KR20230008751A - 피부 t-세포 림프종 및 tfh 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법 - Google Patents

피부 t-세포 림프종 및 tfh 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법 Download PDF

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위니베르시떼 덱스-마르세이유
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Abstract

본 발명은 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및 TFH 유래된 림프종의 치료에 관한 것이다. 이 연구에서, 발명자는 질환의 상이한 단계에서 MF 및 SS를 지닌 환자(CTCL)의 피부, 및 SS를 지닌 환자의 혈액에서 종양 세포에 의한 ICOS의 발현을 입증하였다. 따라서, 아이디어는 ICOS에 대한 ADC-항체 세부사항을 사용하여 이러한 종양 세포를 사멸하는 것이었다. 세포주 뮤린 이종이식체 모델 및 환자 유래된 이종이식체(PDX) 덕분에, 이는 CTCL 및 AITL와 같은 TFH-유래된 림프종에서 이러한 항-ICOS ADC의 효능을 나타내었다. 따라서, 본 발명은, 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료에서 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다.

Description

피부 T-세포 림프종 및 TFH 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법
본 발명은 피부 T-세포 림프종(cutaneous T-cell lymphoma; CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 이를 필요로 하는 대상체에서의 치료 시에 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다.
원발성 피부 T-세포 림프종(CTCL)은 (1) 균상 식육종(mycosis fungoides; MF) 및 가장 일반적인 아형인, 시자리 증후군(S
Figure pct00001
zary syndrome; SS)과 함께 모든 원발성 피부 림프종의 대략 2/3을 차지한다(1). MF 및 SS 둘 다는 피부에서 성숙한 T-헬퍼 림프구의 모노클로날 증식(monoclonal proliferation)에 의해 특성화된다. MF 내 종양 세포는 CD7의 흔한 손실과 함께 전통적으로 CD3+CD4+CD8-이다(2). 시자리 세포(순환하는 악성 림프구)는 CD4+CD7-, 및/또는 CD4+CD26-이고 CD158k(KIR3DL2)를 흔하게 발현한다(3). CD158k는 혈액 및 피부에서 시자리 세포의 검출을 위한 가장 민감한 마커이다(4-6). 프로그램화된 사멸(Programmed Death)-1(PD-1)은 또한 피부 및 혈액 속에서 신생물 T-세포에 의해 또한 발현되며(7,8) SS 피부 병변의 진단을 위한 유용한 마커를 나타낸다(9). 그러나, 시자리 세포의 표현형은 환자들 사이에서 크게 변한다(5,10).
진전된 CTCL에는 충족되지 않은 의학적 필요성이 남아있다. 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E; MMAE)에 연결된 항-CD30 항체-약물 접합체(항체-drug conjugate; ADC)는 환자 결과에서 유의적인 장기간 개선을 전달하지 않는다. 보다 최근에, 모가물리주맙(12) 및 항-KIR3DL213은 고무적인 결과를 제공하였지만 신규의 표적화된 치료요법이 요구되고 있다.
림프종생성(lymphomagenesis)에서, 종양 T-세포는 이것이 생존, 증식, 및 세포자멸사(apoptosis)를 견디도록 하는 공자극성 수용체, 및 이의 기능적 고갈과 관련된 공억제성 수용체(coinhibitory receptor) 둘 다를 과발현할 수 있다(14,15). CTCL에서, 종양 성장은 공자극성 및 공억제성 수용체 둘 다에 의해 유도된다(16). 한편, CTCL에서 종양 및 비-종양 CD4 T-세포는 광범위한 공자극성 수용체, 예를 들면, PD-1을 발현한다(16). 다른 한편, MF를 지닌 환자의 작은 코호트(cohort)에서, 면역조직화학적 분석은 또한 악성 T-세포의 표면에서 공자극성 수용체, 예를 들면, 유도성 T 세포 공자극인자(ICOS)의 상향조절(upregulation)을 나타내었다(17). 보다 최근에, CTCL을 지닌 환자로부터의 피부 생검의 상피 및 피부 이식 배양물의 분석은, 그러나, 이러한 림프구의 종양성 또는 반응성 특성을 명시하지 않고, 건강한 공여자 피부로부터의 샘플에서보다 CTCL 샘플에서 보다 많은 ICOS+ T-세포가 존재하였음을 나타내었다(16).
ICOS(CD278, AILIM, H4)는 T-세포 향상을 위한 공자극성 수용체이고 B7/CD28 수용체 상과의 구성원이다(18). 이는 활성화된 T 림프구(CD4 및 CD8 효과기, T 소포성 헬퍼(T follicular helper)[TFH], 자극성 T 세포[Tregs])에서 상향조절된다. 나이브(na
Figure pct00002
ve) T-세포는 낮은 수준의 ICOS를 발현하지만 이의 발현은 T-세포 수용체 개입(engagement) 후 신속하게 유도된다. 이의 독특한 리간드, ICOSL은 항원-제시 세포(antigen-presenting cell)인, B-세포, 및 많은 비-조혈 세포에 의해 발현된다. 이의 리간드에 의한 ICOS의 개입은 증식, 생존, 분화, 및 사이토킨 생산을 유도함으로써, 항원-특이적인 면역 반응을 강화시킨다.
TFH-유래된 종양 세포에 의한 고 수준의 ICOS 발현은 대략 20년 동안 알려져 왔다(20,21). 혈관면역모구 T-세포 림프종(angioimmunoblastic T-cell lymphoma; AITL) 및 원발성 피부 CD4+ 작은/중간 T-세포 림프-증식성 장애(primary cutaneous CD4+ small/medium T-cell lympho-proliferative disorder; PCSMTLPD)에서 악성 세포는 ICOS를 광범위하게 발현한다. 더욱이, 활성화된 Treg는 또한 ICOS를 발현하고(19), ICOS+ Treg는 ICOS- Treg보다 더 높은 면억억제성 능력을 나타낸다(22). 최근에, 게스킨(Geskin) 등(23)은 SS를 지닌 환자의 혈액에서 고 수준의 Treg를 확인하였다. Treg에서 모가물리주맙의 억제성 영향은 SS에서 이의 효능을 설명한다(24).
따라서, ICOS는 수개의 말초 T-세포 림프종(peripheral T-cell lymphoma; PTCL)으로 인하여, 유사하게는 악성 T-세포 및 Treg 둘 다에 의해 촉망되는 치료학적 표적이다.
본 연구에서, 본 발명자는 질환의 상이한 단계에서 MF 및 SS를 지닌 환자(CTCL)의 피부, 및 SS를 지닌 환자의 혈액에서 종양 세포에 의한 ICOS의 발현을 입증하였다. 따라서, 아이디어는 ICOS에 대한 ADC-항체 세부사항(specifics)을 사용하여 이러한 종양 세포를 사멸하는 것이었다. 세포주 뮤린(murine) 이종이식체 모델 및 환자 유래된 이종이식체(Patient Derived Xenograft; PDX) 덕분에, 이는 TFH-유래된 림프종, 예를 들면, CTCL 및 AITL에서 이러한 항-ICOS ADC의 효능을 나타내었다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(cutaneous T-cell lymphomas; CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료 시에 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된다.
본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료 시에 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항-ICOS 항체"는 ICOS 또는 ICOS-리간드(ICOS 경로)를 표적화할 수 있는 모노클로날 항체를 나타낸다. 이러한 항체는 ICOS 또는 ICOS-L에 결합할 수 있고 ICOS 경로의 활성, 예를 들면, PI3K/AKT 신호전달 경로 및 상기 경로의 항-종양 T 세포 반응의 향상을 차단하거나 ICOS, ICOS-L 또는 재조합 단백질 ICOS-L에 바로 결합한다.
본 발명에 따르면, ICOS-L은 재조합 사람 B7-H2 Fc 키메라 단백질, CF일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "유도성 T 세포 공자극인자"에 대한 용어 "ICOS"(CD278, AILIM, H4)는 이의 세포외 부분에서 IgV 형 도메인 및 이의 세포질성 부분에서 YMFM 모티프(motif) 내에 타이로신을 나타내는 55 내지 60kDa의 막관통 단독이량체성 당단백질을 지칭한다. 이의 독특한 리간드(ICOSL, CD275, B7-H2, B7h, B7RP-1)와 ICOS의 개입은 ICOS의 세포질성 부분에서 타이로신의 포스포릴화를 유도한다. 상기 포스포릴화는 p85 PI3K 조절성 소단위의 보충에 관여하며, 이는 PI3K/AKT 신호전달 경로를 활성화시킨다. ICOS 개입은 또한 세포 표면에서 CD40L의 발현을 유도하기 위해 기술된다. CD40L은 T 림프구와 B 림프구 사이의 협력에서 중요한 효과를 가지는 것으로 알려져 있다. 공자극성 B7-1/B7-2-CD28/CTLA-4 계열의 구성원으로서, ICOS는 통상의 T 세포(Tconv CD4+, CD8+ 소세트) 뿐만 아니라 Treg에서 TCR 개입 후에 신속하에 유도된다. ICOS는 항-종양 T 세포 반응을 향상시키고 흑색종(melanoma) 또는 유방암(breast cancer)을 앓는 환자에서와 같이, Treg를 통한 종양 발달을 뒷받침할 수 있으므로, 이원적 거동(dualistic behaviour)을 나타낸다. 이의 Entrez 유전자 ID 번호는 29851이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "TFH 유래된 림프종"은 당해 분야에서 이의 일반적인 의미를 가지며 일반화된 림프샘 장애(lymphadenopathy) 및 간비장비대(hepatosplenomegaly)를 나타내는, TFH 세포로부터 기원하는 침입성의 성숙한 말초 T-세포 림프종을 나타낸다. 이는 소낭 수지상 세포(follicular dendritic cell; FDC) 및 고 내피 소정맥(high endothelial venule; HEV)에서 현저한 증가 및 전신성 침습(systemic involvement)을 나타내는 다형 림프절 침윤물(polymorphous lymph node infiltrate)에 의해 특성화된다. TFH 유래된 림프종은 혈관면역모구 T-세포 림프종(Angioimmunoblastic T-cell Lymphoma; AITL), 원발성 피부 CD4 + 작은/중간 T-세포 림프종(primary cutaneous CD4 + small/medium T-cell lymphoma; PCSMLPD) 및 신생물을 포함한다 (참고: 예컨대 Shimin Hu MD 등 2012).
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "피부 T-세포 림프종(CTCL)"은 당해 분야에서 이의 일반적인 의미를 가지며 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma)의 부류를 나타내고, 이는 면역계의 암 유형이다. 대부분의 비-호지킨 림프종(이는 일반적으로 B 세포와 관련되어 있다)과는 달리, CTCL은 T 세포의 성숙에 의해 유발된다. 체내에서 종양 T 세포는 초기에 피부로 이주하여, 다양한 병변이 나타나도록 한다. 이러한 병변은 질환이 진행되면서 형태를 변화시키며, 전형적으로 매우 가려울 수 있는 발진인 것으로 나타나는 것으로 시작하여 궁극적으로는 신체의 다른 부분으로 확산하기 전에 플라크(plaque) 및 종양을 형성한다.
본 발명에 따라서, CTCL은 원발성 피부 T-세포 림프종일 수 있고 다음의 질환을 재그룹화할 수 있다: 균상 식육종(Mycosis Fungoides; MF) 및 MF 변이체(여포성(folliculotropic), 페제트병모양 망상증(pagetoid reticulosis), 육아종 이완 피부(granulomatous slack skin)), 시자리 증후군(SS) 성체 T-세포 백혈병/림프종, 원발성 피부 CD30+ 림프증식성 질환(Primary cutaneous CD30+ lymphoproliferative disease)(피부 역형성 T-세포 림프종(cutaneous anaplastic T-cell lymphoma) 및 림프종양구진증(lymphomatoid papulosis)), 피하지방층염-유사 T-세포 림프종(Subcutaneous panniculitis-like T-cell lymphoma), 엑스트라노달 NK/T-세포 림프종(Extranodal NK/T-cell lymphoma)(비강형), 원발성 피부 g/d T-세포 림프종(Primary cutaneous g/d T-cell lymphoma), CD8+ AECTCL, 원발성 피부 CD4+ 작은/중간 T-세포 림프증식성 장애, 원발성 피부 아크랄 CD8+T-세포 림프종(Primary cutaneous acral CD8+T-cell lymphoma), 원발성 피부 말초 T-세포 림프종(Primary cutaneous peripheral T-cell lymphoma) NOS.
특히, CTCL은 균상 식육종(mycosis fungoides) 또는 시자리 증후군이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "대상체"는 포유동물, 예를 들면, 설치류, 고양이과, 개과, 및 영장류를 나타내다. 특히, 본 발명에 따른 대상체는 사람이다. 보다 특히, 본 발명에 따른 대상체는 피부 T-세포 림프종(cutaneous T-cell lymphoma; CTCL) 또는 TFH 유래된 림프종을 앓고 있다.
본 발명의 항체
본 발명자는 ADC 또는 ADCC/ADCP에 사용된 상이한 항-ICOS 항체가 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종을 치료하는데 유용할 수 있음을 나타내었다.
따라서, 항-ICOS 항체는 ICOS 또는 ICOS-L을 표적화하는 임의의 항체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 동일한 의미를 가지며, 본 발명에서 동일하게 사용될 것이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부위, 즉, 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭한다. 따라서, 용어 항체는 전체 항체 분자 만이 아니라, 또한 항체 단편 뿐만 아니라 항체의 변이체(예를 들면, 유도체) 및 항체 단편을 포함한다. 천연 항체에서, 2개의 중쇄는 이황화물 결합에 의해 서로 연결되어 있고 각각의 중쇄는 이황화물 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있다. 2개 유형의 경쇄, 람다(1) 및 카파(k)가 존재한다. 항체 분자의 기능적 활성을 결정하는 5개의 주요 중쇄 부류(또는 동형)이 존재한다: IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE. 각각의 쇄는 명백한 서열 도메인을 함유한다. 경쇄는 2개의 도메인, 가변 도메인(VL) 및 불변 도메인(CL)을 포함한다. 중쇄는 4개의 도메인, 가변 도메인(VH) 및 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3, 총괄하여 CH로 지칭됨)을 함유한다. 경(VL) 및 중(VH) 쇄의 불변 영역 도메인은 항원에 대해 결합 인식 및 특이성을 결정한다. 경(CL) 및 중(CH) 쇄의 불변 영역 도메인은 중요한 생물학적 특성, 예를 들면, 항체 쇄 연합, 분비, 태반-통과 이동능(trans-placental mobility), 상보체 결합, 및 Fc 수용체(FcR)에 대한 결합을 부여한다. Fv 단편은 면역글로불린의 Fab 단편의 N-말단 부분이고 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 가변 부위로 이루어진다. 항체의 특이성은 항체 결합 부위와 항원성 결정인자 사이의 구조적 상보성에 있다. 항체 결합 부위는 주로 초가변 또는 상보성 결정 영역(CDR)으로부터 유래된 잔기로 이루어진다. 때때로, 비초가변성 또는 골격 영역(FR)로부터의 잔기는 항체 결합 부위에 관여하거나 전체적인 도메인 구조 및 따라서 결합 부위에 영향을 미칠 수 있다. 상보성 결정 영역 또는 CDR은 천연 면역글로불린 결합 부위의 천연 Fv 영역의 결합 친화성 및 특이성을 함께 정의하는 아미노산 서열을 지칭한다. 면역글로불린 각각의 경쇄 및 중쇄는 각각 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3 및 H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3로 지정된 3개의 CDR을 갖는다. 따라서, 항원-결합 부위는 전형적으로 각각의 중쇄 및 경쇄 V 영역으로부터의 CDR 세트를 포함하는, 6개의 CDR을 포함한다. 골격 영역(FR)은 CDR 사이에 삽입된 아미노산 서열을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "특이성"은 항원 상에 나타난 에피토프, 예를 들면, ICOS에 검출가능하게 결합하지만, 비-ICOS 단백질 또는 구조와는 비교적 검출가능한 반응성을 거의 가지지 않는 항체의 능력을 지칭한다. 특이성은 결합 또는 경쟁적 결합 검정에 의해, 예를 들면, 본원의 어딘가에 기술된 바와 같은 Biacore 장치를 사용하여 상대적으로 측정할 수 있다. 특이성은 특정 항원에 대한 결합 대 다른 관련된 분자(이러한 경우에 특정 항원은 ICOS이다)에 대한 비특이적 결합에서 예컨대, 약 10:1, 약 20:1, 약 50:1, 약 100:1, 10.000:1 또는 그 이상의 비의 친화성/항원항체 결합력(avidity)을 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "친화성"은 에피토프에 대한 항체의 결합의 강도를 의미한다. 항체의 친화성은 [Ab] x [Ag] / [Ab-Ag]로서 정의된 해리 상수 Kd에 의해 제공되고, 여기서 [Ab-Ag]는 항체-항원 복합체의 몰 농도이고, [Ab]는 결합하지 않은 항체의 몰 농도이고 [Ag]는 결합하지 않은 항원의 몰 농도이다. 친와성 상수 Ka는 1/Kd로 정의된다. mAb의 친화성을 결정하는 바람직한 방법은 문헌: Harlow, 등., 항체: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), Coligan 등., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993), 및 Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983)에서 찾을 수 있고, 이러한 참고문헌은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 당해 분야에 잘 공지된 한가지 바람직하고 표준인 방법은 Biacore 장치의 사용이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체", "모노클로날 Ab", "모노클로날 항체 조성물", "mAb" 등은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제조를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성물은 특수한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본 발명의 항체는 당해 분야에 공지된 임의의 기술, 예를 들면, 제한없이, 단독 또는 조합된 임의의 화학적, 생물학적, 유전적 또는 효소적 기술에 의해 생산된다. 전형적으로, 목적한 서열의 아미노산 서열을 아는 경우, 당해 분야의 숙련가는 상기 항체를 펩타이드 생산을 위한 표준 기술에 의해 용이하게 생산할 수 있다. 예를 들면, 이는 잘-공지된 고체 상 방법을 사용하여, 바람직하게는 시판되는 펩타이드 합성 장치(예를 들면, 캘리포니아주 포스터 시티 소재의 Applied Biosystems에서 제조된 것)를 사용하여 제조업자의 설명서에 따라 용이하게 생산할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 항체는 당해 분야에 잘 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 합성할 수 있다. 예를 들면, 항체는 항체를 암호화하는 DNA 서열을 발현 벡터 내로 혼입시키고 이러한 벡터를 목적한 항체를 발현할 적합한 진핵 또는 원핵 숙주 내로 도입시킨 후 DNA 발현 생성물로서 수득할 수 있고, 이로부터 이들은 잘-공지된 기술을 사용하여 후에 단리할 수 있다.
본 발명에 따라서, 복수 또는 단수로 사용된 용어가 등가 방식으로 사용된다.
특히, 본 발명의 항-ICOS는 특허원 제WO2008137915호 또는 제WO0187981호에 기술된 바와 같은 항체일 수 있다.
특히, 본 발명의 항-ICOS는 문헌: Solinas 등. 2019에 기술된 바와 같은 항체 GSK3359609, JTX-2011, MEDI-570 또는 KY1044 중 하나일 수 있다.
특히, 본 발명의 항-ICOS 항체는 특허원 제WO2012131004호에 기술된 항체(53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 및 314.8 mab 및 이의 유도체) 중 하나일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "항체의 유도체"는 상기 항체의 6개의 CDR을 포함하는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "53.3 mAb" 또는 "Icos 53-3"은 2009년 7월 2일자로 CNCM에 수탁 번호 CNCM I-4186으로 기탁된 ICOS에 대해 지시된 모노클로날 항체를 지칭한다. 상기 항체는 ICOS의 효능제(agonist)이다. 표현 "53.3 mAb의 유도체"는 53.5 mAb의 6개의 CDR을 포함하는 항-ICOS 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "88.2 mAb" 또는 "Icos 88-2"는 2009년 7월 2일자로 CNCM에 수탁번호 CNCM I-4177로 기탁된 ICOS에 대해 지시된 모노클로날 항체를 지칭한다. 상기 항체는 ICOS의 효능제이다. 표현 "88.2 mAb의 유도체"는 88.2 mAb의 6개의 CDR을 포함하는 항-ICOS 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "92.17 mAb" 또는 "Icos 92-17"은 2009년 7월 2일자로 CNCM에 수탁번호 CNCM I-4178로 기탁된 ICOS에 대해 지시된 모노클로날 항체를 지칭한다. 상기 항체는 ICOS의 효능제이다. 표현 "92.17 mAb의 유도체"는 92.17 mAb의 6개의 CDR을 포함하는 항-ICOS 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "145.1 mAb" 또는 "Icos 145-1"은 2009년 7월 2일자로 CNCM에 수탁번호 CNCM I-4179로 기탁된 ICOS에 대해 지시된 모노클로날 항체를 지칭한다. 상기 항체는 ICOS의 길항제이다. 표현 "145.1 mAb의 유도체"는 145-1 mAb의 6개의 CDR을 포함하는 항-ICOS 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 표현 "314.8 mAb" 또는 "Icos 314-8"은 2009년 7월 2일자로 CNCM에 수탁번호 CNCM I-4180으로 기탁된 ICOS에 대해 지시된 모노클로날 항체를 지칭한다. 표현 "314.8 mAb의 유도체"는 314.8 mAb의 6개의 CDR을 포함하는 항-ICOS 항체를 지칭한다.
특히, 본 발명의 항-ICOS 항체는 다음의 CDR을 지닌 88.2 항체일 수 있다(표 1):
Figure pct00003
88.2 mAb의 중쇄(H)의 아미노산 서열(서열번호: 7):
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNIYPSDSYTNYNQMFKDKATLTVDKSSNTAYMQLTSPTSEDSAVYYCTRWNLSYYFDNNYYLDYWGQGTTLTVSS
88.2 mAb의 경쇄(L)의 아미노산 서열(서열번호: 8):
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPWTFGGGTKLEIK
특히, 본 발명의 항-ICOS 항체는 다음 CDR을 지닌 314.8 항체일 수 있다(표 2):
Figure pct00004
314.8 mAb의 중쇄(H)의 아미노산 서열(서열번호: 15):
QVQLQQPGTELMKPGASVKLSCKASGYTFTTYWMHWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYVNYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYIQLSSLTSEDSAVYFCARSPDYYGTSLAWFDYWGQGTLVTVST
314.8 mAb의 경쇄(L)의 아미노산 서열(서열번호: 16):
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSPLHSNGNIYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTTFTLKISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK
본 발명의 항체의 아미노산 잔기는 IMGT 또는 KABAT 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 수 있다. IMGT 독특한 넘버링은 항원 수용체, 쇄 유형, 또는 종(species)에 상관없이 가변 도메인을 비교하기 위해 정의되었다(Lefranc M.-P., "Unique database numbering system for immunogenetic analysis" Immunology Today, 18, 509 (1997); Lefranc M.-P., "The IMGT unique numbering for Immunoglobulins, T 세포 receptors and Ig-like domains" The Immunologist, 7, 132-136 (1999).; Lefranc, M.-P., Pommi
Figure pct00005
, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, G., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T 세포 receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains" Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003).). IMGT 독특한 넘버링에서, 보존된 아미노산은 항상 동일한 위치, 예를 들면, 시스테인 23, 트립토판 41, 소수성 아미노산 89, 시스테인 104, 페닐알라닌 또는 트립토판 118을 갖는다. IMGT 독특한 넘버링은 골격 영역(FR1-IMGT: 1 내지 26번 위치, FR2-IMGT: 39 내지 55번, FR3-IMGT: 66 내지 104번 및 FR4-IMGT: 118 내지 128번) 및 상보설결정 영역: CDR1-IMGT: 27 내지 38, CDR2-IMGT: 56 내지 65 및 CDR3-IMGT: 105 내지 117의 표준화된 한계를 제공한다. CDR3-IMGT 길이가 13개 미만의 아미노산인 경우, 갭은 루프의 상단으로부터 다음의 순서로 생성된다: 111, 112, 110, 113, 109, 114 등. CDR3-IMGT 길이가 13개 이상의 아미노산인 경우, 추가의 위치가 다음의 순서로 CDR3-IMGT 루프의 상단에서 111 내지 112번 위치 사이에서 생성된다: 112.1,111.1, 112.2, 111.2, 112.3, 111.3 등(http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Nomenclature/IMGT-FRCDRdefinition.html).
항체 가변 도메인내 잔기는 카밧 등에 의해 고안된 시스템에 따라 편리하게 넘버링될 수 있다. 이러한 시스템은 문헌: Kabat 등., 1987, in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA (hereafter "Kabat 등.")에 제시되어 있다. 이러한 넘버링 시스템이 본 명세서에서 사용된다. 카밧 잔기 지정은 서열 ID 서열내 아미노산 잔기의 선형 넘버링에 항상 상응하지 않는다. 실제 선형 아미노산 서열은 기본적인 가변 도메인 구조의 골격 또는 상보성 결정 영역(CDR)에 상관없이, 구조적 구성성분의 단축, 또는 구조적 구성성분 내로의 삽입에 상응하는 엄격한 카밧 넘버링에서보다 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 잔기의 정확한 카밧 넘버링은 항체의 서열 내 상동성의 잔기를 "표준" 카밧 넘버링된 서열과 정렬함으로써 주어진 항체에 대해 측정될 수 있다. 중쇄 가변 도메인의 CDR은 카밧 번호매긴 시스템에 따라 잔기 31 내지 35B(H-CDR1), 잔기 50 내지 65(H-CDR2) 및 잔기 95 내지 102(H-CDR3)에 위치한다. 경쇄 가변 도메인의 CDR은 카밧 넘버링 시스템에 따라 잔기 24 내지 34(L-CDR1), 잔기 50 내지 56(L-CDR2) 및 잔기 89-97(L-CDR3)에 위치한다. (http://www.bioinf.org.uk/abs/#cdrdef).
