TWI851577B - 喜樹鹼結合物 - Google Patents

喜樹鹼結合物 Download PDF

Info

Publication number
TWI851577B
TWI851577B TW108119649A TW108119649A TWI851577B TW I851577 B TWI851577 B TW I851577B TW 108119649 A TW108119649 A TW 108119649A TW 108119649 A TW108119649 A TW 108119649A TW I851577 B TWI851577 B TW I851577B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
alkyl
unit
group
linker
conjugate
Prior art date
Application number
TW108119649A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202015740A (zh
Inventor
史考特 傑佛瑞
雷恩 萊斯基
宇倫 劉
Original Assignee
美商思進公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商思進公司 filed Critical 美商思進公司
Publication of TW202015740A publication Critical patent/TW202015740A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI851577B publication Critical patent/TWI851577B/zh

Links

Abstract

本發明描述抗體與喜樹鹼化合物之結合物，及使用及製備方法。

Description

喜樹鹼結合物
已針對靶向遞送細胞毒性劑至腫瘤細胞探究抗體(mAb)。儘管已針對藉由抗體靶向遞送評估各種藥物類別，但已證明僅少量藥物類別具有作為抗體藥物結合物之充分活性，同時具有適合毒性概況及其他藥理學特性，以保證臨床研發。一種受關注之藥物類別為喜樹鹼。
藉由通常經由連接子將細胞毒性劑連接至抗體來設計抗體藥物結合物(ADC)涉及對多種因素之考慮，包括藥物上之用於連接至連接子的結合柄之存在及以條件穩定方式將藥物連接至抗體的連接技術。類別中之母化合物的結合柄為C20羥基官能基，其中連接子係經由碳酸根官能基連接(例如參見Walker, M.A.等人Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2002) 12(2)：217-219)。然而，碳酸根官能基通常受水解不穩定性影響，其造成游離藥物過早釋放至全身循環中，可導致ADC效能降低、結合物之免疫特異性不充分及毒性增加。因此，需要用於喜樹鹼結合物之技術，該等喜樹鹼結合物具有提高之穩定性以增加遞送至所需作用位置的藥物之量。本發明解決彼等及其他需要。
本發明尤其提供喜樹鹼結合物、喜樹鹼-連接子化合物及喜樹鹼化合物、製備及使用其之方法以及其中間物。本發明之喜樹鹼結合物在循環中穩定，又能夠在游離藥物自結合物釋放於腫瘤細胞附近或腫瘤細胞內時造成細胞死亡。
在一個原理實施例中，提供一種喜樹鹼結合物，其具有下式： L-(Q-D)p 或其鹽，其中 L為配位子單元； 下標p為1至16之整數； Q為連接子單元，其具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、 Z-A-S* -W-、-Z-A-S* -W-RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-B(S* )-W-、 -Z-A-B(S* )-W-RL-及-Z-A-B(S* )-RL-Y-， 其中Z為延伸子單元； A為鍵或連結子單元； B為並聯連結子單元； S* 為分隔劑； RL為可釋放連接子； W為胺基酸單元； Y為間隔子單元；及 D為藥物單元，其選自由以下組成之群： ； 其中 RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-； RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基； 各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -C1 -C4 羥烷基-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基-C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，或 RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；及 其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；及 其中當Q為-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y- (其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者)時，D與Q之連接點經由存在於CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7上的羥基或一級或二級胺官能基中之任一者之雜原子，或 其中當Q為-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A- B(S*)-W-時或當Q為-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A -S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL- (其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放單元)時，D與Q之連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之內酯環中的羥基取代基之氧原子；及 其限制條件為當連接點達至CPT6之一級或二級胺基之氮原子時，RF 及RF ' 中之至少一者為-H， 其限制條件為當D為具有經由其一級胺基之氮原子連接之CPT1時-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -RL-Y-及-Z-A-B(S* )-RL-Y-之-Z-A-不為丁二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環。
如上文所指出之其他原理實施例，為適用為用於製備喜樹鹼結合物之中間物的喜樹鹼-連接子化合物，其中喜樹鹼-連接子化合物由喜樹鹼及連接子單元(Q)組成，其中連接子單元由能夠形成與提供配位子單元之靶向配位子之共價鍵的延伸子單元前驅體(Z')、可釋放連接子(RL) (其在不具有胺基酸單元的Q之一些態樣中為葡萄糖醛酸苷單元)組成。
在另一態樣中，本文提供治療癌症之方法，其包括向有需要之個體投與本文所描述之喜樹鹼結合物。
在另一態樣中，本文提供包括本文所描述之喜樹鹼結合物的套組。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2018年6月7日申請之美國臨時專利申請案第62/681,847號及2018年12月10日申請之第62/777,491號的優先權，兩者均出於所有目的以其全文引用之方式併入本文中。定義
除非另有規定，否則如本文所用之以下術語及片語意欲具有以下含義。當本文使用商標名時，除非上下文另有指示，否則商標名包括商標名產品之產品調配物、通用藥物及活性醫藥成分。
如本文所用，術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且尤其涵蓋完整單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及展現所期望的生物活性之抗體片段。抗體之原生形式為四聚體且由兩個相同之免疫球蛋白鏈對組成，每個對具有一個輕鏈及一個重鏈。在每個對中，輕鏈可變區及重鏈可變區(VL 及VH )一起主要負責與抗原之結合。輕鏈及重鏈可變域由間雜有三個亦稱為「互補決定區」或「CDR」之高變區的構架區組成。恆定區可藉由免疫系統識別且與免疫系統相互作用。(參見例如 ，Janeway等人 ，2001,Immunol . Biology , 第 5 版 , Garland Publishing, New York)。抗體可為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、類別(例如IgG1 、IgG2 、IgG3 、IgG4 、IgA1 及IgA2 )或其子類別。抗體可來源於任何適合的物種。在一些實施例中，抗體源自人類或鼠類。舉例而言，抗體可為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
如本文所用，術語「單株抗體」係指自一群實質上均質之抗體獲得的抗體，亦即構成該群體之個別抗體除了以少量存在的有可能天然存在之突變外為相同的。單株抗體為高度特異性的，其針對單一抗原位點。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群獲得，且不應視為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。
「完整抗體」為適於抗體類別而包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定域(CL )及重鏈恆定域(CH 1、CH 2、CH 3及CH 4)之抗體。恆定域可為原生序列恆定域(例如人類原生序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，包含其抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括與目標抗原(例如癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)免疫特異性結合之Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子、scFv、scFv-Fc、由抗體片段(由Fab表現庫產生之片段)形成之多特異性抗體片段或以上中之任一者之抗原決定基-結合片段。
「抗原」為與抗體特異性結合之實體。
術語「特異性結合」及「特異性地結合」意謂抗體或抗體衍生物將以高選擇性方式與目標抗原之其對應抗原決定基結合且不與眾多其他抗原結合。通常，抗體或抗體衍生物以至少約1 × 10- 7 M，且較佳10- 8 M至10- 9 M、10- 10 M、10- 11 M或10- 12 M之親和力結合，且以至少兩倍高於其結合至除預定抗原或緊密相關抗原之外的非特異性抗原(例如，BSA、酪蛋白)的親和力之親和力結合至預定抗原。
術語「抑制(inhibit/inhibition of)」意謂降低可量測之量或完全防止。
術語「治療有效量」係指有效治療哺乳動物之疾病或病症的結合物之量。在癌症之情況下，結合物之治療有效量可減少癌細胞之數目；減小腫瘤尺寸；抑制(亦即在一定程度上減緩且較佳阻止)癌細胞浸潤入周邊器官中；抑制(亦即，在一定程度上減緩且較佳阻止)腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上減輕一或多種與癌症相關的症狀。為達到藥物可抑制所存在之癌細胞生長及/或殺死所存在之癌細胞的程度，該藥物可具有細胞生長抑制性及/或細胞毒性。對於癌症療法，可例如藉由評估疾病進展時間(TTP)及/或測定反應率(RR)來量測功效。
術語「實質性」或「實質上」係指群體、混合物或樣品之大部分，亦即＞50%，較佳為群體之超過50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
術語「細胞毒性活性」係指藥物或喜樹鹼結合物或喜樹鹼結合物之胞內代謝物之細胞殺死效果。細胞毒性活性可表示為IC50 值，其為一半細胞存活時之每單位體積濃度(莫耳或質量)。
術語「細胞生長抑制活性」係指藥物或喜樹鹼結合物或喜樹鹼結合物之胞內代謝物之抗增殖效果。
如本文所用，術語「細胞毒性劑」係指具有細胞毒性活性且導致細胞破壞之物質。該術語意欲包括化學治療劑及毒素，諸如小分子毒素或源自細菌、真菌、植物或動物之酶促活性毒素，包括其合成類似物及衍生物。
如本文所用，術語「細胞生長抑制劑」係指抑制細胞功能之物質，該細胞功能包括細胞生長或繁殖。細胞生長抑制劑包括抑制劑，諸如蛋白質抑制劑，例如酶抑制劑。細胞生長抑制劑具有細胞生長抑制活性。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物中通常以不受調控之細胞生長為特徵的生理病狀或病症。「腫瘤」包含一或多種癌細胞。
如本文所用，「自體免疫疾病」係指由個體自身組織或蛋白質產生且針對個體自身組織或蛋白質之疾病或病症。
如本文所用，「患者」係指投與本發明之喜樹鹼結合物之個體。患者包括但不限於人類、大鼠、小鼠、天竺鼠、非人類靈長類動物、豬、山羊、牛、馬、狗、貓、鳥及家禽。通常，患者為大鼠、小鼠、狗、人類或非人類靈長類動物，更通常為人類。
除非上下文另有指示，否則術語「治療(treat/treatment)」係指治療性治療及預防性，其中目的為抑制或減緩(減輕)非所需生理變化或病症，諸如癌症之進展或擴散。出於本發明之目的，有益或所期望的臨床結果包括但不限於症狀緩解、疾病程度減輕、疾病病況穩定(亦即不惡化)、疾病進展延緩或減緩、疾病病況改善或緩和及緩解(部分或完全)，該等結果為可偵測或不可偵測的。「治療」亦可意謂與不接受治療之預期存活期相比延長存活期。需要治療之彼等患者包括已具有病狀或病症之彼等患者以及易於具有病狀或病症之彼等患者。
在癌症之情況下，術語「治療」包括以下各者中之任一者或所有：殺死腫瘤細胞；抑制腫瘤細胞、癌細胞或腫瘤之生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞之複製；減輕總腫瘤負荷或減少癌細胞之數目；及改善與疾病相關之一或多種症狀。
在自體免疫疾病之情況下，術語「治療」包括以下中之任一者或所有：抑制與自體免疫疾病病況相關之細胞(包括但不限於產生自體免疫抗體之細胞)的複製、減輕自體免疫抗體負荷及改善自體免疫疾病之一或多種症狀。
如本文所用之術語「化合物」係指且涵蓋由結構命名或表示之化學化合物本身及其明確規定或未規定之鹽形式，除非上下文明確表示排除此等鹽形式。術語「化合物」進一步涵蓋化合物之溶劑合物形式，其中當化合物之羰基水合以形成孿-二醇時溶劑與化合物非共價締合或與化合物逆向共價締合。溶劑合物形式包括化合物本身形式及其鹽形式且包括半溶劑合物、單溶劑合物、二溶劑合物(包括水合物)；及當化合物可與兩個或更多個溶劑分子締合時，兩個或更多個溶劑分子可相同或不同。
在一些例項中，本發明之化合物將包括對上述形式中之一或多者(例如鹽及溶劑合物)之明確參考，其不暗示化合物之固態形式；然而，此參考僅為強調且不應視為排除如上述經鑑別之任何其他形式。此外，當不明確參考化合物或配位體藥物結合組合物之鹽及/或溶劑合物形式時，該省略不應視為排除化合物或結合物之鹽及/或溶劑合物形式，除非上下文明確表示排除此等鹽及/或溶劑合物形式。
如本文所用之片語，片語「其鹽」係指化合物(例如藥物、藥物連接子化合物或配位體藥物結合化合物)之鹽形式。化合物之鹽形式具有一或多種內部鹽形式及/或涉及包括另一分子，諸如醋酸根離子、丁二酸根離子或其他相對離子。呈化合物之鹽形式之相對離子通常為使母體化合物上之電荷穩定的有機或無機部分。化合物之鹽形式在其結構中具有一個或超過一個帶電原子。在多個帶電原子為鹽形式之部分之例項中，存在多個相對離子及/或多個帶電相對離子。因此，化合物之鹽形式通常具有對應於化合物之非鹽形式之原子的一或多個帶電原子及一或多個相反離子。在一些態樣中，化合物之非鹽形式含有至少一個胺基或其他鹼性部分，且因此在酸存在下，獲得具有鹼性部分之酸加成鹽。在其他態樣中，化合物之非鹽形式含有至少一個羧酸基或其他酸性部分，且因此在鹼基存在下，獲得羧酸鹽或其他陰離子部分。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、三氟乙酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、乙二酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸(亦即1,l'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸))鹽。
醫藥學上可接受之鹽為適合於如本文所描述向個體投與之化合物之鹽形式且在一些態樣中包括相對陽離子或相對陰離子，如由P. H. Stahl及C. G. Wermuth,編輯, Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties, Selection and Use, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002所描述。
連接子單元為在喜樹鹼結合物中將喜樹鹼連結至配位子單元之雙官能部分。本發明之連接子單元具有若干組分(例如在一些實施例中將具有鹼性單元之延伸子單元；可存在或不存在之連結子單元；亦可存在或不存在之並聯連結子單元；可釋放連接子；及亦可存在或不存在之間隔子單元)。
如本文所用，「PEG」、「PEG單元」或「聚乙二醇」為有機部分，其由重複伸乙基-氧基子單元組成且可為多分散、單分散或離散的(亦即具有離散數目之伸乙基-氧基子單元)。多分散PEG係各尺寸及分子量之異質混合物，然而單分散PEG通常自異質混合物純化且因此提供單一鏈長及分子量。較佳PEG單元為離散PEG，即以逐步方式且不經由聚合方法合成之化合物。離散PEG提供具有限定及指定鏈長之單一分子。
本文所提供之PEG單元包含一或多個聚乙二醇鏈，其各由一或多個彼此共價連接之伸乙基氧基子單元組成。聚乙二醇鏈可例如以直鏈、分支鏈或星形組態連接在一起。通常，在併入喜樹鹼結合物中之前，聚乙二醇鏈中之至少一者係在一個烷基部分經親電子基團取代以用於共價連接至亞甲基胺基甲酸酯單元之胺基甲酸酯氮的末端處衍生(亦即表示R之例項)。通常每個聚乙二醇鏈中之不涉及共價連接至連接子單元之其餘部分的末端伸乙基氧基子單元經PEG封端單元修飾，該PEG封端單元通常視情況經烷基(諸如-CH3 、-CH2 CH3 或-CH2 CH2 CO2 H)取代。較佳PEG單元具有單一聚乙二醇鏈，該單一聚乙二醇鏈具有4至24個串聯共價連接且在一端處用PEG封端單元封端之-CH2 CH2 O-子單元。
除非另有指示，否則術語「烷基」本身或作為另一術語之一部分係指具有指定數目之碳原子的經取代或未經取代之直鏈或分支鏈、飽和或不飽和烴(例如「-C1 -C8 烷基」或「-C1 -C10 」烷基係指分別具有1至8個或1至10個碳原子的烷基)。當未指定碳原子數目時，烷基具有1至8個碳原子。代表性直鏈「-C1 -C8 烷基」基團包括但不限於-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基及-正辛基；而分支鏈-C3 -C8 烷基包括但不限於-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基及-2-甲基丁基；不飽和-C2 -C8 烷基包括但不限於-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1戊烯基、-2戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2甲基-2-丁烯基、-2,3二甲基-2-丁烯基、-1-己基、2-己基、-3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1丁炔基、-2丁炔基、-1戊炔基、-2戊炔基及-3甲基1丁炔基。有時烷基未經取代。烷基可經一或多個基團取代。在其他態樣中，烷基將為飽和的。
除非另有指示，否則「伸烷基」本身或作為另一術語之一部分係指具有規定數目之碳原子(通常1至10個碳原子)且具有藉由自母體烷烴的相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而衍生之兩個單價基團中心之經取代或未經取代之飽和分支鏈或直鏈或環烴基。典型伸烷基基團包括但不限於：亞甲基(-CH2 -)、1,2-伸乙基(-CH2 CH2 -)、1,3-伸丙基(-CH2 CH2 CH2 -)、1,4-丁烯(-CH2 CH2 CH2 CH2 -)及類似基團。在較佳態樣中，伸烷基為分支鏈或直鏈烴(亦即其不為環烴)。
除非另外指示，否則「芳基」本身或作為另一術語之一部分意謂具有規定數目之碳原子(通常6至20個碳原子)的經取代或未經取代之單價碳環芳烴基團，其係藉由自母體芳環系統之單個碳原子移除一個氫原子而衍生。一些芳基係以如「Ar」之例示性結構表示。典型芳基包括但不限於衍生自苯、經取代之苯、萘、蒽、聯二苯及其類似物之基團。例示性芳基為苯基。
除非另有指示，否則「伸芳基」本身或作為另一術語之一部分為如上文所定義之芳基，其具有兩個共價鍵(亦即其為二價的)且可呈如以下結構中所示之鄰位、間位或對位取向，以苯基作為例示性基團：。
除非另有指示，否則「C3 -C8 雜環」本身或作為另一術語之一部分係指單價經取代或未經取代之芳族或非芳族單環或雙環系統，其具有3至8個碳原子(亦稱為環成員)及一至四個獨立地選自N、O、P或S之雜原子環成員，且藉由自母體環系統之環原子移除一個氫原子而衍生。雜環中之一或多個N、C或S原子可經氧化。包括雜原子之環可為芳族或非芳族的。其中所有環原子與芳族性有關之雜環稱為雜芳基且以其他方式稱為雜碳環。
除非另外指出，否則雜環在產生穩定結構之任何雜原子或碳原子處與其側基連接。因而，雜芳基可經由其芳環系統之芳族碳鍵結，其稱為C-連接雜芳基，或經由其芳環系統中之非雙重鍵結N原子(亦即，非=N-)鍵結，其稱為N-連接雜芳基。因此，含氮雜環可為C-連接或N-連接且包括吡咯部分，諸如吡咯-1-基(N-連接)及吡咯-3-基(C-連接)；及咪唑部分，諸如咪唑-1-基及咪唑-3-基(兩者均為N-連接)，及咪唑-2-基、咪唑-4-基及咪唑-5-基部分(其均為C-連接)。
除非另有指示，否則「C3 -C8 雜芳基」為芳族C3 -C8 雜環，其中下標指示雜環之環狀環系統之碳總數或雜芳基之芳環系統之芳族碳總數且不暗示環系統之大小或環稠合之存在或不存在。C3 -C8 雜環之代表性實例包括但不限於吡咯啶基、氮雜環丁基、哌啶基、嗎啉基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、吡咯基、噻吩基(噻吩)、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基及異噁唑基。
當明確給定時，雜環或雜芳基之環系統之大小係藉由環中之原子總數指示。舉例而言，指定為5員或6員雜芳基指示雜芳基之雜芳環系統中之芳族原子總數(亦即5或6)，但不暗示在彼環系統中之芳族雜原子或芳族碳之數目。稠合雜芳基係由上下文按此明確規定或暗示，且通常藉由稠合在一起以構成稠合雜芳環系統之各芳環中之芳族原子數目指示。舉例而言，5,6-員雜芳基為稠合至芳族6員環之芳族5員環，其中該等環中之一者或兩者具有芳族雜原子或其中兩個環之間共用一個雜原子。
稠合至芳基或雜芳基以使得雜環仍為非芳族且經由與稠環系統之非芳族部分連接而為較大結構之部分的雜環為視情況經取代的雜環之一實例，其中該雜環藉由與芳基或雜芳基環稠合取代。同樣地，稠合至雜環或碳環之經由與稠環系統之芳族部分連接而為較大結構之部分的芳基或雜芳基為視情況經取代的芳基或雜環之一實例，其中該芳基或雜環藉由與雜環或碳環環稠合取代。
除非另有指示，否則「C3 -C8 雜環基」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C3 -C8 雜環，其中雜環之氫原子中之一者經一鍵置換(亦即其為二價的)。除非另有指示，否則「C3 -C8 伸雜芳基」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C3 -C8 雜芳基，其中雜芳基之氫原子中之一者經一鍵置換(亦即其為二價的)。
除非另有指示，否則「C3 -C8 碳環」本身或作為另一術語之一部分為藉由自母體環系統之環原子移除一個氫原子而衍生之3員、4員、5員、6員、7員或8員單價經取代或未經取代之飽和或不飽和非芳族單環或雙環碳環。代表性-C3 -C8 碳環包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊二烯基、環己基、環己烯基、1,3-環己二烯基、1,4-環己二烯基、環庚基、1,3-環庚二烯基、1,3,5-環庚三烯基、環辛基及環辛二烯基。
除非另有指示，否則「C3 -C8 碳環基」本身或作為另一術語之一部分係指如上文所定義之C3 -C8 碳環基，其中碳環基之氫原子中之另一者經一鍵置換(亦即其為二價的)。
除非另有指示，否則術語「雜烷基」本身或與另一術語組合除非另有規定，否則意謂完全飽和或含有1至3不飽和度且由規定數目碳原子及一至十個、較佳一至三個選自由O、N、Si及S組成之群的雜原子組成之穩定直鏈或分支鏈烴或其組合，且其中氮及硫原子可視情況經氧化且氮雜原子可視情況經四級銨化。雜原子O、N及S可位於雜烷基之任何內部位置處或烷基連接至分子之其餘部分之位置處。雜原子Si可位於雜烷基之任何位置，包括烷基連接至分子之其餘部分之位置。
實例包括-CH2 -CH2 -O-CH3 、-CH2 -CH2 -NH-CH3 、-CH2 -CH2 -N(CH3 )-CH3 、-CH2 -S-CH2 -CH3 、-CH2 -CH2 -S(O)-CH3 、-NH-CH2 -CH2 -NH-C(O)-CH2 -CH3 、-CH2 -CH2 -S(O)2 -CH3 、-CH=CH-O-CH3 、-Si(CH3 )3 、-CH2 -CH=N-O-CH3 及-CH=CH-N(CH3 )-CH3 。至多兩個雜原子可為連續的，諸如(例如)-CH2 -NH-OCH3 及-CH2 -O-Si(CH3 )3 。通常，C1 至C4 雜烷基或伸雜烷基具有1至4個碳原子及1或2個雜原子，且C1 至C3 雜烷基或伸雜烷基具有1至3個碳原子及1或2個雜原子。在一些態樣中，雜烷基伸雜烷基為飽和的。
除非另有指示，否則術語「伸雜烷基」本身或與另一術語組合意謂如藉由-CH2 -CH2 -S-CH2 -CH2 -及-CH2 -S-CH2 -CH2 -NH-CH2 -所例示之衍生自雜烷基(如上文所論述)之二價基團。對於伸雜烷基，雜原子亦可佔據任一或兩個鏈末端。再者，對於伸烷基及伸雜烷基連接基團，未暗示連接基團之定向。
除非另有指示，否則「胺基烷基」本身或與另一術語組合意謂雜烷基，其中如本文所定義之烷基部分經胺基、烷胺基、二烷胺基或環烷胺基取代。例示性非限制性胺基烷基為-CH2 NH2 、-CH2 CH2 NH2 、-CH2 CH2 NHCH3 及-CH2 CH2 N(CH3 )2 且進一步包括分支鏈種類，諸如(R)-或(S)-組態中之-CH(CH3 )NH2 及-C(CH3 )CH2 NH2 。或者，胺基烷基為如本文所定義之烷基部分、基團或取代基，其中除基團碳以外的sp3 碳已經胺基或烷胺基部分置換，其中其sp3 氮置換烷基之sp3 碳，其限制條件為至少一個sp3 碳保留。當將胺基烷基部分指代為較大結構或另一部分之取代基時，胺基烷基係經由胺基烷基之烷基部分的碳基團共價連接至該結構或部分。
除非另有指示，否則「烷胺基」及「環烷胺基」本身或與另一術語組合意謂烷基或環烷基基團，如本文所描述，其中烷基或環烷基基團之基團碳已經氮基團置換，其限制條件為至少一個sp3 碳保留。在烷胺基在其氮處經另一烷基部分取代之彼等例項中，所得經取代基團有時稱為二烷胺基部分、基團或取代基，其中取代氮之烷基部分獨立地經選擇。
例示性及非限制性胺基、烷胺基及二烷胺基取代基包括具有-N(R')2 結構之彼等取代基，其中此等實例中之R'獨立地選自氫或C1 - 6 烷基，通常選自氫或甲基，而在包括於雜環烷基中之環烷基胺中，R'與其所連接之氮兩者一起定義雜環。當兩個R'均為氫或烷基時，該部分有時分別描述為一級胺基及三級胺基。當一個R'為氫且另一個為烷基時，則該部分有時描述為二級胺基。一級及二級烷胺基部分作為針對含羰基親電子中心之親核體反應性更大，而三級胺更基本。
「經取代烷基」及「經取代芳基」分別意謂烷基及芳基，其中一或多個氫原子(通常為一個)各自獨立地經取代基置換。典型取代基包括但不限於-X、-R'、-OH、-OR'、-SR'、-N(R')2 、-N(R')3 、=NR'、-CX3 、-CN、-NO2 、-NR'C(=O)R'、-C(=O)R' 、-C(=O)N(R' )2 、-S(=O)2 R' 、-S(=O)2 NR' 、-S(=O)R' 、-OP(=O)(OR' )2 、-P(=O)(OR' )2 、-PO3 = 、PO3 H2 、-C(=O)R' 、-C(=S)R' 、-CO2 R' 、-CO2 - 、-C(=S)OR' 、-C(=O)SR' 、-C(=S)SR' 、-C(=O)N(R' )2 、-C(=S)N(R' )2 及-C(=NR)N(R' )2 ，其中各X獨立地選自由鹵素：-F、-Cl、-Br及-I組成之群；且其中各R'獨立地選自由-H、-C1 -C20 烷基、-C6 -C20 芳基、-C3 -C14 雜環、保護基及前藥部分組成之群。
更典型地取代基係選自由-X、-R'、-OH、-OR'、-SR'、-N(R')2 、-N(R')3 、=NR'、-NR' C(=O)R' 、-C(=O)R' 、-C(=O)N(R' )2 、-S(=O)2 R' 、-S(=O)2 NR' 、-S(=O)R' 、-C(=O)R' 、-C(=S)R' 、-C(=O)N(R' )2 、-C(=S)N(R' )2 及-C(=NR)N(R' )2 組成之群，其中各X獨立地選自由-F及-Cl組成之群或係選自由-X、-R'、-OH、-OR'、-N(R')2 、-N(R')3 、-NR'C(=O)R'、-C(=O)N(R')2 、-S(=O)2 R'、-S(=O)2 NR'、-S(=O)R'、-C(=O)R'、-C(=O)N(R')2 、-C(=NR)N(R')2 、保護基及前藥部分組成之群，其中各X為-F；且其中各R'獨立地選自由氫、-C1 -C20 烷基、-C6 -C20 芳基、-C3 -C14 雜環、保護基及前藥部分組成之群。
在一些態樣中，烷基取代基係選自由-N(R' )2 、-N(R' )3 及-C(=NR)N(R' )2 組成之群，其中R'係選自由氫及-C1 -C20 烷基組成之群。在其他態樣中，烷基經一系列伸乙基氧基部分取代以定義PEG單元。如上文所描述之伸烷基、碳環、碳環基、伸芳基、雜烷基、伸雜烷基、雜環、雜環基、雜芳基及伸雜芳基亦可類似地經取代。
如此處所用之「保護基」意謂防止或減少其所連接之原子或官能基參與非所需反應之能力的部分。用於原子或官能基之典型保護基在Greene(1999),「Protective groups in organic synthesis, 第3版」, Wiley Interscience中給出。諸如氧、硫及氮之雜原子的保護基在一些例項中用於最小化或避免其與親電子化合物之非所需反應。在其他例項中，保護基係用於減小或消除無保護雜原子之親核性及/或鹼度。受保護氧之非限制性實例係藉由-ORPR 給出，其中RPR 為羥基之保護基，其中羥基通常作為酯(例如乙酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)受保護。羥基之其他保護基避免干擾有機金屬試劑或其他高鹼性試劑之親核性，其中羥基通常以醚之形式受保護，包括烷基或雜環烷基醚(例如甲基或四氫哌喃基醚)、烷氧基甲基醚(例如甲氧基甲基或乙氧基甲基醚)、視情況經取代之芳基醚及矽烷基醚(例如三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、第三丁基二甲基矽烷基(TBS/TBDMS)、三異丙基矽烷基(TIPS)及[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]-甲基矽烷基(SEM))。氮保護基包括如在-NHRPR 或-N(RPR )2 -中之用於一級或二級胺之彼等氮保護基，其中RPR 中之至少一者為氮原子保護基或兩個RPR 一起構成保護基。
當保護基能夠在實現分子中別處之期望化學轉化所需的反應條件下及在期望時純化新形成之分子期間防止或避免非所需副反應或保護基之過早喪失，且可以在不會不利地影響新形成分子之結構或立體化學完整性的條件下移除時，該保護基為適合之保護基。借助於實例（且非限制），適合之保護基可包括先前針對保護官能基所描述之彼等保護基。適合之保護基有時為用於肽偶合反應之保護基。
「芳族醇」本身或作為較大結構之一部分係指經羥基官能基-OH取代之芳環系統。因此，芳族醇係指如本文所描述之任何芳基、雜芳基、伸芳基及伸雜芳基部分，其具有結合至其芳環系統之芳族碳的羥基官能基。芳族醇可為較大部分之一部分，如當其芳環系統為此部分之取代基時，或可藉由環稠合嵌入該較大部分中，且可視情況經如本文所描述之包括一或多個其他羥基取代基之部分取代。酚醇為具有酚基團作為芳環之芳族醇。
「脂族醇」本身或作為較大結構之一部分係指具有結合至羥基官能基-OH之非芳族碳之部分。含羥基碳可未經取代(亦即甲基醇)或可具有一個、兩個或三個視情況經取代分支鏈或非分支鏈烷基取代基以在線性或環狀結構內定義一級醇或二級或三級脂族醇。當為較大結構之一部分時，醇可藉由經由含羥基碳、經由如本文所描述之烷基或其他部分之碳鍵結至此含羥基碳或經由此烷基或其他部分之取代基而為此結構之取代基。脂族醇涵蓋非芳族環狀結構(亦即碳環及雜碳環，其視情況經取代)，其中羥基官能基鍵結至其環狀環系統之非芳族碳。
如本文所用，「芳烷基」或「雜芳烷基」意謂其中芳基部分鍵結至烷基部分(亦即芳基-烷基-)之取代基、部分或基團，其中烷基及芳基如上文所描述，例如C6 H5 -CH2 -或C6 H5 -CH(CH3 )CH2 -。芳烷基或雜芳烷基經由其烷基部分之sp3 碳與較大結構或部分締合。
如本文所用，「拉電子基團」意謂以電感方式及/或經由共振(以兩者中佔主導者為準(亦即官能基或原子可以電感方式拉電子但可整體上經由共振而供給電子))將電子密度拉離其所鍵結的原子之官能基或負電性原子，且傾向於穩定陰離子或富電子部分。拉電子效果通常藉由拉電子基團(EWG)以電感方式傳輸(儘管以減弱形式)至連接至已變為缺電子的鍵結原子之其他原子，由此影響較遠端反應性中心之親電子性。例示性拉電子基團包括但不限於-C(=O)、-CN、-NO2 、-CX3 、-X、-C(=O)OR' 、-C(=O)N(R' )2 、-C(=O)R' 、-C(=O)X、-S(=O)2 R' 、-S(=O)2 OR' 、-S(=O)2 NHR' 、-S(=O)2 N(R' )2 、-P(=O)(OR' )2 、-P(=O)(CH3 )NHR' 、-NO、-N(R' )3 + ，其中X為-F、-Br、-Cl或-I，且在一些態樣中在每次出現時R'獨立地選自由氫及C1 - 6 烷基及如本文所描述之某些O-連接部分(諸如醯氧基)組成之群。
例示性EWG亦可視取代基而定包括芳基(例如苯基)及某些雜芳基(例如吡啶)。因此，術語「拉電子基團」亦包括進一步經拉電子基團取代之芳基或雜芳基。通常，芳基或雜芳基上之拉電子基團為-C(=O)、-CN、-NO2 、-CX3 及-X，其中X獨立地選為鹵素，通常選為-F或-Cl。視其取代基而定，烷基部分亦可為拉電子基團。
「離去基能力」係關於對應於喜樹鹼結合物中之喜樹鹼的含醇、硫醇、胺或醯胺化合物在結合物內之自我分解型事件之活化之後自結合物釋放為游離藥物之能力。該釋放在無其喜樹鹼所連接之亞甲基胺基甲酸酯單元的益處之情況下(亦即當喜樹鹼直接連接至自我分解型部分且不具有插入亞甲基胺基甲酸酯單元時)可為可變的。良好離去基通常為弱鹼基，且自此等結合物排出之官能基之酸性愈大，結合物鹼基愈弱。因此，來自喜樹鹼之含醇、硫醇、胺或醯胺游離藥物的離去基能力將與在不使用亞甲基胺基甲酸酯單元之情況下(亦即其中喜樹鹼直接連接至自我分解型部分的情況)自結合物排出之藥物之官能基的pKa相關。因此，該官能基之較低pKa將增加其離去基能力。儘管其他因素可有助於游離藥物自不具有亞甲基胺基甲酸酯單元之益處的結合物釋放，但一般具有更低pKa值之官能基的藥物將通常為比經由具有更高pKa值之官能基連接的藥物更佳之離去基團。另一考慮因素為具有過低pKa值之官能基可產生因過早經由自發性水解喪失喜樹鹼所致的不可接受之活性概況。對於採用亞甲基胺基甲酸酯單元之結合物，在自我分解時生成具有引起游離藥物之有效釋放的pKa值之共用官能基(亦即胺基甲酸)而不遭受不可接受之喜樹鹼喪失。
如本文所用，「丁二醯亞胺部分」係指由丁二醯亞胺環系統組成之有機部分，其存在於一種類型之延伸子單元(Z)中，該延伸子單元通常進一步由鍵結至彼環系統之醯亞胺氮之含伸烷基部分組成。丁二醯亞胺部分通常由配位子單元之硫氫基至延伸子單元前驅體(Z')之順丁烯二醯亞胺環系統之邁克爾(Michael)加成產生。因此丁二醯亞胺部分由經硫基取代之丁二醯亞胺環系統組成且當存在於喜樹鹼結合物中時使其醯亞胺氮經喜樹鹼結合物之連接子單元的其餘部分取代且視情況經存在於Z'之順丁烯二醯亞胺環系統上之取代基取代。
如本文所用，「酸-醯胺部分」係指丁二酸，其具有由丁二醯亞胺部分之經硫基取代丁二醯亞胺環系統產生之醯胺取代基，該丁二醯亞胺部分已藉由水解經受其羰基-氮鍵中之一者之斷裂。產生丁二酸-醯胺部分之水解經由消除抗體-硫基取代基提供較不可能遭受其所鍵結的配位子單元之過早喪失之連接子單元。預期經硫基取代之丁二醯亞胺部分之丁二醯亞胺環系統的水解提供酸-醯胺部分之區域化學異構體，該等異構體係因丁二醯亞胺環系統之兩個羰基碳之反應性差異所致，其可至少部分歸因於存在於延伸子單元前驅體的順丁烯二醯亞胺環系統中之任何取代基且歸因於藉由靶向配位子引入之硫基取代基。
如本文所用，術語「前藥」係指更低生物活性或非活性化合物，其在體內經由化學或生物過程(亦即化學反應或酶促生物轉型)轉型成更具生物活性化合物。通常，生物活性化合物藉由用前藥部分化學修飾該化合物而呈現更低生物活性(亦即轉化成前藥)。在一些態樣中，前藥為第II型前藥，其在細胞外(例如在消化流體中)或在身體循環系統中(例如在血液中)生物活化。例示性前藥為酯及β-D-葡萄哌喃醣苷。
在許多例項中，本文所描述之結合物、連接子及組分之組件係指反應性基團。「反應性基團」或RG為含有能夠與連接子單元(亦即A、W、Y)或喜樹鹼D之任一組分形成鍵之反應性位點(RS)的基團。RS為反應性基團(RG)內之反應性位點。反應性基團包括用以形成二硫鍵或硫醚鍵之硫氫基；用以形成腙鍵之醛、酮或肼基；用以形成肽鍵之羧基或胺基；用以形成酯鍵之羧基或羥基；用以形成磺醯胺鍵之磺酸；用以形成胺基甲酸酯鍵之醇；及用以形成磺醯胺鍵或胺基甲酸酯鍵之胺。
下表說明在反應性位點之反應之後可形成的反應性基團、反應性位點及例示性官能基。該表不具限制性。熟習此項技術者應瞭解該表中所指出之R'及R''部分有效地為與於使RG轉化為例示性官能基中之一者中所提供之鍵形成相容的任何有機部分(例如烷基、芳基、雜芳基；或經取代之烷基、芳基或雜芳基)。亦應瞭解，當應用於本發明之實施例時，視具體情況R'可表示自穩定連接子或視情況選用之次要連接子的一或多種組分，且視具體情況R"可表示視情況選用之次要連接子、喜樹鹼、穩定單元或偵測單元之一或多種組分。 實施例
下文描述本發明之多個實施例，該等實施例不意欲以任何方式限制本發明，且隨後為對構成結合物之組分之更詳細論述。熟習此項技術者應理解，所鑑別之結合物中之每一者及其所選實施例中之任一者意欲包括各組分及連接子之完整範疇。喜樹鹼結合物
在一個原理實施例中，本文提供喜樹鹼結合物，其具有下式： L-(Q-D)p 或其鹽，其中 L為配位子單元； 下標p為1至16之整數； Q為連接子單元，其具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-、-Z-A-RL-；-Z-A-RL-Y-；Z-A-S* -W-；-Z-A-S* -RL-；-Z-A-B(S* )-RL-； -Z-A-S* -W-RL-、-Z-A-S* -RL-Y-；及-Z-A-B(S* )-RL-Y-； 其中Z為延伸子單元， A為鍵或連結子單元； B為並聯連結子單元； S* 為分隔劑； W為肽單元； RL為可釋放單元； Y為間隔子單元；及 D為藥物單元，其選自由以下組成之群： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-；
RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；
各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基-C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基-C(O)-、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基-C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，或
RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自由以下組成之群的取代基之5員、6員或7員環：鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 ；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；及
其中當Q為-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -RL-Y-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-(其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者)時，D與Q之連接點經由存在於CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7上的羥基或一級胺或二級胺官能基中之任一者之雜原子，或
其中當Q為-Z-A-、-Z-A-S* -W-或-Z-A- B(S* )-W-時或當-Q為Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-或-Z-A-B(S* )-W-RL-(其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放單元)時，D與Q之連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之內酯環中的羥基取代基之氧原子；及
其限制條件為當連接點達至CPT6之胺基之氮原子時，RF 及RF ' 中之至少一者為-H，及
其限制條件為當D為具有經由其胺基之連接之CPT1時-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -RL-Y-及-Z-A-B(S* )-RL-Y-之-Z-A-不為丁二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環。
在一組實施例中，D具有式CPT5。
在一組實施例中，D具有式CPT2。
在一組實施例中，D具有式CPT3。
在一組實施例中，D具有式CPT4。
在一組實施例中，D具有式CPT1。
在一組實施例中，D具有式CPT6。
在一組實施例中，D具有式CPT7。
在一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-RL-及-Z-A-RL-Y-，
其中RL為可釋放連接子(其為葡萄糖醛酸苷單元)且基團Z、A及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-S* -RL-及-Z-A-S* -RL-Y-，
其中RL為可釋放連接子(其為葡萄糖醛酸苷單元)且基團Z、A、S* 及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-B(S* )-RL-及-Z-A-B(S* )-RL-Y-，
其中RL為可釋放連接子(其為葡萄糖醛酸苷單元)且基團Z、A、S* 、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A- 或 -Z-A-RL-，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團Z及A具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-S* -RL-及-Z-A-B(S* )-RL-，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團Z、A、S* 及B具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-S* -W-及-Z-A-B(S* )-W-，
其中基團Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、-Z-A-B(S* )-RL-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-且包含具有式CPT1的藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S* 、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義，其限制條件為CPT1iN、CPT1iiN、CPT1iiiN、CPT1ivN、CPT1vN及CPT1viN之-Z-A-不為丁二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S* -W-、-Z-A-B(S* )-W-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-且包含具有式CPT1的藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、-Z-A-B(S* )-RL-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-且包含具有式CPT2之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S* 、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S* -W-、-Z-A-B(S* )-W-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-且包含具有式CPT2之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示：，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，式CPT2iOa、CPT2iiOa、CPT2iiiOa、CPT2ivOa、CPT2vOa、CPT2viOa、CPT2iOb、CPT2iiOb、CPT2iiiOb、CPT2ivOb、CPT2vOb、CPT2viOb、CPT2viiOb或CPT2viiiOb中之RB 為選自由-H、C1 -C8 烷基及C1 -C8 鹵烷基組成之群的部分。
