EA012622B1 - Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки - Google Patents

Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки Download PDF

Info

Publication number
EA012622B1
EA012622B1 EA200602183A EA200602183A EA012622B1 EA 012622 B1 EA012622 B1 EA 012622B1 EA 200602183 A EA200602183 A EA 200602183A EA 200602183 A EA200602183 A EA 200602183A EA 012622 B1 EA012622 B1 EA 012622B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
drug
polypeptide
weu
receptor
binding
Prior art date
Application number
EA200602183A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200602183A1 (ru
Inventor
Люси Дж. Холт
Ян М. Томлинсон
Original Assignee
Домэнтис Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Домэнтис Лимитед filed Critical Домэнтис Лимитед
Publication of EA200602183A1 publication Critical patent/EA200602183A1/ru
Publication of EA012622B1 publication Critical patent/EA012622B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/545—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6843—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)

Abstract

Предложены лекарственные композиции, гибриды и конъюгаты. Лекарственные гибриды и конъюгаты содержат терапевтический или диагностический агент, который слит или конъюгирован с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Лекарственные композиции, гибриды и конъюгаты имеют более продолжительный период полувыведения in vivo по сравнению с неконъюгированным или неслитым терапевтическим или диагностическим агентом.

Description

Родственные заявки
Эта заявка основана на предварительной заявке на патент США № 60/632361, поданной 2 декабря 2004 г., и на предварительной заявке на патент США № 60/576271, поданной 1 июня 2004 г. Идеи вышеупомянутых заявок целиком включены в данное описание путем ссылки.
Предшествующий уровень техники
Многие лекарства, которые обладают активностями, которые могли бы быть полезны для терапевтических и/или диагностических целей, имеют ограниченное значение, так как при введении они быстро выводятся из организма. Например, многие полипептиды, которые имеют терапевтически полезные активности, быстро выводятся из кровотока через почки. Соответственно, для достижения желаемого терапевтического эффекта нужно вводить большую дозу. Существует потребность в улучшенных терапевтических и диагностических агентах, которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства. Полипептиды, которые связывают сывороточный альбумин, известны в данной области (см., например ЕР 0486525 В1 (Сети Вю1ектк АВ); И8 6267964 В1 (Ыудгеп е! а1.); АО 04/001064 А2 (Эуах, Согр.); АО 02/076489 А1 (Оуах, Согр.); АО 01/45746 (Оепейесб, 1пс.)).
Краткое изложение сущности изобретения
Изобретение относится к лекарственным композициям (например, лекарственным конъюгатам, нековалентным лекарственным конъюгатам, лекарственным гибридам), которые имеют улучшенные периоды полувыведения из сыворотки. В одном аспекте изобретение представляет собой лекарственный гибрид, представляющий собой непрерывную полипептидную цепь, имеющую формулу
или
где X представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;
Υ представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (VI), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;
Ζ представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени;
а, Ь, с и ά, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;
п1 означает от 1 до приблизительно 10;
п2 означает от 1 до приблизительно 10 и п3 означает от 0 до приблизительно 10, при условии, что когда п1 и п2 оба означают 1, и п3 означает ноль, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела.
В некоторых воплощениях Υ содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 10, 8ЕО ГО N0: 11, 8ЕО ГО N0: 12, 8ЕО ГО N0: 13, 8ЕО ГО N0: 14, 8Е0 ГО N0: 15, 8Е0 ГО N0: 24, 8Е0 ГО N0: 25 и 8Е0 ГО N0: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 16, 8Е0 ГО N0: 17, 8Е0 ГО N0: 18, 8ЕО ГО N0: 19, 8ЕО ГО N0: 20, 8ЕО ГО N0: 21, 8ЕО ГО N0: 22 и 8ЕО ГО N0: 23. В конкретных воплощениях X представляет собой 1Ь-1га или функциональный вариант 1Ь-1га.
В другом аспекте лекарственный гибрид содержит непрерывную полипептидную цепь, содержащую группировки X' и Υ', где
X' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X' не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; и
Υ' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (УЭ, который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В некоторых воплощениях Υ' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 10, 8Е0 ГО N0: 11, 8Е0 ГО N0: 12, 8ЕО ГО N0: 13, 8ЕО ГО N0: 14, 8ЕО ГО N0: 15, 8ЕО ГО N0: 24, 8ЕО ГО N0: 25 и 8ЕО ГО N0: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 16, 8ЕО ГО N0: 17, 8ЕО ГО N0: 18, 8ЕО ГО N0: 19, 8 НО ГО N0: 20, 8ЕО ГО N0: 21, 8ЕО ГО N0: 22 и 8Е0 ГО N0: 23. В конкретных воплощениях X' представляет собой 1Ь-1га или функциональный вариант 1Ь-1га.
В другом аспекте изобретение представляет собой лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уъ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство,
- 1 012622 которое ковалентно связано с указанным Ун или Уь. В некоторых воплощениях вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8 ЕС) ΙΌ N0: 10, 8 ЕС) ΙΌ N0: 11, 8 ЕС) ΙΌ N0: 12, 8 ЕС) ΙΌ N0: 13, 8 ЕС) ΙΌ N0: 14, 8Еф ΙΌ N0: 15, 8Еф ΙΌ N0: 24, 8Еф ΙΌ N0: 25 и 8Еф ΙΌ N0: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ΙΌ N0: 16, 8Еф ΙΌ N0: 17, 8Еф ΙΌ N0: 18, 8ЕС) ΙΌ N0: 19, 8ЕС) ΙΌ N0: 20, 8ЕС) ΙΌ N0: 21, 8ЕС) ΙΌ N0: 22 и 8ЕС) ΙΌ N0: 23. В конкретных воплощениях лекарство представляет собой ГЬ-На или функциональный вариант ГШга.
В другом аспекте изобретение представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое нековалентно связано с указанным Ун или Уь. В некоторых воплощениях вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ΙΌ N0: 10, 8Еф ΙΌ N0: 11, 8Еф ΙΌ N0: 12, 8Еф ΙΌ N0: 13, 8ЕС) ΙΌ N0: 14, 8ЕС) ΙΌ N0: 15, 8ЕС) ΙΌ N0: 24, 8ЕС) ΙΌ N0: 25 и 8ЕС) ΙΌ N0: 26, или аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ΙΌ N0: 16, 8Еф ΙΌ N0: 17, 8ЕС) ΙΌ N0: 18, 8ЕС) ΙΌ N0: 19, 8ЕС) ΙΌ N0: 20, 8ЕС) ΙΌ N0: 21, 8ЕС) ΙΌ N0: 22 и 8ЕС) ΙΌ N0: 23.
В изобретении также предложены рекомбинантные нуклеиновые кислоты и конструкции, которые кодируют лекарственные гибриды, раскрытые в данном описании, и клетки-хозяева, которые содержат рекомбинантные нуклеиновые кислоты и/или конструкции. В изобретении дополнительно предложен способ продуцирования лекарственного гибрида, включающий поддержание клетки-хозяина, которая содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту и/или конструкцию, кодирующую лекарственный гибрид, раскрытый в данном описании, в условиях, подходящих для экспрессии указанной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, в соответствии с которым продуцируют лекарственный гибрид.
В изобретении также предложены композиции (например, фармацевтические композиции), содержащие лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению. В изобретении также предложен способ лечения индивидуума, имеющего заболевание или расстройство, например такое, которое раскрыто в данном описании, включающий введение указанному индивидууму терапевтически эффективного количества лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) по изобретению. В некоторых воплощениях заболевание или расстройство представляет собой воспалительное заболевание, такое как артрит (например, ревматоидный артрит). В изобретении также предложено применение лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) по изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения заболевания или расстройства, такого как воспалительное заболевание (например, артрит (например, ревматоидный артрит)). Изобретение также относится к лекарственной композиции (например, лекарственному конъюгату, нековалентному лекарственному конъюгату, лекарственному гибриду), как раскрыто в данном описании, для применения в терапии, диагностике или профилактике.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1А представлено выравнивание аминокислотных последовательностей трех Ук, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином мыши (М8А). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из Ук, обозначенных М8А16, который также обозначен как О0М7ш-16 (8Еф ΙΌ N0: 1), М8А12, который также обозначен как О0М7ш-12 (8Еф ΙΌ N0: 2), и М8А 26, который также обозначен как О0М7ш-26 (8Еф ΙΌ N0: 3).
На фиг. 1Б представлено выравнивание аминокислотных последовательностей шести Ук, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином крысы (К.8А). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из Ук, обозначенных О0М7т-1 (8Еф ΙΌ N0: 4), О0М7т-3 (8 ЕС) ΙΌ N0: 5), И0М7т-4 (8 ЕС) ΙΌ N0: 6), И0М7т-5 (8 ЕС) ΙΌ N0: 7), И0М7т-7 (8 ЕС) ΙΌ N0: 8) и И0М7т-8 (8ЕС) ΙΌ N0: 9).
На фиг. 1В представлено выравнивание аминокислотных последовательностей шести Ук, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека (Н8А). Выровненные аминокислотные последовательности происходят из Ук, обозначенных 00М711-2 (8Еф ΙΌ N0: 10), 00М711-3 (8ЕС) ΙΌ N0: 11), О0М7Й-4 (8ЕС) ΙΌ N0: 12), О0М7Й-6 (8ЕС) ΙΌ N0: 13), О0М7Й-1 (8ЕС) ΙΌ N0: 14) и Ι)0\17Ιι-7 (8Е() ΙΌ N0: 15).
На фиг. 1Г представлено выравнивание аминокислотных последовательностей семи Ун, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека, и консенсусной последовательности (8Еф ΙΌ N0: 23). Выровненные последовательности происходят из Ун, обозначенных 00М711-22 (8Е() ΙΌ N0: 16), О0М7Й-23 (8ЕС) ΙΌ N0: 17), О0М7Й-24 (8ЕС) ΙΌ N0: 18), О0М7Й-25 (8ЕС) ΙΌ N0: 19), 120М711-26 (8ЕС) ΙΌ N0: 20), О0М7Й-21 (8ЕС) ΙΌ N0: 21) и О0М7Й-27 (8ЕС) ΙΌ N0: 22).
- 2 012622
На фиг. 1Д представлено выравнивание аминокислотных последовательностей трех νκ, выбранных посредством связывания с сывороточным альбумином человека и сывороточным альбумином крысы. Выровненные аминокислотные последовательности происходят из νκ, обозначенных ΌΟΜ7Η-8 (ЗЕС ГО N0: 24), ΌΟΜ7τ-13 (ЗЕС ГО N0: 25) и ΌΟΜ7τ-14 (ЗЕС ГО N0: 26).
На фиг. 2А и 2Б представлены схематические карты векторов, используемых для экспрессии гибридов МЗА161Ь-1га (также обозначенного как О0М7т-16/1Е-1га) и 1Ь-1таМЗА16 (также обозначенного как 1Ь-1та/П0М7т-16) соответственно.
На фиг. 2В-2Г представлены нуклеотидная последовательность (ЗЕф ГО N0: 27), кодирующая гибрид 1Ь-1таМ8А16 (также обозначенный как 1Ь-1та/П0М7т-16), и аминокислотная последовательность (ЗЕф ГО N0: 28) данного гибрида.
На фиг. 2Д-2Е представлены нуклеотидная последовательность (ЗЕф ГО N0: 29), кодирующая гибрид М8А161Ь-1га (также обозначенный как П0М7т-16/1Ь-1та), и аминокислотная последовательность (ЗЕф ГО N0: 30) данного гибрида.
На фиг. 2Ж, 2З представлены нуклеотидная последовательность (ЗЕф ГО N0: 31), кодирующая гибрид ОиттуШ-На. который не связывал сывороточный альбумин, и аминокислотная последовательность (ЗЕф ГО N0: 32) данного гибрида.
На фиг. 3А представлена схема, демонстрирующая, что 1Ь-1 индуцирует продукцию 1Ь-8 клетками НеЬа, и демонстрирующая механизм, с помощью которого 1Ь-8 определяют в анализе ЕБ1ЗА.
На фиг. 3Б представлен график, демонстрирующий, что каждый из 1Ь-1та, М8А161Ь-1та и 1Ь-1гаМ8А16 ингибировал 1Ь-1-индуцироваиную секрецию 1Ь-8 культивируемыми клетками МКС-5. Наблюдавшееся ингибирование было дозозависимым для 1Ь-1та, М8А161Ь-1та и 1Ь-1таМ8А16.
На фиг. 4А-4В представлены графики, демонстрирующие, что и 1Ь-1та и М8А161Ь-1та ингибировали 1Ь-1-индуцированную секрецию 1Ь-8 культивируемыми клетками МКС-5 в анализах, в которых не использовали сывороточный альбумин мыши (фиг. 4А), использовали 5% сывороточного альбумина мыши (фиг. 4Б) или 10% сывороточного альбумина мыши (фиг. 4В). Наблюдавшееся ингибирование было дозозависимым для 1Ь-1та и М8А161Ь-1та во всех протестированных условиях.
На фиг. 5 представлено схематическое изображение результатов анализа ЕЫ8А, демонстрирующего, что и гибрид М8А161Ь1-та, и гибрид 1Ь-1таМ8А16 связывали сывороточный альбумин, а гибрид ОиттуШЕга нет.
На фиг. 6А-6В представлены сенсограммы и таблицы, демонстрирующие В1АС0КЕ данные по аффинности для клона Э0М711-Е связывающегося с сывороточным альбумином человека (Н8А) (фиг. 6А), 00М711-7, связывающегося с Н8А (фиг. 6Б), и О0М7т-1, связывающегося с сывороточным альбумином крысы (К8А) (фиг.6В).
На фиг. 7 представлена таблица, демонстрирующая аффинности 00М711-Е О0М7т-1, 00М711-2, П0М7Т-3, П0М7Й-7, П0М7Й-8, П0М7т-8, П0М7т-13, П0М7т-14, П0М7ш-16, П0М7Й-22, П0М7Й-23, 00М711-26, О0М7т-16, О0М7т-26, О0М7т-27 и О0М7К-31 к сывороточным альбуминам, которые они связывают. 00М711-8 связывает также свиной сывороточный альбумин с аффинностью (ΚΌ) 60 нМ.
На фиг. 8А представлена нуклеотидная последовательность (ЗЕЦ ГО N0: 33) нуклеиновой кислоты, кодирующей антагонист рецептора интерлейкйна-1 человека (1Ь-1та), депонированная в СепВапк под регистрационным номером NΜ 173842. Данная нуклеиновая кислота имеет открытую рамку считывания, начинающуюся в положении 65.
На фиг. 8Б представлена аминокислотная последовательность 1Ь-1та человека (ЗЕЦ ГО N0: 34), кодируемая нуклеиновой кислотой, приведенной на фиг. 8А (ЗЕЦ ГО N0: 33). Зрелый белок состоит из 152 аминокислотных остатков (аминокислотные остатки 26-177 из ЗЕЦ ГО N0: 34).
На фиг. 9 представлен график, демонстрирующий концентрацию (мкг/мл) гибридного белка «МЗАсвязывающее бАЬ/эпитопная метка НА» в мышиной сыворотке после однократной внутривенной (в/в) инъекции (доза составляла приблизительно 1,5 мг/кг) самцам животных линии СЭ1 в зависимости от времени (сутки). Концентрацию сыворотки определяли с помощью ЕЬ18А, используя анти-НА козы (АЬеат, иК) для захвата и реагенты для определения белка Ь-НКР (1пуйтодеп, США). Стандартные кривые известных концентраций гибрида «М8А-связывающее 6АЬ/НА» были построены в присутствии 1х мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тест-образцами. Моделирование с 1-компонентной моделью (АшЫопйп Зойгаге, РйагщдЫ Согр., США) показало, что гибридный белок «МЗА-связывающее бАЬ/эпитопная метка НА» имел конечную фазу 11/2 29,1 ч и площадь под кривой 559 ч-мкг/мл.
На фиг. 10 представлены аминокислотные последовательности νκ, выбранные посредством связывания с сывороточным альбумином крысы (КЗА). Проиллюстрированные последовательности происходят из νκ, обозначенных П0М7т-15 (ЗЕС ГО N0: 37), П0М7т-16 (ЗЕС ГО N0: 38), П0М7т-17 (ЗЕС ГО N0: 39), П0М7т-18 (ЗЕС ГО N0: 40), П0М7т-19 (ЗЕС ГО N0:41).
На фиг. 11 А, 11Б представлены аминокислотные последовательности Ун, которые связывают сывороточный альбумин крысы (КЗА). Проиллюстрированные последовательности происходят из ν^ обозначенных П0М7т-20 (ЗЕС ГО N0: 42), П0М7т-21 (ЗЕС ГО N0: 43), П0М7т-22 (ЗЕС ГО N0: 44),
- 3 012622
Ό0Μ7τ-23 (8ΕΟ ΙΌ N0: 45), Ό0Μ7τ-24 (8Ε0 ΙΌ N0: 46), Ό0Μ7τ-25 (8Ε0 ΙΌ N0: 47), Ό0Μ7τ-26 (8Ε0 ΙΌ N0: 48), Ό0Μ7τ-27 (8Ε0 ΙΌ N0: 49), Ό0Μ7τ-28 (8Ε0 ΙΌ N0: 50), Ό0Μ7τ-29 (8Ε0 ΙΌ N0: 51), Ό0Μ7Γ-30 (8Ε0 ΙΌ N0: 52), Ό0Μ7γ-31 (8Ε0 ΙΌ N0: 53), Ό0Μ7γ-32 (8Ε0 ΙΌ N0: 54) и Ό0Μ7γ-33 (8Ε0 ΙΌ N0: 55).
На фиг. 12 представлен график, демонстрирующий концентрацию (% начальной дозы) Ό0Μ7η-16, Ό0Μ7111-26 или контрольного бЛЬ. которое не связывает Μ8Α, каждый из которых содержал эпитопную метку НА, в мышиной сыворотке после однократной внутривенной (в/в) инъекции (доза составляла приблизительно 1,5 мг/кг) самцам животных линии 0Ό1 в зависимости от времени. Концентрацию сыворотки определяли с помощью ΕΌΙ8Α, используя анти-НА козы (АЬеаш, ИК) для захвата и реагенты для определения белка Ь-НКР Циуйгодеи, США). Стандартные кривые известных концентраций гибрида Μ8Α-связывающее 6АЬ/НА были построены в присутствии 1х мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тест-образцами. Моделирование с 1-компонентной моделью (\УшНоп1т 8ойгате, РйатыдЫ Согр., США) показало, что контрольное бАЬ имело конечную фазу 11/2β 20 мин, тогда как Ό0Μ7η-16, Ό0Μ7111-26 сохранялись в сыворотке значительно дольше.
На фиг. 13 представлен график, демонстрирующий, что Ό0Μ7ιη-16/ΙΕ-1η был более эффективным, чем Ш-1 га или ΕΧΕΚΕΕ® (этанерцепт; Пшпипех Сотротайоп), в лечении артрита в мышиной модели коллагениндуцированного артрита (ΟΙΑ). Артрит индуцировали и начиная с 21 суток мышей лечили дексаметазоном в концентрации 0,4 мг/кг (стероид), ^0Μ7т-16/I^-1^а в концентрации 1 мг/кг (Ш-На/анти8А, 1 мг/кг) или 10 мг/кг (Ш-На/анти^А, 10 мг/кг), Ш-На в концентрации 1 мг/кг или 10 мг/кг, ΕΧΕΚΕΕ® (этанерцепт; Ишпипех Сотротайоп) в концентрации 5 мг/кг или физиологическим раствором. Результаты показывают, что в этом исследовании Ό0Μ7ιη-16/ΙΕ-1πι оказался более эффективным, чем Ш-На или ΕΧΕΚΕΕ® (этанерцепт; Ишпипех Сотротайоп). Как ожидалось, ответ на ΙΌ-1Γη был дозозависимым, и ответ на Ό0Μ7ιη-16/ΙΕ-1 га также был дозозависимым. Средние баллы за лечение с помощью ^0Μ7т-16/I^-1^а в концентрации 1 мг/кг были постоянно ниже, чем средние баллы, полученные за лечение с помощью ΙΌ-1Γη в концентрации 10 мг/кг. Результаты показывают, что в этом исследовании лечение с помощью Ό0Μ7ιη-16/ΙΕ-1η было в 10 раз более эффективным, чем с помощью ΙΌ-1Γη.
На фиг. 14А-14Ж показаны аминокислотные последовательности полипептидов сапорина. На фиг. 14А показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина-2, депонированная в банке данных 8\νί5φΐΌΐ под регистрационным номером Р27559 (8Ε0 ΙΌ N0: 60). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из 8Ε0 ΙΌ N0: 60. На фиг. 14Б показана аминокислотная последовательность сапорина-3, депонированная в 8\νί55ρΐΌΐ под регистрационным номером Р27560 (8Ε0 Ш N0: 61). На фиг. 14В показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина4, депонированная в 8\νί5φΐΌΐ под регистрационным номером Р27561 (8Ε0 ΙΌ N0: 62). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из 8Ε0 ΙΌ N0: 62. На фиг. 14Г показана аминокислотная последовательность сапорина-5, депонированная в 8\νί5φΐΌΐ под регистрационным номером 041389 (8Ε0 ΙΌ N0: 63). На фиг. 14Д показана аминокислотная последовательность предшественника сапорина6, депонированная в 8\νί5φΐΌΐ под регистрационным номером Р20656 (8Ε0 ΙΌ N0: 64). Сигнальный пептид представляет собой аминокислоты 1-24 из 8Ε0 ΙΌ N0: 64, и потенциальный пропептид представляет собой аминокислоты 278-299 из 8Ε0 ΙΌ N0: 64. Зрелый полипептид представляет собой аминокислоты 25-277 из 8Ε0 ΙΌ N0: 64 (8Ε0 ΙΌ N0: 65). На фиг. 14Е показана аминокислотная последовательность сапорина-7, депонированная в 8\\'155рго1 под регистрационным номером 041391 (8Ε0 ΙΌ N0: 66). На фиг. 14Ж показана консенсусная аминокислотная последовательность, охватывающая некоторые варианты и изоформы сапорина-6 (8Ε0 ΙΌ N0: 67).
На фиг. 15 показаны аминокислотные последовательности некоторых верблюжьих (СашеШ) УНН, которые связывают сывороточный альбумин мыши, раскрытые в XV0 2004/041862: последовательность А (8Ε0 ΙΌ N0: 72), последовательность В (8Ε0 ΙΌ N0: 73), последовательность С (8Ε0 ΙΌ N0: 74), последовательность Ό (8Ε0 ΙΌ N0: 75), последовательность Е (8Ε0 ΙΌ N0: 76), последовательность Р (8Ε0 ΙΌ N0: 77), последовательность 6 (8Ε0 ΙΌ N0: 78), последовательность Н (8Ε0 ΙΌ N0: 79), последовательность Ι (8Ε0 ΙΌ N0: 80), последовательность 1 (8Ε0 ΙΌ N0: 81), последовательность К (8Ε0 ΙΌ N0: 82), последовательность Ь (8Ε0 ΙΌ N0: 83), последовательность М (8Ε0 ΙΌ N0: 84), последовательность N (8Ε0 ΙΌ N0: 85), последовательность О (8Ε0 ΙΌ N0: 86), последовательность Р (8Ε0 ΙΌ N0: 87), последовательность О (8Ε0 ΙΌ N0: 88).
Подробное описание изобретения
Воплощения в пределах этого описания были описаны таким образом, чтобы сделать описание ясным и точным, но подразумевается и будет понятно, что данные воплощения могут быть различным образом объединены или разделены без отклонения от сущности изобретения.
Известные вещества (композиции), имеющие структурную формулу, идентичную любому из воплощений изобретения, сами по себе исключаются из объема охраны. При этом не исключаются новые вещества (композиции), новые комбинации известных веществ (композиций), новые применения известных веществ (композиций) или новые способы, вовлекающие известные вещества (композиции).
- 4 012622
Используемый в данном описании термин лекарство относится к любому соединению (например, органической молекуле низкого молекулярного веса, нуклеиновой кислоте, полипептиду), которое может быть введено индивидууму для получения положительного терапевтического или диагностического эффекта в силу связывания с биологической молекулой-мишенью и/или изменение функции биологической молекулы-мишени у индивидуума. Молекула-мишень может представлять собой эндогенную молекулумишень, кодируемую геномом данного индивидуума (например, фермент, рецептор, фактор роста, цитокин, кодируемый геномом данного индивидуума), или экзогенную молекулу-мишень, кодируемую геномом патогена (например, фермент, кодируемый геномом вируса, бактерии, гриба, нематоды или другого патогена).
Используемый в данном описании термин лекарственная композиция относится к композиции, содержащей лекарство, которое ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, где данная полипептидсвязывающая группировка содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. Лекарственная композиция может представлять собой конъюгат, где лекарство ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой. Лекарство может быть ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой непосредственно или опосредованно (например, через подходящий линкер и/или нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина)). При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с полипептидсвязывающей группировкой непосредственно или через подходящую линкерную группировку. Когда лекарство представляет собой полипептид или пептид, лекарственная композиция может представлять собой гибридный белок, где полипептидное или пептидное лекарство и полипептидсвязывающая группировка представляют собой отдельные части (группировки) непрерывной полипептидной цепи.
Используемый в данном описании термин конъюгат относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, который связан с лекарством. Такие конъюгаты включают в себя лекарственные конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно, и нековалентные лекарственные конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно.
Используемый в данном описании термин лекарственный конъюгат относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно. Лекарство может быть ковалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно или опосредованно через подходящую линкерную группировку. Лекарство может быть связано с антигенсвязывающим фрагментом в любом подходящем положении, таком как аминоконец, карбоксильный конец или через подходящие аминокислотные боковые цепи (например, ε-аминогруппу лизина).
Используемый в данном описании термин нековалентный лекарственный конъюгат относится к композиции, содержащей антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно. Лекарство может быть нековалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно (например, через электростатическое взаимодействие, гидрофобное взаимодействие) или опосредованно (например, через нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина), где один из партнеров ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом). При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или через подходящую линкерную группировку.
Используемый в данном описании термин лекарственный гибрид относится к гибридному белку, который содержит антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и полипептидное лекарство. Антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и полипептидное лекарство присутствуют в виде отдельных частей (группировок) одной непрерывной полипептидной цепи.
Используемый в данном описании термин лекарственная основа относится к активностям лекарственных композиций и лекарств, которые стандартизованы на основе количества лекарства (или лекарственной группировки), используемого для оценки, измерения или определения активности. Обычно лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеют большую молекулярную массу, чем лекарство, которое они содержат. Таким образом, эквивалентные количества лекарственной композиции и лекарства по массе будут содержать различные количества лекарства на основе молекулярной или молярной массы.
- 5 012622
Например, если лекарственная композиция по изобретению имеет молекулярную массу, которая в два раза больше молекулярной массы лекарства, которое она содержит, то активности могут быть определены на лекарственной основе с использованием 2 мкг лекарственной композиции и 1 мкг лекарства, так как эти количества будут содержать одинаковое количество лекарства (в виде свободного лекарства или в виде части лекарственной композиции). Активности могут быть стандартизованы и выражены на лекарственной основе с использованием соответствующих вычислений, например путем выражения активности в расчете на целевой связывающий сайт или, для ферментных лекарств, в расчете на активный сайт.
Используемый в данном описании термин антагонист рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1га) относится к встречающимся в природе или эндогенным белкам 1Ь-1га млекопитающих и к белкам, имеющим аминокислотную последовательность, которая является такой же, как последовательность соответствующего природного или эндогенного белка 1Ь-1га млекопитающих (например, рекомбинантные белки, синтетические белки (т. е. полученные с использованием способов синтетической органической химии)). Соответственно, как определено в данном описании, этот термин включает в себя зрелый белок, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы 1Ь-1га (например, полученные посредством альтернативного сплайсинга или других клеточных процессов), и модифицированные или немодифицированные формы вышеупомянутого (например, липидированные, гликозилированные, ПЭГилированные). Природные или эндогенные 1Ь-1га включают в себя белки дикого типа, такие как зрелые 1Ь-1га, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы, которые встречаются в природе у млекопитающих (например, человека или примата, не являющегося человеком). Такие белки могут быть получены или выделены из источника, который, например, естественно продуцирует 1Ь-1га. Эти белки и белки 1Ь-1га, имеющие такую же аминокислотную последовательность, как соответствующие природные или эндогенные 1Ь-1га, обозначаются по названию соответствующего млекопитающего. Например, в тех случаях, когда соответствующее млекопитающее представляет собой человека, белок обозначают как 1Ь-1га человека.
Функциональные варианты 1Ь-1га включают в себя функциональные фрагменты, функциональные мутантные белки и/или функциональные гибридные белки, которые могут быть получены с использованием подходящих способов (например, мутагенеза (например, химического мутагенеза, радиационного мутагенеза), методов рекомбинантных ДНК). Функциональный вариант является антагонистом рецептора интерлейкина-1 типа 1. Обычно фрагменты или участки 1Ь-1га включают в себя фрагменты или участки, имеющие делецию и/или вставку (т. е. одну или более аминокислотных делеций и/или вставок) аминокислоты (т.е. одной или более аминокислот) относительно зрелого 1Ь-1га (например, Ν-концевые, С-концевые или внутренние делеции). Также подразумеваются фрагменты или участки, в которых были делетированы только смежные аминокислоты или в которых были делетированы несмежные аминокислоты относительно зрелого 1Ь-1га.
Функциональный вариант 1Ь-1га человека может иметь по меньшей мере приблизительно 80%,
или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%,
или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,
или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,
или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелой формой человеческого 1Ь-1га длиной 152 аминокислоты и является антагонистом человеческого рецептора интерлейкина-1 типа 1 (см. Е|кепЬегд с1 а1., №1Шге 343:341-346 (1990)). Данный вариант может содержать одну или более дополнительных аминокислот (например, содержит 153, или 154, или более аминокислот). Например, вариант 1Ь-1га может иметь аминокислотную последовательность, которая состоит из аминоконцевого остатка метионина, за которым следуют остатки 26-177 из 8ΕΟ ΙΌ N0: 33 (ΚΙΝΕΚΕΤ® (анакинра), Атдеп 1пс.).
Используемый в данном описании термин сапорин относится к семейству одноцепочечных инактивирующих рибосомы полипептидов, продуцируемых растением 8аропапа оГПсшаНк (8Дгре, Е. е1 а1., Вюсйет. 1. 216:617-625 (1983), Вадда, 8. е! а1., 1. Вю1. С’Еет. 278:4813-4820 (2003)). Полипептиды сапорина существуют в нескольких формах, которые различаются по длине и/или аминокислотной последовательности (см., например, И и ВаП11е1ету. I. е! а1., 1. Βίο1. Сйет. 268:6541-6548 (1993)). Сапорин-6 представляет собой наиболее активную форму сапорина (Вадда, 8. е! а1., 1. Βίο1. Сйет. 278:4813-4820 (2003)). Описаны по меньшей мере четыре природные изоформы сапорина-6, в которых аминокислота в положении 48 зрелого полипептида (8ΕΟ ΙΌ N0: 65) представляет собой Акр или С1и, а аминокислота в положении 91 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой Агд или Ьук (Ваййе1ету, I. е! а1., 1. Вю1. С11ет. 268:6541-6548 (1993)). Дополнительные формы сапорина-6 включают в себя полипептиды, в которых аминокислота в положении 99 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой 8ег или Ьеи; аминокислота в положении 134 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой С1п или Ьук; аминокислота в положении 147 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой 8ег или Ьеи; аминокислота в положении 149 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой 8ег или Рйе; аминокислота в положении 162 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет собой Акр или Акп; аминокислота в положении 177 зрелого полипептида (8Ε0 ΙΌ N0: 65) представляет
- 6 012622 собой А1а или Уа1; аминокислота в положении 188 зрелого полипептида (ЗЕф ГО N0: 65) представляет собой 11е или ТЬг; аминокислота в положении 196 зрелого полипептида (ЗЕф ГО N0: 65) представляет собой Акп или Акр; аминокислота в положении 198 зрелого полипептида (ЗЕф ГО N0: 65) представляет собой С1и или Акр; аминокислота в положении 231 зрелого полипептида (ЗЕф ГО N0: 65) представляет собой Акп или Зег; и полипептиды, в которых аминокислота в положении 233 зрелого полипептида (ЗЕф ГО N0: 65) представляет собой Ьук или Агд (Ιά). Консенсусная последовательность, охватывающая эти изоформы и варианты, представлена на фиг. 14Ж (ЗЕф ГО N0: 67).
Соответственно, термин сапорин включает в себя белок-предшественник, зрелый полипептид, нативный белок, полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы (например, полученные посредством альтернативного сплайсинга или других клеточных процессов) и модифицированные или немодифицированные формы вышеупомянутого (например, липидированные, гликозилированные, ПЭГилированные) включая природные, синтетические или рекомбинантно полученные полипептиды. Природный или эндогенный сапорин включает в себя белки дикого типа, такие как зрелый сапорин (например, зрелый сапорин-6), полиморфные или аллельные варианты и другие изоформы, которые встречаются в природе в Заропапа οΓΓίοίηα1ίκ. Такие белки могут быть получены или выделены из Заропапа ой1ста118 с использованием любых подходящих способов. Функциональные варианты сапорина включают в себя функциональные фрагменты, функциональные мутантные белки и/или функциональные гибридные белки, которые могут быть получены с использованием подходящих способов (например, мутагенеза (например, химического мутагенеза, радиационного мутагенеза), методов рекомбинантных ДНК). Обычно фрагменты или участки сапорина (например, сапорин-6) включают в себя фрагменты или участки, имеющие делецию и/или вставку (т. е. одну или более аминокислотных делеций и/или вставок) аминокислоты (т.е. одной или более аминокислот) относительно зрелого сапорина (например, ^концевые, С-концевые или внутренние делеций). Также подразумеваются фрагменты или участки, в которых были делетированы только смежные аминокислоты или в которых были делетированы несмежные аминокислоты относительно зрелого сапорина. Могут быть получены различные функциональные варианты сапорина. Например, были получены гибридные белки сапорина-6, которые содержат аминоконцевые удлинения, и было показано, что они полностью сохраняют рибосомоингибирующую активность в анализах лизата ретикулоцитов кролика (Ват1йе1ету, Ι. е! а1., 1. Βίο1. СЬет. 268:6541-6548 (1993)). Варианты или сапорин-6, в которых остаток в активном сайте: Туг72, Туг120, С1и176, Агд 179 или Тгр208 (аминокислоты 72, 120, 176, 179 или 208 из ЗЕО ГО N0: 65) был заменен аланином, имел пониженную цитотоксическую активность в анализах ίη νίΐτο (Вадда, З. е! а1., 1. Βίο1. СЬет. 278:4813-4820 (2003)). Соответственно, если желательно получить дополнительные функциональные варианты сапорина, следует избегать мутации, замены, перестановки, делеции или модификации остатков в активном сайте. Предпочтительно функциональный вариант сапорина, который содержит меньше аминокислот, чем природный зрелый полипептид, включает, по меньшей мере, активный сайт. Например, вариант сапорина-6, который содержит меньше аминокислот, чем природный зрелый сапорин-6, может включать остатки активного сайта зрелого сапорина-6 (Туг72, Туг120, С1и176, Агд 179 и Тгр208 (аминокислоты 72, 120, 176, 179 и 208 из ЗЕО ГО N0: 65)) и иметь длину по меньшей мере приблизительно 137 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 150 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 175 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 200 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 225 аминокислот или по меньшей мере приблизительно 250 аминокислот.
Функциональный вариант сапорина имеет рибосомоинактивирующую активность (например, рРНК ^гликозидазную активность) и/или цитотоксическую активность. Такую активность можно легко оценить, используя любой подходящий способ, такой как ингибирование синтеза белка с использованием хорошо известного анализа лизата ретикулоцитов кролика или любого из хорошо известных анализов цитотоксичности, в которых используются опухолевые клеточные линии (см., например Вадда, З. е! а1., 1. Βίο1. СЬет. 278:4813-4820 (2003) и ВаПйе1ету, Ι. е! а1., 1. Вю1. СЬет. 268:6541-6548(1993)).
В некоторых воплощениях функциональный вариант сапорина имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно
90%, или по меньшей мере приблизительно 91%, или по меньшей мере приблизительно 92%,
или по меньшей мере приблизительно 93%, или по меньшей мере приблизительно 94%,
или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,
или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,
или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелым сапорином-6 (ЗЕО ГО N0: 65).
Изобретение относится к лекарственным композициям, содержащим лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. Как подробно раскрыто в данном описании в отношении лекарственных композиций, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, лекарство и полипептидсвязывающая группировка могут быть связаны друг с другом ковалентно или нековалентно. В некоторых вопло
- 7 012622 щениях лекарственная композиция представляет собой гибридный белок, который содержит полипептидное лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит антигенсвязывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. В других воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое ковалентно или нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит антигенсвязывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο.
Обычно полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, представляет собой полипептид, который встречается в природе ίη νίνο и который обладает устойчивостью к деградации или удалению посредством эндогенных механизмов, с помощью которых нежелательный материал удаляется из организма (например, человека). Например, полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, может быть выбран из белков внеклеточного матрикса, белков, обнаруженных в крови, белков, обнаруженных в гематоэнцефалическом барьере или в нервной ткани, белков, локализованных в почке, печени, легком, сердце, коже или кости, стресс-белков, белков, специфических для заболевания, или белков, вовлеченных в Рс-транспорт.
Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, включают в себя, например, гибридные белки, представляющие собой лиганд, специфичный к рецептору трансферрина/нейрофармацевтический агент (см. патент США № 5977307, содержание которого включено в данное описание путем ссылки), рецептор эндотелиальных клеток капилляров головного мозга, трансферрин, рецептор трансферрина (например, растворимый рецептор трансферрина), инсулин, рецептор инсулиноподобного фактора роста 1 (ЮР 1), рецептор инсулиноподобного фактора роста 2 (ЮР 2), рецептор инсулина, фактор свертывания крови X, αΐ-антитрипсин и ΗΝΡ (йераЮсуЗе гшс1саг ГасЮг. ядерный фактор гепатоцитов) αΐ. Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки, также включают в себя альфа-1 гликопротеин (оросомукоид; ААС), альфа-1 антихимотрипсин (АСТ), альфа-1 микроглобулин (белок НС; А1М), антитромбин III (АТ III), аполипопротеин А-1 (Аро А-1), аполипопротеин В (Аро В), церулоплазмин (Ср), компонент С3 комплемента (С3), компонент С4 комплемента (С4), ингибитор С1-эстеразы (С1 ΣΝΗ), С-реактивный белок (СВР), ферритин (РЕВ), гемопексин (НРХ), липопротеин(а) (Ьр(а)), маннозосвязывающий белок (МБР), миоглобин (Муо), преальбумин (транстиретин; РАБ), ретинолсвязывающий белок (ВВР) и ревматоидный фактор (ВР).
Подходящие белки внеклеточного матрикса включают в себя, например, коллагены, ламинины, интегрины и фибронектин. Коллагены являются основными белками внеклеточного матрикса. В настоящее время известно примерно 15 типов молекул коллагена, обнаруженных в различных частях организма, например коллаген I типа (составляющий 90% коллагена организма), обнаруженный в костях, коже, сухожилиях, связках, роговице, внутренних органах, или коллаген II типа, обнаруженный в хряще, позвоночном диске, хорде и стекловидном теле глаза.
Подходящие белки крови включают в себя, например, плазматические белки (например, фибрин, α-2 макроглобулин, сывороточный альбумин, фибриноген (например, фибриноген А, фибриноген В), сывороточный амилоидный белок А, гаптоглобин, профилин, убиквитин, утероглобулин и β-2микроглобулин), ферменты и ингибиторы ферментов (например, плазминоген, лизоцим, цистатин С, альфа-1-антитрипсин и панкреатический ингибитор трипсина), белки иммунной системы, такие как иммуноглобулиновые белки (например, ^А, [βϋ, ^Е, [дС, ^М, легкие цепи иммуноглобулинов (каппа/лямбда)), транспортные белки (например, ретинолсвязывающий белок, α-1 микроглобулин), дефензины (например, бета-дефензин 1, нейтрофильный дефензин 1, нейтрофильный дефензин 2 и нейтрофильный дефензин 3) и т.п.
Подходящие белки, обнаруженные в гематоэнцефалическом барьере или в нервной ткани, включают в себя, например, рецептор меланокортина, миелин, переносчик аскорбата и т.п.
Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, также включают в себя белки, локализованные в почке (например, полицистин, коллаген IV типа, транспортер К1 органических анионов, антиген Хейманна (Неутаип)), белки, локализованные в печени (например, алкогольдегидрогеназу, С250), белки, локализованные в легких (например, секреторный компонент, который связывает ^А), белки, локализованные в сердце (например, Н8Р 27, который ассоциирован с дилатационной кардиомиопатией), белки, локализованные в коже (например, кератин), белки, специфические для кости, такие как морфогенетические белки (ВМР), которые представляют собой подгруппу белков суперсемейства трансформирующего фактора роста β, которые демонстрируют остеогенную активность (например, ВМР-2, ВМР-4, ВМР-5, ВМР-6, ВМР-7, ВМР-8), опухолеспецифические белки (например, антиген трофобласта, рецептор герцептина, рецептор эстрогена, катепсины (например, катепсин В, который можно обнаружить в печени и селезенке)).
Подходящие специфические для заболеваний белки включают в себя, например, антигены, экспрессирующиеся только на активированных Т-клетках, включающие ЬАС-3 (ген активации лимфоцитов), остеопротегерин-лиганд (ОРСЬ; см. №1иге 402, 304-309 (1999)), ОХ40 (член семейства рецепторов к ΤΝΓ, экспрессируется на активированных Т-клетках и специфически активируется в человеческих клет
- 8 012622 ках, продуцирующих вирус Т-клеточного лейкоза I типа (НТЬУ-Ι); см. 1ттипо1. 165 (1):263-70 (2000)). Подходящие специфические для заболеваний белки также включают в себя, например, металлопротеазы (ассоциированные с артритом/видами рака), включая СС6512 Эго5орЫ1а. параплегин человека, Р18Н человека, АЕС3Б2 человека, мышиные й&Н; и ангиогенные факторы роста, включая кислый фактор роста фибробластов (ЕСЕ-1), основный фактор роста фибробластов (ЕСЕ-2), сосудистый эндотелиальный фактор роста/фактор проницаемости сосудов (УЕСЕ/УРЕ), трансформирующий фактор роста-α (ТСЕ-α), фактор некроза опухолей-альфа (ΤΝΡ-α), ангиогенин, интерлейкин-3 (1Ь-3), интерлейкин-8 (1Ь-8), тромбоцитарный эндотелиальный фактор роста (ΡΌ-ЕССЕ), плацентарный фактор роста (Р1СЕ), мидкайн (т1бкше) тромбоцитарный фактор роста-ВВ (РОСЕ) и фракталкин (Ггас1а1кте).
Подходящие полипептиды, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, также включают в себя стресс-белки, такие как белки теплового шока (НЗР). НЗР обычно обнаруживаются внутри клеток. Когда они обнаруживаются вне клеток, это является признаком смерти клетки и потери ею содержимого. Эта ^запрограммированная клеточная гибель (некроз) происходит в результате травмы, заболевания или повреждения, внеклеточные НЗР запускают реакцию иммунной системы. Связывание с внеклеточным НЗР может приводить к локализации композиций по изобретению в участке заболевания.
Подходящие белки, вовлеченные в Ес-транспорт, включают в себя, например, рецептор Брамбелла (ВгатЬе11) (также известный как ЕсКВ). Этот Ес-рецептор имеет две функции, которые обе потенциально полезны для доставки. Эти функции представляют собой (1) транспорт 1дС от матери ребенку через плаценту, (2) защиту 1дС от распада, увеличивающую таким образом период его полувыведения из сыворотки. Предполагают, что этот рецептор осуществляет рециркуляцию 1дС из эндосом (см. НоШдег е1 а1., Ναι. Вю1ссЬпо1. 15(7):632-6 (1997)).
Лекарственные композиции по изобретению могут содержать любую полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νί\Ό. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка содержит по меньшей мере 31, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 90 аминокислот, по меньшей мере приблизительно 100 аминокислот или по меньшей мере приблизительно 110 аминокислот как отдельная молекулярная структурная единица. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, с ΚΌ по меньшей мере приблизительно 5 мМ КО (КЭ=КоГГ(кб)/Коп(ка)). В некоторых воплощениях полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, с КО от приблизительно 10 до приблизительно 100 нМ, или от приблизительно 100 нМ до приблизительно 500 нМ, или от приблизительно 500 нМ до приблизительно 5 мМ, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса (например, с использованием прибора В1АСОКЕ). В конкретных воплощениях полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, с КО приблизительно 50 нМ, или приблизительно 70 нМ, или приблизительно 100 нМ, или приблизительно 150 нМ, или приблизительно 200 нМ.
Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, не является прокариотическим или бактериальным полипептидом или пептидом. Предпочтительно полипептидсвязывающая группировка представляет собой полипептид или пептид эукариот млекопитающих или человека.
В некоторых воплощениях полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, представляет собой свернутый белковый домен. В других воплощениях полипептидсвязывающая группировка имеет молекулярную массу по меньшей мере приблизительно 4 кДа, по меньшей мере приблизительно 4,5 кДа, по по по меньшей мере приблизительно 7 кДа, по меньшей мере приблизительно 7,5 по меньшей мере приблизительно 8 кДа как отдельная молекулярная структурная единица.
Подходящие полипептидсвязывающие группировки, которые содержат связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, могут быть идентифицированы с использованием любого подходящего способа, например путем скрининга встречающихся в природе или не встречающихся в природе полипептидов в подходящем анализе адгезии. Как раскрыто в данном описании, предпочтительные полипептидсвязывающие группировки, которые имеют антигенсвязывающий сайт для полипептида, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνΌ, представляют меньшей мере приблизительно 5 кДа, меньшей мере приблизительно 6 кДа, меньшей мере приблизительно меньшей мере приблизительно по по
5.5 кДа,
6.5 кДа, кДа или
- 9 012622 собой антигенсвязывающие фрагменты антител, которые обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Однако в данном изобретении могут быть использованы антигенсвязывающие фрагменты антител, которые обладают специфичностью связывания по отношению к другим полипептидам, которые увеличивают период полувыведения из сыворотки ίη νίνο.
При желании, одна или более определяющих комплементарность областей (СЭК.) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, который связывает полипептид, увеличивающий период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, могут быть преобразованы в неиммуноглобулиновую структуру, которая сохраняет антигенсвязывающую специфичность антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Лекарственные композиции по изобретению могут содержать такую неиммуноглобулиновую связывающую группировку. Такие неиммуноглобулиновые связывающие группировки могут быть получены с использованием любого подходящего способа, например природные бактериальные рецепторы, такие как 8рА, были использованы в качестве структурных каркасов (ксаНЫбк) для трансплантации СЭК с образованием полипептидсвязывающих группировок, которые специфически связывают эпитоп. Детали этой процедуры описаны в заявке на патент США № 5831012, содержание которой включено в данное описание путем ссылки. Другие подходящие структурные каркасы включают в себя структурные каркасы на основе фибронектина и аффител. Детали соответствующих процедур описаны в АО 98/58965. Другие подходящие структурные каркасы включают в себя липокаллин и СТЬА4, как описано в ναη бсп Веикеп с1 а1., 1. Μο1. Βίο1. 310:591-601 (2001), и такие структурные каркасы, которые описаны в АО 00/69907 (Мебюа1 Векеагсй ί,'οιιηαΐ) и которые основаны, например, на кольцевой структуре бактериального ОгоВЬ или других шаперонных полипептидов.
В некоторых воплощениях лекарственная композиция по изобретению содержит неиммуноглобулиновую связывающую группировку, которая обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, где неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит одну, две или три СЭВ из νΗ, Ук или Унн, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В некоторых воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит СЭК.3, но не СЭК.1 или СЭК.2, из Ун, Ук или Унн, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит СЭК! и СЭК.2, но не СЭК3. из Ун, Ук или Унн, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях неиммуноглобулиновая связывающая группировка содержит СЭК1, СЭК2 и СЭК3 из Ун, Ук или Унн, раскрытых в данном описании, и подходящий структурный каркас. В других воплощениях лекарственная композиция содержит только СЭК3 из Ун, Ук или Унн, раскрытых в данном описании, и лекарство.
Лекарственные композиции по изобретению могут быть получены с использованием подходящих способов, таких как способы, раскрытые в данном описании, для получения лекарственных гибридов, лекарственных конъюгатов и нековалентных лекарственных конъюгатов. Кроме того, лекарственные композиции по изобретению имеют преимущества и полезность, которые подробно раскрыты в данном описании в отношении лекарственных гибридов, лекарственных конъюгатов и нековалентных лекарственных конъюгатов.
В изобретении предложены лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства (например, увеличивают период полувыведения из сыворотки) и другие преимущества по сравнению с одним лекарством (неконъюгированным лекарством, негибридным лекарством). Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды содержат антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и одно или более желаемых лекарств.
