CN104020301B - 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法 - Google Patents

用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104020301B
CN104020301B CN201410004190.4A CN201410004190A CN104020301B CN 104020301 B CN104020301 B CN 104020301B CN 201410004190 A CN201410004190 A CN 201410004190A CN 104020301 B CN104020301 B CN 104020301B
Authority
CN
China
Prior art keywords
apolipoprotein
caliberator
serum
density lipoprotein
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410004190.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104020301A (zh
Inventor
杨昌国
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yuhuan Nanfang Reagent Co.,Ltd.
Original Assignee
Ningbo Bo Tai Bioisystech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningbo Bo Tai Bioisystech Co Ltd filed Critical Ningbo Bo Tai Bioisystech Co Ltd
Priority to CN201410004190.4A priority Critical patent/CN104020301B/zh
Publication of CN104020301A publication Critical patent/CN104020301A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104020301B publication Critical patent/CN104020301B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，其技术方案要点是：1）将血清加入多阴离子化合物和二价金属离子进行预处理；2）低密度脂蛋白的提取；3）高密度脂蛋白的提取；4）将蛋白与基质血清混合制备校准物；5）校准物的定值，本发明的优势在于，简化多阴离子化合物和二价金属离子分步沉淀法提取血清中的LDL和HDL组份，并测得其ApoB和ApoA1含量，可按需要的量加到健康人混合血清中,使ApoA1和ApoB达到预期的含量，方法简便，再在上述混合血清中，加稳定剂，防混浊剂，使制备的冻干校准物，复溶后澄清，稳定性好，不存在基质效应，稀释成5个不同浓度，即可在自动分析仪上作ApoA1和ApoB测定的非线性校准。

