RU2794359C2 - Полипептиды, которые связываются с компонентом комплемента c5 или сывороточным альбумином, и их белки слияния - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к слитым белкам на основе специфически связывающихся с человеческим компонентом комплемента C5 полипептидов, и может быть использовано в медицине для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством. Предложены слитые белки, которые включают сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слитые непосредственно, либо через линкер. Изобретение обеспечивает получение слитого белка, включающего сконструированные полипептиды, которые специфически связываются с человеческими компонентом комплемента C5 и сывороточным альбумином, соответственно, без снижения связывания сывороточного альбумина с FcRn или без уменьшения периода полужизни сывороточного альбумина. 13 н. и 9 з.п. ф-лы, 12 ил., 20 табл., 17 пр.

Description

СОПУТСТВУЮЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Настоящая заявка испрашивает преимущество даты приоритета предварительной заявки США № 62/531215, поданной 11 июля 2017 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Компонент комплемента 5 (C5) является пятым компонентом комплемента, который играет важную роль в воспалительных процессах и киллинге клеток. Активированный пептид C5a, который представляет собой анафилатоксин, который обладает сильной спазмогенной и хемотаксической активностью, образуется из альфа полипептида в результате расщепления C5-конвертазой. Продукт расщепления макромолекулы C5b может образовывать комплекс с компонентом комплемента C6, и этот комплекс является основой для образования мембраноатакующего комплекса (MAC), который включает дополнительные компоненты комплемента.

При нарушенной регуляции C5 может привести к ослабленному иммунитету у пациентов или расстройствам, характеризующимся чрезмерной клеточной деградацией (например, гемолитическим расстройствам, вызываемым C5-опосредованным гемолизом).

Поскольку нарушенная регуляция C5 может привести к тяжелым и разрушительным фенотипам, необходимы модуляторы C5 активности с подходящими фармацевтическими свойствами (например, периодом полужизни).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее раскрытие представляет сконструированные полипептиды, которые специфически связываются с компонентом комплемента C5 или сывороточным альбумином, при этом такие сконструированные полипептиды могут представлять собой вариабельные домены sdAb или Ig. В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды не снижают существенным образом или не ингибируют связывание сывороточного альбумина с FcRn, или не уменьшают существенным образом период полужизни сывороточного альбумина. Настоящее раскрытие также представляет слитые белки, включающие такие сконструированные полипептиды, где такие слитые белки могут представлять собой мультивалентные и мультиспецифические слитые белки. Настоящее раскрытие также представляет молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют такие сконструированные полипептиды или слитые белки, и способы получения таких сконструированных полипептидов или слитых белков. Настоящее раскрытие также представляет фармацевтические композиции, которые включают такие сконструированные полипептиды или слитые белки, и способы лечения с использованием таких сконструированных полипептидов или слитых белков.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на слитый белок, включающий сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит с полипептидом, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, либо непосредственно, либо через пептидный линкер. В особом варианте осуществления C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5. В особом варианте осуществления C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином. В особом варианте осуществления полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12 и их фрагментов; и полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:22-34 и их фрагментов. В особом варианте осуществления полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, и полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26. В особом варианте осуществления слитые белки, описанные в настоящей заявке, дополнительно включают пептидный линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102 или 103. В особом варианте осуществления слитый белок включает последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:96-101. В особом варианте осуществления слитый белок состоит из последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:96-101. В особом варианте осуществления слитый белок состоит из полипептидной последовательности SEQ ID NO:96. В особом варианте осуществления полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, включает три определяющие комплементарность области CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:13-17, CDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18 или 19, и CDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:20 или 21. В особом варианте осуществления полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает три определяющие комплементарность области CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:35-43, CDR2 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:44-51, и CDR3 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:52-63. В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающие домены, описанные в настоящей заявке, могут быть сконструированы или далее разработаны так, чтобы связывать антиген pH-зависимым образом, например, с высокой аффинностью к антигену при высоком pH и с более низкой аффинностью связывания с антигеном при более низком pH, или наоборот.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на фармацевтическую композицию, включающую терапевтически эффективное количество слитого белка, описанного в настоящей заявке, и фармацевтически приемлемый носитель. В особом варианте осуществления фармацевтические композиции могут содержать агент, который разрушает или инактивирует гиалуронан, например гиалуронидазу или рекомбинантную гиалуронидазу.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок, описанный в настоящей заявке. Молекула нуклеиновой кислоты может представлять собой, например, вектор экспрессии. Изобретение направлено на клетки-хозяева (например, клетки яичников китайского хомячка (CHO), клетки HEK293, клетки Pichia pastoris, клетки млекопитающих, клетки дрожжей, клетки растений) и системы экспрессии, которые включают или используют нуклеиновые кислоты, которые кодируют слитые белки, описанные в настоящей заявке.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на сконструированный полипептид, который связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12 и их фрагментов. В особом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:3, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:4 или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:5, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:6, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:7, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:8, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:9, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:10, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:11, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:12, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%.

В другом варианте осуществления обеспечивается сконструированный полипептид, который связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12 и их фрагментов. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:3. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:5. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:6. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:7. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:8. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:9. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:10. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:11. в другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:12.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:22-34 и их фрагментов. В особом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентична) любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:22-34. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:22, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:23, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:24, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:25, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:26, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:27, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:28, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:29, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:30, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:31, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:32, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:33, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:34, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%.

В другом варианте осуществления сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:22-34 и их фрагментов. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:22. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:23. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:24. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:25. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:26. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:27. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:28. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:29. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:30. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:31. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:32. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:33. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:34.

В особом варианте осуществления сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает три определяющие комплементарность области CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:35-43, CDR2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:44-51, и CDR3 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:52-63. В особом варианте осуществления полипептид специфически связывается с тем же эпитопом на человеческом сывороточном альбумине, что и Alb1.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на способ получения слитого белка, описанного в настоящей заявке, включающий экспрессию в клетке-хозяине по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на терапевтический набор, включающий: (a) контейнер, включающий этикетку; и (b) композицию, включающую слитый белок, описанный в настоящей заявке; где этикетка указывает, что композиция предназначена для введения пациенту, имеющему, или у которого подозревается, комплемент-опосредованное расстройство. Набор необязательно может включать агент, который разрушает или инактивирует гиалуронан, например, гиалуронидазу или рекомбинантную гиалуронидазу.

В одном варианте осуществления изобретение направлено на способ лечения пациента, имеющего комплемент-опосредованное расстройство, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества слитого белка, описанного в настоящей заявке. В особом варианте осуществления комплемент-опосредованное расстройство выбрано из группы, состоящей из следующих расстройств: ревматоидный артрит; люпус-нефрит; астма; ишемическое-реперфузионное повреждение; атипичный гемолитико-уремический синдром; болезнь плотного осадка; пароксизмальная ночная гемоглобинурия; дегенерация желтого пятна; синдром гемолиза, повышения уровня печеночных ферментов и низкого уровня тромбоцитов (HELLP); синдром Гийена-Барре; синдром CHAPLE; тяжелая миастения; оптиконевромиелит; тромботическая микроангиопатия после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (post-HSCT-TMA); TMA после трансплантации костного мозга (post-BMT TMA); болезнь Дегоса; болезнь Гоше; гломерулонефрит; тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (TTP); спонтанная потеря плода; малоиммунный васкулит; буллезный эпидермолиз; рекуррентная потеря плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга; и повреждение в результате инфаркта миокарда, сердечно-легочного шунтирования и гемодиализа.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1A и 1B показывают результаты анализа классического пути комплемента (CCP) методом гемолиза для анти-C5 VHH доменов.

Фиг. 2 показывает результаты анализа высвобождения C5a для анти-C5 VHH доменов.

Фиг. 3A-3D показывают результаты анализа CCP методом гемолиза для биспецифических слитых белков.

Фиг. 4 показывает результаты анализа CCP методом Wieslab для биспецифических слитых белков.

Фиг. 5 показывает результаты анализа высвобождения C5a для биспецифических слитых белков.

Фиг. 6A и 6B показывают результаты основанного на ЖХ-МС количественного анализа, демонстрирующие фармакокинетику биспецифических слитых белков.

Фиг. 7A-7D показывают Biacore сенсограммы, показывающие связывание FcRn при pH 6,0 в HBS-EP буфере с HSA с насыщением без VHH домена (контроль, Фиг. 7A), MSA21 (Фиг. 7B), HAS040 (Фиг. 7C) или HAS041 (Фиг. 7D).

Фиг. 8A-8D показывают Biacore сенсограммы, показывающие связывание альбумина VHH доменами HAS020, HAS040, HAS041 и HAS044 в конкуренции с Alb1 VHH.

Фиг. 9A и 9B показывают способность различных биспецифических слитых белков ингибировать гемолиз.

Фиг. 10 показывает, что CRL0952 (SEQ ID NO:96) функционально является чрезвычайно схожим с CRL0500 в предотвращении гемолиза. CRL0500 представляет собой биспецифический C5- и альбумин-связывающий слитый белок с (G₄S)₃ (SEQ ID NO:106) линкером.

Фиг. 11A-11D показывают pH-зависимое связывание гистидин-замещенных слитых белков.

Фиг. 12A и 12B показывают pH-зависимое связывание гистидин-замещенных слитых белков.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее раскрытие представляет сконструированные полипептиды, которые специфически связываются с сывороточным альбумином или компонентом комплемента C5, при этом сконструированные полипептиды могут представлять собой, например, однодоменные антитела (sdAb) или вариабельные домены иммуноглобулинов (IgG). В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды не снижают существенным образом или не ингибируют связывание сывороточного альбумина с FcRn или не уменьшают существенным образом период полужизни сывороточного альбумина. Настоящее раскрытие также представляет слитые белки, включающие сконструированные полипептиды, при этом слитые белки могут представлять собой, например, мультивалентные и мультиспецифические слитые белки. Настоящее раскрытие также представляет молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют сконструированные полипептиды или слитые белки, и способы получения таких сконструированных полипептидов или слитых белков. Настоящее раскрытие также представляет фармацевтические композиции, которые включают сконструированные полипептиды или слитые белки, и способы лечения с использованием таких сконструированных полипептидов или слитых белков.

Стандартные методы рекомбинантной ДНК используются для конструирования полинуклеотидов, кодирующих сконструированные полипептиды или слитые белки по настоящему изобретению, включения таких полинуклеотидов в рекомбинантные экспрессирующие векторы и введения таких векторов в клетки-хозяева для продуцирования сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению. См., например, Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3^rd ed.). Если не представлены конкретные определения, номенклатура, а также лабораторные процедуры и методы, используемые в связи с аналитической химией, синтетической органической химией и медицинской и фармацевтической химией, являются такими, которые известны и широко используются в данной области. Аналогичным образом, традиционные методы можно использовать для процедур химического синтеза, химических анализов, получения фармацевтических композиций, формулирования, доставки и лечения пациентов.

Определения

В контексте настоящего раскрытия следующие термины, если не указано иное, следует понимать как имеющие следующие значения. Если контекст не требует иного, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число.

В контексте настоящего раскрытия термин “связывающийся домен” относится к части белка или антитела, которая включает аминокислотные остатки, которые взаимодействуют с антигеном. Связывающиеся домены включают, но не ограничиваются этим, антитела (например, полноразмерные антитела), а также их антигенсвязывающие части. Связывающийся домен придает связывающему агенту его специфичность и аффинность к антигену. Термин также охватывает любой белок, имеющий связывающийся домен, который гомологичен или в значительной степени гомологичен иммуноглобулин-связывающему домену.

Термин “антитело” в контексте настоящего раскрытия включает полные антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент (то есть “антигенсвязывающую часть”) или одноцепочечный вариант. “Антитело” в одном предпочтительном варианте осуществления относится к гликопротеину, включающему по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, связанные между собой дисульфидными связями, или его антигенсвязывающей части. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначенной как V_H) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначенной как V_L) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена CL. Области V_H и V_L можно далее подразделить на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), чередующиеся с областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (FR). Каждая V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающийся домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (Clq) классической системы комплемента.

Термин “антигенсвязывающий фрагмент” антитела (или просто “фрагмент антитела”), в контексте настоящей заявки, относится к одному или нескольким фрагментам или частям антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном. Такие "фрагменты" имеют, например, от около 8 до около 1500 аминокислот в длину, подходяще от около 8 до около 745 аминокислот в длину, подходяще от около 8 до около 300, например от около 8 до около 200 аминокислот или от около 10 до около 50 или 100 аминокислот в длину. Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающихся фрагментов, охватываемых термином “антигенсвязывающий фрагмент” антитела, включают (i) Fab фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из V_L, V_H, CL и CH1 доменов; (ii) F(ab')₂ фрагмент, двухвалентный фрагмент, включающий два Fab фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) Fd фрагмент, состоящий из V_H и CH1 доменов; (iv) Fv фрагмент, состоящий из V_L и V_H доменов одного плеча антитела, (v) dAb фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), который состоит из V_H домена; и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR) или (vii) комбинацию двух или более выделенных CDR, которые необязательно моегут быть соединены синтетическим линкером. Кроме того, хотя два домена Fv фрагмента, V_L и V_H, кодируются отдельными генами, их можно соединить, с использованием рекомбинантных методов, синтетическим линкером, который обеспечивает возможность их получения в виде одной белковой цепи, в которой V_L и V_H области спариваются с образованием одновалентных молекул (известны как одноцепочечный Fv (sFv); см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также охватываеются термином “антигенсвязывающий фрагмент” антитела. Эти фрагменты антител получают с использованием традиционных методов, известных специалистам в данной области, и фрагменты скринируют на применимость таким же способом, как и интактные антитела. Антигенсвязывающие части можно получить методами рекомбинантной ДНК или путем ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов.

Термин “рекомбинантное человеческое антитело,” в контексте настоящей заявки, включает все человеческие антитела, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными методами, такие как (a) антитела, выделенные у животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным для генов иммуноглобулина человека, или гибридома, полученная из них, (b) антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела, например, из трансфектомы, (c) антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных человеческих антител, и (d) антитела, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены любыми другими способами, которые включают сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулина человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела включают вариабельные и константные области, которые используют определенные последовательности иммуноглобулинов зародышевой линии человека, кодируются генами зародышевой линии, но включают последующие перестройки и мутации, которые происходят, например, в процессе созревания антитела. Как известно в данной области техники (см., например, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125), вариабельная область содержит антигенсвязывающий домен, который кодируется различными генами, которые перестраиваются для образования антитела, специфического к чужеродному антигену. В дополнение перестройке, вариабельная область может быть далее модифицирована множественными изменениями отдельных аминокислот (указаны как соматическая мутация или гипермутация) для повышения аффинности антитела к чужеродному антигену. Константная область будет меняться в дальнейшем в ответ на антиген (т.е. переключение изотипа). Поэтому перестроенные и соматически мутированные молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют полипептиды легких цепей и тяжелых цепей иммуноглобулинов, в ответ на антиген могут не иметь идентичность последовательности с исходными молекулами нуклеиновых кислот, но вместо этого будут по существу идентичными или схожими (т.е. имеют идентичность по меньшей мере 80%).

Термин "человеческое антитело" в контексте настоящей заявки относится к иммуноглобулину (Ig), который используется, например, иммунной системой для связывания и нейтрализации патогенов. Термин включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, по существу соответствующие Ig последовательностям зародышевой линии человека. В некоторых вариантах осуществления человеческие антитела продуцируются у млекопитающих, не являющихся человеком, включая, но не ограничиваясь этим, грызунов, таких как мыши и крысы, и лагоморфов, таких как кролики. В других вариантах осуществления человеческие антитела продуцируются в гибридомных клетках. В других вариантах осуществления человеческие антитела продуцируются рекомбинантно. В контексте настоящей заявки человеческие антитела включают все или часть антитела, включая, например, тяжелые и легкие цепи, вариабельные области, константные области, протеолитические фрагменты, определяющие комплементарность области (CDR) и другие функциональные фрагменты.

В контексте настоящей заявки "биологически активный фрагмент" относится к части молекулы, например, гена, кодирующей последовательность, мРНК, полипептида или белка, которая имеет желаемую длину или биологическую функцию. Биологически активный фрагмент белка, например, может представлять собой фрагмент полноразмерного белка, который сохраняет одну или несколько биологических активностей этого белка. Биологически активный фрагмент мРНК, например, может представлять собой фрагмент, который, когда он транслируется, экспрессирует биологически активный фрагмент белка. Кроме того, биологически активный фрагмент мРНК может содержать укороченные варианты некодирующих последовательностей, например, регуляторных последовательностей, UTR и т.д. Как правило, фрагмент фермента или сигнальной молекулы может представлять собой, например, ту часть(части) молекулы, которая сохраняет ее сигнальную или ферментативную активность. Например, фрагмент гена или кодирующей последовательности может представлять собой ту часть гена или кодирующей последовательности, которая продуцирует фрагмент продукта экспрессии. Фрагмент необязательно должен быть определен функционально, так как он может также относиться к части молекулы, которая не является целой молекулой, но имеет некоторую желаемую характеристику или длину (например, рестрикционные фрагменты, протеолитический фрагмент белка, фрагменты амплификации и т.д.).

Обычные или традиционные антитела млекопитающих включают тетрамер, который обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая из которых имеет одну полноразмерную "легкую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу около 25 кДа) и одну полноразмерную "тяжелую" цепь (обычно имеющую молекулярную массу около 50-70 кДа). Термины "тяжелая цепь" и "легкая цепь" в контексте настоящей заявки относятся к любому Ig полипептиду, имеющему достаточную последовательность вариабельного домена для придания специфичности к антигену-мишени. N-концевая часть каждой легкой и тяжелой цепи обычно включает вариабельный домен из примерно 100-110 или более аминокислот, который обычно отвечает за распознавание антигена. С-концевая часть каждой цепи обычно определяет константный домен, отвечающий за эффекторную функцию. Таким образом, в природном антителе полноразмерный полипептид тяжелой цепи Ig включает вариабельный домен (V_H или VH) и три константных домена (C_H1 или CH1, C_H2 или CH2 и C_H3 или CH3), где V_H домен находится на N-конце полипептида, а C_H3 домен находится на C-конце, и полноразмерный полипептид легкой цепи Ig включает вариабельный домен (V_L или VL) и константный домен (C_L или CL), где V_L домен находится на N-конце полипептида, а C_L домен находится на С-конце.

В полноразмерных легких и тяжелых цепях вариабельные и константные домены обычно соединены "J"-областью из примерно 12 или более аминокислот, при этом тяжелая цепь также включает "D" -область еще из около 10 аминокислот. Вариабельные области каждой пары легкой/тяжелой цепи обычно образуют сайт связывания антигена. Вариабельные домены природных антител обычно имеют одинаковую общую структуру из относительно консервативных каркасных областей (FR), соединенных тремя гипервариабельными областями, называемыми CDR. CDR из двух цепей каждой пары обычно выровнены посредством каркасных областей, что позволяет связываться с конкретным эпитопом. От N-конца к C-концу вариабельные домены как легкой, так и тяжелой цепи типично включают домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4.

Термины "по существу чистый" или "по существу очищенный", в контексте настоящей заявки, относятся к соединению или виду, который является преобладающим видом, присутствующим в композиции (т.е., на молярной основе, он является преобладающим по сравнению с любыми другими отдельными видами в композиции). По существу очищенная фракция, например, может представлять собой композицию, в которой преобладающий вид составляет по меньшей мере около 50% (в молярном отношении) от всех присутствующих макромолекулярных частиц. Например, по существу чистая композиция может включать преобладающий вид, который составляет более примерно 80%, 85%, 90%, 95% или 99% от всех макромолярных видов, присутствующих в композиции. В других вариантах осуществления преобладающий вид может быть очищен по существу до гомогенности (загрязняющие виды не могут быть обнаружены в композиции обычными способами детекции), где композиция состоит по существу из одного макромолекулярного вида.

Термины "антиген" или "антиген-мишень" в контексте настоящей заявки относятся к молекуле или части молекулы, которая может связываться антителом, одним или несколькими связывающими доменами Ig или другим иммунологически связывающим фрагментом, включая, например, сконструированные полипептиды или слитые белки, раскрытые в настоящей заявке. Антиген может использоваться у животного для продуцирования антител, способных связываться с эпитопом этого антигена. Антиген может иметь один или несколько эпитопов.

Термин "эпитоп" или "антигенная детерминанта" относится к сайту на антигене, с которым специфически связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы могут быть образованы как из смежных аминокислот, так и из несмежных аминокислот, объединенных в результате третичной укладки белка. Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, как правило, сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные третичной укладкой, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп обычно включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения того, какие эпитопы связываются данным антителом (т.е. картирование эпитопов), хорошо известны в данной области и включают, например, методы иммуноблоттинга и иммунопреципитации, в которых перекрывающиеся или смежные пептиды из антигена испытывают на реакционную способность с данным антителом. Методы определения пространственной конформации эпитопов включают методы, используемые в данной области техники, и методы, описанные в настоящей заявке, например, рентгеновскую кристаллографию и двумерный ядерный магнитный резонанс (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)).

Термины "активность", "биологическая активность" или "биологическое свойство", используемые в отношении сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, аффинность и специфичность в отношении эпитопа, способность антагонизировать активность антигена-мишени, стабильность in vivo сконструированных полипептидов или слитых белков по настоящему изобретению и иммуногенные свойства сконструированных полипептидов или слитых белков по настоящему изобретению. Другие идентифицируемые биологические свойства включают, например, перекрестную реактивность (например, с не-человеческими гомологами антигена-мишени или с другими антигенами-мишенями или тканями в целом) и способность сохранять высокие уровни экспрессии белка в клетках млекопитающих.

Антитело, иммуноглобулин или иммунологически функциональный фрагмент иммуноглобулина, или сконструированные полипептиды или слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, указываются как "специфически" связывающие антиген, когда молекула предпочтительно распознает свой антиген-мишень в комплексной смеси белков и/или макромолекул. Термин "специфически связывается" в контексте настоящей заявки относится к способности антитела, иммуноглобулина или иммунологически функционального фрагмента иммуноглобулина, или сконструированного полипептида или слитого белка по изобретению связываться с антигеном, содержащим эпитоп, с K_D по меньшей мере около 10^-6 M, 10^-7 M, 10^-8 M, 10^-9 M, 10^-10 M, 10^-11 M, 10^-12 M или более, и/или связываться с эпитопом с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза больше, чем его аффинность к неспецифическому антигену.

Термин "K_D" в контексте настоящей заявки, относится к константе диссоциации взаимодействия между антителом, иммуноглобулином или иммунологически функциональным фрагментом иммуноглобулина, или сконструированным полипептидом, или слитым белком, раскрытыми в настоящей заявке, и антигеном-мишенью. Когда сконструированный полипептид или слитый белок по изобретению включает последовательность одновалентного Ig, последовательность одновалентного Ig предпочтительно связывается с целевым антигеном, например, с K_D l0^-5-10^-12 M или меньше, или 10^-7-10^-12 M или меньше, или 10^-3-10^-12 M, и/или с аффинностью связывания по меньшей мере 10⁷ M^-1, по меньшей мере 10⁸ M^-1, по меньшей мере 10⁹ M^-1 или по меньшей мере 10¹² M^-1. Как правило, считается, что K_D значение больше чем 10^-4 M указывает на неспецифическое связывание. В некоторых вариантах осуществления последовательность одновалентного Ig сконструированного полипептида или слитого белка по изобретению связывается с целевым антигеном с аффинностью меньше чем 500 мМ, меньше чем 200 нМ, меньше чем 10 нМ или меньше чем 500 пМ.

K_D можно определить способами, известными в данной области техники, включая, например, поверхностный плазмонный резонанс (SPR). Как правило, в SPR анализе измеряют в реальном времени связывающие взаимодействия между лигандом (целевой антиген на биосенсорной матрице) и аналитом с использованием, например, системы BIAcore (Pharmacia Biosensor; Piscataway, NJ). SPR анализ также можно осуществить путем иммобилизации аналита и презентации лиганда. Специфическое связывание сконструированного полипептида или слитого белка по изобретению с антигеном или антигенной детерминантой также можно определить любым подходящящим способом, известным в данной области техники, включая, например, анализ Скэтчарда и/или конкурентные анализы связывания, такие как радиоиммуноанализы (RIA), иммуноферментные анализы (EIA) и конкурентные сэндвич-анализы.

