MX2013014687A - Formulaciones de anticuerpo anti-c-met. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan en la presente formulaciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-c-met rama única y los usos de los mismos.

Description

FORMULACIONES DE ANTICUERPO ANTI-C-MET REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de la prioridad para la Solicitud de Patente de Estados Unidos 61/503.513, presentada el 30 de junio de 2011, cuyos contenidos completos se incorporan en la presente por referencia en su totalidad.

LISTADO DE SECUENCIAS La presente solicitud contiene un listado de secuencias que se ha remitido en formato ASCII por medio de EFS-Web y se incorporan en la presente por referencia en su totalidad. Dicha copia ASCII, creada el 16 de febrero de 2012, se denomina PR4690US.txt y tiene 21.878 bytes de tamaño.

CAMPO TÉCNICO En la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprende un anticuerpo anti-c-met y usos de los mismos.

ANTECEDENTES Se añaden excipientes a las formulaciones farmacéuticas para ayudar a la estabilización del compuesto activo. La compatibilidad de los excipientes con el compuesto activo es critica para la calidad y estabilidad de la formulación farmacéutica. Si bien los excipientes son importantes en la estabilización del compuesto activo, los excipientes pueden causar problemas: el excipiente se puede degradar en consecuencia perder su mecanismo de estabilización o se pueden producir degradantes que interactuar con el compuesto activo.

Las formulaciones farmacéuticas en que el compuesto activo es un polipéptido, por ejemplo, un anticuerpo, puede plantear problemas especiales ya que los polipéptidos generalmente son más grandes y complejos que las moléculas orgánicas e inorgánicas tradicionales (por ejemplo, los polipéptidos poseen múltiples grupos funcionales, además de complejas estructuras tridimensionales) . Además, para que un polipéptido permanezca biológicamente activo, la formulación farmacéutica de polipéptido debe conservar intacta la integridad conformacional de al menos una secuencia central de. los aminoácidos del polipéptido, mientras que al mismo tiempo mantiene la estabilidad física y química de la formulación farmacéutica de polipéptido. Los excipientes son generalmente estables en solución acuosa; sin embargo, los excipientes de una formulación farmacéutica de polipéptido pueden interactuar con el polipéptido para someterse a la degradación en una formulación y puede evitar la estabilización de la proteína o los degradantes pueden interactuar con el polipéptido para plantear desafíos (tales como una pérdida de actividad) . En consecuencia, la evaluación de la interacción de los componentes no activos de la formulación farmacéutica y agente activo del polipéptido es crucial para asegurar la estabilidad química y física.

Los polisorbatos son tensioactivos no iónicos usados para estabilizar un agente del compuesto activo contra la, agregación inducida en la interfaz y la adsorción superficial. Los polisorbatos pueden ser efectivos frente a varios tipos de estrés tales como agitación (por ejemplo, sacudir o agitar), congelado/descongelado, y liofilización . En las formulaciones farmacéuticas de polipéptido, los polisorbatos minimizan la adsorción en las superficies y reducen la tensión superficial interfacial aire-líquido y en consecuencia la velocidad de desnaturalización de la proteína. La pérdida de polisorbato en la formulación farmacéutica puede producir la inestabilidad de la formulación. Además, los polisorbatos se pueden degradar por oxidación e hidrólisis que pueden llevar a una disminución de la1 concentración aparente del polisorbato en la formulación farmacéutica durante la vida útil larga. Los polisorbatos (por ejemplo, polisorbato 20) se pueden escindir para producir degradantes (por ejemplo, ácido láurico libre y cadena lateral de sorbitan polioxietileno) . Estos degradantes de, polisorbato son menos activos en superficie que el polisorbato no degradado y en consecuencia se puede comprometer la estabilidad química y física de la formulación farmacéutica. Además, algunos degradantes de polisorbato son insolubles y pueden formar partículas si estas no se solubilizan en polisorbato intacto, es decir, si la relación del polisorbato 20 degradado: polisorbato 20 intacto es demasiado alto.

La velocidad y grado de degradación del polisorbato está influida por las propiedades químicas y físicas del compuesto activo, y la capacidad estabilizante del polisorbato puede variar entre las diferentes formulaciones farmacéuticas que comprenden diferentes compuestos activos. En particular debido a que los polisorbatos se incluyen en las formulaciones de proteina para estabilizar la prote na, la disminución de la concentración del polisorbato y la acumulación de las moléculas de degradante en una formulación farmacéutica de polipéptido es de potencial interés para la estabilidad de la proteína.

Se han informado numerosas moléculas dirigidas a la vía de HGF/c-met. Estas moléculas incluyen una porción del dominio extracelular de los anticuerpos c-met y anti-c-met taes como los que se describen en US 5.686.292, Martens, T. et al., Clin. Cáncer Res. 12 (20 Pt . 1):6144 (2006); US 6.468.529; WO2006/015371 ; WO2007/063816, y WO2010/045345. Se ha demostrados que las formas bivalentes de los anticuerpos anti-c-met promueven la dimerización y producen la activación de c-met (función agonista), mientras que a la inversa se ha demostrado que los anticuerpos monovalentes inhiben la actividad c-met (función antagonista) . Para el tratamiento de las afecciones patológicas que requieren una función antagonista, la bivalencia de un anticuerpo anti-c-met puede producir un efecto agonista no deseable, y en consecuencia, se. requiere el rasgo monovalente para asegurar una actividad antagonista después de la unión del anticuerpo anti-c-met al blanco para el tratamiento de la afección patológica. Los fragmentos Fab y los anticuerpos de una rama son ejemplos de los anticuerpos monovalentes. Los anticuerpos de una rama generalmente tienen una vida media más larga que los Fab. Sin embargo, debido a un anticuerpo de una rama comprende una cadena liviana única y una cadena pesada única (asi como una región Fe adicional) , si la estructura del anticuerpo de una rama no se estabiliza, los polipéptidos potencialmente pueden formar un anticuerpo bivalente con dos cadenas pesadas y dos cadenas livianas. La agregación de los anticuerpos monovalentes (formación de multimeros y oligómeros) y/o fracaso para mantener la estructura monovalente en una formulación farmacéutica que comprende anticuerpos anti-c-met puede llevar a un efecto agonista no deseable. La minimización de la agregación del anticuerpo anti-c-met en la formulación farmacéutica en consecuencia es particularmente importante, a pesar del avance significativo en las moléculas que se dirigen a la vía HGF/c-met, aún se necesitan formulaciones farmacéuticas estables, que minimicen la agregación de los anticuerpos c-met.

Todas las referencias citadas en la presente, que incluyen solicitudes y publicaciones de patente, se incorporan por referencia en su totalidad.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprende un anticuerpo anti-c-met. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida estable. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista .

Por ejemplo, en la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprende: (a) un anticuerpo anti-c-met; (b) un buffer de histidina a pH 5.0-5.4; (c) un sacárido; y (d) un polisorbato, donde el polisorbato está presente en más de 0,02% p/v.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, el anticuerpo anti-c-met que comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia KSSQSLLYTSSQKNYLA (SEQ ID NO:l), una HVR-L2 que comprende la secuencia WASTRES (SEQ ID NO: 2), una HVR-L3 que comprende la secuencia QQYYAYPWT (SEQ ID NO: 3), una HVR-H1 que comprende la secuencia GYTFTSY LH (SEQ ID N0:4), una HVR-H2 que comprende la secuencia GMIDPSNSDTRFNPNFKD (SEQ ID NO: 5), y a HVR-H3 que comprende la secuencia ATYRSYVTPLDY (SEQ ID NO: 6). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un dominio variable de la cadena pesada que comprende la se'cuencia : EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVG IDPSNSDTRFN PNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 19) y (b) un dominio variable de la cadena liviana que comprende la secuencia: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTR ESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:20). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una rama de unión al antigeno única y comprende una región Fe, donde la región Fe comprende un primer y un segundo polipéptido de Fe, y donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo. En algunas formas de realización, el primer y segundo polipéptido de Fe forman una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el! antigeno. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un primer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19, una secuencia de CH1, y un primer polipéptido de Fe y (b) un segundo polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y secuencia de CL1. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met también comprende (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe. En algunas formas de realización, el primer polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NO: 17) y el segundo polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3 (SEQ ID NO: 18) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es onartuzumab. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met se une al mismo epitope que onartuzumab.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml (por ejemplo, aproximadamente 15 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 60 mg/ml.

; En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, el sacárido está presente en una concentración de aproximadamente 75 mM a aproximadamente 200 mM (por ejemplo, aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM) . En algunas formas de realización, el sacárido está presente en una concentración de aproximadamente 120 mM. En algunas formas de realización, el sacárido es un disacárido. En algunas formas de realización, el disacárido es trehalosa. En algunas formas de realización, el disacárido es sacarosa.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, el buffer de histidina está en una i concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 50 mM (por ejemplo, aproximadamente 1 mM a aproximadamente 25 mM) . En algunas formas de realización, el buffer de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 mM. En algunas formas de realización, el buffer de histidina es acetato de histidina .

' En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, el polisorbato está presente en una concentración mayor de 0,02% y menor de aproximadamente 0,1%. Eni algunas formas de realización, el polisorbato está presente en una concentración de aproximadamente 0,04%. En algunas formas de realización, el polisorbato es polisorbato I 20. I En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones, la formulación se diluye con un diluyente (por ejemplo, 0,9% de NaCl) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 1 mg/ml.

En la presente se proporcionan métodos de inhibir la proliferación celular activada por c-met, dicho método que comprende poner en contacto una célula o tejido con una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución) .

En la presente también se proporcionan métodos de modular una enfermedad asociada con la desregulación del eje de señalización HGF/c-met, dicho método que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución) .

También se proporcionan métodos de tratar un sujeto que tiene un trastorno proliferativo, dicho método que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución) . En algunas formas de realización, el trastorno proliferativo es cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar (cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) ) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, carcinoma de hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, y/o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, los métodos también comprenden un segundo agente terapéutico .

Se proporcionan métodos de obtener la formulación farmacéutica descripta en la presente.

Además, en la presente se proporcionan artículos de manufactura que comprenden un recipiente con una formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución) contenida en este. En la presente se proporcionan métodos de fabricar artículos de manufacture que comprenden una formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución) .

DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIG. 1 ilustra las estructuras generales de los agonistas de y antagonistas de c-Met de vida media corta y vida media larga.

La FIG. 2 ilustra las secuencias de aminoácidos de la región estructural (FR) , región hipervariable (HVR) , primer dominio constante (CL o CH1) y región Fe (Fe) de MetMAb (onartuzumab o OA5D5.v2). La secuencia de Fe ilustrada comprende mutaciones "ojal" (cavidad) T366S, L368A y Y407V, como se describe en la WO 2005/063816.

La FIG. 3 ilustra la secuencia de un polipéptido de Fe, que comprende mutación "botón" (protuberancia) T366W, como se describe en WO 2005/063816. En algunas formas de realización, un polipéptido de Fe que comprende esta secuencia forma un complejo con un polipéptido de Fe que comprende la secuencia de Fe de la Fig. 1 para generar una región Fe. La secuencia descripta en la FIG. 3 representa los residuos 6-227 de la SEQ ID NO: 18.

La FIG. 4 ilustra la tasa de formación de agregado indicada por el porcentaje de especies de peso molecular alto (H S) con el tiempo (días) a 40°C para las formulaciones de 20 mg/ml de onartuzumab, 10 mM acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, y 0,02% de polisorbato 20 a pH 5,2, 5,7, y 6,2.

La FIG. 5 ilustra la tasa de formación de agregado indicada por el porcentaje de especies de peso molecular alto (HMWS) con el tiempo (días) a 25°C para las formulaciones de 40 mg/ml onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, y 0,02% de polisorbato 20 a pH 5,1, 5,4, y 5,7.

La FIG. 6 ilustra la tasa de formación del agregado indicado por el porcentaje de especies de peso molecular alto (HMWS) con el tiempo (días) a 40°C para las formulaciones de 40, mg/ml de onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, 120 mM' de trehalosa, y 0.02% de polisorbato 20 a pH 5,1, 5,4, y 5,7.

La FIG. 7 ilustra la estabilidad química medida por la' cromatografía de intercambio iónico (IEC) indicado por el por ciento pico principal con el tiempo (días) a 25°C y 40°C para las formulaciones de 40 mg/ml de onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, y 0,02% de polisorbato 20 a pH 5,1, 5,4, y 5,7.

La FIG. 8 ilustra el porcentaje del polisorbato intacto con el tiempo (semanas) a 40°C para las formulaciones de 60 mg/ml onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, pH 5,4, y 120 mM sacarosa con 0,02% de polisorbato 20 o 0,04% de polisorbato 20.

La FIG. 9 ilustra la tasa de formación del agregado de¦ onartuzumab diluido a razón de 1 mg/ml en bolsas IV que contienen con 0,9% de NaCl. La velocidad de agregación está indicada por el porcentaje de especies de peso molecular alto (HMWS) con el tiempo (horas) de agitación para las formulaciones diluidas de (a) 60 mg/ml de onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, y 0,02% de polisorbato 20 a pH 5,4 mantenida a temperatura ambiente que se ! muestra con cuadrados y (b) 60 mg/ml de onartuzumab, 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de sacarosa, y 0,04% de polisorbato 20 a pH 5,4 mantenida a 30°C que se muestra con circuios .

DESCRIPCIÓN DETALLADA I En la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas estables que comprenden un anticuerpo anti-c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met monovalente. Además, se proporcionan kits y artículos de manufactura que comprenden formulaciones farmacéuticas de anticuerpo anti-c-met y usos de las formulaciones farmacéuticas de anticuerpo anti-c-met.

I. Definiciones El , término "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está en forma tal que permite que la actividad biológica de los compuestos sea efectiva, y que no contiene componentes adicionales que sean tóxicos para un sujeto al que se debe administrar la formulación. Los excipientes "farmacéuticamente aceptables" (vehículos, aditivos) son los que se pueden administrar de modo razonable a < un sujeto para proporcionar una dosis efectiva del compuesto activo.

Una formulación "estable" es una en que el polipéptido de esta retiene esencialmente su estabilidad física y/o estabilidad química y/o actividad biológica después del almacenamiento y/o durante la administración (por ejemplo, después de la dilución en una bolsa IV) . Varias técnicas analíticas . para medir la estabilidad de la proteína están disponibles en la técnica y se revisan en Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed. , Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) y Jones, A. Adv. Drüg Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por ejemplo. La estabilidad se puede medir a una temperatura seleccionada durante un período de tiempo seleccionado.

Un polipéptido "retiene su estabilidad física" en una formulación farmacéutica si la estabilidad química a un tiempo dado es tal que se considera que la proteína aún retiene su actividad biológica y un perfil de seguridad aceptable, por ejemplo, determinado por International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use Guidelines (por ejemplo, niveles de agregación, precipitación y/o desnaturalización aceptables en el comercio, por ejemplo, después del examen visual de color y/o transparencia o medido por dispersión de la luz UV o por cromatografía de exclusión por tamaño) .

Un polipéptido "retiene su estabilidad química" en una formulación farmacéutica, si la estabilidad química a un tiempo dado es tal que se considera que la proteína aún retiene su actividad biológica. La estabilidad química se puede evaluar por la detección cuantificación de formas químicamente alteradas de la proteína. La alteración química puede involucrar la modificación por tamaño (por ejemplo, corte) que se puede evaluar mediante por ejemplo, cromatografía de exclusión por tamaño, SDS-PAGE y/o ionización por desorción láser asistida por matriz/espectrometría de masa tiempo de vuelo (MALDI/TOF MS) . Otros tipos de alteración química incluyen alteración de carga que se puede evaluar, por ejemplo por una cromatografía de intercambio iónico.

Un "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un ingrediente de una formulación farmacéutica, diferente de un ingrediente activo que es no tóxico para un sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable incluye, pero sin limitación, un buffer, un excipiente, estabilizante, o conservante .

Un "buffer de histidina" es un buffer que comprende iones de histidina.

Un "sacárido" de la presente comprende la composición general (CH20)n y sus derivados.

Un "anticuerpo anti-c-met" y "un anticuerpo que se une a c-met" se refiere a un anticuerpo que es capaz de unirse con c-met con afinidad suficiente para que el anticuerpo sea útil como agente diagnóstico y/o terapéutico para dirigirse a c-met. En algunas formas de realización, el grado de unión de un anticuerpo anti-c-met a una proteina no-c-met no relacionada es menor de aproximadamente 10% de la unión del anticuerpo a c-met medido, por ejemplo, por un radioinmunoensayo (RIA) . En algunas formas de realización, un anticuerpo que se une a c-met tiene una constante de disociación (Kd) de < 1 µ?, < 100 nM, < 10 n , < 1 nM, < 0,1 nM, = 0,01 nM, o = 0,001 nM (por ejemplo, 10~8 M o menos, por ejemplo, de 10"8 M a 10~13 M, por ejemplo, de 10"9 M a 10"13 M) .

En algunas formas de realización, un anticuerpo anti-c-met se une a un epitope de c-met que está conservado entre los c-met de las diferentes especies.

El término "anticuerpo" de la presente se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales (que incluyen anticuerpos monoclonales de longitud completa) , anticuerpos policlonales , anticuerpos multiespecíficos (por . ejemplo, anticuerpos biespecífieos ) , anticuerpos monovalentes, anticuerpos multivalentes y fragmentos de anticuerpos siempre que exhiban actividad biológica deseada (por ejemplo, Fab y/o anticuerpos de rama única) .

La "clase" de un anticuerpo se refiere al tipo de dominio constante o región constante poseída por su cadena pesada. Existen cinco clases principales de anticuerpos: IgA, IgP, IgE, IgG, e IgM, y varios de estos también se pueden dividir en subclases (isotipos), por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se llaman a, d, e, ?, y µ, respectivamente.

Un "fragmento de anticuerpo" se refiere a una molécula diferente de un anticuerpo intacto que comprende una porción de un anticuerpo intacto, que se une al antígeno al que se une el anticuerpo intacto. Los ejemplos de los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fv, Fab, Fab1, Fab'-SH, F(ab')2/* diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de cadena única (por ejemplo scFv) ; y anticuerpos multiespecificos formados de fragmentos de anticuerpo .

Los términos "anticuerpo de longitud completa" "anticuerpo intacto" y "anticuerpo entero" se usan en la présente en forma indistinta para referirse a un anticuerpo que tiene una estructura sustancialmente similar a una estructura de anticuerpo nativo o que tiene cadenas pesadas que contienen una región Fe como se define en la presente. ? Un anticuerpo "bloqueante" o un anticuerpo "antagonista" es uno que se inhibe significativamente ( sea en forma parcial o completa) una actividad biológica del antigeno al que se une.

Un "anticuerpo que se une al mismo epitope" que un anticuerpo de referencia se refiere a un anticuerpo que bloquea la unión del anticuerpo de referencia a su antigeno en un ensayo de competición en 50% o más, y a la inversa, el anticuerpo de referencia bloquea la unión del anticuerpo a su antigeno en un ensayo de competición en 50% o más. Un ejemplo de !ensayo de competición se proporciona en la presente.

Una "estructura humana aceptora" para los fines de la ! presente es una estructura que comprende la secuencia de aminoácidos de una estructura de dominio variable de cadena liviana (VL) o una estructura de dominio variable de cadena pesada (VH) derivada de una estructura de inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana, como se define a continuación. Una estructura humana aceptora "derivada de" una estructura de inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana puede comprender la misma secuencia de aminoácidos de esta, o puede contener cambios de la secuencia de ¡ aminoácidos preexistente. En algunas formas de realización, el número de cambios de aminoácidos son 10 o menos, 9 o menos, 8 o menos, 7 o menos, 6 o menos, 5 o menos, 4 o menos, 3 o menos, o 2 o menos. En algunas formas de realización, la estructura humana aceptora VL es idéntica en secuencia a la estructura de la secuencia de inmunoglobulina humana aceptora o secuencia de la estructura de consenso humana .

El término "región variable" o "dominio variable" se ¡ refiere al dominio de una cadena pesada o liviana del anticuerpo que está involucrada en la unión del anticuerpo al antiigeno. Los dominios variables de la cadena pesada y cadena liviana (VH y VL, respectivamente) de un anticuerpo nativo generalmente tienen estructuras similares, con cada dominio que comprende cuatro regiones estructurales conservadas (FR) y tres regiones hipervariables (HVR) . (Ver, por ejemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman y Co., página 91 (2007) .) Un dominio VH o VL único puede ser suficiente para conferir especificidad de unión al antigeno.

Por otra parte, los anticuerpos que unen a un antigeno particular se pueden aislar usando un dominio VH o VL de un anticuerpo que se une al antigeno para seleccionar una biblioteca de dominios de VL o VH complementarios, respectivamente. Ver, por ejemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991), El término "región hipervariable" o "HVR" como se usa en la presente se refiere a cada una de las regiones de i un ¡ dominio variable del anticuerpo que son hipervariables en la ' secuencia y/o forman bucles definidos estructuralmente ("bucles hipervariables") . En general, los anticuerpos nativos de cuatro cadenas comprenden seis HVR; tres en la VH (Hl, H2, H3) y tres de la VL (Ll, L2, L3) . Las HVR generalmente comprenden residuos de aminoácidos de los bucles hipervariables y/o de las "regiones determinantes de complementariedad" (CDR) , estásn últimas típicamente son de mayor variabilidad de secuencia y/o están involucradas en el reconocimiento del antigeno. Los ejemplos de bucles hipervariables se producen en los residuos de aminoácidos 26-32 (Ll), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (Hl), 53-55 (H2), y 96-rl01 (H3) . (Chothia y Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987).) Los ejemplos de CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, y CDR-H3) se producen en los residuos de aminoácidos 24-34 de Ll, 50-56 de L2, 89-97 de L3, 31-35B de Hl, 50-65 de H2, y 95-102 de H3. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).) Con la excepción de la CDR1 de la VH, las CDR generalmente comprenden los residuos de aminoácidos que forman los bucles hipervariables . Las CDR también comprenden "residuos determinantes de especificidad" o "SDR" que son residuos que se ponen en contacto con el antigeno. Los SDR están contenidas dentro de las regiones de las CDR llamadas CDR abreviadas, o a-CDR. Los ejemplos de a-CDR (a-CDR-Ll, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-Hl, a-CDR-H2, y a-CDR-H3) se producen en los residuos de aminoácidos 31-34 de Ll, 50-55 de L2 , 89-96 de L3, 31-35B de Hl, 50-58 de H2, y 95-102 de H3. (Ver Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008).) A menos que se indique de otro modo, los residuos de HVR y otros residuos del dominio variable (por ejemplo, residuos FR) se numeran en la presente de acuerdo con Kabat et al., supra .

Estructura" o residuos de "FR" se refieren a los residuos del dominio variable diferentes de los residuos de la región hipervariable (HVR) . La FR de un dominio variable generalmente consiste en cuatro dominios FR: FR1, FR2, FR3, y FR . Por consiguiente, las secuencias de HVR y FR generalmente aparecen en la siguiente secuencia en VH (o VL) : FRl-Hl (Ll) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4.