Как раскрыто в данном описании, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) по изобретению могут иметь существенно более длительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο и/или увеличенную АИС по сравнению с одним лекарством. Кроме того, активность лекарства обычно, по существу, не меняется в лекарственной композиции (например, лекарственном конъюгате, нековалентном лекарственном конъюгате, лекарственном гибриде). Однако некоторое изменение активности лекарственной композиции по сравнению с одним лекарством является приемлемым и обычно компенсируется улучшенными фармакокинетическими свойствами лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида). Например, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) могут связывать мишень лекарства с меньшей аффинностью, чем одно лекарство, но имеют приблизительно эквивалентную или лучшую эффективность по сравнению с одним лекарством благодаря улучшенным фармакокинетическим свойствам лекарственной композиции (например, более длительному периоду полувыведения из сыворотки ίη νίνο, большей АИС). Кроме того, для достижения желаемого терапевтического или диагностического эффекта можно вводить меньшие количества лекарственных композиций (например, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов и лекар- 10 012622 ственных гибридов). Предпочтительно активность лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) отличается от активности одного лекарства в число раз, составляющее не более чем приблизительно 100, или не более чем приблизительно 50, или не более чем приблизительно 10, или не более чем приблизительно 5, или не более чем приблизительно 4, или не более чем приблизительно 3, или не более чем приблизительно 2. Например, лекарство может иметь ΚΌ, Κι или нейтрализующую дозу 50 (ΝΏ50) 1 нМ, а лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) может иметь ΚΌ, Κι или ΝΌ50 приблизительно 2 нМ, или приблизительно 3 нМ, или приблизительно 4 нМ, или приблизительно 5 нМ, или приблизительно 10 нМ.
Предпочтительно активность лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида), по существу, не уменьшается по сравнению с активностью лекарства. В некоторых воплощениях активность лекарственной композиции уменьшена относительно активности лекарства не более чем на приблизи-
тельно 10%, не более чем на приблизительно 9%, не ι более чем на приблизительно 8%,
не более чем на приблизительно 7%, не более чем на приблизительно 6%,
не более чем на приблизительно 5%, не более чем на приблизительно 4%,
не более чем на приблизительно 3%, не более чем на приблизительно 2%,
не более чем на приблизительно 1% или, по существу, не изменена. В качестве альтернативы указано, что лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный
конъюгат, лекарственный гибрид) сохраняет по меньшей мере приблизительно 90%,
по меньшей мере приблизительно 91%, по меньшей мере приблизительно 92%,
по меньшей мере приблизительно 93%, по меньшей мере приблизительно 94%,
по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%,
по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%,
по меньшей мере приблизительно 99% активности лекарства или, по существу, такую же активность, как лекарство. Предпочтительно активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарств определяется и/или сравнивается с лекарственной основой.
Как описано и показано в данном описании, лекарственные композиции (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению могут иметь большую активность (например, активность ίη νίνο), чем одно лекарство. Например, как показано в примере 6, ПОМ7ш-16/1Ь-1га был более эффективным в лечении артрита в мышиной модели, чем 1Ь-1та, когда эти агенты вводили в одной и той же дозе по массе (10 мг/кг или 1 мг/кг). ПОМ7ш-16/1Ь-1та был более эффективным, несмотря на то, что его молекулярная масса приблизительно в два раза выше молекулярной массы 1Ь-1та. Таким образом, мыши, которые получали ПОМ7ш-16/1Ь-1га, получали приблизительно только половину 1Ь-1та (в виде группировки в ПОМ7ш-16/1Ь1-га) по сравнению с мышами, которые получали 1Ь-1та.
В некоторых воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность (например, активность ίη νίνο), чем лекарство; например, лекарственная композиция может иметь по меньшей мере приблизительно 100%, по меньшей мере приблизительно 150%, по меньшей мере приблизительно 200%, по меньшей мере приблизительно 250%, по меньшей мере приблизительно 300%, по меньшей мере приблизительно 350%, по меньшей мере приблизительно 400%, по меньшей мере приблизительно 450% или по меньшей мере приблизительно 500% активности лекарства. Предпочтительно активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарств определяется и/или сравнивается с лекарственной основой. Активность лекарственных композиций (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и лекарства может быть определена с использованием подходящей системы ίη νίίτο или ίη νίνο. В некоторых воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность, чем лекарство, которое она включает, как определено ίη νίνο. В других воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет большую активность, чем лекарство, которое она включает, как определено ίη νίίτο.
Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), которые содержат доменное антитело (бАЬ), обладающее специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, обеспечивают дополнительные преимущества. Доменные антитела являются очень стабильными, небольшими относительно антител и других антигенсвязывающих фрагментов антител, могут быть получены с высокими выходами путем экспрессии в Ε.οοίί или дрожжах (например, Р1сЫа ρηδίοπδ) и, как раскрыто в данном описании, антигенсвязывающие фрагменты антител, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть легко выбраны
- 11 012622 из библиотек человеческого происхождения или из любого желаемого вида. Соответственно, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), которые содержат бЛЬ. которое связывает сывороточный альбумин, можно легче получить, чем терапевтические агенты, которые обычно получают в клетках млекопитающих (например, человеческие, гуманизированные или химерные антитела), и могут быть использованы бАЬ, которые не являются иммуногенными (например, человеческое бЛЬ может быть использовано для лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата для лечения или диагностики заболевания у людей).
Иммуногенность лекарства может быть уменьшена, когда лекарство является частью лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида), содержащей полипептидсвязывающую группировку, которая связывает сывороточный альбумин (например, антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин). Соответственно, лекарство может быть менее иммуногенным (чем одно лекарство) или, по существу, неиммуногенным в контексте лекарственной композиции, содержащей полипептидсвязывающую группировку, которая связывает сывороточный альбумин (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид). Таким образом, такие лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) можно вводить субъекту повторно с течением времени с минимальной потерей эффективности из-за наработки антитела к лекарству иммунной системой данного субъекта.
Кроме того, лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), раскрытые в данном описании, могут иметь повышенные показатели безопасности и меньшие побочные эффекты, чем одно лекарство. Например, в результате активности связывания сывороточного альбумина антигенсвязывающего фрагмента антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, лекарственные гибриды и конъюгаты (лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) имеют увеличенную продолжительность пребывания в сосудистом кровотоке. Кроме того, конъюгаты и лекарственные гибриды, по существу, не способны проникать через гематоэнцефалический барьер и накапливаться в центральной нервной системе после системного введения (например, внутрисосудистого введения). Соответственно, конъюгаты (лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) и лекарственные гибриды, которые содержат лекарство, обладающее нейротоксичностью или нежелательными психотропными эффектами, можно вводить с большей безопасностью и уменьшенными побочными эффектами по сравнению с одним лекарством. Аналогично, конъюгаты (лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) и лекарственные гибриды могут иметь уменьшенную токсичность по отношению к конкретным органам (например, почке или печени), чем одно лекарство. Конъюгаты и лекарственные гибриды, раскрытые в данном описании, можно использовать также для задержки лекарства или мишени, связывающей лекарство (например, токсина), в сосудистом кровотоке, уменьшая тем самым эффекты лекарства или мишени на ткани (например, ингибируя эффекты токсина).
Подходящие способы фармакокинетического анализа и определения периода полувыведения ίη νίνο хорошо известны в данной области. Такие способы описаны, например в КеппеШ, А. с1 а1.: Сйеш1са1 81аЬ1Н(у о£ Рйагтасеийсак: А НапбЬоок £ог РйагтасШк, и в Ре1ег5 е1 а1., РйагтасокшеК апа1у§щ: А Ргасйса1 Арргоасй (1996). Ссылка сделана также на Рйагтасокшейск, М. С1Ьа1б1 & Ό Реггоп, опубликованную Магсе1 Оеккег, 2'1 Рет. ебйюп (1982), которая описывает фармакокинетические параметры, такие как ΐ-альфа и ΐ-бета периоды полувыведения (11/2-альфа, ΐ'Λ-бета) и площадь под кривой (агеа ипбег сшуе, АИС).
Периоды полувыведения 11/2-альфа, 11/2-бета) и АИС могут быть определены из кривой зависимости концентрации конъюгата или гибрида в сыворотке от времени. Можно использовать пакет программ для анализа \Уш№п1ш (доступный от РйагщдЫ Согр., Моип1аш У1ете, СА 94040, США), например для моделирования кривой. В первой фазе (альфа-фаза) лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) подвергается у пациента главным образом распределению с некоторой элиминацией.
Вторая фаза (бета-фаза) представляет собой конечную фазу, когда лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) распределена, и концентрация в сыворотке уменьшается, поскольку лекарственная композиция выводится из организма пациента. Период полувыведения ΐ-альфа представляет собой период полувыведения в первой фазе, а ΐ-бета период полувыведения представляет собой период полувыведения во второй фазе. Таким образом, в настоящем изобретении предложена лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) или композиция, содержащая лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению, имеющая ΐα период полувыведения в диапазоне от 15 мин или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 30 мин, 45 мин, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч. Кроме того, или в качестве альтернативы, лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) или
- 12 012622 композиция по изобретению будет иметь ΐα период полувыведения в диапазоне вплоть до и включая 12 ч. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 11, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 ч. Примером подходящего диапазона является диапазон от 1 до 6 ч, от 2 до 5 ч или от 3 до 4 ч.
Преимущественно в настоящем изобретении предложены лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), имеющие ΐβ период полувыведения в диапазоне от 2,5 ч или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 ч. В некоторых воплощениях лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) имеют ΐβ период полувыведения в диапазоне вплоть до и включая 21 сутки. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 12 ч, 24 ч, 2, 3, 5, 10, 15 или 20 суток. В конкретных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по изобретению будет иметь ΐβ период полувыведения в диапазоне от 12 до 60 ч. В другом воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 48 ч. В еще одном воплощении он будет находиться в диапазоне от 12 до 26 ч.
Кроме того, или в качестве альтернативы вышеупомянутым критериям в настоящем изобретении предложены лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), имеющие значение ЛИС (область под кривой) в диапазоне от 0,01 мг-мин/мл или более или от 1 мг-мин/мл или более. В одном воплощении нижний предел диапазона составляет 0,01, 0,1, 1, 5, 10, 15, 20, 30, 100, 200 или 300 мг-мин/мл. В конкретных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет ЛИС в диапазоне вплоть до 600 мг-мин /мл. В одном воплощении верхний предел диапазона составляет 500, 400, 300, 200, 150, 100, 75 или 50 мг-мин/мл. В других воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) имеет ЛИС в диапазоне, выбранном из группы, состоящей из следующего: 15-150 мг-мин/мл, 15-100 мг-мин/мл, 15-75 мг-мин/мл, 15-50 мг-мин/мл, 0,01-50 мг-мин/мл,
0,1-50 мг-мин/мл, 1-50 мг-мин/мл, 5-50 мг-мин/мл и 10-50 мг-мин/мл.
Изобретение относится к лекарственным композициям (например, лекарственным конъюгатам, нековалентным лекарственным конъюгатам, лекарственным гибридам), которые содержат лекарство и полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. В предпочтительных воплощениях лекарственных композиций полипептидсвязывающая группировка, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
В некоторых воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое ковалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. В этих воплощениях лекарство может быть ковалентно связано с полипептидсвязывающим доменом в любом подходящем положении, таком как аминоконец, карбоксильный конец, или через подходящие аминокислотные боковые цепи (например, ε-аминогруппу лизина).
В других воплощениях лекарственная композиция содержит лекарство, которое нековалентно связано с полипептидсвязывающей группировкой, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο. В таких воплощениях лекарство может быть нековалентно связано с антигенсвязывающим фрагментом непосредственно (например, через электростатическое взаимодействие, гидрофобное взаимодействие) или опосредованно (например, через нековалентное связывание комплементарных связывающих партнеров (например, биотина и авидина), где один партнер ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом). При использовании комплементарных связывающих партнеров один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством, непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с полипептидсвязывающим доменом, непосредственно или через подходящую линкерную группировку.
В других воплощениях лекарственная композиция представляет собой гибридный белок, содержащий полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, и полипептидное лекарство. Гибридные белки содержат непрерывную полипептидную цепь, содержащую полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфично
- 13 012622 стью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в качестве первой группировки и полипептидное лекарство в качестве второй группировки, которые присутствуют в виде отдельных частей (группировок) полипептидной цепи. Первые и вторые группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту или пептидный или полипептидный линкер. В соответствующих случаях могут присутствовать дополнительные группировки (например, третья, четвертая) и/или линкерные последовательности. Первая группировка может находиться в Ν-концевом положении, С-концевом положении или в пределах второй группировки (т.е. полипептидного лекарства). В некоторых воплощениях гибридный белок содержит одну или более полипептидсвязывающих группировок, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, и одну или более полипептидных лекарственных группировок. В этих воплощениях гибридный белок может содержать от 1 до приблизительно 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) полипептидных лекарственных группировок, которые могут быть одинаковыми или разными, и от 1 до приблизительно 20 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20) полипептидсвязывающих группировок, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, и которые могут быть одинаковыми или разными.
Полипептидсвязывающие группировки, которые содержат связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, и полипептидные лекарственные группировки могут присутствовать в любом желаемом положении. Например, начиная с аминоконца к карбоксильному концу, группировки могут присутствовать в следующем порядке: одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок. В другом примере, начиная с аминоконца к карбоксильному концу, группировки могут присутствовать в следующем порядке: одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок, одна или более полипептидных лекарственных группировок, одна или более полипептидсвязывающих группировок. Как раскрыто в данном описании, полипептидсвязывающие группировки и полипептидные лекарственные группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту или пептидный или полипептидный линкер.
В некоторых воплощениях гибридный белок представляет собой непрерывную полипептидную цепь, которая имеет формулу (с аминоконца к карбоксиконцу):
а-(Р)п2-Ъ-(Х)г1-с-(ф)пЗ-б или
где X представляет собой полипептидное лекарство;
Р и О, каждый независимо, представляют собой полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο;
а, Ь, с и б, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;
η1, η2 и η3 означает соответственно число присутствующих группировок X, Р или О;
η1 означает от 1 до приблизительно 10;
η2 означает от 0 до приблизительно 10 и η3 означает от 0 до приблизительно 10, при условии, что η2 и η3 не являются нулем одновременно и при условии, что когда η1 и η2 оба означают 1, а η3 означает ноль, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела.
В некоторых воплощениях η2 означает 1, 2, 3, 4, 5 или 6 и η3 означает ноль. В других воплощениях η3 означает 1, 2, 3, 4, 5 или 6 и η2 означает ноль. В других воплощениях η1, η2 и η3, каждый, означает 1.
В некоторых воплощениях X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела.
В предпочтительных воплощениях каждый из Р и О независимо представляет собой полипептидсвязывающую группировку, обладающую специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
В особенно предпочтительных воплощениях лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) содержит полипептидсвязывающую группировку, которая содержит связывающий сайт (например, антигенсвязывающий сайт), обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, где полипептидсвязывающий домен представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
- 14 012622
Изобретение также относится к способу увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο, включающему связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο относительно данного лекарства.
В некоторых воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο относительно указанного лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
В других воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο и уменьшения иммуногенности лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο относительно данного лекарства и является менее иммуногенной, чем указанное лекарство.
В других воплощениях способ предназначен для уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
В других воплощениях способ предназначен для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο и уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
Лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, могут быть связаны через ковалентную связь (например, пептидную связь) или нековалентную связь, с применением линкеров или без них, как раскрыто в данном описании. В некоторых воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, связаны через ковалентную связь. Например, полученная лекарственная композиция представляет собой лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. В других воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, связаны через нековалентную связь, и лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
Лекарственная композиция, полученная с использованием данного способа, может иметь большую активность (например, активность ίη νίνο), чем лекарство. В некоторых воплощениях способ предназначен для получения лекарственной композиции, которая имеет большую активность (например, активность ίη νίνο), чем одно лекарство, включающий связывание лекарства с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в соответствии с которым получают лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), которая имеет большую активность относительно лекарства. В таких воплощениях предпочтительно, чтобы активность лекарственной композиции была больше, чем активность лекарства, как раскрыто в данном описании.
- 15 012622
В предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В конкретных предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
В некоторых воплощениях данный способ включает отбор указанной полипептидсвязывающей группировки из одного или более полипептидов (например, антигенсвязывающих фрагментов антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину), где выбранная полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, с ΚΌ по меньшей мере приблизительно 5 мМ.
Изобретение также относится к применению полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο.
В некоторых воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο и уменьшения иммуногенности лекарства.
В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
В других воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο и уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
Лекарственная композиция может содержать лекарство и полипептидсвязывающую группировку, имеющую связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, которые связаны через ковалентную связь (например, пептидную связь) или нековалентную связь, с применением линкеров или без них, как раскрыто в данном описании. В некоторых воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, связаны через ковалентную связь. Например, лекарственная композиция может представлять собой лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. В других воплощениях лекарство и полипептидсвязывающая группировка, имеющая связывающий сайт, обладающий специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, связаны через нековалентную связь, и лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
В некоторых воплощениях предложено применение для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения активности (например, активности ίη νίνο) относительно указанного лекарства. В таких воплощениях предпочтительно, чтобы активность лекарственной композиции была больше, чем активность лекарства, как раскрыто в данном описании.
В предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. В особенно предпочтительных воплощениях полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
- 16 012622
Антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин.
Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды по изобретению содержат (т.е. один или более) антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Антигенсвязывающий фрагмент может иметь специфичность связывания по отношению к сывороточному альбумину животного, которому будут вводить лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид. Предпочтительно антигенсвязывающий фрагмент обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину человека. Однако предполагаются ветеринарные применения, и антигенсвязывающий фрагмент может иметь специфичность связывания по отношению к сывороточному альбумину желаемого животного, например сывороточному альбумину собаки, кошки, лошади, коровы, курицы, овцы, свиньи, козы, оленя, норки и т.п. В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину более из чем одного вида. Например, как раскрыто в данном описании, были получены бАЬ человека, которые обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину крысы и сывороточному альбумину мыши, и бАЬ, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину крысы, мыши и человека (табл. 1 и фиг. 7). Такие бАЬ обеспечивают преимущество при проведении доклинических и клинических исследований с использоанием одного и того же лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида и избавляют он необходимости проводить доклинические исследования с подходящим суррогатным лекарственным гибридом или лекарственным конъюгатом.
Антигенсвязывающие фрагменты, подходящие для применения в изобретении, включают в себя, например, ТаЬ-фрагменты, ТаЬ'-фрагменты, Р(аЬ')2-фрагменты, Τν-фрагменты (включая одноцепочечный Τν (κοΤν) и дисульфидсвязанный Τν), один вариабельный домен и бАЬ (Ун, Уь). Такие антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены с использованием любого подходящего способа, такого как протеолиз антитела с помощью пепсина, папаина или другой протеазы, имеющей требуемую специфичность расщепления, или с использованием рекомбинантных методов. Например, Τν-фрагменты могут быть получены путем переваривания антитела подходящей протеазой или с использованием технологии рекомбинантных ДНК. Например, может быть получена нуклеиновая кислота, которая кодирует вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, которые соединены подходящим пептидным линкером, таким как цепь из 2 до приблизительно 20 глицильных остатков. Нуклеиновую кислоту можно вводить в подходящего хозяина (например, Ε.οοίί) с использованием любой подходящей методики (например, трасфекции, трасформации, инфекции) и данного хозяина можно поддерживать в условиях, подходящих для экспрессии одноцепочечного Τν-фрагмента. Различные антигенсвязывающие фрагменты антител могут быть получены с использованием генов антител, в которых один или более стоп-кодонов были введены выше от природного стоп-сайта. Например, экспрессирующая конструкция, кодирующая Т(аЬ')2-участок иммуноглобулиновой тяжелой цепи, может быть сконструирована путем введения трансляционного стоп-кодона на 3'-конце последовательности, кодирующей шарнирный участок тяжелой цепи. Лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды по изобретению могут содержать индивидуальные тяжелые и легкие цепи антител, которые связывают сывороточный альбумин, или участки индивидуальных цепей, которые связывают сывороточный альбумин (например, один Ун, Ук или УД.
Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают желаемый сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека), могут быть выбраны из подходящей коллекции природных или искусственных антител или индуцированы против соответствующего иммуногена в подходящем хозяине. Например, антитела могут быть индуцированы путем иммунизации подходящего хозяина (например, мыши, трансгенной мыши с человеческими антителами, крысы, кролика, курицы, козы, примата, не являющегося человеком (например, обезьяны)) сывороточным альбумином (например, выделенным или очищенным сывороточным альбумином человека) или пептидом сывороточного альбумина (например, пептидом, содержащим по меньшей мере приблизительно 8, 9, 10, 11, 12, 15, 20, 25, 30, 33, 35, 37 или 40 аминокислотных остатков). Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть выбраны также из библиотеки рекомбинантных антител или антигенсвязывающих фрагментов, такой как фаговая дисплейная библиотека. Такие библиотеки могут содержать антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые содержат природные или искусственные аминокислотные последовательности. Например, библиотека может содержать ТаЬ-фрагменты, которые содержат искусственные ΟΌΚ (например, случайные аминокислотные последовательности) и человеческие каркасные области (см., например, патент США № 6300064 (Киарр1к, с1 а1.)). В других примерах библиотека содержит ксШ-фрагменты или бАЬ (один Ун, один Ук или один Ух) с разнообразием последовательностей в одной или более ΟΌΚ (см., например ШО 99/20749 (Τοιηΐίηδοη и Шт1ег), ШО 03/002609 А2 (Ш1Шег е1 а1.), ШО 2004/003019А2 (Ш1Шег е1 а1.)).
Подходящие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают сывороточный альбумин, включают в себя, например, человеческие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, гуманизированные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, химерные антитела и их антигенсвя- 17 012622 по меньшей мере приблизительно 90%, по по по меньшей меньшей меньшей последовательность, которая мере приблизительно 85%, мере приблизительно 95%, мере приблизительно 97%, зывающие фрагменты, антитела грызунов (например, мыши, крысы) и их антигенсвязывающие фрагменты и СатеШ антитела и их антигенсвязывающие фрагменты. В некоторых воплощениях лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды содержат СатеШ Унн, который связывает сывороточный альбумин. СатеШ Унн представляют собой полипептиды одноцепочечных иммуноглобулиновых вариабельных доменов, которые происходят из тяжелой цепи антител, которые в природе лишены легких цепей. Такие антитела встречаются у видов семейства верблюдовых (СатеМае), включая верблюда, ламу, альпаку, одногорбого верблюда и гуанако. Молекулы Унн приблизительно в десять раз меньше, чем 1дС молекулы, и как одиночные полипептиды являются очень стабильными и устойчивыми к критическим рН и температурным условиям. Подходящие СатеШ Унн, которые связывают сывороточный альбумин, включают те, которые раскрыты в \УО 2004/041862 (ЛЫуих Ы.У.) и в данном описании (фиг. 15 и 8Еф ГО N0: 77-88). В некоторых воплощениях С’атеНй Унн связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или или по меньшей мере приблизительно 96%, или по меньшей мере приблизительно 98%, или по аминокислотной последовательности с 8Еф ГО N0: 72, 8Еф ГО N0: 73, 8Еф ГО N0: 74, 8Еф ГО N0: 75, 8Еф ГО N0: 76, 8Еф ГО N0: 77, 8Еф ГО N0: 78, 8Еф ГО N0: 79, 8Еф ГО N0: 80, 8Еф ГО N0: 81, 8Еф ГО N0: 82, 8Еф ГО N0: 83, 8Еф ГО N0: 84, 8Еф ГО N0: 85, 8Еф ГО N0: 86, 8Еф ГО N0: 87 или ЗЕО ГО N0: 88. Предпочтительно идентичность аминокислотной последовательности определяют, используя подходящий алгоритм выравнивания последовательностей и подходящие значения параметров по умолчанию, такие как ВЬЛЗТ Р (Каг1т анй А1(ьсПи1. Ртос. №111. Лсаб. 8с1. ИЗЛ 87(6):2264-2268 (1990)).
Получение иммунизирующего антигена и производство поликлональных и моноклональных антител можно осуществить с использованием любой подходящей методики. Описаны различные способы (см., например КиШет е! а1., №11иге. 256:495-497 (1975) и Еиг. I. Iттиηο1. 6:511-519 (1976); МШ!ет е! а1., №11иге. 266 550-552 (1977); ΚορΐΌ\ν51<ί е! а1., патент США № 4172124; ΒιγΙο^, Е. и Ό. Баге, 1988, ΛηίΛο^κ: Л ^аЫο^а!ο^у Мапиа1, (Οο1ά Зргтд ΗιΛογ ^аЫο^а!ο^у: Сс1й Зргтд ΗιΛογ, НУ); С’иггегИ ΡΐΌΐο^Ιδ Ιη Μο^μΕ-ιι· Вю^ду, νο1. 2 (8ирр1етегИ 27, 8иттег'94), Ли8иЫе1, Е.М. е! а1., Ебк., (Ιοίιη \νίΕ\·&8οη5: №\ν ΥοιΈ ΧΥ), Сйар!ег 11, (1991)). Обычно в тех случаях, когда желательно моноклональное антитело, получают гибридому путем слияния подходящих клеток из иммортализованной (бессмертной) клеточной линии (например, миеломной клеточной линии, такой как ЗР2/0, Р3Х63Лд8.653 или гетеромиеломы) с антителопродуцирующими клетками. Антителопродуцирующие клетки могут быть получены из периферической крови или, предпочтительно, из селезенки или лимфатических узлов человека, или или или меньшей мере приблизительно 99% идентичности трансгенных животных с человеческими антителами, или других подходящих животных, которых иммунизировали интересующим антигеном. Клетки, которые продуцируют антитела человеческого происхождения (например, человеческое антитело), могут быть получены с использованием подходящих способов, например слияния человеческой антителопродуцирующей клетки и гетеромиеломы или триомы, или иммортализации активированной человеческой В-клетки путем инфицирования вирусом ЭпштейнаБарра (см., например патент США № 6197582 (Тгакй!); №ейЫа1а е! а1., ^Ыи^та, 17:299-304 (1998); 2аие11а е! а1., I Ιιηιηι.ιηο1 Ме!йοά8, 156:205-215 (1992); Ομ51ιΓ55οπ е! а1., Нит Λη!ώο^8 ^Ын^та^, 2:2632 (1991)). Слитые или иммортализованные антителопродуцирующие клетки (гибридомы) могут быть выделены с использованием селективных условий культивирования и клонированы методом лимитирующего разведения. Клетки, которые продуцируют антитела с желаемой специфичностью, могут быть идентифицированы с использованием подходящего анализа (например, ЕЬ18Л).
Антитела могут быть также получены непосредственно (например, синтезированы или клонированы) из изолированной антигенспецифической антителопродуцирующей клетки (например, клетки из периферической крови или предпочтительно селезенки или лимфатических узлов, определенной для получения антитела с желаемой специфичностью) человека, трансгенных животных с человеческими антителами или других подходящих животных, которых иммунизировали интересующим антигеном (см., например, патент США № 5627052 (Зсйгабег)).
Когда лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид предназначены для введения человеку, тогда антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека), может представлять собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело или антигенсвязывающий фрагмент такого антитела. Эти типы антител и антигенсвязывающих фрагментов являются менее иммуногенными или неиммуногенными у людей и дают хорошо известные преимущества. Например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты или лекарственные гибриды, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент человеческого, гуманизированного или химерного антитела, могут быть введены человеку повторно с меньшей эффективностью или без потери эффективности (по сравнению с другими полностью иммуногенными антителами) благодаря наработке человеческих антител, которые связываются с лекарственным конъюгатом или лекарственным гибридом. Когда лекарственный конъю
- 18 012622 гат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид предназначен для ветеринарного введения, тогда могут быть использованы аналогичные антитела или антигенсвязывающие фрагменты. Например, СОВ из мышиного или человеческого антитела могут быть трансплантированы на каркасные области из желаемого животного, такого как лошадь или корова.
Человеческие антитела и нуклеиновые кислоты, кодирующие их, могут быть получены, например, из человека или из трансгенных животных с человеческими антителами. Трансгенные животные с человеческими антителами (например, мыши) представляют собой животных, которые способны продуцировать набор человеческих антител, такой как XЕNОМОυ8Е (АЬдейх, Егетоп!, СА), НиМАВ-М0и8Е, К1ВШ ТС М0И8Е или КМ-М0И8Е (МЕ^АВЕX, Рбпсе!оп, N1). Обычно геном трансгенных животных с человеческими антителами изменен таким образом, чтобы включать трансген, содержащий ДНК из человеческого иммуноглобулинового локуса, который может подвергаться функциональной перестройке. Эндогенный иммуноглобулиновый локус у трансгенного животного с человеческими антителами может быть разрушен или делетирован для того, чтобы исключить способность животного производить антитела, кодируемые эндогенным геном. Подходящие способы получения трансгенных животных с человеческими антителами хорошо известны в данной области (см., например, патенты США № 5939598 и 6075181 (Кисбебарай е! а1.), патенты США № 5569825, 5545806, 5625126, 5633425, 5661016 и 5789650 (ЬопЬегд е! а1), 1акоЬоуЙ8 е! а1., Ргос. Май. Асай. 8с1. И8А, 90:2551-2555 (1993), 1акоЬоуЙ8 е! а1., №1иге, 362:255-258 (1993), 1акоЬоуб§ е! а1. А0 98/50433, 1акоЬоуЙ8 е! а1. А0 98/24893, ЬопЬегд е! а1. А0 98/24884, ЬопЬегд е! а1. А0 97/13852, ЬопЬегд е! а1. А0 94/25585, ЬопЬегд е! а1. ЕР 0814259 А2, ЬопЬегд е! а1. ОВ 2272440 А, ЬопЬегд е! а1., №11иге 368:856-859 (1994), ЬопЬегд е! а1., 1п! Веу 1ттипо1 13(1):65-93 (1995), Кисбебарай е! а1. А0 96/34096, Кисбег1арай е! а1. ЕР 0463151 В1, Кисбебарай е! а1. ЕР 0710719 А1, 8игат е! а1. И8 5545807, Вгиддетапп е! а1. А0 90/04036, Вгиддетапп е! а1. ЕР 0438474 В1, Тау1ог е! а1., 1п!. 1ттипо1. 6(4):579-591 (1994), Тау1ог е! а1., Мис1ек Ас1йк Векеагсб. 20(23):6287-6295 (1992), Огееп е! а1., №|1иге Оепейск. 7:13-21 (1994), Мепйех е! а1., №11иге Оепейск. 15:146-156 (1997), ТиаШоп е! а1., Ргос. №111. Асай. 8сг И8А, 90(8):3720-3724 (1993) и Ейбетйй е! а1., №1 Вю!есбпо1. 14(7):845851 (1996), содержания каждого из вышеупомянутого включены в данное описание путем ссылки во всех их полноте).
Трансгенные животные с человеческими антителами могут быть проиммунизированы подходящим антигеном (например, сывороточным альбумином человека) и антителопродуцирующие клетки могут быть выделены и слиты с образованием гибридом с помощью стандартных способов. Гибридомы, которые продуцируют человеческие антитела, имеющие желательные характеристики (например, специфичность, аффинность), могут быть идентифицированы с использованием любого подходящего анализа (например, ЕЫ8А) и, при желании, селектированы и субклонированы с использованием подходящих методов культивирования.
Гуманизированные антитела и другие СОВ-трансплантированные антитела могут быть получены с использованием любого подходящего способа. СОВ из СОВ-трансплантированного антитела могут быть получены из подходящего антитела, которое связывает сывороточный альбумин (известного как донорное антитело). Другие источники подходящих СОВ включают в себя специфические антитела к природному и искусственному сывороточному альбумину, полученные из источников человеческого или нечеловеческого происхождения, таких как грызуны (например, мышь, крыса, кролик), курица, свинья, коза, примат, не являющийся человеком, (например, обезьяна) или библиотека.
Каркасные области гуманизированного антитела имеют предпочтительно человеческое происхождение и могут происходить из любой вариабельной области человеческого антитела, имеющей сходство последовательности с аналогичной или эквивалентной областью (например, вариабельной областью тяжелой цепи или вариабельной областью легкой цепи) антигенсвязывающего участка донорного антитела. Другие источники каркасных областей человеческого происхождения включают в себя консенсусные последовательности человеческих вариабельных областей (см., например, КебкЬогоидб, С.А. е! а1., Рго!еш Епдтееппд, 4:773-783 (1991); Сабег е! а1., А0 94/04679; КаЬа!, Е.А., е! а1., Зециепсек ой Рго!еш8 ой 1ттипо1одка1 1йегей, Е1йб Ейбюп, И.8. ЭераПтей ой Неа1!б апй Нитап 8егуке§, И.8. Ооуегптеп! Рбп!1пд 0ййсе (1991)). Другие типы СОВ-трансплантированных антител могут содержать каркасные области подходящего происхождения, такие как каркасные области, кодируемые генными сегментами антител зародышевой линии из лошади, коровы, собаки, кошки и т.п.
Каркасные области человеческого происхождения могут включать аминокислотные замены или перестановки, такие как обратные мутации, которые заменяют аминокислотный остаток в каркасной области человеческого или животного происхождения на остаток из соответствующего положения донорного антитела. Могут быть произведены одна или более мутаций в каркасной области, включая делеции, вставки и замены одной или более аминокислот. Варианты могут быть получены различными подходящими способами, включая мутагенез донора, не являющегося человеком, или акцепторных человеческих цепей (см., например патенты США № 5693762 (Онееп е! а1.) и 5859205 (Айап е! а1.), полное содержание которых включено в данное описание путем ссылки).
- 19 012622
Константные области антител, цепей антител (например, тяжелой цепи, легкой цепи) или их фрагменты или участки, если присутствуют, могут происходить из любого подходящего источника. Например, константные области человеческих, гуманизированных и некоторых химерных антител, цепей антител (например, тяжелой цепи, легкой цепи) или их фрагментов или участков, если присутствуют, могут иметь человеческое происхождение и могут происходить из любого подходящего человеческого антитела или цепи антитела. Например, константная область человеческого происхождения или его участок могут происходить из человеческой к- или λ-легкой цепи и/или человеческой γ- (например, γ1-, γ2-, γ3-, γ4-), μ-, α- (например, α1-, α2-), δ- или ε-тяжелой цепи, включая аллельные варианты. В некоторых воплощениях антитело или антигенсвязывающий фрагмент (например, антитело человеческого происхождения, человеческое антитело) может включать аминокислотные замены или перестановки, которые изменяют или задают функцию (например, эффекторную функцию). Например, константная область человеческого происхождения (например, γ1-константная область, γ2-константная область) может быть сконструирована так, чтобы уменьшить активацию комплемента и/или связывание Рс-рецептора (см., например, патенты США № 5648260 (Αίηΐβτ с1 а1.), 5624821 (Αίηΐβτ с1 а1.) и 5834597 (Τκο с1 а1.), полное содержание которых включено в данное описание путем ссылки.) Предпочтительно аминокислотная последовательность константной области человеческого происхождения, которая содержит такие аминокислотные замены или перестановки, по меньшей мере приблизительно на 95% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности неизмененной константной области человеческого происхождения, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 99% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности неизмененной константной области человеческого происхождения.
Гуманизированные антитела, СЭЯ-трансплантированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты гуманизированного или СОЯ-трансплантированного антитела могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Некоторые такие способы хорошо известны в данной области (см., например, патент США № 5225539 (Αίηΐβτ), патент США № 5530101 (Сисси с1 а1.)). Участки гуманизированного или СОЯ-трансплантированного антитела (например, СЭЯ, каркасная, константная область) могут быть получены или могут происходить непосредственно из подходящих антител (например, путем синтеза участка бе ηονο) или могут быть получены и экспрессированы нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело или его цепь, имеющие желаемое свойство (например, связывает сывороточный альбумин). Чтобы получить участок цепи, один или более стоп-кодонов можно вводить в желаемое положение. Например, последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК), кодирующие гуманизированные или СОЯ-трансплантированные вариабельные области, могут быть сконструированы с использованием способов ПЦР-мутагенеза для изменения существующих последовательностей ДНК (см., например, Каштан, М., еΐ а1., Ыис1. АсШк Яек. 17:5404 (1989)). ПЦР-праймеры, кодирующие новые СОЯ, могут быть гибридизованы с ДНК-матрицей предварительно гуманизированной вариабельной области, в основе которой лежит такая же или очень похожая, человеческая вариабельная область (8;·ιΙο. К., еΐ а1., Саг1сег Яекеатск, 53:851-856 (1993)). Если похожая последовательность ДНК не доступна для применения в качестве матрицы, то нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, кодирующую последовательность вариабельной области, может быть сконструирована из синтетических олигонуклеотидов (см., например, Κο1Μη^τ, Р., Ρ^οΐе^η Εηд^ηее^^ηд, 8:971-980 (1993)). Последовательность, кодирующая сигнальный пептид, также может быть включена в нуклеиновую кислоту (например, во время синтеза, после вставки в вектор). Можно использовать природную сигнальную пептидную последовательность из акцепторного антитела, сигнальную пептидную последовательность из другого антитела или другой подходящей последовательности (см., например, ΚχΟΚόοϊΌνιμΙτ С.А., Ρ^οΐе^η Εηд^ηее^^ηд, 4:773-783 (1991)). Используя эти способы или другие подходящие способы, можно легко получить варианты. В одном воплощении клонированные вариабельные области могут быть мутированы и можно выбрать последовательности, кодирующие варианты с желаемой специфичностью (например, из фаговой библиотеки; см., например, патент США № 5514548 (КтеЬЬет еΐ а1.) и АО 93/06213 (Ηοο^ηδοοιη еΐ а1.)).
Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают сывороточный альбумин, могут представлять собой химерное антитело или антигенсвязывающий фрагмент химерного антитела. Химерное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область из одного вида (например, мыши) и, по меньшей мере, участок константной области из другого вида (например, человека). Химерные антитела и антигенсвязывающие фрагменты химерных антител могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Некоторые подходящие способы хорошо известны в данной области (см., например, патент США № 4816567 (СаЬШу еΐ а1.), патент США № 5116946 (Οηροη еΐ а1.)).
Предпочтительный способ получения антигенсвязывающих фрагментов антител, которые связывают сывороточный альбумин, включает отбор антигенсвязывающего фрагмента (например, 5сРν, бАЬ), который обладает специфичностью связывания по отношению к желаемому сывороточному альбумину, из набора антигенсвязывающих фрагментов. Например, как раскрыто в данном описании, бАЬ, которые связывают сывороточный альбумин, могут быть выбраны из подходящей фаговой дисплейной библиотеки. Было описано множество подходящих бактериофаговых дисплейных библиотек и способов отбора
- 20 012622 (например, моновалентные дисплейные и поливалентные дисплейные системы) (см., например, СпГГй115 е! а1., патент США № 6555313 В1 (включенный в данное описание путем ссылки); ΙοΗπκοη е! а1., патент США № 5733743 (включенный в данное описание путем ссылки); МсСаГГеПу е! а1., патент США № 5969108 (включенный в данное описание путем ссылки); МиШдаη-Кейοе, патент США № 5702892 (включенный в данное описание путем ссылки); Ат1ег, С. е! а1., Аиии. Веν. ^тишЕ 12:433-455 (1994); 8οит^Шοη, Р. е! а1., Арр1. Вюсйет. Βΐο^οΗηο1, 47(2-3):175-189 (1994); Са8ίадηο1^, Ь. е! а1., СотЬ. Сйет. Н1дй Тйгоидйри! Зсгсси, 4(2):121-133 (2001); АО 99/20749 (Τοιιι1ιιΐ8οιι и Ат1ег); АО 03/002609 А2 (Аш1ег е! а1.); АО 2004/003019А2 (Аш1ег е! а1.)). Полипептиды, представленные в бактериофаговой библиотеке, могут быть представлены на любом подходящем бактериофаге, таком как нитевидный фаг (например, Гб, М13, Р1), литический фаг (например, Т4, Т7, лямбда) или РНК-фаг (например, М82), и выбраны для связывания с сывороточным альбумином (например, сывороточным альбумином человека).
Обычно используют библиотеку фага, который представляет спектр полипептидов в виде гибридных белков с подходящим белком оболочки фага. Такая библиотека может быть получена с использованием любых подходящих способов, таких как введение библиотеки фаговых векторов или фагмидных векторов, кодирующих представленные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, в подходящих бактерий-хозяев и культивирование полученных в результате бактерий для получения фага (например, с использованием подходящего хелперного фага или комплементирующей плазмиды, при желании). Библиотека фага может быть получена из такой культуры с использованием любого подходящего способа, такого как осаждение и центрифугирование.
Библиотека может содержать спектр антител или их антигенсвязывающих фрагментов, который содержит любое желаемое количество из разнообразия аминокислотных последовательностей. Например, этот спектр может содержать антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые имеют аминокислотные последовательности, соответствующие встречающимся в природе антителам из желаемого организма, и/или могут содержать одну или более областей случайных или рандомизированных аминокислотных последовательностей (например, СИВ-последовательности). Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты в таком спектре или библиотеке могут содержать установленные области случайных или рандомизированных аминокислотных последовательностей и области общей аминокислотной последовательности. В некоторых воплощениях все или, по существу, все полипептиды в спектре представляют собой желаемый тип антигенсвязывающего фрагмента антитела (например, человеческий νΗ или человеческий V]/). Например, каждый полипептид в спектре может содержать νΗ, ν9 или Рν (например, одноцепочечный Ρν).
Разнообразие аминокислотных последовательностей может быть введено в любую желаемую область антител или их антигенсвязывающих фрагментов с использованием любого подходящего способа. Например, разнообразие аминокислотных последовательностей может быть введено в область-мишень, такую как область, определяющая комплементарность вариабельного домена антитела, путем приготовления библиотеки нуклеиновых кислот, которые кодируют разнообразные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, с использованием любых подходящих способов мутагенеза (например, ПЦР с низкой точностью (1ον йбе1бу), олигонуклеотид-опосредованного или сайт-направленного мутагенеза, диверсификации с использованием ΝΝΚ кодонов) или любого другого подходящего способа. При желании, область антител или их антигенсвязывающих фрагментов, подлежащих диверсификации, может быть рандомизирована.
Подходящая фаговая дисплейная библиотека может быть использована для выбранных антител или антигенсвязывающих фрагментов антител, которые связывают сывороточный альбумин и имеют другие полезные свойства. Например, могут быть выбраны антитела или антигенсвязывающие фрагменты, которые устойчивы к агрегации при разворачивании. Агрегация зависит от концентрации полипептида и, как полагают, во многих случаях обусловлена частично свернутыми или несвернутыми промежуточными формами. Факторы и условия, которые поддерживают частично свернутые промежуточные формы, такие как повышенная температура и высокая концентрация полипептида, способствуют необратимой агрегации (Έίπΐν А.Ь., Рο1б^ηд & Эе^ди 3:В1-В23 (1998)). Например, хранение очищенных полипептидов в концентрированной форме, такой как лиофилизированный препарат, часто приводит к необратимой агрегации по меньшей мере части полипептидов. Также производство полипептида путем экспрессии в биологических системах, таких как Ε^ο1ί, часто приводит к образованию телец включений, которые содержат агрегированные полипептиды. Извлечение активных полипептидов из телец включений может быть очень трудным и может требовать добавления дополнительных стадий, таких как стадия рефолдинга (повторного сворачивания) в биологической продуцирующей системе.