在一組實施例中，式CPT2iOa、CPT2iiOa、CPT2iiiOa、CPT2ivOa、CPT2vOa、CPT2viOa、CPT2iOb、CPT2iiOb、CPT2iiiOb、CPT2ivOb、CPT2vOb、CPT2viOb、CPT2viiOb或CPT2viiiOb中之RB 為選自由C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-組成之群的部分，且其中RB 之環烷基及苯基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、-Z-A-B(S* )-RL-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-且包含具有式CPT3之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S* 、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S* -W-、-Z-A-B(S* )-W-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-且包含具有式CPT3之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示：，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，式CPT3iOa、CPT3iiOa、CPT3iiiOa、CPT3ivOa、CPT3vOa、CPT3viOa、CPT3iO'a、CPT3iiO'a、CPT3iiiO'a、CPT3ivO'a、CPT3vO'a、CPT3viO'a、CPT3iOb、CPT3iiOb、CPT3iiiOb、CPT3ivOb、CPT3vOb、CPT3viOb、CPT3viiOb或CPT3viiiOb中之RC 為C1 -C6 烷基。
在一組實施例中，式CPT3iOa、CPT3iiOa、CPT3iiiOa、CPT3ivOa、CPT3vOa、CPT3viOa、CPT3iO'a、CPT3iiO'a、CPT3iiiO'a、CPT3ivO'a、CPT3vO'a、CPT3viO'a、CPT3iOb、CPT3iiOb、CPT3iiiOb、CPT3ivOb、CPT3vOb、CPT3viOb、CPT3viiOb或CPT3viiiOb中之RC 為C3 -C6 環烷基。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、-Z-A-B(S* )-RL-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-且包含具有式CPT4之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S* 、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S* -W-、-Z-A-B(S* )-W-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-且包含具有式CPT4之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S* 、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-S* -RL-Y-、-Z-A-B(S* )-RL-或-Z-A-B(S* )-RL-Y-且包含具有式CPT5之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S*、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S* -W-、-Z-A-B(S* )-W-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S* -W-RL-及-Z-A-B(S* )-W-RL-且包含具有式CPT5之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S*、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-且包含具有式CPT6之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S*、B及Y具有上文及本文所具體列舉之任何實施例中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-及-Z-A-B(S*)-W-RL-且包含具有式CPT6之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示：
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S*、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在一組實施例中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中之RF 為-H。
在一組實施例中，式CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中之RF 及RF ' 均為-H。
在一組實施例中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中之RF 為選自由以下組成之群的部分：C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基-C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-及C1 -C8 胺基烷基C(O)-。
在一組實施例中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中之RF 為選自由以下組成之群的部分：C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，且其中RF 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代。
在一組實施例中，式CPT6iN、CPT6iiN、CPT6iiiN、CPT6ivN、CPT6vN或CPT6viN中之RF 為獨立地選自由以下組成之群的部分：-H、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，且其中RF 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代。
在一組實施例中，式CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中之RF 及RF ' 與二者所連接之氮原子組合以形成具有0至3個取代基之5員、6員或7員環，取代基獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組。
在一組實施例中，CPT6iOa、CPT6iiOa、CPT6iiiOa、CPT6ivOa、CPT6vOa、CPT6viOa、CPT6iOb、CPT6iiOb、CPT6iiiOb、CPT6ivOb、CPT6vOb、CPT6viOb、CPT6viiOb或CPT6viiiOb中之RF 及RF ' 中之至少一者為獨立地選自由以下組成之群的部分：C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-及C1 -C8 胺基烷基-C(O)-，且另一者為選自由以下組成之群的部分：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基-C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-及C1 -C8 胺基烷基C(O)-。
在一組實施例中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中之RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的部分：C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-及C1 -C8 胺基烷基-C(O)-。
在一組實施例中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中之RF 及RF ' 中之至少一者為獨立地選自由以下組成之群的部分：C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，且其中RF 或RF ' 之苯基及雜芳基部分經0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代，且另一者為選自由以下組成之群的部分：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基-C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-及C1 -C8 胺基烷基C(O)-。
在一組實施例中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中之RF 及RF ' 中之至少一者為獨立地選自由以下組成之群的部分：C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，且另一者為選自由以下組成之群的部分：-H、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，其中RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代。
在一組實施例中，式CPT6iO、CPT6iiO、CPT6iiiO、CPT6ivO、CPT6vO或CPT6viO中之各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的部分：-H、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，且其中RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分獨立地經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代。
在另一組實施例中，其中Q具有式-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A- S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-且包含具有式CPT7之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ，
其中RL為本文所揭示之可釋放連接子中之任一者，較佳地RL為葡萄糖醛酸苷單元，且基團L、Z、A、S*、B及Y具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。
在其他實施例中，其中Q具有式-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-及-Z-A-B(S*)-W-RL-且包含具有式CPT5之藥物單元之喜樹鹼結合物分別由下式表示： ,
其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子且基團L、Z、A、S*、B及W具有上文及本文所具體列舉之實施例中之任一者中所提供的含義。喜樹鹼 - 連接子化合物
在一些實施例中，當製備喜樹鹼結合物時，將需要在結合至靶向劑之前合成完全藥物-連接子。在此等實施例中，如本文所描述之喜樹鹼-連接子化合物為中間化合物。在彼等實施例中，喜樹鹼-連接子化合物中之延伸子單元並未共價連接至配位子單元(亦即為延伸子單元前驅體，Z')，且因此具有用於結合至靶向配位子的官能基。在一個實施例中，喜樹鹼-連接子化合物包含喜樹鹼化合物(在本文顯示為式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7)，且連接子單元(Q)包含葡萄糖醛酸苷單元作為可釋放連接子(RL)，經由該可釋放連接子配位子單元連結至喜樹鹼。
在另一實施例中，喜樹鹼-連接子化合物包含式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之喜樹鹼化合物，且連接子單元(Q)包含除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放連接子(RL)，經由該可釋放連接子配位子單元連結至結合之喜樹鹼化合物。因此，在任一實施例中除RL以外連接子單元包含延伸子單元前驅體(Z')，該延伸子單元前驅體包含用於結合至為配位子單元之前驅體的靶向劑之官能基且因此能夠(直接地或間接地)將RL連結至配位子單元。在一些彼等實施例中，當並聯連結子單元(B)為所期望的時，添加分隔劑(S*)作為側鏈附件。在彼等實施例中之任一者中，當期望在延伸子單元與RL之間添加更大間距時存在連結子單元(A)。
在一組實施例中，喜樹鹼-連接子化合物包含具有式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之喜樹鹼化合物及連接子單元(Q)，其中Q包含為葡萄糖醛酸苷單元之可釋放連接子(RL)，該可釋放連接子直接連接至延伸子單元前驅體(Z')或經由連接至喜樹鹼-連接子化合物之連接子單元(亦即A、S*及/或B(S*))的插入組分而間接連接至Z'，其中Z'包含能夠形成與靶向劑之共價鍵的官能基。
在另一組實施例中，喜樹鹼-連接子化合物包含具有式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之喜樹鹼及連接子單元(Q)，其中Q包含除葡萄糖醛酸苷單元(RL)以外的可釋放連接子(RL)，該可釋放連接子直接連接至延伸子單元前驅體(Z')或經由連接至喜樹鹼-連接子化合物之連接子單元(亦即A、S*及/或B(S*))的插入組分而間接連接至Z'，其中Z'包含能夠形成與靶向劑之共價鍵的官能基。
在喜樹鹼結合物及/或喜樹鹼-連接子化合物之情形下組裝最佳就其組分基團而言描述。儘管本文亦描述一些程序，但熟習此項技術者將充分理解組裝之次序及製備結合物及化合物之一般條件。組分基團 配位子單元：
在本發明之一些實施例中，存在配位子單元。配位子單元(L-)為特異性結合至目標部分之靶向劑。在一組實施例中，配位子單元特異性且選擇性結合至細胞組分(細胞結合劑)或其他所關注之目標分子。配位子單元用以靶向及呈遞喜樹鹼(CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7)至特定目標細胞群體，配位子單元由於存在其靶向組分或分子與配位子單元相互作用且引起目標細胞內(亦即胞內)或目標細胞之附近內(亦即胞外)游離藥物之後續釋放。配位子單元(L)包括但不限於蛋白質、多肽及肽。適合之配位子單元包括例如抗體(例如全長抗體及其抗原結合片段)、干擾素、淋巴介質、激素、生長因子及菌落刺激因子、維生素、養分輸送分子(諸如但不限於運鐵蛋白)或任何其他細胞結合分子或物質。在一些實施例中，配位子單元(L)來自抗體或非抗體蛋白質靶向劑。
在一組實施例中，配位子單元鍵結至包含葡萄糖醛酸苷可釋放連接子之Q (連接子單元)。如上文所指出，另外其他連接組分可能存在於本文所描述之結合物中以供提供喜樹鹼藥物化合物與配位子單元之間的額外空間(例如延伸子單元及視情況選用之連結子單元，A)或得到組合物之特性以提高溶解度(例如分隔劑，S* )之目的。在一些彼等實施例中，配位子單元經由配位子單元之雜原子鍵結至連接子單元之Z。可存在於配位子單元上用於彼鍵結之雜原子包括硫(在一個實施例中，其來自靶向配位子之硫氫基)、氧(在一個實施例中，其來自靶向配位子之羧基或羥基)及視情況經取代之氮(在一個實施例中，其來自靶向配位子之一級或二級胺官能基或在另一實施例中，其來自視情況經取代之醯胺氮)。彼等雜原子可存在於呈配物子之天然態(例如呈天然存在之抗體)之靶向配位子上或可經由化學修飾或生物工程改造引入靶向配位子中。
在一個實施例中，為配位子單元之前驅體的靶向劑具有硫氫基官能基以使得配位子單元經由該硫氫基官能基之硫原子鍵結至連接子單元。
在另一實施例中，為配位子單元之前驅體的靶向劑具有一或多個離胺酸殘基，離胺酸殘基能夠與喜樹鹼-連接子化合物中間物之延伸子單元前驅體之經活化酯(此等酯包括但不限於N -羥基丁二醯亞胺、五氟苯基及對硝苯基酯)反應且因此提供由配位子單元的氮原子及連接子單元之延伸子單元的C=O基團組成之醯胺鍵。
在又另一態樣中，為配位子單元之前驅體的靶向劑具有一或多個能夠化學修飾以引入一或多個硫氫基之離胺酸殘基。在彼等實施例中，配位子單元經由硫氫基官能基之硫原子共價連接至連接子單元。可用於以彼方式修飾離胺酸之試劑包括但不限於S-乙醯基硫基乙酸N-丁二醯亞胺酯(SATA)及2-亞胺基硫雜環戊烷鹽酸鹽(妥特氏試劑(Traut's Reagent))。
在另一實施例中，為配位子單元之前驅體的靶向劑具有一或多個能夠修飾以提供一或多個硫氫基官能基之碳水化合物基團。喜樹鹼結合物中之經化學修飾配位子單元經由硫氫基官能基之硫原子鍵結至連接子單元組分(例如延伸子單元)。
在又一實施例中，為配位子單元之前驅體的靶向劑具有一或多個可經氧化以提供醛(-CHO)官能基之碳水化合物基團(參見例如 Laguzza等人 , 1989,J . Med . Chem . 32(3):548-55)。在此等實施例中，對應醛與延伸子單元前驅體上之反應性位點相互作用以形成延伸子單元與配位體單元之間的鍵。延伸子單元前驅體上之能夠與靶向配位子單元上之反應性含羰基官能基相互作用之反應性位點包括包括但不限於肼及羥胺。其他用於修飾蛋白質以用於連接連接子單元(Q)或相關物種之方案在Coligan等人 ,Current Protocols in Protein Science , 第2卷, John Wiley & Sons (2002) (其以引用之方式併入本文中)中描述。
在一些態樣中，為配位子單元t之前驅體的靶向劑能夠藉由與延伸子單元前驅體(Z')上之反應性官能基相互作用形成鍵以形成延伸子單元(Z)與配位子單元之間的共價鍵，其在結構上對應於靶向劑。能夠與靶向劑相互作用之Z'之官能基將視靶向劑之性質而定，靶向劑將在結構上對應於配位子單元。在一些實施例中，反應性基團為在其連接形成配位子單元之前存在於延伸子單元上的順丁烯二醯亞胺(亦即延伸子單元前驅體之順丁烯二醯亞胺部分)。配位子單元與延伸子單元之共價連接係經由靶向劑之硫氫基官能基實現，靶向劑為與Z'之順丁烯二醯亞胺官能基相互作用以形成經硫基取代的丁二醯亞胺之配位子單元之前驅體。硫氫基官能基可存在於呈靶向劑之天然態(例如呈天然存在之殘基)之靶向劑上或可經由化學修飾或藉由生物工程改造引入靶向劑中。
在再一實施例中，配位子單元來自抗體，且硫氫基係藉由還原抗體之鏈間二硫鍵產生。因此，在一些實施例中，連接子單元與來自經還原鏈間二硫鍵之半胱胺酸殘基結合。
在又一實施例中，配位子單元來自抗體，且硫氫基官能基係以化學方式引入抗體中，例如藉由引入半胱胺酸殘基。因此，在一些實施例中，連接子單元(具有或不具有連接喜樹鹼)經由配位子單元之引入半胱胺酸殘基與配位子單元結合。
關於生物結合物已觀測到，藥物結合之位點可影響多個參數，包括結合容易性、藥物-連接子穩定性、對所得生物結合物之生理特性的影響及活體外細胞毒性。關於藥物-連接子穩定性，藥物-連接子部分與配位子單元之結合位點可影響在一些例項中所結合藥物-連接子部分經受消除反應以引起游離藥物之過早釋放的能力。靶向劑上之結合位點包括例如經還原之鏈間二硫鍵以及在工程改造位點處之選定半胱胺酸殘基。在一些實施例中，形成如本文所描述之喜樹鹼結合物的結合方法使用與使用來自經還原二硫鍵之硫醇殘基的結合方法相比更不易受消除反應影響之基因工程改造位點處(例如根據如Kabat中所列之EU索引位置239)之硫醇殘基。在其他實施例中，形成如本文所描述之喜樹鹼結合物之結合方法使用由鏈間二硫鍵還原產生的硫醇殘基。
在一些實施例中，喜樹鹼結合物包含非免疫反應性蛋白質、多肽或肽作為其配位子單元。因此，在一些實施例中，配位子單元來自非免疫反應性蛋白質、多肽或肽。實例包括但不限於運鐵蛋白、表皮生長因子(「EGF」)、鈴蟾素、胃泌素、釋放胃泌素之肽、血小板衍生生長因子、IL-2、IL-6、轉型生長因子(「TGF」) (諸如TGF-α及TGF-β)、痘瘡生長因子(「VGF」)、胰島素及胰島素樣生長因子I及II、生長抑素、凝集素及來自低密度脂蛋白質之缺輔基蛋白質。
尤其較佳的配位子單元來自抗體。因此，在本文所描述之實施例中之任一者中，配位子單元來自抗體。適用多株抗體為來源於經免疫接種動物之血清的異質抗體分子群。適用單株抗體為針對特定抗原決定子(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學品、核酸或其片段)之均質抗體群。在一些實施例中，針對所關注抗原的單株抗體(mAb)係藉由使用此項技術中已知之任何技術製備，該技術藉由培養物中的連續細胞系提供抗體分子之產生。
適用單株抗體包括但不限於人類單株抗體、人類化單株抗體或嵌合人類-小鼠(或其他物種)單株抗體。抗體包括全長抗體及其抗原結合片段。可藉由此項技術中已知之大量技術中之任一者來製備人類單株抗體(例如 Teng等人 , 1983,Proc . Natl . Acad . Sci . USA . 80：7308-7312；Kozbor等人 , 1983,Immunology Today 4：72-79；及Olsson等人 , 1982,Meth Enzymol . 92：3-16)。
適用於實踐本發明之抗體為完整抗體或抗體之功能活性片段、衍生物或類似物，其中抗體或其片段能夠免疫特異性結合至目標細胞(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原)或鍵結至腫瘤細胞腫瘤細胞或基質之其他抗體。就此而言，「功能活性」意謂片段、衍生物或類似物能夠免疫特異性結合目標細胞。在一些實施例中，為確定何種CDR序列結合抗原，在使用抗原之結合分析中使用含有CDR序列之合成肽藉由此項技術中已知之結合分析方法(例如BIA核心分析) (參見例如 Kabat等人 , 1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, National Institute of Health, Bethesda, Md；Kabat E等人 , 1980,J . Immunology 125(3):961-969)。
其他適用抗體包括抗體之片段，諸如但不限於F(ab')2 片段、Fab片段、Fv、單鏈抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、scFv、scFv-FV或具有與抗體相同之特異性的任何其他分子。
另外，包含人類與非人類部分之重組抗體(諸如嵌合及人類化單株抗體)為適用抗體，在一些實施例中，該等重組抗體使用標準重組DNA技術製成。嵌合抗體為不同部分衍生自不同動物物種之分子，諸如(例如)具有衍生自鼠類單株之可變區及人類免疫球蛋白恆定區之彼等分子。(參見例如 美國專利第4,816,567號；及美國專利第4,816,397號，其以全文引用之方式併入本文中)。人類化抗體為來自非人類物種之抗體分子，其具有一或多個來自非人類物種之互補決定區(CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。(參見例如 美國專利第5,585,089號，其以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，此等嵌合及人類化單株抗體藉由此項技術中已知之重組DNA技術例如使用在以下各者中所描述的方法產生：國際公開案第WO 87/02671號；歐洲專利公開案第0 184 187號；歐洲專利公開案第0 171 496號；歐洲專利公開案第0 173 494號；國際公開案第WO 86/01533號；美國專利第4,816,567號；歐洲專利公開案第012 023號；Berter等人 , 1988,Science 240:1041-1043；Liu等人 , 1987,Proc . Natl . Acad . Sci . USA 84:3439-3443；Liu等人 , 1987,J . Immunol . 139:3521-3526；Sun等人 , 1987,Proc . Natl . Acad . Sci . USA 84:214-218；Nishimura等人 , 1987,Cancer . Res . 47:999-1005；Wood等人 , 1985,Nature 314:446-449；及Shaw等人 , 1988,J . Natl . Cancer Inst . 80:1553-1559；Morrison, 1985,Science 229:1202-1207；Oi等人 , 1986,BioTechniques 4:214；美國專利第5,225,539號；Jones等人 , 1986,Nature 321:552-525；Verhoeyan等人 , 1988,Science 239:1534；及Beidler等人 , 1988,J . Immunol . 141:4053-4060；其各自以全文引用之方式併入本文中。
完全人類抗體在一些例項中(例如當可能出現對非人類或嵌合抗體之免疫原性時)為更合乎需要的且在一些實施例中使用不能表現內源性免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因但能夠表現人類重鏈及輕鏈基因之轉殖基因小鼠產生。
抗體包括類似物及衍生物，其各自經修飾，亦即藉由共價連接任何類型之分子修飾，只要此等共價連接允許抗體保持其抗原結合免疫特異性即可。舉例而言(但不以限制方式)，抗體之衍生物及類似物包括已例如藉由醣基化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團衍生化、蛋白質裂解、與細胞抗體單元或其他蛋白質連接等而進一步修飾的彼等衍生物及類似物。在一些實施例中，彼等許多化學修飾中之一或多者藉由已知技術實施，該等技術包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、在衣黴素存在下代謝合成等。在其他實施例中，抗體之類似物或衍生物含有一或多種非天然胺基酸，其有時與一或多個上文所描述之化學修飾組合。
在一些實施例中，抗體在與Fc受體相互作用之胺基酸殘基中具有一或多個修飾(例如取代、缺失或添加)。彼等修飾包括經鑑別為涉及抗Fc域與FcRn受體之間的相互作用之胺基酸殘基中的修飾(參見例如 國際公開案第WO 97/34631號，其以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，抗體對癌細胞抗原之免疫特異性可以商業方式獲得或藉由熟習此項技術者已知的方法(諸如重組表現技術)產生。編碼對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體的核苷酸序列有時例如自GenBank資料庫或與其類似之資料庫、文獻出版物或藉由常規選殖及定序獲得。
在一具體實施例中，使用用於治療癌症之已知抗體。
在另一具體實施例中，根據本發明之組合物及方法使用用於治療自體免疫疾病之抗體。
在某些實施例中，適用抗體結合表現於經活化淋巴細胞上之受體或受體複合物。在一些實施例中，該受體或受體複合物為免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整合素、細胞介素受體、趨化介素受體、主要組織相容蛋白質、凝集素或補體控制蛋白質。
在一些實施例中，併入喜樹鹼結合物中之抗體將特異性結合CD19、CD30、CD33、CD70及LIV-1。喜樹鹼化合物：
本文所描述之各種實施例中所利用之喜樹鹼化合物由下式表示： ;
其中RB 為選自由以下組成之群的部分：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-；
RC 為選自由以下組成之群的部分：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；
各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的部分：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基-C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基-C(O)-、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，或
RF 及RF ' 與二者所連接之氮原子組合形成具有0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基之5員、6員或7員環，
其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個獨立地選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成的群組之取代基取代。
在本文所描述之喜樹鹼結合物及喜樹鹼連接子化合物之情形下另外其他喜樹鹼化合物為適用的。有效地，彼等喜樹鹼化合物將具有與如式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7所提供之彼等結構類似的五環或六環稠合框架，但可具有額外基團，包括但不限於羥基、硫醇、胺或醯胺官能基，該等官能基之氧、硫或視情況經取代之氮原子能夠併入連接子中且能夠自喜樹鹼結合物釋放為游離藥物。在一些態樣中，官能基在可用喜樹鹼化合物上提供唯一位點用於連接至連接子單元(Q)。所得喜樹鹼結合物之藥物-連接子部分為能夠在由其配位子單元靶向之位點處釋放活性游離藥物以便發揮細胞毒性、細胞抑制或免疫抑制作用之部分。
「游離藥物」係指藥物，因為其在自藥物-連接子部分釋放後存在。在一些實施例中，游離藥物包括可釋放連接子或間隔子單元(Y)基團之片段。包括可釋放連接子或間隔子單元(Y)之片段的游離藥物經由可釋放連接子之裂解自藥物-連接子部分之其餘部分釋放或經由間隔子單元(Y)基團中之鍵的裂解釋放且在釋放之後為生物活性的。在一些實施例中，游離藥物與結合藥物之不同之處在於游離藥物之用於連接至自我分解型組件單元之官能基不再與喜樹鹼結合物之組分(除先前共有雜原子以外)締合。舉例而言，含醇藥物之游離羥基官能基可表示為D-O* H，而在結合形式中，由O*指定之氧雜原子併入自我分解型單元之亞甲基胺基甲酸酯單元中。在自我分解型部分之活化及游離藥物之釋放之後，與O*之共價鍵經氫原子置換以使得由O*指定之氧雜原子以-O-H形式存在於游離藥物上。連接子單元 ( Q )
如上文所指出，在一些實施例中，連接子單元Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-RL-；-Z-A-RL-Y-；-Z-A-S* -RL-；-Z-A-B(S* )-RL-； -Z-A-S* -RL-Y-；及-Z-A-B(S* )-RL-Y-；
其中Z為延伸子單元；A為鍵或連結子單元；B為分支單元；S* 為分隔劑；RL為可釋放連接子(其為葡萄糖醛酸苷單元)；及Y為間隔子單元；及
其中D至Q之連接點經由存在於CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7上羥基及之一級及二級胺的雜原子中之任一者。
在其他實施例中，連接子單元Q具有選自由以下組成之群之式： -Z-A-；-Z-A-RL-；-Z-A-S* -W-；-Z-A-B(S* )-W-；-Z-A-S* -RL-；-Z-A-B(S* )-RL-； -Z-A-S* -W-RL-；及-Z-A-B(S* )-W-RL-；
其中Z為延伸子單元，A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S* 為分隔劑；RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外之可釋放連接子；及W為胺基酸單元；及
其中與Q之連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之內酯環之羥基取代基。
在一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式：-Z-A-S* -RL-及-Z-A-S* -RL-Y-。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式：-Z-A-B(S* )-RL-及-Z-A-B(S* )-RL-Y-。
在另一組實施例中，Q具有選自由以下組成之群之式：-Z-A-RL-及-Z-A-RL-Y-。延伸子單元 ( Z ) 或 ( Z ' ) ：
延伸子單元(Z)為用以連結配位子單元至結合物之其餘部分的喜樹鹼結合物或喜樹鹼-連接子化合物或其他中間物之組分。在彼方面，在連接至配位子單元之前的延伸子單元(亦即延伸子單元前驅體，Z')具有可與靶向配位子之官能基形成鍵之官能基。
在一些態樣中，延伸子單元前驅體(Z')具有親電子基團，其能夠與存在於配位子單元(例如抗體)上之反應性親核基團相互作用以提供配位子單元與連接子單元之延伸子單元之間的共價鍵。抗體上之具有彼能力之親核基團包括但不限於硫氫基、羥基及胺基官能基。抗體之親核基團之雜原子對延伸子單元前驅體上之親電子基團具反應性且提供配位子單元與連接子單元或藥物-連接子部分之延伸子單元之間的共價鍵。用於彼目的之適用親電子基團包括但不限於順丁烯二醯亞胺、鹵乙醯胺基團及NHS酯。親電子基團提供用於抗體連接之適宜位點以形成喜樹鹼結合物或配位子單元-連接子中間物。
在另一實施例中，延伸子單元前驅體具有反應性位點，其具有對存在於配位子單元(例如抗體)上之親電子基團具反應性之親核基團。抗體上之用於彼目的之適用親電子基團包括但不限於醛及酮羰基基團。延伸子單元前驅體之親核基團之雜原子可與抗體上的親電子基團反應且形成與抗體之共價鍵。延伸子單元前驅體上之用於彼目的之適用親核基團包括但不限於醯肼、羥胺、胺基、肼、硫半卡巴肼(thiosemicarbazone)、肼羧酸根及芳基醯肼。抗體上之親電子基團提供用於抗體連接之適宜位點以形成喜樹鹼結合物或配位子單元-連接子中間物。
在一些實施例中，配位子單元之硫原子鍵結至延伸子單元之丁二醯亞胺環系統，該丁二醯亞胺環系統係藉由靶向配位子之硫醇官能基與對應延伸子單元前驅體之順丁烯二醯亞胺部分之反應形成。在其他實施例中，配位子單元之硫醇官能基與α鹵乙醯胺部分反應以藉由其鹵素取代基之親核移位提供硫鍵結延伸子單元。
彼等實施例之代表性延伸子單元包括在下式Za及Zb之方括號內之彼等延伸子單元：
其中若B不存在，則波浪線指示與並聯連結子單元(B)或連結子單元(A)連接，或若B不存在，則指示與分隔劑(S* )連接，且R17 為-C1 -C10 伸烷基-、C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、C1 -C10 伸雜烷基-C(=O)-、-C3 -C8 碳環基-C(=O)-、-O-(C1 -C8 烷基)-C(=O)-、-伸芳基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-C(=O)-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C3 -C8 雜環基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-NH-、C1 -C10 伸雜烷基-NH-、-C3 -C8 碳環基-NH-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-NH-、-伸芳基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-NH-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-NH-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C3 -C8 雜環基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-NH-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-S-、C1 -C10 伸雜烷基-S-、-C3 -C8 碳環基-S-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-S-、-伸芳基-S-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-S-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-S-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-S-、-C3 -C8 雜環基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-S-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-S-。
在一些實施例中，式Za之R17 基團視情況經諸如胺基烷基部分之鹼性單元(BU)取代，例如-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 及-(CH2 )x NRa 2 ，其中x為自1至4之整數且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 基團與其所連接之氮組合以形成氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。
說明性延伸子單元為式Za或Zb之彼延伸子單元，其中R17 為-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸雜烷基-C(=O)-、-C3 -C8 碳環基-C(=O)-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-C(=O)-、-伸芳基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-C(=O)-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C3 -C8 雜環基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-C(=O)-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-。
另一說明性延伸子單元為式Za之彼延伸子單元，其中R17 為-C1 -C5 伸烷基-C(=O)-，其中伸烷基視情況經諸如視情況經取代的胺基烷基之鹼性單元(BU)取代，例如-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 及-(CH2 )x N(Ra )2 ，其中x為自1至4之整數且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 基團與其所連接之氮組合以形成氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。在合成期間，鹼性單元之鹼性胺基官能基可受保護基保護。
鍵結至配位子單元之延伸子單元之例示性實施例如下：
其中鄰近羰基之波浪線視是否存在A及/或B而定指示與上式中的B、A或S* 之連接。
在一些較佳實施例中，延伸子單元(Z)包含丁二醯亞胺部分，該丁二醯亞胺部分在鍵結至L時由式Za'之結構表示：
其中鄰近羰基之波浪線視是否存在A及/或B而定指示與上式中的B、A或S* 之連接；R17 為-C1 -C5 伸烷基-，其中伸烷基經鹼性單元(BU)取代，其中BU為-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 或-(CH2 )x N(Ra )2 ，其中x為自1至4之整數，且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 連同其所連接之氮定義氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。
應理解，經配位子單元取代之丁二醯亞胺可以水解形式存在。下文例示鍵結至L之Za'之水解的彼等形式，其中來自彼水解之區位異構體之結構為式Zb'及Zc'。因此，在其他較佳實施例中，延伸子單元(Z)包含酸-醯胺部分，該部分在鍵結至L時由以下表示：
鄰接鍵結至R17 之羰基的波浪線視是否存在A及/或B而定如針對Za'所定義；及R17 為-C1 -C5 伸烷基-，其中伸烷基經鹼性單元(BU)取代，其中BU為-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 或-(CH2 )x N(Ra )2 ，其中x為自1至4之整數，且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 連同其所連接之氮定義氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。
在一些實施例中，延伸子單元(Z)包含酸-醯胺部分，該部分在鍵結至L時由式Zd'或Ze'之結構表示：
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義。
在較佳實施例中，延伸子單元(Z)包含丁二醯亞胺部分，該部分在鍵結至L時由以下結構表示：。
或包含酸-醯胺部分，該部分在鍵結至L時由以下結構表示：。
鍵結至配位子單元(L)及連結子單元(A)之說明性延伸子單元具有以下結構，其包含來自Za、Za'、Zb'或Zc'之結構，其中-R17 -或-R17 (BU)-為-CH2 -、-CH2 CH2 -或-CH(CH2 NH2 )-：
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義。
在一組實施例中，Z-A-包含順丁烯二醯亞胺-烷酸組分或mDPR組分。參見例如，參見WO 2013/173337。在一組實施例中，Z-A-為順丁烯二醯亞胺丙醯基組分。
其他鍵結至配位子單元(L)及連結子單元(A)之延伸子單元具有上文結構，其中上文Z-A結構中之A經具有以下結構的並聯連結子單元置換
其中n在8至24範圍內；RPEG 為PEG單元封端基團，較佳為-CH3 或-CH2 CH2 CO2 H，星號(*)指示與結構上對應於式Za、Za'、Zb'或Zc'之延伸子單元之共價連接，且波浪線指示與可釋放連接子(RL)之共價連接。
在結合至配位子單元之前的說明性延伸子單元(亦即延伸子單元前驅體)包含順丁烯二醯亞胺部分且由包括式Z'a之結構表示：
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義；及R17 為-(CH2 )1 - 5 -，視情況經諸如視情況經取代之胺基烷基的鹼性單元取代，例如-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 及-(CH2 )x N(Ra )2 ，其中下標x為自1至4之整數，且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 基團與其所連接之氮組合以形成氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。
在式Z'a之一些較佳實施例中，延伸子單元前驅體(Z')由以下結構中之一者表示：
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義。
在其他較佳實施例中，延伸子單元前驅體(Z')包含順丁烯二醯亞胺部分且由式Za'之結構表示：
其中鄰接鍵結至R17 之羰基的波浪線如針對Za'所定義；及R17 為-C1 -C5 伸烷基-，其中伸烷基經鹼性單元(BU)取代，其中BU為-(CH2 )x NH2 、-(CH2 )x NHRa 或-(CH2 )x N(Ra )2 ，其中x為自1至4之整數，且各Ra 獨立地選自由C1 - 6 烷基及C1 - 6 鹵烷基組成之群或兩個Ra 連同其所連接之氮定義氮雜環丁基、吡咯啶基或哌啶基。
在更佳實施例中，延伸子單元前驅體(Z')包含順丁烯二醯亞胺部分且由以下結構表示：，
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義且胺基視情況質子化或受胺基保護基保護。
應理解，在具有BU部分之延伸子單元中該部分之胺基官能基通常在合成期間受胺基保護基保護，例如酸性不穩定保護基(例如BOC)。
共價連接至包含來自Za或Za' (其中-R17 -或-R17 (BU)-為-CH2 -、-CH2 CH2 -或-CH(CH2 NH2 )-)之結構的連結子單元之說明性延伸子單元前驅體具有以下結構：
其中鄰接羰基之波浪線如針對Za'所定義。
其他鍵結連結子單元(A)之延伸子單元前驅體具有上文結構，其中上文Z'-A結構中之A經並聯連結子單元及分隔劑(-B(S* )-)置換，該並聯連結子單元及分隔劑具有以下結構
其中n在8至24範圍內；RPEG 為PEG單元封端基團，較佳為-CH3 或-CH2 CH2 CO2 H，星號(* )指示與結構上對應於式Za或Za'之延伸子單元前驅體之共價連接，且波浪線指示與RL之共價連接。在諸如本文所示之彼等例項中，所示PEG基團意圖例示多種分隔劑，包括不同長度之PEG基團及可直接連接或經修飾以連接至並聯連結子單元的其他分隔劑。