La frase "cadena pesada truncada en forma N-terminal", como se usa en la presente, se refiere a un polipéptido que comprende partes pero no el total de una cadena pesada de inmunoglobulina de longitud completa, donde las partes faltantes se ubican normalmente en la región N terminal de la cadena pesada. Las partes faltantes pueden incluir, pero sin limitación, el dominio variable, CH1, y parte o el total de una secuencia bisagra. En general, si la secuencia bisagra tipo salvaje no está presente, los dominios constantes restantes de la cadena truncada N-terminal pueden comprender un componente que es capaz de ligarse a otra secuencia de Fe (es decir, el "primer" polipéptido de Fe como se describe en la presente). Por ejemplo, dicho componente puede ser un residuo modificado o un residuo de cisteina añadido capaz de formar una unión disulfuro.

El término "región Fe" como se usa en la presente, generalmente se refiere a un complejo dimérico que comprende las secuencias del polipéptido C-terminal de una cadena pesada de la inmunoglobulina, donde una secuencia del polipéptido C-terminal es la que se puede obtener por la digestión con papaina de un anticuerpo intacto. La región Fe puede comprender las secuencias nativas y variantes de Fe. Si bien los limites de la secuencia de secuencia de Fe de una cadena pesada de la inmunoglobulina pueden variar, la secuencia de Fe de la cadena pesada de IgG humana usualmente definida se extiende desde un residuo de aminoácido en aproximadamente la posición Cys226, o de aproximadamente la posición Pro230, al extremo carboxilo terminal de la secuencia de Fe. Sin embargo, la lisina C-terminal (Lys447) de I la secuencia de Fe puede o no estar presente. La secuencia de j Fe de una inmunoglobulina generalmente comprende dos dominios constantes, un dominio CH2 y un dominio CH3, y opcionalmente comprende un dominio CH4. Por "polipéptido de Fe" en la presente se entiende uno de los polipéptidos que componen una región Fe. Un polipéptido de Fe se puede obtener de I cualquier inmunoglobulina adecuada, tal como los subtipos IgGl, IgG2, IgG3, o IgG4, IgA, IgE, IgD o IgM. En algunas formas de realización, un polipéptido de Fe comprende parte o el j total de una secuencia bisagra tipo salvaje (generalmente en j su extremo N terminal). En algunas formas de realización, i un polipéptido de Fe no comprende una secuencia bisagra funcional o tipo salvaje.

I "Fe receptor" o "FcR" describe un receptor que se une a la región Fe de un anticuerpo. En algunas formas de realización, una FcR es una FcR humana nativa. En algunas formas de realización, una FcR es una que se une con un I anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FcyRIII, que incluyen variantes alélicas y alternativamente formas empalmadas de estos receptores. Los receptores FcyRII incluyen FcyRIIA (un I "receptor activador") y FcyRIIB (un "receptor inhibidor"), que tiene secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en sus dominios citoplásmicos . El receptor activador FcyRIIA contiene un motivo de activación basado en la: tirosina del inmunorreceptor (ITA ) en su dominio cifeoplásmico . El receptor inhibidor FcyRIIB contiene un motivo de inhibición basado en la tirosina del inmunorreceptor (ITIM) en su dominio citoplásmico . (Ver, por ejemplo, Daéron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Las FcR se revisan, por ejemplo, en Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994) ; y de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) ) . Otros FcR, que incluyen los que identifiquen en el futuro, estás comprendidos por el término "FcR" de la presente.

El término "receptor de Fe" o "FcR" también incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de las IgG maternas al feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) y Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) y de la regulación de la homeostasis de la inmunoglobulinas . Los métodos de medir la unión al FcRn son conocidos (ver, por ejemplo, Ghetie y Ward., Immunol. Today 18 (12) : 592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15 (7) : 637-640 (1997); Hinton et al., J. Biol . Chem. 279 (8) : 6213-6216 (2004); WO 2004/92219 (Hinton et al.).

! La unión al FcRn humano in vivo y la vida media sérica de los polipéptidos que se unen con alta afinidad al FcRn humano, se puede analizar por ejemplo, en ratones tránsgénicos o lineas celulares humanas transíectadas que expresan FcRn humana, o en primates en los que se administran los polipéptidos con una variante de la región Fe. WO 2000/42072 (Presta) describe variantes de anticuerpo con aumento o disminución de la unión a las FcR. Ver también, por ejemplo, Shields et al., J. Biol . Chem. 9 ( 2 ): 6591-6604 (2001) .

La "región bisagra", "secuencia bisagra", y sus variaciones, como se usa en la presente, incluyen el significado conocido en la técnica, que se ilustra en, por ejemplo, Janeway et al., Immuno Biology: the immune system in health and disease, (Elsevier Science Ltd., NY) (4th ed., 1999); Bloom et al., Protein Science (1997), 6:407-415; Humphreys et al., J. Immuno1. ethods (1997), 209:193-202.

A menos que se indique de otro modo, la expresión "anticuerpo multivalente" se usa a lo largo de esta memoria descriptiva para indicar un anticuerpo que comprende tres o más sitios de unión al antigeno. El anticuerpo multivalente con preferencia se manipula genéticamente para tener tres o más sitios de unión con el antigeno y generalmente no es una secuencia nativa del anticuerpo IgM o IgA.

Un fragmento "Fv" es un fragmento de anticuerpo que contiene un sitio de reconocimiento y unión al antigeno completo. Esta región consiste en un dimero de un dominio variable de la cadena pesada y uno de la cadena liviana en asociación estrecha, que puede ser de naturaleza covalente por ejemplo en scFv. En esta configuración es que las tres HVR de cada dominio variable interactúa para definir un sitio de unión al antigeno sobre la superficie del dimero VH-VL. En conjunto, las seis HVR confieren la especificidad de unión cori el antigeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un dominio variable único (o la mitad de un Fv que comprende solo tres HVR especificas para un antigeno) tiene la capacidad de reconocer y unir al antigeno, aunque a una menor afinidad que el sitio de unión completo.

El fragmento Fab contiene un dominio variable y constante de la cadena liviana y un dominio variable y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 comprenden un par de fragmentos Fab' que generalmente están ligados covalentemente cerca de sus extremos carboxi terminal con residuos de cisteina bisagra entre ellos. También se conocen en la técnica otros acoplamientos químicos de los fragmentos de anticuerpo .

' La frase "rama de unión con el antígeno", como se usa en la presente, se refiere a una parte componente de un fragmento de anticuerpo gue tiene una capacidad de unirse específicamente a una molécula blanco de interés. Generalmente y con preferencia, la rama de unión con el antígeno es un complejo de secuencias polipeptídicas de la inmunoglobulina, por ejemplo, secuencias de HVR y/o dominio Í variable de una cadena liviana y pesada de la inmunoglobulina .

Los fragmentos de anticuerpo de "cadena única Fv" o "scFv" comprenden los dominios VH y VL del anticuerpo, en donde estos dominios están presentes en una cadena polipeptídica única. Generalmente, el polipéptido Fv además comprende un ligador polipeptidico entre los dominios VH y VL que permiten que el scFv forme la estructura deseada para la unión con el antígeno. Para una revisión de scFv, ver, por ejemplo, Pluckthün, en The Pharmacology of monoclonal anticuerpos, vol. 113, Rosenburg y Moore eds . , (Springer- Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

El término "diacuerpos" se refiere a los fragmentos de I anticuerpo pequeños con dos sitios de unión al antígeno, dichos fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena liviana (VL) en la misma cadena polipeptídica (VH-VL) . Por medio de un ligador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios de la misma cadena, los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y a crear dos sitios de unión al antigeno. Los diacuerpos se describen más completamente en, por ejemplo, EP 404,097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. i Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).

La expresión "anticuerpos lineales" se refiere a los anticuerpos descriptos en Zapata et al., Protein Eng. , 8 ( 10 ): 1057-1062 (1995). En breves palabras, estos anticuerpos comprenden un par de segmentos de Fd tándem (VH-CH1-VH-CH1 ) que, junto con los polipéptidos de cadena liviana complementaria, forman un par de regiones de unión de antigeno. Los anticuerpos lineales pueden ser biespecificos o monoespecifieos .

¡ El término "anticuerpo monoclonal" como se usa en la ' presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos o se unen al mismo epitope excepto por posibles variantes de anticuerpo, por ejemplo, que contienen mutaciones naturales o que surgen durante la producción de una preparación de un anticuerpo monoclonal, I tales variantes generalmente están presentes en cantidades menores. En contraste con las preparaciones del anticuerpo policlonal, que normalmente incluye anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes diferentes (epitopes) , cada anticuerpo monoclonal de una preparación de anticuerpo monoclonal está dirigida contra un solo determinante en el antigeno. En consecuencia, el modificador "monoclonal" indica el! carácter del anticuerpo que se obtiene de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y no se interpreta que requieren la producción del anticuerpo por cualquier método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales usádos de acuerdo con la presente invención se pueden obtener por una variedad de técnicas, que incluyen, por ejemplo, el método del hibridoma, métodos de ADN recombinante , métodos de despliegue en fagos, y métodos que utilizan animales transgénicos que contienen el total o parte del locus inmunoglobulina humana, tales métodos y otros ejemplos de métodos para obtener anticuerpos monoclonales que se describen en la presente.

El término anticuerpo "quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que una porción de la cadena pesada y/o liviana deriva de una fuente o especie particular, mientras que el resto de la cadena pesada y/o liviana es deriva de una fuente o especie diferente. i Una "estructura de consenso humana" es una estructura que representa los residuos de aminoácidos naturales más comunes en una selección de secuencias estructurales VL o VH de la inmunoglobulina humana. En general, la selección las secuencias estructurales VL o VH de la inmunoglobulina humana es de un subgrupo de las secuencias del dominio variable. En general, el subgrupo de las secuencias es un subgrupo de Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vol. 1-3. En una forma de realización, para la VL, el subgrupo es el subgrupo kappa I de Kabat et al., supra . En una forma de realización, para la VH, el subgrupo es el subgrupo III de Kabat et al., supra .

Un anticuerpo "humanizado" se refiere a un anticuerpo quimérico que comprende residuos de aminoácidos de HVR no humanas y residuos de aminoácidos de FR humanas. En ciertas formas de realización, un anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente el total de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que el total o sustancialmente el total de las HVR (por ejemplo, CDR) corresponden a las del anticuerpo no humano, y el total o sustancialmente el total de las FR corresponden a las de un anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado opcionalmente puede comprender al menos una porción de una región constante del anticuerpo derivada de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo no humano, se refiere a un anticuerpo que ha experimentado la humanización .

Un "anticuerpo humano" es uno que posee una secuencia de aminoácidos que corresponde al de un anticuerpo producido por un ser humano y/o una célula humana derivado de una fuente humana que utiliza repertorios de anticuerpos humanos u otras secuencias que codifica anticuerpos humanos. Esta definición de un anticuerpo humano excluye específicamente un anticuerpo humanizado que comprende residuos de unión al antígeno no humano.

Un "anticuerpo desnudo" se refiere a un anticuerpo qué no está conjugado con un residuo heterologo (por ejemplo, un residuo citotóxico) o radiomarca. El anticuerpo desnudo puede estar presente en una formulación farmacéutica.

"Anticuerpos nativos" se refieren a moléculas de inmunoglobulina naturales con estructuras variadas. Por ejemplo, los anticuerpos IgG nativos son glicoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 dalton, j compuestas de dos cadenas livianas idénticas y dos cadenas pesadas idénticas que están unidas por disulfuro. Desde el extremo N- a C-terminal, cada cadena pesada tiene una región variable (VH) , también llamada un dominio pesado variable o uní dominio variable de la cadena pesada, seguida por tres dominios constantes (CHl, CH2, y CH3). De modo similar, desde el! extremo N- a C-terminal, cada cadena liviana tiene una región variable (VL) , también llamada dominio liviano variable o un dominio variable de la cadena pesada, seguido por un dominio liviano constante (CL) . La cadena liviana de un1 anticuerpo se puede asignar a uno de dos tipos, llamados I ! i kappa (?) y lambda (?) , sobre la base de las secuencias de aminoácidos de su dominio constante. i i ; "Afinidad" se refiere a la fuerza de la suma total de ¡ interacciones no covalentes entre un solo sitio de unión de ¡ una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y su compañero I de ·! unión (por ejemplo, un antigeno). A menos que se indique I de j otro modo, como se usa en la presente, la "afinidad de unión" se refiere a afinidad de unión intrínseca que refleja i una interacción 1:1 entre los miembros de un par de unión i (por ejemplo, anticuerpo y antígeno).La afinidad de una I molécula X por su pareja Y en general se puede representar con una constante de disociación (Kd) . La afinidad se puede I I medir por métodos comunes en la técnica, que incluyen los que se ! describen en la presente. Los ejemplos de realizaciones I ilustrativas y especificas para medir la afinidad de unión se I describen a continuación. i i Un anticuerpo de "afinidad madura" se refiere a un anticuerpo con una o más alteraciones en una o más de sus hipervariables (HVR) , en comparación con un original que no posee estas alteraciones, tales alteraciones producen una mejora de la afinidad del I I anticuerpo por el antígeno. j ¡¦ Un anticuerpo que tiene una "característica I biológica" de un anticuerpo denominado es uno que posee una o ! más de las características biológicas de este anticuerpo que se distinga de otros anticuerpos que se unen al mismo antigeno .

Un "sitio de unión al antigeno funcional" de un anticuerpo es que uno que es capaz de unirse a un antigeno blanco. La afinidad de unión al antigeno del sitio de unión al j antigeno no es necesariamente tan fuerte como en el anticuerpo original del que deriva el sitio de unión al antígeno, pero la capacidad de unirse al antigeno debe ser medible mediante alguno de una variedad de métodos conocidos para evaluar la unión del anticuerpo a un antigeno. Además, la afinidad de unión al antigeno de cada uno de los sitios de unión al antigeno de un anticuerpo multivalente en la presente no necesitan ser cuantitativamente iguales. En los anticuerpos multiméricos de la presente, se puede evaluar el número de sitios de unión al antigeno funcional usando el análisis de ultracentrifugación descripto en el Ejemplo 2 de la I Publicación de la Solicitud de Patente U.S. No. 20050186208. De acuerdo con este método de análisis, se combinan diferentes relaciones de antigeno blanco al anticuerpo multimérico y se calcula el peso molecular promedio de los complejos asumiendo números diferentes de sitios de unión funcionales. Estos valores teóricos se comparan con los valores experimentales reales obtenidos a fin de evaluar el número de sitios de unión funcional.

Un "anticuerpo dependiente de la especie" es uno que tiene mayor afinidad de unión por un antigeno de una primera especie de mamífero que la que tiene por un homólogo de ese antígeno proveniente de una segunda especie de mamífero. Normalmente, el anticuerpo dependiente de la especie "se une específicamente" a un antígeno humano (es decir, tiene un valor de constante de afinidad (Kd) de no más de aproximadamente 1 x 10"7 M, con preferencia no más de o aproximadamente 1 x 10~ y con máxima preferencia no más de aproximadamente 1 x 10~9 M) pero tiene una afinidad de unión para un homólogo del antígeno de una segunda especie mamifera no humana que es al menos aproximadamente 50 veces, o al merlos aproximadamente 500 veces, o al menos aproximadamente 1000 veces, más débil que su afinidad de unión para el antígeno humano. El anticuerpo dependiente de la especie puede ser cualquiera de los diversos tipos de anticuerpos definidos anteriormente. En algunas formas de realización, el anticuerpo dependiente de la especie es un anticuerpo humanizado o humano.

Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido separado de un componente de. su ambiente natural. En algunas formas de realización, un anticuerpo se purifica a más del 95% o 99% de pureza determinado, por ejemplo, por métodos electroforéticos (por ejemplo, SDS-PAGE, isoelectroenfoque (IEF), eletroforesis capilar) o cromatográficos (por ejemplo, intercambio iónico o fase inversa HPLC) . Para la revisión de los métodos para la evaluación de la pureza del anticuerpo, ver, por ejemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).

El término "sustancialmente similar" -o I "sustancialmente igual", como se usa en la presente, se refiere a un grado suficientemente alto de semejanza entre dos valores numéricos (por ejemplo, uno asociado con un anticuerpo y el otro asociado con un anticuerpo de referencia/comparador) , de modo que los expertos en la i técnica consideren que la diferencia entre los dos valores es de poca o ninguna significación biológica y/o estadística dentro del contexto de la característica biológica medida por dichos valores (por ejemplo, valores de Kd) .

La frase "sustancialmente reducido" o "sustancialmente diferente, " como se usa en la presente, indica un grado suficientemente alto de diferencia entre dos valores numéricos (generalmente, uno asociado con una molécula y el otro asociado con una molécula de referencia/comparadora) , de modo que los expertos en la técnica consideren que la diferencia entre los dos valores tiene significación estadística dentro del contexto de la característica biológica medida por dichos valores (por ejemplo, valores de Kd) .

Las "funciones efectoras" del anticuerpo se refieren a las actividades biológicas atribuibles a la región Fe,i que varían con el isotipo del anticuerpo. Los ejemplos de las funciones efectoras del anticuerpo incluyen: unión a Clq y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) ; unión al receptor de Fe; citotoxicidad mediada por células dependiente del anticuerpo (ADCC) ; fagocitosis; regulación por disminución de los receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de células B) ; y activación de células B.

; Un "inmunoconjugado" es un anticuerpo conjugado con una o más moléculas heterólogas que incluyen pero sin limitación un agente citotóxico.

El término "agente citotóxico" como se usa en la présente se refiere a una sustancia que inhibe o impide una función celular y/o causa muerte o destrucción celular, .LOS agentes citotóxicos incluyen, pero sin limitación, los I isótopos radiactivos (por ejemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 y los isótopos radiactivos de Lu) , agentes o fármacos quimioterapéuticos (por ejemplo, metotrexato, adriamicina, alcaloides de vinca (vincristina, vinblastina, etopósido) , doxorrubicina, melfalan, mitomicina C, ¡ clorambucilo, daunorrubicina u otros agentes intercalantes, agentes inhibidores del crecimiento; enzimas y sus fragmentos tales como enzimas nucleolíticas , antibióticos; toxinas tales como toxinas de pequeñas moléculas o toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico o animal, que incluyen sus fragmentos y/o variantes, y los diversos agentes antitumorales o anticancerosos que se describen a continuación.

Un "trastorno" es cualquier afección que se debería beneficiar con el tratamiento con una sustancia/molécula o método descripto en la presente. Esto incluye trastornos o enfermedades agudas y crónicas que incluyen las condiciones patológicas, que predisponen al mamífero al trastorno en cuestión. Los ejemplos no limitantes de trastornos tratados en ¡ la presente incluyen tumores malignos y benignos; neoplasias no leucémicas y linfoides; trastornos neuronales, gliales, astrocíticos , hipotalámicos y otros glandulares, de macrófagos, epiteliales, estromales y blastocélicos ; y trastornos inflamatorios, inmunológicos y otros relacionados con la angiogénesis . i Los términos "trastorno proliferativo celular" y "trastorno proliferativo" se refieren a los trastornos que se asocian con algún grado de proliferación celular anormal. En una forma de realización, el trastorno proliferativo celular es cáncer . i "Tumor, " como se usa en la presente, se refiere a todo crecimiento y proliferación celular neoplásico, sea maligno benigno, y todas las células y los tejidos precancerosos y cancerosos. Los términos "cáncer" "canceroso" "trastorno proliferativo celular" "trastorno proliferativo" y ""tumor" no son mutuamente exclusivos como se menciona en la presente .

Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren o describen la condición fisiológica de mamíferos que normalmente se caracteriza por el crecimiento/proliferación celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen pero sin limitación, carcinoma, linfoma (por ejemplo, linfoma de Hodgkin y non Hodgkin) , blastoma, sarcoma y leucemia. Los ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen pero sin limitación, cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón de ¡células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma de pulmón, y carcinoma escamoso de pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gastrointestinal, cáncer . pancreático, glioma, cáncer cervical, cáncer ovárico, cáncer hepático, cáncer de vesícula, hepatoma, cáncer de mamas, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas salivares, cáncer de riñon, cáncer hepático, cáncer de ; próstata, cáncer vulvar, cáncer tiroideo, carcinoma hepático, leucemia y otros trastornos linfoproliferativos y varios tipos de cáncer de cabeza y cuello. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer triple negativo (ER-, PR-, HER2-) cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de mamas metastásica triple negativo, que incluye cualquier adenocarcinoma triple negativo histológicamente confirmado (ER-, PR-, HER2-) de la mama con enfermedad localmente recurrente o metastásica, por ejemplo, cuando la enfermedad localmente recurrente no es pasible de resección con intento curativo.

! Por "metástasis" se entiende la difusión del cáncer desde su sitio primario a otros lugares del cuerpo. Las células cancerosas pueden desprenderse de un tumor primario, penetrar en los vasos linfáticos y sanguíneos, circular a través del torrente sanguíneo, y crecer en un foco distante (metastizar) en tejidos normales en otra parte del cuerpo. La metástasis puede ser local o distante. La metástasis es un proceso secuencial, contingente sobre las células tumorales qué se desprenden del tumor primario, se desplazan a través del torrente sanguíneo, y se detienen en un sitio distante. En el nuevo sitio, las células establecen una irrigación sanguínea y pueden crecer para formar una masa peligrosa para la! vida. Ambas vías estimulatorias e inhibitorias de las células tumorales regulan este comportamiento, y las interacciones entre la célula tumoral y las células huésped en el sitio distante también son significativas.

Tal como se usa en la presente, "tratamiento" (y sus variaciones gramaticales tales como "tratar" o "tratado") se ! refieren a una intervención clínica para intentar alterar el curso natural del individuo tratado, y se puede realizar por prevención o durante el curso de la patología clínica. Los efectos deseables del tratamiento incluyen, pero sin limitación, prevenir la aparición o la recurrencia de la enfermedad, el alivio de los síntomas, la disminución de cualquiera consecuencia patológica directa o indirecta de la enfermedad, prevenir metástasis, disminuir la velocidad del progreso de la enfermedad, aliviar y paliar el estado de enfermedad, y la remisión o el mejoramiento del pronóstico. En algunas formas de realización, los anticuerpos de la invención se usan para retrasar el desarrollo de una enfermedad o trastorno o para frenar la progresión de una enfermedad .

Una "cantidad efectiva" de un agente, por ejemplo, una formulación farmacéutica, se refiere a una cantidad efectiva, en dosis y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico o profiláctico deseado.

Una "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a :una cantidad de un agente terapéutico para tratar o prévenir una enfermedad i trastorno en un mamífero. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente efectiva del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño primario del tumor; inhibir (es decir, retardar en alguna medida o detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, retardar en alguna medida y con preferencia "detener) la metástasis tumoral; inhibir, en alguna medida, el crecimiento del tumor y/o aliviar en alguna medida uno o más síntomas asociados con el trastorno. En la medida que el fármaco pueda evitar el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para la terapia del cáncer, se puede medir la eficacia in vivo, por ejemplo, por la evaluación de la duración de la supervivencia, tiempo a la progresión de la enfermedad (TTP) , las tasas de respuesta (R ) , duración de la respuesta, y/o calidad de vida.