Термин "биспецифический" относится к слитому белку по изобретению, который способен связывать два антигена. Термин "мультивалентный слитый белок" означает слитый белок, включающий два или более антигенсвязывающих сайтов.

Термин "мультиспецифический слитый белок" относится к слитому белку по изобретению, который способен связывать две или более родственные или неродственные мишени.

В контексте настоящей заявки термин "слитый с" относится к полипептиду, полученному путем объединения более чем одной последовательности, типично путем клонирования одной последовательности, например кодирующей последовательности, в вектор экспрессии в рамке с одной или несколькими вторыми кодирующими последовательностями таким образом, чтобы две (или более) кодирующие последовательности транскрибировались и транслировались в один непрерывный полипептид. В дополнение к получению с использованием рекомбинантной технологии, части полипептида могут быть "слиты" друг с другом посредством химической реакции или с использованием других способов, известных в данной области для получения специально разработанных полипептидов.

В контексте настоящей заявки термин "вектор" относится к любой молекуле (например, нуклеиновой кислоте, плазмиде или вирусу), которая используется для передачи кодирующей информации системе экспрессии (например, клетке-хозяину или системе экспрессии in vitro). Одним типом вектора является "плазмида", которая относится к кольцевой двухцепочечной молекуле ДНК (дцДНК), в которую могут быть встроены дополнительные сегменты ДНК. Другим типом вектора является вирусный вектор, в котором дополнительные фрагменты ДНК могут быть встроены в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую они введены (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальный источник репликации, и эписомальные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэпизомальные векторы млекопитающих) могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина при введении в клетку-хозяина и, таким образом, реплицируются вместе с геномом-хозяином. Кроме того, некоторые векторы способны направлять экспрессию кодирующих последовательностей, с которыми они функционально связаны. Такие векторы указаны в настоящей заявке как "векторы экспрессии".

В контексте настоящей заявки термин "функционально связанный" относится к расположению фланкирующих последовательностей, в котором фланкирующие последовательности сконфигурированы или собраны для выполнения желаемой функции. Таким образом, фланкирующая последовательность, функционально связанная с кодирующей последовательностью, может быть способна влиять на репликацию, транскрипцию и/или трансляцию кодирующей последовательности. Кодирующая последовательность функционально связана с промотором, например, когда промотор способен направлять транскрипцию этой кодирующей последовательности. Фланкирующая последовательность не должна быть обязательно смежной с кодирующей последовательностью, чтобы считаться функционально связанной, при условии, что она функционирует должным образом.

В контексте настоящей заявки термин "клетка-хозяин" относится к клетке, в которую был введен вектор экспрессии. Предполагается, что клетка-хозяин относится не только к конкретной клетке субъекта, но также к потомству такой клетки. Поскольку некоторые модификации могут происходить в последующих поколениях из-за мутации или влияния окружающей среды, такое потомство может фактически не быть идентичным родительской клетке, но такие клетки все же включены в объем термина "клетка-хозяин", как он используется в настоящей заявке. Для экспрессии сконструированных полипептидов или слитых белков по настоящему изобретению можно использовать широкое разнообразие систем экспрессии клеток-хозяев, включая бактериальные, дрожжевые, бакуловирусные системы экспрессии и системы экспрессии млекопитающих (а также системы экспрессии на основе фагового дисплея).

Термин "природный", в контексте настоящей заявки и в применении к конкретной молекуле, относится к молекуле, которая присутствует в природе и с которой человек не осуществлял никаких манипуляций. Аналогично, термин "не встречающийся в природе" в контексте настоящей заявки относится к молекуле, которая не обнаружена в природе или которая была модифицирована или искусственно синтезирована.

Термин "сконструированный", в контексте настоящей заявки и в применении к конкретной молекуле, относится к молекуле, такой как, например полипептид, которая была модифицирована или подвергнут манипуляциям, например, путем мутации, усечения, делеции, замены, добавления, конъюгации или другим способом изменения первичной последовательности, химической или трехмерной структуры, химической сигнатуры, фолдинга, состояния гликозилирования или любого другого свойства молекулы, таким образом, молекула отличается от природного аналога.

В контексте настоящей заявки термин "пациент" включает субъектов людей и животных.

"Расстройство" представляет собой любое состояние, для которого будет полезно лечение с использованием сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению. "Расстройство" и "состояние" используются в настоящей заявке взаимозаменяемо.

Термин "комплемент-опосредованное расстройство", в контексте настоящей заявки, относится к расстройству, вызванному непосредственно или опосредованно нарушением регуляции пути комплемента, например активацией или супрессией пути комплемента, или к расстройству, которое опосредовано, прямо или косвенно, одним или несколькими компонентами пути комплемента, или продуктом, генерируемым посредством пути комплемента. Термин также относится к расстройству, которое усугубляется одним или несколькими компонентами пути комплемента или продуктом, генерируемым посредством пути комплемента.

В контексте настоящей заявки термины "лечение" или "лечить" относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам. Нуждающиеся в лечении, включают тех, у кого есть расстройство, а также тех, кто подвержен риску расстройства, или тех, у кого расстройство нужно предотвратить.

В контексте настоящей заявки термин "терапевтически эффективное" количество, например гибридного белка или сконструированного полипептида, описанных в настоящей заявке, представляет собой количество, которое при введении приводит к уменьшению тяжести симптомов заболевания (например, уменьшению симптомов расстройств, связанных с комплемент-опосредованным расстройством, увеличению частоты и продолжительности периодов без симптомов заболевания, или предотвращению нарушения или нетрудоспособности из-за заболевания. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество терапевтического средства, описанного в настоящей заявке, может включать количество (или различные количества в случае многократного введения), которое уменьшает гемолиз или улучшает симптомы комплемент-опосредованного расстройства.

Термины "фармацевтическая композиция" или "терапевтическая композиция" в контексте настоящей заявки относятся к соединению или композиции, способной индуцировать желаемый терапевтический эффект при введении пациенту.

В контексте настоящей заявки термин "фармацевтически приемлемый носитель" или "физиологически приемлемый носитель" относится к одному или нескольким веществам в композиции, подходящим для осуществления или улучшения доставки сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению.

Термин "терапевтически эффективное количество", используемый в отношении фармацевтической композиции, включающей один или несколько сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению, относится к количеству или дозировке, достаточным для получения желаемого терапевтического результата. Более конкретно, терапевтически эффективное количество представляет собой количество одного или нескольких сконструированных полипептидов или слитых белков по изобретению, достаточное для ингибирования, на некоторый период времени, одного или нескольких клинически определяемых патологических процессов, связанных с состоянием, которое лечат, например, комплемент-опосредованного расстройства. Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости от конкретного сконструированного полипептида или слитого белка, который используется, и зависит от множества факторов и условий, связанных с пациентом, которого лечат, и тяжести расстройства.

Система комплемента

Система комплемента действует совместно с другими иммунологическими системами организма для защиты от проникновения клеточных и вирусных патогенов. Существует не менее 25 белков комплемента, которые представляют собой комплексную совокупность белков плазмы и мембранных кофакторов. Белки плазмы составляют около 10% глобулинов в сыворотке позвоночных. Компоненты комплемента достигают своих иммунных защитных функций путем взаимодействия в серии сложных, но точных ферментативных процессов расщепления и мембранного связывания. Возникающий в результате каскад комплемента приводит к продукции продуктов с опсонической, иммунорегуляторной и литической функциями.

Каскад комплемента может развиваться через классический путь (CP), лектиновый путь или альтернативный путь (AP). Лектиновый путь обычно инициируется связыванием манноза-связывающего лектина (MBL) с субстратами с высоким содержанием маннозы. АР может быть антитело-независимым и инициироваться определенными молекулами на поверхностях патогена. CP обычно инициируется распознаванием, и связыванием, антителом антигенного сайта на клетке-мишени. Эти пути сходятся на С3 конвертазе-, где компонент комплемента С3 расщепляется активной протеазой с образованием C3a и C3b.

Спонтанный гидролиз компонента C3 комплемента, который широко присутствует в плазменной фракции крови, также может привести к инициации конвертазы AP C3. Этот процесс, известный как "движение по инерции", происходит посредством самопроизвольного расщепления тиоэфирной связи в С3 с образованием С3i или С3 (Н₂0). Движение по инерции облегчается наличием поверхностей, которые поддерживают связывание активированного C3 и/или имеют нейтральные или положительные характеристики заряда (например, поверхности бактериальных клеток). Образование C3 (H₂0) обеспечивает связывание Фактора B белков плазмы, что, в свою очередь, позволяет Фактору D расщеплять Фактор B на Ba и Bb. Bb фрагмент остается связанным с C3 с образованием комплекса, содержащего C3 (H₂0)Bb - "жидкофазной" или "инициирующей" конвертазы C3. Хотя она продуцируется только в небольших количествах, жидкофазная конвертаза С3 может расщеплять множество белков С3 на С3а и С3b и приводит к образованию С3b и его последующему ковалентному связыванию с поверхностью (например, бактериальной поверхностью). Фактор B, связанный с поверхностно-связанным C3b, расщепляется Фактором D с образованием связанного на поверхности конвертазного комплекса AP C3, содержащего C3b, Bb.

Конвертаза AP C5 ((C3b) 2, Bb) образуется при добавлении второго мономера C3b к конвертазе AP C3. Роль второй молекулы C3b состоит в том, чтобы связывать C5 и представлять его для расщепления посредством Bb. AP C3 и C5 конвертазы стабилизируются добавлением тримерного белка пропердина. Связывание с пропердином, однако, не требуется для образования функционирующего альтернативного пути С3 или С5 конвертазы.

Конвертаза CP C3 образуется при взаимодействии компонента комплемента C1, который представляет собой комплекс C1q, C1r и C1s, с антителом, которое связано с антигеном-мишенью (например, микробным антигеном). Связывание C1q части C1 с комплексом антиген-антитело вызывает конформационное изменение в C1, которое активирует C1r. Активный C1r затем расщепляет C1-ассоциированный C1s с образованием активной сериновой протеазы. Активный C1s расщепляет компонент C4 комплемента на C4b и C4a. Подобно C3b, вновь образованный фрагмент C4b содержит высокореактивный тиол, который легко образует амидные или сложноэфирные связи с подходящими молекулами на целевой поверхности (например, на поверхности микробных клеток). C1s также расщепляет компонент комплемента C2 на C2b и C2a. Комплекс, образованный C4b и C2a, представляет собой конвертазу CP C3, которая способна к процессированию C3 на C3a и C3b. Конвертаза СР С5 (C4b, C2a, C3b) образуется при добавлении мономера С3b к конвертазе СР С3

В дополнение к роли в C3 и C5 конвертазах, C3b также функционирует как опсонин благодаря взаимодействию с рецепторами комплемента, присутствующими на поверхностях антиген-презентирующих клеток, таких как макрофаги и дендритные клетки. Опсоническая функция C3b обычно считается одной из наиболее важных противоинфекционных функций системы комплемента. Пациенты с генетическими повреждениями, которые блокируют функцию C3b, имеют предрасположенность к инфекциям, вызываемым широким спектром патогенных организмов, в то время как пациенты с повреждениями позже в каскадной последовательности комплемента, то есть пациенты с повреждениями, которые блокируют функции C5, оказались более предрасположенными только к Neisseria инфекции, к тому же только несколько более предрасположенными.

AP и CP C5 конвертазы расщепляют C5 на C5a и C5b. Расщепление С5 высвобождает С5а, сильный анафилатоксин и хемотаксический фактор, и С5b, который делает возможным образование литического терминального комплекса комплемента, С5b 9. С5b объединяется с С6, С7 и С8 с образованием комплекса С5b 8 на поверхности клетки-мишени. При связывании нескольких C9 молекул образуется мембранно-атакующий комплекс (MAC, C5b-9, терминальный комплекс комплемента ("TCC")). Когда достаточное количество MAC встраивается в мембраны клеток-мишеней, создаваемые ими отверстия (MAC поры) опосредуют быстрый осмотический лизис клеток-мишеней.

В то время как правильно функционирующая система комплемента обеспечивает надежную защиту от микробных инфекций, неправильная регуляция или активация путей комплемента вовлечена в патогенез различных расстройств, включая, например, ревматоидный артрит (RA); люпус-нефрит; астму; ишемическое-реперфузионное повреждение; атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS); болезнь плотного осадка (DDD); пароксизмальную ночную гемоглобинурию (PNH); дегенерацию желтого пятна (например, возрастную дегенерацию желтого пятна (AMD)); синдром гемолиза, повышения уровня печеночных ферментов и низкого уровня тромбоцитов (HELLP); синдром Гийена-Барре (GBS); энтеропатию с потерей белка (например, синдром CHAPLE); тяжелую миастению (MG); оптиконевромиелит (NMO); тромботическую микроангиопатию после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (post-HSCT-TMA); TMA после трансплантации костного мозга (post-BMT TMA); болезнь Дегоса; болезнь Гоше; гломерулонефрит; тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру (TTP); спонтанную потерю плода; малоиммунный васкулит; буллезный эпидермолиз; рекуррентную потерю плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга; и повреждение в результате инфаркта миокарда, сердечно-легочного шунтирования и гемодиализа (Holers, V., Immunol. Rev., 223:300-16, 2008). Было продемонстрировано, что даун-регуляция активации комплемента является эффективной в лечении некоторых признаков заболеваний в ряде животных моделей (Rother, R. et al., Nat. Biotechnol., 25:1256-64, 2007; Wang, Y. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:8563-8, 1996; Wang, Y. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:8955-9, 1995; Rinder, C. et al., J. Clin. Invest., 96:1564-72, 1995; Kroshus, T. et al., Transplantation, 60:1194-202, 1995; Homeister, J. et al., J. Immunol., 150:1055-64, 1993; Weisman, H. et al., Science, 249:146-51, 1990; Amsterdam, E. et al., Am. J. Physiol., 268:H448-57, 1995; и Rabinovici, R. et al., J. Immunol., 149:1744-50, 1992).

Человеческий сывороточный альбумин и неонатальный Fc-рецептор

Были описаны полипептиды, которые могут связываться с человеческим сывороточным альбумином (HSA), для увеличения времени полужизни терапевтически релевантных белков (WO 91/01743, WO 01/45746 и WO 02/076489). Однако описанные пептидные фрагменты имеют бактериальное или синтетическое происхождение, что не является предпочтительным для применения в лечении человека. В WO 04/041865 описаны однодоменные антитела (sdAb или Нанотела®), направленные против сывороточного альбумина (и, в частности, против HSA), которые могут быть связаны с другими белками (такими как один или несколько других sdAb, направленных против желаемой мишени), чтобы увеличить период полужизни белка.

Неонатальный Fc-рецептор (FcRn), также называемый "рецептором Брамбелла", вовлечен в пролонгирование периода жизни альбумина в кровотоке (Chaudhury, C. et al., J. Exp. Med., 3: 315 22, 2003). FcRn представляет собой интегральный мембранный гликопротеин, состоящий из растворимой легкой цепи, состоящей из β2 микроглобулина (β2m), нековалентно связанной с α-цепью 43 кДа с тремя внеклеточными доменами, трансмембранной областью и цитоплазматическим хвостом из приблизительно 50 аминокислот. Цитоплазматический хвост содержит динуклеотидный мотив, связанный с сигналом эндоцитоза, участвующий в интернализации рецептора. α-Цепь является членом неклассического семейства белков MHC I. Ассоциация β2m с α-цепью является критической для правильной укладки FcRn и выхода из эндоплазматического ретикулума для направления на эндосомы и клеточную поверхность.

Общая структура FcRn аналогична структуре молекул класса I. Области α-1 и α-2 напоминают платформу, состоящую из восьми антипараллельных нитей, образующих один β-лист, увенчанный двумя антипараллельными α-спиралями, сильно напоминающими пептидную щель в молекулах MHC I. Вследствие полного изменения положения спирали α-1 и изгиба С-концевой части спирали α-2 из-за разрыва спирали, вызванного присутствием Pro162, спирали FcRn находятся близко друг к другу, мешая пептидному связыванию. Боковая цепь Arg164 FcRn также мешает потенциальному взаимодействию пептидного N-конца с карманом MHC. Кроме того, солевой мостик и гидрофобное взаимодействие между спиралями α-1 и α-2 также могут способствовать закрытию бороздки. Поэтому FcRn не участвует в презентации антигена, и пептидная щель пуста.

FcRn связывает и транспортирует IgG через синцитиотрофобласт плаценты от материнского кровообращения к кровообращению плода и защищает IgG от деградации у взрослых. В дополнение к гомеостазу, FcRn контролирует трансцитоз IgG в тканях. FcRn локализован в эпителиальных клетках, эндотелиальных клетках и гепатоцитах.

HSA связывает FcRn с образованием тримолекулярного комплекса с IgG. Как альбумин, так и IgG некооперативно связываются с разными сайтами на FcRn. Связывание человеческого FcRn с сефароза-HSA и сефарозна-hIgG является рН-зависимым, являясь максимальным при рН 5 и необнаружимым при рН 7 - рН 8. Наблюдение, что FcRn связывается с альбумином таким же рН-зависимым образом, как и IgG, предполагает, что механизм, посредством которого альбумин взаимодействует с FcRn и, таким образом, защищен от деградации, является таким же механизмом, как у IgG, и опосредуется через также рН-чувствительное взаимодействие с FcRn. При использовании поверхностного плазмонного резонанса для измерения способности отдельных HSA доменов связывать иммобилизованный растворимый hFcRn было показано, что FcRn и альбумин взаимодействует через D III домен альбумина pH-зависимым образом на сайте, отличном от сайта связывания IgG (Chaudhury C. et al., Biochemistry, 45: 4983-90, 2006).

Сконструированные полипептиды специфически связываются с комплементом C5 или сывороточным альбумином

В настоящей заявке описаны сконструированные полипептиды, включающие Ig последовательности, например, последовательности вариабельного домена Ig, которые могут связываться или иным образом вступать в ассоциацию с компонентом С5 комплемента или сывороточным альбумином. Сконструированные полипептиды, описанные в настоящей заявке, могут специфически связываться с сывороточным альбумином таким образом, что, когда сконструированный полипептид связан с молекулой сывороточного альбумина или иным образом ассоциирован с ней, связывание молекулы сывороточного альбумина с FcRn существенно не снижается и не ингибируется по сравнению со связыванием молекулы сывороточного альбумина с FcRn, когда полипептид не связан с ней. В этом варианте осуществления "существенно не снижается или не ингибируется" означает, что аффинность связывания для сывороточного альбумина с FcRn (как измерено с использованием подходящего анализа, такого как, например SPR) не снижается больше чем на 50% или больше чем на 30%, или больше чем на 10%, или больше чем на 5%, или вообще не снижается. В этом варианте осуществления "существенно не снижается или не ингибируется" также означает, что период полужизни молекулы сывороточного альбумина существенно не уменьшается. В частности, сконструированные полипептиды могут связываться с аминокислотными остатками сывороточного альбумина, которые не участвуют в связывании сывороточного альбумина с FcRn. Более конкретно, сконструированные полипептиды могут связываться с аминокислотными остатками или последовательностями сывороточного альбумина, которые не образуют часть домена III сывороточного альбумина, например сконструированные полипептиды, которые способны связываться с аминокислотными остатками или последовательностями сывороточного альбумина, которые образуют часть домена I и/или домена II.

В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды представляют собой sdAb или являются подходящими для использования в качестве sdAb, и как таковые могут представлять собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи или последовательность вариабельного домена легкой цепи, а в некоторых вариантах осуществления последовательности вариабельных доменов тяжелых цепей антитела только из тяжелых цепей. В случаях, когда сконструированные полипептиды представляют собой последовательности одного домена, вариабельного домена тяжелой цепи, из антитела, содержащего только тяжелые цепи, такие последовательности могут быть указаны как VHH или V_HH антитела, фрагменты VHH или V_HH антител, или VHH или V_HH домены.

"Антитело из тяжелых цепей" относится к антителу, которое состоит из двух тяжелых цепей и не имеет двух легких цепей, присутствующих в обычных антителах. Верблюды (члены биологического семейства Camelidae, единственного ныне живущего семейства в подотряде Tylopoda; существующие верблюды включают одногорбых верблюдов, двугорбых верблюдов, диких или одичавших верблюдов, лам, альпак, викуньев и гуанако) являются единственными млекопитающими с одноцепочечными VHH антителами, Около 50% антител у верблюдов представляют собой антитела из тяжелых цепей, а остальные 50% относятся к обычному или традиционному типу антител млекопитающих с тяжелыми/легкими цепями.

"VHH домен" относится к вариабельным доменам, присутствующим в природных антителах, содержащих только тяжелые цепи, чтобы отличить его от вариабельных доменов тяжелой цепи, которые присутствуют в обычных четырехцепочечных антителах (указанных как "VH домены"), и от вариабельных доменов легкой цепи, которые присутствуют в обычных четырехцепочечных антителах (указанных как "VL домены")

VHH домены имеют ряд уникальных структурных характеристик и функциональных свойств, которые делают выделенные VHH домены (а также sdAb, которые основаны на VHH доменах и имеют такие же структурные характеристики и функциональные свойства, как у природных VHH доменов) и белки, содержащие VHH домены, весьма полезными для использования в качестве функциональных антигенсвязывающих доменов или белков. Например, VHH домены, которые связываются с антигеном без присутствия VL, и sdAb могут функционировать как одна, относительно небольшая, функциональная антигенсвязывающая структурная единица, домен или белок. Небольшой размер этих молекул отличает VHH домены от VH и VL доменов обычных четырехцепочечных антител. Использование VHH доменов и sdAb в качестве отдельных антигенсвязывающих белков или в качестве антигенсвязывающих доменов (например, как части более крупного белка или полипептида) дает ряд существенных преимуществ по сравнению с использованием обычных VH и VL доменов, а также scFv или обычных фрагментов антител (таких как Fab или F(ab')₂ фрагменты). Например, для связывания антигена с высокой аффинностью и высокой селективностью требуется только один домен, поэтому нет необходимости иметь два отдельных домена или гарантировать, что эти два домена присутствуют в определенной пространственной конформации и конфигурации (например, с использованием специальных линкеров, как с scFv). VHH домены и sdAb также могут быть экспрессированы из одного гена и не требуют посттрансляционной укладки или модификаций. VHH домены и sdAb легко можно сконструировать в мультивалентные и мультиспецифические форматы. VHH домены и sdAb также хорошо растворимы и не имеют тенденции к агрегации (Ward, E. et al., Nature, 341:544-6, 1989) и они очень устойчивы к нагреванию, pH, протеазам и другим денатурирующим агентам или условиям (Ewert, S. et al., Biochemistry, 41: 3628-36, 2002). Способы получения VHH доменов и sdAb относительно просты и дешевы, даже в масштабе, необходимом для производства. Например, VHH домены, sdAb и полипептиды, содержащие VHH домены или sdAb, можно получить с использованием микробной ферментации с использованием способов, известных в данной области техники, и не для этого требуются системы экспрессии млекопитающих, как, например, с обычными фрагментами антител. VHH домены и sdAb относительно малы (приблизительно в 15 кДа или в 10 раз меньше, чем обычный IgG) по сравнению с обычными четырехцепочечными антителами и их антигенсвязывающими фрагментами и поэтому демонстрируют более высокое проникновение в ткани (включая, но не ограничиваясь этим, солидные опухоли и другие плотные ткани), чем обычные четырехцепочечные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты. VHH домены и sdAb могут проявлять так называемые "связывающие полость" свойства (например, из-за их удлиненной CDR3 петли) и могут достигать мишеней и эпитопов, недоступных для обычных четырехцепочечных антител и их антигенсвязывающих фрагментов. Было показано, например, что VHH домены и sdAb могут ингибировать ферменты (WO 97/49805; Transue, T. et al., Proteins, 32:515-22, 1998; Lauwereys, M. et al., EMBO J. 17:3512-20, 1998)

В контексте настоящей заявки термин "однодоменное антитело" или "sdAb" представляет собой антитело или его фрагмент, состоящий из одного мономерного вариабельного домена антитела. Оно не ограничивается конкретным биологическим источником или конкретным способом получения. sdAb может быть получено, например, путем (1) выделения VHH домена природного антитела, содержащего только тяжелые цепи; (2) экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей природный VHH домен; (3) "гуманизации" природного VHH домена или экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей такой гуманизированный VHH домен; (4) "камелизации" природного VH домена животного любого вида, в частности млекопитающего, такого как человек, или экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей такой камелизированный VH домен; (5) "камелизации" "доменного антитела" ("Dab") или экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей такой камелизированный VH домен; (6) использования синтетических или полусинтетических методов для получения сконструированных полипептидов или слитых белков; (7) получения нуклеиновой кислоты, кодирующей sdAb, с использованием методов синтеза нуклеиновых кислот, с последующей экспрессией полученной таким образом нуклеиновой кислоты; и/или (8) любой комбинации вышеперечисленных.