在另一實施例中，延伸子單元經由配位子單元之硫原子與延伸子單元之硫原子之間的二硫鍵連接至配位子單元。此實施例之代表性延伸子單元在式Zb之方括號內描繪：
其中若B不存在，則波浪線指示與並聯連結子單元(B)或連結子單元(A)連接，或若A與B不存在，則指示與分隔劑(S* )連接，且R17 為-C1 -C10 伸烷基-、C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、C1 -C10 伸雜烷基-C(=O)-、-C3 -C8 碳環基-C(=O)-、-O-(C1 -C8 烷基)-C(=O)-、-伸芳基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-C(=O)-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C3 -C8 雜環基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-NH-、C1 -C10 伸雜烷基-NH-、-C3 -C8 碳環基-NH-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-NH-、-伸芳基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-NH-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-NH-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C3 -C8 雜環基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-NH-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-S-、C1 -C10 伸雜烷基-S-、-C3 -C8 碳環基-S-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-S-、-伸芳基-S-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-S-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-S-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-S-、-C3 -C8 雜環基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-S-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-S-。
在又一實施例中，延伸子單元前驅體之反應性基團含有可與配位子單元之一級或二級胺基形成鍵之反應性位點。此等反應性位點之實例包括但不限於經活化酯，諸如丁二醯亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯；酸酐；酸氯化物；磺醯氯；異氰酸酯及異硫氰酸酯。此實施例之代表性延伸子單元在式Zci、Zcii及Zciii之方括號內描繪：
其中若B不存在，則波浪線指示與並聯連結子單元(B)或連結子單元(A)連接，或若A與B不存在，則指示與分隔劑(S* )連接，且R17 為-C1 -C10 伸烷基-、C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、C1 -C10 伸雜烷基-C(=O)-、-C3 -C8 碳環基-C(=O)-、-O-(C1 -C8 烷基)-C(=O)-、-伸芳基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-C(=O)-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C3 -C8 雜環基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-NH-、C1 -C10 伸雜烷基-NH-、-C3 -C8 碳環基-NH-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-NH-、-伸芳基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-NH-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-NH-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C3 -C8 雜環基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-NH-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-S-、C1 -C10 伸雜烷基-S-、-C3 -C8 碳環基-S-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-S-、-伸芳基-S-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-S-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-S-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-S-、-C3 -C8 雜環基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-S-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-S-。
在另其他實施例中，延伸子單元前驅體之反應性基團含有能夠與存在於配位子單元上或引入配位子單元中的親電子劑反應之反應性親核試劑。舉例而言，靶向配位子上之碳水化合物部分可使用諸如高碘酸鈉之試劑輕度氧化且所得經氧化碳水化合物之親電子官能基(-CHO)可與含有反應性親核試劑之延伸子單元前驅體縮合，該反應性親核試劑為諸如醯肼、肟、一級或二級胺、肼、硫半卡巴肼、肼羧酸鹽或芳基醯肼，諸如由Kaneko, T.等人 (1991) Bioconjugate Chem. 2:133-41所描述之彼等反應性親核試劑。此實施例之代表性延伸子單元在式Zdi、Zdii及Zdiii之方括號內描繪：
其中若A與B不存在，則波浪線指示與並聯連結子單元(B)或連結子單元(A)或分配試劑(S* )連接，且R17 為-C1 -C10 伸烷基-、C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、C1 -C10 伸雜烷基-C(=O)-、-C3 -C8 碳環基-C(=O)-、-O-(C1 -C8 烷基)-C(=O)-、-伸芳基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-C(=O)-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C3 -C8 雜環基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-C(=O)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-C(=O)-、-C1 -C10 伸烷基-NH-、C1 -C10 伸雜烷基-NH-、-C3 -C8 碳環基-NH-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-NH-、-伸芳基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-NH-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-NH-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C3 -C8 雜環基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-NH-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-NH-、-C1 -C10 伸烷基-S-、C1 -C10 伸雜烷基-S-、-C3 -C8 碳環基-S-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-S-、-伸芳基-S-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-S-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-S-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-S-、-C3 -C8 雜環基-S-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-S-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-S-。
在本發明之一些態樣中，延伸子單元之質量不超過約1000道爾頓，不超過約500道爾頓，不超過約200道爾頓，為約30、50或100道爾頓至約1000道爾頓，約30、50或100道爾頓至約500道爾頓或約30、50或100道爾頓至約200道爾頓。連結子單元 ( A )
在一些實施例中，在期望添加延伸子單元(Z)或其前驅體(Z')與可釋放連接子之間的額外間距之例項中連結子單元(A)包括於喜樹鹼結合物或喜樹鹼-連接子化合物中。在一些態樣中，額外間距將有助於在RL內活化。因此，連結子單元(A)在存在時延長連接子單元之框架。在彼方面，連結子單元(A)與延伸子單元(或其前驅體)在一個末端處共價鍵結且在其其他末端處共價鍵結至視情況選用之並聯連結子單元或分隔劑(S* )。
熟習此項技術者應瞭解，連結子單元可為任何用以提供可釋放連接子與連接子單元(Q)之其餘部分之連接的基團。連結子單元可例如包含一或多個(例如1至10個，較佳地1、2、3或4個)天然或非天然胺基酸、胺基醇、胺基醛、二胺殘基。在一些態樣中，連結子單元為單一天然或非天然胺基酸、胺基醇、胺基醛或二胺基殘基。能夠充當連結子單元之例示性胺基酸為β-丙胺酸。
在一些彼等實施例中，連結子單元具有下文指示之式：
其中波浪線指示喜樹鹼結合物或喜樹鹼連接子化合物內之連結子單元之連接；且其中R111 獨立地選自由以下各者組成之群：氫、對羥基苯甲基、甲基、異丙基、異丁基、第二丁基、-CH2 OH、-CH(OH)CH3 、-CH2 CH2 SCH3 、-CH2 CONH2 、-CH2 COOH、-CH2 CH2 CONH2 、-CH2 CH2 COOH、-(CH2 )3 NHC(=NH)NH2 、-(CH2 )3 NH2 、-(CH2 )3 NHCOCH3 、-(CH2 )3 NHCHO、-(CH2 )4 NHC(=NH)NH2 、-(CH2 )4 NH2 、-(CH2 )4 NHCOCH3 、-(CH2 )4 NHCHO、-(CH2 )3 NHCONH2 、-(CH2 )4 NHCONH2 、-CH2 CH2 CH(OH)CH2 NH2 、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基，，
各R100 獨立地選自氫或-C1 -C3 烷基，較佳地氫或CH3 ；及下標c為獨立經選擇之自1至10，較佳地1至3的整數。
具有用於連接至分隔劑(S* )或連接至-B(S* )-之羰基的代表性連結子單元為如下：
其中在各例項中R13 獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C6 伸烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-及-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-，且下標c為在1至4範圍內之整數。在一些實施例中，R13 為-C1 -C6 伸烷基且c為1。
具有用於連接至分隔劑(S* )或連接至-B(S* )-之羰基的另一代表性連結子單元為如下： 其中R13 為-C1 -C6 伸烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-或-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-。在一些實施例中，R13 為-C1 -C6 伸烷基。
具有連接至分隔劑(S* )或連接至-B(S* )-之NH部分的代表性連結子單元為如下：
其中在各例項中，R13 獨立地選自由以下組成之群：-C1 -C6 伸烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-及-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-，且下標c為自1至14。在一些實施例中，R13 為-C1 -C6 伸烷基且下標c為1。
具有連接至分隔劑(S* )或連接至-B(S* )-之NH部分的另一代表性連結子單元為如下：
其中R13 為-C1 -C6 伸烷基-、-C3 -C8 碳環基-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸雜烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 碳環基)-、-(C3 -C8 碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(C3 -C8 雜環基)-、-(C3 -C8 雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C(=O)C1 -C6 伸烷基-或-C1 -C6 伸烷基-C(=O)-C1 -C6 伸烷基。
連結子單元之所選實施例包括具有以下結構之彼等連接子單元：，
其中鄰接氮之波浪線指示共價連接至延伸子單元(Z) (或其前驅體Z')，且鄰接羰基之波浪線指示共價連接至分隔劑(S*)或共價連接至-B(S* )-；及m為在1至6、較佳地2至6、更佳地2至4範圍內之整數。可釋放連接子 ( RL )
葡萄糖醛酸苷單元為一種提供經由連接子單元內之自我分解cascade的活化將喜樹鹼與配位子單元及連接子單元之其他組分分離的機制之可釋放連接子類型。在此等實施例中，自我分解cascade藉由葡萄糖醛酸苷單元之碳水化合物部分上的醣苷酶之操作活化。多種糖適用於本文所描述之實施例。特定碳水化合物部分包括半乳糖、葡萄糖、甘露糖(Mannose)、木糖、阿拉伯糖(Arabinose)、甘露糖-6-磷酸酯、海藻糖、鼠李糖(Rhamnose)、古洛糖(Gulose)、阿洛糖(Allose)、6-去氧-葡萄糖、乳糖、麥芽糖、纖維二糖、龍膽二糖(Gentiobiose)、麥芽三糖(Maltotriose)、GlcNAc、GalNAc及麥芽六糖(maltohexaose)之彼等碳水化合物部分。
醣苷單元通常包含經由與自我分解型間隔子之氧醣苷鍵連接的糖部分(Su)。氧醣苷鍵之裂解引發自我分解反應序列，其引起游離藥物之釋放。在一些實施例中，自我分解序列藉由葡萄糖醛酸苷單元之β-葡萄糖醛酸苷酶依靠裂解活化，葡萄糖醛酸苷單元為例示性醣苷單元。葡萄糖醛酸苷單元包含活化單元及自我分解型間隔子單元。葡萄糖醛酸苷單元包含經由氧醣苷鍵連接至自我分解型間隔子單元之糖部分(Su)。
在一些實施例中，葡萄糖醛酸苷單元包含經由氧醣苷鍵(-O'-)連接至自我分解型單元(SP)之糖部分(Su)，其具有下式：
其中波浪線指示共價連接至式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7中之任一者的藥物單元或共價連接至與藥物單元(喜樹鹼化合物)連接之間隔子單元及視具體情況直接或間接地經由連結子單元(A)或並聯連結子單元(B)、分隔劑(S* )或連結子單元與並聯連結子單元的組合共價連接至延伸子單元(Z)或其前驅體(Z')。
氧醣苷鍵(-O'-)通常為β-葡萄糖醛酸苷酶-裂解位點(亦即Su來自葡萄糖醛酸苷)，諸如藉由人類、溶酶體β-葡萄糖醛酸苷酶可裂解之醣苷鍵。
在一些實施例中，葡萄糖醛酸苷單元可由下式Ga或Gb表示：；
其中Su為糖部分，-O'-表示氧醣苷鍵；R1S 、R2S 及R3S 獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO2 或其他拉電子基團或供電子基團；且其中波浪線指示連接至延伸子單元(Z) (或其前驅體(Z')，經由連結子單元或並聯連結子單元或連結子單元與並聯連結子單元直接地或間接地連接)；及#指示連接至喜樹鹼或間隔子(經由插入官能基或其他部分直接地或間接地連接)。
在較佳實施例中，R1S 、R2S 及R3S 獨立地選自氫、鹵素、-CN或-NO2 。在其他較佳實施例中，R1S 、R2S 及R3S 各自為氫。在其他較佳實施例中，R2S 為拉電子基團，較佳為NO2 ，且R1S 及R3S 各自為氫。
在一些此等態樣中，能夠醣苷酶裂解以引發自我分解型反應序列之可活化自我分解型基團由下式Gc表示：
其中R4S 為CH2 OH或-CO2 H，波浪線指示經由連結子單元或並聯連結子單元或連結子單元與並聯連結子單元直接地或間接地共價連接至延伸子單元(Z) (或其前驅體Z')，且井號(#)指示共價連接至亞甲基胺基甲酸酯單元。
在一些實施例中，其中可活化自我分解型部分包含葡萄糖醛酸苷單元，該葡萄糖醛酸苷單元由下式Gd表示：
其中波浪線指示經由連結子單元或並聯連結子單元或連結子單元與並聯連結子單元直接地或間接地共價連接至延伸子單元(Z) (或其前驅體Z')，且井號(#)指示間隔子或官能基之苯甲基碳連接至喜樹鹼之共價連接。
另一類型之提供經由連接子單元內之自我分解cascade的活化將喜樹鹼與配位子單元及連接子單元之其他組分分離的機制之可釋放連接子為對胺基苯甲氧基羰基(PAB)單元，其伸苯基部分經Jm 取代，其中指示取代基之數量的下標m為在0至4範圍內之整數，且各J獨立地為-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基。
在一些實施例中，RL為能夠在不需要單獨水解步驟或後續自我分解型事件之情況下釋放-D之自我分解型基團。在一些實施例中，-RL-為經由PAB基團之胺基氮原子連接至-W-之羰基且經由碳酸根基團直接連結至-D的PAB基團。在相關實施例中，-RL-為經由PAB基團之胺基氮原子連接至-A-、-S* -或-B-之羰基且經由碳酸根基團直接連結至-D的PAB基團。在不受任何特定理論或機制束縛之情況下，經由碳酸根基團直接連接至-D的PAB基團之藥物釋放之可能機制展示於Toki等人 (2002) J Org. Chem. 67:1866-1872中。
在一些實施例中，RL單元由下式表示：
其中下標m為在0至4範圍內之整數，且各J獨立地為-C1 -C8 烷基、-O-(C1 -C8 烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基。
自我分解型基團之其他實例包括但不限於電子學上與PAB基團類似之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等人 (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237)及鄰胺基苯甲基乙醛或對胺基苯甲基乙醛。可使用在醯胺鍵水解時經受環化之RL，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人 , Chemistry Biology, 1995, 2, 223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人 , J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 5815)及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等人 , J. Org. Chem., 1990, 55, 5867)。
在一個實施例中，RL為分支鏈雙(羥甲基)苯乙烯(BHMS)單元。
在一些實施例中，RL具有下式： 其中用**標示之波浪線指示與D之連接位點；及用*標示之波浪線指示與Q之額外連接子組分的連接點。
在一些實施例中，RL包含鍵結至藥物之式I、II或III之雜環「自我分解部分」且併入醯胺基，該醯胺基在藉由胞內蛋白酶水解時引發最終自藥物分裂自我分解型部分之反應從而使藥物自呈活性形式之結合物釋放。連接部分進一步包含鄰接自我分解型部分之肽序列，該自我分解型部分為在與自我分解型部分共用的醯胺鍵處分裂肽之胞內酶(例如組織蛋白酶，諸如組織蛋白酶B)之底物。對於本文實施例，RL直接連接至存在於CPT1至CPT6中之每一者中的內酯環之第三羥基。
在一些實施例中，雜環自我分解基團(RL)係選自下式I、II及III：
其中波浪線指示與細胞特異性配位子及藥物部分之共價連接位點，且其中U為O、S或NR6 ；Q為CR4 或N；V1 、V2 及V3 獨立地為CR4 或N，其限制條件為對於式II 及III 而言Q、V1 及V2 中之至少一者為N；T為待定來自CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7的O；
R1 、R2 、R3 及R4 獨立地選自由以下組成之群：H、F、Cl、Br、I、OH、-N(R5 )2 、-N(R5 )3 + 、C1 -C8 烷基鹵、羧酸根、硫酸根、胺基磺酸根、磺酸根、-SO2 R5 、-S(=O)R5 、-SR5 、-SO2 N(R5 )2 、-C(=O)R5 、-CO2 R5 、-C(=O)N(R5 )2 、-CN、-N3 、-NO2 、C1 -C8 烷氧基、C1 -C8 經鹵基取代烷基、聚伸乙基氧基、膦酸根、磷酸根、C1 -C8 烷基、C1 -C8 經取代烷基、C2 -C8 烯基、C2 -C8 經取代烯基、C2 -C8 炔基、C2 -C8 經取代炔基、C6 -C20 芳基、C6 -C20 經取代芳基、C1 -C20 雜環及C1 -C20 經取代雜環；或當一起時，R2 及R3 形成羰基(=O)或具有3至7個碳原子之螺碳環；及
R5 及R6 獨立地選自H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 經取代烷基、C2 -C8 烯基、C2 -C8 經取代烯基、C2 -C8 炔基、C2 -C8 經取代炔基、C6 -C20 芳基、C6 -C20 經取代芳基、C1 -C20 雜環及C1 -C20 經取代雜環；
其中C1 -C8 經取代烷基、C2 -C8 經取代烯基、C2 -C8 經取代炔基、C6 -C20 經取代芳基及C2 -C20 經取代雜環獨立地經一或多個選自由以下組成之群的取代基取代：F、Cl、Br、I、OH、-N(R5 )2 、-N(R5 )3 + 、C1 -C8 烷基鹵、羧酸根、硫酸根、胺基磺酸根、磺酸根、C1 -C8 烷基磺酸根、C1 -C8 烷胺基、4-二烷胺基吡啶鎓、C1 -C8 烷羥基、C1 -C8 烷基硫醇、-SO2 R5 、-S(=O)R5 、-SR5 、-SO2 N(R5 )2 、-C(=O)R5 、-CO2 R5 、-C(=O)N(R5 )2 、-CN、-N3 、-NO2 、C1 -C8 烷氧基、C1 -C8 三氟烷基、C1 -C8 烷基、C3 -C12 碳環、C6 -C20 芳基、C2 -C20 雜環、聚伸乙基氧基、膦酸根及磷酸根。
結合物在胞外穩定或在沒有酶存在之情況下能夠裂解該自我分解型部分之醯胺鍵。然而，在進入細胞中或曝露於適合之酶時，醯胺鍵會裂解，啟動自發性自我分解型反應，引起共價連接該自我分解型部分與藥物之鍵結裂解，從而造成藥物呈其未衍生化或藥理學活性形式釋放。
本發明之結合物中之自我分解型部分併入一或多個雜原子且藉此提供提高之溶解度、提高裂解速率、及/或降低結合物之凝聚傾向。本發明之雜環自我分解型連接子構築體相比於非雜環、PAB型連接子之此等改進在一些例子中產生出人意料及未預期之生物特性，諸如提高之功效、降低之毒性及/或改進一或多個合乎需要的藥物動力學及/或藥效學特性。
應理解式I-III中之T為O，該O實際上衍生自CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7中之任一者的內酯環部分上之第三羥基(-OH)。
不受理論或特定機制限制，式I、II或III連接子之雜環上之拉電子基的存在有時會調節裂解速率。
在一個實施例中，自我分解型部分為式I之基團，其中Q為N且U為O或S。此類基團具有提高結合物之溶解度的非線性結構特徵。在此情形下R有時為H、甲基、硝基或CF3 。在一個實施例中，Q為N且U為O進而形成噁唑環，且R為H。在另一實施例中，Q為N且U為S進而形成視情況在R處經Me或CF3 基團取代之噻唑環。
在另一例示性實施例中，自我分解型部分為式II之基團，其中Q為N且V1 及V2 獨立地為N或CH。在另一實施例中，Q、V1 及V2 各自為N。在另一實施例中，Q及V1 為N而V2 為CH。在另一實施例中，Q及V2 為N而V1 為CH。在另一實施例中，Q及V1 均為CH且V2 為N。在另一實施例中，Q為N而V1 及V2 均為CH。
在另一實施例中，自我分解型部分為式III之基團，其中Q、V1 、V2 及V3 各自獨立地為N或CH。在另一實施例中Q為N而V1 、V2 及V3 各自為N。在另一實施例中，Q、V1 及V2 各自為CH而V3 為N。在另一實施例中，Q、V2 及V3 各自為CH而V1 為N。在另一實施例中，Q、V1 及V3 各自為CH而V2 為N。在另一實施例中，Q及V2 均為N而V1 及V3 均為CH。在另一實施例中Q及V2 均為CH而V1 及V3 均為N。在另一實施例中，Q及V3 均為N而V1 及V2 均為CH。
在不受理論束縛之情況下，流程1a描繪游離藥物自喜樹鹼藥物單元釋放之機制，該喜樹鹼藥物單元經由來自游離藥物之胺取代基的氮原子連接至可釋放連接子(其為葡萄糖醛酸苷單元)。流程 1a ： 分隔劑 ( S* ) ：
本文所描述之喜樹鹼結合物亦可包括分隔劑(S* )。分隔劑部分適用於例如掩蔽特定喜樹鹼或其他連接單元組分之疏水性。
代表性分隔劑包括聚乙二醇(PEG)單元、環糊精單元、聚醯胺、親水性肽、多醣及樹狀體。
當聚乙二醇(PEG)單元、環糊精單元、聚醯胺、親水性肽、多醣或樹狀體包括於Q中時，基團可作為「直線」組分或作為側鏈或分支鏈組分存在。對於其中存在分支鏈型式之彼等實施例，連接子單元將通常包括提供例如PEG單元與連接單元之其餘部分的單純功能性結合之離胺酸殘基(或並聯連結子單元，B)。聚乙二醇單元 ( PEG )
多分散PEG、單分散PEG及離散PEG可用於製得本發明化合物。多分散PEG為各尺寸及分子量之異質混合物，然而單分散PEG通常自異質混合物純化且因此提供單一鏈長及分子量。較佳PEG單元為離散PEG，即以逐步方式且不經由聚合方法合成之化合物。離散PEG提供具有限定及指定鏈長之單一分子。
本文提供之PEG單元包含一或多個聚乙二醇鏈。聚乙二醇鏈可例如以直鏈、分支鏈或星形組態連接在一起。通常，PEG鏈中之至少一者在一個用於共價連接至連接子單元(例如B)之組分上之適當位點的末端處衍生或可用作內部直線(例如雙功能)連接基團以共價聯結兩種連接子單元組分(例如Z-A-S* -RL-、Z-A-S* -RL-Y-)。連接子單元內之例示性連接藉助於非條件性可裂解連接或經由條件性可裂連接。例示性連接經由醯胺連接、醚連接、酯連接、腙連接、肟連接、二硫鍵連接、肽連接或三唑連接實現。在一些態樣中，連接子單元內之連接藉助於非條件性可裂解連接。在一些態樣中，連接子單元內之連接並不經由酯連接、腙連接、肟連接或二硫鍵連接。在一些態樣中，連接子單元內之連接並不經由腙連接。
條件性可裂解連接係指在血漿中循環時對裂解實質上不敏感但在胞內或瘤內環境中對裂解敏感之連接。非條件性可裂解連接為在任何生物環境中對裂解實質上不敏感之連接。腙之化學水解、二硫鍵之還原及肽鍵或糖苷連接之酶促裂解為條件性可裂解連接之實例。
在一些實施例中，PEG單元將直接連接至並聯連結子單元B。PEG單元之另一末端(terminus/termini)將為游離且未繫栓的且可呈甲氧基、羧酸、醇或其他適合官能基之形式。甲氧基、羧酸、醇或其他適合官能基充當PEG單元之末端PEG子單元之封端。藉由未繫栓，意圖不將PEG單元在未繫栓位點處連接至喜樹鹼、連接至抗體或連接至另一連接組分。熟習此項技術者將理解PEG單元除包含重複聚乙二醇子單元以外亦可含有非PEG物質(例如以促進多重PEG鏈與彼此偶合)。非PEG物質係指並非重複-CH2 CH2 O-子單元之部分的PEG單元中之原子。在本文提供之一些實施例中，PEG單元包含兩個經由非PEG要素彼此連接之單體PEG鏈。在本文提供之其他實施例中，PEG單元包含兩個連接至中央核心或並聯連結子單元(亦即PEG單元本身為分支鏈的)之直鏈PEG鏈。
存在多種可供熟習此項技術者使用之PEG連接方法，[參見例如Goodson等人 (1990)Bio / Technology 8 :343 (PEGylation of interleukin-2 at its glycosylation site after site-directed mutagenesis)；EP 0 401 384 (coupling PEG to G-CSF)；Malik等人, (1992)Exp . Hematol . 20 :1028-1035 (PEGylation of GM-CSF using tresyl chloride)；ACT公開案第WO 90/12874號(PEGylation of erythropoietin containing a recombinantly introduced cysteine residue using a cysteine-specific mPEG derivative)；美國專利第5,757,078號(PEGylation of EPO peptides)；美國專利第5,672,662號(Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications)；美國專利第6,077,939號(PEGylation of an N-terminal .alpha.-carbon of a peptide)；Veronese等人, (1985)Appl . Biochem . Bioechnol 11 :141-142 (PEGylation of an N-terminal α-carbon of a peptide with PEG-nitrophenylcarbonate (「PEG-NPC」) or PEG-trichlorophenylcarbonate)；及Veronese (2001)Biomaterials 22 :405-417 (Review article on peptide and protein PEGylation)]。
舉例而言，PEG可經由反應性基團共價鍵結至胺基酸殘基。反應性基團為可鍵結經活化PEG分子之基團(例如游離胺基或羧基)。舉例而言，N-末端胺基酸殘基及離胺酸(K)殘基具有游離胺基；及C-末端胺基酸殘基具有游離羧基。硫醇基(例如如存在於半胱胺酸殘基上的)亦適用作用於連接PEG之反應性基團。此外，已描述用於在多肽之C末端處特異性引入經活化基團(例如醯肼、醛及芳族胺基)之酶輔助方法(參見Schwarz等人 (1990)Methods Enzymol . 184 :160；Rose等人 (1991)Bioconjugate Chem . 2 :154；及Gaertner等人 (1994)J . Biol . Chem . 269 :7224)。
在一些實施例中，PEG分子可使用具有不同反應性部分之甲氧基化PEG(「mPEG」)連接至胺基。此等反應性部分之非限制性實例包括丁二酸丁二醯亞胺酯(SS)、碳酸丁二醯亞胺酯(SC)、mPEG-醯亞胺酯、對硝基苯基碳酸酯(NPC)、丙酸丁二醯亞胺酯(SPA)及三聚氯化氰。此等mPEG之非限制性實例包括mPEG-丁二酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SS)、mPEG2 -丁二酸丁二醯亞胺酯(mPEG2 -SS)；mPEG-碳酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SC)、mPEG2 -碳酸丁二醯亞胺酯(mPEG2 -SC)；mPEG-醯亞胺酯、mPEG-對硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-醯亞胺酯；mPEG2 -對硝基苯基碳酸酯(mPEG2 -NPC)；mPEG-丙酸丁二醯亞胺酯(mPEG-SPA)；mPEG2 -丙酸丁二醯亞胺酯(mPEG2 -SPA)；mPEG-N-羥基-丁二醯亞胺(mPEG-NHS)；mPEG2 -N-羥基-丁二醯亞胺(mPEG2 -NHS)；mPEG-三聚氯化氰；mPEG2 -三聚氯化氰；mPEG2 -離胺醇-NPC及mPEG2 -Lys-NHS。
一般而言，構成PEG單元之PEG鏈中之至少一者經官能化以使得其能夠共價連接至其他連接子單元組分。
官能化包括例如經由胺、硫醇、NHS酯、順丁烯二醯亞胺、炔、疊氮基、羰基或其他官能基官能化。在一些實施例中，PEG單元進一步包含提供與其他連接子單元組分之偶合或促進兩個或更多個PEG鏈之偶合的非PEG物質(亦即不包含-CH2 CH2 O-之物質)。
連接子單元中PEG單元(或其他分隔劑)之存在可具有對所得喜樹鹼結合物之藥物動力學的兩個潛在影響。所期望的影響為清除率降低(及隨之而來的曝露增加)，其由藉由喜樹鹼結合物之經曝露疏水性要素或喜樹鹼本身誘發之非特異性相互作用降低引起。第二影響為非所需的且為分散體積及速率之降低，其有時由喜樹鹼結合物之分子量的增大引起。
增加PEG子單元之數量使結合物之流體動力半徑增加，通常引起擴散率降低。轉而，降低的擴散率通常使喜樹鹼結合物穿透至腫瘤中之能力減小(Schmidt及Wittrup,Mol Cancer Ther 2009;8:2861-2871)。由於此等兩種競爭性藥物動力學效應，故期望使用足夠大以降低結合物清除率由此增加血漿曝露但並不會大至極大地減小其擴散率之PEG，在一定程度上其干擾喜樹鹼結合物達到預定目標細胞群體之能力。對於選擇用於特定藥物-連接子之最佳PEG尺寸參見US2016/0310612之實例(例如實例1、18及21)，其以引用之方式併入本文中。
在一組實施例中，PEG單元包含一或多個直鏈PEG鏈，該等PEG鏈各自具有至少2個子單元、至少3個子單元、至少4個子單元、至少5個子單元、至少6個子單元、至少7個子單元、至少8個子單元、至少9個子單元、至少10個子單元、至少11個子單元、至少12個子單元、至少13個子單元、至少14個子單元、至少15個子單元、至少16個子單元、至少17個子單元、至少18個子單元、至少19個子單元、至少20個子單元、至少21個子單元、至少22個子單元、至少23個子單元或至少24個子單元。在較佳實施例中，PEG單元包含總共至少4個子單元、至少6個子單元、至少8個子單元、至少10個子單元或至少12個子單元。在一些此等實施例中，PEG單元包含不超過總共約72個子單元、較佳不超過總共約36個子單元。
在另一組實施例中，PEG單元包含總共4至72、4至60、4至48、4至36或4至24個子單元；5至72、5至60、5至48、5至36或5至24個子單元；6至72、6至60、6至48、6至36或6至24個子單元；7至72、7至60、7至48、7至36或7至24個子單元；8至72、8至60、8至48、8至36或8至24個子單元；9至72、9至60、9至48、9至36或9至24個子單元；10至72、10至60、10至48、10至36或10至24個子單元；11至72、11至60、11至48、11至36或11至24個子單元；12至72、12至60、12至48、12至36或12至24個子單元；13至72、13至60、13至48、13至36或13至24個子單元；14至72、14至60、14至48、14至36或14至24個子單元；15至72、15至60、15至48、15至36或15至24個子單元；16至72、16至60、16至48、16至36或16至24個子單元；17至72、17至60、17至48、17至36或17至24個子單元；18至72、18至60、18至48、18至36或18至24個子單元；19至72、19至60、19至48、19至36或19至24個子單元；20至72、20至60、20至48、20至36或20至24個子單元；21至72、21至60、21至48、21至36或21至24個子單元；22至72、22至60、22至48、22至36或22至24個子單元；23至72、23至60、23至48、23至36或23至24個子單元；或24至72、24至60、24至48、24至36或24個子單元。
可用於本文提供之任何實施例中之說明性直鏈PEG單元如下： 其中波浪線指示連接至並聯連結子單元(B)之位點，且各n獨立地選自4至72、6至72、8至72、10至72、12至72、6至24或8至24。在一些實施例中，下標b為約4、約8、約12或約24。
如本文所描述，PEG單元經選擇從而提高所得喜樹鹼結合物之清除率但並不顯著影響結合物穿透至腫瘤中之能力。在實施例中，待選擇以供使用之PEG單元將較佳地具有4個子單元至約24個子單元、更佳地約4個子單元至約12個子單元。
在本發明之較佳實施例中，PEG單元為約300道爾頓至約5千道爾頓；約300道爾頓至約4千道爾頓；約300道爾頓至約3千道爾頓；約300道爾頓至約2千道爾頓；或約300道爾頓至約1道爾頓。在一些此等態樣中，PEG單元具有至少6個子單元或至少8、10或12個子單元。在一些此等態樣中，PEG單元具有至少6個子單元或至少8、10或12個子單元，但不超過72個子單元，較佳不超過36個子單元。
應瞭解，在提及PEG子單元且視情形而定時，子單元之數量可表示平均數量，例如在提及喜樹鹼結合物或喜樹鹼-連接子化合物及使用多分散PEG時。並聯連結子單元 ( B ) ：
在一些實施例中，喜樹鹼結合物及喜樹鹼連接子化合物將包含並聯連結子單元以提供連接至分隔劑的連接點(展示於呈-B(S* )-形式之連接子單元中)。作為一般實施例，PEG單元可連接至諸如如下文所示之離胺酸的並聯連結子單元，其中波浪線及星號指示喜樹鹼結合物或喜樹鹼連接子化合物之連接子單元內之共價鍵： 間隔子單元 ( Y ) ：
在一些實施例中，本文提供之喜樹鹼結合物將具有在可釋放連接子(RL)與喜樹鹼之間的間隔子(Y)。間隔子單元可為官能基以促進RL與喜樹鹼之連接或其可提供額外結構組分以進一步促進喜樹鹼單元自結合物之其餘部分(例如亞甲基胺基甲酸酯單元)釋放。
在彼等實施例中，為進一步促進喜樹鹼單元釋放為游離藥物，例示性間隔單元由下式表示：
其中EWG表示拉電子基團，R1 為-H或C1 -C4 烷基且下標n為1或2。在一些實施例中，EWG選自由以下組成之群：-CN、-NO2 、-CX3 、-X、C(=O)OR' 、-C(=O)N(R' )2 、-C(=O)R' 、-C(=O)X、-S(=O)2 R' 、-S(=O)2 OR' 、-S(=O)2 NHR' 、-S(=O)2 N(R' )2 、-P(=O)(OR' )2 、-P(=O)(CH3 )NHR' 、-NO、-N(R' )3 + ，其中X為-F、-Br、-Cl或-I，及R' 獨立地選自由以下組成之群：氫及C1 -C6 烷基，且其中(a)、(a')、(a'')、(b)及(b')中之每一者中鄰接氮原子的波浪線為與RL之共價連接點且式(b)及式(b')之鄰接羰基碳原子的波浪線為與式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7喜樹鹼化合物之羥基或一級或二級胺之雜原子的共價連接點，且其中
式(a)、式(a')及式(a'')表示例示性亞甲基胺基甲酸酯單元，其中T*為來自式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7喜樹鹼化合物之羥基或一級或二級胺官能基的雜原子，且其中鄰接T*之波浪線為與在結構上與喜樹鹼化合物對應的喜樹鹼藥物單元之其餘部分之共價連接點。
在另其他實施例中，間隔子單元為亞甲基胺基甲酸酯單元，其由下式表示： ，
其中各R獨立地為-H或C1 -C4 烷基之式(a1)及式(a1')表示亞甲基胺基甲酸酯單元，其中O*為來自式CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7喜樹鹼化合物之內酯環的羥基取代基或來自式CPT5或CPT7喜樹鹼化合物之另一羥基取代基之氧原子，或當RF 及RF ' 中之至少一者為C1 -C8 羥烷基N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-或N -C1 -C4 羥烷基-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-時為來自CPT6之RF 或RF ' 的羥基取代基之氧原子，
且式(a1)、式(a1')及式(b1)之波浪線保留其分別根據式(a)、(a')及(b)之前述含義。在式(a1')中-CH2 CH2 N+ (R)2 部分表示呈質子化形式之例示性鹼性單元。
在不受理論束縛之情況下，流程1b描繪游離藥物自連接至具有自我分解型部分之喜樹鹼結合物中之亞甲基胺基甲酸酯單元的喜樹鹼釋放之機制。在彼流程中T*為來自併入亞甲基胺基甲酸酯單元中之喜樹鹼化合物之羥基或一級或二級胺的雜原子。流程 1b ： 下標「 p 」
在本發明之一個態樣中，下標p表示單獨喜樹鹼結合物之配位子單元上之藥物連接子部分的數量且較佳為在1至16、1至12、1至10或1至8範圍內之整數。單獨喜樹鹼結合物亦可稱為喜樹鹼結合物化合物。在本文之任何實施例中，可存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個與單獨喜樹鹼結合物之配位子單元結合的藥物連接子部分。在本發明之另一態樣中，一組實施例描述一群單獨喜樹鹼結合物，其除鍵結至各配位子單元(亦即喜樹鹼結合物組合物)之喜樹鹼連接子化合物部分的數量之外實質上一致，從而p表示鍵結至喜樹鹼結合物組合物之配位子單元的喜樹鹼連接子化合物部分之平均數量。在彼組實施例中，p為在1至約16、1至約12、1至約10或1至約8、2至約16、2至約12、2至約10或2至約8範圍內之數值。在一些態樣中，p值係指平均藥物負載以及組合物中起主要作用ADC之藥物負載。
在一些態樣中，結合將經由鏈間二硫基且將存在1至約8個喜樹鹼連接子化合物分子與變成配位子單元之目標試劑結合。在一些態樣中，結合將經由引入半胱胺酸殘基以及鏈間二硫基且將存在1至10或1至12或1至14或1至16個與配位子單元結合之喜樹鹼連接子化合物部分。在一些態樣中，結合將經由引入半胱胺酸殘基且將存在2或4個與配位子單元結合之喜樹鹼連接子化合物分子。喜樹鹼藥物 - 連接子 ( Q - D ) mDPR =順丁烯二醯亞胺二胺基丙醯基： mPR =順丁烯二醯亞胺丙醯基： PropargOPr = -(C=O)CH2 CH2 OCH2 C≡CH喜樹鹼結合物混合物及組合物
本發明提供包含本文所描述之任何喜樹鹼結合物之喜樹鹼結合物混合物及醫藥組合物。混合物及醫藥組合物包含複數種結合物。在一些態樣中，混合物或組合物中之結合物中之每一者相同或實質上相同，然而，藥物-連接子在混合物或組合物中的配位體上之分佈以及藥物負載可變化。舉例而言，用於將藥物-連接子與抗體結合為靶向配位子之結合技術可產生就混合物及/或組合物內之抗體(配位子單元)上的喜樹鹼連接子化合物之分佈而言為非均質的組合物或混合物。在一些態樣中，在此等分子之混合物或組合物中的抗體分子中之每一者上之喜樹鹼連接子化合物負載為在1至16範圍內之整數。
在彼等態樣中，當作為整體提及組合物時藥物-連接子之負載為在1至約16範圍內之數值。在組合物或混合物內，亦可存在較小百分比之非結合抗體。混合物或組合物中之每配位體單元之藥物-連接子之平均數量(亦即平均藥物-負載)為重要屬性，因為其決定可遞送至目標細胞之藥物的最大量。平均藥物負載可為1、2或約2、3或約3、4或約4、5或約5、6或約6、7或約7、8或約8、9或約9、10或約10、11或約11、12或約12、13或約13、14或約14、15或約15、16或約16。
在一些態樣中，混合物及醫藥組合物包含複數個(亦即一群)結合物，然而，該等結合物相同或實質上相同，且其就藥物-連接子在混合物及/或組合物內之配位子分子上之分佈而言及/或就藥物-連接子在混合物及/或組合物內之配位子分子上之負載而言為實質上均質的。在一些此等態樣中，藥物-連接子在抗體配位子單元上之負載為2或4。在組合物或混合物內，亦可存在較小百分比之非結合抗體。在此等實施例中，平均藥物負載為約2或約4。通常，此等組合物及混合物由使用位點特異性結合技術產生且結合係歸因於引入之半胱胺酸殘基。
來自結合反應之製劑中每配位子單元之喜樹鹼或喜樹鹼-連接子化合物的平均數量可由習知方式表徵，諸如質譜、ELISA分析、HPLC(例如HIC)。亦可根據p確定喜樹鹼結合物之定量分佈。在一些例項中，均質喜樹鹼結合物之分離、純化及表徵可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式達成。
在一些態樣中，組合物為包含本文所描述之喜樹鹼結合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在一些態樣中，醫藥組合物將呈液體形式。在一些態樣中，其將為凍乾粉末。
組合物，包括醫藥組合物，可以純化形式提供。如本文所用，「純化」意謂在分離時分離物含有按分離物之重量計至少95%，且在另一態樣中至少98%之結合物。使用方法 癌症之治療
喜樹鹼結合物適用於抑制腫瘤細胞或癌細胞之繁殖、引起腫瘤或癌症細胞之細胞凋亡或用於治療患者之癌症。因此，喜樹鹼結合物可用於供治療癌症用之多種裝置中。喜樹鹼結合物可用於將藥物遞送至腫瘤細胞或癌細胞中。在不受理論束縛之情況下，在一個實施例中，喜樹鹼結合物之配位子單元與癌細胞或腫瘤細胞相關抗原結合或締合，且喜樹鹼結合物可在腫瘤細胞或癌細胞內部經由受體介導之內飲作用或其他內化機制而溶解(內化)。抗原可連接至腫瘤細胞或癌細胞或可為與腫瘤細胞或癌細胞締合之細胞外基質蛋白質。一旦在細胞內，藥物即經由活化單元之活化在細胞內釋放。在一替代實施例中，游離藥物在腫瘤細胞或癌細胞外部自喜樹鹼結合物釋放，且游離藥物隨後穿透細胞。
在一個實施例中，配位子單元結合至腫瘤細胞或癌細胞。
在另一個實施例中，配位子單元結合至處於腫瘤細胞或癌細胞表面上之腫瘤細胞或癌細胞抗原。
在另一實施例中，配位子單元結合至腫瘤細胞或癌細胞抗原，該腫瘤細胞或癌細胞抗原為與腫瘤細胞或癌細胞締合之細胞外基質蛋白質。