Un "individuo" o "sujeto" es un mamífero. Los mamíferos incluyen pero sin limitación, animales domesticados (por ejemplo, vacas, ovejas, gatos, perros y caballos), primates (por ejemplo, seres humanos y primates no humanos tales como monos), conejos, y roedores (por ejemplo, ratones y ratas. En ciertas formas de realización, el individuo o sujeto es un ser humano.

El término "terapia anti-cáncer" se refiere a una terapia útil para tratar el cáncer. Los ejemplos de agentes terapéuticos (agentes anti-cáncer) incluyen, pero sin limitación, por ejemplo, agentes quimioterapéuticos , agentes inhibidores del crecimiento, agentes citotóxicos, agentes usados en la terapia de radiación, agentes anti-angiogénesis , agentes apoptóticos, agentes anti-tubulina y otros agentes para tratar cáncer, anticuerpos anti-CD20, inhibidores del factor derivado de plaquetas (por ejemplo, Gleevec™ (Imatinib Mesilato) ) , un inhibidor de COX-2 (por ejemplo, celecoxib) , interferones , citoquinas, antagonistas {por ejemplo, anticuerpos neutralizantes) que se unen a uno o más de los siguientes blancos PDGFR-beta, BlyS, APRIL, receptores de BCMA, TRAIL/Apo2, y otros agentes químicos bioactivos y orgánicos, etc. Sus combinaciones también están incluidas en la invención El término "agente citotóxico" como se usa en la présente se refiere a una sustancia que inhibe o impide una función celular y/o causa muerte o destrucción celular. El término incluye los isótopos radiactivos (por ejemplo, At211, I13 , I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 y los isótopos radiactivos de Lu) , agentes quimioterapéuticos (por ej emplo, metotrexato, adriamicina, alcaloides de vinca (vincristina, vinblastina, etopósido) , doxorrubicina, melfalan, mitomicina C, clorambucilo, daunorrubicina u otros agentes de intercalantes, enzimas y sus fragmentos tales como enzimas nucleolíticas, antibióticos y toxinas tales como toxinas de pequeñas moléculas o toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico o animal, que incluyen sus fragmentos y/o variantes, y los diversos agentes antitumorales o anticancerosos que se describen a continuación. Otros agentes citotóxicos se describen a continuación. Un agente tumoricida causa la destrucción de las células tumorales.

Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil para el tratamiento del cáncer. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclosfosfamida (CYTOXAN®) ; alquilsulfonatos tales como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa, y uredopa; etileniminas y metilamelaminas que incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, I trietilentiofosforamida y trimetilmelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona ) ; delta-9-tetrahidrocannabinol (dronabinol, MARINOLO) ; beta-lapachona ; lapachol; colchicinas; ácido betulínico; una camptotecina (que incluye el análogo sintético de topotecano (HYCAMTIN®) , CPT-11 (irinotecano, CAMPTOSAR®) , acetilcamptotecina , escopolectina y 9-aminocamptotecina) ; briostatina; calistatina; CC-1065 (que incluyen sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina) ; podofilotoxina; ácido podofilínico; tenipósido, criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina ; duocarmicina (qüe incluyen los análogos sintéticos, KW-2189 y CB1-TM1); eleutherobina; pancratistatina; una sarcodictiína; espongistatina; mostazas nitrogenadas tales como i clórambucilo, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalan, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida , mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimustina antibióticos tales como los antibióticos de enediina (por ejemplo, calicheamicina, especialmente calicheamicina gammall y calicheamicina omegall (vér, por ejemplo, Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); CDP323, un inhibidor de alfa-4 integrina oral; dinemicina, que incluyen dinemicina A; una esperamicina; asi como cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos de antibiótico enediina cromoproteina relacionados) , aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azáserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomícina , carzinofilina , cromomicinas , dactinomicina , daúnorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (que incluyen ADRIAMICINA®, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, inyección liposómica de doxorrubicina HC1 (DOXIL®) , doxorrubicina TLC D-99 liposómica ( YOCET®) , doxorrubicina liposómica pegilada (CAELYX®) , y deoxidoxorrubicina) , epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas tal como mitomicina C, ! ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas , peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina; anti-metabolitos tales como metotrexato, gemcitabina (GEMZAR®) , tegafur (UFTORAL®) , capecitabina (XELODA®) , un epotilón, y 5-fluorouracilo (5-FU)i; combretastatina; análogos de ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos tales como calusterona, propirionato de dromostanolona , epitiostanol , mepitiostano, testolactona ; anti-adrenales tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; restaurador de ácido fólico tal como ácido froliinico; aceglatona; glicósido de aldofosfamida; ácido aminolevulinico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etóglucido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinana; lonidainina; maytansinoides tales como maytansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona ; mopidanmol; nitraerina; pentostatina ; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; 2-etilhidrazida; procarbazina;¦ complejo de polisacáridos PSK® (JHS Natural Products, Eugene, 0) ; razoxana; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico, triaziquona; 2, 2' , 2' -triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina) ; uretano; vindesina (ELDISINE®, FILDESIN®) ; dacarbazina; mannomustina; mitobronitol ; mitolactol; pipobroman; gacitosina arabinoósido ("Ara-C"); tiotepa; taxoide, por ejemplo, paclitaxel (TAXOL®) , formulación en nanoparticulas de albúmina manipuladas genéticamente de paclitaxel (ABRAXANE™) , y docetaxel (TAXOTERE®) ; cloranbucilo ; 6-tioguanina ; mercaptopurina ; metotrexato; agentes de platino tales como cisplatino, oxaliplatino (por ejemplo, ELOXATIN®) , y carboplatino; vincas, que impiden la polimerización de tubulina a partir de la formación de microtúbulos , que incluyen vinblastina (VELBAN®) , vincristina (ONCOVIN®) , vindesina (ELDISINE®, FILDESIN®) , y vinorelbina (NAVELBINE®) ; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantroña ; leucovorina; novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; ibandronato; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO) ; retinoides tales como ácido retinoico, que incluyen bexaroteno (TARGRETIN®) ; bisfosfonatos tales como clodronato (por ejemplo, BONEFOS® o OST(AC®) , etidronato (DIDROCAL®) , NE-58095, ácido zoíedrónico/zoledronato (ZOMETA®) , alendronato (FOSAMAX®), pamidronato (AREDIA®) , tiludronato (SKELID®) , o risedronato (AGTONEL®) / troxacitabina (un análogo de citosina nucleosidico de 1, 3-dioxolano) ; oligonucleótidos antisentido, en ; particular los que inhiben la expresión de los genes en las vías de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, tal como, por ejemplo, PKC-alfa, Ra f , H-Ras, y receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF-R) (por ejemplo, erlotinib (Tarceva™) ) ; vacunas tales como vacuna THERATOPE® y vacuna de terapia génica, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN®, y vacuna VAXID®; inhibidor de topoisomerasa 1. (por ejemplo, LURTOTECAN®) ; rmRH (por ejemplo, ABARELIX®) ; BAY439006 (sorafenib; Bayer) ; SU-11248 (sunitinib, SUTENT®, Pfizer) ; perifosina, inhibidor de COX-2 (por ejemplo, celecoxib o etoricoxib) , inhibidor de proteosoma (por ejemplo, PS341); bortezomib (VELCADE®) ; CCI-779; tipifarnib (R11577); orafenib, ABT510; inhibidor de Bcl- 2 ¡tal como oblimersen de sodio ( GENASENSE®) ; pixantrona; inhibidores de EGFR ; inhibidor de tirosina quinasas (ver definición más adelante) ; inhibidores de serina-treonina quinasa tales como rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®) ; inhibidores de farnesiltransferasa tales como lonafarnib (SCH 6636, SARASAR™) ; y sales, ácidos o derivados aceptables para usó farmacéutico de cualquiera de los anteriores; asi como las combinaciones de dos o más de los anteriores tales como CHOP, una abreviatura para una terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, y prednisolona; y FOLFOX, una abreviatura para el régimen de tratamiento con oxáliplatino (ELOXATIN™) combinado con 5-FU y leucovorina. j I Los agentes quimioterapéuticos definidos en la présente incluyen "agentes anti-hormonales" o "agentes terapéuticos endocrinos" que actúan para regular, reducir, bloquear o inhibir los efectos de las hormonas que puedan promover el crecimiento del cáncer. Estas pueden ser las hormonas mismas, que incluyen pero sin limitación: antiestrógenos con perfil de agonista/antagonista mixto, que i incluyen, .por ejemplo, tamoxifeno (que incluyen NOLVADEX® i I tamoxifeno) , 4-hidroxitamoxifeno, torremifeno FARESTON; (FARESTON®), idoxifeno, droloxifeno, raloxifeno (EVISTA®) , trioxifeno, keoxifeno, y moduladores del receptor selectivo de j estrogeno (SERM) tales como SERM3; ant?-estrogenos puros sirl propiedades agonistas, tales como fulvestrant i (FASLODEX®), y EM800 (tales agentes pueden bloquear la dimerización del receptor de estrogeno (ER) , inhibir la unión i de¡ADN, aumento del recambio de ER, y/o suprimir los niveles I dejER); inhibidores de aromatasa, que incluyen inhibidores de aromatasa esteroides tales como formestano y exemestano (AROMASIN®) , e inhibidores de aromatasa no esteroides tales I como anastrazol (ARI IDEX®) , letrozol (FEMARA®) y i I aminoglutetimida y otros inhibidores de aromatasa incluyen vorozol (RIVISOR®) , acetato de megestrol (MEGASE®) , fadrozol, y ( 5 ) -imidazoles ; agonistas de hormona liberadora de hormona lulíeinizante,. que incluye leuprolida (LUPRON® y ELIGARD®) , i goserelina, buserelina, y tripterelina; esteroides sexuales, que incluyen progestinas tales como acetato de megestrol y acetato -de medroxiprogesterona, estrógenos tales como diétilstilbestrol y premarina, y andrógenos/retinoides tales como fluoximesterona, todo el ácido transretiónico y fenretinida; onapristona; anti-progesteronas ; reguladores de disminución del receptor de estrógeno (ERD) ; anti-andrógenos tales como flutamida, nilutamida y bicalutamida; y sales, ácidos o derivados farmacéuticamente aceptables de alguno de los anteriores; asi como las combinaciones de dos o más de los anteriores.

! El término "profármaco" como se usa en esta solicitud se refiere a una forma precursora o derivada de una sustancia activa para uso farmacéutico que es menos citotóxica para las células tumorales que el fármaco original y es capaz de activarse enzimáticamente o convertirse en la forma original más activa. Ver, por ejemplo, Wilma, 1986) "Prodrugs in Cáncer Chemotherapy" Biochemical Society Tránsactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast y Stella et ¡ al. (1985). "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drúg Delivery, " Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed. ) , pp. 247-267, Humana Press. Los profármacos de esta invención incluyen pero sin limitación, profármacos que contienen fosfato, profármacos que contienen tiofosfato, i profármacos que contienen sulfato, profármacos que contienen ¦péptidos, profármacos modificados con D-aminoácidos , profármacos glicosilados, profármacos que contienen ß-lactama, profármacos que contienen fenoxiacetamida opcionalmente sustituida o profármacos que contienen fenilacetamida opcionalmente susituida, 5-fluorocitosina y otros profármacos de 5-fluorouridina que se pueden convertir en 1 el fármaco libre citotóxico más activo. Los ejemplos de fármacos citotóxicos que pueden derivar en una forma de profármaco para usar en esta invención incluyen pero sin limitación, los agentes quimioterapéuticos descriptos antíeriormente .

Un "agente inhibidor del crecimiento" cuando se usa en¦ la presente se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula (por ejemplo, una célula cuyo crecimiento depende de la activación de HGF/c-met sea in vitro o in vivo) . En consecuencia, el agente inhibidor del crecimiento puede ser uno que reduce en forma significativa el 'porcentaje de las células dependientes de HGF/c-met en la fase S) . Los ejemplos de agentes inhibidores del crecimiento incluyen agentes que bloquean el avance del ciclo celular (en un lugar diferente que la fase S) , tal como agentes que inducen la detención de Gl y la detención de la fase M. Los bloqueadores clásicos de la fase incluyen las vincas (vincristina y vinblastina) , taxanos e inhibidores de la topoisomerasa II tales como doxorrubicina, epirrubicina, daunorrubicina, etopósido, y bleomicina. Estos agentes que también se extienden a la detención de la fase S, , los agentes alquilantes de ADN tales como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, ci platino, metotrexato, 5-fluorouracilo, y ara-C.

Información adicional se puede hallar en Mendelsohn y Israel, i eds . , The Molecular Basis of Cáncer, Capitulo 1, titulado "Céll cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" de! Murakami et al. (W.B. Saunders, Filadelfia 1995), por i ejemplo, p. 13. Los taxanos (paclitaxel y docetaxel) son fármacos anticáncer derivados del árbol tejo. Docetaxel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer) , derivado del tejo europeo, es ! un análogo semisintético de paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb) . Paclitaxel y docetaxel promueven el ensamblaje de ¡ los microtúbulos a partir de los dimeros de tubulina y estabilizan los microtúbulos al impedir la despolimerización, que produce la inhibición de la mitosis en las células.

! Por "terapia de radiación" se entiende el uso de i rayos gamma o rayos beta dirigido para inducir daño suficiente a una célula para limitar su capacidad de actuar normalmente o destruir las células juntas. Se apreciará que muchas maneras conocidas en la técnica para determinar la dosis y duración del tratamiento. Los i tratamientos típicos se dan como una administración de tiempo y ías dosis típicas varían de 10 a 200 unidades (Grays) por día . i El término "en forma concurrente" se usa en la presente para referirse a la administración de dos o más agentes terapéuticos, donde al menos parte de la administración se superpone en el tiempo. Por consiguiente, i i la ¡ administración concurrente incluye un régimen de dosis cuando la administración de uno o más aqentes continúa I después de discontinuar la administración de uno o más agentes diferentes.

¡ Por "reducir o inhibir" se entiende la capacidad de causar una disminución total de 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, ' 95%, o mayor. Reducir o inhibir puede referirse a los síntomas del trastorno tratado, la presencia o tamaño de metástasis, o el tamaño del tumor primario.

I El término "prospecto" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de los productos terapéuticos, que contienen información acerca de las indicaciones, uso, dosis, administración, terapia de combinación, contraindicaciones y/o advertencias concernientes al uso de tales productos terapéuticos.

Se entiende que el aspecto y las formas de realización de la invención descriptas en la presente incluyen "que consiste" y/o "que consiste esencialmente en" los aspectos y formas de realización.

Como se usa en la presente, la forma singular "un", "una", y "el/la" incluye referencias plurales a menos que indique de otro modo.

Como es entendido por los expertos en la técnica, la referencia a "aproximadamente" un valor o parámetro de la presente incluye (y describe) formas de realización que se dirigen' a este valor o parámetro per se. Por ejemplo, la descripción que se refiere a "aproximadamente X" incluye la descripción de "X" .

Formulaciones farmacéuticas En la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprende un anticuerpo anti-c-met. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida estable. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met monovalente. La minimización de la formulación farmacéutica de la agregación del anticuerpo anti-c-met es particularmente importante. Se ha demostrado que las formas bivalentes de anticuerpos anti-c-met promueven la dimerización y llevan a la activación de c-met (función agonista), mientras que a la inversa los anticuerpos monovalentes inhiben la actividad c-met (función antagonista) . La agregación de los anticuerpos monovalentes (formación de multimeros y oligómeros) y/o falla para mantener la estructura monovalente de una formulación farmacéutica que comprende anticuerpos anti-c-met puede produce un efecto agonista no deseable.

En particular, en la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprenden (a) un anticuerpo anti-c-met y (b) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met; (b) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v; y (c) un buffer de histidina (por ejemplo, un buffer de histidina a un pH entre 5,0 y 5,4) . En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) un sacárido; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liquida estable.

Los anticuerpos anti-c-met útiles en las formulaciones farmacéuticas se describen en la Sección III. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met monovalente. Por ejemplo, en algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una rama de unión al antigeno única. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una rama de unión al antigeno única y comprende una región Fe, donde la región Fe comprende un primer y un segundo polipéptido de Fe, donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo. En algunas formas de realización, el primer y segundo polipéptido de Fe forma una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una HVR-Ll que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID N0:1, una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3, una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4, una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5, y a HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19 y (b) un dominio variable de la cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un primer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19, una secuencia de CH1, y un primer polipéptido de Fe, (b) un segundo polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y secuencia de CL1, y (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe. En algunas formas de realización, el primer polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NO: 17) y el segundo polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3 (SEQ ID NO: 18) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es onartuzumab .

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas descriptas en la I presente, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica está presente en una concentración entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml. En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) es entre aproximadamente alguno de 10 mg/ml a 50 mg/ml, 10 mg/ml a 75 mg/ml, 25 mg/ml a 75 mg/ml, 50 mg/ml a 100 mg/ml, 50 mg/ml a 75 mg/ml, y/o 75 mg/ml a 100 mg/ml. En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met {por ejemplo, onartuzumab) es mayor de aproximadamente alguno de 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, o 100 mg/ml. Por ejemplo, en algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) un sacárido; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v. En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) es menor de aproximadamente alguno de 150 mg/ml, 125 mg/ml, 100 mg/ml, o 75 mg/ml. En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) es aproximadamente alguno de 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, o 80 mg/ml. En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) es aproximadamente 60 mg/ml.

La formulación farmacéutica con preferencia comprende un polisorbato. El polisorbato se incluye generalmente en una cantidad que reduce la formación de agregado (tal como el que se puede produce después de la agitación o transporte) . Los ejemplos de polisorbato incluyen, pero sin limitación, polisorbato 20 (monolaurato de polioxietilen (20) sorbitano) , polisorbato 40 (monopalmitato de polioxietilen (20) sorbitano) , polisorbato 60 (monoestearato de polioxietilen (20) sorbitano), y/o polisorbato 80 (monooleato de polioxietilen (20) sorbitano) . En algunas formas de realización, el polisorbato es polisorbato 20 (monolaurato de polioxietilen (20) sorbitano) . En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente, la concentración de polisorbato es suficiente para minimizar la agregación y/o mantener la estabilidad después del almacenamiento a largo plazo y/o durante la administración (por ejemplo, después de la dilución en una bolsa IV) . En algunas formas de realización, la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v, mayor de o igual a aproximadamente 0,03% p/v, o mayor de o igual a aproximadamente 0,04% p/v. En algunas formas de realización, la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v y menor de aproximadamente 0,1% p/v. En algunas formas de realización, la concentración de polisorbato es mayor de 0,03% p/v y menor de aproximadamente 0,1% p/v. En algunas formas de realización, la concentración de polisorbato es aproximadamente cualquiera de 0,03% p/v, 0,04% p/v, o 0,05% p/v. En algunas formas de realización, el polisorbato está presente en una concentración de aproximadamente 0,04% p/v. Por ejemplo, en algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) ; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) sacárido; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es aproximadamente 0,04% p/v.

La formulación farmacéutica con preferencia comprende un sacárido. Los sacáridos incluyen monosacáridos, disacáridos, trisacáridos , polisacáridos, alcoholes de azúcar, azúcares reductores, azúcares no reductores, etc. Otros ejemplos de sacáridos incluyen, pero sin limitación, glucosa, sacarosa, trehalosa, lactosa, fructosa, maltosa, dextrano, glicerina, dextrano, eritritol, glicerol, arabitol, silitol, sorbitol, manitol, mellibiosa, melezitosa, rafinosa, manotriosa, estaquiosa, maltosa, lactulosa, maltulosa, glucitol, maltitol, lactitol, iso-maltulosa, etc. En algunas formas de realización, el sacárido es un disacárido. En algunas formas de realización, el sacárido es un disacárido no reductor. En algunas formas de realización, el sacárido es trehalosa. En algunas formas de realización, el sacárido es sacarosa. Por ejemplo, en algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) ; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) sacarosa; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v.

El sacárido generalmente se incluye en una cantidad que reduce la formación del agregado. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente, el sacárido está presente en una concentración de entre aproximadamente cualquiera de 50 mM a 250 mM, 75 mM a 200 mM, 75 mM a 150 mM, 100 mM a 150 mM, o 110 mM a 130 mM. En algunas formas de realización, el sacárido está presente en una concentración mayor de aproximadamente cualquiera de 50 mM, 75 mM, 100 mM, 110 mM, o 115 mM. En algunas formas de realización, el sacárido está presente en una I concentración de aproximadamente cualquiera de 100 mM, : 110 mM, 120 mM, 130 mM, o 140 mM. En algunas formas de realización, el sacárido está presente en una ¦ concentración de aproximadamente 120 mM. Por ejemplo, en algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) ; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) sacarosa, donde la sacarosa está presente en una concentración de aproximadamente 120 mM; y (d) un ¦ polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v.

La formulación farmacéu ica con preferencia ; comprende un buffer de histidina. Los ejemplos de buffer de histidina incluyen, pero sin limitación, cloruro de histidina, succinato de histidina, acetato de histidina, fosfato de histidina, sulfato de histidina. En algunas ' formas de realización, el buffer de histidina es acetato de histidina. En algunas formas de realización de ¦ cualquiera de las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente, el buffer de histidina concentración es entre aproximadamente cualquiera de 1 mM a 50 mM, 1 mM a 35 mM, 1 mM a 25 mM, 1 mM a 20 mM, 7,5 mM a 12,5 mM, o 5 mM a 15 mM. En algunas formas de realización, el buffer de histidina concentración es mayor de o igual a aproximadamente cualquiera de 5 mM, 7,5 mM, o 10 mM. En algunas formas de realización, el buffer de histidina concentración es aproximadamente cualquiera de 5 mM, 7,5 mM, 10 mM, 12,5 mM, o 15 m . En algunas formas de realización, el buffer de histidina concentración es aproximadamente 10 mM. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente, el buffer de histidina está a un pH entre pH 5,0 y 5,4, por ejemplo, aproximadamente cualquiera de pH 5,0, pH 5,1, pH 5,2, pH 5,3, o pH 5,4. En algunas formas de realización, el pH es entre pH 5,1 y 5,4. Por ejemplo, en algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) ; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 mM; (c) sacárido; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v.

En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 60 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración de aproximadamente 120 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es aproximadamente 0,04% p/v.

La formulación farmacéutica en la presente también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular tratada, con preferencia los que tienen actividades complementarias que no se afectan adversamente entre si. Tales moléculas están presentes adecuadamente en combinación en cantidades que son efectivas para el fin deseado, i Además, en la presente se proporcionan viales ! y métodos de cargado de un vial que comprende una formulación farmacéutica descripta en la presente. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica se proporciona dentro de un vial con un tapón perforable por una jeringa, con preferencia en forma acuosa. El vial se conserva en forma conveniente a aproximadamente 2-8°C asi como hasta 30°C durante 24 horas hasta que se administra a un sujeto que lo necesita. El vial puede ser, por ejemplo un vial de 15 ce (por ejemplo para una dosis de 600 mg) o vial de 20 ce (por ejemplo, para una dosis de 900 mg) .

