CN109323910B - 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法 - Google Patents

一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109323910B
CN109323910B CN201811472111.7A CN201811472111A CN109323910B CN 109323910 B CN109323910 B CN 109323910B CN 201811472111 A CN201811472111 A CN 201811472111A CN 109323910 B CN109323910 B CN 109323910B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ldl
density lipoprotein
low
density
dialysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201811472111.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109323910A (zh
Inventor
庞慧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xuzhou Central Hospital
Original Assignee
Xuzhou Central Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xuzhou Central Hospital filed Critical Xuzhou Central Hospital
Priority to CN201811472111.7A priority Critical patent/CN109323910B/zh
Publication of CN109323910A publication Critical patent/CN109323910A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109323910B publication Critical patent/CN109323910B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/34—Purifying; Cleaning
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6806—Determination of free amino acids
    • G01N33/6812—Assays for specific amino acids

Abstract

本发明属于物质提取技术领域，具体涉及一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法，根据密度不同离心去除血浆中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白，提取剩余的血浆加入溴化钾调密度为1.045g/mL，再进行离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白，使用磷酸缓冲盐溶液透析降低K+浓度，低密度脂蛋白透析前后K+浓度的全自动生化分析仪所测结果与渗透压仪检测结果相比较，如透析至与磷酸缓冲盐溶液渗透压无明显差异，则认为溴化钾被完全透析，进而获取高纯度低密度脂蛋白。上述方法可以获取高纯度的低密度脂蛋白满足现有的实验要求。