Сконструированные полипептиды или слитые белки, описанные в настоящей заявке, могут включать, например, аминокислотные последовательности природных VHH доменов, которые были "гуманизированы", например, путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности природного VHH одним или несколькими аминокислотными остатками, которые встречаются в соответствующих положениях в человеческом VH домене.

Сконструированные полипептиды или слитые белки, описанные в настоящей заявке, могут включать, например, аминокислотные последовательности природных VH доменов, которые были "камелизированы", т.е. путем замены одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности природного VH домена одним или несколькими аминокислотными остатками, которые находятся в соответствующих положениях в VHH домене, например, верблюжьего антитела. Это можно осуществить способом, известным в данной области техники. Такая камелизация может преимущественно происходить в положениях аминокислот, которые присутствуют на границе раздела VH-VL и в так называемых "уникальных остатках верблюдовых" (WO 94/04678). VH домен или последовательность, которая используется в качестве родительской последовательности или исходного материала для генерирования или конструирования камелизированной последовательности, может представлять собой, например, VH последовательность млекопитающего, а в некоторых вариантах осуществления VH последовательность человека. Следует отметить, однако, что такие камелизированные последовательности могут быть получены любым подходящим способом, известным в данной области, и, таким образом, строго не ограничиваются полипептидами, которые были получены с использованием полипептида, который включает природный родительский VH домен.

Как "гуманизацию", так и "камелизацию" можно осуществить путем обеспечения нуклеотидной последовательности, которая кодирует природный VHH домен или V_H домен, соответственно, и затем изменения способом, известным специалистам в данной области техники, одного или нескольких кодонов в нуклеотидной последовательности таким образом, чтобы новая нуклеотидная последовательность кодировала гуманизированную или камелизированную последовательность, соответственно. Кроме того, на основе аминокислотной последовательности или нуклеотидной последовательности природного VHH домена или VH домена можно разработать и синтезировать de novo нуклеотидную последовательность, кодирующую желаемую гуманизированную или камелизированную последовательность, с использованием методов синтеза нуклеиновых кислот, известных в данной области техники, после чего полученную таким образом нуклеотидную последовательность можно экспрессировать способом, известным в данной области техники.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с тем же эпитопом на человеческом C5, что и экулизумаб, или который связывается с эпитопом на C5, который препятствует расщеплению C5 на C5a и C5b. В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где полипептид включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-12 или ее фрагмент. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-12. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична, по меньшей мере на 96% идентична, по меньшей мере на 97% идентична, по меньшей мере на 98% идентична или по меньшей мере на 99% идентична любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-12. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:3, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:4, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:5, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:6, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:7, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:8, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:9, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:10, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:11, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:12, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%.

В другом варианте осуществления обеспечивается сконструированный полипептид, который связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12 и их фрагментов. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:1. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:3. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:5. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:6. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:7. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:8. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:9. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:10. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:11. в другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:12.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, где полипептид включает три определяющие комплементарность области CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:13-17 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:13-17; CDR2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18 или 19 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:18 или 19; и CDR3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:20 или 21 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:20 или 21.

В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где полипептид включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:22-34 или ее фрагмент. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:22-34. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где полипептид включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична, по меньшей мере на 96% идентична, по меньшей мере на 97% идентична, по меньшей мере на 98% идентична или по меньшей мере на 99% идентична любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:22-34. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:22, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:23, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:24, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:25, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:26, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:27, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:28, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:29, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:30, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:31, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:32, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:33, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:34, или последовательность, которая идентична ей по меньшей мере на 90%.

В другом варианте осуществления сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:22-34 и их фрагментов. Например, в одном варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:22. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:23. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:24. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:25. в другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:26. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:27. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:28. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:29. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:30. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:31. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:32. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:33. В другом варианте осуществления сконструированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:34.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает сконструированный полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где полипептид включает три определяющие комплементарность области CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:35-43 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID No:35-43; CDR2 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:44-51 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID No:44-51; и CDR3 включает любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:52-63 или последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID No:52-63.

Сконструированный полипептид, раскрытый в настоящей заявке, может специфически связываться, например, с тем же эпитопом на человеческом сывороточном альбумине, что и Alb1 (AVQLVESGGG LVQPGNSLRL SCAASGFTFR SFGMSWVRQA PGKEPEWVSS ISGSGSDTLY ADSVKGRFTI SRDNAKTTLY LQMNSLKPED TAVYYCTIGG SLSRSSQGTQ VTVSS; SEQ ID NO:149). В других вариантах осуществления сконструированный полипептид конкурентно ингибирует связывание Alb1 с человеческим сывороточным альбумином.

Когда сконструированный полипептид включает Ig, подходящий фрагмент Ig, такой как вариабельный домен Ig, также можно использовать вместо полного Ig.

Способы идентификации CDR из данного вариабельного домена иммуноглобулина известны в данной области техники (Wu, T. & Kabat, E., J. Exp. Med., 132:211-50, 1970; Clothia, C. et al., Nature, 342:877-83, 1989; Al-Lazikani, B. et al., J. Mol. Biol., 273:927-48, 1997; и Ofran, Y. et al., J. Immunol., 181:6230-35, 2008).

Слитые белки, которые специфически связываются с компонентом комплемента C5 и сывороточным альбумином

В настоящей заявке описаны слитые белки, которые включают сконструированные полипептиды, которые специфически связываются с альбумином и компонентом комплемента C5, при этом сконструированные полипептиды слиты непосредственно или связаны через один или несколько подходящих линкеров или спейсеров. Термин "пептидный линкер" в контексте настоящей заявки относится к одному или нескольким аминокислотным остаткам, встроенным или включенным между сконструированными полипептидами слитого белка(белков). Пептидный линкер может быть, например, встроен или включен в переходном положении между сконструированными полипептидами слитого белка на уровне последовательности. Идентичность и последовательность аминокислотных остатков в линкере может варьироваться в зависимости от желательной вторичной структуры. Например, глицин, серин и аланин полезны для линкеров, имеющих максимальную гибкость. Любой аминокислотный остаток может считаться линкером в комбинации с одним или несколькими другими аминокислотными остатками, которые могут быть такими же или отличными от первого аминокислотного остатка, для создания

пептидных линкеров, если это необходимо в зависимости от желательных свойств. В других вариантах осуществления линкер представляет собой GGGGAGGGGAGGGGS (SEQ ID NO:102). В других вариантах осуществления линкер представляет собой GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:103). Дополнительные пептидные линкеры, подходящие для создания слитых белков, описанных в настоящей заявке, включают, например, G₄S (SEQ ID NO:104), (G₄S)₂ (SEQ ID NO:105), (G₄S)₃ (SEQ ID NO:106), (G₄S)₄ (SEQ ID NO:107), (G₄S)₅ (SEQ ID NO:108), (G₄S)₆ (SEQ ID NO:109), (EAAAK)₃ (SEQ ID NO:110), PAPAP (SEQ ID NO:111), G₄SPAPAP (SEQ ID NO:112), PAPAPG₄S (SEQ ID NO:113), GSTSGKSSEGKG (SEQ ID NO:114), (GGGDS)₂ (SEQ ID NO:115), (GGGES)₂ (SEQ ID NO:116), GGGDSGGGGS (SEQ ID NO:117), GGGASGGGGS (SEQ ID NO:118), GGGESGGGGS (SEQ ID NO:119), ASTKGP (SEQ ID NO:120), ASTKGPSVFPLAP (SEQ ID NO:121), G₃P (SEQ ID NO:122), G₇P (SEQ ID NO:123), PAPNLLGGP (SEQ ID NO:124), G₆ (SEQ ID NO:125), G₁₂ (SEQ ID NO:126), APELPGGP (SEQ ID NO:127), SEPQPQPG (SEQ ID NO:128), (G₃S₂)₃ (SEQ ID NO:129), GGGGGGGGGSGGGS (SEQ ID NO:130), GGGGSGGGGGGGGGS (SEQ ID NO:131), (GGSSS)₃ (SEQ ID NO:132), (GS₄)₃ (SEQ ID NO:133), G₄A(G₄S)₂ (SEQ ID NO:134), G₄SG₄AG₄S (SEQ ID NO:135), G₃AS(G₄S)₂ (SEQ ID NO:136), G₄SG₃ASG₄S (SEQ ID NO:137), G₄SAG₃SG₄S (SEQ ID NO:138), (G₄S)₂AG₃S (SEQ ID NO:139), G₄SAG₃SAG₃S (SEQ ID NO:140), G₄D(G₄S)₂ (SEQ ID NO:141), G₄SG₄DG₄S (SEQ ID NO:142), (G₄D)₂G₄S (SEQ ID NO:143), G₄E(G₄S)₂ (SEQ ID NO:144), G₄SG₄EG₄S (SEQ ID NO:145) и (G₄E)₂G₄S (SEQ ID NO:146). Специалист в данной области может выбрать линкер, например, для уменьшения или устранения посттрансляционной модификации, например гликозилирования, например ксилозилирования. В некоторых вариантах осуществления слитый белок включает по меньшей мере два sdAb, Dab, VHH антитела, VHH фрагмента антитела или их комбинацию, где по меньшей мере один из sdAb, Dab, VHH антитела или VHH фрагментов антитела направлен против альбумина, а один из sdAb, Dab, VHH антитела или VHH фрагментов антитела направлен против компонента комплемента C5, чтобы, таким образом, получить слитый белок, который является мультивалентным или мультиспецифическим. Связывающие домены или фрагменты могут быть направлены, например, против HSA, сывороточного альбумина яванского макака, человеческого C5 и/или C5 яванского макака.

В некоторых вариантах осуществления C-концевой остаток альбумин-связывающего домена слитого белка может быть слит либо непосредственно, либо через пептид с N-концевым остатком домена, связывающего C5-компонент комплемента. В других вариантах осуществления C-концевой остаток домена, связывающего C5-компонент комплемента, слитого белка может быть слит либо непосредственно, либо через пептид с N-концевым остатком альбумин-связывающего домена.

В некоторых вариантах осуществления слитый белок включает полипептид, связывающийся с компонентом C5 системы комплемента, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1-12 или ее фрагмент; и полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, может включать аминокислотную последовательность SEQ ID NO:22-34 или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления первый полипептид происходит из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO:1-12, а второй полипептид происходит из аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO:22-34. Человеческий домен, связывающий C5-компонент комплемента, может включать, например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5 или 11, а альбумин-связывающий домен может включать, например аминокислотную последовательность SEQ ID NO:26. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает слитый белок, имеющий любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:64-95. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает слитый белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает слитый белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает слитый белок, имеющий любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:96-101.

Слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, можно получить путем экспрессии в клетке-хозяине по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок. Клетки-хозяева могут быть клетками млекопитающих, клетками растительного или микробного происхождения. В дополнение к известным клеткам-хозяевам млекопитающих можно использовать дрожжевые клетки-хозяева, например Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, и/или растительные клетки-хозяева.

Терапевтические композиции, включающие полипептиды, которые специфически связываются с C5-компонентом комплемента или сывороточным альбумином, или их слитые белки, и их введение

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает сконструированные полипептиды, включающие или состоящие из аминокислотной последовательности, раскрытой в настоящей заявке. В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, включающие или состоящие из по меньшей мере одного сконструированного полипептида по изобретению, который связан с по меньшей мере одним терапевтическим или нацеливающим фрагментом, необязательно через один или несколько подходящих линкеров или спейсеров.

Изобретение также относится к терапевтическим применениям сконструированных полипептидов по изобретению или слитых белков и мультивалентных и мультиспецифических слитых белков, включающих или состоящих из таких сконструированных полипептидов, или к фармацевтическим композициям, включающим такие сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки.

В некоторых вариантах осуществления терапевтический или нацеливающий фрагмент может включать, например, по меньшей мере один sdAb, Dab, VHH или их фрагмент(фрагменты). В некоторых вариантах осуществления, сконструированный полипептид по изобретению представляет собой мультивалентный и/или мультиспецифический слитый белок, включающий по меньшей мере два sdAb, Dab, VHH антитела, VHH фрагмента антитела или их комбинацию(комбинации).

В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к HSA, которая выше, чем аффинность к мышиному сывороточному альбумину. В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к сывороточному альбумину яванского макака, которая выше, чем аффинность к мышиному сывороточному альбумину. В других вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки, или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к HSA, которая выше, чем аффинность к сывороточному альбумину яванского макака.

В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки, или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к человеческому C5, которая выше, чем аффинность к мышиному C5. В некоторых вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к C5 яванского макака, которая выше, чем аффинность к мышиному C5. В других вариантах осуществления сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки показывают аффинность к человеческому C5, которая выше, чем аффинность к C5 яванского макака.

Сконструированные полипептиды, слитые белки или мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, описанные в настоящей заявке, могут демонстрировать, например, улучшенные терапевтические свойства, включая, например, повышенную эффективность, биодоступность, период полужизни или другие терапевтически желаемые свойства, по сравнению с терапевтическими препаратами на основе антител или другими терапевтическими средствами. В одном варианте осуществления слитый белок по изобретению включает по меньшей мере один сконструированный полипептид, раскрытый в настоящей заявке, и по меньшей мере один терапевтический или нацеливающий фрагмент. В таких слитых белках слитый белок может демонстрировать, например, больший период полужизни по сравнению с терапевтическим связывающим доменом в отдельности. Как правило, такие слитые белки имеют период полужизни, который по меньшей мере в 1,5 раза или по меньшей мере в 2 раза, или по меньшей мере в 5 раз, или по меньшей мере в 10 раз, или более чем в 20 раз больше, чем период полужизни соответствующего терапевтического или нацеливающего фрагмента в отдельности. В некоторых вариантах осуществления слитый белок по изобретению имеет период полужизни, который увеличен больше чем на 1 час, больше чем на 2 часа, больше чем на 6 часов или более чем на 12 часов по сравнению с периодом полужизни соответствующего терапевтического или нацеливающего фрагмента. В других вариантах осуществления слитый белок имеет период полужизни, который больше 1 часа, больше 2 часов, больше 6 часов, больше 12 часов, около одного дня, около двух дней, около одной недели, около двух недель, около трех недель или не больше 2 месяцев.

Термин "период полужизни" в контексте настоящей заявки относится к времени, необходимому для уменьшения концентрации в сыворотке сконструированного полипептида, слитого белка или мультивалентного и мультиспецифического слитого белка на 50% in vivo, в результате, например, разрушения молекулы и/или клиренса или секвестрации молекулы посредством физиологических механизмов. Способы осуществления фармакокинетического анализа и определения периода полужизни известны специалистам в данной области техники.

См. общее описание мультивалентных и мультиспецифических слитых белков, содержащих одно или несколько VHH антител, и их получение (Els Conrath, K. et al., J. Biol. Chem., 276:7346-50, 2001; Muyldermans, S., J. Biotechnol., 74:277-302 2001; Международные публикации №№. WO 96/34103, WO 99/23221 и WO 04/041865).

Сконструированные полипептиды, слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, могут экспрессироваться или находиться в ассоциации с конструкциями, которые включают, например, один или несколько элементов, таких как векторы экспрессии (WO 04/041862).

Сконструированные полипептиды, слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, могут экспрессироваться, например, в выделенных клетках-хозяевах, включающих молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют сконструированные полипептиды, слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке. Подходящие клетки-хозяева включают, но не ограничиваются этим, клетки млекопитающих и дрожжей.

Терапевтические или фармацевтические композиции, раскрытые в настоящей заявке, могут включать терапевтически эффективное количество одного или нескольких сконструированных полипептидов, слитых белков или многовалентных и мультиспецифических слитых белков, описанных в настоящей заявке, в смеси с фармацевтически или физиологически приемлемым агентом, используемым для формулирования композиции, выбранным в соответствии со способом введения. Приемлемые вещества, используемые для формулирования композиций, предпочтительно являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях.

Приемлемые вещества для формулирования композиций можно использовать для модификации, поддержания или сохранения, например, pH, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения композиции. Приемлемые вещества для формулирования композиций включают, но не ограничиваются этим, аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин), противомикробные средства, антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия), буферы (такие как борат, бикарбонат, трис-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты), объемообразующие агенты (такие как маннит или глицин), хелатообразующие агенты (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), комплексообразующие агенты (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин), наполнители, моносахариды, дисахариды и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины), белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины), красители, ароматизаторы и разбавители, эмульгаторы, гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон), низкомолекулярные полипептиды, солеобразующие противоионы (такие как натрий), консерванты (такие как бензалконий хлорид, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода), растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль), сахарные спирты (такие как маннит или сорбит), суспендирующие агенты, поверхностно-активные вещества или смачивающие вещества (такие как плуроники; ПЭГ; сложные эфиры сорбитана; полисорбаты, такие как полисорбат 20 или полисорбат 80; тритон; трометамин; лецитин; холестерин или тилоксапал), агенты, улучшающие стабильность (такие как сахароза или сорбит), агенты, повышающие тоничность (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, или сорбит, маннит), носители для доставки, разбавители, эксципиенты и/или фармацевтические адъюванты для регулирования рН (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th Ed., A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company 1990) и последующие издания, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки).

Специалист в данной области может разработать фармацевтическую композицию, включающую сконструированные полипептиды, слитые белки или многовалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, в зависимости, например, от предполагаемого пути введения, формата доставки и желаемой дозировки.

Поскольку сконструированные полипептиды, слитые белки и многовалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, могут демонстрировать, например, увеличенный период полужизни, их в некоторых вариантах осуществления можно вводить так, чтобы они поступали в кровоток. Как таковые, их можно вводить любым подходящим способом, например внутривенно, подкожно, посредством инъекции или инфузии, или любым другим подходящим способом, который позволяет сконструированным полипептидам, слитым белкам или мультивалентным и мультиспецифическим слитым белкам поступать в кровоток. Получение таких фармацевтических композиций известно специалистам в данной области.

Любой из сконструированных полипептидов, слитых белков и мультивалентных и мультиспецифичных слитых белков, раскрытых в настоящей заявке, можно вводить в комбинации с дополнительной терапией, то есть в комбинации с другими средствами. Используемый термин “совместно вводимый” включает любое или все из одновременного, раздельного или последовательного введения сконструированных полипептидов, слитых белков и мультивалентных и мультиспецифичных слитых белков, описанных в настоящей заявке, с адъювантами и другими агентами, включая введение в качестве части схемы лечения.

Фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, могут включать один или несколько агентов для улучшения, например, доставки терапевтического средства. Дополнительные средства можно вводить совместно, например, в виде инъекций. Вещества, которые разлагают гиалуронан, например, могут быть включены в фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, или такие вещества можно вводить совместно с фармацевтическими композициями, описанными в настоящей заявке, для облегчения, например, диспергирования и абсорбции терапевтических средств, описанных в настоящей заявке, после введения. Примером такого вещества является рекомбинантная гиалуронидаза.

Фармацевтические композиции также могут быть выбраны для парентеральной доставки. Альтернативно, композиции могут быть выбраны для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт, например пероральным путем. Получение таких фармацевтических композиций известно специалистам в данной области.

Дополнительные фармацевтические композиции будут очевидны для специалистов в данной области, в том числе композиции, включающие композиции с пролонгированной доставкой или композиции с контролируемой доставкой. Способы получения композиций с пролонгированной доставкой или с контролируемой доставкой с использованием, например, липосомных носителей, биоразлагаемых микрочастиц или пористых шариков, а также депо-инъекций известны специалистам в данной области.

Изобретение также охватывает терапевтические наборы, включающие сконструированные полипептиды, слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления наборы включают первый контейнер, содержащий сухой белок, а также второй контейнер, содержащий водную композицию. В других вариантах осуществления наборы включают однокамерные и многокамерные предварительно заполненные шприцы (например, шприцы с жидкостью и шприцы с лиофилизатом).

Изобретение также охватывает изделие, включающее контейнер, содержащий этикетку и композицию, включающую сконструированные полипептиды, слитые белки и мультивалентные и мультиспецифические слитые белки, раскрытые в настоящей заявке, где этикетка указывает, что композиция предназначена для введения пациенту, имеющему, или у которого подозревается, комплемент-опосредованное расстройство.

В одном варианте осуществления изобретение обеспечивает способ профилактики и/или лечения по меньшей мере одного заболевания, состояния или расстройства, которое можно предотвратить или лечить с использованием сконструированного полипептида, слитого белка или мультивалентного и мультиспецифического слитого белка, раскрытых в настоящей заявке, при этом способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически или фармацевтически эффективного количества сконструированного полипептида, слитого белка или мультивалентного и мультиспецифического слитого белка, раскрытого в настоящей заявке. В конкретных вариантах осуществления расстройство представляет собой комплемент-опосредованное расстройство, такое как, например, ревматоидный артрит (RA); люпус-нефрит; астма; ишемическое-реперфузионное повреждение; атипичный гемолитико-уремический синдром (aHUS); болезнь плотного осадка (DDD); пароксизмальная ночная гемоглобинурия (PNH); дегенерация желтого пятна (например, возрастная дегенерация желтого пятна (AMD); синдром гемолиза, повышения уровня печеночных ферментов и низкого уровня тромбоцитов (HELLP); синдром Гийена-Барре (GBS); синдром CHAPLE; тяжелая миастения (MG); оптиконевромиелит (NMO); тромботическая микроангиопатия после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (post-HSCT-TMA); TMA после трансплантации костного мозга (post-BMT TMA); болезнь Дегоса; болезнь Гоше; гломерулонефрит; тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (TTP); спонтанная потеря плода; малоиммунный васкулит; буллезный эпидермолиз; рекуррентная потеря плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга; и повреждение в результате инфаркта миокарда, сердечно-легочного шунтирования и гемодиализа.

Эффективное количество фармацевтической композиции, описанной в настоящей заявке, для терапевтического применения будет зависеть, например, от терапевтического контекста и целей. Специалист в данной области поймет, что подходящий уровень дозировки для лечения будет варьироваться в зависимости, отчасти, от доставляемой молекулы, показания, для которого применяется композиция, пути введения и размера (массы тела, поверхности тела или размера органа) и состояния (возраста и общего состояния здоровья) пациента.

ПРИМЕРЫ

Примеры, представленные ниже, иллюстрируют конкретные варианты осуществления и различные применения изобретения. Они представлены только в целях объяснения, и не должны рассматриваться как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения.

Пример 1. Иммунизация лам и конструирование фаговой библиотеки анти-C5 VHH

Иммунизацию лам осуществляли начиная с первичной инъекции, с последующими вторичными бустер-инъекциями. Вкратце, первичную иммунизацию начинали с 500 мкг человеческого C5-белка системы комплемента с последующими 500 мкг бустер-инъекциями антигена человеческого C5-белка системы комплемента, вводимыми на неделе 2 (бустер-инъекция 1), неделе 4 (бустер-инъекция 2), неделе 8 (бустер-инъекция 3) и неделе 12 (бустер-инъекция 4). Титры в сыворотке измеряли методом ELISA, и было найдено, что титры после бустер-инъекции 3 являются самыми высокими, в 10 раз выше сигнала до иммунизации, при 1:1000000 разведении. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) выделяли из образцов крови после бустер-инъекции 3. Жизнеспособность клеток составила 98%, как было определено методом окрашивания трипановым синим. Клетки лизировали в лизирующем буфере для выделения РНК сразу после выделения PBMC. Тотальную РНК выделяли из PBMС и синтезировали кДНК с использованием специфических праймеров для тяжелых цепей ламы. VHH фрагменты (тяжелые цепи только) отделяли от VH (обычная тяжелая цепь) фрагментов методом гель-электрофореза. VHH фрагменты клонировали в pADL-10b (Antibody Design Labs, San Diego, CA) и библиотеку ДНК трансформировали в TG1 клетки. 114 колоний рандомизированно секвенировали и получали 101 (89%) подходящую последовательность. Библиотеку соскребали и суспендировали в 25% глицерине, затем хранили при -80C.