La formulación farmacéutica para administración es con preferencia una formulación liquida (no liofilizada) y no ha sido sometida a liofilización previa. Si bien la formulación farmacéutica puede estar liofilizada, con preferencia no lo es. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica, la formulación farmacéutica es una formulación farmacéutica liofilizada. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es una formulación liquida. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica no contiene una cantidad tonificante de una sal tal como cloruro de sodio. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones f rmacéuticas, la formulación farmacéutica está diluida.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met es estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met está físicamente estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met está químicamente estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met está físicamente estable y químicamente estable. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende un anticuerpo anti-c-met antagonista y actividad agonista de la formulación farmacéutica es sustancialmente no detectable. Los métodos de detectar la actividad agonística y/o agonista son conocidos en la técnica, por ejemplo, Patente U.S. No. 6.207.152, que se incorpora por referencia en su totalidad. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica es sustancialmente no inmunogénica .

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica no produce significativamente aumento de la formación del agregado después del almacenamiento a aproximadamente 40°C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica tiene niveles reducidos o más bajos de la formación del agregado después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año [por ejemplo, en comparación con una formulación similar a pH 5,7).

Las especies de peso molecular alto (HM S) son generalmente más grandes que la molécula de referencia. Por ejemplo, onartuzumab es aproximadamente 100 kDa (99,161 Daltons) , en consecuencia, una HMWS es mayor de aproximadamente 100 kDa. El tamaño de un anticuerpo bivalente es aproximadamente 150 kDa y un dimero de onartuzumab es aproximadamente 200 kDa. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica comprende menor de aproximadamente cualquiera de 1,5%, 1,25%, 1%, 0,75%, 0,5%, 0,25%, 0,20% o 0,15% HMWS (por ejemplo, después del almacenamiento) . En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica no aumenta significativamente el porcentaje de HMWS después del almacenamiento a aproximadamente 40°C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25°C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20°C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica tiene niveles reducidos o más bajos de HMWS después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25°C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año (por ejemplo, en comparación con una formulación similar a pH 5,7). En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica no aumenta significativamente el porcentaje de HMWS después del almacenamiento a aproximadamente 40°C durante aproximadamente cualquiera de 15 días, 30 dias, 45 días, o 60 días o a aproximadamente 25°C durante aproximadamente 30 días o aproximadamente 60 días. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica tiene niveles reducidos o más bajos de HMWS después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente cualquiera de 15 días, 30 días, 45 días, o 60 días o a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente 30 días o aproximadamente 60 días (por ejemplo, en comparación con una formulación similar a pH 5,7) .

Las especies de peso molecular baja (LMWS) son generalmente menores que la molécula de referencia. Por ejemplo, onartuzumab es aproximadamente 100 kDa (99,161 Dalton) , en consecuencia, un LMWS es menor de aproximadamente 100 kDa. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica no aumenta significativamente la degradación y/o porcentaje de LMWS después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente - 20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año (por ejemplo, en comparación con una formulación similar a pH 5,7) . En ¡ algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica no aumenta significativamente la degradación y/o ! porcentaje de L WS después del almacenamiento a i ] aproximadamente 40 °C durante aproximadamente cualquiera de 15 días, 30 dias, 45 días, o 60 dias, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente 30 dias o i i aproximadamente 60 dias (por ejemplo, en comparación con una formulación similar a pH 5,7) .

En algunas formas de realización de cualquiera ¡ de las formulaciones farmacéuticas, el porcentaje de ! polisorbato intacto en la formulación farmacéutica es mayor de aproximadamente cualquiera de 75%, 80%, 85%, o ¡ 90% después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C I i durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a · aproximadamente 25°C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año. En algunas formas de realización de, el porcentaje de polisorbato intacto en la formulación farmacéutica es mayor de aproximadamente cualquiera de 75%, 80%, 85%, o 90% después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente cualquiera de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, u ocho semanas.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, el porcentaje de polisorbato degradado en la formulación farmacéutica es menor de aproximadamente cualquiera de 25%, 20%, 15%, o 10% después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro semanas, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente seis meses, o aproximadamente un año. En algunas formas de realización, el porcentaje de polisorbato degradado en la formulación farmacéutica es ? I menor de aproximadamente cualquiera de 25%, 20%, 15%, o j 10% después del almacenamiento a aproximadamente 40 °C I j durante uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, u ¡ ocho semanas.

' En algunas formas de realización, la relación del polisorbato degradado a polisorbato intacto en la j formulación farmacéutica es menor de aproximadamente I ! cualquiera de 0,25, 0,20, 0,15 o 0,10 después del ¡ almacenamiento a aproximadamente 40 °C durante i aproximadamente dos semanas o aproximadamente cuatro I i semanas, a aproximadamente 25 °C durante aproximadamente ¡ un mes o aproximadamente tres meses; a aproximadamente i i 5°C durante aproximadamente seis meses, aproximadamente i i j un año, o aproximadamente dos años, y/o aproximadamente -i 20 °C durante aproximadamente tres meses, aproximadamente j i seis meses, o aproximadamente un año. En algunas formas de realización, la relación del polisorbato degradado a I ! polisorbato intacto en la formulación farmacéutica es menor de aproximadamente cualquiera de 0,25, 0,20, 0,15 o 0,10 después del almacenamiento a aproximadamente 40°C j durante aproximadamente cualquiera de uno, dos, tres, J cuatro, cinco, seis, siete, u ocho semanas. En algunas ! formas de realización, la formulación farmacéutica que ¡ comprende el anticuerpo anti-c-met es más estable que una formulación similar a pH 5,7 y/o con una concentración de polisorbato de 0,02% o menos.

Además, la formulación farmacéutica es de modo conveniente una que ha demostrado ser estable después del almacenamiento y/o durante la administración (por ejemplo, después de la dilución en una bolsa IV) . Los profesionales expertos disponen de varios ensayos de estabilidad para confirmar la estabilidad de la formulación. Por ejemplo, la formulación puede ser una i ! que se halla en forma estable después del almacenamiento: ¡ a aproximadamente 25 °C durante al menos aproximadamente un mes o al menos aproximadamente tres meses, aproximadamente 5°C durante al menos aproximadamente seis meses o al menos aproximadamente un año; y/o 1 aproximadamente -20°C durante al menos aproximadamente seis meses o al menos aproximadamente un año. Además, la i formulación farmacéutica con preferencia es estable ¡ después de congelar (a, por ejemplo, -70°C.) y descongelar la formulación farmacéutica. El congelado de la formulación farmacéutica acuosa, sin secado simultáneo que ocurre durante el congelado-secado, está ! específicamente contemplado en la presente, lo que I facilita su almacenamiento a más largo plazo, por ejemplo ! en un tanque de acero inoxidable. El congelado de la ' formulación farmacéutica está específicamente contemplado en la presente. En consecuencia, la formulación farmacéutica se puede analizar en cuanto a la estabilidad después del congelado y descongelado. En otra forma de realización, la formulación se proporciona dentro de un tanque de acero inoxidable. La formulación del tanque de acero inoxidable está opcionalmente congelada y no liofilizada .

La formulación farmacéutica usada para la administración in vivo debe ser estéril. Esto se puede obtener de acuerdo con los procedimientos conocidos por los expertos para generar formulaciones farmacéuticas estériles adecuadas para la administración a sujetos humanos, que incluye filtración a través de membranas de filtración estériles, antes o después de la preparación de la formulación.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met es estable después de la dilución con un diluyente (por ejemplo, solución salina) . Por ejemplo, en la presente se proporcionan bolsas IV que comprenden una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente. En algunas formas de realización, el diluyente es solución salina (por ejemplo, 0,9% de cloruro de sodio). En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met se diluye a aproximadamente cualquiera de 0,5 mg/ml, 1 mg/ml, 1,5 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml o 5 mg/ml . En algunas formas de realización, la concentración del anticuerpo anti-c-met se diluye a entre aproximadamente cualquiera de 0,5-5 mg/ml, 0,5-2,5 mg/ml, o 0,5-1,5 mg/ml. En consecuencia, por ejemplo, en la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprende a) un anticuerpo anti-c-met, donde la concentración del anticuerpo es aproximadamente 1 mg/ml, y (b) un polisorbato, donde la. concentración de polisorbato es mayor de 0,00033% p/v. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met, donde la concentración del anticuerpo es aproximadamente 1 mg/ml; (b) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0, 00033% p/v; (c) un buffer de histidina (por ejemplo, un buffer de histidina a un pH entre 5,0 y 5,4). En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica es estable (por ejemplo, físicamente estable) en una bolsa IV y/o conjunto de administración IV.

En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica (por ejemplo, después de la dilución) es estable después de la agitación durante cualquiera de ! aproximadamente treinta minutos, una hora, 1,5 horas, o dos horas a aproximadamente cualquiera de 75, 100, 125, o 150 rpm. En algunas formas de realización de cualquiera de las formulaciones farmacéuticas, la formulación farmacéutica (por ejemplo, después de la dilución) ¡ comprende menor de aproximadamente cualquiera de 1,5%, 1,25%, 1%, 0,75%, 0,5%, 0,25%, 0,20% o 0,15% de HM S (por ! ejemplo, después de la agitación) . j En la presente también se proporcionan métodos i de obtener una formulación farmacéutica que comprende preparar la formulación que se describe en la presente, En algunas formas de realización, los métodos también comprenden evaluar la estabilidad física, estabilidad ' química, o actividad biológica del anticuerpo anti-c-met en la formulación.

I La estabilidad se puede analizar por la evaluación de la estabilidad física, estabilidad química, ¡ y/o actividad biológica del anticuerpo en la formulación alrededor del momento de la formulación así como después ¡ del almacenamiento, durante la administración, y/o después de la agitación a las temperaturas indicadas La estabilidad física y/o química se puede evaluar en forma cualitativa y/o cuantitativa de una variedad de maneras diferentes, que incluye la evaluación de la formación del I agregado (por ejemplo, usando cromatografía de exclusión por tamaño, por la medición de la turbidez, y/o por la inspección visual) ; por evaluación de la heterogeneidad de la carga usando cromatografía de intercambio iónico o electroforesis capilar en zona; análisis de la secuencia amino-terminal o carboxi-terminal; análisis espectrométrico de masa; análisis de SDS-PAGE para comparar anticuerpo reducido e intacto; análisis del mapa peptídico (por ejemplo, tríptico o LYS-C) ; evaluar la actividad biológica o función de unión al antígeno del anticuerpo; etc. La inestabilidad puede producir la agregación, desamidación (por ejemplo, desamidación de Asn) , oxidación (por ejemplo, oxidación de Me ) , isomerización (por ejemplo, isomerización Asp) , corte/hidrólisis/fragmentación (por ejemplo, fragmentación de la región bisagra) , formación de la succinimida, cisteína no apareada, extensión N-terminal, procesamiento C-terminal, diferencias de glicosilación, etc. La actividad biológica o función de unión al antígeno se puede evaluar usando varias técnicas disponibles para el profesional experto.

Uno o más portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables tales como los descriptos en Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edición, Gennaro, A. Ed. (1990) se pueden incluir en la formulación con la condición de que no afecten adversamente las características deseadas de la formulación. Los portadores, excipientes o estabilizantes aceptables son no tóxicas para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas e incluyen; agentes buffer adicionales; co-solventes ; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina, agentes quelantes tales como EDTA; complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteína) ; polímeros biodegradables tales , como poliésteres; conservantes; y/o contraiones J formadores de sal tales como sodio.

III· Anticuerpos anti-c-met ! En la presente se proporcionan anticuerpos ! anti-c-met para usar en las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente. Los anticuerpos anti-c-met útiles incluyen anticuerpos que se unen con afinidad y especificidad suficiente para c-met y pueden reducir e inhibir una o más actividades de c-met. Los anticuerpos anti-c-met de las formulaciones farmacéuticas se pueden usar para modular uno o más aspectos de los efectos asociados con HGF/c-met, que incluyen, pero sin limitación activación c-met, señalización molecular ; corriente abajo (por ejemplo, fosforilación de la '< proteína quinasa activad por mitógeno (MAPK) ) , ¡ proliferación celular, migración celular, supervivencia I i celular, morfogénesis celular y angiogénesis . Estos efectos se pueden modular por cualquier mecanismo biológicamente relevantes, que incluyen la alteración de la unión del ligando (por ejemplo, HGF) a c-met, fosforilación de c-met y/o multimerización de c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met interfiere en las enfermedades o afecciones donde está involucrada la actividad de c-met/HGF.

En algunas formas de realización de cualquiera de formulaciones de anticuerpo anti-c-met descriptas en la presente, el anticuerpo anti-c-met es un fragmento del anticuerpo anti-c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es monovalente. En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met puede comprender una rama de unión al antigeno única y una región Fe. Los fragmentos de anticuerpo anti-c-met se describen en la presente y son conocidos en la técnica, en el formato de una rama. Por consiguiente, en algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama (es decir, el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena liviana forman una rama de unión al antigeno única) que comprende una '¦ región Fe, donde la región Fe comprende un primer y un segundo polipéptido de Fe, donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo. En algunas formas de realización, el primer y segundo polipéptido de Fe forman una región Fe que aumenta la estabilidad del anticuerpo anti-c-met en comparación con una molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un primer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19, una secuencia de CH1, y un primer polipéptido de Fe y (b) un segundo polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y secuencia de CL1. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met que además comprende (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe.

En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente comprende un sitio de unión al antigeno del anticuerpo bivalente y en consecuencia retiene la capacidad de unirse al antigeno. En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met comprende la región Fe y retiene al menos una de las funciones biológicas normalmente asociadas con la región Fe cuando está presente en un anticuerpo bivalente, tal como la unión a FcRn, modulación de la vida media del anticuerpo, función de ADCC y unión al complemento. En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met no tiene función de ADCC y/o actividad de unión al complemento. En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo monovalente que una vida media in vivo sustancialmente similar a un anticuerpo bivalente. Por ejemplo, tal fragmento de anticuerpo puede comprender la rama de unión con el antigeno ligada a una secuencia de Fe capaz de conferir estabilidad in vivo al fragmento. En algunas formas de realización, un polipéptido de Fe comprende parte o el total de una secuencia bisagra tipo salvaje (generalmente en su extremo N-terminal) . En algunas formas de realización, un polipéptido de Fe no comprende una secuencia bisagra funcional o tipo salvaje. En algunas formas de realización, el fragmento de anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama como se describe en WO2005/063816. En algunas formas de realización, el anticuerpo de una rama comprende mutaciones Fe que constituyen "botones" y "ojales" como se describe en WO2005/063816; Ridgeway, J et al, Prot Eng (1996) 9:617-21; y Zhu Z et al. Prot Sci (1997) 6:781-8. En algunas formas de realización, la región Fe comprende al menos una protuberancia (botón) y al menos una cavidad (ojal) , donde la presencia de la protuberancia y la cavidad aumenta la formación de un complejo entre un polipéptido de Fe que comprende la protuberancia y un polipéptido de Fe que comprende la cavidad, por ejemplo como se describe en WO 2005/063816. En algunas formas de realización, la región Fe de los anticuerpos anti-c-met comprende un primer y un segundo polipéptido de Fe, donde el primer y segundo polipéptido comprende una o más mutaciones con respecto la Fe humana tipo salvaje. En algunas formas de realización, una mutación en la cavidad es T366S, L368A y/o Y407V. En algunas formas de realización, a protuberancia mutación es T366W. En algunas formas de realización, el primer polipéptido comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 y el segundo polipéptido comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met puede comprender al menos una característica que promueve la heterodimerización, mientras que se minimiza la homodimerización, de las secuencias de Fe dentro del fragmento de anticuerpo.

En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, los anticuerpos anti-c-met bloqueantes o los anticuerpos anti-c-met antagonistas inhiben por completo la actividad biológica del antígeno. Para el tratamiento de las condiciones patológicas que requieren una función antagonista y donde la bivalencia de un anticuerpo anti-c-met produce un efecto agonista no deseable después de la unión a un antigeno blanco (aun cuando sea un anticuerpo anti-c-met antagonista como un fragmento Fab) , el rasgo monovalente de un anticuerpo de una rama (es decir, un anticuerpo que comprende una rama de unión al antigeno única) produce y/o asegura una función antagonista después de la unión del anticuerpo anti-c-met a una molécula blanco. Además, el anticuerpo de una rama que comprende una región Fe se caracteriza por atributos farmacocinéticos superiores (tales como un aumento de la vida media y/o reducción de la tasa de depuración in vivo) en comparación con las formas Fab que tienen características de unión al antígeno similares/sustancialmente idénticas, en consecuencia superan un inconveniente importante del uso de anticuerpos Fab monovalentes convencionales.

Los anticuerpos anti-c-met (que se pueden proporcionar como anticuerpos de una rama) útiles en la formulación farmacéutica. descripta en la presente incluyen los conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Martens, T. et al., Clin. Cáncer Res. 12 (20 Pt . 1):6144 (2006); US 6.468.529; WO2006/015371 ; WO2007/063816, y O2010/045345, que se incorporan por referencia en su totalidad) . En algunas . formas de realización, el anticuerpo anti-c-met para usar en las formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente comprende una o más de las secuencias de HVR del anticuerpo monoclonal producido por la linea celular del hibridoma depositado bajo el Número de acceso de American Type Culture Collection (ATCC) ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3,3,13) o HB-11895 (hibridoma 5D5,11,6) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c—met es un anticuerpo de una rama que comprende una o más de las HVR del dominio variable de la cadena liviana y/o una o más de las HVR del dominio variable de la cadena pesada de Número de acceso ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3,3,13) o HB-11895 (hibridoma 5D5,11,6) y un polipéptido de Fe.

En algunas formas de realización del formulación farmacéutica del anticuerpo anti-c-met, el anticuerpo anti-c-met comprende un dominio variable de la cadena liviana que comprende una o más de secuencias de HVR1-LC, HVR2-LC y HVR3-LC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:l-3). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende una o más de secuencias de HVR1-HC, HVR2-HC y HVR3-HC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:4-6). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende un dominio variable de la cadena liviana que comprende una o más de secuencias de HVR1-LC, HVR2-LC y HVR3-LC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:l-3) y una o más de secuencias de HVR1-HC, HVR2-HC y HVR3-HC ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NOs:4-6). En algunas formas de realización, el dominio variable de la cadena pesada comprende una o más de secuencias de HVR1-HC, HVR2-HC y HVR3-HC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:4-6) y una o más de secuencias de FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC y FR4-HC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:ll- 14) . En algunas formas de realización, el dominio variable de la cadena liviana comprende una o más de secuencias de HVR1-LC, HVR2-LC y HVR3-LC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID N0s:l-3) y una o más de secuencias de FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC y FR4-LC ilustradas en la Figura 2 (SEQ ID NOs:7-10). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama que comprende una o más de las HVR del dominio variable de la cadena liviana (SEQ ID N0s:l-3) y/o una o más de las HVR del dominio variable de la cadena pesada (SEQ ID NOs:4-6) y un polipéptido de Fe.

En algunas formas de realización de la formulación farmacéutica del anticuerpo anti-c-met, el anticuerpo anti-c-met comprende: (a) al menos una, dos, , tres, cuatro, o cinco secuencias de HVR seleccionadas del ¡ grupo que consiste en: (i) HVR-L1 que comprende la : secuencia A1-A17, donde Al-Al7 es KSSQSLLYTSSQKNYLA (SEQ i ID NO:23) (ii) HVR-L2 que comprende la secuencia B1-B7, donde B1-B7 es ASTRES (SEQ ID NO:24); (iii) HVR-L3 que comprende la secuencia C1-C9, donde C1-C9 es QQYYAYPWT (SEQ ID NO:25); (iv) HVR-H1 que comprende la secuencia , D1-D10, donde D1-D10 es GYTFTSY LH (SEQ ID NO: 26); (v) ! HVR-H2 que comprende la secuencia E1-E18, donde E1-E18 es ! G IDPSNSDTRFNPNFKD (SEQ ID NO:27); y (vi) HVR-H3 que comprende la secuencia Fl-Fll, donde Fl-Fll es XYGSYVSPLDY (SEQ ID NO: 28) y X no es R; y(b) al menos una variante de HVR, donde la secuencia de la variante de HVR comprende la modificación de al menos un residuo de la ; secuencia ilustrada de las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, 27, ¡ o 28. En algunas formas de realización, HVR-L1 del anticuerpo anti-c-met comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 23. En algunas formas de realización, la HVR-L2 comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 24. En algunas ; formas de realización, HVR-L3 comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 25. En algunas formas de realización, HVR-H1 ¡ comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 26. En algunas ! formas de realización, HVR-H2 comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 27. En algunas formas de realización, HVR-H3 la secuencia de la SEQ ID NO: 28. En algunas formas de realización, HVR-H3 comprende TYGSYVSPLDY (SEQ ID NO: 29) . En algunas formas de realización, HVR-H3 comprende SYGSYVSPLDY (SEQ ID NO:30). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met que comprende estas secuencias (en combinación como se describe en la presente) es humanizado o humano. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama que comprende una o más de las HVR of el dominio variable de la cadena liviana (SEQ ID NOs:23-25) y/o una o más de las HVR del dominio variable de la cadena pesada (SEQ ID NOs:26-30) y un polipéptido de Fe.

En la presente también se proporcionan anticuerpos anti-c-met para usar en la formulación farmacéutica que comprende una, dos, tres, cuatro, cinco o seis HVR, donde cada HVR comprende, consiste o consiste esencialmente en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, 27, 28, y 29, y donde SEQ ID NO: 23 corresponde a una HVR-Ll, SEQ ID NO: 24 corresponde a una HVR-L2, SEQ ID NO: 25 corresponde a una HVR-L3, SEQ ID NO: 26 corresponde a una HVR-H1, SEQ ID NO:27 corresponde a una HVR-H2, y SEQ ID NOs:26, 27, o 28 corresponde a una HVR-H3. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende HVR-Ll, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, y HVR-H3, donde cada una, en orden, comprende las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, 27 y 29. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti- c-met comprende HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2, y HVR-H3, donde cada una, en orden, comprende las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, 27 y 30.