Description

一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法
技术领域
本发明属于物质提取技术领域，具体涉及一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法。
背景技术
血脂是血清中胆固醇、甘油三酯和类脂等的总称，血脂不溶于水，必须与载脂蛋白结合形成脂蛋白才能溶于血液，被运输至组织进行代谢。低密度脂蛋白胆固醇(Low-density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C)是血液中胆固醇含量(约50％)最多的脂蛋白，故LDL-C浓度基本能反应血液低密度脂蛋白(LDL)总量。另外，LDL能够被氧化为氧化型LDL(Oxidized Low-density Lipoprotein，Ox-LDL)。
用于脂蛋白分析的三种常见超速离心法是：分析性超速离心、区带超速离心、制备性超速离心，在超速离心过程中各类脂蛋白因其密度不同而上浮速度各异，各类脂蛋白可通过依次增加血浆密度而分离。目前市场上用于科研的LDL主要分为冻干粉及液体两种保存形式。如实验需要高浓度LDL进行干预，冻干粉往往不能够被溶剂完全溶解，且冻干粉本身就容易造成LDL生物活性减低，而液体LDL的浓缩主要采用风干的方法，也容易影响其生物活性。LDL提取过程中加入大量溴化钾(KBr)调密度，需要透析后才能用于后续实验，但是LDL透析的时间各不相同，尚无统一标准。这与透析时LDL的体积与磷酸缓冲盐溶液(PBS)的体积比，换液时间间隔及次数，透析袋宽度等多个因素有关。并且很多实验室透析袋都是经过洗净、灭菌等步骤后回收利用的，这样对透析袋反复多次处理，会明显影响透析的效率。血浆LDL的常规提取量一般较少，如实验需大量LDL时，单个体单次采血量难以满足要求。但单个体多次采血、多个体单次采血或者多个体多次采血均不能保证LDL活性的批间差异，更无法保证实验结果的稳定性及可重复性。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足之处，本发明提供一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法，采用超速离心机固定角式转头密度梯度离心法，通过溴化钾调整血浆密度，实现各类脂蛋白的逐层分离，利用琼脂糖凝胶电泳鉴定血浆低密度脂蛋白纯度，全自动生化分析仪测定低密度脂蛋白及K+浓度，渗透压仪检测透析前后低密度脂蛋白的渗透压，具体包括以下步骤：
根据密度不同离心去除血浆中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白，提取剩余的血浆加入溴化钾调密度为1.045g/mL，再进行离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白，使用磷酸缓冲盐溶液透析降低K+浓度，低密度脂蛋白透析前后K+浓度的全自动生化分析仪所测结果与渗透压仪检测结果相比较，如透析至与磷酸缓冲盐溶液渗透压无明显差异，则认为溴化钾被完全透析，进而获取高纯度低密度脂蛋白。
进一步地，将上述步骤中离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白吸取后，提取第二层并加入溴化钾调密度为1.045g/mL，再次离心得到高浓度低密度脂蛋白。
进一步地，将上述步骤中离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白吸取后，提取第二层和第三层，并混合后加入超纯水调密度为1.045g/mL，再次离心获得纯度较高的低密度脂蛋白。
本发明采用固定角式转头密度梯度离心法，加入KBr调整血浆的密度，实现各类脂蛋白的逐层分离。再利用渗透压仪、全自动生化分析仪、琼脂糖凝胶电泳纯化及鉴定血浆LDL。提取的LDL透析至与PBS缓冲液渗透压无明显差异时，可以认为KBr已被完全去除；将第一次离心去除LDL的第二层调密度后，再次离心得高浓度LDL；混合第二、三两层或仅第二层调密度后，仍可离心得到高纯度LDL，提高了回收率。
具体的操作方法如下：
1、制备高纯度LDL的方法
取血浆(含1mmol/L乙二胺四乙酸)离心，4℃，20000rpm×2h除去CM，将其余部分混合后加入KBr调密度为1.025g/mL离心，4℃，50000rpm×12h除去VLDL，收集剩下的血浆加入KBr调密度为1.045g/mL离心，4℃，50000rpm×12h得最上层的常规LDL。由于LDL提取过程中加入大量KBr，致使透析前K+浓度较正常高出数十倍，通过PBS缓冲液的反复多次透析后，K+浓度明显降低，对于如心肌细胞收缩功能测定、膜片钳钾通道的测定等无明显影响。将LDL透析前后K+浓度的全自动生化分析仪所测结果，与对应渗透压相比较发现，如透析至与PBS缓冲液渗透压无明显差异，则可以认为KBr被完全透析。
2、制备高浓度LDL的方法
取血浆(含1mmol/L乙二胺四乙酸)离心，4℃，20000rpm×2h除去CM，将其余部分混合后加入KBr调密度为1.025g/mL离心，4℃，50000rpm×12h除去VLDL，收集剩下的血浆加入KBr调密度为1.045g/mL离心，4℃，50000rpm×12h得最上层的常规LDL，将其中的第二层吸出混合加入KBr调密度为1.045g/mL离心，4℃，50000rpm×12h，吸出淡黄色的上层液体，即为高浓度的LDL。对于部分需要高浓度LDL的实验，基本上无需浓缩即可使用。