Пример 2. пэннинг и скрининг библиотеки фагового дисплея на анти-C5 VHH домены

TG1 клетки, содержащие библиотеку VHH доменов против человеческого C5-белка системы комплемента, выращивали до логарифмической фазы (OD₆₀₀=0,4-0,8) при 37°С в среде 2×YT, содержащей 100 мкг/мл карбенициллина и 2% глюкозы. Клетки инфицировали хелперным фагом M13K07 с и без встряхивания при 37°C в течение 30 минут. Инфицированные клетки осаждали при 4000 × g в течение 10 минут и ресуспендировали в среде 2×YT, содержащей 100 мкг/мл карбенициллина, 50 мкг/мл канамицина и 1 мМ IPTG, и бактериофаг размножали путем выращивания в течение ночи при 30°С и 250 об/мин. Выращенную в течение ночи культуру центрифугировали при 9000 × g в течение 10 минут при 4°С и фаг осаждали, используя 1/5 объема раствора ПЭГ-NaCl [20% полиэтиленгликоля 6000, 1,5 М NaCl] путем инкубации в течение 1 часа на льду. Фаговые частицы осаждали центрифугированием при 9000 × g в течение 15 минут при 4°С и супернатант отбрасывали. Фаговые частицы ресуспендировали в блокирующем буфере SuperBlock и клеточный дебрис осаждали центрифугированием в течение 10 минут при 7500 × g в микроцентрифужной пробирке. Супернатант, содержащий фаговые частицы, переносили в новую пробирку, и фаг снова осаждали, как описано выше. Концентрированные фаговые частицы подвергали нагреванию в течение 1 часа при 70°C и титр фага до и после нагревания определяли путем инфицирования клеток TG1 в логарифмической фазе с последующим посевом на чашки с 2 × YT-агаром с 100 мкг/мл карбенициллина 50 мкг/мл канамицина и 2% глюкозы.

Стратегия выбора библиотеки включала выбор с использованием биотинилированного C5-белка комплемента яванского макака (cyno) и конкуренцию с молярно эквивалентным небиотинилированным человеческим C5-белком системы комплемента с получением соответствующих по аффинности анти-C5 VHH доменов с реактивностью в отношении обоих человеческого и cyno видов. Библиотеку фагового дисплея VHH подвергали стадии де-селекции против Dynabeads^® M-280 стрептавидина в течение 1 часа при комнатной температуре. Отсеянные фаговые частицы, отбирали на сопоставимую аффинность к человеческому и cyno C5 путем инкубации в эквимолярном растворе биотинилированного cyno C5 и небиотинилированного человеческого C5 с Dynabeads^® M-280 Стрептавидином в течение 30 минут при комнатной температуре. После 5 циклов промывки при помощи PBST и PBS фаг элюировали из шариков с использованием 0,1 M глицина (pH 2,2) с 1 мг/мл BSA. Элюированный супернатант нейтрализовали при помощи 1 M Tris pH 8,0. TG1 клетки в log-фазе инфицировали нейтрализованным фагом и высевали на 2YTCG среду для измерения выходного титра. Выходной и входной титры сравнивали для расчета отношения обогащения; более высокое отношение говорит об успешном выделении C5-специфических клонов.

Индивидуальные клоны выбирали, инокулировали в 96-луночный планшет с глубокими лунками в 2×YT среду с 100 мг/мл карбенициллина и 2% глюкозы и выращивали до log-фазы. Клетки инфицировали M13K07 и культивировали в течение ночи при 30°C для продукции фаговых частиц, отображающих индивидуальные VHH домены, в культуральном супернатанте. Фаговый ELISA скрининг четырех 96-луночных планшетов с человеческим C5, захваченным на стрептавидин-покрытых планшетах, предполагал ~60% положительных клонов. Было отобрано 72 уникальных клонов из общего количества 76 клонов в качестве репрезентативных на основании анализа последовательности CDR H3. Последовательности этих репрезентативных VHH клонов представлены в Таблице 1. В целях клонирования, N- и C-концевые аминокислоты модифицировали для соответствия N- и C-концевым аминокислотам VH-3 зародышевой линии человека.

Аминокислотные последовательности, подходящие для использования в сконструированных полипептидах по изобретению, включают аминокислотные последовательности, раскрытые в Таблицах 1, или их фрагменты.

Таблица 1 Репрезентативные анти-C5 VHH домены ламы, и связывается или нет каждый клон с человеческим C5-белком системы комплемента (hC5) и/или cyno C5-белком системы комплемента (cC5)
VHH домен	Последовательность	Связывается с hC5	Связывается с cC5
LCP0081	EVQLVESGGGLVQTGGSLRLSCAASTSGSDFSGKKMAWYRQAPGNGREFVAIIFSNKVTDYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMSSLTPTDTAVYYCHDQEISWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:150)	+	-
LCP0082	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGTSVVINSMGWYRQAPGKQRELVATIDLSGTTNYADSAQGRFTISRDNAENLNLVYLQMNNLNPDDTAVYYCNALLSRAVSGSYVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:151)	+	+
LCP0083	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTSRIGTISNIDLMNWYRQAPGKQREFVASLQSNGATNYADSVKGRFTISRDNAKNTLFLQMNSLNPEDTAVYFCHALLPRSPYNSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:152)	+	+
LCP0085	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASSIIPNIYAMGWYRQAPGKQRELVASIENGLPANYADSVKGRFTISRDNAKNTVFLQMHSLKSEDTAVYYCYAFRPGVPTTWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:153)	+	+
LCP0086	EVQLVESGGGLVQAGESLRLSCAASGSISAINAMGWYRQAPGKQREFVADITRAGVSDYADAVKGRFTISRDNAKNTFYLQMNDLKPEDTAVYYCDALLIAGGVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:154)	+	-
LCP0088	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTASGRTISTTVMGWFRQAPGKEREFVAAVHWGDGNTVYADSVKGRFTISRDDAKNTVYLQLNYLKPEDTSVYYCAARPPTYVGTSRNSRSYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:155)	+	+
LCP0089	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVVSGRAIDRNAMGWFRQAPGKERESVAAISASSGNTYYSDSVTGRFTISRDNTKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAGSRGSWYLFDRREYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:156)	+	-
LCP0090	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLTCTASETSFDINVMGWYRQAPGKQRELVAIITASGNTEYADSAKGRFTISRDNTKNTVAMQMNNLKPDDTAVYYCYVLLSGAVSGVYAHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:157)	+	+
LCP0091	EVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCAASGRTDSRYAMGWFRQAPGKERELMAAISWSGRPTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVSLQMNSLKPEDTAVYYCAYKRLPAWYTGSAYYSQESEYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:158)	+	+
LCP0092	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTSRIGTISNIDLMNWYRQAPGKQREFVASLQSTGTTDYADSVKGRFTISRDNAKNTLFLQMNSLNPEDTAVYYCHALIPRSPYNVWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:159)	+	+
LCP0095	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTASGRTISTTVMAWFRQAPGKEREFVAADHWGDAGTVYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNYLKPEDTSVYYCAARPPTYVGTSRDSRAYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:160)	+	+
LCP0097	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASESISSDSPMAWYRQAPGKQREMVARILPIGPPDYADAVKDRFSISRENAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNLLHLPSGLNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:161)	+	+
LCP0098	EVQLVESGGDLVQAGGSLRLSCVASRSISSAMNWYRQPPGKQRELVALITRGFNTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTGVYYCNSLNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:162)	+	-
LCP0100	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTDSMWSMGWFRQAPGQEREFVAAISWSVGTYYEDSVKGRFTLSRDDDKDTAYLEMSDLKLEDTADYYCAASTRHGTNLVLPRDYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:163)	+	-
LCP0101	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTSRIGTISNIDLMNWYRQAPGKQREFVASLQSTGTTDYADSVKGRFTISRDNAKNTLFLQMNSLNPEDTAVYYCHALLPRSPYNAWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:164)	+	+
LCP0102	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGIIPNIYAMGWYRQAPGKQRELVASIENGGSTNYADSVKGRFTISRDNARNTVFLQMHSLKSEDTAVYYCYAFRPGVPTDWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:165)	+	+
LCP0103	EVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCVASGRTFSNYRMGWFRQAPGAEREFVGTIYWSTGRSYYGDSVKGRFIISGDNAKNTIHLQMNSLKPEDTGVYYCASGPENSAFDSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:166)	+	+
LCP0104	EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCAASGRPFSSYTMGWFRQAPGKERDFVATISWSGGIKYYADSVEGRFSISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTAVYYCAATELRTWSRQTFEYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:167)	+	-
LCP0105	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTASGRTISTTVMAWFRQAPGKEREFVAAVHWGDESTVYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNYLKPEDTSVYYCAARPPTYVGSSRSSRAYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:168)	+	+
LCP0106	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVVSGSILDINVMAWYRQAPGKQREFVARITSGGDIDYADPVKGRFTISTNGAKNTVYLQMNSLKPEDTAAYYCNVLLSRSSAGRYTHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:169)	+	+
LCP0111	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFPFSLYDMGWYRQAPEKQRESVAIITQSGSTDYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCRLVGVTWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:170)	+	-
LCP0112	EVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCAASGRTFSSYGIGWFRQAPGKEREFVAAISRTGQTTHYADSIRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAARTGGPIYGSEYHYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:171)	+	-
LCP0113	EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCAASGRPFSSLTMGWFRQAPGKGREFVATTSWSGDIKYYADFVKGRFTISRDNAKNMVYLQMNSLKPEDTAVYYCAATLLRTWSRQTNEYEYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:172)	+	-
LCP0114	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTSRIGTISNIDLMNWYRQAPGKQREFVASLQSTGTTDYADSVRGRFTISRDNAKNTLFLQMNSLNPEDTAVYYCHALLPRSPYNVWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:173)	+	+
LCP0115	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGREFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:174)	+	+
LCP0122	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPETGATINVMAWYRQAPGKQRELVARVAIDNNTDYADHAKGRFTISRDNTKNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNVLLSRQISGSYGHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:175)	+	+
LCP0123	EVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCAMSGGTRPFEDYVMAWFRQATGKEREFVATITWMGETTYYKDSVNGRFAISRDNAENTVALQMNSLEPEDTAVYFCAAHSRSSFSTSGGRYNPRPTEYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:176)	+	+
LCP0125	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTASGRTISTTVMGWFRQAPGKEREFVAAVHWGDEGTVYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNALKPEDTSVYYCAAKPPTYVGTSRSSRAYVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:177)	+	+
LCP0126	EVQLVESGGGLVQAGDSLTLSCAASGSGFSINVMAWYRQAPGKQRDLVASMTIGGRTNYKDSLKGRFTISRDNTKNTAYLQMNSLKPEDTAVYYCYALLDRGIGGNYVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:178)	+	+
LCP0127	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGLTFSDYYMGWFRQAPGKERDFLARIGKSGIGKSYADSVRGRFTISRDNAKNTVYLQMNNLKLEDTAVYYCAADRDIAYDARLTAEYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:179)	+	+
LCP0128	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTASGRTISTTVMGWFRQAPGKEREFVAAVHWGDESTVYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNYLKPEDTAVYYCAARPPTYVGTSRSSRAYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:180)	+	-
LCP0129	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASVASETIVSINDMAWYRQAPGKQRELVASITIHNNRDYADSAKGRFTISRDDTKNTVYLQMTHLKPDDTAVYYCTVLLSRALSGSYRFWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:181)	+	+
LCP0130	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCTGSETSGTIFNINVMGWYRQAPGKQRELVAIMDIGGTTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYVQMNNLKSEDTAVYYCYCALDRAVAGRYTYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:182)	ND	ND
LCP0132	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGISLNDYNMGWFRQAPGKDREIVAALSRRSHGIYQSDSVKYRFSISRDNTKNMVSLQMDSLRPEDTAVYYCAADGDPYFTGRDMNPEYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:183)	+	-
LCP0133	EVQLVESGGGSVQAGGSLRLSCAFSGGRFSDYGMAWFRQGPGKEREFVSRISGNGRGTQYTDSVSGRFIISRDNDKNTVYLQMNDLKVEDTAIYYCARGSGPSSFNEGSVYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:184)	+	+
LCP0134	EVQLVESGGGLVQSGGSLTLSCVLSGSIFSSNTMGWHRQAPGKQREWVAITTSGGTTKYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLRMNNLKPEDTGVYFCYASLAGIWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:185)	+	+
LCP0135	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPETEATYNVMGWYRRAPGKQRELVATMTIDYNTNYADSAKGRFTISRDNTKNTVYLQMNNLRPDDTAVYYCRVDLSRQISGSYNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:186)	+	+
LCP0136	EVQLVESGGGLVQPGESLRLSCAISGFAFTDVGMSWVRQAPGKGLEWVSSISSGSSITTYSDSVKGRFTISRDNARNTLFLQMNSLKPEDTAVYYCGRYYCTGLGCHPRRDSALWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:187)	+	+
LCP0137	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCRASGFTYSTAAMGWVRQAPGKGLEWVSSISSLGSDRKSADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCARFISNRWSRDVHAPSDFGSRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:188)	+	+
LCP0138	EVQLVESGGGSVPAGGSLRLSCAAFGFTFDNYAIAWFRQAPGKEREGVSCLSTNDGETYYADSVKGRFTISSDHAKNTVYLQMDSLRPEDTAVYYCAAAEGSWCHKYEYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:189)	+	-
LCP0139	EVQLVESGGGLVQAGESLRLSCAASGRTSDLYVVGWFRQTPGKEREFVAGIAWTGDASYYADSVEGRFTIARDNAENRIDLQMTSLKPEDTAVYYCAADSRARFERQRYNDMNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:190)	+	-
LCP0141	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCIASVTIADINVMGWYRQAPGKQREFVASIPTTGDKNYAESAKGRFTISRDNSQNTVAMQMNNLKPDDTAVYYCYVLLSRAVSGSYGHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:191)	+	+
LCP0142	EVQLVESGGGLVQVGGSLRLSCAASGSIVDIKVMGWYRQAPGNERELVALINDADDSEYSPSMRGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLKPEDTAAYYCAADRDSSWFKSPYIPGSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:192)	+	+
LCP0143	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:193)	+	+
LCP0144	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGIDGDINVMAWYRQAPGKQRELVASITIGGNTNYADSVKGRFTIARDNAKNRMSLEMNSLKSEDTAVYYCNTLLSRVHDGQYVFWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:194)	+	+
LCP0145	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASEDAFKTDTLGWFRQAPGEEREFVAAFVWAGGPFYADSVKGRFTISMDEDRNTVYLQMNSLKPEDTGVYYCAASLSRLRVGEITPRHMNYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:195)	+	-
LCP0146	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSKDNAKNRMSLQMNSLKPEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:196)	+	+
LCP0147	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSSNMGWFRQAPGEEREFVTAIDWSGGRTYYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMDSLKPEDTAVYYCAAQGSGLDWGYPWTYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:197)	+	+
LCP0149	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGSVLNIDSMAWYRQAPGKQRELVAEMLWGGTKNYGDSVKGRFTISGDADWGTELQMSSLKPEDTAVYYCNAVGRGFRDAWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:198)	+	-
LCP0150	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGSGFGILDMGWYRQAPGSRRELVGYVTRDGTTNYGNSVKGRSIISEDITKNTVILQMNSLKPEDTAVYFCTAGLTNQPRAWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:199)	+	+
LCP0151	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGSVSSINVMGWYRQTPGKQRELVAAINRGGSTNVADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNAEPYGLDWRYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:200)	+	+
LCP0152	EVQLVESGGGLEQAGGSLRLSCTASGGTDSIYQMGWFRQTPGKEREFVAAINWNYGGAYYPDSVKGRFTISRDKAKNIGFLQMNSLKPEDTAVYYCATSQTSVDAFSVPITTARRYQYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:201)	+	-
LCP0153	EVQLVESGGGLVQAGGSLTLSCVASGRTFSNYRMGWFRQAPGKEREFVGTIYWSTGRSYYGDSVKGRFIISGDNAKNTIHLQMNSLKPGDTGVYYCASGPEMSAFDSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:202)	+	+
LCP0154	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDDYAIGWFRQAPGKEREGVSCISSSDGSTYYGDSVKGRFTISRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCATGTPLSSYYGSCLDYDMAYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:203)	+	+
LCP0155	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGVTFSNYGMAWFRQAPEKEREFVARISSNGRRTEYADGVSGRFTISRDNAKNTVYLQMNGLKPEDTAVYYCARAAGPSGFHEQSIYDDWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:204)	+	+
LCP0295	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAVSGRSISTYVAGWFRQGPGKEREFVALISRGGGDIQYSDSVKGRFTISRDNAKNAVYLQMNSLKPADTAVYYCSLDASFGSRLVSRWDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:205)	+	+
LCP0296	EVQLVESGGGVVQAGDSLTLTCTAPVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNDKNAVYLRMNSLNAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:206)	+	+
LCP0297	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAGSGFTSDDYAIAWFRQAPGKEREGVSCIGSGDGTTYYADSVKGRFIISSENAKKTVYLQMNSLKPEDTGIYYCAADLYPPADYALDHTWYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:207)	+	+
LCP0298	EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCVVSGSRFSLDTVGWHHQAPGKLRELVARIRDDGDTMYVASVKGRFIISRDDAKNTVYLQMNSLKPEDTGVYYCYFSRNGAWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:208)	+	+
LCP0299	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCGASGRISDINVMGWYRQAPGKQREMVADIDIRGYTNYADSVKGRFTVSRDNAETMYLEMNSLKPEDTAVYRCNALTSRDWGTGKYVYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:209)	+	+
LCP0300	EVQLVESGGDLVQVGGSLRLSCAFPGSMSSRNSVNWYRQPPGKQREWVATISVSGFTQYADSAKGRFTISRDSAKNTVHLQMNSLKPEDTGVYYCNYMDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:210)	+	+
LCP0301	EVQLVESGGGVVRAGGSLKLSCTAAGTDINIVTVGWHRQAPGKHRELVATIVGSGSRTNYADSVKGRFTISRDNPKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYATSIGWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:211)	+	+
LCP0302	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:212)	+	+
LCP0303	EVQLVESGGGSVQAGGSLRLTCTASGNVRSIFTMAWYRQAPGKQRELVASAAKGGDTYYADSAKGRFTISRDDAKAIVSLQMNSLKPEDTAVYYCKTDGRPWFSEDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:213)	+	+
LCP0304	EVQLVESGGGLVQVGDSMRLSCAVFGNIFTRDPVMWFRQPPGKQREWVATITPSGFANYADSVKGRFTISRYAANNTVHLQMNSLKPEDTGVYFCNFGTYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:214)	+	+
LCP0306	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASKGAFNINVMAWYRQAPGKQRELVARVALGGTTDYADSVKGRFTISRNNAQDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCNVLLDRGVRGSYAYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:215)	+	+
LCP0309	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYSSYVIGWFRQAPGKEREFVASIRWAGGDSHYQESVKGRSTISKDNARNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAGAAPVPGQSYEWSSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:216)	+	+
LCP0310	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCVASGSAFYVGPMAWYRQAPGKERESVASITKGGITNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTDVYVCNARVKLQEDRLFRDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:217)	+	+
LCP0311	EVQLVESGGGMVQPGGSLRLSCVVSGASGNIDFVTVGWHRQAPGKHREMVAVITGDGTRNYRDSVKGRFSISRDNAKNTIYLQMNSLKPEDTAVYYCYMSNPISSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:218)	+	+
LCP0312	EVQLVESGGGLVQAGGSRRLSCAVSGRTLSSFGMGWFRQAPEKPREFVAAITWGQGGTFYADSVKGRFTISRDIVKNTVYLQMNDLKPDDTGLYFCVSAPHFHEAFPSRPPAYAYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:219)	+	+
LCP0313	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYGSYVIGWFRQAPGKEREFVASIRWAGGDSHYGDPLKGRSTISKDNAKNTVYLQMNSLKPEDAAVYYCAGAAPVPGSSYEWTNWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:220)	+	+
LCP0314	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSISSVNTMGWYRQAPGKQRELVAFITSGDDTNYADSMKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCVATLGRSSSGTYTYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:221)	+	+
LCP0316	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASLRTLDNYGVGWFRQTPGREREFVSAVSWNGDRTYYQDSVKGRFTISREYAKNTVYLQMDSLKPEDTAVYYCAVNMYGSTFPGLSVESHYDYWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:222)	+	+
LCP0317	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIFSINAMAWYRQAQGKQRELVADITKNDITDYADSVKGRFTIARDNAKNTVDLQMNSLKPEDTAVYYCTAALSRHPYRSWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:223)	+	+
LCP0319	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAAGRSLSDYYIIWFRQPPGKEYEFVSSIRWNTGSTTYGDSVKGRFTISRDNAKSTVYLQMNSLKPEDTALYWCAAGLHLTPTSRTYNYRGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:224)	+	+
LCP0320	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPETIFTINSMGWYRQAPGKQRELVAFINLDGNTNYADSAKGRFTISRDNAENTVYLQMDNLKPDDTAVYYCNVLLSRAISGSYVHWGQGTQVTVSS (SEQ ID NO:225)	+	+

Пример 3. Клонирование и экспрессия анти-C5 VHH доменов

Репрезентативные анти-C5 VHH домены субклонировали в вектор экспрессии млекопитающего и экспрессировали в виде VHH-His-tag слияний в Expi293F клетках. Культуральные супернатанты собирали, когда жизнеспособность клеток падала до 50-60%. Супернатанты анализировали методом SDS-PAGE в восстанавливающих условиях с последующим окрашиванием кумасси бриллиантовым синим. Уровни экспрессии рассчитывали с использованием биослойной интерферометрии на устройстве Octet (ForteBio Inc.). His-меченные VHH домены очищали аффинной хроматографией на иммобилизованных ионах металла (IMAC) на AKTA (GE Healthcare) из культуральных супернатантов.

Пример 4. Анализ связывания и функциональный анализ анти-C5 VHH доменов

Анализ связывания с компонентом C5 комплемента. Репрезентативные анти-C5 VHH домены секвенировали, охарактеризовывали и оценивали на связывание с C5-белком человека, яванского макака (cyno) и мыши с использованием биослойной интерферометрии на устройстве Octet (ForteBio Inc.). Клеточные культуральные супернатанты из экспрессированных VHH-His доменов нормализовали до концентрации 20 мг/мл в 2× буфере для кинетического анализа и загружали на наконечники anti-penta-HIS (HIS1K) биосенсора (ForteBio Inc.) в течение 300 секунд до полной пропитки наконечников сенсора. На пропитанные наконечники затем воздействовали раствором, содержащим 50 нМ растворимого C5 (человека, cyno или мыши) в 2× буфере для кинетического анализа, при воздействии каждого раствора в течение 600 секунд в отдельных экспериментах, и диссоциацию отслеживали в течение 600 секунд в 2× буфере для кинетического анализа. VHH домены, которые показали связывание с человеческим (hC5) или cyno C5 (cC5), помечены знаком '+' в Таблице 1.

Анализы гемолиза на антагонизм C5. Методом гемолиза измеряют высвобождение гемоглобина из сенсибилизированных эритроцитов цыпленка, лизированных при воздействии Классический Путь Комплемента (CCP)-активированной сыворотки. His-меченные VHH домены экспрессировали в клетках Expi293. Предварительные анализы использовали для выбора функциональных анти-C5 VHH доменов, которые очищали при помощи IMAC. Десять очищенных VHH доменов анализировали на их способность ингибировать CCP-опосредованный гемолиз сенсибилизированных эритроцитов цыпленка при различных концентрациях.