본 발명은 본 발명의 항체의 VL 영역, VH 영역, 또는 하나 이상의 CDR의 구조적 변이체를 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 모노클로날 항체의 문맥에서 사용된 VL, VH, 또는 CDR의 기능적 변이체는 항체가 여전히 모 항체의 친화성/항원항체결합력 및/또는 특이성/선택성의 적어도 실질적인 부분(적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상)을 보유하도록 하고 일부 경우에 본 발명의 이러한 모노클로날 항체는 모 Ab보다 보다 큰 친화성, 선택성 및/또는 특이성과 관련될 수 있다. 이러한 변이체는 CDR의 돌연변이(Yang 등., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), 쇄 셔플링(chain shuffling)(Marks 등., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), 이, 콜라이(E. coli)의 돌연변이인자(mutator) 균주의 사용(Low 등., J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), DNA 셔플링(Patten 등., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), 파아지 디스플레이(Thompson 등., J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) 및 성(sexual) PCR(Crameri 등., Nature, 391, 288-291, 1998)을 포함하는 다수의 친화성 성숙 프로토콜에 의해 수득될 수 있다. 바우간(Vaughan) 등(상기 참고)은 이러한 친화성 성숙의 방법을 논의하고 있다. 이러한 기능적 변이체는 전형적으로 모 Ab에 대해 유의적인 서열 동일성을 보유한다. CDR 변이체의 서열은 대부분 보존적 치환을 통해 모 항체 서열의 CDR의 서열과는 상이할 수 있는데; 예를 들면, 변이체 내 치환의 적어도 약 35%, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상(예컨대, 약 65 내지 95%, 예를 들면, 약 92%, 93% 또는 94%)은 보존적 아미노산 잔기 대체이다. CDR 변이체의 서열은 대부분의 보존적 치환을 통해 모 항체 서열의 서열과는 상이할 수 있다: 예를 들면, 변이체 내 치환의 적어도 10개, 예를 들면, 적어도 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개는 보존적 아미노산 잔기 대체이다. 본 발명의 문맥에서, 보존적 치환은 다음과 같이 반영된 아미노산의 부류 내에서 치환에 의해 정의될 수 있다:
지방족 잔기 I, L, V, 및 M
사이클로알케닐-관련된 잔기 F, H, W, 및 Y
소수성 잔기 A, C, F, G, H, I, L, M, R, T, V, W, 및 Y
음으로 하전된 잔기 D 및 E
극성 잔기 C, D, E, H, K, N, Q, R, S, 및 T
양으로 하전된 잔기 H, K, 및 R
작은 잔기 A, C, D, G, N, P, S, T, 및 V
매우 작은 잔기 A, G, 및 S
최종적으로 포함된 잔기 A, C, D, E, G, H, K, N, Q, R, S, P, 및 형성에 포함된 잔기 T
유연한 잔기(Flexible residue) Q, T, K, S, G, P, D, E, 및 R
보다 보존적 치환 그룹화는 다음을 포함한다: 발린-루이신-이소루이신, 페닐알라닌-타이로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 및 아스파라긴-글루타민. 수치적/친수성 특성 및 잔기 중량/크기의 측면에서 보존은 또한 본 발명의 항체의 CDR과 비교하여 변이체 CDR 내에 실질적으로 보유된다. 단백질에서 상호작용적 생물학적 기능을 부여하는데 있어서 수치적 아미노산 지수는 당해 분야에 일반적으로 이해되어 있다. 아미노산의 상대적인 수치적 특성은 수득되는 단백질의 2차 구조에 기여하며, 이는 결과적으로 다른 분자, 예를 들면, 효소, 기질, 수용체, DNA, 항체, 항원 등과 단백질의 상호작용을 정의하는 것으로 받아들여진다. 각각의 아미노산은 이의 소수성을 기반으로 수치적 지수로 지정되었으며 이의 전하 특성은 다음과 같다: 이소루이신(+4.5); 발린(+4.2); 루이신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스테인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5). 유사한 잔기의 보유는 또한 또는 대안적으로 BLAST 프로그램(예컨대, 표준 설정 BLOSUM62, 오픈 갭(Open Gap) = ll 및 연장된 갭(Extended Gap) = l을 사용하여 NCBI를 통해 이용가능한 BLAST 2.2.8)의 사용에 의해 측정된 바와 같이, 유사성 점수로 측정될 수 있다. 적합한 변이체는 모 펩타이드에 대해 적어도 약 70% 동일성을 전형적으로 나타낸다. 본 발명에 따라서, 제2의 아미노산과 적어도 70%의 동일성을 갖는 제1의 아미노산은, 제1의 서열이 제2의 아미노산 서열과 70; 71; 72; 73; 74; 75; 76; 77; 78; 79; 80; 81; 82; 83; 84; 85; 86; 87; 88; 89; 90; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 98; 99; 또는 100%의 동일성을 가짐을 의미한다. 본 발명에 따라서, 제2의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 제1의 아미노산 서열은 제1의 서열이 제2의 서열과 90; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 98; 99; 또는 100%의 동일성을 가짐을 의미한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 i) the 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab의 H-CDR1, ii) 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab의 H-CDR2 및 iii) 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8의 H-CDR3를 포함하는 중쇄 및 i) 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab의 L-CDR1, ii) 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab의 L-CDR2 및 iii) 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab의 L-CDR3를 포함하는 경쇄를 갖는 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 서열 번호: 7 또는 15와 적어도 70; 71; 72; 73; 74; 75; 76; 77; 78; 79; 80; 81; 82; 83; 84; 85; 86; 87; 88; 89; 90; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 98; 또는 99%의 동일성을 갖는 중쇄 및 서열 번호: 8 또는 16과 적어도 70; 71; 72; 73; 74; 75; 76; 77; 78; 79; 80; 81; 82; 83; 84; 85; 86; 87; 88; 89; 90; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 98; 또는 99%의 동일성을 갖는 경쇄를 갖는 항체이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 서열 번호: 7 또는 15에 대해 동일한 중쇄 및 서열 번호: 8 또는 16에 대해 동일한 경쇄를 갖는 항체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 키메라 항체, 특히 키메라 마우스/사람 항체이다.
따라서, 본 발명의 항체는 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료에 사용하기 위한 항-ICOS 키메라 항체에 관한 것이다.
본 발명에 따라서, 용어 "키메라 항체"는 비-사람 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인, 및 사람 항체의 CH 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 항체를 지칭한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 사람 키메라 항체는 앞서 기술된 바와 같이 VL 및 VH 도메인을 암호화하는 핵산 서열을 수득하고, 이를 사람 항체 CH 및 사람 항체 CL을 암호화하는 유전자를 갖는 동물 세포용 발현 벡터 내로 삽입함으로써 사람 키메라 항체 발현 벡터를 작제하고, 발현 벡터를 동물 세포 내로 도입함으로써 암호화 서열을 발현시킴에 의해 생산할 수 있다. 사람 키메라 항체의 CH 도메인으로서, 이는 사람 면역글로불린에 속하는 임의의 영역일 수 있디만, IgG 부류의 것이 적합하고, IgG 부류, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4에 속하는 아부류 중 임의의 하나를 또한 사용할 수 있다. 또한, 사람 키메라 항체의 CL로서, 이는 Ig에 속하는 임의의 영역일 수 있고, 카파 부류 또는 람다 부류의 것이 사용될 수 있다. 키메라 항체를 생산하기 위한 방법은 통상의 재조합 DNA를 포함하고 유전자 형질감염 기술이 또한 당해 분야에 공지되어 있다(참고: Morrison SL. 등. (1984) 및 특허 문헌 US 5,202,238; 및 US 5,204, 244).
본 발명에 따라서, 항-ICOS 항체는 상술한 항체의 키메라 항체 및 특히 항체 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 및 314.8 mab일 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 사람화된 항체이다. 특히, 상기 사람화된 항체에서, 가변 도메인은 사람 수용체 골격 영역, 및 임의로 존재하는 경우 사람 불변 도메인, 및 비-사람 공여체 CDRs, 예를 들면, 마우스 CDR을 포함한다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 사람화된 항체에 관한 것이다.
일 구현예에서, 사람화된 항체는 키메라 항체(본 발명의 항체로부터 수득된)로부터 유래될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 사람화의 동일한 방법을 기반으로 개과화 또는 영장류화된다.
본 발명에 따라서, 용어 "사람화된 항체"는 사람 항체로부터의 가변 영역 골격 및 불변 영역을 갖는 항체를 지칭하지만, 이전의 비-사람 항체의 CDR을 보유한다.
본 발명의 사람화된 항체는 앞서 기술한 바와 같은 CDR 도메인을 암호화하는 핵산 서열을 수득하고, 이를 (i) 사람 항체의 것과 동일한 중쇄 불변 영역 및 (ii) 사람 항체의 것과 동일한 경쇄 불변 영역을 암호화하는 유전자를 갖는 동물 세포용 발현 벡터 내로 삽입함으로써 사람화된 항체 발현 벡터를 작제하고, 발현 벡터를 동물 세포 내로 도입함으로써 유전자를 발현시킴에 의해 생산할 수 있다. 사람화된 항체 발현 벡터는 항체 중쇄를 암호화하는 유전자 및 항체 경쇄를 암호화하는 유전자가 별개의 벡터 상에 존재하는 유형 또는 유전자 둘 다가 동일한 벡터 상에 존재하는(탄뎀 방식(tandem type)) 유형일 수 있다. 사람화된 항체 발현 벡터의 작제 용이성, 동물 세포 내로의 도입 용이성, 및 동물 세포 내 항체 H 및 L 쇄의 발현 수준 사이의 균형의 측면에서, 탄뎀 유형의 사람화된 항체 발현 벡터가 바람직하다. 탄뎀 유형의 사람화된 항체 발현 벡터의 예는 pKANTEX93(WO 97/10354), pEE18 등이다. 통상의 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기술을 기반으로 사람화된 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다(참고: 예컨대, Riechmann L. 등. 1988; Neuberger MS. 등. 1985). 항체는 당해 분야에 공지된 다양한 기술, 예를 들면, CDR-이식(EP 239,400; PCT 출원 WO 91/09967; 미국 특허 Nos. 5,225,539; 5,530,101; 및 5,585,089), 베니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)(EP 592,106; EP 519,596; Padlan EA (1991); Studnicka GM 등. (1994); Roguska MA. 등. (1994)), 및 쇄 셔플링(미국 특허 No.5,565,332)을 사용하여 사람화할 수 있다. 이러한 항체의 제조를 위한 일반적인 재조합 DNA 기술이 또한 알려져 있다(참고: 유럽 특허 출원 EP 125023 및 국제 특허 출원 WO 96/02576).
본 발명에 따라서, 항-ICOS 항체는 상술한 항체의 사람화된 항체, 특히 항체 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 및 314.8 mab일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 사람 항체이다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 사람 항체에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사람 항체"는 사람 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 사람 항체는 사람 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예컨대, 시험관 내(in vitro)에서 무작위 또는 부위-특이적인 돌연변이유발에 의해 또는 생체 내에서(in vivo) 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "사람 항체"는 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 사람 골격 서열 상에 이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
사람 항체는 당해 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 사람 항체는 일반적으로 문헌(van Dijk and van de Winkel, cur. Opin. Pharmacol. 5; 368-74 (2001) and lonberg, cur. Opin.Immunol. 20; 450-459 (2008)에 기술되어 있다. 사람 항체는 완전한 사람 항체 또는 사람 가변 영역을 지닌 완전한 항체를 항원성 챌린지(antigenic challenge)에 대해 반응하여 생산하도록 변형된 유전자이식 동물에게 면역원을 투여함으로써 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 사람 면역글로불린 유전자자리 모두 또는 일부를 함유하거나, 이는 염색체외적으로 존재하거나 동물의 염색체 내로 무작위로 통합된다. 이러한 유전자이식 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자자리는 일반적으로 불활성화되었다. 유전자이식 동물로부터 사람 항체를 수득하기 위한 방법의 고찰을 위해서, Lonberg, Nat.Biotech. 23;1117-1125 (2005)를 참고할 수 있다. 또한, 예컨대, XENOMOUSETM 기술을 기재하는 미국 특허 6,075,181 및 6,150,584; HUMAB® 기술을 기재하는 미국 특허 No. 5,770,429; K-M MOUSE® 기술을 기재하는 미국 특허 No. 7,041,870, 및 VELOCIMOUSE® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 No. US 2007/0061900를 참고할 수 있다. 이러한 동물에 의해 생성된 완전한 항체로부터의 사람 가변 영역을 예컨대, 상이한 사람 불변 영역과 조합함으로써 추가로 변형시킬 수 있다. 사람 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법으로 제조할 수 있다. 사람 모노클로날 항체의 생산을 위한 사람 골수종 및 마우스-사람 헤테로골수종 세포주가 기술되어 왔다. (참고: 예컨대, Kozbor J. Immunol., 13: 3001 (1984); Brodeur 등, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner 등, J. Immunol., 147: 86(1991).) 사람 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 사람 항체는 또한 문헌: Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에 기술되어 있다. 추가의 방법은 예를 들면, 미국 특허 제7,189,826호(하이브리도마 세포주로부터 사람 igM 항체의 생산을 기술함) 및 문헌: Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(사람-사람 하이브리도마를 기술함)에 기술된 것을 포함한다. 사람 하이브리도마 기술(Trioma 기술)은 또한 문헌: Vollmers and Brandlein,, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)에 기술되어 있다. 전체 사람 항체는 또한 파아지-디스플레이 라이브러리로부터 유래될 수 있다(문헌: Hoogenboom 등., 1991, J. Mol. Biol. 227:381; 및 Marks 등., 1991, J. Mol. Biol. 222:581에 개시된 바와 같음). 파아지 디스플레이 기술은 섬유상 박테리오파아지의 표면에서 항체 레퍼토리의 디스플레이를 통한 면역 선택, 및 선택한 항원에 대한 이의 결합에 의한 파아지의 후속적인 선택을 모사한다. 한가지 이러한 기술은 PCT 공보 제WO 99/10494호에 기술되어 있다. 본원에 기술된 사람 항체는 또한 사람 면역 세포가 재구성되어 사람 항체 반응이 면역화시 생성될 수 있도록 된 SCID 마우스를 사용하여 제조할 수 있다. 이러한 마우스는 예를 들면, 미국 특허 제5,476,996호 및 제5,698,767호(Wilson 등)에 기술되어 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체는 Fab, F(ab)'2, 단일 도메인 항체, ScFv, Sc(Fv)2, 디아보디(diabody), 트리아보디(triabody), 테트라보디(tetrabody), 유니보디(unibody), 미니보디(minibody), 막시보디(maxibody), 작은 모듈러 면역약제(small modular immunopharmaceutical; SMIP), 단리된 상보성 결정 영역(CDR)로서 항체의 초가변 영역을 모사한 아미노산 잔기로 이루어진 최소의 인식 단위(minimal recognition unit), 및 VL 또는 VH 쇄를 포함하거나 이로 이루어진 단편 뿐만 아니라 서열 번호: 7 또는 15 및/또는 서열 번호: 8 또는 16에 대해 적어도 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항원 결합 단편(본원에서 ICOS 결합 단편)이다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 ICOS 결합 단편에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 항체의 "항원 결합 단편"은 주어진 항원(예컨대, [항원])에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 완전한 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 바이딩(biding) 기능은 완전한 항체의 단편으로 수행할 수 있다. 용어 항체의 항원 바이딩 단편 내에 포함된 바이딩 단편의 예는 Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 일가 단편; Fab' 단편, VL, VH, CL, CH1 도메인 및 힌지 영역으로 이루어진 일가 단편; F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 이가 단편; 항체의 단일 아암(arm)의 VH 도메인으로 이루어진 Fd 단편; VH 도메인 또는 VL 도메인으로 이루어진, 단일 도메인 항체(single 도메인 항체; sdAb) 단편(Ward 등., 1989 Nature 341:544-546); 및 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인, VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 암호화되어 있지만, 이는 재조합 방법을 사용하여, 이들을 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 일가 분자(단일 쇄 Fv(ScFv)로서 공지됨)를 형성하는 단일 단백질 쇄로서 제조되도록 하는 인공 펩타이드 링커에 의해 결합될 수 있다; 참고: 예컨대, Bird 등, 1989 Science 242:423-426; 및 Huston 등, 1988 proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883). "dsFv"는 이황화물 결합에 의해 안정화된 VH::VL 이종이량체이다. 이가 및 일가 항체 단편은 일가 scFv의 연합에 의해 자발적으로 형성할 수 있거나, 펩타이드 링커, 예를 들면, 이가 sc(Fv)2에 의해 일가 scFv를 커플링함으로써 생성시킬 수 있다. 이러한 단일 쇄 항체는 항체의 하나 이상의 항원 결합 부위 또는 단편을 포함한다. 이러한 항체 단편은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 통상의 기술을 사용하여 수득되며, 단편은 완전한 항체에서와 동일한 방식으로 활용하기 위해 스크리닝된다. 유니보디는 IgG4 항체의 힌지 영역을 결여한 항체 단편의 다른 유형이다. 힌지 영역의 결실은 전통적인 IgG4 항체의 크기의 필수적으로 1/2이고 IgG4 항체의 이가 결합 영역보다는 일가 결합 영역을 갖는 분자를 생성한다. 항원 결합 단편은 단일 도메인 항체, SMIP, 막시보디, 미니보디, 인트라보디, 디아보디, 트리아보디 및 테트라보디로 혼입될 수 있다(참고: 예컨대, Hollinger 및 Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9, 1126-1136). 용어 "디아보디", "트리보디" 또는 "테트라보디"는 다가 항원-결합 부위(2, 3 또는 4)를 지닌 작은 항체 단편을 지칭하고, 이러한 단편은 동일한 펩타이드 쇄(VH-VL) 내에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)를 포함한다. 너무나 짧아서 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이에 쌍화(pairing)을 허용하는 링커를 사용함으로써, 도메인이 다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 할 수 있다. 항원 바이딩 단편은 탄뎀 Fv 분절의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 단일 쇄 분자로 혼입될 수 있고, 이는 상보성 경쇄 폴리펩타이드와 함께, 항원 결합 영역의 쌍을 형성할 수 있다(Zapata 등, 1995 Protein Eng. 8(10); 1057-1062 및 미국 특허 No. 5,641,870).
본 발명의 Fab는 [항원]과 특이적으로 반응하는 항체를 프로테아제, 파파인으로 처리함으로써 수득할 수 있다. 또한, Fab는 항체의 Fab를 암호화하는 DNA를 원핵세포 발현 시스템용, 또는 진핵 세포 발현 시스템 용 벡터 내로 삽입하고, 벡터를 원핵생물 또는 진핵생물(적절하게는) 내로 도입하여 Fab를 발현시킴으로써 생산할 수 있다.
본 발명의 F(ab')2는 [항원]과 특이적으로 반응하는 항체를 프로테아제, 펩신과 반응시켜 수득할 수 있다. 또한, F(ab')2는 티오에테르 결합 또는 이황화물 결합을 통해 후술된 Fab'를 결합시킴으로써 생산할 수 있다.
본 발명의 Fab'는 [항원]과 특이적으로 반응하는 F(ab')2를 환원제, 디티오트레이톨로 처리하여 수득할 수 있다. 또한, Fab'는 항체의 Fab' 단편을 암호화하는 DNA를 원핵생물용 발현 벡터, 또는 진핵생물용 발현 벡터 내로 삽입하고, 벡터를 원핵생물 또는 진핵생물(적절하게는) 내로 도입하여 이의 발현을 수생함으로써 생산할 수 있다.
본 발명의 scFv는 앞서 기술된 바와 같이 VH 및 VL을 암호화하는 cDNA를 수득하고, scFv를 암호화하는 DNA를 작제하고, DNA를 원핵생물용 발현 벡터, 또는 진핵생물용 발현 벡터 내로 삽입한 다음, 발현 벡터를 원핵생물 또는 진핵생물(절절하게는) 내로 도입하여 scFv를 발현시킴으로써 생산할 수 있다. 사람화된 scFv 단편을 생성하기 위하여, CDR 이식으로 불리는 잘 공지된 기술을 사용할 수 있고, 이는 공여체 scFv 단편으로부터 상보성 결정 영역(CDR)을 선택하고, 이를 공지된 3차원 구조의 사람 scFv 단편 골격 상에 이식함을 포함한다(참고: 예컨대, W0 98/45322; WO 87/02671; US 5,859,205; US 5,585,089; US 4,816,567; EP 0173494).
도메인 항체(dAb)는 항체의 가장 작은 기능성 결합 단위 - 대략 13 kDa의 분자량 - 이고 항체의 중(VH) 또는 경(VL) 쇄의 가변 영역에 상응한다. 도메인 항체 및 이의 생산 방법에 관한 추가의 세부사항은 US 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; 6,172,197; 및 6,696,245; US 2004/0110941; EP 1433846, 0368684, 및 0616640; WO 2005/035572, 2004/101790, 2004/081026, 2004/058821, 2004/003019 및 2003/002609호에 나타나 있으며, 이들은 각각 전체로서 여기에 참조로서 통합된다.
유니보디(unibody)는 IgG4 항체의 힌지 영역의 제거를 기반으로 한, 다른 항체 단편 기술이다. 힌지 영역의 결실은 전통적인 IgG4 항체의 크기의 필수적으로 1/2인 분자를 생성하며 2가 결합 영역보다는 1가 결합 영역을 갖는다. 또한, 유니보디는 거의 보다 더 작으므로, 이는 잠재적으로 유리한 효능을 지닌 보다 큰 고형 종양보다 더 우수한 분포를 나타낼 수 있다. 유니보디에 대한 추가의 세부사항은 이의 전문이 참고로 포함된 제WO 2007/059782호를 참고로 수득될 수 있다.
본 발명에 따라서, 항-ICOS 항체는 상술한 항체의 ICOS 결합 단편 및 특히 항체 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 및 314.8 mab일 수 있다.
단일 도메인 항체
특수한 구현예에서, 항-ICOS 항체는 항-ICOS 단일 도메인 항체이다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 단일 도메인 항체에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단일 도메인 항체"는 당해 분야에서 이의 일반적인 의미를 가지며 경쇄를 천연적으로 결여하고 있는 낙타과(Camelid) 포유동물에서 발견될 수 있는 유형의 항체의 단일 중쇄 가변 도메인을 지칭한다. 이러한 단일 도메인 항체는 또한 VHH 또는 "nanobody®"로 불린다. (단일) 도메인 항체의 일반적인 설명을 위하여, 상기 인용한 선행 문헌, 및 EP 0 368 684, Ward 등 (Nature 1989 Oct 12; 341 (6242): 544-6), Holt 등, Trends Biotechnol., 2003, 21(11):484-490; 및 WO 06/030220, WO 06/003388에 대한 참고가 또한 이루어질 수 있다. 나노보디는 사람 IgG 분자의 대략 1/10의 중량을 가지고, 단백질은 단지 약간의 나노미터의 물리적 직경을 갖는다. 작은 크기의 하나의 결과는 보다 큰 항체 단백질에 대해 기능적으로 비가시적인 항원성 부위에 결합하는 낙타과 나노보디의 능력인데, 즉, 낙타과 나노보디는 전통적인 면역학적 기술을 사용하여 달리 난해한 항원을 검출하기 위한 시약으로서, 및 가능한 치료제로서 유용하다. 따라서 작은 크기의 여전히 다른 결과는 나노보디가 표적 단백질의 홈이 있거나 협소한 틈(cleft) 내 특정 부위에 대한 결합의 결과로서 억제할 수 있고, 따라서 전통적인 항체의 것보다 전통적인 저 분자량 약물의 기능을 보다 근접하게 유사한 능력으로 제공될 수 있다는 것이다. 저 분자량 및 압축된 크기는 또한 극도로 열안정성이고, 극도의 pH 및 단백질분해적 분해에 대해 안정한 나노보디를 생성한다. 다른 결과는 나노보디가 순환계로부터 조직으로 용이하게 이동하며, 심지어 혈액-뇌 장벽을 교차하여 신경 조직에 영향을 미치는 장애를 치료할 수 있다는 것이다. 나노보디는 또한 혈액 뇌 장벽에 거쳐 약물 수송을 추가로 촉진시킬 수 있다. 2004년 8월 19일에 공개된 미국 특허 출원 20040161738을 참조할 수 있다. 사람에 대한 낮은 항원성과 조합된 이러한 특징은 큰 치료학적 잠재능을 나타낸다. 단일 도메인 항체의 아미노산 서열 및 구조는 당해 분야에서 및 본원에서 "골격 영역 1" 또는 "FR1"으로서; "골격 영역 2" 또는 "FR2"로서; "골격 영역 3" 또는 "FR3"으로서; 및 "골격 영역 4" 또는 "FR4"로서 각각 지칭된 4개의 골격 영역 또는 "FR"로 구성되는 것으로 고려될 수 있고; 이러한 골격 영역은 3개의 상보성 결정 영역 또는 "CDR"에 의해 차단되며, 이는 당해 분야에서 "CDR1"에 대한 상보성 결정 영역으로서; "상보성 결정 영역 2" 또는 "CDR2"로서 및 "상보성 결정 영역 3" 또는 "CDR3"로서 각각 지칭된다. 따라서, 단일 도메인 항체는 일반적인 구조를 지닌 아미노산 서열로서 정의될 수 있고: FRl - CDRl - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4, 여기서 FRl 내지 FR4는 각각 골격 영역 1 내지 4를 지칭하고, 여기서 CDRl 내지 CDR3은 상보성 결정 영역 1 내지 3으로 지칭된다. 본 발명의 문맥에서, 단일 도메인 항체의 아미노산 잔기는 국제 ImMunoGeneTics 정보 시스템 아미노산 넘버링(International ImMunoGeneTics information system aminoacid numbering) (http://imgt.cines.fr/)에 의해 제공된 VH 도메인에 대한 일반적인 넘버링에 따라 넘버링된다.