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые устойчивы к агрегации и обратимо разворачиваются при нагревании, могут быть выбраны из подходящей фаговой дисплейной библиотеки. Обычно фаговую дисплейную библиотеку, содержащую спектр представленных антител или их антигенсвязывающих фрагментов, нагревают до температуры (Т§), при которой по меньшей мере часть представленных антител или их антигенсвязывающих фрагментов разворачивается, затем охлаждают до температуры (Тс), где Т5>Тс, в результате чего по меньшей мере часть антител или их антигенсвязывающих фрагментов повторно сворачивалась, а часть полипептидов агрегировала. Затем антитела или их антигенсвязы
- 21 012622 вающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются и связывают сывороточный альбумин, извлекают при температуре (Тг). Извлеченное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются, имеют температуру плавления (Тт), и предпочтительно спектр нагревали до Тк, охлаждали до Тс и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются, выделяли при Тг, такой, что Тк>Тт>Тс, и Тк>Тт>Тг. Обычно фаговую дисплейную библиотеку нагревают приблизительно до 80°С и охлаждают приблизительно до комнатной температуры или приблизительно 4°С перед отбором. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обратимо разворачиваются и устойчивы к агрегации, могут быть также разработаны или сконструированы путем замещения определенного аминокислотного остатка остатками, которые обеспечивают способность обратимо разворачиваться. Способы отбора и разработки или конструирования антител или их антигенсвязывающих фрагментов, которые обратимо разворачиваются, детально рассмотрены в АО 2004/101790 (1екрегк е1 а1.) и предварительных заявках на патент США № 60/470340 (поданная 14 мая 2003 г.) и 60/554021 (поданная 17 марта 2004 г.), содержание которых (АО 2004/101790 и обеих вышеупомянутых предварительных заявок на патент США) включено в данное описание путем этой ссылки.
Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются и устойчивы к агрегации, дают некоторые преимущества. Например, благодаря их устойчивости к агрегации, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются, могут быть легко получены с высоким выходом в виде растворимых белков путем экспрессии с использованием подходящей биологической продуцирующей системы, такой как Εχο1ί. Кроме того, антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые обратимо разворачиваются, могут быть приготовлены в виде препарата и/или храниться при более высоких концентрациях, чем стандартные полипептиды, и с меньшей агрегацией и потерей активности. ЭОМ711-26 (8ЕО ΙΌ N0: 20) представляет собой человеческий Ун, который обратимо разворачивается.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин, содержит вариабельный домен (Ун, νκ, νλ), в котором одна или более каркасных областей (ЕВ, 4:111^(411( гедюи) содержат (а) аминокислотную последовательность человеческой каркасной области, (Ь) по меньшей мере 8 смежных аминокислот аминокислотной последовательности человеческой каркасной области или (с) аминокислотную последовательность, кодируемую генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, где указанные каркасные области являются такими, как определено Кабатом (КаЬа1). В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность одной или более каркасных областей является такой же, как аминокислотная последовательность соответствующей каркасной области, кодируемой генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, или аминокислотные последовательности одной или более указанных каркасных областей вместе содержат вплоть до 5 аминокислотных различий относительно аминокислотной последовательности указанной соответствующей каркасной области, кодируемой генным сегментом антител человеческой зародышевой линии.
В других воплощениях аминокислотные последовательности ЕВ1, ЕВ2, ЕВ3 и ЕВ4 являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных областей, кодируемых генным сегментом антител человеческой зародышевой линии, или аминокислотные последовательности ЕВ1, ЕВ2, ЕВ3 и ЕВ4 вместе содержат вплоть до 10 аминокислотных различий относительно аминокислотных последовательностей соответствующих каркасных областей, кодируемых генными сегментами антител указанной человеческой зародышевой линии. В других воплощениях аминокислотные последовательности указанных ЕВ1, ЕВ2 и ЕВ3 являются такими же, как аминокислотные последовательности соответствующих каркасных областей, кодируемых генным сегментом антител указанной человеческой зародышевой линии.
В конкретных воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, содержит иммуноглобулиновый вариабельный домен (например, Ун, Уь) на основе последовательности из человеческой зародышевой линии и, при желании, может иметь одну или более диверсифицированных областей, таких как области, определяющие комплементарность. Подходящая последовательность Ун из человеческой зародышевой линии содержит, например, последовательности, кодируемые Ун генными сегментами ΌΡ4, ΌΡ7, ΌΡ8, ΌΡ9, ΌΡ10, ΌΡ31, ΌΡ33, ΌΡ45, ΌΡ46, ΌΡ47, ΌΡ49, ΌΡ50, ΌΡ51, ΌΡ53, ΌΡ54, ΌΡ65, ΌΡ66, ΌΡ67, ΌΡ68 и ΌΡ69 и Ш сегментами 1Ή1, 1Ή2, 1Ή3, 1Ή4, Ш4Ь, 1Ή5 и 1Ή6. Подходящая последовательность У|, из человеческой зародышевой линии содержит, например, последовательности, кодируемые Ук генными сегментами ΌΡΚ1, ΌΡΚ2, ΌΡΚ3, ΌΡΚ4, ΌΡΚ5, ΌΡΚ6, ΌΡΚ7, ΌΡΚ8, ΌΡΚ9, ΌΡΚ10, ΌΡΚ12, ΌΡΚ13, ΌΡΚ15, ΌΡΚ16, ΌΡΚ18, ΌΡΚ19, ΌΡΚ20, ΌΡΚ21, ΌΡΚ22, ΌΡΚ23, ΌΡΚ24, ΌΡΚ25, ΌΡΚ26 и ΌΡΚ28 и 1к сегментами 1κ1, 1κ2, 1κ3, 1κ4 и 1κ5.
В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид не содержат антитело мыши, крысы и/или кролика, которое связывает сывороточный альбумин, или антигенсвязывающий фрагмент такого антитела.
- 22 012622
Антигенсвязывающий фрагмент может связывать сывороточный альбумин с любой желаемой аффинностью, οη гаке (скоростью ассоциации) и οΓΓ гаке (скоростью диссоциации). Для получения желаемого периода полувыведения конкретного лекарства из сыворотки могут быть выбраны аффинность (ΚΌ), οη гаке (Κοη (константа скорости ассоциации) или ка (константа аффинности)) и οΓΓ гаке (ΚοΓΓ (константа скорости диссоциации) или к, (равновесная константа диссоциации)). Например, может быть желательным получение максимального периода полувыведения из сыворотки для лекарства, которое нейтрализует воспалительный медиатор хронического воспалительного расстройства (например, ЙЛЬ, которое связывает и нейтрализует воспалительный цитокин), тогда как более короткий период полувыведения может быть желательным для лекарства, которое имеет некоторую токсичность (например, химиотерапевтический агент). Для связывания с сывороточным альбумином предпочтительным обычно является быстрая скорость ассоциации и быстрая или умеренная скорость диссоциации. Лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды, которые содержат антигенсвязывающий фрагмент с этими характеристиками, будут быстро связывать сывороточный альбумин после введения и быстро диссоциировать и снова связывать сывороточный альбумин. Эти характеристики будут снижать быстрый клиренс лекарства (например, через почки), но все же обеспечивать эффективную доставку и доступ к лекарству-мишени.
Антигенсвязывающий фрагмент, который связывает сывороточный альбумин (например, ,АЬ), обычно связывает с ΚΌ от приблизительно 1 нМ до приблизительно 500 мкМ. В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент связывает сывороточный альбумин с ΚΌ (ΚΟ=Ι<ο1-|(1<, ι)/Κοι ,(ка)) от приблизительно 10 до приблизительно 100 нМ, или от приблизительно 100 нМ до приблизительно 500 нМ, или от приблизительно 500 нМ до приблизительно 5 мМ, как определено методом поверхностного плазмонного резонанса (например, с использованием прибора В1АС0ВЕ). В конкретных воплощениях лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат или лекарственный гибрид содержит и антигенсвязывающий фрагмент антитела (например, ,АЬ), которое связывает сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека) с ΚΌ приблизительно 50 нМ, или приблизительно 70 нМ, или приблизительно 100 нМ, или приблизительно 150 нМ, или приблизительно 200 нМ. Улучшенные фармакокинетические свойства (например, пролонгированный 11/2β, увеличенная ЛИС) лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов и лекарственных гибридов, раскрытых в данном описании, могут коррелировать с аффинностью антигенсвязывающего фрагмента, который связывает сывороточный альбумин. Соответственно, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты и лекарственные гибриды, которые имеют улучшенные фармакокинетические свойства, обычно могут быть получены с использованием антигенсвязывающего фрагмента, который связывает сывороточный альбумин (например, сывороточный альбумин человека) с высокой аффинностью (например, ΚΌ приблизительно 500 нМ или меньше, приблизительно 250 нМ или меньше, приблизительно 100 нМ или меньше, приблизительно 50 нМ или меньше, приблизительно 10 нМ или меньше, или приблизительно 1 нМ или меньше, или приблизительно 100 пМ или меньше).
Предпочтительно лекарство, которое конъюгировано или слито с антигенсвязывающим фрагментом, который связывает сывороточный альбумин, связывается с его мишенью (мишенью лекарства) с аффинностью (ΚΌ), которая выше, чем аффинность антигенсвязывающего фрагмента для сывороточного альбумина, и/или ΚοΓΓ (к,), которая быстрее, чем ΚοΓΓ антигенсвязывающего фрагмента для сывороточного альбумина, как измерено методом поверхностного плазменного резонанса (например, с использованием прибора В1АС0ВЕ). Например, лекарство может связывать свою мишень с аффинностью, которая от приблизительно 1 до приблизительно 100000, или от приблизительно 100 до приблизительно 100000, или от приблизительно 1000 до приблизительно 100000, или от приблизительно 10000 до приблизительно 100000 раз выше, чем аффинность антигенсвязывающего фрагмента, который связывает 8А для 8Л. Например, антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает 8А, может связывать с аффинностью приблизительно 10 мкМ, тогда как лекарство связывает свою мишень с аффинностью приблизительно 100 пМ.
В конкретных воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой ,АЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека. Например, νκ ,АЬ, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 10, 8ЕС ГО N0: 11, 8ЕС ГО N0: 12, 8ЕС ГО N0: 13, 8ЕС ГО N0: 14, 8ЕС ГО N0: 15, 8Е0 ГО N0: 24, 8Е0 ГО N0: 25 и 8Е0 ГО N0: 26, или νΗ ,АЬ, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8 ЕС ГО N0: 16, 8Е0 ГО N0: 17, 8 ЕС ГО N0: 18, 8ЕС ГО N0: 19, 8ЕС ГО N0: 20, 8ЕС ГО N0: 21, 8ЕС ГО N0: 22 и 8ЕС ГО N0: 23. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой ,АЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит СЭВ из любых вышеупомянутых аминокислотных последовательностей. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляет собой ,АЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере приблизительно 80%, или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%, или по меньшей мере приблизительно 95%, или
- 23 012622 по меньшей мере приблизительно 96%, или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%, или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности с 8ΕΟ ГО NО: 10, 8ΕΟ ГО NО: 11, 8ΕΟ ГО NО: 12, 8ΕΟ ГО NО: 13, 8ΕΕ) ГО ^: 14, 8ΕΕ) ГО 15, 8ΕΕ) ГО 24, 8ΕΕ) ГО 25, 8ΕΕ) ГО 26, 8ΕΕ) ГО 16,
8ΕΕ) ГО ^: 17, 8ΕΕ) ГО ^: 18, 8ΕΕ) ГО N3: 19, 8ΕΕ) ГО ^: 20, 8ΕΕ) ГО ^: 21, 8ΕΕ) ГО ^: 22 или 8ΕΟ ГО NО: 23. Идентичность аминокислотной последовательности предпочтительно определяют с использованием подходящего алгоритма выравнивания последовательностей и подходящих значений параметров по умолчанию, таких как ВЬА8Т Р (ΚηγΙιπ ηηά ΑΙΙδοΗυΙ. Ргос. Νίί. Асаб. 8с1. И8А, 87(6):22642268 (1990)).
Лекарства.
Некоторые лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты) могут содержать любое лекарство (например, органическую молекулу низкой молекулярной массы, нуклеиновую кислоту, полипептид), которое может быть введено индивидууму для получения положительного терапевтического или диагностического эффекта, например, благодаря связыванию с биологической молекулой-мишенью и/или изменение функции биологической молекулы-мишени у индивидуума. Другие лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственные гибриды) могут содержать полипептидное или пептидное лекарство. В предпочтительных воплощениях лекарственных гибридов лекарство не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела (например, Ун, У<, Ух).
Подходящие лекарства для применения в изобретении включают в себя, например, иммуносупрессорные агенты (например, циклоспорин А, рапамицин, ΡΚ506, преднизон), противовирусные агенты (ацикловир, ганцикловир, индинавир), антибиотики (пенициллин, миноциклин, тетрациклин), противовоспалительные агенты (аспирин, ибупрофен, преднизон), цитотоксины или цитотоксические агенты (например, паклитаксел, цитохалазин В, грамицидин Ό, бромистый этидий, эметин, митомицин С, этопозид, тенопозид, винкристин, винбластин, колхицин, доксорубицин, даунорубицин, дигидроксиантрациндион, митоксантрон, митрамицин, актиномицин Ό, 1-дигидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, и аналоги или гомологи любых вышеупомянутых агентов. Подходящие лекарства также включают в себя антиметаболиты (например, метотрексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацилдекарбазин), алкилирующие агенты (например, мехлоретамин, тиоэпахлорамбуцил (ίЫοеρасЫο^атЬис^1), СС-1065, мелфалан, кармустин (ΒδΝυ), ломустин (ССКИ), циклофосфамид, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С и цисдихлордиамин платины (II) (ИИР, цисплатин), антрациклины (например, даунорубицин (ранее дауномицин) и доксорубицин), антибиотики (например, дактиномицин (ранее актиномицин), блеомицин, митрамицин и антрамицин (АМС)), радионуклиды (например, йод-125, -126), иттрий (например, иттрий-90, -91) и празеодимий (например, празеодимий-144, -145), и ингибиторы протеаз (например, ингибиторы матриксных металлопротеиназ). Другие подходящие лекарства представляют собой нуклеиновые кислоты, такие как антисмысловые нуклеиновые кислоты и РНК-ί. Калихеамицин также подходит для применения в данном изобретении.
Подходящие лекарства также включают в себя аналгезирующие агенты, включая наркотики (например, кодеин, налмефен, налоксон, фентанил, меперидин, морфин, трамадол, пропоксифен, оксикодон, метадон, налбуфин), нестероидные противовоспалительные агенты (например, индометацин, кеторолак, артротек, ибупрофен, напроксен, салицилат, целекоксиб, рофекоксиб), ацетаминофен, капсаицин, зиконотид и т.п.
В некоторых воплощениях лекарство представляет собой полипептидный токсин, например токсин, такой как абрин, рицин А, псевдомонадный экзотоксин или дифтерийный токсин. Другие подходящие полипептидные лекарства включают в себя антитела или антигенсвязывающие фрагменты (например, бАЬ) антител, полипептидных агонистов, активаторов, стимуляторов секреции, антагонистов или ингибиторов. Например, полипептидное или пептидное лекарство может связывать и являться агонистом или антагонистом клеточного поверхностного белка, такого как антиген СИ, цитокиновый рецептор (например, интерлейкиновый рецептор, хемокиновый рецептор), адгезивная молекула или костимулирующая молекула. Например, полипептидное лекарство может связывать цитокин, факторы роста, цитокиновый рецептор, рецептор фактора роста и другой лиганд-мишень, которые включают в себя, но не ограничиваются этим: АροΕ, Аρο-8АА, ΒΌΝΒ, кардиотрофин-1, СЕА, СИ40, лиганд СИ40, СИ56, СИ38, СИ138, Ε6Ρ, рецептор Ε6Ρ, ΕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, РАРа, РСР-кислый, РСР-основный, фактор роста фибробластов-10, РЬТ3 лиганд, фракталкин (РгаСа1кше) (СХ3С), СИОТ, С-С8Р, СМ-С8Р, 0Р-Р1, сывороточный альбумин человека, инсулин, ΨΝ-γ, 1СР-1, 1СР-11, 1Ь-1а, (Ь-1 β, рецептор ГО-1, ГО-2, ГО-3, ГО-4, ГО-5, ГО-6, ГО-7, ГО-8 (72 а.к.), ГО-8 (77 а.к.), ГО-9, ГО-10, ГО-11, ГО-12, ГО-13, ГО-15, ГО-16, ГО-17, ГО-18 (1С1Р), ингибин а, ингибин β, 1Р-10, фактор роста кератиноцитов-2 ЩСР-2), ΚСΡ, лептин, ЫР, лимфотактин, Мюллеров ингибиторующий фактор (МиПепаи), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, М-С8Р, МИС (67 а.к.), МИС (69 а.к.), МСР-1 (МСАР), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МИС (67 а.к.), МИС (69 а.к.), М1С, М1Р-1а, М1Р-1в, М1Р-3а, М1Р-3в, М1Р-4,
- 24 012622 миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МР1Е-1), NАΡ-2, неуртурин (№ипшт), фактор роста нервов, β-ΝΟΡ, ΝΤ-3, ΝΤ-4, онкостатин М, РОСЕ-АА, РОСЕ-АВ, РОСЕ-ВВ, РЕ-4, ΒΑΝΤΕ3, 3ОЕ1а, 8ϋΡ1β, ЗСЕ, ЗССЕ, стволовый клеточный фактор (ЗСЕ), ТАКС, ТСЕ-α, ТСЕ-β, ТСЕ-в2, ТСЕ-в3, фактор некроза опухолей (ЮТ), ЮТ-а, ЮТ-β, рецептор ЮТ типа I, рецептор ЮТ типа II, ТУП, ТРО, УЕСЕ, УЕСЕ А, УЕСЕ В, УЕСЕ С, УЕСЕ Ό, рецептор УЕСЕ типа 1, рецептор УЕСЕ типа 2, рецептор УЕСЕ типа 3, ССР-2, СКО/МСЗА, СКО-β, СКО-γ, НСС1, 1-309, НЕК 1, НЕК 2, НЕК 3 и НЕК 4. Следует понимать, что этот перечень никоим образом не является исчерпывающим.
Подходящие лекарства также включают в себя гормоны, включая гормон гипофиза (РТН), адренокортикотропный гормон (АСТН), ренин, гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (ЬНКН), гонадотропин-высвобождающий гормон (СпКН), лютеинизирующий гормон (ЬН), фолликулостимулирующий гормон (ЕЗН), альдостерон и т.п. Подходящие лекарства также включают в себя фактор роста кератиноцитов, интерфероны (например, ШЫ-а, ^Ν-β, ШЫ^), эритропоэтин (ЕРО), протеазы, эластазы, аналоги, агонисты и антагонисты ЬНКН, агонисты опиоидных рецепторов, такие как агонисты каппаопиоидных рецепторов (например, динорфин А), кальцитонин и аналоги кальцитонина, антидиуретический гормон (вазопрессин), антагонисты окситоцина, вазоактивный интестинальный пептид, ингибиторы тромбина, фактор Виллебранда, поверхностно-активные вещества и яд улитки (например, зиконотид).
Подходящие лекарства также включают в себя пептиды и полипептиды, которые имеют противораковые активности (например, ингибирующие пролиферацию, ингибирующие рост, индуцирующие апоптоз, ингибирующие метастазы, ингибирующая адгезию, ингибирующие неоваскуляризацию). Некоторые такие пептиды и полипептиды известны в данной области (см., например ίαηίη У.Ь., Атто Ас1бк, 25:1-40 (2003). Полное содержание этой ссылки, в частности пептиды и полипептиды, раскрытые в ней, включены в данное описание путем ссылки). Аминокислотные последовательности некоторых таких пептидов представлены в табл. 8.
Другие подходящие лекарства включают в себя пептиды и полипептиды, которые обладают противовирусной активностью. Некоторые такие пептиды и полипептиды известны в данной области, например пептиды и полипептиды, раскрытые в Οΐαηη^οΗΐηΐ, е! а1., ί. У1го., 77(6):3724-33 (2003); ХУан^ 1., е! а1., С1т. Сйет. (2003); ШПета^ М.К., Уассте, 21(32):4626-49 (2003); Т/КеКка, Ь.А., е! а1., Сигг Тор Меб. Сйет., 3(73): 1512-35 (2003); Рогйд М.А., е! а1., У1го1оду, 313(7): 170-83 (2003); Оеνе^таηη, А., е! а1., АШУга! Ке.8, 59(7):23-33 (2003); Со1е, А.М. е! а1., Сигг Рйагт Оек, 9(75):1463-73 (2003); Ршоп, Ю., е! а1., У1го1., 77(5):3281-90 (2003); 31а, З.К., е! а1., Ргос. №6. Асаб. Зск ИЗА, 99(23):14664-9 (2002); ВайЬоиЫ, В., е! а1., Вюсйет. 1., 66(Р!. 3):863-72 (2002); бе Зоийгай, У.К., е! а1., 1. Мо1. Вю1., 18(7):45-58 (2002); Уййегей, С., Сигг Орт Шуекйд Эгидк, 2(3):340-7 (2001); КиГГ, М.К., е! а1., АйМгаЕ Кек., 52(7):63-75 (2001); Ви1!таηη, Н., е! а1., 1. У1го1, 75(6):2634-45 (2001); Еда1, М., е! а1., Ш!. 1. А^тюю^ АдегИк, 13(7):57-60 (1999) и КоЬшкоп, У.Е., 1г., 1. Ьеикос. Вю1., 63(7):94-100 (1998). Полное содержание этих ссылок, в частности пептиды и полипептиды, раскрытые в них, включены в данное описание путем ссылки. Эти пептиды и полипептиды являются примерами лекарств, которые могут быть использованы в композициях, лекарственных гибридах, лекарственных конъюгатах, нековалентных лекарственных конъюгатах по настоящему изобретению.
Полипептидное лекарство может представлять собой также цитокин или фактор роста, или растворимый участок рецептора (например, рецептор цитокина, рецептор фактора роста, рецептор гормона) или другой полипептид, такой как полипептиды, перечисленные выше. Например, подходящие полипептидные лекарства также включают в себя агонисты и антагонисты рецепторов (например, рецептора фактора роста, рецептора цитокина, рецептора гормона), такие как антагонист рецептора интерлейкина-1 (Еще^е^ е! а1., кашге, 343:341-346 (1990)), агонисты рецептора тромбопоэтина (например, СУ 395058 (бе Зеггек е! а1., 3!ет Се11к, 17:316-326 (1999)), антагонисты рецептора меланокортина (например, антагонисты МСК-4 (Серо1 е! а1., Вгат Кек. 1000:64-71 (2004)), ангинекс, 6ЭВЕ7 (Мауо е! а1., 1. Вю1. Сйет. 278:45746-45752 (2003)), миметики хемокина (например, миметики КАКТЕЗ Щагбеке е! а1., №11. 3!гис!. Вю1. 8:611-615 (2001)), гормон роста (например, гормон роста человека), аналоги гормона роста и стимуляторы секреции гормона роста (например, СР-424391 (МасАпбге\\· е! а1., Еиг. ί. Рйагтасо1. 432:195-202 (2001)), миметики гормона, высвобождающего гормон роста (например, МК-677 (Сйартаη е! а1., ί. С1т. Еп6осг1по1 Ме!аЬ. 82:3455-3463 (1997)), ингибиторы клеточных взаимодействий адгезивных молекул (например, ЙЕА-ПСАМ-Е УЙА-1/УСАМ-1 (ΥикиГ-Макад^аηка^ е! а1., Меб. Кек. Ксу. 22:146-167 (2002)), миметики интерферона (например, 3ΥΚ6 (За!о е! а1., Вюсйет. ί. 371(Р!.2):603-608 (2003), миметики герцептина (ЛаШге Вю!ссйпо1. 18:137 (2000)), ингибиторы представления антигена (Во1т е! а1., ί. Меб. Сйет. 43:2135-2148 (2000)), антагонисты СРПВ/ША (например, ЕК633 (Аок1 е! а1., ТйготЬ. Кек. 81:439-450 (1996)), антагонисты альфа-у-бета-3 (например, 3С56631 (Εηд1етаη е! а1., ί. С1т. Шуек!. 99:2284-2292 (1997)), миметики эритропоэтина (например, ЕМР1 (1ойпкоп е! а1., Вюсйет1к!гу, 37:3699-3710 (1998)), антагонисты опиоидных рецепторов (например, [(23,3К)-ТМТ1]ОРОРЕ (Ыао е! а1., ί. Меб. Сйет. 41:4161-4776 (1998)), гематопоэтические факторы (например, эритропоэтин (ЕРО), гранулоцитколониестимулирующий фактор (СМ-СЗЕ)).
- 25 012622
Дополнительные подходящие пептидные и полипептидные лекарства включают в себя пептидные антагонисты, которые связывают рецептор ЕС-1 типа 1 человека (например, АР 11377 (РЕ^ТРСУ^фРУАЬРЬ, ЗЕО ΙΌ N0: 56), АР11869 (1ТЛ\'ТРС¥\\Г).1УА1.Р1.. ЗЕГ) ΙΌ N0: 57 (1=1-азетидин-2-карбоновая кислота), РЕ\\'ТРС¥\\Г).1¥ (ЗЕО ΙΌ N0: 58), РЕ\\'ТРС\\'¥О.1¥ (ЗЕО ΙΌ N0: 59), РЕ\ТРС\УР1¥АЬРЬ (ЗЕО ΙΌ N0: 60) или любую из вышеупомянутых последовательностей, возможно содержащую ацилированный аминоконец и/или аминированный карбоксильный конец (Аке^п е! а1., I. Вю1. СЬет. 271:30517-305123 (1996)), пептидные антагонисты ТИР-а-опосредованной цитотоксичности (например, те, которые раскрыты в ΟΊιίΓίι·ιοκ-Κο_ί<ικ е! а1., I. Iттиηο1. 161:5621-5626 (1998)), пептидные агонисты рецептора эритропоэтина (например, те, которые раскрыты в ΜсСοηηе1 е! а1., Вю1. СЬет. 379:1279-1286 (1998) или \\пд11Юп е! а1., Зс1епсе, 273:458-464 (1996)), глюкагон-подобный пептид-1 (СЬР-1, например СЬР-1(7-37), СЬР-1(7-36)амид и его аналоги (см., например КЦхе1 и. е! а1., I. Β^ο^гюкду 159:93-102 (1998)) и интерфероны (например, ШЕ-а. ΙΧΕ-β, ЮТ-у). Дополнительные подходящие полипептидные и пептидные лекарства включают в себя ингибиторы интегрина (например, КСБпептиды, такие как Н-С1и[цикло(Агд-С1у-Акр-Э-РЬе-Еук)]2 (1апккеп, М.Х., е! а1., Сапсег КекеагсЬ 62:61466151 (2002)), цикло(Агд-С1у-Акр-Э-РЬе-Еук) (КапИеЬпег М., е! а1., Адпете. СЬет. ШЕ. ЕЕ. 38:560 (1999)), цикло(Агд-С1у-Акр-Б-Туг-Ьук) (НаиЬпег, В., е! а1., I. N^1. МеЕ. 42:326-336 (2001)), белки, инактивирующие рибосомы (КЕР), такие как сапорин (например, ЗЕО ΙΌ N0: 67), ингибиторы матриксных металлопротеиназ (например, патент США № 5616605) и противовирусные пептиды и полипептиды, такие как слитые ингибиторы ВИЧ (например, Т-1249 и Т-20 (ΕυΖЕ0N® (энфувиртид); Тптепк Шс.), и растворимые антагонисты рецепторов, такие как иммуноадгезины (например, ^ΕА3-Iд, СТ^А4-Iд).
Противомикробные полипептидные и пептидные лекарства также подходят для применения в изобретении. Примеры подходящих противомикробных полипептидных и пептидных лекарств включают в себя аденорегулин, дермцидин-Ш, кателицидины (например, кателицидин-подобный пептид, человеческий ЕЬ-37/ЬСАР-18), дефензины, включая α-дефензины (например, нейтрофильный пептид 1 человека (ЖР-β, НЕР-2, НЕР-3, НЕР-4, дефензин-5 человека, дефензин-6 человека), β-дефензины (например, в-дефензин-1 человека, в-дефензин-2 человека) и θ-дефензины (например, 0-дефензин-1), гистатины (например, гистатин-1, гистатин-3, гистатин-5), лактоферрицинпроисходящий пептид и родственные пептиды (см. ШтГО М., е! а1., Ас!а РаеЕ1аЛ. 1рп. 36:585-591 (1994) и ЗЕгот, М.В., е! а1. ВюсЬет Се11 Вю1. 80:65-74 (2002)).
Лекарственные гибриды.
Лекарственные гибриды по изобретению представляют собой гибридные белки, которые содержат непрерывную полипептидную цепь, содержащую антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин в качестве первой группировки, связанный со второй группировкой, которая представляет собой полипептидное лекарство. Первые и вторые группировки могут быть непосредственно связаны друг с другом через пептидную связь или через подходящую аминокислоту, или пептидный или полипептидный линкер. В соответствующих случаях могут присутствовать дополнительные группировки (например, третья, четвертая) и/или линкерные последовательности. Первая группировка может находиться в ^концевом положении, С-концевом положении или в пределах второй группировки (т. е. полипептидного лекарства). В некоторых воплощениях каждая группировка может присутствовать в более чем одной копии. Например, лекарственная гибрид может содержать две или более первых группировок, причем каждая содержит антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин (например, УН, который связывает сывороточный альбумин человека, и Уъ, который связывает сывороточный альбумин человека, или два или более УН или Уъ, которые связывают сывороточный альбумин человека).
В некоторых воплощениях лекарственный гибрид представляет собой непрерывную полипептидную цепь, которая имеет формулу
или
где Х представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;
Υ представляет собой одоцепочечный антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;
Ζ представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени;
а, Ь, с и Е, каждый независимо, отсутствуют или включают от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков;
п1 означает от 1 до приблизительно 10;
п2 означает от 1 до приблизительно 10 и п3 означает от 0 до приблизительно 10, при условии, что когда п1 и п2, оба, означают 1 и п4 означает 0, тогда Х не содержит цепь антитела или
- 26 012622 фрагмент цепи антитела.
В одном воплощении ни X, ни Ζ не содержат цепь антитела или фрагмент цепи антитела. В одном воплощении п1означает 1, п3 означает 1 и п2 означает 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9. Предпочтительно Υ представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (УН), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Более предпочтительно, Υ представляет собой ЙАЬ (например, УН, Ук или Ух), которое связывает сывороточный альбумин человека. В конкретном воплощении X или Ζ означает 1Ь-1га человека или функциональный вариант 1Ь-1га человека.
В некоторых воплощениях Υ содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 81Ю ГО N0: 10, 81 У) ГО N0: 11, 8 ЕС) ГО N0: 12, 8ЕС) ГО N0: 13, 8ЕС) ГО N0: 14, 8Е0 ГО N0: 15, 8Е0 ГО N0: 24, 8Е0 ГО N0: 25 и 8Е0 ГО N0: 26. В других воплощениях Υ содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 16, 8ЕС) ГО N0: 17, 8ЕС) ГО N0: 18, 8ЕС) ГО N0: 19, 8 ЕС) ГО N0: 20, 8ЕС) ГО N0: 21, 8ЕС) ГО N0: 22 и 8ЕС) ГО N0: 23.
В других воплощениях лекарственный гибрид содержит группировки X' и Υ', где X' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X' не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; и Υ' представляет собой одноцепочечный антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Предпочтительно Υ' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (УН), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (УЬ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Более предпочтительно, Υ' представляет собой ЙАЬ (например, УН, Ук или Ух), которое связывает сывороточный альбумин человека. X' может быть расположен на аминоконце относительно Υ', или Υ' может быть расположен на аминоконце относительно X'. В некоторых воплощениях X' и Υ' разделены аминокислотой или пептидным или полипептидным линкером, который содержит от 2 до приблизительно 100 аминокислот. В конкретном воплощении X' представляет собой 1Ь-1га человека или функциональный вариант 1Ь-1га человека.
В некоторых воплощениях Υ' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС) ГО N0: 10, 8ЕС) ГО N0: 11, 8 ЕС) ГО N0: 12, 8ЕС) ГО N0: 13, 8ЕС) ГО N0: 14, 8Е0 ГО N0: 15, 8Е0 ГО N0: 24, 8Е0 ГО N0: 25 и 8Е0 ГО N0: 26. В других воплощениях Υ' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 16, 8ЕС) ГО N0: 17, 8ЕС) ГО N0: 18, 8ЕС) ГО N0: 19, 8 ЕС) ГО N0: 20, 8ЕС) ГО N0: 21, 8ЕС) ГО N0: 22 и 8ЕС) ГО N0: 23.
В конкретных воплощениях лекарственный гибрид содержит бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин, и 1Ь-1га человека (например, 8Е0 ГО N0: 28). Предпочтительно ЙАЬ связывает сывороточный альбумин человека и содержит человеческие каркасные области.
В других воплощениях лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат содержит функцио
нальный вариант 1Ь-1га человека, который имеет по меньшей мере приблизительно 80%,
или по меньшей мере приблизительно 85%, или по меньшей мере приблизительно 90%,
или по меньшей мере приблизительно 95%, или по меньшей мере приблизительно 96%,
или по меньшей мере приблизительно 97%, или по меньшей мере приблизительно 98%,
или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности аминокислотной последовательности со зрелой 152 аминокислотной формой 1Ь-1га человека и является антагонистом рецептора интерлейкина-1 типа 1 человека (см. ЕйепЬегд еΐ а1., №11иге 343:341-346 (1990)). Вариант может содержать одну или более дополнительных аминокислот (например, содержит 153, или 154, или более аминокислот). Лекарственные гибриды по изобретению могут быть получены с использованием любого подходящего способа. Например, некоторые воплощения могут быть получены путем вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей лекарственный гибрид, в подходящий экспрессирующем векторе. Полученную конструкцию затем вводят в подходящую клетку-хозяина для экспрессии. После экспрессии гибридный белок может быть выделен или очищен из клеточного лизата или предпочтительно из культуральных сред или периплазмы с использованием любого подходящего способа (см., например, Сиггеп) РгоЮсоЬ ш Мо1еси1аг Вю1оду (Аи8иЬе1, Е.М. а а1., ейк., то1. 2, 8ирр1. 26, р. 16.4.1-16.7.8 (1991)).
Подходящие экспрессирующие векторы могут содержать множество компонентов, например точку начала (опдт) репликации, селектируемый маркерный ген, один или более элементов, контролирующих экспрессию, таких как элемент, контролирующий транскрипцию (например, промотор, энхансер, терминатор), и/или один или более трансляционных сигналов, сигнальную последовательность или лидерную последовательность и т.п. Элементы, контролирующие экспрессию, и сигнальная последовательность, если присутствуют, могут быть предоставлены вектором или другим источником. Например, транскрипционные и/или трансляционные регуляторные последовательности клонированной нуклеиновой кислоты, кодирующей цепь антитела, могут быть использованы для прямой экспрессии.
- 27 012622
Для экспрессии в желаемой клетке-хозяине может быть предложен промотор. Промоторы могут быть конститутивными или индуцибельными. Например, промотор может быть функциональным образом связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей антитело, цепь антитела или его участок, таким образом, что он направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Имеются различные подходящие промоторы для прокариотических (например, 1ас, !ас, Т3, Т7 промоторы для Е^й) и эукариотических (например, ранний или поздний промотор обезьяньего вируса 40, промотор в длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса, промотор цитомегаловируса, поздний промотор аденовируса) хозяев.
Кроме того, экспрессирующие векторы обычно содержат селектируемый маркер для селекции клеток-хозяев, несущих данный вектор, и в случае реплицируемого экспрессирующего вектора - точку начала репликации. Гены, кодирующие продукты, которые придают устойчивость к антибиотикам или лекарствам, являются обычными селектируемыми маркерами и могут быть использованы в прокариотических (например, ген лактамазы (устойчивость к ампициллину), ген Те! для устойчивости к тетрациклину) и эукариотических клетках (например, гены устойчивости к неомицину (0418 или генетицин), др! (микофеноловая кислота), ампициллину или гигромицину). Дигидрофолатредуктазные маркерные гены позволяют осуществить селекцию метотрексатом в различных хозяевах. Гены, кодирующие генный продукт ауксотрофных маркеров хозяина (например, ЬЕи2, ИКАЗ, ΗΙ83), часто используют в качестве селектируемых маркеров в дрожжах. Предполагается также применение вирусных (например, бакуловирусных) или фаговых векторов и векторов, которые способны встраиваться в геном клетки-хозяина, таких как ретровирусные векторы. Подходящие экспрессирующие векторы для экспрессии в клетках млекопитающих и прокариотических клетках (Ε^ο1ί), клетках насекомых (клетках ΟΐΌ5ορ1ιί1;·ι 8сйшебег 82, 8£9) и дрожжах (Р.те!йаηο1^са, Ρ.ρηδΙοΓίδ, 8.сегеуыае) хорошо известны в данной области.
Предложены рекомбинантные клетки-хозяева, которые экспрессируют лекарственный гибрид, и способ получения лекарственного гибрида, как раскрыто в данном описании. Рекомбинантная клеткахозяин содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую лекарственный гибрид. Лекарственные гибриды могут быть получены путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, в подходящей клетке-хозяине или с использованием других подходящих способов. Например, экспрессирующие конструкции, раскрытые в данном описании, могут быть введены в подходящую клетку-хозяина, и полученную клетку можно поддерживать (например, в культуре, в животном) в условиях, подходящих для экспрессии данных конструкций. Подходящие клетки-хозяева могут быть прокариотическими, включая бактериальные клетки, такие как Εχο1ί, В.киЬййк и/или другие подходящие бактерии, эукариотическими, такими как грибковые или дрожжевые клетки (например, РюЫа ρηδΙοΓίδ, АкрегдШик крешек, 8ассйаготусек се^еν^к^ае, 8сй^ζοкассйа^οтусек рοтЬе, №ιΐΓοκροπ·ι сгакка), или другие низшие эукариотические клетки, и клетками высших эукариот, такими как клетки насекомых (например, клетки насекомых 8£9 (ШО 94/26087 (Ο'Οοηηοτ)) или млекопитающих (например, клетки СО8, такие как СО8-1 (регистрационный № в АТСС СКЬ-1650) и СО8-7 (регистрационный № в АТСС СКЙ-1651), СНО (например, регистрационный № в АТСС СКЬ-9096), 293 (регистрационный № в АТСС СКЙ-1573), НеЬа (регистрационный № в АТСС ССЬ-2), СУ1 (регистрационный № в АТСС ССЬ-70), ШОР (Иайеу е! а1., 1. У1ГО1. 54:139-149 (1985)), 3Т3, 293Т (Реаг е! а1., Ртос. N86. Асаб. 8сг И.8.А., 90:8392-8396 (1993)), клетки №О, 8Р2/0, клетки НиТ 78 и т.п. (см., например АикиЬе1, Т.М. е! а1., ебк. Сипси! РюШ^к ίη Μο^υΕπ ВюШду, Сгееие РиЬйкйтд Аккοс^а!ек аиб ίοΗη Шх^уй^щ 1пс., (1993)).
Изобретение также включает способ получения лекарственного гибрида, включающий поддержание рекомбинантной клетки-хозяина по изобретению в условиях, подходящих для экспрессии лекарственного гибрида. При желании, способ может дополнительно включать стадию выделения или регенерации лекарственного гибрида. В другом воплощении компоненты лекарственного гибрида (например, бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека и 1Ь-1га) собирают вместе химическим путем для создания непрерывной полипептидной цепи.
Конъюгаты.
В другом аспекте согласно изобретению предложены конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, связанный с лекарством. Такие конъюгаты включают в себя лекарственные конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано ковалентно, и нековалентные лекарственные конъюгаты, содержащие антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с которым лекарство связано нековалентно. Предпочтительно конъюгаты являются достаточно стабильными, так что антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и лекарство остаются, по существу, связанными (либо ковалентно, либо нековалентно) друг с другом в условиях ίη νίνο (например, при введении человеку). Предпочтительно не более чем приблизительно 20%, не более чем приблизительно 15%, не более чем приблизительно 10%, не более чем приблизительно 9%, не более чем приблизительно 8%, не более чем приблизительно 7%, не более чем приблизительно 6%, не более чем приблизительно 5%, не более чем приблизительно 4%, не более чем приблизительно 3%, не более чем приблизительно 2%, не более чем приблизительно 1% или, по существу, ни один из конъюгатов не диссоциирует или не распадается с высвобождением лекарства и антигенсвязывающего фрагмента в условиях ίη νίνο.
- 28 012622
Например, стабильность в условиях ίη νίνο может быть легко оценена путем инкубации лекарственного конъюгата или нековалентного лекарственного конъюгата в течение 24 ч в сыворотке (например, сыворотке человека) при 37°С. В одном из примеров такого способа одинаковые количества лекарственного конъюгата и неконъюгированного лекарства разбавляют в двух разных флаконах сыворотки.
Половину содержимого каждого флакона сразу замораживают при -20°С, а другую половину инкубируют в течение 24 ч при 37°С. Все четыре образца могут быть затем проанализированы с использованием любого подходящего способа, такого как ПААГ-ДСН (электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия) и/или Вестерн-блоттинг. Вестерн-блоты могут быть исследованы с использованием антитела, которое связывает лекарство. Если диссоциации не произошло, то все лекарство на дорожках с лекарственным конъюгатом будет двигаться на уровне размера лекарственного конъюгата. Для оценки стабильности в условиях ίη νίνο можно использовать многие другие подходящие способы, например анализ полученных образцов, как описано выше, с использованием подходящих аналитических способов, таких как хроматография (например, гель-фильтрация, ионный обмен, обращенная фаза), ЕЫ8Л (твердофазный иммуноферментый анализ), масс-спектроскопия и т.п.
Лекарственные конъюгаты.
В другом аспекте согласно изобретению предложен лекарственный конъюгат, содержащий антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным антигенсвязывающим фрагментом, при условии, что лекарственный конъюгат не является единичной непрерывной полипептидной цепью.
В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат содержит вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уъ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным Ун или Уъ, при условии, что лекарственный конъюгат не является единичной непрерывной полипептидной цепью. Предпочтительно лекарственный конъюгат содержит один Ун, который связывает сывороточный альбумин, или один Уъ, который связывает сывороточный альбумин. В некоторых воплощениях лекарственный конъюгат содержит Ук ЙАЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ΕΟ ΙΌ N0: 10, 8ΕΟ ΙΌ N0: 11, 8ΕΟ ΙΌ N0: 12, 8ΕΟ ΙΌ N0: 13, 8ΕΟ ΙΌ N0: 14, 8ΕΟ ΙΌ N0: 15, 8Ε0 ΙΌ N0: 24, 8Ε0 ΙΌ N0: 25 и 8Ε0 ΙΌ N0: 26. В других воплощениях лекарственный конъюгат содержит Ун бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Ε0 ΙΌ N0: 16, 8Ε0 ΙΌ N0: 17, 8Ε0 ΙΌ N0: 18, 8ΕΟ ΙΌ N0: 19, 8ΕΟ ΙΌ N0: 20, 8ΕΟ ΙΌ N0: 21, 8ΕΟ ΙΌ N0: 22 и 8ΕΟ ΙΌ N0: 23.
Лекарственные конъюгаты могут содержать любое желаемое лекарство и могут быть получены с использованием любых подходящих способов. Например, лекарство может быть связано с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или опосредованно через подходящую линкерную группировку в одном или более положениях, таких как аминоконец, карбоксильный конец, или через аминокислотные боковые цепи. В одном воплощении лекарственный конъюгат содержит бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека, и полипептидное лекарство (например, ГЕ-1га человека или функциональный вариант ГЕ-1га человека), а аминоконец полипептидного лекарства (например, !И-1 га человека или функциональный вариант οί ГБ-1га человека) связан с карбоксильным концом бАЬ непосредственно или через подходящую линкерную группировку. В других воплощениях лекарственный конъюгат содержит бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин человека, и два или более различных лекарств, которые ковалентно связаны с ЙАЬ. Например, первое лекарство может быть ковалентно связано (непосредственно или опосредованно) с карбоксильным концом бАЬ, а второе лекарство может быть ковалентно связано (непосредственно или опосредованно) с аминоконцом или через аминогруппу боковой цепи (например, ε-аминогруппу лизина). Такие лекарственные конъюгаты могут быть получены с использованием хорошо известных способов селективного связывания (см., например, Не^аитои, 6. Т., Вю^и^да^ Тесйшдиек, Асабетк Ргекк: 8ап ^^едο, СА (1996)),
Могут быть использованы различные способы конъюгирования лекарств с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину. Конкретный выбранный способ будет зависеть от лекарства, подлежащего конъюгации. При желании, для соединения антигенсвязывающего фрагмента и лекарства могут быть использованы линкеры, которые содержат концевые функциональные группы. Обычно конъюгирование осуществляют путем взаимодействия лекарства, которое содержит реактивную функциональную группу (или модифицировано для того, чтобы содержать реактивную функциональную группу), с линкером или непосредственно с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин. Ковалентные связи образуются путем взаимодействия лекарства, которое содержит (или модифицировано, для того чтобы содержать) химическую группировку или функциональную группу, которая может в подходящих
- 29 012622 условиях взаимодействовать со второй химической группой, образуя, таким образом, ковалентную связь. При желании, подходящая реактивная химическая группа может быть добавлена к антигенсвязывающему фрагменту или к линкеру с использованием любого подходящего способа (см., например, Негшапкоп, 6.Т., ВюсоищдаГе Тесйшдиек, Асабешк Ргекк: 8ап П1едо, СА (1996)). Многие комбинации подходящих реактивных химических групп известны в данной области, например аминогруппа может взаимодействовать с электрофильной группой, такой как тозилат, мезилат, галогено (хлоро, бромо, фторо, йодо), №гидроксисукцинимидиловый эфир (N48) и т.п. Тиолы могут взаимодействовать с малеимид-, йодацетил-, акрилоил-, пиридилдисульфидами, тиолом 5-тиол-2-нитробензойной кислоты (ТNВ-тиол) и т.п. Альдегидная функциональная группа может быть связана с амин- или гидразидсодержащами молекулами и азидная группа может взаимодействовать с трехвалентной фосфорной группой с образованием фосфорамидатных или фосфоримидных связей. Подходящие способы для введения активирующих групп в молекулы известны в данной области (см., например, Негшапкоп, С.Т., ВюсопщдЦе ТесБЫдиек, Асабешк Ргекк: 8ап П1едо, СА(1996)).
В некоторых воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, связан с лекарством путем взаимодействия двух тиолов с образованием дисульфидной связь. В других воплощениях антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, связан с лекарством путем взаимодействия изотиоцианатной группы и первичного амина с получением изотиомочевинной связи.
Подходящие линкерные группировки могут быть линейными или разветвленными и включают в себя, например, тетраэтиленгликоль, С2-С12-алкилен, -№Н-(СН2)р-ХН- или -(СН2)р-ХН- (где р означает от 1 до 12), -СН2-0-СН2-СН2-0-СН2-СН2-0-СН-ХН-, полипептидную цепь, содержащую от 1 до приблизительно 100 (предпочтительно от одной до приблизительно 12) аминокислот и т.п.
Нековалентные лекарственные конъюгаты.
Некоторые нековалентные связи (например, водородные связи, взаимодействия Ван-дер-Ваальса) могут давать стабильные, высоко специфические межмолекулярные связи. Например, молекулярные взаимодействия распознавания, достигнутые через множественные нековалентные связи между комплементарными связывающими партнерами, лежат в основе многих важных биологических взаимодействий, таких как связывание ферментов с их субстратами, распознавание антигенов антителами, связывание лигандов с их рецепторами и стабилизация трехмерной структуры белков и пептида. Соответственно, такие слабые нековалентные взаимодействия (например, водородные связи, взаимодействия Ван-дерВаальса, электростатические взаимодействия, гидрофобные взаимодействия и т.п.) могут быть использованы для связывания лекарства с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
Предпочтительно нековалентное связывание антигенсвязывающего фрагмента и лекарства является достаточно сильным для того, чтобы антигенсвязывающий фрагмент и лекарство оставались, по существу, связанными друг с другом в условиях ш у1уо (например, при введении человеку). Обычно нековалентное связывание антигенсвязывающего фрагмента и лекарства имеет силу по меньшей мере приблизительно 1010 М-1. В предпочтительных воплощениях сила нековалентной связи составляет по меньшей мере приблизительно 1011 М-1, по меньшей мере приблизительно 1012 М-1, по меньшей мере приблизительно 1013 М-1, по меньшей мере приблизительно 1014 М-1 или по меньшей мере приблизительно 1015 М1. Известно, что взаимодействия между биотином и авидином и между биотином и стрептавидином являются очень эффективными и стабильными во многих условиях, и, как раскрыто в данном описании, нековалентные связи между биотином и авидином или между биотином и стрептавидином могут быть использованы для получения нековалентного лекарственного конъюгата по изобретению.
Нековалентная связь может быть образована непосредственно между антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое имеет специфичность по отношению к сывороточному альбумину, и лекарством, или может быть образована между подходящими комплементарными связывающими партнерами (например, биотином и авидином или стрептавидином), где один партнер ковалентно связан с лекарством, а комплементарный связывающий партнер ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом. При использовании комплементарных связывающих партнеров, один из связывающих партнеров может быть ковалентно связан с лекарством непосредственно или через подходящую линкерную группировку, а комплементарный связывающий партнер может быть ковалентно связан с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин непосредственно или через подходящую линкерную группировку.
Комплементарные связывающие партнеры представляют собой пары молекул, которые селективно связываются друг с другом. Многие комплементарные связывающие партнеры известны в данной области, например антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) и распознаваемый им антиген или эпитоп, ферменты и их субстраты и рецепторы и их лиганды. Предпочтительными комплементарными связывающими партнерами являются биотин и авидин и биотин и стрептавидин.
- 30 012622
Прямое или непрямое ковалентное связывание члена комплементарной связывающей пары с антигенсвязывающим фрагментом, который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или лекарством может быть осуществлено, как описано выше, например путем взаимодействия комплементарного связывающего партнера, который содержит реактивную функциональную группу (или модифицирован таким образом, чтобы содержать реактивную функциональную группу), с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин, с применением линкера или без него. Конкретный выбранный способ будет зависеть от конъюгируемых соединений (например, лекарства, комплементарного связывающего партнера, антигенсвязывающего фрагмента антитела, которое связывает сывороточный альбумин). При желании, линкеры (например, гомобифункциональные линкеры, гетеробифункциональные линкеры), которые содержат концевые реактивные функциональные группы, могут быть использованы для связывания антигенсвязывающего фрагмента и/или лекарства с комплементарным связывающим партнером. В одном из воплощений может быть использован гетеробифункциональный линкер, который содержит две различные реактивные группировки.
Гетеробифункциональный линкер может быть выбран таким образом, что одна из реактивных группировок будет взаимодействовать с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или лекарством, а другая реактивная группировка будет взаимодействовать с комплементарным связывающим партнером. Может быть использован любой подходящий линкер (например, гетеробифункциональный линкер), и многие такие линкеры известны в данной области и доступны из коммерческих источников (например, Р1егсе Вю1ес11по1оду, 1пс., 1Ь).
Композиции и терапевтические и диагностические способы.
