KR920700228A - 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법) - Google Patents

Abstract

내용 없음

Description

단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

제1도는 재배열되지 않은 것과 재배열된 중쇄, 경쇄 가변성 유전자와 프라이머 위치의 도식화된 표시를 보여준다;

제2도는 M13－VHPCR1 백터와 증폭된 중쇄 가변성 영역에 대한 클로닝 체계의 도식화된 표시를 보여준다;

제3도는 M13－VHPCR1에서 Ig 가변성 영역이 유도된 서열을 보여준다.

Claims (32)

1. 면역글로불린(Ig) 슈퍼훼미리로부터 분자중 한 연쇄내에 최소한 한부분의 가변성 영역을 포함하는 단일영역 리간드.
2. 제1항에 있어서, Ig 중쇄(heavy cbain)의 가변성 영역으로 구성됨을 특징으로 하는 리간드.
3. 제1항에 있어서, 천연 서열에서 한개이상의 점 돌연변이를 가진 Ig 연쇄의 가변성 영역으로 구성됨을 특징으로하는 리간드.
4. 제1항 내지 제3항의 어느 한 항에 있어서, 한개 이상의 효과분자(effector molecule), 보결분자단(prosthetic group), 라벨, 고체지지체와 한개 이상의 같거나 다른 특이성을 가진 다른 리간드와 연결된 리간드를 포함하는 수용체.
5. 제4항에 있어서, 2개 이상의 리간드를 포함함을 특징으로하는 수용체.
6. 제5항에 있어서, 첫번째 리간드는 첫번째 항원에 에피토프에, 두번째 리간드는 두번째 에피토프에 결합함을 특지응로 하는 수용체.
7. 제6항에 있어서, 효과분자나 라벨을 포함함을 특징으로 하는 수용체.
8. 제5항 내지 제7항의 어느 한 항에 있어서, 융합생성물로서 재조합 DNA 기술에 의해 제조되고 리간드와 다른 단백질 분자를 포함함을 특징으로 하는 수용체.
9. 제8항에 있어서, 링커펩타이드(linker peptide) 서열이 리간드와 다른 단백질 분자 사이에 위치함을 특징으로 하는 수용체.
10. Ig 슈퍼훼미리 분자의 최소한 일부의 가변성 영역을 암호하는 서열(표적서열)의 클로닝 방법으로 하기 (a)에서 (e)의 단계를 거침을 특징으로 하는 방법.

