JP2023537761A - ヒト化抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用 - Google Patents

ヒト化抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、分子量４３ｋＤａのトランス活性応答ＤＮＡ結合性タンパク質（ＴＡＲＤＢまたはＴＤＰ－４３とも）の分野にある。本発明は、ヒト化されたＴＤＰ－４３特異的結合分子、特にヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片もしくは誘導体、およびその使用に関する。本発明は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むがそれらに限らない、ＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害、および／または異常を診断、防止、改善、および／または処置するための手段および方法を提供する。

Description

本発明は、分子量４３ｋＤａのトランス活性応答ＤＮＡ結合性タンパク質（ＴＡＲＤＢまたはＴＤＰ－４３とも）の分野にある。本発明は、ヒト化されたＴＤＰ－４３特異的結合分子、特にヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片もしくは誘導体、およびその使用に関する。本発明は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むがそれらに限らない、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断、防止、改善、および／または処置するための手段および方法を提供する。
中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢臓器におけるタンパク質の病的な凝集によって特徴付けられる加齢性脳障害（タンパク質症）は、世界的な障害および死亡の主原因の１つを代表している。凝集体を形成する最もよく特徴付けられたタンパク質は、アルツハイマー病および関連する障害におけるアミロイドベータである。神経変性をもたらすその他の疾患関連凝集性タンパク質には、それだけに限らないが、タウ、アルファシヌクレイン（ａＳｙｎ、ａ－ｓｙｎ）、ハンチントン、フューズドインザルコーマ（fused in sarcoma、ＦＵＳ）、Ｃ９ｏｒｆ７２リピート伸長の非従来型翻訳によって産生されるジペプチドリピートタンパク質（ＤＰＲ）、スーパーオキサイドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）、およびＴＤＰ－４３が含まれる。ＴＤＰ－４３凝集体が関与する疾患は一般に、ＡＬＳおよびＦＴＤを含むがそれらに限らないＴＤＰ－４３タンパク質症として列挙されている。
Ｉ．ＴＤＰ－４３ 緒言
トランス活性応答（ＴＡＲ）ＤＮＡ結合性タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ－４３）は、染色体１ｐ３６．２（ＡＬＳ１０）の上にあるＴＡＲＤＢＰ遺伝子によってコードされる４１４アミノ酸のタンパク質である。ＴＡＲＤＢＰは６つのエクソン（エクソン１は非コード性、エクソン２～６はタンパク質をコードする）からなっている。ＴＤＰ－４３は不均質なリボヌクレオプロテイン（ｈｎＲＮＰ）ＲＮＡ結合性タンパク質のファミリーに属している（Wang et al., Trends in Molecular Medicine Vol.14 No.11, 2008, 479-485; Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64）。ＴＤＰ－４３は、５つの機能性ドメイン（Warraich et al., The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 42 (2010) 1606-1609の図１)、即ち高度に保存された２つのヘキサマーリボヌクレオプロテイン２（ＲＮＰ２）領域およびオクタマーリボヌクレオプロテイン１（ＲＮＰ１）領域を有する２つのＲＮＡ認識モチーフ（ＲＲＭ１およびＲＲＭ２）、これが核と細胞質との間に往復して結合したｍＲＡＮを輸送することを可能にする核外搬出シグナル（ＮＥＳ）および核局在化シグナル（ＮＬＳ）、ならびにタンパク質間の相互作用を媒介するＣ末端のグリシンに富むドメインを含む。ＴＤＰ－４３は、転写、スプライシング、輸送、および安定化を含むＲＮＡプロセシングの多種の態様に関与している（Buratti and Baralle, FEBS Journal 277 (2010) 2268-2281）。これは継続的に核と細胞質との間を往復するが主として核に局在化している、厳しく自己規制された発現レベルを有する高度に保存され遍在的に発現するタンパク質である。２００６年に、ＴＤＰ－４３はタウ陰性、ユビキチン陽性の封入体を有する前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）の圧倒的多数の症例（このとき、ＦＴＬＤ－ＴＤＰと称された）および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の大部分の症例において集積するタンパク質として同定された（Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133）。
ＴＤＰ－４３の３８種の陰性優性な突然変異が、散発性および家族性のＡＬＳ患者ならびに遺伝性ＦＴＤの患者において、主としてグリシンに富むドメインに位置して同定された（Lagier-Tourenne and Cleveland, Cell 136, 2009, 1001-1004の図１）。沈降アッセイによって示されたように、ＴＤＰ－４３は遺伝的に凝集しやすく、この傾向はＡＬＳに関連するＴＡＲＤＢＰ突然変異のいくつかによってさらに増大し（Ticozzi et al., CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2010, 9(3), 285-296.）、ＴＤＰ－４３の凝集が臨床的な疾患の兆候と関連付けられる。
ＩＩ．神経変性におけるＴＤＰ－４３
ＴＤＰ－４３凝集体は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー）、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）を含むがそれらに限らない神経変性状態の増大するリスト（Lagier-Tourenne et al., Human Molecular Genetics, 2010, Vol. 19, Review Issue 1 R46-R64）の中で特定されてきた。用語ＬＡＴＥは、海馬硬化症、加齢性海馬硬化症、海馬硬化性認知症、硬化を伴う加齢性脳ＴＤＰ－４３（ＣＡＲＴＳ）、および高齢者におけるＴＤＰ－４３病変を含む認識機能障害を伴う可能性があるＴＤＰ－４３タンパク質症に関連するいくつかの以前使用された病名を包含することを意図している（総説としてKuslansky et al., 2004; Lippa and Dickson, 2004; Nelson et al., 2013, 2016b; Dutra et al., 2015を参照されたい）。
患者の脳に由来する凝集ＴＤＰ－４３は、過剰リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、およびタンパク質分解性切断によるＣ末端断片を含むいくつかの異常な修飾を示す（Arai et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 351 (2006) 602-611; Neumann et al., Science 314, (2006), 130-133; Neumann et al., Acta Neuropathol. (2009) 117: 137-149; Hasegawa et al., (2008) Annals of Neurology Vol 64 No 1, 60-70; Cohen et al., Nat Commun. 6: 5845, 2015）。ＴＤＰ－４３病因のもう1つの特徴は、核から細胞質へのＴＤＰ－４３の再分布および集積である。ＦＴＬＤ－ＴＤＰの特徴的病変は、ＴＤＰ－４３ならびにユビキチンおよびｐ６２に対しては免疫反応性であるが、他の神経変性疾患関連タンパク質に対しては陰性であるニューロンおよびグリアの細胞質内封入体（それぞれＮＣＩおよびＧＣＩ）およびジストロフィー性神経突起（ＤＮ）である。封入体の形態およびその組織分布の相違は、特定の突然変異および／または臨床的表徴に関連している。ＴＤＰ－４３の病因の４つの型は、これまでのところ、組織学的分類によって記述されている（Mackenzie and Neumann, J. Neurochem. (2016) 138 (Suppl. 1), 54-70）。Ａ型ＦＴＬＤ－ＴＤＰの症例は、主として新皮質の層ＩＩにおける豊富な短いジストロフィー性神経突起（ＤＮ）およびコンパクトな楕円形または三日月形のＮＣＩによって特徴付けられる（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70の図２ｆ)。この病因を有する症例は通常、臨床的に行動性亜型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）または原発性進行性失語症の非流暢性／失文性亜型（ｎｆｖＰＰＡ）のいずれかを呈し、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異と関連している。Ｂ型の症例は、表層および深部の皮質層に比較的少ないＤＮおよびＮＩＩ（ニューロン性核内封入体、Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70)の図２ｇ）を伴う中程度の数のコンパクトなまたは顆粒状のＮＣＩを示す。ＦＴＤおよびＡＬＳの症状の共出現を伴う大部分の症例は、Ｂ型ＦＴＬＤ－ＴＤＰの病因を有していることが見出される。Ｃ型の症例は、僅かなＮＣＩを伴うかＮＣＩを伴わない、主として表層皮質薄層における豊富で長い曲がりくねった神経突起を有する（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70の図２ｊ）。この病因は、原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）の意味性亜型を呈する症例で特に見出される。Ｄ型ＦＴＬＤ－ＴＤＰは、僅かなＮＣＩのみを伴う豊富なレンズ状ニューロン核内封入体（ＮＩＩ）および短いＤＮを新皮質に呈する（Mackenzie et al., 2016 J. Neurochem. 138 (Suppl. 1), 54-70の図２ｋ)。Ｅ型は、白質中の曲線性の希突起神経膠細胞封入体に加えて全ての新皮質層に影響する顆粒線維状ニューロン封入体（ＧＦＮＩ）および極めて微細なドット状の神経網凝集体によって特徴付けられる（Edward B. Lee et al., Acta Neuropathol. 2017 July ; 134(1): 65-78.）。病因のこのパターンは、封入体筋炎に関連するＶＣＰの症例のみで見出される。
ＩＩＩ．ＦＴＤにおけるＴＤＰ－４３
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、前頭葉および側頭葉の変性に基づく広いスペクトラムの障害を包含する臨床用語であり、病的特徴は前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）と命名されている。ＦＴＤは６５歳未満の年齢群における早期変性認知症の２番目に多い原因である（Le Ber, Revue Neurologique 169 (2013) 811-819）。ＦＴＤは、人格および行動の変化によって特徴付けられるｂｖＦＴＤ；言語機能の変化によって特徴付けられる意味性認知症（ＳＤ）および進行性非流暢性失語症（ＰＮＦＡ）；皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、運動機能不全によって特徴付けられる進行性核上性麻痺症候群および運動ニューロン疾患（ＦＴＤ－ＭＮＤ）を含むいくつかの症候群によって代表される。これらの症候群の臨床診断は複雑で、最終の結論は、凝集したタンパク質を検出し、罹患した脳の領域を画定する死後の病理組織学解析によってのみ達成できる。病的なタンパク質封入体に関しては、症例の約４５％がミスフォールドしたタウの病的な集積を示し、症例の４５％が病的なＴＤＰ－４３を有し、より小さなサブグループがＦＵＳおよびその他のタンパク質の凝集体を有している。
ＩＶ．ＡＬＳにおけるＴＤＰ－４３
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、上位および下位の運動ニューロンの成熟前の喪失によって特徴付けられる神経変性障害である。ＡＬＳの進行は、診断から死亡まで１～５年の疾患経過を伴う致死的な麻痺および呼吸不全を特徴とする。散発性ＡＬＳの大部分の症例において、神経病理は、原発運動皮質、脳幹運動核、脊髄および付随する白質のニューロンおよびグリアにおけるＴＤＰ－４３の異常な細胞質集積によって特徴付けられる。認知症を伴うＡＬＳには、運動外新皮質および海馬におけるＴＤＰ－４３の集積が関与している。ＡＬＳ患者におけるＴＤＰ－４３のリン酸化の役割は、ＴＤＰ－４３のリン酸化の主な部位としてのアミノ酸Ｓ３７９、Ｓ４０３、Ｓ４０４、Ｓ４０９、Ｓ４１０で核および細胞質の封入体におけるリン酸化されたＴＤＰ－４３に特異的に結合する抗体の助けを借りて探索されてきた（Hasegawa et al., Ann Neurol 2008; 64: 60-70; Neumann et al., Acta Neuropathol (2009) 117: 137-149）。
Ｖ．ＡＤおよびその他の疾患におけるＴＤＰ－４３
ＴＤＰ－４３の病因はアルツハイマー病の患者の脳の５７％までで起こる（Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450; McAleese et al., Brain Pathol. 2017 Jul; 27(4): 472-479）。ＴＤＰ－４３の凝集は患者の年齢に関連し、ＡＤにおける認識の衰退、記憶の喪失、および側頭葉内側部の萎縮と相関している。ＡＤにおいては、ＴＤＰ－４３は側頭葉内側部におけるアミロイドベータおよびタウの病変と重複する脳内分布を共有する二次的なまたは独立の病因を表しているようである。病因的ＴＤＰ－４３は、いわゆる「ＡＤにおけるＴＤＰ－４３」（ＴＡＤ）のステージ分けスキームによって記述される進行性沈着の型通りのパターンに従い、ＴＤＰ－４３は最初に偏桃体に沈着し（ステージＩ）、続いて海馬、辺縁、側頭、そして最後に前頭線条体に沈着する（ステージＶ）（Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014;127(6): 811-824; Josephs KA et al., Acta Neuropathol. 2014; 127(3): 441-450）。
ＶＩ．ＴＤＰ－４３の拡散
ＡＬＳおよびＦＴＤの発症および最初の症状は患者によって顕著に変動するが、疾患の進行の共通の特徴は、最初の病巣区域から大部分のニューロンへの病変の拡散である。症状の継続的な悪化は、ＴＤＰ－４３の病変の継続的な拡散によって説明できるであろう。ＡＬＳ患者の脳におけるＴＤＰ－４３の病変は４段階のプロセスによって拡散しているようであり、伝播は順行性軸索内輸送による皮質下行性軸索投射を介して経シナプス的に起こっていると考えられる（Brettschneider et al., Ann Neurol. 2013 July; 74(1): 20-38.）。最近の実験的証拠は、プリオン様機構によるアミロイドベータ、タウ、アルファシヌクレイン、およびＴＤＰ－４３のニューロン組織におけるタンパク質の伝播の仮説（Hasegawa et al., 2017）を支持しており、開始点および地形学的な拡散パターンはこれら４つのタンパク質について明確に区別される（Brettschneider J et al., Nature Rev. Neuroscience, 2015, 109）。疾患の間で一体化された共通の機構は、病原性のタンパク質凝集体の細胞間拡散に基づくと考えられる。この機構は、病的な細胞からの凝集体の放出、ナイーブな細胞による取り込み、および内因性タンパク質の鋳型化されたコンフォメーション変化による病原性タンパク質のコンフォメーションの播種からなっている。
ＴＤＰ－４３の細胞間拡散は、患者脳由来の不溶性ＴＤＰ－４３の調製物がレセプター細胞中での細胞内凝集形成を誘起することができるという数少ないインビトロ(in vitro)モデルにおいて分子レベルで研究されてきた（Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013), 124-134; Feiler et al., 2015; Porta et al., Nat. Comm., 2018）。さらに、細胞内ＴＤＰ－４３凝集体が次の細胞への拡散に先立ってエキソソームと共同して放出されることが観察されている（Nonaka et al., Cell Reports 4 (2013, 124-134)）。同様に、アデノウイルスを形質導入したＴＤＰ－４３の発現が細胞質内凝集をもたらし、これがリン酸化およびユビキチン化され、より重要なことに細胞間拡散を開始するシーズとして作用する（Ishii et al., PLoS ONE 12(6): e0179375, 2017）。患者由来の病原性ＴＤＰ－４３は、トランスジェニックおよび野生型のマウスの脳内への接種に続いて内因性ＴＤＰ－４３の広範囲の沈着をもたらすことができる（Porta et al., Nat. Comm., 2018）。
ＶＩＩ．ＴＤＰ－４３タンパク質症の防止および処置
ＴＤＰ－４３の凝集および病原の拡散は、現在のところ治癒ができない致命的疾患であるＡＬＳおよびＦＴＤの主要な特徴である。したがって、ＴＤＰ－４３タンパク質症の処置および防止のための新たな方法に対するニーズがある。ＴＤＰ－４３における突然変異はＡＬＳおよびＦＴＤの家族性症例と関連しており、ＴＤＰ－４３のミスフォールディングと疾患の進行との原因となる関連性を提供している。
ＶＩＩＩ．ＴＤＰ－４３タンパク質症の診断
臨床的な表徴が特に早期の段階で他の疾患と重複し得るので、臨床的兆候に基づくＦＴＤの診断は不十分である。
いくつかのアプローチは、様々な型のＦＴＤ病因を識別するための生化学的なバイオマーカーの開発を目指している。ＴＤＰ－４３の様々なコンフォメーションに対する抗体の開発は、より高感度で特異的な診断ツールを生成することを可能にし得る。生化学なバイオマーカーと並行して、イメージングバイオマーカーの開発はＴＤＰ－４３タンパク質症における病因の早期かつ特異的な検出を可能にし得る。脳におけるＴＤＰ－４３の沈着をイメージングする能力は、ＴＤＰ－４３タンパク質症のための診断および薬物の開発のための実質的な成果となり得る。細胞を透過できる抗体断片を使用することによって、そのような検出を可能にすることができよう。
様々なタンパク質のミスフォールディングに基づく神経変性疾患における最も早期の事象は、タンパク質を毒性にする代替のコンフォメーションの取得である。さらに、このミスフォールドしたコンフォメーションは、内因性の正常なタンパク質を、冒された組織を通る観察された拡散の機械的基礎としてのミスフォールドしたコンフォメーションに動員することによって、自己増殖することができる。
所与のタンパク質の様々なコンフォメーション状態に対する抗体を開発するため、提示された抗原のコンフォメーションを制御して特定のコンフォメーション状態にある所与の標的に対するコンフォメーション特異的抗体を生じさせる超分子抗原性コンストラクトを設計した（ＷＯ２０１２／０５５９３３およびＷＯ２０１２／０２０１２４）。コンフォメーション特異的抗体は、これらのタンパク質の疾患関連性のコンフォメーションと機能性の内因性コンフォメーションとを区別できるので、多くの利点を提供する。そのような抗体は、疾患に関連するタンパク質のミスフォールドされたアイソフォームを標的とする一方、正常なコンフォメーションのタンパク質に吸着される可能性が少ないので、このアプローチは治療応用において多くの利点を提供する。これと同様に診断応用については、そのような抗体は疾患に関連するタンパク質の構造状態のみを認識し、これは敏感かつ特異的な診断の開発のために重要である。
ＴＤＰ－４３タンパク質症におけるＴＤＰ－４３に基づくバイオマーカーの使用は、今も確立すべき状況のままである。そのような評価は、部分的には生体液中の病原性ＴＤＰ－４３の定量のための好適な免疫アッセイに採用できる高親和性の抗体がないために妨げられてきた（Feneberg et al., Molecular Neurobiology, 2018）。
したがって、様々な型のＴＤＰ－４３タンパク質症を診断するため、および／またはＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の処置のために使用される治療薬の有効性をモニターするために、特にヒト試料中のミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３を検出することができるバイオマーカーに対する明らかなニーズがある。
ＴＤＰ－４３タンパク質症は、病原性ＴＤＰ－４３によって特徴付けられる神経変性障害の組として定義される。
ＩＸ．先行技術
特許出願ＷＯ２００８／１５１０５５は、生体液中のＴＤＰ－４３ポリペプチドおよび／またはＴＤＰ－４３ポリペプチド切断産物（例えば２５ｋＤおよび３５ｋＤのＴＤＰ－４３ポリペプチド切断産物）のレベルを使用して哺乳動物が神経変性疾患を有しているか否かを判定するための方法および材料を開示している。
特許出願ＷＯ２０１３／０６１１６３は、ヒト抗体ならびにその断片、誘導体、および変異体等のポリペプチドを含むＴＤＰ－４３特異的結合分子を開示している。
上記に鑑みて、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３に結合するヒト化された抗ＴＤＰ－４３結合分子に対するニーズがある。そのようなヒト化された結合分子、特に抗体およびその抗原結合性断片は、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）の特定のエピトープに結合し得る。さらに、ＦＴＤスペクトラムの中の病原の型の間の区別を可能にする高感度で特異的なバイオマーカーの開発は緊急の仕事である。
技術的課題は、本明細書で提供する実施形態によって解決される。
本発明の結合分子はマウス抗体のヒト化形態であり、特にヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）に結合するマウスモノクローナル抗体のヒト化形態である。本明細書でＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１と称する抗体をヒト化結合分子の開発に選択した。本明細書に記載したように、この抗体はハイブリドーマクローン６３３Ｂ１２Ｃ８に由来する。これはヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸３９７－４１１の中のエピトープに結合する。より具体的には、これはヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸４００－４０５に由来するエピトープに結合する。この抗体は、配列番号２８として示されるＶＨヌクレオチド配列および配列番号２９として示されるＶＬヌクレオチド配列を有する（これらによってコードされる）。本明細書の表１０を参照されたい。この抗体は、配列番号２０として示されるＶＨアミノ酸配列および配列番号２４として示されるＶＬアミノ酸配列を有する。本明細書の表１１を参照されたい。この抗体は、配列番号２１として示されるＶＨ ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２として示されるＶＨ ＣＤＲ２アミノ酸配列、およびＥＳのＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列を有する。本明細書の表１１を参照されたい。この抗体は、配列番号２５として示されるＶＬ ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１６として示されるＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号２７として示されるＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列を有する。本明細書の表１１を参照されたい。
選択したＣＤＲ配列は特定の位置で突然変異させ得る。一部の実施形態では、そのような突然変異は潜在的な翻訳後修飾部位を避けるために行なわれる。特定の実施形態では、ＶＨ領域（ＣＤＲＨ２）における以下の残基、Ｎ５３、Ｎ５４、およびＧ５５の１つまたは複数、最大で全部が突然変異される。特定の突然変異には、Ｎ５３Ｇ、Ｎ５３Ｓ、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５４Ｑ、Ｎ５４Ｇ、およびＧ５５Ａが含まれる。残基はＫａｂａｔに従って番号付けしている。特定の実施形態では、ＶＬ領域（ＣＤＲＬ１および／またはＣＤＲＬ２および／またはＣＤＲＬ３）における以下の残基、Ｋ２４、Ｄ２８、Ｇ２９、Ｄ５５、Ｓ５６、およびＷ８９の１つまたは複数、最大で全部が突然変異される。残基はＫａｂａｔに従って番号付けしている。特定の突然変異には、Ｋ２４Ｒ、Ｄ２８Ｅ、Ｄ２８Ｇ、Ｇ２９Ａ、Ｄ５５Ｅ、Ｓ５６Ａ、Ｗ８９Ｙ、Ｗ８９Ｆ、およびＷ８９Ｌが含まれる。
特定の実施形態では、ヒト化結合分子、特に本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖可変ドメインサブファミリー１のフレームワーク配列を含む。より具体的には、ヒト化結合分子、特に本発明のヒト化抗体または抗原結合性断片は、ＩＧＨＶ１－３（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ６２１０９、Ｘ６２１０７、ＭＫ５４０６４５、ＭＨ７７９６２２、およびＭＮ３３７６１６；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０Ａ０Ｃ４ＤＨ２９）、ＩＧＨＶ１－２（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ０７４４８、Ｘ６２１０６、Ｘ９２２０８、ＫＦ６９８７３３、ＨＭ８５５６７４、ＭＨ２６７２８５、およびＭＮ３３７６１５；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２３０８３）、ＩＧＨＶ１－４６（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ９２３４３、Ｊ００２４０、Ｌ０６６１２、およびＭＫ５４０６５０；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０１７４３）、またはＩＧＨＶ１－２４（ＩＭＧＴ受託番号Ｍ９９６４２；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０Ａ０Ｃ４ＤＨ３３）ＶＨフレームワーク配列、好ましくはＩＧＨＶ１－３ ＶＨフレームワーク配列を含み得る。
特定の実施形態では、ヒト化結合分子、特に本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト軽鎖可変ドメインカッパサブファミリー２フレームワーク配列を含む。より具体的には、ヒト化結合分子、特に本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＧＫＶ２－３０（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ６３４０３およびＦＭ１６４４０８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ０６３１０）、ＩＧＫＶ２－２９（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ６３３９６、Ｕ４１６４５およびＡＪ７８３４３７；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ２ＮＪＶ５）、ＩＧＫＶ２Ｄ－２９（ＩＭＧＴ受託番号Ｍ３１９５２およびＵ４１６４４；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０Ａ０７５Ｂ６Ｓ２）またはＩＧＫＶ２－２４（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ１２６８４；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０Ａ０Ｃ４ＤＨ６８）ＶＬフレームワーク配列、好ましくはＩＧＫＶ２－３０またはＩＧＫＶ２－２９ ＶＬフレームワーク配列、最も好ましくはＩＧＫＶ２－３０ ＶＬ（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ６３４０３およびＦＭ１６４４０８）フレームワーク配列、特にＩＧＫＶ２－３０＊０２ ＶＬ（ＩＭＧＴ受託番号ＦＭ１６４４０８）フレームワーク配列を含み得る。
選択したフレームワーク配列は特定の位置で突然変異させ得る。一部の実施形態では、そのような突然変異はＣＤＲのループコンフォメーションおよび／またはＶＨドメインとＶＬドメインの間の可変ドメインパッキングに有利に影響を及ぼすために行なわれる。特定の実施形態では、Ｋａｂａｔ番号付けに従って下の表１２に列挙した残基の１つまたは複数、最大で全部が突然変異される。特定の実施形態では、Ｋａｂａｔ番号付けに従って、以下のＶＨの突然変異、Ｑ１Ｅ、Ａ２４Ｔ、Ｒ３８Ｋ、Ｐ４１Ｈ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ｖ、Ｔ７３Ｋの１つまたは複数、最大で全部が行なわれる。ＶＨの突然変異と組み合わされる特定の実施形態では、以下のＶＬの突然変異、Ｒ２４Ｋ、Ｆ３６Ｌ、Ｒ４５Ｋ、Ｇ５７Ｒ、Ｖ５８Ｉの１つまたは複数、最大で全部の突然変異が行なわれる（Ｋａｂａｔ番号付けに従って）。
したがって、本発明は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３を特異的に認識するヒト化結合分子、特にヒト化抗体およびその抗原結合性断片に関する。本発明の中で、ミスフォールドされたＴＤＰ－４３は、ミスフォールドされたモノマー性の、および／またはミスフォールドされたオリゴマー性の、および／またはミスフォールドされた凝集体の、および／または翻訳後修飾された、および／またはミスフォールドされた切断されたＴＤＰ－４３を含む。翻訳後修飾されたＴＤＰ－４３には、リン酸化、ユビキチン化、アセチル化、スモイル化、および／またはメチル化されたＴＤＰ－４３が含まれる。生理的ＴＤＰ－４３には、可溶性核ＴＤＰ－４３が含まれる。本発明のヒト化結合分子は、ＴＤＰ－４３凝集体およびリン酸化ＴＤＰ－４３を含む病原性ＴＤＰ－４３に結合することができることが本明細書で実証される。即ち、本発明は、ヒト化結合分子、特にミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３を特異的に認識するヒト化抗体またはその抗原結合性断片を提供する。そのような結合分子は、本明細書でヒト化「汎ＴＤＰ－４３」結合分子、特にヒト化汎ＴＤＰ－４３抗体と称する。本明細書で説明するように、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３に等しく結合するか、または両方のカテゴリーのＴＤＰ－４３に特異的に結合するが、他方に対して一方に優先的に結合し得る。本発明はまた、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、改善、処置、および／または診断のための、ヒト化結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を提供する。本発明はまた、神経変性を惹起する特定の型の病原を検出および／または理解（即ち同定）するためのヒト化結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を提供する。臨床研究における長期のモニタリングのためのより効率的かつ正確な対象の選択を可能にし、ＴＤＰ－４３タンパク質症の新規な療法の開発を支持する診断用バイオマーカーとしての使用も想定している。
本発明はまた、医薬（治療剤）としてのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
理論に縛られることは望まないが、本発明は、ＴＤＰ－４３タンパク質に由来する修飾されたコンフォメーション特異的抗原性ペプチドおよびペプチド断片または全体のＴＤＰ－４３タンパク質、ならびに前記ペプチドもしくは断片または全体のＴＤＰ－４３タンパク質を抗原として使用することによって得られるまたは得られたヒト化抗体が、ＴＤＰ－４３の細胞間伝播を遮断し、および／またはＴＤＰ－４３凝集体を脱凝集させ、および／またはＴＤＰ－４３の播種を遮断し、および／またはＴＤＰ－４３タンパク質もしくはその断片の凝集を阻害するという仮定に基づいて開発された。本発明のヒト化結合分子、特にヒト化ポリペプチド、より具体的にはヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３、特に細胞質および細胞外のミスフォールドされたＴＤＰ－４３に結合する。本発明のヒト化結合分子、特にヒト化ポリペプチド、より具体的にはヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、完全長のＴＤＰ－４３および／または切断されたＴＤＰ－４３に結合する。一実施形態では、本発明のヒト化結合分子、特にヒト化ポリペプチド、より具体的にはヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、細胞質のミスフォールドされたＴＤＰ－４３に特異的に結合する。
ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３、または病原関連ＴＤＰ－４３は、その正常なフォールディングおよび局在化を失った（即ちミスフォールドされた）ＴＤＰ－４３タンパク質からなっている。ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３は、プレ封入体の中、ならびにＴＤＰ－４３について免疫反応性のニューロンおよびグリアの細胞質封入体（それぞれＮＣＩおよびＧＣＩ）、ニューロン核内封入体（ＮＩＩ）、およびジストロフィー神経突起（ＤＮ）の中で見出すことができる。
非凝集生理的ＴＤＰ－４３は、主として核内に位置し、細胞質に往復する生理的機能性のＴＤＰ－４３タンパク質であり、インビボ（in vivo）の細胞環境においてその望ましい機能を呈することができる状態にある。
本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片は、驚くべきことに、以下の特性の少なくとも１つ、好ましくは２つ、より好ましくは３つ、さらにより好ましくは４つ全てを有する：
－ ＴＤＰ－４３の細胞間伝播を遮断すること；
－ ＴＤＰ－４３凝集体を脱凝集すること；
－ ＴＤＰ－４３タンパク質またはその断片の凝集を阻害すること；
－ ＴＤＰ－４３の播種を遮断すること；
－ ＴＤＰ－４３の拡散を遮断すること。
上で列挙した１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの特性の組合せとは無関係に、ヒト化抗ＴＤＰ－４３結合分子、好ましくは本発明のヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片は、ＴＤＰ－４３タンパク質症のインビボモデルにおいて、より重要にはＴＤＰ－４３病原を有する患者において、ＴＤＰ－４３病原の生成を改善／阻害／低減し得る。
ヒト化抗ＴＤＰ－４３結合分子はヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸３９７－４１１の中の領域に結合し、より具体的にはヒト化ＴＤＰ－４３結合分子はヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基４００～４０５内のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、
－ 配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；ならびに
－ 配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む。
本発明はとりわけ、（ｉ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む免疫コンジュゲート、（ｉｉ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む標識抗体、（ｉｉｉ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子および薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／または希釈剤を含む医薬組成物、（ｉｖ）ヒトまたは獣医学の用途のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、（ｖ）ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、改善、処置における使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、（ｖｉ）診断用途（特にインビボ診断のため、しかしインビトロ試験のためにも）のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、（ｖｉｉ）研究用途のための、特に分析ツールまたは参照分子としてのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、（ｖｉｉｉ）ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／もしくは異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症をモニターするための診断ツールとしての使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、（ｉｘ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を用いて個体を処置することによる、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を有する個体における認識記憶能力を維持もしくは増大させるかまたは記憶喪失を遅延させる方法、（ｘ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を用いて個体を処置することによる、個体における凝集ＴＤＰ－４３および／またはリン酸化ＴＤＰ－４３のレベルを低減させる方法、（ｘｉ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子をコードする核酸分子、（ｘｉｉ）本発明の核酸分子を含む組換え発現ベクター、（ｘｉｉｉ）本発明の核酸および／またはベクターを含む宿主細胞、（ｘｉｖ）本発明の組換え発現ベクターを含有する無細胞発現系、（ｘｖ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を産生する方法、（ｘｖｉ）ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を使用して対象から得た試料中のＴＤＰ－４３を定量する方法、ならびに（ｘｖｉｉ）本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子および／またはこれを産生するための核酸、発現ベクター、宿主細胞、および／もしくは無細胞発現系を含むキットをさらに指向している。