3、提高LDL回收率的方法
取血浆(含1mmol/L乙二胺四乙酸)离心，4℃，20000rpm×2h除去CM，将其余部分混合后加入KBr调密度为1.025g/mL离心，4℃，50000rpm×12h除去VLDL，收集剩下的血浆加入KBr调密度为1.045g/mL离心，4℃，50000rpm×12h得最上层的常规LDL。实验中除第一次加入KBr调密度为1.045g/mL所得常规LDL外，无论混合第二、三两层加入超纯水或仅第二层加入KBr调密度为1.045g/mL，亦可再次获得纯度较高的LDL，只是浓度有所差别。反复多次从血浆中提取LDL，可以明显提高其回收率。
本发明的方法在五个方面做了优化与改良：
一、目前市场上用于科研的LDL主要分为冻干粉及液体两种保存形式。如实验需要高浓度LDL进行干预，冻干粉往往不能够被溶剂完全溶解，且冻干粉本身就容易造成LDL生物活性减低，而液体LDL的浓缩主要采用风干的方法，也容易影响其生物活性。本发明首先离心去除CM与VLDL，收集剩下的血浆调密度为1.045g/mL，离心得最上层的LDL，将其中的第二层吸出混合调密度为1.045g/mL，离心后吸出淡黄色的上层液体，即为高浓度的LDL。对于部分需要高浓度LDL的实验，基本上无需浓缩即可使用。
二、本发明采用全自动生化分析仪检测LDL的含量标定提取LDL的浓度。现今国际上通常采用BCA试剂盒或Lowry法测定LDL的蛋白含量，以蛋白量的大小来反应LDL中相应脂质量的大小。LDL主要是载脂蛋白ApoB和胆固醇酯组成的，而脂蛋白中胆固醇酯含量较为稳定，细胞吞噬大量脂质才会泡沫化，因此虽然测脂质不如测蛋白方便，但是测定LDL中胆固醇的方法作为脂蛋白的定量依据更为科学、严谨。
三、本发明将提取出的LDL溶液置入再生纤维素透析袋内，然后浸入PBS缓冲液中，通过PBS缓冲液的反复多次透析后，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，通过不断更换缓冲液，即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。对于影响透析的多个因素本发明没有具体限定，而是就其透析完全的指标加以分析。最终通过全自动生化分析仪与渗透压仪确定透析的程度，以及是否达到后续实验的要求。正常血浆中K+浓度为3.5-5.5mmol/L，由于LDL提取过程中加入大量KBr，致使透析前K+浓度较正常高出数十倍。正常情况下细胞内的K+比细胞外高几十倍，当LDL中的大量KBr没有被完全透析而作为干预因素作用于细胞时，导致细胞内外K+浓度差变小，对心肌、骨骼肌、酸碱平衡等都会产生影响，如引起心肌兴奋性先升高后降低，传导性降低，自律性降低，收缩性减弱等。通过PBS缓冲液的反复多次透析后，K+浓度明显降低，对于如心肌细胞收缩功能测定、膜片钳钾通道的测定等才能不产生明显影响。
四、本发明将LDL透析前后K+浓度的全自动生化分析仪所测结果，与渗透压仪检测结果相比较发现，如透析至与PBS缓冲液渗透压无明显差异，则可以认为KBr被完全透析，LDL可以作为一种干预因素用于后续实验。与渗透压仪相比，全自动生化分析仪的检测成本高，耗时长，需要的样本量大。以PBS缓冲液渗透压为参照，采用渗透压仪测定LDL透析液的渗透压值就能便捷的反映LDL纯度。
五、本发明中除第一次加入KBr调密度为1.045g/mL所得LDL外，混合第二、三两层加入超纯水或仅第二层再次加入KBr调密度为1.045g/mL离心后，亦可再次获得纯度较高的LDL。序贯漂浮超速离心法虽然能够处理较大的血浆样本量，但是耗时很长。常规的密度梯度超速离心法主要优点就是大大缩短离心时间，但是它所能处理的血浆样本量较序贯漂浮超速离心法少得多，无法一次性制备大量脂蛋白样本，故脂蛋白的回收率较低。本发明采用超速离心机固定角式转头密度梯度离心法，反复多次从血浆中提取LDL，可以明显提高其回收率，为分离制备大量实验所用的脂蛋白样本成功地探索出一条新的途径。
本发明的有益效果是：1、LDL纯度高：通过PBS缓冲液的反复多次透析后，以PBS缓冲液渗透压为参照，采用渗透压仪测定LDL透析液的渗透压值可以便捷的反映LDL纯度。
2、LDL浓度高：将常规超速离心第一次所得LDL吸出后，第二层再次加入KBr调整密度后提取的LDL浓度显著高于之前第一次提取的LDL。
3、LDL回收率高：除常规超速离心第一次所得LDL，混合第二、三两层再次加入超纯水调密度后仍能离心得到高纯度的LDL。反复多次从血浆中提取LDL，可以明显提高LDL回收率。
附图说明
图1 LDL苏丹黑B染色琼脂糖电泳图[1为正常血浆，2、3、4分别为C组、A组、B组提取的LDL]
图2 LDL及Ox-LDL苏丹黑B染色琼脂糖电泳图[1为正常血浆，2为B组提取的LDL，3、4、5分别为A组、B组、C组提取LDL氧化后的Ox-LDL]
具体实施方式
下面根据附图和实施例对本发明进一步说明。
1、血浆分离：
在血浆中加入乙二胺四乙酸(EDTA)，终浓度为1mmol/L，3000rpm×20min，沉淀为血细胞，上清血浆待用。
2、CM分离：
离心机：Beckman Avanti J-E高速冷冻离心机；
转头，离心管：JA-20：20000rpm，18400×g，8×50ml；
离心参数：4℃，20000rpm×2h；
