JP2018520658A - ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体に関する。本発明は、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を使用する診察方法、ならびにこれらの抗体を治療的に及び予防的に使用する薬学的組成物に関する。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年５月２９日出願の米国仮出願第６２／１６８，０９６号の優先権の利益を主張するものであり、この仮出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年５月１９日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ３２８５４−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、１９８，７４６バイトのサイズである。
本発明は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質に対する抗体、具体的には、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質（ＧＰ）抗体及びその使用方法に関する。
エボラウイルス（ＥＢＯＶ）は、エボラウイルス疾患（ＥＶＤ）を引き起こす感染性因子である。エボラウイルスは、ＦｉｌｏｖｉｒｉｄａｅファミリーのＥｂｏｌａｖｉｒｕｓ属に属する。エボラウイルスは、ヒト及び非ヒト霊長類において重度の出血熱を引き起こす。ウイルスの表面上に存在する唯一のタンパク質が、エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質（ＧＰ）である。
これまでのところ、エボラウイルスに対する認可されたワクチンまたは治療がない。過去１０年の間、いくつかの実験戦略は、感染後のＥＢＯＶチャレンジ非ヒト霊長類を治療する際に有望である（例えば、Ｑｕｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ ５１４：４７−５３）。これまでに、抗体ベースの治療的アプローチのみが、ＥＢＯＶ曝露から２４時間以降に投与されるときに、非ヒト霊長類において実質的な利益を示した。例示的な抗体には、ＭＢ−００３（ヒトまたはヒト−マウスキメラモノクローナル抗体ｃ１３Ｃ６、ｈ１３Ｆ６、及びｃ６Ｄ８からなる；例えば、Ｚｅｉｔｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＰＮＡＳ １０８：２０６９０−２０６９４）を参照のこと、ＺＭａｂ（マウスモノクローナル抗体ｍ１Ｈ３、ｍ２Ｇ４、及びｍ４Ｇ７からなる、例えば、Ｍｕｒｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＰＮＡＳ １１１：１７１８２−１７１８７、Ａｕｄｅｔ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ４：６８８１ ｐｐ．１−７）を参照のこと、ならびにＺＭａｐｐ（キメラモノクローナル抗体ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、及びｃ４Ｇ７からなる、例えば、米国特許第７，３３５，３５６号、米国特許第８，５１３，３８１号、Ｇｅｉｓｂｅｒｔ（２０１４） Ｎａｔｕｒｅ ５１４：４１−４３、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｈｉｎａ ５７：９８７−９８８を参照のこと）が含まれる。
ＺＭａｐｐは、ＥＢＯＶチャレンジ後から最長５日までに処置を開始したときに、アカゲザルを１００％救った。肝臓酵素の上昇、粘膜出血、及び全身性点状出血で示されるように、進行疾患が好転し、感染した動物の完全な回復をもたらした。
非ヒト霊長類における有効性を示すこれらの有望な結果にもかかわらず、ＺＭａｐｐのヒト臨床開発は、この治療法の臨床開発で用いるために、ＺＭａｐｐ内に含まれる３つのモノクローナル抗体のそれぞれの十分な信頼できる、製造可能な量を得る能力を制限する現行のＺＭａｐｐの様々な易罹病性により制限されている。具体的には、ＺＭａｐｐカクテル内に含まれる３つのモノクローナル抗体のそれぞれの十分な量の生成は、タバコにおけるその現行の製造により、ある程度制限されている。さらに、ＺＭａｐｐ内に含まれる３つのモノクローナル抗体は、キメラである。したがって、十分な信頼できる量で抗ＥＢＯＶモノクローナル抗体を提供する必要がある。本発明は、様々なヒト化抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質モノクローナル抗体を提供することによって、ある程度この必要性に対処する。
本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体及びその使用方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する、単離されたヒト化抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、配列番号９２のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号１４、１６、１８、及び２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３、５、及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号１４、１６、１８、及び２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３、５、及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１５、１７、１９、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号４、６、及び８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号１５、１７、１９、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号４、６、及び８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号４２、４４、４６、及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２７、２９、３１、３３、及び３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号４２、４４、４６、及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１、３３、及び３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号４３、４５、４７、及び４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２８、３０、３２、３４、及び３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号４３、４５、４７、及び４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２８、３０、３２、３４、及び３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号７０、７２、及び７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５５、５７、５９、６１、及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号７０、７２、及び７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５５、５７、５９、６１、及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号７１、７３、及び７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号５６、５８、６０、６２、及び６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号７１、７３、及び７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６、５８、６０、６２、及び６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供し、抗体は、配列番号７９〜９０からなる群から選択される配列を含むエボラウイルス糖タンパク質に結合する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、抗体断片である。他の実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、完全長ＩｇＧ１抗体である。他の実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、非フコシル化抗体である。
本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体をコードする単離された核酸分子をさらに提供する。本発明はまた、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする核酸分子を含むベクターも提供する。ベクターは、任意のタイプであってよく、例えば、発現ベクター等の組み換えベクターであってよい。
いくつかの態様では、本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体をコードする核酸分子を含む宿主細胞を提供する。様々な宿主細胞のうちのいずれかを使用することができる。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞、例えば、大腸菌である。別の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳動物細胞、またはタバコ細胞等の植物細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、非フコシル化抗体を産生することができる宿主細胞である。他の実施形態では、宿主細胞は、非フコシル化抗体を産生することができる哺乳動物宿主細胞である。他の実施形態では、宿主細胞は、発現タンパク質に対するフコースの付加をもたらさないＦＵＴ８（アルファ−（１，６）−フコース転移酵素）遺伝子の欠失を有する哺乳動物宿主細胞である。
本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を産生する方法をさらに提供する。例えば、本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体（本明細書に定義される場合、完全長抗体及びその断片を含む）を作製するための方法を提供し、本方法は、好適な宿主細胞において、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体またはその断片をコードする本発明の組み換えベクターを発現し、そのため、抗体またはその断片を産生することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体（またはその断片）をコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、そのため、核酸を発現することを含む。本方法は、宿主細胞から、宿主細胞培地から、または宿主細胞培養培地から抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体またはその断片を回収することをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、非フコシル化抗体を産生しない宿主細胞において抗体を産生することに対して、抗体凝集の低下をもたらす。
いくつかの実施形態では、本方法は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体及び細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を含む薬学的製剤を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体ならびに／または免疫複合体及び薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む薬学的製剤を提供する。いくつかの実施形態では、薬学的製剤は、さらに、別の抗エボラウイルス抗体、抗ウイルス剤、または抗エボラワクチン等のさらなる治療剤を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、エボラウイルス感染を治療、予防、または阻害するのに用いるために本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を含む薬学的製剤を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、医薬品として用いるために抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、エボラウイルス感染を治療するのに用いるために本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、エボラウイルス感染を治療するために医薬品の製造において本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体を提供する。別の態様では、本発明は、医薬品の製造において本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体の使用のために提供する。医薬品は、エボラウイルス感染を阻害、治療、または予防するのに用いるものであり得る。別の態様では、本発明は、医薬品の製造において本発明の製品の使用のために提供する。医薬品は、エボラウイルス感染を阻害、治療、または予防するのに用いるものであり得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、エボラウイルス感染に罹患している個体を治療する方法を提供し、本方法は、個体に、有効量の本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体またはその免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、さらなる治療剤を個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、別の抗エボラウイルス抗体、抗ウイルス剤、または抗エボラワクチンである。
本発明はまた、エボラウイルス感染を阻害するための方法も提供し、本方法は、阻害を必要とする個体に、有効量の本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体のうちの１つ以上を含む組成物を投与し、それによりエボラウイルス感染を阻害することを含む。本発明はまた、エボラウイルス感染を治療するための方法も提供し、本方法は、治療を必要とする個体に、有効量の本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体のうちの１つ以上を含む組成物を投与し、それによりエボラウイルス感染を治療することを含む。本発明はまた、エボラウイルス感染を予防するための方法も提供し、本方法は、予防を必要とする個体に、有効量の本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体のうちの１つ以上を含む組成物を投与し、それによりエボラウイルス感染を治療することを含む。
