KR20200035966A - 인간 cd137에 결합하는 작동자 항체 및 이의 용도 - Google Patents
인간 cd137에 결합하는 작동자 항체 및 이의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200035966A KR20200035966A KR1020207003970A KR20207003970A KR20200035966A KR 20200035966 A KR20200035966 A KR 20200035966A KR 1020207003970 A KR1020207003970 A KR 1020207003970A KR 20207003970 A KR20207003970 A KR 20207003970A KR 20200035966 A KR20200035966 A KR 20200035966A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- seq
- nos
- antigen
- binding portion
- antibody
- Prior art date
Links
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 title claims abstract description 455
- 102000050327 human TNFRSF9 Human genes 0.000 title claims description 307
- 239000012636 effector Substances 0.000 title description 9
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 535
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 534
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 500
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 500
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 497
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims abstract description 151
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 137
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 129
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 56
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 274
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 246
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims description 217
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 191
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 164
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 128
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 103
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 102
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 102
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 69
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 claims description 54
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 44
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 43
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 40
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 36
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 34
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 34
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 34
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 34
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 32
- 239000004235 Orange GGN Substances 0.000 claims description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 31
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 30
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 30
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 28
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 27
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 27
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 26
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 26
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 claims description 25
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 25
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 24
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 22
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 18
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 18
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 18
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 14
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 13
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 claims description 11
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 claims description 11
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 claims description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 11
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims description 10
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims description 10
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 10
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 10
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 8
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 7
- 101000638251 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 7
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 7
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 6
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 230000003915 cell function Effects 0.000 claims description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 claims description 3
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102000051144 human TNFSF9 Human genes 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 4
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 241
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 58
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 55
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 53
- 229940116741 CD137 agonist Drugs 0.000 description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 51
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 37
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 32
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 25
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 23
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 22
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 21
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 19
- 230000006870 function Effects 0.000 description 19
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 18
- 230000004044 response Effects 0.000 description 17
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 16
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 16
- 101100022187 Caenorhabditis elegans mab-10 gene Proteins 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 13
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 12
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 12
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 11
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 11
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 11
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 11
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 10
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 10
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 9
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 8
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 8
- 101100075830 Caenorhabditis elegans mab-5 gene Proteins 0.000 description 7
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 6
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 6
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 6
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 6
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 6
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 4
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 4
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 4
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 3
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 3
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 3
- 238000010378 bimolecular fluorescence complementation Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 3
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 2
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 2
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022056 Serum response factor Human genes 0.000 description 2
- 101710165434 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 238000000225 bioluminescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- -1 coatings Substances 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002060 fluorescence correlation spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002376 fluorescence recovery after photobleaching Methods 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 2
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000000111 isothermal titration calorimetry Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 2
- 231100000847 severe hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010002412 Angiocentric lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 101100044298 Drosophila melanogaster fand gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000679903 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Proteins 0.000 description 1
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 description 1
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 201000003791 MALT lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000011769 Member 9 Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Human genes 0.000 description 1
- 108010037274 Member 9 Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010029461 Nodal marginal zone B-cell lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101100335198 Pneumocystis carinii fol1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010065857 Primary Effusion Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010036711 Primary mediastinal large B-cell lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000004283 Shwachman-Diamond syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000004346 Smoldering Multiple Myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000000277 Splenic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 description 1
- 102100040112 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Human genes 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100022203 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Human genes 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000016025 Waldenstroem macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 206010002449 angioimmunoblastic T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N carboxyglutamic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 208000018554 digestive system carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000198 fluorescence anisotropy Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000018711 interleukin-13 production Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 208000026876 intravascular large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 201000010453 lymph node cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006116 lymphomatoid granulomatosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000003826 marginal zone b cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O methylsulfide anion Chemical compound [SH2+]C LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000004980 monocyte derived macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000010721 smoldering plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002471 spleen cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010062113 splenic marginal zone lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003158 yeast two-hybrid assay Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001116—Receptors for cytokines
- A61K39/001117—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR] or CD30
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 개시는, 특히 CD137의 에피토프에 결합하여 CD137을 효능화하는 화합물(예: 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 및 암의 하나 이상의 증상을 치료 또는 경감하기 위한 방법에서 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.
Description
관련 출원
본 출원은 2017년 7월 11일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/531,259호; 2017년 7월 11일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/531,190호; 2017년 10월 4일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/568,231호; 2017년 10월 26일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/577,257호; 및 2017년 10월 26일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/577,259호의 이익을 주장하며, 상기 언급된 출원의 전체 내용은 참조로서 본원에 통합된다.
면역 체계가 종양 형성 및 진행에 대한 상당한 장벽으로서 작용한다는 것을 시사하는 일련의 증거가 최근 늘어나고 있다. 항종양 효능 또는 활성을 가진 자연 발생 T 세포가 암 환자 내에 존재한다는 원리는 종양학에 있어서 면역요법적 접근법의 개발에 대한 근거가 되어왔다. T 세포, 대식 세포 및 자연 살해 세포와 같은 면역 세포는 항종양 활성을 나타낼 수 있고 악성 종양의 발생 및 성장을 효과적으로 조절할 수 있다. 종양 특이적 항원 또는 종양 관련 항원은 악성 종양을 인식하여 제거하도록 면역 세포를 유도할 수 있다 (Chen & Mellman, (2013) Immunity 39(1):1-10 참조). 종양 특이적 면역 반응의 존재에도 불구하고, 악성 종양은 종종 다양한 면역조절 메커니즘을 통해 면역 공격을 모면하거나 회피하여 종양의 발생과 진행을 조절할 수 없게 한다(Motz & Coukos, (2013) Immunity 39(1):61-730 참조). 실제로, 암의 새로운 특징은 이러한 면역조절 메커니즘을 이용해 항종양 면역 반응을 무력화시키는 것이며, 이는 통해 종양은 면역학적 살해를 회피하고 이로부터 탈출하게 된다(Hanahan 및 Weinberg (2011)) Cell 144(5):646-674 참조).
암의 면역 요법에서의 신규한 접근법은 이러한 면역 회피 및 탈출 메커니즘에 대항하는 것 및 종양을 거부하도록 내인성 면역 체계를 유도하는 것을 포함한다. CD137(대안적으로은 "종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 9"(TNFRSF9)인 4-1BB로도 알려져 있고, "림프구 유도형"(ILA)임)은 종양 괴사 인자 수퍼패밀리에 속하는 막관통 공동 자극 수용체 단백질이다. CD137은 TCR 활성화로 유도되는 T 세포 공동 자극 수용체이다(Nam 등의 (2005) Curr Cancer Drug Target 5:357-363; Watts 등의 (2005) Annu Rev Immunol 23:23-68 참조). CD137은 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 발현될 뿐만 아니라, CD4+CD25+ 조절 T 세포, 활성화 자연 살해(NK) 세포 및 NK-T 세포, 단핵구, 호중구 및 수지상 세포에서도 발현된다.
생리학적 조건 하에서, CD137은 B 세포, 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포를 포함하는 항원 제시 세포에 존재하는 작용제 막 분자인 CD137 리간드(CD137L)에 의해 연결된다(Watt 등, (2005) Annu Rev Immunol 23:23-68 참조). CD137이 이의 리간드와 상호 작용하면, CD137은 TCR-유도 T 세포 증식을 증가시키고, 사이토카인 생산을 증가시키고, 기능적 성숙을 증가시키며, CD8+ T 세포의 생존을 연장시킨다. 면역 체계가 종양을 공격할 수 있게 함에 있어서, 다양한 작용제(예: 작용체 항체, 재조합 CD137L 단백질, 및 CD137-특이적 앱타머)를 사용하는 CD137 공동 자극의 효능은 많은 모델에서 문서화되었다(Dharmadhikari 등의 (2016) Oncoimmunology 5(4):e1113367 및 이에 통합된 참조 문헌 참조). 작용성 CD137 항체(우렐루맙, BMS-663513; Bristol-Myers Squibb)의 임상 평가에 대한 최근의 보고서에는 항체 투약량과 상관되는 중증 간독성(아미노 전이효소 증가(transaminitis))의 징후를 포함하여, 인간 대상체에서 치료와 관련하여 관찰된 이상 사례들이 문서화되어 있다(Segal 등의 (2016) Clin Cancer Res 23(8):1929-1936 참조). 대조적으로, 항PD-1 항체(펨브롤리주맙)와 병용 시험한 상이한 작용성 CD137 항체(우토밀루맙, PF-05082566; Pfizer)는, 임의의 용량 제한 독성(dose-limiting toxicity)을 초래하지는 않았지만, 항PD-1 항체 단독 요법과 유사한 결과를 보였다(Tolcher, A. 등의 (2017) Clin Cancer Res 23(18): 5349-5357 참조). 이러한 결과는, CD137 작용제로 치료할 수 있는, 암을 포함한 다양한 질환 및 병태를 가진 환자들을 대상으로, CD137 작용제에 결합하면서, 안전하고 효과적인 치료제를 개발하기에 충분한 특성을 나타내는 신규한 작용성 항체에 대한 충족되지 않는 요구가 지속적으로 존재한다는 것을 강조한다.
본 개시는, 동물에서 보호 항종양 면역성을 나타내는 신규한 작용제 항CD137 항체의 발견에 적어도 부분적으로 기초한다. 특히, 본원에 기술된 항체는 다양한 종양 유형에 대해 효과적이고, 넓은 용량 범위에 걸쳐 효과적이다. 또한, 실시예에서 예시된 바와 같이, 본원에 기술된 항체는 매우 큰 종양에 대해 치료적으로 효과가 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 작용제 항CD137 항체로 종양을 가진 마우스를 치료한 결과 1,800 mm3만큼 큰 종양의 완전한 퇴행을 유도하였다. 도 15에 제시된 바와 같이, 이러한 마우스의 치료도 보호 면역성을 유도하였다. 그리고, 관찰된 바와 일관되게, 효능은 종양 미세환경에서의 긍정적인 면역 표현형 변화, 예컨대 조절 T 세포의 감소 및 T 세포 집단의 기능 소실을 수반하는 면역 세포 침윤의 증가였다(예: 도 22a~22d 참조).
전술한 바와 같이, CD137의 작용성은 인간에서 간독성과 관련된 사망을 포함하여 특정 이상 사례와 연관되어왔다(예: Segal 등의 (2017) Clin Cancer Res 23(8): 1929-1935.참조). 작용제 항CD137 항체(예: 3H3 항체)를 사용한 치료로 인한 유사한 독성은 동물 모델에서도 관찰되었다(예: Bartkowiak 등의 (2018) Clin Cancer Res 24(5):1138-1151 참조). 그러나, 본원에 기술된 작용제 항CD137 항체는, 예를 들어, 간 효소의 혈장 수준(예를 들어, 알라닌 아미노기 전이 효소(ALT)) 및 면역 세포 침윤에 의해 결정했을 때, 간에 최소한의 영향을 미친다. 예를 들어, 상기 항체로 치료한 마우스에서는 간이나 비장 내에서 면역 세포 침윤이 증가했다는 증거가 없었다. 따라서, 본원에 기술된 항체는 매우 효과적일 뿐만 아니라, CD137 작용제와 연관된 특정 독성을 줄이기도 한다.
본 개시는 임의의 특정 이론이나 작용 메커니즘에 의해 구속되지 않지만, 본원에 기술된 항체의 우월한 치료 특성 및 독성-감소 특성은 이들의 친화도 및 이들이 결합하는 신규한 에피토프 중 하나 또는 둘 다로부터 부분적으로 유도되는 것으로 여겨진다. 즉, 본원에 기술된 항체는 다른 효능제 항CD137 항체의 에피토프와 구별되는 공통의 신규한 에피토프를 공유한다. 그리고, 실시예에서 예시된 바와 같이, 본원에 기술된 항체에 의한 이러한 에피토프의 결합은 CD137의 상이한 에피토프에 결합하는 작용제 항체와 비교해 차별화된 시험관 내 활성, 예컨대, 조절 T 세포 증식, CD8+ T 세포 및 대식 세포에 의한 사이토카인 생성, 및 세포 내 신호 전달 등을 일으킨다. 또한, 항체에 대한 친화도 범위("스윗 스팟")가 항종양 활성에 특히 최적이라는 것이 입증되었다. 예를 들어, 친화도가 중간인 항체는 친화도가 더 높거나 낮은 항체와 비교해 큰 종양에 대해 더 효과적인 것으로 나타났다.
전술한 바를 고려하면, 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 40 nM 내지 약 100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 양태에서, 인간 CD137에 대한 항CD137 항체의 친화도는 마우스 CD137에 대한 mAb10의 친화도보다 적어도 2배(예를 들어, 적어도 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배) 더 높다. 일부 양태에서, 항CD137 항체의 친화도는 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 250, 200, 175, 150, 125, 110 또는 100 nM 이하이다. 일부 양태에서, 인간 CD137에 대한 항CD137 항체의 친화도는 마우스 CD137에 대한 mAb10의 친화도보다 적어도 2배(예를 들어, 적어도 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배) 더 높지만, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 250, 200, 175, 150, 125, 110 또는 100 nM 이하이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132 중 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 모두)을 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132 내의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132의 전부 또는 일부에 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 K114를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, 및 K114를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126 및 I132를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114 및 P135를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 약 30 nM 내지 약 100 nM(예: 약 30 nM 내지 약 110 nM)의 친화도로 인간 CD137에 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 40~100 nM(예: 약 40 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, 및 K114를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126 및 I132를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114 및 P135를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM 내지 약 100 nM)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 인간 CD137은 서열번호 3의 아미노산 위치 111에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 서열번호 3의 아미노산 잔기 111~135 사이에 위치한 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산이다. 일부 양태에서, 에피토프는 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 미만의 아미노산이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, (서열번호 3의 아미노산 잔기 111~114에 상응하는) ELTK를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 N126, I132 및 P135를 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 비선형 에피토프이다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 서열번호 3의 잔기 K114의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 결합을 방해한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM, 30~95 nM, 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM, 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 인간 CD137의 세포외 도메인의 비리간드 결합 영역에 결합한다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 CD137과 CD137L 간의 상호 작용을 억제하지 않는다. 일부 양태에서, 비리간드 결합 영역은 시스테인 풍부 도메인(CRD) III 및 CRD IV에 걸쳐 있다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 CD137:CD137L 단량체의 삼량체 형성을 억제하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은:
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 인간 CD137의 세포외 도메인의 비리간드 결합 영역에 결합하며;
(iii) 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은:
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 인간 CD137과 인간 CD137 리간드 간의 상호 작용을 억제하지 않으며;
(iii) 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은: (i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, (ii) CD137:CD137L 단량체의 삼량체(즉, CD137:CD137L 삼량체:삼량체 복합체)의 형성을 억제하지 않는다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 (i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, (ii) 인간 CD137의 세포외 도메인의 비리간드 결합 영역에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 (i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, (ii) 인간 CD137과 CD137 리간드 간의 상호 작용을 억제하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 127)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 중쇄 CDR3의 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 감소를 초래한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하되, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나( X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임). 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 K114를 포함한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 E111, T113 및 K114를 포함한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 E11, T113, K114, N126 및 I132를 포함한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나( X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하며;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임). 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하며;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나( X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하며;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임). 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되,
(i) 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하며;
(iii) 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다
전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 ELTK(서열번호 3의 아미노산 잔기 111~114에 상응함)를 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 3의 잔기 ELTK(서열번호 3의 아미노산 잔기 111~114에 상응함) 및 서열번호 3의 잔기 N126, I132 및 P135를 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 에피토프는 비선형 에피토프이다. 일부 양태에서, 인간 CD137(서열번호 3)의 잔기 K114의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 결합을 방해한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 128)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분의 중쇄 CDR3의 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분의 중쇄 CDR3의 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 감소를 초래한다. 다른 양태에서, 알라닌을 제외한 임의의 잔기에 대한 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분의 중쇄 CDR3의 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 증가를 초래한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 약 45~nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM, 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 약 45 nM 내지 약 95 nM, 약 50 내지 약 90 nM, 약 55 내지 약 85 nM, 약 60 내지 약 80 nM, 약 65 내지 약 75 nM, 약 55 내지 약 75 nM, 약 40 내지 약 70 nM, 약 50 내지 약 80 nM, 또는 약 60 내지 약 90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하되, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(b) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 129 및 133의 각각; 및
(b) 서열번호 131 및 133의 각각.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 본원에 기술된 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD137 활성의 작용제이다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 본원에 기술된 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD137의 에피토프에 결합하기 위해 mAb1 또는 mAb1의 항원 결합 단편과 경쟁한다.
일부 양태에서, 본 개시는 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(b) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 70, 79 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(c) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 71, 80 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(d) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 72, 81 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(e) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 73, 82 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(f) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 83 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(g) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 75, 84 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(h) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 85 및 94에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(i) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 76, 86 및 95에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(j) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 77, 87 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(k) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 88 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(l) 서열번호 49, 57 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(m) 서열번호 49, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(n) 서열번호 49, 59 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(o) 서열번호 49, 60 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(p) 서열번호 50, 61 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(q) 서열번호 50, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(r) 서열번호 51, 62 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(s) 서열번호 52, 63 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(t) 서열번호 50, 64 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(u) 서열번호 50, 65 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(w) 서열번호 107, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(x) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 109, 110 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은, 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각; 및
(b) 서열번호 102 및 7의 각각.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 5 및 29의 각각;
(c) 서열번호 5 및 31의 각각;
(d) 서열번호 5 및 33의 각각;
(e) 서열번호 5 및 35의 각각;
(f) 서열번호 5 및 37의 각각;
(g) 서열번호 5 및 39의 각각;
(h) 서열번호 5 및 41의 각각;
(i) 서열번호 5 및 43의 각각;
(j) 서열번호 5 및 45의 각각;
(k) 서열번호 5 및 47의 각각;
(l) 서열번호 9 및 7의 각각;
(m) 서열번호 11 및 7의 각각;
(n) 서열번호 13 및 7의 각각;
(o) 서열번호 15 및 7의 각각;
(p) 서열번호 17 및 7의 각각;
(q) 서열번호 19 및 7의 각각;
(r) 서열번호 21 및 7의 각각;
(s) 서열번호 23 및 7의 각각;
(t) 서열번호 25 및 7의 각각;
(u) 서열번호 27 및 7의 각각;
(v) 서열번호 102 및 7의 각각;
(w) 서열번호 104 및 7의 각각; 및
(x) 서열번호 5 및 106의 각각.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 127)를 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래한다.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 127)를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합을 감소시킨다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 127)를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌을 제외한 임의의 잔기로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합을 감소시킨다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 양태에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 129 및 133의 각각; 및
(b) 서열번호 131 및 133의 각각.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 129 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 갖는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 131 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 갖는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다
전술한 양태 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 인간 CD137에 특이적으로 결합하여 이를 효능화한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 특성 중 적어도 하나 이상을 나타낸다:
(a) CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화함;
(b) CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화함;
(c) T 세포 활성화를 유도 또는 강화함;
(d) 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화함;
(e) T 세포 증식을 유도 또는 강화함;
(f) 면역 세포 사이토카인 생산을 유도 또는 강화함; 및
(g) 특성 (a)~(f)의 임의의 조합.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD137에 결합하는 기준 항체에 비해 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 특성 중 적어도 하나 이상을 나타낸다:
(a) 간 내 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(b) 간 내 T 세포 증식을 유도 또는 강화하지 않음;
(c) 종양 내 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(d) 종양 내 T 세포 증식을 유도 또는 강화하지 않음;
(e) 대식세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(f) 대식세포 분화를 유도 또는 강화하지 않음;
(g) 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 활성을 유도 또는 강화하지 않음; 및
(h) 특성 (a)~(g)의 임의의 조합. 일부 양태에서, 기준 항체는 우렐루맙이다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 T 세포 활성화를 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 세포독성 T 세포 반응을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유도하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유의미하게 유도하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 T 세포 증식을 유도하지만, 비장 및/또는 간에서는 T 세포 증식을 유의미하게 유도하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 침윤을 유도하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 침윤을 유의미하게 유도하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 T 세포 침윤을 유도하지만, 비장 및/또는 간에서는 T 세포 침윤을 유의미하게 유도하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분의 특성은 Fc 감마 수용체 결합에 의존하지 않는다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분의 특성은 Fc 감마 수용체 결합에 의해 강화되지 않는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 교차 경쟁한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)와 교차 경쟁한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 교차 경쟁한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 교차 경쟁한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)의 기능적 특성을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)의 기능적 특성을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)의 기능적 특성을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)의 기능적 특성을 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 적어도 동등한 KD 값을 갖는다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)와 적어도 동등한 KD 값을 갖는다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 적어도 동등한 KD 값을 갖는다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 적어도 동등한 KD 값을 갖는다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 CD137 및/또는 마우스 CD137과 교차 반응한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1 항체 또는 IgG4 항체이다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체는 야생형 IgG1 또는 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 단클론 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 Ser228에서 치환을 포함한다. 일부 측면에서, 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 치환 S228P를 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CD137의 에피토프에 결합하되, 항체가 결합된 에피토프를 포함하는 아미노산 잔기는 본원에 기술된 mAb1 항체의 파라토프를 포함하는 아미노산 잔기의 4 옹스트롬 내에 위치한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CD137의 에피토프에 결합하되, 항체가 결합된 에피토프의 돌연변이는 항체 및 항체 mAb1에 대한 결합을 억제하거나, 감소시키거나, 차단한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 완전한 인간 항체이거나 인간화 항체(즉, 완전한 인간 항체 또는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 부분)이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 약학적 조성물, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 제공한다.
다른 양태에서, 본 개시는 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄와 중쇄 둘 다를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 일부 양태에서, 핵산은 서열번호 5 및 7을 포함한다. 일부 양태에서, 핵산은 서열번호 102 및 7을 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기술된 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 기술된 발현 벡터로 형질 변환된 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생산하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건 하에서 본원에 기술된 세포를 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생산하기 위한 방법은 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, T 세포 활성화는 종양 미세환경에서 발생한다. 다른 양태에서, T 세포 활성화는 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 세포독성 T 세포 반응은 종양 미세환경에서 발생한다. 다른 양태에서, 세포독성 T 세포 반응은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα, IL-13, IFNγ, 또는 이들의 조합이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFNγTNFα 및 IL-13이다. 다른 양태에서, 사이토카인 생성은 종양 미세환경에서 발생한다. 또 다른 양태에서, 사이토카인 생성은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 증식을 유도 또는 강화하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, T 세포 증식은 종양 미세환경에서 발생한다. 다른 양태에서, T 세포 증식은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 종양 성장을 감소 또는 억제하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 장애를 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 암은 흑색종, 신경 교종, 신암, 유방암, 혈액암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 혈액암은 B 세포 림프종이다.
일부 양태에서, 본 개시는 항종양 기억 면역 반응을 유도하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 본원에 기술된 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 면역 세포의 종양 미세환경 내로의 침윤은 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후에 증가한다. 일부 양태에서, 면역 세포는 CD45를 발현한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, T 조절(Treg) 세포의 양은 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후에 종양 미세환경에서 감소한다. 일부 양태에서, Treg 세포는 CD4, FOXP-3 및 CD24를 발현한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, 대식 세포의 양은 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후에 종양 미세환경에서 감소한다. 일부 양태에서, 대식 세포는 CD45 및 CD11b를 발현한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, T 세포의 기능 소실은 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후에 감소된다. 일부 양태에서, T 세포 기능 소실 감소는 TIGIT, PD-1, LAG-3 또는 이들의 조합의 발현 감소를 포함한다. 일부 양태에서, T 세포 기능 소실은 TIGIT 및 PD-1의 발현 감소를 포함한다.
전술한 양태 중 어느 하나에서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합의 고갈은 항체 또는 항원 결합 부분의 효능을 감소시킨다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은:
(a) 생물학적 샘플을 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분과 접촉시키되, 항체 또는 항원 결합 부분은 검출 가능한 물질로 표지되는 단계; 및
(b) 인간 CD137에 결합된 항체 또는 항원 결합 부분을 검출하여 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 용기 및 패키지 삽입체를 포함하는 키트를 제공하며, 상기 용기는 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분, 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체, 또는 약학적 조성물을 포함하고; 상기 패키지 삽입체는 항체 또는 약학적 조성물의 투여를 위한 지침을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 용기 및 패키지 삽입체를 포함하는 키트를 제공하며, 상기 용기는 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 부분, 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체, 또는 약학적 조성물을 포함하고; 상기 패키지 삽입체는 항체 또는 약학적 조성물의 단독 투여 또는 다른 제제와의 병용 투여를 위한 지침을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137 이량체의 다량체와를 유도 또는 강화하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 사이토카인의 생성을 유도 또는 강화하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 증식을 유도 또는 강화하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 종양 성장의 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체에서 종양 성장의 감소 또는 억제를 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 다른 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 의해 매개된 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 장애의 치료를 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료를 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시는 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소 또는 억제를 위한 의약 제조를 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소 또는 억제를 위한 의약의 제조에, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 의약으로서 사용하기 위한, 본원에 기술된 바와 같은 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
도 1은 상기 부모 항CD137 항체 mAb1의 친화도 성숙된 클론의 결합 친화도의 분포를 도시하는 그래프를 제공한다.
도 2은 인간 또는 마우스 CD137에 대한 결합 친화도에 의해 측정했을 때, mAb1 CDRH3 알라닌 스캐닝의 결과를 보여주는 개략도를 제공한다.
도 3a는 인간 CD137의 아미노산 서열을 보여주며, mAb1, mAb4 또는 mAb5가 결합된 에피토프를 포함하는 잔기는 굵은 글씨체로 표시되어 있다.
도 3b는 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)에 의해 결정했을 때, 마우스 및 랫트 CD137의 세포외 도메인에 대한 mAb1의 동역학 결합 데이터를 도시한 그래프이다.
도 3c는 CD137L(회색으로 도시됨)에 결합된 인간 CD137 및 잔기 E111, T113, K114 및 P135(구체로 도시됨)의 x-선 결정 이미지를 제공한다.
도 3d는 상기 3량체를 형성함에 있어서 CD137L(회색으로 도시됨)에 결합된 인간 CD137 및 잔기 E111, T113, K114 및 P135(구체로 도시됨)의 x-선 결정 이미지를 제공한다.
도 4a는 항CD137 항체에 반응하여 CD44+ T 세포 상에서 TIGIT(상단) 또는 PD-1(하단)의 발현이 증가한 것을 도시하는 유세포 분석 데이터의 산포도를 제공한다.
도 4b는 항CD137 항체로 치료한 후 마우스의 비장에서 TIGIT(상단) 또는 PD-1(하단)을 발현하는 CD8+ CD44+ T 세포의 정량화를 도시한 그래프를 제공한다.
도 4c는 항CD137 항체로 치료한 후 마우스의 비장에서 CD8+ T 세포의 정량화를 비장당 CD45+ 세포의 백분율(좌측) 또는 세포 수의 백분율(우측)로서 도시한 그래프를 제공한다.
도 5a는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후 마우스에서 개별 CT26 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 5b는 도 5a에서 제공된 평균 종양 부피를 나타낸 그래프이다.
도 5c는 항CD137 항체로 치료한 후 종양을 가진 마우스의 전체 생존율을 나타낸 카플란-마이어 그래프이다.
도 5d는 종양원성 CT26 세포를 재접종한 마우스에서 종양 부피를 나타낸 그래프이다.
도 6a는 부모 및 친화도 성숙 항CD137 항체로 치료한 후 마우스에서 개별 CT26 종양의 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 6b는 도 6a에서 제공된 평균 종양 부피를 제공하는 그래프이다.
도 7은 표시된 투약양의 항CD137 항체로 치료한 후 비장 T 세포(상단) 및 종양 침윤 백혈구(하단) 대비 CD8+ 또는 CD4+ T 세포의 백분율을 나타낸 그래프를 제공한다.
도 8은 림프구 고갈 항체의 유무와 상관없이, 마우스를 mAb1로 치료했을 때 개별 종양 부피를 나타내는 그래프를 제공한다. CD4+ T 세포는 GK1.5에 의해 고갈되었고(중간 그래프), CD8+ T 세포는 YTS169.4에 의해 고갈되었고(오른쪽에서 2번째 그래프), NK 세포는 항아시알로-GM1 항체에 의해 고갈되었다(오른쪽 마지막 그래프).
도 9는 CT26 종양(결장 암종), EMT-6 종양(유방 암종), A20 종양(B 세포 림프종), 또는 MC38 종양(결장 암종)을 가졌고 mAb8 또는 이소형 대조군 항체로 치료한 마우스에서 개별 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 10a~10c는 마우스당 150 μg을 투여했을 때 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 10a에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 10b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 10c에 도시되어 있다.
도 11a~11c는 마우스당 20 μg을 투여했을 때 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 11a에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 11b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 11c에 도시되어 있다.
도 12는 CT26 종양을 가졌고 다양한 투약량의 mAb1(12.5, 25, 50, 100 또는 200 μg) 또는 이소형 대조군으로 치료한 마우스에서 개별 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 13a 및 도 13b는 mAab1의 항종양 효능에서 Fc 결합의 기여를 보여준다. 도 13a는 mAb1을 IgG4 이소형 또는 IgG4 아글리코실화된 이소형으로서 보여준다. 평균 종양 부피는 상단에 표시되어 있고 개별 종양 부피는 하단에 도시되어 있다. 도 13b는 mAb1을 IgG4 이소형 또는 IgG1 아글리코실화된 이소형으로서 보여준다. 평균 종양 부피는 상단에 표시되어 있고 개별 종양 부피는 하단에 도시되어 있다.
도 14a~14d는 치료를 받기 전에 큰 확립된 종양(500 mm3)을 가진 마우스에서 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 14a 및 14d에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 14b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 14c에 도시되어 있다.
도 15는 도 14a~14c에서 mAb1, mAb8 또는 이소형 대조군으로 이전에 치료하여 치유된 것으로 간주되는 마우스의 반대 쪽 옆구리에 CT26 세포를 재 접종한 후 보호적 항종양 면역성을 보여주는 카플란-마이어 생존율 그래프를 제공한다.
도 16a는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후 CD45+ 간 내 T 세포의 증식을 보여주는 유세포 분석 데이터의 산포도를 제공한다.
도 16b는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후, 간 내 CD8+ T 세포(좌측) 및 CD4+ T 세포(우측)의 정량화를 도시한 그래프를 제공한다.
도 17a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 비장의 T 세포 대비 CD3+, CD4+, 또는 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 17b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 간의 T 세포 대비 CD3+, CD4+, 또는 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 18a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 비장의 CD8+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 18b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 간의 CD8+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 19a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 비장의 CD4+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 19b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 간의 CD4+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 20a~20c는 다양한 투약량의 항CD137 항체 mAb1, mAb8 또는 3H3를 여러 번 투여한 것에 의한 생체 내 독성을 나타내는 그래프를 제공한다. 도 20a는 항CD137 항체의 투여 후 간에서 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다. 도 20b는 항CD137 항체가 투여된 마우스의 혈장에서 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 활성을 보여주는 그래프이다. 도 20c는 항CD137 항체가 투여된 마우스의 혈장 내 TNFα의 수준을 보여주는 그래프이다.
도 21은 도 20a~20c에서 설명된 바와 같이 mAb1, mAb8, 3H3 또는 이소형 대조군으로 치료한 마우스의 간을 헤마톡실린과 에오신(H&E)로 염색하여 절개한 대표적인 이미지를 제공한다. 화살표는 면역 세포의 침윤을 나타낸다.
도 22a~22d는 종양 미세환경에서 면역 세포 재프로그래밍을 보여주는 대표적인 FACS 도표를 제공한다. CT26 종양을 가진 마우스에게 mAb8 또는 이소형 대조군의 투약량을 여러 번 투여하였다(0, 3, 6 및 9일차). 도 22a는 CD45 발현에 기초한 전체 면역 세포 침윤을 보여준다. 도 22b는 FOXP-3 및 CD25 발현에 의해 측정한 Treg 세포의 감소를 보여준다. 도 22c는 PD-1 및 TIGIT 발현에 의해 측정한 T 세포 기능 소실의 감소를 보여준다. 도 22d는 F4/80 및 CD11b 발현에 의해 측정한 종양-관련 대식 세포의 감소를 보여준다.
도 23은 CT26 종양을 가진 마우스를 항CD137 항체 mAb1 및 3H3, 또는 이소형 대조군으로 치료한 다음, 해당 마우스의 비장에 대한 면역표현형 분석을 보여준다.
도 24는 OVA 자극 분석에서, 표시된 항CD137 항체로 자극했을 때 쥣과 T 세포에 의해 생성된 IL-2의 농도(pg/ml)를 보여주는 그래프이다. 아테졸리주맙(항PD-L1 항체)과 함께, 쥣과 항PD-1(RMP1-14)을 비교기로서 사용하였다.
도 25a 및 25b는 OVA 자극 분석에서, 표시된 항CD137 항체로 자극했을 때 CD25(25a) 또는 TIGIT(25b) 중 하나를 발현하는 쥣과 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다. 아테졸리주맙(항PD-L1 항체)과 함께, 쥣과 항PD-1(RMP1-14) 및 쥣과 항CD137(3H3)을 비교기로서 사용하였다.
도 26은 플레이트에 결합된 항CD137 항체와 함께 인큐베이션한 후 CD3+ T 세포에 의해 생성된 사이토카인(IL-2, TNFα, IL-13 및 IFNγ)의 정량화를 도시한 막대 그래프를 제공한다. 사이토카인 레벨은 항CD3 항체에 의한 베이스라인 활성화에 대한 배수 증가로서 도시되어 있다.
도 27a~27c는 항CD137 항체로 치료한 후 혼합된 림프구 반응물에서 IFNγ 생산의 투약량-반응을 도시한 그래프를 제공한다. 항PD1 항체(키트루다; Merck)를 대조군으로서 사용하였다.
도 28은 항CD137 항체 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 CD32를 발현하도록 조작된 CHO 세포(CHO-CD32 세포)와 함께 공동 배양한 인간 T 세포로부터 IFNγ의 생성을 보여주는 그래프이다.
도 29는 항CD137 항체 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 여부와 상관없이 CD32를 발현하도록 조작된 CHO 세포(CHO-CD32 세포)와 함께 공동 배양했을 때 Treg 세포의 증식을 보여주는 그래프이다.
도 30은 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5가 다양한 농도로 존재하는 가운데 NFκβ 및 SRF용 루시페라아제 리포터를 형질 도입한 CCL-119 세포에서 NFκβ 및 SRF의 신호 전달을 보여주는 그래프를 제공한다.
도 31은 항CD137 항체 mAb1, 3H3 또는 LOB12.3, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 TLR9 작용제 CpG로 자극한 골수 유래 마우스 대식 세포에 의한 IL-6, TNFα, 또는 IL-27의 유도를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 32는 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 LPS로 자극한 인간 단핵구 유래 대식 세포에 의한 TNFα의 유도를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 33은 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 PMA로 배양한 THP1 단핵구의 CD64 발현에 의해 결정했을 때 항CD137 항체가 대식 세포 분화에 미치는 효과를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 34a~34c는 인간 PBMC와 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군을 투여한 면역적격성 마우스에서 hCD45+, hCD8+ 또는 hCD4+의 백분율을 보여주는 그래프를 제공한다.
도 2은 인간 또는 마우스 CD137에 대한 결합 친화도에 의해 측정했을 때, mAb1 CDRH3 알라닌 스캐닝의 결과를 보여주는 개략도를 제공한다.
도 3a는 인간 CD137의 아미노산 서열을 보여주며, mAb1, mAb4 또는 mAb5가 결합된 에피토프를 포함하는 잔기는 굵은 글씨체로 표시되어 있다.
도 3b는 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)에 의해 결정했을 때, 마우스 및 랫트 CD137의 세포외 도메인에 대한 mAb1의 동역학 결합 데이터를 도시한 그래프이다.
도 3c는 CD137L(회색으로 도시됨)에 결합된 인간 CD137 및 잔기 E111, T113, K114 및 P135(구체로 도시됨)의 x-선 결정 이미지를 제공한다.
도 3d는 상기 3량체를 형성함에 있어서 CD137L(회색으로 도시됨)에 결합된 인간 CD137 및 잔기 E111, T113, K114 및 P135(구체로 도시됨)의 x-선 결정 이미지를 제공한다.
도 4a는 항CD137 항체에 반응하여 CD44+ T 세포 상에서 TIGIT(상단) 또는 PD-1(하단)의 발현이 증가한 것을 도시하는 유세포 분석 데이터의 산포도를 제공한다.
도 4b는 항CD137 항체로 치료한 후 마우스의 비장에서 TIGIT(상단) 또는 PD-1(하단)을 발현하는 CD8+ CD44+ T 세포의 정량화를 도시한 그래프를 제공한다.
도 4c는 항CD137 항체로 치료한 후 마우스의 비장에서 CD8+ T 세포의 정량화를 비장당 CD45+ 세포의 백분율(좌측) 또는 세포 수의 백분율(우측)로서 도시한 그래프를 제공한다.
도 5a는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후 마우스에서 개별 CT26 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 5b는 도 5a에서 제공된 평균 종양 부피를 나타낸 그래프이다.
도 5c는 항CD137 항체로 치료한 후 종양을 가진 마우스의 전체 생존율을 나타낸 카플란-마이어 그래프이다.
도 5d는 종양원성 CT26 세포를 재접종한 마우스에서 종양 부피를 나타낸 그래프이다.
도 6a는 부모 및 친화도 성숙 항CD137 항체로 치료한 후 마우스에서 개별 CT26 종양의 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 6b는 도 6a에서 제공된 평균 종양 부피를 제공하는 그래프이다.
도 7은 표시된 투약양의 항CD137 항체로 치료한 후 비장 T 세포(상단) 및 종양 침윤 백혈구(하단) 대비 CD8+ 또는 CD4+ T 세포의 백분율을 나타낸 그래프를 제공한다.
도 8은 림프구 고갈 항체의 유무와 상관없이, 마우스를 mAb1로 치료했을 때 개별 종양 부피를 나타내는 그래프를 제공한다. CD4+ T 세포는 GK1.5에 의해 고갈되었고(중간 그래프), CD8+ T 세포는 YTS169.4에 의해 고갈되었고(오른쪽에서 2번째 그래프), NK 세포는 항아시알로-GM1 항체에 의해 고갈되었다(오른쪽 마지막 그래프).
도 9는 CT26 종양(결장 암종), EMT-6 종양(유방 암종), A20 종양(B 세포 림프종), 또는 MC38 종양(결장 암종)을 가졌고 mAb8 또는 이소형 대조군 항체로 치료한 마우스에서 개별 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 10a~10c는 마우스당 150 μg을 투여했을 때 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 10a에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 10b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 10c에 도시되어 있다.
도 11a~11c는 마우스당 20 μg을 투여했을 때 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 11a에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 11b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 11c에 도시되어 있다.
도 12는 CT26 종양을 가졌고 다양한 투약량의 mAb1(12.5, 25, 50, 100 또는 200 μg) 또는 이소형 대조군으로 치료한 마우스에서 개별 종양 부피를 나타낸 그래프를 제공한다.
도 13a 및 도 13b는 mAab1의 항종양 효능에서 Fc 결합의 기여를 보여준다. 도 13a는 mAb1을 IgG4 이소형 또는 IgG4 아글리코실화된 이소형으로서 보여준다. 평균 종양 부피는 상단에 표시되어 있고 개별 종양 부피는 하단에 도시되어 있다. 도 13b는 mAb1을 IgG4 이소형 또는 IgG1 아글리코실화된 이소형으로서 보여준다. 평균 종양 부피는 상단에 표시되어 있고 개별 종양 부피는 하단에 도시되어 있다.
도 14a~14d는 치료를 받기 전에 큰 확립된 종양(500 mm3)을 가진 마우스에서 항CD137 항체의 생체 내 항종양 효능을 보여준다. 개별 종양 부피는 14a 및 14d에 도시되어 있고, 평균 종양 부피는 14b에 도시되어 있으며 생존 백분율은 14c에 도시되어 있다.
도 15는 도 14a~14c에서 mAb1, mAb8 또는 이소형 대조군으로 이전에 치료하여 치유된 것으로 간주되는 마우스의 반대 쪽 옆구리에 CT26 세포를 재 접종한 후 보호적 항종양 면역성을 보여주는 카플란-마이어 생존율 그래프를 제공한다.
도 16a는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후 CD45+ 간 내 T 세포의 증식을 보여주는 유세포 분석 데이터의 산포도를 제공한다.
도 16b는 표시된 투약량의 항CD137 항체로 치료한 후, 간 내 CD8+ T 세포(좌측) 및 CD4+ T 세포(우측)의 정량화를 도시한 그래프를 제공한다.
도 17a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 비장의 T 세포 대비 CD3+, CD4+, 또는 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 17b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 간의 T 세포 대비 CD3+, CD4+, 또는 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 18a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 비장의 CD8+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 18b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 간의 CD8+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 19a는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 비장의 CD4+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 19b는 친화도 성숙된 항CD137 항체로 마우스를 치료한 후 TIGIT, PD-1 또는 LAG3을 발현하는 간의 CD4+CD44+ T 세포의 백분율을 도시한 그래프를 제공한다.
도 20a~20c는 다양한 투약량의 항CD137 항체 mAb1, mAb8 또는 3H3를 여러 번 투여한 것에 의한 생체 내 독성을 나타내는 그래프를 제공한다. 도 20a는 항CD137 항체의 투여 후 간에서 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다. 도 20b는 항CD137 항체가 투여된 마우스의 혈장에서 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 활성을 보여주는 그래프이다. 도 20c는 항CD137 항체가 투여된 마우스의 혈장 내 TNFα의 수준을 보여주는 그래프이다.
도 21은 도 20a~20c에서 설명된 바와 같이 mAb1, mAb8, 3H3 또는 이소형 대조군으로 치료한 마우스의 간을 헤마톡실린과 에오신(H&E)로 염색하여 절개한 대표적인 이미지를 제공한다. 화살표는 면역 세포의 침윤을 나타낸다.
도 22a~22d는 종양 미세환경에서 면역 세포 재프로그래밍을 보여주는 대표적인 FACS 도표를 제공한다. CT26 종양을 가진 마우스에게 mAb8 또는 이소형 대조군의 투약량을 여러 번 투여하였다(0, 3, 6 및 9일차). 도 22a는 CD45 발현에 기초한 전체 면역 세포 침윤을 보여준다. 도 22b는 FOXP-3 및 CD25 발현에 의해 측정한 Treg 세포의 감소를 보여준다. 도 22c는 PD-1 및 TIGIT 발현에 의해 측정한 T 세포 기능 소실의 감소를 보여준다. 도 22d는 F4/80 및 CD11b 발현에 의해 측정한 종양-관련 대식 세포의 감소를 보여준다.
도 23은 CT26 종양을 가진 마우스를 항CD137 항체 mAb1 및 3H3, 또는 이소형 대조군으로 치료한 다음, 해당 마우스의 비장에 대한 면역표현형 분석을 보여준다.
도 24는 OVA 자극 분석에서, 표시된 항CD137 항체로 자극했을 때 쥣과 T 세포에 의해 생성된 IL-2의 농도(pg/ml)를 보여주는 그래프이다. 아테졸리주맙(항PD-L1 항체)과 함께, 쥣과 항PD-1(RMP1-14)을 비교기로서 사용하였다.
도 25a 및 25b는 OVA 자극 분석에서, 표시된 항CD137 항체로 자극했을 때 CD25(25a) 또는 TIGIT(25b) 중 하나를 발현하는 쥣과 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 그래프이다. 아테졸리주맙(항PD-L1 항체)과 함께, 쥣과 항PD-1(RMP1-14) 및 쥣과 항CD137(3H3)을 비교기로서 사용하였다.
도 26은 플레이트에 결합된 항CD137 항체와 함께 인큐베이션한 후 CD3+ T 세포에 의해 생성된 사이토카인(IL-2, TNFα, IL-13 및 IFNγ)의 정량화를 도시한 막대 그래프를 제공한다. 사이토카인 레벨은 항CD3 항체에 의한 베이스라인 활성화에 대한 배수 증가로서 도시되어 있다.
도 27a~27c는 항CD137 항체로 치료한 후 혼합된 림프구 반응물에서 IFNγ 생산의 투약량-반응을 도시한 그래프를 제공한다. 항PD1 항체(키트루다; Merck)를 대조군으로서 사용하였다.
도 28은 항CD137 항체 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 CD32를 발현하도록 조작된 CHO 세포(CHO-CD32 세포)와 함께 공동 배양한 인간 T 세포로부터 IFNγ의 생성을 보여주는 그래프이다.
도 29는 항CD137 항체 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 여부와 상관없이 CD32를 발현하도록 조작된 CHO 세포(CHO-CD32 세포)와 함께 공동 배양했을 때 Treg 세포의 증식을 보여주는 그래프이다.
도 30은 mAb1, mAb8, mAb4 또는 mAb5가 다양한 농도로 존재하는 가운데 NFκβ 및 SRF용 루시페라아제 리포터를 형질 도입한 CCL-119 세포에서 NFκβ 및 SRF의 신호 전달을 보여주는 그래프를 제공한다.
도 31은 항CD137 항체 mAb1, 3H3 또는 LOB12.3, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 TLR9 작용제 CpG로 자극한 골수 유래 마우스 대식 세포에 의한 IL-6, TNFα, 또는 IL-27의 유도를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 32는 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 LPS로 자극한 인간 단핵구 유래 대식 세포에 의한 TNFα의 유도를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 33은 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군의 존재 하에 PMA로 배양한 THP1 단핵구의 CD64 발현에 의해 결정했을 때 항CD137 항체가 대식 세포 분화에 미치는 효과를 보여주는 그래프를 제공한다.
도 34a~34c는 인간 PBMC와 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5, 또는 이소형 대조군을 투여한 면역적격성 마우스에서 hCD45+, hCD8+ 또는 hCD4+의 백분율을 보여주는 그래프를 제공한다.
작용제 항CD137 항체를 사용하는 암 요법은 마우스에서 면역 매개 종양 거부 작용을 유도하는 것으로 나타났으며, 현재 이러한 종류의 유사체가 암 환자에서 시험되고 있다. 이전의 보고는 항CD137 항체의 투여가 간에서 T 림프구의 다클론 침윤물의 상당한 축적을 유도할 수 있음을 보여주었는데(Dubrot 등의 (2010) Cancer Immunology, Immunotherapy 59(8):1223-1233), 이는 간 염증 및 약물 유도성 간 독성의 가능성을 시사한다. 작용성 항CD137 항체(우렐루맙, BMS-663513; Bristol-Myers Squibb)의 임상 평가에 대한 최근의 보고서에는 항체 투약량과 상관되는 중증 간독성(아미노 전이효소 증가(transaminitis))의 징후를 포함하여, 인간 대상체에서 치료와 관련하여 관찰된 이상 사례들이 문서화되어 있다(Segal 등의 (2016) Clin Cancer Res 23(8):1929-1936 참조).
본 발명은 인간 CD137의 에피토프에 특이적으로 결합하여 인간 CD137을 효능화하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD137의 에피토프에 결합하기 위해 mAb1과 경쟁한다. 일부 양태에서, 본 개시의 항CD137 효능제 항체는 항마우스 CD137 3H3 항체(Melero 등의 (1997) Nature Medicine 3(6):682-685; Uno 등의 (2006) Nature Medicine 12(6):693-696) 및 임상 개발 중인 적어도 2개의 항인간 CD137 항체(BMS-663513/우렐루맙, Bristol-Meyers Squibb, 및 PF-05082566/우토밀루맙, Pfizer)와 비교했을 때 종양 미세환경에서 CD8+ T 세포의 사이토카인 생성 및 증식을 유도하고, 생체 내에서 보호성 항종양 면역성을 유도하며, 독성 관련 사례의 발생 가능성 감소를 수반한다.
정의
청구범위 및 명세서에서 사용된 용어는 달리 명시되지 않는 한, 아래에 기재한 바와 같이 정의된다.
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태("a", "an" 및 "the")는 문맥상 달리 언급하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의한다. 또한, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함하고 복수형은 단수형을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "약(about)"은 당업자에 의해 이해될 것이고, 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 변경될 것이다. 용어 "약"이 사용되는 문맥이 주어졌을 때 용어의 용도가 당업자에게 명확하지 않은 경우, "약"은 특정 값의 최대 +/- 10%를 의미하게 된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "작용제(agonist)"는 본원에 기술된 천연 폴리펩티드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 촉진, 유도, 증가 및/또는 활성화시키는 임의의 분자를 지칭한다(예: CD137). 적합한 작용제 분자는 구체적으로 효능제 항체 또는 항체 단편, 천연 폴리펩티드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 작은 유기 분자 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 작용제의 존재 하의 활성화는 투약량 의존적인 방식으로 관찰된다. 일부 구현예에서, 측정된 신호(예: 생물학적 활성)는 유사한 조건 하에서 음성 대조군으로 측정된 신호보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 100% 더 높다. 본 개시의 방법에 사용하기에 적합한 효능제를 식별하는 방법도 본원에 개시된다. 예를 들어, 이들 방법은 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA), Forte Bioⓒ 시스템, 및 방사성 면역 분석법(RIA)과 같은 결합 분석법을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 이들 분석법은 관심 폴리펩티드(예: CD137과 같은 수용체 또는 리간드)에 결합하는 작용제의 능력을 결정하므로, 폴리펩티드의 활성을 촉진, 증가 또는 활성화시키는 작용제의 능력을 나타낸다. 작용제의 효능은 폴리펩티드의 기능을 활성화 또는 촉진하는 작용제의 능력 등과 같은 기능적 분석법을 사용해 결정될 수도 있다. 예를 들어, 기능적 분석법은 폴리펩티드를 후보 작용제 분자와 접촉시키는 단계, 및 폴리펩티드와 정상적으로 관련된 하나 이상의 생물학적 활성의 검출 가능한 변화를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 작용제의 효능은 일반적으로 이의 EC50 값(작용제 반응의 50%까지 활성화하는 데 필요한 농도)에 의해 정의된다. EC50 값이 낮을수록 작용제의 효능이 커지며, 생물학적 반응을 최대로 활성화하는데 필요한 농도가 낮아진다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알라닌 스캐닝(alanine scanning)"은 주어진 단백질 또는 폴리펩티드의 안정성 또는 기능(들)(예: 결합 친화도)에 대한 특정 야생형 잔기의 기여도를 결정하는 데 사용되는 기술을 지칭한다. 상기 기술은 폴리펩티드 내의 야생형 잔기를 알라닌 잔기로 치환하는 단계, 이어서 알라닌-치환된 유도체 또는 돌연변이체 폴리펩티드의 안정성 또는 기능(들)(예: 결합 친화도)을 평가하는 단계, 및 야생형 폴리펩티드와 이를 비교하는 단계를 포함한다. 폴리펩티드 내의 야생형 잔기를 알라닌으로 치환하는 기술은 당업계에 공지되어 있다.