离心结果：CM呈白色上浮于液体的表面，或紧贴于离心管壁，小心吸出。
3、血浆脂蛋白的分离：
离心机：Hitachi CP-80WX超速离心机；
转头，离心管：P70AT：70000rpm，505000×g，8×40ml，40PA管。
3.1、VLDL分离：
血浆处理：将去除CM后的血浆混合，加入超纯水或KBr，调密度至1.025g/mL；
离心参数：4℃，50000rpm×12h；
离心结果：VLDL浮于离心管的上层呈奶油状，约占上面无色透明层的1/2，用巴氏吸管仔细吸出。若血浆含有大量甘油三脂(＞1000mg/ml)，VLDL则在管顶部形成淡黄色透明的胶状层。
3.2、LDL分离：
血浆处理：将去除VLDL后的血浆混合，加入KBr，使最终密度为1.045g/mL；
离心参数：4℃，50000rpm×12h；
离心结果：大致可以分为三层：LDL形成一层淡黄色带浮于顶部为最上层(A组)，用巴氏吸管仔细吸出。第二层与第三层之间存在一条白色颗粒漂浮带。将上步离心吸出LDL后的剩余液体，分为两种不同方法处理：
(1)将第二层的液体吸出混合后，加入KBr，调密度至1.045g/mL。
离心参数：4℃，50000rpm×12h；
离心结果：大致分为两层：LDL浮于最上层为淡黄色(B组)，用巴氏吸管仔细吸出。第二层液体的黄色较LDL层稍深。
(2)将第二、三层的液体混合后，加超纯水，调密度至1.045g/mL。
离心参数：4℃，50000rpm×12h；
离心结果：大致可以分为三层：LDL浮于最上层为无色透明(C组)，用巴氏吸管仔细吸出。第二层与第三层之间仍存在一条白色颗粒漂浮带。
4、将上述所得LDL移入再生纤维素透析袋，两端用透析袋夹夹紧，放入0.01mol/L的PBS缓冲液(NaCl 138mM，KCl 2.7mM，Na2HPO4 10.14mM，KH2PO4 1.76mM，PH＝7.4)中4℃透析5-8h，以除去离心过程中所加的抗氧化剂和大量的KBr。
5、经过上述处理后，根据是否进行后续氧化，可以对LDL做以下两种不同处理：
5.1、如不需氧化，将LDL以0.22μm滤膜过滤除菌后，保存于Tris缓冲液(Tris-HCl50mM，NaCl 0.15M，EDTA2mM，PH＝7.4)，4℃备用。
5.2、如需氧化，用PBS缓冲液将LDL稀释至蛋白浓度0.5mg/ml，加入终浓度为5μmol/L的新鲜配制的CuSO4溶液，37℃孵育24小时后，放入0.01mol/L的PBS中4℃透析5-8h，以终止氧化反应。氧化前的LDL为淡黄色，氧化后一般黄色消失甚至出现乳白色，这是肉眼判断氧化成功的标准。将制备好的Ox-LDL以0.22μm滤膜过滤除菌后，保存于Tris缓冲液，4℃备用。
6、实验中测定LDL浓度(全自动生化分析仪)、渗透压(渗透压仪WESCOR5520，美国)及Ox-LDL氧化修饰程度(琼脂糖凝胶电泳以及MDA试剂盒，南京建成生物公司)。
7、统计学方法：
采用SPSS23.0统计分析软件进行统计学分析，定量资料以均数±标准差(mean±SD)表示，三组样本均数间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
8、结果：
8.1、琼脂糖凝胶电泳结果：
三组不同方法提取的LDL经苏丹黑B染色后，均呈单条色带，证明三组不同方法提取的LDL纯度均较高(图1)。琼脂糖电泳时，ApoB中的赖氨酸残基与醛反应使Ox-LDL相对带负电荷，其向阳极迁移，根据Ox-LDL电泳距离和非氧化LDL的电泳距离之比的变化即相对电泳迁移率，判断其氧化修饰的程度。三组不同方法提取的LDL经氧化后，Ox-LDL的相对电泳迁移率均加快，但是三组之间无明显差异(图2)。
8.2、硫代巴比妥酸反应物(TBARS)测定：
脂质过氧化物(LPO)的分解产物丙二醛(MDA)，在酸性环境下能与硫代巴比妥酸(TBA)形成红色物质，可在532nm比色测定。测MDA的含量与Ox-LDL浓度之间没有关系，它主要说明LDL已经氧化以及氧化的程度，它的值不能代表Ox-LDL的含量。我们实验中Ox-LDL是LDL TBARS值的5-8倍，结合Ox-LDL相对电泳迁移率的增加，说明LDL已经被氧化。
8.3、提取LDL浓度的全自动生化分析仪检测(表1)：
第一次调密度为1.045g/mL，离心后大致分为三层，通过琼脂糖凝胶电泳的结果，发现第一层为较纯的LDL，第二层以LDL为主及少量HDL，第三层以HDL为主及少量LDL，根据此线索又对上述样品进行了全自动生化分析仪的检测，结论与前面一致。按照方案中三种不同提取方法得到的LDL，分别进行全自动生化分析仪检测，结果发现三组之间LDL浓度有显著差异(P＜0.05)，B组＞A组＞C组(P＜0.05)。
表1 LDL检测结果(mean±SD，n＝6)
Figure BDA0001890145930000071
8.4、提取LDL透析前后渗透压的改变(表2)：
LDL透析后渗透压较透析前明显降低(P＜0.05)，但是和PBS缓冲液相比无明显差异。与透析前及PBS缓冲液相比较，LDL透析后的K+浓度均明显减少(P＜0.05)。将LDL中含K+浓度的全自动生化分析仪所测结果，与对应渗透压相比较发现，如透析至与PBS缓冲液渗透压无明显差异，则可以认为KBr被完全透析，LDL可以作为一种干预因素用于后续实验。
表2 LDL透析前后渗透压与K+浓度的改变(mean±SD，n＝6)
Figure BDA0001890145930000081

