CN114762678B - 抗tigit抗体药物组合物及其用途 - Google Patents

抗tigit抗体药物组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供稳定的抗TIGIT抗体药物组合物及其用途。该药物组合物含有缓冲液和抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；其中所述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中，所述药物组合物的pH为约5.0‑6.5，优选为约5.0‑6.0。

Description

抗TIGIT抗体药物组合物及其用途
技术领域
本发明涉及治疗性药物组合物领域，具体涉及抗TIGIT抗体药物组合物及其用途。
背景技术
TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)是由一个细胞外免疫球蛋白结构域、I型跨膜区和两个ITIM基序组成的，主要在活化T细胞和NK细胞上表达的免疫调节受体(Stanietsky等，PNAS.2009,106,17858-17863)。TIGIT识别配体为脊髓灰质炎病毒受体(PVR，CD155)和连接蛋白(Nectin)2(PVRL2/CD112)，该配体在多种不同的肿瘤细胞上过表达。已报道，TIGIT与配体PVR以高亲和力结合。TIGIT与配体结合，会激活由TIGIT的细胞质尾部中存在的以下两个基序所介导的抑制性信号:免疫受体尾部酪氨酸(ITT)样基序和免疫优势的基于酪氨酸的抑制性(ITIM)基序(Liu等，Cell death and differentiation2013，20,456-464；Stanietsky等，European journal of immunology,2013,43,2138-2150)。肿瘤细胞表面配体通过与NK细胞和T细胞表面TIGIT的ITIM结构域结合，抑制NK细胞毒性和T细胞活性，从而介导肿瘤细胞的免疫逃避机制。已有多篇专利文献报导具有阻断TIGIT与其配体结合的抗TIGIT抗体，可通过抑制TIGIT介导的免疫抑制作用，用于肿瘤等疾病的治疗(WO2004/024068、WO2009/126688、WO2015/009856、WO2016/028656)。
对于提供能够单独地或与其它药剂相组合，通过降低人类TIGIT的抑制活性而使免疫系统的细胞攻击肿瘤细胞的其他更有效、特异、安全和/或稳定的药剂，存在着未满足的需求。
发明内容
本发明所述的药物组合物是一种含有与TIGIT特异性结合的人源抗体的高稳定性药物组合物。特别地，本发明发现海藻糖具有能明显提高药物组合物的稳定性。
本发明提供了一种药物组合物，包含：(1)缓冲液；(2)抗TIGIT抗体或其抗原结合片段。
在一些方案中，上述药物组合物的pH为约5.0-6.5，优选为约5.0-6.0，更优选为约5.5。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列分别如SEQID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述药物组合物中抗TIGIT抗体或其抗原结合片段的浓度约为1-300mg/mL，优选约为1-250mg/mL，优选约为1-200mg/mL，优选约为10-80mg/mL，更优选10-40mg/mL；更优选地，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度约为5mg/mL，10mg/mL，15mg/mL，20mg/mL，25mg/mL，30mg/mL，35mg/mL，40mg/mL，50mg/mL，60mg/mL，70mg/mL，80mg/mL，90mg/mL，100mg/mL，110mg/mL，120mg/mL，130mg/mL或140mg/mL，优选约为10mg/mL，20mg/mL或40mg/mL。
在一些方案中，上述缓冲液选自醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和组氨酸缓冲液中一种或一种以上；优选地，所述缓冲液为醋酸缓冲液。
在一些方案中，上述缓冲液为组氨酸缓冲液，优选地，所述组氨酸缓冲液选自组氨酸-盐酸盐缓冲液或组氨酸-醋酸盐缓冲液，优选组氨酸-盐酸盐缓冲液。
在一些方案中，上述组氨酸缓冲液为组氨酸-盐酸盐缓冲液。在一些方案中，上述组氨酸-盐酸盐缓冲液由组氨酸和组氨酸盐酸盐制成，优选L-组氨酸和L-组氨酸单盐酸盐。在一些方案中，组氨酸缓冲液由1-30mM的L-组氨酸和1-30mM的L-组氨酸单盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:1到1:4的组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:1组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:3的组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸制剂为：由4.5mM的L-组氨酸和15.5mM的L-组氨酸单盐酸盐制成的pH为5.5的组氨酸缓冲剂。在一些方案中，组氨酸制剂为：由7.5mM的L-组氨酸和22.5mM的L-组氨酸单盐酸盐制成的pH为5.5的组氨酸缓冲剂。在一些方案中，组氨酸制剂为：由15mM的组氨酸和15mM的组氨酸盐酸盐制成的pH为6.0的组氨酸缓冲液。
在一些方案中，上述组氨酸缓冲液为组氨酸-醋酸盐缓冲液，优选地，两者的摩尔比为1:1到1.5:1，优选地，此类缓冲液的pH为5.5±0.3，优选约为5.5，优选地，这类缓冲液含有15-20mM的组氨酸和12-15mM的醋酸。
在一些方案中，上述缓冲液为醋酸缓冲液，优选地，所述醋酸缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或醋酸-醋酸钾缓冲液，优选醋酸-醋酸钠缓冲液。在一些方案中，醋酸缓冲液由1-30mM的醋酸和1-30mM的醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液由摩尔比为约1:2.1的醋酸和醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液由摩尔比为约1:5.7的醋酸和醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液为：由约6.5mM的醋酸和约13.5mM的醋酸钠制成的pH约为5.0的醋酸缓冲液。在一些方案中，醋酸缓冲液为：由约3mM的醋酸和约17mM的醋酸钠制成的pH约为5.5的醋酸缓冲液。
在一些方案中，上述缓冲液为柠檬酸缓冲液，优选地，所述柠檬酸缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
在一些方案中，上述缓冲液的浓度约为1-200mM，优选约为5-200mM，优选约为10-50mM，优选约为10-30mM；优选约为20-30mM，上述缓冲液浓度非限制性实施例约为5mM，10mM，15mM，20mM，25mM，30mM、40mM、45mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM或180mM或这些范围内任意两个数值作为端点形成的范围，优选为10mM、15mM、20mM或30mM。
在一些方案中，上述缓冲液的pH约为5.0-6.5，优选约为5.0-6.0，优选约为5.5-6.5，优选约为5.0-5.5，优选约为5.5-6.0，优选约为6.0-6.5，上述缓冲液的pH非限制性实施例约为5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，优选约为5.0，5.5或6.0。
在一些方案中，上述的药物组合物还包括稳定剂，所述稳定剂选自盐酸精氨酸、氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖和海藻糖中的一种或一种以上；优选地，所述稳定剂为海藻糖或蔗糖。
在一些方案中，上述稳定剂的浓度为约10mM-400mM，优选20mM-300mM，更优选30mM-200mM。
在一些方案中，上述稳定剂为浓度约30-200mM的氯化钠；或所述稳定剂为浓度约100-300mM的甘露醇；或所述稳定剂为浓度约100-300mM的山梨醇；或所述稳定剂为浓度约100-300mM的蔗糖；或所述稳定剂为浓度约100-300mM的海藻糖；或所述稳定剂为浓度约30-200mM的盐酸精氨酸。
在一些方案中，上述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的甘露醇的组合；或所述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的海藻糖的组合；或所述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的蔗糖的组合。
在一些方案中，上述稳定剂为氯化钠。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约30-200mM的氯化钠，上述氯化钠的浓度优选约为50-190mM，优选约为100-180mM，优选约为120-170mM，优选约为130-150mM，上述氯化钠浓度的非限制性实施例为约100mM，110mM，120mM，125mM，130mM，135mM，140mM，145mM，150mM，155mM，160mM，170mM，180mM，190mM，200mM，优选135mM或140mM。
在一些方案中，上述稳定剂为甘露醇。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约100-300mM的甘露醇，上述甘露醇的浓度优选约为150-300mM，优选约为200-280mM，上述甘露醇浓度的非限制性实施例为约200mM，210mM，220mM，230mM，240mM，250mM，260mM，270mM，280mM，优选为240mM。