Description

用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种生物医药领域，具体涉及一种载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法。
背景技术
临床上血清载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB)测定，常作为心脑血管病的风险度估计和药物治疗的疗效监察以及某些异常脂蛋白血症的诊断，目前国际和国内通用的血清ApoA1和ApoB测定试剂盒,均采用免疫比浊法(Immunoturbidimetricassay,ITA)，因其快速、准确、精密并适用于各种类型的自动生化分析仪，特别适用于临床实验室作大批量标本的测定。但测定时需釆用多点(一般为5个不同浓度)作非线性校准，因此需要一个ApoA1和ApoB测定范围高端浓度的校准物,血清ApoA1的参考范围：男性为1.04-2.02g/L；女性为1.08-2.25g/L,平均为1.43g/L,在病理情况下血清ApoA1含量都是下降的，因此校准物ApoA1的值应为2.50g/L左右，血清ApoB的参考范围：男性为0.66-1.33g/L；女性为0.60-1.17g/L,平均为0.85g/L.但病理情况下血清ApoB含量都是上升的，因此校准物ApoB的值亦应在2.50g/L左右。
新鲜健康人混合血清的ApoA1和ApoB含量分别为1.43g/L和0.85g/L左右，两者均要达到2.5g/L的浓度，必需要在人混合血清中添加提纯的人血清低密度脂蛋白组份(LDL，含ApoB)和高密度脂蛋白组份(HDL，含ApoA1)，传统的提纯方法是将健康人的混合血清直接进行超速离心，将血清通过多次超速离心后进行分离提纯，之后通过将提纯后的校准物，然后将校准物质冷冻干燥，在低温下保存。
传统方法制备Apoa1和Apob校准物时，直接将人血清进行超速离心，不仅离心次数多，耗时长，而且无法将血清中的其他蛋白分离，造成了资源的浪费，同时冻干后的校准物复溶后溶液易浑浊，稳定性一般，会出现一定的基质效应。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，该制备方法的优点有：
1.本发明釆用简化的多阴离子化合物和二价金属离子分步沉淀法提取血清中的LDL和HDL组份(相当血清浓度的20倍)，并测得其ApoB和ApoA1含量，可按需要的量加到健康人混合血清中,使ApoA1和ApoB达到预期的含量，方法简便。
2.再在上述达到预期的含量的人混合血清中，加稳定剂，防混浊剂，使制备的冻干校准物，复溶后澄清，稳定性好，不存在基质效应，稀释成5个不同浓度，即可在自动分析仪上作ApoA1和ApoB测定的非线性校准。
为实现上述目的，本发明的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法，包括如下步骤：
1)血清的处理：将血清分成两部分，一部分作为基质血清，另一部分作为用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的组分，往用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的血清中加入浓度为6％-20％的多阴离子化合物，离心、沉淀低密度脂蛋白；
2)低密度脂蛋白的提取：将沉淀的低密度脂蛋白溶解，用草酸钾沉淀过剩的多阴离子化合物，离心后取上层清液，用生理盐水透析；
3)高密度脂蛋白的提取：取沉淀低密度脂蛋白之后的上层液，追加1)浓度为6％-20％的多阴离子化合物和浓度为2-8mol/L的二价金属离子，沉淀其中的极低密度脂蛋白，离心，取上层液再加入相同浓度的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取沉淀物加入草酸钾溶液沉淀多余的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取上层清液用生理盐水透析；
4)基质血清的处理：在基质血清中加入高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，调节载脂蛋白A1和载脂蛋白B的浓度，再加入柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖混匀溶解。
通过采用上述方案，用多阴离子化合物和二价金属离子来对血清进行处理，能够将血清中的低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白沉淀，与血清中的高密度脂蛋白分离，便于后续Apoa1和ApoB的制取，而且溶液中的多阴离子化合物可以被草酸钾沉淀，也能够避免后续反应中引入杂质影响制备，而且减少了传统方法中的超速离心的次数，大大节约了制备的时间，在基质血清当中加入柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖作为添加剂，能够使得校准物复溶后澄清，稳定性好，不存在基质效应，稀释成5个不同浓度，即可在自动分析仪上作ApoA1和ApoB测定。
本发明的进一步设置为,所述低密度脂蛋白的提取和高密度脂蛋白的提取的步骤中，草酸钾的浓度为0.5-1.3mol/L。
通过采用上述方案，将草酸钾的浓度设置为0.5-1.3mol/L能够刚好对应溶液中的多阴离子化合物的浓度，避免造成材料的浪费。
本发明的进一步设置为,所述3)步骤中，沉淀了极低密度脂蛋白后的溶液，在加入多阴离子化合物和二价金属离子之后需在4℃下静置2小时。
通过采用上述方案，在4℃静置2小时能够使溶液中形成HDL-Ca-多阴离子聚合物，避免在离心过程中HDL因离心沉淀，而导致制备的HDL的量减少。
本发明的进一步设置为,所述步骤4)中，载脂蛋白A1和载脂蛋白B调节后的最终浓度为2.5g/L。
通过采用上述方案，血清中ApoA1的范围为：男性为1.04-2.02g/L；女性为1.08-2.25g/L,平均为1.43g/L,在病理情况下血清ApoA1含量都是下降的，因此校准物ApoA1的值应为2.50g/L左右，ApoB的范围为：男性为0.66-1.33g/L；女性为0.60-1.17g/L,平均为0.85g/L.但病理情况下血清ApoB含量都是上升的，因此校准物ApoB的值亦应在2.50g/L左右，所以需要将载脂蛋白A1和载脂蛋白B调节后浓度至2.5g/L。
本发明的进一步设置为,所述加入的柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖的质量比为柠檬酸三钠：丙氨酸：海藻糖＝1：20：2。