配位子單元對特定腫瘤細胞或癌細胞之特異性對於測定經最有效治療之腫瘤或癌症而言可為至關重要的。舉例而言，靶向存在於造血癌症中之癌細胞抗原的喜樹鹼結合物可適用於治療血液科惡性疾病(例如抗CD30、抗CD70、抗CD19、抗CD33結合配位子單元(例如抗體)可適用於治療血液科惡性疾病)。靶向存在於實體腫瘤上之癌細胞抗原之喜樹鹼結合物可適用於治療此等實體腫瘤。
可用喜樹鹼結合物治療之癌症包括但不限於造血癌症，諸如(例如)淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma)及非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphomas))及白血病以及實體腫瘤。造血癌症之實例包括濾泡性淋巴瘤、多形性大細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、急性骨髓母細胞白血病、慢性骨髓細胞性白血病、慢性淋巴球性白血病、瀰漫性大B細胞淋巴瘤及多發性骨髓瘤。實體腫瘤之實例包括纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏腫瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、結腸直腸癌、腎臟癌、胰臟癌、骨癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝腫瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、威爾姆斯氏腫瘤(Wilms' tumor)、宮頸癌、子宮癌、睾丸癌、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經管胚細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突神經膠質瘤、脊膜瘤、皮膚癌、黑素瘤、神經母細胞瘤及視網膜胚細胞瘤。
在較佳實施例中，所治療之癌症為上文所列淋巴瘤及白血病中之任一者。癌症之多模態療法
癌症，包括但不限於腫瘤、轉移或以不受控制的細胞生長為特徵之其他疾病或病症可藉由投與喜樹鹼結合物來治療或抑制。
在其他實施例中，提供治療癌症之方法，其包括向需要其之患者投與有效量的喜樹鹼結合物及化學治療劑。在一個實施例中，化學治療劑為尚未發現治療癌症較難之彼治療劑。在另一實施例中，化學治療劑為已發現治療癌症較難之彼治療劑。可向已亦經受手術作為癌症之治療的患者投與喜樹鹼結合物。
在一些實施例中，患者亦接受其他治療，諸如放射療法。在一具體實施例中，喜樹鹼結合物與化學治療劑或與放射療法同時投與。在另一具體實施例中，化學治療劑或放射療法在投與喜樹鹼結合物之前或之後投與。
化學治療劑可經一系列階段投與。可投與任一種化學治療劑或其組合，諸如護理標準之化學治療劑。
另外，提供用喜樹鹼結合物治療癌症之方法來作為化學療法或放射療法之替代，其中已證實或可證實化學療法或放射療法對於所治療之個體而言毒性過大，例如產生不可接受或不堪忍受的副作用。所治療之患者可視情況用另一癌症療法治療，諸如手術、放射療法或化學療法，視發現何種治療為可接受或可忍受的而定。自體免疫疾病之治療
喜樹鹼結合物適用於殺死產生自體免疫疾病之細胞或抑制該等細胞之非所需複製或適用於治療自體免疫疾病。
因此，喜樹鹼結合物可用於供治療患者之自體免疫疾病用之多種裝置中。喜樹鹼結合物可用於將藥物遞送至目標細胞。在不受理論束縛之情況下，在一個實施例中，喜樹鹼結合物與促發炎或經不適當刺激的免疫細胞之表面上之抗原締合，且喜樹鹼結合物隨後在目標細胞內部經由受體介導的內飲作用溶解。一旦在細胞內，連接子單元分裂，引起喜樹鹼之釋放。隨後所釋放之喜樹鹼在胞溶質中自由遷移且誘導細胞毒性或細胞抑制活性。在一替代實施例中，藥物自目標細胞外部之喜樹鹼結合物分裂，且喜樹鹼隨後穿透細胞。
在一個實施例中，配位子單元結合至自體免疫抗原。在一個態樣中，抗原在涉及自體免疫病狀之細胞的表面上。
在一個實施例中，配位子單元結合至與自體免疫疾病病況相關之經活化淋巴細胞。
在另一實施例中，喜樹鹼結合物殺死產生與特定自體免疫疾病相關之自體免疫抗體的細胞或抑制該等細胞之增殖。
可用喜樹鹼結合物治療之特定類型之自體免疫疾病包括但不限於Th2淋巴細胞相關病症(例如異位性皮炎、異位性哮喘、鼻結膜炎、過敏性鼻炎、歐門氏症候群(Omenn's syndrome)、全身性硬化症及移植物抗宿主疾病)；Th1淋巴細胞相關病症(例如類風濕性關節炎、多發性硬化症、牛皮癬、休格連氏症候群(Sjorgren's syndrome)、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、格雷氏病(Grave's disease)、原發性膽汁性肝硬化、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)及肺結核)；及已活化B淋巴細胞相關病症(例如全身性紅斑狼瘡、古巴士德氏症候群(Goodpasture's syndrome)、類風濕性關節炎及第I型糖尿病)。自體免疫疾病之多藥物療法
亦揭示治療自體免疫疾病之方法，其包括向需要其之患者投與有效量的喜樹鹼結合物及已知用於治療自體免疫疾病之另一治療劑。組合物及投與方法
本發明提供包含本文所描述之喜樹鹼結合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。喜樹鹼結合物可呈任何形式，該形式使得化合物可向患者投與以用於治療與配位子單元所結合之抗原之表現相關的病症。舉例而言，結合物可呈液體或固體形式。較佳投與途徑為非經腸。非經腸投與包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、胸骨內注射或輸注技術。在一個態樣中，非經腸投與組合物。在一個態樣中，靜脈內投與結合物。投與可藉由任何適宜途徑，例如藉由輸注或快速注射。
醫藥組合物可經調配以使得在向患者投與組合物之後化合物為生物可用的。組合物可呈一或多個劑量單位之形式。
用於製備醫藥組合物之材料在所用量下可為無毒的。對一般熟習此項技術者而言將顯而易見的是醫藥組合物中活性成分之最佳劑量將取決於多種因素。相關因素包括但不限於動物之類型(例如人類)、化合物之特定形式、投與方式及所用組合物。
組合物可例如呈液體形式。液體可適用於藉由注射遞送。在用於藉由注射投與之組合物中，亦可包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、穩定劑及等張劑中之一或多者。
液體組合物(無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式)亦可包括以下中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液(較佳為生理鹽水)、林格氏溶液(Ringer's solution)、等張氯化鈉、非揮發性油(諸如可充當溶劑或懸浮介質的合成甘油單酯或甘油二酯)、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如胺基酸、乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；清潔劑，諸如非離子表面活性劑、多元醇；及用於調節張力之試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸組合物可密封於由玻璃、塑膠或其他材料製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水為例示性佐劑。可注射組合物較佳為無菌的。
有效治療特定病症或病狀之結合物之量將視該病症或病狀之性質而定，且可藉由標準臨床技術來確定。另外，可視情況採用活體外或活體內分析來幫助鑑別最佳劑量範圍。待用於組合物中之精確劑量亦將視投與途徑及疾病或病症之嚴重性而定，且應根據醫師之判斷及各患者之情況來決定。
組合物包含有效量之化合物，從而將獲得適合之劑量。通常，此量為按組合物之重量計至少約0.01%之化合物。
對於靜脈內投與，組合物可包括約0.01至約100 mg喜樹鹼結合物/kg動物體重。在一個態樣中，組合物可包括約1至約100 mg喜樹鹼結合物/kg動物體重。在另一態樣中，投與量將在約0.1至約25 mg化合物/kg體重範圍內。視所用之藥物而定，劑量可為甚至更低的，例如1.0 µg/kg至5.0 mg/kg、4.0 mg/kg、3.0 mg/kg、2.0 mg/kg或1.0 mg/kg或1.0 µg/kg至500.0 µg/kg個體體重。
一般而言，向患者投與之結合物之劑量通常為約0.01 mg/kg至約100 mg/kg個體體重或1.0 µg/kg至5.0 mg/kg個體體重。在一些實施例中，向患者投與之劑量在約0.01 mg/kg至約15 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，向患者投與之劑量在約0.1 mg/kg與約15 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，向患者投與之劑量在約0.1 mg/kg與約20 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，投與劑量在約0.1 mg/kg至約5 mg/kg或約0.1 mg/kg至約10 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，投與劑量在約1 mg/kg至約15 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，投與劑量在約1 mg/kg至約10 mg/kg個體體重之間。在一些實施例中，在治療週期內所投與之劑量在約0.1至4 mg/kg、甚至更佳地0.1至3.2 mg/kg或甚至更佳地0.1至2.7 mg/kg個體體重之間。
術語「載劑」係指與化合物一起投與之稀釋劑、佐劑或賦形劑。此等醫藥載劑可為液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油。載劑可為鹽水、阿拉伯膠(gum acacia)、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠態二氧化矽、尿素。此外，可使用助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。在一個實施例中，當向患者投與時，化合物或組合物及醫藥學上可接受之載劑為無菌的。
當靜脈內投與化合物時，水為例示性載劑。亦可使用鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作為液體載劑，尤其用於可注射溶液。適合之醫藥載劑亦包括賦形劑，諸如澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、乾燥脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇。視需要，本發明組合物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑或pH緩衝劑。
在一實施例中，根據常規程序將結合物調配成適合於向動物、尤其人類靜脈內投與之醫藥組合物。通常，用於靜脈內投與之載劑或媒劑為無菌等張緩衝水溶液。必要時，組合物亦可包括助溶劑。用於靜脈內投與之組合物可視情況包含局部麻醉劑(諸如利多卡因(lignocaine))以減輕注射部位之疼痛。一般而言，該等成分係單獨地或以單位劑型混合在一起提供，例如呈於指示活性劑之量的密閉性密封容器(諸如安瓿或藥囊)中之乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式。當藉由輸注投與結合物時，其可例如用含有無菌醫藥級水或鹽水之輸注瓶來配製。當藉由注射投與結合物時，可提供注射用無菌水或鹽水之安瓿，使得該等成分可於投與前混合。
醫藥組合物一般經調配為無菌、實質上等張且完全符合美國食品與藥物管理局(U. S. Food and Drug Administration)之所有優良製造規範(Good Manufacturing Practice，GMP)法規。製備喜樹鹼結合物之方法
本文所描述之喜樹鹼結合物可以抗體、連接子及藥物單元之連續構築或以藉由組裝各部分隨後進行完整組裝步驟之彙集方式製備。庫爾提斯重排(Curtius Rearrangement)或氯胺合成可用於提供亞甲基胺基甲酸酯連接子(間隔子)，其適用於本文所描述之結合物的多個實施例。
流程 2 ：使用庫爾提斯重排反應製備式Z'-A-RL-Y-D、Z'-A-S*-RL-Y-D或Z'-A-B(S*)-RL-Y-D之例示性喜樹鹼藥物-連接子化合物(其中Y具有式(a'))：
流程 2 說明涉及游離藥物之醯基疊氮衍生物之庫爾提斯重排的合成策略，其中CPT為在結構上對應於具有羥基官能基之喜樹鹼化合物之喜樹鹼藥物單元，該羥基官能基之由O*表示的氧原子併入作為重排之結果形成之亞甲基胺基甲酸酯單元中，Z'為延伸子單元前驅體，RL為可釋放連接子且X為-A-、-A-S*-或-A-B(S*)-，其中A為連結子單元，S*為分隔劑且B為並聯連結子單元。彼策略可作為用於獲取區位選擇性之方式應用於含有多個醇或其他雜原子之喜樹鹼藥物，因為存在許多烷基化以形成醯基疊氮之互補方法，諸如：鹵代酯烷基化、鹵代酸烷基化或用重氮乙酸乙酯或重氮乙酸甲酯插入金屬碳烯，參見 Doyle, M.等人 Modern Catalytic Methods for Organic Synthesis with Diazo Compounds; Wiley：New York, 1998。隨後將醯基疊氮與至少化學計算量之式Z'-X-RL-OH的含醇連接子單元中間物一起加熱。
流程 3 ：經由N-氯甲胺合成替代性製備式Z'-A-RL-Y-D、Z'-A-S*-RL-Y-D或Z'-A-B(S*)-RL-Y-D之例示性喜樹鹼藥物-連接子化合物(其中間隔子單元Y為式(a)或式(a')之亞甲基胺基甲酸酯單元)：
其中R1 為氫或C1 -C4 烷基，R為-H或-CH2 CH2 SO2 Me且其他可變基團在此處具有根據流程2之含義。
N-氯甲胺合成為庫爾提斯重排之替代，因為其引起引入未經修飾之醇或其他含雜原子喜樹鹼化合物，其使用可與形成流程 2 之醯基疊氮所需的條件不相容，且其藉由與反應性N-氯甲胺縮合來進行。彼方法亦較適合於引入某些類型之亞甲基胺基甲酸酯單元，如例如由流程 4 所示。
流程 4 展現式Z'-A-RL-Y-D、Z'-A-S*-RL-Y-D或Z'-A-B(S*)-RL-Y-D之例示性喜樹鹼-連接子化合物(其中間隔子單元Y為式(a'')之亞甲基胺基甲酸酯單元)的合成。碳酸對硝基-苯酯與環狀胺醇(aminol)之反應得到胺基甲酸酯，其隨後轉化為氯環烷基胺用於與來自游離藥物之硫醇、羥基、胺或醯胺官能基之親核試劑烷基化。或者，胺基甲酸酯可在藥物部分存在下用酸處理以組裝所示藥物-連接子中間物。烷基化產物在所得游離胺與3-順丁烯二醯亞胺基丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯之縮合之後去保護，其引入共價連接至連結子單元的延伸子單元前驅體，由此得到喜樹鹼-連接子化合物。隨後使所得喜樹鹼-連接子化合物與含硫醇靶向配位子縮合以得到喜樹鹼結合物，該等喜樹鹼結合物具有包含自我分解型部分之間隔子及式Ib之亞甲基胺基甲酸酯單元。
流程 4
對於具有亞甲基胺基甲酸酯單元之喜樹鹼-連接子化合物及喜樹鹼結合物，其中T*為來自喜樹鹼化合物之一級或二級胺取代基的氮原子，該喜樹鹼化合物在由流程 3 或流程 4 所提供的一般性程序後直接用氯甲胺烷基化，其可能由於來自游離藥物之胺官能基的氮雜原子過度或非所需過度烷基化而為不適合的。在彼等情況下，可使用由流程 5 實施的方法。
流程 5 ：
在流程 5 中，中間物胺基甲酸酯製備為已具有鹼性單元(亦即二甲胺基乙基部分)作為式(a1')亞甲基胺基甲酸酯單元之R取代基。胺基甲酸酯之氮與甲醛縮合，且所得中間物用含脂族胺藥物之胺官能基淬滅。縮合形成共價連接至喜樹鹼之式(a1')之亞甲基胺基甲酸酯，其中R1 為氫且R為二甲胺基乙基。苯基硝基隨後藉由通用方法還原以提供用於依序引入連結子單元(A)及延伸子單元前驅體(Z')之操作。編號實施例
以下編號實施例描述本發明之各種非限制性態樣，
1. 具有式L-(Q-D)p 之喜樹鹼結合物或其鹽，其中L為配位子單元；下標p為在1至16範圍內之整數；Q為具有選自由以下組成之群之式之連接子單元：-Z-A-、-Z-A-RL、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-S*-W-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-B(S*)-W-RL-及-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中Z為延伸子單元；A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子；W為胺基酸單元；Y為間隔子單元；及D為選自由如下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7組成之群的藥物單元： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基-C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，或RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代，或
D為選自由表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 組成之群的藥物單元；
且其中當Q為-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-時，D之共價連接點係連接至CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7中之任一者或表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 中之任一者的羥基或脂族一級或二級胺基取代基中之任一者的雜原子，或
其中當Q為-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-時或當Q為-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-時(其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放單元)，D之共價連接點係連接至CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7中之任一者或表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 中之任一者的內酯環上之羥基取代基的氧原子；及
其限制條件為當共價連接點係連接至CPT6之一級或二級脂族胺基取代基的氮原子時，RF 及RF ' 中之至少一者為-H；及其限制條件為當D為具有經由其胺基取代基之氮原子的共價連接之化合物CPT1時，-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-及-Z-A-B(S*)-RL-Y-之-Z-A-不為丁二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基部分，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環。
2. 如實施例1之喜樹鹼結合物，其中Q為具有選自由以下組成之群之式之連接子單元：-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-及-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中A為連結子單元且RL為葡萄糖醛酸苷單元。
3. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中D之共價連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7之內酯環上的羥基取代基之氧原子。
4. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中D之共價連接點經由表I 之14a 至14z 或表J 之18a 至18n 中之任一者的內酯環上之羥基取代基之氧原子。
5. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中當RF 及RF ' 中之至少一者為C1 -C8 羥烷基N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-、N -C1 -C4 羥烷基-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-時，D之共價連接點經由CPT6之RF 或RF ' 的羥基取代基之氧原子，
6. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中當RF 及RF ' 中之至少一者為C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N-(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-或C1 -C8 胺基烷基C(O)-時，D之共價連接點經由CPT6之RF 或RF ' 的胺取代基之氮原子，
7. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中D之共價連接點經由CPT1之胺基取代基的氮原子，其限制條件為-Z-A-不為丁二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分。
8. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中D之共價連接點係連接至CPT4上的胺基取代基之氮原子。
9. 如實施例1 或2 之喜樹鹼結合物，其中共價連接點經由CPT6上之取代基的氮原子，其限制條件為RF 及RF ' 中之至少一者為-H。
10. 如實施例1 至9 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為具有選自由-Z-A-RL-及-Z-A-RL-Y-組成之群之式之連接子單元。
11. 如實施例1 至9 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為具有選自由-Z-A-S* -RL-及-Z-A-S* -RL-Y-組成之群之式之連接子單元。
12. 如實施例1 至9 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為具有選自由-Z-A-B(S*)-RL-及-Z-A-B(S*)-RL-Y-組成之群之式之連接子單元。
13. 如實施例1 至3 及7 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT1。
14. 如實施例1 至3 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT2。
15. 如實施例1 至3 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT3。
16. 如實施例1 至3 及8 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT4。
17. 如實施例1 至3 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT5。
18. 如實施例1 至3 、5 、6 及9 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT6。
18. 如實施例1 至3 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT7。
19. 如實施例2 至18 中任一項之喜樹鹼結合物，其中RL為葡萄糖醛酸苷單元，其具有下式：
其中Su為己醣型單醣；O'表示能夠藉由醣苷酶裂解之醣苷鍵之氧原子；用單一星號(*)標示之波浪線指示與CPT1、CPT4、CPT6 (其中RF 及RF ' 中之至少一者為-H)或表I 之14a 至14f 及14i 至14o 、14s 及14u 至14z 的一級或二級脂族胺基取代基之氮原子或與間隔子單元的共價連接位點，或指示與CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7或表I之14a 至14z 中之任一者的內酯環上之羥基取代基的氧原子之共價連接位點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與Q之其餘部分的共價連接位點。
20. 如實施例19 之喜樹鹼結合物，其中Q為具有式-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-之連接子單元；及間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；O*代表來自D之羥基取代基的氧原子；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接O*之波浪線指示與D之其餘部分的共價連接位點。
21. 如實施例19 之喜樹鹼結合物，其中Q為具有式-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-之連接子單元；D選自由以下組成之群：CPT1、CPT4及CPT6，其中RF 及RF ' 各自為-H；及間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接羰基碳原子之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)之胺基取代基的氮原子之共價連接位點。
22. 如實施例19 之喜樹鹼結合物，其中Q為具有式-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-之連接子單元；D選自由以下組成之群：CPT1、CPT4及CPT6，其中RF 及RF ' 各自為-H；及間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接羰基碳原子之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)之胺基取代基的氮原子之共價連接位點。
23. 如實施例1 至22 中任一項之喜樹鹼結合物，其中A為連結子單元，其中連結子單元包含三唑基部分，其中三唑部分視情況由來自經化學修飾之靶向劑的疊氮基取代基之1,3-偶極環加成反應形成，該靶向劑為藥物連接子化合物之炔基部分的結合物之配位子單元之前驅體。
24. 如實施例1 至22 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基部分或丁二醯亞胺基及三唑基部分，其各自視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分或可衍生自喜樹鹼-連接子化合物之mDPR部分的丁二酸醯胺部分，其限制條件為-Z-A-包含丁二醯亞胺基及三唑基部分，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分或當CPT1具有經由其胺基取代基之氮原子的共價連接時具有可衍生自mDPR部分之丁二酸醯胺部分。
25. 如實施例1 至22 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基部分，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分，其限制條件為當D為CPT1時D具有與其內酯環上的羥基取代基之氧原子之共價連接。
26. 如實施例1 至22 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含可衍生自喜樹鹼-連接子化合物之mDPR部分的丁二酸醯胺部分。
27. 如實施例26 之喜樹鹼結合物，其中Q具有下式：
或其鹽，其中丁二醯亞胺環呈水解形式作為丁二酸醯胺部分；用單一星號(*)標示之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 為-H)之氮原子或與間隔子單元的共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
28. 如實施例2 至26 中任一項之喜樹鹼結合物，其中RL為葡萄糖醛酸苷單元，其具有以下結構：
其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6之內酯環上的羥基取代基之氧原子或與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)之胺基取代基的氮原子或與間隔子單元(Y)之共價連接點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與A、B、S*或Z之共價連接點。
29. 如實施例28 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-S*-RL-；-Z-A-B(S*)-RL-；-Z-A-S*-RL-Y-；及-Z-A-B(S*)-RL-Y-組成之群之式，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-丙醯基部分。
30. 如實施例29 之喜樹鹼結合物，其中Q為-Z-A-S*-RL-，其具有下式：
其中下標n為在1至50範圍內之整數；用單一星號(*)標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
31. 如實施例30 之喜樹鹼結合物，其中下標n為4。
32. 如實施例2 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有以下結構：,
或其鹽，其中波浪線指示與配位子單元之硫原子的共價連接。
33. 如實施例2 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有以下結構：
或其鹽，其中波浪線指示與配位子單元之硫原子的共價連接且丁二醯亞胺環呈水解形式作為丁二酸醯胺部分。
34. 如實施例2 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有以下結構：
或其鹽，其中波浪線指示與配位子單元之硫原子的共價連接。
35. 如實施例1 至34 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L來自抗體。
36. 如實施例35 之喜樹鹼結合物，其中抗體特異性結合選自由CD19、CD30、CD33、CD70及LIV-1組成之群的抗原。
37. 如實施例1 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-、-Z-A-S*-W-及-Z-A-B(S*)-W-組成之群之式，其中A為連結子單元，或Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-及-Z-A-B(S*)-W-RL組成之群之式，其中A為連結子單元且RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放連接子。
38. 如實施例37 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-S*-W-或-Z-A-S*-W-RL-。
39. 如實施例37 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-RL-或-Z-A-S* -RL-。
40. 如實施例37 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-。
41. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT2。
42. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT3。
43. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT1。
44. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT4。
45. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT5。
46. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT6。
47. 如實施例37 至40 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D為CPT7。
48. 如實施例37 至47 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-RL-、-Z-A-S*-RL-及-Z-A-S*-W-RL-組成之群之式，其中RL具有下式：
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與D之共價連接位點；及用單一星號(*)標示之波浪線指示與A、S*或W之共價連接點。
49. 如實施例48 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有式-Z-A-S*-W-RL-D，其中D為具有與胺取代基之氮原子的共價連接之CPT1、CPT4或CPT6，其中RF 及RF ' 各自為-H；且W為選自由N-甲基-甘胺酸(肌胺酸)、N-甲基-丙胺酸、N-甲基-β-丙胺酸、纈胺酸、N-甲基-纈胺酸組成之群的胺基酸單元，或D為具有與內酯環上之羥基取代基之氧原子的共價連接之CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7；且W為選自由麩胺酸或離胺酸組成之群的胺基酸單元。
50. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基部分或丁二醯亞胺基及三唑部分，各自視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分或衍生自喜樹鹼-連接子化合物的mDPR之丁二酸醯胺部分。
51. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基部分，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分。
52. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含可衍生自喜樹鹼-連接子化合物之mDPR部分的丁二酸醯胺部分。
53. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-S*-RL-及-Z-A-S*-W-RL-組成之群之式，其中-Z-A-具有選自由以下組成之群之式：，
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與S*之共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
54. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-S*-RL-及-Z-A-S*-W-RL-組成之群之式，其中S*具有下式：，
其中下標n為在2至36範圍內之整數。
55. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-具有下式：，
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與S*之共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
56. 如實施例37 至49 中任一項之喜樹鹼結合物，其中Q為式-Z-A-S*-W-或-Z-A-S-W-RL-之連接子單元，其中RL不為葡萄糖醛酸苷單元，其中任一式中的-Z-A-S*-W-具有下式：
其中下標n為在2至10範圍內之整數；用雙重星號(**)標示之波浪線指示與D或RL的共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
57. 如實施例56 之喜樹鹼結合物，其中n為在2至4範圍內之整數。
58. 如實施例49 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有以下結構：，
或其鹽，其中波浪線指示與配位子單元之硫原子之共價連接點。
59. 如實施例49 之喜樹鹼結合物，其中-Q-D具有以下結構：，
或其鹽，其中波浪線指示與配位子單元之硫原子之共價連接點。
60. 如實施例37 至59 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L來自抗體。
61. 如實施例60 之喜樹鹼結合物，其中抗體特異性結合選自由CD19、CD30、CD33、CD70及LIV-1組成之群的抗原。
62. 一種喜樹鹼-連接子化合物，其具有選自由以下組成之群之式：Z'-A-RL-D (i)、Z'-A-RL-Y-D (ii)、Z'-A-S* -RL-D (iii)、Z'-A-S* -RL-Y-D (iv)、Z'-A-B(S* )-RL-D (v)、Z'-A-B(S* )-RL-Y-D (vi)、Z'-A-D (vii)、Z'-A-S*-W-D (viii)、Z'-A-B(S*)-W-D (ix)、Z'-A-S*-W-RL-D (x)及Z'-A-B(S*)-W-RL-D (xi)，其中在各式中Z'為延伸子單元前驅體；A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子；Y為間隔子單元；及D為喜樹鹼化合物，其選自由如下CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7組成之群： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、(C3 -C8 環烷基)C1 -C4 烷基-、苯基及苯基-C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的部分：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的部分：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-、N , N -二(C1 -C4 烷基)胺基-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、(C3 -C10 環烷基)-C1 -C4 烷基-、C3 -C10 雜環烷基、(C3 -C10 雜環烷基)-C1 -C4 烷基-、苯基、苯基-C1 -C4 烷基-、二苯基-C1 -C4 烷基-、雜芳基及雜芳基-C1 -C4 烷基-，或RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代，或
D為選自由表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 組成之群的藥物單元；
且其中當Q為-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-時，D之共價連接點係連接至CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7中之任一者或表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 中之任一者的羥基或脂族一級或二級胺基取代基中之任一者的雜原子，或
其中當Q為-Z-A-、-Z-A-S*-W-或-Z-A-B(S*)-W-時或當Q為-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-或-Z-A-B(S*)-W-RL-時(其中RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放單元)，D之共價連接點係連接至CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7中之任一者或表I 之14a 至14z 及表J 之18a 至18n 中之任一者的內酯環上之羥基取代基之氧原子；及
其限制條件為當共價連接點係連接至CPT6上之胺基取代基的氮原子時，RF 及RF ' 中之至少一者為-H；及其限制條件為當D為具有經由胺基取代基之氮原子的共價連接之CPT1時，式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)及式(vi)喜樹鹼-連接子化合物之Z'-A-不為順丁烯二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基部分。
63. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有選自由式(i)、式(ii)；式(iii)、式(iv)、式(v)及式(vi)組成之群之式，其中A為連結子單元且RL為葡萄糖醛酸苷單元。
64. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中D之共價連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6或CPT7之內酯環上的羥基取代基之氧原子。
65. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中D之共價連接點經由表I之14a 至14z 或表J 之18a 至18n 中之任一者的內酯環上之羥基取代基之氧原子。
66. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中當RF 及RF ' 中之至少一者為C1 -C8 羥烷基N , N -(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)-胺基-C1 -C8 烷基-、N -C1 -C4 羥烷基-C1 -C8 胺基烷基-、C1 -C8 烷基C(O)-時，D之共價連接點經由CPT6之RF 或RF ' 的羥基取代基之氧原子，
67. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中當RF 及RF ' 中之至少一者為C1 -C8 胺基烷基、(C1 -C4 烷胺基)-C1 -C8 烷基-、N -(C1 -C4 羥烷基)-C1 -C8 胺基烷基-或C1 -C8 胺基烷基C(O)-時，D之共價連接點經由CPT6之RF 或RF ' 的胺取代基之氮原子，
68. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中D之連接點經由CPT1上之胺基取代基的氮原子，其限制條件為Z'-A-不為順丁烯二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基。
69. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中D之連接點係連接至CPT4上之胺基取代基的氮原子。
70. 如實施例62 或63 之喜樹鹼-連接子化合物，其中D之連接點經由CPT6上之取代基的氮原子，其限制條件為RF 及RF ' 中之至少一者為-H。
71. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)或(ii)。
72. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)或(iv)。
73. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(v)或(vi)。
74. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)。
75. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(ii)。
76. 如實施例62 至64 、66 、67 及70 至75 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT6。
77. 如實施例62 至64 、69 及71 至75 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT4。
78. 如實施例62 至64 及71 至75 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D選自由以下組成之群：CPT1、CPT2、CPT3及CPT5。
79. 如實施例62 至78 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'為順丁烯二醯亞胺基部分。
80. 如實施例62 至78 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-為順丁烯二醯亞胺丙醯基、順丁烯二醯亞胺丙醯基-β-丙胺醯基或mDPR，其鹼性氮視情況質子化或使用對酸不穩定之保護基保護，其限制條件為當D為具有經由其胺基取代基之氮原子的共價連接之CPT1時Z'-A-不為順丁烯二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基部分。
81. 如實施例62 至70 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)、式(iv)、式(v)及式(vi)，其中S*為PEG基團。