在一些方案中，上述稳定剂为山梨醇。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约100-300mM的山梨醇，上述山梨醇的浓度优选约为150-300mM，优选约为200-280mM，上述山梨醇浓度的非限制性实施例为约200mM，210mM，220mM，230mM，240mM，250mM，260mM，270mM，280mM，优选为240mM。
在一些方案中，上述稳定剂为蔗糖。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约100-300mM的蔗糖，上述蔗糖的浓度优选约为150-300mM，优选约为200-280mM，上述蔗糖浓度的非限制性实施例为约200mM，210mM，220mM，230mM，240mM，250mM，260mM，270mM，280mM，优选为220mM。
在一些方案中，上述稳定剂为海藻糖。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约100-300mM的海藻糖，上述海藻糖的浓度优选约为150-300mM，优选约为200-280mM，上述海藻糖浓度的非限制性实施例为约180mM，200mM，210mM，220mM，230mM，240mM，250mM，260mM，270mM，280mM，优选为220mM。
在一些方案中，上述稳定剂为盐酸精氨酸。在一些方案中，上述稳定剂为浓度约30-200mM的盐酸精氨酸，上述盐酸精氨酸的浓度优选约为50-190mM，优选约为100-180mM，优选约为120-170mM，优选约为130-150mM，上述盐酸精氨酸浓度的非限制性实施例为约100mM，110mM，120mM，125mM，130mM，135mM，140mM，145mM，150mM，155mM，160mM，170mM，180mM，190mM，200mM，优选135mM或140mM。
在一些方案中，上述稳定剂为氯化钠与甘露醇的组合。在一些方案中，上述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的甘露醇的组合，优选约40-150mM的氯化钠与约40-180mM的甘露醇的组合，优选约40-100mM的氯化钠与约80-160mM的甘露醇的组合，上述稳定剂的非限制性实施例约为50mM的氯化钠与约120mM的甘露醇的组合，或约50mM的氯化钠与约140mM的甘露醇的组合。
在一些方案中，上述稳定剂为氯化钠与蔗糖的组合。在一些方案中，上述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的蔗糖的组合，优选约40-150mM的氯化钠与约40-180mM的蔗糖的组合，优选约40-100mM的氯化钠与约80-160mM的蔗糖的组合，上述稳定剂的非限制性实施例约为50mM的氯化钠与约120mM的蔗糖的组合，或约50mM的氯化钠与约140mM的蔗糖的组合。
在一些方案中，上述稳定剂为氯化钠与海藻糖的组合。在一些方案中，上述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的海藻糖的组合，优选约40-150mM的氯化钠与约40-180mM的海藻糖的组合，优选约40-100mM的氯化钠与约80-160mM的海藻糖的组合，上述稳定剂的非限制性实施例约为50mM的氯化钠与约120mM的海藻糖的组合，或约50mM的氯化钠与约140mM的海藻糖的组合。
在一些方案中，上述药物组合物还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188。
在一些方案中，上述表面活性剂选自聚山梨醇酯80。
在一些方案中，上述表面活性剂选自聚山梨醇酯20。
在一些方案中，以w/v计算，上述表面活性剂浓度约为0.001％-0.1％，优选约为0.01％-0.1％，优选约为0.02％-0.08％；作为非限制性实施例，上述表面活性剂的浓度约为0.02％，0.04％或0.08％，优选0.02％。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段具有如SEQ ID NO:7所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段具有如SEQ ID NO:9所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段具有如SEQ ID NO:11所示的重链氨基酸序列，和如SEQ ID NO:12所示的轻链氨基酸序列。
在一些方案中，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段具有如SEQ ID NO:13所示的重链氨基酸序列，和如SEQ ID NO:14所示的轻链氨基酸序列。
在一些方案中，药物组合物包含如下(1)-(8)任一项所示的组分，或分别由(1)-(8)任一项所示的组分组成：
(1)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM醋酸缓冲液，pH约为5.0；(c)约100-300mM的山梨醇；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(2)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约100-300mM的甘露醇；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(3)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM醋酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的海藻糖；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(4)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM醋酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的蔗糖；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(5)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM柠檬酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的蔗糖；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(6)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM柠檬酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的海藻糖；以及(d)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(7)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM醋酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的海藻糖；(d)约30-200mM的氯化钠；以及(e)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80；或
(8)(a)约10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约10-30mM柠檬酸缓冲液，pH约为5.0-6.0；(c)约100-300mM的蔗糖；(d)约30-200mM的氯化钠；以及(e)约0.01％-0.1％的聚山梨醇酯80。
优选地，所述抗TIGIT抗体如本文任一实施方案所述。
在一些方案中，药物组合物包含如下(1)-(7)任一项所示的组分，或分别由(1)-(7)任一项所示的组分组成：
(1)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.0；(c)约220mM的蔗糖；以及(d)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(2)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.0；(c)约220mM的海藻糖；以及(d)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(3)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约240mM的甘露醇；以及(d)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(4)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约220mM的蔗糖；以及(d)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(5)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约220mM的海藻糖；以及(d)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(6)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约140mM的海藻糖；(d)约50mM的氯化钠；以及(e)约0.02％的聚山梨醇酯80；或