いくつかの実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、インビトロ、インビボ、またはインビトロ及びインビボでエボラウイルスを中和させる。いくつかの実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、本発明の抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体は、単離されたモノクローナル抗体である。
キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の軽鎖可変領域（配列番号１）及び軽鎖（配列番号２）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 カッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの軽鎖可変領域（配列番号３）及び軽鎖（配列番号４）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの軽鎖可変領域（配列番号５）及び軽鎖（配列番号６）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３及び８７（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの軽鎖可変領域（配列番号７）及び軽鎖（配列番号８）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１０）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１１）のアミノ酸配列を示す。 キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の重鎖可変領域（配列番号１２）及び重鎖（配列番号１３）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 Ｈ２生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの重鎖可変領域（配列番号１４）及び重鎖（配列番号１５）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置２、２４、及び３７（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ２生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの重鎖可変領域（配列番号１６）及び重鎖（配列番号１７）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置２、２４、３７、７３、及び７５（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ２生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの重鎖可変領域（配列番号１８）及び重鎖（配列番号１９）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置２、２４、３７、６６、６８、７３、及び７５（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ２生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６グラフトの重鎖可変領域（配列番号２０）及び重鎖（配列番号２１）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２２）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２３）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４）のアミノ酸配列を示す。 キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の軽鎖可変領域（配列番号２５）及び軽鎖（配列番号２６）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 カッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの軽鎖可変領域（配列番号２７）及び軽鎖（配列番号２８）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの軽鎖可変領域（配列番号２９）及び軽鎖（配列番号３０）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの軽鎖可変領域（配列番号３１）及び軽鎖（配列番号３２）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３及び４８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの軽鎖可変領域（配列番号３３）及び軽鎖（配列番号３４）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３、４８、及び７１（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの軽鎖可変領域（配列番号３５）及び軽鎖（配列番号３６）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３７）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３８）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ３、配列番号３９）のアミノ酸配列を示す。 キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の重鎖可変領域（配列番号４０）及び重鎖（配列番号４１）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 Ｈ３生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの重鎖可変領域（配列番号４２）及び重鎖（配列番号４３）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４９（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ３生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの重鎖可変領域（配列番号４４）及び重鎖（配列番号４５）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置７８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ３生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの重鎖可変領域（配列番号４６）及び重鎖（配列番号４７）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４９及び７８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ３生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４グラフトの重鎖可変領域（配列番号４８）及び重鎖（配列番号４９）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５０）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５１）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体２Ｇ４の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５２）のアミノ酸配列を示す。 キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の軽鎖可変領域（配列番号５３）及び軽鎖（配列番号５４）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 カッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの軽鎖可変領域（配列番号５５）及び軽鎖（配列番号５６）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの軽鎖可変領域（配列番号５７）及び軽鎖（配列番号５８）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの軽鎖可変領域（配列番号５９）及び軽鎖（配列番号６０）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３及び４８（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの軽鎖可変領域（配列番号６１）及び軽鎖（配列番号６２）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置４３、４８、及び８７（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するカッパ１に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの軽鎖可変領域（配列番号６３）及び軽鎖（配列番号６４）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、配列番号６５）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ２、配列番号６６）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ３、配列番号６７）のアミノ酸配列を示す。 キメラ抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の重鎖可変領域（配列番号６８）及び重鎖（配列番号６９）のアミノ酸配列を示す。超可変領域に下線が付されている。 Ｈ１生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの重鎖可変領域（配列番号７０）及び重鎖（配列番号７１）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置７１（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ１生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの重鎖可変領域（配列番号７２）及び重鎖（配列番号７３）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 バーニア位置６７、６９、及び７１（Ｋａｂａｔ番号付け）にマウス置換を有するＨ１生殖細胞系に対するヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７グラフトの重鎖可変領域（配列番号７４）及び重鎖（配列番号７５）のアミノ酸配列を示す。下線が付されているアミノ酸残基は、キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の間で異なる可変領域におけるアミノ酸の位置を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７６）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ２、配列番号７７）のアミノ酸配列を示す。 キメラ及びヒト化抗エボラウイルスモノクローナル抗体４Ｇ７の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７８）のアミノ酸配列を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 エボラウイルス種の異なる株からウイルスエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９〜９０）を示す。 抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６（配列番号９１）、２Ｇ４（配列番号９２）、及び４Ｇ７（配列番号９２）のエピトープ配列を示す。 抗エボラウイルスモノクローナル抗体１３Ｃ６（配列番号９１）、２Ｇ４（配列番号９２）、及び４Ｇ７（配列番号９２）のエピトープ配列を示す。
Ｉ．定義
本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬまたはＶＨ受容体ヒトフレームワークは、ＶＬまたはＶＨヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して配列が同一である。
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な例証的説明及び例示的な実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
「抗エボラウイルス糖タンパク質抗体」、「抗エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質抗体」、「エボラウイルス糖タンパク質に結合する抗体」、「抗エボラウイルスＧＰ抗体」、及び「エボラウイルスＧＰに結合する抗体」という用語は、抗体が診断剤及び／または治療剤としてエボラウイルス糖タンパク質を標的とすることに有用となるような十分な親和性でエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質に結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が非関連非エボラウイルス糖タンパク質タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、エボラウイルス糖タンパク質への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、エボラウイルス糖タンパク質に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、エボラウイルス属（例えば、Ｚａｉｒｅエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質、Ｓｕｄａｎエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質、Ｒｅｓｔｏｎエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質、Ｔａｉ Ｆｏｒｅｓｔエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質、Ｂｕｎｄｉｂｕｇｙｏエボラウイルスエンベロープ糖タンパク質、例えば、図４Ａ〜図４Ｌを参照のこと、配列番号７９〜９０）内の異なるエボラウイルス種からエボラウイルス糖タンパク質の中から保存されているエボラウイルス糖タンパク質のエピトープに結合する。
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む、種々の抗体構造を包含する。
「抗体断片」とは、無傷の抗体が結合する抗原に結合する、無傷の抗体の一部を含む無傷の抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体がその抗原に結合するのを５０％以上遮断する抗体、及び逆に、競合アッセイにおいて、抗体がその抗原に結合するのを５０％以上遮断する参照抗体を指す。例示的な競合アッセイが本明細書に提供される。