82. 如實施例63 至81 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中RL為葡萄糖醛酸苷單元，其具有以下結構：
其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之共價連接位點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與A、B或S*之共價連接點。
83. 如實施例82 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；O*代表來自D之羥基取代基的氧原子；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接O*之波浪線指示與D之其餘部分的共價連接位點。
84. 如實施例82 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D選自由CPT1、CPT4及CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)組成之群；及間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接羰基碳原子之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)之胺基取代基的氮原子之共價連接位點。
85. 如實施例82 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(ii)、式(iv)或式(vi)，其中D選自由CPT1、CPT4及CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)組成之群；及間隔子單元(Y)具有下式：
其中EWG為拉電子基團；鄰接氮原子之波浪線指示與葡萄糖醛酸苷單元之羰基碳原子的共價連接位點；及鄰接羰基碳原子之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6 (其中RF 及RF ' 各自為-H)之胺基取代基的氮原子之共價連接位點。
86 .     如實施例62 至85 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中A包含炔基部分，該炔基部分能夠與來自經化學修飾之靶向劑的疊氮基取代基進行1,3-偶極環加成反應從而提供具有包含三唑基部分之連結子單元之結合物，該靶向劑為喜樹鹼結合物之配位子單元的前驅體。
87. 如實施例62 至85 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分或順丁烯二醯亞胺基及三唑基部分，其限制條件為當CPT1具有經由其胺基取代基之氮原子的共價連接時Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基及三唑基部分。
88. 如實施例62 至85 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基部分，其限制條件為當D為CPT1時D具有與其內酯環上之羥基取代基的氧原子之共價連接。
89. 如實施例58 至79 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含mDPR，其鹼性氮原子視情況質子化或使用對酸不穩定之保護基保護。
90. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(vii)、式(viii)或式(ix)，其中A為連結子單元；或具有式(i)、式(iii)、式(x)或式(xi)，其中A為連結子單元且RL為除葡萄糖醛酸苷單元以外的可釋放連接子。
91. 如實施例62 或90 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(viii)或式(x)。
92. 如實施例62 或90 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)或式(iii)。
93. 如實施例62 或90 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(vii)。
94. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT2。
95. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT3。
96. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT1。
97. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT4。
98. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT5。
99. 如實施例62 及90 至93 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D具有式CPT6。
100. 如實施例62 及90 至99 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)、式(iii)或式(x)，其中RL具有下式：
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與D之共價連接位點；及用單一星號(*)標示之波浪線指示與A、S*或W之共價連接點。
101. 如實施例100 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(x)，其中W為選自由N-甲基-甘胺酸(肌胺酸)、N-甲基-丙胺酸、N-甲基-β-丙胺酸、纈胺酸及N-甲基-纈胺酸組成之群的胺基酸單元。
102. 如實施例62 至101 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分、順丁烯二醯亞胺及三唑部分或mDPR，其鹼性氮原子視情況質子化或使用對酸不穩定之保護基保護。
102. 如實施例62 至101 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分。
103. 如實施例62 至101 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含mDPR。
104. 如實施例62 至70 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)或式(x)，其中Z'-A-具有選自由以下組成之群之式：，
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與S*之共價連接位點。
105. 如實施例62 至70 及94 至104 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)或式(x)，其中S*具有下式：，
其中下標n為在2至36範圍內之整數。
106. 如實施例62 至70 及94 至105 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中-Z-A-具有下式：，
其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與S*之共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
107 .   如實施例62 至70 及94 至105 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(viii)或式(x)，其中Z'-A-S*-W-具有下式：，
其中下標n為在2至10範圍內之整數；用雙重星號(**)標示之波浪線指示與D或RL的共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
108 .   如實施例107 之喜樹鹼-連接子化合物，其中下標n為在2至4範圍內之整數。
109. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：， 或其鹽。
110. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：，
或其鹽。
111. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：，
或其鹽。
112. 如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：，
或其鹽。
113 .    如實施例62 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：，
或其鹽。
114. 喜樹鹼結合物在製備用於治療個體之癌症的藥物中之用途，其中喜樹鹼結合物具有實施例1 至113 中之任一項之式。
115 .    如實施例114 之用途，其中該癌症選自由淋巴瘤、白血病及實體腫瘤組成之群。
116. 如實施例114 之用途，其中該癌症為淋巴瘤或白血病。
117. 喜樹鹼結合物在製備用於治療個體之自體免疫疾病之藥物中的用途，其中喜樹鹼結合物具有實施例1 至113 中之任一項之式且自體免疫疾病選自由Th2淋巴細胞相關病症、Th1淋巴細胞相關病症及已活化B淋巴細胞相關病症組成之群。
118. 一種製備如實施例1 至61 中任一項之喜樹鹼結合物的方法，該方法包含接觸抗體之步驟，該抗體具有對如實施例62 至113 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物的Z'具有反應性之官能基。
1A. 一種具有式L-(Q-D)p 之喜樹鹼結合物或其鹽，其中L為配位子單元；Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S* -RL-、-Z-A-B(S* )-RL-、-Z-A-S*-RL- Y-及-Z-A-B(S*)-RL-Y-組成之群之式，其中Z為延伸子單元，A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為葡萄糖醛酸苷單元；及Y為間隔子單元；D為藥物單元，其選自由以下組成之群：；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烷基C1 -C4 烷基、苯基及苯基C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、C1 -C4 烷胺基-C1 -C8 烷基、(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、二(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、C1 -C4 羥烷基C1 -C8 胺基烷基、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基-C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基C1 -C4 烷基、C3 -C10 雜環烷基、C3 -C10 雜環烷基C1 -C4 烷基、苯基、苯基C1 -C4 烷基、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基C1 -C4 烷基；或RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及-N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；下標p為自1至16之整數；及
其中Q經由存在於CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上之任何羥基及胺基連接；且其中當D為經由CPT1之胺基連接的CPT1時，則-Z-A-不為順丁烯二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基。
2A .     如實施例1A 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-RL-及-Z-A-RL-Y-組成之群之式。
3 A .     如實施例1A 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-S*-RL-及-Z-A-S*-RL-Y-組成之群之式。
4 A .     如實施例1A 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-B(S*)-RL-及-Z-A- B(S*)-RL-Y-組成之群之式。
5 A .     如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT1。
6 A .     如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT2。
7 A .     如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT3。
8 A .     如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT4。
9 A .     如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT5。
10 A .   如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT6。
11 A .   如實施例1A 至4A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L為抗體。
12A. 如實施例1A 之喜樹鹼結合物，其中Q包含具有下式之葡萄糖醛酸苷單元(RL)：
其中糖為天然或非天然之己醣型單醣，且其中RL連接至CPT1、CPT4或CPT6中之任一者的一級胺，其中用單一*標示之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6之一級胺或與間隔子單元(Y)之連接位點；及用**標示之波浪線指示與Q之額外連接子組分的連接點。
13 A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中存在間隔子單元(Y)且其包含：
其中EWG為拉電子基團。
14 A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中A包含在使用點擊化學下由炔烴及疊氮形成之三唑。
15 A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷酸組分、順丁烯二醯亞胺基及三唑組分或mDPR組分。
16 A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基組分。
17A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中Z-A-包含mDPR組分。
18A .   如實施例12A 之喜樹鹼結合物，其中Q具有下式：
其中用單一*標示之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6之一級胺或與間隔子單元的連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子之連接點。
19A .   如實施例1A 之喜樹鹼結合物，其中葡萄糖醛酸苷單元具有下式：
其中用單一*標示之波浪線指示與CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6或與間隔子單元(Y)之連接點；及用**標示之波浪線指示與A、B、S*或Z之連接點。
20A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中存在間隔子單元(Y)且其包含：
其中EWG為拉電子基團。
21A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中存在間隔子單元(Y)且其包含：。
22A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中A包含在使用點擊化學下由炔烴及疊氮形成之三唑。
23A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷酸組分、順丁烯二醯亞胺基及三唑組分或mDPR組分。
24A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基組分。
25A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含mDPR組分。
26A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺丙醯基組分且分隔劑(S*)存在於該連接子單元中。
27A .   如實施例19A 之喜樹鹼結合物，其中Q具有下式：
其中n為自1至50之整數；用單一*標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子的連接點。
28A .   如實施例27A 之喜樹鹼結合物，其中n為4。
29A .   如實施例1A 至28A 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L為特異性結合選自由CD19、CD30、CD33、CD70及LIV-1組成之群的抗原之抗體。
30A .   一種喜樹鹼-連接子化合物，其具有選自由Z'-A-RL-D (i)、Z'-A-RL-Y-D (ii)、Z'-A-S* -RL-D (iii)、Z'-A-S*-RL-Y-D (iv)、Z'-A-B(S* )-RL-D (v)及Z'-A-B(S* )-RL-Y-D (vi)組成之群之式，其中Z'為延伸子單元，A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為葡萄糖醛酸苷單元；Y為間隔子單元；及D為選自由以下組成之群的喜樹鹼化合物： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烷基C1 -C4 烷基、苯基及苯基C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、C1 -C4 烷胺基C1 -C8 烷基、(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、二(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、C1 -C4 羥烷基C1 -C8 胺基烷基、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基C1 -C4 烷基、C3 -C10 雜環烷基、C3 -C10 雜環烷基C1 -C4 烷基、苯基、苯基C1 -C4 烷基、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基C1 -C4 烷基；或RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；
下標p為自1至16之整數；且其中Q經由存在於CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上之任何羥基及胺基連接；且其中當D為經由CPT1之胺基連接的CPT1時，則-Z-A-不為順丁烯二醯亞胺基-己醯基-β-丙胺醯基。
31A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，且具有式(i)或(ii)。
32A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，且具有式(iii)或(iv)。
33 A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，且具有式(v)或(vi)。
34 A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，且具有式(i)。
35 A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，且具有式(ii)。
36 A .   如實施例30A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT6。
37 A .   如實施例30A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT4。
38 A .   如實施例30A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D選自由以下組成之群：CPT1、CPT2、CPT3及CPT5。
39 A .   如實施例30A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'為順丁烯二醯亞胺基。
40 A .   如實施例30A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-為順丁烯二醯亞胺丙醯基、mDPR或順丁烯二醯亞胺丙醯基-β-丙胺醯基。
41 A .   如實施例30A 及32A 至34A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中S*為PEG基團。
42A. 如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中該葡萄糖醛酸苷單元具有下式：
其中用單一*標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之連接位點；及用**標示之波浪線指示與喜樹鹼-連接子化合物之額外連接子組分、A、B、S*或Z'的連接點。
42 A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中存在間隔子單元且其包含：
其中EWG為拉電子基團。
43 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中存在間隔子單元且其包含：。
44 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中A包含在使用點擊化學下由炔烴及疊氮形成之三唑。
45 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷酸組分、順丁烯二醯亞胺基及三唑組分或mDPR組分。
46 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基組分。
47 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含mDPR組分。
48 A .   如實施例42A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺丙醯基組分且分隔劑(S*)存在於該連接子單元中。
49 A .   如實施例30A 之喜樹鹼-連接子化合物，其中式(i)及(ii)包含下式：
其中用單一*標示之波浪線指示與CPT1、CPT4或CPT6之一級胺或與間隔子單元之連接位點。
50A .   一種治療有需要之個體的癌症之方法，該方法包含向個體投與如實施例1A 至29A 中任一項之喜樹鹼結合物。
51 A .   實施例50A 之方法，其中該癌症選自由淋巴瘤、白血病及實體腫瘤組成之群。
52 A .   實施例50A 之方法，其中該癌症為淋巴瘤或白血病。
53 A .   實施例50A 至53A 中任一例之方法，其進一步包含額外治療劑。
54 A .   實施例53A 之方法，其中該額外治療劑為一或多種化學治療劑或放射療法。
55 A .   一種治療有需要之個體的自體免疫疾病之方法，該方法包含向個體投與如實施例1A 至29A 中任一項之喜樹鹼結合物。
56 A .   實施例55A 之方法，其中該自體免疫疾病選自由Th2淋巴細胞相關病症、Th1淋巴細胞相關病症及已活化B淋巴細胞相關病症組成之群。
57 A .   一種製備如實施例1A 至29A 中任一項之喜樹鹼結合物的方法，該方法包含使抗體與如實施例30A 至49A 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物反應。
58 A .   一種包含如實施例1A 至29A 中任一項之喜樹鹼結合物的套組。
59 A .   如實施例58A 之套組，其進一步包含額外治療劑。
1B. 一種具有式L-(Q-D)p 之喜樹鹼結合物或其鹽，其中L為配位子單元；Q為連接子單元，其具有選自由-Z-A-、-Z-A-RL-、-Z-A-S*-W-、-Z-A-B(S*)-W-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A- B(S*)-RL-、-Z-A-S*-W-RL-及-Z-A-B(S*)-W-RL-組成之群之式，其中Z為延伸子單元，A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子；及W為胺基酸單元；D為藥物單元，其選自由以下組成之群： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烷基C1 -C4 烷基、苯基及苯基C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、C1 -C4 烷胺基C1 -C8 烷基、(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、二(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、C1 -C4 羥烷基C1 -C8 胺基烷基、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基C1 -C4 烷基、C3 -C10 雜環烷基、C3 -C10 雜環烷基C1 -C4 烷基、苯基、苯基C1 -C4 烷基、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基C1 -C4 烷基；或RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；及
其中D與Q之連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6之內酯環的羥基取代基之氧原子。
2B .     如實施例1B 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-S* -W-。
3B .     如實施例1B 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-S*-W-RL-。
4B .     如實施例1B 之喜樹鹼結合物，其中Q為連接子單元，其具有式-Z-A-。
5B .     如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT2。
6B .     如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT3。
7B .     如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT1。
8B .     如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT4。
9B .     如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT5。
10B .   如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中D具有式CPT6。
11B .   如實施例1B 至4B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L為抗體。
12B. 如實施例3B 之喜樹鹼結合物，其中RL具有下式：
其中用**標示之波浪線指示與D之連接位點；及用*標示之波浪線指示與Q之另一連接子組分的連接點。
13B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中W為胺基酸單元，其選自由N-甲基甘胺酸、N-甲基丙胺酸、N-甲基β-丙胺酸、纈胺酸及N-甲基纈胺酸組成之群。
14B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分或順丁烯二醯亞胺基及三唑部分或mDPR部分。
15B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分。
16B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-具有選自由以下組成之群之式：，
其中用**標示之波浪線指示與S*之連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子的連接點。
17B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中S*具有下式：
且下標n為自2至36之整數。
18B .   如實施例2B 之喜樹鹼結合物，其中W為胺基酸單元，其選自由N-甲基甘胺酸、N-甲基丙胺酸、N-甲基β-丙胺酸、纈胺酸及N-甲基纈胺酸組成之群。
19B .   如實施例12B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分或順丁烯二醯亞胺基及三唑部分或mDPR部分。
20B .   如實施例2B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分。
21B .   如實施例2B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-具有選自由以下組成之群之式：，
其中用**標示之波浪線指示與S*之連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子的連接點。
22B .   如實施例2B 之喜樹鹼結合物，其中S*具有下式：。
23B .   如實施例18B 之喜樹鹼結合物，其中-Z-A-為，
其中用**標示之波浪線指示與S*之連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子的連接點。
24B .   如實施例18B 之喜樹鹼結合物，其中Q具有下式：
其中n為自2至10之整數；用**標示之波浪線指示與D之連接位點；及用***標示之波浪線指示與L之硫原子的連接點。
25B .   如實施例27B 之喜樹鹼結合物，其中n為2至4。
26B .   如實施例1B 至25B 中任一項之喜樹鹼結合物，其中L為抗體，其選擇性結合選自由CD19、CD30、CD33、CD70及LIV-1組成之群的抗原。
27B .   一種喜樹鹼-連接子化合物，其具有選自由以下組成之群之式：Z'-A-D (i)、Z'-A-RL-D (ii)、Z'-A-S* -W-D (iii)、Z'-A-S* -W-RL-D (iv)、Z'-A-B(S* )-RL-D (v)及Z'-A-B(S* )-W-RL-D，其中Z'為延伸子單元，A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子單元；及D為藥物單元，其選自由以下組成之群： ；
其中RB 為選自由以下組成之群的成員：H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 鹵烷基、C3 -C8 環烷基、C3 -C8 環烷基C1 -C4 烷基、苯基及苯基C1 -C4 烷基-；RC 為選自由以下組成之群的成員：C1 -C6 烷基及C3 -C6 環烷基；各RF 及RF ' 為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1 -C8 烷基、C1 -C8 羥烷基、C1 -C8 胺基烷基、C1 -C4 烷胺基C1 -C8 烷基、(C1 -C4 羥烷基)(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、二(C1 -C4 烷基)胺基C1 -C8 烷基、C1 -C4 羥烷基C1 -C8 胺基烷基、C1 -C8 烷基C(O)-、C1 -C8 羥烷基C(O)-、C1 -C8 胺基烷基C(O)-、C3 -C10 環烷基、C3 -C10 環烷基C1 -C4 烷基、C3 -C10 雜環烷基、C3 -C10 雜環烷基C1 -C4 烷基、苯基、苯基C1 -C4 烷基、二苯基C1 -C4 烷基、雜芳基及雜芳基C1 -C4 烷基，或
RF 及RF ' 與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1 -C4 烷基、-OH、-OC1 -C4 烷基、-NH2 、-NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 之取代基的5員、6員或7員環；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、OH、OC1 -C4 烷基、NH2 、NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；且其中RB 、RC 、RF 及RF ' 之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1 -C4 烷基、OH、OC1 -C4 烷基、NH2 、NHC1 -C4 烷基及N(C1 -C4 烷基)2 組成之群的取代基取代；及
其中D與Q之連接點經由CPT1、CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6之內酯環的羥基取代基之氧原子。
28B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)或(ii)。
29B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)或(iv)。
30B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(v)或(vi)。
31B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(i)。
32B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(ii)。
33B .   如實施例27B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT2。
34B .   如實施例27B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT3。
35B .   如實施例27B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中D選自由以下組成之群：CPT1、CPT4、CPT5及CPT6。
36B .   如實施例27B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'為順丁烯二醯亞胺基。
37B .   如實施例27B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-為順丁烯二醯亞胺丙醯基、mDPR或順丁烯二醯亞胺丙醯基-β-丙胺醯基。
38B .   如實施例27B 及29B 至31B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中S*為PEG基團。
39B .   如實施例27B 之喜樹鹼-連接子化合物，其中RL具有下式：
其中用**標示之波浪線指示與D之連接位點；及用*標示之波浪線指示與Q之另一連接子組分的連接點。
40B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷酸部分或順丁烯二醯亞胺基及三唑部分或mDPR部分。
41B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基組分。
42B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含mDPR部分。
43B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺丙醯基部分，且其中存在分隔劑(S*)。
44B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有下式：。
45B .   如實施例39B 之喜樹鹼-連接子化合物，其具有下式：。
46B .   一種治療有需要之個體的癌症之方法，該方法包含向個體投與如實施例1B 至29B 中任一項之喜樹鹼結合物。
47B .   實施例46B 之方法，其中該癌症選自由淋巴瘤、白血病及實體腫瘤組成之群。
48B .   實施例46B 之方法，其中該癌症為淋巴瘤或白血病。
49B .   實施例46B 至48B 中任一例之方法，其進一步包含投與額外治療劑。
50B .   實施例39B 之方法，其中該額外治療劑為一或多種化學治療劑或放射療法。
51B .   一種治療有需要之個體的自體免疫疾病之方法，該方法包含向個體投與如實施例1B 至26B 中任一項之喜樹鹼結合物。
52B .   實施例51B 之方法，其中該自體免疫疾病選自由Th2淋巴細胞相關病症、Th1淋巴細胞相關病症及已活化B淋巴細胞相關病症組成之群。
53B .   一種製備如實施例1B 至26B 中任一項之喜樹鹼結合物的方法，該方法包含使具有游離硫醇的抗體與如實施例27B 至43B 中任一項之喜樹鹼-連接子化合物反應。
54B .   一種包含如實施例1B 至26B 中任一項之喜樹鹼結合物的套組。
55B .   如實施例54B 之套組，其進一步包含額外治療劑。實例 材料及方法
除非另外指示，否則以下材料及方法適用於此章節中所描述之合成程序。所有市售無水溶劑均未經進一步純化即使用。起始材料、試劑及溶劑購自商業供應商(SigmaAldrich及Fischer)。產品係藉由急驟管柱層析利用Biotage Isolera One急驟純化系統來純化(Charlotte，NC)。UPLC-MS在接合至Waters Acquity UPLC系統之Waters單一四極偵測器質譜儀上使用展示於表A至F中之UPLC方法來進行。製備型HPLC係在配置有Wasters 2998 PDA偵測器之Waters 2454 Binary Gradient Module溶劑遞送系統上進行。除非另外指定，否則產品經具有適當直徑之Phenomenex Max-RP 4 μm Synergi 80 Å 250 mm逆相管柱用0.05%三氟乙酸/水及0.05%三氟乙酸/乙腈溶離來純化。
表 A ： 管柱- Waters Acuity UPLC BEH C18 2.1 × 50 mm，1.7 μm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B -含有0.1%甲酸之乙腈(方法A)。
表 B ： 管柱- Waters Acuity UPLC BEH C18 2.1 × 50 mm，1.7 μm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B -含有0.1%甲酸之乙腈(方法B)。
表 C ：管柱- Kinetex F5 1.7 μm 100 Å，2.1 × 50 mm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B - 含有0.1%甲酸之乙腈(方法C)。
表 D ： 管柱- Waters CORTECS C18 1.6 μm，2.1 × 50 mm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B -含有0.1%甲酸之乙腈(方法D)。
表 E ： 管柱- Waters CORTECS C18 1.6 μm，2.1 × 50 mm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B -含有0.1%甲酸之乙腈(方法E)。
表 F ： 管柱- Waters CORTECS C8 1.6 μm，2.1 × 50 mm，逆相管柱，溶劑A - 0.1%甲酸水溶液，溶劑B -含有0.1%甲酸之乙腈(方法F)。
表G：縮寫列表 喜樹鹼化合物製備
以下實例中所提供之喜樹鹼化合物可用於製備如本文所描述之喜樹鹼-連接子化合物以及喜樹鹼結合物。
實例 1
將購自MedChemExpress之SN-38 (化合物1 ，160.0 mg，0.4077 mmol)懸浮於無水DCM (2 mL)中。添加DIPEA (0.22 mL，1.3 mmol)，隨後添加TBSCl (154 mg，1.02 mmol)。攪拌反應物30分鐘直至化合物1 變得可溶且藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物用MeOH淬滅、經由二氧化矽塞過濾且在真空中濃縮。將所獲得的無色油狀物用Hex濕磨。自溶液沈澱出產物。藉由過濾來收集沈澱物且將其用Hex淋洗以獲得呈灰白色固體之化合物2 (TBS-SN-38) (200 mg，0.395 mmol，97%)。tR = 1.86 min (方法B)；MS (m/z) [M + H]+ C28 H35 N2 O5 Si計算值：507.23，實驗值：506.96。
實例 2
化合物3 係根據由Burke, P. J., Jeffrey, S. C.等人在Bioconjugate Chem . 2009, 20, 1242-1250中所描述之程序合成。將化合物3 (50 mg，0.108 mmol)溶解於DCM (1 mL)中。添加DMAP (13 mg，0.11 mmol)至反應物，隨後添加Boc2 O (24 mg，0.11 mmol)。攪拌反應物5分鐘，此時觀測到完全轉化成所需產物。受保護產物藉由管柱層析10G Biotage Ultra 0至5% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物4 (49 mg，0.087 mmol，80%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.24 min；MS (m/z) [M + H]+ C30 H34 N3 O8 計算值：564.23，實驗值：564.10。
將化合物4 (49 mg，0.087 mmol)溶解於無水DCM (2 mL)中。添加DMAP (37 mg，0.304 mmol)且使反應物冷卻至0℃。取於DCM中溶解成10 mg/mL之三光氣(12 mg，0.039 mmol)以15分鐘時間逐滴添加至反應物中。將2 uL等分試樣在98 uL MeOH稀釋劑中淬滅且注射至UPLC-MS上。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成MeOH加合物。反應混合物(化合物5 )可直接用於與適合之連接子的偶合步驟中。LC-MS (方法A)：tR = 2.09 min；MS (m/z) [M + H]+ C32 H36 N3 O10 計算值：622.24，實驗值：622.02。
實例 3
將根據Bioconjugate Chem . (2009) 20：1242-1250中所描述之程序合成的化合物6 (150 mg，0.334 mmol)溶解於無水DCM (2 mL)中。添加DMAP (143 mg，1.17 mmol)。以5分鐘時間逐滴添加溶解於無水DCM (50 mg/mL)中之三光氣(45 mg，0.15 mmol)。在室溫下攪拌反應物30分鐘。將2 uL等分試樣之反應混合物於98 uL MeOH稀釋劑中淬滅。觀測到之接近完全轉化成MeOH碳酸酯指示氯甲酸酯形成。由此獲得之化合物7 未經進一步純化即用於與適合之連接子的偶合步驟中。LC-MS (方法A)：tR = 1.55 min；MS (m/z) [M + H]+ C27 H27 N2 O8 計算值：507.18，實驗值：507.06。
實例 4
將獲自TCI Research Chemicals (Cat. No. A1356)之6-胺基-3,4-(亞甲二氧基)苯乙酮(8 ，5.00 g，27.9 mmol)溶解於DCM (100 mL)中。使反應物冷卻至0℃且添加DIPEA (7.29 mL，41.9 mmol)，隨後緩慢添加乙醯氯(2.49 mL，34.9 mL)。使反應物升溫至室溫且攪拌30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用MeOH (5 mL)淬滅，且將反應物在真空中濃縮以獲得呈白色固體之化合物9，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 1.37；MS (m/z) [M + H]+ C11 H12 NO4 計算值：222.08，實驗值：222.11。
將化合物9 (27.9 mmol)溶解於AcOH (100 mL)中。緩慢添加HBr 33% w/w之AcOH溶液(9.78 mL，55.8 mmoL)。以15分鐘時間滴加溴(1.44 mL，27.9 mmol) 。攪拌反應物30分鐘，此時觀測到轉化成所需產物。將反應物傾倒在冰水上，藉由過濾收集沈澱物，並用水洗滌。濾液乾燥以獲得黃色粉末，其為所需產物化合物10 與起始材料及二溴化產物雜質之混合物，其不經進一步純化即用於下一步驟(7.2 g，24 mmol，86%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.58 min；MS (m/z) [M + H]+ C11 H11 BrNO4 計算值：299.99，實驗值：299.90。
