KR101186210B1 - 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체 - Google Patents

혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체 Download PDF

Info

Publication number
KR101186210B1
KR101186210B1 KR1020057010146A KR20057010146A KR101186210B1 KR 101186210 B1 KR101186210 B1 KR 101186210B1 KR 1020057010146 A KR1020057010146 A KR 1020057010146A KR 20057010146 A KR20057010146 A KR 20057010146A KR 101186210 B1 KR101186210 B1 KR 101186210B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ldl
density lipoprotein
low density
artificial low
particles
Prior art date
Application number
KR1020057010146A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20050084163A (ko
Inventor
토마스 제이 넬슨
알레싼드로 쿠아트론
다니엘 엘 알콘
Original Assignee
블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트 filed Critical 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트
Publication of KR20050084163A publication Critical patent/KR20050084163A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101186210B1 publication Critical patent/KR101186210B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1275—Lipoproteins; Chylomicrons; Artificial HDL, LDL, VLDL, protein-free species thereof; Precursors thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/902—Specified use of nanostructure
    • Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
    • Y10S977/906—Drug delivery

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 치료제를 혈뇌장벽(BBB)을 통과하여 표적화 전달하기 위한 고도로 효율적인 인공 저밀도 지단백질(LDL) 운반체 시스템에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 포스파티딜 콜린, 지방-아실-콜레스테롤 에스테르 및 하나 이상의 아포지단백질과 같은 3개의 지질 요소로 이루어진 인공 LDL 입자에 관한 것이다. 본 발명은 뇌 질환의 예방 및 치료를 위해 약제를 표적화하고 BBB를 통과시키는 인공 LDL 입자를 포함하는 조성물, 방법 및 키트에 관한 것이다.
Figure R1020057010146
혈뇌장벽, 저밀도 지단백질, 포스파티딜 콜린, 지방-아실-콜레스테롤 에스테르, 아포지단백질