Отсутствие антитела и 20 мМ EDTA использовали в качестве контролей с полным лизисом и отсутствием лизиса для анализа, соответственно. Десять VHH доменов и контрольные анти-C5 IgG (обозначены как h5G1.1, BNJ441 и Ec-CHO) при различных концентрациях (32 мг/мл - 0,5 мг/мл) предварительно инкубировали с 20% нормальной человеческой сывороткой (NHS) в 0,1 мл желатин-веронал буферного солевого раствора (GVB++, cat #B100, Comptech) в течение 30 минут при комнатной температуре. 400 мл эритроцитов цыпленка (Lampire Biologicals, cat# 7201403) промывали четыре раза 1 мл GVB++, и сенсибилизированные cRBC получали путем инкубации 5 × 10⁷ клеток/мл с 1:500 (об./об.) разведением кроличьего-анти-куриного IgG (cat # 203-4139, Rockland) и инкубировали при 4°C в течение 15 минут. Клетки промывали два раза GVB++ и ресуспендировали в конечном объеме 3,6 мл GVB++. 30 мл сенсибилизированных cRBC (2,5 × 10⁶ клеток) добавляли к предварительно инкубированной человеческой сыворотке и антителам и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Клетки осаждали центрифугированием при 1700 × g в течение 3 минут при 4°C и супернатант (85 мл) переносили в новый плоскодонный 96-луночный планшет. Поглощение измеряли при 415 нм. Процент лизиса рассчитывали для каждого VHH домена и контрольных антител следующим образом:

((A_{415образец} - A_{415 отсутствие лизиса})/(A_{415полный лизис} - A_{415 отсутствие лизиса})) × 100

где A_{415образец} означает поглощение при 415 нм для образца антитела, A_{415отсутствие лизиса} означает поглощение при 415 нм для контроля с отсутствием лизиса (20 мМ EDTA), и A_{415 полный лизис} означает поглощение при 415 нм для контроля с полным лизисом. Результаты показаны на Фиг. 1.

Идентификация VHH доменов, которые ингибируют высвобождение C5a. Расщепление человеческого C5-белка (например, высвобождение C5a посредством C5 конвертазы альтернативного пути активации комплемента, осажденной на CAP-активаторе Зимозане) измеряли с использованием иммуноанализа на основе Meso Scale Discovery (MSD). Анти-C5 VHH домены экспрессировали и очищали, как описано в предыдущем разделе, и анализировали на их способность блокировать расщепление человеческого C5-белка путем измерения количества высвобожденного hC5a. Оптимальную концентрацию для образца VHH домена определяли в пилотных экспериментах. Образцы VHH доменов и контрольные антитела (h5G1.1, N19/8, BNJ441 и Ec-CHO) добавляли к человеческому C5-белку (конечная концентрация 25 нМ) (CompTech Inc.) в GVB++ буфере, содержащем 1% желатина и 2,5 мМ NiCl, в течение 30 минут при 37°C и хранили при 4°C до последующего использования. Обеспечивающий высокое связывание 96-луночный планшет MSD покрывали анти-C5a антителом при 2 мг/мл в BupH фосфатно-солевом буферном растворе (ThermoFisher) и инкубировали в течение 1 часа. Зимозан затем добавляли к NHS в равной пропорции для активации альтернативного пути активации комплемента. Эту смесь зимозан-NHS затем добавляли к предварительно инкубированному VHH-hC5 раствору и инкубировали при 37°C. Реакцию останавливали в разных точках времени (0, 30, 60 и 90 минут) путем добавления futhan-EDTA. Планшет центрифугировали при 3600 об/мин в течение 2 минут и супернатант переносили в новый полипропиленовый планшет. Блокатор A добавляли в течение 1 часа при комнатной температуре для блокирования неспецифического связывания с покрытым MSD планшетом. MSD планшет промывали и добавляли супернатант из образцов, указанных выше. Этот планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Получали смесь антитела для детекции биотин-Ab2942 (Abcam) при 1 мг/мл и стрептавидин-конъюгированной сульфо-метки при 0,5 мг/мл и затем добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. MSD 2× буфер считывания добавляли в каждую лунку и измеряли электро-хемилюминесцентный сигнал. Необработанные данные анализировали с использованием программного обеспечения MSD. Результаты этого эксперимента показаны на Фиг. 2.

LCP0115, LCP0146, LCP0295, LCP0296, LCP0297 и LCP0302 ингибировали высвобождение C5a и были использованы для дальнейшей характеризации.

Пример 5. Анализ аффинности анти-C5 VHH доменов методом Biacore

Анти-C5 VHH домены распределяли в соответствии с приоритетом на основании перекрестной реактивности относительно cyno C5, и восемь очищенных анти-C5 VHH доменов подвергали анализу аффинности на системе Biacore. Кинетические параметры для связывания с C5 человека и cyno для первоначальных восьми кандидатов показаны в Таблице 2. Из восьми проанализированных на аффинность кандидатов были выбраны пять анти-C5 доменов (LCP0115, LCP0143, LCP0146, LCP0296, и LCP0302) и расположены в соответствии с приоритетом для гуманизации и последующего анализа на основании сопоставимой аффинности к C5 человека и cyno.

Таблица 2 Результаты Biacore анализа VHH доменов
Образец	C5	k a (1/Ms)	k d (1/s)	K D (M)	Chi 2
LCP0095	hC5	2,86e5	7,14e-4	2,50e-9	6,94
	cC5	4,56e5	1,68e-3	3,69e-9	12,9
LCP0115	hC5	1,13e5	3,48e-5	3,09e-10	0,08
	cC5	9,53e4	1,02e-5	1,07e-10	0,10
LCP0123	hC5	1,08e5	2,16e-4	1,99e-9	0,13
	cC5	1e5	3,81e-4	3,8e-9	0,14
LCP0136	hC5	4,86e5	8,82e-4	1,81e-9	2,47
	cC5	7,89e5	2,51e-4	3,18e-10	1,01
LCP0143	hC5	6,91e5	5,66e-5	8,2e-11	0,90
	cC5	7,41e5	1,24e-4	1,67e-10	0,81
LCP0146	hC5	2,24e6	9,75e-5	4,35e-11	0,42
	cC5	2,64e6	2,44e-4	9,22e-11	0,47
LCP0296	hC5	9,34e4	3,9e-5	4,17e-10	0,06
	cC5	6,84e4	1,06e-4	1,55e-9	0,03
LCP0302	hC5	1,14e5	2,22e-5	1,95e-10	0,03
	cC5	1,03e5	2,38e-5	2,32e-10	0,03

Пример 6. Гуманизация анти-C5 VHH доменов

Пять приоритетных анти-C5 VHH доменов (LCP0115, LCP0143, LCP0146, LCP0296 и LCP0302) были гуманизированы путем CDR прививки на зародышевые линии человека с последовательностью, сходной с последовательностью ламы. CDR были основаны на более высоком охвате аминокислот среди IMGT и Kabat определений. Обратные мутации к уникальным остаткам FR2 ламы осуществляли для поддержания стабильности VHH домена. Гуманизированные варианты экспрессировали в клетках Expi293 и испытывали на связывание с C5 человека с использованием биослойной интерферометрии.

Последующие обратные мутации до исходных остатков ламы вводили в выбранные каркасы для нескольких вариантов для улучшения их аффинности к человеческому С5. Конструкции экспрессировали в клетках HEK293F и оценивали на связывание методом биослойной интерферометрии. В некоторых вариантах были осуществлены дополнительные мутации для дальнейшей оптимизации их аффинности, и N-концы были гуманизированы до EVQLV (SEQ ID NO: 147; где необходимо), а С-концы были гуманизированы до WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 148; где необходимо). Полученные анти-C5 VHH кандидаты, распределенные в соответствии с приоритетом, показаны в Таблице 3 ниже. CDR этих кандидатов показаны в таблице 4.

Таблица 3 Гуманизированные анти-C5 VHH домены-кандидаты
Название анти-C5 VHH кандидата	Последовательность-кандидат	SEQ ID NO:
LCP0177	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGLEAVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	226
LCP0178	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASEMGATINVMAWFRQAPGQGLEAVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTLVTVSS	227
LCP0179	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEAVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	228
LCP0180	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGREFVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	229
LCP0181	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGQQRELVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTLVTVSS	230
LCP0182	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	231
LCP0183	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGREFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	232
LCP0184	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	233
LCP0185	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVSRLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTLVTVSS	234
LCP0186	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASEMGATINVMAWYRQAPGKGLELVSRLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTLVTVSS	235
LCP0187	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVSGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	236
LCP0188	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKGLEFVSGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	237
LCP0195	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	1
LCP0197	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	2
LCP0199	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	3
LCP0203	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	4
LCP0207	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	5
LCP0208	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	6
LCP0209	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	7
LCP0212	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGLEFVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	8
CRL0303	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	9
CRL0304	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	10
CRL0305	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	11
CRL0307	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	12
CRL0726	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGQGLEAVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	238
CRL0727	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGQGLEAVATITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	239
CRL0728	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGQEREFVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	240
CRL0729	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGQEREFVATITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	241
CRL0730	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVSSISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	242
CRL0731	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGKGLEFVSSISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	243
CRL0732	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	244
CRL0733	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	245
CRL0960	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRAFSDYAMAWVRQAPGQGLEWMGGIGWSGGDTLYADSVRGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	246
CRL0961	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFMGGIGWSGGDTLYADSVRGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	247
CRL0962	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEFMGGIGWSGGDTLYADSVRGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	248
CRL0963	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVGTISDYGMGWVRQAPGQGLEWMGSISWGGMWTDYADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	249
CRL0964	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVGTISDYGMGWFRQAPGQEREFMGSISWGGMWTDYADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	250
CRL0965	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVGTISDYGMGWFRQAPGQGLEFMGSISWGGMWTDYADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	251
CRL0966	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRTFSGILSAYAVGWVRQAPGQGLEWMGTITSGGSTLSADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	252
CRL0967	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGQEREFMGTITSGGSTLSADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	253
CRL0968	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGQGLEFMGTITSGGSTLSADSVKGYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTLVTVSS	254
CRL0972	EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSFAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVSGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYHCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	255
CRL0973	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVSGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	256
CRL0974	EVQLVESGGVVVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVSGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	257
CRL0975	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVSSISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTQVTVSS	258
CRL0976	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASVGTISDYGMGWFHQAPGKEREFVSSISWGGMWTDYADSVKGRFIISRDNSRNTLYLQTNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTLVTVSS	259
CRL0977	EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTQVTVSS	260
CRL0978	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS	261
CRL0979	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNTLYVQMSSLRAEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS	262
CRL0980	EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS	263

Таблица 4 CDR гуманизированных анти-C5 VHH доменов-кандидатов
VHH домен	Последовательность CDR1 [SEQ ID NO:]	Последовательность CDR2 [SEQ ID NO:]	Последовательность CDR3 [SEQ ID NO:]
LCP0146 LCP0179 LCP0182 LCP0187 LCP0188 LCP0195 LCP0197 LCP0199 LCP0203 CRL0960 CRL0961 CRL0962 CRL0972 CRL0973 CRL0974	GRAFSDYAMA [13]	GIGWSGGDTLYADSVRG [18]	AARQGQYIYSSMRSDSYDY [20]
LCP0115 LCP0177 LCP0180 LCP0183 LCP0184 LCP0207 LCP0208 LCP0209 LCP0212	GRTFSGILSPYAVG [14]	TITSGGSAIYTDSVKG [19]	AVRTRRYGSNLGEVPQENEYGY [21]
LCP0143 LCP0178 LCP0181 LCP0185 LCP0186	EMGATINVMA [327]	RLPLDNNIDYGDFAKG [325]	NVLLSRQINGAYVH [326]
CRL0303	GRHFSDYAMA [15]	GIGWSGGDTLYADSVRG [18]	AARQGQYIYSSMRSDSYDY [20]
CRL0304 CRL0305	GRAHSDYAMA [16]	GIGWSGGDTLYADSVRG [18]	AARQGQYIYSSMRSDSYDY [20]
CRL0307	GRHHSDYAMA [17]	GIGWSGGDTLYADSVRG [18]	AARQGQYIYSSMRSDSYDY [20]
LCP0296 CRL0726 CRL0728 CRL0730 CRL0731 CRL0963 CRL0964 CRL0965 CRL0975 CRL0976 CRL0977	VGTISDYGMG [264]	SISWGGMWTDYADSVKG [266]	GRGRMYRGIGNSLAQPKSYGY [268]
LCP0302 CRL0727 CRL0729 CRL0732 CRL0733 CRL0966 CRL0967 CRL0968 CRL0978 CRL0979 CRL0980	GRTFSGILSAYAVG [265]	TITSGGSTLSADSVKG [267]	AVRTWPYGSNRGEVPTENEYGH [269]

Обратные мутации до исходных остатков ламы вводили в выбранные каркасы из процедур оценки гуманизации для улучшения аффинности выбранных вариантов. Последовательности обратно мутированных вариантов показаны в Таблице 5. Конструкции экспрессировали в HEK293F клетках и оценивали на связывание методом биослойной интерферометрии.

Таблица 5 Анти-C5 VHH гуманизированные варианты с обратными мутациями
Название варианта	Последовательность варианта с обратными мутациями	SEQ ID NO
LCP0115 варианты
LCP0204	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	270
LCP0205	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGREFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	232
LCP0206	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTLSRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	271
LCP0207	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	5
LCP0208	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	6
LCP0209	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	7
LCP0210	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLKAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	272
LCP0211	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRPEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	273
LCP0212	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGLEFVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	8
LCP0146 варианты
LCP0193	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	274
LCP0194	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	275
LCP0195	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	1
LCP0196	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	276
LCP0197	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	2
LCP0198	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNRLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	277
LCP0199	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	3
LCP0200	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	278
LCP0201	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	279
LCP0202	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	280
LCP0203	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	4

Пример 7. Выделение VHH доменов, связывающихся с человеческим сывороточным альбумином

Альбумин является белком, в большом количестве присутствующим в сыворотке крови, и имеет достаточную молекулярную массу, чтобы избежать удаления фильтрацией через клубочковый фильтрующий барьер. Удаление альбумина из сыворотки путем внутриклеточной деградации ингибируется взаимодействием FcRn с альбумином, которое происходит при низких значениях pH. Это взаимодействие приводит к переносу комплекса альбумин-FcRn обратно в плазматическую мембрану, где альбумин высвобождается обратно в кровь в условиях более нейтрального рН крови.

Обзор процесса генерирования анти-HSA VHH

Библиотеку фагового дисплея анти-HSA VHH со смещенной иммунной активностью получали из В-клеток иммунизированной ламы для анти-C5 VHH доменов и для анти-HSA VHH доменов. После получения конечных титров больше чем 1000000 относительно HSA, PBMC собирали, выделяли РНК и генетически изолировали области VHH. Как подробно описано для анти-С5 VHH доменов в примерах 2-4, эти последовательности анти-HSA VHH клонировали в фагмиду слияния pIII с получением библиотеки из 6 × 10⁸ независимых клонов. Стандартные процедуры пэннинга библиотеки фагового дисплея использовали для выбора VHH доменов, реактивных в отношении HSA и CSA (сывороточный альбумин яванского макака). Результаты трех раундов пэннинга анализировали методом ELISA и секвенирования по Сэнгеру. Параллельно использовали секвенирование следующего поколения (NGS) для изучения популяций последовательностей в исходной библиотеке или последовательностей, пополненных путем пэннинга. В общей сложности ~1000 клонов были выделены и проанализированы с использованием этих методов.

Иммунизация лам и конструирование VHH фаговой библиотеки. Ламу иммунизировали HSA. Первичная иммунизация состояла из 500 мкг антигена, смешанного с полным адъювантом Фрейнда. Стимулирующие иммунизации 500 мкг антигена в неполном адъюванте Фрейнда осуществляли через 2 недели, 4 недели, 8 недель и 12 недель. Сывороточные титры контролировали с использованием кровопусканий примерно через 2 недели после каждой бустер-инъекци. Пробы кровопусканий анализировали методом ELISA для определения титра иммунного ответа. Сывороточный титр анти-HSA определяли при сигнале в 20 раз выше, чем до иммунизации, для 1:100000 разведения, поэтому 500 мл крови обрабатывали с получением ~7 × 10⁸ PBMC для выделения РНК и получения библиотеки. Тотальную РНК из PBMC очищали экстракцией с использованием фенола/хлороформа, с последующей очисткой на спин-колонке с диоксидом кремния, и тотальную РНК элюировали водой, не содержащей РНКазу. Качество РНК оценивали путем определения отношения OD_260/280 и методом электрофореза на агарозном геле. кДНК синтезировали с использованием специфических обратных праймеров тяжелых цепей ламы. VHH (тяжелые цепи только) фрагменты отделяли VH (обычная тяжелая цепь) фрагментов методом гель-электрофореза.

VHH фрагменты модифицировали SfiI сайтами и клонировали в pADL-10b, и ДНК библиотеку трансформировали в TG1 клетки. В общей сложности получали 6 × 10⁸ независимых клонов для библиотеки. Все клоны собирали и хранили в 25% глицерине при -80°C до использования. Качество библиотеки подтверждали путем анализа 105 клонов на присутствие вставки с подходящей рамкой считывания, уникальностью и присутствием последовательностей праймеров.

Пэннинг и скрининг библиотеки фагового дисплея.

Аликвоту исходного раствора в глицерине библиотеки анти-HSA VHH, включающего 3,75 × 10¹⁰ клеток, культивировали в 2×YT среде, дополненной 2% глюкозы и 100 мг/мл карбенициллина. Клетки выращивали при 37°C при встряхивании при ~250 об/мин до достижения OD₆₀₀ ~0,6. Хелперный фаг добавляли при множественности заражения (MOI) 20 и культуру инкубировали в течение 30 минут без втряхивания, с последующей инкубацией в течение 30 минут при встряхивании при 37°C. Клетки собирали и ресуспендировали в 2×YT среде, дополненной 25 мг/мл Карбенициллина, 50 мг/мл канамицина и 200 мМ IPTG. Культуры втряхивали в течение ночи при 30°C и 250 об/мин. Среду очищали центрифугированием, фаги осаждали путем добавления 1/4 объема 10% PEG-8000/2,5 M NaCl и инкубации на льду в течение 30 минут. Фаги осаждали центрифугированием при 7500 об/мин в течение 15 минут при 4°C в роторе SLA3000. Клеточный осадок ресуспендировали в Superblock (Thermo Scientific, 37515).

Аликвоту фагов отсеивали с использованием M280 Стрептавидиновых шариков (Life Technologies, 11205D) в течение 30 минут при комнатной температуре, шарики удаляли с использованием магнита, и фаг-содержащий супернатант переносили в новую пробирку Эппендорфа. Фаги дополняли 10 мкг биотинилированного HSA, инкубировали при вращении при комнатной температуре в течение 30 минут, затем добавляли M280 стрептавидиновые шарики для иммобилизации биотинилированного HSA. Шарики промывали 11 раз промывочным буфером PBS/0,05% Tween, элюировали раствором 0,1 M глицина pH 2,7, затем элюирующий буфер нейтрализовали раствором 1 M Tris pH 9,0. Элюированные фаги сохраняли в TG1 клетках в log-фазе и продукты выделяли на 250 см × 250 см лотки с LB Карбенициллина, 2% глюкозы. Титры определяли путем серийного разведения аликвоты полученных фагов. Второй раунд пэннинга осуществляли по существу как описано выше, используя аликвоту продукта первого раунда и 5 мкг биотинилированного HSA для селекций.

Для скрининга клонов на реактивность в отношении HSA отдельные клоны отбирали в 96-луночные планшеты, культивировали в объеме 250 мл 2×YT, дополненной 100 мг/мл Карбенициллина и 2% глюкозы, в течение ночи при 37°C. Каждую лунку субкультивировали путем переноса 5 мл плотной культуры после культивирования в течение ночи в 250 мл свежей среды. Аликвоту брали для анализа последовательности с амплификацией по типу катящегося кольца для определения кодируемой вставки. Клетки выращивали до OD₆₀₀ ~0,6, затем дополняли хелперным фагом M13 при MOI 20 в течение одного часа. Клетки собирали центрифугированием и среду заменяли на средой 2×YT по 250 мл на лунку, дополненной 100 мг/мл Карбенициллина и 50 мг/мл канамицина. Планшеты затем инкубировали в течение ночи при 30°C при встряхивании при 250 об/мин. Среду очищали центрифугированием с получением фаг-содержащих супернатантов для использования в анализах ELISA.

Для анализа ELISA покрытые стрептавидином предварительно блокированные 96-луночные планшеты (Pierce, 15500) инкубировали с has-Биотином при 2 мг/мл в течение 30 минут при комнатной температуре при встряхивании. Планшеты промывали и затем блокирование повторяли в течение 1 часа при комнатной температуре. Планшеты снова промывали и добавляли 50 мл очищенного супернатанта в течение 30 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза, затем инкубировали с анти-M13 HRP антителом (GE Healthcare, Cat # 27-9421-01) в блокирующем буфере в течение 30 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали четыре раза, затем добавляли реагент 1-й стадии Ultra TMB-ELISA (Thermo Scientific, Cat # 34029), происходило проявление цвета, и реакцию останавливали с использованием стоп-растворов 2 M серной кислоты. OD₄₅₀ значения определяли с использованием планшет-ридера iMark BioRad.

NGS использовали для исследования популяций последовательностей в исходной библиотеке или последовательностей, пополненных путем пэннинга. Для NGS, фагмидную ДНК выделяли из продуктов, являющихся результатом раунда 1 пэннинга и раунда 2 пэннинга исходной библиотеки. VHH кассету высвобождали из фагмиды путем расщепления рестриктазами, VHH-кодирующие полосы выделяли методом электрофореза на агарозном геле и ДНК очищали с использованием аффинных колонок для очистки ДНК. Эту ДНК использовали для получения библиотеки и анализа на MiSeq 2×300 платформе.

Пример 8. Экспрессия и очистка VHH доменов, связывающихся с HSA

VHH последовательности, выбранные с использованием описанных выше методов, синтезировали с N-концевыми сигнальными пептидами и C-концевыми 6× His-метками (SEQ ID NO: 324) и клонировали в экспрессирующую конструкцию млекопитающего. Описанный в публикации MSA21 VHH домен (Международная публикация № WO 2004/062551 A2) и генетически модифицировалиые варианты индивидуальных клонов (дегликозилированные или гуманизированные) получали путем синтеза GeneBlocks (Integrated DNA Technologies) и клонирования в стандартный вектор экспрессии млекопитающего. Эти конструкции трансфицировали в 293expi клетки и супернатант собирали через 96 часов после трансфекции. Супернатанты диализировали против PBS и VHH-His белки очищали с использованием стандартных хроматографических методов. Очищенные белки подвергали буферному обмену в PBS и количественному анализу с использованием OD и коэффициента экстинкции.

Пример 9. Характеризация иммобилизованных VHH доменов, связывающихся с растворимым HSA, CSA и мышиным сывороточным альбумином

Были созданы экспрессирующие векторы млекопитающих для 112 VHH последовательностей и белка, продуцируемого в 293 expi системе экспрессии. VHH последовательности сначала анализировали методом SDS-PAGE и кумасси окрашиванием для определения приблизительной концентрации по сравнению с известным стандартом. Концентрации в супернатанте затем нормализовали и подвергали биослойной интерферометрии на Octet HTX (Pall/ForteBio). Penta-His сенсоры подвергали воздействию буфера для кинетического анализа в течение 60 секунд для установления начальных показателей. На сенсоры затем нагружали VHH-His-содержащие супернатанты в течение 300 секунд, затем устанавливали вторые начальные показатели в буфере для кинетического анализа в течение 120 секунд. Наконечники затем инкубировали с 100 нМ HSA или CSA в буфере для кинетического анализа в течение 600 секунд и диссоциацию измеряли еще в течение 600 секунд.