將化合物10 (7.2 g，24 mmol)溶解於EtOH (100 mL)中。添加濃縮HBr (5 mL)且將反應物加熱至迴流持續60分鐘。觀測到接近完全轉化成脫除保護基之產物。將反應物在真空中濃縮，用DCM (200 mL)及H2 O (200 mL)稀釋。用DCM (3 × 200 mL)萃取水相，將所收集的有機相用MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析0至10% MeOH/DCM純化粗產物。將含有所需產物與少量雜質之溶離份濃縮以獲得呈黃色粉末狀之化合物11 (4.05 g，15.7 mmol，65%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.57 min；MS (m/z) [M + H]+ C9 H9 BrNO3 計算值：257.98，實驗值：257.71。
實例 5
將化合物11 (1.00 g，3.87 mmol)、p-TSA (667 mg，3.87 mmol)及4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮 (1.02 g，3.87 mmol，獲自Avra Laboratories Pvt. Ltd.)裝入燒瓶中。添加DCM (5 mL)以使固體均質化，且隨後在氮氣下蒸發。隨後由固體在無溶劑下，在高度真空(1 mbar)下加熱至120℃持續60分鐘。使反應物冷卻至室溫，將粗產物用H2 O沈澱、過濾且用H2 O洗滌。藉由管柱層析0至10% MeOH/DCM純化沈澱物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈棕色固體之化合物12 (989 mg，2.04 mmol，53%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.62 min (通用方法UPLC)；MS (m/z) [M + H]+ C22 H17 BrN2 O6 計算值：485.03，實驗值：484.95。
實例 6
將化合物12 (188 mg，0.387 mmol)溶解於EtOH (5 mL)中。添加六亞甲基四胺(163 mg，1.16 mmol)且在迴流下攪拌反應物90分鐘。使反應物冷卻且添加濃HCl水溶液(0.1 mL)。將反應物濃縮且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈灰白色固體之化合物13 (109 mg，0.259 mmol，67%)。LC-MS (方法A)：tR = 0.89；MS (m/z) [M + H]+ C22 H20 N3 O6 計算值：422.14，實驗值：422.16。
表 H ： 由化合物13 (7-MAD-MDCPT)製備之喜樹鹼化合物
實例 7
將來自實例4之化合物12 (10.0 mg，20.6 µmol)溶解於無水DMF (0.25 mL)中。添加甲胺(2 M於THF中，0.031 mL，62 µmol)。攪拌反應物30分鐘，隨後用AcOH (20 µL)淬滅。將反應物藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物(14 )之溶離份凍乾以獲得黃色固體(3.27 mg，7.51 µmol，36%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.57 min；MS (m/z) [M + H]+ C9 H9 BrNO3 計算值：257.98，實驗值：257.71。tR = 0.93 min (方法A)；MS (m/z) [M + H]+ C23 H22 N3 O6 計算值：436.15，實驗值：435.78。
表 I ： 根據實例7製備之其他喜樹鹼化合物。
實例 8
如Heterocycles , (2007) 71：39-48)中所描述製備6-硝基-1,3-苯并間二氧雜環戊烯-5-甲腈(化合物15 ，2.00 g，10.4 mmol)且隨後將其溶解於EtOH (50 mL)中。將反應物放置在氮氣氛圍下。添加Pd/C (2.22 g，10% w/w，2.08 mmol)至放置在氫氣氛圍下的反應物。攪拌反應物2小時。將反應物經由矽藻土床過濾且用MeOH淋洗。將溶離液在真空中濃縮且藉由急驟層析0至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈紅色固體狀之化合物16 (1.46 g，9.00 mmol，87%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.14 min；MS (m/z) [M + H]+ C8 H7 N2 O2 計算值：163.05，實驗值：162.37。
實例 9
將6-胺基-1,3-苯并間二氧雜環戊烯-5-甲腈(化合物16 ，50 mg，0.31 mmol)放置在氮氣氛圍下且溶解於無水THF (1 mL)中。添加CuBr (1.5 mg，0.010 mmol)，隨後添加1 M溴化4-氟苯基鎂/THF(1.23 mL)。將反應物加熱至60℃持續30分鐘，且隨後冷卻至室溫。緩慢添加15% H2 SO4 溶液至反應物，且攪拌30分鐘。將反應物傾入至飽和NaHCO3 (50 mL)中，且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。有機物經MgSO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析10G Biotage Ultra 0至10% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈紅色固體之化合物17 (46.2 mg，0.178 mmol，58%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.81 min；MS (m/z) [M + H]+ C14 H11 FNO3 計算值：260.07實驗值：259.46。
實例 10
將化合物17 (46.2 mg，0.178 mmol)、p-TSA (30.7 mg，0.178 mmol)及4-乙基-4-羥基-7,8-二氫-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(46.9 mg，0.178 mmol，獲自Avra Laboratories Pvt. Ltd.)裝入閃爍瓶中。添加DCM (1 mL)以使固體均質化。在氮氣下濃縮溶劑。隨後由固體在無溶劑下，在高度真空(1 mbar)下加熱至120℃持續60分鐘。將反應物在DCM (50 ml)中復原，用H2 O洗滌，有機相經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析10G Biotage Ultra 0至10% MeOH/DCM純化粗產物。將含有所需產物(18 )之溶離份在真空中濃縮以獲得紅色固體(32.9 mg，0.0676 mmol，38%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.81 min；MS (m/z) [M + H]+ C27 H20 FN2 O6 計算值：487.13，實驗值：487.19。
表 J ： 根據實例9 及10 之程序製備的其他喜樹鹼化合物。
實例 11
將獲自MedChemExpress的SN-38 ((化合物1 ，76.0 mg，0.19 mmol)溶解於二氯甲烷中，隨後添加三乙胺(128 µL，0.92 mmol)及DMAP (2.60 mg，0.02 mmol)。將混合物在冰浴中冷卻至0℃，隨後逐滴添加乙醯氯(15.9 µL，0.22 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16 h。將反應物用二氯甲烷稀釋，用飽和NH4 Cl、水及鹽水洗滌。有機相隨後經MgSO4 乾燥、過濾、濃縮且經二氧化矽經由Biotage急驟管柱層析(CH2 Cl2 /MeOH 0-15%)純化以得到乙醯化SN-38 (19 )。MS (m/z ) 計算值：435.15 (M+H)+ ，實驗值：435.07。
表 K ： 如本文所描述製備之喜樹鹼化合物：
實例 12
將依喜替康甲磺酸鹽(Exatecan mesylate) (化合物21a ，20.0 mg，0.0376 mmol，獲自MedChemExpress目錄號：HY-13631A)懸浮於無水DCM (1 mL)中。添加DIPEA (20.0 µL，0.0146 mmol)，隨後添加乙醯氧基乙醯基氯化物(5.0 µL，0.046 mmol)。將反應物攪拌30分鐘，隨後用MeOH淬滅且在真空中濃縮。將反應混合物再溶解於MeOH (1 mL)中。添加LiOH (20 mg)。觀測到乙酸酯之完全脫除保護基。淬滅AcOH。藉由prep-HPLC 10 mm 10%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物21b (15.3 mg，0.0310 mmol，82%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.46 min；MS (m/z) [M + H]+ C26 H25 N3 O6 計算值：494.17，實驗值：494.05。
實例 13
將依喜替康甲磺酸鹽(化合物21a ，20.0 mg，0.0376 mol)溶解於MeCN (1 mL)及NaHCO3 0.75M/H2 O中。添加Fmoc-OSu (19.0 mg, 0.0564 mmol)且將反應物攪拌2小時30分鐘。將反應物用H2 O (50 mL)稀釋，將pH調節至中性且用DCM (3 × 50 mL)萃取。有機相經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由prep-TLC 0至5% MeOH/DCM純化粗產物。刮下含有所需產物之條帶，將其用10% MeOH/DCM洗滌過濾，且將溶離液在真空中濃縮以獲得呈橙色固體之化合物22 (19.1 mg，0.0290 mmol，77%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.23 min；MS (m/z) [M + H]+ C39 H33 FN3 O6 計算值：658.24，實驗值：658.09。
實例 14
將根據實例1 製備的化合物2 (132 mg，0.260 mmol)溶解於2 mL無水DCM中。添加DMAP (111 mg，0.911 mmol)。將三光氣(34.8 mg，0.117 mmol)溶解於50 mg/mL無水DCM中，且以5分鐘時間將溶液逐滴添加至經攪拌反應溶液。將2 uL等分試樣之反應溶液於98 uL MeOH稀釋劑中淬滅。在15分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到接近完全轉化成Me-碳酸酯。將含有化合物24 之反應混合物立即用於本文所描述之偶合反應中。喜樹鹼藥物連接子化合物製備
實例 15
將依喜替康甲磺酸鹽(化合物21a ，5.00 mg，9.41 µmol)溶解於無水DCM中。添加DIPEA (5.0 µL，28 µmol)隨後添加先前由Jeffrey, S. C.等人在Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840中所描述之化合物25 (17.2 mg，18.8 µmol)。將反應物在40 ℃下攪拌3小時。用MeOH淬滅反應物且在真空中濃縮。將粗反應混合物用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 2.32 min；MS (m/z) [M + H]+ C63 H61 FN5 O19 計算值：1210.39，實驗值：1210.08。
將來自前一步驟之粗化合物26 (9.41 µmol)溶解於THF (1 mL)及1 M LiOH/MeOH (1 mL)中。將反應物攪拌5分鐘，隨後添加H2 O且再攪拌5分鐘。反應物用AcOH (100 µL)淬滅，在真空中濃縮且藉由prep-HPLC 21 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物27 (1.1 mg，1.3 µmol)。LC-MS (方法A)：tR = 1.29 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H43 FN5 O14 計算值：848.28，實驗值：848.03。
實例 16
將化合物27 (1.1 mg，1.3 µmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (1 µL)，隨後添加購自TCI (CAS：55750-62-4)之3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-丁二醯亞胺酯(28 ，0.63 mg，2.4 µmol)。攪拌反應物5分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (10 uL)淬滅，且藉由prep-HPLC 10 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物29 (1.21 mg，1.21 µmol，93%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.52 min；MS (m/z) [M + H]+ C48 H48 FN6 O17 計算值：999.31，實驗值：999.07。
實例 17
將如藉由實例21及22所描述製備之化合物30 (210 mg，0.234 mmol)溶解於實驗室DCM (3 mL)中。添加三聚甲醛(300至600 mg，xs)。用力攪拌，添加TMSBr (0.1 mL)。攪拌反應物10分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應混合物經由針筒過濾器過濾、DCM (2 × 3 mL)淋洗，添加甲苯(3 mL)以使最終混合物共沸。在真空中濃縮以獲得白色固體。不經進一步純化即用於下一步驟。將MeOH稀釋劑用於藉由UPLC-MS觀測MeOH淬滅加合物。LC-MS (方法A)：tR = 2.19 min；MS (m/z) [M + Na]+ C44 H51 N3 NaO18 S計算值：964.28，實驗值：965.17。
實例 18
使稱為7-BAD-MDCPT之化合物20c (20 mg，0.047 mmol)與甲苯共沸3次且在使用之前在高真空下乾燥。將來自實例16之粗化合物31 (231 mg，0.234 mmol)溶解於無水DCM中，且添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP，51.4 µL，0.284 mmol)。在鹼基添加之後藉由UPLC-MS觀測化合物31 在溶液中之最低水解。將化合物31 之溶液直接添加至藥物反應容器且加熱至回流。化合物20c 僅略微可溶於DCM。藉由UPLC-MS監測反應完成，其需要在回流下加熱3天。然後，反應物用MeOH淬滅、在真空中濃縮且藉由FCC Biotage 10G Ultra 0至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物(化合物32 )之溶離份濃縮以獲得黃色固體(50 mg，約50% w/w，0.019 mmol，40%)，其與二聚水解連接子大致50% w/w混合。tR = 1.46 min (通用方法UPLC)；MS (m/z) [M + H]+ C65 H66 N5 O24 S計算值：1332.38，實驗值：1332.54。
實例 19
將化合物32 (50 mg，50% w/w，0.019 mmol)溶解於MeOH:THF 1:1 (1 mL)中。添加LiOH (20 mg，0.84 mmol)且攪拌60分鐘。添加水(0.5 mL)。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH淬滅、在真空中濃縮且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色固體之所需產物化合物33 (5 mg，0.005 mmol，27%)。LC-MS (方法A)：tR = 0.84 min；MS (m/z) [M + H]+ C43 H48 N5 O19 S計算值：970.27，實驗值：969.92。
實例 20
將化合物33 (5 mg，0.005 mmol)溶解於DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (10 µL)隨後添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，4.1 mg，0.016 mmol)且攪拌45分鐘此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcoH (20 µL)淬滅且藉由prep-HPLC 10 mm Max-RP C12 5%至60%至95% MeCN/H2 O純化。將含有所需產物化合物34 之溶離份凍乾以獲得黃色粉末(2.33 mg，2.08 µmol，40.3%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.35 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H53 N6 O22 S計算值：1121.29，實驗值：1121.25。
實例 21
將根據Bioconjugate Chem . (2006)17 ：831-840中之程序製備的化合物35 (2.00 g，4.12 mmol)溶解於無水DCM (20 mL)中。添加DIPEA (3.59 mL，20.60 mmol)隨後添加1,1'-羰基-二-(1,2,4-三唑) (744 mg，4.53 mmol)。攪拌反應物5分鐘，且將含有化合物36 之反應混合物用於下一步驟。
向含有化合物36 (4.12 mmol)之反應混合物添加2-(甲磺醯基)乙胺(0.61 mL，6.2 mmol)。攪拌反應物5分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物在真空中濃縮且藉由管柱層析KP-Sil 100G 10%至100% EtOAc/Hex純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體狀之化合物37 (2.40 g，3.78 mmol，92%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.71 min；MS (m/z) [M + Na]+ C24 H30 N2 NaO16 S計算值：657.12，實驗值：656.93。
實例 22
將化合物37 (2.40 g，3.78 mmol)溶解於MeOH (20 ml)中。添加AcOH (10 mL)至反應物，隨後添加鋅粉塵(7.42 g，113 mmol)。攪拌反應物20分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物經由二氧化矽過濾用20% MeOH/DCM溶離。將溶離液濃縮且用於下一步驟。
將粗化合物38 (3.78 mmol)溶解於無水DCM (10 mL)中。添加DIPEA (3.30 mL，18.9 mmol)，隨後添加Fmoc-Sar-Cl (2.50 g，7.58 mmol)。攪拌反應物5分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用MeOH淬滅，在真空中濃縮且藉由管柱層析KP-Sil 100G 10%至100% EtOAc/Hex純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物30 。LC-MS (方法A)：tR = 2.17 min；MS (m/z) [M + H]+ C42 H48 N3 O17 S計算值：898.27，實驗值：898.09。
實例 23
將化合物30 (200 mg，0.223 mmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加三聚甲醛(200 mg，6.68 mmol)，隨後添加TMSCl (1 mL)。攪拌反應物15分鐘，隨後過濾，DCM (2 × 2 mL)淋洗且添加甲苯(2 mL)以使最終混合物共沸。將溶離液濃縮以獲得白色固體。將粗化合物39 立即用於下一步驟。
將粗化合物39 (0.223 mmol)溶解於無水DCM (1 mL)中。添加DIPEA (0.047 mL，0.27 mmol)至反應物。將反應溶液直接添加至固體化合物21 - b (22 mg，0.045 mmol)。攪拌反應物120分鐘。反應物用MeOH淬滅，在真空中濃縮且藉由管柱層析0%至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物及少量雜質之溶離份在真空中濃縮以獲得呈白色固體之化合物40 (30 mg，80% w/w，0.021 mmol，48%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.25 min；MS (m/z) [M + H]+ C69 H72 FN6 O23 S計算值：1403.44，實驗值：1404.03。
實例 24
將化合物40 (30 mg, 0.021 mmol)溶解於MeOH (1 mL)中。添加LiOH (25 mg, 1.1 mmol)至反應物，且音波處理反應物以有助於溶解。攪拌反應物10分鐘，隨後添加H2 O (1 mL)。再攪拌反應物20分鐘，隨後用AcOH淬滅。將反應物在真空中濃縮且藉由prep-HPLC 21 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份純化以獲得呈白色固體之化合物41 (14.5 mg，0.0139 mmol，65%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.29 min；MS (m/z) [M + H]+ C47 H54 FN6 O18 S計算值：1041.32，實驗值：1041.24。
實例 25
將化合物41 (14.5 mg，0.0139 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (15 µL，0.084 mmol)，隨後添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，11 mg，0.042 mmol)。在室溫下攪拌反應物80分鐘。反應物用AcOH淬滅，且藉由prep-HPLC 10 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色固體之化合物42 (2.24 mg，1.88 µmol，13%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.49 min；MS (m/z) [M + H]+ C54 H59 FN7 O21 S計算值：1192.35，實驗值：1192.31。
實例 26
將根據Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840)之程序製備的化合物43 (200 mg, 0.267 mmol)溶解於DCM (1 mL)中。添加羰基二三唑(44 ，131.52 mg，0.801 mmol)且攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物用EtOAc (50 mL)稀釋且用H2 O (3 × 50 mL)洗滌。有機物經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈白色固體之化合物45 (209 mg，0.248 mmol，93%)。LC-MS (方法D)：tR = 2.07 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H42 N5 O15 計算值：844.27，實驗值：844.02。產物不經進一步純化即用於下一步驟。
將化合物45 (100 mg，0.119 mmol)及稱為H-Gly-7-MAD-MDCPT之化合物13b (18 mg，0.039 mmol)溶解於DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (0.1 mL)且在室溫下攪拌反應物。觀測到大致50%轉化成所需產物化合物46 ，在15分鐘之後觀測到化合物45 之水解。註釋：根據UPLC-MS化合物46 及水解產物具有相同滯留時間。反應物用AcOH淬滅且在真空中濃縮，且藉由管柱層析0至5% MeOH/DCM純化。將含有化合物46 以及50%化合物13b 雜質之溶離份濃縮以獲得白色固體(46 mg，50% w/w，0.018 mmol，46%)。LC-MS (方法E)：tR = 1.32 min；MS (m/z) [M + H]+ C63 H61 N6 O22 計算值：1253.38，實驗值：1253.47。
實例 27
將化合物46 (0.018 mmoL)溶解於MeOH (0.5 mL)及THF (0.5 mL)中。添加LiOH (25 mg，1.0 mmol)。音波處理反應物以溶解LiOH並攪拌。在10分鐘之後添加水(0.5 mL)。在100分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。用AcOH (0.2 mL)淬滅反應物。將反應物濃縮且藉由prep-HPLC使用10 mm Max-RP用5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA梯度純化。將含有所需產物化合物47 之溶離份在真空中濃縮以獲得黃色固體(8.4 mg，9.4 µmol，51%)。LC-MS (方法D)：tR = 0.92 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H43 N6 O17 計算值：891.27，實驗值：891.06。
實例 28
將化合物47 (8.4 mg, 9.4 µmol)溶解於DMF (0.2 mL)中。添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，7.5 mg，0.028 mmol)。添加DIPEA (9 µL，0.05 mmol)。攪拌反應物5分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.05 mL)淬滅，且藉由prep-HPLC 10 mm Max RP C12純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得含有10%雜質之黃色粉末。藉由Prep-HPLC 10 mm Max-RP C12再純化粗凍乾產物，將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色固體之化合物48 (1.33 mg，1.28 µmol，13.5%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.08 min；MS (m/z) [M + H]+ C48 H48 N7 O20 計算值：1042.30，實驗值：1042.19。實例 29
向直火烘乾燒瓶中裝入化合物3 (30 mg，65 µmol)且用N2 沖洗。添加無水DCM (3.25 mL)隨後添加光氣(20%於甲苯中，1.2 mL)。將反應物覆蓋且攪拌24 h。藉由注射反應混合物至MeOH中且觀測胺基甲酸甲酯加合物確認異氰酸酯形成。LC-MS (方法A)：tR = 1.58 min，MS m/z (ES+)實驗值：522.32。將反應物在N2 流下攪拌至乾燥，放置在高真空下1 h以得到化合物64 ，不經進一步純化即將其運送向前。
將根據Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840之程序製備的化合物43 (103 mg, 138 µmol)溶解於無水DMF (1.5 mL)中且添加至裝有化合物64 (32 mg, 65 µmol)之燒瓶。在N2 下攪拌反應物24 h，隨後旋轉蒸發至乾燥。將粗混合物裝載至1 mM層析儀平板上且用DCM/MeOH (1%、2%、3% MeOH梯度)溶離以得到化合物49 (25 mg, 31%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.23 min；MS (m/z )計算值：1238.22 (M+H)+ ，實驗值：1238.40。
實例 30
將化合物49 (3 ，41 mg，33 µmol)溶解於MeOH (1.1 mL)及THF (1.1 mL)中，隨後冷卻至0℃。將LiOH單水合物(14 mg，333 µmol)溶解於H2 O (1.1 mL)中，隨後在攪拌下逐滴添加至反應物。使反應物升溫至RT且在4.5 h之後停止。藉由旋轉蒸發器去除MeOH及THF，添加DMSO以溶解，隨後將反應物藉由製備型HPLC純化以得到化合物50 (9 mg，31%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.16 min；MS m/z (ES+)實驗值：876.23。
實例 31
將3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 )溶解於無水DMF中且添加至化合物50 至最終濃度為30 mM，隨後添加DIPEA。藉由LC-MS監測反應。完成後，將溶液用乙酸中和、濃縮且隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物51 。LC-MS (方法A)：tR = 1.36 min，MS (m/z )計算值：1026.96 (M+H)+ 實驗值：1027.21。
實例 32
在經烘箱乾燥之燒瓶中，將如實例21中所描述製備之化合物30 (162 mg，180 µmol)溶解於無水二氯甲烷(1 mL)中，隨後添加三聚甲醛(10.8 mg，0.36 mmol)及TMSBr (250 µL，1.40 mmol)。在監測下在室溫下攪拌溶液10 min，藉由用甲醇淬滅及藉由LC-MS觀測甲醇加合物之形成。將反應物過濾，用無水甲苯及二氯甲烷洗滌且在真空中乾燥3個循環以得到粗產物，不經進一步純化即將該粗產物用於後續反應中。將粗化合物再溶解於無水二氯甲烷中且添加至根據Bioconjugate Chem . (2009) 20：1242-1250中之程序製備的化合物18r (32.3 mg，72 µmol)，隨後添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP，200 µL，0.96 mmol)。將反應物覆蓋，在80℃下微波2 h且藉由LC-MS監測。完成後，移除溶劑其藉由製備型HPLC純化以得到所需產物化合物53 。MS (m/z )計算值;1358.39 (M+H)+ ，實驗值：1358.03。
將粗化合物53 溶解於MeOH及THF中，且冷卻至0℃。將LiOH/H2 O緩慢添加至反應瓶至最終濃度為10 mM。使反應物升溫至室溫，且藉由LC-MS監測。完成後，將溶液用乙酸中和、濃縮且隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物54 。MS (m/z )計算值：996.01 (M+H)+ ，實驗值：996.36。
實例 33
將3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 )溶解於無水DMF中且添加至化合物54 至最終濃度為30 mM，隨後添加DIPEA。藉由LC-MS監測反應。完成後，將溶液用乙酸中和、濃縮且隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物55 。LC-MS (方法A)：tR = 1.75 min，MS (m/z )計算值：1147.13 (M+H)+ ，實驗值：1147.02。
實例 34
在經烘箱乾燥之燒瓶中，將如實例21中所描述製備之化合物30 (1235 mg，1.38 mmol)溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中，隨後添加三聚甲醛(13.8 mg，0.46 mmol)及TMSCl (1.0 mL，7.88 mmol)。在監測下在室溫下攪拌溶液30 min，藉由用甲醇淬滅及藉由LC-MS觀測甲醇加合物之形成。甲醇加合物之MS (m/z )計算值：942.29 (M+H)+ ，實驗值：942.28。將反應物過濾、用無水甲苯及二氯甲烷洗滌且在真空中乾燥3個循環。將粗產物溶解於無水二氯甲烷(6 mL)及DIPEA (359 µL，2.06 mmol)中，且添加至含有SN-38 (化合物1 ，90 mg，0.23 mmol)之燒瓶。將反應物覆蓋且在40℃下攪拌18 h。反應混合物經二氧化矽經由Biotage急驟管柱層析(CH2 Cl2 /MeOH，0至10%)純化以得到化合物56 。MS (m/z )計算值：1302.40 (M+H)+ ，實驗值：1302.36。
實例 35
將化合物56 (282.6 mg, 0.22 mmol)溶解於THF及MeOH中且在冰浴中冷卻至0℃。將LiOH (91.1 mg，2.17 mmol)溶解於H2 O中且逐滴添加。將反應物在室溫下攪拌且在45 min內完成。將反應物用乙酸中和、濃縮且直接藉由製備型HPLC純化以得到化合物57 。
實例 36
將3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 )溶解於DMF及DIPEA中，且添加至化合物57 。攪拌反應物3 h直至如藉由LC-MS監測完成。將反應混合物用乙酸中和且直接藉由製備型HPLC純化以得到化合物58 。LC-MS (方法A)：tR = 1.40 min；MS (m/z )計算值：1091.31 (M+H)+ ，實驗值：1091.47。
實例 37
將SN-38 (1 ，76.0 mg，0.19 mmol，購自MedChemExpress)溶解於二氯甲烷中，隨後添加三乙胺(128 µL，0.92 mmol)及DMAP (2.60 mg，0.02 mmol)。將混合物在冰浴中冷卻至0℃，隨後逐滴添加乙醯氯(15.9 µL，0.22 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16 h。將反應物用二氯甲烷稀釋，用飽和NH4 Cl、水及鹽水洗滌。隨後有機相經MgSO4 乾燥、過濾、濃縮且經二氧化矽經由Biotage急驟管柱層析(CH2 Cl2 /MeOH 0至15%)純化以得到化合物19 (Ac-SN-38)。MS (m/z )計算值：435.15 (M+H)+ ，實驗值：435.07。
實例 38
在經烘箱乾燥之燒瓶中，將化合物30 (1.12 g，1.24 mmol)溶解於無水二氯甲烷(5 mL)中，隨後添加三聚甲醛(12.4 mg，0.41 mmol)及TMSBr (300 µL，1.68 mmol)。在監測下在室溫下攪拌溶液10 min，藉由用甲醇淬滅及藉由LC-MS觀測甲醇加合物之形成。將反應物過濾、用無水甲苯及二氯甲烷洗滌且在真空中乾燥3個循環。將粗產物溶解於無水二氯甲烷中且添加至化合物19 (90.0 mg，0.21 mmol)，隨後添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(3.90 mL，1.86 mmol)。將反應物覆蓋且在40℃下攪拌18 h。反應混合物經二氧化矽經由Biotage急驟管柱層析(CH2 Cl2 /MeOH，0至10%)純化以得到化合物59 。MS (m/z )計算值：1344.41 (M+H)+ ，實驗值：1344.46。
實例 39
將化合物59 (290.0 mg, 0.22 mmol)溶解於THF及MeOH中且在冰浴中冷卻至0℃。將LiOH (90.5 mg，2.16 mmol)溶解於H2 O中且逐滴添加。將反應物在室溫下攪拌且在45 min內完成。將反應物用乙酸中和、濃縮且直接藉由製備型HPLC純化以得到脫除保護基中間化合物60 。
將稱為MP-OSu之3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 )溶解於DMF及DIPEA中，且添加至化合物60 。攪拌反應物3 h直至如藉由LC-MS監測完成。將反應混合物用乙酸中和且直接藉由製備型HPLC純化以得到化合物61 。LC-MS (方法A)：tR = 1.42 min，MS (m/z )計算值：1091.31 (M+H)+ ，實驗值：1091.31。
實例 40
將購自Click Chemistry Tools (CAS：1174157-65-3)之化合物75 (3 當量)溶解於DMF及DIPEA中，且添加至化合物57 。攪拌反應物3 h直至如藉由LC-MS監測完成。將反應混合物用乙酸中和且直接藉由製備型HPLC純化以得到化合物62 。LC-MS (方法A)：tR = 1.43 min，MS (m/z )計算值：1050.06 (M+H)+ ，實驗值：1050.07。
實例 41
根據實例37之程序製備化合物63 。LC-MS (方法A)；tR = 1.44 min；MS (m/z )計算值：1050.06 (M+H)+ ，實驗值：1050。
實例 42
將根據Nature Biotechnology (2014)32 ：1059-1065之程序製備的稱為mDPR(Boc)-OSu之化合物65 (6 mg，16 µmol)溶解於無水DMF (0.25 mL)中且添加至含有根據實例30之程序製備的化合物50 (9 mg, 10 µmol)之燒瓶。在添加DIPEA (9 µL)時攪拌反應物，且反應在1.5 h中完成。反應物隨後用AcOH (9 µL)淬滅，稀釋於DMSO中，隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物66 (7 mg, 61%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.57 min；MS m/z (ES+)實驗值：1143.51。
實例 43
在0℃下在無水DCM (0.54 mL)中攪拌化合物66 (7 mg，6 µmol)，隨後逐滴添加TFA (0.06 mL)。反應在2.5 h中完成。將反應物稀釋於DMSO中，藉由旋轉蒸發器移除DCM，隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物67 (4 mg，64%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.18 min；MS m/z (ES+)實驗值：1041.22。
實例 44
使稱為Fmoc-Lys(PEG24)-OSu且根據WO 2017165851之程序製備的化合物68 (86 mg，56 µmol)溶於無水DMF (0.93 mL)中，且添加至裝有根據實例30之程序製備的化合物50 (32 mg，37 µmol)之燒瓶。添加DIPEA (32 µL)，攪拌反應物1 h，隨後稀釋於DMSO中且藉由製備型HPLC純化以得到化合物69 (25 mg，29%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.68 min；MS m/z (ES+)實驗值：1163.50 (½質量)。
實例 45
將化合物69 (10，25 mg，11 µmol)溶解於20%哌啶/DMF (0.55 mL)中且攪拌1 h。隨後將反應物稀釋於DMSO中且藉由製備型HPLC純化以得到化合物70 (22 mg，95%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.31 min，MS m/z (ES+)實驗值：1052.41 (½質量)。
實例 46
將稱為mDPR(Boc)-OSu之化合物65 (8 mg，21 µmol)溶解於DMF (0.2 mL)中，隨後轉移至含有化合物70 (11 ，22 mg，10 µmol)之燒瓶，之後加DIPEA (9 µL)。攪拌反應物3 h，用AcOH (9 µL)淬滅，稀釋於DMSO中，且藉由製備型HPLC純化以得到化合物71 (12 mg，51%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.58 min；MS m/z (ES+)實驗值：1185.52 (½質量)。
實例 47
將化合物71 溶解於無水DCM (0.45 mL)中且冷卻至0℃。添加TFA (0.05 mL)且攪拌反應物3 h。隨後將反應物用DMSO稀釋，經由旋轉蒸發器移除DCM，隨後藉由製備型HPLC純化以得到化合物72 (10 mg，88%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.32 min；MS m/z (ES+)實驗值：1135.85 (½質量)。
實例 48
將根據Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840中之程序製備的化合物35 (660 mg，1.36 mmol)溶解於DCM (5 mL)中。添加DIPEA (0.71 mL，4.1 mmol)隨後緩慢添加TBSOTf (0.34 mL，1.5 mmol)。將反應物攪拌5分鐘，用MeOH淬滅且在真空中濃縮。藉由管柱層析25G KP-Sil 10%至80% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物73 (731 mg，1.22 mmol，90%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.44 min；MS (m/z) [M + Na]+ C26 H37 NNaO13 Si計算值：622.19，實驗值：622.10。
實例 49
將化合物73 (731 mg，1.22 mmol)溶解於5:1 MeOH:AcOH (10 mL)中。添加鋅粉塵(2.39 g，36.6 mmol)至反應物。攪拌反應物10分鐘，隨後經由矽藻土床過濾且用MeOH淋洗。將溶離液濃縮且藉由管柱層析25G KP-Sil 10%至100% EtOAc/Hex純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈無色固體之化合物74 (693 mg，1.22 mmol，99%)。LC-MS (方法A):tR = 2.40 min;MS (m/z) [M + H]+ C26 H40 NO11 Si計算值：570.24，實驗值：571.08。
實例 50
將稱為PropargOPr且獲自Click Chemistry Tools (CAS：1174157-65-3)之化合物75 (1.05 g, 4.66 mmol)溶解於DMF (10 mL)中。添加H-Sar-OH (831 mg，9.33 mmol) (其為N-甲基甘胺酸)及DIPEA (2.4 mL，14 mmol)。將反應物攪拌45分鐘，用AcOH淬滅且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈無色固體之化合物76 (821.3 mg，4.12 mmol，88%)。LC-MS (方法A)：tR = 0.81 min；MS (m/z) [M + H]+ C9 H14 NO4 計算值：200.09，實驗值：199.72。 實例 51
將來自實例49之化合物74 (636 mg，1.22 mmol)溶解於DMF (5 mL)中。添加DIPEA (1.06 mL，6.08 mmol)、來自實例50之化合物76 (727 mg，3.65 mmol)及HATU (1.38g，3.65 mmol)至反應物。將反應物攪拌90分鐘，隨後稀釋於EtOAc (200 mL)中，用飽和NaHCO3 (200 mL)及H2 O (2 × 200 mL)洗滌。有機部分用MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析10%至80% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈無色固體之化合物77 (823 mg，1.10 mmol，90%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.34 min；MS (m/z) [M + H]+ C35 H51 N2 O14 Si計算值：751.31，實驗值：751.22。
實例 52
將化合物77 (823 mg，1.10 mmol)溶解於1:1:1 THF:H2 O:AcOH中且在室溫下攪拌24小時。將反應物在真空中濃縮，稀釋於EtOAc (200 mL)中，用飽和NaHCO3 (3 × 200 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物78 (601 mg，0.944 mmol，86%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.55 min；MS (m/z) [M + H]+ C29 H37 N2 O14 計算值：637.22，實驗值：637.04。
實例 53
將化合物78 (300 mg, 0.47 mmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加1,1'-羰基-二-(1,2,4-三唑) (232 mg，1.41 mmol)。將反應物攪拌30分鐘隨後稀釋至EtOAc( 50 mL)中，用H2 O (3 × 50 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物79 (340 mg，0.465 mmol，99%)，其不經純化即用於後續步驟中。LC-MS (方法A)：tR = 1.68 min；MS (m/z) [M + H]+ C32 H38 N5 O15 計算值：732.24，實驗值：732.11。
實例 54