    (a) 표적서열을 함유하는 이중가닥(ds) 뉴클레익 산의 샘플 제공단계, (b) 두개의 사슬을 분리하기 위한 샘플의 변성단계, (c) 프라이머가 바로 표적서열이나 그 근처의 뉴클레익 산에 하이브리드화 할 수 있는 조건하에서 전방 올리고 뉴클레오타이드 프라미너 및 후방 올리고 뉴클레오타이드 프라이머에 어닐링 시키는 단계로, 이때 전방 프라이머는 표적 서열중 센스사슬의 3’말단이나 그 근처의 서열을 후방 프라이머표적 서열중 안티센스 사슬의 3’말단이다 또는 그 근처의 서열 (d) 프라이머 확장을 일으키는 조건하에서 데옥시 뉴클레오 사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 폴리머라제 효소와 어닐(anneal)된 샘플의 처리단계 (e) 확장된 프라이머가 표적 서열로부터 분리되는 것과 같은 조건하에서 샘플의 변성 단계.
11. 제10항의 방법에 있어서, 더 나아가 변성 혼합물에 대한 단계(c)에서 (e)가 수회 반복되는 단계(f)를 포함함을 특징으로 하는 방법.
12. 제10항이나 제11항에 있어서, Ig 증쇄로부터 완전한 가변성 영역을 클론하는데 사용됨을 특징으로 하는 방법.
13. 제10항이나 제11항에 있어서, 제1항 내지 제3중 어느 한항에 따르는 리간드를 암호하는 DNA 서열 생산에 사용됨을 특징으로 하는 방법.
14. 제10항이나 제13항의 어느 한 항에 있어서, 전방과 후방 프라이머가 단일 올리고 뉴클레오타이드로서 제공됨을 특징으로 하는 방법.
15. 제10항이나 제13항의 어느 한 항에 있어서, 전방과 후방 프라이머가 가깝게 연관된 올리고 뉴클레오타이드의 혼합물로서 각각 제공됨을 특징으로 하는 방법.
16. 제14항이나 제15항에 있어서, 사용된 프라이머가 종들에 따른 특이적 일반적 프라이머들임을 특징으로 하는 방법.
17. 제10항이나 제16항의 어느 한 항에 있어서, ds 뉴클레익산 서열이 게놈성 DNA임을 특징으로 하는 방법.
18. 제10항 내지 제17항의 어느 한 항에 있어서, ds 뉴클레익산이 인간으로부터 유도된 것임을 특징으로 하는 방법.
19. 제10항 내지 제18항의 어느 한 항에 있어서, ds 뉴클레익산이 말초 혈액 임파구로부터 유도된 것임을 특징으로 하는 방법.
20. 제10항 내지 제18항의 어느 한 항에 있어서, 각각의 프라이머가 제한요소 인식 부위를 암호하는 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법.
21. 제20항에 있어서, 제한효소 인식부위가 ds 뉴클레익산에 어닐할 서열에 위치함을 특징으로 하는 방법.
22. 제10항 내지 제21항의 어느 한 항에 있어서, 생성물인 ds cDNA가 발현벡터에 삽입되어 단독으로 발현됨을 특징으로 하는 방법.
23. 제10항 내지 제22항의 어느 한 항에 있어서, 생성물인 ds cDNA가 상보적인 가변성 영역과 결합되어 발현됨을 특징으로 하는 방법.
24. 제10항 내지 제23항의 어느 한 항에 있어서, 클론된 ds cDNA가 Ig－타입 사슬을 발견하도록 하는 한개이상의 불변성 영역을 암호하는 서열을 이미 포함하는 발현벡터에 삽입됨을 특징으로 하는 방법.
25. 제10항 내지 제24항의 어느 한 항에 있어서, 클론된 ds cDNA가 융합 단백질로서 발현될 수 있도록 하기위하여 발현 벡터에 삽입됨을 특징으로 하는 방법.
26. 제10항에 있어서, 한개나 양 프라이머 모두가 가변성 영역을 암호하는 서열의 혼합물이 제조되는 초가변서열의 올리고 뉴클레오타이드 혼합물을 포함함을 특징으로 하는 방법.
27. Ig 슈퍼훼미리 분자의 최소한 일부의 가변성 영역을 암호하는 서열(표적서열)의 클로닝 방법으로서 하기 (a)에서 (d) 및 (g)(h)의 단계를 거침을 특징으로 하는 방법.

    (a) 표적서열을 함유하는 이중가닥(ds) 뉴클레익 산의 샘물 제공단계, (b) 두개의 사슬을 분리하기 위한 샘플의 변성단계, (c) 프라이머가 바로 표적서열이나 그 근처의 뉴클레익 산에 하이브리드화 할 수 있는 조건하에서 전방 올리고 뉴클레오타이드 프라이머 및 후방 올리고 뉴클레오타이드 프라이머에 어닐링 시키는 단계로, 이때 전방 프라이머는 표적 서열중 센스사슬의 3’말단이나 그 근처의 서열을 후방 프라이머표적 서열중 안티센스 사슬의 3’말단이나 또는 그 근처의 서열 (e) DNA를 닉 번역하기 위해 DNA 폴리머라제 I 존재하에 극소량의 DNAse와 ds CDNA 샘플의 처리단계 (f) 벡터로부터 ds cDNA 클로닝 단계.
28. 제27항에 있어서, 다음의 (i)(j) 단계를 더 거침을 특징으로 하는 방법.

    (i) 가변성 영역을 암호하는 유전자를 함유하는 DNA 단편을 분비하기 위해 재조합 플라스미드의 DNA를 분해하는 단계, (j)(c)에서 (h)단계에 따르는 셋트에 단편의 처리단계.
29. 제27항이나 제28항에 있어서, 단편이 벡터와 겔 전기영동에 의한 다른 크기의 다른 단편으로부터 분리됨을 특징으로 하는 방법.
30. 제27항이나 제29항의 어느 한 항에 있어서, 생성물인 ds cDNA가 발현벡터로 직접 클론됨을 특징으로 하는 방법.
31. 일반적 종특이적 올리고 뉴클레오타이드 프라이머나 그 종의 동물로부터 최소한 일부분의 가변성 영역을 암호하는 서열의 클로닝에 유용한 이와같은 프라이머의 혼합물.
32. 제27항에 있어서, 각각의 프라이머가 가변성 영역을 암호하는 서열의 암호부분에 어닐하는 서열내에 제한효소 인식부위를 포함함을 특징으로 하는 프라이머나 그 혼합물.

    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.