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要なクラスの抗体ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書で用いる場合、細胞機能を阻害するもしくは阻む、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤としては、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異体を含む）等の毒素；ならびに下に開示される種々の抗腫瘍または抗癌薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在しなくてもよい。本明細書で別途指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付け方式に従う。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、同義に使用され、その中に外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含有量でない場合があるが、変異を含んでもよい。元来形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。概して、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ （１９９１），ｖｏｌｓ．１−３におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるようなサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに相当し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに相当する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で用いる場合、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。概して、抗体は、ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
ある特定の実施形態では、ＨＶＲ残基は、図１Ｅ、図１Ｆ、及び図１Ｇ（配列番号９、１０、１１）、図１Ｍ、図１Ｎ、及び図１Ｏ（配列番号２２、２３、２４）、図２Ｇ、図２Ｈ、及び図２Ｉ（配列番号３７、３８、３９）、図２Ｏ、図Ｐ、及び図２Ｑ（配列番号５０、５１、５２）、図３Ｇ、図３Ｈ、及び図３Ｉ（配列番号６５、６６、６７）、ならびに図３Ｎ、図３Ｏ、及び図３Ｐ（配列番号７６、７７、７８）において同定されるものを含む。
別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って付番される。
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）に複合体化される抗体である。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
「単離された」抗体とは、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説に関して、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
「単離された」核酸とは、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、通常は核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗エボラウイルス糖タンパク質抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で用いる場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異抗体は例外であり、かかる変異体は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのこのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する自然発生免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つに割り当てられ得る。
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療剤製品の商業パッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列し、最大パーセントの配列同一性を達成するために必要な場合はギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大整列を達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）においてユーザ文書とともに申請されており、これは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であり、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、またはそれを含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
１００×画分Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解されよう。別途具体的に示されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性値％は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与され得る対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を全く含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
「エボラウイルス糖タンパク質」、または「エボラウイルスエンベロープ糖タンパク質」は、本明細書で用いる場合、任意のエボラウイルス株または単離物からの任意の天然のエボラウイルス糖タンパク質を指す。この用語は、「完全長」未処理のエボラウイルス糖タンパク質、ならびにエボラウイルスまたはエボラウイルスに感染した細胞内の処理から生じるエボラウイルス糖タンパク質の任意の形態を包含する。この用語はまた、エボラウイルス糖タンパク質の天然に存在する変異型、例えば、スプライス変異型または対立遺伝子変異型も包含する。例示的なエボラウイルス糖タンパク質のアミノ酸配列を、図４Ａ〜図４Ｌ（配列番号７９〜９０）に示す。エボラウイルス糖タンパク質は、例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２００９） Ｆｕｔｕｒｅ Ｖｉｒｏｌ．４（６）：６２１−６３５、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２００８） Ｎａｔｕｒｅ ４５４：１７７−１８２、ＷＯ２００５／０６３７９８、ＷＯ２０１１／０７１５７４）においてさらに記載されている。
本明細書で用いる場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む同様の構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照のこと）。単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からのＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して単離されて、それぞれ、相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと。
「ベクター」という用語は、本明細書で用いる場合、連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入された宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を指示することができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、ある程度抗エボラウイルスＧＰ抗体に基づいている。ある特定の実施形態では、エボラウイルス糖タンパク質に結合するヒト化抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、エボラウイルス疾患の診断または治療に有用である。
Ａ．例示的な抗エボラウイルス糖タンパク質抗体
一態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する、単離された抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号９１または配列番号９２のアミノ酸配列を含むエピトープに結合するヒト化抗体であるような、ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２２、５０、または７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３、５１、または７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４、５２、または７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９、３７、または６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０、３８、または６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１、３９、または６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む、ヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を提供する。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２を含む、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む抗体を提供する。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む抗体を提供する。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）（ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメイン、ならびに（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、上に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体における任意の１つ以上のアミノ酸は、以下のＨＶＲ位置（Ｋａｂａｔ番号付け）で置換される。
１３Ｃ６．ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号２２）では、位置３５ｂ
１３Ｃ６．ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号２３）では、位置５２、５４、５８、６０、または６１
１３Ｃ６．ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号２４）では、位置１００ｄまたは１０１
１３Ｃ６．ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号９）では、位置２４、２８、２９、３０、３１、３２、または３３
１３Ｃ６．ＨＶＥ−Ｌ２（配列番号１０）では、位置５０、５３、５４、５５、または５６
１３Ｃ６．ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１１）では、位置９２または９６
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号５０）では、位置３１、３３、または３５
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号５１）では、位置５０、５２、５２ａ、５２ｂ、５２ｃ、５３、５４、５５、５６、５８、または６１
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号５２）では、位置９３または１００ｂ
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号３７）では、位置２７、２８、３０、または３２
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号３８）では、位置５０、５２、５３、５５、または５６
２Ｇ４．ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号３９）では、位置９０、９１、９２、９３、９４、または９６
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号７６）では、位置２７、２８、３１、３２、３３、３４、または３５
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号７７）では、位置５０、５２、５２ａ、５３、５４、５６、５８、６０、または６４
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号７８）では、位置９３、９４、または１０１
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号６５）では、位置２７、２８、または３０
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号６６）では、位置５０、５２、５３、５５、または５６
４Ｇ７．ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号６７）では、位置９０、９１、９２、９３、または９４
ある特定の実施形態では、置換は、本明細書において提供されるような、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、表１〜３に記載される通りである。
