EA043040B1

EA043040B1 - Пептид, связывающий ангиопоэтин-2, мультиспецифические комплексы, содержащие указанный пептид и антитела, и их применение

Info

Publication number: EA043040B1
Application number: EA201890895
Authority: EA
Inventors: Виктор Рошке; Дэвид Ляфлёр; Дэвид М. Гилберт; Питер КИНЕР
Original assignee: Зинджения, Инк.
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-14
Publication date: 2023-04-20

Description

Уровень техники Область техники

Настоящее изобретение в целом относится к комплексу, содержащему антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), при этом указанный по меньшей мере один MRD содержит пептид, обладающий способностью связывать ангиопоэтин-2 (ANG-2). Дополнительно, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим указанный комплекс, в том числе фармацевтическим композициям, способам, включающим применение указанного комплекса, и применению указанного комплекса, в частности, для ингибирования ангиогенеза, лечения рака и воспалительных расстройств.

Предпосылки создания изобретения

В последние годы усилия, направленные на поиск новых лекарственных средств, были в основном сосредоточены на идентификации агентов, модулирующих заранее выбранные индивидуальные мишени. Однако агенты, направленные на индивидуальные мишени, часто демонстрируют ограниченную эффективность и неудовлетворительные профили безопасности и устойчивости как результат малой чувствительности, избыточности, перекрестных взаимодействий, активности компенсаторных сигнальных путей и обратных или противоположно направленных сигнальных путей, связанных с терапевтической мишенью. Соответственно, усилия, направленные на поиск новых лекарственных средств, все чаще становятся направлены на поиск новых многокомпонентных способов терапии.

Разработка биспецифических или мультиспецифических молекул, нацеленных на две или большее количество мишеней одновременно, обеспечивает новое перспективное решение для получения новых системных агентов, нацеленных на несколько мишеней, демонстрирующих улучшенную эффективность и фармакологические свойства по сравнению со стандартными способами монотерапии. Многочисленные попытки разработки мультиспецифических молекул были основаны на иммуноглобулинподобных доменах или субдоменах. Например, биспецифические антитела традиционно получали путем химического связывания двух разных моноклональных антител или путем слияния двух гибридомных клеточных линий с получением гибридной гибридомы. Другие основанные на иммуноглобулинподобных доменах технологии, использовавшиеся для создания мультиспецифических и/или мультивалентных молекул, включают однодоменные антитела (dAb), диатела, тандемные антитела (TandAb), нанотела, антитела BiTE, иммунофармацевтические средства на основе модульных белков малого размера (SMIP), антитела, полученные с помощью технологии DNL, белки Affibody, финомеры, домены Куница, доменные антитела к альбумину Albu-dab, антитела DART, DVD-IG, антитела Covx, пептитела, антитела на основе одноцепочечных Fv-фрагментов (scFv-Ig), SVD-Ig, dAb-Ig, антитела на основе технологии Выступы-вовпадинах, антитела DuoBody™ и трифункциональные моноклональные антитела (triomAb). Хотя каждая из указанных молекул может связывать одну или большее количество мишеней, с каждой из них связаны проблемы, касающиеся сохранения характерных функций иммуноглобулина (например, времени периода полувыведения, эффекторной функции), получения (например, выхода, чистоты), валентности, одновременного распознавания мишеней и биодоступности. Другие попытки получения мультиспецифических и мультивалентных молекул были основаны на альтернативных вариантах скаффолдов (каркасных структур) на основе полипептидов VASP, панкреатического полипептида птиц (аРР), тетранектина (на основе CTLD3), аффилина (на основе уВ-кристаллина/убиквитина), ноттинсов (knottins), SH3-доменов, PDZ-доменов, тендамистата, трансферрина, домена с анкириновым консенсусным повтором (например, дарпинов (DARPin)), укладках белка липокалина (например, дуокалинов (Duocalin)), фибронектина (см., например, опубликованные заявки на патент США № 2003/0170753 и № 20090155275, включенные в настоящий документ посредством ссылки), домена белка А (например, белков Affibody), тиоредоксина. Другие попытки были основаны на альтернативных вариантах скаффолдов на основе соединения или связывания представляющих интерес полипептидов с альбумином (например, ALBUdAb (Domantis/GSK) и ALB-Kunitz (Dyax)), последовательности с неструктурированными повторами из 3 или 6 аминокислот (например, технология PASylation® и технология XTEN®), и последовательности, содержащие домены с эластиноподобными повторами (см., например, заявку на патент США № 61/442106, которая включена в настоящий документ посредством ссылки). К настоящему времени указанные технологии продемонстрировали ограниченный клинический потенциал в качестве надежных платформ для разработки различных мультиспецифических и мультивалентных терапевтических композиций. Генетическая сложность большинства злокачественных новообразований и других расстройств у человека дает веские основания предполагать, что взаимодействие с одной мишенью или путем, связанным с указанными расстройствами, предположительно не способно обеспечить оптимальный или продолжительный терапевтический эффект. Таким образом, существует значительная потребность в разработке мультиспецифических и мультивалентных терапевтических средств, таких как мультиспецифические антитела, способных влиять на активность нескольких мишеней и/или сигнальных механизмов или оптимизировать терапевтические эффекты лечения, направленного против указанных расстройств.

- 1 043040

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим мультивалентные, а также мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы, содержащие скаффолды, такие как антитела, поддерживающие такие связывающие функциональные группы. Настоящее изобретение основано отчасти на неожиданном открытии, заключающемся в том, что мультиспецифические и мультивалентные связывающие композиции, например, полученные с применением платформы ZYBODY™ (Zyngenia, Inc.; см., например, международную публикацию №WO 2009/088805, которая включена в настоящий документ посредством ссылки), демонстрируют ярковыраженную синергическую биологическую активность по сравнению с комбинациями стандартных монотерапий. Предполагается, что указанная синергическая активность приведет к появлению новых вариантов терапии, направленной на лечение или предотвращение раковых заболеваний, заболеваний или расстройств иммунной системы (например, аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и ВЗК), скелетной системы (например, остеопороза), сердечно-сосудистой системы (например, инсульта, заболевания сердца), нервной системы (например, болезни Альцгеймера), инфекционного заболевания (например, ВИЧ) и других заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе или известных из других источников в данной области техники.

Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентного мультиспецифического MRDсодержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для трех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для четырех или большего количества мишеней. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для пяти или большего количества мишеней. Согласно некоторым вариантам реализации с по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или большее количество указанных мишеней расположены на поверхности клетки. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или большее количество указанных мишеней представляют собой растворимые мишени (например, хемокины, цитокины и факторы роста). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает 1, 2, 3, 4 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с раковым заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с раковым заболеванием.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с заболеванием или расстройством иммунной системы.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4, 5 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе.

Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для трех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для четырех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для пяти или большего количества мишеней.

Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспеци

- 2 043040 фическая композиция содержит 2 сайта связывания для трех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для четырех или большего количества мишеней.

Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания для пяти или большего количества мишеней. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, или большее количество указанных мишеней связаны с клеточной мембраной. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, или большее количество указанных мишеней представляют собой растворимые мишени (например, хемокины, цитокины и факторы роста). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает 1, 2, 3, 4, или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с раковым заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4, или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с раковым заболеванием. Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4, или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает:

(1) мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолеассоциированный антиген на опухолевой клетке, иммунной клетке, пораженной заболеванием клетке или инфекционном агенте) и (2) мишень на эффекторной клетке.

В соответствии с одним вариантом такое связывание одной или большего количества мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией направляет иммунный ответ на клетку, ткань, инфекционный агент или в другую представляющую интерес локализацию у пациента. Согласно некоторым вариантам реализации указанная эффекторная клетка представляет собой лейкоцит, такой как T-клетка или естественная клетка киллер. Согласно другим вариантам реализации указанная эффекторная клетка представляет собой вспомогательную клетку, такую как миелоидная клетка или дендритная клетка.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает (1) мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолеассоциированный антиген на опухолевой клетке, иммунной клетке, пораженной заболеванием клетке или инфекционном агенте) и (2) мишень на лейкоците, такую как молекула Тклеточного рецептора. В соответствии с одним вариантом связывание одной или большего количества мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией направляет иммунный ответ на инфекционный агент, клетку, ткань, или другую представляющую интерес локализацию у пациента. Например, согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень на поверхности T-клетки. Согласно конкретным вариантам реализации указанная композиция связывает CD3-мишень, выбранную из CD3дельта, CD3-эпсилон, CD3-гамма, CD3-зета, T-клеточного рецептора альфа (TCR-альфа), T-клеточного рецептора бета (TCR-бета) и мультимеров белков в комплексе CD3 (TCR). Согласно конкретным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD2. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, экспрессируемую на естественной клетке киллере. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из: CD2, CD56 и CD161.

Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, экспрессируемую на вспомогательной (например, миелоидной) клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из: CD64 (т.е. рецептор Fc-гамма), МНС класса 2 и его инвариантной цепи, Toll-подобного рецептора 1 (TLR1), Toll-подобного рецептора 2 (TLR2), TLR4, TLR5 и TLR6. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моновалентной). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единст

- 3 043040 венный сайт связывания мишени на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3), и несколько сайтов связывания мишени (т.е. является мультивалентной) на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолеассоциированного антигена на опухолевой клетке, например, мишени, описанной в настоящем документе). Согласно другим вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция содержит единственные сайты связывания двух разных мишеней (т.е. моновалентно связывает более чем одну другую мишень). Согласно конкретным вариантам реализации указанная представляющая интерес клетка или ткань представляет собой раковую клетку, иммунную клетку, пораженную заболеванием клетку или инфекционный агент.

Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания CD3. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3 и несколько сайтов связывания для 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, опухолевого антигена или другой мишени, раскрытой в настоящем документе). Согласно другим вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3 и единственный сайт связывания другой мишени (т.е. моновалентно связывает CD3 и другую мишень). Согласно другим вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3-эпсилон. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3-эпсилон и несколько сайтов связывания для 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, опухолевого антигена или другой мишени, раскрытой в настоящем документе). Согласно другим вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3эпсилон и единственный сайт связывания другой мишени (т.е. моновалентно связывает CD3-эпсилон и другую мишень). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени на раковой клетке, выбранной из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Согласно другим вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, которая содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывающей мишень) нуждающемуся в этом пациенту. Согласно некоторым вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3) и несколько сайтов связывания (т.е. способна к мультивалентному связыванию) мишени, расположенной на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевого антигена на опухолевой клетке). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците (например, CD3) и единственный сайт связывания другой мишени. Согласно некоторым вариантам реализации представляющая интерес клетка представляет собой опухолевую клетку ракового заболевания, выбранного из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени на неврологической опухоли. Согласно конкретным вариантам реализации указанная неврологическая опухоль представляет собой глиому (например, глиобластому, мультиформную глиобластому (GBM) и астроцитому), эпендимому, олигодендроглиому, нейрофиброму, саркому, медуллобластому, примитивную нейроэктодермальную опухоль, аденому гипофиза, нейробластому или рак мозговых оболочек (например, менингиому, менингосаркому и глиоматоз). Согласно другим вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRDсодержащего антитела), которая содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывающей мишень) и несколько сайтов связывания для 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственные сайты связывания двух разных мишеней. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени на раковой клетке, выбранной из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого

- 4 043040 пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Согласно другим вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которая содержит единственный сайт связывания CD3 (например, СПЗ-эпсилон), моновалентно связывающий CD3, и несколько сайтов связывания для 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней, расположенных на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевого антигена на опухолевой клетке). Согласно некоторым вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD3 (например, CD3 -эпсилон) и единственный сайт связывания другой мишени, а также содержит несколько сайтов связывания мишени, расположенных на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевого антигена на опухолевой клетке). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени на раковой клетке, выбранной из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на клеточной поверхности, требующей мультимеризации для передачи сигнала. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания рецептора фактора роста. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания представителя суперсемейства рецепторов ФНО. Согласно другим вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция дополнительно содержит единственный сайт связывания другой мишени (т.е. моновалентно связывает более чем одну другую мишень).

Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает мишень, связанную с опосредованной эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) транспортной системой и способную проникать на мозговую сторону ГЭБ (в спинномозговую жидкость). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит два или большее количество сайтов связывания целевого антигена, связанного с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой (например, опосредованными рецептором инсулина, рецептором трансферрина, рецептором лептина, рецептором липопротеинов и рецептором ИФР транспортными системами). Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция дополнительно связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, расположенных с мозговой стороны ГЭБ. Согласно конкретным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связанных с неврологическим заболеванием или расстройством. Согласно еще одному варианту реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения рака головного мозга, метастатического рака головного мозга или первичного рака головного мозга. Согласно дополнительному варианту реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения повреждения головного мозга, инсульта, повреждения спинного мозга или болевого синдрома.

Согласно другим вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащее антитело), связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4, 5 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с одним или большим количеством перечисленных выше заболеваний или расстройств. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе.

Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция представляет собой ZYBODY™ (называемое в настоящем документе MRDсодержащим антителом или т.п.). Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело содержит сайты связывания трех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит 2 сайта связывания четырех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации ука

- 5 043040 занное MRD-содержащее антитело содержит 2 сайта связывания пяти или большего количества мишеней. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит 2 сайта связывания трех или большего количества мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит 2 сайта связывания четырех или большего количества мишеней. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит 2 сайта связывания пяти или большего количества мишеней. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или большее количество указанных мишеней расположены на поверхности клетки. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или большее количество указанных мишеней представляют собой растворимые мишени (например, хемокины, цитокины и факторы роста). Согласно другим вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе. Согласно другим вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащим антителом), связаны с раковым заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые MRD-содержащим антителом, связаны с 1, 2, 3, 4 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с раковым заболеванием.

Согласно другим вариантам реализации мишень, связываемая указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащим антителом), связана с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанным MRD-содержащим антителом, связаны с 1, 2, 3, 4, 5 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно другим вариантам реализации мишень, связываемая указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащее антитело), связана с заболеванием или расстройством скелетной системы, сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишень, связываемая указанным MRD-содержащим антителом, связана с 1, 2, 3, 4 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с одним или большим количеством перечисленных выше заболеваний или расстройств. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает 1, 2, 3, 4 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении (например, MRD-содержащие антитела) обеспечивают возможность избирательного нацеливания на несколько мишеней (например, рецепторов и связанных с микроокружением мишеней), которым свойственны, например, разные, перекрывающиеся или избыточные механизмы действия, связанные с этиологией или патофизиологией заболевания или расстройства.

Согласно другим вариантам реализации настоящее изобретение включает мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), ковалентно или иным образом связанную с цитотоксическим агентом. Согласно некоторым вариантам реализации указанный цитотоксический агент ковалентно связан с MRD-содержащим антителом, посредством линкера. Согласно некоторым вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой химиотерапевтический агент, ингибирующий рост агент, токсин (например, ферментативно активный токсин бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, или его фрагменты), радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат) или пролекарство. Композиции, предложенные в настоящем изобретении, необязательно, связаны с цитотоксическим агентом, посредством линкера. Согласно конкретным вариантам реализации линкер, соединяющий мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию и цитотоксический агент, может быть расщеплен протеазой. Согласно конкретным вариантам реализации линкер, соединяющий мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию и цитотоксический агент, может быть расщеплен при низких значениях pH или в восстанавливающих условиях. Способы применения составов с композициями, предложенными в настоящем изобретении, и цитотоксическими агентами (например, конъюгатов MRD-содержащего антитела с лекарственными средствами) также охвачены настоящим изобретением.

Согласно другим вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции ковалентно или иным образом связаны с цитотоксическим агентом, выбранным из, например, токсина, энтеротоксина, нейротоксина, лейкоцидина или гемолизина, химиотерапевтического агента, лекарственного вещества (например, химиотерапевтического агента или пролекарства), антибиотика, радиоактивного изотопа, хелатного лиганда (например, DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA и ТЕТА) и нуклеолитического фермента. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент выбран из ауристатина и долостатина, ММАЕ, MMAF, и производного майтансиноида (например, DM1 (N(2')-деацетил-N(2')-(3-меркапто-1-оксопропил)майтансина), DM3 (N(2')-деацетил-N2-(4меркапто-1-оксопентил)майтансина) и DM4 (N(2')-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)

- 6 043040 майтансина). Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и мультиспецифическая композиция ковалентно или иным образом связана с цитостатическим агентом. Согласно другим вариантам реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, предложенную в настоящем изобретении (например, MRD-содержащее антитело), вводят в комбинации с многоцелевым терапевтическим средством. Согласно одному варианту реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят в комбинации с многоцелевым ингибитором протеинкиназы. Согласно еще одному варианту реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят в комбинации с ингибитором NFkB. Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят в комбинации с ингибитором гистондеацетилазы (HDAC). Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят в комбинации с ингибитором HSP70 или HSP90. Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят в комбинации с химиотерапией.

Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, предложенную в настоящем изобретении (например, MRD-содержащее антитело), вводят в комбинации с моноспецифическим терапевтическим средством (например, моноклональным антителом). Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция, предложенная в настоящем изобретении, представляет собой полноразмерное антитело, содержащее по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD). Согласно некоторым вариантам реализации указанное полноразмерное антитело содержит несколько доменов MRD. Согласно другим вариантам реализации указанное полноразмерное антитело содержит MRD более чем одного типа (т.е. несколько MRD с одинаковой или разной специфичностью). Также в настоящем изобретении реализованы варианты и производные таких комплексов с антителами.

MRD в MRD-содержащих антителах могут быть функционально связаны с указанными антителами в любой локализации на указанном антителе (например, на аминоконце тяжелой цепи или легкой цепи или карбоксильном конце тяжелой цепи или легкой цепи), могут быть присоединены к одному или к разным концам, и, необязательно, функционально связаны друг с другом или с антителом, посредством линкера.

Антитела в MRD-содержащих антителах могут представлять собой любую молекулу иммуноглобулина, которая связывается с антигеном и могут относиться к любому типу, классу или подклассу. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело гуманизировано или представляет собой антитело человека. Согласно другим вариантам реализации указанные антитела также содержат модификации, не препятствующие их способности связывать антиген. Согласно конкретным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) содержат модификации, усиливающие АЗКЦ, уменьшающие АЗКЦ, усиливающие КЗЦ или уменьшающие КЗЦ, увеличивающие период полувыведения антитела или уменьшающие период полувыведения антитела по сравнению с антителом без указанной модификации. Антитела в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению могут представлять собой любое антитело, которое связывается с мишенью, имеющей терапевтическое или диагностическое значение. Согласно предпочтительным вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывается с подтверждённой мишенью. Согласно некоторым вариантам реализации антитела, соответствующие указанным MRD-содержащим антителам, проходят клинические испытания для одобрения регуляторными органами. Согласно некоторым вариантам реализации антитела, соответствующие указанным MRD-содержащим антителам, имеются в продаже. Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с антигеном клеточной поверхности. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с ангиогенным фактором. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело связывается с ангиогенным рецептором. Согласно некоторым вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывается с мишенью, выбранной из: рЭФР, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, рецептора инсулиноподобного фактора роста-1, ФРЭС, р-ФРЭС и простатического специфического мембранного антигена. Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывается с ФРЭС, рФРЭС-1, рЭФР, ErbB2, рецептором ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рецептором ФРФ-1 (рФРФ-1), рецептором ФРФ-2 (рФРФ-2) и CD20.

Согласно одному варианту реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывается с рЭФР. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой эрбитукс (Erbitux®), нимотузумаб или залутумумаб (например, от Genmab). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело эрбитукс (Erbitux®) или конкурентно ингибирует связывание антитела эрбитукс (Erbitux®) с рЭФР. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело эрбитукс (Erbitux®). Согласно одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело эрбитукс (Erbitux®), нимотузумаб, залутумумаб (например, от Genmab). Со

- 7 043040 гласно еще одному конкретному варианту реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурентно ингибирует связывание антитела эрбитукс (Erbitux®), нимотузумаб, залутумумаб с рЭФР.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рЭФР и мишень, выбранную из: ФРГ, CD64, содержащего CUB-домен белка 1 (CDCP1), RON, cMET, ErbB2, ErbB3, рецептора инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1), плацентарного фактора роста (ПФР), молекулы RGMa, альфа-рецептора ТцФР (PDGFRa), β-рецептора ТцФР (PDGFRb), рецептора ФРЭС-1, рецептора ФРЭС-2, рецептора 10А суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF10A, DR4), TNFRSF10B (DR5), TNFRSF21 (DR6), ИФР-1,2, ИФР-2, CD3, CD4 и белок D группы естественных киллеров 2 (NKG2D). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащие антитела) связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рЭФР. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой нимотузумаб, залутумумаб. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой эрбитукс (Erbitux®). Согласно конкретному варианту реализации антитело из MRDсодержащего антитела связывается с ErbB2. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело Герцептин (Herceptin®) (трастузумаб) или конкурентно ингибирует связывание антитела Герцептин® (трастузумаба) с ErbB2. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с ФРЭС. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело Авастин® (AVASTEST®, бевацизумаб), или конкурентно ингибирует антитело Авастин®. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело Авастин®.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело связывается с мишенью, которая связана с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с ФНО. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело Хумира® (HUMIRA®, адалимумаб) или конкурентно ингибирует антитело Хумира®. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело Хумира®. Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с ФНО. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и Симпони (SIMPONI™, голимумаб) антитело или конкурентно ингибирует антитело Симпони™. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело Симпони™.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывается с мишенью, которая связана с заболеванием или расстройством системы обмена веществ, сердечно-сосудистой, скелетно-мышечной, нервной или скелетной системы. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывается с мишенью, которая связана с дрожжевой, грибной, вирусной или бактериальной инфекцией или заболеванием. Настоящее изобретение также охватывает MRD, содержащие MRD композиции (например, антитела и/или другие композиции), полинуклеотиды, кодирующие домены MRD, способы получения MRD и способы применения MRD, предложенных в настоящем изобретении. Согласно одному варианту реализации длина MRD составляет приблизительно 2-150 аминокислот. Согласно еще одному варианту реализации длина MRD составляет приблизительно 2-60 аминокислот. MRD могут быть присоединены к антителу или другим MRD прямо или через линкер. MRD могут представлять собой любую связывающий мишень пептид. Согласно некоторым вариантам реализации мишень MRD представляет собой растворимый фактор. Согласно другим вариантам реализации мишень MRD представляет собой трансмембранный белок, такой как рецептор клеточной поверхности. Согласно еще одному варианту реализации мишень MRD представляет собой клеточный антиген. Согласно конкретному варианту реализации мишень MRD представляет собой CD20.

Согласно еще одному варианту реализации мишень MRD представляет собой интегрин. Согласно одному аспекту пептидная последовательность нацеленного на интегрин MRD представляет собой YCRGDCT (SEQ Ш NO:3).

Согласно другому аспекту пептидная последовательность нацеленного на интегрин MRD представляет собой PCRGDCL (SEQ ID NO:4).

Согласно еще одному аспекту пептидная последовательность нацеленного на интегрин MRD представляет собой TCRGDCY (SEQ ID NO:5).

Согласно другому аспекту пептидная последовательность нацеленного на интегрин MRD представляет собой LCRGDCF (SEQ ID NO:6).

Согласно дополнительному варианту реализации мишень MRD представляет собой ангиогенный цитокин. Согласно одному аспекту пептидная последовательность нацеленного на (т.е. связывающего) ангиогенный цитокин MRD представляет собой MGAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQQGLE (SEQ IDNO:7).

- 8 043040

Согласно одному варианту реализации мишень MRD представляет собой ErbB2. Согласно еще одному варианту реализации мишень, с которой связывается MRD, представляет собой ErbB3. Согласно дополнительному варианту реализации мишень, с которой связывается MRD, представляет собой опухолеассоциированный поверхностный антиген или молекулу адгезии эпителиальных клеток (Ер-САМ). Согласно одному варианту реализации мишень, с которой связывается MRD представляет собой ФРЭС. Согласно одному аспекту пептидная последовательность нацеленного на ФРЭС MRD представляет собой VEPNCDIHVMWEWECFERL (SEQ ID NO:13).

Согласно одному варианту реализации мишень, с которой связывается MRD, представляет собой рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Иллюстративный пример нацеленного на рИФР-1 MRD включает, например, пептидная последовательность, имеющую формулу: NFYQCIDLLMAYPAEKSRGQWQECRTGG (SEQ Ш NO:37);

Согласно одному варианту реализации мишень MRD представляет собой опухолевый антиген. Под опухолевым антигеном в настоящем документе могут подразумеваться как антигены (в том числе мутации), экспрессируемые исключительно на опухолевых клетках (т.е. опухолеспецифические антигены), так и антигены, экспрессируемые на опухолевых клетках и нормальных клетках (например, антигены, сверхэкспрессируемые на опухолевых клетках). Согласно одному варианту реализации мишень MRD представляет собой рецептор эпидермального фактора роста (рЭФР). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения мишень MRD представляет собой ангиогенный фактор. Согласно дополнительному варианту реализации мишень MRD представляет собой ангиогенный рецептор. Согласно предпочтительному варианту реализации, настоящее изобретение относится к комплексу, содержащему антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), при этом указанный по меньшей мере один MRD содержит пептид, обладающий способностью связывать ангиопоэтин-2 (ANG2), при этом указанный пептид содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO: 626. Согласно одному варианту реализации, указанное антитело связывает мишень, выбранную из группы, состоящей из: ФНО (TNF), ФРЭС (VEGF), рФРЭС-1 (VEGFR1), рЭФР (EGFR), ErbB2, рецептора ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рФРФ-1 (FGFR1), рФРФ-2 (FGFR2) и CD20, предпочтительно указанное антитело связывает TNF. Согласно одному варианту реализации, указанный MRD способен связывать ANG-2, и указанное антитело способно связывать TNF одновременно. Согласно одному варианту реализации, указанное антитело выбрано из группы, состоящей из: адалимумаба, голумимаба и инфликсимаба. Дополнительно, предложен способ ингибирования роста клетки in vitro, который включает приведение в контакт указанной клетки с комплексом согласно настоящему изобретению. В рамках настоящего изобретения предложено применение заявленного комплекса при изготовлении медикамента для ингибирования ангиогенеза у пациента, или для лечения пациента, у которого присутствует рак или воспалительное расстройство, которое необязательно представляет собой аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание кишечника или артрит. В рамках настоящего изобретения также предложены способы ингибирования ангиогенеза у пациента и способы лечения пациента, у которого присутствует рак или воспалительное расстройство, которое необязательно представляет собой аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание кишечника или артрит, при этом указанные способы включают введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества комплекса согласно настоящему изобретению. В рамках настоящего изобретения предложена также фармацевтическая композиция, содержащая комплекс согласно настоящему изобретению и один или более фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и/или стабилизаторов.

Согласно еще одному варианту реализации MRD представляет собой сосудистый хоминг-пептид.

Согласно одному варианту реализации мишень MRD представляет собой фактор роста нервов.

Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело и/или MRD связывается с рЭФР, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 или простатическим специфическим мембранным антигеном.

Настоящее изобретение также относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность нуклеотидов, кодирующую MRD-содержащее антитело. Согласно одному аспекту вектор содержит последовательность полинуклеотидов, кодирующая MRD-содержащее антитело. Согласно другому аспекту последовательность полинуклеотидов, кодирующая MRD-содержащее антитело, функционально соединена с регуляторной последовательностью, которая контролирует экспрессию на указанном полинуклеотиде. Согласно дополнительному аспекту клетка-хозяин содержит последовательность полинуклеотидов, кодирующую MRD-содержащее антитело.

Также предложены способы получения мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), а также применение указанных гибридов MRD-антитело в диагностических и терапевтических целях. Настоящее изобретение также относится к способам разработки и получения мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) с полноразмерным антителом, содержащим MRD. Согласно одному аспекту указанный MRD происходят из библиотеки, полученной методом фагового дисплея. Согласно другому аспекту указанный MRD происходит из природных лигандов. Согласно другому аспекту указанный MRD получен с помощью технологии дрожжевого дисплея или РНК-дисплей.

- 9 043040

Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предотвращения заболевания или расстройства у нуждающегося в этом субъекта (пациента), включающий введение антитела, содержащего MRD, указанному субъекту (пациенту). Согласно одному аспекту указанное заболевание представляет собой раковое заболевание. Согласно другому аспекту нежелательный ангиогенез ингибирован. Согласно другому аспекту ангиогенез модулирован. Согласно еще одному аспекту рост опухоли ингибирован.

Согласно некоторым вариантам реализации предложены способы лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) нуждающемуся в этом пациенту. Согласно некоторым вариантам реализации указанное заболевание, расстройство или повреждение представляет собой раковое заболевание. Согласно другим вариантам реализации указанное заболевание, расстройство или повреждение представляет собой расстройство иммунной системы. Согласно одному варианту реализации указанное расстройство иммунной системы представляет собой воспаление. Согласно еще одному варианту реализации указанное расстройство иммунной системы представляет собой аутоиммунное заболевание. Согласно дополнительному варианту реализации указанное расстройство иммунной системы выбрано из группы, состоящей из: ревматоидного артрита, болезни Крона, системной красной волчанки, воспалительного заболевания кишечника, псориаза, диабета, язвенного колита и рассеянного склероза. Согласно одному варианту реализации указанное заболевание, расстройство или повреждение представляет собой заболевание обмена веществ. Согласно еще одному варианту реализации указанное заболевание, расстройство, или повреждение представляет собой инфекционное заболевание. Согласно конкретным вариантам реализации указанное инфекционное заболевание представляет собой инфекцию вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или СПИД, ботулизм, сибирская язва или Clostridium difficile. Согласно другим вариантам реализации указанное заболевание, расстройство, или повреждение является неврологическим. Согласно конкретному варианту реализации указанное неврологическое заболевание, расстройство или повреждение представляет собой боль. Согласно более конкретному варианту реализации указанная боль представляет собой острую боль или хроническую боль.

Согласно еще одному варианту реализации предложен способ лечения или предотвращения, включающий введение дополнительного терапевтического агента наряду с антителом, содержащим MRD. Согласно другим вариантам реализации указанные способы лечения или предотвращения включают введение антитела, содержащего MRD более чем одного типа.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 приведено схематическое изображение разных конструкций мультиспецифических и мультивалентных молекул. Домены MRD изображены в виде треугольников, кружков, ромбов и квадратов.

На фиг. 2А показано типичное пептитело в форме С-концевого гибрида с тяжелой цепью Fc.

На фиг. 2В показано MRD-содержащее антитело с С-концевым гибридом MRD с легкой цепью указанного антитела.

На фиг. 2С показано MRD-содержащее антитело с N-концевым гибридом MRD с легкой цепью указанного антитела.

На фиг. 2D показано MRD-содержащее антитело с уникальными пептидами MRD, соединенными с каждым концом указанного антитела.

На фиг. 3 представлены результаты твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) в которых интегрин и Ang2 связывались антителом против интегрина (JC7U), соединенным с нацеленным на Ang2 MRD (2xCon4).

На фиг. 4 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором интегрин и Ang2 связывались антителом против интегрина (JC7U), соединенным с нацеленным на Ang2 MRD (2xCon4).

На фиг. 5 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором антитело против ErbB2 соединяли с MRD, нацеленным на Ang2.

На фиг. 6 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на Ang2 MRD соединяли со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов (сМЕТ) антителом.

На фиг. 7 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на интегрин MRD соединяли со связывающим ErbB2 антителом.

На фиг. 8 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на интегрин MRD соединяли со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом.

На фиг. 9 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD соединяли со связывающим ErbB2 антителом.

На фиг. 10 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на ФРЭС MRD соединяли со связывающим ErbB2 антителом.

На фиг. 11 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на интегрин MRD соединяли с каталитическим антителом.

На фиг. 12 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на Ang2 MRD со

- 10 043040 единяли с каталитическим антителом.

На фиг. 13 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на интегрин MRD и нацеленный на Ang2 MRD соединяли со связывающим ErbB2 антителом.

На фиг. 14 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором нацеленный на интегрин MRD соединяли со связывающим ErbB2 антителом.

На фиг. 15 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором связывающий интегрин, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD соединяли со связывающим ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов антителом коротким линкерным пептидом.

На фиг. 16 представлены результаты анализа ИФА ELISA, в котором связывающий интегрин, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD соединяли со связывающим ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов антителом длинным линкерным пептидом.

На фиг. 17А приведены кривые зависимости доза-эффект для гибридов MRD и связывающего мальтозу белка (МВР), анализируемых на прямое связывание с Ang2.

На фиг. 17В представлены протестированные гибридные белки MRD-MBP, последовательность аминокислот MRD и значения ЕС₅₀ (вычисленные с использованием четырехпараметрической аппроксимации). Последовательность мотива MXD в MRD-компонентах гибридов MRD-MBP выделена подчеркиванием, а мутированные остатки выделены жирным начертанием и курсивом.

На фиг. 18А представлены результаты анализа на прямое связывание доменов MRD антитела Zybody на основе Герцептина® (т.е. MRD, содержащего последовательности антитела Герцептин®) и антитела Герцептин® с Her2 (ErbB2) Fc в присутствии биотинилированного Ang2. Связывание детектировали с применением конъюгированного с HRP моноклонального антитела против цепи каппа человека.

На фиг. 18В представлены результаты анализа на прямое связывание антитела Zybody на основе Герцептина® (т.е. MRD, содержащего последовательности антитела Герцептин®) и антитела Герцептин® с Her2 Fc в присутствии биотинилированного Ang2. Связывание детектировали с применением конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) стрептавидина.

На фиг. 19А представлены результаты анализа на прямое связывание антител с доменами MRD и антитела Авастин® с ФРЭС в присутствии биотинилированного Ang2. Связывание детектировали с применением конъюгированного с HRP моноклонального антитела против цепи каппа человека.

На фиг. 19В представлены результаты анализа на прямое связывание антител с доменами MRD и антитела Авастин® с ФРЭС в присутствии биотинилированного Ang2. Связывание детектировали с применением конъюгированного с HRP стрептавидина.

На фиг. 20А представлены результаты анализа с применением проточной цитометрии, показывающего, что антитела с доменами MRD одновременно связывают Her2 и Ang2 на клетках ВТ-474 рака молочной железы. На фиг. 20В показано связывание антител с доменами MRD с HER2 на клетках ВТ-474 рака молочной железы.

На фиг. 21 представлены результаты анализа ИФА ELISA, демонстрирующего ингибирующий эффект антител с доменами MRD на связывание TIE-2 с иммобилизованных на планшете Ang2.

На фиг. 22 представлены результаты анализа конкурентного связывания, демонстрирующего ингибирование связывания биотинилированного антитела антителом-MRD и немеченым антителом.

На фиг. 23 представлены результаты анализа конкурентного связывания, который иллюстрирует ингибирование связывания меченого антитела с клетками ВТ-474 антителами с доменами MRD и немеченым антителом.

На фиг. 24А приведены аппроксимированные кривые доза-ответ, иллюстрирующие ингибирование пролиферации клеток ВТ-474 Герцептином® с MRD lm32 (SEQ ID NO: 8), соединенным с тяжелой цепью, и Герцептином®. На фиг. 24В приведены аппроксимированные кривые доза-ответ, иллюстрирующие ингибирование пролиферации клеток ВТ-474 Герцептином® с MRD lm32, соединенным с легкой цепью, и Герцептином®.

На фиг. 24С приведены аппроксимированные кривые доза-ответ, иллюстрирующие ингибирование пролиферации клеток ВТ-474 Герцептином® с MRD 2xcon4, соединенным с тяжелой цепью, и Герцептином®. На фиг. 25А представлены результаты анализа цитотоксичности, иллюстрирующие опосредованный АЗКЦ киллинг клеток ВТ-474 Герцептином® с MRD lm32, соединенным с тяжелой цепью, Герцептином® с MRD lm32, соединенным с легкой цепью, и Герцептином®.

На фиг. 25В представлены результаты анализа цитотоксичности, иллюстрирующие опосредованный АЗКЦ киллинг клеток ВТ-474 Герцептином® с MRD 2xcon4, соединенным с тяжелой цепью, и Герцептином®.

На фиг. 26А показано ингибирование пролиферации ЭКПВЧ Авастином® с MRD lm32, соединенным с тяжелой цепью, и Авастином®, с использованием клеток ЭКПВЧ, полученных от GlycoTech (Гейтерсберг, Мэриленд).

На фиг. 26В показано ингибирование пролиферации ЭКПВЧ Авастином® с MRD lm32, соединенным с тяжелой цепью, и Авастином®, с использованием клеток ЭКПВЧ, полученных от Lonza.

- 11 043040

На фиг. 27 показан эффект ритуксимаба (РИТУКСИМАБ®), Герцептина® и MRD-содержащего антитела на объем опухоли in vivo.

На фиг. 28 показана повышенная эффективность содержащих MRD антител для фосфорилирования рецепторов и активации АКТ по сравнению с эффектом антитела в комбинации с MRD.

На фиг. 29А показана повышенная эффективность биспецифического MRD-содержащего антитела на пролиферацию клеток по сравнению с эффектом антитела или антитела в комбинации с MRD.

На фиг. 29В показана повышенная эффективность пентаспецифического MRD-содержащего антитела на пролиферацию клеток по сравнению с эффектом антитела или антитела в комбинации с MRD.

На фиг. 30 показана повышенная эффективность в модели артрита антитела Хумира, содержащего Ang2-связывающий MRD, по сравнению с Хумирой.

На фиг. 31 показано ингибирование ЭФР-индуцированной сигнализации в клетках SK-BR3 антителами Zybody.

На фиг. 32 показано ингибирование херегулин-индуцированной сигнализации в клетках SK-BR3 антителами Zybody.

На фиг. 33 показано ингибирование ЭФР- и херегулин-индуцированной сигнализации в клетках SKBR3 антителами Zybody.

На фиг. 34 приведена столбчатая диаграмма (А) и результаты проточной цитометрии (В), отражающие понижающую регуляцию экспрессии рЭФР на клетках SK-BR3 антителами Zybody.

На фиг. 35 показана понижающая регуляция рЭФР в клетках SKBR3 антителами Zybody.

На фиг. 36 показаны цитотоксические эффекты MRD-содержащих антител, проявляющих разные валентности агонизирующих DR5 MRD на трех разных скаффолдах на основе моноклональных антител (mAb) с применением анализа жизнеспособности клеток. На фиг. 36А показано, что антитело Zybody со скаффолдом на основе тетравалентного трастузумаба демонстрирует более высокую цитотоксическую активность по сравнению с соответствующими бивалентными антителами Zybody. На фиг. 36В-С показано, что антитела Zybody со скаффолдом на основе октавалентного трастузумаба и паливизумаба, содержащие 8 копий нацеленных на DR5 MRD, демонстрируют более высокую цитотоксическую активность по сравнению с соответствующими им тетравалентными антителами Zybody. На фиг. 36D показано, что мультиэпитопное нацеливание на отличные от DR5 рецепторы (her2 и рЭФР, соответственно) усиливает цитотоксическую активность тетравалентного нацеленного на DR5 MRD. На фиг. 36F показано, что скаффолд антитела Zybody на основе mAb (например, цетуксимаба (СЕТ), трастузумаба (TRA) и паливизумаба (PAL)) может влиять на кажущуюся цитотоксическую эффективность нацеленных на DR5 MRD.

На фиг. 37 показано, что Ang-связывающие пептиды могут отличаться в отношении относительного связывания Ang1 и Ang4.

Анализировали пептиды

ANG100 (SEQ ID

NO:621), ANG126 (SEQ Ш NO:232); ANG129 (SEQ ГО NO:234); ANG156 (SEQ ID

NO:255); ANG157 (SEQ ID NO:256); ANG163 (SEQ ID NO:261); ANG179 (SEQ ID

NO:270); ANG200 (SEQ ID NO:628); ANG303 (SEQ ID NO:331); ANG318 (SEQ ID

NO:625); ANG335 (SEQ ID NO:332); и ANG599 (SEQ ID NO:367).

Подробное описание изобретения

Ниже приводится описание мультивалентных и моновалентных мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител, содержащих по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD)). Связывание одного или большего количества доменов MRD с антителом приводит к образованию мультиспецифической молекулы согласно настоящему изобретению, которая сохраняет структурные и функциональные характеристики традиционных антител или Fc-оптимизированных антител и может легко быть синтезирована с применением стандартных систем и техник экспрессии антител. Указанное антитело может представлять собой любой подходящий антиген-связывающий иммуноглобулин, a MRD может представлять собой любой подходящий связывающий мишень пептид. Домены MRD могут быть функционально связаны с любой локализацией на антителе, и указанное присоединение может быть прямым или непрямым (например, через химический или полипептидный линкер). Композиции с антителами, содержащими MRD, способы получения антител, содержащих MRD, и способы применения антител, содержащих домены MRD, также описаны в приведенных ниже разделах.

Настоящим изобретением также охвачены домены MRD, содержащие MRD композиции, полинуклеотиды, кодирующие домены MRD, способы получения доменов MRD и способы применения MRD, предложенных в настоящем изобретении.

Используемые в настоящем документе названия разделов предназначены исключительно для организационных целей и не должны толковаться как каким-либо образом ограничивающие описываемый предмет изобретения. Для получения рекомбинантной молекулы ДНК, белка и антител, а также для культивирования тканей и трансформации клеток могут использоваться стандартные техники. Ферментативные реакции и техники очищения, как правило, осуществляют в соответствии с спецификациями

- 12 043040 изготовителя или согласно общепринятым в данной области техники способам с применением стандартных процедур, таких как приведенные в источниках: Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2^nd ed. 1988) и Sambrook et al., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)) (оба источника включены в настоящий документ посредством ссылки), или согласно описанию в настоящем документе. Если не приведены конкретные определения, лабораторные процедуры и техники аналитической химии, синтетические методы органической химии, медицинской и фармацевтической химии в настоящем документе, а также используемая применительно к ним номенклатура представляют собой известные и применяемые в данной области техники номенклатуру, процедуры и техники. Стандартные техники могут использоваться для химического синтеза, химического анализа, получения фармацевтических составов, лекарственных форм, доставки лекарств и лечения пациентов.

I. Определения.

Термины мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы, мультивалентные и мультиспецифические комплексы, MRD-содержащие антитела, антитело-MRD молекул, молекулы MRD-антитело, антитела, содержащие MRD и антитела Zybody используются в настоящем документе взаимозаменяемо и не охватывают пептитело. Каждый из указанных терминов может также использоваться в настоящем документе для обозначения комплекса согласно настоящему изобретению. Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы может содержать домены MRD, антитела, цитотоксические агенты, и связывающие мотивы помимо доменов MRD, которые связываются с одной или большим количеством мишеней. Например, мультивалентный и моновалентный мультиспецифический комплекс (например, MRD-содержащее антитело) может содержать фрагмент или производное связывающей последовательности, содержащейся в антителе (например, одиночный связывающий домен, ScFv, область CDR) и/или могут также включать цитотоксический агент (например, терапевтический агент). Такие молекулы также описаны в предварительной заявке на патент США №61/481063, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Термины мультивалентный(ые) и моновалентный(ые) мультиспецифический(ие) комплекс(ы) и мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы, соответственно, в настоящем документе относятся к композициям, способным связывать 2 или большее количество мишеней, и содержащих один сайт связывания и/или несколько сайтов связывания разных эпитопов. Соответственно, предполагается, что указанный термин включает комплексы, содержащие несколько сайтов связывания для каждого из связываемых указанным комплексом разных эпитопов, или как вариант, комплексы, содержащие по меньшей мере один единственный сайт связывания другого эпитопа. Указанные разные эпитопы могут располагаться на одной или на разных мишенях. Мишени мультивалентных и мультиспецифических комплексов могут располагаться на одной или на разных клетках. Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы могут быть мультивалентными и мультиспецифическими и могут, соответственно, связывать две или большее количество мишеней и содержать два или большее количество сайтов связывания каждой из мишеней, связываемых указанным комплексом. Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы могут также содержать один единственный сайт (или большее количество единственных сайтов) связывания одной мишени (или большего количества мишеней) и несколько сайтов связывания других мишеней и, соответственно, указанные комплексы являются моновалентными (в отношении единственного(ых) сайта(ов) связывания), мультивалентными и мультиспецифическими. Кроме того, мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы могут быть моновалентными и мультиспецифическими и, соответственно, содержать только единственные сайты связывания двух или большего количества разных мишеней. Термин комплекс мультивалентного и моновалентного мультиспецифического комплекса и лекарственного средства или MRD-содержащее антитело-цитотоксический агент в настоящем документе относится к мультивалентному и моновалентному мультиспецифическому комплексу, содержащему одну или большее количество цитотоксических агентов.

Термин цитотоксический агент в настоящем документе включает любой агент, оказывающий на клетки неблагоприятное действие, в том числе, например, вещество, которое ингибирует или предотвращает функцию клеток и/или вызывает разрушение клеток. Предполагается, что указанный термин включает химиотерапевтический агент, лекарственное вещество (например, цитокин или пролекарство), антибиотик, радиоактивный изотоп, хелатный лиганд (например, DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA и ТЕТА), нуклеолитический фермент, токсин, такой как токсин - малая молекула или ферментативно активный токсин бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, включая фрагменты и/или варианты указанных токсинов. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент выбран из: ауристатина, доластатина, ММАЕ, MMAF, производного майтансиноида (например, DM1 (N(2')-деацетил-N(2')-(3-меркапто-1-оксопропил)майтансина), DM3 (N(2')-деацетил-N2-(4меркапто-1-оксопентил)майтансина) и DM4 (N(2')-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1оксопентил)майтансина).

Термин антитело используется в настоящем документе для обозначения молекул иммуноглобулина, способных связывать антигены посредством антигенсвязывающего домена (т.е. антитело

- 13 043040 комбинирующий сайт). Термин антитело включает поликлональные, олигоклональные (смеси антител) и моноклональные антитела, гибридные, одноцепочечные и гуманизированные антитела. Термин антитело также включает антитела человека. Согласно некоторым вариантам реализации антитело содержит по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (обозначаемой в настоящем документе аббревиатурой VH) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов: CH1, CH2 и СН3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (обозначаемой в настоящем документе аббревиатурой VL) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена, CL. Области VH и VL могут быть дополнительно подразделены на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), перемежаемые более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR). Каждая из VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных в направлении от аминоконца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело представляет собой гомомерное антитело тяжелой цепи (например, антитела камелидов), в котором отсутствует первый домен константной области (СН1), но сохраняет в остальном интактную тяжелую цепь и способен связывать антигены через антигенсвязывающий домен. Вариабельные области тяжелых и легких цепей в гибридах антителоMRD согласно настоящему изобретению содержат функциональный связывающий домен, взаимодействующий с антигеном.

Термин моноклональное антитело, как правило, относится к популяции молекул антитела, которые содержат только один вид антитело-комбинирующего сайта, способного вступать в иммунную реакцию с конкретным антигеном. Моноклональное антитело, соответственно, как правило, проявляет один тип сродства к связыванию любого эпитопа, с которым оно вступает в иммунную реакцию. В настоящем документе моноклональное антитело может также содержать молекулу антитела, содержащую совокупность антитело-комбинирующих сайтов (т.е. совокупность вариабельных доменов), каждый из которых обладает иммуноспецифичностью в отношении другого антигена, например, биспецифическое моноклональное антитело. Соответственно, в настоящем документе моноклональное антитело относится к популяции гомогенных антител, вовлеченных в высокоспецифичное распознавание и связывание одной или двух (в случае биспецифического моноклонального антитела) антигенных детерминант, или эпитопов. В этом заключается отличие от поликлональных антител, которые, как правило, включают разные антитела, направленные против разных антигенных детерминант. Термин моноклональное антитело относится к таким антителам, полученным любым числом способов, включая, но не ограничиваясь перечисленными, с использованием гибридомы, селекции фагов, рекомбинантной экспрессии, дрожжей и трансгенных животных. Термин антитело с двойной специфичностью используется в настоящем документе для обозначения молекулы иммуноглобулина, которая содержит вариабельный домен иммуноглобулина с двойной специфичностью, при этом указанный вариабельный домен с двойной специфичностью может быть сконструирован из любых двух моноклональных антител.

Термин гибридные антитела относится к антителам, отличающимся тем, что последовательность аминокислот молекулы иммуноглобулина происходит из двух или большего количества видов. Как правило, вариабельная область как легких, так и тяжелых цепей соответствует вариабельной области антител, происходящей из один вида млекопитающих (например, мыши, крысы, кролика и т.д.) с нужной специфичностью и/или сродством (аффинностью), а константные области гомологичны последовательностям антител, происходящих из другого вида (обычно человека), чтобы избежать возникновения иммунного ответа у указанного вида. Термин гуманизированное антитело относится к формам не принадлежащих человеку (например, мышиных) антител, представляющих собой специфические цепи иммуноглобулина, гибридные иммуноглобулины или их фрагменты, которые содержат минимальные не принадлежащие человеку (например, принадлежащие мыши) последовательности. Как правило, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека, в которых остатки определяющей комплементарность области (CDR) заменены остатками CDR не являющегося человеком вида (например, мыши, крысы, кролика, хомяка), обладающими требуемой специфичностью и/или аффинностью (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)). В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) иммуноглобулина человека заменены соответствующими остатками антитела не являющегося человеком вида, обладающего требуемой специфичностью и/или аффинностью. Гуманизированное антитело может быть дополнительно модифицировано путем замены дополнительных остатков или в каркасной области Fv и/или в замененных не принадлежащих человеку остатках для улучшения и оптимизации специфичности, аффинности и/или эффективности антитела. В общем случае гуманизированное антитело содержит по существу все из по меньшей мере одного, и, как правило, двух или трех вариабельных доменов, содержащих все или по существу все из областей CDR, соответствующие не принадлежащему человеку иммуноглобулину, тогда как все или по существу все FR-области представляют собой FR-области консенсусной последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело может также содержать константную область иммуноглобулина или домен (Fc), как правило, из иммуноглобулина челове

- 14 043040 ка. Примеры способов, используемых для получения гуманизированных антител, описаны в следующих источниках: патент США №5225539, патент США №4816567, Morrison, Science 229:1202 (1985); Oi et al., BioTechniques 4:214 (1986); Cabilly et al., Taniguchi et al., EP 171496; Morrison et al., EP 173494, WO86/01533; WO8702671; Boulianne et al., Nature 312:643 (1984); и Neuberger et al., Nature 314:268 (1985), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. В настоящем документе антитела человека включают антитела, имеющие последовательность аминокислот иммуноглобулина человека или одной или большего числа зародышевых линий человека и включают антитела, выделенные из библиотек иммуноглобулинов человека или из животных, несущих трансгены одного или большего количества иммуноглобулинов человека и не экспрессирующих эндогенные иммуноглобулины, согласно описанию ниже, а также, например, в патенте США № 5939598, Kucherlapati et al. Антитело человека может по-прежнему считаться принадлежащим человеку даже в том случае, когда в указанном антителе осуществлены замены аминокислот. Примеры способов, используемых для получения антител человека, описаны в следующих источниках: международные заявки на патент № WO98/24893, WO92/01047, WO96/34096 и WO96/33735; европейский патент №0598877; патенты США № 5413923, 5625126, 5633425, 5569825, 5661016, 5545806, 5814318, 5885793, 5916771 и 5939598; и Lonberg and Huszar, Int. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995), включенных в настоящий документ посредством ссылки.

Антитело-комбинирующий сайт представляет собой структурный фрагмент молекулы антитела, состоящий из вариабельных и гипервариабельных областей тяжелой и легкой цепей, который специфически связывает антиген (вступает в иммунную реакцию с антигеном). Термин вступать в иммунную реакцию в различных формах означает специфическое связывание между содержащей антигенную детерминанту молекулой и молекулой, содержащей антитело-комбинирующий сайт, такой как целая молекула антитела или ее фрагмент. Во встречающихся в природе антителах шесть определяющих комплементарность областей, или CDR, присутствующих в каждом антигенсвязывающем домене, представляют собой короткие, не являющиеся непрерывными последовательности аминокислот, расположенные специфическим образом, обеспечивающим формирование антигенсвязывающего домена при принятии антителом его трехмерной конфигурации в водной среде. Оставшиеся аминокислоты антигенсвязывающих доменов, называемые каркасными областями, демонстрируют меньшую межмолекулярную вариабельность. Каркасные области главным образом имеют β-складчатую конформацию, и области CDR образуют петли, соединяющие указанную β-складчатую структуру, а в некоторых случаях образующие часть указанной β-складчатой структуры. Соответственно, каркасные области действуют таким образом, что образуется скаффолд, обеспечивающий расположение областей CDR в правильной ориентации за счет нековалентных взаимодействий между цепями. Антигенсвязывающий домен (т.е. антителокомбинирующий сайт), образованный расположенными указанным образом областями CDR определяет комплементарность поверхности эпитопу на иммунореактивном антигене. Указанная комплементарная поверхность обеспечивает нековалентное связывание антитела с когнатным эпитопом. Аминокислоты, содержащие области CDR и каркасные области, соответственно, могут быть легко идентифицированы для любой заданной вариабельной области тяжелой или легкой цепи специалистом в данной области техники, поскольку они были точно определены (см. источники: Sequences of Proteins of Immunological Interest (Последовательности белков, представляющих интерес для иммунологии), Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); а также Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), включенные в настоящий документ посредством ссылки). Гуманизированное антитело или гибридное антитело включает антитела, в которых последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии другого вида млекопитающих, такого как мышь, привиты на каркасные последовательности человека.

Термины Т-лимфоцит, T-клетка, T-клетки и популяция T-клеток используются в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения клетки или клеток, экспонирующей(их) на поверхности один или большее количество антигенов, характерных для T-клеток, например, CD3 и CD11b. Термин включает потомство T-клетки или популяцию T-клеток. Т-лимфоцит, или T-клетка включает клетку, которая экспрессирует CD3 на клеточной поверхности и Т-клеточный антигенраспознающий рецептор (TCR), способный к распознаванию антигена при экспонировании на поверхности аутологичных клеток или любой антигенпредставляющей матрицы, наряду с одной или большим количеством молекул МНС или одной или большим количеством неклассических молекул МНС. Термин T-клетки может относится к любым T-клеткам, в том числе, например, лимфоцитам, фенотипически являющимся CD3+, т.е. экспрессирующим CD3 на клеточной поверхности.

В настоящем документе CD3 используется для индивидуального или совокупного обозначения молекулы, экспрессируемой в качестве части T-клеточного рецептора и имеет значение, которое, как правило, придается указанному термину в данной области техники. В отношении человека термин CD3 охватывает все известные субъединицы CD3, например, CD3-дельта, CD3-эпсилон, CD3-гамма и CD3-зета (TCR-зета), а также CD3-альфа (TCR-альфа) и CD3-бета (TCR-бета), индивидуально или в виде независимых комбинаций.

Термин пептитело относится к пептиду или полипептиду, который содержит менее чем полное

- 15 043040 интактное антитело. Пептитело может представлять собой Fc-домен антитела, присоединенный по меньшей мере к одному пептиду. Пептитело не включает вариабельные области антитела, антителокомбинирующий сайт, домены СН1 или домены константной области легкой цепи Ig.

Термин встречающийся в природе в отношении биологических материалов, таких как молекулы нуклеиновых кислот, полипептиды, клетки-хозяева и т.п., относится к таким материалам, присутствующим в природе и не модифицированным человеком.

Термин домен в настоящем документе относится к части молекулы или структуре, обладающей общими физическими или химическими свойствами, например, гидрофобные, полярные, глобулярные, спиральные домены или свойства, например, связывающий белок домен, ДНК-связывающий домен или АТФ-связывающий домен. Домены могут быть идентифицированы на основании гомологичности консервативным структурным или функциональным мотивам.

Консервативная замена аминокислоты представляет собой замену, при которой один остаток аминокислоты заменен на другой остаток аминокислоты с аналогичной боковой цепью. В данной области техники определены семейства остатков аминокислот, имеющих аналогичные боковые цепи, включая основные боковые цепи (например, лизин, аргинин, гистидин), кислые боковые цепи (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженные полярные боковые цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин), неполярные боковые цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан), бета-разветвленные боковые цепи (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматические боковые цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Например, замена фенилаланина на тирозин представляет собой консервативную замену. Согласно некоторым вариантам реализации консервативные замены в последовательностях полипептидов и антител согласно настоящему изобретению не устраняют связывание полипептида или антитела, содержащего указанную последовательность аминокислот, с антигеном(ами), с которым(и) связывается указанный(ое) полипептид или антитело. Способы идентификации консервативных замен и неконсервативных замен нуклеотидов и аминокислот, не устраняющих связывание полипептидов или антигенов, хорошо известны в данной области техники (см., например, Brummell et al., Biochem. 32:11801187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); и Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)).

Модульный домен распознавания (MRD), или связывающий мишень пептид представляет собой молекулу, такую как белок, гликопротеин и т.п., способную специфически (неслучайным образом) связываться с целевой молекулой. Как правило, допустима определенная степень вариабельности последовательности аминокислот MRD при сохранении некоторого уровня эффективности связывания целевой молекулы. Далее, изменения последовательности могут приводить к изменениям специфичности связывания и константы связывания между заданной целевой молекулой и сайтом связывания. Согласно одному варианту реализации указанный MRD представляет собой агонист мишени, которую он связывает. MRD-агонист относится к MRD, который каким-либо образом повышает или усиливает биологическую активность целевого белка MRD или обладает биологической активностью, сопоставимой с известным агонистом целевого белка MRD. Согласно еще одному варианту реализации MRD представляет собой антагонист мишени, которую он связывает. MRD-антагонист относится к MRD, блокирующему или каким-либо образом влияющему на биологическую активность целевого белка MRD или обладающих биологической активностью, сопоставимой с известным антагонистом или ингибитором целевого белка MRD.

Рецептор клеточной поверхности относится к молекулам и комплексам молекул, способным получать сигнал и передавать такой сигнал через плазматическую мембрану клетки. Примером рецептора клеточной поверхности согласно настоящему изобретению является активированный рецептор интегрина, например, активированный рецептор интегрина αΎβ3 на метастатической клетке. В настоящем документе рецептор клеточной поверхности также включает молекулу, экспрессируемую на поверхности клетки, которую может связывать MRD-содержащее антитело согласно настоящему изобретению.

В настоящем документе сайт связывания мишени, или нацеливающий сайт представляет собой любую известную или еще не определенную последовательность аминокислот, обладающую способностью селективно связывать заданный агент. Примеры референсных целевых сайтов происходят из RGDзависимых лигандов интегрина, а именно фибронектина, фибриногена, витронектина, фактора фон Виллебранда и т.п., клеточных рецепторов, таких как ErbB2, ФРЭС, сосудистый хоминг-пептид или ангиогенные цитокины, из белковых рецепторов гормонов, таких как рецептор инсулиноподобного фактора роста-1, рецептор эпидермального фактора роста и т.п., и из опухолевых антигенов.

Термин эпитоп или антигенная детерминанта используются в настоящем документе взаимозаменяемо и относятся к фрагменту любой молекулы, которые может распознаваться и специфически связываться конкретным связывающим агентом (например, антителом или MRD). Когда распознаваемая молекула представляет собой полипептид, эпитопы могут быть образованы непрерывными последовательностями аминокислот и не являющимися непрерывными последовательностями аминокислот и/или другими химически активными поверхностными группами молекул (таких как углеводы), сближенными за счет третичной укладки белка. Эпитопы, образованные непрерывными последовательностями амино

- 16 043040 кислот, как правило, сохраняются при денатурации белка, тогда как эпитопы, образованные за счет третичной укладки, как правило, утрачиваются при денатурации белка. Эпитоп, как правило, включает по меньшей мере 3, и чаще по меньшей мере 5 или 8-10 аминокислот в уникальной пространственной конформации.

Говорят, что антитело, MRD, антитело-содержащий MRD или другая молекула конкурентно ингибирует связывание референсной молекулы с определенным эпитопом, если она связывается с указанным эпитопом в степени, позволяющей ей блокировать, в некоторой степени, связывание референсной молекулы с указанным эпитопом. Конкурентное ингибирование может быть определено любым способом, известным в данной области техники, например, с применением конкурентного ИФА ELISA. В настоящем документе может говориться, что антитело, MRD, антитело-содержащий MRD или другая молекула конкурентно ингибирует связывание референсной молекулы с определенным эпитопом, например, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 60% или по меньшей мере на 50%.

Термин белок определен как биологический полимер, содержащий единицы, происходящие из аминокислот, связанных пептидными связями; белок может состоять из двух или большего количества цепей.

Гибридный полипептид представляет собой полипептид, состоящий по меньшей мере из двух полипептидов и, необязательно, соединяющей последовательности для функционального соединения указанных двух полипептидов в один непрерывный полипептид. Указанные два полипептида, соединенные в гибридный полипептид, как правило, происходят из двух независимых источников, и, соответственно, гибридный полипептид содержит два соединенных полипептида, обычно не соединенные в природе. Указанные два полипептида могут быть функционально соединены прямо посредством пептидной связи или могут быть соединены непрямо через линкер, описанный в настоящем документе, или другим известным в данной области техники способом.

Термин функционально связаны в настоящем документе указывает на то, что две молекулы соединены таким образом, что каждая из них сохраняет функциональную активность. Две молекулы функционально связаны независимо от того, соединены ли они прямо (например, гибридный белок) или непрямо (например, посредством линкера).

Термин линкер относится к пептиду, расположенному между антителом и MRD, или между двумя MRD. Длина линкеров может составлять приблизительно 1-20 аминокислот, приблизительно 2-20 аминокислот или приблизительно 4-15 аминокислот. Одна или большее количество указанных аминокислот могут быть гликозилированы, как будет ясно специалистам в данной области техники. Согласно одному варианту реализации указанные 1-20 аминокислот выбраны из глицина, аланина, пролина, аспарагина, глутамина и лизина. Согласно еще одному варианту реализации линкер состоит в основном из стерически не ограниченных аминокислот, таких как глицин и аланин. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанный линкер выбран из полиглицинов (например, (Gly)₅ и (Gly)8), поли(GlyAla) и полиаланинов. Указанный линкер может также представлять собой непептидный линкер, такой как алкильный линкер, или ПЭГ-линкер. Например, могут применяться алкильные линкеры, такие как NH-(CH₂)s-C(O)-, где s=2-20. Указанные алкильные линкеры могут дополнительно быть замещены любой не ограниченной стерически группой, такой как низший алкил (например, Ο₁-Ο₆) низший ацил, галоген (например, Cl, Br), CN, NH2, фенил и т.д. Примером непептидного линкера является ПЭГ-линкер. Согласно определенным вариантам реализации указанный ПЭГ-линкер имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно от 100 до 5000 кДа, или приблизительно от 100 до 500 кДа. Пептидные линкеры могут быть изменены с получением производных. Согласно некоторым вариантам реализации указанный линкер представляет собой непептидный линкер, такой как алкильный линкер или ПЭГ-линкер. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный линкер представляет собой расщепляемый линкер, способствующий высвобождению MRD или цитотоксического агента в клетке или поблизости от клетки.

Целевая клетка относится к любой клетке у субъекта (например, у человека или животного), на которую может быть нацелена мультиспецифическая и мультивалентная композиция (например, антитело-содержащие MRD) или MRD согласно настоящему изобретению. Указанная целевая клетка может представлять собой клетку, экспрессирующую или сверхэкспрессирующую сайт связывания мишени, такой как активированный рецептор интегрина.

Термин иммунный ответ относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых описанными выше клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), которое приводит к селективному повреждению, разрушению или устранению из организма человека инвазивных патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случаях аутоиммунной реакции или патологического воспаления, нормальных клеток или тканей человека.

В настоящем документе термин эффекторная клетка относится к иммунной клетке, вовлеченной в эффекторную фазу иммунного ответа, в противоположность фазам распознавания и активации иммунного ответа. Примеры иммунных клеток включают клетку миелоидного или лимфоидного происхождения,

- 17 043040 например, лимфоциты (например, В-клетки и T-клетки, включая цитолитические T-клетки (CTL)), клетки киллеры, естественные клетки киллеры, макрофаги, моноциты, эозинофилы, нейтрофилы, полиморфноядерные клетки, гранулоциты, тучные клетки и базофилы). Некоторые эффекторные клетки экспрессируют специфические Fc-рецепторы и выполняют специфические иммунные функции. Согласно определенным вариантам реализации эффекторная клетка способна индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ), например, нейтрофил, способный индуцировать АЗКЦ. Например, моноциты и макрофаги, которые экспрессируют FcR, вовлечены в специфический киллинг целевых клеток и представление антигенов другим компонентам иммунной системы, или связывание с клетками, представляющими антигены. Согласно другим вариантам реализации эффекторная клетка может фагоцитировать целевой антиген или целевую клетку. Экспрессия конкретного FcR на эффекторной клетке может регулироваться гуморальными факторами, такими как цитокины. Например, было обнаружено, что экспрессия Fc-рецептора IgA (RI Fc-альфа) повышающе регулируется гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Г-КСФ) или гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором ГМ-КСФ. Указанная повышенная экспрессия усиливает эффекторную функцию клеток, несущих Fc-альфа RI, направленную против мишеней. Примеры функций эффекторной клетки включают фагоцитоз или лизис целевого антигена или целевой клетки. Целевая клетка относится к любой клетке или патогену, элиминация которой благоприятна для пациента (например, человека или животного) и на которую может быть нацелена композиция (например, антитело) согласно настоящему изобретению. Пациент, субъект, животное или млекопитающее используются взаимозаменяемо и относятся к млекопитающим, таким как пациенты-люди и не являющиеся человеком приматы, а также экспериментальным животным, таким как кролики, крысы и мыши, и другим животным. Животные включают всех позвоночных животных, например, млекопитающих и не являющихся млекопитающими животных, таких как овцы, собаки, коровы, куры, амфибии и рептилии. Согласно некоторым вариантам реализации указанный пациент представляет собой человека.

Лечить или лечение включает введение антитела, содержащего MRD согласно настоящему изобретению, для предотвращения или задержки появления симптомов, осложнений, или биохимических признаков заболевания, состояния или расстройства, облегчения симптомов, или остановки или ингибирования дальнейшего развития указанного заболевания, состояния или расстройства. Лечение может представлять собой профилактическое (для предотвращения или задержки появления указанного заболевания, или для предотвращения проявления его клинических или субклинических симптомов) или терапевтическое подавление или облегчение симптомов после проявления указанного заболевания, состояния или расстройства. Лечение может проводиться с применением только композиции с антителом и MRD, только MRD, или с применением комбинации любого из указанных вариантов с одним или большим количеством дополнительных терапевтических агентов.

В настоящем документе термины фармацевтически приемлемый или физиологически переносимый, и их грамматические варианты, в отношении композиций, носителей, разбавителей и реагентов, используются взаимозаменяемо и означают, что указанные материалы могут быть введены человеку или применены к человеку без чрезмерных терапевтически нежелательных физиологических эффектов, таких как тошнота, головокружение, расстройство желудка и т.п.

Модулировать или модулирует означает корректировку или регуляцию амплитуды, частоты, степени или активности. Согласно другому родственному аспекту такая модуляция может быть положительной (например, повышение частоты, степени или активности) или отрицательной (например, снижение частоты, степени или активности).

Термины рак (раковое заболевание), опухоль или злокачественное новообразование используются как синонимы и относятся к любым из ряда заболеваний, характеризующихся неконтролируемой аномальной пролиферацией клеток, способностью пораженных клеток распространяться локально или через кровоток и лимфатическую систему в другие части организма (метастазировать), а также к любым из ряда характерных структурных и/или молекулярных признаков. Под раковой опухолью или злокачественными клетками понимается клетка, у которой имеются специфические структурные свойства, отсутствует дифференцировка и способная к инвазии и метастазированию. Примеры раковых заболеваний, лечение которых может проводиться с применением гибридов антитело-MRD согласно настоящему изобретению, включают солидные опухоли и гематологическое раковое заболевание. Дополнительные примеры раковых заболеваний, лечение которых может проводиться с применением гибридов антителоMRD согласно настоящему изобретению, включают рак молочной железы, легкого, головного мозга, костей, печени, почки, толстой кишки, головы и шеи, яичников, гематопоэтической системы (например, лейкоз), и рак предстательной железы. Дополнительные примеры раковых заболеваний, для лечения которых могут применяться мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), включают, не ограничиваясь перечисленными, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные примеры таких раковых заболеваний включают плоскоклеточный рак, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, плоскоклеточный рак легкого, рак брюшной полости, гепатоцеллюлярный рак, рак ЖКТ, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молоч

- 18 043040 ной железы, рак толстой кишки, рак толстой и прямой кишки, рак эндометрия матки или матки, карциному слюнных желез, рак почки, рак печени, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, гепатокарциному и различные типы рака головы и шеи. Другие типы раковых заболеваний и опухолей, лечение которых может проводиться с применением мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), описаны в настоящем документе или известны из других источников в данной области техники.

Эффективное количество антитела, MRD или MRD-содержащего антитела согласно описанию в настоящем документе представляет собой количество, достаточное для достижения конкретной заявленной цели, например, обеспечения наблюдаемого изменения уровня одного или большего количества видов биологической активности, связанных с мишенью, с которой связывается указанное антитело, MRD или MRD-содержащее антитело. Согласно определенным вариантам реализации указанное изменение повышает уровень целевой активности. Согласно другим вариантам реализации указанное изменение снижает уровень целевой активности. Эффективное количество в отношении заявленной цели может быть определено эмпирически рутинным способом.

Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству антитела, MRD, MRDсодержащего антитела, других мультивалентных и мультиспецифических лекарственных средств согласно настоящему изобретению, или другого лекарственного средства, эффективного для лечения заболевания или расстройства у пациента или млекопитающего. В случае ракового заболевания терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшать ангиогенез и неоваскуляризацию; уменьшать число раковых клеток; уменьшать размер опухоли; ингибировать (т.е. до некоторой степени замедлять или останавливать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (т.е. до некоторой степени замедлять или останавливать) метастазирование опухолей; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли или частоту возникновения опухолей; стимулировать иммунный ответ против раковых клеток и/или облегчать до некоторой степени один или большее количество симптомов, связанных с раковым заболеваниям. См. определение лечения в настоящем документе. Терапевтически эффективное количество также может относиться к количеству, эффективному, при необходимых дозировках и продолжительности применения, для достижения требуемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество композиции, предложенной в настоящем изобретении, может варьировать в зависимости от таких факторов, как статус заболевания, возраст, пол и масса индивидуума, и способности указанной композиции вызывать требуемый ответ у указанного индивидуума. Терапевтически эффективное количество представляет собой также такое количество, при использовании которого терапевтически благоприятные эффекты перевешивают какие-либо токсические или неблагоприятные эффекты указанной терапевтической композиции.

В тех случаях, когда указанное лекарственное средство может предотвращать рост и/или убивать существующие раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Профилактически эффективное количество относится к количеству, эффективному, при необходимых дозировках и продолжительности применения, для достижения требуемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическая доза применяется у субъектов (пациентов) до заболевания или на более ранней стадии заболевания, указанное профилактически эффективное количество меньше, чем терапевтически эффективное количество.

В тех случаях, когда варианты реализации настоящего изобретения описаны в терминах группы Маркуша или других групп альтернатив, настоящее изобретение охватывает не только всю указанную группу в целом, но также и каждый член указанной группы по отдельности и все возможные подгруппы главной группы, а также главную группу, в которой отсутствует один или большее количество членов указанной группы. Настоящее изобретение также предусматривает явное исключение одной или большего количества любых членов группы в раскрытом и/или заявленном изобретении.

Модульные домены распознавания (Домены MRD)

В настоящем изобретении описан подход, основанный на получении связывающих мишени пептидов или модульных доменов распознавания (доменов MRD) в виде гибридов с каталитическими или некаталитическими антителами. Согласно определенным вариантам реализации, когда антитело-компонент гибрида MRD-антитело представляет собой каталитическое антитело, указанные гибриды MRD-антитело обеспечивают эффективное нацеливание на опухолевые клетки или растворимые молекулы, при полном сохранении способности к активации пролекарства каталитического антитела. Домены MRD могут также расширять связывающую способность некаталитических антител, обеспечивая эффективный подход к расширению связывающей способности антител, в частности, для терапевтических целей.

Один аспект настоящего изобретения относится к разработке полноразмерного антитела, содержащего по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD). Согласно еще одному неисключительному варианту реализации указанное полноразмерное антитело содержит более одного MRD, при этом указанные домены MRD обладают одинаковыми или разными видами специфичности. Кроме того, одиночный MRD может состоять из тандемного повтора одной или разных последовательностей аминокислот, который может обеспечивать связывание одного MRD с несколькими мишенями и/или с повторяющимся эпитопом на определенной мишени.

- 19 043040

Взаимодействие между белковым лигандом и целевым рецепторным сайтом часто происходит на относительно большой площади поверхности. Однако только несколько ключевых остатков на указанной поверхности вносят вклад в большую часть связывания. Домены MRD могут имитировать связывание лиганда. Согласно определенным вариантам реализации указанный MRD может имитировать биологическую активность лиганда (агонист MRD) или путем конкурентного связывания ингибировать биологическую активность лиганда (MRD-антагонист). Домены MRD в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащих антителах) могут также влиять на мишени другим образом, например, нейтрализуя, блокируя, стабилизируя, объединяя или перекрестно сшивая мишень MRD.

Предполагается, что домены MRD согласно настоящему изобретению обычно содержат пептидную последовательность, которая связывается с представляющими интерес целевыми сайтами и имеют длину, составляющую приблизительно от 2 до 150 аминокислот, приблизительно от 2 до 125 аминокислот, приблизительно от 2 до 100 аминокислот, приблизительно от 2 до 90 аминокислот, приблизительно от 2 до 80 аминокислот, приблизительно от 2 до 70 аминокислот, приблизительно от 2 до 60 аминокислот, приблизительно от 2 до 50 аминокислот, приблизительно от 2 до 40 аминокислот, приблизительно от 2 до 30 аминокислот, или приблизительно от 2 до 20 аминокислот. Предполагается также, что домены MRD имеют длину, составляющую приблизительно от 10 до 150 аминокислот, приблизительно от 10 до 125 аминокислот, приблизительно от 10 до 100 аминокислот, приблизительно от 10 до 90 аминокислот, приблизительно от 10 до 80 аминокислот, приблизительно от 10 до 70 аминокислот, приблизительно от 10 до 60 аминокислот, приблизительно от 10 до 50 аминокислот, приблизительно от 10 до 40 аминокислот, приблизительно от 10 до 30 аминокислот, или приблизительно от 10 до 20 аминокислот. Дополнительно предполагается, что домены MRD имеют длину, составляющую приблизительно от 20 до 150 аминокислот, приблизительно от 20 до 125 аминокислот, приблизительно от 20 до 100 аминокислот, приблизительно от 20 до 90 аминокислот, приблизительно от 20 до 80 аминокислот, приблизительно от 20 до 70 аминокислот, приблизительно от 20 до 60 аминокислот, приблизительно от 20 до 50 аминокислот, приблизительно от 20 до 40 аминокислот, или приблизительно от 20 до 30 аминокислот. Согласно определенным вариантам реализации длина указанных MRD составляет приблизительно от 2 до 60 аминокислот. Согласно другим вариантам реализации длина указанных MRD составляет приблизительно от 10 до 60 аминокислот. Согласно другим вариантам реализации длина указанных MRD составляет приблизительно от 10 до 50 аминокислот. Согласно дополнительным вариантам реализации длина указанных MRD составляет приблизительно от 10 до 40 аминокислот. Согласно дополнительным вариантам реализации длина указанных MRD составляет приблизительно от 10 до 30 аминокислот.

Согласно некоторым вариантам реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антитела) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’3 М, 10’³ М, 5х10’⁴ М, 10^-4 М, 5x10’5 М, 10’5 М, 5x10’6 М, 10’6 М, 5х10’⁷ М, 10’⁷ М, 5x10’8 М, 10’⁸ М, 5x10’9 М, 10’9 М, 5х10’¹⁰ М, 10’¹⁰ М, 5x10’11 М, 10’¹¹ М, 5x10’¹² М, 10’¹² М, 5x10’¹³ М, 10’¹³ М, 5x10’¹⁴ М, 10’¹⁴ М, 5x10’15 М или 10’¹⁵ М. Согласно одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’5 М. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’8 М. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’9 М. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’¹⁰ М. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антитела) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5x10’11 М. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5χ10’¹²М.

Согласно конкретным вариантам реализации один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) связывают свои мишени со скоростью диссоциации(кой), составляющей менее 5x10’2 с’¹, 10’² с’¹, 5x10’3 с’ ¹ или 10’³ с’¹. Предпочтительнее, если один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) связывают свои мишени со скоростью диссоциации (кой) составляющей менее 5x10’4 с-¹, 10’⁴ c’¹, 5x10’5 с’¹, или 10’5 с’¹, 5x10’6 с’¹, 10’6 с’¹, 5x10’7 с’¹ или 10’⁷ с’¹.

Согласно другим конкретным вариантам реализации один или большее количество MRDкомпонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD

- 20 043040 содержащих антител) связывают свои мишени со скоростью связывания (коп), составляющей более 10³М-'-с-¹, 5х10³ М^-с'¹, 10⁴ М’^с’¹ или 5х10⁴ М^-с'¹. Предпочтительнее, если один или большее количество MRD-компонентов указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител) связывают свои мишени со скоростью связывания(коп), составляющей более 105 М'1-с'¹, 5x105 М'1-с'¹, 10⁶ М'1-с'¹, или 5х106М'¹-с'¹, или 10⁷ М'1-с'¹.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные домены MRD представляют собой белки Affibody. Белки Affibody представляют собой класс аффинных белков на основе белкового домена из 58 остатков аминокислот, происходящего из одного из IgG-связывающих доменов белка А стафилококка. Указанный трехспиральный домен использовался в качестве скаффолда для конструирования комбинаторных фагемидных библиотек, из которых варианты Affibody, которые связывают требуемую целевую молекулу, например, одну или большее количество мишеней, раскрытых в настоящем документе, могут быть выбраны рутинным способом с применением технологии фагового дисплея (см., например, Nord et al., Nat. Biotechnol. 15:772-7 (1997), и Ronmark et al., A, Eur. J. Biochem. 2002; 269:2647-55). Дальнейшая информация о белках Affibody и способах их получения приведена в виде ссылки на патент США № 5831012, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Согласно другим вариантам реализации MRD согласно настоящему изобретению (например, MRD на MRD-содержащем антителе) содержит один или большее количество остатков аминокислот или последовательностей остатков аминокислот (включая их производные, аналоги и миметики), преимущественное нацеливание на которые обеспечивается химическими или другими процессами, ковалентно или нековалентно связывающими молекулярный объект с MRD, по сравнению с MRD без преимущественного нацеливания на последовательности или без антитела-компонента MRD-содержащего антитела. Например, согласно некоторым вариантам реализации указанная последовательность аминокислот MRD содержит один или большее количество остатков, имеющих реакционноспособную боковую цепь (например, цистеин или лизин), обеспечивающую селективное или преимущественное связывание указанного MRD с цитотоксическими агентами (например, конъюгатами лекарственных средств и пролекарств, токсинами и биологически активными лигандами) или агентами для визуализации. Применение указанных связывающих MRD для обеспечения MRD-содержащего антитела нагрузкой решает многие проблемы, связанные с дестабилизацией антитела и снижением активности антитела, часто наблюдавшихся при применении стандартных способов получения иммунотоксинов. Компонент нагрузки комплекса с MRD-содержащим антителом согласно настоящему изобретению может представлять собой любую композицию, обеспечивающую благоприятный терапевтический, диагностический или прогностический эффект, или обеспечивающую преимущество при получении, очищении или приготовлении состава с MRD-содержащим антителом. Согласно некоторым вариантам реализации указанная нагрузка представляет собой химиотерапевтическое лекарственное средство или пролекарство, такое как доксорубицин, или майтансиноид-подобное лекарственное средство. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная нагрузка представляет собой другой MRD, токсин, химиотерапевтическое лекарственное средство, каталитический фермент, пролекарство, радиоактивный нуклид, хелатор (например, для присоединения лантаноидов) или другой компонент предложенных в настоящем изобретении мультивалентных и мультиспецифических композиций согласно описанию в настоящем документе.

Согласно неисключительным вариантам реализации указанный MRD не содержит антигенсвязывающего домена или другого домена антитела, такого как константная область, вариабельная область, определяющая комплементарность область (CDR), каркасная область, Fc-домен или шарнирная область. Согласно одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не содержит антигенсвязывающего домена. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не содержит трех областей CDR. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не содержит CDR1 и CDR2. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не содержит CDR1. Согласно одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не происходит из природного клеточного лиганда. Согласно другому неисключительному варианту реализации указанный MRD не является радиоизотопом. Согласно другому неисключительному варианту реализации указанный MRD не является маркером экспрессии белка, таким как глутатион Sтрансфераза (GST), His-метка, метка Flag, гемагглютинин (ГА), метка MYC или флуоресцентный белок (например, GFP или RFP). Согласно другому неисключительному варианту реализации указанный MRD не связывает сывороточный альбумин. Согласно дополнительному неисключительному варианту реализации указанный MRD не является малой молекулой, которая представляет собой цитотоксин. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации указанный MRD не обладает ферментативной активностью. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации MRD при введении отдельно и/или в соединенном с Fc виде оказывает терапевтический эффект на пациента или в модели на животных. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации MRD при неоднократном введении отдельно и/или в соединенном с Fc виде оказывает терапевтический эффект на пациента или в модели на животных (например, 3 или более раз на протяжении курса продолжительностью по меньшей мере шесть месяцев).

- 21 043040

Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD конформационно ограничен. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD конформационно не ограничен. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD содержит один остаток цистеина. Указанный остаток цистеина в MRD может формировать межцепочечную связь (например, между цистеинами в одном MRD, между разными связанными пептидной связью доменами MRD, и между MRD и связанным пептидной связью иммуноглобулином). Согласно некоторым вариантам реализации MRD, вовлеченный(ые) в указанную межцепочечную связь, связан(ы) с единственным коровым связывающим мишень доменом. Согласно другим вариантам реализации домен(ы) MRD, вовлеченный(ые) в межцепочечную связь, связан(ы) с несколькими коровыми связывающими мишень доменами. Согласно альтернативному варианту реализации остаток цистеина в MRD может образовывать межцепочечную связь (например, между цистеинами связанных непептидной связью доменов MRD, или MRD и иммуноглобулина, не связанных пептидной связью). Согласно некоторым вариантам реализации домен(ы) MRD, связанный(ые) межцепочечной связью, связан(ы) с единственным коровым связывающим мишень доменом (т.е. 2 домена MRD, расположенные на разных полипептидных цепях, образуют одну или большее количество межцепочечных связей и в совокупности образуют один сайт связывания мишени). Соответственно, например, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, отличающиеся тем, что домены MRD, расположенные на карбоксильном конце тяжелой цепи, взаимодействуют (например, посредством дисульфидной связи) с образованием единственного сайта связывания мишени. Согласно другим вариантам реализации указанный(ые) MRD, связанный(ые) межцепочечной связью, связан(ы) с несколькими коровыми связывающими мишень доменами. Как вариант, согласно описанию в настоящем документе, MRD может содержать один или большее количество остатков цистеина (или других остатков, имеющих реакционноспособную боковую цепь (например, лизина)), обеспечивающий селективное или преимущественное связывание MRD с цитотоксическим агентом. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD содержит два остатка цистеина вне корового связывающего мишень домена. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD содержит два остатка цистеина, расположенные в пределах корового связывающего мишень домена на каждом конце указанного связывающего мишень домена. Согласно некоторым вариантам реализации первый цистеин расположен возле конца молекулы (т.е. на С-конце домена MRD на С-конце линкера или цепи антитела, или на N-конце домена MRD на N-конце линкера или цепи антитела). Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации первый цистеин расположен в пределах одной аминокислоты, в пределах двух аминокислот, в пределах трех аминокислот, в пределах четырех аминокислот, в пределах пяти аминокислот, или в пределах шести аминокислот от конца молекулы. Согласно некоторым вариантам реализации второй цистеин расположен возле локализации гибрида MRD (т.е. на N-конце домена MRD на С-конце линкера или цепи антитела или на С-конце домена MRD на N-конце линкера или цепи антитела). Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации второй цистеин расположен в пределах одной аминокислоты, в пределах двух аминокислот, в пределах трех аминокислот, в пределах четырех аминокислот, в пределах пяти аминокислот, в пределах 10 аминокислот или в пределах 15 аминокислот от MRD-гибрида.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD кэпирован стабильными остатками. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD кэпирован дисульфидом. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD не содержит сайтов расщепления.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD выбран таким образом, что он не содержит известных потенциальных T-клеточных эпитопов человека. Согласно некоторым конкретным вариантам реализации указанный MRD обладает конкретной гидрофобностью. Например, гидрофобность доменов MRD может сравниваться на основании времени удержания, определенного с применением хроматографии гидрофобного взаимодействия или жидкостной хроматографии с обращенной фазой.

Мишень MRD может представлять собой любую молекулу, взаимодействие MRD-содержащего антитела с которой является желательным. Например, мишень MRD может представлять собой растворимый фактор или трансмембранный белок, такой как рецептор клеточной поверхности. Мишень MRD может также представлять собой внеклеточный компонент или внутриклеточный компонент. Согласно определенным неисключительным вариантам реализации мишень MRD представляет собой фактор, который регулирует пролиферацию, дифференцировку или выживаемость клеток. Согласно другим неисключительным вариантам реализации мишень MRD представляет собой цитокин. Согласно другому неисключительному варианту реализации мишень MRD представляет собой фактор, который регулирует ангиогенез. Согласно другому неисключительному варианту реализации мишень MRD представляет собой фактор, который регулирует клеточную адгезию и/или межклеточные взаимодействия. Согласно определенным неисключительным вариантам реализации мишень MRD представляет собой молекулу клеточной сигнализации. Согласно другому неисключительному варианту реализации мишень MRD представляет собой фактор, который регулирует одну или большее количество иммунных реакций, таких как аутоиммунная реакция, воспаление и иммунный ответ против раковых клеток. Согласно другому неисключительному варианту реализации мишень MRD представляет собой фактор, который регулирует клеточную адгезию и/или межклеточные взаимодействия. Согласно дополнительному неисключительному варианту реализации мишень MRD представляет собой молекулу клеточной сигнализации. Соглас

- 22 043040 но еще одному варианту реализации MRD может связывать мишень, которая сама представляет собой MRD. Способность доменов MRD связывать мишень и блокировать, увеличивать или влиять на биологическую активность целевого MRD может быть определена с применением или путем рутинной модификации известных в данной области техники анализов, биологических анализов и/или моделей на животных для оценки такой активности.

Домены MRD способны связывать соответствующую им мишень, когда они присоединены к антителу. Согласно некоторым вариантам реализации MRD способен связывать соответствующую ему мишень, когда он не присоединен к антителу. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD представляет собой агонист мишени. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD представляет собой антагонист мишени. Согласно определенным вариантам реализации указанный MRD может применяться для локализации MRD-содержащего антитела в области, где расположена мишень MRD. Последовательность MRD может быть определена несколькими способами. Например, последовательности MRD может происходить из природных лигандов или известных последовательностей, которые связываются со специфическим сайтом связывания мишени. Кроме того, появились технологии фагового дисплея, обеспечивающие эффективный метод идентификации пептидов, которые связываются с целевыми рецепторами и лигандами. В пептидных библиотеках с фаговым дисплеем встречающиеся в природе и не встречающиеся в природе последовательности (например, случайные пептидные последовательности) могут быть экспонированы путем слияния с белками оболочки нитевидного фага. Способы выявления сайтов связывания на полипептидах с применением векторов фагового дисплея были описаны ранее, в частности, в WO94/18221, которая включена в настоящий документ посредством ссылки. Указанные способы в общем включают применение экспрессионной векторной системы на основе поверхности нитевидного фага (фагмиды) для клонирования и экспрессирования полипептидов, которые связываются с заданным представляющим интерес нацеливающим сайтом. Способы получения доменов MRD согласно настоящему изобретению включают применение векторов фагового дисплея ввиду их особого преимущества, заключающегося в возможности скрининга очень большой популяции экспрессируемых экспонируемых белков и, таким образом, локализации одного или большего количества специфических клонов, кодирующих требуемую реакционную способность в отношении связывания мишени. Способность полипептидов, кодируемых указанными клонами, связывать мишень и/или изменять биологическую активность мишени может быть определена с применением или путем рутинной модификации анализов и другие методик, описанных в настоящем документе или известных из других источников в данной области техники. Например, для идентификации и улучшения связывающих свойств доменов MRD может применяться технология фагового дисплея. См., например, Scott et al., Science 249:386 (1990); Devlin et al., Science 249:404 (1990); патенты США № 5223409, 5733731, 5498530, 5432018, 5338665, 5922545; и международные заявки на патент №WO96/40987 и №WO98/15833; включенные в настоящий документ посредством ссылки. В пептидных библиотеках с фаговым дисплеем природные и/или не встречающиеся в природе пептидные последовательности могут быть экспонированы путем слияния с белками оболочки нитевидного фага. При необходимости может быть проведено аффинное элюирование экспонированных пептидов против представляющей интерес мишени. Оставшийся фаг может быть обогащен путем проведения последовательных циклов аффинной очистки и повторного размножения. Наилучшим образом связывающие мишень пептиды могут быть секвенированы для идентификации ключевых остатков в пределах одного или нескольких структурно родственных семейств пептидов. См., например, Cwirla et al., Science 276:1696-9 (1997), в которых были идентифицированы два отдельных семейства. Пептидные последовательности могут также позволить предположить, какие остатки могут быть безопасно удалены путем аланинового сканирования или путем мутагенеза на уровне ДНК. Могут быть созданы библиотеки мутагенеза и проведен их скрининг для дополнительной оптимизации последовательности наилучших связующих веществ. Lowman, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:401-424 (1997).

Структурный анализ белок-белковых взаимодействий может также использоваться для прогнозирования пептидов, которые имитируют связывающую активность больших белковых лигандов. В таком анализе по кристаллической структуре можно идентифицировать большой белковый лиганд, из которого может быть сконструирован пептид, например, MRD, и определить взаимную ориентацию его ключевых остатков. См., например, Takasaki et al., Nature Biotech. 15:1266-1270 (1997). Указанные аналитические способы могут также использоваться для исследования взаимодействия между мишенью и MRD, отобранным с помощью фагового дисплея, которое может предусматривать дополнительную модификацию доменов MRD для увеличения сродства к связыванию.

Другие известные в данной области техники способы могут применяться для идентификации доменов MRD. Например, пептидная библиотека может быть соединена с карбоксильным концом lacрепрессора и экспрессирована в Е. coli. Другой способ на основе Е. coli позволяет обеспечить дисплей на внешней мембране клеток путем слияния с ассоциированным с пептидогликаном липопротеином (PAL). Указанные и родственные им способы в совокупности называют дисплеем Е. coli. В другом способе трансляцию случайной РНК останавливают до высвобождения с рибосомы, что приводит к получению библиотеки полипептидов, к которым по-прежнему присоединены ассоциированные РНК. Указанные и родственные способы в совокупности называют рибосомным дисплеем. Другие известные способы

- 23 043040 задействуют химическое связывание пептидов с РНК. См., например, Roberts and Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:12297-12303 (1997). Указанный способ и родственные способы в совокупности называют РНК-пептидный скрининг, РНК-дисплей и мРНК-дисплей. Были разработаны полученные химическим путем пептидные библиотеки, в которых пептиды иммобилизованы на стабильных небиологических материалах, таких как полиэтиленовые стержни или проницаемые для растворителя смолы. В другой химически полученной пептидной библиотеке применяется фотолитография для сканирования пептидов, иммобилизованных на стеклянных пластинах. Указанные и родственные им способы в совокупности называют химическим пептидным скринингом. Химический пептидный скрининг может обладать преимуществом, позволяя применять D-аминокислоты и другие неприродные аналоги, а также непептидные элементы. Обзор и биологических, и химических способов приведен у Wells and Lowman, Curr. Opin. Biotechnol. 3:355-362 (1992). Кроме того, библиотеки с ограничениями конформации, линейные библиотеки и/или направленные библиотеки (состоящие из структурно родственных доменов, обладающих значимой гомологией первичной последовательности) могут применяться для идентификации, описания и модификации доменов MRD Усовершенствованный MRD, который специфически связывает требуемую мишень, может также быть получен на основе известной последовательности MRD. Например, в известную последовательность MRD могут быть введены по меньшей мере одна, два, три, четыре, пять или большее число мутаций аминокислот (например, консервативных или неконсервативных замен), удалений или вставок, и может быть проведен скрининг полученного MRD на связывание с требуемой мишенью и биологическую активность, такую как способность антагонизировать целевую биологическую активность или агонизировать целевую биологическую активность. Согласно еще одному варианту реализации обеспечивают аффинное созревание сайтов, выбранных для модификации, с применением известной в данной области техники фагового дисплея. См., например, Lowman, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:401-4 24 (1997).

Для модификации индивидуальных нуклеотидов в последовательности ДНК, с целью добавления(ий), замен(ы) или удаления(ий) аминокислот(ы) в последовательности антитела или для получения/удаления сайтов рестрикции и последовательностей, кодирующих требуемые аминокислоты (например, цистеин) для облегчения дальнейших манипуляций, может применяться любая техника мутагенеза, известная в данной области техники. Такие техники включают, не ограничиваясь перечисленными, химический мутагенез, сайт-специфический мутагенез in vitro (Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488 (1985); Hutchinson et al., J. Biol. Chem. 253:6551 (1978)), олигонуклеотид-направленный мутагенез (Smith, Ann. Rev. Genet. 19:423-463 (1985); Hill et al., Methods Enzymol. 155:558-568 (1987)), мутагенез на основе ПНР с перекрывающимися праймерами (Но et al., Gene 77:51-59 (1989)), мутагенез на основе ПНР с использованием мегапраймеров (Sarkar et al., Biotechniques 8:404-407 (1990)) и т.д. Модификации могут быть подтверждены путем секвенирования ДНК.

Дополнительные гибридные белки могут быть получены с использованием техник шаффлинга генов, шаффлинга мотивов, шаффлинга экзонов и/или шаффлинга кодонов (в совокупности называемых шаффлингом ДНК). Шаффлинг ДНК может применяться для изменения активности SYNAGIS® или его фрагментов (например, антитело или его фрагмент с большей аффинностью и меньшими скоростями диссоциации). См., в целом, источники: патенты США № 5605793, 5811238, 5830721, 5834252 и 5837458, и Patten et al., Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33 (1997); Harayama et al., Trends Biotechnol. 16(2):76-82 (1998); Hansson et al., J. Mol. Biol. 287:265-76 (1999); Lorenzo et al., Biotechniques 24(2):308-313 (1998); опубликованные заявки на патент США № 20030118592 и 200330133939; и опубликованную международную заявку № WO02/056910; каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Кроме того, домены MRD могут быть идентифицированы на основе оказываемых ими эффектов в анализах для оценки конкретных путей или типов активности. Например, анализы для оценки сигнальных путей (например, исследования фосфорилирования или мультимеризации), тока через ионные каналы, внутриклеточных уровней цАМФ, клеточной активности, например, миграции, адгезии, пролиферации или апоптоза; проникновения, репликации, баддинга или интеграции вируса могут применяться для идентификации, описания и усовершенствования доменов MRD.

В объем настоящего изобретения входят варианты и производные доменов MRD, сохраняющие способность связывать целевой антиген. Во варианты включены варианты со вставками, удалениями и заменами, а также варианты, включающие домены MRD, представленные в настоящем документе, с дополнительными аминокислотами на N-конце и/или С-конце, включающими приблизительно от 0 до 50, от 0 до 40, от 0 до 30, от 0 до 20 аминокислот и т.п. Следует понимать, что конкретный MRD согласно настоящему изобретению может быть модифицирован таким образом, чтобы содержать варианты одного, двух или всех трех типов. Варианты со вставками и заменами могут включать природные аминокислоты, нестандартные аминокислоты, или и первые, и вторые. Согласно некоторым вариантам реализации MRD содержит последовательность, отличающуюся не более чем на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 или 20 аминокислот от последовательности MRD, описанной в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам реализации указанные аминокислотные отличия представляют собой замены. Указанные замены могут быть консервативными или неконсервативными в природе и могут включать нестандартные или

- 24 043040 не встречающиеся в природе аминокислоты. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD содержит последовательность, которая конкурентно ингибирует способность MRD-содержащей последовательности, описанной в настоящем документе, связываться с целевой молекулой. Способность домена MRD конкурентно ингибировать другую MRD-содержащую последовательность может быть определена с применением известных в данной области техники техник, включая анализ ELISA и BIAcore.

Способность домена MRD связывать соответствующую ему мишень может оцениваться с применением любой техники оценки молекулярного взаимодействия. Например, взаимодействие MRD-мишень может быть проанализировано согласно описанию в примерах ниже или, как вариант, с применением анализов связывания in vitro или in vivo, таких как вестерн-блоттинг, радиоиммунологический анализ, ИФА ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ), сэндвич-иммуноанализ, иммунопреципитационный анализ, флуоресцентный иммуноанализ, иммуноанализ с белком А и иммуногистохимический анализ (ИГХ). Для непрямой оценки взаимодействия MRD-мишень могут также применяться анализы для определения способности домена MRD функционально влиять на его мишень (например, анализы для измерения сигнализации, пролиферации, миграции и т.д.).

Усовершенствованный MRD, имеющий конкретный период полувыведения in vivo, может также быть получен на основе известной последовательности MRD. Например, в известную последовательность MRD могут быть введены по меньшей мере одна, два, три, четыре, пять или более мутаций аминокислот (например, консервативные или неконсервативные замены), удалений или вставок, и может быть проведен скрининг полученного MRD для определения увеличенного периода полувыведения. Соответственно, в мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут быть включены варианты и производные доменов MRD, сохраняющие способность связывать мишень и имеющие увеличенный период полувыведения. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации домен MRD в MRD-содержащем антителе имеет период полувыведения, составляющий по меньшей мере приблизительно 5, по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 15, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 25, по меньшей мере приблизительно 30, по меньшей мере приблизительно 35, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 45, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 55, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 65, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 75, по меньшей мере приблизительно 80, по меньшей мере приблизительно 85, по меньшей мере приблизительно 90, по меньшей мере приблизительно 95, по меньшей мере приблизительно 100, по меньшей мере приблизительно 110, по меньшей мере приблизительно 120, по меньшей мере приблизительно 130, по меньшей мере приблизительно 140 или по меньшей мере приблизительно 150 ч. Согласно некоторым вариантам реализации домен MRD в MRDсодержащем антителе имеет период полувыведения, составляющий по меньшей мере приблизительно 5, по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 15, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 25, по меньшей мере приблизительно 30, по меньшей мере приблизительно 35, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 45, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 55, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 65, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 75, по меньшей мере приблизительно 80, по меньшей мере приблизительно 85, по меньшей мере приблизительно 90, по меньшей мере приблизительно 95, по меньшей мере приблизительно 100, по меньшей мере приблизительно 110, по меньшей мере приблизительно 120, по меньшей мере приблизительно 130, по меньшей мере приблизительно 140 или по меньшей мере приблизительно 150 ч. После установления последовательности MRD могут быть получены пептиды с помощью любых известных в данной области техники способов. Например, пептиды MRD могут быть химически синтезированы и функционально соединены с антителом, или могут быть синтезированы с применением рекомбинантной технологии. Например, домены MRD могут быть синтезированы в растворе или на твердой подложке с применением известных техник. Коммерчески доступны и могут применяться в соответствии с известными протоколами различные автоматические установки для синтеза. См., например, Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 105:6442 (1983); Merrifield, Science 232:341-347 (1986); Barany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds, Academic Press, New York, 1-284; Barany et al., Int. J. Pep. Protein Res., 30:705739 (1987); и патент США № 5424398, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Могут быть синтезированы домены MRD с ковалентно присоединенными молекулами, не являющимися аминокислотами, но способствующими очищению, идентификации и/или отслеживания домена MRD in vitro или in vivo (например, биотином для реакции с авидином или мечеными авидином молекулами). Ниже, исключительно в качестве примеров, более подробно описаны мишени MRD. Согласно некоторым описанным в настоящем документе вариантам реализации MRD нацелен на интегрин. Роль интегринов, таких как αΎβ3 и αΎβ5, как опухолеассоциированных маркеров была подробно описана. Недавнее исследование 25 перманентных устойчивых клеточных линий человека, полученных из распространенного рака яичника, продемонстрировало, что все линии были положительными по экспрессии

- 25 043040 αγβ5 и многие были положительными по экспрессии αγβ3. Исследования также показали, что αγβ3 и αγβ5 интенсивно экспрессируются в тканях злокачественных опухолей шейки матки человека.

Интегрины также демонстрировали терапевтические эффекты в моделях саркомы Капоши, меланомы и рака молочной железы на животных.

Ряд антагонистов интегринов αvβ3 и αvβ5 находится в клинической разработке. Указанные антагонисты включают циклические RGD-пептиды и синтетические миметики RGD - малые молекулы. Два антагониста интегринов на основе антител в настоящий момент проходят клинические испытания для лечения раковых заболеваний. Первое представляет собой витаксин (VITAXIN®, MEDI-522, Abegrein), гуманизированную форму антитела мыши LM609 против αvβ3 человека. Исследование I фазы по эскалации дозы у пациентов с раковыми заболеваниями продемонстрировали, что VITAXIN® безопасен для применения у человека. Другое антитело, проходящее клинические испытания, представлено CNT095, полностью человеческим антителом, распознающим интегрины αγ. Исследование I фазы антитела CNT095 у пациентов с различными солидными опухолями показало, что оно хорошо переносится. Была также подтверждена в испытаниях I фазы безопасность циленгитида (EMD 121974), пептидного антагониста αγβ3 и αγβ5. Также проводились многочисленные исследования лекарственных средств направленного воздействия и визуализация на основе применения лигандов указанных рецепторов. Указанные доклинические и клинические наблюдения демонстрируют важность направленного воздействия на αγβ3 и αγβ5, и исследования, включавшие применение антител в указанной стратегии, стабильно подтверждали, что направленное воздействие через указанные интегрины безопасно. Также продолжаются клинические испытания антагонистов, нацеленных на α5γβ 1, для лечения метастатической меланомы, почечноклеточной карциномы и немелкоклеточного рака легкого (М200 (волоциксимаб)) и злокачественной глиомы (ATN-161).

Примером доменов MRD согласно настоящему изобретению являются интегрин-связывающие домены MRD, содержащие один или большее количество мотивов с трипептидной последовательностью RGD. Хорошо известны лиганды, содержащие мотив RGD в качестве минимального домена распознавания, из которых могут быть получены MRD согласно настоящему изобретению; их неполный перечень включает (соответствующие целевые интегрины указаны в скобках) фибронектин (α3β1, α5β1, αγβΐ, α11bβ3, αγβ3 и α3β 1) фибриноген (αΜβ2 и α11bβ 1), фактор фон Виллебранда (α11bβ3 и αγβ3) и витронектин (α11bβ3, αγβ3 и αγβ5).

Согласно одному варианту реализации указанные содержащие RGD направленные MRD выбраны из группы, состоящей из:

YCRGDCT (SEQ Ш NO:3); PCRGDCL (SEQ

Ш NO:4); TCRGDCY (SEQ ГО NO:5); и LCRGDCF (SEQ ГО NO:6).

MRD, имитирующий RGD-независимый сайт связывания на рецепторе интегрина и обладающий в отношении связывания мишени специфичностью высокоаффинного лиганда, который распознает выбранный интегрин, также охвачен настоящим изобретением. Также включены домены MRD, которые связываются с рецептором интегрина и нарушают связывание и/или сигнальную активность интегрина. Согласно некоторым вариантам реализации MRD нацелен на ангиогенную молекулу. Ангиогенез критически важен для многих физиологических и патологических процессов. Было показано, что Ang2 действует как проангиогенная молекула. Введения селективных ингибиторов Ang2 достаточно для подавления как опухолевого ангиогенеза, так и ангиогенеза роговицы. Соответственно, ингибирование только Ang2 или ингибирование Ang2 в сочетании с ингибированием других ангиогенных факторов, таких как ФРЭС, может представлять собой эффективную антиангиогенную стратегию для лечения пациентов с солидными опухолями.

Предполагается, что домены MRD, подходящие для настоящего изобретения, включают домены MRD, которые связываются с ангиогенными рецепторами, ангиогенными факторами и/или ангиопоэтином 2 Ang2. Согласно конкретному варианту реализации MRD согласно настоящему изобретению связывает Ang2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный связывающий TIE2 компонент содержит фрагмент ANG2, который связывает TIE2. Согласно конкретным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении связывают TIE2 и содержат аминокислоты 283-449 ANG2 человека, приведенного в референсной последовательности NCBI № NP_001138.1. Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает Ang2 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:136-619 и 620, приведенных в табл. 10. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание Ang2 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 136-619 и 620. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом Ang2, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 136-619 и 620.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD

- 26 043040 содержащее антитело, которое(ый) связывает Ang2 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

DCFWYPNPEWCY (ANG100; SEQ ГО NO:621); KCPLLPDWASCH (ANG99; SEQ ГО

NO:622); TCQDYPFWRYCH (ANG53; SEQ ГО NO:623); DCYF YPNPPHCY (ANG57;

SEQ ID NO:624); PHEECYFYPNPPHCYTMS (ANG318; SEQ ID NO:625);

DCAVYPNPPWCYKMEFGK (ANG202; SEQ ID NO: 626); RPILCPLLPDW ISCHEWL (ANG205; SEQ ID NO:627); и LWDDCYFFPNPPHCYNSP (ANG200; SEQ ID NO:628).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание Ang2 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 621-627 и 628. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом Ang2, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 621-627 и 628.

Согласно одному варианту реализации MRD и/или MRD-содержащее антитело связывает Ang2 и содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

GAQTNFMPMDDLEQRLYEQFILQQGLE (SEQ ГО NO:9) (ANGa); LWDDCYFFP

NPPHCYNSP (SEQ ГО NO:И) (ANGb); LWDDCYSYPNPPHCYNSP (SEQ ID NO: 12) (ANGc); LWDDCYSFPNPPHCYNSP (SEQ ID NO :15) (ANGd);

DCAVYPNPPWCYKME FGK (SEQ ID NO:16) (ANGe); PHEECYFY PNPPHCYTMS (SEQ ID NO: 17) (ANGf); и PHEECYSYPNPPHCYTMS (SEQ ID NO: 18) (ANGg).

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит связывающий ANG-2 пептид, раскрытый в патентах США №7309483, 7205275, 7138370 7063965, 7063840, 7045302, 7008781, 6825008, 6645484, 6627415, 6455035, 6441137, 6433143, 6265564, 6166185, 5879672, 5814464, 5681714, 5650490, 5643755 и 5521073; и опубликованных заявках на патент США № 2007/0225221, 2007/0093419, 2007/0093418, 2007/0072801, 2007/0025993, 2006/0122370, 2005/0186665, 2005/0175617, 2005/0106099, 2005/0100906, 2003/0236193, 2003/0229023, 2003/0166858, 2003/0166857, 2003/0162712, 2003/0109677, 2003/0092891, 2003/0040463, 2002/0173627 и 2002/0039992, и опубликованных международных заявках № WO2006/005361, WO/2006/002854, WO2004/092215, WO/2004/076650,

WO2003/057134, WO/2000/075323, WO2000/065085, WO/1998/018914 или WO1995/021866, содержание каждой из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит MRD, который преимущественно связывает ангиопоэтин 2 (ANG2), а не ANG1 и ANG4. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит MRD, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: ANG100 (SEQ ID NO: 621), ANG156 (SEQ ID NO: 255), ANG318 (SEQ ID NO: 625) и ANG599 (SEQ ID NO: 367). Согласно дополнительному варианту реализации MRDсодержащее антитело содержит MRD, который преимущественно связывает ANG1 и ANG2, а не ANG4. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит MRD, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из: ANG126 (SEQ ID NO: 232), ANG129 (SEQ ID NO: 234), ANG179 (SEQ ID NO: 270), ANG200 (SEQ ID NO: 628), ANG303 (SEQ ID NO: 331) и ANG335 (SEQ ID NO: 332). Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит MRD, который связывает ANG1, ANG2 и ANG4. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит MRD, имеющий последовательность ANG335 (SEQ ID NO: 332). MRD-содержащие антитела, которые конкурируют за связывание ANG1, ANG2 и/или ANG4 с одним или большим количеством из указанных выше доменов MRD и/или MRD-содержащих антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD нацелен на фактор роста эндотелия сосудов (ФРЭС). Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ФРЭС и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 629-691 и 692, приведенных в табл. 11. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ФРЭС с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:629-691 и 692. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ФРЭС, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:629-691 и 692.

- 27 043040 содержащее антитело, которое(ый) связывает ФРЭС и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

ACVKQVPWWLCI (VGF5; SEQ Ш NO:693); TCWKPTPWWLCD (VGF26; SEQ Ш

NO:694); WCNGFPPNYPCY (VGF57; SEQ Ш NO:695); GCVKEAPWWLCV (VGF61;

SEQ Ш NO:696); и WCNGFPANYPCY (VGF50; SEQ ID NO:697).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ФРЭС с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:693-696 и 697. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ФРЭС, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:693-696 и 697. Согласно одному варианту реализации гибрид антитело-MRD содержит MRD с последовательностью ATWLPPP (SEQ ID NO:71), который ингибирует ФРЭСопосредованный ангиогенез. Binetruy-Tournaire et al., EMBO J. 19:1525-1533 (2000). Согласно дополнительным вариантам реализации настоящим изобретением охвачено антитело против ФРЭС, содержащее MRD, нацеленный на ФРЭС. Описание антител против ФРЭС можно найти, например, в источниках: Presta et al., Cancer Research 57:4593-4599 (1997); и Fuh et al., J. Biol. Chem. 281:10 6625 (2006), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. В настоящем изобретении могут также применяться специфические в отношении рИФР-1 домены MRD. Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает рИФР-1 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:698-1149 и 1150, приведенных в табл. 12. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рИФР-1 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: NO: 698-1149 и 1150. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рИФР-1, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: NO: 698-1149 и 1150.

Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рИФР-1 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

LCKEFPELCF (ИФР-252; SEQ ГО NO: 1151); QPWEGYSWLY (IGF71; SEQ ГО NO:1152); RITPSDLCKEFPELCF (IGF550; SEQ ГО NO:1153);

GFHHAYYKY RGQAGQGSATGGSSRITPSDLCKEFP ELCF (ИФР-2044; SEQ ID NO: 1154); LCHGYPWYGPCQGQAGQGSATGGSGSTAS SRITPSDLCKEFPELCF (ИФР-2037: SEQ ID NO: 1155); GSWCDHYPQPVMCLGQAG

QGSATGGSSRITPSDLCKEFPELCF (ИФР-2039 SEQ ID NO:1156); и TFENAL YCLAYGICDKITLI (ИФР-2045; SEQ ID NO: 1157).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рИФР-1 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1151-1156 и 1157. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рИФР-1, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: SEQ ID NO: 1151-1156 и 1157.

Предусматривается также применение в настоящем изобретении специфических в отношении сосудистого хоминг-пептида доменов MRD. В ряде исследований была описана эффективность соединения сосудистого хоминг-пептида с другими белками, подобными ИЛ-12, или с лекарственными средствами для их направленной доставки у живых животных.

Множество других сайтов связывания мишени включены в качестве мишеней гибридов антителоMRD согласно настоящему изобретению, в том числе, например, рецептор ФРФ-1 (рФРФ-1), рецептор ФРФ-2 (рФРФ-2), рЭФР, ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 и рецептор фактора роста гепатоцитов. Домены MRD могут быть направлены на указанные сайты связывания мишени или соответствующие лиганды.

Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ИЛ-6 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:1158-1731 и 1732, приведенных в табл. 13. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ИЛ-6 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, вы

- 28 043040 бранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1158-1731 и 1732. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ИЛ-6, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1158-1731 и 1732.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает ИЛ-6 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

YCPWDPIMMQCA (ILB394; SEQ Ш NO: 1733); LSNSCAW DPLLMNCIDTH (ILB227; SEQ Ш NO: 1734); FNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB915; SEQ IDNO4735);

INNLSPVCYWDPLLMDCI (ILB235; SEQ IDNO:I736); VQY

WEFETWEGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB914; SEQ Ш NO: 1737);

HQADDPFGQWGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB910; SEQ ГО

NO: 1738); PLWEQTKWQYGQAGQGSFNEDCMWDPLLMDCAYSP (ILB916; SEQ

ID NO: 1739); FNEDC MWDPLLMDCAYSPGQGSATGGSAAGGGSMCLTYEEICS (ILB790; SEQ ID NO: 1740); ISMPCH SWEHCLSLL (ILB754; SEQ ID NO: 1741);

GWGRVCDADYCCWWC (ILB753; SEQ ID NO: 1742); EYDWCMWEVK MFEEACWSLS (ILB909; SEQ ID NO: 1743); VLSECFEAYRVVCQALT (ILB913; SEQ ID NO: 1744); MGIRCQTWDHCLSIL (ILB911; SEQ ID NO: 1745); и QRYPCTTWEDCLVVL (ILB912; SEQ ID NO: 1746).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ИЛ-6 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1733-1745 и 1746. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ИЛ-6, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1733-1745 и 1746.

Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с рецептором ИЛ-6 (рИЛ-6). Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает рИЛ-6 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1747-1908 и 1909, приведенных в табл. 14. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующий(ее) за связывание рИЛ-6 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1747-1908 и 1909. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рИЛ-6, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1747-1908 и 1909.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает рИЛ-6 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

DLLYCEWEMVVRECHGTI (ILC111; SEQ ГО NO: 1910); EFVLCELAM

VFRECHGAV (ILC82; SEQ ГО NO: 1911); ELIFCDLEMVFNECHGAI (ILC85; SEQ ГО

NO: 1912); DYILCDLEMVFRECHGVL (ILC289; SEQ ГО NO: 1913);

EFILCELEMVIRECHGTT (ILC92; SEQ ГО NO: 1914); РСЕ EAFAAYLE (ILC110; SEQ

ГО NO: 1915); PCEEAFAAYLEEAYN (ILC134; SEQ ГО NO: 1916);

ACEEAFASYLEENVM (ILC100; SEQ ГО NO: 1917); DCNALFTGDLAW (ILC145;

- 29 043040

SEQ Ш NO:1918); DEEWTCFP TLCSLWSE (ILC51; SEQ ID NO:1919); EEEWTCFPSLCTIWSQ (ILC163; SEQ ID NO: 1920); EEEWTCFPYLCSDWLQ (ILC168; SEQ ID NO: 1921); EEEWTCFPYLCSEWVH (ILC235; SEQ ID NO: 1922); QEEWTCFPYLCSYWAQ (ILC217; SEQ ID NO: 1923); GQDDCWPYYCDELEY (ILC54 SEQ ID NO :1924); SCWTCIPEMVNCEAAH (ILC293; SEQ ID NO :1925); YWAKCDYHEGWHHCELHP (ILC296; SEQ ID NO: 1926); VFWDCWYYGT WIECENTG (ILC295; SEQ ID NO: 1927); GDTPCQEWPYWCLPPY (ILC290; SEQ ID NO: 1928); HLISCEFHEKYVECVEVA (ILC291; SEQ ID NO: 1929); STDYC EVLEIQWVCYRPP (ILC294; SEQ ID NO: 1930); и QIVECWTEMDWHHCVLFF (ILC292 SEQ ID NO: 1931).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рИЛ-6 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO:1910-1930 и 1931. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рИЛ-6, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1910-1930 и 1931.

Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с ИЛ-17а. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ИЛ-17а и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1932-1989 и 1990, приведенной в табл. 15. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ИЛ-17а с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1932-1989 и 1990. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ИЛ-17а, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1932-1989 и 1990.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает ИЛ-17a и содержит последовательность аминокислот

LSLWCWLINDVNCSEPV (ILA72; SEQ Ш

NO: 1991) или NPLWCWMFPADDPC VHPG (ILA20; SEQ Ш NO: 1992).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ИЛ-17а с полипептидом, имеющим последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1991 или SEQ ID NO:1992. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ИЛ-17а, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1991 или SEQ ID NO: 1992. Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с TNFSF15 (TL1A). Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает TL1A и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 19932234 и 2235, приведенных в табл. 16. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание TL1A с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 1993-2234 и 2235. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом TL1A, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1993-2234 и 2235.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает TL1A и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

QDRVCWDFHQKLQFCELSM (TLA525; SEQ ГО NO:2236); YSSVCWDDTRE

ALFYCETTV (TLA27; SEQ ГО NO:2237); EYALCWVEAQEK LEWCKGLN (TLA522;

SEQ ID NO:2238); DYEVCWDVHVDRLVYCDAPM (TLA523; SEQ ID NO:2239);

STEVCWDFIEQKLIWCSTFR (TLA35; SEQ ID NO:2240); QSDVCW NQSHQLLQFCWESN (TLA54; SEQ ID NO:2241); и DYAVCWDPDYG NLVWCNVLS (TLA524; SEQ ID NO:2242).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание TL1A с полипептидом, содержащим по

- 30 043040 следовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: 2236-2241 и 2242. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом TL1A, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2236-2241 и 2242. Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с TNFSF13B (BLyS). Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает BLyS и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

GDMGCWDWLTRTQVKCSLLV (BLY50; SEQ ГО NO:2243); PRGTCWADPLT GQCVQVM (BLY47; SEQ ГО NO:2244); PAGMCFDNLTLQMVQCTSLK (BLY35 SEQ ID NO:2245); GPWACYETPTRQMCVPVF (BLY69 SEQ ID NO:2246); ERKA CYFDPLVK QCLFVR (BLY60; SEQ ID NO:2247); TMPTCFMDPLTHQCWPSV (BLY34; SEQ ID NO:2248); HPGRCYDQLTYEWVTCWHLW (BLY31; SEQ ID NO:2249); RADLCYHEHH NNECFFGM (BLY73; SEQ ID NO:2250); и TGSSC WDILTKQMVPC LT AW (BLY27; SEQ ID NO:2251).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание BLyS с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 2243-2250 и 2251. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом BLyS, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2243-2250 и 2251.

Согласно одному варианту реализации указанный MRD связывается с HER2/3. Согласно еще одному варианту реализации указанный MRD связывает рЭФР. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает рЭФР и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 2252-3090 и 3091, приведенных в табл. 17. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рЭФР с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 2252-3090 и 3091. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рЭФР, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 2252-3090 и 3091.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает рЭФР и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

LTAPCYWTTWGKECLMLR (EGA79; SEQ ГО NO: 3092);

LNDNCYWTTWGRECYLLR (EGA191; SEQ ГО NO:3093); FSDPCYWTTWGR ECFLLP (EGA214; SEQ ГО NO:3094); LPEGCYWTTWGKECLLLP (EGA234; SEQ ГО NO:3095); LPQGCVWTNWGKECYLPL (EGA626; SEQ ID NO:3096); LPEGCW WSQWGKECLLLP (EGA623; SEQ ID NO:3097); LPQECYWAHWGKECYLPP (EGA625; SEQ ID NO:3098); LPEGCWWAPWGKECLLHP (EGA673 SEQ ID NO:3099); LPEDCWWSTWGRECLLPP (EGA990; SEQ ID NO:3100); ADSWCHTL YWQLHHCASWE (EGA349; SEQ ID NO:3101); EESLCHTLYRQLHNCRSLE (EGA406; SEQ ID NO:3102); ADSLCLTEYLELLQCERWE (EGA466; SEQ ID NO:3103); ADSLCQTRHQQLLDCERQE (EGA467; SEQ ID NO:3104); PESWCHTLY WNLQHCLSQE (EGA433; SEQ ID NO:3105); YAEHCWQFPTDWICTLMT (EGA518; SEQ ID NO:3106); YAEHCLMFPGDWICTLLP (EGA771; SEQ ID NO:3107); YASHCSQFPGDWICSLMT (EGA772; SEQ ID NO:3108); YAEHCRQ FPSDWICTLLP (EGA797; SEQ IDNO:3109); YADHCSQFPNDWICTLLS (EGA926; SEQIDNO:3110);

YAEHCSLFPTDWICTLMS (EGA958; SEQ ID NO:3111); и YAEHCSQFPSDWICSLLS (EGA917; SEQ ID NO:3112).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание рЭФР с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 3092-3111 и 3112. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает

- 31 043040

MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом рЭФР, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 3092-3111 и 3112.

Согласно еще одному варианту реализации указанный MRD связывает ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ErbB2 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 3113-3494 и 3495, приведенных в табл. 18. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ErbB2 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 3113-3494 и 3495. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ErbB2, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 3113-3494 и 3495.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает ErbB2 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

SAISCYVYQQHRHCDWDH (EGB417; SEQ Ш NO:3496);

WSGYCEMKDHWAHCGHSE (EGB390; SEQ ГО NO:3497); и WSGYCETPSGWK ACRGNI (EGB858; SEQ ГО NO:3498).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ErbB2 с полипептидом, имеющим последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3496, SEQ ID NO: 3497 или SEQ ID NO: 3498. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ErbB2, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3496, SEQ ID NO: 3497 или SEQ ID NO: 3498.

Согласно еще одному варианту реализации указанный MRD связывает ErbB3. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ErbB3 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 3499-4086 и 4087, приведенных в табл. 19. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ErbB3 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 3499-4086 и 4087. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ErbB3, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 3499-4086 и 4087.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает ErbB3 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

SSETYCPFLNPYWYDQCMSRT (EGC1077; SEQ ГО NO:4088);

SEPYCPFLNPTWKSQCIART (EGC180; SEQ ГО NO:4089); SQVSCP

FQNPIWWSHCMELM (EGC42; SEQ ID N0:4090); GSKPYCPFTNPIWYDECIKRS (EGC593; SEQ ID NO:4091); ATEPYCPFLNPIWKAECLARS (EGC503; SEQ ID NO:4092); KFLMCQVYPSEKWHVCVETL (EGC41 SEQ ID NO:4093); и SKPYC PFTNPIWYDECIKRSGGGSGGGSQ AAAGGS YMHEPHMQVLEIMN (EGC1086; SEQ ID NO:4094).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ErbB3 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4088-4093 и 4094. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ErbB3, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4088-4093 и 4094.

В настоящем изобретении могут также применяться специфические в отношении рецептора инсулиноподобного фактора роста-1 (ErbB4) домены MRD. Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает ErbB4 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ roNO:4095-4123 и 4124, приведенных в табл. 20. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание ErbB4 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоя

- 32 043040 щей из: последовательностей SEQ ID NO: 4095-4123 и 4124. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом ErbB4, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4095-4123 и 4124. Согласно еще одному варианту реализации указанный MRD связывает рецептор суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF) 10В (DR5). Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает DR5 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4125-4319 и 4320, приведенных в табл. 21. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание DR5 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4125-4319 и 4320. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом DR5, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID N0:4125-4319 и 4320.

Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, которое(ый) связывает DR5 и содержит последовательность аминокислот

WDCLGKLGQR QCVKL (DR5218; SEQ Ш

NO:4321) или FPRPCAEEDVIMTCRWRV (DR53; SEQ Ш NO:4322).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание DR5 с полипептидом, имеющим последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4321 или SEQ ID NO: 4322. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом DR5, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4321 или SEQ ID NO: 4322. Как продемонстрировано В настоящем документе увеличение валентности нацеленных на DR5 доменов MRD в MRD-содержащем антителе приводит к соответствующему повышению опосредованной DR-5 клеточной цитотоксичности (см. пример 46).

Соответственно, согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD-содержащее антитело, которое содержит по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 8 или по меньшей мере 10 доменов MRD, которые связывают DR5. Кроме того, как продемонстрировано в настоящем документе, увеличение количества эпитопов при таргетинге мишени, отличной от DR5 (например, ErbB2 и рЭФР) в связывающем DR5 MRD-содержащем антителе коррелирует с повышенной опосредованной DR5 клеточной цитотоксичностью. Соответственно, согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD-содержащее антитело, которое связывает DR5 и по меньшей мере два отдельных эпитопа мишени, отличной от DR5. Более того, как продемонстрировано в настоящем документе, антитело-скаффолд связывающего DR5 MRD-содержащего антитела влияет на уровень опосредованной DR5 клеточной цитотоксичности MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный антитело-комбинирующий сайт связывающего DR5 MRD-содержащего антитела связывает молекулу на поверхности целевой клетки, экспрессирующей DR5. Согласно дополнительному варианту реализации указанный антитело-комбинирующий сайт MRDсодержащего антитела связывает молекулу на поверхности клетки, а домены MRD MRD-содержащего антитела связывают DR5 через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Согласно альтернативным вариантам реализации указанный антителокомбинирующий сайт связывающего DR5 MRD-содержащего антитела не связывается с молекулой на поверхности целевой клетки, которая экспрессирует на поверхности DR5. Согласно дополнительному варианту реализации указанный антитело-комбинирующий сайт MRD-содержащего антитела не связывает молекулу на поверхности целевой клетки, а домены MRD MRD-содержащего антитела связывают DR5 через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более.

Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает DR4 (TNFRSF10A/TRAIL R1). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 8 или по меньшей мере 10 доменов MRD, которые связывают DR4 (TNFRSF10A/(TRAIL R1). Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD-содержащее антитело, которое связывает DR4 и по меньшей мере два отдельных эпитопа мишени, отличной от DR4. Согласно некоторым вариантам реализации указанный антителокомбинирующий сайт связывающего DR4 MRD-содержащего антитела связывает молекулу на поверхности целевой клетки, экспрессирующей DR4. Согласно дополнительному варианту реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывает молекулу на поверхности клетки, а домены MRD MRDсодержащего антитела связывают DR4 через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Согласно альтернативным вариантам реализации указан

- 33 043040 ный антитело-комбинирующий сайт связывающего DR4 MRD-содержащего антитела не связывается с молекулой на поверхности целевой клетки, которая экспрессирует на поверхности DR4. Согласно дополнительному варианту реализации антитело-комбинирующий сайт MRD-содержащего антитела не связывает молекулу на поверхности целевой клетки, а домены MRD MRD-содержащего антитела связывают DR4 через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более.

Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRDсодержащее антитело, которое связывает сигнальную молекулу клеточной поверхности. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере 4, по меньшей мере 6, по меньшей мере 8 или по меньшей мере 10 доменов MRD, которые связывают сигнальную молекулу клеточной поверхности. Согласно конкретным вариантам реализации указанная сигнальная молекула клеточной поверхности выбрана из: с-Met, рЭФР, ErbB2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-InC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2-IIIa, рФРФ-2-IIIb и рФРФ-2-IIIc), рецептора ФРФ-3 (рФРФ-3), α-рецептора тромбоцитарного фактора роста (рТцФР-А), β-рецептора тромбоцитарного фактора роста (рТцФР-В), нетрина, CD28, рецептора 1А суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли (TNFRSF1A, TNFR1, р55, р60), рецептора суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли 1B (TNFRSF1B, TNFR2), TNFRSF 6 (Fas, CD95), TNFRSF 21 или TNFRSF 25, TNFRSF 7 (CD27), TNFRSF 8 (CD30), TNFRSF 11A (RANK), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3) и LRP6. Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD-содержащее антитело, которое связывает сигнальную молекулу клеточной поверхности и по меньшей мере два отдельных эпитопа мишени, отличной от сигнальной молекулы клеточной поверхности. Согласно некоторым вариантам реализации указанный антитело-комбинирующий сайт MRDсодержащего антитела связывает молекулу на поверхности целевой клетки, экспрессирующей сигнальную молекулу клеточной поверхности. Согласно дополнительному варианту реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывает молекулу на поверхности клетки, а домены MRD MRDсодержащего антитела связывает сигнальную молекулу клеточной поверхности через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Согласно альтернативным вариантам реализации указанный антитело-комбинирующий сайт связывающего сигнальную молекулу клеточной поверхности MRD-содержащего антитела не связывается с молекулой на поверхности целевой клетки, которая экспрессирует сигнальную молекулу клеточной поверхности. Согласно дополнительному варианту реализации указанный антитело-комбинирующий сайт MRD-содержащего антитела не связывает молекулу на поверхности целевой клетки, а домены MRD MRD-содержащего антитела связывает сигнальную молекулу клеточной поверхности через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Согласно еще одному варианту реализации MRD связывает CD19. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывает CD19 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

STLTCQVWLEDWYECIEVD (CDA1; SEQ ГО NO:4323); PNWVCWET PWTYECLEIE (CDA16; SEQ ГО NO:4324); VLLH CFGEPQWMECVPYV (CDA26; SEQ ID NO:4325); FSPFCQYFQEFGECHYLS (CDA33; SEQ ID NO:4326); LLLRCM YEPYYWELQCVEVE (CDA48; SEQ ID NO:4327); и YIYTCSFIWDYQEIYCSPEL (CDA53; SEQ ID NO:4328).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание CD19 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4323-4327 и 4328. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, которое(ый) связывается с тем же эпитопом CD19, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4323-4327 и 4328.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD связывается с белком человека. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD, связывается и с белком человека и его ортологом у мыши, крысы, кролика или хомяка.

III. Антитела.

Антитело в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащих антителах), описанных в настоящем документе, может представлять собой любой подходящий антигенсвязывающий иммуноглобулин. Согласно определенным вариантам реализации молекулы MRDсодержащего антитела, описанные в настоящем документе, сохраняют структурные и функциональные характеристики традиционных моноклональных антител. Соответственно, указанные антитела сохраняют связывающие свойства в отношении эпитопов, но также, благоприятным образом, обладают одной или большим числом дополнительных видов связывающей специфичности в отношении мишени. Анти

- 34 043040 тела, которые могут применяться в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащих антителах) включают, не ограничиваясь перечисленными, моноклональные антитела, мультиспецифические антитела, антитела человека, гуманизированные, приматизированные и гибридные антитела. Молекулы иммуноглобулина или антитела согласно настоящему изобретению могут относиться к любому типу (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, и IgY), классу (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подклассу молекул иммуноглобулина. Согласно конкретным вариантам реализации указанные антитела представляют собой IgG1. Согласно другим конкретным вариантам реализации указанные антитела представляют собой IgG3.

Антитела, которые могут применяться в качестве части указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) может быть получены естественным путем или в результате применения рекомбинантной инженерии (например, фагового дисплея, мышей Xenomouse и синтетических методов). Указанные антитела могут содержать модификации, например, для увеличения периода полувыведения или для усиления или ослабления активности антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) и/или комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ). Антитела могут принадлежать любым животным или происходить от любых животных, включая птиц и млекопитающих, или быть получены синтетическим путем. Согласно некоторым вариантам реализации указанные антитела представляют собой антитела человека, мыши, осла, кролика, козы, морской свинки, верблюда, ламы, лошади или курицы. Согласно конкретным вариантам реализации указанный антител представляют собой антитела человека.

Согласно определенным вариантам реализации фрагменты тяжелой цепи одной полипептидной цепи мультимера идентичны фрагментам тяжелой цепи второй полипептидной цепи указанного мультимера. Согласно альтернативным вариантам реализации мономеры, содержащие фрагменты тяжелой цепи согласно настоящему изобретению не идентичны. Например, все мономеры могут содержать разные сайты связывания мишени, образуя, например, биспецифические антитело. Биспецифические бивалентные антитела и способы их получения описаны, например, в патентах США № 5731168, 5807706, 5821333 и опубликованных заявках на патент США № 2003/020734 и 2002/0155537, каждый(ая) из которых полностью включен(а) в настоящий документ посредством ссылки. Биспецифические тетравалентные антитела и способы их получения описаны, например, в международных заявках на патент № WO02/096948 и WO00/44788, содержание которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. См., в целом, международные заявки на патент № WO93/17715, WO92/08802, WO91/00360 и WO92/05793; Tutt et al., J. Immunol. 147:60-69 (1991); патенты США№ 4474893; 4714681; 4925648; 5573920; и 5601819; и Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992).

Фрагменты тяжелой цепи антитела-компонента гибридов MRD-антитело для применения в способах, раскрытых в настоящем документе, могут происходить из разных молекул иммуноглобулина. Например, фрагмент тяжелой цепи полипептида может содержать домен СН1, который происходит из молекулы IgG1, и шарнирную область, которая происходит из молекулы IgG3. Согласно другому примеру фрагмент тяжелой цепи может содержать шарнирную область, происходящую частично из молекулы IgG1 и частично из молекулы IgG3. Согласно другому примеру фрагмент тяжелой цепи может содержать гибридную шарнирную область, происходящую частично из молекулы IgG1 и частично из молекулы IgG4.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные антигенсвязывающие домены антителакомпонента указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащие антител) связываются со своей мишенью с константой диссоциации, или K_d, составляющей менее чем 5х10^-3 М, 10^-3 М, 5х10^-4 М, 10^-4 М, 5х10^-5 М, 10^-5 М, 5х10^-6 М, 10^-6 М, 5х10^-7 М, 10^-7 М, 5х10^-8М, 10^-8 М, 5х10^-9 М, 10^-9 М, 5х10^-10 М, 10^-10 М, 5х10^-11 М, 10^-11 М, 5х10^-12 М, 10^-12 М, 5х10^-13 М, 10^-13 М, 5х10^-14 М, 10^-14 М, 5х10^-15 М или 10^-15 М. Согласно одному варианту реализации антитело-компонент указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5х10^-5 М. Согласно еще одному варианту реализации связывание антигена антителом-компонентом указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеет константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5х10^-8 М. Согласно еще одному варианту реализации связывание антигена антителом-компонентом указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащие антител) имеет константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем менее чем 5х10^-9 М. Согласно еще одному варианту реализации антитело-компонент указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5х10^-10 М. Согласно еще одному варианту реализации антителокомпонент указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5х10^-11 М. Согласно еще одному варианту реализации антитело-компонент указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) имеют константу диссоциации, или Kd, составляющую менее чем 5х10^-12 М. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент

- 35 043040

MRD-содержащего антитела связывает мишень со скоростью диссоциации (koff) составляющей менее 5х10’² с’¹, 10’² с’¹, 5х10’³ с^-1 или 10’³ с^-1. Предпочтительнее, чтобы антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает мишень со скоростью диссоциации (k_off) составляющей менее 5х10’⁴ с^-1, 10’⁴ с^-1, 5х10’⁵ с’¹ или 10’⁵ с^-1, 5х10’⁶ с^-1, 10’⁶ с^-1, 5х10’⁷ с^-1 или 10’⁷ с^-1.

Согласно другим конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает мишень со скоростью связывания (kon), составляющей более 10³ М’^с’¹, 5х10’³ М’¹-с’¹, 10⁴М’^с’¹ или 5х10⁴ М^-1-с^-1. Предпочтительнее, чтобы антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает мишень со скоростью связывания (kon), составляющей более 10⁵ М’¹-с’¹, 5х10⁵ М^-1-с^-1, 10⁶ М^-1-с^-1, или 5х10⁶ М’^с’¹, или 10⁷ М^-1-с^-1.

Стратегии аффинного созревания и шаффлинга цепей (например, шаффлинга генов, шаффлинга мотивов, шаффлинга экзонов и/или шаффлинга кодонов (в совокупности называемые шаффлингом ДНК) известны в данной области техники и могут применяться для обеспечения высокой аффинности и/или для изменения активности (например, АЗКЦ и КЗЦ) мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител)). См., например, источники: патенты США № 5605793, 5811238, 5830721, 5834252 и 5837458; и Patten et al., Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-733 (1997), Harayama, Trends Biotechnol. 16(2):76-82 (1998), Hansson et al., J. Mol. Biol. 287:265-276 (1999) и Lorenzo and Blasco, Biotechniques 24(2):308-313 (1998); каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Благоприятным образом, стратегии аффинного созревания и стратегии шаффлинга цепей могут рутинно использоваться для получения мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), которые могут также включать варианты и производные, улучшающие функцию и/или нужные фармакодинамические свойства антитела.

Соответственно, определенные варианты реализации настоящего изобретения включают гибрид антитело-MRD, в котором по меньшей мере часть одного или большего количества доменов константной области были изменены таким образом, чтобы обеспечивать требуемые биохимические характеристики, такие как пониженные или повышенные эффекторные функции, способность к нековалентной димеризации, повышенная способность к локализации в области опухоли, уменьшенный период полувыведения в сыворотке или увеличенный период полувыведения в сыворотке по сравнению с неизмененным антителом, обладающим приблизительно такой же иммунореактивностью. Изменения доменов константной области могут представлять собой замены, вставки или удаления аминокислот.

Антителозависимая клеточная цитотоксичность, или АЗКЦ относится к форме цитотоксичности, при которой секретируемый Ig, связанный с Fc-рецепторами (FcR), экспрессируемых на определенных цитотоксических клетках (например, естественные клетки киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), позволяет указанным цитотоксическим эффекторным клеткам локализоваться возле несущей антиген целевой клетки и затем убивать целевую клетку цитотоксинами. Специфические высокоаффинные IgGантитела, нацеленные на поверхность целевых клеток, вооружают цитотоксические клетки и необходимы для такого киллинга. Лизис целевой клетки является внеклеточным, требует контакта или плотного сближения цитотоксических клеток и целевых клеток, и не включает комплемент.

Предполагается, что в настоящем документе термин усиливает АЗКЦ (например, в отношении клеток) включает любое измеряемое увеличение лизиса клеток при контакте с вариантом MRDсодержащего антитела, по сравнению с киллингом клеток при контакте с MRD-содержащим антителом, которое не было модифицировано изменяющим АЗКЦ способом, в присутствии эффекторных клеток (например, при отношении целевых клеток к эффекторным клеткам, составляющем 1:50), например, увеличение лизиса клеток по меньшей мере приблизительно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300 или 325%. Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD модифицировано таким образом, чтобы увеличивать антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) (см., например, источники: Bruhns et al., Blood 113:3716-3725 (2009); Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010 (2006); Stavenhagen et al., Cancer Res., 67:8882-8890 (2007); Horton et al., Cancer Res. 68:8049-8057 (2008); Zalevsky et al., Blood 113:3735-3743 (2009); Bruckheimer et al., Neoplasia 11:509-517 (2009); Allan et al., WO2006/020114; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Watkins et al., WO2004/074455, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательности Fc, содержащейся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые усиливают АЗКЦ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-S298A, ЕЗЗЗА, К334А; IgGl-S239D, I332E;

IgGl-S239D, A330L, I332E; IgGl-P247I, A339D или Q; IgGl-D280H, K290S - c S298D или V или без S298D или V; IgGl-F243L, R292P, Y300L; IgGl-F243L, R292P, Y300L, P396L; и IgGl-F243L, R292P, Y300L, V305I, P396L;

нумерация остатков Fc-области соответствует EU-индексу согласно системе Kabat.

Согласно одному варианту реализации вариант белка Fc обладает повышенной АЗКЦ-активностью по сравнению с сопоставляемой молекулой. Согласно конкретному варианту реализации вариант белка

- 36 043040

Fc обладает АЗКЦ-активностью, по меньшей мере в 2 раза, или по меньшей мере в 3 раза, или по меньшей мере в 5 раз или по меньшей мере в 10 раз, или по меньшей мере в 50 раз, или по меньшей мере в 100 раз превышающей АЗКЦ-активность сопоставляемой молекулы. Согласно еще одному конкретному варианту реализации связывание варианта белка Fc с Fc-рецептором Fc-гамма-ПЛ усилено и он обладает повышенной АЗКЦ-активностью по сравнению с сопоставляемой молекулой. Согласно другим вариантам реализации указанный вариант белка Fc и обладает повышенной АЗКЦ-активностью, и имеет увеличенный период полувыведения в сыворотке по сравнению с сопоставляемой молекулой.

Способность любого конкретного варианта белка Fc опосредовать лизис целевой клетки путем АЗКЦ может быть проанализирована с применением известного в данной области техники способа. Например, для оценки АЗКЦ-активности мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) может быть добавлена к целевым клеткам в комбинации с иммунными эффекторными клетками, которые могут активироваться комплексами антиген-антитело, что приводит к цитолизу целевой клетки. Цитолиз детектируют, как правило, по высвобождению метки (например, радиоактивных субстратов, флуоресцентных красителей или природных внутриклеточных белков) из лизированных клеток. Подходящие эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКГЖ) и естественные клетки киллеры (NK). Конкретные примеры анализов АЗКЦ in vitro описаны у Wisecarvere et al., J Immunol Methods 79:277-282 (1985); Bruggemann et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987); Wilkinson et al., J. Immunol. Methods 258:183-191 (2001); Patel et al., J. Immunol. Methods 184:29-38 (1995). Как альтернативный вариант или дополнительно, АЗКЦ-активность указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело) может оцениваться in vivo, например, в модели на животных, например, раскрытых у Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998) и в патенте США № 7662925. Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD был модифицирован таким образом, чтобы уменьшать АЗКЦ (см., например, источники: Idusogie et al., J. Immunol. 166:2571-2575 (2001); Sazinsky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:20167-20172 (2008); Davis et al., J. Rheumatol. 34:2204-2210 (2007); Bolt et al., Eur. J. Immunol. 23:403-411 (1993); Alegre et al., Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al., Cell Immunol. 200:16-26 (2000); Cole et al., Transplantation 68:563-571 (1999); Hutchins et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:11980-11984 (1995); Reddy et al., J. Immunol. 164:19251933 (2000); Int. Appl. публ. № WO1997/11971 и WO2007/106585; опубликованная заявка на патент США 2007/0148167А1; McEarchern et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Kumagai et al., J. Clin. Pharmacol. 47:1489-1497 (2007), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, уменьшающих АЗКЦ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-K326W, E333S; IgG2-E333S; IgGl-N297A; IgGl-L234A, L235A; IgG2-V234A,

G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; последовательность 118260 IgG2 no EU; последовательность IgG4 261-447 no EU; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgGl-C220S, C226S, C229S, P238S; IgGl-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; и IgGl-L234F, L235E, P331S.

Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD модифицирован для увеличения антитело-зависимого клеточного фагоцитоза (АЗКФ); (см., например, источники: Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:40054010 (2006); Stavenhagen et al., Cancer Res., 67:8882-8890 (2007); Richards et al., Mol. Cancer Ther. 7:25172527 (2008); Horton et al., Cancer Res. 68:8049-8057 (2008), Zalevsky et al., Blood 113:3735-3743 (2009); Bruckheimer et al., Neoplasia 11:509-517 (2009); Allan et al., WO2006/020114; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Watkins et al., WO2004/074455, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые увеличивают АЗКФ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-S298A, ЕЗЗЗА, К334А; IgGl-S239D, I332E;

IgGl-S239D, A330L, I332E; IgGl-P247I, A339D или Q; IgGl-D280H, K290S и S298D или V, или без S298D или V; IgGl-F243L, R292P, Y300L; IgGl-F243L, R292P, Y300L, P396L; IgGl-F243L, R292P, Y300L, V305I, P396L; IgGl-G236A, S239D, I332E.

Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD было модифицировано для уменьшения АЗКФ (см., например, источники: Sazinsky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:20167-20172 (2008); Davis et al., J. Rheumatol. 34:2204-2210 (2007); Bolt et al., Eur. J. Immunol. 23:403-411 (1993); Alegre et al., Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al., Cell Immunol. 200:16-20 (2000); Cole et al., Transplantation 68:563-571 (1999); Hutchins et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1198011984 (1995); Reddy et al., J. Immunol. 164:1925-1933 (2000); опубликованные международные заявки №WO 1997/11971 и WO2007/106585; опубликованная заявка на патент США 2007/0148167; McEarchern

- 37 043040 et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Kumagai et al., J. Clin. Pharmacol. 47:1489-1497 (2007), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые уменьшают АЗКЦ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-N297A; IgGl-L234A, L235A;

IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E;

последовательность IgG2 118-260 no EU; последовательность IgG4 261-447 no EU;

IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgGl-C220S, C226S, C229S, P238S; IgGl-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; и IgGl-L234F, L235E, P331S.

Комплементзависимая цитотоксичность и КЗЦ относятся к лизису целевой клетки в присутствии комплемента. Путь активации комплемента запускается связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с молекулой, например, антителом, образующим комплекс с когнатным антигеном. Для оценки активации комплемента может быть выполнен анализ КЗЦ, например, согласно описанию у Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996). Согласно одному варианту реализации вариант белка Fc обладает повышенной КЗЦ-активностью по сравнению с сопоставляемой молекулой. Согласно конкретному варианту реализации вариант белка Fc обладает КЗЦ-активностью, по меньшей мере в 2 раза, или по меньшей мере в 3 раза, или по меньшей мере в 5 раз, или по меньшей мере в 10 раз, или по меньшей мере в 50 раз, или по меньшей мере в 100 раз превышающей активность сопоставляемой молекулы. Согласно другим вариантам реализации указанный вариант белка Fc и обладает усиленной КЗЦ-активностью, и имеет увеличенный период полувыведения в сыворотке по сравнению с сопоставляемой молекулой.

Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибридов антитело-MRD было модифицировано для повышения комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ) (см., например, источники: Idusogie et al., J. Immunol. 166:2571-2575 (2001); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Natsume et al., Cancer Res. 68:3863-3872 (2008), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые увеличивают КЗЦ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих: IgG1-K326A, E333A; и IgG1-K326W, E333S, IgG2-E333S.

Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложены составы, Fc-область в которых содержит не встречающийся в природе остаток аминокислоты в одном или большем количестве положений, выбранных из группы, состоящей из 234, 235, 236, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 296, 297, 298, 299, 313, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 333, и 334 согласно EU-индексу в системе Kabat. Fc-область может, необязательно, содержать не встречающийся в природе остаток аминокислоты в дополнительных и/или альтернативных положениях, известных специалисту в данной области техники (см., например, патенты США № 5624821, 6277375 и 6737056; и международные заявки на патент № WO01/58957, WO02/06919, WO04/016750, WO04/029207, WO04/035752 и WO05/040217).

Согласно конкретным вариантам реализации MRD-содержащие антитела согласно настоящему изобретению содержат вариант Fc, содержащий по меньшей мере один не встречающийся в природе остаток аминокислоты, выбранный из группы, состоящей из

234D, 234Е, 234N, 234Q, 234Т, 234Н, 234Y, 2341, 234V, 234F, 235А,

235D, 235R, 235W, 235Р, 235S, 235N, 235Q, 235Т, 235Н, 235Y, 2351, 235V, 235F,

236Е, 239D, 239Е, 239N, 239Q, 239F, 239Т, 239Н, 239Y, 2401, 240А, 240Т, 240М, 241W, 241 L, 241Y, 241Е, 241 R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244Н, 245А, 247V,

247G, 252Y, 254Т, 256Е, 2621, 262А, 262Т, 262Е, 2631, 263А, 263Т, 263М, 264L, 2641,

264W, 264Т, 264R, 264F, 264М, 264Y, 264Е, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V,

2651, 265L, 265Н, 265Т, 2661, 266А, 266Т, 266М, 267Q, 267L, 269Н, 269Y, 269F, 269R,

296Е, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296Т, 296L, 2961, 296Н, 269G, 297S, 297D, 297Е, 298Н,

2981, 298Т, 298F, 2991, 299L, 299А, 299S, 299V, 200Н, 299F, 299Е, 313F, 325Q, 325L,

3251, 325D, 325Е, 325А, 325Т, 325V, 325Н, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328М,

328D, 328Е, 328N, 328Q, 328F, 3281, 328V, 328Т, 328Н, 328А, 329F, 329Н, 329Q, ЗЗОК,

330G, ЗЗОТ, ЗЗОС, 330L, 330Y, 330V, 3301, 330F, 330R, ЗЗОН, 332D, 332S, 332W, 332F,

332Е, 332N, 332Q, 332Т, 332Н, 332Y и 332А согласно EU-индексу в системе Kabat.

Необязательно Fc-область может содержать дополнительные и/или альтернативные не встречающиеся в природе остатки аминокислот, известные специалисту в данной области техники (см., например,

- 38 043040 патенты США № 5624821, 6277375 и 6737056; и международные заявки на патент № WO01/58957, WO02/06919, WO04/016750, WO04/029207, WO04/035752 и WO05/040217).

Согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция представляет собой гибриды антитело-MRD, где компонент-антитело был модифицирован для усиления ингибирующего связывания с рецептором Fc-гамма-IB (см., например, Chu et al., Mol. Immunol. 45:3926-3933 (2008)). Примером сконструированных модификаций последовательности Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые увеличивают связывание с ингибирующим рецептором Fc-гамма-Ib, является IgG1-S267E, L328F.

Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибридов антитело-MRD были модифицированы таким образом, чтобы уменьшать КЗЦ (см., например, международные заявки на патент № WO1997/11971 и WO2007/106585; опубликованную заявку на патент США №2007/0148167А1; McEarchern et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Hayden-Ledbetter et al.,, Clin. Cancer 15:2739-2746 (2009); Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010 (2006); Bruckheimer et al., Neoplasia 11:509-517 (2009); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Sazinsky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:20167-20172 (2008); каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителекомпоненте гибридов антитело-MRD, которые уменьшают КЗЦ, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих: IgG1-S239D, A330L, I332E; последовательность 118-260 IgG2 по EU; последовательность 261-447IgG4 по EU; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C226S, C229S, Е233Р, L234V, L235A; IgG1-L234F, L235E,P331S; и IgG1-C226S, P230S.

Период полувыведения IgG опосредован его pH-зависимым связыванием с неонатальным рецептором FcRn. Согласно определенным вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD модифицировано таким образом, чтобы усиливать связывание с FcRn (см., например, источники: Petkova et al., Int. Immunol. 18:1759-1769 (2006); Dall'Acqua et al., J. Immunol. 169:5171-5180 (2002); Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46:1750-1755 (2009); Dall'Acqua et al., J. Biol. Chem. 281:23514-23524 (2006), Hinton et al., J. Immunol. 176:346-356 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab. Dispos. 35:86-94 (2007); Datta-Mannan et al., J. Biol. Chem. 282:1709-1717 (2007); межд. опубл. заявка №WO2006/130834; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Yeung et al., J. Immunol. 182:7663-7671 (2009); каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело в гибриде антитело-MRD модифицировано таким образом, чтобы селективно связывать FcRn при pH 6,0, не при pH 7,4. Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, которые увеличивают период полувыведения, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-M252Y, S254T, Т256Е; IgGl-T250Q, M428L;

IgGl-H433K, N434Y; IgGl-N434A; и IgGl-T307A, E380A, N434A.

Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD модифицировано таким образом, чтобы уменьшать связывание с FcRn (см., например, источники, Petkova et al., Int. Immunol. 18:1759-1769 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab. Dispos. 35:86-94 (2007); Datta-Mannan et al., J. Biol. Chem. 282:1709-1717 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); и Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23:1283-1288 (2005), каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Примеры сконструированных модификаций последовательностей Fc, содержащихся в антителе-компоненте гибридов антитело-MRD, уменьшающих период полувыведения, включают одну или большее количество модификаций, соответствующих:

IgGl-M252Y, S254T, Т256Е;

Н433К, N434F, 436Н; IgGl-I253A; и IgGl-P257I, N434H или D376V, N434H.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные гибриды антитело-MRD были получены с использованием гликоинженерии, или Fc-фрагмент MRD-содержащего антитела был мутирован для усиления эффекторной функции с применением техник, известных в данной области техники. Например, инактивация (посредством точечных мутаций или другим способом) домена константной области может уменьшать связывание Fc-рецептором циркулирующего модифицированного антитела, таким образом улучшая локализацию в опухоли. В других случаях модификации константной области, согласующиеся с настоящим изобретением, могут ослаблять связывание комплемента и соответственно уменьшать период полувыведения в сыворотке и неспецифическое связывание конъюгированного цитотоксина. Могут использоваться и другие модификации константной области для модификации дисульфидных связей или олигосахаридных фрагментов, обеспечивающие лучшую локализацию за счет повышенной антигенспецифичности или гибкости антитела. Полученный физиологический профиль, биодоступность и другие биохимические эффекты указанных модификаций, такие как локализация в опухоли, биораспределение и период полувыведения в сыворотке, может легко быть измерено и количественно определено с применением хорошо известных иммунологических техник без излишних экспериментов.

Способы получения антител, содержащих не встречающиеся в природе Fc-области, известны в данной области техники. Например, замены и/или удаления аминокислот могут быть получены путем мута

- 39 043040 генеза, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, сайт-специфического мутагенеза (Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492 (1985)), ПЦР-мутагенеза (Higuchi, PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990)) и кассетного мутагенеза (Wells et al., Gene 34:315-323 (1985)). Сайт-специфический мутагенез может быть выполнен методом ПНР с перекрывающимися праймерами (Higuchi, PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, Stockton Press, New York, pp. 61-70 (1989)). Как вариант, может применяться техника ПНР с перекрывающимися праймерами (Higuchi, там же) для введения любой(ых) требуемой(ых) мутации(ий) в целевую последовательность (стартовая ДНК). В данной области техники известны другие способы, подходящие для получения антител, содержащих не встречающийся в природе Fc-области (см., например, патенты США№ 5624821, 5885573, 5677425, 6165745, 6277375, 5869046, 6121022, 5624821, 5648260, 6528624, 6194551, 6737056, 6821505 и 6277375; опубликованную заявку на патент США №2004/0002587 и опубликованные международные заявки №WO94/29351, WO99/58572, WO00/42072, WO02/060919, WO04/029207, WO04/099249 и WO04/063351).

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), применяемые в соответствии со способами, предложенными в настоящем изобретении, также включают производные, модифицированные, например, путем ковалентного присоединения к антителу молекулы любого типа таким образом, что указанное ковалентное присоединение не предотвращает специфическое связывание антитела с его когнатным эпитопом. Например, но без ограничения, производные антитела включают антитела, которые были модифицированы, например, путем гликозилирования, ацетилирования, пегилирования, фосфорилирования, амидирования или дериватизации известными защитными/блокирующими группами. Любые из многочисленных химических модификаций могут быть выполнены посредством известных техник, включая, но не ограничиваясь перечисленными, ацетилирование, формилирование и т.д. кроме того, указанное производное может содержать одну или большее количество неклассических аминокислот.

В соответствии с некоторыми вариантами реализации антитело-компонент предложенных в настоящем изобретении композиций сконструировано таким образом, чтобы содержать одну или большее количество свободных аминокислот -цистеинов с реакционноспособными в пределах нужного диапазона тиолами (например, от 0,6 до 1,0), при этом указанное антитело со встроенными цистеинами получают путем процесса, включающего замену одного или большего количества остатков аминокислот исходного антитела на цистеин. Согласно некоторым вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты цистеина расположены в легкой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты цистеина расположены в тяжелой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты цистеина расположены и в тяжелой, и в легкой цепях. Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело со встроенными цистеинами содержит свободный цистеин с показателем реакционноспособности тиолов в диапазоне от 0,6 до 1,0 и модификацию последовательности легкой цепи или тяжелой цепи, раскрытую в патенте США № 7855275. Согласно другим вариантам реализации антитело со встроенными цистеинами содержит свободный цистеин с показателем реакционноспособности тиолов в диапазоне от 0,6 до 1,0 и модификацию последовательности легкой цепи или тяжелой цепи, не раскрытую в патенте США № 7855275, содержание которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело сконструировано так, что оно содержит один или несколько свободных селеноцистеинов или других не встречающихся в природе аминокислот, способных к образованию дисульфидных связей. Содержащие их антитела и способы получения таких антител известны в данной области техники. См., например, источники: Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 105(34):12451-12456 (2008); и Hofer et al., Biochem. 48(50): 1204712057 (2009), каждый из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Согласно некоторым вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты селеноцистеина расположены в легкой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты селеноцистеина расположены в тяжелой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации один или большее количество свободных остатков аминокислоты селеноцистеина расположены и в тяжелой, и в легкой цепях.

Согласно определенным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) были модифицированы таким образом, что они не вызывают неблагоприятного иммунного ответа у животного, подлежащего лечению, например, у человека. Согласно одному варианту реализации указанное антитело модифицировано таким образом, чтобы уменьшить его иммуногенность, с применением известных в данной области техник. Например, антитела-компоненты указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) могут быть гуманизированы, приматизированы, деиммунизированы или химеризованы. Указанные типы антител происходят из не принадлежащего человеку антитела, как правило, антитела мыши или примата, которое сохраняет или по существу сохраняет антиген-связывающие свойства исходного антитела, но является менее иммуногенным для человека. Это может достигаться

- 40 043040 различными способами, включая:

(а) перенос не принадлежащих человеку полных вариабельных доменов на константные области человека для получения гибридных антител;

(b) перенос по меньшей мере части одной или большего количества не принадлежащих человеку определяющих комплементарность областей (областей CDR) в каркасные и константные области человека с сохранением или без сохранения ключевых каркасных остатков; или (с) перенос не принадлежащих человеку полных вариабельных доменов, но с маскировкой участками, похожими на принадлежащие человеку участки, путем замены поверхностных остатков.

Такие способы раскрыты в источниках: Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 81:6851-6855 (1984); Morrison et al., Adv. Immunol. 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun. 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun. 31:169-217 (1994), и в патентах США № 5585089, 5693761, 5693762 и 6190370, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Для снижения иммуногенности MRD-содержащего антитела может также применяться деиммунизация. В настоящем документе термин деиммунизация включает изменение MRD-содержащего антитела для модификации T-клеточных эпитопов (см., например, опубликованные международные патентные заявки WO9852976A1 и WO0034317A2, каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки). Например, анализируют последовательности VH и VL исходного антитела и получают карту эпитопов Т-клетки человека для каждой V-области, отражающей расположение эпитопов, соответствующих определяющим комплементарность областям (областям CDR) и других ключевых остатков в пределах указанной последовательности. Индивидуальные T-клеточные эпитопы на карте Tклеточных эпитопов анализируют для идентификации альтернативных вариантов замен аминокислот с незначительным риском изменения активности полученного антитела. Конструируют набор альтернативных вариантов последовательностей VH и VL, содержащих комбинаций замен аминокислот, и затем указанные последовательности включают в набор антител для применения в раскрытых в настоящем документе способах диагностики и лечения, функционирование которых затем тестируют. Как правило, получают и тестируют от 12 до 24 вариантов антител. Затем полные гены тяжелых и легких цепей, содержащих модифицированные V-области и С-области человека, клонируют в экспрессионные векторы, и полученные плазмиды вводят в клеточные линии для получения полного антитела. Затем указанные антитела сравнивают с применением подходящих биохимических и биологических анализов, и идентифицируют оптимальный вариант.

Многие другие антитела-компоненты указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) могут применяться в описанных в настоящем документе способах. Предполагается, что в настоящем изобретении могут применяться каталитические и некаталитическое антитела. Например, антитело 38С2 представляет собой антитело-секретирующую гибридому и было ранее описано в опубликованной международной заявке WO97/21803. 38С2 содержит антителокомбинирующий сайт, который катализирует реакцию альдольного присоединения между алифатическим донором и альдегидным акцептором. В сингенной модели нейробластомы на мышах системное введение пролекарства этопозида и внутриопухолевое инъецирование антитела 38С2 ингибировали рост опухоли.

Мишень антитела MRD-содержащего антитела (т.е. мишень антигенсвязывающего домена) может представлять собой любую молекулу, с которой желательно взаимодействие гибрида MRD-антитело. Например, мишень антитела может представлять собой растворимый фактор, или мишень антитела может представлять собой трансмембранный белок, такой как рецептор клеточной поверхности. Мишень антитела может также представлять собой внеклеточный компонент или внутриклеточный компонент. Согласно определенным вариантам реализации указанная мишень антитела представляет собой фактор, который регулирует пролиферацию клеток, дифференцировку или выживаемость. Согласно другим вариантам реализации указанная мишень антитела представляет собой цитокин. Согласно другому неисключительному варианту реализации указанная мишень антитела представляет собой фактор, который регулирует ангиогенез. Согласно другому неисключительному варианту реализации указанная мишень антитела представляет собой фактор, который регулирует одну или большее количество иммунных ответов, таких как аутоиммунная реакция, воспаление и иммунный ответ против раковых клеток. Согласно другому неисключительному варианту реализации указанная мишень антитела представляет собой фактор, который регулирует клеточную адгезию и/или межклеточные взаимодействия. Согласно определенным неисключительным вариантам реализации мишень антитела представляет собой молекулу клеточной сигнализации. Способность антитела связываться с мишенью и блокировать, повышать или влиять на биологическую активность мишени антитела может быть определена с применением известных в данной области техники анализов, биологических анализов и/или моделей на животных для оценки такой активности, или путем их рутинной модификации.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой связанный с заболеванием антиген. Указанный антиген может представлять собой антиген, характерный для конкретного ракового заболевания, и/или конкретного типа клеток (например,

- 41 043040 гиперпролиферативной клетки), и/или конкретного патогена (например, бактериальной клетки (например, возбудителя туберкулеза, оспы, сибирской язвы)), вируса (например, ВИЧ), паразита (например, малярии, лейшманиоза), грибной инфекции, плесневого гриба, микоплазмы, прионного антигена или антигена, связанного с расстройством иммунной системы.

Согласно некоторым вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой мишень, которая была валидирована в модели на животных или в клинических условиях.

Согласно другим вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой раковый антиген.

Согласно одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой: рТцФР-А, рТцФР-В, ТцФР-А, ТцФР-В, ТцФР-СС, ТцФР-С, ТцФР-D, рФРЭС-1, рецептор ФРЭС-2, рФРЭС-3, ФРЭС-С, ФРЭС-D, нейропилин 2 (NRP2), бетацеллюлин, плацентарный фактор роста (ПФР), RET-белок (rearranged during transfection), тирозинкиназу с иммуноглобулиноподобным и ЭФРподобным доменом 1 (TIE1), TIE2 (TEK), углеводный антиген 125 (СА125), CD3, CD4, CD7, CD10, CD13, CD25, CD32, CD32b, CD44, CD49e (интегрин альфа-5), CD55, CD64, CD90 (THY1), CD133 (проминин 1), CD147, CD166, CD200, альдегиддегидрогеназу 1 (ALDH1), эпителиальный специфический антиген (ESA), белок Sonic hedgehog (SHH), белок Desert hedgehog (DHH), белок Indian hedgehog (IHH), белок patched 1 (РТСН1), белок smoothened (SMO), WNT1, WNT2B, WNT3A, WNT4, WNT4A, WNT5A, WNT5B, WNT7B, WNT8A, WNT10A, WNT10B, WNT16B, связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности белок 5 (LRP5), связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности белок 6 (LRP6), FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Notch, Notch1, Notch3, Notch4, дельтаподобный лиганд (DLL4), Jagged, Jagged 1, Jagged2, Jagged3, TNFSF1 (ФИОбета, LTa), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), TNFRSF7 (CD27), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF13 (APRIL), TNFSF13B (BLYS), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3), ангиопоэтин 1 (ANG1 (ANGPT1)), ANG3 (ANGPTL1), ANG4 (ANGPT4), ИЛ1-альфа, ИЛ-1-бета, рИЛ-11, рИЛ-12, ИЛ-2, рИЛ-2, ИЛ-5, рИЛ-5, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ8, рИЛ-8, ИЛ-10, рИЛ-10, ИЛ-12, рИЛ-12, ИЛ-13, рИЛ-13, ИЛ-15, рИЛ-15, ИЛ-18, рИЛ-18, ИЛ-19, рИЛ-19, рИЛ-21, ИЛ-23, рИЛ-23, фактор ингибирования миграции (MIF), XAG1, XAG3, REGIV, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-3, ФРФ-4, рецептор ФРФ-1 (рФРФ-1), рФРФ-2, рФРФ-3, подобную рецептору активина киназу (ALK), подобную рецептору активина киназу-1 (ALK1), ALK7, молекулу клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM), артемин, Ax1, ТФР-бета, ТФР-бета2, ТФР-бета3, рТФР-бета-1, рИФР-II, ВМР2, ВМР5, ВМР6, BMPRI, GDF3, GDF8, GDF9, N-кадгерин, Е-кадгерин, VE-кадгерин, NCAM, L1CAM (CD171), ганглиозид GM2, ганглиозид GD2, кальцитонин, простатический специфический сопряженный с G-белком рецептор (PSGR), DCC, CDCP1, CXCR2, CXCR7, хемокиновый рецептор 3 с ССмотивом (CCR3), CCR5, CCR7, CCR10, хемокиновый лиганд с СХС-мотивом 1 (CXCL1), CXCL5, CXCL6, CXCL8, CXCL12, хемокиновый лиганд с СС-мотивом 3 (CCL3), CCL4, CCL5, CCL11, клаудин 1, клаудин 2, клаудин 3, клаудин 4, трансмембранный белок с EGF-подобным и двумя фоллистатинподобными доменами (TMEFF2), нейрегулин, макрофагальный колониестимулирующий фактор (МКСФ), колониестимулирующий фактор (КСФ), рецептор колониестимулирующего фактора (CSFR, fins), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (ГКСФ), рецептор гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (рГКСФ), молекулы адгезии базальных клеток (BCAM), HPV, hCG, SR1F, ПСА, FOLR2 (рецептор фолиевой кислоты бета), BRCA1, BRCA2, HLA-DR, АВСС3, АВСВ5, НМ1.24, LFA1, LYNX, S100A8, S100A9, фактор стволовых клеток (SCF), фактор фон Виллебранда, рецептор Lewis Y6, Lewis Y, CA G250 (СА9), интегрин охв3 (CNTO95), интегрин охв5, активин В1-альфа, рецептор лейкотриена В4 (LTB4R), нейротензиновый NT-рецептор (NTR), онкофетальный антиген 5Т4, танасцин С, матриксную металлопротеиназу (ММР), ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, ММР14, ММР26, катепсин G, катепсин Н, катепсин L, сульфатазу 1 (SULF1), сульфатазу 2 (SULF2), MET, UPA, MHC1, MN (CA9), TAG-72, TM4SF1, гепараназу (HPSE), синдекан (SDC1), эфрин В2, эфрин В4 или релаксин 2. Согласно еще одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD137, CD137L, CD152, CD160, CD272, CD273, CD274, CD275 (лиганд индуцируемого костимулятора T-клеток (ICOSL)), CD276, рецептор CD276, CD278 (индуцируемый костимулятор T-клеток (ICOS)), CD279, В7-Н4, рецептор В7Н4, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CCL17, CCL21, CCL22, ИЛ-35, TNFRSF10b (DR5) или гуанилатциклазу 2С (GUC2c, MECIL). MRD, который связывается с одной из перечисленных

- 42 043040 выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Предполагается, что указанные выше и описанные в других местах в настоящем документе мишени антител и MRD являются иллюстративными и неограничивающими.

Согласно еще одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD19, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44v6, TNFSF5 (лиганд CD40), TNFRSF5 (CD40), CD52, CD54 (молекулу межклеточной адгезии (ICAM)), CD74, CD80, CD200 ЕРСАМ (EGP2), нейропилин 1 (NRP1), ТЕМ1, мезотелин, ТРФ-бета 1, рецептор II трансформирующего фактора роста β (рТФР-β, рТФР-бета-II), фосфатидилсерин, рецептор фолиевой кислоты альфа (FOLR1), TNFRSF10A (TRAIL R1 DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2 DR5), CXCR4, CCR4, CCL2, ФРГ, CRYPTO, VLA5, TNFSF9 (лиганд 41BB), TNFRSF9 (41BB), связанный с цитотоксическими Т-лимфоцитами белок 4 (CTLA4), HLA-DR, ИЛ-6, рецептор 4 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNFSF4, лиганд ОХ40), TNFRSF 4 (OX40), MUC1, MUC18, муцин CanAg, ганглиозид GD3, содержащий ЭФР-подобный домен белок 7 (EGFL7), рецептор ТцФР-альфа, ИЛ-21, ИФР-1, ИФР-2, CD117 (cKit), простатический специфический мембранный антиген (ПСМА), SLAMF7, раково-эмбриональный антиген (РЭА), белок активации фибробластов (FAP), интегрин αΎβ3 или интегрин α5β3. Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD70, LAG3 или KIR. MRD, которые связываются с одной из перечисленных выше мишеней, охвачены настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно конкретным вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание мишени с антителом, выбранным из: сиплизумаба к CD2 (например, MEDI-507, MedImmune), блинатумомаба к CD19 CD3 (например, МТ103, Micromet/MedImmune); XMAB®5574 к CD19 (Xencor), SGN-19A к CD19 (Seattle Genetics), ASG-5ME (Agenesys и Seattle Genetics), MEDI-551 к CD19 (MedImmune), эпратузумаба к CD22 (например, hLL2, Immunomedics/UCB), инотузумаба озогамицина к CD22 (Pfizer), иратумумаба к CD30 (например, SGN-30 (Seattle Genetics) и MDX-060 (Medarex)), ХМАВ®2513 к CD30 (Xencor), брентуксимаба ведотина к CD30 (например, SGN-35, Seattle Genetics), гемтузумаба озогамицина к CD33 (например, MYLOTARG®, Pfizer), линтузумаба к CD33 (например, антитела Seattle Genetics), MOR202, CD38 (MorphoSys), даратумумаба к CD38 (например, антитело Genmab), CP870893 к CD40 (Pfizer), дацетузумаба к CD40 (например, SGN40, Seattle Genetics), ANTOVA® к CD40 (Biogen Idec), лукатумумаба к CD40 (например, HCD122, Novartis) ХМАВ®5485 к CD40 (Xencor), тенеликсимаба, руплизумаба к CD40L (например, ANTOVA®), биватузумаба мертанзина к CD44v6, алемтузумаба к CD52 (например, САМРАТН®/МАВСАМРАТН®, Genzyme/Bayer), BI505 к молекуле межклеточной адгезии ICAM1 (Bioinvent), милатузумаба к CD74 (например, антитело от Immunomedics), галиксимаба к CD80 (Biogen Idec), BMS663513 к 4-1ВВ (Bristol-Myers Squibb), антитело Alexion к CD200 (Alexion), едреколомаб к EPCAM (например, МАЬ17-1А, PANOREX® (GlaxoSmithKline), АТ003 к ЕРСАМ (Affitech)), адекатумумаба к ЕРСАМ (например, МТ201, Micromet), опортузумаба монатокса к ЕРСАМ, антитела против NRP1 Genentech, MORAB004 к ТЕМ1 (Morphotek), MORAB009 против мезотелина (Morphotek), лерделимумаба к ТФР-бета-1 (например, CAT-152, Cambridge Antibody Technology), метелимумаба к ТФР-бета-1 (например, CAT-192, Cambridge Antibody Technology), антитела против рТФРβ ImClone, бавитуксимаба к фосфатидилсерину (например, антитела Peregrine (Peregrine Pharmaceuticals)), AT004 к фосфатидилсерину (Affitech), AT005 к фосфатидилсерину (Affitech), MORAB03 к рецептору фолиевой кислоты альфа (Morphotek), фарлетузумаба к раковому рецептору фолиевой кислоты альфа (например, MORAB003, Morphotek), CS1008 к DR4 (Sankyo), мапатумумаба к DR4 (например, HGS-ETR1, Human Genome Sciences), LBY135 к DR5 (Novartis), AMG66 к DR5 (Amgen), апомаба (Apomab) к DR5 (Genentech), PRO95780 (Genentech), лексатумумаба к DR5 (например, HGS-ETR2, Human Genome Sciences), конатумумаба к DR5 (например, AMG655, Amgen), тигатузумаба к DR5 (например, CS-1008), AT009 к CXCR4 (Affitech), AT008 к CCR4 (Affitech), CNTO-888 к CCL2 (Centocor), AMG102 к ФРГ (Amgen), антитела к CRYPTO (Biogen Idec), антитела М200 к VLA5 (Biogen Idec), ипилимумаба к CTLA4 (например, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex), белатасепта к CTLA4 ECD (например, СР-675206, Pfizer), IMMU114 HLA-DR (Immunomedics), аполизумаба к HLA-DR, тоцилизумаба крИЛ-6 (например, ACTEMR®A/ROACTREMRA®, Hoffman-La Roche), OX86 к ОХ40, пемтумомаба к PEM/MUC1 (Theragyn), ABX-MA1 к MUC-18 (Abgenix), кливатузумаба к MUC-18 (например, hPAM4, Immunomedics), кантузумаба мертансина к муцину CanAg, экромексимаба (Ludwig Institute), антитела против EGFL7 от Genentech, AMG820 к CSFR (Amgen), оларатумаба к рецептору ТцФР-альфа (например, антитела Imclone (Imclone)), антитела к ИЛ-21 Zymogenetics (Zymogenetics), MEDI-573 к ИФР-1/ИФР-2 (MedImmune), AMG191 к cKit (Amgen), этарацизумаба (например, MEDI-522, MedImmune) и MLN591 к ПСМА (Millennium Pharmaceuticals), элотузумаба к SLAMF7 (например, HuLuc63, BMS), лабетузумаба к

- 43 043040

РЭА (СЕА-CIDE®, Immunomedics), сибротузумаба к FAP, CNTO95 к интегрину aveS (Centocor), VITAXIN® к интегрину ave3 (MedImmune) и волоксимаба к α5β1 (мишени антитела выделены курсивом). MRD, которые конкурируют за связывание мишени с одним из указанных выше антител, охвачены настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело из MRDсодержащего антитела конкурирует за связывание мишени с антителом, выбранным из: MDX-1342 к CD19 (BMS), SGN-CD19A к CD19 (Seattle Genetics), антитела против CD20, описанного в патенте США № 5500362, офатумумаба к CD20 (например, ARZERRA®, GENMAB), велтузумаба к CD20 (hA20, Takeda и Nycomed), PRO70769 к CD20 (Genentech; см. например, международную заявку № PCT/US2003/040426), AMG780 к Tie2/Ang1 (Amgen), REGN910 к ANG2 (Regeneron) и антитело против CD22, описанное в патенте США № 5789554 (Immunomedics), лумиликсимаба к CD23 (например, IDEC152, Biogen), IDEC-152 к CD23 (Biogen), MDX-1401 к CD30 (BMS), HeFi-1 к CD30 (NCI), даратумумаба к CD38, антитела против CD-40, описанное в опубликованной международной заявке №WO2007124299 (Novartis), IDEC-131 к CD40L (Biogen), MDX-1411 к CD70 (BMS), ADC SGN-75 к CD70 (Seattle Genetics), ADC HuMax-CD74™ к CD74 (Genmab), IDEC-114 к CD80 (Biogen), TRC105 к CD105/эндоглину (Tracon), ABX-CBL к CD747 (Amgen), RG1HuMax-TF™ к тканевому фактору (TF) (Genmab), HuMax-Her2™ к ErbB2 (Genmab), трастузумаба-DM1 к ErbB2-DM1(Genentech), AMG888 к HER3 (Amgen и Daiichi Sankyo), HuMV833 к ФРЭС (Tsukuba Research Lab, см., например, опубликованную международную заявку №WO/2000/034337), IMC-18F1 к рФРЭС-1 (Imclone), IMC-1O11 к рФРЭС(Imclone), DC101 к рецептору ФРЭС-2 (Imclone), KSB-102 к рЭФР (KS Biomedix), mAb-806 крЭФР (Институт Людвига по исследованию рака, Ludwig Institute for Cancer Research), MR1-1 к токсину рЭФРвариант III (IVAX, National Cancer Institute), HuMax-рЭФР к рЭФР (Genmab, см., например, заявку на патент США № 10/172317), IMC-11F8 к рЭФР (Imclone), CDX-110 к рЭФР-вариант III (AVANT Immunotherapeutics), залумумаба к рЭФР (Genmab), 425, EMD55900 и EMD62000 к рЭФР (Merck KGaA, см., например, патент США №5558864), ICR62 к рЭФР (Institute of Cancer Research, см., например, опубликованные международные заявки №WO95/20045), SC100 к рЭФР (Scancell и ISU Chemical), MOR201 к рФРФ-3 (Morphosys), ARGX-111 к c-Met (arGEN-X), HuMax-cMet™ к cMet (Genmab), GC-1008 к ТФРбета-1 (Genzyme), MDX-070 к ПСМА (BMS), huJ591 к ПСМА (Cornell Research Foundation), muJ591 к ПСМА (Cornell Research Foundation), GC1008 к ТФР-бета (Genzyme), NG-1 к Ep-CAM (Xoma), MOR101 к ICAM-1 (CD54) (Morphosys), MOR102 к ICAM-1 (CD54)(Morphosys), ABX-MA1 к MUC18 (Abgenix), HumaLYM (Intracel), HumaRAD-HN (Intracel), HumaRAD-OV (Intracel), ARGX-110 и ARGX-111 (arGENX), HuMax для лечения лимфомы (Genmab и Amgen), милатузумаба к CD74 (например, IMMU-115, IMMU-110; Immunomedics), HuMax для лечения рака к гепараназе I (Genmab), Hu3S193 к Lewis (у) (Wyeth, Ludwig Institute of Cancer Research), RAV12 к N-связанному углеводному эпитопу (Raven), нимотузумаба (TheraCIM, hR3; YM Biosciences, см., например, патенты США № 5891996 и 6506883), ВЕС2 к GD3 (Imclone), ⁹⁰Y такатузумаба тетраксетана к алъфа-фетопротеину (например, FP-CIDE®, Immunomedics), KRN330 (Kirin), huA33 к A33 (Институт Людвига по исследованию рака), mAb 216 к гликозилированному эпитопу В-клеток (NCI), REGN421 к DLL4 (Regeneron), ADC ASG-5ME к SLC44A4 (AGS-5), ADC ASG-22ME к нектину-4, CDX-1307 (MDX-1307), hCGb (Celldex), белка, ассоциированного с паратиреоидным гормоном (PTH-rP)(UCB), MT293 к расщепленному коллагену (TRC093/D93, Tracon), KW-2871 к GD3 (Kyowa), KIR (1-7F9) к KIR (Novo), A27.15 к рецептору трансферрина (Salk Institute, см., например, опубликованную международную заявку № WO2005/111082) и Е2.3 к рецептору трансферрина (Salk Institute). MRD, которые конкурируют за связывание мишени с одним из указанных выше антител, охвачены настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительным вариантам реализации одно из описанных выше антител представляет собой антитело MRD-содержащего антитела.

Согласно конкретным вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела представляет собой антитело, выбранное из: сиплизумаба к CD2 (например, MEDI-507, MedImmune), блинатумомаба CD19 CD3 (например, МТ103, Micromet/MedImmune); XMAB®5574 к CD19 (Xencor), SGN-19A к CD19 (Seattle Genetics), ASG-5ME (Agenesys и Seattle Genetics), MEDI-551 к CD19 (MedImmune), эпратузумаба CD22 (например, hLL2, Immunomedics/UCB), инотузумаба озогамицина к CD22, иратумумаба к CD30 (например, SGN-30 (Seattle Genetics) и MDX-060 (Medarex)), ХМАВ®2513 к CD30 (Xencor), брентуксимаба ведотина к CD30 (например, SGN-35, Seattle Genetics), гемтузумаба озогамицина к CD33 (например, MYLOTARG®, Pfizer), линтузумаба CD33 (например, антитело от Seattle Genetics), MOR202 к CD38 (MorphoSys), даратумумаба к CD38 (например, антитело Genmab), CP870893 к CD40 (Pfizer), дацетузумаба к CD40 (например, SGN40, Seattle Genetics), ANTOVA® к CD40 (Biogen Idec), лукатумумаба к CD40 (например, HCD122, Novartis) ХМАВ®5485 к CD40 (Xencor), тенеликсимаба, руплизумаба к

- 44 043040

CD40L (например, ANTOVA®), биватузумаба мертанзина CD44v6, алемтузумаба к CD52 (например, САМРАТН®/МАВСАМРАТН®, Genzyme/Bayer), BI505 к ICAM1 (Bioinvent), милатузумаба к CD74 (например, антитело от Immunomedics), галиксимаба к CD80 (Biogen Idec), BMS663513 к 4-1ВВ (BristolMyers Squibb), антитела Alexion к CD200 (Alexion), едреколомаба к ЕРСАМ (например, МАЬ17-1А, PANOREX® (GlaxoSmithKline), AT003 к ЕРСАМ (Affitech)), адекатумумаба к ЕРСАМ (например, МТ201, Micromet), опортузумаба монатокса к ЕРСАМ, антитела против NRP1 от Genentech, MORAB004 к ТЕМ1 (Morphotek), MORAB009 к мезотелину (Morphotek), лерделимумаба к ТФР-бета-1 (например, CAT-152, Cambridge Antibody Technology), метелимумаба к ТФР-бета-1 (например, CAT-192, Cambridge Antibody Technology), антитела против рТФР-β от ImClone, бавитуксимаба к фосфатидилсерину (например, антитела Peregrine (Peregrine Pharmaceuticals)), AT004 к фосфатидилсерину (Affitech), AT005 к фосфатидилсерину (Affitech), MORAB03 к рецептору фолиевой кислоты альфа (Morphotek), фарлетузумаба к раковому рецептору фолиевой кислоты альфа (например, MORAB003, Morphotek), CS1008 к DR4 (Sankyo), мапатумумаба к DR4 (например, HGS-ETR1, Human Genome Sciences), LBY135 kDR5 (Novartis), AMG66 к DR5 (Amgen), апомаба к DR5 (Genentech), PRO95780 (Genentech), лексатумумаба к DR5 (например, HGS-ETR2, Human Genome Sciences), конатумумаба к DR5 (например, AMG655, Amgen), тигатузумаба (например, CS-1008), AT009 к CXCR4 (Affitech), AT008 к CCR4 (Affitech), CNTO-888 к CCL2 (Centocor), AMG102 к ФРГ (Amgen), антитела к CRYPTO (Biogen Idec), антитело М200 к VLA5 (Biogen Idec), ипилимумаба к CTLA4 (например, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex), белатасепта к CTLA4 ECD (например, СР-675,206, Pfizer), IMMU114 к HLA-DR (Immunomedics), аполизумаба к HLA-DR, тоцилизумаба к рИЛ-6 (например, ACTEMR®A/ROACTREMRA®, Hoffman-La Roche), 0X86 к ОХ40, пемтумомаба к PEM/MUC1 (Theragyn), ABX-MA1 к MUC-18 (Abgenix), кантузумаба мертансина к муцину CanAg, экромексимаба (Ludwig Institute), антитела Genentech против EGFL7, AMG820 к CSFR (Amgen), оларатумаба к рецептору ТцФР-алъфа (например, антитело от Imclone (Imclone)), антитела Zymogenetics к ИЛ-21 (Zymogenetics), MEDI-573 к ИФР-1/ИФР-2 (MedImmune), AMG191 к cKit (Amgen), этарацизумаба (например, MEDI-522, MedImmune), MLN591 к ПСМА (Millennium Pharmaceuticals), элотузумаба к SLAMF7 (например, HuLuc63, PDL), лабетузумаба к РЭА (СЕА-CIDE®, Immunomedics), сибротузумаба к FAP, CNTO95 к интегрину αΎβ3 (Centocor), VITAXIN® к интегрину αΎβ3 (MedImmune) и волоксимаба к α5β1 (например, М200, PDL и Biogen Idec).

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой ALK1. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-3446962 (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PF-3446962. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-3446962 с ALK1. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание ALK1 с PF-3446962, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD22. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой инотузумаб (например, инотузумаб озогамицина СМС-544, PF-5208773; Pfizer). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и инотузумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание инотузумаба с CD22. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CD22 с инотузумабом также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CRYPTO. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело к CRYPTO от Biogen, доведенное до I фазы клинических испытаний (Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело к CRYPTO от Biogen. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание антитела к CRYPTO от Biogen с CRYPTO. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CRYPTO с антителом к CRYPTO от Biogen, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой TNFSF5 (лиганд CD40). Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело к CD40L от Biogen, доведенное до I фазы клинических испытаний (Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело к CD40L от Biogen. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание антитела к CD40L от Biogen с CD40L. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CD40L с антителом к CD40L от Biogen, также охвачены настоящим изобретением.

- 45 043040

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD80. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой галиксимаб (Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и галиксимаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание галиксимаба с CD80. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CD80 с галиксимабом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD80 и мишень, выбранную из: CD2, CD3, CD4, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), рФРЭС-1, рФРЭС-2 и ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD80 и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), которые связывают CD80 и также по меньшей мере связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD80. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой галиксимаб. Согласно дополнительному варианту реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывает молекулу на поверхности клетки, а домены MRD MRD-содержащего антитела связывает TNFRSF10B (DR5) через один или большее количество эпитопов с валентностью, составляющей 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой МКСФ. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой PD-360324 (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PD-360324. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PD-360324 с МКСФ. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание МКСФ с PD-360324, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой CD44. Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-3475952 (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PF-3475952. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-3475952 с CD44. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за CD44 связывание с PF-3475952, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой р-кадгерин (CDH3). Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-3 732 010 (Pfizer).

Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PF-3 732 010. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-3 732 010 с р-кадгерином. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание р-кадгерина с PF-3 732 010, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно еще одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой ANG2 (ANGPT2). Согласно одному варианту реализации указанное антитело представляет собой MEDI3617 (MedImmune). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и MEDI3617. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание MEDI3617 с ANG2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание ANG2 с MEDI3617 также охвачены настоящим изобретением.

Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой ANG-2-связывающее антитело, раскрытое в патентах США №7063965, 7063840, 6645484, 6627415, 6455035, 6433143, 6376653, 6166185, 5879672, 5814464, 5650490, 5643755, 5521073; опубликованных заявках на патент США № 2011/0158978 (например, H4L4), 2006/0246071, 2006/0057138, 2006/0024297, 2006/0018909, 2005/0100906, 2003/0166858, 2003/0166857, 2003/0124129, 2003/0109677, 2003/0040463 и 2002/0173627; или опубликованные международные заявки № WO2006/020706, WO2006/045049, WO2006/068953 или WO2003/030833 (содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD,

- 46 043040 которые конкурируют за связывание ANG2 с указанными антителами, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ANG2 и дополнительно связывает мишень, выбранную из:

ФРЭС (т.е. ФРЭС-А),

ФРЭС-В, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, ρΦΡΦ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, ФНО, рФРФ-3, эфрина А-1 (EFNal), эфрина А-2 (EFNa2), ANG1, ANG2, ИЛ-1, ИЛ-бета, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, тромбоцитарного фактора роста альфа (ТрФР-А), ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4,

Тирозиновой протеинфосфатазы С рецепторного типа (PTPRC), TIE2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС3, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αΎββ, ТФР-бета, матриксной металлопротеиназы 2 (ММР2), ММР7, ММР9, ММР12, урокиназного активатора плазминогена (PLAU), молекулы адгезии сосудистого эндотелия 1 (VCAM1), рТцФР-А и рТцФР-В. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ANG2 и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой MEDI3617, AMG780 или REGN910. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой H4L4.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ANG2 и ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ANG2 и ИЛ-6. Согласно другим вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ANG2 и ИЛ-1. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRDсодержащее антитело связывает ANG2, ИЛ-6 и ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает ANG2, ИЛ-1 и ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ANG2, ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ANG2 и ФНО, и антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой адалимумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело конкурирует с адалимумабом за связывание с ФНО.

Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ANG2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой связывающее ANG2 антитело, выбранное из SAITAng-2-1, SAITAng-2-2, SAITAng-2-3, SAITAng-2-4 или другого антитела, раскрытого в опубликованной международной заявке WO2009/142460. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело и/или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание ANG2 с одним или большим количеством указанных антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает TIE2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой связывающее TIE2 антитело, раскрытое в патентах США № 6365154 и 6376653; опубликованных заявках на патент США № 2007/0025993, 2006/0057138 и 2006/0024297; или опубликованные международные заявки № WO2006/020706, WO2000/018437 и WO2000/018804 (содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело и/или 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание TIE с одним или большим количеством указанных антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно определенным вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой рЭФР (ErbB1), ErbB2, ErbB3, ErbB4, CD20, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1, простатический специфический мембранный антиген, интегрин или cMet.

Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает рЭФР (ErbB1). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой ERBITUX® (IMC-C225). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ERBITUX®. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ERBITUX® с рЭФР. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует димеризацию рЭФР. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой матузумаб (например, EMD 72000, Merck Serono) или панитумумаб (например, VECTIBIX®, Amgen). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и матузумаб или панитумумаб. Согласно еще

- 47 043040 одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание матузумаба или панитумумаба с рЭФР. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело представляет собой ABX-EGF (Immunex) или MEDX-214 (Medarex). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ABX-EGF или MEDX-214. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ABX-EGF или MEDX-214 с рЭФР. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой залутумумаб (Genmab) или нимотузумаб (Biocon). Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и залутумумаб (Genmab) или нимотузумаб (Biocon). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание залутумумаба (Genmab) или нимотузумаба (Biocon) с рЭФР. Согласно одному варианту реализации MRDсодержащее антитело связывает рЭФР (ErbB1) и мишень, выбранную из: ФРГ, CD64, CDCP1, RON, cMET, ErbB2, ErbB3, рИФР-1, плацентарного фактора роста (ПФР), молекулы RGMa, рецептора ТцФРальфа, (рТцФР-В), рецептора ФРЭС-1, рецептора ФРЭС-2, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), ИФР1,2, ИФР-2, CD3, CD4, NKG2D и столбнячного анатоксина. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащие антитела) связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рЭФР. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой матузумаб, панитумумаб, MEDX-214 или ABX-EGF. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой нимотузумаб (Biocon) или залутумумаб. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой эрбитукс (Erbitux®).

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ErbB1 и дополнительно связывает ErbB3. Согласно некоторым вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB1 и MRD MRD-содержащего антитела связывает ErbB3. Согласно конкретному варианту реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой цетуксимаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за ErbB1-связывающих с цетуксимабом. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой ErbB1-связывающее антитело, выбранное из: нимотузумаба (Biocon), матузумаба (Merck KGaA), панитумумаба (Amgen), залутумумаба (Genmab), MEDX-214 и ABX-EGF. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB1 с антителом, выбранным из: нимотузумаба, матузумаба, панитумумаба и залутумумаба. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB3 и MRD MRDсодержащего антитела связывает ErbB1 Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой связывающее ErbB3 антитело, выбранное из ММ121 (Merrimack), 8B8 (Genentech), AV203 (Aveo) и AMG888 (Amgen). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB3 с антителом, выбранным из ММ121, 8В8, AV203 и AMG888.

Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело специфически связывает ErbB2 (Her2). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой трастузумаб (например, Герцептин®, Genentech/Roche). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и трастузумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание трастузумаба с ErbB2. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 из перечисленных выше антител. Согласно другим вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывается с ErbB2. Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое специфически связывается с тем же эпитопом, что и антитело против ErbB2 трастузумаб (например, Герцептин®, Genentech). Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание ErbB2 антителом против ErbB2 трастузумабом. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело трастузумаб против ErbB2. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует димеризацию HER2. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует гетеродимеризацию HER2 с HER3 (ErbB3). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой пертузумаб (например,

- 48 043040

OMNITARG® и phrMab2C4, Genentech). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и пертузумаб. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание ErbB2 пертузумабом. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой трастузумаб и 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD в MRD-содержащем антителе конкурентно ингибируют связывание ErbB2 пертузумабом.

Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой связывающее ErbB2 антитело, выбранное из группы: MDX-210 (Medarex), tgDCC-E1A (Targeted Genetics), MGAH22 (MacroGenics) и пертузумаб (OMNITARG™, 2C4; Genentech). MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, или 4 из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 из указанных выше антител. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает ErbB2 и дополнительно связывает ErbB3. Согласно некоторым вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB2 и MRD MRDсодержащего антитела связывает ErbB3. Согласно конкретному варианту реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой трастузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRDсодержащем антителе представляет собой связывающее ErbB2 антитело, выбранное из: MDX-210 (Medarex), tgDCC-E1A (Targeted Genetics), MGAH22 (MacroGenics) и пертузумаба (OMNITARG™). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с антителом, выбранным из: MDX-210, tgDCC-E1A, MGAH22 и пертузумаба. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает ErbB3 и MRD MRD-содержащего антитела связывает ErbB2.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе содержит области CDR антитела трастузумаб против ErbB2. Последовательности CDR, VH и VL трастузумаба приведены в табл. 1.

Таблица 1

CDR	Последовательность
VL-CDR1	RASQDVNTAVAW (SEQ ID NO:59)
VL-CDR2	SASFLYS (SEQ ID NO:60)
VL-CDR3	OOHYTTPPT (SEQ ID NO:61)
VH-CDR1	GRNIKDTYIH(SEQ ID NO:62)
VH-CDR2	RIYPTNGYTRYADSVKG(SEQ ID NO:63)
VH-CDR3	WGGDGFYAMDY(SEQ ID NO:64)
VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPK LLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYT TPPTFGQGTKVEIKRT (SEQ ID NO:65)
VH	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGL EWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAED TAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:66)

Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело специфически связывает ErbB3 (Her3). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой ММ121 (Merrimack Pharmaceuticals) или AMG888 (Amgen). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ММ121 или AMG888. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ММ121 или AMG888 с ErbB3. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой AV-203 (AVEO). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и AV-203. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует свя

- 49 043040 зывание AV-203. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1 или обоими указанными выше антителами, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело специфически связывает ФРЭС (ФРЭС-А). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой бевацизумаб (например, Авастин®, Genentech/Roche). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и бевацизумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание бевацизумаба с ФРЭС-А. Согласно другому варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело представляет собой АТ001 (Affitech). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и AT001. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание АТ001 с ФРЭС-А. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с одним или обоими указанными выше антителами, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе содержит области CDR антитела бевацизумаб против ФРЭС. Последовательности CDR, VH и VL бевацизумаба приведены в табл. 2.

Таблица 2

CDR	Последовательность
VL-CDR1	SASQDISNYLN (SEQ ID NO :72)
VL-CDR2	FTSSLHS (SEQIDNO:73)
VL-CDR3	QQYSTVPWT (SEQ ID NO:74)
VH-CDR1	GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:75)
VH-CDR2	WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO:76)
VH-CDR3	YPHYYGSSHWYFDV (SEQ ID NO:77)
VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKV LIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTV PWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:78)
VH	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKG LEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAE DTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO :79)

Согласно другим конкретным вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает ФРЭС. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой бевацизумаб (например, Авастин®, Genentech). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и бевацизумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание бевацизумаба с ФРЭС. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой r84 (Peregrine) или 2С3 (Peregrine). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и r84 или 2С3. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ФРЭС антителом r84 или 2С3. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или 3 из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно одному варианту реализации MRDсодержащее антитело связывает ФРЭС и дополнительно связывает ангиогенную мишень, выбранную из:

- 50 043040

ФРЭС-В, ФРФ-1,

ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, TIE2, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, TIE2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина ανβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12,

PLAU, VCAM1, рТцФР-А и рТцФР-В.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФРЭС и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой r85, 2C3 или АТ001. Согласно конкретному варианту реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФРЭС и дополнительно связывает мишень, выбранную из: ИЛ-1-бета, фосфатидилсерина, TNFSF11 (RANKL), TNFSF12 (TWEAK), ИФР-1,2, ИФР-2, ИФР-1, DKK1, SDF2, CXC3CL1 (фракталкина), склеростина и столбнячного анатоксина, и ФРГ. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФРЭС и дополнительно связывает мишень, выбранную из: ErbB3, рЭФР, cMet, ФРЭС, RON (MST1R), DLL4, CDCP1 CD318), NRP1, ROBO4, CD13, CTLA4 (CD152), ICOS (CD278), CD20, CD22, CD30, CD33, CD80 и рИЛ-6. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФРЭС и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой r85, 2C3 или АТ001. Согласно конкретному варианту реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело специфически связывает рФРЭС-1. Согласно одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание афлиберцепта (Regeneron) с рФРЭС-1. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует димеризацию рФРЭС-1. MRD, конкурирующий за связывание мишени с афлиберцептом, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с афлиберцептом, также охвачены настоящим изобретением. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело специфически связывает рецептор ФРЭС-2. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой рамуцирумаб (например, IMC1121B и IMC1C11, ImClone). Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует димеризацию рецептора ФРЭС-2. Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и рамуцирумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание рамуцирумаба с рецептором ФРЭС-2. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание афлиберцепта с рецептором ФРЭС-2. MRD, конкурирующий за связывание мишени с рамуцирумабом, также охвачен настоящим изобретением.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с рамуцирумабом или афлиберцептом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно другим вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывается с рецептором ФРФ (например, рецептором ФРФ-1 (рФРФ-1), рФРФ-2, рФРФ-3 или рФРФ-4). Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое специфически связывается с рецептором ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-IIIC). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой IMC-A1 (Imclone). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и IMC-A1. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание IMC-A1 с рецептором ФРФ-1 (рФРФ-1). Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание FP-1039 (Five Prime) с лигандом ФРФ рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1). Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое специфически связывается с рФРФ-2 (например, рФРФ-2-IIIB и рФРФ-2IIIC). Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое специфически связывается с рФРФ-3. Согласно конкретному варианту реа

- 51 043040 лизации указанное антитело представляет собой IMC-A1 (Imclone). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PRO-001 (ProChon Biotech), R3Mab (Genentech) или 1А6 (Genentech). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PRO-001 (ProChon Biotech), R3Mab (Genentech) или 1А6 (Genentech). MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител или ловушек для лигандов, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1 или большим количеством указанных выше антител или ловушек для лигандов, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает CD20. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой ритуксимаб (например, RITUXAN®/MABTHERA®, Genentech/Roche/Biogen Idec). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ритуксимаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ритуксимаба с CD20. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело представляет собой GA101 (Biogen Idec/Roche/Glycart). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и GA101. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание GA101 с CD20. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-5230895 (SBI-087; Pfizer). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PF-5230895. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-5230895 с CD20. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой окрелизумаб (например, 2Н7; Genentech/Roche/Biogen Idec). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и окрелизумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание окрелизумаба с CD20. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело выбрано из: обинутузумаба (например, GA101; Biogen Idec/Roche/Glycart), офатумумаба (например, ARZERRA® и HuMax-CD20 от Genmab), велтузумаба (например, IMMU-160, Immunomedics), АМЕ-133 (Applied Molecular Evolution), SGN35 (Millennium), TG-20 (GTC Biotherapeutics), афутузумаба (Hoffman-La Roche) и PRO131921 (Genentech). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из: обинутузумаба, офатумумаба, велтузумаба, АМЕ-133, SGN35, TG-20 и PRO131921. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание CD20 антителом, выбранным из: обинутузумаба, офатумумаба, велтузумаба, АМЕ-133, SGN35, TG-20, афутузумаба и PRO131921. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRDсодержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 из указанных выше антител.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD20 и мишень, выбранную из: CD19, CD22, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, CD80, CD138, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рЭФР, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), ФНО, фактора роста нервов (НРФ), ФРЭС, ИФР-1,2, ИФР-2, ИФР-1 и RANKL. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD20 и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD20 и также связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD20. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой антитело, выбранное из: ритуксимаба, GA101, PF-5230895, окрелизумаба, обинутузумаба, офатумумаба, велтузумаба, АМЕ-133, SGN35, TG-20, афутузумаба и PRO131921.

Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело специфически связывает рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело выбрано из: циксутумумаба (например, IMC-A12, Imclone), фигитумумаба (например, СР-751,871, Pfizer), AMG479 (ганитумаб, Amgen/Millennium), BIIB022 (Biogen Idec), SCH 717454 (Schering-Plough) и R1507 (Hoffman La-Roche). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из: циксутумумаба, фигитумумаба, AMG479, BIIB022, SCH 717454 и R1507. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание рИФР-1 антителом, выбранным из: циксутумумаба, фигитумумаба, AMG479, BIIB022, SCH 717454 и R1507. Согласно конкретному варианту реализации указанное антите

- 52 043040 ло представляет собой фигитумумаб. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и фигитумумаб. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание рИФР-1 фигитумумабом. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой BIIB022. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и BIIB022. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание рИФР-1 BIIB022. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе ингибирует димеризацию рИФР-1. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание рИФР-1 с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание рИФР-1 с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 из указанных выше антител.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и мишень, выбранную из: рЭФР, ErbB2, ErbB3, рецептора ТцФР-альфа, β-рецептор тромбоцитарного фактора роста (рТцФР-В), cMet, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), CD20, NKG2D, ФРЭС, простагландина Е2 (PGE2), ИФР-1, ИФР-2 и ИФР-1,2. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и связывают 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела выбран из: циксутумумаба, фигитумумаба, AMG479, BIIB022, SCH 717454 и R1507.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает мишень (например, лиганд, рецептор или вспомогательный белок), связанную с опосредованной эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) транспортной системой (например, опосредованными рецептором инсулина, рецептором трансферрина, рецептором лептина, рецептором липопротеинов и рецептором ИФР транспортными системами) и способную проникать на мозговую сторону ГЭБ. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит 2, 3, 4, 5 или большее количество сайтов связывания (т.е. способна к мультивалентному связыванию) целевого антигена (например, лиганда, рецептора или вспомогательного белка), связанного с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой (например, опосредованными рецептором инсулина, рецептором трансферрина, рецептором лептина, рецептором липопротеинов и рецептором ИФР транспортными системами). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2, 3, 4, 5 или большее количество единственных сайтов связывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, расположенных на мозговой стороне ГЭБ (в спинномозговой жидкости). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело дополнительно связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, расположенных на мозговой стороне ГЭБ (в спинномозговой жидкости). Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связанных с неврологическим заболеванием или расстройством. Согласно конкретным вариантам реализации указанное неврологическое заболевание или расстройство выбрано из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧ-ассоциированной деменции). Соответственно, настоящее изобретение охватывает способы лечения пациента путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧассоциированной деменции). Согласно еще одному варианту реализации указанную мультивалентную и

- 53 043040 моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения рака головного мозга, метастатического рака головного мозга или первичного рака головного мозга. Согласно дополнительным вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения неврологической опухоли, такой как глиома (например, глиобластомы, мультиформной глиобластомы (GBM) и астроцитомы), эпендимома, олигодендроглиома, нейрофиброма, саркома, медуллобластома, примитивная нейроэктодермальная опухоль, аденома гипофиза, нейробластома или рак мозговых оболочек (например, менингиома, менингосаркома и глиоматоз). Согласно конкретным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает способы лечения пациента путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции для лечения нейродегенеративного заболевания.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает опосредованную эндогенным рецептором ГЭБ транспортную систему, выбранную из опосредованных рецептором инсулина, рецептором трансферрина, рецептором лептина, рецептором липопротеинов и рецептором ИФР транспортных систем.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает рецептор трансферрина. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает мишень, выбранную из: рецептора липопротеинов низкой плотности 1 (LRP-1), лиганда LRP-1 или его функционального фрагмента или варианта, который связывает LRP-1, рецептора липопротеинов низкой плотности 2 (LRP2), лиганда LRP-2 или его функционального фрагмента или варианта, который связывает LRP-1, белка трансферрина или его функционального фрагмента или варианта, рецептора инсулина, ТМЕМ30Л, рецептора лептина, рецептора ИФР, лиганда рИФР или его функционального фрагмента или варианта, рецептора дифтерийного токсина, лиганда рецептора дифтерийного токсина или его функционального фрагмента или варианта, транспортера холина, комплекса, который связывает рецептор холина, транспортера аминокислот (например, LAT1/CD98, SLC3A2, и SLC7A5), лиганда транспортера аминокислот или его функционального фрагмента или варианта, рецептора конечных продуктов гликозилирования (RAGE), лиганда RAGE или его функционального фрагмента или варианта, SLC2A1 и лиганда SLC2A1 или его функционального фрагмента или варианта.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает рецептор конечных продуктов гликозилирования (RAGE). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает RAGE и мишень, выбранную из: А-бета, эндотелина 1, ФНО, ИЛ-6, МКСФ, AGE, члена семейства S100, белка группы высокой мобильности бокс-1 (HMGB1), ЛПС и TLR2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают RAGE и также связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает RAGE.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает целевой антиген, связанный с опосредованной эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) транспортной системой, и также связывает целевой антиген, выбранный из альфа-синуклеина, молекулы А семейства RGM (RGM A), NOGO А, рецептора NOGO (NgR), миелина гликопротеина олигодендроцитов (OMGp), миелинассоциированного гликопротеина (MAG), протеогликана хондроитинсульфата (CSPG), ингибирующих рост нейритов семафоринов (например, семафорина ЗА и семафорина 4), эфрина, А-бета, AGE (S100 А, амфотерина), НРФ, растворимого А-В, аггрекана, мидкина, нейрокана, версикана, фосфакана, Te38 и простагландина Е2 (PGE2), ИЛ-1, рИЛ-1, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганда CD40), CD45RB, CD52, CD200, ФРЭС, VLA4, ФНО-альфа, интерферона гамма, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13, CCR2, СВ2, воспалительный белок 1-альфа макрофагов (MIP 1а) и моноцитарного хемоаттрактанта белка-1 (МСР-1). Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит единственный сайт связывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) транспортной системой и дополнительно связывает мишень, выбранную из альфа-синуклеина, RGM A, NOGO A, NgR, OMGp, MAG, CSPG, ингибирующих рост нейритов семафоринов (например, семафорина 3А и семафорина 4), эфрина, А-бета, AGE (S100 А, амфотерин), НРФ, растворимого А-В, аггрекана, мидкина, нейрокана, версикана, фосфакана, Те38, простагландина Е2 (PGE2), ИЛ-1, рИЛ-1, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганда CD40), CD45RB, CD52, CD200, ФРЭС, VLA4, ФНО-альфа, интерферона гамма, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13, CCR2, СВ2, MIP 1а и МСР-1.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят пациенту для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (напри

- 54 043040 мер, ВИЧ-ассоциированной деменции). Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания 2 или более перечисленных выше мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 2 сайта связывания 3 или большего количества мишеней. Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с раковым заболеванием. Согласно дополнительному варианту реализации мишени, связываемые указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с 1, 2, 3, 4, 5 или большим количеством разных сигнальных путей или механизмов действия, связанных с раковым заболеванием. Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает интегрин. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело выбрано из: MEDI-522 к αΎβ3 (VITAXIN®, MedImmune), CNTO 95 к α5β3 (Centocor), JC7U к αΎβ3 и волоциксимаба к α5β1 (например, М200, PDL и Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из: MEDI-522, CNTO 95, JC7U αΎβ3 и волоциксимаба. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание интегрина антителом, выбранным из: MEDI-522, CNTO 95, JC7U и М200. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой натализумаб (например, TSABRI®, Biogen Idec). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и натализумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание интегрина натализумабом. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает cMet. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело выбрано из: MetMab (OA5D5, Genentech), AMG-102 (Amgen) и DN30. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из: MetMab), AMG-102 и DN30. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует сМЕТ связывание антителом, выбранным из: MetMab (OA-5D5), AMG-102 и DN30. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или 3 из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает cMet и антитело, выбранное из: 11Е1, СЕ-355621, LA480 и LMH87. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из: MetMab), AMG-102 и DN30. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует сМЕТ связывание антителом, выбранным из: 11Е1, СЕ-355621, LA480 и LMH87. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3 или 4 указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает сМЕТ и мишень, выбранную из: ErbB2, ErbB3, рЭФР, рИФР-1, NRP1, RON, рТцФР-А, рТцФР-В, ФРЭС, рФРЭС1, рФРЭС-2, ТФР-бета, рецептора -2 ТФР-бета, CD82, CD152, НРФ, ВМР2, ВМР4, ВМР5, ВМР9, ВМР10, BMPR-IA, ALK1, α3β1 интегрин и ФРГ. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают сМЕТ и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает сМЕТ. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой антитело, выбранное из: MetMab, AMG-102 и DN30. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой антитело, выбранное из: 11Е1, СЕ-355621, LA480 и LMH87.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает рецептор стимулирующего макрофаги белка 1 (MST1R, RON). Согласно конкретному варианту реализации MRDсодержащее антитело связывает RON и мишень, выбранную из: рЭФР, ErbB2, ErbB3, рецептора ФРЭС-1, рецептора ФРЭС-2, сМЕТ, CXCR4, ФРЭС, MST, MTSP1, CDCP1, рецептора В-эфрина 2 (ЕРНВ2), НРФ, CXCL12 и ФРГ (SF). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), которые связывают MST1R и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкрет

- 55 043040 ным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает MST1R. Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает ФРГ (SF). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой AMG-102 (Amgen) или SCH 900105 (AV-229, AVEO). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и AMG-102 (Amgen) или SCH 900105 (AV-229, AVEO). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ФРГ AMG102 (Amgen) или SCH 900105 (AV-229, AVEO). MRD, конкурирующий за связывание мишени с AMG102 (Amgen) или SCH 900105 (AV-229, AVEO), также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или 3 из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФРГ и мишень, выбранную из: ErbB2, ErbB3, рЭФР, рИФР-1, NRP1, RON, рТцФР-А, рТцФР-В, ФРЭС, рФРЭС-1, рФРЭС-2, ТФР-бета, рецептора 2 ТФР-бета, CD82, CD152, НРФ, ВМР2, ВМР4, ВМР5, ВМР9, ВМР10, BMPRIA, ALK1, интегрина α3β1, сМЕТ, MST1R (RON), CXCR4, MST, MTSP1, CDCP1, EPHB2, НРФ, CXCL12, NRP1 и фосфатидилсерина. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), которые связывают ФРГ и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФРГ. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой AMG-102 или SCH 900105.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает интегрин α5β1 (VLA5). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой волоциксимаб (например, М200 Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и волоциксимаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание интегрина α5β1 волоциксимабом. MRD, конкурирующий за связывание интегрина α5β1 с волоциксимабом, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание интегрина α5β1 с волоциксимабом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно еще одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой антиген, связанный с аутоиммунным расстройством, воспалительным или другим расстройством иммунной системы или связан с регуляцией иммунного ответа.

Согласно другому варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело повышает эффективность антигенпрезентирующих клеток (например, дендритных клеток). Согласно одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела выбрано из:

CD 19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD28, CD30, CD30L,

TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM), CD70, ICOS, ICOSL (В7-Н2), CTLA4, PD-1, PDL1 (В7-Н1), В7-Н4, В7-НЗ, PDL2 (B7-DC), BTLA, CD46, CD80 (В7-1), CD86 (В7-2), HLA-DR, CD74, PD1, TNFRSF 4 (ОХ40), TNFRSF 9 (41ВВ), TNFSF4 (лиганд ОХ40), TNFSF9 (лиганд 41ВВ), TNFRSF1A (TNFR1, р55, р60), TNFRSF IB (TNFR2), TNFRSF 13В (TACI), TNFRSF 13С (BAFFR), TNFRSF 17 (BCMA), TNFRSF 18 (GITR), MHC-1, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF 14 (HVEM), Fc-raMMa-RIIB и IL4R.

Согласно одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой иммуноингибирующую мишень, выбранную из: ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-1a, L-5, ИЛ-6, рИЛ-6, CD26L, CD28, CD80, FcRn и рецептора IIB Fc-гамма. MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает простагландин E2 (PGE2). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рИЛ-6 и мишень, выбранную из: рЭФР, рИФР-1, рИЛ-6, ФНО, НРФ, ИЛ-1-бета, ИЛ-6, ИЛ-17А, ФРЭС, ИЛ-15, ИЛ18, S1P и А-бета. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают PGE2 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает PGE2.

Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело модулирует иммунный ответ, гомеостаз иммунных клеток или поддержание иммунологической толерантности за счет мультиспецифического и мультивалентного связывания растворимых молекул, молекул клеточной

- 56 043040 поверхности или ассоциированных с внеклеточным матриксом молекул. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает один или большее количество цитокинов или хемокинов, модулирующих иммунный ответ, гомеостаз иммунных клеток или поддержание иммунологической толерантности. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает один или большее количество цитокинов или хемокинов, выбранных из: ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, ИЛ-35, ИФН-гамма, ИФН-альфа, ИФНбета, CCL17, CCL21, CCL22, CXCL9, CXCL10, CXCL11, ТРФ-бета, LIGHT и TL1α. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает хемокин, который модулирует иммунный ответ за счет миграции иммунных клеток. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает хемокин, выбранный из CCL17, CCL22 и CCL21. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает комбинацию растворимых факторов, модулирующих активность Т-лимфоцитов. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает комбинацию растворимых факторов, выбранную из: IL2 и ИФН-гамма; IL2 и ИФН-альфа; IL2 и ТФР-бета-1; ИФН-гамма и ТФР-бета-1; и ИФНальфа и ТФР-бета-1. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает растворимый фактор, который модулирует экспрессию CD25 или внутриклеточную экспрессию FOXP3 в Т-лимфоцитах. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает два, три, четыре, пять или шесть цитокинов или хемокинов, модулирующих иммунный ответ, гомеостаз иммунных клеток или факторы поддержания иммунологической толерантности.

Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество ассоциированных с клеточной поверхностью молекул, модулирующих иммунный ответ, гомеостаз иммунных клеток, или поддержание иммунологической толерантности. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество ассоциированных с клеточной поверхностью молекул, выбранных из: лиганда-1 белка программируемой смерти (PDL1), PDL2, PD1,CD80, CD86, CTLA4, В7-Н2, ICOS, B7-H3, В7-Н4, HVEM, BTLA, МНС класса 1, МНС класса II, KIR, TCR-альфа, TCR-бета, TCR-гамма, LAG3, CD137, C137L, ОХ40, OX40L, CD70, CD27, CD40, CD40L, GAL9, TIM3, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10 и A2aR. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество молекул клеточной поверхности, влияющих на миграцию иммунных клеток. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает молекулу, выбранную из CCR4, CCR7 и CXCR3. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает комбинацию молекул клеточной поверхности, модулирующую функцию Т-лимфоцитов. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает комбинацию растворимых факторов, выбранную из: CD25 и CTLA4; PD1 и CTLA4; В7-Н3 и B7-H3R; В7-Н4 и B7H4R; BTLA и HVEM; KIR и LAG3; A2aR и TIM3; TIM3 и CTLA4; PDL1 и PD1; PDL2 и PD1; и CD80 и CD86. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело действует как антагонист двух или более ингибирующих сигналов, доставляемых в Т-лимфоциты через ингибирующие рецепторы. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело действует как антагонист двух или более ингибирующих сигналов, доставляемых в Т-лимфоциты, включая сигнал, доставляемый через ингибирующий рецептор, выбранный из: PD1, CTLA4, BTLA, HVEM, KIR, LAG3, TIM3 и A2aR. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело усиливает костимулирующие сигналы, доставляемые в Т-лимфоциты через один или большее количество костимулирующих рецепторов. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело усиливает два или большее количество костимулирующих сигналов, доставляемых в Т-лимфоциты, включая сигнал, доставляемый через костимулирующий рецептор, выбранный из: CD28, ICOS, OX40 и CD27. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает молекулу, которая модулирует экспрессию CD25 или FOXP3 в Т-лимфоцитах. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает молекулу, которая модулирует экспрессию CD39 на Тлимфоцитах. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает две, три, четыре, пять или шесть ассоциированных с клеточной поверхностью молекул, модулирующих иммунный ответ, гомеостаз иммунных клеток или поддержание иммунологической толерантности.

Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество молекул клеточной поверхности экспрессируемых на антигенпрезентирующих клетках. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество молекул клеточной поверхности, выбранных из PDL1, PDL2, CD80, CD86, B7RP1, В7-Н3, В7-Н4, HVEM, CD137L, ОХ40, CD70 и GAL3. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает молекулу на антигенпрезентирующих клетках, модулирующую экспрессию CD25 или FOXP3 в Т-лимфоцитах человека. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает комбинацию молекул на поверхности вспомогательной клетки. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD

- 57 043040 содержащее антитело связывает комбинацию молекул, выбранную из:

CD80 и CD86; В7-НЗ и В7-Н4; PDL1 и PDL2; HVEM и В7-Н2;

CD137L и HVEM; GAL9 и OX40L; HVEM, PDL1 и PDL2; CD80, CD86 и HVEM; и В7-НЗ, В7-Н4 и В7-Н2.

MRD-содержащее антитело может связывать одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или большее количество молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на антигенпрезентирующих клетках. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество молекул клеточной поверхности на поверхности антигенпрезентирующих клеток и одну или большее количество молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на поверхности Т-лимфоцитов. MRD-содержащее антитело может связывать комбинацию одной, двух, трех или четырех молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на поверхности антигенпрезентирующих клеток человека, и одной, двух, трех или четырех молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на поверхности Т-лимфоцитов человека. Согласно предпочтительному варианту реализации указанная комбинация молекул, связываемая указанным MRD-содержащим антителом, оказывает общие костимулирующие или ингибирующие эффекты на Т-лимфоциты. Согласно другому предпочтительному варианту реализации указанная комбинация молекул, связываемая указанным MRD-содержащим антителом, стабилизирует межклеточные контакты между иммунными клетками.

Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело действует как антагонист функции регуляторных Т-лимфоцитов (Treg) за счет антагонистического действия на растворимые молекулы и/или рецепторы клеточной поверхности. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество растворимых молекул и/или один или большее количество рецепторов клеточной поверхности, которые согласованным образом усиливают функцию Treg. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает клетки Treg и ингибирует их функцию. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает клетки Treg и усиливает их функцию. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает одну или большее количество молекул, выбранных из:

PDL1,

PDL2, PDl,CD80, CD86, CTLA4, В7-Н2, ICOS, В7-НЗ, В7-Н4, HVEM, BTLA, МНС класса 1, МНС класса II, KIR, TCR-альфа, TCR-бета, TCR-гамма, LAG3, CD137, C137L, 0X40, OX40L, CD70, CD27, CD40, CD40L, GAL9, TIM3, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10 и A2aR.

Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает клетки Treg и действует как антагонист активности растворимого фактора, которые действует на клетки Treg.

Мультивалентные и мультиспецифические связывающие свойства MRD-содержащие антител согласно настоящему изобретению позволяют осуществлять рациональный дизайн терапевтических средств, преимущественно направляющих in vivo локализацию MRD-содержащего антитела в специфические анатомические области, где присутствует мишень антитела и/или MRD-компонентов MRDсодержащих антител. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело локализуется в области воспаления путем связывания антитело-комбинирующего сайта с молекулой, для которой характерна повышенная экспрессия в области воспаления. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный антитело-комбинирующий сайт связывает молекулу, выбранную из: молекулы адгезии, интегрина, madCam, CD44 и CD45. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело дополнительно содержит MRD, который связывается с молекулой клеточной поверхности на Treg, которая усиливает активность Treg. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает костимулирующий рецептор, выбранный из: CD28, ICOS, OX40 и CD27. Согласно конкретным вариантам реализации сродство к связыванию MRDсодержащего антитела в отношении мишени в сайте воспаления in vivo по меньшей мере в 3, по меньшей мере в 10, по меньшей мере в 30 или по меньшей мере в 100 раз выше сродства MRD-содержащего антитела в отношении молекулы клеточной поверхности Treg. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ преимущественной нацеленной локализации in vivo MRDсодержащего антитела в место локализации опухоли. Согласно некоторым вариантам реализации указанный антитело-комбинирующий сайт MRD-содержащего антитела связывает опухолеассоциированный антиген, a MRD MRD-содержащего антитела связывает молекулу клеточной поверхности на Treg, которая подавляет функцию Treg. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает костимулирующий рецептор, выбранный из: PD1, CTLA4, BTLA, HVEM, KIR, LAG3, TIM3 и A2aR. Согласно еще одному варианту реализации указанный антителокомбинирующий сайт MRD-содержащего антитела связывает опухолеассоциированный антиген, a MRD связывает молекулу клеточной поверхности на Treg, которая подавляет функцию Treg. Согласно допол

- 58 043040 нительному варианту реализации указанный антитело-комбинирующий сайт связывает опухолеассоциированный антиген, a MRD MRD-содержащего антитела связывает молекулу клеточной поверхности на эффекторных Т-лимфоцитах, которая усиливает активность эффекторных T-клеток. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает костимулирующий рецептор, выбранный из: CD28, ICOS, OX40 и CD27. Согласно конкретным вариантам реализации сродство к связыванию MRD-содержащего антитела в отношении опухолеассоциированного антигена in vivo меньшей мере в 3, по меньшей мере в 10, по меньшей мере в 30 или по меньшей мере в 100 раз выше сродства MRD-содержащего антитела в отношении молекулы клеточной поверхности Treg. Согласно дополнительному варианту реализации указанный антитело-комбинирующий сайт и/или MRD MRDсодержащего антитела связывает опухолеассоциированный антиген, который доставляет ингибирующий сигнал в Т-лимфоцит. Согласно конкретным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD80 или CD86. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает В7Н1, B7H3 или В7Н4.

Согласно другому варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой иммуностимулирующую мишень (например, агонист ассоциированной с мишенью активации иммунных клеток (такой как TNFRSF9 (41ВВ) или TNFRSF5 (CD40)) или антагонист ингибирующей иммунной контрольной точки (такой как ассоциированный с цитотоксическими Т-лимфоцитами белок 4 (CTLA-4)). Согласно одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой иммуностимулирующую мишень, выбранную из:

CD25, CD28, CTLA-4, PD1, PDL1, В7-Н1, В7-Н4, ИЛ-10,

ТРФ-бета, TNFSF4 (лиганд ОХ40), TNFRSF 4 (ОХ40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFRSF5 (CD40), TNFSF9 (лиганд 41ВВ), TNFRSF 9 (41ВВ), TNFSF14 (LIGHT, Лиганд HVEM), TNFRSF 14 (HVEM), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3), TNFSF18 (лиганд GITR) и TNFRSF 18 (GITR).

Согласно еще одному варианту реализации указанная мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой иммуностимулирующую мишень, выбранную из: CD272 (BTLA), TIM3, GAL9, B7-DC (PDL2) и рецептор PDL2. MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает 2, 3 или все 4 мишени, выбранные из CTLA-4, TNFRSF 18 (GITR), 4-1BB и TNFRSF5 (CD40). Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CTLA-4 и TNFRSF 9 (41BB). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CTLA-4 и TNFRSF 18 (GITR). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает CTLA-4 и TNFRSF5 (CD40). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает TNFRSF5 (CD40) и TNFRSF 9 (41BB). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает TNFRSF 4 (ОХ40) и TNFRSF 9 (41BB). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает PD1 и В7-Н1. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело усиливает иммунный ответ, такой как противоопухолевый ответ иммунной системы или иммунный ответ на вакцину.

Согласно другому варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой цитокин, выбранный из: ИЛ-1-альфа, ИЛ-1-бета, ИЛ-18, TNFSF2 (ФНО-альфа), лимфотоксина альфа (LT-альфа), лимфотоксина бета (LT-бета), TNFSF11 (RANKL), TNFSF13B (BLYS), TNFSF13 (APRIL), ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17А, ИЛ-23, онкостатина М, ТРФ-бета, ВМР2-15, ТцФР (например, ТцФР-А, ТцФР-В, ТцФР-СС, ТцФР-С, ТцФР-D), члена семейства ФРФ (например, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь и ФРФ-19), ФРЭС (например, ФРЭС-А и ФРЭС-В), MIF и интерферона типа I. MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением.

Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 из перечисленных выше мишеней.

Согласно другому варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой цитокин, выбранный из:

- 59 043040

ΦΗΟ, CD25, CD28, CTLA-4,

PD1, PDL1, B7-H1, B7-H4, ИЛ-10, ТРФ-бета, TNFSF4 (лиганд 0X40), TNFRSF 4 (0X40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFRSF5 (CD40), TNFSF9 (лиганд 41BB), TNFRSF9 (41ВВ), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3), TNFSF18 (лиганд GITR), и TNFRSF 18 (GITR).

Настоящим изобретением охвачен MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 из перечисленных выше мишеней.

Согласно одному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой рИЛ-1а, рИЛ-lb, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-7, ИЛ-10, ИЛ-

11, ИЛ-15, ИЛ-16, ИЛ-17, ИЛ-17А, ИЛ-HF, ИЛ-18, ИЛ-19, ИЛ-25, ИЛ-32, ИЛ-33, интерферон-бета, SCF, BCA1/CXCL13, CXCL1, CXCL2, CXCL6, CXCL13, CXCL16, C3AR, C5AR, CXCR1, CXCR2, CXCR3 CCR1, CCR3, CCR4, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, ChemR23, CCL3, CCL5, CCL11, CCL13, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCL22, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, MPL, гликопротеин 130 (GP130), TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TREM1, TREM2, FcRn, Fc-ГаммаRIIB, онкостатин М, лимфотоксин альфа (LTa), субъединицу интегрина бета 7, CD49a (интегрин альфа 1), интегрин α5β3, MIF, ESM1, WIF1, катепсин В, катепсин D, катепсин K, катепсин S,

TNFSF2 (ΦΗΟ-альфа), TNFSF3 (LTb), TNFRSF 3 (LTBR),

TNFSF6 (лиганд Fas), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF8 (лиганд

CD30), TNFRSF8 (CD30), TNFSF9 (лиганд 41BB), TNFRSF 9 (41BB), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFSF14 (LIGHT, Лиганд HVEM), TNFRSF 14 (HVEM), TNFRSF 16 (NGFR), TNFSF18 (лиганд GITR), TNFRSF 18 (GITR), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6), CD14, CD23 CD25, CD28, CD36, CD36L, CD39, CD52, CD91, CD153, CD164, CD200, CD200R, BTLA, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), B7h, ICOS, ICOSL (B7-H2), MHC, CD, B7-H3, B7-H4, B7x, SLAM, KIM-1, SLAMF2, SLAMF3, SLAMF4, SLAMF5, SLAMF6 или SLAMF7. MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются по меньшей мере с 1, 2, 3, 4, 5, 6 из перечисленных выше мишеней. Предполагается, что перечисленные выше мишени антител и MRD и описанные в других разделах настоящего документа являются иллюстративными и неограничивающими.