용어 "완화(ameliorating)"는 암과 같은 질환 상태의 치료에 있어서 치료적으로 유익한 임의의 결과를 지칭하며, 질환 상태의 예방, 이의 중증도 또는 진행에 있어서의 경감, 이의 차도, 또는 이의 치유를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산(amino acid)"은 자연 발생 아미노산과 합성 아미노산뿐만 아니라, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체도 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 암호화된 것들을 비롯하여 히드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린과 같이 나중에 변형되는 아미노산들이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조(수소, 카복실기, 아미노기, 및 R 기에 결합하는 탄소)를 포함하는 화합물, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭시드, 메티오닌 메틸 설포늄 등을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예: 노르류신) 또는 변형된 펩티드 백본을 가지지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학적 구조와 상이하지만 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 구조를 갖는 화학 화합물을 지칭한다.
아미노산은 IUPAC-IUB 생화학 명명법 위원회(Biochemical Nomenclature Commission)에서 권장하는 이들의 3자 기호 또는 1자 기호 중 하나로 본원에서 지칭될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오티드는 공통적으로 수용된 이들의 1자 코드로 지칭될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "극성 아미노산"은 수성 환경에 상주하는 것을 선호하는 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 일부 구현예에서, 극성 아미노산은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민, 히스티딘, 리신, 세린, 트레오닌 및 티로신으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 극성 아미노산은 양성, 음성 또는 중성으로 하전될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "비극성 아미노산"은 알라닌, 시스테인, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "아미노산 치환"은 소정의 아미노산 서열(시작 폴리펩티드의 아미노산 서열)에서 적어도 하나의 기존 아미노산 잔기를 제2의 상이한 "대체" 아미노산 잔기로 치환하는 것을 지칭한다. "아미노산 삽입"은 적어도 하나의 추가의 아미노산이 소정의 아미노산 서열에 혼입되는 것을 지칭한다. 삽입은 일반적으로 1개 또는 2개의 아미노산 잔기의 삽입으로 이루어지게 되지만, 약 3개 내지 약 5개 또는 심지어 최대 약 10개, 15개 또는 20개의 아미노산 잔기가 삽입되는 보다 큰 "펩티드 삽입"이 이루어질 수도 있다. 삽입된 잔기(들)는 전술한 바와 같이 자연 발생 잔기 또는 비자연 발생 잔기일 수 있다. "아미노산 결실"은 소정의 아미노산 서열로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기를 제거하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "양(amount)" 또는 "수준(level)"은 물질(예: 단백질)의 검출 가능한 수량, 수준 또는 존재율(abundance)을 지칭한다. 본원에 기술된 것과 같은 폴리펩티드를 지칭할 때의 용어 "발현의 수준(level of expression)" 또는 "발현 수준(expression level)"은 일반적으로 상호 교환적으로 사용되며, 일반적으로는 생물학적 샘플에서(예: 세포의 표면 상에서) 폴리펩티드의 검출 가능한 양을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항CD137 작용제 항체"(용어 "항CD137 항체"와 상호 교환적으로 사용됨)는 CD137에 특이적으로 결합하고 CD137 신호 전달 또는 다른 CD137 매개 기능에 의해 매개되된 CD137 생물학적 활성, 반응 및/또는 하류 경로(들)를 부분적으로 또는 완전히 촉진, 유도, 증가 및/또는 활성화시키는 항체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 CD137에 결합하고 CD137L의 결합을 허용한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 CD137에 결합하고 CD137의 다량체화를 유도한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 CD137에 결합하고 CD137 삼량체의 이량체화를 유도한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 CD137에 결합하고 CD137 삼량체의 다량체화를 유도한다. 항CD137 작용제 항체의 실시예가 본원에서 제공된다. 삼량체:삼량체 복합체의 형성을 검출하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 전자 현미경으로 이러한 복합체를 검출할 수 있는 것으로 나타났다(예: Won, E. The Journal of Biological Chemistry, Vol. 285 (12): 9202-9210(2010) 참조).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항CD137 mAb1"("mAb1"과 상호 교환적으로 사용됨)은 다음의 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS (서열번호 4),
및 다음의 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열:
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHLFPITFGGGTKVEIK (서열번호 6)를 포함하는 예시적인 항CD137 작용체 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항CD137 mAb8"("mAb8"과 상호 교환적으로 사용됨)은 다음의 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS (서열번호 101);
및 다음의 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열:
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHLFPITFGGGTKVEIK (서열번호 6)을 포함하는 예시적인 항CD137 작용체 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항CD137 mAb10"("mAb10"과 상호 교환적으로 사용됨)은 다음의 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGSGDSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS (서열번호 26);
및 다음의 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열:
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHLFPITFGGGTKVEIK (서열번호 6)을 포함하는 예시적인 항CD137 작용체 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 2개의 경쇄 폴리펩티드와 2개의 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 전체 항체를 지칭한다. 전체 항체는 IgM, IgG, IgA, IgD, 및 IgE 항체를 포함하는 상이한 항체 이소형을 포함한다. 용어 "항체"는 다클론 항체, 단클론 항체, 키메라화 또는 키메라 항체, 인간화 항체, 영장류화 항체, 탈면역화 항체 및 완전한 인간 항체를 포함한다. 항체는 다양한 종, 예를 들어, 인간, 비인간 영장류(예: 오랑우탄, 개코원숭이 또는 침팬지), 말, 소, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니피그, 게르빌루스쥐, 햄스터, 랫트 및 마우스와 같은 포유동물 중 어느 하나에서 만들어지거나 이로부터 유래될 수 있다. 항체는 정제된 항체 또는 재조합 항체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체 단편", "항원 결합 단편", "항원 결합 부분" 또는 유사한 용어는 표적 항원(예를 들어, CD137)에 결합하는 능력을 보유하고 표적 항원의 활성을 억제하는 항체의 단편을 지칭한다. 이러한 단편은, 예를 들어, 단쇄 항체, 단쇄 Fv 단편(scFv), Fd 단편, Fab 단편, Fab' 단편, 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. scFv 단편은 scFv가 유래되는 항체의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 둘 다를 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬이다. 또한, 인트라바디, 미니바디, 트리아바디, 및 디아바디 또한 항체의 정의에 포함되며, 본원에 기술된 방법에서 사용하기에 적합하다. 예를 들어, Todorovska 등의 (2001) J. Immunol. Methods 248(1):47-66; Hudson 및 Kortt, (1999) J. Immunol. Methods 231(1):177-189; Poljak, (1994) Structure 2(12):1121-1123; Rondon 및 Marasco, (1997) Annu. Rev. Microbiol. 51:257-283을 참조하고, 이들 각각의 개시는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체 단편"은, 예를 들어, 카멜화 단일 도메인 항체(camelized single domain antibody)와 같은 단일 도메인 항체도 포함한다. 예를 들어, Muyldermans 등의 (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230-235; Nuttall 등의 (2000) Curr. Pharm. Biotech. 1:253-263; Reichmann 등의 (1999) J. Immunol. Meth. 231:25-38; PCT 출원 공개 번호 WO 94/04678 및 WO 94/25591; 및 미국 특허 제6,005,079호를 참조하고, 이들 모두는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 일부 구현예에서, 본 개시는 단일 도메인 항체가 형성되도록 변형을 가진 2개의 VH 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 단편은 중쇄 폴리펩티드의 가변 영역 및 경쇄 폴리펩티드의 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항원 결합 단편은 항체의 경쇄 및 중쇄 폴리펩티드의 CDR을 포함한다.
용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 MHC와 복합체를 이룬 외래 항원을 표면에서 디스플레이하는 세포이다. T 세포는 T 세포 수용체(TCR)을 사용해 이러한 복합체를 인식한다. APC의 예는 수지상 세포(DC), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 단핵구(예: THP-1 등), B 림프아구성 세포(예: C1R.A2, 1518 B-LCL) 및 단핵구 유래 수지상 세포(DC)를 포함하나 이들로 한정되지는 않는다. 일부 APC는 식균작용 또는 수용체 매개 엔도시토시스 중 하나에 의해 항원을 내재화한다.
용어 "항원 제시"는 APC가 항원을 포획하여 이를 T 세포가, 예를 들어, MHC-I 및/또는 MHC-II 접합체의 성분으로서 인식할 수 있게 하는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포 자멸사(apoptosis)"는 다세포 유기체(예를 들어, 인간)에서 발생하는 예정된 세포 사멸의 과정을 지칭한다. 세포 자멸사를 초래하는 고도로 조절된 생화학적 이벤트 및 분자 이벤트는 세포에 대한 관찰 가능하고 특징적인 형태 변화를 초래할 수 있으며, 이에는 세포막 기포 형성, 세포 부피 수축, 염색체 DNA 축합 및 단편화, 및 mRNA 분해 등이 포함된다. T 세포를 포함하여 세포 자멸사를 겪는 세포를 식별하는 흔한 방법은 세포를 형광단-접합 단백질(아넥신 V)에 노출시키는 것이다. 아넥신 V는 원형질막의 외벽 상에서 포스파티딜세린에 결합하는 능력에 의해 세포 자멸사 세포를 검출하는 데 흔히 사용되는데, 이는 세포가 세포 자멸사의 과정을 겪고 있음을 조기에 알려준다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "고정된 CD137에 결합하는"은 본 개시의 인간 항체가, 예를 들어, 세포의 표면에서 발현되거나 고형 지지체에 부착되는 CD137에 결합하는 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "이중특이적" 또는 "이중특이적 항체"는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 혼성화 항체(artificial hybrid antibody)를 지칭한다. 이중특이적 항체는 하이브리도마 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, Songsivilai & Lachmann, (1990) Clin. Exp Immunol. 79:315-321; Kostelny 등의 (1992) J. Immunol. 148:1547-1553을 참조한다.
전통적으로, 이중 특이적 항체의 재조합 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동 발현에 기초하는데, 여기서 2개의 중쇄/경쇄 쌍은 상이한 특이성을 갖는다(Milstein 및 Cuello, (1983) Nature 305:537-539 참조). 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 결합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 중쇄 가변 영역의 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역 글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합이다. 현재 알려진 이중 특이적 항체를 생성하는 예시적인 방법에 대한 보다 상세한 내용에 대해서는, 예를 들어, Suresh 등의 (1986) Methods Enzymol. 121:210; PCT 공개 번호 WO 96/27011; Brennan 등의 (1985) Science 229:81; Shalaby 등의 J. Exp. Med. (1992) 175:217-225; Kostelny 등의 (1992) J. Immunol. 148(5):1547-1553; Hollinger 등의 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Gruber 등의 (1994) J. Immunol. 152:5368; 및 Tutt 등의 (1991) J. Immunol. 147:60을 참조한다. 이중 특이적 항체는 가교 결합된 항체 또는 이형접합 항체도 포함한다. 이형접합 항체는 임의의 편리한 가교 결합법을 사용해 만들 수 있다. 적절한 가교제는 당업계에 잘 알려져 있고, 미국 특허 제4,676,980호에 다수의 가교 결합 기술과 함께 개시되어 있다.
재조합 세포 배양물로부터 직접 이중 특이적 항체 단편을 만들고 단리하기 위한 다양한 기술도 기술되어 있다. 예를 들어, 이중 특이적 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되어 왔다. 예를 들어 Kostelny 등의 (1992) J Immunol 148(5):1547-1553을 참조한다. Fos 및 Jun 단백질 유래의 류신 지퍼 펩티드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결될 수 있다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 감소되어 단량체를 형성한 다음 재산화되어 항체 이종이량체를 형성할 수 있다. 이러한 방법을 항체 동종이량체의 생산에 이용할 수도 있다. Hollinger 등의 (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:6444-6448에 기술된 "디아바디(diabody)" 기술은 이중 특이적 항체 단편을 제조하기 위한 대안적인 메커니즘을 제공하였다. 단편은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)를 포함하는데, 링커는 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 2개의 도메인을 쌍으로 연결할 수 없다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 이룰 수 밖에 없고, 이로써 2개의 항원 결합 부위가 형성된다. 단쇄 Fv(scFv) 이량체를 사용해 이중 특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략도 보고되었다. 예를 들어, Gruber 등의 (1994) J Immunol 152:5368을 참조한다. 대안적으로, 항체는 예를 들어, Zapata 등의 (1995) Protein Eng. 8(10):1057-1062에 기술된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 요약하자면, 이들 항체는 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 순차 Fd 분절(VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 선형 항체는 이중 특이적이거나 단일 특이적일 수 있다.
3가 이상의 항체(예: 삼중 특이적 항체)는, 예를 들어, Tutt 등의 (1991) J Immunol 147:60에서 고려되고 기술되어 있다.
본 개시는 다양한 형태의 다중 특이적 항체, 예컨대, Wu 등의 (2007) Nat Biotechnol 25(11): 1290-1297에 기술된 이중 가변 도메인 면역글로불린(DVD-Ig) 분자도 포함한다. DVD-Ig 분자는 2개의 상이한 부모 항체 유래의 2개의 상이한 경쇄 가변 도메인(VL)이 재조합 DNA 기술에 의해 직접적으로 또는 짧은 링커를 통해 순차 연결되고, 경쇄 불변 도메인이 이어지도록 설계된다. 유사하게, 중쇄는 순차 연결된 2개의 상이한 중쇄 가변 도메인(VH)과, 이어지는 불변 도메인 CH1 및 Fc 영역을 포함한다. 2개의 부모 항체로부터 DVD-Ig 분자를 제조하기 위한 방법은, 예컨대 PCT 공개 번호 WO 08/024188 및 WO 07/024715에 추가로 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 항체는 제2 특이성을 갖는 경쇄 가변 영역이 전체 항체의 중쇄 가변 영역에 융합되는 Fabs-인-탠덤(Fabs-in-Tandem) 면역글로불린이다. 이러한 항체는, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2015/103072에 기술되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "암 항원"은 (i) 종양 특이적 항원, (ii) 종양 관련 항원, (iii) 종양 특이적 항원을 발현하는 세포, (iv) 종양 관련 항원을 발현하는 세포, (v) 종양 상의 태아 항원, (vi) 자가 조직 종양 세포, (vii) 종양 특이적 세포막 항원, (viii) 종양 관련 세포막 항원, (ix) 성장 인자 수용체, (x) 성장 인자 리간드, 및 (xi) 암과 관련된 임의의 다른 유형의 항원 또는 항원 제시 세포 또는 물질을 지칭한다.
용어 "암종(carcinoma)"은 당업계에서 인지되어 있으며, 호흡기 계통 암종, 위장 계통 암종, 비뇨생식기 암종, 고환 암종, 유방 암종, 전립선 암종, 내분비계 암종, 및 흑색종을 포함하는 상피 또는 내분비 조직의 악성 종양을 지칭한다. 본원에 기술된 항CD137 항체는 신장 암종이나 흑색종을 포함하여, 임의의 유형의 암에 걸렸거나, 암 발생이 의심되거나, 암 발생 위험이 높을 수 있는 환자를 치료하는 데 사용될 수 있다. 예시적인 암종은 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 두경부, 결장 및 난소의 조직에서 형성되는 것들을 포함한다. 또한 상기 용어는 암종 및 육종 조직으로 이루어진 악성 종양을 포함하는 암육종(carcinosarcomas)을 포함한다. "선암종(adenocarcinoma)"은 샘 조직(glandular tissue)으로부터 유래된 암종 또는 인식 가능한 샘 구조가 종양 세포에 의해 형성되는 암종을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "경쟁"이란 용어가 동일한 에피토프에 결합하기 위해 경쟁하는 항원 결합 단백질(예를 들어, 면역글로불린, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 맥락에서 사용될 때, 이는 분석법(예: 경쟁 결합 분석; 교차 차단 분석법)에 의해 결정했을 때의 항원 결합 단백질 간의 상호 작용을 지칭하는데. 여기서, 시험 항원 결합 단백질(예: 시험 항체)은 공통 항원(예: CD137 또는 이의 단편)에 대한 기준 항원 결합 단백질(예: mAb1과 같은 기준 항체)의 특이적 결합을 억제(예: 감소 또는 차단)한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체는 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)과 교차 경쟁한다.
지정된 폴리펩티드 또는 단백질로부터 "유래된(derived from)" 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 폴리펩티드의 기원을 지칭한다. 바람직하게는, 특정 서열로부터 유래되는 폴리펩티드 또는 아미노산 서열은 해당 특정 서열 또는 그의 일부분과 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지며, 여기서 상기 일부분은 적어도 10~20개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 20~30개의 아미노산, 더 바람직하게는 적어도 30~50개 아미노산으로 이루어지거나, 달리 상기 일부분은 서열에 그의 기원을 갖는 것으로 당업자에게 식별될 수 있다. 또 다른 펩티드로부터 유래된 폴리펩티드는 출발 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어 또 다른 아미노산 잔기로 치환되었거나 하나 이상의 아미노산 잔기의 삽입 또는 결실을 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다.
폴리펩티드는 자연적으로 발생하지 않는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 변이체는 본질적으로 출발 분자와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 특정 구현예에서, 변이체는 출발 폴리펩티드의 아미노산 서열과, 예를 들어 변이체 분자의 길이에 걸쳐, 약 75% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 80% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 85% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 90% 내지 100% 미만(예: 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%), 및 가장 바람직하게는 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖게 된다.
특정 구현예에서, 출발 폴리펩티드 서열과 이로부터 유도된 서열 간에는 하나의 아미노산 차이가 존재한다. 이러한 서열에 대한 동일성 또는 유사성은, 최대 백분율의 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 필요에 따라 갭을 도입한 후에, 출발 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내 아미노산 잔기(즉, 동일한 잔기)의 백분율로서 본원에서 정의된다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 연속 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 연속 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 아미노산 서열 중 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 또는 500개(또는 이들 숫자 이내에 있는 임의의 정수 개)의 연속 아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 개시의 항체는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 다수의 응용 분야에 유용할 수 있으며, 이에는: 클로닝, 유전자 치료, 단백질 발현 및 정제, 돌연변이 도입, DNA 예방접종을 필요로 하는 숙주의 DNA 예방접종, 예를 들어, 수동 면역화를 위한 항체 생성, PCR, 프라이머와 프로브 생성 등이 포함된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 뉴클레오티드 서열은 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어진다. 특정 구현예에서, 뉴클레오티드 서열은 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 뉴클레오티드 서열은 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 연속 뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 연속 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 뉴클레오티드 서열은 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 뉴클레오티드 서열 중 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 200, 300, 400, 또는 500개(또는 이들 숫자 이내에 있는 임의의 정수 개)의 연속 뉴클레오티드를 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
당업자는 본원에 개시된 방법에서 사용하기에 적합한 항체는 천연 서열의 바람직한 활성을 유지하면서, 천연 서열 또는 이로부터 유래된 자연 발생 서열과 서열이 달라지도록 변경될 수 있다는 것을 또한 이해할 것이다. 예를 들어, "비-필수" 아미노산 잔기에서 보존적 치환 또는 변화를 유도하는 뉴클레오티드 치환 또는 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 돌연변이는 부위-지향적 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이 유발과 같은 표준 기술에 의해 도입될 수 있다.
본원에 개시된 방법에서 사용하기에 적합한 항체는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어 필수 또는 비-필수 아미노산 잔기에서 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 치환되는 것이다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에서 정의되어 왔으며, 이에는 염기성 측쇄(예: 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예: 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예: 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예: 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예: 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예: 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)이 포함된다. 따라서, 결합 폴리펩티드 내의 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 동일한 측쇄 패밀리 유래의 또 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산의 스트링은, 구조적으로 유사하면서 측쇄 패밀리 구성원과는 순서 및/또는 조성이 상이한 스트링으로 치환될 수 있다. 대안적으로, 특정 구현예에서, 돌연변이는 예컨대 포화 돌연변이 유발에 의해, 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체는 본 발명의 결합 폴리펩티드에 통합되어 원하는 표적에 결합하는 이들의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "교차-제시(cross-presentation)"는 APC 상의 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자를 통해 외인성 단백질 항원을 T 세포에게 제시하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "교차 반응(cross-react)"은 본 개시의 항체가 상이한 종 유래의 CD137에 결합하는 능력을 지칭한다. 예를 들어, 인간 CD137에 결합하는 본 개시의 항체는 또 다른 종의 CD137에도 결합할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 교차 반응성은 결합 분석(예: SPR, ELISA)에서 정제된 항원으로 특이적 반응성을 검출하거나, CD137을 생리학적으로 발현하는 세포에 결합시키거나, 다르게는 이러한 세포와 기능적으로 상호 작용시킴으로써 측정된다. 교차 반응성을 결정하는 방법은 본원에 기술된 바와 같은 표준 결합 분석법, 예를 들어, BiacoreTM 2000 SPR 기기(Biacore AB, 스웨덴 웁살라 소재)를 사용하는 BiacoreTM 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석법, 또는 유세포 분석 기술을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성 T 림프구(CTL) 반응"은 세포독성 T 세포에 의해 유도된 면역 반응을 지칭한다. CTL 반응은 주로 CD8+ T 세포에 의해 매개된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "이량체화"는 일반적으로 비공유 결합된 2개의 거대분자, 예컨대 단백질 또는 단백질 다량체에 의해 거대분자 복합체가 형성되는 것을 지칭한다. 동종이량체화는 거대분자(예: 단백질)의 속성이 동일한 경우의 이량체화 과정을 지칭한다. 이종이량체화는 거대분자(예: 단백질)의 속성이 동일하지 않은 경우의 이량체화 과정을 지칭한다. 이량체화의 결정 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 이러한 방법은 효모 2-하이브리드 분석법(yeast two-hybrid assay), 형광 공명 에너지 전달법(fluorescence resonance energy transfer, FRET), 생물 발광 공명 에너지 전달(bioluminescence resonance energy transfer, BRET), 단백질 질량 분석법(protein mass spectrometry), 소멸파 방법(evanescent wave method), 크기 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography), 분석 초원심분리(analytical ultracentrifugation), 산란 기술(scattering techniques), NMR 분광법, 등온 적정 열량측정법(isothermal titration calorimetry), 형광 이방성(fluorescence anisotropy), 형광 상관 분광법(fluorescence correlation spectroscopy, FCS), 광 퇴색 후의 형광 회복(fluorescence recovery after photobleaching, FRAP), 인접 이미징(proximity imaging, PRIM) 및 이분자 형광 상보법(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다(예를 들어,Gell D.A., Grant R.P., Mackay J.P. (2012) The Detection and Quantitation of Protein Oligomerization. In: Matthews J.M. (편집자) Protein Dimerization and Oligomerization in Biology. Advances in Experimental Medicine and Biology, vol 747. Springer, New York, NY; 및 Xie, Q. 등의 Methods Mol Biol, 2011; 680: 3-28 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CD137의 이량체화"는 2개의 CD137 삼량체를 이량체화하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 CD137의 이량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는, 항CD137 작용제 항체가 없을 때 이량체화의 양에 비해 CD137의 이량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는, 기준 항CD137 작용제 항체가 있을 때 이량체화의 양에 비해 CD137의 이량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 이량체화는 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%만큼 증가된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "EC50"은 시험관 내 또는 생체 내 분석에서 최대 반응의 50%, 즉 최대 반응과 베이스라인의 반치에 해당하는 반응을 유도하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 농도를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효 투약량(effective dose 또는 effective dosage)"은 원하는 효과를 달성하거나 적어도 부분적으로 달성하기에 충분한 양으로 정의된다. 용어 "치료적으로 유효한 투약량"은 이미 질환을 앓고 있는 환자에서 질환 및 이의 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 정의된다. 이러한 용도에 효과적인 양은 치료 중인 장애의 중증도 및 환자 자신의 면역 시스템의 일반적인 상태에 따라 달라질 것이다.
본원에서 사용되는, 용어 "에피토프" 또는 "항원 결정인자"는 항원 결합 단백질(예를 들어, 면역글로불린, 항체 또는 항원 결합 단편)이 특이적으로 결합하는 항원(예를 들어, CD137) 상의 결정인자 또는 부위를 지칭한다. 단백질 항원의 에피토프는 "선형 에피토프" 및 "입체형 에피토프"로 구분될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "선형 에피토프"는 연결된 아미노산의 연속 선형 서열로부터 형성된 에피토프를 지칭한다. 단백질 항원의 선형 에피토프는 전형적으로 화학적 변성제(예를 들어, 산, 염기, 용매, 가교 결합 시약, 수축제, 이황화 결합 환원제) 또는 물리적 변성제(예를 들어, 열, 방사능, 또는 기계적 전단 또는 응력)에 노출될 때 보유된다. 일부 구현예에서, 에피토프는 비선형이고, 중단된 에피토프(interrupted epitope)로도 지칭된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "입체형 에피토프" 또는 "비선형 에피토프"는 폴리펩티드의 삼차 접힘에 의해 병치된 비연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프를 지칭한다. 입체형 에피토프는 일반적으로 변성제로 치료 시 소실된다. 에피토프는 일반적으로 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 독특한 공간 형태로 포함한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 미만의 아미노산을 독특한 공간 형태로 포함한다. 일반적으로, 특정 표적 분자에 특이적인 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물 내에서 표적 분자 상의 특이적 에피토프를 우선적으로 인식하고 이에 결합하게 된다. 일부 구현예에서, 에피토프는 인간 CD137의 세포 외 도메인의 모든 아미노산을 포함하지는 않는다.
본원에 기술된 특정 항체에 의해 인식되는 에피토프의 전부 또는 일부(예: 동일하거나 중첩되는 영역, 또는 영역 사이 또는 영역에 걸쳐있는 영역)를 포함하는 CD137 상의 에피토프에 결합하는 항체도 본 개시에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "에피토프 맵핑"은 표적 단백질 항원 상에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 부위 또는 에피토프를 식별하는 과정 또는 방법을 지칭한다. 에피토프 맵핑 방법 및 기술이 본원에서 제공된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CD137"은 막관통 단백질의 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 패밀리의 특정 구성원을 지칭한다. CD137에 대한 당업계에서의 대안적인 명칭 및 약어는 "종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 9(TNFRSF9)", 4-1BB 및 "림프구 활성화에 의해 유도된 것(ILA)"을 포함한다(Alderson 등의 (1994) Eur J Immunol 24(9):2219-2227; Schwarz 등의 (1993) Gene 134(2):295-298 참조). 리더 도메인, 막관통 도메인 및 세포질 도메인을 포함하는 전장 인간 CD137의 예시적인 아미노산 서열이 표 4(서열번호 3) 및 다음에 제시되어 있다:
MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMR PVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CD137L" 또는 "CD137 리간드"는 막관통 단백질의 종양 괴사 인자(TNF) 패밀리의 구성원을 지칭한다. CD137L에 대한 당업계에서의 대안적인 명칭 및 약어는 "종양 괴사 인자 수퍼패밀리 구성원 9(TNFSF9)" 및 4-1BB 리간드(4-1BBL)를 포함한다(Alderson 등의 (1994) Eur J Immunol 24(9):2219-2227 참조). 전장 CD137L의 예시적인 아미노산 서열은 표 4(서열번호 97)에 제시된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "Fc-매개 효과기 기능" 또는 "Fc 효과기 기능"은 항체의 주요 기능 및 목적을 제외한, 항체의 생물학적 활성을 지칭한다. 예를 들어, 치료적 작용성 항체의 효과기 기능은 표적 단백질 또는 경로의 활성화를 제외한, 생물학적 활성이다. 항체 효과기 기능의 예는, C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예: B 세포 수용체)의 하향 조절; Fc 수용체를 발현하는 혈소판의 활성화 결여; 및 B 세포 활성화를 포함한다. 많은 효과기 기능은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합으로 시작한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "Fc 수용체"는 항체의 Fc 영역이 결합된 면역 효과기 세포의 표면에서 발견되는 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 구현예에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. Fcγ 수용체에는 3가지 하위 분류, 즉 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FγCriII(CD16)가 있다. 4개의 IgG 이소형(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4) 모두는 Fc 수용체인 FcγRI, FcγRIIA 및 FcγRIIIA에 결합하여 이들을 활성화시킨다. FcγRIIB는 억제성 수용체이며, 따라서 이러한 수용체에 결합하는 항체는 보체 반응 및 세포 반응을 활성화시키지 않는다. FcγRI는 단량체 형태로 IgG에 결합하는 고 친화도 수용체인 반면, FcγRIIA 및 FcγRIIA는 다량체 형태로만 IgG에 결합하고 약간 낮은 친화도를 갖는 저 친화도 수용체이다. Fc 수용체 및/또는 C1q에 대한 항체의 결합은 Fc 영역 내의 특정 잔기 또는 도메인에 의해 좌우된다. 결합은 항체의 힌지 영역 내에 위치한 잔기 및 CH2 부분 내에 위치한 잔기에도 의존한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체의 작용제 활성 및/또는 치료 활성은 Fc 수용체(예: FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의존한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체의 작용제 활성 및/또는 치료 활성은 Fc 수용체(예: FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의해 강화된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "글리코실화 패턴"은 단백질에, 보다 구체적으로는 면역글로불린 단백질에 공유 부착되는 탄수화물 단위의 패턴으로서 정의된다. 당업자가, 이종 항체의 글리코실화 패턴을 이식 유전자의 CH 유전자가 유래된 종에서의 글리코실화 패턴보다는 비인간 유전자 이식 동물 종에 의해 생산된 항체에서 자연적으로 발생하는 글리코실화 패턴과 더 유사한 것으로 인식하게 될 경우, 이종 항체의 글리코실화 패턴은 비인간 유전자 이식 동물 종에서의 상기 글리코실화 패턴과 실질적으로 유사한 것으로 특징지을 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "혈액암"은 림프종, 백혈병, 골수종 또는 림프 악성 종양뿐만 아니라 비장 및 림프절의 암을 포함한다. 예시적인 림프종은 B 세포 림프종(B 세포 혈액암) 및 T 세포 림프종 둘 다를 포함한다. B-세포 림프종은 호지킨 림프종 및 대부분의 비호지킨 림프종을 포함한다. B 세포 림프종의 비제한적인 예는 확산 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 점막-관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma), 소세포 림프구 림프종(만성 림프구성 백혈병과 중첩됨), 맨틀 세포 림프종(MCL), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 종격동 거대 B 세포 림프종(mediastinal large B cell lymphoma), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 변연부 B 세포 림프종(nodal marginal zone B cell lymphoma), 비장 변연부 림프종(splenic marginal zone lymphoma), 혈관 내 거대 B 세포 림프종(intravascular large B-cell lymphoma), 원발성 삼출액 림프종(primary effusion lymphoma), 림프종모양 육아종증(lymphomatoid granulomatosis)을 포함한다. T 세포 림프종의 비제한적인 예는 결절 외 T 세포 림프종(extranodal T cell lymphoma), 피부 T 세포 림프종(cutaneous T cell lymphomas), 역형성 큰세포 림프종(anaplastic large cell lymphoma), 및 혈관면역모구 T 세포 림프종(angioimmunoblastic T cell lymphoma)을 포함한다. 혈액암은, 또한 2차성 백혈병(secondary leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukemia), 만성 골수성 백혈병(chronic myelogenous leukemia), 및 급성 림프모세포 백혈병(acute lymphoblastic leukemia)과 같은 백혈병을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다. 혈액암은 다발성 골수종(multiple myeloma) 및 무증상 다발성 골수종(smoldering multiple myeloma)과 같은 골수종을 추가로 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다. 다른 혈액암 및/또는 B 세포 관련 암 또는 T 세포 관련 암은 혈액학적 악성 종양이라는 용어로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 인간 생식계열 면역글로불린 서열의 가변 및 불변 영역(존재하는 경우)을 갖는 항체를 포함한다. 본 개시의 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예: 시험관 내 무작위 돌연변이 유발 또는 부위 특이적 돌연변이 유발에 의하거나 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다(예를 들어, Lonberg 등의 (1994) Nature 368(6474): 856-859); Lonberg, (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg & Huszar, (1995) Intern. Rev. Immunol. 13:65-93, 및 Harding & Lonberg, (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546 참조). 그러나, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식계열에서 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 이식된 항체(예: 인간화 항체)는 포함하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "이종 항체"는 이러한 항체를 생산하는 유전자 이식 비인간 유기체와 관련하여 정의된다. 이 용어는 유전자 이식 비인간 동물로 이루어지지 않는 유기체에서 발견된 것에 상응하는 아미노산 서열 또는 암호화 핵산 서열을 갖는 항체, 및 일반적으로 유전자이식 비인간 동물의 항체가 아닌 다른 종 유래의 항체를 지칭한다.
용어 "면역 반응 유도" 및 "면역 반응 강화"는 상호 교환적으로 사용되며, 특정 항원에 대한 면역 반응(수동적 또는 적응적)을 자극하는 것을 지칭한다. CDC 또는 ADCC의 유도와 관련하여 사용될 때, 용어 "유도하다"는 특정한 직접적인 세포 살해 메커니즘을 자극하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "예방을 필요로 하는", "치료를 필요로 하는" 또는 "이를 필요로 하는" 대상체는 적합한 의료인(예를 들어, 인간이 대상인 경우, 의사, 간호사, 또는 임상 간호사; 비인간 포유류가 대상인 경우, 수의사)의 판단에 의해 주어진 치료(예: 항CD137 항체를 포함하는 조성물을 사용하는 치료)로부터 합리적으로 혜택을 받게 될 대상을 지칭한다.
용어 "생체 내(in vivo)"는 살아있는 유기체에서 발생하는 과정을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하도로고 의도된다(예를 들어, 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 CD137 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 상이한 종 유래의 다른 CD137 단백질에 대한 교차 반응성을 가질 수 있다. 그러나, 항체는 본원에 기술된 바와 같은 특이적 결합 분석에서 인간 CD137에 대한 특이적 결합을 계속해서 디스플레이한다. 또한, 단리된 항체는 일반적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 상이한 CD137 특이성을 갖는 "단리된" 항체의 조합은 잘 정의된 조성물로 조합된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단리된 핵산 분자"는 CD137에 결합하는 항체 또는 항체 부분(예: VH, VL, CDR3)을 암호화하는 핵산을 지칭하고; 뉴클레오티드 서열이 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 핵산 서열을 지칭하도록 의도되는데, 여기서 상기 뉴클레오티드 서열에는 CD137 이외의 항원에 결합하는 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 다른 뉴클레오티드 서열이 없으며, 상기 다른 서열은 인간 게놈 DNA에서 자연적으로 핵산의 측면에 위치될 수 있다. 예를 들어, 표 3 또는 표 4에 제시된 서열로부터 선택된 서열은 본원에 기술된 단클론 항체인 항CD137 항체의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL) 가변 영역을 포함하는 뉴클레오티드 서열에 상응한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "이소형(isotype)"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 클래스(예: IgM 또는 IgGl)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG1 이소형이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG1 이소형이고 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG2 이소형이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG3 이소형이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG4 이소형이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 인간 단클론 항체는 IgG4 이소형이고 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 Ser228에서의 치환이다. 일부 구현예에서, Ser228에서의 치환은 S228P이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이소형 전환(isotype switching)"은 항체의 클래스 또는 이소형이 하나의 Ig 클래스에서 다른 Ig 클래스 중 하나로 바뀌는 현상을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "KD" 또는 "KD"는 항체와 항원 간의 결합 반응의 평형 해리 상수를 지칭한다. KD 값은 항체 결합 속도 상수(ka)에 대한 항체 해리 속도 상수(kd)의 비율의 수치 표현이다. KD 값은 항원에 대한 항체의 결합 친화도에 반비례한다. KD 값이 작을수록 항원에 대한 항체의 친화도는 더 크다. 친화도는 리간드에 대한 단일 분자의 결합 강도이며, 일반적으로, 2분자 상호 작용의 강도를 평가하여 순위를 매기는 데 사용되는 평형 해리 상수(KD)에 의해 일반적으로 측정되고 보고된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "kd" 또는 "kd"(대안적으로는 "koff" 또는 "koff")는 항체/항원 복합체로부터 항체의 해리에 대한 해리-속도 상수를 지칭하도록 의도된다. kd의 값은 초당 붕괴 또는 해리되는 복합체의 분획에 대한 수치 표현이며, 단위 초-1로 표현된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "ka" 또는 "ka"(대안적으로는 "kon" 또는 "kon")는 항체와 항원의 결합에 대한 결합-속도 상수를 지칭하도록 의도된다. ka의 값은 항체와 항원의 1몰(1M) 용액에서 초당 형성되는 항체/항원 복합체의 수에 대한 수치 표현이며, 단위 M-1초-1 단위로 표현된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "연결된(linked)", "융합된(fused)", 또는 "융합(fusion)"은 상호 교환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 포함하는 갖가지 수단에 의해, 2개 이상의 요소 또는 성분 또는 도메인이 서로 결합하는 것을 지칭한다. 화학적 접합 방법(예: 이종 2분자 가교제를 사용함)은 당업계에 공지되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "국소 투여" 또는 "국소 전달"은 혈관 계통을 통해 조성물이나 제제를 이의 표적 조직이나 부위까지 운반하는 것에 의존하지 않는 전달을 지칭한다. 예를 들어, 조성물은 조성물이나 제제의 주사 또는 이식에 의하거나, 조성물이나 제제가 담긴 장치의 주사 또는 이식에 의해 전달될 수 있다. 조성물이나 제제 또는 이의 하나 이상의 성분은, 표적 조직이나 부위의 근위에 국소 투여된 다음, 의도된 표적 조직 또는 부위까지 확산될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "MHC 분자"는 2가지 유형의 분자, 즉 MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 II를 지칭한다. MHC 클래스 I 분자는 특이적 CD8+ T 세포에 항원을 제시하고 MHC 클래스 II 분자는 특이적 CD4+ T 세포에 항원을 제시한다. APC에 외인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 II와 결합하도록 처리된다. 대조적으로, APC에 내인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 I과 결합하도록 처리된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단클론 항체"는 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 디스플레이하는 항체를 지칭한다. 따라서, 용어 "인간 단클론 항체"는, 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역과 임의로 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간 단클론 항체는, 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 이식 유전자 및 경쇄 이식 유전자를 포함하는 게놈을 가진 유전자 이식 비인간 동물(예: 유전자 이식 마우스)로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마(hybridoma)에 의해 생산된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "다량체화(multimerization)"는 일반적으로 비공유 상호 작용에 의해 결합된 3개 이상의 거대 분자(예: 단백질)를 포함하는 거대 분자 복합체를 형성하는 것을 지칭한다. 다량체화의 결정 방법은 당업자에게 공지되어 있으며, 이량체화에 대한 전술한 문헌에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 CD137의 다량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는, 항CD137 작용제 항체가 없을 때 다량체화의 양에 비해 CD137의 다량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는, 기준 항CD137 작용제 항체가 있을 때 다량체화의 양에 비해 CD137의 다량체화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 다량체화는 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%만큼 증가된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 대상에 적용했을 때의 "자연 발생(naturally-occurring)"이라는 용어는 대상이 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 의미한다. 예를 들어, 유기체(바이러스를 포함함)에 존재하고, 자연에서 기원으로부터 단리될 수 있으며, 사람이 실험실에서 의도적으로 변형하지 않은 폴리펩티드 서열 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 자연 발생이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "비전환 이소형(nonswitched isotype)"은 이소형 전환이 발생하지 않았을 때 생성되는 중쇄의 이소형 클래스를 지칭하며; 비전환 이소형을 암호화하는 CH 유전자는 일반적으로, 기능적으로 재배열된 VDJ 유전자의 바로 하류에 있는 제1 CH 유전자이다. 이소형 전환은 고전적 이소형 전환 또는 비고전적 이소형 전환으로 분류되어 왔다. 고전적 이소형 전환은 이식 유전자에 적어도 하나의 전환 서열 영역(switch sequence region)을 포함하는 재조합 사례에 의해 발생한다. 비고전적 이소형 전환은, 예를 들어, 인간 σμ 및 인간 Σμ (δ-관련 결실) 사이의 상동 재조합에 의해 발생할 수 있다. 특히, 대안적인 비고전적 전환 메커니즘, 예컨대 이식 유전자간 및/또는 염색체간 재조합이 발생하여 이소형 전환을 달성할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 디옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 이들의 중합체를 지칭한다. 명시적으로 제한되지 않는 한, 상기 용어는 기준 핵산과 유사한 결합 특성을 가지고 자연 발생 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는 천연 뉴클레오티드의 알려진 유사체를 함유하는 핵산을 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 보존적으로 변형된 그의 변이체(예: 축퇴 코돈 치환) 및 상보적 서열 및 명시적으로 표시된 서열을 또한 명시적으로 포함한다. 구체적으로, 축퇴 코돈 치환(degenerate codon substitution)은 하나 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer 등의 Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka 등의 Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; 및 Cassol 등의 1992; Rossolini 등의 Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994 참조). 아르기닌과 류신의 경우, 제2 염기에서의 변형도 보존적일 수 있다. 용어 "핵산(nucleic acid)"은 유전자, cDNA, 및 유전자에 의해 암호화된 mRNA와 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 폴리뉴클레오티드는 변형되지 않은 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리디옥시리보뉴클레오티드로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥 및 이중-가닥 DNA; 단일-가닥 영역과 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA; 단일-가닥 및 이중-가닥 RNA; 및 단일-가닥 영역과 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA; 단일-가닥이거나, 더 일반적으로는 이중-가닥이거나, 단일-가닥과 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 혼성 분자로 이루어질 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드는 RNA 또는 DNA 또는 RNA와 DNA 둘 다를 포함하는 삼중-가닥 영역으로 이루어질 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 변형된 염기, 또는 안정성을 위해 또는 다른 이유로 변형된 DNA 또는 RNA 백본을 함유할 수도 있다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화 염기, 및 이노신과 같은 비정상적 염기를 포함한다. 다양한 변형이 DNA 및 RNA에 대해 이루어질 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태를 포함한다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적인 관계로 배치될 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서는 이들이 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이다. 전사 조절 서열과 관련하여, "작동 가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 연속적이고, 필요 시 2개의 단백질 코딩 영역에 연결되도록 인접하고, 해독 프레임 내에 있음을 의미한다. 전환 서열의 경우, "작동 가능하게 연결된"은 서열이 전환 재조합을 수행할 수 있음을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "파라토프(paratope)"뿐만 아니라 "항원 결합 부위(antigen-binding site)"는 항원 상의 에피토프를 인식하여 이에 결합하는 항체의 일부분 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭하며, 가변 중쇄 및 경쇄 내에 위치한 일단의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "비경구 투여", "비경구로 투여되는" 및 기타 이와 문법적으로 동등한 구문은, 장내 투여 및 국소 투여를 제외한, 일반적으로 주사에 의한 투여 방식을 지칭하며, 정맥 내(intravenous), 비강 내(intranasal), 안구 내(intraocular), 근육 내(intramuscular), 동맥 내(intraarterial), 척수 내(intrathecal), 낭 내(intracapsular), 안와 내(intraorbital), 심장 내(intracardiac), 피 내(intradermal), 복강 내(intraperitoneal), 기관 경유(transtracheal), 피하(subcutaneous), 표피하(subcuticular), 관절 내(intraarticular), 피막하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척수 내(intraspinal), 경막 외(epidural), 뇌 내(intracerebral), 두개 내(intracranial), 경동맥 내(intracarotid), 및 흉골 내(intrasternal) 주사 및 주입을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자"는 예방적 또는 치료적 치료를 받는 인간 및 기타 포유류 대상체를 포함한다.
2개 이상의 핵산 서열 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서, 용어 "동일성 백분율"은, 최대한의 상응성을 위해 비교하고 정렬했을 때, 아래에 기술된 서열 비교 알고리즘(예: BLASTP 및 BLASTN 또는 당업자가 이용할 수 있는 다른 알고리즘) 중 하나 또는 육안 검사를 사용해 측정했을 때 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 둘 이상의 서열 또는 하위 서열을 지칭한다. 응용 분야에 따라, "동일성 백분율"은 비교되는 서열의 영역(예: 기능적 도메인)에 걸쳐 존재하거나, 대안적으로, 비교될 두 서열의 전장에 걸쳐 존재할 수 있다. 서열 비교를 위해서는, 일반적으로 하나의 서열이 시험 서열을 비교할 기준 서열의 역할을 한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 서열 및 기준 서열이 컴퓨터에 입력되고, 필요에 따라 하위 서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여, 기준 서열에 대해 시험 서열(들)의 서열 동일성 백분율을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어, Smith & Waterman의 국소 상동성 알고리즘에 의해(Adv. Appl. Math. 2:482 (1981) 참조), Needleman & Wunsch의 상동성 정렬 알고리즘에 의해(J. Mol. Biol. 48:443 (1970) 참조), Pearson & Lipman의 유사성 검색 방법에 의해(Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) 참조), 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 적용(Wisconsin Genetics 소프트웨어 패키지의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)(Genetics Computer Group, 위스콘신주 매디슨 575 Science Dr. 소재)에 의해, 또는 육안 검사에 의해 수행될 수 있다(전체적으로, Ausubel 등의 전술한 문헌 참조).
서열 동일성 백분율 및 서열 유사성을 결정하는 데 적합한 알고리즘의 일례는 BLAST 알고리즘으로, Altschul 등의 J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)에 기술되어 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립 생물공학 정보 센터를 통해 공개적으로 이용할 수 있다.
본원에서 일반적으로 사용되는 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한(pharmaceutically acceptable)"은, 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 혜택/위험 비율에 상응하는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제나 합병증이 없이 인간 및 동물의 조직, 기관 및/또는 체액과 접촉된 상태로 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 적합한 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 지칭하고 포함한다. 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다(예를 들어, Berge 등의 (1977) J Pharm Sci 66:1-19 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하도록 상호 교환적으로 사용된다. 상기 용어는, 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공적인 화학적 모방체인 아미노산 중합체뿐만 아니라, 자연 발생 아미노산 중합체 및 비-자연 발생 아미노산 중합체에도 적용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방(preventing)"은, 조성물을 투여받지 않는 대상체에 비해 대상체에서 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 병태의 발생을 지연시키는 조성물을 투여하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정제된(purified)" 또는 "단리된(isolated)"은, 본원에 기술된 단백질(항체 또는 단편) 중 어느 하나에 적용될 때, 자연적으로 폴리펩티드를 갖는 성분(예: 단백질 또는 자연 발생 생물학적 분자 또는 유기 분자), 예를 들어, 단백질을 발현하는 원핵 생물에서의 다른 단백질, 지질 및 핵산으로부터 분리되었거나 정제된 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로, 폴리펩티드는 샘플에서 총 단백질의 적어도 60 wt%(예를 들어, 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 97 또는 99 wt%)를 구성하는 경우에 정제된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "재배열된(rearranged)"은 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 유전자좌의 구성을 지칭하며, 여기서 V 분절은 본질적으로 완전한 VH 또는 VL 도메인을 각각 암호화하는 형태로 D-J 또는 J 분절에 바로 인접하게 위치된다. 재배열된 면역글로불린 유전자의 유전자좌는 생식계열 DNA와 비교하여 식별될 수 있고; 재배열된 유전자좌는 적어도 하나의 재조합된 헵타머/나노머 상동 요소를 갖게 된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "수용체 클러스터링(receptor clustering)"은 일단의 수용체를 특정 세포 위치에 그룹화하거나 국소적으로 축적시키는 세포 과정을 지칭하며, 종종 신호 반응을 유도하거나 증폭시킨다. 많은 단백질 수용체가 동족 리간드에 결합하며, 이들은 동족 리간드에 결합할 때 클러스터링한다(즉, 이량체, 삼량체, 올리고머 또는 다량체를 형성한다). 예를 들어, PDGF 수용체 및 TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원은 리간드 결합 시 각각 이량체와 삼량체를 형성한다. 동족 리간드-유도 클러스터링(예를 들어, 이량체화, 다량체화)은 수용체를 통해 신호 전달을 유도한다. 따라서, 본 개시의 항체 또는 항원 결합 단편은 둘 이상의 수용체에 결합함으로써 수용체를 활성화시키고, 동족 리간드 결합의 유무와 상관없이 이량체화, 삼량체화 및/또는 다량체화를 유도하거나 안정화시킬 수 있다.