將化合物79 (200 mg, 0.273 mmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加購自Enamine之2-(甲磺醯基)乙胺(54 µL，0.547 mmol)及DIPEA (0.14 mL，0.82 mmol)至反應物。將反應物攪拌10分鐘隨後稀釋至EtOAc (50 mL)中，用1M HCl (3 × 50 mL)、H2 O (50 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物80 (210 mg，0.267 mmol，98%)。LC-MS (方法A)；tR = 1.64 min；MS (m/z) [M + H]+ C33 H44 N3 O17 S計算值：786.24，實驗值：786.14。
實例 55
將依喜替康甲磺酸鹽(21a ，10.0 mg，0.0188 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (16 µL，0.094 mmol)及化合物79 (41.3 mg，0.0.564 mmol)至反應物。將反應物在60℃下加熱5 h。將反應物用AcOH淬滅且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物81 (1.4 mg，1.3 µmol，6.8%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.10 min；MS (m/z) [M + H]+ C54 H57 N5 FO19 計算值：1098.36，實驗值：1098.51。
實例 56
將化合物81 (1.4 mg，1.3 µmol)溶解於MeOH (0.5 mL)中。添加LiOH (5 mg，0.209 mmol)且音波處理反應物以有助於溶解並攪拌5 min。添加H2 O (0.5 mL)至反應物且攪拌5分鐘，隨後用AcOH淬滅且在真空中濃縮。反應物藉由prep-HPLC 10 mm 5%至95% MeCN/H2 O純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物82 (0.7 mg，0.7 µmol，57%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.62 min。MS (m/z) [M + H]+ C47 H49 FN5 O16 計算值：958.32，實驗值：958.62。
實例 57
將化合物80 (50.0 mg，0.0636 mmol)溶解於DCM (1 mL)中。添加三聚甲醛(100 mg，3.3 mmol)至反應物隨後添加TMSBr (21 µL，0.16 mmol)。攪拌反應物15分鐘。等分試樣在MeOH中淬滅且藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成MeOH加合物。反應物經由0.45 µm PTFE過濾器過濾、用DCM (2 × 2 mL)淋洗，且添加甲苯(2 mL)以使最終混合物共沸。將溶離液濃縮以獲得呈無色固體之化合物83 ，且立即用於下一步驟。
將化合物83 (0.0636 mmol)溶解於無水DCM (0.5 mL)中。添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(21 µL，0.11 mmol)至反應物，且直接添加反應溶液至化合物22 固體(12.0 mg，0.0183 mmol)。將反應物在室溫下攪拌3.5 h，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH淬滅、濃縮且藉由prep-HPLC 21 mm 10%至95% MeCN/H2 O純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈黃色固體之化合物84 (5.4 mg，3.7 µmol，20%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.30 min；MS (m/z) [M + H]+ C73 H76 FN6 O23 S計算值：1455.47，實驗值：1455.43。將含有假定為受依喜替康Fmoc保護之胺的差向異構之所觀測產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物85 (2.1 mg，1.4 µmol，8%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.33 min；MS (m/z) [M + H]+ C73 H76 FN6 O23 S計算值：1455.47，實驗值：1455.63。
將化合物84 (5.4 mg，3.7 µmol)溶解於MeOH (1 mL)中。添加LiOH (25 mg)且音波處理反應物以有助於溶解。攪拌反應物10分鐘且添加H2 O (1 mL)並再攪拌20分鐘。反應物用AcOH淬滅、濃縮且藉由prep-HPLC 10 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物86 (1.96 mg，1.79 µmol，48%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.22 min；MS (m/z) [M + H]+ C51 H58 FN6 O18 S計算值：1093.35，實驗值：1093.56。
實例 58
將來自實例59之化合物85 (2.1 mg，1.4 µmol)溶解於MeOH (1 mL)中。添加LiOH (25 mg)且音波處理反應物以有助於溶解。攪拌反應物10分鐘且添加H2 O (1 mL)並再攪拌20分鐘。反應物用AcOH淬滅、濃縮且藉由prep-HPLC 10 mm 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物87 (0.98 mg，0.90 µmol，62%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.40 min；MS (m/z) [M + H]+ C51 H58 FN6 O18 S計算值：1093.35，實驗值：1093.18。
實例 59
將肌胺酸甲酯HCl (88 ，5.00 g，35.8 mmol)懸浮於無水DCM (100 mL)中。添加DIPEA (18.7 mL，107.5 mmol)且音波處理反應物並劇烈攪拌以溶解H-Sar-OMe。溶液略微不透明。將CO2 鼓泡通過反應物30分鐘。將購自Gelest, Inc.之三氟甲烷磺酸二-第三丁基異丁基矽烷酯(BIBSOTf，20 mL，72 mmol)添加至反應物且攪拌1小時。添加乾冰顆粒至反應混合物。在停止鼓泡之後，將反應物濃縮、用Hex (200 mL)稀釋、用1M HCl水溶液(3 × 200 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析0至10% EtOAc/Hex純化粗產物。在9:1 Hex:EtOAc染色KMnO4 中Rf = 0.25。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色油狀之化合物89 (10.38 mg，30.03 mmol，84%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.67 min；MS (m/z) [M + H]+ C17 H36 NO4 Si計算值：346.24，實驗值：346.99。
實例 60
將化合物89 溶解於1:1:1 THF:MeOH:H2 O (60 mL)中。添加LiOH (1.80 g，75.1 mmol)且攪拌反應物10分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物用AcOH淬滅，在真空中濃縮且藉由管柱層析0至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物90 (8.79 mg，26.5 mmol，88%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.50 min；MS (m/z) [M + H]+ C16 H34 NO4 Si計算值：332.23，實驗值：331.86。
實例 61
將根據Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840之方法製備的化合物91 (4.00 g, 8.78 mmol)溶解於DCM (10 mL)中。添加來自實例60之BIBS-Sar-OH (90 ，5.82 g，17.6 mmol)，隨後添加EEDQ (6.52 g，26.4 mmol)。攪拌反應物90分鐘。將反應物用EtOAc (200 mL)稀釋，用1 M HCL水溶液(3 × 200 mL)、飽和NaHCO3 (3 × 200 mL)、水(200 mL)洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析0至60% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物92 (5.16，6.71 mmol，76%)。LC-MS：tR = 1.58 min；MS (m/z) [M + H]+ C36 H57 N2 O14 Si計算值：769.36，實驗值：769.29。
實例 62
將化合物92 (2.70 g，3.51 mmol)溶解於無水吡啶(10 mL)中。添加LiI (2.82 g，21.1 mmol)且將反應物密封並在115℃下加熱整夜(約16 h)。將反應物用EtOAc (200 mL)稀釋、 1M HCl水溶液(3 × 200 mL)洗滌、H2 O洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析0至60% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物93 (2.06 g，2.73 mmol，78%)。LC-MS (Method C)：tR = 1.50 min；MS (m/z) [M + H]+ C35 H55 N2 O14 Si計算值：755.34，實驗值：755.32。
實例 63
將化合物93 (700 mg，0.927 mmol)溶解於吡啶(2 mL)中。添加購自Gelest Inc.之BIBSOTf (0.78 mL，2.78 mmol)。將反應物攪拌30分鐘、用EtOAc (50 mL)稀釋、用1M HCl (3 × 50 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析0至60% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物94 (723 mg，0.758 mmol，82%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.85 min；MS (m/z) [M + H]+ C47 H81 N2 O14 Si2 計算值：953.52，實驗值：953.34。
實例 64
將化合物94 (723 mg，0.758 mmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加CDT (373 mg，2.28 mmol)且將反應物攪拌30分鐘。將反應物用EtOAc (50 mL)稀釋、用H2 O (3 × 50 mL)洗滌、經MgSO4 乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物95 (790 mg，0.753 mmol，99%)，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法C)：tR = 1.86 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H82 N5 O15 Si2 計算值：1048.53，實驗值：1049.29。
將化合物95 (395 mg，0.376 mmol)溶解於0.5 mL無水DMF中且直接添加至依喜替康甲磺酸鹽(21 - a ，25 mg，0.047 mmol)固體隨後加DIPEA (0.081 mL，0.47 mmol)。攪拌反應物隔夜(大致15 h)。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物用EtOAc (20 mL)稀釋、用飽和NH4 Cl (3 × 20 mL)洗滌、經MgSO4乾燥、過濾且在真空中濃縮以獲得呈粗產物之化合物96 ，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (Method C)：tR = 1.89 min；MS (m/z) [M + H]+ C72 H101 N5 O19 Si2 計算值：1414.66，實驗值：1414.71。
將粗化合物96 (0.047 mmol)溶解於1 mL無水DMF中。添加AcOH (200 uL)。添加於THF中之1 M TBAF (0.28 mL)至反應物。在45 min之後觀測到完全轉化。添加二氧化矽(100 mg)以淬滅氟化物。反應物經過濾且藉由prep-HPLC 21 mm 10%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物97 (45 mg，0.046 mmol，98%)。LC-MS (Method A)：tR = 1.53 min；MS (m/z) [M + H]+ C47 H49 N5 O17 計算值：974.31，實驗值：974.10。
實例 65
將化合物97 (45 mg，0.046 mmol)稀釋以形成10 mM DMSO溶液(4.6 mL)。添加PBS 7.4 (10x，4.6 mL)以製得5 mM溶液。添加乙醯基酯酶800單元/mL之溶液以形成2.5 mM藥物連接子溶液(9.2 mL)。將反應物在40℃下攪拌整夜(大致15 h)。觀測到完全轉化。將反應物稀釋至200 mL冷MeOH中、離心、收集上清液、濃縮且藉由prep-HPLC 21mm 10%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物98 (30 mg，0.035 mmol)。LC-MS (方法A)：tR = 1.30 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H43 N5 O14 計算值：848.28，實驗值：847.97。
實例 66
將藉由Nature Biotechnology (2014)32 ：1059-1062之程序製備的順丁烯二醯亞胺基-Dpr(Boc)-OH (65 ，26.6 mg，0.0936 mmol)溶解於0.5 mL無水DMF中冷卻至0℃。添加二甲基吡啶(0.022 mL，0.19 mmol)隨後添加COMU (38.7 mg，0.0905 mmol)。攪拌反應物30分鐘。直接添加經活化順丁烯二醯亞胺基-DPr(Boc)-OH溶液至化合物98 (30 mg，0.035 mmol)固體。攪拌反應物60分鐘，此時觀測到完全轉化。反應物用AcOH淬滅且藉由prep-HPLC 21 mm 10%至95% MeCN/H2 O純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色固體之化合物99 (4.5 mg，4.0 µmol，13%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.72 min；MS (m/z) [M + H]+ C53 H57 N7 O19 計算值：1114.37，實驗值：1114.69。
實例 67
將化合物99 (4.5 mg，4.0 µmol)溶解於20% TFA/DCM中。在25分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成化合物100 。將反應物在真空中濃縮且藉由prep-HPLC 10 mm 10%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈白色粉末之化合物100 (3.91 mg，3.86 µmol，96%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.31 min；MS (m/z) [M + H]+ C48 H50 N7 O17 計算值：1014.32，實驗值：1014.07。
實例 68
將根據實例26之程序製備之化合物45 (82 mg，0.097 mmol)及稱為7-MAD-MDCPT之化合物13 (14 mg, 0.033 mmol)溶解於DCM (2 mL)中，隨後為DMF (0.5 mL)。將DCM蒸發掉以濃縮反應混合物至DMF中。在30分鐘之後未觀測到轉化成產物，另外未觀測到化合物45 之水解。添加(0.1 mL)至反應混合物，此時透明紅色反應混合物變得不透明。使反應物在室溫下攪拌隔夜(約15 h)。觀測到大致50%藥物轉化成所期望的藥物連接子產物，約10%之剩餘經活化CDT連接子水解。[註釋：使用MeOH稀釋劑用於UPLC-MS分析在t = 30 min時(反應物中性)觀測到連接子-CDT，在t =15 h時觀測到連接子-OCOMe (在添加鹼基之後)]。反應物在45℃下在真空下緩慢濃縮60分鐘。在60℃下加熱反應混合物4小時直至藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物在真空中濃縮，且藉由管柱層析0至5% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈白色固體之化合物101 (28 mg，0.023 mmol，70%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.17 min；MS (m/z) [M + H]+ C61 H58 N5 O21 計算值：1196.36，實驗值：1196.19。
實例 69
將化合物101 (28 mg，0.023 mmoL)溶解於MeOH (0.5 mL)及THF (0.5 mL)中。添加LiOH (25 mg，1.0 mmol)。音波處理反應物以溶解LiOH且隨後攪拌。在10分鐘之後添加水(0.5 mL)。在90分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成脫除保護基之葡萄糖醛酸苷。添加哌啶(0.05 mL)。在再60分鐘之後觀測到Fmoc之完全去保護。用AcOH (0.2 mL)淬滅反應物。將反應物濃縮且藉由prep-HPLC使用10 mm Max-RP用5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA梯度純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物102 (10.1 mg，0.0121 mmol，51.8%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.05 min；MS (m/z) [M + H]+ C39 H40 N5 O16 計算值：834.25，實驗值：833.71。
實例 70
將化合物102 (10.1 mg, 0.0121 mmol)溶解於DMF (0.2 mL)中。添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(9.7 mg，0.036 mmol)。添加DIPEA (13 µL，0.073 mmol)。攪拌反應物15分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.05 mL)淬滅，且藉由prep-HPLC 10 mm Max RP C12 5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物103 (5.53 mg，0.00561 mmol，46.4%)。LC-MS (方法A)tR = 1.24 min；MS (m/z) [M + H]+ C46 H45 N6 O19 計算值：985.27，實驗值：985.45。
實例 71
將根據實例60之程序製備之化合物92 (500 mg，0.65 mmol)溶解於MeOH (10 mL)中。添加LiOH (500 mg，21 mmol)。音波處理反應物，且攪拌5 min。添加H2 O，攪拌5 min。觀測到完全轉化。反應物用AcOH淬滅，在真空中濃縮且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物104 (295 mg，0.469 mmol，72%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.23 min；MS (m/z) [M + H]+ C29 H49 N2 O11 Si計算值：629.31，實驗值：629.01。
實例 72
將化合物104 (295 mg, 0.469 mmol)溶解於無水吡啶(5 mL)中且冷卻至0℃。以15分鐘時間逐滴添加BIBSOTf (0.392 mL，1.41 mmol)在添加各化學計量當量之後藉由UPLC-MS檢查完成。將反應物用EtOAc (100 mL)稀釋，用1M HCl (3 × 100 mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由管柱層析50G KP-Sil，10%至100% EtOAc/Hex純化粗產物。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈無色固體之化合物105 (301 mg，0.363 mmol，77%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.65 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H75 N2 O11 Si2 計算值：827.49，實驗值：827.31。
實例 73
將化合物105 (218 mg，0.264 mmol)溶解於無水DCM (1 mL)中且冷卻至0℃。直接添加來自實例2之化合物5 (0.087 mmol)反應溶液至DCM反應溶液。在1 h內使反應混合物升溫至室溫。在室溫下攪拌16小時。反應物用MeOH淬滅，且藉由急驟層析50G KP-Sil 0%至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物106 (66.1 mg，0.0467 mmol，53%)。LC-MS (方法C)：tR = 1.76 min；MS (m/z) [M + H]+ C72 H106 N5 O20 Si2 計算值：1416.70，實驗值：1416.74。
實例 74
將化合物106 (66.1 mg，0.0467 mmmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加TFA (0.4 mL)。攪拌反應物20分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物107 且不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 1.68 min；MS (m/z) [M + H]+ C67 H98 N5 O18 Si2 計算值：1316.64，實驗值：1316.80。
將粗化合物107 (0.0467 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中。添加AcOH (200 uL)隨後加於THF中之1 M TBAF (200 uL)。在室溫下攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。添加二氧化矽(約100 mg)以淬滅氟陰離子。反應混合物經由針筒過濾器過濾，2 × 1 mL 2:1 DMA:H2O 10% AcOH淋洗且藉由prep-HPLC 30 mm 10%至-95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物108 (33.5 mg，0.0383 mmol，82%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.16；MS (m/z) [M + H]+ C42 H45 N5 O16 計算值：875.29，實驗值：875.82。
實例 75
將化合物108 (33.5 mg，0.0383 mmol)溶解於DMF中。添加DIPEA (0.040 mL，0.23 mmol)至反應物隨後添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，30.6 mg，115 mmol)。攪拌反應物90分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH淬滅，且藉由prep-HPLC-21 mm純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物109 (26.2 mg，0.0255 mmol，67%)。Rt = 1.39 min 通用方法UPLC。MS (m/z) [M + H]+ C49 H51 N6 O19 計算值：1027.32，實驗值：1026.88。
實例 76
遵循實例73至75之程序根據以下反應流程製備化合物113 。
使用類似程序與化合物18a 至18o 中之任一者製備藥物連接子化合物，其具有通式114 ：
其中喜樹鹼之R部分為實例10之化合物18a 至18o 中所提供之R基團中之任一者。
實例 77
遵循實例73及74以及實例44及45之程序製備化合物，其具有式115 ：
其中下標n為自4至24之整數且R為實例10之化合物18a 至18o 中所提供之R基團中之任一者。
實例 78
遵循實例26至28之程序製備化合物，其具有式116 ：
其中R為實例5之喜樹鹼化合物14a 至14z 中的基團中之任一者，該等喜樹鹼化合物與化合物45 之偶合反應相容，因為在R取代基中不存在反應性親核基團。
實例 78
遵循實例14及實例73至75之程序製備化合物，其具有式117 ：
實例 78
將根據Bioconjugate Chem . (2009) 20：1242-1250之程序製備的化合物6 (19.0 mg，0.0424 mmol)溶解於無水DCM (0.5 mL)中。添加DMAP (15.4 mg，0.127 mmol)、Sc(OTf)3 (12.5 mg，0.0254 mmol)、Boc-Sar-OH (24.1 mg，127 mmol)及DIC (21 µL，136 mmol)至反應物。攪拌反應物90分鐘。反應物藉由管柱層析0至5% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物2 。LC-MS (方法A)：tR = 1.52 min；MS (m/z) [M + H]+ C33 H38 N3 O9 計算值：620.26，實驗值：619.96。
實例 79
將化合物118 (25.2 mg，0.0407 mmol)溶解於20% TFA/DCM (2 mL)中。攪拌反應物15分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物119 ，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 0.93 min；MS (m/z) [M + H]+ C28 H30 N3 O7 計算值：520.21，實驗值：519.87。
將粗產物119 (0.0407 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (35 µL，0.203 mmol)隨後添加獲自Broadpharm (CAS：955094-26-5)之Mal-醯胺基-PEG2-NHS (52 mg，0.122 mmol)。反應物攪拌90分鐘，用AcOH (50 µL)淬滅，且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物120 (18.9 mg，0.0228 mmol，56%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.16 min；MS (m/z) [M + H]+ C42 H48 N5 O13 計算值：830.32，實驗值：829.86。化合物120 為例示性藥物連接子化合物，其具有通式Z'-A-S*-W-CPT2。
實例 80
將N-(3-羥丙基)順丁烯二醯亞胺(455 mg，2.93 mmol)溶解於無水DCM (4 mL)中。添加光氣20% w/w/甲苯且攪拌反應物60分鐘且隨後在氮氣流下濃縮，隨後在真空中濃縮以得到粗化合物122 ，其在DCM中以50 mg/mL復原且直接用於下一步驟。
將根據Bioconjugate Chem . (2009) 20：1242-1250之程序製備的化合物6 (10 mg，0.022 mmol)溶解於無水DCM (0.5 mL)中。添加DMAP (3 mg，0.02 mmol)至反應物。添加在前一步驟中製備之化合物64 氯甲酸酯溶液(1 mL)至反應物。攪拌反應物90分鐘。觀測到大致50%轉化成所需產物。反應物藉由FCC 10G Biotage Ultra 0至5% MeOH/DCM純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物65 (7.5 mg，0.012 mmol，53%)。LC-MS (方法A)：tR = 2.17 min；MS (m/z) [M + H]+ C33 H32 N3 O10 計算值：630.21，實驗值：629.98。化合物122 為例示性藥物連接子化合物，其具有通式Z'-A-CPT2。
實例 81
將根據實例1之程序製備之化合物2 (45 mg，0.088 mmol)溶解於無水DCM (0.5 mL)中。添加DIPEA (0.05 mL)及DMAP (11 mg，0.09 mmol)至反應物。添加先前所描述之化合物64 氯甲酸酯溶液(1.1 mL)至溶液且攪拌反應物60分鐘。觀測到大致70%轉化成所需產物。反應物用MeOH淬滅，並經由二氧化矽10% MeOH/DCM過濾。濃縮溶離液以獲得呈白色固體之化合物123 (0.088 mmol)，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法B)：tR = 1.91 min；MS (m/z) [M + H]+ C36 H42 N3 O9 Si計算值：688.27，實驗值：687.99。
將粗化合物123 (0.088 mmol)溶解於DMF (2 mL)中。添加AcOH (0.5 mL)至反應混合物隨後添加於THF中之1 M TBAF (0.440 mL，0.444 mmol)。反應物攪拌30分鐘，且藉由prep-HPLC 21 mm 5%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物124 (10.24，0.01785 mmol，20%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.24 min；MS (m/z) [M + H]+ C30 H28 N3 O9 計算值：574.18，實驗值：573.90。化合物124 為例示性藥物連接子化合物，其具有通式Z'-A-CPT3。
實例 82
向根據實例14製備之化合物24 氯甲酸酯反應混合物添加根據Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2002) 12：217-219之程序製備的固體化合物125 (291 mg，0.390 mmol)。在10分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到轉化成產物。反應物用淬滅MeOH，在真空中濃縮，隨後粗略地藉由0%至10% MeOH/DCM管柱層析純化。將含有所需產物與雜質(游離藥物、連接子)之溶離份濃縮以獲得呈微黃色固體之化合物126 ，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法C)：tR = 1.85 min；MS (m/z) [M + H]+ C77 H80 N5 O11 Si計算值：1278.56，實驗值：1278.09。
將粗化合物126 溶解於50% Et2 NH/DCM中。將反應物攪拌30分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全Fmoc去保護。在真空中濃縮反應混合物。在蒸發之後觀測到TBS保護基之完全去保護。反應物藉由管柱層析0至10% MeOH/DCM純化。將含有所需產物與少量雜質之溶離份在真空中濃縮以獲得呈灰白色固體之化合物127 (100 mg，0.10 mmol，41%)，其不經進一步純化即用於下一步驟。Rt = 1.03 min疏水性方法UPLC。MS (m/z) [M + H]+ C56 H56 N5 O9 計算值：942.41，實驗值：942.18。
將粗化合物127 (100 mg，0.10 mmol)溶解於無水DMF (2 mL)中。添加DIPEA (0.037 mL，0.212 mmol)隨後添加MP-PEG8-OSu (81 mg，117 mmol)。在5分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用MeOH及AcOH淬滅，在真空中濃縮以得到粗化合物128 ，其不經進一步純化即用於下一步驟。
將粗化合物128 溶解於20% TFA/DCM中且攪拌1小時。反應物在真空中濃縮且藉由prep-HPLC純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈灰白色固體之化合物129 (31.0 mg，0.0249 mmol，23%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.37 min；MS (m/z) [M + H]+ C62 H82 N7 O20 計算值：244.56，實驗值：1243.93。化合物129 為例示性藥物連接子化合物，其具有通式Z'-A-S*-W-RL-CPT3。
實例 83
一次性向來自實例3之化合物7 氯甲酸酯溶液(0.334 mmol)添加根據Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2002) 12：217-219之程序製備之化合物125 (372 mg，0.499 mmol)。攪拌反應物45分鐘。使用先前所描述之樣品製備觀測到氯甲酸酯接近完全轉化成所需產物。反應物用MeOH淬滅，在真空中濃縮且藉由FCC 50G KP-Sil 0至5%MeOH/DCM使用階段梯度純化。將含有所需產物及雜質之混合物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物130 (450 mg，約80% w/w，0.294 mmol)，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 1.61 min；MS (m/z) [M + H]+ C74 H70 N5 O12 計算值：1220.50，實驗值：1220.16。
將粗化合物130 (0.294 mmol)溶解於10 mL 50% Et2 HN/DCM中。攪拌反應物30分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到接近完全轉化。將反應物在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物131 ，其不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 1.20 min；MS (m/z) [M + H]+ C59 H60 N5 O10 計算值：998.43，實驗值：998.26。
將來自前一步驟之粗化合物131 (0.294 mmol)溶解於無水DCM (5 mL)中。添加溶解於DMF (250 mg/mL)中之MP-Peg8-OSu (483 mg，0.701 mmol)。添加DIPEA (0.3 mL)去攪拌反應物30分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成化合物132 。含有化合物132 之反應混合物不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法A)：tR = 1.37 min；MS (m/z) [M + H]+ C85 H102 N7 O22 計算值：1572.71，實驗值：1571.90。
將含有粗化合物132 之反應混合物(化合物57 ，0.294 mmol)淬滅且用TFA (1 mL)酸化。將反應物在室溫下攪拌20分鐘，此時觀測到完全轉化。將反應物在真空中濃縮且藉由prep-HPLC 30 mm C18 10%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色固體之化合物133 (107 mg，0.0823 mmol，28%)。LC-MS (方法A)：tR = 1.17 min；MS (m/z) [M + H]+ C65 H86 N7 O21 計算值：1300.59，實驗值：1300.69。化合物133 為例示性藥物連接子化合物，其具有通式Z'-A-S*-W-RL-CPT2。
實例 84
將根據Bioconjugate Chem . (2006) 17：831-840之程序製備之化合物43 (143.4 mg，0.1916 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。DIPEA (0.0334 mL，0.192 mmol)。向DMF溶液添加雙-(五氟苯基)碳酸酯(75.5 mg，0.192 mmol，購自TCI America產品編號B3604)。攪拌反應物30分鐘，隨後添加於0.5 mL無水DMF中之來自實例7之化合物14a (28.7 mg，0.0639 mg)。在室溫下攪拌反應物2小時。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.035 mL)淬滅且藉由製備型HPLC在21.2 × 250 mm Max-RP管柱上使用30%至95% MeCN/H2O 0.05% TFA之梯度純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物133 。(76.6 mg，0.0623 mmol，98%)。LC-MS (方法F)：tR = 1.68 min；MS (m/z) [M + H]+ C63 H62 N5 O21 計算值：1224.39，實驗值：1224.46。
實例 85
將化合物133 (76.6 mg，0.0623 mmol)溶解於THF:MeOH 1:1 (2 mL)中。將反應物用冰/水浴冷卻。添加LiOH (45 mg，1.9 mmol)且攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到轉化成乙酸酯去保護產物。添加H2 O (1 mL)至反應混合物。攪拌反應物60分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.2 mL)淬滅，在真空中濃縮且藉由製備型HPLC使用21.2 × 250 mm Max-RP管柱用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA之梯度溶離純化。將含有所需化合物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物134 (33.3 mg，0.0386 mmol，62%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.09 min；MS (m/z) [M + H]+ C41 H44 N5 O16 計算值：862.28，實驗值：862.16。
實例 86
向溶解於無水DMF (0.5 mL)及DIPEA (0.020 mL，0.116 mmol)中之化合物134 (33.3 mg，0.0386 mmol)添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，15.4 mg，0.0580 mmol，購自TCI America產品編號S0427)。攪拌反應物30分鐘。在5分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.020 mL)淬滅且藉由製備型HPLC在21.2 × 250 mm Max-RP上用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA溶離純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物112 (21.85 mg，0.02157 mmol，55.8%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.27 min；MS (m/z) [M + H]+ C48 H49 N6 O19 計算值：1013.30，實驗值：1013.38。
實例 87
將實例10之化合物18h (100.0 mg，0.2094 mmol)溶解於無水DCM (4 mL)中。添加光氣20% w/w/甲苯(2 mL，3.51 mmol)至反應物。攪拌反應物2 h，此時藉由用98 uL MeOH淬滅2 uL等分試樣之反應物且藉由UPLC-MS觀測所形成的MeOH加合物觀測到完全轉化成經活化異氰酸酯中間物。在氮氣流下濃縮反應物，隨後在高真空下進一步乾燥。將化合物43 (239.6 mg，0.3141 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中，且直接添加至經活化異氰酸酯固體。添加DIPEA (0.11 mL，0.63 mmol)且攪拌反應物以溶解所有組分。攪拌反應物30分鐘，此時觀測到完全轉化。反應物用MeOH淬滅，在真空中濃縮且藉由管柱層析在25G KP-Sil管柱上用0至6% MeOH/DCM溶離純化。將含有所需產物及藥物相關雜質之溶離份濃縮以獲得呈黃色固體之化合物113 (186.6 mg，0.1474 mmol，70%)。產物不經進一步純化即用於下一步驟。LC-MS (方法D)：tR = 2.14 min；MS (m/z) [M + H]+ C66 H68 N5 O21 計算值：1266.44，實驗值：1266.57。
實例 88
將化合物136 (186.6 mg，0.1474 mmol)溶解於20%二乙胺/DMF (2 mL)中。攪拌反應物50分鐘，此時觀測到Fmoc保護基之接近完全去保護。反應物在真空中濃縮且再溶解於MeOH (2 mL)中。添加NaOMe (於MeOH中0.5 M，1.77 mL，0.884 mmol)且將反應物在室溫下攪拌20分鐘。在20分鐘之後藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。將反應物用AcOH中和，在真空中濃縮且藉由製備型HPLC在21.2 × 250 mm Max-RP上用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA溶離純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物137 (22.5 mg，0.0257 mmol，17%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.13 min；MS (m/z) [M + H]+ C43 H50 N5 O15 計算值：876.33，實驗值：876.22。
實例 89
將化合物137 (22.5 mg, 0.0257 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加DIPEA (0.027 mL，0.15 mmol)至反應物隨後添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，20.5 mg，0.0771 mmol，購自TCI America產品編號S0427)。攪拌反應物5分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.030 mL)淬滅且藉由製備型HPLC在21.2 × 250 mm MaxRP上用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.05% TFA溶離純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物138 (11.36 mg，0.01106 mmol，43.1%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.33 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H55 N6 O18 計算值：1027.36，實驗值：1027.15。
實例 90
將如藉由實例21及22所描述製備之化合物30 (623 mg，0.694 mmol)溶解於無水DCM (4 mL)中。添加三聚甲醛(208 mg，6.94 mmol)至反應物，隨後添加TMSBr (0.12 mL，0.925 mmol)。將反應物在室溫下攪拌30分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成經活化氯甲基中間物。反應物經由針筒過濾器過濾，用DCM 2 mL淋洗，且添加甲苯(2 mL)以使最終混合物共沸。將溶離液在真空中濃縮以獲得無色固體。使來自實例10之化合物18m (100.0 mg，0.2313 mmol)與甲苯共沸。將氯甲基中間物溶解於無水CHCl3 (6 mL)中且直接添加化合物18m 隨後添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP，0.17 mL，0.93 mmol)。將反應物在室溫下攪拌15小時，用MeOH淬滅且在真空中濃縮。含有化合物139 之粗反應混合物不經純化即用於下一步驟。