낙타(camel) Ig는 유전 가공에 의해 변형되어 표적에 대해 고 친화성을 갖는 작은 단백질을 생성함으로써, "나노보디" 또는 "VHH"로 알려진 저 분자량 항체-유래된 단백질을 생성할 수 있다. 1998년 6월 2일에 등록된 미국 특허 No. 5,759,808을 참조할 수 있다; 또한 Stijlemans, B. 등. , 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261 ; Dumoulin, M. 등. , 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, M. 등. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440- 448; Cortez-Retamozo, V. 등. 2002 Int J Cancer 89: 456-62; 및 Lauwereys, M. 등. 1998 EMBO J 17: 3512-3520을 참조할 수 있다. 낙타과 항체 및 항체 단편의 가공된 라이브러리는 예를 들면, 벨기에 겐트 소재의 Ablynx으로부터 상업적으로 이용가능하다. 여기서 특정의 구현예에서, 낙타과 항체 또는 나노보디는 낙타과 동물에서 천연적으로 생산되는데, 즉, [항원] 또는 이의 펩타이드 단편으로, 다른 항체의 경우 본원에 기술된 기술을 사용하여 면역화한 후 낙타과에 의해 생산된다. 대안적으로, [항원-결합 낙타과 나노보디는 가공되어, 즉, 예를 들면, 패닝 과정(panning procedure)을 사용하여 표적으로서 [항원]으로 적절히 돌연변이된 낙타과 나노보디 단백질을 나타내는 파아지의 라이브러리로부터 선택에 의해 생산된다.
일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는 "사람화된" 단일 도메인 항체이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사람화된"은 본 발명의 단일 도메인 항체를 지칭하고 여기서 천연적으로 존재하는 VHH 도메인의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열은 즉, 상기 천연적으로 존재하는 VHH 서열(및 특히 골격 서열 내)의 아미노산 서열 내 하나 이상의 아미노산 잔기를 사람으로부터의 통상의 쇄 항체로부터 VH 도메인 내 상응하는 위치(들)에서 발생하는 아미노산 잔기의 하나 이상으로 대체시킴으로써, "사람화"되었다. 단일 도메인 항체를 사람화하기 위한 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 전형적으로, 사람화 치환을 선택하여 수득되는 사람화된 단일 도메인 항체가 여전히 본 발명의 단일 도메인 항체의 양호한 특성을 여전히 보유하도록 할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 적합한 사람화 치환 또는 사람화 치환의 적합한 조합을 결정 및 선택할 수 있다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 적어도 하나의 단일 도메인 항체를 포함하는 폴리펩타이드에 관한 것이다.
전형적으로, 본 발명의 폴리펩타이드는 본 발명의 단일 도메인 항체를 포함하고, 이는 이의 N 말단 끝에서, 이의 C 말단 끝에서, 또는 이의 N 말단 끝과 이의 C 말단 끝에서 둘 다 적어도 하나의 추가의 아미노산 서열에 융합됨으로써, 즉, 융합 단백질을 제공한다. 본 발명에 따라서, 단독의 단일 도메인 항체를 포함하는 폴??베타이드는 본원에서 "일가" 폴리펩타이드로서 지칭된다. 본 발명에 따른 2개 이상의 단일 도메인 항체를 포함하거나 이로 필수적으로 이루어진 폴??베타이드는 본원에서 "다가" 폴리펩타이드로서 지칭된다.
본 발명에 따라서, 본 발명의 단일 도메인 항체 및 폴리펩타이드는 통상의 자동화된 펩타이드 합성 방법에 의해 또는 재조합 발현에 의해 생산될 수 있다. 단백질을 설계 및 제조하기 위한 일반적인 원리는 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 본 발명의 단일 도메인 항체 또는 폴리펩타이드는 용액 속에서 또는 고체 지지체 상에서 통상의 기술에 따라 합성될 수 있다. 다양한 자동화 합성기가 상업적으로 이용가능하며 문헌: Stewart and Young; Tam 등., 1983; Merrifield, 1986 및 Barany and Merrifield, Gross and Meienhofer, 1979에 기술된 바와 같은 공지된 프로토콜에 따라 사용할 수 있다. 본 발명의 단일 도메인 항체 및 폴리펩타이드는 또한 예시적인 펩타이드 합성기, 예를 들면, Applied Biosystems Inc.로부터의 모델 433A를 사용하는 고체-상 기술에 의해 합성할 수 있다. 자동화된 펩타이드 합성 또는 재조합 방법을 통해 생성된; 임의의 주어진 단백질의 순도는 역상 HPLC 분석을 사용하여 측정할 수 있다. 각각의 펩타이드의 화학적 확실성은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지된 방법으로 확립될 수 있다. 자동화된 펩타이드 합성의 대안으로서, 재조합 DNA 기술을 사용할 수 있고 여기서 선택한 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 발현 벡터 내로 삽입되고, 형질전환되거나 적절한 숙주 세포 내로 형질감염되고 하기 본원에 기술된 바와 같이 발현에 적합한 조건 하에서 배양된다. 재조합 방법은 보다 긴 폴리펩타이드를 생산하는데 특히 바람직하다.
핵산, 벡터 및 숙주 세포.
본 발명의 추가의 목적은 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 보다 특히 핵산 분자는 본 발명의 중쇄 또는 경쇄를 암호화한다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다.
전형적으로, 상기 핵산은 DNA 또는 RNA 분자이고, 이는 임의의 적합한 벡터, 예를 들면, 플라스미드, 코스미드, 에피솜, 인공 염색체, 파아지 또는 바이러스 벡터에 포함될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "벡터", "클로닝 벡터" 및 "발현 벡터"는 DNA 또는 RNA 서열(예컨대, 외부 유전자)이 숙주 세포 내로 도입되어, 숙주를 형질전환시키고 도입된 서열의 발현(예컨대, 전사 및 해독)을 촉진할 수 있는 비히클을 의미한다. 따라서, 본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 이러한 벡터는 조절 성분, 예를 들면, 프로모터, 인핸서, 터미네이터 등을 포함함으로써, 환자에게 투여 시 상기 항체의 발현을 유발하거나 지시할 수 있다. 동물 세포용 발현 벡터에 사용된 프로모터 및 인핸서의 예는 SV40의 얼리 프로모터(early promoter) 및 인핸서(Mizukami T. 등. 1987), 몰로니 마우스 백혈병 바이러스(Moloney mouse leukemia virus)의 LTR 프로모터 및 인핸서(Kuwana Y 등. 1987), 면역글로불린 H 쇄의 프로모터(Mason JO 등. 1985) 및 인핸서(Gillies SD 등. 1983) 등을 포함한다. 사람 항체 C 영역을 암호화하는 유전자를 삽입하거나 발현시킬 수 있는 한, 동물 세포용의 임의의 발현 벡터를 사용할 수 있다. 적절한 벡터의 예는 pAGE107 (Miyaji H 등. 1990), pAGE103 (Mizukami T 등. 1987), pHSG274 (Brady G 등. 1984), pKCR (O'Hare K 등. 1981), pSG1 beta d2-4-(Miyaji H 등. 1990) 등을 포함한다. 플라스미드의 다른 예는 복제 오리진을 포함하는 복제 플라스미드, 또는 통합 플라스미드, 예를 들면, pUC, pcDNA, pBR 등을 포함한다. 바이러스 벡터의 다른 예는 아데노바이러스, 레트로바이러스, 헤르페스 바이러스 및 AAV 벡터를 포함한다. 이러한 재조합 벡터는 아데노바이러스, 레트로바이러스, 헤르페스 바이러스 및 AAV ㅂ게터를 포함한다. 이러한 재조합 바이러스는 당해 분야에 공지된 기술, 예를 들면, 패키징 세포를 형질감염시키거나 헬퍼 플라스미드 또는 바이러스로 일시적으로 형질감염시킴에 의해 생산할 수 있다. 바이러스 패키징 세포의 대표적인 예는 PA317 세포, PsiCRIP 세포, GPenv+ 세포, 293 세포 등을 포함한다. 이러한 복제-결핍성 재조합 바이러스를 생산하기 위한 상세한 프로토콜은 예를 들면, WO 95/14785, WO 96/22378, US 5,882,877, US 6,013,516, US 4,861,719, US 5,278,056 및 WO 94/19478에서 찾을 수 있다.
88.2 mAb의 중쇄(H)의 핵산 서열(서열번호: 17):
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACAGTTTCACCAGCTACTGGATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATCGGAAATATTTATCCTTCTGATAGTTATACTAACTACAATCAAATGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAACACAGCCTACATGCAGCTCACCAGCCCGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACAAGATGGAATCTTTCTTATTACTTCGATAATAACTACTACTTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
88.2 mAb의 경쇄(L)의 핵산 서열(서열번호: 18):
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAACTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
314.8 mAb의 중쇄(H)의 핵산 서열(서열번호: 19):
CAGGTCCAACTACAGCAGCCTGGGACTGAACTTATGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGTTATGTTAACTACAATCAAAACTTTAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATACAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTTTTGTGCGAGATCCCCTGATTACTACGGTACTAGTCTTGCCTGGTTTGATTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTACA
314.8 mAb의 경쇄(L)의 핵산 서열(서열번호: 20):
GATATTGTGATGACTCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCCCCTGCATAGTAACGGCAACATTTACTTATATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTACTTTCACACTGAAAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따른 핵산 및/또는 벡터에 의해 형질감염되거나, 감염되거나 형질전환된 숙주 세포를 지칭한다.
용어 "형질전환"은 "외부"(즉, 고유의 또는 세포외) 유전자, DNA 또는 RNA 서열을 숙주 세포에 도입시킴으로써, 숙주 세포가 도입된 유전자 또는 서열을 발현시켜 목적한 물질, 전형적으로 도입된 유전자 또는 서열에 의해 암호화된 단백질 또는 효소를 생산하도록 함을 의미한다. 도입된 DNA 또는 RNA를 수용하여 발현하는 숙주 세포는 "형질전환"되어있다.
본 발명의 핵산을 사용하여 적합한 발현 시스템 내에서 본 발명의 항체를 생산할 수 있다. 용어 "발현 시스템"은 예컨대, 벡터에 의해 수반되고 숙주 세포로 도입된 외부 DNA에 의해 암호화된 단백질의 발현을 위한, 적합한 조건 하에서의 숙주 세포 및 상용성 벡터를 의미한다. 일반적인 발현 시스템은 이. 콜라이 숙주 세포 및 플라스미드 벡터, 곤충 숙주 세포 및 바쿨로바이러스 벡터, 및 포유동물 숙주 세포 및 벡터를 포함한다. 숙주 세포의 다른 예는 제한없이, 원핵 세포(예를 들면, 세균) 및 진핵 세포(예를 들면, 효모 세포, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포 등)을 포함한다. 특정 예는 이. 콜라이, 클루이베로마이세스Kluyveromyces) 또는 사카로마이세스 효모(Saccharomyces yeast), 포유동물 세포주(예컨대, 베로 세포(Vero cell), CHO 세포, 3T3 세포, COS 세포 등) 뿐만 아니라 원발성 또는 확립된 포유동물 세포 배양물(예컨대, 림프모세포, 섬유아세포, 배아 세포, 상피 세포, 신경 세포, 지방 세포 등)을 포함한다. 예는 또한 마우스 SP2/0-Ag14 세포(ATCC CRL1581), 마우스 P3X63-Ag8.653 세포(ATCC CRL1580), 디하이드로폴레이트 리덕타제 유전자(본원에서 이후 "DHFR 유전자"로서 지칭됨)가 결핍된 CHO 세포(Urlaub G 등; 1980), 랫트 YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20 세포(ATCC CRL1662, 본원에서 이후에 "YB2/0 세포"로서 지칭됨) 등을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명에 따라 항체를 발현하는 재조합 숙주 세포를 생산하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은: (i) 상술한 바와 같은 재조합 핵산 또는 벡터를 적격 세포(competent host cell) 내로 시험관 내 또는 생체 외(ex vivo)에서 도입시키는 단계, (ii) 수득된 재조합 숙주 세포를 시험관 내 또는 생체 외에서 배양하는 단계 및 (iii), 임의로, 상기 항체를 발현하고/하거나 분비하는 세포를 선택하는 단계를 포함한다. 이러한 재조합 숙주 세포는 본 발명의 항체의 생산을 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 예를 들면, 단백질 A-세파로스, 하이드록실아파타이드 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피와 같은, 통상의 면역글로불린 정제 과정에 의해 배양 배지로부터 적합하게 분리된다.
본 발명의 항체와 경쟁하는 항체
다른 양태에서, 본 발명은 ICOS에 대한 결합에 대해 본 발명의 항체와 경쟁하는 항체를 제공한다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료 시 사용하기 위해 ICOS에 대한 결합에 대해 본 발명의 항체와 경쟁하는 항체에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 예정된 항원 또는 에피토프에 대한 항체의 결합의 문맥에서 용어 '결합하는'은 예를 들면, 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 BIAcore 3000 장치 속에서 리간드로서 항원의 가용성 형태 및 분석물로서 항체를 사용하여 측정하는 경우 전형적으로 약 10-7 M 이하, 예를 들면, 약 10-8 M 이하, 예를 들면, 약 10-9 M 이하, 약 10-10 M 이하, 또는 심지어 약 10-11 M 이하의 KD에 상응하는 친화성으로 예정된 항원에 결합한다. BIACORE®(GE Healthcare, 뉴저지주 피츠카타웨이 소재)는 모노클로날 항체의 에피토프 빈 패널(epitope bin panel)에 통상적으로 사용된 다양한 표면 플라스몬 공명 검정 양식 중 하나이다. 전형적으로, 항체는 예정된 항원과 동일하지 않거나 밀접하게 관련되지 않은, 비-특이적인 항원(에컨대, BSA, 카세인)에 대한 결합에 대해 이의 KD보다 예정된 항원에 적어도 10배 더 낮은, 예를 들면, 적어도 100배 더 낮은, 예를 들면, 적어도 1,000배 더 낮은, 예를 들면, 적어도 10,000배 더 낮은, 예를 들면, 적어도 100,000배 더 낮은 KD에 상응하는 친화성으로 결합한다. 항체의 KD가 매우 낮은 경우(즉, 항체가 고 친화성을 갖는 경우), 이것이 항원과 결합하는 KD는 전형적으로 비-특이적인 항원에 대한 이의 KD보다 적어도 10,000배 더 낮다. 항체는 이러한 결합이 검출불가능하거나(예를 들면, 리간드로서 항원의 가용성 형태 및 분석물로서 항체를 사용하는 BIAcore 3000 장치 속에서 플라스몬 공명(SPR) 기술을 사용하여), 항체 및 상이한 화학적 구조 또는 아미노산 서열을 갖는 항원 또는 에피토프에 의해 검출된 결합보다 100배, 500배, 1000배 이상 및 100배 미만인 경우 항원 또는 에피토프에 필수적으로 결합하지 않는 것으로 일컬어진다.
추가의 항체는 표준 ICOS 결합 검정에서 본 발명의 다른 항체와 교차-경쟁하는(예컨대, 통계적으로 유의적인 방식으로, 이의 결합을 경쟁적으로 억제하는) 이의 능력을 기반으로 확인할 수 있다. ICOS에 대한 본 발명의 항체의 결합을 억제하는 시험 항체의 능력은 시험 항체가 ICOS에 대한 결합에 대해 이러한 항체와 경쟁할 수 있고; 이러한 항체가 비-제한적 이론에 따라서, 이것이 경쟁하는 항체와 ICOS 상에서 동일하거나 관련된(예컨대, 구조적으로 유사하거나 공간적으로 근접한) 에피토프에 결합할 수 있음을 입증한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태는 본원에 개시된 항체와 동일한 항원에 결합하고, 이와 경쟁하는 항체를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같이, 항체는 경쟁하는 항체가 경쟁하는 항체의 등몰 농도의 존재하에서 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상 까지 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편의 ICOS 결합을 억제하는 경우 결합에 대해 "경쟁한다".
다른 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 ICOS의 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편이 결합하는 에피토프는 선형 에피토프이다. 다른 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편이 결합하는 에피토프는 비-선형의, 구조적 에피토프이다.
본 발명의 항체는 당해 분야에 공지된 임의의 방법으로 특정 결합에 대해 검정될 수 있다. 많은 상이한 경쟁적 결합 검정 양식(들)을 에피토프 결합에 사용할 수 있다. 사용될 수 있는 면역검정은 웨스턴 블롯, 방사선면역검정, ELISA, "샌드위치" 면역검정, 면역침전 검정, 프레시피틴 검정(precipitin assay), 면역방사 게측법(immunoradiometric assay), 형광성 면역검정, 단백질 A 면역검정, 및 상보체-고정 검정과 같은 기술을 사용하는 경쟁적 검정 시스템을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 검정은 통상적이고 당해 분야에 잘 공지되어 있다(참고: 예컨대, Ausubel 등, eds, 1994 Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & sons, Inc., 뉴욕).
항체 가공
본 발명의 가공된 항체는 변형이 VH 및/또는 VL 내에서 골격 잔기에 대해 이루어져, 에컨대, 항체의 특성을 증진시키는 것을 포함한다. 전형적으로, 이러한 골격 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들면, 한가지 시도는 하나 이상의 골격 잔기를 상응하는 배선 서열로 "역돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 겪는 항체는 이로부터 항체가 유래되는 배선 서열과는 상이한 골격 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 골격 서열을 이로부터 항체가 유래된 배선 서열과 비교함으로써 확인할 수 있다. 골격 영역 서열을 이의 배선 구조로 되돌리기 위하여, 체세포 돌연변이를 예를 들면, 부위-지시된 돌연변이유발 또는 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 배선 서열로 "역돌연변이"시킬 수 있다. 이러한 "역돌연변이된" 항체는 또한 본 발명에 의해 포함되는 것으로 의도된다. 골격 변형의 다른 유형은 골격 영역 내에서, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T 세포-에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시킴을 포함한다. 이러한 접근법은 또한 "탈면역화(deimmunization)"로 지칭되며, 이는 U.S. 특허 공개 No. 20030153043 (Carr 등)에 더 상세히 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 항체의 글리코실화가 변형된다. 글리코실화를 변경시켜 예 를 들면, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들면, 항체 서열 내 글리코실화의 하나 이상의 부위를 변경시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 가변 영역 골격 글리코실화 부위를 제거함으로써 이러한 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 아글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 접근법은 U.S. 특허 No. 5,714,350 및 No. 6,350,861 (Co 등)에 더 상세히 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 일부 돌연변이가 제1의 CDR(CDR1) 내에서 및 근처에서 응집 "핫스폿(hotspot)" 내에 위치한 아미노산에 대해 이루어져 응집에 대한 항원 민감성을 감소시킨다 (참고: Joseph M. Perchiacca 등, Proteins 2011; 79:2637-2647).
본 발명의 항체는 임의의 동형의 것일 수 있다. 동형의 선택은 전형적으로 목적한 효과기 기능에 의해 안내될 것이다. IgGl 및 IgG3은, IgG2 및 IgG4가 매개하지 않거나 보다 적은 방식으로 매개하는 경우, ADCC 또는 CDC와 같은 이러한 효과기 기능을 매개하는 동형이다. 사람 경쇄 불변 영역, 카파 또는 람다를 사용할 수 있다. 경우에 따라, 본 발명의 모노클로날 항체의 부류는 공지된 방법에 의해 스위치될수 있다. 대표적인, 부류 스위칭 기술(class switching technique)을 사용하여 IgG 소부류를 다른 것으로, 예를 들면, IgG1을 IgG2로 전환시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 모노클로날 항체의 효과기 기능은 다양한 치료학적 용도를 위해 예컨대, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgE, 또는 IgM 항체에 대한 동형 스위칭에 의해 변화될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 전체 길이의 항체이다. 일부 구현예에서, 전체 길이의 항체는 IgG1 항체이다. 일부 구현예에서, 전체 길이의 항체는 IgG3 항체이다.
따라서, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS IgG1 항체에 관한 것이다.
일부 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 변형됨으로써 힌지 영역내 다수의 시스테인 잔기가 변경되도록, 예컨대, 증가되거나 감소되도록 한다. 이러한 접근법은 U.S. 특허 No. 5,677,425 (Bodmer 등)에 더 상세히 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수는 예를 들면, 경쇄 및 중쇄의 조립을 촉진시고 항체의 안정성을 증가시키거나 감소시키도록 변경된다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 항체의 효과기 기능을 변경시키도록 변경된다. 예를 들면, 하나 이상의 아미노산을 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 항체가 효과기 리간드에 대해 변경된 친화성을 가지지만 모 항체의 항원-결합 능력을 유지하도록 할 수 있다. 친화성이 변경된 효과기 리간드는 예를 들면, Fc 수용체 또는 상보체의 C1 구성성분일 수 있다. 이러한 접근법은 U.S. 특허 No. 5,624,821 및 No. 5,648,260 (Winter 등)에 더 상세히 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 아미노산 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 항체가 변경된 C1q 결합 및/또는 감소되거나 폐기된 상보체 의존성 세포독성(complement dependent cytotoxicity; CDC)을 갖도록 할 수 있다. 이러한 접근법은 U.S. 특허 No. 6,194,551 (ldusogie 등)에 더 상세히 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기를 변경시킴으로써, 상보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이러한 접근법은 PCT 공보 WO 94/29351 (Bodmer 등)에 더 상세히 기술되어 있다.
일부 구현예에서, Fc 영역을 변형시켜 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 또는 항체-의존성 세포 식세포작용(ADCP)를 매개하고/하거나 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 Fc 수용체에 대한 항체의 친화성을 증가시킨다. 이러한 접근법은 PCT 공보 WO 00/42072 (Presta)에 더 상세히 기술되어 있다. 더욱이, FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 사람 IgGI 상의 결합 부위를 맵핑하고 증진된 결합을 지닌 변이체를 기술하였다 (참고: Shields, R. L. 등, 2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604, WO 2010106180).
용어 "항체-의존성 세포-매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는 당해 분야에서 잘 이해되어 있고, Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비-특이적인 세포독성 세포가 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식하여 후속적으로 표적 세포의 분해를 유발하도록 하는 세포-매개된 반응을 지칭한다. ADCC를 매개하는 비-특이적인 세포독성 세포는 천연 킬러(NK) 세포, 대식구, 단핵구, 호중구, 및 호산구를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역에 기여할 수 있는 생물학적 활성을 지칭하고, 이는 항체 동형으로 변한다. 항체 효과기 기능의 예는 다음을 포함한다: Clq 결합 및 상보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화.
추가로 또는 대안적으로, 변경된 유형의 글리코실화를 갖는 항체, 예를 들면, 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖거나 푸코실 잔기를 가지지 않는 하이포푸코실화되거나 비-푸코실화된 항체 또는 증가된 이등분되는 GlcNac 구조를 갖는 항체를 제조할 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시킴이 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들면, 변경된 글리코실화 기구를 지닌 숙주 세포 내에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 글리코실화 기구를 지닌 세포는 당해 분야에 기술되었고 본 발명의 재조합 항체를 발현함으로써 변경된 글리코실화를 지닌 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 항(Hang) 등에 의한 EP1,176,195는 기능적으로 파열된 FUT8 유전자를 지닌 세포주를 기술하고 있고, 이는 푸코실 트랜스퍼라제를 암호화함으로써, 이러한 세포주 내에서 발현된 항체가 하이포푸코실화를 나타내거나 푸코실 잔기가 고갈되도록 한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 하이포푸코실화 또는 비-푸코실화 패턴을 나타내는 세포주, 예를 들면, 푸코실트랜스퍼라제를 암호화하는 FUT8 유전자의 결핍된 발현을 지닌 포유동물 세포주에서 재조합 발현에 의해 생산될 수 있다. 프레스타(Presta)에 의한 PCT 공보 WO 03/035835는 Asn(297)-연결된 탄수화물에 푸코스를 부착시키는 능력이 감소되어, 또한 이러한 숙주 세포 내에서 발현된 항체의 하이포푸코실화를 야기하는 변이체 CHO 세포주, Lecl3 세포를 기술하고 있다 (참고: 또한 Shields, R.L. 등, 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740). 우마나(Umana) 등에 의한 PCT 공보 WO 99/54342는 당단백질-변형된 글리코실 트랜스퍼라제 (예컨대, 베타(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII)을 발현하도록 가공되어 가공된 세포주 내에서 발현된 항체가 항체의 증가된 ADCC 활성을 야기하는 증가된 양분된 GlcNac 구조를 나타내도록 하는 세포주를 기술하고 있다 (참고: 또한 Umana 등, 1999 Nat. Biotech. 17: 176-180). Eureka Therapeutics는 또한 쿠코실 잔기가 고갈된 변경된 포유동물 글리코실화 패턴을 지닌 항체를 생산할 수 있는 유전적으로 가공된 CHO 포유동물 세포를 추가로 기술하고 있다(http://www.eurekainc.com/a&boutus/companyoverview.html). 대안적으로, 본 발명의 모노클로날 항체는 포유동물-유사 글리코실화 패턴을 위해 가공되어 글리코실화 패턴으로서 푸코스를 결여한 항체를 생산할 수 있는 효모 또는 섬유상 진균에서 생산할 수 있다 (참고: 예컨대 EP 1297172 B1).
다른 구현예에서, 항체를 변형시켜 이의 생물학적 반감기를 증가시킨다. 다양한 접근법이 가능하다. 예를 들면, 다음의 돌연변이 중 하나 이상을 도입시킬 수 있다: 와드(Ward)에 의한 미국 특허 6,277,375에 기술된 바와 같은 T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위하여, 항체를 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경시켜 프레스타(Presta) 등에 의한 미국 특허 5,869,046 및 6,121,022에 기술된 바와 같이 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프로부터 취한 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 할 수 있다. 증가된 반감기 및 모 IgG의 태아로의 이동에 관여하는(Guyer 등., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim 등., J. immunol. 24:249 (1994)), 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 증진된 결합을 지닌 항체는 US2005/0014934A1(힌톤(Hinton) 등)에 기술되어 있다. 이러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 증진시키는 하나 이상의 치환을 지닌 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311,312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 또는 434 중 하나 이상에서 치환, 예컨대, Fc 영역 잔기 434의 치환(미국 특허 7,371,826)을 지닌 것을 포함한다.
본 발명에 의해 고려되는 본원의 항체의 다른 변형은 페길화(pegylation)이다. 항체를 페길화시켜 예를 들면, 항체의 생물학적(예컨대, 혈청) 반감기를 증가시킬 수 있다. 항체를 페길화시키기 위해, 항체 또는 이의 단편은 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 예를 들면, PEG의 반응성 에스테르 또는 알데하이드 유도체와 하나 이상의 PEG 그룹이 항체 또는 항체 단편에 부착되도록 하는 조건 하에서 반응시킨다. 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응에 의해 수행될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용된 임의의 형태의 PEG, 예를 들면, 모노(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포함하는 것으로 의도된다. 특정의 구현예에서, 페길화될 항체는 아글리코실화된 항체이다. 단백질을 페길화하기 위한 방법은 당해 분야에 공지되어 있고 본 발명의 항체에 적용될 수 있다 (참고: 예컨대, Nishimura 등에 의한 EP 0154316, 및 Ishikawa 등에 의한 EP 0401384).
