CN101147066A

CN101147066A - Mgc4504的用途

Info

Publication number: CN101147066A
Application number: CNA2006800064098A
Authority: CN
Inventors: M·D·沃斯; G·钱克; M·H·柯恩
Original assignee: Sanofi Aventis SpA
Current assignee: Sanofi Aventis France; Sanofi Aventis SpA
Priority date: 2005-03-11
Filing date: 2006-03-06
Publication date: 2008-03-19
Also published as: EP1861711B1; ATE541212T1; AU2006222204A1; JP4960951B2; IL185806A0; AU2006222204B2; JP2008532503A; DK1861711T3; MX2007010835A; BRPI0609209A2; KR20080005185A; CA2600209A1; IL185806A; KR101338885B1; WO2006094735A1; US20080249011A1; EP1861711A1

Abstract

本发明涉及MGC4504蛋白质、其功能衍生物或片段或者编码所述蛋白质、衍生物或片段的核酸的用途，用于鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

Description

MGC4504的用途

本发明涉及MGC4504用于鉴定药物物质的用途。本发明的其他方面涉及所述物质的鉴定方法和MGC4504用于制备药物的用途。

糖尿病是内分泌系统的经常的功能失常。术语糖尿病包括葡萄糖和脂类代谢的功能失常的不同形式，都具有共同的相对或绝对缺乏胰岛素，以及受损的胰岛素作用。1型糖尿病是自身免疫介导的胰腺β细胞的破坏，导致胰岛素不足和高血糖症。最常见的形式2型糖尿病的特征是脂类和葡萄糖代谢中的失调，伴随着肥胖症、抗胰岛素性和代谢综合征。最初，2型糖尿病的发展与抗胰岛素性有关，但是血糖量正常并且具有正常的胰腺胰岛素分泌。疾病进展与高血糖症和胰腺β细胞质量减轻有关，而且最终导致胰岛素不足和高血糖症。6％以上的美国人口患有糖尿病(即，在2004年超过1800万人)并且预测将来其数目在世界范围不断增长，必须面对不断增长的糖尿病患者人口，他们的生活质量受到严重影响。此外，糖尿病带来沉重的社会经济负担，具有很大的直接和间接损失。

因此，非常需要用于预防和/或治疗与糖尿病有关或者糖尿病导致的疾病的新的药物物质。

从而，本发明的目的是提供鉴定在预防和/或治疗糖尿病中有活性的物质的新手段。

这通过使用MGC4504蛋白质、其功能衍生物或者片段或者编码所述蛋白质、衍生物或者片段的核酸实现，其用于鉴定在预防或治疗葡萄糖或者脂类代谢的功能失常有关或者导致的疾病中有活性的物质。

本发明是基于发明人的结果，发明人首次提供了MGC4504(Q9BUX1)与糖尿病、特别是2型糖尿病潜在的病理过程有关联的证据。迄今为止，还没有MGC4504与受损的糖类或者脂类代谢有关或者引起的疾病状态有关联的知识。通过证明在抗胰岛素性和2型糖尿病的动物模型中MGC4504表达水平降低和提供实验证据证明MGC4504的增加的表达导致增强的细胞胰岛素敏感性，发明人首次阐明MGC4504在该生理背景中的功能关联。从而，能够调节MGC4504活性的物质肯定被认为对这些代谢的功能失常有关或者引起的疾病的病理状态或者发展具有根本的影响。

MGC4504(trEMBL数据库中条目Q9BUX1)是222个氨基酸的蛋白质，根据标准序列预测，其含有推定的Chac样结构域(aa32-208)，但是没有跨膜结构域。MGC4504氨基酸序列在人、大鼠和小鼠之间高度保守(>85％氨基酸同一性)。迄今为止，在文献中还没有对MGC4504分配分子功能。

MGC4504的基因座在15号染色体上。MGC4504的基因组序列可以在NCBI核苷酸数据库中以AC_020661(SEQ ID No.3)公开获得。MGC4504的编码多核苷酸序列可以在NCBI核苷酸数据库中以下面的条目号获得：NM_024111(序列ID No.1)。衍生的蛋白质序列可以在NCBI核苷酸数据库中在下面相同的条目号得到：NM_024111(序列ID No.2)。NCBI是国家生物技术信息中心(邮政地址：National Centre forBiotechnology Information，National Library of Medicine，Building 38A，Bethesda，MD20894，USA；因特网网址：www.ncbi.nhm.nih.gov)。

根据本发明的用途允许鉴定用于预防和/或治疗与受损的葡萄糖或者脂类代谢有关的疾病的新物质。根据本发明的用途包括鉴定具有所希望特征的物质以及进一步表征已经鉴定可用于预防和/或治疗与葡萄糖或者脂类代谢障碍有关的疾病的物质(即，根据本发明的用途可用于例如化合物筛选以及化合物序型分析)。

将用于本发明的不同方面的物质可以是任何生物或者化学物质或者天然产物提取物，其是纯化的、部分纯化的、合成或者通过生物化学或者分子生物学方法生产。

在本发明不同方面的意义下，被考虑在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者其导致的疾病中有活性的物质可以是影响MGC4504的一种功能或者细胞中MGC4504的量或者稳态水平或者MGC4504表达的任何物质。

为此，该物质可以调节MGC4504的任一种功能(例如，如下述的那些功能)。通过该物质，例如，通过直接相互作用或者干扰MGC4504多肽/蛋白质或者其片段，可以调节MGC4504蛋白质活性。该物质还可以调节MGC4504表达，例如，调节转录(起始、延长、加工等等)、转录物稳定性、翻译的水平。此外，它可以调节MGC4504的翻译后修饰、蛋白质折叠等等。该物质可以直接或者间接发挥上述效果(间接指例如，通过干扰(积极或者消极地)影响MGC4504功能/蛋白质活性/表达等等的天然信号级联)。此外，该物质还可以模拟MGC4504活性(例如，取代它的功能/角色)。

MGC4504的片段可以是任何多肽或多核苷酸，其短于对应的野生型，例如，短于根据SEQ ID No.2的多肽的人(hs)MGC4504或者根据SEQ IDNo.1或SEQ ID No.3或No.14的多核苷酸之一。

MGC4504或者MGC4504片段的衍生物可以是MGC4504多核苷酸、多肽或者其片段的任何修饰。衍生物包含例如，氨基酸或者核苷酸序列的修饰或者任何其他类型的修饰，如化学或者生物学修饰，例如，其导致多肽或者多核苷酸的稳定化(如核酸主链的硫代磷酸酯修饰或者其他类型的修饰或者氨基酸之间键的交换等)，或者使得将该多肽或者多核苷酸特异靶向某些细胞或者促进它进入细胞或被细胞摄入(如细胞可渗透的磷酸肽、邻位偶联到细胞可渗透的肽载体，例如，基于antennapedia/penetratin、TAT和基于信号肽的序列；或者偶联到特定转运蛋白或者importers的配体)。

MGC4504的功能片段是显示出MGC4504的至少一种功能的任一种片段(多肽或者多核苷酸)。

术语MGC4504的“功能衍生物”包括MGC4504关于天然存在的形式(多肽或者多核苷酸)的任一种类的修饰，其具有MGC4504的至少一种功能。本发明还包括MGC4504片段的功能衍生物。

MGC4504的功能包括能够促进/增加胰岛素从胰腺β细胞的释放，促进/增加胰岛素刺激的葡萄糖处理(例如，葡萄糖摄入；糖原合成和胰岛素敏感性)、影响细胞信号途径，例如，但不限于，胰岛素信号传递或胰岛素作用(例如，Akt磷酸化、GLUT4转移、aPKC激活；下游信号级联的活化，导致提高的葡萄糖摄入)。MGC4504的功能一般还包括MGC4504(蛋白质或者核酸)或者其片段与其他分子(包括，但不限于，蛋白质、核酸、合成分子)相互作用的能力，并且优选涉及增加胰岛素刺激的葡萄糖摄入的能力。

本发明的一方面涉及鉴定在预防或治疗糖类或者脂类代谢功能失常有关或者导致的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将MGC4504蛋白质与受试物质接触；和

b.确定该物质是否调节MGC4504蛋白质的活性。

术语“MGC4504的活性”涉及MGC4504蛋白质、其多肽或者片段(例如，涉及上述功能的那些之一)的蛋白质活性。

其中能够调节MGC4504活性的物质是认为在本发明上下文中在预防或治疗糖类或者脂类代谢功能失常有关或者导致的疾病中有活性的物质。

该方法可以是使用分离的MGC4504或者包含MGC4504的提取物的生物化学测定法或者它可以是细胞测定法。

调节可以是MGC4504活性的正调节或者负调节并且包括(完全或部分)活化(即活性增加)以及(完全或部分)失活MGC4504蛋白质活性。根据本发明的不同方面的优选实施方案，MGC4504的调节是活化(即，活性增加)。

受试物质可以是如上面定义的任一种物质。

本发明的另一方面涉及鉴定在预防或治疗糖类或者脂类代谢功能失常有关或者导致的疾病中有活性的物质的方法，该方法包括：

a.将具有降低的MGC4504量或者活性的细胞与受试物质接触；

b.确定受试物质是否能够增加细胞中存在的MGC4504的量或者活性。

其中认为能够可检测地增加MGC4504量或者活性的物质是在预防或治疗糖类或者脂类代谢功能失常有关或者导致的疾病中有活性的物质。

根据一个优选的实施方案，该物质能够完全恢复MGC4504的量或活性。

具有降低的MGC4504量或者活性的细胞可以是任何细胞，该细胞与参考细胞，例如具有完整MGC4504活性的细胞(例如，HEK293)相比具有可检测的较低的MGC4504量或者活性(例如，由于具有降低功能的突变MGC4504蛋白质的表达或者低水平表达等等)。它还可以是完全没有MGC4504或者MGC4504活性(例如，由于表达失去功能的MGC4504突变蛋白或者由于完全不存在MGC4504表达)。这些包含天然具有这些特征的细胞以及经遗传修饰而显示出这些特征的细胞，例如，基因组或者可诱导的MGC4504敲除细胞，以及表达MGC4504的显性失活突变体的细胞等等。

本发明的再一方面涉及鉴定在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将编码MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的核酸与受试物质在转录活性系统中接触；

b.测定在所述物质存在下，所述系统中存在的编码MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的mRNA的量；

c.测定所述物质不存在下，所述系统中存在的编码MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的mRNA的量；

d.测定该物质是否能够调节所述系统中存在的MGC4504mRNA的量。

其中认为能够调节并优选增加所述系统中存在的MGC4504mRNA的量的物质是在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

转录活性系统是任何生物化学或者细胞系统，其至少具有进行转录单位的转录反应的能力。此类系统是本领域中公知的并且包括细胞(通常实验室株系或者细胞系以及真核或者原核细胞的原代培养物)以及也可以通过商业途径得到的体外转录系统或者试剂盒(例如，基于细胞提取物)。

可以根据本领域中公知的技术进行系统中存在的mRNA的量的测定(例如，通过放射性或者荧光标记直接标记产物或者通过使用特异引物或者探针等检测产物)。

本发明的另一方面涉及鉴定在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将编码MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的核酸与物质在翻译活性系统中接触；

b.测定在所述物质存在下，所述系统中存在的MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的量；

c.测定不在所述物质存在下，所述系统中存在的MGC4504蛋白质、其衍生物或者片段的量；

d.测定该物质是否能够调节所述系统中存在的MGC4504蛋白质、衍生物或者片段的量。

其中认为能够调节并优选增加所述系统中存在的MGC4504蛋白质、衍生物或者片段的量的物质是在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

翻译活性系统是任何生物化学或者细胞系统，其至少具有进行转录物的翻译反应的能力。此类系统是本领域中公知的并且包括细胞(例如，通常实验室株系或者细胞系以及真核或者原核细胞的原代培养物)以及体外翻译系统(其也可以通过商业途径得到，如试剂盒)。对于多核苷酸的体外翻译，用合适的载体亚克隆多核苷酸，接着在合适的缓冲液和细胞提取物(例如，网织红细胞裂解物)中表达该多核苷酸。载体、必要的试剂和使用合适条件的方案是本领域中公知的并且可通过商业途径获得。

在本发明上下文中，术语“多肽”指包含通过肽键相互连接的氨基酸并且含有以线性方式相互连接的至少10个氨基酸的分子。该类型的较短的分子称作肽。术语“蛋白质”指包含至少一条多肽链的分子，但是也可以指包含相互连接或结合的两条或多条多肽链的分子。从而，术语“蛋白质”包含术语“多肽”。