수용체 클러스터링 및 다량체화는 TNFR 신호 전달에 필요하고(Wajant (2015) Cell Death Differ 22(11):1727-1741 참조), 특히 TNFRSF 활성화에 필요하다. 4-1BB(CD137), CD40, GITR, CD27, DR3, DR5, 및 Fas는 하류 신호 전달을 유발하기 위해 클러스터링이 필요한 것으로 알려진 TNFSF 수용체 중 일부이다. 4-1BB 수용체가 신호에 가교 결합되어야 한다는 실험 증거는 Rabu 등의 문헌에 제시되어 있다. 이들 저자는, 인간 4-1BBL의 1-삼량체 형태가 인간 T 세포에 대한 활성화 효과가 없었지만, 단백질을 2- 이상의 삼량체로 가교 결합시킨 결과 단백질을 강력하게 활성화하였음을 보고하였다(Rabu 등의 (2005) J Biol Chem 280:41472-41481 참조). 따라서, 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 CD137의 2개 이상의 삼량체의 다량체화를 유도한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "재조합 숙주 세포"(또는 단순히 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하도록 의도된다. 이러한 용어는 특정 대상체 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손까지도 지칭하도록 의도된 것으로 이해해야 한다. 돌연변이 또는 환경적 영향에 의해 후행 세대에서 특정 변형이 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 사실 부모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에서 사용된 용어 "숙주 세포"의 범주 내에는 여전히 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 모든 인간 항체로서, 예컨대 (a) 동물(예: 마우스)로부터 단리된 항체(상기 동물은 인간 면역글로불린 유전자 또는 하이브리도마를 제조하기 위해 유전자가 이식되었거나 염색체가 이식된 동물임), (b) 항체를 발현하도록 형질 변환된 숙주 세포(예: 트랜스펙토마(transfectoma))로부터 단리된 항체, (c) 재조합체 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 접합시키는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체 등을 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 특정한 인간 생식계열 면역글로불린 서열을 이용하는 가변 및 불변 영역을 포함하고, 생식계열 유전자에 의해 암호화되지만, 예를 들어, 항체가 성숙되는 동안 발생하는 후속 재배열 및 예를 들어 항체 성숙 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함한다. 당업계에 공지된 바와 같이(예를 들어, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125 참조), 가변 영역은 항원 결합 도메인을 함유하는데, 이는 외래 항원에 특이적인 항체를 형성하기 위해 재배열되는 다양한 유전자에 의해 암호화된다. 재배열되는 것 외에도, 가변 영역은 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 과돌연변이로 지칭됨)에 의해 추가로 변형되어 외래 항원에 대한 항체의 친화도을 증가시킬 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가 반응을 변화시키게 된다(이소형 전환). 그러므로, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩티드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래의 핵산 분자와 서열 동일성을 갖지 않을 수 있지만, 대신에 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(적어도 80% 동일성을 가짐).
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "기준 항체"("기준 mAb"와 상호 교환적으로 사용됨) 또는 "기준 항원 결합 단백질"은 인간 CD137 상의 특정 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭하며, 자신과 하나 이상의 구별되는 항체 간의 관계를 정립하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 관계란 기준 항체 및 하나 이상의 구별되는 항체가 CD137 상의 동일한 에피토프에 결합하는 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어는 본원에서 기술된 것들과 같은 시험 또는 분석에서 경쟁자(competitor)로서 유용한 항CD137 항체를 의미하며, 여기서 분석(assay)은 동일한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 구별되는 항체의 발견, 식별 또는 개발에 유용하다. 예시적인 기준 항체(mAb1)의 가변 중쇄(VH) 및 경쇄 (VL) 아미노산 서열은 표 4에 제공된다(VH1, 서열번호 4; VH2, 서열번호 6). 일부 구현예에서, 상기 용어는 시험 또는 분석에서 비교기(comparator)로서 유용한 항CD137 항체를 의미하며, 여기서 분석은 항체의 특성(예를 들어, 간 독성, 항종양 효능)을 구별하는데 유용하다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 우렐루맙이다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 우토밀루맙이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "특이적 결합", "선택적 결합", "선택적으로 결합하는" 및 "특이적으로 결합하는"은 항체가 소정의 항원 상의 에피토프에 결합하는 것을 지칭한다. 일반적으로, BIACORE 2000 기기에서 재조합 인간 CD137을 분석물로서 사용하고 항체를 리간드로 사용해, 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정했을 때, 항체는 대략 10-6 M 미만, 예컨대 대략 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 더 낮은 평형 해리 상수(KD)로 결합하고, 소정의 항원이나 이와 밀접하게 관련된 항원이 아닌 비특이적 항원(예: BSA, 카세인)에 대한 결합 친화도보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 소정의 항원에 결합한다. 문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호 교환적으로 본원에서 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전환 서열(switch sequence)"은 전환 재조합을 담당하는 DNA 서열을 지칭한다. 일반적으로는 μ 전환 영역인 "전환 공여자(switch donor)" 서열은 전환 재조합 도중에 결실될 작제물 영역의 5'(상류)이 될 것이다. "전환 수용자(switch acceptor)" 영역은 결실될 작제물 영역과 대체 불변 영역(예: γ, ε등) 사이가 될 것이다. 재조합이 항상 발생하는 특정 부위가 없기 때문에, 최종 유전자 서열은 작제물로부터 일반적으로 예측할 수 없게 된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체(subject)"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 방법 및 조성물은 면역 장애를 가진 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 용어 "비인간 동물(non-human animal)"은 모든 척추 동물, 예를 들어, 비인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등과 같은 포유류 및 비포유류이다.
핵산의 경우, 용어 "실질적 상동성(substantial homology)"은 2개의 핵산 또는 이들의 지정된 서열이 최적으로 정렬되어 비교될 때, 이들이 뉴클레오티드의 적어도 약 80%, 일반적으로 적어도 약 90% 내지 95%, 및 더 바람직하게는 적어도 약 98% 내지 99.5%에서 뉴클레오티드의 적절히 삽입 또는 결실을 통해 동일함을 나타낸다. 대안적으로, 선택적 혼성화 조건 하에서 분절들이 가닥의 보체에 혼성화될 때 실질적 상동성이 존재한다.
2개의 서열 사이의 동일성 백분율은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입할 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려해 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 상동성(%)= 동일한 위치의 #/위치들의 총 # x 100). 서열 비교 및 2개의 서열 사이의 동일성 백분율의 결정은 아래의 비제한적인 실시예에 기술된 바와 같이, 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다.
2개의 뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 백분율은 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능함)의 GAP 프로그램을 이용해, NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용해 결정될 수 있다. 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율은 또한, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller의 알고리즘(CABIOS, 4:11-17(1989) 참조)을 이용해, PAM120 중량 잔기 테이블, 12의 갭 길이 패널티 및 4의 갭 페널티를 사용해 결정될 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성은 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능함)의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman 및 Wunsch 알고리즘(J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970) 참조)을 이용해, Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용해 결정될 수 있다.
본 개시의 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어, 관련 서열을 식별하기 위해 공공 데이터베이스에 대한 검색을 수행하는 데 "쿼리 서열(query sequence)"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다(Altschul 등의 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10 참조). NBLAST 프로그램, score = 100, wordlength = 12를 사용해 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행해 본 발명의 핵산 분자에 대해 상동인 뉴클레오티드 서열을 얻을 수 있다. XBLAST 프로그램, score = 50, wordlength = 3을 사용해 BLAST 단백질 검색을 수행해 본 발명의 단백질 분자에 대해 상동인 아미노산 서열을 얻을 수 있다. 비교를 위한 갭이 있는 정렬을 얻기 위해, Altschul 등의 문헌[(1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402]에 기술된 바와 같이 Gapped BLAST를 사용할 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예: XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터를 사용할 수 있다. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov 참조)
핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산이, 알칼리/SDS 처리, CsCl 밴딩(CsCl banding), 컬럼 크로마토그래피, 아가로오스 겔 전기영동 및 당업계에 잘 알려진 다른 것들을 포함하는 표준 기술에 의해 다른 세포 성분이나 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산 또는 단백질이 없이 정제될 때, 핵산이 "단리"되거나 핵산에게 "실질적인 순수함이 부여"된다. (F. Ausubel, 등의(편집주) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987) 참조).
본 개시의 핵산 조성물로서, 종종 천연 서열에 존재하지만 cDNA, 게놈 또는 이의 혼합물 유래인 조성물은 표준 기술에 따라 돌연변이되어 유전자 서열을 제공할 수 있다. 코딩 서열의 경우, 이들 돌연변이는 원하는 대로 아미노산 서열에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 본원에 기술된 천연 V, D, J, 불변, 전환 서열 및 기타 이러한 서열과 실질적으로 상동이거나 이로부터 유래된 DNA 서열이 고려된다(여기서, "유래된"은 서열이 다른 서열과 동일하거나 이로부터 변형됨을 나타냄).
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "종양 미세환경"(대안적으로는 "암 미세환경"이며, TME로 약칭됨)은 면역 세포, 섬유아세포, 골수 유래 염증 세포, 및 림프구를 포함하되 이에 한정되지 않는 비암 세포뿐만 아니라 주변 혈관을 포함하여 종양이나 신생물이 존재하는 세포 환경 또는 환경(milieu)을 지칭한다. 신호 전달 분자와 세포 외 매트릭스도 TME를 포함한다. 종양 및 주변 미세환경은 밀접한 관련이 있고 일정하게 상호 작용한다. 종양은 세포 외 신호를 방출하고, 종양 혈관형성을 촉진하고, 말초 면역 내성을 유도함으로써 미세환경에 영향을 미치는 반면, 미세환경 내의 면역 세포는 종양 세포의 성장 및 진화에 영향을 미칠 수 있다.
용어 "T 세포"는 세포 표면 상에 존재하는 T 세포 수용체에 의해 다른 백혈구 세포와 구별될 수 있는 백혈구 세포의 유형을 지칭한다. 여러 가지 T 세포의 하위 집합이 있는데, 이에는 T 헬퍼 세포(TH 세포 또는 CD4+ T 세포로도 알려짐) 및 하위 유형(TH1, TH2, TH3, TH17, TH9, 및 TFH 세포를 포함함); 세포독성 T 세포(TC 세포, CD8+ T 세포, 세포독성 T 림프구, T-살해 세포, 살해 T 세포), 기억 T 세포 및 하위 유형(중심 기억 T 세포(TCM 세포), 효과기 기억 T 세포(TEM 및 TEMRA 세포), 및 상주 기억 T 세포(TRM 세포), 조절 T 세포(Treg 세포 또는 억제 T 세포로도 알려짐) 및 하위 유형(CD4+ FOXP3+ Treg 세포, CD4+FOXP3- Treg 세포, Tr1 세포, Th3 세포, 및 Treg17 세포를 포함함), 자연 살해 T 세포(NKT 세포로도 알려짐), 점막 관련 비변이 T 세포(MAIT), 및 감마 델타 T 세포(γδ T 세포)(Vγ9/Vδ2 T 세포를 포함함) 등이 포함되지만, 이들로 한정되지는 않는다. 위에 언급되었거나 언급되지 않은 T 세포 중 하나 이상은 본 발명의 사용 방법을 위한 표적 세포 유형일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "T 세포 활성화" 또는 "T 세포의 활성화"는 항원 특이적 T 세포 수용체를 그 표면에서 발현하는 성숙한 T 세포가 이들의 동족 항원을 인식하여, 이에 반응하는 세포 과정을 지칭하며, 여기서 반응은 성숙한 T 세포가 세포 사이클에 진입하는 것; 사이토카인이나 용해 효소를 분비하는 것; 및 세포 기반 효과기 기능의 수행을 개시하거나, 이를 개시하도록 유능해지는 것에 의해 일어난다. T 세포 활성화에는, 완전한 활성화를 위한 적어도 2개의 신호가 요구된다. 첫 번째는 항원-주요 조직적합성 복합체(MHC)에 의한 T 세포 항원-특이적 수용체(TCR)의 결합 후에 발생하고, 두 번째는 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)의 후속 결합에 의해 발생한다. 이들 신호는 핵에 전달되어, T 세포의 클론 증식, 세포 표면 상의 활성화 마커의 상향 조절, 효과기 세포로의 분화, 세포독성 또는 사이토카인 분비의 유도, 세포 자멸사(apoptosis)의 유도, 또는 이들의 조합을 야기한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "T 세포 매개 반응"은 T 세포에 의해 매개된 임의의 반응을 지칭하며, T 세포는 효과기 T 세포(예: CD8+ 세포) 및 헬퍼 T 세포(예: CD4+ 세포)를 포함하되 이들로 한정되지는 않는다. T 세포 매개 반응은, 예를 들어 T 세포 세포독성 및 증식을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료적으로 유효한 양" 또는 "치료적으로 유효한 투약량" 또는 본원에 사용된 유사한 용어는 원하는 생물학적 또는 의학적 반응(예를 들어, 암의 하나 이상의 증상의 개선)을 유도하는 제제(예를 들어, 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 양을 의미도록 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료(treat, treating, 및 treatment)"는 본원에 기술된 치료적 또는 예방적 대책을 지칭한다. "치료" 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 개시의 인간 항체를 투여하는 단계를 포함하는데, 예를 들어, 특정 항원에 대한 강화된 면역 반응을 필요로 하는 대상체 또는 궁극적으로 이러한 장애를 가질 수 있는 대상체에게 장애 또는 재발성 장애의 하나 이상의 증상을 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 개선하거나, 이의 중증도를 감소시키기 위해 본 개시의 인간 항체를 투여하는 단계, 또는 이러한 치료의 부재 시 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키기 위해 본 개시의 인간 항체를 투여하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "재배열되지 않은" 또는 "생식 계열 구성"는 V 분절이 D 또는 J 분절에 바로 인접하도록 재조합되지 않는 구성을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산을 운반할 수 있는 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 한 가지 유형의 벡터는 "플라스미드"로서, 이는 추가의 DNA 분절이 연결될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터인데, 이 경우 추가의 DNA 분절은 바이러스 게놈 내로 연결될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 스스로 복제할 수 있다(예: 박테리아 복제 기원을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터). 다른 벡터(예: 비에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포에 도입될 때 숙주 세포의 게놈에 통합되어 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 또한, 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 유도할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")로 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 벡터는 종종 플라스미드의 형태를 갖는다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 상호 교환적으로 사용될 수 있는데, 이는 플라스미드가 가장 널리 사용되는 벡터의 형태이기 때문이다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 수행하는 다른 형태의 이러한 발현 벡터, 예컨대 바이러스 벡터(예: 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스) 등을 포함하도록 의도된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시가 속하는 기술분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본원에 개시된 방법 및 조성물의 실시 또는 시험에 사용될 수도 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 아래에 기술된다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 및 기타 참조 문헌은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
항CD137 항체 및 이의 항원 결합 단편
본 개시는 CD137에 특이적으로 결합하고 이를 효능화하는 항체를 제공한다. 일부 양태에서, 본 개시는 암의 치료에 유용한 항CD137 작용제 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 사이토카인 생성을 유도한다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 종양 미세환경에서 CD8+ T 세포의 수를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 항CD137 작용제 항체는 보호성 항종양 면역성을 유도한다. 본 개시는, 생체 내 투여 시, 비장 내 또는 간 내 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 집단을 실질적으로 증가시키지 않는 항CD137 작용제 항체를 제공한다.
인간 CD137은 255개 아미노산의 막관통 폴리펩티드(서열번호 3; 수탁 번호 NM_001561; NP_001552)이면서 계통 발생적으로 보존된 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 수퍼패밀리의 구성원이다. CD137(대안적으로 4-1BB, TNFR 슈퍼패밀리 9) 및 이의 리간드(CD137L)는 광범위한 면역 활동의 조절에 관여한다. CD137 리간드는 활성화된 T 세포에서 발현되는 이의 수용체 CD137과 가교 결합하여 T 세포 활성을 공동 자극한다. CD137은 활성화-유도 공동-자극 분자이다. 최근의 연구는, CD137 매개 항암 효과가, T 세포를 활성화하여, 특히 세포독성 T 림프구(CTL) 반응을 유도하고, 사이토카인의 생성, 특히 많은 양의 IFNγ의 생성을 유도하는 CD137의 능력에 크게 기초한다는 것을 밝혀 냈다(Ye 등의 (2014) Clin Cancer Res 20(1):44-55 참조). CD137 리간드는 세포 표면 상의 막관통 단백질로서, 이 단백질이 발현되는 세포 내로 신호를 전송하는데, 이는 "역 신호전달(reverse signaling)" 또는 "후방 신호전달(back signaling)"로 지칭되는 현상이다. CD137 리간드의 발현은 대부분의 유형의 백혈구와 일부 비면역 세포에서 발견된다. 단핵구 세포(단핵구, 대식세포 및 DC)에서, CD137 리간드 신호전달은 활성화, 이동, 생존 및 분화를 유도한다.
따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD137에 결합하여 이를 효능화하며, CD137L 결합을 가능하게 하거나 이를 촉진한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD137에 결합하여 이를 효능화한다. 일부 구현예에서, 본 개시에 의해 제공되는 항CD137 항체는 CD137에 결합하여 이를 효능화하고, T 세포의 활성화를 공동 자극한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음의 특성 또는 특징 중 하나 이상을 갖는다:
a) 인간 CD137에 특이적으로 결합함;
b) 인간 및 시노몰구스 CD137에 결합함; 및
c) 인간 및 마우스 CD137에 결합함.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD137에 결합하여 T 세포 활성을 공동 자극한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD137에 결합하여 T 세포 활성화, 세포독성 T 림프구(CTL) 반응, T 세포 증식, 사이토카인 생성, 또는 이들의 조합을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 미세환경에서 CD137에 결합하여 T 세포 활성화, 세포독성 T 림프구(CTL) 반응, T 세포 증식, 사이토카인 생성, 또는 이들의 조합을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 간 내 및/또는 비장 내 T 세포 활성화 및/또는 T 세포 증식을 유의미하게 유도하거나 강화시키지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 CD137에 결합하여 IFNγ의 생성을 유도한다. 일부 구현예에서, 본 개시에 의해 제공되는 항체는 CD137에 결합하여 IL-2, TNF-α, IL-13, 또는 이들의 조합의 생성을 유도한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 CD137에 특이적으로 결합하여 이를 효능화한다. 일부 구현예에서, CD137의 작용성은 면역 세포에 의해 생성된 사이토카인의 농도를 결정함으로써 측정된다. 사이토카인 생성을 분석하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있으며 실시예에서 사용된다. 일부 구현예에서, 면역 세포에 의한 사이토카인 생성의 증가는 CD137의 작용성을 나타낸다. 일부 구현예에서, CD137의 작용성은 T 세포 증식을 분석함으로써 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 증식 증가는 CD137의 작용성을 나타낸다. 일부 구현예에서, CD137의 작용성은 관련 분자의 인산화의 정량화 또는 관련 프로모터 다음의 유전자 리포터의 발현의 정량화를 통해 세포 신호전달 수준을 측정함으로써 측정된다. 일부 구현예에서, 세포 신호전달의 증가는 CD137의 작용성을 나타낸다. 일부 구현예에서, CD137의 작용성은 종양의 부피를 측정함으로써 측정된다. 일부 구현예에서, 종양의 부피 감소는 CD137의 작용성을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 CD137의 올리고머화, 다량체화, 또는 다른 고차 클러스터링을 유도하거나, 증가시키거나, 안정화시킨다. 일부 구현예에서, 세포 표면 상에서 CD137의 클러스터링은 형광 현미경을 통해 관찰된다.
CD137에 결합하여 이를 효능화하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, (i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고; (ii) 본원에 기술된 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하고/하거나; (iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
CD137에 대한 친화도
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이, 또는 약 40 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 인간 CD137에 대한 항CD137 항체의 친화도는 마우스 CD137에 대한 mAb10의 친화도보다 적어도 2배(예를 들어, 적어도 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배) 더 높다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체의 친화도는 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 250, 200, 175, 150, 125, 110 또는 100 nM 이하이다. 일부 구현예에서, 인간 CD137에 대한 항CD137 항체의 친화도는 마우스 CD137에 대한 mAb10의 친화도보다 적어도 2배(예를 들어, 적어도 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배) 더 높지만, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 250, 200, 175, 150, 125, 110 또는 100 nM 이하이다. 항체의 친화도는 단일 CD137 폴리펩티드에 대한 결합의 강도이다. 일부 구현예에서, 친화도는 평형 해리 상수(KD)로 표시된다. KD 값은 항원에 대한 항체의 결합 친화도에 반비례한다. 따라서, KD 값이 작을수록 항원에 대한 항체의 친화도는 커진다.
항원에 대한 항체의 친화도를 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 결합 친화도를 결정하기 위한 예시적인 방법에는 표면 플라스몬 공명이 사용된다. 표면 플라스몬 공명은, 예를 들어 BIAcore 시스템(Pharmacia Biosensor AB, 스웨덴 웁살라 및 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 사용하여, 바이오센서 매트릭스 내에서 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 생체특이적 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학 현상이다. 추가의 설명에 관해서는, 문헌[Jonsson, U., 등의 (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26; Jonsson, U., i (1991) Biotechniques 11 :620-627; Johnsson, B., 등의 (1995) J. Mol. Recognit. 8: 125-131; 및 Johnsson, B., 등의 (1991) Anal. Biochem. 198:268-277]을 참조한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 40~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 30~40 nM, 40~50 nM, 50~60 nM, 60~70 nM, 70~80 nM, 80~90 nM, 90~100 nM, 45~55 nM, 55~65 nM, 75~85 nM, 85~95 nM, 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM, 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 60~80 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 60~75 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 50~80 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 40~70 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 55~75 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 65~75 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 60~80 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 55~85 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 50~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 45~95 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 85~95 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 75~85 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 75~85 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 55~65 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 45~55 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 80~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 70~80 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 60~70 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 50~60 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 40~50 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 30~40 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 30 nM, 약 31 nM, 약 32 nM, 약 33 nM, 약 34 nM, 약 35 nM, 약 36 nM, 약 37 nM, 약 38 nM, 약 39 nM, 약 40 nM, 약 41 nM, 약 42 nM, 약 43 nM, 약 44 nM, 약 45 nM, 약 46 nM, 약 47 nM, 약 48 nM, 약 49 nM, 약 50 nM, 약 51 nM, 약 52 nM, 약 53 nM, 약 54 nM, 약 55 nM, 약 56 nM, 약 57 nM, 약 58 nM, 약 59 nM, 약 60 nM, 약 61 nM, 약 62 nM, 약 63 nM, 약 64 nM, 약 65 nM, 약 66 nM, 약 67 nM, 약 68 nM, 약 69 nM, 약 70 nM, 약 71 nM, 약 72 nM, 약 73 nM, 약 74 nM, 약 75 nM, 약 76 nM, 약 77 nM, 약 78 nM, 약 79 nM, 약 80 nM, 약 81 nM, 약 82 nM, 약 83 nM, 약 84 nM, 약 85 nM, 약 86 nM, 약 87 nM, 약 88 nM, 약 89 nM, 약 90 nM, 약 91 nM, 약 92 nM, 약 93 nM, 약 94 nM, 약 95 nM, 약 96 nM, 약 97 nM, 약 98 nM, 약 99 nM, 약 100 nM, 약 101 nM, 약 102 nM, 약 103 nM, 약 104 nM, 약 105 nM, 약 106 nM, 약 107 nM, 약 108 nM, 약 109 nM 또는 약 110 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 인간 CD137에 친화성 (KD) 적어도 30 nM이지만 약 110 nM 미만, 적어도 31 nM이지만 약 109 nM 미만, 적어도 32 nM이지만 약 108 nM 미만, 적어도 33 nM이지만 약 107 nM 미만, 적어도 34 nM이지만 약 106 nM 미만, 적어도 35 nM이지만 약 105 nM 미만, 적어도 36 nM이지만 약 104 nM 미만, 적어도 37 nM이지만 약 103 nM 미만, 적어도 38 nM이지만 약 102 nM 미만, 적어도 39 nM이지만 약 101 nM 미만, 적어도 40 nM이지만 약 100 nM 미만; 적어도 41 nM이지만 약 99 nM 미만; 적어도 42 nM이지만 약 98 nM 미만; 적어도 43 nM이지만 약 97 nM 미만; 적어도 44 nM이지만 약 96 nM 미만; 적어도 45 nM이지만 약 95 nM 미만; 적어도 46 nM이지만 약 94 nM 미만; 적어도 47 nM이지만 약 93 nM 미만; 적어도 48 nM이지만 약 92 nM 미만; 적어도 49 nM이지만 약 91 nM 미만; 적어도 50 nM이지만 약 90 nM 미만; 적어도 51 nM이지만 약 89 nM 미만; 적어도 52 nM이지만 약 88 nM 미만; 적어도 53 nM이지만 약 87 nM 미만; 적어도 54 nM이지만 약 86 nM 미만; 적어도 55 nM이지만 약 85 nM 미만; 적어도 56 nM이지만 약 84 nM 미만; 적어도 57 nM이지만 약 83 nM 미만; 적어도 58 nM이지만 약 82 nM 미만; 적어도 59 nM이지만 약 81 nM 미만; 적어도 60 nM이지만 약 80 nM 미만; 적어도 61 nM이지만 약 79 nM 미만; 적어도 62 nM이지만 약 78 nM 미만; 적어도 63 nM이지만 약 77 nM 미만; 적어도 64 nM이지만 약 76 nM 미만; 또는 적어도 65 nM이지만 약 75 nM 미만의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 적어도 40 nM이지만 100 nM 미만의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 둘 이상의 종 유래의 CD137 폴리펩티드와 교차 반응한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 시노몰구스 CD137 및 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 마우스 CD137 및 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 인간 CD137, 마우스 CD137 및 시노몰구스 CD137에 결합한다.
CD137 에피토프 결합
일부 구현예에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132 중 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 모두)을 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132 내의 에피토프에 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 111~132의 전부 또는 일부에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 잔기 K114를 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 잔기 E111, T113 및 K114를 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114 및 N126을 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 아미노산 위치 100 내지 135, 101 내지 135, 102 내지 135, 103 내지 135, 104 내지 135, 105 내지 135, 106 내지 135, 107 내지 135, 또는 108 내지 135, 109 내지 135, 110 내지 135, 또는 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 아미노산 위치 100 내지 135, 101 내지 135, 102 내지 135, 103 내지 135, 104 내지 135, 105 내지 135, 106 내지 135, 107 내지 135, 또는 108 내지 135, 109 내지 135, 110 내지 135, 또는 111 내지 135 내의 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135 내의 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 에피토프는 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ELTK(서열번호 3의 아미노산 잔기 111~114에 상응함)를 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 아미노산 잔기 L112는 또 다른 아미노산 잔기일 수 있다.
일부 구현예에서, 에피토프는 비선형 에피토프이다. 일부 구현예에서, 아미노산 잔기 K114의 돌연변이는 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 인간 CD137에 결합하는 것을 방해한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 인간 CD137의 에피토프에 결합하며, 상기 에피토프는 적어도 아미노산 K114를 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 마우스 CD137에 결합하고 랫트 CD137에는 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 에피토프는 비선형 에피토프이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 마우스 CD137 및 시노몰구스 CD137에 결합하고, 랫트 CD137에는 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 인간, 마우스, 랫트 및 시노몰구스 CD137에 결합하는 것은 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 랫트 CD137에 대한 항체의 친화도보다 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500 또는 1000배 더 큰 친화도로 마우스, 시노몰구스 또는 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 3의 인간 CD137에 비해 위치 114에서 리신을 포함하지 않는 CD137에 대한 항체의 친화도보다 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500 또는 1000배 더 큰 친화도로 마우스, 시노몰구스 또는 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 CD137의 에피토프에 결합하고 인간 CD137의 에피토프에 결합하기 위해 mAb1과 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 단리된 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD137에 결합하여 이를 효능화한다. 일부 구현예에서, 본 개시에 의해 제공되는 항CD137 항체는 CD137에 결합하여 이를 효능화하고, T 세포의 활성화를 공동 자극한다.
본 개시는 본원에 기술된 하나 이상의 특정 기준 항체(예: mAb1)에 의해 인식되는 에피토프의 전부 또는 일부를 포함하는 CD137 상의 에피토프에 결합하기 위해 경쟁하는 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 인간 CD137의 에피토프에 결합하고, 인간 CD137의 에피토프에 결합하기 위한 기준 항체(예: mAb1)와 경쟁하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 1 x 10-6 이하의 평형 해리 상수 KD로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 CD137의 에피토프에 결합하되, 에피토프에 대한 하나 이상의 돌연변이는 항체 및 기준 항체(예: mAb1) 둘 다에 대한 결합을 억제, 감소 또는 차단한다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 본원에 기술된 mAb1 항체이다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 표 3 또는 표 4에 제공된 임의의 하나의 항체이다.
따라서, 본 개시에 의해 제공되는 항CD137 항체는 CD137에 결합된 항체, 또는 이의 단편 또는 부분을 포함하는 결정 구조의 x-선 결정학적 분석을 통해 평가될 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시에 의해 제공되는 항체가 결합된 에피토프는 항체 파라토프 잔기(예: mAb1)의 4 옹스트롬(Å) 내에 상주하거나 위치하는 인간 CD137 항원 상의 잔기를 결정함으로써 식별된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 3개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 4개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 5개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 6개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 7개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 적어도 8개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 9개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 10개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 12개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 3개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 13개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 14개의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체가 결합된 에피토프는 적어도 15개의 아미노산 잔기이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 25개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 24개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 23개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 22개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 21개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 20개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 19개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 18개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 17개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 16개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 15개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 14개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 13개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 12개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 11개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 10개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 9개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 8개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 7개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 6개 미만의 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 5개 미만의 아미노산 잔기이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 잔기가 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 미만인 에피토프에 결합하고 서열번호 3의 아미노산 잔기 K114를 포함한다.
가변 영역
일부 구현예에서, 표 3 및 표 4에 기재된 바와 같은 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 포함하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(b) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 70, 79 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(c) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 71, 80 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(d) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 72, 81 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(e) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 73, 82 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(f) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 83 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(g) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 75, 84 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(h) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 85 및 94에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(i) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 76, 86 및 95에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(j) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 77, 87 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(k) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 88 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(l) 서열번호 49, 57 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(m) 서열번호 49, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(n) 서열번호 49, 59 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(o) 서열번호 49, 60 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(p) 서열번호 50, 61 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(q) 서열번호 50, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(r) 서열번호 51, 62 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(s) 서열번호 52, 63 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(t) 서열번호 50, 64 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(u) 서열번호 50, 65 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(w) 서열번호 107, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(x) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 109, 110 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하되, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
일부 구현예에서, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 항체가 본원에 제공된다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 5 및 29의 각각;
(c) 서열번호 5 및 31의 각각;
(d) 서열번호 5 및 33의 각각;
(e) 서열번호 5 및 35의 각각;
(f) 서열번호 5 및 37의 각각;
(g) 서열번호 5 및 39의 각각;
(h) 서열번호 5 및 41의 각각;
(i) 서열번호 5 및 43의 각각;
(j) 서열번호 5 및 45의 각각;
(k) 서열번호 5 및 47의 각각;
(l) 서열번호 9 및 7의 각각;
(m) 서열번호 11 및 7의 각각;
(n) 서열번호 13 및 7의 각각;
(o) 서열번호 15 및 7의 각각;
(p) 서열번호 17 및 7의 각각;
(q) 서열번호 19 및 7의 각각;
(r) 서열번호 21 및 7의 각각;
(s) 서열번호 23 및 7의 각각;
(t) 서열번호 25 및 7의 각각;
(u) 서열번호 27 및 7의 각각;
(v) 서열번호 102 및 7의 각각;
(w) 서열번호 104 및 7의 각각; 및
(x) 서열번호 5 및 106의 각각.
일부 구현예에서, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 항체가 본원에 제공된다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 5 및 29의 각각;
(c) 서열번호 5 및 31의 각각;
(d) 서열번호 5 및 33의 각각;
(e) 서열번호 5 및 35의 각각;
(f) 서열번호 5 및 37의 각각;
(g) 서열번호 5 및 39의 각각;
(h) 서열번호 5 및 41의 각각;
(i) 서열번호 5 및 43의 각각;
(j) 서열번호 5 및 45의 각각;
(k) 서열번호 5 및 47의 각각;
(l) 서열번호 9 및 7의 각각;
(m) 서열번호 11 및 7의 각각;
(n) 서열번호 13 및 7의 각각;
(o) 서열번호 15 및 7의 각각;
(p) 서열번호 17 및 7의 각각;
(q) 서열번호 19 및 7의 각각;
(r) 서열번호 21 및 7의 각각;
(s) 서열번호 23 및 7의 각각;
(t) 서열번호 25 및 7의 각각;
(u) 서열번호 27 및 7의 각각;
(v) 서열번호 102 및 7의 각각;
(w) 서열번호 104 및 7의 각각; 및
(x) 서열번호 5 및 106의 각각.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 102 및 104로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 7, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 및 106으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 102 및 104로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 7, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 및 106으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하며, 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 항CD137 항체가 본원에 제공되며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다. 일부 구현예에서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산이다. 일부 구현예에서, 서열번호 126의 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, 및/또는 Y100H의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래한다.
일부 구현예에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하며, 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX (서열번호 127)를 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 항CD137 항체가 본원에 제공되며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다. 일부 구현예에서, 서열번호 126의 잔기 F98, D100A, Y100D, 및/또는 Y100F 및/또는 Y100H의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래한다. 일부 구현예에서, 서열번호 126의 잔기 F98, D100A, Y100D, 및/또는 Y100F 및/또는 Y100H의 알라닌을 제외한 임의의 잔기로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 인간 CD137에 특이적으로 결합하며, 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10(서열번호 128)을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는 항CD137 항체가 본원에 제공되며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다. 일부 구현예에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신이다.
특정 표적(예: CD137)에 대한 결합에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 CDR3 내의 아미노산 잔기의 역할은 당업자에게 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 알라닌 스캐닝을 사용하는 초기 분석을 완료하여 항원 결합을 위한 중요 잔기를 결정한다. 본원에 기술된 바와 같이, 알라닌 스캐닝은 주어진 단백질 또는 폴리펩티드의 안정성 또는 기능(들)(예: 결합 친화도)에 대한 특정 야생형 잔기의 기여도를 결정하는 데 사용되는 기술이다. 상기 기술은 폴리펩티드 내의 야생형 잔기를 알라닌 잔기로 치환하는 단계, 이어서 알라닌-치환된 유도체 또는 돌연변이체 폴리펩티드의 안정성 또는 기능(들)(예: 결합 친화도)을 평가하는 단계, 및 야생형 폴리펩티드와 이를 비교하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 중요하지 않은 것으로 식별된 잔기를 추가로 평가하여 항원에 대한 항체의 결합을 조절(예: 결합 증가 또는 감소)한다. 이러한 분석의 비제한적인 예는 돌연변이 심층 스캐닝(deep mutational scanning)이다. 이 방법은 많은 수의 돌연변이를 평가할 수 있게 한다. 일부 구현예에서, 중쇄 CDR3 내의 각각의 아미노산 잔기가 (알라닌을 제외한) 모든 아미노산 잔기로 돌연변이되고, 그 결합이 평가된다. 아미노산 잔기 돌연변이의 영향을 분석하기 위한 다른 방법은 당업계에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 이들 방법을 사용해 인간 CD137에 결합함에 있어서 모든 중쇄 및 경쇄 CDR 내의 잔기의 역할을 평가한다.
예시적인 CD137 결합 항체
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 약 40~100 nM(예: 약 40 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 전술한 인간 CD137(예를 들어, K114를 포함함) 상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 전술한 인간 CD137(예를 들어, K114를 포함함) 상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 전술한 인간 CD137(예를 들어, K114를 포함함) 상의 에피토프와 결합하고, 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 전술한 인간 CD137(예를 들어, K114를 포함함) 상의 에피토프에 결합하며, 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX (서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하며, 여기서 X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X는 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하거나(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임);
(iv) 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 결합하고;
(iii) 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X는 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 항CD137 항체는
(i) 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이의) 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) (서열번호 3의 아미노산 잔기 111 내지 114에 상응하는) ELTK를 포함하는 에피토프에 결합하고;
(ii) 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다(X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산임).
일부 구현예에서, 전술한 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(b) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 101 및 6의 각각; 및
(c) 서열번호 26 및 6의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각; 및
(b) 서열번호 102 및 7의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 102 및 7의 각각; 및
(c) 서열번호 27 및 7의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 26 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 5 및 102로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 5, 27 및 102로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 7의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 101 및 6의 각각; 및
(c) 서열번호 26 및 6의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각; 및
(b) 서열번호 102 및 7의 각각.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 90% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 102 및 7의 각각; 및
(c) 서열번호 27 및 7의 각각.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 적어도 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)의 기능적 특성을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체의 기능적 특성은: CD137의 이량체화의 유도 또는 강화; CD137의 다량체화의 유도 또는 강화; CD137 매개 T 세포 활성화의 유도 또는 강화; CD137 매개 세포독성 T 세포 반응의 유도 또는 강화; CD137 매개 T 세포 증식의 유도 또는 강화; CD137 매개 사이토카인 생성의 유도 또는 강화; 간 내 및/또는 비장 내 T 세포 활성화 및/또는 T 세포 증식의 유도 또는 강화의 결여; 및 종양 성장의 감소 또는 억제를 포함하나 이들로 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 mAb1(즉, 서열번호 4와 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체), mAb8(즉, 서열번호 101과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체) 또는 mAb10(즉, 서열번호 26과 6의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 각각 포함하는 항체)와 적어도 동등한 평형 해리 상수(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 인간 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 인간 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열 번호 1에 제시된 것과 같은 인간 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하되, 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 잔기 Ser228에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 잔기 Ser228에서의 아미노산 치환은 S228P이다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 C-말단 리신 잔기가 제거된 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 C-말단 리신 잔기가 제거되고 S228P 아미노산 치환이 포함된 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열 번호 2에 제시된 것과 같은 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 129 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 130 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 131 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 132 및 133에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 129 및 133에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도, 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 130 및 133에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도, 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 131 및 133에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도, 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 서열번호 132 및 133에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도, 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
CD137 결합 항체의 특징 분석 및 기능
I. 친화도
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 항원 결합 분석에 의해 결정했을 때, 약 40~100 nM(예: 약 40 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 항원 결합 분석에 의해 결정했을 때, 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 항원 결합 분석에 의해 결정했을 때, 약 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 분석은 CD137 폴리펩티드에 대한 항CD137 항체의 결합 친화도를 결정한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분석은 표면 플라스몬 공명이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 표면 플라스몬 공명을 사용해 결정했을 때, 약 40~100 nM(예: 약 40 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 표면 플라스몬 공명을 사용해 결정했을 때, 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 표면 플라스몬 공명을 사용해 결정했을 때, 약 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
"표면 플라스몬 공명"이란 용어는, 예를 들어 BIAcore 시스템(Pharmacia Biosensor AB, 스웨덴 웁살라 및 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 사용하여, 바이오센서 매트릭스 내에서 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 생체특이적 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학 현상을 포함한다. 추가의 설명에 관해서는, 문헌[Joensson, U. 등의 (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Joensson, U. 등의 (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B. 등의 (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; 및 Johnnson, B. 등의 (1991) Anal. Biochem. 198:268-277]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분석은 바이오층 간섭법(BLI)이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 바이오층 간섭법을 사용해 결정했을 때, 약 40~100 nM(예: 약 40 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 바이오층 간섭법을 사용해 결정했을 때, 약 30~100 nM(예: 약 30 nM과 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 바이오층 간섭법을 사용해 결정했을 때, 약 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합한다.
"바이오층 간섭법(biolayer interferometry)" 또는 "BLI"라는 용어는 이의 광학층 검출 표면의 두께에 있어서 나노미터보다 작은 변화의 측정을 가능하게 하는 광학 현상을 포함한다. 일부 구현예에서, 생체분자는 센서 표면에 결합하여 광학층의 두께를 변화시킨다. 광학층 두께 변화의 크기는 결합 분자의 질량 또는 분자량에 비례한다. 일부 구현예에서, CD137은 항체에 의한 결합을 측정하도록 센서 표면에 고정되며, 여기서 결합은 분자량을 변화시켜 광학층에서 이에 상응하는 두께 변화를 생성한다. 일부 구현예에서, BLI는 OCTET 시스템(ForteBio)으로 수행된다.
II 면역 세포 효과
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 사이토카인 분석에 의해 결정했을 때, 면역 세포에 의해 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 사이토카인 분석은 항CD137 항체와 접촉된 면역 세포로부터 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는데, 여기서 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 항CD137 항체에 의해 사이토카인 생성이 유도 또는 강화됨을 나타낸다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생성의 증가는 대조군 항체(예를 들어, CD137에 결합하지 않고 사이토카인 생성을 유도하지 않는 항체)와 비교해 적어도 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 많다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 사이토카인 분석에 의해 결정했을 때, 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키는데, 여기서 사이토카인 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 면역 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계; 및
(ii) 면역 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하되,
적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 항CD137 항체가 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 사이토카인 분석에 의해 결정했을 때, 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키는데, 여기서 사이토카인 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 면역 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계; 및
(ii) 면역 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는 단계; 및
(iii) 면역 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 기준 면역 세포로부터 분비된 양과 비교하되,
기준 면역 세포는 대조군 항체와 접촉되고, 기준 면역 세포에 비해 면역 세포로부터 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 인간 CD137 매개 사이토카인 생성이 유도 또는 강화되는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 사이토카인 분석에 의해 결정했을 때, 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키는데, 여기서 사이토카인 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 면역 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(ii) 면역 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는 단계; 및
(iii) 면역 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 기준 면역 세포로부터 분비된 양 또는 수준과 비교하되,
기준 면역 세포는 항CD137 항체와 접촉되고, 기준 면역 세포에 비해 면역 세포로부터 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 면역 세포에 의한 인간 CD137 매개 사이토카인 생성이 유도 또는 강화되는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 사이토카인은 IL-2, IFNγ, TNFα, IL-13, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IFNγ이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 TNFα이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-13이다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 IL-2 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 TNFα 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 IL-13 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFN γ 이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IFN γ 이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IFN γ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13 및 IFN γ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFNγ, TNFα 및 IL-13이다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 기준 면역 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다.
일부 구현예에서, 사이토카인 분석은 사이토카인 비드 어레이 분석법이다. 사이토카인 비드 어레이 분석법은 샘플에서 다수의 사이토카인의 다중 분석물 유세포 계측 결정을 가능하게 하는 비드 기반 면역 분석법이다. 크기 또는 색상이 다른 미소구체의 사용은 사이토카인 비드 어레이 분석의 기초로서, 각각의 미세구체(또는 "비드")는 항원(예를 들어, 사이토카인)에 특이적으로 결합하는 항체로 코팅된다. 그런 다음, 항체로 코팅된 비드를 검출기 항체와 함께 샘플에 도입한다. 그런 다음, 비드:항원:검출기 항체의 복합체를 유세포 분석에 의해 분석한다. 상업적으로 입수 가능한 사이토카인 비드 어레이 분석법은 BD™ Cytometric 비드 어레이 시스템(BD Biosciences) 및 Luminex® Assays(R&D Systems)를 포함하나 이들로 한정되지는 않는다. 일부 구현예에서, 인간 CD137 매개 사이토카인 생성의 유도 또는 강화는 사이토카인 비드 어레이 분석법에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 인간 CD137 매개 사이토카인 생성의 유도 또는 강화는 Luminex® Assay에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 분석은 Meso Scale Discovery(MSD) 분석(Meso Scale Diagnostics; 메릴랜드주 록빌 소재)이다. MSD 분석은 관심 항원(예: 사이토카인)에 특이적으로 결합하는 전기화학발광-표지된 항체의 검출에 기초한, 상업적으로 입수 가능한 분석법이다. MSD 분석법은 생물학적 시약(예: 사이토카인에 특이적인 포획 항체)을 부착할 수 있는 마이크로플레이트 웰의 바닥에 높은 결합 탄소 전극을 포함한다. MSD 분석법은 검출 항체에 접합되는 전기화학발광 표지를 사용한다. 샘플을 마이크로플레이트 웰에 첨가하고 MSD 기기로 플레이트 전극에 전기를 인가하여 전기 화학발광 표지에 의한 발광을 유도한다. 광 강도를 측정하여 샘플 내의 분석물(예를 들어, 사이토카인)을 정량화한다. 일부 구현예에서, 인간 CD137 매개 사이토카인 생성의 유도 또는 강화는 Meso Scale Discovery (MSD) 분석에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, T 세포 활성화 분석은 본원에 기술된 항CD137 항체와 접촉된 T 세포로부터 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는데, 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 T 세포 활성화의 유도 또는 강화를 나타낸다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생성의 증가는 대조군 항체(예를 들어, CD137에 결합하지 않고 사이토카인 생성을 유도하지 않는 항체)와 비교해 적어도 1배, 2배, 3배, 4배 또는 5배 더 많다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계; 및
(iii) 단계 (ii) 이후에 T 세포에 의해 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하되,
적어도 하나의 사이토카인의 수준의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포에 의해 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는 단계; 및
(iv) T 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 기준 T 세포로부터 분비된 양 또는 수준과 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체와 접촉되지 않고, 기준 T 세포에 비해 T 세포로부터 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포에 의해 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하는 단계; 및
(iv) T 세포에 의해 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양을 기준 T 세포로부터 분비된 양과 비교하되,
기준 T 세포는 기준 항체와 접촉되고, 기준 T 세포에 비해 T 세포로부터 생성된 적어도 하나의 사이토카인의 양의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, T 세포 활성화 분석은 본원에 기술된 항CD137 항체와 접촉 후 T 세포에 의해 분비된 적어도 하나의 사이토카인의 수준을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 적어도 하나의 사이토카인은 IL-2, IFNγ, TNFα 및 IL-13으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IFNγ이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 TNFα이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-13이다. 일부 구현예에서, T 세포 활성화 분석은 적어도 하나의 사이토카인의 양을 결정하기 위한 사이토카인 분석, 예컨대 본원에 기술된 것들을 포함한다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 TNFα이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 TNFα 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-13 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IL-13이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및 IFNγ이다. 일부 양태에서, 생성된 사이토카인은 IFNγ, TNFα 및 IL-13이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 검출하는 단계를 포함하되, 적어도 하나의 활성화 마커의 발현 수준의 증가는 T 세포 활성화의 유도 또는 강화를 나타낸다. 일부 구현예에서, "표면 발현의 증가(increase in surface expression)"는 대조군 항체가 존재하거나 항체의 부재한 경우의 표면 발현에 비해 표면 발현이 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 증가하는 것을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 시험관 내 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계; 및
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 검출하되,
적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 결정하는 단계; 및
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체와 접촉되지 않고, 기준 T 세포에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 결정하는 단계;
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체와 접촉되고, 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 생체 내 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계; 및
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 검출하되,
적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 CD137 매개 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 결정하는 단계; 및
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체가 투여되지 않은 대상체로부터 단리되고, 기준 T 세포에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 결정하는 단계; 및
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 대조군 항체와 접촉된 대상체로부터 단리되고, 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현의 증가는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 생체 내 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, 간 내 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키지 않는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137을 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 대상체의 간으로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 검출하는 단계; 및
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체가 투여되지 않은 대상체로부터 단리되고, 임의로, 기준 T 세포는 대조군 항체가 투여된 대상체로부터 단리되며, 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현 증가의 부재는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 생체 내 T 세포 활성화 분석에 의해 결정했을 때, 비장 내 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키지 않는데, 여기서 T 세포 활성화 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137을 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 대상체의 비장으로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(iii) T 세포 상에서 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 검출하는 단계; 및
(iv) T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현과 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현을 비교하되,
기준 T 세포는 항CD137 항체가 투여되지 않은 대상체로부터 단리되고, 임의로, 기준 T 세포는 대조군 항체가 투여된 대상체로부터 단리되며, 기준 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현에 비해 T 세포 상에서의 적어도 하나의 활성화 마커의 표면 발현 증가의 부재는 항CD137 항체가 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, "유도하거나 강화시키지 않는(does not incude or enhance)"은 활성(예: T 세포 활성화)의 부재, 또는 기준 항체에 의한 증가에 비해 활성 증가의 결여를 지칭하도록 의도된다.
일부 구현예에서, T 세포 활성화 마커의 표면 발현은 항체 부재 시의 표면 발현과 동등하다. 일부 구현예에서, T 세포 활성화 마커의 표면 발현은 기준 항체 존재 시의 표면 발현보다 적으며, 항체 부재 시의 표면 발현과 비교해 표면 발현을 적어도 1배, 5배, 10배, 50배, 또는 100배 더 높게 유도하거나 강화시킨다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 활성화 마커는 CD25, CD69 및 CD40L로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 활성화 마커는 CD25이다.