본 발명에 의해 고려되는 항체의 다른 변형은 수득되는 분자의 반감기를 증가시키기 위한 혈청 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민 또는 이의 단편에 대한 본 발명의 항체의 적어도 항원-결합 영역의 접합체 또는 단백질 융합체이다. 이러한 접근법은 예를 들면 발란스(Ballance) 등의 EP0322094에 기술되어 있다. 다른 가능성은 수득되는 분자의 반감기를 증가시키기 위한 혈청 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민에 결합할 수 있는 단백질에 대한 본 발명의 항체의 적어도 항원-결합 영역의 융합이다. 이러한 접근법은 예를 들면 니그렌(Nygren) 등의 EP 0 486 525에 기술되어 있다.
폴리시알릴화(polysialytion)는 천연 중합체 폴리시알산(PSA)를 사용하여 치료학적 펩타이드 및 단백질의 활성 수명을 연장시키고 이의 안정성을 증진시키는, 다른 기술이다. PSA는 시알산의 중합체(당)이다. 단백질 및 치료학적 펩타이드 약물 전달을 위해 사용된 경우, 폴리시알산은 접합시 보호성 미세환경을 제공한다. 이는 순환시 치료학적 단백질의 활성 수면을 증가시키고 이를 면역계에 의한 인식으로부터 방지한다. PSA 중합체는 사람 체내에서 천연적으로 발견된다. 이는 이의 벽을 이것으로 코팅하기 위해 수만년에 걸쳐 진화된 특정 세균에 의해 채택되었다. 이러한 천연적으로 폴리시알릴화된 세균은 이후 분자 미미크리(molecular mimicry) 덕분에, 신체 방어 시스템을 둘러싸을 수 있다. 천연의 궁극적인 쉘쓰 기술(nature's ultimate stealth technology)인, PSA는 이러한 세균으로부터 대량으로 용이하게 및 예정된 물리적 특성으로 생산될 수 있다. 세균 PSA는 심지어 단백질과 커플링되는 경우에도, 사람 체내에서 PSA와 화학적으로 동일하므로, 완전히 비-면역원성이다.
다른 기술은 항체에 연결된 하이드록시에틸 전분("HES") 유도체의 사용을 포함한다. HES는 왁스성옥수수 전분으로부터 유도된 변형된 천영 중합체이며 신체의 효소에 의해 대사될수 있다. HES 용액은 일반적으로 투여되어 결핍성 혈액 용적을 대체하며 혈액의 유동학적 특성을 증진시킨다. 항체의 헤실화(hesylation)는 분자의 안정성을 증가시킬 뿐만 아니라 신장 청소를 감소시킴으로써 순환 반감기의 연장시켜, 증가된 생물학적 활성을 야기한다. 상이한 매개변수, 예를 들면, HES의 분자량을 변화시킴으로써, 광범위한 HES 항체 접합체를 제작할 수 있다.
본 발명의 특정의 구현예에서 항체를 가공하여 탈아민화 부위를 제거하였다. 탈아민화는 펩타이드 또는 단백질 내 구조적 및 기능적 변화를 유발하는 것으로 알려져 있다. 탈아민화는 감소된 생활성 뿐만 아니라 약동학 및 단백질 약제의 항원성에서의 변경을 야기할 수 있다(Anal Chem. 2005 Mar 1 ;77(5):1432-9).
특수한 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이고 여기서 상기 항체는 ADCC 및/또는 ADCP에 의해 CTCL 세포 또는 TFH 유래된 림프종 ITL 세포를 사멸시킬 수 있다.
다시 말해서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이고, 여기서 상기 항체는 ADCC 활성 및/또는 ADCP 활성을 매개한다.
본 발명의 특정 구현예에서, 항체를 가공하여 pI를 증가시키고 이의 약물-유사 특성을 증진시켰다. 단백질의 pI는 분자의 전체 생물리학적 특성의 주요 결정인자이다. 낮은 pI를 가진 항체는 거의 가용성이 아닌 것으로 알려졌고, 응집하는 경향이 있다. 또한, 낮은 pI를 지닌 항체의 정제는 도전과제이고 특히 임상 용도를 위한 규모 확장 동안 필수적으로 문제가 될 수 있다. 본 발명의 항-ICOS 항체 또는 이의 단편의 pI를 증가시키는 것은 이의 용해도를 증진시키고, 항제를 보다 높은 농도(>100 mg/ml)에서 제형화하는 것을 가능하도록 한다. 고 농도(예컨대, >100mg/ml)에서 항체의 제형은 고 용량의 항체를 유리체내 주사를 통해 환자의 눈에 투여할 수 있는 장점을 제공하며, 이는 궁극적으로 심혈관 장애를 포함하는 만성 질환의 치료를 위한 유의적인 장점인, 투여 빈도를 감소시킬 수 있다. 보다 높은 pI는 또한 항체의 IgG 버젼의 FcRn-매개된 리사이클링을 증가시킴으로서 보다 오랜 기간 동안 체 내에서 약물이 지속되도록 할 수 있으며, 보다 적은 주사를 요구한다. 최종적으로, 항체의 전반적인 안정성은 보다 긴 반감기 및 생체 내에서 생물활성을 야기하는 보다 높은 pi로 인하여 유의적으로 증진된다. 바람직하게는, pI는 8.2 이상이다.
글리코실화 변형은 또한 시알릴화된 글리칸의 첨가에 의해 항체의 향상된 소염 특성을 유도할 수 있다. Fc 글리칸에 말단 시알산의 첨가는 FcγR 결합을 감소시키고 신규한 결합 활성의 획득을 통해 IgG 항체를 소염 매개인자로 전환시킨다 (참고: Robert M. Anthony 등, J Clin Immunol (2010) 30 (Suppl 1):S9-S14; Kai-Ting C 등, Antibodies 2013, 2, 392-414).
항체 모사체(mimetic)
일부 구현예에서, 개시된 중쇄 및 경쇄, 가변 영역 도메인 및 CDR을 사용하여 ICOS에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 영역을 함유하는 폴리펩타이드를 제조할 수 있다. 예를 들면, 표 1 또는 2에 나타낸 CDR 중 하나 이상을 분자(예컨대, 폴리펩타이드) 내에 공유결합 또는 비공유결합적으로 혼입시켜 면역부착을 이룰 수 있다. 면역부착은 보다 큰 폴리펩타이드 쇄의 일부로서 CDR(들)을 혼입할 수 있거나, CDR(들)을 다른 폴리펩타이드 쇄에 공유결합으로 연결할 수 있거나, CDR(들)을 비공유결합으로 혼입시킬 수 있다. CDR(들)은 면역부착이 목적한 특수 항원(예컨대, ICOS 또는 이의 에피토프)에 특이적으로 결합할 수 있도록 한다.
용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용되어 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 당해 용어는 아미노산 중합체에 적용되며 여기서 하나 이상의 아미노산 잔기는 상응하는 천연적으로 발생하는 아미노산 뿐만 아니라, 천연적으로 발생하는 아미노산 중합체 및 비-천연적으로 발생하는 아미노산 중합체의 인공의 화학적 모사체이다. 달리 나타내지 않는 한, 특수한 폴리펩타이드 서열은 또한 보존적으로 변형된 이의 변이체를 함축적으로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항원 결합 단편은 아피보디, 아필린, 아피틴, 애드넥틴, 아트리머, 에바신, DARPin, 안티칼린, 아비머(avimer), 피노머, 및 베르사보디로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체 모세체로 또한 불리는 비-면역글로불린 기반 항체 내로 이식된다.
용어 "항체 모사체"는 항원에 결합하는 항체의 능력을 모사할 수 잇는 분자를 지칭하는 것으로 의도되지만, 천연 항체 구조로 제한되지 않는다. 이러한 항체 모사체의 예는 애드넥틴, 아피보디, DARPin, 안티칼린, 아비머, 및 베르사보디를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 이들 모두는 전통적인 항체 결합을 모사하지만, 명백한 메카니즘으로부터 생성되어 이를 통해 작용하는 결합 구조를 사용한다. 항체의 항원 결합 단편은 피브로넥틴 제III형(Fn3)과 같은 폴리펩타이드를 기반으로 스캐폴드 내로 이식될 수 있다 (참고: U.S. 특허 No. 6,703,199, fibronectin polypeptide monobodies를 기술함). 아피보디는 당해 분야에 잘 공지되어 있고 스타필로코쿠스 단백질 A의 IgG 결합 도메인 중 하나로부터 유래된, 58개 아미노산 잔기 단백질 도메인을 기반으로 한 친화성 단백질을 지칭한다. DARPin(설계된 안키린 반복 단백질(designed Ankyrin Repeat Protein)은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 비-항체 단백질의 결합 능력을 탐구하기 위해 개발된 항체 모사체 DRP(설계된 반복 단백질) 기술을 지칭한다. 안티칼린은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 다른 항체 모사체 기술을 지칭하며, 여기서 결합 특이성은 리포칼린으로부터 유래된다. 안티칼린은 또한 듀오칼린으로 불리는 이중 표적화 단백질로서 제형화될 수 있다. 아비머는 당해 분야에 잘 공지되어 있고 다른 항체 모사체 기술을 지칭하며, 아비머는 천연의 A-도메인 함유 단백질로부터 유래된다. 베르사보디는 당해 분야에 잘 공지되어 있고 다른 항체 모사체 기술을 지칭하며, 이는 >15% 시스테인을 지닌 3 내지 5 kDa의 작은 단백질이고, 이는 높은 이황화물 밀도 스캐폴드를 형성하고, 대표적인 단백질이 가진 소수성 코어를 대체한다. 이러한 항체 모사체는 스캐폴드 내에 포함될 수 있다. 용어 "스캐폴드"는 조정된 기능 및 특성을 지닌 신규 생성물의 가공을 위한 폴리펩타이드 플랫포옴을 지칭한다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 CDR이 이식될 수 있는 비-면역글로불린 스캐폴드를 사용하여 또한 항체 모사체로 불리는 비-면역글로불린 기반한 항체를 생성하는데 관한 것이다. 공지되거나 미래의 비-면역글로불린 골격 및 스캐폴드가 표적 [항원] 단백질에 대해 특이적인 결합 영역을 포함하는 한, 이를 사용할 수 있다.
피브로넥틴 스캐폴드는 피브로넥틴 제III형 도메인(예컨대, 피브로넥틴 제III형의 10번째 모델(10 Fn3 도메인))을 기반으로 한다. 피브로넥틴 제III형 도메인은 2개의 베타 쉬이트 사이에 분포된 7 또는 8개의 베타 쇄를 가지며, 이는 자체적으로 서로에 대해 팩킹(packing)되어 단백질의 코어를 형성하고, 또한 베타 다닥을 서로 연결시키고 용매를 노축시키는 루프(CDR과 유사)를 함유한다. 베타 쉬이느 샌드위치의 각각의 가장자리에 3개의 이러한 루프가 존재하며, 여기서 가장자리는 베타 가닥의 방향에 대해 직각인 단백질의 경계부이다(참고: US 6,818,418). 이러한 피브로넥틴-기반 스캐폴드는, 전반적인 배수(fold)가 가장 작은 기능성 항체 단편인, 중쇄의 가변 영역의 것과 밀접하게 관련되어 있다고 해도, 면역글로불린이 아니며, 이는 낙타 및 라마(llama) IgG 내에 전체 항원 인식 단위를 포함한다. 이러한 구조로 인하여, 비-면역글로불린 항체는 천연적으로 유사하고 항체의 것에 대해 친화성인 항원 결합 특성을 모사한다. 이러한 스캐폴드는 생체 내에서 친화성 성숙의 공정과 유사한 시험관 내에서 루프 무작위화 및 셔플링 전력에 사용될 수 있다. 이러한 피브로넥틴-기반한 분자는 스캐폴드로서 사용될 수 있고 여기서 분자의 루프 영역은 표준 클로닝 기술을 사용하여 본 발명의 CDR로 대체시킬 수 있따.
안키린 기술은 상이한 표적에 대한 결합에 사용될 수 있는 가변 영역을 생성하기 위한 스캐폴드로서 안키린 유래된 반복 모듈을 지닌 단백질을 사용하는 것으로 기반으로 한다. 안키린 반복체 모듈은 2개의 항-평행 α-나선 및 β-턴(turn)으로 이루어진 33개의 아미노산 폴리펩타이드이다. 가변 영역의 결합은 리보손 디스플레이를 사용함으로써 대부분 최적화된다.
아비머는 LRP-1과 같은 천연의 A-도메인 함유 단백질로부터 유래된다. 이러한 도메인은 천연적으로 단백질-단백질 상호작용을 위해 사용되며 사람에서 구조적으로 250개의 단백질이 아미노산 링커를 통해 연결된 "A-도메인" 단량체(2 내지 10)를 기반으로 한다. 예를 들면, 미국 특허원 공보 20040175756; 20050053973; 20050048512; 및 20060008844에 기술된 방법을 사용하여 표적 항원에 결합할 수 있는 아비머를 생성시킬 수 있다.
아피보디(affibody) 친화성 리간드는 단백질 A의 IgG-결합 도메인 중 하나의 스캐폴드를 기반으로 한 3개의 나선 번들(three-helix bundle))로 구성된 작고, 간단한 단백질이다. 단백질 A는 세균 스타필로코쿠스 아우레우스로부터의 표면 단백질이다. 이러한 스캐폴드 도메인은 58개의 아미노산으로 이루어지고, 이들 중 13개는 무작위화되어 다수의 리간드 변이체를 지닌 아피보디 라이브러리를 생성한다(참고: 예컨대, US 5,831,012). 아피보디 분자는 항체를 모사하고, 이는 6kDa의 분자량을 갖는다. 이의 작은 크기에도 불구하고, 아피보디 분자의 결합 부위는 항체의 것과 유사하다.
안티칼린은 Pieris ProteoLab AG 회사에서 개발된 생성물이다. 이는 화학적으로 민감하거나 불용성인 화합물의 생리학적 수송 또는 저장에 일반적으로 관여하는 작고 풍부한 단백질의 광범위한 그룹인, 리포칼린으로부터 유래된다. 수개의 천연 리포칼린이 사람 조직 또는 체액 속에서 발생한다. 단백질 구성(architecture)은 면역글로불린을 연상시키며, 엄격한 골격의 상부에 초가변성 루프를 지닌다. 그러나, 항체 또는 이의 재조합 단편과는 대조적으로, 리포칼린은 160 내지 180개 아미노산 잔기를 지닌 단일 폴리펩타이드 쇄로 구성되고, 단일 면역글로불린 도메인보다 아주 미미하게 더 크다. 결합 포켓을 이루는 4개의 루프의 세트는 알려진 구조적 가소성을 나타내고 다양한 측쇄를 견딘다. 따라서 결합 부위를 독점적인 공정에서 재성형시켜 고 친화성 및 특이성을 지닌 상이한 유형의 규정된 표적 분자를 인식시킬 수 있다. 리포칼린 계열의 하나의 단백질인, Pieris Brassicae의 빌린-결합 단백질(bilin-binding protein; BBP)을 사용하여 4개의 루프의 세트를 돌연변이시켜 안티칼린을 개발하였다. 안티칼린을 기술하는 특허원의 하나의 예는 PCT 공보 WO 199916873에 있다.
아필린 분자는 단백질 및 소 분자에 대한 특이적인 친화성을 위해 고안된 작은 비-면역글로불린 단백질이다. 신규한 아필린 분자가 2개의 라이브러리로부터 매우 신속하게 선택될 수 있고, 이들 각각은 상이한 사람 유래된 스캐폴드 단백질을 기반으로 한다. 아필린 분자는 면역글로불린 단백질에 대해 임의의 구조적 상동성을 나타내지 않는다. 현재, 2개의 아필린 스캐폴드가 사용되며, 이들 중 하나는 감마 결정의, 사람 구조적 눈 렌즈 단백질이고 다른 것은 "우비퀴틴" 상과 단백질이다. 사람 스캐폴드 둘 다는 매우 작고, 고온 안정성을 나타내며 pH 변화 및 변성제에 대해 거의 내성이다. 이러한 높은 안정성은 주로 단백질의 확장된 베타 쉬이트 구조에 기인한다. "우비퀴틴-유사" 단백질의 예는 WO2004106368에 기술되어 있다.
베르사보디는 매우 가용성이고 고 농도로 제형화될 수 있다. 베르사보디는 예외적으로 열 안정성이고 연장된 반감기를 제공한다. 베르사보디에 관한 추가의 정보는 본원에 이의 전문이 참고로 포함된 US 2007/0191272에서 찾을 수 있다.
항체 단편 및 모사체 기술의 상기 설명은 포괄적인 것으로 의도되지 않는다. 대안의 폴리펩타이드-기반 기술, 예를 들면, Qui 등., Nature Biotechnology, 25(8) 921-929 (2007)에 요약된 바와 같은 상보성 결정 영역의 융합 뿐만 아니라 모두 본원에 참고로 포함된, US 5,789,157; 5,864,026; 5,712,375; 5,763,566; 6,013,443; 6,376,474; 6,613,526; 6,114,120; 6,261,774; 및 6,387,620에 기술된 RNA 아프타머 기술과 같은 핵산-기반 기술을 본 발명의 내용에서 사용할 수 있다.
CAR-T 세포
본 발명은 또한 본 발명의 항체의 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다. 전형적으로, 상기 키메라 항원 수용체는 본 발명의 항체의 적어도 하나의 VH 및/또는 VL 서열을 포함한다. 본 발명의 키메라 항원 수용체는 또한 세포외 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 세포내 T 세포 신호전달 도메인을 포함한다. CAR-T 세포는 CTCL에서 이미 사용되었다(참고: 예를 들면 Scarf
Figure pct00006
I et al., 2019).
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS CAR-T 세포에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 당해 분야에서 이의 일반적인 의미를 가지며 T-세포 신호전달 도메인에 연결된 항체의 항원 결합 도메인(예컨대, scFv)을 함유하는 인공적으로 작제된 하이브리드 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. CAR의 특성은 비-MHC-제한된 방식으로 선택된 표적에 대해 T-세포 특이성 및 반응성을 재지시하여, 모노클로날 항체의 항원-결합 특성을 이용하는 이의 능력을 포함한다. 비-MHC-제한된 항원 인식은 CAR을 발현하는 T 세포에게 항원 프로세싱과는 별개로 항원을 인식하는 능력을 제공함으로써, 종양 회피의 주요 메카니즘을 건너뛰도록 한다. 더욱이, T-세포 내에서 발현된 경우, CAR은 내인성 T 세포 수용체(TCR) 알파 및 베타 쇄를 유리하게 이량체화하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체의 단일 쇄 가변 단편(scFv)를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 이로 필수적으로 이루어진 항원-결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 링커 펩타이드를 포함한다. 링커 펩타이드는 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역 사이에 위치할 수 있다.
일부 구현예에서, CAR은 세포외 힌지 도메인, 막관통 도메인, 및 CD28, 4-1BB, 및 CD3ζ 세포내 도메인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포내 T 세포 신호전달 도메인을 포함한다. CD28은 T 세포 공-자극에 중요한 T 세포 마커이다. 4-1BB는 강력한 공자극성 신호를 T 세포에 전송하여, T 림프구의 분화를 촉진하고 이의 장기간 생존을 향상시킨다. CD3ζ는 TCR과 연합하여 신호를 생산하고 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif; ITAM)를 함유한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 예컨대, 이황화물 브릿지를 통해 글리코실화, 아미드화, 카복실화, 포스포릴화, 에스테르화, N-아실화, 폐환되고/되거나, 산 부가염으로 전환되고/되거나, 임의로 이량체화 또는 중합될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 제공한다. 일부 구현예에서, 핵산은 상술한 바와 같은 벡터 내에 혼입된다.
본 발명은 또한 본 발명의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 숙주 세포가 임의의 세포 유형일 수 있고, 조직의 임의의 유형으로부터 기원할 수 있고 임의의 발달 단계일 수 있지만; 숙주 세포는 예컨대, 말초 혈액 림프구(PBL) 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된, T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 임의의 T 세포, 예를 들면, 배양된 T 세포, 즉, 1차 T 세포, 또는 배양된 T 세포로부터의 T 세포, 예컨대, 저켓(Jurkat), SupTl 등, 또는 포유동물로부터 수득된 T 세포일 수 있다. 포유동물로부터 수득된 경우, T 세포는 다수의 공급원, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 혈액, 골수, 림프절, 흉선, 또는 다른 조직 또는 유액으로부터 수득될 수 있다. T 세포는 또한 농축되거나 정화시킬 수 있다. T 세포는 T 세포의 임의의 유형일 수 있고 임의의 발달 단계, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, CD4+/CD8+ 이중 양성 T 세포, CD4+ 헬퍼 T 세포, 예컨대, Th2 세포, CD8+ T 세포(예컨대, 세포독성 T 세포), 종양 침윤 세포, 기억 T 세포, 나이브(naive) T 세포 등일 수 있다. T 세포는 CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포일 수 있다.
상술한 바와 같은 이러한 T 세포의 집단을 공지된 기술, 또는 본 개시내용을 기반으로 당해 분야의 숙련가에게 명백할 이의 변형에 따라 입양 면역치료요법을 위한 방법 및 조성물에서 활용될 수 있다. 예컨대, Gruenberg 등의 US 특허 출원 공개 No. 2003/0170238를 참조하라; 또한 Rosenberg의 US 특허 No. 4,690,915를 참조하라.
암의 입양 면역치료요법은 치료학적 접근법을 지칭하고 여기서 항종양 반응성을 지닌 면역 세포는 세포를 확립된 종양과 상관없이 직접 또는 간접적으로 매개시키는 목적으로, 종양-생성 숙주에게 투여된다. 림프구, 특히 T 림프구의 주입(transfusion)은 이러한 범주에 속한다. 현재, 대부분의 입양 면역치료요법은 환자 자체의 면역 세포를 사용한 치료에 관한 지가림프구 치료요법(autolymphocyte therapy; ALT)이다. 이러한 치료요법은 환자 자체의 림프구를 가공하여 면역 세포 매개된 반응을 향상시키거나 암 세포를 포함하는, 체 내의 특이적인 항원 또는 외부 물질을 인식시킴을 포함한다. 치료는 환자의 림프구를 제거하고 이러한 세포를 시험관 내에서 생물제 및 약물에 노출시켜 세포의 면역 기능을 활성화시킴으로써 달성된다. 자가 세포가 활성화되면, 이러한 생체 외 활성화된 세포를 환자에게 재주입하여 면역계를 향상시킴으로써 암을 치료한다. 일부 구현예에서, 세포는 이를 먼저 이의 배양 배지로부터 수거한 다음, 세포를 배지 및 투여에 적합한 용기 시스템("약제학적으로 허용되는" 담체) 속에서 치료-유효량으로 세척 및 농축시켜 제형화시킨다. 적합한 주입 배지는 임의의 등장성 배지 제형, 전형적으로, 정상 염수, Normosol R(Abbott) 또는 Plasma-Lyte A(Baxter)일 수 있지만, 또한 수중 5% 덱스트로스 또는 링거 락테이트(Ringer's lactate)를 활용할 수 있다. 주입 배지에 사람 혈청 알부민을 보충할 수 있다. 조성물 속의 세포의 치료-유효량은 목적한 특이성을 지닌 T 세포의 상대적인 제시, 수용체의 연령 및 체중, 표적화된 상태의 중증도 및 표적화된 Ag의 면역원성에 의존한다. 세포의 이러한 양은 대략 103/kg, 바람직하게는 5x103/kg로 낮을 수 있고; 107/kg, 바람직하게는 108/kg로 높을 수 있다. 세포의 수는 조성물에 포함된 세포의 유형과 같이, 조성물이 의도하는 궁극적인 용도에 의존할 것이다. 예를 들면, 특수한 Ag에 대해 특이적인 세포가 요구되는 경우, 집단은 70% 초과, 일반적으로 80%, 85% 및 90 내지 95% 초과의 이러한 세포를 함유할 것이다. 본원에 제공된 용도를 위해, 세포는 일반적으로 리터 이하의 용적일 수 있고, 500 ml 이하, 심지어 250 ml 또는 100 ml 이하의 용적이다. 면역 세포의 임상적으로 상대적인 수는 세포의 목적한 총 수와 누적적으로 동일하거나 이를 초과하는 다수의 주입물로 할당될 수 있다.
다중특이적 항체
일부 구현예에서, 본 발명은 상기 본원에 기술된 본 발명의 항체로부터의 제1의 항원 결합 부위 및 적어도 하나의 제2의 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체를 제공한다.
따라서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 본 발명의 항체 항-ICOS로부터의 제1의 항원 결합 부위 및 적어도 하나의 제2의 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적인 항체에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 제2의 항원-결합 부위는 예를 들면, US7235641에 기술된 T 세포 상의 표적 항원 및 CD3에 대해 지시된 이중특이적 scFv2인 BiTE(이중특이적 T-세포 인게이저(engager)) 항체로서 사람 효과기 세포 상의 항원을 결합시키거나, 세포독성제 또는 제2의 치료제를 결합시킴에 의해서와 같은 사멸 메카니즘을 보충하기 위해 사용된다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "효과기 세포"는 면역 반응의 인식 및 활성화 상과 대치되는 것으로서, 면역 반응의 효과기 상에 포함된 면역 세포를 지칭한다. 예시적인 면역 세포는 골수구 또는 림프구 기원의 세포, 예를 들면, 림프구(예를 들면, B 세포 및 T 세포, 예를 들면, 세포분해성 T 세포(CTL)), 킬러 세포, 천연 킬러 세포, 대식구, 비반 세포 및 과립구, 예를 들면, 호중구, 호산구 및 호염기구를 포함한다. 일부 효과기 세포는 특이적인 Fc 수용체(FcR)를 발현하며 특이적인 면역 기능을 수반한다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 ADCC, 예를 들면, 천연 킬러 세포를 유도할 수 있다. 예를 들면, FcR을 발현하는, 단핵구, 대식구는 표적 세포의 특이적인 사멸 및 면역계의 다른 구성성분에 대한 항원 제시에 포함된다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 표적 항원 또는 표적 세포를 포식작용할 수 있다. 효과기 세포 상에서 특수한 FcR의 발현은 체액성 인자, 예를 들면, 사이토킨에 의해 조절될 수 있다. 효과기 세포는 표적 항원을 포식작용하거나 표적 세포를 포식작용 또는 분해할 수 있다. 적합한 세포독성제 및 제2의 치료학적 제제는 하기 예시되어 있고 독소(예를 들면, 방사선표지된 펩타이드), 화학치료제 및 전구약물(prodrug)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2의 항원-결합 부위는 예컨대, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD46, CD80, CD138 및 HLA-DR과 같은 사람 B 세포 상의 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 제2의 항원-결합 부위는 조직-특이적인 항원에 결합하여 특정 조직에 대한 이중특이적 항체의 국재화를 촉진한다.