通过采用上述方案，通过按上述配比加入柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖能够使校准物溶液澄清，稳定性好，不存在基质效应。
本发明的进一步设置为,基质血清处理完成后需进行冷冻干燥，冷冻干燥后密封保存。
通过采用上述方案，将基质血清冷冻干燥，冻干后保存能够避免校准物长期保存，复溶后即可进行使用。
本发明的进一步设置为,所述血清中多阴离子化合物、二价金属离子和草酸钾残留的浓度依次分别为6％、0.3mol/L和0.03mol/L。
通过采用上述方案，通过草酸钾与多阴离子化合物和二价金属离子反应，将三者的浓度控制到多阴离子化合物6％、二价金属离子0.3mol/L和草酸钾0.03mol/L，可以避免引入的三种试剂对制备造成影响。
本发明的进一步设置为,所述2)和3)步骤中，提取获得的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均需通过免疫浊度法测量蛋白含量。
通过采用上述方案，将低密度脂蛋白和高密度脂蛋白通过免疫浊度法测定，能够使调节载脂蛋白A1和载脂蛋白B的密度时，更加的精确，便于密度的调剂。
本发明的进一步设置为,制备的载脂蛋白A1和载脂蛋白B需通过世界卫生组织的国际参考物载脂蛋白A1SP1-01和载脂蛋白BSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用载脂蛋白A1和载脂蛋白B免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
通过采用上述方案，将校准物进行定值，能够对校准物的质量进行筛选，进一步提升了校准物的质量。
本发明的进一步设置为,用于制备载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的血清均通过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗体以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体检测，且检测结果须呈阴性。
通过采用上述方案，通过采用上述方案，将制备载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的血清通过病毒检测能够保证本发明提供的载脂蛋白A1和载脂蛋白B校准物的制备方法所制备出的校准物无毒无害，在进行测定时不会对被测定者造成损害，提高了生物安全性。
具体实施方式
本发明的具体步骤可分为：1)血清的预处理；2)LDL的提取；3)HDL的提取；4)通过基质血清获得校准物；5)校准物的定值。
具体实施方式如下：
实施例一：1.收集人混合血清1.5L，[经检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒表面抗体(HCV抗体)以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体(HIV抗体)均为阴性]，其中0.5L作基质血清，另1L用作提取LDL和HDL组份。
2.LDL的提取：于1L混合人血清中加10％多阴离子溶液4ml，混匀，立即形成LDL-多阴离子聚合物，分4管，4000转/分，离心20分钟，(上层液收集于另一容器中，作HDL提取用)，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上层液沥干，每只离心管加0.5mol/L的草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为黄色透明的LDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoB含量，备用。
3.HDL的提取：沉淀LDL后的上层液，追加10％多阴离子溶液1ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，VLDL-Ca-多阴离子聚合物立即沉出，分4管，4000转/分，离心20分钟，去沉淀，上层液(只含HDL)，再加10％多阴离子溶液50ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，HDL-Ca-多阴离子聚合物立即形成，置4℃2小时，分4管，4000转/分，离心20分钟，倒去上层液，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上钟层液沥干，每只离心管加0.5mol/L草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子和Ca离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为桔黄色透明的HDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoA1含量，备用。
4.另500mL混合人血清，用免疫浊度法分别测定ApoA1和ApoB含量，然后加入浓缩的HDL和LDL组份，使ApoA1和ApoB的最终浓度都达到2.50g/L，再加入柠檬酸三钠1.5g，丙氨酸30g，海藻糖3g，混匀溶解后1ml分装于棕色玻璃瓶中，然后置冷冻干燥机中冷冻干燥，冻干后用橡胶塞塞紧瓶口，盖上外盖。
5.使用WHO国际参考物ApoA1SP1-01和ApoBSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用ApoA1和ApoB免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
实施例二：1.收集人混合血清1.5L，[经检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒表面抗体(HCV抗体)以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体(HIV抗体)均为阴性]，其中0.5L作基质血清，另1L用作提取LDL和HDL组份。
2.LDL的提取：于1L混合人血清中加6％多阴离子溶液4ml，混匀，立即形成LDL-多阴离子聚合物，分4管，4000转/分，离心20分钟，(上层液收集于另一容器中，作HDL提取用)，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上层液沥干，每只离心管加0.5mol/L的草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为黄色透明的LDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoB含量，备用。