(7)(a)约40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；(b)约20mM醋酸缓冲液，pH约为5.5；(c)约140mM的蔗糖；(d)约50mM的氯化钠；以及(e)约0.02％的聚山梨醇酯80。
优选地，所述抗TIGIT抗体如本文任一实施方案所述。
在一些方案中，所述药物组合物为液体制剂或冻干制剂。
在一些方案中，所述药物组合物为液体制剂。
在一些方案中，上述液体制剂或冻干制剂于2-8℃稳定至少3个月，至少6个月，至少12个月，至少18个月或至少24个月。
在一些方案中，上述水溶液或冻干制剂于40℃稳定至少7天，至少14天或至少28天。
本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗或预防TIGIT介导的疾病的药物中的用途；优选地，所述疾病或病症是癌症。
附图说明
图1：Luciferase assay检测人源化抗体对T细胞活性的影响。
图2：FACS检测人源化抗体阻断TIGIT与配体PVR结合作用。
图3：人源化TIGIT抗体及其与抗PD-1抗体联合在MC38荷瘤的TIGIT转基因小鼠中的药效研究。
具体实施方式
定义和说明
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文中另有明确定义，本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义。应理解本发明不限于具体的方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，当然可以对以上进行变化。还应理解本申请所用术语仅为了描述具体的实施方式，并不旨在进行限制。
除非该内容被另外明确说明，否则本说明书以及所附权利要求中所用的单数形式"一个"、"一种"和"该"包括复数指代。因此，例如，提及"一种多肽"包括了两种或更多种多肽等的组合。
术语"药物组合物"或“制剂”表示含有一种或多种本文所述抗体与其他组分的混合物，所述其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“液体制剂”是指处于液体状态下的制剂，且不意图指称重悬浮的冻干制剂。本发明的液体制剂在储存时稳定，并且其稳定性不依赖于冻干(或其他状态改变方法，例如喷雾干燥)。
术语“水性液体制剂”是指使用水作为溶剂的液体制剂。在一些方案中，水性液体制剂是不需冻干、喷雾干燥和/或冷冻来维持稳定性(例如化学和/或物理稳定性和/或生物活性)的制剂。
术语“赋形剂”是指可以向制剂添加以提供所需特性(例如稠度、提高的稳定性)和/或调节渗透压的试剂。常用赋形剂的实例包括但不限于糖类、多元醇、氨基酸、表面活性剂和聚合物。
本申请所用的"约"在指代可测量数值(如量、持续时间等)时意在涵盖相对于具体数值±20％或±10％的变化，包括±5％、±1％和±0.1％，因为这些变化适于进行所公开的方法。
术语"缓冲液pH约为5.0-6.5"是指这样的试剂，通过其酸/碱共轭组分的作用使得包含该试剂的溶液能抵抗pH变化。本发明的制剂中使用的缓冲液可具有约5.0至约6.5范围内的pH、或约5.5至约6.5范围内的pH、或约5.0至约6.0范围内的pH。
在本文中，将pH控制在该范围内的“缓冲液”实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸、组氨酸、组氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐/磷酸盐、咪唑、醋酸、醋酸盐、枸橼酸盐、其组合和其他有机酸缓冲剂。
"组氨酸缓冲液"为包含组氨酸离子的缓冲液。组氨酸缓冲液的实例包括组氨酸和组氨酸的盐，如组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐和组氨酸硫酸盐等，如含有组氨酸与组氨酸盐酸盐的组氨酸缓冲液；本发明的组氨酸缓冲液也包括含有组氨酸和醋酸盐(如钠盐或钾盐)的组氨酸缓冲液。
“柠檬酸盐缓冲液”是包括柠檬酸根离子的缓冲液。柠檬酸盐缓冲液的实例包括柠檬酸-柠檬酸纳、柠檬酸-柠檬酸钾、柠檬酸-柠檬酸钙、柠檬酸-柠檬酸镁等。优选的柠檬酸盐缓冲液为柠檬酸-柠檬酸纳缓冲液。
“醋酸盐缓冲液”是包括醋酸根离子的缓冲液。醋酸盐缓冲液的实例包括醋酸-醋酸纳、醋酸-醋酸钾、醋酸-醋酸钙、醋酸-醋酸镁等。优选的醋酸盐缓冲液为醋酸-醋酸纳缓冲液。
“琥珀酸盐缓冲液”是包括琥珀酸根离子的缓冲液。琥珀盐缓冲液的实例包括琥珀酸-琥珀酸纳、琥珀-琥珀酸钾、琥珀酸-琥珀酸钙、琥珀酸-琥珀酸镁等。优选的琥珀酸盐缓冲液为琥珀-琥珀酸纳缓冲液。
术语“稳定剂”表示药学上可接受的赋形剂，其在制造，储存和应用过程中保护活性药物成分和/或制剂免受化学和/或物理降解。稳定剂包括但不限于如以下定义的糖，氨基酸，盐，多元醇和他们的代谢产物，例如氯化钠、氯化钙、氯化镁、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖、精氨酸或其盐(如盐酸精氨酸)、甘氨酸、丙氨酸(α-丙氨酸、β-丙氨酸)、甜菜碱、亮氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、4-羟基脯氨酸、肌氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、奥品类(opines)、丙氨奥品、章鱼碱、甘氨奥品(strombine))和三甲胺的N-氧化物(TMAO)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、α-酪蛋白、球蛋白、α-乳白蛋白、LDH、溶菌酶、肌红蛋白、卵清蛋白和RNAaseA。部分稳定剂，如氯化钠、氯化钙、氯化镁、甘露醇、山梨醇、蔗糖等也可起到控制渗透压的作用。在本发明中具体地使用的稳定剂选自多元醇、氨基酸、盐、糖中的一种或一种以上。优选的盐为氯化钠，优选的糖为蔗糖和海藻糖，优选的多元醇为山梨醇和甘露醇。优选的氨基酸为精氨酸或其盐(如盐酸精氨酸)、甘氨酸、脯氨酸。优选的稳定剂为氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖、盐酸精氨酸、甘氨酸、脯氨酸、氯化钠-山梨醇、氯化钠-甘露醇、氯化钠-蔗糖、氯化钠-海藻糖、盐酸精氨酸-甘露醇、盐酸精氨酸-蔗糖。
术语“表面活性剂”一般包括保护蛋白质例如抗体免受空气/溶液界面诱导的应力、溶液/表面诱导的应力的影响以减少抗体的聚集或使制剂中颗粒物的形成最小化的试剂。示例性的表面活性剂包括但不限于非离子型表面活性剂例如聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)、聚乙烯-聚丙烯共聚物、聚乙烯-聚丙烯二醇、聚氧乙烯-硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚、例如聚氧乙烯单月桂基醚、烷基苯基聚氧乙烯醚(Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(泊洛沙姆，Pluronic)、十二烷基硫酸钠(SDS)。
术语"等渗"是指该制剂具有与人血液基本相同的渗透压。等渗制剂一般具有约250至350mOsm的渗透压。可使用蒸汽压或冰点下降式的渗透压计测量等渗性。
术语“稳定的”制剂是其中的抗体在制造过程期间和/或储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。即使所含的抗体在经过一定时间储存之后未能保持其100％的化学结构或生物功能，医药制剂也可以是稳定的。在某些情况下，在经过一定时间储存之后，能维持约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的抗体结构或功能，也可被认为是“稳定的”。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本技术领域中是可得的，并综述在《肽和蛋白质药物递送》(Peptide and Protein Drug Delivery)247-301，Vincent Lee主编，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991))，和Jones，A.(1993)Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90中(二者引入作为参考)。
制剂在一定温度下经过一定时间的储存之后，通过测定其中剩余的天然抗体的百分比(及其它方法)，可以测量其稳定性。除其它方法外，天然抗体的百分比可以通过尺寸排阻色谱法(例如尺寸排阻高效液相色谱法[SEC-HPLC])来测量，“天然的”指未聚集的和未降解的。在一些方案中，蛋白质的稳定性按照具有低百分比的降解(例如片段化)和/或聚集蛋白质的溶液中单体蛋白质的百分数来确定。在一些方案中，制剂可以在室温、约25-30℃或40℃下稳定储存至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月，或更长，最多不超过约6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％，或0.1％聚集形式的抗体。
通过测定在离子交换期间在此抗体主馏分(“主要荷电形式”)较为酸性的馏分中迁移的抗体(“酸性形式”)的百分比(及其它方法)，可以测量稳定性，其中稳定性与酸性形式抗体的百分比成反比。除其它方法外，“酸化”抗体的百分比可以通过离子交换色谱法(例如阳离子交换高效液相色谱法[CEX-HPLC])来测量。在一些实施方式中，可接受程度的稳定性意为当制剂在一定温度下经过一定时间的储存之后，其中可检测出的酸性形式的抗体最多不超过约49％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％。在测量稳定性之前储存的一定时间可以是至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月，或更长。当评估稳定性时，容许储存医药制剂的一定温度可以是约-80℃至约45℃范围内的任何温度，例如储存于约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约2-8℃、约5℃、约25℃，或约40℃。