일부 구현예에서, 제2의 항원-결합 부위는 ICOS-발현 세포로서 동일한 유형의 세포 상에 위치한 항원, 전형적으로 종양-관련된 항원(tumor-associated antigen; TAA)에 결합하지만, 제1의 항원-결합 부위의 것과는 상이한 결합 특이성을 갖는다. 이러한 다중- 또는 이중특이적인 항체는 종양 세포 결합의 특이성을 향상시키고/시키거나 다수의 효과기 경로에 관여할 수 있다. 예시적인 TAA는 암배아 항원(carcinoembryonic antigen; CEA), 전립선 특이적인 항원(prostate specific antigen; PSA), RAGE(신장 항원), a-페토단백질, CAMEL(흑색종에서 CTL-인식된 항원), CT 항원(예를 들면, MAGE-B5, -B6, -C2, -C3, 및 D; Mage-12; CT10; NY-ESO-1, SSX-2, GAGE, BAGE, MAGE, 및 SAGE), 무친 항원(mucin antigen)(예컨대, MUC1, 무친-CA125 등), 강글리오사이드 항원, 타이로시나제, gp75, c-Met, Marti, MelanA, MUM-1, MUM-2, MUM-3, HLA-B7, Ep-CAM 또는 암-관련된 인테그린, 예를 들면, α5β3 인테그린을 포함한다. 대안적으로, 제2의 항원-결합 부위는 [항원]의 상이한 에피토프에 결합한다. 제2의 항원-결합 부위는 대안적으로 혈관형성 인자 또는 다른 암-관련된 성장 인자, 예를 들면, 혈관 내피 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, 상피 성장 인자, 안기오게닌 또는 이러한 임의의 수용체, 특히 암 진행과 관련된 수용체에 결합할 수 있다.
본 발명의 다중특이적인 항체에 대한 예시적인 양식은 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: (i) 화학적 이종 접합에 의해 가교-결합된 2개의 항체, 즉, ICOS에 대한 특이성을 지닌 항체 및 제2의 항원에 대한 특이성을 지닌 다른 항체; (ii) 2개의 상이한 항원-결합 영역을 포함하는 단일 항체; (iii) 2개의 상이한 항원-결합 영역, 예컨대, 과외의 펩타이드 링커에 의해 탄뎀(tandem) 방식으로 연결된 2개의 scFv; (iv) 이중-가변성-도메인 항체(DVD-Ig)(여기서 각각의 경쇄 및 중쇄는 짧은 펩타이드 연결을 통해 탄뎀 방식으로 2개의 가변 도메인을 함유한다(Wu 등., Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-IgTM) Molecule, In : Antibody Engineering, Springer Berlin Heidelberg (2010)); (v) 화학적으로 연결된 이중특이적인 (Fab')2 단편; (vi) 표적 항원 각각에 대해 2개의 결합 부위를 갖는 4가의 이중특이적인 항체를 생성하는 2개의 단일 쇄 디아보디의 융합체인, Tandab; (vii) 다가의 분자를 생성하는 디아보디와 scFv의 조합인, 플렉시보디(flexibody); (viii) Fab에 적용하는 경우 상이한 Fab 단편에 연결된 2개의 동일한 Fab 단편으로 이루어진 4가의 이중특이적인 결합 단백질을 생성할 수 있는 단백질 키나제 A내 "이량체화 및 도킹(docking) 도메인"을 기반으로 한 소위 "독 앤드 록(dock and lock)" 분자; (ix) 예컨대, 사람 Fab-아암의 말단 둘 다에 융합된 2개의 scFv를 포함하는 소위 스코르피온 분자(Scorpion molecule); 및 (x) 디아보디, 이중특이적인 항원에 대한 다른 예시적인 양식은 이종이량체화되도록 하는 상보성 CH3 도메인을 지닌 IgG-유사 분자이다. 이러한 분자는 예컨대, 트리오맵/쿼드로마(Triomab/Quadroma)(Trion Pharma/Fresenius Biotech), 놉-인투-홀(Knob-into-Hole)(Genentech), CrossMAb(Roche) 및 정전기적으로-일치된(electrostatically-matched)(Amgen), LUZ-Y(Genentech), 가닥 교환 가공된 도메인 체(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody)(EMD Serono), Biclonic(Merus) 및 DuoBody(Genmab A/S) 기술과 같은 공지된 기술을 사용하여 제조할 수 있다.
일부 구현예에서, 이특이적 항체는 전형적으로 DuoBody 기술을 사용하여 제어된 Fab-아암 교환을 통해 수득되거나 수득될 수 있다. 제어된 Fab-아암 교환에 의해 이중특이적 항체를 생산하기 위한 시험관 내 방법은 WO2008119353 및 WO 2011131746(둘 다 Genmab A/S)에 기술되어 있다. WO 2008119353에 기술된, 하나의 예시적인 방법에서, 이중특이적인 항체는 둘 다 환원 조건 하에서 항온처리 시, IgG4-유사 CH3 영역을 포함하는, 2개의 일특이적 항체 사이의 "Fab-아암(arm)" 또는 "반(1/2)-분자" 교환(중쇄 및 부착된 경쇄의 스와핑)에 의해 형성된다. 수득되는 생성물은 상이한 서열을 포함할 수 있는 2개의 Fab 아암을 갖는 이중특이적 항체이다. WO 2011131746에 기술된 다른 예시적인 방법에서, 본 발명의 이중특이적인 항체는 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되고, 여기서 제1 및 제2의 항체 중 적어도 하나는 본 발명의 항체이다: a) 면역글로불린의 Fc 영역을 포함하는 제1의 항체(상기 Fc 영역은 제1의 CH3 영역을 포함한다)를 제공하는 단계; b) 면역글로불린의 Fc 영역을 포함하는 제2의 항체(상기 Fc 영역은 제2의 CH3 영역을 포함한다)를 제공하는 단계로서; 여기서 상기 제1 및 제2의 CH3 영역의 서열을 상이하고 상기 제1과 제2의 CH3 영역 사이의 이종이량체성 상호작용이 상기 제1 및 제2의 CH3 영역의 단독이량체성 상호작용 각각보다 더 강하도록 하는, 단계; c) 상기 제1의 항체를 상기 제2의 항체와 함께 환원 조건 하에서 항온처리하는 단계; 및 d) 상이 이중특이적인 항체를 수득하는 단계로서, 여기서 제1의 항체는 본 발명의 항체이고 제2의 항체는 상이한 결합 특이성을 가지거나, 또는 이의 역인 단계. 환원 조건은 예를 들면, 예컨대, 2-머캅토에틸아민, 디티오트레이톨 및 트리스(2-카복시에틸)포스핀으로부터 선택된 환원제를 가함으로써 제공될 수 있다. 단계 d)는 예를 들면, 환원제를 제거함으로써, 예컨대, 탈염시킴으로써, 조건을 회복시켜 비-환원성이 되거나 거의 환원되지 않도록 하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 제1 및 제2의 CH3 영역의 서열은 상이하고, 단지 적은 수의, 상당히 보존적인, 비대칭 돌연변이를 포함함으로써, 상기 제1과 제2의 CH3 영역 사이의 이종이량체성 상호작용이 상기 제1 및 제2의 CH3 영역의 단독이량체성 상호작용 각각보다 더 강력하도록 한다. 이러한 상호작용의 보다 더 세부사항 및 이들이 달성될 수 있는 방법은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된 WO 2011131746에 제공된다. 다음은 이러한 비대칭 돌연변이의 조합의 예시적인 구현예이며, 임의로 여기서 하나 또는 둘 다의 Fc-영역은 IgG1 아형의 것이다.
일부 구현예에서, 제1의 Fc 영역은 366, 368, 370, 399, 405, 407 및 409로 이루어진 그룹으로부터 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖고, 제2의 Fc 영역은 366, 368, 370, 399, 405, 407 및 409로 이루어진 그룹으로부터 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖고, 여기서 제1 및 제2의 Fc 영역은 동일한 위치에서 치환되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1의 Fc 영역은 405번 위치에서 아미노산 치환을 갖고, 상기 제2의 Fc 영역은 366, 368, 370, 399, 407 및 409로 이루어진 그룹으로부터 선택된 위치, 및 임의로 409번 위치에서 아미노산 치환을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1의 Fc 영역은 408번 위치에서 아미노산 치환을 갖고, 상기 제2의 Fc 영역은 366, 368, 370, 399, 405, 및 407로 이루어진 그룹으로부터 선택된 위치, 임의로 405 또는 368번 위치에서 아미노산 치환을 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2의 Fc 영역 둘 다는 IgGl 동형의 것이고, 제2의 Fc 영역은 405번 위치에서 Leu을 갖고, 제2의 Fc 영역은 409번 위치에서 Arg를 갖는다.
면역접합체
본 발명의 항체는 검출가능한 표지와 접합하여 항-ICOS 면역접합체를 형성할 수 있다. 적합한 검출가능한 표지는 예를 들면, 방사선동위원소, 형광성 표지, 화학발광성 표지, 효소 표지, 생물발광성 표지 또는 콜로이드성 금을 포함한다. 이러한 검출가능하게 표지된 면역접합체를 제조 및 검출하는 방법은 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있고, 하기에 보다 상세히 기술되어 있다. 검출가능한 표지는 방사선사진술에 의해 검출된 방사선동위원소일 수 있다. 본 발명의 목적에 특히 유용한 동위원소는 3H, 125I, 131I, 35S 및 14C이다.
항-ICOS 면역접합체는 또한 형광성 화합물로 표지될 수 있다. 형광성-표지된 항체의 존재는 적절한 파장의 광에 면역접합체를 노출시키고 수득되는 형광성을 검출함으로써 측정된다. 형관성 표지 화합물은 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데하이드 및 플루오레스카민을 포함한다.
대안적으로, 항-ICOS 면역접합체는 항체를 화학발광성 화합물에 커플링시킴으로써 검출가능하게 표지시킬 수 있다. 화학발광성-태그된 면역접합체의 존재는 화학 반응 과정 동안 발생하는 발광성의 존재를 검출함으로써 측정된다. 화학발광성 표지 화합물의 예는 루미놀, 이소루미놀, 방향족 아크리디늄 에스테르, 이미다졸, 아크리디늄 염 및 옥살레이트 에스테르를 포함한다.
유사하게, 생물발광성 화합물을 사용하여 본 발명의 항-ICOS 면역접합체를 표지시킬 수 있다. 생물발광성은 촉매 단백질이 화학발광성 반응의 효능을 증가시키는 생물학적 시스템에서 발견된 화학발광성의 유형이다. 생물발광성 단백질의 존재는 발광성의 존재를 검출함으로써 측정된다. 표지화에 유용한 생물발광성 화합물은 루시페린, 루시퍼라제 및 아에쿠오린을 포함한다.
대안적으로, 항-ICOS 면역접합체는 항-[항원] 항체를 효소에 연결시켜 검출가능하게 표지할 수 있다. 항-ICOS-효소 접합체를 적절한 기질의 존재하에서 항온처리하는 경우, 효소 모이어티는 기질과 반응하여 예를 들면, 분광광도법적, 형광분석적 또는 가시적 수단에 의해 검출될 수 있는 화학적 모이어티를 생산한다. 다중특이적인 면역접합체를 검출가능하게 표지하는데 사용될 수 있는 효소의 예는 베타-갈락토시다제, 글루코스 옥시다제, 퍼옥시다제 및 알칼린 포스파타제를 포함한다.
당해 분야의 숙련가는 본 발명에 따라 사용될 수 있는 다른 적합한 표지를 알 것이다. 항-[항원] 모노클로날 항체에 대한 마커 모이어티의 결합은 당해 분야에 공지된 표준 기술을 사용하여 달성할 수 있다. 이와 관련하여 대표적인 방법론은 Kennedy 등., Clin. Chim. Acta 70:1, 1976; Schurs 등., Clin. Chim. Acta 81:1, 1977; Shih 등., Int'l J. Cancer 46:1101, 1990; Stein 등., Cancer Res. 50:1330, 1990; 및 Coligan, supra(상기 참조)에 기술되어 있다.
더욱이, 면역화학적 검출의 편리성 및 다양성은 아비딘, 스트렙타비딘, 및 바이오틴과 접합된 항-ICOS 모노클로날 항체를 사용함으로써 향상시킬 수 있다. (참고: 예컨대, Wilchek 등, (eds.), "Avidin-Biotin Technology," Methods In Enzymology (Vol. 184) (Academic Press 1990); Bayer 등, "Immunochemical Applications of Avidin-Biotin Technology," in Methods In Molecular Biology (Vol. 10) 149-162 (Manson, ed., The Humana Press, Inc. 1992).)
면역검정을 수행하기 위한 방법은 잘-확립되어 있다 (참고: 예컨대, Cook ㅁ및 Self, "Monoclonal Antibodies in Diagnostic Immunoassays," in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering, and Clinical Application 180-208 (Ritter and Ladyman, eds., Cambridge University Press 1995); Perry, "The Role of Monoclonal Antibodies in the Advancement of Immunoassay Technology," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications 107-120 (Birch and Lennox, eds., Wiley-Liss, Inc. 1995); Diamandis, Immunoassay (Academic Press, Inc. 1996).)
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 치료학적 모이어티(moiety), 즉, 약물에 접합된다. 치료학적 모이어티는 예컨대, 세포독소, 세포독성 모이어티, 화학치료학적 제제, 사이토킨, 면역억제제, 면역 자극인자, 분해성 펩타이드, 또는 방사선동위원소일 수 있다. 이러한 접합체는 본원에서 "항체-약물 접합체" 또는 "ADC"로서 지칭된다.
따라서, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 -ICOS 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 세포독성 모이어티에 접합된다. 세포독성 모이어티는 예를 들면, 탁솔; 사이토칼라신 B; 그라미시딘 D; 에티디움 브로마이드; 에메틴; 미토마이신; 에토포시드; 테노포시드; 빈크리스틴; 빈블라스틴; 콜히친; 독소루비신; 다우노루비신; 디하이드록시 안트라신 디온; 투불린-억제제, 예를 들면, 마이탄신 또는 이의 유사체 또는 유도체; 항유사분열제, 예를 들면, 모노메틸 아우리스타틴 E 또는 F(MMAE 또는 MMAF) 또는 이의 유사체 또는 유도체; 돌라스타틴 10 또는 15 또는 이의 유사체; 이리노테칸 또는 이의 유사체; 미톡산트론; 미트라마이신; 악티노마이신 D; 1-데하이드로테스토스테론; 글루코코르티코이드; 프로카인; 테트라카인; 리도카인; 프로프라놀올; 푸로마이신; 칼시체아미신 또는 이의 유사체 또는 유도체; 항대사산물, 예를 들면, 메토트렉세이트 6 머캅토푸린, 6 티오구아닌, 사이타라빈, 플루다라빈 5 플루오로우라실, 데카르바진, 하이드록시우레아, 아스파라기나제, 겜시타빈, 또는 클라드리빈; 알킬화제, 예를 들면, 메클로에타민, 티오에파, 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조신, 데카르바진(DTIC), 프로카르바진, 미토마이신 C; 백금 유도체, 예를 들면, 시스플라틴 또는 카르보플라틴; 두오카르마이신 A, 두오카르마이신 SA, 라첼마이신(CC-1065), 또는 이의 유사체 또는 유도체; 항생제, 예를 들면, 닥티노마이신, 블레오마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 미트라마이신, 미토마이신, 미톡산트론; 플리카마이신, 안트라마이신(AMC)); 피롤로[2,l-c][l,4]-벤조디아제핀(PDB); 디프테리아 독소 및 관련된 분자, 예를 들면, 디프테리아 A 쇄 및 이의 활성 단편 및 하이브리드 분자, 리신 독소, 예를 들면, 리신 A 또는 데글리코실화된 리신 A 쇄 독소, 콜레라 독소, 시가-유사 독소(Shiga-like toxin), 예를 들면, SLT I, SLT II, SLT IIV, LT 독소, C3 독소, 시가 독소, 페르투씨스 독소(pertussis toxin), 테타누스 독소, 대두 보우만-버크 프로테아제 억제제(soybean Bowman-Birk protease inhibitor), 슈도모나스 외독소, 알로린, 사포린, 모덱신, 겔라닌, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질(Aleurites fordii protein), 디안트린 단백질, 파이톨락카 아메리카나 단백질(Phytolacca americana protein), 예를 들면, PAPI, PAPII, 및 PAP-S, 모모르디카 차란티아 억제제(momordica charantia inhibitor), 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제(sapaonaria officinalis inhibitor), 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 및 에노마이신 독소; 리보뉴클레아제(RNase); DNase I, 스타필로코쿠스 장독소(Staphylococcal enterotoxin) A; 포크위드 항바이러스 단백질(pokeweed antiviral protein); 디프테린 독소; 및 슈도모나스 내동소로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포독성 모이어티는 α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마눌린, 아마눌린산, 아마닌아미드, 아마닌 또는 아로아마눌린으로 이루어진 그룹에서 선택된 아마톡신이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 핵산 또는 핵산-관련된 분자에 접합된다. 하나의 이러한 구현예에서, 접합된 핵산은 세포독성 리보뉴클레아제(RNase) 또는 데옥시-리보뉴클레아제(예컨대, DNase I), 안티센스 핵산, 억제성 RNA 분자(예컨대, siRNA 분자) 또는 면역자극성 핵산(예컨대, 면역자극성 CpG 모티프-함유 DNA 분자)이다. 일부 구현예에서, 항체는 아프타머 또는 리보자인에 접합된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 예컨대, 융합 단백질로서 분해성 펩타이드, 예를 들면, CLIP, 마가이닌 2, 멜리틴, 세크로핀 및 P18에 접합된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 예컨대, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-23, IL-24, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, KGF, IFNa, IFN3, IFNy, GM-CSF, CD40L, Flt3 리간드, 줄기 세포 인자, 안세스팀, 및 TNFa와 같은 사이토킨에 접합된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 방사선동위원소 또는 방사선동위원소-함유 킬레이트에 접합된다. 예를 들면, 본 발명의 항체는 항체가 방사선동위원소와 복합체화되도록 하는 킬레이터 링커, 예컨대, DOTA, DTPA 또는 티욱세탄에 접합될 수 있다. 항체는 또한 또는 대안적으로 하나 이상의 방사선표지된 아미노산 또는 다른 방사선표지된 분자를 포함하거나 이에 접합될 수 있다. 방사선동위원소의 비-제한적 예는 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 125I, 131I, 186Re, 213Bi, 225Ac 및 227Th를 포함한다. 치료학적 목적을 위해, 베타- 또는 알파-입자 방사선을 방출하는 방사선동위원소, 예컨대, 1311, 90Y, 211At, 212Bi, 67Cu, 186Re, 188Re, 및 212Pb를 사용할 수 있다.
특정의 구현예에서, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체는 항-투불린제를 포함한다. 항-투불린제의 예는 예를 들면, 탁산(예컨대, Taxol®(파클리탁셀), Taxotere®(도세탁셀)), T67(툴라릭), 빈카 알킬로이드(예컨대, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 및 비노렐빈), 및 돌라스타틴(예컨대, 아우리스타틴 E, AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB)을 포함한다. 다른 항투불린제는 예를 들면, 박카틴 유도체, 탁산 유사체(예컨대, 에포틸론 A 및 B), 노코다졸, 콜히친 및 콜시미드, 에스트라무스틴, 크립토피신, 세마도틴, 마이탄시노이드, 콤브레타스타틴, 디스코데르몰리드, 및 엘레우테로빈을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포독성제는 항-투불린제의 다른 그룹인, 마이탄시노이드이다. 예를 들면, 구체적인 구현예에서, 마이탄시노이드는 마이탄신 또는 DM-1이다(ImmunoGen, Inc.; 또한 Chari 등., Cancer Res. 52:127-131, 1992 참조).
다른 구현예에서, 세포독성제는 항대사체(antimetabolite)이다. 항대사체는 예를 들면, 푸린 길항제(예컨대, 아조티오프린 또는 마이코페놀레이트 모페틸), 디하이드로폴레이트 리덕타제 억제제(예컨대, 메토트렉세이트), 아실클로비르, 강사이클로비르, 지도부딘, 빈다라빈, 리바바린, 아지도티미딘, 사이티딘 아라비노시드, 아만타딘, 디데옥시우리딘, 요오도데옥시우리딘, 포스카르넷, 또는 트리플루리딘일 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 항체는 프로-약물 전환 효소에 접합된다. 프로-약물 전환 효소는 항체에 재조합적으로 융합되거나 공지된 방법을 사용하여 이에 화학적으로 접합시킬 수 있다. 예시적인 프로-약물 전환 효소는 카복시펩티다제 G2, 베타-글루쿠로니다제, 페니실린-V-아미다제, 베타-락타마제, 베타-글루코시다제, 니트로리덕타제 및 카복시펩티다제 A이다.
전형적으로, 본 발명의 항체-약물 접합체는 약물 단위와 항체 단위 사이의 링커 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 세포내 조적 하에서 절단될 수 있어서 이러한 링커의 절단이 세포내 환경에서 항체로부터 약물 단위를 방출하도록 한다. 여전히 다른 구현예에서, 링커 단위는 절단가능하지 않고 약물은 예를 들면, 항체 분해에 의해 방출된다.
일부 구현예에서, 링커는 세포내 환경(예컨대, 라이소솜 또는 엔도솜 또는 카베올레아(caveolea)) 내에 존재하는 절단화제에 의해 절단가능하다. 링커는 예컨대, 라이소솜 또는 엔소솜 프로테아제를 포함하나, 이에 한정되지 않는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소인 펩티질 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티딜 링커는 적어도 2개의 아미노산이 길거나 적어도 3개의 아미노산이 길다. 절단화제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있고, 이들 모두는 디펩타이드 약물 유도체를 가수분해하여 표적 세포 내에서 활성 약물의 방출을 야기하는 것으로 알려져 있다 (참고: 예컨대, Dubowchik 및 Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123).
가장 대표적인 것은 191P4D12-발현 세포 내에 존재하는 효소에 의해 절단가능한 펩티딜 링커이다. 이러한 링커의 예는 예컨대, 이의 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함된, 미국 특허 6,214,345에 기술되어 있다. 특정 구현에에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티딜 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다(참고, 예컨대, U.S. 특허 No. 6,214,345, Val-Cit 링커를 사용한 독소루비신(doxorubicin)의 합성을 기술함). 치료제의 세포 내 단백질분해 방출을 사용하는 한가지 장점은 접합되는 경우 전형적으로 약화되며 접합체의 혈청 안정성은 전형적으로 높다.
다른 구현예에서, 절단가능한 링커는 pH-민감성인데, 즉, 특정의 pH 값에서 가수분해에 대해 민감성이다.
전형적으로, pH-민감성 링커는 산성 조건 하에서 가수분해될 수 있다. 예를 들면, 라이소솜 속에서 가수분해가능한 산-불안정성 링커(예컨대, 하이드라존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니틱 아미드, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈 등)을 사용할 수 있다 (참고: 예컨대, U.S. 특허 No. 5,122,368; No. 5,824,805; No. 5,622,929; Dubowchik 및 Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville 등, 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661.). 이러한 링커는 중성 pH 조건, 예를 들면, 혈액 속에서 비교적 안정하지만, 라이소솜의 대략적인 pH인, pH 5.5 또는 5.0 이하에서는 불안정하다. 특정 구현에에서, 가수분해가능한 링커는 티오에스테르 링커(예컨대, 아실하이드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르(참고: 예컨대, 미국 특허 5,622,929)이다.
여전히 다른 구현예에서, 링커는 환원 조건 하에서 절단가능하다(예컨대, 이황화물 링커). SATA(N-석신이미딜-S-아세틸티오아세테이트), SPDP(N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB(N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT(N-석신이미딜-옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔, SPDB 및 SMPT을 사용하여 형성시킬 수 있는 것을 포함하는 다양한 이황화물 링커가 당해 분야에 공지되어 있다 (참고: 예컨대, Thorpe 등, 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak 등, In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. 또한 U.S. Pat. No. 4,880,935 참조.).
여전히 다른 특정 구현예에서, 링커는 말로네이트 링커(Johnson 등, 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), 말레이미도벤조일 링커이다(Lau 등, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304), 또는 3'-N-amide analog (Lau 등, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12).
여전히 다른 구현예에서, 링커 단위는 절단불가능하고 약물은 항체 분해에 의해 방출된다.
전형적으로, 링커는 세포외 환경에 대해 실질적으로 민감하지 않다. 본원에 사용된 바와 같은, "세포외 환경에 대해 실질적으로 민감하지 않는"은, 링커의 문맥에서, 항체-약물 접합체 화합물이 세포외 환경(예컨대, 혈장) 속에 존재하는 경우, 항체-약물 접합체 화합물의 샘플 속에서 약 20% 이하, 전형적으로 약 15%, 이하, 보다 전형적으로 약 10% 이하, 및 심지어 보다 전형적으로 약 5% 이하, 약 3% 이하, 또는 약 1% 이하가 분해됨을 의미한다. 링커가 세포외 환경에 대해 실질적으로 민감하지 않은지의 여부는 예를 들면, 혈장을 항체-약물 접합체 화합물과 예정된 기간(예컨대, 2, 4, 8, 16, 또는 24시간 동안) 동안 항온처리한 다음, 혈장 속에 존재하는 유리 약물의 양을 정량화함으로써 측정할 수 있다.