3.HDL的提取：沉淀LDL后的上层液，追加6％多阴离子溶液1ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，VLDL-Ca-多阴离子聚合物立即沉出，分4管，4000转/分，离心20分钟，去沉淀，上层液(只含HDL)，再加6％多阴离子溶液50ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，HDL-Ca-多阴离子聚合物立即形成，置4℃2小时，分4管，4000转/分，离心20分钟，倒去上层液，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上钟层液沥干，每只离心管加0.5mol/L草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子和Ca离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为桔黄色透明的HDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoA1含量，备用。
4.另500mL混合人血清，用免疫浊度法分别测定ApoA1和ApoB含量，然后加入浓缩的HDL和LDL组份，使ApoA1和ApoB的最终浓度都达到2.50g/L，再加入柠檬酸三钠3g，丙氨酸60g，海藻糖6g，混匀溶解后1ml分装于棕色玻璃瓶中，然后置冷冻干燥机中冷冻干燥，冻干后用橡胶塞塞紧瓶口，盖上外盖。
5.使用WHO国际参考物ApoA1SP1-01和ApoBSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用ApoA1和ApoB免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
实施例三：1.收集人混合血清1.5L，[经检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒表面抗体(HCV抗体)以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体(HIV抗体)均为阴性]，其中0.5L作基质血清，另1L用作提取LDL和HDL组份。
2.LDL的提取：于1L混合人血清中加15％多阴离子溶液4ml，混匀，立即形成LDL-多阴离子聚合物，分4管，4000转/分，离心20分钟，(上层液收集于另一容器中，作HDL提取用)，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上层液沥干，每只离心管加0.5mol/L的草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为黄色透明的LDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoB含量，备用。
3.HDL的提取：沉淀LDL后的上层液，追加15％多阴离子溶液1ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，VLDL-Ca-多阴离子聚合物立即沉出，分4管，4000转/分，离心20分钟，去沉淀，上层液(只含HDL)，再加15％多阴离子溶液50ml和3mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，HDL-Ca-多阴离子聚合物立即形成，置4℃2小时，分4管，4000转/分，离心20分钟，倒去上层液，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上钟层液沥干，每只离心管加0.75mol/L草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子和Ca离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为桔黄色透明的HDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoA1含量，备用。
4.另500mL混合人血清，用免疫浊度法分别测定ApoA1和ApoB含量，然后加入浓缩的HDL和LDL组份，使ApoA1和ApoB的最终浓度都达到2.50g/L，再加入柠檬酸三钠1.65g，丙氨酸33g，海藻糖3.3g，混匀溶解后1ml分装于棕色玻璃瓶中，然后置冷冻干燥机中冷冻干燥，冻干后用橡胶塞塞紧瓶口，盖上外盖。
5.使用WHO国际参考物ApoA1SP1-01和ApoBSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用ApoA1和ApoB免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
实施例四：1.收集人混合血清1.5L，[经检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒表面抗体(HCV抗体)以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体(HIV抗体)均为阴性]，其中0.5L作基质血清，另1L用作提取LDL和HDL组份。
2.LDL的提取：于1L混合人血清中加18％多阴离子溶液4ml，混匀，立即形成LDL-多阴离子聚合物，分4管，4000转/分，离心20分钟，(上层液收集于另一容器中，作HDL提取用)，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上层液沥干，每只离心管加0.5mol/L的草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为黄色透明的LDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoB含量，备用。