上述の実施形態のうちのいずれかでは、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるように、ＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、配列番号１４、４２、または７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４、４２、または７０において、置換、挿入、及び／または欠失した。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で、例えば、重鎖バーニア位置２、２４、３７、４９、６６、６７、６８、６９、７１、７３、及び／または７５（Ｋａｂａｔ番号付け）において）生じる。いくつかの実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、配列番号１４、１６、１８、２０、４２、４４、４６、４８、７０、７２、または７４にＶＨ（可変重鎖領域）配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２２、５０、または７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３、５１、または７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４、５２、または７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供され、該抗体は、配列番号３、２７、または５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含むヒト化抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３、２７、または５５において、置換、挿入、及び／または欠失した。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で、例えば、重鎖バーニア位置４、４３、４８、７１、及び／または８７（Ｋａｂａｔ番号付け）において）生じる。いくつかの実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、配列番号３、５、７、２７、２９、３１、３３、３５、５５、５７、５９、６１、または６３にＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号９、３７、または６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０、３８、または６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１、３９、または６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供され、該抗体は、上に提供された実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ、及び上に提供された実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。特定のＶＨ（可変重鎖）及びＶＬ（可変軽鎖）配列または特定の重鎖及び軽鎖配列を含む例示的な抗体を、下の表１〜３中に詳述する。
Figure 2018520658
Figure 2018520658
Figure 2018520658
特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４及び配列番号７のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。別の特定の実施形態では、抗体は、配列番号４２及び配列番号３５のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。さらに別の特定の実施形態では、抗体は、配列番号７０及び配列番号５５のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態では、抗体は、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号１のＶＬ配列を含む抗エボラウイルス糖タンパク質抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。他の実施形態では、抗体は、配列番号４０のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む抗エボラウイルス糖タンパク質抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。さらに他の実施形態では、抗体は、配列番号６８のＶＨ配列及び配列番号５３のＶＬ配列を含む抗エボラウイルス糖タンパク質抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、アミノ酸３８９−４９３（配列番号９１）からなるエボラＺａｉｒｅ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｌ１１３６５）の糖タンパク質遺伝子の断片内のエピトープに結合する、抗体が提供される（例えば、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体１３Ｃ６によって認識されるエピトープを説明している、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．７，３３５，３５６を参照のこと）。他の実施形態では、アミノ酸５０２〜５１６（配列番号９２）からなるエボラＺａｉｒｅエンベロープ糖タンパク質（例えば、ユニプロットＩＤ：Ｐ８７６６６）の断片内のエピトープに結合する、抗体が提供される（例えば、様々なモノクローナル抗体のエピトープマッピング研究を説明している、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．８，５１３，３９１も参照のこと）。
本発明のさらなる態様では、上述の実施形態のいずれかに従う抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書において定義される無傷の抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＭ）である。
さらなる態様では、上述の実施形態のうちのいずれかによる抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、以下の項１〜７に記載される特徴のうちのいずれかを、単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施形態では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的とする抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングされ、その後、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたりＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで遮断される。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中に、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの系列希釈（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）と混合する。その後、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。その後、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。
別の実施形態に従って、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いたアッセイは、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化した抗体ＣＭ５チップを用いて２５℃で行われる。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）になるまで希釈した後に、５μｌ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングしたタンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。反応速度測定のために、Ｆａｂの２倍連続希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中におよそ２５μｌ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによるオンレートが１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オンレートは、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。ＷＯ ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。エピトープ残基を結合し、増加したインビボ半減期を有するサルベージ受容体を含むＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察に関しては、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ ４０４，０９７、ＷＯ １９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照のこと）。
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷の抗体のタンパク質消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、様々な技法によって作製することができる。
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しつつ、ヒトに対する免疫原性を低減するため、非ヒト抗体がヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの一部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの一部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含むであろう。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を復元または改善するため、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基に置換される。
置換に適しているＦＲにおける残基を特定するための戦略は、以下の通りである：（ａ）ドナー及び受容体配列の分析：ヒトフレームワーク残基から元のソース残基への推定上の逆の点突然変異は、標準の残基、鎖間パッキング残基、異常な残基、及びグリコシル化部位におけるドナー及び受容体配列の分析から特定することができる。特定の実施形態では、ソースの標準及び鎖間パッキング残基を保持することが重要であることが示されている（例えば、抗体６０．３及びＢＲ９６を参照のこと）、（ｂ）バーニアゾーン及びＣＤＲ−Ｈ３の分析：「プラットフォーム」を形成し、その上にＣＤＲが置かれ、それ故に、それらの構成に潜在的に影響を及ぼすバーニアゾーンにおける残基が置換され得る。それらの極度の変動性により、ＣＤＲ−Ｈ３に対して定義される標準的な残基がなく、したがって、その構成に潜在的に影響を及ぼし得る残基のための構造モデルを分析するためにこのループへの注意が払われるべきである、（ｃ）近接から結合部位への分析：構造モデルが利用可能である場合、任意のＣＤＲ残基の５オングストローム内の残基の分析は、特に、これらの残基がソース配列の分析によって重要であると分類される場合に抗原に結合する可能性があると試験されるべきである、（ｄ）グリコシル化部位の分析：グリコシル化の除去が、しばしば、ヒト化抗体の結合活性を増強するため、特に、抗体の利用可能な構造モデルの表面上に存在する場合、潜在的なグリコシル化部位の除去があるか否かを考慮する。
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトについて記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載）にさらに記載されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照のこと）、軽または重鎖可変領域の特定の下位群のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照のこと）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原投与に応答してヒト可変領域を有する無傷のヒト抗体または無傷の抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について説明）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術について説明）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について説明）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ ２００７／００６１９００（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術について説明）も参照のこと。かかる動物によって生成された無傷の抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について説明されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体についても、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に説明されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について説明）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて説明）に説明されている方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についても、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に説明されている。
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が以下に記載されている。
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７ （Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに説明されている。
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ内でランダムに組み換えられ、その後、これは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとしてディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、免疫付与を伴うことなく、広範な非自己抗原及び自己抗原に対する単一源の抗体を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによって合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載している特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの１つがエボラウイルス糖タンパク質に対するものであり、もう一方が、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、エボラウイルス糖タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、エボラウイルスまたはエボラウイルス糖タンパク質を発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用されてもよい。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製され得る。
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、及び「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されるように三重特異性抗体を調製することによっても作製され得る。
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）。
本明細書における抗体または断片にはまた、エボラウイルス糖タンパク質及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）。