Согласно еще одному варианту реализации указанная мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой

TNFSF1A (ФНО/ФНО-альфа),

TNFRSF1A (TNFR1, р55, рбО), TNFRSF IB (TNFR2), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70),

TNFRSF 7 (CD27), TNFSF13B (BLYS), TNFSF13 (APRIL), TNFRSF 13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF25 (DR3), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF4 (лиганд OX40), TNFRSF 4 (OX40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFRSF5 (CD40), ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-1, рИЛ-2, ИЛ-4-Ra, ИЛ-5, рИЛ-5, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-14, ИЛ-15, рИЛ-15, ИЛ-17f, рИЛ-17, рИЛ-17Ь, рИЛ-17С, ИЛ-20, ИЛ-21, α-рецептор ИЛ-22 (рИЛ-22-А), ИЛ-23, рИЛ-23, ИЛ-31, тиусный стромальный лимфопоэтин (TSLP), рецептор TSLP (TSLPR), интерферон альфа, интерферон гамма,

- 60 043040

B7RP-1, cKit, ГМКСФ, рГМКСФ,

CTLA-4, CD2, CD3, CD4, CDlla, CD18, CD20, CD22, CD26L, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD80, CD86, CXCR3, CXCR4, CCR2, CCR4, CCR5, CCR8, CCL2, CXCL10, ПФР, PD1, B7-DC (PDL2), B7-H1 (PDL1), интегрин альфа-4, интегрин А4В7, С5, RhD, IgE или Rh. MRD, который связывается с одной из перечисленных выше мишеней, охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством перечисленных выше мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество доменов MRD, которые связываются по меньшей мере с 1, 2, 3, 4, 5, 6 из перечисленных выше мишеней. Согласно конкретным вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание мишени с: SGN-70 к CD70 (Seattle Genetics), SGN-75 к CD70 (Seattle Genetics), белимумабом к BLYS (например, BENLYSTA®, Human Genome Sciences/GlaxoSmithKline), атацисептом к BLYS/APRIL (Merck/Serono), TWEAK (например, Biogen mAb), антителами к TL1A от CoGenesys/Teva (например, huml 1D8, hum25B9 и hum1B4 (опубликованная заявка на патент США № 2009/0280116), моноклональным антителом к ОХ40, моноклональным антителом человека к OX40L (Genentech), рилонацептом к ловушке ИЛ-l (например, ARCALYST®, Regeneron), катумаксомабом к ИЛ-1-бета (например, REMOVAB®, Fresenius Biotech GmbH), Xoma052 к ИЛ-1-бета (Lilly), канакинумабом к ИЛ-l-бета (например, ILARIS® (Novartis) и ACZ885 (Novartis)), AMG108 к рИЛ-l (Amgen), даклизумабом к рИЛ-2а (например, ZENAPAX®, Hoffman-La Roche), базиликсимабом к рИЛ-2а (например, SIMULECT®, Novartis), AMGN-317 к ИЛ-4а (Amgen), пасколизумабом к ИЛ-4 (PDL), меполизумабом к ИЛ-5 (например, BOSATRIA®, GlaxoSmithKline), реслизумабом к ИЛ-5 (например, SCH55700, Ception Therapeutics), бенрализумабом к рИЛ-5 (например, MEDI-563 MedImmune), BIW-8405, рИЛ-5 (BioWa), этанерцептом к рИФР-2-fc (например, ENBREL®, Amgen), силтуксимабом к ИЛ-6 (например, CNTO328, Centocor), CNTO136 к ИЛ-6 (Centocor), CDP-6038 к ИЛ-6 (UCB), AMGN-220 к ИЛ-6 (Amgen), REGN-88 к рИЛ-6 (Regeneron), тоцилизумабом к рИЛ-6 (например, ACTEMRA™/ ROACTEMRA™, Chugai/Roche), MEDI528 к IL9 (MedImmune), бриакинумабом к ИЛ-12/13 (например, АВТ-874, Abbott), устекинумабом к ИЛ12, ИЛ-23 (например, STELARA® и CNTO 1275, Centocor), TNX-65 к ИЛ-13 (Tanox), лебрикизумабом к ИЛ-13 (Genentech), тралокинумабом к ИЛ-13 (например, САТ354, например, Cambridge Antibody Technology), AMG714 к ИЛ-15 (Amgen), CRB-15 к рИЛ-15 (Hoffman La-Roche), AMG827 к рИЛ-17 (Amgen), антителом к рИЛ-17С от Zymogenetics/Merck Serono, антителом к ИЛ-20 от Zymogenetics, антителом к ИЛ-20 от Novo Nordisk, антителом к ИЛ-21 от Novo Nordisk (например, NCT01038674), антителом Zymogenetics к ИЛ-21 (Zymogenetics), антителом к рИЛ-22-А от Zymogenetics, антителом к ИЛ-31 к Zymogenetics, AMG157 к TSLP (Amgen), MEDI-545 к интерферону альфа (MedImmune), MEDI-546 крецептору интерферона альфа (MedImmune), AMG811 к интерферону гамма (Amgen), INNO202 к интерферону гамма (Innogenetics/Advanced Biotherapy), HuZAF к интерферону-гамма (PDL), AMG557 к B7RP1 (Amgen), AMG191 к cKit (Amgen), MOR103 к ГМКСФ (MorphoSys), маврилимумабом к рГМКСФ (например,. САМ-3001, MedImmune), тремелимумабом к CTLA4 (например, СР-675,206, Pfizer), иплимумабом к CTLA4 (например, MDX-010, BMS/Medarex), алефасептом к CD2 (например, AMEVIVE®, Astellas), сиплизумабом к CD2 (например, MEDI-507, MedImmune), отеликсизумабом к CD3 (например, TRX4, Tolerx/GlaxoSmithKline), теплизумабом к CD3 (например, MGA031, MacroGenics/Eli Lilly), визилизумабом к CD3 (например, NUVION®, PDL), муромонабом-CD3 к CD3 (Ortho), ибализумабом (например, ТМВ-355 и TNX-355, TaiMed Biologics), занулимумабом к CD4 (например, HUMAX-CD4®, от Genmab), цеделизумабом к CD4 (Euroasian Chemicals), келиксимабом к CD4, приликсимабом к CD4 (например, сМТ412, Centocor), BT-061 к CD4 (BioTest AG), эфализумабом к CDlla (например, RAPTIVA®/XANELIM™, Genentech/Roche/Merck-Serono), MLN01 к CD18 (Millennium Pharmaceuticals), эпратузумабом к CD22 (например, антителом Amgen) и hLL2; (Immunomedics/UCB)), аселизумабом к CD26L, иратумумабом к CD30 (например, SGN30 (Seattle Genetics) и MDX-060 (Medarex), SGN40 к CD40 (Seattle Genetics), ANTOVA® к лиганду CD40 (Biogen Idec), абатацептом к CD80 и CD86 (например, ORENCIA®, BristolMyers Squibb), СТ-011 к PDl (Cure Tech), GITR (например, TRX518, (Tolerx), АТ010 к CXCR3 (Affitech), MLN1202 к CCR2 (Millennium Pharmaceuticals), AMG-761 к CCR4 (Amgen), HGS004 к CCR5 (Human Genome Sciences), PRO 140 (Progenies), MDX-1338 к CXCR4 (Medarex), CNTO-888 к CCL2 (Centocor), ABN912 к CCL2 (Novartis), MDX-1100 к CXCL10 (Medarex), TB-403 к ПФР (BioInvent), натализумабом к субъединице интегрина алъфа-4 (например, TYSABRI®, Biogen Idec/Elan), ведолизумабом к интегрину А4В7 (например, MLN2, Millennium Pharmaceuticals/Takeda), экулизумабом к фактору комплемента С5 (например, SOLIRIS®, Alexion), пекселизумабом к фактору комплемента С5 (Alexion), омализумабом к IgE (например, XOLAIR®, Genentech/Roche/Novartis), тализумабом (например, TNX-901, Tanox), торализумабом (IDEC 131, IDEC), бертилимумабом к эотаксину (например, iCo-008, iCos Therapeutics Inc.), озролимупабом к RhD (например, Sym001, Symphogen A/S), аторолимумабом или моролимумабом (Rh

- 61 043040 фактор). MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени по меньшей мере с 1, 2, 3, 4, 5 или 6 из указанных выше антител. Согласно конкретным вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела представляет собой: SGN-70 к CD70 (Seattle Genetics), SGN-75 к CD70 (Seattle Genetics), белимумаб к BLYS (например, BENLYSTA®, Human Genome Sciences/GlaxoSmithKline), BIIB023 к TWEAK (Biogen Idec), антитела к TL1A от CoGenesys/Teva (например, 11D8, 25B9 и 1В4 (опубликованная заявка на патент США № 2009/0280116), моноклональное антитело к ОХ40, моноклональное антитело человека к OX40L (Genentech), катумаксомаб к ИЛ-1-бета (например, REMOVAB®, Fresenius Biotech GmbH), канакинумаб к ИЛ-1-бета (например, ILARIS® (Novartis) и ACZ885 (Novartis)), AMG108 к рИЛ-1 (Amgen), даклизумаб к рИЛ-2а (например, ZENAPAX®, Hoffman-La Roche), базиликсимаб к рИЛ-2а (например, SIMULECT®, Novartis), AMGN317 к ИЛ-4а (Amgen), пасколизумаб к ИЛ-4 (PDL), меполизумаб к ИЛ-5 (например, BOSATRIA®, GlaxoSmithKline), реслизумаб к ИЛ-5 (например, SCH55700, Ception Therapeutics), бенрализумаб к рИЛ-5 (например, MEDI-563, MedImmune), BIW-8405, рИЛ-5 (BioWa), силтуксимаб к ИЛ-6 (например, CNTO328, Centocor), CNTO-136 к ИЛ-6 (Centocor), CDP-6038 к ИЛ-6 (UCB), AMGN-220 к ИЛ-6 (Amgen), REGN-88 к рИЛ-6 (Regeneron), тоцилизумаб к рИЛ-6 (например, ACTEMRA™/ROACTEMRA™, Chugai/Roche), MEDI-528 к IL9 (MedImmune), бриакинумаб к ИЛ-12/13 (например, АВТ-874, Abbott), устекинумаб к ИЛ-12, ИЛ-23 (например, CNTO 1275, Centocor), лебрикизумаб к ИЛ-13 (Genentech), TNX-650 к ИЛ-13 (Tanox), САТ354 к ИЛ-13 (Cambridge Antibody Technology), AMG714 к ИЛ-15 (Amgen), CRB-15 к рИЛ-15 (Hoffman La-Roche), AMG827 к рИЛ-17 (Amgen), антитело к рИЛ-17С от Zymogenetics/Merck Serono, антитело к ИЛ-20 от Zymogenetics, антитело к ИЛ-20 от Novo Nordisk, ИЛ-21 антитело от Novo Nordisk, ИЛ-21 антитело Zymogenetics (Zymogenetics), антитело к рИЛ-22-А от Zymogenetics, антитело к ИЛ-31 от Zymogenetics, AMG157 к TSLP (Amgen), MEDI-545 к интерферону альфа (MedImmune), MEDI546 к рецептору интерферона альфа (MedImmune), AMG811 к интерферону гамма (Amgen), INNO202 к интерферону гамма (Innogenetics/Advanced Biotherapy), HuZAF к интерферону-гамма (PDL), AMG557 к B7RP1 (Amgen), AMG191 к cKit (Amgen), MORI03 к ГМКСФ (MorphoSys), CAM-3001 к рГМКСФ (MedImmune), тремелимумаб к CTLA4 (например, СР-675206, Pfizer), иплимумаб к CTLA4 (например, MDX-010, BMS/Medarex), сиплизумаб к CD2 (например, MEDI-507, MedImmune), отеликсизумаб к CD3 (например, TRX4, Tolerx/GlaxoSmithKline), муромонаб-CD3 к CD3 (Ortho), теплизумаб к CD3 (например, MGA031, MacroGenics/Eli Lilly), визилизумаб к CD3 (например, NUVION®, PDL), занулимумаб к CD4 (например, HUMAX-CD4®, от Genmab), цеделизумаб к CD4 (Euroasian Chemicals), келиксимаб к CD4, приликсимаб к CD4 (например, сМТ412, Centocor), BT-061 к CD4 (BioTest AG), ибализумаб (например, ТМВ-355 и TNX-355, TaiMed Biologics), эфализумаб к CD11a. (например, RAPTIVA®/XANELIM™, Genentech/Roche/Merck-Serono), MLN01 к CD18 (Millennium Pharmaceuticals), эпратузумаб к CD22 (например, антитело Amgen) и hLL2 (Immunomedics/UCB)), аселизумаб к CD26L, иратумумаб к CD30 (например, SGN30 (Seattle Genetics) и MDX-060 (Medarex), SGN40 к CD40 (Seattle Genetics), ANTOVA® к лиганду CD40 (Biogen Idec), CT-011 к PD1 (Cure Tech), AT010 к CXCR3 (Affitech), MLN3897 к CCR1 (Millennium Pharmaceuticals), MLN1202 к CCR2 (Millennium Pharmaceuticals), AMG-761 к CCR4 (Amgen), HGS004 к CCR5 (Human Genome Sciences), PRO 140 (Progenies), MDX-1338 к CXCR4 (Medarex), CNTO888 к CCL2 (Centocor), ABN912 к CCL2 (Novartis), MDX-1100 к CXCL10 (Medarex), TB-403 к ПФР (BioInvent), натализумаб к субъединице интегрина алъфа-4 (например, TYSABRI®, Biogen Idec/Elan), ведолизумаб к интегрину А4В7 (например, MLN02, Millennium Pharmaceuticals/Takeda), экулизумаб к фактору комплемента С5 (например, SOLIRIS®, Alexion pharmaceuticals), омализумаб к IgE (например, XOLAIR®, Genentech/Roche/Novartis), тализумаб (например, TNX-901, Tanox), торализумаб (IDEC 131, IDEC), бертилимумаб к эотаксину (например, iCo-008, iCo Therapeutics Inc.), озролимупаб к RhD (например, Sym001, Symphogen A/S), аторолимумаб или моролимумаб (Rh фактор).

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мишень антитела MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание мишени с антителом, выбранным из: окселумаба (например, RG4930; Genmab), AMG139 (Amgen), AMG181 (Amgen), CNTO 148 к ФНО (Medarex), антителом против ФНО, описанным в патенте США № 6258562 (BASF), Humicade® к ФНО (Celltech), HuM29\CD3 к fcрецептору (PDL), Mik-beta-1 к рИЛ-2-бета (CD122) (Hoffman LaRoche), REGN668 к рИЛ-4 (Regeneron), сарилумаба к рИЛ-6 (например, REGN88, Regeneron), HuMax-Inflam к ИЛ-8 (например, HuMax-Inflam™/ MDX-018; Genmab и Medarex), антитела против ИЛ-12 и/или против ИЛ-12р40, раскрытого в патенте США № 6914128 (Abbott), HuMax-IL-15 к ИЛ-15 (Medarex и Genmab), ABX-IL8 к ИЛ-8 (Abgenix), антитела против ИЛ-18 раскрытого в опубл. заявке на патент США № 2005/0147610 (Abbott), hCBE-11 к рецептору лимфотоксина-бета (LTBR) (Biogen), HuMax-TAC к ИЛ-2Rα (CD25) (Genmab, см., например, опубликованную международную заявку №WO2004045512, MLN01 к интегрину бета-2 (Xoma), D3H44 к

- 62 043040 активирующему фактору транскрипции (ATF) (Genentech), MT203 к ГМКСФ (например, намилумаб, Micromet и Takeda), IFX1/CaCP29 (InflaRx GmbH), CAT-213 к эотаксину-1 (Cambridge Antibody Technologies), MDX-018 к ИЛ-8 (например, HuMax-Inflam™; Medarex), REGN846 к рИЛ-4 (Regeneron, см., например, опубл. заявку на патент США № 20100291107), REGN728 (Regeneron), RGN846 (Regeneron), Т218С3 к ИЛ-1А (MABp1; XBiotech), RA-18C3 к ИЛ-1А (XBiotech) и CV-18C3 к ИЛ-1А (XBiotech). MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащие антитела, содержащие по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, или 6 из указанных выше антител.

Согласно дополнительным вариантам реализации одно из описанных выше антител представляет собой антитело из MRD-содержащего антитела.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает CTLA4. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой тремелимумаб (например, СР-675206, Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и тремелимумаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание тремелимумаба с CTLA4. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой ипилимумаб (например, MDX-010, Bristol-Myers Squibb/Medarex). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ипилимумаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ипилимумаба с CTLA4. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CTLA4 с тремелимумабом или ипилимумабом, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает TNFSF12 (TWEAK). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой антитело к TWEAK от Biogen, доведенное до I фазы клинических испытаний. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и антитело к TWEAK от Biogen. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание антитела к TWEAK от Biogen с TWEAK. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание TWEAK с антителом к TWEAK от Biogen, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает рИЛ-2а (CD25). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой даклизумаб (например, ZENAPAX®). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и даклизумаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание даклизумаба с рИЛ-2а (CD25). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание рИЛ-2а (CD25) с даклизумабом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает CD40 (TNFRSF5). Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой СР-870893 к CD40 (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и СР-870893. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание СР-870893 с CD40. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание CD40 с СР-870893, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает интегрин альфа-4. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой натализумаб (например, TYSABRI®; Biogen Idec/Elan). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и натализумаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание натализумаба с интегрином альфа-4. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание интегрина альфа-4 с натализумабом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает ИЛ-22. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-5212367 (ILV-094) (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело свя- 63 043040 зывается с тем же эпитопом, что и PF-5212367. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-5212367 с ИЛ-22. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание ИЛ-22 с PF-5212367, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает MAdCAM. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой PF-547659 (Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и PF-547659. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание PF-547659 с MAdCAM. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание MAdCAM с PF-547659, также охвачены настоящим изобретением. Согласно одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе специфически связывает ФНО. Согласно конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой адалимумаб (например, Хумира®/TRUDEXA®, Abbott). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и адалимумаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание адалимумаба с ФНО. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой ATN-103 (Pfizer). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и ATN-103. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание ATN-103 с ФНО. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой инфликсимаб. Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и инфликсимаб. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание инфликсимаба с ФНО. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело выбрано из: цертолизумаба (например, CIMZIA®, UCB), голимумаба (например, Симпони™, Centocor) и AME-527 (Applied Molecular Evolution). Согласно одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и цертолизумаб, голимумаб или AME527. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует связывание цертолизумаба, голимумаба или AME-527 с ФНО. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2, 3, 4 или 5 указанными выше антителами, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе содержит области CDR антитела адалимумаб против ФНО. Последовательности CDR, VH и VL адалимумаба приведены в табл. 3.

Таблица 3

CDR	Последовательность
VL-CDR1	RASQGIRNYLA (SEQ ID NO:80)
VL-CDR2	AASTLQS (SEQ ID NO:81)
VL-CDR3	QRYNRAPYT (SEQ ID NO:82)
VH-CDR1	DYAMH (SEQ ID NO:83)
VH-CDR2	AITWNSGHIDYADSVEG (SEQ ID NO:84)
VH-CDR3	VSYLSTASSLDY (SEQ ID NO:85)
VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKL LIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNR APYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:86)
VH	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKG LEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAE DTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:87)

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФНО (т.е. ФНОальфа) и дополнительно связывает мишень, выбранную из:

Те38, ИЛ-12,

ИЛ-12р40, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-1-бета, ИЛ-23, MIF, PGE2, PGE4,

ФРЭС, TNFSF11 (RANKL), TNFSF13B (BLYS), GP130, CD22 и CTLA-4.

еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФНО-альфа, ИЛ-6 и TNFSF13B (BLYS). Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает

- 64 043040

ФНО-альфа и TNFSF12 (TWEAK). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает ФНО и TNFSF15 (TL1A). Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФНО и дополнительно связывает мишень, выбранную из НРФ, SOST (склеростина), липопротеина (a) (LPA), ИЛ-17А, DKK, αΎβ3, ИЛ-23р19, ИЛ-2, рИЛ-2А (CD25), ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-12р40, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-21, ИЛ-22; и CD20 связывает ФнО. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФНО-альфа и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФНО-альфа. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой адалимумаб, инфликсимаб, цертолизумаб, голимумаб, CNTO 148, AME-527 или ATN-103.

Согласно другим вариантам реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело MRD-содержащего антитела представляет собой силтуксимаб (CNTO328, Centocor), CNTO-136 (Centocor), CDP-6038 (UCB) или AMGN-220 (Amgen). Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует с силтуксимабом (CNTO328, Centocor), CNTO-136 (Centocor), CDP-6038 (UCB) или AMGN-220 (Amgen) за связывание с ИЛ-6. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-6. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-6 и мишень, выбранную из: ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-1а, ИЛ-5, CD8, TNFRSF5 (CD40), PDL1, рИЛ-6, ИЛ-17А, ФНО, ФРЭС, TNFSF11 (RANKL) и PGE2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ИЛ-6 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ИЛ-6. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой силтуксимаб, CNTO136, CDP-6038 или AMGN-220. Согласно другим вариантам реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой рИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело MRD-содержащего антитела представляет собой REGN-88 (Regeneron) или тоцилизумаб (ACTEMRA™/ROACTEMRA™, Chugai/Roche). Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует с силтуксимабом, REGN-88 (Regeneron) или тоцилизумабом (ACTEMRA™/ROACTEMRA™, Chugai/Roche) за связывание с рИЛ-6. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1 или обоими указанными выше антителами, также охвачены настоящим изобретением. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рИЛ-6. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рИЛ-6 и мишень, выбранную из: CD8, TNFRSF5 (CD40), PDL1, ИЛ-6, ИЛ-ПА, ФИО, ФРЭС, TNFSF11 (RANKL) и PGE2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рИЛ-6 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рИЛ-6. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой REGN-88 или тоцилизумаб.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFSF15 (TL1A). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает TL1A и мишень, выбранную из: ФИО, ИФН-альфа, ИФН-гамма, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ12, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23 и ИЛ-32. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают TL1A и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Указанные композиции находят применение в лечении заболеваний и расстройств, включающих воспалительное заболевание кишечника и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает TL1a.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает интерферон альфа. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает интерферон альфа и TNFSF13B (BLYS). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает интерферон альфа, TNFSF13B (BLYS) и нейтрофильную внеклеточную ловушку (NET). Указанные композиции находят применение в лечении заболеваний и рас

- 65 043040 стройств, включающих аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит и системная красная волчанка. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает интерферон альфа.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении, также находят применение в лечении неврологических заболеваний или расстройств, в том числе нейродегенеративных заболеваний, боли и неврологического повреждения или травмы. Согласно конкретным вариантам реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой: амилоид бета (А-бета), бета-амилоид, фактор комплемента D, протеолипидный белок (PLP), ROBO4, ROBO, глиальный нейротрофический фактор (GDNF), НРФ, белок, содержащий богатый лейцином повтор и Igподобный домен (LINGO) или миостатин. Согласно конкретным вариантам реализации антитело в MRDсодержащем антителе представляет собой гантенеромаб (например, R1450, Hoffman La-Roche), бапинейзумаб к бета-амилоиду 9 (Elan и Pfizer), соланезумаб к бета-амилоиду 9 (Eli Lilly), танезумаб к НРФ (например, RN624, Pfizer), BIIB033 к LINGO (Biogen Idec), PF-3446879 к миостатину (Pfizer) или стамулумаб к миостатину (Wyeth). Согласно конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой фулранумаб (например, AMG-403; Amgen/Millennium. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и гантенеромаб, бапинейзумаб, соларезумаб, танезумаб, антитело к LINGO от Biogen или стамулумаб. Согласно дополнительному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и фулранумаб. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание мишени гантенеромабом, бапинейзумаб, соларезумаб, танезумаб, BIIB033 или стамулумаб. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание НРФ фулранумабом. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой бета-амилоид. Согласно конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой RN1219 (PF-4360365; Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и RN1219. Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание бета-амилоида RN1219. MRD, конкурирующий за связывание бета-амилоида с RN1219, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание бета-амилоида с RN1219, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой НРФ. Согласно конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой танезумаб (например, RN624, Pfizer). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и танезумаб. Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание НРФ танезумабом. MRD, конкурирующий за связывание НРФ с танезумабом, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание НРФ с танезумабом, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает НРФ и мишень, выбранную из:

МТХ, NKG2D, RON, рИЛ-6, ЕгЬВЗ, TNFRSF21 (DR6), CD3, рИФР, DLL4, P1GF, CD20, рЭФР, HER2, CD19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, сМЕТ, NRP1, ФИО, LINGO, ФРГ, ИФР-1, ИФР-1,2, ИФР-2, НРФ, Те38, NogoA, RGM A, MAG, OMGp, NgR, TNFSF12 (TWEAK), PGE2, ИЛ-1-бета, семафорина 3А и семафорина 4. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают НРФ и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает НРФ. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой танезумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела конкурирует за связывание НРФ с танезумабом. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой MEDI-578. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конку

- 66 043040 рирует за связывание НРФ с MEDI-578.

Согласно дополнительному варианту реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой LINGO (например, LINGO1). Согласно конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой BIIB033 (Biogen Idec). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и BIIB033. Согласно дополнительному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание LINGO антителом BIIB033. MRD, конкурирующий за связывание LINGO с BIIB033, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание LINGO с BIIB033, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает LINGO и мишень, выбранную из:

МТХ, NKG2D, RON, рИЛ-6, ЕгЬВЗ, TNFRSF21 (DR6), CD3, рИФР, DLL4, P1GF, CD20, рЭФР, HER2, CD19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, сМЕТ, NRP1, ФНО, TNFSF12 (TWEAK), ФРГ, ИФР-1, ИФР-1,2, ИФР-2, НРФ, Те38, NogoA, RGM A, MAG, OMGp, NgR, НРФ, PGE2, ИЛ-1-бета, семафорина 3А и семафорина 4. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают LINGO и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает LINGO. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой BIIB033.

Согласно конкретному варианту реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой TNFSF12 (TWEAK). Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRDсодержащем антителе связывает TNFSF12 (TWEAK) и мишень, выбранную из:

МТХ, NKG2D, RON, рИЛ-6, ЕгЬВЗ, TNFRSF21 (DR6), CD3, рИФР, DLL4, P1GF, CD20, рЭФР, HER2, CD 19, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD80, сМЕТ, NRP1, ФНО, LINGO, ФРГ, ИФР-1, ИФР-1,2, ИФР-2, НРФ, Те38, NogoA, RGM A, MAG, OMGp, NgR, НРФ, PGE2, ИЛ-1-бета, семафорина 3А и семафорина 4.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают TNFSF12 (TWEAK) и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает TNFSF12 (TWEAK). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой BIIB023.

Согласно еще одному варианту реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой: окисленный ЛПНП, gpIIB, gpIIIa, PCSK9, фактор VIII, интегрин α2β3, АОС3 или мезотелин. Согласно конкретным вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой BI-204 окисленный ЛПНП (BioInvent), абциксимаб к gpIIB, gpIIIa (например, REOPRO, Eli Lilly), AMG-145 к PCSK9 (Amgen), TB-402 к фактору VIII (BioInvent), вапаликсимаб или тадоцизумаб к интегрину α2β3 (Yamonochi Pharma). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и BI-204, абциксимаб, AMG-145, ТВ-402 или тадоцизумаб. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание BI-204, абциксимаба, AMG-145, ТВ-402, вапаликсимаба или тадоцизумаба. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела связано с ростом и/или метаболизмом костей. Согласно определенным вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой TNFSF11 (RANKL). Согласно другим вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой: DKK1, остеопонтин, катепсин K, TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY) или склеростин (CDP-7851 UCB Celltech). Согласно другому варианту реализации мишень антитела MRDсодержащего антитела представляет собой TNFSF11 (RANKL). Согласно конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой деносумаб (например, AMG-162, Amgen). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и деносумаб. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем

- 67 043040 антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание TNFSF11 (RANKL) деносумабом. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное антитело представляет собой AMG617 или AMG785 (например, CDP7851, Amgen). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело специфически связывается с тем же эпитопом, что и AMG617 или AMG785. Согласно еще одному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой антитело, которое конкурентно ингибирует связывание склеростина AMG617 или AMG785. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFSF11 (RANKL). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFSF11 и мишень, выбранную из: склеростина (SOST), эндотелина-1, DKK1, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, ИЛ-11, ИЛ-17А, МКСФ, ИФР-1, ИФР-2, ИФР-1,2 рИФР-1, ФНО, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8а, ФРФ-8Ь, ФРФ18, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2-Шa, рФРФ-2-IIIb и рФРФ-2-IIIc), рФРФ-3, ТФР-бета, рецептора-2 ТФР-бета, ВМР2, ВМР4, ВМР5, ВМР9, BMP10, BMPR-IA, ТцФР, рецептора ТцФР-альфа, β-рецептора тромбоцитарного фактора роста (рТцФРВ), РТН, связанный с РТН белок (PTHrP) и PGE2. Согласно конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает TNFSF11 и DKK1. Согласно дополнительному варианту реализации антитело из MRD-содержащего антитела связывает DKK1. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают TNFSF11 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает TNFSF11. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой деносумаб, AMG617 или AMG785. Согласно дополнительным вариантам реализации мишень антитела MRD-содержащего антитела представляет собой бактериальный антиген, вирусный антиген, антиген микоплазмы, прионный антиген или антиген паразита (например, паразита, инфицирующего млекопитающее).

Согласно другим вариантам реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой вирусный антиген. Согласно одному варианту реализации мишень антитела из MRDсодержащего антитела представляет собой сибирскую язву, гепатит В, бешенство, вирус Нипах, вирус Западного Нила, вирус менингита или ЦМВ. Согласно другим вариантам реализации антитело MRDсодержащего антитела конкурирует со связыванием антигена с ABTHRAX® (Human Genome Sciences), эксбивирумабом, форавирумабом, либивирумабом, рафивирумабом, регавирумабом, севирумабом (например, MSL-109, Protovir), тивирумабом, раксибакумабом, вирусом Нипах M102.4 или MGAWN1® (MacroGenics) за связывание мишени. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно другим вариантам реализации мишень антитела из MRD-содержащего антитела представляет собой респираторный синцитиальный вирус (РСВ). Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела представляет собой мотавизумаб (например, NUMAX®, MEDI-577; MedImmune) или паливизумаб к гибридному f-белку РСВ (например, SYNAGIS®, MedImmune). Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует с мотавизумабом или паливизумабом к гибридному f-белку РСВ за связывание мишени. Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела представляет собой фелвизумаб. Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует с фелвизумабом за связывание мишени. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением. Согласно другим вариантам реализации мишень антитела из MRDсодержащего антитела представляет собой бактериальный или грибной антиген. Согласно другим вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание антигена с небакумабом, эдобакомабом (например, Е5), тефибазумабом (Inhibitex), панобакумабом (например,

- 68 043040

KBPA101, Kenta), пагибаксимабом (например, BSYX-A110, Biosynexus), уртоксазумабом или эфунгумабом (например, MYCOGRAB®, Novartis). Согласно другим вариантам реализации антитело из MRDсодержащего антитела представляет собой небакумаб, эдобакомаб, тефибазумаб (Inhibitex), панобакумаб, пагибаксимаб, уртоксазумаб или эфунгумаб. MRD, конкурирующий за связывание мишени с одним из указанных выше антител, также охвачен настоящим изобретением. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие 1, 2, 3, 4, 5, 6 или большее количество MRD, которые конкурируют за связывание мишени с 1, 2 или большим количеством из указанных выше антител, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно еще одному конкретному варианту реализации антитело в MRD-содержащем антителе представляет собой каталитическое антитело 38С2. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело связывается с тем же эпитопом, что и 38С2. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело конкурентно ингибирует 38С2.

Другие антитела, представляющие интерес, включают связывающие A33 антитела. Антиген A33 человека представляет собой трансмембранный гликопротеин суперсемейства Ig. Функция антигена A33 человека в нормальной и злокачественной ткани толстой кишки до настоящего времени неизвестна. Однако некоторые свойства антигена A33 предполагают, что он представляет собой перспективную мишень для иммунотерапии рака толстой кишки. Указанные свойства включают:

(i) строго ограниченный паттерн экспрессии антигена A33, (ii) экспрессию значительных количеств антигена A33 на раковых клетках толстой кишки, (iii) отсутствие секретируемого антигена или шеддинга антигена A33, (iv) тот факт, что при связывании антитела к A33 с антигеном A33, антитело к A33 интернализуется и секвестрируется в везикулах, и (v) нацеливание антитела A33 на экспрессирующий антиген A33 рак толстой кишки в предварительных клинических исследованиях.

Гибрид MRD, направленный на A33, с каталитическим или не-каталитическим антителом, повышает терапевтическую эффективность нацеленных на A33 антител.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело в MRD-содержащем антителе связывается с целевым белком человека. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD связывается и с белком человека, и с его ортологом у мыши, крысы, кролика или хомяка.

Антитела в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащие антител) способны связывать соответствующие им мишени, если домены MRD соединены с антителом. Согласно определенным вариантам реализации указанное антитело связывает мишень независимым образом. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело представляет собой агонист мишени. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело представляет собой антагонист мишени. Согласно определенным вариантам реализации указанное антитело может применяться для локализации MRD-содержащего антитела в области, где расположена мишень антитела.

Предполагается, что антитела, используемые в настоящем изобретении, могут быть получены любым способом, известным в данной области техники. Например, молекулы антител и мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут быть получены рекомбинантным способом, т.е. получены с применением технологии рекомбинантной ДНК. Моноклональные антитела, которые могут применяться в качестве антитела-компонента указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) могут быть получены с применением гибридомных способов, такие как описанные у Kohler and Milstein, Nature 256:495 (1975). При применении гибридомного способа мышь, хомяка или другое подходящее животное-хозяина иммунизируют согласно описанию выше, чтобы вызвать продуцирование лимфоцитами антител, специфически связывающихся с иммунизирующим антигеном. Лимфоциты могут также быть иммунизированы in vitro. После иммунизации лимфоциты выделяют и соединяют с подходящей миеломной клеточной линией с применением, например, полиэтиленгликоля, с получением клеток гибридомы, которые затем могут быть отделены от неслитых лимфоцитов и клеток миеломы. Гибридомы, продуцирующие моноклональные специфические антитела, направленные против выбранного антигена согласно оценке с помощью иммунопреципитации, иммуноблоттинга или с применением анализа связывания in vitro (например, радиоиммунологического анализа (RIA); иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA)), могут быть затем размножены либо in vitro, например, с применением известных способов (см., например, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986) или in vivo, например, в асцитных опухолях у животного. Затем моноклональные антитела могут быть очищены из культуральной среды или асцитной жидкости согласно приведенному выше описанию для поликлональных антител.

Как вариант, моноклональные антитела могут также быть получены с применением методов рекомбинантной ДНК, например, согласно описанию в патенте США №4816567. Например, согласно одному подходу полинуклеотиды, кодирующие моноклональное антитело, выделяют из зрелых В-клеток или клетки гибридомы, например, с помощью ОТ-ПЦР с использованием олигонуклеотидных праймеров, специфически амплифицирующих гены, кодирующие тяжелые и легкие цепи указанного антитела, и определяют их последовательность с применением стандартных процедур. Выделенные полинуклеотиды,

- 69 043040 кодирующие тяжелые и легкие цепи, затем клонируют в подходящие экспрессионные векторы, при трансфекции которыми клеток-хозяев, таких как клетки Е. coli, клеток обезьян COS, клеток яичника китайского хомячка (СНО) или клеток миеломы, не продуцирующих в иных условиях иммуноглобулиновый белок, указанные клетки-хозяева продуцируют моноклональные антитела. При других подходах рекомбинантный моноклональные антитела или фрагменты антител, обладающие требуемой иммунореактивностью, могут быть выделены из библиотек с фаговым дисплеем, экспрессирующих области CDR нужного типа, с применением техники, известной в данной области техники (McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); и Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)). Полинуклеотид(ы), кодирующий(ие) моноклональное антитело, может(гут) быть дополнительно модифицированы различными способами с применением технологии рекомбинантной ДНК для получения альтернативных вариантов антител. Например, полинуклеотидные последовательности, кодирующие один или большее количество доменов MRD и в некоторых случаях линкеры, могут быть функционально связаны, например, с 5'- или 3'-концом последовательности, кодирующей последовательности моноклонального антитела. Согласно некоторым вариантам реализации константные домены легких и тяжелых цепей, например, моноклонального антитела мыши, могут быть заменены:

(1) на соответствующие области, например, антитела человека для получения гибридного антитела, или (2) на неиммуноглобулиновый полипептид для получения гибридного антитела.

Техники направленного мутагенеза и мутагенеза высокой плотности вариабельной области известны в данной области техники и могут применяться для оптимизации специфичности, аффинности и т.п. моноклонального антитела.

Согласно определенным вариантам реализации антитело из MRD-содержащего антитела представляет собой антитело человека. Например, антитела человека могут быть прямо получены с применением различных техник, известных в данной области техники. Могут быть получены иммортализованные Влимфоциты человека, иммунизированные in vitro или выделенные из иммунизированного индивидуума, продуцирующие антитело, направленное против целевого антигена (См., например, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer et al., J. Immunol. 147 (l):86-95 (1991); и патенты США № 5750373 и 6787637). Согласно одному варианту реализации указанное антитело человека может быть получено методом минилокусов, при котором локус экзогенного иммуноглобулина имитируют путем включения индивидуальных генов локуса иммуноглобулина (см. например, патент США № 5545807). Способы получения антитела человека из фаговой библиотеки и, необязательно, оптимизации сродства к связыванию известны в данной области техники и описаны, например, у Vaughan et al., Nat. Biotech. 14:309-314 (1996); Sheets et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 95:6157-6162 (1998); Hoogenboom et al., Nat. Biotechnology 23:1105-1116 (2005); Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227:381 (1991); Persic et al., Gene 187:9-18 (1997); Jostock et al., J. Immunol. Methods 289:65-80 (2004); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)); et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:7978-7982 (1991); et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Yang et al., J. Mol. Biol. 254:392-403 (1995); и Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4457-4461 (1992). Техники получения и применения фаговых библиотек антител также описаны в патентах США № 5545807, 5969108, 6172197, 5885793, 6521404, 6544731, 6555313, 6582915, 6593081, 6300064, 6653068, 6706484 и 7264963; и у Rothe et al., J. Mol. Bio. 130:448-54 (2007) (каждый из указанных источников полностью включен в настоящий документ посредством ссылки). Стратегии аффинного созревания и стратегии шаффлинга цепей (Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 10:779-783 (1992) (источник полностью включен в настоящий документ посредством ссылки) известны в данной области техники и могут применяться для получения высокоаффинных антител человека. Антитела могут также быть получены у мышей, трансгенных по генам иммуноглобулинов человека или фрагментам указанных генов и способных, при иммунизации, продуцировать широкий репертуар антител человека при отсутствии продуцирования эндогенных иммуноглобулинов. Указанный подход описан в источниках: Lonberg, Nat. Biotechnol 23:1117-1125 (2005), Green et al., Nature Genet. 7:13-21 (1994), и Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); патенты США № 5545807, 5545806, 5569825, 5625126, 5633425, 5661016, 6596541, 7105348 и 7368334 (каждый из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки).

IV. Линкеры.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению могут содержать один линкер, несколько линкеров или не содержать линкеров. Соответственно, MRD может быть функционально соединен (связан) с антителом прямо, или функционально присоединен через необязательный линкерный пептид. Аналогичным образом MRD может быть функционально присоединен к одному или большему количеству MRD прямо, или функционально присоединен к одному или большему количеству MRD через один или большее количество необязательных линкерных пептидов. Линкеры могут иметь любые размер или состав при условии, что они способны функционально соединять MRD и антитело таким образом, чтобы указанный MRD позволял MRD-содержащему антителу связывать мишень MRD. Согласно некоторым вариантам реализации размер линкеров составляет приблизительно от 1 до 20 аминокислот, приблизительно от 1 до 15 аминокис

- 70 043040 лот, приблизительно от 1 до 10 аминокислот, приблизительно от 1 до 5 аминокислот, приблизительно от 2 до 20 аминокислот, приблизительно от 2 до 15 аминокислот, приблизительно от 2 до 10 аминокислот или приблизительно от 2 до 5 аминокислот. Линкер может также содержать приблизительно от 4 до 15 аминокислот. Согласно определенным вариантам реализации указанный линкерный пептид включает короткий линкерный пептид с последовательностью CGGS (SEQ ID NO:1), линкерный пептид средней длины с последовательностью SSGGGGSGGGGGGSS (SEQ ID NO:2), или длинный линкерный пептид с последовательностью SSGGGG SGGGGGGSSRSS (SEQIDNO:19).

Согласно еще одному варианту реализации MRD встроен в четвертую петлю константной области легкой цепи. Например, указанный MRD может быть встроен между выделенными подчеркиванием символами в следующей последовательности аминокислот:

RTVAAPSVFIFP

PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDKLGTNSQESVTEQDSKDSTYSL

SS TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSLPVTKSFNRGEC (SEQ Ш NO: 102).

Указанный линкер может также представлять собой непептидный линкер, такой как алкильный линкер или ПЭГ-линкер. Например, могут применяться алкильные линкеры, такие как -NH-(CH₂)_s-C(O)-, где s=2-20. Указанные алкильные линкеры могут дополнительно быть замещены любой не ограниченной стерически группой, такой как низший алкил (например, C1-C6) низший ацил, галоген (например, Cl, Br), CN, NH2, фенил и т.д. Примером непептидного линкера является ПЭГ-линкер. Согласно определенным вариантам реализации указанный ПЭГ-линкер имеет молекулярную массу, составляющую приблизительно от 100 до 5000 кДа, или приблизительно от 100 до 500 кДа.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный линкер представляет собой расщепляемый линкер, способствующий высвобождению MRD или цитотоксического агента в клетке. Например, может применяться кислотолабильный линкер (например, гидразон), чувствительный к протеазе (например, чувствительный к пептидазе) линкер, фотолабильный линкер, диметильный линкер или дисульфидсодержащий линкер (Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); патент США № 5208020; опубл. заявка на патент США №20090110753), если требуется, чтобы ковалентная связь между MRD или цитотоксическим агентом и мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащим антителом) расщеплялась внутриклеточно, когда указанная композиция интернализуется клеткой. Термины внутриклеточно расщепляемый и внутриклеточное расщепление относятся к метаболическому процессу или реакции внутри клетки на конъюгате антитела с лекарственным средством (ADC), в ходе которого разрушается ковалентная связь, т.е. связь посредством линкера, между MRD и цитотоксическим агентом, MRD и антителом, антителом и цитотоксическим агентом, или между двумя доменами MRD, что приводит к отсоединению свободного MRD и/или цитотоксического агента от антитела внутри клетки. Отщепленные фрагменты ADC с антителом Zybody, соответственно, представляют собой внутриклеточные метаболиты.

Оптимизация линкера может оцениваться с применением техник, описанных в примерах 1-18 и техник, известных из других источников в данной области техники. Линкеры предпочтительно не нарушают способность домена MRD и/или антитела связывать целевые молекулы.

V. Антитела, содержащие домены MRD.

При применении способов, описанных в настоящем документе, мультиспецифичность и большая мультивалентность может быть достигнута путем соединения доменов MRD с антителами.

Домены MRD указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител), полученные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть функционально связаны с антителом через N-конец или С-конец пептида. Указанные MRD могут быть функционально связаны с антителом на С-конце тяжелой цепи антитела, N-конце тяжелой цепи антитела, С-конце легкой цепи антитела или N-конце легкой цепи антитела. Оптимизация состава MRD, локализации связи MRD-антитело и состава линкера может быть выполнена с применением анализов связывания, описанных в примерах 1-18, и биологических анализов и других известных в данной области техники анализов подходящей связанной с мишенью биологической активности.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело представляет собой MRDсодержащее антитело, описанное в заявке на патент США № 61/489249, поданной 24 мая 2011 г., которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.

Согласно одному варианту реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) содержат MRD, функционально связанные с тяжелой цепью антитело, легкой цепью антитела или и тяжелой, и легкой цепями. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, соединенный с одним из концов цепи антитела. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с двумя концами цепей антитела. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с тремя концами цепей антитела. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально

- 71 043040 связанный с каждым из четырех концов цепей антитела (т.е. с N- и С-концами легкой цепи и с N- и Сконцами тяжелой цепи). Согласно некоторым конкретным вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с N-концом легкой цепи. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с N-концом тяжелой цепи. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с С-концом легкой цепи. Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один MRD, функционально связанный с С-концом тяжелой цепи.

MRD-содержащее антитело может быть мультиспецифическим (например, биспецифическим, триспецифическим, тетраспецифическим, пентаспецифическим или обладать большей мультиспецифичностью), то есть оно распознает и связывается с двумя или большим количеством разных эпитопов, присутствующих на одном или большем количестве разных антигенов (например, белков). Соответственно, то, является ли MRD-содержащее антитело моноспецифическим или мультиспецифическим (например, биспецифическим, триспецифическим и тетраспецифическим), относится к числу разных эпитопов, с которым связывается указанное MRD-содержащее антитело. Мультиспецифические антитела могут быть специфическими в отношении разных эпитопов целевого полипептида (например, согласно описанию в настоящем документе) или могут быть специфическими в отношении целевого полипептида, а также гетерологичного эпитопа, такого как гетерологичный целевой полипептид или материал твердой подложки. Настоящее изобретение предусматривает получение моно-, би-, три-, тетра- и пентаспецифических антител, а также антител, обладающих большей мультиспецифичностью. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает два разных эпитопа. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает два разных эпитопа одновременно. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает три разных эпитопа. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает три разных эпитопа одновременно. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает четыре разных эпитопа. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает четыре разных эпитопа одновременно. Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает пять разных эпитопов (см., например, фиг. 2D). Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает пять разных эпитопов одновременно. Согласно другим вариантам реализации два домена MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRDсодержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере два домена MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять Домены MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации два домена MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере два домена MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и один MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и по меньшей мере один MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же антиген. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и один MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и по меньшей мере один MRD MRDсодержащего антитела связывают один и тот же эпитоп. Согласно другим вариантам реализации указанное антитело и по меньшей мере два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять доменов MRD MRD-содержащего антитела связывают один и тот же эпитоп.

В настоящем изобретении также предложены два или большее количество доменов MRD, которые соединены с любым концом антитела. Соответственно, согласно одному неисключительному варианту реализации два, три, четыре или большее количество доменов MRD функционально связаны с N-концом тяжелой цепи. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации два, три, четыре или большее количество доменов MRD функционально связаны с N-концом легкой цепи. Согласно еще од

- 72 043040 ному неисключительному варианту реализации два, три, четыре или большее количество доменов MRD функционально связаны с С-концом тяжелой цепи. Согласно еще одному неисключительному варианту реализации два, три, четыре или большее количество доменов MRD функционально связаны с С-концом легкой цепи. Предполагается, что указанные домены MRD могут быть одинаковыми или разными. Кроме того, может применяться любая комбинация числа и связей MRD. Например, два домена MRD могут быть функционально связаны с N-концом тяжелой цепи антитела, которое содержит один MRD, соединенный с С-концом легкой цепи. Аналогичным образом, три домена MRD могут быть функционально связаны с С-концом легкой цепи, и два домена MRD могут быть функционально связаны с N-концом легкой цепи.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут содержать один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более десяти доменов MRD.

Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит один MRD (см., например, фиг. 2В и 2С). Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит два домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит три домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит четыре домена MRD (см., например, фиг. 2В и 2С). Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит пять доменов MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит шесть доменов MRD. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит от двух до десяти доменов MRD. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере один MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере два домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере три домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере четыре домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере пять доменов MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере шесть доменов MRD.

Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит два разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит три разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит четыре разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит пять разных доменов MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит шесть разных доменов MRD. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит от двух до десяти разных доменов MRD.

Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере два разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере три разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере четыре разных домена MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере пять разных доменов MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) содержит по меньшей мере шесть разных доменов MRD. Соответственно, муль

- 73 043040 тивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут быть мономерными по MRD (т.е. содержать один MRD на конце пептидной цепи, в некоторых случаях присоединенный посредством линкера) или мультимерными по MRD (т.е. содержать более одного MRD, при этом MRD, необязательно, последовательно присоединены посредством линкера). Указанные мультимерный мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут быть гомомультимерными (т.е. содержать более одного идентичного MRD, необязательно, последовательно соединенные линкером(ами) (например, гомодимеры, гомотримеры, гомотетрамеры и т.д.)) или гетеромультимерными (т.е. содержат два или большее количество доменов MRD, включающих по меньшей мере два разных домена MRD, необязательно, соединенные посредством линкера(ов), при этом все или некоторые домены MRD, соединенные с конкретным концом, отличаются (например, гетеродимер, гетеротример, гетеротетрамер и т.д.)). Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит два разных мономерных доменов MRD, расположенных на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит три разных мономерных доменов MRD, расположенных на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) содержит четыре разных мономерных доменов MRD, расположенных на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит пять разных мономерных доменов MRD, расположенных на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит шесть разных мономерных доменов MRD, расположенных на разных концах иммуноглобулина. Согласно альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) содержит по меньшей мере один димерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) содержит по меньшей мере один гомодимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) содержит по меньшей мере один гетеродимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина.

Согласно альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере один мультимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере один гомомультимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит по меньшей мере один гетеромультимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина.

Согласно альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит домены MRD, функционально связанные по меньшей мере с двумя разными концами иммуноглобулина. Согласно конкретному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов представляют собой мультимер. Согласно одному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов, представляют собой гомомультимер (т.е. более одного одинакового MRD последовательно функционально связаны, необязательно, соединяясь посредством линкера). Согласно еще одному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов, представляют собой гетеромультимер (т.е. два или большее количество разных доменов MRD функционально связаны последовательно, необязательно, соединяясь посредством линкера). Согласно дополнительному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов, представляют собой димер. Согласно еще одному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов, представляют собой гомодимер. Согласно еще одному варианту реализации указанные домены MRD, соединенные по меньшей мере с одним из иммуноглобулинов, представляют собой гетеродимер. Указанные несколько MRD могут быть нацелены на один и тот же сайт связывания мишени, или на два или большее количество разных сайтов связывания мишени. Если домены MRD связываются с разными сайтами связывания мишени, указанный сайты связывания могут располагаться на одной и той же или на разных целевых молекулах.

- 74 043040

Аналогичным образом, антитело и MRD в мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащем антителе) может связываться с одной и той же целевой молекулой или с разными целевыми молекулами.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один MRD и антитело в мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащем антителе) могут связываться со своими мишенями одновременно. Согласно одному варианту реализации каждый MRD в мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRDсодержащем антителе) и антитело могут связываться со своей мишенью одновременно. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или большее количество мишеней одновременно. Способность мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело) связываться с множеством мишеней одновременно может быть проанализирована с применением способов, известных в данной области техники, включая, например, способы, описанные в приведенных ниже примерах.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, обладающие моновалентной специфичностью.

Согласно дополнительным вариантам реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению, содержащие единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывают) мишень.

Согласно некоторым вариантам реализации антигенсвязывающие домены антитела-компонента мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, предложенной в настоящем изобретении, связываются с разными целевыми эпитопами (т.е. указанное антитело является биспецифическим). Предполагается, что термин биспецифические антитело включает любое антитело, обладающее двумя разными видами связывающей специфичности, т.е. указанное антитело связывает два разных эпитопа, которые могут быть расположены на одном целевом антигене, или, чаще, на разных целевых антигенах. Способы получения биспецифических антител известны в данной области техники. (См., например, Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983); Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991); Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986); Kostelny et al., J. Immunol. 148(5): 1547-1553 (1992); Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994); Tutt et al., J. Immunol. 147:60-69 (1991); патенты США № 4474893, 4676980, 4714681, 4925648, 5573920, 5601819, 5731168, 5807706 и 5821333; опубликованные международные заявки № WO94/04690, WO91/00360, WO92/05793, WO92/08802, WO92/200373, WO93/17715, WO00/44788 и WO02/096948; EP 1870459А1 и EP 03089, содержание каждой из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки). Один способ получения биспецифических антител был назван стратегией выступы-вовпадины (см., например, межд. публ. WO2006/028936). Ошибочное спаривание тяжелых цепей Ig при применении указанной технологии снижается за счет мутирования выбранных аминокислот, образующих поверхность CH3-доменов IgG. В положениях в пределах CH3-домена, где происходит прямое взаимодействие двух тяжелых цепей, в последовательность одной тяжелой цепи вводят аминокислоту с небольшой боковой цепью (впадина), а в положение, соответствующее взаимодействующему остатку на другой тяжелой цепи вводят аминокислоту с большой боковой цепью (выступ). Согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат цепи иммуноглобулина, CH3-домены которых были модифицированы путем мутирования выбранных аминокислот, взаимодействующие в области поверхности между двумя полипептидами таким образом, что преимущественно образуется биспецифическое антитело. Указанные биспецифические антитела могут состоять из цепей иммуноглобулина одного подкласса (например, IgG1 или IgG3) или разных подклассов (например, IgG1 и IgG3, или IgG3 и IgG4).

Согласно одному варианту реализации биспецифическое антитело-компонент мультиспецифической и мультивалентной композиции (например, MRD-содержащего антитела) содержит мутацию T366W в цепи с выступами и мутации T366S, L368A, Y407V в цепи с впадинами, и, необязательно, дополнительный межцепочечный дисульфидный мостик между CH3-доменами, например, за счет введения мутации Y349C в цепь с выступами и мутации Е356С или мутации S354C в цепи с впадинами; мутаций R409D, К37ОЕ в цепь с выступами и мутаций D399K, Е357К в цепь с впадинами; мутаций R409D, К37ОЕ в цепь с выступами и мутаций D399K, E357K в цепь с впадинами; мутации T366W в цепь с выступами и мутаций T366S, L368A, Y407V в цепь с впадинами; мутаций R409D, K370E в цепь с выступами и мутаций D399K, E357K в цепь с впадинами; мутаций Y349C, T366W в одну из цепей, и мутаций Е356С, T366S, L368A, Y407V в ответную цепь; мутаций Y349C, T366W в одну цепь и мутаций s354C, T366S, L368A, Y407V в ответную цепь; мутаций Y349C, T366W в одну цепь и мутаций S354C, T366S, L368A, Y407V в ответную цепь; мутаций Y349C, T366W в одну цепь и мутаций S354C, T366S, L368A, Y407V в ответную цепь (нумерация в соответствии с индексом EU по Kabat).

Согласно некоторым вариантам реализации биспецифическое антитело-компонент композиции, предложенной в настоящем изобретении (например, MRD-содержащее антитело) представляет собой

- 75 043040

IgG4-антитело или модифицированное IgG4-антитело, или содержит тяжелую цепь IgG4 или модифицированную тяжелую цепь IgG4. IgG4-антитела представляют собой динамические молекулы, в которых происходит обмен Fab-фрагментами посредством перестановки местами тяжелой цепи IgG4 и присоединенной легкой цепи с парой тяжелая цепь/легкая цепь другой молекулы IgG4, соответственно, что приводит к образованию биспецифических антител.

Соответственно, обмен Fab-фрагментами посредством перестановки в MRD-содержащих IgG4антителах, запущенный in vivo или in vitro в физиологических условиях, приводит к образованию композиций с биспецифическим антителом. Согласно конкретным вариантам реализации тяжелая цепь IgG4 в композиции, предложенной в настоящем изобретении, содержит замену S228P. Было показано, что указанная замена значимо ингибирует обмен Fab-фрагментами в полученных мутантных антителах IgG4, и, таким образом, снижает вероятность обмена Fab-фрагментами между рекомбинантным антителом и эндогенным IgG4. (См., например, Labrijn et al., Nat. Biotechnol. 27(8):767-71 (2009)). Согласно дополнительным вариантам реализации тяжелая цепь IgG4 композиции, предложенной в настоящем изобретении, содержит замену Arg в положении 409 (например, на Lys, Ala, Thr, Met или Leu), Phe в положении 405 (например, на Lys, Ala, Thr, Met или Leu) или Lys в положении 370. Согласно другим вариантам реализации область CH3 тяжелой цепи IgG4 композиции, предложенной в настоящем изобретении, заменяли на область CHH3 IgG1, IgG2 или IgG3. Согласно дополнительным вариантам реализации взаимодействия между одним или большим количеством доменов MRD, расположенных на С-концах отдельных тяжелых цепей (например, IgG4, или IgG4 и IgG3), благоприятствуют и/или стабилизируют гетеродимеры между тяжелыми цепями, или иным образом уменьшает обмен Fab-фрагментами в гетеродимере.

Примеры биспецифических антител-компонентов мультивалентных и мультиспецифических композиций, предложенных в настоящем изобретении, включают гетеродимеры цепей IgG4 и IgG1, IgG4 и IgG2, IgG4 и IgG2, IgG4 и IgG3, IgG1 и IgG3. Такие антитела с гетеродимерными тяжелыми цепями могут рутинным образом быть сконструированы, например, путем модификации выбранных аминокислот, образующих поверхность CH3-доменов IgG4 и IgG1 или IgG3 человека, таким образом, чтобы способствовать образованию гетеродимерной тяжелой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации взаимодействие между одним или несколькими доменами MRD, расположенными на С-концах гетеромерных тяжелых цепей, благоприятствует образованию или структуре, или стабилизирует образование или структуру гетеромультимеров, соответственно. Известно, что IgG4-антитела обладают пониженными АЗКЦ-активностью и периодом полувыведения по сравнению с иммуноглобулинами других подклассов, например, IgG1 и IgG3. Соответственно, форматы на основе подкласса IgG4 представляют собой привлекательный формат для разработки терапевтических средств, которые связывают и блокируют клеточные рецепторы, но не истощают целевые клетки. Как вариант, во вариантах реализации, для которых требуется повышенная эффекторная активность, тяжелая цепь IgG4 композиции, предложенной в настоящем изобретении, может быть модифицирована согласно описанию в настоящем документе или известным в данной области техники способом так, чтобы усилить эффекторную функцию (например, модификацией остатков в положениях 327, 330 и 331; нумерация в соответствии с индексом EU по Kabat). Аналогичным образом, если требуется увеличенный период полувыведения, тяжелая цепь IgG4 композиции, предложенной в настоящем изобретении, может быть сконструирована согласно описанию в настоящем документе или известным в данной области техники способом так, чтобы более селективно связывать FcRn при pH 6,0, но не при pH 7,4, например, путем введения мутаций на поверхности между доменами СН2 и CH3, например, замен T250Q/M428L, а также M252Y/S254T/T256E и H433K/N434F (нумерация в соответствии с индексом EU по Kabat). Как было показано в примерах выше, предполагается, что, согласно некоторым вариантам реализации, мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению содержат единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывают мишень). Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания (т.е. моновалентный сайт связывания) представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно другим вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Соответственно, мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают (и могут быть рутинным образом сконструированы так, чтобы включать) MRD-содержащие антитела, которые содержат 1, 2, 3, 4 или большее количество единственных сайтов связывания мишени. Указанный(ые) единственный(ые) сайт(ы) связывания может(гут) обеспечиваться одним или большим количеством доменов MRD, расположенных на одном или более из 4 концов тяжелых цепей иммуноглобулина или 4 концов легких цепей иммуноглобулина. Кроме того, единственный сайт связывания может обеспечиваться одним из антигенсвязывающих доменов указанного антитела (при этом MRD MRD-содержащего антитела связывает тот же целевой эпитоп другого антигенсвязывающего домена указанного антитела. Более того, согласно конкретному варианту реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают (и могут быть рутинным образом сконструированы так, чтобы включать) MRD-содержащие антитела, которые содержат 1, 2, 3, 4 или большее количество единственных сайтов связывания мишени и не связывают бивалентно другую мишень.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная

- 76 043040 мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащие антитела) содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на клеточной поверхности, образующей мультимеры (например, гомомеры или гетеромеры). Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания связывает мишень на клеточной поверхности, требующую мультимеризации для сигнализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания, который связывает мишень на клеточной поверхности и ингибирует связывание другой молекулы (такой как лиганд) с мишенью на клеточной поверхности. Согласно другим вариантам реализации связывание единственного сайта связывания ингибирует мультимеризацию мишени (например, гомомерную и гетеромерную мультимеризацию). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит единственные сайты связывания других мишеней (т.е. моновалентно связывает более чем одну другую мишень). Согласно некоторым вариантам реализации указанный несколько единственных сайтов связывания композиции связывают мишени на одной и той же клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные несколько единственных сайтов связывания композиции связывают мишени на разных клетках. В данной области техники известны многочисленные рецепторы, требующие мультимеризацию для изменения их нормальной функции. Такие рецепторы предположительно являются мишенями единственных сайтов связывания в мультивалентных и мультиспецифических композициях (например, MRD-содержащих антителах) согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания рецепторной тирозинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания рецептора фактора роста. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания рецептора, связанного с G-белком. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания рецептора хемокина. Согласно другим вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания представителя суперсемейства рецепторов ФНО. Согласно конкретным вариантам реализации указанная композиция содержит единственный сайт связывания рецептора, выбранного из: рецептора конечных продуктов гликозилирования (RAGE), c-Met, ErbB2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, ρΦΡΦ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2Ша, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, рТцФР-А, рТцФР-В, нетрина, CD28, TNFRSF1A (TNFR1, р55, р60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFRSF 6 (Fas, CD95), TNFRSF21 или TNFRSF25, TNFRSF 7 (CD27), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF 8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF 11A (RANK), TNFRSF21 (DR6),

TNFRSF25 (DR3) и LRP6.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на клеточной поверхности, образующей мультимер, и содержит несколько сайтов связывания двух или большего количества других мишеней (т.е. мультивалентно связывает мишени). Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на клеточной поверхности и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, расположены на поверхности клетки. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляют собой растворимые мишени (например, хемокины, цитокины и факторы роста). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, описанных в настоящем документе. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мишени, связываемые указанной композицией, представляют собой опухолевые антигены (включая опухолевые антигены и опухолеассоциированные антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанной композицией, связана с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанной композицией, связана с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело содержит единственный сайт связывания TNFRSF21 (DR6). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело содержит единственный сайт связывания DR6 и связывает мишень, выбранную из: AGE (S100 А, амфотерин), ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-18, ИЛ-12, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), ФНО-альфа, ФРЭС, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), интерферон гамма, ГМКСФ, ФРФ, CXCL13, МСР1, CCR2,

- 77 043040

NogoA, RGM A, OMGp MAG, CPSG, LINGO, альфа-синуклеина, семафорина (например, семафорина 3А, семафорина 4), эфрина, VLA4, CD45, RB, C5, CD52 и CD200. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают DR6 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Указанные композиции находят применение в лечении заболеваний и расстройств, включающих неврологические заболевания и расстройства, такие как рассеянный склероз и другие нейродегенеративные заболевания. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает DR6. Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело содержит единственный сайт связывания TNFRSF25 (DR3). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит единственный сайт связывания DR3 и связывает мишень, выбранную из: ФНО, ИФН-альфа, ИФН-гамма, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23 и ИЛ-32. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают DR3 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Указанные композиции находят применение в лечении заболеваний и расстройств, включая воспалительное заболевание кишечника и аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает DR3.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащие антитела) содержит несколько сайтов связывания мишени (т.е. мультивалентно связывает мишень) на клеточной поверхности, образующих мультимеры (например, гомомеры или гетеромеры). Согласно некоторым вариантам реализации указанные несколько сайтов связывания связывают мишень на клеточной поверхности, требующей мультимеризации для сигнализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит несколько сайтов связывания мишени на клеточной поверхности. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание нескольких сайтов связывания приводит к мультимеризации мишени (например, гомомерной и гетеромерной мультимеризации). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания других мишеней (т.е. мультивалентно связывает более чем одну другую мишень). Согласно некоторым вариантам реализации несколько единственных сайтов связывания композиции связывают мишени на одной и той же клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации несколько единственных сайтов связывания композиции связывают мишеней на разных клетках. В данной области техники известны многочисленные рецепторы, требующие мультимеризации для изменения их нормальной функции. Такие рецепторы предположительно являются мишенями указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител). Согласно некоторым вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания рецепторной тирозинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания рецептора фактора роста. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания рецептора, связанного с G-белком. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания рецептора хемокина. Согласно другим вариантам реализации указанная композиция содержит несколько сайтов связывания представителя суперсемейства рецепторов ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFRSF10A (DR4). Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает DR4 и мишень, выбранную из: ErbB2, рЭФР, рИФР-1, TNFRSF10b (DR5), CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF9 (41BB), ИЛ-6 и ИФР-1,2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают DR4 и также связывают по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Указанные композиции находят применение в лечении заболеваний и расстройств, включающих такие раковые заболевания, как рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, рак головы и шеи, В-клеточные лимфомы, лейкоз ворсистых клеток, хронический В-клеточный лимфолейкоз и меланомы. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает DR4. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой CS1008 или мапатумумаб.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFRSF10B (DR5). Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает DR5 и мишень, выбранную из: ErbB2, рЭФР, рИФР-1, TNFRSF10A (DR4), CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD138, синдекана, CD39, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF 9 (41ВВ), ИЛ-6 и ИФР-1,2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают DR5 и также связывают по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Указанные композиции находят применение при лечении заболеваний и расстройств, в том числе раковых заболеваний, таких как рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, рак головы и шеи, В-клеточных лимфом, лейкоза ворсистых клеток, хронического В-клеточного

- 78 043040 лимфолейкоза и меланомы. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает DR5. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой LBY135, AMG66, апомаб, PRO95780, лексатумумаб, конатумумаб или тигатузумаб.

Композиции, перенаправляющие функцию эффекторных клеток.

Настоящее изобретение также охватывает такие мультивалентные и мультиспецифические композиции, как мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), способные сближать эффекторные клетки хозяина с клетками, которые требуется устранить (например, иммунными клетками, раковыми клетками, пораженными заболеванием клетками, инфекционными агентами и клетками, инфицированными инфекционными агентами). Мультивалентные и мультиспецифические функциональные группы предложенных в настоящем изобретении композиций, в частности, хорошо подходят для перенаправления иммунного ответа у хозяина и обеспечивают многочисленные преимущества по сравнению с альтернативными разрабатываемыми платформами на основе мультиспецифических композиций. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, иммунная клетка или опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на эффекторной клетке, с тем чтобы направлять иммунный ответ на клетку, ткань или инфекционный агент, представляющий(ую) интерес.

Мишень(и) с которой(ыми) связывается указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция, може(гу)т быть мономерной(ыми) или мультимерной(ыми). Кроме того, мультимерная мишень, с которой связывается мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция, может быть гомомультимерной или гетеромультимерной. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно дополнительным вариантам реализации одна или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляет(ют) собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции также находят применение в лечении заболеваний и расстройств, включая, но не ограничиваясь перечисленными, заболевания иммунной системы, скелетной системы, сердечно-сосудистой системы и нервной системы, а также инфекционное заболевание. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы (например, заболеванием или расстройством иммунной системы, описанным в настоящем документе, таким как воспаление или аутоиммунное заболевание (например, ревматоидный артрит)). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом или другим заболеванием или расстройством скелетной системы, описанным в настоящем документе). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством сердечно-сосудистой системы (например, заболеванием или расстройством сердечно-сосудистой системы, описанным в настоящем документе). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством нервной системы (например, заболеванием или расстройством нервной системы, описанным в настоящем документе). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с инфекционным агентом или заболеванием (например, инфекционным заболеванием или агентом, описанным в настоящем документе).

Эффекторные клетки, которые может связывать мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) согласно настоящему изобретению, включают, не ограничиваясь перечисленными, T-клеток, моноциты/макрофаги и естественные клетки киллеры.

Согласно одному варианту реализации мишень на клетке, на которую мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) направляет иммунный ответ, представляет собой опухолевый антиген. Мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении (например, MRD-содержащие антитела), предположительно способны связывать опухоль и опухолевый антиген практически любого типа. Примеры типов опухолей, на которые может обеспечиваться нацеливание, включают, не ограничиваясь перечисленными, одно или большее количество раковых заболеваний, выбранных из группы: рака толстой и прямой киш

- 79 043040 ки, рака пищевода, рака желудка, рака головы и шеи, рака щитовидной железы, множественной миеломы, рака почки, рака поджелудочной железы, рака легкого, рака желчных протоков, глиомы, меланомы, рака печени, рака предстательной железы и рака мочевого пузыря, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки и рака эндометрия. Примеры типов опухолей, на которые может обеспечиваться нацеливание, включают гематологические раковые заболевания. Гематологические раковые заболевания, которые могут быть мишенями, включают, не ограничиваясь перечисленными, одно или большее количество раковых заболеваний, выбранных из группы: лимфомы Ходжкина, медуллярной неходжкинской лимфомы, острого лимфобластного лейкоза, лимфоцитарного лейкоза и хронического миелогенного лейкоза, острого миелогенного лейкоза. Примеры опухолевых антигенов включают ErbB1, ErbB2, ErbB3, рФРЭС-1, рецептор ФРЭС-2, рЭФР-вариант III, CD16, CD19, CD20, онкостатин М, ПСА, ПСМА, интегрин ave6, ADAM9, CD22, CD23, CD25, CD28, CD36, CD45, CD46, CD56, CD79a/CD79b, CD 103, JAM-3, gp100, ALCAM, PIPA, A33, карбоксипептидазу M, E-кадгерин, СА125, CDK4, РЭА, CTLA-4, RAAG10, рецептор трансферрина, р-15, GD2, MUM-1, MAGE-1, MAGE-3, KSA, MOC31, MIC-1, EphA2, GAGE-1, GAGE-2, MART, KID31, CD44v3, CD44v6 и ROR1. Дополнительные примеры опухолевых антигенов описаны в настоящем документе и/или известны в данной области техники.

Согласно одному варианту реализации мишень на клетке, на которую мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) направляет иммунный ответ, представляет собой иммунную клетку или воспалительную клетку.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение включает мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, которая связывает опухолевый антиген, экспрессируемый не собственно на опухолевых клетках, а на окружающих реактивных и поддерживающих опухоль незлокачественных клетках, включая опухолевую строму (т.е. опухолеассоциированные антигены). Опухолевая строма содержит эндотелиальные клетки, формирующие новые кровеносные сосуды, и стромальные фибробласты, окружающие сосудистую сеть опухоли. Согласно одному варианту реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает опухолеассоциированный антиген на эндотелиальной клетке. Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает опухолевый антиген и также связывает опухолеассоциированный антиген на фибробласте. Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает опухолевый антиген и также связывает белок активации фибробластов (FAP).

Инфекционные агенты, на которые мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) может направлять иммунный ответ, включают, не ограничиваясь перечисленными, прокариотические и эукариотические клетки, вирусы (в том числе бактериофаги), инородные объекты (например, токсины) и инфекционные организмы, такие как грибы и паразиты (например, паразиты млекопитающих), согласно описанию в настоящем документе, и инфекционные агенты, связанные с инфекционными заболеваниями, описанными в настоящем документе. Предполагается также, что термин инфекционные агенты охватывает другие прокариотические и эукариотические клетки, вирусы (в том числе бактериофаги), инородные объекты (например, токсины), и инфекционные организмы, такие как грибы и паразиты, известные из других источников в данной области техники.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) содержит единственный сайт связывания мишени на эффекторной клетке, с тем, чтобы направлять иммунный ответ на клетку, ткань или инфекционный агент, представляющий(ую) интерес.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции не возбуждает сигнал при связывании указанной композицией мишени на эффекторной клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляют собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации одна или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации одна или большее количество мише

- 80 043040 ней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопороз), сердечнососудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием.

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на лейкоците, с тем чтобы направлять иммунный ответ на клетку, ткань или инфекционный агент, представляющий(ую) интерес.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней, описанных в настоящем документе. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляют собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации одна или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации одна или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием.

Настоящее изобретение также охватывает мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают мишень, экспрессируемую на лейкоците. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците, с тем чтобы направлять иммунный ответ на клетку, ткань или инфекционный агент, представляющий(ую) интерес.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией представляет собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопороз), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, экспрессируемую на Т-клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на T-клетке, с тем, чтобы сблизить миелоидные клетки с клеткой, тканью или инфекционным агентом, представляющим(ей) интерес.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени (т.е. мультивалентно связывает мишень) на T-клетке. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на T-клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации указанный

- 81 043040 единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции не возбуждает сигнал при связывании указанной композицией мишени на T-клетке. Согласно другим вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции не приводит к лизису T-клетки, экспрессирующей указанную мишень. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из: CD2, CD3, CD4, CD8, CD161, рецептора хемокина, CD95 и CCR5. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляет собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопороз), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит гибридный белок, содержащий один или большее количество пептидов, которые связываются с белком на поверхности клетки, такой как T-клетка. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает целевые ближайшие к мембране белковые последовательности на клетке и ингибирует перекрестное сшивание (например, мультимеризацию) целевого белка или ассоциированных с ним белков. Согласно конкретному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывается с T-клеткой и ингибирует перекрестное сшивание клеточного белка или ассоциированных с ним белков. Например, согласно одному варианту реализации указанный мультивалентные и мультиспецифические антитело содержит 27 аминоконцевых аминокислот зрелого CD3-эпсилон. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит гибридный белок, содержащий один или большее количество белков, соответствующих G-домену белка CD3 (например, CD3-эпсилон, CD3-гамма, CD3-альфа (TCRA) или CD3-бета (TCRB). Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанный гибридный белок содержит полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из:

GYYVCYPRGSKPEDANFYLYLR

ARVC (SEQ Ш NO:21), YLYLRAR (SEQ ID NO:22), YRCNGTDIYKDKESTVQ

VHYRMC (SEQ ID NO:23) и DKESTVQVH (SEQ ID NO:24).

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная композиция содержит гибридный белок, содержащий одну или большее количество белков, соответствующих фрагменту внеклеточного домена белка CD3 (например, CD3-эnсилон, CD3-гамма, CDS-альфа (TCRA) или CD3-бета (TCRB)), который способен связывать CD3 или мультимер CD3. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанный гибридный белок содержит фрагмент белка CD3, который способен связывать CD3 или мультимер CD3, причем указанный фрагмент содержит связывающий CD3 фрагмент полипептида, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из:

KIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEG

TVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIY KDKESTVQVHYRMCQSCVELD (зрелый внеклеточный домен (ECD) CDS-дельта человека, SEQ ID NO: 25), QSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAK

NITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRM

CQNCIELN (зрелый ECD CDS-гамма человека, Ig-подобный домен выделен; SEQ ID NO: 26), GNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGS

DEDHL SLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVM (зрелый ECD CDS-эпсилон человека, Ig-подобный домен выделен, SEQ ID NO: 27) и QSFGLLDPK (зрелый ECD CDS-зета человека, SEQ ID NO: 28). Согласно альтернативным вариантам реализации указанный гибридный белок содержит фрагмент хемокина, который связывает мишень на клеточной поверхности. Согласно некоторым вариантам реализации указанный фрагмент хемокина представляет собой фрагмент хемокина, выбранный из: CCL20 (LARC/C^), CCL25 (ТЕСК/Cκβ15), CXCL12 (SDF-1),

- 82 043040

CXCL13 (ВСА-1), CXCL16 (SRPSOX) и CX3CL1 (Фракталкин). Согласно некоторым вариантам реализации указанный фрагмент хемокина представляет собой фрагмент хемокина, выбранный из: CCL5 (RANTES), CCL8 (МСР-2), CXCL9 (MIG/CRG-10), CXCL10 (IP-10/CRG-2) и CXCL11 (TAC/IP-9). Согласно некоторым вариантам реализации указанный фрагмент хемокина представляет собой фрагмент хемокина, выбранный из CCL3 (MIP-1а) и CCL4 (MIP-1B).

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение включает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), которое связывает CD3 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4329-4492 и 4493, приведенных в табл. 22. Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRD-содержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание CD3 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4329-4492 и 4493. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), которое связывается с тем же эпитопом CD3, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4329-4492 и 4493.

Согласно конкретным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), который(ая/ое) связывает CD3 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

IALMCSMHFDEVVWCSPYY (CD31916; SEQ Ш NO:4494); PLMLCRHMKHFEYYC

WPLA (CD3437; SEQ Ш NO:4495); PVICQWTLELQCSPWT (CD3914; SEQ ГО NO:4496); ILLECYWEDWRLVCSSLA (CD3434; SEQ ID NO:4497);

KGTICWWHLEATCFATS (CD3702; SEQ IDNO:4498); и LREICVKVPYGVVCQRLP (CD31913; SEQ ID NO:4499).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, конкурирующую(ий) за связывание CD3 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4494-4498 и 4499. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), который(ая/ое) связывается с тем же эпитопом CD3, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4494-4498 и 4499. Согласно конкретным вариантам реализации указанная композиция связывает CD3-мишень, выбранную из CD3-дельта, CD3-эпсилон, CD3-гамма, CD3зета, TCR-альфа, TCR-бета, комплекс TCR или их гетеромерную или гомомультимерную комбинацию. Согласно дополнительному варианту реализации указанная композиция связывает CD3-эпсилон. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3 и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, опухолевый антиген согласно описанию в настоящем документе или известный в данной области техники). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает) CD3. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный MRD, который связывает CD3 и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, опухолевый антиген согласно описанию в настоящем документе или известный в данной области техники). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный антигенсвязывающий домен антитела, который связывает CD3 и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, опухолевый антиген согласно описанию в настоящем документе или известный в данной области техники). Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3 композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает CD3 человека и ортолог CD3 из другого организма. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3 человека и ортолог CD3 другого примата. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3 человека и ортолог CD3 яванского макака или макакарезуса. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3 человека и ортолог CD3 примата, выбранного из Saguinus Oedipus и Callithrixjacchus). Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3 человека, ортолог CD3 яванского ма

- 83 043040 кака и ортолог CD3 мыши или крысы. Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3эпсилон человека композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами. Согласно дополнительным конкретным вариантам реализации связывающие CD3 композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

В соответствии с одним вариантом реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает CD3-эпсилон человека. Согласно конкретному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает белок CD3-эпсилон человека, имеющий последовательность аминокислот 23-207, приведенную в референсной последовательности NCBI №NP_000724. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает полипептид, имеющий последовательность аминокислот

QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTT VILT (SEQ ID NO :29).

Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает полипептид, имеющий последовательность аминокислот QDGNEEMGGI (SEQ Ш NO:30).

Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает полипептид, имеющий последовательность аминокислот QDGNEEMGG (SEQ ID NO:31).

Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3-эпсилон человека композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) содержит единственный сайт связывания CD3эпсилон (т.е. моновалентно связывает CD3-эпсилон) и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней (например, В-клетки или другой мишени, раскрытой в настоящем документе). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) конкурирует за связывание с CD3 с антителом, выбранным из: OKT-3, отеликсизумаба, теплизумаба, визилизумаба, муромонаба, Х35-3, VIT3, ВМА030 (BW264/56), CLB-T3/3, CRIS7, YTH12.5, F111409, CLB-n^^, TR-66, WT31, WT32, SPv-T3b, 11D8, XIII-141, XIII46, XIII-87, 12F6, T3/RW2-8C8, T3/RW24B6, OKT3D, М-Т301, SMC2 и F101.01. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание с CD3 с антителом, выбранным из: OKT-3, отеликсизумаба, теплизумаба, визилизумаба, муромонаба Х35-3, VIT3, ВМА030 (BW264/56), CLB-T3/3, CRIS7, YTH12.5, F111409, CLB-T3.4.2, TR-66, WT31, WT32, SPv-T3b, 11D8, XIII-141, XIII46, XIII-87, 12F6, T3/RW2-8C8, T3/RW24B6, OKT3D, М-Т301, SMC2 и F101.01. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) конкурирует за связывание с CD3 со связывающей CD3 композицией, раскрытой в опубликованных международных заявках №WO2004/106380 и №WO99/54440; Tunnacliffe et al., Int. Immunol. 1:546-550 (1989); KjerNielsen, PNAS 101:7675-7680 (2004); или у Salmeron et al., J. Immunol. 147: 3047-3052 (1991).

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает CD3-эпсилон человека и ортолог CD3-эпсилон из другого организма. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) связывает CD3-эпсилон человека и ортолог CD3-эпсилон другого примата. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3-эпсилон человека и ортолог CD3-эпсилон яванского макака или макака-резуса. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3-эпсилон человека и ортолог CD3-эпсилон примата, выбранного из Saguinus Oedipus и Callithrix jacchus. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3эпсилон человека, ортолог CD3-эпсилон яванского макака и ортолог CD3-эпсилон мыши или крысы. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-эпсилон. Согласно другому варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает CD3-дельта человека. Согласно конкретному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD3-дельта человека, имеющий последовательность аминокислот 22-171, приведенную в референсной последовательности NCBI №NP_000723. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-дельта. Согласно другим вариантам реализации антигенсвязывающий домен антитела указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-дельта. Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3-эпсилон человека композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

- 84 043040

Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает белок человека CD3-гамма, имеющий последовательность аминокислот 23-182, приведенную в референсной последовательности NCBI № NP_000064. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-гамма. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-гамма. Согласно другим вариантам реализации антигенсвязывающий домен антитела указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-гамма. Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3-гамма человека композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает белок CD3-зета человека, имеющий последовательность аминокислот 22-164, приведенную в референсной последовательности NCBI №NP_932170. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-зета. Согласно другим вариантам реализации антигенсвязывающий домен антитела указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3-зета. Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD3-зета человека композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

Настоящее изобретение также охватывает мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают мишень, экспрессируемую на естественной клетке киллере. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на естественной клетке киллере.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени (т.е. мультивалентно связывает мишень) на естественной клетке киллере. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на естественной клетке киллере. Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции не возбуждает сигнал при связывании указанной композицией мишени на естественной клетке киллере. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из: KLRD1, KLRK1, KLRB1, 2В4 (CD244), KIR2D4, KIR2D5 и KIR3DL1. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из: CD56, CD2 и CD161. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляют собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы или с инфекционным заболеванием. Согласно конкретному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), который(ая/ое) связывает NKGD2 и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

- 85 043040

FSLFCYNVHGWWECFPVY	(NKG1;	SEQ	ID	N0:4500);
SLTWCMVEKLHYWVICDRVA	(NKG4;	SEQ	ID	NO:4501);

ILISCQEQWPVFQCYAVR (NKG7; SEQ ID NO:4502); HEEDCYWILYQHCPRAT (NKG9; SEQ ID NO:4503); LEHLCTTYPMWFHCPEGA (NKG12 SEQ ID NO:4504); SGLVCFSRFDWWECVWTS (NKG14; SEQ ID NO:4505); SLTRSRYQRFHYWVICDRVA (NKG15; SEQ ID NO:4506); и YTVACYYGVDQY WMCFSNS (NKG17; SEQ ID NO:4507).

Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, конкурирующую за связывание NKGD2 с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4500-4506 и 4507. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) с MRD-содержащим антителом, который(ая) связывается с тем же эпитопом NKGD2, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4500-4506 и 4507.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение содержит MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), который(ая) связывает CD319 (CRACC) и содержит последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из:

WRLDCWEHHEWDFWCWAHG (SEQ ID NO:4508); SLYECWRVFVSFPRCPDGS (SEQ Ш NO:4509); LYLLCEHVHDKHWECGSWL (SEQ ID NO:4510);

IHLRCTYVEPLYML CSPYA (SEQ ID NO:4511); TMMVECYMGYCYPTVF (SEQ ID

NO:4512); VLLRCQYVGV SHIKCKSVD (SEQ ID NO:4513);

LVLECFLIDAWYMKCHTTG (SEQ ID NO:4514); LRL YCIPVDHTFFKCTLYG (SEQ

ID NO:4515); YCIYRCQVQQCWMFPA (SEQ ID NO:4516);

WHIACWEMRDVHWYVCEFFV (SEQ ID NO:4517); RVLQCKWVSSEYFQCVETS (SEQ ID NO:4518); VVVECFQVKEMYWSCRPAV (SEQ ID NO:4519); и YLMYCTALEYPYF QCRQMV (SEQ ID NO:4520).

Согласно еще одному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или MRDсодержащее антитело, конкурирующее(ий) за связывание CRACC с полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: последовательностей SEQ ID NO: 4508-4519 и 4520. Согласно дополнительному варианту реализации настоящее изобретение охватывает MRD и/или мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRDсодержащее антитело), который(ая) связывается с тем же эпитопом CRACC, что и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4508-4519 и 4520.

Согласно конкретным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD2. В соответствии с одним вариантом реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает человека CD2. Согласно конкретному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает белок CD2 человека, имеющий последовательность аминокислот 25-209, приведенную в референсной последовательности NCBI № NP_001758. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания CD2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания CD2. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции с CD2 не возбуждает сигнал на клетке, на которой экспрессируется CD2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD2 и 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество других мишеней (например, опухолевый антиген согласно описанию в настоящем документе или известный в данной области техники). Согласно конкретным вариантам реализации связывающие CD2 композиции, предложенные в настоящем изобретении, не являются одноцепочечными антителами.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает CD2 человека и ортолог CD2 из другого организма. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD2 человека и ортолог CD2 другого

- 86 043040 примата. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD2 человека и ортолог CD2 яванского макака или макакарезуса. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает мишень на миелоидной клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает:

(1) мишень на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на иммунной вспомогательной клетке (например, миелоидной клетке), с тем чтобы сблизить миелоидные клетки с клеткой, тканью или инфекционным агентом, представляющим(ей) интерес.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит несколько сайтов связывания мишени (т.е. мультивалентно связывает мишень) на миелоидной клетке. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывает мишень) на вспомогательной клетке (например, миелоидной клетке). Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции не возбуждает сигнал при связывании указанной композицией мишени на миелоидной клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает рецептор Fc-гамма, выбранный из CD16 (т.е. рецептора Fc-гамма-П), CD64 (т.е. рецептора Fcгамма) и CD32 (т.е. рецептор Fc-гамма-I). Согласно конкретным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает CD64 (т.е. рецептор Fcгамма). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает мишень, выбранную из МНС класса 2 и его инвариантной цепи, TLR1, TLR2, TLR4, TLR5 и TLR6. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 2, 3, 4 или 5 мишеней на клетке, ткани или инфекционном агенте, представляющем(ей) интерес. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции расположены на поверхности клетки. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, представляют собой опухолевый антиген (например, опухолевые антигены и опухолеассоциированные/ассоциированные с раком антигены). Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством иммунной системы. Согласно дополнительным вариантам реализации 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество мишеней, связываемых указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией, связаны с заболеванием или расстройством скелетной системы (например, остеопорозом), сердечно-сосудистой системы, нервной системы, или с инфекционным заболеванием. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает представляющую интерес мишень на раковой клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает представляющую интерес мишень на иммунной клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает представляющую интерес мишень на пораженной заболеванием клетке. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает представляющую интерес мишень на инфекционном агенте (например, бактериальной клетке или вирусе). Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение охватывает способ лечения заболевания или расстройства путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, предложенной в настоящем изобретении. Конкретные варианты реализации относятся к способу лечения заболевания или расстройства путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которая содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывающей мишень). Согласно некоторым вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците, таком как T-клетка

- 87 043040 (например, CD3) и несколько сайтов связывания мишени (т.е. способна к мультивалентному связыванию), расположенной на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевого антигена на опухолевой клетке).

Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которая содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. моновалентно связывающей мишень) и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней. Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которая содержит единственный сайт связывания CD3 (например, CD3-эпсилон), моновалентно связывающий CD3, и несколько сайтов связывания 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества других мишеней.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный опухолевая клетка относится к раковому заболеванию, выбранному из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Согласно некоторым вариантам реализации домен(ы) MRD и антитело в MRD-содержащем антителе представляют собой антагонисты соответствующих им мишеней. Согласно другим вариантам реализации домен(ы) MRD и антитело в MRD-содержащем антителе представляют собой агонисты соответствующей им мишени. Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере один из доменов MRD в MRD-содержащем антителе представляет собой антагонист соответствующей им целевой молекулы, а антитело представляет собой агонист соответствующей им целевой молекулы. Согласно еще одному варианту реализации по меньшей мере один из доменов MRD в MRD-содержащем антителе представляет собой агонист соответствующей им целевой молекулы, а антитело представляет собой антагонист соответствующей им целевой молекулы.

Согласно некоторым вариантам реализации и домен(ы) MRD, и антитело в MRD-содержащем антителе связываются с растворимыми факторами. Согласно некоторым вариантам реализации и домен(ы) MRD, и антитело в MRD-содержащем антителе связываются с молекулами клеточной поверхности. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один MRD в MRD-содержащем антителе связывается с молекулой клеточной поверхности, а антитело в MRD-содержащем антителе связывается с растворимым фактором. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один MRD в MRD-содержащем антителе связывается с растворимым фактором, а антитело в MRD-содержащем антителе связывается с молекулой клеточной поверхности.

Усовершенствованная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело), которая специфически связывает требуемую мишень или мишени, может также быть получен на основе ранее известных MRD или мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела).

Например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 10-20, 20-30, 30-50, 50-100, 100-150 или более 150 замен, удалений или вставок аминокислот могут быть введены в последовательность MRD или мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело), и может быть проведен скрининг полученного(ой) MRD или мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) за связывание с требуемой мишенью или мишенями, для антагонизирования активности мишени или агонизирования активности мишени согласно описанию в примерах или с применением техник, известных в данной области техники.

Дополнительные пептидные последовательности могут быть добавлены, например, для усиления стабильности MRD in vivo или сродства MRD в отношении его мишени.

Согласно определенным вариантам реализации связывание мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело) с ее мишенью (например, клеткой) усиливается по сравнению со связыванием MRD по отдельности, антитела по отдельности и/или комбинации MRD и антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанное связывание усиливается по меньшей мере приблизительно в 2 раза, по меньшей мере приблизительно в 5 раз, по меньшей мере приблизительно в 10 раз, по меньшей мере приблизительно в 20 раз, по меньшей мере приблизительно в 50 раз, по меньшей мере приблизительно в 75 раз, по меньшей мере приблизительно в 100 раз, по меньшей мере приблизительно в 500 раз или по меньшей мере приблизительно в 1000 раз.

Кроме того, согласно некоторым вариантам реализации связывание мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело) с мишенью (например, клеткой или молекулой, содержащей несколько эпитопов), экспрессирующей и мишень MRD, и мишень антитела, усиливается по сравнению со связыванием указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) с мишенью (например, клеткой или молекулой, содержащей несколько эпитопов), экспрессирующей только мишень MRD или

- 88 043040 только мишень антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанное связывание усиливается по меньшей мере приблизительно в 2 раз, по меньшей мере приблизительно в 5 раз, по меньшей мере приблизительно в 10 раз, по меньшей мере приблизительно в 20 раз, по меньшей мере приблизительно в 50 раз, по меньшей мере приблизительно в 75 раз, по меньшей мере приблизительно в 100 раз, по меньшей мере приблизительно в 500 раз или по меньшей мере приблизительно в 1000 раз. Указанная повышенная авидность может обеспечивать связывание мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) с мишенями, нацеливание на которые ранее представляло трудности, например, связанные с G-белком рецепторы и молекулы углеводов.

Кроме того, согласно некоторым вариантам реализации связывание мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащее антитело) с мишенью MRD усиливается в области (например, организма), где локализована мишень антитела, по сравнению с областью, где мишень антитела не экспрессируется или экспрессируется на более низком уровне. Согласно некоторым вариантам реализации связывание мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) с мишенью антитела усиливается в области (например, организма), где локализована мишень MRD, по сравнению с областью, где мишень MRD не экспрессируется или экспрессируется на более низком уровне. Согласно некоторым вариантам реализации указанное связывание усиливается по меньшей мере приблизительно в 2 раза, по меньшей мере приблизительно в 5 раз, по меньшей мере приблизительно в 10 раз, по меньшей мере приблизительно в 20 раз, по меньшей мере приблизительно в 50 раз, по меньшей мере приблизительно в 75 раз, по меньшей мере приблизительно в 100 раз, по меньшей мере приблизительно в 500 раз или по меньшей мере приблизительно в 1000 раз.

Согласно предпочтительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) сохраняет специфическую активность исходного антитела. Соответственно, согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) способна индуцировать комплементзависимую цитотоксичность. Согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) способна индуцировать антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (АЗКЦ). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) способна индуцировать апоптоз. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) способна уменьшать объем опухоли. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) способны ингибировать рост опухоли.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) демонстрирует повышенную активность или фармакодинамические свойства по сравнению с соответствующим антителом без присоединенного MRD. Соответственно, согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) обладает большей авидностью, чем соответствующее антитело без присоединенного MRD. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) приводит к повышенной агрегации рецепторов по сравнению с соответствующим антителом без присоединенного MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) действует как антагонист активности мишени в более выраженной степени, чем соответствующее антитело без присоединенного MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) действует как агонист активности мишени в более выраженной степени, чем соответствующее антитело без присоединенного MRD. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) имеет улучшенный профиль фармакодинамики по сравнению с соответствующим антителом без присоединенного MRD.

Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело обладает большей терапевтической эффективностью, чем соответствующее антитело без присоединенного MRD.

Согласно другим вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) оказывают один или большее количество следующих эффектов: ингибируют пролиферацию опухолевых клеток, уменьшают онкогенность опухоли, ингибируют рост опухоли, повышают выживаемость пациентов, запускают клеточную смерть опухолевых клеток, обеспечивают дифференцировку опухолеобразующих клеток в неонкогенное состояние или предотвращают метастазы опухолевых клеток.

Согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная муль

- 89 043040 тиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) по меньшей мере настолько же стабильна, как и соответствующие антитело без присоединенного MRD. Согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) более стабильна, чем соответствующее антитело без присоединенного MRD. Стабильность MRD-антитела может быть измерена с применением способов, известных специалистам в данной области техники, включая, например, техники ИФА ELISA. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) стабильно в цельной крови при 37°С на протяжении по меньшей мере приблизительно 10 ч, по меньшей мере приблизительно 15 ч, по меньшей мере приблизительно 20 ч, по меньшей мере приблизительно 24 ч, по меньшей мере приблизительно 25 ч, по меньшей мере приблизительно 30 ч, по меньшей мере приблизительно 35 ч, по меньшей мере приблизительно 40 ч, по меньшей мере приблизительно 45 ч, по меньшей мере приблизительно 48 ч, по меньшей мере приблизительно 50 ч, по меньшей мере приблизительно 55 ч, по меньшей мере приблизительно 60 ч, по меньшей мере приблизительно 65 ч, по меньшей мере приблизительно 70 ч, по меньшей мере приблизительно 72 часов, по меньшей мере приблизительно 75 ч, по меньшей мере приблизительно 80 ч, по меньшей мере приблизительно 85 ч, по меньшей мере приблизительно 90 ч, по меньшей мере приблизительно 95 ч или по меньшей мере приблизительно 100 ч.

Согласно определенным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) обладает по меньшей мере таким же сродством к Fc-рецепторами, что и соответствующее исходное антитело. Согласно другим неисключительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) обладает по меньшей мере таким же сродством к рецепторам комплемента, что и соответствующее исходное антитело. Согласно другим неисключительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) имеет по меньшей мере такой же период полувыведения, что и соответствующее исходное антитело. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) может экспрессироваться на уровнях, соизмеримых с уровнями экспрессии соответствующего исходного антитела.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) обладает повышенным сродством к Fc-рецепторам по сравнению с соответствующим исходным антителом. Согласно другим неисключительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) обладает повышенным сродством к рецепторам комплемента по сравнению с соответствующим исходным антителом. Согласно другим неисключительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) имеет увеличенный период полувыведения по сравнению с соответствующим исходным антителом. Согласно другим вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) может экспрессироваться на уровнях, повышенных по сравнению с уровнями экспрессии соответствующего исходного антитела.

Иммуноконъюгаты (конъюгаты MRD-содержащего антитела с лекарственными средствами)

Применение конъюгатов антител с лекарственными средствами для местной доставки цитотоксических агентов обеспечивает направленную доставку лекарственного средства в опухоли и внутриклеточную аккумуляцию в опухолях, в случаях, когда системное введение указанных неконъюгированных лекарственных агентов может приводить к неприемлемым уровням токсичности не только для опухолевых клеток, которые требуется элиминировать, но и для нормальных клеток (Baldwin et al., Lancet, стр. 603-05 (1986); Thorpe, Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, в Monoclonal Antibodies'84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (ed.s), p. 475-506) (1985)).

Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение включает мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело), ковалентно или иным образом связанную с цитотоксическим агентом (нагрузкой) (т.е. в виде комплексов мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции и цитотоксического агента (например, комплексов MRD-содержащего антитела и цитотоксического агента). Согласно некоторым вариантам реализации указанный цитотоксический агент ковалентно связан с мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащим антителом), посредством линкера. Согласно некоторым вариантам реализации указанный линкер, соединяющий мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию с цитотоксическим агентом, может быть расщеплен протеазой. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой химиотерапевтический агент, ингибирующий рост агент, токсин (например, ферментативно активный токсин бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, или его фрагменты), радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат) или пролекарство. Способы применения

- 90 043040 иммуноконъюгатов (конъюгатов MRD-содержащего антитела с лекарственными средствами) также охвачены настоящим изобретением.

Цитотоксические агенты, которые могут быть ковалентно или иным образом связаны с мультивалентными и мультиспецифическими композициями (например, MRD-содержащим антителом), включают, не ограничиваясь указанным, любой агент, неблагоприятный для клеток (например, убивающий клетки). Цитотоксины, подходящие для композиций и способов согласно настоящему изобретению, включают, наряду с прочими, алкилирующие агенты, интеркалирующие агенты, антипролиферативные агенты, антимитотические агенты, связывающие тубулин агенты, алкалоиды барвинка, ендиины, трихотецены, подофиллотоксины или производные подофиллотоксинов, лекарственные средства семейства птеридинов, таксаны, антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (ранее актиномицин, доластатины (например, доластатин 10, доластатин 11 и доластатин 15)), ингибиторы топоизомеразы и химиотерапевтические агенты с комплексами платины (например, цисплатин).

Согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат цитотоксический агент, который представляет собой деполимеризующий тубулин агент. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат ауристатин или производное или аналог ауристатина. Согласно одному варианту реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат монометил ауристатин Е (ММАЕ). Согласно еще одному варианту реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат монометил ауристатин F (MMAF). Согласно дополнительным вариантам реализации композиция с иммуноконъюгатом, предложенная в настоящем изобретении, содержит доластатин или пептидный аналог или производное доластатина, например, ауристатин (см., например, патенты США № 5635483, 5780588 и 5663149).

Согласно дополнительным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат молекулу майтансиноида. Майтансиноиды представляют собой ингибиторы митоза, действующие за счет ингибирования полимеризации тубулина. Способы получения майтансиноидов и их терапевтическое применение раскрыты, например, в патентах США № 5208020; 5416064, 6441163 и европейском патенте ЕР0425235В1, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанный цитотоксин представляет собой майтансиноид, производное или аналог майтансиноида. Фрагменты майтансиноидных лекарственных средств представляют собой привлекательные лекарственные фрагменты для конъюгатов антител с лекарственными средствами, поскольку они:

(i) относительно доступны для получения путем ферментации или химической модификации, или дериватизации продуктов ферментации, (ii) поддаются дериватизации функциональными группами, подходящими для конъюгации с антителами посредством не-дисульфидных линкеров, (iii) стабильны в плазме, и (iv) эффективны против клеток разнообразных опухолевых линий.

Соединения майтансина, подходящие для применения в качестве фрагментов майтансиноидных лекарственных средств, хорошо известны в данной области техники и могут быть выделены из природных источников в соответствии с известными способами, получены с применением техник генной инженерии (см. Yu et al., PNAS 99:7968-7973 (2002)); либо майтансинол и аналоги майтансинола могут быть получены синтетически в соответствии с известными способами.

Согласно конкретным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают майтансиноид DM1 (N(2')-деацетил-N(2')-(3-меркапто-1-оксопропил)майтансин). Согласно другим конкретным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают майтансиноид DM2. Согласно дополнительным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают майтансиноид DM3 (N(2')-деацетил-N2-(4-меркапто-1оксопентил)майтансин) или DM4 (N(2')-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)майтансин).

Согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают цитотоксический агент, который представляет собой алкилирующий агент. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент выбран из мехлоретамина, тиотепы, тиотепы хлорамбуцила, мелфалана, кармустина (BSNU), BCNU, ломустина (CCNU), циклофосфамида, бусульфана, дибромманнитола и стрептозоцина.

Согласно другим вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, включают цитотоксический агент, который представляет собой антиметаболит. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент выбран из метотрексата, дихлорметотрексата, 6-меркаптопурина, 6-тиогуанина, цитарабина, 5-фторурацила и 5-фторурацила декарбазина.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанный конъюгат мультивалентной и мультиспецифической композиции и лекарственного средства (например, конъюгат MRD-содержащего антитела и лекарственного средства) способен обеспечивать двухцепочечные разрывы ДНК. Согласно допол

- 91 043040 нительным вариантам реализации указанный конъюгат MRD-содержащего антитела и лекарственного средства содержит антибиотик из семейства калихемициновых антибиотиков, способный производить двухцепочечные разрывы ДНК в субпикомолярных концентрациях. Согласно дополнительным вариантам реализации конъюгат мультивалентной и мультиспецифической композиции и лекарственного средства (например, конъюгат MRD-содержащего антитела и лекарственного средства) содержит калихемицин. Информацию о получении конъюгатов с представителями семейства калихемицинов, см. например, в патентах США № 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 и 5877296 (все патенты принадлежат American Cyanamid Company). Структурные аналоги калихемицина, которые могут содержаться в конъюгате мультивалентной и мультиспецифической композиции и лекарственного средства (например, конъюгате MRD-содержащего антитела и лекарственного средства) согласно настоящему изобретению, включают, не ограничиваясь перечисленными, гамма/, альфа₂ ^I, альфа/, N-ацетилгамма/, PSAG и тэта/ (Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), и Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998).

Согласно другим вариантам реализации композиции с конъюгатом мультивалентной и мультиспецифической композиции и лекарственного средства (например, конъюгат MRD-содержащего антитела и лекарственного средства), предложенные в настоящем изобретении, включают цитотоксический агент, выбранный из адриамицина, доксорубицина, митомицина С, бусульфана, цитоксина, хлорамбуцила, этопозида, этопозида фосфата, СС-1065, дуокармицина, KW-2189, СС1065, таксотера (доцетаксела), метоптерина, аминоптерина, топотекана, камптотецина, порфиромицина, блеомицина, тенипозида, эсперамицинов, митрамицина, антрамицина (АМС), флударабина, тамоксифена, таксотера (доцетаксела), цитозинарабинозида (Ara-С), аденозинарабинозида, цисплатина, карбоплатина, цис-дихлор-диаминоплатины (II) (DDP), цисплатина, хлорохина, циклоспорина А, доцетаксела, паклитаксела, таксола, винорелбина, виндезина, цитохалазина В, грамицидина D, этидия бромида, эметина, митомицина, ифосфамида, циклофосфамида, тенопозида, карминомицина, порфиромицина, дигидроксиантрацендиона, митоксантрона, митрамицина, дактиномицина, актиномицина D, пуромицина 1-дегидротестостерона, адриамицина, глюкокортикоидов, прокаина, тетракаина, лидокаина, пропранолола, эпотилона, QFA, комбретастатина, комбретастатина А4 фосфата, винбластина, винкристина, колхицина, гелданамицина, доксорубицина, хлорамбуцила, фенилендиамина ауристатина F (AFP)), монометилауристатина, представителей семейства агентов, известных в совокупности как комплекс LL-E33288, описанный в патентах США № 5053394, 5770710, а также эсперамицинов (патент США № 5877296) или их производного или аналога; а также их производных и аналогов. Дополнительные подходящие токсины и химиотерапевтические агенты описаны в источниках: Remington's Pharmaceutical Sciences, 19^th Ed. (Mack Publishing Co. 1995), а также Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7^th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985). Кроме того, дополнительную информацию о типах цитотоксинов, линкеров и других способах, которые могут использоваться или быть рутинным образом адаптированы для конъюгирования с терапевтическими агентами с комплексом MRD-содержащего антитела, можно найти, например, в опубликованных международных заявках WO2007/059404; Saito et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215 (2003); Trail et al., Cancer Immunol Immunother. 52:328-337 (2003); Payne, Cancer Cell 3:207-212 (2003); Allen, Nat. Rev. Cancer 2:750-763(2002); Pastan et al., Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091 (2002); и Senter et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264 (2001); каждый из указанных источников полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Цитотоксические химиотерапевтические агенты, которые могут применяться с иммуноконъюгатах согласно настоящему изобретению (например, конъюгатах мультивалентных и мультиспецифических композиций с лекарственными средствами, таких как конъюгаты MRD-содержащего антитела с лекарственными средствами), включают ядовитые лектины и растительные или другие токсины (например, рицин, абрин, модессин, ботулиновый и дифтерийный токсины). Предполагается, что несколько копий токсина или комбинации различных токсинов могут, необязательно, быть соединены с мультиспецифической и мультивалентной композицией, предложенной в настоящем изобретении (например, MRDсодержащим антителом), с обеспечением таким образом дополнительной цитотоксичности. Ферментативно активные токсины и их фрагменты которые могут применяться в композициях, предложенных в настоящем изобретении, включают, не ограничиваясь перечисленными, А-цепь дифтерийного токсина, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, А-цепь экзотоксина (Pseudomonas aeruginosa), экзотоксин Pseudomonas, эндотоксин Pseudomonas, А-цепь рицина, А-цепь абрина, А-цепь модессина, альфа-сарцин, белки Aleurites fordii, рибонуклеазу, ДНКазу I, стафилококковый энтеротоксин-А, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и PAP-S), ингибитор Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор Saponaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трихотецены. См., например, Pastan et al., Cell 47:641 (1986), Goldenberg et al., Cancer Journal for Clinicians 44:43 (1994) и опубликованные международные заявки № WO93/21232 и WO93/21232; каждый из указанных источников полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Как правило, фрагменты лекарственных средств на основе пептидов могут быть получены путем образования пептидной связи между двумя или большим количеством аминокислот и/или пептидных фрагментов. Такие пептидные связи могут быть получены, например, в соответствии с методом жидкофазного синтеза (см.

- 92 043040

Е. Schroder и K. Lubke, The Peptides, volume 1, pp. 76-136, 1965, Academic Press), хорошо известным в области химии пептидов.

Ауристатиновые/доластатиновые фрагменты лекарственных средств могут быть получены в соответствии со способами согласно: патентам США № 5635483 и 5780588; Pettit et al., J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465 (1989); Pettit et al., Anti-Cancer Drug Design 13:243-277 (1998); Pettit et al., Synthesis 719-725 (1996); Pettit et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15:859-863 (1996); и Doronina et al., Nat. Biotechnol 21(7):778-784 (2003).

Согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат высокорадиоактивный атом. Доступны разнообразные радиоактивные изотопы для получения радиоконъюгатов с мультивалентными и мультиспецифическими композициями (например, MRDсодержащими антителами). Примеры включают At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y.⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² и радиоактивные изотопы Lu. Если конъюгат применяется для детекции, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например технеций-99 (tc^99m) или I¹²³, или спиновую метку для визуализации с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (также известной как магнитная резонансная томография, МРТ), такую как, опять же, йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.

Радиоактивные или другие метки могут быть включены в конъюгат с применением известных в данной области техники техник. Например, пептид может быть синтезирован биологически или путем химического аминокислотного синтеза с применением подходящих предшественников аминокислот, с включением, например, фтора-19 вместо водорода. Метки, такие как технеций-99 (tc^99m) или I¹²³, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸ и In¹¹¹ могут быть присоединены к пептиду через остаток цистеина. Иттрий-90 может быть присоединен через остаток лизина. Метод IODOGEN (Fraker et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57 (1978)) может применяться для включения йода-123. В источнике Моноклоналъные антитела в иммуносцинтиграфии (Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy, Chatal, CRC Press 1989) подробно описаны другие способы, которые могут рутинным образом применяться для мечения композиций, предложенных в настоящем изобретении. Линкер может представлять собой расщепляемый линкер, облегчающий высвобождение лекарственного средства в клетке. Например, может применяться кислотолабильный линкер (например, гидразон), чувствительный к протеазе (например, чувствительный к пептидазе) линкер, фотолабильный линкер, диметильный линкер или дисульфид-содержащий линкер (Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); патент США № 5208020, опубликованная заявка на патент США №20110293513). Соответственно, настоящее изобретение охватывает мультивалентные и мультиспецифические композиции, содержащие один или большее количество линкеров, которые могут содержать в качестве части цепи любые из разнообразных групп, расщепляющихся in vivo, например, в клетке, со скоростью, повышенной относительно скорости расщепления конструкций, в которых отсутствуют такие группы. Также предложены конъюгаты линкерных фрагментов с терапевтическими и диагностическими агентами. Указанные линкеры подходят для получения аналогов пролекарственных терапевтических агентов и для обратимого связывания терапевтического или диагностического агента (например, цитотоксина или MRD) с агентом для нацеливания, детектируемой меткой или твердой подложкой. Указанные линкеры могут быть стабильными в плазме, не высвобождая MRD или цитотоксический агент. В случае цитотоксинов линкеры могут быть стабильными в плазме и лабильными при интернализации для высвобождения цитотоксина в активной форме.

Домены MRD и/или цитотоксические агенты, необязательно, соединены друг с другом или с мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащим антителом) согласно настоящему изобретению линкером согласно описанию в настоящем документе или известным из других источников в данной области техники. Конъюгаты MRD-содержащего антитела с MRD или цитотоксическим агентом могут быть получены с применением различных бифункциональных связывающих белки агентов, известных в данной области техники, включая, но не ограничиваясь перечисленными, связывающие агенты, содержащие группу, выбранную из: 6-малеимидокапроила (МС), малеимидокапроил-полиэтиленгликоля (MC(PEG)6-OH (подходит для присоединения к цистеинам антитела)), малеимидопропаноила (МР), МРВН, валин-цитруллина (val-cit (пример дипептида в расщепляемом протеазой линкере)), метил-валин-цитруллина (Me-Val-CitN, линкера, в котором пептидная связь была модифицирована для предотвращения расщепления катепсином В) аланин-фенилаланина (ala-phe), р-аминобензилоксикарбонила (РАВ (пример саморасщепляющегося линкерного компонента)), валинцитруллин-р-аминобензилоксикарбонила (vc-PAB), N-сукцинимидил-4-(2-пиридилтио) пентаноата (SPP), N-сукцинимидила 4-(И-малеимидометил) циклогексан-1 карбоксилата (SMCC), LC-SMCC, Nсукцинимидил(4-йод-ацетил)аминобензоата (SIAB), IT (иминотиолана), SPDP (М-сукцинимидил-3-(2пиридилдитио)пропионата), 6-малеимидокапроил-валин-цитруллин-p-аминобензилоксикарбонила (MCvc-PAB), этиленокси-CH₂CH₂O- в виде одной или большего количества повторяющихся единиц (ЕО или РЕО), BMPS (сложного эфира N-в-малеимидопропил-оксисукцинимида), EMCS (сложного эфира N-ε-малеимидокапроил-оксисукцинимида), GMBS (сложного эфира N-γ-малеимидобутирилоксисукцинимида), HBVS (винилсульфона), MBS (сложного эфира м-малеимидобензоил-N

- 93 043040 гидроксисукцинимида), SBAP (сукцинимидил-З-(бромацетамидо)пропионата), SIA (сукцинимидилйодацетата), SMPB (сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутирата), SMPH (сукцинимидил-6-(вмалеимидопропионамидо)-гексаноата), сульфо-EMCS (сложного эфира N-ε-малеимидокапроилоксисукцинимида) (сложного эфира N-ε-малеимидо-капроил-оксисульфосуkцинимида), сульфо-GMBS (сложного эфира N-γ-малеимидобутирил-оксисульфосукцинимида), сульфо-KMUS (сложного эфира N[каппа-малеимидоундеканоилокси]сульфосукцинимида), сульфо-MBS (сложного эфира ммалеимидобензоил-N-гидроксисульфосуkцинимида), сульфо-SMCC (сульфосукцинимидил-4-[Nмалеимидометил]циклогексан-1-карбоксилата), сульфо-SIAB (сульфосукцинимидил(4иодацетил)аминобензоата), сульфо-SMPB (сукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутирата) (сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидофенил)бутирата), SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоата), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бисазидосоединения (такие как бис-(р-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(р-диазонийбензоил)-этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бисактивные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Дополнительные линкерные компоненты известны в данной области техники и некоторые из них описаны в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция ковалентно связана с цитотоксическим агентом посредством линкера в 1-5, 5-10, 1-10 или 1-20 сайтах на мультивалентной и мультиспецифической композиции. В соответствии с дополнительными вариантами реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция ковалентно связана с цитотоксическим агентом посредством линкера более чем в 2, 5 или 10 сайтах на мультивалентной и мультиспецифической композиции.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс с мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией (например, MRD-содержащее антитело) связан с пролекарством. Синтез пролекарства, химическое связывание с антителами и фармакодинамические свойства известны в данной области техники и могут рутинным образом использоваться для получения и применения предложенных в настоящем изобретении мультивалентных и мультивалентных композиций, которые содержат пролекарства, например, композиций с MRD-содержащим антителом и пролекарством. См., например, межд. публ. №WO96/05863 и патент США № 5962216, каждый из которых полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Как вариант, гибридный белок, содержащий антитело и цитотоксический агент, может быть получен, например, с применением рекомбинантных техник или пептидного синтеза. Молекула рекомбинантной ДНК может содержать области, кодирующие антитело и цитотоксические фрагменты конъюгата, смежные друг с другом или разделенные областью, кодирующей линкерный пептид, не устраняющий требуемые свойства конъюгата.

Мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело), предложенная в настоящем изобретении, также может быть конъюгирована с радиоактивным изотопом для получения цитотоксических радиофармацевтических средств, также называемые радиоиммуноконъюгатами. Примеры радиоактивных изотопом, которые могут быть конъюгированы с мультивалентными и моновалентными мультиспецифическими композициями (например, MRDсодержащими антителами) для диагностического или терапевтического применения, включают, не ограничиваясь перечисленными, иод¹³¹, индий¹¹¹, иттрий⁹⁰ и лютеций¹⁷⁷. В данной области техники установлены способы получения радиоиммуноконъюгатов. Примеры радиоиммуноконъюгатов коммерчески доступны, включая Zevalin™ (IDEC Pharmaceuticals) и Bexxar™ (Corixa Pharmaceuticals); аналогичные способы могут применяться для получения радиоиммуноконъюгатов с применением MRD-содержащих антител согласно настоящему изобретению.

Способы конъюгации линкерных фрагментов с лекарственным средством и нацеленными на клетки белками, такими как антитела, известны в данной области техники и включают описанные, например, в патентах США №5208020 и 6441163; опубликованные международные заявки № WO2005037992, WO2005081711 и WO2006/034488, каждая(ый) из которых полностью включен(а) в настоящий документ посредством ссылки. См., также например, источники: Arnon et al., Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy, в Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., Antibodies For Drug Delivery, в Controlled Drug Delivery (2^nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Saito et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215 (2003); Trail et al., Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337 (2003); Payne, Cancer Cell 3:207212 (2003); Allen et al., Nat. Rev. Cancer 2:750-763 (2002); Pastan et al., Curr. Opin. Investig. Drugs 3:10891091 (2002); и Senter et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264 (2001), содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция, предложенная в настоящем изобретении, содержит цитотоксический агент (например, конъюгат MRD-содержащее антителоцитотоксический агент) и может в общем случае называться в настоящем документе иммуноконъюгатом.

- 94 043040

Согласно некоторым вариантам реализации иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению связывает мишень на клеточной поверхности, которая интернализуется клеткой. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание иммуноконъюгата согласно настоящему изобретению (например, конъюгата MRD-содержащего антитела и цитотоксического агента) с мишенью на клеточной поверхности приводит к интернализации иммуноконъюгата клеткой in vitro. Согласно дополнительным вариантам реализации связывание иммуноконъюгата с мишенью на клеточной поверхности приводит к интернализации композиции клеткой in vivo. Способы лечения пациента, описанные в настоящем документе, могут включать: введение пациенту терапевтически эффективного количества иммуноконъюгата (например, предложенной в настоящем изобретении мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, содержащей цитотоксический агент, например, конъюгата MRD-содержащего антитела и цитотоксического агента), который содержит цитотоксический агент и связывает мишень, которая интернализуется клеткой. Согласно некоторым вариантам реализации указанный иммуноконъюгат содержит цитотоксический агент, раскрытый в настоящем документе. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный иммуноконъюгат содержит цитотоксический агент, выбранный из алкилирующего агента, антипролиферативного агента, связывающего тубулин агента, алкалоида барвинка, енедиина, подофиллотоксина, производного подофиллотоксина, представителя семейства птеридиновых лекарственных средств, таксана, доластатина, ингибитора топоизомеразы, или химиотерапевтического агента с комплексом платины. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой майтансиноид, производное или аналог майтансиноида. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой майтансиноид DM1, DM2 или DM3. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой ауристатин или производное или аналог ауристатина. Согласно конкретным вариантам реализации указанный цитотоксический агент представляет собой ММАЕ или MMAF Указанные цитотоксические агенты, необязательно, присоединен к другим компонентам иммуноконъюгата посредством линкера. Согласно некоторым вариантам реализации указанный цитотоксический агент присоединен к другим компонентам иммуноконъюгата посредством ферментативно расщепляемого линкера. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный цитотоксический агент присоединен к другим компонентам иммуноконъюгата посредством кислотолабильного линкера.

Согласно дополнительным вариантам реализации активность несвязанного цитотоксического агента иммуноконъюгата согласно настоящему изобретению составляет менее 10^-7М, 10^-8М или 10^-9М. Согласно дополнительным вариантам реализации активность несвязанного цитоксина составляет от 10^-8 до 10’11M. Согласно некоторым вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, выбрана из CD19, CD22, CD30, CD33, CD56, CD70, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133, CD138, ПСМА, EphA2, ErbB2 (CD340), SLC44A4, MN (карбоангидразы IX), GPNMB (гликопротеина неметастатической меланомы), Cripto и интегрина aV. Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, выбрана из CD1, CD1a, CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD11A, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD25, TNFRSF5 (CD40), CD64, CD74, CD79, CD105, CD174, CD205, CD227, CD326, CD340, муцина 16 (MUC16), эпителиального гликопротеина-1 (EGP-1), EGP-2, рецептора ЭФР (ErbB1), ErbB2, ErbB3, фактора Н, FHL-1, Flt-3, рецептора фолиевой кислоты, Ga 733, GROB, HMGB-1, индуцируемого гипоксией фактора (HIF), HM1.24, HER-2/neu, инсулиноподобного фактора роста (ILGF), ИФН-гамма, ИФН-альфа, ИФН-бета, рИЛ-2, рИЛ-4, рИЛ-6, рИЛ-13, рИЛ-15, рИЛ17, рИЛ-18, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-25, IP-10, рИФР-1, Ia, HM1.24, HCG, HLA-DR, ED-В, TMEFF2, EphB2, FAP (белка активации фибробластов), мезотелина, рЭФР, TAG-72, GD2 (кодируемого геном B4GALNT1) и 5Т4.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, представляет собой миелоидную и гематопоэтическую мишень, выбранную из CD33, CD64, TNFRSF5 (CD40), CD56 и CD138. Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, представляет собой мишень карциномы, выбранную из молекулы адгезии эпителиальных клеток (EpCam), GD2, рЭФР, CD74, CD227, CD340, муцина 16 (MUC16), GD2, GPNMB, ПСМА, crypto, TMEFF2, EphB2, 5t4, мезотелина, TAG-72 и MN.

Согласно другим вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, представляет собой В-клеточную мишень, выбранную из CD19/CD21, CD20, CD22, TNFRSF5 (CD40), CD70, CD79a, CD79b и CD205. Согласно дополнительным вариантам реализации мишень, связываемая указанным иммуноконъюгатом, представляет собой T-клеточную мишень, выбранную из CD25, CD30, TNFRSF5 (CD40), CD70 и CD205. Согласно дополнительным вариантам реализации связываемая мишень представляет собой мишень, выбранную из CD105 на эндотелиальных клетках, FAP на стромальных клетках и сосудистой мишени ED-В.

Согласно дополнительным вариантам реализации иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению связывается с опухолевым антигеном клеточной поверхности и второй мишенью, которая связана с путем ускользания при устойчивости к химиотерапии. Согласно некоторым вариантам реализации указанный опухолевый антиген клеточной поверхности выбран из

- 95 043040 рЭФР, ErbB2,

ЕгЬВЗ, ErbB4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рТрФР-1, CD3, CD 19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно дополнительным вариантам реализации иммуноконъюгат связывает P-гликопротеин (кодируемый MDR1) и антиген клеточной поверхности. Согласно конкретным вариантам реализации указанный антиген клеточной поверхности представляет собой опухолевый антиген. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный опухолевый антиген выбран из:

рЭФР, ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ, ЕгЬВ4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рТрФР-1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно конкретным вариантам реализации указанный иммуноконъюгат конкурирует за связывание CD30 с SGN-35 (брентуксимабом). Согласно дополнительным вариантам реализации указанный иммуноконъюгат конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом.

Согласно дополнительным вариантам реализации иммуноконъюгат связывает MRP (ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью белок) и антиген клеточной поверхности. Согласно конкретным вариантам реализации указанный антиген клеточной поверхности представляет собой опухолевый антиген. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный опухолевый антиген выбран из:

рЭФР, ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ, ЕгЬВ4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рТрФР-1, CD3,

CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно конкретным вариантам реализации указанный иммуноконъюгат конкурирует за связывание CD30 с SGN-35 (брентуксимабом). Согласно дополнительным вариантам реализации указанный иммуноконъюгат конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом. Как вариант, может быть получен гибридный белок, содержащий указанное антитело и цитотоксический агент, например, в помощью рекомбинантных техник или пептидного синтеза. Отрезок ДНК может содержать соответствующие области, кодирующие два фрагмента конъюгата, либо смежные, либо или разделенные областью, кодирующей линкерный пептид, не устраняющий нужные свойства указанного конъюгата.

Дополнительно предложены следующие варианты реализации для любых из описанных выше иммуноконъюгатов. Согласно одному варианту реализации иммуноконъюгат обладает киллинговой активностью в отношении клеток in vitro или in vivo. Согласно одному варианту реализации указанный линкер присоединен к антителу через тиольную группу антитела. Согласно одному варианту реализации указанный линкер может быть расщеплен протеазой. Согласно одному варианту реализации указанный линкер содержит дипептид валин-цитруллин. Согласно одному варианту реализации указанный линкер содержит п-аминобензильную единицу. Согласно одному варианту реализации указанная п-аминобензильная единица располагается между лекарственным средством и сайтом расщепления протеазой в линкере. Согласно одному варианту реализации указанная п-аминобензильная единица представляет собой паминобензилоксикарбонил (РАВ). Согласно одному варианту реализации указанный линкер содержит 6малеимидокапроил. Согласно одному варианту реализации указанный 6-малеимидокапроил располагается между антителом и сайтом расщепления протеазой в линкере. Перечисленные выше варианты реализации могут использоваться по отдельности или в любой комбинации друг с другом. MRD-содержащее антитело согласно настоящему изобретению может также быть конъюгировано с активирующим пролекарство ферментом, преобразующим пролекарство (например, пептидильный химиотерапевтический агент, см. например, WO81/01145) в активное противораковое лекарственное средство. См., например, WO88/07378 и патент США № 4975278, содержание которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Ферментный компонент иммуноконъюгата предпочтительно способен воздействовать на пролекарство таким образом, чтобы оно преобразуется в более активную цитотоксическую форму. См., например, Pastan et al., Cell, 47:641 (1986), и Goldenberg et al., Cancer Journal for Clinicians, 44:43 (1994). Ферментативно активные токсины и их фрагменты, которые могут применяться, включают А-цепь дифтерийного токсина, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, А-цепь экзотоксина (Pseudomonas aeruginosa), А-цепь рицина, А-цепь абрина, А-цепь модессина, альфасарцин, белки Aleurites fordii, диантиновые белки, белки Phytolaca americana (PAPI, PAPII и РАР-S), ингибитор Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор Saponaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трихотецены. См., например, WO93/21232.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении (например, MRD-содержащие антитела) конъюгированы с радиоизотопом, таким как ⁹⁰Y, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹²³I, ^mIn, ¹⁰⁵Rh, ¹⁵³Sm, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re и ¹⁸⁸Re, с применением любого из ряда хорошо известных хелаторов или путем прямого мечения. Согласно

- 96 043040 другим вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело соединяют с лекарственными средствами, пролекарствами или лимфокинами, такими как интерферон. В композиции, предложенные в настоящем изобретении, может быть внесена метка с помощью реагентов-лигандов, которые связывают, хелатируют или иным образом образуют комплекс с радиоизотопом металла, причем указанный реагент способен вступать в реакцию с тиольной группой встроенных цистеинов антитела, с применением техник, известный в данной области техники, таких как описанные в источнике: Current Protocols in Immunology, т. 1 и 2, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs. (1991). Хелатные лиганды, способные образовывать комплекс с ионом металла и подходящие для применения в композициях и способах согласно настоящему изобретению, включают DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA и ТЕТА (Macrocyclics, Даллас, Техас). Нацеливание на радионуклиды может обеспечиваться за счет образования комплексов с конъюгатами антител с лекарственными средствами согласно настоящему изобретению (Wu et al., Nature Biotechnology 23(9): 1137-1146 (2005)). Линкерные реагенты, такие как DOTA-малеимид (4малеимидобутирамидобензил-DOTA) могут быть получены с применением реакции аминобензил-DOTA с 4-малеимидомасляной кислотой (Fluka), активированной изопропилхлорформиатом (Aldrich), после процедуры согласно Axworthy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(4): 1802-1807 (2000)). DOTAмалеимидные реагенты вступают в реакцию со свободными встроенными цистеинами в антителах и обеспечивают присутствие образующего металлокомплекс лиганда на антителе (Lewis et al., Bioconj. Chem. 9:72-86 (1998)). Коммерчески доступны хелатирующие линкерные реагенты для мечения, такие как DOTA-NHS (1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты moho-(Nгидроксисукцинимидный сложный эфир) (Macrocyclics, Даллас, Техас).

Конъюгаты мультивалентных и мультиспецифических композиций, предложенных в настоящем изобретении (например, MRD-содержащих антител), и цитотоксина могут быть рутинным образом получены с применением разнообразных бифункциональных связывающих белки агентов, таких как Nсукцинимидил-3-(2-пиридилдитиол)пропионат (SPDP), иминотиолан (IT), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис(разидобензоил) гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(р-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат), и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Согласно конкретным вариантам реализации указанный токсин конъюгирован с MRD-содержащим антитело посредством ферментативно расщепляемой линкерной системы (например, такой как в SGN-35). Могут также применяться конъюгаты MRD-содержащего антитела и одного или большего количества низкомолекулярных токсинов, таких как калихемицин, майтансиноиды, трихотецен и СС1065, и производных указанных токсинов, обладающих токсической активностью.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело может образовывать комплекс или содержать домены MRD, которые связываются с другими иммунологически активными лигандами (например, хемокинами, цитокинами и антителами или их фрагментами), причем полученная молекула связывается с неопластической клеткой или другой мишенью, а также хемокином, цитокином или эффекторной клеткой, такой как T-клетка. Согласно определенным вариантам реализации указанные конъюгаты могут быть получены в виде гибридных белков. Ферменты согласно настоящему изобретению могут быть ковалентно связаны с антителом с применением техник, хорошо известных в данной области техники, например, с применением гетеробифункциональных реагентов для перекрестного связывания, описанных выше. Как вариант, гибридные белки, содержащие по меньшей мере антиген-связывающую область антитела согласно настоящему изобретению, соединенную с минимальным функционально активным фрагментом фермента согласно настоящему изобретению, могут быть сконструированы с применением техник рекомбинантной ДНК, известных в данной области техники.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный N-конец или С-конец антитела, с которым функционально связан MRD в указанные гибридах MRD-антитело, урокочен. Согласно предпочтительным вариантам реализации указанное укорочение не предотвращает или не уменьшает способность указанного антитела связываться с целевым антигеном через антигенсвязывающий домен. Согласно другим вариантам реализации указанное укорочение не предотвращает или не уменьшает эффекторную функцию, период полувыведения и/или АЗКЦ-активность Fc. Согласно другим вариантам реализации домены MRD присоединены в концевой области цепи указанного антитела. В частности, согласно определенным вариантам реализации указанный MRD присоединен в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 остатков от С-концевой аминокислоты тяжелой цепи. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD присоединен в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 остатков от Сконцевой аминокислоты легкой цепи. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный MRD присоединен в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 остатков от N-концевой аминокислоты тяжелой цепи. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD присоединен в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, или 50 остатков от N-концевой аминокислоты легкой цепи. Соответственно, например, MRD, который соединен с N-концом тяжелой цепи, может быть присоединен к первой, второй, третьей, четвертой, пятой или десятой аминокислоте от N-конца тяжелой цепи. Напри

- 97 043040 мер, гибрид MRD-антитело, содержащий MRD, соединенный с N-концом тяжелой цепи, может включать аминокислоты 1-3 последовательности тяжелой цепи, соединенной с указанным MRD, который соединен с аминокислотой 4 последовательности тяжелой цепи.

Согласно определенным вариантам реализации один или большее количество доменов MRD присоединены к антителу в локализациях, отличных от концов легких и тяжелых цепей антитела. Указанный MRD может быть присоединен к любому фрагменту антитела, не устраняющему способность указанного антитела связывать соответствующую ему мишень. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD расположен вне антитело-комбинирующего сайта. Например, указанный MRD может быть расположен в пределах последовательности тяжелой цепи или в пределах последовательности легкой цепи. В неограничивающем примере MRD может быть расположен между Fc-доменом и шарнирной областью, между шарнирной областью и доменом СН1 тяжелой цепи, между доменом СН1 и вариабельной областью тяжелой цепи, или между константной областью и вариабельной областью легкой цепи.

Согласно наблюдениям, ингибиторы ангиогенеза, нацеленные на опосредованные фактором роста эндотелия сосудов (ФРЭС) сигнальные пути, обеспечивают наилучшие временные благоприятные терапевтические эффекты с последующим восстановлением роста и прогрессированием опухоли ввиду предполагаемой способности ангиогенных опухолей адаптироваться к присутствию указанных ингибиторов. Без связи с теорией считается, что мультивалентные и мультиспецифические свойства мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), которые связывают ангиогенную мишень, обеспечивают указанным соединениям способность оказывать расширенные благоприятные антиангиогенные терапевтические эффекты по сравнению с наблюдаемыми, например, при терапии стандартными моноклональными антителами, за счет связывания нескольких отдельных связанных с ангиогенезом мишеней и разрушения таким образом механизмов устойчивости, которыми обладает ангиогенная опухоль.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает 2 или большее количество мишеней, выбранных из:

ФРЭС (т.е. ФРЭС-А), ФРЭС-В, ФРФ-

1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-

3, ТШ2, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, ТШ2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина ανβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1, рТцФР-А и рТцФР-В.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФРЭС и 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФРЭС и 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФРЭС (т.е. ФРЭС-А) и дополнительно связывает ангиогенную мишень, выбранную из:

ФРЭС-В, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, ТШ2, ТрФР-А, P1GF, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, ТШ2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, Notch 1, DLL4, ЭФРподобного домена 7 (EGFL7), интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина ανβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1, рТцФРА и рТцФР-В.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФРЭС и 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело

- 98 043040 компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание ФРЭС с бевацизумабом. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФНО-альфа и дополнительно связывает мишень, выбранную из: Te38, ИЛ-12, ИЛ-12р40, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-1-бета, ИЛ-23, MIF, PEG2, PGE4, ФРЭС, TNFSF11 (RANKL), TNFSF13B (BLYS), GP130, CD-22 и CTLA-4. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ФНО-альфа, ИЛ-6 и TNFSF13B (BLYS). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФНО и 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой адалимумаб, цертолизумаб, голимумаб или AME-527. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание ФНО с адалимумабом, цертолизумабом, голимумабом или AME-527.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-1 альфа и ИЛ-1бета. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-1-бета и TNFSF11 (RANKL). Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-1-бета и мишень, выбранную из ИЛ-13, ИЛ-17А, ФНО, ФРЭС, PGE2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, TNFSF12 (TWEAK) и ФНО. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), которые связывают ИЛ-1-бета и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ИЛ-1-бета. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой катумаксомаб, Xoma052, канакинумаб или ACZ885. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание ИЛ-1-альфа или ИЛ-1-бета с катумаксомабом, Xoma052, канакинумабом или ACZ885.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-12. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-12 и дополнительно связывает ИЛ-18 или TNFSF12 (TWEAK). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CTLA-4 и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CTLA-4. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бриакинумаб или устекинумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание ИЛ-12 с бриакинумабом или устекинумабом. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает CTLA-4. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает CTLA4 и дополнительно связывает PDL-1 или BTNO2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CTLA-4 и одну или обе из указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает CTLA-4. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой тремелимумаб или иплимумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание CTLA-4 с тремелимумабом или иплимумабом.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-13. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-13 и дополнительно связывает мишень, выбранную из: ИЛ-1-бета, ИЛ-4, ИЛ-9, ИЛ-13, ИЛ-25, агониста рецептора лютеинизирующего гормона (LHR), цитокина макрофагов (MDC), MIF, PED2, малого богатого пролином белка 2а (SPRR2a), малого богатого пролином белка 2b (SPRR2b); регулируемого тимусом и активацией хемокина (TARC), ТФР-бета и ИЛ-25. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-13 и мишень, выбранную из ИЛ-5, ADAM8, LHR (агонист), ИЛ-23р19 и IgE. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ИЛ-13 и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает ИЛ-13. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой TNX-650, лебрикизумаб или САТ354. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание ИЛ-13 с TNX-650, лебрикизумабом или САТ354.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает RGM А. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает RGM А и дополнительно связывает мишень, выбранную из: RGM В, MAG, NgR, NogoA, OMGp и ХСПГ. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают

- 99 043040

RGM А и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает RGM А.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает CD38 и дополнительно связывает мишень, выбранную из

CD20, TNFRSF5 (CD40)

ALK1, ФНО, ФРЭС, ФРЭС-А, ФРЭС-В, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, рФРЭС-1, рФРЭС-2 и CD 13 8.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD38 и по меньшей мере 1, 2 или все 3 из указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает CD38. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает MOR202 или даратумумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела конкурирует за связывание CD38 с MOR202 или даратумумабом.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB 1 (рЭФР) и дополнительно связывает ErbB3. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB 1. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой ERBITUX®. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB1 с ERBITUX®. Согласно еще одному варианту реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой связывающее ErbB1 антитело, выбранное из: нимотузумаба, залутумумаба, матузумаба, панитумумаба, MEDX-214 и ABX-EGF. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB1 с антителом, выбранным из: нимотузумаба, залутумумаба матузумаба, панитумумаба, MEDX-214 и ABX-EGF.

Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно еще одному варианту реализации MRDсодержащее антитело связывает ErbB2, Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой HuMax-Her2™ или трастузумаб-DM1. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой трастузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за ErbB2 связывание с трастузумабом. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и дополнительно связывает мишень, выбранную из: ErbB3, рЭФР, рИФР-1, cMet, ФРЭС, RON (MST1R), DLL4, ПФР, CDCP1 (CD318), NRP1, TNFRSF10A (DR4) и TNFRSF10B (DR5). Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и дополнительно связывает мишень, выбранную из: CD2, CD3, CD4 и NKG2D. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и ИФР-1, ИФР-2 или ИФР1,2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ErbB2 и дополнительно связывают 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой HuMax-Her2™ или трастузумаб-DM1. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела представляет собой трастузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и дополнительно связывает ErbB3. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRDсодержащего антитела связывает ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела представляет собой HuMax-Her2™ или трастузумаб-DM1. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой трастузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом. Согласно еще одному варианту реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой связывающее ErbB2 антитело, выбранное из: MDX-210 (Medarex), tgDCC-E1A (Targeted Ge

- 100 043040 netics), MGAH22 (MacroGenics) и пертузумаба (OMNITARG™). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с антителом, выбранным из: MDX-210, tgDCC-E1A, MGAH22 и пертузумабом.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает ErbB2 и HER2/3 одновременно.

Ингибиторы ангиогенеза, нацеленные на сигнальные пути фактора роста эндотелия сосудов (ФРЭС), согласно наблюдениям, обеспечивают наилучшие временные благоприятные терапевтические эффекты, с последующим восстановлением роста и прогрессированием опухоли ввиду предполагаемой способности ангиогенных опухолей адаптироваться к присутствию указанных ингибиторов. Без связи с теорией считается, что мультивалентные и мультиспецифические свойства MRD-содержащих антител, которые связывают ангиогенную мишень, обеспечивают указанным соединениям способность оказывать расширенные благоприятные антиангиогенные терапевтические эффекты по сравнению с наблюдаемыми, например, при терапии стандартными моноклональными антителами, за счет связывания нескольких отдельных связанных с ангиогенезом мишеней и разрушения таким образом механизмов устойчивости, которыми обладает ангиогенная опухоль. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рТцФР-А и дополнительно связывает мишень, выбранную из:

ФРЭС-А, ФРЭС-В,

ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС, рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и рФРФ-2Шс), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ИФР-1, ИФР-2, ИФР-1,2, ФРГ, ТШ2, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, TIE2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рЭФР, сМЕТ, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αvβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1 и рТцФР-В.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рТцФР-А и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает рТцФР-А. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой оларатумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание рТцФР-А с оларатумабом. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой MEDI-575. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание рТцФР-А с MEDI-575.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рТцФР-В и дополнительно связывает мишень, выбранную из:

ФРЭС-А, ФРЭС-В,

ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и рФРФ-2Шс), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ИФР-1, ИФР-2, ИФР-1,2, ФРГ, ТШ2, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, ТШ2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рЭФР, сМЕТ, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αγβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1 и рТцФР-А. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рТцФР-В и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рТцФР-В.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рФРЭС-1 и дополнительно связывает ангиогенную мишень, выбранную из:

- 101 043040

ФРЭС (т.е. ФРЭС-А), ФРЭС-В, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, ρΦΡΦ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2Ша, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, ТШ2, рецептора ФРЭС-2, рФРЭС-3, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αvβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1, рТцФР-А и рТцФР-В. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рФРЭС-1 и дополнительно связывают 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рФРЭС-1. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой IMC-18F1. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание рФРЭС-1 с IMC-18F1.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рецептора ФРЭС2 и дополнительно связывает мишень, выбранную из:

ФРЭС (т.е.

ФРЭС-А), ФРЭС-В, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-4, ФРФ-7, ФРФ-8Ь, ФРФ-19, рецептора

ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-ШС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, рФРФ2-1ПЬ и ρΦΡΦ-2-IIIc), рФРФ-3, TNFSF2 (ФНО-альфа), рФРФ-3, NRP1, ROBO4, CD30, CD33, CD55 CD80, KIT, CXCL12, Notchl, EFNal, EFNa2, ANG1, ANG2, ИЛ-

6, ИЛ-8, ИЛ-18, ФРГ, ТрФР-А, ПФР, ТрФР-В, CXCL12, KIT, ГКСФ, CXCR4, PTPRC, ТШ2, рФРЭС-1, рФРЭС-3, Notch 1, DLL4, EGFL7, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αvβ3, ТФР-бета, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, VCAM1, рТцФР-А и рТцФР-В. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают рецептор ФРЭС-2 и дополнительно связывают 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает рецептор ФРЭС-2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой IMC-1O1 или DC101. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание рецептора ФРЭС-2 с IMC-1C11 или DC101.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает рецептора ФРЭС2 и дополнительно связывает ANG2 или TIE2. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает рецептор ФРЭС-2. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой IMC-1C11, DC101 или ТТАС-0001. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание рецептора ФРЭС-2 с IMC-1C11, DC101 или ТТАС-0001. Согласно дополнительным вариантам реализации связывающий TIE2 компонент содержит фрагмент ANG2, который связывает TIE2. Согласно конкретным вариантам реализации указанный связывающий TIE2 компонент содержит аминокислоты 283-449 ANG2 человека, раскрытого в референсной последовательности NCBI № NP_001138.1.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывает DLL4 и дополнительно связывает мишень, выбранную из: рЭФР, ПФР, рФРЭС-1, рФРЭС-2 и ФРЭС. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают DLL4 и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой REGN421. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание DLL4 с REGN421.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывается с антиангиогенной мишенью и мишенью метастатического или инвазивного рака. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с ангиогенной мишенью и также связывает мишень метастатического или инвазивного рака, выбранную из: CXCL12, CXCR4 (например, CXCR4b), CCR7 (например, CXCR7b), CD44 (например, CD44v3 и CD44v6), интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α5β1, интегрина αvβ1, интегрина αvβ3, ТФР-бета, интегрина αvβ5, интегрина α9β1, интегрина α6β4,

- 102 043040 интегрина αΜβ2, PD-1, ФРГ, сМЕТ, ММР2, ММР-7, ММР-9, ММР-12, ФРЭС-А, ФРЭС-В и ИФР-1. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ангиогенную мишень и также связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней метастатического или инвазивного рака, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой бевацизумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ФРЭС с бевацизумабом. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с отдельными клеточными сигнальными путями. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанную с избыточными, перекрывающимися или пересекающимися сигнальными путями. Например, согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с сигнализацией PI3K/AKT/mTOR (например, ErbB2, рЭФР, рИФР-1, Notch, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2-IIIa, рФРФ-2-IIIb и рФРФ-2-IIIb), рФРФ-3, рФРФ-4, GPCR и/или с-МЕТ). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRDсодержащее антитело) связывает 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с сигнализацией через рецепторные тирозинкиназы Raf/MEK/MAPK (например, рФРЭС-1, рецептором ФРЭС-2, рФРЭС-3, рецептором ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, рФРФ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФ-2-IIIa, рФРФ-2-IIIb и рФРФ-2-IIIb), рФРФ-3, рФРФ-4, CD28, RET, сМЕТ, рЭФР, ErbB2, Notch, Notch 1, Notch3, Notch4, DLL1, DLL4, Jagged, Jagged1, Jagged2, и Jagged3. Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связывают 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с сигнализацией SMAD (например, Notch, TGF3, TGF3R1, TGFeR2 и BMP). Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с сигнализацией JAK/STAT (например, рецептором интерферона гамма 1 (ИФН-гамма-R1), ИФН-гамма-R3, ИФН-гамма, ИФН-альфа-R2, ИФН-альфа-R1, ИФН-альфа, ИФН-бета, рецептором ИЛ-6а (GP130), ИЛ-6, рИЛ-12В1, ИЛ-12 и рЭФР). Соответственно, настоящее изобретение охватывает MRD-содержащее антитело, которое связывается с 2 или большим количеством мишеней, выбранных из

WNT1, WNT2, WNT2b, WNT3,

WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Notch, Notchl, Notch3, Notch4, DLL1, DLL4, Jagged, Jaggedl, Jagged2 и Jagged3.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с сигнализацией NFkB

- 103 043040 (например, BCR, TCR, рИЛ-1, ИЛ-1, FZD1, FZD2, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, Notch, Notchl, Notch3, Notch4, DLL4, Jagged, Jaggedl, Jagged2, Jagged3, TNFSF1 (ФИО-бета, LTa), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF6B (DcR3), TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), TNFRSF 7 (CD27), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF 8 (CD30), TNFSF11 (RANKL), TNFRSF11A (RANK), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF12 (TWEAKR), TNFSF13 (APRIL), TNFSF13B (BLYS), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF15 (TL1A), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF19 (TROY), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF25 (DR3), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFRSF5 (CD40), TNFSF2 (ФНО-альфа), TNFSF3 (LTb), TNFRSF3 (LTBR), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM), TNFRSF 14 (HVEM), TNFSF18 (лиганд GITR), TNFRSF 18 (GITR), TNFSF4 (лиганд 0X40), TNFRSF 4 (OX40), TNFSF9 (лиганд 4IBB), TNFRSF 9 (4IBB), BMP, НРФ и ТФР-альфа).

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с пролиферацией клеток (например, ФРФ-1, ФРФ-2, ФРФ-7, ФРФ-4, ФРФ-10, ФРФ-18Ь, ФРФ-19, ФРФ-23, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) (например, ρΦΡΦ-1-IIIC), рФРФ-2 (например, рФРФШВ и рФРФ-ШС), рФРФ-3, рФРФ-4, TCR, TNFRSF5 (CD40), TLR1, TLR2, TLR3, TLR 4, TLR5 и TLR6).

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с опосредованной Toll-подобным рецептором сигнализацией (например, TLR1, TLR2, TLR3, TLR 4, TLR5 и TLR6). Согласно еще одному варианту реализации MRDсодержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с В-клеточной сигнализацией (например, mIg, гетеродимерами Iga/IgP (CD79a/CD79b) (α/β), CD 19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD30, CD46, CD80, CD86, ICOSL (B7-H2), HLA-DR (CD74), PD1, PDL1, TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF 13C (BAFFR), TNFRSF 17 (BCMA), BTLA, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF 14 (HVEM), рецептор Fc-гамма-Ш, рИЛ-4 и CRAC.

Согласно конкретному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывается с CD19 и CD20. Согласно дополнительному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CD19, CD20 и CD22. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащие антитела) связывает 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 1 или большим количеством поверхностных маркеров Вклеток, выбранных из: CD10, CD24, CD37, CD53, CD72, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD81, CD82, CD83, CD84 (SLAM5) и CD85. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 1 или большим количеством поверхностных маркеров В-клеток, выбранных из: CD10, CD24, CD37, CD53, CD72, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD81, CD82, CD83, CD84 (SLAM5) и CD85. Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных поверхностных маркеров В-клеток.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD19 и мишень, выбранную из:

CD20, CD22, CD30, CD33, TNFRSF5 (CD40), CD52, CD74, CD80, CD 13 8, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рЭФР, TNFRSF 10А (DR4), TNFRSF10B (DR5), ФНО, НРФ, ФРЭС, ИФР-1,2, ИФР-2, ИФР-1 и TNFSF11 (RANKL).

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD20 и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции

- 104 043040 (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD19 и также связывают по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD19. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой MDX-1342, SGN-CD19A, ХМАВ®5574, SGN-19A, ASG-5ME или MEDI-551. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRDсодержащее антитело конкурирует за связывание CD19 с MDX-1342, SGN-CD19A, ХМАВ®5574, SGN19A, ASG-5ME или MEDI-551.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD22 и мишень, выбранную из: CD19, CD20, CD23, CD30, CD33, TNFRSF5(CD40), CD52, CD74, CD80, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), ФРЭС, ФНО и НРФ. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD22 и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD22 и также связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD22. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой эпратузумаб или инотузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD22 с эпратузумабом или инотузумабом. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой моксетумомаб (САТ-8015, Cambridge Antibody Technologies). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD22 с моксетумомабом.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает TNFRSF5 (CD40) и мишень, выбранную из:

ВСМА, TNFSF11 (RANKL), рФРЭС-1, рФРЭС-2, TNFRSF 10А (DR4), TNFRSF 10В (DR5), CD22, CD30, CD38, CD56 (NCAM), CD70, CD80, CD 138, ИЛ-6, ИФР-1, ИФР-2, ИФР-1,2, BLyS, APRIL и НРФ.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD40 и мишень, выбранную из: CD3, CD4 и NKG2D. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD40 и также связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD40. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой СР870893, дацетузумаб, ANTOVA®, лукатумумаб, ХМАВ®5485 или тенеликсимаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD40 с СР870893, дацетузумабом, ANTOVA®, лукатумумабом, ХМАВ®5485 или тенеликсимабом.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD33 и мишень, выбранную из: FLT3, CD44, TNFRSF10A (DR4), TNFRSF10B (DR5), CD80, MGC, рФРЭС-1, рФРЭС-2, ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО и ФРЭС. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела), которые связывают TNFRSF10B и также связывают по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD33. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой гемтузумаб или линтузумаб. Согласно дополнительным вариантам реализации антителокомпонент, MRD-компонент и/или MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD33 с гемтузумабом или линтузумабом.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с опосредованной антигенпрезентирующими клетками сигнализацией (например, mIg, гетеродимерами

Iga/Igp (CD79a/CD79b) (α/β), CD 19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD27, CD28, CD30,

CD30L, TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM), CD70, ICOS, ICOSL (B7-H2), CTLA4, PD- 105 043040

1, PDLl (B7-H1), B7-H4, B7-H3, PDL2 (B7-DC), BTLA, CD46, CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), HLA-DR, CD74, PD1, TNFRSF 4 (0X40), TNFRSF 9 (41BB), TNFSF4 (лиганд 0X40), TNFSF9 (лиганд 41BB), TNFRSF 9 (41BB), TNFRSF1A (TNFR1, p55, p60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFFR), TNFRSF17 (BCMA), BTLA, TNFRSF 18 (GITR), MHC-1, TNFRSF5 (CD40), TLR4, TNFRSF 14 (HVEM), Ес-гамма-RIIB, рИЛ-4 и CRAC).

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с 2 или большим количеством мишеней, связанных с опосредованной T-клеточным рецептором сигнализацией (например,

CD3, CD4, CD27, CD28, CD70, рИЛ-2, LFA-

1, С4, ICOS, CTLA-4, CD45, CD80, CD86, PG-1, TIM1, TIM2, TIM3, TIM4, галектин

9, TNFRSF1A (TNFR1, р55, р60), TNFRSF1B (TNFR2), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF25 (DR3), TNFRSF 14 (HVEM), TNFSF18, TNFRSF 18 (GITR), TNFRSF4 (OX40), TNFSF4 (лиганд 0X40), PD1, PDLl, CTLA4, TNFSF9 (лиганд 41BB), TNFRSF 9 (41BB), TNFSF14 (LIGHT, лиганд HVEM), TNFSF5 (лиганд CD40), BTLA и CRAC).

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывается с опухолевым антигеном клеточной поверхности и второй мишенью, которая связана с путем ускользания при устойчивости к химиотерапии. Согласно некоторым вариантам реализации указанный клеточной поверхности опухолевый антиген выбран из рЭФР, ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ, ЕгЬВ4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-

3, рТрФР-1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает Pгликопротеин (кодируемый MDR1) и антиген клеточной поверхности. Согласно конкретным вариантам реализации указанный антиген клеточной поверхности представляет собой опухолевый антиген. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный опухолевый антиген клеточной поверхности выбран из рЭФР, ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ, ЕгЬВ4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рТрФР-1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD 138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD30 с SGN-35 (брентуксимаб). Согласно дополнительным конкретным вариантам реализации MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом.

Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает MRP (ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью белок) и антиген клеточной поверхности. Согласно конкретным вариантам реализации указанный антиген клеточной поверхности представляет собой опухолевый антиген. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный опухолевый антиген клеточной поверхности выбран из рЭФР, ЕгЬВ2, ЕгЬВЗ, ЕгЬВ4, рФРФ, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, рТрФР-1, CD3, CD19, CD20, CD22, CD25, CD30, CD33, CD37, CD56, CD70, CD133, CD138, FOLR1, рИФР-1, Cripto, SLC44A4 и GCC.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание CD30 с SGN-35 (брентуксимабом). Согласно дополнительным конкретным вариантам реализации MRD-содержащее антитело конкурирует за связывание ErbB2 с трастузумабом.

Согласно другим вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывается с терапевтической мишенью и второй мишенью, которая связана с путем ускользания при устойчивости к терапевтическому эффекту при нацеливании на терапевтическую мишень. Например, согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело связывается с рЭФР и мишенью, выбранной из MDR1, сМЕТ, Notch, Notch1, Notch3, Notch4, DLL1, DLL4, Jagged, Jagged1, Jagged2 и Jagged3. Согласно некоторым вариантам

- 106 043040 реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащие антител) связывает 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2 и ангиогенный фактор. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело нацелено на ErbB2, и по меньшей мере один MRD нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно одному варианту реализации антитело, которое связывается с тем же эпитопом ErbB2, что и трастузумаб, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительному варианту реализации антитело, которое конкурентно ингибирует связывание трастузумаба, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело, которое содержит последовательности SEQ ID NO: 59-64, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело трастузумаб функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1).

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено со связывающим Ang2 MRD, который связывается с тем же эпитопом Ang2, что и MRD, содержащий последовательность MGAQTNFMPMDNDELLLYEQFILQQGLE SEQ IDNO:8.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено со связывающим Ang2 MRD, который конкурентно ингибирует MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено с MRD, содержащим последовательность SEQ ID NO: 8.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с Nконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ErbB2, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, функционально связано с MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, который связывается с тем же эпитопом рИФР-1, что и MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, который конкурентно ингибирует MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, соединено с MRD, содержащим последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывает ErbB2, соединено с MRD, кодирующим последовательность SLFVPRPERK (SEQ ID NO: 103).

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывает ErbB2, соединено с MRD, кодирующим последовательность ESDVLHFTST (SEQ ID NO: 104).

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывает ErbB2, соединено с MRD, кодирующим последовательность LRKYADGTL (SEQ ID NO: 105).

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с Nконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2.

- 107 043040

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ErbB2, посредством линкера. Согласно некоторым вариантам реализации MRDсодержащее антитело нацелено на ErbB2 и HER2/3. Согласно некоторым вариантам реализации MRDсодержащее антитело может связываться с ErbB2 и HER2/3 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ErbB2, функционально связано с MRD, который нацелен на HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3связывающий MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3-связывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ErbB2.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один HER2/3-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ErbB2, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2 и HER2/3. Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело может связываться с ErbB2 и HER2/3 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с HER2/3, функционально связано с MRD, который нацелен на ErbB2. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан с Сконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с HER2/3. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с HER2/3. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ErbB2-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с HER2/3, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2, Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело включает антитело, которое нацелено на ErbB2, MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в одной локализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в разных локализациях. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на Ang2 MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ErbB2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на Ang2, MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1); и мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено

- 108 043040 на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1), MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на Ang2, также охвачены настоящим изобретением. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2, Ang2 и HER2/3. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело включает антитело, которое нацелено на ErbB2, MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на HER2/3. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и HER2/3 домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в одной локализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и HER2/3 домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в разных локализациях. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и HER2/3 домены MRD располагаются на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и HER2/3 домены MRD располагаются на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на HER2/3 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на HER2/3 MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на HER2/3 MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на HER2/3 MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на Ang2 MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ErbB2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на HER2/3, MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на Ang2; и мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на Ang2, MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на HER2/3, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело включает антитело, которое нацелено на ErbB2, MRD, который нацелен на HER2/3, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в одной локализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к антителу против ErbB2 в разных локализациях. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на HER2/3 MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на HER2/3 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на HER2/3 MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела против ErbB2, а нацеленный на HER2/3 MRD располагается на Сконце легкой цепи антитела против ErbB2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на HER2/3, MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1); и мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР1), MRD, который нацелен на ErbB2, и MRD, который нацелен на HER2/3, также охвачены настоящим изобретением. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ErbB2, Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело включает антитело, которое нацелено на ErbB2, MRD, который нацелен на Ang2, MRD, который нацелен на HER2/3, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к одной цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1

- 109 043040 (рИФР-1) домены MRD присоединены к разным цепям антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на легкой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD располагаются на тяжелой цепи антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к одному и тому же концу антитела против ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2, HER2/3 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) домены MRD присоединены к разным концам антитела против ErbB2. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие: антитело, которое нацелено на HER2/3, MRD, который нацелен на ErbB2, MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1); мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на Ang2, MRD, который нацелен на ErbB2, MRD, который нацелен на HER2/3, и MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР1); и мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), содержащие антитело, которое нацелено на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1), MRD, который нацелен на ErbB2, MRD, который нацелен на HER2/3, и MRD, который нацелен на Ang2, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим Ang2 MRD, связывается и с ErbB2, и с Ang2 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, связывается и с ErbB2, и с рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим HER2/3 MRD, связывается и с ErbB2, и с HER2/3 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим Ang2 MRD, связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD и/или связывающим HER2/3 MRD, связывается с ErbB2, Ang2, рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и/или HER2/3 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим(и) Ang2, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и/или HER2/3 MRD проявляет АЗКЦ-активность. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим(и) Ang2, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и/или HER2/3 MRD, понижающе регулирует Akt-сигнализацию. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим Ang2 MRD, ингибирует связывание Ang2 с TIE2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим(и) рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, понижающе регулирует опосредованную рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) сигнализацию. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим(и) Ang2, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и/или HER2/3 MRD ингибирует пролиферацию клеток. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ErbB2, функционально связанное со связывающим(и) Ang2, рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) и/или HER2/3 MRD, ингибирует рост опухоли.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФРЭС и ангиогенный фактор. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФРЭС и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело нацелено на ФРЭС и по меньшей мере один MRD нацелено на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно одному варианту реализации антитело, которое связывается с тем же эпитопом ФРЭС, что и бевацизумаб, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительному варианту реализации антитело, которое конкурентно ингибирует связывание бевацизумаба, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело, которое содержит последовательности SEQ ID NO: 78-79, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно дополнительным вариантам реализации антитело бевацизумаб функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор и/или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1).

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое

- 110 043040 связывается с ФРЭС, соединено со связывающим Ang2 MRD, которое связывается с тем же эпитопом Ang2, что и MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, соединено со связывающим Ang2 MRD, который конкурентно ингибирует MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, соединено с MRD, содержащим последовательность SEQ ID NO: 8.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с Nконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ФРЭС, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, функционально связано с MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, соединено со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, который связывается с тем же эпитопом рИФР-1, что и MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, соединено со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD, который конкурентно ингибирует MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФРЭС, соединено с MRD, содержащим последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывает ErbB2, соединено с MRD, кодирующим последовательность SLFVPRPERK (SEQ ID NO: 103).

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с Nконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФРЭС.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один связывающий рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1) MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ФРЭС, посредством линкера. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФРЭС, Ang2 и рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (рИФР-1). Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело включает антитело, которое нацелено на ФРЭС, MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на рИФР-1. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рИФР-1 домены MRD присоединены к антителу против ФРЭС в одной и той же локализации. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рИФР-1 домены MRD присоединены к антителу против ФРЭС в разных локализациях. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рИФР-1 домены MRD располагаются на легкой цепи антитела против ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации указанные нацеленные на Ang2 и рИФР-1 домены MRD располагаются на тяжелой цепи антитела против ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на легкой цепи антитела против ФРЭС, а нацеленный на рИФР-1 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на тяжелой цепи антитела против ФРЭС, а нацеленный на рИФР-1 MRD располагается на легкой цепи антитела против ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на Ang2 MRD располагается на N-конце тяжелой цепи антитела про

- 111 043040 тив ФРЭС, а нацеленный на рИФР-1 MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ФРЭС. Согласно некоторым вариантам реализации указанный нацеленный на рИФР-1 MRD располагается на Nконце тяжелой цепи антитела против ФРЭС, а нацеленный на Ang2 MRD располагается на С-конце легкой цепи антитела против ФРЭС.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, связывается и с ФРЭС, и с Ang2 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим рИФР-1 MRD, связывается и с ФРЭС, и с рИФР1 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD и связывающим рИФР-1 MRD, связывается с ФРЭС, Ang2, и рИФР-1 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим(и) Ang2 и/или рИФР-1 MRD, проявляет АЗКЦ-активность. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим(и) Ang2 и/или рИФР1 MRD, понижающе регулирует сигнализацию ФРЭС. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, ингибирует связывание Ang2 с TIE2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим рИФР-1 MRD, ингибирует сигнализацию рИФР-1. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим(и) Ang2 и/или рИФР-1 MRD, ингибирует пролиферация клеток. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФРЭС, функционально связанное со связывающим(и) Ang2 и/или рИФР-1 MRD, ингибирует рост опухоли.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ErbB2 или антитело к ФРЭС содержит MRD, который ингибирует связывание пертузумаба с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело против ErbB2 содержит по меньшей мере один MRD, который связывается с Ang2 или рИФР-1, и один MRD, который ингибирует связывание пертузумаба с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело против ФРЭС содержит по меньшей мере один MRD, который связывается с Ang2 или рИФР-1, и один MRD, который ингибирует связывание пертузумаба с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело против ErbB2 содержит MRD, который связывает Ang2, MRD, который связывает рИФР-1, и MRD, который ингибирует связывание пертузумаба с ErbB2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело против ФРЭС содержит MRD, который связывает Ang2, MRD, который связывает рИФР-1, и MRD, который ингибирует связывание пертузумаба с ErbB2.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФНО и ангиогенный фактор. Согласно еще одному варианту реализации указанное антитело нацелено на ФНО, а по меньшей мере один MRD нацелен на ангиогенный фактор. Согласно одному варианту реализации антитело, которое связывается с тем же эпитопом ФНО, что и адалимумаб, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно дополнительному варианту реализации антитело, которое конкурентно ингибирует связывание адалимумаба, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело, которое содержит последовательности SEQ ID NO: 8085, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело адалимумаб функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно одному варианту реализации антитело, которое связывается с тем же эпитопом ФНО, что и голимумаб, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно дополнительному варианту реализации антитело, которое конкурентно ингибирует связывание голимумаба, функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело голимумаб функционально связано с по меньшей мере одним MRD, который нацелен на ангиогенный фактор.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, соединено со связывающим Ang2 MRD, который связывается с тем же эпитопом Ang2, что и MRD содержащий последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, соединено со связывающим Ang2 MRD, который конкурентно ингибирует MRD, содержащий последовательность SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, соединено с MRD, содержащим последовательность SEQ ID NO: 8.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с Nконцом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один свя

- 112 043040 зывающий Ang2 MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один связывающий Ang2 MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ФНО, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, одновременно связывается и с ФНО, и с Ang2. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, проявляет АЗКЦ-активность. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, ингибирует связывание ФНО с рецепторами ФНО клеточной поверхности p55 и p75. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, лизирует клетки, экспрессирующие на поверхности ФНО, in vitro в присутствии комплемента. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное с связывающим ANG2 MRD, ингибирует связывание Ang2 с TIE2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело против ФНО, функционально связанное со связывающим ANG2 MRD, уменьшает признаки и симптомы артрита.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФНО и ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело способно связывать ФНО и ИЛ-6 одновременно. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на ИЛ-6. Согласно другим вариантам реализации антитело, которое связывается с ИЛ-6, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6-связывающий MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывает ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6связывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывает ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНОсвязывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ИЛ6.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ИЛ-6-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ФНО, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ИЛ-6. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ИЛ-6, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на ФНО и BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело способно связывать ФНО и BLyS одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на BLyS. Согласно другим вариантам реализации антитело, которое связывается с BLyS, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один BLyS-связывающий MRD функционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывает ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один BLyS-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один BLyS-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один BLySсвязывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с ФНО.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функ

- 113 043040 ционально связан с С-концом тяжелой цепи антитела, которое связывает BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с С-концом легкой цепи антитела, которое связывается с BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один ФНОсвязывающий MRD функционально связан с N-концом легкой цепи антитела, которое связывается с BLyS.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один BLyS-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один BLyS-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с ФНО, посредством линкера.

Согласно другим вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан прямо с антителом, которое связывается с BLyS. Согласно дополнительным вариантам реализации по меньшей мере один ФНО-связывающий MRD функционально связан с антителом, которое связывается с BLyS, посредством линкера.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на Ang2, ФНО и ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело способно связывать Ang2, ФНО и ИЛ-6 одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2 и ИЛ-6связывающие домены MRD расположены на одной цепи антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2 и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на том же конце антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2 и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на разных цепях антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2 и ИЛ-6связывающие домены MRD расположены на разных концах антитела.

Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с Ang2, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО, и MRD, который нацелен на ИЛ-6. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО- и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на одной цепи антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО- и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на том же конце антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО- и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на разных цепях антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО-и ИЛ-6-связывающие домены MRD расположены на разных концах антитела. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ИЛ-6, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2- и ФНО-связывающие домены MRD расположены на одной цепи антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2- и ФНО-связывающие домены MRD расположены на том же конце антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2- и ФНО-связывающие домены MRD расположены на разных цепях антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2-и ФНО-связывающие домены MRD расположены на разных концах антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на Ang2, ФНО и BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело, способное связывать Ang2, ФНО и BLyS одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, и MRD, который нацелен на BLyS. Согласно другим вариантам реализации антитело, которое связывается с BLyS, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО, и MRD, который нацелен на Ang2. Согласно другим вариантам реализации антитело, которое связывается с Ang2, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО, и MRD, который нацелен на BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2-, BLyS- и/или ФНО-связывающие домены MRD расположены на одной цепи антитела. Согласно некоторым вариантам реализации Ang2-, BLyS- и/или ФНО-связывающие домены MRD расположены на том же конце антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2-, BLyS- и/или ФНО-связывающие домены MRD расположены на разных цепях антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные Ang2-, BLyS- и/или ФНО-связывающие домены MRD расположены на разных концах антитела.

Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело нацелено на Ang2, ФНО, ИЛ-6 и BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело способно связывать Ang2, ФНО, ИЛ-6 и BLyS одновременно. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ФНО, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, MRD, который нацелен на ИЛ-6, и MRD, который нацелен на BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с Ang2, функционально связано с MRD, который нацелен на ФНО, MRD, который нацелен на ИЛ-6, и MRD, который нацелен на BLyS. Согласно некоторым вариантам реализации антитело, которое связывается с ИЛ-6, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, MRD, который нацелен на ФНО, и MRD, который нацелен на BLyS. Согласно некоторым

- 114 043040 вариантам реализации антитело, которое связывается с BLyS, функционально связано с MRD, который нацелен на Ang2, MRD, который нацелен на ИЛ-6, и MRD, который нацелен на ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО-, Ang2-, ИЛ-6- и/или BLyS-связывающие домены MRD расположены на одной цепи антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО-, Ang2-, ИЛ-6- и/или BLyS-связывающие домены MRD расположены на том же конце антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО-, Ang2-, ИЛ-6- и/или BLyS-связывающие домены MRD расположены на разных цепях антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанные ФНО-, Ang2-, ИЛ-6- и/или BLyS-связывающие домены MRD расположены на разных концах антитела.

VI. Способы получения гибридов антитело-MRD.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, предложенные в настоящем изобретении (например, MRD-содержащие антитела), и домены MRD могут быть получены любым известным в данной области техники способом синтеза антител, полипептидов, иммуноконъюгатов и цитотоксинов, в частности, посредством химического синтеза или техник рекомбинантной экспрессии. Преимущество мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) заключается в том, что они могут быть получены с применением известных в данной области техники протоколов получения антител. Молекулы гибрида антитело-MRD могут кодироваться полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеотидов. Соответственно, полинуклеотиды, описанные в настоящем документе могут кодировать MRD, тяжелую цепь антитела, легкую цепь антитела, гибридный белок, содержащий тяжелую цепь антитело и по меньшей мере один MRD, и/или гибридный белок, содержащий легкую цепь антитела и по меньшей мере один MRD.

Соответственно, в настоящем изобретении предложены векторные конструкции, содержащие последовательность(и) полинуклеотидов, кодирующую(ие) мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), и клетка-хозяин, содержащая указанные векторные конструкции. Стандартные техники клонирования и трансформации могут использоваться для получения клеточных линий, экспрессирующих мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению.

Рекомбинантные экспрессионные векторы, содержащие последовательность(и) полинуклеотидов, кодирующую(ие) мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению, могут быть получены с применением хорошо известных техник. Экспрессионные векторы включают полинуклеотидную кодирующую последовательность, функционально связанную с подходящими транскрипционными или трансляционными регуляторными нуклеотидными последовательностями, например, происходящими из генов млекопитающих, микроорганизмов, вирусов или насекомых. Примеры регуляторных последовательностей, присутствующих в экспрессионных векторных конструкциях, включают транскрипционные промоторы, операторы, энхансеры, мРНК-сайты связывания рибосомы и/или другие подходящие последовательности, которые контролируют инициацию и терминацию транскрипции и трансляции. Нуклеотидные последовательности функционально связаны, если регуляторная последовательность функционально относится к последовательности нуклеотидов соответствующего полипептида. Соответственно, промоторная последовательность функционально связана, например, с последовательностью тяжелая цепь антитела-MRD, если промоторная последовательность нуклеотидов контролирует транскрипцию соответствующей последовательности нуклеотидов. Полинуклеотидная кодирующая последовательность в экспрессионном векторе может включать дополнительные гетерологичные последовательности, кодирующие такие полипептиды, как сигнальные пептиды, в природе не связанные с последовательностями тяжелых и/или легких цепей антитела. Например, последовательность нуклеотидов сигнального пептида (секреторная лидерная последовательность) может быть соединена внутри рамки с полипептидной последовательностью таким образом, чтобы MRD-содержащее антитело секретировалась в периплазматическое пространство или в среду. Сигнальный пептид, функциональный в заданных клетках-хозяевах, усиливает внеклеточную секрецию подходящего антитела. Сигнальный пептид может отщепляться от полипептида при секретировании антитела из клетки. Примеры последовательностей, кодирующих секреторные сигналы, которые могут быть включены в экспрессионные векторы, включают описанные, например, в патентах США № 5698435,5698417 и 6204023.

Для экспрессирования кодирующей последовательности MRD-содержащего антитела могут использоваться разнообразные системы хозяев и экспрессионных векторов.

Клетки-хозяева, подходящие для настоящего изобретения, включают, не ограничиваясь перечисленными, микроорганизмы, такие как бактерии (например, E.coli, B. subtilis), трансформированные рекомбинантными экспрессионными векторами с бактериофагальной ДНК, плазмидной ДНК или космидной ДНК, содержащими кодирующие антитело последовательности; дрожжи (например, Saccharomyces, Pichia), трансформированные рекомбинантными дрожжевыми экспрессионными векторами, содержащими кодирующие антитело последовательности; системы клеток насекомых, инфицированные рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, бакуловирусными), содержащими кодирующие антитело последовательности; системы клеток растений, инфицированные рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, вирус мозаики цветной капусты, CaMV; вирус та

- 115 043040 бачной мозаики, TMV) или трансформированные рекомбинантными плазмидными экспрессионными векторами (например, Ti-плазмидой), содержащими MRD-содержащее кодирующие антитело последовательности. Согласно конкретным вариантам реализации системы клеток млекопитающих используют для получения мультивалентных и мультиспецифических композиций, предложенных в настоящем изобретении (например, MRD-содержащие антител). В системах клеток млекопитающих, как правило, задействованы рекомбинантные экспрессионные конструкции, содержащие промоторы, происходящие из генома клеток млекопитающих (например, промотор металлотионеина) или вирусов млекопитающих (например, поздний аденовирусный промотор; промотор вируса осповакцины 7,5K). Примеры клетокхозяев млекопитающих, подходящих для получения мультивалентных и мультиспецифических композиций, предложенных в настоящем изобретении, включают клетки СНО, клетки ВНК, клетки NS0, клетки SP2/0, клетки миеломы YO, клетки миеломы мыши P3X63, клетки PER, клетки PER.C6, клетки COS, клетки 293, клетки 3T3 и клетки гибридомы. Векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие предложенные в настоящем изобретении мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) или его участки или фрагменты, включают плазмидные векторы, одноцепочечные и двуцепочечные фаговые векторы, а также вирусные одноцепочечные и двуцепочечные РНКили ДНК-векторы. Указанные векторы могут быть рутинным образом введены в клетки-хозяева с применением известных техник введения ДНК и РНК в клетки. Фаговые и вирусные векторы могут также быть введены в клетки-хозяева в форме упакованного или инкапсулированного вируса с применением известных техник инфицирования и трансдукции. Кроме того, вирусные векторы могут быть компетентными по репликации или, как вариант, дефективными по репликации. Как вариант, для получения белка также могут использоваться бесклеточные системы трансляции с применением РНК, происходящих из экспрессионных ДНК-конструкций согласно настоящему изобретению (см., например, опубликованные международные заявки WO86/05807 и WO89/01036; и патент США № 5122464).

Также в настоящем документе предложены способы получения MRD-содержащего антитела, включающие: культивирование клетки-хозяина, содержащей один или большее количество полинуклеотидов или экспрессионных векторов, содержащих один или большее количество выделенных полинуклеотидов, в среде в условиях, обеспечивающих экспрессирование указанного одного или большего количества полинуклеотидов, при этом указанный(ые) один или большее количество полинуклеотидов кодирует(ют) один или большее количество полипептидов, образующих часть MRD-содержащего антитела; и выделение указанного MRD-содержащего антитела.

Прокариоты, подходящие в качестве клеток-хозяев при получении композиций, предложенных в настоящем изобретении (например, доменов MRD), включают грамотрицательные или грамположительные организмы, такие как E. coli и В. subtilis. Экспрессионные векторы для применения в прокариотических клетках-хозяевах обычно содержат один или большее количество фенотипически селектируемых маркерных генов (например, гены, кодирующие белки, придающие устойчивость к антибиотикам или поддерживающие автотрофный рост). Примеры экспрессионных векторов, подходящих для прокариотических хозяев, включают серии векторов pKK223-3 (Pharmacia, Упсала, Швеция), pGEM1 (Promega, Висконсин, США), рЕТ (Novagen, Висконсин, США) и pRSET (Invitrogen, Калифорния, США) (см., например, Studier, J. Mol. Biol. 219:37 (1991) и Schoepfer, Gene 124:83 (1993)). Примеры промоторных последовательностей, часто используемых в экспрессионных векторах для прокариотических клеток-хозяев, включают Т7, (Rosenberg et al., Gene 56: 125-135 (1987)), бета-лактамазу (пенициллиназу), систему с лактозным промотором (Chang et al., Nature 275:615 (1978)); и Goeddel et al., Nature 281:544 (1979)), систему с триптофановым (trp) промотором (Goeddel et al., Nucl. Acids Res. 8:4057, (1980)) и tac-промотором (Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2^d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.).

Согласно альтернативным вариантам реализации могут применяться системы эукариотических клеток-хозяев, в том числе дрожжевых клеток, трансформированных рекомбинантными дрожжевыми экспрессионными векторами, содержащими кодирующую последовательность MRD-содержащего антитела согласно настоящему изобретению, например, экспрессионные системы, описанные в заявке на патент США № 60/344169 и в WO03/056914 (способы получения гликопротеина, подобного гликопротеину человека в не принадлежащей человеку эукариотической клетке-хозяине) (содержание каждого из указанных источников полностью включено посредством ссылки). Примеры дрожжей, которые могут применяться для получения композиций, предложенных в настоящем изобретении, например, домены MRD, включают дрожжи рода Saccharomyces, Pichia, Actinomycetes и Kluyveromyces. Дрожжевые векторы, как правило, содержат последовательность начала репликации дрожжевой плазмиды 2mu, автономно реплицирующуюся последовательность (ARS), промоторную область, последовательности полиаденилирования, последовательности терминации транскрипции и ген селектируемого маркера. Примеры промоторных последовательностей в дрожжевых экспрессионных конструкциях включают промоторы металлотионеина, 3-фосфоглицераткиназы (Hitzeman et al., J. Biol. Chem. 255:2073, (1980)) и других гликолитических ферментов, таких как енолаза, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофруктокиназа, глюкозо-6-фосфат-изомераза, 3-фосфоглицератмутаза, пируваткиназа, триозофосфатизомераза, фосфоглюкозоизомераза и глюкокиназа. Дополнительные подходящие век

- 116 043040 торы и промоторы для применения для экспрессии у дрожжей, а также протоколы трансформации дрожжей известны в данной области техники. См., например, Fleer et al., Gene, 107:285-195 (1991) и Hinnen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 75:1929 (1978).

Системы клеток-хозяев на основе культур клеток растений или насекомых также подходят для получения композиций, предложенных в настоящем изобретении. Такие системы клеток-хозяев включают, например, системы клеток насекомых, инфицированные рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, бакуловирусными), содержащими кодирующую последовательность MRDсодержащего антитела; системы клеток растений, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, вирусом мозаики цветной капусты, CaMV; вирусом табачной мозаики, TMV) или трансформированные рекомбинантными плазмидными экспрессионными векторами (например, Ti-плазмидой), содержащими кодирующую последовательность MRD-содержащего антитела, включая, но не ограничиваясь перечисленными, экспрессионные системы, описанные в патенте США № 6815184, WO2004/057002, WO2004/024927, заявках на патент США №60/365769, 60/368047 и WO2003/078614; содержание каждого из перечисленных источников полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

Согласно альтернативным вариантам реализации могут использоваться другие эукариотические системы клеток-хозяев, включая системы животных клеток, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессионными векторами (например, аденовирусом, вирусом осповакцины), в том числе клеточные линии, сконструированные таким образом, что они содержат несколько копий ДНК, кодирующей MRD-содержащее антитело, либо стабильно амплифицирующейся (CHO/dhfr), либо нестабильно амплифицирующейся в двойных микрохромосомах (например, линии клеток мыши). Согласно одному варианту реализации вектор, содержащий полинуклеотид(ы), кодирующий(ие) MRD-содержащее антитело согласно настоящему изобретению, является полицистронным. Примеры клеток млекопитающих, подходящих для получения указанных композиций, включают клетки 293 (например, 293Т и 293F), клетки СНО, клетки ВНК, клетки NS0, клетки SP2/0, клетки миеломы YO, клетки миеломы мыши P3X63, клетки PER, клетки PER.C6 (Круцелл, Нидерланды) или клетки гибридомы, другие клетки млекопитающих. Дополнительные примеры клеток-хозяев млекопитающих, подходящих для реализации настоящего изобретения, включают, не ограничиваясь перечисленными, клетки VERY, Hela, COS, MDCK, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 и T47D, CRL7O3O и HsS78Bst. Некоторые примеры экспрессионных систем и способов отбора описаны в приведенных ниже и цитируемых в настоящем документе источниках: Borth et al., Biotechnol. Bioen. 71(4):266-73 (2000-2001), Werner et al., Arzneimittelforschung/Drug Res. 48(8):870-80 (1998), Andersen and Krummen, Curr. Op. Biotechnol. 13:117-123 (2002), Chadd and Chamow, Curr. Op. Biotechnol. 12:188-194 (2001) и Giddings, Curr. Op. Biotechnol. 12: 450-454 (2001).

Дополнительные примеры экспрессионных систем и способов отбора описаны у Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:355-359 (1984) и Bittner et al., Methods in Enzymol. 153:51-544(1987)). Последовательности контроля транскрипции и трансляции для экспрессионных векторов клеток-хозяев млекопитающих часто происходят из вирусных геномов. Часто используемые промоторные последовательности и энхансерные последовательности в экспрессионных векторах для млекопитающих включают последовательности, происходящие из полиомавируса, аденовируса 2, вируса обезьян 40 (SV40) и цитомегаловируса человека (CMV). Примеры коммерчески доступных экспрессионных векторов для применения в клетках-хозяевах млекопитающих включают рСЕР4 (Invitrogen®) и pcDNA3 (Invitrogen®).

Ряд систем селекции может применяться в экспрессионных векторных системах на основе клеток млекопитающих, включая, но не ограничиваясь перечисленными, гены тимидинкиназы вируса простого герпеса, гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы и аденинфосфорибозилтрансферазы (Lowy et al., Cell 22:817 (1980)), которые могут применяться в клетках tk, hgprt^- или aprt^-, соответственно. Дополнительно, в качестве основы для отбора может использоваться устойчивость к антиметаболитам, например, для dhfr, gpt, neo, hygro, trpB, hisD, ODC (орнитиндекарбоксилазной) и глутаминсинтазной системы. Хорошо известные специалистам в данной области техники способы могут применяться для конструирования экспрессионных векторов, содержащих кодирующую последовательность MRD-содержащего антитела наряду с подходящими сигналами контроля транскрипции/трансляции. Указанные способы включают техники рекомбинантной ДНК in vitro, синтетические техники и in vivo рекомбинацию/генетическую рекомбинацию. См., например, техники, описанные у Maniatis et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989) и Ausubel et al., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y (1989).

Для экспрессирования кодирующей последовательности MRD-содержащего антитела могут использоваться разнообразные системы векторной экспрессии у хозяев. Может быть выбран штамм клетокхозяев, который модулирует экспрессию встроенных последовательностей антитела, или модифицирует и подвергает процессингу продукт гена антитела специфическим нужным образом. Такие модификации (например, гликозилирование) и процессинг (например, расщепление) белковых продуктов могут быть важны для функции белка. Разные клетки-хозяева обладают характеристическими специфическими механизмами посттрансляционного процессинга и модификации белков и генных продуктов. Могут быть

- 117 043040 выбраны подходящие клеточные линии или системы хозяев для обеспечения корректной модификации и процессинга антитела или его экспрессируемого фрагмента. С этой целью могут использоваться эукариотические клетки-хозяева, обладающие клеточными механизмами для надлежащего процессинга первичного транскрипта, гликозилирования и фосфорилирования генного продукта.

Стабильная экспрессия, как правило, обеспечивает более воспроизводимые результаты, чем транзиентная экспрессия, а также лучше подходит для массового производства в больших масштабах; однако определение того, подходит ли транзиентная экспрессия лучше в конкретной ситуации, находится в пределах компетенции специалиста в данной области техники. Вместо применения экспрессионных векторов, которые содержат вирусные точки начала репликации, клетки-хозяева могут быть трансформированы соответствующими кодирующими нуклеиновыми кислотами, контролируемыми подходящими элементами контроля экспрессии (например, промоторными, энхансерными последовательностями, терминаторами транскрипции, сайтами полиаденилирования и т.д.) и селектируемым маркером. После введения чужеродной ДНК сконструированные клетки могут культивироваться в течение 1-2 дней на обогащенной среде, а затем их переводят на селективную среду. Селектируемый маркер в рекомбинантной плазмиде придает устойчивость к селекции и позволяет отбирать клетки, которые стабильно интегрировали плазмиду в хромосомы, и культивировать их с получением очагов, которые, в свою очередь, могут быть клонированы и размножены для получения клеточных линий.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) экспрессируются на уровнях (в титрах), сопоставимых с уровнями антител. Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) экспрессируются на уровне, составляющем по меньшей мере приблизительно 10 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 20 мкг/мл, или по меньшей мере приблизительно 30 мкг/мл. Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) экспрессируются на уровне, составляющем по меньшей мере приблизительно 40 мкг/мл или по меньшей мере приблизительно 50 мкг/мл. Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) экспрессируются на уровне, составляющем по меньшей мере приблизительно 60 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 70 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 80 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 90 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 95 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 100 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 110 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 120 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 130 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 140 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 150 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 160 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 170 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 180 мкг/мл, по меньшей мере приблизительно 190 мкг/мл, или по меньшей мере приблизительно 200 мкг/мл. Уровни экспрессии молекулы антитела могут быть повышены с помощью амплификации вектора и применения рекомбинантных способов и инструментов, известных в данной области техники, включая стратегии реконструкции хроматина для усиления экспрессии трансгена.

Настоящее изобретение также направлено на способ модификации профиля гликозилирования MRD-содержащего антитела, продуцируемого клеткой-хозяином, включающий экспрессию в указанной клетке-хозяине нуклеиновой кислоты, кодирующей MRD-содержащее антитело, и нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с гликозилтрансферазной активностью, или вектора, содержащего такие нуклеиновые кислоты. Гены с гликозилтрансферазной активностью включают e(1,4)-Nацетилглюкозаминилтрансферазу III (GnTII), α-маннозидазу II (ManII), в(1,4)-галактозилтрансферазу (GalT), β(1,2)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу I (GnTI) и β(1,2)-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу II (GnTII). Согласно одному варианту реализации в клетке-хозяине экспрессируется комбинация генов с гликозилтрансферазной активностью (например, GnTIII и ManII). Аналогичным образом, указанный способ также охватывает экспрессию одного или большего количества полинуклеотидов, кодирующих MRD-содержащее антитело, в клетке-хозяине, в которой ген гликозилтрансферазы был разрушен или иным образом дезактивирован (например, в клетке-хозяине, в которой активность гена, кодирующего а1-6-кор-фукозилтрансферазу, была нокаутирована). Согласно еще одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело может быть получено в клетке-хозяине, которая также экспрессирует полинуклеотид, кодирующий полипептид, обладающий GnTIII-активностью, для модификации паттерна гликозилирования. Согласно конкретному варианту реализации указанный полипептид, обладающий GnTIII-активностью, представляет собой гибридный полипептид, содержащий домен локализации в комплексе Гольджи полипептидов-резидентов аппарата Гольджи. Согласно еще одному варианту реализации экспрессия MRD-содержащего антитела в клетке-хозяине, которая экспрессирует полинуклеотид, кодирующий полипептид, обладающий GnTIII-активностью, приводит к получению MRD-содержащего антитела с повышенным сродством к связыванию Fc-рецептора и повышенной эффекторной функцией. Соответственно, согласно одному варианту реализации настоящее изобретение относится к клеткехозяину, содержащей:

(а) выделенную нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность, кодирующую полипеп

- 118 043040 тид, обладающий GnTШ-активностью; и (b) выделенный полинуклеотид, кодирующий MRD-содержащее антитело согласно настоящему изобретению, например, гибридное, приматизированное или гуманизированное антитело.

Согласно еще одному варианту реализации указанный полипептид, обладающий активностью GnTIII, представляет собой гибридный полипептид, содержащий каталитический домен GnTIII, и домен локализации в комплексе Гольджи представляет собой домен локализации маннозидазы II. Способы получения таких гибридных полипептидов и их применения для получения антител с усиленными эффекторными функциями раскрыты в предварительной заявке на патент США 60/495142 и опубликованной заявке на патент США № 2004/0241817, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) с измененным гликозилированием, продуцируемые клетками-хозяевами согласно настоящему изобретению, как правило, демонстрируют повышенное сродство к связыванию Fc-рецептора и/или повышенную эффекторную функцию в результате модификации клетки-хозяина (например, за счет экспрессии гена гликозилтрансферазы). Повышенное сродство к связыванию Fc-рецептора может представлять собой повышенное связывание с активирующим рецептором Fcy, таким как рецептор FcyRIIIa. Повышенная эффекторная функция может представлять собой что-либо одно или более из следующего: усиленная антителозависимая клеточная цитотоксичность, усиленный антителозависимый клеточный фагоцитоз (АЗКФ), увеличенная секреция цитокинов, увеличенное опосредованное иммунными комплексами поглощение антигена антигенпрезентирующими клетками, повышенная опосредованная Fc клеточная цитотоксичность, повышенное связывание с NK-клетками, повышенное связывание с макрофагами, повышенное связывание с полиморфноядерными клетками (ПЯК), повышенное связывание с моноцитами, повышенное перекрестное связывание связанных с мишенью антител, усиленная прямая сигнализация, индуцирующая апоптоз, усиленное созревание дендритных клеток и усиленное примирование T-клеток.

После того как мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) согласно настоящему изобретению получена при помощи рекомбинантной экспрессии, она может быть очищена любым способом, известным в данной области техники для очищения молекул иммуноглобулина, например, с помощью хроматографии (например, ионообменной, аффинной, в частности, за счет сродства к специфическому антигену после хроматографии с белком А и хроматографии на эксклюзионной колонке), центрифугирования, дифференциальная растворимость, или с помощью любой другой стандартной техники очищения белков. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции согласно настоящему изобретению или их фрагменты, необязательно, соединены с гетерологичными полипептидными последовательностями, описанными в настоящем документе или известными в данной области техники, облегчающими очищение. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции или их фрагменты, необязательно, соединены с облегчающими очищение гетерологичными полипептидными последовательностями, описанными в настоящем документе или известными в данной области техники. В частности, предполагается, что лиганды (например, антитела и другие аффинные матрицы) доменов MRD или других компонентов мультивалентных и мультиспецифических композиций могут применяться в аффинных колонках для аффинной очистка, и, необязательно, домены MRD или другие компоненты указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, связываемые указанными лигандами, удаляют из композиции перед получением готовых мультивалентных и мультиспецифических композиций с применением техник, известных в данной области техники.

Применение гибридов антитело-MRD.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), описанные в настоящем документе подходят для разнообразных применений, включая, но не ограничиваясь указанным, способы терапевтического лечения, например, лечения раковых заболеваний. Согласно определенным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) подходят для ингибирования роста опухоли, уменьшения неоваскуляризации, уменьшения ангиогенеза, индуцирования дифференцировки, уменьшения объема опухоли и/или снижения онкогенности опухоли. Способы применения могут быть представлены способами для применения in vitro, ex vivo или in vivo. Терапевтические средства для лечения рака и их дозировки, способы введения и рекомендации по применению известны в данной области техники и были описаны в таких литературных источниках, как Настольный справочник врача (Physician's Desk Reference, PDR). В PDR описаны дозировки агентов, которые использовались в лечении различных раковых заболеваний. Терапевтически эффективные режимы дозирования и дозировки указанных выше химиотерапевтических лекарственных средств зависят от конкретного ракового заболевания, лечение которого проводят, степени заболевания и других факторов, которые известны практикующему специалисту в данной области техники, и могут быть определены практикующим врачом. Содержание справочника PDR явным образом и полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. В издании Настольного справочника врача (PDR) 2006 года описан механизм действия, предпочтительные дозы

- 119 043040 для лечения и схемы дозирования для талидомида (стр. 979-983), велкейда (VELCADE®) (стр. 21022106) и мелфалана (стр. 976-979).

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят в составы, дозируют и вводят соответствующим надлежащей клинической практике образом. Факторы, учитываемые в данном контексте, включают конкретное расстройство, лечение которого проводят, конкретного млекопитающего, лечение которого проводят, клинического состояния индивидуального пациента, причины расстройства, участка доставки агента, способа введения, расписания введения и других факторов, известных практикующим медицинским специалистам. Диапазоны доз для введения мультивалентных и мультиспецифических композиций, предложенных в настоящем изобретении, достаточно велики для обеспечения требуемого эффекта, при котором происходит облегчение симптомов заболевания, опосредованного целевой молекулой. Дозировка не должна быть слишком большой, чтобы не вызывать нежелательных побочных явлений, таких как синдром повышенной вязкости, отек легких, застойная сердечная недостаточность и т.п. Обычно дозировка варьирует в зависимости от возраста, состояния, пола и степени заболевания пациента и может быть определена специалистом в данной области техники. Дозировка может корректироваться индивидуально лечащим врачом в случае какого-либо осложнения. Получение фармакологической композиции, которая содержит растворенные или диспергированные активные ингредиенты, хорошо известно в данной области техники. Как правило, такие композиции получают в виде стерильных подходящих для инъекций жидких растворов либо суспензий, водных или неводных. Однако могут также быть получены твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидкости перед использованием. Состав может также быть эмульгирован. Таким образом, содержащая антитело-MRD композиция может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, капсул, составов для пролонгированного высвобождения или порошков, или других композиционных форм.

Согласно некоторым вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении (например, мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела)), вводят в состав, обеспечивающий или оптимизирующий распределение in vivo. Например, гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) исключает многие высокогидрофильные соединения и, при необходимости, указанные композиции получают в таком виде, чтобы усиливать их проникновение через ГЭБ, например, введением в липосомы. Способы получения липосом описаны, например, в патентах США № 4522811; 5374548; и 5399331. Липосомы могут содержать один или большее количество фрагментов, избирательно транспортируемых в специфические клетки или органы, и, соответственно, улучшающих направленную доставку лекарственного средства (см., например, Ranade Clin. Pharmacol. 29:685 (1989)).

Мультивалентные и мультиспецифические связывающие свойства предложенных в настоящем изобретении композиций обеспечивают рациональный дизайн терапевтических средств, предпочтительно направленных на конкретные представляющие интерес анатомические области in vivo. Например, согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело локализуется в области воспаления или локализации опухоли за счет связывания антитело-комбинирующего сайта с молекулой, характеризующейся повышенной экспрессией в области локализации воспаления или опухоли, соответственно. Согласно конкретным вариантам реализации сродство антитело-комбинирующего сайта в MRD-содержащем антителе к связыванию мишени in vivo по меньшей мере в 3, по меньшей мере в 10, по меньшей мере в 30 или по меньшей мере в 100 раз выше сродства одной или большего количества мишеней MRD, связываемых указанным MRD-содержащим антителом (например, поверхностного антигена, который в иных случаях не рассматривается в качестве приемлемой мишени антитела, ввиду, например, неспецифической поверхностной экспрессии или низкого сродства к связыванию мишени, ассоциированного со стандартными технологиями антител).

Терапевтические составы согласно настоящему изобретению, необязательно, содержат фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы (Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042 [1990]). Приемлемые носители, вспомогательные вещества, или стабилизаторы нетоксичны для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, и включают буферы, антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту, метионин, витамин Е, матабисульфит натрия, консерванты, изотонирующие агенты, стабилизаторы, комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или хелатирующие агенты, такие как ЭДТК. Физиологически переносимые носители хорошо известны в данной области техники. Аналогичным образом, мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению могут включать фармацевтически приемлемые соли их компонентов. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные свободными аминогруппами полипептида), образующиеся при реакции с неорганическими кислотами, например, соляной или фосфорной кислотами, или такими органическими кислотами, как уксусная, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, могут также быть получены из неорганических оснований, например, гидроксида натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и т.п.

Подходящие вспомогательные вещества включают, например, воду, солевой раствор, декстрозу,

- 120 043040 глицерин, этанол или т.п., и их комбинации. Дополнительные вспомогательные вещества, подходящие для получения составов с композициями, предложенными в настоящем изобретении, включают агент, который может действовать как:

(1) наполнитель, (2) усилитель растворимости и (3) стабилизатор.

Такие вспомогательные вещества включают, не ограничиваясь перечисленными: многоатомные сахарные спирты (перечисленные выше); аминокислоты, такие как аланин, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин, лизин, орнитин, лейцин, 2-фенилаланин, глутаминовая кислота, треонин и т.д.; органические сахара или сахарные спирты, такие как сахароза, лактоза, лактит, трегалоза, стахиоза, манноза, сорбоза, ксилоза, рибоза, рибит, миоинозитоза, миоинозит, галактоза, галактит, глицерин, циклиты (например, инозит), полиэтиленгликоль; серосодержащие восстанавливающие агенты, такие как мочевина, глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолят натрия, тиоглицерин, альфа-монотиоглицерин и натрия тиосульфат; низкомолекулярные белки, такие как сывороточный альбумин человека, бычий сывороточный альбумин, желатин или другие иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; моносахариды (например, ксилоза, манноза, фруктоза, глюкоза; дисахариды (например, лактоза, мальтоза, сахароза); трисахариды, такие как раффиноза; и полисахариды, такие как декстрин или декстран.

Буферы используют для контроля показателей pH, с поддержанием их в диапазоне, оптимизирующем терапевтическую эффективность, в частности, в том случае, когда стабильность зависит от pH. Согласно некоторым вариантам реализации буферы присутствуют в концентрациях, варьирующих от приблизительно 1 мМ до приблизительно 200 мМ, от приблизительно 1 мМ до приблизительно 100 мМ или от приблизительно 1 мМ до приблизительно 50 мМ. Подходящие буферные агенты для применения в составах согласно настоящему изобретению включают органические и неорганические кислоты и их соли. Например, цитрат, фосфат, сукцинат, тартрат, фумарат, глюконат, оксалат, лактат, ацетат. Кроме того, буферы могут содержать соли гистидина и триметиламина, такие как Tris.

Стабилизаторы, называемые модификаторами тоничности, присутствуют для корректировки или поддержания тоничности жидкой композиции. При использовании с большими заряженными биомолекулами, такими как белки и антитела, стабилизаторы взаимодействуют с заряженными группами боковых цепей аминокислот, уменьшая потенциал для внутримолекулярных и межмолекулярных взаимодействий. Примеры модифицирующих тоничность агентов, подходящих для получения составов согласно настоящему изобретению, включают многоатомные сахарные спирты, предпочтительно трехатомные или более многоатомные сахарные спирты, такие как глицерин, эритрит, арабит, ксилит, сорбит и маннит. Жидкие композиции могут также содержать жидкие фазы помимо воды и вместо воды. Примерами таких дополнительных жидких фаз являются глицерин, растительные масла, такие как хлопковое масло, органические сложные эфиры, такие как этилолеат, и водно-масляные эмульсии.

Согласно одному варианту реализации терапевтическая композиция содержит мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) в количестве, составляющем по меньшей мере 0,1% гибридного MRD-содержащего антитела от общей массы терапевтической композиции. Процент по массе представляет собой отношение массы MRD-содержащего антитела и общей массы композиции. Соответственно, например, 0,1% по массе составляет 0,1 г MRDсодержащего антитела на 100 г композиции.

Составы для парентерального введения включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и подходящие для инъекций органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевые и забуференные среды. В соответствии с настоящим изобретением фармацевтически приемлемые носители включают, не ограничиваясь перечисленными, 0,01-0,1М и, предпочтительно, 0,05М фосфатный буфер или 0,8% солевой раствор. Другие распространенные основы для парентерального применения включают растворы фосфата натрия, декстрозный раствор Рингера, декстрозы и хлорида натрия, лактатный раствор Рингера или жирные масла. Основы для внутривенного применения включают восполняющие жидкость и питательные вещества агенты, восполняющие электролиты агенты, например, на основе декстрозного раствора Рингера, и т.п. Могут также присутствовать консерванты и другие добавки, такие как, например, противомикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы и т.п.

В частности, фармацевтические композиции, подходящие для инъекций, как правило, включают стерильные водные растворы (в случае водорастворимых композиций) или дисперсии и стерильные порошки для экстемпорального приготовления стерильных подходящих для инъекций растворов или дисперсий. В таких случаях композиция должна быть стерильной и должна быть текучей в достаточной степени, чтобы позволять легкое введение через шприц. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и предпочтительно защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содер

- 121 043040 жащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль, и т.п.) и их подходящие смеси. Нужная текучесть может поддерживаться, например, за счет применения покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем применения поверхностно-активных веществ. Подходящие составы для применения в терапевтических способах, раскрытых в настоящем документе, описаны в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., 16^th ed. (1980).

Предотвращение действия микроорганизмов может достигаться за счет различных антибактериальных и антимикотических агентов, например, парабенов, хлорбутана, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. во многих случаях предпочтительно включение изотонических агентов, например, Сахаров, полиспиртов, таких как маннит, сорбит, или хлорида натрия в композицию. Пролонгированная абсорбция подходящих для инъекций композиций может обеспечиваться путем включения в композицию агента, задерживающего абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.

Согласно одному варианту реализации фармацевтические составы с композициями согласно настоящему изобретению содержат соединение, способное снижать вязкость водного состава, содержащего мультивалентные и моновалентные мультиспецифические композиции. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция представляет собой MRD-содержащее антитело. Согласно дополнительному варианту реализации указанное соединение, способное снижать вязкость состава, выбрано из группы, состоящей из: метионина, аргинина (например, сукцината аргинина), дипептида аргинина, трипептида аргинина, полиаргинина, гомоаргинина, N-гидрокси-L-нор-аргинина, метилового сложного эфира нитроаргинина, аргининамида, аргинин метилового сложного эфира, этилового сложного эфира аргинина, лизина, лизинамида, метилового сложного эфира лизина, гистидина, метилового сложного эфира гистидина, гистамина, аланина, аланинамида, метилового сложного эфира аланина, 2-амино-3-гуанидино-пропионовой кислоты, гуанидина, орнитина, агматина, гуанидиномасляной кислоты, цитруллина, путресцина, кадаверина, спермидина, спермина и мочевины. Согласно некоторым вариантам реализации указанное соединение присутствует в составе в концентрации, составляющей по меньшей мере 10 мМ, по меньшей мере 20 мМ, по меньшей мере 50 мМ или по меньшей мере 100 мМ. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное соединение присутствует в составе в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до 1 М. Согласно дополнительным вариантам реализации общая концентрация белка, присутствующего в составе, составляет по меньшей мере 50 мг/мл, по меньшей мере 75 мг/мл, по меньшей мере 100 мг/мл, по меньшей мере 150 мг/мл, по меньшей мере 200 мг/мл или по меньшей мере 250 мг/мл.

Схема дозирования и эффективные количества для терапевтического и профилактического применения, т.е. режим дозирования, зависит от разнообразных факторов, включающих причину, стадию и тяжесть заболевания или расстройства, состояние здоровья, физический статус, возраст млекопитающего, лечение которого проводят, а также область и способ доставки MRD-содержащего антитела. Терапевтическая эффективность и токсичность комплекса и структуры могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических, фармакологических и токсикологических процедур в клеточных культурах или у экспериментальных животных. Данные, полученные в результате указанных процедур, могут использоваться также и при определении диапазона дозировок для применения у человека. Кроме того, с применением известных процедур может быть легко определен терапевтический индекс (т.е. отношение дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции, к дозе, летальной для 50% популяции (ED₅₀/LD₅₀)). Дозировка предпочтительно находится в пределах диапазона концентраций, который включает ED₅₀ с незначительной токсичностью или без токсичности, и может варьировать в пределах указанный диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы, чувствительности пациента и способа введения. Режим дозирования должен также учитывать известные в данной области техники фармакокинетические параметры, такие как скорость абсорбции, биодоступность, метаболизм и клиренс лекарственного средства (см., например, Hidalgo-Aragones, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617 (1996); Groning et al., Pharmazie 51:337-341 (1996); Fotherby Contraception 54:59-69 (1996); и Johnson et al., J. Pharm. Sci. 84:1144-1146 (1995)). В данной области техники хорошо известны способы определения лечащим врачом режима дозирования для каждого получающего лечение субъекта. Кроме того, композиции, содержащие мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) могут вводиться однократно или многократно в зависимости от необходимых и переносимых субъектом дозировки и частоты введения. Продолжительность профилактического и терапевтического лечения варьирует в зависимости от конкретного заболевание или состояния, лечение которого проводят. Для некоторых заболеваний подходит кратковременное лечение, тогда как другие требуют длительной терапии в течение продолжительного времени. При лечении дополнительным терапевтическим агентом MRD-содержащее антитело может вводиться последовательно или одновременно с указанным дополнительным терапевтическим агентом.

Терапевтически эффективные количества MRD-содержащего антитела согласно настоящему изобретению варьируют в зависимости, например, от мишеней MRD-содержащего антитела и активности конъюгированных цитотоксических агентов, охваченных различными вариантами реализации настоящего изобретения. Таким образом, например, терапевтически эффективная доза мультивалентной и моно

- 122 043040 валентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которое впитывает растворимый лиганд, такой как ФНО-альфа, предположительно будет выше, чем терапевтически эффективная доза мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела), которое перенаправляет эффекторную функцию Т-клеток на мишень на гематологическом злокачественном новообразовании. Аналогичным образом, терапевтически эффективные количества мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), содержащий майтансиноидный цитотоксический агент, предположительно будут ниже, чем дозировка мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRDсодержащего антитела), содержащего менее активное химиотерапевтическое средство, такое как таксол, или аналогичной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, которая не содержит цитотоксического агента.

В соответствии с одним вариантом реализации терапевтически эффективная доза мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) представляет собой количество, выбранное из приблизительно 0,00001 мг/кг - приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 0,00001 мг/кг - приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 0,00001 мг/кг - приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 0,0001 мг/кг - приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 0,0001 мг/кг - приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 0,0001 мг/кг - приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 0,001 мг/кг приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 0,001 мг/кг - приблизительно 10 мг/кг, и приблизительно 0,001 мг/кг - приблизительно 5 мг/кг массы тела пациента, в виде одной или нескольких доз, вводимых ежедневно, на протяжении одного или нескольких дней.

В соответствии с другим вариантом реализации терапевтически эффективное количество мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) представляет собой количество, достаточное для обеспечения при введении в физиологически переносимом составе достигается концентрации в плазме, составляющей от приблизительно 0,1 микрограммов (мкг) на миллилитр (мл) до приблизительно 100 мкг/мл, от приблизительно 1 мкг/мл до приблизительно 5 мкг/мл, и обычно приблизительно 5 мкг/мл. Иными словами, согласно еще одному варианту реализации дозировка может варьировать от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 300 мг/кг, от приблизительно 0,2 мг/кг до приблизительно 200 мг/кг, от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг в виде одной или нескольких доз, вводимых ежедневно на протяжении одного или нескольких дней.

Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) вводят в дозе от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг.

Согласно дополнительным вариантам реализации дозы указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) вводят примерно один раз сутки, примерно два раза в неделю, примерно еженедельно, примерно один раз в две недели или примерно каждые три недели. Согласно некоторым вариантам реализации сначала вводят более высокую нагрузочную доза мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, а затем вводят более низкую поддерживающую дозу. Согласно дополнительным вариантам реализации терапевтические композиции, предложенные в настоящем изобретении, содержат мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) в количестве, составляющем по меньшей мере 0,1% антитела по массе от общей массы терапевтической композиции. Процент по массе представляет собой отношение массы антитела к общей массе композиции. Соответственно, например, 0,1 % по массе составляет 0,1 г антитела-MRD на 100 г композиции. Согласно некоторым вариантам реализации терапевтическая композиция, содержащая мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, содержит от приблизительно 10 микрограммов (мкг) антитела на миллилитр (мл) до приблизительно 100 микрограммов (мг) антитела на мл в качестве активного ингредиента в объеме композиции. Согласно дополнительным вариантам реализации терапевтическая композиция, содержащая мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию, содержит от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл (т.е. приблизительно 0,1-1 % по массе) антитела в качестве активного ингредиента в объеме композиции.

Как показывают примеры в настоящем документе, мультивалентная и мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) может иметь профиль ФК, аналогичный соответствующему антителу. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации антитело-MRD вводят в соответствии с дозирующими концентрациями и режимом дозирования, совпадающими с дозировками и режимом для антитела-компонента молекулы антитела-MRD по отдельности (например, для коммерческого антитела или его так называемого биосимиляра или биопревосходного средства). Также мультивалентная и мультиспецифическая композиция может иметь профиль ФК, отличный от профиля соответствующего антитела. Например, согласно вариантам реализации, где мультивалентные и мультиспецифические композиции перенаправляют Т-клеточный ответ и/или включают цитотоксический агент, дозирующая концентрация предположительно будет меньше, чем для соответствующего антитела. В

- 123 043040 указанных случаях терапевтически эффективные дозирующие концентрации и режимы дозирования для указанных композиций могут быть определены рутинным образом с применением параметром и критериев, известных в данной области техники. В составы с мультивалентными и мультиспецифическими композициями (например, MRD-содержащими антителами) не должны, но могут, необязательно, входить один или большее количество агентов, в настоящее время применяемых для предотвращения или лечения расстройства, представляющего интерес. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, присутствующей в составе, типа расстройства или лечения, и других факторов, обсуждаемых выше.

Согласно обсуждению выше, подходящая дозировка указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) зависит от типа заболевания, лечение которого проводится, согласно описанию выше, тяжести и течения заболевания, предшествующей терапии, клинической истории пациента и выбора лечащего врача. Мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию подходящим образом вводят пациенту однократно или периодически на протяжении курса лечения. Предпочтительно, мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят путем внутривенной инфузии или подкожных инъекций. Согласно некоторым вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят парентерально путем инъецирования или постепенной инфузии в течение периода времени. Хотя оценка целевой молекулы в организме может, как правило, быть проведена при системном введении и, соответственно, чаще всего лечение проводят путем внутривенного введения терапевтических композиций, предусмотрены и другие ткани и способы доставки, если существует вероятность, что целевая ткань содержит целевую молекулу. Соответственно, мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция может вводиться внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно, внутриполостным путем, чрескожно, и может доставляться перильстатически. Мультивалентные и мультиспецифические композиции могут также доставляться в виде аэрозоля в дыхательные пути и легкие. Согласно некоторым вариантам реализации молекулу антитела-MRD вводят путем внутривенной инфузии. Согласно некоторым вариантам реализации указанную молекулу антитела-MRD вводят путем подкожной инъекции.

Терапевтические композиции, содержащие мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) может вводиться внутривенно обычным способом, например, путем инъекции единицы дозы. Термин единица дозы в отношении терапевтической композиции согласно настоящему изобретению относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичной дозированной формы для пациента, причем каждая единица содержит заданное рассчитанное количество активного материала для получения требуемого терапевтического эффекта, связанное с требуемым разбавителем, т.е. носителем или основой. Согласно конкретному варианту реализации указанный терапевтические композиции, содержащие моноклональное антитело человека или полипептид, вводят подкожно.

Композиции, предложенные в настоящем изобретении, вводят совместимым с лекарственной формой способом в терапевтически эффективном количестве. Количество для введения зависит от пациента, лечение которого проводят, способности систем пациента утилизовать активный ингредиент и уровня требуемого терапевтического эффекта. Точные количества активного ингредиента, которые необходимо ввести, зависят от решения практикующего врача и являются специфическими для каждого индивидуума. Однако подходящие диапазоны доз для системного применения раскрыты в настоящем документе и зависят от способа введения. Подходящие режимы введения также варьируют, однако характерным является начальное введение с введением последующих повторных доз с одним или несколькими часовыми интервалами путем последовательных инъекций или другого способа введения. Как вариант, предусмотрена непрерывная внутривенная инфузия, достаточная для поддержания концентраций в крови в диапазонах, определенных для терапии in vivo.

Согласно другим вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, включающий введение терапевтически эффективного количества или профилактически эффективного количества молекулы антитело-MRD нуждающемуся в этом пациенту. Согласно некоторым вариантам реализации указанное заболевание, расстройство или повреждение представляет собой раковое заболевание. Согласно другим вариантам реализации указанное заболевание, расстройство или повреждение представляет собой заболевание или расстройство иммунной системы, такое как воспаление или аутоиммунное заболевание. Ожидается, что мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) обладают по меньшей мере такой же терапевтической эффективностью, как и антитело, содержащееся в MRDантителе, содержащем антитело, при его отдельном введении. Соответственно, предполагается, что мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут вводиться пациенту для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, при котором антитело, содержащееся в MRD-содержащем антителе, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-содержащем антителе, демонстрирует приемлемо согласованную благоприятную активность при лечении или предотвращении такие заболевания,

- 124 043040 расстройства или повреждения. Указанная благоприятная активность может быть продемонстрировали in vitro, в модели на животных in vivo или в клинических испытаниях у человека. Согласно одному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят пациенту для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, при котором антитело-компонент MRD-содержащего антитела, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-содержащем антителе, демонстрирует терапевтическую или профилактическую эффективность in vitro или в модели на животных. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят пациенту для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, при которых антителокомпонент MRD-содержащего антитела, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-содержащем антителе, демонстрирует терапевтическую или профилактическую эффективность у человека. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят пациенту для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, применение при таком лечении или предотвращении которого антитело-компонент указанного MRDсодержащего антитела, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-содержащем антителе, было одобрено регулирующим органом.

Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с другим терапевтическим средством для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, при котором антитело-компонент указанного MRD-содержащего антитела, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-антителе, в комбинации с указанным терапевтическим средством или другим терапевтическим средством, которое функционирует таким же образом, что и терапевтическое средство в указанной комбинации, демонстрирует терапевтическую или профилактическую эффективность in vitro или в модели на животных. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с другим терапевтическим средством для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, при котором антитело-компонент указанного MRD-содержащего антитела, или антитело, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-антителе, в комбинации с указанным терапевтическим средством или другим терапевтическим средством, которое функционирует таким же образом, что и терапевтическое средство в указанной комбинации, демонстрирует терапевтическую или профилактическую эффективность у человека. Согласно еще одному варианту реализации MRD-содержащее антитело, вводят в комбинации с другим терапевтическим средством для лечения или предотвращения заболевания, расстройства или повреждения, применение при таком лечении или предотвращении которого антитела-компонента MRD-содержащего антитела, или антитела, которое функционирует таким же образом, что и антитело, содержащееся в MRD-антителе, в комбинации с указанным терапевтическим средством или другим терапевтическим средством, которое функционирует таким же образом, что и терапевтическое средство в указанной комбинации, было одобрено регулирующим органом. Введение MRDсодержащего антитела в комбинации более чем с одним терапевтическим средством согласно описанию выше также охвачено настоящим изобретением.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое способствует апоптозу, ингибирует апоптоз, способствует выживаемости клеток, ингибирует выживаемость клеток, способствует старению пораженных заболеванием или аберрантных клеток, ингибирует старение клеток, способствует пролиферация клеток, ингибирует пролиферацию клеток, способствует клеточной дифференцировке, ингибирует клеточную дифференцировку, способствует активация клеток, ингибирует активацию клеток, способствует клеточный метаболизм, ингибирует клеточный метаболизм, способствует адгезии клеток, ингибирует адгезию клеток, способствует прохождению клеточного цикла или делению клеток, ингибирует прохождение клеточного цикла или деление клеток, способствует репликации или репарации ДНК, ингибирует репликацию или репарацию ДНК, способствует транскрипции или трансляции, или ингибирует транскрипцию или трансляцию.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое способствует апоптозу или старению пораженных заболеванием или аберрантных клеток. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как агонист, действует как антагонист или уменьшает активность:

рЭФР, ЕгЬВ2, сМЕТ, ФНО-альфа, ТФР-бета, интегрина ανβ3,

TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TNFR1, TNFRSF10A (TRAIL RI DR4), TNFRSF 10В (TRAIL R2 DR5), ФНО, TRAIL, ИФН-бета, МУС, Ras, BCR, ABL, JNK, CKH2, CHK1, CDK1, RAC1, MEK, MOS, mTOR, АКТ, NFkB, Ikk, IAP1, IAP2, XIAP, b-катенина, сурвивина, HDAC, HSP70, HSP90, 208-протеасомы, топоизомеразы 1, MDM2, E2F или E2F1.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое ингибирует выживаемость клеток. Согласно некоторым вариантам реализации

- 125 043040 указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как антагонист или уменьшает активность: ФРЭС, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рИФР-1, ИФР-1, ИФР-2, ТцФР-А, ТцФРВ, ТцФР-СС, ТцФР-С, ТцФР-D, рТцФР-А, рТцФР-В, трансформирующего ростового фактора альфа (ТРФ-альфа), ТРФ-ВЗ, фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), TNFSF13B (BLYS), TNFRSF13C (BAFFR), JNK, ядерный фактор каппа-В (NFkB), SIP, интегрина αγβ3 или сурвивина.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует пролиферацию клеток. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как антагонист или уменьшает активность: ФРЭС, рФРЭС-, рЭФР, ErbB2, NFkB, HIF, MUC1, MUC2 или HDAC. В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует адгезию клеток. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое ингибирует или уменьшает активность: ММР1, ММР2, ММР7, ММР9, ММР12, PLAU, интегрина αγβ1, интегрина αγβ3, интегрина αγβ5, ТФР-бета, ЕРСАМ, интегрина α1β1, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α2β1, интегрина α5β1, интегрина α9β1, интегрина α6β4, интегрина αΜβ2, РЭА, L1, Mel-CAM или HIF1. Согласно одному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое ингибирует или уменьшает активность интегрина αγβ3, интегрина αγβ5 или интегрина α5β1.

Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с: MEDI-522 (VITAXIN, Abegrin; Medlmmune), ATN-161 (Attenuon), EMD 121974 (Merck KGaA), CNTO 95 (Cenotocor) или велосиксимабом (M200, Protein Design Labs).

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует активацию клеток. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое способствует, ингибирует или уменьшает активность: CD80, CD86, МНС, PDL2 (B7-DC), В7-Н1, В7-Н2 (ICOSL), B7-H3, В7-Н4, CD28, CTLA4, TCR, PD1, CD80 или ICOS.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует прохождение клеточного цикла, деление клеток или митоз. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как антагонист или уменьшает активность: PI3K, SMO, Ptch, HH, SHH, plk1, plk2, plk3, plk4, aurora A, aurora B, aurora C, CDK1, CDK2, CDK4, CHK1, CHK2, GSK3B, PAK, NEK2A, ROCK 2, MDM2, ЭФР (KSP), 20S-протеасомы, HDAC или сурвивина. В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует репликацию или репарацию ДНК. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как антагонист или уменьшает активность: BRCA1, CHK1, CHK2, E2F, E2FL, MDM2, MDM4 или PARP1.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует транскрипцию или трансляцию. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое действует как антагонист или уменьшает активность: рИФР-1, ИФР-1, ИФР-2, рТцФР-А, рТцФР-В, ТцФР-А, ТцФР-В, ТцФР-СС, ТцФР-С, ТцФР-D, KIT, MYC, CD28, CDK4, CDK6, mTOR, MDM2, HDAC, E2F, E2F1 или HIF1.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует миграцию, инвазивность или метастазирование. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое ингибирует или уменьшает активность: с-МЕТ, RON, CXCR4, PI3K, АКТ, ММР2, FN1, CATHD, AMF, интегрина αγβ1, интегрина αγβ3, интегрина αγβ5, ТФР-бета, интегрина α1β1, интегрина α2β1, интегрина α4β1, интегрина α2β1, интегрина α5β1, интегрина α9β1, интегрина α6β4, интегрина αΜβ2 или HIF1.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое регулирует клеточный метаболизм. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с соединением, которое ингибирует или уменьшает активность: ErbB2, рЭФР, рИФР-1, ИФР-1, ИФР-2, ТРФ-альфа, ICOS, PI3K, рФРЭС-1, рФРЭС-2, mTOR, HIF1 или HDAC.

В соответствии с одним вариантом реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором одной или большего количества протеинкиназ. Согласно одному варианту реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень MRD-содержащего антитела (например, посредством одного или большего количества доменов MRD либо антитела MRD-содержащего антитела). Согласно альтернативному варианту реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует протеинкиназу, которая не является мишенью MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует одну протеинкиназу. Согласно другим вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует более одной протеинкиназы.

- 126 043040

Согласно некоторым вариантам реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором (например, малой молекулой, антителом и т.д.) протеинкиназы, выбранным из:

рЭФР, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-I) (например, рФРФ-МПС), рФРФ-2 (например, ρΦΡΦ-2-IIIa, ρΦΡΦ-2-IIIb и ρΦΡΦ-2-IIIb), рФРФ3, ЕгЬВ2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, Tie-2, рецептор ТцФР, рТцФР-В, RON и сMet.

Согласно другим вариантам реализации указанный ингибитор ингибирует протеинкиназу, которая не является мишенью MRD-содержащего антитела. Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором одной или большего количества протеинкиназ, выбранным из:

рЭФР, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-I) (например, ρΦΡΦ-1-IIIC), рФРФ2 (например, ρΦΡΦ-2-Ша, ρΦΡΦ-2-IIIb и рФРФ-2-П1Ь), рФРФ-3, ЕгЬВ2, рФРЭС-1, рФРЭС-2, рФРЭС-3, Tie-2, рТцФР-А, рТцФР-В, FIT3, ALK, RET, Kit, raf, р38, RON, c-Met, PI3K, ERK, FAK, АКТ, SYK, JAKI, JAK2, JAK3, TYK2, SIP, FAK, PTK7, PKD1, РКА, PKC, PKG, PRKDC, Pim, CDK, plk, p38MAPK, SRC, ABL, FGR, FYN, HCK, LCK, LYN, YES, EPH4, BMK1, ERK5, mTOR, CHK1, CHK2, CSNK1G1, CSNK1G2, CSNK1G3, GSK3, ВТК, JNK, киназы Aurora, киназы Aurora А, киназы Aurora В и киназы Aurora С.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: иматиниба мезилата (например, GLEEVEC™), гефитиниба (например, IRES SA™, Astra Zeneca), вандетаниба (например, ZACTIMA™, Astra Zeneca), эрлотиниба (например, TARCEVA™, Genentech/OSI), сунитиниба (например, SUTENT™, Pfizer), лапатаниба (GSK) и сорафениба (например, NEXAVAR™, Bayer). Согласно дополнительному варианту реализации MRDсодержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: нилотиниба (например, AMN107, Novartis), дазатиниба (например, BMS 354825, BMS), АВТ-869, ботсутиниба (например, SKI-606, Wyeth), цедираниба, рецентиба, кальпастатина, АЕЕ788 (Novartis), AZD0530 (AstraZeneca) Exel 7646/Exel 0999 Exelixis), кабозантиниба (например, XL184; Exelixis), XL880/GSK1363089 (Exelixis/GSK), ARQ-197 (Arqule и Daiichi Sankyo), Inno-406 (Innovive), SGS523 (SGX), PF-2341066 (Pfizer), CI-1033 (Pfizer), мотесаниба (например, AMG-706, Amgen), AG-013736 (Axitinib), AMG-705 (Amgen), пегаптаниба (OSI/Pfizer), лестауртиниба, руксолитиниба, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348 JANEX-1, тофацитиниба (Pfizer), INCB18424, LFM-A13, пазопаниба (например, GW786034B, GlaxoSmithKline), GW-572016, EKB-569 (Wyeth-Ayerst), ваталаниба (например, PTK787/ZK), AZD2171, MK0457 (VX-680, Merck), PHA 739358 (Nerviano), мубритиниба (Takeda), E7080 (Eisai), фостаматиниба (Rigel/AstraZeneca), SGX523, SNS-032 (Sunesis), XL143, SNS-314 (Sunesis), SU6668 (Pfizer), AV-951 (AVEO), AV-412 (AVEO), тивизаниба (AVEO), PX-866 (Oncothyreon), канертиниба (CI-1033), NSC 109555, VRX0466617, UCN-01, ингибитора CHK2 II, EXEL-9844, XL844, CBP501, PF-004777736, дибромхимериалдизина, Go6976, AEG3482, цедираниба (например, RECENTIN™, AstraZeneca), семаксаниба (SU5416), SU5616, CGP,53716, мастиниба и ZD6474 (AstraZeneca).

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы рФРФ, выбранным из: сунитиниба, SU5402, PD173074, TKI258 (Novartis), BIBF 1120 (Boehringer Ingelheim), бриваниба (BMS-582,664), E7080 (Eisai) и TSU-68 (Taiho).

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы JAK1, JAK2, JAK3, или SYK. Согласно дополнительному варианту реализации указанный ингибитор протеинкиназы выбран из: лестауртиниба, тофацитиниба, руксолитиниба, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348, фостаматиниба, BAY 61-3606 и сунитиниба. Согласно одному варианту реализации ErbB2 (HER2) связывающее MRD-содержащее антитело (например, MRDсвязывающие антитело, которое связывает ErbB2 посредством одного или большего количества доменов MRD либо антитела MRD-содержащего антитела) вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы ErbB2. Согласно другому специфическому варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы ErbB2. Согласно одному варианту реализации связывающее ErbB2 MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно одному варианту реализации связывающее ErbB2 MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с сунитинибом. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с сунитинибом. Согласно одному варианту реализации связывающее ErbB2 MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с нератинибом. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с нератинибом. Согласно одному варианту реализации связывающее ErbB2 MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно конкретно- 127 043040 му варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно дополнительному варианту реализации связывающее ErbB2 (HER2) MRDсодержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: канертиниба (GW-572016), AV-412 (AVEO), тивозаниба (AVEO), вандетаниба (например, ZACTIMA™, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer) и EKB-569 (Wyeth-Ayerst). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела трастузумаба вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: канертиниба (GW-572016), AV-412 (AVEO), тивозаниба (AVEO), вандетаниба (например, ZACTIMA™, AstraZeneca), АЕЕ788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer), PX-866 (Oncothyreon) и EKB-569 (Wyeth-Ayerst).

Согласно еще одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело (например, MRD-связывающие антитело, которое связывает рЭФР посредством одного или большего количества доменов MRD либо антитела MRD-содержащего антитела) вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы рЭФР. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы рЭФР. Согласно одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с гефитинибом (например, IRESSA™, AstraZeneca). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с гефитинибом (например, IRESSA™, AstraZeneca). Согласно одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с эрлотинибом (например, TARCEVA™, Genentech/OSI). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с эрлотинибом (например, TARCEVA™, Genentech/OSI). Согласно одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с лапатинибом. Согласно одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с сорафенибом (например, NEXAVAR™, Bayer). Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с сорафенибом (например, NEXAVAR™, Bayer). Согласно еще одному варианту реализации связывающее рЭФР MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: канертиниба (GW-572016), ZD6474, AV-412 (AVEO), тивозаниба (AVEO), вандетаниба (ZACTIMA, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer) и EKB-569 (Wyeth-Ayerst).