將粗化合物139 (0.2313 mmol)溶解於1:1 MeOH:THF (4 mL)中。添加LiOH (55.4 mg，2.31 mmol)且攪拌反應物30分鐘。添加H2 O (2 mL)且攪拌反應物30分鐘。反應物用AcOH (0.1 mL)淬滅，在真空中濃縮且藉由逆相急驟管柱層析使用Biotage Ultra C18 60G管柱用5%至30%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度溶離純化。將含有所需產物及雜質之溶離份濃縮且藉由製備型HPLC使用21.2 × 250 mm Max-RP管柱用5%至30%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度再純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物140 (40.9 mg，0.0417 mmol，18%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.23 min；MS (m/z) [M + H]+ C45 H50 N5 O18 S計算值：980.29，實驗值：980.20。
實例 91
將化合物140 (40.9 mg，0.0417 mmol)溶解於無水DMF (1 mL)中。添加DIPEA (43 µL，0.25 mmoL)隨後添加3-(順丁烯二醯亞胺基)丙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(28 ，33.3 mg，0.125 mmol，購自TCI America產品編號S0427)。攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (5 µL)淬滅且藉由製備型HPLC在21.2 × 250 mm MaxRP上用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸溶離純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物141 (8.94 mg，7.90 µmol，19%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.47 min；MS (m/z) [M + H]+ C52 H55 N6 O21 S計算值：1131.31，實驗值：1131.43。
實例 92
將藉由實例54製備之化合物80 (200 mg, 0.262 mmol)溶解於DCM (4 mL)中。添加三聚甲醛(250 mg)隨後添加TMSCl (2 mL)。攪拌反應物20分鐘，此時藉由淬滅2 µL等分試樣至98 µL MeOH中以藉由UPLC-MS觀測對應MeOH加合物而觀測到完全轉化成經活化氯甲基中間物。反應物經由針筒過濾器過濾、DCM (2 mL)淋洗，且添加甲苯(2 mL)。在真空中蒸發溶劑且將最終產物置放於高真空直至準備使用。如WO 2006006196中所描述來製備Fmoc-參(羥基甲基)胺基甲烷(THAM)。將Fmoc-THAM (270 mg，0.786 mmoL)溶解於DCM (2 mL)中且直接添加至經活化中間物。添加DIPEA (0.136 mL，0.786 mmoL)且攪拌反應物1小時。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用MeOH淬滅，在真空中濃縮且藉由管柱層析使用50G KP-Sil管柱用20%至100% EtOAc/Hex梯度純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物142 (242.3 mg，0.2264 mmol，86%)。LC-MS (方法D)：tR = 2.04 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H60 N3 O21 S計算值：1070.34，實驗值：1070.42。
實例 93
將化合物142 (242.3 mg，0.2264 mmol)溶解於MeOH:THF 1:1 (4 mL)中且用冰/水浴冷卻。添加LiOH (54 mg，2.6 mmol)至反應物且攪拌30分鐘。添加H2 O (2 mL)至反應物，使其升溫至室溫且攪拌30分鐘。觀測到完全轉化成去保護產物。反應物用AcOH中和，在真空中濃縮且藉由逆相急驟層析法使用Biotage C18 Ultra 30G管柱用5%至20%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度溶離純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物143 (88.3 mg，0.125 mmol，55%)。LC-MS (方法D)：tR = 0.60 min；MS (m/z) [M + H]+ C28 H42 N3 O16 S計算值：708.23，實驗值：707.84。
實例 94
將化合物143 (88.3 mg，0.125 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加化合物20b (30.0 mg, 0.0618 mmol)至反應物隨後添加DIPEA (0.032 mL，0.024 mmol)。攪拌反應物30 min，此時觀測到完全轉化成產物。反應物用AcOH (0.050 mL)淬滅，且藉由製備型HPLC使用21.2 × 250 Max-RP管柱用5%至40%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度溶離純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物144 (1.69 mg，0.00104 mmol，1.7%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.03 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H58 N5 O22 S計算值：1112.33，實驗值：1112.42。
實例 95
將參(羥基甲基)胺基甲烷氫氯酸鹽(2.00 g，4.72 mmol)溶解於3:1水:乙醇(8 mL)中。添加氯甲酸2,2,2-三氯乙酯(1.32 mL，4.72 mmol)至反應混合物。將反應物在60℃下攪拌60分鐘。將反應物冷卻至室溫，用EtOAc (100 mL)稀釋，用1 M HCl (3 × 100 mL)洗滌，用飽和NaCl (50 mL)洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物145 (1.64 g，5.52 mmol，58%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.06 min；MS (m/z) [M + H]+ C7 H13 Cl3 NO5 計算值：295.99，實驗值：296.12。
實例 96
將化合物80 (300 mg，0.334 mmol)溶解於DCM (2 mL)中。添加三聚甲醛(300 mg，10.0 mmol)隨後添加TMSCl (1 mL)。攪拌反應物10分鐘，此時藉由稀釋2 uL等分試樣至98 uL MeOH中且藉由UPLC-MS觀測MeOH加合物而觀測到完全轉化。反應物用針筒過濾器過濾，用DCM (1 mL)洗滌，添加甲苯(2 mL)以使最終混合物在濃縮時共沸。將溶離液在真空中濃縮以獲得無色固體。在使用之前使化合物145 與甲苯共沸。將經活化氯甲基化合物溶解於無水DCM (1 mL，經分子篩額外乾燥)中。添加DIPEA (0.23 mL，1.3 mmol)隨後添加化合物145 。攪拌反應物30分鐘，此時觀測到完全轉化。反應物用MeOH (0.1 mL)淬滅，在真空中濃縮以獲得呈無色固體之化合物146 ，其未經純化即用於下一步驟。LC-MS (方法D)：tR = 2.16 min；MS (m/z) [M + H]+ C50 H60 Cl3 N4 O22 S計算值：1205.25，實驗值：1205.16。
將粗化合物146 (0.334 mmol)溶解於1:1:1 MeOH:THF:AcOH (3 mL)中。添加鋅粉塵(218 mg，3.34 mmol)且攪拌反應物10分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成去保護產物。反應物經過濾，且濃縮溶離液。藉由製備型HPLC 5%至30%至50%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸使用30 × 250 mm Max-RP管柱純化粗產物。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮直至體積減少一半，用飽和NaHCO3 使水溶液變成鹼性，隨後用CHCl3 (3 × 50 mL)及EtOAc (3 × 50 mL)萃取。合併有機相且用MgSO4乾燥。過濾且在真空中濃縮以獲得呈白色固體之化合物147 (103.4 mg，0.1003 mmol，30%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.65 min；MS (m/z) [M + H]+ C47 H59 N4 O20 S計算值：1031.34，實驗值：1031.42。
實例 97
將化合物147 (103.4 mg，0.1003 mmol)溶解於無水DMF (0.5 mL)中。添加1,2,2,6,6-五甲基哌啶(PMP，0.036 mL，0.20 mmol)隨後添加化合物20b (97.3 mg，0.201 mmol)。攪拌反應物60分鐘，此時藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (0.030 mL)淬滅，且藉由逆相急驟管柱層析使用50G Biotage C18 ultra管柱用5%至60%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度溶離純化。將含有所需產物之溶離份濃縮以獲得呈灰白色固體之化合物148 (18.7 mg，0.0130 mmol，13%)。LC-MS (方法D)：tR = 1.79 min；MS (m/z) [M + H]+ C69 H75 N6 O26 S計算值：1435.44，實驗值：1435.27。
實例 98
將化合物148 (18.7 mg，0.0130 mmol) 溶解於MeOH (1 mL)中。添加NaOMe (0.5 M於MeOH中，0.026 mL，0.013 mmol)且攪拌反應物30分鐘。添加H2 O (1 mL)隨後添加LiOH (1.5 mg，0.065 mmol)且攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化成去保護產物。反應物用AcOH中和，濃縮且藉由製備型HPLC使用10 × 250 mm管柱用5%至25%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸之梯度溶離純化。將含有所需產物之溶離份在真空中濃縮以獲得呈黃色固體之化合物149 (3.9 mg，0.0036 mmol，28%)。LC-MS (方法D)：tR = 0.92 min；MS (m/z) [M + H]+ C47 H57 N6 O21 S計算值：1073.33，實驗值：1073.81。
實例 99
將化合物149 (3.9 mg，0.0036 mmol)溶解於無水DMF (0.2 mL)中。添加DIPEA (1.3 µL，0.0073 mmoL)隨後添加3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-丁二醯亞胺酯(1.1 mg，0.0040 mmol，購自TCI America產品編號S0427)。攪拌反應物30分鐘。藉由UPLC-MS觀測到完全轉化。反應物用AcOH (5 µL)淬滅且藉由製備型HPLC在10 × 250 mm MaxRP上用5%至30%至95% MeCN/H2 O 0.1%甲酸溶離純化。將含有所需產物之溶離份凍乾以獲得呈黃色粉末之化合物126 (0.23 mg，0.19 µmol，5%)。Rt = 1.06 min CORTECS C18通用方法UPLC。MS (m/z) [M + H]+ C54 H62 N7 O24 S計算值：1224.36，實驗值：1224.46。生物實例 活體外小分子及 ADC 評估
在多個癌細胞株上評估活體外效能。所有細胞系均藉由STR解析在IDEXX Bioresearch下驗證且在復蘇之後培養不超過2個月。將培養的處於對數期生長之細胞接種於含有150 μL補充有20% FBS之RPMI 1640的96孔板中持續24小時。以4×工作濃度製備抗體-藥物結合物於細胞培養基中之連續稀釋液，且向96孔板添加50 μL之各稀釋液。在添加測試物之後，將細胞與測試物一起在37℃下培育4天。在96小時之後，藉由CellTiter-Glo® (Promega，Madison，WI)評估生長抑制且在讀板儀上量測發光。在此處將一式三份測定之EC50 值定義為引起細胞生長相對於未經處理對照降低50%之濃度。喜樹鹼結合方法
在50%丙二醇(PG)1×PBS混合物中製備完全或部分還原ADC。添加PG之一半部分以還原mAb，且添加一半PG至1 mM DMSO喜樹鹼藥物-連接子儲備液。添加PG/藥物-連接子混合物以還原25%部分之mAb。在添加藥物-連接子完成之後，藉由用活性木炭(1 mg之木炭比1 mg之mAb)處理移除過量藥物-連接子。隨後經由過濾移除木炭，且使用NAP5或PD10管柱將所得ADC緩衝交換至5%海藻糖/1× PBS pH 7.4中。活體內模型方法
所有實驗均根據動物照護與使用委員會(Animal Care and Use Committee)在由實驗室動物照護評估及評審協會(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care)完全認可之設施中進行。功效實驗在786-0、L540cy、BXPC3、Colo205及Caki-1模型中執行。將腫瘤細胞作為細胞懸浮液皮下植入免疫功能不全SCID或裸鼠中。移入腫瘤後，當平均腫瘤體積達到約100 mm3 時，將小鼠隨機分入研究組(每組5隻小鼠)。經由腹膜內注射給予ADC或對照物一次。使用式(L×W2 )/2測定隨時間而變之腫瘤體積。當腫瘤體積達到750 mm3 時，對動物實施安樂死。在植入後10至12週之後，展示持久消退之小鼠結束研究。ADC 血漿穩定性測定
所有ADC儲備液均標準化至2.5 mg/mL。將2.5 mL單次使用等分試樣之檸檬酸化小鼠(Balb C)在使用之前在-80℃下儲存。如下製造於小鼠血漿中之ADC的儲備溶液。ADC (50 μg)於200 μL血漿(每時間點，0.25 mg/mL)中，最終PBS濃度在13.85。將血漿樣品在37攝氏度下培育6 h、1 d、3 d及7 d時間點，且重複取樣。在各時間點之後，將樣品在-80攝氏度下儲存直至將其處理用於分析。製備於1×PBS中之IgSelect之50%漿料。對於各時間點樣品，添加50 μL IgSelect漿料至3 uM過濾板，且將真空應用於移除上清液。洗滌(2 × 1mL 1×PBS)樹脂，在每次洗滌之後應用真空。施用樣品(180 uL)，且搖晃(在4攝氏度下1200 rpm持續1 h)過濾板。隨後將真空應用於移除血漿。將樹脂用1 mL PBS + 50 mM NaCl、1 mL PBS及用1 mL水洗滌，在每次洗滌之後應用真空。隨後將樣品板在Waters 350 μL集合板上在500 xg下離心2分鐘。藉由用50 μL Gly pH 3 (2 × 50 uL)處理、在4℃下在500 rpm下混合2 min、在500 xg下離心3 min至350 μL 96孔盤(各孔含有10 μL之1M Tris pH 7.4緩衝液)中自樹脂洗脫ADC。使用UV-Vis讀板儀測定ADC濃度。使用1 μL PNGase/樣品使樣品脫糖基化且在37攝氏度下培育1 h。藉由添加12 μL之100 mM DTT還原各ADC且在37攝氏度下培育15 min。最終，使用15 min PLRP-MS方法評估輕鏈及重鏈組成來分析樣品(10或50 μL注射液)。ADC PK 分析實驗方法
此程序描述一種用於定量嚙齒動物K2 EDTA血漿中總人類IgG之方法。
該方法使用生物素結合鼠類抗人類輕鏈κ mAb (SDIX)作為捕捉試劑，且相同抗體與Alexafluor-647結合作為偵測試劑用於以K2 EDTA嚙齒動物血漿中總抗體(TAb)形式定量人類抗體及/或抗體-藥物結合物測試物。分析係使用GyroLab xPlore平台進行，其利用含有微流體結構與奈升等級經抗生蛋白鏈菌素塗佈之珠粒管柱之圓盤，在該圓盤上進行配體結合分析。簡言之，視需要將研究樣品用未經處理收集之嚙齒動物K2 EDTA血漿稀釋，且隨後在裝入96孔樣品板中之前連同校準劑、對照及血漿空白組一起用Rexxip-HX緩衝液在1:10之最低需要稀釋度(MRD)下稀釋。添加1 ug/mL之於磷酸鹽緩衝鹽水pH 7.4與Tween-20 (PBS-T)中之生物素-抗人類κ捕捉試劑、25 nM的於Rexxip F緩衝液中之AF647-抗人類κ偵測試劑及PBS-T洗滌緩衝劑至96孔試劑板，且將兩個均密封並添加至儀器。在GyroLab Control軟體中建立運行文件，且將樣品模板導出為Excel以允許輸入樣品名稱及稀釋係數。隨後在開始運行之前將此模板導回至GyroLab Control中。分析依序：首先將經生物素標記之捕捉試劑應用於BioAffy1000 CD，圓盤用PBS-T淋洗，且隨後添加經稀釋血漿空白組、標準物、對照及樣品。在後續PBS-T淋洗之後，施用AF647-結合偵測試劑。在最終PBS-T淋洗之後，用雷射誘導之螢光偵測(激發波長：635 nm)讀取圓盤之每一管柱。使用Gyrolab Evaluator軟體對在1% PMT下所偵測之響應進行5-參數邏輯回歸模型(5-PL)用於將螢光響應轉化成樣品中存在的ng/mL總抗體。
對於非結合抗體測試物嚙齒動物K2 EDTA血漿中總人類IgG之數量分析之範圍為22.9 ng/mL (LLOQ)至50,000 ng/mL (ULOQ)，而對於ADC為22.9 ng/mL (LLOQ)至100,000 ng/mL (ULOQ)。將質量控制水平建立在80.0 ng/mL (LQC)、800 ng/mL (MQC)及8,000 ng/mL (HQC2)及40,000 ng/mL (HQC1)。
此測試方法應用於定量測定嚙齒動物K2 EDTA血漿中之總人類IgG支持非GLP非臨床研究。此方法未在用於cGMP順應或GLP順應方式中之Seattle Genetics下檢驗或驗證。結果：
在下表中ADC及CPT游離藥物之IC50 值分別以ng/mL及mmol/mL濃度形式提供，括號中的值表示相對於未經處理細胞在最高測試濃度(除非另有指示，否則對於ADC而言1000 ng/mL而對於CPT游離化合物而言1 µM)下剩餘的細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。ND =未測定。Ag1係指靶向癌細胞上普遍存在且易於內化之抗原的抗體及h00為非結合對照抗體，Ag2係指靶向CD30抗原之cAC10，Ag3係指靶向發現於T淋巴球上之岩藻醣化外周血液抗原之抗體；Ag4係指靶向經活化T及B淋巴球上的表面抗原之抗體；及Ag5係指靶向為外周血液淋巴細胞共有的表面抗原之抗體。
表 1 .基於葡萄糖醛酸苷之喜樹鹼DAR 8 ADC之活體外細胞毒性。灰色區之值對應於IC50 (ng/mL)濃度。透明區中之值代表相對於未經處理細胞在最高測試濃度(1000 ng/mL)下剩餘的細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。
表 2 .基於非葡萄糖醛酸苷之喜樹鹼DAR 8 ADC之活體外細胞毒性。灰色區之值對應於IC50 (ng/mL)濃度。透明區中之值代表相對於未經處理細胞在最高測試濃度(1000 ng/mL)下剩餘的細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。 灰色區，IC50 值(ng/mL)：+ ＞ 1K；100 ≤ ++ ≤ 1000；+++ ＜ 100。 透明區：在1 ug/mL下%最大抑制：+ ＜ 20%；++ ≥ 20%。 ND為未測定。
表 3 .葡萄糖醛酸苷喜樹鹼DAR 8 Ag2及Ag3 ADC之活體外細胞毒性效能。濃度對應於IC50 (ng/mL)值。括號中之值代表相對於未經處理對照在最高測試濃度(10000 ng/mL)下剩餘細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。
表 4A - C .葡萄糖醛酸苷喜樹鹼DAR 8 ADC之活體外細胞毒性效能。A . 抗Ag2 ADC、B . 抗Ag4 ADC及C . 抗Ag5 ADC。灰色區中之濃度對應於IC50 值(ng/mL)。透明區中之值代表相對於未經處理對照在最高測試濃度(10000 ng/mL)下剩餘細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。A B C
表 5 .基於選擇抗Ag2葡萄糖醛酸苷之DAR8喜樹鹼ADC對抗具有可變Ag2表現之Ag2+腫瘤系的活體外細胞毒性效能。灰色區之值對應於IC50 (ng/mL)濃度。透明區中之值代表相對於未經處理細胞在最高測試濃度(1000 ng/mL)下剩餘的細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。各括號中的值為癌細胞上之靶向抗原之平均複本數。
表 6 . Ag2+親本DEL及Ag2+、MDR+、DEL-BVR細胞系上葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC Ag2-(67)之細胞毒性活性。在本妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)存在下培養親本DEL淋巴瘤細胞系以誘導MDR表型之過表現產生DEL本妥昔單抗維多汀抗性系(DEL-BVR)。測定親本(DEL)及MDR+ (DEL-BVR)系之IC50 值(灰色區，ng/mL)。包括本妥昔單抗維多汀(Ag2-vcMMAE (8))ADC作為對照。透明區中之值代表相對於未經處理細胞在最高測試劑量(1000 ng/mL)下剩餘的細胞百分比。在曝露於ADC 96 h之後藉由CellTiter-Glo染色測定細胞活力。
表 7 . 藉由CellTitre-Glo評估之Ag5 (抗Ag5)葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC對抗MM.1R細胞(Ag5陽性)的成活力、藉由Bright-Glo評估之MM.1R與MM.1R Ag5 KO luc+細胞之3:1共培養物及MM.1R Ag5 KO luc+細胞的成活力之IC50 值(ng/mL)之表。灰色區中之濃度對應於IC50 值(ng/mL)。透明區中之值代表相對於未經處理對照在最高測試濃度(10000 ng/mL)下剩餘細胞百分比。
表 8 .經Ag5-(67 )處理之MM.1R、與MM.1R Ag5 KO luc+之3:1共培養物及MM.1R Ag5 KO luc+細胞之IC50 值(ng/mL)。灰色區中之濃度對應於IC50 值(ng/mL)。透明區中之值代表相對於未經處理對照在最高測試濃度(10000 ng/mL)下剩餘細胞百分比(參見圖1)。 表 9 .如由PLRP-MS定量藥物負載所判定之小鼠血漿中在37攝氏度下培育的喜樹鹼DAR8 ADC之穩定性(參見圖2及13)。 *IMMU為由European Journal of Medicinal Chemistry (2019)167 ：583-593描述之靶向CL2A的喜樹鹼結合物
圖 1A 至 1B 展示基於葡萄糖醛酸苷之喜樹鹼ADC在多發性骨髓瘤活體外旁觀者活性模型中之評估。A.對抗MM.1R (Ag5+)細胞系之抗Ag5喜樹鹼DAR8 ADC (Ag5-(67 ))劑量反應滴定。藉由CellTitre-GloTM 評估成活力。B. MM.1R及MM.1R Ag5 KO (crispr cas基因敲除) luc+細胞系之3:1共培養混合物之抗Ag5喜樹鹼DAR8 ADC (Ag5-(67 ))劑量反應滴定。藉由Bright-GloTM 評估成活力。
圖 2 展示小鼠血漿中ADC穩定性研究之結果。A.喜樹鹼DAR8 ADC係在37攝氏度下在小鼠血漿(Balb C)中培育。在第6 h、24 h、72 h及第7天取樣血漿。B.將ADC用IgSelect自血漿分離，用PNGase脫糖基化且用二硫蘇糖醇還原。ADC重鏈及輕鏈均藉由PLRP-MS評估以定量各時間點之藥物負載。
圖 3 展示用抗Ag4喜樹鹼DAR 4 ADC ((Ag4-(67 ))之786O腎細胞癌瘤皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積圖示。向動物植入786O細胞。在第7天，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量3 mg/Kg及10 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 4 展示用抗Ag2喜樹鹼DAR 4 ADC (Ag2-(67 ))治療之霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)之L540cy皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積圖示。向動物植入L540cy細胞。在7天之後，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量3 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 5 展示用喜樹鹼ADC治療之Karpas 299/Karpas299-BVR多形性大細胞淋巴瘤旁觀者皮下異種移植腫瘤模型之結果。圖示展示抗Ag2喜樹鹼DAR 4 ADC (Ag2-(67 ))及非結合DAR 4 ADC (h00-(67 ))之平均腫瘤體積。向動物植入Ag2+ Karpas299與抗Ag2- Karpas299-本妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)性(Karpas299-BVR)細胞之1:1混合物。在8天之後，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量3 mg/Kg、10 mg/Kg及30 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。非結合ADC以30 mg/Kg給藥。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 6 展示用DAR4葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC之caki-1腎細胞癌瘤皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積。經由套針向動物植入固體caki-1腫瘤。在第13天，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量10 mg/Kg及30 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 7 展示用DAR4葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC之786O腎細胞癌瘤皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積。向動物植入786O細胞。在第7天，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量10 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 8 展示用Ag2及非結合h00葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC治療之霍奇金淋巴瘤之L540cy皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積圖示。向動物皮下植入L540cy細胞。在7天之後，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用10 mg/kg及30 mg/kg的Ag2-(58 )或Ag2-(61 ) DAR4喜樹鹼ADC治療q4dx3。對應非結合h00 ADC以30 mg/Kg給藥q4dx3。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 9 展示h00 mAb及h00喜樹鹼ADC在史泊格-多利(Sprague-Dawley)大鼠中之藥物動力學概況。向大鼠注射1 mg/kg之親本非結合人類化抗體(h00)或h00-(67 ) (DAR8)喜樹鹼ADC。處理來自預定血液抽取之樣品且經由生物素結合鼠類抗人類輕鏈κ mAb及塗佈抗生蛋白鏈菌素之珠粒自血漿捕獲h00抗體及ADC。經由ELISA使用AF647抗人類κ偵測試劑定量h00抗體及ADC。
圖 10 展示葡萄糖醛酸苷喜樹鹼DAR8 ADC在Del-BVR (抗本妥昔單抗維多汀性，MDR+)異種移植模型中之平均腫瘤體積圖示。向動物皮下植入Del-BVR細胞。在4天之後，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且用單次劑量之ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 11 展示用DAR4葡萄糖醛酸苷喜樹鹼ADC之Caki-1腎細胞癌瘤皮下小鼠異種移植模型的平均腫瘤體積圖示。向動物植入Caki-1細胞。在第11天，將動物分選至平均腫瘤尺寸為100 mm3 之群組中，且隨後用單次劑量10 mg/Kg之喜樹鹼ADC治療。在研究過程期間針對腫瘤尺寸及生命中體徵評估動物。
圖 12 為展示所選喜樹鹼ADC在裸鼠RCC異種移植模型中之活性的圖式。
圖 13 為說明所選喜樹鹼ADC在小鼠模型中之血漿穩定性的圖示及表格。

Claims (28)

  1. 一種具有下式之喜樹鹼結合物或其鹽，L-(Q-D)p其中L為來自靶向劑之配位子單元；下標p為在1至16範圍內之整數；Q為連接子單元，其具有選自由以下組成之群之式：-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-、-Z-A-B(S*)-RL-、及-Z-A-B(S*)-RL-Y-，其中Z為延伸子單元；A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子，其中該可釋放連接子為葡萄糖醛酸苷單元；Y為間隔子單元；及D為選自由如下CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7組成之群的藥物單元：
    Figure 108119649-A0305-02-0256-1
     其中RB為選自由以下組成之群的成員：C1-C8烷基、C3-C8環烷基、(C3-C8環烷基)-C1-C4烷基-、苯基及苯基-C1-C4烷基-；RC為選自由以下組成之群的成員：C1-C6烷基及C3-C6環烷基；各RF及RF'為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1-C8烷基、C1-C8羥烷基、C1-C8胺基烷基、(C1-C4烷胺基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4羥烷基)(C1-C4烷基)-胺基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)胺基-C1-C8烷基-、N-C1-C4羥烷基-C1-C8胺基烷基-、C1-C8烷基 C(O)-、C1-C8羥烷基-C(O)-、C1-C8胺基烷基C(O)-、C3-C10環烷基、(C3-C10環烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10雜環烷基、(C3-C10雜環烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基-C1-C4烷基-、雜芳基及雜芳基-C1-C4烷基-，或RF及RF'與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2及-NHC1-C4烷基之取代基的5員、6員或7員環；及其中RB、RC、RF及RF'之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基及-N(C1-C4烷基)2組成之群的取代基取代；及其中當Q為-Z-A-RL-、-Z-A-RL-Y-、-Z-A-S*-RL-、-Z-A-B(S*)-RL-、-Z-A-S*-RL-Y-或-Z-A-B(S*)-RL-Y-時，D之共價連接點係連接至CPT2、CPT3、CPT4、CPT5或CPT6上任一羥基或胺基取代基的雜原子；及其限制條件為當共價連接點係連接至CPT6上之胺基取代基之氮原子時，RF及RF'中之至少一者為-H。
  2. 如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽其中A為連結子單元。
  3. 如請求項1或2之喜樹鹼結合物或其鹽，其中D為CPT4、CPT6或CPT7，其中連接至CPT4之共價連接點係經由CPT4之胺官能基之氮原子， 其中連接至CPT6之共價連接點係經由CPT6之胺官能基的氮原子，其限制條件為RF及RF'中之至少一者為-H，及其中連接至CPT7之共價連接點係經由CPT7之一級羥官能基之一者的氧原子。
  4. 如請求項3之喜樹鹼結合物或其鹽，其中該葡萄糖醛酸苷單元具有下式：
    Figure 108119649-A0305-02-0258-3
     其中Su為己醣型單醣；O'表示能夠藉由醣苷酶裂解之醣苷鍵的氧原子；用單一星號(*)標示之波浪線指示與CPT4或CPT6(其中RF及RF'中之至少一者為-H)上之胺基取代基之氮原子或與間隔子單元(Y)的共價連接位點，或指示與CPT2至CPT7中任一者之內酯環上的羥基取代基之氧原子之共價連接位點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與Q之其餘部分的共價連接位點。
  5. 如請求項4之喜樹鹼結合物或其鹽，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基部分或丁二醯亞胺基及三唑基部分，各自視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分，其中該三唑基部分視情況由來自經化學修飾之靶向劑的疊氮基取代基與藥物連接子化合物之炔基部分之1,3-偶極 環加成反應形成，其中該靶向劑為結合物之配位子單元之前驅體，或-Z-A-包含可衍生自喜樹鹼-連接子化合物的mDPR部分之丁二酸醯胺部分或包含丁二醯亞胺基-丙醯基部分，其視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環，其限制條件為，D具有經由其胺基取代基之氮原子的共價連接，且-Z-A-包含丁二醯亞胺基及三唑基部分，其視情況具有該呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分，或其限制條件為，D具有與其內酯環上羥基取代基之氧原子的共價連接，且-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基部分。
  6. 如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽，其中-Z-A-包含丁二醯亞胺基-烷醯基部分或丁二醯亞胺基及三唑部分，各自視情況具有呈水解形式之丁二醯亞胺環作為丁二酸醯胺部分或可衍生自喜樹鹼-連接子化合物的mDPR之丁二酸醯胺部分，或其中-Z-A-具有下式：
    Figure 108119649-A0305-02-0259-4
     其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與Q之其餘部分之共價連接位點；及用三重星號(***)標示之波浪線指示與L之硫原子的共價連接點。
  7. 如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽，其中-Q-D具有以下結構：
    Figure 108119649-A0305-02-0260-5
     其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與L之共價連接點。
  8. 如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽，其中-Q-D具有以下結構：
    Figure 108119649-A0305-02-0260-6
    Figure 108119649-A0305-02-0261-7
     其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與L之共價連接點。
  9. 一種喜樹鹼-連接子化合物，其具有選自由以下組成之群之式：(i)Z'-A-RL-D；(ii)Z'-A-RL-Y-D；(iii)Z'-A-S*-RL-D；(iv)Z'-A-S*-RL-Y-D；(v)Z'-A-B(S*)-RL-D；及(vi)Z'-A-B(S*)-RL-Y-D；其中Z'為延伸子單元前驅體；A為鍵或連結子單元；B為並聯連結子單元；S*為分隔劑；RL為可釋放連接子，其中該可釋放連接子為葡萄糖醛酸苷單元；Y為間隔子單元；及 D為喜樹鹼化合物，其選自由如下CPT2、CPT3、CPT4、CPT5、CPT6及CPT7組成之群：
    Figure 108119649-A0305-02-0262-8
     RB為選自由以下組成之群的部分：C1-C8烷基、C3-C8環烷基、(C3-C8環烷基)C1-C4烷基-、苯基及苯基-C1-C4烷基-；RC為選自由以下組成之群的部分：C1-C6烷基及C3-C6環烷基；各RF及RF'為獨立地選自由以下組成之群的成員：-H、C1-C8烷基、C1-C8羥烷基、C1-C8胺基烷基、(C1-C4烷胺基)-C1-C8烷基-、N,N-(C1-C4 羥烷基)(C1-C4烷基)-胺基-C1-C8烷基-、N,N-二(C1-C4烷基)胺基-C1-C8烷基-、N-C1-C4羥烷基-C1-C8胺基烷基-、C1-C8烷基C(O)-、C1-C8羥烷基-C(O)-、C1-C8胺基烷基C(O)-、C3-C10環烷基、(C3-C10環烷基)-C1-C4烷基-、C3-C10雜環烷基、(C3-C10雜環烷基)-C1-C4烷基-、苯基、苯基-C1-C4烷基-、二苯基-C1-C4烷基-、雜芳基及雜芳基-C1-C4烷基-，或RF及RF'與各自所連接之氮原子組合形成具有0至3個選自鹵素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2及-NHC1-C4烷基之取代基的5員、6員或7員環；及其中RB、RC、RF及RF'之環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基部分經0至3個選自由鹵素、C1-C4烷基、-OH、-OC1-C4烷基、-NH2、-NHC1-C4烷基及-N(C1-C4烷基)2組成之群的取代基取代；及其中當該喜樹鹼-連接子化合物具有式(i)、式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)或式(vi)時，D之共價連接點係連接至CPT2至CPT7中任一者上任一羥基或胺基取代基的雜原子；及其限制條件為當共價連接點係連接至CPT6上之胺基取代基之氮原子時，RF及RF'中之至少一者為-H。
  10. 如請求項9之喜樹鹼-連接子化合物，其中A為連結子單元。
  11. 如請求項10之喜樹鹼-連接子化合物，其中D為CPT4或CPT6，其中CPT4之連接點係經由CPT4之胺官能基之氮原子，及CPT6之連接點係經由CPT6之胺官能基之氮原子，其限制條件為RF 及RF'中之至少一者為-H。
  12. 如請求項9至11中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含順丁烯二醯亞胺基-烷醯基部分或mDPR，其鹼性氮視情況質子化或使用對酸不穩定之保護基保護。
  13. 如請求項9至11中任一項之喜樹鹼-連接子化合物，其具有式(iii)，其中Z'-A-具有選自由以下組成之群之式：
    Figure 108119649-A0305-02-0264-9
     其中用雙重星號(**)標示之波浪線指示與S*之共價連接位點。
  14. 如請求項9之喜樹鹼-連接子化合物，其具有以下結構：
    Figure 108119649-A0305-02-0264-10
     或其鹽。
  15. 一種喜樹鹼結合物於製備供治療個體之癌症的藥物上之用途，其中該喜樹鹼結合物具有請求項1所載之式或其鹽。
  16. 一種醫藥學上可接受之組合物，其包含如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
  17. 一種供治療有需要之個體之癌症之組合物，其中該組合物包含有效量之如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽。
  18. 一種製備如請求項1之喜樹鹼結合物的方法，該方法包括接觸靶向劑的步驟，該靶向劑具有對如請求項9之喜樹鹼-連接子化合物之Z'具有反應性的官能基，藉此於喜樹鹼結合物之配位子單元及延伸子單元(Z)之間形成共價鍵，其結構分別對應於靶向劑及Z'。
  19. 如請求項1之喜樹鹼結合物或其鹽，其中L為選擇性結合CD30抗原之抗體。
  20. 如請求項19之喜樹鹼結合物或其鹽，其中L為cAC10。
  21. 如請求項4之喜樹鹼結合物或其鹽，其中該葡萄糖醛酸苷單元具有下式：
    Figure 108119649-A0305-02-0266-11
     其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之共價連接位點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與A、B或S*之共價連接點。
  22. 如請求項10之喜樹鹼-連接子化合物，其中該葡萄糖醛酸苷單元具有下式：
    Figure 108119649-A0305-02-0266-13
     其中用單一星號(*)標示之波浪線指示與D或與間隔子單元(Y)之共價連接位點；及用雙重星號(**)標示之波浪線指示與A、B或S*之共價連接點。
  23. 如請求項12之喜樹鹼-連接子化合物，其中Z'-A-包含mDPR或順丁烯二醯亞胺基-烷醯基-β-丙胺醯基部分。
  24. 如請求項15之用途，其中該癌症選自由淋巴瘤、白血病及實體腫瘤組成之群。
  25. 如請求項17之組合物，其中該癌症選自由淋巴瘤、白血病及實體腫瘤組成之群。
  26. 如請求項15之用途，其中該癌症為淋巴瘤或白血病。
  27. 如請求項17之組合物，其中該癌症為淋巴瘤或白血病。
  28. 如請求項18之方法，其中該靶向劑為抗CD30抗體，其具有至少一個半胱胺酸殘基，其中反應性官能基為硫醇基，及Z'包含順丁烯二醯亞胺部分，或該靶向劑為抗CD30抗體，其經修飾以具有含疊氮基之殘基作為反應性官能基，及Z'包含炔官能基，其中該疊氮基及炔官能基能夠進行1,3-偶極環加成反應以形成三唑環系統。
TW108119649A 2018-06-07 2019-06-06 喜樹鹼結合物 TWI851577B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862681847P 2018-06-07 2018-06-07
US62/681,847 2018-06-07
US201862777491P 2018-12-10 2018-12-10
US62/777,491 2018-12-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202015740A TW202015740A (zh) 2020-05-01
TWI851577B true TWI851577B (zh) 2024-08-11

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201532616A (zh) 2013-12-19 2015-09-01 Seattle Genetics Inc 與標的－藥物結合物併用之亞甲基胺基甲酸酯連接物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201532616A (zh) 2013-12-19 2015-09-01 Seattle Genetics Inc 與標的－藥物結合物併用之亞甲基胺基甲酸酯連接物

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7527978B2 (ja) カンプトテシンコンジュゲート
JP7430643B2 (ja) カンプトテシンペプチドコンジュゲート
JP6784790B2 (ja) 標的化薬物結合体と使用するためのメチレンカルバメートリンカー
TWI814699B (zh) 四級胺化妥布賴森(tubulysin)化合物之結合物
KR20220079606A (ko) 캄프토테신 펩티드 접합체
TW202400137A (zh) 喜樹鹼偶聯物
TWI851577B (zh) 喜樹鹼結合物
TWI777502B (zh) 與標的-藥物結合物併用之亞甲基胺基甲酸酯連接物
BR122023026165A2 (pt) Conjugados de peptídeo de camptotecina e usos dos mesmos