Из проанализированных 112 VHH доменов, 12 доменов продемонстрировали связывание с биотинилированным HSA, и три клона (HAS040, HAS041 и HAS042) взаимодействовали как с биотинилированным CSA, так и с биотинилированным HSA. Пследовательности этих 12 анти-HSA VHH доменов, включая один или несколько их гуманизированных вариантов, показаны в Таблице 6, а CDR этих анти-HSA VHH доменов показаны в Таблице 7.

Таблица 6 Последовательности для анти-альбуминовых VHH доменов
VHH домен	Последовательность	SEQ ID NO:
HAS020	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFGSDAAGWFRQASGKEREFVASISWSGGYTYYADSVKGRFTISSDNVKNTVYLQMNSLTPEDTAVYFCATGNRYSDYRISLVTPSQYEYWGQGTLVTVS	22
HAS038	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTGSGHSFSTYTVGWFRQAPGEERKFVASISWSGEVTLYGDSVKGRFTISRDNRKKTVYLQMHSLKPEDSAIYYCAAKRGGRPTDSSDDYFYWGQGTQVTVSS	23
HAS040	QVQLNESGGGMVQAGGSLRLSCAASGRTVSNYAAGWFRQAPGKEREFVAAINWNKTTTYADSVKGRFIISREYAKNTVALQMNSLKPEDTAVYYCAAVFRIVAPKTQYEYDYWGQGTQVTVSS	24
HAS041	QVQLIESGGGLVQAGGSLGLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVAAINWNKTATYADSVKGRFTISRDNAKSTVALQMNSLKPEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTQVTVSS	25
HAS042	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	26
HAS044	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSYAIGWFRQAPGKAREFVARVSTIAGDTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAADSYNVRLVTGEADYWGEGTQVTVSS	27
HAS077	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSYAIGWFRQAPGKAREFVARVSTIAGDTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAADSYNVRLGTGEADYWGEGTQVTVSS	28
HAS079	EVQLVESGGGLVQAGDSLRLSCAASGFTFSNYAIGWFRQAPGKAREFVARVSTIAGDTDYANAVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPDDTAVYYCAAESYNVRLVTGEADYWGEGTQVTVSS	29
HAS080	QVRLAESGGGRVQAGESLRLSCVASGRTFSNDAAGWFREASGKEREFVASISWSGNYTYYADSVKGRFTISEDNVKNTVYLQMTSLKPEDTAVYYCAAGNRYSDYRISLVTPRLYEYWGQGTQVTVS	30
HAS081	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSSDAAGWFRQASGKEREFVAAISWSGNYTYSADSVKGRFTISSDNVKNTVYLQMNSLKPEDTAVYLCAAGNRYSDYRISLVTPSQYEYWGQGTQVTVS	31
HAS091	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFGSDAAGWFRQASGKEREFVASISWSGGYTYYADSGTGRFTISSDNVKNTVYLQMNSLTPEDTAVYFCATGNRDSDYRISLVTPSQYEYWGQGTQVTVS	32
HAS093	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFGSDAAGWFRQASGKEREFVASISWSGGYTYYADSGKGRFTISSDNVKNTVYLQMNSLTPEDTAVYFCATGNRYSDYRISLVTPSQYDYWGQGTQVTVS	33
HAS096	QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFGSDAAGWFRQASGKEREFVASISWSGGYTYYADSVKGRFTSSSDNVKNTVYLQMNSLTPEDTAVYFCATVNRYSDYRISLVTPSQYEYWGQGTQVTVS	34

Таблица 7 Последовательности CDR для анти-альбуминовых VHH доменов
VHH домен	Последовательность CDR1 [SEQ ID NO:]	Последовательность CDR2 [SEQ ID NO:]	Последовательность CDR3 [SEQ ID NO:]
HAS020	GRTFGSDA [35]	ISWSGGYT [44]	ATGNRYSDYRISLVTPSQYEY [52]
HAS038	GHSFSTYT [36]	ISWSGEVT [45]	AAKRGGRPTDSSDDYFY [53]
HAS040	GRTVSNYA [37]	INWNKTTT [46]	AAVFRIVAPKTQYEYDY [54]
HAS041	GRPVSNYA [38]	INWNKTAT [47]	AAVFRVVAPKTQYDYDY [55]
HAS042	GRPVSNYA [38]	INWQKTAT [48]	AAVFRVVAPKTQYDYDY [55]
HAS044	GRTFSSYA [39]	VSTIAGDT [49]	AADSYNVRLVTGEADY [56]
HAS077	GRTFSSYA [39]	VSTIAGDT [49]	AADSYNVRLGTGEADY [57]
HAS079	GFTFSNYA [40]	VSTIAGDT [49]	AAESYNVRLVTGEADY [58]
HAS080	GRTFSNDA [41]	ISWSGNYT [50]	AAGNRYSDYRISLVTPRLYEY [59]
HAS081	GRTFSSDA [42]	ISWSGNYT [50]	AAGNRYSDYRISLVTPSQYEY [60]
HAS091	GRTFGSDA [43]	ISWSGGYT [51]	ATGNRDSDYRISLVTPSQYEY [61]
HAS093	GRTFGSDA [43]	ISWSGGYT [51]	ATGNRYSDYRISLVTPSQYDY [62]
HAS096	GRTFGSDA [43]	ISWSGGYT [51]	ATVNRYSDYRISLVTPSQYEY [63]

Пример 10. Определение кинетики связывания с альбумином на системе Biacore

Кинетику связывания VHH доменов HAS040 и HAS041 с HSA или CSA определяли с использованием SPR на устройстве Biacore 3000. Биотинилированный альбумин захватывали на CAP чипе, пропитанном Biotin CAPture реагентом, содержащим дезоксирибоолигонуклеотиды (получены от GE Healthcare). Концентрации очищенных VHH доменов вводили в течение 5 минут при скорости потока 50 мл/мин. Оценивали три концентрации на VHH домен. Обеспечивали возможность диссоциации связанного аналита в течение 600 секунд. Поверхность чипа восстанавливали после каждой концентрации инжектированием раствора 6 M гуанидина HCl/0,25 M NaOH в течение 2 минут при 10 мл/мин. Кинетику определяли при pH 7,4 и pH 6,0 в HBS-EP буфере с использованием 1:1 модели Ленгмюра (локальное значение R_max и постоянное RI) и вычитания контроля дважды (вычитание цикла концентрации буфера из цикла концентрации образца и вычитание параллельной контрольной проточной ячейки). VHH домен MSA21 (Международная публикация № WO 2004/062551 A2) (последовательность:

получали и использовали в качестве сравнительного в этих анализах.

Результаты этого анализа показаны в Таблице 8. Аффинности связывания наблюдали в диапазоне 0,3-5 нМ, и это говорит о том, что HAS040 и HAS041 домены имеют достаточную аффинность как при pH 6, так и при pH 7,4, чтобы способствовать продлению периода полужизни. Кроме того, эти VHH домены продемонстрировали связывание с CSA и HSA с очень схожими аффинностями, подтверждая предсказательный характер исследований продления периода полужизни для их осуществления на приматах.

Таблица 8 Результаты Biacore анализа анти-альбуминовых VHH доменов
Образцец	Альбумин/pH	ka	kd	KD	Chi2
		(1/Ms)	(1/s)	(M)
HAS40	CSA/pH6,0	3,68E+05	2,81E-04	7,64E-10	0,05
	CSA/pH7,4	1,04E+06	5,62E-04	5,39E-10	0,1
	HSA/pH6,0	4,45E+05	2,08E-04	4,66E-10	0,09
	HSA/pH7,4	1,29E+06	4,40E-04	3,41E-10	0,03
HAS41	CSA/pH6,0	3,12E+05	7,39E-04	2,37E-09	0,41
	CSA/pH7,4	1,07E+06	1,23E-03	1,15E-09	0,18
	HSA/pH6,0	3,73E+05	3,87E-04	1,04E-09	0,12
	HSA/pH7,4	1,23E+06	5,66E-04	4,61E-10	0,03
MSA21	CSA/pH6,0	2,80E+05	1,53E-03	5,47E-09	0,05
	CSA/pH7,4	5,61E+05	2,16E-03	3,85E-09	0,05
	HSA/pH6,0	3,30E+05	1,81E-03	5,46E-09	0,06
	HSA/pH7,4	1,13E+06	3,93E-03	3,49E-09	0,07

Пример 11. Демонстрация неконкурентного связывания альбумина посредством VHH и FcRn

Рециклирование альбумина из эндоциклических везикул опосредовано взаимодействием с FcRn. Поэтому необходимо было определить будет ли VHH препятствовать взаимодействию HSA и FcRn. Чтобы определить связываются или нет VHH домены HAS040 и HAS041 с тем же эпитопом, что и FcRn, связывание FcRn с HSA, который был насыщен анти-HSA VHH доменами, анализировали на устройстве Biacore 3000 при pH 6,0 в HBS-EP буфере. HSA непосредственно иммобилизовывали на CM5 чипе для достижения целевой плотности 250 RUs (резонансных единиц) с использованием иммобилизации по аминогруппе. VHH домены разводили до примерно 1-10 мг/мл и вводили до достижения насыщения (3 минут при 50 мл/мин). Одну концентрацию FcRn инжектировали по поверхности HSA:VHH для анализа кинетики в течение 5 минут при 50 мл/мин. Обеспечивали возможность диссоциации в течение 180 секунд перед восстановлением. Поверхность чипа восстанавливали, инжектируя 20 мл 25 мМ NaOH при 100 мл/мин. Кинетику определяли с использованием 1:1 модели Ленгмюра (локальное значение R_max и постоянное RI) и вычитания контроля дважды (вычитание цикла концентрации буфера из цикла концентрации образца и вычитание параллельной контрольной проточной ячейки).

Результаты показаны на Фиг. 7. На Фиг. 7A непосредственное взаимодействие FcRn с HSA-насыщенной поверхностью приводило к разнице в ответе 30 RUs. Подобные RUs были получены, когда 400 нМ FcRn инжектировали по поверхности, насыщенной комплексами HSA с MSA21 (ADL021) (Фиг. 7B), HAS040 (Фиг. 7C) или HAS041 (Фиг. 7D). На основании этих данных, HAS040 и HAS041 не препятствуют связыванию FcRn и, как ожидается, будут рециркулированы из эндосомы посредством взаимодействия альбумина с FcRn.

Пример 12. Генерирование анти-C5 и анти-альбуминовых биспецифических слитых белков

Анти-C5 VHH домены соединяли путем слияния с анти-альбуминовым доменом с образованием биспецифических молекул. Оценивали четыре разных длины линкера (G₄S)₃, (G₄S)₄, (G₄S)₅ и (G₄S)₆ и две разные ориентации (N-концевая или C-концевая) анти-альбуминового домена. Конструкции экспрессировали в HEK293F клетках и очищали с использованием аффинной хроматографии с белком A. Очищенные слитые молекулы оценивали в экспериментах на системе Biacore. Человеческий C5 биотинилировали и иммобилизовывали на biacore чипе, очищенные биспецифические молекулы инжектировали для пропитки чипа с последующим введением трех разных концентраций человеческого сывороточного альбумина для получения кинетических характеристик. Измеренную аффинность к человеческому сывороточному альбумину использовали в качестве приблизительного значения для сравнения разных длин линкера. В качестве оптимальной длины линкера была выбрана (G₄S)₃ для синтеза биспецифических слитых молекул. N-концевые или C-концевые анти-альбуминовые слияния также оценивали в этом же эксперименте. Различные ориентации были найдены оптимальными для различных анти-C5 VHH доменов. N- против C-концевой ориентации конструкций определены ниже в названии конструкции в Таблице 9, где (C5/HSA) указывает, что анти-C5 домен расположен в направлении к N-концу относительно анти-HSA домена. Подобным образом, (HSA/C5) указывает, что анти-HSA домен расположен в направлении к N-концу относительно анти-C5 домена.

После выбора оптимальной длины линкера был получен ряд различных биспецифических слитых молекул с гуманизированными анти-C5 VHH доменами, слитыми с двумя разными анти-альбуминовыми доменами (показаны в Таблице 8). Эти конструкции экспрессировали в Expi293 клетках и очищали с использованием хроматографии с белком A. Очищенные биспецифические слитые белки испытывали в анализах гемолиза, и результаты показаны на Фиг. 3A и 3B.

Таблица 9 Анти-C5/анти-альбуминовые слитые белки
Название	Последовательность	SEQ ID NO:
CRL0400 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	64
CRL0401 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	65
CRL0402 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	66
CRL0403 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	67
CRL0404 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	68
CRL0405 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	69
CRL0406 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	70
CRL0407 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	71
CRL0408 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	72
CRL0409 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	73
CRL0410 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	74
CRL0411 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRHHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	75
CRL0483 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	76
CRL0484 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	77
CRL0485 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	78
CRL0486 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	79
CRL0487 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	80
CRL0488 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	81
CRL0489 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGLEFVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	82
CRL0490 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGQGLEFVATITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	83
CRL0491 (C5/HSA)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	84
CRL0492 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	85
CRL0493 (C5/HSA)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	86
CRL0494 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	87
CRL0495 (C5/HSA)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	88
CRL0496 (C5/HSA)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTMYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	89
CRL0497 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	90
CRL0498 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	91
CRL0499 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	92
CRL0500 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	93
CRL0501 (HSA/C5)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	94
CRL0502 (HSA/C5)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQGLEFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	95

Четыре биспецифические молекулы CRL0483, CRL0484, CRL0499 и CRL0500 распределяли в соответствии с приоритетом на основании анализов связывания и функциональности. Данные аффинности, определенной на системе Biacore, для связывания с человеческим C5 для CRL0483, CRL0484, CRL0499 и CRL0500 показаны в Таблице 10, а оценки функциональности показаны на Фиг. 3, 4 и 5. Эти четыре биспецифические молекулы оценивали в in vivo фармакокинетических исследованиях на яванских макаках.

Таблица 10 Полученные на системе Biacore данные распределенных по приоритетам слитых молекул при pH 7,4 и pH 6,0
Образец	C5	pH	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (M)	Chi2
CRL0483	hC5	7,4	2,25e5	2,42e-4	1,07e-9	0,03
	cC5	7,4	9,15e4	2,20e-5	2,40e-10	0,01
CRL0484	hC5	7,4	7,01e4	7,69e-5	1,10e-9	0,04
	cC5	7,4	9,15e4	2,2e-5	2,40e-10	0,01
CRL0499	hC5*	7,4	2,22e6	3,32e-4	1,5e-10	3,3
	cC5	7,4	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.
CRL0500	hC5	7,4	2,88e6	6,72e-4	2,33e-10	0,65
	cC5	7,4	2,00e6	8,48e-4	4,2e-10	0,04
CRL0483	hC5	6,0	4,00e4	2,11e-04	5,27e-09	0,02
	cC5	6,0	3,71e4	4,62e-5	1,25e-9	0,02
CRL0484	hC5	6,0	4,25e5	2,36e-4	5,56e-10	0,02
	cC5	6,0	4,82e4	6,17e-6	1,28e-10	0,03
CRL0499	hC5*	6,0	2,51e6	1,12e-3	4,48e-10	0,24
	cC5	6,0	1,92e6	3,88e-3	2,02e-9	0,31
CRL0500	hC5*	6,0	8,02e6	1,519e-3	1,89e-10	1,06
	cC5*	6,0	3,91e6	2,5e-3	6,41e-10	3,16

Пример 13. Фармакокинетический (PK) анализ биспецифических слитых белков

Очищенные белки вводили в дозе 10 мг/кг либо внутривенно, либо подкожно яванским макакам. Использовали по три обезьяны на дозовую группу на исследуемый препарат. Фармакокинетические свойства биспецифических молекул измеряли в количественном анализе на основе ЖХ-МС с использованием сигнатурных пептидов для каждой конструкции. PK профиль показан на Фиг. 6, и параметры описаны в Таблице 11.

Таблица 11 PK параметры у яванских макак после 10 мг/кг исследуемых препаратов
Исследуемый препарат	t1/2 (ч)	tmax (ч)	Cmax (мг/мл)	AUC (ч*мг/мл)	CL (мл/ч/кг)	V (мл/кг)	F (%)
CRL0483 в/в	139	1,33	324	47900	0,211	42,0
CRL0484 в/в	125	1	382	43700	0,238	43,0
CRL0483 п/к	103	20	238	46412	0,218	32,5	97
CRL0484 п/к	75,9	24	161	32610	0,315	34,9	75
CRL0499 в/в	170	2,11	299	53773	0,184	46,9
CRL0500 в/в	239	0,167	351	51929	0,205	62,5
CRL0499 п/к	220	32	146	58666	0,173	54,2	109
CRL0500 п/к	209	32	161	61475	0,163	49,0	118

Также были получены варианты линкерных последовательностей для биспецифических слитых белков. Последовательности, включающие эти варианты линкерных последовательностей, показаны в Таблице 12.

Таблица 12 Последовательности анти-C5/анти-альбуминовых биспецифических молекул с различными линкерами
Название	Последовательность	SEQ ID NO
CRL0952	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAHSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	96
CRL0953	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKDSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	97
CRL0954	EVQLVESGGGVVQAGDSLTLTCTAPVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNDKNAVYLRMNSLNAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTQVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	98
CRL0955	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSS	99
CRL0956	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGVVQAGDSLTLTCTAPVGTISDYGMGWFRQAPGKEREFVASISWGGMWTDYADSVKGRFTISRDNDKNAVYLRMNSLNAEDTAVYYCGRGRMYRGIGNSLAQPKSYGYWGQGTQVTVSS	100
CRL0957	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGRPVSNYAAAWFRQAPGKEREFVSAINWQKTATYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAVFRVVAPKTQYDYDYWGQGTLVTVSSGGGGAGGGGAGGGGSEVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSAYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS	101

Пример 14. Изменяющиеся последовательности пептидных линкеров

Конструкции получали с использованием HAS042 (SEQ ID NO:26) альбумин-связывающего домена и CRL0305 (SEQ ID NO:11) гуманизированного анти-C5 VHH. Конструкции, которые были оценены, представлены в Таблице 13.

Таблица 13 Линкеры, используемые для получения слитых белков
Белок	Линкер	SEQ ID НЕТ	Octet связывание- с человеческим C5 и человеческим альбумином
TPP-3211	отсутствие анти-альбуминового домена (только анти-C5)		нет
TPP-3212	отсутствие анти-C5 домена (только анти-альбуминовый)		нет
TPP-3213	отсутствие линкера		да
TPP-3214	GGGGS	104	да
TPP-3215	EAAAKEAAAKEAAAK	110	да
TPP-3216	PAPAP	111	да
TPP-3217	GGGGSPAPAP	112	да
TPP-3218	PAPAPGGGGS	113	да
TPP-3219	GSTSGKSSEGKG	114	да
TPP-3220	GGGDSGGGDS	115	да
TPP-3221	GGGESGGGES	116	да
TPP-3222	GGGGSGGGGS	105	да
TPP-3223	GGGDSGGGGS	117	да
TPP-3224	GGGASGGGGS	118	да
TPP-3225	GGGESGGGGS	119	да
TPP-3226	ASTKGP	120	да
TPP-3227	ASTKGPSVFPLAP	121	да
TPP-3228	GGGGGGGP	123	да
TPP-3229	GGGGGGGGP	321	да
TPP-3230	PAPNLLGGP	124	да
TPP-3231	PNLLGGP	323	да
TPP-3232	GGGGGG	125	да
TPP-3233	GGGGGGGGGGGG	126	да
TPP-3234	APELPGGP	127	да
TPP-3235	SEPQPQPG	128	да
TPP-1252	GGGGSGGGGSGGGGS	106	да

Экспрессировали 26 конструкций, перечисленных в Таблице 13, и слитые белки оценивали на связывание с человеческим C5 и альбумином (Таблица 13- Octet связывание), образование агрегатов, гидрофобность (HIC HPLC) и гликозилирование (масс-спектрометрия с электрораспылением). Для octet-анализа биотинилированный человеческий C5 захватывали на CAP чипе с последующей инжекцией испытываемой биспецифической молекулы. Затем инжектировали различные концентрации альбумина. Кинетику определяли при pH 7,4 (Biacore 3000). Все биспецифические молекулы связывались как с C5, так и с альбумином, при этом каждая имела одинаковую аффинность к альбумину (5-6 нМ).

Биспецифические слитые белки испытывали на их способность ингибировать гемолиз в in vitro анализе гемолиза. Данные показаны в Фиг. 9A и 9B.

Таблица 14 показывает кинетику связывания для CRL0500 и CRL0952, связывающихся с C5 человека (hC5) и C5 яванского макака (cC5).

Таблица 14 Кинетика связывания биспецифических молекул с C5
Образец	Антиген	pH	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (M)	Chi2
CRL0500	hC5	7,4	9,60e+06	4,91e-04	5,12e-11	0,24
CRL0500	cC5	7,4	3,74e+06	8,18e-04	2,19e-10	0,01
CRL0952	hC5	7,4	1,01e+07	5,39e-04	5,36e-11	0,27
CRL0952	cC5	7,4	3,53e+06	7,86e-04	2,23e-10	0,01
CRL0500	hC5	6,0	7,56e+06	1,04e-03	1,38e-10	0,54
CRL0500	cC5	6,0	5,51e+06	4,10e-03	7,44e-10	0,07
CRL0952	hC5	6,0	5,84e+06	9,07e-04	1,55e-10	0,58
CRL0952	cC5	6,0	5,55e+06	3,99e-03	7,20e-10	0,06

Таблица 15 показывает кинетику связывания для CRL0500 и CRL0952, связывающихся с Plasbumin^® и альбумином яванского макака.

Таблица 15 Кинетика связывания биспецифических молекул с альбумином
Образец	Альбумин	pH	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (M)	Chi2
CRL0500	Plasbumin	7,4	3,70e06	3,46e-03	9,36e-10	0,30
CRL0500	Plasbumin	6,0	3,55e06	2,0e-03	5,63e-10	0,17
CRL0952	Plasbumin	7,4	3,98e06	3,59e-03	9,01e-10	0,21
CRL0952	Plasbumin	6,0	3,23e06	2,10e-03	6,49e-10	0,10
CRL0500	cyno	7,4	3,32e06	1,26e-02	3,78e-09	0,42
CRL0500	cyno	6,0	3,27e06	6,93e-03	2,12e-09	0,43
CRL0952	cyno	7,4	2,93e06	1,52e-02	5,19e-09	0,17
CRL0952	cyno	6,0	3,03e06	7,55e-03	2,49e-09	0,22

Пример 15. pH-зависимое связывание анти-C5 VHH доменов

Сканирование на гистидин осуществляли по всем CDR для анти-C5 VHH доменов LCP0115, LCP0143, LCP0146 и LCP0302. Отдельные гистидиновые замены были получены в каждом положении в CDRs (показаны жирным шрифтом, подчеркнутый текст). Варианты трансфицировали в Expi293 клеточную культуру и оценивали на pH-зависимое связывание при pH 7,4, 6,0 и 5,5. Некоторые варианты из каждого антитела показали pH-зависимое связывание. Эти варианты перечислены в Таблице 16, и их pH-зависимая реакция связывания проиллюстрирована на Фиг. 11A-D.

Таблица 16 Предгуманизированные сканированные гистидиновые варианты анти-C5 VHH доменов
Название варианта	Последовательность с гистидиновым вариантом	SEQ ID NO
варианты LCP0115
CRL0085	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGREFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYC H VRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTQVTVSS	281
CRL0091	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGREFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTRR H GSNLGEVPQENEYGYWGQGTQVTVSS	282
варианты LCP0143
CRL0120	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLP H DNNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTQVTVSS	283
CRL0121	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLPL H NNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNVLLSRQINGAYVHWGQGTQVTVSS	284
CRL0133	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYC H VLLSRQINGAYVHWGQGTQVTVSS	285
CRL0135	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNV H LSRQINGAYVHWGQGTQVTVSS	286
CRL0144	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAAPEMGATINVMAWYRQAPGKQRELVARLPLDNNIDYGDFAKGRFTISRDITRNTVYLQMNNLKPDDTAVYYCNVLLSRQINGA H VHWGQGTQVTVSS	287
варианты LCP0146
CRL0149	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGR H FSDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSKDNAKNRMSLQMNSLKPEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTQVTVSS	288
CRL0150	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRA H SDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSKDNAKNRMSLQMNSLKPEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTQVTVSS	289
CRL0166	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDT H YADSVRGRFTNSKDNAKNRMSLQMNSLKPEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTQVTVSS	290
CRL0180	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGKEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTNSKDNAKNRMSLQMNSLKPEDTAVYYCAARQGQ H IYSSMRSDSYDYWGQGTQVTVSS	291
варианты LCP0302
CRL0623	EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSGILSHYAVGWFRQAPGKEREFVSTITSGGSTLSADSVKGRFTLSRDNAKDTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAVRTWPYGSNRGEVPTENEYGHWGQGTQVTVSS	292

Одиночные гистидиновые мутации, идентифицированные для pH-зависимого связывания, объединяли для усиления pH-чувствительности. Последовательности этих вариантов показаны в Таблице 17. Эти варианты оценивали методом биослойной интерферометрии на pH-зависимое связывание, и результаты показаны на Фиг. 12A и 12B.