Согласно конкретному варианту реализации MRD-содержащее антитело на основе антитела цетуксимаба вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы, выбранным из: канертиниба (GW-572016), ZD6474, AV-412 (AVEO), тивозаниба (AVEO), вандетаниба (ZACTIMA, AstraZeneca), AEE788 (Novartis), Exel 7646/Exel 0999 (Exelixis), CI-1033 (Pfizer), PX-866 (Oncothyreon) и EKB-569 (Wyeth-Ayerst). Согласно одному варианту реализации связывающее ФРЭС-А, рФРЭС-1 или рецептор ФРЭС-2 MRDсодержащее антитело (например, MRD-связывающие антитело, которое связывает рФРЭС-1 посредством одного или большего количества доменов MRD либо антитела MRD-содержащего антитела) вводят в комбинации с ингибитором протеинкиназы VEGR1, рецептора ФРЭС-2 или рФРЭС-3. Согласно одному варианту реализации связывающее ФРЭС-А, рФРЭС-1 или рФРЭС-г2 MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с: сунитинибом, сорафенибом, пазопанибом (например, GW786034B), AZD2171, ваталанибом, ZD6474, AMG-706 или АС013736.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором протеасомы. Согласно конкретному варианту реализации указанный ингибитор представляет собой бортезомиб (например, VELCADE™). Согласно еще одному конкретному варианту реализации указанный ингибитор представляет собой PR-171 (Proteolix).

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором HDAC.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором mTOR.

Согласно дополнительному варианту реализации MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с ингибитором NFkB.

Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ФРЭС-А или рФРЭС MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рака толстой и прямой кишки путем введения терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему раком толстой и прямой кишки. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рака молочной железы путем введения терапевтически эффективно

- 128 043040 го количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему раком молочной железы. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения немелкоклеточного рака легких путем введения терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему немелкоклеточным раком легких. Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективные количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, вводят пациенту для лечения метастатического рака толстой и прямой кишки, метастатического рака молочной железы, метастатического рака поджелудочной железы или метастатического немелкоклеточного рака легких. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания путем введения терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему почечноклеточной карциномой, мультиформной глиобластомой, раком яичника, раком предстательной железы, раком печени или раком поджелудочной железы.

Комбинированная терапия и комбинированные композиции, включающие мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) согласно настоящему изобретению и другое терапевтическое средство, также охвачены настоящим изобретением, как и способы лечения с применением указанных композиций. Согласно другим вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, вводят отдельно или в комбинации с одним или большим количеством дополнительных терапевтических агентов. Комбинации могут вводиться либо одновременно, например, в виде смеси; по отдельности, но одновременно или параллельно; или последовательно. Сюда включены системы, в которых указанные комбинированные агенты вводят совместно в виде терапевтической смеси, а также процедуры, в ходе которых комбинированные агенты вводят по отдельности, но одновременно, например, через отдельные внутривенные катетеры одному индивидууму. Введение в комбинации также включает раздельное введение, когда один из терапевтических соединений или агентов вводят первым, а затем вводят второй. Соответственно, согласно одному варианту реализации связывающее ФРЭС-А или рФРЭС MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с 5-фторурацилом, карбоплатином, паклитакселем или интерфероном альфа. Согласно еще одному варианту реализации бевацизумаб, содержащий по меньшей мере один MRD, вводят в комбинации с 5-фторурацилом, карбоплатином, паклитакселем или интерфероном альфа.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ФРЭС-А или рФРЭС MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества ранибизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количеств связывающего ErbB2 (HER2) MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно различным вариантам реализации связывающие ErbB2 мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациентам, которые, как было показано, ранее отвечали на другую терапию на основе ErbB2 (например, Герцептин, химиотерапию и/или лучевую терапию), или пациентам, которые, согласно прогнозу, будут отвечать на другую терапию на основе ErbB2. Согласно другим вариантам реализации указанные связывающие ErbB2 мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациентам, которые ранее не отвечали на другую терапию на основе ErbB2, или пациентам, которые, согласно прогнозу, не будут отвечать на другую терапию на основе ErbB2.

Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества трастузумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рака молочной железы путем введения терапевтически эффективного количества трастузумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему раком молочной железы. Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективные количества трастузумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, вводят пациенту для лечения метастатического рака молочной железы.

Согласно еще одному варианту реализации связывающее ErbB2 (HER2) MRD-содержащее антитело вводят в комбинации с циклофосфамидом, паклитакселом, доцетакселом, карбоплатином, антрациклином или майтансиноидом. Согласно конкретному варианту реализации трастузумаб, содержащий по меньшей мере один MRD, вводят в комбинации с циклофосфамидом, паклитакселом, доцетакселом, карбоплатином, антрациклином или майтансиноидом.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения

- 129 043040 ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего CD20 MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения гематологического рака, включающий введение терапевтически эффективного количества ритуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения CD20-положительной НХЛ путем введения терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему CD20положительной НХЛ. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения CD20-положительного ХЛЛ путем введения терапевтически эффективного количества бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему CD20-положительным ХЛЛ.

Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективное количество связывающего CD20 MRD-содержащего антитела вводят в комбинации с: флударабином, циклофосфамидом, FC (флударабин и циклофосфамид), программой химиотерапии на основе антрациклина (например, CHOP (циклофосфамид, адриамицин, винкристин и преднизон)) или химиотерапией CVP (циклофосфамид, преднизон и винкристин). Согласно конкретному варианту реализации терапевтически эффективное количество бевацизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, вводят в комбинации с: флударабином, циклофосфамидом, FC (флударабин и циклофосфамид), программой химиотерапии на основе антрациклина (например, CHOP (циклофосфамид, адриамицин, винкристин и преднизон)) или химиотерапией CVP (циклофосфамид, преднизон, и винкристин). Любые гибриды антитело-MRD содержащих антител и/или доменов MRD, которые связывают CD20, могут применяться в соответствии со способами лечения расстройства, связанного с CD20, или расстройства, лечение которого может проводиться путем направленного воздействия на клетки, экспрессирующие CD20 (например, гематологических раковых заболеваний и аутоиммунных заболеваний). Согласно некоторым вариантам реализации антитело-компонент гибрида антитело-MRD выбран из ритуксимаба, окрелизумаба, GA101 и PF-5230895. В настоящем изобретении также предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает мишень, выбранную из: CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2, рецептора фактора активации тромбоцитов (PAFR), рИЛ-6, TNFRSF1A, VLA4, колониестимулирующего фактора 2 (CSF2), TNFSF5 (лиганд CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-Ш, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, ФНО, TNFSF12 (TWEAK), ЛПС, CXCL13, ФРЭС, ИФНальфа, ИФН-гамма, ГМКСФ, ФРФ, ТФР-бета, С5 и CCR3. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно конкретным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает ФНО и ANG2.

Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает ИЛ-1, ИЛ-12 и ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-1, ИЛ-12, ФНО и ANG2.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное MRDсодержащее антитело связывает ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО и ANG2, мишень, выбранную из:

CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2,

PAFR, рИЛ-6, TNFRSF1A, VLA4, CSF2, TNFSF5 (лиганд CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-ΙΝ, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, ФНО, TNFSF12 (TWEAK), ЛПС, CXCL13, ФРЭС, ИФН-альфа, ИФН-гамма, ГМКСФ, ФРФ, ТФРбета, С5 и CCR3.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела. Согласно конкретному варианту реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает мишень, выбранную из:

- 130 043040

CD1C, CD3, CD4, CD 19, CD20, CD21, CD22,

CD23, CD24, CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74, CD75, CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, рИЛ-2A, рИЛ-l2, рИЛ-6, VLA4, HLADRA, HLA-A, интегрина альфа-2 (ITGA2), интегрина альфа-3 (ITGA3), колониестимулирующего фактора -2 (CSF2), TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, ТШ2, ФНО, FASL, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-ΙΝ, ИЛ-2, ИЛЛ, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, ICOSL (В7-Н2), MS4A1, ИФН-альфа, ИФН-бета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), PAFR, ингибина альфа (INHA), ингибина бета-А (INHBA), дипептидилпептидазы-4 (DPP4), 5’-нуклеотидазы (NT5E), CTLA4, В7.1/В7.2, ЛПС, ФРЭС, ГМКСФ, ФРФ, С5,

CXCL13, CXCR4, CCR2 и CCR3.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения ревматоидного артрита, и мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают мишень, выбранную из:

CD19, CD20, CD45RB, CD52CD200, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ17, ИЛ-18, ИЛ-23, ФНО, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF13B (BLyS), ФРЭС, VLA4, ИФН-гамма, ИФН-альфа, ГМКСФ, ФРФ,

С5, CXCL13 и CCR2.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения системной красной волчанки, и мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают ИФН-альфа и TNFSF13B (BLyS). Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения рассеянного склероза, и мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают мишень, выбранную из:

ANG2, ИЛ1, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-23, CXCL13, ФНО, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), ФРЭС, VLA4, ФНО, CD45RB, CD200, ИФН-гамма, ГМ-КСФ, ФРФ, С5, CD52, TNFRSF 1 A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF 6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, AGE (SI00 А, амфотерин), ICOSL (B7-H2), MS4A 1, ИФНальфа, ИФН-бета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), МСР1, CCR2 и

CXCL13.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают по меньшей мере 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего CD20 MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего CD20 MRDсодержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества ритуксимабMRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение терапевтически эффективного количества ритуксимαб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества ритуксимаб-MRD-содержαщего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества ритуксимаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ ле

- 131 043040 чения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества окрелизумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение терапевтически эффективного количества окрелизумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества окрелизумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества окрелизумаб-MRDсодержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества PF5230895-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение терапевтически эффективного количества PF5230895-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества PF5230895-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества PF5230895-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает CD20. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает CD20 и мишень, выбранную из:

ФНО, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF1A, CD45, RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, рИЛ-6, VLA4, CSF2, RAGE, TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, TIE2, тканевого фактора, MIF, MIP2, ЛПС, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-ΙΝ, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, CXCL13, ФРЭС, ИФН-альфа, ИФН-гамма, ГМКСФ, ФРФ, С5 и CCR3.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают CD20 и также связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD20. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела представляет собой ритуксимаб, окрелизумаб, GA101 или PF-5230895. Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает CD20. Согласно конкретному варианту реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает CD20 и мишень, выбранную из:

CD1C, CD3, CD4, CD 19, CD21,

CD22, CD23, CD24,CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74, CD75,

CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, рИЛ-2А, рИЛ-12, рИЛ-6, VLA4, HLA-DRA, HLA-A, ITGA2, ITGA3, CSF2, TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, ТШ2, ФНО, FASL, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-ΙΝ, ИЛ-2, ИЛЛ, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, TIE2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, ICOSL (В7-Н2), MS4A1, ИФН-альфа, ИФН-бета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), PAFR, INHA, INHBA, DPP4, NT5E, CTLA4, В7Л/В7.2, ЛПС, ФРЭС, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13, CXCR4, CCR2 и CCR3.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения ревматоидного артрита, и указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают CD20 и мишень, выбранную из: CD19, CD45RB, CD52, CD200, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, ФНО, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), ФРЭС, VLA4, ИФН-гамма, интерферон альфа, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13 и CCR2. Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и

- 132 043040 мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения рассеянного склероза, и мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают CD20 и мишень, выбранную из:

ANG2, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-

23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), ФРЭС, VLA4, ФНО,

CD45RB, CD200, ИФН-гамма, ГМ-КСФ, ФРФ, С5, CD52, TIE2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF 6 (Fas, CD95), TNFRSF 7 (CD27), TNFRSF 8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ICOSL (B7-H2), MS4A 1, ИФН-альфа, ИФН-бета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), CCR2 и CXCL13.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела выбран из ритуксимаб, окрелизумаб, GA101 и PF-5230895.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества ФНО-связывающего MRD-содержащего антитело нуждающемуся в этом пациенту. Согласно различным вариантам реализации ФНО-связывающие мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациентам, которые, как было показано, ранее отвечали на другую терапию на основе ФНО, или пациентам, которые, согласно прогнозу, будут отвечать на другую терапию на основе ФНО (например, антагонистами ФНО, такими как анти-ФНО препараты (например, Хумира), EMBREL, антагонистами CD28, антагонистами CD20 и антагонистами ИЛ-6/рИЛ-6). Согласно другим вариантам реализации указанные связывающие ФНО мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациентам, которые ранее не отвечали на другую терапию на основе ФНО, или пациентам, которые, согласно прогнозу, не будут отвечать на другую терапию на основе ФНО.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает ФНО.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает ФНО и мишень, выбранную из:

CD20, TNFRSF5 (CD40), CD45RB, CD52, CD200, CCR2, PAFR, рИЛ-6, TNFRSF 1 A, VLA4, CSF2, TNFSF5 (лиганд CD40), TLR2, TLR4, GPR44, FASL, TREM1, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ1N, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ17, ИЛ-18, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), ЛИС, CXCL13, ФРЭС, ИФН-гамма, ГМКСФ, FGF, C5hCCR3.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают ФНО и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антителокомпонент MRD-содержащего антитела связывает ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела выбран из адалимумаба, цертолизумаба, голимумаба и AME-527.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества MRDсодержащего антитела, которое связывает ФНО. Согласно конкретному варианту реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает ФНО и мишень, выбранную из:

- 133 043040

CD1C, CD3, CD4, CD 19, CD20,

CD21, CD22, CD23, CD24,CD28, CD37, CD38, CD45RB, CD52, CD69, CD72, CD74,

CD75, CD79A, CD79B, CD80, CD81, CD83, CD86, CD200, рИЛ-2А, рИЛ-12, рИЛ-6, VLA4, HLA-DRA, HLA-A, ITGA2, ITGA3, CSF2, TLR2, TLR4, GPR44, TREM1, ТШ2, FASL, тканевого фактора, MIF, MIP2, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, рИЛ-ΙΝ, ИЛ-2, ИЛЛ, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23, ТШ2, TNFRSF1A, TNFRSF5 (CD40), TNFRSF6 (Fas, CD95), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (лиганд Fas), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ANG2, ICOSL (В7-Н2), MS4A1, ИФН-альфа, ИФН-бета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), PAFR, INHA, INHBA, DPP4, NT5E, CTLA4, В7Л/В7.2, ЛИС, ФРЭС, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13, CXCR4, CCR2 и CCR3.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения ревматоидного артрита, и указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают ФНО и мишень, выбранную из:

CD19, CD20, CD45RB, CD52CD200, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-17,

ИЛ-18, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF13B (BLyS), ФРЭС, VLA4, ИФН-гамма, интерферон альфа, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13 и CCR2.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят для лечения рассеянного склероза, и указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции связывают ФНО и мишень, выбранную из:

ANG2, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганд CD40), ФРЭС, VLA4, ФНО, CD45RB, CD200, ИФН-гамма, ГМ-КСФ, ФРФ, С5, CD52, TNFRSF 1 A, TNFRSF5 (CD40), ТШ2, TNFRSF 6 (Fas, CD95), TNFRSF 7 (CD27), TNFRSF 8 (CD30), TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF13C (BAFFR), TNFSF5 (лиганд CD40), TNFSF6 (Fas Лиганд), TNFSF8 (лиганд CD30), TNFRSF21 (DR6), TNFSF12 (TWEAK), TNFSF13B (BLyS), ICOSL (B7-H2), MS4A1, ИФН-альфа, ИФНбета-1, ИФН-гамма, TNFSF7 (лиганд CD27, CD70), CCR2 и CXCL13.

Мультивалентные и мультиспецифические композиции, которые связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает ФНО. Согласно дополнительным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела выбран из адалимумаба, цертолизумаба, голимумаба и AME-527. Согласно другим вариантам реализации указанные связывающие ФНО мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела) вводят пациентам, ранее, как было показано, отвечавшим на терапию аутоиммунного заболевания, или пациентам, которые, согласно прогнозу, будут отвечать на другую терапию аутоиммунного заболевания (например, антагонистами ФНО, такими как анти-ФНО препараты (например, Хумира®), ENBREL®, антагонистами CD28, антагонистами CD20, антагонистами BLyS и антагонистами ИЛ-6/рИЛ-6). Согласно другим вариантам реализации указанные связывающие ФНО мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациентам, которые ранее не отвечали на другую терапию аутоиммунного заболевания, или пациентам, которые, согласно прогнозу, не будут отвечать на другую терапию аутоиммунного заболевания.

Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту

- 134 043040 реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества адалимумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества ATN103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества ATN-103, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества инфликсимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела, которое связывает TNFSF15 (TL1a).

Согласно дополнительным вариантам реализации указанное вводимое MRD-содержащее антитело связывает TL1a и мишень, выбранную из: ФНО, ИФН-гамма, ИЛ-1, ИЛ-1-бета, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ15, ИЛ-17, ИЛ-18, ИЛ-23 и ИЛ-32. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают TL1a и по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает TL1a.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ИЛ-22 MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества PF5212367 (ILV-094),

- 135 043040 содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества PF5212367, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего альфа-4 интегрин MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества натализумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества натализумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего TNFSF5 (лиганд CD40) MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества CDР7657-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, вклю

- 136 043040 чающий введение терапевтически эффективного количества CDP7657-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества CDP7657, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего TNFSF12 (TWEAK) MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK) (проходящего клинические испытания 1 фазы), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к TNFSF12 (TWEAK), содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего CD25 MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения расстройства иммунной системы, включающий введение терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки, включающий введение терапевтически эффективного количества даклизумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рассеянного склероза, включающий введение терапевтически эффективного количества даклизумаб-MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем

- 137 043040 изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества даклизумаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Гибридные белки с антителами и MRD, содержащие антитела и/или домены MRD, которые связывают раковые антигены или другие мишени, связанные с возникновением, прогрессированием и/или метастазами раковых заболеваний, описаны в настоящем документе или известны в данной области техники и могут использоваться в соответствии со способами, предложенными в настоящем изобретении, для лечения раковых заболеваний. Согласно конкретным вариантам реализации гибридные белки с антителами и MRD содержат антитело и/или MRD, которые связываются с мишенью, идентифицированной в настоящем документе. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего рЭФР MRD-содержащего антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества цетуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания путем введения терапевтически эффективного количества цетуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD пациенту, страдающему раком толстой и прямой кишки. Согласно еще одному варианту реализации терапевтически эффективные количества цетуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, вводят пациенту для лечения метастатического рака толстой и прямой кишки, метастатического рака молочной железы, метастатического рака поджелудочной железы или метастатического немелкоклеточного рака легких. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания путем введения терапевтически эффективного количества цетуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD, пациенту, страдающему плоскоклеточной карциномой головы и шеи.

Согласно еще одному варианту реализации терапевтически эффективное количество связывающего рЭФР MRD-содержащего антитела вводят в комбинации с иринотеканом, FOLFIRI, химиотерапией на основе платины или лучевой терапией. Согласно конкретному варианту реализации терапевтически эффективное количество цетуксимаба, содержащего по меньшей мере один MRD вводят в комбинации с иринотеканом, FOLFIRI, химиотерапией на основе платины или лучевой терапией.

Согласно определенным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества MRDантитела, описанного в настоящем документе, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения солидного рака путем введения терапевтически эффективного количества связывающего солидное раковое новообразование MRD-антитела, описанного в настоящем документе (например, MRD-антитела, которое связывает валидированную ассоциированную с солидной опухолью мишень согласно описанию в настоящем документе нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения солидного рака путем введения терапевтически эффективного количества MRD-антитела, которое связывается с представителем группы, состоящей из: рИФР1, ALK1, p-кадгерина, CRYPTO и интегрина альфа5 b1. Согласно другим вариантам реализации антитело-компонент вводимого MRD-антитела выбрано из: фигитумумаба, СР-870893, PF-3 732 010, PF-3446962, волоциксимаба, BIIB022 и антитела CRYPTO от Biogen.

Согласно некоторым вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), описанные в настоящем документе, подходят для лечения раковых заболеваний. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложены способы лечения ракового заболевания, включающие введение терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела пациенту (например, пациенту (субъекту), нуждающемуся в лечении). Согласно определенным вариантам реализации указанное раковое заболевание представляет собой раковое заболевание, выбранное из группы, состоящей из рака толстой и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака легкого, рака яичника, рака печени, рака молочной железы, рака головного мозга, рака почки, рака предстательной железы, рака ЖКТ, меланомы, рака шейки матки, рака мочевого пузыря, глиобластомы и рака головы и шеи. Согласно определенным вариантам реализации указанное раковое заболевание представляет собой рак молочной железы. Согласно определенным вариантам реализации указанный пациент представляет собой человека.

Другие примеры раковых заболеваний или злокачественных новообразований, лечение которых

- 138 043040 может проводиться с применением MRD-содержащих антител и доменов MRD, включают, не ограничиваясь перечисленными: острый лимфобластный лейкоз детского возраста, острый лимфобластный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, карциному коры надпочечников, гепатоцеллюлярный рак взрослых (первичный), рак печени взрослых (первичный), острый лимфоцитарный лейкоз взрослых, острый миелоидный лейкоз взрослых, болезнь Ходжкина взрослых, лимфома Ходжкина взрослых, лимфоцитарный лейкоз взрослых, неходжкинская лимфома взрослых, первичный рак печени взрослых, саркома мягких тканей взрослых, СПИД-ассоциированную лимфому, СПИДассоциированные злокачественные новообразования, рак анального канала, астроцитому, рак желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак кости, рак ствола мозга, опухоли головного мозга, рак молочной железы, рак почечной лоханки и мочеточника, (первичную) лимфому центральной нервной системы, лимфому центральной нервной системы, астроцитому мозжечка, астроцитомы головного мозга, рак шейки матки, (первичный) гепатоцеллюлярный рак детского возраста, (первичный) рак печени детского возраста, острый лимфобластный лейкоз детского возраста, острый миелоидный лейкоз детского возраста, рак ствола мозга детского возраста, астроцитому мозжечка детского возраста, астроцитому головного мозга детского возраста, экстракраниальных опухолей клеток зародышевой линии детского возраста, болезнь Ходжкина детского возраста, лимфому Ходжкина детского возраста, глиому гипоталамической области и зрительного пути детского возраста, лимфобластный лейкоз детского возраста, медуллобластому детского возраста, неходжкинскую лимфому детского возраста, опухоли шишковидной железы и супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли детского возраста, первичный рак печени детского возраста, рабдомиосаркому детского возраста, саркому мягких тканей детского возраста, глиому зрительного пути и гипоталамической области детского возраста, хронический лимфолейкоз, хронический миелогенный лейкоз, рак толстой кишки, кожную T-клеточную лимфому, эндокринную карциному островковых клеток поджелудочной железы, рак эндометрия, эпендимому, эпителиальный рак, рак пищевода, саркому Юинга и связанные с ней опухоли, экзокринный рак поджелудочной железы, экстракраниальную опухоль клеток зародышевой линии, внегонадную опухоль клеток зародышевой линии, внепеченочный рак желчных протоков, рак глаза, рак молочной железы у женщин, болезнь Гоше, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидную опухоль ЖКТ, опухоли ЖКТ, опухоли клеток зародышевой линии, гестационную трофобластическую опухоль, лейкоз ворсистых клеток, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, болезнь Ходжкина, лимфому Ходжкина, гипергаммаглобулинемию, гипофарингеальный рак, рак кишечника, внутриглазную меланому, карциному островковых клеток, рак островковых клеток поджелудочной железы, саркому Капоши, рак почки, рак гортани, рак губ и ротовой полости, рак печени, рак легкого, лимфопролиферативные расстройства, макроглобулинемию, рак молочной железы мужчин, злокачественную мезотелиому, злокачественную тимому, медуллобластому, меланому, мезотелиому, метастатический скрытый первичный плоскоклеточный рак шеи, метастатический первичный плоскоклеточный рак шеи, метастатический плоскоклеточный рак шеи, множественную миелому, множественную миелому/новообразование плазматических клеток, миелодиспластический синдром, миелогенный лейкоз, миелоидный лейкоз, миелопролиферативные расстройства, рак полости носа и придаточных пазух, рак носоглотки, нейробластому, неходжкинскую лимфому при беременности, немеланоцитарный рак кожи, немелкоклеточный рак легкого, скрытый первичный метастатический плоскоклеточный рак шеи, рак ротоглотки, остеосаркому/злокачественную фиброзную саркому, остеосаркому/злокачественную фиброзную гистиоцитому, остеосаркому/злокачественную фиброзную гистиоцитому кости, эпителиальный рак яичника, герминогенную опухоль яичника, опухоль яичника с низким злокачественным потенциалом, рак поджелудочной железы, парапротеинемии, пурпуру, рак паращитовидной железы, рак полового члена, феохромоцитому, опухоль гипофиза, новообразование плазматических клеток/множественную миелому, первичную лимфому центральной нервной системы, первичный рак печени, рак предстательной железы, рак прямой кишки, почечноклеточный рак, рак почечной лоханки и мочеточника, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак слюнных желез, саркоидоз, саркомы, синдром Сезари, рак кожи, мелкоклеточный рак легкого, рак тонкой кишки, саркома мягких тканей, плоскоклеточный рак шеи, рак желудка, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли и опухоли шишковидной железы, T-клеточную лимфому, рак яичка, тимому, рак щитовидной железы, переходноклеточный рак почечной лоханки и мочеточника, переходный рак почечной лоханки и мочеточника, трофобластические опухоли, рак клеток мочеточника и почечной лоханки, рак уретры, рак матки, саркому матки, рак влагалища, глиому зрительных путей и гипоталамической области, рак вульвы, макроглобулинемию Вальденстрема и опухоль Вильмса.

Согласно некоторым вариантам реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) подходят для ингибирования роста опухоли. Согласно определенным вариантам реализации указанный способ ингибирования роста опухоли включает приведение клетки в контакт с MRD-содержащим антителом in vitro. Например, иммортализованную клеточную линию или раковую клеточную линию, которая экспрессирует мишень MRD и/или мишень антитела, культивируют в среде, к которой добавлено MRD-содержащее антитело для ингибирования роста опухоли. Согласно некоторым вариантам реализации опухолевые клетки выделяют из образца, полученного от пациента, например, биоптата ткани, плеврального экссудата или образца крови, и культивируют в среде,

- 139 043040 к которой добавлено MRD-содержащее антитело для ингибирования роста опухоли.

Согласно некоторым вариантам реализации указанный способ ингибирования роста опухоли включает приведение опухоли или опухолевых клеток в контакт с терапевтически эффективным количеством MRD-содержащего антитела in vivo. Согласно определенным вариантам реализации приведение опухоли или опухолевой клетки в контакт происходит в модели на животных. Например, мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) могут вводиться в ксенотрансплантаты у иммунокомпрометированных мышей (например, мышей NOD/SCID) для ингибирования роста опухоли. Согласно некоторым вариантам реализации раковые стволовые клетки выделяют из образца, полученного от пациента, например, биоптата ткани, плеврального экссудата или образца крови, и инъецируют мышам с иммунной недостаточностью, которым затем вводят MRD-содержащее антитело для ингибирования роста опухолевых клеток. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят животному в тот же момент времени, что и опухолеобразующие клетки, или вскоре после введения опухолеобразующих клеток для предотвращения роста опухоли. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело вводят в качестве терапевтического средства после того как опухолеобразующие клетки вырастают до определенного размера.

Согласно определенным вариантам реализации способ ингибирования роста опухоли включает введение пациенту (субъекту) терапевтически эффективного количества MRD-содержащего антитела. Согласно определенным вариантам реализации указанный пациент представляет собой человека. Согласно определенным вариантам реализации у указанного пациента имеется опухоль или была удалена опухоль. Согласно определенным вариантам реализации указанная опухоль экспрессирует мишень антитела. Согласно определенным вариантам реализации указанная опухоль сверхэкспрессирует мишень MRD и/или мишень антитела.

Согласно определенным вариантам реализации опухоль, рост которой ингибирован, выбрана из группы, состоящей из опухоли головного мозга, опухоли толстой и прямой кишки, опухоли поджелудочной железы, опухоли легкого, опухоли яичника, опухоли печени, опухоли молочной железы, опухоли почки, опухоли предстательной железы, опухоли ЖКТ, меланомы, опухоли шейки матки, опухоль мочевого пузыря, глиобластому и опухоль головы и шеи. Согласно определенным вариантам реализации указанная опухоль представляет собой опухоль молочной железы.

Согласно дополнительным вариантам реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) подходят для снижения онкогенности. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации способ снижения онкогенности опухоли у пациента включает введение терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) пациенту. Согласно определенным вариантам реализации указанный опухоль содержит раковые стволовые клетки. Согласно определенным вариантам реализации частота встречаемости раковых стволовых клеток в опухоли снижается в результате введения указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела). Согласно другим вариантам реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) подходят для диагностики, лечения или предотвращения расстройства иммунной системы. Согласно одному варианту реализации указанное расстройство иммунной системы представляет собой воспаление или воспалительное расстройство. Согласно более конкретному варианту реализации указанное воспалительное расстройство выбрано из группы, состоящей из астмы, аллергических расстройств и ревматоидного артрита. Согласно дополнительному варианту реализации указанное расстройство иммунной системы представляет собой аутоиммунное заболевание. Аутоиммунные расстройства, заболевания или состояния, диагностика, лечение или предотвращение которых может проводиться с применением мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), включают, не ограничиваясь перечисленными, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную тромбоцитопению новорожденных, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, аутоиммунную нейтропению, аутоиммунную цитопению, гемолитическую анемию, антифосфолипидный синдром, дерматит, глютен-чувствительную энтеропатию, аллергический энцефаломиелит, миокардит, рецидивирующий полихондрит, ревматическое заболевание сердца, гломерулонефрит (например, IgA-нефропатию), рассеянный склероз, неврит, увеит, офтальмит, полиэндокринопатии, пурпуру (например, пурпуру Шенлейна-Геноха), болезнь Рейтера, синдром скованного человека, аутоиммунное воспаление легких, миокардит, IgA-гломерулонефрит, болезнь плотного осадка, ревматическое заболевание сердца, синдром Гийена-Барре, инсулинозависимый сахарный диабет, аутоиммунное воспалительное заболевание глаз, аутоиммунный тиреоидит, гипотиреоидизм (т.е. тиреоидит Хашимото, системную красную волчанку, дискоидную волчанку, синдром Гудпасчера, пузырчатку, аутоиммунитет к рецепторам, например:

(а) болезнь Грейвса, (b) тяжелую миастению, и (с) инсулинорезистентность, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную тромбоцитопеническую пурпуру, ревматоидный артрит, склеродермию с антителами против коллагена, смешанное

- 140 043040 заболевание соединительной ткани, полимиозит/дерматомиозит, пернициозную анемию, идиопатическую болезнь Аддисона, бесплодие, гломерулонефрит, например, первичный гломерулонефрит и IgAнефропатию, буллезный пемфигоид, синдром Шегрена, сахарный диабет и резистентность к адренергическим лекарственным средствам (включая резистентность к адренергическим лекарственным средствам при астме или цистофиброзе), хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, другая недостаточность эндокринных желез, витилиго, васкулит, постинфарктный синдром, посткардиотомный синдром, крапивницу, атопический дерматит, астму, воспалительные миопатии и другие воспалительные, гранулематозные, дегенеративные и атрофические расстройства.

Согласно другому варианту реализации указанное расстройство иммунной системы, диагностика, лечение или предотвращение которого проводится с применением мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), выбрано из группы, состоящей из: болезни Крона, системной красной волчанки (СКВ), воспалительного заболевания кишечника, псориаза, диабета, язвенного колита, рассеянного склероза и ревматоидного артрита. Согласно предпочтительному варианту реализации аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит.

Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективное количество мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) вводят пациенту для лечения заболевания или расстройства обмена веществ.

Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективное количество мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) вводят пациенту для лечения заболевания или расстройства сердечно-сосудистой системы. Согласно одному варианту реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациенту для лечения тромбоза, атеросклероза, сердечного приступа или инсульта.

Согласно другим вариантам реализации терапевтически эффективное количество мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащих антител) вводят пациенту для лечения заболевания или расстройства скелетно-мышечной системы.

Согласно дополнительным вариантам реализации терапевтически эффективное количество мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции (например, MRD-содержащего антитела) вводят пациенту для лечения заболевания или расстройства скелетной системы. Согласно одному варианту реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию (например, MRD-содержащее антитело) вводят пациенту для лечения остеопороза. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает:

(1) мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке) и (2) мишень на лейкоците, такая как молекула T-клеточного рецептора.

В соответствии с одним вариантом связывание одной или большего количества мишеней указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композицией применяется для направления иммунного ответа на инфекционный агент, клетку, ткань или в другую представляющую интерес локализацию у пациента. Например, согласно некоторым вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает мишень на поверхности эффекторной клетки. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает мишень на поверхности Tклетки. Согласно конкретным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD3. Согласно другим вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD2. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает Т-клеточный рецептор (TCR). В соответствии с дополнительными вариантами реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает мишень на поверхности естественной клетки киллере. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает рецептор NKG2D (белок D естественных клеток киллеров группы 2). Согласно дополнительным вариантам реализации MRD указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции связывает CD 16 (т. е. рецептор Fc-гамма-П) CD64 (т.е. рецептор Fcгамма), или CD32 (т.е. рецептор Fc-гамма-I). Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультиспецифическая композиция содержит более одного моноспецифического сайта связывания разных мишеней.

Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает мишень на лейкоците и опухолевый антиген на опухолевой клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает NKG2D. Согласно дополнительным вариантам реализации MRDсодержащее антитело связывает NKG2D и мишень, выбранную из ErbB2, рЭФР, рИФР-1, CD19, CD20,

- 141 043040

CD80 и ЕРСАМ. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CD3. Согласно конкретным вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CD3-эпсилон. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD3 и мишень, выбранную из ErbB2, рЭФР, рИФР-1, CD19, CD20, CD80 и ЕРСАМ. Согласно некоторым вариантам реализации указанное MRD-содержащее антитело связывает CD4. Согласно дополнительным вариантам реализации MRD-содержащее антитело связывает CD4 и мишень, выбранную из ErbB2, рЭФР, рИФР-1, CD19, CD20, CD80 и ЕРСАМ.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифической). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифической) на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3), и связывает мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолевый антиген на опухолевой клетке, такой как раскрытая в настоящем документе мишень).

Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции, которая содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифической). Согласно некоторым вариантам реализации указанная вводимая мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифической) на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3), и связывает мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолеассоциированный антиген на опухолевой клетке). Согласно некоторым вариантам реализации указанная опухолевая клетка относится к раковому заболеванию, выбранному из рака молочной железы, рака толстой и прямой кишки, рака эндометрия, рака почки (почечно-клеточного рака), рака легкого, меланомы, неходжкинской лимфомы, лейкоза, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака поджелудочной железы и рака щитовидной железы. Дополнительные варианты реализации относятся к введению терапевтически эффективного количества мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧ-ассоциированной деменции). Согласно еще одному варианту реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения рака головного мозга, метастатического рака головного мозга или первичного рака головного мозга. Согласно дополнительному варианту реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения повреждения головного мозга, инсульта, повреждения спинного мозга или лечения болевого синдрома. Согласно дополнительным вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения повреждения головного мозга, инсульта или повреждения спинного мозга, или лечения болевого синдрома.

Согласно одному варианту реализации терапевтически эффективное количество указанной мультивалентной и моновалентной мультиспецифической композиции вводят пациенту для лечения инфекции или симптома, связанного с инфекцией, вызванной инфекционным агентом. Согласно некоторым вариантам реализации указанный инфекция вызвана инфекционным агентом, выбранным из паповавируса (например, полиомавируса JC), трипаносомы, вируса Западного Нила, ВИЧ, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae, губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота, менингита, прогрессирующей многоочаговой лейкоэнцефалопатии (ПМЛ), поздней неврологической стадии трипаносомоза, энцефалита и бешенства.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) способна проникать через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и связывать мишень, расположенную за ГЭБ со стороны головного мозга. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания, который связывает мишень (например, лиганд, рецептор или вспомогательный белок), связанную с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно некоторым вариантам реализации единственный сайт связывания в композиции представляет собой MRD. Согласно другим вариантам реализации единственный сайт связывания в композиции представляет собой антигенсвязывающий домен антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество единственных сайтов связывания (т.е. моновалентно связывает) мишени, связанные с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой, и указанная композиция способна проникать через ГЭБ на сторону спинномозговой жидкости. Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество множественных сайтов связы

- 142 043040 вания (т.е. мультивалентно связывает мишень) мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой, и указанная композиция способна проникать через ГЭБ на сторону спинномозговой жидкости. Согласно дополнительным вариантам реализации терапевтически эффективное количество MRD-содержащего антитела вводят пациенту для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧ-ассоциированной деменции). Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция содержит единственный сайт связывания (т.е. является моновалентным в отношении связывания конкретной мишени (антиген)) или два или большее количество сайтов связывания мишени (т.е. является моновалентным в отношении связывания конкретной мишени), выбранной из альфа-синуклеина, RGM A, NOGO A, NgR, OMGp MAG, CSPG, ингибирующих рост нейритов семафоринов (например, семафорина 3А и семафорина 4), эфрина, А-бета, AGE (S100 А, амфотерин), НРФ, растворимого А-В, аггрекана, мидкина, нейрокана, версикана, фосфакана, Те38 и PGE2. Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция дополнительно содержит единственный сайт связывания или несколько сайтов связывания мишени, выбранной из ИЛ-1, рил1, ИЛ-6, рИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-18, ИЛ-23, TNFSF12 (TWEAK), TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганда CD40), CD45RB, CD52, CD200, ФРЭС, VLA4, ФНО-альфа, интерферона гамма, ГМКСФ, ФРФ, С5, CXCL13, CCR2, СВ2, MIP 1а и МСР-1.

Согласно дополнительным вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция способна проникать через ГЭБ в спинномозговую жидкость и вводится пациенту для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из: рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧ-ассоциированной деменции). Согласно дополнительным вариантам реализации настоящее изобретение относится к лечению заболевания или расстройства путем введения MRD-содержащего антитела, которое содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифическим) нуждающемуся в этом пациенту. Согласно некоторым вариантам реализации указанное вводимое MRDсодержащее антитело содержит единственный сайт связывания мишени (т.е. является моноспецифической) на лейкоците, таком как T-клетка (например, CD3) и связывает мишень на представляющей интерес клетке или ткани (например, опухолеассоциированный антиген на опухолевой клетке).

Согласно некоторым вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения неврологического заболевания или расстройства, выбранного из рака головного мозга, нейродегенеративного заболевания, шизофрении, эпилепсии, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, БАС, рассеянного склероза, оптиконейромиелита и нейро-СПИДа (например, ВИЧ-ассоциированной деменции). Согласно дополнительным вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения рака головного мозга, метастатического рака головного мозга или первичного рака головного мозга. Согласно дополнительным вариантам реализации указанную мультивалентную и моновалентную мультиспецифическую композицию вводят пациенту для лечения повреждения головного мозга, инсульта, повреждения спинного мозга или боли. Соответственно, согласно некоторым вариантам реализации указанное заболевание, расстройство, или повреждение, лечение или предотвращение которого проводится с применением MRD-содержащего антитела или MRD согласно настоящему изобретению, является неврологическим. Согласно одному варианту реализации указанное неврологическое заболевание, расстройство или повреждение связано с болью, такой как острая боль или хроническая боль.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, связанных с неврологическим заболеванием или расстройством. Согласно одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция (например, MRD-содержащее антитело) связывает 1, 2 или все 3 из мишеней RGM A; NgR и NogoA. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает 1, 2, 3 или все 4 мишени из RGM А, RGM В, семафорина 3А или семафорина 4. Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из аггрекана, мидкина, нейрокана, версикана, фосфакана, Те38, ФНО-альфа, NogoA, RGM A, MAG и OMGp. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из аггрекана, мидкина, нейрокана, версикана, фосфакана, Те38 и ФНО-альфа. Согласно альтернативному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из NgR-р75, NgR-Troy, NgR-Nogo66 (Nogo), NgR-Lingo, Lingo-Troy, Lingo-p75, MAG и OMGp. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая

- 143 043040 композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из НРФ, простагландин E2 (PGE2), ФНО-альфа, ИЛ-1-бета и рИЛ-6.

Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из альфа-синуклеина, RGM А и один или большее количество провоспалительных медиаторов (например, ФНО-альфа, ИЛ-1 и МСР-1). Такие композиции находят применение, например, при лечении нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона. Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает и действует как антагонист (т. е. представляет собой антагонист, например, ингибирует активность) 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из RGM A, NOGO А, ингибирующих рост нейритов семафоринов (например, семафорина 3А и семафорина 4), эфринов и провоспалительных мишеней (например, ИЛ-12, TNFSF12 (TWEAK), ИЛ-23, CXCL13, TNFRSF5 (CD40), TNFSF5 (лиганда CD40), ИЛ-18, ФРЭС, VLA4, ФНОальфа, CD45RB, CD200, интерферона гамма, ГМКСФ, ФРФ, С5, CD52 и CCR2). Согласно дополнительному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает и действует как антагонист 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из CD3, ИЛ-2, рИЛ-2, ИЛ6, рИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-23, ТФР-бета, TNFRSF21 (DR6), fn14, CD20, LINGO, CXCL13 и CCL2. Указанные композиции находят применение в лечении, например, воспаления, нейродегенерации и нейродегенеративных расстройств, таких как PC). Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые связывают по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или большее количество указанных мишеней, также охвачены настоящим изобретением. Согласно конкретным вариантам реализации антитело-компонент MRD-содержащего антитела связывает CD3, CD20, CD52, VLA4, ФИО, TNFRSF21 (DR6), LINGO, CD3, интерферон гамма или ИЛ-6.

Согласно еще одному варианту реализации указанная мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает и действует как антагонист (т.е. представляет собой антагонист) 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, выбранных из AGE (S100 А, амфотерин), провоспалительных цитокинов (например, ИЛ-1, ИЛ-6 и ФИО), хемокинов (например, МСР 1) и молекул, которые ингибируют нейронную регенерацию (например, Nogo и RGM А). Указанные композиции находят применение в лечении, например, хронических нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера. Согласно дополнительному варианту реализации композиция, предложенная в настоящем изобретении, связывает по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, которые оказывают воздействие на нейронную генерацию и выживаемость, включая, например, агонисты НРФ, антагонисты ИЛ-1 или рИЛ-1, и А-бета. Указанные композиции находят применение в лечении, например, хронических нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера.

Согласно дополнительному варианту реализации композиция, предложенная в настоящем изобретении, связывает и действует как антагонист на 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, влияющих на нейронную регенерацию или восстановление, включая NogoA, OMGp MAG, RGM А, CSPG, один или большее количество ингибирующих астроциты семафоринов (например, семафорин 3А и семафорин 4), эфрины и провоспалительные цитокины (например, ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО). Указанные композиции находят применение в лечении нейродегенеративных заболеваний и неврологических повреждений или травм.

Согласно дополнительному варианту реализации мультивалентная и моновалентная мультиспецифическая композиция связывает и антагонизирует (т.е. представляет собой антагонист) 1, 2, 3, 4 или 5 мишеней, связанных с болью, включая, но не ограничиваясь перечисленными, НРФ и SCN9A/NAV1.7. Такие композиции находят применение, например, для лечения или облегчения боли и связанных с болью состояний.

Согласно дополнительным вариантам реализации мишени, связываемые композициями, предложенными в настоящем изобретении, связывает и действует как антагонист 1, 2, 3, 4, 5 или большего количество медиаторов и/или растворимых мишеней или мишеней клеточной поверхности, вовлеченных в ингибирование рост или восстановление нейрита. Согласно конкретным вариантам реализации композиции, предложенные в настоящем изобретении, связывают и действуют как антагонисты 1, 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней, выбранных из Nogo, Ompg, MAG, RGM А, семафоринов, эфринов, растворимого A-b, провоспалительных цитокинов (например, ИЛ-1 и ФНО-альфа), хемокинов (например, MIP 1а). Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения боли путем введения терапевтически эффективного количества связывающего ассоциированную с болью мишень MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения боли путем введения терапевтически эффективного количества связывающего НРФ MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения боли путем введения терапевтически эффективного количества танезумумаба (например, Pfizer), содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения болезни Альцгеймера путем введения терапевтически эффективного количества связывающего ассоциированную с болезнью Альцгеймера мишень MRD-антитела нуждающемуся в этом

- 144 043040 пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения болезни Альцгеймера путем введения терапевтически эффективного количества связывающего бета-амилоид MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения болезни Альцгеймера путем введения терапевтически эффективного количества RN1219 (PF-4360365; Pfizer), содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества связывающего ассоциированную с рассеянным склерозом мишень MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества связывающего LINGO MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества MRD-антитела, которое связывает LINGO и TNFRSF21 (DR6), нуждающемуся в этом пациенту Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к LINGO, содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительным вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества натализумаба (например, TYSABRI®; Biogen), содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту. Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества антитела Biogen к LINGO, содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно дополнительному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества связывающего CD20 MRD-антитела нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения или облегчения рассеянного склероза путем введения терапевтически эффективного количества окрелизумаба (Biogen Idec), содержащего MRD, нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно другим вариантам реализации указанные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) подходят для лечения или предотвращения инфекционного заболевания. Инфекционные заболевания, лечение которых может проводиться или которые могут быть предотвращены с применением мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител), включают, не ограничиваясь перечисленными, заболевания, связанные с дрожжевыми, микотическими, вирусными и бактериальными инфекциями. Вирусы, вызывающие вирусные инфекции, лечение которых может проводиться или которые могут быть предотвращены с применением мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) включают, не ограничиваясь перечисленными, ретровирусы (например, Т-клеточный лимфотропный вирус человека (ТЛВЧ) I и II типов и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ)), герпесвирусы (например, вирус простого герпеса (ВПГ) I и II типов, вирус Эпштейна-Барр, ВГЧ6-ВГЧ8 и цитомегаловирус), аренавирусы (например, вирус лихорадки Ласса), парамиксовирусы (например, морбилливирус, респираторно-синцитиальный вирус человека, вирус эпидемического паротита и пневмовирус), адреновирусы, буньявирусы (например, хантавирус), коронавирусы, филовирусы (например, вирус Эбола), флавивирусы (например, вирус гепатита С (HCV), вирус желтой лихорадки и вирус японского энцефалита), гепаднавирусы (например, вирусы гепатита В (HBV)), ортомиовирусы (например, вирусы гриппа А, В и С (включая птичий грипп, например, подтип H5N1)), паповавирусы (например, папилломавирусы), пикомавирусы (например, риновирусы, энтеровирусы и вирусы гепатита А), поксвирусы, реовирусы (например, ротавирусы), тогавирусы (например, вирус краснухи), рабдовирусы (например, вирус бешенства). Микроорганизмы-патогены, вызывающие бактериальные инфекции, включают, не ограничиваясь перечисленными,

- 145 043040

Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium botulinum, Clostridium pefringens, Clostridium tetani, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Klebsiella rhinoscleromotis, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter (Vibrio) fetus, Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Edwardsiella tarda, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Shigella dysenteriae, Shigellaflexneri, Shigella sonnei, Salmonella typhimurium, Treponema pallidum, Treponema pertenue, Treponema carateneum, Borrelia vincentii, Borrelia burgdorferi, Leptospira icterohemorrhagiae, Mycobacterium tuberculosis, Toxoplasma gondii, Pneumocystis carinii, Francisella tularensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsia prowazeki, Rickettsia Lsutsugumushi, Chlamydia spp. и Helicobacter pylori.

Согласно предпочтительному варианту реализации мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) вводят пациенту для лечения или предотвращения инфекция вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или СПИДа, ботулизма, сибирской язвы или Clostridium difficile.

VIII. Связанные с MRD соединения, не являющиеся антителами.

Согласно относящимся к отдельной группе вариантам реализации один или большее количество доменов MRD согласно настоящему изобретению функционально связаны с аминоконцом и/или карбоксильным концом фрагмента иммуноглобулина, таким как Fab, Fab', F(ab')2, pFc' или Fc. Согласно некоторым вариантам реализации указанные домены MRD функционально связаны с полипептидом Fab или Fc, содержащим дополнительный домен Ig. Согласно некоторым вариантам реализации указанные домены MRD функционально связаны с аминоконцом и/или карбоксильным концом фрагмента иммуноглобулина, который также функционально связан с scFv. Согласно другим вариантам реализации MRD, предложенные в настоящем изобретении, функционально связаны с гибридным белком Fc.

В соответствии с относящимися к указанной группе вариантами реализации, один два, три, четыре, пять, шесть, от семи до десяти или более десяти доменов MRD функционально связаны с аминоконцом и/или карбоксильным концом фрагмента иммуноглобулина. Указанные домены MRD, необязательно, связаны между собой или с фрагментом иммуноглобулина посредством линкера. Согласно одному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть, от семи до десяти или более десяти доменов MRD, функционально связанные с аминоконцом и/или карбоксильным концом фрагмента иммуноглобулина, являются одинаковыми. Согласно еще одному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть, от семи до десяти или более десяти доменов MRD, функционально связанные с аминоконцом и/или карбоксильным концом фрагмента иммуноглобулина, являются разными.

Домены MRD, функционально связанные с фрагментом иммуноглобулина, могут быть мономерными (т.е. содержать один MRD на конце пептидной цепи, необязательно, присоединенный посредством линкера) или мультимерными (т.е. содержать более одного MRD, при этом MRD, необязательно, последовательно присоединены посредством линкера). Домены MRD могут быть гомомультимерными (т.е. содержать более одного одинакового MRD, при этом MRD, необязательно, последовательно присоединены посредством линкера(ов) (например, гомодимеры, гомотримеры, гомотетрамеры и т.д.)) или гетеромультимерными (т.е. содержать два или большее количество доменов MRD, среди которых присутствует по меньшей мере два разных домена MRD, необязательно, соединенных посредством линкера(ов), при этом все или некоторые домены MRD, соединенные с конкретным концом, отличаются (например, в гетеродимере)). Согласно одному варианту реализации два разных мономерных домена MRD расположены на разных концах фрагмента иммуноглобулина. Согласно еще одному варианту реализации три, четыре, пять, шесть или более разных мономерных доменов MRD расположены на разных концах фрагмента иммуноглобулина.

Согласно альтернативному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один димерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один гомодимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один гетеродимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина.

Согласно альтернативному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один мультимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанное MRDсодержащее антитело содержит по меньшей мере один гомомультимерный и один мономерный MRD,

- 146 043040 расположенные на разных концах иммуноглобулина. Согласно еще одному альтернативному варианту реализации указанное MRD-содержащее антитело содержит по меньшей мере один гетеромультимерный и один мономерный MRD, расположенные на разных концах иммуноглобулина.

Несколько MRD, функционально связанных с фрагментом иммуноглобулина, могут быть нацелены на один сайт связывания мишени, или на два или большее количество разных сайтов связывания мишени. В том случае, если домены MRD связываются с разными сайтами связывания мишени, указанные сайты связывания могут располагаться на одной и той же или на разных мишенях. Аналогичным образом, один или большее количество доменов MRD могут связываться с той же мишенью, что и фрагмент иммуноглобулина.

Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один из доменов MRD и, если это применимо, фрагмент иммуноглобулина (например, если фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fab) связываются со своими мишенями одновременно. Согласно дополнительным вариантам реализации два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более десяти доменов MRD, и, если это применимо, фрагмент иммуноглобулина, связываются со своими мишенями одновременно.

Синтез доменов MRD, функционально связанных с фрагментом иммуноглобулина, и анализ указанных MRD и фрагмента иммуноглобулина на способность связывать или конкурировать за связывание с одной или большим количеством мишеней одновременно, может быть осуществлен рутинным образом с применением способов, раскрытых в настоящем документе или известных из других источников в данной области техники.

Согласно конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD или фрагмент иммуноглобулина связывается с ФРЭС. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD или фрагмент иммуноглобулина связывается с тем же эпитопом, что и ранибизумаб (LUCENTIS®, Genentech). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD или фрагмент иммуноглобулина конкурентно ингибирует связывание ранибизумаба с ФРЭС. Согласно дополнительному варианту реализации указанный фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fab. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанный фрагмент иммуноглобулина представляет собой ранибизумаб.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ФРЭС-А или рФРЭС гибрида MRD и фрагмента иммуноглобулина нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ФРЭС-А или рФРЭС гибрида MRD-Fab нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-ранибизумаба нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно другим вариантам реализации один или большее количество доменов MRD согласно настоящему изобретению функционально связаны с аминоконцом и/или карбоксильным концом гибридного белка Fc. Гибридный белок Fc может включать гибриды с любым белком или полипептидной последовательностью, имеющей(им) терапевтическое значение, например, с любыми мишенями или рецепторами мишеней, описанных в настоящем документе. Например, указанные гибриды могут содержать внеклеточный домен рецепторов или лигандов, который, как правило, функционирует или проявляет улучшенное связывание когнатного партнера в мультимерной форме, в том числе, например, рецепторов суперсемейства рецепторов ФНО (например, TNFR2, TACI, BCMA, HVEM и т.д.), суперсемейства рецепторов ИЛ (например, рецепторов ИЛ-1-ИЛ-6), суперсемейства рФРЭС (например, рФРЭС-1-рФРЭС-3), суперсемейства рецепторов ФРФ (например, рФРФ-1-рФРФ-4) и суперсемейства В7 (например, CTLA)).

Согласно конкретному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть или большее количество доменов MRD функционально связаны с гибридным белком рФРЭСЛ/рФРЭС-2-Fc. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и афлиберцепт (Regeneron). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибируют связывание афлиберцепта с ФРЭС-А или ПФР. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с афлиберцептом. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФРЭС-1/рФРЭС-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рака толстой и прямой кишки, рака предстательной железы или немелкоклеточного рака легкого, включающий введение терапевтически эффективного количества связывающего ФРЭС-А или плацентарный фактор роста (ПФР) гибридного белка MRDFc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффек

- 147 043040 тивного количества связывающего ФРЭС-А или плацентарный фактор роста (ПФР) гибридного белка MRD-Fc и иринотекана, 5FU, оксалиплатина, доцетаксела или FOLFOX6 нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ракового заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества MRDафлиберцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения рака толстой и прямой кишки, рака предстательной железы или немелкоклеточного рака легкого, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-афлиберцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения макулярной дегенерации, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-афлиберцепта и иринотекана, 5FU, оксалиплатина, доцетаксела или FOLFOX6 нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно конкретному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть или большее количество доменов MRD функционально связаны с гибридным белком CTLA4-Fc. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и абатацепт (ORENCIA®). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибируют связывание абатацепта с CD80 (В7-1) или CD86 (В7-2). Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с абатацептом. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и белатасепт (Bristol Myers Squibb). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибирует связывание белатасепта с CD80 (В7-1) или CD86 (В7-2). Согласно дополнительному варианту реализации указанный фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fab. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с белатасептом.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-CTLA4-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-абатацепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-абатацепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа при отторжении трансплантата, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-абатацепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества MRDбелатасепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа при отторжении трансплантата, включающий введение терапевтически эффективного количества MRD-белатасепта нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно еще одному конкретному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть или большее количество доменов MRD функционально связаны с гибридным белком TNFR2-Fc. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и этанерцепт (ENBREL®). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибирует связывание этанерцепта с ФНО-альфа. Согласно еще одному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связывают ANG2. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с этанерцептом.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введе

- 148 043040 ния терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRDрФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рФНО-2-Fc нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-этанерцепт-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества MRD-этанерцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества MRD-этанерцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения воспалительного расстройства путем введения терапевтически эффективного количества MRD-этанерцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения болезни Крона путем введения терапевтически эффективного количества MRDэтанерцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения язвенного колита путем введения терапевтически эффективного количества MRD-этанерцепта нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, псориаза или ювенильного идиопатического артрита путем введения терапевтически эффективного количества MRD-этанерцепта нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно еще одному конкретному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть или большее количество доменов MRD функционально связаны с гибридным белком TACI-Fc. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и атацисепт (Merck/Serono). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибирует связывание атацисепта с BLyS или APRIL. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с атацисептом.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-TACI-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-TACI-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-TACI-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системной красной волчанки путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-TACI-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ подавления иммунного ответа, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-атацисепт нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения аутоиммунного заболевания путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-атацисепт нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения ревматоидного артрита путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-атацисепт нуждающемуся в этом пациенту. Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения системная красная волчанка, путем введения терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-атацисепт нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно еще одному конкретному варианту реализации один, два, три, четыре, пять, шесть или большее количество доменов MRD функционально связаны с гибридным белком рИЛ-1-Fc. Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD связываются с тем же эпитопом, что и рилонацепт (Regeneron). Согласно еще одному конкретному варианту реализации один или большее количество функционально связанных доменов MRD конкурентно ингибируют связывание рилонацепта с рИЛ-1. Согласно дополнительному конкретному варианту реализации указанные домены MRD функционально связаны с рилонацептом.

Согласно еще одному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ предотвращения подагры, включающий введение терапевтически эффективного количества гибридного белка MRD-рИЛ-1-Fc нуждающемуся в этом пациенту. Согласно конкретному варианту реализации в настоящем изобретении предложен способ предотвращения подагры, включающий введение терапевтически

- 149 043040 эффективного количества гибридного белка MRD-рилонацепт-Fc нуждающемуся в этом пациенту.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает комплекс, содержащий антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), отличающийся тем, что указанный MRD содержит по меньшей мере два цистеина, при этом первый цистеин расположен в пределах первых десяти аминокислот указанного MRD, а второй цистеин расположен в пределах последних десяти аминокислот указанного MRD, и при этом указанный MRD содержит по меньшей мере пять аминокислот между указанным первым цистеином и указанным вторым цистеином. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный MRD содержит по меньшей мере 10, 15, 20, или 25 аминокислот между указанным первым цистеином и указанным вторым цистеином. Согласно некоторым вариантам реализации указанный MRD содержит по меньшей мере один пролин между указанным первым цистеином и указанным вторым цистеином. Согласно другим вариантам реализации указанный MRD содержит по меньшей мере два пролина между указанным первым цистеином и указанным вторым цистеином. Согласно некоторым вариантам реализации указанный первый цистеин расположен на расстоянии не более чем 5, 3, 3, 2 или 1 аминокислоты от N-конца указанного комплекса. Согласно некоторым вариантам реализации указанный второй цистеин расположен на расстоянии не более чем 5,3,3,2 или 1 аминокислоты от С-конца указанного комплекса. Согласно некоторым вариантам реализации период полувыведения домена MRD in vivo в комплексе согласно настоящему изобретению увеличен по сравнению с периодом полувыведения домена MRD в соответствующем комплексе, где по меньшей мере один из цистеинов мутирован или удален. Согласно некоторым вариантам реализации указанный сродство к связыванию указанного MRD по меньшей мере равно сродству к связыванию домена MRD в соответствующем комплексе, где по меньшей мере один из цистеинов мутирован или удален.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает комплекс, содержащий антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), при этом указанные антитело и MRD связываются с разными мишенями или эпитопами на одной клетке или молекуле, причем связывание MRD действует агонистически или действует антагонистически на мишень MRD в физиологических условиях, при этом указанный MRD не связывает, не обладает агонизирующим или антагонизирующим действием на указанную мишень MRD в физиологических условиях в отсутствие указанного антитела. Согласно некоторым вариантам реализации MRD в комплексе согласно настоящему изобретению связывает мишень MRD в отсутствие указанного антитела с ЕС₅₀, составляющей более чем 0,01 нМ, 0,1 нМ, 0,5 нМ или 0,7 нМ в физиологических условиях. Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает комплекс, содержащий антитело и по меньшей мере один MRD, при этом указанные антитело и MRD связываются с разными мишенями или эпитопами на гетеромерном или гомомерном белке, причем связывание MRD действует как агонист или действует как антагонист мишени MRD в физиологических условиях, при этом указанный MRD не связывает, не обладает агонизирующим или антагонизирующим действием на указанную мишень MRD в физиологических условиях в отсутствие указанного антитела. Согласно некоторым вариантам реализации MRD в комплексе согласно настоящему изобретению связывает мишень MRD с ЕС₅₀, составляющей более чем 0,01 нМ, 0,1 нМ, 0,5 нМ или 0,7 нМ в физиологических условиях.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает способ ингибирования роста клетки, включающий приведение указанной клетки в контакт с мультиспецифическим и мультивалентным комплексом, содержащим антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD) и ингибитор протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело связывается с мишенью, выбранной из: ФРЭС, рФРЭС-1, рЭФР, ErbB2, рецептора ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) и рФРФ-2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень, отличную от мишени MRDсодержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует более одной протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы выбран из: иматиниба, гефитиниба, вандетаниба, эрлотиниба, сунитиниба, лапатиниба и сорафениба.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает способ ингибирования ангиогенез у пациента, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества мультиспецифического и мультивалентного комплекса, содержащего антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), и ингибитор протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело связывается с мишенью, выбранной из: ФРЭС, рФРЭС-1, рЭФР, ErbB2, рецептора ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) и рФРФ-2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень MRDсодержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень, отличную от мишени MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует более одной протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы выбран из: иматиниба, гефитиниба, вандетаниба, эрлотиниба, сунитиниба, лапатиниба и сорафениба. Согласно некоторым вариантам ре

- 150 043040 ализации настоящее изобретение охватывает способ лечения пациента, страдающего раковым заболеванием, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества мультиспецифического и мультивалентного комплекса, содержащего антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), и ингибитор протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанное антитело связывается с мишенью, выбранной из: ФРЭС, рФРЭС-1, рЭФР, ErbB2, рецептора ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рецептора ФРФ-1 (рФРФ-1) и рФРФ-2. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень, отличную от мишени MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует более одной протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы выбран из: иматиниба, гефитиниба, вандетаниба, эрлотиниба, сунитиниба, лапатиниба и сорафениба.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает способ лечения пациента, у которого имеется заболевание или расстройство иммунной системы, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества мультиспецифического и мультивалентного комплекса, содержащего антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), и ингибитор протеинкиназы. Согласно некоторым вариантам реализации указанное заболевание или расстройство иммунной системы представляет собой воспаление или аутоиммунное заболевание. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное аутоиммунное заболевание представляет собой ревматоидный артрит, болезнь Крона, системную красную волчанку, воспалительное заболевание кишечника, псориаз, диабет, язвенный колит или рассеянный склероз. Согласно дополнительным вариантам реализации указанное антитело связывает ФНО. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует мишень, которая не является мишенью MRD-содержащего антитела. Согласно некоторым вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы ингибирует более одной протеинкиназы. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный ингибитор протеинкиназы выбран из: лестауртиниба, тофацитиниба, руксолитиниба, SB1518, CYT387, LY3009104, TG101348, фостаматиниб, BAY 61-3606 и сунитиниба.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящее изобретение охватывает мультивалентный и мультиспецифический комплекс, содержащий антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), при этом указанный комплекс содержит единственный сайт связывания мишени на клеточной поверхности. Согласно некоторым вариантам реализации указанный мультивалентный и мультиспецифический комплекс содержит два единственных сайта связывания разных эпитопов на одной мишени. Согласно некоторым вариантам реализации указанный мультивалентный и мультиспецифический комплекс содержит 2, 3, 4, 5 или большее количество единственных сайтов связывания разных мишеней. Согласно некоторым вариантам реализации указанный мультивалентный и мультиспецифический комплекс содержит единственный сайт связывания мишени на лейкоците. Согласно некоторым вариантам реализации указанный мультивалентный и мультиспецифический комплекс содержит единственный сайт связывания мишени на T-клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный мультивалентный и мультиспецифический комплекс содержит единственный сайт связывания CD3. Согласно дополнительным вариантам реализации комплекс содержит единственный сайт связывания CD3эпсилон. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит единственный сайт связывания мишени на естественной клетке киллере. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания мишени на пораженной заболеванием клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней на пораженной заболеванием клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания мишени на опухолевой клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней на опухолевой клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания мишени на иммунной клетке. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней на иммунной клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс содержит единственный сайт связывания мишени на естественной клетке киллере. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс связывает мишень на лейкоците и мишень на опухолевой клетке. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс связывает CD3 и CD19. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания мишени на инфекционном агенте или клетке, инфицированной инфекционным агентом. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней на инфекционном агенте или клетке, инфицированной инфекционным агентом. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс содержит единственный сайт связывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) транспортной системой. Согласно дополнительным вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов свя

- 151 043040 зывания мишени, связанной с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно некоторым вариантам реализации указанный комплекс содержит несколько сайтов связывания 2, 3, 4, 5 или большего количества мишеней связанную с опосредованной эндогенным рецептором ГЭБ транспортной системой. Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой MRD. Согласно некоторым вариантам реализации указанный единственный сайт связывания представляет собой антигенсвязывающий домен.

Согласно некоторым вариантам реализации комплексы согласно настоящему изобретению содержат цитотоксический агент.

Полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь MRD-содержащего антитела согласно настоящему изобретению, векторы, содержащие указанные полинуклеотиды и клетки-хозяева, содержащие указанные векторы и/или полинуклеотиды, также охвачены настоящим изобретением.

Приведенные ниже примеры предназначены для иллюстрации, но не для ограничения настоящего изобретения.

Примеры

Пример 1. Нацеленные на интегрины молекулы антитело-MRD.

Новые гибридные молекулы антитело-MRD получали путем соединения нацеленных на интегрин ave3 пептидов с каталитическим антителом 38С2. Гибриды на N-концах и С-концах легкой цепи и Сконцах тяжелой цепи были наиболее эффективными. С применением проточной цитометрии было показано, что конъюгаты антител эффективно связываются с экспрессирующими интегрин ΟΑββ клетками рака молочной железы человека. Конъюгаты антител также сохраняли ретроальдольную активность исходного каталитического антитела 38С2, по оценке на основании активации пролекарств мето дола и доксорубицина. Это показывает, что нацеливание на клетки и свойства каталитического антитела могут быть эффективно скомбинированы для селективной химиотерапии.

Пример 2. Нацеленные на ангиогенный цитокин молекулы антитело-MRD.

Конструировали нацеленную на ангиогенный цитокин гибридную молекулу антитело-MRD. Использовали антитело 38С2, которое соединяли с MRD, содержащим пептид 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTA

SSGSGSATHQEEC EWDPWTC EHMLE (SEQ ID NO: 10)).

MRD-содержащий пептид соединяли либо с N-концом, либо с С-концом легкой цепи и С-концом тяжелой цепи. Аналогичные результаты были получены с другими нацеленными на Ang2 пептидами MRD. Дополнительные нацеленные на Ang2 пептиды MRD включают:

MGAQTNFMPMDNDELLLYEQFILQQGLEGGSGSTAS SGSGS SLGAQT

NFMPMDNDELLLY (SEQ Ш NO:20) (LM-2x-32); и AQQEECEWDPWTCEHM GSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEHMLE (SEQ Ш NO: 10) (2xCon4).

Специалисту в данной области техники, с учетом изложенные в настоящем документе принципы, будет понятно, что и другие такие комбинации образуют функциональные связывающие Ang2 домены MRD согласно описанию в настоящем документе.

Пример 3. Гибриды антитело-MRD с некаталитическими антителами.

Ранее было описано гуманизированное моноклональное антитело мыши, LM609, против интегрина ave3 человека (Rader, С. et al., PNAS 95:8910-5 (1998)). Некаталитическое моноклональное антитело человека JC7U соединяли с MRD против Ang2, содержащим 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTAS SGSGS ATHQEEC EWDPWTCEH

MLE (SEQ ID NO:10)) на N-конце либо на С-конце легкой цепи. 2xCon4 (AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGSGSTASSGSGSATHQEECEWDPWT

CEHMLE (SEQ Ш NO:10)) исследовали в виде N-концевого гибрида с каппа-цепью антитела (2xCon4-JC7U) и в виде Сконцевого гибрида (JC7U-2xCon4). Оба гибрида сохраняли способность связывать интегрин и ANG2. На левой панели на фиг. 3 видно, что обе конструкции с антителами (2xCon4-JC7U и JC7U-2xCon4) специфически связывались с рекомбинантным Ang2, как было продемонстрировано в исследовании с применением ИФА ELISA. Связывание с Ang2, однако, значимо выше для JC7U-2xCon4, содержащего 2xCon4 (SEQ ID NO: 10), соединенный с С-концом легкой цепи антитела. На правой панели фиг. 3 показано связывание Ang2-JC7U и JC7U-Ang2 с интегрином ave3. Результаты показывают, что соединение 2xCon4 (SEQ ID NO: 10) с N- или С-концом легкой цепи не влияло на связывание моноклонального антитела JC7U с интегрином ave3. На фиг. 4 представлено другое исследование методом ИФА ELISA с применением тех же гибридных конструкций антитело-MRD.

Пример 4. Гибридные молекулы Герцептин®-MRD.

Другой пример гибридов MRD с некаталитическим антителом представлен гибридными конструк

- 152 043040 циями Герцептин®-MRD. Гибриды Герцептин®-MRD являются многофункциональными, одновременно являясь низкомолекулярными антагонистами интегрина αν и химически запрограммированными нацеленными на интегрин антителами, которые демонстрируют выраженную эффективность для предотвращения метастазирования рака молочной железы за счет влияния на опосредованную av адгезию и пролиферацию клеток. Эффективными являются гибриды MRD, содержащие Герцептин®-2xCon4 (нацеленный на ErbB2 и Ang2), Герцептин®-V114 (нацеленный на ErbB2 и ФРЭС) и Герцептин®-RGD-4С-2xCon4 (нацеленный на ErbB2, ang2 и интегрин).

Пример 5. Нацеленные на ФРЭС молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитело, содержащее MRD, нацеленный на ФРЭС. MRD, нацеленный на Vl14 (SEQ ID NO: 13), присоединяли на N-конце каппа-цепи 38С2 и Герцептина® с применением линкера. При экспрессировании и тестировании полученных гибридных конструкций антитело-MRD наблюдалось выраженное связывание ФРЭС.

Пример 6. Нацеленные на рИФР-1 молекулы антитело-MRD.

Исследовали MRD, который нацелен на рИФР-1 (SFYSCLESLVNGPAEKSRG QWDGCRKK (SEQ ID NO: 14)), соединенный с N-концом каппа-цепи 38С2 и Герцептина® с длинной линкерной последовательностью в качестве соединительной части. При экспрессировании и тестировании полученных гибридных конструкций антитело-MRD наблюдалось выраженное связывание рИФР-1. Дополнительные клоны, проявляющие значительное связывание с рИФР-1, были идентифицированы за несколько циклов мутагенеза и скрининга областей, описанных в табл. 4. Предпочтительные последовательности, приведенные в табл. 5, связывают рИФР-1 и не демонстрируют значимого сродства либо демонстрируют отсутствие сродства к связыванию рецептора инсулина, таким образом предположительно обладая специфичностью в отношении рИФР-1.

Таблица 4

Матрица для последующего мутагенеза

Название	ДНК	AK
Rm2-2-218	GTGGAGTGCAGGGCGCCG (SEQ Ш NO:50)	VECRAP (SEQ ID NO:51)
Rm2-2-316	GCTGAGTGCAGGGCTGGG (SEQ ID NO:52)	AECRAG (SEQ ID NO:53)
Rm2-2-319	CAGGAGTGCAGGACGGGG (SEQ ID NO:54)	QECRTG (SEQ ID NO:55)

Таблица 5

Мутант	Последовательность аминокислот	Матрица	SEQ ID NO
Rm4-31	NFYQCIEMLASHPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	35
Rm4-33	NFYQCIEQLALRPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	36
Rm4-39	NFYQCIDLLMAYPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	37
Rm4-310	NFYQCIERLVTGPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	38
Rm4-314	NFYQCIEYLAMKPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	39
Rm4-316	NF YQCIEALQ SRP AEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	40
Rm4-319	NFYQCIEALSRSPAEKSRGQWQECRTGG	Rm2-2-319	41
Rm4-44	NFYQCIEHLSGSPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	42
Rm4-45	NFYQCIESLAGGPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	43
Rm4-46	NFYQCIEALVGVPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	44
Rm4-49	NFYQCIEMLSLPPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	45
Rm4-410	NFYQCIEVFWGRPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	46
Rm4-411	NFYQCIEQLSSGPAEKSRGQWQECRTG	Rm2-2-319	47
Rm4-415	NFYQCIELLSARPAEKSRGQ WAECRAG	Rm2-2-316	48
Rm4-417	NFYQCIEALARTPAEKSRGQWVECRAP	Rm2-2-218	49

Пример 7. Связывающие ErbB2 нацеленные на Ang2 молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитело, содержащее MRD, который нацелен на Ang2 (L17) (SEQ ID NO: 7), соединенный с легкой цепью антитела, которое связывается с ErbB2. В качестве линкера использовали короткую линкерную последовательность, длинную линкерную последовательность или четвертую петлю в константной области легкой цепи. На фиг. 5 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом ErbB2 с коротким линкерным пептидом (GGGS (SEQ ID NO: 1)) (L17-sL-Her), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к ErbB2 с коротким линкерным пептидом (Her-sL-L17), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к ErbB2 с четвертой петлей в константной области легкой цепи (Her-loL17) или N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к ErbB2 с длинным линкерным пеп

- 153 043040 тидом (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID NO: 19)) (L17-1L-Her). ErbB2 в различной степени связывали все конструкции. Однако, Ang2 связывали только Her-sL-L17 и L17-1L-Her.

Пример 8. Связывающие рецептор фактора роста гепатоцитов нацеленные на Ang2 молекулы антитело-MRD.

Гибрид MRD, который нацелен на Ang2 (L17) (SEQ ID NO: 7), получали соединением с N-концом либо С-концом легкой цепи антитела к Met, которое связывается с рецептором фактора роста гепатоцитов. В качестве соединительной части использовали короткую линкерную последовательность или длинную линкерную последовательность. На фиг. 6 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к Met с коротким линкерным пептидом (GGGS (SEQ IDNO:1)) (L17-sL-Met), N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к Met с длинным линкерным пептидом (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID NO: 19)) (L17-1L-Met) и С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD с антителом к Met с длинным линкерным пептидом (Met-ILL17). При экспрессировании и тестировании полученных гибридных конструкций антитело-MRD наблюдалось значительное связывание ANG2 при использовании длинного линкерного пептида. Гибрид нацеленного на Ang2 MRD с С-концом легкой цепи антитела обеспечивал незначительно большее связывание с Ang2, чем гибрид нацеленного на Ang2 MRD с N-концом легкой цепи антитела.

Пример 9. Связывающие ErbB2 нацеленные на интегрин молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитело, содержащее MRD, который нацелен на интегрин ave3, (RGD4C) с последовательностью CDCRGDCFC (SEQ ID NO: 106), соединенный с легкой цепью антитела Герцептин®, которое связывается с ErbB2 (Her). В качестве линкера использовали короткую линкерную последовательность, длинную линкерную последовательность или четвертую петлю в константной области легкой цепи. На фиг. 7 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на интегрин av33 MRD с антителом к ErbB2 с коротким линкерным пептидом (GGGS (SEQ ID NO: 1)) (RGD4C-sL-Her), С-концевой гибрид нацеленного на интегрин ave3 MRD с антителом к ErbB2 с коротким линкерным пептидом (Her-sL-RGD4C), С-концевой гибрид нацеленного на интегрин ave3 MRD с антителом к ErbB2 с четвертой петлей в константной области легкой цепи (Her-lo-RGD4C) или N-концевой гибрид нацеленного на интегрин αγβ3 MRD с антителом к ErbB2 с длинным линкерным пептидом (SSGGGGSGGGGGGSSRSS (SEQ ID NO: 19)) (RGD4C-1L-Her). ErbB2 в различной степени связывали все указанные конструкции. Однако интегрин av33 связывал только RGD4C1L-Her.

Пример 10. Связывающие рецептор фактора роста гепатоцитов нацеленные на интегрин молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитело, содержащее MRD, который нацелен на интегрин av33 (RGD4C) (SEQ ID NO: 106), соединенный с легкой цепью антитела, которое связывается с рецептором фактора роста гепатоцитов (Met). Использовали конструкции антитело-MRD, содержащие длинную линкерную последовательность. На фиг. 8 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на интегрин ave3 MRD с антителом к рецептору фактора роста гепатоцитов (RGD4C-1L-Met) или С-концевой гибрид нацеленного на интегрин av33 MRD с антителом к рецептору фактора роста гепатоцитов (Met-1L-RGD4C). RGD4C-1L-Met продемонстрировал выраженное связывание интегрина αχβ3.

Пример 11. Связывающие ErbB2 нацеленные на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитела, которые содержат MRD, который нацелен на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 (RP) (SEQ ID NO: 14), соединенный с легкой цепью антитела, которое связывается с ErbB2 (Her). В качестве линкера использовали короткий линкерный пептид, длинный линкерный пептид или четвертую петлю в константной области легкой цепи. (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-4289 (1992); патент США № 5677171; № в банке АТСС 10463, каждый из перечисленных источников включен в настоящий документ посредством ссылки). На фиг. 9 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD с антителом к ErbB2 с коротким линкерным пептидом (RP-sLHer), С-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD с антителом к ErbB2 и короткий линкерный пептид (Her-sL-RP), С-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD с антителом к ErbB2 с четвертой петлей в константной области легкой цепи (Her-lo-RP), N-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD с антителом к ErbB2 с длинным линкерным пептидом (RP-1L-Her) или С-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD с антителом к ErbB2 с длинным линкерным пептидом (Her-1L-RP). ErbB2 в различной степени связывали все указанные конструкции. Рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 связывал RP-1L-Her.

Пример 12. Связывающие ErbB2 нацеленные на ФРЭС молекулы антитело-MRD.

Гибрид MRD, который нацелен на ФРЭС (Vl14) (SEQ ID NO: 13) (Fairbrother W. J., et al., Biochemistry 37:177754-177764 (1998)), получали путем соединения с N-концом легкой цепи связывающего ErbB2

- 154 043040 антитела (Her). Линкерный пептид средней длины (SSGGGGSGGGGGGSS (SEQ ID NO:2)) использовали в качестве соединительной части. На фиг. 10 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкции, содержащей N-концевой гибрид нацеленного на ФРЭС MRD со связывающим ErbB2 антителом с линкерным пептидом средней длины (Vl 14-mL-Her). При экспрессировании и тестировании полученной гибридной конструкции антитело-MRD наблюдалось выраженное связывание ФРЭС и ErbB2.

Пример 13. Нацеленные на интегрина молекулы антитело-MRD.

Исследовали гибрид MRD, который нацелен на интегрин ave3 (RGD) (SEQ ID NO: 106), с Nконцом легкой цепи 38С2 с применением линкерного пептида средней длины в качестве соединительной части. На фиг. 11 показано, что при экспрессировании и тестировании полученной гибридной конструкции антитело-MRD наблюдалось выраженное связывание интегрина ov33.

Пример 14. Нацеленные на Ang2 молекулы антитело-MRD.

Исследовали гибрид MRD, который нацелен на Ang2 (L 17) (SEQ ID NO: 7) с С-концом легкой цепи 38С2 с короткой линкерной последовательностью в качестве соединительной части. На фиг. 12 показано, что при экспрессировании и тестировании полученной гибридной конструкции антитело-MRD наблюдалось выраженное связывание ANG2.

Пример 15. Связывающие ErbB2 нацеленные на интегрин и Ang2 молекулы антитело-MRD.

MRD, который нацелен на интегрин av33 (RGD4C), соединяли с N-концом легкой цепи нацеленного на ErbB2 антитела (Her) линкером средней длины, а нацеленный на Ang2 (L17) MRD был соединен коротким линкером с С-концом того же нацеленного на ErbB2 антитела (RGD4C-mL-Her-sL-L17). На фиг. 13 показано, что полученная гибридная конструкция антитело-MRD связывается с интегрином, Ang2 и ErbB2.

Аналогичным образом, нацеленные на ErbB2 антитела (например, Her) с нацеленным на рИФР-1 MRD, соединенным с С-концом тяжелой цепи или N-концом легкой цепи, связывались с иммобилизованными рИФР-1 в сопоставимой степени. Кроме того, нацеленные на ErbB2 антитела содержащие нацеленный на рИФР-1 MRD, соединенный с N-концом легкой цепи, и нацеленный на Ang2 MRD, соединенный с С-концом тяжелой цепи, связывались с иммобилизованными рИФР-1 в сопоставимой степени. Каждая из указанных трех мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител) также ингибировала связывание ИФР-1 с иммобилизованным рИФР-1. Триспецифическая молекула (Герцептин с нацеленными на рИФР-1 и Ang2 доменами MRD) связывалась как с ErbB2 на клеточной поверхности, так и с растворимым Ang2.

Пример 16. Связывающие ErbB2 нацеленные на интегрин молекулы антитело-MRD.

Конструировали антитело, содержащее MRD, который нацелен на интегрин ave3 (RGD4C), соединенный с N-концом тяжелой цепи антитела, которое связывается с ErbB2 (Her) с применением линкера средней длины в качестве соединительной части (RGD4C-mL-her-heavy). На фиг. 14 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением указанной конструкции. Указанная конструкция связывала как интегрина, так и ErbB2.

Пример 17. Связывающие ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов, и связывающие интегрин, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 молекулы антитело-MRD с коротким линкерным пептидом.

Конструировали молекулы антитела-MRD, которые содержат связывающие ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов антитела, и связывающие интегрин ov33, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 области MRD соединяли коротким линкерным пептидом с легкой цепью указанного антитела. На фиг. 15 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD, соединенного с антителом к ErbB2 (L17-sL-Her), N-концевой гибрид нацеленного на интегрин MRD с антителом к ErbB2 (RGD4C-sL-Her), N-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD со связывающим ErbB2 антителом (RP-sL-Her), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом (L17-sL-Met), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD со связывающим ErbB2 антителом (Her-sL-L17), C-концевой гибрид нацеленного на интегрин MRD со связывающим ErbB2 антителом (Her-sL-RGD4C) или С-концевой гибрид нацеленного на рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD со связывающим ErbB2 антителом (Her-sL-RP). Указанные конструкции антитело-MRD в различной степени связывали ErbB2, за исключением конструкции, содержащей связывающее рецептор фактора роста гепатоцитов антитело. Антиген связывала только конструкция HersL-L17.

Пример 18. Связывающие ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов, и связывающие интегрин, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 молекулы антитело-MRD с длинным линкерным пептидом.

Конструировали молекулы антитело-MRD, которые содержат связывающие ErbB2 или рецептор фактора роста гепатоцитов антитела, и связывающие интегрин ov33, Ang2 или рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD-области, соединенные длинным линкерный пептидом с легкой цепью ука

- 155 043040 занного антитела. На фиг. 16 представлены результаты анализа ИФА ELISA с применением конструкций, содержащих N-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD, соединенного с антителом к ErbB2 (L17-1L-Her), N-концевой гибрид нацеленного на интегрин MRD с антителом к ErbB2 (RGD4C-1L-Her), N-концевой гибрид связывающего рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 MRD со связывающим ErbB2 антителом (RP-1L-Her), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом (L17-1L-Met), С-концевой гибрид нацеленного на интегрин MRD со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом (RGD4C-1L-Met), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD со связывающим рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 антителом (Her-1L-RP), С-концевой гибрид нацеленного на Ang2 MRD со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом (Met-1L-L17) или С-концевой гибрид нацеленного на интегрин MRD со связывающим рецептор фактора роста гепатоцитов антителом (Met-1L-RGD4C). Как видно на фиг. 16, гибриды антитело-MRD эффективно связывают антиген и ErbB2. Lu et al., J. Biol. Chem. 20:280(20): 1966519672 (2005); Lu et al., J. Biol. Chem.:279(4):2856-65 (2004).

Пример 19. Клонирование и экспрессия нацеленных на Ang2 доменов MRD, соединенных со связывающим мальтозу белком.

А. Клонирование гибридов МВР.

Мономерные и димерные пептиды экспрессировали в виде белковых гибридов со связывающим мальтозу белком (МВР) с применением модифицированной формы вектора pMAL-p2 и экспрессионной системы от New England Biolabs (NEB; Беверли, Массачусетс). Последовательность MRD, полученную с помощью ПЦР, встраивали в вектор pMAL в 3'-направлении от гена malE, кодирующего МВР. Это приводит к получению вектора, кодирующего гибридный белок MRD-MBP. Вектор pMAL содержит сильный промотор Ptac, индуцируемый ИПТГ. Серия pMAL-p2 содержит нормальную сигнальную последовательность malE, направляющую гибридный белок через цитоплазматическую мембрану. Гибридные белки pMAL-p2 способные экспортироваться, могут быть очищены из периплазмы с использованием осмотического шока. Может быть проведено дополнительно очищение, например, путем связывания на амилозной смоле.

B. Экспрессия гибридных белков МВР и фракционирование с использованием осмотического шока.

Для экспрессирования гибридных белков бактериальные культуры, культивированные в течение ночи, повторно разводили в свежей среде до OD A600, составляющей приблизительно 0,1. Культуры культивировали до достижения OD, составляющей приблизительно 0,8, и индуцировали ИПТГ в концентрации 0,3 мМ. Культуры инкубировали со встряхиванием в течение приблизительно 4 ч, после чего бактерии центрифугировали в течение 15 мин при 4700 g. Осажденные бактерии ресуспендировали в 30 мМ Tris-HCL, pH 7,4, 20% сахарозы, 1 мМ ЭДТК. Клетки инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре (КТ) перед центрифугированием в течение 15 мин при 4700 g. Осажденные бактерии затем ресуспендировали в ледяном MgSO₄ и инкубировали в течение 20 мин на льду с периодическим перемешиванием. Суспензии клеток обрабатывали ультразвуком (Misonix XL2020) в течение 90 с. Клетки центрифугировали при 4°С в течение 20 мин при 4700g. Супернатант (выделенную под действием осмотического шока фракцию) доводили до концентрации 1хФСБ с применением 10хФСБ (Quality Biologics, кат. № 119-069-131) и фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм. Указанные выделенные под действием осмотического шока фракции прямо анализировали на связывание с Ang2.

C. Прямое связывание гибридных белков МВР.

Для детекции прямого связывания гибридов MRD-MBP с Ang2 проводили описанный ниже ИФА ELISA. 96-луночные планшеты покрывали в течение ночи rhAng2 (R&D, кат. №623-AN) в концентрации 320 нг/мл (100 мкл/лунку). Лунки блокировали в течение 3,25 ч 250 мкл блокирующего буфера (Thermo, кат. № N502), с последующим 4-кратным промыванием 300 мкл промывочного буфера (ФСБ, 0,1% TWEEN). Гибридные белки MBP серийно разводили в блокирующем буфере и добавляли в лунки в течение 2 ч при комнатной температуре. После промывания (х300 мкл промывочного буфера) образцы обрабатывали HRP-конъюгированным моноклональным антителом мыши против MBP (NEB, кат. № E8038S), разводили в блокирующем буфере 1:4000. После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре лунки промывали (8х300 мкл промывочного буфера) перед добавлением 100 мкл субстрата ТМВ (KPL Laboratories). Развитие цвета останавливали 100 мкл H2SO4 и считывали поглощение при 450 нм.

D. Результаты.

Гибриды MRD-MBP анализировали на прямое связывание с Ang2. Выделенные под действием осмотического шока фракции индуцированных бактериальных культур серийно разводили и добавляли в покрытые Ang2 лунки. Связанные гибридные белки детектировали моноклональным антителом против МВР. Кривые зависимости доза-эффект представлены на фиг. 17А. Анализируемые белки представляют мутантные варианты последовательности MGAQTNFMPMDDDE LLLYEQFILQQGLE (L17D) (SEQ ID NO: 107).

В этой серии мотив MDD в пределах L17D был мутирован по первому D, который заменяли на все другие возможные аминокислоты (кроме цистеина). Другие протестированные домены MRD представляли собой Lm32 KtoS и димер Lm32 (2xLm32). Как показано на фиг. 17В, несколько мутантов MXD демонстрировали связывание в диапазоне от 0,1 до 100 нм. Димер Lm32 (2xLm32) проявляет более чем

- 156 043040

10-кратно более высокое сродство к Ang2, чем любой из L17D или Lm32 KtoS.

Пример 21. Экспрессия и очищение антител, содержащих домены MRD.

Домены молекулярного распознавания конструировали и экспрессировали в векторе pcDNA 3.3 в виде гибридных белков с тяжелыми или легкими цепями антител. Для получения белка плазмидными ДНК, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела, содержащего домены MRD, сначала трансформировали химически компетентные бактерии для продуцирования больших количеств ДНК для транзиентной трансфекции. Одиночные трансформанты размножали в среде LB и очищали с применением наборов для выделения плазмид без эндотоксинов от Qiagen. Вкратце, лизировали клетки ночной культуры; лизаты очищали и наносили на анионообменную колонку, затем проводили этап промывания и элюировали концентрированным солевым раствором. Плазмиды осаждали, промывали и ресуспендировали в стерильной воде.

Клетки HEK293T размножали до требуемого конечного объема партии (приблизительно 5 л) до трансфекции. Получали комплекс очищенной плазмиды (1 мг/л продукта) с реагентом для трансфекции полиэтиленимином (ПЭИ), добавляли в культуру в качалочной колбе и инкубировали при 37°С. Ежедневно проводили мониторинг культуры, отслеживая число клеток, диаметр клеток и жизнеспособность. Кондиционированную среду собирали и хранили при -80°С до очищения.

Антитела, содержащие домены MRD, очищали из кондиционированной среды с применением аффинной хроматографии. Культуральный супернатант очищали фильтрацией и наносили прямо на хроматографическую колонку, содержащую сефарозу с рекомбинантным белком A (GE Healthcare). Колонку промывали, и связанные антитела, содержащие домены MRD, элюировали понижением pH буфера. После элюции pH фракций элюата немедленно доводили до физиологических значений. После аффинного очищения с белком А при необходимости может быть проведен дополнительный необязательный этап тонкой хроматографической очистки.

Очищенные белки диализируют в ФСБ, концентрируют до ~1-4 мг/мл, стерилизуют фильтрацией, разделяют на аликвоты в асептических условиях и хранят в замороженной виде при -80°С. На всех этапах очищения проводят мониторинг с применением ДСН-ПААГ-Кумасси и принимают меры для поддержания уровней эндотоксина во время очищения на минимальном возможном уровне. Конечный продукт анализировали на уровни эндотоксина (EndoSafe), чистоту (ДСН-ПААГ-Кумасси, аналитическая эксклюзионная ВЭЖХ), идентичность белков (вестерн-блоттинг) и выход белков (анализ по Бредфорду). Дополнительный анализ с применением эксклюзионной ВЭЖХ проводили для оценки уровня агрегатов.

Данные, представленные в табл. 6, указывают на то, что антитела, содержащие домены MRD, могут быть экспрессированы и очищены с применением стандартных техник.

Таблица 6

Антитело Zybody	Выход (мг)	Чистота	Агрегаты (%)	Эндотоксин (ЕЭ/мл)
HER2xCon4(H)	36	>90%	4,6	<1
HER-lm32(H)	57	>90%	1	2,02
HER-lm32(L)	98	>90%	2	3,26
AVA-lm32(H)	12	>90%	0	<1

Пример 22. Одновременное связывание HER Lm32(H) и HER Lm32 (L) с Her2 и Ang2.

А. Методы.

96-луночные планшеты покрывали в течение ночи rHER2-Fc (R&D, кат. №1129-ER-050) в концентрации 20 нг/мл (100 мкл/лунку). Лунки блокировали в течение 3,25 ч 250 мкл блокирующего буфера (Thermo, кат. № N502), с последующим 4-кратным промыванием 300 мкл промывочного буфера (ФСБ, 0,1% TWEEN). Антитела, содержащие домены MRD (HER-lm32(H), HER-lm32(L) и AVA-lm32(H)), и антитела (Герцептин®), серийно разводили в блокирующем буфере, содержащем 1,94 мкг/мл биотинилированного Ang2 (R&D, кат. №ВТ633), и добавляли в лунки в течение 2 ч при комнатной температуре. После промывания (8x300 мкл промывочного буфера) к параллельным образцам добавляли либо конъюгированное с HRP моноклональное антитело против цепи каппа человека (Abcam, кат. № ab79115-1), разведенное 1: 1000 в блокирующем буфере, или конъюгированный с HRP стрептавидин (Thermo Scientific, кат. №N100), разведенный 1:4000 в блокирующем буфере. После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре лунки промывали (8x300 мкл промывочного буфера) перед добавлением 100 мкл субстрата ТМВ (KPL Laboratories). Развитие цвета останавливали 100 мкл H2SO4 и считывали поглощение при 450 нм.

В. Результаты.

Как было обнаружено на основании детекции с моноклональным антителом против цепи каппа человека, как антитело на основе Герцептина®, так и содержащие домены MRD антитела на основе Герцептина® дозозависимым образом связываются с Her2 Fc в присутствии Ang2 (фиг. 18А). Только антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD (HER-lm32(H) и HER-lm32(L)), демонстрирова

- 157 043040 ли одновременное связывание с Her2 Fc и Ang2, как обнаружено на основании детекции с конъюгированным с HRP стрептавидином (фиг. 18В).

Пример 23. Одновременное связывание AVA-lm32(H) с ФРЭС и Ang2.

A. Методы.

96-луночные планшеты покрывали ФРЭС человека в течение ночи (PeproTech, Inc. кат. №100-20) в концентрации 30 нг/мл (100 мкл/лунку). Лунки блокировали в течение 3,25 ч 250 мкл блокирующего буфера (Thermo, кат. № N502) с последующим 4-кратным промыванием 300 мкл промывочного буфера (ФСБ, 0,1% TWEEN). Антитела, содержащие домены MRD (HER-lm32(H) и AVA-lm32(H)) и антитела (Авастин®), серийно разводили в блокирующем буфере, содержащем 3,876 мкг/мл биотинилированного Ang2 (R&D, кат. №ВТ633), и добавляли в лунки в течение 2 ч при комнатной температуре. После промывания (8x300 мкл промывочного буфера) к параллельным образцам добавляли либо конъюгированное с HRP моноклональное антитело против цепи каппа человека (Abcam, кат. №ab79115), разведенное 1:1000 в блокирующем буфере, либо конъюгированный с HRP стрептавидин (Thermo Scientific, кат. №N100), разведенном 1:4000 в блокирующем буфере. После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре лунки промывали (8x300 мкл промывочного буфера) перед добавлением 100 мкл субстрата ТМВ (KPL Laboratories). Развитие цвета останавливали 100 мкл H₂SO₄ и считывали поглощение при 450 нм.

B. Результаты.

Как обнаружено на основании детекции с моноклональным антителом против цепи каппа человека, как Авастин®, так и антитела на основе Авастина®, содержащие домены MRD, дозозависимым образом связываются с ФРЭС в присутствии Ang2 (фиг. 19А). Только антитела на основе Авастина®, содержащие домены MRD (AVA-lm32(H)), демонстрировали одновременное связывание с ФРЭС и Ang2, как обнаружено на основании детекции с конъюгированным с HRP стрептавидин (фиг. 19В).

Пример 24. Одновременное связывание HER-lm32 (H) и HER-lm32 (L) с HER2 и ангиопоэтином-2

Способность HER-lm32 (Н) и HER-lm32 (L) одновременно связываться с Her2, экспрессируемым на поверхности клеток карциномы молочной железы ВТ-474, и с Ang2 в растворе определяли с применением проточной цитометрии. ФИТЦ-конъюгированные антитела мыши против Ig человека использовали для детекции тяжелой цепи антител, содержащих домены MRD, и Ang2-биотин/стрептавидин-ФЭ использовали для детекции MRD lm32. Клетки, которые связывают Her2 и Ang2 одновременно предположительно детектируются как двойные положительные по ФИТЦ- и ФЭ-флуоресценции.

млн HER2-положительных клеток карциномы молочной железы ВТ-474 инкубировали с 1 мкг HER-lm32(H) или HER-lm32(L) в течение 25 мин при комнатной температуре. После промывания клетки инкубировали с 200 нг/мл Ang2-биотина (R&D Systems) в течение 25 мин при комнатной температуре, а затем с 20 мкл ФИТЦ-конъюгированных антител мыши против Ig человека и стрептавидина-ФЭ в течение 15 мин. После промывания 2 мл буфера клетки анализировали путем проточной цитометрии (FACS Canto II, BD).

Для подтверждения специфичности связывания HER-lm32(H) и HER-lm32(L) с HER2 на клетках ВТ-474 определяли связывание в присутствии 10-кратного избытка Герцептина®. В данных экспериментах антитела, содержащие домены MRD (1 мкг), инкубировали с 1 млн клеток ВТ-474 в отсутствие или в присутствии 10 мкг Герцептина® в течение 25 мин при комнатной температуре. Связывание антител, содержащих домены MRD, с HER2 определяли путем инкубирования с 200 нг/мл Ang2-биотина с последующей детекцией со стрептавидином-ФЭ.

Данные, представленные на фиг. 20А демонстрируют, что и HER-lm32(H), и HER-lm32(L) связывают одновременно и HER2, и Ang2. В обоих случаях наблюдалась яркая двойная флуоресценция клеток в каналах флуоресценции ФИТЦ и ФЭ. Тот факт, что Герцептин® полностью ингибировал связывание HER-lm32(H) и HER-lm32(L) с HER2 (фиг. 20В), указывает на специфичность связывания.

Кроме того, триспецифическое связывание было продемонстрировано с применением антитела, содержащего два отдельных домена MRD. Связывающее рЭФР антитело Affibody и связывающий Ang2 пептид (LM32) соединяли с С-концом легкой и тяжелой цепей Герцептина, соответственно. Указанное MRD-содержащее антитело инкубировали с рЭФР+ клеточной линией эпителия человека Her2-А431. Связанное клетками MRD-содержащее антитело детектировали биотинилированным Ang2/стрептавидином-ФЭ, меченым Alexafluor ErbB2-Fc или комбинацией Ang2/стрептавидина-ФЭ и меченого Alexafluor ErbB2-Fc. Результаты продемонстрировали, что указанное MRD-содержащее антитело одновременно связывало рецептор рЭФР клеточной поверхности и два растворимых лиганда (ErbB2 и Ang2).

Дополнительные эксперименты продемонстрировали, что гибрид lm32 с С-концом тяжелой цепи Герцептина сохранял специфичность связывания и функцию Fc Герцептина. Герцептин и гибрид Герцептин-lm32 связывались с FcRn с аналогичным сродством (значения ЕС50 для Герцептина и Герцептина-lm32 составляли 2,17 и 2,84 мкг/мл, соответственно). Герцептин и гибрид Герцептин-lm32 проявляли сопоставимую АЗКЦ-активность в отношении клеток SK-BR-3. Гибрид Герцептин-lm32 и Герцептин связывались с Fcy-RI и Fcy-RIII с аналогичным сродством. Гибрид Герцептин-lm32 и Герцептин связыва

- 158 043040 лись с рецептором комплемента C1q с аналогичным сродством. Кроме того, гибрид Герцептин-1т32 связывал Ang2 с субнаномолярным сродством и оказывали антагонистический эффект на связывание ANG2 с рецептором Tie-2. Гибрид Герцептин-lm32 связывал внеклеточный домен ErbB2 и также ингибировал индуцированную Ang2 пролиферацию первичных бычьих лимфоэндотелиальных клеток. Гибрид Герцептин-lm32 и Герцептин связывались с внеклеточным доменом Her2 с аналогичными кинетическими показателями. Дополнительные эксперименты продемонстрировали, что гибрид Герцептин-lm32 был настолько же эффективен, как и Герцептин для ингибирования пролиферации нескольких культивируемых клеточных линий рака молочной железы (ВТ-474, MDA-MB-361 и SK-BR-3). На антипролиферативный эффект гибрида Герцептин-lm32 на клетки SK-BR-3 не влияло присутствие Ang2 (2 мкг/мл) в культуре.

Одновременное связывание мишени наблюдалось и для других мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител). Например, гибрид lm32, соединенного с С-концом тяжелой цепи антитела Хумира (HUM-lm32(H)) был способен одновременно связываться с Ang2 и ФНО-альфа. Тот же гибрид был способен связывать клетки 293, транзиентно трансфицированные полноразмерным ФНО-альфа человека, со сродством, аналогичным сродству антитела Хумира. HUMlm32(H) также был способен ингибировать взаимодействие ФНО с его рецепторами. HUM-lm32(H) также связывался с экспрессируемым на клеточной поверхности и связанным на планшетах FcRn, а также с Fcy-RI и Fcy-RIII.

Пример 25. Антитела с доменами MRD, содержащие гибриды с тяжелыми цепями, связываются с мишенями.

Для оценки способности lm32-содержащих антител блокировать взаимодействие Ang2 с его рецептором TIE2, определяли с применением ИФА ELISA их эффект на связывание растворимого TIE2 со связанным на планшетах Ang2. Покрывали 96-луночный планшет (Thermo Electron, кат. №3855) Ang2 (R&D Systems, кат №623-AN) в концентрации 200 нг/мл в ФСБ в течение ночи при 4°С. Затем планшет инкубировали с 100 мкл блокирующего раствора (Thermo Scientific, кат. №N502) в течение 1 ч при комнатной температуре. После 4-кратного промывания планшета 0,1% TWEEN-20 в ФСБ связанны на планшете Ang2 инкубировали с 0,5 мкг/мл растворимого TIE2 (R&D Systems, кат. №313-Т1,) в отсутствие или в присутствии различных концентраций серийно разведенного антитела, содержащего домены MRD, в течение 1 ч при комнатной температуре. После 4-кратного промывания добавляли 100 мкл антитела против TIE2 в концентрации 0,5 мкг/мл (кат. №ВАМ3313, R&D Systems) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Связывание TIE2 с Ang2 детектировали путем инкубирования с разведенным 1:1000 антителом козы против AT мыши, конъюгированным с HRP (BD Pharmingen, кат. №554002) в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали 4-кратно и инкубировали с 100 мкл реагента ТМВ на протяжении 10 мин при комнатной температуре. После прекращения реакции 100 мкл 0,36Н H₂SO₄ планшет считывали при 450 нм с применением спектрофотометра.

Как видно на фиг. 21А, HER-lm32(H), HER-lm32(L), и AVA-lm32(H) ингибировал связывание TIE2 со связанным на планшете Ang2 дозозависимым образом. Все протестированные lm32-содержащие антитела продемонстрировали сопоставимые ингибирующие эффекты со значениями IC₅₀, составляющими 4 нМ для HER-lm32 (Н), 8 нМ для HER-lm32(L) и 3,3 нМ для AVA-lm32(H).

Пример 26. Антитела с доменами MRD, содержащие гибриды с тяжелыми цепями, связываются с мишенями.

Для определения специфичности и относительного сродства к связыванию AVA-lm32 (H) с ФРЭС проводили конкурентный анализ связывания с применением меченого биотином Авастина®.

Авастином®, меченым биотином с применением EZ-Link NHS-LC-Биотин (Pierce, кат. №21336). ФРЭС (Peprotech, кат. №100-20), покрывали 96-луночный планшет (Thermo Electron, кат. №3855) в концентрации 100 нг/мл в ФСБ в течение ночи при 4°С. Затем планшет инкубировали с 100 мкл блокирующего раствора (Thermo Scientific, кат. №N502) в течение 1 ч при комнатной температуре. После 4кратного промывания планшета 0,1% TWEEN 20 в ФСБ, добавляли 50 мкл a®-биотина в концентрации 150 нг/мл и по 50 мкл AVA-lm32(H) или немеченого Авастина® в различных концентрациях и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Планшет промывали 4-кратно и инкубировали со стрептавидином-HRP (Thermo, кат. №N100) в разведении 1: 1000 в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали 4-кратно и добавляли 100 мкл реагента ТМВ. После 10 мин инкубирования при комнатной температуре добавляли 100 мкл 0,36Н H2SO4 для остановки реакции, и считывали планшет при 450 нм.

Данные, представленные на фиг. 22 демонстрируют, что AVA-lm32(H) специфически связывается с ФРЭС-2. Он ингибирует связывание биотинилированного Авастина® с ФРЭС дозозависимым образом. Кривые зависимости доза-эффект, полученные для AVA-lm32(H) и немеченого Авастина®, совпадают при наложении и указывают на аналогичные показатели сродства к связыванию.

Пример 27. Связывание HER-lm32(H) и HER-lm32(L) с HER2, экспрессируемым на клетках рака молочной железы.

Для определения относительного сродства антител на основе Герцептина®, содержащих домены

- 159 043040

MRD, к связыванию HER2 на клеточной поверхности по сравнению с Герцептином® проводили конкурентный анализ связывания с Eu-меченым Герцептином®.

Герцептин® метили Eu3⁺ с применением набора для мечения европием (Perkin Elmer Life Sciences, кат. №1244-302) в системе диссоциативно-усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа (DELFIA), следуя инструкциям производителя. Агент для мечения представляет собой хелат Eu и N1 -(пизотиоцианатбензил)диэтилентриамин-М1,№(№,№-тетрауксусной кислоты (DTTA). Группа DTTA образует стабильный комплекс с Eu3⁺, и изотиоцианатная группа вступает в реакцию с аминогруппами белка при щелочных показателях pH с образованием стабильной ковалентной тиомочевинной связи. Герцептин® (0,2 мг в 200 мл натрий-бикарбонатного буфера, pH 9,3) метили 0,2 мг агента для мечения при 4°С в течение ночи. Меченый Eu Герцептин® очищали на спин-колонке с применением 50 ммоль/л трис-HCl, pH 7,5 и 0,9% NaCl в качестве элюирующего буфера.

Анализ связывания Eu-Герцептина® проводили путем инкубирования 0,5-1 млн клеток ВТ-474 или SK-BR3 рака молочной железы на лунку в 96-луночном планшете с 2-5 нМ Eu-Герцептина® в присутствии различных концентраций немеченых антител на основе Герцептина®, содержащих домены MRD, или Герцептина®, в течение 1 ч при комнатной температуре. Несвязанный Eu-Герцептин® удаляли, промывая 200 мкл полной среды. Затем клетки ресуспендировали в 100 мкл полной среды, и 80 мкл суспензии клеток переносили в 96-луночный планшет IsoPlate. Клетки инкубировали с 100 мкл раствора DELFIA Enhancer при комнатной температуре на протяжении 10 мин и связанный клетками EuГерцептин® детектировали с помощью Envison (Perkin Elmer).

Ингибирование кривых связывания, полученных с применением клеток ВТ-474, показано на фиг. 23. Герцептин® и антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD, дозозависимым образом ингибировали связывание Eu-Герцептина® с ВТ-474. Наблюдались сопоставимые значения IC₅₀: 4,7 нМ для HER-lm32(H), 5,7 нМ для HER-lm32(L) и 3,7 нМ для немеченого Герцептина®.

Пример 28. Ингибирование пролиферации клеток рака молочной железы содержащими домены MRD антителами на основе Герцептина®.

Чувствительные к Герцептину клетки рака молочной железы SK-BR-3, экспрессирующие рецептор HER2neo, также тестировали в биологическом анализе. Клетки SK-BR-3 (2000 клеток/лунку) высевали в 96-луночные планшеты (Costar) с полной ростовой средой Маккоя, содержащей 2 мМ глутамин, пенициллин/стрептомицин (Invitrogen) и 10% ФБС (HyClone). Клетки культивировали в течение 24 ч при 37°С, 5% CO₂, 85% влажности. На следующий день ростовую среду заменяли на голодную среду (среда Маккоя с 2 мМ глутамином, пенициллином/стрептомицином, 0,5% ФБС). Получали девять серийных разведений (диапазон концентраций: 5000-7,8 нг/мл) Герцептина® и антител на основе Герцептина®, содержащих домены MRD, в полной ростовой среде. Через 24 ч инкубирования голодную среду удаляли и серийные разведения Герцептина® и антитела на основе Герцептина®, содержащего домены MRD, переносили в планшеты в трех повторностях. Клетки культивировали в течение 6 дней. Пролиферацию количественно определяли с применением люминесцентного анализа CellTiter Glo.

С применением четырехпараметрической логистической модели были определены следующие значения IC₅₀: 0,49±0,17 нм для HER-lm32(H), 0,81±0,19 нм для HER-lm32(L) и 0,67±0,15 нм для HERcon4(H). Все протестированные антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD, были способны ингибировать пролиферацию клеток карциномы молочной железы SK-BR-3 с субнаномолярными значениями IC₅₀. Репрезентативные аппроксимированные кривые зависимости доза-эффект, приведенные на фиг. 24А-С, демонстрируют, что антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD, ингибируют пролиферацию клеток с активностью, аналогичной активности Герцептина®.

Пример 29. Антителозависимая цитотоксичность содержащих домены MRD антител на основе Герцептина®.

Для оценки способности антител, содержащих домены MRD, опосредовать АЗКЦ in vitro использовали анализ цитотоксичности на основе набора реагентов DELFIA EUTDA Cytotoxicity reagents AD0116 (PerkinElmer). В указанном анализе целевые клетки метили гидрофобным усиливающим флуоресценцию лигандом (BADTA, бис(ацетоксиметил)-2,2':6',2-терпиридин-6,6-дикарбоксилатом). После проникновения в клетки BADTA превращается в гидрофильное соединение (TDA, 2,2':6',2-терпиридин6,6-дикарбоновую кислоту) за счет опосредованного цитоплазматическими эстеразами расщепления, и уже не способен пересекать мембрану. После лизиса клеток TDA высвобождается в среду, содержащую раствор Eu3⁺, с образованием флуоресцентного хелата (EuTDA). Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна числу лизированных клеток.

Герцептин® и антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD, могут опосредовать АЗКЦ на HEK2-положительных клетках рака молочной железы посредством связывания с рецептором HER2 на поверхности целевых клеток и активации эффекторных клеток, присутствующих в ПМКК человека, за счет взаимодействия с их рецепторами FcyRIII. Для демонстрации этого в анализе АЗКЦ использовали HER2-положительную клеточную линию SK-BR-3 рака молочной железы человека в качестве целевой клеточной линии.

- 160 043040

Клетки SK-BR-3 разъединяли 0,05% трипсин-версеном и ресуспендировали с плотностью 1х10⁶клеток/мл в среде RPMI1640, содержащей 2 мМ глутамин, пенициллин/стрептомицин и 10% ФБС (полная ростовая среда). 2х10⁶ клеток в 2 мл среды переносили в 15 мл пробирку и добавляли 10 мкл реагента BADTA. Суспензию клеток аккуратно перемешивали и помещали в термостат с температурой 37°С, 5% СО₂ и 85% влажностью на 15 мин. При мечении клеток получали 7x10 серийных разведений, начиная в концентрации 5 мкг/мл Герцептина® или антител на основе Герцептина®, содержащих домены MRD.

После инкубирования с BADTA клетки 4-кратно промывали в полной ростовой среде, содержащей 2,5 мМ пробенецид. Между промывками клетки осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3 мин. После последней промывки меченые клетки SK-BR-3 ресуспендировали в 10 мл полной ростовой среды и добавляли по 50 мкл клеток в каждую лунку 96-луночного планшета, кроме фоновых лунок. В заданные лунки добавляли по 50 мкл серийных разведений Герцептина® или антител на основе Герцептина®, содержащих домены MRD. Планшеты перемещали в термостат при 37°С, 5% CO2 и 85% влажности на 30 мин.

МКПК, выделенные из периферической крови человека за сутки до анализа АЗКЦ, промывали однократно в RPMI1640 с 2 мМ глутамином, пенициллином/стрептомицинам, 10% ФБС. Получали 10 мл суспензии МКПК с плотностью клеток 2,5x10⁶ клеток/мл. 100 мкл суспензии МКПК переносили в лунки, содержащие целевые клетки и Герцептин® или антитела на основе Герцептина®, содержащие домены MRD, в трех повторностях. В заданные лунки помещали следующие контрольные составы: спонтанное высвобождение (целевые клетки без эффекторных клеток), максимальное высвобождение (лизированные целевые клетки) и фон (среда без клеток). Планшеты инкубировали в течение 2,5 ч в термостате при 37°С, 5% CO2 и 85% влажности.

После инкубирования 20 мкл супернатанта переносили в другой планшет и добавляли 200 мкл раствора европия. Планшеты инкубировали на планшетном шейкере при комнатной температуре в течение 15 мин. Разрешенную во времени флуоресценцию измеряли с применением ридера PerkinElmer EnVision 2104 Multilabel Reader.

Для расчета процента специфического высвобождения использовали следующую формулу: Экспериментальное высвобождение (число импульсов)-Спонтанное высвобождение (число импульсов)х100

Максимальное высвобождение (число импульсов)-Спонтанное высвобождение (число импульсов)

С применением четырехпараметрической логистической модели были определены следующие значения IC₅₀: 0,213±0,077 нМ для HER-lm32(H), 07204±0,036 нМ для HER-lm32(L) и 0,067±0,015 нМ для HER-con4(H). Все протестированные антитела, содержащие домены MRD, продемонстрировали выраженную АЗКЦ-активность при субнаномолярных значениях IC₅₀. Репрезентативные аппроксимированные кривые зависимости доза-эффект, приведенные на фиг. 25А и 25В демонстрируют, что антитела, содержащие домены MRD, способны опосредовать клеточно-зависимую цитотоксичность с активностью, сопоставимой с активностью Герцептина®.