분자를 항체에 접합시키는 기술은 당해 분야에 잘 공지되어 있다 (참고: 예컨대, Arnon 등, "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (Reisfeld 등. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985); Hellstrom 등, "Antibodies For Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery (Robinson 등 eds., Marcel Deiker, Inc., 2nd ed. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (Pinchera 등 eds., 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy (Baldwin 등 eds., Academic Press, 1985); 및 Thorpe 등, 1982, Immunol. Rev. 62:119-58. 또한 예컨대, PCT 공보 WO 89/12624 참조.) 전형적으로, 핵산 분자는 항체 상의 라이신 또는 시스테인에, N-하이드록시석신이미드 에스테르 또는 말레이미드 기능성 각각을 통해 공유결합으로 부착된다. 가공된 시스테인을 사용한 접합 또는 비천연 아미노산의 혼입 방법은 접합체의 균질성을 증진시키는 것으로 보고되었다 (Axup, J.Y., Bajjuri, K.M., Ritland, M., Hutchins, B.M., Kim, C.H., Kazane, S.A., Halder, R., Forsyth, J.S., Santidrian, A.F., Stafin, K., 등. (2012). Synthesis of site-specific antibody-drug conjugates using unnatural amino acids. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109, 16101-16106.; Junutula, J.R., Flagella, K.M., Graham, R.A., Parsons, K.L., Ha, E., Raab, H., Bhakta, S., Nguyen, T., Dugger, D.L., Li, G., 등 (2010). Engineered thio-trastuzumab-DM1 conjugate with an improved therapeutic index to target human epidermal growth factor receptor 2-positive breast cancer. Clin. Cancer Res.16, 4769-4778.). 주누툴라(Junutula) 등(2008)은 통상의 접합 방법과 비교한 것으로서 증진된 치료학적 지수를 나타내는 것으로 청구된 "THIOMAB"(TDC)로 불리는 시스테인-기반 부위-특이적인 접합을 개발하였다. 항체 내로 혼입된 비천연 아미노산에 대한 접합이 ADC에 대해 또한 탐구되고 있으나; 이러한 접근법의 일반성은 아직 확립되어 있지 않다(Axup 등., 2012). 특히, 당해 분야의 숙련가는 아실 공여체 글루타민-함유 태그(예컨대, Gin-함유 펩타이드 태그 또는 Q-태그) 또는 폴리펩타이드 가공(예컨대, 폴리펩타이드 상에서 아미노산 결실, 삽입, 치환, 또는 돌연변이를 통해)에 의해 반응성이 되도록 한 내인성 글루타민으로 가공된 Fc-함유 폴리펩타이드를 구상하고 있다. 이후에, 트랜스글루타미나제를 아민 공여체 제제(예컨대, 반응성 아민을 포함하거나 이에 부착된 작은 분자)와 공유결합으로 가교결합시켜 아실 공여체 글루타민-함유 태그 또는 접근가능한/노출된/반응성의 내인성 글루타민을 통해 Fc-함유 폴리펩타이드에 부위-특이적으로 접합된 아민 공여체 제제와의 가공된 Fc-함유 폴리펩타이드 접합체의 안정하고 균질한 집단을 형성시킬 수 있다(WO 2012059882).
치료학적 용도
상술한 바와 같이, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다.
다른 특수한 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 또는 TFH 유래된 림프종에 의해 유도된 전이의 치료시 사용하기 위한 항-ICOS 항체에 관한 것이다.
상술한 치료 방법의 각각의 구현예에서, 항-ICOS 항체 또는 항-ICOS 항체-약물 접합체(ADC)는 치료가 고려되는 질환 또는 장애의 관리와 관련된 통상의 방법론과 일치하는 방식으로 전달된다. 본원의 개시내용에 따라서, 항체 또는 항체-약물 접합체의 유효량은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 질환 또는 장애의 예방 또는 치료에 충분한 시간 동안 및 조건 하에서 투여된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "치료" 또는 "치료하다"는 질환을 직면할 위험에 있거나 질환과 직면한 것으로 예측된 대상체 뿐만 아니라 아프거나 질환 또는 의학적 상태를 앓는 것으로 진단된 대상체의 치료를 포함하는 예방학적 또는 예방 치료 뿐만 아니라 치유 또는 질환 개질 치료를 지칭하고 임상적 재발의 억제를 포함한다. 치료는 의학적 장애를 가기거나 궁극적으로 장애를 획득할 수 있는 대상체에게 투여되어, 장애 또는 재발하는 장애의 발생을 예방, 치유, 지연시키거나, 이의 중증도를 감소시키거나, 이의 하나 이상의 증상을 경감시키거나, 이러한 치료의 부재하에서 예측된 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시킬 수 있다. "치료학적 요법"은 질병의 치료 패턴, 예컨대, 치료요법 동안 사용된 투여의 패턴을 의미한다. 치료학적 요법은 유도 요법 및 유지 요법을 포함할 수 있다. 어구 "유도 요법" 또는 "유도 기간"은 질환의 초기 치료를 위해 사용된 치료학적 요법(또는 치료학적 요법의 일부)를 지칭한다. 유도 요법의 일반적인 목표는 치료 요법의 초기 기간 동안 대상체에게 고 수준의 약물을 제공하는 것이다. 유도 요법은 "로딩 요법(loading regimen)"을 사용할 수 있고(부분적으로 또는 전체적으로), 이는 주치의가 유지 요법 동안 사용할 수 있는 것보다 더 많은 용량의 약물을 투여하는 것 및 주치의가 유지 요법 동안 약물을 투여할 수 있는 것보다 더 자주 약물을 투여하는 것, 또는 이들 둘 다를 포함할 수 있다. 어구 "유지 요법" 또는 "유지 기간"은 질병의 치료 동안 대상체의 유지를 위해 사용된, 예컨대, 오랜 기간(수개월 또는 수년) 동안 대상체가 차도를 유지하도록 하기 위해 사용된 치료학적 요법(또는 치료학적 요법의 일부)를 지칭한다. 유지 요법은 연속적인 치료요법(예컨대, 약물을 일정 간격으로, 예컨대, 매주, 매달, 매년 등에 투여하는 것) 또는 간혈적 치료요법(예컨대, 차단된 치료, 간혈적 치료, 재발시 치료, 또는 특수한 예정된 기준의 달성시[예컨대, 질환 조짐 등] 치료)를 사용할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 용량에서 효과적인 양 및 목적한 치료학적 결과를 달성하는데 필수적인 기간 동안을 지칭한다. 본 발명의 항체의 치료학적 유효량은 질환 상태, 개체의 연령, 성별, 및 체중, 및 개체에서 목적한 반응을 유발하기 위한 본 발명의 항체의 능력과 같은 인자에 따라 변할 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 항체 또는 항체 부위의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료학적으로 유리한 효과보다 더 큰 것이다. 본 발명의 항체에 대해 효율적인 투여량 및 투여량 요법은 치료될 질환 또는 상태에 의존하며 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 당해 분야의 통상의 기술자는 필요한 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들면, 주치의는 약제학적 조성물 속에 사용된 본 발명의 항체의 용량을 목적한 치료학적 효과를 달성하기 위해 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 출발하고 목적한 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 조성물의 적합한 용량은 특수한 투여량 요법에 따라 치료학적 효과를 생산하기에 효과적인 최저의 용량인 화합물의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상술한 인자에 의존할 것이다. 예를 들면, 치료학적 용도에 대한 치료학적으로 유효한 양은 질환의 진행을 안정화시키는 이의 능력으로 측정할 수 있다. 전형적으로, 암을 억제하는 화합물의 능력은 예를 들면, 사람 종양에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 평가할 수 있다. 대안적으로, 조성물의 이러한 특성은 숙련의에게 공지된 시험관 내 검정에 의해 세포독성을 유도하는 화합물의 능력을 실험함으로써 평가할 수 있다. 치료학적 화합물의 치료학적 유효량은 대상체에서 종양 크기를 감소시킬 수 있거나, 달리는 증상을 경감시킬 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 대상체의 체격, 대상체 증상의 중증도, 및 선택된 특수한 조성물 또는 투여 경로와 같은 인자를 기반으로 결정할 수 있다. 본 발명의 항체의 치료학적 유효량에 대한 예시적인, 비-제한적 범위는 약 0.1 내지 100 mg/kg, 예를 들면, 약 0.1 내지 50 mg/kg, 예를 들면, 약 0.1 내지 20 mg/kg, 예를 들면, 약 0.1 내지 10 mg/kg, 예를 들면, 약 0.5, 예를 들면, 약 0.3, 약 1, 약 3 mg/kg, 약 5 mg/kg 또는 약 8 mg/kg이다. 본 발명의 항체의 치료학적 유효량에 대한 예시적인, 비-제한적 범위는 0.02 내지 100 mg/kg, 예를 들면, 약 0.02 내지 30 mg/kg, 예를 들면, 약 0.05 내지 10 mg/kg 또는 0.1 내지 3 mg/kg, 예를 들면 약 0.5 내지 2 mg/kg이다. 투여는 예컨대, 정맥내, 근육내, 복강내, 또는 피하일 수 있고, 예를 들면, 표적 부위에 근접하게 투여된다. 상기 치료 방법 및 사용에서 투여량 요법을 조절하여 최적의 목적한 반응(예컨대, 치료학적 반응)을 제공한다. 예를 들면, 단일 거환(bolus)을 투여할 수 있거나, 수개의 분할된 용량을 시간에 걸쳐 투여할 수 있거나 용량을 치료학적 상황의 위급 상황에 의해 나타난 바와 같이 비례적으로 감소시키거나 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 치료의 효능은 치료요법 동안, 예컨대, 예정된 시점에서 모니터링한다. 일부 구현예에서, 효능은 질환 부위의 가시화에 의해, 또는 본원에 추가로 기술된 다른 진단 방법에 의해, 예를 들면, 본 발명의 표지된 항체, 본 발명의 항체로부터 유래된 단편 또는 미니-항체를 사용하여, 예를 들면, 하나 이상의 PET-CT 스캔을 수행함에 의해 모니터링할 수 있다. 경우에 따라, 약제학적 조성물의 유효 1일 용량은 임의로 단위 투여량 형태로, 하루 전체에서 적절한 간격으로 별개 투여된 2, 3, 4, 5, 6회 이상의 소-용량으로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 모노클로날 항체는 긴 기간, 예를 들면, 24시간 이상에 걸쳐 느린 연속 주입으로 투여되어, 원치않는 부작용을 최소화시킬 수 있다. 본 발명의 항체의 유효 용량은 또한 매주, 격주, 또는 3주마다의 투여 기간을 사용하여 투여할 수 있다. 투여 기간은 예컨대, 8주, 12주 또는 임상 진행이 확립될 때까지 제한할 수 있다. 비-제한적인 예로서, 본 발명에 따른 치료는 본 발명의 항체의 1일 투여량으로서 1일 당 약 0.1 내지 100 mg/kg, 예를 들면, 0.2, 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/kg의 양으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40일 중 적어도 하나, 또는 대안적으로 치료 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20주 중 적어도 하나, 또는 23, 12, 8, 6, 4 또는 2시간 마다, 또는 이의 임의의 조합의 단일 또는 분할된 용량을 사용한 이의 임의의 조합으로 제공될 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나의 목적은 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 본 발명의 항체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종 또는 CTCL 또는 TFH 유래된 림프종에 의해 유도된 전이를 치료하는 방법에 관한 것이다.
특수한 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 본 발명의 항체를 투여함을 포함하여, CTCL(피부 및 혈액 포함)을 치료하는 방법에 관한 것이다.
특정의 구현예에서, 항-ICOS 항체 또는 항체-약물 접합체(ADC)는 질환 또는 장애의 치료를 위한 제2 제제와 함께 사용된다. 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종 또는 CTCL 또는 TFH 유래된 림프종의 전이를 치료하는데 사용되는 경우, 본 발명의 항-ICOS 항체 또는 ADC는 예컨대, 수술, 방사선치료요법, 화학치료요법, 또는 이의 조합과 같은 통상의 암 치료요법과 함께 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체가 예컨대, 암 및 전이성 암을 치료하기 위한 적어도 하나의 추가의 치료제와 함게 사용된 경우의 치료학적 적용을 위해 제공된다. 이러한 투여는 동시, 별개 또는 순차적일 수 있다. 동시 투여를 위해, 제제는 적절하게는 하나의 조성물로서 또는 별개의 조성물로서 투여될 수 있다. 추가의 치료제는 전형적으로 치료될 장애와 관련된다. 예시적인 치료제는 다른 항-암 항체, 세포독성제, 화학치료제, 항-혈관형성제, 항암 면역원, 세포 주기 제어/세포사멸사 조절제, 호르몬 조절제, 및 후술된 다른 제제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 화학치료제와 함께 사용된다. 용어 "화학치료제"는 종양 성장을 억제하는데 효과적인 화학적 화합물을 지칭한다. 화학치료제의 예는 알킬화제, 예를 들면, 티오테파 및 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예를 들면, 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예를 들면, 벤조도파, 카르보도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예를 들면, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스파오르아르니드 및 트리메틸롤로멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 카른프토테신(예를 들면 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(예를 들면, 이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신(예를 들면, 합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예를 들면, 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라르누스틴(estrarnustine), 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벨비친, 페네스테린, 프레드니무스 틴(prednimus tine), 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예를 들면, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제, 예를 들면, 에네디인 항생제(예컨대 칼리체아미신, 특히 칼리체아미신(11 및 칼리체아미신 211, 참고: 예컨대, Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994); 다이네미신, 예를 들면, 다이네미신 A; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로테인 에네디인 항생제 크로모모포레스), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우쓰라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 칸니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, 독소루비신(예를 들면, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이단르비신(idanrbicin), 마르셀로마이신, 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라르니신(nogalarnycin), 올리보마이신, 펩프로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙톰그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사산물, 예를 들면, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예를 들면, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 푸린 유사체, 예를 들면, 플루다라빈, 6-머캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들면, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐, 예를 들면, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항-부신, 예를 들면, 아미노글루테쓰이미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예를 들면, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파르니드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글리시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 마이탄시노이드, 예를 들면, 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토 스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린 산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로겐나늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트레에틸라르닌; 트리초테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 리리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브롬톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예컨대, 파클리탁셀(TAXOL®, 유저지주 프린스톤 소재의 Bristol-Myers Squibb Oncology) 및 도세탁셀(TAXOTERE®, 프랑스 안토니 소재의 Rhone-Poulenc Rorer); 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토푸린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예를 들면, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로르니틴(DMFO); 레틴산; 카펙시타빈; 및 상기 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한 종양에서 호르몬 작용을 조절하거나 억제하기 위해 작용하는 항호르몬 제제, 예를 들면, 항-에스트로겐, 예를 들면, 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제를 억제하는 4(5)-이미다졸, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜(파레스톤); 및 항-안드로겐, 예를 들면, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체가 본 정의에 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 표적화된 암 치료요법과 함께 사용된다. 표적화된 암 치료요법은 암의 성장, 진행, 및 확산에 포함된 특수한 분자("분자 표적")을 방해함으로써 암의 성장 및 확산을 차단하는 약물 또는 다른 물질이다. 표적화된 암 치료요법은 때때로 "분자적으로 표적화된 약물", "분자적으로 표적화된 치료요법", "정밀 의약(precision medicine)", 또는 유사한 명칭으로 불린다. 일부 구현예에서, 표적화된 치료요법은 대상체에게 타이로신 키나제 억제제를 투여하는 것으로 이루어진다. 용어 "타이로신 키나제 억제제"는 수용체 및/또는 비-수용체 타이로신 키나제의 선택적 또는 비-선택적 억제제로서 작용하는 다양한 치료학적 제제 또는 약물 중 어느 것을 지칭한다. 타이로신 키나제 억제제 및 관련 화합물은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 이의 전문이 본원에 참고로 포함된 미국 특허 공보2007/0254295에 기술되어 있다. 타이로신 키나제 억제제와 관련된 화합물은 타이로신 키나제 억제제의 효과를 개괄할 것임을, 즉, 관련된 화합물이 상이한 수의 타이로신 키나제 신호전달 경로에 작용하여 이러한 타이로신 카나제의 타이로신 키나제 억제제와 동일한 효과를 생산할 것임은 당해 분야의 숙련가에 의해 인식될 것이다.본 발명의 구현예의 방법에서 사용하기에 적합한 타이로신 키나제 억제제 및 관련 화합물의 예는 다사티닙(BMS-354825), PP2, BEZ235, 사라카티닙, 게피티닙(이레싸), 수니티닙(수텐트; SU11248), 에를로티닙(타르세바; OSI-1774), 라파티닙(GW572016; GW2016), 카네르티닙(CI 1033), 세막시닙(SU5416), 바탈라닙(PTK787/ZK222584), 소라페닙(BAY 43-9006), 이마티닙(글리벡; STI571), 레플루노미드(SU101), 반데타닙(작티마; ZD6474), MK-2206(8-[4-아미노사이클로부틸)페닐]-9-페닐-1,2,4-트리아졸로[3,4-f][1,6]나프티리딘-3(2H)-온 하이브로클로라이드), 이의 유도체, 이의 유사체, 및 이의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 추가의 타이로신 키나제 억제제 및 관련 화합물은 예를 들면, 미국 특허 공보 2007/0254295, 미국 특허 5,618,829, 5,639,757, 5,728,868, 5,804,396, 6,100,254, 6,127,374, 6,245,759, 6,306,874, 6,313,138, 6,316,444, 6,329,380, 6,344,459, 6,420,382, 6,479,512, 6,498,165, 6,544,988, 6,562,818, 6,586,423, 6,586,424, 6,740,665, 6,794,393, 6,875,767, 6,927,293, 및 6,958,340에 기술되어 있으며, 이들 모두는 이의 전문이 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 타이로신 키나제 억제제는 경구 투여되고 적어도 하나의 제I상 임상 시험, 보다 바람직하게는 적어도 하나의 제II상 임상, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 하나의 제III상 임상 시험, 및 가장 바람직하게는 FDA에 의해 적어도 하나의 혈액학적 또는 종양학적 처방용으로 승인된 작은 분자 키나제 억제제이다. 이러한 억제제의 예는 게피티닙, 에를로티닙, 라파티닙, 카네르티닙, BMS-599626(AC-480), 네라티닙, KRN-633, CEP-11981, 이마티닙, 닐로티닙, 다사티닙, AZM-475271, CP-724714, TAK-165, 수니티닙, 바탈라닙, CP-547632, 반데타닙, 보수티닙, 레스타우르티닙, 탄두티닙, 미도스타우린, 엔자스타우린, AEE-788, 파조파닙, 악시티닙, 모타세닙, OSI-930, 세디라닙, KRN-951, 도비티닙, 셀리시클립, SNS-032, PD-0332991, MKC-I(Ro-317453; R-440), 소라페닙, ABT-869, 브리바닙(BMS-582664), SU-14813, 텔라티닙, SU-6668, (TSU-68), L-21649, MLN-8054, AEW-541, 및 PD-0325901을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 면역치료제와 함께 사용된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역치료제"는 암 세포에 대한 신체의 면역 반응을 간접적으로 또는 직접적으로 향상, 자극 또는 증가시키고/시키거나 다른 항암 치료요법의 부작용을 감소시키는 화합물, 조성물 또는 치료를 지칭한다. 면역치료요법은 따라서 암 세포에 대한 면역계 반응을 직접적으로 또는 간접적으로 자극하고/하거나 다른 항암제에 의해 유발될 수 있는 부작용을 낮추는 치료요법이다. 면역치료요법은 또한 당해 분야에서 면역학적 치료요법, 생물학적 치료요법 생물학적 반응 개질인자 치료요법 및 생물치료요법으로서 지칭된다. 당해 분야에 공지된 일반적인 면역치료제의 예는 사이토킨, 암 백신, 모노클로날 항체 및 비-사이토킨 보조제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 대안적으로, 면역치료학적 치료는 대상체에게 면역 세포(T 세포, NK 세포, 수지 세포, B 세포...)의 양을 투여하는 것으로 이루어질 수 있다. 면역치료제는 비-특이적일 수 있는데, 즉, 면역계를 일반적으로 증각시켜 사람 신체가 암 세포의 성장 및/또는 확산과 싸우는데 보다 효과적이 되도록 할 수 있거나, 이들이 특이적이어서, 즉, 암 세포 자체에 대해 표적화되어서 면역치료요법 요법을 비-특이적인 및 특이적인 면역치료제의 사용과 조합시킬 수 있다. 비-특이적인 면역치료제는 면역계를 자극하거나 간접적으로 증진시키는 물질이다. 비-특이적인 면역치료제는 암의 치료를 위한 단독 치료요법으로서 단독으로 사용될 뿐만 아니라, 주요 치료요법 외에, 이러한 경우에 비-특이적인 면역치료제가 다른 치료요법(예컨대, 암 백신)의 효능을 향상시키기 위한 보조제로서 기능하는 요법으로서 사용되었다. 비-특이적인 면역치료제는 또한 이러한 후자의 문맥에서 다른 치료요법, 예를 들면, 특정의 화학치료제에 의해 유도된 골수 억제의 부작용을 감소시키기 위해 기능할 수 있다. 비-특이적인 면역치료제는 주요 면역계 세포에서 작용할 수 있고 제2의 반응, 예를 들면, 사이토킨 및 면역글로불린의 증가된 생산을 유발할 수 있다. 대안적으로, 제제는 자체적으로 사이토킨을 포함할 수 있다. 비-특이적인 면역치료제는 일반적으로 사이토킨 또는 비-사이토킨 보조제로서 분류된다. 다수의 사이토킨이 면역계를 증강시키도록 설계된 비-특이적인 면역치료요법으로서, 또는 다른 치료제와 함께 제공된 보조제로서 암의 치료시 적용이 발견되었다. 적합한 사이토킨은 인터류킨 및 콜로니-자극 인자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다, 적합한 사이토킨은 인터페론, 인터류신 및 콜로니-자극 인자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에 의해 고려된 인터페론(IFN)은 일반적인 유형의 IFN, IFN-알파(IFN-α), IFN-베타(IFN-β) 및 IFN-감마(IFN-γ)를 포함한다. IFN은 암 예를 들면, 암의 성장을 지연시키고/시키거나, 보다 일반적인 거동을 지닌 세포 내로 이의 발달를 촉진시키고/시키거나 항원의 생산을 증가시킴으로써 암 세포를 면역계가 인식하여 파괴하기에 용이하도록 함으로써, 암 세포에서 직접 작용할 수 있다. IFN는 또한 예를 들면, 혈관형성을 지연시키고/시키거나, 면역계를 증강시키고/시키거나 천연 킬러(NK) 세포, T 세포 및 대식구를 자극함으로써, 암 세포 상에서 간접적으로 작용할 수 있다. 재조합 IFN-알파는 로페론(Roferon)(Roche Pharmaceuticals) 및 인트론 A(Schering Corporation)으로서 상업적으로 이용가능하다. 본 발명에 의해 고려된 인터류킨은 IL-2, IL-4, IL-11 및 IL-12를 포함한다. 상업적으로 이용가능한 재조합 인터류킨의 예는 Proleukin®(IL-2; Chiron Corporation) 및 Neumega®(IL-12; Wyeth Pharmaceuticals)를 포함한다. Zymogenetics, Inc.(워싱톤주 시애틀 소재)는 본 발명의 조합에서 사용을 위해 고려되는, IL-21의 재조합 형태를 현재 시험 중에 있다. 본 발명에 의해 고려된 콜로니-자극 인자(CSF)는 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF 또는 필그라스팀), 과립구-대식구 콜로니 자극 인자(GM-CSF 또는 사르그라모스팀) 및 에리트로포이에틴(에포에틴 알파, 다르베포이에틴)을 포함한다. 하나 이상의 성장 인자를 사용한 치료는 전통적인 화학치료요법을 받는 대상체에서 새로운 혈액 세포의 생성을 자극하는 것을 도울 수 있다. 따라서, CSF를 사용한 치료는 화학치료요법과 관련된 부작용을 감소시키는데 도움을 줄 수 있고 보다 높은 용량의 화학치료제가 사용되도록 할 수 있다. 다양한-재조합 콜로니 자극 인자, 예를 들면, Neupogen®(G-CSF; Amgen), 네울라스타(펠피그라스팀; Amgen), 류킨(GM-CSF; Berlex), 프로크리트(에리트로포이에틴; Ortho Biotech), 에포겐(에리트로포이에틴; Amgen), 아르네스프(에리트로포이에틴)가 상업적으로 이용가능하다. 본 발명의 조합 조성물 및 조합 투여 방법은 또한 "전체 세포" 및 "입양" 면역치료요법 방법을 포함할 수 있다. 예를 들면, 이러한 방법은 면역계 세포(예를 들면, 종양-침윤 림프구(TIL), 예를 들면, CC2+ 및/또는 CD8+ T 세포(예를 들면, 종양-특이적인 항원 및/또는 유전적 향상으로 확장된 T 세포), 항체-발현 B 세포 또는 다른 항체-생산 또는 -제시 세포, 수지 세포(예컨대, DC-확장제, 예를 들면, GM-CSF 및/또는 Flt3-L과 함께 배양된 수지 세포, 및/또는 종양 관련된 항원-로딩된 수지 세포), 항-종양 NK 세포, 소위 하이브리드 세포, 또는 이의 조합의 주입 또는 재-주입을 포함할 수 있다. 세포 분해물이 또한 이러한 방법 및 조성물에 유용할 수 있다. 이러한 양태에서 유용할 수 있는 임상 시험에서 세포 "백신"은 CanvaxinTM, APC-8015(덴드레온), HSPPC-96(안티게닉스(Antigenics)), 및 Melacine® 세포 분해물을 포함한다 (참고: 예컨대, Bystryn 등, Clinical Cancer Research Vol. 7, 1882-1887, July 2001). 임의로, 보조제, 예를 들면, 명반과 혼합된, 암 세포로부터 제거된 항원, 및 이의 혼합물이 이러한 방법 및 조합 조성물에서 구성성분일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 방사선치료요법과 함께 사용된다. 방사선치료요법은 환자에게 방사선약제의 조사 또는 관련된 투여를 포함할 수 있다. 방사선의 공급원은 치료되는 환자에 대해 외적이거나 내적일 수 있다(방사선 치료는 예를 들면, 외부 빔 방사선 치료요법(external beam radiation therapy; EBRT) 또는 근접치료(brachytherapy; BT)의 형태일 수 있다). 이러한 방법을 실시하는데 사용될 수 있는 방사활성 성분는 예컨대, 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오다이드-123, 요오다이드-131, 및 인듐-111을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 공자극성 분자에 대해 특이적인 항체와 함께 사용된다. 공자극성 분자에 대해 특이적인 항체의 예는 항-CTLA4 항체(예컨대 이필리무맙), 항-PD1 항체, 항-PDL1 항체, 항-TIMP3 항체, 항-LAG3 항체, 항-B7H3 항체, 항-B7H4 항체 또는 항-B7H6 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 제2의 제제는 ADCC를 통해 제2의 제제가 결합하는 항원을 발현하는 세포의 사멸을 유도하는 제제이다. 일부 구현예에서, 제제는 이의 작용 방식이 항체가 결합하는 세포에 대한 ADCC의 유도를 포함하는 항체(예컨대, IgG1 또는 IgG3 동형의)이다. NK 세포는 ADCC를 유도하는데 중요한 역활을 가지며 NK 세포의 증가된 반응성은 이러한 제2 제제의 사용을 통해 표적 세포에 대해 지시될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2의 제제는 세포 표면 항원, 예컨대, 막 항원에 대해 특이적인 항체이다. 일부 구현예에서, 제2의 항체는 상술한 종양 항원(예컨대, 종양 세포에 의해 특이적으로 발현된 분자), 예를 들면, CD20, CD52, ErbB2(또는 HER2/Neu), CD33, CD22, CD25, MUC-1, CEA, KDR, αVβ3, 등, 특히 림프종 항원(예컨대, CD20)에 대해 특이적이다. 따라서, 본 발명은 또한 종양 항원(들)에 대해 지시된 모노클로날 항체의 항-종양 효과를 향상시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서, ADCC 기능은 특이적으로 증강되며, 이는 궁극적으로 하나 이사의 종양 항원에 대해 지시된 항체, 및 본 발명의 항체의 순차적인 투여에 의해 표적 세포 사멸을 향상시킨다.