일부 구현예에서, T 세포는 종양을 가진 대상체로부터 단리된다. 일부 구현예에서, T 세포는 종양으로부터 단리된다. 일부 구현예에서, 대조군 항체는 이소형 대조군 항체이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 하나 이상의 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 하나 이상의 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 면역 세포 침윤 분석은 종양에서 하나 이상의 면역 세포 마커를 발현하는 면역 세포의 양을 결정한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 면역 세포 마커는 항체로 표지된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 면역 세포 마커는 CD45, CD25, FOXP3, CD4, CD8, F4/80, CD11b, TIGIT 및 PD-1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 종양에서 하나 이상의 면역 세포 마커를 발현하는 면역 세포의 양은 유세포 분석에 의해 결정된다. 유세포 분석에 의해, 하나 이상의 면역 세포 마커를 발현하는 면역 세포를 정량화하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 기준 항체에 비해 하나 이상의 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 동일한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합하지는 않는다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 동일한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 상이한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합하지는 않는다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 상이한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, CD45를 발현하는 면역 세포가 대상체에서 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 증가시키는데, 상기 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 종양을 가진 대상체에게 투여하는 단계;
(ii) 종양의 샘플을 수득하는 단계;
(iii) 샘플을 CD45에 특이적으로 결합하는 형광 표지된 검출 항체와 접촉시키되, 검출 항체는 CD45를 발현하는 면역 세포를 형광 표지하는 단계; 및
(iv) CD45를 발현하는 형광 표지된 면역 세포의 양을 유세포 계측에 의해 결정하되,
CD45를 발현하는 형광 표지된 면역 세포의 양이 종양에서 증가한 것은, 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 항CD137 항체가 유도하거나 강화시키는 것임을 나타내는 단계. 일부 구현예에서, CD45를 발현하는 면역 세포의 양의 증가는 종양 미세환경 내 총 세포의 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 80%이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 하나 이상의 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 감소시키거나 억제한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 기준 항체에 비해 하나 이상의 면역 세포가 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 동일한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합하지는 않는다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 동일한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 상이한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합하지는 않는다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 항CD137 항체와 상이한 이소형을 포함하는 항체이며, CD137에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 세포의 감소는 종양 미세환경 내 총 세포의 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, 종양 관련 대식 세포(tumor associated macrophage)가 대상체에서 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 감소시키는데, 상기 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 종양의 샘플을 수득하는 단계;
(ii) 샘플을 종양 관련 대식 세포를 표지하는 하나 이상의 항체와 접촉시키되, 하나 이상의 항체는 F4/80, CD11b, CD45 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 세포 마커에 특이적으로 결합하는 단계; 및
(iii) 표지된 종양 관련 대식 세포의 양을 유세포 계측에 의해 결정하는 단계. 일부 구현예에서, 종양 관련 대식 세포는 종양 미세환경 내 면역 세포의 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 또는 5% 미만이다. 일부 구현예에서, 종양 관련 대식 세포는 F4/80, CD11b 및 CD45를 발현한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 면역 세포 침윤 분석에 의해 결정했을 때, T 조절(Treg) 세포가 대상체에서 종양 미세환경 내로 침윤하는 것을 감소시키는데, 상기 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 종양의 샘플을 수득하는 단계;
(ii) 샘플을 종양 관련 대식 세포를 표지하는 하나 이상의 항체와 접촉시키되, 하나 이상의 항체는 CD25, FOXP-3, CD4 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 세포 마커에 특이적으로 결합하는 단계; 및
(iii) 표지된 Treg 세포의 양을 유세포 계측에 의해 결정하는 단계. 일부 구현예에서, Treg 세포는 종양 미세환경 내 CD4+ T 세포의 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만이다. 일부 구현예에서, Treg 세포는 CD4, FOXP-3 및 CD25를 발현한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 기능 소실 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 기능 소실로부터 T 세포를 보호하고/하거나 T 세포 기능 소실을 역전시킨다. 기능 소실된 T 세포는 이들의 기저 분자 메커니즘에 기초하여 아네르기(anergy) 및 세포 노화(senescence)와 같은 다른 T 세포 기능 장애와 구별될 수 있다(Crespo 등의 (2013) Curr Opin Immunol 25(2):241-221 참조). 아네르기는 공동자극 신호의 부재로 인해 프라이밍 도중에 발생하고, 세포 노화는 광범위한 증식 후의 성장 정지인 반면, 기능 소실된 T 세포는, 초기에 T 세포 효과기 기능을 얻어 이를 제공하였지만 종양에서 발생하는 지속성 항원 및 염증 매개체 둘 다로부터의 연속적인 T 세포 수용체(TCR) 자극으로 인해 T 세포 효과기 기능의 점진적 저하를 나타내는 T 세포로부터 생성된다(Wherry & Kurachi (2015) Nat Rev Immunol 15(8):486-99 참조). T 세포 기능 소실의 특징은, 생체 내 및/또는 생체 외 T 세포 기능의 연속적인 저하, 다수의 억제 수용체(IR)(예를 들어, PD-1, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, CD244, CD160, TIGIT)의 발현 증가, 효과기 사이토카인 분비(예: IL-2, 인터페론 감마(IFNγ), 종양 괴사인자 알파(TNFα))의 진행성 손실 또는 감소, CC 케모카인(β-케모카인) 생성의 손실 또는 감소, IL-7 및 IL-15에 대한 반응성 부족, 증식 능력의 손실 또는 감소, 생체 내 및/또는 생체 외 세포 용해 활성의 손실 또는 감소, 세포 대사의 변경, 및 기능 소실되지 않은 T 세포 대비 상이한 전사 프로파일을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다. 심각한 기능 소실 T 세포는 결실로 인해 사멸할 수 있다(Yi 등, (2010) Immunology 129(4):474-481 참조).
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 기능 소실 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 기능 소실로부터 T 세포를 보호하고/하거나 T 세포 기능 소실을 역전시키는데, 여기서 T 세포 기능 소실 분석은, 본원에 기술된 항CD137 항체로 치료된 T 세포로부터 분비된 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준을 결정하고, 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준은 T 세포 기능 소실로부터의 보호 또는 이의 역전을 나타낸다. 일부 구현예에서, T 세포 기능 소실 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체(예: 인간 대상체)로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 T 세포 기능 소실을 유도하는 항원과 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iv) T 세포로부터 분비된 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양을 결정하는 단계; 및
(v) T 세포로부터 분비된 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준을 기준 T 세포로부터 분비된 양 또는 수준과 비교하되,
기준 T 세포는 T 세포 기능 소실을 유도하는 항원과 접촉되지 않으며, T 세포 및 기준 T 세포로부터 분비된 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준의 차이는 T 세포 기능 소실로부터의 보호 또는 이의 역전을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 하나 이상의 효과기 사이토카인은 IL-2, IFNγ, 및 TNFα로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준은 ELISA에 의해 결정된다. 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준의 결정에 적합한 ELISA는 당업계에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준은 Meso Scale Discovery에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 효과기 사이토카인의 양 또는 수준은 본원에 기술된 사이토카인 생성 분석법 중 어느 하나에 의해 결정된다.
기능 소실된 T 세포의 점진적 기능 이상은 IR의 발현을 수반하는데, 이는 표적 세포 상의 리간드와 상호작용할 때 억제 신호를 핵에 전송한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 T 세포 기능 소실 분석에 의해 결정했을 때, T 세포 기능 소실로부터 T 세포를 보호하고/하거나 T 세포 기능 소실을 역전시키는데, 여기서 T 세포 기능 소실 분석은, 본원에 기술된 항CD137 항체로 치료된 T 세포 상에서 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준을 결정하고, 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준은 T 세포 기능 소실로부터의 보호 또는 이의 역전을 나타낸다. 일부 구현예에서, T 세포 기능 소실 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 대상체(예: 인간 대상체)로부터 T 세포를 단리하는 단계;
(ii) T 세포를 T 세포 기능 소실을 유도하는 항원과 접촉시키는 단계;
(iii) T 세포를 항CD137 항체와 접촉시키는 단계;
(iv) T 세포 상에서 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준을 결정하는 단계; 및
(v) T 세포 상의 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준을 기준 T 세포로부터 분비된 양 또는 수준과 비교하되, 기준 T 세포는 T 세포 기능 소실을 유도하는 항원과 접촉되지 않으며, T 세포 및 기준 T 세포 상의 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준의 차이는 T 세포 기능 소실로부터의 보호 또는 이의 역전을 나타내는 단계.
일부 구현예에서, 하나 이상의 억제 수용체는 TIGIT 및 PD-1로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 억제 수용체의 발현 수준은 유세포 계측에 의해 결정된다. 유세포 계측에 의해 면역 세포(예를 들어, T 세포) 상의 억제 수용체의 발현 수준을 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
일부 구현예에서, 기능 소실된 T 세포의 양은 종양 미세환경에서 총 CD8+ 또는 CD4+ T 세포의 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만이다.
본원에 기술된 분석법이 '대상체로부터 T 세포를 단리하는 것'을 지칭하는 경우, 분석법은 대상체로부터 이전에 단리된 T 세포 상에서 적절히 수행될 수 있음을 이해해야 한다.
본원에 기술된 분석법이 (i) 대상체에게 항CD137 항체를 투여하는 것 및 (ii) 대상체로부터 T 세포를 단리하는 것을 지칭하는 경우, 분석법은 항CD137 항체가 투여된 대상체로부터 이전에 단리된 T 세포 상에서 적절히 수행될 수 있음을 이해해야 한다.
본원에 기술된 분석법이 '종양으로부터 샘플을 수득하는 것'을 지칭하는 경우, 분석법은 대상체로부터 이전에 단리된 종양 샘플 상에서 적절히 수행될 수 있음을 이해해야 한다.
본원에 기술된 분석법이 (i) 종양을 가진 대상체에게 항CD137 항체를 투여하는 것 및 (ii) 종양으로부터 샘플을 수득하는 것을 지칭하는 경우, 분석법은 항CD137 항체가 투여된 대상체로부터 이전에 단리된 종양 샘플 상에서 적절히 수행될 수 있음을 이해해야 한다.
III 비리간드 결합
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 리간드 결합 분석에 의해 결정했을 때, CD137의 비리간드 결합 영역에 결합한다. 리간드 결합 분석(LBA)은 2개의 반응물 분자들(예를 들어, 수용체 및 리간드 폴리펩티드) 간에 발생하는 상호작용의 척도를 제공하는 분석법, 또는 분석 절차이다. 적절하게는, LBA는 2개의 반응물 분자(예를 들어, 수용체 및 리간드 폴리펩티드) 간의 친화도의 정도에 대한 척도를 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 리간드 결합 분석은 수용체(예: CD137)에 대한 리간드 분자(예: CD137L)의 결합의 존재, 속도, 정도, 또는 이들의 조합을 결정하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 수용체에 대한 리간드 결합의 존재, 속도 및/또는 정도를 결정하기 위해, 리간드 결합 분석은 리간드:수용체 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체에 대한 리간드 결합의 존재, 속도 및/또는 정도를 결정하기 위해, 리간드 결합 분석은 리간드:수용체 복합체의 해리를 결정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 형광 표지된 리간드를 수용체로 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 형광 표지된 수용체를 리간드로 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 리간드 수용체 복합체에 특이적으로 결합하는 형광 표지된 항체를 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 형광을 검출하고 정량화하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 형광 편광(FP) 및 형광 이방성(FA)을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 방사성 표지된 리간드를 수용체로 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 방사성 표지된 수용체를 리간드로 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 리간드 수용체 복합체에 특이적으로 결합하는 방사성 표지된 항체를 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 방사성을 검출하고 정량화하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 양적 방사성 자가 촬영(quantitative autoradiography) 및 섬광 계수(scintillation counting)를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 생물발광 표지된 리간드를 수용체로 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 복합체에서 생물발광 표지된 수용체를 리간드로 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 리간드 수용체 복합체에 특이적으로 결합하는 생물발광 표지된 항체를 검출하고/하거나 그 양을 정량화함으로써 결정된다. 생물발광(bioluminescence)을 검출하고 정량화하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 발광법(luminometry)을 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 리간드:수용체 복합체의 형성 및/또는 해리는 전술한 바와 같은 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 리간드 결합 분석은 항체의 존재 하에 수용체에 대한 리간드 결합의 존재, 속도 및/또는 정도를 결정함으로써, 수용체에 특이적으로 결합하는 항체(예: 항CD137 항체)가 리간드 수용체 복합체의 형성에 영향을 미치는지 여부를 결정한다. 일부 구현예에서, 수용체(예: CD137)에 특이적으로 결합하여 리간드:수용체 복합체(예: CD137:CD137L 복합체)의 형성을 감소시키거나, 파괴하거나 차단하는 항체(예: 항CD137 항체)는 "리간드 차단 항체"로서 알려져 있다. 일부 구현예에서, "리간드 차단 항체"는 리간드 차단 항체의 부재 시 발생하는 리간드:수용체 복합체(예를 들어, CD137:CD137L 복합체)의 형성과 비교해 리간드:수용체 복합체(예를 들어, CD137:CD137L 복합체)의 형성을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50%만큼 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체(예: CD137)에 특이적으로 결합하고 리간드:수용체 복합체(예: CD137:CD137L 복합체)의 형성을 감소, 파괴 또는 차단하지 않는 항체(예: 항CD137 항체)는 "비리간드 차단 항체"로서 지칭된다. 일부 구현예에서, "비리간드 차단 항체"는 비리간드 차단 항체의 부재 시 발생하는 리간드:수용체 복합체(예를 들어, CD137:CD137L 복합체)의 형성과 비교해 리간드:수용체 복합체(예를 들어, CD137:CD137L 복합체)의 형성을 10% 미만, 5% 미만, 2% 미만, 1% 미만 만큼 감소시킬 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 리간드 결합 분석은 수용체에 결합하는 항체를 "리간드 차단 항체" 또는 "비리간드 차단 항체"로서 특징을 분석한다.
일부 구현예에서, 리간드 결합 분석은 수용체에 특이적으로 결합하여 리간드:수용체 복합체의 형성을 촉진하는 항체를 특징 분석한다. 일부 구현예에서, 리간드 결합 분석은 수용체에 특이적으로 결합하여 리간드:수용체 복합체의 형성을 안정화하는 항체를 특징 분석한다. 일부 구현예에서, 항체에 의한 리간드:수용체 복합체의 형성 유도 및/또는 안정화는 항체의 작용적 효과에 기여한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 리간드 결합 분석에 의해 결정했을 때, CD137을 효능화한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 리간드 결합 분석(LBA)에 의해 결정했을 때, CD137에 결합하여 CD137L 결합을 유도한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 리간드 결합 분석(LBA)에 의해 결정했을 때, CD137에 결합하여 CD137L 결합을 유도하며, 여기서 리간드 결합 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 CD137 및 CD137L과 다양한 농도로 조합하되, CD137 및 CD137L은 CD137:CD137L 복합체를 형성하는 단계; 및
(ii) 항CD137 항체의 존재 하에 시간의 경과에 따라 CD137:CD137L 복합체를 검출하되,
항CD137 항체의 존재 하에 CD137:CD137L 복합체의 증가는 항CD137 항체가 CD137에 대한 CD137L의 결합을 유도함을 나타내는 단계. 항CD137 항체의 존재 하에 CD137:CD137L 복합체의 증가는 항CD137 항체의 부재 하에 CD137:CD137L 복합체의 양보다 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 5배, 적어도 10배, 또는 적어도 20배 더 많을 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 리간드 결합 분석(LBA)에 의해 결정했을 때, CD137의 비리간드 결합 영역에 결합하며, 여기서 리간드 결합 분석은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 항CD137 항체를 CD137 및 CD137L과 다양한 농도로 조합하되, CD137 및 CD137L은 CD137:CD137L 복합체를 형성하는 단계; 및
(ii) 항CD137 항체의 존재 하에 시간의 경과에 따라 CD137:CD137L 복합체를 검출하되,
항CD137 항체의 존재 하에 CD137:CD137L 복합체에 변화가 없는 것은 항CD137 항체가 CD137의 비리간드 결합 영역에 결합함을 나타내는 단계. 일부 구현예에서, CD137:CD137L 복합체의 2% 미만의 변화는 항CD137 항체가 CD137의 비리간드 결합 영역에 결합함을 나타낸다. 일부 구현예에서, CD137:CD137L 복합체의 5% 미만의 변화는 항CD137 항체가 CD137의 비리간드 결합 영역에 결합함을 나타낸다. 일부 구현예에서, CD137:CD137L 복합체의 10% 미만의 변화는 항CD137 항체가 CD137의 비리간드 결합 영역에 결합함을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 바이오층 간섭법에 의해 결정했을 때, CD137의 비리간드 결합 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 표면 플라스몬 공명 촬영(SPRi)에 의해 결정했을 때, CD137의 비리간드 결합 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, CD137 및 CD137L은 항CD137 항체가 미리 첨가된 센서에 순차적으로 도말된다(즉, 항체가 센서 상에 포획됨). 일부 구현예에서, 비리간드 결합 영역에 대한 항CD137 항체의 결합은 CD137L에 노출시 반응의 증가에 의해 표시된다.
IV CD137 결합 항체의 기능
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 T 세포 증식을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 항종양 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하여 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, CD137과 CD137L의 상호 작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 약 30~100 nM(예: 약 30 nM와 약 100 nM 사이)의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 T 세포 증식을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 항종양 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 기능 소실을 억제하거나 감소시키고 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, T 세포 증식을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 항종양 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 활성화를 유도하거나 강화시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, T 세포 증식을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 항종양 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 면역 세포에 의한 사이토카인 생성을 유도하거나 강화시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 항종양 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 T 세포 증식을 유도하거나 강화시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 항종양 효능을 나타내고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 대식 세포 분화 및/또는 활성화를 억제하거나 감소시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시키고, 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 NFκβ 신호전달을 유도하거나 강화시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시키고, 간 독성을 유도하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시키고, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시키고, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도하거나 강화시키고, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 간 독성을 유도하지 않으며, 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 간 독성을 유도하지 않으며, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 간 독성을 유도하지 않으며, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합하며, CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 세포 외 CD137 상의 비리간드 결합 도메인에 결합하며, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 작용제 항체는 CD137과 CD137L의 상호작용을 억제하지 않으며, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다.
에피토프 맵핑
본 개시는 인간 CD137의 에피토프에 특이적으로 결합하고 인간 CD137의 에피토프에 결합하기 위해 기준 mAb(예를 들어, mAb1)와 경쟁하는 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 항CD137 항체의 에피토프의 특징을 분석하고, 맵핑하거나 달리 설명하는 방법은 구조적, 기능적 또는 연산 방법으로 그룹화될 수 있다. 항체 및 항체가 결합하는 상응 항원 간의 상호작용의 정확한 분자 구조를 결정하기 위한 특히 적합한 구조적 방법은 x-선 결정학(대안적으로 "x-선 공동-결정학")이다. 결합된 항체-항원 쌍의 결정 구조는 항원의 에피토프 및 항체의 파라토프 둘 다에서 측쇄 및 주쇄 원자 모두의 개발 아미노산 간의 주요 상호작용에 대한 매우 정확한 결정을 가능하게 한다. 서로에 대해 4옹스트롬(Å) 이내에 위치하는 아미노산은 일반적으로 접촉 잔기로 간주된다. 방법론은 일반적으로 항체 및 항원의 정제, 복합체의 형성 및 정제, 이어지는 연속 차수의 결정화 스크리닝 및 회절-품질 결정을 얻기 위한 최적화의 단계들 포함한다. 구조 용액은 x-선 결정학 이후에 흔히는 싱크로트론 소스(synchrotron source)에서 수득된다. 에피토프 맵핑을 위한 다른 구조적 방법은 질량 분광분석법, 가교-결합식 질량 분광분석법, 및 핵 자기 공명(NMR)에 결합된 수소-중수소 교환을 포함하나 이에 한정되지는 않는다(예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996); Abbott 등의 (2014) Immunology 142(4):526-535 참조).
에피토프 맵핑을 위한 기능적 방법은 당업계에 잘 알려져 있고 전형적으로 전체 단백질, 단백질 단편 또는 펩티드에 대한 항체 결합의 평가 또는 정량화를 포함한다. 에피토프 맵핑을 위한 기능적 방법은, 예를 들어 선형 또는 입체형 에피토프를 식별하는 데 사용될 수 있고/있거나 2개 이상의 구별되는 항체가 동일하거나 유사한 에피토프에 결합할 때를 추론하는데 사용될 수 있다. 에피토프 맵핑을 위한 기능적 방법은, 예를 들어 면역블롯팅 및 면역침강 분석을 포함하며, 여기서 CD137 유래의 중첩 또는 연속 펩티드는 항CD137 항체, 예를 들어, mAb1과의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프 맵핑을 위한 다른 기능적 방법은 어레이 기반 올리고펩티드 스캐닝(대안적으로는 "중첩 펩티드 스캐닝" 또는 "펩스캔 분석(pepscan analysis)"으로 알려짐), 부위-유도성 돌연변이 유발(예컨대, 알라닌-스캐닝 돌연변이 유발), 및 고처리량 돌연변이 유발 맵핑(예컨대, 샷건(shotgun) 돌연변이 유발 맵핑)을 포함한다.
많은 유형의 경쟁 결합 분석법이 알려져 있으며, 예를 들어, 고상 직접 또는 간접 방사면역검정(RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(Stahli 등의 Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Kirkland 등의 Immunol. 137:3614 (1986) 참조); 고상 직접 표지 분석, 고상 직접 표지 샌드위치 분석(Harlow 및 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); I-125 표지를 사용하는 고상 직접 표지 RIA(Morel 등의 Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Cheung 등의 Virology 176:546 (1990) 참조); 및 직접 표지 RIA (Moldenhauer 등의 Scand. J. Immunol. 32:77 (1990) 참조) 등이 알려져 있다. 일반적으로, 이러한 분석은 고체 표면이나 세포에 결합된 정제된 항원, 및 1) 비표지 시험 항원 결합 단백질 및 표지된 기준 항원 결합 단백질, 또는 2) 표지된 시험 항원 결합 단백질 및 비표지 기준 항원 결합 단백질을 사용하는 것을 포함한다. 경쟁 억제는 시험 항원 결합 단백질의 존재 하에 고체 표면이나 세포에 결합된 라벨의 양을 결정함으로써 측정된다. 일반적으로, 시험 항원 결합 단백질은 과잉으로 존재한다. 경쟁 분석(경쟁 항원 결합 단백질)에 의해 식별된 항원 결합 단백질은, 기준 항원 결합 단백질(예를 들어, mAb1)과 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질, 및 입체 장애가 일어나도록 기준 항원 결합 단백질(예: mAb1)이 결합된 에피토프와 충분히 가까운 인접 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 경쟁 결합을 결정하기 위한 방법에 관한 추가 세부사항이 본원의 실시예에 제공된다. 일반적으로, 경쟁하는 항원 결합 단백질이 과량으로(예를 들어, 약 1배, 약 5배, 약 10배, 약 20배, 약 50배, 또는 약 100배 과량으로) 존재하는 경우, 이는 공통 항원에 대한 기준 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 약 40~45%, 약 45~50%, 약 50~55%, 약 55~60%, 약 60~65%, 약 65~70%, 약 70~75% 또는 약 75% 이상 만큼 억제(예: 감소 또는 차단)하게 된다. 일부 경우에, 결합은 적어도 약 80~85%, 약 85~90%, 약 90~95%, 약 95~97%, 또는 약 97% 이상 만큼 억제된다.
부위-유도성 돌연변이 유발 방법은 표적 부위-유도성 돌연변이 유발을 포함하는데, 이 경우 중요 아미노산은 단백질 서열을 따라 치환을 체계적으로 도입한 다음 각각의 치환이 항체 결합에 미치는 영향을 결정함으로써 식별된다. 이는 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발(alanine scanning mutagenesis)" (Cunningham 및 Wells (1989) Science 244:1081-085 참조), 또는 CD137에서 아미노산 잔기의 일부 다른 형태의 점 돌연변이 유발에 의해 이뤄질 수 있다. 이론에 구속되지 않고, 항원에서 제1 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 모든 아미노산 돌연변이가 본질적으로 제2 또는 그 이상의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우, 2개 이상의 항체(예를 들어, 시험 항체 및 기준 항체, 예컨대 mAb1)는 동일한 에피토프를 갖는다.
샷건 돌연변이 유발 맵핑은 표적 유전자에 대한 포괄적인 플라스미드 돌연변이 라이브러리를 사용하는데, 라이브러리 내의 각 클론은 독특한 아미노산 돌연변이를 가지며, 전체 라이브러리는 표적 단백질 내의 모든 아미노산을 포함한다. 돌연변이 라이브러리를 구성하는 클론은 마이크로플레이트에 개별적으로 배열되고, 살아있는 포유류 세포 내에서 발현되며, 관심 항체와의 면역반응성에 대해 시험된다. 항체 에피토프에 중요한 아미노산은 반응성 상실에 의해 식별된 다음, 단백질 구조 상에 맵핑되어 에피토프를 가시화한다. 포유류 세포 내에서의 표적 단백질 항원의 발현은 종종 표적 단백질 항원의 천연 구조를 제공하는데, 이는 선형 및 입체형 에피토프 구조 모두가 복합 단백질에 대해 맵핑될 수 있게 한다. (Paes 등의 J. Am. Chem. Soc. 131 (20): 6952-6954 (2009); Banik 및 Doranz, Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28 (2010) 참조).
항CD137 항체에 의해 결합된 에피토프는 펩티드 스캐닝 방법을 사용하여 결정될 수도 있다. 펩티드 스캐닝에서는, 표적 단백질의 중첩 분절 유래의 짧은 펩티드 서열의 라이브러리가 관심 항체에 결합하는 능력에 대해 CD137을 시험한다. 펩티드는 합성되며, "펩스캔" 방법론(WO 84/03564; WO 93/09872)에서와 같이 고상 스크리닝을 위한 다수의 방법(Reineke 등, Curr. Opin. Biotechnol. 12: 59-64, 2001 참조) 중 어느 하나에 의해, 예를 들어 ELISA 또는 BIACORE를 사용하거나, 칩 상에서 결합에 대해 스크리닝된다.
최근에 개발된 CLIPS(chemical linkage of peptides onto scaffolds)라는 명칭의 기술을 사용해 입체형 에피토프를 매핑할 수 있다. 펩티드의 느슨한 단부가 합성 골격(scaffold) 상에 고정됨으로써, 골격화된 펩티드가 온전한 단백질 내의 상응하는 서열과 동일한 공간 구조를 채택할 수 있다. CLIPS 기술은 선형 펩티드를 환형 구조('단일 루프' 포맷)로 고정시키고, 단백질 결합 부위의 상이한 부분들을 합쳐서('이중 루프', '삼중 루프' 등의 포맷), 항체 결합에 대해 분석될 수 있는 입체형 에피토프를 생성하는데 사용된다. (미국 특허 제7,972,993호 참조).
본 개시에 의해 제공되는 항체에 의해 결합된 에피토프는 연산 방법을 사용해 맵핑될 수도 있다. 이들 방법에서, 예를 들어, 펩티드 단편의 라이브러리가 파지 또는 세포의 표면 상에 디스플레이된다. 그런 다음, 선택적 결합 분석을 사용해 이들 단편에 대한 항체를 스크리닝함으로써 에피토프가 맵핑된다. 파지 디스플레이를 사용해 수득된 선형 친화도-선택 펩티드에 기초하여 입체형 에피토프에 대한 예측을 가능하게 하는 다수의 연산 도구가 개발되었다(Mayrose 등, (2007) Bioinformatics 23:3244-3246 참조). 파지 디스플레이에 의해 입체형 에피토프를 검출하는 방법들도 이용 가능하다. 미생물 디스플레이 시스템은 입체형 에피토프의 식별을 위해 세포 표면 상에사 적절하게 접힌 항원성 단편을 발현하는데 사용될 수도 있다(Cochran 등, J. Immunol. Meth. 287: 147-158, 2004; Rockberg 등, Nature Methods 5: 1039-1045, 2008 참조).
단백질 분해 및 질량 분광법을 포함하는 방법을 사용해 항체 에피토프를 결정할 수도 있다(Baerga-Ortiz 등, Protein Sci. 2002 June; 1 1 (6): 1300-1308 참조). 단백질 분해가 제한되는 경우, 항체의 존재 여부와 상관없이 항원은 상이한 프로테아제에 의해 절단되고, 단편은 질량 분석에 의해 식별된다. 에피토프는 항체가 결합할 때 단백질 분해로부터 보호되는 항원의 영역이다(Suckau 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9848-9852, 1990 참조). 단백질 분해에 기반한 추가의 방법은, 예를 들어, 선택적 화학적 변형(Fiedler 등, Bioconjugate Chemistry 1998, 9(2): 236-234, 1998 참조), 에피토프 절제(Van de Water 등, Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85(3): 229-235, 1997 참조), 및 최근에 개발된 수소 중수소(H/D) 교환 방법(Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28, 2010 참조)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이 유발 및 포유류 디스플레이에 의해 결정했을 때, 서열번호 3의 아미노산 잔기 111~135 내에 위치한 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이 유발 및 포유류 디스플레이에 의해 결정했을 때, 서열번호 3의 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이 유발 및 포유류 디스플레이에 의해 결정했을 때, 서열번호 3의 E111, T113 및 K114를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이 유발 및 포유류 디스플레이에 의해 결정했을 때, 서열번호 3의 E111, T113, K114 및 P135를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 돌연변이 유발 및 포유류 디스플레이에 의해 결정했을 때, 서열번호 3의 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는 에피토프에 결합한다.
항CD137 항체 및 이의 항원 결합 단편의 생산 방법
본 개시는 또한 본원에 기술된 항CD137 항체 중 어느 하나 또는 이의 항원 결합 단편을 생산하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체를 제조하기 위한 방법은 적절한 면역원(immunogen)으로 대상체(예를 들어, 비인간 포유동물)을 면역화하는 단계를 포함할 수 있다. 본원에 기술된 임의의 항체를 생성하기 위한 적합한 면역원은 본원에 제시되어 있다. 예를 들어, CD137에 결합하는 항체를 생성하기 위해, 당업자는 전장 CD137 폴리펩티드, 예컨대, 서열번호 3에 예시된 아미노산 서열을 포함하는 전장 인간 CD137 폴리펩티드로 적절한 대상체(예: 랫트, 마우스, 저빌(gerbil), 햄스터, 개, 고양이, 돼지, 염소, 말, 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 포유동물)를 면역화할 수 있다.
적절한 대상체(예를 들어, 비인간 포유동물)는 적절한 항체를 접종하고, 더불어 포유동물에 의한 항체의 생산을 유도하기에 충분한 회수의 후속적인 추가 접종을 통해 면역화될 수 있다. 면역원은 보조제(adjuvant)와 함께 대상체(예를 들어, 비인간 포유동물)에게 투여될 수 있다. 대상체에서 항체를 생산하는 데 유용한 보조제는 단백질 보조제; 세균 보조제, 예를 들어, 전체 박테리아(BCG, 코리네박테리움 파붐 또는 살모넬라 미네소타) 및 세포벽 골격을 포함하는 박테리아 성분, 트레할로스 디미콜레이트, 모노포스포릴 지질 A, 결핵균(tubercle bacillus)의 메탄올 추출 가능 잔기(MER), 완전하거나 불완전한 프로인트 보조제; 바이러스 보조제; 화학적 보조제, 예를 들어, 수산화알루미늄, 및 요오드아세트산 및 콜레스테릴 반숙신산염을 포함하되, 이들로 한정되지는 않는다. 면역 반응을 유도하기 위한 방법에 사용될 수 있는 다른 보조제는, 예를 들어, 콜레라 독소 및 파라폭스바이러스 단백질을 포함한다. (Bieg 등의 (1999) Autoimmunity 31(1):15-24 참조). 예를 들어, Lodmell 등의 (2000) Vaccine 18:1059-1066; Johnson 등의 (1999) J Med Chem 42:4640-4649; Baldridge 등의 (1999) Methods 19:103-107; 및 Gupta 등의 (1995) Vaccine 13(14): 1263-1276을 참조한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 면역원에 결합하는 단클론 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주를 제조하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 실험실용 마우스와 같은 적절한 포유동물을 전술한 바와 같이 CD137 폴리펩티드로 면역화한다. 면역화된 포유류의 항체 생성 세포(예를 들어, 비장의 B 세포)는 면역원으로 적어도 1회 추가 면역화 후 2 내지 4일 후에 단리한 다음, 배지에서 짧게 성장시킨 후, 적절한 골수종 세포주의 세포와 융합할 수 있다. 세포는 예를 들어, 우두 바이러스 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 융합 프로모터의 존재 하에 융합될 수 있다. 융합에서 수득된 혼성 세포를 클로닝하고, 원하는 항체를 분비하는 세포 클론을 선택한다. 예를 들어, 적절한 면역원으로 면역화된 Balb/c 마우스의 비장 세포를 골수종 세포주 PAI 또는 골수종 세포주 Sp2/0-Ag 14의 세포와 융합할 수 있다. 융합 후, 세포를 적절한 배양 배지에서 증식시키는데, 이 배지는 정상 골수종 세포가 원하는 하이브리도마 세포를 과성장시키는 것을 방지하기 위해 일정한 간격으로 선택 배지, 예를 들어 HAT 배지로 보충한다. 그런 다음, 수득된 하이브리도마 세포를 원하는 항체, 예를 들어 CD137에 결합하는 항체의 분비에 대해 스크리닝한다.
일부 구현예에서, 당업자는, 예를 들어, 미국 특허 제6,300,064호(Knappik 등; Morphosys AG) 및 Schoonbroodt 등의 문헌[(2005) Nucleic Acids Res 33(9):e81]에 기술된 바와 같이 비-면역 편향된 라이브러리로부터 항CD137 항체를 식별할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법은, 예를 들어, 파지 디스플레이 기술, 박테리아 디스플레이, 효모 표면 디스플레이, 진핵생물 바이러스 디스플레이, 포유류 세포 디스플레이, 및 무세포(예: 리보솜 디스플레이) 항체 스크리닝 기술을 포함하거나, 이와 함께 사용될 수 있다(예를 들어, Etz 등의 (2001) J Bacteriol 183:6924-6935; Cornelis (2000) Curr Opin Biotechnol 11:450-454; Klemm 등의 (2000) Microbiology 146:3025-3032; Kieke 등의 (1997) Protein Eng 10:1303-1310; Yeung 등의 (2002) Biotechnol Prog 18:212-220; Boder 등의 (2000) Methods Enzymology 328:430-444; Grabherr 등의 (2001) Comb Chem High Throughput Screen 4:185-192; Michael 등의 (1995) Gene Ther 2:660-668; Pereboev 등의 (2001) J Virol 75:7107-7113; Schaffitzel 등의 (1999) J Immunol Methods 231:119-135; 및 Hanes 등의 (2000) Nat Biotechnol 18:1287-1292 참조).
다양한 파지 디스플레이 방법을 사용해 항체를 식별하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 가진 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된다. 이러한 파지는 항체의 레퍼토리나 조합 항체 라이브러리(예를 들어, 인간 또는 쥣과)로부터 발현되는 항원 결합 도메인, 예컨대, Fab, Fv 또는 이황화 결합 안정화 Fv 항체 단편 등을 디스플레이하는 데 사용될 수 있다. 이들 방법에 사용되는 파지는 통상적으로 fd 및 M13과 같은 사상 파지(filamentous phage)이다. 항원 결합 도메인은 임의의 파지 코팅 단백질 pIII, pVIII, 또는 pIX 중 어느 하나에 재조합적으로 융합된 단백질로서 발현된다. 예를 들어, Shi 등의 (2010) JMB 397:385-396을 참조한다. 본원에 기술된 면역글로불린, 또는 이의 단편을 제조하는 데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 Brinkman 등의 (1995) J Immunol Methods 182:41-50; Ames 등의 (1995) J Immunol Methods 184:177-186; Kettleborough 등의 (1994) Eur J Immunol 24:952-958; Persic 등의 (1997) Gene 187:9-18; Burton 등의 (1994) Advances in Immunology 57:191-280; 및 PCT 공개 번호 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, 및 WO 95/20401에 개시된 것들을 포함한다. 적합한 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제5,698,426호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,750,753호; 제5,821,047호; 제5,571,698호; 제5,427,908호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호 및 제5,969,108호에도 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 파지 디스플레이 항체 라이브러리는 면역화된 포유동물 유래의 B 세포로부터 수집된 mRNA를 사용해 생성할 수 있다. 예를 들어, B 세포를 포함하는 비장 세포 샘플을 전술한 바와 같이 CD137 폴리펩티드로 면역화된 마우스로부터 단리할 수 있다. mRNA는 세포로부터 단리하여 표준 분자 생물학 기술을 사용해 cDNA로 변환할 수 있다. 예를 들어, Sambrook 등의 (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition," Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Harlow and Lane (1988), 전술한 문헌; Benny K. C. Lo (2004), 전술한 문헌; 및 Borrebaek (1995), 전술한 문헌을 참조한다. 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 가변 영역을 코딩하는 cDNA를 사용해 파지 디스플레이 라이브러리를 작제한다. 이러한 라이브러리를 생성하기 위한 방법은 예를 들어 Merz 등의 (1995) J Neurosci Methods 62(1-2):213-9; Di Niro 등의 (2005) Biochem J 388(Pt 3):889-894; 및 Engberg 등의 (1995) Methods Mol Biol 51:355-376에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 선택 및 스크리닝의 조합을 사용하여, 예를 들어 하이브리도마 유래 항체의 모집단 또는 파지 디스플레이 항체 라이브러리로부터 관심 항체를 식별할 수 있다. 적절한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, Hoogenboom (1997) Trends in Biotechnology 15:62-70; Brinkman 등의 (1995) 전술한 문헌; Ames 등의 (1995) 전술한 문헌; Kettleborough 등의 (1994) 전술한 문헌; Persic 등의 (1997) 전술한 문헌; 및 Burton 등의 (1994) 전술한 문헌에 기술되어 있다. 예를 들어, 박테리오파지 코팅 단백질의 융합 단백질(예를 들어, M13 파지의 pIII, pVIII, 또는 pIX) 및 상이한 항원 결합 영역을 각각 암호화하는 복수의 파지미드 벡터를 표준 분자 생물학 기술을 사용해 생산한 다음, 박테리아 모집단(예를 들어, 대장균)에 도입할 수 있다. 박테리아에서 박테리오파지의 발현에는, 일부 구현예에서, 헬퍼 파지의 사용이 필요할 수 있다. 일부 구현예에서, 헬퍼 파지는 필요하지 않다(예를 들어, Chasteen 등의 (2006) Nucleic Acids Res 34(21):e145 참조). 박테리아로부터 생산된 파지를 회수한 다음, 예를 들어, 고형 지지체에 결합된(고정된) 표적 항원과 접촉시킨다. 파지는 용액에서 항원에 접촉시킬 수도 있으며, 복합체는 후속하여 고형 지지체에 결합된다.
상기 방법을 사용하여 스크리닝된 항체의 하위집단은 당업계에 공지된 임의의 면역학 또는 생화학에 기반한 방법을 사용해 특정 항원(예를 들어, 인간 CD137)에 대한 특이성 및 결합 친화도에 대해 특징을 분석할 수 있다. 예를 들어, CD137에 대한 항체의 특이적 결합은, 예를 들어, ELISA 분석, SPR 분석, 면역침강 분석, 친화도 크로마토그래피, 및 전술한 바와 같은 평형 투석(equilibrium dialysis)과 같은, 그러나 이들로 한정되지 않는 면역학 또는 생화학 기반의 방법을 사용하여 결정할 수 있다. 항체의 면역특이적 결합 및 교차 반응성을 분석하는데 사용될 수 있는 면역분석법은, 웨스턴 블롯, RIA, ELISA(효소 결합 면역흡착 분석), "샌드위치" 면역분석, 면역침강 분석, 면역확산 분석, 응집 분석, 보체 고정 분석, 면역방사성 분석, 형광 면역분석, 및 단백질 A 면역 분석과 같은 기술을 사용하는 경쟁적 및 비경쟁적 분석 시스템을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 이러한 분석법은 일상적이며 당업계에 잘 알려져 있다.
위의 방법은, 예를 들어, 항CD137 항체가 전장까지 인간 CD137 및/또는 CD137 단백질에 결합하지 않는지 여부를 결정하는데 사용될 수도 있는 것으로 이해된다.
선택된 CDR 아미노산 서열이 짧은 서열(예를 들어, 길이가 10 내지 15개 미만의 아미노산임)인 구현예에서, CDR을 암호화하는 핵산은, 예를 들어 Shiraishi 등의 (2007) Nucleic Acids Symposium Series 51(1):129-130 및 미국 특허 제6,995,259호에 기술된 바와 같이 화학적으로 합성할 수 있다. 수용자 항체를 암호화하는 핵산 서열이 주어진 경우, CDR을 암호화하는 핵산 서열의 영역은 표준 분자 생물학 기술을 사용해, 화학적으로 합성된 핵산으로 대체될 수 있다. 화학적으로 합성된 핵산의 5' 및 3' 말단은, 핵산을 공여자 항체의 가변 영역을 인코딩하는 핵산으로 클로닝하는데 사용하기 위한 점착성 말단 제한 효소 부위를 포함하도록 합성될 수 있다. 대안적으로, 함께 항체를 암호화할 수 있는, 화학적으로 합성된 핵산의 단편은 당업계에 공지된 DNA 조립 기술(예를 들어, Gibson Assembly)을 사용하여 함께 결합될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 이의 상응하는 변경되지 않은 불변 영역에 비해 효과기 기능이 감소된(또는 없는) 변경된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 항CD137 항체의 불변 영역과 관련된 효과기 기능은 불변 영역 또는 Fc 영역의 특성을 변경함으로써 조절될 수 있다. 변경된 효과기 기능은, 예를 들어, 다음의 활성 중 하나 이상의 조절을 포함한다: 항체 의존성 세포의 세포독성(ADCC); 보체 의존성 세포독성(CDC); 세포 자멸사; 하나 이상의 Fc-수용체에 대한 결합; 및 전 염증성 반응. 조절은 변경되지 않은 형태의 불변 영역의 활성과 비교해 변경된 불변 영역을 함유하는 대상체 항체에 의해 나타난 효과기 기능 활성의 증가, 감소, 또는 제거를 지칭한다. 특정 구현예에서, 조절은 활성이 제거되거나 완전히 부재하는 상황을 포함한다.
변경된 FcR 결합 친화도 및/또는 ADCC 활성 및/또는 변경된 CDC 활성을 갖는 변경된 불변 영역은, 변경되지 않은 형태의 불변 영역과 비교해 강화되거나 감쇠된 FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성 및/또는 CDC 활성을 갖는 폴리펩티드이다. FcR에 대한 결합 증가를 디스플레이하는 변경된 불변 영역은 변경되지 않은 폴리펩티드보다 더 큰 친화도로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 결합 감소를 디스플레이하는 변경된 불변 영역은 변경되지 않은 불변 영역보다 더 낮은 친화도로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 결합 감소를 디스플레이하는 이러한 변이체는 FcR에 대한 결합을 거의 갖지 않거나 주목할 만한 결합을 갖지 않을 수 있는데, 예를 들어, FcR에 대한 원시 서열 면역글로불린 불변 영역 또는 Fc 영역의 결합 수준과 비교해 FcR에 대한 결합의 0 내지 50%(예를 들어, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1% 미만)를 가질 수 있다. 유사하게, 조절된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 디스플레이하는 변경된 불변 영역은 변경되지 않은 불변 영역과 비교해 증가되었거나 감소된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 변경된 불변 영역을 포함하는 항CD137 항체는 변경된 형태의 불변 영역의 ADCC 및/또는 CDC 활성의 대략 0 내지 50%(예를 들어, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1% 미만)를 나타낼 수 있다. 감소된 ADCC 및/또는 CDC를 디스플레이하는 변경된 불변 영역을 포함하는 본원에 기술된 항CD137 항체는 감소된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타내거나 전혀 나타내지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 감소된 효과기 기능을 나타내거나 전혀 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 혼성화 불변 영역 또는 이의 일부, 예컨대 G2/G4 혼성화 불변 영역을 포함한다(예를 들어, Burton 등의 (1992) Adv Immun 51:1-18; Canfield 등의 (1991) J Exp Med 173:1483-1491; 및 Mueller 등의 (1997) Mol Immunol 34(6):441-452 참조). 상기 참조.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 강화되었거나 감소된 보체 의존성 세포 독성(CDC)을 나타내는 변경된 불변 영역을 포함할 수 있다. 조절된 CDC 활성은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입, 또는 결실을 항체의 Fc 영역에 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551호를 참조한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기(들)가 Fc 영역에 도입되어, 이 영역에서 사슬간 이황화 결합을 형성할 수 있다. 따라서, 동종 이량체 항체는 개선되었거나 감소된 내재화 능력 및/또는 증가하였거나 감소한 보체 매개 세포 살해 능력을 가질 수 있다. 예를 들어 Caron 등의 (1992) J Exp Med 176:1191-1195 및 Shopes (1992) Immunol 148:2918-2922; PCT 공개 번호 WO 99/51642 및 WO 94/29351; Duncan 및 Winter (1988) Nature 322:738-40; 및 미국 특허 제5,648,260호 및 제5,624,821호를 참조한다.
재조합 항체의 발현 및 정제
본원에 기술된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 분자 생물학 및 단백질 화학 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 핵산은 전사 및 번역 조절 서열을 포함하는 발현 벡터 내에 삽입될 수 있으며, 이는 예를 들어 프로모터 서열, 리보솜 결합 부위, 전사 개시 및 종결 서열, 번역 개시 및 종결 서열, 전사 종결자 신호, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서 또는 활성화제 서열을 포함한다. 조절 서열은 프로모터 및 전사 개시 및 종결 서열을 포함한다. 또한, 발현 벡터는 발현 벡터가 2가지 상이한 유기체에서 유지될 수 있도록, 예를 들어, 발현을 위해서 포유동물 또는 공충 세포에서 유지되고 클로닝과 증폭을 위해 원핵 생물 숙주에서 유지될 수 있도록, 2개 이상의 복제 시스템을 포함할 수 있다.
포유동물 세포에서 핵산으로부터 클로닝된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 위한 여러 가지 가능한 벡터 시스템을 이용할 수 있다. 한 부류의 벡터는 숙주 세포 게놈 내로 원하는 유전자 서열을 통합시키는 것에 의존한다. DNA를 안정적으로 통합한 세포는, E. coli gpt와 같은 약물 내성 유전자를 동시에 도입함으로써 선택될 수 있다(Mulligan 및 Berg (1981) Proc Natl Acad Sci USA 78:2072) 또는 Tn5 neo (Southern 및 Berg (1982) Mol Appl Genet 1:327 참조). 선택성 마커 유전자는 발현될 DNA 유전자 서열에 연결되거나, 공동-형질감염에 의해 동일 세포 내로 도입될 수 있다(Wigler 등 (1979) Cell 16:77 참조). 2번째 부류의 벡터는 염색체 외 플라스미드에 자율 복제 능력을 부여하는 DNA 요소를 사용한다. 이들 벡터는 동물 바이러스, 예컨대 소 유두종 바이러스(Sarver 등의 (1982) Proc Natl Acad Sci USA, 79:7147), 사이토메갈로바이러스, 폴리오마 바이러스(Deans 등 (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:1292), 또는 SV40 바이러스(Lusky 및 Botchan (1981)) Nature 293:79)로부터 유래될 수 있다.
발현 벡터는 핵산의 후속 발현에 적합한 방식으로 세포 내에 도입될 수 있다. 도입의 방법은 후술하는 표적화 세포 유형에 의해 크게 좌우된다. 예시적인 방법은 CaPO4 침강, 리포솜 융합, 양이온성 리포솜, 천기 천공, 바이러스 감염, 덱스트란 매개 형질 감염, 폴리프렌 매개 형질 감염, 원형질 융합, 및 직접 미세 주입을 포함한다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현에 적합한 숙주 세포는 효모, 박테리아, 곤충, 식물 및 포유동물 세포를 포함한다. 특히 관심이 있는 것은 E. coli와 같은 박테리아, 사카로마이세스 세레비시애 및 피키아 파스토리스와 같은 진균, SF9와 같은 곤충 세포, 포유동물 세포주(예: 인간 세포주)뿐만 아니라 단일 세포계 등이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 유전자 이식 동물(예: 유전자 이식 포유류)에서 발현되고, 이로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체는 Houdebine 등의 문헌에 기술된 바와 같이, 유전자 이식 비인간 포유동물(예: 설치류)에서 생산될 수 있고 우유로부터 단리될 수 있다(예를 들어, Houdebine (2002) Curr Opin Biotechnol 13(6):625-629; van Kuik-Romeijn 등의 (2000) Transgenic Res 9(2):155-159; 및 Pollock 등의 (1999) J Immunol Methods 231(1-2):147-157 참조).
항체 및 이의 단편은 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터로 형질 변환된 숙주 세포를, 단백질 발현이 충분히 가능한 조건 하에서, 충분한 시간 동안 배양함으로써 세포로부터 생산될 수 있다. 단백질 발현을 위한 이러한 조건은 발현 벡터 및 숙주 세포의 선택에 따라 달라지게 되며, 당업자는 일상적인 실험을 통해 쉽게 확인할 것이다. 예를 들어, E. coli에서 발현된 항체는 봉입체로부터 다시 접힐 수 있다(예: Hou 등의 (1998) Cytokine 10:319-30 참조). 박테리아 발현 시스템 및 그 사용 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다(문헌[Current Protocols in Molecular Biology, Wiley & Sons, 및 Molecular Cloning--A Laboratory Manual --3rd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001)] 참조). 코돈, 적절한 발현 벡터 및 적절한 숙주 세포의 선택은 다수의 요인에 따라 달라질 것이고, 필요에 따라 쉽게 최적화될 수 있다. 본원에 기술된 항체(또는 이의 단편)는 포유동물 세포에서 발현되거나, 효모, 바큘로바이러스, 및 시험관 내 발현 시스템을 포함하되 이들로 한정되지 않는 다른 발현 시스템에서 발현될 수 있다(예를 들어, Kaszubska 등의 (2000) Protein Expression and Purification 18:213-220 참조).
발현 후, 항체 및 이의 단편은 단리될 수 있다. 항체 또는 이의 단편은, 샘플에 어떤 다른 성분이 존재하는지에 따라 당업자에게 공지된 다양한 방식으로 단리되거나 정제될 수 있다. 표준 정제 방법은 전기영동 기술, 분자 기술, 면역학적 기술, 및 크로마토그래피 기술을 포함하며, 크로마토그래피 기술은 이온 교환, 소수성, 친화도 및 역상 HPLC 크로마토그래피를 포함한다. 예를 들어, 항체는 표준 항체 컬럼(예를 들어, 단백질-A 또는 단백질-G 컬럼)을 사용하여 정제될 수 있다. 단백질 농축과 함께 초여과 및 정용여과 기술도 유용하다. 예를 들어, Scopes (1994) "Protein Purification, 3rd edition," Springer-Verlag, New York City, New York을 참조한다. 필요한 정제 정도는 원하는 용도에 따라 달라지게 된다. 일부 경우에, 발현된 항체 또는 이의 단편의 정제가 필요하지 않을 수도 있다.