７．抗体変異体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。最終構築物に到達ために欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができるが、最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の目的とする部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表４において「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表４において「例示的置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照してさらに後述される。アミノ酸置換が目的とする抗体に導入され、生成物が所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低減、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされ得る。
Figure 2018520658
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのあるメンバーと別のクラスとの交換を伴うであろう。
ある種類の置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる試験のために選択される結果として生じる変異体（複数可）は、親抗体と比較したある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有するであろう。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載の技法等のファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が突然変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
改変（例えば、置換）がＨＶＲに行われて、例えば、抗体親和性を改善することができる。かかる改変が、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を経るコドンによってコードされた残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照のこと）、及び／または抗原と接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異体ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそれからの再選択による親和性成熟については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリが作製される。その後、このライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）がＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の変異体ＶＨ配列及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されないか、または１つより多く、２つより多く、もしくは３つより多くのアミノ酸置換を含有しないかのいずれかである。
変異導入のために標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、「アラニン系統的変異導入法」と称され、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されている。この方法では、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされ得るか、または排除され得る。変異体がスクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかを決定することができる。
アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
ｂ）グリコシル化変異体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって好都合に達成され得る。
この抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖としては、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の特性が改善された抗体変異体を作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠くまたは低減されたフルコシ化を有する炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。定質の完全非フコシル化治療抗体の強固及び安定な産生は、非フコシル化治療抗体分子の高レベルのＡＤＣＣ有効性が標的細胞上に抗原に結合するための競合を通してフコシル化対応物によってインビボで低減するため、治療抗体の開発に必要である（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｍａｂｓ．１（３）：２３０−２３６，Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．５５（２−３）：１０９−１１４を参照のこと）。本発明は、完全非フコシル化抗体を安定して産生することができる哺乳動物宿主細胞株を使用し、これらの抗体は、以下の実施例１〜４において詳述される有益な特徴を有する。様々な態様では、本発明はまた、制御されたフコシル化による抗体の産生も特徴とする。
特定の実施形態では、例えば、かかる抗体中のフコースの量は、０％〜１％、０％〜２％、１％〜８０％、１〜６５％、５〜６５％、２０〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体内のわずかな配列変異のため、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４位と３００位との間に位置し得る。かかるフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関する公報の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化（または非フコシル化）抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．）、具体的には、実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）である。
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体変異体がさらに提供される。かかる抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ）、及び米国特許第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それにより、Ｆｃ領域変異体が生成され得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不要または有害である用途に望ましい候補となる抗体変異体を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例が、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照のこと）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的にまたは追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示の動物モデルで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。当該技術分野で既知の方法を使用して、ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定を行うこともできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照のこと）。
低減したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上の置換を有するＦｃ突然変異体、例えば、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体が挙げられる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）。
ある特定の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載される、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の変化（すなわち、改善または減縮）をもたらす変化を、Ｆｃ領域に起こさせる。
母体ＩｇＧの胎児への移送に関与する半減期の延長及び新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の改善を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））については、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域をそこに含む。かかるＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
ｄ）システイン操作された抗体変異体
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を創出することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の接触可能部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に抗体を複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基、軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）のうちの任意の１つ以上が、システインで置換されてもよい。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載のものを含む。
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。本抗体に結合したポリマーの数は異なり得、１つより多くのポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される本抗体の具体的な特性または機能、本抗体誘導体が規定の状態下である療法で使用されるか等を含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞を死滅させる温度まで加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
Ｂ．組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるもの等の組み換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、宿主細胞は、植物細胞、例えば、タバコ植物細胞（例えば、タバコＢＹ−２細胞、例えば、Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｎｔｅｒ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏ １３２：１−３０、Ｋｉｒｃｈｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊ．１０．８：９３６−９４４を参照のこと）である。他の実施形態では、宿主細胞は、脱フコシル化（または非フコシル化）抗体を産生することができる細胞であり、例えば、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．）、具体的には、実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）である。一実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の作製方法が提供され、該方法は、上に提供されるように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、及び任意に、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む。
抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の組み換え産生のために、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌内で産生され得る。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照のこと。（また、Ｅ．ｃｏｌｉ内での抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照のこと。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物における抗体の産生のためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８２０−８２５（植物における抗体の産生について記載）を参照のこと。
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳動物細胞株が、有用である場合がある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。他の有用な哺乳動物宿主細胞株はまた、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．）、具体的には、実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照のこと。
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット等の既知の方法によってその抗原結合活性について試験される。
別の態様では、競合アッセイを使用して、エボラウイルス糖タンパク質への結合のための表１〜３中に列挙される、ＶＨ及びＶＬ配列、または重鎖及び軽鎖配列を有するヒト化抗エボラ抗体のうちの１つ以上と競合する抗体を特定してもよい。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、表１〜３中に列挙される、ＶＨ及びＶＬ配列、または重鎖及び軽鎖配列を有するヒト化抗エボラ抗体のうちの１つ以上と結合する同じエピトープ（例えば、線形または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，” ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
例示的な競合アッセイでは、固定化されたエボラウイルス糖タンパク質を、エボラウイルス糖タンパク質（例えば、表１〜３中に列挙される、ＶＨ及びＶＬ配列、または重鎖及び軽鎖配列を有するヒト化抗エボラ抗体のうちの１つ以上）に結合する第１の標識抗体と、エボラウイルス糖タンパク質に結合する第１の抗体と競合するその能力について試験される第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたエボラウイルス糖タンパク質を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のエボラウイルス糖タンパク質への結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたエボラウイルス糖タンパク質に関連する標識の量を測定する。固定化されたエボラウイルス糖タンパク質に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がエボラウイルス糖タンパク質への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照のこと。