Аналогичный эксперимент проводили в присутствии Ang2. МКПК человека активировали 20 нг/мл ИЛ-2 в течение ночи и добавляли к свежевысеянным (10000 клеток/лунку) меченым BADTA клеткам SKBR-3. Соотношение эффекторы/мишень составляло 25/1. Через 4 ч инкубирования с серийными разведениями HER-lm32(H) или Хумира в присутствии 2 мкг/мл Ang2 в среду добавляли Eu и измеряли флуоресценцию с разрешением по времени (TRFI) на ридере Envision (Perkin-Elmer). HER-lm32 более активно опосредовал АЗКЦ в присутствии Ang2.

Пример 30. Ингибирование пролиферации эндотелиальных клеток AVA-lm32(H).

Тестировали биологическую активность антител на основе Авастина®, содержащих домены MRD AVA-lm32(H), для определения их способности ингибировать индуцируемую ФРЭС пролиферацию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ЭКПВЧ).

Клетки ЭКПВЧ 1 и 3 пассажа, соответственно, получали от GlycoTech (Гейтерсберг, Мэриленд) и Lonza. Клетки культивировали на базовой среде для эндотелиальных клеток (ЕВМ-2) с добавлением 2% фетальной бычьей сыворотки (ФБС) и Single Quotes (Lonza) при 37°С, 5% CO₂, 85% влажности. Для экспериментов с ингибированием пролиферации клетки высевали в 96-луночные планшеты (Costar) с плотностью 2000 клеток на лунку в среду ЕВМ-2 с 2% ФБС и культивировали в течение 24 ч. Получали девять серийных разведений Авастина® или AVA-lm32(Н), начиная с 5 мкг/мл, на среде ЕВМ-2 с 2% ФБС. Во все серийные разведения добавляли ФРЭС (R&D Systems) в конечной концентрации 10 нг/мл. После инкубирования в течение 15 мин при 37°С, 5% CO2, 85% влажности, серийные разведения добавляли к клеткам. Через 96 часов к клеткам добавляли CellTiter Glo. После инкубирования при комнатной температуре в течение 15 мин суспензию клеток переносили в 96-луночные белые непрозрачные планшеты и измеряли люминесценцию с применением ридера PerkinElmer EnVision 2104 Multilabel Reader.

Как видно на фиг. 26А и 26В, AVA-lm32(H) демонстрировал дозозависимую антипролиферативную активность в отношении клеток ЭКПВЧ из обоих источников. Значения IC₅₀, рассчитанные на основе аппроксимированных 4-параметрической логистической моделью кривых, указывают на аналогичную активность AVA-lm32(H) и Авастина® (значения IC₅₀ составляли 0,36±0,42 нМ и 0,33±0,38 нМ, соответ

- 161 043040 ственно).

Пример 31. MRD-содержащие антитела ингибируют пролиферацию опухоли in vivo.

Для определения эффективности мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) in vivo, оценивали их эффективность в модели опухоли Colo5 на мышах. В данных экспериментах опухоли имплантировали на правый бок шестинедельных самок бестимусных мышей nude путем инъекции 5х10⁶ клеток Colo205, суспендированных в 100 мкл ФСБ. Животным в трех группах, по восемь животных каждая, внутрибрюшинно инъецировали по 5 мг/кг антитела (Герцептин, Rituxan) или MRD-содержащее антитело (HER-2xCon4; H2xCon4) в 100 мкл ФСБ раз в три дня, начиная на 6 день после имплантирования опухоли. Результаты, представленные на фиг. 27, демонстрируют, что MRD-содержащее антитело более эффективно ингибировало рост опухоли, чем Ритуксимаб® или Герцептин®.

Герцептин с lm32, присоединенным к С-концу тяжелой цепи, также ингибировал рост опухоли в моделях как Her2-зависимых, так и зависимых от ангиогенеза ксенотрансплантированных опухолей. Фармакокинетика гибрида Герцептин-lm32 была аналогичная ФК Герцептина у мышей и у обезьян после однократных инъекций. Кроме того, гибрид Герцептин-lm32 сохранял стабильность в цельной крови до 72 ч при 37°С.

Пример 32. Молекулярные анализы для оценки MRD-содержащих антител.

Новые мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) получают путем изменения последовательности MRD и/или антитела, путем изменения локализации, в которой антитело соединено с MRD, и/или путем изменения линкера, посредством которого MRD соединен с антителом. Связывающий потенциал, структуру и функциональные характеристики указанных мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) оценивают с применением известных техник измерения связывания и функции белков. Мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) сравнивают с MRD по отдельности, антителом по отдельности и с другими мультивалентными и мультиспецифическими композициями (например, MRD-содержащими антителами).

MRD-содержащее антитело тестируют с применением твердофазного анализа, в котором мишень MRD и/или антитело иммобилизуют на твердой поверхности и затем подвергают воздействию возрастающих концентраций флуоресцентно меченого MRD-содержащего антитела. Твердую поверхность промывают для удаления несвязанного MRD-содержащего антитела и прямо определяют количество связанного с мишенью MRD-содержащего антитела путем количественного определения флуоресценции. В другом эксперименте иммобилизованную мишень подвергают воздействию возрастающих концентраций немеченого MRD-содержащего антитела и количество связанного с мишенью MRD-содержащего антитела определяют непрямо с применением меченого реагента, который связывается с MRD-содержащим антителом.

MRD-содержащее антитело тестируют с применением жидкофазного анализа, в котором мишень MRD и/или антитела добавляют в раствор с различными концентрациями MRD-содержащего антитела. Взаимодействие мишени с MRD-содержащим антителом детектируют по появлению молекулярного комплекса, состоящего из мишени и MRD-содержащего антитела, отличающегося молекулярной массой (и подвижностью) от несвязанной мишени и несвязанного MRD-содержащего антитела.

MRD-содержащее антитело также анализируют с применением клеточного анализа, в котором экспрессирующие мишень клетки инкубируют в присутствии возрастающих концентраций MRDсодержащего антитела. Связывание MRD-содержащего антитела детектируют путем сортировки клеток с активированной флуоресценцией. Кроме того, оценивают клеточную пролиферацию, клеточную дифференцировку, фосфорилирование белков, экспрессию белков, экспрессию мРНК, состав мембран, активность сигнальных путей и жизнеспособность клеток. Подходящие мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связываются и с мишенью MRD, и с мишенью антитела.

Кроме того, подходящие мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRDсодержащие антитела) влияют по меньшей мере на один клеточный процесс.

Пример 33. Идентификация доменов MRD с улучшенными характеристиками.

В LM32 были идентифицированы два потенциальных T-клеточных эпитопа. Для идентификации вариантов LM32. которые не содержат T-клеточных эпитопов, и, соответственно, с меньшей вероятностью вызывают иммуногенный ответ, получали варианты пептида LM32 с мутациями и удалениями. Варианты LM32 перечислены в табл. 7. Домены MRD экспрессировали в виде гибридов с белком МВР и тестировали на способность связывать Ang2.

- 162 043040

Таблица 7

MRD, экспрессируемые в виде гибрида с белком МБР	ЕС50 (нМ)	SEQ ГО NO

KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDELLLYEQFI	1,080	32
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNEELLLYEQFI	20,700	33
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEGLLYEQFILQQGLE	1,040	88
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDELGLYEQFILQQGLE	н/о	89
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEALLYEQFILQQGLE	0,182	90
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDELTLYEQFILQQGLE	1,420	91
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDELLLYEQFIYQQGLE	н/о	92
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEGLLYEQFIYQQGLE	0,902	93
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEALLYEQFIYQQGLE	0,392	94
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNEELTLYEQFIFQQG	н/о	95
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEGLLYEEFILQQGLE	0,922	96
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNDEALLYEEFILQQGLE	0,426	97
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDNEELTLYEEFILQQGLE	н/о	98
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDODELLLYEOFILOOGLE	0,383	99
KSLSLSPGSGGGSMGAQTNFMPMDDDELLLYEQFILQQGLE	0,240	100

Затем варианты LM32 тестируют на способность индуцировать пролиферацию и/или высвобождение цитокинов. Идентифицируют варианты LM32, функционально активные и обладающие пониженным иммуногенным потенциалом. Получают MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с легкой цепью Герцептина®, MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с тяжелой цепью Герцептина®, MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с легкой цепью Хумира®, MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с тяжелой цепью Хумира®, MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с легкой цепью Авастина®, и MRD-содержащее антитело, содержащее вариант LM32, соединенный с тяжелой цепью Авастина®. Содержащие варианты LM32 антитела вводят в моделях на животных, измеряют представленность в форме белка плазмы, время удержания в плазме и в ткани, и сравнивают с указанными показателями антител Герцептин®, Хумира® и Авастин®. Кроме того, эффекты содержащих варианты LM32 антител на клеточную пролиферацию, ангиогенез, онкогенность, артритные показатели сравнивают с эффектами антител Герцептин®, Хумира® и Авастин®.

Пример 34. Анализы in vivo для оценки MRD-содержащих антител.

Для определения эффективности мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) in vivo в моделях на животных проводят лечение антителом и MRDсодержащим антителом и сравнивают результаты.

MRD-содержащие антитела против HER2 тестируют в следующе модели in vivo. Клетки NIH ЗТЗ, трансфицированные экспрессионной плазмидой с HER2, инъецируют бестимусным мышам nu/nu подкожно в дозе 10⁶ клеток в 0,1 мл забуференного фосфатом солевого раствора согласно описанию в патенте США №6399063, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. На 0, 1, 5 день и затем раз в 4 дня внутрибрюшинно инъецируют 100 мкг антитела к HER2, Ang2-coдepжaщeгo антитела к HER2, igflr-содержащего антитела к HER2 и Ang2-igHr- содержащего антитела к HER2. Возникновение и размер опухолей отслеживают в течение одного месяца. Наблюдается повышенная эффективность мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) по сравнению с антителами.

MRD-содержащие антитела против ФРЭС тестируют в следующей модели in vivo. Мышей RIPTpAg содержат на богатом сахарами корме и 5% растворе сахара в воде согласно описанию в опубликованной заявке на патент США №2008/0248033, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. В возрасте 9-9,5 или 11-12 недель мыши получают лечение два раза в неделю в виде внутрибрюшинных инъекций 5 мг/кг антитела против ФРЭС, Ang2-coдepжaщeгo антитела против ФРЭС, ifglr-содержащего антитела против ФРЭС или Ang2-содержащего и ifglr-содержащего антитела. Мыши возрастом 9-9,5 недель получают лечение на протяжении 14 дней, после чего проводится исследование. Мышей возрастом 11-12 недель исследуют через 7, 14 и 21 день лечения. Поджелудочную железу и селезенку мышей извлекают и анализируют. Число опухолей определяют, препарируя каждую сферическую опухоль и производя подсчет. Опухолевую нагрузку определяют путем вычисления суммарного объема всех опухолей в пределах поджелудочной железы мыши. Эффект на ангиогенез определяют путем вы

-163043040 числения среднего количества наблюдаемых ангиогенных островков. Наблюдается повышенная эффективность мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) по сравнению с антителами.

MRD-содержащие антитела против ФНО тестируют в следующей модели in vivo. Трансгенные мыши (Tg197) получают лечение в виде трех внутрибрюшинных инъекций антитела против ФНО или Ang2содержащего антитела против ФНО в дозе 1,5 мкг/г, 15 мкг/г или 30 мкг/г согласно патенту США №6258562, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Инъекции продолжают на протяжении приблизительно 10 недель; еженедельно регистрируют макроскопические изменения морфологии суставов. Через 10 недель мышей умерщвляют и проводят микроскопическое исследование тканей. Размер суставов определяют как средний измеренный размер заднего правого голеностопного сустава с применением микрометра; артритные показатели регистрируют следующим образом: 1=артрит отсутствует;±=незначительный (видоизменение суставов); ++=умеренный артрит (опухание, деформация суставов); и +++=тяжелый артрит (детектирован анкилоз при сгибании; тяжелые двигательные нарушения).

Используют следующие патогистологические оценки на основе окрашивания срезов суставов гематоксилином-эозином; 0=детектируемое заболевание отсутствует; 1=пролиферация синовиальной мембраны; 2=сильное утолщение синовиальной оболочки 3=разрушение хряща и эрозия кости. Наблюдается повышенная эффективность мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащих антител) по сравнению с антителами.

Пример 35. MRD-содержащие антитела превосходят комбинации антител и доменов MRD.

Для сравнения эффективности мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) с комбинациями антител и доменов MRD, исследовали их эффект на клетки SK-BR-3, обработанные ЭФР.

Клетки SK-BR-3 обрабатывали Герцептином, содержащим рЭФР-MRD Герцептином, содержащим рЭФР-MRD антителом Хумира (только MRD) или Герцептином в комбинации с антителом Хумира, содержащим рЭФР-MRD (антитело плюс только MRD) на протяжении 10 мин или 3 ч, и стимулировали ЭФР в течение 5 мин. Собирали клеточные лизаты и использовали вестерн-блоттинг для определения уровней фосфотирозина или фосфо-Akt. Результаты представлены на фиг. 28. Герцептин, содержащий рЭФР-MRD полностью ингибировал индуцированные ЭФР фосфорилирование рецепторов и активацию Akt, тогда как Герцептин, только MRD, и антитело Герцептин плюс только MRD оказывали незначительный эффект или не оказывали эффекта.

Кроме того, эффект мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRDсодержащие антител) на клеточную пролиферацию сравнивали с эффектом комбинации антител и доменов MRD. В данных экспериментах полученные из MCF-7 клетки карциномы молочной железы обрабатывали антителом Герцептин, содержащим нацеленный на ifg1r MRD, соединенный с С-концом легкой цепи, только Герцептином или антителом Хумира, содержащим тот же нацеленный на ifg1r MRD (только MRD). Как видно на фиг. 29А, MRD-содержащее антитело ингибировало пролиферацию клеток лучше, чем только Герцептин или только MRD.

Клетки MCF-7 также обрабатывали пентаспецифическим MRD-содержащим антителом. Сначала было продемонстрировано, что указанные пентаспецифические мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) связываются с пятью мишенями. Нацеленный на Ang2 MRD (lm32) и нацеленный на р-ЭФР MRD соединяли с N- и С-концами, соответственно, антитела Герцептин. Кроме того, нацеленный на αΎβ3 MRD (eeti) и нацеленный на ifg1r MRD соединяли с Nи С-концами, соответственно, такого же антитела Герцептин. Отдельные лунки 96-луночного планшета покрывали Ang2, ErbB2, рЭФР, рИФР-1 и αΎβ3 и инкубировали с серийными разведениями MRDсодержащего антитела. Связанное MRD-содержащее антитело детектировали с применением детектирующего антитела против IgG-каппа человека. Результаты продемонстрировали, что MRD-содержащее антитело связывалось с Ang2, ErbB2, рЭФР, рИФР-1 и αΎβ3 с низким наномолярным или субнаномолярным сродством, сопоставимым с индивидуальными показателями сродства к связыванию доменов MRD или антител.

Затем согласно описанию выше тестировали способность указанных пентаспецифических мультивалентных и мультиспецифических композиций (например, MRD-содержащих антител) к ингибированию пролиферации клеток MCF-7. Результаты, представленные на фиг. 29В, демонстрируют, что пентаспецифические мультивалентные и мультиспецифические композиции с Герцептином (например, MRD-содержащие антитела) уменьшают пролиферацию более эффективно, чем антитело Герцептин.

Пример 36. MRD-содержащие антитела против ФНО.

MRD-содержащее антитело, которое нацелено на ФНО, получали путем соединения Ang2связывающего MRD (lm32) с С-концом тяжелой цепи Хумира и экспрессировали в системах как транзиентной, так и стабильной экспрессии. Указанное MRD-содержащее антитело связывало одновременно ФНО-альфа и Ang2. Указанное MRD-содержащее антитело связывало растворимый ФНО-альфа и ФНОальфа на клеточной поверхности, и сохраняло специфичность связывания и функции Fc антитела Хумира

- 164 043040 (например, связывание FcRn, Fc-raMMa-Rl и Fc-raMMa-R3), а также ингибировало опосредованную Ang2 сигнализацию через рецептор Tie-2 дозозависимым образом с субнаномолярной аффинностью.

Гибрид Хумирa-lm32 также ингибировал опосредованную ФНО-альфа цитотоксичность в клетках L929. Указанные клетки культивировали в 96-луночных планшетах в течение ночи и обрабатывали 1 нг/мл ФНО с добавлением 1 мкг/мл актиномицина D в присутствии Хумира или Хумирa-lm32 в течение 24 ч при 37°С. После инкубирования добавляли 100 мкл реагента CellTiter-Glo, и измеряли люминесценцию с применением InVision (Perkin-Elmer) через 15 мин при комнатной температуре. Результаты показали, что Хумира и Хумирa-lm32 проявляли равную активность при ингибировании ФНО-альфаопосредованной цитотоксичности в клетках L929 (IC₅₀ антитела Хумира=19,0нг/мл; IC₅₀ Хумираlm32=18,9нг/мл).

Далее, гибрид Хумирa-lm32 демонстрировал дозозависимую защиту трансгенных по ФНО человека мышей от клинических признаков артрита в общепринятой модели на мышах. См., например, Keffer et al., EMBO J. 10:4025-4031 (1991). Однодозовое исследование ФК на мышах показало, что гибрид Хумирa-lm32 и Хумира имеют аналогичные профили ФК и иммуногенности. Однако гибрид Хумирa-lm32 продемонстрировал повышенную эффективность в указанной модели по сравнению с эффективностью только Хумира, по оценке как клинических симптомов, так и гистологии. См. фиг. 30.

Пример 37. Антитела Zybody ингибируют индуцируемую ЭФР сигнализацию.

Клетки SK-BR3 высевали с плотностью 0,5x106 клеток/лунку в 6-луночные планшеты и инкубировали (37°С, 5% CO₂) в течение 24 ч, после чего клетки обрабатывали 10 мкг/мл биспецифических и триспецифических антител Zybody или Герцептина в 1 мл полной среды DMEM с 10% ФБС в течение 24 ч при 37°С. Затем клетки стимулировали 100 нг/мл ЭФР в течение 5 мин. После стимуляции клетки разрушали в 200 мкл лизирующего клеточного буфера (10 мМ Tris-HCl (pH 7,5), 1% Triton Х-100, 150 мМ NaCl, 10% глицерина, 1 мМ ванадат натрия, 5 мМ ЭДТК и ингибиторы протеазы). Клеточные лизаты центрифугировали при 14000 об/мин на протяжении 10 мин при 4°С для удаления клеточного дебриса. Равный объем 2х буфера для образцов и клеточные лизаты смешивали и кипятили при 100°С в течение 5 мин, белки разделяли на 10% ДСН-ПААГ и переносили на ПВДФ-мембраны (кат. №LC2005, Invitrogen). Мембраны блокировали 3% БСА, 0,1% TWEEN 20 в течение ночи и инкубировали с антителами к фосфо-АКТ (кат. №AF887, R&D Systems), фосфо-ERK (кат. №AF1018, R&D Systems) и тотальной ERK (MAB1576, R&D Systems). Конъюгированные с пероксидазой хрена или АР-конъюгированные вторичные антитела против AT кролика и против AT мыши (Invitrogen) использовали для визуализации иммунореактивных белков с использованием хемилюминесценции или реагентов для детекции ассоциированного фосфопротеина (АР), соответственно.

Одно биспецифические антитело, использованное в указанном примере, содержало Герцептин и связывающий рЭФР MRD (Her-egfr, Her-рЭФР). Другое биспецифическое антитело содержало Герцептин с scfv пертузумаба (нацеленным на эпитоп HER2, отличный от эпитопа антитела Герцептин) на Сконце тяжелой цепи (Her-пертузумaб(Н)). Одно триспецифическое антитело содержало Герцептин со связывающим рЭФР MRD на С-конце тяжелой цепи и scfv пертузумаба на С-конце легкой цепи. Другое триспецифическое антитело содержало Герцептин со связывающим рЭФР MRD на С-конце легкой цепи и scfv пертузумаба на С-конце тяжелой цепи (Her-zEGFR(L)-Pert(H)). Другое триспецифическое антитело содержало рЭФР-связывающий MRD, и scfv пертузумаба, который нацелен на эпитоп HER2, отличный от целевого эпитопа HER2 антитела Герцептин (Her-Pert(L)zEGFR(H) и Her-zEGFR(L)-Pert(H).

Клетки SK-BR3 экспрессируют очень высокие уровни HER2 и чувствительны к антипролиферативным эффектам Герцептина. Ингибирование конститутивно активированной АКТ представляет собой один из механизмов антипролиферативных эффектов Герцептина в сверхэкспрессирующих HER2 клетках. Такое ингибирование можно предотвратить добавлением факторов роста, таких как ЭФР, ИФР-1 и херегулина (HRG) за счет индуцирования внутриклеточной промитогенной сигнализации. Как показано на фиг. 31, индуцируемая ЭФР активация путей АКТ и ERK в клетках SK-BR3 видна по повышению уровней фосфорилированной АКТ и ERK. Герцептин не оказывает эффекта на ЭФР-индуцированную активацию сигнальных путей в клетках SK-BR3, тогда как Her-egfr и два триспецифических антитела Zybody с нацеленным на рЭФР пептидом ингибировали эффекты ЭФР. В отличие от биспецифического антитела, которое ингибировало только индуцируемую ЭФР сигнализацию, триспецифические антитела также ингибировали конститутивно активные Akt и ERK в клетках SK-BR3.

Пример 38. Антитела Zybody ингибируют индицируемую херегулином сигнализацию.

Клетки SK-BR3 высевали с плотностью 0,5x106 клеток/лунку в 6-луночные планшеты и культивировали в течение ночи. На следующий день клетки обрабатывали 10 мкг/мл биспецифических и триспецифических антител Zybody или Герцептина в 1 мл полной среды DMEM с 10% ФБС в течение 24 ч при 37°С. Затем клетки стимулировали 200 нг/мл херегулина на протяжении 10 мин. Проводили анализ методом вестерн-блоттинга для детекции уровней фосфорилированной и тотальной Akt и ERK согласно описанию в примере 37.

Херегулин связывается с HER3 и индуцирует активацию сигнальных путей за счет образования гетеродимера HER2-HER3. Как видно на фиг. 32, херегулин индуцировал активацию Akt и ERK в клетках

- 165 043040

SK-BR3. Герцептин и HER-egfr не оказывали эффекта на индуцируемую херегулином активацию Akt. Пертузумаб, но не Герцептин, блокирует опосредованное херегулином образование гетеродимера HER2HER3 и сигнализацию. На фиг. 32 показано, что биспецифические и триспецифические антитела Zybody, содержащие scfv пертузумаба, полностью ингибировали индуцированную херегулином активацию Akt в клетках SK-BR3.

Пример 39. Антитела Zybody ингибируют индуцируемую ЭФР и херегулином сигнализацию.

Клетки SK-BR3 высевали с плотностью 0,5х10⁶ клеток/лунку в 6-луночные планшеты и культивировали в течение ночи. На следующий день клетки обрабатывали 10 мкг/мл биспецифических и триспецифических антител Zybody или Герцептина в 1 мл полной среды DMEM с 10% ФБС в течение 24 ч при 37°С. Затем клетки стимулировали 100 нг/мл ЭФР и 200 нг/мл херегулина на протяжении 10 мин. Проводили анализ методом вестерн-блоттинга для детекции уровней фосфорилированной и тотальной Akt и ERK согласно описанию в примере 37.

Комбинированная стимуляция клеток SK-BR3 ЭФР и херегулином приводила к активации и АКТ, и ERK (фиг. 33). Герцептин, HER-efgr и HER-pertuzuScfv были неэффективны для блокирования комбинированных эффектов ЭФР и херегулина. Триспецифические антитела Zybody, содержащие как нацеленный на рЭФР пептид, так и scfv пертузумаба, полностью ингибировали индуцируемую ЭФР и херегулином активацию Akt и ERK в клетках SK-BR3.

Пример 40. Антитела Zybody понижающе регулируют рЭФР клеточной поверхности.

Клетки SK-BR3 высевали с плотностью 0,5х10⁶ клеток/лунку в 6-луночные планшеты и культивировали в течение ночи. На следующий день клетки обрабатывали 10 мкг/мл биспецифических и триспецифических антител Zybody, Герцептина, эрбитукса (Erbitux), ЭФР и их комбинаций в 1 мл полной среды DMEM с 10% ФБС в течение 24 ч при 37°С, согласно описанию. Клетки разъединяли и определяли уровни рЭФР на клетках с применением проточной цитометрии с ФЭ-конъюгированным антителом против рЭФР.

В данном эксперименте использовали следующие антитела Zybody: антитело Герцептин со связывающим рЭФР MRD на С-конце тяжелой цепи (HER-egfr(H)); антитело Хумира со связывающим рЭФР MRD на С-конце тяжелой цепи (HUM-egfr(H)); Герцептин с scfv пертузумаба на С-конце тяжелой цепи (HER-perscfv(H)); Хумира с scfv пертузумаба на С-конце тяжелой цепи (HUM-perscfv(H)); Герцептин с scfv пертузумаба на С-конце легкой цепи и связывающим рЭФР MRD на С-конце тяжелой цепи (HERperscfv(L)-egfr(H)); Герцептин с scfv пертузумаба на С-конце тяжелой цепи и связывающим рЭФР MRD на С-конце легкой цепи (HER-perscfv(H)-egfr(L)); и антитело Хумира со связывающим рЭФР MRD (HUM-egfr).

Эрбитукс (Erbitux), ЭФР, а также биспецифические и триспецифические антитела Zybody, содержащие нацеленные на рЭФР пептиды, понижающе регулировали уровни рецептора рЭФР на клеточной поверхности (фиг. 34А и В). Обработка HER-egfr в течение 24 ч была более эффективна (61%), чем обработка только HUM-egfr (27%) или комбинацией HUM-egfr с Герцептином (41%), и эрбитукса (Erbitux) с Герцептином (51%) (фиг. 34А и В). Это показывает, что одновременный таргетинг рЭФР и HER2 в формате антитела Zybody был более эффективен для понижающей регуляции рЭФР, чем комбинация двух индивидуальных антител. Кроме того, обработка триспецифическими антителами, нацеленными на рЭФР и два разные эпитопа HER2, полностью понижающе регулировала (понижала на 99%) уровни рЭФР на клетках SK-BR3.

Пример 41. Антитела Zybody понижающе регулируют экспрессию рЭФР.

Клетки SK-BR3 высевали с плотностью 0.5х10⁶ клеток/лунку в 6-луночные планшеты и культивировали в течение ночи. На следующий день клетки обрабатывали 10 мкг/мл биспецифических и триспецифических антител Zybody или Герцептина в 1 мл полной среды DMEM с 10% ФБС в течение 24 ч при 37°С. Получали клеточные лизаты и проводили анализ методом вестерн-блоттинга для детекции рЭФР с применением антитела к рЭФР (кат№ МАВ10951, R&D Systems) и общих уровней ERK согласно описанию в примере 37.

Обработка Герцептином и scfv Her-Пертузумаба не оказывала эффекта на уровни рЭФР в клетках SK-BR3. HER-egfr частично понижающе регулировал белок рЭФР, и практически полное разрушение рЭФР наблюдалось в клетках, обработанных триспецифическими антителами Zybody.

Пример 42. Антитела Zybody повышают активность MRD.

Проводили следующие эксперименты для исследования эффекта, оказываемого гибридным антителом на активность MRD. Индивидуальные лунки 96-луночного планшета покрывали рИФР-1 и ErbB2-Fc (HER2) (1 мкг/мл) в различных соотношениях. Лунки промывали, и затем добавляли серийные разведения антител Zybody в присутствии меченого биотином ИФР-1. Использовали антитела Zybody, представляющие собой антитело Герцептин, содержащее нацеленный на рИФР MRD на С-конце тяжелой цепи (HER-igfr(H)), и антитело Хумира, содержащее нацеленный на рИФР MRD на С-конце тяжелой цепи (HUM-igfr(H)). Связанный ИФР-1 количественно определяли с добавлением стрептавидина-HRP. Результаты представлены в табл. ниже.

- 166 043040

Таблица 8 Ингибирование связывания ИФР-1, IC₅₀ (нМ)

Антитело Zybody	Отношение рИФР-1 :HER2
1:0	3:1	1:1	1:3
HER-igfr(H)	220	20,91	1,44	0,14
HUM-igfr(H)	240	189,9	186	111

Ингибирование связывания ИФР-1 было аналогичным для обоих антител Zybody, протестированных при отсутствии в планшетах ErbB2-Fc (HER2) (IC₅₀ HER-igfr(H)=220 нМ; IC₅₀ HUM-igfr(H)=240 нМ). В тех случаях, когда планшеты содержали и мишень антитела, и мишень MRD, связывание с мишенью MRD резко уменьшалось. Например, при применении антитела Zybody HER-igfr(H) ингибирование связывания ИФР-1 снижалось от IC₅₀=220 нм при отсутствии мишени антитела в планшетах (отношение рИФР-1:HER2=1:0) до IC₅₀=1,44 при наличии мишени антитела и мишени MRD в планшетах в эквивалентных количествах (отношение рИФР-1:HER2=1:1). Эти данные свидетельствуют, что вовлечение мишеней и антитела, и MRD в случае HER-igf1r(H) усиливает активность низкоаффинного рИФР-1 MRD более чем в 1000 раз. И напротив, указанный резкий эффект не наблюдался, когда тот же эксперимент проводили с применением антитела Zybody, содержащего антитело Хумира, которое не связывается с HER2, даже несмотря на то, что указанное антитело Zybody содержит тот же нацеленный на рИФР-1 MRD. Соответственно, биспецифические антитела Zybody проявляют повышенную активность MRD за счет обеспечиваемого авидностью гетеротипического связывания.

Пример 43. Конформационные ограничения могут повышать связывание и стабильность MRD.

Для определения эффекта конформационных ограничений на домены MRD в контексте MRDсодержащего антитела было разработано несколько модифицированных MRD-конструкций, содержащих цистеины в различных локализациях. Указанные цистеины образуют межмолекулярные дисульфидные связи и соответственно вовлечены в формирование трехмерной конформации белков. MRD, подвергавшийся изменениям в указанном эксперименте, представлял собой МРМ. Последовательность МРМ, представленная в табл. ниже, аналогична последовательности lm32 (описан выше), но включает четыре аминокислотных модификации: M5G, N16Q, L19A и Q24E. G в положении 5 в МРМ минимизирует потенциальное окисление остатка метионина, a L19A и Q24E устраняют потенциально иммуногенные последовательности. В данных экспериментах все домены MRD соединяли с С-концом тяжелой цепи Гер цептина.

Полученные мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела) затем тестируют на связывание мишени и стабильность. Стабильность определяли путем введения MRD-содержащего антитела посредством внутривенной инъекции мышам и сравнения уровней MRD в плазме через 15 мин после инъекции с уровнями MRD в плазме через 2, 3 или 4 дня после инъекции. Результаты приведены ниже в табл. 9.

Таблица 9

Связывание и стабильность пространственно ограниченных доменов MRD

Конструкция	Последовательность	EC50, HM	% MRD, 48 ч
HER-2*-con4	AQQEECEWDPWTCEHMGSGSATGGS GSTASSGSGSATHQEECEWDPWTCEH MLE (SEQ ID NO: 136)	0,018	70
HER-lm32(H)	KSLSLSPGKGGGSMGAQTNFMPMDND ELLLYEQFILQQGLE (SEQ ID NO:34)	0,033	23
HER-mpm(H)	KSLSLSPGSGGGSGGAQTNFMPMDQD EALLYEEFILQQGLE (SEQ ID NO:56)		19
HER-lm32 (MPM Q8C G30C) (H)	KSLSLSPGSGGGSGGACTNFMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO:57)	4,06
HER-lm32 (MPM T9C G30C) (H)	KSLSLSPGSGGGSGGAQCNFMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO:58)	0,598	38
HER-lm32 (MPM NIOC G30C) (H)	KSLSLSPGSGGGSGGAQTCFMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO:67)	0,177	9

- 167 043040

HER-lm32 (МРМ FllCG30C)(H)	KSLSLSPGSGGGSGGAQTNCMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO:68)	5,91
HER-lm32 (МРМ N10CL28C)(H)	KSLSLSPGSGGGSGGAQTCFMPMDQD EALLYEEFICQQGLE (SEQ ID NO:69)	0,403	33
HER-lm32 (МРМ M5C G30C) (Η)	KSLSLSPGSGGGSCGAQTNFMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO:70)	0,0641	60
HER-lm32 (МРМ М5С L28C) (Η)	KSLSLSPGSGGGSCGAQTNFMPMDQD EALLYEEFICQQGLE (SEQ ID NO: 101)	0,109	14
HER-lm32 МРМ A7C G30C) (Η)	KSLSLSPGSGGGSGGCOTNFMPMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO: 108)	0,174	82
HER-lm32 (МРМ Р13С G30C) (Η)	KSLSLSPGSGGGSGGAOTNFMCMDQD EALLYEEFILQQCLE (SEQ ID NO: 109)
HER-lm32 (МРМ M5CN10C)(H)	KSLSLSPGSGGGSCGAQTCFMPMDQD EALLYEEFILQQGLE (SEQ ID NO: 110)	0,2	13
HER-lm32 (МРМ M5CF11C)(H)	KSLSLSPGSGGGSCGAQTNCMPMDQD EALLYEEFILQQGLE (SEQ ID NO: 111)
HER-lm32 (MPM D5 NIOC G30C) (H)	KSLSLSPGSGGGSCFMPMDQDEALLYE EFILQQCLE (SEQ ID NO: 112)	0,751	J
HER-lm32 (MPM D5N10C L28C) (H)	KSLSLSPGSGGGSCFMPMDQDEALLYE EFICQQGLE (SEQ ID NO: 113)	0,697	36

Результаты продемонстрировали, что добавление двух остатков цистеина вне корового связывающего мишень домена (например, PMDQDEALLY в МРМ) домена MRD может увеличивать период полувыведения MRD по существу без уменьшения сродства к связыванию.

Конструкции, содержащие один цистеин, расположенный возле конца молекулы (например, приблизительно через две аминокислоты от конца), и один цистеин, расположенный на противоположном конце указанного связывающего мишень домена (например, по меньшей мере приблизительно через 3 или приблизительно через 4-7 аминокислот от корового связывающего домена) и возле места присоединения белка (например, приблизительно через 4-6 аминокислот от линкера или последовательности антитела) могут демонстрировать увеличение периода полувыведения MRD по существу без уменьшения сродства к связыванию. Кроме того, домены MRD, содержащие цистеины в пределах сайта связывания мишени, в частности, на каждом конце сайта связывания мишени, могут представлять собой MRD, как отличающиеся высокой стабильностью, так и эффективно связывающие мишень.

Новые мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), домены MRD которых имеют продолжительный период полувыведения in vivo, и эффективно связывающие мишень, могут быть идентифицированы путем изменения последовательности MRD с включением по меньшей мере двух цистеинов. Цистеины могут быть расположены на расстоянии по меньшей мере приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 13, приблизительно 14, приблизительно 15, приблизительно 16, приблизительно 17, приблизительно 18, приблизительно 19 или приблизительно 20 аминокислот друг от друга. Связывающий потенциал и период полувыведения MRD в MRD-содержащем антителе оценивают с применением известных техник и способов, описанных в настоящем документе. MRD-содержащие антитела вводят мышам внутривенно. Через непродолжительное время после введения (например, через 15 мин после введения) и в более поздний момент времени (например, через 2, 3 или 4 дня после введения) собирают плазму мышей. Идентифицируют подходящие мультивалентные и мультиспецифические композиции (например, MRD-содержащие антитела), которые и эффективно связываются с мишенью MRD, и стабильны in vivo (например, через 48 ч после введения присутствует по меньшей мере приблизительно 50% MRD).

Пример 44. MRD-содержащие антитела для перенаправленного Т-клеточного киллинга.

Гибридные молекулы антитело-MRD получали путем соединения нацеленного на CD3 пептида с антителом против CD 19, и путем соединения нацеленного на CD 19 пептида с антителом против CD3. Полученные MRD-содержащие антитела анализируют с применением проточной цитометрии на CD3положительных клетках Jurkat, МКПК человека и ряде различных CD 19-положительных клеточных линий В-клеточной лимфомы (например, SKW6.4, Blin I, BJAB, Daudi и Raji) для определения специфических показателей сродства к связыванию каждой мишени. Поскольку BL60 и линии клеток плазмацитомы NCI и L363 отрицательны и по CD3, и по CD19, они используются в качестве клеток отрицательного контроля для определения специфичности MRD-содержащих антител. CD3-отрицательные клетки Jurkat

-168043040 могут также применяться в качестве популяции клеток отрицательного контроля. Клеточные линии культивируют на полной среде RPMI 1640 (Invitrogen) с 10% ФБС (GIBCO).

Клетки промывают ФСБ и блокируют ресуспендированием в ФСБ с 10% IgG человека (Innovative Research) и 0,1% NaN₃ (блокирующий буфер) в течение 30 мин при 4°С. Затем клетки осаждают центрифугированием (100xg в течение 5 мин) с последующим инкубированием с MRD-содержащими антителами в блокирующем буфере в течение 30 мин при 4°С. Клетки троекратно промывают ФСБ и детектируют связанные на клеточной поверхности MRD-содержащие антитела. Проточная цитометрия может быть проведена с применением BD FACScan.

Пример 45. Цитотоксичность MRD-содержащих антител in vitro для перенаправленного Тклеточного киллинга.

Биспецифические CD19/CD3 MRD-содержащие антитела анализируют в отношении способности индуцировать перенаправленный T-клеточный киллинг CD19-положительных клеток лимфомы. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (МКПК) выделяют в качестве эффекторных клеток из свежих лейкоцитарных пленок случайных доноров с применением градиентного центрифугирования с Lymphoprep™ (Nycomed/Axis-Shield PoC), с последующим центрифугированием при 100xg для удаления тромбоцитов. CD19-положительные В-клетки истощают с применением гранул Dynabeads® CD19 Pan В (Life Technologies). Популяции МКПК анализируют с применением проточной цитометрии до и после истощения по С019-положительным В-клеткам путем мечения ФИТЦ-конъюгированным антителом мыши против CD19 человека и дополнительного мечения ФЭ-конъюгированным антителом против CD45. МКПК инкубировали в течение ночи при 37°С с 5% CO2. CD19-положительные В-клеточные линии (например, SKW6.4, Blin I, BJAB, Daudi и Raji) использовали в качестве целевых клеток.

Целевые клетки инкубировали в 96-луночных планшетах на полной среде RPMI 1640 (Invitrogen) с 10% ФБС (GIBCO) при разной плотности клеток, таким образом, чтобы добавление одного и того же количества нестимулированных МКПК приводило к получению разных соотношений эффекторных и целевых клеток (Е:Т). Затем в каждую лунку добавляли различные концентрации биспецифических CD19/CD3 MRD-содержащих антител с последующим добавлением нестимулированных МКПК. Планшеты инкубировали при 37°С с 5% CO2 в течение 3 ч. Цитотоксичность может быть измерена с помощью анализа цитотоксичности DELFIA® EuTDA (PerkinElmer) в круглодонных 96-луночных планшетах в соответствии с инструкциями производителя. Спонтанную клеточную смерть измеряют путем инкубирования целевых клеток без эффекторных клеток или MRD-содержащих антител, а максимальную клеточную смерть определяют путем инкубирования целевых клеток с 10% Triton Х-100. Долю клеток, подвергшихся специфическому лизису, рассчитывают как отношение между опосредованной эффекторами цитотоксичностью ([экспериментальная клеточная смерть]-[спонтанная клеточная смерть]) и максимальной ожидаемой цитотоксичностью ([максимальная клеточная смерть]-[спонтанная клеточная смерть]).

Пример 45. Эффективность MRD-содержащих антител in vivo для перенаправленного Т-клеточного киллинга.

В-клетки лимфомы Raji извлекают из рутинным образом полученной клеточной культуры, промывают в ФСБ и получают состав с плотностью 1x10⁷ клеток/мл. Затем мышам NOD/SCID подкожно инокулируют 1x106 клеток Raji с 5x106 МКПК или без МКПК (полученных в соответствии с приведенным выше описанием) в 50% растворе Matrigel. Биспецифические CD19/CD3 MRD-содержащие антитела вводят внутривенно через 1 ч после инокуляции клеток лимфомы. В качестве отрицательного контроля через 1 ч после инокуляции клеток лимфомы также вводят внутривенно биспецифические MRDсодержащие антитела, направленные на HER2 и CD3 (т.е. связывающий CD3 MRD, соединенный с антителом против HER2, и связывающий HER2 MRD, соединенный с антителом против CD3), HER2 и CD19 (т.е. связывающий CD19 MRD, соединенный с антителом против HER2, и связывающий HER2 MRD, соединенный с антителом против CD19), и ФСБ. MRD-содержащие антитела или ФСБ вводят один раз в сутки в течение четырех дней после введения начальной дозы. Подкожные опухоли измеряют калипером для определения скорости роста в каждой экспериментальной группе. Также дважды в неделю измеряют массу тела мышей в качестве индикатора переносимости лечения.

Пример 46. Антитела Zybody, несущие агонизирующие DR5 домены MRD на разных mAbскаффолдах.

С применением анализа жизнеспособности клеток оценивали цитотоксические эффекты нескольких антител Zybody (а именно, MRD-содержащих антител), проявляющих разные валентности агонизирующих DR5 (TNFRSF10B/TRAILR2) MRD на трех разных mAb-скаффолдах. Вкратце, восемь серийных разведений антител Zybody (5-кратных, начиная с 30 мг/мл) инкубировали с 10⁴ клеток COLO-205 в лунках 96-луночного планшета, содержащих 100 мл среды RPMI с добавлением 10% ФБС. Через 48 ч жизнеспособность клеток измеряли посредством анализа Cell TiterGlo® (Promega). Результаты, представленные на фиг. 36А, показывают, что тетравалентное антитело Zybody 2xdr51m(H)-TRA, содержащее четыре копии направленных на DR5 MRD, соединенных со скаффолдом на основе моноклонального антитела трастузумаба, продемонстрировали более высокую цитотоксическую активность по сравнению с бивалентными антителами Zybody dr51m(H)-TRA, dr51m(L)-TRA и TRA-dr51m(H). Указанные результа

- 169 043040 ты демонстрируют, что увеличенная валентность агонизирующих DR5 доменов MRD коррелирует с увеличенным киллингом клеток, опосредованным рецептором с доменом смерти DR5.

Для дополнительного исследования валентности на опосредованную DR5 клеточную цитотоксичность, два октавалентных антитела Zybody (2xdr51m(L)2xdr51m(H)-HER и 2xdr51m(L)2xdr51m(H)-PAL, содержащие скаффолды на основе моноклональных антител трастузумаба и паливизумаба, соответственно) анализировали на способность к киллингу опухолевых клеток COLO205 по сравнению со сконструированным аналогичным образом тетравалентным антителом Zybody, обладающим такими же видами специфичности.

Октавалентные антитела Zybody 2xdr51m(L)2xdr51m(H)-HER и 2xdr51m(L)2xdr51 m(H)-PAL, содержащие 8 копий направленного на DR5 MRD, продемонстрировали более высокую цитотоксическую активность по сравнению с тетравалентными антителами Zybody 2xdr51m(H)-HER и 2xdr51m(H)-PAL (фиг. 36В-С). Указанные результаты дополнительно подтверждают корреляцию между увеличением валентности связывания DR5 и повышенной цитотоксической активностью (т.е. клеточной смертью).

Для исследования эффекта дополнительных видов специфичности, направленных не на DR5, на цитотоксичность антител Zybody на основе DR5, нацеленный на Her2 MRD (eb18) соединяли с С-концом тяжелой цепи трастузумаба с получением триспецифического тетравалентного DR5-антитела Zybody, 2xDR5(H)-TRA-eb18(H). MRD eb18 был выбран, поскольку он связывает her2 через эпитоп, отличный от распознаваемого трастузумабом. Мультиэпитопный таргетинг her2 повышал цитотоксичность антитела Zybody (фиг. 36D). Указанные результаты демонстрируют, что антитело Zybody, способное к мультиэпитопному таргетингу рецепторов, отличных от DR5 (her2), усиливает цитотоксическую активность тетравалентных нацеленных на DR5 доменов MRD.

Для дополнительного исследования эффекта мультиспецифичности на цитотоксическую активность антител Zybody на основе DR5 нацеленный на рЭФР MRD (eb13) соединяли с С-концом тяжелой цепи цетуксимаба (антитела против рЭФР) с получением триспецифического тетравалентного DR5антитела Zybody, 2xDR5(H)-CET-eb13(H). MRD eb1l3 был выбран, поскольку он связывает рЭФР через эпитоп, отличный от распознаваемого цетуксимабом. Мультиэпитопный таргетинг рЭФР повышал цитотоксичность антитела Zybody (фиг. 36Е). Указанные результаты демонстрируют, что антитело Zybody, способное к мультиэпитопному таргетингу отличных от DR5 рецепторов (рЭФР), усиливает цитотоксическую активность тетравалентных нацеленных на DR5 доменов MRD.

Для исследования эффекта специфичности mAB-скаффолда на активность антител Zybody на основе DR5 сравнивали цитотоксическую эффективность трех антител Zybody, отличающихся тем, что каждое антитело Zybody конструировали с одними и теми же нацеленными на DR5 доменами MRD на разных скаффолдах; цетуксимабе (СЕТ), трастузумабе (TRA) и паливизумабе (PAL). Результаты показывают, что mAB-скаффолд антитела Zybody может влиять на кажущуюся цитотоксическую эффективность нацеленных на DR5 доменов MRD (фиг. 36F).

Пример 47. Специфичность Ang-связывающих MRD в отношении Ang1, Ang2 и Ang4.

Специфичность выбранной группы Ang2-связывающих пептидов, экспонируемых на фагах, в отношении Ang1, Ang2 и Ang4 оценивали в ИФА-анализе ELISA прямого связывания. Вкратце, планшеты для ELISA покрывали заданным белком в концентрации 0,1 мкг/мл в ФСБ. Планшеты блокировали и добавляли фаговые супернатанты в разведении 1:10 в блокирующем буфере. Несвязанный фаг удаляли, промывая ФСБ с 0,1%Tween, связанный фаг детектировали с применением HRP-конъюгированного моноклонального антитела против М13. Анализировали следующие пептиды:

ANG100 (SEQ Ш NO:621), ANG126 (SEQ Ш NO:232); ANG129 (SEQ Ш NO:234); ANG156 (SEQ Ш NO:255); ANG157 (SEQ ID NO:256); ANG163 (SEQ ID NO:261); ANG179 (SEQ ID NO:270); ANG200 (SEQ ID NO:628); ANG303 (SEQ ID NO:331); ANG318 (SEQ ID NO:625); ANG335 (SEQ ID NO:332); и ANG599 (SEQ ID NO:367).

Эти данные показывают, что все Ang-связывающие пептиды связывают Ang2, но отличаются по относительному связыванию с Ang1 и Ang4 (фиг. 37). Указанные данные демонстрируют, что точная специфичность связывающих Ang пептидов может отличаться у разных пептидов. Перекрестная реактивность доменов MRD в отношении представителей семейства Ang может использоваться при заболеваниях, характеризующихся дифференциальной экспрессией представителей семейства Ang.

Пример 48. Идентификация примеров связывающих мишени доменов MRD.

Приведенные ниже примеры связывающих мишени доменов MRD были идентифицированы с применением процедуры по существу соответствующей описанию в настоящем документе.

- 170 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
136	ANG2	SACDHPMNNKCG
137	ANG4	SACGTFTHPQCG
138	ANG6	SACHPMAPKSCG
139	ANG7	SACGSYNHPMCG
140	ANG8	SACGSYEHPMCG
141	ANG10	SACQSSVCFFVRWRF
142	ANG12	SACHPLIHNRCG
143	ANG18	TCIFNFPACI
144	ANG19	FCDEYTPAWCW
145	ANG20	MCPDFGMFIYCI
146	ANG22	QCQEVISACFGQAGQGGG SGGSQCWLMELVCL
147	ANG23	KCPDMWPQCW
148	ANG24	KCPDMWPMCW
149	ANG25	QCEWIWVACDGQAGPAG FCYEHMLMCA
150	ANG26	RCYEVWWDCA
151	ANG27	ACIPDLFLCM
152	ANG28	QCMWMWYQCR
153	ANG29	KCPDMWPECW
154	ANG30	PCQYWWVLCP
155	ANG31	LCWNHWWMCE
156	ANG32	FCHEYTPACCW
157	ANG33	KCPDFWPECW
158	ANG34	ECYHHWPECM
159	ANG35	RCPDMWFPACW
160	ANG37	ICIYWKDPWCY
161	ANG38	KCPDLWPQCY

Таблица 10

Связывающие ANG2 домены MRD

162	ANG40	YCWVIAKSCVGQAGQGG GGGGSICRHYVWRCE
163	ANG41	LCWNHWWMCD
164	ANG42	MCTWQFMVCPGQAGQGG GSGGSYCWEYVYRCD
165	ANG43	MCWNHWWMCE
166	ANG46	HCIFNFPACI
167	ANG47	LCFNHWWMCP
168	ANG49	MCIYWKEPWCY
169	ANG50	WCDHTEAWPECF
170	ANG51	ECYWYPNPMWCY
171	ANG52	HCPWGTTMNCV
172	ANG54	ECTDYPEWRYCQ
173	ANG55	ECFFFPNPWHCY
174	ANG56	PCAWFPNPSFCY
175	ANG58	MCPWWYDHLHCY
176	ANG59	MCPIWYDHQWCH
177	ANG61	ECWWYYNHFWCH
178	ANG62	ECAWFPNPWCCY
179	ANG63	GCWHDGFMCF
180	ANG64	WCDHWIVWPECW
181	ANG65	QCNDYPNWRYCF
182	ANG66	PCAWYPNPEFCY
183	ANG67	LQYEEFYDHV
184	ANG68	QCPYRINHQRCS
185	ANG69	DCVWFPNPDWCY
186	ANG70	FCALFPYMFPCE
187	ANG71	DGSPCAWFPNPSFCY
188	ANG72	VCPWWYDHWLCS
189	ANG73	ECDGWEYHYFCW
190	ANG74	YCPLCQYHYGCF
191	ANG75	SCWWYPNPQWCY
192	ANG76	ECYFLVNMEWCQ
193	ANG77	TCWFWELEFFCI

- 171 043040

194	ANG78	KCYWFPNPIECY
195	ANG79	DCAWFPNPAWCH
196	ANG80	HCPYWYDHELCH
197	ANG81	YCPQWYDHWLCT
198	ANG82	NCWEYPNPAWCY
199	ANG83	ECDGWEYHYVCW
200	ANG84	ECYWYPNPWFCY
201	ANG85	DCVDYPGWEYCV
202	ANG86	ECYMLHACYDEGH
203	ANG87	WCDRGTYVMFCD
204	ANG88	TCPVWWDDYWCG
205	ANG89	WCDYGTYVVQCE
206	ANG90	HCYWHPSPSWCY
207	ANG91	QCYWFPNPLECY
208	ANG93	QCKWFPNPKECY
209	ANG94	PCPYYFNRQHCV
210	ANG95	ICYVYGLEEWCI
211	ANG98	HCPLWYDHYFCA
212	ANG10 1	ACAWYPNPVECY
213	ANG10 2	ECAIYPNPQWCY
214	ANG10 3	DCYYYPNPSWCW
215	ANG10 4	DCYYFPNPQWCF
216	ANG10 6	QCPWWYDHYWCN
217	ANG10 7	FCDFYDYHYVCF
218	ANG10 8	VCPYWWDHWLCL
219	ANG10 9	MCPFWYDHELCV

220	ANG11 0	ICPWWYDHYTCF
221	ANG11 1	ACDWFQNPYVCW
222	ANG11 2	PCAWYPNPAECY
223	ANG11	ECPFWYDHYMCM
224	ANG11 4	PCHWFPNPTECY
225	ANG11 6	ECYTFPNPQFCY
226	ANG11 8	SCYSYPNPAWCY
227	ANG11 9	ECYWYPNPHWCR
228	ANG12 0	HCYWHPSPNWCR
229	ANG12 1	HCPDWYNHQLCP
230	ANG12 2	ACVWFPNPDWCY
231	ANG12	LGPVLLECYFYPNPQHCY
232	ANG12 6	VPIDCYFYPNPPECYLHN
233	ANG12 8	GYRDCYFYPNPRHCYGSH
234	ANG12 9	VVVEFWECYVYPNPPHCY
235	ANG13 0	LVNDCFFFPNPPHCYVSS
236	ANG13 1	RMADCYFYPNPQHCYTEG

- 172043040

237	ANG13 2	DEQACYFYPNPAHCYQRD
238	ANG13	FLGAMMDCYFFPNPPHCY
239	ANG13 4	VYQDCYNFPNPVHCYRTT
240	ANG13 5	LVDYSMDCYFFPNPPHCY
241	ANG13 6	HSLIYHDCYFYPNPPHCY
242	ANG13 7	LLSVLLECYFYPNPPHCY
243	ANG13 8	PTDVLLECYLYPNPPHCY
244	ANG13 9	SLPLRAFCYFPPNWPHCY
245	ANG14 2	TDTDCYFFPNPPHCYSPG
246	ANG14 3	IYDDCYIFPNPHHCYVGF
247	ANG14 4	PWHECYWYPNPPHCYGIL
248	ANG14 5	MPLIF SEC YS YPNPPHC Y
249	ANG14 8	GNFAHEECYFYPNPAHCY
250	ANG14 9	QPRLLHDCYFYPNPSHCY
251	ANG15 0	NPTDCYFYPNPQHCYNW G
252	ANG15 1	YPFFLVDCYFFPNPLHCY
253	ANG15	SVAHVHGLLLLPESDALL

254	ANG15 4	GEYDCYFYPNPPHCYDRN
255	ANG15 6	LHVDCYFYPNPPHCYIDE
256	ANG15 7	QDHDCYFYPNPPHCYLEG
257	ANG15 8	HFSDCFFYPNPQHCYHMM
258	ANG15 9	PIEDCYFYPNPRHCYLQP
259	ANG16 0	ECCYCYNYDTWSHCCQK G
260	ANG16 1	VVLPSYDCYFYPNPPHCY
261	ANG16 3	VPWDCYFYPNPPHCYEDA
262	ANG16 4	F VS S AFDC YF YPNPAHC Y
263	ANG16 5	ALVECYFYPNPLHCYNTS
264	ANG16 6	FWYSLDDCYFYPNPSHCY
265	ANG16 9	RSNLMTDCYYYPNPPHCY
266	ANG17 2	QLVDCLYYPNPPHCYESM
267	ANG17 4	WDVDCGFFPNPAYCYELG
268	ANG17 5	LQGRMIDCYS YPNPPHC Y
269	ANG17 6	QRDPLAACYIYPNPPHCY
270	ANG17 9	LLWECYFYPNPSHCYTDR

-173043040

271	ANG18 0	QDIDCYFYPNPPHCYHVT
272	ANG18 2	RLHDCYFYPNPPHCYLWQ
273	ANG18 3	SLTTFIDCYFYPNPPHCY
274	ANG18 6	SSGPDIDCYFYPNPPHCY
275	ANG18 7	DCYFYPNPLYCYEDWDYT
276	ANG18 8	IWLDCYFYPNPPHCSLNS
277	ANG18 9	QWNDCYFYPNPPHCYGR Q
278	ANG19 0	GHMDCYYYPNPSHCYQQ L
279	ANG19 2	WLSQCYSYPNPPHCYTLF
280	ANG19 3	SSLHMLDCYYYPNPPHCY
281	ANG19 4	QSLSFLDCYFYPNPLHCY
282	ANG19 7	NYYYCYLSPNPPHCYLSF
283	ANG19 8	HFSDCYYFPNPPHCYESI
284	ANG19 9	EVLDCFFYPNPPHCYKAL
285	ANG20 1	RDTDCYFYPNPAHCYLGT
286	ANG20 3	KCPMLPDWVSCDEWMLQ К
287	ANG21 0	LSLKCPLLPDWISCDEYY

288	ANG21 1	KCPLLPDWLSCLEWQLME
289	ANG21 5	KCPLLPDWVPCHEWLNV W
290	ANG21 7	AMSLCPLLPDWASCNDYL
291	ANG21 8	LCPRLPDWVSCHTWLERY
292	ANG21 9	LSTKCPLLPDWVSCHEWL
293	ANG22 0	LGWTELKCPLLPDWATCN
294	ANG22 2	KCPLLPDWVSCHEWNVW L
295	ANG22 3	KCPLLPDWISCAQWQRAV
296	ANG22 4	VGSLCPLLPDWASCHEWL
297	ANG22 5	RCPFLPDWLSCNEWLMIE
298	ANG22 8	WYRKCPLLPDWVSCHEW Y
299	ANG22 9	TTLNCPLLPDWLTCQEFL
300	ANG23 1	KCPLLPDWASCESWLEVR
301	ANG23 2	HLDKCPLLPDWISCTDWL
302	ANG23 3	KCPLLPDWVTCDEFQGM Q
303	ANG23 9	ATSKCPLLPDWVSCDEHL
304	ANG24 1	SSGKCPLLPDWKSCDEWL

- 174043040

305	ANG24 2	KCPLLPDWVSCHEWNIRE
306	ANG24 5	KCPLLPD WF SCHE YQEMF
307	ANG24 6	KCPLLPDWVSCHTYLEES
308	ANG24 7	EPPKCPMLPDWVSCDTWL
309	ANG24 8	DVPHQLNCPLLPDWAACL
310	ANG24 9	EISKCPLLPDWVSCYQWL
311	ANG25 0	MNVKCPLLPDWVSCLDY L
312	ANG25 2	MLMKCPLLPDWASCDVW L
313	ANG25 6	LMHECPLLPDWVSCHTFL
314	ANG25 7	KCPLLPDWVSCETYLNGD
315	ANG25 8	KCPLLPD W VS CDMYLERQ
316	ANG25 9	KCPLLPDWASCDQWNEW N
317	ANG26 3	YVSKCPFLPDWVSCHGWL
318	ANG26 6	KCPFLPDWVSCHDYSQKY
319	ANG26 7	FPPKCPLRPDWVSCHERH
320	ANG26 9	ECPLLPDWVSCHEWNRLH
321	ANG27 0	SPVKCPFLPDWISCDLYL

322	ANG27 2	TAFKCPPLPDWVSCLDWL
323	ANG27 4	KCPLLPDWVSCQEWLSSK
324	ANG27 5	HYDKCPLLPDWVSCHEFL
325	ANG27 7	GLRKCPVLPDWVSCDNW L
326	ANG27 8	SGFKCPLLPDWVSCTDCT
327	ANG27 9	LASKCPLLPDWISCQTWL
328	ANG28 0	KCPLLPDWVSCDQWRLLE
329	ANG28 1	YFDKCPLLPDWLTCHEW M
330	ANG28 4	LPSKCPLLPDWTSCDEYL
331	ANG30 3	KSVSMKTCQDYPGWRYC Q
332	ANG33 5	VNVFLKTCQDYPGWRYC H
333	ANG33 9	PWPDCPVYRYCRHCHHK T
334	ANG35 5	TGSTAKYCQDYPGWRYC H
335	ANG35 8	LPMECYFYPNPEHCYLVP
336	ANG37 0	TYTKCMTYPNPQYCFKHS
337	ANG37 1	RFLECAWFPTPYFCHESE
338	ANG37 4	QYDPCEYYIPCVKWG

-175043040

339	ANG37 5	GFHRC STFPNPHYC ΥΚΤΗ
340	ANG37 6	RWSYCEETMIGYPYCFTR P
341	ANG37 7	AAFMLSCHSTDGQSWAC MESH
342	ANG37 8	RSFECRWQPEHPICAKGV
343	ANG38 0	ILLRCAWYPAPPWCNIET
344	ANG38 1	PHVICHYWKHPWCFQNS
345	ANG38 2	VFYRCMKWPNPWWCYSQ P
346	ANG38 3	GFQRCKTFPNPHYCYKTH
347	ANG38 4	DWSKCPKYPNPEWCYHPS
348	ANG38 5	TYTKCMTYPNPQYCFKHN
349	ANG38 7	SMWGCHMQPNYRECSLW I
350	ANG38 8	PHVICHYCPHPWCFLNS
351	ANG38 9	LELPCGKYPNMWFCYKV A
352	ANG39 0	KERPCVWWKQPWCFQAS
353	ANG39 1	QWFRCYEFPEPDWCRVRS
354	ANG39 3	EWAFCYSYPNPDYCHEAV
355	ANG39 4	TYRKCMTYPNPHYCFKHS

356	ANG39 5	RYSLCMTYPNPYQCYKSN
357	ANG39 6	PHVICHYWKHPWCFHNS
358	ANG39 7	PWFSCYYFPNPSHCMDVV
359	ANG39 8	LYDRCVCFPNLFWCEMTT
360	ANG39 9	RSLACEFHPQKYHVQCAL PH
361	ANG40 0	NTLRCYSGVLVDAMVCFT SG
362	ANG40 3	QYDPCEYDIPCVKWG
363	ANG40 4	SWAQCYAYPNPDFCNRSG
364	ANG40 5	PYEKCMTYPNPWYCFLTD
365	ANG40 6	PYERCTKHPNPTYCWKNL
366	ANG40 7	MYAMCQWHPSPEQCRSPS
367	ANG59 9	KCPLLPDWASCR
368	ANG63 7	TYLQIIECYFYPNPPHCY
369	ANG63 8	LTPSGSDCYFYPNPLHCY
370	ANG63 9	GAYDCYFYPNPPHCYGTT
371	ANG64 0	YLNHNYECYFFPNPTHCY
372	ANG64 1	GFLTFYDCYFFPNPPHCF

- 176043040

373	ANG64 2	TFIDCYF YPNPPHC YALW
374	ANG64	ASDILLDCYFFPNPPHCR
375	ANG64 4	LPLSWSDCYFYPNPPHCY
376	ANG64 5	ALLDCYFYPNPAHCYITM
377	ANG64 6	GMLDCYFYPNPPHCYLDR
378	ANG64 7	SGTECYF YPNPPHC YS SD
379	ANG64 8	SLEDCFFYPNPTLCYNNG
380	ANG64 9	AFSRFLDCYFYPNPQHCY
381	ANG65 0	GVYSFLECSFFPNPPYCY
382	ANG65 1	EEGSSSDCYFYPNPRHCY
383	ANG65 2	LTLLLDDCYFYPNPPHCY
384	ANG65	LFHSMTDCYFYPNPRHCY
385	ANG65 4	REQDCFF YPNPPHC YVDN
386	ANG65 5	ASLGLYDCYYFPNPPNCY
387	ANG65 7	RTGTLGDCYFYPNPRHCY
388	ANG65 8	SPLDCYFYPNPPHCYYAH
389	ANG65 9	IEGDCYFYPNPPHCYEQN

390	ANG66 0	FNYSMYDCYFYPNPAHCY
391	ANG66 1	LVLPLFDCYFYPNPPHCY
392	ANG66 2	FHFVLYDCYFYPNPPYCF
393	ANG66 3	HRADCYFFPNPMDCYQW R
394	ANG66 4	STNLALDCYFYPNPPHCY
395	ANG66 5	SPNDCYFYPNPPECYTHR
396	ANG66 6	IVITSLACYFYPNPLHCY
397	ANG66 7	GGVPMTDCYFYPNPRHCY
398	ANG66 8	DFRDCYSFPNPTQCYINT
399	ANG67 0	WPTDCFFFPNPPHCYHDG
400	ANG67 1	HILDCYFYPNPPHCYLVT
401	ANG67 2	DEADC YYYPNPPHCYSGH
402	ANG67	TLVSMMDCYYYPNPPHC Y
403	ANG67 4	QSVRYMDCYFYPNPSHCY
404	ANG67 5	WYDPYYACYFYPNPTYC Y
405	ANG67 6	LSGPFLDCYFYPNPTHCY
406	ANG67 7	VMLDCYFYPNPLDCYWL T

- 177043040

407	ANG67 9	SSLEHNDCYFYPNPMHCY
408	ANG68 0	RHVDCYFYPNPPHCYLVL
409	ANG68 1	IYPECYFYPNPKSCYSDQ
410	ANG68 2	PPTSLADCYFFPNPLHCY
411	ANG68 3	LLAACYFYPNPPLCFTST
412	ANG68 4	GEEDCYFYPNPPHCYSEL
413	ANG68 5	ECYFYPNPPHCYMEHRST
414	ANG68 6	TEIECYFYPNPPQCYAIH
415	ANG68 7	PRMDCYFYPNPPHCYNGQ
416	ANG68 8	MSLPHQNCYFFPNPTYCY
417	ANG68 9	YGDEC YFFPNPPHCF S WD
418	ANG69 1	FFES SFDC YFFPNPNHC Y
419	ANG69 2	MLVVPSDCYFYPNPSHCY
420	ANG69	LQVDSLDCYFYPNPPHCY
421	ANG69 4	QLMDCYFFPNPHHCFESK
422	ANG69 5	DCYFYPNPPHCYNERYEA
423	ANG69 6	SDMDCYFYPNPPHCFTPP

424	ANG69 7	GADTMQWNDCYFFPNPT HCY
425	ANG69 8	HIKDCYFFPNPPHCYKST
426	ANG69 9	PHQRHLECYFYPNPPECY
427	ANG70 0	SYLDFTDCYFYPNPPHCY
428	ANG70 1	APGYTQDCYWFPNPPHCY
429	ANG70 2	RFSSFHDCYFYPNPSHCY
430	ANG70 3	HSHHLTDCYYFPNPLHCY
431	ANG70 4	AQVDCYFFPNPTHCYFDR
432	ANG70 5	MGDDCYFYPNPPRCYVKP
433	ANG70 6	FLADCYLFPNPPHCYLDY
434	ANG70 7	LGEDCYWYPNPPHCYGM L
435	ANG70 8	NDSVVSECYFFPNPPHCY
436	ANG70 9	DCYFYPNPPSCYEVQGAS
437	ANG71 0	GPWECFFYPNPLHCFKEP
438	ANG71 1	PSADFAECFFYPNPPQCY
439	ANG71 2	ASNDIHDCYFYPNPPHCY
440	ANG71	SDTDCYFYPNPPHCYWDT

-178043040

441	ANG71 4	AFVHCYFFPNPQHCYHRL
442	ANG71 5	MIFDCYFFPNPRHCYHEG
443	ANG71 6	SYFLTWD CYT YPNPPHC Y
444	ANG71 8	TGFECYFYPNPRHCYNDI
445	ANG71 9	LYPSLLDCYFYPNPTHCY
446	ANG72 1	MVDECYF YPNPPHC YSNT
447	ANG72 2	PLRSYMDCYWYPNPPHCY
448	ANG72 3	WLGRLSDCYFYPNPPHCY
449	ANG72 4	FHIDCYFYPNPPHCYTGA
450	ANG72 6	NFRECVF YPNPPHC YDFG
451	ANG72 7	KEIDCYFYPNPPHCYGKW
452	ANG72 8	TNQDCYFYPNPPHCFRDH
453	ANG73 0	SNAQCYFYPNPLHCYKNA
454	ANG73 1	DCYFYPNPPHCYTVEGGK
455	ANG73 2	QPMDCFF YPNPPHC YAEE
456	ANG73	IVSREYDCYFYPNPTHCY
457	ANG73 4	SMHDCYYYPNPTHCYRGT

458	ANG73 6	DETEC YWFPSP АНС YKDS
459	ANG74 0	LGLDCYFYPNPPDCYHDA
460	ANG74 1	FDEDCYFYPNPPHCYLLS
461	ANG74 2	EHEACYF YPNPPHC YESS
462	ANG74 3	PSYNIFECFFFPNPPHCY
463	ANG74 4	SESDCYFYPNPPHCYAVV
464	ANG74 5	HPFDCYFYPNPPHCYTRS
465	ANG74 6	LILDCYFYPNPPHCYTST
466	ANG74 7	YEFRWTDCYFYPNPPHCF
467	ANG74 8	QSQNVVECYF YPNPPHC Y
468	ANG74 9	YRLDLSECYYYPNPLHCY
469	ANG75 1	IPLDCYFYPNPPSCYHSY
470	ANG75 2	AASQTSDCYFYPNPPSCY
471	ANG75 5	THLDCYF YPNPPHC YS ST
472	ANG75 6	NTNDPFDCFFYPNPPHCY
473	ANG75 7	IHKLDLDCYYYPNPPHCY
474	ANG76 2	FSHPFTDCFFYPNPQHCY

- 179043040

475	ANG76 3	TVYDCYFYPNPGHCYLQL
476	ANG76 5	MVFHELDCYFYPNPPHCY
477	ANG76 6	HSLLHWDCYFYPNPSHCY
478	ANG76 7	QLRECYWFPNPSHCYIES
479	ANG76 9	GLVDCYFYPNPPHCYWPH
480	ANG77 1	LFENSLGCYFFPNPPHCY
481	ANG77 3	FPPWFQDCFFYPNPPVCY
482	ANG77 4	HALECYFYPNPLHCYTQP
483	ANG77 5	DPVDCYFYPNPAHCYSTV
484	ANG77 6	IVVYSADCFFYPNPRHCY
485	ANG77 7	RMFDCYFYPNPPLCYNHI
486	ANG78 1	LWYTTVNCYFCPNPLHCY
487	ANG78 2	DYLSMLECYFYPNPSHCY
488	ANG78	FMTSGVECYFYPNPPHCY
489	ANG78 4	LFLNPYDCYFYPNPPQCY
490	ANG78 5	HQMTQIECYFFPNPQHCY
491	ANG78 6	PWSPCYWYPNPRFCYEAS

492	ANG78 7	LLVDCYYYPNPTHCSKNS
493	ANG78 8	DCYFYPNPPHCYHDNEIE
494	ANG79 0	PLLPFYDCYFYPNPSHCY
495	ANG79 1	LVVDCYFYPNPPHCYDYS
496	ANG79 3	RPSMHMECYFYPNPPYCY
497	ANG79 5	GFLTSLDCYFYPNPPHCY
498	ANG79 7	EVPDCYYYPNPPHCYEAN
499	ANG79 8	RIS SMVECYF YPNPPHC Y
500	ANG79 9	PF SVITECYF YPNPPHC Y
501	ANG80 0	PS ADLLDC YFFPNPPHC S
502	ANG80 1	QQADHIDCYFYPNPPYCY
503	ANG80 2	STHDCFLYPNPPHCYWPQ
504	ANG80	VASWKYDCYFYPNPLHC Y
505	ANG80 4	VDIDCYFYPNPPNCYNKA
506	ANG80 5	LLDRFLDC YF YPNP SHC S
507	ANG80 6	ECYFYPNPAHCYTGTNKE
508	ANG80 7	LPHPHLDCYF YPNP AFC Y

- 180043040

509	ANG80 8	SYVDTTDCYFYPNPQHCY
510	ANG80 9	PPLDCYFYPNPPNCYLGQ
511	ANG81 0	WINDCYFYPNPSHCFVGD
512	ANG81 1	YGTDCYFFPNPRNCYKIN
513	ANG81 2	YSTDCYFYPNPPHCYGPH
514	ANG81 3	PF S SFFDC YF YPNPHHC Y
515	ANG81 4	YVGHMLDCYFYPNPPHCY
516	ANG81 5	SMYDCLYFPNPPHCYIQN
517	ANG81 6	FTQPMVDCYFYPNPPHCY
518	ANG81 7	FNSTLFDCFFYPNPMHCY
519	ANG82 0	RSLPIYECYFYPNPPHCY
520	ANG82 2	VSLYYSACYFYPNPPWCN
521	ANG82	SVLDCYFYPNPAHCYENV
522	ANG82 4	VSTDCYFYPNPPHCYSVL
523	ANG82 5	QGTHMLDCYFYPNPPNCY
524	ANG82 6	TPSDCFFYPNPPHCYLMN
525	ANG82 7	TWGVCYFYPNPPHCYEQL

526	ANG82 9	VEEACYFYPNPPHCYEAV
527	ANG83 2	DDSDCFFYPNPPRCYETY
528	ANG83 4	YYYSYTHCYYYPNPTHCY
529	ANG83 5	MTWFPNDCYFYPNPPYCY
530	ANG83 6	LQLECYYYPNPTHCYETR
531	ANG83 7	MGISFLDCYFFPNPQHCY
532	ANG83 8	PSPYYSDCAWYPNPPYCY
533	ANG84 0	SMS VYIDCF S YPNPPRC Y
534	ANG84 1	DCYFYPNPTHCYLKGGFV
535	ANG84 4	DHSACYAFPNPSSCYNSR
536	ANG84 5	PLNACYFYPNPPHCYFLK
537	ANG84 6	LLSVMQDCYFYPNPSHCY
538	ANG84 7	PPPS S YEC YF YPNPAHC Y
539	ANG84 8	SHTDCYYYPNPPHCYLEN
540	ANG84 9	AGHECYFYPNPPHCYSEQ
541	ANG85 0	AGMNDFDCYFFPNPPHCF
542	ANG85	GSRDCYFYPNPKYCYIQD

- 181 043040

543	ANG85 4	SDSFLRDCYF YPNPPHC Y
544	ANG85 5	AWKDCFFYPNPSFCSYSS
545	ANG85 6	PSLYELDCYFYPNPPHCY
546	ANG85 7	YLHSFEDCYFYPNPAHCY
547	ANG85 8	LTIEHQDCYFYPNPPHCY
548	ANG86 1	YVMGGDDCYFYPNPPECY
549	ANG86 2	GNIACYFYPNPPHCYNVH
550	ANG86 3	SGMECYFFPNPPHCYDLK
551	ANG86 6	LGLRHYACYL YPNPPHC Y
552	ANG86 7	ARSSQFECYF YPNPPHC Y
553	ANG86 9	YPGPFTGCYFYPNPLQCY
554	ANG87 1	NERD CYF YPNPPHC YQNG
555	ANG87 2	LDSECFF YPNPPHC YNTL
556	ANG87	PYLDCAEYPNPLYCYESE
557	ANG87 4	IGYPF SDCYF YPNPPHC Y
558	ANG87 5	WNFDCYFYPNPPLCYNME
559	ANG87 7	AAVECLFYPNPPHCYERA

560	ANG87 9	SNVDCYFYPNPPNCFVHD
561	ANG88 0	VLSFFQDCYFYPNPANCY
562	ANG88 1	SPPVFWECYFYPNPTHCY
563	ANG88 2	PNQ SNYDCYF YPNPPHC Y
564	ANG88 3	LAFDLSDCYFYPNPPHCS
565	ANG88 4	FNEECYF YPNPPHC YGEY
566	ANG88 5	LVVTAFDCYFYPNPPYCY
567	ANG88 6	SLNPSVDCYFYPNPAHCY
568	ANG88 7	ALHDCYFYPNPQHCYQA
569	ANG88 9	FSPGEVDCYFYPNPPHCK
570	ANG89 0	ADTDCYFYPNPPHCYDIT
571	ANG89 1	LSLELSECYFFPNPPHCY
572	ANG89 4	A VLEHFDCYF YPNPPHC Y
573	ANG89 5	MLWDMSGCYF YPNPPHC Y
574	ANG89 6	SKQDCYFYPNPSHCYLDQ
575	ANG89 7	YDLLLHDCYVFPNPPHCY
576	ANG89 8	ECYFYPNPPDCFYLHQRR

- 182043040

577	ANG89 9	DHVECYFYPNPLHCYKDR
578	ANG90 1	PRPLVIDCYFFPNPPHCY
579	ANG90 2	DCYFYPNPPHCYIEHKPS
580	ANG90 3	SHF SFKDC YF YPNP AHC Y
581	ANG90 4	SLRDCYFYPNPAHCRNNM
582	ANG90 6	YGNECYFFPNPPHCYHRD
583	ANG90 7	DTLDCYYFPNPPHCYSSQ
584	ANG90 9	QWNPHYHCFFYPNPPHCY
585	ANG91 1	TSLDCYFYPNPPHCYETP
586	ANG91 2	KWARGMECFFYPNPPDCY
587	ANG91 3	RLVDCYYYPNPLHCYDRS
588	ANG91 4	THKDCYFFPNPPHCYTKT
589	ANG91 5	PLKDCYFYPNPLHCYLVS
590	ANG91 6	APHILQDCYFYPNPRHCY
591	ANG91 7	LSILYPSCYFYPNPEHCQ
592	ANG91 8	ECYFYPNPPECYNVDDQA
593	ANG91 9	ECYFYPNPPHCYVLKQQI
611	ANG94 5	SPHECYFYPNPPHCYADR
612	ANG94 6	DVQIEFDCYFYPNPPYCY
613	ANG94 7	YPMNSHDCYFYPNPPQCY
614	ANG94 8	SPAHCSYCPFPPNSCFCY
615	ANG94 9	LRLDLEECYWYPNPPYCK

594	ANG92 0	ISTRNTDCYFYPNPPHCY
595	ANG92 3	FYYDCFFYPNPPNCYNSF
596	ANG92 4	F SHLEQDC YF YPNPPHC Y
597	ANG92 5	SPVDCYFYPNPPHCYDWD
598	ANG92 6	PYQLMTDCYFFPNPPHCY
599	ANG92 9	ESFQNMDCYFYPNPPYCY
600	ANG93 0	PRKSFHDCYFYPNPPHCY
601	ANG93 2	SWPNHMECYFFPNPPHCY
602	ANG93 4	KSVGNTDCYFFPNPPHCY
603	ANG93 5	TIYDCYIYPNPRHCYKLN
604	ANG93 6	ECYFYPNPPHCYHALTSK
605	ANG93 7	FYQSWVDCYFYPNPPHCS
606	ANG93 9	YALDLGGCYWFPNPPHCY
607	ANG94 0	SIFLSLDCYFFPNPSNSL
608	ANG94 2	GVYSFDQCYVFPNPPDCY
609	ANG94 3	VVLHYGDCYYYPNPPYCY
610	ANG94 4	RALDCYFYPNPQHCYQGI
	616	ANG95 1	GSALLSDCYFYPNPPHCY
617	ANG95 2	SVLALEDCYFYPNPHHCY
618	ANG95 4	PTAVLMECYFYPNPDYCY
619	ANG95 5	YGTEC YF YPNP AHC YSNE
620	ANG95 6	HWYFCPNPPNPPQCHLKW

- 183 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
629	VGF1	WCWVPGPIQCY
630	VGF2	CMWEMPWWFCQ
631	VGF3	TCTWVMPWWFCE
632	VGF4	ICLWQMPWWFCE
633	VGF6	GDWEWVWDWCF
634	VGF8	ECRWVMPWWFCE
635	VGF9	ACWKAMPWWFCT
636	VGF10	FCMVQVPWWLCK
637	VGF11	FYQWFEEQLM
638	VGF13	MCWLVPGPMICH
639	VGF14	FCMYKPLMFLCP
640	VGF15	HCWWLYTWDPCI
641	VGF16	HCYVYVPWWLCP
642	VGF17	MCWTPVPWWLCL
643	VGF18	TCWKPTPWWLCD
644	VGF19	SCWFKIPWWLCP
645	VGF20	YCQPMWWNMACW
646	VGF21	YCFWIPPEWYCV
647	VGF23	GCWEWRPHWLCV
648	VGF24	ECTWTMPWWFC
649	VGF25	TCWKPAPWWLCA
650	VGF27	TCWKPTPWWLCA
651	VGF29	KCNFNPWKAACG
652	VGF30	TCWKPAPWWLCD
653	VGF31	TSWKAAAWGLCA
654	VGF32	ACWKATPWWLCD
655	VGF34	TCWKATPWWLCA
656	VGF35	ACWKAAPWWLCD
687	VGF13 1	WCAGFPPTSAGY
688	VGF14 0	TAWEAAASWLCA
689	VGF14 6	TCGKAAAAWLAA
690	VGF15 2	TGWKPTAWGVGD
691	VGF15 6	ASWKPAPWWLCA
692	VGF16 2	TSGKATPGGACD

Таблица 11

Связывающие ФРЭС домены MRD

657	VGF36	TCWKAAPWWLCD
658	VGF37	ACWKPAPWWLCD
659	VGF38	TCWKATPWWLCD
660	VGF39	TCWKAAPWWLCA
661	VGF40	ACWKAAPWWLCA
662	VGF47	WCAGFPPNYPCY
663	VGF48	WCNGFPPNYPCS
664	VGF49	WCNGFPPNYPCY
665	VGF53	WCNGFPPNYPCA
666	VGF57	GCVKEVPWWLCI
667	VGF59	GCVKQVPWWLCV
668	VGF60	GCVTQVPWWLCI
669	VGF62	ACVKEVPWWLCI
670	VGF63	GCVKQVPWWLCI
671	VGF65	ACVAEVPWWLCI
672	VGF67	GCVKAAPWWLCV
673	VGF69	GCVKEVPWWLCV
674	VGF70	GCVKPAPWWLCI
675	VGF71	GCVTEVPWWLCI
676	VGF72	GCVAQVPWWLCI
677	VGF76	ACVKEAPWWLCI
678	VGF82	GCVAEVPWWLCI
679	VGF83	ACVKQVPWWLCI
680	VGF85	GCVKPAPWWLCV
681	VGF95	GCVAEVPWWLCT
682	VGF99	GGVKQVASWLGT
683	VGF10 0	GAVTEAAWWLAI
684	VGF10 1	GGVEAAAWWVGI
685	VGF10 4	GCVKQVPWGLCI
686	VGF10 7	VEPNCDIHVMWEWECFER L

- 184 043040

Таблица 12

Связывающие рецептор инсулиноподобно]	го фа 723 724 725 726 727 728 729 730 731 732 733 734 735 736 737 738 739 740 741 742 743 744 745 746 747 748	ктора ро IGF48 IGF49 IGF50 IGF51 IGF52 IGF53 IGF54 IGF55 IGF56 IGF57 IGF59 IGF60 IGF61 IGF64 IGF66 IGF67 IGF68 IGF69 IGF72 IGF73 IGF74 IGF75 IGF76 IGF77 IGF78 IGF79	ста-1 (pIGF1) домены MR LCLEFEELCF LCYEFEELCF LCMEFQELCF LCHEFEELCF LCYEFHELCF LCDEFQELCF WCQIQAFHCRGQAGQGG GS AGGGS SCNILQLMC S FECVLWNFVCK LCAEFPVLCF LCTEFKELCF LCQEFNELCF AMTLDEWIRMRGQAGGS WVDPAFWGDF FYGWFEEQIL FYEQLEKLVY FYEWFEEQLI FYEWFEAQIM FYDWFDMHVK SFYDMIELLIGQAGQGGGS GGGGGGSTIHFAQEEHP FYEWFEAQVM FYDWFAEQVI FYEWFTEQVN FYEWFHEQVI QFYEWFEAQT FYEWFQLQMD VHWEGYQWVY FYETLFELAY	D
	SE Q ID: 698 699 700 701 702 703 704 705 706 707 708 709 710 711 712 713 714 715 716 717 718	Иденти фикаци онный номер IGF3 IGF 10 IGF21 IGF22 IGF23 IGF24 IGF25 IGF27 IGF28 IGF29 IGF30 IGF31 IGF32 IGF33 IGF34 IGF35 IGF36 IGF38 IGF39 IGF40 IGF42	Пептидная последовательность DSGFYMGLHK MDQFHWALLG LCQEFHELCF LCDEFVELCF LCEEFHELCF LCDEFKELCF LCAEFPELCF ICHIFWQTCNGQAGQGGG SGGSKCDILEMMCN LCMEFPELCF LCMEFKELCF LCEEFPVLCF LCQEFIELCF LCLEFHELCF LCQEFSELCF LCEEFAELCF LCFEFVELCF LCSEFQVLCF LCLEFVELCF LCWEFPVLCF LCEEFIELCF WCEISTTFCNGQAGQGGG GGGSQCQLLHMFCH
749	IGF82	FYEWFEAALI
	719	IGF43	LCMEFEQLCF		750	IGF83	FYDWFDMQVQ
720	IGF44	LCLEFRELCF	751	IGF84	FYEWFEPQVT
721	IGF45	LCQEFAELCF	752	IGF85	EFYYWFFDQY
722	IGF46	LCQEFKELCF	753	IGF91	FYEWFDMQVK

- 185 043040

754	IGF92	ADFYQWFQNQV
755	IGF93	SFYAWFDEQV
756	IGF95	EVWEGYDWLY
757	IGF 196	SHPLCTEFIELCFGFE
758	IGF253	VPFLCLEFSELCFTDP
759	IGF254	ADLLCAEFTELCFDVI
760	IGF255	AHPLCLEF SELCFEA V
761	IGF256	PHPLCQEFEELCFETV
762	IGF257	ASQLCGEFPELCFDKV
763	IGF258	IPLLCFEFVELCFDLT
764	IGF259	DDALCKEFPELCFQNV
765	IGF260	IPYLCLEFPVLCFQDT
766	IGF261	PHILCLEFAELCFDHL
767	IGF263	VPALCLEFKELCFHDR
768	IGF264	TPALCLEFWELCFDEA
769	IGF265	VPPLCMEFTELCFHDP
770	IGF266	AHPLCVEFSELCFNED
771	IGF267	IPMLCWEFTELCFDLN
772	IGF268	VPQLCLEFQELCFGEH
773	IGF269	VPSLCLEFPELCFNEA
774	IGF270	PHPLCLEFIELCFGTH
775	IGF271	IPFLCLEFEELCFHLD
776	IGF272	EHPLCLEFPELCFSHP
777	IGF273	PHYLCLEF SELCFDER
778	IGF274	TPFLCLEFHELCFGEH
779	IGF275	PQLLCLEFAELCFWDI
780	IGF276	PHALCREFHELCFEKS
781	IGF277	RLPLCVEFSELCFDLR
782	IGF278	VPALCWEFPELCFHYQ
783	IGF279	TPSLCLEFSELCFADG
784	IGF280	VHWLCAEFEELCFDQT
785	IGF281	LHFLCLEFQELCFDSN
786	IGF282	VPPLCLEFPELCFTDS
787	IGF283	DHWLCIEFSELCFGKS

788	IGF284	EHPLCEEFKELCFGTN
789	IGF285	DWRLCQEFTELCFMDG
790	IGF286	YLSLCAEFTELCFHTE
791	IGF287	PPLLCFEFPELCFGYE
792	IGF288	DHKLCNEFPELCFHDV
793	IGF289	AHALCLEFLELCFEER
794	IGF290	IPFLCYEFQELCFGTL
795	IGF291	AELLCREFTELCFLRD
796	IGF292	APGLCIEFRELCFDEK
797	IGF293	YYALCAEFQELCFDEH
798	IGF294	VPLLCFEFPELCFGYQ
799	IGF295	VPSLCIEFSELCFDSP
800	IGF296	DYALCLEFRELCFGMN
801	IGF297	AHRLCQEFVELCFGET
802	IGF298	PHFLCMEFP VLCFND S
803	IGF299	IPQLCLEF SELCFGMT
804	IGF300	RTDLCMEFYELCFHSD
805	IGF301	KPPLCEEFHELCFDLT
806	IGF303	PHKLCLEFRELCFDEL
807	IGF304	LHFLCVEFVELCFDEA
808	IGF305	VPRLCYEFPELCFHKQ
809	IGF306	PHPLCLEFEELCFTER
810	IGF307	AARLCSEFPELCFHAS
811	IGF308	RHSLCIEFPELCFDEY
812	IGF309	AGRLCAEFHELCFGTN
813	IGF310	ASRLCMEFPELCFDRK
814	IGF311	HPALCVEFVELCFGHE
815	IGF312	IPPLCLEFQELCFGWD
816	IGF313	DDALCAEFNELCFEVT
817	IGF314	APPLCIEFEELCFGFL
818	IGF315	SHPLCLEFHELCFTDA
819	IGF316	IHPLCLEFTELCFHEV
820	IGF317	QEPLCVEFRELCFNED
821	IGF318	IPDLCREFEELCFGSK

- 186 043040

822	IGF319	IHPLCKEFPELCFDVD
823	IGF320	GPLLCAEFVELCFGDD
824	IGF321	YPPLCLEFPELCFWNH
825	IGF322	SHNLCLEFVELCFGDV
826	IGF323	PPLLCLEFHELCFHIE
827	IGF324	AHVLCLEFHELCFDMG
828	IGF325	RPLLCYEFSELCFDIT
829	IGF326	HPRLCLEFSELCFDEM
830	IGF327	IPALCLEFSELCFSTS
831	IGF328	APSLCLEFIELCFDNM
832	IGF329	PHPLCREFPVLCFDDT
833	IGF330	VHPLCLEFAELCFVNY
834	IGF331	VPSLCMEFPELCFTTE
835	IGF332	VPLLCLEFAELCFHVE
836	IGF334	AMRLCNEFHELCFGVV
837	IGF335	EERLCKEFPELCFMMT
838	IGF336	TPSLCREFTELCFDSD
839	IGF337	VHPLCMEFTELCFHLR
840	IGF338	AGALCKEFPILCFTME
841	IGF339	EHPLCREFSELCFGMG
842	IGF340	S S SLCLEF SELCFHDD
843	IGF341	ALRLCNEFPELCFGGT
844	IGF343	IPLLCLEFPVLCFENE
845	IGF344	APLLCLEFPELCFGWD
846	IGF345	PALLCQEFAELCFDMP
847	IGF346	YLHLCREFTELCFDEG
848	IGF347	AHWLCLEFKELCFGND
849	IGF348	VPSLCFEFEELCFDWS
850	IGF349	VPSLCLEFQELCFTTE
851	IGF350	PHPLCLEFPELCFGAE
852	IGF351	D SRLC AEFPELCFED V
853	IGF352	AATLCLEFSELCFDMS
854	IGF353	IPHLCKEFPELCFEQR
855	IGF354	SYLLCREFSELCFDKT

856	IGF355	VPYLCLEFAELCFQVD
857	IGF356	VPPLC VEF SELCFD AP
858	IGF357	MELLCFEFSELCFGSH
859	IGF358	TVALCKEFPELCFDIV
860	IGF359	DPYLCLEFEELCFRFV
861	IGF360	TPALCLEFAELCFEDS
862	IGF361	RHPLCVEFPELCFVDY
863	IGF362	VHPLCIEFPALCFDTR
864	IGF363	YLALCYEFRELCFGDQ
865	IGF364	APLLCLEFPELCFEDI
866	IGF365	VHYLCLEFQELCFDEL
867	IGF366	RP SLCLEFRELCFDTL
868	IGF367	APSLCWEFKELCFD SE
869	IGF369	AHALCLEF SELCFD VT
870	IGF370	TQYLCIEFAELCFDTI
871	IGF371	AGALCREFAELCFHNH
872	IGF372	TPPLCFEFPELCFHLS
873	IGF373	SERLCLEFAELCFGHG
874	IGF374	AHWLCLEFPELCFDKL
875	IGF375	DLHLCREF SELCF S SP
876	IGF376	TPSLCLEFPELCFHGT
877	IGF377	APSLCLEFRELCFEDY
878	IGF378	VPSLCLEFADLCFHDI
879	IGF379	MPALCLEFRELCFEDP
880	IGF380	YMRLCYEFSELCFHAS
881	IGF381	APSLCTEFRELCFDII
882	IGF382	VPPLCLEFAELCFYAD
883	IGF384	TPSLCVEFRELCFDDL
884	IGF385	QEALCIEFHELCFEEY
885	IGF386	ADRLCREF SELCFD VV
886	IGF387	AHPLCLEFPVLCFDDE
887	IGF388	RPVLCIEFPELCFNET
888	IGF389	DVKLCQEFPELCFESY
889	IGF390	VPALCFEFAELCFHIE

- 187 043040

890	IGF391	AYALCHEFQELCFETT		924	IGF429	VHQLCMEFEELCFGGA
891	IGF392	AALLCHEFTELCFLEA	925	IGF430	PHALCLEFHELCFD SN
892	IGF393	QHLLCIEFNELCFNDV	926	IGF431	YRALCFEFAELCFDEN
893	IGF394	IPPLCLEFWELCFDAP	927	IGF485	EFYQGLERLV
894	IGF395	AHRLCMEFAELCFGNA	928	IGF498	YFYWFQEMVM
895	IGF396	RPSLCQEFVELCFEEA	929	IGF500	FYQWFEKQLM
896	IGF397	PHRLCIEFPELCFDVV	930	IGF503	QEFYNWFALQI
897	IGF398	AQALCLEFMELCFDVR	931	IGF504	ECDFYCGIYTL
898	IGF399	ADALCAEFKELCFNIK	932	IGF507	LCREFQELCF
899	IGF400	GHKLCTEFIELCFDVN	933	IGF511	GFYEWFEMQL
900	IGF401	DEQLCLEFVELCFEQT	934	IGF512	FYEWFQAQLT
901	IGF402	V YALCREF SELCF YGN	935	IGF514	GFYEWFEMQM
902	IGF404	AGALCAEFPELCFGGT	936	IGF515	YLSPDDMCYEFPELCF
903	IGF405	PPSLCLEFPELCFHRS	937	IGF516	KTSQDMLCWEFEELCF
904	IGF406	IPALCIEFSELCFWPS	938	IGF517	QTTPHILCLEFPELCF
905	IGF407	VQPLCLEFSELCFDSA	939	IGF518	LTSWELLCFEFEELCF
906	IGF408	EHILCQEFSELCFNRD	940	IGF519	LVSPEDLCQEFVELCF
907	IGF409	VPPLCLEFTELCFIID	941	IGF520	WYVDPPLCFEFPELCF
908	IGF410	IPPLCLEFWELCFDER	942	IGF521	LCAEFAELCFEDTVRY
909	IGF411	PHPLCREFPDLCFDHS	943	IGF522	PGLEIPQLCKEFPELCFTM DDDF
910	IGF412	PHWLCEEFEELCFEAI
911	IGF413	DRLLC SEF YELCFDDN	944	IGF523	LCAEFRELCFHLPAQA
912	IGF414	PAALCLEFSELCFTQQ	945	IGF524	MRVESLQLCKEFPELCFFS HGWT
913	IGF416	YSSLCLEFSELCFDQM
914	IGF417	RPALCGEFKELCFDGA	946	IGF526	RLTPQDLCFEF SELCF
915	IGF419	YNALCNEFIELCFHVN	947	IGF527	LSSYDVLCQEFSELCF
916	IGF420	PHWLCLEFAELCFGSG	948	IGF532	GPMEVHDLCKEF SELCF
917	IGF421	APPLCLEFRELCFGEQ	949	IGF533	LRPESIALCKEFPELCFEG WKSA
918	IGF423	IPQLCLEFTDLCFEDT
919	IGF424	VPHLCIEFAELCFEGT	950	IGF534	QSLDIPGLCKEFPELCFEM TGMR
920	IGF425	RMDLCREFTELCFTDS
921	IGF426	AHQLCIEFAELCFNDG	951	IGF535	LCSEFIELCFDQVPLR
922	IGF427	PPLLCLEFPVLCFDSP	952	IGF536	TSSALKLCQEFPELCF
923	IGF428	PHALCLEF SELCFWSL	953	IGF537	LSSYMLLCMEF SELCF

- 188 043040

954	IGF538	YVIPHPLCLEFSELCF
955	IGF539	DPSVPALCHEFPELCF
956	IGF540	QGWTHPLCLEFQELCF
957	IGF541	FALVPSLCLEFNELCF
958	IGF542	MS SNSIKLCKEFPELCFHIH GKD
959	IGF543	LCLEFRELCFDLSEPH
960	IGF544	MRLESLELCKEFPELCF ST DLTL
961	IGF545	TMLEIPQLCKEFPELCFHD TTVW
962	IGF546	LCQEFKELCFEAEFQA
963	IGF547	KVTPFMLCQEFPELCF
964	IGF548	APGEHWLCLEFQELCF
965	IGF549	VFQMHPLCLEFPELCF
966	IGF551	YEPPHSLCLEFVELCF
967	IGF552	PPIMHPLCLEFAELCF
968	IGF553	LCAEFIELCFDLEPGI
969	IGF554	LSPEFPDLCLYFGLDC
970	IGF555	GSLSVPKLCKEFPELCFDK KMSG
971	IGF556	QRFEPDDLCKEFPELCFNL NMNV
972	IGF557	LCLEFAELCFGWDDNS
973	IGF559	RIYPSELCLEFAELCF
974	IGF560	QSYEHWLCQEFHELCF
975	IGF561	S SPPHWLCLEFEELCF
976	IGF562	RMSEMDLCAEFFELCF
977	IGF563	LCAEFHELCFDISNQE
978	IGF564	LCFEFAELCFDTEFYN
979	IGF565	PRLCKEFPELCFEVPVIGN EEHYSL
980	IGF566	QGSKVLELCKEFPELCFDR ANRL

981	IGF567	TLSPHPLCVEFPELCF
982	IGF568	SEWYHPLCVEFSELCF
983	IGF569	SAGEHWLCVEFQELCF
984	IGF570	LSPAELLCLDFPELCF
985	IGF571	LTPAERLCDEFPVLCF
986	IGF572	LCKEFPELCFDERDKK
987	IGF573	LTSADLLCSEFRELCF
988	IGF574	RITPNDLCQEFQELCF
989	IGF575	FAPPHPLCIEFQELCF
990	IGF577	VGKEVFRLCKEFPELCFYP AISQ
991	IGF578	LRFESPQLCKEFPELCFFES NGW
992	IGF579	YRAERPELCKEFPELCFFE NDWW
993	IGF580	LCREFIELCFDIETEV
994	IGF581	RTVVPPLCLEFPELCF
995	IGF582	LYTPQSMCAEFTELCF
996	IGF583	GLVQHNLCLEFVELCF
997	IGF584	IDRPPDLCKEFPELCF
998	IGF585	VFLDAPELCKEFSELCFGY SDSL
999	IGF586	RFSESPPLCKEFPELCFWSP PFP
100 0	IGF589	RDFTYDTDWEGYSWLY
100 1	IGF592	IPGLCLEFPELCFHQW
100 2	IGF596	EPWEGYSWLY
100 3	IGF600	PLWEGYSWLYSQEAGN
100 4	IGF602	FASGEYPPWEGYRWLY

- 189043040

100 5	IGF603	WGDDHWEGYDWLYAQT
100 6	IGF604	RDEAEWEGYNWLYSQM
100 7	IGF605	DTWEGYLWLYAQTADA
100 8	IGF607	YTRSLGDPWEGYSWLY
100 9	IGF611	SAWEGYAWFDLQVESG
101 0	IGF612	YSIQDHGAWPGYDWLY
101 1	IGF613	QWGHKSEQWEGYSWLY
101 2	IGF614	QQPNTWEGYSWLYSQV
101 3	IGF616	DLWEGYLWFDSQVLGD
101 4	IGF617	IPLLCLEFPVLCFENE
101 5	IGF618	SYDYSQGEWEGYQWLY
101 6	IGF619	HDSALMAEWEGYNWLY
101 7	IGF623	QPWEGYKWLYEAA
101 8	IGF625	PAASAWEGYKWLYDQV
101 9	IGF630	LSTDWSGDWEGYAWLY
102 0	IGF633	LLASEWEGYEWLYGQI
102 1	IGF 127 0	ALPECQDLMFYECLFTL

102 2	IGF 127 1	FYNTCQFVGMEFYQCLD WL
102	IGF 127	RDPVCETKDVFYQMLCTV
3	2	AF
102	IGF 127	RSLVCSEEEPFYLALCRLT
4	3	H
102 5	IGF 127 5	SVLGCDDVGFYQCLEFL
102	IGF 127	LEHLCQTRDGFYELMCTL
6	6	AL
102	IGF 127	AARWCDMQQHSFYECLQ
7	7	VL
102	IGF 127	NALGCQEEWETLDQCLM
8	8	RL
102	IGF 127	AVPKCPGWDFYTALECLS
9	9	RT
103 0	IGF 128 0	EPRLCHNYPDFYQCMSFL
103	IGF 128	ASQTCIGMDFYSGLECLL
1	1	GW
103	IGF 128	WVEECHNLHWDLKHCLM
2	2	HQ
103	IGF 128	SVP SCID YYGDWFLCL A A
3	3	P
103 4	IGF 128 4	NNTLCRGVPTFEECVFIL
103	IGF 128	SNGSCHIVDFYGWFQCQT
5	5	SA
103	IGF 128	LTEPCSQHSMFYSMLCEL
6	6	AF
103	IGF 128	RDRVCHNKTFFHCLF SIFP
7	7	DG
103 8	IGF 129 0	YGLGCSQMDFYQCLDML

- 190043040

103 9	IGF 129 1	DVSHCHIMFWDFQQCLEY L
104	IGF 129	NPATCYQKSYQFEQCLMY
0	2	L
104 1	IGF 132 8	VDVLCHHVDFYECMDRL
104	IGF 132	WLSQCEAKEIDFYMCLAG
2	9	QAG
104 3	IGF133 0	GPKECIGVPNFDLCMAML
104 4	IGF133 1	LEDWCLHLDFYQCLEAV
104 5	IGF133 2	TMPTCEKLNFYECMNLL
104 6	IGF133 3	SLSICTYADFYECMDLL
104	IGF133	YIRECHELQNFTEGIHCLV
7	4	TR
104 8	IGF133 5	TFKDCAHIPGIDFCLWRL
104	IGF133	SWDPCFESDEFHMKLCVL
9	6	MD
105 0	IGF133 7	LLSECYDKDFYECLGLL
105 1	IGF133 8	YQDMCEDMSFYECLEVL
105	IGF133	AAANCHWPDEALQELCR
2	9	YFA
105 3	IGF 134 0	TGICENPDEFYRQLCLLVE
105	IGF 134	WEHHCRRSHLDF YGCLS S
4	1	I
105	IGF 134	AAGSPLDDCYGYTGFYQG
5	7	MCLLEL

105 6	IGF 134 8	PSYHCSNMDYTFYECLMY L
105	IGF 134	EQSYCSQNDMFYDWFCA
7	9	LVS
105	IGF135	GEEVCWVQEPFYSTLCILA
8	4	F
105	IGF135	NPFWCSWGHQFDNECDS
9	5	MV
106	IGF135	WASTCQQTFYSMNRCLSQ
0	6	W
106	IGF136	LMELCAMDEDYYLWFCR
1	0	AVE
106	IGF136	SAVQCDLRLMCWQLRGP
2	4	SRP
106 3	IGF136 5	PSEICITEGLGFYQCLLKL
106	IGF136	WVDKCHQEMMEFHECLK
4	6	YV
106	IGF137	ARCECWESQFYWDLCSLA
5	0	L
106	IGF137	CTATCLEDQGFYWNMCK
6	1	LVF
106	IGF137	AYDCRKHHMNFYECLTY
7	3	L
106	IGF137	VGQMCSMGLELDRMKCN
8	6	PCY
106 9	IGF137 8	LVDICQRQELDFYSCLRSV
107	IGF137	TGSDCYFYKHLYSLCVEV
0	9	E
107	IGF138	ESGDCPWLGHVSFEECLM
1	0	WL
107 2	IGF138	LHSVCFEAPEWQQCLMQR

- 191 043040

107 3	IGF138 6	PGVSAHALCYEFPVLCFY DVG
107	IGF138	AGVSADALCYEFPVLCFY
4	7	DVG
107	IGF139	DGESYFYVCLEHLLNVPG
5	0	YHCVMTNG
107	IGF139	SYGTRWNPSFESNQFHMK
6	2	LCVLMDGK
107	IGF139	PGVSADALCYEFPVLCFY
7	5	DV
107 8	IGF139 6	HALCYEFPVLCFYDV
107	IGF 140	TSRRCEEYQDPLKEVCRY
9	1	FL
108 0	IGF 140 5	AHALCYEFPVLCFYDVG
108 1	IGF 140 6	AHALCYEFPVLCFYDV
108	IGF 140	DFYICLEHLLNVPGYHCV
2	8	MTNG
108 3	IGF 140 9	DALCYEFPVLCFYDV
108	IGF141	NLMECHALDFNQGMQCL
4	1	QAY
108	IGF141	NLMECHALDFYQGMQCL
5	3	QPYRHP
108	IGF141	DLMECHGLDFYKGMECL
6	4	QAYG
108 7	IGF 142 1	AHALCYEFPVLCFYDV
108	IGF 142	NLMECHALDFNQGMQCV
8	2	QAY
108 9	IGF 143 0	AHALCYEFPVLCFYDVG

109 0	IGF 143 2	AYVCSNLNHCPALDFNQG MQCLQAYG
109 1	IGF 143 7	VTEARTNDCNTTTFYHWF DCQLGTG
109 2	IGF 144	NLMHCHGLDFYQGMQCL QAY
109 3	IGF 144 5	EAECRYPDTDLMWLCTYF SG
109 4	IGF 144 6	DALCYEFPVLCFYDVG
109 5	IGF 189 5	MAVGCTWVE SCHWA
109 6	IGF 189 6	ALPECQDLMFYECLFT
109 7	IGF 189 7	FYNTCQFVGMEFYQCLD W
109 8	IGF 189 9	SVLGCDDVGFYQCLEF
109 9	IGF 190 0	AARWCDMQQHSFYECLQ V
110 0	IGF 190 4	EPRLCHNYPDFYQCMSF
110 1	IGF 190 5	ASQTCIGMDFYSGLECLL G
110 2	IGF 190 6	SNGSCHIVDFYGWFQCQT S
110	IGF 198 7	ALAECIFEPTFEDCMWIL
110 4	IGF 198 8	VDMQCQVHGMTFYECLM RL
110 5	IGF 198 9	TLPECLYAPTFEICVEYL
110 6	IGF 199 0	WEERCVDSDFYTQLCML AW

- 192043040

110 7	IGF 199 1	GTVLCPEDMDFYECMTFI
110 8	IGF 199 2	REELCSVSPFDYHCRLFS
110 9	IGF 199	LSYTCQHFDLPWELCLSL H
111 0	IGF 199 4	VISECEGLTFYQCMASL
111 1	IGF 199 5	WEEWCVDSDFYTQLCML AW
111 2	IGF 199 6	REPLCIQDDPIMYLHCYFS V
111 3	IGF 199 7	MSYTCEDFDLPWELCLSL H
111 4	IGF 199 8	DDLDCKCLTFYECMAAL
111 5	IGF 199 9	WSNVCQARNMAFQECLE YL
111 6	IGF200 0	EDLGCLYLTFNQCMMWL
111 7	IGF200 1	FAHECSFHKLNFYQCLSFE
111 8	IGF200 2	LMDFC YVYPNICGC SN
111 9	IGF200 4	SRFVCQHDWGFYECLSML
112 0	IGF200 5	ASHICHLIPTIEQCLFSL
112 1	IGF200 6	VISECEGLTFYECMAAL
112 2	IGF200 9	VDMLCQVHGMTFYECLM LL
112 3	IGF201 0	WEEWCVDSDFYTQLCLL AW
114 1	IGF203 1	PREACHDYDVVLHQLCM YFV
114 2	IGF203	EDLGCVCLTFYECMIAL
114 3	IGF203 4	IPGLCLE FPELCFHQW
114 4	IGF203 5	LCWEGYKWFYDQIKPD
114 5	IGF203 6	GFHHAYY KYRGQAGQGS ATGGSSRITP SDLCKEFPEL CF

112 4	IGF201 1	WDRWCVTEELPEQLCFLD G
112 5	IGF201 2	MSYTCEDFDLPCELCLSLH
112 6	IGF201	GLDSCQQAYFYQFFCEVF R
112 7	IGF201 4	VDMQCQVHGMTFYQCLM RL
112 8	IGF201 5	EDLGCMYLTFYECMIWL
112 9	IGF201 6	VSALCEDLEFYECILAL
113 0	IGF201 7	DVRECEGLTFYECMAAL
113 1	IGF201 9	TAWCHAAGLTFTQCLLW L
113 2	IGF202 0	CEEWCVDSDFYTQLCML AW
113 3	IGF202 1	GISECEGLTFYECMAAL
113 4	IGF202 2	EYKVCTSNDTFHWGICAL LK
113 5	IGF202	EDLGCMYLTFDECMMWL
113 6	IGF202 5	WKEWCVDSDFYTQLCML AW
113 7	IGF202 6	FGQLCDQQVETMIECFER L
113 8	IGF202 7	DLFDCQGLTFYQCLAAL
113 9	IGF202 9	LQQICDPEHVTFYQCMTL L
114 0	IGF203 0	QSLTCNDFTDWQSLCRC
114 6	IGF203 8	RCLANSY HCSGQAGQGS ATGGSSRITP SDLCKEFPEL CF
114 7	IGF204 0	GSYCAPDWHN CFGQAGQGSR ITPSDLCKEF PELCF
114 8	IGF204 1	IPLLCLE FPVLCFENE
114 9	IGF204 2	SLEHLCQTRDGFYELMCT LAL
115 0	IGF204 3	SKDPVCKTKHQFYQMLCT LAF

-193043040

Таблица 13

Связывающие ИЛ-6 домены MRD

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
115 8	ILB59	QRMEKFMHGS
115 9	ILB60	MLDWVGRRPF
116 0	ILB65	YFWHSLKTMM
116 1	ILB69	DEIPLWEFQF
116 2	ILB71	FQESWSTWVEGQAG
116 3	ILB73	VWTAFIQMNS
116 4	ILB75	ECTHPVFVRPCWGQAG
116 5	ILB76	MWMYGWWWAG
116 6	ILB77	FCIYYHNHMIWGQACQA GRCGSYCWWQDYAYKV GQAG
116 7	ILB82	ICVASICGLVC
116 8	ILB84	RWHYWHQHWWGQAG
116 9	ILB87	VCKWKQEYCKGQAG
117 0	ILB88	WYHWMKEHMWGQAG

117 1	ILB89	HHHKMWPQNKSADSHAY ТММ
117 2	ILB91	WPSWTYWYHF
117 3	ILB92	PWTYNWPWFM
117 4	ILB94	IWHVFYMVQAGQAG
117 5	ILB96	RYMHMVWQHI
117 6	ILB98	PMTMWWFFWKGQAG
117 7	ILB99	HSFVYMHWFL
117 8	ILB100	WPMITWLGWYGQAG
117 9	ILB101	YMFHWPLFWLGQAG
118 0	ILB102	MQGWLWAKWW
118 1	ILB104	IYAWWKWHWFGQAG
118 2	ILB105	TMQPHHIYGYGQAG
118 3	ILB106	SLFMPQHNVHGQAG
118 4	ILB107	YWPSLEWDWS
118 5	ILB114	GCWWVATECWGQAG
118 6	ILB122	GCTWLIDICTGQAG
118	ILB128	HQLQPYIQDL

- 194 043040

118 8	ILB130	WCLAGHVYCQGQAG
118 9	ILB135	GVLKSGFRSLRCMARP
119 0	ILB139	PCPGFPPPMLCMGQAG
119 1	ILB140	PCMRDWWMCGGQAG
119 2	ILB142	KCTHLPFQRNCSGQAG
119 3	ILB143	FCHHWRPVCLGQAG
119 4	ILB146	ACMLKTHRCKGPGR
119 5	ILB148	RCSIWKVYAMCM
119 6	ILB151	ECLWTSLECEGQAG
119 7	ILB158	VCIPMATMCIGQAG
119 8	ILB226	SVSWCFWDPLVMQCKDH T
119 9	ILB228	VHFNCAWDPLMMRCNYD L
120 0	ILB229	RMSTCLWDPLLMNCKSL W
120 1	ILB230	TSEPCFWDPLLMTCDYGS
120 2	ILB231	QNVNCLWDPLRMNCVEY К
120	ILB232	SYIGYTYCPWDPLTMRCV
120 4	ILB233	LRHFVQYCPWDPLLMACI

120 5	ILB234	FTIGGPICGWDPLLMRCV
120 6	ILB236	LLCSENWCRWDPLMMSC R
120 7	ILB237	FSQMCGWDPLLMMCRSV N
120 8	ILB238	VGSDCMWDPLMMNCRYS Y
120 9	ILB239	LSLLCHWDPLIMRCSYDS
121 0	ILB240	YIPPCHWDPLLMDCAQIQ
121 1	ILB241	MMMECHWDPLLMRCQN PK
121 2	ILB242	LPSSCYWDPLLMECSHRN
121 3	ILB243	LVPPLFACFWDPLLMNCS
121 4	ILB244	WSYFNRSCAWDPLLMKC A
121 5	ILB245	SSFTVVSCMWDPLLMSCM
121 6	ILB246	LLTKYRTCHWDPLLMLCR
121 7	ILB247	MVFWDEFCSWDPLLMAC R
121 8	ILB248	NQLSSIMCHWDPLLMTCQ
121 9	ILB249	TFTSCSWDPLLMDCTDFV
122 0	ILB250	MVFYCYWDPLLMLCHDQ T
122 1	ILB252	QVSLCFWDPLMMTCSVPF