정제된 항체 또는 이의 단편의 수율 또는 순도를 결정하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 Bradford 분석, UV 분광법, Biuret 단백질 분석, Lowry 단백질 분석, 아미도 검은 단백질 분석, 고압의 액체 크로마토그래피(HPLC), 질량 분광분석(MS), 및 겔 전기영동 방법(예를 들어, 쿠마시 블루 또는 콜로이드성 실버 염색과 같은 단백질 염색을 사용함)을 포함한다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편의 변형
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이의 발현 및 정제 후에 변형될 수 있다. 변형은 공유 또는 비공유 변형일 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 선택된 측면 사슬 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체와의 폴리펩티드의 표적화된 아미노산 잔기를 반응시킴으로써 항체 또는 단편 내로 도입될 수 있다. 변형에 적절한 부위는, 예컨대 항체 또는 단편의 구조적 분석 또는 아미노산 서열 분석을 포함하는 다양한 기준 중 어느 하나를 사용해 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이종 모이어티에 접합될 수 있다. 이종 모이어티는, 예를 들어, 이종 폴리펩티드, 치료제(예컨대, 독소 또는 약물), 또는 검출 가능한 표지일 수 있으며, 여기서 검출 가능한 표지는 방사성 표지, 효소 표지, 형광 표지, 중금속 표지, 발광 표지, 또는 친화도 태그(예: 비오틴 또는 스트렙트아비딘)를 포함하되 이들로 한정되지 않는다. 적절한 이종 폴리펩티드는, 예를 들어, 항체 또는 단편을 정제하는 데 사용하기 위한 항원성 태그(예를 들어, FLAG (DYKDDDDK; 서열번호 98), 폴리히스티딘 (6-His; HHHHHH; 서열번호 99), 헤마글루티닌 (HA; YPYDVPDYA; 서열번호 100), 글루타티온-S-전이효소 (GST), 또는 말토오스-결합 단백질 (MBP)을 포함한다. 이종 폴리펩티드는 진단 마커 또는 검출 가능한 마커로서 유용한 폴리펩티드(예: 효소), 예를 들어 루시페라아제, 형광 단백질(예: 녹색 형광 단백질(GFP)), 또는 클로람페니콜 아세틸 전이효소(CAT)를 또한 포함한다. 적절한 방사성 표지는 예를 들어, 32P, 33P, 14C, 125I, 131I, 35S, 및 3H를 포함한다. 적절한 형광 표지는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 녹색 형광 단백질(GFP), DyLight™ 488, 피코에레트린(PE), 프로피듐 요오드화물(PI), PerCP, PE-Alexa Fluor® 700, Cy5, 알로피코시아닌 및 Cy7을 포함하되 이들로 한정되지 않는다. 발광 표지는 예를 들어, 다양한 발광 란타나이드(예를 들어, 유로퓸 또는 테르븀) 킬레이트들 중 어느 하나를 포함한다. 예를 들어, 적절한 유로퓸 킬레이트는 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산(DTPA) 또는 테트라시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA)의 유로퓸 킬레이트를 포함한다. 효소 표지는, 예를 들어 알칼리 포스파타아제, CAT, 루시페라아제, 및 서양고추냉이 퍼옥시다아제를 포함한다.
다수의 공지된 화학적 가교제를 사용하여 2개의 단백질(예를 들어, 항체 및 이종 모이어티)을 가교 결합할 수 있다. 이러한 가교제의 예는 "방해된" 이황화 결합을 포함하는 연결을 통해 2개의 아미노산 잔기를 연결시키는 것들이다. 이들 연결에서, 가교 유닛 내의 이황화 결합은 (이황화 결합의 양측 중 일측에서 그룹을 방해함으로써), 환원된 글루타티온 또는 효소 이황화 환원 효소와 같은 작용에 의한 환원으로부터 보호된다. 적절한 하나의 시약인, 4-숙신이미딜옥시카보닐-α-메틸- α (2-피리딜디티오) 톨루엔 (SMPT)은 2개의 단백질 사이에서 이러한 결합을 형성하는데, 여기서 2개의 단백질 중 하나에는 말단 리신을 사용하고 다른 하나에는 말단 시스테인을 사용한다. 각 단백질 상의 상이한 결합 모이어티에 의해 가교 결합을 유도하는 이종이기능성 시약을 사용할 수도 있다. 다른 유용한 가교결합제는, 2개의 아미노기를 연결하는 시약(예컨대, N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드), 2개의 설프히드릴기를 연결하는 시약(예컨대, 1,4-비스-말레이미도부탄), 아미노기와 설프히드릴기를 연결하는 시약(예컨대, m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르), 아미노기와 카복실기를 연결하는 시약(예컨대, 4-[p-아지도살리실아미도]부틸아민), 및 아미노기와 아르기닌의 측쇄에 존재하는 구아니디늄기를 연결하는 시약(예컨대, p-아지도페닐 글리옥살 1수화물)을 포함하되 이들로 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 방사성 표지는 항체의 아미노산 백본에 직접 접합될 수 있다.
대안적으로, 방사성 표지는 더 큰 단백질의 일부로서 포함되거나(예: 유리 아미노기와 결합하여 관련 단백질의 메타-요오드페닐(mIP) 유도체를 형성하는 메타-[125I]요오드페닐-N-히드록시숙신이미드([125I]mIPNHS)에서의 125I)(예를 들어, Rogers 등의 (1997) J Nucl Med 38:1221-1229 참조) 킬레이트(예를 들어, DOTA 또는 DTPA)에 포함되어, 결과적으로 단백질 백본에 결합될 수 있다. 방사성 표지 또는 이를 포함하는 더 큰 분자/킬레이트를 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 단편에 접합하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 단백질에 대한 방사성 표지 또는 킬레이트의 결합을 용이하게 하는 조건 (예를 들어, pH, 염 농도 및/또는 온도) 하에서 단백질을 방사성 표지와 함께 인큐베이션하는 단계를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 제6,001,329호 참조).
단백질(예를 들어, 항체)에 형광 표지("형광단"으로 지칭되기도 함)를 접합하는 방법은 단백질 화학 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 형광단은 형광단에 부착된 숙신이미딜(NHS) 에스테르 또는 테트라플루오로페닐(TFP) 에스테르 모이어티를 사용해 단백질의 유리 아미노기(예를 들어, 리신) 또는 설프히드릴 기(예를 들어, 시스테인)에 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 형광단은 설포-SMCC와 같은 이종이기능성 가교제 모이어티에 접합될 수 있다. 적합한 접합 방법은, 단백질에 대한 형광단의 결합을 용이하게 하는 조건 하에서 항체 단백질 또는 이의 단편을 형광단과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함한다. 예를 들어 Welch 및 Redvanly (2003) "Handbook of Radiopharmaceuticals: Radiochemistry and Applications," John Wiley and Sons (ISBN 0471495603)를 참조한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 단편은, 예를 들어, 혈액, 혈청 또는 다른 조직에서 순환 중인 항체의 안정화 및/또는 유지를 개선하는 모이어티로 변형될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 단편은, 예를 들어, Lee 등의 (1999) Bioconjug Chem 10(6): 973-8; Kinstler 등의 (2002) Advanced Drug Deliveries Reviews 54:477-485; 및 Roberts 등의 (2002) Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476 또는 HESylated (Fresenius Kabi, Germany; 가령, Pavisiζ 등의 (2010) Int J Pharm 387(1-2):110-119)에 기술된 바와 같이 PEG화될 수 있다. 안정화 모이어티는 항체(또는 단편)를 적어도 1.5(예를 들어, 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40 또는 50개 이상) 접힘으로 안정성 또는 유지할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 글리코실화될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 효소 또는 화학적 처리를 거칠 수 있거나, 세포로부터 생산되어, 항체 또는 단편이 글리코실화를 감소시키거나 없앨 수 있다. 글리코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 제6,933,368호; Wright 등의 (1991) EMBO J 10(10):2717-2723; 및 Co 등의 (1993) Mol Immunol 30:1361에 기술되어 있다.
약학적 조성물 및 제형
소정의 실시예들에서, 본 발명은 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보강제를 포함하는 항CD137 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
소정의 실시예들에서, 수용 가능한 제형화 물질은 바람직하게는 투여량과 사용된 농도에서 수용자에게 독성이 없다. 특정 구현예에서, 제형화 물질은 s.c. 및/또는 I.V. 투여용 것이다. 소정의 실시예들에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어, Ph, 삼투압, 점도, 투명도, 색상, 동편성, 냄새, 불임성, 안정성, 용해 속도 또는 조성물의 방출, 흡착 또는 침투를 개질하거나, 유지 또는 보존하기 위한 제형화 물질을 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 적합한 제형화 물질은 다음을 포함하되, 이들로 한정되지는 않는다: 아미노산(예: 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항균제; 항산화제(예: 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제(예: 붕산, 중탄산염, 트리스-HCl, 구연산염, 인산염 또는 기타 유기산); 벌크화제(예: 만니톨 또는 글리신); 킬레이트화제(예: 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 복합화제(예: 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충진제; 단당류; 이당류; 및 기타 탄수화물(예: 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린); 단백질(예: 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예: 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염형성 반대 이온(예: 나트륨); 보존제(예: 염화벤즈알코늄, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용제(예: 글리세린, 프로필렌글리콜 또는 폴리에틸렌글리콜); 당알코올(예: 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예: 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트(예: 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80), 트라이톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 티록사팔); 안정성 강화제(예: 수크로오스 또는 소르비톨); 긴장성 강화제(예: 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약학적 보조제. (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1995) 참조). 특정 구현예에서, 제형은 PBS; 20 mM NaOAC, pH 5.2, 50 mM NaCl; 및/또는 10 mM NAOAC, pH 5.2, 9% 수크로오스를 포함한다. 특정 구현예에서, 최적의 약학적 조성물은, 예를 들어, 의도하는 투여 경로, 전달 포맷 및 원하는 투약량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences의 전술한 문헌을 참조한다. 특정 구현예에서, 이러한 조성물은 항CD137 항체의 물리적 상태, 안정성, 생체 내 방출 속도 및/또는 생체 내 제거 속도에 영향을 미칠 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물 내의 일차 비히클 또는 담체는 성질이 수성 또는 비수성일 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 적절한 비히클 또는 담체는 주사용 물, 생리학적 식염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있으며, 비경구 투여용 조성물에 흔히 사용되는 다른 물질로 보충할 수 있다. 특정 구현예에서, 식염수는 등장성 인산-완충 식염수를 포함한다. 특정 구현예에서, 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수는 추가로 예시적인 비히클이다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 약 pH 7.0~8.5의 트리스 완충액, 또는 약 pH 4.0~5.5의 아세테이트 완충제를 포함하며, 이들은 소르비톨 또는 이의 적절한 치환체를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 항CD137 항체를 포함하는 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 임의의 제형화제(Remington's Pharmaceutical Sciences, 전술함)와 혼합함으로써, 보관용의 동결 건조된 케이크 또는 수용액 형태로 제조할 수 있다. 또한, 특정 구현예에서, 항CD137 항체를 포함하는 조성물은 수크로오스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결 건조물(lyophilizate)로서 제형화될 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 비경구 전달용으로 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 흡입용으로 선택되거나, 경구 투여와 같이 소화관을 경유 전달용으로 선택될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 이러한 조성물은 당업자의 능력 범위 내에서 제조될 수 있다.
특정 구현예에서, 제형화 성분은 투여 부위에 대해 허용 가능한 농도로 존재한다.
특정 구현예에서, 조성물을 생리적 pH 또는 약간 낮은 pH, 일반적으로는 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 유지하지 위해 완충액이 사용된다.
특정 구현예에서, 비경구 투여를 고려하는 경우, 치료용 조성물은, 항CD137 항체를 약학적으로 허용 가능한 비히클로 포함하고, 발열 물질이 없으며, 비경구적으로 허용 가능한 수용액의 형태를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 비경구 주입용 비히클은 항CD137 항체가 멸균 등장성 용액으로 제형화된 멸균 증류수이며, 적절하게 보존된다. 특정 구현예에서, 제조는 원하는 분자를 약품(product)의 방출을 조절하거나 서방출시키는 제제(약품을 데포 제형으로 주입하여 전달될 수 있게 하는 제제), 예컨대 주사 가능한 미소구체, 생체부식성 입자, 중합체 화합물(예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포좀과 함께 제형화시키는 단계를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 히알루론산이 사용될 수도 있는데, 이는 순환계에서 지속 시간을 연장하는 효과를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 원하는 분자를 도입하기 위해 이식 가능한 약물 전달 장치가 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 흡입용으로 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 항CD137 항체는 흡입용 건조 분말로서 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 항CD137 항체를 포함하는 흡입 용액은 에어로졸 전달을 위한 압축가스(propellant)와 함께 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 용액은 분무될 수 있다. 폐 투여는, 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 기술하는 PCT 출원 번호 PCT/US94/001875에 추가로 기술되어 있다.
특정 구현예에서, 제형은 경구 투여될 수 있는 것으로 고려된다. 특정 구현예에서, 이러한 방식으로 투여되는 항CD137 항체는 정제 및 캡슐과 같은 고형 투여 형태를 구성하는 데 관례적으로 사용되는 담체와 함께 제형화되거나 이러한 담체 없이 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 캡슐은, 위장관 내에서 생체이용률이 극대화되고 사전 전신 분해가 최소화되는 시점에 제형의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. 특정 구현예에서, 항CD137 항체의 흡수를 용이하게 하기 위한 적어도 하나의 추가적인 제제가 포함될 수 있다. 특정 구현예에서, 희석제, 향미제, 저융점 왁스, 식물성 오일, 윤활제, 현탁제, 정제 분해제, 및 결합제가 사용될 수도 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물은 항CD137 항체의 유효량을 정제의 제조에 적합한 비-독성 부형제와의 혼합물로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 멸균수 또는 적절한 다른 비히클에 정제를 녹여 단일 투약량 형태의 용액을 제조할 수 있다.
특정 구현예에서, 적합한 부형제는, 탄산칼슘, 탄산나트륨이나 중탄산나트륨, 락토오스, 또는 인산칼슘과 같은 불활성 희석제; 또는 전분, 젤라틴 또는 아카시아와 같은 결합제; 또는 스테아린산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크와 같은 윤활제를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.
항CD137 항체를 서방출 제형이나 전달 조절식 제형으로 포함하는 제형을 포함하여, 추가의 약학적 조성물이 당업자에게 명백해질 것이다. 특정 구현예에서, 다양한 다른 서방출 수단 전달 조절식 수단, 예컨대 리포좀 담체, 생체부식성 미세입자 나 다공성 비드, 및 데포 주사 등을 제형화하는 기술도 당업자에게 공지되어 있다.
예를 들어, 약학적 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체 미세입자의 방출 조절이 기술된 PCT 출원 번호 PCT/US93/00829를 참조한다. 특정 구현예에서, 서방성 제제는 필름이나 마이크로캡슐과 같은 성형된 물품 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 서방성 매트릭스는 폴리에스테르, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 번호 제3,773,919호 및 EP 058,481 참조), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트(Sidman 등의, Biopolymer, 22:547-556(1983) 참조), 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer 등의, J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277(1981) 및 Langer, Chem. Tech., 12:98- 105(1982) 참조), 에틸렌 비닐 아세테이트(Langer 등의 전술한 문헌) 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산(EP 133,988 참조)을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 서방성 조성물은 리포좀을 포함할 수도 있는데, 이는 당업계에 공지된 여러 가지 방법 중 어느 하나에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, Eppstein 등의 Proc. Natl Acad. Sci. USA, 82:3688-3692 (1985); EP 036,676; EP 088,046 및 EP 143,949를 참조한다.
생체 내 투여에 사용될 약학적 조성물은 일반적으로 멸균 상태이다. 특정 구현예에서, 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물이 동결 건조되는 경우, 이러한 방법을 사용하는 멸균은 동결 건조 및 재구성 전에 수행되거나 그 후에 수행될 수 있다. 특정 구현예에서, 비경구 투여용 조성물은 동결 건조된 형태로 보관되거나 용액으로 보관될 수 있다.
특정 구현예에서, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘로 관통할 수 있는 스토퍼가 구비된 정맥 주사액용 백이나 바이알에 담겨진다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물이 제형되고 나면, 이를 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고형으로 멸균 바이알에 저장하거나, 탈수하거나 동결건조한 분말로 저장할 수 있다. 특정 구현예에 있어서, 이러한 제형은 즉시 사용 가능한 상태로 저장하거나 투여 전에 재구성해 사용하는 형태 (예를 들어, 동결 건조된 형태)로 저장할 수 있다.
특정 구현예에서, 단일 투약량 투여 유닛을 생산하기 위한 키트가 제공된다. 특정 구현예에서, 키트는 건조된 단백질이 담긴 제1 용기 및 수성 제형이 담긴 제2 용기를 모두 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 단일 챔버형 및 다중 챔버형의 미리 채워진 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 리오주사기(lyosyringe))를 함유하는 키트가 포함된다.
특정 구현예에서, 치료적으로 사용될 항CD137 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은, 예를 들어 치료 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 당업자라면, 특정 구현예에 따른, 치료를 위한 적절한 투약량 수준이, 전달되는 분자, 항CD137 항체가 사용되는 대상 징후, 투여 경로, 및 환자의 크기(체중, 신체 표면 또는 장기 크기) 및/또는 상태(나이 및 일반적인 건강 상태)에 따라 부분적으로 달라진다는 것을 이해할 것이다. 특정 구현예에서, 임상의는 투약량을 적정하고 투여 경로를 수정하여 최적의 치료 효과를 얻을 수 있다. 특정 구현예에서, 투여 빈도에는 제형으로 사용된 항CD137 항체의 약동학적 파라미터가 고려된다. 특정 구현예에서, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투약량에 도달할 때까지 조성물을 투여하게 된다.
따라서, 특정 구현예에서, 조성물은 단일 투약량 또는 시간의 경과에 따라 2회 이상의 투약량(동일한 양의 원하는 분자를 함유하거나 함유하지 않을 수 있음)으로서 투여되거나, 이식 장치나 카테터를 통한 연속으로 주입될 수 있다.
적절한 투여량에 대한 추가의 개선은 당업자에 의해 일상적으로 이루어지며, 일상적으로 수행되는 이들의 업무 범위에 속한다. 특정 구현예에서, 적절한 투약량은 적절한 투약량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다.
특정 구현예에서, 약학적 조성물의 투여 경로는 알려진 방법, 예를 들어, 경구 투여, 정맥 내, 복강 내, 두개 내(내엽 내), 뇌심실 내, 근육 내, 피하, 안구 내, 동맥 내, 척추 내, 또는 병변 내 경로에 의한 주입; 서방형 시스템에 의하거나 이식 장치에 의한 주입에 따른다. 특정 구현예에서, 조성물은 볼루스 주사에 의해 투여되거나, 주입 또는 이식 장치에 의해 연속 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 병용 요법의 개별 성분은 상이한 경로로 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 조성물은, 원하는 분자가 흡수되거나 캡슐화된 막, 스폰지 또는 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국소적으로 투여될 수 있다. 이식 장치가 사용되는 특정 구현예에서, 장치는 임의의 적합한 조직 또는 기관에 이식될 수 있고, 원하는 분자의 전달은 확산, 정기 방출형 볼루스(timed-release bolus), 또는 연속 투여를 통해 이루어질 수 있다. 특정 구현예에서, 항CD137 항체를 포함하는 약학적 조성물을 생체 외 방식으로 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
이러한 경우에, 환자로부터 꺼낸 세포, 조직 및/또는 기관은 항CD137 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 노출된 후, 후속적으로 이들 세포, 조직 및/또는 기관이 환자에게 이식된다.
특정 구현예에서, 항CD137 항체가, 본원에 기술된 것과 같은 방법을 사용해 유전자 조작된 특정 세포를 이식함으로써 전달되어 폴리펩티드를 발현하고 분비할 수 있다. 특정 구현예에서, 이러한 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있고, 자가 세포, 이종 세포 또는 이종 개체 세포일 수 있다. 특정 구현예에서, 세포는 불멸화 될 수 있다. 특정 구현예에서, 면역 반응의 가능성을 감소시키기 위해, 세포는 주변 조직의 침윤을 피하도록 캡슐화 될 수 있다. 특정 구현예에서, 캡슐화 물질은 통상적으로 단백질 생성물(들)의 방출을 가능하게 하지만 환자의 면역 시스템에 의한 세포 파괴, 또는 주변 조직의 다른 유해 인자에 의한 세포의 파괴를 방지할 수 있는 생체적합성, 반투과성 중합체 인클로저 또는 막이다.
응용 분야
본원에 기술된 조성물은 진단적 및 치료적 응용 분야에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 검출 가능하게 표지된 항원 결합 분자는 샘플(예를 들어, 생물학적 샘플)에서 표적 항원의 존재 또는 양을 검출하기 위한 분석에 사용될 수 있다. 조성물은 표적 항원 기능(예를 들어, CD137 매개 세포 신호 전달 또는 반응)의 억제를 연구하기 위한 시험관 내 분석에 사용될 수 있다. 예를 들어, 조성물이 표적 항원(예컨대, 단백질 또는 폴리펩티드)에 결합하여 이를 활성화시키는 일부 구현예에서, 조성물은 표적 단백질 또는 폴리펩티드의 활성을 또한 유도하고/하거나 표적 단백질 또는 폴리펩티드와 관련된 장애를 치료하는 데 유용한 추가적인 신규 화합물을 식별하도록 설계된 분석에서 양성 대조군으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, CD137-활성화 조성물은 CD137 기능을 유도하거나, 증가시키거나, 자극하는 추가 화합물(예를 들어, 소 분자, 앱타머, 또는 항체)을 식별하는 분석에서 양성 대조군으로서 사용될 수 있다. 조성물은 아래에 상술된 바와 같이 치료 방법에서 사용될 수 있다.
키트
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 항CD137 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 본원에 개시된 바와 같은 항CD137 항체, 및 사용 지침을 포함한다. 키트는, 적절한 용기, 항CD137 항체, 하나 이상의 대조군, 및 다양한 완충제, 시약, 효소 및 당업계에 널리 공지된 다른 표준 성분을 포함할 수 있다.
용기는 적어도 하나의 바이알, 웰, 시험 튜브, 플라스크, 병, 주사기, 또는 항CD137 항체를 넣거나 일부 경우에는 적절하게 분획할 수 있는 다른 용기 수단을 포함할 수 있다. 추가의 성분이 제공되는 경우, 키트는 이러한 성분을 넣을 수 있는 추가 용기를 포함할 수 있다. 키트는 또한 상업적 판매를 위해 항CD137 항체 및 임의의 다른 시약 용기를 엄격하게 구분해 담기 위한 수단을 포함할 수 있다. 이러한 용기는 원하는 바이알을 유지시키는 사출 용기 또는 취입 성형식(blow-molded) 플라스틱 용기를 포함할 수 있다. 용기 및/또는 키트에는 사용 및/또는 경고에 대한 지침이 표기된 라벨이 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 항CD137 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 항CD137 항체를 포함하는 약학적 조성물; 및 암 진행을 치료 또는 지연시키거나 종양 성장을 감소 또는 억제하는 것을 필요로 하는 대상체에서 암 진행을 치료 또는 지연시키거나 종양 성장을 감소 또는 억제하기 위한 지침을 포함하는 용기를 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 항CD137 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 항CD137 항체를 포함하는 약학적 조성물; 및 대상체에서 암 진행을 치료 또는 지연시키거나 종양 성장을 감소 또는 억제하기 위해, 항CD137 항체를 필요로 하는 대상체에게 이를 단독으로 투여하거나 다른 제제와 조합하여 투여하기 위한 지침을 포함하는 용기를 포함한다.
사용 방법
본 발명의 조성물은 CD137의 검출 및/또는 정량화 및 CD137 기능의 효능화를 관련된 다수의 시험관 내 및 생체 내 유용성을 갖는다.
전술한 조성물은, 대상체에서 다양한 암을 치료 또는 예방하는 방법에 특히 유용하다. 조성물은, 부분적으로 투여 경로에 따라 달라지는 다양한 방법을 사용해 인간 대상체와 같은 대상체에게 투여될 수 있다. 경로는 정맥 내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강 내(IP) 주사, 근육 내 주사(IM), 또는 척수 내 주사(IT)일 수 있다. 주사는 볼루스 또는 연속 주입일 수 있다.
투여는, 예를 들어, 국소 주입, 주사, 또는 임플란트에 의해 달성될 수 있다. 임플란트는 다공성, 비다공성 또는 젤라틴성 물질로서, 시알라스틱 막(sialastic membrane)이나 섬유와 같은 막을 포함할 수 있다. 임플란트는 대상체에 대한 조성물의 지속 방출 또는 주기적인 방출에 맞게 구성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제20080241223호; 미국 특허 제5,501,856호; 제4,863,457호; 및 제3,710,795호; EP488401; 및 EP 430539를 참조하고, 이들 각각의 개시는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 조성물은, 예를 들어, 확산 시스템, 침식성 시스템, 또는 대류 시스템에 기초한 이식 가능한 장치, 예를 들어, 삼투 펌프, 생분해성 임플란트, 전기확산 시스템, 전기 삼투압 시스템, 증기압 펌프, 전해성 펌프, 비등성 펌프, 압전 펌프, 침식 기반 시스템, 또는 전자기계 시스템에 의해 대상체에게 전달될 수 있다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 국소 투여를 통해 대상체에게 치료적으로 전달된다.
본원에 기술된 항체 또는 이의 단편의 적절한 투약량으로서, 대상체에서 암을 치료하거나 예방할 수 있는 투약량은, 예를 들어, 치료될 대상체의 연령, 성별, 및 체중 및 사용되는 특정 억제제 조성물을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 암을 가진 대상체를 치료하기 위해 필요한 전체 CD137 항체의 투약량은 동일한 대상체를 치료하기 위해 필요한 CD137 결합 Fab' 항체 단편의 투약량과 비교했을 때 상이할 수 있다. 대상체에게 투여되는 투약량에 영향을 미치는 다른 인자는 예를 들어 암의 유형 또는 중증도를 포함한다. 예를 들어, 전이성 흑색종을 가진 대상체는 교아세포종을 가진 대상체와는 다른 투약량의 항CD137 항체를 투여하는 것이 필요할 수 있다. 다른 인자는 예를 들어, 대상체에게 동시에 영향을 미치거나 이전에 영향을 미친 기타 의학적 장애, 대상체의 일반적인 건강 상태, 대상체의 유전자 분포, 식단, 투여 시간, 배설 속도, 약물 조합, 및 대상체에게 투여되는 임의의 기타 추가 치료제를 포함할 수 있다. 임의의 특정 대상체에 대한 특이적 투약량 및 치료 처방은 이를 치료하는 의료인(예를 들어, 의사 또는 간호사)의 판단에 따라 달라질 수도 있다는 것을 또한 이해해야 한다. 적절한 투약량은 본원에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 고 용량 및 저 용량 모두에서 효과적이다.
약학적 조성물은 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 포함할 수 있다. 이러한 유효량은, 투여되는 항체의 효과, 또는 (하나 이상의 제제가 사용되는 경우) 항체 및 하나 이상의 추가 활성제의 조합적인 효과에 부분적으로 기초하여 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 본원에 기술된 항체 또는 이의 단편의 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 개체에서 원하는 반응(예를 들어 종양 성장의 감소)을 유도하는 항체(및 하나 이상의 부가적인 활성제)의 능력에 따라 달라질 수도 있다. 예를 들어, 치료적 유효량의 항CD137 항체는 당업계에 알려져 있거나 본원에 기술된 특정 장애 및/또는 특정 장애의 증상 중 어느 하나를 억제할 수(중증도를 경감시키거나 발생을 없앨 수) 있다. 치료적 유효량은 조성물의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료적으로 유익한 효과보다 더 큰 양이다.
본원에 기술된 항체 또는 이의 단편의 적절한 인간 투약량은, 예를 들어, I상 투약량 증가 연구에서 추가로 평가될 수 있다. 예를 들어, van Gurp 등의 (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718; Hanouska 등의 (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531; 및 Hetherington 등의 (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500을 참조한다.
일부 구현예에서, 조성물은 조성물이 전체적으로 치료에 효과적이도록, 본원에 기술된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 어느 하나, 및 하나 이상의 (예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 11개 또는 그 이상) 추가 치료제를 함유한다. 예를 들어, 조성물은 본원에 기술된 항CD137 항체 및 알킬화제를 함유할 수 있으며, 여기서 항체 및 제제는 조합되었을 때, 대상체에서 암(예를 들어, 흑색종)을 치료하거나 예방하기에 치료적으로 유효한 농도로 각각 존재한다.
이러한 조성물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양물 또는 실험 동물(예를 들어, 본원에 기술된 임의의 암 중 하나의 동물 모델)에서, 공지된 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 이러한 절차는 예를 들어 LD50(모집단의 50%에 대한 치사량) 및 ED50(모집단의 50%에서 치료적으로 유효한 투약량)의 결정에 사용될 수 있다. 독성과 치료 효과 간의 투약량 비는 치료 지수이고, 이는 LD50/ED50. 비율로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 조성물이 사용될 수 있지만, 이러한 화합물을 손상된 조직의 부위에 표적화하는 전달 시스템의 설계하고, 정상 세포에 대한 잠재적인 손상을 최소화하여 부작용을 줄이기 위해서는 주의해야 한다.
세포 배양 분석법 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에게 사용하기 위한 다양한 범위의 투약량을 제형화하는데 사용될 수 있다. 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투약량은 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 항체 또는 단편의 다양한 순환 농도의 범위에 일반적으로 포함된다. 투약량은 사용된 투약량 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 다양할 수 있다. 본원에 기술된 항CD137 항체의 경우, 치료적으로 유효한 투약량은 먼저 세포 배양 분석법에서 추정할 수 있다. 투약량은 세포 배양물에서 결정된 바와 같은 EC50(즉, 증상의 반치 억제를 달성하는 항체의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 투약량을 보다 정확하게 결정하는 데 사용될 수 있다. 혈장 수준은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 국소 투여(예컨대, 눈 또는 관절에 대한 투여)가 요구되는 경우, 세포 배양 또는 동물 모델링을 사용하여 국소 부위 내에서 치료학적으로 유효한 농도를 달성하는 데 필요한 용량을 결정할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 암에 대한 다른 치료법과 함께 수행될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 방사선, 수술, 표적화 또는 세포독성 화학요법, 화학방사선 요법, 호르몬 요법, 면역 요법, 유전자 치료, 세포 이식 요법, 정밀 약물, 게놈 편집 요법, 또는 기타 약물치료의 전 또는 후에 대상체에게 투여될 수 있다.
전술한 바와 같이, 본원에 기술된 조성물(예를 들어, 항CD137 조성물)은 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다양한 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다: 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 백혈병(leukemia), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia), 골수아세포 전골수세포 골수단핵구 단핵구 적백혈병(myeloblasts promyelocyte myelomonocytic monocytic erythroleukemia), 만성 백혈병(chronic leukemia), 만성 골수성(과립구성) 백혈병(chronic myelocytic (granulocytic) leukemia), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 외투세포 림프종(mantle cell lymphoma), 원발성 중추신경계 림프종(primary central nervous system lymphoma), 버킷 림프종 및 변연부 B 세포 림프종(Burkitt's lymphoma and marginal zone B cell lymphoma), 진성다혈구성 림프종(Polycythemia vera Lymphoma), 호지킨병(Hodgkin's disease), 비호지킨병(non-Hodgkin' s disease), 다발성 골수종(multiple myeloma), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄 질환(heavy chain disease), 고형 종양(solid tumors), 육종 및 암종(sarcomas, and carcinomas), 섬유육종(fibrosarcoma), 점액육종(myxosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma, osteosarcoma), 척색종(chordoma), 혈관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관 내피 육종(lymphangio endothelio sarcoma), 윤활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유잉종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 대장육종(colon sarcoma), 결장육종(colorectal carcinoma), 췌장암(pancreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 편평세포암종(squamous cell carcinoma), 기저세포암종(basal cell carcinoma), 선암(adenocarcinoma), 땀샘육종(sweat gland carcinoma), 피지선암종(sebaceous gland carcinoma), 유두상암종(papillary carcinoma), 유두상선암(papillary adenocarcinomas), 낭샘암종(cystadenocarcinoma), 수질암종(medullary carcinoma), 기관지암종(bronchogenic carcinoma), 신세포암(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담도암(bile duct carcinoma), 융모막암종(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 배아암종(embryonal carcinoma), 빌름스 종양(Wilm's tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁암(uterine cancer), 고환 종양(testicular tumor), 폐암종(lung carcinoma), 소세포 폐암종(small cell lung carcinoma), 비소세포 폐암종(non-small cell lung carcinoma), 방광암종(bladder carcinoma), 상피암종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수모세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 뇌실막종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관모 세포종(hemangioblastoma), 속귀신경집종(acoustic neuroma), 희돌기교종(oligodendroglioma), 수막종(menangioma), 흑색종(melanoma), 신경아 세포종(neuroblastoma), 망막아종(retinoblastoma), 비인두암(nasopharyngeal carcinoma), 식도 암종(esophageal carcinoma), 기저세포 암종(basal cell carcinoma), 담도암(biliary tract cancer), 방광암(bladder cancer), 골암(bone cancer), 뇌 및 중추 신경계암(brain and central nervous system (CNS) cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 융모암종(choriocarcinoma), 결장암(colorectal cancers), 결합조직암(connective tissue cancer), 소화기계통의 암(cancer of the digestive system), 자궁내막암(endometrial cancer), 식도암(esophageal cancer), 안암(eye cancer), 두경부암(head and neck cancer), 위암(gastric cancer), 상피내 신생물(intraepithelial neoplasm), 신장암(kidney cancer), 후두암(larynx cancer), 간암(liver cancer), 폐암(소세포, 대세포)(lung cancer (small cell, large cell)), 흑색종(melanoma), 신경아세포종(neuroblastoma); 구강암(oral cavity cancer)(예를 들어, 입술, 혀, 입 및 인두의 암), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 망막아종(retinoblastoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 직장암(rectal cancer); 호흡기계통의 암, 육종(sarcoma), 피부암(skin cancer), 위암(stomach cancer), 고환암(testicular cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 자궁암(uterine cancer), 및 비뇨기 계통의 암.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 요법으로 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 전술한 바와 같이, 항체 또는 이의 단편은 다른 치료제, 예를 들어, 암에 대한 다른 치료제와 병용 요법으로 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 병용 요법은 암을 가졌거나 발생 위험이 높은 대상체에게 치료적 이익을 제공하는 하나 이상의 추가 제제를 상기 대상체(예: 인간 환자)에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물과 공동 투여에 적합한 화학치료제는, 예를 들어: 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시안트란신디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 액티노마이신 D, 1-디하이드로테스토스테론, 글루코코티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 푸로마이신 및 이들의 유사체 또는 상동체를 포함한다. 추가 제제는, 예를 들어, 항대사성 물질(예: 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카바진), 알킬화제(예: 메클로르에타민, 티오TEPA, 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 로무스틴(CCNU), 시클로포스파미드(BSNU), 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로르디아민 플래티넘 (II)(DDP), 프로카바진, 알트레타민, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴, 또는 트리플라틴 테트라니트레이트), 안트라사이클린(예: 다우노루비신(이전의 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예: 닥티노마이신(이전의 악티노마이신) 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항유사분열성 제제(예: 빈크리스틴 및 빈블라스틴) 및 테모졸로마이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체 및 하나 이상의 추가 활성제가 동시에 투여된다. 다른 구현예에서, 항CD137 항체가 먼저 투여되고 하나 이상의 추가 활성제는 시간 내에 두 번째로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 활성제가 먼저 투여되고 항CD137 항체는 시간 내에 두 번째로 투여된다.
본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이전에 투여되었거나 현재 투여되는 치료제를 대체하거나 효능을 증강시킬 수 있다. 예를 들어, 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 치료 시, 하나 이상의 추가 활성제의 투여는 중단되거나 감소될 수 있다(예를 들어, 더 낮은 수준 또는 투여량으로 투여될 수 있음). 일부 구현예에서, 이전 치료제의 투여는 유지될 수 있다. 일부 구현예에서, 이전 치료제는 항CD137 항체가 치료 효과를 제공하기에 충분한 수준에 도달할 때까지 유지될 것이다. 2가지 치료제는 조합으로 투여될 수 있다. 본원에서 정의된 바와 같이, 암의 개선에 대해 대상체(예를 들어, 인간 환자)를 모니터링하는 것은, 질환 파라미터의 변화, 예를 들어, 종양 성장의 감소에 대해 대상체를 평가하는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 평가는 투여 후 적어도 1시간, 예를 들어, 적어도 2, 4, 6, 8, 12, 24 또는 48 시간 후에, 또는 적어도 1일, 2일, 4일, 10일, 13일, 20일 또는 그 이상 후에, 또는 적어도 1주, 2주, 4주, 10주, 13주, 20주 또는 그 이상 후에 수행된다. 대상체는 다음 주기 중 하나 이상에 평가된다; 치료 시작 전; 치료 중; 또는 치료의 하나 이상의 요소가 투여된 후. 평가는 추가의 치료에 대한 필요를 평가하는 것, 예를 들어, 투약량, 투여 빈도, 또는 치료 기간이 변경되어야 하는지 여부를 평가하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 선택된 치료 양식을 추가하거나 그만둘 필요가 있는지를 평가하는 것, 예를 들어 본원에 기술된 암에 대한 치료 중 어느 하나를 추가하거나 그만두는 것을 포함할 수도 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어, T 세포 활성화의 증가 및/또는 증식에 의해 환자에서 T 세포 반응을 조절하기 위해 투여된다. CD137의 가교결합은 T 세포 증식, IFNγ 생성 및 분비, 및 T 세포의 세포용해 활성을 강력하게 향상시킨다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 개시의 항CD137 작용제 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 T 세포 활성화를 유도하거나 증가시키고, T 세포 증식을 강화시키며, IFNγ의 생산 및/또는 분비를 유도하고/하거나 세포용해성 T 세포 반응을 유도하기 위해 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 환자에서 T 세포군을 조절하거나 TH2/Treg T 세포군에서 TH1/TH17 T 세포군으로 변화시킴으로써 환자에서 항종양 반응을 개선시키거나 강화시킨다. 연구에 따르면, CD137은 T 세포 서브세트, Th1 및 Th2 T 세포 모두에서 발현되는 반면, CD137은 CD4+ T 세포보다 CD8+ T 세포 상에서 더 높은 수준으로 발현된다. 따라서, CD137은 주로 CD8+ T 세포를 공동 자극한다. 따라서, 본원에 기술된 바와 같이, 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 환자에서 T 세포 반응을 조절하고/하거나, 환자에서 T 세포군을 TH2/Treg T 세포 반응 및/또는 T 세포군에서 TH1/TH17 T 세포 반응 및/또는 T 세포군으로 변화시킴으로써 항종양 반응을 향상시키기 위해 환자에게 투여된다.
일부 암(예를 들어, 흑색종 및 난소암)에서, 자연 종양-침윤 림프구(TIL)는 최적화된 세포 배양 방법을 통해 풍부해질 수 있고 입양 면역요법에 유용한 종양 반응성 림프구의 공급원을 제공할 수 있다. 입양 TIL 요법은 일부 유형의 암에 대한 항구적 종양 퇴행을 유도할 수 있으며, 이는 암에 대한 TIL 기반 접근법의 개발 및 최적화를 보증한다. 현재, 자연 종양-반응성 TIL의 식별 및 증식은 항원 특이적 CD8+ T 세포의 낮은 수준 및/또는 희귀성으로 인해 과제로 남아있다. T 세포에 의한 CD137의 발현은 활성화에 의존하며, 이는 순환으로부터 또는 종양 샘플로부터 CD137을 발현하는 활성화된 T 세포를 포획할 기회를 제공한다. 따라서, 본원에 기술된 바와 같은 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 활성화된 항원 특이적 T 세포의 선택적으로 풍부화하는 데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체의 효능은 적격 면역 시스템(competent immune system)에 의존한다. 구체적으로, 일부 구현예에서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 고갈은 항CD137 항체의 효능을 감소시킨다. 일부 구현예에서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 고갈은 본원에 기술된 항CD137 항체에 의한 종양 성장의 억제 또는 감소를 줄인다. 일부 구현예에서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및/또는 자연 살해 세포의 고갈은 본원에 기술된 항CD137 항체에 의한 종양 성장의 억제 또는 감소를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체의 효능은 종양 미세환경으로의 면역 세포의 침윤에 따라 달라진다. 일부 구현예에서, 종양 미세환경으로의 면역 세포의 침윤은 비장 및/또는 간으로의 침윤의 결여와 결합된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 보호 항종양 기억 면역 반응을 유도한다. 기억 T 세포는 장기간의 항원특이적 T 세포의 서브세트로서, 이들의 동족 항원을 만나 이에 반응한 후 장기간 지속된다. 이러한 세포는 이들의 동족 항원에 재노출될 때 다수의 효과기 세포로 신속하게 증식한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 암 항원에 대한 기억 T 세포의 생산을 자극한다. 일부 구현예에서, 암을 치료하거나 치유하기 위해 본원에 기술된 항CD137 항체를 투여받은 대상체는 암에 특이적인 기억 T 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 암을 치료하거나 치유하기 위해 본원에 기술된 항CD137 항체를 투여받은 대상체는 암에 재노출될 때 항종양 기억 면역 반응을 생성한다. 일부 구현예에서, 항종양 기억 면역 반응은 기억 T 세포를 자극해 효과기 세포가 되게하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 암을 치료하거나 치유하기 위해 본원에 기술된 항CD137 항체를 투여받은 대상체는 암 항원에 대한 항종양 기억 면역 반응을 생성한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체는 종양 미세환경을 사용해 면역 재프로그래밍을 유도한다. 구체적으로, 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 면역 침윤을 유도하고; Treg 증식을 감소, 억제 또는 예방하고; 종양 관련 대식 세포의 증식을 감소, 억제 또는 예방하며; T 세포 기능 소실을 보호하거나 역전시킨다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 종양 미세환경 내로 면역 세포의 침윤을 유도한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 면역 세포 침윤을 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 105%, 적어도 110%, 적어도 115%, 적어도 120%, 적어도 125%, 적어도 130%, 적어도 135%, 적어도 140%, 적어도 145%, 또는 적어도 150% 만큼 증가시킨다. 일부 구현예에서, 면역 세포 침윤은 종양 미세환경으로부터 단리된 세포에서 CD45 발현 수준을 측정함으로써 결정된다. 단백질 발현을 측정하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있으며 본원에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 종양 미세환경에서 Treg 세포의 증가를 방지하거나 억제한다. 일부 구현예에서, 예방 또는 억제는 항CD137 항체의 부재 하에 종양 미세환경에서 Treg 세포의 양에 대해 상대적인 것이다. 일부 구현예에서, Treg 세포 증가의 방지 또는 억제는 기준 항체에 비해 상대적인 것이다. 일부 구현예에서, Treg 세포는 종양 미세환경으로부터 단리된 CD4+ T 세포 상에서 CD25 및 FOX-3P의 발현에 의해 검출된다. 단백질 발현을 측정하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있으며 본원에 기술된 것이다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 종양 미세환경에서 종양 관련 대식 세포의 증가를 방지하거나 억제한다. 일부 구현예에서, 예방 또는 억제는 항CD137 항체의 부재 하에 종양 미세환경에서 종양 연관 대식세포의 양에 대해 상대적인 것이다. 일부 구현예에서, 종양 관련 대식세포 증가의 예방 또는 억제는 기준 항체에 대해 상대적인 것이다. 일부 구현예에서, 종양 연관 대식세포는 종양 미세환경으로부터 단리된 CD45+ 면역 세포 상에서 CD11b 및 F4/80의 발현에 의해 검출된다. 단백질 발현을 측정하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있으며 본원에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 항CD137 항체는 종양 미세환경에서 T 세포 기능 소실로부터 T 세포를 보호한다. 일부 구현예에서, 항CD137 항체는 종양 미세환경에서 T 세포 기능 소실을 역전시킨다. 일부 구현예에서, 종양 미세환경에서 T 세포 기능 소실은 항CD137 항체의 부재 시의 종양 미세환경에 비해 본원에 기술된 항CD137 항체 존재 시의 종양 미세환경에서 감소된다. 일부 구현예에서, T 세포 기능 소실은 공동 억제 수용체(예를 들어, PD-1, TIGIT 또는 LAG-3)의 발현을 위한 CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포를 분석함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, T 세포 기능 소실은 종양 미세환경으로부터 단리된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상에서 PD-1 및 TIGIT의 발현에 의해 검출된다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 검출 방법 및/또는 정량화 방법에 사용될 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 항CD137 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 환자의 질병(예를 들어, 암) 진행을 진단하고, 예측하고/하거나 결정하는 데 사용된다.
기타 구현예
E1. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(b) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 70, 79 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(c) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 71, 80 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(d) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 72, 81 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(e) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 73, 82 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(f) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 83 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(g) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 75, 84 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(h) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 85 및 94에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(i) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 76, 86 및 95에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(j) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 77, 87 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(k) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 88 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(l) 서열번호 49, 57 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(m) 서열번호 49, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(n) 서열번호 49, 59 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(o) 서열번호 49, 60 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(p) 서열번호 50, 61 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(q) 서열번호 50, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(r) 서열번호 51, 62 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(s) 서열번호 52, 63 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(t) 서열번호 50, 64 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(u) 서열번호 50, 65 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(w) 서열번호 107, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(x) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 109, 110 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
E2. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은, 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E3. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E4. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
E5. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E6. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각.
E7. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E8. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E9. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX를 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E10. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하되, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E11. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX를 포함하되, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E12. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E13. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E14. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX를 포함하되, X는 임의의 아미노산이고, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F 또는 이들의 조합의 알라닌을 제외한 임의의 잔기로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합을 증가시키는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E15. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E16. 구현예 15에서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신인, 단리된 단클론 항체.
E17. 구현예 8 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1과 교차 경쟁하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E18. 구현예 8 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1, mAb8 또는 mAb10과 교차 경쟁하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E19. 구현예 8 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb1의 기능적 특성을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E20. 구현예 8 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 mAb1, mAb8 또는 mAb10의 기능적 특성을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E21. 구현예 8 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1과 적어도 동등한 KD 값을 갖는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E22. 구현예 8 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 mAb1, mAb8 또는 mAb10과 적어도 동등한 KD 값을 갖는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E23. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 인간 CD137에 결합할 때, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 mAb1이 결합된 아미노산 잔기, 또는 mAb1의 항원 결합 단편 중 적어도 하나에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E24. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 인간 CD137에 결합할 때, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 (i) mAb1이 결합된 아미노산 잔기, 또는 mAb1의 항원 결합 단편 중 적어도 하나에 결합하여, (ii) 인간 CD137을 효능화하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E25. 구현예 23 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체가 결합된 에피토프를 포함하는 아미노산 잔기는 mAb1 항체의 파라토프를 포함하는 아미노산 잔기의 4옹스트롬 내에 위치하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E26. 구현예 23 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 항체가 결합된 에피토프의 돌연변이는 항체 및 항체 mAb1에 대한 결합을 억제, 감소 또는 차단하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E27. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 40~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E28. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
(i) 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 40~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E29. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
(i) 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 40~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X1은 임의의 아미노산이고, X2는 비극성 아미노산이고, X3은 비극성 아미노산이고, X4는 임의의 아미노산이고, X5는 극성 아미노산이고, X6은 임의의 아미노산이고, X7은 임의의 아미노산이고, X8은 극성 아미노산이고, X9는 극성 아미노산이며, X10은 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E30. 구현예 27에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E31. 구현예 28 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 CDR3의 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E32. 구현예 28 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 감소를 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E33. 구현예 28 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌을 제외한 임의의 잔기로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합을 증가시키는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E34. 구현예 28, 및 29 내지 33 중 어느 하나에 있어서, X는 알라닌을 제외한 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E35. 구현예 29, 및 31 내지 33 중 어느 하나에 있어서, X2는 프롤린이고, X3은 페닐알라닌 또는 트립토판이고, X5는 아스파르트산 또는 글루탐산이고, X8은 티로신이며, X9는 티로신인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E36. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM, 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E37. 구현예 27 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하되, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E38. 구현예 27 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(b) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
E39. 구현예 27 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E40. 구현예 27 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
E41. 구현예 27 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E42. 구현예 27 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각.
E43. 구현예 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD137에 특이적으로 결합하여 이를 효능화하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E44. 구현예 1 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음의 특성 중 적어도 하나 이상 나타내는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화함;
(b) CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화함;
(c) 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유도 또는 강화함;
(d) 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화함;
(e) 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유도 또는 강화함;
(f) 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유도 또는 강화함;
(g) 간 내 및/또는 비장 내 T 세포 활성화 및/또는 T 세포 증식을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않음;
(h) 1 x 10-6 이하의 평형 해리 상수 평형 KD로 인간 CD137에 결합함; 또는
(i) 특성 (a)~(h)의 조합.
E45. 구현예 44에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E46. 구현예 44에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E47. 구현예 44에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유도하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유의미하게 유도하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E48. 구현예 44에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E49. 구현예 44 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 특성은 Fc 수용체 결합에 의존하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E50. 구현예 44 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 특성은 Fc 수용체 결합에 의해 강화되는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E51. 구현예 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 시노몰구스 CD137 및/또는 마우스 CD137과 교차 반응하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E52. 인간 CD137에 결합하고 다음 특성 중 적어도 하나를 나타내는 단리된 작용성 단클론 항체:
(a) 인간 CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화함;
(b) 인간 CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화함;
(c) 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 활성화를 유의미하게 유도 또는 강화하지 않음;
(d) 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 세포독성 T 세포 반응을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않음;
(e) 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 사이토카인 생성을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않음;
(f) 종양 미세환경에서 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유도 또는 강화하지만, 비장 및/또는 간에서는 인간 CD137 매개 T 세포 증식을 유의미하게 유도 또는 강화하지 않음;
(g) 1 x 10-6 이하의 평형 해리 상수 평형 KD로 인간 CD137에 결합함; 또는
(h) 특성 (a)~(g)의 임의의 조합.