２．活性アッセイ
一態様では、生物学的活性を有する抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性は、例えば、エボラウイルスによるプラーク形成の阻害、感染に対する予防、及び／または感染後の生存の延長を含み得る。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、インビトロでのプラーク減少中和アッセイによってかかる生物学的活性に関して試験される。プラークアッセイは、例えば、コンフルエントＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を用いて行われ得る。エボラウイルスを中和させる抗体の存在を評価するために、抗体の希釈物を、１００ｐｆｕのマウスに馴化したエボラウイルスと、３７℃で１時間混合させ、これを使用して、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を感染させることができる。次いで、細胞を、アガロースオーバーレイで覆い（Ｍｏｅ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９８１） Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３：７９１−７９３）、ＰＢＳまたはアガロース中の５％ ニュートラルレッド溶液を含有する第２のオーバーレイを６日後に添加する。次いで、プラークを翌日計数する。エンドポイント力価は、抗体の最終希釈物のプラークの数が対照ウェルの８０％減少していると決定する。インビトロプラーク減少中和アッセイのさらなる詳細については、例えば、ＷＯ２０１０／０１６１８３を参照のこと。
他の実施形態では、本発明の抗体はまた、インビボ生物学的活性（例えば、感染に対する予防、及び／または感染後の生存の延長）に関しても試験され得る。例えば、本発明の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の予防的及び／または治療的有用性を決定するために、精製した抗体または抗体の組み合わせを、マウスに馴化したエボラＺａｉｒｅウイルスを抗原投与する２４時間前、及び／またはマウスに馴化したエボラＺａｉｒｅウイルスを抗原投与してから１日、２日、もしくは３日後に、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスの腹腔内に注入することができる。マウスにおけるエボラ感染を、１０ｐｆｕのマウスに馴化したエボラＺａｉｒｅ １９７６ウイルスの腹腔内接種によって行うことができる。次いで、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の処置を受ける及びその処置を受けない、動物を、感染から２８日後の罹患率及び脂肪率についてモニタリングする（マウス研究におけるさらなる詳細については、例えば、ＷＯ２０１０／０１６１８３を参照のこと）。霊長類及びモルモットにおけるさらなるインビボ生物学的アッセイについては、例えば、Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１４） Ｎａｔｕｒｅ ５１４：４７−５３，Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．８，５１３，３９１を参照のこと。
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤または化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、もしくは放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤と複合された本明細書における抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を含む、免疫複合体を提供する。
一実施形態では、免疫複合体は、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０４２５２３５ Ｂ１号を参照のこと）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照のこと）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８））；ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照のこと）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）等のタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含むがこれらに限定されない、１つ以上の薬物に抗体が複合された抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である。
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的活性毒素またはその断片に複合体化される、本明細書に記載される抗体を含む。
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。多様な放射性同位体が、放射性複合体の産生のために利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性複合体が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または再びヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄等の核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても既知である）のためのスピン標識を含み得る。
抗体及び細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）等の多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に複合体化するための例示的キレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
本明細書のイムヌオ複合体またはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびに市販される（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない、架橋剤試薬で調製されたかかる複合体を明白に企図するが、これらに限定されない。
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体のいずれも、生体試料中のエボラウイルス糖タンパク質の存在の検出に有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で用いる場合、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、例えば、ＥＤＴＡの全血、血清、鼻液、または口腔スワブを含む。
一実施形態では、診断または検出方法において用いるための抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料中のエボラウイルス糖タンパク質の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、エボラウイルス糖タンパク質への抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の結合を許容する条件下で、生体試料を本明細書に記載される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体と接触させることと、複合体が抗エボラウイルス糖タンパク質抗体とエボラウイルス糖タンパク質との間で形成されるかどうかを検出することと、を含む。かかる方法は、インビトロ方法またはインビボ方法であり得る。一実施形態では、例えば、エボラウイルス糖タンパク質が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を使用して、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体での治療法に適格な対象を選択する。
診断または検出の他の方法には、（ａ）基本的な血液検査：感染初期段階は、血小板減少、白血球減少、及び著しいリンパ球減少を特徴とする。数日後に好中球増加が生じ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ及びアラニンアミノトランスフェラーゼの上昇も生じる。ビリルビンは、正常またはわずかに上昇し得る。無尿の兆候、血中尿素窒素、及び血清中クレアチニンの増加がある。末期症状の患者は、これらの患者が代償性過呼吸の試みであり得る頻呼吸を有する場合があるという観察に寄与し得る代謝性アシドーシスを発症し得、（ｂ）ウイルスを単離するための研究：確定診断は、組織培養によるウイルスの単離または逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに基づいている。組織培養中のエボラウイルスの単離は、世界中でごく少数の高度密閉実験室でのみ安全に行うことができる危険性の高い手順である、（ｃ）抗体及び抗原についての血清学的検査：間接蛍光抗体試験（ＩＦＡＴ）は、偽陽性の結果と関連している。この試験の感受性及び実用性に関する懸念は、確認血清学的試験の開発において生じた。免疫応答を発生するのに十分長く生存する感染患者において、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）及び免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）試験は、エボラウイルス感染の診断において有用であり得る。両方のＥＬＩＳＡ試験は、感受性があり、特異的であることを実証した。ＩｇＭ捕捉ＥＬＩＳＡは、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞中で成長したＺａｉｒｅエボラウイルス抗原を使用し、この株に対するＩｇＭ抗体を検出する。結果は、感染から６日以内に実験霊長類において陽性になるが、長期間陽性を保持しない。これらの質は、ＩｇＭ試験が急性エボラ感染を文書化するために使用され得ることを示す。ＩｇＧ捕捉ＥＬＩＳＡは、洗剤抽出したウイルス抗原を使用し、ＩｇＧ抗エボラ抗体を検出する。それは、ＩＦＡＴよりもさらに特異的であり、長期間陽性を保持する。エボラウイルス抗原を特定する抗原検出ＥＬＩＳＡ試験が、使用できる。エボラウイルス感染の診断を確認するために使用される他の方法は、エボラ出血熱で死亡した患者から採取したホルマリンで固定した死後皮膚上で行われた免疫組織化学的試験を含む。
本発明の抗体を用いて診断され得る例示的な障害は、エボラウイルス疾患及びエボラウイルス感染を含む。
ある特定の実施形態では、標識された抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンド等の部分が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な標識としては、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、蛍光光団、例えば、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化する酵素（ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはミクロペルオキシダーゼ等）とカップリングした複素環オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定フリーラジカル等が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の薬学的製剤が、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と凍結乾燥製剤または水溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、それらとしては、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸及びメチオニン；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖、二糖、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０等のある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法が、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤が、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載のものが挙げられ、後者の製剤にはヒスチジン−酢酸緩衝液が含まれる。
本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症の必要に応じて、１つを上回る活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。例えば、別の抗エボラウイルス抗体（例えば、５Ｄ２、５Ｅ６、６Ｄ３、６Ｄ８、７Ｃ９、７Ｇ４、１Ｈ３、１０Ｃ８、１２Ｂ５、もしくは１３Ｆ６）、抗ウイルス剤（例えば、アダマンチン抗ウイルス剤、抗ウイルスインターフェロン、ケモカイン受容体拮抗薬、インテグラーゼストランド転移阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、ＮＮＲＴＩ、プロテアーゼ阻害剤、プリンヌクレオシド、またはヌクレオシド逆転写酵素阻害剤）等をさらに提供することは、望ましいことであり得る。かかる活性成分は、好適には、意図される目的に有効な量で、組み合わせで存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
徐放性調製物を調製してもよい。持続放出調製物の好適な例としては、本抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌のものである。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成され得る。
Ｇ．治療法及び組成物
本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体のいずれも、治療方法において使用され得る。