如果抗体在颜色和/或澄清度目测检查时或通过UV光散射或通过孔径排阻层析测量时基本上不显示出例如聚集、沉淀和/或变性的迹象，则所述抗体在该药物组合物中“保持其物理稳定性”。聚集是单个分子或复合物共价或非共价缔合以形成聚集体的过程。聚集可以进行到形成可见沉淀物的程度。
制剂的稳定性例如物理稳定性可以通过本技术领域中公知的方法来评估，包括测量样品的表观消光度(吸光度或光密度)。这样的消光测量与制剂的浊度相关。制剂的浊度部分地是溶解在溶液中的蛋白质的固有性质，并且通常通过比浊法来测量，并用比浊法浊度单位(NTU)来量度。
随着例如溶液中一种或多种组分的浓度(例如蛋白质和/或盐浓度)而变化的浊度水平也被称为制剂的“乳浊”或“乳浊外观”。浊度水平可以参照使用已知浊度的悬液产生的标准曲线来计算。用于测定药物组合物的浊度水平的参比标准品可以基于《欧洲药典》标准(《欧洲药典》(European Pharmacopoeia)，第四版，“欧洲药品质量委员会指令”(Directorate for the Quality of Medicine of the Council of Europe)(EDQM)，Strasbourg，France)。根据《欧洲药典》标准，澄清溶液被定义为浊度低于或等于按照《欧洲药典》标准具有约3的参比悬液的浊度的溶液。比浊法的浊度测量可以检测在不存在缔合或非理想效应的情况下的瑞利散射，其通常随浓度线性变化。用于评估物理稳定性的其他方法在本技术领域中是公知的。
如果抗体在给定时间点的化学稳定性使得抗体被认为仍保持如下文中所定义的其生物活性，则所述抗体在药物组合物中“保持其化学稳定性”。可以通过例如检测或定量抗体的化学改变的形式来评估化学稳定性。化学改变可以包括尺寸改变(例如剪短)，其可以使用例如孔径排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助的激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)来评估。其他类型的化学改变包括电荷改变(例如作为脱酰胺或氧化的结果而发生)，其可以通过例如离子交换层析来评估。
如果药物组合物中的抗体对于其预期目的来说是生物活性的，则所述抗体在药物组合物中“保持其生物活性”。例如，如果制剂于例如5℃、25℃、45℃等温度下储存一定时间(例如1至12个月)之后，该制剂所含抗TIGIT抗体与TIGIT结合的亲和力为所述储存之前抗体结合亲和力的至少90％、95％或以上，则可认为本发明之制剂是稳定的。结合亲和力也可用例如ELISA或等离子共振技术测定。
在本发明的情形中，在药理学意义上，抗体的“治疗有效量”或“有效量”是指在抗体可以有效治疗的障碍的症状的预防或治疗或减轻方面有效的量。本发明中，药物的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或促进疾病消退的任何量的药物，所述疾病消退通过疾病症状的严重性的降低，疾病无症状期的频率和持续时间的增加，或由疾病痛苦引起的损伤或失能的预防来证明。药物促进疾病消退的能力可以使用本领域技术人员已知的多种方法来评价，比如在临床试验期间的人受试者中，在预测人类功效的动物模型系统中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。药物治疗有效量包括“预防有效量”，即当单独或如与其它治疗药物组合给与处于患病风险的受试者或患病复发的受试者时，抑制疾病的发展或复发的任何量的药物。
术语“受试者”或“患者”意图包括哺乳动物生物体。受试者/患者的实例包括人类和非人类哺乳动物，例如非人类灵长动物、狗、奶牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在本发明的特定实施方式中，受试者是人类。
术语“施用”、“给与”及“处理”是指采用本领域技术人员已知的各种方法或递送系统中的任意一种将包含治疗剂的组合物引入受试者。抗PD-1抗体的给药途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜、脊髓或其他胃肠外给药途径，比如注射或输注。“胃肠外给药”是指除了肠内或局部给药以外的通常通过注射的给药方式，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴内、损伤内、囊内、框内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜内和胸骨内注射和输注以及经体内电穿孔。
抗TIGIT抗体
本文所用的术语“抗体”应被理解为包括完整抗体分子及其抗原结合片段。本文所用的术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简称为“抗体部分”或“抗体片段”)是指抗体中保持了与人TIGIT或其表位特异性结合能力的一个或多个片段。
本文所用的术语“全长抗体”或“完整抗体分子”指包含四条肽链的免疫球蛋白分子，两条重(H)链(全长时约50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约25kDa)通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
当在本文中使用时，术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。在重链和轻链的各个可变区中存在3个CDR，其对于各个重链和轻链可变区被命名为HCDR1、HCDR2和HCDR3或LCDR1、LCDR2和LCDR3。这些CDR的准确边界按照不同的系统有不同的定义。
本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883，Al-Lazikani等人,“Standard conformations for thecanonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999NucleicAcids Research,27,209-212)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinitypropagation clustering)的North CDR定义。本发明抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
本文所使用的“抗原结合片段”包括抗体的片段或其衍生物，通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段，其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗体的结合活性在摩尔浓度基础上表示时，结合片段或其衍生物通常保持亲代抗体抗原结合活性的至少10％。优选结合片段或其衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。
本发明所述的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段包括申请号为PCT/CN2020/101883中描述的任意一个抗TIGIT抗体或其抗原结合片段，本文将其所公开的全部内容以引入的方式纳入本文。在一些方案中，在本发明的方法和组合物中使用的抗体的CDR序列包括来自于PCT/CN2020/101883中描述的抗体hu20或hu3的CDR序列。
在本文实施例中所用的非限制性、示范性抗体选自PCT/CN2020/101883中描述的人源化抗体hu20和hu3，其氨基酸CDR序列，可变区序列及全长氨基酸序列见表1。
表1：人源化抗体全长、可变区和CDR氨基酸序列(IMGT定义)
抗体 hu20 hu3
HCDR1 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:1
HCDR2 SEQ ID NO:2 SEQ ID NO:2
HCDR3 SEQ ID NO:3 SEQ ID NO:3
LCDR1 SEQ ID NO:4 SEQ ID NO:4
LCDR2 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:5
LCDR3 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:6
VH SEQ ID NO:7 SEQ ID NO:9
VL SEQ ID NO:8 SEQ ID NO:10
HC SEQ ID NO:11 SEQ ID NO:13
LC SEQ ID NO:12 SEQ ID NO:14
医药制剂
本发明所述的药物组合物是一种含有与TIGIT特异性结合的人源化抗体的高稳定性药物组合物。本发明发现海藻糖能明显提高药物组合物的稳定性。
本发明所述的药物组合物是一种具有高稳定性的液体性制剂。特别地，本发明发现含有醋酸缓冲液的制剂稳定性明显高于其它缓冲液。
本发明提供了一种药物组合物，包含：(1)缓冲液；(2)抗TIGIT抗体或其抗原结合片段。