Пример 16. Получение анти-C5 и анти-альбуминовых биспецифических слитых молекул

Анти-C5 VHH домены сливали с анти-альбуминовым доменом для получения биспецифических молекул. Оценивали четыре разных длины линкера (G₄S)₃, (G₄S)₄, (G₄S)₅ и (G₄S)₆ и две разные ориентации (N-концевая или C-концевая) анти-альбуминового домена. Последовательности полученных молекул показаны в Таблице 18. Конструкции экспрессировали в HEK293F клетках и очищали с использованием аффинной хроматографии с белком A. Очищенные слитые молекулы оценивали в экспериментах на системе Biacore. Человеческий C5 биотинилировали и иммобилизовывали на biacore чипе, очищенные биспецифические молекулы инжектировали для насыщения чипа с последующим введением трех разных концентраций человеческого сывороточного альбумина для получения кинетических характеристик. Измеренную аффинность к человеческому сывороточному альбумину использовали в качестве приблизительного значения для сравнения разных длин линкера. В качестве оптимальной длины линкера была выбрана (G₄S)₃ для синтеза биспецифических слитых молекул. N-концевые или C-концевые анти-альбуминовые слияния также оценивали в этом же эксперименте. Различные ориентации были найдены оптимальными для различных анти-C5 VHH доменов.

Таблица 18 Последовательности вариантов анти-C5/анти-альбуминовых биспецифических молекул с разной длиной линкера и ориентацией
Название	Последовательность	SEQ ID NO
CRL0248	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	305
CRL0249	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	306
CRL0250	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	307
CRL0251	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	308
CRL0254	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	309
CRL0255	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	310
CRL0256	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	311
CRL0257	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSGILSPYAVGWFRQAPGKGLEFVSTITSGGSAIYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAVRTRRYGSNLGEVPQENEYGYWGQGTLVTVSS	312
CRL0272	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	313
CRL0273	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	314
CRL0274	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	315
CRL0275	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS	316
CRL0278	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	317
CRL0279	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	318
CRL0280	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	319
CRL0281	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRSFGMSWVRQAPGKGPEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRAFSDYAMAWFRQAPGQEREFVAGIGWSGGDTLYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAARQGQYIYSSMRSDSYDYWGQGTLVTVSS	320

Был получен ряд различных биспецифических слитых молекул с гуманизированными анти-C5 VHH доменами с или без pH-зависимого связывания. Осуществляли слияние анти-C5 VHH доменов с двумя разными анти-альбуминовыми доменами для получения биспецифических молекул (показаны в Таблице 9). Эти конструкции экспрессировали в HEK293F клетках и очищали с использованием хроматографии с белком A. Очищенные биспецифические конструкции испытывали в анализах гемолиза, и результаты показаны на Фиг. 3A-D.

Четыре биспецифические молекулы CRL0483, CRL0484, CRL0499 и CRL0500 распределяли по приоритетам на основании анализов связывания и функциональности. Данные аффинности, определенной на системе Biacore, для связывания с человеческим C5 для CRL0483, CRL0484, CRL0499 и CRL0500 показаны в Таблице 10, а оценки функциональности показаны на Фиг. 5, 6 и 7. Эти четыре биспецифические молекулы оценивали в in vivo фармакокинетических исследованиях на яванских макаках.

Пример 17. Фармакокинетический анализ биспецифических слитых молекул

Очищенные белки вводили яванским макакам в дозе 10 мг/кг либо внутривенно, либо подкожно. Использовали по три обезьяны на дозовую группу на исследуемый препарат. Фармакокинетические свойства биспецифических молекул измеряли в количественном анализе на основе ЖХ-МС с использованием сигнатурных пептидов, специфических для каждой конструкции. PK профиль показан на Фиг. 6А и 6В, и параметры описаны в Таблице 20.

Таблица 20 PK параметры у яванских макак после 10 мг/кг исследуемых препаратов
Исследуемый препарат	t1/2	tmax	Cmax	AUC	CL	V	F
	ч	ч	мкг/мл	ч*мкг/мл	мл/ч/кг	мл/кг	%
CRL0483 в/в	139	1,33	324	47900	0,211	42,0
CRL0484 в/в	125	1	382	43700	0,238	43,0
CRL0483 п/к	103	20	238	46412	0,218	32,5	97
CRL0484 п/к	75,9	24	161	32610	0,315	34,9	75
CRL0499 в/в	170	2,11	299	53773	0,184	46,9
CRL0500 в/в	239	0,167	351	51929	0,205	62,5
CRL0499 п/к	220	32	146	58666	0,173	54,2	109
CRL0500 п/к	209	32	161	61475	0,163	49,0	118

Хотя в настоящем раскрытии описаны различные варианты осуществления изобретения, специалистам в данной области техники должно быть понятно, что возможны его вариации и модификации. Следовательно, предполагается, что прилагаемая формула изобретения охватывает все такие эквивалентные варианты. Кроме того, заголовки разделов, используемые в настоящей заявке, предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие описанное изобретение.

Каждый вариант осуществления, описанный в настоящей заявке, может быть объединен с любым другим вариантом осуществления или вариантами осуществления, если явно не указано иное. В частности, любой признак или вариант осуществления, указанный как предпочтительный или выгодный, может быть объединен с любым другим признаком или признаками или вариантом или вариантами осуществления, указанными как предпочтительные или выгодные, если явно не указано иное.

Все ссылки, цитируемые в настоящей заявке, специально включены в настоящую заявку посредством ссылки.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Alexion Pharmaceuticals, Inc.

<120> ПОЛИПЕПТИДЫ, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С КОМПОНЕНТОМ КОМПЛЕМЕНТА C5 ИЛИ

СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ, И ИХ БЕЛКИ СЛИЯНИЯ

<130> 51196-005RU2

<150> US 62/531,215

<151> 2017-07-11

<160> 327

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 2

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 3

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Met Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 4

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 5

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 6

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 7

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 8

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 9

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 10

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 11

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 12

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 12

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 13

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 13

Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala

1 5 10

<210> 14

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 14

Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly

1 5 10

<210> 15

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 15

Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala

1 5 10

<210> 16

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 16

Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala

1 5 10

<210> 17

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 17

Gly Arg His His Ser Asp Tyr Ala Met Ala

1 5 10

<210> 18

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 18

Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 19

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 19

Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 20

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 20

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

1 5 10 15

Tyr Asp Tyr

<210> 21

<211> 22

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 21

Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu Val Pro Gln

1 5 10 15

Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr

20

<210> 22

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Ser Gln Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 23

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Gly His Ser Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Thr Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Lys Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Glu Val Thr Leu Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Arg Lys Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met His Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Lys Arg Gly Gly Arg Pro Thr Asp Ser Ser Asp Asp Tyr Phe

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 24

Gln Val Gln Leu Asn Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Trp Asn Lys Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Glu Tyr Ala Lys Asn Thr Val Ala Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Ile Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Glu Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 25

Gln Val Gln Leu Ile Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Trp Asn Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Ala Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 26

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 27

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Arg Val Ser Thr Ile Ala Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Ser Tyr Asn Val Arg Leu Val Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Glu Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Arg Val Ser Thr Ile Ala Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Ser Tyr Asn Val Arg Leu Gly Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Glu Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 29

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Arg Val Ser Thr Ile Ala Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Asn Ala Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Glu Ser Tyr Asn Val Arg Leu Val Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Glu Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 30

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 30

Gln Val Arg Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Ala Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Glu Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Glu Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Arg Leu Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 31

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Asn Tyr Thr Tyr Ser Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys

85 90 95

Ala Ala Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Ser Gln Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 32

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Gly

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Asn Arg Asp Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Ser Gln Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 33

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 33

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Gly

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Ser Gln Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 34

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp

20 25 30

Ala Ala Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ser Ser Ser Asp Asn Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Val Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

100 105 110

Ser Gln Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

<210> 35

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 35

Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp Ala

1 5

<210> 36

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 36

Gly His Ser Phe Ser Thr Tyr Thr

1 5

<210> 37

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 37

Gly Arg Thr Val Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 38

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 38

Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 39

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 39

Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 40

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 40

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 41

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 41

Gly Arg Thr Phe Ser Asn Asp Ala

1 5

<210> 42

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 42

Gly Arg Thr Phe Ser Ser Asp Ala

1 5

<210> 43

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 43

Gly Arg Thr Phe Gly Ser Asp Ala

1 5

<210> 44

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 44

Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr

1 5

<210> 45

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 45

Ile Ser Trp Ser Gly Glu Val Thr

1 5

<210> 46

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 46

Ile Asn Trp Asn Lys Thr Thr Thr

1 5

<210> 47

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 47

Ile Asn Trp Asn Lys Thr Ala Thr

1 5

<210> 48

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 48

Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr

1 5

<210> 49

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 49

Val Ser Thr Ile Ala Gly Asp Thr

1 5

<210> 50

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 50

Ile Ser Trp Ser Gly Asn Tyr Thr

1 5

<210> 51

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 51

Ile Ser Trp Ser Gly Gly Tyr Thr

1 5

<210> 52

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 52

Ala Thr Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Ser Gln Tyr Glu Tyr

20

<210> 53

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 53

Ala Ala Lys Arg Gly Gly Arg Pro Thr Asp Ser Ser Asp Asp Tyr Phe

1 5 10 15

Tyr

<210> 54

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 54

Ala Ala Val Phe Arg Ile Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Glu Tyr Asp

1 5 10 15

Tyr

<210> 55

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 55

Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp

1 5 10 15

Tyr

<210> 56

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 56

Ala Ala Asp Ser Tyr Asn Val Arg Leu Val Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 57

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 57

Ala Ala Asp Ser Tyr Asn Val Arg Leu Gly Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 58

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 58

Ala Ala Glu Ser Tyr Asn Val Arg Leu Val Thr Gly Glu Ala Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 59

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 59

Ala Ala Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Arg Leu Tyr Glu Tyr

20

<210> 60

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 60

Ala Ala Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Ser Gln Tyr Glu Tyr

20

<210> 61

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 61

Ala Thr Gly Asn Arg Asp Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Ser Gln Tyr Glu Tyr

20

<210> 62

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 62

Ala Thr Gly Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Ser Gln Tyr Asp Tyr

20

<210> 63

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 63

Ala Thr Val Asn Arg Tyr Ser Asp Tyr Arg Ile Ser Leu Val Thr Pro

1 5 10 15

Ser Gln Tyr Glu Tyr

20

<210> 64

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 64

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 65

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 65

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 66

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 66

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 67

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 67

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 68

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 68

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 69

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 69

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 70

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 71

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 71

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 72

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 72

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 73

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 73

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 74

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 74

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 75

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 75

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 76

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 76

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 77

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 77

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 78

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 78

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 79

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 79

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 80

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 81

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 81

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 82

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 82

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 83

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 83

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 84

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 84

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 85

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Asn

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 86

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 86

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 87

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 87

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 88

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 88

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 89

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 89

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 90

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 90

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 91

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 92

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 92

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 93

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 93

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Asn

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 94

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 94

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 95

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 95

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 96

<211> 264

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 96

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser

180 185 190

Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Asn

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln

225 230 235 240

Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln

245 250 255

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 97

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 98

<211> 266

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 98

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Pro Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Ala Val Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Met Asn Ser Leu Asn Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu

130 135 140

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser

145 150 155 160

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr Ala

165 170 175

Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser

180 185 190

Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

195 200 205

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

210 215 220

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

225 230 235 240

Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 99

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 99

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val

165 170 175

Ser Asn Tyr Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg

180 185 190

Glu Phe Val Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp

245 250 255

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 100

<211> 266

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 100

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Thr Leu Thr Cys

145 150 155 160

Thr Ala Pro Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr Gly Met Gly Trp Phe Arg

165 170 175

Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Ile Ser Trp Gly

180 185 190

Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Ala Val Tyr Leu Arg Met Asn Ser Leu

210 215 220

Asn Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Gly Arg Met Tyr

225 230 235 240

Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 101

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 101

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Val Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Ala Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Trp Gln Lys Thr Ala Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Val Phe Arg Val Val Ala Pro Lys Thr Gln Tyr Asp Tyr Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys

145 150 155 160

Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile Leu Ser Ala Tyr Ala Val

165 170 175

Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Thr

180 185 190

Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

195 200 205

Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Thr Val Tyr Leu Gln Met

210 215 220

Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Arg

225 230 235 240

Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu Val Pro Thr Glu Asn Glu

245 250 255

Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 102

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 102

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 103

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 103

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 104

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 104

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 105

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 105

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 106

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 106

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 107

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 107

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 108

<211> 25

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 108

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25

<210> 109

<211> 30

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 109

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

20 25 30

<210> 110

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 110

Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys

1 5 10 15

<210> 111

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 111

Pro Ala Pro Ala Pro

1 5

<210> 112

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 112

Gly Gly Gly Gly Ser Pro Ala Pro Ala Pro

1 5 10

<210> 113

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 113

Pro Ala Pro Ala Pro Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 114

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 114

Gly Ser Thr Ser Gly Lys Ser Ser Glu Gly Lys Gly

1 5 10

<210> 115

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 115

Gly Gly Gly Asp Ser Gly Gly Gly Asp Ser

1 5 10

<210> 116

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 116

Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Gly Glu Ser

1 5 10

<210> 117

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 117

Gly Gly Gly Asp Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 118

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 118

Gly Gly Gly Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 119

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 119

Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 120

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 120

Ala Ser Thr Lys Gly Pro

1 5

<210> 121

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 121

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

1 5 10

<210> 122

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 122

Gly Gly Gly Pro

1

<210> 123

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 123

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro

1 5

<210> 124

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 124

Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro

1 5

<210> 125

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 125

Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 126

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 126

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5 10

<210> 127

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 127

Ala Pro Glu Leu Pro Gly Gly Pro

1 5

<210> 128

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 128

Ser Glu Pro Gln Pro Gln Pro Gly

1 5

<210> 129

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 129

Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser

1 5 10 15

<210> 130

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 130

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 131

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 131

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 132

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 132

Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Ser

1 5 10 15

<210> 133

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 133

Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ser

1 5 10 15

<210> 134

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 134

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 135

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 135

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 136

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 136

Gly Gly Gly Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 137

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 137

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 138

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 138

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 139

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 139

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 140

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 140

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 141

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 141

Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 142

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 142

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 143

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 143

Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 144

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 144

Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 145

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 145

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 146

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 146

Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 147

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 147

Glu Val Gln Leu Val

1 5

<210> 148

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 148

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 149

<211> 115

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 149

Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 150

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 150

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Thr Ser Gly Ser Asp Phe Ser

20 25 30

Gly Lys Lys Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gly Arg Glu

35 40 45

Phe Val Ala Ile Ile Phe Ser Asn Lys Val Thr Asp Tyr Ala Asp Ser

50 55 60

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Val

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Thr Pro Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys His Asp Gln Glu Ile Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 151

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 151

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Thr Ser Val Val Ile Asn

20 25 30

Ser Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Asp Leu Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Gln

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Leu Asn Leu Val

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Asn Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Asn Ala Leu Leu Ser Arg Ala Val Ser Gly Ser Tyr Val Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 152

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 152

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ser Arg Ile Gly Thr Ile Ser Asn Ile

20 25 30

Asp Leu Met Asn Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe

35 40 45

Val Ala Ser Leu Gln Ser Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

His Ala Leu Leu Pro Arg Ser Pro Tyr Asn Ser Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 153

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 153

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ser Ile Ile Pro Asn Ile Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ser Ile Glu Asn Gly Leu Pro Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe Leu

65 70 75 80

Gln Met His Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Phe Arg Pro Gly Val Pro Thr Thr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 154

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 154

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ser Ala Ile Asn

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Asp Ile Thr Arg Ala Gly Val Ser Asp Tyr Ala Asp Ala Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Phe Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asp Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asp

85 90 95

Ala Leu Leu Ile Ala Gly Gly Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 155

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 155

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Val His Trp Gly Asp Gly Asn Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Tyr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ser Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Pro Pro Thr Tyr Val Gly Thr Ser Arg Asn Ser Arg Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 156

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 156

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Arg Ala Ile Asp Arg Asn

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Ala Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Gly Ser Arg Gly Ser Trp Tyr Leu Phe Asp Arg Arg Glu Tyr

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 157

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 157

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Glu Thr Ser Phe Asp Ile Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ile Ile Thr Ala Ser Gly Asn Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Ala Met

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Val Leu Leu Ser Gly Ala Val Ser Gly Val Tyr Ala His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 158

<211> 130

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 158

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Asp Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Met

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Arg Pro Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Tyr Lys Arg Leu Pro Ala Trp Tyr Thr Gly Ser Ala Tyr Tyr Ser

100 105 110

Gln Glu Ser Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val

115 120 125

Ser Ser

130

<210> 159

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 159

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ser Arg Ile Gly Thr Ile Ser Asn Ile

20 25 30

Asp Leu Met Asn Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe

35 40 45

Val Ala Ser Leu Gln Ser Thr Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

His Ala Leu Ile Pro Arg Ser Pro Tyr Asn Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 160

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 160

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Val Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Asp His Trp Gly Asp Ala Gly Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Tyr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ser Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Pro Pro Thr Tyr Val Gly Thr Ser Arg Asp Ser Arg Ala

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 161

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 161

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ser Asp Ser

20 25 30

Pro Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Met Val

35 40 45

Ala Arg Ile Leu Pro Ile Gly Pro Pro Asp Tyr Ala Asp Ala Val Lys

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Leu Leu His Leu Pro Ser Gly Leu Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 162

<211> 109

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 162

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Arg Ser Ile Ser Ser Ala Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu

35 40 45

Ile Thr Arg Gly Phe Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

50 55 60

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met

65 70 75 80

Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Asn Ser Leu

85 90 95

Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

100 105

<210> 163

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 163

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Asp Ser Met Trp

20 25 30

Ser Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Trp Ser Val Gly Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asp Asp Lys Asp Thr Ala Tyr Leu

65 70 75 80

Glu Met Ser Asp Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Ser Thr Arg His Gly Thr Asn Leu Val Leu Pro Arg Asp Tyr Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 164

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 164

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ser Arg Ile Gly Thr Ile Ser Asn Ile

20 25 30

Asp Leu Met Asn Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe

35 40 45

Val Ala Ser Leu Gln Ser Thr Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

His Ala Leu Leu Pro Arg Ser Pro Tyr Asn Ala Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 165

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 165

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Ile Pro Asn Ile Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ser Ile Glu Asn Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Val Phe Leu

65 70 75 80

Gln Met His Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Phe Arg Pro Gly Val Pro Thr Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 166

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 166

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Arg Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Ala Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Gly Thr Ile Tyr Trp Ser Thr Gly Arg Ser Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Gly Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile His

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Pro Glu Asn Ser Ala Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 167

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 167

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Phe Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Thr Glu Leu Arg Thr Trp Ser Arg Gln Thr Phe Glu Tyr Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 168

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 168

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Val Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Val His Trp Gly Asp Glu Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Tyr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ser Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Pro Pro Thr Tyr Val Gly Ser Ser Arg Ser Ser Arg Ala

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 169

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 169

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Ser Ile Leu Asp Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Arg Ile Thr Ser Gly Gly Asp Ile Asp Tyr Ala Asp Pro Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Asn Gly Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Ser Ser Ala Gly Arg Tyr Thr His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 170

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 170

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Leu Tyr

20 25 30

Asp Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gln Arg Glu Ser Val

35 40 45

Ala Ile Ile Thr Gln Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg

85 90 95

Leu Val Gly Val Thr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 171

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 171

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Arg Thr Gly Gln Thr Thr His Tyr Ala Asp Ser Ile

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

85 90 95

Arg Thr Gly Gly Pro Ile Tyr Gly Ser Glu Tyr His Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 172

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 172

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Phe Ser Ser Leu

20 25 30

Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Thr Thr Ser Trp Ser Gly Asp Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Phe Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Thr Leu Leu Arg Thr Trp Ser Arg Gln Thr Asn Glu Tyr Glu

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 173

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 173

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ser Arg Ile Gly Thr Ile Ser Asn Ile

20 25 30

Asp Leu Met Asn Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe

35 40 45

Val Ala Ser Leu Gln Ser Thr Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

His Ala Leu Leu Pro Arg Ser Pro Tyr Asn Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 174

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 174

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 175

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 175

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Thr Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Val Ala Ile Asp Asn Asn Thr Asp Tyr Ala Asp His Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Ser Gly Ser Tyr Gly His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 176

<211> 133

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 176

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Met Ser Gly Gly Thr Arg Pro Phe Glu

20 25 30

Asp Tyr Val Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Thr Gly Lys Glu Arg Glu

35 40 45

Phe Val Ala Thr Ile Thr Trp Met Gly Glu Thr Thr Tyr Tyr Lys Asp

50 55 60

Ser Val Asn Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr

65 70 75 80

Val Ala Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Phe Cys Ala Ala His Ser Arg Ser Ser Phe Ser Thr Ser Gly Gly Arg

100 105 110

Tyr Asn Pro Arg Pro Thr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln

115 120 125

Val Thr Val Ser Ser

130

<210> 177

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 177

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Val His Trp Gly Asp Glu Gly Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ala Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ser Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Lys Pro Pro Thr Tyr Val Gly Thr Ser Arg Ser Ser Arg Ala

100 105 110

Tyr Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 178

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 178

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Gly Phe Ser Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Asp Leu Val

35 40 45

Ala Ser Met Thr Ile Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Lys Asp Ser Leu Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Ala Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Ala Leu Leu Asp Arg Gly Ile Gly Gly Asn Tyr Val Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 179

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 179

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Asp Phe Leu

35 40 45

Ala Arg Ile Gly Lys Ser Gly Ile Gly Lys Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Arg Asp Ile Ala Tyr Asp Ala Arg Leu Thr Ala Glu Tyr

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 180

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 180

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Ser Thr Thr

20 25 30

Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Val His Trp Gly Asp Glu Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Tyr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Pro Pro Thr Tyr Val Gly Thr Ser Arg Ser Ser Arg Ala

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 181

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 181

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Ala Ser Glu Thr Ile Val

20 25 30

Ser Ile Asn Asp Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg

35 40 45

Glu Leu Val Ala Ser Ile Thr Ile His Asn Asn Arg Asp Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Thr Lys Asn Thr

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gln Met Thr His Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Val Leu Leu Ser Arg Ala Leu Ser Gly Ser Tyr Arg Phe

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 182

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 182

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Gly Ser Glu Thr Ser Gly Thr Ile Phe

20 25 30

Asn Ile Asn Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg

35 40 45

Glu Leu Val Ala Ile Met Asp Ile Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

65 70 75 80

Val Tyr Val Gln Met Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Tyr Cys Ala Leu Asp Arg Ala Val Ala Gly Arg Tyr Thr Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 183

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 183

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Ile Ser Leu Asn Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Arg Glu Ile Val

35 40 45

Ala Ala Leu Ser Arg Arg Ser His Gly Ile Tyr Gln Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Met Val Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Gly Asp Pro Tyr Phe Thr Gly Arg Asp Met Asn Pro Glu

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 184

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 184

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Gly Arg Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Arg Ile Ser Gly Asn Gly Arg Gly Thr Gln Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Ser Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Val Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gly Pro Ser Ser Phe Asn Glu Gly Ser Val Tyr Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 185

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 185

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Val Leu Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Thr Met Gly Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ile Thr Thr Ser Gly Gly Thr Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Arg Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Tyr

85 90 95

Ala Ser Leu Ala Gly Ile Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 186

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 186

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Thr Glu Ala Thr Tyr Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Met Thr Ile Asp Tyr Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg

85 90 95

Val Asp Leu Ser Arg Gln Ile Ser Gly Ser Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 187

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 187

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ile Ser Gly Phe Ala Phe Thr Asp Val

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Thr Thr Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Tyr Tyr Cys Thr Gly Leu Gly Cys His Pro Arg Arg Asp Ser