Las variantes de HVR pueden tener modificaciones de uno o más residuos dentro de la HVR. En algunas formas de realización, una variante de HVR-L2 comprende 1-5 (1, 2, 3, 4 o 5) substituciones en cualquier combinación de las siguientes posiciones: Bl (M o L) , B2 (P, T, G o S), B3 ( N, G, R o T) , B4 ( I, N o F) , B5 ( P, I, L o G), B6 ( A, D, T o V) y B7 ( R, I, M o G) . En algunas formas de realización, una variante de HVR-H1 comprende 1-5 (1, 2, 3, 4 o 5) sustituciones en - cualquier combinación de las siguientes posiciones: D3 ; (N, P, L, S, A, I), D5 (I, S o Y) , D6 (G, D, T, K, R) , D7 ! (F, H, R, S, T o V) y D9 (M o V) . En algunas formas de ¡ realización, una variante de HVR-H2 comprende 1-4 (1, 2, 3 o 4) sustituciones en cualquier combinación de las siguientes posiciones: E7 (Y), E9 (I), E10 (I), E14 (T o Q) , E15 (D, K, S, T o V) , E16 (L) , E17 (E, H, N o D) y I E18 (Y, E o H) . En algunas formas de realización, una ¡ variante de HVR-H3 comprende 1-5 (1, 2, 3, 4 o 5) ! substituciones en cualquier combinación de las siguientes ' posiciones: Fl (T, S) , F3 (R, S, H, T, A, K) , F4 (G) , F6 (R, F, M, T, E, K, A, L, . W) , F7 (L, I, T, R, K, V), F8 (S, A) , FIO ( Y, N) y Fll (Q, S, H, F) . Las letras entre paréntesis después de cada posición indican una sustitución ilustrativa (es decir, reemplazo) de aminoácido; como puede ser evidente para los expertos en la técnica, la adecuación de otros aminoácidos como aminoácidos de sustitución en el contexto descripto en la presente se puede evaluar de rutina usando las técnicas conocidas en la materia y/o descriptas en la presente. En algunas formas de realización, una HVR-L1 comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 23. En algunas formas de realización, Fl de una variante de HVR-H3 es T. En algunas formas de realización, Fl de una variante de HVR-H3 es S. En algunas formas de realización, F3 de una variante de HVR-H3 es R. En algunas formas de realización, F3 de una variante de HVR-H3 es S. En algunas formas de realización, F7 de una variante de HVR-H3 es T. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es T o S, F3 es R o S, y F7 es T.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es T, F3 es R y F7 es T. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es S. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met. comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es T, y F3 es R. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es S, F3 es R y F7 es T. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es T, F3 es S, F7 es T, y F8 es S. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H3 donde Fl es T, F3 es S, F7 es T, y F8 es A. En algunas formas de realización, dicho anticuerpos de la variante de HVR-H3 también comprende HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1 y HVR-H2 donde cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:l, 2, 3, 4 y 5. En algunas formas de realización, estos anticuerpos también comprenden una secuencia de consenso estructural de la cadena pesada del subgrupo III humano. En algunas formas de realización de estos anticuerpos, la secuencia de consenso estructural comprende substitución en la posición 71, 73 y/o 78. En algunas formas de realización de estos anticuerpos, posición 71 es A, 73 es T y/o 78 es A. En algunas formas de realización de estos anticuerpos, estos anticuerpos también comprenden una secuencia de consenso estructural de la cadena liviana ?? humana.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica comprende una variante de HVR-H3-L2 donde B6 es V. En algunas formas de realización, dicho anticuerpo anti-c- met de la variante HVR-L2 también comprende HVR-Ll, HVR- L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 , donde cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 25, 26, 27 y 28. En algunas formas de realización, dicho anticuerpo anti-c-met de la variante HVR-L2 también : comprende HVR-Ll, HVR-L3 , HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, donde cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 25, 26, 27 y 29. En algunas formas de realización, dicho anticuerpo anti-c-met de la variante ; HVR-L2 también comprende HVR-Ll, HVR-L3, HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, donde cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 25, 26,27 y 30. En algunas formas de realización, estos anticuerpos anti-c- met también comprenden una secuencia de consenso estructural de la cadena pesada del subgrupo III humano. En algunas formas de realización de estos anticuerpos anti-c-met, la secuencia de consenso estructural comprende substitución en la posición 71, 73 y/o 78. En algunas formas de realización de estos anticuerpos anti- c-met, posición 71 es A, 73 es T y/o 78 es A. En algunas formas de realización de estos anticuerpos anti-c-met, estos anticuerpos también comprenden a secuencia de consenso estructural de la cadena liviana ?? humana.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica comprende una variante de HVR-H3-H2 donde E14 es T, E15 es K y E17 es E. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende una variante de HVR-H3-H2 ¦ donde E17 es E. En algunas formas de realización, dicho ¡ anticuerpo anti-c-met de la variante HVR-H3 también ! comprende HVR-L1, HVR-L2 , HVR-L3, HVR-H1, y HVR-H3 donde í cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, y 28. En algunas formas de i realización, dicho anticuerpo anti-c-met de la variante : HVR-H2 también comprende HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3 , HVR-H1, y HVR-H3, donde cada una comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26, y 29. En algunas formas de realización, dicho anticuerpo ¦ anti-c-met de la variante HVR-H2 también comprende HVR- Ll, HVR-L2, HVR-L3, HVR-H1, y HVR-H3, donde cada una ! comprende, en orden, la secuencia ilustrada en las SEQ ID NOs:23, 24, 25, 26 y 30. En algunas formas de | realización, estos anticuerpos anti-c-met también I ' comprenden una secuencia de consenso estructural de la ¡ cadena pesada del subgrupo III humano. En algunas formas de realización de estos anticuerpos anti-c-met, la secuencia de consenso estructural comprende substitución en la posición 71, 73 y/o 78. En algunas formas de realización de estos anticuerpos anti-c-met, posición 71 es A, 73 es T y/o 78 es A. En algunas formas de realización de estos anticuerpos, estos anticuerpos anti-c-met también comprenden una secuencia de consenso estructural de la cadena liviana ?? humana.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica comprende (a) un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGY FTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMI DPS SD TRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 19) y/o (b) un dominio variable de la cadena liviana que comprende la secuencia: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIY A STR ESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYP TFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:20). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama que comprende (a) el dominio variable de la cadena liviana (SEQ ID NO: 20) y/o (b) el dominio variable de la cadena pesada (SEQ ID NO: 19) y (c) un polipéptido de Fe.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica comprende (a) HVR-H1, HVR-H2, y HVR-H3 de un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSY LHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSD TRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 19) y/o (b) HVR-L1, HVR-L2 , y HVR-L3 de un dominio variable de la cadena liviana que comprende la secuencia : DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKP GKAPKLLIYWASTR ESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:20) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama que comprende (a) el dominio variable de la cadena liviana (SEQ ID NO: 20) y/o (b) el dominio variable de la cadena pesada (SEQ ID NO: 19) y (c) un polipéptido de Fe.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica es un fragmento de anticuerpo anti-c-met, donde el fragmento de anticuerpo comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 19, secuencia de CH1 (por ejemplo, SEQ ID NO: 16), y un primer polipéptido de Fe; y (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena liviana que comprende SEQ ID NO: 20, y secuencia de CL1 (por ejemplo, SEQ ID NO: 15).

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica es un fragmento de anticuerpo anti-c-met, donde el fragmento de anticuerpo comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 19, secuencia de CH1 (por ejemplo, SEQ ID NO: 16), y un primer polipéptido de Fe; (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena liviana que comprende SEQ ID NO: 20, y secuencia de CLl (por ejemplo, SEQ ID NO: 15); y (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe, donde el dominio variable de la cadena pesada y el • dominio variable de la cadena liviana están presentes como un complejo y forman una rama de unión al antigeno única y donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo. En algunas formas de realización, el primer y segundo polipéptido de Fe forman una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula 1 de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno. En algunas formas de realización, la región Fe es la de una IgG humana (por ejemplo, IgGl, 2, 3 o 4) . En algunas formas de realización, el primer polipéptido de Fe ' comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NO: 17) y el segundo polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3 (SEQ ID NO: 18). En algunas formas de realización, el primer polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3 (SEQ ID NO: 18) y el segundo polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NO: 17) .

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met o fragmento de anticuerpo de este, donde el anticuerpo comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 19, secuencia de CH1, y un primer polipéptido de Fe; (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena liviana que comprende SEQ ID NO: 20, y secuencia de CL1; y (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe, donde el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena liviana están presentes como un complejo y forman una rama de unión al antigeno única, donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo y forman una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con a molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno .

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un primer polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena pesada, dicho polipéptido que comprende la secuencia: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSY LHWVRQAPGKGLEWVG IDPSNSD TRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTC PPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVE VHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ( SEQ ID N0:21); (b) un segundo polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena liviana, el polipéptido que comprende la secuencia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKP GKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWT FGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ KVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO: 22); y un tercer polipéptido que comprende a secuencia de Fe, el polipéptido que comprende la secuencia DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD LNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSL CLVKGFYPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK (SEQ ID ?0:18),· donde el dominio variable de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena liviana están presentes como un complejo y forman una rama de unión al antigeno única y donde el primer y segundo polipéptido de Fe están presentes en un complejo. En algunas formas de realización, el primer y segundo polipéptido de Fe forman una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con a molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno.

En algunas formas de realización, los polinucleótidos que codifican cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente se expresan de modo que se produzca el anticuerpo anti-c-met. En algunas formas de realización, los polinucleótidos que codifican cualquier anticuerpo anti-c-met se expresan in vitro o in vivo (por ejemplo, en las células CHO o células de E. colí) .

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met para usar en la formulación farmacéutica descripta en la presente es onartuzumab (denominada en forma indistinta MetMAb) , un anticuerpo de una rama que comprende una región Fe. Una secuencia de MetMAb se muestra en las Figuras 2 y 3. MetMAb (también denominado OA5D5v2 y onartuzumab) también se describe en, por ejemplo, WO2006/015371 ; O2010/04345; y Jin et al, Cáncer Res (2008) 68:4360. La versión biosimilar de etMAb también está contemplada y comprendida en la presente para usar en la formulación.

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica se une específicamente al menos a una porción del dominio Sema de c-met o variante de este. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met antagonista se une específicamente al menos una de las secuencias seleccionadas del grupo que consiste en LDAQT (SEQ ID NO: 31) (por ejemplo, residuos 269-273 de c-met), LTEKRKKRS (SEQ ID NO:32) (por ejemplo, residuos 300-308 de c-met), KPDSAEPM (SEQ ID NO: 33) (por ejemplo, residuos 350-357 de c-met) y NVRCLQHF (SEQ ID NO: 34) (por ejemplo, residuos 381-388 de c-met) . En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met antagonista se une específicamente al epitope conformacional formado por parte o el total de al menos una de la secuencias seleccionadas del grupo que consiste en LDAQT (SEQ ID NO: 31) (por ejemplo, residuos 269-273 de c-met), LTEKRKKRS (SEQ ID NO: 32) (por ejemplo, residuos 300-308 de c-met), KPDSAEPM (SEQ ID NO: 33) (por ejemplo, residuos 350-357 de c-met) y NVRCLQHF (SEQ ID NO: 34) (por ejemplo, residuos 381-388 de c-met) . En algunas formas de realización, un anticuerpo antagonista se une específicamente a una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% de identidad o semejanza de secuencia con la secuencia LDAQT (SEQ ID NO: 31), LTEKRKKRS (SEQ ID NO: 32), KPDSAEPM (SEQ ID NO: 33) y/o NVRCLQHF (SEQ ID NO:34). En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo anti-c-met antagonista. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es un anticuerpo de una rama. A fin de analizar los anticuerpos que se unen a un epitope de un antígeno unido por un anticuerpo de interés, se puede realizar un ensayo de bloqueo cruzado de rutina tal como el que se describe en Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow y David Lañe (1988).

En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, el anticuerpo anti-c-met puede interferir en la activación de HGF/c-met, que incluye, pero sin limitación interferir en la unión de HGF a la porción extracelular de c-met y multimerización del receptor. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met es útil para tratar o diagnosticar condiciones patológicas asociadas con señalización anormal o no deseada de la vía de HGF/c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met puede modular la vía de HGF/c-met, que incluye la modulación de la unión del ligando de c- met, dimerización de c-met, activación, y otras actividades biológicas/fisiológicas asociadas con la señalización de HGF/c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met puede alterar la vía de señalización de HGF/c-met. En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, la unión del anticuerpo anti- c-met a c-met inhibe la activación de c-met por parte de HGF. En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, la unión del anticuerpo anti-c-met a c-met en una célula inhibe la proliferación, supervivencia, dispersión, morfogénesis y/o motilidad de la célula.

En algunos casos, puede ser ventajoso tener un anticuerpo anti-c-met que no interfiere en la unión de un ligando (tal como HGF) a c-met. Por consiguiente, en algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met no se une a un sitio de unión de HGF en c-met. En alguna ¡ forma de realización, el anticuerpo anti-c-met no inhibe [ sustancialmente la unión de HGF al c-met. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met no compite sustancialmente con HGF por la unión a c-met. En un ejemplo, el anticuerpo anti-c-met se puede usar en conjunto con uno o más de antagonistas diferentes, donde los antagonistas se dirigen a procesos y/o funciones diferentes dentro del eje HGF/c-met. En consecuencia, en algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met se une a un epitope de c-met distinto de un epitope hallado con otro antagonista c-met (tal como el fragmento Fab del anticuerpo monoclonal producido por la linea celular del hibridoma depositada bajo American Type Culture Collection Accession Número ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3,3,13)) . En otra forma de realización, el anticuerpo anti-c-met es distinta de (es decir, no es) un fragmento Fab del anticuerpo monoclonal producido por la linea celular del hibridoma depositada bajo American Type Culture Collection Accession Número ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3,3,13).

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met se une a c-met de una primera especie animal, y no se une específicamente a c-met de una segunda especie animal. En algunas formas de realización, la primera especie animal es humana y/o primata (por ejemplo, mono cynomolgus) , y la segunda especie animal es murina (por ejemplo, ratón) y/o canina. En algunas formas de realización, la primera especie animal es humana. En algunas formas de realización, la primera especie animal es primate, por ejemplo mono cynomolgus . En algunas formas de realización, la segunda especie animal es murina, por ejemplo, ratón. En algunas formas de realización, la segunda especie animal es canina .

En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met induce poca a ninguna respuesta inmunogénica en dicho sujeto. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met induce una respuesta inmunogénica en o menor de un nivel clínicamente aceptable.

En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, un anticuerpo alterado que posee alguna pero no todas las funciones efectoras. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met no posee reducción del complemento y/o actividad de ADCC. En algunas formas de realización, las actividades de Fe de la inmunoglobulina producida se miden para asegurar que solo se mantienen las propiedades deseadas (por ejemplo, vida media pero reducción del complemento y/o actividad de ADCC) . Los ensayos de citotoxicidad in vitro y/o in vivo se pueden realizar para confirmar la reducción/depleción de las actividades CDC y/o ADCC. Por ejemplo, los ensayos de unión del receptor Fe (FcR) se pueden realizar para asegurar que el anticuerpo carece de la unión de FcyR (en consecuencia es probable que carezca de actividad de ADCC) , pero retiene la capacidad de unión de FcRn. Las células primarias que median la ADCC, las células NK, expresan solo Fc(RIII, mientras que los monocitos expresan Fc(RI, Fc(RII y Fc(RIII. La expresión de FcR en las células hematopoyéticas se sintetizan en la Tabla 3 de la página 464 de Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) . Un ejemplo de un ensayo in vitro para evaluar la actividad de ADCC de una molécula de interés se describe en la Patente US No. 5.500.362 o 5.821.337. Las células efectoras útiles para estos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células citoliticas naturales (NK) . En forma alternativa o adicional, la actividad de ADCC de la molécula de interés se puede evaluar in vivo, por ejemplo, en un modelo animal tal como el que se describe en Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998). Los ensayos de unión Clq también ¡ se pueden llevar a cabo para confirmar que el anticuerpo ! no puede unir Clq y en consecuencia carece de actividad de CDC. Para evaluar la activación del complemento, se , puede realizar un ensayo CDC, por ejemplo, que se i describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996). La unión de FcRn y las determinaciones de depuración/vida media in vivo también se pueden realizar usando métodos conocidos en la técnica. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met está glicosilado. En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met está sustancialmente aglicosilado.

Los anticuerpos anti-c-met de la formulación descriptos en la presente se pueden caracterizar por sus propiedades fisicas/quimicas y funciones biológicas por varios ensayos conocidos en la técnica. Los anticuerpos anti-c-met purificados se pueden caracterizar adicionalmente por una serie de ensayos que incluyen, pero sin limitación, secuenciación N-terminal, análisis de aminoácidos, cromatografía líquida de alta presión de exclusión por tamaño no desnaturalizante (HPLC) , espectrometría de masa, cromatografía de intercambio iónico y digestión con papaína.

En algunas formas de realización de cualquiera de los anticuerpos anti-c-met descriptos en la presente, el anticuerpo anti-c-met se puede purificar (1) a más de 95% en peso del anticuerpo determinado por el método de Lowry, y con máxima preferencia más den 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos N-terminal o interna por el uso de un secuenciador de copa giratoria o (3) a homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras usando azul Coomassie, o tinción de plata.

Además, en algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de acuerdo con cualquiera de las anteriores formas de realización puede incorporar cualquiera de los rasgos, en forma individual o en combinación, como se describe en las siguientes Secciones 1-8: 1. Afinidad del anticuerpo En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met provisto en la presente tiene una constante de disociación (Kd) de = 1 µ?, = 100 nM, = 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM, o < 0,001 nM (por ejemplo, 10"8 M o menos, por ejemplo, de 10"8 M a 10"13 M, por ejemplo, de 10"9 M a 10"13 M) .

La afinidad de unión de un ligando a su receptor se puede determinar usando cualquiera de una variedad de ensayos y expresado en términos de una ! variedad de valores cuantitativos. Los ensayos de unión al antigeno son conocidos en la técnica y los que se ¡ pueden usar en la presente incluyen sin limitación cualquier ensayo de unión directa o competitiva usando : técnicas tales como transferencias western, '. radioinmunoensayos , ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA), inmunoensayos "sándwich", ensayo basado en resonancia de plasmón superficial (tal como el ensayo BIAcore que se describe en la Publicación de la Solicitud PCT No. WO2005/012359) , ensayos de inmunoprecipitación, inmunoensayos fluorescentes, e inmunoensayos de proteina A.

Por consiguiente, en algunas formas de realización, la afinidad de unión se expresa como valores Kd y refleja la afinidad de unión intrínseca (por ejemplo, con efecto de avidez minimizados). El anticuerpo anti-c-met seleccionado normalmente tendrá una afinidad de unión suficientemente fuerte por c-met, por ejemplo, el anticuerpo puede unir c-met humano con un valor de Kd entre 100 nM"1 pM. 2. Fragmentos de anticuerpo En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente es un fragmento de anticuerpo. Los fragmentos de anticuerpos incluyen, pero sin limitación, Fab, Fab' , Fab'-SH, F(ab')2, Fv, anticuerpos de una rama, y fragmento de scFv, y otros fragmentos que se describen a continuación. Para una revisión de ciertos fragmentos de anticuerpo, ver Hudson et al. Wat. Med. 9:129-134 (2003). Para una revisión de los fragmentos scFv, ver, por ejemplo, Pluckthün, en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg y Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); ver también WO 93/16185/ y Patentes U.S. Nos. 5.571.894 y 5.587.458. Para la discusión de los fragmentos Fab y F(ab')2 que comprenden residuos del epitope de unión del receptor de rescate y que tienen aumento de la vida media in vivo, ver Patente U.S. No. 5.869.046. Otras formas de anticuerpo monovalente se describe en, por ejemplo, O2007048037, O2008145137 , O2008145138, y WO2007059782. Se describen anticuerpos de una rama, por ejemplo, en WO2005/063816. Los diacuerpos son fragmentos de anticuerpo con dos sitios de unión al antigeno que pueden ser bivalentes o biespecificos . Ver, por ejemplo, EP 404, 097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129- 134 (2003); y Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) . Triacuerpos y tetracuerpos también se describen en Hudson et al., Nat. Med. 9:129- 134 (2003).

Los anticuerpos de dominio único son ! fragmentos de anticuerpo que comprenden el total o una porción del dominio variable de la cadena pesada o el ! total o una porción del dominio variable de la cadena liviana de un anticuerpo. En algunas formas de ¦ realización, un anticuerpo de dominio único es un anticuerpo de dominio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; ver, por ejemplo, Patentes U.S. No. 6.248.516 Bl) .

Los fragmentos de anticuerpo se pueden obtener por varias técnicas, que incluyen, pero sin limitación digestión proteolitica de un anticuerpo intacto asi como la producción por células huésped recombinantes (por ejemplo, E. coli o fago) , como se describe en la presente . 3. Anticuerpos quiméricos y humanizados En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente es un anticuerpo quimérico. Ciertos anticuerpos quiméricos se describen, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 4, 816, 567; y Morrison et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). En un ejemplo, un anticuerpo quimérico comprende una región variable no humana (por ejemplo, una región variable derivada de un ratón, rata, hámster, conejo, o primate no humano, tal como un mono) y una región constante humana. En un ejemplo adicional, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo "cambio de clase" en que la clase o subclase ha sido cambiada desde la del anticuerpo original. Los anticuerpos quiméricos incluyen los fragmentos de unión ! al antigeno de esto.

En algunas formas de realización, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo humanizado. Normalmente, un anticuerpo no humano es humanizado para reducir la inmunogenicidad en los seres humanos, a la vez que se retiene la especificidad y afinidad del anticuerpo no humano original. Generalmente, un anticuerpo humanizado comprende uno o más dominios variables en. los que las HVR, por ejemplo, CDR, (o porciones de estos) derivan de un anticuerpo no humano, y las FR (o porciones de estas) derivan de las secuencias del anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado opcionalmente también comprenderá al menos una porción de una región constante humana. En algunas formas de realización, algunos residuos de la FR en un anticuerpo humanizado se sustituyen con los correspondientes residuos de un anticuerpo no humano (por ejemplo, el anticuerpo del que derivan los residuos de CDR) , por ejemplo, para restaurar o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.

Los anticuerpos humanizados y los métodos de obtenerlos se revisan, por ejemplo, en Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), y se describen adicionalmente, por ejemplo, en Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); Patentes U.S. Nros. 5.821.337, 7.527.791, 6.982.321, y 7,087.409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (que describen el injerto de SDR (a-HVR) ) ; Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (que describen "revestimiento"); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (que describe "transposición de FR"); y Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) y Klimka et al., Br. J. , cáncer 83:252-260 (2000) (que describe el método de "selección guiada" para la transposición de FR) .

Las regiones estructurales humanas que se pueden usar para la humanización incluyen pero sin limitación: regiones estructurales seleccionadas usando el método de "mejor ajuste" (ver, por ejemplo, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); regiones estructurales derivadas de la secuencia de consenso de los anticuerpos humanos de un subgrupo particular de regiones variables de cadena liviana o pesada (ver, por ejemplo, Cárter et al. Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); y Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); regiones estructurales maduras humanas (con mutación somática) o regiones estructurales de la linea germinal humana (ver, por ejemplo, Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); y regiones estructurales derivadas de la selección de bibliotecas de FR (ver, por ejemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) y Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)). 4. Anticuerpos humanos En algunas formas de realización, el ¡ anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente es un anticuerpo humano. Los anticuerpos humanos se pueden producir usando varias técnicas conocidas en la materia. Los anticuerpos humanos se describen en general en van Dijk y van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol . 5: 368-74 (2001) y Lonberg, Curr. > Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).

! Los anticuerpos humanos se pueden preparar por la administración de un inmunógeno a un animal transgénico que se ha modificado para producir i anticuerpos humanos intactos o anticuerpos intactos con ¡ i ¦ regiones variables humanas en respuesta al estímulo antigénico. Tales animales normalmente contienen todo o ¦ una porción de los locus de la inmunoglobulina humana, que reemplaza los locus de la inmunoglobulina endógena, o que están presentes en forma extracromosómica o integrada i aleatoriamente en los cromosomas del animal. En tales 1 ratones transgénicos, se han inactivado los locus de la ! inmunoglobulina endógena. Para la revisión de los métodos para obtener anticuerpos humanos de los animales j transgénicos, ver Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 ! (2005) . Ver también, por ejemplo, las Patentes U.S. Nros . 6,075.181 y 6.150.584 que describe tecnología XENOMOUSE™; Patente U.S. N.° 5.770.429 que describe la tecnología HUMAB®; Patente U.S. N.° 7,041.870 que describe la tecnología K-M OUSE®, y Publicación de la solicitud de patente U.S. N.° US 2007/0061900, que describe la tecnología VELOCI OUSE®) . Las regiones variables humanas de los anticuerpos intactos generado por tales animales se pueden modificar adicionalmente, por ejemplo, por la combinación con una región constante humana diferente.

Los anticuerpos humanos también se pueden por métodos basados en hibridoma. Se han descripto líneas celulares de mieloma humano y de heteromieloma ratón-humano para la producción de los anticuerpos humanos monoclonales. (Ver, por ejemplo, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Anticuerpo monoclonal Producción Techniques y Applications, pp . 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); y Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).) Los anticuerpos humanos generados por medio de tecnología de hibridoma de células B humanas también se describen en Li et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006). Los métodos adicionales incluyen a los que se describen, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 7.189.826 (que describe la producción de anticuerpos IgM humanos monoclonales de las líneas celulares del hibridoma) y Ni, Xiandai Mianyixue, 26 ( ): 265-268 (2006) (que describe los hibridomas humano- humano) . La tecnología del hibridoma humano (tecnología Trioma) también se describe en Vollmers y Brandlein, Histology y Histopathology, 20 ( 3 ) : 927-937 (2005) y Vollmers y Brandlein, Methods y Findings in Experimental y Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005).

Los anticuerpos también se pueden generar por aislamiento de las secuencias del dominio variable del clon Fv seleccionados de las bibliotecas de despliegue en fago derivadas humanas. Tales secuencias del dominio variable luego se pueden combinar con un dominio constante humano deseado. Las técnicas para seleccionar anticuerpos humanos de las bibliotecas del anticuerpo se describen a continuación. 5. Anticuerpos derivados de biblioteca El anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente se pueden aislar por medio de bibliotecas combinatorias de selección de anticuerpos actividad o actividades deseadas. Por ejemplo, una variedad de métodos son conocidos en la técnica para generar bibliotecas de despliegue de fagos y analizar dichas bibliotecas para hallar anticuerpos que posean las características de unión deseadas. Dichos métodos se revisan, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) y se describen adicionalmente, por ejemplo, en McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks y Bradbury, en Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); y Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).

En ciertos métodos de despliegue en fagos, Los repertorios de los genes VH y VL se pueden . clonar separadamente por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y recombinar al azar en bibliotecas de fagos, que luego se pueden analizar para hallar clones de unión con el antigeno como se describe en Winter et al., Ann . Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Los fagos normalmente despliegan fragmentos de anticuerpo, sea como fragmentos de cadena simple Fv (scFv) o como fragmentos Fab. Las bibliotecas de fuentes inmunizadas proporcionan anticuerpos de alta afinidad para el inmunógeno sin el requisito de la construcción de hibridomas. Alternativamente, el repertorio inactivo se puede clonar (por ejemplo, del ser humano) para proporcionar una fuente única de anticuerpos humanos con una amplia variedad de antigenos no propios y propios sin ninguna ¡ inmunización como se describe en Griffiths et al., EMBO ¦ J, 12: 725-734 (1993). Finalmente, las bibliotecas ! inactivas también se pueden también preparar : sintéticamente por clonación de los segmentos génicos V ¦ de las células madre, y mediante los cebadores de PCR que contienen secuencias aleatorias para codificar las ' regiones CDR3 altamente variables y para obtener el cambio de lugar in vitro como se describe en Hoogenboom y i 1 Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Las publicaciones de patente que describen bibliotecas de ! fago de anticuerpo humano incluyen, por ejemplo: Patente US N.° 5.750.373, y Publicaciones de patente US Nros . ! 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, ; 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, y 2009/0002360.

; Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo ', aislados de bibliotecas de anticuerpos humanos se j consideran anticuerpos humanos o fragmentos de anticuerpo I humanos en la presente. ¡ 6. Anticuerpos multiespecífieos En algunas formas de realización, el 1 anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente es un anticuerpo ! multiespecifico, por ejemplo un anticuerpo biespecifico .

! Los anticuerpos multiespecificos son anticuerpos i ' monoclonales que tienen especificidades de unión para al menos dos antigenos diferentes. En algunas formas de realización, una de las especificidades de unión es para un antigeno y el otro es para cualquier otro antigeno. En algunas formas de realización, anticuerpos biespecificos se pueden unir a dos diferentes de un antigeno. Los i anticuerpos biespecificos también se pueden usar para localizar agentes citotóxicos en las células, que expresa : un antigeno. Los anticuerpos biespecificos se pueden preparar como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpo. i | Las técnicas para obtener anticuerpos multiespecificos incluyen, pero sin limitación, la ¡ coexpresión recombinante de dos pares de cadena pesada - cadena liviana de inmunoglobulina, donde las dos cadenas ¦ pesadas tienen diferentes especificidades (Milstein y ' Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, y Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)) y, I manipulación genética "botón en ojal" (ver, por ejemplo, Patente U.S. N.° 5.731.168). Los anticuerpos multiespecificos también se pueden obtener por manipulación genética de los efectos inductores ¡ electrostáticos para obtener anticuerpo Fc-moléculas ' heterodiméricas (WO 2009/089004A1) ; entrecruzamiento de dos o más anticuerpos o fragmentos (ver, por ejemplo, ! Patente US N.° 4.676.980, y Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); usando cierres de leucina para producir anticuerpos biespecificos (ver, por ejemplo, Kostelny et al., J. Immunol., 148 ( 5 ): 1547-1553 (1992)); usando tecnología "diacuerpo" para obtener los fragmentos de anticuerpo biespecífico (ver, por ejemplo, Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); y por el uso de dímeros de cadena única Fv (sFv) . (ver, por ejemplo Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); y la preparación de anticuerpos triespecífieos como se describió, por ejemplo, en Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).

Los anticuerpos manipulados genéticamente con tres o más sitios de unión de unión al antígeno funcionales, que incluye "anticuerpos Octopus" también se incluyen en la presente (ver, por ejemplo US 2006/0025576A1) .

El anticuerpo o fragmento en la presente también incluye un "FAb de acción dual" o "DAF" que comprende un sitio de unión al antígeno que se une a IL-13 así como a otro antígeno diferente (ver, por ejemplo, US 2008/0069820) . 7. Variantes de anticuerpo En algunas formas de realización, se contemplan las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo anti-c-met para usar en la formulación farmacéutica descripta en la presente. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo. Las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo se pueden preparar por la introducción de modificaciones apropiadas en la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo, o por la síntesis de péptidos. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, supresiones y/o inserciones en y/o sustituciones de residuos dentro de las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. Se puede realizar alguna combinación de supresión, inserción, y sustitución para obtener la construcción final, con la condición que la construcción final posea las características deseadas, por ejemplo, unión al antígeno. a. Variantes de sustitución , inserción y supresión En algunas formas de realización, se proporcionan las variantes del anticuerpo anti-c-met que tienen una o más sustituciones de aminoácidos para usar en la formulación farmacéutica descripta en la presente. Los sitios de interés para la mutagénesis por sustitución incluyen las HVR y FR. Las sustituciones conservadoras se muestran en la Tabla 1 bajo el título de "sustituciones preferidas". Los cambios más sustanciales, se proporcionan en la Tabla 1, bajo el título de "ejemplos de sustituciones" o como también se describe más adelante con referencia a las clases de aminoácidos. Las sustituciones de aminoácidos se pueden introducir en un , anticuerpo de interés y los productos se analizan, para determinar una actividad deseada, por ejemplo, unión al antigeno retenido/mejorado, reducción de la inmunogenicidad, mejora de ADCC o CDC.

TABLA 1 Los aminoácidos se pueden agrupar de acuerdo I con las propiedades de las cadenas laterales : i) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; i (2) hidrofilico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; ¡ (3) ácido: Asp, Glu; (4) ácido: His, Lys, Arg; I (5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; (6) aromático: Trp, Tyr, Phe.

! Non Las sustituciones no conservadoras ; supondrán el intercambio un miembro de uno de estas clases por otra clase.

Un tipo de variante de sustitución involucra sustituir uno o más residuos de la región hipervariable de un anticuerpo original (por ejemplo, un anticuerpo humanizado o humano) . En general, las variantes resultantes seleccionadas para posterior desarrollo ¡ tendrán modificaciones (por ejemplo, mejoradas) en ciertas propiedades biológicas (por ejemplo, aumento de ¡ afinidad, reducción de inmunogenicidad) con respecto al anticuerpo original del cual y/o tendrán ciertas ! propiedades biológicas sustancialmente retenidas. Un ejemplo de variante de sustitución es un anticuerpo de j afinidad madura, que se puede generar en forma conveniente, por ejemplo, usando técnicas de maduración ! de afinidad basadas en despliegue de fagos tales como los que se describen en la presente. En breves palabras, uno o más residuos HVR se mutan y las variantes desplegadas en el fago y se analizan para determinar una actividad i biológica particular (por ejemplo, afinidad de unión) .

' Las alteraciones (por ejemplo, sustituciones) ! se pueden realizar en las HVR, por ejemplo, para mejorar la afinidad del anticuerpo. Tales alteraciones se pueden ! realizar en "puntos calientes" de la HVR es decir, ; residuos codificados por codones que experimentan mutación en alta frecuencia durante el proceso de maduración somática (ver, por ejemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), y/o SDR (a-CDR) , con la variantes VH o VL resultante que se analiza para determinar la afinidad de unión. La maduración de afinidad por la construcción y reselección de bibliotecas secundarias se ha descripto, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).) En algunas formas de realización de maduración de afinidad, se introduce diversidad en los genes variables elegidos por maduración por alguno de una variedad de métodos (por ejemplo, PCR predispuesta a error, transposición de cadena, o mutagénesis dirigida a oligonucleótidos ) . Luego se crea una biblioteca secundaria. La biblioteca luego se analiza para identificar cualquier variante de anticuerpo con la afinidad deseada. Otro método para introducir diversidad involucra los abordajes dirigidos a HVR, en los que se aleatorizan varios residuos de la HVR (por ejemplo, 4-6 residuos de una vez) . Los residuos de HVR involucrados en la unión al antigeno se pueden identificar específicamente, por ejemplo, usando mutagénesis por barrido de alanina o modelado. A menudo se localiza selectivamente en particular CDR-H3 y CDR-L3.

En algunas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren dentro de una o más HVR siempre que tales alteraciones no reduzcan sustancialmente la capacidad del anticuerpo de unirse al antigeno. Por ejemplo, se pueden realizar alteraciones conservadoras (por ejemplo, sustituciones conservadoras provistas en la presente) que no reducen sustancialmente la afinidad de unión en las HVR. Tales alteraciones pueden ser externas de los "puntos calientes" de HVR o SDR. En algunas formas de realización de las secuencias de la variante de VH y VL provistas anteriormente, cada HVR están no alterada, o contiene no más de una, dos o tres sustituciones de aminoácidos.

Un método útil para la identificación de residuos o regiones del anticuerpo que son localizaciones preferidas para la mutagénesis se llama "mutagénesis por barrido de alanina" descripto por Cunningham y Wells (1989) Science, 244:1081-1085. En este método, se identifican un residuo o un grupo de residuos blanco (por ejemplo, residuos cargados tales como arg, asp, his, lys, y glu) y se reemplaza con un aminoácido neutro o cargado negativamente (por ejemplo, alanina o polialanina) para determinar si se afecta la interacción de los aminoácidos con el antigeno. Se pueden introducir otras sustituciones en las localizaciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional para las sustituciones adicionales. En forma alternativa o adicional, se puede analizar la estructura cristalina del complejo antigeno- anticuerpo para identificar los puntos de contacto entre el anticuerpo y antigeno. Dichos residuos de contacto y residuos vecinos pueden ser localizados selectivamente o eliminados como candidatos para la substitución. Las variantes se pueden analizar para determinar si contienen las propiedades deseadas.

Las inserciones de secuencias de aminoácidos incluyen las fusiones de amino- y/o carboxilo-terminal que varían de extensión desde un residuo a los polipéptidos que contienen cien o más residuos, así como las inserciones intrasecuencia de residuos de aminoácidos únicos o múltiples. Los ejemplos de inserciones terminales incluyen la molécula de anticuerpo con un residuo metionilo N-terminal. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen la fusión a los extremos N- o C terminales del anticuerpo a una enzima (por ejemplo, para ADEPT) o un polipéptido que aumenta la vida media sérica del anticuerpo. b. Variantes de glicosilación En algunas formas de realización, el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente se altera para aumentar o disminuir el grado de glicosilación del anticuerpo. La adición o supresión de sitios de glicosilación en un anticuerpo se obtiene en forma conveniente por la alteración de la secuencia de aminoácidos de modo de crear o eliminar una o más de los sitios de glicosilación.

Cuando el anticuerpo comprende una región Fe, el hidrato de carbono adosado se puede alterar. Los anticuerpos nativos producidos por las células de mamífero generalmente comprenden un oligosacárido ramificado con dos antenas que en general está adosado a través de un enlace N a Asn297 del dominio CH2 de la región Fe. Ver, por ejemplo, Wright et al. TIBTECH 15:26- 32 (1997). El oligosacárido puede incluir diversos hidratos de carbono, por ejemplo, mañosa, N- acetilglucosamina (GlcNAc) , galactosa, y ácido siálico, así como una fucosa adosada a un GlcNAc en el "tallo" de la estructura de oligosacárido con dos antenas. En algunas formas de realización, se pueden hacer modificaciones del oligosacárido en un anticuerpo a fin de crear variantes de anticuerpo con ciertas propiedades mejoradas .

En algunas formas de realización, se proporcionan variantes de anticuerpo que tienen una estructura de carbohidrato que carece de mucosa unida (en : forma directa o indirecta) a una región Fe. Por ejemplo, la cantidad de mucosa en tal anticuerpo puede ser de 1% a : 80%. de 1% a 65%. de 5% a 65% o de 20% a 40%. La cantidad de mucosa se determina por el cálculo de la cantidad promedio de mucosa dentro de la cadena de azúcar en Asn297, con respecto a la suma de todas glicoestructuras unidas a Asn 297 (por ejemplo, estructuras de mañosa híbrida y alta, complejas) que se mide por espectrometría de masa ALDI-TOF, que se describe en, por ejemplo, WO 2008/077546. Asn297 se refiere al residuo de asparagina localizado en aproximadamente la posición 297 de la región Fe (numeración de Eu de los residuos de la región de Fe); sin embargo, Asn297 también se puede localizar aproximadamente ± 3 aminoácidos corriente arriba o corriente abajo de la posición 297, es decir, entre las posiciones 294 y 300, debido a variaciones de secuencia menores en los anticuerpos. Tales variantes de fucosilación pueden tener función de ADCC mejorada.. Ver, por ejemplo, Publicaciones de patente US Nros. US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) . Los ejemplos de publicaciones relacionadas con variantes de anticuerpo "desfucosiladas" o "deficientes en fucosa" incluyen: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; O 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742 ; WO2002/031140; Okazaki et al.

J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Los ejemplos de líneas celulares capaces de producir anticuerpos desfucosilados incluyen células CHO Lecl3 deficientes en la fucosilación ¡ de proteínas (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Solicitud de patente US N.° I 2003/0157108 Al, Presta, L; y WO 2004/056312 Al, Adams et ' al., especialmente en el Ejemplo 11), y líneas de células inactivadas tales como el gen de alfa-1, 6-! fucosiltransferasa FUT8, células CHO inactivadas (ver, ' por ejemplo, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: ¡ 614 (2004); Kanda, Y. et al. , Biotechnol . Bioeng., ! 94 (4) : 680-688 (2006); y O2003/085107 ) .

I También se proporcionan variantes de ! anticuerpos con oligosacáridos bisecados, por ejemplo, en i el que un oligosacárido biantenario fijado a la región Fe del anticuerpo se biseca con GlcNÁc. Dichas variantes de ¡ anticuerpo pueden tener fucosilación reducida y/o función de ADCC mejorada. Se describen ejemplos de dichas variantes de anticuerpo, por ejemplo, en WO 2003/011878 ¡ (Jean-Mairet et al.); Patente US N.° 6,602,684 (Umana et al.); y US 2005/0123546 (Umana et al.). También se ' proporcionan variantes de anticuerpo con al menos un I ! residuo de galactosa en el oligosacárido unido a la región Fe. Dichas variantes de anticuerpo pueden tener mejor función de CDC. Dichas variantes de anticuerpo se describen, por ejemplo, en WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); y WO 1999/22764 (Raju, S.).. c. región Fe variants En algunas formas de realización, se pueden introducir una o más modificaciones de aminoácidos en la región Fe de un anticuerpo provisto en la presente, de este modo se genera una variante de la región Fe. La variante de la región Fe puede comprender una secuencia de la región Fe humana (por ejemplo, una región Fe de IgGl, IgG2, IgG3 o IgG4 humana) que comprende una modificación de aminoácido (por ejemplo, una sustitución) en una o más posiciones de aminoácidos.

En algunas formas de realización, la invención contempla una variante del anticuerpo que posee algunas pero no todas las funciones efectoras, lo que la convierte en una candidata deseable que para muchas aplicaciones en las que la vida media del anticuerpo in vivo es importante, ya que ciertas funciones efectoras (tales como complemento y ADCC) son innecesarias o perjudiciales. Los ensayos de citotoxicidad in vitro y/o in vivo se pueden realizar para confirmar la reducción/depleción de las actividades de CDC y/o ADCC. Por ejemplo, los ensayos de unión al receptor de Fe (FcR) se pueden realizar para asegurar que el anticuerpo carezca de la unión a FcyR (por consiguiente probablemente que carezca de actividad ADCC) , pero retenga la capacidad de unión al FcRn. Las células principales para la mediación de ADCC, las células NK, expresan solo Fc(RIII, mientras que los monocitos expresan Fc(RI, Fc(RII y Fc(RIII. La expresión de FcR en las células hematopoyéticas se sintetiza en la Tabla 3 de la página 464 of Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991). Los ejemplos no limitantes de los ensayos in vi tro para evaluar la actividad de ADCC de una molécula de interés se describe en la Patente U.S. N.° 5.500.362 (ver, por ejemplo Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) y Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5.821.337 (ver Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). En forma alternativa, se pueden emplear métodos de ensayo no radiactivos (ver, por ejemplo, ensayo de citotoxicidad no radiactiva ACTI™ por citometria de flujo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; y ensayo de citotoxicidad no radiactiva CytoTox 96® (Promega, Madison, WI). Las células efectoras útiles para dichos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células citoliticas naturales (NK) . En forma alternativa o adicional, se puede evaluar la actividad de ADCC de la molécula de interés in vivo, por ejemplo, en un modelo animal tal como se describió en Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998) . Los ensayos de unión Clq también se pueden llevar a cabo para confirmar que el anticuerpo es incapaz de unirse a Clq y por consiguiente carece de actividad de CDC. Ver, por ejemplo, ELISA de unión de Clq y C3c en WO 2006/029879 y WO 2005/100402. Para evaluar la activación del commplemento, se puede realizar un ensayo CDC (ver, por ejemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); y Cragg, M.S. y M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)) . También se pueden realizar determinaciones de la unión de FcRn y la depuración/vida media in vivo usando métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18 (12) : 1759-1769 (2006) ) .

Los anticuerpos con función efectora reducida incluyen aquellos con sustitución de uno o más residuos de la región Fe 238, 265, 269, 270, 297, 327 y 329 (Patente U.S. N.° 6.737,056). Tales mutantes de Fe incluyen las mutantes de Fe con sustituciones en dos o más de las posiciones de aminoácidos 265, 269, 270, 297 y 327, qie incluyen la llamada mutante de Fe "DANA" con la sustitución de los residuos 265 y 297 para alanina (Patente US N.° 7.332.581).

Se describen ciertas variantes de anticuerpo con unión mejorada o disminuida a las FcR. (Ver, por ejemplo, Patente U.S. N.° 6.737,056; WO 2004/056312, y Shields et al., J. Biol . Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).

En algunas formas de realización, una variante del anticuerpo comprende una región Fe con una o más sustituciones de aminoácidos que mejoran la ADCC, por ejemplo, sustituciones en las posiciones 298, 333, y/o 334 de la región Fe (numeración EU de residuos) .

En algunas formas de realización, las : alteraciones se realizan, en la región Fe que produce unión a Ciq alterada (es decir, mejorada o disminuida) ¡ y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) , por ¡ ejemplo, como se describe en la Patente US N.° 6.194.551, WO 99/51642, y Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 : (2000).

Los anticuerpos con aumento de vida media y ' mejor unión al receptor neonatal receptor de Fe (FcRn), ¡ que es el responsable de la transferencia de las IgG . maternas al feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 ; (1976) y Kim et al., J. Immunol. 24 :249 (1994)), se , describen en US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Estos anticuerpos comprenden una región Fe con una o más I sustituciones en ella que aumentan la unión de la región Fe a FcRn. Tales variantes de Fe incluyen aquellas con sustituciones en uno o más residuos de la región Fe: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, ' 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 o 434, por ejemplo, substitución del residuo 434 de la región Fe 1 (Patente US N.° 7.371.826) .

Ver también Duncan & inter, Nature 322:738- 1 40 (1988); Patente U.S. N.° 5.648.260; Patente U.S. N.° 5.624.821; y O 94/29351 con respecto a otros ejemplos de las variantes de la región Fe. d., Variantes de anticuerpo con cisteina manipulada genéticamente , En algunas formas de realización, se puede ! desear crear anticuerpos manipulados genéticamente con cisteina, por ejemplo, " tioMAbs" , en los que uno o más ! residuos del anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente se sustituyen con ! residuos de cisteina. En formas de realización I particulares, los residuos sustituidos aparecen en sitios ¡ accesibles del anticuerpo. Al sustituir estos residuos , con cisteina, los grupos tiol reactivos en consecuencia ! se ubican en sitios accesibles del anticuerpo y se pueden usar para conjugar el anticuerpo con otros residuos, ! tales como residuos de fármaco o residuos de fármaco- . ligador, para crear un inmunoconjugado, como se describe ! adicionalmente en la presente. En ciertas formas de realización, alguno o más de los siguientes residuos se puede sustituir con cisteina: V205 (numeración de Kabat) de la cadena liviana; A118 (numeración de EU) de la cadena pesada; y S400 (numeración de EU) de la cadena pesada de la región Fe. Los anticuerpos manipulados genéticamente con cisteina se pueden generar como se describe, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 7.521.541. e. Derivados del anticuerpo En algunas formas de realización, el 1 anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica descripta en la presente también se puede modificar para contener residuos no proteináceos adicionales que son conocidos en la técnica y fácilmente disponibles. Los ¡ residuos adecuados para la derivatización del anticuerpo, incluyen pero sin limitación polímeros hidrosolubles . Los ejemplos no limitantes de polímeros hidrosolubles incluyen pero sin limitación, polietilenglicol (PEG), copolímeros de etilenglicol/propilenglicol, ¡ carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1, 3-dioxolano, poli-1,3,6-¡ trioxano, copolímero de etileno/anhídrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros o copolímeros aleatorios) , y dextrano o poli (n-vinil pirrolidona) polietilenglicol , homopolímeros de propropilenglicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol), alcohol polivinílico y sus mezclas. El polietilenglicol propionaldehído puede tener ventajas para la fabricación debida a su estabilidad en agua. El polímero puede ser de cualquier peso molecular y puede ser ramificado o no ramificado. El número de polímeros unidos al anticuerpo puede variar y si más de un polímero se une, estos pueden ser moléculas iguales o diferentes. En general, se puede determinar el número y/o el tipo de los polímeros usados para la derivatización sobre la base de las consideraciones que incluyen pero sin limitación, las propiedades o funciones particulares del anticuerpo mejorado, si el derivado del anticuerpo se usará en una terapia en condiciones patológicas definidas, etc.

En otra forma de realización, se proporcionan conjugados de un anticuerpo y residuo no proteináceo que se pueden calentar selectivamente por la exposición a la radiación. En una forma de realización, el residuo no proteináceo es un nanotubo de carbono (Kam et al., Proc. Nati. Acad. Sci . USA 102: 11600-11605 (2005)). La radiación puede ser de cualquier longitud de onda, e incluye pero sin limitación, longitudes de onda que no dañan las células comunes, pero que se calientan el residuo no proteináceo a una temperatura en la que se destruyen las células próximas al anticuerpo-residuo no proteináceo . 8. Inmunoconjugados Los inmunoconjugados que comprenden el anticuerpo anti-c-met conjugado a uno o más a uno o más agentes citotóxicos tales como un agentes quimioterapéuticos o fármacos, agentes inhibitorios del crecimiento, toxinas (por ejemplo, toxinas proteicas, toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, planta o animal o sus fragmentos) , o isótopos radiactivos están contemplados para usar en la formulación farmacéutica descripta en la presente.

En algunas formas de realización, un inmunoconj ugado es un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) en que un anticuerpo se conjuga a uno o más fármacos, que incluyen, pero sin limitación un maytansinoide (ver Patentes U.S. Nros . 5.208,020, 5.416,064 y Patente Europea EP 0 425 235 Bl); una auristatina tal como restos DE y DF de monometilauristatina fármaco (M AE y AF) (ver Patentes U.S. Nros. 5.635.483 y 5.780.588, y 7.498.298); una dolastatina; una calicheamicina o derivado de esta (ver Patentes U.S. Nros. 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.770.701, 5.770.710, 5.773,001, y 5.877.296; Hinman et al., Cáncer Res. 53:3336-3342 (1993); y Lode et al., Cáncer Res. 58:2925-2928 (1998)); una antraciclina tal como daunomicina o doxorrubicina (ver Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj . Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); y Patente U.S. N.° 6,630.579); metotrexato; vindesina; un taxano tal como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel, y ortataxel; un tricoteceno; y CC1065.

En algunas formas de realización, inmunocon ugado comprende el anticuerpo anti-c-met como se describe en la presente conjugado a una toxina enzimáticamente activa o fragmentos de este que incluyen, pero sin limitación, cadena A de difteria, fragmentos activos de no unión de la toxina de difteria, cadena de exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa) , cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modeccina, alfa-sarcina, proteina Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S) , inhibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina y los tricotecenos .

En algunas formas de realización, un inmunoconj ugado comprende el anticuerpo anti-c-met que se describe en la presente conjugado a un átomo radiactivo para formar un radioconj ugado . Una variedad de isótopos radiactivos están disponibles para la producción de los radioconjugados . Los ejemplos incluyen At211, I131, I125, v Y90, ?Re„186, R-,e„188, S™m153, nBi · 212, nP32 , P nb212 e„ i jsótopos radiactivos de Lu. Cuando el radioconjugado se usa para la detección, puede comprender un átomo radiactivo para los estudios centellográficos, por ejemplo tc99m o 1123, o una marca de espin para imagen de resonancia magnética nuclear (RMN) (también conocida como imagen de resonancia magnética, mri) , tales como nuevamente yodo 123, yodo 131, indio 111, flúor 19, carbono 13, nitrógeno 15, oxigeno 17, gadolinio, manganeso o hierro.

Los conjugados del anticuerpo anti-c-met y el agente citotóxico se preparan por medio una variedad de agentes de acoplamiento de la proteina bifuncional tales como propionato de N-succinimidil-3- (2-piridilditiol) (SPDP) , succinimidil-4- (N-maleimidometil ) ciclohexano-1-carboxilato (SMCC) , iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tal como adipimidato de dimetilo HC1) , ésteres activos (tal como suberato de disuccinimidilo) , aldehidos (tales como glutaraldehido) , compuestos bis-azido (tal como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina) , derivados de bis-diazonio (tal como bis-(p-diazoniobenzoil) -etilendiamina) , diisocianatos (tal como 2 , 6-diisocianato de tolueno), y compuestos de flúor bis-activo (tal como 1, 5-difluoro-2, 4-dinitrobenceno) . Por ejemplo se puede preparar una inmunotoxina de ricina como se describe en Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987). El ácido l-isotiocianatobencil-3-metildietilen triaminopentaacético marcado con carbono 14 (MX-DTPA) es un ejemplo de agente quelante para conjugación del radionucleótido al anticuerpo. Ver WO94/11026. El ligador puede ser un "ligador escindible" que facilita la liberación de un fármaco citotóxico en la célula. Por ejemplo, se puede usar un ligador lábil al ácido, ligador sensible a peptidasa, ligador fotolábil, ligador dimetilo o ligador que contiene disulfuro (Chari et al., Cáncer Res. 52:127-131 (1992); Patente U.S. N.° 5.208,020).

Los inmunoconjugados o ADC de la presente contemplan expresamente, pero sin limitación a tales conjugados preparados con reactivos de entrecruzamiento que incluyen, pero sin limitación, BMPS, E CS, GMBS, HBVS, LC-S CC, MBS, PBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-S CC, y sulfo-SMPB, y SVSB (succinimidil- (4-vinilsulfona) benzoato) que están disponibles en el comercio (por ejemplo, en Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., Estados Unidos), Métodos y composiciones recomblnantes El anticuerpo anti-c-met para usar en cualquiera de la formulaciones farmacéuticas descriptas en la presente se pueden producir usando métodos y composiciones recombinantes, por ejemplo, como se describe en la Patente U.S. N.° 4.816.567. En una forma de realización, se proporciona el ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo. Tal ácido nucleico puede codificar una secuencia de aminoácidos que comprende la VL y/o una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo (por ejemplo, las cadenas liviana y/o pesada del anticuerpo) . En una forma de realización adicional, se proporcionan uno o más vectores (por ejemplo, vectores de expresión) que comprenden tal ácido nucleico. En una forma de realización adicional, se proporciona una célula huésped que comprende tal ácido nucleico. En tal forma de realización, una célula huésped comprende (por ejemplo, ha sido transformada con): (1) un vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VL del anticuerpo y una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo, o (2) un primer vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VL del anticuerpo y un segundo vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo. La producción de un anticuerpo de una rama se describe, por ejemplo, en WO2005/063816.

En una forma de realización, la célula huésped es eucariótica, por ejemplo una célula de ovario de hámster chino (CHO) o célula linfoide (por ejemplo, células YO, NSO, Sp20) . En una forma de realización, se proporciona un método de obtener un anticuerpo, donde el método comprende cultivar una célula huésped que comprende un ácido nucleico que codifica el anticuerpo, provisto antes, en las condiciones adecuadas para la expresión del anticuerpo, y opcionalmente recuperar el anticuerpo de la célula huésped (o medio de cultivo de la célula huésped) .

Para la producción recombinante de anticuerpo, el ácido nucleico que codifica un anticuerpo, por ejemplo, como se describió anteriormente, se aisla e inserta en uno más vectores para la clonación adicional y/o para expresión en una célula huésped. Tal ácido nucleico se puede aislar fácilmente y secuenciar mediante procedimientos convencionales (por ejemplo, por medio de sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a los genes que codifican las cadenas pesadas y livianas del anticuerpo) .

Las células huésped adecuadas para la clonación o la expresión de los vectores que codifican el anticuerpo incluyen células procarióticas o eucarióticas que se describen en la presente. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden producir en las bacterias, en particular cuando no se necesitan la glicosilación y función efectora del Fe. Para la expresión de los fragmentos de anticuerpos y polipéptidos en las bacterias, ver, por ejemplo, patentes U.S. Nros. 5.648.237, 5.789.199 y 5.840.523, WO2005/063816 (Ver también Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp . 245-254, que describe la expresión de los fragmentos de anticuerpo en E. coli.) Después de la expresión, el anticuerpo se puede aislar de la pasta celular bacteriana en una fracción soluble y se puede purificar adicionalmente .

Además de procariotas, los microbios eucarióticos tales como los hongos filamentosos o levaduras son huésped de clonación o expresión adecuados : para los vectores que codifican anticuerpos, que incluyen cepas de hongos y levaduras cuyas vías de glicosilación i ¦ han sido "humanizadas", lo que origina la producción de un anticuerpo con un patrón de glicosilación parcial o completamente humano. Ver Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), y Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).

Las células huésped adecuadas para la expresión de anticuerpos glicosilados también derivan de organismos multicelulares (invertebrados y vertebrados). Los ejemplos de células de invertebrados incluyen células vegetales y de insectos. Se han identificado numerosas cepas y variantes baculovirales que se pueden usar en conjunto con las células de insecto, en particular para la transfección de las células de Spodoptera frugiperda .

Los cultivos celulares también se pueden utilizar como huéspedes. Ver, por ejemplo, Patentes U.S. Nros. 5.959.177, 6,040.498, 6.420.548, 7.125.978, y 6.417.429 (que describe la tecnología PLANTIBODIES™ para producir anticuerpos en plantas transgénicas ) .

Las células de vertebrados se pueden usar como huéspedes. Por ejemplo, las líneas celulares de mamífero que se adaptan a crecer en suspensión pueden ser útiles. Otros ejemplos de las líneas de células huésped de mamíferos útiles son la línea CV1 del riñon de mono transformadas por SV40 (COS-7) , línea de riñon embrionario humano (293 o células 293 como se describió, por ejemplo, en Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977))/ células de riñon de hámster bebé (BHK, ) , células de sertoli de ratón (células TM4 , como se describe, por ejemplo, en Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de riñon de mono (CV1), células de riñon de mono verde africano (VERO-76), células de carcinoma cervical humano (HELA) , células de riñon canino (MDCK) , células de hígado de rata búfalo (BRL 3A, ) , células de pulmón humano (W138 ), células de hígado humano (Hep G2); tumor mamario de ratón (MMT 060562), células TRI como se describe, por ejemplo, en Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44- 68 (1982), células MRC 5, células FS4. Otras líneas de células huésped de mamífero incluyen las células de ovario de hámster chino (CHO) que incluyen las células DFR-CHO (Urlaub et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)), y líneas celulares de mieloma tales como YO, NSO y Sp2/0. Para una revisión de ciertas líneas celulares huésped de mamífero adecuadas para la producción de anticuerpos, ver, por ejemplo, Yazaki y u, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ) , pp. 255-268 (2003).

Usos y métodos de tratamiento La formulaciones farmacéuticas provistas en la presente que comprende un anticuerpo anti-c-met son útiles para modular estados de enfermedad asociados con la desregulación del eje de señalización de HGF/c-met. La vía de señalización HGF/c-met está involucrada en múltiples funciones biológicas y fisiológicas, que incluyen, por ejemplo, proliferación celular y angiogénesis .

En la presente se proporcionan métodos de inhibir la proliferación celular activada por c-met, dicho método comprende poner en contacto una célula o tejido con una formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) que comprende una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-c-met, a través del cual se inhibe la proliferación celular asociada con la activación de c-met . En algunas formas de realización, el trastorno proliferativo celular se asocia con aumento de la expresión o actividad de c-met o crecimiento de hepatocitos, o ambos. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo a c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, por inmunohistoquimica) . En algunas formas de realización, la proliferación celular es cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, carcinoma de hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer es de estadio Illb y/o estadio IV. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer avanzado local o metastático. En algunas formas de realización, la terapia es terapia de segunda linea o tercera linea (por ejemplo, terapia de NSCLC de ¡ segunda linea o tercera linea) . En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR mutante. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR tipo salvaje. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo para c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, por inmunohistoquimica (IHC) ) . En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde i 1 el anticuerpo anti-c-met está presente en una . concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y ¡ aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de ' histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la ' sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es mayor de 0,02% p/v.

En la presente se proporcionan métodos de ; tratar una condición patológica asociada con la desregulación de la activación de c-met en un sujeto, dicho método que comprende administrar al sujeto una formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de la dilución (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) que comprende una cantidad efectiva del anticuerpo c-met, por medio de la cual se trata dicha afección. En algunas formas de realización, la condición patológica es cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, carcinoma de hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de estadio Illb y/o estadio IV. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer avanzado local o metastático. En algunas formas de realización, la terapia es terapia de segunda linea o tercera linea (por ejemplo, terapia de NSCLC de segunda linea o tercera linea) . La desregulación de la activación de c-met (y en consecuencia la señalización) puede resultar de numerosos cambios celulares, que incluyen, por ejemplo, la sobreexpresion de HGF (ligando del cognado de c-met) y/o c-met mismo. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR mutante. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR tipo salvaje. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo para c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, by IHC) . En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v.

También se proporcionan en la presente métodos de inhibir el crecimiento de una célula que expresa c-met o factor de crecimiento de hepatocitos, o ambos, dicho método que comprende poner en contacto dicha célula con una formulación farmacéutica descripta en la presente (por ejemplo, después de. la dilución (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) que comprende un anticuerpo anti-c-met de este modo se produce una inhibición del crecimiento de dicha célula. En algunas formas de realización, el crecimiento de dicha célula es al menos en parte dependiente de un efecto potenciador del crecimiento de c-met o el factor de crecimiento de hepatocitos, o ambos. En algunas formas de realización, la célula se pone en contacto con el HGF expresado por una célula diferente (por ejemplo, a través de un efecto paracrino) . En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 m ; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v.

En la presente también se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer que comprende administrar una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v (por ejemplo, después de la dilución a aproximadamente cualquiera de 0,75, 1, o 1,25 mg/ml (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) . En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo , onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 60 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración de aproximadamente 120 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es aproximadamente 0,04% p/v. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, carcinoma de hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de estadio Illb y/o estadio IV. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer avanzado local o metastático. En algunas formas de realización, la terapia es terapia de segunda linea o tercera linea {por ejemplo, terapia de NSCLC de segunda linea o tercera linea) . En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR mutante. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR tipo salvaje. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo para c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, by IHC) . En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamen e 15 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg administrada el día uno de un ciclo de 21 días. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg administrada el día 1 y 15 de un ciclo de 28 días.

Los métodos descriptos en la presente se pueden usar para afectar cualquier estado patológico adecuado, por ejemplo, células y/o tejidos asociados con la desregulación de la via de señalización de HGF/c-met. En algunas formas de realización de cualquiera de los métodos descriptos en la presente, una célula que se localiza selectivamente en un método de la presente es una célula cancerosa. Por ejemplo, una célula cancerosa puede ser una seleccionada del grupo que consiste una célula de cáncer de mamas, una célula de cáncer colorrectal, una célula de cáncer pulmonar, una célula de carcinoma papilar (por ejemplo, de la glándula tiroides) , una célula de cáncer de colon, una célula de cáncer pancreático, una célula de cáncer ovárico, una célula de cáncer cervical, una célula de cáncer del sistema nervioso central, una célula de sarcoma osteogénico, una célula de carcinoma renal, un carcinoma célula hepatocelular , una célula de cáncer de vejiga, una célula de carcinoma gástrico, una célula de carcinoma escamoso de cabeza y cuello, una célula de melanoma y una célula de leucemia. En algunas formas de realización, una célula que se localiza selectivamente en un método descripto en la presente es una célula hiperproliferativa y/o hiperplásica . En algunas formas de realización, una célula que se localiza selectivamente en un método descripto en la presente es una célula displásica. En aún otra forma de realización, una célula que se localiza selectivamente en un método descripto en la presente es una célula metastásica.

En algunas formas de realización de cualquiera de los métodos descriptos en la presente, el método también comprende etapas de tratamiento adicional. Por ejemplo, en algunas formas de realización, el método también comprende una etapa donde una célula y/o tejido localizado selectivamente (por ejemplo, una célula cancerosa) se expone a tratamiento de radiación o un segundo agente terapéutico (por ejemplo, agente quimioterapéutico) . Por ejemplo, se proporcionan métodos para tratar o prevenir cáncer que comprenden administrar (i) una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v (por ejemplo, después de la dilución a aproximadamente cualquiera de 0,75, 1, o 1,25 mg/ml (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente)) y (ii) a segundo agente terapéutico. En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de EGFR (por ejemplo, erlotinib) , inhibidor de VEGF (por ejemplo, bevacizumab) , taxano (por ejemplo, paclitaxel).

En algunas formas de realización de cualquiera de los métodos descriptos en la presente, el método también comprende administrar una cantidad efectiva de un segundo agente terapéutico. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg.

En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de EGFR. En algunas formas de realización, el inhibidor de EGFR es erlotinib (N- (3-etinilfenil) -6, 7-bis (2-metoxietoxi ) -4-quinazolinamina) . En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg administrada el dia uno de un ciclo de 21 días. Por ejemplo, se proporcionan métodos de tratar cáncer (por ejemplo, NSCLC) que comprenden administrar (i) una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v (por ejemplo, después de la dilución a aproximadamente cualquiera de 0,75, 1, o 1,25 mg/ml (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) , donde el anticuerpo anti-c-met se administra a una dosis de 15 mg/kg cada tres semanas; y (ii) erlotinib (N- ( 3-etinilfenil) -6, 7-bis (2-metoxietoxi) -4-quinazolinamina ) , donde erlotinib se administra a una dosis de 150 mg, cada día de un ciclo de tres semanas.

En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico es un taxano (por ejemplo, paclitaxel) . En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer de mamas es un cáncer de mamas metastático ER-negativo, PR-negativo, y HER2-negativo (ER-, PR-, y HER2-; o triple-negativo) . En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg en el dia 1 y día 15 de un ciclo de 28 dias. Por ejemplo, se proporcionan métodos para tratar cáncer (por ejemplo, cáncer de mamas) que comprende administrar (i) una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM;. y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v (por ejemplo, después de la dilución a aproximadamente cualquiera de 0,75, 1, o 1,25 mg/ml (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) , donde el anticuerpo anti-c-met se administra a una dosis de 10 mg/kg en el dia 1 y dia 15 de un ciclo de 28 días; y (ii) paclitaxel, donde ' paclitaxel se administra a una dosis de 90 mg/m2 por ¡ infusión IV en el dia 1, dia 8, y dia 15 del ciclo de 28 i días. En algunas formas de realización, el método aumenta la supervivencia del paciente, diminuye el riesgo de recurrencia del cáncer del paciente y/o aumenta la probabilidad de supervivencia del paciente. En algunas j formas de realización, el método también comprende , administración de un anticuerpo anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab) . Por ejemplo, se proporcionan métodos par tratar cáncer (por ejemplo, cáncer de mamas) que comprende administrar (i) una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v (por ejemplo, después de la dilución a aproximadamente cualquiera de 0,75, 1, o 1,25 mg/ml (por ejemplo, una formulación farmacéutica diluida descripta en la presente) ) , donde el anticuerpo anti-c-met se administra a una dosis de 10 mg/kg en el día 1 y dia 15 de un ciclo de 28 días; (ii) un anticuerpo anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab) , donde el anticuerpo anti-VEGF se administra a una dosis de 10 mg/kg en el dia 1 y Dia 15 del ciclo de 28 días; y (iii) paclitaxel, donde paclitaxel se administra a una dosis de 90 mg/m2 por infusión IV en el día 1, Día 8, y Día 15 del ciclo de 28 días.

La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se puede usar solo o en combinación con otros agentes en una terapia. Por ejemplo, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se puede coadministrar con un segundo agente terapéutico (por ejemplo, otro anticuerpo, agente quimioterapéutico (que incluye cócteles de agentes quimioterapéuticos) , otros agentes citotóxicos, agentes anti-angiogénicos, citoquinas, y/o agentes inhibidores del crecimiento) . En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico se administra en forma concurrente o secuencial. El segundo agente terapéutico se puede administrar de modo separado de la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met, pero como parte del mismo régimen de tratamiento. Cuando el anticuerpo anti-c-met de la formulación farmacéutica inhibe el crecimiento tumoral, puede ser particularmente ? conveniente combinarlo con uno o más agentes terapéuticos ¡ diferentes que también inhiben el crecimiento tumoral.

Por ejemplo, la formulación farmacéutica que comprende el ! anticuerpo anti-c-met se puede combinar con un inhibidor de EGFR, un anticuerpo anti-VEGF y/o anticuerpos anti-,- ErbB en un esquema de tratamiento, por ejemplo, para tratar cualquiera de las enfermedades que se describen en la presente, que incluyen cáncer colorrectal, cáncer de mamas metastásico y cáncer de riñon.

Tales terapias combinadas indicadas anteriormente abarcan la administración combinada (cuando se incluyen dos o más agentes en formulaciones iguales o separadas), administración simultánea, y separada, en tal caso, la administración de la formulación farmacéutica se puede producir antes, y/o después de la administración del agente terapéutico y/o adyuvante adicional.

Por consiguiente, en algunas formas de realización de cualquiera de los métodos descriptos en la presente, el método comprende dirigir una célula donde c— met o el factor de crecimiento de hepatocitos, o ambos, es expresado más abundantemente en dicha célula (por ejemplo, una célula cancerosa) en comparación con una célula normal del mismo origen tisular. Una célula que expresa c-met puede ser regulada por HGF de una variedad de fuentes, es decir de una manera autocrina o paracrina. La activación y/o señalización de c-met también se puede producir en forma independiente del ligando. En consecuencia, en algunas formas de realización de cualquiera de los métodos, la activación de c-met en una célula localizada selectivamente se produce en forma independiente del ligando.