本发明药物组合物中的抗体可以是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体，可具有分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。优选地，本发明药物组合物中的抗体具有如SEQ ID NO:7所示的重链可变区和如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区，或具有如SEQ ID NO:9所示的重链可变区和如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区；更优选地，本发明药物组合物中的抗体具有分别如SEQ ID NO:11所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:12所示的轻链氨基酸序列，或本发明药物组合物中的抗体具有分别如SEQ ID NO:13所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:14所示的轻链氨基酸序列。
本发明的药物组合物中，抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度约为1-300mg/mL，优选约为1-250mg/mL，优选约为1-200mg/mL，优选约为10-80mg/mL，更优选10-40mg/mL；更优选地，上述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度约为5mg/mL，10mg/mL，15mg/mL，20mg/mL，25mg/mL，30mg/mL，35mg/mL，40mg/mL，50mg/mL，60mg/mL，70mg/mL，80mg/mL，90mg/mL，100mg/mL，110mg/mL，120mg/mL，130mg/mL或140mg/mL，优选约为10mg/mL，20mg/mL或40mg/mL。
本发明药物组合物中的缓冲液可选自醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和组氨酸缓冲液，用以为本发明的药物组合物提供5.0到6.5、优选5.0到6.0，更优选5.5±0.3，更优选为约5.5的pH。另一方面，用于本发明药物组合物中的缓冲液的pH可为5.0-6.5，优选为5.0-6.0，更优选5.5±0.3，更优选为约5.5。
本发明药物组合物中特别优选的缓冲液是醋酸缓冲液。优选地，该醋酸缓冲液的pH为约5.0到约6.0，更优选为约5.5±0.3。优选地，所述醋酸缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或醋酸-醋酸钾缓冲液，优选醋酸-醋酸钠缓冲液。在一些方案中，醋酸缓冲液由1-30mM的醋酸和1-30mM的醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液由摩尔比为约1:2.1的醋酸和醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液由摩尔比为约1:5.7的醋酸和醋酸钠制成。在一些方案中，醋酸缓冲液为：由约6.5mM的醋酸和约13.5mM的醋酸钠制成的pH约为5.0的醋酸缓冲液。在一些方案中，醋酸缓冲液为：由约3mM的醋酸和约17mM的醋酸钠制成的pH约为5.5的醋酸缓冲液。
在其它一些优选的实施方案中，本发明药物组合物中的缓冲液为柠檬酸缓冲液，优选地，所述柠檬酸缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。优选地，本发明药物组合物中柠檬酸缓冲液的pH为约5.0到约6.0。
本发明药物组合物中的缓冲液可以是组氨酸缓冲液，包括组氨酸-盐酸盐缓冲液或组氨酸-醋酸盐缓冲液，优选组氨酸-盐酸盐缓冲液。更优选地，所述组氨酸-盐酸盐缓冲液由组氨酸和组氨酸盐酸盐制成，优选L-组氨酸和L-组氨酸单盐酸盐。在一些方案中，组氨酸缓冲液由1-20mM的L-组氨酸和1-20mM的L-组氨酸单盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:1到1:4的组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:1组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。在一些方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:3的组氨酸和组氨酸盐酸盐制成。
因此，本发明的药物组合物中，缓冲液可以是pH为5.0-6.0的醋酸缓冲液，其在药物组合物中的浓度为10-30mM；且所述药物组合物含有10-80mg/mL的前文任一实施方案所述的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段，尤其是本文所述的hu3和hu30抗体或其抗原结合片段。
在一些方案中，本发明的药物组合物还含有稳定剂。优选地，所述稳定剂选自盐酸精氨酸、氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖和海藻糖中的一种或一种以上。优选地，所述稳定剂为海藻糖或蔗糖。本发明的药物组合物中稳定剂的浓度为约10mM-400mM，优选20mM-300mM，更优选30mM-200mM。在一些方案中，稳定剂为浓度约30-200mM的氯化钠；或所述稳定剂为浓度约100-300mM、优选200-300mM的甘露醇；或所述稳定剂为浓度约100-300mM、优选200-300mM的山梨醇；或所述稳定剂为浓度约100-300mM、优选200-300mM的蔗糖；或所述稳定剂为浓度约100-300mM、优选200-300mM的海藻糖；或所述稳定剂为浓度约30-200mM、优选约60-150mM的盐酸精氨酸。在一些方案中，所述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的甘露醇的组合；或所述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的蔗糖的组合；或所述稳定剂为约30-200mM的氯化钠与约30-200mM的海藻糖的组合。
因此，在一些实施方案中，本发明的药物组合物含有：(a)10-30mM的缓冲液，其为pH为5.0-6.0的醋酸缓冲液；(b)10-80mg/mL的前文任一实施方案所述的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段，尤其是本文所述的hu3或hu20抗体或其抗原结合片段；以及(c)20mM-300mM的稳定剂，优选为浓度约30-200mM的氯化钠，或为浓度约200-300mM的甘露醇，或为浓度约200-300mM的山梨醇，或为约200-300mM的蔗糖，或为约200-300mM的海藻糖，或为约60-150mM的盐酸精氨酸。在一些实施方案中，所述稳定剂为约200-300mM的蔗糖。在一些实施方案中，所述稳定剂为约200-300mM的海藻糖。
在一些方案中，本发明的药物组合物还包括表面活性剂。优选的表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和泊洛沙姆188。最优选的表面活性剂是聚山梨醇酯80。以w/v计，本发明药物组合物中表面活性剂的浓度约为0.001％-0.1％，优选约为0.02％-0.08％，优选约为0.02％-0.04％。作为非限制性实施例，本发明药物组合物中表面活性剂的浓度约为0.02％，0.04％或0.08％，优选0.02％。
因此，在一些实施方案中，本发明的药物组合物含有：缓冲液，其为pH为5.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液，其在药物组合物中的浓度为10-30mM；10-80mg/mL的前文任一实施方案所述的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段，尤其是本文所述的hu3，hu20或其抗原结合片段；100mM-300mM的稳定剂，优选地，所述稳定剂为约200-300mM的蔗糖，或为约200-300mM的海藻糖；以及以w/v计0.02％-0.04％的聚山梨醇酯80。
本发明的药物组合物可以是液体制剂，或者是冻干制剂。
医药用途和方法
本发明还提供了用于治疗或预防TIGIT介导的疾病的本发明任一实施方案所述的药物组合物，本发明任一实施方案所述的药物组合物在制备治疗或预防TIGIT介导的疾病的药物中的用途，以及给予需要的个体或患者治疗有效量的本发明任一实施方案所述的药物组合物以治疗或预防TIGIT介导的疾病的方法。
本发明中，TIGIT介导的疾病指在TIGIT参与了疾病的发生和发展的疾病，包括但不限于癌症。
“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调控的生理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤，和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌，肺癌(包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌，和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤(hepatoma)，乳腺癌，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，鼻咽癌，食管鳞状细胞癌，肝癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，及各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，小淋巴细胞性(SL)NHL，中级/滤泡性NHL，中级弥漫性NHL，高级成免疫细胞性NHL，高级成淋巴细胞性NHL，高级小无核裂细胞性NHL，贮积病(bulky disease)NHL，套细胞淋巴瘤，AIDS相关淋巴瘤，和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，慢性成髓细胞性白血病，和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)，水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。