Предложены композиции, содержащие лекарственные композиции по изобретению (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), включая фармацевтические или физиологические композиции (например, для введения человеку и/или для ветеринарного введения). Фармацевтические или физиологические композиции содержат одну или более лекарственных композиций (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) и фармацевтически или физиологически приемлемый носитель. Обычно эти носители включают в себя водные или спиртоводные растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и/или забуференные среды. Парентеральные носители включают в себя раствор хлорида натрия, дектрозу Рингера, дектрозу и хлорид натрия, и лактат Рингера. Подходящие физиологически приемлемые адъюванты, если необходимо поддерживать полипептидный комплекс в суспензии, могут быть выбраны из загустителей, таких как карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, желатин и альгинаты. Внутривенные носители включают в себя жидкие и питательные наполнители и электролитные наполнители, такие как те, в основе которых лежит дектроза Рингера. Могут также присутствовать консерванты и другие добавки, такие как противомикробные агенты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы (Маск (1982) КеттдФп'к Рйагтасеийса1 Зс1епсе§, 16'1' ЕбШоп).
Композиции могут содержать желаемое количество лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида). Например, композиции могут содержать от приблизительно 5 до приблизительно 99% лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по массе. В конкретных воплощениях композиция может содержать от приблизительно 10 до приблизительно 99%, или от приблизительно 20 до приблизительно 99%, или от приблизительно 30 до приблизительно 99%, или от приблизительно 40 до приблизительно 99%, или от приблизительно 50 до приблизительно 99%, или от приблизительно 60 до приблизительно 99%, или от приблизительно 70 до приблизительно 99%, или от приблизительно 80 до приблизительно 99%, или от приблизительно 90 до приблизительно 99%, или от приблизительно 95 до приблизительно 99% лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) по массе. В одном примере композиция высушена сублимацией (лиофилизирована).
Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), раскрытые в данном описании, будут типично находить применение в предупреждении, подавлении или лечении воспалительных состояний (например, острых и/или хронических воспалительных заболеваний), таких как хроническое обструктивное заболевание легких (например, хронический бронхит, хронический обструктивный бронхит, эмфизема), аллергической гиперчувствительности, рака, бактериальной или вирусной инфекции, воспаления легких, такого как бактериальное воспаление легких (например, стафилококковое воспаление легких)), аутоиммунных расстройств (которые включают в себя, но не ограничиваются этим, диабет I типа, рассеянный склероз, артрит (например, остеоартрит, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, псориатический артрит, волчаночный артрит, спондилоартропатию (например, анкилозирующий спондилит)), системную красную волчанку, воспалительное заболевание кишечника (например, заболевание Крона, язвенный колит), синдром Бехчета и астенический бульбарный паралич), эндометриоза, псориазаа, спаек брюшной полости (например, после полостной операции), астмы и септического шока. Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибри
- 31 012622 ды), раскрытые в данном описании, могут быть использованы для предупреждения, подавления или лечения боли, такой как хроническая или острая травматическая боль, хроническая или острая невропатическая боль, острая или хроническая мышечно-скелетная, хроническая или острая раковая боль и т.п. Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), раскрытые в данном описании, могут быть введены также для диагностических целей.
Виды рака, которые можно предупреждать, супрессировать или лечить с использованием лекарственных композиций (например, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов, лекарственных гибридов), раскрытых в данном описании, включают в себя лимфомы (например, В-клеточную лимфому, острую миелоидную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому), миеломы (например, множественную миелому), рак легких (например, мелкоклеточную карциному легких, немелкоклеточную карциному легких), колоректальный рак, рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак печени, рак желудка, рак молочной железы, рак яичника, рак мочевого пузыря, лейкозы (например, острый миелобластный лейкоз, хронический миелобластный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз), аденокарциномы, рак почки, виды рака гематопоэтической системы (например, миелодиспластический синдром, миелопролиферативное расстройство (например, истинную полицитемию, эссенциальную (или первичную) тромбоцитемию, идиопатический миелофиброз) и т.п.
Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды), раскрытые в данном описании, также подходят для применения в предупреждении, подавлении или лечении эндометриоза, фиброза, бесплодия, преждевременных родов, эректильной дисфункции, остеопороза, диабета (например, диабета ΙΙ типа), расстройства роста, ВИЧинфекции, респираторного дистресс-синдрома, опухолей и энуреза.
В настоящем описании термин предупреждение включает в себя введение защитной композиции до индукции заболевания. Супрессия относится к введению композиции после индуцирующего события, но до клинической картины заболевания. Лечение включает в себя введение защитной композиции после появления симптомов заболевания.
Имеются животные модельные системы, которые могут быть использованы для скрининга эффективности лекарственных композиций (например, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов, лекарственных гибридов) в защите против заболевания или в лечении заболевания. В данной области известны способы тестирования системной красной волчанки (8ЬЕ) на чувствительных мышах (КшдЫ е! а1. (1978), 1. Ехр. Меб., 147:1653; йешегйеп е! а1. (1978), №\ν Епд 1. Меб., 299:515). Астенический бульбарный паралич (МС) тестируют на самках мышей МШ путем индуцирования заболевания растворимым белком Аскй из другого вида (Ьтбйгот е! а1. (1988), Абу. Iттиηο1., 42:233). Артрит индуцируют в чувствительной линии мышей путем инъекции коллагена ΙΙ типа (8!иаг! е! а1. (1984), Апп. Кеу. Iттиηο1., 42:233). Была описана модель, с помощью которой у чувствительных крыс индуцируют адъювантный артрит путем инъекции микобактериального белка теплового шока (Уап Ебеп е! а1. (1988), №щ.1ге. 331:171). Эффективность лечения остеоартрита может быть оценена в мышиной модели, в которой артрит индуцируют внутрисуставной инъекцией коллагеназы (В1от., А.В. е! а1., 081еоаг(Нг1118 Саййаде 12:627-635 (2004). Тиреоидит индуцируют у мышей путем введения тиреоглобулина, как описано (Магоп е! а1. (1980), 1. Ехр. Меб., 152:1115). Инсулинзависимый сахарный диабет (ГОЭМ) встречается в природе или может быть индуцирован в некоторых линиях мышей, таких как те, которые описаны в Капака^а е! а1. (1984), П1аЬе!о1од1а, 27:113. ЕАЕ у мышей и крыс служит в качестве модели для М8 у человека. В этой модели демиелинизирующее заболевание индуцируют путем введения миелинового основного белка (см. Ра!егаоп (1986), Тех!Ьоок ок ^типораШо^ду, Мщскег е! а1., ебк., Спте апб 8йайоп, №\ν Уогк, р. 179-213; МсРагйп е! а1. (1973), 8с1епсе, 179:478: и 8а!о11 е! а1. (1987), 1. Iттипо1., 138:179).
Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) по настоящему изобретению могут быть использованы как раздельно вводимые композиции или вместе с другими агентами. Они могут содержать различные иммунотерапевтические лекарства, такие как циклоспорин, метотрексат, адриамицин или цисплатин, иммунотоксины и т.п. Фармацевтические композиции могут содержать смеси различных цитотоксических или других агентов в сочетании с лекарственной композицией (например, лекарственным конъюгатом, нековалентным лекарственным конъюгатом, лекарственным гибридом) по настоящему изобретению или комбинации лекарственных композиций (например, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов, лекарственных гибридов) по настоящему изобретению, содержащие различные лекарства.
Лекарственные композиции (например, лекарственные конъюгаты, нековалентные лекарственные конъюгаты, лекарственные гибриды) могут быть введены любому индивидууму или субъекту в соответствии с любой подходящей методикой. Возможны различные пути введения, включая, например, пероральный, диетический, местный, чрескожный, ректальный, парентеральный (например, внутривенная, внутриартериальная, внутримышечная, подкожная, интрадермальная, внутрибрюшинная, интратекальная, внутрисуставная инъекция) и ингаляционный (например, внутрибронхиальная, интраназальная или
- 32 012622 пероральная ингаляция, интраназальные капли) пути введения, в зависимости от лекарственной композиции и заболевания или состояния, которое лечат. Как указано, введение может быть местным или системным. Предпочтительный способ введения может меняться в зависимости от выбранной лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) и состояния (например, заболевания), которое лечат. Дозировка и частота введения будут зависеть от возраста, пола и состояния пациента, одновременного введения других лекарств, противопоказаний и других параметров, принимаемых во внимание лечащим врачом. Вводят терапевтически эффективное количество лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида). Терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для достижения желаемого терапевтического эффекта при условиях введения.
Термин субъект или индивидуум определяют в данном описании для включения животных, таких как млекопитающие, включая, но не ограничиваясь этим, приматов (например, людей), коров, овец, коз, лошадей, собак, кошек, кроликов, морских свинок, крыс, мышей или других видов крупного рогатого скота, овец, лошадей, собак, кошек, грызунов или мышей.
Лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) может быть введена в виде нейтрального соединения или в виде соли. Соли соединений (например, лекарственных композиций, лекарственных конъюгатов, нековалентных лекарственных конъюгатов, лекарственных гибридов), содержащих аминную или другую щелочную группу, могут быть получены, например, путем взаимодействия с подходящей органической или неорганической кислотой, такой как соляная, бромисто-водородная, уксусная кислота, перхлорная кислота и т.п. Соединения с четвертичной аммониевой группой также содержат противоанион, такой как хлорид, бромид, йодид, ацетат, перхлорат и т. п. Соли соединений, содержащие карбоновую кислоту или другую кислотную функциональную группу, могут быть получены путем взаимодействия с подходящим основанием, например гидроксидным основанием. Соли кислотных функциональных групп содержат противокатион, такой как натрий, калий и т.п.
В изобретении также предложен набор для применения при введении лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) субъекту (например, пациенту), содержащий лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), устройство для доставки лекарства и, возможно, инструкции по применению. Лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) может быть предложена в виде препарата, такого как лиофилизированный препарат. В некоторых воплощениях устройство для доставки лекарства выбрано из группы, состоящей из шприца, ингалятора, устройства для интраназального или глазного введения (например, аэрозоля, пипетки для глаз или носа) и устройства для безыгольной инъекции.
Лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по этому изобретению может быть лиофилизирована для хранения и перерастворена в подходящем носителе перед применением. Могут быть использованы любой подходящий способ лиофилизации (например, распылительная сушка, сушка осадка (саке бгутд)) и/или методы растворения. Специалистам в данной области следует понимать, что лиофилизация и перерастворение могут приводить к различной степени потери активности антител (например, что касается стандартных иммуноглобулинов, то ^М антитела имеют тенденцию к большей потере активности, чем ^С антитела), и что для компенсации могут быть подобраны уровни применения. В конкретном воплощении согласно изобретению предложена композиция, содержащая лиофилизированную (высушенную сублимацией) лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), как раскрыто в данном описании. Предпочтительно лиофилизированная (высушенная сублимацией) лекарственная композиция (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) теряет не более чем приблизительно 20%, или не более чем приблизительно 25%, или не более чем приблизительно 30%, или не более чем приблизительно 35%, или не более чем приблизительно 40%, или не более чем приблизительно 45%, или не более чем приблизительно 50% своей активности (например, связывающей активности по отношению к сывороточному альбумину) при восстановлении водой. Активность представляет собой количество лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида), необходимое для получения эффекта лекарственной композиции, перед тем как она была лиофилизирована. Например, количество лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида, необходимое для достижения и поддержания желаемой концентрации в сыворотке в течение желаемого периода времени. Активность лекарственной композиции (например, лекарственного конъюгата, нековалентного лекарственного конъюгата, лекарственного гибрида) может быть определена с использованием любого подходящего способа до лиофилизации, и активность может быть определена с использованием того же способа после растворения водой для того, чтобы определить количество потерянной активности.
- 33 012622
Композиции, содержащие лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) или их смесь, могут быть введены для профилактического и/или терапевтического лечения. В некоторых терапевтических применениях количество, достаточное для достижения желаемого терапевтического или профилактического эффекта при условиях введения, такого как, по меньшей мере, частичное ингибирование, супрессия, модуляция, киллинг или какой-либо другой измеряемый параметр для популяции выбранных клеток, определен как терапевтически эффективное количество или доза. Количества, необходимые для достижения этой дозировки, будут зависеть от тяжести заболевания и общего состояния собственной иммунной системы пациента и общего состояния здоровья, но обычно варьируют от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 80 мг/кг, или от приблизительно 0,005 до 5,0 мг лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида на килограмм массы тела, причем более стандартные используемые дозы составляют от 0,05 до 2,0 мг/кг/доза. Например, лекарственную композицию (например, лекарственный гибрид, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат) по изобретению можно вводить ежесуточно (например, вплоть до четырех введений в сутки), каждые двое суток, каждые трое суток, два раза в неде приблизительно приблизительно приблизительно мкг/кг до мг/кг, мг/кг, мг/кг, мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, от от от от приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно лю, один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз месяц или один раз каждые два месяца в дозе, например, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 80 мг/кг, от приблизительно 100 мкг/кг до приблизительно 80 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 80 до приблизительно 70 мг/кг, от приблизительно 1 до до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 1 до до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 1 до до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг или приблизительно 10 мг/кг.
Для профилактических применений могут быть введены также композиции, содержащие лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид), или их смеси в похожих или несколько меньших дозировках. Композиция, содержащая лекарственную композицию (например, лекарственный конъюгат, нековалентный лекарственный конъюгат, лекарственный гибрид) по настоящему изобретению, может быть использована в профилактических и терапевтических установках для облегчения изменения, инактивации, киллинга или удаления выбранной клеточной популяции-мишени у млекопитающего.
Примеры
Антагонист рецептора интерлейкина-1 (1Ь-1га) представляет собой антагонист, который блокирует биологическую активность 1Ь-1 путем конкурентного ингибирования связывания 1Ь-1 с рецептором интерлейкина-1 типа 1 (1Ь-1Я1). Продукция 1Ь-1 индуцируется в ответ на воспалительные стимулы и опосредует различные физиологические ответы, включая воспалительный и иммунологический ответы. 1Ь-1 имеет диапазон активностей, включая деградацию хряща и стимуляцию резорбции кости. У пациентов с ревматоидным артритом количество локально продуцирующегося 1Ь-1 повышается, а уровни природного 1Ь-1га являются недостаточными для конкуренции с этими аномально повышенными количествами. Существует несколько способов лечения, доступных для ЯА, включая антиревматические лекарства, модифицирующие заболевание (ОМАЯОЗ), такие как метотрексат, и биологические препараты, такие как ΚΙΝΕΗΕΤ® (анакинра, Атдеη 1пс.).
ΚΙΝΕΕ.ΕΤ® (анакинра, Атдеη 1пс.) представляет собой рекомбинантную, негликозилированную форму антагониста человеческого рецептора интерлейкина-1, который состоит из 153 аминокислот и имеет молекулярную массу 17,3 кДа (аминокислотная последовательность ΚΙΝΕΚΕΤ® (анакинра, Атдеη 1пс) соответствует 152 аминокислотам в природном 1Ь-1га и дополнительному Ν-концевому метионину). ΚΙΝΕΕ.ΕΤ® (анакинра, Атдеη 1пс.) показан для уменьшения признаков и симптомов умеренноготяжелого ревматоидного артрита у пациентов в возрасте от 18 лет или старше, для которых лечение одним или более ОМАЯО оказалось неудачным. Дозировка представляет собой однократное ежесуточное введение путем подкожной инъекции 100 мг лекарства. Ψβι/2 составляет 4-6 ч, и 71% пациентов дают реакцию в месте инъекции через 14-28 суток.
Авторы изобретения демонстрируют, что сшивание терапевтического полипептида с сывороточным альбумином, связывающего бАЬ, дает соединение, которое (1) имеет активность, аналогичную активности одного лишь терапевтического полипептида, и (2) также связывает сывороточный альбумин. Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ создания варианта терапевтического полипептида с продолжительным периодом полувыведения из сыворотки. Например, авторы изобретения сшили бАЬ, связывающее сывороточный альбумин, с 1Ь-1га, что дает соединение с более продолжительным периодом полувыведения из сыворотки, чем в случае только 1Ь-1га.
- 34 012622
Пример 1. Селекция доменных антител, которые связывают сывороточный альбумин мыши, крысы и человека.
Этот пример поясняет способ создания единичного доменного антитела (,АЬ), направленного против сывороточного альбумина. Описана селекция ,АЬ против сывороточного альбумина мыши (М8А), сывороточного альбумина человека (Н8А) и сывороточного альбумина крысы (В8А).
,АЬ против сывороточного альбумина мыши были выбраны, как описано в XV0 2004/003019 А2. Использовали три человеческие фаговые дисплейные библиотеки антител. Каждая библиотека основана на одном человеческом каркасном участке νΗ (ν3-23/ΌΡ47 и 1Н4Ь) или νκ (ο12/ο2/ΏΡΚ9 и Ικ1) с разнообразием боковых цепей, кодируемым НМ< кодонами, включенными в области, определяющие комплементарность (СЭВ1, СИВ2 и СИВ3).
Библиотека 1 (νΗ).
Разнообразие в положениях: Н30, Н31, Н33, Н35, Н50, Н52, Н52а, Н53, Н55, Н56, Н58, Н95, Н97, Н98.
Размер библиотеки: 6,2х109.
Библиотека 2 (νΗ).
Разнообразие в положениях: Н30, Н31, Н33, Н35, Н50, Н52, Н52а, Н53, Н55, Н56, Н58, Н95, Н97, Н98, Н99, Н100, Н100А, Н100В.
Размер библиотеки: 4,3 х109.
Библиотека 3 (νκ).
Разнообразие в положениях: Ь30, Ь31, Ь32, Ь34, Ь50, Ь53, Ь91, Ь92, Ь93, Ь94, Ь96.
Размер библиотеки: 2х109.
Библиотеки νΗ и νκ были подвегнуты предварительной селекции на связывание с общими лигандами белком А и белком Ь соответственно, так чтобы большинство клонов в выбранных библиотеках было функциональным. Размеры библиотек, приведенных выше, соответствуют размерам после предварительной селекции.
Два раунда селекции осуществляли на сывороточном альбумине, используя каждую из библиотек отдельно. Для каждой селекции антиген наносили на иммунопробирку (пипс) в 4 мл РВ8 в концентрации 100 мкг/мл. В первом раунде селекции каждую из трех библиотек подвергали сортировке отдельно против Η8Λ (81дта) или М8А (81дта). Во втором раунде селекции фаг из каждых шести первых раундов селекции подвергали сортировке против (1) одного и того же антигена снова (например, 1-й раунд М8А, 2-й раунд М8А) и (2) против реципрокного антигена (например, 1-й раунд М8А, 2-й раунд Η8Λ), дающего в итоге двенадцать 2-х раундов селекции. В каждом случае после второго раунда селекции 48 клонов тестировали на связывание с Η8Λ и М8А. Растворимые фрагменты ,АЬ получали, как описано для ксЕуфрагментов в ΗηΓπκοη ек а1., Мекйοάк Еηζутο1. 1996; 267: 83-109, и затем осуществляли стандартный протокол ЕЫ8А (ΗοοдеηЬοοт ек а1. (1991), ШсЫс Ас1,к Век., 19:4133), за исключением того, что в качестве блокирующего буфера использовали 2% Ъгеен в РВ8, и связанные ,АЬ определяли либо с белком Ь-ΗΒΡ (81дта) (для νκ), либо с белком А-ΗΒΡ (АтегкБат РБагтас1а ВюкесБ) (для νΗ).
,АЬ, которые давали сигнал выше фонового, указывающий на связывание с М8А, Η8Λ или и с тем, и с другим, тестировали в нерастворимой форме в ЕБ18А на связывание только с пластиком, но все оказались специфичными к сывороточному альбумину. Клоны затем секвенировали (см. табл. 1), обнаружив, что была идентифицирована 21 уникальная последовательность ,АЬ. Минимальное сходство (в аминокислотном уровне) между выбранными νκ ,АЬ клонами составляло 86,25% ((69/80)х100; результат, когда все диверсифицированные остатки являются различными, например клоны 24 и 34). Минимальное сходство между выбранными νΗ ,АЬ клонами составляло 94 % ((127/136)х100).
Затем тестировали связывание ,АЬ с сывороточным альбумином на их способность захватывать биотинилированный антиген из раствора. Следовали протоколу ЕЫ8А (как выше), за исключением того, что на планшет для ЕЫ8А наносили 1 мкг/мл белка Ь (для νκ клонов) и 1 мкг/мл белка А (для νΗ клонов). Растворимое ,АЬ вылавливали из раствора, как описано в протоколе, и определение осуществляли с помощью биотинилированного М8А или Η8Λ и стрептавидин-ΗΒΡ. Биотинилированные М8А и Η8Λ были получены согласно инструкциям производителя с целью достижения в среднем 2 молекул биотина на молекулу сывороточного альбумина. Идентифицировали 24 клона, которые вылавливали биотинилированный М8А из раствора в ЕБ18А. Два из них (клоны 2 и 38, ниже) также вылавливали биотинилированный Η8Λ. Затем ,АЬ тестировали на их способность связывать М8А, нанесенный на СМ5 Ма^ге чип. Обнаружили восемь клонов, которые связывали М8А на Шатоте.
,АЬ против сывороточного альбумина человека и сывороточного альбумина крысы выбирали, как описано ранее для анти-М8А ,АЬ, за исключением следующих модификаций в протоколе: фаговая библиотека синтетических νΗ доменов представляла собой библиотеку 40, которая основана на человеческом νΗ3, содержащем ген ΌΡ47 зародышевой линии и сегмент ΙΗ4. В СИВ1 посредством мутагенеза вносили разнообразие (с использованием НМ< кодонов; нумерация по Кабату) в следующих специфических положениях: 30, 31, 33, 35; в СИВ2: 50, 52, 52а, 53, 55, 56 и в СИВ3: 4-12 диверсифицированных остатков: например Н95, Н96, Н97 и Н98 в 40 Η11 и Н95, Н96, Н97, Н98, Н99, Н100, Н100а, Ш00Ь,
- 35 012622
Н100с, н100б, н100е и н100Г в 4О н19. Последние три остатка в СЭВ3 представляют собой РЭУ, поэтому длины СОВ3 отличаются на 7-15 остатков. Библиотека содержит более 1х1010 индивидуальных клонов.
Подгруппа Ун и Ук библиотек была предварительно селектирована на связывание с общими лигандами белком А и белком Ь соответственно таким образом, что большинство клонов в неселектированных библиотеках было функциональным. Размеры библиотек, приведенные выше, соответствуют размерам после предварительной селекции.
Два раунда селекции осуществляли на сывороточном альбумине крысы и человека, используя подгруппы Ун и Ук библиотек отдельно. Для каждой селекции антиген либо (1) наносили на иммунопробирку (пипс) в 4 мл ΡΒ8 в концентрации 100 мкг/мл, либо (2) подвергали биотинилированию и затем использовали для растворимой селекции с последующим захватом на гранулах, покрытых стрептавидином (в 1-м раунде), и гранулах, покрытых нейтравидином (во 2-м раунде) (см. табл. 1 для деталей стратегии селекции, используемой для выделения каждого клона). В каждом случае после второго раунда селекции тестировали 24 фаговых клона на связывание с н§А или В8А.
Если значительная часть клонов в одной из селекций была положительной в фаговой ЕБ18А, то ДНК из этой селекции клонировали в экспрессирующий вектор для получения растворимого бАЬ и отбирали индивидуальные колонии. Растворимые фрагменты бАЬ получали, как описано для ксЕуфрагментов у ΜηΓΓίκοη с соавт. (Мебюбк Еηζутο1. 1996; 267:83-109), и осуществляли стандартный протокол ЕЫ8А (ΗοοдеηЬοοт е! а1. (1991), ШсШс Ас1бк Век., 19:4133), за исключением того, что в качестве блокирующего буфера использовали 2% Т\уссп в ΡΒ8, и связанные бАЬ определяли с помощью антитус-ΗВΡ. Клоны, которые были положительными в ЕБ18А, затем подвергали скринингу на связывание с М8А, В8А или нА8, используя прибор В1АСОВЕ для измерения поверхностного плазменного резонанса (ΒΪ8εοΐ€ АВ). Далее анализировали бАЬ, которые связывались с М8А, В8А или н§А. Клоны затем секвенировали и идентифицировали уникальные последовательности бАЬ.
Таблица 1 Протоколы селекции бАЬ, которые связывают сывороточный альбумин
бАЪ Библиотека К.1 селекция К2 селекция В1асоге связывание
ϋΟΜ7Γ-1 4(3 Ук 10 мкг/мл, пробирка К.8А 10 мкг/мл, пробирка К8А К8А
ООМ7Г-3 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка К8А 10 мкг/мл, пробирка К.8А К.8А
ООМ7Г-4 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка Я8А 10 мкг/мл, пробирка В.8А К8А, М8А
0ОМ7Г-5 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка К.8А 10 мкг/мл, пробирка К.8А В.8А
ЦОМ7г-7 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка К.ЗА 10 мкг/мл, пробирка К8А К.8А, М8А
ООМ7г-8 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка К8А 10 мкг/мл, пробирка В.8А К8А, М8А
ЭОМ7Ь-1 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка Н8А 10 мкг/мл, пробирка Н8А Н8А
ЭОМ711-2 40 Ук Растворимый 100 нМ Н8А Растворимый 50 нМ Н8А Н8А
ΏΟΜ711-3 40 Ук 10 мкг/мл, пробирка Н8А 10 мкг/мл, пробирка Н8А
- 36 012622
ООМ711-4 4(3 Ук 10 мкг/мл, пробирка Н8А 10 мкг/мл, пробирка Н8А
ΏΟΜ711-6 40 Ук
ООМ7П-7 40 Ук
ПОМ711-8 40 Ук Растворимый 200 нМ НА8 Растворимый 50 нМ К8А Н8А, Р8А, М8А
ООМ7г-13 40 Ук Растворимый 200 нМ НА5 Растворимый 50 нМ К8А К8А, М8А
0019171-14 40 Ук Растворимый 200 нМ НА8 Растворимый 50 нМ К8А К8А, М8А
ΏΟΜ711-21 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл Н8А, пробирка Н8А
ООМ7Н-22 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл Н8А, пробирка Н8А
ООМ711-23 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл НЗА, пробирка Н8А
ΟΟΜ7Ι1-24 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл Н8А, пробирка Н8А
ЭОМ711-25 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/млН8А, пробирка Н8А
ООМ75-26 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл Н8А, пробирка Н8А
ΟΟΜ7Ι1-27 40 УН 100 мкг/мл Н8А, пробирка 100 мкг/мл Ι-Ι8Α, пробирка Н8А
бАЬ, которые связывали сывороточный альбумин на В1АСОКЕ чипе (Шп^ге АВ), затем дополнительно анализировали для получения информации об аффинности. Анализ осуществляли с использованием СМ5 чипа (карбоксиметилированный декстрановый матрикс), на который наносили сывороточный альбумин. Проточная кювета 1 представляла собой непокрытый, блокированный отрицательный контроль, проточная кювета 2 была покрыта Н8А, проточная кювета 3 была покрыта К8А и проточная кювета 4 была покрыта М8А. Сывороточные альбумины подвергали иммобилизации в ацетатном буфере с рН 5,5, используя программу нанесения покрытия в В1АСОКЕ, которая запрограммирована на 500 резонансных единиц (КИ) материала покрытия. Каждое интересующее бАЬ экспрессировали в периплазме Е.той в объеме 200-500 мл и очищали из супернатанта, используя периодическую абсорбцию на 81теат1те аффинной смоле с белком А (Атегкйат, ИК) для Ун, и агарозную аффинную смолу с белком Ь (АГП(есН, Νοπνην) для Ук, с последующей элюцией глицином при рН 2,2 и заменой буфера на РВ8. Диапазон концентраций бАЬ получали (в диапазоне от 5 нМ до 5 мкМ) путем разведения в В1АСОКЕ нВ8-ЕР-буфере и пропускания через В1АСОКЕ чип.
Аффинность (КО) расчитывали из В1АСОКЕ траекторий путем корректировки кривых скорости ассоциации и скорости диссоциации траекториям, полученным для концентраций бАЬ на участке КО. Были идентифицированы бАЬ с диапазоном различных аффинностей к сывороточному альбумину. В диапазон 10-100 нМ были включены аффинности ЭОМ711-8 для н8А, ЭОМ711-2 для н8А и ООМ7г-1 для К.8А. В диапазон от 100 до 500 нМ были включены аффинности ЭОМ711-7 для н8А, ЭОМ711-8 для К8А и ЭОМ711-26 для н8А. В диапазон от 500 нМ до 5 мкМ были включены аффинности ЭОМ711-23 для н8А и ЭОМ711-1 для н8А. Примерные траектории включены на фиг. 6А-6В.
Пример 2. Форматирование антител против сывороточного альбумина в виде гибрида с антагонистом рецептора 1Ь-1 (1Ь-1га).
В этом примере описан способ создания гибридного белка, содержащего 1Ь-1га и бАЬ, которое связывается с сывороточным альбумином. Были созданы два гибрида: один с Ν-концевым бАЬ относительно 1Ь-1га (М8А161Ь1-га), и один с С-концевым бАЬ относительно 1Ь-1га (1Ь-1гаМ8А16). Последовательности данных гибридов и вектор приведены на фиг. 2В и 2Г. Также был получен контрольный гибрид, который не связывал М8А, и его последовательность приведена на фиг. 2Д.
ИМЕКЕТ (анакинра, Атдеη 1пс) имеет короткий период полувыведения 4-6 ч, и рекомендуемый режим введения доз указан для ежедневных инъекций. Этот режим дал в результате реакцию в месте инъекции через 14-28 суток в 71% случаев. Поэтому форма человеческого 1Ь-1га, которая имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки, была бы полезней и могла бы увеличить эффек
- 37 012622 тивность и уменьшить частоту введения доз. И то, и другое представляют желательные свойства для фармацевтического препарата.
Клонирование.
Кратко, конструировали два сайта поликлонирования (МС8), как подробно описано ниже, и вставляли в экспрессирующий вектор с промотором Т7. Конструировали рестрикционные сайты для вставки 1Ь1-га, йАЬ, 6А8 лидера и линкера. Один (МС8 1+3) кодирует белок с N-концевым йАЬ относительно 1Ь1га, а другой (МС8 2 + 4) кодируют белок с С-концевым йАЬ относительно 1Ь-1га.
Клонирующий сайт 1+3 для гибрида йАЫЫ-га №1е1, “лишний” (аЩйег) фрагмент, 8а11, ΝοίΙ, “лишний” фрагмент, ХЬо1, ВашН1 дс§са1а1§йа£1§с^с£ас§1саааа§дсса1а§с£§§сд§ссдс(дса8§1с(сдадгдс8а{8§а1сс (8ΕΟΙΌΝΟ:35)
Клонирующий сайт 2+4 для гибрида ГГ,1-га<1АЬ
ΝάεΙ, “лишний” фрагмент, 8йЛ, 8ас1, “лишний” фрагмент, 8а11, ΝοίΙ, ТАА ТАА
ВаптН!
§с£са1а1£йаа§с£а§£ссис1д2а£а£а£с1са£§а§1§1с§асд§аса1сса§а1§ассса£§сддсс§с1аа
1аадда1ссаа1£с (8Ер Ю ΝΟ: 36)
СА8 лидер затем вставляли в каждый вектор путем переваривания МС8 с использованием соответствующих рестрикционных ферментов и лигирования гибридизованных праймеров, кодирующих лидер. Затем аналогичным образом вставляли линкерную ДНК, кодирующую линкер. ДНК, кодирующую 1Ь1га, получали с помощью ПНР (используя праймеры, сконструированные для добавления необходимых рестрикционных сайтов) из клона кДНК и вставляли в клонирующий вектор ТОРО. После подтверждения правильной последовательности с помощью секвенирования нуклеиновой кислотой, ДНК, кодирующую 1Ь-1га, вырезали из вектора ТОРО и лигировали в векторы, содержащие лидер и линкер. И, наконец, ДНК, кодирующую йАЬ, вырезали из вектора, экспрессирующего йАЬ, и вставляли в векторы путем переваривания вставки (очищенной посредством очистки в геле) и вектора с помощью 8а1I/NоίI.
Экспрессия и очистка.
М8А161Ь-1га, 1Ь-1гаМ8А16 и Питту1Ь-1га экспрессировали в периплазме Е.со11 и очищали из супернатанта, используя периодическую абсорбцию на агарозной аффинной смоле с белком Ь (Айй!есб, Иог\уау) с последующей элюцией глицином при рН 2,2. Очищенные йАЬ затем анализировали с помощью гель-электрофореза в ПААГ с ДСН с последующим окрашиванием Кумасси. Для одного из белков (1Ь-1гаМ8А16) более 90% белка имели ожидаемый размер и поэтому анализировались на активность без дополнительной очистки. Другие белки (М8А161Ь1-га и Питту1Ь-1га) содержали загрязнение меньшей полосой и поэтому дополнительно очищались с помощью ионообменной хроматографии ЕРЬС на ионообменной колонке ВЕ80ИВ8ЕР при рН 9. Белок элюировали, используя линейный градиент соли от 0 до 500 мМ №С1. После анализа с помощью гель-электрофореза в ПААГ с ДСН, фракции, содержащие белок ожидаемого размера, объединяли, получая выход объединенной фракции более 90% чистоты. Этот белок использовали для дополнительного анализа.
Пример 3. Определение активности гибрида йАЬ1Ь-1га в анализе 1Ь-8 с помощью МВС-5 т уйго.
Гибрид М8А161Ь-1га тестировали на способность нейтрализовать индукцию секреции 1Ь-8 с помощью 1Ь-1 в клетках МВС-5 (регистрационный № в АТСС ССЬ-171; Американская Коллекция Типовых Культур (АТСС), Мапаккак, УА). Способ адаптирован из Акекоп, Ь. е! а1. (1996), 1оита1 ой Вю1одка1 Сбеткйу 271, 30517-30523, который описывает индукцию 1Ь-8 с помощью 1Ь-1 в клетках НИУЕС; МВС-5 использовали вместо клеточной линии НИУЕС. Кратко, клетки МВС-5, посеянные в микротитрационные планшеты, инкубировали в течение ночи с гибридными белками йАЬ1Ь-1га или контрольным 1Ь-1га и 1Ь-1 (100 пг/мл). После инкубации супернатант удаляли из клеток и концентрацию 1Ь-8 измеряли с помощью сэндвич''-ЕЫ8А (В&И 8ук!етк).
Активность 1Ь-1га в гибридных белках приводила к уменьшению секреции 1Ь-8. Уменьшение секреции 1Ь-8, являющееся результатом активности гибрида М8А161Ь-1га и активности гибрида 1Ь-1гаМ8А16, сравнивали с уменьшением, наблюдаемым с контрольным 1Ь-1га (рекомбинантный 1Ь-1га человека, В&И 8ук!етк). Определяли нейтрализующую дозу 50 (ИО50) для каждого из протестированных белков и суммировали в табл. 2.
Таблица 2
Белок Νϋ50
1Ь-1га 0,5 нМ
М8А161Ъ-1га 2 нМ
1ЫгаМ8А1б 8 нМ
- 38 012622
Результаты демонстрируют, что 1Ь-1га оставался активным в виде части гибридной конструкции с бАЬ против сывороточного альбумина. Белок МЗА161Ь-1га дополнительно исследовали для оценки его фармакокинетических параметров (исследование РК).
Сэндвич''-ЕЫЗА сывороточного альбумина, анти-1Ь-1га.
Три гибрида бАЬ/1Ь-1га тестировали на способность связывать сывороточный альбумин и одновременно обнаруживаться моноклональным антителом против 1Ь-1га. Протестированные гибриды представляли собой МЗА161Ь-1га, 1Ь-1гаМЗА16 и Питту1Ь-1га. Кратко, на планшет для ЕЬ1ЗА наносили в течение ночи сывороточный альбумин мыши в концентрации 10 мкг/мл, промывали 5x0,05% Туееп в РВЗ и затем блокировали в течение 1 ч с помощью 4% Магуе1 в РВЗ. После блокирования планшет промывали 5x0,05% Туееп в РВЗ и затем инкубировали в течение 1 ч с каждым гибридом бАЬ, 1Ь-1га, разбавленным в 4% МРВЗ. Каждый гибрид инкубировали в концентрации 1 мкМ и в 7 последовательных 4-кратных разведениях (т.е. вплоть до 60 пМ). После инкубации планшеты промывали 5x0,05% Туееп в РВЗ и затем инкубировали в течение 1 ч с рекомендуемым производителем разведением кроличьего поликлонального антитела (аЬ-2573) к антагонисту рецептора 1Ь-1 человека (АЬеат, ИК), разбавленному в 4% МРВЗ. После этой инкубации планшеты промывали 5x0,05% Туееп в РВЗ и затем инкубировали в течение 1 ч с 1/2000 разведением вторичного антитела (антикроличьего 1дО-НКР), разбавленного в 4% МРВЗ. После инкубации с вторичным антителом планшеты промывали 3x0,05% Туееп в РВЗ и 2хРВЗ и затем проявляли с помощью 50 мкл на лунку пероксидазного субстрата ТМВ для микролунок (КРЬ, МА) и реакцию останавливали с помощью 50 мкл на лунку НОЬ. Абсорбцию считывали при 450 нМ.
Как МЗА161Ь-1га, так и 1Ь-1гаМЗА16 белки обнаруживали при более чем 2x фоновом уровне в концентрации 1 мкМ в сэндвич''-ЕЫЗА. Белок МЗА161Ь-1га обнаруживали при 2x фоновом уровне или выше в разведениях вплоть до 3,9 нМ, тогда как белок 1Ь-1гаМЗА16 обнаруживали при 2x фоновом уровне только вплоть до 500 нМ. Как показано, связывание гибрида МЗА161Ь-1га с сывороточным альбумином является специфическим по отношению к сывороточному альбумину, тогда как контрольная конструкция (ЭитиМИга) не связывала сывороточный альбумин.
Пример 4. Определение периода полувыведения из сыворотки лекарственных гибридов в исследованиях РК у мышей.
А. Определение периода полувыведения из сыворотки мышей гибридного белка МЗА-связывающее бАЬ/эпитопная метка НА.
Гибридный белок МЗА-связывающее бАЬ/эпитопная метка НА экспрессировали в периплазме Е.сой и очищали, используя периодическую абсорбцию на агарозной аффинной смоле с белком Ь (Айй1есй, №г\гау) с последующей элюцией глицином при рН 2,2. Период полувыведения данного гибридного белка из сыворотки определяли у мыши после однократной внутривенной (в/в) инъекции приблизительно 1,5 мг/кг самцам животных линии СЭ1. Анализ сывороточных уровней осуществляли с помощью ЕЫЗА с использованием козьих анти-НА (АЬеат, ИК) для захвата и обнаружения белка Ь-НКР (1пуйгодеп, США), который блокировали с помощью 4% Магуей Промывку осуществляли с помощью 0,05% Туееп-20 в РВЗ. Строили стандартные кривые известных концентраций гибрида МЗАсвязывающее бАЬ/НА в присутствии Н мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тестобразцами. Моделирование с 1-компонентной моделью (АтЫопйп Зойуаге, Рйагыдй! Согр., США) показало, что гибридный белок МЗА-связывающее бЛЬ/эпитопная метка НА имеет конечную фазу 11/2 29,1 ч и площадь под кривой 559 ч-мкг/мл. Это демонстрирует существенное улучшение относительно предсказанного периода полувыведения для одного пептида, представляющего собой эпитопную метку НА, который мог бы быть всего несколько минут.
Результаты этого исследования с использованием эпитопной метки НА в качестве лекарственной модели демонстрируют, что период полувыведения лекарства из сыворотки ίη у1уо может быть увеличен при получении лекарства в виде лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата с антигенсвязывающим фрагментом (например, бАЬ) антитела, которое связывает сывороточный альбумин.
Также оценивали период полувыведения ίη у1уо у мышей анти-МЗА бАЬ Э0М7т-16 и Э0М7т-26, и контрольного бАЬ, которое не связывает МЗА. Снова Э0М7т-16, Э0М7т-26 и контрольное бАЬ содержали эпитопную метку НА, которая служит в качестве модели лекарства (например, белкового, полипептидного или пептидного лекарства). В этом исследовании контрольное бАЬ, которое не связывает МЗА, имело период полувыведения ίη угуо 20 мин, тогда как периоды полувыведения ίη угуо для Э0М71П-16 и Э0М71П-26 были значительно длиннее (фиг. 12). В дополнительных исследованиях обнаружили, что Э0М71П-16 имеет период полувыведения ίη у1уо у мышей 29,5 ч.
В другом исследовании период полувыведения ίη угуо (11/2β) Э0М7Й-8, который содержал эпитопную метку НА, оценивали у мышей. Моделирование с 2-компонентной моделью (А1пКоийп Зойуаге, Рйагыдй! Согр., США) показало, что Э0М7Й-8 имел ΐ1/2β 29,1 ч.
Результаты каждого из этих исследований с использованием эпитопной метки НА в качестве модели лекарства (например, белкового, полипептидного или пептидного лекарства) демонстрируют, что период полувыведения лекарства из сыворотки ίη угуо может быть существенно увеличен, когда лекарство получено в виде лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата с антигенсвязывающим фраг
- 39 012622 ментом (например, бАЬ) антитела, которое связывает сывороточный альбумин.
Б. Определение периода полувыведения гибридного белка Μ8Α-связывающее бАЬЛБ-1 га из сыворотки мышей.
Гибридный белок Μ8Α-связывающее бАЬЛЬ-1га (Μ8Α16I^-1^а) экспрессировали в периплазме Ε.^ΐί и очищали, используя периодическую абсорбцию на агарозной аффинной смоле с белком Ь (АПйесЕ, Боггзу) с последующей элюцией глицином при рН 2,2. Период полувыведения из сыворотки Μ8Α16I^-1^а (^0Μ7ш-16/I^-1^а), гибрида ΙΚ-1γη с бАЬ, которое не связывает Μ8Α (Оппину бАЬЛЬ-1га) и анти-Μ8Α бАЬ, слитого с эпитопной меткой НА (^0Μ7ш-16 НА 1ад), определяли у мышей после однократной в/в инъекции в концентрации приблизительно 1,5 мг/кг у самцов животных линии СО1.
Анализ сывороточных уровней осуществляли с помощью сэндвич^Е^А Ю-1 га (Κ&Ό 8ук1еш8, США). Стандартные кривые известных концентраций гибрида бАЬЛЬ-1га строили в присутствии 1х мышиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тест-образцами. Моделирование осуществляли, используя пакет программ для анализа фармакокинетических параметров №т№пНп (РЕагадЫ Согр., США).
Ожидали, что гибрид ББ-1га с анти-Μ8Α бАЬ будет значительно увеличивать период полувыведения из сыворотки по сравнению с контролем, который представлял собой гибрид бАЬ, не связывающее Μ8Α/I^-1^а. Предсказали, что контрольный гибрид бАЬ, не связывающее Μ8Α/I^-1^а будет иметь короткий период полувыведения из сыворотки.
Результаты данного исследования представлены в табл. 3 и показывают, что гибрид ББ-1га с антиΜ8Α бАЬ (^0Μ7ш-16/I^-1^а) имел период полувыведения из сыворотки, который был приблизительно в 10 раз дольше, чем для гибрида Ю-1га с бАЬ, которое не связывают Μ8Α (Оии-ину бАЬЛЬ-1га). Результаты также обнаружили, что наблюдалось более чем 200-кратное улучшение (увеличение) в зависимости концентрации от времени в площади под кривой для ^0Μ7ш-16/I^-1^а (АИС: 267 ч-мкг/мл) по сравнению с ^итту/I^-1^а (АИС: 1,5 ч-мкг/мл)
Таблица 3
Агент Период полувыведения из сыворотки
ГЮМ7т-16ЛЫга 4,3 часа
ЕипипуЛБ-1 га 0,4 часа
ООМ7т-16 НА (ад 29 часов
Результаты этих исследований демонстрируют, что период полувыведения из сыворотки ш у1уо и АИС лекарства могут быть значительно увеличены, когда лекарство получаено в виде лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата с антигенсвязывающим фрагментом (например, бАЬ) антитела, которое связывает сывороточный альбумин.
Пример 5. Определение периода полувыведения гибридных белков К8А-связывающее бАЬ/эпитопная метка НА из сыворотки у крыс.
бАЬ против сывороточного альбумина крысы экспрессировали с С-концевыми метками НА в периплазме Ε.^ΐί и очищали, используя периодическую абсорбцию на агарозной аффинной смоле с белком Ь (АПЦесй Хопгау) для νκ бАЬ и периодическую абсорбцию на аффинной смоле с белком А для УН бАЬ, с последующей элюцией глицином при рН 2,2. Для того чтобы определить период полувыведения из сыворотки, группам из 4 крыс давали однократную в/в инъекцию в концентрации 1,5 мг/кг Ό0Μ7Γ-27, ΌΘΜ7γ-31, ΌΘΜ7γ-16, ΌΘΜ7γ-3, Ό0Μ7Ε-8 или контрольного бАЬ (НΕ^4), которое связывает неродственный антиген. Образцы сыворотки получали с помощью последовательного забора крови из хвостовой вены в течение 7-дневного периода времени и анализировали с помощью сэндвич^Е^А, используя анти-НА козы (АЬеаш, СашЬпбде ИК), нанесенные на планшет для Ε^I8Α, с последующим обнаружением с помощью белка А-НКР (для νΗ бАЬ) или белка Б-НКР (для νκ бАЬ). Стандартные кривые известных концентраций бАЬ строили в присутствии 1 х крысиной сыворотки для обеспечения сравнимости с тестобразцами. Моделирование с 2-компонентной моделью (с использованием пакета программ для анализа фармакокинетических параметров V^пNоп1^п (РЕагадЫ Согр., США)) использовали для вычисления ΐ1/2β и площади под кривой (АИС) (табл. 4). ΐ1/2β для ΗΕ^4 контроля у крыс составляет вплоть до 30 мин, и, основываясь на полученных данных, ожидают, что АИС для Ό0Μ7Ε-8 будет составлять от приблизительно 150 до приблизительно 2500 ч-мкг/мл.
- 40 012622
Таблица 4
Агент Структурный каркас Аффинность (КО) для сывороточного альбумина крысы ΐ1/2β дис (ч.мкг/мл)
ЕЮМ7г-3 V* 12 нМ 13,7 часа 224
ΌΟΜ7Γ-16 Ук 1 мкМ 34,4 часа 170
ЕЮМ7г-27 Ун 250 нМ 14,8 часа 78,9
ЦОМ7г-31 Ун 5 мкМ 5,96 часа 71,2
Результаты этого исследования на крысах с использованием эпитопной метки НА в качестве модели лекарства (например, белкового, полипептидного или пептидного лекарства) демонстрируют, что период полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο может быть значительно увеличен, когда лекарство получено в виде лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата с антигенсвязывающим фрагментом (например, бАЬ) антитела, которое связывает сывороточный альбумин.
Предсказание периода полувыведения у людей.
Период полувыведения ίη νίνο бАЬ, лекарственного гибрида или лекарственного конъюгата у людей можно вычислить на основании данных о периодах полувыведения, полученных на животных с использованием аллометрического масштабирования, ^д периодов полувыведения ίη νίνο, определенный у 3 животных, наносят на график против ^д массы животного. Линию наносят по точкам на графике, а наклон и отрезок, отсекаемый на оси у данной линией, используют для вычисления периода полувыведения ίη νίνο у людей, используя формулу ^д У^д (а)+Ъ·^ (А), в которой Υ означает период полувыведения ίη νίνο у людей, ^д (а) означает отрезок, отсекаемый на оси у, Ь означает наклон и А означает массу человека. Линия может быть получена с использованием данных о периодах полувыведения ίη νίνο, полученных на животных, которые имеют массу приблизительно 35 г (например, мыши), приблизительно 260 г (например, крысы) и приблизительно 2710 г. Для этого вычисления можно считать, что масса человека равна 70000 г. Основываясь на значениях периодов полувыведения, полученных на мышах и крысах, ожидают, что бАЬ, которые связывают сывороточный альбумин человека, такие как ООМ711-8, будут иметь у людей !1/2β от приблизительно 5,5 ч до приблизительно 40 ч и АИС от приблизительно 150 до приблизительно 2500 ч· мкг/мл.
Пример 6. Эффективность лекарственного гибрида анти-8А бАЪ/ГИг в мышиной коллагениндуцированной модели ревматоидного артрита.
Оценивали эффективность гибрида ^ОМ7т-16/I^-1^а и эффективность Ю-Иа в общепризнанной мышиной модели ревматоидного артрита (артрита, индуцированного коллагеном II типа (СТА) у мышей ΌΒΆ/1). В течение исследования мышей держали в испытательной установке в 2 клетках стандартного типа, которые помещали в НЕРА-вентилируемый контейнер при 20-24°С с 12-часовым световым и 12-часовым ночным циклом. Пищу (Ηа^1аη-Τек1аб универсальная диета 2016) и простерилизованную УФ-воду предлагали аб НЪйит. Мышей вносили в испытательную установку по меньшей мере за 7 суток до начала исследования для обеспечения надлежащей акклиматизации.
Мышам ЭВА/1 в возрасте 7-8 недель (полученных из Та^шс М и В, ^οтйο1ίνед, Дания) делали один раз инъекцию эмульсией АйЬгодеп-СТА адъюванта и А^ίй^ίοдеη-СIА коллагена (оба МЭ Ъюксь спсс5); эмульгиремого в соотношении 1:1 до тех пор, пока не получали стабильную эмульсию. Считали, что эмульсия является стабильной, когда капля эмульсии, добавленная в химический стакан с водой, образовывала твердый агрегат. Затем мышам делали инъекцию этой эмульсией.
Через 21 сутки после инъекции эмульсии 20 животных с наиболее выраженным артритным заболеванием исключали из исследования, а оставшихся мышей делили на группы по 10 животных (каждая группа содержала 5 самцов и 5 самок). Мышей лечили, как показано в табл. 5, и все виды лечения выполняли в концентрации, рассчитанной таким образом, чтобы вводить 10 мл/кг.
Таблица 5
Группа Лечение
1 П_-1га, 1 мг/кг (внутрибрюшинный (в/б) болюс)
2 1Ь-1га, 10 мг/кг (в/б болюс)
3 ООМ7ш-16/ТШга, 1 мг/кг (в/б болюс)
4 ООМ7т-16/1Ь“1га, 10 мг/кг (в/б болюс)
5 ΕΝΒΒ-ЕЬ® (этанерцепт; йптипех Согрога(юп), 5 мг/кг (в/б болюс)
6 Физиологический раствор (отрицательный контроль), 10 мл/кг (в/б болюс)
7 Дексаметазон (положительный контроль), 0,4 мг/кг (подкожная инъекция)
- 41 012622
Клинические оценки тяжести артрита регистрировали 3 раза в неделю от 21 до 49 суток. Мышей подвергали эвтаназии на 49 сутки. Отдельных мышей подвергали эвтаназии раньше, если они демонстрировали балл 12 или более по артритной шкале или имели серьезные проблемы при движении.
Для клинической оценки каждую конечность оценивали согласно приведенным ниже критериям и баллы для всех четырех конечностей складывали с получением общего балла для данной мыши. Этот способ давал в результате балл от 0 до 16 для каждой мыши. Критерии оценки представляли собой: 0 = нормальный; 1 = среднее, но отчетливое покраснение и опухание голеностопного сустава или плюсневого сустава или явное покраснение и опухание, ограниченное отдельными пальцами, несмотря на множество пораженных пальцев; 2 = умеренное покраснение и опухание голеностопного сустава и плюсневого сустава; 3 = сильное покраснение и опухание всей лапы, включая пальцы; 4 = максимально воспаленная конечность с вовлечением многочисленнх суставов.
Средние баллы при оценке артрита в группе вычисляли для каждой группы лечения в каждые сутки лечения с использованием клинических оценок от отдельных мышей. Любым животным, которые были исключены из исследования по этическим соображениям, присваивали максимальный балл 16. Средние баллы при оценке артрита в группе наносили на график в зависимости от времени (фиг. 13).