所述系统中存在的MGC4504蛋白质的检测可以根据本领域中公知的技术进行(例如，直接放射或者荧光标记翻译物或者使用特异抗体、标记蛋白质并检测标记物，等等)。

a.提供用核酸载体转染的细胞，所述核酸载体包含有效连接到报道基因或者其功能片段的MGC4504启动子或者其功能片段；

b.提供用对照载体转染的细胞，该对照载体包含不有效连接到功能MGC4504启动子的报道基因或者其功能片段；

c.测定不在物质存在下，根据a)和b)的细胞的报道基因活性；

d.测定在所述物质存在下报道基因的活性；

其中认为能够显著增加根据a)的报道基因活性而不显著增加b)的报道基因活性(即能够特异增加MGC4504启动子活性)的物质是在预防或治疗与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

显著增加是高于标准差的任何增加，优选它是标准差的至少两倍。

本发明的上述方面是基于本领域中公知的典型的报道基因测定法。为此，以这样的方式将所选的启动子插入到适于所选宿主细胞类型的表达载体中，处于所选的报道基因的上游，使得如果启动子是有活性的，那么允许报道基因的表达。通常将构建体导入所选的宿主细胞。合适的转化或转染方法以及细胞培养条件和报道基因表达的检测是本领域中公知的(见例如，下面列出的标准文献)。合适的条件以及也可以通过商业途径获得的载体、报道基因和必要的试剂是本领域中公知的。

载体是环状或者线性多核苷酸分子，例如，DNA质粒、噬菌体或者粘粒，通过载体，可以将多核苷酸片段(例如，从其他载体切割出来或者通过PCR扩增并插入克隆载体中)可以在合适的细胞或者生物中特异扩增。表达载体使得目的基因(例如，报道基因)能够在宿主或者生物中异源表达。细胞或者生物的类型很大程度上取决于目的并且选择在技术人员的知识范围内。用于扩增核酸的合适的生物例如多数为具有高增殖速率的单细胞生物，例如，细菌或者酵母。合适的生物还可以是从多细胞组织分离和培养的细胞，例如，从不同的生物产生的细胞系(例如，来自草地夜蛾(Spodoptera Frugiperda)的SF9细胞，等等)。合适的克隆载体是本领域中已知的并且通常可以从不同的生物技术供应商象例如，RocheDiagnostics、New England Biolabs、Promega、Stratagene等等通过商业途径获得。合适的细胞系例如可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC)通过商业途径获得。

对于蛋白质或者多肽的异源表达，细胞可以是能够被核酸载体转染并且能够表达目的基因，如报道基因的任何原核或者真核细胞。这些主要包括原代细胞和来自细胞培养物的细胞，优选包含来自多细胞生物和组织(例如，HEK293、RIN-5F、HeLA、CHO、COS、SF9或3T3细胞)或单细胞生物如酵母(例如，栗酒裂殖酵母(S.pombe)或者酿酒酵母(S.cerevisiae)的细胞的真核细胞培养物，或者原核细胞培养物，优选毕赤酵母(Pichia)或者大肠杆菌(E.coli)。通过公知的技术，如抽血、组织穿刺或者手术技术可以从组织得到细胞和样品。

在本申请的上下文内，术语“转染”指向宿主细胞(原核或者真核)内导入核酸载体，并且从而包括术语“转化”。

转染可以是稳定的或者瞬时转染。

MGC4504启动子是MGC4504基因的部分，其如果导入表达合适的表达载体中基因产物的编码序列的上游，那么能够驱动目的基因产物的表达。优选地，MGC4504启动子包含或者由根据SEQ ID No.3/NCBI检索号AC020661序列的核苷酸84361-88681的序列组成[核苷酸84361-88681对应于核苷酸位置-4377/+1]。MGC4504启动子的功能片段是MGC4504启动子的任一片段，其如果导入合适的表达载体中处于基因产物的编码序列的上游，那么能够驱动目的基因产物的表达。优选的片段包含根据SEQID No.3的核苷酸84361-88681的MGC4504启动子的功能片段。

报道基因可以是允许容易定量其基因产物的任何基因。真核或原核宿主的多种报道基因以及检测方法和必要的试剂是本领域中已知的并且可通过商业途径获得。这些包括例如，β内酰胺酶(lacZ)、萤光素酶、绿色或蓝色荧光蛋白(GFP或BFP)、DsRed、HIS3、URA3、TRP1或LEU2或β半乳糖苷酶的基因。这些基因编码可以通过可见的(颜色或者发光)反应(例如，lacZ、萤光素酶)容易地检测的蛋白质。这些蛋白质包括通过可见的(颜色或者发光)反应容易检测的基因产物或者当表达时赋予对抗生素像氨苄青霉素或者卡那霉素抗性的基因产物。其他报道基因产物使得表达细胞能够在某些条件下表达，像例如营养缺陷型基因。

报道基因的功能片段是给定报导基因的任一片段，其允许容易定量其基因产物。

在本发明的上面方面的上下文中，对照载体可以是任何合适的载体，其包含报道基因或者其功能片段，但是其中报道基因表达不被(功能的)MGC4504启动子驱动。这可以例如指报道基因或者其功能片段不有效连接到功能的MGC4504启动子(即完全没有MGC4504启动子，包含非功能的MGC4504启动子或者启动子片段或者其中启动子和报道基因的偶联不是功能性的)。这还可以指报道基因或者其功能片段有效连接到不同于MGC4504启动子的另一启动子(例如，SV40或者另一标准启动子)。还可以将功能载体和对照载体转染到相同的细胞，但是在该情况中需要报道基因是不同的。

本发明的另一方面涉及检测MGC4504的手段用于诊断个体的分离的样品中与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者其导致的疾病或者疾病素因的用途。

该诊断可以例如包括

1.检测分离的样品中存在的MGC4504(蛋白质或者mRNA)的量；其中与参考样品相比降低的量表明该素因或者疾病。

2.检测分离的样品中存在的MGC4504的活性；其中与参考样品相比降低的活性表明该素因或者疾病。

3.检测MGC4504蛋白质/基因/编码序列/启动子等内导致MGC4504的降低的量或降低的活性或者功能失常的突变，其中该突变的检测表明该素因或者疾病。

其中参考样品可以例如是分离的样品，其具有MGC4504的平均活性或者量和/或供体的样品，该供体没有与糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者其导致的疾病或者疾病素因。

用于检测MGC4504的手段可以是能够特异检测生物样品中存在的MGC4504多肽/蛋白质或核酸的任何手段。

检测MGC4504蛋白质或者多肽的手段可以是能够特异检测野生型MGC4504蛋白质/多肽的任何手段并且还可以是特异检测在大小或者氨基酸序列方面与野生型多肽/蛋白质相比含有一个或多个突变的MGC4504蛋白质/多肽。这种手段的优选实例包括或者是能够特异检测MGC4504蛋白质，例如用于免疫组织学或者免疫组织化学技术的抗体(例如，检测组织学组织切片中MGC4504蛋白质或者其某些突变或者检测固定在合适的载体像膜、芯片、ELISA板等等上的MGC4504蛋白质)。

检测MGC4504核酸的手段可以例如是检测MGC4504mRNA/cDNA或基因组DNA的手段，所述MGC4504mRNA/cDNA或基因组DNA是野生型的或者在它们的长度或它们的核苷酸序列方面与野生型MGC4504核酸相比含有一个或多个突变。所述手段可以例如是特异检测和/或定量MGC4504mRNA并优选包含或者是特异MGC4504核酸探针或者能够扩增MGC4504DNA，或者例如用于PCR测序(用于检测核苷酸序列中的突变)或者能够扩增MGC4504cDNA，例如，用于RT-PCR(用于检测和/或定量MGC4504mRNA表达)的引物组。另一手段可以例如是核酸探针，其能够在标准条件下与MGC4504mRNA或cDNA特异杂交，例如用于RNA印迹或者芯片杂交技术。

术语野生型指在自然中或者在给定生物的标准实验室原种中发现的基因型或者表型。根据一个优选的实施方案，MGC4504的野生型序列是根据SEQ ID No.1、2、3或14的序列。

合适的引物的设计和合成是本领域中公知的(也见上文)。根据本发明的优选实施方案，该手段是用于扩增MGC4504核酸的引物组，优选包含根据SEQ ID No.8和/或9的至少一种引物的一组引物。

根据本发明的进一步优选的实施方案，该手段是用于检测MGC4504核酸的探针，优选具有根据SEQ ID No.10的序列的探针。合适探针的设计和合成是本领域中公知的(也见下面的标准文献)。

根据本发明的另一优选的实施方案，手段是用于特异检测MGC4504蛋白质或者多肽的抗体。合适的抗体或者其功能片段的制备是本领域中公知的，例如，通过用MGC4504蛋白质或者其片段，适当时在例如弗氏佐剂和/或氢氧化铝凝胶存在下(见例如Diamond，B.A.et al.(1981)The NewEngland Journal of Medicine：1344-1349)免疫哺乳动物，例如，兔。由于免疫反应在动物中形成的多克隆抗体可以随后用公知方法从血液分离并且例如，通过柱层析纯化。可以例如根据Winter&Milstein(Winter，G.&Milstein，C.(1991)Nature，349,293-299)的已知方法制备单克隆抗体。产生单克隆抗体的合适的方法也是本领域中公知的(见例如，下面列出的标准方法的文献)。在本发明上下文中，术语抗体或者抗体片段还包括抗体或者其抗原结合部分，其已经重组制备并且，适当时，经修饰，如嵌合抗体、人源化抗体、多功能抗体、双特异性或寡特异性抗体、单链抗体和F(ab)或F(ab)₂片段(见例如，EP-B1-0368684、US4,816,567、US4,816,397、WO88/01649、WO93/06213或WO98/24884)。

分离的样品包含从个体分离的任何种类的生物样品，例如，细胞、制备物、切片或者组织或器官(例如，肌肉、胰腺、脑、血液、肝脏、脾脏、肾、心脏、血管等等)的部分。通过公知的技术，如取血、组织穿刺或者手术技术可以得到分离的样品。细胞或者组织提取物的制备是本领域技术人员公知的(也见例如，下文列出的标准文献)。

本发明的另一方面涉及检测MGC4504的手段用于生产诊断试剂盒的用途，所述诊断试剂盒用于鉴定与糖类和/或脂类代谢功能失常有关或其引起的疾病或者疾病的素因。

本发明的另一方面涉及诊断糖类和/或脂类代谢功能失常有关的素因或功能失常的方法，包括分析个体的分离的样品中存在的MGC4504的量，其中与一种或多种参考样品相比降低的MGC4504量表明素因或者功能失常。

在本发明的不同方面的上下文中，个体可以是任何生物并且优选为哺乳动物，更优选为人。

MGC4504的量的分析可以是样品中存在的mRNA的量的分析，例如，通过RNA印迹分析、芯片分析(像cDNA微阵列)或者定量RT PCR。分析还可以是样品中存在的蛋白质量的分析，例如，通过使用特异抗体的技术，像ELISA、蛋白质印迹、芯片技术(像蛋白质微阵列)等等。

本发明的再一方面涉及诊断糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因的方法，其包括分析个体的分离的样品中MGC4504与MGC4504的参考序列相比的突变，其中突变的存在表明所述疾病或素因。

突变，即与最经常发现的基因型(也称作基因的野生型)的偏离是本领域中公知的。这些突变包括单核苷酸多态性(SNP，即给定核苷酸序列的在单个核苷酸位置上的交换产生的变异)、长度多态性、缺失、倒位等等。遗传突变可以影响基因表达或者蛋白质功能并且它们可以因此与某些疾病的发作和素因有关。由于发明人发现MGC4504与糖尿病潜在的病理过程有关，所以MGC4504基因的突变，特别是影响MGC4504表达和/或功能和/或活性的那些突变一定对糖类和/或脂类代谢功能有关或者引起的疾病具有高度影响。

可以根据用于检测MGC4504的任一种已知的方法，例如，通过使用上述检测样品中MGC4504的任一种手段进行诊断方法。突变可以例如在基因组水平上分析，例如，通过MGC4504基因的分子生物学分析(如DNA印迹、基因组测序技术、序列的质谱分析、DNA微阵列，等等)。突变还可以在表达的mRNA或者蛋白质水平上分析，例如，通过cDNA的测序(例如，鉴于RT PCR)或者通过蛋白质测序技术或者使用特异抗体。

参考样品可以是如上定义的样品。

参考序列可以例如是MGC4504野生型序列(见例如上文)和/或在没有上述疾病或其素因的多数个体中发现的MGC4504序列(在该情况中，参考序列还可以是不存在于群体的最大部分中的序列但是存在于没有上述疾病或其素因的群体的最大部分中的序列；在该情况中，野生型序列与发生所述疾病的升高的危险有关)。根据优选实施方案，参考序列是MGC4504的野生型序列之一(见上文)。

根据本发明所述方面的优选实施方案，突变可以是导致降低量的MGC4504和/或活性或者完全没有MGC4504和/或完全没有活性的突变。

本发明的另一方面涉及诊断糖类和/或脂类代谢功能失常或其素因的方法，并且包括分析分离的个体样品中存在的MGC4504的活性，其中与一种或多种参考样品相比，降低的MGC4504活性表明所述素因或功能失常。

所述活性可以是与如上定义的MGC4504的一种功能有关的任一蛋白质活性。活性可以直接或间接测量(例如，通过分析MGC4504的一种或多种功能的强度或者程度)。

本发明的另一方面涉及用于鉴定糖类或脂类代谢功能失常或引起的疾病或疾病素因的试剂盒，其包含至少一种用于检测MGC4504的手段。

在本发明的上下文中，将试剂盒(也称作“套药包”)理解为本申请中鉴定的一种或多种组分的任一组合，所述组分被组合、部分共存，成为功能单位，并且可以含有其他组分。

在本发明的上下文中，试剂盒包含用于检测MGC4504的至少一种手段，适宜地与合适的缓冲剂和/或用于检测MGC4504的试剂和/或样品制备物一起，和任选地用于进行各自的检测技术的使用手册。

手段可以是如上定义的任何手段，并且优选包含或者为特异MGC4504核酸探针或者能够扩增MGC4504核酸的引物组或者特异MGC4504抗体的引物组。

本发明的另一方面涉及调整药物以治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或引起的疾病的方法，其中对分离的个体样品分析与参考序列相比在MGC4504中的突变和/或与参考样品相比，MGC4504的降低的量和/或活性，其中如果在样品中存在MGC4504的突变和/或降低的量和/或活性，那么调整剂量。

药物的调整可以例如是调整可用于个体的药物类型，即例如，确定个体是否可以被施用物质(例如，激动剂、拮抗剂、肽模拟物、蛋白质、肽、核酸、小分子或者其他药物候选物)或者特定类别的物质(例如，直接增加MGC4504蛋白质活性的物质或者属于具有共同结构基序的化学化合物子集的物质)或者用所述物质有效治疗，以治疗或预防与糖类和/或脂类代谢功能失常有关或引起疾病。根据另一实例，药物的调整可以是调整给定药物/物质或者一类物质的剂量。

如通过筛选测定法鉴定的对MGC4504表达或者活性(例如，MGC4504基因表达)具有刺激或者抑制作用(和优选地刺激作用)的物质可以用于制备药物，该药物可用于治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或引起的疾病(例如，与表达MGC4504的细胞或组织有关，如与异常或者缺乏MGC4504活性有关的肌细胞有关的病症)。与此类治疗结合，可以考虑个体的药物基因组学(即，研究个体的基因型和个体对外来化合物或者药物的反应之间的关系)。治疗剂的代谢中的不同可以通过改变药学活性药物的剂量和血液浓度之间的关系引起严重的毒性或者治疗失败。从而，个体的药物基因组学允许基于个体基因型的考虑选择用于预防性或者治疗性治疗的有效物质(例如，药物)。此类药物基因组学可以进一步用于确定合适的剂量和治疗方案。因此，可以确定个体中MGC4504蛋白质的活性、MGC4504核酸的表达或者MGC4504基因中的突变含量，以选择用于治疗性或预防性治疗个体的合适的物质。

本发明的再一方面涉及MGC4504或者其功能片段或者衍生物或者包含MGC4504或者其功能片段或者衍生物的组合物用于生产治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的药物的用途。

本发明的其他方面涉及调节MGC4504活性的物质用于生产治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的药物的用途，和治疗患有糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的个体的方法，其包括对个体施用调节MGC4504活性的物质。

为此，MGC4504或者其片段或者衍生物可以以多肽或者肽或者寡核苷酸或多核苷酸的形式使用。可使用合适的修饰或者添加剂以确保或者促进它靶向需要的部位和它进入细胞或者它的稳定性。另一方面，局部应用，如皮下、真皮下或者肌内注射等等也可以确保它靶向需要的部位。其他有用的添加剂包括用于它的稳定性的盐、缓冲剂等等。

可以将MGC4504多核苷酸或者其功能片段或衍生物例如放入合适的载体，该载体确保它的细胞内表达或者它靶向细胞中。使用本领域中已知的细胞类型或者组织特异基因的合适的启动子/增强子，可以确保细胞类型特异表达。也可能使用MGC4504寡核苷酸。

为了产生药物，通常将活性成分用合适的添加剂或者辅助物质配制，如生理缓冲溶液，例如，氯化钠溶液、去矿质水、稳定剂，如蛋白酶或者核酸酶抑制剂、优选抑酶肽、ε-氨基己酸或者胃蛋白酶抑制剂A或者螯合剂，如EDTA、凝胶制剂，如白凡士林、低粘度石蜡和/或黄蜡，等等，这取决于施用类型。

合适的其他添加剂为例如去污剂，例如Triton X-100或脱氧胆酸钠，以及多元醇，如聚乙二醇或者甘油、糖，如蔗糖或葡萄糖、两性离子化合物，如氨基酸，如甘氨酸或者尤其牛磺酸或甜菜碱和/或蛋白质，如牛或者人血清白蛋白。优选去污剂、多元醇和/或两性离子化合物。

生理缓冲溶液优选具有约6.0-8.0的pH，优选约6.8-7.8的pH，尤其约7.4的pH，和/或约200-400毫渗摩尔/升，优选约290-310毫渗摩尔/升的摩尔渗透压浓度。通常使用合适的有机或无机缓冲剂调节药物的pH，如优选使用磷酸盐缓冲剂、tris缓冲剂(三(羟基甲基)氨基甲烷)、HEPES缓冲剂(([4-(2-羟基乙基)哌嗪子基]乙磺酸)或MOPS缓冲剂(3-吗啉代-1-丙磺酸)。各自缓冲剂的选择通常取决于希望的缓冲剂摩尔浓度。例如，磷酸盐缓冲剂适于注射和灌注溶液(也见Remington′s PharmaceuticalSciences，17^thEdition，1985(用于生理上耐受的盐(无机或有机的)，特别见p.1418)。

可以以任何合适的常规方式施用药物，例如，通过口服剂型，如片剂或胶囊剂，通过粘膜，例如，鼻或者口腔，以植入皮肤下的dispositories的形式，通过注射或灌注或者含有根据本发明的药物的凝胶剂的方式。还可以局部施用药物以便治疗如上述的具体疾病，如果合适，以脂质体复合物的形式施用。此外，可以通过经皮治疗系统(TTS)进行治疗，经皮治疗系统使得药物可以暂时控释。TTS可以从例如EP0944398A1、EP0916336A1、EP0889723A1或EP0852493A1知道。

施用应该以允许MGC4504靶向作用部位(例如，肌内、脑或胰腺组织)的方式合适地进行，例如，通过全身施用MGC4504衍生物或者制剂，其自身靶向需要的部位或者局部(例如肌内)应用含有MGC4504或者其片段或者衍生物的制剂。

如果仅将相对少量的溶液或混悬液，如约1到约20ml施用于身体，那么通常施用注射溶液。如果将施用较大量的溶液或者混悬液，如1升或更多，那么通常使用灌注溶液。因为与灌注溶液相比，注射溶液仅仅施用几毫升，所以注射中与血液或者组织液的pH和渗透压的小的差异不使得它们造成可察觉的痛觉或者痛觉程度无关重要。因此，在使用前稀释本发明的药物通常是不必要的。然而，对于施用相对大量的情况，应该在施用前快速稀释根据本发明的药物以至于得到至少近似等渗的溶液。等渗溶液的实例是0.9％强度的氯化钠溶液。对于灌注，可以例如，使用无菌水进行施用，而可以例如通过所称作的旁路进行施用。

本发明的另一方面涉及治疗患有糖类或者脂类代谢不良有关或者引起的疾病或者具有该疾病素因的个体的方法，其包括调节和优选增加MGC4504的量或活性。

该方法可以包括对需要其的个体施用有效量的MGC4504蛋白质或者核酸或者内源地增加MGC4504稳态水平(例如，通过应用能够增加需要部位处MGC4504的量的物质或者通过使用合适的载体进行体细胞基因治疗)。

本发明的另一方面涉及异源表达MGC4504的细胞鉴定在治疗或预防糖类或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。根据优选的实施方案，细胞是转基因细胞。

根据本发明的另一方面，异源表达MGC4504的转基因非人动物可以用于鉴定在治疗或预防糖类或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

转基因细胞/动物是除了它的正常的一组基因外还在其基因组中携带转基因的细胞/动物。转基因细胞和动物以及必要的载体构建体的产生是本领域中公知的(综述见例如，Gene targeting：A Practical Approach，2^nd Ed.，Joyner AL，ed.2000.IRL Press at Oxford University Press，New York；Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual.N agy，A，Gertsenstein，M.，Vintersten，K.，Behringer，R.，2003，Cold Spring HarborPress，New York；Transgenic Animal Technology：A LaboratoryHandbook，Pinkert CA，ed.，1994，Academic Press.，New York)并且它们的产生也作为商业服务由几家供应商提供(例如，The Jackson Laboratory，Bar Harbor，Maine，USA)。

根据本发明的不同方面，转基因可以是MGC4504或者其片段或衍生物，其有功能或者具有受损的或者消除的功能。

根据本发明的另一优选实施方案，使用与它的未修饰状态相比具有较低MGC4504活性的经修饰的细胞。这样，可以测试将测试的化学化合物是否能够增强或者恢复降低的或者完全消除的MGC4504活性。

修饰可以是任何类型的修饰(稳定的或者短暂的，优选稳定的)，其导致MGC4504活性的降低(即，它与其他分子相互作用的能力，它增加细胞的胰岛素敏感性的能力，等)、MGC4504转录物稳态水平(即，通过激活MGC4504转录或者转录物稳定化)或者MGC4504蛋白质稳态水平(即，通过激活MGC4504翻译或者它的翻译后加工；通过调节MGC4504翻译后修饰或者通过激活它的稳定性或者通过抑制它的降解)。这可以例如通过使用MGC4504的显性失活突变体、反义寡核苷酸、MGC4504的RNAi构建体、通过产生功能或者基因组MGC4504敲除(其可以例如是可诱导的)或者本领域现状内已知的其他合适的技术来实现。关于上述技术的综述，见例如：Current protocols in Molecular biology(2000)J.G.Seidman，Chapter23，Supplement52，John Wiley and Sons，Inc.；GeneTargeting：a practical approach(1995)，Editor：A.L.Joyner，IRL Press；Genetic Manipulation of Receptor Expression and Function，2000；Antisense Therapeutics，1996；Scherr et al，2003。

本发明的另一方面涉及MGC4504敲除细胞或者非人敲除动物用于鉴定在治疗或预防糖类或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。敲除可以是基因组敲除或者功能敲除。用于产生敲除的合适的细胞系是本领域中公知的并且产生敲除的方案包括例如Currentprotocols in Molecular Biology(2000)J.G.Seidman，Chapter23，Supplement52，John Wiley and Sons，Inc；or Gene targeting：A PracticalApproach，2^nd Ed.，Joyner AL，ed.2000.IRL Press at Oxford UniversityPress，New York；Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual.Nagy，A，Gertsenstein，M.，Vintersten，K.，Behringer，R.，2003，Cold SpringHarbor Press，New York中公开的那些方案。此外，目的基因的敲除作为服务由供应商提供(例如The Jackson Laboratory，Bar Harbor，Maine，USA)。

本发明的另一方面涉及基于根据上面新方法之一的方法的高通量筛选，其用于鉴定活性物质(此类方法也称作“测定法”)。

用于测量确定的靶分子(所称作的靶标，通常为蛋白质或核酸)的活性或者浓度作为潜在的药物化合物的有效性参数的分析方法或者分析系统，也称作测定法，是本领域中公知的。测定法包括例如，生物化学分析方法或者系统，其使用分离的或者部分分离的组分，它们一起放入确定的空间和时间内的反应混合物中，其中可以测试潜在的药物化合物的有效性。测定法的其他实例包括生物化学分析方法或系统，其中可以测定细胞内靶分子的活性和潜在影响该活性的有效性。

测定法可以是用于监视生物过程的任一类型的分析方法或系统(例如，上面的分析方法)。适当时，代表生理代谢途径而且也代表生理状况的部分的分子级联和机制在细胞或生物化学(体外)系统中再现。从而，潜在的药物化合物的药理学活性可以根据它干扰或者调节这些级联或机理的能力来确定。

对于用于药物筛选，特别是新的药物化合物的高通量筛选，测定法需要可以再现并且它优选还是规模可调节和稳定的。在本发明的范围内，高通量筛选指本发明的方法以非常小的规模进行，例如，在96、386或1536孔板上用几毫升到几纳升或者甚至更小范围内的极小体积的样品进行。从而，可以在短时间内分析非常大量的样品。高通量筛选通常包括通过单次测定法筛选高达约500,000种不同化合物的某种能力。该测定法优选适于高通量筛选化学物质调节所研究的靶分子的活性的能力。测定法的类型取决于例如使用的靶分子的类型(例如，多肽或多核苷酸)和“读出”，即，据此可以确定靶分子活性的参数(见下文)。

不同类型的测定法是本领域中公知的并且可以从供应商商购。

用于不同目的的合适的测定法包括放射性同位素的或者荧光测定法，例如，荧光偏振测定法(用于测量标记的成员与非标记的成员的相互作用(例如，经标记的蛋白质受体与它们的未标记的配体的相互作用))。

更多实例包括基于细胞的测定法，其中细胞系稳定(可诱导或不可诱导的；染色体的或附加体的)或者暂时表达目的重组蛋白。这些测定法包括例如，报道基因测定法，其中根据报道酶的活性测量信号转导级联成员的某个启动子或者信号转导途径的调节，所述报道酶的表达处于所述某个启动子的控制下。对于该类型的测定法，必须构建重组细胞系，其含有处于确定的启动子控制下的报道基因，所述启动子将自身被研究或者受到将研究的信号级联的调节。合适的报道酶是本领域中公知的并且包括不同类型的萤光素酶或者β-半乳糖苷酶。合适的细胞系取决于测定的目的但是包括容易转染和容易培养的多数细胞系，如HEK293、HeLA、COS、CHO、NIH-3T3等等。

用于测量细胞内离子水平的测定法包括例如，FLIPR(荧光成像平板读出器，可从Molecular Devices商购)，其中与冷却的CCD照像机组合的氩激光器光源允许平行测量384孔板中细胞(例如，神经元细胞或者其他细胞(例如，重组或天然表达某些离子通道的细胞))内的瞬时离子信号(如Ca²⁺，等等)。FLIPR测定法允许例如使用某些荧光染料监视细胞内的钙或者检测膜电位改变或者使用特定FLIPR测定试剂盒监视膜极化。为了监视其他细胞内离子，例如，锌或者钠，可以使用本领域中公知的其他染料。其他类型的测定法和其他类型的读出是本领域技术人员公知的。

为了测量cAMP水平，例如，ALPHAScreen^TM、荧光偏振或者HTRF技术是合适的。

为了测定离子通道活性(其控制例如细胞内离子浓度并且从而可以用于测量细胞内离子浓度)，例如，可以使用膜电位灵敏的测定法和染料。

对于测量GPCR活性，例如，cAMP测量，例如，通过PackardBioscience的AlphaScreen^TM cAMP检测系统、Ca²⁺动员测定法或者报道基因测定法是合适的。

对于测定蛋白质磷酸化，例如，激酶活性、荧光偏振测定法是合适的，例如，可从Panvera商购；此外，可以应用HTRF(均相时间解析荧光，CisBio)、LANCE测定法(Perkin Elmer Life Science)或放大的发光近似均相测定法(Packard BioScience的ALPHAScreen^TM)。其他类型的测定法和其他类型的“读出”是本领域中公知的。

根据本发明不同方面的一个优选实施方案，可以将MGC4504、其衍生物或者片段用作分离的分子。

在本发明的上下文中，特别关于MGC4504的术语“分离的分子”指从天然来源纯化的MGC4504多核苷酸或多肽，以及纯化的重组分子(其中术语纯化的包括部分纯化以及完全纯化)。

重组多肽或多核苷酸的制备和天然存在的分子从细胞或组织的纯化，以及细胞或组织提取物的制备是本领域技术人员公知的(也见例如下文列出的标准文献)。

这些包括例如，通过聚合酶链式反应(PCR)基于公布的基因组或者编码多核苷酸序列扩增目的长度的多核苷酸并随后在宿主细胞中克隆产生的多核苷酸(也见例如下文列出的标准文献)。

PCR是体外技术，其能够特异扩增在它们的5’和3’附近具有已知序列的一段核苷酸序列的一段序列。为了扩增所选的序列，使用短的单链DNA分子(“引物”)，其与围绕待扩增的多核苷酸序列的一段序列互补。多核苷酸模板可以是DNA或RNA。通过选择以确定温度和确定的时间间隔进行的温育步骤的确定序列，将所述步骤周期地重复，成指数扩增目的多核苷酸。

通过根据公知方案的化学合成可以产生合适的引物。此类引物也可以从不同供应商如MWG Biotech等购买。

通过公知的标准程序可以产生DNA和RNA模板，以及cDNA模板(如通过克隆载体克隆DNA模板；从培养的细胞、组织等等制备基因组DNA或者RNA或者从此类RNA的来源制备cDNA等等，见例如下面的标准文献)，并且它们也可以从供应商如Promega和Stratagene等购买。合适的缓冲液和酶以及用于进行PCR的反应方案是本领域中公知的和可以商购的。可以通过已知的方法(例如，凝胶纯化或者柱纯化)纯化反应产物。

另一种产生分离的多核苷酸的方法是通过标准方法克隆希望的序列和它的随后的完全或部分纯化。为了产生分离的多肽，将多核苷酸克隆到表达载体中并在合适的宿主生物，优选在单细胞生物，像合适的细菌或酵母菌株中表达，接着完全或部分纯化该多肽。

根据本发明的方法例如可以作为生物化学或者细胞测定法进行。

MGC4504可以来自任一可以得到的序列，其允许它的根据本发明不同方面之一的特定目的。优选地，MGC4504是人MGC4504。

根据一个优选实施方案，MGC4504用作多核苷酸。优选地，多核苷酸包含或者组成为：

a.SEQ ID No.1；

b.在低、中或者高严格条件下能够与根据a)的序列杂交并且编码具有MGC4504功能的多肽的序列；

c.由于遗传密码简并性来自根据a)或者b)的序列并且编码具有MGC4504功能的多肽的序列；

d.根据a)、b)或者c)的序列之一的片段，其编码具有MGC4504功能的多肽；和编码包含或组成为根据SEQ ID No.2的序列的多肽；

e.通过交换一个或多个核苷酸来自a)、b)、c)或者d)的序列之一的序列，其中核苷酸交换不是或者不是仅仅由于遗传密码简并性，该序列并且编码具有MGC4504功能的多肽。

优选的多核苷酸片段是根据SEQ ID No.14的片段。

术语“严格性”描述反应条件，其影响两个单链核苷酸分子的杂交或者退火的特异性。

当单链形式的两种分子可以在合适的反应(“退火”或杂交)条件下退火(取决于周围介质的温度和离子强度)形成新的双链核酸分子时，核酸分子可以与另一核酸分子杂交。杂交需要两个退火的核酸分子包含互补序列。取决于所选的退火条件、严格性条件，碱基之间不阻碍双链形成的错配是可能的。

从而，反应的严格性和特异性取决于用于反应的温度和缓冲液条件：严格性，从而特异性可以例如通过升高反应温度和/或通过降低反应缓冲液的离子强度来增加。核酸杂交的合适的严格性条件取决于核酸的长度、类型和它们的互补性程度。变量是本领域中公知的。两个退火核苷酸序列之间的相似性或者同源性程度越高，核酸与那些序列的杂交产物的解链温度越高。核酸杂交的相对稳定性依赖于形成双链的单链核酸的类型：RNA：RNA>DNA：RNA>DNA：DNA。对于长度超过100个核苷酸的杂交产物，用于计算解链温度的等式是本领域中已知的。对于较短的杂交产物(例如，寡核苷酸)，解链温度的计算依赖于长度，其中错配变得更重要。

例如，如果在室温下2xSSC溶液中进行杂交，那么存在低严格性(从而低反应和杂交特异性)条件。高严格性条件包括例如，在68℃0.1xSSC和0.1％SDS溶液中的杂交反应。

在本发明的上下文中，术语“在严格条件下杂交”指进行杂交反应和下面的洗涤步骤的条件，在该条件下，具有至少50、55、60、65、70和优选75％或更高互补性的核苷酸序列通常保持杂交。给定一组核酸的此类条件的选择在普通技术人员技术范围内，合适的方案可以见标准方法的公知的文献，像例如，“Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1到6.3.6(也见下文列出的文献)。

本发明不同方面内严格性条件下的杂交优选被理解为：

1)经标记的探针与将分析的核酸样品在65℃，或者对于寡核苷酸探针，在由寡核苷酸和样品组成的双链体的退火或解链温度以下5℃(退火温度和解链温度在下文中理解为同义的)在50mM Tris pH7.5，1M NaCl，1％SDS，10％硫酸葡聚糖，0.5mg/ml变性鲑精或者鲱精DNA中过夜杂交。

2)在2xSSC中室温下洗涤10分钟。

3)在1xSSC/0.1％SDS中65℃下(或者对于寡核苷酸：低于解链温度5℃下)洗涤30分钟。

4)在0.1xSSC/0.1％SDS中65℃下(或者对于寡核苷酸：低于解链温度5℃下)洗涤30分钟。

寡核苷酸是多核苷酸并且优选具有15到30、优选20个核苷酸长度的DNA片段。根据下式确定退火温度：Tm＝2x(A+T数)+4x(G+C数)℃。

为了制备2xSSC或0.1xSSC(或者任何其他类型的SSC稀释液)，例如，因此稀释20xSSC溶液。20x SSC由3M NaCl/0.3M柠檬酸钠x2H₂O组成。

在进行杂交反应前，如果在进行电泳分离(然后：DNA印迹(DNA)或者RNA印迹(RNA))后希望或者不进行电泳分离(然后狭线或者点印迹)，将多核苷酸转移到合适的膜，例如，尼龙或者硝酸纤维素膜。使用合适的经标记探针进行杂交。合适的标记技术是例如，放射性标记或者使用荧光染料标记。探针是单链的多核糖核苷酸或者多脱氧核糖核苷酸，其天然为单链的或者通常是双链的并且已经通过变性使得成为单链。该探针通过碱基配对结合DNA或者RNA样品(其也是单链状态)。

根据本发明的不同方面的优选实施方案，严格性条件是高严格性条件。

根据另一实施方案，将MGC4504用作多肽。优选地，通过下面序列之一编码多肽：

a.SEQ ID No.1；

b.在低、中或者高严格条件下与根据a)的序列杂交并且编码具有MGC4504功能的多肽的序列；

d.根据a)、b)或者c)序列之一的片段，其编码具有MGC4504功能的多肽；

根据再一个优选的实施方案，多肽包含或者组成为根据SEQ ID No2的序列。

糖类或者脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病优选为葡萄糖代谢的功能失常、肥胖症、血脂异常或者代谢综合征或者糖尿病或者胰岛素作用的任何其他功能失常，更优选1型或2型糖尿病或者抗胰岛素性。

下文中，通过不同的实施例更详细地描述本发明，本发明不意在受到这些实施例的限制。

附图说明：

表1：瘦胰岛素敏感对照和肥胖抗胰岛素性或糖尿病ZDF大鼠的合并的一式两份中MGC4504基因表达的Affymetrix Gene Chip_分析。

表2：来自瘦胰岛素敏感对照和肥胖抗胰岛素性或糖尿病ZDF大鼠的RNA样品的定量实时PCR。

表3：2型糖尿病的饮食诱导的模型中MGC4504基因表达的Affymetrix Gene Chip_分析。

图1：不同人组织的所选的子集中MGC4504基因表达水平。

图2：L6GLUT4myc成肌细胞中HA-MGC4504的稳定表达。

图3：瞬时转染的L6GLUT4myc(图3A)和RIN-5F(图3B)细胞的细胞质和细胞核中MGC4504的亚细胞分布。

图4：

图4A：L6GLUT4myc HA-MCG4504细胞的2-脱氧葡萄糖摄入测定法和增加的胰岛素敏感性。

图4B：RIN-5F HA-MGC4504细胞的胰岛素分泌测定法和增加的基础的和葡萄糖刺激的胰岛素分泌。

图5：可溶性GST-MGC4504蛋白质表达和纯化期间收获的不同样品的考马斯染色。

图6：

图6A：瞬时96孔形式的双萤光素酶报道基因测定中不同细胞系中MGC45045’-UTR位-4311/+1的活性。

图6B：通过测定瞬时96孔形式的双萤光素酶报道基因测定中HEK293细胞中不同截短的启动子片段，实验确定MGC45045’-UTR位-4311/+1内MGC4504核心启动子。

图7：人MGC4504的编码序列(SEQ ID No.1)。

图8：人MGC4504的推导的氨基酸序列(SEQ ID No.2)。

图9：人MGC4504的基因组序列(SEQ ID No.3)。

图10：大鼠MGC4504mRNA的特异扩增的引物(SEQ ID No.4和5)。

图11：大鼠β肌动蛋白mRNA的特异扩增的引物(SEQ ID No.6和7)。

图12：人MGC4504mRNA的特异扩增的引物(SEQ ID No.8和9)和人MGC4504mRNA的特异杂交的探针(SEQ ID No.10)。

图13：用于从eDNA克隆人MGC4504ORF的引物(SEQ ID No.11到13)。

图14：人MGC4504cDNA序列的包含编码序列的片段(SEQ IDNo.14)。

实施例：

实施例1：抗胰岛素性和2型糖尿病的体内模型中MGC4504的基因表达

材料和方法

动物和样品制备：

年龄匹配组的肥胖雄性Zucker糖尿病脂肪(ZDF)大鼠(Gmi，fa/fa)和它们的瘦幼鼠(Gmi，+/？)从Genetic Models购买。将大鼠在20℃和12小时光暗周期下成对喂养，到达时无限制地获得水和含有4％脂肪、64％糖类和19％蛋白质的标准大鼠饮食(Altromin，Germany)一周，以允许从运输中恢复。所有实验步骤都按照德国动物保护法(German Animal ProtectionLaw)进行。2小时饥饿后，在异氟醚麻醉下抽取血样并通过颈脱位法处死动物。用于基因表达分析的动物总数为34只动物(6周龄[n＝12只动物]，7周龄[n＝12只动物]和12周龄[n＝10只动物])。快速切除组织探针并在液氮中快速冷冻并在-80℃保存。

Affymetrix Gene Chip_分析：

用于基因表达监测的寡核苷酸阵列的一般用途已经在US6,177,248中描述。在我们的实际应用中，使用的微阵列含有脱氧核苷酸序列，其代表约8000种已知的基因或者EST簇。每种基因或者EST序列由高达20对寡核苷酸代表，每对由与转录物的区段匹配的寡核苷酸和含有位于中心的1bp错配的对照寡核苷酸组成。对于大鼠，3个阵列(RG U34A、RG U34B和RG U34C)代表总共约24000个基因和EST序列，它们来自已知基因的数据库，或者由Affymetrix，Santa Clara，CA，US提供EST序列。将150mg骨骼肌探针(M.gluteus maximus)在Qiagen RLT缓冲液中用UtraTurrax匀浆器(Janke and Kunkel IKA Labortechnik)裂解。用Qiagen RNeasy试剂盒从组织裂解物分离总RNA，包括如生产商(Qiagen)推荐的蛋白酶K消化、DNA酶消化和额外的RNeasy清除步骤。使用SuperScript SSII RT聚合酶系统(Invitrogen)和连接T7RNA聚合酶启动子和寡(脱氧胸苷)24的T7(dT)24引物，用10μg每种总RNA进行第一和第二链cDNA合成。将双链cDNA用苯酚-氯仿萃取，然后乙醇沉淀，并重悬浮在12μl无RNA酶的水中。使用Enzo BioArray High Yield RNA Transcript Labelling Kit(Enzo Diagnostics)在体外转录生物素-UPT和-CTP标记的cDNA并通过RNeasy清除和乙醇沉淀纯化。通过UV-分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和BioAnalyzer RNA芯片(Agilent)进行每次纯化步骤之前和之后监视每种总的RNA和cDNA的等分试样。将15μg cRNA样品在94℃在40mM Tris/乙酸盐pH8.1，100mM KOAc和30mM MgOAc中断裂35分钟，加入杂交缓冲液并与Affymetrix GeneChips_RG-U34A、B和C微阵列在45℃和60rpm下杂交16小时。洗涤微阵列并根据Affymetrix描述的方法，用链霉抗生物素蛋白-藻红蛋白缀合物(Molecular Probes)、抗-链霉抗生物素蛋白抗体双染并再次用链霉抗生物素蛋白-藻红蛋白缀合物染色以增强信号强度。洗涤后，用具有Micro array Suite Version4.0软件的共焦GeneArray Scanner(HP)分析微阵列。根据Affymetrix质量标准进行每个芯片的质量控制，所述标准包括平均数平均差异、原始强度和管家基因β肌动蛋白和GAPDH的3’/5’比率。使用内部的软件工具(GECKO2)分析表达序型数据，所述工具对所有微阵列进行总体归一化，为每组使用参考芯片和中位数的75百分位数。确定差别表达的基因的标准是表达水平的改变高于2倍和p值<0.05。使用Affymetrix qualifier RC_AI170665_AT在RGU-34A上分析瘦胰岛素敏感对照和肥胖抗胰岛素性(或者已经是糖尿病的，如12周龄组)ZDF大鼠的所有合并的一式两份之间MGC4504基因表达的倍数改变。这些分析的结果在表1中总结。

在肥胖的抗胰岛素性和糖尿病ZDF大鼠中，与瘦的胰岛素敏感对照相比，通过从骨骼肌活组织检查分离的RNA的Affymetrix基因芯片分析可以检测MGC4504基因表达的显著较低的水平。这表明抗胰岛素性和2型糖尿病与MGC4504降低的基因表达水平有关。

定量实时PCR：

将从6和7周龄组(n＝24只动物)的每只大鼠分离的1μg总RNA用AMV-RT第一链cDNA合成试剂盒(Roche)在20μl反应体积中反转录。2μl反转录的单链cDNA用作LightCycler_(Roche)中的扩增模板，根据生产商的使用说明，使用FastStart DNA Master Sybr Green(Roche)。使用的引物为：

5′-ACTTCGCCTCCTTCTCTGCTCTCC-3′(SEQ ID No.4，5`大鼠MGC4504)和5′-GGCCCTGCTAATCCCACACTACC-3′(SEQ ID No.5，3`大鼠MGC4504)，5′-AAGTCCCTCACCCTCCCAAAAG-3′(SEQ IDNo.6，5`大鼠β肌动蛋白)和5′-CCTCAACACCTCAAACCACTCC-3′(SEQ ID No.7，3`大鼠β肌动蛋白)。通过琼脂糖凝胶电泳监视所得片段的正确大小(分别为156和268个碱基对)。使用各自扩增片段的浓度标准曲线计算总RNA含量，对管家基因β肌动蛋白的表达水平归一化并在表2中概述为瘦胰岛素敏感对照和肥胖的抗胰岛素性ZDF大鼠之间MGC4504的基因表达的倍数改变。

在肥胖的抗胰岛素性和糖尿病ZDF大鼠中，与瘦的胰岛素敏感对照相比，通过从骨骼肌活组织检查分离的RNA的定量实时PCR分析可以检测MGC4504基因表达水平的显著较低的水平。这表明抗胰岛素性和2型糖尿病与MGC4504的降低的基因表达水平有关。

实施例2：

人组织中MGC4504的基因表达

材料和方法

人组织中MGC4504基因表达的TaqMan分析：

通过TaqMan分析确定多种人组织中MGC4504表达水平，该分析使用引物5’-GGCAGGGAGACACCTTCCAT-3’(5`人MGC4504，SEQ IDNo.8)和5’-TGCAGCCCTCATGATCTTCA-3’(3`人MGC4504，SEQID No.9)和探针5’-GCTGCCCCGATGGAA-3’(SEQ ID No.10)。所有值都对人β-2-微球蛋白表达水平归一化以为相等的负荷标准化。图1总结了测试的不同人组织的所选子集中MGC4504基因表达水平。

TaqMan分析揭示在脑、骨骼肌、胰腺和肾脏的不同部分中检测到最高的MGC4504表达。这表明MGC4504表达几乎局限于肌肉和胰腺。

实施例3：

MGC4504过表达对葡萄糖代谢和胰岛素分泌的影响

材料和方法

克隆和质粒：

使用5’-引物MGC4504-5’：5′-CGGGATCCCGCATGAAGCAGGAGTCTGCAGCC-3′(SEQIDNo.11)或HA-MGC4504-5’：5′-CGGGATCCCGCATGTACCCATACGACGTCCCAGACTACGCTATGAAGCAGGAGTCTGCAGCC-3′(SEQ ID No.12)和MGC4504-3’-STOP：5′-CCGGAATTCCGGTCACACCAGCGCCAGAGCCTG-3′(SEQ IDNo.13)，通过PCR从人骨骼肌cDNA扩增人MGC4504的完整ORF。后一5’引物导入编码氨基末端框内HA-表位标签的序列。将所得片段通过BamHI/EcoRI或通过BamHI(5’)和平末端的(3’)EcoRI(插入片段)和NotI(载体)位点克隆到pGEX-6P1和pcDNA3.1(+)hygro载体(Invitrogen)以分别得到pGEX-6P1MGC4504或pcDNA3.1(+)hygroHA-MGC4054。通过测序证实所有构建体的身份。

细胞培养物、转染和免疫荧光：

表达myc表位标记的GLUT4的大鼠L6GLUT4myc成肌细胞是A.Klip(The Hospital for Sick Children，Toronto，Ontario，Canada)的友情赠送物。将L6(ATCC#：CRL-1458)和L6GLUT4myc保持在补充10％FCS金(PAA，A15-609)、青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)的具有Glutamax的α-MEM(Gibco#32571)中。将L6GLUT4myc培养基额外补充2μg/ml杀稻瘟素(Calbiochem#203350)以选择GLUT4myc表达。将RIN-5F大鼠胰岛素瘤细胞(ATCC#：CRL-2058)保持在补充10％FCS金(PAA，#A15-609)、青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)和1mM丙酮酸钠(Gibco#11360-039)的具有HEPES/L-谷氨酰胺/NaHCO₃的RPMI1640(GIBCO#52400-025)中。将HEK293细胞(ATCC#：CRL-1573)保持在补充10％FCS金(PAA，A15-609)、青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)和1mM L-谷氨酰胺(Gibco#25030-032)的DMEM(GIBCO#41965-039)中。所有细胞系培养在37℃5％CO₂和95％湿度下并每周传代两次。用在6孔板中生长到60％汇合的L6GLUT4myc或RIN-5F细胞、2.5μg质粒DNA和Fugene6试剂(Roche)如生产商推荐的进行用于研究蛋白质表达的转染。在所有瞬时转染或者稳定转染的细胞克隆中，空的pcDNA3.1(+)hygro载体用作阴性对照(称作WT细胞)。用500μg/ml潮霉素B选择稳定的细胞克隆，手工挑选抗性单个细胞克隆并扩大。通过SDS-PAGE和蛋白质印迹(NuPAGE，Invitrogen)，使用抗-HA3F10单克隆抗体(Roche)和抗大鼠辣根过氧化物酶二级抗体和ECL化学发光检测(Amersham)测定HA-MGC4504表达水平。如所述的(Voss et al，2001)，使用稳定的L6GLUT4myc或RIN-5F HA-MGC4504细胞或者用pcDNA3.1(+)HA-MGC4504转染的、在盖玻片上生长到70％汇合的L6GLUT4myc或RIN-5F细胞进行免疫荧光测定法。使用抗HA3F10抗体(Roche)和抗大鼠alexa fluor 488抗体(Molecular Probes)监视HA-MGC4504表达。用PBS中的1μM ToPro碘化物(Molecular Probes)对细胞核显色。用LeicaTCS SP2共焦激光扫描激光显微镜取共焦图像。图2显示了L6GLUT4myc成肌细胞中HA-MGC4504的稳定表达。图3显示了瞬时转染的L6GLUT4myc(图3A)和RIN-5F(图3B)细胞的细胞质和细胞核中MGC4504的亚细胞分布。

MGC4504cDNA可以容易地转染并且HA表位标记的MGC4504蛋白质可以在大鼠成肌细胞和胰岛素瘤细胞中表达，其中它定位于细胞质中并且在细胞核中显著。

2-脱氧葡萄糖摄入和胰岛素分泌的分析：

将L6GLUT4myc细胞或L6GLUT4myc HA-MGC4504和WT细胞克隆以4.0x10⁴个存活细胞/孔接种在96孔Cytostar-T^TM闪烁微量培养板(Amersham)中。32小时后，用补充2％新生小牛血清(PAA)和青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)的α-MEM对细胞血清饥饿16小时。为了分析葡萄糖摄入，将细胞用Krebs-Ringer缓冲液pH7.3(KRB)洗涤两次，并用KRB中给定的胰岛素浓度温育25分钟。加入¹⁴C 2-脱氧葡萄糖(0.3μCi/孔)并将细胞以每孔150μl的总体积继续温育25分钟。通过加入40μM细胞松弛素B停止摄入，密封并用Wallac micro beta计数器(Perkin Elmer)测量闪烁。通过将对照孔与20μM细胞松弛素B温育并从每个值扣除来确定非特异摄入。为了监视胰岛素分泌，将RIN-5F细胞或RIN-5FHA-MGC4504和WT细胞克隆接种在12孔板中并生长24小时。用补充25新生胎牛血清(PAA)和抗生素(青霉素/链霉素)的α-MEM血清饥饿16小时后，用KRB洗涤细胞两次并用含有不同量葡萄糖(0-20mM)的KRB温育2小时。根据生产商的方案使用大鼠胰岛素ELISA(Mercodia)测定上清液的胰岛素含量并进一步裂解细胞以测定蛋白质含量，从而确保可比较的负荷。图4A显示了典型的2-脱氧葡萄糖摄入测定和L6GLUT4mycHA-MCG4504细胞的增加的胰岛素敏感性。图4B显示了典型的胰岛素分泌测定和RIN-5F HA-MGC4504细胞的增加的基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌。这些结果表明MGC4504表达与胰岛素敏感性和葡萄糖处理以及胰岛素分泌关联，因为MGC4504的过表达导致增强的胰岛素敏感性和肌细胞系中胰岛素刺激的葡萄糖摄入增加以及胰岛素瘤细胞系中葡萄糖刺激的胰岛素分泌增强。

实施例4：

可溶性重组MGC4504融合蛋白的重组表达

将大肠杆菌菌株BL21DE3细菌(Invitrogen)用pGEX-6P1空载体或者pGEX-6P1MGC4504转化并在LB中生长，在OD₆₀₀为0.6时用0.1mMIPTG诱导并生长4小时。裂解细胞并通过GST-亲和层析，根据Amersham的GST-微量旋转柱标准方案纯化，并通过SDS-PAGE和使用抗-GST抗体(Amersham)通过蛋白质印迹监视GST和GST-MGC4504蛋白质的表达。图5显示了可溶性GST-MGC4504蛋白质的不同的表达和纯化步骤，表明重组的可溶性MGC4504蛋白质可以在大肠杆菌表达系统中容易地得到。

实施例5：

用于确定调节MGC4504表达的化合物的服从HST的测定法

材料和方法：

通过PCR扩增包含核苷酸-4311到+1(相对于转录起始：(基因组序列AC020661中nts84361-88681)的人MGC4504的5’-UTR并通过XhoI和BglII克隆到pGL3neo basic中，得到pGL3neo basic MGC4504-4311/+1。通过用BfrBI、XhoI或AvrII消化pGL3neo basic MGC4504-4311/+1，随后klenow平末端化和BglII消化，产生进一步截短的构建体。将得到的片段连接到KpnI消化的、Klenow平末端化的和随后BglII消化的pGL3neobasic载体中，以得到pGL3neo basic MGC4504-1944/+1、-847/+1和-546/+1质粒。通过测序证实所有构建体的身份。RIN-5F大鼠胰岛素瘤细胞保持在具有HEPES/L-谷氨酰胺/NaHCO₃的RPMI1640(GIBCO#52400-025)中，其补充10％FCS金，(PAA，#A15-609)、青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)和1mM丙酮酸钠(Gibco#11360-039)。将HEK293细胞保持在补充10％FCS金(PAA，A15-609)、青霉素/链霉素溶液(PAA#P11-010)和1mM L-谷氨酰胺(Gibco#25030-032)的DMEM(GIBCO#41965-039)中。所有细胞系都在37℃5％CO₂中和95％湿度下培养并每周传代两次。将RIN-5F细胞用作为载体的1ng pCMV-RL(Promega)和0.4ngpBluescript-SK+(Stratagene)和不同量的pGL3.1neo basic空载体或者启动子构建体pGL3.1neo basic MGC4504-5’-UTR-4311/+1、-1944/+1、-847/+1或-546/+1通过使用Fugene6(Roche)在96孔微量滴定板(CorningCostar#3610)瞬时转染。通过使用Polyfect(Qiagen)转染HEK细胞。根据生产商的方案进行转染。将pGL3.1neo basic构建体的浓度优化到10ng(HEK)和40ng(RIN5F)质粒/孔以得到最大报道子活性。使用QiagenEndofree MaxiPrep试剂盒根据生产商方案分离用于转染的所有质粒。48小时后，裂解细胞，根据生产商的方案(Promega Dual-luciferase System)通过用Wallac microbeta计数器(Perkin Elmer)测量各自的活性测定萤火虫和renilla萤光素酶活性。将萤火虫萤光素酶值对renilla萤光素酶活性归一化并作为相对于空的pGL3.1neo basic对照的倍数诱导作图。用pGL3.1neo basic MGC4504-5’-UTR-4311/+1产生稳定的HEK293细胞系并用500μg/ml遗传霉素(Gibco)选择并对阳性克隆选择萤光素酶活性。将所得的HEK MGC45045’-UTR-4311/+1细胞接种在96-孔微量滴定板(Corning Costar#3610)中并生长24小时。将化合物用DMSO溶解到10mM的浓度并用补充2％Ultroser(#12039-012，Biosepra)、1％青霉素-链霉素溶液(#15140-122，Invitrogen)和2mM L-谷氨酰胺(#25030-024，Invitrogen)的DMEM培养基(#41965-039，Invitrogen)稀释到各自的工作浓度(10μM到100pM)。为了测定能够调节MGC4504启动子构建体的启动子/转录活性的化合物，从细胞吸出培养基并可以直接加入例如含有各自稀释的化合物的100μl培养基。例如培养48小时后，可以如上述测定萤火虫萤光素酶活性。可以将原始数据转移到excel文件中并对每孔测定萤火虫/renilla活性比率。可以根据生产商的方案(IDBS)用XL-Fit确定剂量/活性关系。图6显示了在瞬时96孔形式的双萤光素酶报道基因测定中不同细胞系中MGC45045’-UTR位置-4311/+1的活性。这些结果表明可以以服从HTS的报道基因测定法测定MGC4504启动子活性，在细胞系中给出足够的信噪比，其反映MGC4504的天然存在的表达模式。

此外，MGC4504必要的最小启动子包含在MGC45045’-UTR位置-546/+1内。

实施例6：

用于测试物质积极影响/刺激MGC4504蛋白质活性的假定的服从HTS的测定法

为了测定MGC4504蛋白质活性，根据本发明的一种方法可以用仅仅弱表达(内源或异源地)MGC4504并且具有弱的或者中等胰岛素敏感性的细胞进行，将细胞接触受试物质并测试胰岛素敏感性是否被调节(即增强或减弱)。使用一种或多种阴性对照细胞确保该物质不通过调节所述细胞中存在的MGC4504量(在转录物或蛋白质水平上)而是通过调节MGC4504蛋白质活性调节胰岛素敏感性。

根据标准方案用表达载体稳定转染细胞系(例如HEK293)，该表达载体包含处于如pCDNA3.1+hygro HA-MGC4504中的启动子像SV40(或较弱的启动子)控制下的根据SEQ ID No.1的MGC4504。作为对照，将相同的细胞系(例如HEK293)用包含处于相同启动子控制下的报道基因像renilla萤光素酶(例如，pCDNA3.1萤光素酶)的相同表达载体转染。将两种细胞与受试物质温育后，根据标准步骤，在受试物质存在和不存在下，为两种细胞测定胰岛素刺激的葡萄糖摄入。对于对照细胞，还通过标准步骤，在受试物质存在和不存在下，测定萤光素酶活性。那些能够在表达MGC4504的细胞中增加胰岛素刺激的葡萄糖摄入并且在不表达MGC4504的对照细胞中不增强萤光素酶活性或者胰岛素敏感性的物质是可以认为增加MGC4504活性的物质。

实施例7

2型糖尿病的饮食诱导的模型中MGC4504的基因表达

材料和方法

动物和样品制备：

年龄匹配的雌性Zucker糖尿病脂肪(ZDF)大鼠(Gmi，fa/fa)购自Genetic Models。一次将三只大鼠在20℃、12小时光暗周期下喂养，随意获得水和高脂肪饮食(Research Diets，USA)几周。所有实验步骤都根据德国动物保护法进行。高脂肪饮食喂养的动物可以分成两个小组：不产生2型糖尿病状态(血糖<<12mM)的非应答者组)，而应答者组产生2型糖尿病状态(血糖>12mM)。将应答者组中的7只动物和非应答者组中的6只动物用异氟醚麻醉并通过颈脱位法杀死。快速切除胰腺样品并转移到RNAIater，在-80℃进行长期保存。

如实施例1中描述的进行Affymetrix Gene Chip_分析和RNA分离，有两个例外：没有进行蛋白酶K消化而使用代表约28000种大鼠基因的RAE2302阵列进行RNA制备和杂交。为了杂交，为每个组(非应答者和应答者)将分离的RNA在一次组合成两个库。使用Resolver4.0(RosettaInc，USA)根据软件生产商使用说明进行数据分析。

用于确定差别表达的基因的标准是表达水平高于1.5倍的改变和p值<0.001。使用Affymetrix qualifier1389573_at在RAE230_2上分析非应答者和应答者组之间MGC4504的基因表达的倍数改变。该分析的结果在表3中总结。

在产生2型糖尿病的应答者组中，与非应答动物相比，通过对从胰腺活组织检查分离的RNA的Affymetrix Gene Chip_分析可以检测到MGC4504基因表达水平的显著较低的水平。这表明高脂肪饮食引起的2型糖尿病的发生与MGC4504的降低的基因表达水平有关。

参考文献

Voss，M.D.，Hille，A.，Barth，S.，Spurk，A.，Hennrich，F.，Holzer，D.，Mueller-Lantzsch，N.，Kremmer，E.，Grasser，F.A.(2001)J.Virol75，11781-90

标准实验室方法的文献

如果不另外指出，那么根据或可以根据下面标准文献中公开的步骤进行标准实验室方法：

Sambrook et al.(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual.Secondedition.Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY.545pp；

Current Protocols in Molecular Biology；regularly updated，e.g.Volume 2000；Wiley&Sons，Inc；Editors：Fred M.Ausubel，Roger Brent，Robert Eg.Kingston，David D.Moore，J.G.Seidman，John A.Smith，KevinStruhl.

Current Protocols in Human Genetics；regularly uptdated；Wiley&Sons，Inc；Editors：Nicholas C.Dracopoli，Honathan L.Haines，Bruce R.Korf，Cynthia C.Morton，Christine E.Seidman，J.G.Seigman，Douglas R.Smith.

Current Protocols in Protein Science；regularly updated；Wiley&Sons，Inc；Editors：John E.Coligan，Ben M.Dunn，Hidde L.Ploegh，DavidW.Speicher，Paul T.Wingfield.

Molecular Biology of the Cell；third edition；Alberts，B.，Bray，D.，Lewis，J.，Raff，M.，Roberts，K.，Watson，J.D.；Garland Publishing，Inc.New York&London，1994；

Short Protocols in Molecular Biology，5th edition，by Frederick M.Ansubel(Editor)，Roger Brent(Editor)，Robert E.Kingston(Editor)，David D.Moore(Editor)，J.G.Seidman(Editor)，John A.Smith(Editor)，Kevin Struhl(Editor)，October2002，John Wiley&Sons，Inc.，New York“

Transgenic Animal Technology：A Laboratory Handboook.C.A.Pinkert，editor；Academic Press Inc.，San Diego，California，1994(ISBN：0125571658)

Gene targeting：A Practical Approach，2nd Ed.，Joyner AL，ed.2000.IRL Press at Oxford University Press，New York；

Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual.Nagy，A，Gertsenstein，M.，Vintersten，K.，Behringer，R.，2003，Cold Spring HarborPress，New York；

表1：

ZDF大鼠6周龄		ZDF大鼠7周龄		ZDF大鼠12周龄
ZDF大鼠6周龄		ZDF大鼠7周龄		ZDF大鼠12周龄		倍数改变	P-值	倍数改变	P-值	倍数改变	P-值
-3.92	0.0053	-6.18	0.0008	-4.87	0.0005	倍数改变	P-值	倍数改变	P-值	倍数改变	P-值

表2：

ZDF大鼠6周龄		ZDF大鼠7周龄
ZDF大鼠6周龄		ZDF大鼠7周龄		倍数改变	P-值	倍数改变	P-值
-2.98	0.0047	-3.32	0.0076	倍数改变	P-值	倍数改变	P-值

表3：

具有饮食诱导的糖尿病的雌性ZDF大鼠，胰腺
具有饮食诱导的糖尿病的雌性ZDF大鼠，胰腺		倍数改变	P-值
-1.77	1.29E-06	倍数改变	P-值

<110>塞诺菲-安万特德国有限公司

<120>MGC4504的用途

<130>DE2005/008

<140>05005383.4

<141>2005-03-11

<160>14

<170>PatentIn版本2.1

<210>1

<211>1528

<212>DNA

<213>人(Homo sapiens)

<400>1

ggcacgaggc aggccaggtg tgtgcgtccg tcggtctttc cgtgcccacg ccggagacca60

gccccggagg ccgcctgggc ctatccctgt gccaggcacc atgaagcagg agtctgcagc120

cccgaacacc ccgcccacct cgcagtcccc tacgccgtcc gctcagttcc cccgaaacga180

cggcgaccct caagcgctgt ggattttcgg gtacggctcc ctggtgtgga ggcccgactt240

cgcctacagc gacagccgtg tgggcttcgt gcgcggctac agccgccgtt tctggcaggg300

agacaccttc catcggggca gcgacaagat gcctggccgt gtggtgacgc tccttgaaga360

tcatgagggc tgcacttggg gcgtggcata ccaagtgcaa ggggagcagg taagcaaggc420

cctgaagtac ctgaatgtgc gagaggcagt gcttggtggc tacgatacca aggaggtcac480

cttctatccc caagatgctc ctgaccaacc actgaaggca ttggcctatg tggccacccc540

acagaaccct ggttacctgg gccctgcgcc tgaagaggcc attgccacgc agatcctggc600

ctgccggggc ttctccggcc acaaccttga atacttgctg cgtctggcag acttcatgca660

gctctgtggg cctcaggcgc aggacgagca cctggcagcc atcgtggacg ctgtgggcac720

catgttgccc tgcttctgcc ccaccgagca ggctctggcg ctggtgtgag gggctgagcc780

cctgcgggga gtgctcatgt ggacatcagg gccagacacc cactccagtg cacaagacag840

acttgcgacc gcttgagccc actgagcaga tatggtgggt ggctggaggc ttctctttct900

cagtccctgc ctgtctgcca gcctgcagct ctcctgcttg acactgactt actacttgaa960

actttattta ttgcaccatg ttggtgtggt gggcaggtgg agggcctgcc ctggacacag1020

gggccctgct gagcagtggc cccatcctgg aacttgacca gattcccccc agtgctgctg1080

ctaaccccac accacccagg cctccacctc cccagggagt ctccaagagc ctcgatcctc1140

tgctcactca gcccagccat ccatagccct gggaattcca cctgccaagg atcccagcag1200

gctggatgag ggatagtagg gcatgaggag aaggagccc t gtaaggactg aggccccggc1260

cagcccttct cctccaccag ttccccagag cagagctgga gctgatgcct ggacacagct1320

gctgagcctg gcctgggcct cttacccact tggttgtttt cttgtccctc tgtctgtctg1380

tctatctact tgtctgtctg ggccactcct gcctgtgtgt tggtctattc ctgggaagct1440

catcactaca ggccctggca accttcccag tctgtcccat actgttaccc ataaaactat1500

c tct ttaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa1528

<210> 2

<211> 222

<212> PRT

<213> 人

<400> 2

Met Lys Gln Glu Ser Ala Ala Pro Asn Thr Pro Pro Thr Ser Gln Ser

1 5 10 15

Pro Thr Pro Ser Ala Gln Phe Pro Arg Asn Asp Gly Asp Pro Gln Ala

20 25 30

Leu Trp Ile Phe Gly Tyr Gly Ser Leu Val Trp Arg Pro Asp Phe Ala

35 40 45

Tyr Ser Asp Ser Arg Val Gly Phe Val Arg Gly Tyr Ser Arg Arg Phe

50 55 60

Trp Gln Gly Asp Thr Phe His Arg Gly Ser Asp Lys Met Pro Gly Arg

65 70 75 80

Val Val Thr Leu Leu Glu Asp His Glu Gly Cys Thr Trp Gly Val Ala

85 90 95

Tyr Gln Val Gln Gly Glu Gln Val Ser Lys Ala Leu Lys Tyr Leu Asn

100 105 110

Val Arg Glu Ala Val Leu Gly Gly Tyr Asp Thr Lys Glu Val Thr Phe

115 120 125

Tyr Pro Gln Asp Ala Pro Asp Gln Pro Leu Lys Ala Leu Ala Tyr Val

130 135 140

Ala Thr Pro Gln Asn Pro Gly Tyr Leu Gly Pro Ala Pro Glu Glu Ala

145 150 155 160

Ile Ala Thr Gln Ile Leu Ala Cys Arg Gly Phe Ser Gly His Asn Leu

165 170 175

Glu Tyr Leu Leu Arg Leu Ala Asp Phe Met Gln Leu Cys Gly Pro Gln

180 185 190Ala Gln Asp Glu His Leu Ala Ala Ile Val Asp Ala Val Gly Thr Met

195 200 205

Leu Pro Cys Phe Cys Pro Thr Glu Gln Ala Leu Ala Leu Val

210 215 220

<210> 3

<211> 4324

<212> DNA

<213> 人

<400> 3

tgcacatcat gtgcgactct gcaaggtgga ggtgatgcct gggcccatcg ctgctcataa60

actggcacct ctgtgggtat gacatcggcg gccccttcct gtggggcgtt agaaggaaag120

acgggaaggg tttgccgttg aagttacaga gaggaaccag ctaagtgagt ggtttgctgc180

ctgggagtgt cctgctggga ggaaaagaga cagatgttgt tggcaagaat aagcaaggaa240

tgggaacagg aaagacatgttcccagggag acattgcaga tcccctgggc cagcttctgt300

ggagattcct attttgaggg tcaaggttga acttgtgtta cacaggacat gggatatagc360

cctggccttt tccaagcaat agcctcactt attctaccta tatttgtgga ggatcttcca420

catgcctggc ttgtgttggt tctcttgggc cttcaaccat gaaccatact ctggggaagt480

gctcaggtga gtgagaggca ggacgcaaac gattcccagc aaggaggctctggagctggc540

ccagctgcct tcagatccag gctccactac tttctgccac gtcaccaaca gggtttacct600

agctttcctg catgcttatc tgtgaaatga tatttacctc acaaagtagt gaagaaatgt660

gtaattagaa tggatgatgt aaaggcgttt agcaaattgc ctggcacatg ttatacacat720

aataaatgag tgtttctgtt gtaagcacga gttggaaggg acagataagt aaactgcagt780

ggcgtaaagt gttgtgggag tgtagaggag ggagtgtctg actctgccag gagcaagatc840

aggttattga ggacattgcc aaaagagtta tgaaacactg ggactttggt cagggtggga900

ggaggtctga gaacgggcat catgaaaatg ttccctaaat gtttcaggta tgctatccat960

ccctccccct ccagaaaacc actaatgact ctttaaaagt aacttttttt ttttttttta1020

gacaggatct tgctctgttg cccaggttag agagcagtgg cacaatcatg gctcactaca1080

gcctcgacct cctgggctca agcaaccctc ctgcctcggt ctcctgagta gctgggacta1140

caggtgcatg ttgctaagcc cggctaattt ttaaaaattt ttttgtagag atgaggtttc1200

attatgtttc ccaggctggt ctcaaactcc tgagctcaag tgatcctcct gcttggcctc1260

ccaaagtgct gagattacag gtgtgaacca ccacgcccag caaaaattaa cttattatta1320

tttaaaaatt acttttcata aaacttggaa aatagaggaa agaattgctc acaatcccaa1380

cacactagta tttgctgcct ccctatcttt attgttactg tttttaagtt ttaatcatag1440

ttcatgtgaa aatttatatt ttgcattttt gccttaatat gcaatcatac acatgtttac1500

tacgtttttt ttgtttgttt tgtttgtttg tttcccgaga caaactcgtg ctctgttgcc1560

caggctggac tgcagtggtg ggatcttggc tcactgcaac ctctgcctcc tgggttgaag1620

taattctcct gcctcagcct cccgagtaac tgggatttca ggcacctgcc accatgcccg1680

gctaattttt tttgtatttt tagaagagac ggggtttcac catgttgccc aggctggtct1740

cgaactcctg agctcaggca gtctgcccac cttggcctcc catagtgcta agactactgg1800

cgtgagccac tgcacccggc ccaacataca tattgtttct aatgtctgca caaatttaat1860

ggactatatc atatttatgt aactaattat ctattgctgg gtatttaggt tgttttcttt1920

gtgtttgtgt gtgtgtgtat gtgcacattt ttctgtcatg tgaatggtaa attgacataa1980

tttccttaaa catttagcta attttggata tttaagtagt ttttcttctt ttgtttttgc2040

tataatatgt aaaggtcggg cgtggtggct cacgcctgta atctcagcac tttgggaggc2100

caaggtgggc ggatcacaaa atcaggagtt tgagatcagc ctggccaata tggcgaaacc2160

tcgtgtctac taaaaataca aaaattatcc aggcgtggtg gcaggtgcct gtagtcccag2220

ctactcggga ggctcaggca ggagaatcgc ttgaacctgg gaggcggagg ttgcagtgag2280

ccgagattgt gccactgcac tccagcctgg gcaacagaga gagactccac ctcaaaaaaa2340

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagt aacaatgcat tgaaaatctt caggcatatg2400

gcttttcccg tattttgaat aatttcctga aggagtattg ggtcaaaggg cagggatatt2460

ttgtgattct tgacttgtat caccaagctg ctttctcaaa gggttgtttg tgccaattca2520

gatacttcag caatatgtgg ataccagttt cccacttccc ggactacaac ccacagctgg2580

tgagtggaaa agaggacatt cttctaagaa gctaccaaca aaggaggtgc tcatatgaac2640

gaaaggggac aggatagaag agaagaggga gactgaatgt gggaaatgga gagaaagcga2700

aaaagaaagg aataaccaga aaggaccatt tgctggtaat tttttttttt tcctgattgg2760

aaaagtaatt catgctccct gtaaaaatcc agactttttc attactgttt aagtttgata2820

ctgaaagtcc tcctctggtg ccagcctctg ctaactgttt aggtatattc ttccagatta2880

tttattacac gaatactttt tgtttttaaa gaaatagctt tgtactatac acactgttgt2940

gcaagtttcc cacttatatc tgcgacacct tcggaatgaa tatgtgaagt gtgaagatca3000

cgtttagttt aaatattgaa ttagaatcga atgagaagcc atgttgcaca ttgcccctgc3060

cagccatctc ctggccagtt tagagagaag gccttcagct gcctctgttt cccttttaca3120

gtcagtgaca tcccctgagg gcagtccctt gctgcgtatt gggtcaaccc ccggcggcct3180

gtggactcgg ctgggaggcc agaagccgag ggagaagacc agtagctggc catagtcttg3240

tgggggcctc actgggccct ccttgcccgc tgctcccgga accttgtgcc tatggattaa3300

tcattgctgc aaaatctcac gtccaggaag aattaaaccc atcgccttgg gggcaagact3360

agcctggctt ttgcatcttt atagcctttc tccgcaggtg cagccaccac ctccaaagtg3420

actgccggtc ggtccaagcg ctctaacagg ctcttccccg agcctacctg ggctcgaggg3480

gtcccacacc tggtccgggg cgtagcccat gtgaggcctg caagctccgg gcgcctggcc3540

tacctaactc agccccgcag tctctgcaga accccctgca gccccgtggc ccagtttctc3600

catttgctca caatggccaa cggcgtgagg cacttgagcg gaatgcggac ggtgcctccg3660

acagctttcc cgcagtgcat gatctcagga ggggccccag agacggaagt ttacgacgcc3720

cagagcgctc cttctggacg tgccctggac tcgacttggg actgagtctg tgccgcctag3780

gctggcaggg actcggccag atgcactagc ggcaaggctg ggctgacacc gcctgggact3840

cgctcgccgt acctccaagg ggcccaggtc atgagggggc ggctggggag acgcccgccc3900

ggtgcccgcc ctgggcccgg cgggtgcccc ctgcccgccg cctgacgcaa tccgaggcgc3960

ccttgctgca tgccggcgct ggagaaacct cccctgccgt tgcatcactc ctgccaggtt4020

tgccacagag gtggagctga accaatcagc gggcgcgctg ggcccgcggc gcggttaagt4080

gagaagcaga atccgaagtt gattggccaa aaggggattt gccccacccc aatcaccgcg4140

gcagctggcc gcggtgggcg tggtctcccg gcaagaaggt ttaaagggcg cctccatggg4200

gggcgctcag ctggagctac cgagcggtgc caggccaggt gtgtgcgtcc gtcggtcttt4260

ccgtgcccac gccggagacc agccccggag gccgcctggg cctatccctg tgccaggcac4320

catg 4324

<210> 4

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 4

acttcgcctc cttctctgct ctcc24

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 5

ggccctgcta atcccacact acc23

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 6

aagtccctca ccctcccaaa ag22

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 7

cctcaacacc tcaaaccact cc22

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 8

ggcagggaga caccttccat20

<210> 9

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 9

tgcagccctc atgatcttca

<210> 10

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 10

gctgccccga tggaa15

<210> 11

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 11

cgggatcccg catgaagcag gagtctgcag cc32

<210> 12

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 12

cgggatcccg catgtaccca tacgacgtcc cagactacgc tatgaagcag gagtctgcag60

cc62

<210> 13

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：引物

<400> 13

ccggaattcc ggtcacacca gcgccagagc ctg33

<210> 14

<212> DNA

<213> 人

<400> 14

atgaagcagg agtctgcagc cccgaacacc ccgcccacct cgcagtcccc tacgccgtcc60

gctcagttcc cccgaaacga cggcgaccct caagcgctgt ggattttcgg gtacggctcc120

ctggtgtgga ggcccgactt cgcctacagc gacagccgtg tgggcttcgt gcgcggctac180

agccgccgtt tctggcaggg agacaccttc catcggggca gcgacaagat gcctggccgt240

gtggtgacgc tccttgaaga tcatgagggc tgcacttggg gcgtggcata ccaagtgcaa300

ggggagcagg taagcaaggc cctgaagtac ctgaatgtgc gagaggcagt gcttggtggc360

tacgatacca aggaggtcac cttctatccc caagatgctc ctgaccaacc actgaaggca420

ttggcctatg tggccacccc acagaaccct ggttacctgg gccctgcgcc tgaagaggcc480

attgccacgc agatcctggc ctgccggggc ttctccggcc acaaccttga atacttgctg540

cgtctggcag acttcatgca gctctgtggg cctcaggcgc aggacgagca cctggcagcc600

atcgtggacg ctgtgggcac catgttgccc tgcttctgcc ccaccgagca ggctctggcg660

ctggtgtgag 670

Claims

1.MGC4504蛋白质、其功能衍生物或片段或者编码所述蛋白质、衍生物或片段的核酸的用途，用于鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质。

2.鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将MGC4504蛋白质与受试物质接触；和

b.确定该受试物质是否调节MGC4504蛋白质的活性。

3.鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将具有MGC4504的降低的活性或者量的细胞与受试物质接触；

b.确定该物质是否能够增加细胞中存在的MGC4504的活性或量。

4.鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.将编码MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的核酸与受试物质在转录活性系统中接触；

b.确定所述物质存在下，在所述系统中存在的编码MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的mRNA的量；

c.确定所述物质不存在下，在所述系统中存在的编码MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的mRNA的量；

d.确定该物质能否调节所述系统中存在的MGC4504 mRNA的量。

5.鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

b.确定所述物质存在下，在所述系统中存在的MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的量；

c.确定所述物质不存在下，在所述系统中存在的MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的量；

d.确定该物质能否调节所述系统中存在的MGC4504蛋白质、其衍生物或片段的量。

6.鉴定在预防或治疗糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的方法，其包括：

a.提供用核酸载体转染的细胞，该核酸载体包含有效连接到报道基因或者其功能片段的MGC4505启动子或者其功能片段；

b.提供用对照载体转染的细胞，该对照载体包含不有效连接到功能MGC4505启动子的报道基因或者其功能片段；

c.测定在受试物质存在下，根据a)和b)的细胞的报道基因活性；

d.测定所述物质不存在下的报道基因活性，

其中活性物质是能够增强根据a)的报道基因活性而不增强b)的报道基因活性的物质。

7.用于检测MGC4505的手段的用途，用于诊断个体的分离的样品中糖类或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因。

8.用于检测MGC4505的手段的用途，用于生产诊断试剂盒，该试剂盒用于鉴定糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因。

9.诊断糖类和/或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因的方法，其包括分析个体的分离样品中存在的MGC4505的量，其中与一种或多种参考样品相比在所述样品中存在的降低的MGC4505量表明所述素因或者疾病。

10.诊断糖类和/或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因的方法，其包括分析个体的分离样品中MGC4505与MGC4505的参考序列相比的突变，其中所述突变的存在表明所述疾病或素因。

11.诊断糖类和/或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因的方法，其包括分析个体的分离样品中与参考样品相比受损的或者降低的MGC4504活性，其中受损的或者降低的活性的存在表明所述疾病或素因。

12.用于鉴定糖类和/或脂类代谢的功能失常有关或者引起的疾病或者疾病素因的试剂盒，其包含至少一种检测MGC4504的手段。

13.调整药物以治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或引起的疾病的方法，其中对分离的个体样品分析与参考序列相比在MGC4504中的突变或与参考样品相比，MGC4504的降低的量或活性，其中如果在样品中存在MGC4504的突变或降低的量或活性，那么调整药物。

14.MGC4504或其功能片段或衍生物或者包含MGC4504或其功能片段或衍生物的组合物的用途，用于生产治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或引起的疾病的药物。

15.患有糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的个体的治疗方法，其包括调节并优选增加个体中MGC4504的量。

16.调节MGC4504活性的物质用于生产治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的药物的用途。

17.患有糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病的个体的治疗方法，其包括对个体施用调节MGC4504活性的物质。

18.异源表达MGC4504的细胞用于鉴定在治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。

19.异源表达MGC4504的非人动物用于鉴定在治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。

20.MGC4504敲除细胞用于鉴定在治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。

21.非人MGC4504敲除动物用于鉴定在治疗或预防糖类和/或脂类代谢功能失常有关或者引起的疾病中有活性的物质的用途。

22.具有根据SEQ ID No.8或9的核苷酸序列的引物。

23.具有根据SEQ ID No.10的核苷酸序列的核酸探针。

24.基于根据权利要求2到6之一的方法的高通量筛选(HTS)。

25.根据权利要求1或14的用途、根据权利要求2、4或5之一的方法，或者根据权利要求24的HTS，其中MGC4504、其衍生物或者片段用作分离的分子。

26.根据权利要求1的用途、根据权利要求2、4或5之一的方法，或者根据权利要求24的HTS，其中MGC4504、其衍生物或者片段用于生物化学或者细胞测定法。

27.根据权利要求26的用途、方法或HTS，其中测定法是细胞测定法并且所述细胞经瞬时或者稳定转染并且优选稳定转染以异源表达MGC4504。

28.根据权利要求27的用途、方法或HTS或权利要求18或20之一的用途，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

29.根据权利要求28的用途、方法或HTS，其中所述细胞是啮齿动物细胞并且优选是鼠细胞。

30.根据权利要求28的用途、方法或HTS，其中所述细胞是人细胞。

31.根据权利要求19或者21的用途，其中所述动物是脊椎动物或无脊椎动物，优选脊椎动物，更优选非人哺乳动物，甚至更优选小鼠或大鼠。

32.根据权利要求18或者19的用途，其中异源表达的MGC4504是转基因。

33.根据权利要求1、14或16的用途、根据权利要求2到6、15或17的方法，或者根据权利要求24的HTS，其中MGC4504是哺乳动物MGC4504并且优选是人MGC4504。

34.根据权利要求7或16的用途或者根据权利要求9到11、13、15或17之一的方法，其中所述个体是人类个体。

35.根据权利要求1或14的用途、根据权利要求3、5、9或10的方法、根据权利要求12的试剂盒或者根据权利要求24的HTS，其中MGC4504或者其衍生物或片段是核酸。

36.根据权利要求35的用途、方法或者高通量筛选或者根据权利要求4的方法，其中所述核酸包含或者组成为下面的序列之一：

a.根据SEQ ID No.1或14的序列；

b.在低、中或者高严格条件下能够与根据a)的序列杂交并且编码具有MGC4504功能的蛋白质或多肽的序列；

c.由于遗传密码简并性来自根据a)或者b)的序列并且编码具有MGC4504功能的蛋白质或多肽的序列；

d.根据a)、b)或者c)的序列之一的片段，其编码具有MGC4504功能的多肽，其中该蛋白质或多肽具有包含或组成为根据SEQ ID No.2的序列的多肽序列；

e.通过交换一个或多个核苷酸，来自a)、b)、c)或者d)的序列之一的序列，其中核苷酸交换不是或者不是仅仅由于遗传密码简并性，并且该序列编码具有MGC4504功能的蛋白质或多肽。

37.根据权利要求1、14或16的用途、根据权利要求3、5、9、10或17的方法、根据权利要求12的试剂盒或者根据权利要求24的高通量筛选，其中MGC4504或者其衍生物或者片段是蛋白质或多肽。

38.根据权利要求37的用途、方法、试剂盒或高通量筛选、根据权利要求2的用途或者根据权利要求2或4之一的方法，其中该多肽或蛋白质由下面序列之一编码：

a.根据SEQ ID No.1或14的序列；

d.根据a)、b)或者c)的序列之一的片段，其编码具有MGC4504功能的蛋白质或多肽；

e.通过交换一个或多个核苷酸来自根据a)、b)、c)或者d)的序列之一的序列，其中核苷酸交换不是或者不是仅仅由于遗传密码简并性，并且该序列编码具有MGC4504功能的蛋白质或多肽。

39.根据权利要求37或者38的用途、方法、试剂盒、高通量筛选，其中所述蛋白质或多肽包含或组成为根据SEQ ID No.2的序列。

40.根据前面权利要求之一的用途、方法或高通量筛选，其中疾病是代谢综合征、肥胖症、I或II型糖尿病或者抗胰岛素性并优选抗胰岛素性。

41.根据前面权利要求之一的用途、方法或高通量筛选，其中调节是激活。

42.根据权利要求6的方法，其中报道基因是编码renilla或萤火虫萤光素酶、绿色或蓝色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶或者氯霉素乙酰转移酶的基因。

43.根据权利要求3、6、18或20之一的方法，其中所述细胞是原代细胞或属于细胞系。

44.根据权利要求43的方法，其中所述细胞是HEK293、RIN-5F、CHO或NIH3T3细胞。

45.根据权利要求18或30之一的用途，其中细胞从非人转基因动物分离。

46.根据权利要求208的用途，其中细胞从非人敲除动物分离。

47.根据权利要求6的方法，其中转染是瞬时或稳定的转染并且优选是稳定转染。

48.根据权利要求11或34之一的方法，其包括对所述个体施用有效量的MGC4504。

49.根据权利要求11或34之一的治疗方法，其包括内源增加MGC4504稳态水平。

50.根据权利要求9的方法，其包括使用特异分析MGC4504 mRNA水平的手段并且优选使用能够特异扩增MGC4504 cDNA或其片段的特异MGC4504核酸探针或者引物组。

51.根据权利要求9的方法，其包括使用特异分析MGC4504蛋白质水平的手段并且优选使用特异MGC4504抗体。

52.根据权利要求7或8之一的用途、根据权利要求9的方法或根据权利要求12的试剂盒，其使用检测MGC4504 mRNA的手段和优选地能够扩增MGC4504 mRNA或cDNA的mRNA探针或引物组。

53.根据权利要求7或8之一的用途、根据权利要求9的方法或根据权利要求12的试剂盒，其使用检测MGC4504蛋白质的手段，优选特异的MGC4504抗体。

54.根据权利要求7或8之一的用途、根据权利要求10的方法或根据权利要求12的试剂盒，其使用检测MGC4504核酸中突变的手段，优选能够扩增MGC4504核酸的核酸探针或引物组。

55.根据权利要求7或8之一的用途、根据权利要求10的方法或根据权利要求12的试剂盒，其使用检测MGC4504蛋白质中突变的手段，优选特异抗体。

56.根据权利要求7的用途或根据权利要求9的试剂盒，其中所述手段是特异分析MGC4504 mRNA或基因组DNA的手段并且优选包含或为特异MGC4504核酸探针或引物组，其能够扩增MGC4504基因组DNA或者cDNA或者其片段。

57.根据权利要求20或21之一的敲除细胞或动物的用途，其中敲除是功能性敲除或基因组敲除。