下文将以具体实施例的方式阐述本发明。应理解，这些实施例仅仅是阐述性的，并非意图限制本发明的范围。实施例中所用到的方法和材料，除非另有说明，否则为本领域的常规方法和材料。
实施例1：缓冲液体系、pH和蛋白浓度筛选实验
液体型药物组合物中，缓冲液体系和pH密切影响抗体的稳定性，每种具有独特理化性质的抗体都具有最适宜的缓冲液的种类和pH。本实施例旨在筛选一种最佳缓冲液体系和pH，使本发明公开的抗TIGIT抗体具有最佳的稳定性以适宜临床应用。
本实施例以约10mg/mL、20mg/mL和40mg/mL浓度的抗体hu20进行。样品使用Millipore Pellicon3 0.11m2膜进行超滤浓缩换液，换液后样品处于相应的处方中，样品放置在密闭的离心管中进行缓冲液筛选。筛选了醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和组氨酸缓冲液，pH从5.0到6.5(如表2所示)。将样品放置在40±2℃环境下，分别在第0周、第1周、第2周、第4周取出，进行外观和可见异物、SEC-HPLC和CEX-HPLC分析检测。蛋白降解的主要途径是聚集物、裂解产品和带电变体的形成。采用尺寸排阻色谱法(SEC-HPLC)测定天然形式(蛋白单体)与聚集形式所占的百分比，采用阳离子交换色谱法(CEX-HPLC)测定酸性与碱性形式抗体所占的百分比。以放置四周(4W)的SEC-HPLC单体含量和CEX-HPLC主峰含量，拟合直线并计算下降斜率(％/周)考察不同缓冲液体系和pH对抗体hu20抗体稳定性的影响，结果汇总见表3所示。
表2：缓冲液体系和pH筛选实验中的处方信息
表3：不同蛋白浓度、pH和缓冲液下单体和主峰含量降解速率
注：*表示为两周数据平均值。
其中，外观可见异物结果显示，在40±2℃加速条件下，处方1-4出现沉淀终止放样，其他处方样品正常，说明pH6.5柠檬酸缓冲体系不适合本项目缓冲体系。
SEC-HPLC和CEX-HPLC下降速率结果显示，在40±2℃放置4周后，在pH 5.5的组氨酸缓冲体系下(处方1-5)，单体纯度和主峰下降最快，pH 6.0的柠檬酸缓冲体系(处方1-3)次之，pH5.5的醋酸缓冲体系(处方1-2)在不同蛋白浓度条件下纯度下降及主峰下降均最低，纯度平均下降速率0.23％/周，主峰含量平均下降速率2.76％/周，同时，蛋白浓度的高低对纯度影响不大。
实施例2：稳定剂(辅料)筛选实验
为了进一步探究不同辅料对抗体稳定性影响，我们选取氯化钠、蔗糖、盐酸精氨酸、海藻糖、山梨醇或甘露醇之一的辅料进行了比较测试。考察pH5.0，20mM醋酸缓冲体系，pH5.5，20mM醋酸缓冲体系和pH6.0，20mM柠檬酸缓冲体系，单抗hu20浓度20mg/ml条件下，上述不同辅料对稳定性的影响，具体处方信息如表4所示。各处方制剂分装后放置于40±2℃条件下，分别在第0周、第1周、第2周、第4周取出进行分析检测。通过分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)检测抗体hu20单体含量变化、弱阳离子高效液相色谱法(CEX-HPLC)检测抗体hu20电荷主峰含量，同时检测外观和可见异物。结果见表5。
表4：辅料筛选实验中的处方信息
表5：不同pH和辅料中单体含量和主峰含量降解速率
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注：“/”表示未测定。
不同辅料的制剂处方样品在40±2℃高温条件下，外观和可见异物结果显示，处方2-1-3出现沉淀，其他处方样品正常，说明pH5.0醋酸缓冲体系下含辅料甘露醇相对其他pH和辅料不稳定。
在三个不同pH条件下，含氯化钠和盐酸精氨酸的处方SEC单体纯度下降均较快，pH5.5含山梨醇(处方2-2-4)SEC单体纯度下降也较快；pH5.0条件下，辅料蔗糖和海藻糖(处方2-1-5和2-1-6)优于其他辅料单体，单体纯度下降速率只有0.2％/周，pH5.5条件下甘露醇，海藻糖(处方2-2-3和2-2-6)表现较好，单体纯度下降速率只有0.2％/周；对比CEX-HPLC的降解速率发现，处方2-1-6的表现最优，主峰含量下降速率仅为2.8％/周。详见表5。
综合各项数据分析，在pH5.0含辅料甘露醇处方(处方2-1-3)有蛋白沉淀，pH5.5和pH6.0均正常，表明辅料甘露醇对pH值相对较敏感；处方2-1-6整体表现最佳，其次为处方2-1-5，处方2-2-6，不同pH条件下辅料海藻糖和蔗糖表现均较好。因此，辅料选用海藻糖和蔗糖更有利于产品的稳定性。
实施例3：稳定剂(辅料)和表面活性剂筛选实验
液体制剂中添加表面活性剂常用于保护蛋白质例如抗体在储存过程中免受空气/溶液界面诱导的应力、溶液/表面诱导的应力的影响以减少抗体的聚集或使制剂中颗粒物的形成最小化的试剂，其利于抗体理化性质的稳定。在含有20mM醋酸缓冲液和40mg/ml的抗体hu20的制剂中分别加入海藻糖、蔗糖或其与氯化钠的组合，以及不同浓度的聚山梨酯20或聚山梨酯80，考察上述不同辅料和表面活性剂对稳定性的影响，具体处方信息如表6所示。在40±2℃放置0周、2周、4周后分析检测外观和可见异物、SEC-HPLC、CEX-HPLC。结果如表7所示。
表6：辅料和表面活性剂筛选实验中的处方信息
注：“/”表示未添加。
表7：不同辅料和表面活性剂条件下单体含量和主峰含量降解速率
不同辅料和表面活性剂的制剂处方样品在40±2℃高温条件下放置2周后，外观和可见异物结果显示，处方3-3出现沉淀，其他处方样品正常。
SEC-HPLC检测结果表明，在加速40±2℃条件下，处方3-4和处方3-5单体纯度下降较快，处方3-3聚集严重出现蛋白沉淀，说明单辅料蔗糖、海藻糖的效果优于蔗糖、海藻糖和氯化钠的组合，其中，含单一辅料海藻糖的处方最优(处方3-2)。表面活性剂筛选表明，含有0.04％吐温-80的处方3-5单体下降速率较快，其他吐温-20与吐温-80的处方(处方3-1/5/6/7/8/9)浓度效果差异不大。CEX-HPLC主峰含量变化整体差异不大。
综合分析表明，处方3-2表现整体最优，即20mM醋酸缓冲液，220mM海藻糖，pH5.5，0.02％吐温-80。
实施例4：制剂长期稳定性研究
含有治疗性抗体的液体药物制品通常需要储存在2-8℃条件下，所以制剂能在长期储存中保持高稳定性非常重要。根据上述的筛选结果，20mM醋酸缓冲液，220mM海藻糖，pH5.5，0.02％吐温-80作为最终处方。我们使用此处方进行后续的生产与长期和加速稳定性考察。
选用4个批次成品，放置2-8℃条件下0-36个月后，对各样品进行分析测试。通过以下参数评估稳定性：(a)目视外观；(b)光阻法检测不溶性微粒(OD405nm)；(c)pH；(d)CE-SDS(十二烷基硫酸钠毛细管电泳)法检测抗体的分子量；(d)SEC-HPLC测量抗体单体(质量标准：≥95.0％)、聚体(质量标准：≤5.0％)、片段的含量(质量标准：≤3.0％)；(e)CEX-HPLC测量抗体主要电荷(质量标准：≥50.0％)、酸性电荷(质量标准：≤40.0％)、碱性电荷含量(质量标准：≤30.0％)；(f)ELISA法检测抗体结合活性(质量标准：参比品的70％-130％)；(g)蛋白质含量(质量标准：36.0-44.0mg/ml)。
结果显示，4个批次成品的外观、pH值、不溶性微粒、蛋白质含量、纯度(SEC-HPLC(分子排阻高效液相色谱法)、CEX-HPLC(弱阳离子交换高效液相色谱法)、R-CE-SDS(还原电泳法)、NR-CE-SDS(非还原电泳法)和生物学活性均无显著变化，具体见表8。结果表明，上述4个批次原液在2-8℃条件下，0-12月储存过程具有非常好的稳定性。
表8：制剂处方的长期稳定性数据
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注：NR表示未到该时间点。
实施例5：制剂的加速稳定性研究
我们使用生产成品进行加速稳定性研究。放置25±2℃，60±5％相对湿度(RH)条件下，0-6个月后，对各样品进行分析测试。
如表9所示，该成品制剂对抗蛋白质降解具有较高的稳定性，在25±2℃下测量的所得降解动力学参数满足室温环境储存长达6个月的要求。
表9：制剂处方的加速稳定性数据
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实施例6：制剂的处方影响因素和处方确认
选用抗体原液，配制如表10所示的处方制剂，考察反复冻融条件下的样品稳定性，进行处方条件确认，抗体hu20的浓度为40mg/ml，考察指标见表11。
表10：影响因素处方信息
注：“/”表示未添加。
表11：考察条件、时间点和检测项目
结果表明，在≤-40℃放置5小时以上完全冻结后，取出至室温完全融化，如此反复冻融三次后，外观、SEC-HPLC和Binding ELISA(相对结合活性)均无显著变化，表现了处方良好的稳定性。详见表12。
表12：反复冻融筛选结果
综上所述，我们通过对不同缓冲体系、不同pH条件、不同抗体浓度以及不同辅料和表面活性剂组成进行考察，探索研究重组人源化抗TIGIT单克隆抗体hu20的稳定性，并确定最佳液体制剂配方。根据上述实验，本发明抗体选择醋酸缓冲液来调节pH，海藻糖调节制剂渗透压，添加聚山梨酯80来增加制剂溶解性。
实施例7：人源化抗TIGIT抗体对T细胞活性的影响
将稳定表达hPVRL2的CHO细胞铺到96孔板，每孔细胞量为5×104，37℃、7％CO2培养过夜，去除细胞上清，每孔中加入40μL抗TIGIT抗体(hu20或MBSA43)稀释液(起始浓度为10ug/ml，3倍滴定)，加入40μL可以持续表达hTIGIT/NFAT-荧光素酶的Jurkat报告细胞，总细胞数为1×105细胞，37℃、7％CO2培养6小时，加入荧光素酶试剂，酶标仪检测发光值。
其中，MBSA43为商业化抗人TIGIT抗体(Etigilimab)，购自ThermoFisher，货号16-9500-82。