-195043040

122 2	ILB253	ISMPCSWDPLLMNCAKWP
122 3	ILB254	FEAWCVWDPLLMNCVTY T
122 4	ILB255	NRYERFMCFWDPLLMMC S
122 5	ILB256	VIMNQFFCFWDPLLMRCM
122 6	ILB257	FSSAYSGCYWDPLLMECI
122 7	ILB258	WS SGLYGCYWDPLLMLC К
122 8	ILB259	RSSADWSCLWDPLLMQC M
122 9	ILB260	ITSLERSCMWDPLLMLCS
123 0	ILB261	MHGYCTWDPLLMRCSNY I
123 1	ILB262	STVGCFWDPLLMDCRSM V
123 2	ILB263	WLSTCLWDPLLMQCIESE
123 3	ILB264	SGVSCFWDPLRMICYILP
123 4	ILB265	YLS SCLWDPLLMRCTKLM
123 5	ILB266	APQQCNWDPLLMNCVKY V
123 6	ILB267	SYVTFLSCHWDPLRMQCI
123 7	ILB268	FSSVTSACAWDPLIMRCI
123 8	ILB269	AL ALVAS VTGTRYQCRV

123 9	ILB270	TKNVTYECMWDPLLMVC T
124 0	ILB271	PFYEYTCCPWDPLLMNCL
124 1	ILB272	KDYFHQYCIWDPLTMNC A
124 2	ILB273	HYTNCVWDPLLMRCYEF A
124 3	ILB274	AVGWCPWDPLLMNCMG RN
124 4	ILB275	VASVCLWDPLLMQCWSH Y
124 5	ILB276	DGMICLWDPIRMDCYYTE
124 6	ILB277	DFTFCAWDPLLMACNDQF
124 7	ILB278	DWEECVWDPLLMMCGIS Y
124 8	ILB279	QRNYSEFCHWDPLLMLCQ
124 9	ILB280	ALVNRVECSWDPLLMKCS
125 0	ILB281	NLDVTPYCYWDPLRMVC Y
125 1	ILB282	PRFLIYFCNWDPLLMMCK
125 2	ILB283	YYPITLDCHWDPLLMRCL
125 3	ILB284	YIEINHPCHWDPLLMDCT
125 4	ILB285	LVD VC SWDPLLMNCRL A N
125 5	ILB286	FDTFCFWDPLLMDCAAPT

- 196043040

125 6	ILB287	QSNDCAWDPLLMQCLNS L
125 7	ILB288	MTSHCLWDPLLMVCVNH E
125 8	ILB289	HFTFCAWDPLLMQCGIDS
125 9	ILB290	KSTALITCIWDPLLMQCR
126 0	ILB291	YTNNMETCAWDPLLMMC Y
126 1	ILB292	FSGKQMMCAWDPLMMQ CA
126 2	ILB293	LHLGEWDCYWDPLLMIC R
126 3	ILB294	WLFNGVDCLWDPLLMDC I
126 4	ILB295	FHESLLPCFWDPLLMTCQ
126 5	ILB296	LYMICTWDPLLMDCREDR
126 6	ILB297	LNLLCAWDPLLMSCIETL
126 7	ILB298	WEHGCMWDPLLMQCINR S
126 8	ILB299	GSTCCVWDPLLMKCMSP V
126 9	ILB300	GLYNCTWDPLLMRCSESI
127 0	ILB302	DNWSIS SCYWDPLLMNCP
127 1	ILB303	WFLFPWTCPWDPLLMECI
127 2	ILB304	SVQYETPCYWDPLRMQC Q

127 3	ILB305	LDFSFFDCSWDPLLMRCS
127 4	ILB306	FRMKKVDCCWDPLLMNC R
127 5	ILB307	NAPVWVECMWDPLLMSC V
127 6	ILB308	GYAWCFWDPLLMKCTW QV
127 7	ILB309	DDFLCSWDPLLMDCMVY P
127 8	ILB310	FEDSCAWDPLLMACSNPI
127 9	ILB311	LAGSVSGTLLQQTVQRT
128 0	ILB312	LVSFCAWDPLLMNCMWP M
128 1	ILB313	LYGECAWDPLLMRCQPY Y
128 2	ILB314	GSKRFGICFWDPLLMDCA
128	ILB315	YVAVGPSCLWDPLLMMC A
128 4	ILB316	GFGSSWFCSWDPLLMQCQ
128 5	ILB317	SISRAFSCVWDPLLMNCS
128 6	ILB319	MTQSLSFCHWDPLLMYC V
128 7	ILB320	LVPYSWYCVWDPLLMDC V
128 8	ILB321	SDNLYFDCHWDPLLMMC R
128 9	ILB323	LFTMCHWDPLLMDCATV P

- 197043040

129 0	ILB324	FCSWDPMLMDCSTITFDM
129 1	ILB329	TQMYCWWDPLLMNCTE MS
129 2	ILB330	LTGYCYWDPLLMNCLEQ G
129 3	ILB331	NHPMCWWDPLMMDCMY FE
129 4	ILB332	PDTLCIWDPLLMQCRWMP
129 5	ILB333	VNVSFWGCVWDPLLMVC S
129 6	ILB334	К AVLSNYC YWDPLLMIC S
129 7	ILB335	LGRLVPYCRWDPLSMVCL
129 8	ILB337	RWKIDVICKVEILQRRCT
129 9	ILB339	SHIACGWDPLMMMCTQE M
130 0	ILB340	ICWWDPLLMDCISTVEPY
130 1	ILB341	MFLSVVDCFWDPLLMEC V
130 2	ILB342	HC YWDPLLMTC YD SGPW V
130 3	ILB343	IFE YC VWDPLLLRC SENS
130 4	ILB344	FVDDCVWDPLMMDCHRY S
130 5	ILB347	KLALLDDCIWDPLLMSCR
130 6	ILB348	WTNWCGWVLPTMLCMY WI

130 7	ILB349	DWSTLYFCSWDPLLMLCS
130 8	ILB350	GQNHCFWDPLMMICLNG H
130 9	ILB351	TLLTCVWDPLLMQCRDLE
131 0	ILB352	YVSPCVWDPLLMLCNES W
131 1	ILB353	LCFWDPLYMECSTHLYID
131 2	ILB357	LLAWCFWDPLLMDCVWD S
131 3	ILB358	YHYLSVNCHWDPLLMEC T
131 4	ILB359	FHHFCFWDPLLMGCMNY N
131 5	ILB360	FCVWDPLLMLCQWLEDSS
131 6	ILB361	FNTQSTDCWWDPLLMLC A
131 7	ILB362	VQLTCFWDPLMMWCSEQ S
131 8	ILB365	LRAICIWDPLMMLCGTMG
131 9	ILB367	ISFPHFICPWDPLLMQCS
132 0	ILB368	RSFVCNWDPLMMTCTSDL
132 1	ILB369	PLWSCFWDPLLMDCQWT L
132 2	ILB370	SHS SNMGC YWDPLMMMC H
132	ILB371	RVYECYWDPLIMDCTWD L

-198043040

132 4	ILB377	FSVNYTPCVWDPLLMRCS
132 5	ILB378	LVALPNSCFWDPLLMTCR
132 6	ILB379	FWVGCPWDPLLMKCTSY N
132 7	ILB380	KLALMS SCLWDPLLMDC M
132 8	ILB381	HCYWDPLLMDCKYLILEG
132 9	ILB382	GSIICWWDPLLMSCADLK
133 0	ILB383	QLFTCHWDPLLMDCTWD S
133 1	ILB387	WLEQCVWDPLLMSCTSY V
133 2	ILB388	SSPGIDACWWDPLLMDCA
133 3	ILB389	LHF VCF WDPLIMDC SPQM
133 4	ILB390	SYAYCYWDPLLMECADP M
133 5	ILB393	VWLVF WPCFLDPIS SICN
133 6	ILB395	SLLECFWDPLMMNCSNGL
133 7	ILB397	SDDWTMECYWDPLLMTC I
133 8	ILB398	ALMFCFWDPLLMRCNAN V
133 9	ILB399	NRLMCF WDPLLMVCQ SD L
134 0	ILB402	LMQRPVHCVWDPLLMNC R

134 1	ILB403	WQC YYRLCMGYPLGILC S
134 2	ILB404	FRFATFFCYWDPLLMSCR
134	ILB405	LTFLFYRCSWESVTPGCI
134 4	ILB406	LLLSTYWCSWDPLLMDC N
134 5	ILB407	SLWLTVLCPWDPLLMACI
134 6	ILB408	TSGLCVWDPLMMSCASLL
134 7	ILB409	LIMGCPWDPLLMLCQERR
134 8	ILB410	SNPICIWDPLLMRCIWYQ
134 9	ILB412	QSFLMRGCAWDPLLMQCI
135 0	ILB414	LVVNCPWDPLLMACAVN V
135 1	ILB418	STRDCYWDPLLMTCINYI
135 2	ILB419	SYQVCCWDPLLMTCQRA R
135	ILB421	YHWQLNGCVWHPLMINC L
135 4	ILB423	LCLWDALLMECRIHSFDS
135 5	ILB425	FCVWDPLLMHCRFTHDR M
135 6	ILB426	SMTMCGWNPLGMWCHSL G
135 7	ILB428	TLVSLGLCAWDPLLMSCA

- 199043040

135 8	ILB429	SFLFYSSCVWDPLLMQCG
135 9	ILB430	TLDNCAWDPLLMRCWGQ W
136 0	ILB431	SSIYCLWDPLLMRCATPL
136 1	ILB432	RCPWDPLMMMCIEEMYT D
136 2	ILB436	LCSWDPLMMRCVVMDSL D
136 3	ILB437	FFCLWHFCTGDPLKIHCM
136 4	ILB439	QLFLTLNCSWDPLLMQCL
136 5	ILB440	SYLGGLACAWDPLLMQCI
136 6	ILB441	GFPECFWDPLLMDCTYWF
136 7	ILB445	VFPWCYWDPLMMDCAIQ N
136 8	ILB450	FCVWDPLLMDCSGNTFYF
136 9	ILB451	TCAWDPLLMVCRYPCPAF
137 0	ILB452	AALECPWDPLMMSCIKTS
137 1	ILB453	YLPSWLSCSWDPLLMICS
137 2	ILB454	HLSLLMDCCWDPLTMQC T
137 3	ILB455	RWPFCHWDPLLMMCSVS Y
137 4	ILB457	LPLLRFPCDGKQLWKFCL

137 5	ILB461	QVSYCPWDPLLMQCQLSG
137 6	ILB463	RSIECFWDPLMMECMGY V
137 7	ILB464	LGMTFYVCPWDPLLMLCI
137 8	ILB465	YYYSWPMCYWDPHMLFC L
137 9	ILB467	PCYWDPLLMRCMLQVDN W
138 0	ILB469	FF SDCNWDPLLMHC ANKL
138 1	ILB470	RPSLVPICYWDPLLMICI
138 2	ILB471	NYFNCVWDPLRMDCQYF M
138	ILB473	DWQ YYS SKT YGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
138 4	ILB474	PDWITWQPAWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
138 5	ILB475	NMYHEHAAWGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
138 6	ILB476	EVNHVEDFPAGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
138 7	ILB477	WYTHSLQMWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
138 8	ILB478	GPDVTQYVKFGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
138 9	ILB479	QSPSASHIMGGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP

-200043040

139 0	ILB480	GPVEESAPQYGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
139 1	ILB481	WIMSLSWPMAGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
139 2	ILB482	HVGWHAMNPWGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
139	ILB483	VWTAFIQMNSGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
139 4	ILB485	PDWITWQPAWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
139 5	ILB486	VMWQWEEGHWGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
139 6	ILB487	TQEMWFTGINGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
139 7	ILB488	DNWWRIWDKQGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
139 8	ILB489	VTWFMYQDRAGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
139 9	ILB490	LPPPCYWTTWGKECQMF D
140 0	ILB491	VEPIPYTMMRGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
140 1	ILB492	RIVVMEQMQIGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP

140 2	ILB493	MCNPMESECHGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
140 3	ILB494	VYWYDVKWTWGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
140 4	ILB495	DCEQNQTYCVGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
140 5	ILB497	WWPNYTWDHPQGSATGG SSFNEDCMWDPLLMDCA YSP
140 6	ILB498	DGSPGYRAYHSQFGQAGQ GSATGGSGSTASSGSGSSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
140 7	ILB499	WPWFEQEHFWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
140 8	ILB500	WCRPTDLKLVKGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
140 9	ILB501	DKSGGLVAIQGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
141 0	ILB502	DRWGWQKEPSGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
141 1	ILB5O3	LAWKQSWIDTGQAGQGS ATGGSGSTASSGSGSSFNE DCMWDPLLMDCAYSP
141 2	ILB504	VMLEQMPMMRGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP

-201 043040

141 3	ILB505	ATRMWPMSISGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
141 4	ILB506	MYVMKWQNWTGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
141 5	ILB508	ISDVYQWHSYGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
141 6	ILB509	MVKLWEIYSWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
141 7	ILB511	QWGWSMWQEVGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
141 8	ILB512	MWSAVFQPYQGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPGGSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
141 9	ILB513	AMHNVMWRAMGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
142 0	ILB514	HEDKFIVWMWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
142 1	ILB516	QWWWTNSPWLGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
142 2	ILB517	QHQTAFTEMVGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
142 3	ILB518	QTMWTRWMHDGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP

142 4	ILB519	YAWHHHVLNTGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
142 5	ILB520	YCPFMPALCVGQAGQGSA TGGSGSTASSGSGSSFNED CMWDPLLMDCAYSP
142 6	ILB522	RTYSTPYWGWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
142 7	ILB523	EIFWWLLQWEGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
142 8	ILB524	QIDFKYMMWTGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
142 9	ILB525	QMQWLDDEFYGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
143 0	ILB526	PVQQEWMQWYGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
143 1	ILB527	QAWKLMWFAWGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
143 2	ILB528	MPSTQINQWVGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
143 3	ILB529	TEKDPAQDWWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
143 4	ILB531	EYTNTSWKGHGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP

-202043040

143 5	ILB532	QMEVAHVVDLGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
143 6	ILB533	IKPS SHWWWQGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
143 7	ILB534	YEEQQVDEFGGQ AGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
143 8	ILB535	AWWQGQRPYNGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
143 9	ILB536	PPLWMSQMVPQGSATGG SSFNEDCMWDPLLMDCA YSP
144 0	ILB537	VEHLSHSYVLGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
144 1	ILB538	DC SPDVHDCHGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
144 2	ILB539	TYLQLWYFIQGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
144 3	ILB540	GRWWMVQWVEGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
144 4	ILB541	VMEGHQFAQFGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
144 5	ILB542	WWSPSYAWVMGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP

144 6	ILB543	MEMVSAAWQEGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
144 7	ILB544	YWWTIDYWPYGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
144 8	ILB545	YPMYYYQDISGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
144 9	ILB546	IMWAGPIFPNGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
145 0	ILB547	IMGMYEGFRTGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
145 1	ILB548	IERAYHSTRWGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
145 2	ILB549	ETELKKPAMQGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
145	ILB550	QDWHYPWVYQGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
145 4	ILB551	PLQKWEHIVNGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
145 5	ILB552	TDSWCHTLYWALQHCVA QE
145 6	ILB553	WQNPWPVRFWGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
145 7	ILB554	APGVAMWMFIGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
145 8	ILB555	QSNGAHAWVWGQAGQG SATGGSGSTASSFNEDCM

- 203 043040

145 9	ILB556	PDSSCHTLYWQLHHCARR E
146 0	ILB557	KWNQQWTIARGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
146 1	ILB558	ECSCAKSRYANGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
146 2	ILB559	SCQFLEEYKDCRGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
146 3	ILB560	VPSLIYHTYYGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
146 4	ILB561	SIYISYRQNHGQAGQGSAT GGSGST AS SFNEDCMWDP LLMDCAYSP
146 5	ILB562	TYYTHTAWDRGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
146 6	ILB563	LLVEFFKHTYGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
146 7	ILB564	FQGHWHIKKQGQAGQGS ATGGSGSTASSGSGSSFNE DCMWDPLLMDCAYSP
146 8	ILB565	FHLPIHWHYQGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
146 9	ILB566	LIVLQPKNMVGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
147 0	ILB567	TYSWRDWGMYGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP

147 1	ILB568	DGSHPIVVVTEWFGQAGQ GSFNEDCMWDPLLMDCA YSP
147 2	ILB569	VYWQAMNQDYGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
147 3	ILB570	PDSWCHTLYWDLLYCVN QE
147 4	ILB572	DCAMWFMFKDQGQAGQ GS ATGGS SFNEDCMWDPL LMDCAYSP
147 5	ILB573	NNMHPLWPISGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
147 6	ILB574	FWYSWNPQWDGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
147 7	ILB576	EGYWRGPHWEGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
147 8	ILB577	YRMKWDFMLHGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
147 9	ILB578	WWWDQHMLENGQAGQG SATGGSGSTASSFNEDCM WDPLLMDCAYSP
148 0	ILB579	PCHWAQQPCAGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
148 1	ILB580	FFDFF SF SNSGQ AGQGS AT GGS SFNEDCMWDPLLMD CAYSP

- 204 043040

148 3	ILB582	QIQQFSFWVQGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
148 4	ILB583	LFIPYMAQIWGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
148 5	ILB584	MTTMYHIIVLGQAGQGSA TGGSGSTASSFNEDCMWD PLLMDCAYSP
148 6	ILB585	GCSMCHMMMVKWHRGQ AGQGSFNEDCMWDPLLM DCAYSP
148 7	ILB586	EQHVDWYWVPQGSFNED CMWDPLLMDCAYSP
148 8	ILB587	NQTQPKRPTDGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
148 9	ILB588	ELGGRKSMLIGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
149 0	ILB589	EAWRELRWWNGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
149 1	ILB590	YCTDRVDICMGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
149 2	ILB591	LIVPAPLTWWGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
149 3	ILB592	WVPDMWMHEWGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
149 4	ILB593	YQDSWITGMQGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
149 5	ILB594	YEEHCRLFPADWICSLLQ

149 6	ILB595	VCQDEVYMWCEGQAGQ GS ATGGS SFNEDCMWDPL LMDCAYSP
149 7	ILB596	ADSWCHTLYWNLRHCEIQ E
149 8	ILB597	HHQQSMYWLEGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
149 9	ILB598	AEHTFALQYVGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
150 0	ILB599	YTTYNWKPWQGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
150 1	ILB600	ACDTQHHGCMGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
150 2	ILB601	EVVGVGWFLNGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
150	ILB602	PESWCHTLYWNLQHCLSQ E
150 4	ILB603	IDNKYEGMVLGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
150 5	ILB604	HWMTYQFWIQGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
150 6	ILB605	TCELMQAWTHLGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
150 7	ILB606	YYPQHIDHIMGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP

-205 043040

150 9	ILB608	HTEFQRLEWPQGSATGGS SFNEDCMWDPLLMDCAY SP		152 1	ILB620	SCFGDLQICWGQAGQGSA TGGSGSTASSGSGSSFNED CMWDPLLMDCAYSP
151 0	ILB609	IQWPSMMEIHGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP	152 2	ILB621	HCKDMHWAIQFGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
151 1	ILB610	QTGWGPKYMWGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP
152 3	ILB622	WLFVAEQSQYGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
151 2	ILB611	QSHIHLEKWLGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
152 4	ILB623	ANSWCHTLYWDLMYCV WQE
151 3	ILB612	QCWIYPYDGLCNGQAGQ GS ATGGS SFNEDCMWDPL LMDCAYSP
152 5	ILB624	DGSGFYPNKWFHGGQAG QGS ATGGS SFNEDCMWDP LLMDCAYSP
151 4	ILB613	TCTHLVKTVLIGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
152 6	ILB625	MVYRWVMQADGQAGQG S ATGGSGSTAS SGSGS SFN EDCMWDPLLMDCAYSP
151 5	ILB614	PLYTVWKWSGGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
152 7	ILB627	HPMEIKTMMKGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
151 6	ILB615	FNFERWEQKPQGSFNEDC MWDPLLMDCAYSP
152 8	ILB629	LQAWMWQVNQGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
151 7	ILB616	YVLQQVEMQEGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
152 9	ILB630	GCNYFPTQWECYGQAGQ GSFNEDCMWDPLLMDCA YSP
151 8	ILB617	SMTKYKALYHGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
153 0	ILB631	LQAWMWQVNQGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGS ATGGS SFN EDCMWDPLLMDCAYSP
151 9	ILB618	QDNIAYQGWWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
152 0	ILB619	MDHIWQHGQLGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP	153 1	ILB632	QFPYESPPSIGQAGQGSFN EDCMWDPLLMDCAYSP

- 206 043040

153 2	ILB633	IYLSWDMPALGQAGQGSA TGGSGSTASSFNEDCMWD PLLMDCAYSP		154 4	ILB645	QYQSRQTFQIGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP QGSFNEDCMWDPLLMDC AYSP
153 3	ILB634	QYTEMVALVYGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
154 5	ILB646	YWAWQQEFQWGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPGSYWAWQQEF QWGQ AGQGS ATGGS SFN EDCMWDPLLMDCAYSP
153 4	ILB635	PDSWCHTLYWHLQHCLS QE
153 5	ILB636	PAKDPFVMRHGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
154 6	ILB647	YYQGFPWFQIGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
153 6	ILB637	WQ VS S VQLP YGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
154 7	ILB648	FFYQWSYGWSGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
153 7	ILB638	QQTQTYWGTWGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
154 8	ILB649	YEEHCALFPTDWICTLH
153 8	ILB639	DQLWRQNWMQGQAGQG SFNEDCMWDPLLMDCAY SP	154 9	ILB650	WRWHAEWDWYGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
153 9	ILB640	QYYNVYWQNQGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP	155 0	ILB652	WRWEF GY YYHGQ AGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
154 0	ILB641	QTYSNKPMGPQGSFNEDC MWDPLLMDCAYSP	155 1	ILB653	MF YEYQWWH4GQ AGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
154 1	ILB642	EEEWSWYDRRGQAGQGS FNEDCMWDPLLMDCAYS P
155 2	ILB654	PDWITWQPAWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGS ATGGS SFN EDCMWDPLLMDCAYSP
154 2	ILB643	AYYWKEWMKMGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPG
155	ILB655	WPFYEYIIHMGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
154 3	ILB644	AIAHLDVFPPQGSFNEDC MWDPLLMDCAYSP

- 207 043040

155 4	ILB656	RPYYYQWHIWGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP		156 2	ILB666	QWSFHWWSHTGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
155 5	ILB657	TGFFWSWSFGGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP	156 3	ILB667	WTFEWWIYTKGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
155 6	ILB659	SKMEQYPWNMGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSP	156 4	ILB669	ADRFFVWNPYGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSP
155 7	ILB660	YHWQQQHQYHGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSP	156 5	ILB670	QRYMMQTMLIGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSP
155 8	ILB661	DWQVYYKTWIGQAGQGS ATGGSGSTASSGSGSSFNE DCMWDPLLMDCAYSPQG SATGGSGSTASSGSGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSP	156 6	ILB671	PWSKATQPGWGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSPQGSATGG SGS T AS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSGST ASSFNEDCMWDPLLMDC AYSP
155 9	ILB662	YRYTTYWWYSGQAGQGS ATGGSGSTASSFNEDCMW DPLLMDCAYSP
156 7	ILB672	IWWGYSWDHYGQAGQGS ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
156 0	ILB664	QCCMSQVSWYVGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSPQGSATGGSSFN EDCMWDPLLMDCAYSPQ GS ATGGS SFNEDCMWDPL LMDCAYSP
156 8	ILB673	IVNFTWNFLSGQAGQGSF NEDCMWDPLLMDCAYSP
156 9	ILB675	MQFSWTQHFFGQAGQGS ATGGSGSTASSGSGSSFNE DCMWDPLLMDCAYSPGM QFSWTQHFFGQAGQGSAT GGSGSTASSGSGSSFNEDC MWDPLLMDCAYSP
156 1	ILB665	YYQGFPWFQIGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSPGGGSYYQGFPWF QIGQAGQGS ATGGS SFNE DCMWDPLLMDCAYSP

- 208 043040

157 0	ILB676	LHANSIATNWGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSP
157 1	ILB677	PDSWCHTLYWQLIHCERQ E
157 2	ILB678	QFPYESPPSIGQAGQGSAT GGSSFNEDCMWDPLLMD CAYSP
157	ILB680	YYQGFPWFQIGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSPGGGSYYQGFPWF QIGQ AGQGS ATGGS SFNE DCMWDPLLMDCAYSPGG GSYYQGFPWFQIGQAGQG S ATGGS SFNEDCMWDPLL MDCAYSP
157 4	ILB681	YYQGFPWFQIGQAGQGSA TGGS SFNEDCMWDPLLM DCAYSPGGGSYYQGFPWF QIGQ AGQGS ATGGS SFNE DCMWDPLLMDCAYSP
157 5	ILB739	GEAWCWDPIRMDVRVCS VFI
157 6	ILB740	GPYSCPWDPMKMECAYS P
157 7	ILB741	EYSSCNWDPLLMQCQRV V
157 8	ILB742	FHSTCFWDPLLMRCVSAP
157 9	ILB743	SVSPCIWDPLLMMCGNYS
158 0	ILB744	VGVDCPWDPLMMECAGR N

158 1	ILB745	VS AEC YWDPLMMQC STD M
158 2	ILB747	FGDTCFWHPFNEDMCESK P
158 3	ILB748	QWLHCFWDPLMMKCVTV S
158 4	ILB749	TPHPCHWDPMIMYCMLE M
158 5	ILB750	HEEDCWWDPLIMQCFNRT
158 6	ILB751	HTANCPWDPLIMNCSFQS
158 7	ILB752	YTKHCQRLPTYKICNLFM
158 8	ILB755	ADSWCHTLYWQLQHCLS QE
158 9	ILB756	HSRWCYWEPIRMIEMCM GDK
159 0	ILB757	PGVACFWDPLLMSCSYDE
159 1	ILB758	RAFTCPWDPLIMDCAGAS
159 2	ILB759	GDDWCAWDPIRMQCSYT К
159 3	ILB760	EIEQCWWDPMLMEGVCW PSI
159 4	ILB761	HGRSCAWDPLKMDCVWY H
159 5	ILB762	RLGACVWDPLMMQCAWI S
159 6	ILB763	LYPSCPWDPILMQCSALK

-209043040

159 8	ILB765	TDSWCHTLYWQLHHCAIL E
159 9	ILB766	RWNVCAWDPLLMQCASA P
160 0	ILB767	MSVSCNWDPLLMTCRLPT
160 1	ILB768	PGLRCPWDPLMMTCVAH P
160 2	ILB769	QIAFCLWDPLLMDCTVQT
160 3	ILB770	SPQECPWDPIAMKCAFVR
160 4	ILB771	TSHPCWWDPIMMSCWLE E
160 5	ILB772	VQLYCIWDPLMMDCGQR S
160 6	ILB773	CRNSCHWDPLIMDCMQE M
160 7	ILB774	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSIVQHQPS RMY
160 8	ILB775	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSICQATPYSPWCR
160 9	ILB776	HRAPCFSCTACRQPCFSLT
161 0	ILB778	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSALRMCDSWVENR CLG
161 1	ILB779	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSAQWQCHIN PTGMACVDMLQG
161 2	ILB780	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSHPWRHN MQKI

161	ILB781	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSQFPYESPP SI
161 4	ILB782	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSVCPTQPANCQ
161 5	ILB783	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPCRFWPG RAFCH
161 6	ILB784	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSEC ELDYHMVWCK
161 7	ILB785	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSFWMQQA QQHK
161 8	ILB786	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSKCDWQP WFCP
161 9	ILB787	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSFVGESQYMQTK
162 0	ILB788	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSQPWRHNMQKI
162 1	ILB789	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSQFPYESPPSI
162 2		FNEDCMWDPLLMDCAYS PGRGS SLGGVSPPIVSGRA

ILB791 SA

162	ILB792	ANSWCHTLYWQLHHCEIL E
162 4	ILB793	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSIWQTEVIVPD

- 210 043040

162 5	ILB794	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSRVRLDHWEQV
162 6	ILB797	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGDGSIE HHGAWSAQ
162 7	ILB798	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSPVLGCRNV HNTQCRLWFQG
162 8	ILB799	GLHGCQYVQMFFHFCAPK T
162 9	ILB800	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSHW ERCVPHSDPDYNCSFDS
163 0		FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSGWVFRCKNMPCA

ILB801 КАЕН

163 1	ILB802	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPPHPSNSI WR
163 2	ILB803	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSRLS LHCPEHPCGSSWTQG
163 3	ILB804	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSPDWITWQPAW
163 4	ILB806	FQGHCALFPTDWICTLKS
163 5	ILB807	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSVGLLCQDF AYGQTHCDVLQQG
163 6	ILB808	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGDGSMCYQEP HFTYCP

163 7	ILB809	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGG SECMS SW HGCT
163 8	ILB810	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GSDAWGCLDDFFMKVAG CKTLF
163 9	ILB811	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSQFLLCNGS EWCPANRQG
164 0	ILB812	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGG SFCMWPFC IPPR
164 1	ILB813	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSMGGEDDI WHQ
164 2	ILB814	PDSRCHTLYWALRYCAY QE
164 3	ILB815	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSW HSYTAMYAD
164 4	ILB816	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGGSGMVSHW KKVQ
164 5	ILB817	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GSQGMPCQYHAMQLCPPS R
164 6	ILB818	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSHQHNFQLRYT
164 7		FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSLCDQWQ

- 211 043040

164 8	ILB820	FNEDCMWDPLLMDCAYS P
164 9	ILB821	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSYCHEDPR SLDCR
165 0	ILB822	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSHPWRHN MHKI
165 1	ILB823	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSPLVDCLTY PEWVNCPRTIQG
165 2	ILB824	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSDCNFAPK ETNCW
165 3	ILB825	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GSKTLFCGYDGYDMCDLS A
165 4	ILB826	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSWNRHPPP SGQ
165 5	ILB827	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSMQYHPWQDMW
165 6	ILB828	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSSCNITDQ MGVCL
165 7	ILB829	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSWD DTCNAEVYQQGLMCDTR VQG
165 8	ILB831	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSARRGCVM LNECSSVSQG

165 9	ILB832	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSRMRSVCPH HVCWRGVPQG
166 0	ILB833	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSPKSECVAPLEMIEC PSLW
166 1	ILB834	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSSVFWCYSQ HGCALTSQG
166 2	ILB835	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPRAWQFP vss
166 3	ILB836	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSIC MEYPIIRPCT
166 4	ILB837	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPCLSWYV APMF
166 5	ILB838	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSADDCCVSH LPFIGYCGFVRQG
166 6	ILB840	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GSGEDQCKLFGSGLDTCIP YV
166 7	ILB842	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPCVKAPE FDWCT
166 8	ILB843	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSHESCAVHY QHGCPYASQG
166 9		FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG

-212043040

167 0	ILB845	QAASAPASEPPGSLCLPDQ FRCGNGQCIPLDWVCDGV NDCPDDSDEEGCPPRTCA PSQFQCGSGYCISQRWVC DGENDCEDGSDEANCAGS VPTCPSDEFR
167 1	ILB846	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSEEQPTEW HVY
167 2	ILB847	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSETFDCNTPWEHEC YGRF
167	ILB848	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSETL PCQYWGQSWCSQSAQG
167 4	ILB849	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSPCTPWTEWQQCP
167 5	ILB850	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSHSMLCQP WHLCPPAQQG
167 6	ILB851	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSKCSIDVQQCM
167 7	ILB852	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSQPWRHN MQKI
167 8	ILB853	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS ATGGS AAGGGSHH KNNGTIYQ
167 9	ILB854	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPAERMK MHMF

168 0	ILB855	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSREFTQNW SIY
168 1	ILB856	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSAYTMWQYHKF
168 2	ILB857	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSYMGQIPA HNI
168 3	ILB858	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSKC WSFSGNRPCP
168 4	ILB860	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPDWITWQ PAW
168 5	ILB861	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSYQP GCAQWWDMERGCFITQ
168 6	ILB862	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSSYWEHG WPWQ
168 7	ILB863	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSWPSPPWK QMV
168 8	ILB864	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSDEFQFGSEMM
168 9	ILB865	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSINALGVA VQH
169 0	ILB866	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSQWQWKI HPAE

-213 043040

169 1	ILB867	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSLCERPLH TPWA
169 2	ILB868	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPWAKNR HEAV
169 3	ILB869	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSQPWRHNMQKI
169 4	ILB870	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSIRGLSCWPQDCGL EEL
169 5	ILB871	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSLNFGSYS TPH
169 6	ILB872	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSHYLWQE KTYK
169 7	ILB873	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSDCGANHEHCS
169 8	ILB874	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSRVQIIVPEKW
169 9	ILB875	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSEHHWEH PTNF
170 0	ILB876	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS ATGGS AAGGS S AH DCTEESWCWMEVQG
170 1	ILB877	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSYSF RCDVEPHQPGCFDLIQG

170 2	ILB878	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSLMYMWE PRTQ
170	ILB879	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSLEASCAQS DQCFRQSQG
170 4	ILB880	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSLCF SNWDEMKCF
170 5	ILB881	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSIC NWEEVDPHCA
170 6	ILB882	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSPWLDPQ WDIW
170 7	ILB883	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGSRNSWICMEWHCSD LTR
170 8	ILB884	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSW GYQQSWVQQ
170 9	ILB885	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSLTV SNCQEEICMQDEYQG
171 0	ILB886	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSQCKAYM PQCA
171 1	ILB887	FNEDCMWDPLLMDCAYS PAGGGSSWQRHDGHQI
171 2	ILB888	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSTR EMLVHPRH

- 214 043040

171 3	ILB889	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSQQKERISPWP
171 4	ILB890	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSFNINNIYV GN
171 5	ILB891	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGGS VS S YNPW IIY
171 6	ILB892	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSMQTSCEFH EKYERHGCQQLSQG
171 7	ILB893	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSNCLIAEW ECE
171 8	ILB894	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSWEVPRSL WGQGQAGPGGGSG
171 9	ILB895	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GSMSLECESYGIGWCSLL H
172 0	ILB896	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGSHISTCKLIM GAYAHCQTPSQG
172 1	ILB897	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSLQQGRRH HMR
172 2	ILB898	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGSNIDFQCYPF KCGVLFSQG
172 3	ILB899	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSGCSSTPF AWSCS

172 4	ILB900	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSGSTASAAG GGSPCQNQPSYQVCT
172 5	ILB901	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSLRQ SCYPIPESEKCSFSNQG
172 6	ILB902	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSFFHWPTK AKE
172 7	ILB903	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSQC EFEQEECW
172 8	ILB904	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGSGVT GCSGFPTTGTCSQHEQG
172 9	ILB905	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSATGGSAAGGGSLD YHDIPRHA
173 0	ILB906	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS ATGGS AAGGGS SG WEHSSIVF
173 1	ILB907	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGS AAGGGSWWSP AY GWQN
173 2	ILB908	FNEDCMWDPLLMDCAYS PGQGSAAGGGSQCALKSF TVPCN

- 215 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
174 7	ILC19	GDWEWVWDWCF
174 8	ILC20	PCQWVIYHCF
174 9	ILC21	WEIEWSWYWD
175 0	ILC23	FYMEFIIWSP
175 1	ILC24	WYWMLEWEWD
175 2	ILC25	PCEEAFAAYLE
175 3	ILC27	QCFAWEFVWHCD
175 4	ILC28	YTWDLYIYQA
175 5	ILC31	MYTEWQMWWIGQAGQG GGSGGGGSFYDQWEVEL Н
175 6	ILC33	AEFDWMQYGYGQAGQG GGSGGGGSYEFNWKYQE W
175 7	ILC34	YMQWKVEWWG
175 8	ILC35	WEITWDWEYY
175 9	ILC39	WCLITPWEVQCY

Таблица 14

Связывающие рИЛ-6 домены MRD

176 0	ILC40	TTMVFQASLG
176 1	ILC41	LCFCYEYEWVH
176 2	ILC42	HWEFYYEFGI
176	ILC43	LCYWEVWFTWE
176 4	ILC44	PCYLVMMEWECM
176 5	ILC46	GCDFYMNLCK
176 6	ILC50	WQEQWWYKQH
176 7	ILC52	SELSCYWEMKWECSWVT
176 8	ILC53	FCWSCEVFQMEICDELG
176 9	ILC55	HALHC ANEERIF VQCLES S
177 0	ILC56	VYLECNVYEWPEAWCVV МР
177 1	ILC57	TQHLCAWDVRSQADMCI YWT
177 2	ILC58	QVYVCYVLAEQHEAICTS WA
177	ILC59	LTWVCTVMQHMNHMEC LLDL
177 4	ILC60	MLLHCP AMWKCQ SDL
177 5	ILC61	LTWDCYQVFEEWYDCTM SH
177 6	ILC62	VWGGCWYHFTIQHWCPT LS

- 216 043040

177 7	ILC63	MTILCYEQREDMWDCWN VF
177 8	ILC64	LDC ACHFEEHVRTIFC SIG H
177 9	ILC65	WLVDCWVVEDMNMICRL YE
178 0	ILC66	LDFLCYENIHNNFDCFRV M
178 1	ILC67	VASHCIQMPHWLLCQTLI
178 2	ILC70	WTVWCEWENEYGGWCD VSL
178 3	ILC71	LQCKCDEPYPSYYTCRVY F
178 4	ILC74	GPFMCMMDLHRDELLHC WASD
178 5	ILC75	VAVDCFWVTPYEPWYCT VMS
178 6	ILC77	MTDRCYTYEWQYTVCYG RN
178 7	ILC80	RDWRCYLMAHWVHVCG PFIGQAGQGGPGWAGGSD MDLCQDWVYESKYCVPL A
178 8	ILC83	SRYVICDLDMVFRECHGA F
178 9	ILC84	SALVLCELEMVFRECHGV L
179 0	ILC86	SEFILCDLAMVFAECHGA A
179 1	ILC89	SELLLCAFDMVISECHGTT
179 2	ILC90	DSFGCTWEVWGRECHPQ L

179 3	ILC93	SEFIFCDLEMVFRECHGTT
179 4	ILC95	SEFVYCMLDMVFRECHGT A
179 5	ILC96	SELILCALEMVFNECHGA V
179 6	ILC97	SDLVLCEWDMVVRECHG VF
179 7	ILC99	SDLIWCELDMVFRECHGA A
179 8	ILC102	SSFVFCDLEMVFRECHGV F
179 9	ILC103	SDLILCNLEMVFKECHGVI
180 0	ILC106	SSLILCDLEMVFKECHGVL
180 1	ILC108	SEIVLCEWAMVLAECHGA A
180 2	ILC144	SRCDRVLGTHINL
180	ILC164	SHEEWTCFPYLCTFWAE
180 4	ILC165	SEEEWTCFPYLCSIWLE
180 5	ILC166	SQEEWTCFPYLCSYWLE
180 6	ILC167	SQEEWTCFPYLCSFWSE
180 7	ILC169	SHEEWTCFPYLCKYWLH
180 8	ILC170	SHEDWTCFPYLCKVLLH
180 9	ILC171	SHEEWTCFPYLCENWLH

-217043040

181 0	ILC172	SEEEWTCFPYLCTDWVH
181 1	ILC173	SEEEWTCFPYLCTILLQ
181 2	ILC174	SDEEWTCFP YLC S VWVE
181 3	ILC175	SEEEWTCFPYLCSYLLH
181 4	ILC176	SHEDWTCFPYLCKYLLD
181 5	ILC177	SQEEWTCFPYLCREWVE
181 6	ILC178	SDEEWTCFP YLC SQWVE
181 7	ILC179	SEEEWTCFPYLCREWAH
181 8	ILC180	SEEEWTCFPYLCSYWLD
181 9	ILC181	SEEEWTCFPYLCSQWLE
182 0	ILC182	SEEEWTCFPYLCTNWLH
182 1	ILC183	SHEDWTCFPYLCRILVE
182 2	ILC184	SDEEWTCFPSLCTQLLQ
182	ILC185	SEEDWTCFPYLCRILVE
182 4	ILC186	SHEEWTCFPYLCGKWAE
182 5	ILC187	SHEDWTCFPYLCSILLQ
182 6	ILC189	SHEDWTCFPYLCRVLLE

182 7	ILC190	SDEEWTCFP YLCTFWLQ
182 8	ILC191	SEEEWTCFPYLCRNWLD
182 9	ILC192	SEEEWTCFPYLCGLWVE
183 0	ILC193	SEEDWTCFPYLCRILLD
183 1	ILC194	SHEDWTCFPYLCRILSH
183 2	ILC195	SEEEWTCFPYLCTNWLD
183 3	ILC196	SEEEWTCFPYLCSDWLE
183 4	ILC197	SEEEWTCFPYLCTHWLH
183 5	ILC198	SEEEWTCFPSLCNFWSQ
183 6	ILC199	SQEEWTCFPYLCTYWLQ
183 7	ILC200	SHEEWTCFPYLCTYWSH
183 8	ILC201	SDEEWTCFPYLCSIWAQ
183 9	ILC202	SDEEWTCFPYLCSYWVD
184 0	ILC203	SHEEWTCFPYLCRILLD
184 1	ILC204	SQEEWTCFPYLCTDWLH
184 2	ILC205	SEEEWTCFPYLCSFWLE
184 3	ILC206	SHEDWTCFPYLCTLLLQ

-218043040

184 4	ILC207	SHEDWTCFPYLCNILLQ
184 5	ILC208	SEEEWTCFPYLCSHWAE
184 6	ILC209	SHEEWTCFPYLCKILLE
184 7	ILC210	SQEEWTCFP YLC S YWLQ
184 8	ILC211	SEEEWTCFPYLCSIWLD
184 9	ILC212	SHEEWTCFPTLCTDWLQ
185 0	ILC213	SEEEWTCFPSLCTIWLQ
185 1	ILC214	SHEEWTCFP YLC SDWLQ
185 2	ILC215	SEEEWTCFPYLCSLWVD
185 3	ILC216	SHEEWTCFP YLC S VW AQ
185 4	ILC218	SHEEWTCFP YLC SLW AQ
185 5	ILC219	SDEEWTCFPTLCTDWLQ
185 6	ILC220	SQEEWTCFP YLC SHWLD
185 7	ILC221	SE AEWTCFP YLC SDWLH
185 8	ILC222	SEEEWTCFPYLCGQWVE
185 9	ILC223	SDEEWTCFPSLCSFWLE
186 0	ILC224	SEEEWTCFPYLCTLWSQ

186 1	ILC225	SDEEWTCFPTLCSLWSE
186 2	ILC226	SDEEWTCFPSLCSFWLD
186 3	ILC227	SQEEWTCFPYLCTDWVQ
186 4	ILC228	SEEEWTCFPYLCSILVD
186 5	ILC229	SEEEWTCFPYLCSKLLH
186 6	ILC230	SEEEWTCFPYLCGKWLQ
186 7	ILC231	SEEEWTCFPYLCTQLLH
186 8	ILC232	SDEDWTCFPYLCRILLE
186 9	ILC233	SQEEWTCFPSLCSDWVQ
187 0	ILC234	SDEEWTCFPYLCSFWAQ
187 1	ILC236	SEEEWTCFPYLCRELLE
187 2	ILC237	SEEEWTCFPSLCGVWAE
187 3	ILC238	SHEEWTCFP YLCTVWAE
187 4	ILC239	SEEEWTCFPYLCTNLVE
187 5	ILC240	SQEEWTCFPYLCSKWVD
187 6	ILC241	SQEEWTCFP YLC SDWLQ
187 7	ILC242	SDEEWTCFPYLCSYWLQ

-219043040

187 8	ILC243	SDEEWTCVPSLCAKLADG QAGQAAAGGSHEEWTCF AYLCGLLAD
187 9	ILC244	SHEEWTCFPYLCTYWLQ
188 0	ILC247	SEEEWTCFPYLCSEWAQ
188 1	ILC248	SEEEWTCFPYLCSQWLH
188 2	ILC249	SDEEWTCFP YLC SEWLQ
188 3	ILC250	SACEEAFAAYLEDSAV
188 4	ILC253	SDEEWTCFP YLCEYWLQ
188 5	ILC254	SQEEWTCFPYLCRILVD
188 6	ILC257	SHEEWTCFP YLC S YLLE
188 7	ILC258	SEEEWTCFPSLCKILLQ
188 8	ILC259	SEEEWTCFPYLCSKWVE
188 9	ILC260	SACEEAFAAYLEDGLM
189 0	ILC262	SEEEWTCFPSLCSNLVQ
189 1	ILC263	SHEEWTCFP YLC SFW AE
189 2	ILC264	SHEEWTCFPSLCTLWSH
189 3	ILC265	SEEEWTCFPYLCSKWLD

189 4	ILC269	SEEEWTCFPYLCTYWVD
189 5	ILC270	SDEEWTCFPYLCDYWLH
189 6	ILC274	SHEEWTCFPYLCSFWLE
189 7	ILC275	SDEEWTCFP YLCTDWLH
189 8	ILC276	SHEEWTCFPYLCNLLSH
189 9	ILC277	SQDEWTCFPSLCSDLSE
190 0	ILC280	SEEEWTCFPYLCSFWLQ
190 1	ILC281	SEEEWTCFPYLCSLWLE
190 2	ILC282	SHEEWTCFPYLCSYWLE
190 3	ILC283	FMV HCTWYDVT1D CVGPT
190 4	ILC284	SDI SCSYIDGWYQ CLLHL
190 5	ILC285	WGC LCQQQGHFME CEITW
190 6	ILC286	ESL LCIQHDVWVD CYIVE
190 7	ILC287	NSS FCYIHAIEWV CESSS
190 8	ILC288	DLL YCEWEMVVRE CHGTIGQ
190 9	ILC292	QIVECWTEMDWHHCVLF F

- 220 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
193 2	ILA1	LSLWCWHDQAEFCVESN
193 3	ILA2	SKYDCFWEHEWLYCAPR M
193 4	ILA3	FDLYCWVWPDMMECTAG T
193 5	ILA4	GTWDCWVEGEWVYCTP WS
193 6	ILA5	STEGCHQDWYDLCAFLA
193 7	ILA6	LSLWCWMFPEHNACLSPV
193 8	ILA7	ESLWCWMFPNEQTCLVQ H
193 9	ILA8	VSYLCDEYQGLLYCMVQ R
194 0	ILA9	LDLWCWFPNDTKCMRLT
194 1	ПА10	LGLWCFVYPDDQMCIRS W
194 2	ПАИ	MGELCEFFGFHDCPMQI
194 3	ILA12	SETLCWDGWDIWICQDPQ
194 4	ILA13	DWATCWEFNELWYCIPY N
194 5	ILA16	IDPGCWLTPWSFQCPGYM

Таблица 15

Связывающие ИЛ-17а домены MRD

194 6	ILA19	LGLWCWMFPIDSFCYPAV
194 7	ILA23	LHLWCWMFPLDDACADF F
194 8	ILA24	LDLWCWFPNDDWCMTHL
194 9	ILA25	MVLDCYIIEELDEYWCDW YS
195 0	ILA26	LGLWCWMFPIDSFCYPAI
195 1	ILA27	YDVWCFFFPDEIMCNETQ
195 2	ILA28	VEIDCEYDWMNEYLYCAP RV
195 3	ILA29	KCNFNPWKAACG
195 4	ПА30	DWLHCEIKPPFYHCWNMT
195 5	ПА31	LSLWCWINDVNCSEPV
195 6	ILA33	LSLWCFIDETSEQCSILS
195 7	ILA34	MDLSCWMTDPTLEWWFC EYRP
195 8	ПАЗ 5	LNLWCWMFPAAAECEFD Q
195 9	ПАЗ 6	WCFGCVIPPFWYECMCPT
196 0	ПАЗ 7	LTLWCWIFPQDEICWTML
196 1	ПАЗ 8	IFFDCTFSDWQLDCVELD
196 2	ПАЗ 9	LALWCWMFPMSDECPPK H

- 221 043040

196 3	ILA40	GHIGCWGPEWYCHWYG
196 4	ILA43	VDELCVFMFGQSDCRNLF
196 5	ILA44	LSLWCWAFPSDTVCLARL
196 6	ILA45	STWECWEVNNETYECAR LL
196 7	ILA46	SNPWCHIAEYELWCWMG H
196 8	ILA47	TSWECHETGDDYFYCWH LK
196 9	ILA48	LDLVCWMYPTEKACWSM R
197 0	ILA50	LGLWCWMFPWEQVCSVR L
197 1	ILA51	TWYLCWESQWWDVYYC EEEG
197 2	ILA52	MSLWCWMFPWDNMCFK FS
197 3	ILA53	IRDDCQENWQSELVCFLL G
197 4	ILA55	LGLWCWMFPMDPDCHRG Y
197 5	ILA56	LAYECWVLEDLEYVICEQ GM
197 6	ILA57	LFFICYETPEEYMYCLPKG
197 7	ILA58	Q SPWCFMFPQEEHCNHYN
197 8	ILA59	LSLWCWIFPTEETCKHGL
197 9	ILA61	HSAWCWFPEDNICLDRR

198 0	ILA62	LTMWCEEMIKDEWWCVP AI
198 1	ILA63	NALWCWFPEASECGLME
198 2	ILA64	YTYYCVETEYNMVCELD Y
198 3	ILA65	IGWQCEYLPWDECQWQF
198 4	ILA66	DDLFCWMFPSAYVCLPPV
198 5	ILA67	QDELCNFIFNDHCASAF
198 6	ILA68	LQELCHYLGFEECVGQQ
198 7	ILA69	ASLWCWMYPNDISCFMES
198 8	ILA71	TADLCMFLWHQDCGRIF
198 9	ILA73	LSLWCWLHDQAEFCVESN
199 0	ILA74	WPLECYTDEE LYDIWCLMDL

-222043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
199 3	TLA26	LLGDCFAGFDNIWCEFLD
199 4	TLA29	KCNFNPWKAACG
199 5	TLA30	QTFWC YDDWHEC SGKP
199 6	TLA34	LNHSCWWWDEWEECPHN V
199 7	TLA37	KVEYCYDDWHQCKQVQ
199 8	TLA38	DDSMCAWWDEWHECEH HS
199 9	TLA39	EYMYCYDDWYDC
200 0	TLA43	DNTDCYYQGYWVYCTDL N
200 1	TLA44	RSDVCWDMAAQHLFYCG EWI
200 2	TLA46	RYDVCWDQKLQELYYCS YYH
200 3	TLA47	LSSVCWNNSAEKLEYCGP LE
200 4	TLA49	HITICDYQEYFYMCTILY
200 5	TLA50	DMAGCHWDPVYINFDCR ASM
200 6	TLA56	KFNECF VGYD YIWCNS S V

Таблица 16

Связывающие TL1A домены MRD

200 7	TLA58	GEDTCHWVHFIDDWYCL АРМ
200 8	TLA62	EVTICQYTEDFTYYYCTRP N
200 9	TLA70	EVCWDSESESIQWCDME W
201 0	TLA72	PFVVCYTQWQGEREFHNC WKLQ
201 1	TLA77	QTVRVCFYDRCQDVKF
201 2	TLA81	QKAICWNTEHITYYYCSR PN
201	TLA85	SSWDCMGGPIVWVCPEGR
201 4	TLA88	RVEECSYEFRQCLANY
201 5	TLA89	DYDVCWDVLADRLYYCD EPI
201 6	TLA90	DSFGCTWEVWGRECHPQ L
201 7	TLA91	DYDVCWDLEVDRLYYCD DPL
201 8	TLA92	DYDVCWDVQLDRLYYCD VPM
201 9	TLA93	DYDVCWDIHADRLYYCN APF
202 0	TLA94	DIDVCWDIAADRLFYCHA РМ
202 1	TLA95	DHDVCWDIDIDRLYYCEG PW
202 2	TLA97	MYDVCWDLQVDKLYFCG DDL
202	TLA98	DWDVCWDVEVDRLFYCE APT

- 223 043040

202 4	TLA99	DFDVCWDLDLDRLVYCD АРМ
202	TLA10	DYDVCWDVHLDRLYYCN
5	1	SPI
202	TLA10	DYDVCWDIDEDRLYYCD
6	2	AFL
202	TLA10	DYDVCWDLLVDRLYYCD
7	3	GPT
202	TLA10	DYDVCWDIYDDRLYYCD
8	4	TPV
202	TLA10	ALDVCWDIEEDRLYYCDA
9	5	PL
203	TLA10	DYDVCWDVYHDRLFYCE
0	6	DHL
203	TLA10	DYDVCWDFEVDRLYYCD
1	7	GPG
203	TLA10	EYDVCWDIDVDRLYYCAS
2	8	PM
203	TLA10	DYDVCWDIELDRLYYCD
3	9	ASI
203	TLA11	DYDVCWDVELDRLYYCE
4	0	APL
203	TLA11	YYDVCWDLDLDILYYCD
5	1	APG
203	TLA11	DYEVCWDLQMDRLYYCE
6	3	ASI
203	TLA11	IFDVCWDVDEDRLYYCQA
7	4	ET
203	TLA11	YTDVCWDIDVDRLYYCD
8	5	ADV
203	TLA11	EDAVCWDPAHEKLVWCN
9	7	RFE
204	TLA11	DYDVCWDVNADRLFYCD
0	8	DAI

204 1	TLA11 9	DYDVCWDVDEDRLYYCN VPI
204	TLA12	DYDVCWDLDFDRLYYCH
2	0	PAE
204	TLA12	RWDVCWDYHADKLFFCN
3	1	EDL
204	TLA12	DYDVCWDVDLDRLYYCE
4	2	АРМ
204	TLA12	EYEVCWDVHVHRLVFCN
5	3	VPV
204	TLA12	KTDVCWDLLLDKLYFCDI
6	5	DT
204	TLA12	RDDVCWDYNTDKLYFCG
7	6	SNI
204	TLA12	DYDVCWDYDVDRLYYCD
8	7	FPV
204	TLA12	NYDVCWDVSEDRLYYCD
9	8	APR
205	TLA12	DWDVCWDLLEDRLYYCE
0	9	DPM
205	TLA13	EYDHCWDVSRAKLELCW
1	0	EHN
205	TLA13	EYAVCWDEAQQKLVWCK
2	1	DLN
205	TLA13	DYDVCWDIYEDRLFYCE
3	3	MHV
205	TLA13	KLDVCWDLDVDRLYFCD
4	4	АРМ
205	TLA 13	DYDVCWDVLVDRLYYCD
5	5	VPM
205	TLA13	DYDVCWDLHLDRLYYCH
6	6	AYC
205	TLA13	DYDVCWDIDLDRLYYCD
7	8	AGS

-224043040

205 8	TLA13 9	DYDVCWDIDADRLYYCH AAM
205	TLA14	KYDVCWDDYLDILYYCN
9	0	GPL
206	TLA14	HLDVCWDIDLDHLYYCDL
0	1	GM
206	TLA14	MYDVCWDLEVDRLYYCE
1	2	АРМ
206	TLA14	EYD VC W D ID SDRL YLC VG
2	3	LM
206	TLA14	DYDVCWDVHADRLYYCK
3	4	EDI
206	TLA14	DYDVCWDLNLDRLYYCD
4	5	SPM
206	TLA14	EYDVCWDVQNDRLYYCD
5	6	APE
206	TLA14	DYDVCWDYDVDRLYYCN
6	7	FQS
206	TLA14	DYDVCWDYKIDHLYYCD
7	8	GPV
206	TLA14	GYDVCWDYEEDRLFYCES
8	9	PL
206	TLA15	DYDVCWDLDNDRLFYCD
9	0	SAM
207	TLA29	KFHVCWDSHQDKLVYCS
0	0	LKV
207	TLA29	LEFVCWDDDRGKLVFCA
1	1	GHM
207	TLA29	GHEVCWDMHNEKLVFCR
2	3	THI
207	TLA29	NKAVCWNYHQEKLEFCN
3	4	STM
207	TLA29	TYAVCWDFNAHKLVFCD
4	5	DMM

207 5	TLA29 6	EYALCWVEAQEKLVWCK DLI
207	TLA29	DYAVCWVEDQGKLVWC
6	7	NGVN
207	TLA29	DYAVCWDEAQEKLVWCN
7	8	GLS
207	TLA29	EYAVCWVHSQEKLDWCT
8	9	GSK
207	TLA30	EYAVCWNEARGKLEYCT
9	0	ALK
208	TLA30	DYAVCWDEHKQKLEFCR
0	1	TFI
208	TLA30	EYTVCWDASNEKLYFCH
1	2	YPL
208	TLA30	SLDVCWDHHLDKLTFCNL
2	3	NM
208	TLA30	QLDVCWDDHYQKLYFCY
3	4	ARI
208	TLA30	SYDVCWDSRLTKLVYCN
4	6	ASN
208	TLA30	QYAVCWDEALEKLLWCK
5	7	ELH
208	TLA30	DYAVCWSEAQDKLEWCI
6	8	GHN
208	TLA30	EYAVCWVEEHEKLLWCE
7	9	GLN
208	TLA31	EYSVCWVVDQEKLVWCR
8	0	SLH
208	TLA31	EYAVCWSEAQGKLEWCQ
9	1	GSN
209	TLA31	DYAVCWDVGLEKLVWCK
0	2	GSL
209	TLA31	PP AVCWDNNS SKLVFCHS
1	3	FI

-225 043040

209 2	TLA31 4	SSNVCWDDVLETLRFCHT НМ
209	TLA31	LDQVCWDLYANKLIFCAD
3	5	VI
209	TLA31	NLDVCWDNNRGKLMFCR
4	6	NHD
209	TLA31	SYAVCWNALEEKLVFCTD
5	7	EI
209	TLA31	PNEVCWDSHKEKLVFCTH
6	8	QM
209	TLA31	EYALCWLEAQEKLDWCT
7	9	ELN
209	TLA32	ENAVCWDESQEKLVWCN
8	1	GIR
209	TLA32	ESDVCWNENVEQLEFCNG
9	3	RF
210	TLA32	EYAVCWDEAPEKLIWCEG
0	4	LN
210	TLA32	RWAVCWDTDRQKLLFCG
1	5	PML
210	TLA32	LDLVCWDENSQKLLFCTK
2	6	PG
210	TLA32	QSSVCWDYNSQKLRFCD
3	7	MSL
210	TLA32	RLDVCWDEHASKLVFCRS
4	8	YM
210	TLA32	ISAVCWDTQLQKLVFCNA
5	9	SM
210	TLA33	LDTVCWDIHSGRLVFCAS
6	0	LL
210	TLA33	EYALCWDDPLEKLQWCK
7	1	DIS
210	TLA33	EYALCWNEVQEKLVWCK
8	2	ELN

210 9	TLA33 3	EYAVCWDEVQDKLVWCN GVN
211	TLA33	EYAVCWDEVQERLEWCT
0	4	RPN
211	TLA33	EFAVCWDDGQEKLVWCN
1	5	RLH
211	TLA33	EYALCWNEVHEQLEFCIG
2	6	RN
211	TLA33	RSEVCWDTHLFKLVYCQD
3	7	WF
211	TLA33	QSYVCWDEHQSRLRFCSE
4	8	TI
211	TLA33	PDTVCWDDHLGKLMFCSS
5	9	IM
211	TLA34	RNHVCWDEYTEKLRFCG
6	0	DGA
211	TLA34	HSDVCWDDHMDKLAFC
7	1	WHMI
211	TLA34	FTAVCWDYHSNKLQFCST
8	2	LM
211	TLA34	DYAVCWDDVRGKLVWC
9	3	KGLK
212	TLA34	EYDLCWDEIRQKLEWCQ
0	4	GLT
212	TLA34	EYAVCWDAENEKLEWCE
1	5	GLN
212	TLA34	KHFVCWDELNEKLVWCK
2	6	GLI
212	TLA34	EYAVCWNEDHAKLEWCQ
3	7	ELN
212	TLA34	LSMVCWDQHQERLVFCIN
4	9	RM
212	TLA35	AQYVCWDDKEQKLKFCE
5	0	DQM

-226043040

212 6	TLA35 1	RYAVCWDESTEKLVYCQ NQM
212	TLA35	NEFVCWDEYKNKLVFCVP
7	2	TL
212	TLA35	RFFVCWDHDNSKLVFCSQ
8	3	NM
212	TLA35	RYAVCWDEAQEKLVWCG
9	6	RVN
213	TLA35	AFDVCWVEALEKLEWCL
0	7	GHN
213	TLA35	SSDVCWEAHSEKLYFCDP
1	8	AR
213	TLA35	KLYVCWDKYKEKLVFCQ
2	9	ALM
213	TLA36	KSEVCWDYDMNKLMFCF
3	0	YDM
213	TLA36	LDAVCWDTQQQKLRFCH
4	1	THM
213	TLA36	RSDVCWDAHLDKLIFCAG
5	2	VM
213	TLA36	DHAVCWNEFQEKLDWCT
6	4	GLN
213	TLA36	QNDVCWDYHRGKLAFCE
7	6	ALI
213	TLA36	DTDVCWDHVQGKLYFCT
8	7	KSL
213	TLA36	TSDVCWNYHYSKLQFCQ
9	8	QSM
214	TLA36	LQDVCWDLYYQKLYFCH
0	9	QPM
214	TLA37	STDVCWDRDHDKLMFCM
1	0	SVR
214	TLA37	DYAVCWDEAQGKLGWCI
2	1	GMN

214 3	TLA37 2	EYAVCWDDAQERLEWCK EPL
214	TLA37	EYAVCWDESLEKLEWCT
4	3	GLY
214	TLA37	EYAVCWDEAQQRLIWCK
5	4	GLY
214	TLA37	EYALCWDQDKEILHWCV
6	5	EFY
214	TLA37	DNEVCWDGHVDRLVFCD
7	6	STM
214	TLA37	NHDVCWDFHVDRLVYCD
8	7	TPI
214	TLA37	DYAVCWDAHMDHLVYC
9	8	DAIA
215	TLA37	DYEVCWDDYADRLVYCD
0	9	LSL
215	TLA38	SYEVCWDVHLDRLVYCN
1	0	SVM
215	TLA38	HYAVCWDFHLDRLVYCD
2	1	RPS
215	TLA38	DYEVCWDVIRGRLVYCET
3	2	PM
215	TLA38	AYEVCWDVNLDRLVYCE
4	3	ALM
215	TLA38	GYEVCWDLKWDRLVFCD
5	4	API
215	TLA38	ALEVCWDFDVDHLVYCA
6	5	AAL
215	TLA38	EFEVCWDVHLDRLVYCH
7	6	ATM
215	TLA38	QYDVCWDIYSDRLVYCD
8	8	AHL
215	TLA38	DYEVCWDLYLGRLYYCN
9	9	API

-227043040

216 0	TLA39 0	EYEVCWDVNVDRLVYCN MPN
216	TLA39	DYEVCWDVHFDRLVYCD
1	1	TPL
216	TLA39	DYEVCWSDDLDRLVYCQ
2	3	ALI
216	TLA39	DDAVCWDYHLDRLVFCE
3	4	TPM
216	TLA39	DYDVCWDIHLDRLVYCD
4	5	GPL
216	TLA39	DYEVCWDVQLDRLVYCD
5	6	GAM
216	TLA39	DYEVCWDVHVERLVYCE
6	7	DLI
216	TLA39	DYAVCWDVYADRLIYCE
7	8	VPM
216	TLA39	DYEVCWDFDIDRLVYCNP
8	9	PM
216	TLA40	DYEVCWDVHLDRLVYCD
9	2	GPL
217	TLA40	DYSVCWDFYFDRLVYCN
0	3	ALF
217	TLA40	DYEVCWDVHVGRLIYCN
1	4	ALI
217	TLA40	SYDVCWDDWDRLVYCE
2	5	ATL
217	TLA40	DYEVCWDVEVDRLVYCV
3	6	GHK
217	TLA40	PYEVCWDFHLDRLVFCDA
4	7	DK
217	TLA40	DYEVCWDFLLDRLVYCD
5	8	API
217	TLA40	DWEVCWDVHLDRLVFCE
6	9	TLI

217 7	TLA41 0	DYEVCWDFDFDRLVFCEA VM
217	TLA41	DYDVCWDVNADRLVYCN
8	1	AIL
217	TLA41	NHDVCWEFHLDRLVYCD
9	2	GPS
218	TLA41	DYEVCWDVQLEHLVYCE
0	3	API
218	TLA41	DDQVCWDVKIDRLVYCE
1	5	ALM
218	TLA41	HSDVCWDFDIDRLVFCDT
2	6	LI
218	TLA41	DYEVCWDIHLDRLVYCNT
3	8	PM
218	TLA41	DYDVCWDEDVDRLVYCE
4	9	PPI
218	TLA42	DYEVCWDFDLDRLVYCD
5	0	SDV
218	TLA42	DYEVCWDDHLDRLVYCD
6	1	APG
218	TLA42	DYDVCWDFDLDRLVYCS
7	2	GPL
218	TLA42	DYEVCWDDHVDRLVYCD
8	3	RTL
218	TLA42	DYEVCWDPHVDRLVYCD
9	4	APA
219	TLA42	HYEVCWDAHFDRLVYCE
0	5	API
219	TLA42	DLEVCWDFDVDRLVYCE
1	6	API
219	TLA42	GFEVCWDVDLDRLVFCA
2	7	ASE
219	TLA42	SYAVCWDFDLERLVYCEI
3	8	PL

-228 043040

219 4	TLA42 9	DHEVCWDFELDRLVYCY КАК
219	TLA43	KYEVCWDEHIDRLVYCD
5	0	VPM
219	TLA43	YSDVCWDFDLDRLVYCE
6	1	AHL
219	TLA43	DYEVCWDVNLDRLVYCA
7	2	GPM
219	TLA43	HYDVCWDDQVDRLVYCH
8	3	APL
219	TLA43	EYDVCWDFDIDRLVYCVP
9	4	LS
220	TLA43	YYEVCWDLNLDRLVYCD
0	5	VNK
220	TLA43	NYQVCWDFDLDRLVYCG
1	6	AHK
220	TLA43	DYEVCWDVYFGRLVYCD
2	7	VLM
220	TLA43	EYVVCWDTEVDHLVYCD
3	8	AAM
220	TLA43	YSDVCWDFYYDRLVYCD
4	9	ASI
220	TLA44	DYEVCWDVDVDRLVYCD
5	0	GPK
220	TLA44	DYAVCWDDHVEHLVYCD
6	1	ASW
220	TLA44	DYDVCWDFDFERLVFCNS
7	2	SM
220	TLA44	DYAVCWDDHFDRLVYCD
8	3	WTT
220	TLA44	DYDVCWDEHLDRLVYCN
9	4	GLG
221	TLA44	EYEVCWDVNVDRLVWCY
0	5	ATM
222 8	TLA48 5	LVSSCPYGTPSAVCNGMW
222	TLA48	GTVYCQPYMSVMECAFR
9	9	A
223 0	TLA49 1	EDFLCYPAPWVLSAAGT
223	TLA49	VSGGCPSYMNQWECVFR
1	3	W

221 1	TLA44 6	DYEVCWDVHAERLYYCD API
221	TLA44	DHEVCWDEHVDRLVYCY
2	7	KAI
221	TLA44	DYDVCWDDYLDRLVYCE
3	8	ARI
221	TLA45	HYDVCWDYHLDRLVYCN
4	0	RHM
221	TLA45	DYEVCWDIHLDHLVYCD
5	1	APW
221	TLA45	EYDVCWDVDLDRLVYCA
6	2	TTY
221	TLA45	EYEVCWDFQVDRLVYCM
7	3	AIT
221	TLA45	DYEVCWDIIVDRLVYCEA
8	4	PP
221	TLA45	YYEVCWDLYLDRLVFCN
9	5	ADL
222	TLA45	DYEVCWDFREDRLVYCD
0	7	SIM
222	TLA45	DYAVCWDFHLNRLVYCD
1	8	VPV
222	TLA45	EYDVCWDFQLDRLVYCD
2	9	SQM
222	TLA46	DYAVCWDFDEDRLVYCV
3	0	GPL
222	TLA46	SERDCNIQKMRKVPCLVM
4	1	L
222	TLA46	SDW ACPMYMHEIEC S VR
5	4	W
222 6	TLA46 8	VPEVCQWEFVKCLWNA
222	TLA47	AAWQCLDPEWWVCVML
7	5	N
223 2	TLA49 5	HVELCFDKMRYCIMEL
223 3	TLA51 9	TLLACQLKFIKCLNNW
223 4	TLA52 0	LVFLCPGYRAQHHCVLLS
223	TLA52	QDRVCWDFHLQKLQFCEL
5	1	SM

-229043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
225 2	EGA43	WEFQCHFYDESMFECTLS Р
225 3	EGA46	WLSMCPHFYHQKCRFW К
225 4	EGA47	SRILCMVNPYWMACWLE Т
225 5	EGA49	GMRRCIWEYVMKHQAC APIF
225 6	EGA50	HLCGCYLELPGVLLCYCF S
225 7	EGA51	ARLLCVVYPGFVACVVQ Q
225 8	EGA54	VAFRCIIDEMYYMTCWE VE
225 9	EGA57	GLHGCQYVQMFFHFCAP КТ
226 0	EGA58	LLMFCHSMWWWPNCYS CV
226 1	EGA67	LSLRCTSEMWWGCYLVA
226 2	EGA69	EKMYCTYTHFFHMCYLP Р
226 3	EGA70	LGVICIHWNYCKTFV
226 4	EGA78	SVLGCDDVGFYQCLEFL
226 5	EGA81	LLILCFHHQLEWKWTCLT ME

Таблица 17 Связывающие рЭФР домены MRD

226 6	EGA85	HSGQCTWEVWGRECWY QN
226 7	EGA86	QMDTCTWEVWGRDCIQ WA
226 8	EGA87	DAWGCTWQVWGRECSD PG
226 9	EGA88	HEVGCTWEVWGRDCEQI R
227 0	EGA90	DPWGCTWEVWGRECPL NL
227 1	EGA91	DLHGCTWEIWGRECQIR H
227 2	EGA92	DPGGCTWEVWGRECQNS M
227 3	EGA93	DMFGCTWEVWGRECPSP Q
227 4	EGA95	DAWGCTWEIWGRECARS Y
227 5	EGA96	TSDSCTWEIWGRECYMQ R
227 6	EGA98	DQYGCTWEVWGRECVG GA
227 7	EGA99	DQYGCIWEQWGRECFVN T
227 8	EGA100	DNDGCTWEVWGRECHQ FK
227 9	EGA101	EYDGCTWEVWGRECHES S
228 0	EGA 102	GAGNCTWEIWGRDCPQD V
228 1	EGA103	TVDRCTWEVWGRECSQN G
228 2	EGA104	LADNCTWEVWGRECPIT E

- 230 043040

228 3	EGA105	DNYGCTWEVWGRDCSK SP
228 4	EGA106	DAHGCHWEVWGRECTR TA
228 5	EGA107	SSDLCTWEIWGRECYSG Y
228 6	EGA108	DDFGCYWKGWGRECHL PL
228 7	EGA109	DWWGCTWEVWGRECLQ LE
228 8	EGA110	DAHGCTWEVWGRECGQ WA
228 9	EGAI 11	DAFGCTWEVWGRECRH vv
229 0	EGA112	DAWGCTWEIWGRDCAA DN
229 1	EGA113	DASGCTWEVWGRECMM WH
229 2	EGA114	DPWACTWEVWGRECNH VG
229 3	EGA115	ASDNCTWEVWGRECQL WG
229 4	EGA116	DM YGCTWEIW GRECHIN D
229 5	EGA117	DSWGCRWEVWGRECGS DI
229 6	EGA118	NPDGCTWEVWGRECYSN R
229 7	EGA119	DFFGCTWEIWGRECYWE F
229 8	EGA120	S S SFCTWEVWGRDCPQD Q
229 9	EGA121	AADRCTWEVWGRDCPQ TH

230 0	EGA122	LVDLCTWEVWGRECWY SD
230 1	EGA124	DSYGCTWEVWGRECPM DT
230 2	EGA125	DNWGCTWEVWGRDCHY GT
230 3	EGA126	PDFGCTWEVWGRECYGV N
230 4	EGA128	QSTQCTWEVWGRECHQ MR
230 5	EGA129	LPPGCTWEVWGRDCLHP R
230 6	EGA130	GEVDCTWEVWGRECYN GW
230 7	EGA131	LTVGCTWEVWGRECWQ QP
230 8	EGA132	DDDGCTWEVWGRECRLP A
230 9	EGA133	SLLSCTWEVWGRDC S AF Y
231 0	EGA134	KDKECTWEVWGRECWQ DR
231 1	EGA135	DQGGCTWQVWGRDCRS NP
231 2	EGA136	DHYGCTWEVWGRECWT VG
231 3	EGA137	DAFGCTWAVWGRECRH DQ
231 4	EGA138	YGDSCTWEVWGRECMM GR
231 5	EGA139	TADPCTWEVWGRECHM RP
231 6	EGA140	QDWGCTWEVWGRDCQQ YT

-231 043040

231 7	EGA141	DSWGCTWEIWGRECWG ТЕ
231 8	EGA142	SVDFCTWEVWGRECYW YP
231 9	EGA143	AGDGCTWEVWGRECLQ ES
232 0	EGA144	MWPNCTWEVWGRDCA WYH
232 1	EGA145	DE YGC S WE VWGRECHTT L
232 2	EGA146	DQWGCTWEVWGRECAF NS
232 3	EGA147	S SDPCTWEVWGRECPQG P
232 4	EGA148	LVLGCWWEVWGRECGS TA
232 5	EGA149	KADHCTWEIWGRECAQY T
232 6	EGA150	DDWGC S WEVWGRECQIP К
232 7	EGA151	PKYGCTWEIWGRECWHS T
232 8	EGA153	S NLGCT WELWGRDC SLY Y
232 9	EGA154	DAYGCYWELWGRDCHQ IV
233 0	EGA155	DYWGCTWEVWGRECTT NP
233 1	EGA156	DIWNCTWEVWGRECYL NQ
233 2	EGA157	SWSLCTWEVWGRDCYW QK
233 3	EGA158	DIWGCTWEVWGRECLN YY

233 4	EGA159	TNGFCTWEVWGRECWY GS
233 5	EGA160	DLYGCTWEIWGRECHIT G
233 6	EGA161	DENGCTWEVWGRECYIQ R
233 7	EGA162	DSFGCTWEVWGRECHPQ L
233 8	EGA163	NHDFCTWEVWGRECWP NA
233 9	EGA164	DEHGCTWEVWGRECHRP G
234 0	EGA165	DHHGCTWEVWGRDCYW AI
234 1	EGA166	WQDNCWWEVWGRECL GDR
234 2	EGA167	PTDTCTWEVWGRECYWI R
234 3	EGA168	YQDPCTWEIWGRDCHQG M
234 4	EGA169	DRWGCTWEIWGRECHQ DN
234 5	EGA170	DLWGCTWEVWGRECFV VN
234 6	EGA171	GLDGCTWEVWGRECYQ GS
234 7	EGA173	LPIPCYWTTWGKECFMP R
234 8	EGA 174	LPDPCYWTTWGKECFMF R
234 9	EGA175	LADPCYWTTWGKECVIP R
235 0	EGA176	LTVPCYWTTWGKECFLP R

-232 043040

235 1	EGA177	LPAPCYWTTWGKECFILR
235 2	EGA178	LPAPCYWTTWGKECHMP R
235 3	EGA179	LPAPCFWTTWGKECFLFR
235 4	EGA180	LAAPCYWTTWGKECYM PR
235 5	EGA181	PTSPCYWTTWGKECYLL R
235 6	EGA182	ITPPCYWTSWGKECHLFR
235 7	EGA183	LPAPCYWTTWGKECFML R
235 8	EGA184	LTEPCYWTTWGKECFLP V
235 9	EGA185	LPAGCYWTTWGKECFM HN
236 0	EGA186	ITSPCYWTTWGKECFIFP
236 1	EGA187	LPAPCYWTTWGKECLLF G
236 2	EGA188	LPAPCYWTTWGKECFMP Q
236 3	EGA189	LPAPCYWTTWGKECFILS
236 4	EGA190	LPTPCYWTTWGKECYVY G
236 5	EGA 192	LPAPCYWTTWGKECYML P
236 6	EGA193	LTPPCYWTTWGKECFMF P
236 7	EGA194	LSTQCYWTTWGKECYLF P

236 8	EGA195	LPAPCYWTTWGKECLML R
236 9	EGA196	LPYPCYWTTWGKECFMH R
237 0	EGA197	LAAPCYWTTWGKECLMI R
237 1	EGA198	LTAPCYWTTWGKECYLF H
237 2	EGA199	LPAPCYWTTWGKECVLG V
237 3	EGA200	LPFPCYWTVWGKECFMP R
237 4	EGA202	LSPPCYWTIWGKECHML Q
237 5	EGA203	PNDPCYWTTWGRECLLG R
237 6	EGA204	LPPPCYWTTWGKECQMF D
237 7	EGA205	LTDPCYWTIWGRECLLPS
237 8	EGA206	FNEPCYWTTWGKECYLP R
237 9	EGA207	LPAPCYWTNWGKECFM MR
238 0	EGA208	FPDPCYWTTWGRECLLP R
238 1	EGA209	VTSGCYWTTWGKECFLP R
238 2	EGA210	STAACYWTTWGKECYM PR
238	EGA211	LPGGCYWTTWGKECFMP R
238 4	EGA212	IITPCYWTTWGKECYLIP

-233 043040

238 5	EGA213	TADPCYWTIWGRECVMS R
238 6	EGA215	LADQCYWTTWGKECYL GL
238 7	EGA216	LTDPCYWTVWGRECFLL R
238 8	EGA217	IDAACYWTTWGKECLLP R
238 9	EGA218	LTAPCYWTTWGKECFLL R
239 0	EGA219	LPVPCYWTTWGKECLML R
239 1	EGA220	VTDSCYWTTWGRECYLP H
239 2	EGA221	LPAGCYWTTWGKECYM FA
239 3	EGA222	FTDPCYWTVWGRECLLP R
239 4	EGA223	LTAPCYWTTWGKECLIL R
239 5	EGA224	VTDPCYWTTWGRECLML P
239 6	EGA225	LTSPCYWTTWGKECFML N
239 7	EGA226	LPVPCYWTTWGKECLMF P
239 8	EGA227	TADPCYWTTWGRECLMP R
239 9	EGA228	LTAPCYWTIWGKECYLL P
240 0	EGA229	LAPPCYWTIWGKECLLLR
240 1	EGA230	LPSPCYWTTWGKECFMP R

240 2	EGA231	VTDGCYWTTWGKECLM PR
240	EGA233	LPDDCYWTTWGKECYLQ R
240 4	EGA235	DIDPCWWAPWGRECLM VR
240 5	EGA236	TPDPCWWATWGRECILD R
240 6	EGA237	LPAPCFWTTWGKECFLL R
240 7	EGA238	DNDPCYWTVWGRECLM PL
240 8	EGA239	LTAPCYWTTWGKECLLL P
240 9	EGA240	LTVPCYWTTWGKECYLL s
241 0	EGA241	LIAPCYWTTWGKECYML P
241 1	EGA242	LPEPCYWTTWGRECFLPR
241 2	EGA243	LTTPCYWTIWGKECFLPI
241	EGA244	LPEGCYWTTWGKECFML R
241 4	EGA245	LPAPCYWTTWGKECFILL
241 5	EGA247	LKAPCYWTTWGKECYLL P
241 6	EGA248	LKDPCYWTTWGRECLML P
241 7	EGA249	VRPGCYWTTWGKECFMP G
241 8	EGA250	PSDPCYWTIWGRECYMIP

-234043040

241 9	EGA251	LPAPCYWTVWGKECHM SR
242 0	EGA252	LSDPCYWTIWGKECFLIL
242 1	EGA254	LTDHCYWTIWGRECLLP R
242 2	EGA255	VTDPCYWTTWGRECLLL R
242 3	EGA256	LPAGCYWTTWGKECHLH L
242 4	EGA257	LPAPCFWTTWGKECYMF T
242 5	EGA258	FSDPCYWTTWGRECFWI P
242 6	EGA259	LSDPCYWTTWGRECFLL P
242 7	EGA260	FKDPCYWTTWGRECYLL P
242 8	EGA261	FPDPCYWTIWGRECILPL
242 9	EGA262	LTDPCHWTIWGRECFLPP
243 0	EGA263	YDDHCCYLTIWGRECFLP P
243 1	EGA265	FSDPCIWTTWGRECFWV H
243 2	EGA266	TRDTCYWTVWGRECFLP P
243 3	EGA268	HRAPCFSCTACRQPCFSL T
243 4	EGA269	FDDPCYWTTWGRECLML P
243 5	EGA270	HNDPCVWTTWGRECFLL P

243 6	EGA271	LGDSCFWTTWGRECFLH P
243 7	EGA272	FSDPCYWTTWGRECLLIP
243 8	EGA273	CTGPCYWTTWGRECCLS YP
243 9	EGA274	ASDPCYWTTWGRECFLL P
244 0	EGA276	LSDPCYWTTWGRECILLQ
244 1	EGA277	LTDPCHWTIWGRECFLLP
244 2	EGA278	STDLCYWTIWGRECYLPP
244 3	EGA279	FSDPCSWTTWGRECFLPP
244 4	EGA280	WRDPCYWATWGRECYL VP
244 5	EGA281	LGDPCYWTTWGRECFWL P
244 6	EGA282	FRDPCYWTTWGRECFLL P
244 7	EGA283	LIDPCYWTTWGRECFLIP
244 8	EGA284	LSDNCYWTTWGRECFLP P
244 9	EGA285	FTDPCYWTTWGRECFLL P
245 0	EGA286	YNDPCYWTTWGRECLLL P
245 1	EGA287	SSDPCYWTTWGRECFLLP
245 2	EGA288	FGDPCYWTTWGRECYLL RP

-235 043040

245 3	EGA289	LTDPCWWTTWGRECLLL P
245 4	EGA290	S SDPC YWTTWGRECLLL P
245 5	EGA291	LSDPCYWTTWGRECLLL P
245 6	EGA292	FRDPCYWTTWGRECFLP P
245 7	EGA293	FDDYCCYWATWGRECY LIP
245 8	EGA294	YSGPCYWTTWGRECILH P
245 9	EGA296	S SD AC YWTTWGRECFLL P
246 0	EGA297	FSDHCWWSTWGRECYLL P
246 1	EGA298	TSDPCYWTTWGRECLLN R
246 2	EGA299	T SDPC YWTTWGRECLLL P
246 3	EGA300	CSGPCYWTTWGRECCFS LP
246 4	EGA302	SIDSCFWTTWGRECFLLP
246 5	EGA303	FSDPCYWTTWGRECFLV Q
246 6	EGA304	FSDPCYWTTWGRECFLTP
246 7	EGA305	CRDPCYWTTWGRECYLI P
246 8	EGA307	FGDPCYWATWGRECFLIP
246 9	EGA308	FADPCYWTTWGRECLLH P

247 0	EGA309	FSEPCYWTIWGRECYLLP
247 1	EGA310	DDDDCYWTTWGRECFLL P
247 2	EGA311	FSDPCTWTTWGRECFLFS
247 3	EGA313	FGDPCSWTIWGRECFLLP
247 4	EGA314	SKDPCYWTTWGRECFLL P
247 5	EGA315	CTGPCYWTTWGRECCFF VP
247 6	EGA316	FSDPCYWTTWGRECYLR P
247 7	EGA318	YSDPCYWTTWGRECFLM P
247 8	EGA319	FGDPCYWTTWGRECFLL P
247 9	EGA321	LTDPCYWTTWGRECFLL P
248 0	EGA322	YIDTCYWTTWGRECFLLP
248 1	EGA323	FSDPCFWTTWGRECFWV H
248 2	EGA324	FSDHATGQHGVESAFCF
248	EGA325	FNDPCIWTIWGRECFLLP
248 4	EGA326	VSDPCYWTIWGRECFLLP
248 5	EGA327	ISDPCYWTTWGRECFLLP
248 6	EGA328	FSDPCYWTTWGRECFWV P

-236043040

248 7	EGA329	SRDPCHWTTWGRECLLL P
248 8	EGA330	FSEPCYWTIWGRECFLLP
248 9	EGA331	VIDTCYWTTWGRECYLL PP
249 0	EGA333	ITDPCYWTTWGRECFLRP
249 1	EGA335	PSDPCHWTTWGRECFLQ S
249 2	EGA336	FTDPCYWTIWGRECYLD P
249 3	EGA337	FSDHCWWTTWGRECLLL P
249 4	EGA338	FSDPCIWTTWGRECFWV P
249 5	EGA339	FDDHCCYWTTWGRECFR LP
249 6	EGA340	FTDPCYWTIWGRECYLD T
249 7	EGA341	SIDPCYWTTWGRECFFLP
249 8	EGA342	FADPCYWTIWGRECFLLP
249 9	EGA344	FSDPCYWTTWGKECFLL H
250 0	EGA346	AFWQC V YTPMHAMCF S HK
250 1	EGA347	MTIHWCQPWGCLLLFG
250 2	EGA350	LYLSCMTGWWGEIVCVS AS
250 3	EGA351	KGLDCVHWPGMHWCW RSD

250 4	EGA352	FSDPCYWTIWGRECFLFP
250 5	EGA354	FLDPCFWTIWGRECYLLP
250 6	EGA355	FTDPCHWTTWGRECIWL P
250 7	EGA356	WRAYCHHSPWDFECFQV W
250 8	EGA358	VGDPC S WTTWGRECFLF D
250 9	EGA359	FSDPCVWTTWGRECLLL P
251 0	EGA362	WSPRCFAWIVCLDLS
251 1	EGA370	YKWVCMWTPFGHQCVS AA
251 2	EGA374	LGDPCYWTTWGRECVLL P
251 3	EGA375	KKVFCYYLPFQQYCVTV S
251 4	EGA376	FVTWCYAWPDSSACYGL H
251 5	EGA377	FSDPCYWTTWGRECFMP P
251 6	EGA378	YSDPCYWTTWGRECLLL P
251 7	EGA379	WF VTC SFQFEWEC VQLH
251 8	EGA380	PD S WCHTL YWQLLHCEM SE
251 9	EGA381	VDSWCHTLYWQLHYCA SQE
252 0	EGA382	ADSWCHTLYWSLLHCAS SE

-237 043040

252 1	EGA383	PDSGCHTLYWNLQHCAS LE
252 2	EGA384	ADSWCHTLYWQLYYCES LE
252 3	EGA386	PESWCHTLYWSLQDCVS SE
252 4	EGA387	PDSWCHTLYWQLHHCLS SE
252 5	EGA388	ADSWCHTLYWQLLHCVT QE
252 6	EGA389	ADSWCHTLYWSLLECES RE
252 7	EGA390	PDSWCHTLFWDLQHCVS GE
252 8	EGA391	PDSLCHTLYWSLRHCEIE E
252 9	EGA392	PDSLCHTLYWQLQHCAF WE
253 0	EGA393	ADSWCHTLYWQLYYCE VWE
253 1	EGA394	AESWCHTLYWSLHHCVY SE
253 2	EGA395	TDSWCHTLYWNLLHCAS YE
253 3	EGA396	PDSWCHTLYWQLLHCAT LE
253 4	EGA397	PDSWCHTLYWLLHECES RE
253 5	EGA398	PDSWCHTLYWSLQFCESS E
253 6	EGA399	PDSWCHTLYWQLHHCEI LE
253 7	EGA400	PDSWCHTLYWKLHHCLS ME

253 8	EGA401	VDSWCHTLYWQLLHCA MSE
253 9	EGA402	AESWCHTLYWQLVHCTS LE
254 0	EGA403	PDSWCHTLYWDLLHCES SE
254 1	EGA404	ADSWCHTLWWQLHHCL FEE
254 2	EGA405	TDSWCHTLYWLLHDCTS RE
254 3	EGA407	ADSWCHTLYWQLLHCV AQE
254 4	EGA408	PDS SCHTLYWLLEHCLS V E
254 5	EGA409	PDSWCHTLYWQLHYCTI LE
254 6	EGA410	PDSWCHTLYWQLLHCEIS E
254 7	EGA411	PDSWCHTLYWQLLHCAA SE
254 8	EGA412	PDSWCHTLYWQLHHCVS WE
254 9	EGA413	TDSWCHTLYWALQHCVS ТЕ
255 0	EGA414	PDSWCHTLYWQLLHCTT QE
255 1	EGA415	ADSWCHTLYWQLLHCIS LE
255 2	EGA416	AD S WCHTLYWQLQHCLS QE
255	EGA417	PDSYCHTLYWSLIHCARS E
255 4	EGA418	TDSWCHTLYWELQYCL MQE

-238 043040

255 5	EGA419	TDSWCHTLYWQLHHCAI LE
255 6	EGA420	PDSWCHTLYWQLYHCVS LE
255 7	EGA421	ADSWCHTLYWQLLHCV NQE
255 8	EGA422	PDSWCHTLYWSLLHCAR QE
255 9	EGA423	ADSWCHTLYWALQHCA RSE
256 0	EGA424	ADSWCHTLYWSLLHCAS ED
256 1	EGA425	ADSWCHTLYWDLLHCA NLE
256 2	EGA426	ADSWCHTLYWQLLHCES SE
256 3	EGA427	PDSWCHTLYWDLLHCPA GE
256 4	EGA428	ADSWCHTLYWQLHHCTS LE
256 5	EGA429	ADSWCHTLYWSLQHCAS SE
256 6	EGA430	PDSWCHTLYWQLYHCE MSE
256 7	EGA431	PDSWCHTLYWDLMHCH HEE
256 8	EGA432	PDSWCHTLYWQLYYCAT SE
256 9	EGA434	AD S WCHTLYWQLLHC AS GE
257 0	EGA435	ADSWCHTLYWQLYHCA YWE
257 1	EGA436	TDSWCHTLYWSLAHCAF LE

257 2	EGA437	ADSWCHTLYWQLLHCET LE
257	EGA438	ADSWCHTLYWQLHHCV SLE
257 4	EGA439	ADSWCHTLYWDLLHCES LE
257 5	EGA440	ADSWCHTLYWQLLHCEF SE
257 6	EGA441	TDSWCHTLYWNLVHCAS QD
257 7	EGA442	PDSWCHTLYWDLLYCVN QE
257 8	EGA443	PDSWCHTLYWNLHHCLS ME
257 9	EGA444	ADSWCHTLYWALHHCSI QE
258 0	EGA445	TDSWCHTLYWALQHCV AQE
258 1	EGA446	PDSRCHTLYWALRYCAY QE
258 2	EGA447	ADSWCHTLYWNLLYCAI RE
258	EGA448	VDSFCHTLYWQLIHCPIE E
258 4	EGA449	ADSWCHTLYWNLLHCR ALE
258 5	EGA450	PDSWCHTLYWQLLDCAT RE
258 6	EGA451	AD S WCHTL YWNLRHCEI QE
258 7	EGA452	PNS WCHTL YWDLLHC VS RE
258 8	EGA453	ADSWCHTLYWQLHHCAI SE

-239 043040

258 9	EGA454	ADSWCHTLYWSLLHCES FD
259 0	EGA455	ADSWCHTLYWQLQHCV SWE
259 1	EGA456	ADSWCHTLYWQLQHCIS YE
259 2	EGA457	PDSWCHTLYWSLQHCAI YE
259 3	EGA458	PDSWCHTLYWQLLDCTS SE
259 4	EGA459	PDSWCHTLYWHLQHCLS QE
259 5	EGA460	AESWCHTLYWSLYHCAS EE
259 6	EGA461	PDSWCHTLYWQLQHCVS WE
259 7	EGA462	ADSWCHTLYWQLLHCVS QE
259 8	EGA463	ADSWCHTLYWQLQYCV MQE
259 9	EGA465	ADSWCHTLYWQLLHCES LE
260 0	EGA468	ADSWCHTLYWQLHHCV LEE
260 1	EGA469	PDSWCHTLYWSLHHCLIS E
260 2	EGA470	PDSWCHTLYWQLIHCER QE
260 3	EGA471	PD S WCHTL YWNLQHCER ME
260 4	EGA472	ADS WCHTL YWQLKHCEF ТЕ
260 5	EGA473	ADSWCHTLYWNLLYCA NQE

260 6	EGA474	PDSWCHTLYWSLQHCLN ME
260 7	EGA475	PDS WCHTL YWSLYHCTIS D
260 8	EGA476	ADSWCHTLWWQLLHCE SGE
260 9	EGA477	SDSWCHTLYWSLRHCES LE
261 0	EGA478	ADSWCHTLYWDLQHCL RWE
261 1	EGA479	PDSWCHTLYWQLLYCES WE
261 2	EGA480	ANSWCHTLFWDLHHCLS LE
261 3	EGA481	ADSWCHTLYWQLYHCTS LE
261 4	EGA482	PDS WCHTL YWQLRHCEI SE
261 5	EGA484	PDSGCHTLYWSLQHCTF WE
261 6	EGA485	ADS WCHTL YWQLYHCE VLE
261 7	EGA486	PDS WCHTL YWDLHWCV SLE
261 8	EGA487	ADSWCHTLYWSLLHCAI GE
261 9	EGA489	ADS WCHTL YWQLHHCL WLE
262 0	EGA490	ADSWCHTLYWSLAHCLS GE
262 1	EGA491	AESWCHTLYWDLHYCV YHE
262 2	EGA492	SDSWCHTLYWSLQHCVI SE

-240043040

262 3	EGA493	ADSWCHTLYWNLLHCEY RE
262 4	EGA494	ADSWCHTLYWQLLHCAS EE
262 5	EGA495	PESWCHTLYWQMIFCESF E
262 6	EGA496	ANSWCHTLYWQLHHCEI LE
262 7	EGA497	PDSWCHTLYWALHHCAS SE
262 8	EGA498	PDSSCHTLYWQLHHCAR RE
262 9	EGA499	ADSWCHTLYWDLQHCLI LE
263 0	EGA500	ADSWCHTLFWNLKHCLI QE
263 1	EGA502	ANSWCHTLYWDLMYCV WQE
263 2	EGA503	ADSWCHTLYWQLHHCV TLE
263	EGA504	PDSWCHTLYWALHHCVS SE
263 4	EGA505	GGSGCHGYLWQLLHCET WEGQAGQAAAGGSTDS WCHTLYWQL YHC AS SE
263 5	EGA506	PESWCHTLYWNLQHCLS GE
263 6	EGA507	PDSWCHTLYWQLIHCESL E
263 7	EGA509	PDSWCHTLYWVLLDCAR HE
263 8	EGA510	PDSWCHTMYWSLIHCMN ME

263 9	EGA511	AASWCQALYWHQFCCA SWE
264 0	EGA514	AD S WCHTLF WQLQHC V WQE
264 1	EGA515	TDSWCHTLYWSLLHCES LG
264 2	EGA517	PDSWCHTLYWQLYHCLS LE
264	EGA519	SPDSCWWAIWGKECILLP
264 4	EGA520	LSSGCYWAVWGRECLLI P
264 5	EGA521	LADGCWWAAWGRECLL PP
264 6	EGA522	LPGGCWWSAWGRECILL P
264 7	EGA523	LPEGCWWAVWGRECQL QP
264 8	EGA524	LPEGCWWSTWGRECLLL P
264 9	EGA526	LPEGCYWAIWGKECFLPP
265 0	EGA527	LPDGCWWAQWGRECLL LP
265 1	EGA528	DPDGCHWEVWGRECILL P
265 2	EGA529	LPEGCWWATWGRECLLP P
265	EGA530	LPDGCWWSLWGRECFLP P
265 4	EGA531	LLDVCWWSTWGRECLL QP

- 241 043040

265 6	EGA533	LPDDCYWAQWGRECHM LP
265 7	EGA534	LPEGCYWAVWGRECILP R
265 8	EGA535	VPEGCWWSPWGRECLLP P
265 9	EGA536	LPSGCWWAVWGKECLL LP
266 0	EGA537	MPEGCWWSLWGRECML LP
266 1	EGA538	LPEGCWWATWGKECLLL P
266 2	EGA539	LPEGCYWAIWGKECYLQ A
266 3	EGA540	LPEGCWWATWGRECFLL P
266 4	EGA541	PPDGCWWAVWGRECLL LP
266 5	EGA542	LPESCWWSPWGRECLLP P
266 6	EGA543	LSEGCWWAVWGKECILP P
266 7	EGA544	LSEGCWWAVWGRECLL QP
266 8	EGA545	LPVGCWWSVWGRECLLP P
266 9	EGA546	VPAGCWWAPWGRECILS P
267 0	EGA547	LPSACNWSPWSWQCFWL P
267 1	EGA548	LPEGCWWAVWGKECVL SP
267 2	EGA550	LPEGCWWSSWGKECFLH P

267 3	EGA551	LPDGCWWSPWGRECILL P
267 4	EGA552	LPDGCWWAVWGRECILP P
267 5	EGA553	LPEGCWWATWGKECVL LP
267 6	EGA555	LPDGCWWSAWGKECFLL P
267 7	EGA556	LPEGCWWSVWGKECLLL P
267 8	EGA557	LPEGCWWAHWGRECLL QP
267 9	EGA558	FPERCWWAMWGKECYL LP
268 0	EGA559	LPEGCWWTVWGKECYL LP
268 1	EGA560	LSADCWWSPWGRECILK P
268 2	EGA561	PSQGCWWSVWGRECFLP P
268	EGA562	FPEECWWATWGRECFLP R
268 4	EGA563	FPEGCWWATWGKECLLR P
268 5	EGA564	LPDGCWWALWGKECFL MH
268 6	EGA565	LPEGCYWAQWGKECFLV P
268 7	EGA566	LADSCYWTIWGRECLLPP
268 8	EGA567	FPADCWWSTWGRECFLQ P
268 9	EGA568	LPEGCYWAVWGRECYL VP

-242043040

269 0	EGA569	LPEGCWWAVWGRECLL LP
269 1	EGA570	DPEGCFWAVWGRECLLQ P
269 2	EGA571	FADGCWWEVWGRECLL LP
269 3	EGA572	DPEGCWWAVWGRECLL RP
269 4	EGA573	VSEGCWWAIWGRECILL P
269 5	EGA574	LPEGCWWSPWGKECLM TP
269 6	EGA575	LPDGCWWALWGKECILR P
269 7	EGA576	LPDGCWWSQWGRECILV P
269 8	EGA577	LPQDCWWAIWGRECFML P
269 9	EGA578	LPDVCWWAVWGRECLL MP
270 0	EGA579	LPEGCWWAKWGKECVL PS
270 1	EGA580	LPEGCYWTIWGRECFLFP
270 2	EGA581	LPESCWWAVWGRECLLS P
270	EGA582	SPDGCWWSQWGRECIML P
270 4	EGA583	KPESCWWANWGRECLLL P
270 5	EGA584	LSEGCWWATWGKECLLL P
270 6	EGA585	VAGGCWWATWGRECLL PP

270 7	EGA586	SAEGCWWAVWGRECLL LP
270 8	EGA587	LPEGCYWAIWGRECLLP R
270 9	EGA588	LPEGCFWAVWGKECFLL P
271 0	EGA589	LTEGCWWAQWGRECILL P
271 1	EGA590	LPKGCFWTTWGKECLLL P
271 2	EGA591	LPEGCWWTVWGRECLLL P
271 3	EGA592	LPDDCWWAPWGRECFLR P
271 4	EGA594	DSDGCYWAVWGRECFFL P
271 5	EGA595	LRDGCWWAIWGRKCLLL P
271 6	EGA596	VDEGCWWAVWGRECVL PE
271 7	EGA597	HTDGCWWAQWGRECLL VP
271 8	EGA598	LPEGCWWAPWGKECLLL P
271 9	EGA599	LPDGCWWASWGRECFLI P
272 0	EGA600	LPEGCWWAVWGRECILL S
272 1	EGA601	LPDACWWSVWGKECILE P
272 2	EGA602	DPHGCWWSPWGRECVL LD
272 3	EGA603	LPQGCYWAVWGRECLLP L

-243 043040

272 4	EGA604	LDAPCYWTVWGKECFLF S
272 5	EGA605	DHYGCYWTQWGRECFP MY
272 6	EGA606	LPEGCYWAVWGKECFLL P
272 7	EGA607	LHEGCWWAVWGKECFL LP
272 8	EGA608	LPEGCWWSKWGRECILV P
272 9	EGA609	LPQGCWWANWGRECFL LP
273 0	EGA610	LPEGCWWATWGRECILL P
273 1	EGA611	ISDGCWWAIWGRECLLM P
273 2	EGA612	TPDGCYWAVWGRECFLR P
273 3	EGA613	LPGDCWWAIWGRECLLP P
273 4	EGA614	FADGCWWAVWGRECFW EP
273 5	EGA615	LPEGCWWAVWGKECFM LP
273 6	EGA616	LPEGCWWSTWGKECVLL P
273 7	EGA617	LPDGCWWSLWGKECHL LQ
273 8	EGA618	LPEGCWWAHWGKECQL RP
273 9	EGA619	DPEGCWWATWGRECLL LP
274 0	EGA620	LPDGCWWAHWGRECLL PP

274 1	EGA621	LPDGCWWAKWGKECLL WP
274 2	EGA622	LPDGCWWSVWGKECILL P
274	EGA624	RSEGCWWATWGRECFL HP
274 4	EGA627	LPEVCWWATWGHECLLL P
274 5	EGA628	LPEGCWWSSWGRECFLL P
274 6	EGA629	LPEGCYWATWGKECLLQ P
274 7	EGA630	LPQGCWWATWGRECLL RP
274 8	EGA631	LPDGCWWAVWGRECLL LP
274 9	EGA632	VSEGCWWAIWGRECFLQ P
275 0	EGA633	VADGCVWMVWGRECLL LP
275 1	EGA634	VPEACWWALWGRECILR P
275 2	EGA635	LPQGCYWTVWGRECLLV P
275	EGA636	QPEYCWWATWGRECLL VP
275 4	EGA637	LPEGCFWAIWGSECLLLP
275 5	EGA638	LPE ACWW STWGRECLLL P
275 6	EGA639	VPEGCWWAVWGVECQL LP
275 7	EGA640	LPESCCWTDWGHECFLPP

-244043040

275 8	EGA641	FPEDCWWSVWGRECLLL P
275 9	EGA642	LSGGCWWAVWGRECLL LP
276 0	EGA643	LPDGCWWSQWGRECILL P
276 1	EGA644	MPEGCWWAAWGRECIL LP
276 2	EGA645	LPEGCYWAVWGRECLLL P
276 3	EGA646	LPDGCYWAIWGRECILPN
276 4	EGA647	LPEGCWWAIWGRECLLL P
276 5	EGA648	LPEGCWWATWGRECLLL P
276 6	EGA650	LPEGCYWTTWGKECLLR P
276 7	EGA651	LPDGCYWAVWGKECYQI R
276 8	EGA652	LPEGCWWSSWGKECFLL P
276 9	EGA654	LPEGCWWAHWGKECLL GP
277 0	EGA655	IPDGCWWTVWGRECFLH P
277 1	EGA656	LPEGCWWSIWGRECILLP
277 2	EGA657	LPEGCHWTMWGKECFLP P
277 3	EGA658	LPEGCWWATWGRECILP P
277 4	EGA659	LPEGCWWAPWGKECILP H

277 5	EGA660	LPEGCWWSNWGRECFM RQ
277 6	EGA661	LPSGCWWAIWGRECLLP P
277 7	EGA662	LADGCYWAIWGRECLLL P
277 8	EGA663	LPEGCFWTVWGKECLLL P
277 9	EGA664	LPEGCYWTTWGRECLLL P
278 0	EGA665	LPDGCWWSTWGRECVLL P
278 1	EGA666	MPDNCWWALWGKECFL MP
278 2	EGA667	LPEGCWWAVWGKECLL LP
278	EGA668	DPYGCWWTQWGRECHL LP
278 4	EGA669	LPEGCYWALWGKECLLP P
278 5	EGA670	GPEDCWWSTWGRECYL AP
278 6	EGA671	LPEGCIWTTWGKECFLQF
278 7	EGA672	LPAGCWWSAWGRECLLT P
278 8	EGA674	LNEQCWWAVWGHECLL LP
278 9	EGA675	IPDDCWWAVWGRECLLL N
279 0	EGA676	LPEGCWWSQWGRECILP P
279 1	EGA677	LPEGCFWTIWGQECFLLP

-245 043040

279 2	EGA678	LPDGCWWSQWGKECILL P
279 3	EGA679	LPEGCWWSTWGRECILL P
279 4	EGA680	LPDGCWWSIWGRECLLA P
279 5	EGA681	VPDGCWWSPWGRECLLP P
279 6	EGA682	VPESCWWAVWGRECLLL P
279 7	EGA683	LPDGCWWAMWGRECIL EP
279 8	EGA684	LPEGCYWTIWGKECFLLP
279 9	EGA685	LPDNCVWMVWGRECLL VS
280 0	EGA686	LTEGCWWATWGRECFLL P
280 1	EGA687	LPKGCFWTVWGKDCYLL P
280 2	EGA688	LPEGCFWAKWGKECYLT Q
280 3	EGA689	LPDGCWWAVWGRECLM LP
280 4	EGA693	DSYGCFWTIWGRECLLLP
280 5	EGA694	LSDGCWWAVWGRECLIQ К
280 6	EGA695	HPEGCWWAVWGKECLL PP
280 7	EGA696	LPEGCWWAIWGRECLM QP
280 8	EGA697	SLEGCWWSPWGKECFLP P

280 9	EGA698	LPSGCWWSTWGRECLLL P
281 0	EGA699	LPDGCYWAVWGRECLLL P
281 1	EGA700	LPEACWWATWGRECILL P
281 2	EGA701	LPEGCCWTVWGLECFLC P
281 3	EGA702	MPEGCYWAQWGKECLL VP
281 4	EGA703	LPEGCLWMVWGKECFLV P
281 5	EGA704	LPEGCHWAVWGKECQL QP
281 6	EGA705	LPEGCWWAPWGRECILP P
281 7	EGA706	LPEGCHWEIWGKECFLPP
281 8	EGA707	LPKGCYWATWGRECLLV P
281 9	EGA708	LPEGCYWAVWGKECLLR P
282 0	EGA710	IGDACYWTVWGRECLLL P
282 1	EGA711	LPDGCVWTVWGRECFGF P
282 2	EGA712	SPDGCYWALWGRECLLA P
282 3	EGA713	LPQGCWWSVWGKECILR P
282 4	EGA714	LPKGCWWAVWGKECLM QS
282 5	EGA715	LPEGCWWAVWGRECLM LH

-246043040

282 6	EGA716	LPEGCYWTTWGKECFLL P
282 7	EGA717	YAEHC SMFPND WICTLV T
282 8	EGA718	YAEHCWQFPTDWICTLM P
282 9	EGA719	YVEHCWQFPTDWICTLK T
283 0	EGA720	YVDHCWHFPADWICGLS T
283 1	EGA721	YEEHCRLFP ADWIC SLLQ
283 2	EGA722	YLEHCRHFPTDWIC SLLP
283 3	EGA723	YLEHCRQFPGDWICTLLE
283 4	EGA724	YAEHCRMFPTDWIC SLIT
283 5	EGA725	YVEHCCKFPTDWICTLNS
283 6	EGA726	YAEHCWLFPTDWICGLR A
283 7	EGA727	YAEHCRLFPTDWICTLLT
283 8	EGA728	YEEHCWLFPTDWICTLLT
283 9	EGA731	YAEHCWQFPTDWICSLSS
284 0	EGA732	YAAHCWQFPTDWICTLL P
284 1	EGA733	YAEHC SLFP SDWIC SLMT
284 2	EGA734	YAEHC SQFPCDWICTLLT

284 3	EGA735	YAEHCCQFPSDWICTLMS
284 4	EGA736	YAEHCRLFPCDWICTLMT
284 5	EGA737	YAEHCWLFPTDWICTLLP
284 6	EGA738	YAEHCWMFP SDWIC SLP T
284 7	EGA739	YADHCEMFPNDWICTLR T
284 8	EGA740	YAEHCRMFP SDWIC TLIP
284 9	EGA741	YAEHCRLFPTDWICTLTT
285 0	EGA742	YAEHC SQFPTDWICTLIT
285 1	EGA743	YEEHCWLFPNDWICSLM T
285 2	EGA744	YAEHCQLFPSDWICSLET
285	EGA746	YAEHC AQFPTDWIC SLIS
285 4	EGA747	YAQHCYQFPSDWICSLLP
285 5	EGA748	YAEHCRHFWTDWICSLK T
285 6	EGA749	YGEHCRSFPTDWICTLLP
285 7	EGA750	YSTHCRLFPTDWICTLEG
285 8	EGA751	YAEHCWHFPTDWICSLLP
285 9	EGA752	YFEHCRQFPTDWICTLMP

-247043040

286 0	EGA753	YAEHCRLFPTDWICTIKS
286 1	EGA755	YVEHCWQFPSDWICTLLP
286 2	EGA757	YAEHCWRFPGDWICSLIT
286 3	EGA758	YAEHCRLFPTDWIC SLRE
286 4	EGA759	YAEHC SMFPTDWICTL VT
286 5	EGA760	YLQHCLLFPTDWICTLLP
286 6	EGA761	YAEHCTLFPTDWICTLLP
286 7	EGA762	YAEHC WMFPTDWIC SLR S
286 8	EGA763	YAEHC WLFPKDWICTLIT
286 9	EGA764	YEEHCWQFPGDWICSLR G
287 0	EGA765	YAEHCRIFPTDWICTLST
287 1	EGA766	YAEHCWQFPSDWICSLIE
287 2	EGA767	YAEHC SHFWTDWICTLST
287 3	EGA768	YAEHCRQFPSDWICTLLS
287 4	EGA769	YAAHCSLFPTDWICTLMP
287 5	EGA770	YAEHCWLFPKDWICTLD M
287 6	EGA773	YAEHCLQFPADWICTLRT

287 7	EGA774	YAGHCALFPSDWICSLLP
287 8	EGA775	YAEHCSYFPTDWICTLRT
287 9	EGA776	YLDHCRLFPTDWICSLLP
288 0	EGA777	YVEHCRLFPCDWICSLMI
288 1	EGA779	YAEHCFQFPHDWIC SLMT
288 2	EGA780	YQEHCWRFPNDWICSLLP
288 3	EGA781	YAEHCRLFPGDWICTLST
288 4	EGA782	YAEHC SMFPSDWIC SLMT
288 5	EGA783	YAEHCWHFPTDWICTLR s
288 6	EGA784	YAEHCGLFPGDWICTLK N
288 7	EGA785	YAEHCNMFPTDWICTLM E
288 8	EGA786	YAEHCSFFPADWICTLIP
288 9	EGA788	YAEHCWMFPTDWICSLN R
289 0	EGA789	YPEHCWQFPGDWICTLLT
289 1	EGA790	YADHCRLFPTDWICTLVT
289 2	EGA791	YAEHCRLFPSDWICSLVT
289	EGA792	YAEHCRQFPADWICTLM T

-248 043040

289 4	EGA793	YSEHCWMFPSDWICTLM E
289 5	EGA795	YAEHC SQFPTDWICTLLT
289 6	EGA796	L AEHC YLFPCDWIC SLLT
289 7	EGA798	YAEHCWQFPADWICTLL P
289 8	EGA799	YREHCSLFPNDWICTLMP
289 9	EGA801	YAEHCSLFPTDWICSLMP
290 0	EGA802	YEEHCWLFPSDWICSLRQ
290 1	EGA804	LPEPCWWAPWGRECLLL P
290 2	EGA805	LPQGCWWAVWGKECHL LP
290 3	EGA806	LYDTCYWTTWGKECLM PR
290 4	EGA807	LPDGCTWMVWGRECFLL P
290 5	EGA808	LPGGCWWAVWGRECQL LP
290 6	EGA809	HPDDCWWALWGRECLL LP
290 7	EGA810	KCNFNPWKAACG
290 8	EGA811	LPEGCWWALWGRECLLL P
290 9	EGA812	LLDACWWATWGKECIW RN
291 0	EGA813	LTYVCWWNMWGYECLP YE