一態様では、医薬品として使用するための抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。さらなる態様では、エボラウイルス疾患または感染を治療するのに用いるために抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。ある特定の実施形態では、治療の方法で用いるために抗エボラウイルス糖タンパク質抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、エボラウイルス疾患または感染を有する個体を治療する方法において使用するための抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を提供し、本方法は、個体に、有効量の１つ以上の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を投与することを含む。あるそのような実施形態では、本方法は、個体に、表１に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体（ｈ１３Ｃ６ａ、ｈ１３Ｃ６ｂ、ｈ１３Ｃ６ｃ、ｈ１３Ｃ６ｄ、ｈ１３Ｃ６ｅ、ｈ１３Ｃ６ｆ、ｈ１３Ｃ６ｇ、ｈ１３Ｃ６ｈ、ｈ１３Ｃ６ｉ、ｈ１３Ｃ６ｊ、ｈ１３Ｃ６ｋ、またはｈ１３Ｃ６ｌ）を投与することを含む。別のそのような実施形態では、本方法は、個体に、表２に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体（ｈ２Ｇ４ａ、ｈ２Ｇ４ｂ、ｈ２Ｇ４ｃ、ｈ２Ｇ４ｄ、ｈ２Ｇ４ｅ、ｈ２Ｇ４ｆ、ｈ２Ｇ４ｇ、ｈ２Ｇ４ｈ、ｈ２Ｇ４ｉ、ｈ２Ｇ４ｊ、ｈ２Ｇ４ｋ、ｈ２Ｇ４ｌ、ｈ２Ｇ４ｍ、ｈ２Ｇ４ｎ、ｈ２Ｇ４ｏ、ｈ２Ｇ４ｐ、ｈ２Ｇ４ｑ、ｈ２Ｇ４ｒ、ｈ２Ｇ４ｓ、またはｈ２Ｇ４ｔ）を投与することを含む。別のそのような実施形態では、本方法は、個体に、表３に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体（ｈ４Ｇ７ｂ、ｈ４Ｇ７ｃ、ｈ４Ｇ７ｄ、ｈ４Ｇ７ｅ、ｈ４Ｇ７ｆ、ｈ４Ｇ７ｇ、ｈ４Ｇ７ｈ、ｈ４Ｇ７ｉ、ｈ４Ｇ７ｊ、ｈ４Ｇ７ｋ、ｈ４Ｇ７ｌ、ｈ４Ｇ７ｍ、ｈ４Ｇ７ｎ、ｈ４Ｇ７ｏ、またはｈ４Ｇ７ｐ）を投与することを含む。さらに他の実施形態では、本方法は、個体に、表１に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体、表２に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体、表３に記載される、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体を投与することを含む。特定の実施形態では、本方法は、個体に、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体ｈ１３Ｃ６ｉ、有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体ｈ２Ｇ４ｎ、及び有効量の抗エボラウイルス糖タンパク質抗体ｈ４Ｇ７ｂを投与することを含む。別のかかる実施形態では、本方法は、個体に、例えば、以下に記載されるような有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を投与することをさらに含む。上述の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
さらなる態様では、本発明は、例えば、上述の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体のうちのいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体のうちのいずれか及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗エボラウイルス糖タンパク質抗体のうちのいずれかと、例えば、以下に記載される少なくとも１つのさらなる治療剤と、を含む。
本発明の抗体は、療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つのさらなる治療剤と同時投与されてもよい。ある特定の実施形態では、さらなる治療剤としては、ｃＡｄ３−ＥＢＯＺ、ｒＶＳＶ−ＥＢＯＶ、ＶＲＣ−ＥＢＯＤＮＡ０２３−００−ＶＰ、ＶＲＣ−ＭＡＲＤＮＡ０２５−００−ＶＰ、ＴＫＭ−Ｅｂｏｌａ、ＢＣＸ４４３０、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー、ファビピラビル、及びブリンシドフォビルが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態では、予防的治療及び／または治療的治療は、本発明の抗体及びさらなる治療剤の投与に加えて支持療法を含み得る。支持療法の例としては、血管内容量の減少の予防、深刻な電解質異常の修正、ショックの合併症の回避、流体及び電解質置換、呼吸補助、輸血、解熱剤、痛みに対処する鎮痛剤、吐き気及び嘔吐に対処する制吐剤、下痢に対処する腸運動抑制剤の投与、透析、または全腎代償療法が挙げられるが、これらに限定されない。
かかる併用療法には、組み合わせ投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与が含まれ、別個の投与の場合、本発明の抗体または免疫コンジュゲートの投与は、さらなる治療剤（複数可）の投与の前、それと同時、及び／またはその後に行うことができる。一実施形態では、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の投与及びさらなる治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１週間、２週間、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。
本発明の抗体（及び任意のさらなる治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路によるもの、例えば、投与が短時間であるか、または慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内注射または皮下注射等の注射によるものであり得る。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、及び投与されるだろう。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因を含む。抗体は必然的にではなく任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に左右される。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は好適に、１回で、または一連の治療にわたって患者に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、１回以上の別個の投与によって、または連続注入によって、約１μｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者に投与するための初回候補投薬量となり得る。典型的な１日用量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜約１００〜１５０ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上の範囲に及び得る。病態に応じて数日間以上にわたって反復投与では、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体の例示的な投薬量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。それ故に、約１．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、または１５０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の投薬量が、患者に投与されてもよい。そのような用量は、断続的に、例えば、毎日、２日毎、３日毎のように投与されてもよい。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。投与量はまた、例えば、２００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１２００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１８００ｍｇ、２０００ｍｇ、２２００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２８００ｍｇ、３０００ｍｇ、３２００ｍｇ、３４００ｍｇ、３６００ｍｇ、５，０００ｍｇ、６，４００ｍｇ、８，４００ｍｇ、１０，４００ｍｇ等のような固定用量であり得る。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫複合体を使用して行われ得ることが理解される。
Ｈ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体によって、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物をその中に収容した第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器を含み得る。本発明のこの実施形態の製品は、組成物を使用して特定の病態を治療することができることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
上記の製品のうちのいずれかは、抗エボラウイルス糖タンパク質抗体の代わりに、またはそれに加えて本発明の免疫複合体を含んでもよいことが理解される。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供される概要を仮定して、種々の他の実施形態が実践され得ることが理解される。
試薬
タバコ植物において産生されたＺＭａｐｐキメラモノクローナル抗体ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、及びｃ４Ｇ７を、Ｌａｒｒｙ Ｚｅｉｔｌｉｎ（Ｍａｐｐ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって供給した。
実施例１：ヒト化抗ＥＢＯＶキメラモノクローナル抗体ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、及びｃ４Ｇ７
３つのキメラモノクローナル抗ＥＢＯＶ抗体ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、及びｃ４Ｇ７を、下述のようにヒト化した。１３Ｃ６をカッパ１／ＶＨ２にヒト化し、２Ｇ４をカッパ１／ＶＨ３にヒト化し、４Ｇ７をカッパ１／ＶＨ１にヒト化した。キメラ抗ＥＢＯＶ抗体ｃ１３Ｃ６、ｃ２Ｇ４、及びｃ４Ｇ７のそれぞれの可変領域アミノ酸配列（米国特許第８，５１３，３９１号及び米国特許第７，３３５，３５６号から得られた）を、重鎖及び軽鎖の両方に対して最も近いヒト生殖細胞系配列に整列させた。超可変領域を、軽鎖及び重鎖受容体フレームワークに操作して、１つ以上のマウスバーニア位置の様々な組み合わせを含むさらなる変異体とともにヒト化ＣＤＲグラフトを作製した。３つの抗ＥＢＯＶモノクローナル抗体の様々なヒト化バージョンのアミノ酸配列に対応するヒト化核酸構築物を、利用可能、かつ当業者に公知である標準的な遺伝子合成法を用いた遺伝子合成によって産生した。
実施例２：ヒト化抗ＥＢＯＶ ｈ１３Ｃ６モノクローナル抗体
モノクローナル抗体１３Ｃ６の１２個のヒト化変異体を、実施例１において上述の方法を用いて設計した。モノクローナル抗体１３Ｃ６のヒト化変異体及びそれらの関連指示を、ＶＨ及びＶＬの配列とともに上の表１に示し、表５において以下に示す。
Figure 2018520658
発現、親和性、活性、及びＦｃγＲＩＩＩａ結合を比較するために、モノクローナル抗体１３Ｃ６の１２個のヒト化変異体のそれぞれは、２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、及びＦＵＴ８ＫＯ ＣＨＯ細胞におけるＦａｂ断片及び完全長ＩｇＧ（ＦＬ）抗体として発現させた。ＦＵＴ８ＫＯ ＣＨＯ細胞は、発現タンパク質（すなわち、非フコシル化タンパク質）に対するフコースの付加をもたらさないＦＵＴ８遺伝子の欠失を含有する。小規模（３０ｍｌ）の発現実験を、各モノクローナル抗体変異体に対して行った。
発現したモノクローナル抗体のそれぞれを、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，１７−５４３８）を用いて親和性クロマトグラフィーによって精製した。溶出材料は、１０ｍＭ ヒスチジン、２４０ｍＭ スクロース、及び０．０１％ ｔｗｅｅｎ ２０を含有する緩衝液に交換した緩衝液であった。
モノクローナル抗体１３Ｃ６のヒト化変異体を、十分に発現し、分析的ＨＰＬＣ−ＳＥＣによって、約１．３ｍｇ／３０ｍｌの培養物及び９７．２％ モノマーの平均収率を有した。
２９３Ｔ細胞、ＣＨＯ細胞、またはＦＵＴ８ＫＯ ＣＨＯ細胞において産生したモノクローナル抗体１３Ｃ６（ＦａｂまたはＦＬ）のヒト化変異体のそれぞれを、これまでに公開された方法に従ってＥＬＩＳＡによるバキュロウイルス粒子に対する非特異的結合について試験した（Ｈｏｔｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．（２０１２） ＭＡｂｓ．４：７５３−７６０）。モノクローナル抗体１３Ｃ６の全てのヒト化変異体は、このアッセイにおいてバキュロウイルス粒子に対する非常に低い非特異的結合を示した。
モノクローナル抗体１３Ｃ６の各ヒト化変異体に対するＥＢＯＶ抗原への結合親和性を、以下の通りにＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を用いて決定した。組み換えＥＢＯＶ ＧＰｄＴＭ（組み換えＥＢＯＶ ＧＰｄＴＭ，ＩＢＴ Ｂｉｏｓｅｒｖｉｃｅｓ，カタログ番号０５０１−０１５、ロット：１４１１００３）を、低密度（２００ＲＵ）、中密度（６００ＲＵ）、及び高密度（２０００ＲＵ）で、ＢｉａｃｏｒｅシリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に固定した。４．１１〜３３３ｎＭの範囲に及ぶ、濃度系列の抗ＥＢＯＶモノクローナル抗体を、チップ上に流動させた。各ヒト化抗ＥＢＯＶ モノクローナル抗体変異体の相互作用を、固定化抗原の完全性を保つために再生を最小限した単一のサイクル動力学によって分析した。３０μｌ／分の流量を使用して、アッセイの各サイクルに対して５分間解離した。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングを用いて１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを、動力学的分析に適用した。初期親和性を、ＦＵＴ８ＫＯに発現した変異体に対して決定した。表６は、ヒト化１３Ｃ６抗体変異体の初期特徴及びＦＵＴ８ＫＯに発現した抗体変異体に対するＢｉａｃｏｒｅ親和性の要約を提供する。
Figure 2018520658
最高親和性抗体変異体（すなわち、ｈ１３Ｃ６ａ、ｈ１３Ｃ６ｅ、及びｈ１３Ｃ６ｉ）を、抗体変異体の親和性をＩＢＴ Ｂｉｏｓｅｒｖｉｃｅｓから市販のキメラｃ１３Ｃ６と比較する、上述のＢｉａｃｏｒｅによって再アッセイした。表７及び表８は、低密度の組み換えＥＢＯＶ ＧＰ及び高密度の組み換えＥＢＯＶ ＧＰのそれぞれに、ＣＨＯまたはＦＵＴ８ＫＯにおいて発現したｈｕ１３Ｃ６ａ、ｈｕ１３Ｃ６ｅ、及びｈｕ１３Ｃ６ｉに対するＢｉａｃｏｒｅ親和性を提供する。
Figure 2018520658
Figure 2018520658
ヒト化１３Ｃ６変異体ｈ１３Ｃ６ｉ及びヒト化変異体ｈ１３Ｃ６ａを、良好な結合剤として特定した。さらなるＢｉａｃｏｒｅ結合アッセイを行って、組み換えＦｃγＲＩＩＩａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号４３２５−ＦＣ−０５０）への結合を評価した。ＦＵＴ８ＫＯ細胞における発現は、表９に示される、ＣＨＯ細胞を発現した材料と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）の結合を約３倍改善した。
Figure 2018520658
ヒト化変異体ｈ１３Ｃ６ｉに対するさらなるインビトロ分析を、表１０に要約する。
Figure 2018520658
実施例３：ヒト化抗ＥＢＯＶ ｈ２Ｇ４モノクローナル抗体
モノクローナル抗体２Ｇ４の２０個のヒト化変異体を設計し、１６個のヒト化変異体を、実施例１において上述の方法を用いて作製した。モノクローナル抗体２Ｇ４のヒト化変異体及びそれらの関連指示を、ＶＨ及びＶＬの配列とともに上の表２に示し、表１１において以下に示す。
Figure 2018520658
＊変異体は依然として作製せず