3.HDL的提取：沉淀LDL后的上层液，追加18％多阴离子溶液1ml和3.6mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，VLDL-Ca-多阴离子聚合物立即沉出，分4管，4000转/分，离心20分钟，去沉淀，上层液(只含HDL)，再加18％多阴离子溶液50ml和2mol/L的氯化钙溶液50ml，混匀，HDL-Ca-多阴离子聚合物立即形成，置4℃2小时，分4管，4000转/分，离心20分钟，倒去上层液，将离心管倒值于滤纸上15分，使残留的上钟层液沥干，每只离心管加0.5mol/L草酸钾溶液10ml，用玻璃棒搅拌，多阴离子和Ca离子被沉淀，4000转/分，离心20分钟，上层液为桔黄色透明的HDL组份，浓度约为血清的20倍，再用生理盐水透析，除去草酸盐，用免疫浊度法测定ApoA1含量，备用。
4.另500mL混合人血清，用免疫浊度法分别测定ApoA1和ApoB含量，然后加入浓缩的HDL和LDL组份，使ApoA1和ApoB的最终浓度都达到2.50g/L，再加入柠檬酸三钠2.4g，丙氨酸48g，海藻糖4.8匀溶解后1ml分装于棕色玻璃瓶中，然后置冷冻干燥机中冷冻干燥，冻干后用橡胶塞塞紧瓶口，盖上外盖。
5.使用WHO国际参考物ApoA1SP1-01和ApoBSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用ApoA1和ApoB免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)血清的处理：将血清分成两部分，一部分作为基质血清，另一部分作为用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的组分，往用于提取低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的血清中加入浓度为6％-20％的多阴离子化合物，离心、沉淀低密度脂蛋白；
2)低密度脂蛋白的提取：将沉淀的低密度脂蛋白溶解，用草酸钾沉淀过剩的多阴离子化合物，离心后取上层清液，用生理盐水透析；
3)高密度脂蛋白的提取：取沉淀低密度脂蛋白之后的上层液，追加浓度为6％-20％的多阴离子化合物和浓度为2-8mol/L的二价金属离子，沉淀其中的极低密度脂蛋白，离心，取上层液再加入相同浓度的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取沉淀物加入草酸钾溶液沉淀多余的多阴离子化合物和二价金属离子，离心，取上层清液用生理盐水透析；
4)基质血清的处理：在基质血清中加入高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，调节载脂蛋白A1和载脂蛋白B的浓度，再加入柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖混匀溶解。
2.如权利要求1所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述低密度脂蛋白的提取和高密度脂蛋白的提取的步骤中，草酸钾的浓度为0.5-1.3mol/L。
3.如权利要求1所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述3)步骤中，沉淀了极低密度脂蛋白后的溶液，在加入多阴离子化合物和二价金属离子之后需在4℃下静置2小时。
4.如权利要求1所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中，载脂蛋白A1和载脂蛋白B调节后的最终浓度为2.5g/L。
5.如权利要求4所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述加入的柠檬酸三钠、丙氨酸和海藻糖的质量比为柠檬酸三钠：丙氨酸：海藻糖＝1：20：2。
6.如权利要求5所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：基质血清处理完成后需进行冷冻干燥，冷冻干燥后密封保存。
7.如权利要求6所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述血清中多阴离子化合物、二价金属离子和草酸钾残留的浓度依次分别为6％、0.3mol/L和0.03mol/L。
8.如权利要求1所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：所述2)和3)步骤中，提取获得的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均需通过免疫浊度法测量蛋白含量。
9.如权利要求1或8所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：制备的载脂蛋白A1和载脂蛋白B需通过世界卫生组织的国际参考物载脂蛋白A1SP1-01和载脂蛋白BSP3-07作校准，按GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定的要求，用载脂蛋白A1和载脂蛋白B免疫浊度法试剂在自动生化分析仪上对制备的校准物定值。
10.如权利要求1所述的用于校准载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的制备方法，其特征在于：用于制备载脂蛋白A1和载脂蛋白B的校准物的血清均通过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗体以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体检测，且检测结果须呈阴性。
CN201410004190.4A 2014-01-06 2014-01-06 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法 Active CN104020301B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410004190.4A CN104020301B (zh) 2014-01-06 2014-01-06 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410004190.4A CN104020301B (zh) 2014-01-06 2014-01-06 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104020301A CN104020301A (zh) 2014-09-03
CN104020301B true CN104020301B (zh) 2015-11-18