Claims (1)

1.一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法，其特征在于，采用超速离心机固定角式转头密度梯度离心法，通过溴化钾调整血浆密度，实现各类脂蛋白的逐层分离，利用琼脂糖凝胶电泳鉴定血浆低密度脂蛋白纯度，全自动生化分析仪测定低密度脂蛋白及K+浓度，渗透压仪检测透析前后低密度脂蛋白的渗透压，具体包括以下步骤：
根据密度不同离心去除血浆中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白，提取剩余的血浆加入溴化钾调密度为1.045g/mL，再进行离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白，使用磷酸缓冲盐溶液透析降低K+浓度，低密度脂蛋白透析前后K+浓度的全自动生化分析仪所测结果与渗透压仪检测结果相比较，如透析至与磷酸缓冲盐溶液渗透压无明显差异，则认为溴化钾被完全透析，进而获取高纯度低密度脂蛋白；将上述步骤中离心得到位于最上层的常规低密度脂蛋白吸取后，提取第二层并加入溴化钾调密度为1.045g/mL，再次离心得到高浓度低密度脂蛋白。
CN201811472111.7A 2018-12-03 2018-12-03 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法 Expired - Fee Related CN109323910B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811472111.7A CN109323910B (zh) 2018-12-03 2018-12-03 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811472111.7A CN109323910B (zh) 2018-12-03 2018-12-03 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109323910A CN109323910A (zh) 2019-02-12
CN109323910B true CN109323910B (zh) 2021-01-08