Статистический анализ средних баллов при оценке артрита в группе на 49 сутки осуществляли, используя критерий Уилкоксона (ΑίΕοχοη 1еЧ). Этот статистический анализ обнаружил, что две группы, леченные ЭОМ7т-16/1Ь-1га (в концентрации 1 или 10 мг/кг (группы 3 и 4)), имели существенно улучшенные баллы по артритной шкале на 49 сутки (при уровнях значимости Р<1% и Р<0,05% соответственно) при сравнении с контрольной группой, леченной физиологическим раствором (группа 6). В отличие от этого лечение с помощью 1Б-1га в концентрации 1 мг/кг (группа 1) не давало статистически значимого улучшения по артритной шкале на 49 сутки, тогда как лечение с помощью 1Б-1га в концентрации 10 мг/кг (группа 2) давало значительное улучшение при уровне значимости Р<5%. Лечение с помощью ΕΝΒΒΕΕ® (этанерцепт; Iттиηеx Ε’οΓροηΙίοη) (группа 5) давало значительное улучшение по артритной шкале на 49 сутки при уровне значимости Р<10%.
Лечение с помощью ЭОМ7т-16/1Ь-1га в дозе 10 мг/кг (группа 4) было эффективным при улучшении балла по артритной шкале на 49 сутки (значимое при уровне Р<0,5%) при сравнении со стандартным лечением с помощью ΕΝΒΚΕΕ® (этанерцепт; Iттиηеx Ε’οΓροηΙίοη) в дозе 5 мг/кг (группа 5). Кроме того, лечение с помощью ЭОМ7т-16/1Е-1га в меньшей дозе 1 мг/кг (группа 3) было более эффективным при улучшении балла по артритной шкале на 49 сутки, чем лечение одним 1Б-1га в той же дозировке (группа 1) (значимое при уровне Р<10%).
Результаты данного исследования показывают, что ЭОМ7т-16/1Е-1га при некоторых дозах был более эффективным, чем 1Б-1га или ΕΝΒΚΕΕ® (этанерцепт; Iттиηеx Ε’οΓροηΙίοη) в этом исследовании. Как ожидалось, ответ на 1Б-1га был дозозависимым, и ответ на ЭОМ7т-16/1Е-1га был также дозозависимым. Средние баллы за лечение с помощью ЭОМ7т-16/1Е-1га в дозе 1 мг/кг были постоянно ниже, чем средние баллы, полученные при лечении с помощью 1Ь-1га в дозе 10 мг/кг. Эти нанесенные на график результаты (фиг. 13) показывают, что лечение с помощью ЭОМ7т-16/1Е-1га было приблизительно в 10 раз более эффективным, чем лечение с помощью 1Б-1га в этом исследовании.
Эту превосходную эффективность ЭОМ7т-16/1Е-1га наблюдали даже несмотря на то, что гибридный белок ЭОМ7-16/1Е-1га содержит приблизительно половину количества эпитопов, связывающих рецептор 1Б-1, так как 1Б-1га по массе (например, 1 мг ЭОМ7т-16/1Е-1га (МА 31,2 кДа) содержит приблизительно половину количества эпитопов, связывающих рецептор ГБ-1, т.е. 1 мг 1Б-1га (МА 17,1 кДа).
Результаты этого исследования демонстрируют, что бАЬ, которое связывает сывороточный альбумин, может быть соединено с 1Б-1га (клинически проверенная терапия для КА) и что полученный лекарственный гибрид обладает свойствами как продолжительного периода полувыведения из сыворотки (подтвержденные с помощью бАЬ), так и свойствами связывания с рецептором ГЪ-1 (подтвержденные с помощью 1Б-1га). Благодаря времени устойчивости лекарственного гибрида в сыворотке, доза ЭОМ716/1Ъ-1га, которая была эффективной для лечения С1А, была значительно уменьшена относительно 1Б-1га.
Результаты этого исследования демонстрируют, что, помимо выгод от продолжительного периода полувыведения и увеличенной АИС, лекарства, полученные как лекарственные гибриды или лекарственные конъюгаты с антигенсвязывающим фрагментом (например, бАЬ) антитела, которое связывает сывороточный альбумин, представляют собой высокоэффективные терапевтические агенты, которые обеспечивают преимущества над одним лекарством. Например, как показано в мышиной модели С1А, меньшая доза лекарственного гибрида оказалась эффективной и ингибировала воспаление суставов и повреждение суставов, вызванное ГБ-1, в течение более продолжительного периода времени по сравнению с одним 1Ъ-1га, и обеспечивала лучшую защиту против прогрессирования заболевания.
- 42 012622
Пример 7. Нековалентный лекарственный конъюгат анти-8А бАЬ/сапорин.
Инактивирующий рибосомы белок сапорин (противораковое лекарство) высоко устойчив к денатурирующим веществам и протеазам и был использован в качестве токсина для направленной доставки в Т-лимфоциты. Нековалентный лекарственный конъюгат получали путем сшивания сапорина с Э0М711-8 через биотин-стрептавидиновую связь. Результаты, полученные с этим нековалентным лекарственным конъюгатом, демонстрируют, что Э0М711-8 сохраняет свои характеристики связывания сывороточного альбумина при соединении с лекарством.
Вариант Ό0Μ7Η-8, обозначенный как П0М7й-8сук, в котором С-концевой аргинин в положении 108 (аминокислота 108 из 8ΕΟ ΙΌ N0: 24) был заменен остатком цистеина, получали путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты в клетках НВ2151. Клетки выращивали и индуцировали при 30°С в течение ночи в готовой смеси ТВ для аутоиндукции экспрессии (Мегск КСа, Германия) в течение 72 ч до отделения супернатанта путем центрифугирования. Э0М711-8сук очищали из супернатанта, используя аффинный захват на агарозе с белком Ь. Смолу затем промывали 10 объемами колонки 2х РВ8, и Э0М711-8сук элюировали 0,1 М глицином, рН 2. Элюированный Э0М711-8сук нейтрализовали 0,2х объемом Трис, рН 8 и концентрировали до 1 мг/мл (используя 20 мл концентратор СВNΤКIС0N (ΜШ^рο^е Согр., МА).
Концентрированный Э0М711-8сук подвергали замене буфера на РВ8, используя обессоливающую колонку NЛР5 (6Ε Неа1!йсаге/Атегкйат Вюкшепсек, N1), и определяли концентрацию. бАЬ затем биотинилировали (через первичные амины), используя ΕΣ-Ε^Κ сульфо-NН8-^С-биотин (Р1егсе Β^ο!есйηο1οду Шс., Ш). Биотинилированный бАЬ смешивали с стрептавидин-сапорином (А^апсеб ТагдеБпд 8ук!етк, 8ап ^е^дο) в молярном соотношении 1:1.
Чтобы подтвердить образование комплекса бАЬ/сапорин, использовали сэндвич^Е^А для обнаружения интактных комплексов. Сывороточный альбумин человека (Н8А) наносили на половину лунок планшета для БЕКА (Мшс, N¥0 в течение ночи в концентрации 10 мкг/мл в объеме 100 мкл на лунку. После ночной инкубации планшет промывали 3 раза РВ8, 0,05% Тетееп и затем весь планшет блокировали в течение 2 ч 2% РВ8. После блокирования планшет промывали 3 раза РВ8, 0,05% Тетееп и затем инкубировали в течение 1 ч с нековалентным конъюгатом П0М7й-8/сапорин, разбавленным до 0,5 мкМ в 2% Тетееп в РВ8. В качестве контролей на том же планшете для ВЫ8А инкубировали несвязанный сапорин в концентрации 0,5 мкМ и несвязанный Ω0Μ7118 в концентрации 0,5 мкМ в 2% Тетееп в РВ8. Дополнительными контролями были те же три разбавленных белка, инкубированных в лунках планшета для В^I8А, не покрытых НА8, но блокированных 2% Тетееп. После инкубации планшет промывали 3 раза РВ8, 0,05% Тетееп и затем инкубировали в течение 1 ч с разведением 1/2000 поликлонального антитела козы против сапорина (А^апсеб Тйегареийс 8ук!етк), разбавленного в 2% Тетееп в РВ8. После инкубации планшет промывали 3 раза РВ8, 0,05% Тетееп и затем инкубировали в течение 1 ч с вторичным антителом для обнаружения (конъюгат антитела против Ι§ козы с НКР, 1/2000). После инкубации планшет промывали 3 раза РВ8, 0,05% Тетееп и 1 раз РВ8 и подсушивали, стряхивая на бумагу. В^I8А проявляли с помощью 100 мкл 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в качестве субстрата и реакцию останавливали с помощью 50 мкл 1 М соляной кислоты. Присутствие нековалентных конъюгатов Ω0Μ711-8 и сапорина подтверждали путем сравнения ОП600 конъюгата с ОП600 одной из двух неконъюгированных частей.
Таблица 6
ВОМ7й-8/Сапорин Только ϋΟΜ71ι-8 Только сапорин
ОП600 (планшет, покрытый НА8) 0,311 0,060 0,079
ОП600 (планшет, блокированный 2%-ным Тмгееп в РВЯ) 0,078 0,068 0,075
Результаты этого исследования демонстрируют, что лекарство может быть конъюгировано с антигенсвязывающим фрагментом антитела, которое связывает сывороточный альбумин, и что конъюгированный антигенсвязывающий фрагмент сохраняет активность связывания с сывороточным альбумином. Кроме того, благодаря стабильности и силе взаимодействия биотин-стрептавидин, эти результаты показывают, что могут быть получены ковалентно связанные и нековалентно связанные конъюгаты, которые сохраняют активность антигенсвязывающего фрагмента антитела, которое связывает сывороточный альбумин, связывать этот сывороточный альбумин.
Пример 8. Конъюгат анти-8А бАЬ/флуоресцеин.
Флуоресцеинизотиоцианат (МТС) может быть сшит с амино-, сульфгидрильными, имидазолильными, тирозильными или карбонильными группами в белке. Он имеет молекулярную массу 389 Да, которая сравнима по размеру со многими низкомолекулярными лекарствами. Результаты, полученные с этим конъюгатом, демонстрируют, что анти-8А бАЬ поддерживает его характеристики связывания с сывороточным альбумином при сшивании с небольшой химической структурной единицей, и показывают, что
- 43 012622 лекарства, имеющие небольшую молекулу, могут быть конъюгированы с анти-ЗА ЕАЬ.
Концентрированный Б0М7Ь-8сук получали, как описано в примере 7. Концентрированный ЕАЬ подвергали замене буфера на 50 мМ боратный буфер, рН 8 (связывающий буфер), используя обессоливающую колонку НАР5 (СЕ НеаЬЬсаге/АтегкЬат Вюкаепсек, N1), и затем концентрировали до 2,3 мг/мл, используя 2 мл концентратор СЕNТКIС0N (М^Шрο^е Εοη}., МА). ИТС (Р1егсе ВюЮсНгюкду Ис.) разбавляли до 10 мг/мл в диметилформамиде (БМЕ) согласно инструкциям производителя и затем смешивали с ЕАЬ в связывающем буфере при молярном соотношении НТС:ЕАЬ, 24:1. Реакции давали возможность протекать в течение 30 мин. В этой точке избыток непрореагировавшего ИТС удаляли из реакции, используя обессоливающую колонку РБ10 (СЕ НеаИЬсаге/АтегкЬат Вюкаепсек, N1), которую предварительно калибровали РВЗ, и конъюгат Б0М7Ь-8сук/ИТС элюировали с помощью РВЗ.
Чтобы подтвердить, что реакция сочетания ИТС/ЕАЬ прошла успешно, использовали сэндвич''ЕЫЗА для обнаружения связанного ЕАЬ. Сывороточный альбумин человека (НЗА) наносили на половину лунок планшета для ЕЫЗА Щипс, ΗΥ) в течение ночи в концентрации 10 мкг/мл в объеме 100 мкл на лунку. После ночной инкубации весь планшет промывали 3 раза РВЗ, 0,05% Туееп и затем все лунки блокировали в течение 2 ч 2% Туееп в РВЗ. После блокирования планшет промывали 3 раза РВЗ, 0,05% Туееп и затем инкубировали в течение 1 ч с Б0М7Ь-8сук/ИТС, разбавленным до 1 мкМ в 2% Туееп в РВЗ. В качестве контролей на том же планшете для ЕЫЗА инкубировали контрольное ИТСконъюгированное антитело в концентрации 1 пМ и несвязанный Б0М711-8 в концентрации 1 мкМ в 2% Туееп в РВЗ. Дополнительные контроли представляли собой те же три разбавленных белка, инкубируемых в лунках планшета для ЕЫЗА, не покрытых НАЗ, но блокированных 2%-ным Туееп. После инкубации планшет промывали 3 раза РВЗ, 0,05% Туееп и затем инкубировали в течение 1 ч с разведением 1/500 анти-ИТС антитела крысы (Зего1ес), разбавленного в 2% Туееп в РВЗ. После инкубации планшет промывали 3 раза РВЗ, 0,05% Туееп и затем инкубировали в течение 1 ч с вторичным антителом для определения, разбавленным в 2% Туееп в РВЗ (конъюгат антитела против Ι§ крысы с НКР, 1/5000). После инкубации планшет промывали 3 раза РВЗ, 0,05% Туееп и один раз РВЗ и подсушивали, стряхивая на бумагу. ЕЫЗА проявляли с помощью 100 мкл на лунку 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в качестве субстрата и реакцию останавливали с помощью 50 мкл на лунку 1 М соляной кислоты. Присутствие конъюгатов Б0М711-8 и ИТС подтверждали путем сравнения ОП600 конъюгата с ОП600 любой из двух неконъюгированных частей.
Таблица 7
ООМ7Н-8/Р1ТС Только ΌΟΜ711-8 РГГС-конъюгированное антитело (отрицательный контроль)
ОП600 (планшет, покрытый Н8А) 0,380 0,042 0,049
ОП600 (планшет, блокированный 2%-ным Т»ееп в РВ8) 0,041 0,041 0,045
Пример 9. Конъюгаты анти-ЗА ЕАЬ/пептид.
Многие пептиды имеют терапевтические эффекты. Модельные пептиды с N или С-концевым цистеином могут быть связаны с ЕАЬ против сывороточного альбумина.
В этом случае используют четыре различных пептида: пептид 1 ΥРΥ^УР^ΥАККККККС (ЗЕО ΙΌ N0: 68); пептид 2 СККККККУРУБУРБУА (ЗЕО ΙΌ N0: 69); пептид 3 ННННННККККККС (ЗЕО ΙΌ N0: 70) и пептид 4: СККККККНННННН (ЗЕО ΙΌ N0: 71). Пептиды 1 и 2 содержат последовательность метки гемагглютинина (НА !ад), а пептиды 3 и 4 содержат последовательность Н1к метки. Концентрированный Б0М7Ь-8сук получают, как описано в примере 7.
Концентрированный ЕАЬ восстанавливают 5 мМ дитиотрейтолом и затем буфер меняют на связывающий буфер (20 мМ бис-Трис, рН 6,5, 5 мМ ЕБТА, 10% глицерина), используя обессоливающую колонку NАР5 (СЕ НеаНЬсаге/АтегкЬат Вюкаепсек, N1). Цистеины блокируют (для предотвращения димеризации ЕАЬ с самим собой) с использованием конечной концентрации 5 мМ дитиодипиридина, который добавляют к раствору ЕАЬ с образованием исходного раствора 100 мМ дитиодипиридина в ДМСО. ЕАЬ и дитиодипиридин оставляют связанными в течение 20-30 мин. Непрореагировавший дитиодипиридин затем удаляют с помощью обессоливающей колонки РБ10 и ЕАЬ элюируют в связывающем буфере (20 мМ бис-Трис, рН 6,5, 5 мМ ЕБТА, 10% глицерина). Полученный белок затем замораживают до тех пор, пока он не понадобится.
Пептиды 1-4 отдельно растворяют в воде в концентрации 200 мкМ, восстанавливают с использованием 5 мМ БТТ и затем обессоливают с использованием обессоливающей колонки NАР5 (СЕ Неа1!11саге/АтегкЬат Вюкаепсек, N1). Каждый пептид затем добавляют к раствору восстановленного и блоки
- 44 012622 рованного бЛЫ в соотношении 20:1 для того, чтобы наблюдать сшивание пептида и бЛЫ. Чтобы подтвердить успешность реакции сшивания пептида с бЛЫ, используют сэндвич-ЕЬ1ЗЛ для обнаружения конъюгатов анти-ЗЛ бЛЫ/пептид.
Сывороточный альбумин человека наносят на планшет для ЕБ1ЗЛ ^цпс, N¥1 в течение ночи в концентрации в 10 мкг/мл в объеме 100 мкл на лунку. После ночной инкубации планшет промывают 3 раза РВЗ, 0,05% Т\уееи и затем блокируют в течение 2 ч с помощью 4% Магуе1 в РВЗ. После блокирования планшет промывают 3 раза РВЗ, 0,05% Т\уеег1 и затем инкубируют в течение 1 ч с конъюгатами П0М7й-8/пептид, разбавленными до 1 мкМ в 4% Магуе1 в РВЗ. В качестве контролей в том же планшете для ЕБ1ЗЛ несвязанный пептид в концентрации 20 мкМ и несвязанный Б0М711-8 в концентрации 1 мкМ инкубируют в 4% МРВЗ. После инкубации планшет промывают 3 раза РВЗ, 0,05% Т\уеег1 и затем инкубируют в течение 1 ч с разведением 1/2000 анти-НА антитела козы (ЛЫеат) для пептидов 1 и 2 и разведением 1/2000 N1 NТΛ-НКР (для пептидов 3 и 4), разбавленных в 4% Магуе1 в РВЗ. После инкубации планшет промывают 3 раза РВЗ, 0,05% Т\уеег1 и лунки с анти-НА антителом козы инкубируют в течение 1 ч с вторичным антителом против антител козы, конъюгированным с НКР, разбавленным 1/2000 в 4% МРВЗ (другие лунки блокировали в течение 1 ч). После инкубации планшет промывают 3 раза РВЗ, 0,05% Т\уеег1 и один раз РВЗ и затем подсушивают, стряхивая на бумагу. ЕЫЗЛ проявляют 3,3',5,5'-тетраметилбензидином в качестве субстрата и реакцию останавливают 1 М соляной кислотой. Присутствие конъюгатов Б0М711-8/пептидный конъюгат подтверждают путем сравнения ОП600 конъюгата с ОП600 любой из двух неконъюгированных частей.
Таблица 8
Противораковые пептиды
Класс пептидов Пептидная последовательность Действие/Применение
Агонисты и антагонисты ЬНКН р-О1и-Н13-Тгр-8ег-Туг-С1у-Беи-Аг§-Рго-С1у- ΝΗ2 8Ер ГО ΝΟ: 89 Лечение злокачественных заболеваний, зависимых от половых гормонов
Гастринвысвобождающий пептид р-С1и-С1п-Аг§-Ееи-О1у-А8п-Сг1п-Тгр-А1а-Уа1- О1у-Н1я-Ееи-МеЬМН2 ЙЕр ГО N0: 90 Мелкоклеточная карцинома легких
Соматостатин р-А1а-О1у-Су8-Еу5-А8П-Р11с-Тф-Ьуз-Т11г-РЬе- ТЬг-8ег-Су8 ЗЕО ГО ΝΟ: 91 Опухоли (общее)
ОН-КН а1п-Тгр-А1а-Уа1-С1у-Н18-Ееи-р51(СН2-КН)- Ιχιι-ΝΗ2 (КС-3094) 8ΕΟΙΟΝΟ: 92 Г лиобластомная опухоль, опухоль предстательной железы
УБОГ Аг§-Аг8-Ьу8-Аг8-Аг§-Аг£ 8ЕО ГО ΝΟ: 93 Карцинома ободочной кишки человека
АЦ-Тйт-Тгр-Ьеи-Рго-Рго-Агд 8 Ер ГО ΝΟ: 94 Пролиферация опухолевых клеток
Аг§-Т11г-О1и-Ееи-А8п-Уа1-С1у-Пе-А8р-Рйе- А8п-Ттр-О1и-Туг-Рго-А1а-8ег-Ьу8 8Ер ГО ΝΟ: 95 Пролиферация и миграция опухолевых клеток
- 45 012622
Н18-Н18-О1и-Vа1 -Уа1 -Ту з-Рке- М.е1- Азр · УаЕТуг- 01л ЗЕфГОИО: 96 Ингибирует эндотелиальные клеточные ответы
Азп-Пе-ТЬг-УаИЪг-Теи-Еуз-Ьуз-РЬе-Рго-Ьеи ЗЕфЮКО: 97 Ингибитор ангиогенеза
БОР Суй-Н18-8ег-С1у-Туг-Уа1-С1у-Уа1-Агё-Су« 8Е0 ГО ΝΟ: 98 Ингибирует клеточную пролиферацию, опосредованную ЕОР
Туг-Суз-А8р-Сг1у-Р11е-Туг-А1а-Су5-Туг-Ме1- Абр-Уа1-МН2 8Ε9ΙΟΝΟ:99 Связывается с НЕК2
1Б-6 О1у-О1у-Су8-Ьу8-Ьеи-Тгр-ТЬг-11е-Рго-О1и-Су8- О1у-О1у 8Ε0ΙΌΝΟ: 100 Ингибирует клеточный рост
1Б-8 А1а-Уа1-Беи-Рго-Аг8 δΕφΙΟΝΟ: 101 Индукция апоптоза и противоопухолевый эффект ίη νΐνο
РЕКЗР Туг-61у-Аг£-Рго-Аг£-Сг1и-8ег-61у-Еу8-Ьу8- Агд-Еуз-Агд-Еуз-Агд-Ееи-Еуз-Рго-ТЬг 8ЕО ГО ΝΟ: 102 Ингибирует рост злокачественной глиомы
ΤΝΡ . Ас-Су8-Рго-8ег-01и-0]у-Ееи-Су8-МН2 ЗЕфГОИО: 103 ...... Ингибирует рост опухоли
Ас-Сув-Рго-Зег-СНи-СИу-Тйг-Рго-Зег-ТЬг-Н!®- УаЕБеи-Суз-ННЗ ЗЕфГОКО: 104
Ас-Ееи-А1а-Азп-СИу-V а1 -О1и ΚΕΟΙϋΝΟ: 105
Р1О-О1п-А1а-О1и-61у-О1п-Еси-МН2 δΕΌΙΌΝΟ: 106
Уа1-А1а-Азп-Рго-С1п-А1а-61и-О1у-О1п-Ееи ЗЕОГОКО: 107
Циклнчес кий Еуа-О1у- Авр-СИп-Еси- Зег 8Ε0ΙΠΝΟ: 108
- 46 012622
Циклический Туг-8ег-С1п-Уа1-Ьеи-Р11е-Ьу8- О1у 8Ер ГО ΝΟ: 109
Альфафетопротеин Сйи-МеЕТЬг-Рго-УаЕАзп-Рго-СРу δΕφΙΟΝΟ: ПО Ингибирует раковые клетки эстрогензависимого рака молочной железы
С на л и л-Льюиса миметики 11е-О1и-Ьеи-Ьеи-О1п-А1а-Аг8 8Е<2 ΙΠΝΟ: 111 Ингибирует колонизацию легких опухолевыми клетками
Активатор плазминогена урокиназного типа Су$-Уа1-8ег-А8п-Ьу8-Туг-РЬе-8ег-А8п-11е-Н18- Тгр-Суя 8Ε0ΙΟΝΟ: 112 Антагонист иРА/иРАК
РЬе-Х-Х-Туг-Ьуз-Тгр 8ЕС) ΙΟΝΟ: 113 Антагонист иРА/иРАК
Еуя-Тгр-Х-Х-Аг 8ЕХ7 ГО N0:114 Антагонист иРА/иРАК.
Ьеи-А8п-РЪе-8ег-О1п-Туг-Ееи-Тгр-Туг-ТЬг- ΝΗ2 . 8ЕЦ ГО ΝΟ: 115 Антагонист иРА/иРАК
Ас-Еу8-Рго-8сг-8ег-Рго-Рго-Сг1и-01и-ПН2 8Еф ГО N0:116 Ингибирует прогрессирование опухоли и ангиогенез
р53 Ас-МеС-Рго-Аг§-РЬе-Ме1-А8р-Туг-Тгр-О1и- СИу-Ееи-Лкп-МН2 δΕφΤΠΝΟ: 117 Ингибирует связывание Ηάηι2 и р53
Мег-Υ а1-Ага-Агд-Рйе-Ьеи-V аЕТЪг-Ееи-Агц-11 е- Аг§-Аг£-А1а-Су5-Сг1у-Рго-Рго-Аг8-Уа1 δΕφΙϋΝΟ: 118 Предупреждает убиквитинирование р53
О1у-8ег-Агд-А1а-Н15-8ег-8ег-Н18-Ееи-Ьуз-8ег- Еу8-С1у-Ц1п-8ег-1Ъг-8ег-Агд-Н1$-Ьу8-Еу8-Е.еи 8Ε0ΙΟΝΟ: 119 Активирует р53
- 47 012622
р34сс1с2 Суз-А1а-Рке-Туг-Пе 8Ε0ΙΟΝΟ: 120 Ингибирует взаимодействие между р34/р33 и рКЬ2 и р107
Т.еи-Су8-А1а-Р11е-Туг-11е-Ме1-А1а-Ьу5 8Εζ) ГОЖ): 121
Мс1-Суя-8ег-МеГ-Туг-О1у-11е-Су8-1у8 8Εζ) ГО N0: 122
Сйк2 Тут-Зег-Рке-УаРЖа-СИу-Рке-Рйе-Акп-РЪе-Агд- Уа1-8ег-Тгр-Аг§-О1и-МеРЬеи-А1а ЗЕО ГОЖ): 123 Ингибирует взаимодействие между С4к2 и гистоном Н1
р21\7АЕ1 Ьуз-Агд-Агд-ОЬ-ТЬг-Зег-МеРТкг-Ак-Рке- Туг-Н18-8ег-Ьу8-Аг§-Аг§-Ееи-11е-Р11е-8ег ЗЕО ГО Ж): 124 Индуцирует блокирование в фазе роста 01/8
Туа- Агд-Агц-Теи-Пе-Рке-Зег-Ьуз 5Ε0ΙΟΝΟ: 125
Рйе- Ьеи- Акр-ТЕг-Ьеи-Уа1-V аРЬеи-Жа- Агд ЗЕО ГО ΝΟ: 126
Транскрипция Е2ГГОР Агд-Суз-УаРАгд-Сув-Агд-Рке-УаРУаРТгр-Пе- О1у-Ьеи-Аг8-Уа1-Аг§-Су8-Ьеи-Уа1 8Εζ> ГО N0:127 .. Ингибирует функционирование Е2Р 1П νϊίΓΟ
Ьеи-А811-Тгр-А1а-Тгр-А1а-А1а-О1и-Уа1-Ьеи- Ьув-УаРСНп-Ьук-Агд-Агд-Пе-Туг-Азр-Не-Ткг- Аап-Уа1 , 8Ер ГО ΝΟ: 128
Ьеи-О1и-О1у-11е-О1п-Ьеи-11е-А1а-ХН2 ЗЕО II) N0: 129
Рке-Тгр-Ьеи-Агд-Рке-Ткг КЕрГОЖ): 130
Тгр-УаРАгд-Тгр-Жз-Рке ЗЕрГОЖ): 131
Тгр-Уа1-Атё-Тгр-Н15 ЗЕрГОИО: 132
Тгр-Н18-Рке-11е-Рке-Т гр
- 48 012622
8ΕφΙΕ)ΝΟ: 133
11е-Тгр-Ьеи-8ег-О1у-Ьеи-8ег-Аг§-С1у-Уа1-Тгр- Уа1-8ег-РЬе-Рго δΕφΙΒΝΟ: 134
Сг1у-8ег-Аг8-11е-Ьеи-ТЬг-Рке-Аг§-8ег-О1у-8ег- Тгр-Туг-А1а-8ег δΕφΙϋΝΟ: 135
А8р-О1и-Ьеи-Еу8-Аг§-А1а-РЬе-А1а-А1а-Ьеи- Аг£-А8р-О1п-11е 8ΕφΙΟΝΟ: 136
Вс12 Ьу8-Еу8-Ьеи-8ег-61и-Су8-Ьеи-Ьу5-Еу8-Аг§-Пе- СИу-Азр-СИи-Ееи-Азр-Зег δΕφΙϋΝΟ: 137 Запускает апоптоз в бесклеточной системе
О1у-О1п-Уа1-О1у-Ат8-С1п-Ееи-А1а-Не-Пе-О1у- Азр-Азр-Пе-Азп-Атц 8ΕΟΤΟΝΟ: 138
Аг8-Азп-11е-А1а-Ат8-Н18-Ееи-А1а-О1п-Уа1-О1у- Азр-8ег-МеЕАзр-Аг8 8ЕОЮ N0:139
Интегрины Туг-11е-О1у-8ег-Аг8-ИН2 . 8ЕЦ ГО N0: 140 Ингибирует связывание опухолевых клеток с ЕСМ
Ас-Туг-11е-О1у-8ег-Аг8-ЯН2 8Ε0ΙΟΝΟ; 141
Ас-Туг-Пе-О1у-8ег-Аг8-1ЧНСНЗ 8ЕЦ ГО ΝΟ: 142
Ас-Туг-Пе-О1у-8ег-Агё-Н(СНЗ)2 ЗЕЦГОЬЮ: 143
Рйе(рИН2)-Пе-О1у-8ег-Аг8-ИН2 8ЕЦ ГО ΝΟ: 144
Ас-Туг-11е-61у-5ег-Аг§-МНСН(СНЗ)2 8Е0 ГО N0: 145
СО(Азр-Туг-Пе-О1у-8ег- Агс-ΝНРг)2
- 49 012622
ЗЕрГОИО: 146
Агд-СИу-Авр 8ЕЦ Ιϋ ΝΟ: 147
Туг-11е-О1у-Зег-Аг2 8ЕО ГО N0: 148
11е-Рго-Су5-Азп-А8п-Ьу5-С1у-А1а-Н15-8ег-\’а1- Сг1у-Ееи-Мс1’Тгр-Тгр-Мс1-Т.еи-А1а-Аг§ ЗЕрГОЫО: 149
Аналоги ангиостатина 8ег-Рго-Н18-Агд-Рго-Агд-Рке-Зег-Рго-А1а 8Ε0ΙϋΝΟ: 150
Зег-Рго-Н1й-А1а-1118-О1у-Ту1-11е-Рго-8ег 8Ε0ΙΟΝΟ: 151
1Ъг-Рго-Н18-1Ъг-Н18-А8п-Аг§-1Ъг-Рго-С1и 8Ε0ΙΓ)ΝΟ: 152
ТНг-Рго-Нн-А|§-НА-Сгк1-Еуз-Т]1г-Рг1>Сг1и 8Ε0ΙΓ)ΝΟ: 153
О1и-Рго-Н18-Агд-Н18-Зег-11е-РЬе-ТЬг-Рго-О1и 8Е0 ГО N0:154 .
Кадхерины Ас-Су 8-Н18-А1а-\'а1-Су8-ИН2 8ЕО 11) N0:155 , Ингибирует ангиогенез
Гистондеацетилаза Су8-О1и-Ьу8-Н18-11е-Ме(-О1и-Ьу8-Ие-Сг1п-О1у- Аг§-С1у-А8р-А8р-Азр-А8р 8Е£) ГО N0:156 Ингибирование лейкоза
ММР2 Су$-Т1и-ТЫ--Н18-Тгр-О1у-Р}1е-Т1и-Ееи-Су8 8Ε0ΙΟΝΟ: 156 Метастазирование опухоли
Хотя это изобретение было конкретно представлено и описано со ссылками на его предпочтительные воплощения, специалистам в данной области будет понятно, что в данном описании могут быть сделаны различные изменения по форме и в деталях без отклонения от объема изобретения, охваченного прилагаемой формулой изобретения.
- 50 012622
Перечень последовательностей <110> ОСМАЫТ18 ЫМТТЕБ (ДОМЭНТИС ЛИМИТЕД) нои, шсу а.
(ХОЛТ, Люси, Дж) ТОМЫЫЗОЫ, ΙΑΝ М.
(ТОМЛИНСОН, Ян, М.) <120> ЛЕКАРСТВЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СЛИЯНИЯ И КОНЪЮГАТЫ <130> 3440.1002-003 <140> РСТ/СВ2005/002163 <141> 2005-05-31 <150> 60/576,271 <151> 2004-06-01 <150> 60/632,361 <151> 2004-12-02 <160> 158 <170> ЕазЪЗЕС £ог Κΐηάον® УегзФоп 4.0 <210> 1 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зарГепз <400> 1
Азр 1 Не С1п МеЪ ТЬг С1п Зег Рго 5 Зег Зег Ъеи Зег А1а Зег Уа1 01у
10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1П Зег 11е Не Ьуз Н±5
20 25 30
Ъеи Ъуз Тгр Туг С1п С1п Ъуе Рго С1у Ъуз А1а Рго Ъуз Ъеи Ъеи Не
35 40 45
Туг (31у А1а Зег Агд Ъеи αΐη Зег Й1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег б1у
50 55 60
Зег Й1у Зег С1у И1Г Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг 116 8ег Зег Ъеи С1п Рго
65 70 75 80
Й1и Азр РЬе А1а И1Г Туг Туг Суз С1п С1п С1у А1а Агд Тгр Рго С1п
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1п (31у гы Ъуа Уа1 С1и 11е Ъуз Агд
100 105 <210> 2 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зар±епз <400> 2
Азр 1 11е С1п МгЬ ТЬг 5 С1п Зег Рго Зег Зег Ъеи Зег А1а Зег Уа1 61у
10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не РЬе Агд ΗΪ3
20 25 30
Ъеи Ъуз Тгр Туг С1п е1п Ъуз Рго С1у Ъуз А1а Рго Ъуз Ъеи Ъеи Не
35 40 45
- 51 012622
Туг А1а 50 А1а Зех Агд Ьеи С1п Зег С1у νβΐ Рхо Зех Агд РЬе Зех С1у
55 60
Зех С1у Зег С1у ТЬг Авр РЬе ТЬх Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ъеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Тух Тух Суз С1п О1п Уа1 А1а Ьеи Туг Рхо Ъуз
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуе Уа1 С1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 3 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <400> 3
Авр 1 11е С1п Меь ТЬг С1п Бег Рго Бег Бег Ъеи Бег А1а Бег Уа1 С1у
5 10 15
Авр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег С1п Бег Пе Туг Туг Н1з
20 25 30
Ъеи Ьуз τχρ Туг С1п С1п Ъуа Рго (31у Ьуз А1а Рго Ъуз Ъеи Ьеи 11е
35 40 45
Тух Ьуз А1а Бег ТЬх Ъеи αΐη Бег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг 11е Бег Бег Ъеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Аар РЬе А1а ТЬх Туг Туг Суз С1п С1п Уа1 Агд Ъуз Уа1 Рго Агд
85 90 95
ТЬх РЬе С1у С1п С1у ТЬх Ьуэ Уа1 С1и 11е Ъуз Агд
100 105
<210> 4 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 4
Авр 11е С1п ТЬх ТЬг С1п Зех Рго
1 5
Азр Агд Уа1 ТЬх 20 Не ТЬх Суз Агд
Ъеи Агд Тгр 35 Тух С1п 61ц Ьуз Рго 40
Туг Азр 50 Зех Зех Уа1 Ьеи С1п 55 Бег
Бег 65 С1у Зех 61у ТЬг Авр 70 РЬе ТЬг
О1и Авр РЬе А1а ТЬг 85 Тух Тух Суз
ТЬг РЬе С1у <31п 100 С1у ТЬх Ахд Уа1
Зех Зех 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 С1у
А1а Зех С1п Туг 11е С1у Агд Тух
25 30
С1у Ьуз А1а Рхо Ьуз Ьеи Ьеи 11е
45
Й1у Уа1 Рхо Зех Агд РЬе Зег Б1у
60
Ьеи ТЬг 11а Зех Зег Ьеи С1п Рго
75 80
С1п Б1п Ахд Тух Ахд МеЬ Рхо Тух
90 95
Й1и 11е Ьуз Агд
105
<210> 5 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното вархепз
- 52 012622
<400> 5
Азр Не αΐη Ме< ТЬг С1п Зех Рго Зех Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд ν&ι ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Туг 11е С1у Агд Тух
20 25 30
Ьеи Агд Тгр Туг С1п σι η Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Азр Зех Зег Уа1 Ьеи <Э1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зех 01у
50 55 60
Зех С1у Зех С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Рхо
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз 61п С1п Агд Туг МеЕ С1п Рго РЬе
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Т1е Ьуз Агд
100 105
<210> 6 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепа <400 6
Аар 11е С1п МеЕ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зех Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬх Суз Агд А1а Зег С1п Тхр Не 61 у Ахд Тух
20 25 30
Ьеи Агд Тхр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рхо Ъуа Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Тух Азп <31у Зег С51п Ьеи 61 η Зег С1у Уа1 Рго Зех Ахд РЬе Зег С1у
50 55 60
8ех С1у 8ех С1у ТЬх Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е 8ех Зех Ьеи С1п Рхо
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬх Тух Туг Суз С1п С1п Агд Тух Ьеи <51п Рго Тух
85 90 95
ТЬх РЬе С1у С1п С1у ТЬх Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд
100 105 <210> 7 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400 7
Азр Не <311! МеЬ ТЬх С1п Зех Рго Зег Зех Ьеи Зег А1а Зег Уа1 61у
1 5 10 15
Аар Ахд Уа1 ТЬх Не ТЬг Суз Ахд А1а Зег С1п Тух Не Зех Ахд С1п
20 25 30
Ьеи Ахд Тхр Туг С1п С1п Ьув Рго С1у Ьуз А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Тух С1у А1а Зех Уа1 Ьеи С1П Зег 01у Не Рго Зег Ахд РЬе Зех С1у
50 55 60
8ех 61у Зех 61у ТЬх Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬх 11е Зех Зех Ьеи 61 η Рго
65 70 75 80
С1и Аар РЬе А1а ТЬх Туг Тух Суз С1п 51η. Ахд Туг Не ТЬг Рхо Тух
85 90 95
ТЬх РЬе 51у (51п С1у ТЬг Ьуз Уа1 Й1и Уа1 Ьуз Агд
100 105
- 53 012622 <210> 8 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 8
Аар Не СЬп Мер ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег УаЬ С1у
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Не ТЫ Суз Агд АЬа Зег СЬп Тух ЬЬе СЬу Агд Туг
20 25 30
Ьеи Агд Тгр Тух С1п СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рхо Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Тух Азр Зех Вех Уа1 Ьеи С1п Вех* СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
8ег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЫ 110 Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Агд Туг Зег Зег Рго Тух
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу С1п С1у ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 9 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното аархепз <400> 9
Азр 1 ЬЬе СЬп МеЪ ТЬг СЬп 5 Зег Рго Зег Зег Ьеи 10 Зег А1а Зег Уа1 15 С1у
Аг'тЗ ν&1 ТЫ Т1(Ь ТИт- СЧтй Аз? ст А1а С1п Тпо Т1а Н£а Αϊ?ίτ С1п
20 25 30
Ьеи Ьуз Тхр Тух СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Тух Тух АЬа Зех Не Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд Рке Зег <31у
50 55 60
Зег С1у Зех СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп ТЬг РЬе Зег Ьуз Рго Зег
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи ЬЬе Ьуз Агд
100 105 <210> 10 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 10
Азр Не С1п МеЬ ТЬг С1п Зех Рхо Зех Зех Ьеи Зег А1а Зех УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬх Суз Агд АЬа Зег С1п Ьуз Не АЬа ТЬг Тух
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Тух С1п С1п Ьуз Рго СЬу Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Агд Зех Зех Зех Ьеи С1п Зег АЬа Уа1 Рго Зех Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зех С1у Зег С1у ТЬг Уа1 РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зех Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
- 54 012622
СЬи Авр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Сув СЬп СЬп ТЬг Туг АЬа Уа1 Рго Рго
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу С1п СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Не Ьув Агд
100 105
<210> 11 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400 11
Авр Не СЬп Мех ТЬг СЬп Зех Рхо Зех Зег Ьеи Зех АЬа Зех Уа1 СЬу
1 5 10 15
Авр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬх Суз Ахд А1а Зег С1п Тгр Не Азр ТЬг СЬу
20 25 30
Ьеи АЬа Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рхо С1у Ъув А1а Рхо Ахд Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Азп УаЬ Зег Агд Ьеи СЬп Зег С1у Уа1 Рго Зех Ахд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зех С1у Зег СЬу ТЬг Авр РЬе ТЬх Ьеи ТЬг Не Зех Зех Ьеи е1п Рхо
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Тух Тух Суз С1п С1п Туг Тхр СЬу Зех Рго ТЬх
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬп С1у ТЬх Ьуз УаЬ Й1и 11е Ьуз Ахд
100 105 <210 12 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400 12
Авр Не СЬп МеЬ ТЬх СЬп Зех Рго Зех Зех Ьеи Зех А1а Зех Уа1 С1у
1 5 10 15
Авр Ахд УаЬ ТЬх ЬЬе ТЬх Суз Агд АЬа Зех С1п СЬи ЬЬе Тух Зех Тхр
20 25 30
Ьеи АЬа Тгр Тух СЬп СЬп Ахд Рго СЬу Ьуз А1а Рхо Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Тух Азп АЬа Зех НЬз Ьеи СЬп Зег СЬу Уа1 Рго Зех Ахд РЬе Зех СЬу
50 55 60
Зех СЬу Зег СЬу ТЬх Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11а вех Зех Ьеи СЬп Рго
65 70 75 90
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬх Тух Тух Сув СЬп СЬп Уа1 ЬЬе СЬу Авр Рго УаЬ
85 90 95
ТЬх РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬх Ьуз ν&1 СЬи ЬЬе Ьув Ахд
100 105
<210 13 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 13
Азр ЬЬе СЬп 1 МеЬ ТЬх 5 СЬп Зег Рхо Зег Зег Ьеи Зег АЬа 10 Зег УаЬ СЬу 15
Авр Ахд УаЬ ТЬх Ив ТЬх Сув Агд АЬа Зег СЬп Зег Не Зег Зег Тух
20 25 30
- 55 012622
Ьеи Αβη Тгр 35 Туг С1п С1п Ьуз Рго 40 С1у Ьуз А1а Рго ТЬг Ьеи 45 Ьеи Не
Туг Агд Ьеи Вех Уа1 Ьеи С1п Зег е1у Уа1 Рго Вех Агд РЬе Зех С1у
50 55 60
Зег 61у Зех С1у ТЪг Азр РЬе ТЪг Ьеи ТЫ Не Зег Зег Ьеи Е1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЪг Туг Тух Суз С1п С1п ТЬг Туг Азп Уа1 Рго Рго
85 90 95
ТЫ РЬе 01у 01п С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Ахд
100 105
<210> 14 <211> 10Θ <212> БЕЛОК <213> Ношо зархепз <400> 14
Азр Не С1п МеЪ ТЪг С1п Вех Рго
1 5
Азр Ахд Уа1 ТЫ 20 Не ТЪх Суз Ахд
Ьеи Азп Тгр 35 Тух (31п С1п Ьуз Рго 40
Туг Агд 50 Азп Зех РЬе Ьеи С1п 55 Вех
Зег 65 (31у Зег С1у ТЫ Азр 70 РЬе ТЫ
(31 и Азр РЬе А1а ТЬг 85 Туг Тух Суз
ТЫ РЬе <31у (31п 100 С1у ТЪг Ьуз Уа1
Вех Зех 10 Ьеи Зег А1а Зех Уа1 15 С1у
А1а Зех С1п Зех Не Вех Вех Тух
25 30
С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
45
С1у Уа1 Рхо Вег Агд РЬе Вех С1у
60
Ьеи ТЫ Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
75 80
С1п <31п ТЬг Туг ТЬг Уа1 Рго Рхо
90 95
С1и Не Ьуз <31п
105
<210> 15 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Нолю зархепз <400> 15
Аар 11е С1п МеЪ ТЪг С11п Зег Рго
1 5
Азр Агд Уа1 ТЫ 20 11е ТЫ Суз Ахд
Ьеи Азп Тгр 35 Тух С1п С1п ьу© Рго 40
Туг Агд 50 Азп Зех С1п Ьеи С1п 55 Зех
Зех 65 С1у Зег С1у ТЪг Азр 70 РЬе ТЬх
С1и Азр РЬе А1а ТЬх 85 Туг Туг Суз
ТЬг РЬе С1у (31 п 100 С1у ТЬх Ьуз Уа1
Зег бег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 С1у
10
А1а Зех С1п Зех Не Вех Зег Туг
25 30
С1у Ьуз А1а Рхо Ьуз Ьеи Ьеи Не
45
С1у Уа1 Рхо Зег Ахд РЬе Зег 81у
60
Ьеи ТЪг Не Зех Вег Ьеи С1п Рхо
75 80
С1п С1п ТЬг РЬе А1а Уа1 Рго Рхо
90 95
С1и Т1е Ьуз Агд
105
<210> 16 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз
- 56 012622
<400> 16
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег СХу С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зех Ьеи Агд Ьеи Зех Суз АХа АХа Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Ьуз Тух
20 25 30
Тгр Мек Зех Тгр УаХ Агд СЯп АХа Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зех Зех Не Азр РЬе Мек СХу Рго Нхз ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз СХу Агд РЬе ТЬг 1Хе Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 60
Ьеи 61п Мек Азп Зех Ьеи Агд АХа С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Тух Суз
85 90 95
А1а Ьуз С1у Агд ТЬг Зег Мек 1>еи Рго Мек Ьуз С1у Ьуз РЬе Азр Тух
100 105 110
Тгр С1у С1п СХу ТЬг Ьеи УаХ ТЬг УаХ Зег Зег
115 120
<210> 17 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зарХепз <400> 17
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи СХи Зех СХу СХу СХу Ьеи УаХ С1п Рго С1у С1у
1 5 хо 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АХа АХа Зег СХу РЬе ТЬг РЬе Тух Азр Тух
20 25 30
Азп Мек Зег Тгр УаХ Агд СХп АХа Рго СХу Ьуз С1у Ьеи СХи Тгр УаХ
35 40 45
Зег ТЬх 11е ТЬг Нхз ТЬг СХу С1у УаХ ТЬг Тух Тух АХа Азр Зех УаХ
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зех Агд Азр Азп Зех Ьуз Азп ТЬг Ьеи Тух
65 70 75 80
Ьеи С1п Мек Азп Зег Ьеи Агд АХа СХи Азр ТЬг АХа УаХ Тух Туг Суз
35 90 95
А1а Ьуз С1п Азп Рго Зех Туг СХп РЬе Азр Тух Тгр СХу СХп С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг УаХ Зег Зег
115 <210> 18 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зарХепз <400> 18
СХи УаХ С1п Ьеи Ьеи С1и Зег СХу С1у СХу Ьеи УаХ С1п Рго С1у 61у
1 5 ХО 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а АХа Зех С1у РЬе ТЬг РЬе Нхз Агд Туг
20 25 30
Зег Мек Зег Тгр Уа1 Агд СХп АХа Рго СХу Ьуз СХу Ьеи СХи Тгр Уа1
35 40 45
Зех ТЬх Не Ьеи Рго С1у СХу Азр Уа1 ТЬг Туг Тух АХа Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз СХу Ахд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СХп Мек Азп Зег Ьеи Агд А1а СХи Азр ТЬг АХа УаХ Туг Тух Суз
85 90 95
- 57 012622
А1а Ьуз (з!п ТЬг Рго Азр Туг МеЬ РЬе Азр Туг Тгр С1у б!п 61у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа 1 ТЬг Уа1 Бег Зег
115
<210> 19 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз
<400> 19
<51 и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у Й1у <31у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг РЬе Тхр Ьуз Туг
20 25 30
Азп МеЬ А1а Тгр Уа1 Аьд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТЬг Не Ьеи С1у С1и С1у Азп Азп ТЬг Туг Туг А1а Авр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЫ 11е Зег Аьд Азр Азп Зег Ьуэ Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз ТЬг Μθΐ. Азр Туг Ьуз РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п <31у ТЬг Ьеи
100 105 110
ν&ι ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 20 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зараепз <400> 20
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 (51п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зет Суз ТЬг А1а Зег С1у РЪе ТЬг РЪе Аар С1и Туг
20 25 30
Азп МеЬ Зег Тгр Уа1 Агд <31п А1а Рго С1у Ьуз 61у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТЬх Не Ьеи Рго Н15 С1у Азр Агд ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ахд А1а С1и Азр ТЬг А1а ν&ι Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз С1п Азр Рго Ьеи Туг Агд РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЫ Уа1 Зег Зег
115 <210> 21 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното вар±епв
- 58 012622
<400> 21
С1и Уа1 СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Аар Ьеи Туг
20 25 30
Азр Мес Зег Тхр УаЬ Агд СЬп АЬа Рхо СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег Зег Не УаЬ Азп Зег СЬу УаЬ Агд ТЫ Тух Туг АЬа Аар Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Ахд РЬе ТЫ Не Зег Ахд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мес Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суа
85 90 95
А1а Ьуз Ьеи Азп С1п Зех Тух НЬз Тхр Азр РЬе Азр Тух Тгр СЬу СЬп
100 105 110
С1у ТЬх Ьеи УаЬ ТЫ УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 22 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 22
СЬи УаЬ С1п Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЫ РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Агд МеЬ Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег ТЬг Не Не Зех Азп СЬу Ьуз РЬе ТЫ Тух Тух АЬа Азр Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп МеЪ Аап Вег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Тух Туг Суз
85 90 95
АЬа Ьуз СЬп Аар Тгр МеЪ Туг МэЬ РЬе Азр Тух Тхр СЬу СЬп СЬу ТЫ
100 Ь05 1Ь0
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 23 <211> 35 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Консенсусная последовательность <221> САЙТ <222> (30) . . . (31) <223> Хаа = любая аминокислота <400> 23
СЬи УаЬ СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Вех Ьеи Ахд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Хаа Хаа Тух
20 25 30
- 59 012622
Азп Мер Зег <210> 24 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепв <400> 24
Адр Не 61п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зех А1а Зег Уа1 <31у
1 5 10 15
Адр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Сув Агд А1а Зег С1п Зех Не Зег Зег Тух
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг С1п С1п Ьув Рго С1у Ьув А1а Рго Ьув Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Агд Азп Зег Рго Ьеи С1п Зег 61у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег 61у
50 55 60
Зех О1у Зег е1у ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи <31 п Рхо
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Сув 61п С1п ТЬх Тух Агд Уа1 Рхо Рхо
85 90 95
ТЬг РЬе 61у С11 п С1у ТЬг Ьув Уа1 61и 11е Ьув Ахд
100 105
<210> 25
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Ното заргепз
<400> 25
Авр 11е (31п Мер ТЬг С1п вех Рхо Зег Бег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 Й1у
1 5 10 15
Азр Ахд Уа1 ТЬх Не ТЬг Суз Ахд А1а Зег С1п ΗΪ3 11е Εϊίε Агд С1и
20 25 30
Ьеи Агд Тгр Тух С1п С1п Ьуз Рго <31у Ьуз А1а Рхо Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Тух <31п А1а Зег Агд Ьеи С1п Зег О1у ν^ι Рго Зех Агд РЬе Зег <51у
50 55 60
Зех (31у Зег <31у ТЬг Азр РЬе ТЬх Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
<31и Авр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Ьуз Туг Ьеи Рго Рго Туг
85 90 95
ТЬх РЬе <51у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 01 и 11е Ьуз Ахд
100 105
<210> 26
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Ното зар!епв
<400> 26
Азр 11е С1п Мек ТЬх С1п Зех Рго Зех Зех Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Ахд Уа1 ТЬг Не ТЬг Сув Агд А1а Зег Й1п Н±з Не Н±з Ахд 01 и
20 25 30
Ьеи Ахд Тгр Тух С1п С1п Ьув Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
40 45
- 60 012622
Туг СЬп 50 АЬа Зех Агд Ьеи СЬп Зег С1у 55 УаЬ Рго Зег Агд РЬе 60 Зег СЬу
Вех СЬу Зег СЬу ТЬх Азр РЬе ТЬх Ьеи ТЬх 11е Зег Зех Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе А1а ТЬх Тух Туг Суз С1п СЬп Ахд Туг Ахд Уа1 Рго Туг
85 90 95
ТЬх РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Ахд
100 105
<210> 27 <211> 879 <212> ДНК <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>
<223> Колирует гибридный белок <400> 27 аддссЬХсЪд ддадааааХс садсаадаЪд саадссЪХса дааХсХддда ЬдХХаассад 60 аадассЪЬсЪ аЬсЪдаддаа саассаасЬа дЬЬдссддаЪ асХЬдсаадд ассаааЕдЬс 120 ааЪЪЪадаад аааадаЪада Хд'ХддЪассс аЪЬдадссЬс аЬдсЬсХдЬХ сХЬдддааЬс 180 саЪддаддда адаЪдЬдссЪ дЬссХдЬдЪс аадЪсЬддЬд аЬдадассад асЕссадсЬд 240 даддсадЪЬа асаЬсасЬда ссЪдадсдад аасадааадс аддасаадсд сЬЬсдссЬЬс 300 аЬссдсЬсад асадЪддссс сассассадЬ ЪЪЬдадЪсЪд ссдссЪдосс сддЫьддЬЪс 360 сЪсЬдсасад сдаХддаадс Ьдассадссс дЬсадссХса ссаа-ЬаХдсс Хдасдааддс 420 дЬсаЪддПса ссаааЬХсЬа сЬЬссаддад дасдададсХ саддХддадд сддЪХсаддс 480 ддаддЬддса дсддсддЪдд сдддХсаддЪ ддХддсддаа дсддсддЬдд сдддЬсдасд 540 дасаХссада ЬдаассадЪс ЪссаЬссЪсс сХдЪсЬдсаЬ сХдЬаддада ссдХдХсасс 600 аЬсасЬЬдсс дддсаадХса дадсаХХаХХ аадсаЫьЬаа адЬддХасса дсадааасса 660 дддааадссс сЪаадсХссЪ даЬсЬаХддЬ дсаЬсссддЬ ЪдсааадЬдд ддЪсссаЬса 720 сдЪЬХсадЪд дсадХддаЪс ЪдддасадаЪ ЬЪсасЬсЪса ссаЬсадсад ЪсЬдсаассЬ 780 даадаЬ-Ь-Ызд сЪасдЬас-Ьа сЛд-Ьсаасад ддддсХсддЬ ддссХсадас дЪЪсддссаа 840 дддассаадд ЪддаааЬсаа асдддсддсс дсаЬааЪаа 879 <2Ь0> 28 <211> 291 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<22 3> Гибридный белок
<400> 28
Агд Рхо Зех СЬу Ахд Ьуз Зех Зег Ьуз МаЬ СЬп АЬа РЬе Агд Не Тхр
1 5 10 15
Азр УаЬ Азп СЬп Ьуз ТЬх РЬе Тух Ьеи Ахд А$п Авп С1п Ьеи УаЬ АЬа
20 25 30
СЬу Тух Ьеи СЬп СЬу Рхо Азп Уа1 Азп Ьеи С1и СЬи Ьув 1Ье Авр УаЬ
35 40 45
УаЬ Рго 11е СЬи Рхо НЬе АЬа Ьеи РЬе Ьеи СЬу ЬЬе НЬз СЬу С1у Ьуз
50 55 60
МеЪ Сув Ьеи Зех Суз УаЬ Ьуз Зех СЬу Азр СЬи ТЬг Ахд Ьеи СЬп Ьеи
65 70 75 80
СЬи АЬа УаЬ Азп Не ТЬх Азр Ьеи Зех СЬи Азп Ахд Ьуз СЬп Авр Ьуз
35 90 95
Ахд РЬе АЬа РЬе Не Ахд Зех Азр Зех СЬу Рго ТЬх ТЬх Зех РЬе СЬи
100 105 1Ь0
Зех АЬа АЬа Суз Рхо СЬу Тхр РЬе Ьеи Суз ТЬх АЬа №£ СЬи АЬа Азр
1Ь5 120 125
- 61 012622
О1п Рго Уа1 Зег Ьеи ТЬг Азп МеЪ 135 Рго Азр 01и С1у 140 Уа1 Меб Уа1 ТЬг
130
Ьу5 РЬе Туг РЬе С1п С1и Азр С1и Зег Зег (51у 61у С1у С1у Зег 61у
145 150 155 160
С1у С1у С1у Зег С1у С1у С1у С1у Зег <31у С1у Й1у С1у Зег <31у С1у
165 170 175
С1у С1у Зег ТЬг Азр Не С1п Ме1 ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег
180 185 190
А1а Зег Уа1 С1у Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1ь Зег
195 200 205
Не 11е Ьуз Н13 Ьеи Ьуз Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго
210 215 220
Ьуз Ьеи Ьеи 11е Туг С1у А1а Зег Агд Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег
225 230 235 240
Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег
245 250 255
Зег Ьеи С1п Рго С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п 61у А1а
260 265 270
Агд Тгр Рго С1п ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд
275 280 285
А1а А1а А1а
290
<210> 29 <211> 879 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кодирует гибридный белок <400> 29 бсдасддаса СссадаЪдас ссадбсбсса Ъссбсссбдб сЪдсабсбдб аддадассдб 60 дбсассабса сЬЬдссдддс аадбсададс аЪЬаЪЪаадс аб'ЬЬааадЪд дбассадсад 120 ааассаддда аадссссЪаа дсЬссбдаЪс СаЬддЬдсаЬ сссддЪЪдса аадбддддбс 180 ссабсасдбб Ъсадбддсад ЬддаЬсбддд асадабббса сЬсбсассаб садсадбсЬд 240 саассЬдаад аЪЬЪЪдсЪас дбасбасЪдЪ саасаддддд сбсддбддсс ЪсадасдбЪс 300 ддссааддда ссааддЪдда ааЬсааасдд дсддссдсаа дсддЪддадд сддЬЬсаддс 360 ддаддЪддса дсддсддЬдд сдддЬсаддб ддбддсддаа дсддсддЬдд сддсЪсдадд 420 сссЬсЪддда даааабссад саадабдсаа дссНЬсадаа Ьсбдддабдб Ъаассадаад 480 ассЬЪсЪабс Ьдаддаасаа ссаасбадбб дссддаЬасЬ Ъдсааддасс ааабдЪсааЪ 540 ббадаадааа адаЬадаЬде ддбасссабб дадссЪсаед сЪсбдЪЪсЪГ дддаабссаЪ 600 ддадддаада ЬдЬдссЬдЬс сбдбдбсаад ЪсЬддЬдаЬд адассадасЪ ссадсЪддад 660 дсадббааса Ъсасбдассб дадсдадаас адааадсадд асаадсдсЬЬ сдссбЬсабс 720 сдсЬсадаса дЬддссссас сассадЬ'ЬЪЬ дадЪсбдссд ссЬдссссдд ЬЬдд-ЬЪссЬс 780 Ъдсасадсда Ъддаадсбда ссадсссдЬс адссбсасса абабдссЬда сдааддсдбс 840 арддрсасса ааЪбсбасСб ссаддаддас дадбаабаа 879 <210> 30 <211> 291 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гибридный белок <400> 30
Зег ТЬг Дер Не С1п МеЬ ТЬг εΐη Зег Рго Вез? Зег Ьеи Зег А1з Зег
1 5 10 15
ν3ι С1у Азр Агд νβΐ ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е Не
20 25 30
- 62 012622
Ьуз Н13 Ьеи Ьуз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи
35 40 45
Ьеи ХЬе 50 Тух СХу АЬа Зег Агд 55 Ьеи СЬп Зег СЬу УаЬ 60 Рго Зег Агд РЬе
Зег 65 СЬу Зег СЬу Зег СЬу 70 ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи 75 ТЬг 11е Зег Зег Ьеи 80
СЬп Рго СЬи Азр РЬе 85 АЬа ТЬг Туг Туг Суз 90 СЬп СЬп СЬу АЬа Агд 95 Тгр
Рго СХп ТЬг РЬе 100 СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз 105 УаЬ СЬи ХЬе Ьуз Агд 110 А1а АЬа
АЬа Зег СЬу 115 СХу СЬу СЬу Зех СЬу 120 СЬу СЬу СЬу Зег СЬу 125 СЬу С1у СЬу
Зег СЬу 130 СЬу СХу СХу Зег СХу 135 С1у СЬу СЬу Зех Агд 140 Рго Зег СЬу Агд
Ьуз 145 Зег Зег Ьуз Мек СЬп 150 А1а РЬе Агд Не Тгр 155 Азр УаХ Азп СЬп Ьуз 160
ТЬг РЬе Туг Ьеи Агд 165 Азп Азп СЬп Ьеи УаЬ 170 АЬа СЬу Туг Ьеи СЬп 175 СЬу
Рго Азп УаХ Азп 180 Ьеи СЬи СЬи Ьуз 11е 185 Азр УаЬ УаЬ Рго Не 190 СЬи Рго
НЬз АЬа Ьеи 195 РЬе Ьеи СЬу 11е НЬз 200 СЬу СЬу Ьуз Мек Суз 205 Ьеи Зег Суз
УаЬ Ьуз 210 Зег СХу Азр СЬи ТЬх 215 Агд Ьеи СЬп Ьеи СЬи 220 АЬа УаЬ Азп Не
ТЬг 225 Азр Ьеи Зег СЬи Азп 230 Агд Ьуз СЬп Азр Ьуз 235 Агд РЪе АЬа РЬе 11е 240
Агд Зег Азр Зег СХу 245 Рго ТЬг ТЬг Зег РЬе 250 С1и Зег АЬа АЬа Суз 255 Рго
СЬу Тгр РЬе Ьеи 260 Суз ТЬх А1а Мек СЬи 265 АЬа Азр СЬп Рго УаЬ 270 Зег Ьеи
ТЬг Азп Мек Рго Азр СХи СЬу УаЬ Мек УаЬ ТЬх Ьуз РЬе Туг РЬе СЬп
275 280 285
СЬи Азр СЬи
290 <210> 31 <211> 879 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Кодирует гибридный белок <400> 31 ксдаоддаса кссадакдас ссадкоксса каскссскдк окдсаЪскдк аддадассдк 60 дксассакса сккдссдддс аадксададс аккадсадск акккаааккд дкассадсад 120 ааассаддда аадсссскаа дсксокдако какдокдсак ссадкккдоа аадкддддко 180 ссаксасдкк ксадкддсад кддакскддд асадаЬккса сксксассак аадсадкскд 240 саасскдаад аккккдскао дкаскаскдк саасададкк асадЬасссс каакасдккс 300 ддссааддда осааддкдда ааксааасдд дсддссдсаа доддкддадд сддкксаддс 360 ддаддкддса дсддсддЬдд сдддксаддк ддкддсддаа дсддсддкдд сддсксдадд 420 соокскддда даааакосад саадакдсаа дсскксадаа кскдддакдк кааосадаад 480 ассккскаЪс кдаддаасаа ссааскадкк дссддакаск кдсааддасс ааакдкоаак 540 ккадаадааа адакадакдк ддкасссакк дадссксакд скскдккскк дддаакссак 600 ддадддаада кдкдсскдкс скдкдксаад кскддкдакд адассадаок ссадскддад 660 дсадккааса ксаокдасск дадсдадаао адааадсадд асаадсдскЪ сдоскксакс 720 сдсксадаса дкддсссоас сассадбккЬ дадкскдссд сскдссссдд ккддкксскс 780 кдоаоадсда кддаадскда ссадсссдбс адссксасса акакдсскда сдааддсдкс 840 акддксасса ааькскаакк ссаддаддас дадкаакаа 879 <210> 32 <211> 290 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гибридный белок
<400> 32
Зев 1 ТЬг Азр Не С1п 5 МеЕ ТЬг С1п Зег Рго 10 Зег Зех Ьеи Зех А1а 15 Зех
Уа1 С1у Азр Агд 20 Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз 25 Агд А1а Зег С1п Зех 30 Не Зег
8е- Туг Ьеи 35 Азп Тгр Туг С1п С1п 40 Ьуз Рго С1у Ьуз А1а 45 Рго Ьуз Ьеи
Ьеи Не 50 Туг А1а А1а Зег Зег 55 Ьеи Й1п Зег С1у Уа1 60 Рго Зех Агд РЬе
Зег 65 С1у Зег С1у Зег С1у 70 ТЬг Авр РЬе ТЬг Ьеи 75 ТЬг Не Зех Зех Ьеи 80
С1п Рго С1и Азр РЬе 95 А1а ТЬг Туг Тух Суз 90 αΐη С1п Зех Туг Зех 95 ТЬх
Рго Азп ТЬг С1у 100 С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 105 С1и Не Ьуз Ахд А1а 110 А1а А1а
Зег С1у С1у 115 С1у С1у Зег С1у С1у 120 С1у С1у Зег С1у С1у 125 С1у С1у Зег
<31у С1у 130 С1у С1у Зег С1у С1у 135 С1у С1у Зег Агд Рго 140 Зег С1у Ахд Ьуз
Зег 145 Зег Ьуз МеЕ С1п А1а 150 РЬе Агд Не Тгр Авр 155 Уа1 Азп С1п Ьуз ТЬх 160
РЬе Тух Ьеи Ахд Азп 165 Азп С1п Ьеи Уа1 А1а 170 С1у Тух Ьеи С1П С1у 175 Рхо
Авп Уа1 Азп Ьеи 180 С1и 61и Ьуз Не Азр 195 Уа1 Уа1 Рго Не С1и 190 Рхо Нхз
А1а Ьеи РЪе 195 Ьеи С1у 11е Ηίβ 61у 200 С1у Ьув МеЕ Сув Ьеи 205 Зех Суз Уа1
Ьуз Зег 210 С1у Азр С1и ТЬг Агд 215 Ьеи С1п Ьеи С1и А1а 220 Уа1 Азп Не ТЬх
Азр 225 Ьеи Зег С1и Азп Агд 230 Ьуз Б1п Азр Ьуз Агд 235 РЬе А1а РЬе Не Ахд 240
Зег Азр Зег С1у Рго 245 ТЬг ТЬг Зег РЬе С1и 250 Зег А1а А1а Суз Рхо 255 С1у
Тгр РЬе Ьеи Суз 260 ТЬг А1а МеЕ С1и А1а 265 Азр 51п Рго Уа1 Зех 270 Ьеи ТЬг
Азп МеЕ Рго 275 Азр О1и 01у Уа1 МеЕ 280 Уа1 ТЬг Ьуз РЬе Туг 285 РЬе Й1п С1и
Азр С1и
290 <210> 33 <211> 1760 <212> ДНК <213> Ното зархепз <400> 33 аЕЕЕсЕЕЕаЕ ааассасаас ЕсЕдддсссд сааЕддсадЕ ссасЕдссЕЕ дсЕдсадЕса 60 садааЕ.ддаа аЕсЕдсадад дссЕасдсад ЕсассЕааЕс асЕсЕссЕсс ЕсЕЕссЕдЕЬ 120 ссаЕЕсадад асдаЕсЕдсс дасссЕсЕдд дадааааЕсс адсаадаЕде аадссЕЕсад 180 ааЕсЕдддаЕ дЕЕаассада адассЕЕсЕа ЕсЕдаддаас аассаасЕад ЕЕдсЕддаЕа 240 сЕЕдсаадда ссаааЕдЕса аЕЕЕадаада ааадаЕадаЕ дЕддЕассса ЕЕдадссЕса 300
ЕдсЕсЕдЕЕс ЕЕдддааЕсс аЕддадддаа даЕдЕдссЕд ЕссЕдЕдЕса адЕсЕддЕда 360
Ьдадассада сЬссадсЕдд ддасаадсдс ЪЬсдсс+Ьса сдссЬдсссс ддЬЬддЬЬсс сааЬа'ЬдосЬ дасдааддод сЪдсссаддс сЬдссЬд-ЬЬс ссЬдссссад ддсЪсссддс садааддсдЬ сасаадаасс саЬдсЬдссЬ ссадааЬддЬ аадсссЬСсс аЬдЪсдссЬс сЪсс+сЪ-Ьдс сасЬдссЬсЬ дссае-ЬЬдаЬ дасссссаас садЬосаЬда дддаддЬЬЬЬ Ъ-ЬЬС-ЬЬЪ-Ьса дЬссссдЕда аддсЬдадда сЫ;ааааСаЪ ЬЬЬсссЬ+сЬ ЫуЬЬсСЬс·^ ЬасСа’ЬдЬЬа дссссаЬааЬ Ъс+дЪссадд сасЬдсЬдсс ЬдссЬдсадЬ асЬССассЪс ЬддсЬсс-Ьдд дддЬЬсЪЬЬс адсХ+сЬддс асЬЪддадас сдддсЬддда дсЬсЪдсада дссаадсасс ЬадссЬсдс'Ь ЬдсааадЫзс ссЬасЬЬссЬ с+аааааааа аааааааааа аддсад ЬЪаа ЬссдсЪсада ЬаЬдсасадс ЬсаЬддХсас ссаЬЕсЪЬдс ЬаЬдддддса ЪддЬсасадд сЬЬЕсЬааЬд ЬдсаЬЬсадд ЬссЬссскса саадЬддс+с ЪаадддЬЬЬд аддададссс Ьсс+дсаЬЬЬ ЬХЪ-ехдЬдаг ЬЬЪ-ЬЬЬЬЬЬа садссЪссаа сЬаСсадаад ЬЬссЬсЬдсЬ ЪЬдЬаЬдааа дсаддаааса сЬСддсаддС дЪдасЪЪсад саЬсасЬдас садсддсссс даЬддаадоЬ саааЬЬсЬас аЬддааадда с+даддасса асЬс+дсс+с ЬдЬдааЬсад аЬсааасссс ЪЪссасс'Ь'Ьс ссасассс+д ЬддааааЬда Ь-Ьса-Ь-ЬЬдда дЬдаааЬдаЬ д+сссаасЬЪ сЬЬЪЪаааас дсЬосаЬсЬо ЬЬЬсЪсадсЪ дааддааЕаа даЬддсЬдЪд ЬдасЬсдЬаЬ асЬсадсдаа сЪсЬдЬЪЕЕа сЪдадсдада ассассадЪЪ дассадсссд ГХссаддадд сЪдсадддас дсса-ЬЪдадд сЬсЬЬсаасЬ адсасадоад дассассЬдс ссаЪдсссЕд ЬЬЪЬасаааа аааЬЬаддаС даЬЬаЬдЬЬс ддХдааадЬа дЪаааааЬЬа асЬЬсааЬаа сасЬсеадаЬ сссааддсЬс а'ЬЬдсЬсс+Ь ссЬс+дссЪд а-ЬдЬсЬсадд Ь.дааЬдс'ЬдЬ сааЬаааа+с асадааадса ЬЪдадЪсЬдс ЬсадссЪсас асдад+ад+а ЬдссадЬссс ддЬддасссЬ дассадссЬс ссссЬдсаса ссаассСдсе даЬссаЪсад аадаааадао ЬЬоаЬдаЪЬЬ ЬЪ-Ьсддддад адХддХадсЬ ааадЪЬаЬдд ЪсЬддасЪсс ЬЪЕЬЬасадс ЬдадсаааЪд дасаЬЪдЬад •ЬсЪсссссас СоссЬдсадд а'ЬаЬдЬЬддд ΐЪдааааГде
420
480
540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1760 <210> 34 <211> 177 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 34
МеЬ 1 С1и 11а Суз Ахд 5 С1у Ъеи Ахд Зех ΗΪ3 10 Ъеи 11е ТЬг Ъеи Ъеи 15 Ьеи
РЬе Ьеи РЬе Нхз Зег 61и ТЬх 11е Сув Ахд Рхо Зех (31 у Агд Ьуз Зег
20 25 30
8 аг Ьуз Мех Θ1Π А1а РЬе Агд 11е Тгр Азр Уа1 Азп 61п Ьув ТЬх РЬе
35 40 45
ТУг Ьеи Ахд Азп Азп С1п Ьеи νβΐ А1а С1у Тух Ьеи С1п С1у Рхо Авп
50 55 60
Vа1 Азп Ьеи <31и С1и Ьуз 11е Аар Уа1 Уа1 Рхо Не С1и Рхо Н1з А1а