따라서, 추가의 목적은 이를 필요로 하는 대상체에게 항체를 투여하고, 대상체에서 본 발명의 항체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 항체의 NK 세포 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)를 향상시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 목적은 이를 필요로 하는 대상체에게 암 세포 항원에 대해 선택적인 제1의 항체를 투여하고 대상체에게 본 발명의 항체를 투여함을 포함하여, 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종을 치료하는 방법에 관한 것이다.
다수의 항체가 암의 치료를 위해 현재 임상 사용 중에 있고, 다른 것은 임상 개발의 다양한 단계에 있다. 본 발명의 방법을 위한 목적한 항체는 ADCC를 통해 작용하며, 당해 분야의 숙련가가 일부 임상적으로 유용한 항체가 비-종양 세포, 예컨대, CD20에서 작용함을 인식할 것이지만, 종양 세포에 대해 전형적으로 선택적이다. B 세포 악성종양의 치료를 위한 다수의 항원 및 상응하는 모노클로날 항체가 존재한다. 하나의 인기있는 표적 항원은 B 세포 악성종양에서 발견되는 CD20이다. 리툭시맙은 CD20 항원에 대해 지시된 접합되지 않은 키메라 모노클로날 항체이다. CD20은 B 세포 활성화, 증식, 및 분화에서 중요한 기능적 역활을 갖는다. CD52 항원은 모노클로날 항체 알렘투주맙에 의해 표적화되며, 이는 만성 림프구성 백혈병의 치료를 위해 처방된다. CD22는 다수의 항체에 의해 표적화되며, 현재 화학치료요법-내성인 털 세포 백혈병에서 독소와 조합된 효능이 최근에 입증되었다. CD20을 표적화하는 모노클로날 항체는 또한 토시투모맙 및 이브리투모맙을 포함한다. 고형 종양에 사용된, 본 발명의 방법에서 유용한 모노클로날 항체는 에드레콜로맙 및 트라스투주맙(헤르셉틴)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 에드레콜로맙은 결장 및 직장 암에서 관찰된 17-1 A 항원을 표적화하며 이러한 처방을 위해 유럽에서 사용 승인되었다. 이의 항종양 효과는 ADCC, CDC, 및 항-특발성 네트워크의 유도를 통해 매개된다. 트라스투주납은 HER- 2/neu 항원을 표적화한다. 이러한 항원은 유방 암의 25% 내지 35%에서 관찰된다. 트라스투주맙은 다양한 방식: HER-2 수용체 발현의 하향조절, HER-2 단백질을 과발현하는 사람 종양 세포의 증식의 억제, HER-2 단백질을 과발현하는 종양 세포에 대해 면역 보충 및 ADCC의 향상, 및 혈관형성 인자의 하향조절에서 작용하는 것으로 고려된다. 알레투주맙(캄페쓰)는 만성 림프구성 백혈병; 결장암 및 폐암의 치료시 사용되고; 겜투주맙(마일로타르그)는 급성 골수성 백혈병의 치료에서의 용도가 발견되어 있고; 이브리투모맙(제발린)은 비-호지킨 림프종의 치료에서의 용도가 발견되어 있고; 파니투무맙(벡티빅스)는 결장 암의 치료에서의 용도가 발견되어 있다. 세툭시맙(에르비툭스)는 또한 본 발명의 방법에서 사용하기 위해 관심이 집중되고 있다. 항체는 EGF 수용체(EGFR)에 결합하며, 결장 암 및 두경부의 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma of the head and neck; SCCHN)을 포함하는 고형 종양의 치료에 사용되었다.
약제학적 조성물
전형적으로, 본 발명의 항체는 대상체에게 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물의 형태로 투여된다.
따라서, 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 치료시에 사용하기 위한 항-ICOS 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
이러한 조성물에 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체는 이온 교환체(ion exchanger), 알루미나, 알루니늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민, 완충제 물질, 예를 들면, 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 포화된 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 염 또는 전해질, 예를 들면, 프로타민 설페이트, 인산이수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스-기반 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-차단 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 울 지방을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 환자에게 투여하는데 사용하기 위해, 조성물은 환자에게 투여하기 위해 제형화될 것이다. 본 발명의 조성물은 경구적으로, 비경구적으로, 흡입 분무에 의해, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 질내로 또는 이식된 저장기를 통해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 것은 피하, 정맥내, 근육내, 동맥내, 활막내, 흉골내, 간내, 병변내 및 구대내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 본 발명의 조성물의 멸균 주사가능한 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이러한 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당해 분야에 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 무-독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 속의 멸균 주사가능한 액제 또는 현탁제, 예를 들면, 1,3-부탄디올 속의 액제일 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액(Ringer's solution) 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균성, 고정 오일은 용매 또는 현탁화 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 임의의 배합 고정 오일, 예를 들면, 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 사용할 수 있다. 지방산, 예를 들면, 올레산 및 이의 글리세리드 유도체는 천연의 약제학적으로 허용되는 오일, 예를 들면, 올리브 오일 또는 파마자 오일과 같이, 특히 이의 폴리에틸화된 버젼으로서, 주사가능한 제제에 유용하다. 이러한 오일 액제 또는 현탁제는 또한 장쇄 알코올 희석제 또는 분산제, 예를 들면, 카복시메틸 셀룰로스 또는 유제 및 현탁제를 포함하는 약제학적으로 허용되는 투여량 형태의 제형에서 일반적으로 사용된 유사한 분산제를 함유할 수 있다. 다른 일반적으로 사용된 표면활성제, 예를 들어, 트윈스(Tweens), 스판스(Spans) 및 다른 유화제 또는 약제학적으로 허용되는 고체, 액체 또는 다른 투여량 형태의 제조시 일반적으로 사용된 생이용능 향상제를 또한 제형 목적을 위해 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물은 임의의 경구적으로 허용되는 투여량 형태, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 캡슐제, 정제, 수성 현탁제 또는 액제로 경구 투여될 수 있다. 경구 사용을 위한 정제의 경우에, 일반적으로 사용된 담체는 락토스 및 옥수수 전분을 포함한다. 윤활제, 예를 들면, 스테아르산마그네슘이 또한 전형적으로 가해진다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 예커대, 락토스를 포함한다. 수성 현탁제가 경우 용으로 요구되는 경우, 활성 성분은 유화제 및 현탁제와 조합된다. 바람직한 경우, 특정의 감미제, 풍미제 또는 착색제를 또한 가할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 직장 투여용 좌제의 형태로 투여될 수 있다. 이는 제제를 실온에서 고체이지만 직장 온도에서 액체이어서 직장 내에서 약물을 방출할 적합한 비-자극성 부형제와 혼합함으로써 제조할 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터, 밀납 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 본 발명의 조성물은 또한 특히 치료 표적이 국소 적용에 의해 용이하게 접근가능한 부위 또는 기관을 포함하는 경우, 예를 들면, 눈, 피부, 또는 하부 장관의 질환의 경우, 국소적으로 투여될 수 있다. 적합한 국소 제형은 이러한 부위 또는 기관 각각에 대해 용이하게 제조된다. 국소 적용을 위해, 조성물은 하나 이상의 담체 속에 현탁되거나 용해된 활성 구성성분을 함유하는 적합한 연고제로 제형화될 수 있다. 본 발명의 화합물의 국소 투여용 담체는 광 오일, 액체 바셀린, 백색 바셀린, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 대안적으로, 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 속에 현탁되거나 용해된 활성 구성성분을 함유하는 적합한 로션제 또는 크림제로 제형화될 수 있다. 적합한 담체는 광 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알코올, 2-옥틸도데카놀, 벤질 알코올 및 물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 하부 작완용 국소 적용은 직장 좌제 제형으로(상기 참고) 또는 적합한 관장 제형으로 시행될 수 있다. 패치제(patch)를 또한 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약제학적 제형 분야에 잘 공지된 기술에 따라 제조되며 염수, 사용하는 벤질 알코올 또는 다른 적합한 방부제, 생이용능을 향상시키는 흡수 촉진제, 플루오로카본, 및/또는 다른 편리한 가용화제 또는 분산제 속의 액제로서 제조될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제학적 조성물 속에 존재하는 항체는 100 mg(10 mL) 또는 500 mg(50 mL)의 단일-사용 바이알 중 10 mg/mL의 농도로 공급될 수 있다. 생성물은 9.0 mg/mL의 염화나트륨, 7.35 mg/mL의 시트르산나트륨 이수화물, 0.7 mg/mL의 폴리소르베이트 80, 및 주사용 멸균수 속의 IV 투여용으로 제형화된다. pH는 6.5로 조절된다. 본 발명의 약제학적 조성물 속의 항체에 대해 예시적인 적합한 투여량 범위는 약 1 mg/m2 내지 500 mg/m2일 수 있다. 그러나, 이러한 스케쥴은 예시적이며 과적의 스케쥴 및 요법은 임상 시험에서 측정되여야만 하는 약제학적 조성물 속의 특수한 항체의 친화성 및 내성을 고려하여 채택될 수 있음이 고려될 것이다. 주사용(예컨대, 근육내, i.v.)의 본 발명의 약제학적 조성물은 멸균 완충수(예컨대, 근윤내 용으로 1 ml), 및 약 1 ng 내지 약 100 mg, 예컨대, 약 50 ng 내지 약 30 mg 이상, 바람직하게는, 약 5 mg 내지 약 25 mg의 본 발명의 항-마이오신 18A 항체를 함유하도록 제조될 수 있다.
특정의 구현예에서, 리포좀 및/또는 나노입자의 사용은 숙주 세포 내에서 항체의 도입을 위해 고려된다. 리포좀 및/또는 나노입자의 형성 및 사용은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다.
나노캡슐은 일반적으로 화합물을 안정하고 재생가능한 방식으로 엔트랩(entrap)할 수 있다. 세포내 중합체성 과부하로 인한 부작용을 피하기 위하여, 이러한 초미세 입자(대략 0.1 μm의 크기)를 일반걱으로 생체 내에서 분해될 수 있는 중합체를 사용하여 설계한다. 이러한 요건을 충족시키는 생분해가능한 폴리알킬-시아노아크릴레이트 나노입자는 본 발명에서 사용하기 위해 고려되며, 이러한 입자는 용이하게 제조될 수 있다.
리포좀은 수성 매질 속에서 분산되어 다중라멜라 동심원성 이층 소낭(또한 다층라멜라 소낭(MLV)로 명명됨)을 자발적으로 형성하는 인지질로부터 형성된다. MLV는 일반적으로 직경이 25 nm 내지 4 μm이다. MLV의 초음파처리는 코어 속에 수용액을 함유하는, 직경이 200 내지 500Å의 범위인 작은 단일라멜라 소장(SUV)의 형성을 야기한다. 리포좀의 물리적 특성은 pH, 이온 강도 및 이가 양이온의 존재에 의존한다.
이하에서는 본 발명을 다음의 도면 및 실시예를 통하여 더 상세히 설명한다. 그러나, 이러한 실시예와 도면은 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안될 것이다.
도 1: 항-ICOS ADC는 ICOS-발현 세포주에서 특이적인 시험관 내 효능을 갖는다. A. 항-ICOS ADC는 ICOS-발현 세포주에서 특이적인 시험관 내 효능을 갖는다. (A-E) alamarBlueTM(평균 16개의 반복물)으로, MyLa 세포(A), MJ 세포(B), HUT78 세포(C), 저켓 세포(Jurkat cell)(D) 및 버켓-ICOS 세포(E)에서 평가된, 증가하는 ADC 농도에서 세포 생존능의 퍼센트. 항-HER2 ADC는 음성 대조군으로 사용된 반면, 항-CD30 ADC(BV)는 양성 대조군이었다. ***: p<0.001; **: p=0.001-0.01; *: p=0.01-0.05; ns: 유의적이지 않음.
도 2: MyLa 세포를 지닌 마우스 이종이식체 모델에서 항-ICOS-MMAE ADC의 생체 내 효능의 평가. (A) 21마리의 마우스에게 8.106개의 MyLa 세포를 이식하였으며, 이는 200 μL의 PBS 및 기저 막 매트릭스 없이 피하 주사되었다. 이후에 마우스를 무작위로 3개의 그룹에 지정하여 4일 간격(이식 후 D10 및 D14)으로 항-HER-2, 항-CD30, 또는 항-ICOS ADC를 투여한 2회 치료 후 종양 용적에 대해 모니터링하였다. (B) 항-ICOS 및 항-CD30 ADC의 효과를 비교하는 전체 생존 곡선(카플란-마이어((Kaplan-Meier)). 2개의 곡선 사이의 차이는 유의적이다(p=0.0006). (C-E) 3개의 그룹으로 지정하여 항-HER2, 항-CD30, 또는 항-ICOS ADC로 치료한 26마리의 마우스에서 폐(C), 비장(D) 및 간(E) 내에서 생물발고아성 MyLa 전이의 발달의 검출.
도 3: ICOS+ PDX에서 항-ICOS-MMAE ADC의 생체 내 효능. (A-C) 14마리의 마우스에게 SS를 지니고 2개의 그룹(항-ICOS-MMAE ADC 그룹 및 항-HER2 ADC 대조군 그룹)으로 지정된 환자로부터의 PDX의 5.105개 세포를 이식하였다. 치료 둘 다를 D55, D58, D62 및 D65에서 3mg/kg의 용량에서 IV 주사하였다. 이후에, 마우스를 D69에 희생시키고 기관을 제거하고, 분리하고 유동 세포분석법(A: 혈액 내; B: 골수 내; C: 비장 내)으로 분석하였다. (D) 30마리의 마우스에게 AITL을 지닌 환자로부터의 PDX의 5.105개의 세포를 이식하고, 10마리의 마우스의 3개 그룹으로 지정하였다. 치료는 가장 이른 블라스트(blast)가 마우스 혈액에서 검출되었을 때(대략 0.2개의 블라스트/μl)인, D22에 시작하였다. 항-ICOS ADC 및 염수 혈청(NaCl 0.9%)을 D22, D25, D38 및 D43에, 3mg/kg의 용량에서 IV 주사하였다. 빈크리스틴을 D22, D29 및 D38에 0.25mg/kg에서 IP로 투여하였다. *: p = 0.01 to 0.05. ***: p<0.001.
도 4: MAB-Zap 검정은 항-ICOS ADC의 개발을 위한 가장 우수한 후보물일 수 있는 ICOS 클론의 확인을 허용한다. (A) MAB-Zap가 작동하는 방식의 개략적 표시. (B) alamarBlueTM으로 평가된, MJ에서 증가하는 ADC 농도에서 세포 생존능의 퍼센트. 항-ICOS 53.3-MMAE 및 항-ICOS 92.17-MMAE가 항-ICOS 314.8-MMAE보다 더 효과적임에 주목한다.
[표 3]
Figure pct00007

[표 4]
Figure pct00008
실시예:
실시예 1: 항-ICOS 항체-약물 접합체(ADC)의 용도
물질 및 방법
연구 설계 및 집단
본 발명자는 2-17년 11월과 2018년 10월 사이에 추정된 다기관 연구(multicenter study)를 수행하였다. 환자는 >18세이었고 연구와 관련된 임의의 과정 개시 전에 서면 동의서 형태에 사인하였다. CTCL의 진단은 임상의 및 병리학자가 수행하였고, 둘 다 프랑스 피부 림프종 그룹(French Cutaneous Lymphoma Group)(GFELC: Groupe Franηais d'Etude des Lymphomes Cutan
Figure pct00009
s)이었다. 본 발명자는 각각의 환자를 2018 WHO-EORTC 진단 및 분류 기준. 25에 따라 특성화하였다. 본 발명자는 이후에 종양-노드 전이-혈액(tumor-node-metastasis-blood; TNMB) 분류 시스템.26을 기반으로, CTCL에 대한 개정된 단계 시스템에 따라 임상 단계화를 수행하였다. SS의 진단을 확인하기 위하여, 환자는 TNMB 분류의 그룹 B2의 기준을 충족하여야 하였다. 기능성 시험을 위해, SS를 지닌 환자를 초기 진단 또는 임상 및 생물학적 재발(B2 기준)에 포함시켰다. 본 발명자는 면역치료요법을 사용한 치료를 받거나 치료학적 시험 중인 환자는 배제시켰다.
진단시 CTCL을 지닌(38명의 환자) 또는 재발된(14명의 환자) 52명의 환자로부터의 피부 샘플을 국소 마취하에 4-mm 펀치 생검으로 수득한 다음 포름알데하이드로 고정시키고 파라핀 속에 봉매하였다. SS를 지닌 13명의 환자로부터의 혈액 샘플은 EDTA 튜브 속에 15 mL의 백혈구로 이루어졌다. B-세포 림프종을 지닌 12명, CD30+ 림프증식성 질환(LPD)를 지닌 14명(피부 역형성 거대 세포 림프종(cutaneous anaplastic large cell lymphoma) 및 림프종양구진(lymphomatoid papulosis)), PCSMLPD를 지닌 12명 및 AITL을 지닌 13명의 환자로부터의 피부 샘플을 대조군으로서 사용하였다. CTCL을 지닌 환자 및 대조군의 임상 특성은 보충 표 S1에 요약한다. 건강한 자원자는 Etablissement Franηais du Sang(EFS)에서 혈액 공여자이었다.
모든 환자 조직 수집 및 연구자는 Institut Paoli-Calmettes(ICOS-LYMPH-IPC2018003), 세인트-루이스 병원(Saint-Louis Hospital), 및 헨리 몬더 병원(Henri-Mondor Hospital)에서 헬싱키 선언(Declaration of Helsinki)에 따라 Institutional Review and Privacy Boards에 의해 승인된 프로토콜에 지지하여 사용하였다.
mAb의 생성
항-ICOS ADC의 생성을 위해, 본 발명자의 실험실 27에서 생성된 정제된 뮤린 항-ICOS 항체를 MMAE 및 피롤로벤조디아제핀(PBD)에 대한 커플링을 위해 Levena Biopharma and Concortis Biotherapeutics(미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)에 보냈다.
BV(항-CD30-MMAE) 및 아도-트라스투주맙 엠탄신(항-HER2-MMAE)은 본 발명자의 병원 약국에서 제공하였다.
세포 배양
본 발명자는 3개의 CTCL 세포주를 사용하였다: MyLa(프랑스의 크레테 소재의 Henri-Mondor 병원의 병리학 부서의 엔. 오르톤(N. Ortonne) 박사로부터), MJ(미국 버지니아주 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)[ATCC]으로부터) 및 HUT78(ATCC로부터). Myla 및 MJ는 MF 세포주인 반면, HUT78은 SS 세포주이다. MyLa 및 HUT78 세포를 10% 소 태아 혈청(FCS), 2% L-글루타민, 1% 피루베이트가 보충된 RPMI 1640 배지(Life Technologies) 속에서; MJ는 20% FCS가 보충된 이소코브 변형된 둘베코 배지(Iscove's modified Dulbecco's medium; IMDM) 속에서 배양하였다. 확산성 거대 B-세포 림프종(다우디(Daudi), ATCC CCL-213) 및 T-세포 백혈병(저켓, ATCC TIB-152) 세포주를 또한 ATCC로부터 구입하고 MyLa 및 HUT78 세포와 동일한 방식으로 배양하였다. 형질감염시켜 ICOS 수용체를 발현하는 저켓 T 세포주는 저켓-ICOS로 명명하였다. 루시퍼라제를 발현하도록 형질감염된(LUC2를 발현하는 렌티바이러스 벡터를 사용한 형질감염) MyLa 세포주는 MyLa-루시퍼라제로 명명하였다.
AITL(DFTL 78024V1) 및 SS(DFTL 90501V3)의 환자-유래된 이종이식체(PDX)를보스톤(미국 매사츄세츠) 28 소재의 Dana-Farber Cancer Institute로부터 입수하였다.
유동 세포분석법 및 면역화학
본 발명자는 면역조직화학을 위해 토끼 항-ICOS 항체(Spring Biosciences [Abcam, 영국 캠브릿지 소재], 및 SP98 토끼 모노클로날 항체(Spring Biosciences, 항-토끼 Alexa488 제2 항체와 함께) 뿐만 아니라 항-마우스 텍사스 레드 제2 항체를 사용하는 형광성 멀티플렉스 염색을 위해 PD-1에 대한 마우스 항체(NAT105, Abcam), CD4(4B12, Novocastra)(Leica Biosystems, 덕일 웨츨라 소재), CD8(C8/144B, Dako)(Agilent Technologies, 미국 캘리포니아주 산타 클라라 소재), 및 FoxP3(236A/E7, Abcam) 및 핵 염색을 위해 DAPI를 사용하였다. 모든 염색 실험을 포르말린 고정된 파라핀 봉매된 세포 및 노드(node) 생검으로부터의 3μm 두께의 단면에서, 수동으로 또는 Bond Max device(Leica Microsystems)를 사용하여 수행하였다. ICOS 및 모든 다른 마커의 발현을 반-정량적으로 기록하고 종양 T-세포 침윤물 내의 양성 세포의 비율을 기반으로 하여, 4개의 범주로 나누었다(0: 염색 없음, 낮은 발현: < 5%, 중간 발현: 5-50%, 고 발현: > 50%).
유동 세포분석법 및 기능성 시험을 위해, 본 발명자는 본 발명자의 실험실에서 생성된 항-ICOS 314.8 항체를 사용하였다(세부사항에 대해서는, Le et al27을 참고한다). 다른 항체들은 Beckman Coulter (BC) (Brea, CA, USA), Becton-Dickinson (BD) (Franklin Lakes, NJ, USA), Miltenyi Biotech (Bergisch Gladbach, Germany), 및 eBioscience (San Diego, CA, USA): CD45 KO (BC), CD3 percpCy5.5 (BD), CD4 Pacblue (BD), CD7 FITC (BD), CD26 APC (Miltenyi), CD14 APCH7 (BD), CD158e/k PE Vio770 (Miltenyi), CD52 PE (Miltenyi), CD56 APC-Vio770 (Miltenyi), CD19 APC (BD), CD20 PE (BC), CD25 PE-Cf 594 (BD), 및 FoxP3 FITC (eBioscience)로부터 구입하였다.
유동 세포분석법적 분석은 FACS Canto II(BD Biosciences, 미국 캘리포니아주 산 조세 소재) 세포분석기 상에서 수행하였다. 생성된 미가공 데이타를 DIVA FACS Canto II 소프트웨어 버젼 8.0.1을 사용하여 분석하였다.
ADC의 존재하에서 세포주 생존능의 측정
세포 생존능을 alamarBlueTM(Biosource, 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재)을 사용하여 측정하였다. ADC에 세포 노출 후 4 내지 5일 째에, alamarBlueTM을 가하였다. 37℃에서 4시간 항온처리 후, 형광성을 발광기(OPTIMA, BMG Labtech)로 560 nm의 파장에서, 제조업자가 추천한 바와 같이, 측정하였다.
동물 및 이종이식체 모델
모든 실험은 동물 취급을 위한 프랑스 가이드라인, ARRIVE 가이드라인에 일치하여 수행하였고 지역 윤리 위원회에 의해 승인되었다(동의 번호 APAFIS#6069-2016071216263470 v3).
6 내지 8주령의 비-비만 중증 당뇨병 조합된 면역결핍성 감마(NSG/NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) 수컷 마우스를 마우스 연구에 사용하였고 Charles Rivers(프랑스 라브레슬 소재)로부터 입수하였다. 마우스를 멸균 조건 하에 멸균된 사료 및 물을 자유로이 공급하면서 가두고 12시간 광 및 12시간 암 주기에서및 온도 및 습도 제어 하에 유지시켰다. 우리는 깔개가 있는 충족된 환경을 함유하였다.