E53. 구현예 1 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E54. 구현예 53에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
E55. 약학적 조성물로서, 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약학적 조성물.
E56. 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄와 중쇄 둘 다를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
E57. 구현예 56의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
E58. 구현예 57의 발현 벡터로 형질 변환된 세포.
E59. 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생산하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건 하에서 구현예 58에 따른 세포를 유지하는 단계를 포함하는, 방법.
E60. 구현예 59에 있어서, 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
E61. 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E62. 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E63. 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E64. 구현예 63에 있어서, T 세포 활성화는 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
E65. 구현예 63에 있어서, T 세포 활성화는 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의미하게 발생하지 않는, 방법.
E66. 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E67. 구현예 66에 있어서, 세포독성 T 세포 반응은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
E68. 구현예 66에 있어서, 세포독성 T 세포 반응은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는, 방법.
E69. 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E70. 구현예 69에 있어서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα, IL-13, IFNγ, 또는 이들의 조합인, 방법.
E71. 구현예 69 또는 구현예 70에 있어서, 사이토카인 생산은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
E72. 구현예 69 또는 구현예 70에 있어서, 사이토카인 생성은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의하게 발생하지 않는, 방법.
E73. 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 T 세포 증식을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E74. 구현예 73에 있어서, T 세포 증식은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
E75. 구현예 73에 있어서, T 세포 증식은 대상체의 비장 및/또는 간에서는 유의미하게 발생하지 않는 방법.
E76. 종양을 감소시키거나 종양 성장을 억제하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E77. 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 장애를 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E78. 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 구현예 55의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
E79. 구현예 78에 있어서, 암은 흑색종, 신경 교종, 신암, 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
E80. 구현예 76 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 Fc 감마 수용체에 결합하는, 방법.
E81. 구현예 76 내지 80 중 어느 하나에 있어서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합의 고갈은 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 효능을 감소시키는, 방법.
E82. 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 방법으로서, 상기 방법은:
(i) 생물학적 샘플을 구현예 1 내지 54 중 어느 하나의 항체와 접촉시키되, 항체는 검출 가능한 물질로 표지되는 단계; 및
(ii) 인간 CD137에 결합된 항체를 검출하여 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
실시예
본 개시는 특정 구현예를 참조하여 기술되었지만, 구현예에 대한 다양한 변경이 이루어질 수 있고, 본 발명의 진정한 사상과 범주를 벗어나지 않고도 균등물이 대체될 수 있다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 또한, 특정 상황, 재료, 물질의 조성, 방법, 방법의 단계(들)를 본 개시의 목적, 사상 및 범주에 맞게 조정하기 위한 많은 변경이 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변경은 본 발명의 범위에 포함되도록 의도된다.
실시예 1: 효모에서 생성된 합성 인간 단클론 항체는 재조합 인간 CD137에 대한 결합을 나타냄
EZ-Link Sulfo-NHS-비오틴화 키트(Thermo Scientific)를 사용해 정제된 CD137 단백질 항원을 비오틴화하였다. CD137 항원을 약 1 mg/mL까지 농축시키고 PBS로 완충액을 교환한 후, 1:7.5 몰비의 비오틴화 시약을 첨가하였다(EZ-Link Sulfo-NHS-비오틴화 키트, Thermo Scientific, Cat #21425). 혼합물을 4℃에 밤새 방치한 후, 또 다른 완충액 교환을 통해 용액 중의 유리 비오틴을 제거하였다. 비오틴화는 ForteBio를 이용해 표지된 단백질의 스트렙트아비딘 센서 결합을 통해 확인하였다. CD137 단백질 항원의 성공적인 비오틴화는, 제조사의 지침에 따라 ForteBio OctetTM Red384 간섭계(Pall ForteBio, 캘리포니아주 멘로 파크 소재)에 장착된 스트렙트아비딘 결합 바이오센서에 대한 검출 가능한 결합을 통해 확인하였다(데이터 미도시).
각각 약 109개의 다양한 항체가 포함된 효모 기반의 8가지 미처리 인간 합성 항체 라이러브리를 전술한 바와 같이 설계하고, 생성하여, 전파하였다(예를 들어, WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; Xu 등, Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70 참조). 비오틴화된 인간 CD137-Fc 융합체에 대해 8가지 미처리 라이브러리를 사용해 8번의 병렬 선택을 수행하였다.
첫 2번의 선택의 경우, 본질적으로 기술된 바와 같이, Miltenyi MACS 시스템을 사용하는 자기 비드 분류 기술을 수행하였다(Siegel 등, J Immunol Methods. 2004 Mar;286(1-2):141-53 참조). 요약하자면, 0.1% BSA가 포함된 FACS 세척 완충액 PBS 중에서 효모 세포(약 1010 세포/라이브러리)를 10 mL의 10 nM 바이오틴화된 인간 CD137-Fc 융합 항원과 함께 15분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 얼음처럼 차가운 50 mL의 세척 완충액으로 1회 세척한 후, 세포 펠릿을 40 mL 세척 완충액 중에 재현탁하고, 500 μl 스트렙트아비딘 마이크로비드(Miltenyi Biotec, 독일 베르기슈글라트바흐 소재. Cat # 130-048-101)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모를 펠릿화하여 5 mL 세척 완충액 중에 재현탁하고, MACS LS 컬럼(Miltenyi Biotec, 독일 베르기슈글라트바흐 소재. Cat # 130-048-101) 상에 첨가하였다. 5 mL를 첨가한 후, 3 mL FACS 세척 완충액으로 컬럼을 3회 세척하였다. 그런 다음, 컬럼을 자기장에서 꺼내고, 5 mL의 성장 배지로 효모를 용출시킨 다음 밤새 성장시켰다.
2회의 MACS 후에, 유세포 계측(FACS)를 사용해 분류를 3회 실시하였으며, 이는 이어지는 3개의 단락에 기술된다.
Fc 항원을 이용한 8번의 병렬 선택을 사용하는 선택 전략
MACS 선택의 8가지 라이브러리는 3회의 FACS 선택을 통해 수득하였다. 라이브러리당 대략 1Х108개의 효모를 펠릿화하고, 세척 완충액으로 3회 세척하고, 10 nM의 비오틴화된 인간 CD137-Fc 융합물, 및 별도로 10 nM의 비오틴화된 쥣과 CD137-Fc 융합 항원과 함께 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음, 효모를 2회 세척하고, 1:100으로 희석된 염소 항인간 F(ab')2 카파-FITC(Southern Biotech, 앨라배마주 버밍햄 소재, Cat# 2062-02)로 염색하고, 2차 시약으로서 1:500으로 희석된 스트렙트아비딘-Alexa Fluor 633(Life Technologies, 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재, Cat # S21375) 또는 1:50으로 희석된 Extravidin-피코에리트린(Sigma-Aldrich, 세인트루이스 소재, Cat # E4011) 중 하나로 15분 동안 4℃에서 염색하였다. 얼음처럼 차가운 세척 완충액으로 2회 세척한 후, 세포 펠릿을 0.4 mL 세척 완충액에 재현탁하고, 뚜껑에 염료명이 기재된 튜브에 옮겼다. FACS ARIA 분류기(BD Biosciences)를 사용해 분류를 수행하였고, 분류 게이트(sort gate)는 CD137 결합만을 선택하도록 결정하였다. 첫 번째 FACS에서의 쥣과- 및 인간-선택 모집단을 이어서 다음 차에 사용하였다.
위에서 선택된 모집단에 대한 2번째 및 3번째 FACS에는 인간 및/또는 쥣과 CD137 시약에 대한 결합제를 대상으로 한 양성 분류를 포함시키거나, 다중특이적 시약 결합제를 줄이기 위한 음성 분류를 포함시켰다(Xu 등의 PEDS. 2013 Oct;26(10):663-70 참조). 특정 선택 출력의 다중특이적 결합 또는 표적 결합의 양에 따라, 양성 분류를 음성 분류 이후에 수행하거나 그 반대로 하여 제한된 양의 다중특이적 결합으로 전체 결합 모집단을 충분히 활용하였다. 경쟁 선택도 문헌의 대조군 mAbs로 수행하였다. 경쟁 선택을 위해, mAb4(우렐루맙; Bristol-Myers Squibb; CAS 번호: 934823-49-1) 및 mAb5(우토밀루맙; Pfizer; CAS 번호: 1417318-27-4)를 비오틴화된 인간 CD137-Fc 융합물로 미리 복합체화하였다. 대조군 mAb의 존재 하에 결합하고 결합하지 않는 항체를 FACS를 위해 선택하였다. 이들 회차의 출력을 플레이팅하고, 시퀀싱 및 특징분석을 위해 단리물을 선택하였다.
선택된 미처리군에서 식별된 클론의 친화도 성숙
비오틴화된 인간 CD137 Fc 융합 출력에 대한 첫 번째 FAC 분류의 중쇄를 사용해 4번의 추가 선택 회차에 사용된 경쇄 다양화 라이브러리를 제조하였다. 이러한 선택 회차 첫 번째에는 10 nM 비오틴화된 인간 CD137-Fc 융합물과 접합된 Miltenyi MAC 비드를 항원으로서 사용하였다.
MAC 비드 선택 후에, 3번의 FACS 분류를 수행하였다. 이러한 회차 중 첫 번째에는 바이오틴화된 인간 CD137-Fc 융합물을 10 nM로 사용하였다. 전술한 2번 째 FACS에는 마우스 CD137 시약에 대한 결합제를 대상으로 한 양성 분류, 전술한 대조군 mAbs를 사용하는 경쟁 분류, 또는 전술한 바와 같이 다중특이적 시약 결합제를 감소시키기 위한 음성 분류를 포함시켰다. 3번째와 마지막 FACS 선택 회차는 비오틴화된 쥣과 CD137 Fc 융합물을 10 nM로 사용하거나 비오틴화된 인간 단량체 CD137을 50 nM로 사용하여 수행하였다. 전술한 각 FACS 선택 회차에서의 개별 콜로니를 시퀀싱과 특징 분석을 위해 선택하였다.
IgG 및 Fab의 생산 및 정제
효모 클론을 포화되도록 성장시킨 다음, 진탕하면서 30℃에서 48시간 동안 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 정제용 상청액을 수확하였다. 단백질 A 컬럼을 사용해 IgG를 정제하고, 아세트산(pH 2.0)으로 용출시켰다. 파파인 분해에 의해 Fab 단편을 생성하고 CaptureSelect IgG-CH1 친화도 매트릭스(Life Technologies, Cat # 1943200250)를 이용해 정제하였다.
실시예 2: 에피토프 비닝 및 재조합 CD137에 대한 인간 항CD137 항체 친화도의 결정
실시예 1에서 단리한 항체의 에피토프 비닝은, 표준 샌드위치 포맷 결합 비닝 분석을 사용하여 Forte Bio Octet Red384 시스템(Pall Forte Bio Corporation, 캘리포니아주 멘로 파크 소재)을 이용해 수행되었다. CD137 대조군 항체 IgG를 AHQ 센서 상에 첨가하고, 무관한 인간 IgG1 항체를 사용해 센서 상의 비점유 Fc-결합 부위를 차단하였다. 그런 다음, 센서를 100 nM 표적 항원에 노출시킨 다음, 실시예 1에 기술된 바와 같이 식별된 단리된 항체에 노출시켰다. ForteBio의 데이터 분석 소프트웨어 7.0을 사용해 데이터를 처리하였다. 항원 결합 후 제2 항체에 의한 추가의 결합은 비점유 에피토프(비경쟁자)를 나타내는 반면, 비결합은 에피토프 차단(경쟁자)을 나타낸다(데이터 미도시).
CD137 항체의 친화도는 ForteBio Octet을 이용해 이들의 동역학 상수(ka, kd, KD)를 측정함으로써 결정하였다. ForteBio 친화도 측정은 일반적으로 전술한 바와 같이 수행하였다(Estep 등의 MAbs. 2013 5(2):270-8 참조). 요약하자면, ForteBio 친화도 측정은 항체(IgG)를 AHQ 센서 상에 온라인으로 첨가함으로써 수행하였다. 센서는 분석 완충액 중에서 30분 동안 오프라인으로 평형화한 다음, 베이스라인이 구축에 위해 60초 동안 온라인으로 모니터링하였다. Avid 결합 측정을 위해, IgG가 첨가된 센서를 100 nM 항원(인간, 시노몰구스, 또는 쥣과 CD137)에 3분 동안 노출하고, 그 후 센서를 3분 동안 분석 완충액으로 옮겨 해리 속도(off-rate)를 측정하였다. 1가 결합 측정 값은 인간 CD137-Fc 융합물을 AHQ 센서에 첨가하고, 이어서 200 nM 항체 Fab 용액에 노출시킴으로써 수득하였다. 동역학 데이터를 1:1 결합 모델을 사용해 ForteBio의 데이터 분석 소프트웨어에 피팅시켰다(데이터 미표시).
항체가 리간드 차단 항체인지 여부도 결정하였다. 구체적으로, 리간드 차단 실험은 Octet HTX(ForteBio) 및 비표지 MX96 SPRi(Caterra) 둘 다를 이용해 수행하였다. mAb1은 Octet 센서 또는 MX96 칩 센서를 이용해 포획하였다. mAb1이 미리 첨가된 센서에 CD137과 CD137L을 순차적으로 발랐다. CD137L에 노출시 반응의 증가는, mAb1과 CD137L이 CD137에 결합하기 위해 경쟁하지 않았음을 나타낸다. 한 편, 신호의 변화 결여는 경쟁을 나타냈는데, 대조 항체 mAb5가 이에 해당하는 경우였다. mAb1은 CD137에 대한 CD137L의 결합을 억제하지 않았으며(데이터 미도시), 따라서 비-리간드 차단 항체로 간주하였다.
실시예 3: 친화도 성숙된 항CD137 항체의 결합 친화도 분포
2개의 돌연변이체 라이브러리를 사용해 친화도 성숙된 항CD137 항체를 생성하였다. 제1 라이브러리는 중쇄에 돌연변이를 포함하고, 제2 라이브러리는 경쇄에 돌연변이를 포함하였으며, 여기서 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 공여자 다양성이 생성되었다. 돌연변이체 라이브러리는 친화성 증가 및 마우스 CD137과의 교차 반응성 유지를 목표로 3회의 파지 패닝(phage panning)을 거쳤다. 각 회차에서, 비오틴화된 항원에 대한 초기 결합(즉, 과량의 비표지 항원 또는 부모 IgG와 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션) 후 해리 속도 경쟁 단계를 사용하였다.
상이한 선택 회차에서 생성된 항CD137 항체를 kd/ka 이중 로그 도표 상에 표시하였다. 겉보기 결합 및 해리 동역학 속도 상수(ka 및 kd 값)은 PBS-T 0.01%의 영동 완충액 중에서 SPRi 판독기(MX96, Carterra)를 이용해 측정하였다. 항인간 CD137 항체는 CFM(Carterra)을 이용해 카복시메틸덱스트란 하이드로겔 50L 칩(Xantec bioanalytics) 상에 공유 인쇄하였다. 갓 혼합한 활성화 시약(H2O 중 150 ml 0.4 M EDC 및 150 ml 0.1 M sulfo-NHS)을 사용해 SPR 기질의 표면을 7분 동안 활성화시켰다. 아세트산 완충액 pH 4.5 중 10 mg/ml의 항체를 사용해 15분 동안 인쇄하였다. 이어서, 인쇄된 칩을 SPRi 판독기(MX96, Carterra) 상에서 1 M 에탄올아민으로 15분 동안 ?칭하였다. 동역학 분석을 위해, 정제된 재조합 his 태그된 인간 CD137(0, 2.05, 5.12, 12.8, 32, 80, 200, 500 nM)을 순차적으로 주사하였다. 각 농도에 대해, 5분의 결합 시간에 이어서 10분의 해리 시간을 두었다. SPR 검사 도구 및 Scrubber 소프트웨어를 이용해 데이터를 처리하고 분석하였다. 동역학 데이터를 세포간 기준 스팟과 함께 참조하고, 완충액 교환 사이클에도 이중 참조한 다음, 1:1 결합 모델에 전체적으로 피팅하여 이들의 겉보기 결합 및 해리 동역학 속도 상수(ka 및 kd 값)를 결정하였다. 비율(kd/ka)을 사용해 각 항원/mAb 상호 작용의 KD 값(KD=kd/ka)을 유도하였다.
KD(kd/ka)가 10~20 nM인 항체는 상향 삼각형으로 도시되고, KD가 10 nM 미만인 것들은 역삼각형으로 도시되어 있다(도 1). 중쇄 만 친화도 성숙된 것(상단 패널) 또는 경쇄 만 친화도 성숙된 것(하단 패널)은 둘 다 부모 항체(mAb1)보다 높은 결합 친화도로 항CD137 항체를 단리시켰다(도 1). mAb1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 6에 각각 제시되어 있다.
실시예 4: 항CD137 항체의 중쇄 CDR3(CDRH3)을 포함하는 중요 결합 잔기의 식별
CDRH3 내의 어떤 아미노산 잔기가 마우스 및 인간 CD137 폴리펩티드에 대한 mAb1의 결합에 중요한지를 결정하기 위해, 알라닌 스캐닝을 수행하였다. mAb1 개방 해독 프레임의 유도체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 세트를 생성하였고, 여기서 각각의 유도체는 CDRH3을 포함하는 야생형 아미노산 잔기 위치에서 단일 알라닌 잔기 치환을 함유하였다. 서열번호 4의 D95 내지 M100I는 야생형 코돈을 알라닌 코돈 GCC로 치환함으로써 각각 알라닌으로 돌연변이시켰다. 알라닌 치환된 각각의 mAb1 유도체의 각 CDRH3의 아미노산 서열은 서열번호 111~125에 제시되어 있다. 알라닌 치환된 15개의 mAb1 유도체 각각을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 Gibson Assembly를 통해 발현 벡터(aglyco-IgG1, DID-2600)로 개별적으로 클로닝하였다. 알라닌 치환된 각 mAb1 유도체를 당업계에 공지된 표준 기술을 사용하여 발현시키고 정제하였다. 알라닌 치환된 각 mAb1 유도체의 인간 및 마우스 CD137에 대한 결합 친화도는, 인간 CD137(huCD137)의 경우 Wasatch SPR 동역학 측정을 통해 결정하고, 마우스 CD137(mCD137)의 경우 평형 세포-결합 분석법을 통해 결정하였다.
표 1은 각 돌연변이체에 대해 계산된 해리 상수(KD)를 포함한다. 표에서 "약함"이라고 표시된 경우, 백그라운드를 상회하는 측정 가능한 결합이 있지만, 정확한 KD 값을 할당하기 위한 곡선 피팅에 있어서는 신뢰도가 충분하지 않은 것이다. 표 1에서, "NB"는 결합 친화도를 결정하는 동안 결합이 관찰되지 않았음(no binding)을 나타내며, CDRH3에서의 어떤 알라닌 치환으로 인해 항체가 CD137에 결합하지 않았는지를 나타낸다.
[표 1] 인간 및 마우스 CD137에 대한 알라닌 스캐닝 클론의 결합 친화도(KD)
알라닌으로의 돌연변이로 초래된 결합 친화도의 유지, 약화 또는 상실은 손실은 CD137 결합에 어떤 잔기가 필요하였고 어떤 잔기가 돌연변이에 내성을 가졌는지를 결정할 수 있는 정보를 제공하였다. 도 2는 각각의 위치에서 표시된 야생형 아미노산 동일성을 갖는 CDRH3의 알라닌 스캐닝에 대한 결합 데이터를 요약한 것이다. 도시된 바와 같이, CDRH3 위치는 위치를 알라닌으로 돌연변이시키는 효과에 기초하여 컬러로 코드화되어 있다. 이러한 분석으로 다음의 공통 서열을 얻었다: DXPFXL DXXY Y Y YYX. 공통 서열 중 굵은 글꼴로 표시된 잔기가 알라닌으로 돌연변이된 경우, 결합이 완전히 상실된 것이며, 따라서 mAb1이 CD137에 결합하는데 이들 잔기가 필요하였다. 공통 서열 중 이탤릭체로 표시된 잔기가 알라닌으로 돌연변이된 경우, 항체가 여전히 CD137에 결합할 수 있지만 친화도가 약한 것이며, 이는 이들 잔기가 결합에 부분적인 역할을 하지만 절대적으로 필요한 것이 아님을 나타낸다. 공통 서열 중 X로 표시된 잔기 위치가 알라닌으로 돌연변이된 경우, 결합 친화도에는 변화가 거의 없거나 전혀 없었다. 따라서, 이들 잔기는 돌연변이에 내성을 가졌고 결합 상호 작용에 중요하지 않았다.
실시예 5: 포화 돌연변이 유발의 스캐닝 및 상동체 비교에 의한 에피토프 맵핑
CD137에 대한 항체의 결합에 중요한 잔기를 식별하기 위해, 포화 돌연변이 유발 라이브러리의 스캐닝 및 상동성 비교에 의해 CD137 에피토프의 기능적 맵핑을 수행하였다. 시스테인을 제외한 모든 가능한 아미노산 치환에 대한 단일 점 돌연변이를 갖는 CD137 돌연변이체의 조합 라이브러리를 생성하고 mAb1, mAb4 및 mAb5에 결합하는 이들의 능력에 대해 시험하였다. CD137의 각 점 돌연변이를 암호화하는 유전자로 이루어진 라이브러리를 상업적 공급자에게서 합성하고 포유류 디스플레이 발현 벡터에 클로닝하였다. 포유류 디스플레이를 사용해 변이체 인간 CD137 세포 외 도메인의 라이브러리를 제시하였으며, 이 때 각각의 변이체는 야생형 인간 CD137에 비해 적어도 하나의 점 돌연변이를 가진다.
CD137 변이체를 디스플레이하는 세포의 라이브러리를 비중첩 항체인 (i) mAb4와 mAb1 또는 (ii) mAb4와 mAb5로 염색하였다. 하나의 항체에 대해서는 결합이 감소되었지만 다른 하나에 대해서는 그렇지 않은 세포의 모집단을 FACS에 의해 농축하였다. 각 모집단을 Illumina sequencing에 의해 시퀀싱하여, 각 항체에 대한 결합을 특이적으로 파괴하였지만 CD137의 정확한 접힘 또는 비중첩 항체에 대한 결합에는 영향을 미치지 않은 위치에서 돌연변이를 식별하였다.
mAb1의 경우, K114가 CD137에 대한 결합에 중요한 가장 중요한 잔기로서 식별되었는데, 해당 위치에서 모든 돌연변이 중 34%가 발생하는 것이 관찰되었으며, 모든 아미노산 치환이 관찰되었다. E111, T113, 및 P135도 결합에 중요하며, 이들 각각의 위치에서 돌연변이 중 10%가 관찰된다. 또한, N126 및 I132는 mAb1에 대한 결합을 부분적으로 감소시킨 모집단에서 관찰되었다. 도 3a는 mAb1, mAb4 and mAb5. mAb4 및 mAb5에 대한 에피토프를 포함하는 잔기가 mAb1과 구별되는 결합 에피토프를 가졌음을 보여준다. mAb4의 경우, N42는 모든 돌연변이 중 50%가 해당 위치에서 관찰된 가장 중요한 잔기였으며, R41과 D38은 그 다음이었다. mAb5의 경우, I132는 모든 돌연변이 중 32%가 해당 위치에서 발생하는 가장 중요한 잔기였으며, N126, G96, K114, 및 L95가 그 다음이었다.
라이브러리 스크리닝에서 단리된 점 돌연변이체를 가용성 단백질로서 발현시켜 mAb1에 대한 결합에 대해 시험하였다. K114에서 시험한 4개의 돌연변이(R, E, N, T) 모두는 mAb1에 대한 결합을 차단하였다. T113 및 P135에서의 돌연변이도 결합을 파괴하였다. E111에서의 점 돌연변이체 2개 중 1개, N126에서의 돌연변이체 3개 중 1개, 및 I132에서의 돌연변이체 4개 중 1개는 결합을 나타내지 않았다. 마찬가지로, N42에서의 돌연변이체 3개 중 3개는 mAb4에 결합하지 않았으며, I132에서의 돌연변이체 4개 중 3개는 mAb5에 결합하지 않았다.
또한, CD137 상동체를 mAb1에 대한 이들의 결합에 대해 시험하였다. 도 3b에 도시된 바와 같이, mAb1은 마우스 CD137에 결합할 수 있었지만 랫트 CD137에는 결합할 수 없었다. 마우스 CD137 및 랫트 CD137 간에, mAb1에 대한 에피토프를 포함하는 잔기에 차이가 있었는지 여부를 결정하기 위해, 인간, 시노몰구스 원숭이, 랫트 및 마우스 유래의 CD137 동족체의 아미노산 서열을 정렬하여 비교하였다. mAb1 에피토프를 포함하는 아미노산 잔기 모두가 인간, 시노몰구스 원숭이 및 마우스에 존재하지만, 랫트에는 존재하지 않는다. 인간 CD137 서열의 리신 114(K114)뿐만 아니라 시노몰구스 원숭이 및 마우스 CD137 서열에서의 상응하는 리신은 랫트 CD137 서열에서는 글루탐산(E)인데, 이는 인간 CD137 서열의 K114가 mAb1에 대한 중요한 결합 잔기 중 적어도 하나임을 추가적으로 나타내는 것이다.
도 3c 및 3d는 CD137L에 결합된 인간 CD137의 결정 구조를 보여주는데(Bitra A 등의 J Biol Chem 2018, 293(26):9958-9969 참조), 여기서 잔기 E111, T113, K114 및 P135는 구형으로 도시되어 있다. 알 수 있는 바와 같이, 이들 잔기는 회색으로 도시된 CD137 리간드(CD137L) 결합 도메인으로부터 멀리 위치한다.
실시예 6: 항CD137 항체가 마우스에서 면역 조절제 및 CD8+ T 세포에 미치는 영향
실시예 1에서 생성된 3가지 항CD137 항체인 mAb1, mAb2 및 mAb3를 이들의 효능에 대해 추가로 분석하였다. 이들 항체는 마우스 교차 반응성이었으며, Fab 뒤섞임(shuffling)을 방지하기 위한 S228P 돌연변이를 함유하는 인간 IgG4 이소형의 불변 영역을 포함하였다. 생체 내에서 마우스 CD137 신호전달을 자극하고 항종양 면역성을 유도하는 것으로 알려진 3H3 단클론 항체(Melero 등의 (1997) Nature Medicine 3(6):682-685; Uno 등의 (2006) Nature Medicine 12(6):693-696 참조)를 비교기로서 사용하였다(BioXcell 카탈로그 # BE0239; 로트 번호 5926/1115). 특히, 항체 3H3은, CD137의 세포 외 도메인을 표적으로 하지만 리간드 결합을 차단하지 않는 완전한 인간 IgG4-S228P 작용성 항체인 우렐루맙(Bristol-Myers Squibb; CAS 번호: 934823-49-1)과 유사한 특성을 갖는다. 또한, 항랫트 IgG4를 이소형 대조군으로서 사용하였다(BioXcell 카탈로그 # BE0089; 로트 번호 5533/5679-316J1). 표시된 바와 같이, 마우스당 바람직한 투약량을 100 μl 주사 부피로 만들기 위해 PBS 중에서 희석액을 제조하였다.
0, 3, 6일차에 종양이 없는 암컷 Balb/c 마우스에게 항체(100 μg)를 복강 내 투여하고, 9일차에 비장을 채취하였다. CD8+CD44+ T 세포에서의 PD-1 및 TIGIT의 발현 수준을 유세포 분석에 의해 측정하였다. 구체적으로, 비장을 기계적으로 파괴하고, 40 μm 세포 여과기에 통과시켜 비장의 단일 세포 현탁액을 수득하였다. 적혈구 세포는 ACK 완충액을 사용해 용해시켰다. 세포 현탁액은 다음의 항체로 염색하였다: CD45(클론 30-F11, eBioscience), CD8(클론 53-6.7, BD Biosciences), CD4(클론 RM-45, BD Biosciences), CD44(클론 IM7, eBioscience), PD-1(RMP1-30, eBioscience) 및 TIGIT(GIGD7, eBioscience). MACSquant Analyzer 유세포 분석기(Milenyi)를 이용해 데이터를 취득하고 FlowJo 소프트웨어, 버전 10을 사용해 데이터를 분석하였다.
항체 3H3은 PD-1 및 TIGIT 둘 다의 발현을 유의미하게 증가시킨 반면, 항체 mAb1만이 mAb2와 mAb3과 비교해 발현을 증가시켰다(도 4a 및 4b 참조). 또한, CD8+ T 세포의 팽창은 비장의 CD45+ 세포의 백분율을 분석하거나 비장당 CD8+ T 세포의 수를 분석하여 평가하였다. 유사하게, 항체 3H3은 CD8+ T 세포를 가장 많이 증식시켰으며, mAb1은 mAb2 및 mAb3에 비해 가장 높은 수준으로 CD8+ T 세포를 증식시켰다(도 4c). 따라서, mAb1을 추가 시험용으로 선택하였다.
실시예 7: 종양을 가진 마우스에서 항CD137 항체의 효능
실시예 6에 나타낸 바와 같은, CD8+ T 세포 증식을 강화하는 mAb1의 능력을 고려하여, 동계 대장암(syngeneic colon cancer)의 피하 모델을 사용하여 mAb1을 항종양 활성에 대해 추가로 분석하였다. 구체적으로, CT26 종양 세포(계대 3)를, 10% 56℃-열 불활성화된 FBS(Gibco 10438-034), 1 mM 피루브산나트륨(Gibco cat. # 11360-070), 1X NEAA(Gibco cat# 11140-050) 및 1X MEM 비타민 용액(Gibco cat#11120-052)이 포함된 DMEM 배지(Gibco cat#11965-092) 중에서 무균 조건 하에 유지시켰다. 세포는 37의 5% CO2 조건에서 유지하였다. 50~70% 컨플루언스에 도달하면, 세포를 1:10의 비율로 총 2대까지 계대한 후 생체 내 이식하였다. 세포를 수확하고 Hemacytometer(Hausser Scientific Bright-Line #1492)를 사용해 계수하였다.
Balb/c 암컷 마우스를 Charles River Laboratories로부터 구입하였는데, 연구 시작 시점에 9주령이었다. CT26 종양 세포(0.1 mL PBS 중 마우스 당 1 x105 세포)를 각 마우스의 우측 옆구리에 피하 주사하고, 종양 부피를 다이얼 캘리퍼스를 사용해 주 2회 계산하였다(길이*(폭^2)/2). 종양 접종 후 7일차에, 동물을 8개 그룹으로 분류하고, 치료를 개시하였다. 체중은 연구 기간 동안 주 3회 기록되었다.
mAb1은 3가지 상이한 투약량(100, 50 또는 25 μg/마우스)으로 투여하고, 3H3은 2가지 상이한 투약량(50 또는 10 μg/마우스)으로 투여하고, 이소형 대조군 항체는 50 μg/마우스의 투약량으로 투여하였다. 모든 마우스에 대한 복강 내 투여는 0, 3, 6 및 9일차에 이루어졌다.
mAb1 및 3H3 상체 둘 다에 대해 종양에서 CD8+ T 세포의 증식을 팽창을 생체 내에서 확인하였다(데이터 미도시). 개별 종양 부피는 도 5a에 도시되어 있고 평균 종양 부피는 도 5b에 도시되어 있다. mAb1 치료는 3가지 투약량 모두에서 대조군과 비교해 종양 성장을 억제하였다. 또한, mAb1를 사용해 치료한 경우, 25 μg 투약량 수준에서는 마우스 8마리 중 6마리, 50 μg 투약량 수준에서는 마우스 8마리 중 5마리, 100 μg 투약량 수준에서는 마우스 8마리 중 3마리에서 완전한 퇴행을 유도하였다.
각 치료 그룹에서의 전체 생존율은 도 5c에 도시되어 있다. CT26 종양에 대한 mAb1의 강력한 항종양 활성은 전체 생존율 연장으로 반영되었다. 장기 생존(>60일)은 25 μg 투약량 수준에서는 마우스의 80%에서, 50 μg 투약량 수준에서는 마우스의 62%에서, 100 μg 투약량 수준에서는 마우스의 38%에서 관찰되었다.
70일차에 촉진할 수 있는(palpable) 종양이 없는 마우스는 치유된 것으로 간주하였고, 반대쪽 옆구리에 CT26 세포를 피하 주입하여 재접종하였다. 구체적으로, 종양이 제거된(eradiated) 마우스에게 1Х105 개의 CT26 세포를 왼쪽 옆구리에 다시 주입하고, 종양 부피를 다이얼 캘리퍼스를 사용해 주 2회 계산하였다(길이*(폭^2)/2). 대조군으로서, 5마리의 비면역화(미처리) 마우스를 동일한 방식으로 각각 접종하였다. 재접종 실험 결과는 도 5d에 도시되어 있다. CT26 세포의 피하 주사 후 22일차에, 재접종 마우스 중 종양을 형성한 마우스는 없었다. 대조적으로, 동일한 세포를 주사한 미처리 마우스는 모두 종양을 형성하였다. 따라서, 치유된 것으로 간주된 모든 마우스가 CT26 종양을 거부하였으며, 이는 mAb1이 장기적인 보호 기억을 유도할 수 있음을 시사한다.
실시예 8: 종양을 가진 마우스에서 친화도 성숙된 항CD137 항체의 효능
실시예 4에서 생성한 친화도 성숙된 단클론 항체를, 본질적으로 실시예 7에 기술된 바와 같이, 동일한 동계 대장암(CT26)의 피하 모델을 사용하여 항종양 활성에 대해 분석하였다. 구체적으로, 6가지 친화도 성숙된 클론(mAab7~mAb12)을 IgG4 불변 영역으로 생성하고 다음과 같이 시험하였다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열은 마우스 CD137에 대한 이들의 KD 값(실시예 2에 기술된 ForteBio Octet에 의해 결정함) 및 인간 CD137에 대한 KD 값(실시예 4에 기술된 Carterra에 의해 결정함)과 함께 아래 표에 제공되어 있다.
부모 mAb1, 3H3 항체(데이터 미도시), 및 IgG4 이소형 항체를 대조군으로서 사용하였다. 모든 마우스에게 마우스당 50 μg의 mAb를 0, 3, 7 및 10일차에 복강 내 투여하였다. 치료 개시 후 13일차에 비장과 간을 채취하였다.
개별 종양 부피는 도 6a에 도시되어 있고 평균 종양 부피는 도 6b에 도시되어 있다. 실시예 7의 결과와 일관되게, 부모 mAb1를 사용한 치료는 종양 부피를 감소시켰다. 또한, 종양을 가진 마우스에게 mAb1 유래의 모든 친화도 성숙된 클론(mAb7~mAb12)을 투여한 결과 이소형 대조군 항체로 치료한 마우스와 비교해 종양 성장이 억제되었다.
실시예 9: 종양을 보유 마우스에서 항CD137 항체가 T 세포에 미치는 영향
종양을 가진 마우스에서 항CD137 항체(즉, 3H3 및 mAb1)가 T 세포의 수준에 미치는 영향을 결정하기 위해, 실시예 7에 기술된 바와 같이, CT26 종양을 가진 Balb/c 마우스에게 0일 및 3일차에 항체를 주사하고, 7일차에 조직을 채취하였다. mAb1은 3가지 상이한 투약량으로(100, 50 또는 25 μg/마우스), 3H3은 2가지 상이한 투약량으로(50 또는 10 μg/마우스), 이소형 대조군 항체는 50 μg/마우스의 투약량으로 투여하였다.
비장의 단일 세포 현탁액은 실시예 6에 기술된 바와 같이 수득였고, 종양 세포 현탁액은 종양 해리 키트(Miltenyi cat# 130-096-730)를 사용하는 효소적 분해 및 기계적 분해에 의해 수득하였다. 세포 현탁액을 완전한 배지로 처리하여 효소를 불활성화시킨 다음 40 μm 세포 여과기를 통과시켰다. 적혈구 세포는 ACK 완충액을 사용해 용해시켰다. 세포를 CD45, CD8 및 CD4에 대한 항체로 염색하고, 실시예 6에 기술된 바와 같이 분석하였다.
도 7은 비장과 종양에서 발견된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수를 CD45+ 세포의 백분율로서 보여준다. 이러한 결과는 mAb1이 비장의 CD8+ T 세포와 비교해 종양 침윤성 CD8+ T 세포를 선택적으로 확장한다는 것을 나타냈다.
실시예 10: CD4+, CD8+ 또는 NK 림프구의 고갈이 생체 내에서 항CD137 항체의 항종양 효능에 미치는 영향
항CD137 항체의 작용 메커니즘을 평가하기 위해, 실시예 7에 기술된 바와 같이, CT26 종양을 가진 Balb/c 마우스에게 mAb1을 단독으로 복강 내 주입하거나 항CD4(GK1.5), 항CD8(YTS169.4), 또는 항아시알로-GM1(표적 NK 세포) 항체와 조합으로 복강내 주입하여 이들 특이적 림프구의 서브세트를 동물로부터 고갈시켰다. mAb1 항체로만 치료한 마우스에게는 6, 9, 12, 19 및 26일차에 150 μg의 항체를 투여하였다. 500 μg의 항CD4, 항CD8, 또는 50 uL의 항아시알로-GM1 항체와 조합하여 150 μg의 mAb1로 치료한 마우스에게는 -1, 0, 5, 10, 15 및 20일차에 투여하였다. 유효한 고갈은 FACS 분석에 의해 확인하였다(데이터 미표시).
개별 종양 부피는 도 8에 도시되어 있다. 실시예 7의 결과와 일관되게, 부모 mAb1를 사용한 치료는 종양 부피를 감소시켰다. 또한, 림프구를 고갈시키는 항CD4, 항CD8, 또는 항아시알로-GM1 항체와 조합하여 mAb1를 투여한 결과 mAb1 항체의 항종양 활성이 감소되었다. 이러한 결과는 본원에 기술된 항CD137 항체의 항종양 효능에 대한 선천성 면역과 적응성 면역 간의 협력을 나타냈다.
실시예 11: 다양한 종양 모델에서 항CD137 항체의 항종양 효능
항CD137 항체가 상이한 종양 모델에서 항종양 효능을 가지는지 여부를 결정하기 위해, CT26 종양(대장암종; 전술한 바와 같음), EMT-6 종양(유방 암종), A20 종양(B 세포 림프종) 또는 MC38 종양(대장 암종)을 가진 마우스에게 mAb8을 투여하였다.
모든 종양 모델을 대상으로, Balb/c 암컷 마우스를 Charles River Laboratories로부터 구입하였는데, 연구 시작 시점에 7~9주령이었다. 각각의 종양 유형에 대해 적절한 동계 마우스 균주를 사용하였다(CT26, EMT-6 및 A20의 경우 Balb/c; MC38의 경우 C57BL/6). EMT6 종양 세포(0.05 mL PBS 중 마우스당 5 x104개의 세포)를 각 마우스의 오른쪽 유선 지방 패드 내에 주입하였다. CT26 종양 세포(마우스당 1 x105 세포), A20 종양 세포(마우스당 5 x106 세포) 및 MC38 종양 세포(마우스당 5 x105 세포)를 각 마우스의 우측 옆구리에 피하 주사하고, 종양 부피를 다이얼 캘리퍼스를 사용하여 주 2회 계산하였다(길이*(폭^2)/2). 종양 크기가 50~100 mm3에 도달하면, 마우스를 무작위 배정하여 mAb8 또는 이소형 대조군을 투여하였다(0일차). 직시(orthoptic) EMT6 종양을 가진 마우스에게는 0, 3, 6 및 9일차에 12.5 μg을 투여하였다. A20(200 μg/마우스) 및 MC38(12.5 μg/마우스) 종양을 가진 마우스에게는 주 1회 5회분의 투약량을 투여하였다. 모든 마우스에 대해서는 복강 내 투여가 이루어졌다.
도 9에 도시된 바와 같이, mAb8은 시험한 4개의 종양 모델에서 효과적이었으며, 이는 다양한 암 유형에 대한 광범위한 효능이 있음을 나타낸 것이다. mAb8로 치료한 결과, CT26 종양을 가진 마우스 8마리 중 8마리, EMT6 종양을 가진 마우스 8마리 중 3마리, A20 종양을 가진 마우스 8마리 중 5마리에서 종양 퇴행이 나타났으며, EMT6, A20 및 MC38을 가진 대부분의 나머지 마우스에서 성장이 지연되었다.
실시예 12: 항CD137 항체 투여량의 영향
항CD137 항체의 항종양 효능의 특징을 추가로 분석하기 위해, 본질적으로 실시예 7에 기술된 바와 같이, 동일한 동계 대장암(CT26)의 피하 모델을 사용하여 투약량 연구를 수행하였다. 구체적으로, 치료 그룹당 8마리의 마우스를 대상으로, 부모 mAb1과 친화도 성숙된 항체 mAb8 및 mAb10을 마우스당 150 μg(고 투약량) 또는 20 μg(저 투약량)의 투약량으로 0, 3, 6 및 9일차에 복강 내 투여하였다. 한 그룹의 마우스(n=8)에게는 IgG4 이소형 대조군을 150 μg의 투약량으로 투여하였다.
개별 종양 부피, 평균 종양 부피, 및 150 μg으로 치료한 마우스의 생존 백분율은 도 10a, 도 10b 및 도 10c에 각각 도시되어 있다. 개별 종양 부피, 평균 종양 부피 및 20 μg으로 치료한 마우스의 생존 백분율은 도 11a, 도 11b 및 도 11c에 각각 도시되어 있다. 이들 결과는, 부모 mAb1과 친화도 성숙된 mAb8 및 mAb10 항체로 치료한 결과 고 투약량 및 저 투약량 모두에서 종양 부피가 감소하였고 마우스의 생존이 증가하였음을 나타낸다.
CT26 종양 모델을 이용하는 별도의 투약량 연구에서는, 부모 mAb1의 추가 투약량을 시험하였다. 구체적으로, mAb1을 다음의 용량으로 복강내 투여하였다: 12.5 μg, 25 μg, 50 μg, 100 μg 및 200 μg. 도 12는 투약량 연구의 결과를 보여주는데, 이는 넓은 투약량 범위에 걸쳐 효능이 있음을 나타낸다. mAb1로 치료한 결과, 각각의 투약량 수준에서는 마우스 8마리 중 적어도 3마리에서 종양 퇴행이 나타났고, 최적 투약량 범위(50~100 μg/마우스)에서는 8마리 중 7마리에서 종양이 제거되는 결과가 나타났다.
실시예 13: Fc-수용체 결합이 항CD137 항체의 항종양 효능에 미치는 영향
항CD137 항체의 항종양 활동에 대한 Fc-수용체 결합의 기여도를 결정하기 위해, mAb1의 아글리코실화 IgG1 버전 및 IgG4 버전을 생성하였다. 실시예 7에 기술된 바와 같이 마우스에서 CT26 종양을 생성하였다. 마우스에게 150 ug의 (a) 이소형 대조군; (b) IgG4로서의 mAb1; (c) IgG4로서의 아글리코실화된 mAb1; 또는 (d) IgG1로서의 아글리코실화된 mAb1을 투여하였다.
도 13a 및 도 13b에 도시된 바와 같이, 부모 mAb1 항체의 아글리코실화된 IgG4 및 IgG1 이소형은 mAb1과 비교해 종양 부피에 미치는 영향이 감소하였다. 그러나, 효능은 완전히 사라진 것은 아니었다. 따라서, 이들 결과는 mAb1의 항종양 효능이 전적으로 Fc-의존성은 아니지만, Fc 수용체 결합에 의해 강화됨을 나타냈다.
실시예 14: 항CD137 항체의 교차 종 친화도
항CD137 항체를 다수의 종 유래의 CD137에 대한 결합에 대해 추가로 시험하였다. 구체적으로, mAb1, mAb8 및 mAb10을 인간, 마우스, 시노몰구스 및 개과 CD137에 대한 결합에 대해 분석하였다. 동역학 실험은 동역학 완충액(1x PBS, pH 7.4, 0.1 mg/ml BSA, 및 0.002% Tween 20)에서 Octet HTX(ForteBio)를 이용해 수행하였다. Fc-, 마우스 IgG2a- 또는 His-태그가 부착된 CD137(인간, 마우스, 시노몰구스 또는 개과)을 미리 수화시킨 바이오센서, 즉 AHC, AMC 또는 NTA 각각에 5분 동안 첨가하였다. 그런 다음, 센서를 5분 동안 Fab(0, 5.12, 12.8, 32, 80, 200 및 500 nM)에 침지하여 결합시킨 다음, 15분 동안 해리시켰다. ForteBio Data Analysis 9.0으로 데이터를 분석하고, 전체적으로 1:1 결합 모델에 피팅하여 겉보기 KD를 결정하였다. 인간 및 마우스 CD137 결합에 대한 KD는 상이한 공급원(ACRO Biosystems, Sino Biological 및 자체 공급) 유래의 항원을 사용해 확인하였다. 그 결과는 아래 표 2에 나타나 있다.
[표 2] 교차 종 친화도
실시예 15: 종양 크기가 항CD137 항체의 항종양 효능에 미치는 영향
항CD137 항체의 항종양 효능을 추가로 특징 분석하기 위해, 큰 종양에 대한 항종양 효능을 평가하였다. 치료에 앞서 CT26 종양을 대략 500 mm3까지 성장시켰다. 부모 mAb1과 친화도 성숙된 mAb8 및 mAb10 항체를 종양 확립 후 0, 3, 6 및 9일차에 마우스당 150 μg씩 투여하였다(치료 그룹당 마우스 n=6). IgG4 이소형 대조군 항체를 비교기로서 사용하였다.
도 14a~14c에 도시된 바와 같이, 부모 mAb1뿐만 아니라 친화도 성숙된 mAb8 및 mAb10은 이소형 대조군에 비해 종양 부피를 감소시켰고(도 14a~14b) 및 마우스 생존율을 증가시켰다(도 14c). mAb8의 항종양 효능은 mAb1 및 mAb10에 비해 유의하게 더 컸다. 25 μg의 항체를 0, 7 및 14일차에 투여한 것을 제외하고는 동일한 연구 설계를 사용해 큰 종양에 대한 mAb8 및 3H3의 효능을 비교하는 별도의 연구를 수행하였다. 도 14d에 결과가 제공되며, 3H3은 큰 종양에 대해 효능이 없는 반면, mAb8은 종양 퇴행을 유도하였음을 보여준다.
실시예 14에 기술된 바와 같이, mAb8은 마우스 CD137에 대한 친화도를 갖는데, 이는 인간 CD137에 대한 mAb1의 친화도와 비슷하다. 본 개시는 임의의 특정 이론이나 작용 메커니즘에 의해 구속되지 않지만, 중간 친화도를 갖는 작용제 항CD137 항체가 암 치료에 훨씬 더 유용할 수 있다고 여겨진다.
70일차에 촉진할 수 있는 종양이 없는 마우스는 치유된 것으로 간주하였고, 반대쪽 옆구리에 CT26 세포를 피하 주입하여 재접종하였다. 구체적으로, 종양이 제거된(eradiated) 마우스에게 1Х105 개의 CT26 세포를 왼쪽 옆구리에 다시 주입하고, 종양 부피를 다이얼 캘리퍼스를 사용해 주 2회 계산하였다(길이*(폭^2)/2). 대조군으로서, 5마리의 비면역화(미처리) 마우스를 동일한 방식으로 각각 접종하였다. 재접종 실험 결과는 도 15에 도시되어 있다. CT26 세포의 피하 주사 후 80일차에, 재접종 마우스 중 종양을 형성한 마우스는 없었다. 대조적으로, 동일한 세포를 주사한 미처리 마우스는 모두 종양을 형성하였다. 따라서, 치유된 것으로 간주된 모든 마우스가 CT26 종양을 거부하였으며, 이는 mAb1이 장기적인 보호 기억 면역을 유도할 수 있음을 시사한다.
실시예 16: 종양을 가진 마우스에서 항CD137 항체의 독성
종양을 가진 마우스에서 항CD137 항체(즉, 3H3 및 mAb1)가 간 내 T 세포 수준에 미치는 영향을 결정하기 위해, 실시예 7의 마우스를 분석하였다. 간 림프구를 수집하여 유세포 분석을 통해 분석하였다. 구체적으로, 간 해리 키트(Miltenyi cat# 130-105-807) 및 gentle MACS 해리기(Miltenyi)를 사용해 간의 단일 세포 현탁액을 수득하였다. 세포 현탁액을 완전한 배지로 처리하여 효소를 불활성화시킨 다음 40 μm 세포 여과기를 통과시켰다. 적혈구 세포는 ACK 완충액을 사용해 용해시켰다. 세포를 CD45, CD8 및 CD4에 대한 항체로 염색하고, 실시예 3에 기술된 바와 같이 분석하였다.
도 16a 및 16b는 치료한 마우스이 간에서 발견된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수를 CD45+ 세포의 백분율로서 보여준다. 결과는, mAb1이 간 내 T 세포의 침윤을 유도하지 않았음을 나타내는데, 이는 항체 3H3에 비해 독성이 더 낮음을 입증하는 것이다.