Family

ID=51437169

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410004190.4A Active CN104020301B (zh) 2014-01-06 2014-01-06 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104020301B (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104356227B (zh) * 2014-11-11 2020-05-22 浙江蓝怡医药有限公司 血清脂类、脂蛋白及载脂蛋白高效浓缩提取方法
CN105548584B (zh) * 2015-12-15 2018-01-19 安徽大千生物工程有限公司 一种测定人体载脂蛋白a1含量的试剂盒
CN110590937A (zh) * 2018-06-13 2019-12-20 杨宝田 一种人血载脂蛋白a1制品的制备方法及应用
CN109323910B (zh) * 2018-12-03 2021-01-08 徐州市中心医院 一种高纯度低密度脂蛋白的制备方法
CN109580303A (zh) * 2018-12-06 2019-04-05 潍坊泽成生物技术有限公司 低密度脂蛋白的制备方法
CN110551207B (zh) * 2019-08-21 2023-05-05 广州蕊特生物科技有限公司 一种脂蛋白纯化方法
CN114279778A (zh) * 2021-12-04 2022-04-05 南京岚煜生物科技有限公司 一种复合高值参考品的制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000049941A1 (en) * 1999-02-25 2000-08-31 Minimed Inc. Glucose monitor calibration methods
CN101108874A (zh) * 2006-07-19 2008-01-23 复旦大学 一种载脂蛋白a-i的制备方法
CN101135687A (zh) * 2005-10-23 2008-03-05 王贤理 一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒
JP2009115773A (ja) * 2007-11-06 2009-05-28 Reference Material Institute For Clinical Chemistry Standards 低密度リポタンパクコレステロールの精度管理方法
CN102127165A (zh) * 2010-01-15 2011-07-20 上海莱士血液制品股份有限公司 一种从血浆组分四沉淀中制备高纯ApoA-I的生产工艺
CN103472240A (zh) * 2013-08-23 2013-12-25 上海北加生化试剂有限公司 人血脂（血清/血浆）质量管理参比试剂盒及制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000049941A1 (en) * 1999-02-25 2000-08-31 Minimed Inc. Glucose monitor calibration methods
CN101135687A (zh) * 2005-10-23 2008-03-05 王贤理 一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒
CN101108874A (zh) * 2006-07-19 2008-01-23 复旦大学 一种载脂蛋白a-i的制备方法
JP2009115773A (ja) * 2007-11-06 2009-05-28 Reference Material Institute For Clinical Chemistry Standards 低密度リポタンパクコレステロールの精度管理方法
CN102127165A (zh) * 2010-01-15 2011-07-20 上海莱士血液制品股份有限公司 一种从血浆组分四沉淀中制备高纯ApoA-I的生产工艺
CN103472240A (zh) * 2013-08-23 2013-12-25 上海北加生化试剂有限公司 人血脂（血清/血浆）质量管理参比试剂盒及制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
International Federation of Clinical Chemistry standardization project for measurements of apolipoproteins A-I and B. II. Evaluation and selection of candidate reference materials;Albers JJ et al;《CLIN.CHEM.》;19920531;第38卷(第5期);658-662 *
介绍琼脂( 糖) 凝胶中脂蛋白和免疫沉淀素的多阴离子显影技术;杨昌国;《浙江医学》;19811231(第5期);54-55 *
脂蛋白（a）测定的标准化及存在的问题;庄一义;《临床检验杂志》;20031231;第21卷(第2期);119-124 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104020301A (zh) 2014-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104020301B (zh) 用于校准载脂蛋白a1和载脂蛋白b的校准物的制备方法
CN107266563B (zh) 一种血红蛋白质控品的制备方法
CN107677839B (zh) 一种d-二聚体和fdp复合质控品的制备方法
CN108524929B (zh) 一种狂犬病疫苗的生产方法
CN104297384A (zh) 一种肉品中硝基呋喃类药物代谢物的检测方法
CN105092336A (zh) 一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法
CN104965092B (zh) 一种金属元素全血质控品的制备方法
CN106771261A (zh) 糖化血红蛋白质控品的制备方法及其质控品
CN104017075B (zh) 载脂蛋白b抗血清的制备方法
CN103520121B (zh) 注射用维库溴铵冻干粉针剂及其制备方法
Charney et al. The concentration and purification of poliomyelitis virus by the use of nucleic acid precipitation
CN107088224B (zh) 人fgf21冻干制剂
Sharp et al. Isolation and characterization of influenza virus B (Lee strain)
CN104181313A (zh) 凝血因子ⅸ质控品制备方法
CN105801689A (zh) 一种共制备卵白蛋白与卵铁传递蛋白的方法
CN108624505A (zh) 一种慢病毒冷冻干燥保护剂及慢病毒冻干粉
CN106771121A (zh) 一种口蹄疫病毒胶体金试纸条、病原快速检测试剂盒及其制备方法
CN107384876A (zh) 一种用于口蹄疫疫苗146s含量检测的标准抗原及其制备方法和应用
CN101782549A (zh) 检测牛乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的方法
Moskowitz et al. Growth promoting activity for mammalian cells in fractions of tissue extracts
CN108653210A (zh) 一种玉屏风多糖脂质体的制备方法
CN106404483A (zh) 一种血清的制备方法
CN102586428A (zh) 一种玉米青枯病原镰刀菌对玉米苗期致病性的检测方法
CN111551414A (zh) 血小板质控品制备方法及制得的血小板质控品的应用
CN109771410A (zh) 紫草酸在制备抗乙肝病毒药物中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20190319

Address after: 315000 Room 03, 15 Building No. 82, 708 Lane, West Section of Huancheng North Road, Jiangbei District, Ningbo City, Zhejiang Province

Patentee after: Yang Changguo

Address before: 315000 No. 181 Canghai Road, Ningbo Science and Technology Park, Zhejiang Province

Patentee before: Ningbo Bo Tai Bioisystech Co., Ltd

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220418

Address after: 318000 Chumen Zhen Tian Ao Cun, Yuhuan City, Taizhou City, Zhejiang Province

Patentee after: Yuhuan Nanfang Reagent Co.,Ltd.

Address before: 315000 Room 03, 15 Building No. 82, 708 Lane, West Section of Huancheng North Road, Jiangbei District, Ningbo City, Zhejiang Province

Patentee before: Yang Changguo