65 70 75 80
Ьеи РЬе Ьеи б1у 11а Н±в С1у Й1у Ьуз МеЬ Суз Ьеи Зех Суз Уа1 Ьуз
85 90 95
Бах С1у Авр С1и ТЬг Агд Ьеи С1п Ьеи Й1и А1а Уа1 Азп 11е ТЬг Азр
100 105 но
Ьеи Зег С1и Авп Ахд Ьув Й1п Азр Ьуз Агд РЬе А1а РЬе 11е Агд Зег
115 120 125
Аар Зех С1у Рхо ТЬх ТЬх Зех РЬе С1и Зег А1а А1а Суз Рхо С1у Тхр
130 135 140
РЬе Ьеи Сув ТЬг А1а МеЬ С1и А1а Азр Й1п Рхо Уа1 Зех Ьеи ТЬх Азп
145 150 155 160
Мех Рхо Авр С1и С1у νβΐ МеЬ νβΐ ТЬх Ьуз РЬе Тух РЬе С1п С1и Авр
165 170 175
С1и
<210> 35 <211> 73 <212> ДНК
- 65 012622 <213> Искусственная последовательность <22 0 >
<223> Сайт поликлонировааия <400> 35 дсдсаЪаЬдЪ ЬадЬдсдЬсд асдЪсаааад дссаЬадсдд дсддссдсЬд саддЬсЬсда 60 дЪдсдаЪдда Ъсс 73 <210> 36 <211> 92 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Сайт поликлонирования <400> 36 дсдса-ЬаЬдЪ Ъаадсдаддс сЬЪсЪддада дадсЬсадда дЪдЬсдасдд асаЪссадаЬ 60 дасссаддсд дссдсСааЬа адда-ЬссааЬ дс 92 <210> 37 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Нолю зархепз <400> 37
Азр Не <31п МеЬ ТЪг б1п бег Рго Зех Зег Ьеи Зег А1а Зег ν*1 (31у
5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг Не ТЪг Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е С1у Агд Ауд
20 25 30
Ьеи Ьуз Тхр Туг О1п С1П Ьуз Рхо С1у А1а А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Агд ТЪг Зег Тгр Ьеи (51 η Зег Б1у ν&ι Рго Зег Агд Рка Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЪг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 60
С1и Азр РЬе А1а ТЪг Туг Туг Суз Й1п С1п ТЬг Зег С1п Тгр Рго Нхэ
85 90 95
ТЬг РЬе Б1у С1п С1у ТЪг Ьуз ν&1 С1и 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 38 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепэ
<400> 38 Азр Не <51п МеЪ ТЪг 61п Зег Рхо Зех Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг Не ТЪг Суз Агд А1а Зег С1п Ьуз Не Туг Ьуз Азп
20 25 30
Ьеи Агд Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Азп Зег Зег 11 в Ьеи С1п Зег С1у νΒ1 Рго Зег Агд РЬе Зег Б1у
50 55 60
Зег С1у Зег <51у И1г Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг На 5аг Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
- 66 012622
С1и Аар РЬе А1а ТНг Туг Туг Суз С1п О1п Агд Туг Ьеи Зег Рго Туг
85 90 95
ТЬх РЬе С1у С1п <31 у ТНг Ьуз ν&1 С1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 39 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното аар£епз <400> 39
Аар 1 Не С1п Ме-Ь ТЬх 5 С1п Зег Рго Зег Зег Ьеи 10 Зег А1а Зег Уа1 15 С1у
Азр Агд Уа1 ТЬх 11е ТЬх Суз Агд А1а Зег* С1п Ьуз Не Туг Азп Азп
20 25 30
Ьеи Ахд Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Азп ТЬх Зег Не Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬх Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬх Не Зег Зег Ьеи Й1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬх Туг Туг Суз С1п С1п Агд Тгр Агд А1а Рго Туг
85 90 95
ТЬх РЬе С1у С1п Е1у ТЬх Ьув Уа1 С1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 40 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното аархепз
<400> 40
Азр Не С1п МеЬ ТЬх <31 п Зех Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зех Уа1 С1у
1 5 10 15
Аар Агд Уа1 ТЬх Не ТЬх Суз Агд А1а Зег С1п Тгр 11е Тух Ьуа Зех
20 25 30
Ьеи С1у Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рхо С1у Ьуз А1а Рхо Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг С1п Зег Зех Ьеи Ьеи 51п Зег С1у Уа1 Рхо Зех Агд РЬе Зех Й1у
50 55 60
Зег О1у Зег б1у ТЬх Аар РЬе ТЬх Ьеи ТЬх Не Зег Зех Ьеи С1п Рхо
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬх Туг Тух Суа С1п С1п Тух Н1з С1п МеЕ Рхо Ахд
85 90 95
ТЬх РЬе С1у С1п С1у ТЬх Ьуз Уа1 С1и Не Ьуа Агд
100 105
<210> 41 <211> 109 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 41
Азр 11е С1п МеЬ ТЬх О1п Зех Рхо Зех Зех Ьеи Зег А1а Зех Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Ахд Уа1 ТЬх Не ТЪг* Суз Ахд А1а Зех С1п Тгр Не Туг Ахд
20 25 30
- 67 012622
Ьеи Агд Тгр 35 Туг ст С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
40 45
Туг Аар А1а Зег Агд Ьеи С1п Зег С1у Уа1 Рго ТЬг Ахд РЪе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Бег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи ст Рго
65 70 75 30
С1и Аар РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз ст С1п ТЬг Нха Азп Рго Рго Ьуз
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Ьуз Уа1 ст Не Ьуз Агд
100 105
<210> 42 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз <400> 42
ст ν&ι ст Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 ст Рго С1у 01у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Тгр Рго Туг
20 25 30
ТЬх МеЬ Зег Тгр νβΐ Агд ст А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТЬг Не Зег Рго РЬе С1у Зег ТЬх ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи ст МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Авр ТЫ А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз С1у С1у Ьуз Азр РЬе Азр Туг Тгр С1у ст С1у ТЬх Ьеи Уа1
100 105 но
ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 43 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепа <400> 43
ст Уа1 ст 1 Ьеи Ьеи 5 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 10 ст Рго С1у 15 С1у
Зех Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЫ РЬе Тгр Рго Тух
20 25 30
ТЬх Иек Зег Тгр Уа1 Агд ст А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТЬг Не Зег Рю РЬе С1у Зег ТЬг ТЫ Туг Туг А1а Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуа С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зех Ьуа Аап ТЬг Ьеи Тух
65 70 75 80
Ьеи С1п Мек Аяп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз С1у Азп Ьеи С1и Рго РЬе Азр Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи
100 105 110
ν®ι ТЬх Уа1 5ег Зех
115
- 68 012622 <210> 44 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Нолю эархепз <400> 44
б1и 1 Уа1 С1п Ьеи Ьеи 5 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Тгр Рго Туг
20 25 30
ТЬг МеЪ Вег Тгр ν&1 Агд С1п А1а Рго <31у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег ТЬг Не Зег Рго РЬе С1у Зег ТЬг ТЬх Туг Туг А1а. Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Пе Зег Агд Азр Азп Зег* Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Ьуз Ьеи Зег Азп С1у РЬе Авр Туг Тхр С1у С1п О1у ТЬг Ьеи
100 105 110
ΥηΙ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 45 <211> 11В <212> БЕЛОК <213> Ното зар±епз <400> 45
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег 01у С1у С1у
1 5 10
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у
20 25
ТЬг МеЪ Вег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у
35 40
Зег ТЬг Не Зег Рго РЬе С1у Зег ТЬг ТЬг
50 55
Ьуз С1у Ахд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп
65 70
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Азр
85 90
А1а Ьуз Уа1 Уа1 Ьуз Азр Азп ТЬг РЬе Азр
100 105
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
Ьеи Уа1 С1п Рго С1у 15 С1у
РЬе ТЬг РЬе Тгр 30 Рго Туг
Ьуз С1у Ьеи 45 С1и Тгр Уа1
Туг Туг 60 А1а Азр Вег ν31
Зег 75 Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
ТЬг А1а ν31 Туг Тух 95 Суз
Туг Тгр С1у С1п но С1у ТЬг
<210> 46
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Ното зар1еьз
<400> 46
01и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 01 у РЬе ТЬг РЬе Тгр Рго Туг
20 25 30
ТЬг МеЬ Зех Тгр Уа1 Агд 01 п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1
40 45
- 69 012622
Зег ТЪг 50 11е Зег Рго РЬе С1у Зег 55
Ьуз С1у Агд РЬе ТЪг 11е Зег Агд
65 70
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а
85
А1а Ьуз Азп ТЬг с1у С1у Ьуз С1п
100
Ьеи νπΐ ТЪг Уа1 Зег Зег
115
ТЬг ТЬг Туг Туг А1а Азр Зех Уа1
60
Азр Азп Зех Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
75 80
С1и Азр ТЬх А1а νβΐ Туг Туг Суз
90 95
РЬе Азр Тух Тгр Е1у С1п С1у ТЬх
105 110
<210> 47 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 47
С1и Уа1 <31п Ьеи Ьеи Й1и Зег С1у 61у 61у Ьеи Уа1 С1п Рго 61у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зех Суз А1а А1а Зех С1у РЬе ТЬг РЬе Тгр Рхо Туг
20 25 30
ТЬг МеХ Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи Й1и Тхр Уа1
35 40 45
Зег ТЬг 11е Зег Рго РЬе С1у Зег ТЬг ТЬх Тух Тух А1а Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬх Не Зех Агд Азр Азп Зех Ьуз Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЪ Азп Зех Ьеи Агд А1а С1и Азр ТЬх А1а Уа1 Тух Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз Ьуз ТЬг С1у Рго Зех Зег РЬе Азр Туг Тгр С1у Й1п О1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЫ Уа1 Зег Зег
115
<210> 48 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепв <400> 48
Й1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зех Й1у Й1у Й1у Ьеи Уа1 С1п Рхо С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зег Сув А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Тгр Рхо Тух
20 25 30
ТЬх МеЬ Зег Тхр Уа1 Ахд Й1п А1а Рхо С1у Ьуз С1у Ьеи 61и Тхр Уа1
35 40 45
Зег ТЬх Не Зег Рго РЬе Й1у Зег ТЬх ТЬг Тух Тух А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬх 11е Зех Ахд Авр Азп Зех Ьуз Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи Й1п Мек Азп Зег Ьеи Ахд А1а Й1и Авр ТЬх А1а Уа1 Тух Тух Суз
85 90 95
А1а Ьуз Агд ТЬх С1и Азп Ахд С1у Уа1 Зех РЬе Авр Тух Тхр Й1у 61п
100 105 110
С1у ТЬх Ьеи Уа1 ТЬг ν^ι Зег Зех
115 120
- 70 012622 <210> 49 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 49
С1и УаЬ СЬп Ьеи Ьеи СЬи Бег С1у СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 Ь5
Зег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Тгр Рго Туг
20 25 30
ТЬх МеЬ 8ег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Бег ТЬх Пе Зег Рго РЬе СЬу Зег ТЬг ТЬг Туг Туг АЬа Аар Бег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мер Азп Бег Ьеи Агд АЬа СЬи Аар ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Ьуз Бег Азр УаЬ Ьеи Ьув ТЬг СЬу Ьеи Азр СЬу РЬе Азр Туг Тгр
100 105 110
СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг· УаЬ Бег Зег
115 120
<210> 50 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното аархепз <400> 50
СЬи УаЬ СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зег еьу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рхо СЬу СЬу
1 5 10 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе МеЬ АЬа Тух
20 25 30
СЬп МеЬ АЬа Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег ТЬх Не ΗΪ3 СЬп ТЬх СЬу РЬе Зег ТЬг Туг Туг АЬа Азр Бег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг ЬЬе Зег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп МеЬ Азп Бег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Тух Туг Суз
85 90 95
АЬа Ьуз УаЬ Агд зег МеЬ Агд Рго Туг Ьуз РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп
100 Ь05 1Ь0
СЬу ТЬх Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Бег
115 120
<210> 51 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепа <400> 51
С1и Уа1 О1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у
1 5
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа А1а
20
Азр МеЪ ТЬг Тгр Уа! Агд СЬп А1а
35 40
СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
10 15
Зег 25 СЬу РЬе ТЬх РЬе Ьуз 30 Азр Тух
Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи 45 СЬи Тгр УаЬ
Зег МеЪ 11е Зег Зег Зег СЬу Ьеи Тгр ТЬг Туг Туг АЬа Авр Зех УаЬ
50 55 60
Ьуз еьу Ахд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Зех Ьуз Азп ТЬг Ьеи Тух
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Ьуз СЬу РЬе Агд Ьеи РЬе Рго Ахд ТЬг РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп
100 105 110
СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 52 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз
<400> 52
С1и УаЬ СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зех СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рхо СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зех СЬу РЬе ТЬх РЬе НЬз Азр Тух
20 25 30
Уа1 МеЬ СЬу Тхр АЬа Ахд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег Ьеи Не Ьуз Рго Авп СЬу Зех Рго ТЬг Тух Тух АЬа Авр Зех УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Ахд РЬе ТЬг ЬЬе Зех Ахд Азр Азп Зех Ьуз Азп ТЬг Ьеи Тух
65 70 75 80
Ьеи СЬп МеЬ Азп Зег Ьеи Агд АЬа СЬи Азр ТЬх АЬа УаЬ Тух Туг Суз
85 90 95
А1а Ьуз СЬу Ахд СЬу Агд РЬе Азп УаЬ Ьеи СЬп РЬе Азр Тух Тгр СЬу
100 105 но
С1п СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬх УаЬ Зех Зег
115 120
<210> 53 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 53
СЬи УаЬ 1 СЬп Ьеи Ьеи СЬи Зех 5 С1у
Зех Ьеи Ахд Ьеи 20 Зег Суз ТЬг А1а
Агд Мек СЬу 35 Тхр Уа1 Агд СЬп А1а 40
Зех Тгр 50 ЬЬе Агд Рго Авр С1У 55 ТЬг
Ьуз 65 С1у Ахд РЬе ТЪг ЬЬе 70 Зех Агд
Ьеи 61п МеЬ Азп Зех 05 Ьеи Агд А1а
АЬа Ьуз Зех Тух 100 Мек СЬу Азр Агд
Ьеи УаЬ ТЬх УаЬ Зег Зег
115
СЬу СЬу 10 Ьеи УаЬ С1п Рго <31у 15 СЬу
Зех 25 СЬу РЬе ТЬх РЬе Агд 30 ΗΪ5 Тух
Рго СЬу Ьув СЬу Ьеи 45 С1и Тгр УаЬ
РЬе ТЬг Туг Тух 60 А1а Аар Зег УаЬ
Азр Азп Зех 75 Ьуз Азп ТЬх Ьеи Тух 80
СЬи Авр 90 ТЬг АЬа ν&ι Туг Туг 95 Суз
РЬе 105 Азр Туг Тгр С1у С1 п 110 С1у ТЬг
- 72 012622 <210> 54 <211> 116 <212> БЕЛОК <213> Ното зархепз <400> 54
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи С1и Зег С1у С1у Е1у Ьеи Уа1 С1п Рго Й1у <31у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зех Суз А1а А1а Зех С1у РЬе ТЬг РЬе МеЬ Тхр Азр
20 25 30
Ьуз МеС (31у Тхр Уа1 Ахд 61п А1а Рго С1у Ьуз Й1у Ьеи Й1и Тхр Уа1
35 40 45
Зех РЬе 11е С1у Ахд С1и С1у Тух С1у ТЬх Тух Туг А1а Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Ахд РЬе ТЬх 11е Зех Агд Аар Азп Зех Ьуз Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МаЬ Азп Зех Ьеи Ахд А1а С1и Азр ТЬх А1а Уа1 Туг Тух Суз
85 90 95
А1а Ьуз Зег Уа1 А1а Зех РЬе Аар Тух Тхр О1у С1п С1у ТЬх Ьеи Уа1
100 105 но
ТЬх Уа1 Зех Зег
115
<210> 55 <211> 117 <212> БЕЛОК <213> Ното аархепз <400> 55
С1и Уа1 С1п Ьеи Ьеи <31и Зех С1у С1у С1у Ьеи Уа1 Й1п Рго Й1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зех Суе А1а А1а Зех С1у РЬе ТЬх РЬе Тхр А1а Туг
20 25 30
Рхо МеЬ Зех Тхр Уа1 Ахд σΐη А1а Рхо С1у Ьуз С1у Ьеи Е1и Тгр Уа1
35 40 45
Зех Зех Не Зех Зех Тхр С1у ТЬг С1у ТЬх Тух Тух А1а Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Ахд РЬе ТЬх Не Зех Агд Азр Азп Зех Ьуа Азп ТЬх Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеС Азп Зег Ьеи Агд А1а 61и Азр ТЬх А1а Уа1 Тух Тух Суэ
85 90 95
А1а Ьуз С1у С1у С1п <31у Зег РЬе Азр Тух Тгр 51у <31п 51у ТЬх Ьеи
100 105 110
Уа1 ТЬх ν&1 Зег Зег
115 <210> 56 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Связывает рецептор 11-1 типа 1 человека <400> 56
РЬе 61ч Тхр ТЬх Рхо С1у Тух Тхр С1п Рхо Тух А1а Ьеи Рхо Ьеи 15 10 15
- 73 012622 <210> 57 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Связывает рецептор 1Ь-1 типа 1 человека <221> САЙТ <222> 10 <223> Хаа = 1-аВетидии-2-карбоновая кислота <400> 57
РЬе 61и Тгр ТЬх Рхо 61у Тух Тхр 61ь Хаа Тух А1а Ьеи Рхо Ьеи
1 5 10 15
<210> 59
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Не и&вестно
<220>
<223> Связывает рецептор 1Ь-1 типа 1 человека
<221> САЙТ
<222> 10
<223> Хаа β 1-азетидин-2-карбоновая кислота
<400> 59
РЬе С1и Тхр ТЬх Рхо 61у Тух Тхр 61п Хаа Тух
10 <210> 59 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Связывает рецептор 1Ь-1 типа 1 человека <221> САЙТ <222> 10 <223> Хаа = 1-азетидин-2-карбоновая кислота <400> 59
РЬе 61и Тгр ТЬг Рго 61у Тхр Тух С1п Хаа Туг 15 10 <210> 60 <211> 292 <212> БЕЛОК <213> Заропахаа οΓ£ϊοϊμ1ϊ3 <400> 60
МеЬ Ьув 11е Тух Уа1 Уа1 А1а ТЬх Т1е А1а Тгр Не Ьеи Ьеи 61 η РЬе 15 10 15
Зех А1а Тхр ТЬх ТЬх ТЬх Авр А1а Уа1 ТЬг Зег Не ТЬх Ьеи Азр Ьеи 20 25 30
- 74 012622
Уа1 Азп Рхо 35 ТЬх А1а С1у С1п Туг Зех Зег РЬе УаЬ Азр Ьуз Не Ахд
40 45
Азп Азп Уа1 Ьуз Азр Рго Азп Ьеи Ьуз Тух С1у С1у ТЬг Азр Не А1а
50 55 60
Уа1 11е СЬу Рго Рго Зег Ьуз Азр Ьуз РЬе Ьеи Ахд Не Азп РЬе С1п
65 70 75 80
Зег Зег Ахд С1у ТЬх УаЬ Зег Ьеи С1у Ьеи Ьуз Ахд Азр Азп Ьеи Тух
85 90 95
Уа1 Уа1 А1а Тух Ьеи АЬа МеЬ Азр Азп ТЬх Азп УаЬ Азп Ахд АЬа Тух
100 105 но
Тух РЬе Ьуз Зех С1и 1Ье ТЬх Зех А1а СЬи Ьеи ТЬх АЬа Ьеи РЬе Рго
115 120 125
С1и А1а ТЬг ТЬг АЬа Азп е1п Ьуз АЬа Ьеи СЬи Туг ТЬг СЬи Азр Тух
130 135 140
С1п Зег Не С1и Ьуз Азп АЬа СЬп 11е ТЬх СЬп СЬу Азр Ьуз Зех Ахд
145 150 155 160
Ьуз 61 и Ьеи С1у Ьеи СЬу Не Азр Ьеи Ьеи Ьеи ТЬх РЬе МеЬ С1и АЬа
165 170 175
Уа1 Азп Ьуз Ьуз АЬа Агд УаЬ УаЬ Ьуз Азп СЬи АЬа Агд РЬе Ьеи Ьеи
180 185 190
Не А1а Не С1п МеЬ ТЬг АЬа С1и Уа1 АЬа Ахд РЬе Ахд Тух Не С1п
195 200 205
Азп Ьеи Уа1 ТЬх Ьуз Азп РЬе Рго Азп Ьуз РЬе Азр Зег Азр Азп Ьуз
210 215 220
Уа1 Не СЬп РЬе СЬи Уа1 Зех Тхр Ахд Ьуз Не Зех ТЬх АЬа 11а Тух
225 230 235 240
О1у Азр АЬа Ьуз Азп СЬу Уаь РЬе Азп Ьуз Азр Тух Азр РЬе С1у РЬе
245 250 255
С1у Ьуз УаЬ Агд СЬп Уа1 Ьуз Азр Ьеи С1п МеЬ СЬу Ьеи Ьеи МеЬ Тух
260 265 270
Ьеи αίγ Ьув ΡχΌ Ьув Зег Д§п СЬи А1а Азп Яаг ТЬх' А1а Тух А1а
275 280 285
ТЬх ТЬх УаЬ Ьеи
290
<210> 61 <211> 236 <212> БЕЛОК <213> Заропагаа о£Т±с±па1хз <400> 61
Азр Рхо Азп Ьеи Ьуз Тух С1у С1у ТЬг Азр 11е АЬа νβΐ 11е СЬу Рго
1 5 10 15
Рго Зег Ахд Азр Ьув РЬе Ьеи Ахд Ьеи Азп РЬе СЬп Зег Зег Агд С1у
20 25 30
ТЬх Уа1 Зех Ьеи Й1у Ьеи Ьуз Ахд СЬи Азп Ьеи Туг Уа1 Уа1 А1а Туг
35 40 45
Ьеи АЬа МеЬ Азр Азп АЬа Азп Уа1 Азп Агд АЬа Тух Туг РЬе С1у ТЬг
50 55 60
С1и Не ТЬх Зех АЬа В1и Ьеи ТЬг ТЬг Ьеи Ьеи Рго СЬи АЬа ТЬг УаЬ
65 70 75 80
АЬа Азп С1п Ьуз АЬа Ьеи С1и Тух ТЬх СЬи Азр Тух С1п Зег Не С1и
85 90 95
Ьув Азп АЬа Ьуз Не ТЬг СЬи СЬу Азр Ьуз ТЬг Агд Ьуз СЬи Ьеи С1у
100 105 110
Ьеи С1у Не Азп Ьеи Ьеи Зех ТЬх Ьеи МеЬ Азр АЬа Уа1 Авп Ьуз Ьуз
115 120 125
АЬа Ахд УаЬ Уа1 Ьуз Азп С1и АЬа Ахд РЬе Ьеи Ьеи Не АЬа 11е СЬп
130 135 140
- 75 012622
МеЬ ТЬх А1а С1и А1а А1а Агд РЬе Агд Туг Не С1п Азп Ьеи Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Ьуз Азп РНе Рго Азп. Ьуз РЬе Азп Зег О1и Азр Ьуз Уа1 11е О1п РЬе
165 170 175
С1п Уа1 Азп Тгр Зег Ьуз 11е Зех Бу® А1а 11е Тух С1у Азр А1а Ьуз
180 185 190
Азп е1у Уа1 РЬе Азп Ьуз Азр Туг Аар РЬе <31у РЬе 01 у Ьуз Уа1 Ахд
195 200 205
С1п Уа1 Ьуз Азр Ьеи С1п МеЬ С1у Ьеи Ьеи МеЬ Туг Ьеи С1у ТЬх ТЬх
210 215 220
Рго Азп Азп А! а А1а Азр Агд Тух Агд А1а С1и Ьеи
225 230 235
<210> 62 <211> 157 <212> БЕЛОК <213> Заропахха о££1с±па11з <400> 62
МеЬ Ьуз 1 11е Тух Уа1 5 Уа1 А1а ТЬх 11е А1а Тгр 10 11е Ьеи Ьеи (51 п РЬе 15
Зех А1а Тгр ТЬх ТЬх ТЬх Азр А1а Уа! ТЬх Зех 11е ТЬг Ьеи Азр Ьеи
20 25 30
Уа1 Азп Рхо ТЬх А1а С1у <31п Тух Зех Зех РЬе Уа1 Азр Ьуз Не Агд
35 40 45
Азп Азп Уа1 Ьуз Азр Рхо Азп Ьеи Ьуз Тух С1у С1у ТЬх Азр 11е А1а
50 55 60
Уа1 Не С1у Рхо Рго Зех Ьуз С1у Ьуз РЬе Ьеи Ахд Не Азп РЬе Й1п
65 70 75 80
Зех Зех Ахд <31у ТЬх Уа1 Зег Ьеи С1у Ьеи Ьуз Ахд Азр Азп Ьеи Туг
65 90 95
Уа! Уа1 А1а Тух Ьеи А1а МеЪ Азр Азп ТЬх Азп Уа1 Азп Агд А1а Туг
100 105 110
Тух РЬе Ахд Зех С1и Не ТЬх Зех А1а С1и Ьеи ТЬх А1а Ьеи РЬе Рхо
115 120 125
С1и А1а ТЬх ТЬх А1а Азп С1п Ьуз А1а Ьеи С1и Туг ТЬх С1и Азр Туг
130 135 140
С1п Зех Не С1и Ьуз Азп А1а 61п Не ТЬх С1п С1и Азр
145 150 155
<210> 63 <211> 253 <212> БЕЛОК <213> Заропахга о££±о1па!1з <400> 63
Уа1 1 ТНг Зех Не ТНг Ьеи Азр Ьеи Уа! Азп Рго ТЬх А1а С1у С1п 15 Тух
5 10
Зех Зег РЬе Уа1 Азр Ьуз Не Ахд Азп Азп Уа1 Ьуз Азр Рго Азп Ьеи
20 25 30
Ьуз Туг е1у С1у ТНг Азр Не А1а Уа! Не 61у Рхо Рхо Зег Ьуз С1и
35 40 45
Ьуз РЬе Ьеи Агд Не Азп РЬе С1п Зех Зег Агд С1у ТЬг Уа! Зех Ьеи
50 55 60
С1у Ьеи Ьуз Агд Азр Азп Ьеи Туг Уа1 Уа! А1а Тух Ьеи А1а МеЬ Азр
65 70 75 80
Азп ТЬх Азп Уа! Азп Агд А1а Тух Туг РЬе Агд Зег С1и 11е ТЬх Зег
90 95
- 76 012622
А1а С1и Ьеи ТЬг А1а Ьеи ?ке Рго С1и А1а 105 ТЬг ТЬг А1а Азп 110 61п Ьуз
100
А1а Ьеи С1и Тух ТЬх С1и Азр Тух 61п Зех Х1е 01и Ьуз Азп А1а С1п
115 120 125
Не ТЬг 61 п Й1у Азр Ьуз Зег Агд Ьуз С1и Ьеи 61у Ьеи СИу Не Азр
130 135 140
Ьеи Ьеи Ьеи ТЬх Зег МеЬ С1и А1а Уа1 Азп Ьуз Ьуз А1а Агд Уа1 Уа1
145 150 155 160
Ьуз Азп С1и А1а Агд РЬе Ьеи Ьеи 11е А1а Не С1п МеЬ ТЬг А1а С1и
165 170 175
Уа1 А1а Ахд РЬе Агд Туг 11е С1п Азп Ьеи Уа1 ТЬх Ьуз Азп РЬе Рго
130 185 190
Азп Ьуз РЬе Азр Зех Азр Азп Ьуз Уа1 Не С1п РЬе СНи Уа1 Зег Тгр
195 200 205
Агд Ьуз 11е Зех ТЬг А1а Не Тух С1у Азр А1а Ьуз Азп Й1у Уа1 РЬе
210 215 220
Азп Ьуз Азр Тух Азр РЬе 61у РЬе С1у Ьуз Уа1 Агд С1п Уа1 Ьуз Азр
225 230 235 240
Ьеи С1п МеЬ С1у Ьеи Ьеи МеЬ Туг Ьеи С1у Ьуз Рго Ьуз
245 250
<210> 64 <211> 299 <212> БЕЛОК <213> Заропахга о££хохпа1хз <400> 64
МеЪ Ьуз 1 Не Тух Уа1 Уа1 А1а ТЬх 11а А1а 10 Тгр Зег Не Ьеи Ьеи С1п 15 Азр РЬе Ьеи
Тгр 5 ТЬх ТЬг 20 ТЬг Авр А1а
Зех А1а Уа1 25 ТЬх Не ТЬг Ьеи 30
Уа1 Азп Рго ТЬг А1а С1у &1п Тух Зех Зех РЬе Уа1 Азр Ьуз Не Ахд
35 40 45
Азп Азп Уа1 Ьуз Азр Рхо Азп Ьеи Ьуз Тух ету <31у ТЬг Азр Не А1а
50 55 60
Уа1 Не <31у Рго Рго Зех Ьуз С1и Ьуз РЬе Ьеи Ахд Не Азп РЬе 61п
65 70 75 80
Зех Зег Агд С1у ТЬх Уа1 Зех Ьеи СИу Ьеи Ьуз Агд Азр Азп Ьеи Тух
85 90 95
Уа1 Уа1 А1а Туг Ьеи А1а МеЬ Азр Азп ТЬх Азп Уа1 Азп Ахд А1а Тух
100 105 110
Тух РЬе Ахд Зег С1и Не ТЬх Зех А1а С1и Зех ТЬх А1а Ьеи РЬе Рхо
115 120 125
С1и А1а ТЬг ТЬг А1а Азп Й1п Ьуз А1а Ьеи С1и Тух ТЬх <Э1и Азр Туг
130 135 140
С1п Зег Не С1и Ьуз Азп А1а Б1п Не ТЬх С1п С1у Азр СНп Зех Ахд
145 150 155 160
Ьуз С1и Ьеи С1у Ьеи С1у 11а Азр Ьеи Ьеи Зех ТЬг Зег МаЬ С1и А1а
165 170 175
Уа1 Азп Ьуз Ьуз А1а Ахд Уа1 Уа1 Ьуз Азр <31 и А1а Ахд РЬе Ьеи Ьаи
180 185 190
Не А1а Не 61п МеЬ ТЬх А1а Й1и А1а А1а Ахд РЬе Ахд Тух Не С1п
195 200 205
Азп Ьеи Уа1 Не Ьуз Азп РЬе Рго Азп Ьуз РЬе Азп Зег С1и Азп Ьуз
210 215 220
Уа1 Не С1п РЬе Й1и Уа1 Азп Тгр Ьуз Ьуз Не Зех ТЬх А1а 11е Тух
225 230 235 240
С1у Азр А1а Ьуз Азп С1у Уа1 РЬе Азп Ьуз Азр Туг Азр РЬе С1у РЬе
245 250 255
- 77 012622
СЬу Ьуз УаЬ Агд С1п Уа1 Ьуз Авр Ьеи С1п МеЪ СЬу Ьеи Ьеи Мек Тух
260 265 270
Ьеи СЬу Буе Рго Ьуз Зег Зег Азп СЬи АЬа Азп Зег ТЬх УаЬ Ахд НЬз
275 280 285
Туг СЬу Рхо Ьеи Ьуз Рго ТЬх Ьеи Ьеи ЬЬе ТНх
290 295 <210> 65 <211> 254 <212> БЕЛОК <213> Заропагха о££хс±паЬхз <400> 65
АЬа 1 УаЬ ТЬх Зег Не 5 ТЬх Ьеи Азр Ьеи УаЬ 10 Азп Рго ТЬх АЬа СЬу 15 СЬп
Тух Зех Зех РЬе УаЬ Азр Ьуз Не Ахд Азп Азп УаЬ Ьуз Азр Рго Азп
20 25 30
Ьеи Ьуз Тух СЬу СЬу ТЬх Азр Не АЬа УаЬ ЬЬе СЬу Рхо Рхо Зех Ьуз
35 40 45
СЬи Ьуз РНе Ьеи Ахд ЬЬе Азп РЬе СЬп Зег Зег Ахд СЬу ТЬх УаЬ Зех
50 55 60
Ьеи СЬу Ьеи Ьуз Агд Азр Азп Ьеи Тух УаЬ УаЬ АЬа Тух Ьеи АЬа МеЬ
65 70 75 80
Азр Азп ТЬх Азп УаЬ Азп Агд АЬа Туг Тух РЬе Ахд Зех СЬи ЬЬе ТЬх
85 90 95
Зех АЬа СЬи Зех ТЬх АЬа Ьеи РЬе Рхо СЬи АЬа ТЬх ТЬх АЬа Азп СЬп
ьоо 105 1Ь0
Ьуз АЬа Ьеи СЬи Туг ТЬх СЬи Азр Туг СЬп Зех ЬЬе СЬи Ьуз Азп АЬа
115 120 125
СЬп ГЬе ТЬх СЬп СЬу Азр СЬп Зех Ахд Ьуз СЬи Ьеи СЬу Ьеи СЬу ЬЬе
130 135 Ь40
Азр Ьеи Ьеи Зех ТЬх Зех Ме£ СЬи АЬа УаЬ Азп Ьуз Ьуз АЬа Агд УаЬ
Ь45 150 155 ЬбО
УаЬ Ьуз Азр СЬи АЬа Агд РЬе Ьеи Ьеи ЬЬе АЬа ЬЬе СЬп МеЬ ТЬх АЬа
165 170 Ь75
СЬи АЬа АЬа Ахд РЬе Ахд Туг ЬЬе СЬп Азп Ьеи УаЬ ЬЬе Ьуз Азп РЬе
180 185 190
Рго Азп Ьуз РЬе Азп Зег СЬи Азп Ьуз УаЬ ЬЬе СЬп РЬе СЬи УаЬ Азп
195 200 205
Тгр Ьуз Ьуз ЬЬе Зег ТЬх АЬа ЬЬе Туг СЬу Азр АЬа Ьуз Азп СЬу УаЬ
210 215 220
РЬе Азп Ьуз Аар Тух Азр РЬе СЬу РЬе СЬу Ьуз УаЬ Ахд СЬп УаЬ Ьуз
225 230 235 240
Азр Ьеи СЬп меь СЬу Ьеи Ьеи МеЬ Тух Ьеи СЬу Ьуз Рго Ьуз
245 250
<2Ь0> 66
<211> 253
<212> БЕЛОК
<213> ЗаропахЬа о££ЬсЬпаЬ1з
<400> 66
УаЬ ТЬг Зех ЬЬе ТЬх Ьеи Азр Ьеи УаЬ Азп Рхо ТЬг АЬа СЬу СЬп Тух
Ь 5 ЬО 15
Зех Зех РЬе УаЬ Азр Ьуз ЬЬе Ахд Азп Азп УаЬ Ьуз Азр Рхо Азп Ьеи
20 25 30
Ьуз Тух СЬу СЬу ТЬх Азр ЬЬе АЬа УаЬ ЬЬе СЬу Рхо Рхо Зех Ьуз СЬи
35 40 45
Ьуз РЬе Ьеи Ахд Не Азп РЬе СЬп Зех Зег Агд СЬу ТЬх УаЬ Зех Ьеи
55 60
- 78 012622
<51у Ьеи Ьуз Агд Азр Азп Ьеи Туг Уа1 Уа1 А1а Туг Ьеи А1а МеЬ Авр
65 70 75 80
Азп ТЪг Азп Уа1 Азп Ахд А1а Тух Тух РЬе Ахд вех С1и Не ТЪх Зег
85 90 95
А1а С1и Ьеи ТЪг А1а Ьеи РЬе Рго О1и А1а ТЪг ТЪг А1а Азп С1п Ьуз
100 105 110
А1а Ьеи <51и Туг ТЪг С1и Авр Туг С1п 8ег 11е С1и ьуз Азп А1а С1п
115 120 125
11е ТЪг б1п <51у Азр Ьуз Зех Агд Ьуз С1и Ьеи (51у Ьеи <51у 11е Авр
130 135 140
Ьеи Ьеи Ьеи ТЪг Зег МеЪ (31и А1а Уа1 Азп Ьуз Ьуз А1а Ахд Уа1 Уа1
145 150 155 160
Ьуз Азп С1и А1а Агд Рке Ьеи Ьеи 11е А1а 11е С1п МеЪ ТЪг А1а С1и
165 170 175
А1а А1а Агд РЬе Ахд Тух Не <51п Азп Ьеи Уа1 Не Ьуз Азп РЬе Рго
180 185 190
Азп Ьуз РЬе Азп Зех С1и Азп Ьуз Уа1 11е С1п РЬе С1и Уа1 Азп Тхр
195 200 205
Ьуз Ьуз 11е Зех ТЪх А1а Не Тух С1у Азр А1а Ьуз Азп 61у Уа1 РЬе
210 215 220
Азп Ьуз Азр Тух Азр РЬе С1у РЬе С1у Ьуз Уа1 Ахд С1п Уа1 Ьуз Аар
225 230 235 240
Ьеи С1П МеЪ <51у Ьеи Ьеи МеЪ Туг Ьеи С1у Ьуз Рго Ьуз
245 250 <210> 67 <211> 275 <212> БЕЛОК <213> Заропахха о££1С1па11з <220>
<221> САЙТ <222> (48) . . . (48) <223> Хаа = <5111 или Азр <221> САЙТ :
<222> (91) ... (91) <223> Хаа = Агд или Ьув <221> САЙТ <222> (99) . . . (99) <223> Хаа = Бег или Ьеи <221> САЙТ <222> (134)... (134) <223> Хаа = С1п или Ьуз <221> САЙТ <222> (147)...(147) <223> Хаа = Зег или Ьеи <221> САЙТ <222> (149) . . . (149) <223> Хаа = Зег или РЬе <221> САЙТ <222> (162) . . . (162) <223> Хаа = Авр или Азп <221> САЙТ
- 79 012622 <222> (177) ... (177) <223> Хаа = А1а или Уа1 <221> САЙТ <222> (188) . . . (18В) <223> Хаа = 11а или ТЬг <221> САЙТ <222> (196) . . . (196) <223> Хаа = Азп или Азр <221> САЙТ <222> (198) . . . (198) <223> Хаа = С1и или Азр <221> САЙТ <222> (207) . . . (207) <223> Хаа = Азп или Зех <221> САЙТ <222> (209) . . . (209) <223> Хаа = Ьуз или Агд <400> 67
Уа1 1 ТЬг Зег 11е ТЬх 5 Ьеи Азр Ьеи Уа1 Азп Рго 10 ТЪл? А1а С1у 01п 15 Тух
Зег Зех РЬе Уа1 20 Азр Ьув Не Ахд Азп 25 Азп Уа1 Ьуз Азр Рго 30 Азп Ьеи
Ьуз Туг С1у 35 С1у ТЬг Азр Не А1а 40 Уа1 Не С1у Рго Рхо 45 Зег Ьуз Хаа
Ьуз РЬе 50 Ьеи Ахд Не Азп РЬе 55 <31 п Зех Зег Агд □1у 60 ТЬг Уа1 Зег Ьеи
С1у 65 Ьеи Ьуз Ахд Азр Азп 70 Ьеи Тух Уа1 Уа1 А1а 75 Туг Ьеи А1а МеЬ Азр 80
Азп ТЬг Азп Уа1 Азп 85 Агд А1а Тух Туг РЬе 90 Хаа Зег 61и 11е ТЬх 95 Зег
А1а 61и Хаа ТЬх 100 А1а Ьеи РЬе Рхо С1и 105 А1а ТИг ТНг А1а Азп 110 С1п Ьуз
А1а Ьеи С1и 115 Тух ТЬх О1и Азр Туг 120 61 п Зех 11е С1и Ьуз 125 Азп А1а 61п
Не ТЬг 130 С1п С1у Азр Хаа 8ег 135 Ахд Ьуз 61и Ьеи С1у 140 Ьеи С1у 11а Азр
Ьеи 145 Ьеи Хаа ТЬг Хаа МеЬ 150 Й1и А1а Уа1 Азп Ьуз 155 Ьуз А1а Ахд Уа1 Уа1 160
Ьуз Хаа С1и А1а Агд 165 РЬе Ьеи Ьеи 11е А1а 170 11е С1п МеЬ ТЬх А1а 175 61и
Хаа А1а Агд РЬе 180 Агд Туг Не С1п Азп 185 Ьеи Уа1 Хаа Ьуз Авп 190 РЬе Рго
Азп Ьуз РЬе 195 Хаа Зег Хаа Азп Ьуз 200 Уа1 Не С1п РНе О1и 205 Уа1 Хаа Тхр
Хаа Ьуз 210 Не Зех ТЬх А1а 11а 215 Тух С1у Азр А1а Ьуз 220 Азп С1у Уа1 РЬе
Азп 225 Ьуз Азр Туг Азр РЬе 230 С1у РЬе С1у Ьуз Уа1 235 Агд С1п Уа1 Ьуз Авр 240
Ьеи С1п МеЬ С1у Ьеи 245 Ьеи Мер Тух Ьеи С1у 250 Ьуз Рго Ьуз Зех Зех 255 Авп
С1и А1а Азп Зех ТЬг Уа1 Агд Н±з Тух С1у Рго Ьеи Ьуз Рхо ТЬх Ьеи
260 265 270
Ьеи 11а ТЬг
275
- 80 012622 <210> 68 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Пептидная метка гемагглютинина <400> 68
Туг Рго Туг Азр УаЬ Рхо Азр Тух АЬа Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Суз 15
1 5 10
<210> 69 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220> <223> Пептидная метка гемагглютинина <400> 69 Суз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Туг Рхо Тух Азр УаЬ Рхо Авр Тух АЬа
1 5 10 15
<210> 70 <211> 13 <212> БЕЛОК <220>
<223> НЬз пептидная метка <400> 70
ΗΪ8 ΗΪ3 ΗΪ3 ΗΪ3 ΗΪ5 Н±з Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Суз
1 5 10
<210> 71
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> И окусственная последовательность
<220>
<223> НЬз пептидная метка
<400> 71
Суз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз Ьуз НЬз НЬз НЬз Н±3 Н±з Н±з
10 <210> 72 <211> 115 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СагаеЬЬс!
- 81 012622 <400> 72
СЬп 1 УаЬ С1л Ьеи С1п 5 СЬи Зег С1у С1у б1у Ьеи Уа1 О1п 10 Рго О1у 61у 15
Бег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи АЬа Зег СЬу РЬе ТЬх РЬе Зех Агд РЬе
20 25 30
СЬу Мек ТЬг Тгр Уа1 Агд С1п АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу УаЬ СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зег СЬу Не Зег Зех Ьеи СЬу Азр Зег ТЬх Ьеи Тух АЬа Азр Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТЫ Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мек Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Тух Туг Суз
65 90 95
ТЬг Не СЬу СЬу Зех Ьеи Азп Рхо СЬу СЬу СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг
100 105 И0
УаЬ Зег Зег
115
<210> 73 <211> 115 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СатеЬШ <400> 73
СЬп УаЬ Ь С1п Ъйи 01п 5 Й1и 8ег О1у С1у СЬу Ьеи УаЬ СЬп ЬО Рго СЬу 15 Азп
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Агд Азп РЬе
20 25 30
СЬу Мек Зех Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Рго СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
Зех Зег 1Ье Зег СЬу Зег СЬу Зег Азп ТЬг 1Ье Туг А1а Авр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз Азр Агд РЬе ТЬг Не Зех Агд Азр Азп АЬа Ьуз Зег ТЬг Ьеи Тух
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мек Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬх АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
ТЬг Не СЬу СЬу Зех Ьеи Зег Агд Зех Зег СЬп СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг
100 105 ььо
УаЬ Зех Зег
ЬЬ5
<2Ь0> 74 <2И> 114 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СатеЬЬб <400> 74
СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рхо СЬу СЬу
ь 5 ЬО Ь5
Зех Ьеи Агд Ьеи ТЬг Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Зех РЬе
20 25 30
С1У Мек Зег Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
- 82 012622
Зег АЬа 11е Зег Зег Азр Зег СЬу ТЬх Ьуз Азп Туг А1а Азр Зех УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Ахд Рке ТЬх ЬЬе Зех Агд Азр Азп АЬа Ьуз Ьуз МеЬ Ьеи РЬе
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мер Азп Зех Ьеи Ахд Рго СЬи Азр ТЬх АЬа УаЬ Тух Туг Суз
85 90 95
УаЬ Не СЬу Ахд СЬу Зех Рго Зег Зег С1п СЬу ТЬг СЬп УаЬ ТЬг УаЬ
100 105 110
Зег Зех
<2Ь0> 75 <211> 114 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНа <400> 75
СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зех СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
Зех Ьеи Ахд Ьеи ТЬх Суз ТЬг АЬа Зех СЬу РЬе ТЬх РЬе Ахд Зех РЬе
20 25 30
СЬу Мер Зех Тхр УаЬ Ахд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тхр УаЬ
35 40 45
Зег АЬа ЬЬе Зех АЬа Азр СЬу Зег Азр Ьуз Агд Туг АЬа Азр Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Ахд РЬе ТЬх 11а Зех Ахд Азр Азп СЬу Ьуз Ьуз Меи Ьеи ТЬх
65 70 75 80
Ьеи Азр Меи Азп Зег Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
УаЬ Не СЬу Ахд СЬу Зег Рго АЬа Зег СЬп СЬу ТЬх СЬп УаЬ ТЬх УаЬ
100 105 110
Зег Зег <210> 76 <211> 128 <2Ь2> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Сате11а <400> 76
АЬа УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи УаЬ СЬп АЬа СЬу Аар
Ь 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз УаЬ УаЬ Зех СЬу ТЬг ТЬх РЬе Зех Зег АЬа
20 25 30
АЬа Меи СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Ахд СЬи РЬе УаЬ
35 40 45
СЬу АЬа ЬЬе Ьуз Тгр Зег СЬу ТЬг Зег ТЬх Туг Туг ТЬг Азр Зег УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Ахд РЬе ТЬх ЬЬе Зег Агд Азр Азп УаЬ Ьуз Азп ТЬх УаЬ Тух
65 70 75 80
Ьеи СЬп Мер Азп Азп Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр ТЬг СЬу УаЬ Туг ТЬг Суз
85 90 95
- 83 012622
А1а А1а Азр Агд Азр Агд Туг Ахд Азр Агд МеЪ <31у Рго МеЬ ТЬг ТЬг
100 105 110
ТЫ Азр РЬе Агд РЬе Тгр С1у С1П С1у ТЬг С1л Уа1 ТЬг Уа1 Зех Зех
115 120 125
<210> 77 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНН <400> 77
С1п Уа1 Ьуз Ьеи <31и С1и Зех С1у 61у 61у Ьеи Уа1 61п ТЬх <31у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у Агд ТЬг РЬе Ваг Вег РЬе
20 25 30
А1а МеЪ Й1у Тхр РЬе Агд С1п А1а Рхо С1у Агд С1и Агд 01и РЬе Уа1
35 40 45
А1а Зег 11е С1у Зех Зех С1у Не ТЬг ТЬг Азп Туг А1а Азр Вег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬх Не Вех Агд Авр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Мес Азп Зег Ьеи Ьуз Рхо С1и Азр ТЬг С1у Ьеи Суз Туг Сув
85 90 95
А1а Уа1 Азп Ахд Тух 61У не Рхо тух Ахд Зех С1у ТЬх с1п Туг С1п
100 105 110
Азп Тгр С1у О1п С1у ТЬх О1п Уа1 ТЬг Вег Вех
115 120
<210> 78 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНа <400> 78
С1и Уа1 Й1п Ьеи С1и С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рхо 61у СНу
1 5 10 15
Зех Ьеи Ахд Ьеи Зех Суз А1а А1а Зег С1у Ьеи ТЬх РЬе Азп Азр Тух
20 25 30
А1а МеЬ <31у Тгр Туг Агд С1п А1а Рхо С1у Ьуз С1и Агд Азр МеС Уа1
35 40 45
А1а ТЬг Не Зег Не С1у С1у Ахд ТЫ Туг Туг А1а Азр Зех Уа1 Ьуз
50 55 60
С1у Ахд РЬе ТЫ Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬх Уа1 Тух Ьеи
65 70 75 80
<31п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Аар ТЬг А1а На Туг Туг Сув Уа1
85 90 95
А1а Н±з Ахд С1п ТЬх Уа1 Уа1 Агд Й1у Рхо Тух Ьеи Ьеи Тгр Й1у <31 п
100 105 НО
Й1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
- 84 012622 <210> 79 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<22 3> Сате1±<1 <400> 79
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 <31и Зег С1у С1у Ьуз Ьеи Уа1 51п А1а 61у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зех <51у Ахд ТЬг РЬе Зех Азп Туг
20 25 30
А1а МеЕ С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго <51у Ьуз С1и Ахд СЛи РЬе Уа1
35 40 45
А1а С1у Зег С1у Агд Зех Азп Зег Тух А&п Тух Тух Зех Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зех Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬх Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Аар ТЬх А1а Уа1 Тух Тух- Суз
85 90 95
А1а А1а Зег ТЬг Азп Ьеи Тхр Рго Ахд Азр Агд Азп Ьеи Туг А1а Тух
100 105 но
Тгр Й1у С1п С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 60 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СзшеНа <400> 80
С1и Уа1 1 <21п Ьеи Уа1 5 С1и Зег С1у 61у С1у Ьеи Уа1 О1п А1а 10 61у 15 Азр
Зех Ьеи Ахд Ьеи Зех Суз А1а А1а Зех С1у Агд Зег Ьеи С1у 11е Туг
20 25 30
Ахд МеЕ С1у Тгр РЬе Ахд С1п Уа1 Рхо С1у Ьуз С1и Агд Й1и РЬе Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Зех Тгр Зех С1у С1у ТЬх ТЬх Ахд Тух Ьеи Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Ахд РЬе ТЬх 11а Зег Агд Азр Зех ТЬх Ьуз Азп А1а Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЕ Азп Зех Ьеи Ьуз Рхо С1и Азр ТЬх А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Уа1 Азр Зех Зех С1у Ахд Ьеи Тух Тхр ТЬх Ьеи Зег ТЬг Зег Туг
100 105 но
Азр Тух Тгр С1у С1п С1у ТЬх С1п Уа1 ТЬх Уа1 Зег Заг
115 120 125
<210> 81 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СалаеНд
- 85 012622
<400> 81
□1п Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и РЬе С1у Е1у С1у Ьеи Уа1 Е1п А1а 01у Азр
1 5 10 15
Зех Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у Ахд Зех Ьеи С1у 11е Тух
20 25 30
Ьуз МеЬ А1а Тгр РЬе Агд Е1п Уа1 Рго Е1у Ьуз Е1и Ахд Е1и РЬе Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Зег Тгр Зег Е1у Е1у ТЬг ТЬг Ахд Тух Не Азр вех Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг Ьеи Зег Агд Азр Азп ТЬг Ьуз Азп МеЬ Уа1 Тух
65 70 75 во
Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Тух Суз
85 90 95
А1а Уа1 Азр Зег Зег Е1у Агд Ьеи Туг Тгр ТЬх Ьеи Зех ТЬх Зех Тух
100 105 110
Азр Туг Тгр Е1у Е1п 61у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зех Зег
115 120 125
<210> 32 <211> 124 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Сате11<1 <400> 82
Е1и Уа1 <Э1п Ьеи Уа1 С1и Зег Е1у е1у Е1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у Е1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег Е1у Ахд ТЬг РЬе Зег Рго Туг
20 25 30
ТЬг Мес С1у Тхр РЬе Ахд С1п А1а Рхо Е1у Ьуз С1и Агд С1и РЬе Ьеи
35 40 45
А1а О1у Уа1 ТЬх Тхр Зех Е1у Зех Зех ТЬх РЬе Тух Е1у Азр Зех Уа1
50 55 60
Ьуз Е1у Ахд РЬе ТЬг А1а Зех Агд Азр Зех А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 ТЬг
65 70 75 80
Ьеи Е1и МеЬ Азп зех Ьеи Азп Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а А1а Тух Е1у С1у С1у Ьеи Тух Ахд Азр Рго Агд Зег Туг Авр
100 105 но
Туг Тхр С1у Ахд Е1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зех Зег
115 120
<210> 83 <211> 131 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Сате1±<1 <400> 83
А1а Уа1 Е1п Ьеи Уа1 Е1и &&Г С1у Е1у С1у Ьеи Уа1 С1П А1а С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег 61у РЬе ТЬг Ьеи Азр А1а Тгр
20 25 30
- 86 012622
Рго 11е А1а 35 Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго 40 (51у Ьуз С1и Агд Е1и 45 СИу Уа1
8ег Суз Не Агд Азр С1у ТЬг ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег ’7а1 Ьуз С1у
50 55 60
Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп А1а Азп Азп ТЬг Уа1 Туг Ьеи οίη
65 70 75 80
ТЬг Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а А1а
85 90 95
Рго Зег <31у Рго А1а ТЬг С1у Зег Зег ΗΪ3 ТЬг РЬе С1у 11е Туг Тгр
100 105 110
Азп Ьеи Агд Азр Азр Туг Азр Азп Тгр С1у С1п С1у ТЬг <31п Уа1 ТЬг
115 120 125
Уа1 Зег Зег
130
<210> 94 <211> 126 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНа <400> 84
С1и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 СИп А1а С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Вег е1у РЬе ТЬг РЬе Аар Н±5 Тух
20 25 30
ТЬг 11е С1у Тгр РЬе Агд С1п Уа1 Рго <31у Ьуз С1и Агд С1и С1у Уа1
35 40 45
Зег Суз 11е Зег Зег Зег Аар εΐγ Зег ТЬг Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Зег Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи Й1п Меб Азп ТЬг Ьеи С1и Рго Азр Азр ТЬг А1а ν&ι Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а СИу С1у Ьеи Ьеи Ьеи Агд Уа1 С1и С1и Ьеи С1п А1а Зег Азр
100 105 110
Туг Аар Тух Тгр е1у С1п С1у 11е С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 85 <211> 128 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНа <400> 85
А1а Уа1 С1п Ьеи Уа1 Азр Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 <51 п Рго &1у <31у
1 5 10 15
Зех Ьеи Агд Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у РЬе ТЬг Ьеи Аар Тух Туг
20 25 30
А1а 11е С1у Тгр РЬе Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1и Ахд С1и С1у Уа1
35 40 45
А1а Суз 11е Зех Азп Зег Азр С1у Зег ТЬг Туг Тух О1у Азр Зех Уа1
50 55 60
- 87 012622
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз ТЬг ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п МеЪ Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а ТЬг А1а Азр Агд Н±з Туг Зег А1а Зег Ηϊβ Н1з Рго РЬе А1а Азр
100 105 110
РЬе А1а РЬе Азп бег Тгр С1у Й1п С1у ТЬг 61п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 86 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Сате11<1 <400> 86
61и Уа1 61п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п А1а С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Тух С1у Ьеи ТЬг РЬе Тхр Ахд А1а
20 25 30
А1а МеЬ А1а Тхр РЬе Агд Ахд А1а Рго С1у Ьуз С1и Ахд С1и Ьеи Уа1
35 40 45
Уа1 А1а Ахд Азп Тгр С1у Азр Е1у Зег ТЬг Агд Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Мее Азп Зег Ьеи Ьуз Рго С1и Азр ТЬг А.1а Уа1 Туг Тух Суз
85 90 95
А1а А1а Уа1 Ахд ТЬг Тух С1у Зег А1а ТЬг Туг АЗр Не Тгр С1у С1П
100 105 но
С1у ТЬг С1п Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 87 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> СашеНД <400> 87
С1и Уа1 е1п Ьеи Уа1 31 и Зег С1у С1у С1у Ьеи Уа1 С1п Азр С1у С1у
1 5 10 15
Зег Ьеи Ахд Ьеи Зег Суз 11е РЬе Зег С1у Ахд ТЬх РЬе А1а Азп Тух
20 25 30
А1а Мак С1у Тгр РЬе Агд 01 п А1а Рго С1у Ьуз С1и Ахд С1и РЬе Уа1
35 40 45
А1а А1а 11е Азп Агд Азп С1у С1у ТЬг ТЬг Азп Туг А1а Аар А1а Ьеи
50 55 60
Ьуз С1у Ахд РЬе ТЬг Не Зег Агд Авр Азп ТЬг Ьуз Азп ТЬг А1а РЬе
65 70 75 80
Ьеи С1п Мее Азп Зег Ьеи Ьуз Рго Азр Азр ТЬх А1а Уа1 Тух Тух Суз
85 90 95
А1а А1а Агд С1и Тхр Рго РЬе 8ег ТЬг 11е Рго Зег е1у Тхр Агд Туг
100 105 110
- 88 012622
Тгр СЬу С1Г1 СЬу ТЪг СЬп УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 <210> 69 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> СашеЬЬЦ <400> 88
Азр УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу С1у Тгр УаЬ СЬп Рхо СЬу СЬу
1 5 10 15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу Рго ТЬг АЬа Зех Зег НЬз
20 25 30
АЬа ЬЬе СЬу Тгр РЬе Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬи Агд СЬи РЬе УаЬ
35 40 45
УаЬ еьу ЬЬе Азп Агд СЬу СЬу УаЬ ТЬг Агд Азр Тух АЬа Аар Зех УаЬ
50 55 60
Ьуз СЬу Агд РЬе АЬа УаЬ Зег Агд Азр Азп УаЬ Ьуз Азп ТЬг УаЬ Тух
65 70 75 80
Ьеи СЬп МеЬ Азп Агд Ьеи Ьуз Рго СЬи Азр Зег АЬа ЬЬе Тух ЬЬе Суз
85 90 95
АЬа АЬа Агд Рго СЬи Туг Зег РЬе ТЬг АЬа Мее Зег Ьуа СЬу Азр меъ
100 105 110
Азр Туг Тгр СЬу Ьуз СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬх УаЬ Зех Зех
115 120 125
<210> 89 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 89
СПи НЬз Тгр Зег Туг СЬу Ьеи Агд Рго СЬу
10 <210> 90 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 90
СЬи СЬп Агд Ьеи СЬу Азп С1п Тгр А1а Уа1 СЬу НЬз Ьеи МеЪ 15 10 <210> 91 <2И> 13 <212> БЕЛОК <213> Не известно
- 89 012622 <220>
<223> Противораковый пептид <400> 91
А1а С1у Суз Ъуз Азп РЬе Тгр Ьуз ТЬг РЬе ТЬг Зег Суз 15 10 <210> 92 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> 8 <223> Хаа = рзх(СН2-ЫН) <400> 92
С1п Тгр А1а Уа1 С1у Н±з Ьеи Хаа Ьеи
5 <210> 93 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 93
Агд Агд Ьуз Ахд Агд Ахд
5 <210> 94 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 94
А1а ТЬх Тгр Ьеи Рхо Рго Ахд
5 <210> 95 <211> 18 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 95
- 90 012622
Агд ТЬг С1и Ьеи Азп Уа1 С1у Не 1 5
Зег Ьуз
Азр РЬе Азп Тхр С1и Тух Рго А1а
15 <210> 96 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 96
Н13 Н±з С1и Уа1 Уа1 Ьуз РЬе Мер
5
Азр νοί Тух С1п <210> 97 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 97
Азп 11е ТЬг \(а1 ТЬг Ьеи Ьуз Ьуз
5 <210> 98 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 98
Суз Нхз Зег С1у Туг Уа1 С1у Уа1
5
РЬе Рго Ьеи
Агд Суз <210> 99 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 99
Тух Суз Азр <31у РЬе Туг А1а Суз
5
Тух МеЕ Азр Уа1 <210> 100 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 100
С1у С1у Суя Ьуз Ьеи Тгр ТЬг 11е Рго С1и Суз О1у <31у
1 5 10
<210> 101 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220> <223> Противораковый пептид <400> 101 А1а Уа1 Ьеи Рго Агд 1 5 <210> 102 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220> <223> Противораковый пептид <400> 102 Туг С1у Агд Рго Агд О1и Зег 61у Ьуз Ьуз Агд Ьуз Агд Ьуз Агд Ьеи
1 5 10 15
Ьуз Рго ТЬг <210> 103 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 103
Суз Рго Зег 01и С1у Ьеи Суз 1 5 <210> 104 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 104
Суз Рго Зег С1и С1у ТЬг Рго Зег ТЪг Н±з Уа1 Ьеи Суз 15 10 <210> 105 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 105
Беи А1а Азп С1у Уа1 61и
5 <210> 106 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 106
Рго О1п А1а 01и С1у С1п Беи
5 <210> 107 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 107
Уа1 А1а Азп Рго 61п А1а О1и О1у С1п Беи
10 <210> 108 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> (1)...(6) <223> Циклический пептид <400> 108
Буз С1у Азр С1п Беи Зег
5 <210> 109 <211> 8 <212> БЕЛОК
- 93 012622 <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> (1)...(8) <223> Циклический пептид <221> САЙТ <222> 3 <223> Хаа = С1п <400> 109
Туг Зег Хаа Уа1 Ьеи РЬе Ьуз 61у
5 <210> 110 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 110
С1и Ме-Ь ТЬг Рго Уа1 Азп Рго С1у
5 <210> 111 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 111
Ие С1и Ьеи Ьеи С1п А1а Агд
5 <210> 112 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 112
Суз Уа1 Бег Азп Ьуз Туг РЬе Зег Азп 11е Н±з Тгр Суз 15 10 <210> 113 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно
- 94 012622 <22 О>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> (2)...(3) <223> Хаа = любая аминокислота <400> 113
РЬе Хаа Хаа Туг- Ьуз Тхр
5 <210> 114 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> На известно <220>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> (3)...(4) <223> Хаа ~ любая аминокислота <221> САЙТ <222> (5)...{5} <223> Хаа = Аг <400> 114
Ьуз Тгр Хаа Хаа Хаа
5 <210> 115 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 115
Ьеи Азп РЬе Зег С1п Туг Ьеи Тгр Туг ТЬг 15 10 <210> 116 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400 116
Ьуз Рго Зег Зег Рго Рго С1и 51и
5
- 95 012622 <210> 117 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 117
МеЬ Рго Агд РЬе МеГ Азр Туг Тгр 61и С1у Ьеи Азп
1 5 10
<2ю> из <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220> <223> Противораковый пептид <400> 118 Ме-Ь Уа1 Агд Агд РЬе Ьеи Уа1 ТЬг Ьеи Агд 11е Агд Агд А1а Суз С1у
1 5 10 15
Рго Рго Агд Уа1 <210> 119 <211> 22 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 119
С1у Бег Агд А1а Н±з Бег Бег ΗΪ3 Ьеи Ьуз Бег Ьуз С1у С1п Бег ТЬг
10 15
Бег Агд ΗΪ3
Ьуз Ьуз Ьеи <210> 120 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 120
Суз А1а РЬе Туг 11е
5 <210> 121 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 121
Ьеи Суз А1а РЬе Туг 11е МеЬ А1а Ьуз
5 <210> 122 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 122
МеЬ Суз Зег МеЪ Туг С1у 11е Суз Ьуа
5 <210> 123 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 123
Туг йег РЬе Уа1 Н±е О1у РЬе РЬе Азп
5
Мес Ьеи А1а
РЬе Агд Уа1 Бег Тгр Агд С1и
15 <210> 124 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Не известно
<220> <223> Противораковый пептид
<400> 124 Ьуа Агд Агд С1п ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а РЬе Туг Щз Зег Ьуз Агд Агд
1 5 10 15
Ьеи 11е РЬе Зег 20
<210> 125 <211> б <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 125
- 97 012622
<210> 126 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 126
РЬе Ьеи Азр ТЬг Ьеи Уа1 Уа1 Ьеи Н1е Ахд 15 10 <210> 127 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 127
Агд Суз Уа1 Агд Суз Ахд РЬе Уа1 Уа1
5
Суз Ьеи Уа1 <210> 128 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 128
Ьеи Азп Тхр А1а Тгр А1а А1а С1и Уа1
5
11е Тух Азр 11е ТЬх Азп Уа1
Тгр 11е С1у Ьеи Ахд Уа1 Ахд
15
Ьеи Ьуз Уа1 С1п Ьуз Ахд Ахд
15 <210> 129 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 129
Ьеи С1и С1у 11е С1п Ьеи 11е А1а
5 <210> 130 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 130
РЬе Тгр Ьеи Агд РЬе ТЬг
5 <210> 131 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 131
Тгр Уа1 Агд Тгр НАз РЬе
5 <210> 132 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 132
Тгр Уа1 Агд Тгр НАз
5 <210> 133 <211> 6 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 133
Тгр НА а РЬе Не РЪе Тгр
5 <210> 134 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 134
- 99 012622
Не Тгр Ьеи Зех СЬу Ьеи Зех Агд Ь 5
СЬу УаЬ Тгр УаЬ Зег РЬе Рго
15 <210> 135 <2ЬЬ> 15 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> ЬЗБ
СЬу Зег Ахд ЬЬе Ьеи ТЬх РЬе Ахд
Ь 5
Зех СЬу Зег Тгр Тух АЬа Зег
15 <210> 136 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 136
Авр СЬи Ьеи Ьуз Ахд АЬа РЬе АЬа
5
АЬа Ьеи Ахд Авр СЬп ЬЬе ЬО <210> 137 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 137
Ьуз Ьуз Ьеи Зех СЬи Суз Ьеи Ьуз
5
Зег
Ьув Ахд ЬЬе СЬу Азр СЬи Ьеи Азр 10 15 <210> 138 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 136
СЬу СЬп УаЬ СЬу Ахд СЬп Ьеи АЬа
5
Не Ые СЬу Авр Азр Не Азп Ахд
15 <210> 139 <211> 16 <212> БЕЛОК
- 100 012622 <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 139
Агд Азп 11е А1а Агд Н±з Ьеи А1а й1п Уа1 С1у Азр Зех МеЕ Азр Агд
10 15 <210> 140 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 140
Туг 11е 61у Зех Ахд
5 <210> 141 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 141
Тух Не <31у Зег Ахд
5 <210> 142 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 142
Туг 11е С1у Зех Ахд
5 <210> 143 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 143
Туг 11е С1у Зег Агд
5
- 101 012622 <210> 144 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> 1 <223> Хаа = пара-аминоРЬе <400> 144
Хаа 11е С1у Зег Ахд
5 <210 145 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220 <223> Противораковый пептид <400> 145
Туг 11е С1у Зег Ахд
5 <210> 146 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> не известно <220 <223> Противораковый пептид <221> САЙТ <222> 7 <223> Хаа = С(О) <400> 146
Ахд Зех С1у 11е Тух Азр Хаа Азр Туг 11е 51 у Зех Ахд 15 10 <210> 147 <211> 3 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220 <223> Противораковый пептид <400 147
Агд С1у Азр <210> 148
- 102 012622 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220 <223> Противораковый пептид <400> 146
Туг 11е СЬу Баг Ахд
Ь 5 <210> 149 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220 <223> Противораковый пептид <400 149
11е Рго Суз Азп Азп Ьуз СЬу АЬа НЬз 1 5
Ме-Ь Ьеи АЬа Агд
Зег Уа1 С1у Ьеи МеЬ Тгр Тгр
15 <210 150 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0 >
<223> Противораковый пептид <400> 150
Зех Рго НЬз Ахд Рго Ахд РЬе Зег Рхо АЬа 15 10 <210> 151 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <22 0>
<223> Противораковый пептид <400> 151
Зех Рхо НЬз АЬа НЬз СЬу Туг ЬЬе Рго Зег
10 <210> 152 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220 <223> Противораковый пептид
- 103 012622 <400> 152
ТЬг Рхо Ηίβ ТЬх Ηίβ Азп Агд ТЪг Рхо С1и
10 <210> 153 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 153
ТНт Рхо Нхз Ахд Нхз С1п Ьуз ТЬх Рхо С1и 15 10 <210> 154 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 154
С1и Рго Нхз Агд Нхз Зет 11е РЬе ТЬг Рго С1и 15 10 <210> 155 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 155
Суз Ηίβ А1а Уа1 Суз
5 <210> 156 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 156
Суз С1и Ьуз Нхз Не МеЬ С1и Ьуз 11а С1п С1у Агд С1у Азр Авр Азр 15 10 15
Азр <210> 157 <211> 10
- 104 012622 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Противораковый пептид <400> 157
Суз ТЬх ТЬг Н1з Тгр С1у РЬе ТЬг Ьеи Суз
10 <210> 158 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Не известно <220>
<223> Связывает рецептор 1Ь-1 типа 1 человека <221> САЙТ <222> 10 <223> Хаа = 1-аэетидин-2-карбоновая кислота <400> 158
РЬе С1и Тгр ТЬх Рхо С1у Тгр Тух С1п Хаа Туг А1а Ьеи Рго Ьеи 15 10 15