１６個のヒト化２Ｇ４変異体抗体は、小規模の３０ｍｌで２９３Ｔ細胞において完全長ＩｇＧとして発現させ、抗原結合を試験した。初期親和性測定を、ヒト化１３Ｃ６変異体抗体について上述のＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を用いて行った。ヒト化２Ｇ４変異体抗体について、１３Ｃ６について記載されたものよりも高い濃度系列が、２００〜５００ｎＭの範囲内のキメラ２Ｇ４バージョンについて報告された親和性に基づいてＫｄ親和性を決定するために必要であった。適用した濃度範囲は、１．８μＭ〜２２．２ｎＭであった。初期親和性測定の結果を表１２に提供する。
Figure 2018520658
ヒト化候補ｈ２Ｇ４ｎを、高親和性及び最も明白なＢＶ ＥＬＩＳＡスコアを有することに基づいてアッセイされたヒト化２Ｇ４変異体抗体の全てから特定した。この候補ｈ２Ｇ４ｎを、さらなる精製ステップにより、大規模に発現させ、組み換え抗原への結合について再アッセイした。タバコ植物において産生されたキメラ材料を比較するために、結合アッセイを行った。空のフローセルへの高い非特異的結合のため、恐らくは、キメラ調製物中の高い凝集含量の結果のため、タバコにより産生したキメラ２Ｇ４抗体については、有意な動力学的データが決定されなかった。キメラ２Ｇ４抗体について公開された親和性値を、比較のために表１２及び１３に含む。表１３は、結合アッセイの結果を提供する。表１３に見られるように、２Ｇ４については、小規模な自社キメラ（２９３Ｔ）は、公開された親和性よりも約３．４倍良好であった。小規模なヒト化２Ｇ４Ｎ（２９３Ｔ）は、同様の親和性を有した。大規模なプールした材料、ＰＵＲ ７８０３２は、公開された親和性よりも約７倍良好であり、ＳＥＣプールは、約９倍良好であった。
Figure 2018520658
実施例４：ヒト化抗ＥＢＯＶ ｈ４Ｇ７モノクローナル抗体
モノクローナル抗体４Ｇ７の１５個のヒト化変異体を設計し、実施例１において上述の方法を用いて作製した。モノクローナル抗体４Ｇ７のヒト化変異体及びそれらの関連指示を、ＶＨ及びＶＬの配列とともに上の表３に示し、表１４において以下に示す。
Figure 2018520658
１５個のヒト化４Ｇ７変異体抗体は、小規模の３０ｍｌで２９３Ｔ細胞において完全長ＩｇＧとして発現させ、抗原結合を試験した。初期親和性測定を、ヒト化１３Ｃ６変異体抗体について上述のＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を用いて行った。ヒト化４Ｇ７変異体抗体について、１３Ｃ６について記載されたものよりも高い濃度系列が、２００〜５００ｎＭの範囲内のキメラ４Ｇ７バージョンについて報告された親和性に基づいてＫｄ親和性を決定するために必要であった。適用した濃度範囲は、１．８μＭ〜２２．２ｎＭであった。初期親和性測定の結果を表１５に提供する。
Figure 2018520658
ヒト化候補、ｈ４Ｇ７ｂを、高親和性及び最も明白なＢＶ ＥＬＩＳＡスコアを有することに基づいてアッセイされたヒト化４Ｇ７変異体抗体の全てから特定した。この候補ｈ４Ｇ７ｂを、さらなる精製ステップにより、大規模に発現させ、組み換え抗原への結合について再アッセイした。タバコ植物において産生されたキメラ材料を比較するために、結合アッセイを行った。空のフローセルへの高い非特異的結合のため、恐らくは、キメラ調製物中の高い凝集含量の結果のため、タバコにより産生したキメラ４Ｇ７抗体については、有意な動力学的データが決定されなかった。キメラ４Ｇ７抗体について公開された親和性値を、比較のために表１５及び１６に含む。表１６は、結合アッセイの結果を提供する。表１３に見られるように、４Ｇ７については、小規模な自社キメラ（２９３Ｔ）は、公開された親和性よりもいくらか良好であるように思われた。小規模なヒト化４Ｇ７ｂ（２９３Ｔ）は、同様の親和性を有した。大規模なプールした４Ｇ７ｂ ＰＵＲ ７８０３２は、約１．５倍良好であった。
Figure 2018520658
前述の発明が明確な理解のために例示説明及び例によってある程度詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。

Claims (54)

  1. エボラウイルス糖タンパク質に結合する、単離されたヒト化抗体。
  2. 前記抗体が、配列番号９１のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記抗体が、配列番号９２のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
  4. 前記抗体が、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  5. 前記抗体が、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  6. 前記抗体が、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  7. 前記抗体が、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号１４、１６、１８、及び２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  8. 前記抗体が、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３、５、及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  9. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号１４、１６、１８、及び２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号３、５、及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  10. 前記抗体が、重鎖可変領域を含み、前記重鎖が、配列番号１５、１７、１９、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  11. 前記抗体が、軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号４、６、及び８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  12. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号１５、１７、１９、及び２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号４、６、及び８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  13. 前記抗体が、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  14. 前記抗体が、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  15. 前記抗体が、（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  16. 前記抗体が、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号４２、４４、４６、及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  17. 前記抗体が、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１、３３、及び３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  18. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号４２、４４、４６、及び４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２７、２９、３１、３３、及び３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  19. 前記抗体が、重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号４３、４５、４７、及び４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  20. 前記抗体が、軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号２８、３０、３２、３４、及び３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  21. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号４３、４５、４７、及び４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２８、３０、３２、３４、及び３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  22. 前記抗体が、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  23. 前記抗体が、（ａ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  24. 前記抗体が、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗体。
  25. 前記抗体が、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号７０、７２、及び７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  26. 前記抗体が、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５５、５７、５９、６１、及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  27. 前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号７０、７２、及び７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５５、５７、５９、６１、及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  28. 前記抗体が、重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７１、７３、及び７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  29. 前記抗体が、軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号５６、５８、６０、６２、及び６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  30. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号７１、７３、及び７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号５６、５８、６０、６２、及び６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  31. 前記抗体が、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  32. 前記抗体が、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  33. 前記抗体が、（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列、または（ｃ）（ａ）と同様の重鎖可変領域アミノ酸配列領域及び（ｂ）と同様の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  34. 前記抗体が、配列番号７９〜９０からなる群から選択される配列を含むエボラウイルス糖タンパク質に結合する、請求項１に記載の抗体。
  35. 抗体断片である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
  36. 完全長ＩｇＧ抗体である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
  37. 前記抗体が、非フコシル化抗体である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
  38. 請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離された核酸分子。
  39. 請求項３８に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
  40. 前記宿主細胞が、非フコシル化抗体を産生することができる宿主細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。
  41. 前記宿主細胞が、非フコシル化抗体を産生することができる哺乳動物宿主細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。
  42. 前記宿主細胞が、発現タンパク質に対するフコースの付加の減少をもたらすか、またはそれに対するフコースの付加をもたらさない、ＦＵＴ８遺伝子における欠失を有する哺乳動物宿主細胞である、請求項４０に記載の宿主細胞。
  43. 請求項３９、４０、４１、または４２に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
  44. 前記方法が、非フコシル化抗体を産生しない宿主細胞における前記抗体の産生に対して、抗体凝集の低下をもたらす、請求項４３に記載の方法。
  45. 請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤と、を含む、免疫複合体。
  46. 請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体、及び／または請求項４５に記載の免疫複合体、ならびに薬学的に許容される担体もしくは希釈剤を含む、薬学的製剤。
  47. さらなる治療剤をさらに含む、請求項４６に記載の薬学的製剤。
  48. 前記さらなる治療剤が、別の抗エボラワクチン抗体、抗ウイルス剤、または抗エボラワクチンである、請求項４７に記載の薬学的製剤。
  49. 医薬品として使用するための請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体。
  50. エボラウイルス感染の治療に使用するための請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体。
  51. エボラウイルス感染を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体の使用。
  52. エボラウイルス感染を有する個体を治療する方法であって、前記個体に、有効量の請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体または請求項４５に記載の免疫複合体を投与することを含む、方法。
  53. 前記個体に、さらなる治療剤を投与することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記さらなる治療剤が、別の抗エボラワクチン抗体、抗ウイルス剤、または抗エボラワクチンである、請求項５３に記載の方法。
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