本发明抗TIGIT抗体按照处方3-2的配方配置。
用GraphPad Prism 5分析数据，计算TIGIT抗体激活T细胞的EC50值，评估抗TIGIT抗体对T细胞活性的影响。
如图1所示，抗体hu20能显著增强荧光信号，即促进T血细胞的激活，其EC50为42.39ng/mL；并且抗体hu20促进T血细胞的激活作用明显优于对照抗体Etigilimab。
实施例8：FACS检测抗体阻断hTIGIT与其配体hPVR的结合作用
采用基于竞争性流式细胞(FACS)测定，检测抗体阻断hTIGIT与其配体hPVR等的结合作用。简而言之，将不同浓度的抗体稀释液(起始30μg/ml，3倍滴定)与PVR-mFC(1ug/ml，50μL)混合，室温孵育30分钟。然后将混合物与细胞悬液(293F-hPVR稳转细胞株，2.5×104细胞/孔)在37摄氏度孵育15分钟，以PBS洗脱3次后，加入100μL山羊抗人IgG-PE抗体，避光孵育30min。以PBS洗脱3次后，通过FACS检测。根据从FSC/SSC对活细胞进行门控，并测量其几何平均荧光。
本发明抗TIGIT抗体按照处方3-2的配方配置。
如图2所示，本发明人源化抗体能有效阻断TIGIT与细胞表面的PVR结合。
实施例9：BIACORE检测人源化抗体与不同种属TIGIT的结合
利用Biacore T200(GE)检测本发明的抗体与TIGIT间的亲和力和结合动力学。首先将S系列CM5芯片(GE)装载到仪器上，准备将溶解于醋酸钠-醋酸缓冲液(pH 5.0)的40μg/mL羊抗人Fc片断抗体(Jackson ImmuneResearch公司)偶联于芯片表面。抗体抗原结合检测使用的缓冲液是GE医疗生命科学公司的HBS-EP+。将抗体hu3与hu20分别稀释至8μg/mL，并捕获于芯片表面。将抗原hTIGIT Fc稀释至20nM，并以30μL/min的流速注入芯片表面180s，检测抗体与抗原的结合解离信号。利用Biacore T200Evaluation Software 3.0软件以1:1结合模型分析所得数据。拟合得到抗体与抗原间结合的动力学常数结合速率ka(1/Ms)，解离速率kd(1/s)，平衡解离常数KD(M)如下表13所示。
本发明抗TIGIT抗体按照处方3-2的配方配置。
表13：抗体与TIGIT-Fc的亲和力
抗体 抗原 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
hu3 Cyno TIGIT-Fc 2.11E+05 3.00E-04 1.42E-09
hu20 Cyno TIGIT-Fc 2.26E+05 3.29E-04 1.45E-09
hu3 hTIGIT-Fc 9.35E+05 1.21E-04 1.30E-10
hu20 hTIGIT-Fc 7.77E+05 1.63E-04 2.09E-10
结果显示，本发明的抗体与人、食蟹猴的TIGIT均具有高亲和力，抗体与人的KD值低至0.13nM。
实施例10：人源化抗体对小鼠肿瘤生长的抑制作用
本研究涉及B-hPD-1/hTIGIT人源化小鼠(购自百奥赛图江苏基因生物技术有限公司；雌性)MC38结肠癌动物模型的建立和抗TIGIT抗体和其与抗-PD1抗体联合给药的协同抗肿瘤效应的研究。
将PBS重悬的MC38细胞以5×105个/0.1mL浓度，0.1mL/只体积接种于B-hPD-1/hTIGIT人源化小鼠的背部右侧皮下。当平均肿瘤体积达到80-100mm3时，根据小鼠肿瘤体积和体重选择合适的小鼠入组，平均分配到8个实验组中，每组8只，分组当天开始给药，具体给药方案见下表14。
表14：给药方案
组别 给药抗体 剂量，(mg/kg)a 给药途径 给药频率b 给药次数
1 KLH hIgG4 10 i.p BIW 6
2 JS001 0.3 i.p BIW 6
3 hu20 1 i.p BIW 6
4 hu20 3 i.p BIW 6
5 hu20 10 i.p BIW 6
6 JS001+hu20 0.3+1 i.p BIW 6
7 JS001+hu20 0.3+3 i.p BIW 6
8 JS001+hu20 0.3+10 i.p BIW 6
注：a：给药体积依实验动物体重按10μL/g计算；
b：BIW指每周给药2次；
i.p：腹腔注射；
KLH hIgG4：阴性对照抗体；
JS001：君实生物自主研发抗PD-1抗体(CN2013102582892，抗体38)。
本发明抗TIGIT抗体按照处方3-2的配方配置。
在整个研究期间从第6天(给药前)开始每周测量两次肿瘤体积和动物体重，连续监测3周。采用游标卡尺测定肿瘤的长径(L)和短径(W)，肿瘤体积(V)按如下公式计算：V＝L×W2/2。将来自每组的小鼠的肿瘤体积与时间作图。使用方差分析(ANOVA)来确定统计显著性。<0.05的P值被视为在所有分析中具有统计显著性。
26天实验结束时，使小鼠安乐死。分离瘤组织拍照并称重测量，测量各组小鼠瘤重和体积(肿瘤终末体积)，并且计算相对肿瘤生长抑制率(TGI(％))。
结果：
(1)如图3所示，单药方面，给药3周后，相对于组l(KLH hIgG4；10mg/kg)给药组，组2(JS001；0.3mg/kg)、组3(hu20；1mg/kg)、组4(hu20；3mg/kg)和组5(hu20；10mg/kg)给药组对MC38荷瘤小鼠中肿瘤增长有明显的抑制作用，瘤体积减小，肿瘤生长也放缓。联合用药方面，联合给药组比单药给药组(组6vs组3/组2；组7vs组4/组2；组8vs组5/组2)对MC38荷瘤小鼠中肿瘤增长有抑制作用更显著，即本发明的抗TIGIT单抗hu20与抗PD-1单抗JS001联合用药表现出良好的协同抗肿瘤效应。
(2)本发明还计算了在第26天(植瘤后)实验结束时各组小鼠中的相对肿瘤生长抑制率。相对肿瘤生长抑制率的计算公式如下：
相对肿瘤生长抑制率TGI(％)＝[1-(Ti–T0)/(Vi–V0)]×100％
其中，Ti-T0＝给药组给药后肿瘤终末体积-给药组给药前肿瘤体积；Vi–V0＝对照组给药后肿瘤终末体积-对照组给药前肿瘤体积(第6天给药前肿瘤体积)。
计算结果如下表15所示。
表15：抗TIGIT抗体对荷瘤小鼠肿瘤组织生长的影响(mm3，Mean±SD,n＝8)
Mean±SD：平均值±标准偏差。
结果显示，在实验终末期(植瘤后第26天)，抗TIGIT抗体hu20与抗PD-1抗体JS001联合给药组的相对肿瘤生长抑制率TGI(％)明显高于hu20或JS001单独给药组(组6vs组3/组2；组7vs组4/组2；组8vs组5/组2)。
序列表
<110> 上海君实生物医药科技股份有限公司
苏州君盟生物医药科技有限公司
<120> 抗TIGIT抗体药物组合物及其用途
<130> 220320
<150> CN 202110048207.6
<151> 2021-01-14
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr Thr
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
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1 5 10
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
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1
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr
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Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Asn Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Leu Leu Arg Leu Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
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Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ile Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
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65 70 75 80
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
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195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
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275 280 285
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (26)

1.一种药物组合物，包含：
（1）缓冲液；和
（2）抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；
其中所述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中，所述药物组合物的pH为5.0-6.5。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH为5.0-6.0。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缓冲液选自醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和组氨酸缓冲液。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述缓冲液为醋酸缓冲液。