本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片は、ミクログリアを動員および／または活性化し得る。より具体的には、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、細胞のサイズおよび活性化状態に関してミクログリアの形態に影響し得る。これは、本発明のＴＤＰ－４３結合分子によって実証されるＴＤＰ－４３の病原性の低減に寄与し得る。
本発明において、ヒト化結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片はＴＤＰ－４３を特異的に認識する。本発明のヒト化結合分子には、ＴＤＰ－４３タンパク質に特異的なヒト化ポリペプチドおよび／またはヒト化抗体および／またはその抗原結合性断片が含まれる。「ＴＤＰ－４３を特異的に認識する」は、本発明のヒト化結合分子が、他のエピトープに対するより大きな親和性で、特異的、一般的、かつ集合的に、ＴＤＰ－４３、特にＴＤＰ－４３の中のいくつかのエピトープに、特にＴＤＰ－４３タンパク質の１つまたは複数の病原性コンフォメーションの中の曝露された／接近可能なエピトープに、結合することを意味する。ＴＤＰ－４３に特異的に結合する本発明のヒト化結合分子、特にヒト化ポリペプチド、より具体的にはヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３を特異的に認識する。
本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非凝集生理的ＴＤＰ－４３と凝集ＴＤＰ－４３の両方に結合する。即ち、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、可溶性のおよび凝集したＴＤＰ－４３にほぼ等しく良好に結合し得る。本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非凝集ＴＤＰ－４３と比較して、凝集ＴＤＰ－４３にほぼ等しく結合し得る。より具体的には、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、核の中の非凝集ＴＤＰ－４３と比較して、細胞質中の凝集ＴＤＰ－４３にほぼ等しく結合し得る。他の実施形態では、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非凝集ＴＤＰ－４３と比較して、凝集ＴＤＰ－４３に優先的に結合し得るが、両方の種に結合する。より具体的には、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、核の中の非凝集ＴＤＰ－４３と比較して、細胞質中の凝集ＴＤＰ－４３に優先的に結合し得るが、両方の種に結合する。あるいは、他の実施形態では、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、凝集ＴＤＰ－４３と比較して、非凝集ＴＤＰ－４３に優先的に結合し得るが、両方の種に結合する。より具体的には、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、細胞質中の凝集ＴＤＰ－４３と比較して、核の中の非凝集ＴＤＰ－４３に優先的に結合し得るが、両方の種に結合する。これらの結合特性は、例えば免疫組織化学を使用して実証し得る。
一部の実施形態では、本発明は、ヒト化結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的に結合する本明細書に記載した本発明のヒト化抗体およびその抗原結合性断片、ならびに前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むがそれらに限らない、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断、防止、改善、および／または処置するためのこれらのヒト化結合分子の使用を包含する。本明細書で開示する方法および組成物は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含むがそれらに限らない、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断、防止、改善、および／または処置において用途を有する。好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断、防止、改善、および／または処置するためのこれらのヒト化結合分子の使用は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、または前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を指向している。より好ましくは、使用は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を指向している。より好ましくは、使用はアルツハイマー病（ＡＤ）を指向している。より好ましくは、使用は前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を指向している。
別の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載した本発明のヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を検出、診断、および／またはモニターするために、試料と接触させる。
一実施形態では、本発明は、試料中のＴＤＰ－４３の存在を検出するための、ヒト化結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的に結合する本明細書に記載した本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片およびこれらのヒト化結合分子、特にこれらのヒト化抗体の使用を包含する。したがって、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、例えば本明細書に記載したヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体は、例えばＥＬＩＳＡ系アッセイまたは表面適合化アッセイを使用することによって、試料中のＴＤＰ－４３の存在について、とりわけ臨床試料、特にヒトの血液、ＣＳＦ、間質液（ＩＳＦ）、および／または尿をスクリーニングするために使用することができる。ある状況では組織試料、例えば脳組織試料を使用してもよい。本発明の方法および組成物は、発症前の疾患の診断、ならびに／または疾患の進行および／もしくは治療有効性のモニタリングにおける用途も有する。一部の実施形態によれば、ＴＤＰ－４３に特異的なヒト化抗体（例えば完全長のヒト化抗体またはＴＤＰ－４３に結合するヒト化抗体の断片もしくは誘導体）は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）を検出、診断、および／またはモニターするために、試料（例えば血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、間質液（ＩＳＦ）、または脳組織）と接触させる。本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、好適な対照と比較して、好適な試料、特に比較的高いＴＤＰ－４３レベルを有する血液、ＣＳＦ、ＩＳＦ、または尿等の臨床試料中のＴＤＰ－４３を定量するために使用して、疾患および／またはより進行した疾患を指摘することができる。多くの好適な免疫アッセイフォーマットが既知である。即ち、高レベルのＴＤＰ－４３を示す疾患を診断する目的で、方法（例えばＥＬＩＳＡ、ＭＳＤ（メソスケールディスカバリー）、ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光（Homogeneous Time Resolved Fluorescence））、およびＡｌｐｈａＬＩＳＡ）を実施してよい。あるいは、モニタリング目的で方法を実施してよい。経時的に増加するレベルは疾患の進行を指摘し得る。経時的に減少するレベルは疾患の退縮を指摘し得る。治療をモニターするため、特に特定の処置の有効性をモニターするためにも、方法を実施してよい。治療の成功は、処置に続くＴＤＰ－４３のレベルの安定化または低下に関連して測定できる。ＴＤＰ－４３のレベルは、ＴＤＰ－４３プロテイン症患者由来のＣＳＦ試料において、健常な対象（健常対照）から採取した対照試料よりも高いことが、本明細書（実施例１２）で実証されている。対照試料は、試験試料と並行して、または並行せずに、処理してよい。一部の実施形態では、対照レベルは、健常対象から同様にまたは同じ実験条件下で採取し、試験試料中で決定したレベルに対する比較対照として使用する一連の対照試料から決定される。本発明のヒト化結合分子を使用して好適な試料中のＴＤＰ－４３を定量する方法は、療法（対象のさらなる処置のための）を選択するためにも使用してよい。即ち、個別化された処置方法が想定される。試料は処置の前および後で採取される。その療法を使用した処置が処置の後で安定な、または好ましくは低下するＴＤＰ－４３のレベルをもたらせば、その療法をその対象に対して選択してよい。その療法が処置の後で安定な、または好ましくは低下するＴＤＰ－４３のレベルをもたらさなければ、その療法はその対象に対して選択されない。療法は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の処置のための任意の好適な候補治療剤であってよい。好ましい実施形態では、療法は、典型的には本明細書に記載した医薬組成物の形態の、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む。
本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、特定の型またはサブタイプへの疾患の分類のためにも使用し得る。即ち、
ａ．ＴＤＰ－４３のレベルが好適な対照と比較して定量される本発明の方法を実施すること、
ｂ．適宜、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異、ＴＡＲＤＢＰの突然変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異、ＴＡＲＤＢＰの突然変異、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異、デスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を含むがこれらに限らない、対象由来の試料中の突然変異を同定すること、ならびに
ｃ．ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類すること
を含む、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常を分類するため、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法が提供される。
同様に、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を有する対象から得られた試料中でＴＤＰ－４３のレベルを定量する本発明の方法を実施することであって、そのレベルが、異なる型またはサブタイプの、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を有する対象から採取された対照試料と比較される（即ち、対照レベルの代表的な組が目的の型またはサブタイプについて決定される）、実施すること、ならびに、その比較に基づいて、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類することを含む、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／もしくは異常を分類するため、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するための方法が提供される。即ち、分類は、試験試料と対照試料の１つまたは複数との最も近い一致を決定することに基づいている。これらの方法は、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異、ＴＡＲＤＢＰの突然変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異、ＴＡＲＤＢＰの突然変異、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異、デスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を含むがこれらに限らない、試料中の突然変異を同定することをさらに含んでもよく、同定された突然変異は、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を分類するためにも使用される。疑いを避けるため、試料中の突然変異の同定は、任意の好適な方法によって、例えば試料中の核酸分子の核酸シーケンシングに基づいて、実施してよい。試料は、ＴＤＰ－４３のレベルが決定された試料とは分離され区別されてよいが、同じ対象からの試料である。
他の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を防止、改善、および／または処置する方法を提供する。一実施形態によれば、本発明の方法は、有効濃度のヒト化結合分子、特に本明細書に記載したＴＤＰ－４３に特異的な本発明のヒト化抗体（例えば完全長の抗体またはＴＤＰ－４３に結合する抗体の断片もしくは誘導体）を対象に投与することを含む。別の実施形態では、本発明はＴＤＰ－４３タンパク質症を防止、改善、および／または処置する方法を提供する。一部の実施形態によれば、ヒト化結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載した本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を処置、改善、および／または防止するために投与される。別の実施形態では、ヒト化結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載した本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される神経変性疾患を、防止、改善、および／または処置するために投与される。
別の実施形態では、ヒト化結合分子、特にＴＤＰ－４３に特異的な本明細書に記載した本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を防止、改善、および／または処置するために投与される。
Ａ型病変を有する前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の対象に由来する組織切片中のＴＤＰ－４３の検出。Ａ型病変を有するＦＴＤ対象の前皮質からの厚さ１０μｍの凍結切片について検出のために蛍光標識した二次抗体を使用して免疫組織化学を実施した。対照として以下の抗体：病的な封入体および生理的核ＴＤＰ－４３を検出するためのウサギポリクローナル汎ＴＤＰ－４３抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，１０７８２－２－ＡＰ）；病的な凝集およびリン酸化したＴＤＰ－４３を検出するためのウサギモノクローナルホスホＴＤＰ－４３ ｐ４０９／４１０抗体（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｐ０２）を使用した。矢印はＴＤＰ－４３凝集体を示し、太い矢じりは核内の生理的ＴＤＰ－４３を示す（核はＤＡＰＩ染色によって可視化している）。ハイブリドーマの名称または市販の抗体源を、それぞれの画像の左上隅に示す。 Ａ型ＦＴＤの剖検脳組織（前皮質）から得た界面活性剤（サルコシル）可溶性および不溶性の分画中のＴＤＰ－４３の検出。Ｎ末端領域（Ａ、Ｂ）またはＣ末端領域（Ｃ）に結合する市販の抗体によるイムノブロットは、サルコシル可溶性（レーン１）および不溶性（レーン２）分画中のＴＤＰ－４３の存在を示す。本研究で生成したＴＤＰ－４３に対するｍＡｂとＴＤＰ－４３のＮ末端領域のエピトープによるイムノブロット（Ｄ～Ｉ）。ＴＤＰ－４３のＣ末端領域に結合するＴＤＰ－４３に対するｍＡｂによるイムノブロット（Ｊ～Ｎ）。ＴＤＰ－４３に対する全てのｍＡｂは、完全長のＴＤＰ－４３を特異的に認識する。さらに、いくつかのｍＡｂ（Ｋ、Ｍ、Ｎ）は、不溶性分画中のＣ末端断片等の疾患状態の病原性シグネチャーを認識する。 媒体（ｎ＝３０、灰色のバー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）で処置したマウス（ｎ＝２５、灰色の点線バー）について測定したｐＴＤＰ－４３免疫反応性目的物の密度を、２つの脳領域：線条体（Ａ）および大脳皮質（Ｂ）について示す。（Ｃ）脳の左半球の皮質から得た不溶性分画を、媒体（ｎ＝３０）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）（ｎ＝２５）で処置した群における全ＴＤＰ－４３について定量した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。 ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）またはアイソタイプ対照の存在下にＴＥＶ切断によって誘起されたＴＤＰ－４３凝集を、３０時間後に６００ｎｍの濁度によって測定する。３０時間後のエンドポイントをアイソタイプ対照（灰色のバー）に対して正規化して、凝集ＴＤＰ－４３の％をＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１について計算した（灰色の点線バー）。３回の独立した実験についての平均値±ＳＤを示す。アイソタイプ対照とＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）との間の統計的差異を、Welchのｔ－検定によって解析した（＊＊＊ｐ＜０．００１）。 （Ａ）媒体（ｎ＝１６、灰色のバー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）で処置したマウス（ｎ＝１６，灰色の点線バー）について測定したＩｂａ１陽性免疫反応性区域を脳皮質について示す。エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。（Ｂ－Ｃ）媒体（ｎ＝１６、灰色のバー）およびＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）で処置したマウス（ｎ＝１６，灰色の点線バー）について測定した平均ミクログリア細胞サイズを脳皮質について示す。ミクログリアを、その形態に基づいて３つのクラスに分類した。（Ｂ）大きな異常肥大、（Ｃ）小分岐状、および（Ｄ）分岐静止。媒体対照とＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）との間の統計的差を、ｔ検定によって解析した（＊ｐ＜０．０５）。 種々のＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者と健常対照のＣＳＦ中のＴＤＰ－４３レベルのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）を用いるＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイによる定量。種々のＣＳＦ試料（ｘ軸）について得られた全ＴＤＰ－４３についてのＡｌｐｈａＬＩＳＡの生カウント（ｙ軸）。統計解析は、３回の独立した実験からのデータにより、固定因子として群、実験、性別、および年齢を、ランダム因子として個体を使用して、生カウントについて線状混合モデルを使用して実施した（＊＊ｐ＜０．０１）。 Ａ型ＦＴＤの剖検脳組織から得た界面活性剤（サルコシル）不溶性分画由来のＴＤＰ－４３およびｐＴＤＰ－４３の、抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）（１）、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）（２）、およびマウスＩｇＧ２ａ対照（３）による免疫枯渇。免疫枯渇した分画１～３を、ＴＤＰ－４３またはｐＴＤＰ－４３に特異的な検出抗体を使用してウェスタンブロットによって解析した。ＩＮはインプット材料（免疫枯渇前）についてのものである。 （Ａ）ＩｇＧ４アイソタイプのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１ヒト化変異体によるＴＤＰ－４３デノボ（de novo）凝集の阻害。（Ｂ）ＩｇＧ１アイソタイプのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１ヒト化変異体によるＴＤＰ－４３デノボ凝集の阻害。曲線下面積（ＡＵＣ）はアイソタイプ対照に対して正規化し、データはＴＤＰ－４３の凝集の阻害パーセントとして表している。データは３回の独立の反復実験の平均±ＳＤとして提示している。 Ａ型ＦＴＤの剖検脳組織から得た界面活性剤（サルコシル）不溶性分画由来のＴＤＰ－４３およびｐＴＤＰ－４３の、抗体ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８（ｈＩｇＧ１アイソタイプ）およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照による免疫枯渇および免疫沈降。免疫枯渇した分画（レーン２～３）および免疫沈降した分画（レーン４～５）を、ＴＤＰ－４３またはｐＴＤＰ－４３に特異的な検出抗体を使用してウェスタンブロットによって解析した。レーン１はインプット材料（免疫枯渇および免疫沈降の前）を示す。
Ｘ．定義
「抗原結合性分子」は、本明細書で使用される場合、抗原、特にＴＤＰ－４３に特異的または選択的に結合することができる任意の分子である。結合分子は抗体もしくはその断片を含むか、抗体もしくはその断片である。抗ＴＤＰ－４３結合分子は、特定の認識部位、即ちエピトープでＴＤＰ－４３タンパク質に結合する分子、例えば抗ＴＤＰ－４３抗体またはその断片である。即ち、本発明の抗原結合分子は、配列番号１のアミノ酸配列の中のエピトープに結合する。本明細書で提供する抗原結合性分子、特に抗体またはその抗原結合性断片は、完全長のＴＤＰ－４３を認識する。その他の抗ＴＤＰ－４３結合性分子は、多価分子、多特異性分子（例えばダイアボディ）、融合分子、アプタマー、アビマー、またはその他の天然に存在するもしくは組換えで作出された分子も含み得る。本発明で有用な実例となる抗原結合性分子は、抗体様分子を含む。抗体様分子は標的分子に結合することによって機能を呈し得る分子であり（例えばCurrent Opinion in Biotechnology 2006, 17:653-658; Current Opinion in Biotechnology 2007, 18:1-10; Current Opinion in Structural Biology 1997, 7:463-469; Protein Science 2006, 15:14-27を参照）、例えばＤＡＲＰｉｎｓ（ＷＯ２００２／０２０５６５）、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（ＷＯ１９９５／００１９３７）、Ａｖｉｍｅｒ（ＷＯ２００４／０４４０１１；ＷＯ２００５／０４０２２９）、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（ＷＯ２００２／０３２９２５）、およびｆｙｎｏｍｅｒｓ（ＷＯ２０１３／１３５５８８）を含む。
本明細書で使用される用語「抗ＴＤＰ－４３抗体」および「ＴＤＰ－４３に結合する抗体」、または単に「抗体」は、ＴＤＰ－４３を標的とする診断薬および／または治療剤として有用なために十分な親和性をもってＴＤＰ－４３に結合することができる抗体を意味する。一般に、用語「抗体」は、本明細書で最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二特異性または二パラトープ性の抗体）、完全ヒト抗体、および抗体断片を含むがそれらに限らない種々の抗体構造を包含する。本発明の抗体は、キメラ抗体、組換え抗体、組換え抗体の抗原結合性断片、ヒト化抗体、またはファージの表面上に呈示される抗体もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の表面上に呈示される抗体であってもよい。
抗体の「抗原結合性断片」または「その機能性断片」は、無傷のまたは完全長の抗体の一部を含み、無傷のまたは完全長の抗体が結合する抗原に結合する（完全にまたは部分的に）、無傷のまたは完全長の抗体以外の分子を指す。抗原断片の例には、それだけに限らないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、および抗体断片から形成された多特異性抗体が含まれる。抗原結合性断片は、それらが誘導された元の抗体の結合機能を保持しているので、「機能性断片」とも称される。
タンパク質の定義された領域の中の「エピトープに結合する抗体」は、そのタンパク質に結合するためにその領域の中の１つまたは複数のアミノ酸の存在を必要とする抗体である。
特定の実施形態では、タンパク質の定義された領域の中の「エピトープに結合する抗体」は、そのタンパク質のアミノ酸が突然変異し、得られる変更されたタンパク質（例えばそのエピトープを含む変更されたタンパク質）に対する抗体の結合が変更されていないタンパク質への結合の少なくとも２０％であることが決定される突然変異解析によって同定される。一部の実施形態では、タンパク質の定義された領域の中の「エピトープに結合する抗体」は、そのタンパク質のアミノ酸が突然変異し、得られる変更されたタンパク質（例えばそのエピトープを含む変更されたタンパク質）に対する抗体の結合が変更されていないタンパク質への結合の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％であることが決定される突然変異解析によって同定される。特定の実施形態では、抗体の結合は、ＦＡＣＳ、ＷＢ、または好適な結合アッセイ、例えばＥＬＩＳＡによって決定される。
本発明の文脈で使用される用語「～に結合する」は、少なくとも２つの「抗原相互作用部位」の相互の結合（相互作用）を定義する。用語「抗原相互作用部位」は、本発明に従えば、ポリペプチドのモチーフ、即ちＴＤＰ－４３の特定の抗原または抗原の特定の群との特定の相互作用の能力を示す本発明の抗体または抗原結合性断片の一部を定義する。前記結合／相互作用は、「特異的認識」を定義するとも理解される。用語「特異的に認識する」は、本発明に従えば、抗体が本明細書で定義するＴＤＰ－４３の少なくとも２つのアミノ酸と特異的に相互作用／結合できる、特にヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１、および１４０～２００内の少なくとも２つのアミノ酸と相互作用／結合できる、さらにより具体的には、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６、または４００～４１２内の少なくとも２つのアミノ酸と相互作用／結合できることを意味する。
用語「汎ＴＤＰ－４３抗体」は、モノマーＴＤＰ－４３、オリゴマーＴＤＰ－４３、翻訳後修飾されたＴＤＰ－４３（例えばリン酸化、ユビキチン化、アセチル化、スモイル化、および／またはメチル化された）、凝集ＴＤＰ－４３、および切断されたＴＤＰ－４３を含む、ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３に結合する抗体を意味する。
本発明に従って使用される用語「特異的相互作用」は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片が、同様の構造の（ポリ）ペプチドと交差反応しないか、本質的に交差反応しないことを意味する。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８１～１９５、１９９～２１３、３０７～３２１、３５２～３６６、３８９～４１１、３９７～４１１、および１４０～２００内の特定のアミノ酸配列によって形成されるＴＤＰ－４３の構造と特異的に結合／相互作用し、より具体的にはヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基１８３～１８８、２０３～２１３、２０４～２０８、２０４～２１１、２０５～２１０、３１６～３２３、３５８～３６１、４００～４０５、４００～４０６、または４００～４１２内の特定のアミノ酸配列によって形成されるＴＤＰ－４３の構造と結合／相互作用する。
抗原結合性分子、特に検討中の抗体またはその抗原結合性断片のパネルの交差反応性は、例えば抗体またはその抗原結合性断片の前記パネルの、目的の（ポリ）ペプチドならびに多少（構造的および／または機能的に）緊密に関係するいくつかの（ポリ）ペプチドとの結合を、従来の条件下で評価することによって試験することができる（例えばHarlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1988) およびUsing Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1999)を参照）。本明細書で定義するＴＤＰ－４３の一定の構造、例えば本明細書で定義するＴＤＰ－４３の特定のエピトープまたは（ポリ）ペプチド／タンパク質に結合するが、同じＴＤＰ－４３の他のエピトープまたは（ポリ）ペプチドのいずれとも結合しないか本質的に結合しないコンストラクト（即ち抗体、その抗原結合性断片等）のみが、目的のエピトープまたは（ポリ）ペプチド／タンパク質に特異的であると考えられ、本明細書で提供する方法によるさらなる研究のために選択される。これらの方法はとりわけ、構造的および／または機能的に緊密に関連する分子との結合研究、遮断および競合研究を含み得る。これらの結合研究には、ＦＡＣＳ解析、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）による）、分析的遠心分離、等温滴定熱量計、蛍光異方性、蛍光分光法、または放射標識リガンド結合アッセイも含まれる。
したがって、特異性は当技術分野で既知の方法および本明細書に記載した方法によって、実験的に決定することができる。そのような方法には、それだけに限らないが、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－試験、およびペプチドスキャンが含まれる。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一の抗体の集団から得られる抗体を意味し、即ちその集団を構成する個別の抗体は、起こり得る少量で存在するかもしれない天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位を指向している。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマの培養によって合成することができ、他の免疫グロブリンによって本質的に汚染されていないという点で有利である。修飾された「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団の中にあり、いずれの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈すべきでないという抗体の性質を示している。上述のように、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohler, Nature 256 (1975), 495によって記載されたハイブリドーマ法によって作製してよい。
本明細書で使用される用語「ポリクローナル抗体」は、１つまたは複数の他の非同一の抗体の中でまたはその存在下に産生された抗体を意味する。一般に、ポリクローナル抗体は、非同一の抗体を産生するいくつかの他のＢリンパ球の存在下にＢリンパ球から産生される。通常、ポリクローナル抗体は免疫化された動物から直接に得られる。
本明細書で使用される用語「完全にヒトの抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全にヒトの抗体は、マウスで、マウス細胞中で、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマ中で産生されれば、マウス炭水化物鎖を含んでもよい。同様に、「マウス抗体」または「ムリン抗体」は、マウス／ムリン免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、「完全にヒトの抗体」は、ラットで、ラット細胞中で、ラット細胞に由来するハイブリドーマ中で産生されれば、ラット炭水化物鎖を含んでもよい。同様に、用語「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全にヒトの抗体は、例えば完全にヒトの抗体の産生およびスクリーニングを可能にする広く使用されているスクリーニング技術であるファージディスプレイによっても産生してよい。本発明の文脈でファージ抗体も使用できる。ファージディスプレイ法は、例えば米国特許第５，４０３，４８４号、第５，９６９，１０８号、および第５，８８５，７９３号に記載されている。完全にヒトの抗体の開発を可能にする別の技術には、マウスハイブリドーマ技術の改変が含まれる。マウスは、マウス自身の遺伝子の代わりにヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むようにトランスジェニック化される（例えば米国特許第５，８７７，３９７号を参照）。
用語「キメラ抗体」は、別のヒトまたは非ヒト種（例えばマウス、ウマ、ウサギ、イヌ、ウシ、ニワトリ）由来の抗体領域（例えば定常領域）と融合またはキメラ化した本発明の可変領域を含む抗体を意味する。
用語「抗体」は、組換えヒト抗体、異種抗体、およびヘテロハイブリッド抗体にも関する。用語「組換え（ヒト）抗体」には、組換え手段によって調製、発現、作出、または単離された全てのヒト配列抗体、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックな動物（例えばマウス）から単離された抗体；宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の任意の手段によって調製、発現、作出、または単離された抗体が含まれる。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域（存在すれば）を有する。しかし、そのような抗体は、インビトロの突然変異生成（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合にはインビボの体細胞突然変異生成）の対象となり、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列のＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、これらに関連するが、インビボでヒト抗体生殖細胞系列のレパートリー中に天然には存在しない配列である。
「異種抗体」は、そのような抗体を産生するトランスジェニックな非ヒト生命体に関連して定義される。この用語は、トランスジェニックな非ヒト動物から構成されない生命体で見出される抗体に対応するアミノ酸配列またはコードする核酸配列を有し、一般にトランスジェニックな非ヒト動物の種以外の種に由来する抗体を意味する。
用語「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生命体起源の軽鎖および重鎖を有する抗体を意味する。例えば、マウス軽鎖と併せてヒト重鎖を有する抗体はヘテロハイブリッド抗体である。ヘテロハイブリッド抗体の例には、キメラ抗体およびヒト化抗体が含まれる。
本発明は、具体的にはヒト化抗体に関する。非ヒト（例えばマウスまたはウサギ）抗体の「ヒト化」形態は、キメラ免疫グロブリン、即ち非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含む免疫グロブリン鎖またはその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体のその他の抗原結合性サブ配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であることが多い。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられる。即ち、本明細書でＩＧＨＶ１－３ ＶＨフレームワーク配列等の特定のヒトフレームワーク配列に言及する場合には、これは単に生殖細胞系列配列だけでなく、突然変異したバージョンも包含することを意図している。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでよい。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良し、最適化するために行なわれる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのそれらの領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになる。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含み得る。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321 (1986), 522-525; Reichmann Nature 332 (1998), 323-327、およびPresta Curr Op Struct Biol 2 (1992), 593-596を参照されたい。特異的な突然変異を含めて本発明に従って採用できる抗体のヒト化の方法の説明については、実施例１４が参照され得る。
抗体のヒト化のためのよく知られた方法はＣＤＲグラフト化を含み、ここでは非ヒト「ドナー」抗体由来の機能性抗原結合性部位が、ヒト「アクセプター」抗体にグラフト化される。ＣＤＲグラフト化法は当技術分野で既知であり、例えば米国特許第５，２２５，５３９号、第５，６９３，７６１号、および第６，４０７，２１３号に記載されている。別の関連する方法は、遺伝子の再配置および遺伝子の変換を受けることができる１つまたは複数のヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むように遺伝子操作されたトランスジェニック動物からのヒト化抗体の産生である（例えば米国特許第７，１２９，０８４号を参照）。
したがって、本発明の文脈において、用語「抗体」は、完全な免疫グロブリン分子ならびにそのような免疫グロブリン分子の一部（即ち「その抗原結合性断片」）に関する。さらに、この用語は、上で論じたように、改変および／または変更された抗体分子に関する。この用語はまた、組換えまたは合成によって生成／合成された抗体に関する。この用語はまた、無傷の抗体ならびにその抗体断片、例えば分離された軽鎖および重鎖、Ｆａｂ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２に関する。用語「抗体」はまた、完全にヒトの抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲグラフト化抗体および抗体コンストラクト、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または抗体融合タンパク質を含むがこれらに限定されない。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、本発明の文脈では抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを有し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖で存在している。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドはＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それによりｓｃＦｖは抗原結合のための望ましい構造を形成することができる。一本鎖抗体の産生のために記載された手法は、例えばPlueckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N.Y. (1994), 269-315に記載されている。
本明細書で使用される「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖ならびに１つの重鎖のＣＨ１領域および可変領域からなっている。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む２つの重鎖断片を含む。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって共に保持されている。
「Ｆａｂ’」断片は、１つの軽鎖ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインおよびＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域をも含む１つの重鎖の一部を含み、それにより、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合を形成してＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つの軽鎖ならびにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部を含む２つの重鎖を含み、それにより、２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。即ち、Ｆ（ａｂ’）２断片は２つの重鎖の間のジスルフィド結合によって共に保持された２つのＦａｂ’断片からなっている。
「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
本発明に従って採用されるヒト化抗体、ヒト化抗体コンストラクト、ヒト化抗体断片、ヒト化抗体誘導体（全てＩｇ由来）またはそれらの対応する免疫グロブリン鎖は、当技術分野で既知の従来の手法を使用して、例えばアミノ酸の欠失、挿入、置換、付加、および／または組換えおよび／または当技術分野で既知のその他の任意の改変を単独でまたは組み合わせて、さらに改変することができる。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列の根底にあるＤＮＡ配列においてそのような改変を導入する方法は当業者には周知である。例えばSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001)を参照されたい。用語「Ｉｇ由来ドメイン」は特に、少なくとも１つのＣＤＲを含む（ポリ）ペプチドコンストラクトに関する。引用したＩｇ由来ドメインの断片または誘導体は、上記の抗体分子の部分であり、および／または化学／生化学的もしくは分子生物学的な方法によって改変される（ポリ）ペプチドを定義する。対応する方法は当技術分野で既知であり、とりわけ実験室マニュアルに記載されている（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989)および3rd edition (2001); Gerhardt et al., Methods for General and Molecular Bacteriology ASM Press (1994); Lefkovits, Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques; Academic Press (1997); Golemis, Protein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002)を参照されたい)。
本明細書で採用される用語「ＣＤＲ」は「相補性決定領域」に関し、これは当技術分野で周知である。ＣＤＲは、前記分子の特異性を決定し、特異的なリガンドと接触する免疫グロブリンの部分である。ＣＤＲは分子の最も可変性の部分であり、これらの分子の多様性に寄与する。それぞれのＶドメインに３つのＣＤＲ領域、即ちＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３が存在する。ＣＤＲ－Ｈは可変重鎖のＣＤＲ領域を表し、ＣＤＲ－Ｌは可変軽鎖のＣＤＲ領域に関連する。ＶＨは可変重鎖を意味し、ＶＬは可変軽鎖を意味する。Ｉｇ由来の領域のＣＤＲ領域は、Kabat “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5th edit. NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services (1991)に記載されたように決定し得る。本明細書で提供するＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔに従って定義している。しかし、ＣＤＲ配列が任意の有用な同定／番号付けスキームに従って定義される結合分子を包含することを本発明が意図していることは、当業者には理解されよう。例えば、ＣＤＲを定義するために、Ｃｈｏｔｈｉａ（Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. Chothia C, Lesk AM. J Mol Biol. 1987 Aug 20; 196(4):901-17）、ＩＭＧＴ（IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Giudicelli V, Chaume D, Bodmer J, Mueller W, Busin C, Marsh S, Bontrop R, Marc L, Malik A, Lefranc MP. Nucleic Acids Res. 1997 Jan 1; 25(1):206-11 および Unique database numbering system for immunogenetic analysis. Lefranc MP. Immunol Today. 1997 Nov; 18(11):509）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（MacCallum RM, Martin AC, Thornton JM, J Mol Biol. 1996 Oct 11; 262(5):732-45）およびＭａｒｔｉｎ（Abhinandan KR, Martin ACR. Analysis and improvements to Kabat and structurally correct numbering of antibody variable domains. Mol Immunol. (2008) 45:3832-9. 10.1016/j.molimm.2008.05.022）の番号付けスキームを採用してもよい。
したがって、本発明の文脈において、本明細書で上に記載したヒト化抗体分子は、完全な抗体（免疫グロブリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ等）、Ｆ（ａｂ）－、Ｆａｂ’－ＳＨ－、Ｆｖ－、Ｆａｂ’－、Ｆ（ａｂ’）２－断片、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、完全にヒトの抗体、二価抗体コンストラクト、抗体融合タンパク質、合成抗体、二価一本鎖抗体、三価一本鎖抗体、および多価一本鎖抗体からなる群から選択される。
「ヒト化アプローチ」は当技術分野で周知であり、特に抗体分子、例えばＩｇ由来分子について記載されている。用語「ヒト化」は、非ヒト抗体に由来する配列のいくらかの部分を含む非ヒト（例えばマウス）抗体またはその断片のヒト化された形態（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）、ｓｃＦｖ、または抗体のその他の抗原結合性部分配列）を意味する。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリンの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が所望の結合特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリンを含む。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、一般には２つの可変ドメインの全てを実質的に含むことになる。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの一部を含むことになる。とりわけ、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525, Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 (1992),593-596を参照されたい。非ヒト抗体をヒト化する方法は当技術分野で周知である。一般には、ヒト化抗体は、非ヒトであってもとの抗体の結合活性を保持している供給源から導入された１つまたは複数のアミノ酸を有している。抗体／抗体分子をヒト化する方法は、Jones et al., Nature 321 (1986),522-525; Reichmann et al., Nature 332 (1988),323-327; およびVerhoeyen et al., Science 239 (1988),1534-1536にさらに詳細に述べられている。ヒト化抗体の具体例、例えばＥｐＣＡＭを指向する抗体は当技術分野で周知である（例えばLoBuglio, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 1562 および Khor, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 847を参照）。
したがって、本発明の文脈において、ヒト化され、医薬組成物において成功裡に採用することができる抗体分子またはその抗原結合性断片が提供される。
本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片の特異性は、上で定義したヒト化抗体または抗原結合性断片のアミノ酸配列の性質によってだけでなく、抗体が結合できるエピトープによって表現される。即ち、本発明は、一実施形態では、本発明の抗体と同じエピトープを認識する、抗ミスフォールドヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片に関する。
エピトープはＴＤＰ－４３タンパク質に含まれるが、その分解産物にも含まれ、または化学合成されたペプチドであってもよいことは、当業者には理解され得る。アミノ酸の位置は、ＴＤＰ－４３タンパク質の配列中の対応するアミノ酸配列の位置を示すために指示されるのみである。本発明は、エピトープを含む全てのペプチドを包含する。ペプチドは、長さ１００アミノ酸を超えるポリペプチドの一部であってよく、または１００未満、好ましくは５０未満、より好ましくは２５アミノ酸未満、さらにより好ましくは１６アミノ酸未満の小さなペプチドであってよい。そのようなペプチドのアミノ酸は、天然のアミノ酸もしくは非天然のアミノ酸（例えばベータアミノ酸、ガンマアミノ酸、Ｄ－アミノ酸）、またはそれらの組合せであってよい。さらに、本発明は、エピトープのそれぞれのレトロインベルソペプチドを包含し得る。ペプチドは非結合でも結合してもよい。これは、例えば小分子（例えば薬物または蛍光物質）に、高分子量ポリマー（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、その他）に、またはタンパク質、脂肪酸、糖部分に結合していてもよく、または膜に挿入されてもよい。
問題の抗体と本発明の抗体が同じエピトープを認識するか否かを試験するため、以下の競合研究が行なわれる。３ＭＯＩ（感染多重度）で感染させたＶｅｒｏ細胞を、２０時間後に競合相手としての種々の濃度の問題の抗体とともに１時間、インキュベートする。第２のインキュベーション工程で、本発明の抗体を１００ｎＭの一定濃度で添加し、本発明の抗体の定常ドメインに対する蛍光標識抗体を使用するフローサイトメトリーによってその結合を検出する。問題の抗体の濃度に対して反比例（逆比例）する結合は、両方の抗体が同じエピトープを認識していることを示す。しかし、使用できる他の多くのアッセイが当技術分野で知られている。
本発明は、ＴＤＰ－４３の天然のポリペプチドおよび組換えポリペプチドに対する特異的抗体の産生にも関する。この産生は、例えばマウス等の動物の免疫化に基づいている。しかし、抗体／抗血清の産生のための他の動物も本発明の中で想定される。例えば、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を、ウサギ、マウス、ヤギ、ロバ、その他によって産生することができる。対応して選択されるＴＤＰ－４３のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを適切なベクターにサブクローニングすることができ、組換えポリペプチドは発現が可能な生命体、例えば細菌の中で発現される。即ち、発現された組換えタンパク質をマウスに腹腔内注射し、得られる特異的抗体を、例えば心臓内血液穿刺によって提供されるマウス血清から得ることができる。本発明は、添付した実施例で例示するＤＮＡワクチン戦略を使用することによる、天然のポリペプチドおよび組換えポリペプチドに対する特異的抗体の産生も想定している。ＤＮＡワクチン戦略は当技術分野で周知であり、遺伝子銃またはジェット注射、および筋肉内または皮内の注射によるリポソーム媒介デリバリーを包含する。即ち、ＴＤＰ－４３のポリペプチドまたはタンパク質またはエピトープ、特に本明細書で提供する抗体のエピトープに対する抗体は、ＴＤＰ－４３の所望のポリペプチドまたはタンパク質またはエピトープ、特に配列番号１のアミノ酸残基３９７～４１１内にある、より具体的には配列番号１のアミノ酸残基４００～４０５内にある本発明の抗体のエピトープを発現するベクターを筋肉内に直接注射して動物を直接免疫化することによって得ることができる。得られる特異的抗体の量は、本明細書でまた以下に記載するＥＬＩＳＡを使用して定量することができる。抗体の産生のためのさらなる方法は当技術分野で周知である。例えばHarlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988を参照されたい。
即ち、指定したアッセイ条件の下で、特定した抗体とＴＤＰ－４３の対応するエピトープは相互に結合し、試料中に存在する他の成分とは有意な量で結合しない。そのような条件下での標的アナライトへの特異的結合は、特定の標的アナライトへの特異性のために選択される結合部分を必要とし得る。特定の抗原と特異的に反応する抗体を選択するために、種々の免疫アッセイフォーマットを使用することができる。例えば、アナライトと特異的に反応するモノクローナル抗体を選択するために、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイが日常的に使用されている。特異的免疫反応性を決定するたに使用できる免疫アッセイのフォーマットおよび条件の説明については、ShepherdおよびDean (2000), Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Press および／またはHowardおよびBethellを参照されたい。典型的には、特異的または選択的な反応は、ノイズへのバックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの１０～１００倍を超えることになる。当業者は、新規なポリペプチドに対する特異的結合分子を提供し、これを生成する立場にある。特異的結合アッセイについては、望ましくない交叉反応性を避けるために、これを容易に採用することができ、例えば既知の方法によってポリクローナル抗体を容易に精製および選択することができる（ShepherdおよびDean、同上を参照）。
抗体の「クラス」は、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域の型を意味する。抗体には５つの主要なクラス、即ちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分割される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供する抗体のアミノ酸配列変異体が意図される。例えば、抗体の結合親和性および／またはその他の生物学的特性を改善することが望ましい。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することまたはペプチド合成によって調製することができる。そのような改変には、例えば抗体のアミノ酸配列の中の残基の欠失、および／または挿入および／または置換が含まれる。最終コンストラクトが所望の特性、例えば抗原結合性を有していることを前提として、最終コンストラクトに到達するために欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行なうことができる。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異生成のための目的の部位には、ＣＤＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換を、「好ましい置換」の見出しの下に表１に示す。より実質的な変更を、「例示的な置換」の見出しの下に表１に提供し、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下にさらに記載する。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、所望の活性、例えば抗原結合性の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善について産物をスクリーニングする。
アミノ酸は共通の側鎖の特性に従って分類することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを必要とする。
置換変異体の１つの型には、親抗体（例えばヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換が含まれる。一般に、さらなる研究のために選択される得られる変異体は、親抗体に対するある生物学的特性（例えば親和性の増大、免疫原性の低減）における改変（例えば改善）を有し、および／または親抗体の実質的に保持されたある生物学的特性を有することになる。例示的な置換変異体は親和性が成熟した抗体であり、これは例えば本明細書に記載したようなファージディスプレイに基づく親和性成熟手法を使用して便利に生成することができる。簡単に述べると、１つまたは複数のＣＤＲ残基が突然変異され、変異抗体がファージ上に提示され、特定の生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングされる。
例えば抗体の親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて変更（例えば置換）を行なってよい。そのような変更はＣＤＲの「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセス（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）の間に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基、および／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われ、得られる変異体のＶＨまたはＶＬは結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築し再選択することによる親和性成熟は、例えばHoogenboom et al., in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).)に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、種々の方法（例えば誤差を発生しやすいＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向突然変異生成）のいずれかによって、成熟のために選択される変化しやすい遺伝子に多様性が導入される。次いで二次ライブラリーが作出される。次いで所望の親和性を有する抗体変異体を同定するためにライブラリーがスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法にはＣＤＲ指向アプローチが含まれ、ここではいくつかのＣＤＲ残基（例えば同時に４～６残基）がランダム化される。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えばアラニンスキャンニング突然変異生成またはモデリングを使用して特異的に同定され得る。ＣＤＲ－Ｈ３および特にＣＤＲ－Ｌ３が標的にされることが多い。
ある特定の実施形態では、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、置換、挿入、または欠失を１つまたは複数のＣＤＲの中で生じさせてよい。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば本明細書で提供する保存的置換）をＣＤＲで行なってよい。そのような変更は、ＣＤＲの「ホットスポット」、即ちＳＤＲの外側であってよい。上で提供した変異体のＶＨおよびＶＬの配列のある特定の実施形態では、それぞれのＣＤＲは変化しないか、または１つ、２つ、もしくは３つを超えないアミノ酸置換を含む。
突然変異生成のために標的とされ得る抗体の残基または領域の同定のために有用な方法は、CunninghamおよびWells (1989) Science, 244: 1081-1085によって記載されたように、「アラニンスキャンニング突然変異生成」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原との相互作用が影響されるか否かを判定するために、残基または標的残基の群（例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕ等の荷電残基）が同定され、中性または陰性荷電のアミノ酸（例えばアラニンまたはポリアラニン）で置き換えられる。さらなる置換がアミノ酸の位置に導入され、最初の置換に対する機能的感受性が実証される。あるいはまたはそれに加えて、抗体と抗原との接触点を同定するために、抗原抗体複合体の結晶構造が使用される。そのような接触残基および近傍の残基は、置換の候補として標的とされるか、除外され得る。変異体は所望の特性を含むか否かを判定するためにスクリーニングされ得る。
アミノ酸配列の挿入には、１つの残基から１００またはそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの長さにわたるアミノ末端および／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内への挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ－末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体のＮ－末端またはＣ－末端への酵素への融合（例えばＡＤＥＰＴのため）、または抗体の血清中半減期を延長するポリペプチドが含まれる。
ある特定の実施形態では、抗体がグリコシル化される程度を増加または低下させるために、本明細書で提供する抗体が変化される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって、便利に達成し得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合には、これに結合した炭水化物が変化し得る。哺乳動物細胞によって産生された天然の抗体は、典型的には一般にＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮリンケージで結合した分枝状で二分岐のオリゴ糖を含む。例えばWright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照されたい。オリゴ糖は種々の炭水化物、例えばマンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」の中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。一部の実施形態では、改善されたある特性を有する抗体変異体を作出するために、本発明の抗体の中のオリゴ糖の修飾を行なってよい。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であってよい。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦマススペクトルによって測定されるＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖の中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７はＦｃ領域中のほぼ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け；Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969)を参照）に位置するアスパラギン残基を意味するが、Ａｓｎ２９７は抗体における軽微な配列の変動によって２９７位の約±３アミノ酸だけ上流または下流、即ち２９４位と３００位との間にも位置し得る。そのようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば米国特許公開２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化された」または「フコース欠失」抗体変異体に関する出版物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；Ｗ０２００５／０５３７４２；Ｗ０２００２／０３１１４０；Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。脱フコシル化された抗体を産生できる細胞系の例には、タンパク質のフコシル化が欠失したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 米国特許公開２００３／０１５７１０８Ａｌ号, Presta, L; およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａｌ号，Adams et al.,特に実施例１１）、およびノックアウト細胞系、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えばYamane-Ohnuki et al., Bioteeh. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Bioteehnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006);およびＷ０２００３／０８５ｌ０７を参照）が含まれる。
分断されたオリゴ糖を有する抗体変異体、例えば抗体のＦｃ領域に結合した二分岐のオリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって分断された抗体変異体がさらに提供される。そのような抗体変異体は、低減したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体の例は、例えばＷＯ２００３／０１１８７８(Jean-Mairet et al.);米国特許第６，６０２，６８４号(Umana et al.); およびＵＳ２００５／０１２３５４６(Umana et al.)に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。そのような抗体変異体は改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体は、例えばＷＯ１９９７／３００８７ (Patel et al.); ＷＯ１９９８／５８９６４(Raju, S.); およびＷＯ１９９９／２２７６４ (Raju, S.)に記載されている。
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変を本明細書で提供する抗体のＦｃ領域に導入し、それにより、Ｆｃ領域変異体を生成してよい。Ｆｃ領域変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸の改変（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでよい。
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体をインビボにおける抗体の半減期が重要であるがある種のエフェクター機能（例えば補体活性化およびＡＤＣＣ）が不要または有害である用途への望ましい候補にする全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣの活性の低減／枯渇を確認するため、インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイを行なうことができる。例えば、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがっておそらくＡＤＣＣ活性を欠いている）がＦｃＲｎ結合能力を保持していることを保証するため、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行なうことができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球およびミクログリアはＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現はRavetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えばHellstrom, I. et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）、およびHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499- 1502 (1985); 第５，８２１，３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。
あるいは、非放射活性アッセイ法を採用してもよい（例えばフローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照）。そのようなアッセイのために有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。
あるいはまたはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えばClynes et al., Proc. Nat'l Acad. sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されているような動物モデルで評価し得る。抗体がＣ１ｑに結合できず、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認するため、Ｃ１ｑ結合アッセイを行なってもよい。例えばＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するため、ＣＤＣアッセイを実施してよい（例えばGazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); およびCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎの結合およびインビボのクリアランス／半減期の決定も、当技術分野で既知の方法を使用して実施することができる（例えばPetkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
低減したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３４、２３５、２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９の１つまたは複数の置換を有する抗体が含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。ＦｃＲへの改善または減少した結合を有するある種の抗体変異体が記載されている（例えば米国特許第６，７３７，０５６号; ＷＯ２００４／０５６３１２、およびShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。そのようなＦｃ突然変異体には、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）、または残基２６５のアラニンへの、および２９７のグリシンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＧ」ＦＣ突然変異体を含む、アミノ酸の２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、および３２７位の２つ以上に置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。あるいは、低減したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３４、２３５、および３２９の１つまたは複数の置換を有する抗体、残基２３４および２３５のアラニンへの置換および３２９のグリシンへの置換を有する、いわゆる「ＰＧ－ＬＡＬＡ」Ｆｃ突然変異体（Lo, M. et al., Journal of Biochemistry, 292, 3900-3908）が含まれる。２３４位、２３５位、および３２１位における他の既知の突然変異、ＣＨ２ドメインにおける突然変異Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓを含む、いわゆるＴＭ突然変異体を使用することができる（Oganesyan et al. Acta Cryst. D64, 700-704. (2008)）。ヒトＩｇＧ４アイソタイプ由来の抗体には、ヒンジを安定化させ、ＦｇＲ結合を低減する突然変異Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅが含まれる（Schlothauer et al, PEDS, 29 (10):457-466）。
その他のＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４の１つまたは複数に置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有する変異体が含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号も参照されたい。
ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域はｐＨ６．０におけるＦｃＲｎに対するその親和性が増大するように突然変異され、結果として抗体の半減期が延長する。ＦｃＲｎに対する親和性が増強された抗体には、置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを有するいわゆるＹＴＥ突然変異(Dall’ Acqua et al, J Immunol. 169:5171-5180 (2002))またはＬＳ突然変異Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ (Zalevsky et al, Nat Biotechnol. 28(2): 157-159 (2010))を含む、Ｆｃ領域残基２５２、２５３、２５４、２５６、４２８、４３４の１つまたは複数の置換を有する抗体が含まれる。
ある特定の実施形態では、システイン操作された抗体、例えば抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換された「チオＭＡｂ」を作出することが望ましい。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の接近可能な部位に位置し、本明細書でさらに述べるように、抗体を他の部分、例えば薬物部分またはリンカー－薬物部分にコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作出するために使用し得る。ある特定の実施形態では、以下の残基、即ち軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）の任意の１つまたは複数をシステインで置換してよい。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供する抗体は、当技術分野において既知で容易に利用可能なさらなる非タンパク質性部分を含むようにさらに修飾してよい。抗体の誘導体化に適した部分には、それだけに限らないが、水溶性ポリマーが含まれる。水溶性ポリマーの非限定的な例には、それだけに限らないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中安定性のために製造において有利性を有している。ポリマーは任意の分子量を有してよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に結合するポリマーの数は変動し、２つ以上のポリマーが結合する場合には、これらは同じ分子でも異なる分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または型は、改善すべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下における治療に使用されるか否か、その他を含むがそれらに限らない考慮に基づいて決定することができる。
別の実施形態では、放射への曝露によって選択的に加熱される抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射は任意の波長のものであってよく、それだけに限らないが、通常の細胞を傷害しないが抗体と非タンパク質性部分とに近接した細胞が死滅する温度に非タンパク質性部分を加熱する波長を含む。
抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え法および組成物を使用して産生してよい。一実施形態では、本明細書に記載したミスフォールドされたＴＤＰ－４３に対する抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つまたは複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのそのような実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターおよび抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えばこれらによって形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）の細胞またはリンパ球様細胞（例えばＹＯ、ＮＳＯ、Ｓｐ２０）である。一実施形態では、ミスフォールドされたＴＤＰ－４３に対する抗体を作製する方法が提供され、本方法は、抗体の発現に適した条件下で、上で提供したように抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、宿主細胞（または宿主細胞の培地）から抗体を回収することを含んでもよい。
ミスフォールドされたＴＤＰ－４３に対する抗体の組換え産生のために、例えば上記のように抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞もしくは無細胞発現系におけるさらなるクローニングおよび／または発現のために１つまたは複数のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して、容易に単離およびシーケンシングすることができる（例えば抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載した原核生物または真核生物の細胞が含まれる。例えば、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要でない場合には、抗体は細菌中で産生してよい。細菌中での抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、および第５，８４０，５２３号を参照されたい（大腸菌（E.coli）中の抗体断片の発現を記載したCharlton, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照）。発現の後、抗体を細菌細胞ペーストから可溶性分画中に単離し、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、そのグリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的にまたは完全にヒトのグリコシル化パターンでの抗体の産生をもたらす真菌および酵母の株を含む糸状菌または酵母等の真核微生物も、抗体をコードするベクターのための好適なクローニングまたは発現用の宿主である。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)および Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照されたい。
グリコシル化された抗体の発現のための好適な宿主細胞は、多細胞生命体（無脊椎生物および脊椎動物）からも誘導される。無脊椎細胞の例には、植物および昆虫の細胞が含まれる。特にスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクションのための、昆虫細胞と併せて使用し得る数多くのバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養も宿主として使用することができる。例えば米国特許第５，９５９，１７７号、第６，０４０，４９８号、第６，４２０，５４８号、第７，１２５，９７８号、および６，４１７，４２９号を参照されたい（トランスジェニック植物中で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＢＯＤＩＥＳ（商標）技術が記載されている）。
脊椎動物細胞も宿主として使用してよい。例えば、懸濁液中で増殖するように適合された哺乳動物細胞系が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞系のその他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたマカク腎ＣＶ１系（ＣＯＳ－７）；ヒト胚腎系（例えばGraham et al., J. Gen Viral. 36:59 (1977)に記載された２９３または２９３細胞)；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えばMather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されたＴＭ４細胞)；マカク腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト頸癌細胞（ＨｅＬａ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えばMather et al., Annals N. Y Aead. Sei. 383:44-68 (1982)に記載されたＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞がある。その他の有用な哺乳動物宿主細胞系には、ＤＨＦＲ ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. cii. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹＯ、ＮＳＯ、およびＳｐ２／０等の骨髄腫細胞系が含まれる。抗体産生に適したある種の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えばYazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Val. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照されたい。
脳血液関門（ＢＢＢ）を超えて分子を送達するために、投与経路の変更、ＢＢＢの破壊およびその透過性の変化、ナノ粒子のデリバリー、トロイの馬のアプローチ、受容体媒介輸送、ならびに細胞および遺伝子の療法等の当技術分野で既知のいくつかのアプローチが存在する。
投与経路の変更は、脳への直接注射（例えばPapanastassiou et al., Gene Therapy 9: 398-406(2002)を参照）、脳へのデリバリーデバイスの埋め込み（例えばGillet al., Nature Med. 9: 589-595 (2003); およびＧｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒｓ（商標）、Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌを参照）、ＢＢＢを迂回するための鼻内投与（Mittal et al, Drug Deliv.21(2):75-86. (2014)）によって達成することができる。
関門破壊の方法には、それだけに限らないが、超音波（例えば米国特許公開２００２／００３８０８６を参照）、浸透圧（例えば高張マンニトールの投与（Neuwelt, E.A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation, Vols 1 & 2, Plenum Press, N.Y.(1989))による）、例えばブラジキニンまたは透過性向上剤Ａ－７による透過性向上（例えば米国特許第５，１１２，５９６号、第５，２６８，１６４号、第５，５０６，２０６号、および第５，６８６，４１６号を参照）が含まれる。
ＢＢＢの透過性を変化させる方法には、それだけに限らないが、血液脳関門の透過性を増大させるためのグルココルチコイドブロッカーの使用（例えば米国特許公開２００２／００６５２５９、２００３／０１６２６９５、および２００５／０１２４５３３を参照）；活性化カリウムチャネル（例えば米国特許公開２００５／００８９４７３を参照）、およびＡＢＣ薬物トランスポーターの阻害（例えば米国特許公開２００３／００７３７１３を参照）が含まれる。
脳血液関門を超えてヒト化抗体またはそのヒト化抗体断片を送達するトロイの馬デリバリー法には、それだけに限らないが、抗体のカチオン化（例えば米国特許第５，００４，６９７号を参照）、およびＣＮＳへの進入を得るためのＴａｔペプチド等の細胞浸透性ペプチドの使用（例えばDietz et al., J. Neurochem. 104:757-765 (2008)）が含まれる。
脳血液関門を超えてヒト化抗体またはその抗原結合性断片を送達するナノ粒子デリバリー法には、それだけに限らないが、限定なしに抗体もしくは抗原結合性断片またはその代わりに脳血液関門の血管内皮上の受容体に結合するペプチドに連結された、リポソーム、またはエキソソーム等の細胞外ベシクル中に、抗体またはその抗原結合性断片をカプセル化すること（例えば米国特許公開２００２００２５３１３を参照）、および抗体またはその抗原結合性断片を低密度リポタンパク質粒子に（例えば米国特許公開２００４０２０４３５４を参照）またはアポリポタンパク質Ｅに（例えば米国特許公開２００４０１３１６９２）コーティングすることが含まれる。
本発明のヒト化抗体は、血液脳関門の浸透を増強するためにさらに修飾することができる。
本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、血液脳関門受容体に結合するポリペプチドと融合させることができる。ＢＢＢ受容体には、それだけに限らないが、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、または低密度リポタンパク質受容体が含まれる。ポリペプチドはペプチド、受容体リガンド、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、またはＦａｂ断片であってよい。
本発明のヒト化抗体は、ヒト化抗体をコードする対応する核酸として送達することもできる。そのような核酸分子は、血液脳関門またはＣＮＳ中のその他の任意の細胞型への標的デリバリーのためのウイルスベクターの一部であってよい。ウイルスベクターは、ヒト化抗体またはヒト化抗体断片またはヒト化抗体誘導体が細胞内または脳実質内に発現されることを可能にする、ＡＡＶ１からＡＡＶ１２までを限定なしに含む当技術分野で既知の任意のＡＡＶ血清型から選択される組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）であってよい。
脳血液関門を超えて本発明のヒト化抗体またはヒト化抗体断片またはヒト化抗体誘導体を送達する細胞治療方法には、それだけに限らないが、脳血液関門の強力なフィルタリング活性（例えばHeller and al., J Cell Mol Med. 00:1-7 (2020)を参照）を克服するための、本発明者らが所有するベクターによってエクスビボ（ex vivo）でトランスフェクトされた内皮前駆細胞（ＥＰＣ）のホーミング能力およびこれらの細胞による抗体または抗体断片の分泌および脳へのデリバリーの使用、または抗体もしくは抗体断片を分泌するための遺伝子操作された細胞を担持したポリマー性細胞埋め込みデバイス（例えばMarroquin Belaunzaran et al. PLoS ONE 6(4): e18268 (2011)を参照）の使用が含まれる。
薬学的に許容される担体、希釈剤、アジュバント、および賦形剤は薬学技術で周知であり、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 15th or 18th Ed. (Alfonso R. Gennaro, ed.; Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990); Remington: the Science and Practice of Pharmacy 19th Ed.(Lippincott, Williams & Wilkins, 1995); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Ed. (Arthur H. Kibbe, ed.; Amer. Pharmaceutical Assoc, 1999); Pharmaceutical Codex: Principles and Practice of Pharmaceutics 12th Ed. (Walter Lund ed.; Pharmaceutical Press, London, 1994); 米国薬局方: 国民医薬品集 (米国薬学会議); Fiedler’s “Lexikon der Hilfstoffe” 5th Ed., Edition Cantor Verlag Aulendorf 2002; “The Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 4th Ed., American Pharmaceuticals Association, 2003; および Goodman and Gilman's: the Pharmacological Basis of Therapeutics (Louis S. Goodman and Lee E. Limbird, eds.; McGraw Hill, 1992)に記載されている。これらの開示はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。
担体、希釈剤、アジュバント、および薬学的賦形剤は、意図した投与経路および標準的な薬学的慣習に関連して選択することができる。これらの化合物は、それらのレシピエントに対して有害でないという意味で許容可能でなければならない。Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th or 18th Ed. (Alfonso R. Gennaro, ed.; Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990); Remington: the Science and Practice of Pharmacy 19th Ed.(Lippincott, Williams & Wilkins, 1995); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Ed. (Arthur H. Kibbe, ed.; Amer. Pharmaceutical Assoc, 1999); Pharmaceutical Codex: Principles and Practice of Pharmaceutics 12th Ed. (Walter Lund ed.; Pharmaceutical Press, London, 1994); 米国薬局方: 国民医薬品集（米国薬学会議）; Fiedler’s “Lexikon der Hilfstoffe” 5th Ed., Edition Cantor Verlag Aulendorf 2002; “The Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 4th Ed., American Pharmaceuticals Association, 2003; およびGoodman and Gilman's: the Pharmacological Basis of Therapeutics (Louis S. Goodman and Lee E. Limbird, eds.; McGraw Hill, 1992) を参照されたい。これらの開示はこれにより参照により本明細書に組み込まれる。
担体、希釈剤、アジュバント、および薬学的賦形剤は、意図した投与経路および標準的な薬学的慣習に関連して選択することができる。これらの化合物は、それらのレシピエントに対して有害でないという意味で許容可能でなければならない。
対象に投与すべき化合物の「有効量」は、妥当な医学的判断に従って疾患、障害、または異常を処置、防止、または改善するために適した投薬量である。具体的な用量レベルおよび投薬の頻度は、例えば採用した特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、投与の様式および時間を含む種々の要素に依存し得る。対象に投与すべき化合物の「有効量」は、妥当な医学的判断に従って障害、疾患、障害、または異常を処置、防止、または改善するために適した投薬量である。具体的な用量レベルおよび投薬の頻度は、例えば採用した特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、投与の様式および時間、排泄の速度、および薬物の組合せを含む種々の要素に依存し得る。患者に特有の要素、例えば年齢、体重、一般的健康、性別、食事、ならびに特定の状態の重症度も、投与すべき量に影響し得る。患者に特有の要素、例えば年齢、体重、一般的健康、性別、食事、ならびに特定の状態の重症度も、投与すべき量に影響し得る。
ＸＩ．ＴＤＰ－４３特異的結合分子の発明実施形態
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｄ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｇ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｈ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｃ）配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｄ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｇ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｈ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｊ）配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｋ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｌ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｍ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｎ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）ｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｖ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
ｂ）ｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｉ．配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｉｉ．配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｖ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｘ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘ．配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｉ．配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｉｉ．配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｖ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）ｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２０２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号１７２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｉｖ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号１８２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号１９２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２１２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２２２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号３８２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに
ｂ）ｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｉ．配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１７５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；または
ｉｉｉ．配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１８５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｖ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１９５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号２０６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号２１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｉｘ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２４７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘ．配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２６５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１９５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｉ．配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号３０５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｉｉ．配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号３０５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号２１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；または
ｘｉｖ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１９５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号２１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２０２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号３８２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
ｃ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１９５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む、軽鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
より具体的には、一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号２０２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および
ｂ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号１９５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２３７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む、軽鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
同様に、一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１または配列番号２１と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２または配列番号３８２と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；およびアミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１または配列番号２５と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２または配列番号１６と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３または配列番号２７と少なくとも８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２０２または配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１９５または配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２３７または配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｃ）アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択されるＣＤＲを含む。
別の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、配列番号１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０から選択され、３８０から選択されてもよい重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、（ａ）配列番号２１から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１２、２２、１７２、１８２、１９２、２０２、２１２、２２２から選択され、３８２から選択されてもよいアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、（ｃ）アミノ酸ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
別の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、配列番号１６４、１７４、１８４、１９４、２０４、２１４、２２４、２３４、２４４、２５４、２６４、２７４、２８４、２９４、３０４、３１４、３２４、３３４、３４４から選択され、３５４から選択されてもよい軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、（ａ）配列番号２５、１７５、１８５、１９５、２６５、３０５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、および（ｂ）配列番号１６、２０６、２１６から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２７（これは配列番号１７と同一である）、２２７、２３７、２４７から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、
ａ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｂ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｃ．配列番号３２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｄ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｆ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）
を含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、
ａ．配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｂ．配列番号３２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｃ．配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｄ．配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｅ．配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；
を含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化ＴＤＰ－４３抗体または抗原断片は、
ａ）ｉ．配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１６０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｉｉ．配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１７０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｉｉｉ．配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１８０のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｉｖ．配列番号１９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１９０のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｖ．配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２００のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｖｉ．配列番号２１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｖｉｉ．配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｖｉｉｉ．配列番号２３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２３０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｉｘ．配列番号２４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘ．配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２５０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｉ．配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２６０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｉｉ．配列番号２７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２７０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｉｉｉ．配列番号２８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｉｖ．配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２９０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｖ．配列番号３００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｖｉ．配列番号３１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｖｉｉ．配列番号３２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｖｉｉｉ．配列番号３３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３３０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｉｘ．配列番号３４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｘ．配列番号３５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｘｉ．配列番号３６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｘｉｉ．配列番号３７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
ｘｘｉｉｉ．配列番号３８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）
から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）；および
ｂ）ｉ．配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉｉ．配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１７４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉｉｉ．配列番号１８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１８４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉｖ．配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１９４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｖ．配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｖｉ．配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２１４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｖｉｉ．配列番号２２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２２４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｖｉｉｉ．配列番号２３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２３４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉｘ．配列番号２４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２４４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘ．配列番号２５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２５４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｉ．配列番号２６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２６４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｉｉ．配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２７４のアミノ酸配列と少なくとも９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｉｉｉ．配列番号２８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２８４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｉｖ．配列番号２９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｖ．配列番号３０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３０４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｖｉ．配列番号３１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３１４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｖｉｉ．配列番号３２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｖｉｉｉ．配列番号３３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｉｘ．配列番号３４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｘｘ．配列番号３５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原断片は、
ａ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｂ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｃ．配列番号３２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｄ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｆ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｇ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｈ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｊ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｋ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｌ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、
ａ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｂ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｃ．配列番号３２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｄ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｆ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｇ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｈ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｉ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｊ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｋ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｌ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３抗体は、
ａ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｂ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｃ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｄ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｆ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
ｇ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
一部の実施形態では、本発明は、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１５Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１６Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１７Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１７、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１５Ｌ１８、またはｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２３Ｌ２０から選択されるヒト化ＴＤＰ－４３結合分子に関する。
好ましくは、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１６Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１８、またはｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１５Ｌ１８、またはｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２３Ｌ２０から選択される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に本明細書に記載したヒト化ＴＤＰ－４３抗体およびその断片をコードする（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１６８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１６９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１７８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１７９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１８８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１８９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１９８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号１９９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２０８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２０９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２１８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２１９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２２８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２２９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２３８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２３９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２４８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２４９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２５８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２５９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２６８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２６９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２７８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２７９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２８８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２８９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２９８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号２９９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３０８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３０９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３１８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３１９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３２８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３２９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３３８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３３９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３４８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３４９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３５８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３５９を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３６８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３７８を含む（単離された）核酸が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化抗ＴＰＤ－４３抗体をコードする配列番号３９８を含む（単離された）核酸が提供される。
ＸＩＩ．組成物および方法
本発明はまた、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に本明細書に記載した本発明のヒト化抗体またはその抗原結合性断片ならびに薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
一部の実施形態では、本明細書に記載した（単離された）ヒト化抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
一部の実施形態では、本明細書に記載した結合分子、特に抗体またはその抗原結合性断片およびコンジュゲートした分子を含むコンジュゲートされた結合分子、特に抗体またはその抗原結合性断片が提供される。本発明のコンジュゲートは免疫コンジュゲートと称される。本発明に従って任意の好適なコンジュゲート分子を採用してよい。好適な例には、それだけに限らないが、酵素（例えばアルカリホスファターゼまたはセイヨウワサビペルオキシダーゼ）、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチン、プロテインＡ／Ｇ、磁性ビーズ、蛍光色素、放射性同位元素（即ち放射性コンジュゲート）、核酸分子、検出可能な標識、治療剤、毒素、および血液脳関門浸透部分が含まれる。コンジュゲーション法は当技術分野で周知であり、抗体を標識またはその他分子にコンジュゲートするいくつかの技術が市販で入手可能である。コンジュゲーションは、典型的には本発明の結合分子の中に含まれるアミノ酸残基（例えばリシン、ヒスチジン、またはシステイン）を介する。これらは、ＮＨＳ（スクシンイミジル）エステル法、イソチオシアネート法、カルボジイミド法、および過ヨウ素酸法等の方法に依拠し得る。コンジュゲーションは、例えば融合タンパク質の作出を通して達成され得る。結合分子が別のタンパク質分子とコンジュゲートする場合には、これは適切である。即ち、本発明の結合分子と標識またはその他の分子との融合の発現を可能にする好適な遺伝子コンストラクトが形成され得る。コンジュゲーションは、抗体とコンジュゲート分子、例えば検出可能な標識との好適な空間的分離を保証するための好適なリンカー部分を介してよい。しかし、リンカーは全ての例で必要なわけではない。一部の実施形態では、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は検出可能な標識に連結されている。
本発明はまた、１つまたは複数の治療剤、例えば化学療法剤もしくは薬物、増殖阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、放射性同位元素（即ち放射性コンジュゲート）、血液脳関門浸透性部分、または検出可能な標識にコンジュゲートされた、本明細書で提供するヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む免疫コンジュゲートに関する。本明細書で論じるように、血液脳関門（ＢＢＢ）を超える薬物デリバリーを改善するための種々の手法が存在し、これらの考察は必要に応じて変更して適用される。非侵襲的手法にはいわゆる「トロイの馬アプローチ」が含まれ、コンジュゲート分子は本発明の結合分子をＢＢＢ受容体への結合および輸送の媒介によって送達する。好適な分子には、ＢＢＢ受容体上の特定のエピトープに結合する内因性リガンドまたは抗体、特にモノクローナル抗体が含まれる。
一部の実施形態では、本明細書に記載した（単離された）ヒト化抗体および治療剤を含む免疫コンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載したヒト化抗体および検出可能な標識を含む標識されたヒト化抗体が提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結されている免疫コンジュゲートの部分である。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子またはこれを含む免疫コンジュゲートは、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物として存在している。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子もしくはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲートを含む医薬組成物、または薬学的に許容される担体および／もしくは賦形剤および／もしくは希釈剤と組み合わせたヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物の部分である。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物を含む検出および／または診断用のキットの部分である。
本発明のヒト化結合分子を含むキットも提供される。特に、そのようなキットは、本発明の診断法（これは分類、モニタリング、および治療選択法を含む）を実施するために有用であり得る。即ち、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断のため、または本発明の方法における使用のためのキットが提供される。そのようなキットは、本明細書で提供する方法を実施するために必要な全ての部品を含み得る。典型的には、それぞれの部品は単一の全体パッケージの中に分離して保存される。キットに内包される好適な追加の部品としては、例えば緩衝剤、検出可能な色素、実験装置、反応容器、使用説明書等がある。使用説明書は、キットが採用される特定の方法に合わせて調整し得る。そのようなキットに内包される好適に標識された本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子も提供される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、ＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、診断、または処置における使用のための免疫診断法において使用される。
一部の実施形態では、それを必要とする対象に投与される、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むがこれらに限らない、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断、防止、改善、または処置するために使用される。
一部の実施形態では、それを必要とする対象に投与される、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を診断またはモニターするための方法において使用される。
他の実施形態では、本発明は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、または辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を検出、診断、またはモニタリングするために任意の方法に関する。
好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）から選択される。より好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。より好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、アルツハイマー病（ＡＤ）である。より好ましくは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、発症前疾患の診断のため、または疾患の進行および治療有効性のモニタリングのため、または応答性の予測のため、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子による処置に応答する可能性のある対象を選択するための方法において使用される。前記方法は、好ましくはヒト血液または尿の試料を使用して実施される。最も好ましくは、本方法はＥＬＩＳＡ系アッセイまたは表面適合化アッセイを含む。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、および／またはパーキンソン病（ＰＤ）を検出、診断、またはモニターするために、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を試料（例えば血液、脳脊髄液、間質液（ＩＳＦ）、または脳組織）と接触させる方法において使用される。
一部の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー）、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を検出、診断するために、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を試料（例えば血液、脳脊髄液、間質液（ＩＳＦ）、または脳組織）と接触させる方法において使用される。
一部の実施形態では、それを必要とする対象に投与される、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物は、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症、または前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）もしくは筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性のＡＤの形態を含む）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、および／またはパーキンソン病（ＰＤ）を防止、改善、または処置するために使用される。
一部の実施形態では、それを必要とする対象に投与される、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物は、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー）、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）から選択される疾患を処置するために使用される。好ましくは、前記疾患の処置は、知的認識を保持または増大させることを助け、および／またはＴＤＰ－４３凝集体の脳内レベルを低減させる。
一部の実施形態では、それを必要とする対象に投与される、ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子が別の好適な治療剤に共有結合で連結された免疫コンジュゲート、またはヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子を含む組成物は、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症、または前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）もしくは筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性のＡＤの形態を含む）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、および辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、および／またはパーキンソン病（ＰＤ）を処置するための医薬を製造するために使用される。
本明細書に記載したヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートの医薬製剤は、所望の純度を有するそのようなヒト化抗体または免疫コンジュゲートを任意の１つまたは複数の薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／または希釈剤（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）と混合することによって調製される。典型的には、抗体またはその断片は、凍結乾燥製剤または水溶液として調製される。薬学的に許容される担体は一般に、採用される投薬量および濃度ではレシピエントに無毒性であり、それだけに限らないが、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール；ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、およびその他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成性カウンターイオン；金属複合体（例えばＺｎ－タンパク質複合体）；および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。本明細書の例示的な薬学的に許容される担体には、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等の間質薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある種の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用の方法は、米国特許公開２００５／０２６０１８６および２００６／０１０４９６８に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは１つまたは複数の追加のグリコサミノグリカナーゼ、例えばコンドロイチナーゼと組み合わされる。組成物を製剤化するために使用できる薬学的に許容される賦形剤には、それだけに限らないが、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清蛋白質、リン酸塩等の緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えばプロタミン硫酸、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリレート、ワックス類、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックコポリマー、ポリエチレングリコール、およびラノリンが含まれる。希釈剤は緩衝剤であってよい。これらは、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、および酒石酸塩からなる群から選択される塩を含んでよく、および／または緩衝剤はヒスチジン、グリシン、ＴＲＩＳグリシン、Ｔｒｉｓ、またはこれらの混合物を含む。本発明の文脈において、希釈剤がリン酸カリウム、酢酸／酢酸ナトリウム、クエン酸／クエン酸ナトリウム、コハク酸／コハク酸ナトリウム、酒石酸／酒石酸ナトリウム、およびヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、またはこれらの混合物からなる群から選択される緩衝剤であることもさらに想定される。
例示的な凍結乾燥抗体または免疫コンジュゲート製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性の抗体または免疫コンジュゲート製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号およびＷ０２００６／０４４９０８に記載されたものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン－酢酸塩緩衝剤を含む。
本明細書の製剤は、処置される特定の適応症のための必要に応じて２つ以上の活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない補完的活性を有する成分を含んでもよい。
活性成分は、例えばコアセルベーション手法によって、または界面重合によって、例えばヒドロキシメチルセルロースまたはそれぞれゼラチンのマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル、コロイド状薬物デリバリーシステム（例えばリポソーム、アルブミンマイクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）、またはマクロエマルションによって調製されるマイクロカプセル中にトラップしてよい。そのような手法は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続放出調製物を調製してもよい。持続放出調製物の好適な例には、抗体または免疫コンジュゲートを含む固体の疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは成形された物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態を有している。インビボ投与のために使用される製剤は一般に無菌である。無菌性は例えば無菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。
本明細書で提供するヒト化抗原結合分子、ヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体、または免疫コンジュゲートのいずれも、例えば治療方法等の方法に使用される。
別の態様では、医薬としての使用のためのヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートが提供される。さらなる態様では、処置の方法における使用のための抗ミスフォールドヒト化ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、ＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、診断、および／または処置における使用のためのヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートが提供される。本発明の好ましい実施形態では、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、または前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、および／または辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）を含むがこれらに限らないＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、診断、および／または処置における使用のためのヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートが提供される。
さらなる態様では、本発明は、医薬の製造または調製におけるヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートの使用が提供される。１つのそのような実施形態では、方法は、有効量の例えば以下に記載する少なくとも１つのさらなる治療剤を個体に投与することをさらに含む。
実施形態のいずれかによる「対象」または「個体」は、動物、哺乳動物、好ましくはヒトであってよい。
さらなる態様では、本発明は、例えば治療方法のいずれかにおける使用のための、本明細書で提供するヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートのいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬製剤は、本明細書で提供するヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートのいずれかならびに薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／または希釈剤（本明細書の別の場所で論じた）を含む。別の実施形態では、医薬製剤は、本明細書で提供するヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートのいずれかならびに例えば以下に記載する少なくとも１つのさらなる治療剤を含む。
本発明のヒト化抗体または免疫コンジュゲートは、単独でまたは他の薬剤と組み合わせて治療に使用することができる。例えば、本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートは、アルファシヌクレイン、ＢＡＣＥ１、タウ、ベータアミロイド、ＴＤＰ－４３、または神経炎症タンパク質を標的とする少なくとも１つのさらなる治療剤と共投与してよい。
例えば、本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートは、神経薬物、抗アミロイドベータ抗体、抗タウ抗体、タウ凝集阻害剤（小分子を含む）、ベータアミロイド凝集阻害剤（小分子を含む）、抗ＢＡＣＥ１抗体、ＢＡＣＥ１阻害剤、抗アルファシヌクレイン阻害剤、抗アルファシヌクレイン抗体、および神経炎症阻害剤から選択されるがこれらに限定されない少なくとも１つのさらなる治療剤と共投与してよい。
上で注記したそのような組合せ治療は、組合せ投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別の製剤に含まれる）および個別の投与（この場合には本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートの投与がさらなる治療剤および／またはアジュバントの投与の前、これと同時に、および／またはその後に行なわれる）を包含する。本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートは、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲート（および任意のさらなる治療剤）は、非経口、肺内、および鼻内、ならびに局所処置のために望まれれば病変内、子宮内、または嚢内の投与を含む任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下の投与が含まれる。投薬は任意の好適な経路、例えば部分的には投与が短期間か慢性かによって静脈内または皮下の注射等の注射によってよい。種々の時点にわたる単回投与または多回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むがこれらに限定されない種々の投薬スケジュールが本明細書で意図されている。
本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートは、適正医療基準に合致した様式で製剤化、投薬、および投与される。この文脈において考慮すべき要素には、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、処置される特定の疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症、処置される哺乳動物、個体対象の臨床的状態、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の原因、薬剤のデリバリーの部位、投与の方法、投与のスケジューリング、および臨床医には既知の他の因子が含まれる。ヒト化抗体または免疫コンジュゲートは、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、または問題のＴＤＰ－４３タンパク質症を防止または処置するために現在使用されている１つまたは複数の薬剤とともに製剤化する必要はないが、これらとともに製剤化してもよい。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するヒト化抗体または免疫コンジュゲートの量、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の型または処置、および上で論じたその他の因子に依存する。これらは一般に、本明細書に記載した同じ投薬量および投与経路で、または本明細書に記載した投薬量の約１～９９％で、または適切であると実験的／臨床的に決定された任意の投薬量および任意の経路で、使用される。
疾患の防止または処置のため、本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートの適切な投薬量（単独でまたは１つもしくは複数の追加の他の治療剤と組み合わせて使用する場合）は、処置すべき疾患の型、抗体または免疫コンジュゲートの型、疾患の重症度および経過、抗体または免疫コンジュゲートが防止目的または治療目的のために投与されるか、以前の治療、対象の病歴、および抗体または免疫コンジュゲートに対する反応、ならびに担当医の裁量に依存することになる。ヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートは一度に、または一連の処置にわたって、好適に対象に投与される。疾患の型および重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートを、例えば１回もしくは複数回の個別の投与、または連続注入によって、対象への最初の候補投薬量とすることができる。１つの典型的な１日投薬量は、上述の因子に応じて約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲であってよい。数日またはそれ以上にわたる反復投与については、状態に応じて処置は一般に疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続される。ヒト化抗体または免疫コンジュゲートの１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。即ち、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組合せ）の１つまたは複数の用量を対象に投与してよい。そのような用量は、間欠的に、例えば毎週または３週ごと（例えば対象が約２～約２０用量、または例えば約６用量の抗体を受けるように）投与してよい。初期の高い負荷用量およびそれに続く１つまたは複数の低い用量を投与してよい。しかし、他の投薬レジメンも有用であり得る。この療法の進行は、従来の手法およびアッセイによって容易にモニターされる。
上記の製剤または治療方法のいずれも、本発明の免疫コンジュゲートおよびヒト化抗ＴＤＰ－４３抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）の両方を使用して行なってよいことが理解される。
本発明の別の態様では、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の処置、防止、および／または診断のために有用な上記の材料を含む、製造のための物品が提供される。製造用物品には、容器および容器上のもしくは容器に付随するラベルまたは添付文書が含まれる。好適な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ、その他が含まれる。容器はガラスまたはプラスチック等の種々の材料から形成してよい。容器は、ＴＤＰ－４３に関連する、特にＴＤＰ－４３凝集体に関連する、疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を処置、防止、および／または診断するためにそれ自体でまたは別の組成物と組み合わせて有効な組成物を保持し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルでよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は本発明のヒト抗体または免疫コンジュゲートである。ラベルまたは添付文書は、組成物が選択した状態を処置するために使用されることを示す。
さらに、製造用物品は、（ａ）本発明のヒト化抗体（ヒト化ＴＤＰ－４３特異的結合分子の好ましい型）または免疫コンジュゲートを含む組成物をその中に含む第１の容器；および（ｂ）さらなる治療剤を含む組成物をその中に含む第２の容器を含んでよい。本発明のこの実施形態における製造用物品は、組成物が特定の状態を処置するために使用することができることを示す添付文書をさらに含んでよい。あるいはまたはさらに、製造用物品は、薬学的に許容される緩衝剤、例えば静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩緩衝食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。製造用物品は、その他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、市販および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでよい。
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のヒト化結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを含む、対象における認識記憶能力、運動および言語の機能を保持または増大し、または認識記憶能力、運動および言語の機能の低下を防止および／または遅延させる方法に関する。
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のヒト化結合分子、本発明の免疫コンジュゲート、本発明の組成物、または本発明の医薬組成物を投与することを含む、ＴＤＰ－４３のレベルを低減させる方法に関する。
本発明の方法は、好ましくはアルファシヌクレイン、ＢＡＣＥ１、タウ、ベータアミロイド、ＴＤＰ－４３、または神経炎症タンパク質を標的とする抗体または小分子から選択されるがそれだけに限らない追加の療法、特に神経薬物、抗ベータアミロイド抗体、抗タウ抗体、タウ凝集阻害剤、ベータアミロイド凝集阻害剤、抗ＢＡＣＥ１抗体、ＢＡＣＥ１阻害剤、抗アルファシヌクレイン抗体、および神経炎症阻害剤から選択される少なくとも１つの追加の療法の投与を含んでよい。
本発明はさらに、脳試料、脳脊髄液試料、尿試料、または血液試料である試料を本発明のヒト化結合分子、好ましくは本発明のヒト化抗体と接触させることを含む、ＴＤＰ－４３を検出する方法に関する。
ある特定の実施形態では、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特に本明細書で提供するヒト化ＴＤＰ－４３抗体およびその断片は、ＴＤＰ－４３、特に可溶性ＴＤＰ－４３との結合に関して１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。例えば、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、可溶性の完全長ＴＤＰ－４３に関して２ｎＭ以下、特定の実施形態では１ｎＭ以下、より特定の実施形態では可溶性の完全長ＴＤＰ－４３に関して７００ｐＭ以下のＫＤを有し得る。これは、本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子について実施例１４で表１３を参照して実証されている。
一実施形態では、完全長（ＦＬ）のＴＤＰ－４３に対する結合親和性は、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解離定数（ＫＤ）を決定することによって評価してよい。採用し得る好適なＳＰＲ法の詳細な説明については、実施例１４を参照されたい。
本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子は、ＴＰ－５１ペプチドについて１５ｎＭ以下、特定の実施形態では１０ｎＭ以下のＫＤを有し得る。これはまた、実施例１４における本発明のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子について表１３を参照して実証されている。
［実施例１］
ＴＤＰ－４３ワクチン組成物の調製
ＷＯ２０１２／０５５９３３で公開されたプロトコールに従ってリポソーム系ワクチンを調製した。完全長のＴＤＰ－４３（ＦＬ ＴＤＰ－４３）タンパク質（表２、配列番号１）を抗原として含むワクチンを抗体生成に使用した。

［実施例２］
抗ＴＤＰ－４３抗体の生成
Ａ．マウスの免疫化
雌のＣ５７ＢＬ／６ＪＯｌａＨｓｄ（Ｃ５７ＢＬ／６）およびＢＡＬＢ／ｃ ＯｌａＨｓｄ（ＢＡＬＢ／ｃ）野生型マウス（Ｈａｒｌａｎ，ＵＳＡ）を９週齢で受け入れた。１０週でワクチン接種を開始した。アジュバントとしてのモノホスホリルヘキサアシルリピッドＡ、３－デアシル（Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ）（３Ｄ－（６－アシル）ＰＨＡＤ（登録商標）の存在下に、リポソームの表面上に提示された完全長のＴＤＰ－４３タンパク質でマウスにワクチン接種した。
０、４、８、２１、３５、および６０日目に皮下注射（ｓ．ｃ．）によってマウスにワクチン接種した。免疫化の７日前（免疫前血漿）および第１の免疫化後１４、２８、４２、８１、および１２１日目にマウスから採血してヘパリン化血漿を調製した。骨髄腫融合のために使用したマウスには、ｉ．ｐ．注射によるＴＤＰ－４３タンパク質の毎日の３回のブースター注射によってアジュバントなしでさらにワクチン接種した。
ワクチンへの応答はマウス血漿で測定した。免疫化マウスからの血漿由来の抗体の固定化組換え完全長（ＦＬ）ＴＤＰ－４３への結合は、ＴＤＰ－４３に対する抗体の高い力価を示した。
Ｂ．ハイブリドーマの生成およびサブクローニングのための選択
マウスを安楽死させ、４匹の個別のマウスからの脾細胞を使用して骨髄腫細胞との融合を実施した。成功裡に融合したハイブリドーマ細胞系からの抗体のスクリーニングを、以下のように実施した。希釈した（１：３２）細胞培養上清を、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズ系マルチプレックスアッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して解析した。ＬｕｍｉｎｅｘビーズをＦＬ ＴＤＰ－４３とコンジュゲートし、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、およびＩｇＧ３サブクラスに特異的な抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，ＵＳＡ）でＩｇＧを捕捉した。ＦＬ ＴＤＰ－４３にコンジュゲートしたビーズへの結合により、ＦＬ ＴＤＰ－４３リポソーマルワクチンで免疫化したマウスに由来する３８６のヒットが同定された。
生存しているハイブリドーマを、血清を含む選択培地を使用して増殖させた。ヒトＦＴＤ脳の中のＴＤＰ－４３封入体に優先的に結合するクローンおよびＴＤＰ－４３のＣ末端に結合するクローンを、さらなるサブクローニングのために選択した。限界希釈に続いて、クローン性ハイブリドーマを低免疫グロブリン含有培地中で増殖させ、安定なコロニーを抗体スクリーニングおよび選択のために選択した。表３に示す抗体は、このスクリーニングから同定された。
［実施例３］
結合効率（ＥＣ５０）の決定
抗体のＦＬ ＴＤＰ－４３への結合の半値最大有効濃度（ＥＣ５０）を決定するために、前に記載したように抗体の段階希釈によるＬｕｍｉｎｅｘアッセイを実施した。全てのＥＣ５０値を表３にまとめる。要約すれば、試験した全ての抗体は完全長のＴＤＰ－４３に高い親和性で結合する。

［実施例４］
ヒトＦＬ ＴＤＰ－４３への抗体の結合
ヒトＦＬ ＴＤＰ－４３への抗体の結合は、間接ＥＬＩＳＡを使用して決定した。１μｇ／ｍｌのヒトＦＬ ＴＤＰ－４３によるＥＬＩＳＡプレートのコーティングを炭酸塩緩衝液中、４℃で一夜実施した。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、次いで０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で、３７℃で１時間ブロッキングした。次いでハイブリドーマ上清から精製した抗体を１μｇ／ｍｌから開始する３倍段階希釈で加え、３７℃で２時間インキュベートし、その後、プレートを洗浄した。ＡＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中１／１０００希釈、３７℃、１時間で加えた。最終洗浄の後、プレートをｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）ホスフェート基質溶液とともにインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して４０５ｎｍで読み取った。試験した全てのクローンは、１０～１５６７ｎｇ／ｍｌの範囲の異なるＥＣ５０値で完全長のＴＤＰ－４３に結合する（表４）。

［実施例５］
ＥＬＩＳＡおよびペプチドアレイによるエピトープマッピング
結合領域を決定するために、４０～６６アミノ酸の線状ペプチドまたはＮ末端でビオチン化した１５マーペプチドのライブラリーを使用し、ＴＤＰ－４３の全配列を９アミノ酸のオフセットおよび６アミノ酸の重複によってカバーして、無血清ハイブリドーマ上清から精製した抗体を間接ＥＬＩＳＡアッセイによってスクリーニングした。ペプチド配列を表５に提供する。
９６ウェルのプレートを、５μｇ／ｍｌの非ビオチン化ペプチドで炭酸塩緩衝液中、４℃で一夜コートした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄し、次いで０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で、３７℃で１時間ブロッキングした。次いでハイブリドーマ上清から精製した抗体を１μｇ／で加え、３７℃で２時間インキュベートし、その後、プレートを洗浄した。ＡＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中１／１０００希釈、３７℃、１時間で加えた。最終洗浄の後、プレートをｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）ホスフェート基質溶液とともにインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して４０５ｎｍで読み取った。
ビオチン化ペプチドについては、９６ウェルのストレプトアビジンコートＥＬＩＳＡプレートを５μｇ／ｍＬのビオチン化１５マーペプチドとインキュベートした。プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで３回洗浄し、次いで０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で、３７℃で１時間ブロッキングした。次いでハイブリドーマ上清から精製した抗体を１μｇ／ｍｌで加え、３７℃で２時間インキュベートし、その後、プレートを洗浄した。ＡＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ中１／１０００希釈、３７℃、１時間で加えた。最終洗浄の後、プレートをｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＡＰ基質溶液とともにインキュベートし、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）を使用して４０５ｎｍで読み取った。決定した結合領域を表６に提供する。試験した抗体は、それぞれ配列番号１の領域１８１－１９５、１９９－２１３、３０７－３２１、３５２－３６６、３８９－４１１、１４０－２００に対応する以下のペプチド、ＴＰ－２１、ＴＰ－２３、ＴＰ－３５、ＴＰ－４０、ＴＰ－４８、ＴＤＰ－６に結合することが見出された。
固相支持体上で直接合成した１５マーペプチドのライブラリーを使用し、配列番号１によるＴＤＰ－４３の全配列を１アミノ酸のオフセットおよび１４アミノ酸の重複でカバーすることによって、より正確な線状エピトープをマッピングした（Ｐｅｐｓｃａｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）。ペプチドアレイをウマ血清およびオボアルブミンでブロッキングし、０．７５～５μｇ／ｍｌの濃度の精製した抗体溶液とともに４℃で一夜インキュベートした。洗浄後、ペプチドアレイを１／１０００希釈のウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＳＡ）とともに２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍｌの３％ Ｈ２Ｏ２を加えた。１時間後、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラおよび画像処理システムによって発色を定量した。これらの結合領域をエピトープマッピングによって確認し、以下のエピトープ（表６に提供する）を配列番号１のアミノ酸１８３－１８８、２０３－２１３、２０４－２０８、２０４－２１１、２０５－２１０、３１６－３２３、３５８－３６１、４００－４０５、４００－４０６、４００－４１２として同定した。



［実施例６］
免疫組織化学によるＦＴＤ／ＡＬＳ対象由来の脳組織中のＴＤＰ－４３の検出
ＦＴＤ対象の脳に由来する組織についての免疫組織化学実験において、標的の関与を評価した。ヒトＦＴＤ脳組織は、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｂｒａｉｎ Ｂａｎｋ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ（オープンアクセス：ｗｗｗ．ｂｒａｉｎｂａｎｋ．ｎｌ）およびＱｕｅｅｎ Ｓｑｕａｒｅ Ｂｒａｉｎ Ｂａｎｋ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ＵＣＬから得た。全ての材料は、脳バンクによって脳生検ならびに研究目的のための材料および臨床情報の使用に関する書面のインフォームドコンセントが得られたドナーから収集した。免疫組織化学は、検出のための蛍光標識二次抗体を使用して厚さ１０μｍの凍結切片について実施した。以下の抗体を対照として使用した：病原性封入体および生理的核ＴＤＰ－４３を検出するためのウサギポリクローナル汎ＴＤＰ－４３抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，１０７８２－２－ＡＰ）；病原性の凝集およびリン酸化したＴＤＰ－４３を検出するためのウサギモノクローナルホスホＴＤＰ－４３ ｐ４０９／４１０抗体（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｐ０２）、および非特異的バックグラウンドを検出するための一次抗体（Ｎｏ．１ Ａｂ）なしの二次抗体。
本発明の全ての抗体は、核の非凝集ならびに凝集したＴＤＰ－４３に結合する。本発明のいくつかの抗体は、Ａ型病変の細胞質中の凝集ＴＤＰ－４３に優先的に結合する（図１）。結合特性の詳細な評価を、表７にまとめる。
［実施例７］
ＦＴＤ／ＡＬＳ対象由来の脳組織中のＴＤＰ－４３のウェスタンブロットによる検出
ＣＫミックス均質化チューブ（Ｌａｂｇｅｎｅ，ＢＥＲ００９２）を使用し、プレセリーズ（precellys）によって、均質化／可溶化緩衝液（ＨＳ緩衝液）中、４℃で、脳組織の領域（前頭皮質）を１：４（ｗ／ｖ）比で均質化した。均質化のために以下のシーケンス：５０００ｒｐｍで３０秒の３サイクル（各サイクルの間に１５秒の中断）を使用した。均質化した試料を分注し、１．５ｍｌの低タンパク質結合性チューブ（Ａｘｙｇｅｎ ＭＣＴ－１７５－Ｌ－Ｃ）中、－８０℃で保存した。
・ＨＳ緩衝液：１０ｍＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、完全ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ，３２５２４３００）およびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ，４９０６８３７００１）。
脳ホモジネートを氷上で解凍し、ＨＳ緩衝液中に再懸濁して、２％のサルコシル、１単位／μＬのベンゾナーゼ、および１ｍＭのＭｇＣｌ２の最終濃度を得た。次いで試料をサーモミキサー上、６００ｒｐｍの一定の振盪下、３７℃で４５分、インキュベートした。上清を新たなチューブ中に収集した。ペレットを１０００μｌのミエリン浮遊緩衝液中に再懸濁し、台上遠心機で、２０，０００ｇ、４℃で６０分、遠心分離した。上清を注意深く取り出し、浮遊する全ての脂質を除去した。１回の工程で全ての脂質を除去できなかった場合は、この工程を繰り返した。続いてペレットをＰＢＳで洗浄し、台上遠心機で、４℃で３０分、遠心分離した。最終ペレットを２００μｌのＰＢＳに再懸濁し、－８０℃で保存した。試料を変性条件下でイムノブロッティングによって解析した。
・サルコシル、ベンゾナーゼ、およびＭｇＣｌ２を含むＨＳ緩衝液：１０ｍＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、４％のサルコシル、１単位／μＬのベンゾナーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ ７０７４６－４）、４ｍＭのＭｇＣｌ２ 完全ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）およびＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）。
・ミエリン浮遊緩衝液：１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および３０％のスクロースを含むＨＳ緩衝液
ウェスタンブロットは、ＭＥＳ ＳＤＳ操作緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を使用し、Ｂｏｌｔ １２％ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｌｕｓゲル １．０ｍｍ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）で実施した。試料（３０μｌ／試料）はＰＢＳ、１００ｍＭのＤＴＴを含む負荷緩衝液（１ｘ，Ｌｉｃｏｒ，９２８－４０００４）中でいったん希釈してゲルに負荷した。タンパク質は、１００Ｖの定電圧で１時間、分離した。電気泳動の後、ｉＢＬＯＴ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，ＩＢ２１００１）を使用して２０Ｖで７分、タンパク質をニトロセルロース膜（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，ＩＢ２３００１）に移動させた。タンパク質の移動の後、ＰＢＳで１：３に希釈したＬｉｃｏｒブロッキング緩衝液（Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液９２７－４００００）で、膜を１時間、ブロッキングした。膜を以下の一次抗体：全ＴＤＰ－４３（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，６００１９－２－Ｉｇまたは１０７８２－２－ＡＰ）、ｐＴＤＰ－４３（Ｃｏｓｍｏｂｉｏ，ＴＩＰ－ＰＴＤ－Ｍ０１）とともに一夜インキュベートした。一次抗体については、ブロッキング緩衝液をＰＢＳ－Ｔ（０．４％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）中、１：１で希釈した。ＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で４回洗浄した後、ＬＩＣＯＲ染料を連結した二次抗体とともに膜をインキュベートした。二次抗体（ロバ抗マウス（カタログ番号９２６－６８０７２）またはヤギ抗ウサギ（カタログ番号９２６－３２２１１））を、ＰＢＳ－Ｔ（０．４％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で１：１に希釈したＬｉｃｏｒブロッキング緩衝液中、１：１００００の希釈で、室温で１時間、使用した。膜を再びＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ）で４回洗浄し、ＬＩＣＯＲシステムを使用してスキャンした。図２に、全てのｍＡｂが完全長のＴＤＰ－４３を特異的に認識することを示す。さらに、いくつかのｍＡｂ（Ｋ、Ｍ、Ｎ）は、不溶性分画および高分子量凝集体におけるＣ末端断片等の疾患状態の病原性シグネチャーを認識する。
［実施例８Ａ］
ＳＰＲを使用する親和力の測定
表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解離定数（ＫＤ）を決定することによって、可溶性のまたは凝集したＦＬ ＴＤＰ－４３に対する結合親和力を評価した。組換えヒト可溶性または凝集ＦＬ ＴＤＰ－４３を、アミンカップリングによってＣＭ５ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化した。可溶性ＴＤＰ－４３を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中、５μｇ／ｍｌの濃度、５μｌ／分の流量で４２０秒、固定化し、１５０ＲＵの固定化レベルを得た。凝集ＴＤＰ－４３は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中、５０μｇ／ｍｌの濃度、５μｌ／分の流量で８４０秒、固定化し、１１０ＲＵの固定化レベルを得た。ビオチン化ＴＰ－７３ペプチド（配列番号１のアミノ酸１８１－１９０）は、ＰＢＳ－Ｐ＋中、５μｇ／ｍｌの濃度、５μｌ／分の流量で３０秒、Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＳＡ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化し、４００ＲＵの固定化レベルを得た。ＫＤ値を評価するため、精製した抗体および対照抗体（２Ｅ２－Ｄ３）を、ＰＢＳ－Ｐ＋中で３３３ｎＭから開始して０．１５ｎＭまで低下させる３倍希釈で注入した。抗体を５０μｌ／分の流量で９０秒の接触時間および７００秒の解離相で注入し、続いて１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ ｐＨ１．７で３回再生させた。最適化されたＳＰＲプロトコールのため、抗体を３００ｎＭから開始して１．２ｎＭまで３倍希釈し、３０μｌ／分で３００秒、注入し、続いて６００秒で解離させた。１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ ｐＨ１．７の１回注入で表面を再生させた。結合速度論から得られた結果を、ブランクフローセルおよび緩衝サイクルを使用してダブルリファレンス処理し、ＲＩによるグローバル１：１フィッティングモデルによって評価した。１１種の抗体および２種のＦａｂ断片についての親和力を表８に示す。本発明の抗体は、０．６２ｎＭ～４．６４ｎＭの範囲のＫＤで凝集ＴＤＰ－４３に結合する。さらに、いくつかの抗体は、可溶性ＴＤＰ－４３と比較して凝集ＴＤＰ－４３への優先的結合を示す。２つのＦａｂ断片は、２．８ｎＭ～２１．８ｎＭの範囲のＫＤで可溶性ＴＤＰ－４３に結合し、凝集ＴＤＰ－４３については同様のＫＤを示す。特に遅い解離速度を有する抗体についてより正確なＫＤの決定を可能にする長い結合相および解離相を含む最適化されたＳＰＲプロトコールを使用して、２つの抗体（＊でマークする）を再解析した。２つの抗体は、０．２２ｎＭ～３．９ｎＭの範囲のＫＤで可溶性ＴＤＰ－４３に、また０．１８ｎＭ～０．６９ｎＭの範囲のＫＤで凝集ＴＤＰ－４３に結合する。抗体ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１は、３．６ｎＭのＫＤでＴＰ－７３ペプチドに結合する。
［実施例８Ｂ］
ＳＰＲを使用する親和性測定
表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ；Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解離定数（ＫＤ）を決定することによって、可溶性ＦＬ ＴＤＰ－４３に対する結合親和性を評価した。ヤギ抗マウス捕捉抗体を、アミンカップリングによってＣＭ５ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に固定化した。抗体を、ＰＢＳ－Ｐ＋（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、２～５μｇ／ｍｌの濃度、１０μｌ／分の流量で１２０秒、捕捉し、３５０～１０００ＲＵの捕捉レベルを得た。ＫＤ値を評価するため、ＦＬ ＴＤＰ－４３またはＴＰ－５１ペプチド（配列番号１のアミノ酸３５２－４１４）を、ＰＢＳ－Ｐ＋中で１．２ｎＭから開始して１００ｎＭまでの３倍希釈、３０μｌ／分の流量、シングルサイクル速度論、３００秒の接触時間で注入した。解離を１時間記録し、続いて１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７で１回再生させた。結合速度論から得られた結果を、ブランクフローセルおよび緩衝サイクルを使用してダブルリファレンス処理し、ＲＩによるグローバル１：１フィッティングモデルによって評価した。３つの抗体についての結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）（ｋａ）、解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｄ）、および親和性（ＫＤ）を、１２回（ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１）、２回（ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１）、または３回（ＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１）の反復実験の平均値±ＳＤとして表９に示す。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１、およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１は、それぞれ１５～１３５ｐＭ、２２６～２７２ｐＭ、および３８９～４５７ｐＭの範囲の親和性で可溶性ＴＤＰ－４３に結合する。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１は１１８４～１３１６ｐＭの範囲の親和性でＴＰ－５１ペプチドに結合する。

［実施例９］
抗体のシーケンシング
可変領域の遺伝子シーケンシングのためにクローナルハイブリドーマ細胞溶解液を使用した。マウスハイブリドーマを収穫し、ＲＮアーゼを不活化するためにグアニジニウム塩を含む溶解緩衝液を使用して溶解した。次いでＲＮアーゼ不含ＤＮアーゼによってゲノムＤＮＡを除去し、ＲＮＡをシリカ系アフィニティカラムで多数回洗浄して精製し、ＲＮアーゼを含まない水を使用してカラムから溶出した。ＲＮＡが抽出されれば、その純度および濃度を分光学的に測定した。ＲＮＡの完全性を変性アガロースゲルによって評価し、逆転写酵素（ＲＴ）を使用してＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ＲＴ反応混合物を添加する前に、ＲＮＡの二次構造を破壊するために、ＲＮＡを７０℃に１０分加熱した。ＲＴ産物を直接ＰＣＲ増幅に使用した。ｃＤＮＡの高忠実度ＰＣＲ増幅のため、抗体をコードする様々な遺伝子ファミリーに対応する可変領域プライマーのそれぞれを、全反応容量５０μｌでＶＨとＶＬに分けて個別に定常プライマーと個別に混合した。最初に縮重プライマープールを使用し（ＶＨについて１２およびＶＬについて１２）、その結果に応じて第２のプールを使用してＰＣＲ産物を得た。ＰＣＲ反応の後、エチジウムブロマイドを添加した２％アガロースゲル上のゲル電気泳動によって産物を解析した。ＶＬおよびＶＨについてのＰＣＲ産物を、トリスアセテート－ＥＤＴＡ（ＴＡＥ）を使用してアガロースゲル上で個別に精製した。ゲルから切り出した精製された断片を、ＰＣＲに使用した同じプライマーを使用して、ダイターミネーターシーケンシング法によってシーケンシングした。シーケンシングは、両末端で重複させるため、両方の方向で行なった。マルチプルシーケンスアラインメント（Ｃｌｕｓｔａｌツール）を使用して配列を解析し、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 91-3242 (1991)に記載されたＫａｂａｔのアルゴリズムを使用して意味付けした。重鎖および軽鎖の可変ドメイン（ＶＨおよびＶＬ）のヌクレオチド配列を表１０に示す。選択した重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインおよびそれらの相補性決定領域（ＣＤＲ）の翻訳されたタンパク質配列を表１１に示す。












［実施例１０］
ＴＤＰ－４３タンパク質症のトランスジェニックマウスモデルにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）のインビボ有効性
インビボにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）の有効性を評価するため、ＮＥＦＨ－ｔＴＡ×ｈＴＤＰ－４３ΔＮＬＳバイジェニックマウス（ｒＮＬＳ８マウス、Walker et al. 2015）におけるＴＤＰ－４３病変を低減するＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）の能力を試験した。ｒＮＬＳ８マウスにＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）（ｎ＝３０）または媒体（ｎ＝３０）を毎週注射し、投薬の終了時にリン酸化および／または全部の不溶性ＴＤＰ－４３等の分子病変マーカーを解析した。
１０．１ 動物
研究の開始に先立って、適切な健康を保証し、実験操作に伴う非特異的なストレスを最小化するため、全ての動物を環境に馴化し、検査し、取り扱い、秤量した。飼育の間および８週齢に達するまで、ドキシサイクリン（２００ｍｇ／ｋｇ）を含む飼料でマウスを飼育した。導入遺伝子発現を可能にするため、８週齢でドキシサイクリン（ＤＯＸ）を含まない飼料に飼料を変更した。研究を通して、明／暗サイクル（１２／１２）、室温（２０～２３℃）、および相対湿度（ほぼ５０％）を一定に保った。研究の間、飼料および水を随意に提供した。マウスが動作困難を呈示し始めた場合には、飼料を湿潤飼料およびケージの床上のヒドロゲルに変更した。全ての行動試験は動物の明サイクル相の間に実施した。
１０．２ 化合物の投与
注射の日、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）（６０ｍｇ／ｋｇ）および媒体を新たに調製し、研究を通して毎週投薬レジメンに従ってｉ．ｐ．投与した。
１０．３ 脳の採取
脳を２つの半球に分割した。左半球を切開して皮質脳区域を採取した。マウスの皮質および残りの脳組織を、さらなる生化学解析のために急速冷凍した。残りの右半球を室温で３時間、潅流した後、直接浸漬固定し、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を含む新たに調製した１×ＰＢＳ中に採取した。
１０．４ 免疫組織化学
浸漬固定した右脳半球を、Ｌｅｉｃａ ＣＭ１９５０クライオトームで切片厚さ１０ミクロンとして均一で系統的なランダムプロトコールによって矢状に切断した。矢状切片の系統的でランダムな組（マウスあたり脳のレベル２、３、４、６、８、１０、および１１からの７個の切片）を、ＴＤＰ－４３およびリン酸化ＴＤＰ－４３について免疫染色した。脳中のミクログリアの数および形態を定量するため、Ｉｂａ１染色を実施した。抗体の結合は、蛍光標識した二次抗体を使用して可視化した。標準的な陰性対照には、野生型脳切片ならびに一次抗体の適用がないトランスジェニック動物からの切片が含まれていた。
１０．５ イメージングおよび免疫反応性の決定
ＬＥＤ（Ｃｏｌｉｂｒｉ２）照明を使用し、１０倍拡大で、ＺＥＮソフトウェアで駆動されるＡｘｉｏ．Ｓｃａｎ Ｚ１スライドスキャナーおよび高感度のＯｒｃａ Ｆｌａｓｈ ４．０単色カメラによって、マウントした切片を全体としてイメージングした。脳のサイズは、大脳皮質および背側線条体における目的の領域の個別の描写を使用して決定した。目標密度（ＯＤ）（１ｍｍ２あたりの目標の数）は、組織アーチファクト（組織の襞、その他）があればそれを除いて、全てのマーカー、標識した区域のパーセンテージ、および第２の描写の目的の領域のサイズに対するＯＤについて決定した。
１０．６ 脳皮質からのタンパク質試料の調製
組織を氷上で解凍し、次いで１ｍＭのＰＭＳＦおよびプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を含む５×ｖ／ｗの放射免疫沈降アッセイ用緩衝液（ＲＩＰＡ、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＩＧＥＰＡＬ ＣＡ６３０、５ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％のデオキシコール酸ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ、ｐＨ８．０）中で超音波処理した。試料を４℃、１００，０００ｇで３０分遠心分離し、上清を可溶性分画とした。ＲＩＰＡとともに超音波処理することによってペレットを洗浄し、上清を廃棄した。ＲＩＰＡ不溶性ペレットを２×ｖ／ｗ尿素緩衝液（７Ｍの尿素、２Ｍのチオ尿素、４％のＣＨＡＰＳ、および３０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．５）中で超音波処理し、２２℃、１００，０００ｇで３０分遠心分離した。この上清をＲＩＰＡ不溶性／尿素可溶性分画とした。ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して、ＲＩＰＡ可溶性分画のタンパク質濃度を決定した。
１０．７ 不溶性ＴＤＰ－４３の定量
ＲＩＰＡ不溶性分画中の全ＴＤＰ－４３レベルを、市販のヒトＴＤＰ－４３ ＡｌｐｈａＬＩＳＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＡＬ３８７ＨＶ）によって分析した。
１０．８ 統計解析
ＩＨＣおよびＡｌｐｈａＬＩＳＡのデータを、平均±ＳＥＭとして提示する。媒体とＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）で処置した動物の統計的差を、Ｗｅｌｃｈのｔ検定で解析し、それぞれのバーの上のアステリスクで示す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。組織学的測定の外れ値は、群もしくはレベルにおけるＧｒｕｂｂｓ外れ値（単一測定）または技術的理由（イメージアーチファクト、組織の襞、その他）によって除外した。
１０．９ 結果
ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）による処置は、ｒＮＬＳ８マウスにおいてリン酸化ＴＤＰ－４３および不溶性ＴＤＰ－４３を低減させる。
Ｋ８２Ａ／Ｒ８３Ａ／Ｋ８４Ａ変異体ヒトＴＤＰ－４３（ｈＴＤＰ－４３ΔＮＬＳ）のＤＯＸ抑制可能な形態の過発現は、ｒＮＬＳ８マウスモデルのニューロンの細胞質内のＴＤＰ－４３の顕著な集積および凝集をもたらす。このモデルの病原としての特徴は、不溶性でリン酸化されたＴＤＰ－４３封入体（ｐＴＤＰ－４３）の沈着である。これらの小さな球状の細胞質封入体はトランスジェニック動物にのみ存在し、ＷＴまたは単一遺伝子性のトランスジェニックｔＴＡ対照マウスには全く存在しない。さらに、ｐＴＤＰ－４３はＤＯＸがない最初の１週では広範囲に非存在で、ＤＯＸが存在しない３～４週の間に急速な経過で集積する（Walker et al., 2015）。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）処置は、媒体処置したマウスと比較して、線条体と大脳皮質の両方でリン酸化ＴＤＰ－４３の密度の統計的に有意な低減をもたらし（図３Ａ～３Ｂ）、ＴＤＰ－４３病変の低減におけるその機能的有効性を示唆している。線条体および大脳皮質は、これらの領域における導入遺伝子の高い発現により、定量のために選択した。
１０．１０ ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）による処置は、ｒＮＬＳ８マウスにおける不溶性ＴＤＰ－４３を低減する
免疫組織化学の読み出しで観察されたＴＤＰ－４３の病原性の低減を確認するため、生化学的分別の後の脳中の全不溶性／凝集ＴＤＰ－４３の量を定量した。不溶性／凝集ＴＤＰ－４３を含む左脳半球の皮質から、ＲＩＰＡ不溶性分画を調製した。媒体処置した動物と比較して、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）で処置したマウスで、不溶性ＴＤＰ－４３の量の有意な低減が観察された（図３Ｃ）。分子ＴＤＰ－４３病変のこの低減は免疫組織化学によって観察された結果と一致し、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）による処置の有効性が確認された。本発明者らが知る限り、これは末梢抗体投与がＴＤＰ－４３タンパク質症のインビボモデルにおいてＴＤＰ－４３病変の形成を改善した最初である。
１０．１１ ｒＮＬＳ８マウスにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）処置はミクログリアの免疫反応性区域を増大する
導入遺伝子発現の抑制の後のｒＮＬＳ８マウスにおける機能回復には、ミクログリアの活性の増大が関与している。ミクログリア細胞体区域はこの相において増大し、ＴＤＰ－４３病変のクリアランスおよび運動障害の機能的回復をもたらし、ｒＮＬＳ８マウスモデルにおける治療パラダイムを示唆している（Spiller K.J et al., Nature Neuroscience, 2018)。
ｒＮＬＳ８マウスのＴＤＰ－４３病変の低減におけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１の作用モードを評価するため、ミクログリアの活性化に対するその効果を評価した。マウスの大脳皮質におけるミクログリアの数および状態を定量するため、免疫組織化学によってＩｂａ１染色を実施した。終末期のｒＮＬＳ８マウスでミクログリア症が見出された（Ｄｏｘオフ５週）。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１処置により、媒体処置した対照と比較して、皮質中のＩｂａ１陽性免疫反応区域が有意に増大した（図５Ａ）。この増大は、ミクログリア細胞の数の増大またはミクログリアの形態の変化に起因する可能性がある。これについて、最初に皮質中のＩｂａ１陽性細胞の密度を評価した。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１処置は、媒体処置した対照と比較して、細胞数を表すミクログリア細胞の密度に影響しなかった。
次に、ミクログリアの形態に対するＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１の影響を評価した。Ｉｂａ１免疫反応性区域の増大と形態を表すミクログリアの活性化状態の変化とを相関させるため、ミクログリアをそのサイズおよび形態に基づいて３つの状態に分類した（大きな異常肥大、小分岐状、および分岐静止）。ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）処置した大きな異常肥大ミクログリアにおいて、媒体処置した対照と比較して、平均細胞サイズの有意な増大が見られた（図５Ｂ）。低活性化状態を表す他の２つのミクログリアのクラスでは有意差は見出されなかった（図５Ｃ～５Ｄ）。この解析は、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１処置コホートで観察された全Ｉｂａ１陽性免疫反応性区域の増大が、ミクログリア細胞のサイズおよび活性化状態の増大に反映される形態の変化に起因することを示唆している。これは、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）が、この動物モデルにおいて少なくとも部分的に、ミクログリアの動員および活性化を介してＴＤＰ－４３病変を低減していることを示唆している。
［実施例１１］
組換えＴＤＰ－４３凝集アッセイにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）のインビトロ機能性
インビトロにおけるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）の機能性を評価するため、ＴＤＰ－４３凝集を阻害するＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）の能力を試験した。ＦＬ ＴＤＰ－４３を、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位によって分離して組換え産生させたマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）にＣ末端で融合させた。２．５μＭのＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）またはＴＤＰ－４３に結合しないアイソタイプ対照の存在下、３０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４中の２．５μＭのＴＤＰ－４３－ＴＥＶ－ＭＢＰ融合タンパク質の凝集をＴＥＶプロテアーゼ（ＡｃＴＥＶ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の添加によって誘起し、吸光度をマイクロクリア９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）中、６００ｎｍで３０時間にわたってモニターした。評価のため、エンドポイントをアイソタイプ対照に対して正規化し、凝集したＴＤＰ－４３のパーセンテージをＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１について計算した。抗体ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１は、アイソタイプ対照と比較して有意に、ＴＤＰ－４３凝集を９８％阻害する（図４）。
［実施例１２］
ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）による生体液中のＴＤＰ－４３の検出および定量
方法：ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）およびＡＣＩ－７０７１－８０９Ｆ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａ変異体）を使用して、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒのビーズ系ＡｌｐｈａＬＩＳＡ免疫アッセイを確立した。ＣＳＦ試料については、スパイク回収実験において希釈直線性を確立した。次いで希釈ＣＳＦ試料中のＴＤＰ－４３の濃度を測定した。試料は白色ｏｐｔｉｐｌａｔｅ（商標）－３８４マイクロプレート中で調製し、６１５ｎｍにおける発光をＡｌｐｈａＬＩＳＡの生カウントとして測定した。
結果：健常対照およびＦＴＬＤ－ＴＤＰ（意味性認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２、またはＧＲＮ）患者に由来する脳脊髄液（ＣＳＦ）試料中の全ＴＤＰ－４３を、この免疫アッセイによって定量した（図６）。ＧＲＮ突然変異を有するＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者に由来する種々の患者のＣＳＦ試料にわたる相対的ＴＤＰ－４３定量は、３回の独立した実験において健常対照と比較して有意に高いＴＤＰ－４３レベルを示した（図６）。Ｃ９ｏｒｆ７２突然変異を有するＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者および意味性認知症に由来する種々の患者のＣＳＦ試料にわたる相対的ＴＤＰ－４３定量も、３回の独立した実験において健常対照と比較して高いＴＤＰ－４３レベルを示した（図６）。
［実施例１３］
ＦＴＤ脳抽出物中の免疫枯渇によって評価した病原性ＴＤＰ－４３への結合
天然の状態で特異的に結合するＴＤＰ－４３凝集体における抗体の有効性を評価するため、病原性ＴＤＰ－４３を富化した脳抽出物中の免疫枯渇実験を実施した。
方法：Ａ型ＦＴＤ（ＦＴＤ－Ａ）剖検脳に由来する不溶性分画を、実施例７に記載したように調製した。免疫枯渇は、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）磁性ビーズ、プロテインＧ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０００３Ｄ）を使用して実施した。チューブ内で再懸濁した後、１３０μｌのビーズを１．５ｍｌの低結合チューブに移した。磁石を使用し、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を添加したＰＢＳでビーズを２回洗浄して上清を除去した。ビーズを３本の異なる低結合チューブに等分した。上清を除去（磁石を使用）した後で、抗体（ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）、ＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）、マウスＩｇＧ２ａ対照）を１００μｇ／ｍｌに希釈して１００μｌを各チューブに加えた。抗体－ビーズ混合物を室温で１時間インキュベートした。ビーズ－抗体複合体を５００μｌのＰＢＳ－０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０で１回およびＰＢＳで１回洗浄し、次いで２５０μｌのＰＢＳ中に再懸濁した。抗体－ビーズを２本の新しいチューブに分割した（チューブ１本あたり１２０μｌ）。不溶性分画を氷上で解凍し、氷上、振幅３０で３０秒、超音波処理した。上清を除いた後、３０μｇの脳材料を各抗体－ビーズに加え、連続回転下に４℃で一夜インキュベートした。チューブを磁石の上に置き、上清を免疫枯渇分画として採取した。インプットおよび免疫枯渇材料をウェスタンブロットによってさらに解析した。ウェスタンブロットは実施例７に記載したように実施した。１レーンあたり２０μｌの試料を負荷した。イムノブロッティングは、以下の抗体を使用して実施した。全ＴＤＰ－４３（ＤｙＬｉｇｈｔ６８０にカップリングしたＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１）、ｐＴＤＰ－４３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、８２９９０１）、それぞれ１：２０００および１：１０００の希釈で使用。ヤギ抗ラット二次抗体（カタログ番号９２５－３２２１９）は１：１００００の希釈で使用した。
結果：ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１およびＡＣＩ－７０６９－６４２Ｄ１２－Ａｂ１は、アイソタイプ対照抗体と比較して、Ａ型ＦＴＤ脳組織から得られたサルコシル不溶性分画からのＴＤＰ－４３およびｐＴＤＰ－４３に特異的に結合し、これを枯渇することができた（図７）。このデータにより、ヒト患者における標的に関与するこれらの抗体の特性が確認される。
［実施例１４］
抗ヒトＴＤＰ－４３マウスモノクローナル抗体のヒト化
ヒト化可変領域の設計
ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１ ＣＤＲにグラフトするヒトアクセプターフレームワークを選択するため、ホモロジーマッチングを使用した。マウスの重鎖および軽鎖のＶ領域（それぞれ配列番号２０および２４）に最も近いヒト可変ドメインサブファミリーを特定するため、ＩＭＧＴデータベース（Ehren mann, F et al, (2010) Nucl. Acids Res., 38(S1):D301-D307）またはＩｇＢｌａｓｔ（Ye J. et al, (2013), Nucleic Acids Res. 2013 Jul; 41(Web Server issue): W34-W40）、またはＶＢＡＳＥ２（Retter I et al, (2005) Nucleic Acids Res. 33, Database issue D671-D674）等のヒトおよびマウスの生殖細胞系列可変遺伝子のデータベースが使用できる。
例えば、ＩＭＧＴデータベースの使用は、グラフトＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１重鎖可変（ＶＨ）ドメインフレームワークとヒト重鎖可変ドメインサブファミリー１のメンバーとの間の最良の配列ホモロジーを示した。ＣＤＲとフレームワーク配列の両方の最大のホモロジーおよび同一性が生殖細胞系列配列：ＩＧＨＶ１－３、ＩＧＨＶ１－２、ＩＧＨＶ１－４６、ＩＧＨＶ１－２４について観察され、それらの全てがＣＤＲ３までの全配列について６５％を超える配列同一性を有していた。ＩＧＨＶ１－３をその高い配列ホモロジーからＶＨフレームワークとして選択した。
同じアプローチを用いて、ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１軽鎖可変ドメイン配列がヒト軽鎖可変（ＶＬ）ドメインカッパサブファミリー２のメンバーに対して最良の配列ホモロジーを示した。ＣＤＲとフレームワーク配列の両方の最大のホモロジーおよび同一性が生殖細胞系列配列：ＩＧＫＶ２－３０、ＩＧＫＶ２－２９、ＩＧＫＶ２Ｄ－２９、ＩＧＫＶ２－２４について観察され、それらの全てがＣＤＲ３までの全配列について７０％を超える配列同一性を有していた。ＩＧＫＶ２－３０をその高い配列ホモロジーからＶＬフレームワークとして選択した。
ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１ ＣＤＲ配列の中の、可能性のある翻訳後修飾部位を同定した。可変重鎖の中で、Ｎ５３、Ｎ５４、およびＧ５５を、２つの脱アミド化部位として同定した。可変軽鎖の中では、Ｄ２８位およびＧ２９位でアイソマー化部位が認識された一方、Ｗ８９位で酸化部位が同定された（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる）。一部のコンストラクトでは、Ｎ５３Ｇおよび／またはＧ５５Ａを含む点突然変異がＶＨ領域に導入された一方、Ｇ２９Ａおよび／またはＷ８９ＦがＶＬ領域に導入されて、ＣＤＲ Ｌ１およびＬ３における翻訳後修飾部位が除去された。
ヒト化プロセスへの出発点として、マウスＣＤＲをＶＨとＶＬ領域の両方についてヒトアクセプターフレームワークにグラフトした。
ＣＤＲをヒトアクセプターフレームワークに適応させるために、ヒト残基をマウス残基に置換することによって、重要な位置を改変した。
ＣＤＲのコンフォメーションおよび／またはＶＨ／ＶＬの配向に最も影響を与える可能性のある残基を特定するため、ヒト－マウスハイブリッドＶＨ－ＶＬペアの３Ｄモデルを、アボディビルダーサーバー（８）を使用するホモロジーモデリングによって生成させた。モデル解析により、表１２に列挙した位置を含む位置のサブセットの選択が可能になった。
表１２からの逆突然変異を組み合わせて、それぞれ表１３および表１５に列挙した配列を生成した。















ヒト化抗体変異体の産生
重および軽の可変ドメインの両方に対するＤＮＡコード配列を合成し、標準的な分子生物学手法を使用してプラスミドにクローニングして、哺乳動物細胞中での発現を可能にした。重鎖可変ドメインを、半分子の生成を防止するためのＳ２２８Ｐ突然変異を含むヒト免疫グロブリンＩｇＧ４定常ドメインに、またはヒトＩｇＧ１定常ドメインに融合させ、軽鎖可変ドメインを、定常カッパ軽鎖ドメインを含むプラスミドにクローニングした。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ１４５２４）を使用して重鎖および軽鎖のプラスミドを共トランスフェクトすることによって、キメラ抗体およびヒト化変異体をＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞中で過渡的に発現させた。トランスフェクションの後、細胞を１５０ｒｐｍの撹拌、８％のＣＯ２レベルの下、３７℃で維持した。トランスフェクションの６日後、上清を収穫し、１ｍＬのＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７５４３８０３）を前充填したプロテインＡカラム上で精製した。カラムを０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．０で平衡化した後、細胞培養液を負荷した。負荷に続いて、カラムを０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．０で洗浄し、続いて０．１Ｍのクエン酸塩、ｐＨ３．５で溶出させた。次いで０．１ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ９．０を加えることによって溶出液を中和した。次いで試料をＰＢＳ緩衝液で透析した。
表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）によるＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１ヒト化変異体の特徴付け
可溶性ＴＤＰ－４３をＣＭ５ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１００５－３０）に固定化することによって、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定を実施した。
ＳＰＲによる可溶性ＴＤＰ－４３のＫＤの決定
装置に操作緩衝液ＰＢＳ－Ｐ＋を充填し、チャネル１～８のフローセル（Ｆｃ）１および２をＥＤＣ／ＮＨＳ（Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔ、両試薬の比１：１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＲ－１００６－３３）の新鮮な溶液で、１０μＬ／分で４２０秒、活性化した。可溶性ＴＤＰ－４３（Ｓｅｌｖｉｔａ）を酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５で最終濃度５μｇ／ｍＬまで希釈し、Ｆｃ２に流量５μＬ／分、９００秒で注入した。全てのフローセルは１Ｍのエタノールアミン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＲ－１００６－３３）、１０μＬ／分、４２０秒でクエンチした。エタノールアミンクエンチ後の固定化レベルは、８チャネル全てで６８０ＲＵであった。解析に先立ち、２つのスタートアップサイクルを実施した。操作緩衝液中、１．２ｎＭから１００ｎＭの範囲の３倍段階希釈で調製した増大する濃度のｍＡｂをシングルサイクル速度論で、接触時間３００秒、解離時間９００秒、流量３０μＬ／分で注入した。それぞれのサイクルに続いて、１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７を使用し、接触時間３０秒、３０μＬ／分で１回の再生を行ない、続いて安定化時間３００秒とした。シングルサイクル速度論から得られた結果を、ブランクＦｃ１および緩衝液サイクルを使用してダブルリファレンス処理し、ＲＩおよびグローバルＲｍａｘによる１：１速度論フィットモデルを使用するＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェアを使用して評価した。以下の速度論パラメーター：結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）、親和性定数（ＫＤ）、および飽和応答（Ｒｍａｘ）が得られた。
ＳＰＲによるＴＰ－５１ペプチドのＫＤの決定
装置に操作緩衝液ＰＢＳ－Ｐ＋を充填した。チャネル１～８（８Ｋ）のＦｃ１～２をＥＤＣ／ＮＨＳ（Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔ、両試薬の比１：１、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＲ－１００６－３３）の新鮮な溶液で、１０μＬ／分で４２０秒、活性化し、ヤギ抗ヒト抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２９２３４６００）を１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５中、２５μｇ／ｍＬで、４２０秒、固定化した。次に全てのＦｃを１Ｍのエタノールアミン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＲ－１００６－３３）で４２０秒、クエンチした。非共有で結合した抗体があれば１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７で３０秒、２回の再生によって除去した。エタノールアミンクエンチに続いて固定化レベルを評価した（全てのチャネルについて１００００ＲＵ）。
各サイクルを、操作緩衝液で最終濃度２μｇ／ｍＬまで希釈し、流量１０μＬ／分で６０秒注入するヒト化変異体の非共有捕捉で開始した。ＴＤＰ－４３ ｍＡｂをチャネル１～８に捕捉し、Ｆｃ１をブランクＦｃとして残した。それぞれのｍＡｂ注入の後の１２０秒の安定化時間の後で捕捉レベルを評価し、捕捉レベルは３００～５００ＲＵの範囲であった。
ＴＰ－５１ペプチド（Ｐｅｐｓｃａｎ）の注入は、１．２ｎＭ～１００ｎＭの範囲の段階３倍希釈で調製した増大する濃度のシングルサイクル速度論で実施した。注入は、３００秒／注入の接触時間、２５μＬ／分の流量で実施した。最終注入の後、解離相を３６００秒とした。１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７、流量１０μＬ／分で１２０秒の１回の注入によってセンサー表面を再生し、続いて安定化時間３００秒とした。シングルサイクル速度論から得られた結果を、ブランクＦｃ１および緩衝液サイクルを使用してダブルリファレンス処理し、ＲＩおよびグローバルＲｍａｘによる１：１速度論フィットモデルを使用するＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェアを使用して評価した。以下の速度論パラメーター：結合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）、親和性定数（ＫＤ）、および飽和応答（Ｒｍａｘ）が得られた。
全てのパラメーター（Ｒｍａｘを除く）を、２～８の独立した実験からの平均±ＳＤとして表１７～１８に報告する。
マウス抗体（表８）について既に観察されたように、全体として全てのヒト化変異体はＴＤＰ－４３およびＴＰ－５１ペプチドに対して良好な親和性を保持していた（表１７）。最良の親和性を有する変異体は、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１６Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１９であった。
ヒトＩｇＧ１として再フォーマットしたヒト化変異体についての標的結合親和性の確認
全体として、全てのヒト化変異体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプとして再フォーマットした場合に、ＴＤＰ－４３およびＴＰ－５１ペプチドに対して同様の親和性を保持していた（表１８）。試験した全ての変異体は、ｐＭ範囲で可溶性ＴＤＰ－４３に対して良好な親和性を示した。
インビトロにおける組換えＴＤＰ－４３のデノボ凝集アッセイ
ヒト化抗体を、ＴＤＰ－４３の凝集を阻害するそれらの能力について評価した。タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位によって分離されたマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）にＣ末端で融合したＴＤＰ－４３をこのアッセイに使用した。遠心分離フィルターを使用して保存緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、５％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴ）をアッセイ緩衝液（３０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）に交換し、タンパク質濃度を２８０ｎｍの紫外（ＵＶ）分光法によって決定した（ＮａｎｏＤｒｏｐ）。ＴＤＰ－４３－ＭＢＰをアッセイ緩衝液中で最終濃度２．５μＭに希釈し、低結合性チューブ内で８３３ｎＭのヒト化変異体またはＩｇＧ４もしくはＩｇＧ１アイソタイプ対照と混合した。９６ウェルプレート中、最終容量８０μＬ／ウェルで最終濃度１０μｇ／ｍＬとしてＴＥＶプロテアーゼを加えることによって、凝集を誘起した。凝集は、技術的３回反復で２４時間にわたって、各測定の前に５秒振盪し、１５分ごとにウェルの中央部における６００ｎｍでの吸光度を測定することによってモニターした。プレートはプレートリーダー内で２５℃に一定に保ち、ホイルでシールした。１．５時間後に、ＴＥＶ切断をウェスタンブロット解析によって確認した。
解析のために、２４時間にわたる曲線下面積（ＡＵＣ）をＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプ対照に正規化し、凝集したＴＤＰ－４３のパーセントを各ｍＡｂについて計算した。データを３回の独立した反復実験の平均±ＳＤとして提示する。図８Ａおよび８Ｂに、キメラ抗体（ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプ）に対するいくつかのヒト化ＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１変異体による凝集の阻害の比較を示す。全てのヒト化変異体は、キメラ抗体と比較して組換えＴＤＰ－４３の凝集の阻害において良好な有効性を示した。試験した全てのヒト化変異体の中で、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１６Ｌ１４、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１８、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２０Ｌ１９、ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１５Ｌ１８、およびｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ２３Ｌ２０は、ＴＤＰ－４３の凝集の阻害においてキメラ抗体ｃＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１（ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプ）と比較して等しい有効性を示した。
ヒト化変異体はＦＴＤ脳抽出物中の免疫枯渇によって評価して病原性ＴＤＰ－４３に結合する
天然の状態で特異的に結合するＴＤＰ－４３凝集体における抗体の有効性を評価するため、病原性ＴＤＰ－４３が富化された脳抽出物中の免疫枯渇および免疫沈降実験を実施した。
Ａ型ＦＴＤ（ＦＴＤ－Ａ）の剖検脳に由来する不溶性分画を、実施例７に記載したように調製した。免疫枯渇は、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）磁性ビーズ、プロテインＧ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０００３Ｄ）を使用して実施した。チューブ中で再懸濁した後、ビーズを１．５ｍｌの低結合性チューブに移した。上清を除くために磁石を用いて、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を添加したＰＢＳでビーズを２回洗浄した。ビーズ１ｍｇに対して抗体８μｇの比で、抗体（ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８（ＩｇＧ１アイソタイプ）、ヒトＩｇＧ１対照）をビーズに加えた（ビーズ飽和）。抗体－ビーズ混合物を室温で３０分インキュベートした。ビーズ－抗体複合体を１０００μｌのＰＢＳ－０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０で３回、および５００μｌのＰＢＳで１回、洗浄した。不溶性分画を氷上で解凍し、氷上、振幅３０で３０秒、超音波処理し、次いでＰＢＳで１００μｇ／ｍｌに希釈した。上清を除いた後、抗体１μｇあたり１０μｇの脳材料を添加し、連続的に回転しながら室温で３０分インキュベートした。チューブを磁石の上に置き、上清を免疫枯渇分画として採取した。インプットの免疫枯渇および免疫沈降した材料を、ウェスタンブロットによってさらに解析した。ウェスタンブロットは実施例７に記載したように実施した。２０μｌの試料をレーンごとに負荷した。イムノブロッティングは以下の抗体を使用して実施した。全ＴＤＰ－４３（ＤｙＬｉｇｈｔ６８０にカップリングしたＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１）、ｐＴＤＰ－４３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、８２９９０１）。それぞれ１：２０００および１：１０００の希釈で使用した。ヤギ抗ラット二次抗体（カタログ番号９２５－３２２１９）を１：１００００の希釈で使用した。
ヒト化変異体ｈＡＣＩ－７０６９－６３３Ｂ１２－Ａｂ１＿Ｈ１９Ｌ１８（ＩｇＧ１アイソタイプ）は、アイソタイプ対照抗体と比較して、Ａ型ＦＴＤ脳組織から得たサルコシル不溶性分画に由来するＴＤＰ－４３（図９Ａ）およびｐＴＤＰ－４３（図９Ｂ）に特異的に結合し、枯渇することができた。これらのデータにより、ヒト患者試料中の標的に関与するこれらの抗体の所望の特性が確認される。
参考文献

Claims (74)

  1. ａ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号２２、配列番号１７２、配列番号１８２、配列番号１９２、配列番号２０２、配列番号２１２、配列番号２２２、および配列番号３８２のアミノ酸配列から選択されるＶＨ－ＣＤＲ２；
    ｃ．アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号２５、配列番号１７５、配列番号１８５、配列番号１９５、配列番号２６５、および配列番号３０５のアミノ酸配列から選択されるＶＬ－ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１６、配列番号２０６、および配列番号２１６のアミノ酸配列から選択されるＶＬ－ＣＤＲ２；ならびに
    ｆ．配列番号２７、配列番号２２７、配列番号２３７、および配列番号２４７のアミノ酸配列から選択されるＶＬ－ＣＤＲ３
    を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化ＴＤＰ－４３抗体またはその抗原結合性断片。
  2. ａ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；
    ｂ．配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；
    ｃ．アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
    ｄ．配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；
    ｅ．配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および
    ｆ．配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
    を含むか、または
    ｉ．配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；
    ｉｉ．配列番号３８２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；
    ｉｉｉ．アミノ酸配列ＥＳ（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ）を含むＶＨ－ＣＤＲ３；
    ｉｖ．配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；
    ｖ．配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および
    ｖｉ．配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３
    を含む、請求項１に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  3. ヒト重鎖可変ドメインサブファミリー１フレームワーク配列を含む、請求項１または２に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  4. ＩＧＨＶ１－３、ＩＧＨＶ１－２、ＩＧＨＶ１－４６、またはＩＧＨＶ１－２４ＶＨフレームワーク配列、好ましくはＩＧＨＶ１－３ＶＨフレームワーク配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  5. ヒト軽鎖可変ドメインカッパサブファミリー２フレームワーク配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  6. ＩＧＫＶ２－３０、ＩＧＫＶ２－２９、ＩＧＫＶ２Ｄ－２９、またはＩＧＫＶ２－２４ＶＬフレームワーク配列、好ましくはＩＧＫＶ２－３０またはＩＧＫＶ２－２９ＶＬフレームワーク配列を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  7. ＩＧＫＶ２－３０ＶＬフレームワーク配列、好ましくはＩＧＫＶ２－３０＊０２ＶＬフレームワーク配列を含む、請求項６に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  8. 以下のＶＨの突然変異：Ｑ１Ｅ、Ａ２４Ｔ、Ｒ３８Ｋ、Ｐ４１Ｈ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ｖ、Ｔ７３Ｋの１つまたは複数、最大で全部を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  9. 以下のＶＬの突然変異：Ｒ２４Ｋ、Ｆ３６Ｌ、Ｒ４５Ｋ、Ｇ５７Ｒ、Ｖ５８Ｉの１つまたは複数、最大で全部を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  10. ｉ．配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１６０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｉｉ．配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１７０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｉｉｉ．配列番号１８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１８０のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｉｖ．配列番号１９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号１９０のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｖ．配列番号２００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２００のアミノ酸配列と少なくとも８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｖｉ．配列番号２１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｖｉｉ．配列番号２２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｖｉｉｉ．配列番号２３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２３０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｉｘ．配列番号２４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘ．配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２５０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｉ．配列番号２６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２６０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｉｉ．配列番号２７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２７０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｉｉｉ．配列番号２８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｉｖ．配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号２９０のアミノ酸配列と少なくとも９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｖ．配列番号３００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｖｉ．配列番号３１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｖｉｉ．配列番号３２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｖｉｉｉ．配列番号３３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３３０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｉｘ．配列番号３４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｘ．配列番号３５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｘｉ．配列番号３６０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３６０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｘｉｉ．配列番号３７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；または
    ｘｘｉｉｉ．配列番号３８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）
    から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）；および
    ｉ．配列番号１６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１６４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉｉ．配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１７４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉｉｉ．配列番号１８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１８４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉｖ．配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号１９４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｖ．配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｖｉ．配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２１４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｖｉｉ．配列番号２２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２２４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｖｉｉｉ．配列番号２３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２３４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉｘ．配列番号２４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２４４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘ．配列番号２５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２５４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｉ．配列番号２６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２６４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｉｉ．配列番号２７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２７４のアミノ酸配列と少なくとも９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｉｉｉ．配列番号２８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２８４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｉｖ．配列番号２９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｖ．配列番号３０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３０４のアミノ酸配列と少なくとも９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｖｉ．配列番号３１４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３１４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｖｉｉ．配列番号３２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｖｉｉｉ．配列番号３３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｉｘ．配列番号３４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｘｘ．配列番号３５４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
    から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  11. ａ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｂ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３１０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｃ．配列番号３２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｄ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号２９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｆ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｇ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｈ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３４０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｊ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３５０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｋ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３００のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３３４のアミノ酸配列と少なくとも９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｌ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）または配列番号３８０のアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）または配列番号３５４のアミノ酸配列と少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  12. ａ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｂ．配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｃ．配列番号３２０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｄ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｅ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｆ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３２４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｇ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｈ．配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｊ．配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｋ．配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｌ．配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  13. 配列番号３１０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  14. 配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  15. 配列番号３４０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  16. 配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  17. 配列番号３５０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  18. 配列番号３００の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  19. 配列番号３８０の配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５４の配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  20. ミスフォールドされた凝集ＴＤＰ－４３および非凝集生理的ＴＤＰ－４３に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  21. モノマー性および／またはオリゴマー性および／または凝集したおよび／または翻訳後修飾されたおよび／または切断されたＴＤＰ－４３に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  22. ミスフォールドされた凝集ヒトＴＤＰ－４３および非凝集生理的ヒトＴＤＰ－４３に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  23. 以下の特性：
    ａ ＴＤＰ－４３タンパク質またはその断片の凝集を阻害すること、
    ｂ ＴＤＰ－４３の細胞間伝播を遮断すること、
    ｃ ＴＤＰ－４３凝集体を脱凝集すること、
    ｄ ＴＤＰ－４３の播種を遮断すること、
    ｅ ＴＤＰ－４３の拡散を遮断すること
    の１つまたは複数、最大で全部を呈する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  24. インビボにおけるＴＤＰ－４３の病変を低減させる、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  25. インビボにおける凝集ＴＤＰ－４３および／またはリン酸化ＴＤＰ－４３のレベルを低減させる、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  26. ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基３９７～４１１内のエピトープまたは非ヒトＴＤＰ－４３の等価なエピトープに結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  27. ヒトＴＤＰ－４３（配列番号１）のアミノ酸残基４００～４０５内のエピトープまたは非ヒトＴＤＰ－４３の等価なエピトープに結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  28. 抗体またはその抗原結合性断片である、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  29. Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、好ましくはＦａｂである、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  30. インビトロにおける組換えＴＤＰ－４３デノボ凝集アッセイ（例えば実施例１４に記載の）で測定した場合に、ＴＤＰ－４３の凝集を少なくとも６０％阻害する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  31. インビトロにおける組換えＴＤＰ－４３デノボ凝集アッセイ（例えば実施例１４に記載の）で測定した場合に、ＴＤＰ－４３の凝集を少なくとも９０％阻害する、請求項２３に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  32. 可溶性ＴＤＰ－４３の結合について２ｎＭ未満、好ましくは７００ｐＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  33. 可溶性ＴＤＰ－５１ペプチドの結合について１５ｎＭ未満、好ましくは１０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）を有する、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  34. ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４抗体またはその抗原結合性断片である、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  35. ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４抗体またはその抗原結合性断片である、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  36. Ｆｃ突然変異、好ましくはＳ２２８Ｐ突然変異を含む、前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子。
  37. 前記請求項のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む免疫コンジュゲート。
  38. デリバリー媒体または血液脳関門部分を使用して脳血液関門を通過する、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む免疫コンジュゲート。
  39. デリバリー媒体がリポソームまたは細胞外ベシクルを含む、請求項３７または３８に記載の免疫コンジュゲート。
  40. ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子が血液脳関門部分に連結されている、請求項３７または３８に記載の免疫コンジュゲート。
  41. 血液脳関門部分がポリペプチドまたは小分子、好ましくはペプチド、受容体リガンド、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、またはＦａｂ断片である、請求項４０に記載の免疫コンジュゲート。
  42. 血液脳関門部分が血液脳関門受容体に結合する、請求項３８、４０、または４１に記載の免疫コンジュゲート。
  43. 血液脳関門受容体がトランスフェリン受容体、インスリン受容体、または低密度リポタンパク質受容体を含むがそれらに限定されない、請求項４２に記載の免疫コンジュゲート。
  44. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む標識された結合分子、特に標識された抗体。
  45. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、ならびに薬学的に許容される担体および／または賦形剤および／または希釈剤を含む医薬組成物。
  46. ヒトまたは獣医学の用途のための、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、または請求項４５に記載の医薬組成物。
  47. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の防止、改善、処置における使用のための、請求項４６に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  48. 診断用途のための、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、または請求項４５に記載の医薬組成物。
  49. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断のための、請求項４８に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  50. 研究使用のための、特に分析ツールまたは参照分子としての、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、または請求項４５に記載の医薬組成物。
  51. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症をモニターするための診断ツールとしての使用のための、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、または請求項４５に記載の医薬組成物。
  52. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭型認知症（例えば染色体９ｐに連鎖する、プログラヌリン（ＧＲＮ）の突然変異を伴う、Ｃ９ｏｒｆ７２の突然変異を伴う、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）を伴うかまたは伴わない散発性または家族性のＦＴＤ、大脳皮質基底核変性症、ユビキチン陽性ＴＤＰ－４３封入体を伴う前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、嗜銀顆粒性疾患、ピック病、意味性亜型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動性亜型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、非流暢性亜型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）等）、筋萎縮性側索硬化症（例えば散発性ＡＬＳ、ＴＡＲＤＢＰの突然変異を伴う、アンギオゲニン（ＡＮＧ）の突然変異を伴うＡＬＳ）、アレクサンダー病（ＡｘＤ）、辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）、慢性外傷性脳症、ペリー症候群、アルツハイマー病（ＡＤ、散発性および家族性の形態のＡＤを含む）、ダウン症候群、家族性英国型認知症、ポリグルタミン病（ハンチントン病および３型脊髄小脳失調（ＳＣＡ３、マチャドジョゼフ病としても知られている））、海馬硬化認知症およびミオパチー（散発性封入体筋炎、バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異を伴う封入体ミオパチー；骨のパジェット病および前頭側頭型認知症も）、辺縁小胞を伴う眼咽頭筋ジストロフィー、ミオチリン（ＭＹＯＴ）遺伝子の突然変異またはデスミン（ＤＥＳ）をコードする遺伝子の突然変異を伴う筋細線維ミオパチー、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）、レヴィー小体認知症（ＤＬＢ）、またはパーキンソン病（ＰＤ）である、請求項４７、４９、または５１のいずれか一項に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  53. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、または辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ－４３脳症（ＬＡＴＥ）である、請求項５２に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  54. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項５３に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  55. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症がアルツハイマー病（ＡＤ）である、請求項５３に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  56. ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症が前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である、請求項５３に記載の使用のためのヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、または免疫コンジュゲート、または医薬組成物。
  57. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項４５に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／または異常、またはＴＤＰ－４３タンパク質症を有する個体における認識記憶能力を維持もしくは増大させるかまたは記憶喪失を遅延させる方法。
  58. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子または請求項３７から４３のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲートまたは請求項４５に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、個体における凝集ＴＤＰ－４３および／またはリン酸化ＴＤＰ－４３のレベルを低減させる方法。
  59. 少なくとも１つのさらなる治療剤を投与することを含む、請求項５７または５８に記載の方法。
  60. さらなる治療剤がアルファシヌクレイン、ＢＡＣＥ１、タウ、ベータアミロイド、ＴＤＰ－４３、または神経炎症タンパク質を標的とする、請求項５９に記載の方法。
  61. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子をコードする核酸分子。
  62. 配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１８、配列番号３１９、配列番号３２８、配列番号３２９、配列番号３３８、配列番号３３９、配列番号３４８、配列番号３４９、配列番号３５８、配列番号３５９、配列番号３６８、配列番号３７８、または配列番号３９８で提供されるヌクレオチド配列を含む核酸。
  63. ａ．配列番号３０８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｂ．配列番号３１８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｃ．配列番号３２８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｄ．配列番号３４８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｅ．配列番号３５８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｆ．配列番号３４８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３２９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｇ．配列番号３４８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｈ．配列番号３４８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｉ．配列番号３５８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｊ．配列番号３５８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｋ．配列番号３０８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｌ．配列番号３９８で提供される重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５９で提供される軽鎖可変領域（ＶＬ）
    として示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子。
  64. ａ．配列番号３１８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２９９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｂ．配列番号３４８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｃ．配列番号３４８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｄ．配列番号３５８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｅ．配列番号３５８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３４９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｆ．配列番号３０８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３３９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
    ｇ．配列番号３９８によってコードされる重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３５９によってコードされる軽鎖可変領域（ＶＬ）
    として示されるヌクレオチド配列を含む核酸分子。
  65. 血液脳関門またはＣＮＳにおけるその他の任意の細胞型への標的デリバリーのためのウイルスベクターの一部である、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子をコードする核酸。
  66. 血液脳関門またはＣＮＳにおけるその他の任意の細胞型への標的デリバリーのためのウイルスベクターの一部である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の核酸。
  67. ウイルスベクターが組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）、好ましくはＡＡＶ１からＡＡＶ１２までから選択される組換えアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項６５または６６に記載の核酸。
  68. 請求項６１から６７のいずれか一項に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
  69. 請求項６１から６７のいずれか一項に記載の核酸および／または請求項６８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  70. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を発現する宿主細胞。
  71. 請求項６８に記載の組換え発現ベクターを含有する無細胞発現系。
  72. ａ．ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を産生するために好適な条件下で、請求項６９もしくは７０に記載の宿主細胞または請求項７１に記載の無細胞発現系を培養する工程、および
    ｂ．ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を単離する工程
    を含む、ヒト化ＴＤＰ－４３結合分子、特にヒト化抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法。
  73. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子と試料を接触させることおよび試料中のＴＤＰ－４３レベルを対照試料中のＴＤＰ－４３レベルと比較することを含む、対象から得た試料中のＴＤＰ－４３を検出および／または定量する方法。
  74. 請求項１から３６のいずれか一項に記載のヒト化ＴＤＰ－４３結合分子を含む、ＴＤＰ－４３に関連する疾患、障害、および／もしくは異常、もしくはＴＤＰ－４３タンパク質症の診断のため、または請求項４６から５６のいずれか一項に記載の使用のため、または請求項５７から６０のいずれか一項に記載の方法における使用のためのキット。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2024009948A (es) 2022-02-16 2024-08-22 Ac Immune Sa Moleculas de union anti-tdp-43 humanizadas y usos de las mismas.
WO2023194565A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US5112596A (en) 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JP3951062B2 (ja) 1991-09-19 2007-08-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド 少なくとも遊離のチオールとして存在するシステインを有する抗体フラグメントの大腸菌での発現、２官能性Ｆ（ａｂ’）２抗体の産生のための使用
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
ATE191853T1 (de) 1992-07-27 2000-05-15 Us Health Zielgerichte liposome zur blut-hirne schranke
FR2707189B1 (fr) 1993-07-09 1995-10-13 Gradient Ass Procédé de traitement de résidus de combustion et installation de mise en Óoeuvre dudit procédé.
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ATE296315T1 (de) 1997-06-24 2005-06-15 Genentech Inc Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
EP1028751B1 (en) 1997-10-31 2008-12-31 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
EP1071700B1 (en) 1998-04-20 2010-02-17 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
DK2270150T4 (da) 1999-04-09 2019-08-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle.
ES2248127T3 (es) 1999-10-04 2006-03-16 Medicago Inc. Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos en presencia de nigtrogeno.
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
US6514221B2 (en) 2000-07-27 2003-02-04 Brigham And Women's Hospital, Inc. Blood-brain barrier opening
MXPA03001915A (es) 2000-08-03 2004-09-10 Therapeutic Human Polyclonals Produccion de anticuerpos humanizados en animales transgenicos.
WO2002017930A2 (en) 2000-08-30 2002-03-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
DK1332209T3 (da) 2000-09-08 2010-03-29 Univ Zuerich Samlinger af repeatproteiner indeholdende repeatmoduler
EP2314686B2 (en) 2000-10-06 2023-06-21 Kyowa Kirin Co., Ltd. Cells producing antibody compositions
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
JP2004526419A (ja) 2000-10-16 2004-09-02 フィロス インク． 抗体模倣物および他の結合タンパク質のためのタンパク質骨格
US7034036B2 (en) 2000-10-30 2006-04-25 Pain Therapeutics, Inc. Inhibitors of ABC drug transporters at the blood-brain barrier
US20030157561A1 (en) 2001-11-19 2003-08-21 Kolkman Joost A. Combinatorial libraries of monomer domains
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
RU2321630C2 (ru) 2001-08-03 2008-04-10 Гликарт Биотекнолоджи АГ Гликозилированные антитела (варианты), обладающие повышенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью
ATE430580T1 (de) 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20030162695A1 (en) 2002-02-27 2003-08-28 Schatzberg Alan F. Glucocorticoid blocking agents for increasing blood-brain barrier permeability
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
EA200401325A1 (ru) 2002-04-09 2005-04-28 Киова Хакко Когио Ко., Лтд. Клетки с модифицированным геномом
JPWO2003085118A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物の製造方法
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
JPWO2003085119A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物のＦｃγ受容体ＩＩＩａに対する結合活性を高める方法
KR101186210B1 (ko) 2002-12-03 2012-10-08 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체
EP2289936B1 (en) 2002-12-16 2017-05-31 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
JP2007505142A (ja) 2003-09-10 2007-03-08 セダーズ−シナイ メディカル センター 血液脳関門を通過する薬剤のカリウムチャネル媒介性送達
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
JPWO2005035778A1 (ja) 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 α１，６−フコシルトランスフェラーゼの機能を抑制するＲＮＡを用いた抗体組成物の製造法
AU2004284090A1 (en) 2003-10-24 2005-05-06 Avidia, Inc. LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ES2403055T3 (es) 2004-04-13 2013-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-P-selectina
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
RU2412947C2 (ru) 2004-09-23 2011-02-27 Дженентек, Инк. Антитела, сконструированные на основе цистеинов, и их конъюгаты
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
WO2008151055A1 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Diagnosing neurodegenerative diseases
EP2189526B1 (en) * 2007-07-06 2013-09-04 Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science Antibody binding specifically to tdp-43 aggregate
WO2012020124A1 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Ac Immune S.A. Vaccine engineering
CN103189050B (zh) 2010-10-26 2017-09-29 Ac免疫有限公司 包含通过疏水部分修饰的肽的基于脂质体的构建体
ES2883212T3 (es) 2011-10-28 2021-12-07 Biogen Int Neuroscience Gmbh Moléculas de unión específica a TDP-43
NZ629283A (en) 2012-03-16 2016-04-29 Covagen Ag Novel binding molecules with antitumoral activity
WO2016053610A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Academia Sinica Antibodies against pathological forms of tdp-43 and uses thereof

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