Claims (95)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Лекарственный гибрид, имеющий формулу а-(Х)п]-Ь-(У)Г12-с-(г)пз-б или а-(2)пз-Ь-(У)П2-с-(Х)пГ(1, где X представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению к первой мишени;
    Υ представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (Ун), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (УД, который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину;
    Ζ представляет собой полипептидное лекарство, которое обладает специфичностью связывания по отношению ко второй мишени;
    а, Ь, с и б независимо представляют собой полипептид, содержащий от 1 до приблизительно 100 аминокислотных остатков, или отсутствуют;
    η1 означает от 1 до приблизительно 10;
    η2 означает от 1 до приблизительно 10 и η3 означает от 0 до приблизительно 10, при условии, что когда η1 и η2, оба, означают 1 и η3 означает 0, тогда X не содержит цепь антитела или фрагмент цепи антитела; где указанный лекарственный гибрид имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства X.
  2. 2. Лекарственный гибрид по п.1, где η1 и η3, оба, означают 1 и η2 означает от 2 до приблизительно 10.
  3. 3. Лекарственный гибрид по п.1, где Υ содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ МО: 10, 8ЕО ΙΌ МО: 11, 8ЕО ΙΌ МО: 12, 8ЕО ΙΌ МО: 13, 8ЕО ΙΌ МО: 14, 8ЕО ΙΌ МО: 15, 8ЕО ΙΌ МО: 24, 8ЕО ΙΌ МО: 25 и 8ЕО ΙΌ МО: 26.
  4. 4. Лекарственный гибрид по п.1, где Υ содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ МО: 16, 8ЕО ΙΌ МО: 17, 8ЕО ΙΌ МО: 18, 8ЕО ΙΌ МО: 19, 8ЕО ΙΌ МО: 20, 8ЕО ΙΌ МО: 21, 8ЕО ΙΌ МО: 22 и 8ЕО ΙΌ МО: 23.
  5. 5. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой ГЬ-1га или функциональный вариант ГЬ-1га.
  6. 6. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой аналгезирующий агент, противораковый агент, гормон или противомикробный полипептид или пептид.
  7. 7. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой иммуносупрессорный агент, противовирусный агент, антибиотик, противовоспалительный агент, цитотоксин или цитотоксический агент.
  8. 8. Лекарственный гибрид по п.1, где X представляет собой ингибитор протеазы.
  9. 9. Лекарственный гибрид, содержащий группировки X' и Υ', где
    X' представляет собой полипептидное лекарство при условии, что X не содержит цепь антитела или
    - 105 012622 фрагмент цепи антитела; и
    Υ' представляет собой вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (νΗ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину; где указанный лекарственный гибрид имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства.
  10. 10. Лекарственный гибрид по п.9, где X' расположен на аминоконце от Υ'.
  11. 11. Лекарственный гибрид по п.9, где Υ' расположен на аминоконце относительно X'.
  12. 12. Лекарственный гибрид по п.9, где указанные νΗ и Уъ обладают специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину человека.
  13. 13. Лекарственный гибрид по п.12, где Υ' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ΙΌ N0: 10, 8Еф ΙΌ N0: 11, 8Еф ΙΌ N0: 12, 8Еф ГО N0: 13, 8ЕО ГО N0: 14, 8ЕО ГО N0: 15, 8ЕО ГО N0: 24, 8ЕО ГО N0: 25 и 8ЕО ГО N0: 26.
  14. 14. Лекарственный гибрид по п.12, где Υ' содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 16, 8Еф ГО N0: 17, 8Еф ГО N0: 18, 8Еф ГО N0: 19, 8ЕО ГО N0: 20, 8ЕО ГО N0: 21, 8ЕО ГО N0: 22 и 8ЕО ГО N0: 23.
  15. 15. Лекарственный гибрид по п.9, где X' представляет собой 1Ь-1га или функциональный вариант 1Ь-1га.
  16. 16. Лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (νΗ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое ковалентно связано с указанным νΗ или У|,; где указанный лекарственный конъюгат не является одной непрерывной полипептидной цепью и указанный лекарственный конъюгат имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного полипептидного лекарства при условии, что указанное лекарство не содержит один вариабельный домен антитела или белковый структурный каркас, содержащий трансплантированные области, определяющие комплементарность антитела (СОВ).
  17. 17. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарственный конъюгат содержит один νΗ.
  18. 18. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарственный конъюгат содержит один Уь.
  19. 19. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанное лекарство связано ковалентно с указанным νΗ или Уъ через линкерную группировку.
  20. 20. Лекарственный конъюгат по п.16, где два или более различных лекарств ковалентно связаны с указанным νΗ или Уь.
  21. 21. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой полипептид.
  22. 22. Лекарственный конъюгат по п.21, где указанный полипептид представляет собой 1Ь-1га или функциональный вариант 1Ь-1га.
  23. 23. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой аналгезирующий агент, противораковый агент, гормон или противомикробный полипептид или пептид.
  24. 24. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой иммуносупрессорный агент, противовирусный агент, антибиотик, противовоспалительный агент, цитотоксин или цитотоксический агент, антиметаболит, алкилирующий агент, антациклин или радионуклид.
  25. 25. Лекарственный конъюгат по п.16, где лекарство представляет собой ингибитор протеазы.
  26. 26. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (νΗ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Еф ГО N0: 10, 8Еф ГО N0: 11, 8Еф ГО N0: 12, 8Еф ГО N0: 13, 8ЕО ГО N0: 14, 8ЕО ГО N0: 15, 8ЕО ГО N0: 24, 8ЕО ГО N0: 25, 8ЕО ГО N0: 26, 8ЕО ГО N0: 16, 8ЕО ГО N0: 17, 8ЕО ГО N0: 18, 8ЕО ГО N0: 19, 8ЕО ГО N0: 20, 8ЕО ГО N0: 21, 8ЕО ГО N0: 22 и 8ЕО ГО N0: 23.
  27. 27. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, кодирующая лекарственный гибрид по п.1 или 9.
  28. 28. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.27.
  29. 29. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантную нуклеиновую кислоту по п.27.
  30. 30. Способ получения лекарственного гибрида, при котором поддерживают клетку-хозяина по п.29 в условиях, подходящих для экспрессии указанной рекомбинантной нуклеиновой кислоты, в результате чего получают лекарственный гибрид.
  31. 31. Фармацевтическая композиция, содержащая лекарственный гибрид по п.1 или 9 и физиологически приемлемый носитель.
  32. 32. Фармацевтическая композиция, содержащая лекарственный конъюгат по п.16 и физиологически приемлемый носитель.
  33. 33. Способ лечения индивидуума, имеющего воспалительное заболевание, при котором вводят указанному индивидууму терапевтически эффективное количество лекарственного конъюгата или лекарст
    - 106 012622 венного гибрида по любому из пп.5, 15 и 22.
  34. 34. Способ по п.33, где указанное воспалительное заболевание представляет собой артрит.
  35. 35. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.3, 4, 13, 14 и 26 в терапии, диагностике или профилактике.
  36. 36. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.5, 15 и 22 в терапии, диагностике или профилактике.
  37. 37. Применение лекарственного конъюгата или лекарственного гибрида по любому из пп.5, 15 и 22 для изготовления лекарственного препарата для лечения воспалительного заболевания.
  38. 38. Применение по п.37, где указанное воспалительное заболевание представляет собой артрит.
  39. 39. Нековалентный лекарственный конъюгат, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (νΗ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уъ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, и лекарство, которое нековалентно связано с указанным νΗ или ν^ где указанный нековалентный лекарственный конъюгат имеет по меньшей мере примерно 90% активности указанного лекарства, при условии, что указанное лекарство не содержит один вариабельный домен антитела или белковый структурный каркас, содержащий трансплантированные области, определяющие комплементарность антитела (СОВ).
  40. 40. Нековалентный лекарственный конъюгат по п.39, где указанный νΗ или ν и указанное лекарство нековалентно связаны через комплементарных связывающих партнеров.
  41. 41. Нековалентный лекарственный конъюгат по п.40, где указанные комплементарные связывающие партнеры представляют собой биотин и авидин или биотин и стрептавидин.
  42. 42. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
  43. 43. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
  44. 44. Применение полипептидсвязывающей группировки, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, для изготовления лекарственного препарата, содержащего лекарственную композицию, в которой лекарство связано с указанной полипептидсвязывающей группировкой, для увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο и уменьшения иммуногенности лекарства без уменьшения активности данного лекарства более чем приблизительно на 10%.
  45. 45. Применение по любому из пп.42-44, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, в которой лекарство связано ковалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  46. 46. Применение по п.45, где лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
  47. 47. Применение по любому из пп.42-44, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, в которой лекарство связано нековалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  48. 48. Применение по п.47, где лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
  49. 49. Применение по любому из пп.42-48, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
  50. 50. Применение по п.49, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
  51. 51. Применение по любому из пп.42-50, где лекарственный препарат содержит лекарственную композицию, которая имеет большую активность, чем указанное лекарство.
  52. 52. Способ увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ίη νίνο, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ίη νίνο, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ίη νίνο относительно указанного лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
    - 107 012622
  53. 53. Способ уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш уйо, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
  54. 54. Способ увеличения периода полувыведения лекарства из сыворотки ш у1уо и уменьшения иммуногенности лекарства, по существу, без уменьшения активности данного лекарства, при котором связывают лекарство с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш у1уо, в результате чего получают лекарственную композицию, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ш у1уо относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
  55. 55. Способ по любому из пп.52-54, при котором указанное лекарство ковалентно связывают с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  56. 56. Способ по п.55, где лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
  57. 57. Способ по любому из пп.52-54, при котором указанное лекарство нековалентно связывают с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  58. 58. Способ по п.57, где лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
  59. 59. Способ по любому из пп.52-58, при котором еще отбирают указанную полипептидсвязывающую группировку из одного или более полипептидов, где выбранная полипептидсвязывающая группировка связывает полипептид, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш у1уо, с КО по меньшей мере приблизительно 5 мМ.
  60. 60. Способ по любому из пп.52-59, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
  61. 61. Способ по п.60, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
  62. 62. Способ по любому из пп.52-61, где лекарственная композиция имеет большую активность, чем указанное лекарство.
  63. 63. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш у1уо, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ш νί\Ό относительно лекарства и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности лекарства.
  64. 64. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш у1уо, где указанная лекарственная композиция является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
  65. 65. Лекарственная композиция, содержащая лекарство, которое связано с полипептидсвязывающей группировкой, имеющей связывающий сайт, который обладает специфичностью связывания по отношению к полипептиду, который увеличивает период полувыведения из сыворотки ш у1уо, где указанная лекарственная композиция имеет более продолжительный период полувыведения из сыворотки ш νί\Ό относительно указанного лекарства, является менее иммуногенной, чем указанное лекарство, и имеет по меньшей мере приблизительно 90% активности указанного лекарства.
  66. 66. Лекарственная композиция по любому из пп.63-65, где лекарство связано ковалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  67. 67. Лекарственная композиция по п.66, где указанная лекарственная композиция представляет собой лекарственный гибрид или лекарственный конъюгат.
  68. 68. Лекарственная композиция по любому из пп.63-65, где лекарство связано нековалентно с указанной полипептидсвязывающей группировкой.
  69. 69. Лекарственная композиция по п.68, где указанная лекарственная композиция представляет собой нековалентный лекарственный конъюгат.
  70. 70. Лекарственная композиция по любому из пп.63-69, где указанная полипептидсвязывающая группировка обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
  71. 71. Лекарственная композиция по п.70, где указанная полипептидсвязывающая группировка представляет собой антигенсвязывающий фрагмент антитела, которое обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину.
    - 108 012622
  72. 72. Лекарственная композиция по любому из пп.63-71, где лекарственная композиция имеет большую активность, чем указанное лекарство.
  73. 73. Лекарственный гибрид по п.1, где X выбран из группы, состоящей из антиметаболита, полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога ЬнВЫ, агониста ЬнВЫ, антагониста ЬнВЫ, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противораковые активности, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антагониста рецептора, агониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ.
  74. 74. Лекарственный гибрид по п.1, где указанная первая мишень выбрана из группы, включающей АроЕ, Арο-8АА, ΒΌΝΕ, кардиотрофин-1, СЕА, СЭ40, СЭ40 лиганд, СЭ56, СЭ38, СЭ138, ЕСЕ, рецептор ЕСЕ, ЕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, ЕАГа, ЕСЕ-кислый, ЕСЕ-основный, фактор роста фибробластов-10, ЕЬТ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), ΟΩΝΓ, С-С8Е, СМ-С8Е, СЕ-β 1, сывороточный альбумин человека, инсулин, ΉΝ-γ, 1СЕ-1, 1СЕ-11, 1Ь-1а, !Ш-1 β, 1Ь-1 рецептор, Ш-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, 1Ь-7, Ш-8 (72 а.к.), Ш-8 (77 а.к.), Ш-9, Ш-10, Ш-11, Ш-12, Ш-13, Ш-15, Ш-16, Ш-17, Ш-18 (1С1Е), ингибин а, ингибин β, ΙΡ-10, фактор роста кератиноцитов-2 ЩСЕ-2), ΚСЕ, лептин, ЫЕ, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Ми11епал), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белокаттрактант моноцитов, М-С8Е, МЭС (67 а.к.), МЭС (69 а.к.), МСР-1 (МСАЕ), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МЭС (67 а.к.), МЭС (69 а.к.), М1С, МШ-1а, МШ-Щ МШ-3а, МШ-3в, МШ-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (ΜΡIЕ-1), ΝΆΡ-2, неуртурин Щеийигт), фактор роста нервов, ]^СЕ, ΝΓ3, ΝΓ-4, онкостатин М, Ρ^СЕ-АА, Ρ^СЕ-АΒ, Ρ^СЕ-ВВ, ΡΡ-4, ВАNТЕ8, 8ПЕ1а, ^041 β, 8СЕ, 8ССЕ, стволовый клеточный фактор (8СЕ), ТАВС, ТСЕ-α, ТСЕ-β, ТСЕ-]2, ТСЕ-]3, фактор некроза опухолей (Т№), ΊΝΤ-α, ЮТ-в, рецептор Т№ типа I, рецептор ЮТ типа II, ТМЬ-1, Т₽О, УЕСЕ, УЕСЕ А, УЕСЕ В, УЕСЕ С, УЕСЕ Ό, рецептор УЕСЕ типа 1, рецептор УЕСЕ типа 2, рецептор УЕСЕ типа 3, ^Ρ-2, СВО/МС8А, СВО-β, СВО-γ, нСС1, 1-309, нЕВ 1, нЕВ 2, нЕВ 3 и нЕВ 4.
  75. 75. Лекарственный гибрид по п.1, где указанная первая мишень представляет собой антиген СО, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
  76. 76. Лекарственный гибрид по п.9, где X' выбран из группы, состоящей из иммуносупрессорного агента, противовирусного агента, антибиотика, противовоспалительного агента, цитотоксина, цитотоксического агента, антиметаболита, ингибитора протеаз, аналгезирующего агента, полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, гормона, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога ЬнВИ, агониста ЬнВИ, антагониста ЬнВИ, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противораковые активности, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антимикробного средства, антагониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ, противовирусного пептида или полипептида.
  77. 77. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство связывает мишень, выбранную из группы, включающей АрοЕ, Арο-8АА, ΒΩΝΓ, кардиотрофин-1, СЕА, СЭ40, СЭ40 лиганд, ί.Ό56, СЭ38, СЭ138, ЕСЕ, рецептор ЕСЕ, ЕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, ЕАГа, ЕСЕ-кислый, ЕСЕ-основный, фактор роста фибробластов-10, ЕЬТ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), СО№, С-С8Е, СМ-С8Е, СЕ-ββ сывороточный альбумин человека, инсулин, ΙΡΝ-γ, 1СЕ-1, 1СЕ-11, Ш-1а, !Ш-1 β, Ш-1 рецептор, Ш-2, Ш-3, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-7, Ш-8 (72 а.к.), Ш-8 (77 а.к.), Ш-9, Ш-10, Ш-11, Ш-12, Ш-13, Ш-15, Ш-16, Ш-17, [Ш-18 (1С1Е), ингибин а, ингибин β, ΙΡ-10, фактор роста кератиноцитов-2 ЩСЕ^), ΚСЕ, лептин, ЫЕ, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Ми11епап), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, М-С8Е, МЭС (67 а.к.), МЭС (69 а.к.), МСР-1 (МСАЕ), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МЭС (67 а.к.), МЭС (69 а.к.), МЮ, МШ-1а, МШ-Щ МШ-3а, МШ^, МШ-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МИЕ-1), N^-2, неуртурин Щеийигт), фактор роста нервов, β-NСЕ, ЭТ-3, ЭТ-4, онкостатин М, БОСЕ-АА, БЭСЕ-АВ, БЭСЕ-ВВ, ΡЕ-4, ВА№ТЕ8, 8ЭЕ1а, 8ЫЕ1 β, 8СЕ, 8ССЕ, стволовый клеточный фактор (8СЕ), ТАВС, ТСЕ-а, ТСЕ-β, ТСЕ-]^, ТСЕ^, фактор некроза опухолей (Т№), Т№-а, Т№-[Е рецептор Т№ типа Ι, рецептор Т№
    - 109 012622 типа II, ΤΝΙΕ-1, ΤΡΟ, УЕСР, УЕСР А, УЕСР В, УЕСР С, УЕСР Ό, рецептор УЕСР типа 1, рецептор УЕСР типа 2, рецептор УЕСР типа 3, ССР-2, СЯО/МСЗА, СЯО-β, СЯО-γ, НСС1, 1-309, НЕЯ 1, НЕЯ 2, НЕЯ 3 и НЕЯ 4.
  78. 78. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство связывает антиген СО, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
  79. 79. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство выбрано из группы, состоящей из полипептидного токсина, полипептидного агониста, активатора, стимулятора секреции, антагониста, ингибитора, фактора роста кератиноцитов, интерферона, эритропоэтина, протеазы, эластазы, аналога ЬНЯН, агониста ЬНЯН, антагониста ЬНЯН, агониста опиоидных рецепторов, кальцитонина, аналога кальцитонина, антидиуретического гормона, антагониста окситоцина, вазоактивного интестинального пептида, ингибитора тромбина, фактора Виллебранда, поверхностно-активного вещества, яда улитки, цитокина, фактора роста, растворимого участка рецептора цитокина, растворимого участка рецептора фактора роста, растворимого участка рецептора гормона, пептидов и полипептидов, которые имеют противовирусную активность, антагониста рецептора, миметика хемокина, ингибитора клеточных взаимодействий адгезивных молекул, ингибитора интегрина, белка, инактивирующего рибосомы, ингибитора матриксных металлопротеиназ, противовирусного пептида или полипептида.
  80. 80. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство связывает мишень, выбранную из группы, включающей АроЕ, Аρο-8АА, ΒΏΝΡ, кардиотрофин-1, СЕА, СО40, СО40 лиганд, СО56, СО38, СО138, ЕСР, рецептор ЕСР, ΕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, РАРа, РСР-кислый, РСРосновный, фактор роста фибробластов-10, ΕΈΤ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), СОНЕ, С-СЗР, СМ-С8Р, СЕ-βΕ сывороточный альбумин человека, инсулин, ΙΕΝ-γ, 1СР-1, 1СР-11, 1Ь-1а, ТС--1 β, 1Ь-1 рецептор, 1Ь-2, 1Ь-3, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-7, Ш-8 (72 а.к.), Ш-8 (77 а.к.), Ш-9, Ш-10, Ш-11, Ш-12, Ш-13, Ш-15, Ш-16, Ш-17, ЕЪ-18 (ЮШ), ингибин а, ингибин β, ΙΡ-10, фактор роста кератиноцитов-2 (КСР-2), КСР, лептин, ЫР, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (МиРеиал), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, М-С8Р, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МСР-1 (МСАР), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МЮ, МШ-1а, МШ-^, МШ-3а, МШ^, МШ-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МРШ-1), NАΡ-2, неуртурин (№ипигт), фактор роста нервов, β-NСР, ΝΤ-3, ΝΤ-4, онкостатин М, РОСР-АА, РОСР-АВ, РОСР-ВВ, РР-4, ЯАNΤΕ8, 8ОР1а, ЗОР^, 8СР, 8ССР, стволовый клеточный фактор (8СР), ΤАΚС, ТСР-а, ТСР-β, ТСР^, ΤСР-β3, фактор некроза опухолей (ЮТ), ΤΝΕ-а, ΤΝΕ-β, рецептор ΤΝΕ типа Ι, рецептор ΤΝΕ типа ΙΙ, ΤΝΙΕ-1, ΤΡΟ, УЕСР, УЕСР А, УЕСР В, УЕСР С, УЕСР О, рецептор УЕСР типа 1, рецептор УЕСР типа 2, рецептор УЕСР типа 3, ССР-2, СЯО/МСЗА, СЯО-β, СЯО-γ, НСС1, 1-309, НЕЯ 1, НЕЯ 2, НЕЯ 3 и НЕЯ 4.
  81. 81. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство связывает антиген СО, цитокин, цитокиновый рецептор, адгезивную молекулу, костимулирующую молекулу, фактор роста или рецептор фактора роста.
  82. 82. Лекарственный гибрид по п.1, где X выбран из группы, включающей АροΕ, Аρο-8АА, ВОИГ, кардиотрофин-1, СЕА, СО40, лиганд СО40, СО56, СО38, СО138, ЕСР, рецептор ЕСР, ΕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, РАРа, РСР-кислый, РСР-основный, фактор роста фибробластов-10, ΓΕΤ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), СО№, С-СЗР, СМ-СЗР, 6Ε-β1, сывороточный альбумин человека, инсулин, ΙΕΝ-γ, ЮР-Ι, ЮР-ΙΙ, Ш-1а, ΙΕ-1β, рецептор Ш-1, Ш-2, Ш-3, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-7, Ш-8 (72 а.к.), Ш-8 (77 а.к.), Ш-9, ΙΕ-10, ΙΕ-11, Ш-12, Ш-13, Ш-15, Ш-16, Ш-17, Ш-18 (КИЕ), ингибин а, ингибин β, №-10, фактор роста кератиноцитов-2 (КСР-2), КСР, лептин, ЫГ, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Ми11еτίαη), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белок-аттрактант моноцитов, М-СЗР, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МСР-1 (МСАР), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МЮ, МШ-1а, МШ-Ц, МШ-3а, МШ^, МШ-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МРШЧ), NАΡ-2, неуртурин (№ипигт), фактор роста нервов, β-ЫСР, ΝΤ-3, ΝΤ-4, онкостатин М, РОСРАА, РОСР-АВ, РОСР-ВВ, РР-4, ЯАНГЕЗ, 8ОР1а, δϋΠβ, ЗСР, ЗССР, стволовый клеточный фактор (ЗСР), ΤАΚС, ТСР-а, ТСР-β, ΤΟΗ-βΣ, ΤСР-β3, фактор некроза опухолей (ΤΝΕ), ΤΝΕ-а, ΤΝΒ-β, рецептор ΤΝΗ типа Ι, рецептор ТОР типа ΙΙ, ΤΝΙΕ-1, ТСО, УЕСР, УЕСР А, УЕСР В, УЕСР С, УЕСР О, рецептор УЕСР типа 1, рецептор УЕСР типа 2, рецептор УЕСР типа 3, ССР-2, СЯО/МСЗА, СЯО-β, СЯО-γ, НСС1, 1-309, НЕЯ 1, НЕЯ 2, НЕЯ 3 и НЕЯ 4.
  83. 83. Лекарственный гибрид по п.9, где указанное полипептидное лекарство выбрано из группы, включающей АροΕ, Аρο-8АА, ВОНН, кардиотрофин-1, СЕА, СО40, лиганд СО40, СО56, СО38, СО138, ЕСР, рецептор ЕСР, ΕNА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, РАРа, РСР-кислый, РСР-основный, фактор роста фибробластов-10, Р^Τ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), СОНР, С-СЗР, СМ-СЗР, 6Ε-β1, сывороточный альбумин человека, инсулин, ΙΕΝ-γ, ЮР-Ι, ЮР-ΙΙ, Ш-1а, ТС--1 β, рецептор Ш-1, Ш-2, Ш-3, Ш-4, Ι Ь-5, Ш-6, Ш-7, Ш-8 (72 а.к.), Ш-8 (77 а.к.), Ш-9, Ш-10, Ш-11, Ш-12, Ш-13, Ш-15, Ш-16, Ш-17, Ш-18 (ЮШ), ингибин а, ингибин β, ЕР-10, фактор роста кератиноцитов-2 (КСР-2), КСР, лептин, МР, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (МиШилн), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов,
    - 110 012622 белок-аттрактант моноцитов, М-СЗЕ, МОС (67 а.к.), МЭС (69 а.к.), МСР-1 (МСАЕ), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МЮ, М1Р-1а, М1Р-13, М1Р-3а, М1Р-33, М1Р-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МР1Е-1), ИАР-2, неуртурин (Иеипипп), фактор роста нервов, Р-ИСЕ, ИТ-3, ИТ-4, онкостатин М, РОСЕ-АА, РОСЕ-АВ, РОСЕ-ВВ, РЕ-4, ВАИТЕЗ, 8ΌΡ1α, 8ΌΡ1β, ЗСЕ, ЗССЕ, стволовый клеточный фактор (ЗСЕ), ТАВС, ТСЕ-а, ТСЕ-β, ТСЕ-Р2, ТСЕ-Р3, фактор некроза опухолей (ТИР), ТИР-а, ТИР-β, рецептор ТИР типа I, рецептор ТИР типа II, ТИШ-Р ТР0, УЕСЕ, УЕСЕ А, УЕСР В, УЕСР С, УЕСР Ό, рецептор УЕСР типа 1, рецептор УЕСР типа 2, рецептор УЕСР типа 3, ССР-2, СВ0/МСЗА, СВ0-Р, СВ0-у, НСС1, 1-309, НЕВ 1, НЕВ 2, НЕВ 3 и НЕВ 4.
  84. 84. Лекарственный конъюгат по п.16 или 39, где указанное лекарство выбрано из группы, включающей АроЕ, Аро-ЗАА, ВЭИР, кардиотрофин-1, СЕА, СЭ40, лиганд СЭ40, СЭ56, СЭ38, Со138, ЕСЕ, рецептор ЕСЕ, ЕИА-78, эотаксин, эотаксин-2, экзодус-2, РАРа, ЕСЕ-кислый, ЕСЕ-основный, фактор роста фибробластов-10, ЕЬТ3 лиганд, фракталкин (СХ3С), СЭИР, С-СЗЕ, СМ-СЗЕ, СЕ-Р1, сывороточный альбумин человека, инсулин, ШИ-у, 1СЕ-1, 1СЕ-11, 1Ь-1а, ΙΠ-1β, рецептор 1Ь-1, 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, ГО-7, ГО-8 (72 а.к.), 1Ь-8 (77 а.к.), 1Ь-9, 1Ь-10, 1Ь-11, 1Ь-12, 1Ь-13, 1Ь-15, 1Ь-16, 1Ь-17, 1Ь-18 (1С1Е), ингибин а, ингибин β, ГР-10, фактор роста кератиноцитов-2 (КСЕ-2), КСЕ, лептин, ЫЕ, лимфотактин, Мюллеров ингибирующий фактор (Ми11епап), фактор, ингибирующий колониеобразование моноцитов, белокаттрактант моноцитов, М-СЗЕ, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), МСР-1 (МСАР), МСР-2, МСР-3, МСР-4, МОС (67 а.к.), МОС (69 а.к.), М1С, М1Р-1а, М1Р-1Р, М1Р-3а, М1Р-3Р, М1Р-4, миелоидный предшественник ингибирующего фактора-1 (МР1Е-1), ИАР-2, неуртурин (ИешГигт), фактор роста нервов, Р-ИСЕ, ИТ3, ИТ-4, онкостатин М, РОСЕ-АА, РОСЕ-АВ, РОСЕ-ВВ, РЕ-4, ВАИТЕЗ, ЗОЕ1а, ЗПЕ1р, ЗСЕ, ЗССЕ, стволовый клеточный фактор (ЗСЕ), ТАВС, ТСЕ-а, ТСЕ-β, ТСЕ-Р2, ТСЕ-Р3, фактор некроза опухолей (ТИР), ТИР-а, ТИР-β, рецептор ТИР типа I, рецептор ТИР типа II, ТИШ-Е ТР0, УЕСЕ, УЕСЕ А, УЕСЕ В, УЕСЕ С, УЕСЕ Ό, рецептор УЕСЕ типа 1, рецептор УЕСЕ типа 2, рецептор УЕСЕ типа 3, ССР-2, СВ0/МСЗА, СВ0-Р, СВ0-у, НСС1, 1-309, НЕВ 1, НЕВ 2, НЕВ 3 и НЕВ 4.
  85. 85. Лекарственный гибрид по п.1, где Υ содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 10, ЗЕС ГО N0: 11, ЗЕС ГО N0: 12, ЗЕС ГО N0: 13, ЗЕС ГО N0: 14, ЗЕС ГО N0: 15, ЗЕС ГО N0: 24, ЗЕС ГО N0: 25 и ЗЕС ГО N0: 26.
  86. 86. Лекарственный гибрид по п.1, где Υ содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 16, ЗЕС ГО N0: 17, ЗЕС ГО N0: 18, ЗЕС ГО N0: 19, ЗЕС ГО N0: 20, ЗЕС ГО N0: 21, ЗЕС ГО N0: 22 и ЗЕС ГО N0: 23.
  87. 87. Лекарственный гибрид по п.12, где Υ' содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 10, ЗЕС ГО N0: 11, ЗЕС ГО N0: 12, ЗЕС ГО N0: 13, ЗЕС ГО N0: 14, ЗЕС ГО N0: 15, ЗЕС ГО N0: 24, ЗЕС ГО N0: 25 и ЗЕС ГО N0: 26.
  88. 88. Лекарственный гибрид по п.12, где Υ' содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 16, ЗЕС ГО N0: 17, ЗЕС ГО N0: 18, ЗЕС ГО N0: 19, ЗЕС ГО N0: 20, ЗЕС ГО N0: 21, ЗЕС ГО N0: 22 и ЗЕС ГО N0: 23.
  89. 89. Лекарственный конъюгат по п.16, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (УН), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 10, ЗЕС ГО N0: 11, ЗЕС ГО N0: 12, ЗЕС ГО N0: 13, ЗЕС ГО N0: 14, ЗЕС ГО N0: 15, ЗЕС ГО N0: 24, ЗЕС ГО N0: 25, ЗЕС ГО N0: 26, ЗЕС ГО N0: 16, ЗЕС ГО N0: 17, ЗЕС ГО N0: 18, ЗЕС ГО N0: 19, ЗЕС ГО N0: 20, ЗЕС ГО N0: 21, ЗЕС ГО N0: 22 и ЗЕС ГО N0: 23.
  90. 90. Лекарственный конъюгат по п.39, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (УН), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уь), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 10, ЗЕС ГО N0: 11, ЗЕС ГО N0: 12, ЗЕС ГО N0: 13, ЗЕС ГО N0: 14, ЗЕС ГО N0: 15, ЗЕС ГО N0: 24, ЗЕС ГО N0: 25, ЗЕС ГО N0: 26, ЗЕС ГО N0: 16, ЗЕС ГО N0: 17, ЗЕС ГО N0: 18, ЗЕС ГО N0: 19, ЗЕС ГО N0: 20, ЗЕС ГО N0: 21, ЗЕС ГО N0: 22 и ЗЕС ГО N0: 23.
  91. 91. Лекарственный конъюгат по п.90, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (УН), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, или вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (Уъ), который обладает специфичностью связывания по отношению к сывороточному альбумину, содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из ЗЕС ГО N0: 10, ЗЕС ГО N0: 11, ЗЕС ГО N0: 12, ЗЕС ГО N0: 13,
    - 111 012622
    ЗЕО II) 14, ЗЕО ГО 15, ЗЕО ГО 24, ЗЕО ГО 25, ЗЕО ГО 26, ЗЕО ГО 16,
    ЗЕО ГО 17, ЗЕО ГО 18, ЗЕО ГО 19, ЗЕО ГО 20, ЗЕО ГО 21, ЗЕО ГО 22 и ЗЕО ГО 23.
  92. 92. Применение лекарственного гибрида по п.1 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
  93. 93. Применение лекарственного гибрида по п.9 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
  94. 94. Применение лекарственного конъюгата по п.16 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
  95. 95. Применение нековалентного лекарственного конъюгата по п.39 для изготовления лекарства для лечения расстройства или заболевания.
EA200602183A 2004-06-01 2005-05-31 Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки EA012622B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US57627104P 2004-06-01 2004-06-01
US63236104P 2004-12-02 2004-12-02
PCT/GB2005/002163 WO2005118642A2 (en) 2004-06-01 2005-05-31 Bispecific fusion antibodies with enhanced serum half-life