100 105 110

Ala Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 188

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 188

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gly Phe Thr Tyr Ser Thr Ala

20 25 30

Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Leu Gly Ser Asp Arg Lys Ser Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Phe Ile Ser Asn Arg Trp Ser Arg Asp Val His Ala Pro Ser

100 105 110

Asp Phe Gly Ser Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 189

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 189

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Pro Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Phe Gly Phe Thr Phe Asp Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45

Ser Cys Leu Ser Thr Asn Asp Gly Glu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp His Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Ala Glu Gly Ser Trp Cys His Lys Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 190

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 190

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Asp Leu Tyr

20 25 30

Val Val Gly Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Ala Trp Thr Gly Asp Ala Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Glu Asn Arg Ile Asp

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Ser Arg Ala Arg Phe Glu Arg Gln Arg Tyr Asn Asp Met

100 105 110

Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 191

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 191

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ile Ala Ser Val Thr Ile Ala Asp Ile Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Pro Thr Thr Gly Asp Lys Asn Tyr Ala Glu Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Val Ala Met

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Ala Val Ser Gly Ser Tyr Gly His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 192

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 192

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Val Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Val Asp Ile Lys

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Leu Ile Asn Asp Ala Asp Asp Ser Glu Tyr Ser Pro Ser Met Arg

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Asp Arg Asp Ser Ser Trp Phe Lys Ser Pro Tyr Ile Pro Gly Ser

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 193

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 193

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 194

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 194

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Gly Asp Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ser Ile Thr Ile Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser Leu

65 70 75 80

Glu Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Thr Leu Leu Ser Arg Val His Asp Gly Gln Tyr Val Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 195

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 195

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Glu Asp Ala Phe Lys Thr Asp

20 25 30

Thr Leu Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Phe Val Trp Ala Gly Gly Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Met Asp Glu Asp Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Ser Leu Ser Arg Leu Arg Val Gly Glu Ile Thr Pro Arg His Met

100 105 110

Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 196

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 196

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 197

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 197

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Thr Ala Ile Asp Trp Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Gln Gly Ser Gly Leu Asp Trp Gly Tyr Pro Trp Thr Tyr Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 198

<211> 115

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 198

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Ser Val Leu Asn Ile Asp

20 25 30

Ser Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Glu Met Leu Trp Gly Gly Thr Lys Asn Tyr Gly Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Ala Asp Trp Gly Thr Glu Leu Gln

65 70 75 80

Met Ser Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala

85 90 95

Val Gly Arg Gly Phe Arg Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 199

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 199

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ser Gly Phe Gly Ile Leu

20 25 30

Asp Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Ser Arg Arg Glu Leu Val

35 40 45

Gly Tyr Val Thr Arg Asp Gly Thr Thr Asn Tyr Gly Asn Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Ser Ile Ile Ser Glu Asp Ile Thr Lys Asn Thr Val Ile Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr

85 90 95

Ala Gly Leu Thr Asn Gln Pro Arg Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 200

<211> 119

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 200

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Arg Gly Gly Ser Thr Asn Val Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Ala Glu Pro Tyr Gly Leu Asp Trp Arg Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 201

<211> 129

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 201

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ser Ile Tyr

20 25 30

Gln Met Gly Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asn Trp Asn Tyr Gly Gly Ala Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Ile Gly Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Ser Gln Thr Ser Val Asp Ala Phe Ser Val Pro Ile Thr Thr

100 105 110

Ala Arg Arg Tyr Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

115 120 125

Ser

<210> 202

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 202

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Arg Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Gly Thr Ile Tyr Trp Ser Thr Gly Arg Ser Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Gly Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile His

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Gly Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Gly Pro Glu Met Ser Ala Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 203

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 203

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45

Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Met Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Gly Thr Pro Leu Ser Ser Tyr Tyr Gly Ser Cys Leu Asp Tyr

100 105 110

Asp Met Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 204

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 204

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Glu Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Arg Ile Ser Ser Asn Gly Arg Arg Thr Glu Tyr Ala Asp Gly Val

50 55 60

Ser Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Gly Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Ala Gly Pro Ser Gly Phe His Glu Gln Ser Ile Tyr Asp

100 105 110

Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 205

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 205

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Arg Ser Ile Ser Thr Tyr

20 25 30

Val Ala Gly Trp Phe Arg Gln Gly Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Leu Ile Ser Arg Gly Gly Gly Asp Ile Gln Tyr Ser Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Leu Asp Ala Ser Phe Gly Ser Arg Leu Val Ser Arg Trp Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 206

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 206

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Asp

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Pro Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Ala Val Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Met Asn Ser Leu Asn Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 207

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 207

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Ser Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Ile Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45

Ser Cys Ile Gly Ser Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Ser Glu Asn Ala Lys Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Asp Leu Tyr Pro Pro Ala Asp Tyr Ala Leu Asp His Thr Trp

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 208

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 208

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Ser Arg Phe Ser Leu Asp

20 25 30

Thr Val Gly Trp His His Gln Ala Pro Gly Lys Leu Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Asp Asp Gly Asp Thr Met Tyr Val Ala Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Tyr

85 90 95

Phe Ser Arg Asn Gly Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 209

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 209

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Arg Ile Ser Asp Ile Asn

20 25 30

Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Met Val

35 40 45

Ala Asp Ile Asp Ile Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Glu Thr Met Tyr Leu Glu

65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Arg Cys Asn Ala

85 90 95

Leu Thr Ser Arg Asp Trp Gly Thr Gly Lys Tyr Val Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 210

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 210

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Val Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Pro Gly Ser Met Ser Ser Arg Asn

20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Val Ser Gly Phe Thr Gln Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 211

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 211

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ala Gly Thr Asp Ile Asn Ile Val

20 25 30

Thr Val Gly Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys His Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Thr Ile Val Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Tyr Ala Thr Ser Ile Gly Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 212

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 212

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 213

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 213

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Asn Val Arg Ser Ile Phe

20 25 30

Thr Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Ser Ala Ala Lys Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Ala Ile Val Ser Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys

85 90 95

Thr Asp Gly Arg Pro Trp Phe Ser Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 214

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 214

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Val Gly Asp

1 5 10 15

Ser Met Arg Leu Ser Cys Ala Val Phe Gly Asn Ile Phe Thr Arg Asp

20 25 30

Pro Val Met Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Thr Pro Ser Gly Phe Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Tyr Ala Ala Asn Asn Thr Val His Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Asn

85 90 95

Phe Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 215

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 215

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Lys Gly Ala Phe Asn Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Val Ala Leu Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ala Gln Asp Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Asp Arg Gly Val Arg Gly Ser Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 216

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 216

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Tyr Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Arg Trp Ala Gly Gly Asp Ser His Tyr Gln Glu Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ala Arg Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Ala Ala Pro Val Pro Gly Gln Ser Tyr Glu Trp Ser Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 217

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 217

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ser Ala Phe Tyr Val Gly

20 25 30

Pro Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val

35 40 45

Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Ile Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Asp Val Tyr Val Cys Asn

85 90 95

Ala Arg Val Lys Leu Gln Glu Asp Arg Leu Phe Arg Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 218

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 218

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Ala Ser Gly Asn Ile Asp

20 25 30

Phe Val Thr Val Gly Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys His Arg Glu

35 40 45

Met Val Ala Val Ile Thr Gly Asp Gly Thr Arg Asn Tyr Arg Asp Ser

50 55 60

Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ile

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Tyr Met Ser Asn Pro Ile Ser Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 219

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 219

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Arg Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Arg Thr Leu Ser Ser Phe

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Glu Lys Pro Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Thr Trp Gly Gln Gly Gly Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Val Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Asp Leu Lys Pro Asp Asp Thr Gly Leu Tyr Phe Cys

85 90 95

Val Ser Ala Pro His Phe His Glu Ala Phe Pro Ser Arg Pro Pro Ala

100 105 110

Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 220

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 220

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Tyr Gly Ser Tyr

20 25 30

Val Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Arg Trp Ala Gly Gly Asp Ser His Tyr Gly Asp Pro Leu

50 55 60

Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Ala Ala Pro Val Pro Gly Ser Ser Tyr Glu Trp Thr Asn Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 221

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 221

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ser Ser Val Asn

20 25 30

Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Phe Ile Thr Ser Gly Asp Asp Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Met Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ala Thr Leu Gly Arg Ser Ser Ser Gly Thr Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 222

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 222

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Leu Arg Thr Leu Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Val Gly Trp Phe Arg Gln Thr Pro Gly Arg Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ala Val Ser Trp Asn Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Gln Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Tyr Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Val Asn Met Tyr Gly Ser Thr Phe Pro Gly Leu Ser Val Glu Ser

100 105 110

His Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 223

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 223

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn

20 25 30

Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Asp Ile Thr Lys Asn Asp Ile Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Asp Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95

Ala Ala Leu Ser Arg His Pro Tyr Arg Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 224

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 224

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ala Gly Arg Ser Leu Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Ile Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Tyr Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ser Ile Arg Trp Asn Thr Gly Ser Thr Thr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Trp Cys

85 90 95

Ala Ala Gly Leu His Leu Thr Pro Thr Ser Arg Thr Tyr Asn Tyr Arg

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 225

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 225

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Thr Ile Phe Thr Ile Asn

20 25 30

Ser Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Phe Ile Asn Leu Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asp Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Ala Ile Ser Gly Ser Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 226

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 226

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Ala Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 227

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 227

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 228

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 228

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 229

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 229

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 230

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 230

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 231

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 231

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 232

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 232

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 233

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 233

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 234

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 234

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ser Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 235

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 235

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 236

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 236

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 237

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 237

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 238

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 238

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 239

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 239

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Ala Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 240

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 240

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 241

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 241

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 242

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 242

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 243

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 243

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 244

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 244

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 245

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 245

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 246

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 246

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser

100 105 110

Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 247

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 247

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Met

35 40 45

Gly Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser

100 105 110

Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 248

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 248

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Phe Met

35 40 45

Gly Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser

100 105 110

Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 249

<211> 137

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 249

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg

100 105 110

Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 250

<211> 137

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 250

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Met

35 40 45

Gly Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg

100 105 110

Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 251

<211> 137

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 251

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Phe Met

35 40 45

Gly Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp

65 70 75 80

Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

85 90 95

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg

100 105 110

Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 252

<211> 141

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 252

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Trp Met Gly Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met

65 70 75 80

Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu

85 90 95

Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Val Arg Thr

100 105 110

Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr

115 120 125

Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 253

<211> 141

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 253

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Met Gly Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met

65 70 75 80

Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu

85 90 95

Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Val Arg Thr

100 105 110

Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr

115 120 125

Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 254

<211> 141

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 254

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Met Gly Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Tyr Thr Glu Asn Phe Lys Asp Arg Val Thr Met

65 70 75 80

Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu

85 90 95

Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Val Arg Thr

100 105 110

Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr

115 120 125

Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 255

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 255

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Phe Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 256

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 256

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 257

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 257

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 258

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 258

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 259

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 259

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe His Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Thr Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 260

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 260

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

100 105 110

Lys Ser Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 261

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 261

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 262

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 262

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Thr Leu Tyr Val Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 263

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 263

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 264

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 264

Val Gly Thr Ile Ser Asp Tyr Gly Met Gly

1 5 10

<210> 265

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 265

Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile Leu Ser Ala Tyr Ala Val Gly

1 5 10

<210> 266

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 266

Ser Ile Ser Trp Gly Gly Met Trp Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 267

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 267

Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 268

<211> 21

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 268

Gly Arg Gly Arg Met Tyr Arg Gly Ile Gly Asn Ser Leu Ala Gln Pro

1 5 10 15

Lys Ser Tyr Gly Tyr

20

<210> 269

<211> 22

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 269

Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu Val Pro Thr

1 5 10 15

Glu Asn Glu Tyr Gly His

20

<210> 270

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 270

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 271

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 271

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 272

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 272

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 273

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 273

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 274

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 274

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 275

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 275

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 276

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 276

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 277

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 277

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 278

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 278

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 279

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 279

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 280

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 280

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 281

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 281

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys His Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 282

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 282

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg His Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 283

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 283

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro His Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 284

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 284

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu His Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 285

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 285

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 286

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 286

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val His Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 287

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 287

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Pro Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn

20 25 30

Val Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn

85 90 95

Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala His Val His Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 288

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 288

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 289

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 289

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 290

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 290

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 291

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 291

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Asn Ser Lys Asp Asn Ala Lys Asn Arg Met Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 292

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 292

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser His Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu

35 40 45

Arg Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Leu Ser Ala

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Trp Pro Tyr Gly Ser Asn Arg Gly Glu

100 105 110

Val Pro Thr Glu Asn Glu Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 293

<211> 132

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 293

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg His Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser

130

<210> 294

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 294

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 295

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 295

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 296

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 296

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 297

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 297

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 298

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 298

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 299

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 299

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 300

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 300

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 301

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 301

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 302

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 302

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 303

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 303

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala His Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 304

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 304

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg His Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln His Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 305

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 305

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 306

<211> 267

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 306

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

165 170 175

Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala

180 185 190

Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg

210 215 220

Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro

225 230 235 240

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg

245 250 255

Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 307

<211> 272

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 307

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

145 150 155 160

Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg

165 170 175

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser

180 185 190

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

210 215 220

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met

225 230 235 240

Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly

245 250 255

Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 308

<211> 277

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 308

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile

20 25 30

Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly

35 40 45

Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr

50 55 60

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

65 70 75 80

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu

100 105 110

Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

115 120 125

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

165 170 175

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg

180 185 190

Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu

195 200 205

Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

210 215 220

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

225 230 235 240

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr

245 250 255

Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu

260 265 270

Val Thr Val Ser Ser

275

<210> 309

<211> 262

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 309

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser

145 150 155 160

Gly Ile Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly

165 170 175

Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile

180 185 190

Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

195 200 205

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu

225 230 235 240

Gly Glu Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

245 250 255

Leu Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 310

<211> 267

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 310

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

145 150 155 160

Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe

165 170 175

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser

180 185 190

Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile

195 200 205

Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu

210 215 220

Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr

245 250 255

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 311

<211> 272

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 311

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu

130 135 140

Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu

145 150 155 160

Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Ile Leu Ser Pro Tyr

165 170 175

Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val

180 185 190

Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr Thr Asp Ser Val Lys

195 200 205

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

210 215 220

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

225 230 235 240

Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly Glu Val Pro Gln Glu

245 250 255

Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 312

<211> 277

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 312

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly

165 170 175

Ile Leu Ser Pro Tyr Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys

180 185 190

Gly Leu Glu Phe Val Ser Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ala Ile Tyr

195 200 205

Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys

210 215 220

Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala

225 230 235 240

Val Tyr Tyr Cys Ala Val Arg Thr Arg Arg Tyr Gly Ser Asn Leu Gly

245 250 255

Glu Val Pro Gln Glu Asn Glu Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

260 265 270

Val Thr Val Ser Ser

275

<210> 313

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 313

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln

130 135 140

Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg

145 150 155 160

Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser

165 170 175

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile

180 185 190

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

195 200 205

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met

210 215 220

Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly

225 230 235 240

Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 314

<211> 261

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 314

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

145 150 155 160

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg

165 170 175

Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu

180 185 190

Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

195 200 205

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

210 215 220

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu

245 250 255

Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 315

<211> 266

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 315

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly

145 150 155 160

Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

165 170 175

Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro

180 185 190

Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp

195 200 205

Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

210 215 220

Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu

225 230 235 240

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser

245 250 255

Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 316

<211> 270

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 316

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val

35 40 45

Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser

100 105 110

Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu

145 150 155 160

Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu

165 170 175

Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser Trp

180 185 190

Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser

195 200 205

Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe

210 215 220

Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

225 230 235 240

Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser

245 250 255

Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 317

<211> 256

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 317

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser

145 150 155 160

Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu

165 170 175

Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp

180 185 190

Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser

225 230 235 240

Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245 250 255

<210> 318

<211> 261

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 318

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

145 150 155 160

Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro

165 170 175

Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp

180 185 190

Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

195 200 205

Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu

210 215 220

Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr

225 230 235 240

Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

245 250 255

Val Thr Val Ser Ser

260

<210> 319

<211> 266

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 319

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu

130 135 140

Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu

145 150 155 160

Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp Tyr Ala Met Ala Trp

165 170 175

Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Gly

180 185 190

Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly Arg Phe

195 200 205

Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn

210 215 220

Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Gln

225 230 235 240

Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp Ser Tyr Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265

<210> 320

<211> 271

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 320

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

130 135 140

Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

145 150 155 160

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Asp

165 170 175

Tyr Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Glu Arg Glu Phe

180 185 190

Val Ala Gly Ile Gly Trp Ser Gly Gly Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser

195 200 205

Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu

210 215 220

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Ala Ala Arg Gln Gly Gln Tyr Ile Tyr Ser Ser Met Arg Ser Asp

245 250 255

Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

260 265 270

<210> 321

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 321

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro

1 5

<210> 322

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 322

Leu Glu Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

1 5 10 15

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser

20 25 30

Arg Phe Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Val Glu

35 40 45

Trp Val Ser Gly Ile Ser Ser Leu Gly Asp Ser Thr Leu Tyr Ala Asp

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ile Gly Gly Ser Leu Asn Pro Gly Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 323

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 323

Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro

1 5

<210> 324

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 324

His His His His His His

1 5

<210> 325

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 325

Arg Leu Pro Leu Asp Asn Asn Ile Asp Tyr Gly Asp Phe Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 326

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 326

Asn Val Leu Leu Ser Arg Gln Ile Asn Gly Ala Tyr Val His

1 5 10

<210> 327

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 327

Glu Met Gly Ala Thr Ile Asn Val Met Ala

1 5 10

<---

Claims (68)

1. Слитый белок для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, где слитый белок включает сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит со сконструированным полипептидом, содержащим VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, либо непосредственно, либо через пептидный линкер; где домен VHH, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, содержит три определяющие комплементарность области (CDR) со следующими последовательностями:

a) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRAHSDYAMA (SEQ ID NO: 16);

b) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность GIGWSGGDTLYADSVRG (SEQ ID NO: 18); и

c) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AARQGQYIYSSMRSDSYDY (SEQ ID NO: 20);

где домен VHH, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, содержит три CDR со следующими последовательностями:

a) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRPVSNYA (SEQ ID NO: 38);

b) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность INWQKTAT (SEQ ID NO: 48); и

c) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AAVFRVVAPKTQYDYDY (SEQ ID NO: 55);

где пептидный линкер содержит последовательность:

a) GGGGAGGGGAGGGGS (SEQ ID NO: 102); или

b) GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 103);

и где С-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, или C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином.

2. Слитый белок по п. 1, где C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5.

3. Слитый белок по п. 1, где C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином.

4. Слитый белок для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, где слитый белок включает сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит со сконструированным полипептидом, содержащим VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, либо непосредственно, либо через пептидный линкер,

где полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-12 и их антигенсвязывающих фрагментов; и полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:22-34 и их антигенсвязывающих фрагментов;

где пептидный линкер содержит последовательность:

a) GGGGAGGGGAGGGGS (SEQ ID NO: 102); или

b) GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 103);

и где С-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, или C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином.

5. Слитый белок по п. 1, где полипептид, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, а полипептид, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.

6. Слитый белок по п. 5, дополнительно включающий пептидный линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103.

7. Слитый белок по п. 5, дополнительно включающий пептидный линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102.

8. Слитый белок для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, где слитый белок включает последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 96-101.

9. Слитый белок по п. 8, где слитый белок состоит из полипептида SEQ ID NO: 96.

10. Слитый белок по п. 1, где любой или оба полипептида, которые связываются с человеческим компонентом комплемента C5 или альбумином, связываются pH-зависимым образом.

11. Фармацевтическая композиция для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, включающая терапевтически эффективное количество слитого белка по любому из пп. 1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.

12. Фармацевтическая композиция для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, включающая терапевтически эффективное количество слитого белка, где слитый белок включает сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит со сконструированным полипептидом, содержащим VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, либо непосредственно, либо через пептидный линкер; где домен VHH, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, содержит три определяющие комплементарность области (CDR) со следующими последовательностями:

a) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRAHSDYAMA (SEQ ID NO: 16);

b) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность GIGWSGGDTLYADSVRG (SEQ ID NO: 18); и

c) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AARQGQYIYSSMRSDSYDY (SEQ ID NO: 20);

где домен VHH, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, содержит три CDR со следующими последовательностями:

a) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRPVSNYA (SEQ ID NO: 38);

b) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность INWQKTAT (SEQ ID NO: 48); и

c) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AAVFRVVAPKTQYDYDY (SEQ ID NO: 55);

где пептидный линкер содержит последовательность:

a) GGGGAGGGGAGGGGS (SEQ ID NO: 102); или

b) GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 103);

и где С-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, или C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином; и

где фармацевтическая композиция дополнительно включает гиалуронидазу и фармацевтически приемлемый носитель.

13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты для экспрессии слитого белка по любому из пп. 1-10, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-10.

14. Вектор экспрессии, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13.

15. Выделенная клетка-хозяин для экспрессии слитого белка по любому из пп. 1-10, включающая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 13.

16. Выделенная клетка-хозяин для экспрессии слитого белка по любому из пп. 1-10, включающая вектор экспрессии по п. 14.

17. Выделенная клетка-хозяин по п. 16, где клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего или клетку дрожжей.

18. Способ получения слитого белка по любому из пп. 1-10, включающий экспрессию в клетке-хозяине по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую указанный слитый белок.

19. Терапевтический набор для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, включающий:

(a) контейнер, включающий этикетку; и

(b) композицию, включающую слитый белок по любому из пп. 1-10;

где этикетка указывает, что композиция предназначена для введения пациенту, имеющему, или у которого подозревается, компонент комплемента С5-опосредованное расстройство.

20. Терапевтический набор для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, включающий:

(a) контейнер, включающий этикетку; и

(b) композицию, включающую слитый белок для лечения пациента с компонент комплемента С5-опосредованным расстройством, где слитый белок включает сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, и сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, где сконструированный полипептид, содержащий VHH домен, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит со сконструированным полипептидом, содержащим VHH домен, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, либо непосредственно, либо через пептидный линкер; где домен VHH, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, содержит три определяющие комплементарность области (CDR) со следующими последовательностями:

i) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRAHSDYAMA (SEQ ID NO: 16);

ii) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность GIGWSGGDTLYADSVRG (SEQ ID NO: 18); и

iii) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AARQGQYIYSSMRSDSYDY (SEQ ID NO: 20);

где домен VHH, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, содержит три CDR со следующими последовательностями:

i) CDR1, содержащая аминокислотную последовательность GRPVSNYA (SEQ ID NO: 38);

ii) CDR2, содержащая аминокислотную последовательность INWQKTAT (SEQ ID NO: 48); и

iii) CDR3, содержащая аминокислотную последовательность AAVFRVVAPKTQYDYDY (SEQ ID NO: 55);

где пептидный линкер содержит последовательность:

i) GGGGAGGGGAGGGGS (SEQ ID NO: 102); или

ii) GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 103);

и где С-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, или C-концевой остаток полипептида, который специфически связывается с человеческим компонентом комплемента C5, слит либо непосредственно, либо через линкер с N-концевым остатком полипептида, который специфически связывается с человеческим сывороточным альбумином; и

(c) гиалуронидазу;

где этикетка указывает, что композиция предназначена для введения пациенту, имеющему, или у которого подозревается, компонент комплемента С5-опосредованное расстройство.

21. Способ лечения пациента, имеющего компонент комплемента C5-опосредованное расстройство, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества слитого белка по любому из пп. 1-10.

22. Способ по п. 21, где компонент комплемента C5-опосредованное расстройство выбрано из группы, состоящей из следующих: ревматоидный артрит; люпус-нефрит; астма; ишемическое-реперфузионное повреждение; атипичный гемолитико-уремический синдром; болезнь плотного осадка; пароксизмальная ночная гемоглобинурия; дегенерация желтого пятна; синдром гемолиза, повышения уровня печеночных ферментов и низкого уровня тромбоцитов (HELLP); синдром Гийена-Барре; синдром CHAPLE; тяжелая миастения; оптиконевромиелит; тромботическая микроангиопатия после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (post-HSCT-TMA); TMA после трансплантации костного мозга (post-BMT TMA); болезнь Дегоса; болезнь Гоше; гломерулонефрит; тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (TTP); спонтанная потеря плода; малоиммунный васкулит; буллезный эпидермолиз; рекуррентная потеря плода; рассеянный склероз (MS); травматическое повреждение головного мозга; и повреждение в результате инфаркта миокарда, сердечно-легочного шунтирования и гемодиализа.

Images