Description

혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체{Artificial low-density lipoprotein carriers for transport of substances across the blood-brain barrier}
본 출원은 2002년 12월 3일자로 출원된 미국 가출원 번호 제60/430,476호에 대한 우선권을 주장한다.
본 발명은 혈뇌장벽(BBB)을 통과하여 물질을 효율적으로 표적화 및 전달시키는 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 다양한 뇌 질환의 예방 및 치료를 위한 인공 LDL 입자 조성물, 방법 및 키트에 관한 것이다.
혈뇌장벽(BBB)는 순환 독소로부터 뇌를 효과적으로 보호하지만 또한 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환 및 뇌암과 같은 뇌질환의 약리학적 치료에 있어서 주요 장애가 된다. 대부분의 하전된 분자 및 크기가 700돌턴을 초과하는 대부분의 분자는 당해 장벽을 통과할 수 없고 소형 분자는 간에서 접합될 수 있다. 이들 요소들은 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 세균성 및 바이러스성 감염 및 암과 같은 뇌 및 중추 신경계(CNS) 질환의 약리학적 치료에 주요 장애가 된다.
뇌 및 CNS의 질환 및 장애를 치료하기 위한 많은 치료제는 BBB를 직접 통과하지 못할 정도로 친수성이다. 추가로, 이들 약제 및 제제는 혈액 및 말초 조직에서 분해되기 쉽기 때문에 치료학적으로 유효한 혈청 농도를 성취하는데 필요한 양은 증가한다. 본 발명은 치료제를 인공 저밀도 지단백질 입자(LDL)중에 포집하여 치료제를 BBB에 전달하는 방법을 제공한다. 본 발명의 LDL은 트랜스사이토시스(transcytosis)에 의해 BBB를 통과하여 치료제의 수송을 촉진시킨다. 대부분의 약제 및 치료제는 BBB를 통과하기에는 너무 친수성이고 또한 LDL 입자에 혼입되기에도 너무 친수성이기 때문에, 본 발명은 LDL 입자내로의 혼입, 치료제를 BBB를 통과하여 수송하고 이어서 치료제의 세포내로의 방출을 용이하게 하는 LDL 성분과 치료제의 접합체를 제조하는 방법을 제공한다.
BBB를 가로질러 약제를 전달하는 이전의 방법은 3개의 일반적인 카테고리를 포함한다: (1) 치료제가 운반체내에 포집되는 리포좀 기본 방법, (2) 입자가, 합성 중합체를 사용하여 정확하게 한정된 크기의 특성을 성취하도록 제조되는 합성 중합체 기본 방법 및 (3) 치료제가 인슐린과 같은 운반체에 공유적으로 결합된, 운반체와 약제의 직접적인 접합.
A. 리포좀
리포좀은 수용액중에서 인지질이 초음파처리되는 경우 자발적으로 형성되는 소형 입자이고 수성 환경을 포위하는 속빈(hollow) 구형 구조를 갖는 대칭적 지질 이중층으로 이루어진다. 인지질은 세포질막에 흡수되어 자동적으로 리포좀의 내용물을 세포질로 방출할 수 있기 때문에 리포좀은 세포막을 통해 수용성 약제를 수송하는 수단으로서 매력이 있다. 당해 기술의 보다 성공적인 변법은 막에 나노공극을 협력적으로 생성시킬 수 있는 양이온성 지질의 사용을 포함한다. 양이온성 지질은 세포 배양물에 광범위하게 사용되어 DNA 분자와 같은 수용성 물질을 실험을 위해 배양된 세포로 도입한다.
리포좀은 이들의 거대 운반 능력때문에 BBB를 통과하여 약제를 수송하는데 매력적이다. 그러나, 리포좀은 일반적으로 너무 거대하여 효과적으로 BBB를 통과하지 못하고 본래 불안정하며 이의 구성 지질은 혈장내 지질 결합 단백질에 의해 흡수되어 점차 소멸된다. 예를 들어, 몇몇 연구에서, 사용되는 대형 크기의 리포좀은 뇌 흡수에 비정상적인 영향을 주는 미세뇌색전증을 유발한다. 몇몇 연구에서, 리포좀은 안정화제로서, BBB를 붕괴시킬 수 있는 세제인 폴리소르베이트 80과 동시 주사된다. 이들 연구에서 폴리소르베이트 80에 의한 BBB의 붕괴는 BBB를 통과하는 임의의 관찰된 수송에 관여할 수 있다.
결과적으로, 리포좀은 BBB를 통과하여 약제를 수송하는 비히클로서 변형되어 왔다. 리포좀을 특정 세포 표적물로 지시하기 위한 다양한 방법이 시도되어 왔다. BBB의 내인성 수용체를 표적으로 하는 펩타이드유사(peptidomimetic) mAb은 수용체 매개 흡수를 성취할 목적으로 다양한 BBB 수용체로 페길화된 면역리포좀을 표적화하는데 사용되어 왔다. 그러나, 이러한 방법은 또한 모노클로날 항체의 대량 생산, 시험 및 정부 승인을 요구한다. mAb는 전형적으로 마우스에서 제조되고 분해되기 쉽기 때문에, 펩타이드유사 mAb의 도입은 조절에 상당한 장벽이 있고 환자 환경내에서 적절히 사용하기가 어려운 것으로 입증되었다.
예를 들어, 면역리포좀은 모노클로날 항체(mAb)를 리포좀의 표면에 공유 접착시킴을 포함하는 방법으로 작제되어 왔다. 이들 면역리포좀은, mAb 접합된 리포좀을 상당히 파괴하는 시스템인 망상내피계(RES)에 의한 흡수를 유발하는 혈장 단백질로 즉시 피복되기 때문에, 면역리포좀은 페길화로서 공지된 과정에서 폴리에틸렌 글리콜(PEG)로 처리되었다. 불행하게도, PEG 분자는 mAb를 방해하여 입체 장애로 인해, 이들에게 비특이성을 부여한다. 후일러[문헌참조: Huwyler et al(1996) Proc. Nat'l. Acad. Sci USA 93: 14164-14169]등은 티올화된 mAb와 접합될 수 있는 PEG 꼬리의 선단에 말레이미드 잔기를 갖는 면역리포좀을 제조함으로써 당해 문제점을 회피하였다. 이들 페길화된 OX26 면역리포좀은 이들의 내부에 다우노마이신을 함유하도록 제조되었고 유리된 치료제 또는 순수한 비페길화된 리포좀 보다 혈장내에서 보다 안정한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 공초점 현미경은, 리포좀이 랫트 뇌 모세관으로 세포유입(endocytosis)되지만 이들은 뇌세포에 도달하지 못하고 내피 세포에 접착되어 있음을 밝혔다. 따라서, 페길화되고 말레이미드 처리된 리포좀은 약제 전달 비히클로서 상대적으로 비효과적인 것으로 나타난다.
1997년에, 데훅크(Dehouck et al.)등은 ApoE에 결합하는 LDL 수용체가 BBB를 통과하는 LDL의 트랜스사이토시스에 관여함을 발견하였다. 3회 연속의 공개문헌에서, 베르슬루이스(Versluis et al)등은 마우스내 암 세포로 다우노루비신을 전달하는 ApoE-풍부 리포좀의 용도를 기재하였다. ApoE는 종양 세포가 이의 막상에 고수 준의 LDL 수용체를 발현한다는 사실을 토대로 LDL-수용체 표적 단백질로서 선택되었다. 베르슬루이스(Versluis et al. (1998))등은 또한 천연 LDL를 사용할 것을 제안하였지만 당해 실험은 시도되지 않았고 후속 논문은 중점적으로 ApoE-풍부 리포좀에 집중되었다. 베르슬루이스(Versluis et al. (1999))등은 다우노루비신의 조직 분포를 조사하였지만 뇌 흡수와 관련된 데이타는 없었고 이는 이러한 방법이 BBB를 통과하여 다우노루비신을 수송하는 수단으로서 고려되지 않았음을 지적한다.
추가로, 베르슬루이스 등에 의해 사용되는 접합 화학적 방법은 본 발명에 사용된 방법과는 상이하다. 약제를 리포좀 막으로 접착시키기 위해, 당해 저자는 3α-O-(올레오일)-4β-콜란산(리토콜산의 에스테르)를, 친수성 항종양 제제 다우노루비신과 공유적으로 결합되는 테트라펩타이드 Ala-Leu-Ala-Leu에 커플링시켰다. 따라서, 종양은 유리되지 않은 접합된 다우노루비신으로 처리되었다. 리토콜산은 이미 활성화가능한 산 그룹을 함유하는 스테로이드이지만 산 그룹은 3-OH 위치 대신 스테로이드 측쇄에 위치하고 이는 반응 생성물의 특성을 덜 바람직하게 한다. 유리된 다우노루비신은 이동안에 접합된 것 또는 제제를 프로테아제, 산 및 기타 가수분해 효소에 노출시키는 고도로 산성인 라이소좀에서 발견되는 프로테아제에 의한 절단 후에만이 생성될 수 있다. 이어서 치료제는 라이소좀 내부 공간으로 방출되어 여기서 이는 추가로 분해되고 세포로부터 방출된다.
대조적으로, 본 발명의 접합체는 바람직하게 에스테르 결합을 통해 치료제를 접착시키기 위해 제공되고 이는 쉽게 세포질에서 절단되어 결과적으로 베르슬루이스등의 방법에 의해 요구되는 엄중한 라이소좀 조건을 회피할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 의해 접합된 치료제는 이의 표적으로의 이동중에 생존하여 효율적인 방식으로 표적물에서 방출될 가능성이 더욱 높아질 것이다. 또한 리포좀 보다 BBB를 통과하여 수송될 가능성이 높다.
베르슬루이스 등의 방법은 또한 테트라펩타이드를 합성하기 위한 고형상 펩타이드 화학적 단계 및 이를 FMOC와 접합시키고 접합체를 리토콜산과 반응시키고 최종적으로 약제와 반응시키는 많은 단계를 요구한다. 본 발명은 보다 소수의 단계를 사용하고 이러한 각각의 단계는 거의 정량적인 수율을 생성시킨다. 따라서, 본 발명은 또한 효율을 개선시키고 비용을 저렴하게 한다.
독소루비신의 기타 리포좀 제형은 현재 암에 대해 가능한 치료 방법으로서 임상 사용중에 있지만 LDL을 사용하는 어떠한 생성물도 도입되지 않았다.
데메울(Demeule et al.)등은 단백질 멜라노트랜스페린(p97)이 트랜스사이토시스에 의해 BBB를 통과하여 수송됨을 밝혔고 LDL 수용체가 관여하는 것으로 결론지었고 이는 당해 단백질이 약제 전달 시스템으로서 사용됨을 시사한다.
B. 합성 중합체
폴리소르베이트 80으로 덮여진 폴리(부틸 시아노아크릴레이트) 또는 폴리아크릴아미드와 같은 합성 중합체가 또한 시도되었다. 이들 중합체는 입자가 충분히 친수성이어서 수용성이지만 장기간동안 이의 구조적 형태를 유지할 수 있어, 천연 무독화 과정을 수행하는 간 및 신장으로의 흡수로부터 치료제를 보호하기 때문에 매력이 있다. 두 경우 모두에서, 흡수는 일반적으로 세포막을 통과하는 수동 분산에 의해 일어나거나 클라트린 피복된 비히클에 의한 방어적 흡수로서 일어난다. 전자 경우에, 치료제는 이전 보다 표적물에 더 근접되어 있지않는 내피 세포에 포집되고, 후자 경우에, 치료제는 위 내용물과 유사한 프로테아제 및 기타 분해 효소를 함유하는, 세포내 고도의 산성 격실인 라이소좀으로 수송된다. 따라서, 후자 경우에, 치료제는 보다 극한 조건에 걸쳐 안정하게 남아있어야만 한다. 어느 경우에서도 약제는 세포를 통과하여 운반되지 않고 목적하는 뇌 실질 세포로 진입하지 못한다. 따라서, 이들 2개의 방법의 어떠한 것도 많은 임상적인 용도를 성취하지 못한다는 것은 놀랍지 않다.
수많은 연구자들은 제한적으로 성공을 거둔 BBB를 통과하는 운반체 흡수를 개선시키기 위해 상기 기재된 방법을 다양하게 변형시키고자 하였다. 예를 들어, 크루터(Kreuter et al. (2002))등[문헌참조: J. Drug Target 10(4): 317-25)]은 BBB에 위치하는 아포지단백질 수용체와 결합하는 다양한 아포지단백질을 함유하는 합성 입자를 가공하였다. 이들은 폴리(부틸 시아노아크릴레이트) 나노입자와 결합되고 폴리소르베이트 80으로 피복된 약제의 수송을 입증하였다. 흡수되기 위해서는 폴리소르베이트 80, ApoE 또는 ApoB와 피복시킬 필요가 있다. 아포지단백질 A11, C11 또는 J 피복은 작용하지 않았다. 그러나, 이들 나노입자는 천연적으로 존재하지 않으므로, 이들은 바람직하지 못한 부작용을 가질 수 있다. 아크릴레이트 중합체는 특히, 자가면역반응을 개시하는 것으로 악명이 높고 화학적으로 관련된 중합체 폴리(아크릴아미드)는 흔히 애쥬반트로서 사용된다.
알리아우딘(Alyaudin et al. (2001))등[문헌참조: J. Drug Target 9(3)]은 BBB를 통과시켜 [3H]-달라르긴을 수송하기 위해 폴리소르베이트 80으로 과피복된 폴리(부틸시아노아크릴레이트) 나노입자를 사용하였고 당해 과정은 세포유입에 이어서 가능한 트랜스사이토시스에 의한 것중 하나인 것으로 추측하였다. 뿐만 아니라 당해 중합체는 면역학적 합병증을 유발한다.
C. 치료제 접합체
BBB를 통과하여 수송될 수 있는 인슐린과 같은 물질과 약리학적 제제를 직접 접합시키기 위한 시도가 있었다. 인슐린 및 인슐린형 성장 인자는 특수화된 촉진 확산 시스템에 의해 혈관뇌장벽을 통과하는 것으로 공지되어 있다[문헌참조: Reinhardt et al.(1994) Endocrinology 135(5):1753-1761]. 인슐린은 내피 인슐린 수용체에 의해 매개되는 트랜스사이토시스에 의해 흡수된다[문헌참조: Pardridge et al. (1986) Ann. Intern. Med. 105(1): 82-95]. 글루코스, 및 트립토판과 같은 대형 아미노산에 대한 특정 수송체가 또한 존재한다. 그러나, 인슐린 수송체의 특이성은 매우 높아 인슐린에 공유적으로 결합된 약리학적 제제는 뇌를 통과할 수 없는 것으로 입증되었다. 유사한 결과는, 뇌에 상당히 근접하는 700Da 미만의 비하전된 분자와 함께 기타 저분자량의 물질과 동일한 일반 원칙을 준수하여 흡수되는 것으로 관찰되는 글루코스 및 아미노산 접합체에 대해 수득되었다. 생분자의 접합된 형태의 화학적 합성을 고안하는데 있어서의 불편함, 예상치 않은 독성 효과에 대한 위험성 및 전반적인 신규 화합물에 대해 FDA 승인을 얻기 위한 필요성은 당해 방법에 대한 열망을 둔화시켰다.
양이온화된 알부민과 같은 단백질, 또는 트랜스페린 수용체에 대한 OX26 모노클로날 항체인 수송 벡터는 각각 흡착 매개 및 수용체 매개 트랜스사이토시스에 의해 BBB를 통과한다. 이들은 소량의 약제를 수송하는데 사용되어 왔다. 이러한 과정은 고가이고 모노클로날 항체 및 양이온화된 알부민을 제조하기가 어렵다는 단점을 갖고 있으며 기타 유형의 분자에는 적용될 수 없다. 또한, 양이온화된 단백질은 이의 면역원성과 신장에 침적되는 면역 복합체의 형성으로 인해 독성인 것으로 밝혀졌다.
우(Wu et al.(2002))등[문헌참조: J. Drug Target 10(3):239-45]은, 스트렙트아비딘(SA)과, 랫트 트랜스페린 수용체에 대한 쥐 OX26 모노클로날 항체의 접합체 및 bio-bFGF/OX26-SA로 명명된 벡터에 결합된 비오티닐화된 bFGF(bio-bFGF)의 접합체로 이루어진 약제 전달 벡터를 사용한, BBB를 통과하는 사람 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 단백질 신경보호제의 수송을 보고하였다. 이들은 말초 기관으로 [125I] 표지된 bio-bFGF를 상당히 흡수시키는 것으로 나타내지만 뇌 그람당 주사된 용량의 0.01% 만이 흡수된다. 또한, 이러한 과정은 약제의 공유적 변형을 필요로하고 제한된 부류의 약제에 대해서만 유용할 수 있다. 운반체는 또한 성분으로서, 환자에서 면역 반응을 유발하는 마우스 모노클로날 항체를 포함한다.
강(Kang et al.)등[문헌참조: J. Drug Target 8(6)]은 또한 BBB를 통과하여 펩타이드를 수송하기 위해 아비딘-비오틴 연결된 키메라 펩타이드를 사용하였지만 조직 그람당 주사된 용량의 0.12%만이 흡수되었다. 강 및 파르드릿지(Pardridge)[문헌참조: Pharm. Res. 11:1257-1264]은 양이온화된 사람 혈청 알부민을 중성의 경량 아비딘과 접합시켰고 이어서 이를 방사선표지된 비오틴과 결합시켰다. 비오틴 /cHSA/NLA 복합체는 24시간까지는 혈액에서 안정하지만 접합체는 뇌에서 선택적으로 분해되어 유리된 비오틴을 방출시킨다. 상기 언급된 바와 같이, 양이온화된 단백질은 이들의 면역원성때문에 독성인 것으로 밝혀졌다.
양이온화된 모노클로날 항체(mAb)가 또한 사용되었다. 파르드릿지(문헌참조: J. Neurochem. 70: 1781-2)는 고유한 사람화된 4D5 MAb가, 단지 단백질을 양이온화시킨 후에 흡착 매개 트랜스사이토시스에 의해 BBB를 통과한다는 것을 공초점 현미경으로 밝혔다. 그러나, 당해 방법은 모노클로날 항체를 제조하고 화학적으로 변형시키는 것이 고비용이라는 단점이 있고, 기타 유형의 분자에는 적용될 수 없다.
위트(Witt et al.(2000))등[문헌참조: J. Pharmacol. Exp. Ther. 295(3)]은 BBB를 통과시켜, 델타-오피오이드 수용체 선택적 펩타이드 D-페니실라민(DPDPE), Met-엔케팔린 유사체를 수송하기 위해 인슐린을 사용하였다. 그러나, 인슐린은 치료학적 전략으로서 이의 용도를 제한시키는 수많은 위험성을 수반한다. 또한, 다른 연구자들은 인슐린 수용체가 매우 선택적임을 밝혔다. 따라서, 키메라 펩타이드를 제조하기가 어려울뿐만 아니라 당해 전략은 협소한 부류의 약제학적 제제로 제한된다.
기타 연구자들은 예를 들어, 당펩타이드를 사용하여 약제를 글루코스에 접합시키는 것을 시도하였다. 그러나, BBB Glut1 수송체를 통해 임의의 당펩타이드가별로 수송되지 않는 것으로 입증되었다. Glut1 글루코스 수송체, 콜린 수송체 또는 LAT1 대형 아미노산 수송체와 같은 수송 비율이 높은 운반체 매개 수송체를 사 용하기 위한 시도는 운반체 수송체가 매우 선택적이어서 접합된 기질을 수용하지 못한다는 문제점 때문에 실패하였다. 이들은 또한 다중약제 내성 유전자의 구성원인 p-당단백질이, 장벽을 간신히 통과하는 임의의 약제를 포함하는 많은 소형분자를 뇌로부터 활발하게 제거하는데 신속하게 작용한다는 문제점을 갖고 있다.