5.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述缓冲液的浓度为10-50mM。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述缓冲液的浓度为10-30mM。
7.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述缓冲液的pH为5.0-6.5。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述缓冲液的pH为5.0-6.0。
9.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包括稳定剂，所述稳定剂选自盐酸精氨酸、氯化钠、甘露醇、山梨醇、蔗糖和海藻糖中的一种或两种以上。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述稳定剂为海藻糖或蔗糖。
11.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述稳定剂为浓度30-200mM的氯化钠；或所述稳定剂为浓度100-300mM的甘露醇；或所述稳定剂为浓度100-300mM的山梨醇；或所述稳定剂为浓度100-300mM的蔗糖；或所述稳定剂为浓度100-300mM的海藻糖；或所述稳定剂为浓度30-200mM的盐酸精氨酸；
或所述稳定剂为30-200mM的氯化钠与30-200mM的甘露醇的组合；或所述稳定剂为30-200mM的氯化钠与30-200mM的蔗糖的组合；或所述稳定剂为30-200mM的氯化钠与30-200mM的海藻糖的组合。
12.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述稳定剂为100-300mM的海藻糖、100-300mM的蔗糖、100-300mM的甘露醇或100-300mM的山梨醇。
13.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述稳定剂为100-300mM的海藻糖。
14.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188。
15.如权利要求14所述的药物组合物，其中所述表面活性剂为聚山梨醇酯80。
16.如权利要求14所述的药物组合物，其中所述表面活性剂浓度为0.01%-0.1%。
17.如权利要求16所述的药物组合物，其中所述表面活性剂浓度为0.02%-0.08%。
18.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中，所述抗TIGIT抗体包含：
（I）氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；或
（II）氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区。
19.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中所述抗TIGIT抗体包含：
（I）如SEQ ID NO:11所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:12所示的轻链氨基酸序列；或
（II）如SEQ ID NO:13所示的重链氨基酸序列和如SEQ ID NO:14所示的轻链氨基酸序列。
20.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其中所述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度为1-200mg/mL。
21.如权利要求20所述的药物组合物，其中所述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度为10-80mg/mL。
22.如权利要求20所述的药物组合物，其中所述抗TIGIT抗体或其抗原结合片段浓度为10-40mg/mL。
23.如权利要求1-8任一项所述的药物组合物，其包含如下（1）-（8）任一项所示的组分，或分别由（1）-（8）任一项所示的组分组成：
（1）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM醋酸缓冲液，pH为5.0；（c）100-300mM的山梨醇；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（2）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）100-300mM的甘露醇；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（3）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM醋酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的海藻糖；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（4）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM醋酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的蔗糖；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（5）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM柠檬酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的蔗糖；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（6）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM柠檬酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的海藻糖；以及（d）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（7）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM醋酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的海藻糖；（d）30-200mM的氯化钠；以及（e）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80；或
（8）（a）10mg/mL-80mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）10-30mM柠檬酸缓冲液，pH为5.0-6.0；（c）100-300mM的蔗糖；（d）30-200mM的氯化钠；以及（e）0.01%-0.1%的聚山梨醇酯80。
24.如权利要求23所述的药物组合物，其包含如下（1）-（5）任一项所示的组分，或分别由（1）-（7）任一项所示的组分组成：
（1）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.0；（c）220mM的蔗糖；以及（d）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（2）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.0；（c）220mM的海藻糖；以及（d）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（3）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）240mM的甘露醇；以及（d）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（4）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）220mM的蔗糖；以及（d）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（5）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）220mM的海藻糖；以及（d）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（6）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）140mM的海藻糖；（d）50mM的氯化钠；以及（e）0.02%的聚山梨醇酯80；或
（7）（a）40mg/mL的抗TIGIT抗体或其抗原结合片段；（b）20mM醋酸缓冲液，pH为5.5；（c）140mM的蔗糖；（d）50mM的氯化钠；以及（e）0.02%的聚山梨醇酯80。
25.一种包含如权利要求1-24中任一项所述的药物组合物的液体制剂或冻干制剂。
26.如权利要求1-24任一项所述的药物组合物在制备治疗或预防TIGIT介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症是癌症。
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