마우스에게 PBS 중 8백만개의 Myla 또는 MylaLuc 세포를 피하 주사로 제공하였다. 종양 성장을 디지탈 캘리퍼로 측정하고 종양 용적(길이 Х 너비2 Х π/6)를 계산함으로써 모니터링하였다. 종양이 100 mm3에 근접한 평균 크기에 도달하면, 마우스를 무작위처리(그룹 당 n=7)하고 치료 반응을 측정하는데 사용하였다. ADC를 사용한 치료는 꼬리 정맥 내로 피하 주사하였다. BV 및 항-ICOS ADC를 동일한 용량(3 mg/kg)으로 투여하고 아도-트라스투주맙 엠탄신을 10 mg/kg에서 투여하였다. 생물발광성 분석을 PhotonIMAGER(Biospace Lab, 프랑스 네슬레-라 발레 소재)를 사용하여 내독소-유리된 루시페린(30 mg/kg)의 첨가 후 수행하였다. 분석의 완료 후, 마우스 생검을 수행하고, 기관 발광성을 평가하였다. 질환의 증상(종양 용적 >1500 mm3, 유의적인 체중 감소, 엉크러진 외피, 약화, 및 감소된 운동능)에 대한 마우스의 매일 모니터링은 고통의 신호를 지닌 주사된 동물에 대한 사멸 시간을 결정하였다. 생존 곡선은 카플란-마이어 방법(Kaplan-Meier method)으로 평가하고 로그-순위 시험(log-rank test)을 사용하여 비교하였다.
림프종 진행에서 ADC 치료의 효능을 탐구하기 위하여, 본 발명자는 AITL(DFTL 78024V1) 및 SS(DFTL 90501V3)의 PDX를 활용하였다. 각각의 PDX의 경우, PDX로부터의 100,000 내지 500,000개의 세포를 시험관 내 배양 이전에 NSG 마우스의 꼬리 정맥 내로 피하 주사하였다. 마우스에게 이식된 경우(hCD45+ 세포가 유동 세포분석법에 의해 말초 혈액에서 검출되었다), NSG 마우스를 앞서 기술한 바와 동일한 방식으로 처리하였다.
통계적 분석
모든 데이타를 GraphPad Prism 프로그램(GraphPad Software, 미국 캘리포니아 주 샌 디에고 소재)으로 분석하였다. p<0.05에서 설정된 유의성의 수준을 사용한 쌍을 이루지 않은 비-매개변수성 스튜던츠 t-시험(unpaired non-parametric Student's t-test)을 사용하여 목적한 항체 및 이의 대조군의 시험관 내 효능을 비교하였다. 그룹화된 효능 분석을 변량의 2원 분석(two-way analysis of variance; ANOVA) 시험으로 수행하였다. IC50(중간 억제 용량)을 비-선형 회귀로 계산하였다. 생체 내 생존 곡선을 로그-순위 시험(카플란-마이어)로 비교하였다.
결과
ICOS는 MF 및 SS를 지닌 환자의 피부에서 악성종양 세포에 의해 광범위하에 발현된다.
본 발명자는 면역조직화학을 사용하여 진단시 CTCL을 지닌(38명의 환자) 또는 재발된(14명의 환자)의 52명의 환자의 피부 생검에서 ICOS 발현을 연구하였다. SS를 지닌 5명의 환자에서, 본 발명자는 또한 조직학적 평가(pN3)에서 조직학적으로 입증된 포함된 종양 T-세포 침입을 지닌 노드로부터의 수반된 코어 생검을 분석하였다. 본 발명자는 형태학적으로(핵 이형성) 및 표현형적으로(CD2, CD5, CD7 중에서 판-T-세포 항원 손실; SS 샘플의 경우 PD-1 발현; 1차 피부 CD30+ T-세포 림프증식성 장애[LPD]의 경우 CD30 발현) 특징화된 CD3+ 종양 T-세포 집단의 ICOS 발현을 측정하였다.
조기-단계 MF(단계 IA 내지 IIA, 거대 세포 형질전환이 없음)를 지닌 23명의 환자의 61%에서 비정형의 림프구성 침윤물은 중간 내지 높은 ICOS 발현을 나타내었다. 형질전환된 MF를 지닌 12명의 환자로부터의 75%로부터의 종양 세포는 중간 내지 높은 ICOS의 발현을 가졌다. 최종적으로, ICOS는 SS를 지닌 환자의 피부 생검의 17개 중 15개(88%)에서 고도로 발현되었다(데이타는 나타내지 않음). 예측된 바와 같이, ICOS는 B-세포 림프종에서 불량하게 발현되었고 PCSMLPD 및 AITL 종양 침윤물에서 광범위하게 발현되었다. 흥미롭게도, CD30+ LPD의 종양 세포는 ICOS의 낮은 발현을 나타내었다. 더욱이, ICOS는 SS를 포함한 모든 5개의 노드에서 비정형의 림프구에 의해 발현되었다. 따라서, ICOS 발현은 질환의 진행을 증가시키고 피부 및 노드 둘 다에서 SS에서 광범위하게 발현되었다.
이중 염색 실험을 이러한 5명의 환자로부터의 피부 및 림프절 샘플 둘 다에서 수행하여 신생물성 T-세포 및 미세환경에 의핸 ICOS 발현을 추가로 특성화하였다(데이타는 나타내지 않음). 본 발명자는 낮은 내지 중간의 ICOS 발현을 지닌 1명의 환자를 제외하고는, 대부분의 비정형 CD4+ T-세포(>50%) 뿐만 아니라 대부분의 PD-1+ 비정형 세포가 ICOS를 발현하였음을 관찰하였다. 후자에서, 모든 ICOS+ 림프구는 PD-1을 공-발현하였다. 높은 PD-1 발현은 모든 피부 및 노드 샘플에서 발견되었고, ICOS+PD-1- 림프구는 부재하거나 매우 드믈게(<5%) 나타났다. 단지 아주 적은 수의(<5%) ICOS+CD8+ T-세포가 3개의 노드 샘플 속에서 종양 미세환경 내에서 확인될 수 있었다. 적은 내지 중간의 양의 CD4+ T-세포가 피부 및 노드 샘플 속의 ICOS-인 것으로 나타났다. FoxP3+ Tregs 림프구의 낮은 비율은 3개의 경우에서 확인되었고, 2개의 경우에는 피부 및 림프절 둘 다에서 및 하나의 경우에는 절에서만 확인되었다. 이 중 낮은 내지 중간 비율이 ICOS를 발현하였다(데이타는 나타내지 않음). 따라서, ICOS 발현은 신생물성 CD4+ T-세포로 주로 제한되며, 종양 미세-환경 내에서 ICOS+CD8+ T-세포 또는 FoxP3+ Tregs에서 드믄 것으로 나타난다.
ICOS는 SS를 지닌 환자의 혈액 속의 악성종양 세포에 의해 광범위하게 발현된다
순환하는 악성종양 세포에 의한 ICOS 발현을 이후에 유동 세포분석법으로 평가하였다. 시자리 세포의 가장 특이적인 선택을 보장하기 위하여, 본 발명자는 CD7 또는 CD26을 상실한 CD4+KIR3DL2+ T-세포를 악성종양 세포인 것으로 고려하였다. 데이타는 12명의 건강한 자원자와 비교하여 13명의 환자에서 림프구 집단의 분포를 나타낸다. 환자에서, 모든 림프구 세포 중 악성 CD4+ T-세포(시자리 세포)의 중간 퍼센트는 53.1%(35.9-71)이었고, 이는 환자 내 모든 CD4+ T-세포 중 64%가 악성종양 세포이었음을 의미한다. Treg(CD4+ CD25+ FoxP3+)는 모든 림프구의 2%, 즉, 비-종양 림프구의 4.3%에 대해 계수되었고; 이는 건강한 자원자에서 3.4%이었다. 또한, NK 림프구는 건강한 자원자에서 5.5%와 비교하여, 환자의 모든 림프구의 2.4%(비-종양 림프구의 5%)를 구성하였다. NK 림프구는 ICOS를 발현하지 않았다(데이타는 나타내지 않음).
순환하는 종양 세포에 의한 ICOS의 발현은 모든 환자에서 발견되었다. 발현은 강력하였다: 종양 세포의 69±7.3% 대 환자에서 비-종양 CD4+ 세포의 38.8±7.1%가 ICOS를 발현하였고(p<0.009; 95% 신뢰 구간 [CI95%]: 8.654-51.55); 건강한 자원자에서 CD4+ 세포의 31±3.2%가 ICOS를 발현하였다(p<0.0001; CI95%: 20.29-46.34)(데이타는 나타내지 않음). 건강한 자원자에서 5.6±1.2%와 비교하여, 환자에서 Foxp3+CD25+CD4+ Treg의 14.4±2.7%는 ICOS를 발현하였다(p=0.04)(데이타는 나타내지 않음).
항-ICOS ADC는 MyLa, MJ 및 HUT78 세포주의 사멸을 매개한다.
본 발명자는 MF(MyLa 및 MJ) 및 SS(HUT78) 세포 주에서 항-ICOS ADC를 먼저 시험하여 이의 기능성을 보증하였다. ICOS 발현은 MyLa(MFI 비 = 143.9) 및 MJ(MFI 비 = 96)에서 강력하였지만 HUT78(MFI 비 = 4.5)에서는 낮았다. CD30는 모든 3개의 세포주에서 강력하게 발현되었다(데이타는 나타내지 않음).
본 발명자는 MyLa 및 MJ 세포주에서 항-ICOS-MMAE ADC의 존재시 세포 생존능에 있어서 유의적인 용량-의존성 감소를 관찰하였다(도 1a 및 1b). MyLa 세포주에서, 항-ICOS-MMAE ADC는 보다 우수하였지만 BV보다 통계적으로 유의하게 상이한 IC50을 가지지 않았다(각각 8.2 ng/ml 및 30.6 ng/ml). MJ 세포에서, 항-ICOS-MMAE ADC는 BV보다 덜 효과적인 경향이 있었다. 이러한 차이는 항-ICOS mAb가 MJ 세포에서보다 MyLa에서 보다 내재화되는 반면, 반재현상이 항-CD30 mAb의 경우 발생하였다는 사실에 의해 설명될 수 있었다(데이타는 나타내지 않음).
HUT78 세포에서, BV는 MyLa 및 MJ(IC50=251.9 ng/ml)에서보다 거의 효과적이지 않았고 항-ICOS-MMAE ADC는 활성을 나타내지 않았다(도 1c). 또한, HUT78 세포주는 유리-MMAE의 IC50이 MyLa 및 HUT78에서 각각 8.2e-007 μM 및 0.001 μM이었으므로, MMAE에 대해 내성을 나타낸다(데이타는 나타내지 않음). 그러나, 항-ICOS-PBD ADC는 세포의 강력한 사멸을 매개하며, 이는 잘-채택된 약물과 커플링된 항-ICOS ADC가 심지어 낮은 수준의 ICOS 발현으로도 효과적일 수 있었음을 의미한다.
최종적으로, 본 발명자는 저켓 및 저켓-ICOS 세포에서 항-ICOS ADC를 시험함으로써 ADC의 특이성을 평가하였다(도 1d 및 1e). 모든 ADC의 IC50 값은 표 3에 요약한다.
생체 내 , 항-ICOS-MMAE ADC는 전반적인 생존의 측면에서 BV보다 우수하고 전이의 발달을 예방한다.
8.106 MyLa 세포를 피하 이식한 마우스를 무작위로 3개 그룹으로 지정하였다: 항-ICOS-MMAE ADC 그룹, BV 그룹, 항-HER2(아도-트라스투주맙-엠탄신) ADC 그룹.
항-HER2 ADC로 치료한 마우스는 (D)10 내지 D12 일 사이에 죽었다. 종양 용적의 신속한 감소는 항-ICOS-MMAE ADC 또는 BV를 사용한 치료 후 발생하였다(도 2a). 피하 종양 용적은 제1의 주사 후 15일로부터 더 이상 인식가능하지 않았고, 2회 치료 사이에 유의적인 차이가 없었다. 내성은 탁월하였고, 치료된 마우스에서 ADC 독성의 증거는 없었다. 흥미롭게도, 항-ICOS-MMAE ADC는 BV보다 더 긴 전반적인 생존(overall survival; OS)을 제공하였다(HR=15.2; CI95%: 3.2-71.1; p<0.0006)(도 2b). BV 그룹에서 중간 생존을 35일이었고 항-ICOS ADC 그룹에서는 도달하지 않았다.
제2의 실험에서, 본 발명자는 MyLa-루시퍼라제 세포를 사용한 전이의 발달을 모니터링하는 것에 목표를 두었다. 27마리의 마우스에 이식하고 제1의 실험과 동일한 조건하에서 치료하였다. D25째에, 각각의 그룹으로부터 7마리의 마우스를 희생시키고 이의 기관을 발광계로 스캐닝하여 전이의 존재를 검출하였다. 다른 마우스는 D40까지 유지시켜 피하 재발의 발생을 생체 내에서 검출하였다. D25째에, 항-HER2 그룹 내 모든 마우스는 폐, 간, 및 비장에서 전이를 가졌다. BV 그룹에서, 마우스의 대략 50%는 이러한 3개 기관 중 하나에서 적어도 하나의 전이를 가졌다. 항-ICOS-MMAE 그룹에서, 기관은 유의적인 생물발광성을 나타내지 않았다(도 2c 내지 2e). D40째에, 피하 재발이 BV 그룹의 마우스에서 생체내 감지되었지만, 항-ICOS 그룹 내 마우스에서는 여전히 완화되었다(데이타는 나타내지 않음).
항-ICOS-MMAE ADC는 ICOS+ 림프종의 PDX에서 강력한 생체 내 효능을 갖는다
본 발명자의 전임상 모델의 예측된 값을 증진시키기 위하여, 본 발명자는 SS 및 AITL을 지닌 환자로부터 의 ICOS+ PDX에서 항-ICOS-MMAE ADC의 효능을 평가하였다.
SS를 지닌 환자로부터의 ICOS+ PDX를 14마리의 NSG 마우스에게 피하 주사하였다. 이식 후 D40째에, 본 발명자는 시자리 세포의 수에 있어서 잔인하고 신속한 증가를 관찰하였다. 본 발명자는 각각의 마우스로부터의 혈액 샘플을 취하고 순환하는 종양 세포의 수를 정량하여 살아있는 마우스를 7마리의 마우스의 2개 그룹으로 균일하게 분포시켰다: 항-ICOS-MMAE ADC 그룹 및 항-HER2 ADC 대조군 그룹. 치료 15일 후, 마우스를 희생시키고, 본 발명자는 혈액 및 기관 속의 악성종양 세포의 수를 유동 세포분석법으로 정량하였다. 본 발명자는 항체-ICOS ADC 그룹의 혈액, 골수, 및 비장에서 감소된 수의 종양 세포를 관찰하였다(도 3a 내지 3c). 항-ICOS ADC는 여기에서 신속하고 유의적인 효능을 나타내며, 이는 이러한 치료학적 전략이 진전된 SS를 지닌 환자에서 사용될 수 있었음을 제시한다.
제2의 실험에서 AITL을 지닌 환자로부터의 ICOS+ PDX를 NSG 마우스 내로 피하 주사하였다. 본 발명자는 후속적으로 혈액 샘플을 취하여 유동 세포분석법으로 종양 세포를 검출하였다. 제1의 종양 세포는 이식 후 D21 째에 검출되었으므로, 치료는 D22에 시작하였다. 마우스를 항-ICOS-MMAE ADC, 빈크리스틴(양성 대조군, MMAE와 동일한 작용 방식을 지님), 또는 염수 용액(NaCl 0.9%)으로 치료하였다. 음성 대조군 및 빈크리스틴 그룹에서 중간 생존은 각각 D67 및 D68이었다. 항-ICOS 그룹에서 중간 생존은 도달하지 않았다. 염수 용액을 제공받은 마우스와 비교하여 항-ICOS ADC로 치료된 마우스의 보다 우수한 생존은 매우 유의적이었다(p<0.0001)(도 3d). ADC 독성의 증가는 치료된 마우스에서 관찰되지 않았다. D120 째에, 항-ICOS ADC로 치료한 마우스는, 블라스트가 더 검출가능하지 않았으므로, 완전히 완화되었다(데이타는 나타내지 않음).
실시예 2: 다른 항-ICOS 항체-약물 접합체(ADC)의 용도
물질 및 방법
ADC로서 작용하는 상이한 항-ICOS 항체의 능력을 평가하기 위하여, 본 발명자는 리보솜 억제제인 사포린에 커플링된 제2의 항-뮤린 IgG 항체인, MAB-Zap(Advanced Targeting System, 미국 샌디에고 소재)을 사용하였다(도 4a). MAB-Zap은 목적한 본 발명자의 항체의 Fc 단편을 인식하고, 이후에 MAB-Zap-항체 복합체는 표면 항원에 결합하여 내재화된다. 사포린은 세포질로 방출되어 리보솜을 억제하고, 단백질 합성을 중지시키고 세포 사멸을 야기한다. 시판 키트는 또한 사포린에 커플링된 혈청 폴리클로날 Ig, IgG-SAP에 상응하는 음성 대조군을 포함한다.
96-웰 환저 플레이트에, 세포를 정제된 항체에 0 nM 내지 40 nM의 증가하는 농도에서 노출시킨다. MAB-Zap를 4.5 nM의 농도(제조업자의 추천)에서 및 대조군 웰에서 IgG-SAP을 가한다. 37℃에서 3일 항온처리 후, AlamarBlue를 각각의 웰(총 웰의 용적의 10%)에 가하고 형광성을 OPTIMA 발광기로 판독한다.
결과
본 발명자는 다음의 9개의 항-ICOS mAb를 MyLa 및 MJ 상에서 시험하였다: 314.8, 92.17, 53.3, 298.1, 88.2, 279.1, 145.1, 121.4. 모든 이러한 mAb는 MyLa에서 3개(279.1, 145.1 및 121.4) 및 MJ에서 2개(145.1 및 121.4)를 제외하고는 MAB-Zap 검정을 사용하여 ADC로서 작용하는 능력을 나타내었다. IC50으로서 나타낸, 각각의 mAb의 효능을 표 4에 나타낸다. 이러한 결과를 확인하기 위하여, 본 발명자는 53.3, 92.17 및 145.1 항-ICOS mAb를 MMAE에 커플링하고, 이를 본 발명자의 제1의 314.8 항-ICOS ADC와 비교하였다(도 4b).
참고문헌:
본 명세서에서, 다양한 참고문헌들이 본 발명이 속하는 기술 분야를 설명한다. 이러한 참고문헌들의 개시는 여기서 본 출원에 참조로서 통합된다.
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SEQUENCE LISTING <110> INSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE) UNIVERSITE D'AIX MARSEILLE CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) INSTITUT JEAN PAOLI & IRENE CALMETTES <120> NEW METHOD TO TREAT CUTANEOUS T-CELL LYMPHOMAS AND TFH DERIVED LYMPHOMAS <130> IP20224187FR <160> 32 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR1 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 1 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR2 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 2 Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR3 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 3 Thr Arg Trp Asn Leu Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn Asn Tyr Tyr Leu Asp 1 5 10 15 Tyr <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR1 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 4 Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR2 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 5 Arg Met Ser 1 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR3 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 6 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids sequence of the heavy chain (H) of the 88.2 mAb <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Met Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Thr Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Trp Asn Leu Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn Asn Tyr Tyr Leu Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids sequence of the light chain (L) of the 88.2 mAb <400> 8 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR1 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 9 Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR2 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 10 Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Val 1 5 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR3 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 11 Ala Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Ala Trp Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR1 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 12 Lys Ser Pro Leu His Ser Asn Gly Asn Ile Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR2 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 13 Arg Met Ser 1 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR3 - Amino acids sequence (IMGT) <400> 14 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids sequence of the heavy chain (H) of the 314.8 mAb <400> 15 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Val Asn Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Ala Trp Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Thr 115 120 <210> 16 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids sequence of the light chain (L) of the 314.8 mAb <400> 16 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Pro Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Thr Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Nucleic acids sequence of the heavy chain (H) of the 88.2 mAb <400> 17 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaggc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta cagtttcacc agctactgga taaactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gatcggaaat atttatcctt ctgatagtta tactaactac 180 aatcaaatgt tcaaggacaa ggccacattg actgtagaca aatcctccaa cacagcctac 240 atgcagctca ccagcccgac atctgaggac tctgcggtct attactgtac aagatggaat 300 ctttcttatt acttcgataa taactactac ttggactact ggggccaagg caccactctc 360 acagtctcct ca 372 <210> 18 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Nucleic acids sequence of the light chain (L) of the 88.2 mAb <400> 18 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttgtattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcaa ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336 <210> 19 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Nucleic acids sequence of the heavy chain (H) of the 314.8 mAb <400> 19 caggtccaac tacagcagcc tgggactgaa cttatgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc acctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gatcggagag attgatcctt ctgatagtta tgttaactac 180 aatcaaaact ttaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240 atacagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttttgtgc gagatcccct 300 gattactacg gtactagtct tgcctggttt gattactggg gccaagggac tctggtcact 360 gtctctaca 369 <210> 20 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Nucleic acids sequence of the light chain (L) of the 314.8 mAb <400> 20 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtcccctg catagtaacg gcaacattta cttatattgg 120 ttcctgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctactttcac actgaaaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaacatct agaatatccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR1 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 21 Ser Tyr Trp Ile Asn 1 5 <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR2 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 22 Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Met Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - H-CDR3 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 23 Trp Asn Leu Ser Tyr Tyr Phe Asp Asn Asn Tyr Tyr Leu Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR1 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 24 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR2 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 25 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 88.2 antibody - L-CDR3 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 26 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR1 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 27 Thr Tyr Trp Met His 1 5 <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR2 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 28 Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Val Asn Tyr Asn Gln Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 29 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - H-CDR3 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 29 Ser Pro Asp Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Ala Trp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 30 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR1 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 30 Arg Ser Ser Lys Ser Pro Leu His Ser Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR2 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 31 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 314.8 antibody - L-CDR3 - Amino acids sequence (KABAT) <400> 32 Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Tyr Thr 1 5

Claims (10)

  1. 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 이를 필요로 하는 대상체에서의 치료에 사용하기 위한, 항-ICOS 항체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    TFH 유래된 림프종은 혈관면역모구 T-세포 림프종(AITL)인, 항-ICOS 항체.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 CTCL은 균상 식육종(Mycosis Fungoides) 또는 시자리 증후군(S
    Figure pct00025
    zary syndrome)인, 항-ICOS 항체.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 53.3 mab, 88.2 mab, 92.17 mab, 145.1 mab 또는 314.8 mab 인, 항-ICOS 항체.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 ADC 또는 ADCC/ADCP에서 사용되는, 항-ICOS 항체.
  6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 세포독성 모이어티에 접합되는, 항-ICOS 항체.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 세포독성 모이어티는, 탁솔; 사이토칼라신 B; 그라미시딘 D; 에티디움 브로마이드; 에메틴; 미토마이신; 에토포시드; 테노포시드; 빈크리스틴; 빈블라스틴; 콜히친; 독소루비신; 다우노루비신; 디하이드록시 안트라신 디온; 마이탄신 또는 이의 유사체 또는 유도체와 같은 투불린-억제제; 모노메틸 아우리스타틴 E 또는 F(MMAE 또는 MMAF) 또는 이의 유사체 또는 유도체와 같은 항유사분열제; 돌라스타틴 10 또는 15 또는 이의 유사체; 이리노테칸 또는 이의 유사체; 미톡산트론; 미트라마이신; 악티노마이신 D; 1-데하이드로테스토스테론; 글루코코르티코이드; 프로카인; 테트라카인; 리도카인; 프로프라놀올; 푸로마이신; 칼시체아미신 또는 이의 유사체 또는 유도체; 메토트렉세이트 6 머캅토푸린, 6 티오구아닌, 사이타라빈, 플루다라빈, 5 플루오로우라실, 데카르바진, 하이드록시우레아, 아스파라기나제, 겜시타빈, 또는 클라드리빈과 같은 항대사산물; 메클로에타민, 티오에파, 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조신, 데카르바진(DTIC), 프로카르바진, 미토마이신 C와 같은 알킬화제; 시스플라틴 또는 카르보플라틴과 같은 백금 유도체; 두오카르마이신 A, 두오카르마이신 SA, 라첼마이신(CC-1065), 또는 이의 유사체 또는 유도체; 닥티노마이신, 블레오마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 미트라마이신, 미토마이신, 미톡산트론, 플리카마이신, 안트라마이신(AMC)과 같은 항생제; 피롤로[2,l-c][l,4]-벤조디아제핀(PDB); 디프테리아 A 쇄 및 이의 활성 단편 및 하이브리드 분자와 같은 디프테리아 독소 및 관련된 분자, 리신 A 또는 데글리코실화된 리신 A 쇄 독소와 같은 리신 독소, 콜레라 독소, SLT I, SLT II, SLT IIV와 같은 시가-유사 독소(Shiga-like toxin), LT 독소, C3 독소, 시가 독소, 페르투씨스 독소(pertussis toxin), 테타누스 독소, 대두 보우만-버크 프로테아제 억제제(soybean Bowman-Birk protease inhibitor), 슈도모나스 외독소, 알로린, 사포린, 모덱신, 겔라닌, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질(Aleurites fordii protein), 디안트린 단백질, PAPI, PAPII, 및 PAP-S와 같은 파이톨락카 아메리카나 단백질(Phytolacca americana protein), 모모르디카 차란티아 억제제(momordica charantia inhibitor), 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제(sapaonaria officinalis inhibitor), 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 및 에노마이신 독소; 리보뉴클레아제(RNase); DNase I, 스타필로코쿠스 장독소(Staphylococcal enterotoxin) A; 포크위드 항바이러스 단백질(pokeweed antiviral protein); 디프테린 독소; 및 슈도모나스 내동소로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, 또는 α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마눌린, 아마눌린산, 아마닌아미드, 아마닌 또는 아로아마눌린으로 이루어진 그룹에서 선택된 아마톡신인, 항-ICOS 항체.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 세포독성 모이어티는 MMAE인, 항-ICOS 항체.
  9. 이를 필요로 하는 대상체에서 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종을 치료하는 방법으로서, 항-ICOS 항체의 치료 유효량을 상기 대상체에 투여하는 것으로 포함하는, 치료 방법.
  10. 피부 T-세포 림프종(CTCL) 및/또는 TFH 유래된 림프종의 이를 필요로 하는 대상체에서의 치료에 사용하기 위한 제 1 항의 항-ICOS 항체를 포함하는 약제학적 조성물.
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