LDL 수용체 뿐만 아니라, BBB는 또한 고친화성으로 LDL과 결합하는 II형 스캐빈저 수용체(SR)를 포함한다. 당해 스캐빈저 수용체는 특히, 아세틸화된 LDL과 같은 변형된 형태의 LDL에 대해 우수하다. SR에 결합하게 되면 세포유입만이 일어나고 목적하는 트랜스사이토시스는 일어나지 않는다. 리고티(Rigotti et al.)등[문헌참조: J. Biol. Chem. 270: 16221]은 아세틸화된 LDL이 BBB를 통과하여 수송되지 않는 반면 양이온화된 소 IgG가 보다 효과적임을 밝혔다[문헌참조: Bickel et al.(1993) Adv. Drug. Del. Rev. 10: 205-245]. 아세틸화된 LDL을 사용하여 트랜스사이토시스를 입증하지 못함으로써 이는 많은 연구자들이 LDL를 사용하는 추가의 실험을 시도하기 위한 의욕을 저하시켰다.
프로터(Protter et al.)등(WO 87/02061)은 약제학적 제제에 또는 제제를 함유하는 운반체에 공유적으로 접착된 ApoE 및 ApoB와 같은 아포지단백질로부터 유래하는 펩타이드를 사용하는 약제 전달 시스템을 기재하고 있다. 그러나, 분자 접합체의 사용은 단지 소수의 약제 부류로 제한되어 있고 상기 논의된 많은 문제점에 봉착된다.
뮬러(Muller et al.)등(미국 특허 제6,288,040호)은 ApoE 분자가 공유적으로 결합된 합성 폴리(부틸 시아노아크릴레이트) 입자의 용도를 기재하고 있다. 입자 표면은 추가로 계면활성제 또는 친수성 중합체의 공유적 접착에 의해 변형된다. 상기된 바와 같이, 당해 입자는 천연적으로 존재하지 않기때문에 이들은 바람직하지 못한 다양한 부작용을 가질 수 있다.
사마인(Samain et al.)등(WO 92/21330)은 고체 친수성 코어에 공유적으로 접착되고 또한 물질을 종양 또는 대식세포로 전달하기 위한 ApoB를 함유하는 지질 함유 합성 입자 운반체의 용도를 기재하고 있다. 그러나, 이들은 BBB를 통과하여 약제를 전달하기 위한 당해 벡터의 용도를 기재하고 있지 않다.
발명의 요약
본 발명은 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 뇌로 표적화시키고 전달하기 위한 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자의 용도에 관한 것이다. 그러나, 본 발명의 또 다른 목적은 구조적으로 안정하고 비면역원성이고 광범위한 약제가 분해되지 않고, 불활성화되지 않고, 가수분해되지않고 변형되지 않고 비표적 조직으로 흡수되지 않도록 하는 LDL 운반체를 합성하는 것이다. 본 발명은 치료제의 운반체로서 사용되는 LDL 입자 및 이전에 기재된 방법과 비교하여 당해 약제 및 제제를 BBB를 통과하여 전달하는 개선된 방법을 제공한다. 리포좀과는 다르게, 예를 들어, LDL 입자는 고체 입자이고 결과적으로 이는 리포좀보다는 구조적으로 보다 안정하다. 본 발명의 추가의 목적은 다양한 뇌 질환을 치료하고 예방하기 위해 LDL 운반체를 포함하는 조성물, 방법 및 키트를 제공하는 것이다.
본 발명은 접합된 치료제가 본 발명의 인공 LDL 입자에 혼입되는 것을 촉진하기 위해 친수성 치료제를 콜레스테롤과 접합시키는 방법을 제공한다. 바람직한 양태에서, 본 발명은 콜레스테롤-접합된 아드리아마이신 및 테트라사이클린을 제공한다. 당해 방법 및 수득한 콜레스테롤 접합체 및 당해 접합체의 조성물은, 뇌 모세관 내피 세포에서 콜레스테롤 및 필수 지방산을 뇌로 수송하기 위한 수단으로서 작용하는 수용체-매개 과정인 트랜스사이토시스에 의해 뇌 장벽을 통과하여 치료제를 수송할 목적으로 LDL 입자를 제공하는데 유용하고 이는 뇌 및 CNS의 다양한 질환 및 장애의 치료를 촉진시키고 개선시킨다. 또한, 본 발명의 콜레스테롤 접합체는, 접합체가 본 발명의 LDL 입자에 혼입되지 않은 상태로 BBB를 통과하는 상응하는 치료제의 전달을 위해 유용하다.
바람직한 양태에서, 본 발명의 콜레스테롤 접합체는 산재하는 내인성 에스테라제의 작용에 의해 치료제가 접합체로부터 방출될 수 있도록 하는 에스테르 결합을 통해 연결되어 있다. 본 발명의 콜레스테롤 접합체를 본 발명의 LDL 입자에 포함시켜 당해 에스테라제에 의한 가수분해로부터 콜레스테롤 접합체를 보호한다.
본 발명은 추가로, 난황 포스파티딜 콜린(EYPC), 콜레스테롤 올레에이트 및 아포지단백질 E3(ApoE3)를 포함하는 인공 LDL 입자를 제공한다. 성분 지질은 3개의 층을 포함하는 고체 입자를 형성한다: 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 활성제로 이루어진 고체 지질 코어; 포스파티딜 콜린의 지방산 쇄의 혼합물로 이루어진 중간 경계층 및 인지질 헤드 그룹 및 ApoE3로 이루어진 표면층.
본 발명의 LDL 입자는 모세관 내피 세포로 활성제의 표적을 상당히 증가시키고 트랜스사이토시스에 의한 혈뇌장벽을 통과하는 수송을 촉진시킨다. 치료제를 포위하는 단백질 및 인지질 성분은 또한 치료제가 분해되거나 비표적 세포로 흡수되는 것을 차단하는 작용을 한다.
본 발명은 또한 제제의 인공 LDL 입자-촉진된 전달을 기초로 질환, 경질환 및 증상을 치료하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 본 발명은 본 발명의 인공 LDL 입자를 사용하여 특정 제제를 뇌 조직으로 표적화시킴을 포함하는 다양한 뇌 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다.
본 발명은 외부 인지질 단층 및 고체 지질 코어를 포함하는 인공 LDL 입자를 제공하고 이때, 외부 인지질 단층은 하나 이상의 아포지단백질을 포함하고 고체 지질 코어는 하나 이상의 치료제를 포함한다. 한 양태에서, 하나 이상의 아포지단백질은 ApoA, ApoB, ApoC, ApoD 또는 ApoE, 또는 아포지단백질의 하나의 이소형(isoform) 또는 지단백질 및/또는 이소형의 배합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 양태에서, 하나 이상의 아포지단백질은 ApoE이다. 보다 바람직한 양태에서, 하나 이상의 아포지단백질은 ApoE2, ApoE3 및 ApoE4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 본 발명은 또한 LDL 복합체의 뇌 조직으로의 표적화된 전달을 증진시키는 추가의 표적화 분자 또는 제제를 추가로 포함하는 인공 LDL 입자에 관한 것이다. 가장 바람직한 양태에서, 하나 이상의 아포지단백질은 단독의 ApoE3 또는 하나 이상의 옥시스테롤 및/또는 ApoB 및 ApoE4로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 추가의 아포지단백질과 배합된 ApoE3이다.
본 발명은 혈뇌장벽을 통과하는 치료제의 수송을 위한 인공 LDL 입자를 제공한다. 바람직한 양태에서, 하나 이상의 치료제는 아미노산, 펩타이드, 단백질, 탄수화물 및 지질로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 양태에서, 하나 이상의 치료제는 콜레스테롤과, 아미노산, 펩타이드, 단백질, 탄수화물 및 지질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제제간에 형성되는 접합체이다. 바람직한 양태에서, 하나 이상의 치료제는 신경영양 인자, 성장 인자, 효소, 신경전달물질, 신경조절물질, 항생제, 항바이러스 제제, 항진균류 제제 및 화학치료제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
인공 LDL 입자의 외부 인지질 단층은 포스파티드산, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 인지질 또는 인지질의 배합물을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 외부 인지질 단층은 포스파티딜콜린 및 하나 이상의 아포지단백질을 포함한다.
본 발명의 인공 LDL 입자는 바람직한 직경이 약 15 내지 50nm인 입자이다. 보다 바람직한 양태에서, 인공 LDL 입자는 직경이 약 20 내지 30nm이다. 본 발명의 인공 LDL 입자는 바람직한 밀도가 약 1.00 내지 1.07g/ml이다. 보다 바람직한 양태에서, 인공 LDL 입자는 밀도가 약 1.02 내지 1.06g/ml이다. 추가로, 본 발명의 인공 LDL 입자는 2시간 이상의 혈청 안정성을 갖는다.
본 발명은 트랜스사이토시스에 의해 BBB를 통과하여 수송되는 인공 LDL 입자를 제공한다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 입자는 간과 비교하여 뇌에 대해 3배 큰 흡수 특이성을 갖는다.
본 발명의 인공 LDL 입자의 고체 지질 코어는 트리아실글리세롤, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 지방-아실 에스테르등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 지질을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 고체 지질 코어는 콜레스테롤이 포화 지방산(미리스테이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 아라키데이트, 리그노세레이트 등을 포함하지만 이에 제한되지 않음) 또는 불포화 지방산(팔미톨레에이트, 올레에이트, 백세네이트, 리놀레에이트, 리놀레네이트, 아라키도네이트등을 포함하지만 이에 제한되지 않음)으로 에스테르화된 콜레스테롤 에스테르를 포함한다. 보다 바람직한 양태에서, 고체 지질 코어는 콜레스테롤 에스테르 콜레스테롤 올레에이트를 포함한다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 인공 LDL 입자의 고체 지질 코어는 콜레스테롤과 아드리아마이신 또는 테트라사이클린간에 형성된 접합체인 하나 이상의 치료제를 포함한다. 바람직한 양태에서, 접합체의 콜레스테롤 및 치료제는 에스테르 결합에 의해 연결되어 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 인공 LDL 입자 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 치료제를 전달하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 아미노산, 펩타이드, 단백질, 탄수화물 및 지질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 치료제에 연결된 콜레스테롤을 포함하는 접합체를 제공한다. 바람직한 양태에서, 치료제는 신경영양 인자, 성장 인자, 효소, 신경전달물질, 신경조절물질, 항생제, 항바이러스 제제, 항진균류 제제 및 화학치료제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 보다 바람직한 양태에서, 본 발명의 접합체의 치료제는 아드리아마이신 또는 테트라사이클린이다. 가장 바람직한 양태에서, 본 발명의 접합체의 콜레스테롤 및 치료제는 에스테르 결합에 의해 연결된다. 본 발명의 각각의 접합체는 본원에 기재된 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합될 수 있고 임의의 본 발명의 약제 전달 방법에 사용된다.
본 발명은 또한, 1) 완충액중에 접합된 또는 비접합된 치료제를 함유하는 인지질을 현탁시키는 단계, 2) 당해 용액을 초음파 처리하여 외부 인지질 단층 및 고체 지질 코어를 형성하는 단계 및 3) 하나 이상의 아포지단백질을 포함하는 용액을 첨가하여 아포지단백질을 외부 인지질 단층에 혼입시키는 단계를 포함하는 본 발명의 인공 LDL 입자를 제조하는 방법을 제공한다. 바람직한 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 인공 LDL 입자는 직경이 10 내지 50nm이다.
본 발명은 또한 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 전달하는 방법을 제공하고 이때 당해 방법은 유효량의 본 발명의 조성물을 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여함을 포함한다.
본 발명은 또한 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 전달하기 위한 키트를 제공하고 당해 키트는 본 발명의 임의의 조성물를 포함하는 용기 및 사용 지침서를 포함한다.
본 발명은 또한 뇌 및 중추 신경계(CNS)의 질환, 예를 들어, 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환, 세균성 및 바이러스성 감염 및 암의 치료용 약물을 제조하는데 있어서 본 발명의 접합체, 인공 LDL 입자 및 조성물의 용도를 제공한다.
도 1은 방사선표지된 지질 및 LDL의 브롬화칼륨 밀도 구배 프로필을 나타낸다.
도 2는 뇌(좌측) 및 간(우측)에서 LDL 및 지질의 흡수를 나타낸 것이다.
도 3은 좌측에서는 뇌 및 간에서 LDL 흡수 대 지질 입자 흡수 비율을 나타내고 우측에서는 LDL 및 지질 입자에 대한 뇌 흡수 비율을 나타낸다.
도 4는 시간 경과에 따른 14C 표지된 LDL 입자의 혈장 수준을 나타낸다.
도 5는 프탈레이트 에스테르를 통해 콜레스테롤에 연결된 친수성 분자의 화학적 구조를 나타낸다. 밝혀진 특정 친수성 분자는 아드리아마이신이다. 접합 없이, 단독의 아드리아마이신은 매우 친수성이어서 LDL 입자로 혼입될 수 없다.
도 6은 티오에테르 에스테르를 통해 콜레스테롤에 연결된 친수성 분자의 화학적 구조를 나타낸다. 밝혀진 특정 친수성 분자는 테트라사이클린이다. 접착 없이, 단독의 테트라사이클린은 매우 친수성이어서 LDL 입자에 혼입될 수 없다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인공 LDL 입자"는 구형 인지질 단층 및 고체 지질 코어를 포함하는 구조를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "리포좀"은 구형 지질 이중층 및 수성 코어를 포함하는 구조를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "흡수 특이성"은 뇌 및 간에서 인공 LDL 입자 흡수 대 지질 입자(아포지단백질이 외부 인지질 단층에 포함되지 않는 것을 제외하고는 인공 LDL 입자와 동일함) 흡수의 비율을 언급한다. 인공 LDL 입자와 지질 입자의 흡수는 본원에 기재된 바와 같이 스프라그 돌리 랫트로 주사한지 2시간 후에 뇌 및 간 둘다에서 측정된다. 흡수 특이성은 뇌에서 인공 LDL 입자 흡수 대 지질 입자 흡수의 비율을 간에서 인공 LDL 입자 흡수 대 지질 입자 흡수의 비율로 나누어 계산된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "혈청 안정성"은 주사된 인공 LDL 입자가 75% 이상 혈장 중에 잔류하는 시간 길이를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아포지단백질" 및 "아포단백질"은 ApoA; ApoB; ApoC; ApoD, ApoE 및 각각의 모든 이소형을 포함하지만 이에 제한되지 않는 지단백질의 인지질의 단층과 연합된 단백질을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "ApoE"는 ApoE2, ApoE3 및 ApoE4를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 ApoE의 이소형을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "ApoB"는 ApoB48 및 ApoB-100을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 ApoB의 이소형을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "외부 인지질 단층"은, 인지질의 포스페이트 헤드 그룹이 외부로 배향되어 있고 지방-아실 쇄가 고형 지질 코어 방향의 내부로 배향되어 있는 하나 이상의 인지질을 포함하는 단층을 의미한다. 인지질은 포스파티드산, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "고체 코어"는 구형 인지질 단층에 의해 포위된 인공 LDL 입자의 부분을 의미한다. 고체 코어는 트리아실글리세롤, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 지방-아실 에스테르 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 지질을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "콜레스테롤 에스테르"는 포화 지방산(미리스테이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 아라키데이트, 리그노세레이트 등을 포함하지만 이에 제한되지 않음) 또는 불포화 지방산(팔미톨레에이트, 올레에이트, 백세네이트, 리놀레에이트, 리놀레네이트, 아라키도네이트 등을 포함하지만 이에 제한되지 않음)으로 에스테르화된 콜레스테롤을 언급한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료제"는 폴리뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오타이드, 유전자 등, 탄수화물 및 지질을 포함하지만 이에 제한되지 않는 치료학적으로 유용한 아미노산, 펩타이드, 단백질, 핵산을 의미한다. 본 발명의 치료제는 신경영양 인자, 성장 인자, 효소, 항체, 신경전달물질, 신경조절물질, 항생제, 항바이러스 제제, 항진균류 제제 및 화학치료제 등을 포함한다. 본 발명의 치료제는 약제, 프로드럭 및 치료제가 표적 조직으로 전달되는 경우 활성화될 수 있는 전구체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 활성 성분과 배합될 수 있고 배합 후 활성 성분을 대상체에 투여하는데 사용될 수 있는 화학적 조성물 또는 화합물을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "생리학적으로 허용되는" 에스테르 또는 염은 조성물이 투여될 대상체에 해롭지 않은 약제학적 조성물의 임의의 기타 성분과 화합할 수 있는 활성 성분의 에스테르 또는 염 형태를 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 "약제학적으로 허용되는 담체"는 또한 하기의 성분들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 부형제; 표면 활성제; 분산제; 불활성 희석제; 과립제 및 붕해제; 결합제; 윤활제; 감미제; 향제; 착색제; 방부제; 겔라틴과 같은 생리학적으로 분해가능한 조성물; 수성 비히클 및 용매; 지성 비히클 및 용매; 현탁제; 분산 제제 또는 습윤화제; 유화제, 진통제; 완충제; 염; 증점제; 충전제; 유화제; 산화방지제; 안정화제 및 약제학적으로 허용되는 중합체성 또는 소수성 물질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 약제학적 조성물중에 포함될 수 있는 기타 "추가의 성분"은 당업계에 공지되어 있고 예를 들어, 본원에 참조로서 인용되는 문헌[참조: Genaro, ed., 1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.,]에 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "유효량"은 치료학적 반응을 유발하기에 충분한 양이다.
LDL 입자 및 아포단백질의 성질
본 발명은 인공 LDL 입자가 트랜스사이토시스로서 공지된 활성 수용체 매개 과정에 의해 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 효율적으로 표적화하고 전달한다는 발견에 관한 것이다. 트랜스사이토시스는 천연적으로 뇌 모세관 내피 세포에서 콜레스테롤 및 필수 지방산을 뇌로 수송하는 수단으로서 일어난다. 따라서, 본 발명의 인공 LDL 운반체 시스템은 최소의 부작용과 최소로 BBB를 붕괴시키면서 약제를 뇌로 효과적으로 표적화하고 전달하는 수단을 제공한다.
천연 LDL 입자는 평균 직경이 약 22nm이다. 내부 코어는 대략 150 내지 200개의 트리글리세라이드 분자 및 1500 내지 2000개의 콜레스테릴 에스테르 분자로 이루어져 있다. 입자 표면은 약 450개의 인지질 분자, 185개의 스핑고마이엘린 분자 및 전형적으로 ApoB-100인 아포단백질의 단일 분자의 단층을 포함한다[문헌참조: Hevonoja et al.(2000) Biochim Biophys Acta 1488(3): 189-210]. 천연 LDL 입자는 또한 약 600개의 비에스테르화된 콜레스테롤 분자 및 소량의 리소포스파티딜 콜린, 포스파티딜에탄올아민, 디아실글리세롤, 세라미드 및 포스파티딜이노시톨 뿐만 아니라 극소량의 기타 생물학적 지질을 포함할 수 있다[문헌참조: Hevonoja et al.(2000) Biochim Biophys Acta 1488(3): 189-210]. ApoE를 포함하는 기타 아포단백질은 LDL, VLVL 및 HDL중에서 발견되지만 상이한 수용체 결합 성질을 갖고 있다[문헌참조: Bradly et al.(1984) J. Biol. Chem. 259(23): 14728-35].
LDL 입자의 표면은 따라서 아포단백질로 균일하게 덮여져 있지 않고 상이한 물성을 나타내는 상이한 영역으로 구성된다. 아포단백질 분자는 입자의 구조적 온전성을 유지하고 간 및 신장에서 및 혈뇌장벽에서 지단백질 수용체에 결합하는데 관여한다. 아포단백질은 지질 성분의 상태에 따라 구조적으로 변화된다[문헌참조: Mims et al.(1990) Biochemistry 29(28):6639-47].
아포단백질 E(ApoE)는 체내 전반에 걸쳐 콜레스테롤 수송 및 혈장 지단백질 대사에 관여하는 단백질이다. 말초 세포에서, ApoE는 콜레스테롤의 수송을 지시함에 의해 세포내 콜레스테롤 농도에 영향을 미친다. 뉴런에서, 콜레스테롤 수준의 변화는 알츠하이머 질환에서 변화되는, 동일한 부위에서 미소구 관련 단백질 tau의 인산화 상태에 영향을 미친다. ApoE는 3개의 주요 이소형을 갖는다: 1회 아미노산 치환에 의해 상이한 ApoE4, ApoE3 및 ApoE2. ApoE3은 정상적인 이소형인 반면 ApoE4 및 ApeE2는 기능부전이다. ApoE2는 III형 지단백질과다혈증과 관련되어 있다. ApoE4는 죽상동맥경화증 및 알츠하이머 질환, 손상된 인지 기능 및 감소된 신경돌기 과성장의 증가된 위험성과 관련이 있다. 연령을 무시한다면 ApoE4는 산발적 알츠하이머 질환에서 가장 중요한 위험 인자이다. ApoE4는 칼슘에 의존하여 독성 효과를 가질 수 있지만(문헌참조: Veinbergs et al. 2002) J. Neurosci. Res. (673): 379-87) 이의 주요 효과는 ApoE3에 의한 베타-아밀로이드의 제거를 손상시키는 것으로 나타난다(문헌참조: Holtzman et al. (2001) J. Mol. Neurosci. 17(2): 147-55). 이것은 혈뇌장벽에서 일어나는 것으로 밝혀졌고[문헌참조: Shibata et al. (2000) J. Clin. Invest. 106(12): 1489-99] 따라서 중요하게 치료학적으로 응용될 수 있다.
인공 LDL 입자 제조
바람직한 양태에서, 본 발명의 인공 LDL 입자는 난황 포스파티딜 콜린(EYPC), 콜레스테롤 올레에이트 및 ApoE3의 혼합물을 포함한다. 성분 지질은 하기 3층으로 이루어진 고체 입자를 형성한다[문헌참조: Hevonoja et al. (2000) Biochim. Biophys. Acta 1488: 189-210]: 콜레스테롤에 접합되거나 비접합될 수 있는, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르 및 활성 약제학적 제제를 함유하는 고체 지질 코어; 포스파티딜 콜린의 지방산 쇄의 혼합물을 포함하는 중간 계면층 및 인지질 헤드 그룹 및 ApoE3을 함유하는 표면 층.
고체 코어 및 ApoE3가 본 발명의 LDL 입자에 존재함으로써 수성 코어를 둘러싸는 구형 지질 이중층으로 이루어지고 불안정한 리포좀과는 구분된다. 추가로, LDL 입자는 천연의 비면역원성 성분으로 구성되어 있어 인공 나노입자, 분자 또는 화학적 접합체 또는 콜로이드 현탁제와는 구분된다. ApoE3은, 트랜스사이토시스의 활성 세포 매개 과정에 의해 연결부를 통해 전체 입자를 수송하는, 모세관 내피 세포상의 특정 수용체에 결합한다. 일단 뇌의 내부에 있게되면 콜레스테롤과 인지질이 점차적으로 뇌에 의해 흡수되고 사용됨으로써 치료제는 천연적으로 LDL 입자로부터 방출된다.
상기된 지질 성분이 바람직하지만, 본 발명은 기타 지질, 예를 들어, 화학적으로 변형된 지질 또는 기타 천연적으로 존재하는 친지성 분자의 혼합물을 포함하는 상이한 지질 조성의 LDL 입자가 또한 동일하게 적용할 수 있음을 고려한다. 당업자는 LDL 운반체 시스템을 특정 치료제 또는 치료학적 응용에 적합하게 변형시킬 수 있음을 이해할 것이다.
바람직하게, LDL 입자는 인공 LDL과 클로닝된 ApoE3으로 제조된다. 이것은 치료제가 LDL의 지질 중앙부로 효율적이고 안정하게 혼입되는 것을 촉진하고 가능한 해독후 변형된 변이체 또는 사람 공여체로부터 정제된 불순한 ApoE3 단백질로 인한 항원성의 문제점을 회피한다. 이것은 또한 혈액 매개 질환과 관련된 HIV 또는 기타 바이러스에 의한 ApoE3 또는 지질의 가능한 비고의적 오염을 회피한다. 당해 오염은 항상 사람 유래된 물질에 대한 심각한 결점이다.
바람직한 양태에서, 본 발명은 인산염 완충 식염수(PBS) 용액중에서 접합되거나 비접합된 약제를 함유하는 지질을 현탁시키는 단계 및 당해 용액을, 약 25와트 이상(22kHz에서 프로브의 18㎛의 증폭)을 전달할 수 있는 초음파처리기를 사용하여 질소 대기하에 54℃에서 초음파처리하는 단계를 포함하는 인공 LDL 입자를 제조하기 위한 변형된 마이크로에멀젼 방법에 관한 것이다. 당해 전력 수준은 BBB를 통과하는 수송을 촉진시키기에 적당한 크기(바람직하게는 직경 50nm 미만 및 보다 바람직하게는 직경 30nm 미만)의 LDL 입자를 제조하는데 중요하다. LDL 입자를 함유하는 샘플은 물 재킷 초음파 챔버(water-jacketed sonication chamber)를 사용하여 일정 온도, 바람직하게는 약 53 내지 56℃에서 유지된다. 초음파 처리 후, 지질 용액을 ApoE와 함께 항온처리하고 제조된 지단백질 입자를 285,000g에서 브롬화칼륨(KBr) 단계적 농도 구배하에 초원심분리하여 분리한다. 이어서 KBr을 PBS에 대해 투석하여 제거한다. 당해 입자를 향후 사용을 위해, 바람직하게는 2주까지 4℃에서 저장할 수 있다.
당업자는 당해 방법의 다양한 측면이 대체될 수 있음을 인지할 것이다. 예를 들어, 염화세슘 또는 슈크로스와 같은 기타 적합한 농도 구배 물질이 대용될 수 있다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 LDL 입자는 원심분리 대신 크기 배제 크로마토그래피, 전기영동 또는 기타 수단에 의해 분리될 수 있다.
본원에 기재된 제조 방법은 BBB를 통과하는데 적합한 크기를 갖고 불안정한 동시 혼입된 분자의 활성 및 구조적 안정성을 유지하는 약제 함유 LDL 입자를 제조한다. 뇌로 전달하기 위해, LDL 입자는 일반적으로 크기가 50nm 미만이어야만 하고 바람직한 직경 범위는 20 내지 30nm이다.
또 다른 바람직한 양태에서, 본 발명의 LDL 입자는 리포좀 g당 0.02 내지 0.2g의 비율로 존재하는 EYPC, 콜레스테롤 올레에이트 및 ApoE3의 혼합물을 포함하고 치료제의 효율적인 혼입을 제공하고 트랜스사이토시스에 의해 BBB를 통과한다. 보다 바람직한 양태에서, 범위는 리포좀 g당 0.08 내지 0.12g이다. 보다 바람직하게, EYPC 대 콜레스테롤 올레에이트 대 ApoE3의 몰비는 중량을 기준으로 23:2.2이다.
본 발명의 추가의 양태에서, LDL 기반 운반체 시스템은 표면층에 동시 혼입된 추가의 표적 분자를 함유하여 제제의 뇌로의 수송 및 전달을 촉진시킬 수 있다. 예를 들어, 콜레스테롤 하이드로퍼옥사이드, 콜레스테롤 에폭사이드 및 하이드록시콜레스테롤 유도체를 포함하는 콜레스테롤(옥시스테롤)의 산화된 유도체는 또한 흡수를 개선시키는데 사용될 수 있다. LDL 입자에는 또한 ApoB 또는 ApoE4와 같은 기타 아포단백질이 혼입될 수 있다.
본 발명은 또한 다양한 뇌 질환 또는 장애를 치료하기 위한 치료제를 포함하는 하나 이상의 광범위한 물질을 혼입하는 방법에 관한 것이다. LDL 운반체 시스템의 장점중 하나는 수용액내에서 화학적으로 불안정하거나 고도의 반응성이거나 용이하게 가수분해되는 것들을 포함하여 광범위한 약제 부류를 안정하고 자연스럽게 전달할 수 있다는 것이다.
가능한 제제의 목록은 뇌 손상 및 신경퇴행성 질환을 치료하기 위한 신경영양 인자, 예를 들어, NGF 또는 아밀로이드 전구체 단백질로부터 제조되는 신경영양 단편; 유전자 결함을 통해 소실된 것들을 대체하기 위한 효소, 예를 들어, 페닐알라닌 하이드록실라제; 파킨슨 질환에서 소실된 도파민을 재생하기 위한 효소, 예를 들어, 티로신 하이드록실라제 및 DOPA 데카복실라제; 소실된 생합성 기능을 회복하기 위한 효소 활성화제 또는 억제제; 감염성 질환을 치료하기 위한 항생제, 예를 들어, 테트라사이클린; 고통 또는 운동, 인식 및 행동 장애를 포함하는 증상을 치료하기 위한 신경전달물질 및 신경조절물질; 뇌종양 또는 허용가능한 용량이 전신적으로 투여되는 경우 뇌에서 충분한 양에 도달하지 못하는 제제와 관련된 증상을 치료하기 위한 화학치료제 및 항-AIDS 약제, 예를 들어, 에토포사이드, 리바비린 또는 항히스타민제, 예를 들어, 로라타딘, 펙소페나딘 또는 세르티리진(ZyrtecR); 가돌리늄 유도체, 이오헥솔 또는 이옥사글레이트 또는 전신 투여시 뇌로의 불량한 침투 때문에 현재 사용되고 있지 않은 제제와 같은 대비 매체를 포함하는 진단제; 천연 및 가공된 치료학적 또는 진단학적 단백질, 예를 들어, 항체 및 비침투적으로 BBB를 통과하여 도입될 수 있는 DNA, RNA 또는 아미노산으로 이루어진, 유전자 또는 단백질 또는 이의 일부를 암호화하는 치료학적 서열을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
LDL 운반체에 존재하는 치료제의 양은 분자 유형에 따라 광범위하게 다양할 것이다. LDL 담체중으로 최적의 혼입을 위해, 치료제의 양은 0.1몰/몰 미만의 콜레스테롤이어야만 한다. 보다 높은 수준이 LDL 입자를 불안정화시킬 수 있는 것으로 예상된다. 본 발명은 추가로 다중 약제 또는 추가의 제제가 동일한 입자에 존재할 수 있음을 고려한다.
한 양태에서, 활성 물질의 비공유적 변형은 본 발명의 LDL 입자내 혼입을 위해 요구되고, 단, 물질은 콜레스테롤과의 마이크로에멀젼으로서 잔류하기에 충분한 소수성이어야 한다. 이것은 대부분의 중성 및 약간 하전된 분자의 경우에 그러하다.
또 다른 양태에서, 예를 들어, 치료제가 DNA 또는 펩타이드와 같이 또는 분산을 차단하기 위해 고도로 하전되어 있는 경우, 당해 제제는 공유적으로 콜레스테롤과 연결될 수 있다. 바람직한 양태에서, 에스테르 결합에 의해 연결되고 이는 제제가 뇌 조직에 산재하는 에스테라제에 의해 방출될 수 있도록 한다[문헌참조: Yordanov et al., (2002) J. Med., Chem. 45(11): 2283-8; Yang et al. (1995) Pharm. Res. 12(3): 329-36]. 또한, 당업자라면 이들중에서 또한 균등하게 작용할 기타 접착 방식, 예를 들어, 포스파티딜 콜린, 몇몇 기타 친지성 화합물 또는 ApoE 자체로의 공유 접착 방식을 선별할 수 있다.
상기된 바와 같이, 본 발명의 LDL 입자는 페길화된 리포좀, 나노입자 및 유사한 인공 물질과 같은 기타 운반체와 비교되는 경우 몇가지 장점을 갖고 있다. 본 발명의 LDL 입자는 정상적인 혈장 성분으로 구성되고 이들의 천연 수용체와 결합하고 외부 필수 지방산에 대한 뇌의 고유 요구사항에 대한 일부로서 정상적인 경로에 의해 세포로 수송된다. 따라서, 이들의 독성은 세포막의 온전성을 붕괴시키는 중합체 계열 운반체 및 제제보다 상당히 낮다. 약제를 뇌로 전달하기 위해 사용되는 현재의 방법은 만니톨을 사용한 BBB의 삼투압성 파괴이다. 그러나 BBB를 파괴시키는 것은 무엇보다 독소 및 심지어 바이러스가 심각한 동조 효과를 가질 수 있는 바람직한 치료제와 함께 뇌로 진입할 수 있다는 사실로 인해 심각한 결점을 갖는다.
본 발명의 인공 LDL 운반체 시스템은 또한 이들이 2시간 이상동안 혈장에 고수준으로 잔류한다는 장점을 제공한다(도 4). 이것은 물질의 뇌로의 적절한 흡수 및 전달을 위해 충분히 효과적인 혈장 농도(흔히, "혈장 농도 곡선하의 면적" 또는 AUC로 언급됨)를 유지하는데 중요하다.
구체적으로, 실시예 3에 나타낸 바와 같이 뇌 조직을 표적화함에 의해, 본 발명의 인공 LDL 입자는, 약제가 간으로 흡수되어 무독화 경로에 의해 불활성화(P450과 같은 간 효소에 의한 불성화를 포함)될 가능성이 훨씬 적기 때문에 약제의 치료학적 효능을 상당히 증가시킨다.
인공 LDL 입자를 포함하는 조성물
본 발명의 LDL 입자는 치료될 뇌 질환의 종류에 따라 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 따라서, 본 발명은 이의 범위내에, 사람의학 또는 수의학용으로 사용하기 위해 제형화된 하나 이상의 약제 함유 LDL 입자 복합체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 당해 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제, 임의로 보충 약물 제제와 함께 사용하기 위해 제공될 수 있다. 통상적인 담체는 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 허용가능한 담체는 글루코스, 식염수 및 인산 완충 식염수를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
유리된 치료제 또는 기타 비혼입된 분자를 제거하기 위한 처리 후, LDL 입자 현탁액은 환자 투여용으로서, 약제학적으로 허용되는 담체중에 목적하는 농도로 조정된다. LDL 입자는 너무 커서 경구적으로 효율적으로 흡수될 수 없기 때문에, 조성물은 정맥내 사용을 위해 의도되지만 또한 근육내 또는 동맥내 또는 심지어 경구적으로 또는 구강으로 적당히 변형시켜 투여될 수 있다.
따라서, 본 발명은 LDL 입자내 함유된 선택된 활성제 및 약제학적으로 허용되는 담체, 바람직하게는 수성 담체의 용액을 포함하는, BBB로 표적화된 투여용의 조성물을 제공한다. 수득한 조성물은 키트에 사용하기 위해 멸균되고 팩키징될 수 있거나 무균 조건하에 여과되고 동결건조될 수 있다. 동결건조된 제제를 함유하는 정맥내 투여용 키트는 또한 투여전 혼합하기 위한 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
당해 조성물은 pH 조정제 및 완충제, 등장성 조정제등과 같은 근사한 생리학적 조건에 요구되는 바와 같은 약제학적으로 하용되는 보조 물질, 예를 들어, 나트륨 아세테이트, 나트륨 락테이트, 염화나트륨, 염화칼륨 및 염화칼슘을 함유할 수 있다.
이들 제형중에 LDL 입자의 농도는 즉, 약 0.5중량% 미만에서, 일반적으로 약 1%에서 또는 1% 이상에서, 5 내지 10중량% 만큼 광범위할 수 있다. 정맥내 투여용의 LDL 입자 제제를 제조하기 위한 추가의 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 당해 방법은 예를 들어, 문헌[참조: Joel G. Hardman(Editor), Lee E. Limbird McGraw-Hill Professional; ISBN: 0071354697; 10th edition(August 13, 2001)]에 상세하게 기재되어 있다.
인공 LDL 운반체를 사용한 치료학적 방법
추가의 양태에서, 인공 LDL 입자는 BBB를 통과하여 뇌로 약제를 효과적으로 전달하기 위해 치료를 필요로 하는 포유동물 숙주에게 투여될 수 있다. 치료에 사용하기 위해, 약제 함유 LDL 입자의 유효량은 LDL 입자가 모세관 내피 세포에 의해 흡수될 수 있도록 하는 임의의 방식으로 대상체에 투여될 수 있다.
임상적 적용에서, LDL 입자 전달 시스템은 알츠하이머 질환, 파킨슨 질환 및 뇌암의 치료에 사용하기 위한 약제의 치료학적 효능을 상당히 증진시킨다. 예를 들어, 신경영양 인자, 예를 들어, 신경 성장 인자는 LDL 입자에 혼입될 수 있고 이는 펩타이드가 뇌로 흡수될 수 있도록 한다. 이것은 새로운 신경 합성 과정의 성장을 유발하여 다수의 신경퇴행성 질환에 이로울 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 당업자는 본 발명의 LDL 운반체 시스템을 사용하여 다양한 또 다른 임상에 적용할 수 있음을 인지할 것이다.
치료제의 콜레스테롤-접합체
콜레스테롤은 상대적으로 화학적 불활성인 분자이다. 결과적으로, 콜레스테롤은 아민 함유 치료제와 콜레스테롤을 반응시키기 전에 활성화되어야만 한다. 예를 들어, 콜레스테롤은 카복실 그룹을 함유하는 프탈레이트 또는 숙시네이트 에스테르를 생산하는 무수 프탈산 또는 무수 숙신산과 같은 사이클릭 무수물과 반응하여 활성화될 수 있다. 이어서, 카복실 그룹은 펜타플루오로페놀과 반응하여 활성화되고 이어서 디이소프로필카보디이미드와 반응하여 아민 함유 치료제와 함께 아미드 연결을 생성한다. 수득한 생성물은 콜레스테롤 치료제 접합체이고 여기서, 치료제는 에스테르 연결을 통해 콜레스테롤과 접합된다. 콜레스테롤-치료제 접합체는 충분히 친지성이어서 본 발명의 인공 LDL 입자에 혼입될 수 있다. 또한, 바람직한 연결은 에스테르 결합이기 때문에, 치료제는 산재하는 내인성 에스테라제의 작용에 의해 콜레스테롤 잔기로부터 방출될 수 있다. 따라서, 접합체로부터 치료제의 방출은 라이소좀에서 발견되는 엄중한 조건 및 비특이적 펩티다제의 작용에 의존하지 않는다. 콜레스테롤과 치료제간의 바람직한 연결은 에스테르 결합이지만 본 발명은 에테르, 아미드 및 펩타이드 결합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 또 다른 연결을 고려한다.
또한 아민- 또는 하이드록실-함유 치료제는 PMPI(이에 제한되지 않음)와 같은 티오콜레스테롤, 치료제 및 이작용성 가교 연결 시약과 반응시켜 티오콜레스테롤과 접합될 수 있다. 수득한 접합체는 티오에테르 연결에 의해 연결된 콜레스테롤과 치료제의 접합체이다. 치료제가 아미노 그룹을 포함하는 경우, 이것은, 숙신이미딜-4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는 많은 시판되는 이작용성 가교결합제중 하나를 사용하여 티오콜레스테롤에 접합될 수 있다.
일단 형성된 콜레스테롤-치료제 접합체는 본원에 기재된 바와 같은 비접합된 콜레스테롤 올레에이트, 인지질, 지단백질과 혼합될 수 있고 이에 의해 본 발명의 인공 LDL 입자가 생성된다.
상기 인용된 각각의 참조문헌은 이의 전반적인 내용이 본원에 참조로서 인용된다.
하기의 실시예는 본 발명을 추가로 설명하기 위한 것이고 어떠한 방식으로 이의 범위를 제한하는 것으로서 해석되지 말아야 한다.
실시예 1: 전장 아포단백질 E(ApoE)의 정제
제조원[Avanti Polar Lipids, Inc]의 DMPC (1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린)을 유리관에서 100mg/ml의 농도로 벤젠중에 현탁시키고 벤치 탑 초음파처리기를 사용하여 초음파 처리한다. DMPC 현탁액을 포장 동결시키고 밤새 동결건조시킴에 이어서 30ml의 표준 완충액(10mM Tris-HCl, pH 7.6, 0.15M NaCl, 1mM EDTA, 0.0005% NaN3)중에 재현탁시켜 10 내지 20mg/ml의 DMPC를 제조하고 플라스틱 50ml의 원뿔형 튜브로 옮긴다. 당해 튜브를 물 욕종 놓고 4회 10분 간격으로 중간에 2 내지 3분 냉각시키면서 마이크로팁을 갖는 초음파처리기를 사용하여 초음파처리한다. 용액이 거의 투명해질때까지 초음파 처리를 반복한다. 이어서 초음파처리된 DMPC를 20분동안 2000rpm에서 원심분리하여 초음파처리동안에 박리되는 임의의 티타늄을 제거한다.
클로닝된 ApoE를 발현하는 세균 세포를 원심분리기로 수거하고 30초동안 고강도의 4회 초음파처리하고 2분동안 냉각 간격을 별도로 수행하면서, 대형 팁을 갖는 브란슨 소니파이어(Branson Sonifier)에서 빙상에서 초음파처리한다. 초음파처리된 현탁액을 20분동안 4℃에서 39,000 x g로 원심분리하여 세포 파편을 제거하고 상등액을 본래의 배양 배지 리터당 100mg으로 DMPC와 배합한다. 혼합물을 24℃(이는 DMPC에 대한 전이 온도이다)에서 물 욕조에서 항온처리한다.
이어서 DMPC-ApoE 혼합물의 밀도를 고체 KBr을 첨가하여 1.21g/ml로 상승시 키고 단계적 농도 구배(1.21, 1.10 및 1.006g/ml)하에 15℃에서 60 Ti 벡크만 고정된 각도 로터에서 55.000rpm으로 밤새 원심분리한다. 유리된 DMPC를 함유하는 튜브의 선단 근처의 백색 밴드를 버리고 1.009g/ml의 밀도에서 그 아래 부유하는 ApoE-DMPC를 제거한다. ApoE의 존재를 겔 전기영동으로 확인한다. 이어서 적당한 분획물을 3회 교환되는 완충액에 대한 4℃에서 0.1M NH4HCO3 및 0.0005%의 NaN3에 대해 투석한다.
이어서 단백질을 트롬빈으로 분해하여 벡터에 의해 남겨진 폴리히스티딘 태그를 제거한다. 활성화된 트롬빈을 트롬빈:ApoE의 1:500의 비율(w:w)로 단백질과 혼합하고 1시간이상동안 37℃에서 항온처리하고 분취액을 겔 전기영동으로 분석하여 단백질이 완전히 절단되었음을 확인한다. 2개의 절단 부위가 존재하기 때문에 불완전한 절단이 고분자량인 제2 밴드를 생성시킨다. 완전한 절단이 일단 입증된 경우, 베타-머캅토에탄올을 1% 최종 농도로 가하여 반응을 종료한다. ApoE를 이어서 50ml 산 세척된 튜브에서 포장 동결시키고 밤새 동결건조시킨다.
이어서 ApoE를 30ml 냉각 클로로포름/메탄올(2:1 v/v)로 세척하고 4℃에서 10분동안 J6 벡크만 원심분리로 1500rpm에서 원심분리하여 수거한다. 펠렛을 소용적의 냉각 메탄올중에 재현탁시키고 볼텍싱하고 이어서 당해 튜브를 냉각 메탄올로 채우고 원심분리한다. 당해 단계는 임의의 잔류 클로로포름을 제거한다. 메탄올을, 이의 소량이 튜브에 잔류하도록 부어버리고 이를 볼텍싱하여 펠렛으로부터 페이스트를 제조한다. 6M 구아니딘-HCl. 0.1M 트리스 HCl, pH 7.4, 0.01% EDTA, 1% 베타-머캅토에탄올 및 0.0005% 나트륨 아지드를 함유하는 5ml을 세파크릴 S-300 칼럼(4M 구아니딘-HCl, 0.1M 트리스-HCl, pH 7.4, 0.1% 베타-머캅토에탄올 및 0.0005% NaN3로 평형화되어 있음)에 로딩한다. 단백질을 0.1%의 베타-머캅토에탄올 및 0.0005%의 나트륨 아지드를 함유하는 4M 구아니딘 완충액으로 용출시킨다. 분획물을 4회 완충액을 교환하면서 0.1M NH4HCO3 및 0.0005% NaN3에 대해 투석한다. 정제된 ApoE를 YM10 아미콘 센트리프렙 농축기(Millipore)를 사용하여 농축시켜 최종농도가 1 내지 2mg/ml이 되도록 하고 -20℃에서 저장한다.
실시예 2: LDL-리포좀의 ApoE 집적
1. 지질 케이크의 제조: 난황 포스파티딜콜린(25mg) 및 콜레스테릴 올레에이트(2mg)을 메탄올/클로로포름(2:3)중에 25:1의 비율로 용해시킨다. 용매를 질소하에 4℃에서 증발시킨다.
2. 리포좀의 제조: 지질 케이크를, 이전에 질소 가스하에 버블링된 0.1M 염화칼륨을 함유하는 10mM Tris-HCl 완충액(pH 8.0) 12ml중에 수화시킨다. 당해 혼합물을 54℃에서 질소 기류하에 18㎛ 출력에서 1시간동안 초음파처리하고 원심분리하여 초음파처리동안에 생성된 임의의 티타늄 입자를 제거한다.
3. 인공 LDL의 제조: 단계 2에서 제조된 리포좀을 37℃에서 30분동안 1/10(w/w) 단백질/지질의 비율에서 ApoE 단백질로 항온처리한다. 당해 리포좀을 이어서 정제하고 밀도가 각각 1.064, 1.019 및 1.006g/cm3인 3층 KCl 단계적 농도 구배를 사용하여 4℃에서 18시간동안 285,000 x g에서 밀도 농도 구배 초원심분리하여 농축시키고 원심분리 튜브 바닥에 적용한다. 옵티실(Optiseal) 튜브는 초원심분리 단계를 위해 적합하다. 원심분리 후, 리포좀은 튜브의 정상으로부터 대략 4분의 1의 거리에 있는 협소한 유백색층으로 가시화된다. 당해 층을 제거하고 1mM EDTA를 함유하는 PBS(인산 완충 식염수)에 대해 4℃에서 밤새 투석한다. LDL 현탁액은 7시간동안 안정하고 아르곤 또는 질소하에 -20℃에서 저장할 수 있다.
실시예 3: 뇌에서 인공 LDL 입자의 흡수
대략 1mg의 지질을 함유하는, PBS중의 14C-LDL 현탁액을 스프라그 돌리 랫트(150g)의 꼬리 정맥에 주사한다. 다양한 간격으로, 혈액 샘플을, EGTA를 함유하는 주사기를 사용하여 심근에 구멍을 내어 채취한다. 혈장, RBC 및 조직을 물에서 파쇄하고 섬광 계수기로 14C를 측정하였다.
도 2는 뇌(좌측) 및 간(우측)에서의 LDL 및 지질의 흡수 결과를 보여준다. 수컷 스프라그 돌리 랫트의 정맥으로 14C-콜레스테롤을 함유하는 LDL 또는 지질 입자를 주사하고 뇌 및 간에서의 방사선활성을 2시간 후 측정하였다. 뇌 및 간은 ApoE의 존재를 제외하고는 동일한 조성물의 지질 입자와 비교하여 LDL로부터 각각 19.8 및 4.7배 더 표지물을 흡수한다. 이것은 흡수가 LDL 수용체에 의해 매개되는 트랜스사이토시스에 의해 유발됨을 지적한다(p(>T)=0.00055).
도 3(좌측)은 뇌 및 간에서 LDL 흡수와 지질 입자 흡수의 비율을 보여준다. 뇌는 간과 비교하여 지질 입자 보다 높은 %의 LDL을 혼입하고 이것은 간과 비교하여 표적 기관에 대해 LDL에 4배 이상 특이적임을 제안한다. 도 3(우측)은 LDL과 지질 입자에 대한 뇌 흡수 대 간 흡수의 비율을 보여준다. 기관 특이성의 또 다른 측정인 뇌: 간 비율은 지질 입자에 대한 것 보다 LDL에 대해 보다 높다(p(>T)-0.0003). 다른 말로, 5.88배 더 지질 입자가 뇌 보다는 간에 의해 흡수되는 반면 단지 1.36배 크게 LDL 입자가 뇌 보다 간에 의해 흡수된다는 것이다(p(>T)=0.034).
도 4는 시간에 따른 14C 표지된 LDL 입자의 혈장 수준을 보여준다. 혈액 14C는 LDL의 주사후 2시간 이상동안 일정한 상태로 있고 이는 당해 표지가 순환하면서 기타 기관에 의해 제거되지 않음을 지적한다.
실시예 4: 14C 콜레스테롤과 1급 아민의 접합
콜레스테롤-프탈레이트 에스테르의 제조: 콜레스테롤(1mg)을 질소로 증발시키고 동결건조시켜 에탄올을 제거한다. 고체를 최소 용적의 THF에 용해시키고 유리 반응 바이엘에 옮긴다. 고체 무수 프탈산(1 내지 2mg, >4당량)을 첨가함에 이어서 50Et3N을 첨가한다. 당해 혼합물을 5분동안 100℃에서 가열하고 약 20㎕의 피리딘을 첨가하여 현탁액이 투명해지도록 한다. 당해 혼합물을 용액이 적색이 될때까지 30분동안 100℃에서 가열하고 EtOH/톨루엔(2:1)으로 TLC(실리카/UV254 플레이트)상에서 정제한다. 최고의 암색 UV 밴드(RF=0.74)를 플레이트로부터 박리 분리하고 생성물을 THF로 용출시킨다(수율: 98=100%).
펜타플루오로페놀을 사용한 카복실 그룹의 활성화: THF중의 펜타플루오로페놀(PFP) 10mg을 콜레스테롤 프탈레이트에 첨가함에 이어서 5㎕의 DIIC(디이소프로필카보디이미드)를 첨가한다. 용액을 반응 바이엘중에서 실온에서 1시간동안 반응시키고 활성화된 콜레스테롤-프탈레이트-PFP를 TLC(CHCl3/CH3OH 30:5)로 정제하고 THF(수율: 100%)로 용출시킨다.
활성화된 아미드의 제조: THF중의 활성화된 콜레스테롤-프탈레이트-PFP를 증발시켜 10㎕가 되도록 하고 DMF중에 용해된 2당량의 1급 아민을 첨가한다. DMF는 부작용을 일으킬 수 있지만 이는 과량의 아민이 존재한다면 문제가 되지 않는다. 메탄올 또는 에탄올과 같은 알콜의 첨가는 수율을 크게 감소시킬 것이다. 3㎕의 DIIC를 첨가하고 용액을 RT에서 밤새 반응시키고 TLC(CHCl3/CH3OH 30:5)로 정제한다(수율 98%). 중요하게, 정제용으로 실리카 겔 G-25 UV254 플레이트(Alltech 809021)를 사용하였다. 실리카 겔 60 플레이트는 정제를 손상시키는 불명확하여 구분되지 않는 밴드를 생성한다.
실시예 5: 아드리아마이신-콜레스테롤(I)의 합성
THF중의 활성화된 콜레스테롤-프탈레이트-PFP를 증발시켜 10㎕가 되게한다. DMF중에 용해된 2당량의 아드리아마이신을 첨가한다. DMF와의 부반응은 과량의 아민을 사용하여 감소시킬 수 있다. 메탄올 또는 에탄올과 같은 알콜의 첨가는 수율을 크게 감소시킬 것이다. 3㎕의 DIIC를 첨가하고 용액을 RT에서 밤새 반응시키고 TLC(CHCl3/CH3OH 30:5)로 정제한다(수율: 95%). 당해 밴드는 아드리아마이신-DIIC 접합체 및 생성물을 함유한다. 콜레스테롤-아드리아마이신 접합체를 100%의 CH3OH중에서 C18-역상 HPLC(유속 = 0.5ml/분, 검출 = A471)로 분리할 수 있다. 당해 생성물은 콜레스테롤과 아드리아마이신사이의 중간 지점인 4.7분에서 용출한다. 총 수율은 95%이다. 아드리아마이신-콜레스테롤 접합체(I)의 구조는 도 5에 나타낸다.
실시예 6: 하이드록시 함유 화합물과 14C 콜레스테롤의 접합
N-[p-말레이미도페닐]이소시아네이트(PMPI)(5mg)을 200㎕의 DMSO중에서 1당량의 하이드록시 함유 화합물과 혼합하고 실온에서 30분동안 반응시킨다. 티오콜레스테롤(6.4mg)을 첨가한다. 당해 혼합물을 실온에서 120분동안 항온처리하고, 생성물을, 용매로서 EtOH/H2O 1:1을 사용하고 0.1M EDTA pH 8.0으로 미리 피복된 실리카 겔 G UV254 플레이트를 사용하는 박층 크로마토그래피로 분리한다.
실시예 7: 테트라사이클린-콜레스테롤(II)의 합성
테트라사이클린을 동결건조시켜 임의의 용매를 제거하고 200㎕의 DMSO중의 2.2mg 테트라사이클린을 5mg의 PMPI와 혼합하고 실온에서 30분동안 반응시킨다. 티오콜레스테롤(6.4mg)을 첨가한다. 혼합물을 실온에서 120분동안 항온처리하고 생성물을, 용매로서 EtOH/H2O 1:1을 사용하고 0.1M EDTA pH 8.0으로 미리 피복된 실리카 겔 G UV254 플레이트를 사용하는 박층 크로마토그래피로 분리한다. 테트라사 이클린-콜레스테롤 접합체(II)의 구조는 도 6에 도시되어 있다
문헌참조
하기에 열거된 참조문헌 각각은 이의 전반적이 내용이 본원에 참조로서 인용된다.
Figure 112005029727118-pct00001
Figure 112005029727118-pct00002

Claims (41)

  1. 혈뇌장벽을 통과하여 친수성 치료제를 전달하기 위한, 외부 인지질 단층 및 고체 지질 코어를 포함하는 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자로서,
    외부 인지질 단층이 하나 이상의 아포지단백질 E(ApoE)를 포함하고,
    고체 지질 코어가 아드리아마이신 및 테트라사이클린으로부터 선택된 하나 이상의 친수성 치료제 및 콜레스테롤을 포함하는 하나 이상의 접합체를 함유하는,
    인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 하나 이상의 아포지단백질 E가 ApoE3인, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  4. 제3항에 있어서, 외부 인지질 단층이 하나 이상의 옥시스테롤; ApoB 및 ApoE4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 추가의 아포지단백질; 또는 이들 둘 다를 추가로 포함하는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제1항에 있어서, 외부 인지질 단층이 포스파티딜콜린 및 하나 이상의 추가의 아포지단백질을 포함하는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  10. 제9항에 있어서, 하나 이상의 추가의 아포지단백질이 ApoE인, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  11. 제1항에 있어서, 15 내지 50nm의 직경을 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  12. 제1항에 있어서, 20 내지 30nm의 직경을 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  13. 제1항에 있어서, 1.00 내지 1.07g/ml의 밀도를 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  14. 제1항에 있어서, 1.02 내지 1.06g/ml의 밀도를 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  15. 제1항에 있어서, 2시간 이상의 혈청 안정성을 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  16. 제1항에 있어서, 혈뇌장벽(BBB)를 트랜스사이토시스(transcytosis)에 의해 통과하여 수송되는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  17. 제1항에 있어서, 간과 비교하여 뇌에 대해 3배 이상의 흡수 특이성을 갖는,인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  18. 제1항에 있어서, 친수성 치료제가 아드리아마이신인, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  19. 제1항에 있어서, 친수성 치료제가 테트라사이클린인, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  20. 제18항에 있어서, 접합체의 콜레스테롤과 아드리아마이신이 에스테르 결합에 의해 연결되는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  21. 제19항에 있어서, 접합체의 콜레스테롤과 테트라사이클린이 에스테르 결합에 의해 연결되는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  22. 외부 단층내에 ApoE를 포함하는 외부 포스파티딜콜린 단층, 및
    지방 아실-콜레스테롤 에스테르, 및 아드리아마이신 및 테트라사이클린으로부터 선택된 하나 이상의 친수성 치료제 및 콜레스테롤을 포함하는 하나 이상의 접합체를 포함하는 고체 지질 코어
    를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 친수성 치료제를 전달하기 위한, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  23. 제22항에 있어서, 고체 지질 코어가 콜레스테롤을 추가로 포함하는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  24. 제22항에 있어서, 외부 단층내 ApoE가 ApoE3인, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자.
  25. 제1항에 따른 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 친수성 치료제를 전달하기 위한 조성물.
  26. 제4항에 따른 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 친수성 치료제를 전달하기 위한 조성물.
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 1) 아드리아마이신 및 테트라사이클린으로부터 선택된 하나 이상의 친수성 치료제 및 콜레스테롤을 포함하는 하나 이상의 접합체를 함유하는 인지질을 완충 용액 중에 현탁시키는 단계;
    2) 당해 용액을 초음파처리하여 외부 인지질 단층 및 고체 지질 코어를 형성하는 단계; 및
    3) 하나 이상의 아포지단백질 E(ApoE)를 포함하는 용액을 첨가하여 ApoE를 외부 인지질 단층에 혼입시키는 단계를 포함하는, 제1항에 따른 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자의 제조방법.
  35. 제34항에 있어서, 제조된 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자가 10 내지 50nm의 직경을 갖는, 인공 저밀도 지단백질(LDL) 입자의 제조방법.
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 제25항에 따른 조성물을 포함하는 용기 및 사용 지침서를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 전달하기 위한 키트.
  40. 제26항에 따른 조성물을 포함하는 용기 및 사용 지침서를 포함하는, 혈뇌장벽을 통과하여 물질을 전달하기 위한 키트.
  41. 삭제
KR1020057010146A 2002-12-03 2003-12-02 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체 KR101186210B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43047602P 2002-12-03 2002-12-03
US60/430,476 2002-12-03
PCT/IB2003/005558 WO2004050062A2 (en) 2002-12-03 2003-12-02 Artificial low-density lipoprotein carriers for transport of substances across the blood-brain barrier

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117016597A Division KR101111477B1 (ko) 2002-12-03 2003-12-02 치료제와 연결된 콜레스테롤을 포함하는 접합체

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20050084163A KR20050084163A (ko) 2005-08-26
KR101186210B1 true KR101186210B1 (ko) 2012-10-08

Family

ID=32469478

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117016597A KR101111477B1 (ko) 2002-12-03 2003-12-02 치료제와 연결된 콜레스테롤을 포함하는 접합체
KR1020057010146A KR101186210B1 (ko) 2002-12-03 2003-12-02 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117016597A KR101111477B1 (ko) 2002-12-03 2003-12-02 치료제와 연결된 콜레스테롤을 포함하는 접합체

Country Status (9)

Country Link
US (4) US7220833B2 (ko)
EP (1) EP1581186A2 (ko)
JP (2) JP4995423B2 (ko)
KR (2) KR101111477B1 (ko)
CN (2) CN100386068C (ko)
AU (1) AU2003302676A1 (ko)
CA (2) CA2791165C (ko)
TW (1) TWI347196B (ko)
WO (1) WO2004050062A2 (ko)

Families Citing this family (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1596828B1 (en) 2003-02-14 2011-12-28 Children's Hospital & Research Center at Oakland Lipophilic drug delivery vehicle and methods of use thereof
JP4786538B2 (ja) * 2003-10-01 2011-10-05 チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド 親油性薬物送達ビヒクルおよびその使用方法
WO2007021735A2 (en) * 2005-08-10 2007-02-22 William Llewellyn Use of phospholipid arachidonic acids for increasing muscle mass in humans
US8252338B2 (en) * 2005-11-10 2012-08-28 The Regents Of The University Of California Synthetic LDL as targeted drug delivery vehicle
US20070122800A1 (en) * 2005-11-23 2007-05-31 Seoju Lee Methods for quantifying polymer attachment to a particle
JP5358187B2 (ja) 2005-12-15 2013-12-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド ポリユビキチンを標的とする方法と組成物
TWI334784B (en) * 2006-04-14 2010-12-21 Buck Inst For Age Res Compositions and methods for suppression of amyloid plaque formation associated with neurodegenerative disorders
US20100150928A1 (en) 2006-05-04 2010-06-17 Geneetech, Inc. Methods and compositions relating to zpa polypeptides
RS56986B1 (sr) 2006-07-14 2018-05-31 Ac Immune Sa Humanizovana antitela na beta amiloid
CL2007002070A1 (es) 2006-07-14 2008-02-08 Ac Immune S A Genentech Inc Anticuerpo quimerico o humanizado, o fragmentos de ellos, que se adhieren especificamente a por lo menos un epitopo en la proteina beta-amiloide; molecula de acido nucleico que lo codifica; composicion que lo comprende; su uso para tratar enfermedade
EP2478903A1 (en) 2006-07-28 2012-07-25 Blanchette Rockefeller Neurosciences Institute Compositions comprising activators of PKC and inhibitors of PKC ubiquitination
DE102007006663A1 (de) * 2007-02-10 2008-08-21 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Transport von Arzneistoffen über die Blut-Hirn-Schranke mittels Apolipoproteinen
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
US20090110739A1 (en) * 2007-05-15 2009-04-30 University Of North Texas Health Science Center At Forth Worth Targeted cancer chemotherapy using synthetic nanoparticles
BRPI0812478A2 (pt) 2007-06-12 2017-05-16 Ac Immune Sa anticorpo quimérico ou um fragmento do mesmo, ou anticorpo humanizado ou um fragmento do mesmo, molécula de ácido nucleico, vetor de expressão, célula, composição, métodos de prevenir, tratar ou aliviar os efeitos d euma ou mais doenças, de diagnosticar uma doença ou condição associada com amilóide em um indivíduo, de determinar a extensão de carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou fluidos corporais de um indivíduo, de desagregar fibras beta-amilóides pré-formadas e de prevenir degradação de neurônios induzidas por abeta, kit de teste, região variável de cadeia, e, linhagem de célula
NZ601843A (en) 2007-06-12 2014-01-31 Ac Immune Sa Monoclonal anti beta amyloid antibody
CN101998863B (zh) 2007-10-05 2015-09-16 基因技术公司 抗淀粉状蛋白β抗体在眼病中的用途
US20100297242A1 (en) * 2007-10-17 2010-11-25 Tae-Gwan Park Ldl-like cationic nanoparticles for deliverying nucleic acid gene, method for preparing thereof and method for deliverying nucleic acid gene using the same
US9550827B2 (en) 2007-10-19 2017-01-24 The Regents Of The University Of California Methods for ameliorating and preventing central nervous system inflammation
US7902147B2 (en) * 2007-11-05 2011-03-08 Duke University Chronic lymphocytic leukemia prognosis and treatment
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
EP2229411B1 (en) * 2007-12-12 2019-02-27 University Health Network High-density lipoprotein-like peptide-phospholipid scaffold ("hpps") nanoparticles
WO2009158678A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 Children's Hospital & Research Center At Oakland Lipophilic nucleic acid delivery vehicle and methods of use therefor
EP2318832B1 (en) 2008-07-15 2013-10-09 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
RU2536937C2 (ru) 2008-10-14 2014-12-27 Дженентек, Инк. Варианты иммуноглобулина и их применения
BRPI0919564A2 (pt) 2008-10-22 2019-09-24 Genentech Inc modulação da degeneração do axônio
US8734853B2 (en) 2008-11-17 2014-05-27 University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth HDL particles for delivery of nucleic acids
BRPI0918204A2 (pt) 2008-12-23 2015-12-08 Genentech Inc igv variante composição farmaceutica e kit
CA2772715C (en) 2009-09-02 2019-03-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US20120328609A1 (en) 2009-10-22 2012-12-27 Genentech, Inc. Modulation of Axon Degeneration
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
ES2565208T3 (es) 2009-12-11 2016-04-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-VEGF-C y métodos de uso de los mismos
RU2559542C2 (ru) 2009-12-23 2015-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против bv8 и их применение
TWI472348B (zh) 2009-12-30 2015-02-11 Ind Tech Res Inst 可通過血腦障壁之胜肽及包含此胜肽之傳輸系統
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CA2835489C (en) 2010-05-10 2018-03-06 Chi-Huey Wong Zanamivir phosphonate congeners with anti-influenza activity and determining oseltamivir susceptibility of influenza viruses
US9107890B2 (en) 2010-07-08 2015-08-18 Blanchette Rockefeller Neurosciences Institute PKC activators and anticoagulant in regimen for treating stroke
WO2012016173A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Ac Immune S.A. Safe and functional humanized antibodies
US9289488B2 (en) 2010-08-12 2016-03-22 Ac Immune Sa Vaccine engineering
US9597312B2 (en) 2010-08-19 2017-03-21 Cognitive Research Enterprises, Inc. Treatment of cognitive disorders associated with abnormal dendritic spines using PKC activators
AU2011312205B2 (en) 2010-10-05 2015-08-13 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
JP6371526B2 (ja) 2010-10-07 2018-08-08 エーシー イミューン エス．エー． タウを認識するリン酸化部位特異的抗体
CN103189050B (zh) 2010-10-26 2017-09-29 Ac免疫有限公司 包含通过疏水部分修饰的肽的基于脂质体的构建体
CA2815840A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
TWI689314B (zh) 2010-11-30 2020-04-01 建南德克公司 低親和力血腦障壁受體抗體及其用途
US20140037552A1 (en) 2011-02-15 2014-02-06 Domokos Máthé Prussian blue based nanoparticle as multimodal imaging contrast material
EP2709670A4 (en) 2011-05-18 2015-01-21 Childrens Hosp Medical Center TARGETED ADMINISTRATION OF PROTEINS ACROSS THE HEMATO-ENCEPHALIC BARRIER
WO2013043864A1 (en) * 2011-09-23 2013-03-28 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to endothelial targeting
EP2764022B9 (en) 2011-10-07 2017-02-22 AC Immune S.A. Phosphospecific antibodies recognising tau
EP2766028B1 (en) 2011-10-14 2017-08-16 F. Hoffmann-La Roche AG Peptide inhibitors of bace1
AR088827A1 (es) 2011-11-10 2014-07-10 Genentech Inc Metodos para tratar, diagnosticar, y monitorear la enfermedad de alzheimer
WO2013071281A1 (en) 2011-11-13 2013-05-16 Blanchette Rockefeller Neurosciences Institute Esters of dcpla and methods of treatment using the same
EP2776018B1 (en) 2011-11-13 2021-08-25 Cognitive Research Enterprises, Inc. Pkc activators and combinations thereof
US9644038B2 (en) 2011-12-21 2017-05-09 The Regents Of The University Of California Apolipoprotein nanodiscs with telodendrimer
SG11201406347TA (en) 2012-04-05 2014-11-27 Ac Immune Sa Humanized tau antibody
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
MX2014014234A (es) 2012-05-22 2015-05-07 Genentech Inc Benzamidas n-sustituidas y su uso en el tratamiento del dolor.
CA2871695A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted dipyridylamines and uses thereof
US8877236B2 (en) * 2012-06-28 2014-11-04 Universita Degli Studi Di Milano-Bicocca Liposomes active in-vivo on neurodegenerative diseases
KR101663436B1 (ko) 2012-07-06 2016-10-06 제넨테크, 인크. N-치환된 벤즈아미드 및 이의 사용 방법
AU2013306098A1 (en) 2012-08-18 2015-02-12 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
WO2014031762A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
AR092684A1 (es) 2012-09-27 2015-04-29 Hoffmann La Roche Compuestos de sulfonamida sustituidos
AU2013204200B2 (en) 2012-10-11 2016-10-20 Brandeis University Treatment of amyotrophic lateral sclerosis
JP6426100B2 (ja) * 2012-10-19 2018-11-21 ヴェクト−オリュスＶｅｃｔ−Ｈｏｒｕｓ 薬物送達のための組成物及び方法
WO2014111496A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 F. Hoffmann-La Roche Ag 3-substituted pyrazoles and use as dlk inhibitors
KR20150131233A (ko) 2013-03-14 2015-11-24 제넨테크, 인크. 치환된 트리아졸로피리딘 및 이의 사용 방법
EP2970452A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 AC Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
CA2907912A1 (en) 2013-05-01 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag C-linked heterocycloalkyl substituted pyrimidines and their uses
MY182082A (en) 2013-05-01 2021-01-18 Hoffmann La Roche Biheteroaryl compounds and uses thereof
US10086054B2 (en) 2013-06-26 2018-10-02 Academia Sinica RM2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
US9782476B2 (en) 2013-09-06 2017-10-10 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
RS58376B1 (sr) 2013-10-11 2019-04-30 Hoffmann La Roche Supstituisana heterociklična sulfonamidna jedinjenja korisna kao modulatori trpa1
WO2015058191A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Blanchette Rockefeller Neurosciences Institute Halogenated esters of cyclopropanated unsaturated fatty acids for use in the treatment of neurodegenerative diseases
MX2016008110A (es) 2013-12-20 2016-08-19 Hoffmann La Roche Derivados de pirazol como inhibidores de la cinasa de cremallera de leucina dual (dlk) y usos de los mismos.
EP3094352B1 (en) 2014-01-16 2020-09-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
WO2016114819A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
ES2694857T3 (es) 2014-02-04 2018-12-27 Genentech, Inc. Smoothened mutante y métodos de uso de la misma
WO2015148975A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Alkon Daniel L Compositions and methods to treat niemann-pick disease
WO2015148915A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
AU2015267045B2 (en) 2014-05-27 2021-02-25 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
KR20220151036A (ko) 2014-05-27 2022-11-11 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
CA2950577A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Academia Sinica Fucosidase from bacteroides and methods using the same
KR102494193B1 (ko) 2014-05-28 2023-01-31 아카데미아 시니카 항-ｔｎｆ-알파 글리코항체 및 이의 용도
US10005724B2 (en) 2014-07-07 2018-06-26 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use thereof
EP3191500A4 (en) 2014-09-08 2018-04-11 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
EP3221364B1 (en) 2014-11-19 2020-12-16 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
SI3221349T1 (sl) 2014-11-19 2021-02-26 Axon Neuroscience Se Humanizirano tau protitelo pri alzheimerjevi bolezni
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US10149826B2 (en) * 2015-01-20 2018-12-11 Hyalo Technologies, LLC Method of preparing microspheres
KR102630294B1 (ko) 2015-01-24 2024-01-26 아카데미아 시니카 암 마커 및 이를 사용하는 방법
EP3248005B1 (en) 2015-01-24 2020-12-09 Academia Sinica Novel glycan conjugates and methods of use thereof
CN107614521B (zh) 2015-01-30 2022-02-08 台湾地区“中央研究院” 增进抗体功效的通用糖型组合物及方法
CN107636170A (zh) 2015-02-04 2018-01-26 健泰科生物技术公司 突变型Smoothened及其使用方法
WO2016142310A1 (en) 2015-03-09 2016-09-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Tricyclic dlk inhibitors and uses thereof
WO2016183252A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Alkon, Daniel, L. Treatment of neurodegenerative conditions using pkc activators after determining the presence of the apoe4 allele
KR20180008761A (ko) 2015-05-22 2018-01-24 제넨테크, 인크. 치환된 벤즈아미드 및 이의 이용 방법
US20160346221A1 (en) 2015-06-01 2016-12-01 Autotelic Llc Phospholipid-coated therapeutic agent nanoparticles and related methods
PE20221008A1 (es) 2015-06-24 2022-06-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-receptor de transferrina con afinidad disenada
CA2991655A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Peptinovo Biopharma, Llc Formulations for improving the efficacy of hydrophobic drugs
US11207461B2 (en) 2015-07-30 2021-12-28 Anoop U. R Drug delivery system and method for controlled and continuous delivery of drugs into the brain by bypassing the blood brain barrier
JP2018526371A (ja) 2015-08-27 2018-09-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療化合物及びその使用方法
US10935544B2 (en) 2015-09-04 2021-03-02 Obi Pharma, Inc. Glycan arrays and method of use
WO2017048778A1 (en) * 2015-09-18 2017-03-23 Oklahoma Medical Research Foundation Method of transporting an agent across blood-brain, blood-cochlear or blood-cerebrospinal fluid barrier
US20180256537A1 (en) 2015-09-23 2018-09-13 Tapan K. Khan Methods for survival and rejuvenation of dermal fibroblasts using pkc activators
PE20181004A1 (es) 2015-10-02 2018-06-26 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
WO2017062924A1 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Alkon Daniel L Dosing regimens of pkc activators
EP3380466A1 (en) 2015-11-25 2018-10-03 Genentech, Inc. Substituted benzamides useful as sodium channel blockers
CN105483076B (zh) * 2015-12-23 2019-01-25 中国科学院生物物理研究所 一种脂肪体的制备方法及其应用
CN109071625A (zh) 2016-02-04 2018-12-21 柯瑞斯公司 平滑化突变体和其使用方法
WO2017156192A1 (en) 2016-03-08 2017-09-14 Academia Sinica Methods for modular synthesis of n-glycans and arrays thereof
US10980894B2 (en) 2016-03-29 2021-04-20 Obi Pharma, Inc. Antibodies, pharmaceutical compositions and methods
BR112018070097A2 (pt) 2016-03-29 2019-02-12 Obi Pharma, Inc. anticorpo, hibridoma, composição farmacêutica, método para tratar câncer em um indivíduo, método para inibir a proliferação de células cancerígenas, método para diagnosticar o câncer em um indivíduo, método para tratar um paciente humano, método para fazer imagens de um indivíduo, conjugado de fármaco-anticorpo (adc), método para tratar câncer, anticorpo biespecífico e método para preparar uma população de anticorpos homogêneos
EP3436432B1 (en) 2016-03-30 2021-01-27 Genentech, Inc. Substituted benzamides and methods of use thereof
EP3445395A4 (en) 2016-04-22 2019-12-25 OBI Pharma, Inc. ANTI-CANCER IMMUNOTHERAPY BY IMMUNO-ACTIVATION OR IMMUNOMODULATION THROUGH GLOBO SERIES ANTIGENS
CN109476640B (zh) 2016-07-20 2022-02-25 豪夫迈·罗氏有限公司 双环脯氨酸化合物
EP3487849A1 (en) 2016-07-20 2019-05-29 H. Hoffnabb-La Roche Ag Sulfonylcycloalkyl carboxamide compounds as trpa1 modulators
TWI752988B (zh) 2016-07-27 2022-01-21 台灣浩鼎生技股份有限公司 免疫性/治療性聚醣組合物及其用途
TWI786054B (zh) 2016-07-29 2022-12-11 台灣浩鼎生技股份有限公司 人類抗體、醫藥組合物、及其方法
EP3497093B1 (en) 2016-08-12 2021-09-15 F. Hoffmann-La Roche AG Sulfonyl pyridyl trp inhibitors
CN109963868B (zh) 2016-08-22 2023-11-14 醣基生医股份有限公司 抗体、结合片段及使用方法
EP3518901A1 (en) * 2016-09-30 2019-08-07 Eriochem USA, LLC Apo-e modified lipid nanoparticles for drug delivery to targeted tissues and therapeutic methods
EP3526219B1 (en) 2016-10-17 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Bicyclic pyridone lactams and methods of use thereof
AU2017361549B2 (en) 2016-11-21 2023-12-21 Obi Pharma, Inc. Conjugated biological molecules, pharmaceutical compositions and methods
WO2018096159A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Oxadiazolones as transient receptor potential channel inhibitors
TW201831478A (zh) 2016-12-02 2018-09-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 雙環醯胺化合物及其使用方法
US11072607B2 (en) 2016-12-16 2021-07-27 Genentech, Inc. Inhibitors of RIP1 kinase and methods of use thereof
JP7178357B2 (ja) 2017-03-07 2022-11-25 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー オキサジアゾール一過性受容器電位チャネル阻害剤
EP3601273B1 (en) 2017-03-24 2021-12-01 Genentech, Inc. 4-piperidin-n-(pyrimidin-4-yl)chroman-7-sulfonamide derivatives as sodium channel inhibitors
CN110914271A (zh) 2017-07-14 2020-03-24 豪夫迈·罗氏有限公司 二环酮化合物及其使用方法
AU2018348930A1 (en) 2017-10-11 2020-03-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic compounds for use as RIP 1 kinase inhibitors
AU2018358883A1 (en) 2017-10-30 2020-04-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies
EP3704097B1 (en) 2017-10-31 2023-10-25 F. Hoffmann-La Roche AG Bicyclic sulfones and sulfoxides and methods of use thereof
US11649246B2 (en) 2017-11-30 2023-05-16 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Salts of 4-amino-N-(l-((3-chloro-2-fluorophenyl)amino)-6-methylisoquinolin-5-yl)thieno[3,2-D]pyrimidine-7-carboxamide, and crystalline forms thereof
AR114585A1 (es) 2018-02-20 2020-09-23 Hoffmann La Roche Proceso para preparar compuestos antagonistas de canales potenciales transitorios del receptor de 1-arilsulfonil-pirrolidin-2-carboxamida y formas cristalinas de los mismos
EP3759098A1 (en) 2018-02-26 2021-01-06 Genentech, Inc. Pyridine-sulfonamide compounds and their use against pain and related conditions
US10710994B2 (en) 2018-03-19 2020-07-14 Genentech, Inc. Oxadiazole transient receptor potential channel inhibitors
SG11202008098TA (en) 2018-03-28 2020-10-29 Axon Neuroscience Se Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
JP2021519788A (ja) 2018-03-30 2021-08-12 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ナトリウムチャネル阻害剤としての縮合環ヒドロピリド化合物
US20190307892A1 (en) * 2018-04-04 2019-10-10 Eriochem Usa, Llc Targeted drug delivery and therapeutic methods using apo-e modified lipid nanoparticles
CN112074519A (zh) 2018-04-20 2020-12-11 豪夫迈·罗氏有限公司 作为rip1激酶抑制剂用于治疗e.g.肠易激综合征（ibs）的n-[4-氧代-2,3-二氢-1,5-苯并氧氮杂-3-基]-5,6-二氢-4h-吡咯并[1,2-b]吡唑-2-甲酰胺衍生物和有关化合物
TW202003490A (zh) 2018-05-22 2020-01-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療性化合物及其使用方法
CN110604821A (zh) * 2018-06-14 2019-12-24 复旦大学 一种淀粉样蛋白β短肽介导的脑靶向递送系统
TW202035444A (zh) 2018-06-27 2020-10-01 台灣浩鼎生技股份有限公司 用於糖蛋白工程的糖苷合成酶變體及其使用方法
CN108685875B (zh) * 2018-07-30 2020-11-03 中国药科大学 一种抗阿尔兹海默症的天然纳米粒-药物组合物及其制备方法和应用
US11517685B2 (en) 2019-01-18 2022-12-06 Qnovia, Inc. Electronic device for producing an aerosol for inhalation by a person
US11690963B2 (en) 2018-08-22 2023-07-04 Qnovia, Inc. Electronic device for producing an aerosol for inhalation by a person
EP3847154A1 (en) 2018-09-03 2021-07-14 F. Hoffmann-La Roche AG Carboxamide and sulfonamide derivatives useful as tead modulators
EP3863453A4 (en) * 2018-10-18 2022-11-23 Qnovia, Inc. ELECTRONIC DEVICE FOR PRODUCING AN AEROSOL INTENDED TO BE INHALED BY A PERSON
CN109323910B (zh) * 2018-12-03 2021-01-08 徐州市中心医院 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法
EP3908586B1 (en) 2019-01-11 2022-12-21 F. Hoffmann-La Roche AG Bicyclic pyrrolotriazolr ketone compounds and methods of use thereof
CN114728905A (zh) 2019-11-13 2022-07-08 基因泰克公司 治疗性化合物及使用方法
CN115151562A (zh) 2019-12-04 2022-10-04 Ac免疫有限公司 用于治疗和诊断的新分子
CN111150834A (zh) * 2020-01-06 2020-05-15 吉林大学 一种载脂蛋白e与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用
WO2021186079A1 (en) * 2020-03-20 2021-09-23 Heidelberg University Colloidal carrier systems for transfer of agents to a desired site of action
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
US20230322908A1 (en) 2020-08-14 2023-10-12 Ac Immune Sa Humanized Anti-TDP-43 Binding Molecules and Uses Thereof
MX2023003759A (es) 2020-10-02 2023-04-24 Genentech Inc Proceso para la preparacion de compuestos de biheteroarilo y formas cristalinas de estos.
US20230365618A1 (en) * 2020-10-12 2023-11-16 Durect Corporation Crystalline thiocholesterol
EP4229082A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 AC Immune SA Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
EP4358936A1 (en) * 2021-06-22 2024-05-01 Bio-TRIP B.V. Nucleic acid containing nanoparticles
WO2023028077A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Genentech, Inc. Sodium channel inhibitors and methods of designing same
WO2023028056A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Genentech, Inc. 3-amino piperidyl sodium channel inhibitors
TW202332429A (zh) 2021-11-24 2023-08-16 美商建南德克公司 治療性化合物及其使用方法
US20230203062A1 (en) 2021-11-24 2023-06-29 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
WO2023156549A1 (en) 2022-02-16 2023-08-24 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
US11951177B2 (en) 2022-03-23 2024-04-09 Nanovation Therapeutics Inc. High sterol-containing lipid nanoparticles
WO2023194565A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules
WO2023233042A1 (en) * 2022-06-03 2023-12-07 Bio-Trip B.V. Polyvalent molecule based lipid nanoparticles for nucleic acid delivery
KR20230171408A (ko) * 2022-06-13 2023-12-20 (주) 멥스젠 아포지단백질을 포함하는 하이브리드 나노입자의 합성 방법
WO2024079662A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Meiragtx Uk Ii Limited Upf1 expression constructs

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3828106A (en) * 1972-01-03 1974-08-06 Biolog Concepts Inc Novel oral pharmaceutical dosage form
EP0238645A1 (en) 1985-10-03 1987-09-30 Biotechnology Research Partners, Ltd. Novel lipoprotein-based drug-delivery systems
FR2609399A1 (fr) 1987-01-13 1988-07-15 Ire Celltarg Sa Procede d'incorporation d'un ou plusieurs principes actifs lipophiles dans des lipoproteines, lipoproteines obtenues et composition pharmaceutique les contenant
FR2664500B1 (fr) * 1990-07-13 1994-10-28 Lille Ii Universite Droit Sant Procede de preparation d'une lipoproteine modifiee par incorporation d'une substance active lipophile, lipoproteine modifiee ainsi obtenue et composition pharmaceutique ou cosmetique la contenant.
FR2677272B1 (fr) 1991-06-05 1995-03-03 Biovecteurs As Vecteur particulaire a tropisme selectif, procede de preparation et composition pharmaceutique.
BR9201168A (pt) * 1992-04-02 1994-04-12 Zerbini E J Fundacao Microemulsoes usadas como velculo para carregar quimioterapicos as celulas neoplasicas
US5851510A (en) * 1994-05-16 1998-12-22 The Board Of Regents Of The University Of Michigan Hepatocyte-selective oil-in-water emulsion
GB9620153D0 (en) * 1996-09-27 1996-11-13 Univ Strathclyde Non-naturally occurring lipoprotein particle
EP0964690B1 (en) * 1996-10-15 2003-07-09 The Liposome Company, Inc. Peptide-lipid conjugates, liposomes and liposomal drug delivery
US6261537B1 (en) * 1996-10-28 2001-07-17 Nycomed Imaging As Diagnostic/therapeutic agents having microbubbles coupled to one or more vectors
SE9702776D0 (sv) 1997-07-22 1997-07-22 Pharmacia & Upjohn Ab Method of preparing pharmaceutical compositions
DE19745950A1 (de) * 1997-10-17 1999-04-22 Dds Drug Delivery Service Ges Arzneistoffträgerpartikel für die gewebespezifische Arzneistoffapplikation
KR100314496B1 (ko) * 1998-05-28 2001-11-22 윤동진 항혈전성이 있는 헤파린 유도체, 그의 제조방법 및 용도
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
EP1880736A1 (en) * 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same

Also Published As

Publication number Publication date
TWI347196B (en) 2011-08-21
US7220833B2 (en) 2007-05-22
AU2003302676A1 (en) 2004-06-23
JP5587352B2 (ja) 2014-09-10
EP1581186A2 (en) 2005-10-05
JP2012131799A (ja) 2012-07-12
CA2507762C (en) 2013-02-05
KR101111477B1 (ko) 2012-02-23
US20040204354A1 (en) 2004-10-14
JP4995423B2 (ja) 2012-08-08
CN101284136A (zh) 2008-10-15
TW200501999A (en) 2005-01-16
US20070264351A1 (en) 2007-11-15
JP2006516539A (ja) 2006-07-06
US7576055B2 (en) 2009-08-18
WO2004050062A3 (en) 2004-12-29
CA2791165A1 (en) 2004-06-17
CA2507762A1 (en) 2004-06-17
AU2003302676A8 (en) 2004-06-23
KR20110086775A (ko) 2011-07-29
CA2791165C (en) 2015-02-24
US7514402B2 (en) 2009-04-07
US7682627B2 (en) 2010-03-23
US20070134313A1 (en) 2007-06-14
US20070292413A1 (en) 2007-12-20
CN100386068C (zh) 2008-05-07
KR20050084163A (ko) 2005-08-26
CN1717223A (zh) 2006-01-04
WO2004050062A2 (en) 2004-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101186210B1 (ko) 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체
US7803400B2 (en) Artificial low-density lipoprotein carriers for transport of substances across the blood-brain barrier
Lasic Recent developments in medical applications of liposomes: sterically stabilized liposomes in cancer therapy and gene delivery in vivo
Zhdanov et al. Cationic lipid–DNA complexes—lipoplexes—for gene transfer and therapy
Wiethoff et al. Barriers to nonviral gene delivery
US7060291B1 (en) Modular targeted liposomal delivery system
EP2288336B1 (en) Nanostructures suitable for sequestering cholesterol
JP2000509394A (ja) 細胞膜を横切って物質を輸送するためのポリペプチド結合体
Boomer et al. Cytoplasmic delivery of liposomal contents mediated by an acid-labile cholesterol-vinyl ether-PEG conjugate
JP2000516630A (ja) 全身への送達を増加させる新規のリポソーム複合体
US20010048940A1 (en) Cationic amphiphile micellar complexes
JP3691850B2 (ja) 薬物の標的化送達のためのヘムを有するマイクロパーティクル
EP1231895B1 (en) Modular targeted liposomal delivery system
JP2002518313A (ja) カチオン性両親媒性ミセル複合体
Patel et al. Role of Transferrin Receptors In Brain Targeting Delivery
KR20140041304A (ko) 소수성기를 포함하는 모이어티가 접합된 엘라스틴-유사 폴리펩티드, 화학 감응제 및 항암제를 포함하는 리포좀 및 그의 용도
Maruyama Liposomes
Sarma et al. CNS DELIVERY OF DRUG VIA LOW-DENSITY LIPOPROTEIN RECEPTOR (LDLr) MEDIATED TRANSCYTOSIS

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
A107 Divisional application of patent
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
J201 Request for trial against refusal decision
B701 Decision to grant
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150904

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160908

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170911

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180905

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190910

Year of fee payment: 8