실시예 17: 종양을 가진 마우스에서 친화도 성숙된 항CD137 항체의 독성
항CD137 항체(즉, 3H3, mAb1 및 mAb7~mAb12)에 의해 매개된 독성 관련 효과를 평가하기 위해, 실시예 8에서의 종양을 가진 마우스에게 항체를 투여한 후, 비장 및 세포의 세포 조성을 분석하였다.
실시예 8에서의 종양을 가진 마우스에서 간 내(간) 및 비장 내(비장) T 세포를 수집하고 유세포 분석을 통해 분석하였다. 항CD137 항체 또는 이소형 대조군 항체를 표시된 바와 같이 투여한 후, 세포와 비장의 CD45+ 세포를 CD3+, CD4+, 또는 CD8+ 발현에 대해 평가하였다. 결과는 도 17a(비장) 및 17b(간)에 도시되어 있다. 결과는, 부모 mAb1뿐만 아니라 친화도 성숙된 항체(mAb7~mAb12)의 투여도 이소형 대조군 항체의 투여에 비해 간 내 또는 종양 내 T 세포의 백분율에 거의 영향을 미치지 않거나 전혀 영향을 미치지 않았음을 나타낸다. 대조적으로, 3H3 항체를 투여한 결과 이소형 대조군 항체, 특히 CD3+ T 세포 및 CD8+ T 세포에 비해 비장과 간 둘 다에서 T 세포가 증가하였다.
또한, 항CD137 항체 또는 이소형 대조군 항체를 투여한 후, 치료한 마우스의 간과 비장 유래의 CD45+CD8+ T 세포 및 CD45+CD4+ T 세포를, T 세포 활성화 또는 기능 상실의 지표로서 TIGIT, PD-1 또는 LAG-3 공동 억제 수용체의 발현에 대해 평가하였다. CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포에서의 TIGIT, PD-1 및 LAG-3 발현의 수준은 이전 실시예에서 기술된 바와 같이 유세포 계측에 의해 측정하였다. 도 18a~18b 및 19a~19b는 3H3 항체의 투여가 CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포 둘 다에서 이들 공동 억제 수용체의 발현을 유의미하게 증가시킨 반면, 부모 mAb1 또는 친화도 성숙된 mAb7-mAb12 항체의 투여는 이소형 대조군 항체의 투여 후 나타난 것과 유사한 정도로 TIGIT, PD-1, 또는 LAG-3을 발현시켰음을 보여준다. 이들 결과는 친화도 성숙된 항체가 전신 CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 활성화를 유도하지 않았음을 나타낸다.
종합하면, 이들 결과는 부모 mAb1과 친화도 성숙된 mAb7~mAb12 항체가 3H3 비교기 항체에 비해 더 낮은 생체 내 독성의 가능성을 나타낸다는 것을 보여준다. mAb1과 친화도 성숙된 mAb7~mAb12 항체로 치료한 후, 특히 간에서의 전신 T 세포 활성화 및 증식의 부재는 환자에서 간독성(아미노기 전이효소 증가)의 가능성으로 더 낮은 것으로 해석될 수 있다.
실시예 18: 종양을 가진 마우스에서 항CD137 항체의 다중 투약의 독성
mAb1에 의해 유도된 독성의 결여를 확인하기 위해, 반복 투약 독성 연구를 수행하였다. 구체적으로, 마우스에게 항CD137 항체 mAb1, mAb8, 또는 3H3을 4주 동안 매주 투여하였다. mAb1 및 mAb8은 10, 20, 40 또는 80 mg/kg으로 투여한 반면, 3H3은 10 또는 80 mg/kg으로 투여하였다. 35일차에, 혈장에서의 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 수준을 형광 활성 분석(Sigma, cat# MAK052)을 사용해 결정하고, 간에서의 CD8+ T 세포를 유세포 분석(전술한 바와 같음)을 사용해 결정하였으며, 혈장에서의 TNFα 농도는 전기화학발광 분석(Meso Scale Discovery, 주문형 키트)을 제조사의 지침에 따라 사용해 결정하였다.
도 20a는 4회 투약량의 mAb1 및 mAb8가 모두 투여된 마우스의 간에서는 CD8+ T 세포의 수준이 낮은 반면, 3H3은 저 투약량(10 mg/kg)과 고 투약량(80 mg/kg) 모두에서 높은 수준의 CD8+ T 세포를 유도하였음을 보여준다. 도 20b는 4회 투약량의 mAb1 및 mAb8이 모두 투여된 마우스의 혈장에서는 ALT 활성이 낮은 반면, 3H3은 80 mg/kg의 투약량에서 높은 수준의 ALT를 유도하였음을 보여준다. 도 20c는 mAb1 및 mAb8이 저 투약량(10 mg/kg) 및 고 투약량(80 mg/kg) 둘 다로 투여된 마우스의 혈장에서는 TNFα의 수준이 낮은 반면, 3H3은 저 투약량(10 mg/kg) 및 고 투약량(80 mg/kg) 둘 다에서 높은 수준의 TNFα를 유도하였음을 보여준다.
또한, 80 mg/kg의 항CD137 작용성 항체를 투여해 치료한 마우스의 간을 절제하여 H&E로 염색하였다. 각 동물로부터의 간엽(liver lobe)의 절반을 OCT에 포매하고 액체 질소에 신선 동결(fresh frozen)하였다. 절제와 H&E 염색은 조직병리학 실험실(Mass Histology Service, Inc)에 의해 표준 절차에 따라 수행되었다. 도 21은 결과를 제공하는데, 3H3를 투여한 마우스에서는 염증성 중심소엽 병소가 나타나지만(화살표 참조), mAb1 또는 친화도 성숙된 mAb1를 투여한 경우에는 나타나지 않음을 보여준다.
실시예 19: 항CD137 항체를 사용한 재프로그래밍
종양 미세환경에서 면역 세포에 대한 항CD137 항체의 역할을 결정하기 위해, CT26 종양 모델을 이용하였다. 구체적으로, CT26 종양을 실시예 7에 기술된 바와 같이 생성하였다. mAb8을 25 ug의 투약량으로 0, 3, 6 및 9일차에 마우스에게 투여하였다. 11일차에 실시예 16에 기술된 바와 같이 종양을 분석하였다.
종양 미세환경 내로의 면역 세포의 전반적인 침윤은 CD45+ 활세포의 수를 측정해 결정하였다. 도 22a에 도시된 바와 같이, mAb8은 종양 미세환경 내로의 면역 세포의 침윤을 유의하게 증가시켰다.
종양 미세환경에서 Treg 세포의 수준은 CD25+ FOXP-3+ CD4+ 종양 침윤 림프구의 양을 측정함으로써 결정하였다. 도 22b에 도시된 바와 같이, mAb8은 종양 미세환경에서 Treg의 수준을 유의하게 감소시켰다.
mAb8이 T 세포 기능 소실에 미치는 영향은 CD8+ 또는 CD4+ 종양 침윤 림프구(TIL) 상에서 PD-1+TIGIT+의 발현 수준을 측정함으로써 결정하였다. 도 22c는 CD8+ TIL에 대한 결과를 도시하며, 여기서 PD-1+TIGIT+ 세포는 mAb8을 투여했을 때 종양 미세환경에서 감소되었다. 유사한 결과가 CD4+ TIL에 대해 관찰되었다(데이터 미도시). 이들 결과는 mAb8이 T 세포 기능 소실을 보호하고/보호하거나 역전시킴을 나타낸다.
또한, mAb8이 종양 관련 대식 세포에 미치는 영향을 분석하였다. 구체적으로, F4/80+CD11b+CD45+ 세포를 측정하였으며, mAb8로 치료했을 때 종양 관련 대식 세포의 감소가 관찰되었다.
별도의 연구에서, 항CD137 항체(mAb1 및 3H3)가 말초 면역 세포에 미치는 영향을 평가하였다. 구체적으로, 150 ug의 mAb1 또는 3H3을 0 및 3일차에 투여하여 치료한, CT26 종양을 가진 마우스의 비장을 7일차에 분석하였다. 도 23에 도시된 바와 같이, 항CD137 항체 3H3은 CD8+ 및 CD4+ T 세포에서 TIGIT 및 PD-1의 발현을 유도하였을 뿐 아니라, CD8+CD25+ 및 CD4+Foxp3+ 세포도 증가시켰다. 또한, 3H3은 CD8+ 및 CD4+ 효과기 기억 세포 둘 다를 유도하였다. 대조적으로, 항CD137 항체 mAb1은 CD8+TIGIT+PD-1+, CD8+CD25+ 및 CD4+Foxp3+ T 세포를 유의하게 유도하지 않았다. 또한, mAb1은 CD8+ 또는 CD4+ 효과기 기억 세포를 유도하지 않았다.
전반적으로, 이들 결과는 항CD137 항체 mAb1과 mAb8이 종양 미세환경 내에서 극적인 면역 재프로그래밍을 유도하며, 말초 면역 세포에 영향을 미치지 않거나 영향을 덜 미친다는 것을 나타낸다.
실시예 20: 항CD137 항체에 의한 쥣과 T 세포 활성화의 강화
쥣과 오브알부민 자극 분석에서 IL-2 생성 자극을 평가함으로써 항CD137 항체의 작용성 활성을 추가로 분석하였다. 96-웰 플레이트 내에, JAWS-II 수지상 세포-유사 세포를 웰당 104개의 세포로 도말하고 쥣과 IFNγ(10ng/Ml)의 존재 하에 밤새 인큐베이션하였다. 세포를 2 μg/mL의 OVA/A2 펩티드와 함께 인큐베이션하고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션한 다음, OT-I 마우스 비장으로부터 단리한, OVA를 발현하는 105개의 CD8+ T 세포와 함께 인큐베이션하였다. 항체는 동시에 첨가하였다. 아테졸리주맙(항PD-L1 항체) 및 마우스 항PD-1 항체(RMP1-14)를 IgG4 이소형 대조군과 함께 비교기로서 사용하였다. IL-2 농도는 Meso Scale Discovery(MSD)에 의해 결정하였다.
도 24에 도시된 바와 같이, mAb8 및 mAb10은 IL-2 생성을 유의하게 강화하였다.
IL-2 생성을 측정하는 것에 추가하여, CD25+CD8+ T 세포 및 TIGIT+CD8+ T 세포의 백분율을 동일한 쥣과 오브알부민 자극 분석을 사용해 분석하였다. 항체 3H3을 비교기로서 포함시켰다. 도 25a 및 25b는 mAb8 및 mAb10이 활성화 마커인 CD25의 발현을 강화하고, 기능 소실 마커인 TIGIT의 유도를 감소시켰음을 보여준다. 대조적으로, 3H3은 TIGIT의 발현을 강화시켰다.
실시예 21: 항CD137 항체가 사이토카인 유도에 미치는 영향
항CD137 항체가 T 세포에 의한 사이토카인 유도에 미치는 영향을 결정하기 위해, 플레이트-결합 항체를 사용하였다. 3개의 항체는 비교기로서 사용하였다: CD137의 세포 외 도메인을 표적으로 하지만 리간드 결합을 차단하지 않는 완전한 인간 IgG4-S228P 작용성 항체로서, 우렐루맙(Bristol-Myers Squibb; CAS 번호: 934823-49-1)에 상응하는 mAb4; CD137의 세포 외 도메인을 표적으로 하고 리간드 결합을 차단하는 완전한 인간 IgG2-S228P 작용성 항체로서, 우토밀루맙(Pfizer; CAS 번호: 1417318-27-4)에 상응하는 mAb5; 및 mAb1과 동일한 라이브러리로부터 선택된 완전한 인간 IgG4-S228P 작용성 항체로서 CD137의 세포 외 도메인을 표적으로 하는 mAb6. mAb6 항체는 리간드 결합을 차단하지 않는다.
인간 CD3+ T 세포를 음성 선택을 통해 단리하고, 항CD137 항체 및 1 μg/ml의 항CD3과 결합된 플레이트에 첨가하였다. 항CD137 항체는 1 nM, 10 nM, 50 nM 또는 100 nM로 첨가하였다. 항체를 4℃에서 밤새 코팅하였다.
T 세포 첨가 후 72시간차에, IL-2, IFNγ, TNFα 및 IL-13의 수준을 제조사의 지침에 따라 Luminex 키트(Luminex Corporation, 텍사스주 오스틴 소재)로 평가하였다. 가용성 항CD28(2 μg/mL)을 T 세포 활성화 대조군으로서 사용하고, 활성화 베이스라인은 플레이트 결합된 항CD3을 사용해 설정하였다. 도 26은 활성화 베이스라인과 관련하여 각 사이토카인 수준에서의 배수 변화를 보여준다. mAb4(우렐루맙)는 각 사이토카인의 가장 높은 유도 최고 수준을 나타냈고, mAb1은 더 낮은 유도 수준을 나타냈지만 mAb5(우토밀루맙) 및 mAb6에 비해 상대적으로 더 높았다. 이들 결과는, 동일한 농도에서 mAb1이 mAb4(우렐루맙)보다 CD137을 덜 효능화한다는 것을 나타낸다.
실시예 22: 항CD137 항체에 의한 인터페론-감마(IFNγ)의 유도
항CD137 항체의 작용성 활성을 추가로 평가하기 위해, 혼합 림프구 반응(MLR)에서 IFNγ의 생성을 분석하였다. mAb2, mAb4(우렐루맙), mAb5(우토밀루맙), 및 PD-1(Merck)을 차단하는 인간화 항체로서 IFNγ 생성을 유도하는 것으로 알려진 키트루다(Keytruda)를 비교기로서 사용하였다.
3명의 독립적인 인간 공여자(D985, D7603 및 D5004) 유래의 류코팩(leukopaks)(HemaCare, 캘리포니아주 밴나이즈 소재)으로부터 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 단리하였다. 전체 T 세포를, 면역자기 세포 분리(EasySepTM; Stemcell Technologies, 밴쿠버 소재)를 사용해 음성 선택에 의해 PBMC에서 농축시켰다. 단핵구를 면역자기 세포 분리(EasySepTM; Stemcell Technologies, 밴쿠버 소재)를 사용해 PBMC로부터 단리하였다. T 세포는 완전한 RPMI에서 1x106 세포/ml의 농도로 재현탁하고, 단핵구를 5x105 세포/ml까지 각각 조정하였다. 96-웰 플레이트 내에, T 세포를 함유하는 100 μl의 배지를 1x105 세포/웰의 밀도로 도말한 다음, 100 μl의 단핵구 세포 현탁액(E:T 비율 2:1)을 첨가하였다. 다음으로, CD137 항체의 다양한 희석액을 함유하는 50 μl의 배지를 첨가하였다. 플레이트를 37℃의 CO2 인큐베이터에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간이 끝나면, 배양 상청액을 수집하여 IFNγ 수준을 MSD 분석(Mesoscale Diagnostics, 메릴랜드 주 록빌)에 의해 분석하였다. 도 27a~27c는 표시된 바와 같이, 시험한 항체의 최종 농도에서 IFNγ의 농도를 pg/mL로 보여준다. 이들 결과는, 동일한 농도에서 mAb1이 mAb4(우렐루맙)보다 CD137을 덜 효능화하지만 mAb5(우토밀루맙)와 비슷한 정도까지는 효능화한다는 것을 나타낸다.
별도의 연구에서, IFNγ 유도는 CD32(FCyRIIb) (CHO-CD32 세포)를 발현하도록 조작된 CHO 세포를 사용해 측정하였다. 구체적으로, CHO-CD32 세포를 가용성 항CD3 및 항CD137 항체인 mAb1, mAb8, mAb4 및 mAb5의 존재 하에 인간 T 세포와 공동 배양하였다.
동결된 PBMC를 해동하고, 습윤화된 37℃의 5% CO2 인큐베이터 내의 T 세포 배지(TCM) 중에 밤새 방치하였다. 다음날, 비접촉식 CD3 T 세포 단리 키트(Stemcell # 17951)를 사용해 CD3+ T 세포를 단리한 후, 인간 CD32를 발현하도록 형질 도입된 CHO 세포(CHO-CD32)(Gibco # A29127), 250 ng/ml 항CD3(클론 OKT3), 및 항CD137 항체 또는 대조군 항체와 함께 혼합하였다. 100,000개의 T 세포를 50,000개의 CHO-CD32 세포와 함께 혼합하였다. 37℃에서 3일 동안 인큐베이션한 후, 분비된 인터페론-감마(IFNγ)를 분석하기 위해 MesoScale Discovery(MSD)를 통해 상청액을 수집하였다.
도 28은 결과를 제공하는데, mAb4가 낮은 투약량으로 가장 높은 수준으로 IFNγ를 유도하였음을 보여준다. 대조적으로, mAb5는 IFNγ의 생성을 거의 유도하지 않았다. 특히, mAb1 및 mAb8은 용량 의존적 반응을 제공하였고 mAb4 및 mAb5에 의해 유도된 수준 사이에서 IFNγ 를 유도하였다. 전반적으로, 이들 결과는 mAb4가 초작용성 활성을 가지고, mAb5는 약한 활성을 가지며, mAb1과 mAb8은 mAb4 및 mAb5와 비교해 중간 활성을 가진다는 것을 나타낸다.
실시예 23: 항CD137 항체가 Treg 세포에 미치는 영향
항CD137 항체의 작용 메커니즘을 추가로 특징 분석하기 위해, 항체가 Treg 세포에 미치는 영향을 결정하였다. EasySep™ 인간 CD4+CD127lowCD25+ 조절 T 세포 단리 키트(Stemcell Technologies, Cat #18063)를 사용하여 인간 Treg를 단리하고 10% FBS가 포함된 완전한 T 세포 배지에서 Immunocult 항CD3/28(Stemcell # 10971)로 13일 동안 증식시켰다. 구체적으로, 실시예 21에 기술된 CHO-CD32 세포는, 항CD3(클론 OKT3) 및 항CD137 항체인 mAb1, mAb8, mAb4, mAb5 및 이소형 대조군의 존재 하에 Cell-trace 보라색 염료(Thermo Fisher, Cat #C34557)로 표지된, 증식시킨 인간 Treg 세포와 공동 배양하였다. Treg 세포의 증식은 4일차에 결정하였다.
도 29는 결과를 제공하는데, mAb4가 낮은 농도에서도 Treg의 증식을 강력하게 유도하였음을 보여준다. 대조적으로, mAb5는 Treg 증식에 매우 약한 영향을 미쳤다. 특히, mAb1 및 mAb8은 Treg 증식에 있어서 중간 정도의 증가를 보여주었다. 전반적으로, 이들 결과는 mAb4가 초작용성 활성을 가지고, mAb5는 약한 활성을 가지며, mAb1과 mAb8은 중간 활성을 가진다는 것을 확인해준다.
실시예 24: 항CD137 항체가 세포 내 신호 전달에 미치는 영향
항CD137 작용성 항체들 간의 차이를 추가로 평가하기 위해, 세포 내 신호 전달을 시험관 내에서 평가하였다. 구체적으로,
NFkβ(Qiagen; Cat# CLS-013L-1) 또는 SRF(Qiagen; Cat# CLS-010L-1)를 사용해 렌티바이러스로 감염시킨(lentifected) CCL-119 T 세포(ATCC; Cat# ATCC CCL-119)를, 다양한 농도의 플레이트-결합 mAb1, mAb8, mAb4, mAb5 및 이소형 대조군과 함께 250 ng/mL의 플레이트-결합 항CD3(클론 OKT3)로 자극하였다. 첨가제가 없는 RPMI 배지에서 16시간 동안 자극한 후, 루시페라아제 완충액(Promega; Cat# E263B)에 세포를 용해시키고 BioTek Synergy H1 마이크로플레이트 판독기(Cat# 11-120-533)를 이용해 상대 광 단위(RLU)를 획득하였다. 이어서, 원시 RLU 데이터를 Microsoft Excel로 내보내고, 자극된 상태의 RLU를 자극되지 않은 대조군으로 나눔으로써 접힘 유도를 계산하였다.
도 30은 결과를 제공하며, mAb1 및 이의 친화도 성숙된 변이체 mAb8에 비해 mAb4 및 mAb5의 최소한의 NFkβ 및 SRF 활성을 보여준다. 전반적으로, 이들 결과는 mAb1이 mAb4 및 mAb5와 상이하게 세포 내 신호전달을 유도함을 나타낸다.
실시예 25: 항CD137 항체가 대식 세포 활성화 및 분화에 미치는 영향
항mCD137 작용성 항체 3H3에 의해 유도된 간 독성은 간에서 대식 세포 및 CD8+ T 세포의 증식과 관련이 있고, 이는 혈청에서 사이토카인 수준 및 ALT 활성을 증가시킨다는 것은 이미 밝혀졌다. 또한, 항체 3H3은 유렐루맙과 유사한 특성을 갖는 것으로 특징 분석된 바 있다. 본원에 기술된 바와 같이, mAb1은 간 독성을 유도하지 않는다. 따라서, 항CD137 작용성 항체를 이들이 대식 세포 활성화에 미치는 영향에 대해 시험관 내에서 분석하였다.
구체적으로, 10주령의 암컷 C57BL/6 마우스(Charles River Laboratories)로부터 쥣과 골수 유래 마우스 대식 세포를 확립하였다. 마우스의 근육 조직으로부터 대퇴골과 경골을 추출하고, PBS를 이용해 얼음 상의 15 mL 원뿔형 튜브 내에 골수를 쏟았다. 세포를 5분 동안 1500 rpm으로 원심분리하고 상청액은 버렸다. 세포 펠릿을 부수고 배양 배지(RPMI, 20% FBS, 50 μg/mL M-CSF(Shenandoah Biotechnology, Inc.; Cat# 200-08-100) 및 pen/strep)를 첨가하였다. 40 μm 메쉬 필터를 이용해 세포를 여과하고, 비조직 배양물로 처리한 페트리 접시 내에 도말하였다. 3일 후, 10 mL의 배지를 각각의 페트리 접시에 첨가하였다. 배양 7일차에, 배지를 제거하고 세포를 PBS(10 mL)로 2회 세척하였다. MACS 완충액(PBS, 2 μM EDTA, 및 0.5% FBS)을 각 접시에 첨가하고 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 페트리 접시로부터 세포를 수집하여 5분 동안 1500 rpm으로 원심분리하였다. 그런 다음, 50 nm 항CD137 항체 mAb1, 3H3, 또는 LOB12.3(마우스 특이적 CD137 작용제 항체)의 존재 하에 이들 골수 유래 대식 세포를 TLR9 작용제 CpG로 자극하였다. 쥣과 골수 유래 대식 세포에 의한 IL-6, TNFα 및 IL-27의 생성은 48시간 후에, 전기 화학발광 분석(Meso Scale Discovery, 주문형 키트)을 제조사의 지침에 따라 사용하여 배양 상청액에서 평가하였다. 도 31은 결과를 제공하는데, mAb1은 대식 세포에 의한 전염증성 사이토카인의 분비를 유도하지 않은 반면, 항체 3H3 및 LOB12.3은 유도하였음을 나타낸다.
인간 단핵구-유래 대식 세포는, 항CD14 마이크로비드(Miltenyi Biotech, Cat# 130-050-201)를 사용해 CD14+ 세포를 자기적으로 분리하고 50 ng/mL m-CSF의 존재 하에 7일 동안 성숙시켜 생성하였다. 그런 다음, 5 nm의 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5의 존재 하에 10 ng/mL LPS로 인간 단핵구-유래 대식 세포를 자극하였다. TNFα의 생성은 48시간 후에, 전기 화학발광 분석(Meso Scale Discovery, 주문형 키트)을 제조사의 지침에 따라 사용하여 평가하였다. 도 32는 결과를 제공하는데, mAb4 및 mAb5가 대식 세포 활성화를 mAb1보다 상당히 많이 유도하였음을 나타낸다.
또한, THP1 단핵구는 2 μM의 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA; Sigma; P1585)를 사용해 밤새 대식 세포로 분화시켰다. 그런 다음, 50 nm의 항CD137 항체 mAb1, mAb4 또는 mAb5의 존재 하에 대식 세포를 배양하고, 48시간이 지난 후에 유세포 계측(APC 항인간 CD64 항체 클론 10.1; BioLegend; Cat#305013)을 사용해 CD64의 발현을 측정하였다. 도 33은 결과를 제공하는데, mAb4 및 mAb5가 대식 세포 분화를 mAb1보다 상당히 많이 유도하였음을 나타낸다.
본 개시는 임의의 특정 이론이나 작용 메커니즘에 의해 구속되지 않지만, 전체적으로, 이들 결과는 대식 mAb1이 세포 활성화 가능성의 감소로 인해 간 독성을 감소시킨다는 것을 시사한다.
실시예 26: 항CD137 작용성 항체에 의한 인간 CD8+ T 세포의 생체 내 증식
CD137 작용성 항체가 인간 세포에 미치는 생체 내 영향을 시험하기 위해, 면역계가 손상된 NSG 마우스(NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; Jackson Laboratory; Cat# 005557)에게 인간 PBMC(7x106)를 정맥 내 주사하였다. 마우스를 8개의 그룹으로 무작위 배정하고, 0, 7 및 14일차에 CD137 항체(200 μg/마우스) 또는 비히클 대조군을 투여하였다. 10, 20 및 29일차에 각 마우스로부터의 말초 혈액을 채취하고, 유세포 계측을 사용해 CD45+(FITC 항인간 CD45 클론 HI30; BioLegend; Cat# 304038), CD8+(Alexa Fluor® 647 항인간 CD8a 클론 HIT8a; BioLegend; Cat#300918) 및 CD4+(APC-Cy7 항인간 CD4 클론 RPA-T4; Bd; Cat# 557871)의 생착을 결정하였다.
도 34a~34c는 인간 CD4+ T 세포를 희생하면서 mAb4를 투여한 마우스에서 hCD45+ 세포의 수가 전반적으로 증가하였고 인간 CD8+ T 세포가 전신 과잉 증식하였음을 보여준다. 특히, mAb1은 인간 T 세포의 과 활성화를 유도하지 않았다. 말초에서 인간 T 세포를 활성화시키는 mAb1이 가능성 감소는 독성의 잠재적 감소에 기여할 수 있다.
| V H | V L | V H CDR | V L CDR | ||||
| CDR1 | CDR2 | CDR3 | CDR1 | CDR2 | CDR3 | ||
| 4 | 6 | 48 | 56 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 4 | 28 | 48 | 56 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 4 | 30 | 48 | 56 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 4 | 32 | 48 | 56 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 4 | 34 | 48 | 56 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 4 | 36 | 48 | 56 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 4 | 38 | 48 | 56 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 4 | 40 | 48 | 56 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 4 | 42 | 48 | 56 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 4 | 44 | 48 | 56 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 4 | 46 | 48 | 56 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 4 | 105 | 48 | 56 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 8 | 6 | 49 | 57 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 10 | 6 | 49 | 58 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 12 | 6 | 49 | 59 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 14 | 6 | 49 | 60 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 16 | 6 | 50 | 61 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 18 | 6 | 50 | 58 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 20 | 6 | 51 | 62 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 22 | 6 | 52 | 63 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 24 | 6 | 50 | 64 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 26 | 6 | 50 | 65 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 101 | 6 | 51 | 108 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 103 | 6 | 107 | 56 | 68 | 69 | 78 | 89 |
| 8 | 28 | 49 | 57 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 8 | 30 | 49 | 57 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 8 | 32 | 49 | 57 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 8 | 34 | 49 | 57 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 8 | 36 | 49 | 57 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 8 | 38 | 49 | 57 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 8 | 40 | 49 | 57 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 8 | 42 | 49 | 57 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 8 | 44 | 49 | 57 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 8 | 46 | 49 | 57 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 8 | 105 | 49 | 57 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 10 | 28 | 49 | 58 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 10 | 30 | 49 | 58 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 10 | 32 | 49 | 58 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 10 | 34 | 49 | 58 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 10 | 36 | 49 | 58 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 10 | 38 | 49 | 58 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 10 | 40 | 49 | 58 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 10 | 42 | 49 | 58 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 10 | 44 | 49 | 58 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 10 | 46 | 49 | 58 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 10 | 105 | 49 | 58 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 12 | 28 | 49 | 59 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 12 | 30 | 49 | 59 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 12 | 32 | 49 | 59 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 12 | 34 | 49 | 59 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 12 | 36 | 49 | 59 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 12 | 38 | 49 | 59 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 12 | 40 | 49 | 59 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 12 | 42 | 49 | 59 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 12 | 44 | 49 | 59 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 12 | 46 | 49 | 59 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 12 | 105 | 49 | 59 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 14 | 28 | 49 | 60 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 14 | 30 | 49 | 60 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 14 | 32 | 49 | 60 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 14 | 34 | 49 | 60 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 14 | 36 | 49 | 60 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 14 | 38 | 49 | 60 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 14 | 40 | 49 | 60 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 14 | 42 | 49 | 60 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 14 | 44 | 49 | 60 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 14 | 46 | 49 | 60 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 14 | 105 | 49 | 60 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 16 | 28 | 50 | 61 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 16 | 30 | 50 | 61 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 16 | 32 | 50 | 61 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 16 | 34 | 50 | 61 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 16 | 36 | 50 | 61 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 16 | 38 | 50 | 61 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 16 | 40 | 50 | 61 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 16 | 42 | 50 | 61 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 16 | 44 | 50 | 61 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 16 | 46 | 50 | 61 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 16 | 105 | 50 | 61 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 18 | 28 | 50 | 58 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 18 | 30 | 50 | 58 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 18 | 32 | 50 | 58 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 18 | 34 | 50 | 58 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 18 | 36 | 50 | 58 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 18 | 38 | 50 | 58 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 18 | 40 | 50 | 58 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 18 | 42 | 50 | 58 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 18 | 44 | 50 | 58 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 18 | 46 | 50 | 58 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 18 | 105 | 50 | 58 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 20 | 28 | 51 | 62 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 20 | 30 | 51 | 62 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 20 | 32 | 51 | 62 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 20 | 34 | 51 | 62 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 20 | 36 | 51 | 62 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 20 | 38 | 51 | 62 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 20 | 40 | 51 | 62 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 20 | 42 | 51 | 62 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 20 | 44 | 51 | 62 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 20 | 46 | 51 | 62 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 20 | 105 | 51 | 62 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 22 | 28 | 52 | 63 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 22 | 30 | 52 | 63 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 22 | 32 | 52 | 63 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 22 | 34 | 52 | 63 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 22 | 36 | 52 | 63 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 22 | 38 | 52 | 63 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 22 | 40 | 52 | 63 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 22 | 42 | 52 | 63 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 22 | 44 | 52 | 63 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 22 | 46 | 52 | 63 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 22 | 105 | 52 | 63 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 24 | 28 | 50 | 64 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 24 | 30 | 50 | 64 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 24 | 32 | 50 | 64 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 24 | 34 | 50 | 64 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 24 | 36 | 50 | 64 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 24 | 38 | 50 | 64 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 24 | 40 | 50 | 64 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 24 | 42 | 50 | 64 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 24 | 44 | 50 | 64 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 24 | 46 | 50 | 64 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 24 | 105 | 50 | 64 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 26 | 28 | 50 | 65 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 26 | 30 | 50 | 65 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 26 | 32 | 50 | 65 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 26 | 34 | 50 | 65 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 26 | 36 | 50 | 65 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 26 | 38 | 50 | 65 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 26 | 40 | 50 | 65 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 26 | 42 | 50 | 65 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 26 | 44 | 50 | 65 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 26 | 46 | 50 | 65 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 26 | 105 | 50 | 65 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 101 | 28 | 51 | 108 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 101 | 30 | 51 | 108 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 101 | 32 | 51 | 108 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 101 | 34 | 51 | 108 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 101 | 36 | 51 | 108 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 101 | 38 | 51 | 108 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 101 | 40 | 51 | 108 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 101 | 42 | 51 | 108 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 101 | 44 | 51 | 108 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 101 | 46 | 51 | 108 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 101 | 105 | 51 | 108 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 103 | 28 | 107 | 56 | 68 | 70 | 79 | 90 |
| 103 | 30 | 107 | 56 | 68 | 71 | 80 | 91 |
| 103 | 32 | 107 | 56 | 68 | 72 | 81 | 92 |
| 103 | 34 | 107 | 56 | 68 | 73 | 82 | 91 |
| 103 | 36 | 107 | 56 | 68 | 74 | 83 | 93 |
| 103 | 38 | 107 | 56 | 68 | 75 | 84 | 91 |
| 103 | 40 | 107 | 56 | 68 | 74 | 85 | 94 |
| 103 | 42 | 107 | 56 | 68 | 76 | 86 | 95 |
| 103 | 44 | 107 | 56 | 68 | 77 | 87 | 93 |
| 103 | 46 | 107 | 56 | 68 | 69 | 88 | 90 |
| 103 | 105 | 107 | 56 | 68 | 109 | 110 | 92 |
| 서열번호 | 설명 | 서열 |
| 1 | 인간 IgG1 | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 2 | 인간 IgG4 돌연변이체(S228P/C-말단 K 절단) | ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG |
| 3 | 인간 CD137(수탁 # NP_001552) | MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMR PVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL |
| 4 | VH1 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 5 | VH1핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACTTTTAGTTCGTATGCAATGTCGTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGAGTGCTATTTCCGGCTCTGGCGGATCTACCTATTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 6 | VL1 아미노산 서열 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHLFPITFGGGTKVEIK |
| 7 | VL1 핵산 서열 | GATATTCAGATGACACAGAGCCCGTCATCAGTAAGTGCAAGCGTCGGAGATCGGGTTACAATAACATGTCGTGCCTCGCAAGGAATTTCCTCCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCTGGCAAAGCCCCCAAATTACTAATTTATGCCGCAAGCTCTCTGCAATCGGGTGTTCCTTCGCGGTTTTCTGGCTCTGGAAGTGGCACCGACTTCACGCTTACTATCTCTAGCCTTCAGCCGGAGGATTTTGCTACCTACTACTGCCAACAAGGCCATTTATTCCCTATTACCTTTGGGGGCGGTACAAAAGTCGAGATCAAGCGTACG |
| 8 | VH2 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNYYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIDGSGDNTTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 9 | VH2핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAACTATTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCGATGGTTCTGGTGATAACACTACTTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 10 | VH3 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNYYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGSGDGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 11 | VH3핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAACTATTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGGCAGCAATCTCTGGTTCTGGTGATGGTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 12 | VH4아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNYYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGDSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 13 | VH4핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAACTATTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCTCTGGTTCTGGTGATTCTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 14 | VH5 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNYYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGGGDATYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 15 | VH5핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAACTATTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGGCAGCAATCTCTGGTGGTGGTGATGCAACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 16 | VH6 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGDVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 17 | VH6핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTTATGGTTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTTCTATCTCTGGTTCTGGTGATGTTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 18 | VH7 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGSGDGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 19 | VH7 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTTATGGTTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGGCAGCAATCTCTGGTTCTGGTGATGGTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 20 | VH8 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGFGESTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 21 | VH8 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAAACTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCTCTGGTTTTGGTGAATCTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 22 | VH9 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNYYAMNWVRQAPGKGLEWVAAISGSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 23 | VH9 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAACTATTACGCAATGAACTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGGCAGCAATCTCTGGTTCTGGTGGTAGAACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 24 | VH10 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGNTSYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 25 | VH10 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTTATGGTTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCTCTGGTTCTGGTGGTAACACTTCTTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 26 | VH11 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGSGDSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 27 | VH11 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTTATGGTTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGGCAGCAATCTCTGGTTCTGGTGATTCTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 28 | VL2 아미노산 서열 | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQNIHNWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASGLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQGDRFPLTFGGGTKVEIK |
| 29 | VL2 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAATATTCATAACTGGTTGGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTGGTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGATTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAACCTGATGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGGGTGACAGATTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG |
| 30 | VL3 아미노산 서열 | DIQMTQSPSILSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKPPKLLIFKASALESGVPSRFSGSGYGTDFTLTISNLQPEDFATYFCQQGNSFPLTFGGGTKVDIK |
| 31 | VL3 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCATCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACTATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATCAGTAGGTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAACCCCCTAAACTCCTGATCTTTAAGGCGTCTGCTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCGAGGTTCAGCGGCAGTGGATATGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAACCTGCAGCCTGAAGACTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGGGTAATAGTTTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACG |
| 32 | VL4 아미노산 서열 | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQNIDIWLAWYQWKPGKAPKLLIYKASGLETGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNQFPLTFGQGTRLEIK |
| 33 | VL4 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAATATTGATATCTGGTTGGCCTGGTATCAGTGGAAACCAGGGAAGGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTGGTTTAGAAACTGGGGTCCCTTCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACTATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGATTTTGCGACTTACTATTGTCAACAGGGTAACCAGTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGTACG |
| 34 | VL5 아미노산 서열 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRWLAWYQQKPGKAPKLLIFKASALEVGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFGGGTKVDIK |
| 35 | VL5 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATCGGTAGGTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTTAAGGCGTCTGCTTTAGAAGTTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTAACAGTTTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACG |
| 36 | VL6 아미노산 서열 | DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASALQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSFPLTFGGGTKVEIK |
| 37 | VL6 핵산 서열 | GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCGCTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGCGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACTATCAGCAGCCTGCAGCCCGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTGACAGTTTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG |
| 38 | VL7 아미노산 서열 | DIQMTQSPSTLSASVGDTVTFSCRASQSINTWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASALENGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPLTFGGGTKVEIK |
| 39 | VL7 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACACAGTCACCTTCAGTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAACACCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAAAAGCCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTTATCTATAAGGCGTCTGCTTTAGAAAATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGGAACAGTTTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG |
| 40 | VL8 아미노산 서열 | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASALESGVPSRFSGGGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHSFPLTFGGGTKLEIK |
| 41 | VL8 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTCATCTATAAGGCGTCTGCTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCGGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTCACAGTTTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACG |
| 42 | VL9 아미노산 서열 | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISDWLAWYQQKPGKAPKLLIFKASALEGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNSFPITFGQGTRLEIK |
| 43 | VL9 핵산 서열 | GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTGACTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGTAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTTTAAGGCTTCTGCTTTAGAAGGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTAACAGTTTCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGTACG |
| 44 | VL10 아미노산 서열 | DIQMTQSPATLSASVGDRVTITCRASQSVDRWLAWYQQKPGKAPNLLIYEASALQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSFPLTFGGGTKVEIK |
| 45 | VL10 핵산 서열 | GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGGGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTGATAGGTGGTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTAATCTATGAGGCGTCTGCCTTACAAGGTGGGGTCCCGTCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTGATAGTTTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG |
| 46 | VL11 아미노산 서열 | DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASGLQNGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDRFPLTFGGGTKVEIK |
| 47 | VL11 핵산 서열 | GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCTTCCGTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCGAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGGTTTGCAAAATGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCAACAGGGTGACAGGTTCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACG |
| 48 | VH CDR1 | FTFSSYAMS |
| 49 | VH CDR1.1 | FTFNYYAMS |
| 50 | VH CDR1.2 | FTFYGYAMS |
| 51 | VH CDR1.3 | FTFRNYAMS |
| 52 | VH CDR1.4 | FTFNYYAMN |
| 53 | VH CDR1.5 | FTFNYYAMXAA1 (Xaa1 = S 또는 N임) |
| 54 | VH CDR1.6 |
FTFXaa1Xaa2YAMS (Xaa1 = S, N, Y, R이고; Xaa2 = S, N, Y, G임) |
| 55 | VH CDR1.7 | FTFXaa1Xaa2YAMXaa3 (Xaa1 = S, N, Y, R이고; Xaa2 = S, N, Y, G이고; Xaa3 = S 또는 N임) |
| 56 | VH CDR2 | SAISGSGGSTYY |
| 57 | VH CDR2.1 | SAIDGSGDNTTY |
| 58 | VH CDR2.2 | AAISGSGDGTYY |
| 59 | VH CDR2.3 | SAISGSGDSTYY |
| 60 | VH CDR2.4 | AAISGGGDATYY |
| 61 | VH CDR2.5 | SSISGSGDVTYY |
| 62 | VH CDR2.6 | SAISGFGESTYY |
| 63 | VH CDR2.7 | AAISGSGGRTYY |
| 64 | VH CDR2.8 | SAISGSGGNTSY |
| 65 | VH CDR2.9 | AAISGSGDSTYY |
| 66 | VH CDR2.10 | AAISGXaa1GXaa2Xaa3TYY (Xaa1 = S 또는 G이고; Xaa2 = D 또는 G이고; Xaa3 = S, R, G, A임) |
| 67 | VH CDR2.11 | Xaa1Xaa2IXaa3GXaa4GXaa5Xaa6TXaa7Y |
| 68 | VH CDR3 | AKDSPFLLDDYYYYYYMD |
| 69 | VL CDR1 | RASQGISSWLAW |
| 70 | VL CDR1.1 | RASQNIHNWLAW |
| 71 | VL CDR1.2 | RASQSISRWLAW |
| 72 | VL CDR1.3 | RASQNIDIWLAW |
| 73 | VL CDR1.4 | RASQSIGRWLAW |
| 74 | VL CDR1.5 | RASQSISSWLAW |
| 75 | VL CDR1.6 | RASQSINTWLAW |
| 76 | VL CDR1.7 | RASQSISDWLAW |
| 77 | VL CDR1.8 | RASQSVDRWLAW |
| 78 | VL CDR2 | YAASSLQS |
| 79 | VL CDR2.1 |
YKASGLES |
| 80 | VL CDR2.2 | FKASALES |
| 81 | VL CDR2.3 | YKASGLET |
| 82 | VL CDR2.4 | FKASALEV |
| 83 | VL CDR2.5 | YAASALQS |
| 84 | VL CDR2.6 | YKASALEN |
| 85 | VL CDR2.7 | YKASALES |
| 86 | VL CDR2.8 | FKASALEG |
| 87 | VL CDR2.9 | YEASALQG |
| 88 | VL CDR2.10 | YAASGLQN |
| 89 | VL CDR3 |
QQGHLFPITF |
| 90 | VL CDR3.1 | QQGDRFPLTF |
| 91 | VL CDR3.2 | QQGNSFPLTF |
| 92 | VL CDR3.3 | QQGNQFPLTF |
| 93 | VL CDR3.4 | QQGDSFPLTF |
| 94 | VL CDR3.5 | QQGHSFPLTF |
| 95 | VL CDR3.6 | QQGNSFPITF |
| 96 | VL CDR3.7 | QQGXaa1Xaa2FPXaa3TF |
| 97 | 인간 CD137L Uniprot ID - P41273 | MEYASDASLDPEAPWPPAPRARACRVLPWALVAGLLLLLLLAAACAVFLACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE |
| 98 | FLAG | DYKDDDDK |
| 99 | 6-His | HHHHHH |
| 100 | HA | YPYDVPDYA |
| 101 | VH12 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 102 | VH12 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAAACTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCTCTGGTTCTGGTGATACTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 103 | VH13 아미노산 서열 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSS |
| 104 | VH13 핵산 서열 | GAAGTGCAATTATTGGAATCCGGCGGCGGTTTAGTTCAGCCAGGTGGCTCTTTGAGGCTGAGTTGCGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGGTTCTTACGCAATGTCTTGGGTTCGCCAGGCGCCCGGTAAGGGTCTGGAGTGGGTGTCTGCAATCTCTGGTTCTGGTGGTTCTACTTACTACGCCGACTCTGTGAAAGGTCGTTTTACCATAAGCCGCGACAATTCTAAGAATACTTTATATCTTCAAATGAATTCGCTGCGGGCAGAAGACACGGCCGTCTATTACTGCGCAAAGGACTCACCTTTTCTATTAGACGACTACTACTACTACTACTACATGGACGTATGGGGCAAGGGTACAACTGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC |
| 105 | VL12 아미노산 서열 | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGDWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASGLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYCQQGNQFPLTFGQGTRLE |
| 106 | VL12 핵산 서열 | GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTAACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGATATTGGTGACTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTGGTTTACAAAGTGGGGTCCCATCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACTATCAGCAACCTGCAGCCAGAGGATTTTGCGACTTACTATTGTCAACAGGGTAACCAGTTCCCGCTCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAG |
| 107 | VH CDR1.8 | FTFGWYAMS |
| 108 | VH CDR2.12 | SAISGSGDTTYY |
| 109 | VL CDR1.9 | RASQDIGDWLAW |
| 110 | VL CDR2.11 | YKASGLQS |
| 111 | VH CDR3.1 | AKASPFLLDDYYYYYYMD |
| 112 | VH CDR3.2 | AKDAPFLLDDYYYYYYMD |
| 113 | VH CDR3.3 | AKDSAFLLDDYYYYYYMD |
| 114 | VH CDR3.4 | AKDSPALLDDYYYYYYMD |
| 115 | VH CDR3.5 | AKDSPFALDDYYYYYYMD |
| 116 | VH CDR3.6 | AKDSPFLADDYYYYYYMD |
| 117 | VH CDR3.7 | AKDSPFLLADYYYYYYMD |
| 118 | VH CDR3.8 | AKDSPFLLDAYYYYYYMD |
| 119 | VH CDR3.9 | AKDSPFLLDDAYYYYYMD |
| 120 | VH CDR3.10 | AKDSPFLLDDYAYYYYMD |
| 121 | VH CDR3.11 | AKDSPFLLDDYYAYYYMD |
| 122 | VH CDR3.12 | AKDSPFLLDDYYYAYYMD |
| 123 | VH CDR3.13 | AKDSPFLLDDYYYYAYMD |
| 124 | VH CDR3.14 | AKDSPFLLDDYYYYYAMD |
| 125 | VH CDR3.15 | AKDSPFLLDDYYYYYYAD |
| 126 | VH CDR3.16 | DXXXXLXXXXYXYYX |
| 127 | VH CDR3.17 | DXPFXLDXXYYYYYX |
| 128 | VH CDR3.18 | DX1X2X3X4LX5X6X7X8YX9YYX10 |
| 129 | mAb1 중쇄 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG |
| 130 | mAb8 중쇄 V1 | GTEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG |
| 131 | mAb8 중쇄 V2 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGDTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG |
| 132 | mAb10 중쇄 | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFYGYAMSWVRQAPGKGLEWVAAISGSGDSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDSPFLLDDYYYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG |
| 133 | mAb1, mAb8 및 mAb10 경쇄 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHLFPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
SEQUENCE LISTING
<110> COMPASS THERAPEUTICS LLC
<120> AGONIST ANTIBODIES THAT BIND HUMAN CD137 AND USES THEREOF
<130> CTN-006PC
<140> PCT/US2018/041612
<141> 2018-07-11
<150> US 62/531,259
<151> 2017-07-11
<150> US 62/577,257
<151> 2017-10-26
<150> US 62/531,190
<151> 2017-07-11
<150> US 62/568,231
<151> 2017-10-04
<150> US 62/577,259
<151> 2017-10-26
<160> 133
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(330)
<223> Human IgG1
<400> 1
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 2
<211> 326
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(326)
<223> Human IgG4 mutant (S228P/C-terminal K truncation)
<400> 2
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
325
<210> 3
<211> 255
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(255)
<223> Human CD137
<400> 3
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 4
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH1 amino acid sequence
<400> 4
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 5
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH1 nucleic acid sequence
<400> 5
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacttttagt tcgtatgcaa tgtcgtgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgagtgct atttccggct ctggcggatc tacctattac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL1 amino acid sequence
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Leu Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL1 nucleic acid sequence
<400> 7
gatattcaga tgacacagag cccgtcatca gtaagtgcaa gcgtcggaga tcgggttaca 60
ataacatgtc gtgcctcgca aggaatttcc tcctggttgg cctggtatca gcagaaacct 120
ggcaaagccc ccaaattact aatttatgcc gcaagctctc tgcaatcggg tgttccttcg 180
cggttttctg gctctggaag tggcaccgac ttcacgctta ctatctctag ccttcagccg 240
gaggattttg ctacctacta ctgccaacaa ggccatttat tccctattac ctttgggggc 300
ggtacaaaag tcgagatcaa gcgtacg 327
<210> 8
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH2 amino acid sequence
<400> 8
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asp Gly Ser Gly Asp Asn Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 9
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH2 nucleic acid sequence
<400> 9
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaac tattacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atcgatggtt ctggtgataa cactacttac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 10
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH3 amino acid sequence
<400> 10
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH3 nucleic acid sequence
<400> 11
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaac tattacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtggcagca atctctggtt ctggtgatgg tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 12
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH4 amino acid sequence
<400> 12
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH4 nucleic acid sequence
<400> 13
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaac tattacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atctctggtt ctggtgattc tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 14
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH5 amino acid sequence
<400> 14
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Gly Gly Asp Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH5 nucleic acid sequence
<400> 15
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaac tattacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtggcagca atctctggtg gtggtgatgc aacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 16
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH6 amino acid sequence
<400> 16
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Asp Val Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 17
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH6 nucleic acid sequence
<400> 17
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt caccttttat ggttacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtcttct atctctggtt ctggtgatgt tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 18
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH7 amino acid sequence
<400> 18
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH7 nucleic acid sequence
<400> 19
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt caccttttat ggttacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtggcagca atctctggtt ctggtgatgg tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 20
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH8 amino acid sequence
<400> 20
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Phe Gly Glu Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH8 nucleic acid sequence
<400> 21
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaga aactacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atctctggtt ttggtgaatc tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 22
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH9 amino acid sequence
<400> 22
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH9 nucleic acid sequence
<400> 23
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaac tattacgcaa tgaactgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtggcagca atctctggtt ctggtggtag aacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 24
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH10 amino acid sequence
<400> 24
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH10 nucleic acid sequence
<400> 25
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt caccttttat ggttacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atctctggtt ctggtggtaa cacttcttac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 26
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH11 amino acid sequence
<400> 26
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH11 nucleic acid sequence
<400> 27
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt caccttttat ggttacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtggcagca atctctggtt ctggtgattc tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 28
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL2 amino acid sequence
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile His Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Arg Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 29
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL2 nucleic acid sequence
<400> 29
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gaatattcat aactggttgg cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctggtt tggaaagtgg ggtcccatca 180
agattcagcg gcagtggatc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcaacct 240
gatgattttg caacttacta ctgtcaacag ggtgacagat tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtacg 327
<210> 30
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL3 amino acid sequence
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ile Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL3 nucleic acid sequence
<400> 31
gacatccaga tgacccagtc tccttccatc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcact 60
atcacttgcc gggccagtca gagtatcagt aggtggttgg cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaacccc ctaaactcct gatctttaag gcgtctgctt tagaaagtgg ggtcccatcg 180
aggttcagcg gcagtggata tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa cctgcagcct 240
gaagactttg caacttactt ctgtcaacag ggtaatagtt tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaaag tggatatcaa acgtacg 327
<210> 32
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL4 amino acid sequence
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asp Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Trp Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Gln Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL4 nucleic acid sequence
<400> 33
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gaatattgat atctggttgg cctggtatca gtggaaacca 120
gggaaggccc ctaaactcct gatctataag gcgtctggtt tagaaactgg ggtcccttca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ctatcagcag cctgcagcca 240
gaggattttg cgacttacta ttgtcaacag ggtaaccagt tcccgctcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa acgtacg 327
<210> 34
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL5 amino acid sequence
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Val Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL5 nucleic acid sequence
<400> 35
gacatccaga tgacccagtc tccttcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtatcggt aggtggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctttaag gcgtctgctt tagaagttgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtaacagtt tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaaag tggatatcaa acgtacg 327
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL6 amino acid sequence
<400> 36
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL6 nucleic acid sequence
<400> 37
gacatccagt tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccgctt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagcggatc tgggacagat ttcactctca ctatcagcag cctgcagccc 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtgacagtt tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtacg 327
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL7 amino acid sequence
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Thr Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ala Leu Glu Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL7 nucleic acid sequence
<400> 39
gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cacagtcacc 60
ttcagttgcc gggccagtca gagtattaac acctggttgg cctggtatca gcaaaagcca 120
gggaaagccc ctaaactcct tatctataag gcgtctgctt tagaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagag ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gggaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtacg 327
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL8 amino acid sequence
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ala Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL8 nucleic acid sequence
<400> 41
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct catctataag gcgtctgctt tagaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcggtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtcacagtt tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagc tggagatcaa acgtacg 327
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL9 amino acid sequence
<400> 42
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL9 nucleic acid sequence
<400> 43
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtattagt gactggttgg cctggtatca gcagaagcca 120
ggtaaagccc ctaaactcct gatctttaag gcttctgctt tagaaggtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa acgtacg 327
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL10 amino acid sequence
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Ala Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL10 nucleic acid sequence
<400> 45
gacatccaga tgacccagtc tccagccacc ctgtctgcat ctgttggaga cagggtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gagtgttgat aggtggttgg cctggtacca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaacctcct aatctatgag gcgtctgcct tacaaggtgg ggtcccgtca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtgatagtt tccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtacg 327
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL11 amino acid sequence
<400> 46
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Arg Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL11 nucleic acid sequence
<400> 47
gacatccagt tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccggtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag ggtgacaggt tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgtacg 327
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1
<400> 48
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.1
<400> 49
Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.2
<400> 50
Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.3
<400> 51
Phe Thr Phe Arg Asn Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.4
<400> 52
Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.5
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> X = S or N
<400> 53
Phe Thr Phe Asn Tyr Tyr Ala Met Xaa
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.6
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> X = S, N, Y, R;
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> X = S, N, Y, G
<400> 54
Phe Thr Phe Xaa Xaa Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.7
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> X = S, N, Y, R
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> X = S, N, Y, G
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> X = S or N
<400> 55
Phe Thr Phe Xaa Xaa Tyr Ala Met Xaa
1 5
<210> 56
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2
<400> 56
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.1
<400> 57
Ser Ala Ile Asp Gly Ser Gly Asp Asn Thr Thr Tyr
1 5 10
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.2
<400> 58
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Gly Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.3
<400> 59
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.4
<400> 60
Ala Ala Ile Ser Gly Gly Gly Asp Ala Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.5
<400> 61
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Asp Val Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.6
<400> 62
Ser Ala Ile Ser Gly Phe Gly Glu Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.7
<400> 63