291 1	EGA814	LPDGCWWAQWGRECLL KP
291 2	EGA815	LPAPCYWTTWGKECFIVP
291	EGA816	LIAPCYWTIWGKECFILD
291 4	EGA817	HPDNCWWAVWGRECLL LP
291 5	EGA818	LSDPCYWTTWGKECFLL R
291 6	EGA819	LTAPCYWTTWGKECLLL R
291 7	EGA820	LAEGCIWTTWGRECFLLP
291 8	EGA821	LPDGCYWTVWGRECFLP P
291 9	EGA822	LRDPCWWAVWGRECILL P
292 0	EGA823	QSPGCWWAVWGVECILL P
292 1	EGA824	IHEGCWWS SWGKECLLL P
292 2	EGA825	LPEGCWWATWGRECLLE P
292	EGA826	LPAGCYWANWGKECFL VP
292 4	EGA828	LTDPCYWTTWGKECLLH R
292 5	EGA830	LPEGCWWAPWGKECLLS P
292 6	EGA831	LPAPCYWTTWGKECLMP R
292 7	EGA832	LPDGCYWSMWGRECFLV P

-249043040

292 8	EGA833	VPQGCYWATWGRECYL LP
292 9	EGA834	LPDSCWWSTWGRECILLP
293 0	EGA835	LPAPCYWTTWGKECLLQ H
293 1	EGA836	LQEGCFWAVWGKECILL P
293 2	EGA837	LNEHCYWALWGKECFLP R
293 3	EGA838	LPEGCWWSPWGRECLLL P
293 4	EGA840	LPEGCFWTVWGKECLLM P
293 5	EGA841	LPDGCYWTTWGKECFMP R
293 6	EGA842	LPEGCWWSPWGKECLL MP
293 7	EGA843	LTPPCYWTIWGKECFMR Q
293 8	EGA844	LPEGCYWSVWGKECLLE S
293 9	EGA846	LTDQCYWATWGRECILL R
294 0	EGA847	FPDGCYWAIWGRECLLQ P
294 1	EGA848	LSGGCYWTTWGRECILLP
294 2	EGA849	LSSPCYWTTWGKECFIIR
294 3	EGA850	FPEGCWWALWGKECFLQ P
294 4	EGA851	LPDGCWWSVWGRECLM LP

294 5	EGA852	LPEDCWWAIWGRECLLT P
294 6	EGA853	LPEPCYWTTWGKECFMI H
294 7	EGA854	LPQGCYWAVWGRECLLL P
294 8	EGA855	LPAGCWWSLWGKECYL LP
294 9	EGA856	LPEECWWAIWGRECHLL P
295 0	EGA857	LPAGCWWSVWGRECLL MP
295 1	EGA858	MPEGCFWAIWGRECFLL P
295 2	EGA859	LPDPCWWAPWGRECVL MP
295	EGA860	IPDGCYWAIWGRECFLLP
295 4	EGA861	LPAPCYWTTWGKECFLL R
295 5	EGA862	LTDSCYWTTWGRECFLIP
295 6	EGA863	IHDPCYWTVWGRECLLL P
295 7	EGA864	LPEGCWWSAWGRECILL Q
295 8	EGA865	LMGDCWWTVWGKECLL QP
295 9	EGA868	VPD SCWWS QWGRECLLP P
296 0	EGA869	LPEGCWWSVWGKECLM LP
296 1	EGA870	LATPCYWTTWGKECLIPR

-250043040

296 2	EGA871	LLLGCSWHFWVYECLPP P
296 3	EGA872	INPPCYWTTWGKECFLH R
296 4	EGA873	LPEGCWWTQWGKECHL AP
296 5	EGA874	FPAGCYWAHWGRECLLL P
296 6	EGA875	LPEGCWWSIWGKECLLL P
296 7	EGA876	LPEGCYWAIWGKECHMT P
296 8	EGA878	IPEGCWWQPWALECFLL P
296 9	EGA879	IAEGCWWSIWGKECFLLP
297 0	EGA880	LPEPCYWTTWGKECHLP N
297 1	EGA881	LPPRCLWNPWGPECFLIH
297 2	EGA882	LTAPCWWTSWGRECYLF G
297 3	EGA883	RPD SC YWTTWGRECLWP R
297 4	EGA884	LPERCWWAIWGRECILLP
297 5	EGA885	ISQGCWWSKWGRECLLP P
297 6	EGA886	IPHGCWWAIWGRECLLL P
297 7	EGA888	YPEHCWWFPSDWICTLM T
297 8	EGA889	YAEHCWRFPSDWICTLM T

297 9	EGA890	YADHCRLFPNDWICTLIT
298 0	EGA891	YAQHCYLFPMDWICTLT T
298 1	EGA892	YSEHCWQFPDDWICTLM T
298 2	EGA893	YAEHCRVFPTDWICTLRP
298 3	EGA894	YGQHCSLFPTDWICSLMT
298 4	EGA895	YAEHCRQFRTDWICTLM T
298 5	EGA896	YAEHCLTFPTDWICSLAQ
298 6	EGA897	YAGHCRDFPSDWICSLVP
298 7	EGA898	YAEHCWYFPTDWICTLT
298 8	EGA899	YQEHCWLFPTDWICSLTS
298 9	EGA900	YADHCCHFPADWICTLN A
299 0	EGA901	YAEHCWLFPTDWICSLM P
299 1	EGA902	YADHCLQFPLDWICTLM К
299 2	EGA903	YAEHCTQFPTDWICTLTS
299 3	EGA904	YAEHCRQFPSDWICTLMT
299 4	EGA905	YSEHCYLFPTDWICTLPT
299 5	EGA906	YVDHCWDFPTDWICTLL s

-251 043040

299 6	EGA907	YIEHCWQFPTDWICTLMT
299 7	EGA908	YADHCRFFPTDWICTLMP
299 8	EGA909	YAQHCMQFPTDWICTLM T
299 9	EGA910	YADHCWQFPSDWICTLL A
300 0	EGA911	YARHCMQFPTDWICSLTT
300 1	EGA912	YAEHCWQFPTDWICTLR S
300 2	EGA913	YEDHC SLFPKDWICGLMP
300 3	EGA914	YAEHCWQFPTDWICTLLP
300 4	EGA915	YEEHCQLFPTDWICTIRT
300 5	EGA916	YAEHC WLFPTDWIC SLM T
300 6	EGA918	YAEHCWQFPTDWICTLM s
300 7	EGA919	YAEHCRQFPTDWICGLM T
300 8	EGA920	YADHCSQFPTDWICTLIP
300 9	EGA921	YSEHCWLFPTDWICTLVP
301 0	EGA922	YAAHCWQFPTDWICTLIP
301 1	EGA924	YAEHCWLFPSDWICTLM P
301 2	EGA925	YAEHCYMFPTDWICTLT A

301 3	EGA927	YTEHCWLFPTDWICSLMP
301 4	EGA929	YEQHCWHFPNDWICTLM T
301 5	EGA930	YAEHCWLFPTDWICTLM T
301 6	EGA931	YYEHCTLFPSDWICTLMT
301 7	EGA932	YEEHCALFPTDWICTLH
301 8	EGA933	YGEHCWQFPTDWICTLV T
301 9	EGA934	YSEHCWLFPSDWICSLDT
302 0	EGA935	YDEHCRQFPTDWICKLTT
302 1	EGA936	YAEHCYRFPTDWICTLMS
302 2	EGA937	YAGHCSRFPTDWICTLM A
302	EGA938	YAQHCWQFPADWICTLIE
302 4	EGA939	YDEHCLKFP ADWIC SLPR
302 5	EGA940	YAGHCNLFPTDWICTLKT
302 6	EGA941	YEEHCGLFPTDWICTLMD
302 7	EGA942	YSEHCWLFPTDWICTLPT
302 8	EGA944	YAEHCWMFPTDWICSLL P
302 9	EGA945	YAEHCWQFPSDWICTLLP

-252 043040

303 0	EGA946	YAEHCWRFPTDWICTLM T
303 1	EGA947	YTSHCRHFPNDWICTLLP
303 2	EGA948	YAEHCWQFPHDWICTLT К
303 3	EGA949	YADHCWLFPNDWICTLIK
303 4	EGA950	YAEHCWLFPTDWICTLRT
303 5	EGA951	FQGHCALFPTDWICTLKS
303 6	EGA952	YAEHCRLFPADWICSLMT
303 7	EGA953	YAEHCGLFPTDWICTLMT
303 8	EGA954	YREHCGQFPNDWIC SLLT
303 9	EGA955	YVEHCYQFPADWICTLK T
304 0	EGA956	YAEHCRHFPSDWICTLTK
304 1	EGA957	YAEHC SQFPTDWIC SLLT
304 2	EGA959	YAVHCWQFP ADWIC SLE M
304 3	EGA960	YEEHCLQFPADWICTLLP
304 4	EGA961	YAEHC GMFPNDWICSLT К
304 5	EGA962	YADHCAHFPTDWICTLM T
304 6	EGA963	YPEHCWLFPTDWICTLVA

304 7	EGA964	YAEHCWQFPADWICSLPS
304 8	EGA965	YAEHCWQFPTDWICSLL D
304 9	EGA966	YAQHCWMFPADWICTL MT
305 0	EGA967	YLAHCWHFPNDWICSLL P
305 1	EGA968	YTKHCQRLPTYKICNLFM
305 2	EGA969	YSEHCWLFPTDWICHLM P
305 3	EGA970	YAEHCYNFPSDWICSLLT
305 4	EGA971	YAEHCWQFPTDWICSLM T
305 5	EGA972	YEEHCWQFPADWICTLL T
305 6	EGA973	YAEHCWHFPSDWICTLK E
305 7	EGA974	YAMHCSQFPSDWICTLM T
305 8	EGA975	YAEHCRQFPTDWICSLMT
305 9	EGA976	YEEHCWLFPSDWICTLMP
306 0	EGA977	YAEHCWLFPTDWICNLIP
306 1	EGA978	YEKHCYQFPSDWICSLKT
306 2	EGA979	LPDGCCWLQWGMECHL CP
306	EGA980	IPDDCYWTVWGRECLLV P

-253 043040

306 4	EGA981	LTDGCYWTIWGRECLLL P
306 5	EGA982	LPDGCWWSTWGRECLLV P
306 6	EGA984	LPEGCYWAIWGKECLLP L
306 7	EGA985	DPYGCYWAAWGRECLL LP
306 8	EGA986	LPEGCWWSVWGRECLLP S
306 9	EGA987	LPEDCWWATWGRECLL QP
307 0	EGA988	LPEGCHWAIWGRECLLPP
307 1	EGA989	LPEGCWWANWGRECLL LP
307 2	EGA991	IPEGCWWAQWGRECILA A
307	EGA992	ISDGCFWAVWGRECLLA A
307 4	EGA993	GTDGCWWEVWGRECLL TP
307 5	EGA994	LPEGCWWSPWGRECLLP P
307 6	EGA995	LTEPCYWTTWGKECHMP R
307 7	EGA996	DEAGCWWEIWGRECILS P
307 8	EGA997	IHDHCCWTIWGYECQLC P
307 9	EGA998	LHDGCWWEVWGRECFV PS
308 0	EGA999	FPDVCYWTVWGRECLLL P

308 1	EGA100 1	HPDGCYWTVWGRECLLP P
308 2	EGA100 2	YSEVCWWEVWGRECFL RS
308	EGA100	LPEDCWWAQWGRECFLP A
308 4	EGA100 4	LNDPCYWTTWGKECLLP R
308 5	EGA100 5	YEEHCGQFPTDWICTLIS
308 6	EGA100 6	YEEHCWLFPSDWICTLM T
308 7	EGA100 7	YEEHCWLFPTDWICTLVT
308 8	EGA100 8	YAEHCWLFPSDWICTLLT
308 9	EGA100 9	YAEHCCRFPSDWICTLMS GQAAAGGSQAQICRLLPS DRVCTLMP
309 0	EGA101 0	PESWCHTLYWNLQHCLS QE
309 1	EGA101 1	LPEGCYWATWGKECLLQ P

-254043040

Таблица 18

Связывающие ErbB2 домены MRD

SE	Иденти	Пептидная
Q	фикаци	последовательность
ID:	онный номер
311 3	EGB98	LCFAHQQAMFCN
311	EGB10	TCHPSWGGKTCT
4	4
311	EGB10	ICVAMTVTCS
5	6
311	EGB11	FCIHFPHSWVCH
6	7
311	EGB12	WCHLFPYSQWCH
7	2
311	EGB12	ICKYFPFSHFCW
8	3
311	EGB12	WDHWHIWHFG
9	5
312	EGB12	LCETQPVSFSCSGQACPGG
0	7	GGGSLCQFWPHIDFCV
312	EGB12	WCHFQIWHHPCY
1	8
312	EGB12	FCQFFPWTMVCQ
2	9
312	EGB13	MPWEYLHQHQ
3	0
312	EGB13	HCNWAPWWGYCMGQAG
4	1	QGRCTAGGGSHCYWPPPN TRCW
312	EGB13	PCVFVIEGCF
5	2

312 6	EGB13 3	ICSRWPYWPHCWGQARQ AAGGGSNCSHEPGSVVCL
312 7	EGB13 4	WCRYYSVVCS
312 8	EGB13 7	ICWIGTFGCA
312 9	EGB22 1	PPYRCIPSESWICSFILGQA
313 0	EGB22 2	QGGGCRGPHWYQMFYCV SPS
313 1	EGB22 4	LVSFCPWGPDWYCSHYH
313 2	EGB22 5	PPRWWCEHYGVQDLMCP GLF
313	EGB22 7	SVFDCKYAPMWYCKHYL
313 4	EGB24 9	GSLGCVLPMVFCRSYQ
313 5	EGB26	YGKVLCSKWQCCKLLR
313 6	EGB26 4	FCHLCQMFPAWCFLQT
313 7	EGB28 9	RWVHCKQHGHYFSQRCIE TW
313 8	EGB31 0	PRRWCHMDFHHSPMCHW HL
313 9	EGB31 5	HTRKCHKFMFQHKHCIEV L
314 0	EGB33 4	MVVPCFTSQRQMAPACIA PRGQAGQGGPGCGRWLP RQRCFIKHGHMSESCMVS A

- 255 043040

314 2	EGB33 9	LLFDCWRIPEWHACGKDY
314	EGB34	WNRICMYQWANHFTVCA
3	4	PGP
314	EGB35	ERALCHKPWSHIMPWCPQ
4	0	KL
314	EGB35	WKPWCKLYWRADPACLQ
5	4	IK
314	EGB35	WSGWCMYTWGWAPCRS
6	6	VD
314	EGB35	WSGWCVKQNAWYFCTG
7	8	KI
314	EGB36	VAQSSAFCEEFPVHWYCS
8	4	FYVG
314	EGB36	VAQSTPSCGMPKWYCIHY
9	6	FG
315	EGB36	VAQS SEHC YFGWNS YHC
0	7	WSQAG
315	EGB37	VAQREKHCVPEWYCKHY
1	3	M
315	EGB37	WSGWCWSDESKYWYSCH
2	5	SRA
315	EGB38	WSGLCLWDMFWQQCHGS
3	0	S
315	EGB38	SVLGCDDVGFYQCLEFLG
4	3	QA
315	EGB38	WSGWCQFKDGQWAKCT
5	4	GRV
315	EGB38	WSGYCFDSTHEGWYQCG
6	5	AVS
315	EGB38	WSGWCFHETHWQHCSAG
7	6	G
315	EGB38	WTGWCLVENQWTYCQN
8	7	GD

315 9	EGB38 8	WSGWCFEEAGWGHCMG LP
316	EGB38	WSGYCFDRGYWQQCSSA
0	9	W
316	EGB39	WSGYCYVFDHWESCRGR
1	1	E
316	EGB39	WSGWCFKEAGWGHCMG
2	2	LP
316	EGB39	WSGCCHWEAAWNNCGG
3	3	WT
316	EGB39	WSGWCMISNQWRHCGSP
4	4	D
316	EGB39	WTGWCEGHGQWGWCHS
5	5	SL
316	EGB39	WVVSCHTSTQVLMCVCL
6	6	L
316	EGB39	WSGYCNSNGAWMMCGG
7	8	GT
316	EGB39	WSGWCFEQAGWGHCLGL
8	9	P
316	EGB40	WSGWCQ SHGEWMRCRS
9	0	WT
317	EGB40	WSGWCEEQFGWSQCRRS
0	1	P
317	EGB40	WSGWCFQETHWQHCMG
1	3	LR
317 2	EGB40 4	WTGFCFDENHWYICGTGR
317	EGB40	WRGWCQIAGEWQHC SNY
3	6	S
317	EGB40	WTGYCVDQERHQWHQCF
4	7	GRS
317	EGB40	WQGYC YQEVYALWDHC S
5	8	GPL

-256043040

317 6	EGB40 9	WSGWCF AMEHQKWKQC AGSS
317 7	EGB41 0	GSMLCLWFNDNPQCFEVC
317	EGB41	WSGWCETPHQWHDCKGT
8	1	I
317 9	EGB41 2	MIEFCWYYMALPECWIPT
318 0	EGB41 3	IIEFCWYLQQYDECWVPK
318	EGB41	WSGYCYEGVTWRSCWGD
1	4	M
318	EGB41	WSGWCFQFDNWDHCTGS
2	6	V
318 3	EGB41 9	SFTLTCGAHQCLCHVL
318	EGB42	WSGWCQHMQVPIWHACS
4	0	GGL
318 5	EGB42 1	WSGLCLTEEVWHVCQGTI
318	EGB42	WTGFCQSSKTQKWQHCR
6	3	GGG
318	EGB42	WSGWCEEELQWSFCSGH
7	5	L
318	EGB42	WSGYCVDFEFPAWGYCH
8	6	GNI
318	EGB42	WSGWCYSQALMSWTYCH
9	7	EFK
319	EGB42	WSGWCFYQVEYIWRSCEP
0	8	AS
319 1	EGB42 9	NRSGCIEIHYEDCLLIV
319	EGB43	WTGWCYMEHFWDICHGP
2	0	A

319 3	EGB43 1	WTGYCLS SERHKWHHCF GRS
319	EGB43	WSGWCFQFDNWDRCPGS
4	2	V
319	EGB43	WSGYCQMKDHWAHCGH
5	3	SE
319	EGB43	WSGWCLFADGWGHCYG
6	5	VI
319	EGB43	WSGWCFIKTHWGHCYGQ
7	6	I
319	EGB43	WSGWCFYVDHWDYCGG
8	7	LI
319	EGB43	WSGYCEGTDHWYHCGGS
9	8	M
320	EGB43	WSGWCF YGDRWGHC SGL
0	9	P
320	EGB44	WSGWCFYGSYWGHCKGI
1	0	L
320	EGB44	WSGYCEFEDHWDYCGTP
2	1	К
320	EGB44	WSGWCLMETGWGHCKG
3	2	LP
320	EGB44	WSGWCF S ADGWGHCRGV
4	4	I
320	EGB44	WSGYCDMGDHWSHCGHS
5	5	G
320	EGB44	WSGWCF YGSWWDYCSG
6	6	GH
320	EGB44	WSGYCEFEDHWDFCGTSR
7	7
320	EGB44	WSGYCEYQDRWAHCGGT
8	8	PGQAGQGGGSWSGYCRT EGHWAHCGGSV

-257 043040

320 9	EGB45 0	WSGWCLGEAGWGHCRGL L
321	EGB45	WSGWCLYESGWGHCYG
0	1	WI
321	EGB45	WSGYCEYKYKWDHCGTS
1	2	V
321	EGB45	WSGYCEFKDHWAHCGGS
2	3	L
321	EGB45	WSGWCLGETGWGHCSG
3	5	MP
321	EGB45	WSGYCEFKDHWAHCGGS
4	6	V
321	EGB45	WSGYCEFQDHWGYCGNT
5	8	E
321	EGB45	WSGYCEFKDYWAHCSGS
6	9	M
321	EGB46	WSGYCEYSDHWAHCGGS
7	0	L
321	EGB46	WSGWCL YD AGWGYC SGL
8	2	Q
321	EGB46	WSGYCEMQDHWDYCSGS
9	3	I
322	EGB46	WSGWCFTEGVWGHCKGL
0	4	G
322	EGB46	WSGYCEFKDHWDFCGHS
1	5	A
322	EGB46	WSGWCFLDSGWGHCQGL
2	9	I
322	EGB47	WSGWCFNSNGWYQCGGL
3	0	I
322	EGB47	WSGWCFFGASWGHCSGF
4	1	P
322	EGB47	WSGWCFFGAGWDYCHG
5	2	QP

322 6	EGB47 3	WSGYCEFKDHWDYCGGS E
322	EGB47	WSGWCFYGTGWGYCYGL
7	4	I
322	EGB47	WSGYCEYKHHWAHCGTR
8	6	H
322	EGB47	WSGYCLMKDHWAHCGH
9	7	SE
323	EGB47	WSGWCMGMSGWDHCRG
0	8	LI
323	EGB47	WSGYCEINGKWDYCSHS
1	9	H
323	EGB48	WSGWCFFGAGWGHCFGN
2	0	P
323	EGB48	WSGWCLQGAGWGHCSG
3	1	RI
323	EGB48	WSGWCFNGVGWGHCFGL
4	2	I
323	EGB48	WSGWCFYEAFWGHCTGP
5	3	T
323	EGB48	WSGWCFDGDGWGYCTG
6	4	VS
323	EGB48	WSGWCLRSNGWDYCHGP
7	5	T
323	EGB48	WSGWCLSGAGWGYCSGL
8	6	P
323	EGB48	WSGWCFFGSAWGHCHGF
9	7	P
324	EGB48	WSGWCFYSTHWAQCKGG
0	8	H
324 1	EGB48 9	WSGWCETDRGWSFCSSPL
324	EGB49	WSGWCESELQWGFCSGL
2	0	L

-258 043040

324 3	EGB49 1	WSGWCEGETQWYFCSGH L
324	EGB49	WSGWCEYELQWSFCSGQ
4	2	L
324 5	EGB49	WSGWCEGEREWFFCSGHI
324	EGB49	WSGWCEYEHHWDFC SGH
6	4	L
324	EGB49	LPPPCYWTTWGKECQMF
7	5	D
324	EGB49	WSGWCFSSSGWGFCGGL
8	6	N
324	EGB49	WSGWCF SP AGWGHCYGL
9	7	S
325	EGB49	WSGWCLDRAGWGHCHG
0	8	LI
325	EGB49	WSGWCLTKSGWGHCLGP
1	9	T
325	EGB50	WSGWCLYEFGWGYCSGL
2	0	I
325	EGB50	WSGWCEYELHWSYCWGP
3	1	L
325	EGB50	WSGWCEGELYWSYCSGY
4	2	L
325 5	EGB50	WSGWCEYELSWSFCSGSL
325	EGB50	WSGWCEYEGFWSFCSGN
6	4	L
325	EGB50	WSGWCEGVLQWYFC SGH
7	5	I
325	EGB50	WSGWCEYDLHWSFCSGH
8	6	L
325	EGB50	WSGWCLGKAGWGHCGG
9	7	LI

326 0	EGB50 8	WSGWCFFGSHWGHCFGS P
326	EGB50	WSGWCLLDAEWGHC SGL
1	9	I
326	EGB51	WSGWCLSNDGWGHCWG
2	0	LM
326	EGB51	WSGWCLSGTGWGHCYGL
3	1	H
326	EGB51	WSGWCLVGTQWSFCSGLI
4	3
326	EGB51	WSGWCEKEFLWTFCSGTI
5	4
326	EGB51	WSGWCESDTHWSFCSGQ
6	5	L
326	EGB51	WSGWCEGVSEWSFCSGLI
7	6
326	EGB51	WSGWCLGLDGWDHCYG
8	8	RP
326	EGB51	WSGWCFFGDRWGHCHGQ
9	9	P
327	EGB52	WSGWCFVGASWGHCYG
0	0	MI
327	EGB52	WSGWCLSDAGWGACGG
1	1	AS
327	EGB52	WSGWCLEWNGWGHCSGI
2	2	P
327	EGB52	WSGWCEGELQWFFCSGTI
327	EGB52	WSGWCEGEHHWYFCRGN
4	4	F
327	EGB52	WSGYCEGEQQWFYCSGQ
5	6	V
327	EGB52	WSGWCENKVGWSFCSGH
6	7	I

-259 043040

327 7	EGB52 8	WSGWCEGERTWHFCSGP L
327	EGB53	WSGWCCFGTSWGYCHGP
8	0	P
327	EGB53	WSGWCLLDAGWGHCKG
9	1	ML
328	EGB53	WSGWCFYGHGWGHCHG
0	2	TP
328	EGB53	WSGWCFDYTRWGHCSG
1	3	MP
328 2	EGB53 4	WSGWCLFSAGWGHCSGLI
328	EGB53	WSGWCEGELQWSFCWGH
3	5	I
328 4	EGB53 7	WSGWCEEEHQWSFCSGYI
328	EGB53	WSGWCEGEREWYFCSGF
5	8	F
328	EGB53	WSGWCEGKLKWNYCSGY
6	9	L
328	EGB54	WSGWCEQDQKWNYCSG
7	0	YI
328	EGB54	WSGWCFYEVRWGHCHGS
8	2	I
328	EGB54	WSGYCLSESGWGHCGGL
9	3	L
329	EGB54	WSGWCLSYSGWGHCSGS
0	4	P
329	EGB54	WSGWCFYGDYWGHCSG
1	5	QP
329 2	EGB54 6	WSGWCFKITGWGHCSGLI
329 3	EGB54 7	WSGWCENELQWSFCSGHI

329 4	EGB54 8	WSGWCEGERQWSFCSGSI
329 5	EGB54 9	WSGWCEYEFKWSFCSGHI
329	EGB55	WSGWCEHEMYWSYCSGH
6	0	К
329 7	EGB55 1	WSGWCEGELRWFFC SGTL
329	EGB55	WSGWCFYGTHWGHCGGL
8	3	P
329	EGB55	WSGWCFDGGRWGYC SGP
9	4	L
330	EGB55	WSGWCLKGDGWGHCWG
0	5	LI
330	EGB55	WSGWCLRVSGWDHCSGH
1	6	P
330	EGB55	TDSWCHTLYWALQHCVA
2	7	QE
330	EGB55	WSGWCLMGDSWGHCSGL
3	8	I
330	EGB55	WSGWCEGEVGWFFC SGY
4	9	L
330 5	EGB56 0	WSGWCEYELQWSFCFGPS
330	EGB56	PDS SCHTLYWQLHHCARR
6	1	E
330	EGB56	WSGWCEGDLQWYYCSGH
7	2	I
330 8	EGB56 3	WSGWCEEALRWSYCSGHI
330	EGB56	WSGWCLGDAGWGHCGG
9	5	LP
331	EGB56	WSGWCFFDTHWGHCSGL
0	6	L

-260043040

331 1	EGB56 7	WSGWCFNHGAWGHCRG LI
331	EGB56	WSGWCYEHTGWRHCHGL
2	8	I
331	EGB56	WSGWCLTREGWGHCKGL
3	9	I
331	EGB57	WSGWCLSGVGWFHCKG
4	0	MI
331 5	EGB57 1	WSGWCEGESQWFFCSGLI
331 6	EGB57 2	WSGWCEYESHWSFCSGHI
331	EGB57	WSGWCEGERKWSYCSGQ
7	3	I
331	EGB57	WSGWCEGELHWYSCSGH
8	4	M
331	EGB57	PDSWCHTLYWDLLYCVN
9	5	QE
332 0	EGB57 7	WSGWCETPCGWESCHGTI
332 1	EGB57 9	WSGWCESTDSWHFCRGNI
332	EGB58	WSGWCETPSGWKACRGN
2	0	I
332	EGB58	WSGWCETGVGWHECHGT
3	1	I
332 4	EGB58 2	WSGWCEAERQWTFCSGHI
332	EGB58	WSGWCENSEGWDFCNGT
5	3	I
332	EGB58	WSGWCETQKGWHSCHGS
6	4	I
332 7	EGB58 5	WSGWCLTGTDWHFCRGFI

332 8	EGB58 6	WSGWCETYKGWHACHG KI
332 9	EGB58 7	WSGWCETNAGWIQCYGSI
333	EGB58	WSGWCQTGANWHYCNG
0	8	TI
333	EGB58	WSGWCLADGMWGHCNG
1	9	TI
333	EGB59	WSGWCEGRDAWYQCKG
2	0	TI
333	EGB59	WSGYCLTDGTWHHCKGT
3	1	I
333	EGB59	WSGWCKTGKKWHHCGG
4	2	TI
333 5	EGB59 3	WSGWCETSSGWHQCSGII
333	EGB59	WSGWCEEKGQWVSCGGS
6	5	L
333	EGB59	WSGWCEGELQWYFC SGH
7	6	L
333	EGB59	WSGWCEGEHKWSFCSGH
8	7	L
333	EGB59	WSGWCESDKGWYQCRGT
9	8	I
334 0	EGB59 9	YEEHCRLFPADWICSLLQ
334	EGB60	WSGWCETPGHWYQCRGS
1	0	I
334	EGB60	AD S WCHTL YWNLRHCEIQ
2	1	E
334	EGB60	WSGWCNSGGGWHQCRG
3	2	TI
334 4	EGB60	WSGWCLTDNKWHSCIGTI

-261 043040

334 5	EGB60 4	WSGWCETDRGWHDCHGT I
334	EGB60	WSGWCETKDHWHACNGI
6	5	I
334	EGB60	WSGWCEGELQWYFCSGK
7	6	I
334	EGB60	PESWCHTLYWNLQHCLSQ
8	7	E
334	EGB60	WSGWCETSGGWHYCKGT
9	9	I
335	EGB61	WSGWCETDQGWHHCWG
0	0	TI
335	EGB61	WSGWCETKFGWNYCKGS
1	1	I
335	EGB61	WSGWCFATSGWHSCRGT
2	2	A
335	EGB61	WSGWCETGNGWDRCWG
3	3	NI
335 4	EGB61 4	WSGWCEGQLQWFFCSGQI
335	EGB61	WSGWCERSWGWEQCRGT
5	5	I
335	EGB61	WSGWCEYEEKWAFCSGY
6	6	I
335	EGB61	WSGYCEGELQWYFCTGH
7	7	L
335	EGB61	WSGWCETSVGWHKCSGT
8	8	I
335 9	EGB61 9	WSGWCRIETGWDFCSGTI
336 0	EGB62 0	WSGWCETSKGWHFCSGTI
336 1	EGB62 1	WSGWCESSHGWHGCKGII

336 2	EGB62 2	WSGWCEYNGYWDYCTG TI
336	EGB62	WSGWCETGKYWHYCSGT I
336	EGB62	WSGWCEGKHQWYFC SGN
4	4	L
336	EGB62	WSGWCETELGWHQCRGT
5	5	I
336	EGB62	WSGWCEGQTKWYFCSGQ
6	6	I
336	EGB62	WSGWCLFDSKWDYCQGN
7	7	I
336	EGB62	ANSWCHTLYWDLMYCV
8	8	WQE
336	EGB62	WSGWCQTGMRWHQCYG
9	9	TI
337	EGB63	WSGWCESNGTWHGCKGT
0	0	I
337	EGB63	WSGWCEGKHGWYSCRGT
1	1	I
337	EGB63	WSGWCETLSGWHQCHGV
2	2	I
337	EGB63	WSGWCEGKEKWHHCNGS I
337	EGB63	WSGWCETSEGWHSCYGSI
4	4
337	EGB63	WSGWCLNELGWQQCFGT
5	5	I
337	EGB63	WSGWCERVSGWNYCHGT
6	6	I
337	EGB63	WSGWCYAPTGWHHCVGT
7	8	I
337	EGB63	WSGWCETGTGWYHCGGT
8	9	I

-262043040

337 9	EGB64 0	PDS WCHTL YWHLQHCLS QE
338 0	EGB64 1	WSGWCEYELRWDFCSGHI
338 1	EGB64 2	WSGWCETVNGWHQCTGT I
338 2	EGB64 3	WSGWCLTKNSWDFCSGTI
338 3	EGB64 4	WSGWCLTNGVWHGCRGI I
338 4	EGB64 5	WSGFCLTEESWHHCTGPI
338 5	EGB64 6	WSGWCEAIDMWYQCHGP I
338 6	EGB64 7	WSGWCFTGDLWHACTGII
338 7	EGB64 8	WSGWCEGELQWYYC SGK I
338 8	EGB64 9	WSGWCEGEFQWYFCSGQ F
338 9	EGB65 0	WSGWCETNGKWDFCQGT I
339 0	EGB65 1	WSGWCETPVGWEQCTGTI
339 1	EGB65 2	WSGWCEGKLHWYFC SGH M
339 2	EGB65	WSGWCEGALGWSSCSGH G
339 3	EGB65 4	YEEHCALFPTDWICTLH
339 4	EGB65 5	WSGWCEGIGAWHFCKGII
339 5	EGB65 6	WSGWCESNDGWYQCKG DI

339 6	EGB65 7	WSGWCETLNGWYGCHGT M
339	EGB65	WSGWCENNDGWHHCHG
7	8	SI
339	EGB65	WSGYCETGRGWHMCQGT
8	9	I
339	EGB66	WSGWCETVTGWDYCNG
9	0	KI
340	EGB66	WSGWCETDEGWRQCSGT
0	1	I
340	EGB66	WSGWCMTLDKWHQCYG
1	2	TI
340	EGB66	WSGWCETNNGWYACWG
2	3	MI
340	EGB66	WSGWCFNEAGWGHCYGL
3	4	P
340	EGB66	WSGWCETDRGWHECHGT
4	5	I
340	EGB66	WSGWCETKFGWSYCKGT
5	6	I
340	EGB66	WSGWCEGEDGWHSCRGT
6	8	I
340 7	EGB66 9	WSGWCETSKGWHFCSGII
340	EGB67	PKYSCVYSIMKEKWHCRA
8	0	QT
340	EGB67	FKPHCVYKHQTWVCGPP
9	3	A
341	EGB67	THMHCYQHKHHYHCRTS
0	5	L
341	EGB68	GPELCHHMAGHEWCLRY
1	6	Y
341	EGB69	HRSKCFMMYWDENCLQP
2	2	W

-263 043040

341 3	EGB69 3	LGGRCMLFALKQCSMGH
341 4	EGB69 6	WSRLCTMRLPSTCGVWE
341	EGB69	RSWHCSHQMGSKPHCVLS
5	7	P
341	EGB69	TWFRCTPHKHHYHCKHN
6	8	V
341	EGB70	GIWICRHDSPYMKPHCIFT
7	5	s
341 8	EGB70 7	TWSKCFMVPLGDYCTRAL
341	EGB70	SVWKCVKHPFKIKPLCKL
9	8	ES
342	EGB71	RTWFCEKMHGQKFHCVS
0	0	WF
342	EGB71	ADSWCHTLFWQLQHCVW
1	2	QE
342 2	EGB71 4	KWRCCYGQFQPACNAVS
342	EGB71	PRYKC VFNWE VQKWQC S
3	6	VWS
342	EGB72	PNRYCYTYPHSVKCAWM
4	2	Y
342	EGB72	DPSRCSKAYQMLYQCRTL
5	3	I
342	EGB72	STDLCWPHKKHWHCPPA
6	9	N
342	EGB73	SAWYCTKHMPQSKYHCIS
7	0	MR
342 8	EGB73 2	KWWKCGVIFEICQIVP
342 9	EGB73 8	AQLKCFEKLYMCRHHL

343 0	EGB73 9	VDRVCQFFMQKCWSSP
343 1	EGB74 0	KWTRCIPRMETHTCDCLL
343	EGB74	KLPQCLWEWDNRDCRWL
2	6	L
343 3	EGB74 8	LHRFCDHFAIQCRFCN
343 4	EGB75 8	LICKQHKNHWHCRNYY
343	EGB76	KPWKCFYSYKIQHWKCH
5	3	GVS
343	EGB77	TDSWCHTLYWQLHHCAIL
6	0	E
343 7	EGB77 1	KWRCCYGQFQQACNAVS
343	EGB77	WTHACVVWNMKQMEAC
8	8	TSLT
343 9	EGB77 9	LLNQCLQWAFHNCGCWN
344 0	EGB78 0	WSGYCELKDRWAYC SGSI
344 1	EGB78 1	HRAPCFSCTACRQPCFSLT
344	EGB78	WSGYCEMKGYWAHCTGL
2	5	I
344	EGB78	WSGYCEFLDHWDHC SGG
3	6	E
344	EGB78	WSGYCEYKDHWDHCGS S
4	7	V
344	EGB78	WSGYCEYKDHWDYCGSS
5	8	V
344	EGB78	WSGYCEYKDHWDFCGNV
6	9	D

-264043040

344 7	EGB79 1	WSGYCEYRDHWAHCGGS L
344 8	EGB79 2	WSGYCEFEGYWAHCGGSI
344 9	EGB79 5	WSGYCEYIDHWGYCQGSI
345	EGB79	WSGYCEMNDHWDYCYG
0	6	SI
345	EGB79	WSGYCEYKDHWGYCGGS
1	8	I
345	EGB79	WSGYCQLMDHWDYCHG
2	9	QG
345	EGB80	WSGYCEMTDHWAHCSGS
3	2	H
345	EGB80	WSGYCEFEDHWDYCHGS
4	3	V
345	EGB80	WSGYCEMKDHWAHCGG
5	5	LI
345	EGB80	WSGYCEFKDHWDYCHGS
6	6	V
345	EGB80	WSGYCEMGDHWDYCSGS
7	7	V
345 8	EGB80 8	WSGYCEFNGFWAHCGGFI
345	EGB80	WSGYCLMKDHWGYCGG
9	9	WI
346	EGB81	WSGYCEFEDHWDYCGNS
0	0	E
346 1	EGB81 1	FQGHCALFPTDWICTLKS
346	EGB81	WSGYCEFKTHWGHCGNP
2	3	Q
346	EGB81	WSGYCEFKDHWDHCHS S
3	4	G

346 4	EGB81 6	WSGYCEKEGYWAHCRGT I
346	EGB81	WSGYCEMKGHWAHCGG
5	7	SP
346	EGB81	WSGYCNMGDHWDHCSGS
6	8	I
346	EGB82	WSGYCEFKDHWAHCSGS
7	0	L
346	EGB82	WSGYCEMKGYWDFCGGL
8	2	I
346	EGB82	WSGYCEFQDYWDYCGGS
9	3	I
347	EGB82	WSGYCEMEHGWDYCSGT
0	4	I
347	EGB82	WSGYCEFKDHWDHCGDS
1	5	E
347 2	EGB82 6	WSGYCELEDHWAFCGGTI
347	EGB82	WSGYCEFKGYWDFCYGS
3	7	M
347	EGB82	WSGYCEGQ YFW YHC SGS
4	9	G
347	EGB83	WSGYCEFQDHWDHCFGS
5	0	S
347	EGB83	WSGYCEMNDHWDYCYG
6	1	PK
347	EGB83	WSGYCEFRDHWDYCGNS
7	2	Y
347	EGB83	WSGYCEFKDHWDYCGNS
8	4	D
347	EGB83	WSGYCEFKDHWDFCGGS
9	5	Y
348	EGB83	WSGYCQTNDHWDYCSGT
0	6	I

-265 043040

348 1	EGB83 7	WSGYCESYDHWYHCGGT L
348	EGB83	WSGYCEYEDHWDYCGT
2	8	WV
348	EGB83	WSGYCEMEDRWAYCSGS
3	9	I
348	EGB84	WSGYCEFKDHWDHCGGS
4	0	L
348	EGB84	WSGYCQMKDHWDYCSGS
5	5	L
348	EGB84	WSGYCEGKEHWYQCGGP
6	7	L
348	EGB84	WSGYCEFNDHWAHCHGS
7	8	P
348	EGB84	WSGYCEFKDRWAHCSGSI
8	9
348	EGB85	WSGYCEFKGYWDHCGS S
9	0	К
349	EGB85	WSGYCEYKDRWAHCRGT
0	1	M
349	EGB85	WSGYCEFKDHWDYCGGS
1	2	Y
349	EGB85	WSGYCEMKDHWAHCSGS
2	3	I
349	EGB85	WSGYCEYQDHWAHCGRS
3	4	M
349	EGB85	WSGYCEF SDHWDHCGNS
4	5	К
349	EGB85	WSGYCEMKDHWAHCGG
5	7	SI

-266043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
349 9	EGC1	VYQLCIKMWVCTWHG
350 0	EGC2	DLVGCLLFSHVSCFSPL
350 1	EGC3	PTLSACMEAKCVLIFL
350 2	EGC5	LLWRCELMPPWP YMC SE VD
350 3	EGC13	GTQECAQDDYFRYWCLR TW
350 4	EGC14	LDLCMTIERPHRQCPCG
350 5	EGC19	LWRWCVWARDCPQSS
350 6	EGC20	IAREFCMNYQCLRLLR
350 7	EGC21	SYWVCLTYFICWPSW
350 8	EGC39	VQQFVHWMESWNPACF WRM
350 9	EGC40	LLNQCLQWAFHNCGCW N
351 0	EGC44	LSWWCRMGWFQEYGEC NFLF
351 1	EGC48	WTHACVVWNMKQMEA CTSLT
351 2	EGC54	KVMFCWVMWKQCSSPP

Таблица 19

Связывающие ErbB3 домены MRD

351 3	EGC93	SLVSCPVHNPIWWSHCM EIM
351 4	EGC94	GHRLCIWMQNFVDGHCA GLV
351 5	EGC99	CHVSCPFYNPNWWSHCM ELM
351 6	EGC100	FLEMCMDWNPKTWCYC MEWM
351 7	EGC101	SFVMCPVYNPKQWSVCM EIL
351 8	EGC102	LFLMCLVYPSEKWHVCV ETL
351 9	EGC104	SLVKCPFFNPIWWSHCME LM
352 0	EGC106	WSHACIVYNDKIMGACT CLT
352 1	EGC115	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
352 2	EGC117	PLERCPFQNPLWF SHCME ML
352 3	EGC120	KFFMCQVYPSNRWAVCV ETL
352 4	EGC121	TFYVCQIYPSGKWHVCV GTC
352 5	EGC122	RFFMCQVYPSYKWHVCV ESW
352 6	EGC123	KFLMCRLYPSGKWHVCV ETL
352 7	EGC125	LEVYCPFENPIWWARCM ELM
352 8	EGC127	SRVRCPFQNPIWLAHCM KMT
352 9	EGC128	SQVRCPFQNPIWRNHCM ELI

- 267 043040

353 0	EGC129	PKVRCPFQNPIWWSHCM EML
353 1	EGC130	NFVMCQVYPSYTWHVC VGTL
353 2	EGC132	KFMICRLYPSGNLHICVE TS
353 3	EGC133	TFMMCQVYPSLKWHVCI ETG
353 4	EGC134	RFVMCQVYPSLNWHVCV QTL
353 5	EGC135	SPVRCPFQNPIWYAHCM KIT
353 6	EGC136	SKVYCPFQNPIWFAKCIE LM
353 7	EGC138	PQVRCPFQNPIWYSHCM KLM
353 8	EGC139	TQVRCPFQNPIWWSHCM EML
353 9	EGC140	KLMLCQVYPSLKWHVCV EAS
354 0	EGC141	NFLMCQVYPSYKWHVC VEQL
354 1	EGC142	RFLVCQVYPSLKWHVCV EKS
354 2	EGC143	TFFICQVYPSGKWHVCV DTV
354 3	EGC144	GFIMCQVYPSENWHVCL DRG
354 4	EGC145	KFIMCQVYPSERWHVCL ETM
354 5	EGC150	SD VYCPF SNP AWW VHC MEML
354 6	EGC151	TQVYCPFANPVWWNHC MLLS

354 7	EGC152	KFFMCQIYPSLKWHVCV EKL
354 8	EGC153	KFVMCQVYPSEKWHVCI APL
354 9	EGC154	QFFMCQVYPSLRWSVCQ VTL
355 0	EGC155	GFVMCQVYPSQKWHVC LDTF
355 1	EGC156	GFHMCQVYPSGKWLVCL HPR
355 2	EGC157	EFYMCQVYPSELWHVCV DKL
355 3	EGC158	FKERCPFQNPIWYSRCME LI
355 4	EGC159	SSVRCPFQNPIWWSHCM ELL
355 5	EGC160	SEIRCPFKNPIWYAHCMK LI
355 6	EGC161	SQVRCPFQNPIWYTHCM ELL
355 7	EGC163	SQVYCPFHNPIWLAHCM ELM
355 8	EGC164	KFILCQ VYP SGKWHICTE TL
355 9	EGC165	NLLLCKVYPSGKWHVCF APL
356 0	EGC166	KFQLCQVYPSERWHICV VTL
356 1	EGC167	NF YMCK VYP SELWH VC V ETL
356 2	EGC168	RFVMCQVYPSAKWHVC VETL
356	EGC169	TNIRCPFQNPIWYSHCIAL T

-268 043040

356 4	EGC171	SPVRCPFQNPIWYEHCMA LI
356 5	EGC172	SAVRCPFHNPIWYSHCM KLL
356 6	EGC174	AQVRCPFQNPVWYSHCM DLI
356 7	EGC175	YFRMCQVYPSLKWHICV ETM
356 8	EGC176	GFFMCQVYPSEKWHVCL ETL
356 9	EGC177	GFIMCQVYPSLKWHVCV ETS
357 0	EGC178	KFFMCQIYPSEKWHVCV KLW
357 1	EGC181	AASLCPFQNPIWLAHCME MM
357 2	EGC182	SKVYCPFQNPIWWSHCM ELI
357 3	EGC183	SQAYCPFQNPIWWNHCM ELI
357 4	EGC185	HLFLCQVYPSEKWHVCV ETL
357 5	EGC186	KFRMCQVYPSGKWHVC AETF
357 6	EGC187	KFFLCQVYPSGKYHICVS TW
357 7	EGC189	KFYMCQVYPSVRWHVC VDTS
357 8	EGC191	TREICPFQNPIWRSHCLKL V
357 9	EGC192	PMVRCPFKNPVWYSHCL ELL
358 0	EGC196	TFFMCQVYPSGKWHVCV GGL

358 1	EGC197	KFFLCQVYPSEKWHVCIE RL
358 2	EGC198	RYQMCQVYPSGKWHVC METI
358	EGC199	RFQMCKVYPSERWHVCV EIL
358 4	EGC222	WCTECMRRFPGHYCVAF C
358 5	EGC223	RAASCLDVFHWCHSWC
358 6	EGC224	CLSRCVDWVFSNCTSGR
358 7	EGC225	FLMLCHVSKYTIKCFSPL
358 8	EGC226	WALACSWTPRWHQCIFS L
358 9	EGC227	LERLCMEIFYVHCSGSI
359 0	EGC228	SWRMCIEMFLTHDECVR FV
359 1	EGC229	SSVVCVRGIHAWTCHFFV
359 2	EGC232	LTS SC VYVYNWC AVWA
359	EGC233	YRHLCVWLMEQCETAR
359 4	EGC234	RAASCLDVFHCRRSWS
359 5	EGC236	HVSICWGYTYCWQIF
359 6	EGC237	RGASCLDLFHWCHSWG
359 7	EGC238	IYILCTNFKPVFWCVF ST

-269043040

359 8	EGC239	LWIRCSLLQYSYYCSWV W
359 9	EGC242	SYLFCYTLYIDYNCWLW s
360 0	EGC243	PGYRCVFQVNYQCGAAF
360 1	EGC244	TIIRCFWTFHMDFVCVTG V
360 2	EGC245	WLNCGCVVITCIVEPR
360 3	EGC246	WGWRCYQSWSYQDCQY WY
360 4	EGC248	FLMLCRVSKYTIKCFSPL
360 5	EGC250	RGRDCLRSFPGHYCVTFR
360 6	EGC251	LNYICWRWAHQVPWQC SLFQ
360 7	EGC252	ASYSCWWGPMYMECWT KV
360 8	EGC253	KTGSCQ AQKVF SWC AQ WC
360 9	EGC254	KFFMCQVYPSLKWHVC METL
361 0	EGC255	KFMMCQVYPSLKWHVC VETL
361 1	EGC256	VEHLC SKIPFWHVQCL AR F
361 2	EGC259	KFLMCQVYPSLKWHVC METL
361 3	EGC263	QFLMCQVYPSLKWHVCV ETL
361 4	EGC264	QFMLCQVYPSKKWHVC VVPV

361 5	EGC265	GSCALKNRSKCARRG
361 6	EGC266	KFQMCQVYPSGNWHVC VETM
361 7	EGC267	RERTCVYFHKILHDFCPS RT
361 8	EGC268	FKFTCYWAPYHTFCNTG Q
361 9	EGC269	KFFMCQVYPSLKWHVW METL
362 0	EGC270	KFQCARFTLPETGMFVSK L
362 1	EGC272	WYEQCMKRHHPQAFCLR FN
362 2	EGC273	KFLMCQVYPSKKWHVCI ETL
362	EGC274	QFMLCQVYPSKKWHVC VVTV
362 4	EGC276	CLGSCMLKGFERWCIHG H
362 5	EGC277	KFFMCVDYPSLKWDVC METL
362 6	EGC278	RFFMCVDYPSIKWDVCPE TI
362 7	EGC280	PRWTCEWYQARQSCSLG Q
362 8	EGC281	KFHMCQVYPSRNWHVW VETL
362 9	EGC283	VEHLC SEIPFWNVQCL AR F
363 0	EGC284	KLFLCQVYPSERWHVCV ESL
363 1	EGC285	HLIMCQVYPSGKWHVCL ATT

-270043040

363 2	EGC286	AVELCFHHTQEWTYCLW RF
363 3	EGC287	GEQLC SKIP S SD ALWW V RLL
363 4	EGC288	DALRCFEWVKRNCLLSS
363 5	EGC289	KFMMCQVYPSQKWHVC VETF
363 6	EGC291	VEHLC SKIPFWHVQCL AR I
363 7	EGC337	RYFYMCQVYPSERWQVC VGTS
363 8	EGC453	SNLYLCQVYPSGKYHICI EAL
363 9	EGC465	YSEPYCPFLNPTWKNECI ARS
364 0	EGC466	TSEPYCPFLNPIWKAECIS RT
364 1	EGC467	SYEPYCPFLNPTWKEQCII RS
364 2	EGC468	LNEPYCPFMNPNWKAEC LARM
364 3	EGC469	SKGPYCPFLNPIWKDECI ARI
364 4	EGC470	NSEPYCPFINPIWK AECIA RT
364 5	EGC471	QSKPYCPFLNPTWKAQCI ARS
364 6	EGC472	TSTPYCPFLNPIWKAECLS RI
364 7	EGC474	ISEPYCPFMNPTWKEQCL ART
364 8	EGC476	VNDPYCPFLNPTWKAECI ART

364 9	EGC488	SIEPYCPFLNPTWKAECL VRS
365 0	EGC489	VSEPYCPFLNPVWKDQC LSRI
365 1	EGC490	LPPPCYWTTWGKECQMF D
365 2	EGC491	KTEPYCPFLNPTWKAECI ART
365 3	EGC492	TSDPYCPFVNPIWYNECI ART
365 4	EGC494	TGSPYCPFLNPTWKAHCI ARE
365 5	EGC500	ASEPYCPFLNPTWKDQC MARL
365 6	EGC501	RSEPYCPFLNPTWKAQCI YRT
365 7	EGC502	SIDPYCPFLNPTWLKECIA RS
365 8	EGC508	IGEPYCPFANPTWKQECI ART
365 9	EGC511	WSEPYCPFLNPAWKDQC LART
366 0	EGC512	MREPYCPFLNPTWKDQCI AIR
366 1	EGC514	YREPYCPFLNPIWKEQCI ARS
366 2	EGC515	ISAPYCPFLNPIWKDECIA RT
366 3	EGC516	LREPYCPFLNPIWNVECL ARS
366 4	EGC517	SSEPYCPFHNPTWKDQCL ARS
366 5	EGC518	DSEPYCPFLNPTWKDQCL ARF

-271 043040

366 6	EGC519	NSEPYCPFLNPSWKASCI ARM
366 7	EGC522	TSEPYCPFLNPIWKDQCIA RT
366 8	EGC523	RSEPYCPFLNPIWKNECIA RS
366 9	EGC524	FSEPYCPFINPTWKAQCL ARI
367 0	EGC525	LNEPYCPFLNPIWKDECL ART
367 1	EGC526	SREIYCPFLNPIWLAECIA RA
367 2	EGC528	LTEPYCPFLNPTWKDQCL ARR
367	EGC529	SKDPYCPFVNPIWKHECI VRS
367 4	EGC532	HSEPYCPFLNPIWKEQCM VRS
367 5	EGC533	S SEP YCPFLNPTWKHECL LRT
367 6	EGC534	ESEPYCPFTNPTWKAQCI ARS
367 7	EGC535	YNEPYCPFINPIWK AECIA RT
367 8	EGC536	ISEPYCPFQNPTWKFQCLI RS
367 9	EGC538	RSEPYCPFLNPTWKEQCI ARQ
368 0	EGC539	GRETYCPFLNPIWKAQCL ART
368 1	EGC540	KSEPYCPFLNPIWKDQCI VRS
368 2	EGC541	VIEPYCPFLNPTWKDHCI ART

368 3	EGC542	MSDPYCPFQNPIWKAACI ART
368 4	EGC544	ESEPYCPFVNPIWKAECIA RH
368 5	EGC546	YNEPYCPFVNPTWKAAC VART
368 6	EGC548	YSKPYCPFINPIWKEQCIA RH
368 7	EGC554	LIEPYCPFLNPTWYDQCI ARS
368 8	EGC557	REVPYCPFLNPIWKEQCII RT
368 9	EGC561	SLQAYCPFVNPTWKNEC LARI
369 0	EGC563	LSEAYCPFLNPTWKQHCI ALT
369 1	EGC564	MSEPYCPFLNPTWKEQCL ARS
369 2	EGC565	LNEPYCPFLNPIWKNQCI ARL
369 3	EGC566	PSKPYCPFLNPYWKAEC MSRS
369 4	EGC568	ISEPYCPFLNPTWKDACIA RS
369 5	EGC570	PDSWCHTLYWDLLYCVN QE
369 6	EGC572	QGQPYCPFVNPIWYAEC MTRT
369 7	EGC578	RPEPYCPFKNPNWKEQCL ARY
369 8	EGC579	SSEPYCPFINPTWKQECIA RT
369 9	EGC582	TTEPYCPFLNPIWKDQCI ARW

-272043040

370 0	EGC583	VSEPYCPFLNPYWKDQCI ARH
370 1	EGC584	YNEPYCPFLNPTWKDQC LARI
370 2	EGC585	RSEPYCPFYNPIWYDHCV ALT
370 3	EGC586	NPEPYCPFLNPIWKEQCIL RS
370 4	EGC589	LSGLYCPFLNPTWKDQCI ARM
370 5	EGC590	ISQPYCPFTNPTWLAECIA RS
370 6	EGC592	LNTPYCPFINPTWKDECL ARS
370 7	EGC594	YEEHCRLFP ADWIC SLLQ
370 8	EGC595	NSEPYCPFLNPSWKAQCI ARS
370 9	EGC596	ADS WCHTL YWNLRHCEI QE
371 0	EGC597	S SEP YCPFLNPTWKEQCI ART
371 1	EGC599	DTKPYCPFLNPIWKNQCI ERT
371 2	EGC600	TRDPYCPFLNPIWKDECF ART
371 3	EGC601	KEEAYCPFLNPLWKDEC VART
371 4	EGC602	PES WCHTL YWNLQHCLS QE
371 5	EGC603	MSEPYCPFQNPTWKHECI ART
371 6	EGC604	DSDPYCPFVNPIWKAQCI ARS

371 7	EGC605	YSEPYCPFVNPTWLDQCI ART
371 8	EGC606	YSEPYCPFLNPTWKAQC MAMI
371 9	EGC608	LSEPYCPFLNPTWKAACL ARI
372 0	EGC609	IRKPYCPFLNPTWYNECI QRS
372 1	EGC610	QGEPYCPFLNPAWKDACI ERL
372 2	EGC612	GSEPYCPFFNPIWKDQCIT RF
372 3	EGC613	RSEPYCPFLNPTWKEHCI ART
372 4	EGC614	TNEPYCPFLNPTWKQQCI ART
372 5	EGC615	TSEPYCPFENPIWKAQCIS RS
372 6	EGC616	KSEPYCPFLNPYWKDQCI ARS
372 7	EGC617	LREPYCPFLNPTWKAECI ARI
372 8	EGC619	TNDPYCPFLNPIWKAQCL DRY
372 9	EGC620	KGQPYCPFLNPIWKEQCL ART
373 0	EGC621	SSEAYCPFLNPTWKQECI ARL
373 1	EGC623	ANSWCHTLYWDLMYCV WQE
373 2	EGC624	TIEPYCPFLNPIWKDQCIA RS
373	EGC625	QHEPYCPFLNPVWKHECI ART

-273 043040

373 4	EGC626	IREPYCPFLNPTWKAQCI ART
373 5	EGC627	HSAPYCPFLNPIWKDECI ARS
373 6	EGC628	VSEPYCPFLNPTWKAHCI ELS
373 7	EGC629	S SDPYCPFLNPTW YDQCI ERY
373 8	EGC630	ISDPYCPFVNPYWKAECI ART
373 9	EGC631	NIDPYCPFLNPTWKAECI ARI
374 0	EGC632	PREPYCPFLNPLWKNQCI ERT
374 1	EGC634	IRVPYCPFQNPTW YDQCI ART
374 2	EGC635	PDSWCHTLYWHLQHCLS QE
374	EGC636	TNDPYCPFLNPTWKAECI ARH
374 4	EGC637	VSEPYCPFLNPTWKAQCL NRI
374 5	EGC638	PIDPYCPFLNPIWKEQCH ARS
374 6	EGC639	VREPYCPFLNPTWKNECI ART
374 7	EGC640	LIEPYCPFLNPIWKDQCL ART
374 8	EGC641	PKFFMCQVYPSGKWHVC TGTV
374 9	EGC642	PKYYMCQIYPSLKWNVC LETL
375 0	EGC644	LNFYICKLYPSANLHVCV DTL

375 1	EGC646	RSEPYCPFLNPVWKDQCI ARS
375 2	EGC647	SSEPYCPFLNPIWKYHCIA RS
375	EGC648	PGSPYCPFLNPFWKEQCI VRT
375 4	EGC649	YEEHCALFPTDWICTLH
375 5	EGC651	FIEPYCPFINPTWKAECLA RT
375 6	EGC652	DKFYLCQIYPSERWHVC VWSS
375 7	EGC653	EKFKMCQIYPSKNWAVC VETF
375 8	EGC654	HKFYMCQVYPSEKWHV CVETL
375 9	EGC655	LSEPYCPFLNPSWKAECI ARS
376 0	EGC656	LSEPYCPFLNPIWKEQCIA RS
376 1	EGC657	LSEPYCPFLNPTWKDQCI ARS
376 2	EGC658	RSEPYCPFVNPIWKAECI VRS
376 3	EGC659	QFEPYCPFLNPTWKEQCI ARI
376 4	EGC660	PIEPYCPFQNPTWKAQCI ART
376 5	EGC661	YRQPYCPFLNPTWKAQC MART
376 6	EGC663	DNFYMCQVYPSLKWHIC VSIL
376 7	EGC664	SMFFMCQVYPSEKWHVC VYPL

-274043040

376 8	EGC665	SKFFMCQVYPSERWHVCI EPL
376 9	EGC666	LKFYMCQVYPSGNWNV CTATQ
377 0	EGC667	NSEPYCPFHNPTWKAAC MART
377 1	EGC668	RSEPYCPFLNPIWKEQCIA RT
377 2	EGC669	SREPYCPFLNPTWKEQCI ARI
377 3	EGC671	MREPYCPFLNPSWKEQCI ARS
377 4	EGC672	LREPYCPFLNPVWKNECI ART
377 5	EGC673	ITDTYCPFQNPIWK AECIA RT
377 6	EGC674	FNFFMCQVYPSEKWHIC VKSL
377 7	EGC675	KKFYMCQIYPSEKWHVC VERI
377 8	EGC676	TRYSMCQVYPSLRWHVC VENL
377 9	EGC678	LGEPYCPFLNPTWKAQCL YMS
378 0	EGC679	S SEP YCPFLNPIWKNECL ARQ
378 1	EGC680	RSEPYCPFLNPIWKEHCIN RS
378 2	EGC681	HSQPYCPFQNPTWYEQCI ART
378 3	EGC682	SNEPYCPFLNPSWKDACL QRT
378 4	EGC683	LSDVYCPFVNPTWKAECI ARS

378 5	EGC684	SDFFMCQVYPSQKWHVC VKSL
378 6	EGC686	PDSWCHTLYWSLLHCAR QE
378 7	EGC687	LPFFMCQVYPSKSWHVC VETS
378 8	EGC688	LSEPYCPFQNPTWKEQCV ARS
378 9	EGC689	ADSWCHTLFWNLKHCLI QE
379 0	EGC690	GGDPYCPFLNPTWKAECI ART
379 1	EGC691	VREPYCPFLNPIWKDQCI ART
379 2	EGC692	ASEPYCPFLNPIWKDQCI ART
379	EGC693	SSEPYCPFQNPTWKDQCI ARN
379 4	EGC694	ADSWCHTLYWNLLYCA NQE
379 5	EGC696	SWFFMCQIYPSLKWHVC VETL
379 6	EGC698	STFYMCKVYPSQRWHVC VDTL
379 7	EGC700	SREPYCPFLNPTWYDECI ART
379 8	EGC701	QSEPYCPFLNPMWKEQCI VRI
379 9	EGC702	TSEPYCPFDNPTWKARCL AML
380 0	EGC703	ARQPYCPFLNPTWKNEC MARS
380 1	EGC704	PSEPYCPFLNPIWK AECIA RT

-275 043040

380 2	EGC705	IAILTALSLTLSGRTSASSE
380 3	EGC706	YSAPDCPFVNPIWKNACI ARY
380 4	EGC707	ADSWCHTLFWQLQHCV WQE
380 5	EGC708	LNFSMCQVYPSYKWHVC VGTL
380 6	EGC709	MEFFMCQVYPSEKWHVC VAKL
380 7	EGC710	LRYYICQIYPSEKYHVCV DTL
380 8	EGC711	VIEPYCPFLNPTWKAECL ARS
380 9	EGC712	STEPYCPFLNPIWKDACIA RH
381 0	EGC715	WRDPYCPFLNPIWKEQCI ARY
381 1	EGC716	RSEPYCPFLNPTWKDQC MART
381 2	EGC717	VIDPYCPFLNPIWKEQCQ VRT
381 3	EGC718	SKFFMCQVYPSKKWHVC VEAL
381 4	EGC719	IKFFMCQVYPSELWHVC VQKQ
381 5	EGC720	TTFFMCQLYPSGNWHVC TETL
381 6	EGC721	FKFFMCQTYPSEKWHVC VEKL
381 7	EGC722	S SEP YCPFLNPLWHEQCL ARI
381 8	EGC723	AREPYCPFLNPIWKAECV ARY

381 9	EGC724	PSEPYCPFVNPTWLDECI ARS
382 0	EGC725	ASEPYCPFLNPIWYEQCIN RT
382 1	EGC726	PISPYCPFLNPIWYEECIA RS
382 2	EGC727	VGEPYCPFMNPIWKEQCI LRS
382 3	EGC729	ADSWCHTLYWQLLHCV NQE
382 4	EGC736	ADSWCHTLYWQLLHCVS QE
382 5	EGC737	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
382 6	EGC745	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
382 7	EGC746	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
382 8	EGC752	YTKHCQRLPTYKICNLFM
382 9	EGC754	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
383 0	EGC755	ADSWCHTLYWQLQHCLS QE
383 1	EGC759	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
383 2	EGC763	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
383 3	EGC764	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
383 4	EGC765	TDSWCHTLYWQLHHCAI LE
383 5	EGC770	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL

-276043040

383 6	EGC771	YQVTCPFLNPPWWSHCM YLL
383 7	EGC772	DQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
383 8	EGC776	HRAPCFSCTACRQPCFSL T
383 9	EGC777	YQVTCPFFNPLWWSHCM YLL
384 0	EGC783	SEPYCPFLNPTWKSQCIA RT
384 1	EGC789	YEVQCPFQNPIWWKHCM DLI
384 2	EGC791	ESCWTWDHWYQYWVPQ RCDP
384 3	EGC792	ANSWCHTLYWQLHHCEI LE
384 4	EGC793	QACNFTSLGWYQEFYCL R
384 5	EGC794	WACRWEWHAAWQKWD EFCVE
384 6	EGC795	AYCYRSIISRNSTCSAL
384 7	EGC796	VYCFLNFKTMNYAGEFW CRH
384 8	EGC797	SWCMWYYESTYSAPYY YCSV
384 9	EGC798	SQCHWWHEPYGMFQTEI CLW
385 0	EGC799	GLHGCQYVQMFFHFCAP KT
385 1	EGC800	WQHVCWQDWYSWVCTS GY
385 2	EGC801	PWRGCWWDPWQPWDC VPFF

385 3	EGC802	QERLCRQIWQHYCVRYM
385 4	EGC803	QPRECNYVPAWYCHYYS
385 5	EGC804	VYQYHCDWYTCLFRHT
385 6	EGC806	FQGHCALFPTDWICTLKS
385 7	EGC807	QMCHMEWHNHVYWQV CHW
385 8	EGC808	WMRQCHLETECQRAS
385 9	EGC809	SAVACFHPPYFFICVASG
386 0	EGC810	LRRRCHSRFMQCSNPG
386 1	EGC811	GQTWCHWGMYCISTT
386 2	EGC818	WEYQCEWGYSYKPQCW LSA
386	EGC820	LPLTCWVLEWHEWLACV SYD
386 4	EGC822	WSYSCVFLPWMYHMCY LET
386 5	EGC823	WFYQCWQSPWHTECSW VN
386 6	EGC824	RDQPCWYKIMTGCLCMP
386 7	EGC825	LPP SWC VRGEC S WLLL
386 8	EGC826	DESDCKQLPICHGHCLVP L
386 9	EGC827	YQVFCEWSYWEYHCISN Q

-277043040

387 0	EGC828	VQHHCLYRQHSYRECVR HY
387 1	EGC829	YIDCVPVLPGFYLPQLG
387 2	EGC831	WHQ ACEYQ YYNWEC SM GW
387 3	EGC832	ETFSCYVFPFFYECYSTP
387 4	EGC836	WTNLFCWGPLCKCLQQ
387 5	EGC839	YQVMCLHQPFVSFCHYE T
387 6	EGC840	GTHWCRYYPSYAECYV WL
387 7	EGC841	TWLCDC S YWGC WWELG
387 8	EGC842	LWVGCYIPPWTEWCPIA W
387 9	EGC844	VWLMCWHYIFCPSKL
388 0	EGC845	PEYLCWVYPYAPQCWDL V
388 1	EGC846	VEHLC S К IP F W MF S AWP G
388 2	EGC849	ICEACPKHVSEQCIRLR
388 3	EGC851	WRVICMARPTGEQCEWV W
388 4	EGC854	DWSKCIQFSLPHDHCLMF M
388 5	EGC856	SRWECAWIVGYHHWDC RWLF
388 6	EGC857	SMEYCFWYHYCQLGV

388 7	EGC858	IFVMCEDSWPVPFCFSNR
388 8	EGC859	VEWMCYAYPFDPECYYN W
388 9	EGC861	DEHLCSISRSGMSFAWAG
389 0	EGC862	ASEPYCPFLNPVWKEQCI ARL
389 1	EGC863	PREPYCPFHNPIWKNQCI ART
389 2	EGC865	ESEPYCPFLNPIWKAHCIA RT
389 3	EGC866	DSEPYCPFLNPIWKEQCL ARM
389 4	EGC867	TSDPYCPFLNPTWKAECI ART
389 5	EGC868	WSEPYCPFTNPTWKAACI ARS
389 6	EGC869	ARDPYCPFQNPIWYNECI ART
389 7	EGC870	PREPYCPFHNPAWKAAC VARA
389 8	EGC871	TNESYCPFLNPTWKAEC MARI
389 9	EGC872	DREPYCPFLNPYWKDQC LART
390 0	EGC873	ISDPYCPFVNPIWKEQCIA RN
390 1	EGC874	RNEPYCPFVNPIWKEQCII RT
390 2	EGC875	LTTPYCPFENPTWKAQCI ART
390 3	EGC876	SIEPYCPFLNPTWLEQCIA RS

-278 043040

390 4	EGC877	KSEPYCPFLNPTWHDQCI ARN
390 5	EGC878	IIGPYCPFLNPEWKDQCM ART
390 6	EGC879	YREPYCPFQNPYWKDQCI ARY
390 7	EGC880	AIEPYCPFLNPIWKDQCL ARI
390 8	EGC881	MSRPYCPFLNPIWKEQCI ART
390 9	EGC882	YNKPYCPFQNPTWKEAC LARS
391 0	EGC883	S SEP YCPFLNPTWK AECI ARS
391 1	EGC884	LSEPYCPFQNPIWKDKCI AMS
391 2	EGC885	SYEPYCPFLNPTWKAECI ARI
391 3	EGC886	GSEPYCPFLNPTWKEQCII RT
391 4	EGC888	SSEPYCPFLNPTWKSQCI ARS
391 5	EGC889	RSEPYCPFLNPIWKDHCI ART
391 6	EGC890	RSEPYCPFLNPTWKAECI ARS
391 7	EGC891	SREPYCPFLNPIWKDKCIS RT
391 8	EGC892	TSDPYCPFLNPIWKEQCIV RT
391 9	EGC893	EREPYCPFLNPTWKEQCL ARH
392 0	EGC894	LREPYCPFLNPTWKAECI ARS

392 1	EGC895	GSEPYCPFLNPTWKEQCL ARE
392 2	EGC896	MSEPYCPFLNPIWKEQCI ARS
392	EGC897	RGEPYCPFTNPIWKEQCI NRS
392 4	EGC898	DADPYCPFLNPTWKAEC LARS
392 5	EGC899	RGEPYCPFLNPAWKNEC LART
392 6	EGC900	IIEPYCPFVNPNWKAQCIA RS
392 7	EGC901	EDEPYCPFLNPIWKAQCL ART
392 8	EGC902	FTEPYCPFINPTWK AECIA RS
392 9	EGC903	TSEPYCPFLNPIWKEQCIT RT
393 0	EGC904	VEPYCPFLNPTWKDACL ART
393 1	EGC905	TSEPYCPFGNPIWKKECIA RT
393 2	EGC906	TSEPYCPFLNPTWKDECI ARM
393 3	EGC907	SNEPYCPFLNPTWKAQCL ARM
393 4	EGC908	YREPYCPFLNPTWKEQCI ARS
393 5	EGC909	LNAPYCPFLNPNWYDQCI HRS
393 6	EGC910	SSDPYCPFLNPTWKQQCI ERS
393 7	EGC911	ASEPYCPFLNPTWKEQCI ART

-279043040

393 8	EGC912	LSEPYCPFQNPTWYDECI SRS
393 9	EGC913	S SEP YCPFLNPKWKHECI ARS
394 0	EGC914	GSEPYCPFLNPIWKAECIA RS
394 1	EGC915	RIEPYCPFVNPTWKDQCL ART
394 2	EGC916	SIEPYCPFLNPTWKEQCIA RS
394	EGC917	RTEPYCPFLNPTWKEQCI ARS
394 4	EGC918	PSEPYCPFLNPTWKDQCL QRS
394 5	EGC919	YSEPYCPFLNPTWKAECI ART
394 6	EGC920	TSEPYCPFLNPTWKEHCM ART
394 7	EGC921	GSNPYCPFLNPIWKEACL ART
394 8	EGC922	INEPYCPFQNPFWYAECL ART
394 9	EGC923	TREPYCPFLNPTWLDQCI ART
395 0	EGC924	IREPYCPFLNPS WK AECIA RS
395 1	EGC925	ASEPYCPFINPTWKDECIA RS
395 2	EGC926	HSEPYCPFLNPTWKEQCI ARS
395 3	EGC927	MKEPYCPFLNPTWKAQCI ART
395 4	EGC928	TDETYCPFKNPIWYEECI ARS

395 5	EGC929	RGEPYCPFKNPTWKYQC LART
395 6	EGC930	IREPYCPFLNPIWKAHCIA LT
395 7	EGC931	VSEPYCPFMNPIWKAECL SRT
395 8	EGC932	EREPYCPFLNPIWLEQCLS RT
395 9	EGC933	YSEPYCPFLNPIWKEQCIA RT
396 0	EGC934	FGEPYCPFLNPTWKAECL VRS
396 1	EGC935	LREPYCPFLNPTWKEQCL VRT
396 2	EGC936	STDPYCPFLNPVWNYQCI ART
396 3	EGC937	SHEPYCPFQNPIWKAECL ART
396 4	EGC938	LNDPYCPFLNPIWKEQCM SRY
396 5	EGC939	GYAPYCPFLNPIWKNECI TRT
396 6	EGC940	FSEPYCPFVNPYWKEQCI ART
396 7	EGC941	HTEPYCPFLNPTWKEQCL ARF
396 8	EGC942	GYEPYCPFLNPIWKAECK ARS
396 9	EGC944	LREAYCPFINPIWKDQCM ARI
397 0	EGC945	LIEPYCPFLNPHWKAECI ARY
397 1	EGC946	SSEPYCPFINPMWKDQCL ART

-280043040

397 2	EGC947	PSDPYCPFLNPSWKAECL ART
397 3	EGC948	S SEP YCPFLNPIWK AECIA RA
397 4	EGC949	FPEPYCPFLNPHWKAQCL ERL
397 5	EGC950	FREPYCPFLNPTWKQQCL ARI
397 6	EGC951	PREPYCPFLNPIWKDECIA RT
397 7	EGC952	MSDPYCPFLNPTWKAQCI ART
397 8	EGC954	NSEPYCPFSNPTWKDECL IRS
397 9	EGC955	LREPYCPFLNPTWKEQCI ARY
398 0	EGC956	HNKTYCPFLNPTWKAQCI ART
398 1	EGC957	IGEPYCPFLNPTWKEECIR RT
398 2	EGC958	ISEPYCPFINPTWKAECIA RS
398 3	EGC959	TKAPYCPFKNPIWKAECI ART
398 4	EGC960	PGDPYCPFLNPIWKQECI VRN
398 5	EGC961	STEP YCPF SNPTWKAQCI ARI
398 6	EGC962	RSEPYCPFLNPTWKDQCI ARS
398 7	EGC963	S SEP YCPFLNPIWKEHCIA RT
398 8	EGC964	YREPYCPFLNPIWKEQCI ART

398 9	EGC965	HSEPYCPFVNPTWYNECI SRT
399 0	EGC966	RSEPYCPFLNPIWKDQCI ARS
399 1	EGC967	VNEPYCPFLNPKWYAEC LART
399 2	EGC968	QNDP YCPFLNPIWK AQ CI ARS
399 3	EGC969	SSEPYCPFLNPYWKEQCI ART
399 4	EGC970	YREPYCPFLNPYWKDQC MART
399 5	EGC972	MHEPYCPFINPTWYEQCL ARS
399 6	EGC973	QLKPYCPFLNPIWYDQCV SRT
399 7	EGC974	SSEPYCPFLNPSWKDQCI ARL
399 8	EGC975	YIDPYCPFLNPTWKDACL ARS
399 9	EGC976	SSEHYCPFVNPAWKEACI ARY
400 0	EGC977	Q SEP YCPF VNPTWKNECI ARY
400 1	EGC978	LSDPYCPFLNPIWKDQCI ART
400 2	EGC979	LGEPYCPFINPTWKAECL ART
400 3	EGC980	YGDPYCPFLNPTWKENCI ART
400 4	EGC981	LTEPYCPFLNPTWKDECL ART
400 5	EGC982	FREPYCPFKNPTWLAQCI ARS

-281 043040

400 6	EGC983	ANEPYCPFLNPHWKGQC VLRS
400 7	EGC984	LNEPYCPFNNPTWKEECI KRS
400 8	EGC985	QSEPYCPFLNPTWYTECV ART
400 9	EGC986	S SQP YCPFLNPTWKD ACL ART
401 0	EGC988	SHEPYCPFLNPEWKAECI ARN
401 1	EGC989	ASDPYCPFLNPIWKDQCI LRS
401 2	EGC990	DNDPYCPFLNPTWKEEC VARS
401	EGC991	ESEPYCPFVNPIWKDQCM ARY
401 4	EGC992	LSAPYCPFLNPTWKDQCL ART
401 5	EGC993	S SEP YCPFLNPIWKQ AC Y DRT
401 6	EGC994	VDEPYCPFLNPNWKEACI ARS
401 7	EGC995	LIEPYCPFLNPTWKEQCF VRS
401 8	EGC996	NDEPYCPFLNPIWKAQCL ARN
401 9	EGC997	AGKPYCPFLNPSWYDECI RRL
402 0	EGC998	LSEPYCPFLNPIWKDQCM IRS
402 1	EGC999	STEPYCPFLNPTWKDQCI ARI
402 2	EGC100 0	PREPYCPFLNPVWKAQCI ARW

402 3	EGC100 1	IS APYCPFKNPIWK AECIA RS
402	EGC100	IGEPYCPFLNPTWKDQCL
4	3	VRS
402	EGC100	SSVPYCPFKNPTWKAECI
5	4	ART
402	EGC100	YREPYCPFLNPLWKDECI
6	5	ART
402	EGC100	HSEPYCPFLNPTWKDECI
7	6	TRT
402	EGC100	YSDPYCPFLNPSWYDECV
8	7	SRM
402	EGC100	YREPYCPFLNPTWYVECI
9	8	ARS
403	EGC100	HREPYCPFLNPAWKEQC
0	9	LVRS
403	EGC101	ASEPYCPFLNPTWRDACL
1	0	ART
403	EGC101	LREPYCPFLNPTWKEQCI
2	1	ARS
403	EGC101	SSEPYCPFLNPTWYNECI
3	2	YRI
403	EGC101	LREPYCPFENPIWKEKCIA
4	3	IT
403	EGC101	PSEPYCPFLNPTWKAECI
5	4	ART
403	EGC101	ATEPYCPFLNPIWKAQCI
6	5	ERM
403	EGC101	LGEPYCPFLNPTWKLQCL
7	6	ART
403	EGC101	ATEPYCPFLNPVWKDQCI
8	7	LRT
403	EGC101	PIEPYCPFINPMWK AECIA
9	8	RT

-282 043040

404 0	EGC101 9	GREPYCPFLNPVWYNEC MVRF
404	EGC102	VIEPYCPFLNPIWKEQCIA
1	0	RS
404	EGC102	TIEPYCPFLNPTWYKECL
2	1	LRS
404	EGC102	LGEPYCPFLNPTWKDQCT
3	2	ARS
404	EGC102	LNEPYCPFLNPIWKAQCI
4	4	ART
404	EGC102	WSEPYCPFLNPTWKAECI
5	5	ART
404	EGC102	ASEPYCPFWNPIWKAQCI
6	6	ARI
404	EGC102	ISEPYCPFVNPTWKAQCI
7	7	ART
404	EGC102	VIEPYCPFVNPTWKEQCI
8	8	LRS
404	EGC102	MSCDEAWYNEQTWLWC
9	9	VT
405	EGC103	WQCEWQWVQEWGAWD
0	0	EFCVM
405	EGC103	GYCATDYWDYNGVWGT
1	1	YCTQ
405 2	EGC103 2	RYCYLFEKYAPFYDQCLL
405	EGC103	RYCYLFQKYAPFYDQCL
3	3	L
405	EGC103	GCCYWWGLVYDKWIKC
4	4	ET
405	EGC103	YQVKCPFQNPVWWSHC
5	5	MYLL
405 6	EGC103 6	GYCFLFYKFPQYHMQCII

405 7	EGC103 7	KECLFTVPGVQHPVMWY CLT
405 8	EGC103 9	LLCRGQTANNLQPDECLT
405 9	EGC104 0	TCCRDYWMYRFLYTQCG M
406 0	EGC104 1	SFHRCFEWVRHNCVWGA
406 1	EGC104 2	ETLACAKLMPWYNECLA RF
406 2	EGC104 3	RYCDHFVNHHDYYKLCL T
406 3	EGC104 4	WQCEWQWVQEWGAWD KFCVM
406 4	EGC104 5	LERLCIEIWSYHCRSFL
406 5	EGC104 6	LATWCQRWLASACFGLF
406 6	EGC104 7	GWCFEYYPEVSRFVYSD CNS
406 7	EGC104 9	YQVKCPFQNPVWWTHC MYLL
406 8	EGC105 0	WHCQWFWVPEWGAWD EFCVM
406 9	EGC105 1	STCLLQYYQFDVFSKKFC PL
407 0	EGC105 2	WHCEWHWVQEWGAWD EFCVM
407 1	EGC105 3	PKVRCPFQNPIWWSHCM EIL
407 2	EGC105 6	SVCHKMWPHDDLYYCLR
407	EGC105 7	SLCQHFQQQPVWYQACI R

-283 043040

407 4	EGC105 8	YQVRCPFQNPVWWSHC MYLL
407 5	EGC105 9	GYCFLFYKFPQYHMQCIS
407 6	EGC106 0	LLCRGQSANNLQRDECL R
407 7	EGC106 3	WHCQWFWVHEWGAWN EFCVM
407 8	EGC106 6	WQCEWEWVQEWGAWD EFCVM
407 9	EGC107 0	DQVKCPFQNPVWWSHC MYLL
408 0	EGC107 2	WHCEWQWVQEWGAWD EFCVM
408 1	EGC107 3	PKVRCPFQNPIWWSHCM KIL
408 2	EGC107 4	GRCRGYEVDPWWHAPCF CDL
408 3	EGC107 5	ILCQHFQQQPVWYQACIR
408 4	EGC108 2	WNEPYCPFLNPTWKAQC IARI
408 5	EGC108 3	LGEPYCPFLNPFWYDQCI ARN
408 6	EGC108 4	LGEPYCPFLNPYWYDQC MSRT
408 7	EGC108 5	AS SET YCPFLNP YW YDQ CMSRTSGGGSGGGSQAA AGGSYMHEPHMQVLEIM N

-284043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
409 5	EGDI	HPWRCLKKPEVVQCLRTG
409 6	EGD2	GIFACVKEPEVVKCLISW
409 7	EGD3	HPWRCLEEPEVVQCLRTG
409 8	EGD4	EERLCYTPEAIFVDCTLHF
409 9	EGD5	SRADWCDWHKCVVLQW
410 0	EGD6	AYADWCSWHQCVQLDS
410 1	EGD7	SVLVCWMYDQCVSVS
410 2	EGD8	HRWRCLIEPEVVQCLRTG
410 3	EGD9	ADGHCWMYYEDWMCLY LM
410 4	EGD10	SGWHCWVDYFCTRVE
410 5	EGD11	VGAFCLPFEYWYQDCTRR L
410 6	EGD12	PVETCMNYYEDIICRFLV
410 7	EGD13	WKDFCPDVPPWLACTGSS
410 8	EGD14	FPFSCVMRPHVIECLLSG

Таблица 20

Связывающие ErbB4 домены MRD

410 9	EGD15	ADGHCWMYYQDWMCLY LM
411 0	EGD16	EQLNCQEKIQYWCTRIY
411 1	EGD17	AYADWCSCINASSWT
411 2	EGD18	AYTDWCSWHRCVQLDS
411	EGD19	YLIMCKEFPWSFTCGTLY
411 4	EGD20	DNSGCNAPTFVCGFLW
411 5	EGD21	SPFLCVHDFQVIECLIRW
411 6	EGD22	QDNCCFIIIDNCQ SGF
411 7	EGD23	S VGRCF SHMP YHVSC S VS V
411 8	EGD24	GWPPC ADWMDQQLC S S A L
411 9	EGD25	LKYRCVIYFHCYGWM
412 0	EGD26	SQNVCLHLPWGWECFAW P
412 1	EGD27	KPWRTCFNHGCELSLR
412 2	EGD28	SRADWCDWXNASSCS
412	EGD29	EGPPC YD WWT S SC ARVR
412 4	EGD30	ADGHCWMYYEYWMCLY LM

- 285 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
412 5	DR51	VSDTCMVIMTCRYSP
412 6	DR52	SERICFKIYMTSKNTCQKA S
412 7	DR54	ALRPCLVYMSMKCSVTW
412 8	DR55	SLTPCVYLTMCAPGH
412 9	DR57	DVGECRVIMTCRPSS
413 0	DR58	QQGSCKIYMTCRYSH
413 1	DR59	Q WQ VC YWTEGRWAD SC GWAQ
413 2	DR510	SVYPCKVIMTCLRSP
413 3	DR512	TGNICKRPVLTCNWSG
413 4	DR513	TEFGCQVYMTCRPKL
413 5	DR514	SVYPCKVIMTCLKSP
413 6	DR515	NFRMCIPIMTMHCWADD
413 7	DR516	DQYTCDRVILTCWTPH
413 8	DR517	RVSECFLYLTCHKGQ

413 9	DR518	PTRECTVILTQHCWNVW
414 0	DR519	LTPCQPIMTCKRPV
414 1	DR520	SPSPCKVIMTCAPLN
414 2	DR521	ARHPHEPPYLCMKCL
414	DR523	ANDRCIPIMHWHCWAYW
414 4	DR524	VQGGCDLVILTCKMWG
414 5	DR525	LRDFCSTTMAHQCHFGP
414 6	DR526	AKGECQVYLTCRYNS
414 7	DR527	GSEGCKVILTMKCPDRI
414 8	DR528	EYVECGPHQYYWFGHCH FWA
414 9	DR529	KCNFNPWKAACG
415 0	DR530	YAERCKVYLTMKCDISQ
415 1	DR531	PSEMCVVVMRNYCWSST
415 2	DR533	LSSGCMVYMTMKCGSTK
415 3	DR534	VGADCWVIMTCRKNL
415 4	DR535	ATTPCMVYMTCFRTP
415 5	DR537	QDRACFPIMTLHCPGEG

- 286 043040

415 6	DR539	QTRNCGVWPNHLVCMPL S
415 7	DR540	LQKVCAAWYYCMESH
415 8	DR541	LRANCKVVLTERCGNYL
415 9	DR542	ADEACLVVLTCRASP
416 0	DR543	SGLGCPQNHLLVLTCRHA М
416 1	DR544	WIAGCKLVLTERCLNYF
416 2	DR545	NNSQCQVILTHRCHSLT
416 3	DR548	KVSVCFPILTMYCSERY
416 4	DR550	NDLMCQPIMTMKCARYQ
416 5	DR551	ILIFCQTPPHHCLSKL
416 6	DR552	SYQRCKVIMTQKCIVPP
416 7	DR553	TSDRCVVVLTCRMWG
416 8	DR554	HVSRCEPVLTMHCWRGS
416 9	DR555	PSYPCSIILTCRSTL
417 0	DR557	RD SECFIYLTCRVLP
417 1	DR558	SAEDCFVILTCLCSR
417 2	DR559	DRYPCYFYLTCIPAS

Таблица 21

Связывающие DR5 домены MRD

417 3	DR561	LQSECFVIMTCKRVN
417 4	DR562	NTKPCMPIMTCLKWN
417 5	DR563	WNTPCMVIMTCRPHE
417 6	DR564	PLTKCKVIMTCARGI
417 7	DR565	WHYPCQPVLTCRSHN
417 8	DR566	FQTECLVYMTCRTIY
417 9	DR568	WESPCFIKLTCHMVA
418 0	DR569	FVGHCWWPLGLCAPLP
418 1	DR570	SSMSCVEYQQCRLGY
418 2	DR571	ARDSCLVYMTCRPVA
418 3	DR573	LNASCMVYLTQRCSHTS
418 4	DR574	RHDGCNKIMLTCHTRA
418 5	DR575	HRDPCTVVLTCRSLS
418 6	DR576	MTSECQKVILTCWNAS
418 7	DR577	YMSVCHIDGHQVVCLKN К
418 8	DR580	SGDTCLVILTHRCATVS
418 9	DR581	YTAPCKVYMTCVRPM

- 287 043040

419 0	DR582	LRANCKVVLTERCCNYL
419 1	DR583	PPSSCQVILTCRPIW
419 2	DR584	LSTRCTDQDIVLTCRIKD
419 3	DR586	WHYPCQPVLTCRSRT
419 4	DR588	GQTDCMIIMTCKQWK
419 5	DR589	PATRCEPVLRHFCWGQG
419 6	DR590	D SFGCTWEVWGRECHPQ L
419 7	DR591	F YLYCPYPEMS SHCVLRA
419 8	DR592	LRADCKVVLTERCSNYL
419 9	DR595	HENPCQVYMTCRHLD
420 0	DR596	SAEECFVILTCLGSR
420 1	DR597	ARQDCVPVMRWHCWAEI
420 2	DR598	PPLGCTRIALTCWDIR
420 3	DR599	QPPECRVIMTLRCGDAW
420 4	DR510 0	PKQACKIIMTERCWAVD
420 5	DR510 1	TVGECMPIMTCFSTN
420 6	DR510 2	WHYPCQPVLTCRSHT

420 7	DR510 4	PLTKCKVIMTCAWGI
420 8	DR510 5	GISGCKLVLTQRCLHVN
420 9	DR510 7	ERQGCVVYLTERCVVGR
421 0	DR510 9	NNSQCQVILTHHCHSLT
421 1	DR511 0	DKSPCQVVMTCRPLL
421 2	DR511 1	ALHKCMVILTNRCETPV
421 3	DR511 2	TTTSCKLYLTSTCSPNH
421 4	DR511 3	TEYPCKVYMTCMWPI
421 5	DR511 4	LGPNCKIVLTERCGNSL
421 6	DR511 5	SERPCGERPVVMTCFPVR
421 7	DR511 6	GSF S MRW DCGDNPIPGRR QCVIM
421 8	DR511 7	GSAQLLWDCGDNPIMGRR QCVKL
421 9	DR511 8	GSYTHTFDCGDFNITGRR QCVKL
422 0	DR511 9	GSLSSQFDCGENPILGRRQ CLYL
422 1	DR512 0	GSRAQIWDCGDNPIRGQR QCVKL
422 2	DR512 1	GSIHIPPRCTEEDVIMTCRR SAD
422	DR512 2	GSSTFPRFCAEEDVIMTCR WRFD

-288 043040

422 4	DR512 3	GSNAIPRHCTEEDVIMTCR LRPS
422	DR512	GSAEFHRPCGEEDVIMTC
5	4	RWRVH
422	DR512	GSNALPRACDERDVIMTC
6	5	RKSVA
422	DR512	GSYDFPRTCAEEDVIMTC
7	6	KWRIS
422	DR512	GSIPSRFDCGENPIAGRRQ
8	7	CVEL
422	DR512	GSQYIHMDCFENRIRGYC
9	8	HCIKM
423	DR512	GSILIPRTCAQEDVIMTCR
0	9	ERAY
423	DR513	GSQGLPRPCGEEDVIMTC
1	0	RWSGY
423	DR513	GSDSFTRTCTEDAVIMTCK
2	1	WRVL
423	DR513	GSDPSPRTCAEEDVIMTCR
3	2	WQVY
423	DR513	GSSMITRPCAEEDVIMTCK
4	3	WLPI
423	DR513	GSGYNPRLCSEQDVIMTC
5	4	RLRFG
423	DR513	GSFDRNWDCGDNPIKGRR
6	5	QCVKV
423	DR513	GSTYMQFDCGDNPIPGRR
7	6	QCVPL
423	DR513	GSFVSHWDCGENPIIGRRQ
8	7	CVLL
423	DR513	GSPPHSRPCAEEDVIMTCR
9	8	YRIY
424	DR513	GSLDRPRPCAEEDVIMTCR
0	9	WRAA

424 1	DR514 0	GSWKWSPTCAEEDVIMTC RKHVK
424	DR514	GSKSVPRLCSEEDVIMTCK
2	1	RGVF
424	DR514	GSEYWQPPCAEEDVIMTC
3	2	KWRVV
424	DR514	GSLCLPRHCAENEVIMTC
4	3	RPLMF
424	DR514	GSLMSQWDCGDNPILGRR
5	4	QCVKL
424	DR514	GSFKTIWDCGDNPIPGRR
6	5	MCVKL
424	DR514	GSS SITWDCGDNPIPGRRQ
7	6	CVIH
424	DR514	GSPRFKWDCGDNPIAGRR
8	7	QCVLL
424	DR514	GSSGFPHHCGEEDVIMTC
9	8	RWRGL
425	DR514	GSPHFPRPCAEEDVIMTCR
0	9	WRVI
425	DR515	GSGWHTRFCAEEDVIMTC
1	0	KWRVI
425	DR515	GSDHWRRSCSEDDVIMTC
2	1	RWRVS
425	DR515	GSFKVPHLCAEEDVIMTC
3	2	RWRVY
425	DR515	GSRS SPHPCGEED VIMTCR
4	3	WRIT
425	DR515	GSVLQVCDCLDIPVFGTC
5	4	QCVQL
425	DR515	GSGDSHWDCGDNPILGRR
6	5	QCVKL
425	DR515	GSTSMLWDCGANPIKGRR
7	6	QCVLL

-289 043040

425 8	DR515 7	GSMPYSWDCGDNPIVGRR QCVKV
425	DR515	GSFTSRWDCGNNLVIGQR
9	8	QCIKL
426	DR515	GSSAPGFDCGDNPIVGQR
0	9	QCIKL
426	DR516	GSMVGQRPCAEEDVIMTC
1	0	RWRVV
426	DR516	GSSLLPRNCSEEDVIMTCR
2	1	WRVD
426	DR516	GSGTTPRRCAEED VIMTC
3	2	RWSAH
426	DR516	GSSYSPRPCAEEDVIMTCR
4	3	PRFH
426	DR516	GSGVFPRPCHEEDVIMTCR
5	4	WRVH
426	DR516	GSADPLWDCGDNPIKGRR
6	5	QCVPL
426	DR516	GSLPHAWDCGDNPIPGRR
7	6	QCVKL
426	DR516	GSTKLTHPCGEED VIMTC
8	7	RWRVA
426	DR516	GSTASPRHCAEHD VIMTC
9	8	RWPVD
427	DR516	GSERLARSCDEDDVIMTC
0	9	RWRVT
427	DR517	GSNKPPRPCSEEDVIMTCR
1	0	WRVV
427	DR517	QGSDEWDCLDNRIGRRQC
2	1	VKL
427	DR517	GSSLSSWDCGDNPIPGRRQ
3	2	CVKL
427	DR517	GSPSEYWDCGDNPIFGRR
4	3	QCVRL

427 5	DR517 4	GSLSPLWDCGDNPILGRR QCVLL
427	DR517	GSAAHYWDCGDNPIVGR
6	5	RQCVKL
427	DR517	GSYLYPRPCSEEDVIMTCR
7	6	WRVS
427	DR517	GSS SFTPTCNEEDVIMTCR
8	7	WRVV
427	DR517	GSLSAPPTCAEEDVIMTCR
9	8	WRLK
428	DR517	GSRNFPVPCDESDVIMTCK
0	9	WRVS
428	DR518	GSDRFQRHC SEAD VIMTC
1	0	KSRLY
428	DR518	QGSDEWDCLDNRIGKRQC
2	1	VKL
428	DR518	GSS SFPRPCAEEDVIMTCK
3	3	WRVY
428	DR518	GSMLLPRSCAEED VIMTC
4	4	RWAHY
428	DR518	GSGKCTEEDVIMTCRSKV
5	5	T
428	DR518	GSSHFPHPCSEEDVIMTCR
6	6	WRVN
428	DR518	GSVDFPRPCLEDDVIMTC
7	7	KWRLY
428	DR518	GSVLDILSCKCLDTSSHVQ
8	9	CVTL
428	DR519	GSRMS SPSFDCKGDFGHR
9	0	QCVKL
429	DR519	GSGEPSDGRVCLTKCSSLI
0	1	QCFKF
429	DR519	GSHCLYVVWECVDHGICL
1	2	RRCAEL

-290043040

429 2	DR519 3	GSNNTTSMWDCLDRPIGQ RQCVKL
429	DR519	GSYWSFSKWDCLDRPLGQ
3	4	RQCVLL
429	DR519	GSPTVPNQCHCQDNRISR
4	5	MCVIL
429	DR519	GSDKFRERWDCLDYRIGH
5	6	RQCIKL
429	DR519	GSMYTDDDRVCLTTCSVL
6	7	RQCIKL
429	DR519	GSDLFSSRWDCLGKLGQR
7	8	QCVKL
429	DR519	GSQLLTFGWDCLDRPIGQ
8	9	RQCVKI
429	DR520	GSGDEHAYWDCLDRPIGQ
9	0	RQCVKM
430	DR520	GSSGFYERWDCLDHHIGR
0	1	RQCVKL
430	DR520	GSMKVTGPWDCLDRPIGQ
1	3	RQCVYL
430	DR520	GSLPDTYLTNCIHNRHDLC
2	4	LCSKH
430	DR520	GSRSSSMPSVCLTDCISLR
3	5	QCVKL
430	DR520	GSSNSMEPRVCLTNCTAL
4	6	RMCAKL
430	DR520	GSRIDLSQWDCLDYRLGQ
5	7	RQCVKV
430	DR520	GSIGHSPRWDCVGKPGHR
6	9	QCVKL
430	DR521	GSQLLTSMFDCGDRPMGR
7	0	RQCVLV
430	DR521	GSPHPTATRVCLTDCLSLR
8	1	KCLKM

430 9	DR521 2	GSCTGVLTQACPAQNSFL QCVEL
431 0	DR521	GSSNFESRWDCIGNVGSR QCVKL
431 1	DR521 4	GSHNHYDDQVCLTQCNN LRLCIEL
431 2	DR521 5	GSQAPNIESLCLTRCVNLL HCIKI
431 3	DR521 6	WDCLDRPLGQRQCVLL
431 4	DR521 7	FDCKGDFGHRQCVKL
431 5	DR521 9	WDCLDRPIGQRQCVKM
431 6	DR522 0	WDCLDYRLGQRQCVKV
431 7	DR522 1	WDCLDRPIGQRQCVYL
431 8	DR522 2	WDCVGKPGHRQCVKL
431 9	DR522	WDCLDYRIGHRQCIKL
432 0	DR522 4	WDCIGNVGSRQCVKL

-291 043040

SE Q ID:	Иденти фикаци онный номер	Пептидная последовательность
432 9	CD32	FDLLCVHVESHKYYCFRP I
433 0	CD34	FILSCHWHNGVVRCYEV S
433 1	CD38	PPFSCVFDVPIWSWVCGQ KS
433 2	CD311	AQLLCHHVTGKYFSCRE VI
433 3	CD317	DWWLCESEKQTFWCSIL R
433 4	CD318	RGMQCHFEKTGWMWVC SLAG
433 5	CD323	FMMQCQYVMNGIYCYD SG
433 6	CD324	FRLGCVPLPVIQACVAQA AAGGSKIWECEQNPQVW ICNLTS
433 7	CD326	PKLLCHDTEDIYCFCELL К
433 8	CD328	LFGRCYLYHNLAWYHCV LVW
433 9	CD329	IGLLCKKDHGEWSCFRIY
434 0	CD330	FMVDCQKMPHYIICAER G
434 1	CD331	EWQCAYYPQYFQWQCEI LG

Таблица 22

Связывающие CD3 домены MRD

434 2	CD332	GPPWCMWHQRQYSWICI FGE
434	CD335	IAWDCQWHHQWHAWEC TMNS
434 4	CD337	WD AVLCVNKRC SGLYF
434 5	CD338	TVVRCYQSPYVYWICKFP Т
434 6	CD340	FSVICWQKPDYLYCAED А
434 7	CD341	RTVYCGWDANRQAWLC HCQN
434 8	CD342	PGFRCSWWEIAKSWVCT MPV
434 9	CD343	DLLDCSFNEFEWHWTCS FTQ
435 0	CD345	PLVSCQYFPPLHHWRCDF LV
435 1	CD347	DKWKCRWKEAYICMRD S
435 2	CD348	YRLSCQYLSAHQVICSGL W
435 3	CD349	RWAYCSVQDIMWDCTLF Р
435 4	CD354	TMITCHWRKDHYDWMC QLEY
435 5	CD356	FILSCHWNLGVVPCYEVS
435 6	CD357	PVMSCEPIPIGWKCSLQT
435 7	CD360	FSPECHYFPGYWKCTWS L
435 8	CD361	WPQRCVWWWEMDYKC RSLI

- 292 043040

435 9	CD365	TYWDCVVGHKHMQCLR LS
436 0	CD367	SRGWCQYEYQHSQWRCF IHE
436 1	CD368	RLVSCSWENSKWQWTCS VLE
436 2	CD369	PDSSCHTLYWQLHHCAR RE
436 3	CD370	GQVTCNYNPATHSWVCS CIS
436 4	CD3309	TVFRCVFVNEYRVWFCHI ST
436 5	CD3318	GEEVCYWAPFEPVRCLP VW
436 6	CD3323	VFMVCVHHYEKVKCWA FW
436 7	CD3324	FFALCKFQNFHTATCLKL I
436 8	CD3354	WSFLCIKVTQQHYECFLF S
436 9	CD3364	GLVSCVILPQGWFCFKTA
437 0	CD3366	QVKYCVVTHMMCVIDL
437 1	CD3399	RSALCHDKMTVKSYCLS SR
437 2	CD3412	IFFVCPNNQYDCAVNH
437 3	CD3430	WNFFCITFGPYLHCWIYT
437 4	CD3431	TMEVCYWGPFTTATCER WP
437 5	CD3432	WECYCQGHVHYIYCVCF R

437 6	CD3433	NHWFCFTDWHHFVCFKF A
437 7	CD3435	CWVSCWIWPNMWYCWL DC
437 8	CD3436	GVGGLLLGSVRTGSLPPG VGPG
437 9	CD3438	YAAWCFKLNKLEVICF SG I
438 0	CD3439	ARF VCF SL VE AQW YCL V LS
438 1	CD3440	IYFTCVWYAQQFWCIVM P
438 2	CD3444	RGWVCYFFPPHFVCYTW V
438 3	CD3446	FSLVCIQMYNQVYCVFIL
438 4	CD3447	QDFLCVKIEPFPWICWTM Q
438 5	CD3448	FTCVCYQHYDHFWCGCL W
438 6	CD3449	ILWACVKQYDGMICWSP s
438 7	CD3450	FWLLCIHAPKQDVCFIW M
438 8	CD3453	FRALCWEHPPTRYCILFT
438 9	CD3454	TAWWCVIMPPKFFCASF N
439 0	CD3455	GRVSCYWETHLNVVCVP SL
439 1	CD3457	IKLECKVHAPSMLSCTLW Q
439 2	CD3458	YEWSCLITPYGHWCAQT V

-293 043040

439 3	CD3459	FTLLCIKFELKPYICWVSL
439 4	CD3461	TPRGCTFIFIMPDMCRPSL
439 5	CD3462	LRCTCWIFPKNVYCLCLS
439 6	CD3463	AFLLRCYAQECVILWL
439 7	CD3465	GMVSCVIMPQGWFCFKT A
439 8	CD3466	MHWVCIIFPPGFFCVSTF
439 9	CD3470	LHFRCFQLYNEYWVCIM SV
440 0	CD3474	WNFLCFFTHHKPVWYCV WTM
440 1	CD3475	GFQCWCPHVVCFRVPY
440 2	CD3477	MQFLCLTVQTNTWYCFL WL
440 3	CD3478	FIVRCVIGQKLVCVQTE
440 4	CD3479	WSPNCLWFIKTTYVVCP DST
440 5	CD3480	YAWECQWIVKPHQFVCG GM
440 6	CD3481	GTLRCYSLNWGYFCILFV
440 7	CD3482	NKVECHIVLWTFHFGCPS AT
440 8	CD3483	TSMVCRSMHMYWLCVN LD
440 9	CD3487	NRVLCMMNYIHVTKLCD RPM

441 0	CD3490	PLMLCRHMKHFQYYCW PLA
441 1	CD3491	PSQRCVNHFVIFFNCTQS N
441 2	CD3492	WNFFCITF SPTCIVDL YW PG
441 3	CD3493	WTMRCYSHAPNKLVCSV GL
441 4	CD3494	LVLHCDYQQGVWTCKA VL
441 5	CD3495	VMF VCF SLPEQQ VC VPLS
441 6	CD3689	PVQICQWTLELQCSPWT
441 7	CD3690	LQWVCHWVAECSMSP
441 8	CD3693	RGFICEWNLVASCVPAT
441 9	CD3694	RIWICDWTIECVESL
442 0	CD3697	FVCECFAWDWFGPWQC MCSV
442 1	CD3700	RFWIECWTEACRPGLLG Q AGQGGPGS AGGS YP SIE CYSYMCNVLWF
442 2	CD3703	LRSSCEYHQTCNQSSQAA AGGSREMKCDWRVDCL YYV
442	CD3704	TLTVCQWVLHATCVDVQ
442 4	CD3706	VSIRCHQYLLCVFES
442 5	CD3707	SAWFCEWTFQCQLMG

-294043040

442 6	CD3708	GFIVCYWEAVCQSST
442 7	CD3709	VLWRCTWVMECVSVS
442 8	CD3718	DMWLCHWRIECVPYL
442 9	CD3724	PWASCYFYQEHVHCLPP D
443 0	CD3743	SYSVCEWEFVYSCWPPY
443 1	CD3789	RQQPCLKIWSCLQLY
443 2	CD3793	PVQICQWTLELPCSPWT
443 3	CD3832	PVPICPWTLELHCPPWTG HA
443 4	CD3872	MACLCVSWSKCTPLG
443 5	CD3882	QTMKCPMEMGHCTTWR
443 6	CD3912	FILLCHQYLVCIKQE
443 7	CD3919	FYMRDCLSHRCRLDLS
443 8	CD3924	GFQLACRFMSCGCRSC
443 9	CD3935	PLMLCRHMKHFEYYCWP L
444 0	CD3940	QDFLCVKIEPFPWICWTM QGQ
444 1	CD3942	IYFYCVEWYQKWICYTV V
444 2	CD3952	VTCFYVETDHVVCFREA

444 3	CD3959	GRVSCYWETHLNVVCVP SL
444 4	CD3960	FPCVCIMTHHHLECFCFIG Q
444 5	CD3972	FSLVCIQMYNQVYCVFIL GQ
444 6	CD3981	ILWACVKQYDGMICWSP SGQ
444 7	CD3992	VKLPCFLIQEMGWMCFW PL
444 8	CD3998	WNF FC INF SP YLHCWIYT GQ
444 9	CD3100 8	MYVLCKEAQVGQQWKC VQFF
445 0	CD3101 4	YTPECGWGYMIMFKHCR HYE
445 1	CD3102 5	FWLLCLHVWNKTTVYCL VKH
445 2	CD3103 2	FQCVCVHWNDGRVVCL CHY
445	CD3103 4	DYTSCQFRGWLICEAMA
445 4	CD3103 5	LVMLCWKWHEVRHCLL LS
445 5	CD3103 9	VVLTC S S S WERS VF VCRL VE
445 6	CD3104 5	LAFLCIHWQEHLWCIVRP
445 7	CD3104 7	SVVTCYHMFPWDRIICFL Q
445 8	CD3105 1	TVRCWCEHMVCFMERD
445 9	CD3105 4	CHFLCFKLGFMEYFYCEY SC

-295 043040

446 0	CD3105 8	VMLACYKHPLNNSEWCY ILP
446 1	CD3106	FRVLCADVPGHRYCFIVS
446 2	CD3106 8	LVFRCLHITQHWFCFGLT
446 3	CD3107 7	EYDSCMFYGFIICPKQT
446 4	CD3107 9	MLFVRCEHGRCTVYEI
446 5	CD3108 6	CEIFCMVSLETQKMVCV HRA
446 6	CD3112 0	MGFLCWSQPGNEYEWC VPIN
446 7	CD3113 8	RFIHCVHFEWINHIVCFV GT
446 8	CD3116 2	QDFLCVKIEPFPWICWTM Q
446 9	CD3116 5	DRALCWLHPHFATVQCII MS
447 0	CD3117	VTCFYVETDHVVCFREA
447 1	CD3117 9	GRVSCYWETHLNVVCVP SL
447 2	CD3118 0	FPCVCIMTHHHLECFCFI
447 3	CD3119 0	FSLVCIQMYNQVYCVFIL
447 4	CD3119 9	ILWACVKQYDGMICWSP S
447 5	CD3121 1	ADSWCHTLYWNLRHCEI QE
447 6	CD3121 7	WNFFCINFSPYLHCWIYT
449	CD3191 5	TMKCPMEMGHCTTWR

447 7	CD3124 9	ESLDCATPLLLCTGCGDQ А
447 8	CD3125 4	SFQMCMGWFWWCWSHS
447 9	CD3125 5	WSQSGCTYAHCMYCIH
448 0	CD3142 0	VNCWLHLQFFYSEQYCIE
448 1	CD3156 7	ATGGSLVVKCDWWLDC LVYL
448 2	CD3157 9	DLQICHWTLELECSPRK
448 3	CD3160 5	ATGGSREIRCKWRVDCM CYS
448 4	CD3163 1	SLSSCELYYKCRHFSQAG QGSATGGSLVVKCDWW LDCLVYL
448 5	CD3164 4	LRCFCDYYQTCKQYTVA GQGSATGGSREIRCKWR VDCMCYS
448 6	CD3165 6	WNYFC VYF SP YLHCWIY S
448 7	CD3166	WNFVCIFVSPYMHCWLY F
448 8	CD3169 7	WKFLCINLSPYLHCWIYP
448 9	CD3171 8	WNFFCIYISPHVHCWIHS
449 0	CD3172 7	IAWDCVVGQKYMLCQRL S
449 1	CD3180	CQERCGKMIKSIVMQCN LRL
449 2	CD3190 9	SVSVCVEHAYGQWYCFA AR

Хотя настоящее изобретение было описано со ссылками на приведенные выше примеры, следует понимать, что в сущность и объем настоящего изобретения входят модификации и варианты. Соответственно, настоящее изобретение ограничено исключительно приведенной ниже формулой изобретения.

По указанной заявке испрашивается приоритет в соответствии с § 119(e) раздела 35 Кодекса США (35 U.S.С. §119(e)) по предварительным заявкам № 61/489249, поданной 24 мая 2011 г.; № 61/597714, поданной 10 февраля 2012; и № 61/610831, поданной 14 марта 2012 г.; каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Дополнительно в настоящий документ полностью включено посредством ссылки описание опубликованной заявки на патент США № 2012/0100166.

Все цитируемые публикации, патенты, патентные заявки, интернет-сайты и номера доступа/базы данных последовательностей (включающие как полинуклеотидные, так и полипептидные последовательности) включены в настоящий документ посредством ссылки полностью и для всех целей, в той же степени, как если бы каждая индивидуальная публикация, патент, патентная заявка, интернет-сайт или номер доступа/база данных последовательностей были специфически и индивидуально указаны как включенные посредством ссылки.

Claims

1. Комплекс, содержащий антитело и по меньшей мере один модульный домен распознавания (MRD), при этом указанный по меньшей мере один MRD содержит пептид, обладающий способностью связывать ангиопоэтин-2 (ANG-2), при этом указанный пептид содержит последовательность аминокислот SEQ ID NO: 626, а указанный комплекс способен связываться с мишенью указанного антитела и ANG-2.

2. Комплекс по п.1, отличающийся тем, что указанное антитело связывает мишень, выбранную из группы, состоящей из: ФНО (TNF), ФРЭС (VEGF), рФРЭС-1 (VEGFR1), рЭФР (EGFR), ErbB2, рецептора ИФР-1 (IGF-IR), сМЕТ, рФРФ-1 (FGFR1), рФРФ-2 (FGFR2) и CD20.

3. Комплекс по п.2, отличающийся тем, что указанное антитело связывает TNF.

4. Комплекс по п.3, отличающийся тем, что указанный MRD способен связывать ANG-2 и указанное антитело способно связывать TNF одновременно.

5. Комплекс по п.3, отличающийся тем, что указанное антитело выбрано из группы, состоящей из адалимумаба, голумимаба и инфликсимаба.

6. Способ ингибирования роста клетки in vitro, который включает приведение в контакт указанной клетки с комплексом по любому из пп.1-5.

7. Применение комплекса по любому из пп.1-5 при изготовлении медикамента для ингибирования ангиогенеза у пациента.

8. Применение комплекса по любому из пп.1-5 при изготовлении медикамента для лечения пациента, у которого присутствует рак.

9. Применение комплекса по любому из пп.1-5 при изготовлении медикамента для лечения пациента, у которого присутствует воспалительное расстройство.

10. Применение по п.9, отличающееся тем, что указанное воспалительное расстройство представляет собой аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание кишечника или артрит.

11. Способ ингибирования ангиогенеза у пациента, который включает введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества комплекса согласно любому из пп.1-5.

12. Способ лечения пациента, у которого присутствует рак, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества комплекса согласно любому из пп.1-5.

13. Способ лечения пациента, у которого присутствует воспалительное расстройство, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества комплекса согласно любому из пп.1-5.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанное воспалительное расстройство представляет собой аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание кишечника или артрит.

15. Фармацевтическая композиция, содержащая комплекс по любому из пп.1-5 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и/или стабилизаторов.