. La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se puede administrar a un sujeto humano con fines terapéuticos. Además, la formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se puede administrar a un mamífero no humano que expresa un antígeno con el que reacciona en forma cruzada la inmunoglobulina (por ejemplo, un primate, cerdo o ratón) para fines veterinarios o como un modelo animal de enfermedad humana.

La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se puede usar para tratar, inhibir, retrasar la progresión de, prevenir/retrasar la recurrencia de, mejorar, o prevenir enfermedades, trastornos o afecciones asociados con la expresión y/o actividad anormal de una o más moléculas de antígeno, que incluyen, pero sin limitación tumores malignos y benignos; neoplasias no leucémicas y linfoides; trastornos neuronales, gliales, astrocíticos , hipotalámicos y otros glandulares, de macrófagos, epiteliales, estromales y blastocélicos ; y trastornos inflamatorios, angiogénicos e inmunológicos .

En algunas formas de realización de cualquiera de los métodos, una formulación farmacéutica que comprende un inmunoconj ugado que comprende el anticuerpo anti-c-met conjugado con un agente citotóxico que se administra al paciente. En algunas formas de realización, el inmunoconjugado y/o antigeno al que se une es incorporado por la célula, lo que produce aumento de la eficacia terapéutica del inmunocon ugado para destruir la célula blanco a la que se une. En algunas formas de realización, el agente citotóxico se dirige o interfiere al ácido nucleico en la célula blanco.

La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met (y cualquier agente terapéutico adicional) se puede administrar por cualquier medio adecuado, que incluye parenteral, intrapulmonar, e intranasal, y, si se desea para tratamiento local, administración intralesional . Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal , o subcutánea. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica se administra por vía intravenosa. La dosificación puede ser por cualquier vía adecuada, por ejemplo, por inyecciones, tales como inyecciones intravenosas o subcutáneas, de acuerdo en parte con si la administración es breve o crónica. En la presente se contemplan varios esquemas de dosis que incluyen, pero sin limitación, administraciones simples o múltiples durante varios puntos de tiempo, administración en bolo, e infusión por pulsos.

La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se dosifica y administra de una manera compatible con la buena práctica médica. Los factores para consideración en este contexto incluyen el trastorno particular tratado, el mamífero particular tratado, la condición clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el método de administración, el esquema de administración, y otros factores conocidos para los profesionales médicos. La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met no necesita, pero opcionalmente se formula con uno o más agentes usados actualmente para prevenir o tratar el trastorno en cuestión. La cantidad efectiva de estos otros agentes depende de la cantidad de anticuerpos presentes en la formulación, el tipo de trastorno o tratamiento, y otros factores descriptos anteriormente. Estos se usan generalmente en las mismas dosis y vías de administración usadas anteriormente en la presente o aproximadamente de 1 a 99% de las dosis empleadas hasta ahora s descriptas en la presente o cualquier dosis y por cualquier vía que se determine apropiada en forma empírica/clínica.

Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosis apropiada del anticuerpo anti-c-met en la formulación farmacéutica (cuando se usa sola o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales) dependerá del tipo de enfermedad tratada, el tipo de anticuerpo, la gravedad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo anti-c-met en la formulación farmacéutica se administra con fines preventivos o terapéuticos, terapia previa, los antecedentes clínicos del paciente y la respuesta al anticuerpo anti-c-met, y el criterio del médico asistente. La formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met se administra adecuadamente al paciente de una vez o en una serie de tratamiento. De acuerdo con el tipo y gravedad de la enfermedad, aproximadamente una dosis de 10 mg/kg, aproximadamente 15 mg/kg o más (por ejemplo, 15-20 mg/kg) del anticuerpo anti-c-met se administra al paciente, sea, por ejemplo, en una o más administraciones separadas, o por infusión continua. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg administrada el día uno de un ciclo de 21 días. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg administrada el día 1 y 15 de un ciclo de 28 días.

Las dosis se pueden administrar de modo intermitente, por ejemplo, aproximadamente una vez por semana, cada dos semanas, cada tres semanas, o cada cuatro semanas.

En las administraciones repetidas durante varios días o más, de acuerdo con la afección, el tratamiento generalmente puede ser sostenido hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, pueden ser útiles otros regímenes de dosis. El proceso de esta terapia se controla fácilmente por técnicas y ensayos convencionales .

Artículos de manufactura El artículo de manufactura que comprende la formulación farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-c-met descriptos en la presente para el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de los trastornos descriptos anteriormente. El artículo de manufactura comprende un recipiente y una marca o prospecto asociado con el recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo frascos, viales, jeringas, bolsas de solución IV, etc. Los recipientes pueden estar construidos de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente porta formulación farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-c-met por sí misma o combinada con otras composición efectiva para tratar, prevenir y/o diagnosticar la afección y puede tener una puerta de acceso estéril (por ejemplo el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja inyectable hipodérmica) . Por ejemplo, en la presente se proporcionan artículos de manufactura y. kits que comprenden un recipiente con una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v contenido en esta. En algunas formas de realización, la formulación farmacéutica . comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab), donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 60 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 m ; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración de aproximadamente 120 mM; y (d) un polisorbato, donde la concentración de polisorbato es aproximadamente 0,04% p/v. La marca o prospecto indica que la composición se usa para tratar la afección de elección, tal como cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de estadio Illb y/o estadio IV. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer avanzado local o metastático. En algunas formas de realización, la terapia es terapia de segunda linea o tercera línea (por ejemplo, terapia de NSCLC de segunda línea o tercera línea) . En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR mutante. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR tipo salvaje. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo para c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, por inmunohistoquímica) . En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg administrada el día uno de un ciclo de 21 días. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 10 mg/kg administrada el día 1 y 15 de un ciclo de 28 días.

El articulo de manufactura de esta forma de realización puede comprender adicionalmente un prospecto que indica que las primera y segunda composiciones de anticuerpos se pueden usar para tratar una afección particular, por ejemplo, cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) , glioblastoma , cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, o cáncer de mamas. En algunas formas de realización, el cáncer es de estadio Illb y/o estadio IV. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer avanzado local o metastático. En algunas formas de realización, la terapia es terapia de segunda linea o tercera linea (por ejemplo, terapia de NSCLC de segunda linea o tercera linea) . En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR mutante. En algunas formas de realización, el cáncer es EGFR tipo salvaje. En algunas formas de realización, el cáncer es positivo para c-met (expresa niveles altos de c-met, por ejemplo, por inmunohistoquimica) . En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo ant -c-met es aproximadamente 15 mg/kg. En algunas formas de realización, la dosis de anticuerpo anti-c-met es aproximadamente 15 mg/kg administrada el día uno de un ciclo de 21 días.

Alternativamente o adicionalmente, en algunas formas de realización de cualquiera de los artículos de manufactura, el artículo de manufactura también puede comprender un segundo recipiente (o tercer) que comprende un buffer farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina regulada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. También puede incluir otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, que incluye otros buffer, diluyentes, filtros, agujas y jeringas., Además, el artículo de manufactura puede comprender (a) un primer recipiente con una formulación farmacéutica descripta en la presente que comprende un anticuerpo anti-c-met allí contenido; y (b) un segundo recipiente con una composición allí contenida, donde la composición comprende un agente citotoxico adicional. Por ejemplo, el artículo de manufactura puede comprender (i) un primer recipiente con una formulación farmacéutica que comprende (a) un anticuerpo anti-c-met (por ejemplo, onartuzumab) , donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 50 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml; (b) un buffer de acetato de histidina a pH 5,0-5,4, donde el buffer de acetato de histidina está en una concentración entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM; (c) sacarosa, donde la sacarosa está en una concentración entre aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM; y (d) polisorbato 20, donde la concentración de polisorbato 20 es mayor de 0,02% p/v; y (ii) un segundo recipiente con una composición allí contenida, donde la composición comprende un segundo agente terapéutico..

En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de EGFR. En algunas formas de realización, el inhibidor de EGFR es erlotinib ! (N- ( 3-etinilfenil ) -6, 7-bis ( 2-metoxietoxi ) -4- quinazolinamina ) . En algunas formas de realización, el ¡ articulo de manufactura comprende instrucciones para la administración de aproximadamente 15 mg/kg administrada el día uno de un ciclo de 21 días de formulación de ! anticuerpo anti-c-met y 150 mg, cada día de un ciclo de j tres semanas de erlotinib. En algunas formas de realización, el articulo de manufactura comprende instrucciones para el tratamiento del cáncer (por 1 ejemplo, NSCLC) .

En algunas formas de realización, el segundo agente terapéutico es un taxano (por ejemplo, paclitaxel). En algunas formas de realización, el articulo de manufactura comprende instrucciones para la administración de aproximadamente 10 mg/kg. en el día 1 y día 15 de un ciclo de 28 días de la formulación de anticuerpo anti-c-met y 90 mg/m2 por infusión IV en el día 1, día 8, y día 15 del ciclo de 28 dias de paclitaxel. En algunas formas de realización, el articulo de manufactura comprende un tercer recipiente con una composición contenida en este, donde la composición comprende un tercer agente terapéutico, donde el tercer agente terapéutico es un anticuerpo anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab) . En algunas formas de realización, el articulo de manufactura comprende instrucciones para la administración de aproximadamente 10 mg/kg. en el día 1 y día 15 de un ciclo de 28 dias del formulación de anticuerpo anti-c-met, 90 mg/m2 por infusión IV en el día 1, día 8, y día 15 del ciclo de 28 dias de paclitaxel, y 10 mg/kg en el día 1 y Dia 15 del ciclo de 28 dias del anticuerpo anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab) . En algunas formas de realización, el articulo de manufactura comprende instrucciones para el tratamiento del cáncer. En algunas formas de realización, el cáncer es cáncer de mamas (por ejemplo, cáncer de mamas metastático ER- negativo, PR-negativo, y HER2-negativo (ER-, PR-, y HER2- ; o triple-negativo) ) . En algunas formas de realización, el método aumenta la supervivencia del paciente, disminuye el riesgo de recurrencia del cáncer del paciente y/o aumenta la probabilidad de supervivencia del . paciente.

Se entiende que cualquiera de los artículos de manufactura anteriores puede incluir un inmunoconjugado del anticuerpo anti-c-met descripto en la presente en lugar o además del anticuerpo anti-c-met.

En la presente también se proporcionan métodos ! de fabricar cualquiera de los artículos de manufactura , descriptos en la presente.

Los siguientes son ejemplos de las formulaciones farmacéuticas. Se considera que se pueden practicar varias formas de realización diferentes, dada la descripción general provista anteriormente.

EJEMPLOS Ejemplo 1-Efecto del pH y buffer sobre la agregación y estabilidad química de las formulaciones líquidas de Onartuzumab Las formulaciones iniciales de anticuerpo anti-c-met, onartuzumab, mostraron aumento de las especies de peso molecular bajo (LMWS) detectadas por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) cuando se almacenan a 5°C con en tiempo. Debido al aumento de LMWS, inicialmente no se buscó una formulación liquida, y se desarrolló una formulación liofilizada con 20 mg/ml de onartuzumab, 10 mM de succinato de histidina, 4% dihidrato de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,7.

En un esfuerzo para desarrollar y determinar la factibilidad de una formulación liquida y aumentar la concentración del anticuerpo, se realizaron pruebas de pH y excipiente.

La viscosidad y estabilidad de onartuzumab a varias concentraciones (20-100 mg/ml) se evaluó en diferentes buffer: a) 10 mM de acetato de histidina, 0,02% de polisorbato 20, y 120 mM de trehalosa, b) 10 mM succinato de histidina, 0,02% de polisorbato 20, y 120 mM de trehalosa, y c) 200 mM de succinato de arginina y 0,02% de polisorbato 20. La formulación que incluye succinato de arginina presentó formación del agregado más rápida a temperaturas acelerada (datos no mostrados) . La viscosidad fue aceptable para todas las formulaciones evaluadas .

El efecto del pH sobre la agregación y estabilidad química de onartuzumab se evaluó en las siguientes formulaciones liquidas: a) 20 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,2, b) 20 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,7, y c) 20 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 6,2. Las muestras se mantuvieron a 25°C o 40°C en el tiempo y se evaluó la formación de agregado y estabilidad química aproximadamente cada quince. La formación del agregado se midió por medio de cromatografía de exclusión por tamaño que caracteriza los cambios de heterogeneidad de tamaño mediante una columna de exclusión por tamaño TSK G3000 SWXL.

Como se muestra en la Figura 4, el pH más alto de 6,2 produjo un aumento de la formación del agregado indicado por el % de especies de peso molecular alto (HMWS) a 40°C en comparación con el pH 5,2 o 5,7. La formulación con un pH 5,2 presentó la menor formación del agregado indicado por el % de HMWS.

El efecto del pH sobre la agregación y estabilidad química de onartuzumab también se evaluó usando una concentración de anticuerpo más alta con las siguientes formulaciones líquidas: a) 40 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,1, b) 40 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,4, y c) 40 mg/ml de onartuzumab en 10 m de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,7. Las muestras se mantuvieron a 25°C o 40°C con el tiempo y se evaluó la formación de agregado y estabilidad química aproximadamente cada cuatro semanas. La formación del agregado se midió como se detalló anteriormente. Como se muestra en las Figuras 5 y 6, el pH más bajo (por ejemplo, pH 5,4 y 5,1) produjo la disminución de la formación del agregado indicado por el % de HMWS a temperaturas aceleradas (25°C y 40°C) en comparación con el pH 5,7.

La estabilidad química se midió usando la cromatografía de intercambio iónico que caracteriza los cambios en la heterogeneidad de carga usando una columna de intercambio iónico Dionex CX-10 (IEC) y elución con un gradiente de sales.

Como se muestra en la Figure 7, si bien el pH más bajo produjo disminución de la formación del agregado, hubo una estabilidad química similar medida por IEC entre pH 5,1 y 5,7 a temperaturas aceleradas a 25°C y 40°C. Sobre la base de estos hallazgos, se utilizó una formulación que incluye buffer de histidina (por ejemplo, acetato de histidina) y pH 5,4 para la experimentación adicional . emplo 2- Efecto de la concentración de polisorhato sobre la sa y grado de degradación del polisorhato Se utiliza polisorbato en las formulaciones de polipéptido para minimizar la adsorción a las superficies y reducir la tensión superficial interfacial aire-liquido y en consecuencia la tasa de desnaturalización de la proteina. La pérdida de polisorbato en una formulación farmacéutica puede producir la inestabilidad de la formulación. Además, los polisorbatos se pueden degradar por oxidación e hidrólisis que pueden llevar a una disminución de la concentración aparente de polisorbato en la formulación farmacéu ica durante la vida media larga. Estos degradantes de polisorbato son menos tensioactivos que el polisorbato no degradado y en consecuencia la estabilidad química y física de la formulación farmacéutica puede estar comprometida. Además, algunos degradantes de polisorbato son insolubles y pueden formar partículas si no se solubilizan con polisorbato intacto, es decir, si la relación del polisorbato 20 degradado: polisorbato intacto 20 es demasiado alta.

La tasa y grado de degradación de polisorbato se evaluó en una formulación de onartuzumab que incluye 60 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de sacarosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,4 a 40°C a lo largo del tiempo. La concentración de polisorbato 20 se evaluó con un ensayo basado en la retención del polisorbato por una columna de intercambio iónico de modo mixto y la posterior elución con un gradiente escalonado. La detección se realizó usando un detector de dispersión luminosa evaporativa (ELSD) . La tasa de degradación y la relación de polisorbato 20 degradado : polisorbato intacto 20 fue más alta que la esperada en la formulación de onartuzumab a 40°C a lo largo del tiempo. La tasa de degradación y la relación de polisorbato 20 degradado : polisorbato intacto 20 mayor que la esperada puede producir inestabilidad de la formulación de onartuzumab y la formación de partículas después del almacenamiento extendido.

El porcentaje de polisorbato 20 aumentó en la formulación de onartuzumab y la tasa y grado de degradación del polisorbato se evaluó en las formulaciones de onartuzumab: a) 60 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de sacarosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,4 y b) 60 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de sacarosa, 0,04% de polisorbato 20, pH 5,4 a 40°C a lo largo del tiempo que se describió anteriormente. De modo sorprendente, como se muestra en la Figura 8, el aumento de la concentración de polisorbato 20 no solo aumentó los ! niveles totales de polisorbato 20 disponibles para | estabilizar la formulación de onartuzumab, sino que también disminuyó la relación polisorbato 20 degradado : polisorbato intacto 20 a 40°C a lo largo del ¡ tiempo, de este modo aumenta la estabilidad de la formulación de onartuzumab después del almacenamiento i extendido.

Ejemplo 3- Efecto de la concentración de polisorbato sobre el % de especies de peso molecular alto después de la dilución y agitación j Antes de la administración, la formulación de j onartuzumab se diluye con un diluyente (por ejemplo, solución salina) para infusión intravenosa. Después de la ¡ dilución, la concentración de polisorbato 20 se reduce significativamente, y la estabilidad de onartuzumab en la formulación puede estar comprometida, por ejemplo, por la ' agregación de polipéptido que se evidencia por el % de ¡ HMWS, cuando la formulación de onartuzumab diluida (por ejemplo, bolsa IV y/o conjunto de administración IV) se ¦ agita (por ejemplo, durante el transporte) . Como se ¡ describió previamente, la agregación de onartuzumab monovalente (formación de multimeros y oligómeros) y/o falla para mantener la estructura monovalente puede i llevar a un efecto agonista no deseable.

Para evaluar la . estabilidad del polipéptido y , el grado de agregación después de la dilución, las 1 formulaciones de onartuzumab, a) 60 mg/ml de onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de trehalosa, 0,02% de polisorbato 20, pH 5,4 y b) 60 mg/ml onartuzumab en 10 mM de acetato de histidina, 120 mM de sacarosa, 0,04% de polisorbato 20, pH 5,4, se diluyeron a 1 mg/ml en bolsas IV (PVC) con 0,9% de NaCl. Las bolsas se I agitaron (agitador orbital, 100 rpm) a temperatura ambiente para la formulación (a) y 30°C para la I I ¡ formulación (b) .

Como se muestra en la Figura 9, el % de HM S I : después de la agitación se redujo significativamente en la formulación (b) que comprende 0,04% de polisorbato 20 I I 1 en comparación con formulación (a) que comprende 0,02% de polisorbato.

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Si bien la invención anterior se ha descripto ' en algún detalle a modo de ilustración y ejemplo con ! fines de claridad de comprensión, las descripciones y ¡ ejemplos no se deben interpretar como limitación del alcance de la invención. Las descripciones de todas las patentes y bibliografía científica se incorporan ! expresamente en su totalidad por referencia. i I

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Una formulación farmacéutica que comprende: (a) un anticuerpo anti-c-met; (b) un buffer de histidina a pH 5,0-5,4; (c) un sacárido; y (d) un polisorbato, donde el polisorbato está presente en más de 0,02% p/v. 2. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, donde el anticuerpo anti-c-met que comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia KSSQSLLYTSSQKNYLA (SEQ ID NO:l), una HVR-L2 que comprende la secuencia WASTRES (SEQ ID NO:2), una HVR-L3 que comprende la secuencia QQYYAYPWT (SEQ ID NO: 3), una HVR-H1 que comprende la : secuencia GYTFTSYWLH (SEQ ID NO:4), una HVR-H2 que comprende la secuencia G IDPSNSDTRFNPNFKD (SEQ ID NO:5), y a HVR-H3 que comprende la secuencia ATYRSYVTPLDY (SEQ ID NO: 6). 3. . La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFN PNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDY GQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 19) y (b) un dominio variable de la cadena liviana que comprende la secuencia: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTR ESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR ( SEQ ID NO:20) . 4., La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el anticuerpo anti-c-met comprende una rama de unión al antigeno única y comprende una re'gión Fe, donde la región Fe comprende un primer y un segundo polipéptido de Fe, y donde el primer y segundo poiipéptido de Fe están presentes en un complejo. 5.' La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, donde el primer y segundo polipéptido de Fe forma una región Fe que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprende dicha rama de unión con el antigeno. 6., La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1-5, donde el anticuerpo anti-c-met comprende (a) un primer polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 19, una secuencia de CH1, y un primer polipéptido de Fe y (b) un segundo polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 y secuencia de CL1. 7. i La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, donde el anticuerpo anti-c-met también comprende (c) un tercer polipéptido que comprende un segundo polipéptido de Fe. 8. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde el primer polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 2 (SEQ ID NQ: 17) y el segundo polipéptido de Fe comprende la secuencia de Fe ilustrada en la Figura 3 (SEQ ID NO: 18). 9 La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de la;s reivindicaciones 1-8, donde el anticuerpo anti-c-met es on'artuzumab. 10!. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde el anticuerpo anti-c-met se une al mismo epitope que onartuzumab. 11. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración entre aproximadamente 10 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml (por ejemplo, aproximadamente 15 mg/ml y aproximadamente 75 mg/ml) . 12. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11, donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 60 mg/ml. 131 La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde el sacárido está presente en una concentración de aproximadamente 75 mM a aproximadamente 200 mM (por ejemplo, aproximadamente 100 mM a aproximadamente 150 mM) . 1 . La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, donde el sacárido está presente en una concentración de aproximadamente 120 mM. 15. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el sacárido es un disacárido . 16.. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, donde el disacárido es trehalosa. 17;. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, donde el disacárido es sacarosa. 18'. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-17, donde el buffer de histidina está en, una concentración de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 50 mM (por ejemplo, aproximadamente 1 mM a aproximadamente 25 mM) . 19 '. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 18, donde el buffer de histidina está en una concentración de aproximadamente 10 mM. 20: La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde el buffer de histidina es acetato de histidina. 21.1 La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-20, donde el polisorbato está presente en una concentración mayor de 0,02% y menor de aproximadamente 0,1%. 22 J La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 21, donde el polisorbato está presente en una concentración de aproximadamente 0,04%. 23. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-22, donde el polisorbato es polisorbato 20. 24. La formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-23, donde la formulación se diluye con un diluyente {por ejemplo, 0,9% de NaCl) . 25. La formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 24, donde el anticuerpo anti-c-met está presente en una concentración de aproximadamente 1 mg/ml. 26. Un método de inhibir proliferación celular activada por c-met, dicho método que comprende poner en contacto una célula o tejido con una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25. 27. Un método de modular una enfermedad asociada con la desregulación del eje de señalización de HGF/c-met, dicho método que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25. 28.' Un método de tratar un sujeto que tiene un trastorno proliferativo, dicho método que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de la formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25. 29. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde el trastorno proliferativo es cáncer. 30% El método de acuerdo con la reivindicación 29, donde el cá'ncer es cáncer pulmonar (cáncer pulmonar de células no pequeñas (NSCLC) ) , glioblastoma, cáncer pancreático, sarcoma, carcinoma de células renales, carcinoma de hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, y/o cáncer de mamas. 31,. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 26-30, que además comprende un segundo agente terapéutico. 32. Un método de preparar una formulación farmacéutica de I acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25. 33'. Un articulo de manufactura que comprende un recipiente con la formulación farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-25 contenidas en el mismo. 34 L Un método de fabricar el articulo de manufactura de acüerdo con la reivindicación 33.