Family

ID=65256239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811472111.7A Expired - Fee Related CN109323910B (zh) 2018-12-03 2018-12-03 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109323910B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117716234A (zh) * 2022-01-03 2024-03-15 科尔仕公司 用于从样本中分离阴电性低密度脂蛋白的生物试剂套组、试剂溶液以及从样本中分离阴电性低密度脂蛋白的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE358683T1 (de) * 1999-06-02 2007-04-15 Kyowa Medex Co Ltd Stabilisiertes denaturiertes lipoprotein und verfahren zu dessen herstellung
CN1129790C (zh) * 1999-07-16 2003-12-03 旭化成株式会社 测定物质的方法和用于该方法中的测定试剂
KR101186210B1 (ko) * 2002-12-03 2012-10-08 블랜체트 록펠러 뉴로사이언시즈 인스티튜트 혈뇌장벽을 통과하는 물질 수송용 인공 저밀도 지단백질 운반체
CN103908571B (zh) * 2013-01-08 2019-11-05 赵宪斌 一种治疗心脏疾病的复方中药制剂
CN103356604B (zh) * 2013-07-04 2015-05-13 丁圣雨 Chukrasone B在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用
CN104020301B (zh) * 2014-01-06 2015-11-18 宁波博泰生物技术有限公司 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法
CN104017075B (zh) * 2014-01-06 2020-02-28 杨昌国 载脂蛋白b抗血清的制备方法
CN104096268B (zh) * 2014-06-19 2016-11-23 北京奥精医药科技有限公司 一种矿化胶原人工骨膜及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
christopher M.west et al.A Physical Explanation for Multiple-Cell Classes after Centrifugation in Colloidal Silica Gradients.《analytical biochemistry》.1976,689-605. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109323910A (zh) 2019-02-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Conrad et al. Evidence for a large internal pressure in biological membranes.
Klibansky et al. Quantitative study of erythrocyte-lysolecithin interaction
Bangham et al. The charged groups at the interface of some blood cells
Mortara et al. Formation of closed vesicles from a simple phosphate diester. Preparation and some properties of vesicles of dihexadecyl phosphate
Dipali et al. Comparative study of separation of non-encapsulated drug from unilamellar liposomes by various methods
Foussard et al. Characterization of the lipid content of Toxoplasma gondii rhoptries
Litman Determination of molecular asymmetry in the phosphatidylethanolamine surface distribution in mixed phospholipid vesicles
Graham et al. A novel method for the rapid separation of plasma lipoproteins using self-generating gradients of iodixanol
CN111269872B (zh) 一种拟穴青蟹组织外泌体分离的方法
IE851514L (en) Producing liposomes
CN109323910B (zh) 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法
JP2009013164A (ja) 高密度リポ蛋白測定装置および分離方法
CN107561297B (zh) 用于血脂分型检测的试剂
CN113567583B (zh) 应用固相萃取-超临界流体色谱-质谱法检测乳中极性脂的方法
Philippot Study of human red blood cell membrane using sodium deoxycholate. I. Mechanism of the solubilization
Hems et al. Rapid separation of isolated hepatocytes or similar tissue fragments for analysis of cell constituents
Nandi et al. Molecular properties of the reassembled coat protein of coated vesicles
Turner et al. Molecular weight and physical properties of a lipoprotein from the floating fraction of egg yolk
US20220096725A1 (en) Centrifuge bowl and blood centrifuge system
Melchior et al. Stacking in lipid vesicle-tubulin mixtures is an artifact of negative staining.
Melnick et al. The size of Coxsackie viruses and Lansing poliomyelitis virus determined by sedimentation and ultrafiltration
CN103833840A (zh) 一种从人血浆中提取高密度脂蛋白及分离纯化载脂蛋白apoA-I的方法
JPH051280B2 (zh)
NL2034093B1 (en) Method for separating exosomes from apostichopus japonicus body fluid sample
CN104558020A (zh) 一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210201

Address after: 221000 No. 199, Jiefang Road, Jiangsu, Xuzhou

Patentee after: XUZHOU CENTRAL Hospital

Address before: 221009 No.199 Jiefang Road, Quanshan District, Xuzhou City, Jiangsu Province

Patentee before: XUZHOU CENTRAL Hospital

Patentee before: Pang Hui

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210108

Termination date: 20211203