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200602183A1 EA200602183A1 (ru) 2007-06-29
EA012622B1 true EA012622B1 (ru) 2009-10-30

Family

ID=35457415

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200602183A EA012622B1 (ru) 2004-06-01 2005-05-31 Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки

Country Status (12)

Country Link
US (2) US8921528B2 (ru)
EP (2) EP2740743A3 (ru)
JP (2) JP2008500830A (ru)
KR (2) KR20070039911A (ru)
AU (1) AU2005250216B2 (ru)
BR (1) BRPI0511755A (ru)
CA (1) CA2569240A1 (ru)
EA (1) EA012622B1 (ru)
IL (1) IL179633A0 (ru)
MX (1) MXPA06014031A (ru)
TW (1) TW200607523A (ru)
WO (1) WO2005118642A2 (ru)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2589697C2 (ru) * 2009-12-18 2016-07-10 Экзодос Лайф Сайенсиз Лимитед Партнершип Способы получения стабильных жидких лекарственных препаратов и их композиции
RU2605309C2 (ru) * 2010-04-30 2016-12-20 Молекьюлер Партнерс Аг Модифицированные связывающие белки, ингибирующие взаимодействие vegf-a рецептора
RU2661087C2 (ru) * 2013-08-30 2018-07-11 Априлбио Ко., Лтд Гибридная конструкция, включающая антигенсвязывающий фрагмент, специфичный к сывороточному альбумину, и эффекторный компонент, и способы ее получения
RU2758513C2 (ru) * 2017-06-02 2021-10-29 Пфайзер Инк. Антитела, специфичные к flt3, и их применения
US11498960B2 (en) 2017-07-11 2022-11-15 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Polypeptides that bind complement component C5 or serum albumin and fusion proteins thereof
RU2794359C2 (ru) * 2017-07-11 2023-04-17 Алексион Фармасьютикалз, Инк. Полипептиды, которые связываются с компонентом комплемента c5 или сывороточным альбумином, и их белки слияния

Families Citing this family (129)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7169752B2 (en) 2003-09-30 2007-01-30 New River Pharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for prevention of overdose of oxycodone
US20060014697A1 (en) 2001-08-22 2006-01-19 Travis Mickle Pharmaceutical compositions for prevention of overdose or abuse
NZ532427A (en) 2001-09-24 2008-07-31 Imp Innovations Ltd Modification of feeding behavior using PYY (peptide YY) and its agonists such as NPY (neuropeptide Y)
DE60305919T2 (de) * 2002-06-28 2007-01-18 Domantis Limited, Cambridge Dual-specifische liganden mit erhöhter halbwertszeit
US9321832B2 (en) * 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
US8921528B2 (en) 2004-06-01 2014-12-30 Domantis Limited Bispecific fusion antibodies with enhanced serum half-life
CA2589800A1 (en) * 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
WO2006134340A2 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Imperial Innovations Limited Oxyntomodulin analogues and their effects on feeding behaviour
US8486890B2 (en) 2006-03-15 2013-07-16 Novo Nordisk A/S Amylin derivatives
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
CN105175553B (zh) * 2007-05-30 2019-11-22 浦项工科大学校产学协力团 免疫球蛋白融合蛋白
ES2415604T3 (es) * 2007-05-30 2013-07-26 Postech Academy-Industry- Foundation Proteínas de fusión de inmunoglobulina
CA2698419C (en) * 2007-09-07 2019-11-12 Edward Dolk Binding molecules with multiple binding sites, compositions comprising the same and uses thereof
EP2036923A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-18 Novo Nordisk A/S Improved derivates of amylin
ES2622460T3 (es) 2007-09-26 2017-07-06 Ucb Biopharma Sprl Fusiones de anticuerpos con doble especificidad
DK2567709T3 (en) * 2007-11-02 2018-03-12 Novartis Ag Molecules and Methods for Modulating Low-Density Lipoprotein Receptor-Related Protein 6 (LRP6)
EA018471B1 (ru) * 2008-03-31 2013-08-30 Глаксо Груп Лимитед Слитые конструкции и конъюгаты лекарственного средства
CN102089325A (zh) 2008-04-17 2011-06-08 埃博灵克斯股份有限公司 能够结合血清白蛋白的肽，以及包含其的化合物、构建体和多肽
EP2439212B1 (en) * 2008-05-02 2016-12-21 Novartis AG Improved fibronectin-based binding molecules and uses thereof
CN102171247A (zh) * 2008-07-02 2011-08-31 特鲁比昂药品公司 TNF-α拮抗剂多靶点结合蛋白
US20100136584A1 (en) * 2008-09-22 2010-06-03 Icb International, Inc. Methods for using antibodies and analogs thereof
US20100092470A1 (en) * 2008-09-22 2010-04-15 Icb International, Inc. Antibodies, analogs and uses thereof
WO2010046357A1 (en) 2008-10-21 2010-04-29 Novo Nordisk A/S Amylin derivatives
CN102257009A (zh) * 2008-10-21 2011-11-23 杜门蒂斯有限公司 具有针对dc-sign的结合特异性的配体
AU2009314311B2 (en) 2008-10-29 2013-01-10 Ablynx N.V. Methods for purification of single domain antigen binding molecules
BR122018013284B1 (pt) 2008-10-29 2022-03-03 Ablynx N.V Formulações de moléculas de ligação ao antígeno de domínio único, seu método de formulação e seu uso, kit ou artigo de fabricação, bem como método para preparar uma formulação reconstituída contendo uma molécula de sdab
US8927694B2 (en) 2008-11-18 2015-01-06 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Human serum albumin linkers and conjugates thereof
CA2743177A1 (en) * 2008-11-24 2010-05-27 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles with improved properties
KR101820968B1 (ko) 2009-02-19 2018-01-23 글락소 그룹 리미티드 개선된 항-혈청 알부민 결합 변이체
MX2011008749A (es) 2009-02-19 2011-09-06 Glaxo Group Ltd Variantes de union a anti-albumina de suero mejoradas.
KR20110137819A (ko) * 2009-03-27 2011-12-23 글락소 그룹 리미티드 약물 융합체 및 컨쥬게이트
WO2010120514A2 (en) * 2009-03-31 2010-10-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antigen-binding proteins comprising recombinant protein scaffolds
BRPI1006443B1 (pt) 2009-04-22 2021-05-25 Alteogen, Inc Proteína ou peptídeo de fusão e método para aumentar a meia-vida in vivo de uma proteína ou peptídeo
US20120058116A1 (en) 2009-04-24 2012-03-08 Andrew Beaton Fgfr1c antibody combinations
EP2448966B1 (en) 2009-07-03 2018-11-14 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
CN102574914A (zh) 2009-07-16 2012-07-11 葛兰素集团有限公司 改进的抗血清清蛋白结合性单可变区
GB201005063D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Ucb Pharma Sa Biological products
SG10201406063XA (en) 2009-09-30 2014-11-27 Glaxo Group Ltd Drug fusions and conjugates with extended half life
ES2691717T3 (es) 2009-10-30 2018-11-28 Novartis Ag Bibliotecas universales del dominio de unión del lado inferior de tipo iii de la fibronectina de tipo III
AU2010336029B2 (en) 2009-12-23 2011-10-13 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them 2
CA2788993A1 (en) 2010-02-05 2011-08-11 Ablynx N.V. Peptides capable of binding to serum albumin and compounds, constructs and polypeptides comprising the same
US20110206672A1 (en) * 2010-02-25 2011-08-25 Melvyn Little Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof
WO2011131659A2 (en) 2010-04-21 2011-10-27 Glaxo Group Limited Binding domains
AU2011254559B2 (en) 2010-05-20 2014-09-04 Glaxo Group Limited Improved anti-serum albumin binding variants
AU2011277983C1 (en) 2010-07-16 2016-09-29 Ablynx Nv Modified single domain antigen binding molecules and uses thereof
JP2013538566A (ja) 2010-08-13 2013-10-17 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド 改良された抗血清アルブミン結合変異体
MX2013002055A (es) 2010-08-20 2013-07-22 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Variantes anti-enlace de albumina de suero mejodas.
TW201302793A (zh) 2010-09-03 2013-01-16 Glaxo Group Ltd 新穎之抗原結合蛋白
JP6190723B2 (ja) 2010-12-01 2017-08-30 アルダーバイオ ホールディングス エルエルシー 抗ｎｇｆ組成物およびその使用
US11214610B2 (en) 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
US9067988B2 (en) 2010-12-01 2015-06-30 Alderbio Holdings Llc Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies
US9078878B2 (en) 2010-12-01 2015-07-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75
US9539324B2 (en) 2010-12-01 2017-01-10 Alderbio Holdings, Llc Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions
EP2646467A2 (en) 2010-12-01 2013-10-09 Glaxo Group Limited Improved anti-serum albumin binding single variable domains
US9884909B2 (en) 2010-12-01 2018-02-06 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
EP2670778A1 (en) 2011-02-02 2013-12-11 Glaxo Group Limited Novel antigen binding proteins
WO2012136792A2 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Glaxo Group Limited Cck compositions
WO2012136790A1 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Glaxo Group Limited Compositions comprising fusion proteins or conjugates with an improved half -life
WO2012166906A1 (en) 2011-05-31 2012-12-06 Massachusetts Institute Of Technology Cell-directed synthesis of multifunctional nanopatterns and nanomaterials
AU2012279237B2 (en) 2011-07-01 2016-09-29 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions, uses and methods for treatment of metabolic disorders and diseases
DK2744931T3 (en) 2011-08-18 2018-08-06 Affinity Biosciences Pty Ltd SOLUBLE POLYPEPTIDES
WO2013068571A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Ucb Pharma S.A. Albumin binding antibodies and binding fragments thereof
GB201203071D0 (en) 2012-02-22 2012-04-04 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2013128027A1 (en) * 2012-03-01 2013-09-06 Amgen Research (Munich) Gmbh Long life polypeptide binding molecules
US9345766B2 (en) 2012-08-30 2016-05-24 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies comprising anti-ERBB3 agents
US20150231199A1 (en) * 2012-09-07 2015-08-20 Agency For Science, Technology And Research Peptides and their uses
WO2014085365A2 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of metabolic disorders and diseases
JP6403685B2 (ja) 2012-12-27 2018-10-17 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 胆汁酸ホメオスタシス調整並びに胆汁酸障害及び疾患の治療の方法
WO2014111550A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Modified anti-serum albumin binding proteins
AU2014211438B2 (en) 2013-01-31 2017-02-02 Glaxo Group Limited Method of producing a protein
EP3019192A4 (en) 2013-07-08 2017-07-05 Nanjingjinsirui Science&Technology Biology Corporation Compositions and methods for increasing protein half-life in a serum
ES2815572T3 (es) 2014-05-16 2021-03-30 Ablynx Nv Dominios variables de inmunoglobulina
GB201409558D0 (en) 2014-05-29 2014-07-16 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412658D0 (en) * 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
EP3209697A4 (en) 2014-10-23 2018-05-30 La Trobe University Fn14-binding proteins and uses thereof
RU2729161C2 (ru) 2014-10-23 2020-08-04 ЭнДжиЭм БАЙОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. Фармацевтические композиции, содержащие варианты пептидов, и способы их применения
WO2016068294A1 (ja) * 2014-10-31 2016-05-06 株式会社カネカ タンパク質合成阻害タンパク質毒素を含むポリペプチドの製造方法
JP6863897B2 (ja) 2015-01-09 2021-04-21 アダルタ・リミテッド Ｃｘｃｒ４結合分子
IL274151B (en) 2015-05-21 2022-07-01 Harpoon Therapeutics Inc Trispecific binding proteins and methods of use
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
US10744185B2 (en) 2015-11-09 2020-08-18 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of using variants of FGF19 polypeptides for the treatment of pruritus
GB201521389D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Method
GB201521383D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech Method
GB201521391D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521382D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521393D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
JP7101621B2 (ja) 2016-05-20 2022-07-15 ハープーン セラピューティクス，インク． 単一ドメイン血清アルブミン結合タンパク質
MX2018014227A (es) 2016-05-20 2019-08-22 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union de cadena unica de fragmento variable cd3.
US10806806B2 (en) 2016-06-23 2020-10-20 Cornell University Trifunctional constructs with tunable pharmacokinetics useful in imaging and anti-tumor therapies
AU2017357931A1 (en) * 2016-11-10 2019-06-20 Keros Therapeutics, Inc. GDNF fusion polypeptides and methods of use thereof
EA201991168A1 (ru) 2016-11-23 2019-12-30 Харпун Терапьютикс, Инк. Белок, связывающий простатический специфический мембранный антиген
KR20190087539A (ko) 2016-11-23 2019-07-24 하푼 테라퓨틱스, 인크. Psma 표적화 삼중특이성 단백질 및 사용 방법
WO2018130660A1 (en) * 2017-01-13 2018-07-19 Academia Sinica Reloadable hydrogel system for treating myocardial infarction
EP3583125A2 (en) 2017-02-16 2019-12-25 Sonnet Bio Therapeutics Albumin binding domain fusion proteins
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
CA3058663A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Cornell University Trifunctional constructs with tunable pharmacokinetics useful in imaging and anti-tumor therapies
CN115028727A (zh) 2017-05-12 2022-09-09 哈普恩治疗公司 靶向msln的三特异性蛋白质及使用方法
BR112019023855B1 (pt) 2017-05-12 2021-11-30 Harpoon Therapeutics, Inc Proteínas de ligação à mesotelina
EP3470426A1 (en) 2017-10-10 2019-04-17 Numab Therapeutics AG Multispecific antibody
CN111194323B (zh) 2017-10-10 2024-07-09 努玛治疗有限公司 多特异性抗体
AU2018346955A1 (en) 2017-10-13 2020-04-30 Harpoon Therapeutics, Inc. B cell maturation antigen binding proteins
CN111630070A (zh) 2017-10-13 2020-09-04 哈普恩治疗公司 三特异性蛋白质及使用方法
US20210230242A1 (en) * 2018-06-18 2021-07-29 Anwita Biosciences, Inc. Cytokine fusion proteins and uses thereof
CA3114038A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
EP3816185A1 (en) 2019-11-04 2021-05-05 Numab Therapeutics AG Multispecific antibody directed against pd-l1 and a tumor-associated antigen
WO2021113740A1 (en) * 2019-12-04 2021-06-10 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for reducing off-target toxicity of antibody drug conjugates
GB201919061D0 (en) 2019-12-20 2020-02-05 Ucb Biopharma Sprl Multi-specific antibody
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
CA3170833A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Flt3 binding proteins and methods of use
US20230293647A1 (en) 2020-04-09 2023-09-21 Autolus Limited Polypeptide
GB202007441D0 (en) 2020-05-19 2020-07-01 Autolus Ltd Polypeptide
EP3915580A1 (en) 2020-05-29 2021-12-01 Numab Therapeutics AG Multispecific antibody
KR20230065254A (ko) * 2020-08-05 2023-05-11 신테카인, 인크. IL27Rα 결합 분자 및 사용 방법
TW202229312A (zh) 2020-09-29 2022-08-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 由非ｈｌａ－ａ*０２顯露以用於不同類型癌症之免疫治療的醯胺化肽及其脫醯胺化對應物
DE102020125465A1 (de) 2020-09-29 2022-03-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Amidierte Peptide und ihre deamidierten Gegenstücke, die durch nicht-HLA-A*02-Moleküle präsentiert werden, zur Verwendung in der Immuntherapie gegen verschiedene Krebsarten
DE102020125457A1 (de) 2020-09-29 2022-03-31 Immatics Biotechnologies Gmbh Amidierte Peptide und ihre deamidierten Gegenstücke, die durch HLA-A*02-Moleküle präsentiert werden, zur Verwendung in der Immuntherapie gegen verschiedene Krebsarten
EP3988568A1 (en) 2020-10-21 2022-04-27 Numab Therapeutics AG Combination treatment
IL303295A (en) 2020-12-07 2023-07-01 UCB Biopharma SRL Multispecific antibodies and antibody combinations
TW202241925A (zh) 2021-01-15 2022-11-01 德商英麥提克生物技術股份有限公司 用於不同類型癌症免疫治療的ｈｌａ展示肽
CA3208781A1 (en) 2021-02-02 2022-08-11 Bithi CHATTERJEE Multispecific antibodies having specificity for ror1 and cd3
EP4183800A1 (en) 2021-11-19 2023-05-24 Medizinische Hochschule Hannover Novel sars-cov-2 neutralizing antibodies
WO2023212238A1 (en) * 2022-04-29 2023-11-02 Geneworks, Llc Method and composition for assaying stem cell mimetic peptides in vitro
TW202409074A (zh) * 2022-05-07 2024-03-01 大陸商北京拓界生物醫藥科技有限公司 鬆弛素或類似物的融合蛋白及其醫藥用途
WO2024038095A1 (en) 2022-08-16 2024-02-22 Iome Bio NOVEL ANTI-RGMb ANTIBODIES

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991001743A1 (en) * 1989-08-01 1991-02-21 Cemu Bioteknik Ab Stabilized protein or peptide conjugates
WO2001045746A2 (en) * 1999-12-24 2001-06-28 Genentech, Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
WO2003002609A2 (en) * 2001-06-28 2003-01-09 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
US20030166524A1 (en) * 2000-05-22 2003-09-04 John Ford Therapeutic uses of IL-1 receptor antagonist
EP1378520A1 (en) * 2001-04-11 2004-01-07 Institute of Genetics, Chinese Academy of Sciences Cyclic single strand trispecific antibody
WO2004003019A2 (en) * 2002-06-28 2004-01-08 Domantis Limited Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs
US20040077022A1 (en) * 1998-10-23 2004-04-22 Ulrich Feige Modified peptides as therapeutic agents
WO2004041862A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
WO2004041867A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against imminoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4172124A (en) 1978-04-28 1979-10-23 The Wistar Institute Method of producing tumor antibodies
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
JP3095168B2 (ja) 1988-02-05 2000-10-03 エル． モリソン，シェリー ドメイン‐変性不変部を有する抗体
US5116946A (en) 1988-06-08 1992-05-26 Eniricerche S.P.A. Synthetic, immunologically active peptides useful for the preparation of antimalarial vaccines
US5609869A (en) * 1988-08-19 1997-03-11 The General Hospital Corporation Hybrid immunoglobulin-thrombolytic enzyme molecules which specifically bind a thrombus, and methods of their production and use
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
JP2919890B2 (ja) 1988-11-11 1999-07-19 メディカル リサーチ カウンスル 単一ドメインリガンド、そのリガンドからなる受容体、その製造方法、ならびにそのリガンドおよび受容体の使用
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
IL106271A (en) 1992-09-03 2008-03-20 Yeda Res & Dev Ligand to TNF 75P receptor and its preparation
US6267964B1 (en) 1989-08-01 2001-07-31 Affibody Technology Sweden Ab Stabilized protein or peptide conjugates able to bond albumin having extended biological half-lives
US5977307A (en) 1989-09-07 1999-11-02 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific ligand-neuropharmaceutical agent fusion proteins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
IL97459A0 (en) 1990-03-09 1992-06-21 Hybritech Inc Trifunctional antibody-like compounds as a combined diagnostic and therapeutic agent
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5612034A (en) 1990-10-03 1997-03-18 Redcell, Inc. Super-globuling for in vivo extended lifetimes
WO1992022523A2 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Research Corporation Technologies, Inc. Peptide derivatives of collagenase inhibitor
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
HU221343B1 (en) 1992-10-28 2002-09-28 Genentech Inc Use of anti-vegf antibodies for the treatment of cancer
ATE199392T1 (de) 1992-12-04 2001-03-15 Medical Res Council Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung
CA2115811A1 (en) 1993-02-17 1994-08-18 Claus Krebber A method for in vivo selection of ligand-binding proteins
EP0754225A4 (en) 1993-04-26 2001-01-31 Genpharm Int HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS
WO1994026087A2 (en) 1993-05-14 1994-11-24 Connor Kim C O Recombinant protein production and insect cell culture and process
SE9400088D0 (sv) 1994-01-14 1994-01-14 Kabi Pharmacia Ab Bacterial receptor structures
EP0739984A1 (en) 1995-04-26 1996-10-30 San Tumorforschungs-Gmbh Bivalent polypeptides containing at least two domains
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5702892A (en) 1995-05-09 1997-12-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Phage-display of immunoglobulin heavy chain libraries
JP4436457B2 (ja) 1995-08-18 2010-03-24 モルフォシス アイピー ゲーエムベーハー 蛋白質／（ポリ）ペプチドライブラリー
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
DE19624387C2 (de) 1996-06-19 1999-08-19 Hatz Motoren Kaltstartvorrichtung
EP2314625B1 (en) 1996-12-03 2014-05-07 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
ES2273415T3 (es) 1997-04-07 2007-05-01 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-vegf.
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
AU8800598A (en) 1997-06-20 1999-01-04 Innogenetics N.V. B7-binding molecules for treating immune diseases
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
US6197582B1 (en) 1998-03-18 2001-03-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Development of human monoclonal antibodies and uses thereof
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
EP1179013A1 (en) 1999-05-14 2002-02-13 Medical Research Council Protein scaffold and its use to multimerise monomeric polypeptides
CA2399388A1 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Michael J. Lenardo Identification of a domain in the tumor necrosis factor receptor family that mediates pre-ligand receptor assembly and function
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
EP1299419A2 (en) 2000-05-24 2003-04-09 Imclone Systems, Inc. Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production
CA2411374C (en) 2000-06-29 2012-10-30 Abbott Laboratories Dual specificity antibodies and methods of making and using
US7319139B2 (en) 2001-01-29 2008-01-15 Biogen Idec, Inc. TAG-72 specific CH2 domain deleted antibodies
JP4336771B2 (ja) 2001-03-09 2009-09-30 モルフォシス アーゲー 血清アルブミン結合部分
US7186797B2 (en) * 2001-08-10 2007-03-06 Epix Pharmaceuticals, Inc. Polypeptide conjugates with extended circulating half-lives
CA2462883A1 (en) 2001-10-12 2003-04-17 Schering Corporation Use of bispecific antibodies to regulate immune responses
EP1471928A1 (en) 2002-02-07 2004-11-03 Delta Biotechnology Limited Hiv inhibiting proteins
GB0213878D0 (en) 2002-06-17 2002-07-31 Protherics Plc Use
WO2004001064A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Dyax Corporation Serum protein-associated target-specific ligands and identification method therefor
HUE025086T2 (en) 2002-10-10 2016-02-29 Merck Patent Gmbh Pharmaceutical preparations for ERB-B1 receptor
ES2466716T3 (es) * 2002-11-08 2014-06-11 Ablynx N.V. Anticuerpos de un solo dominio estabilizados
CA2511910A1 (en) 2002-12-27 2004-07-15 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
JP3803790B2 (ja) 2003-02-17 2006-08-02 株式会社東北テクノアーチ 新規なダイアボディ型二重特異性抗体
EP2357237A1 (en) 2003-05-14 2011-08-17 Domantis Limited A process for recovering polypeptides that unfold reversibly from a polypeptide repertoire
JP5087274B2 (ja) 2003-06-30 2012-12-05 ドマンティス リミテッド ポリペプチド
EP1638510B1 (en) 2003-07-01 2015-09-02 Immunomedics, Inc. Multivalent carriers of bi-specific antibodies
AU2004263538B2 (en) 2003-08-08 2009-09-17 Immunomedics, Inc. Bispecific antibodies for inducing apoptosis of tumor and diseased cells
TW200526254A (en) 2003-09-19 2005-08-16 Novo Nordisk As Novel GLP-1 derivatives
EP1732613A2 (en) 2004-04-06 2006-12-20 Affibody AB Use of serum albumin binding peptides conjugates for the preparation of a medicament
US8921528B2 (en) 2004-06-01 2014-12-30 Domantis Limited Bispecific fusion antibodies with enhanced serum half-life
CN101724071A (zh) 2004-10-08 2010-06-09 杜门蒂斯有限公司 抗肿瘤坏死因子受体1的单域抗体及其使用方法
EP1957115B8 (en) * 2005-11-10 2014-03-05 Celldex Therapeutics, Inc. Method of treating ovarian and renal cancer using antibodies against t cell immunoglobulin domain and mucin domain 1 (tim-1) antigen

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991001743A1 (en) * 1989-08-01 1991-02-21 Cemu Bioteknik Ab Stabilized protein or peptide conjugates
US20040077022A1 (en) * 1998-10-23 2004-04-22 Ulrich Feige Modified peptides as therapeutic agents
WO2001045746A2 (en) * 1999-12-24 2001-06-28 Genentech, Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
US20030166524A1 (en) * 2000-05-22 2003-09-04 John Ford Therapeutic uses of IL-1 receptor antagonist
EP1378520A1 (en) * 2001-04-11 2004-01-07 Institute of Genetics, Chinese Academy of Sciences Cyclic single strand trispecific antibody
WO2003002609A2 (en) * 2001-06-28 2003-01-09 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
WO2004003019A2 (en) * 2002-06-28 2004-01-08 Domantis Limited Immunoglobin single variant antigen-binding domains and dual-specific constructs
WO2004041862A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Single domain antibodies directed against tumour necrosis factor-alpha and uses therefor
WO2004041867A2 (en) * 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against imminoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CORTEZ-RETAMOZO VIRNA ET AL.: "Efficient cancer therapy with a nanobody-based conjugate". CANCER RESEARCH. 15 APR. 2004, vol. 64, no. 8, 15 April 2004 (2004-04-15), pages 2853-2857, XP002360683, ISSN: 0008-5472, the whole document *
DENNIS MARK S. ET AL.: "Albumin binding as a general strategy for improving the pharmacokinetics of proteins". JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 277, no. 38, 20 September, 2002 (2002-09-20), pages 35035-35043, XP002285300, ISSN: 0021-9258, the whole document *
GOUZE-J.N.: "A Comparative Study of the Inhibitory Effects of Interleukin-1 Receptor Antagonist Following Administration as a Recombinant Protein or by Gene Transfer". ARTHRITIS RES THER, 'Online! vol. 5, no. 5, 2003, page 301-309, XP002360782, Retrieved from the Internet: URL:http://www.medscape.com/viewarticle/46 0712_print> paragraph 'INTRODUCTION! abstract *
HARMSEN ET AL.: "Prolonged in vivo residence times of llama single-domain antibody fragments in pigs by binding to porcine immunoglobulins". VACCINE, BUTTERWORTH SCIENTIFIC. GUILDFORD, GB, vol. 23, no. 41, 13 June, 2005 (2005-06-13), pages 4926-4934, XP005063278, ISSN: 0264-410X, the whole document *
HOLLIGER PHILIPP ET AL.: "Retargeting serum immunoglobulin with bispecific diabodies". NATURE BIOTECHNOLOGY, vol. 15, no. 7, 1997, pages 632-636, XP002900862, ISSN: 1087-0156, abstract *
HOLT L.J. ET AL.: "Domain antibodies: proteins for therapy". TRENDS IN BIOTECHNOLOGY, ELSEVIER PUBLICATIONS, CAMBRIDGE, GB, vol. 21, no. 11, November 2003 (2003-11), pages 484-490, XP004467495, ISSN: 0167-7799, abstract, page 488 *
SMITH B.J. ET AL.: "Prolonged in vivo residence times of antibody fragments associated with albumin". BIOCONJUGATE CHEMISTRY. 2001 SEP-OCT, vol. 12, no. 5, September 2001 (2001-09), pages 750-756, XP002270731, ISSN: 1043-1802, the whole document *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2589697C2 (ru) * 2009-12-18 2016-07-10 Экзодос Лайф Сайенсиз Лимитед Партнершип Способы получения стабильных жидких лекарственных препаратов и их композиции
RU2605309C2 (ru) * 2010-04-30 2016-12-20 Молекьюлер Партнерс Аг Модифицированные связывающие белки, ингибирующие взаимодействие vegf-a рецептора
RU2661087C2 (ru) * 2013-08-30 2018-07-11 Априлбио Ко., Лтд Гибридная конструкция, включающая антигенсвязывающий фрагмент, специфичный к сывороточному альбумину, и эффекторный компонент, и способы ее получения
RU2758513C2 (ru) * 2017-06-02 2021-10-29 Пфайзер Инк. Антитела, специфичные к flt3, и их применения
US11421040B2 (en) 2017-06-02 2022-08-23 Pfizer Inc. Antibodies specific for FLT3 and their uses
US11498960B2 (en) 2017-07-11 2022-11-15 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Polypeptides that bind complement component C5 or serum albumin and fusion proteins thereof
RU2794359C2 (ru) * 2017-07-11 2023-04-17 Алексион Фармасьютикалз, Инк. Полипептиды, которые связываются с компонентом комплемента c5 или сывороточным альбумином, и их белки слияния

Also Published As

Publication number Publication date
KR20120133403A (ko) 2012-12-10
AU2005250216A1 (en) 2005-12-15
EP2740743A2 (en) 2014-06-11
JP2008500830A (ja) 2008-01-17
CA2569240A1 (en) 2005-12-15
MXPA06014031A (es) 2007-10-08
EA200602183A1 (ru) 2007-06-29
EP1784427A2 (en) 2007-05-16
US20150064185A1 (en) 2015-03-05
TW200607523A (en) 2006-03-01
US8921528B2 (en) 2014-12-30
EP2740743A3 (en) 2015-08-19
WO2005118642A3 (en) 2006-03-23
KR20070039911A (ko) 2007-04-13
US20080260757A1 (en) 2008-10-23
BRPI0511755A (pt) 2008-01-02
AU2005250216B2 (en) 2009-12-10
WO2005118642A2 (en) 2005-12-15
JP2012135311A (ja) 2012-07-19
IL179633A0 (en) 2007-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA012622B1 (ru) Биспецифичные гибридные антитела с увеличенным периодом полувыведения из сыворотки
US11845793B2 (en) Anti-ROR1 antibodies
KR102271204B1 (ko) 다중특이적 항체 작제물
RU2428431C2 (ru) Слитые конструкции лекарственного средства и конъюгаты
ES2424643T3 (es) Proteínas bouganina modificadas, citotoxinas y procedimientos y usos de las mismas
JP7324565B2 (ja) Ｃｄ１２７に対する抗体
WO2015184941A1 (zh) 一种cd7纳米抗体、其编码序列及应用
KR20070099584A (ko) 도메인 항체와 컨주게이션되어 혈청 반감기가 증가된ｐｌａｄ 도메인 펩티드
WO2021057822A1 (en) Anti-ror1 antibodies and preparation method and uses thereof
EP3502142B1 (en) Bispecific antibody and antibody conjugate for tumour therapy and use thereof
WO2024046239A1 (zh) 靶向人gprc5d的重组人源化单克隆抗体及其应用
US20210388049A1 (en) Novel Rationally Designed Protein Compositions
AU2018243550B2 (en) ALT-803 in combination with anti-CD38 antibody for cancer therapies
CN113527487A (zh) 抗人b7-h3的单克隆抗体及其应用
EP4269442A1 (en) Mesothelin binding molecule and application thereof
EP4299589A1 (en) Anti-human cd73 antibody and use thereof
JP2023529633A (ja) 抗ｂ７－ｈ３抗体ならびにその調製および適用
CN116096753A (zh) 对abcb5具有特异性的抗体及其用途
CN114685666A (zh) 抗间皮素纳米抗体及其应用
EP4397685A1 (en) Anti-cd3 humanized antibody
CN117843793B (zh) 抗间皮素抗体、抗原结合片段及其用途
WO2023088295A1 (zh) 一种多特异性抗体及其药物用途
EP4269437A1 (en) Pd-1 binding molecule and application thereof
WO2023051618A1 (zh) Ctla-4结合分子及其应用
WO2023143535A1 (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU