CN108261544B - 稳定的包含cd147单克隆抗体的药物制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种药物制剂，其包含CD147单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂。所述药物制剂能够在长时间内保持CD147单克隆抗体的稳定性。本申请还公开了所述药物制剂在制备治疗CD147相关疾病，特别是非小细胞肺癌的药物中的用途，以及制备所述药物制剂的方法。

Description

稳定的包含CD147单克隆抗体的药物制剂
技术领域
本发明涉及药物制剂，特别是涉及稳定的包含CD147单克隆抗体的药物制剂。本发明还涉及所述药物制剂的制备方法及其用途。
背景技术
研究表明，CD147分子在肿瘤发展过程中介导多种生物学功能：(1)促进肿瘤细胞伪足形成，铺展及粘附；(2)促进肿瘤细胞运动；(3)促进肿瘤内皮细胞VEGF表达，促进肿瘤新生血管形成；(4)影响下游分子表达；(5)抑制内质网应激诱导的肿瘤细胞凋亡和化学药物敏感性的降低；(6)通过TGF-β1-slug信号通路影响EMT形成；(7)参与T细胞活化和免疫突触形成；(8)促进肿瘤细胞侵袭和转移(Zhang DW等人，J Hepatol.2012；Chen YK等人，PLoSOne，7(7)，2012；Tang J等人，Cell Death Differ，19(11)，2012；Li Y等人，J Biol Chem，287(7)，2012；Wu J等人，Oncogene，2011；Zhao P等人，Hepatology，54(6)，2011；Zhao P等人，Cancer Sci.101(2)，2010；Gou XC等人，Cancer Sci.100(5)，2009；Chen YK等人，Cancer Letters，278(1)，2009)。因此，CD147分子已成为肿瘤治疗的新靶点。
采用特异性单克隆抗体封闭CD147靶点的功能，可以有效地控制肿瘤的发生、发展、侵袭和转移。由于抗体分子具有复杂的蛋白质多级结构，并且易于物理上粘结在一起，从而可能导致不期望的免疫反应，或者可能在施用期间堵塞注射器或泵而对患者不安全，因此，抗体的液体制剂长期以来面临的问题之一是凝聚所导致的稳定性问题。
因此，需要具有稳定性和质量一致性的CD147单克隆抗体的药物制剂。
发明内容
本发明提供了在长时间内保持均一和稳定的包含CD147单克隆抗体的稳定的药物制剂。
在一方面，本发明提供了一种药物制剂，其包含CD147单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂。
在一些实施方案中，所述药物制剂中的CD147单克隆抗体可包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2；和
如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3；
且所述轻链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2；和
如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体可为人鼠嵌合的CD147单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体的重链可变区可包含如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体的轻链可变区可包含如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体可包含如SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链和/或如SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体为HcHAb18单克隆抗体，其包含如SEQID NO：15所示的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，所述药物制剂可具有5.0～8.0的pH。例如，所述药物制剂可具有5.0～5.5、5.5～6.5或6.5～8.0的pH。
在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度可为1～40mg/ml。例如，所述CD147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度可为1～15mg/ml、15～25mg/ml或25～40mg/ml。
在一些实施方案中，所述药物制剂中的缓冲液可选自组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述缓冲液的浓度可为5～25mmol/L。例如，所述缓冲液的浓度可为5～9mmol/L、9～11mmol/L或11～25mmol/L。
在一些实施方案中，所述药物制剂具有5.5～6.5的pH，且所述缓冲液是浓度为9～11mmol/L的组氨酸缓冲液。
在一些实施方案中，所述药物制剂中的蛋白保护剂可选自蔗糖、海藻糖中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述药物制剂不包含醇类蛋白保护剂。
在一些实施方案中，所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。例如，所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度可为10～80mg/ml、80～110mg/ml或110～200mg/ml。
在一些实施方案中，所述蛋白保护剂可为蔗糖，且所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80～110mg/ml。
在一些实施方案中，所述表面活性剂可选自聚山梨酯20、聚山梨酯80中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述表面活性剂在所述药物制剂中的浓度为0.2～0.8mg/ml。例如，所述表面活性剂在所述药物制剂中的浓度为0.2～0.35mg/ml、0.35～0.45mg/ml或0.45～0.8mg/ml。
在一些实施方案中，所述表面活性剂可为聚山梨酯80，且所述聚山梨酯80在所述药物制剂中的浓度为0.35～0.45mg/ml。
在一些实施方案中，在所述药物制剂中，所述CD147单克隆抗体的浓度为15～25mg/ml；所述缓冲液为组氨酸缓冲液，所述组氨酸缓冲液的浓度为9～11mmol/L；所述蛋白保护剂为蔗糖，所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80～110mg/ml；所述表面活性剂为聚山梨酯80，所述聚山梨酯80在所述药物制剂中的浓度为0.35～0.45mg/ml；且所述药物制剂具有5.5～6.5的pH。
在一些实施方案中，所述药物制剂在低温条件下稳定至少24个月。在一些实施方案中，所述低温条件的温度为2-8℃。
在一些实施方案中，所述药物制剂能够被稀释剂稀释2-80倍，并在25±2℃的温度下稳定至少7天。
在一些实施方案中，所述稀释剂是0.9％NaCl注射液。
在一些实施方案中，所述药物制剂在不低于4500lux的照度和2-8℃的温度下稳定高达30天。
在一些实施方案中，所述药物制剂是注射液。
在另一方面，本发明提供了所述药物制剂在制备治疗CD147相关疾病的药物中的用途。
在一些实施方案中，所述CD147相关疾病是非小细胞肺癌。
在又一方面，本发明提供了制备所述药物制剂的方法，所述方法包括：
1)配制溶液：
a)配制浓度为5～25mmol/L的超滤缓冲液；
b)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第一制剂溶媒，在所述第一制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为60-1200mmol/L，表面活性剂的浓度为1.2～4.8mg/ml；
c)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第二制剂溶媒，在所述第二制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为10-200mmol/L，表面活性剂的浓度为0.2～0.8mg/ml；
2)浓缩CD147单克隆抗体的原液，以获得CD147单克隆抗体浓度为30～100mg/ml的第一CD147单克隆抗体溶液；
3)将所述第一CD147单克隆抗体溶液注入超滤系统，使用所述超滤缓冲液进行6倍体积的连续换液，从而获得第二CD147单克隆抗体溶液；
4)将所述第一制剂溶媒加入所述第二CD147单克隆抗体溶液，以获得CD147单克隆抗体浓度为1～40mg/ml的药物制剂。
在一些实施方案中，本发明的方法还包括：
5)将所述第二制剂溶媒加入如上步骤4)所得的药物制剂，使得CD147单克隆抗体浓度达到15～25mg/ml。
附图说明
图1(a)为在加速热稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的pH值随时间的变化；图1(b)为在加速热稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图2(a)为在光照稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的pH值随时间的变化；图2(b)在光照稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图3为在加速热稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图4为在光照稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图5为在冻融稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图6为在加速热稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同表面活性剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图7为在光照稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同表面活性剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图8为在冻融稳定性测试中，包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同表面活性剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图9为在长期稳定性测试中，本发明的A-C三组制剂的蛋白浓度随时间的变化。
图10为在长期稳定性测试中，本发明的A-C三组制剂的由CE-SDS法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图11为在长期稳定性测试中，本发明的A-C三组制剂的由SE-HPLC法测得的单体含量随时间的变化。
图12为在长期稳定性测试中，本发明的A-C三组制剂的由SE-HPLC法测得的聚合物含量随时间的变化。
图13为在稀释稳定性测试中，本发明的A-E五组经稀释的制剂的蛋白浓度随时间的变化。
图14为在稀释稳定性测试中，本发明的A-E五组经稀释的制剂的由CE-SDS法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图15为在稀释稳定性测试中，本发明的A-E五组经稀释的制剂的由SE-HPLC法测得的单体含量随时间的变化。
图16为在稀释稳定性测试中，本发明的A-E五组经稀释的制剂的由SE-HPLC法测得的聚合物含量随时间的变化。
图17为在高温稳定性和光照稳定性测试中，本发明的制剂的蛋白浓度随时间的变化。
图18为在冻融稳定性测试中，本发明的制剂的蛋白浓度随时间的变化。
图19为在高温稳定性和光照稳定性测试中，本发明的制剂的由CE-SDS法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图20为在冻融稳定性测试中，本发明的制剂的由CE-SDS法测得的蛋白纯度随时间的变化。
图21为在高温稳定性和光照稳定性测试中，本发明的制剂的由SE-HPLC法测得的单体含量随时间的变化。
图22为在冻融稳定性测试中，本发明的制剂的由SE-HPLC法测得的单体含量随时间的变化。
图23为在高温稳定性和光照稳定性测试中，本发明的制剂的由SE-HPLC法测得的聚合物含量随时间的变化。
图24为在冻融稳定性测试中，本发明的制剂的由SE-HPLC法测得的聚合物含量随时间的变化。
具体实施方式
本发明的如下描述仅旨在说明本发明的各个实施方案。所描述的具体实施例不应被理解为是对本发明的范围的限制。在不偏离本发明的精神和实质的情况下，本领域技术人员可进行各种等同替代、改变或变化，而且应了解本文也包括这些等同实施方案。本文引用的所有文献，包括出版物、专利和专利申请等以全文引用方式并入本文。
抗体
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指含有均一的或基本上均一的单个抗体的抗体群。单克隆抗体可以获自单一的杂交瘤细胞克隆(Milstein，C(1999).″The hybridomarevolution：an offshoot ofbasic research″.BioEssays.21(11)：966-73)。完整的单克隆抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链由重链可变区(VH)和重链第一、第二和第三恒定区(CH1，CH2，CH3)组成，而每个轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。重链和轻链的VH和VL区中还各有三个互补决定区(CDR)，三个CDR由被称为框架区(FR)的连续部分间隔开，框架区比CDR更加高度保守并形成一个支架支撑超变环。一条重链和一条轻链的6个CDR共同构成抗体的抗原结合部位，决定抗体的特异性。本文所述的单克隆抗体还包括完整的单克隆抗体的具有抗原结合功能的片段或衍生物，所述片段或衍生物与完整的单克隆抗体具有相同的抗原结合特异性，但是所述片段或衍生物与其特异性抗原结合的亲和力可以与完整的单克隆抗体相同或不同。
在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括抗原结合片段。抗原结合片段指保留与抗原特异性结合的能力的一种或多种抗体片段。抗原结合片段的例子包括但不限于(i)Fab片段，其是指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)Fab′片段，其是指包含一部分铰链区的Fab片段；(iii)F(ab′)2片段，其是指包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；(iv)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(v)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(vi)dAb片段(Ward等人，Nature 341：544-546(1989)；PCT公开WO 90/05144)，其包含单个可变结构域；(vii)分离的CDR；(viii)单链Fv片段，其是指VL和VH结构域直接相连或通过一个肽链连接而形成的单价片段(Huston JS等，Proc Natl Acad Sci USA，85：5879(1988))。
在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括嵌合的单克隆抗体，其部分重链和/或轻链与从特定种类中衍生获得的或属于特定抗体类或亚类的抗体对应序列是相同或同源，而剩余的链与从另一种类中衍生获得的或属于另一抗体类或亚类的抗体以及这种抗体的片段的对应序列是相同或同源的，只要它们表现出所需的功能活性。
在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括人鼠嵌合的单克隆抗体，其具有鼠重链和轻链可变区和人重链和轻链恒定区。
在一些实施方案中，本文所述的单克隆抗体包括人源化的单克隆抗体。非人体来源(如鼠源型)抗体的人源化形式是包含最少的从非人源型免疫球蛋白中获得的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其它与抗原结合的序列)。在一些例子中，人源化抗体可以是CDR嫁接的抗体，其中将人源型CDR的氨基酸序列引入非人源型VH和VL的氨基酸序列以替换相应的非人源型CDR的氨基酸序列。在另一些例子中，人源化抗体的大部分氨基酸序列可以来自于人源型免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的CDR的氨基酸残基被具有所需特异性、亲合性和能力的非人源型(例如小鼠、大鼠、兔)抗体的CDR的氨基酸残基替代。通常，人源化抗体基本上都包含至少一个，一般包括两个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人源型免疫球蛋白的序列，且所有或基本上所有的构架(FR)区是人源型免疫球蛋白的序列。在一些例子中，人源型免疫球蛋白的可变区的构架区残基被相应的非人源型残基取代。而且，人源化抗体可包括在受体抗体和输入的CDR或构架区序列中均没有的残基。
本文所述的CD147单克隆抗体是指能够特异性结合CD147蛋白的单克隆抗体。
本文所述的CD147蛋白是指属于免疫球蛋白超家族的单次跨膜糖蛋白，其全长序列具有269个氨基酸残基，N端起始的前21个氨基酸残基为信号肽，22～205个氨基酸残基构成胞外区，206～229个氨基酸残基构成跨膜区，具有典型的亮氨酸拉链结构，靠近C端的230～269个氨基酸残基构成胞内区。胞外4个半胱氨酸形成2个二硫键，构成两个Ig样结构域。CD147蛋白的代表性序列可以是，例如，如GenBank号BAC76828.1所示，也可以参考，例如，Zhang DW等人，J Hepatol.2012；Chen YK等人，PLoS One，7(7)，2012；Tang J等人，CellDeath Differ，19(11)，2012；Li Y等人，J Biol Chem，287(7)，2012；Wu J等人，Oncogene，2011；Zhao P等人，Hepatology，54(6)，2011；Zhao P等人，Cancer Sci.101(2)，2010；GouXC等人，Cancer Sci.100(5)，2009；Chen YK等人，Cancer Letters，278(1)，2009。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括重链CDR序列，所述重链CDR序列选自如SEQ ID NO：1、2和3所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括轻链CDR序列，所述轻链CDR序列选自如SEQ ID NO：4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括重链可变区VH，所述重链可变区VH包含如下所示的重链CDR序列：如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1、如SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列的CDR2，和/或如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括轻链可变区VL，所述轻链可变区VL包含如下所示的轻链CDR：如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1、如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2，和/或如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区VH包含具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列的CDR2，和/或具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3，所述轻链可变区VL包含具有如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2，和/或具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：7、SEQID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的重链可变区VH。在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的重链可变区VH和如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQID NO：14所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的重链可变区VH和如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体进一步包括免疫球蛋白恒定区。在一些实施方式中，免疫球蛋白恒定区包括重链和/或轻链恒定区。所述重链恒定区包括CH1、CH1-CH2或CH1-CH3区，所述轻链恒定区包括CL区。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体包括嵌合的CD147单克隆抗体，特别是人鼠嵌合的CD147单克隆抗体。
在一些实施方案中，本文所述的人鼠嵌合的CD147单克隆抗体包含如SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，本文所述的人鼠嵌合的CD147单克隆抗体包含如SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21或SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本文所述的人鼠嵌合的CD147单克隆抗体包含如SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21或SEQ IDNO：22所示的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，本文所述的CD147单克隆抗体为HcHAb18单克隆抗体，其包含如SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列的重链和如SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列的轻链。
下表1中列出了在一些实施方案中的示例性氨基酸序列：
表1示例性的氨基酸序列
Figure BDA0001525919550000101
Figure BDA0001525919550000111
Figure BDA0001525919550000121
本发明涉及包含CD147单克隆抗体的药物制剂。在一些实施方案中，本发明的药物制剂可包含浓度为1～40mg/ml的所述CD147单克隆抗体。在一些实施方案中，CD147单克隆抗体的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，根据需要，CD147单克隆抗体在药物制剂中的浓度可为至少1mg/ml、至少2mg/ml、至少3mg/ml、至少4mg/ml、至少5mg/ml、至少6mg/ml、至少7mg/ml、至少8mg/ml、至少9mg/ml、至少10mg/ml、至少11mg/ml、至少12mg/ml、至少13mg/ml、至少14mg/ml、至少15mg/ml、至少16mg/ml、至少17mg/ml、至少18mg/ml、至少19mg/ml、至少20mg/ml、至少21mg/ml、至少22mg/ml、至少23mg/ml、至少24mg/ml、或者至少25mg/ml，且至多40mg/ml、至多39mg/ml、至多38mg/ml、至多37mg/ml、至多36mg/ml、至多35mg/ml、至多34mg/ml、至多33mg/ml、至多32mg/ml、至多31mg/ml、至多30mg/ml、至多29mg/ml、至多28mg/ml、至多27mg/ml、至多26mg/ml、至多25mg/ml、至多24mg/ml、至多23mg/ml、至多22mg/ml、至多21mg/ml、至多20mg/ml、至多19mg/ml、至多18mg/ml、至多17mg/ml、至多16mg/ml、或者至多15mg/ml。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂可包含浓度为15～25mg/ml的所述CD147单克隆抗体。在一些实施方案中，所述CD147单克隆抗体的浓度可为15～24mg/ml、15～23mg/ml、15～22mg/ml、15～21mg/ml、16～21mg/ml、17～21mg/ml、18～21mg/ml、或者19～21mg/ml。
缓冲液
术语“缓冲液”指通过其酸碱共轭组分的作用而耐受pH值变化的缓冲溶液。本文所用的“缓冲液”指已知可安全地应用于药学制剂中、具有维持或控制该制剂的pH值在所需范围的化合物溶液。能控制pH值在温和酸性pH值至温和碱性pH值范围(例如，pH5.0～8.0)的可接受的缓冲液包括但不限于磷酸缓冲液、乙酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、精氨酸缓冲液、2-氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇(TRIS)缓冲液、组氨酸缓冲液等中的一种或任意几种的组合。
本发明的稳定的药物制剂可包含使得药物制剂具有5.0～8.0的pH值，例如具有5.0～5.5、5.5～6.5或6.5～8.0的pH值的缓冲液。在一些实施方案中，合适的缓冲液使得本发明的药物制剂具有5.5～6.5的pH值。特别地，本发明的药物制剂的pH值可以是如上列举的那些pH值范围内的任一pH值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。
可将药物制剂的pH值控制在所需范围内的缓冲液的例子包括组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液和其他有机酸或无机酸缓冲液。这些缓冲液可以单独使用1种，也可以将2种以上混合使用。优选地，本发明的药物制剂包含组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液。更优选地，本发明的药物制剂包含组氨酸缓冲液。
“组氨酸缓冲液”为包含组氨酸根离子的缓冲液。组氨酸缓冲液可包括组氨酸、组氨酸盐酸盐、组氨酸醋酸盐、组氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐等中的一种或多种。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液可为组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的pH值可为在5.5～6.5范围内的任一pH值，例如5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。
“柠檬酸缓冲液”为包含柠檬酸根离子的缓冲液。柠檬酸缓冲液可包含柠檬酸、柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠、柠檬酸一钾、柠檬酸二钾、柠檬酸三钾、氯化钠、氯化钾中的一种或多种等。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液的pH可为在5.0～5.5范围内的任一pH值，例如5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。
“磷酸缓冲液”为包含磷酸根离子的缓冲液。磷酸缓冲液可包含磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、氯化钾等中的一种或多种。在一些实施方案中，磷酸缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。在一些实施方案中，磷酸缓冲液的pH可为在6.5～8.0范围内的任一pH值，例如6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。
本文所述的缓冲液的浓度指缓冲液中缓冲离子的浓度。在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的合适的缓冲液的浓度可为5～25mmol/L。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，缓冲液的浓度可为至少5mmol/L、至少6mmol/L、至少7mmol/L、至少8mmol/L、至少9mmol/L、至少10mmol/L、至少11mmol/L、至少12mmol/L、至少13mmol/L、至少14mmol/L、至少15mmol/L、至少16mmol/L、至少17mmol/L、至少18mmol/L、至少19mmol/L、至少20mmol/L、至少21mmol/L、至少22mmol/L、至少23mmol/L、或者至少24mmol/L，且至多25mmol/L、至多24mmol/L、至多23mmol/L、至多22mmol/L、至多21mmol/L、至多20mmol/L、至多19mmol/L、至多18mmol/L、至多17mmol/L、至多16mmol/L、至多15mmol/L、至多14mmol/L、至多13mmol/L、至多12mmol/L、至多11mmol/L、至多10mmol/L、至多9mmol/L、至多8mmol/L、至多7mmol/L、或者至多6mmol/L，取决于具体的缓冲液和药物制剂所需的稳定性。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的缓冲液为组氨酸缓冲液，包括组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液，其浓度可为5～25mmol/L。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度可为9～11mmol/L、10～11mmol/L、或者9～10mmol/L。
蛋白保护剂
如本文所用，术语“蛋白保护剂”指这样一种试剂，当其与感兴趣的蛋白质结合时，其能阻止或减少蛋白质的化学和/或物理不稳定性。蛋白保护剂的例子包括糖类、醇类、酸类、盐类、聚合物等。糖类的例子包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、葡聚糖等。醇类的例子包括山梨醇等。酸类的例子包括柠檬酸、磷酸、酒石酸、氨基酸、乙二胺四乙酸等。盐类的例子包括硫酸钠、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵等。聚合物的例子包括聚乙二醇、聚维酮等。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂选自糖类。在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂选自蔗糖、海藻糖或它们的组合。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂不包含醇类蛋白保护剂。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂在药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。在一些实施方案中，蛋白保护剂的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，蛋白保护剂在药物制剂中的浓度可为至少10mg/ml、至少20mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml、至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml、至少100mg/ml、或者至少110mg/ml，且至多200mg/ml、至多190mg/ml、至多180mg/ml、至多170mg/ml、至多160mg/ml、至多150mg/ml、至多140mg/ml、至多130mg/ml、至多120mg/ml、至多110mg/ml、至多100mg/ml、至多90mg/ml、或者至多80mg/ml，取决于具体的蛋白保护剂和药物制剂所需的稳定性。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂为蔗糖，其在药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。在一些实施方案中，蔗糖在药物制剂中的浓度可为80～110mg/ml、80～100mg/ml、80～99mg/ml、80～98mg/ml、80～97mg/ml、80～96mg/ml、80～95mg/ml、85～100mg/ml、85～95mg/ml、90～100mg/ml、90～95mg/ml、91～95mg/ml、或者92～95mg/ml
表面活性剂
如本文所用，术语“表面活性剂”指同时具有亲水性和疏水性两性结构的有机物质，即它们包含具有相反溶解度趋势的基团，例如，油溶性烃链和水溶性离子基团。取决于表面活性部分的电荷，表面活性剂可分为阴离子、阳离子和非离子表面活性剂。
表面活性剂的例子包括聚山梨酯(例如聚山梨酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；Triton；以及聚乙二醇、聚丙二醇以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如普朗尼克(Pluronics)、PF68等)。在一些实施方案中，本发明的药物制剂的表面活性剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80或它们的组合。
在一些实施方案中，表面活性剂在本发明的药物制剂中的浓度可为0.2～0.8mg/ml。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度是在上述范围内的任一浓度值。例如，表面活性剂在药物制剂中的浓度可为至少0.2mg/ml、至少0.25mg/ml、至少0.3mg/ml、至少0.35mg/ml、至少0.4mg/ml、至少0.45mg/ml、至少0.5mg/ml、至少0.55mg/ml、至少0.6mg/ml、至少0.65mg/ml、至少0.7mg/ml、或者至少0.75mg/ml，且至多0.8mg/ml、至多0.75mg/ml、至多0.7mg/ml、至多0.65mg/ml、至多0.6mg/ml、至多0.55mg/ml、至多0.5mg/ml、至多0.45mg/ml、至多0.4mg/ml、至多0.35mg/ml、至多0.3mg/ml、或者至多0.25mg/ml，取决于具体的表面活性剂和药物制剂所需的稳定性。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂的表面活性剂为聚山梨酯80，其在药物制剂中的浓度可为0.2～0.8mg/ml。在一些实施方案中，聚山梨酯80在药物制剂中的浓度可为0.35～0.45mg/ml、0.36～0.45mg/ml、0.37～0.45mg/ml、0.38～0.45mg/ml、0.39～0.45mg/ml、0.39～0.44mg/ml、0.39～0.43mg/ml、或者0.39～0.42mg/ml。
其他材料
本发明的药物制剂还可任选地包含其他材料，例如但不限于等渗剂、稀释剂等。
术语“等渗剂”指可以赋予药物适宜的渗透张力避免水份跨越接触该药物的细胞膜净流动的化合物或组合物。在一些实施方案中，本发明的制剂具有与人血基本相同的渗透压。在一些实施方案中，本发明的制剂具有300-350mOsmol/kg的渗透压。合适的等渗剂包括但不限于：甘油，氨基酸或蛋白质(如甘氨酸或白蛋白)，盐类(如氯化钠)以及糖类(如葡萄糖、甘露醇、蔗糖和乳糖)。
术语“稀释剂”是药学上可接受的，并可用于稀释本发明的药物制剂的试剂。典型的稀释剂包括水、生理盐水、注射用抑菌剂、pH缓冲液、无菌盐溶液、林格溶液或葡萄糖液。在一些实施方案中，本发明使用的稀释剂为0.9％的NaCl注射液。
制剂
在一方面，本发明提供了包含CD147单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的稳定的药物制剂。所述药物制剂具有pH 5.0～8.0，在一些实施方案中为pH 5.5～6.5，以达到足够的稳定性。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂包含：
CD147单克隆抗体，其浓度为15～25mg/ml；
缓冲液，其优选为组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液，最优选为组氨酸缓冲液，且所述缓冲液在所述药物制剂中的浓度为5～25mmol/L，优选为9～11mmol/L；
蛋白保护剂，其优选为蔗糖或海藻糖，最优选为蔗糖，且所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度为10～200mg/ml，优选为80～110mg/ml；
表面活性剂，其优选为聚山梨酯80或聚山梨酯20，最优选为聚山梨酯80，且所述表面活性剂在所述药物制剂中的浓度为0.2～0.8mg/ml，优选为0.35～0.45mg/ml；且
其中所述药物制剂具有pH 5.5～6.5。
在一些实施方案中，本发明的药物制剂包含浓度为约20mg/ml的CD147单克隆抗体、浓度为约9～11mmol/L的组氨酸缓冲液、浓度为约92～95mg/ml的蔗糖和浓度为约0.39～0.42mg/ml的聚山梨酯80，其中所述药物制剂的pH为5.5～6.5。
抗体分子的化学降解或凝聚形成更高级聚合物、脱糖基、糖基化修饰、氧化或可能导致单体蛋白质至少一种功能活性降低的其它结构性修饰都可能引起抗体制剂的不稳定。对于包含CD147单克隆抗体的药物制剂而言，在药物制剂储存过程中，CD147单克隆抗体可能发生化学降解，从而导致抗体的浓度下降；CD147单克隆抗体还可能凝聚而形成有时不可溶的以含有多个抗体分子的多聚分子形式存在的聚合物，从而导致含单个抗体分子的单体含量减少。因而，聚合物抗体的含量增加，将导致单体抗体的纯度下降。而且，由于不溶性聚合物的形成，药物制剂的浊度可能增大。
在一些实施方案中，本发明的包含CD147单克隆抗体的药物制剂可以在长时间内保持稳定性，其中CD147单克隆抗体的物理和/或化学稳定性和/或功能活性等随时间变化而保持相对恒定。在一些实施方案中，抗体蛋白浓度、蛋白纯度、蛋白活性、制剂的pH值、制剂的渗透压、制剂的外观、制剂中的不溶性微粒等可作为药物制剂的稳定性的标志。本领域中已有多种测定蛋白质稳定性的分析技术，这在Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee编辑，Marcel Dekker Inc.，纽约，纽约出版社(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)中有所综述。在一些实施方案中，药物制剂的稳定性可通过本领域已知的方法在选定的条件和时间内进行测量。
在一些实施方案中，可以对制剂进行加速热稳定性、光照稳定性、冻融稳定性、长期稳定性、稀释稳定性和/或高温稳定性测试。例如，在加速热稳定性测试中，药物制剂可在40±5℃下储存4周，并在第0、1、2、3和4周时取样进行测量。例如，在光照稳定性测试中，药物制剂可在5±3℃下在4500±500Lux的照度下储存10或30天，并在第0、5、10和30天时取样进行测量。例如，在冻融稳定性测试中，药物制剂可经受三次循环，每次循环在-15±5℃下2天，然后在25±2℃下2天，并在第0、4、8、12天时取样进行测量。例如，在长期稳定性测试中，药物制剂可在2-8℃下储存2年，并在第0、3、6、9、12、18和24个月时取样进行测量。例如，在稀释稳定性测试中，经稀释的药物制剂可在25±2℃下储存7天，并在第0、1、2和7天时取样进行测量。在高温稳定性测试中，药物制剂可在40±2℃下储存10天，并在第0、5和10天取样进行测量。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在光照稳定性、冻融稳定性、长期稳定性、稀释稳定性或高温稳定性测试中，药物制剂中的蛋白浓度的变化不超过+/-5％、不超过+/-4％、不超过+/-3％、不超过+/-2％、不超过+/-1％、或者不超过+/-0.5％，其中蛋白浓度可根据《中国药典》2010年版，三部，通则0401，通过紫外-可见光分光光度法测定。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在加速热稳定性、光照稳定性或冻融稳定性测试中，药物制剂中的蛋白纯度下降不超过5.0％、不超过4.0％、不超过3.0％、不超过2.0％、或者不超过1.0％，其中蛋白纯度可通过SDS-PAGE法测得。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在长期稳定性、稀释稳定性、高温稳定性、光照稳定性或冻融稳定性测试中，药物制剂中的蛋白纯度为95.5％以上、96％以上、96.5％以上、97％以上、97.5％以上、98％以上、98.5％以上、99％以上、或者99.5％以上，其中蛋白纯度可通过CE-SDS法测得。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在长期稳定性、稀释稳定性或光照稳定性测试中，药物制剂中含有小于约1％、小于约0.9％、小于约0.8％、小于约0.7％、小于约0.6％、小于约0.5％、小于约0.4％、小于约0.3％、小于约0.2％、或者小于约0.1％的蛋白质为聚合物，其中聚合物的含量可通过SE-HPLC法测得。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在稀释稳定性测试中，药物制剂中的蛋白纯度下降不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％、或者不超过1％，其中蛋白纯度可通过CE-SDS法测得，或者药物制剂中小于约1％、小于约0.9％、小于约0.8％、小于约0.7％、小于约0.6％、小于约0.5％、小于约0.4％、小于约0.3％、小于约0.2％、或者小于约0.1％的蛋白质为聚合物，其中聚合物的含量可通过SE-HPLC法测得。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在光照稳定性、冻融稳定性或稀释稳定性测试中，药物制剂中粒径10μm以上的不溶性微粒的量≤25粒/ml、≤20粒/ml、≤15粒/ml、≤10粒/ml、≤5粒/ml、或者≤1粒/ml；粒径25μm以上的不溶性微粒的量≤3粒/ml、≤2粒/ml、或者≤1粒/ml，其中不溶性微粒的量根据《中国药典》2010年版，三部，制剂通则0903，“不溶性微粒检查法”测得；或者指当药物制剂在光照稳定性和冻融稳定性测试中，药物制剂的外观符合《中国药典》2010年版，三部，制剂通则0102的规定。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在光照稳定性、冻融稳定性、长期稳定性、稀释稳定性或高温稳定性测试中，药物制剂的功能活性保持阳性；或者是指当药物制剂在稀释稳定性测试中，药物制剂的功能活性为50％-150％，其中“功能活性”是指药物制剂针对特定靶细胞产生杀伤或抑制作用的能力，并可通过细胞毒性检测法测得。药物制剂的功能活性为阳性表示该药物制剂具有针对特定靶细胞的杀伤活性。也可定量描述药物制剂的功能活性，其中将新制药物制剂样品(参比品)的靶细胞杀伤率定义为100％，药物制剂的功能活性即为待进行稳定性测试的药物制剂样品(供试品)的靶细胞杀伤率与参比品的靶细胞杀伤率的比值。
在一些实施方案中，药物制剂的功能活性可通过包括如下步骤的细胞毒性检测法进行测定：
1.在96孔板中加入3000个A549细胞(50μl)，再加入40倍的淋巴细胞(50μl)；
2.将药物制剂的供试品和参比品的初始浓度分别稀释至10μg/ml，再以10倍系列稀释6个梯度，获得共7个浓度梯度，以20ul/孔加入至96孔板的试验孔中；
3.将上述96孔板置于37℃孵箱中孵育4小时后，将50μl细胞培养上清液转移到另一96孔板中，将显色剂以50μl/孔加入至96孔板中，室温避光孵育20分钟；
4.以50μl/孔加入终止液，在1小时之内在490nm波长处读值，记为ED值。通过供试品和参比品的ED值，计算供试品的相对值：
功能活性(％)＝供试品的ED值/参比品的ED值×100％。
在一些实施方案中，稳定的药物制剂是指当药物制剂在光照稳定性、冻融稳定性、高温稳定性、长期稳定性或稀释稳定性测试中，抗体的结合活性为65％-150％，所述结合活性表示抗体与靶点的特异性结合活性，其可根据《中国药典》2010版，三部，通则3418通过酶联免疫法测得。
在一些实施方案中，抗体的结合活性通过包括如下步骤的酶联免疫法进行测定：
1.用一抗稀释液将参比品及供试品分别稀释至如下8个梯度：0.1ng/ml，1ng/ml，10ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，500ng/ml，1000ng/ml，10000ng/ml；
2.将稀释好的参比品及供试品溶液以100μl/孔加入至已包被好的96孔板，在37℃下反应1小时，洗涤3次，拍干；
3.将Ap-羊抗人IgG(H+L)抗体用二抗稀释液稀释1000倍，以100μl/孔加入至已包被好的96孔板，在37℃下反应0.5小时，洗涤3次，拍干；
4.加入反应底物pNPP(对硝基苯酚磷酸盐)，以100μl/孔加入至已包被好的96孔板，室温避光反应20分钟，在405nm处读值；
5.以吸光度为纵坐标，以参比品溶液的浓度为横坐标，分别对标准品及供试品进行四参数曲线拟合，得出标准品及供试品的半数有效浓度(EC50)，按下列公式计算供试品的相对结合活性：
相对结合活性(％)＝供试品的EC50/标准品的EC50×100％。
制剂制备
在另一方面，本发明提供了制备药物制剂的方法，其包括：
1)配制溶液：
a)配制浓度为5～25mmol/L的超滤缓冲液；
b)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第一制剂溶媒，在所述第一制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为60-1200mmol/L，表面活性剂的浓度为1.2～4.8mg/ml；
c)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第二制剂溶媒，在所述第二制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为10-200mmol/L，表面活性剂的浓度为0.2～0.8mg/ml；
2)浓缩CD147单克隆抗体的原液，以获得CD147单克隆抗体浓度为30～100mg/ml的第一CD147单克隆抗体溶液；
3)将所述第一CD147单克隆抗体溶液注入超滤系统，使用所述超滤缓冲液进行6倍体积的连续换液，从而获得第二CD147单克隆抗体溶液；
4)将所述第一制剂溶媒加入所述第二CD147单克隆抗体溶液，以获得CD147单克隆抗体浓度为1～40mg/ml的药物制剂。
在一些实施方案中，所述方法还包括：
5)将所述第二制剂溶媒加入如上步骤4)所得的药物制剂，使得CD147单克隆抗体浓度达到15～25mg/ml。
应用
在另一方面，本发明还提供了治疗受试者的疾病的方法，其包括将治疗有效量的本发明的药物制剂施用至受试者，其中所述受试者具有需要用针对CD147的抗体进行治疗的疾病。
如本文所用，术语“治疗”指减少或改善病症或其一种或多种症状的严重性和/或持续时间，抑制或预防病症进展，引起病症消退，抑制或预防与病症相关的一种或多种症状复发、发展、发作或进展。需要治疗的受试者包括已经患有疾病的受试者。
术语“治疗有效量”指实现可测量的改善或预防特定的病症所需的最小浓度。
本发明的药物制剂可用于治疗CD147相关的疾病，包括慢性和急性疾病。CD147相关的疾病包括癌症、炎症等。在一些实施方案中，所述CD147相关的疾病例如为上皮来源的恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述CD147相关的疾病例如为肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌或胃癌。在一些实施方案中，所述CD147相关的疾病例如为类风湿性关节炎。在一些实施方案中，所述CD147相关的疾病为非小细胞肺癌。
本发明的药物制剂可通过任何合适的途径施用于受试者。例如，所述药物制剂可通过皮下注射施用于受试者。
在又一方面，本发明提供了药物制剂在制备治疗CD147相关疾病的药物中的用途。
本发明的实施方案还包括但不限于如下项目：
项目1.一种药物制剂，所述药物制剂包含CD147单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂。
项目2.根据项目1所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2；和
如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3；
且所述轻链可变区包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2；和
如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
项目3.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体为人鼠嵌合的CD147单克隆抗体。
项目4.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。
项目5.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体的轻链可变区包含如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。
项目6.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体包含如SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列的重链和/或如SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列的轻链。
项目7.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有5.0～8.0、5.0～5.5、5.5～6.5或6.5～8.0的pH。
项目8.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为1～40mg/ml、1～15mg/ml、15～25mg/ml或25～40mg/ml。
项目9.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液选自组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液中的一种或多种。
项目10.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述缓冲液的浓度为5～25mmol/L、5～9mmol/L、9～11mmol/L或11～25mmol/L。
项目11.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂具有5.5～6.5的pH，所述缓冲液是浓度为9～11mmol/L的组氨酸缓冲液。
项目12.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白保护剂选自蔗糖、海藻糖中的一种或多种。
项目13.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂不包含醇类蛋白保护剂。
项目14.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度为10～200mg/ml、10～80mg/ml、80～110mg/ml或110～200mg/ml。
项目15.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述蛋白保护剂为蔗糖，且所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80～110mg/ml。
项目16.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80中的一种或多种。
项目17.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂在所述药物制剂中的浓度为0.2～0.8mg/ml、0.2～0.35mg/ml、0.35～0.45mg/ml或0.45～0.8mg/ml。
项目18.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述表面活性剂为聚山梨酯80，且所述聚山梨酯80在所述药物制剂中的浓度为0.35～0.45mg/ml。
项目19.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述CD147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为15～25mg/ml；
所述缓冲液为组氨酸缓冲液，所述组氨酸缓冲液的浓度为9～11mmol/L；
所述蛋白保护剂为蔗糖，所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80～110mg/ml；
所述表面活性剂为聚山梨酯80，所述聚山梨酯80在所述药物制剂中的浓度为0.35～0.45mg/ml；
其中所述药物制剂具有5.5～6.5的pH。
项目20.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂在低温条件下稳定至少24个月。
项目21.根据项目20所述的药物制剂，其中所述低温条件的温度为2-8℃。
项目22.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂能够被稀释剂稀释2-80倍，并在25±2℃的温度下稳定至少7天。
项目23.根据项目22所述的药物制剂，其中所述稀释剂是0.9％NaCl注射液。
项目24.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂在不低于4500lux的照度和2-8℃的温度下稳定高达30天。
项目25.根据前述项目中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂是注射液。
项目26.项目1-25中任一项所述的药物制剂在制备治疗CD147相关疾病的药物中的用途。
项目27.根据项目26所述的用途，其中所述CD147相关疾病是非小细胞肺癌。
项目28.制备项目1-25中任一项所述的药物制剂的方法，所述方法包括：
1)配制溶液：
a)配制浓度为5～25mmol/L的超滤缓冲液；
b)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第一制剂溶媒，在所述第一制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为60-1200mmol/L，表面活性剂的浓度为1.2～4.8mg/ml；
c)配制包含缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂的第二制剂溶媒，在所述第二制剂溶媒中，缓冲液的浓度为5～25mmol/L，蛋白保护剂的浓度为10-200mmol/L，表面活性剂的浓度为0.2～0.8mg/ml；
2)浓缩CD147单克隆抗体的原液，以获得CD147单克隆抗体浓度为30～100mg/ml的第一CD147单克隆抗体溶液；
3)将所述第一CD147单克隆抗体溶液注入超滤系统，使用所述超滤缓冲液进行6倍体积的连续换液，从而获得第二CD147单克隆抗体溶液；
4)将所述第一制剂溶媒加入所述第二CD147单克隆抗体溶液，以获得CD147单克隆抗体浓度为1～40mg/ml的药物制剂。
项目29.根据项目28所述的方法，其还包括：
5)将所述第二制剂溶媒加入所述步骤4)所得的药物制剂，使得CD147单克隆抗体浓度达到15～25mg/ml。
实施例
参照如下实施例可更好地理解本发明，然而，如下实施例旨在说明本发明，不应理解为限制本发明的范围。考虑到本文的教导可能进行多种修改和改变，因此这些修改和改变在本发明的范围内。
在实施例中所用的各种试剂、设备和测量方法如下：
试剂
CD147单克隆抗体：HcHAb18单克隆抗体，其包括如SEQ ID NO：15所示的重链和如SEQ ID NO：19所示的轻链。
组氨酸缓冲液：由0.8mg/ml的组氨酸溶液和1.0mg/ml的组氨酸盐酸盐溶液配制而成。
柠檬酸缓冲液：由1.0mg/ml的柠檬酸溶液和1.5mg/ml的柠檬酸三钠溶液配制而成。
磷酸缓冲液：由1.7mg/ml的磷酸氢二钠溶液和0.8mg/ml的磷酸二氢钠溶液配制而成。
测试
在研究制剂的加速热稳定性、高温稳定性、光照稳定性和冻融稳定性时，本发明所用的表示制剂稳定的预设标准为：蛋白浓度变化不超过1.0mg/ml(对于20mg/ml的初始蛋白浓度)，由SDS-PAGE法(加速热稳定性、光照稳定性或冻融稳定性测试)测得的蛋白纯度降低＜5％或由CE-SDS法(高温稳定性、光照稳定性或冻融稳定性测试)测得的蛋白纯度≥95.5％，制剂外观符合《中国药典》2010年版，三部，制剂通则0102的规定，粒径10μm以上的不溶性微粒的量≤25粒/ml，粒径25μm以上的不溶性微粒的量≤3粒/ml。
在研究制剂的长期稳定性和稀释稳定性时，本发明所用的表示制剂稳定的预设标准为：蛋白浓度变化不超过1.0mg/ml(对于20mg/ml的初始蛋白浓度)，由CE-SDS法测得的蛋白纯度≥95.5％，由SE-HPLC法测得的蛋白纯度中单体含量≥99.00％，聚合物含量≤1.00％，制剂pH为5.5～6.5，制剂渗透压为300～350mOsmol/kg，抗体的功能活性为阳性，抗体的结合活性为65％-150％。
下表列出了制剂稳定性的各种测试条件：
Figure BDA0001525919550000261
蛋白浓度测定：紫外-可见光分光光度法(检测波长：280nm)
蛋白纯度测定：SDS-PAGE法、CE-SDS法、SE-HPLC法
制剂外观测定：目测法
抗体结合活性测定：酶联免疫法
抗体功能活性测定：细胞毒性检测法
实施例1：缓冲液对制剂稳定性的作用
在该实施例中选择以下3组不同的缓冲液制备包含浓度为20.0mg/ml的CD147单克隆抗体的药物制剂：
Figure BDA0001525919550000271
使用制得的药物制剂进行加速热稳定性测试和光照稳定性测试。所得加速热稳定性测试结果示于表1和图1(a)和1(b)中，所得光照稳定性测试结果示于表2和图2(a)和2(b)中，其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法测得。其中，表1和表2中列出的每组缓冲液的测试结果均为包含相关缓冲液组的制剂的测试结果的平均值。
表1.包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的加速热稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000272
Figure BDA0001525919550000281
如表1和图1(a)和(b)可以看出，三个实验组的制剂在测试条件下在4周时间内的pH值波动较小，表明这三种缓冲液均具有足够的pH缓冲能力。另外，三个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，而实验组1的包含组氨酸缓冲液的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明组氨酸缓冲液对CD147单克隆抗体的保护性最佳。
表2.包含CD147单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的光照稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000282
如表2和图2(a)和(b)可以看出，三个实验组的制剂在测试条件下的pH值的波动较小，且蛋白浓度未出现明显变化，表明这三种缓冲液均具有足够的pH缓冲能力，且均能保持蛋白含量稳定。另外，三个实验组的制剂在测试条件下的外观均发生变化而导致不符合规定，表明制剂应当避光保存。三个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在30天时间内均有所下降，其中实验组1的包含组氨酸缓冲液的制剂的蛋白纯度下降最小，表明组氨酸缓冲液对CD147单克隆抗体的保护性最佳。
因此，组氨酸缓冲液可作为用于本发明的包含CD147单克隆抗体的制剂的最优选的缓冲液，而柠檬酸缓冲液和磷酸缓冲液可作为可选的缓冲液。
实施例2：蛋白保护剂对制剂稳定性的作用
在如实施例1所述选择合适的缓冲液(组氨酸缓冲液)之后，在本实施例中研究蛋白保护剂对制剂稳定性的作用。选择3种不同的蛋白保护剂(山梨醇、蔗糖、海藻糖)以落入两个不同范围(80-200mg/ml和10-80mg/ml)内的蛋白保护剂浓度，配制包含浓度为20.0mg/ml的CD147单克隆抗体和浓度为10mmol/L的组氨酸缓冲液的pH为6.0的制剂，并进行加速热稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试。包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同浓度的不同蛋白保护剂的制剂的实验分组如表3所示，其中实验共分为6组，每组分别选择三个蛋白保护剂浓度进行各种稳定性测试，各种稳定性测试结果为每组中所获得的三个数据值的平均值。所得加速热稳定性测试结果示于表4和图3中，所得光照稳定性测试结果示于表5和图4中，所得冻融稳定性测试结果示于表6和图5中，其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法测得。
表3.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同浓度的不同蛋白保护剂的制剂的实验分组
Figure BDA0001525919550000291
Figure BDA0001525919550000301
表4.在包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同浓度的不同蛋白保护剂的制剂的加速热稳定性测试中的蛋白纯度测定结果(％)
时间点 实验组1 实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 实验组6
0周 96.2％ 96.4％ 96.1％ 96.2％ 96.4％ 96.2％
1周 95.6％ 96.1％ 96.1％ 95.5％ 96.1％ 96.1％
2周 92.0％ 95.8％ 95.2％ 91.3％ 95.7％ 95.2％
3周 86.9％ 95.2％ 93.4％ 86.7％ 95.1％ 92.4％
4周 /* 93.7％ 92.3％ /* 93.4％ 91.9％
降低量 9.3％ 2.7％ 3.8％ 9.5％ 3.0％ 4.3％
*未检测
由表4和图3可以看出，包含山梨醇的实验组1和4的蛋白纯度在第3周时就已经低于90.0％，且纯度降低分别为9.3％和9.5％，大大超过5％的预设标准，表明山梨醇不适合作为本发明的制剂的蛋白保护剂。而相比于包含海藻糖的实验组3和6，包含蔗糖的实验组2和5的蛋白纯度降低相对更小，分别为2.7％和3.0％，说明蔗糖对CD147单克隆抗体的保护性最佳。
表5.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同浓度的不同蛋白保护剂的制剂的光照稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000302
Figure BDA0001525919550000311
由表5和图4可以看出，包含山梨醇的实验组1和4的蛋白纯度在第30天时就已经低于90.0％，且纯度降低分别为7.5％和9.2％，大大超过5％的预设标准。而且，实验组1和4的外观和不溶性微粒检测项目在光照稳定性测试后期也不满足制剂稳定性的预设标准。这说明山梨醇在本发明的制剂中无法保持CD147单克隆抗体的光稳定性。而包含蔗糖的实验组2和5和包含海藻糖的实验组3和6的蛋白纯度降低均＜5％，最终蛋白纯度高于90％，pH和制剂外观无明显变化，且不溶性微粒含量符合预设标准。其中包含蔗糖的实验组2和5的蛋白纯度降低相对更小，分别为1.8％和2.3％，说明蔗糖对CD147单克隆抗体的保护性最佳。
表6.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液和不同浓度的不同蛋白保护剂的制剂的冻融稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000321
Figure BDA0001525919550000331
由表6和图5可以看出，包含山梨醇的实验组1和4的最终蛋白纯度低于90.0％，且纯度降低分别为8.6％和7.5％，大大超过5％的预设标准。而且，实验组1和4的外观和不溶性微粒检测项目在冻融稳定性测试后期也不满足制剂稳定性的预设标准。这说明山梨醇在本发明的制剂中无法保持CD147单克隆抗体的冻融稳定性。而包含蔗糖的实验组2和5和包含海藻糖的实验组3和6的蛋白纯度降低均＜5％，最终蛋白纯度高于90％，pH和制剂外观无明显变化，且不溶性微粒含量符合预设标准。其中包含蔗糖的实验组2和5的蛋白纯度降低相对更小，分别为0.7％和1.4％，说明蔗糖对CD147单克隆抗体的保护性更佳。
对不同蛋白保护剂的加速热稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试结果表明，山梨醇不适合作为本发明的包含CD147单克隆抗体的制剂的蛋白保护剂，海藻糖为可选用的蛋白保护剂，而蔗糖为更优选的蛋白保护剂。
当使用蔗糖或海藻糖作为制剂中的蛋白保护剂时，10～200mg/ml的浓度即可使制剂的稳定性满足预设标准。蔗糖或海藻糖在80～110mg/ml的浓度时可更好地维持与人体等渗的渗透压。因此，本发明的制剂中蔗糖或海藻糖作为蛋白保护剂的优选浓度为80～110mg/ml，可选的浓度为10～80mg/ml和110～200mg/ml。优选地，本发明的制剂包含浓度为80～110mg/ml的蔗糖作为蛋白保护剂。
实施例3：表面活性剂对制剂稳定性的作用
在选择合适的缓冲液(组氨酸缓冲液)和蛋白保护剂(蔗糖)的情况下，本实施例选择2种不同的表面活性剂(聚山梨酯80、聚山梨酯20)以落入三种不同范围(0.2～0.35mg/ml、0.35～0.45mg/ml和0.45～0.8mg/ml)内的表面活性剂浓度来配制包含浓度为20.0mg/ml的CD147单克隆抗体、浓度为10mmol/L的组氨酸缓冲液和浓度为93.5mg/ml的蔗糖的pH为6.0的制剂。为了比较，本实施例还配制了其他组分相同，但不含表面活性剂的对照制剂。使用上述制剂进行加速热稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试。包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同浓度的不同表面活性剂的制剂的实验分组如表7所示。所得加速热稳定性测试结果示于表8和图6中，所得光照稳定性测试结果示于表9和图7中，所得冻融稳定性测试结果示于表10和图8中，其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法测得。
表7.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同浓度的不同表面活性剂的制剂的实验分组
Figure BDA0001525919550000341
表8.在包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同浓度的不同表面活性剂的制剂的加速热稳定性测试中的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度测定结果(％)
时间点 实验组1 实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 实验组6 对照组
0周 96.3 96.2 96.1 96.2 96.3 96.1 96.2
1周 96.1 96.0 96.0 96.1 96.0 95.8 95.8
2周 95.7 95.8 95.7 95.7 95.8 95.8 95.2
3周 95.7 95.4 95.6 95.3 95.6 95.2 94.7
4周 94.1 94.0 95.5 95.1 94.5 94.0 93.7
降低量 2.2 2.2 0.6 1.1 1.8 2.1 2.5
由表8和图6可以看出，实验组1～6的蛋白纯度降低程度明显小于不包含表面活性剂的对照组，说明聚山梨酯80和聚山梨酯20在0.2～0.8mg/ml的浓度下均具有减缓蛋白纯度降低的作用。相比于表面活性剂浓度为0.2～0.35mg/ml的实验组1和2以及表面活性剂浓度为0.45～0.8mg/ml的实验组5和6，表面活性剂浓度为0.35～0.45mg/ml的实验组3和4的蛋白纯度降低相对更小，分别为0.6％和1.1％，说明0.35～0.45mg/ml的表面活性剂浓度更优选用于本发明的制剂。而包含聚山梨酯80的实验组3的蛋白纯度降低最小，表明聚山梨酯80对CD147单克隆抗体的保护性更佳。
表9.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同浓度的不同表面活性剂的制剂的光照稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000351
Figure BDA0001525919550000361
由表9和图7可以看出，各实验组在光照稳定性测试条件下的蛋白纯度降低均＜5％，最终蛋白纯度高于90％，pH和制剂外观无明显变化，且不溶性微粒含量符合预设标准，表明测试的制剂在光照稳定性测试条件下是稳定的。其中在0.35～0.45mg/ml的表面活性剂浓度下的实验组3和4的蛋白纯度降低相对更小，分别为0.7％和1.0％，说明0.35～0.45mg/ml的表面活性剂浓度更优选用于本发明的制剂。而包含聚山梨酯80的实验组3的蛋白纯度降低最小，表明聚山梨酯80对CD147单克隆抗体的保护性更佳。
表10.包含CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液、蔗糖蛋白保护剂和不同浓度的不同表面活性剂的制剂的冻融稳定性测试结果
Figure BDA0001525919550000362
Figure BDA0001525919550000371
由表10和图8可以看出，各实验组在冻融稳定性测试条件下的蛋白纯度降低均＜5％，最终蛋白纯度高于90％，pH和制剂外观无明显变化，且不溶性微粒含量符合预设标准，表明测试的制剂在冻融稳定性测试条件下是稳定的。其中在0.35～0.45mg/ml的表面活性剂浓度下的实验组3和4的蛋白纯度降低相对更小，分别为0.3％和0.6％，说明0.35～0.45mg/ml的表面活性剂浓度更优选用于本发明的制剂。而包含聚山梨酯80的实验组3的蛋白纯度降低最小，表明聚山梨酯80对CD147单克隆抗体的保护性更佳。
对不同表面活性剂的加速热稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试结果表明，浓度为0.2～0.8mg/ml的聚山梨酯80和聚山梨酯20均适于用作本发明的包含CD147单克隆抗体的制剂的表面活性剂，其中更优选的是浓度为0.35～0.45mg/ml的聚山梨酯80。
实施例4：本发明的制剂的长期稳定性
使用CD147单克隆抗体、组氨酸缓冲液(由0.8mg/ml的组氨酸溶液和1.0mg/ml的组氨酸盐酸盐溶液配制而成)、蔗糖和聚山梨酯80，制备3个批次的本发明的制剂，分别命名为4A组、4B组和4C组，其中CD147单克隆抗体的浓度为20.0mg/ml，组氨酸缓冲液的浓度为10mmol/L，蔗糖的浓度为93.5mg/ml，聚山梨酯80的浓度为0.40mg/ml，制剂的pH为6.0。对4A-4C组制剂进行长期稳定性测试，结果列于表11和图9-12中。将制剂置于注射剂瓶中，以溴化丁基胶塞密封瓶口，以铝塑组合盖紧固瓶口。将该制剂在2-8℃下避光密闭储存至少2年，定期取样检测制剂的蛋白浓度和纯度等。
Figure BDA0001525919550000391
由表11和图9-12可以看出，在2年的测试终点时，4A-4C组制剂的蛋白浓度、pH、渗透压和功能活性无明显变化；由CE-SDS法测得的蛋白纯度分别降低0.1％、0.2％和0.4％，由SE-HPLC法测得的聚合物含量分别上升0.09％、0.16％和0.15％。4A-4C组制剂的聚合物含量均符合预设标准；结合活性的变化也满足预设标准。这表明本发明的制剂在2-8℃下能够稳定储存2年。
实施例5：本发明的制剂的稀释稳定性
如实施例4所述制备本发明的制剂，其中CD147单克隆抗体的浓度为20.0mg/ml，组氨酸缓冲液的浓度为10mmol/L，蔗糖的浓度为93.5mg/ml，聚山梨酯80的浓度为0.40mg/ml，制剂的pH为6.0。使用0.9％NaCl注射液稀释制剂，使得制剂中的抗体浓度由20.0mg/ml降低至0.5、1.0、2.0、5.0和10.0mg/ml，经稀释的制剂分别为5A、5B、5C、5D和5E组。在稀释稳定性测试条件下测定经稀释的制剂的稳定性，所得结果如表12和图13-16所示。
Figure BDA0001525919550000411
由表12和图13-16可以看出，5A-5E组制剂在经稀释之后，制剂的pH值、蛋白浓度、蛋白纯度(CE-SDS法)、单体和聚合物含量(SE-HPLC法)、不溶性微粒、功能活性、结合活性的变化均符合预设标准，其中各组在第2天和第7天测得的聚合物含量下降是由设备误差所导致。这表明本发明的制剂在用0.9％NaCl注射液稀释2～80倍后，可在25±2℃下稳定储存至少7天。
实施例6：本发明制剂的稳定性的影响因素
如实施例4所述制备本发明的制剂，其中CD147单克隆抗体的浓度为20.0mg/ml，组氨酸缓冲液的浓度为10mmol/L，蔗糖的浓度为93.5mg/ml，聚山梨酯80的浓度为0.40mg/ml，制剂的pH为6.0。使用所得制剂进行影响因素测试，包括高温稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试。各个测试结果示于表13和图17-24中。
Figure BDA0001525919550000431
由表13和图17-24可以看出，在高温、光照和冻融测试条件下，本发明的制剂的蛋白浓度、pH、渗透压、功能活性和结合活性均保持在预设标准范围内。在高温测试条件下，本发明的制剂的蛋白纯度(CE-SDS)降低1.0％，聚合物含量增加0.03％；在光照测试条件下，本发明的制剂的蛋白纯度(CE-SDS)基本上保持不变，聚合物含量增加0.03％；在冻融测试条件下，本发明的制剂的蛋白纯度(CE-SDS)降低0.1％，聚合物含量增加0.06％。在各个测试终点时，本发明的制剂的纯度(CE-SDS)和聚合物含量均符合预设标准。
因此，本发明的制剂能够较好地保持CD147单克隆抗体的稳定性。为了更好地保持抗体的稳定性，优选在2-8℃的温度下避光储存本发明的制剂。
本发明不限于本文所述的具体实施方案的范围。事实上，根据上述说明，本发明的各种修改和改变对本领域技术人员而言是容易想到的。这些修改和改变也落在所附权利要求的范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 陈, 小春
<120> 稳定的包含CD147单克隆抗体的药物制剂
<130> 022079-8005CN02
<160> 22
<170> PatentIn version 3.5
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<212> PRT
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<220>
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Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala Trp Met Asp
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<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链CDR2
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Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu Ser
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<223> CD147单克隆抗体重链CDR3
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Arg Asp Ser Thr Ala Thr His
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<212> PRT
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<223> CD147单克隆抗体轻链CDR1
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<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链CDR2
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Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe Thr
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<220>
<223> CD147单克隆抗体重链可变区VH
<400> 7
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1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
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<220>
<223> CD147单克隆抗体重链可变区VH
<400> 8
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
20 25 30
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
35 40 45
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
50 55 60
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
85 90 95
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
100 105 110
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链可变区VH
<400> 9
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
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Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr
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<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链可变区VH
<400> 10
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
20 25 30
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
35 40 45
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
50 55 60
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
85 90 95
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
100 105 110
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr
115 120 125
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链可变区VL
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Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
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Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
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<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链可变区VL
<400> 12
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
20 25 30
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
35 40 45
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
50 55 60
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
65 70 75 80
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
85 90 95
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
100 105 110
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
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<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链可变区VL
<400> 13
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
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Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
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Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
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Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys
100
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链可变区VL
<400> 14
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
20 25 30
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
35 40 45
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
50 55 60
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
65 70 75 80
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
85 90 95
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
100 105 110
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys
115
<210> 15
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链
<400> 15
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 16
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链
<400> 16
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
20 25 30
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
35 40 45
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
50 55 60
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
85 90 95
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
100 105 110
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130 135 140
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145 150 155 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165 170 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180 185 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195 200 205
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
210 215 220
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
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Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
275 280 285
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
355 360 365
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
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Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385 390 395 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
420 425 430
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 17
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链
<400> 17
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Pro Tyr Tyr Thr Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
340 345 350
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355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
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420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 18
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体重链
<400> 18
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
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100 105 110
Tyr Cys Thr Arg Asp Ser Thr Ala Thr His Trp Gly Gln Gly Thr Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链
<400> 19
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 20
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链
<400> 20
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
20 25 30
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
35 40 45
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
50 55 60
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
65 70 75 80
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
85 90 95
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
100 105 110
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
115 120 125
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
130 135 140
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
145 150 155 160
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
165 170 175
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
195 200 205
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
210 215 220
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 21
<211> 209
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链
<400> 21
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
100 105 110
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
115 120 125
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
130 135 140
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
145 150 155 160
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
165 170 175
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
180 185 190
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
195 200 205
Cys
<210> 22
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD147单克隆抗体轻链
<400> 22
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Phe Leu Val Val Ser Ala Gly
20 25 30
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ile Asn Asp
35 40 45
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
50 55 60
Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
65 70 75 80
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
85 90 95
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Pro Pro Phe
100 105 110
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
130 135 140
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
145 150 155 160
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
165 170 175
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
180 185 190
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
195 200 205
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
210 215 220
Cys
225

Claims (4)

1.一种药物制剂，所述药物制剂包含CD147单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂，其中所述缓冲液为组氨酸缓冲液，所述蛋白保护剂为蔗糖，所述表面活性剂为聚山梨酯80；且其中所述组氨酸缓冲液的浓度为9~11 mmol/L，所述蔗糖在所述药物制剂中的浓度为80~110 mg/ml，所述聚山梨酯80在所述药物制剂中的浓度为0.35~0.45 mg/ml；
其中所述CD147单克隆抗体包含如SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的重链和如SEQID NO: 19所示的氨基酸序列的轻链；
所述CD147单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为15~25 mg/ml；且
所述药物制剂具有5.5~6.5的pH。
2.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述药物制剂在低温条件下稳定至少24个月。
3.根据权利要求1或2所述的药物制剂，其中所述药物制剂能够被稀释剂稀释2-80倍，并在25±2°C的温度下稳定至少7天。
4.权利要求1-3中任一项所述的药物制剂在制备治疗CD147相关疾病的药物中的用途，其中所述CD147相关疾病为癌症。
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