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.8
<400> 64
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Ser Tyr
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.9
<400> 65
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.10
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> X = S or G
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> X = D or G
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> X = S, R, G, A
<400> 66
Ala Ala Ile Ser Gly Xaa Gly Xaa Xaa Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.11
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(9)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 67
Xaa Xaa Ile Xaa Gly Xaa Gly Xaa Xaa Thr Xaa Tyr
1 5 10
<210> 68
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3
<400> 68
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1
<400> 69
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.1
<400> 70
Arg Ala Ser Gln Asn Ile His Asn Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 71
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.2
<400> 71
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 72
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.3
<400> 72
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asp Ile Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 73
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.4
<400> 73
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Arg Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 74
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.5
<400> 74
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.6
<400> 75
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Thr Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.7
<400> 76
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.8
<400> 77
Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Arg Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2
<400> 78
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.1
<400> 79
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Glu Ser
1 5
<210> 80
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.2
<400> 80
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Ser
1 5
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.3
<400> 81
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Glu Thr
1 5
<210> 82
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.4
<400> 82
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Val
1 5
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.5
<400> 83
Tyr Ala Ala Ser Ala Leu Gln Ser
1 5
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.6
<400> 84
Tyr Lys Ala Ser Ala Leu Glu Asn
1 5
<210> 85
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.7
<400> 85
Tyr Lys Ala Ser Ala Leu Glu Ser
1 5
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.8
<400> 86
Phe Lys Ala Ser Ala Leu Glu Gly
1 5
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.9
<400> 87
Tyr Glu Ala Ser Ala Leu Gln Gly
1 5
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.10
<400> 88
Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Gln Asn
1 5
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3
<400> 89
Gln Gln Gly His Leu Phe Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.1
<400> 90
Gln Gln Gly Asp Arg Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.2
<400> 91
Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.3
<400> 92
Gln Gln Gly Asn Gln Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.4
<400> 93
Gln Gln Gly Asp Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.5
<400> 94
Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.6
<400> 95
Gln Gln Gly Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR3.7
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 96
Gln Gln Gly Xaa Xaa Phe Pro Xaa Thr Phe
1 5 10
<210> 97
<211> 254
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(254)
<223> Human CD137L Uniprot ID P41273
<400> 97
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: FLAG
<400> 98
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 99
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 6-His
<400> 99
His His His His His His
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: HA
<400> 100
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
1 5
<210> 101
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH12 amino acid sequence
<400> 101
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 102
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH12 nucleic acid sequence
<400> 102
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttaga aactacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atctctggtt ctggtgatac tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 103
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH13 amino acid sequence
<400> 103
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 104
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH13 nucleic acid sequence
<400> 104
gaagtgcaat tattggaatc cggcggcggt ttagttcagc caggtggctc tttgaggctg 60
agttgcgcag cctctggatt cacctttggt tcttacgcaa tgtcttgggt tcgccaggcg 120
cccggtaagg gtctggagtg ggtgtctgca atctctggtt ctggtggttc tacttactac 180
gccgactctg tgaaaggtcg ttttaccata agccgcgaca attctaagaa tactttatat 240
cttcaaatga attcgctgcg ggcagaagac acggccgtct attactgcgc aaaggactca 300
ccttttctat tagacgacta ctactactac tactacatgg acgtatgggg caagggtaca 360
actgtcaccg tctcctcagc tagc 384
<210> 105
<211> 105
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL12 amino acid sequence
<400> 105
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Gln Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu
100 105
<210> 106
<211> 315
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL12 nucleic acid sequence
<400> 106
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtaacc 60
atcacttgcc gggcaagtca ggatattggt gactggttgg cctggtatca gcagaagcct 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctggtt tacaaagtgg ggtcccatca 180
agattcagtg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ctatcagcaa cctgcagcca 240
gaggattttg cgacttacta ttgtcaacag ggtaaccagt tcccgctcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggag 315
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR1.8
<400> 107
Phe Thr Phe Gly Trp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 108
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR2.12
<400> 108
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR1.9
<400> 109
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asp Trp Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VL CDR2.11
<400> 110
Tyr Lys Ala Ser Gly Leu Gln Ser
1 5
<210> 111
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.1
<400> 111
Ala Lys Ala Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 112
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.2
<400> 112
Ala Lys Asp Ala Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 113
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.3
<400> 113
Ala Lys Asp Ser Ala Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 114
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.4
<400> 114
Ala Lys Asp Ser Pro Ala Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 115
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.5
<400> 115
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Ala Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 116
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.6
<400> 116
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Ala Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 117
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.7
<400> 117
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Ala Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 118
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.8
<400> 118
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 119
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.9
<400> 119
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.10
<400> 120
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Ala Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 121
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.11
<400> 121
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Ala Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 122
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.12
<400> 122
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 123
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.13
<400> 123
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Tyr
1 5 10 15
Met Asp
<210> 124
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.14
<400> 124
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Ala
1 5 10 15
Met Asp
<210> 125
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.15
<400> 125
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Ala Asp
<210> 126
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.16
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(10)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 126
Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Tyr Tyr Xaa
1 5 10 15
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.17
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(9)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 127
Asp Xaa Pro Phe Xaa Leu Asp Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Xaa
1 5 10 15
<210> 128
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: VH CDR3.18
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa is a non-polar amino acid or proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is a non-polar amino acid or phenylalanine or tryptophan
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is a polar amino acid or aspartic acid or glutamic acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa is a polar amino acid or tyrosine
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa is a polar amino acid or tyrosine
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 128
Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Tyr Tyr Xaa
1 5 10 15
<210> 129
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb1 heavy chain
<400> 129
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 130
<211> 454
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb8 heavy chain V1
<400> 130
Gly Thr Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
1 5 10 15
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg
20 25 30
Asn Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
130 135 140
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
195 200 205
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
325 330 335
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450
<210> 131
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb8 heavy chain V2
<400> 131
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 132
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb10 heavy chain
<400> 132
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ser Pro Phe Leu Leu Asp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
130 135 140
Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr
195 200 205
Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Gly
450
<210> 133
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mAb1, mAb8 and mAb10 light chain
<400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Leu Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
Claims (103)
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 30~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제2항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, 및 K114를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제2항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열 번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126 및 I132를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 E111, T113, K114, N126, I132 및 P135를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 하나 이상의 아미노산 잔기의 서열을 포함하는 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제7항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 아미노산 위치 111 내지 135에 상응하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 잔기를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 ELTK(서열번호 3의 아미노산 잔기 111~114에 상응함)를 포함하는 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제9항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 하나 이상의 잔기 N126, I132 및 P135를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 비선형 에피토프인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 3의 잔기 K114의 돌연변이는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 결합을 방해하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 약 45~95 nM, 50~90 nM, 55~85 nM, 60~80 nM, 65~75 nM, 55~75 nM, 40~70 nM, 50~80 nM, 또는 60~90 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 인간 CD137의 세포외 도메인의 비리간드 결합 영역에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은:
(i) 약 30~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 인간 CD137의 세포외 도메인의 비리간드 결합 영역에 결합하며;
(iii) 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은:
(i) 약 30~100 nM의 친화도(KD)로 인간 CD137에 결합하고;
(ii) 인간 CD137과 인간 CD137 리간드 간의 상호 작용을 억제하지 않으며;
(iii) 서열번호 3의 K114를 포함하는 인간 CD137 상의 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 CD137과 CD137L 간의 상호 작용을 억제하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제14항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비리간드 결합 영역은 시스테인 풍부 도메인(CRD) III 및 CRD IV에 걸쳐 있는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항, 제2항, 제3항, 및 제11항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 3의 E111, T113, K114 및 P135를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 127)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CDR3의 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 감소를 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 CD137:CD137L 단량체의 삼량체 형성을 억제하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항, 제13항, 제14항, 제17항 내지 제19항 및 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 3의 아미노산 잔기 111~135 내에 위치한 에피토프에 결합하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제25항에 있어서, 상기 에피토프는 비선형 에피토프인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하되, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(b) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열. - 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각. - 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4 및 101로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각; 및
(b) 서열번호 101 및 6의 각각. - 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 129 및 133의 각각; 및
(b) 서열번호 131 및 133의 각각. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(b) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 70, 79 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(c) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 71, 80 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(d) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 72, 81 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(e) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 73, 82 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(f) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 83 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(g) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 75, 84 및 91에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(h) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 74, 85 및 94에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(i) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 서열번호 76, 86 및 95에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(j) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 77, 87 및 93에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(k) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 88 및 90에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(l) 서열번호 49, 57 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(m) 서열번호 49, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(n) 서열번호 49, 59 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(o) 서열번호 49, 60 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(p) 서열번호 50, 61 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(q) 서열번호 50, 58 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(r) 서열번호 51, 62 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(s) 서열번호 52, 63 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(t) 서열번호 50, 64 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(u) 서열번호 50, 65 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 서열번호 51, 108 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(w) 서열번호 107, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 69, 78 및 89에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(x) 서열번호 48, 56 및 68에 각각 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 서열번호 109, 110 및 92에 각각 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은, 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXXXXLXXXXYXYYX(서열번호 126)를 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR3은 아미노산 서열 DXPFXLDXXYYYYYX(서열번호 128)을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각; 및
(b) 서열번호 102 및 7의 각각. - 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 잔기 D95, L100, Y100E, Y100G, Y100H, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 손실을 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 잔기 P97, F98, D100A, Y100D, Y100F, 또는 이들의 조합의 알라닌으로의 돌연변이는 인간 CD137에 대한 결합의 감소를 초래하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각; 및
(b) 서열번호 102 및 7의 각각. - 제42항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 5 및 7 각각에 대해 적어도 90%의 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 5 및 7의 각각;
(b) 서열번호 5 및 29의 각각;
(c) 서열번호 5 및 31의 각각;
(d) 서열번호 5 및 33의 각각;
(e) 서열번호 5 및 35의 각각;
(f) 서열번호 5 및 37의 각각;
(g) 서열번호 5 및 39의 각각;
(h) 서열번호 5 및 41의 각각;
(i) 서열번호 5 및 43의 각각;
(j) 서열번호 5 및 45의 각각;
(k) 서열번호 5 및 47의 각각;
(l) 서열번호 9 및 7의 각각;
(m) 서열번호 11 및 7의 각각;
(n) 서열번호 13 및 7의 각각;
(o) 서열번호 15 및 7의 각각;
(p) 서열번호 17 및 7의 각각;
(q) 서열번호 19 및 7의 각각;
(r) 서열번호 21 및 7의 각각;
(s) 서열번호 23 및 7의 각각;
(t) 서열번호 25 및 7의 각각;
(u) 서열번호 27 및 7의 각각;
(v) 서열번호 102 및 7의 각각;
(w) 서열번호 104 및 7의 각각; 및
(x) 서열번호 5 및 106의 각각. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 101 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 6, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 및 105로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 4 및 6의 각각;
(b) 서열번호 4 및 28의 각각;
(c) 서열번호 4 및 30의 각각;
(d) 서열번호 4 및 32의 각각;
(e) 서열번호 4 및 34의 각각;
(f) 서열번호 4 및 36의 각각;
(g) 서열번호 4 및 38의 각각;
(h) 서열번호 4 및 40의 각각;
(i) 서열번호 4 및 42의 각각;
(j) 서열번호 4 및 44의 각각;
(k) 서열번호 4 및 46의 각각;
(l) 서열번호 8 및 6의 각각;
(m) 서열번호 10 및 6의 각각;
(n) 서열번호 12 및 6의 각각;
(o) 서열번호 14 및 6의 각각;
(p) 서열번호 16 및 6의 각각;
(q) 서열번호 18 및 6의 각각;
(r) 서열번호 20 및 6의 각각;
(s) 서열번호 22 및 6의 각각;
(t) 서열번호 24 및 6의 각각;
(u) 서열번호 26 및 6의 각각;
(v) 서열번호 101 및 6의 각각;
(w) 서열번호 103 및 6의 각각; 및
(x) 서열번호 4 및 105의 각각. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 서열번호 129 및 133의 각각; 및
(b) 서열번호 131 및 133의 각각. - 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 129 및 133의 각각에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 131 및 133의 각각에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 인간 CD137에 특이적으로 결합하여 이를 효능화하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 특성 중 적어도 하나 이상 나타내는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화함;
(b) CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화함;
(c) T 세포 활성화를 유도 또는 강화함;
(d) 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화함;
(e) T 세포 증식을 유도 또는 강화함;
(f) 면역 세포 사이토카인 생산을 유도 또는 강화함; 및
(g) 특성 (a)~(f)의 임의의 조합. - 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 인간 CD137에 결합하는 기준 항체에 비해 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 특성 중 적어도 하나 이상을 나타내는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(a) 간 내 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(b) 간 내 T 세포 증식을 유도 또는 강화하지 않음;
(c) 종양 내 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(d) 종양 내 T 세포 증식을 유도 또는 강화하지 않음;
(e) 대식세포 활성화를 유도 또는 강화하지 않음;
(f) 대식세포 분화를 유도 또는 강화하지 않음;
(g) 알라닌 아미노기 전이효소(ALT) 활성을 유도 또는 강화하지 않음; 및
(h) 특성 (a)~(g)의 임의의 조합. - 제53항에 있어서, 상기 기준 항체는 우렐루맙인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분의 특성은 Fc 수용체 결합에 의존하지 않는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분의 특성은 Fc 수용체 결합에 의해 강화되는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 시노몰구스 CD137, 마우스 CD137, 또는 둘 모두와 교차 반응하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제47항 및 제51항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제58항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체인, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제47항 및 제51항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 야생형 인간 IgG1 또는 야생형 인간 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제47항 및 제51항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제47항 및 제51항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제62항에 있어서, 상기 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 Ser228에서 치환을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제63항에 있어서, 상기 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 S228P 치환을 포함하는, 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄와 중쇄 둘 다를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
- 제66항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
- 제67항의 발현 벡터로 형질 변환된 세포.
- 인간 CD137에 특이적으로 결합하는 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생산하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건 하에서 제68항에 따른 세포를 유지하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제69항에 있어서, 상기 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 이량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 대상체에서 인간 CD137 삼량체의 다량체화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 대상체에서 T 세포 활성화를 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제73항에 있어서, 상기 T 세포 활성화는 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
- 대상체에서 세포독성 T 세포 반응을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제75항에 있어서, 세포독성 T 세포 반응은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
- 대상체에서 면역 세포의 사이토카인 생성을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제77항에 있어서, 생성된 사이토카인은 IL-2, TNFα, IL-13, IFNγ, 또는 이들의 조합인, 방법.
- 제77항 또는 제78항에 있어서, 사이토카인 생성은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
- 대상체에서 T 세포 증식을 유도 또는 강화하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제80항에 있어서, T 세포 증식은 종양 미세환경에서 발생하는, 방법.
- 종양 성장을 감소시키거나 억제하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 대상체에서 인간 CD137에 의해 매개된 질환을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포의 종양 미세환경 내로의 침윤은 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후에 증가하는, 방법.
- 제85항에 있어서, 면역 세포는 CD45를 발현하는, 방법.
- 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, T 조절(Treg) 세포의 양은 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후 종양 미세환경에서 감소하는, 방법.
- 제87항에 있어서, Treg 세포는 CD4, FOXP-3 및 CD25를 발현하는, 방법.
- 제82항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 대식 세포의 양은 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후 종양 미세환경에서 감소하는, 방법.
- 제89항에 있어서, 대식 세포는 CD45 및 CD11b를 발현하는, 방법.
- 제82항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 기능 소실은 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 후 종양 미세환경에서 감소하는, 방법.
- 제91항에 있어서, T 세포 기능 소실 감소는 TIGIT, PD-1, LAG-3 또는 이들의 조합의 발현 감소를 포함하는, 방법.
- 제84항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종, 신경 교종, 신암, 유방암, 혈액암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제83항에 있어서, 혈액암은 B 세포 림프종인, 방법.
- 항종양 기억 면역 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분 또는 제65항의 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제71항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분은 Fc 감마 수용체에 결합하는, 방법.
- 제82항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합의 고갈은 항체 또는 항원 결합 부분의 효능을 감소시키는, 방법.
- 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하기 위한 방법으로, 상기 방법은:
(i) 생물학적 샘플을 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 부분과 접촉시키되, 항체 또는 항원 결합 부분은 검출 가능한 물질로 표지되는 단계; 및
(ii) 인간 CD137에 결합된 항체 또는 항원 결합 부분을 검출하여 생물학적 샘플에서 인간 CD137의 존재 또는 부재를 검출하는 단계를 포함하는, 방법. - 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분, 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체, 또는 제65항의 약제학적 조성물을 포함하는 용기; 및 항체 또는 약제학적 조성물의 투여를 위한 지침을 포함하는 패키지 삽입체를 포함하는, 키트.
- 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분, 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체, 또는 제65항의 약제학적 조성물을 포함하는 용기; 및 항체 또는 약제학적 조성물의 단독 투여 또는 또 다른 제제와의 변용 투여를 위한 지침을 포함하는 패키지 삽입체를 포함하는, 키트.
- 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항의 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분의 용도.
- 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료나 암 진행의 지연 또는 종양 성장의 감소나 억제를 위한 의약의 제조에서의, 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분.
- 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 단리된 단클론 항체 또는 항원 결합 부분.
Applications Claiming Priority (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762531190P | 2017-07-11 | 2017-07-11 | |
| US201762531259P | 2017-07-11 | 2017-07-11 | |
| US62/531,259 | 2017-07-11 | ||
| US62/531,190 | 2017-07-11 | ||
| US201762568231P | 2017-10-04 | 2017-10-04 | |
| US62/568,231 | 2017-10-04 | ||
| US201762577257P | 2017-10-26 | 2017-10-26 | |
| US201762577259P | 2017-10-26 | 2017-10-26 | |
| US62/577,259 | 2017-10-26 | ||
| US62/577,257 | 2017-10-26 | ||
| PCT/US2018/041612 WO2019014328A2 (en) | 2017-07-11 | 2018-07-11 | AGONISTIC ANTIBODIES THAT BIND HUMAN CD137 AND USES THEREOF |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20200035966A true KR20200035966A (ko) | 2020-04-06 |
Family
ID=63036491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020207003970A KR20200035966A (ko) | 2017-07-11 | 2018-07-11 | 인간 cd137에 결합하는 작동자 항체 및 이의 용도 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (9) | US10716851B2 (ko) |
| EP (1) | EP3652209A2 (ko) |
| JP (3) | JP7402521B2 (ko) |
| KR (1) | KR20200035966A (ko) |
| CN (1) | CN111278858A (ko) |
| AU (1) | AU2018301393A1 (ko) |
| BR (1) | BR112020000719A2 (ko) |
| CA (1) | CA3069438A1 (ko) |
| CO (1) | CO2020000214A2 (ko) |
| IL (1) | IL271696A (ko) |
| MA (1) | MA49565A (ko) |
| MX (1) | MX2020000342A (ko) |
| MY (1) | MY202336A (ko) |
| NZ (1) | NZ760841A (ko) |
| PE (1) | PE20200757A1 (ko) |
| SG (3) | SG10201913144TA (ko) |
| TW (1) | TWI820031B (ko) |
| WO (1) | WO2019014328A2 (ko) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3069438A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Compass Therapeutics Llc | Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
| WO2019036855A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Adagene Inc. | ANTI-CD137 MOLECULES AND THEIR USE |
| WO2019089753A2 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof |
| WO2019100052A2 (en) * | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof |
| WO2019148445A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Adagene Inc. | Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same |
| AU2020208397A1 (en) * | 2019-01-16 | 2021-08-12 | Compass Therapeutics Llc | Formulations of antibodies that bind human CD137 and uses thereof |
| US20200407440A1 (en) | 2019-04-24 | 2020-12-31 | Magenta Therapeutics, Inc. | Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof |
| US20220242966A1 (en) * | 2019-07-24 | 2022-08-04 | Agonox, Inc. | Cd63 agonist-related methods and compositions |
| TW202144395A (zh) * | 2020-02-12 | 2021-12-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子 |
| US20230106973A1 (en) | 2020-02-17 | 2023-04-06 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof |
| WO2021226883A1 (en) * | 2020-05-13 | 2021-11-18 | Adagene Ag | Compositions and methods for treating cancer submission of sequence listing on ascii text file |
| CN113842456B (zh) * | 2020-06-28 | 2022-07-26 | 上海齐鲁制药研究中心有限公司 | 一种抗人4-1bb的单克隆抗体制剂及其用途 |
| WO2024040195A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Capstan Therapeutics, Inc. | Conditioning for in vivo immune cell engineering |
| WO2024109678A1 (en) * | 2022-11-21 | 2024-05-30 | Beigene, Ltd. | Anti-cd137 antibodies and methods of use |
Family Cites Families (250)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
| US3710795A (en) | 1970-09-29 | 1973-01-16 | Alza Corp | Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane |
| US4263428A (en) | 1978-03-24 | 1981-04-21 | The Regents Of The University Of California | Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same |
| IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
| US4433059A (en) | 1981-09-08 | 1984-02-21 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Double antibody conjugate |
| US4444878A (en) | 1981-12-21 | 1984-04-24 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Bispecific antibody determinants |
| EP0088046B1 (de) | 1982-02-17 | 1987-12-09 | Ciba-Geigy Ag | Lipide in wässriger Phase |
| NZ207394A (en) | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
| US4496654A (en) | 1983-04-08 | 1985-01-29 | Quidel | Detection of HCG with solid phase support having avidin coating |
| HUT35524A (en) | 1983-08-02 | 1985-07-29 | Hoechst Ag | Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance |
| DE3474511D1 (en) | 1983-11-01 | 1988-11-17 | Terumo Corp | Pharmaceutical composition containing urokinase |
| DE3584341D1 (de) | 1984-08-24 | 1991-11-14 | Upjohn Co | Rekombinante dna-verbindungen und expression von polypeptiden wie tpa. |
| US5168062A (en) | 1985-01-30 | 1992-12-01 | University Of Iowa Research Foundation | Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence |
| US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
| US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
| US5869620A (en) | 1986-09-02 | 1999-02-09 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
| US4863457A (en) | 1986-11-24 | 1989-09-05 | Lee David A | Drug delivery device |
| US5026773A (en) | 1987-03-11 | 1991-06-25 | Samuel Steel | Apparatus for a solid phase synthesis of peptide analogs |
| DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2 Inc | Geänderte antikörper. |
| JPH021556A (ja) | 1988-06-09 | 1990-01-05 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ハイブリッド抗体及びその作製方法 |
| EP1997891A1 (en) | 1988-09-02 | 2008-12-03 | Dyax Corporation | Generation and selection of recombinant varied binding proteins |
| US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
| US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
| US6362325B1 (en) | 1988-11-07 | 2002-03-26 | Advanced Research And Technology Institute, Inc. | Murine 4-1BB gene |
| US6303121B1 (en) | 1992-07-30 | 2001-10-16 | Advanced Research And Technology | Method of using human receptor protein 4-1BB |
| AU634186B2 (en) | 1988-11-11 | 1993-02-18 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US6291159B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for producing polymers having a preselected activity |
| US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
| DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
| US5071909A (en) | 1989-07-26 | 1991-12-10 | Millipore Corporation | Immobilization of proteins and peptides on insoluble supports |
| US5164188A (en) | 1989-11-22 | 1992-11-17 | Visionex, Inc. | Biodegradable ocular implants |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| AU7247191A (en) | 1990-01-11 | 1991-08-05 | Molecular Affinities Corporation | Production of antibodies using gene libraries |
| US5780225A (en) | 1990-01-12 | 1998-07-14 | Stratagene | Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules |
| EP1566442B1 (de) | 1990-02-01 | 2009-11-25 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Herstellung und Verwendung von Genbanken menschlicher Antikörper("Human-Antikörper-Bibliotheken") |
| CZ280777B6 (cs) | 1990-02-02 | 1996-04-17 | Ústav Organické Chemie A Biochemie Avčr | Mnohonásobná automatizovaná syntéza peptidů na planárních nosičích |
| US5273743A (en) | 1990-03-09 | 1993-12-28 | Hybritech Incorporated | Trifunctional antibody-like compounds as a combined diagnostic and therapeutic agent |
| US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
| GB9012995D0 (en) | 1990-06-11 | 1990-08-01 | Celltech Ltd | Multivalent antigen-binding proteins |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
| US5698426A (en) | 1990-09-28 | 1997-12-16 | Ixsys, Incorporated | Surface expression libraries of heteromeric receptors |
| KR0185215B1 (ko) | 1990-11-30 | 1999-05-01 | 요시다 쇼오지 | 서방성 안구삽입용 약제 |
| US5582996A (en) | 1990-12-04 | 1996-12-10 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Bifunctional antibodies and method of preparing same |
| WO1992018619A1 (en) | 1991-04-10 | 1992-10-29 | The Scripps Research Institute | Heterodimeric receptor libraries using phagemids |
| DE4118120A1 (de) | 1991-06-03 | 1992-12-10 | Behringwerke Ag | Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung |
| US6511663B1 (en) | 1991-06-11 | 2003-01-28 | Celltech R&D Limited | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins |
| US5637481A (en) | 1993-02-01 | 1997-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell |
| NL9101953A (nl) | 1991-11-21 | 1993-06-16 | Seed Capital Investments | Testinrichting omvattende een plaat met een veelvoud van putjes met een bijbehorende doseerinrichting, alsmede een kit die deze inrichtingen omvat en toepassing van de inrichtingen. |
| US5932448A (en) | 1991-11-29 | 1999-08-03 | Protein Design Labs., Inc. | Bispecific antibody heterodimers |
| ATE463573T1 (de) | 1991-12-02 | 2010-04-15 | Medimmune Ltd | Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken |
| WO1993016185A2 (en) | 1992-02-06 | 1993-08-19 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
| US5714350A (en) | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
| US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
| CA2135408A1 (en) | 1992-05-08 | 1993-11-25 | Peter C. Keck | Chimeric multivalent protein analogues and methods of use thereof |
| US5287082A (en) | 1992-07-02 | 1994-02-15 | Cornell Research Foundation, Inc. | Submicron isolated, released resistor structure |
| DE69334258D1 (de) | 1992-08-21 | 2009-02-26 | Univ Bruxelles | Immunoglobuline ohne Leichtkette |
| US6005079A (en) | 1992-08-21 | 1999-12-21 | Vrije Universiteit Brussels | Immunoglobulins devoid of light chains |
| CA2145278C (en) | 1992-09-25 | 2009-03-10 | Peter J. Hudson | Target binding polypeptide |
| GB9221657D0 (en) | 1992-10-15 | 1992-11-25 | Scotgen Ltd | Recombinant bispecific antibodies |
| US5837821A (en) | 1992-11-04 | 1998-11-17 | City Of Hope | Antibody construct |
| GB9323648D0 (en) | 1992-11-23 | 1994-01-05 | Zeneca Ltd | Proteins |
| ES2156149T3 (es) | 1992-12-04 | 2001-06-16 | Medical Res Council | Proteinas de union multivalente y multiespecificas, su fabricacion y su uso. |
| ES2162863T3 (es) | 1993-04-29 | 2002-01-16 | Unilever Nv | Produccion de anticuerpos o fragmentos (funcionalizados) de los mismos derivados de inmunoglobulinas de cadena pesada de camelidae. |
| US7211259B1 (en) | 1993-05-07 | 2007-05-01 | Immunex Corporation | 4-1BB polypeptides and DNA encoding 4-1BB polypeptides |
| US7138500B1 (en) | 1993-05-07 | 2006-11-21 | Immunex Corporation | Antibodies to human 4-1BB |
| CA2163345A1 (en) | 1993-06-16 | 1994-12-22 | Susan Adrienne Morgan | Antibodies |
| US6476198B1 (en) | 1993-07-13 | 2002-11-05 | The Scripps Research Institute | Multispecific and multivalent antigen-binding polypeptide molecules |
| US5635602A (en) | 1993-08-13 | 1997-06-03 | The Regents Of The University Of California | Design and synthesis of bispecific DNA-antibody conjugates |
| JPH09503911A (ja) | 1993-09-16 | 1997-04-22 | インディアナ・ユニバーシティー・ファウンデーション | ヒトｈ４−１ｂｂ受容体 |
| CA2108401A1 (en) | 1993-09-27 | 1995-03-28 | Martin Lotz | Receptor induced by lymphocyte activation in imflammatory response |
| WO1995009917A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
| JPH09506262A (ja) | 1993-12-08 | 1997-06-24 | ジェンザイム・コーポレイション | 特異的抗体の製造方法 |
| DK0744958T3 (da) | 1994-01-31 | 2003-10-20 | Univ Boston | Polyklonale antistofbiblioteker |
| US5516637A (en) | 1994-06-10 | 1996-05-14 | Dade International Inc. | Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage |
| WO1996013583A2 (en) | 1994-10-20 | 1996-05-09 | Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh | Targeted hetero-association of recombinant proteins to multi-functional complexes |
| US5556752A (en) | 1994-10-24 | 1996-09-17 | Affymetrix, Inc. | Surface-bound, unimolecular, double-stranded DNA |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| US5928893A (en) | 1995-04-08 | 1999-07-27 | Lg Chemical Ltd. | Monoclonal antibody specific for human 4-1BB and cell line producing same |
| ATE274064T1 (de) | 1995-05-23 | 2004-09-15 | Morphosys Ag | Multimere proteine |
| JP4436457B2 (ja) | 1995-08-18 | 2010-03-24 | モルフォシス アイピー ゲーエムベーハー | 蛋白質／（ポリ）ペプチドライブラリー |
| AU6873396A (en) | 1995-10-16 | 1997-05-07 | Unilever N.V. | A bifunctional or bivalent antibody fragment analogue |
| JP2978435B2 (ja) | 1996-01-24 | 1999-11-15 | チッソ株式会社 | アクリロキシプロピルシランの製造方法 |
| US5874240A (en) | 1996-03-15 | 1999-02-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Human 4-1BB receptor splicing variant |
| JP2000508892A (ja) | 1996-04-04 | 2000-07-18 | ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシャープ | 多価および多特異的抗原結合タンパク |
| AU3117697A (en) | 1996-05-06 | 1997-11-26 | Uab Research Foundation, The | Radiolabeled fusion toxins for cancer therapy |
| CA2268340A1 (en) | 1996-10-11 | 1998-04-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods and compositions for immunomodulation |
| US6544523B1 (en) | 1996-11-13 | 2003-04-08 | Chiron Corporation | Mutant forms of Fas ligand and uses thereof |
| US6323322B1 (en) | 1997-04-30 | 2001-11-27 | Enzon, Inc. | Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof |
| US20030207346A1 (en) | 1997-05-02 | 2003-11-06 | William R. Arathoon | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
| US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
| PT1012280E (pt) | 1997-06-11 | 2005-02-28 | Borean Pharma As | Modulo de trimerizacao |
| DK1027439T3 (da) | 1997-10-27 | 2010-05-10 | Bac Ip Bv | Multivalente antigenbindende proteiner |
| WO1999037791A1 (en) | 1998-01-23 | 1999-07-29 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie | Multipurpose antibody derivatives |
| IL138608A0 (en) | 1998-04-02 | 2001-10-31 | Genentech Inc | Antibody variants and fragments thereof |
| US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| HUP9900956A2 (hu) | 1998-04-09 | 2002-04-29 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh. | Egyláncú, több antigéntkötőhely kialakítására képes molekulák, előállításuk és alkalmazásuk |
| DE19819846B4 (de) | 1998-05-05 | 2016-11-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Multivalente Antikörper-Konstrukte |
| GB9812545D0 (en) | 1998-06-10 | 1998-08-05 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological products |
| US6333396B1 (en) | 1998-10-20 | 2001-12-25 | Enzon, Inc. | Method for targeted delivery of nucleic acids |
| US6995259B1 (en) | 1998-10-23 | 2006-02-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | Method for the chemical synthesis of oligonucleotides |
| US6818749B1 (en) * | 1998-10-31 | 2004-11-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49 |
| DK2270149T3 (en) | 1999-04-09 | 2016-05-09 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | PROCEDURE TO CONTROL THE ACTIVITY OF IMMUNOLOGICAL FUNCTIONAL MOLECULE. |
| US7534866B2 (en) | 2005-10-19 | 2009-05-19 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses |
| US7527787B2 (en) | 2005-10-19 | 2009-05-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies |
| US20030118588A1 (en) | 1999-05-22 | 2003-06-26 | Linda Diehl | Induction of anti-tumor CTL immunity through in vivo triggering of 4-1BB and/or CD40 |
| EP2314694A3 (en) | 1999-08-17 | 2013-12-11 | Biogen Idec MA Inc. | BAFF receptor (BCMA), an immunoregulatory agent |
| JP2003531588A (ja) | 2000-04-11 | 2003-10-28 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 多価抗体とその用途 |
| US8288322B2 (en) | 2000-04-17 | 2012-10-16 | Dyax Corp. | Methods of constructing libraries comprising displayed and/or expressed members of a diverse family of peptides, polypeptides or proteins and the novel libraries |
| CA2409991A1 (en) | 2000-05-24 | 2001-11-29 | Imclone Systems Incorporated | Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production |
| EP1294904A1 (en) | 2000-06-30 | 2003-03-26 | Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. | Heterodimeric fusion proteins |
| US20020076406A1 (en) | 2000-07-25 | 2002-06-20 | Leung Shui-On | Multivalent target binding protein |
| US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
| EP1197755A1 (en) | 2000-10-11 | 2002-04-17 | Pepscan Systems B.V. | Identification of protein binding sites |
| CN1308447C (zh) | 2000-10-20 | 2007-04-04 | 中外制药株式会社 | 低分子化的激动剂抗体 |
| CA2784251A1 (en) | 2000-12-18 | 2002-08-08 | Dyax Corp. | Focused libraries of genetic packages |
| US7829084B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-11-09 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding constructs and methods for use thereof |
| AU2002247826A1 (en) | 2001-03-13 | 2002-09-24 | University College London | Specific binding members |
| EP1399484B1 (en) | 2001-06-28 | 2010-08-11 | Domantis Limited | Dual-specific ligand and its use |
| US6833441B2 (en) | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
| ATE346866T1 (de) | 2001-09-14 | 2006-12-15 | Affimed Therapeutics Ag | Multimerische, einzelkettige, tandem-fv- antikörper |
| EP1434596B1 (en) | 2001-10-09 | 2009-07-08 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Enhancement of immune responses by agonist 4-1bb-antibodies |
| US20030211078A1 (en) | 2001-12-07 | 2003-11-13 | Heavner George A. | Pseudo-antibody constructs |
| BR0307383A (pt) | 2002-01-23 | 2005-04-26 | Univ Utah Res Found | Mutagênese cromossomica alvo utilizando nucleases de ramificações de zinco |
| EP1487879B1 (en) | 2002-03-01 | 2012-12-26 | Immunomedics, Inc. | Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance |
| WO2003080809A2 (en) | 2002-03-21 | 2003-10-02 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination |
| US8030461B2 (en) | 2002-04-15 | 2011-10-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for constructing scDb libraries |
| AU2003237456A1 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-22 | Sopherion Therapeutics, Inc. | Method to screen ligands using eukaryotic cell display |
| EP1543034A4 (en) * | 2002-07-15 | 2006-11-08 | Mayo Foundation | TREATMENT AND PROPHYLAXIS WITH 4-1BB BINDING AGENTS |
| JP2006500921A (ja) | 2002-07-30 | 2006-01-12 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | ヒト４−１ｂｂに対するヒト化抗体 |
| JP2006502748A (ja) | 2002-09-05 | 2006-01-26 | カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー | 遺伝子ターゲッティングを誘発するキメラヌクレアーゼの使用方法 |
| US20060121030A1 (en) | 2002-12-16 | 2006-06-08 | Herbert Schwarz | Use of cd 137 antagonists for the treatment of tumors |
| GB0230203D0 (en) | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Fc fusion |
| EP1578419A4 (en) | 2002-12-30 | 2008-11-12 | 3M Innovative Properties Co | IMMUNOSTIMULATING COMBINATIONS |
| GB0305702D0 (en) | 2003-03-12 | 2003-04-16 | Univ Birmingham | Bispecific antibodies |
| EP1618181B1 (en) | 2003-04-22 | 2014-10-15 | IBC Pharmaceuticals | Polyvalent protein complex |
| WO2005000899A2 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Biogen Idec Ma Inc. | Modified binding molecules comprising connecting peptides |
| JP5026072B2 (ja) | 2003-07-01 | 2012-09-12 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | 二重特異性抗体の多価キャリヤー |
| US7696322B2 (en) | 2003-07-28 | 2010-04-13 | Catalent Pharma Solutions, Inc. | Fusion antibodies |
| US8409861B2 (en) | 2003-08-08 | 2013-04-02 | Sangamo Biosciences, Inc. | Targeted deletion of cellular DNA sequences |
| US7888121B2 (en) | 2003-08-08 | 2011-02-15 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted cleavage and recombination |
| JPWO2005035586A1 (ja) | 2003-10-08 | 2007-11-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 融合蛋白質組成物 |
| AR046094A1 (es) * | 2003-10-10 | 2005-11-23 | Bristol Myers Squibb Co | Anticuerpos completamente humanos contra 4-1bb humano |
| US7288638B2 (en) | 2003-10-10 | 2007-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Fully human antibodies against human 4-1BB |
| US7435596B2 (en) | 2004-11-04 | 2008-10-14 | St. Jude Children's Research Hospital, Inc. | Modified cell line and method for expansion of NK cell |
| US20050136051A1 (en) | 2003-12-22 | 2005-06-23 | Bernard Scallon | Methods for generating multimeric molecules |
| GB0329825D0 (en) | 2003-12-23 | 2004-01-28 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| US20050266425A1 (en) | 2003-12-31 | 2005-12-01 | Vaccinex, Inc. | Methods for producing and identifying multispecific antibodies |
| US7557197B2 (en) | 2004-01-28 | 2009-07-07 | Oregon Health & Science University | Human soluble neuropilin-1 primary polyadenylation signal and uses thereof |
| US8383575B2 (en) | 2004-01-30 | 2013-02-26 | Paul Scherrer Institut | (DI)barnase-barstar complexes |
| US8685435B2 (en) | 2004-04-30 | 2014-04-01 | Allergan, Inc. | Extended release biodegradable ocular implants |
| AU2005250055B2 (en) | 2004-06-02 | 2008-09-11 | Adalta Pty Ltd | Binding moieties based on shark IgNAR domains |
| WO2006020258A2 (en) | 2004-07-17 | 2006-02-23 | Imclone Systems Incorporated | Novel tetravalent bispecific antibody |
| WO2006012414A2 (en) | 2004-07-20 | 2006-02-02 | Critical Therapeutics, Inc. | Novel polyadenylation signal for use in expression vectors |
| MX2007002856A (es) | 2004-09-02 | 2007-09-25 | Genentech Inc | Metodos para el uso de ligandos receptores de muerte y anticuerpos c20. |
| US20080152655A1 (en) | 2004-09-08 | 2008-06-26 | The Ohio State University Research Foundation | Combination Therapy With Anti-Ctla4 and Anti-4-1BB Antibodies |
| CA2595906C (en) | 2005-02-01 | 2014-04-22 | Dyax Corp. | Libraries and methods for isolating antibodies |
| US20080019905A9 (en) | 2005-02-18 | 2008-01-24 | Strome Scott E | Method of using an anti-CD137 antibody as an agent for radioimmunotherapy or radioimmunodetection |
| JP5620626B2 (ja) | 2005-03-31 | 2014-11-05 | 中外製薬株式会社 | 会合制御によるポリペプチド製造方法 |
| EP1874824A4 (en) | 2005-04-06 | 2009-12-30 | Ibc Pharmaceuticals Inc | METHODS OF GENERATING STABLE COMPOUND RELATED COMPLEXES OF HOMODIMERS, HOMOTRATEERS OR DIMER SIZES AND USES THEREOF |
| ES2971647T3 (es) | 2005-04-15 | 2024-06-06 | Macrogenics Inc | Diacuerpos covalentes y usos de los mismos |
| US20060263367A1 (en) | 2005-05-23 | 2006-11-23 | Fey Georg H | Bispecific antibody devoid of Fc region and method of treatment using same |
| KR100694508B1 (ko) | 2005-05-24 | 2007-03-13 | 울산대학교 산학협력단 | Ｈｂｂｋ４항체를 포함하는 암 질환 치료용 약학조성물및 이를 이용한 암의 면역치료 방법 |
| KR20080033455A (ko) | 2005-07-26 | 2008-04-16 | 상가모 바이오사이언스 인코포레이티드 | 외래 핵산 서열의 표적화된 통합 및 발현 |
| EP1928506A4 (en) | 2005-08-19 | 2009-10-21 | Abbott Lab | IMMUNOGLOBULIN HAVING TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF |
| US7612181B2 (en) | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| DE602005018477D1 (de) | 2005-08-26 | 2010-02-04 | Pls Design Gmbh | Bivalente IgY Antikörperkonstrukte für diagnostische und therapeutische Anwendungen |
| WO2007044887A2 (en) | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Transtarget, Inc. | Method for producing a population of homogenous tetravalent bispecific antibodies |
| US7790655B2 (en) | 2005-10-14 | 2010-09-07 | Medimmune, Llc | Cell display of antibody libraries |
| ES2577292T3 (es) | 2005-11-07 | 2016-07-14 | Genentech, Inc. | Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso |
| WO2007062466A1 (en) | 2005-11-29 | 2007-06-07 | The University Of Sydney | Demibodies: dimerisation-activated therapeutic agents |
| US20090196877A1 (en) | 2005-12-02 | 2009-08-06 | The Johns Hopkins University | Novel Method to Increase Memory T Lymphocytes and Enhance Their Functions |
| JP2009526857A (ja) | 2006-02-15 | 2009-07-23 | イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 機能性抗体 |
| SG170750A1 (en) | 2006-03-17 | 2011-05-30 | Biogen Idec Inc | Stabilized polypeptide compositions |
| EP2006379B1 (en) | 2006-03-23 | 2016-08-31 | Tohoku University | High functional bispecific antibody |
| US8946391B2 (en) | 2006-03-24 | 2015-02-03 | The Regents Of The University Of California | Construction of a multivalent scFv through alkyne-azide 1,3-dipolar cycloaddition |
| JP5474531B2 (ja) | 2006-03-24 | 2014-04-16 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 操作されたヘテロ二量体タンパク質ドメイン |
| JP5144499B2 (ja) | 2006-03-31 | 2013-02-13 | 中外製薬株式会社 | 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法 |
| EP2799449A1 (en) | 2006-05-25 | 2014-11-05 | Bayer Intellectual Property GmbH | Dimeric molecular complexes |
| US20070274985A1 (en) | 2006-05-26 | 2007-11-29 | Stefan Dubel | Antibody |
| RU2487888C2 (ru) | 2006-06-12 | 2013-07-20 | ЭМЕРДЖЕНТ ПРОДАКТ ДИВЕЛОПМЕНТ СИЭТЛ, ЭлЭлСи | Одноцепочечные мультивалентные связывающие белки с эффекторной функцией |
| KR100745488B1 (ko) | 2006-07-04 | 2007-08-02 | 학교법인 울산공업학원 | 항-4-1ｂｂ 항체 및 화학 항암제를 포함하는 암 질환 예방및 치료용 약학 조성물 |
| US8497246B2 (en) | 2006-08-18 | 2013-07-30 | Armagen Technologies, Inc. | Methods for diagnosing and treating CNS disorders by trans-blood-brain barrier delivery of protein compositions |
| PL2059533T3 (pl) | 2006-08-30 | 2013-04-30 | Genentech Inc | Przeciwciała wieloswoiste |
| US20080241139A1 (en) | 2006-10-31 | 2008-10-02 | Regents Of The University Of Colorado | Adjuvant combinations comprising a microbial tlr agonist, a cd40 or 4-1bb agonist, and optionally an antigen and the use thereof for inducing a synergistic enhancement in cellular immunity |
| BRPI0716680A2 (pt) | 2006-11-02 | 2013-09-24 | Daniel J Capon | "composto, multÍmero, composiÇço, mÉtodo de afetar a atividade de um alvo, complexo, processo de produÇço do composto, mÉtodo de produÇço de um extensço de aminoÁcidos consecutivos, processo de produÇço de uma extensço de aminoacidos consecutivos , processo para a produÇço de um composto , mÉtodo de produÇço de uma proteina e polipeptÍdeo" |
| WO2008119353A1 (en) | 2007-03-29 | 2008-10-09 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| WO2008131242A1 (en) | 2007-04-18 | 2008-10-30 | Zymogenetics, Inc. | Single chain fc, methods of making and methods of treatment |
| EP2626371A1 (en) | 2007-07-31 | 2013-08-14 | MedImmune, LLC | Multispecific epitope binding proteins and uses thereof |
| EP2532676B1 (en) | 2007-08-15 | 2017-03-22 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Protease-regulated antibody |
| CA2697193C (en) | 2007-09-14 | 2017-06-06 | Adimab, Inc. | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
| US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
| US7947495B2 (en) | 2007-11-01 | 2011-05-24 | Abbott Biotherapeutics Corp. | Immunoglobulin display vectors |
| AU2008328779B2 (en) | 2007-11-27 | 2014-06-05 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against HER2 and polypeptides comprising the same for the treatment of cancers and/or tumors |
| EP2641919A3 (en) | 2007-11-30 | 2014-05-07 | Glaxo Group Limited | Antigen-binding constructs |
| US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
| US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| SI2235064T1 (sl) | 2008-01-07 | 2016-04-29 | Amgen Inc. | Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov |
| WO2009089295A2 (en) | 2008-01-07 | 2009-07-16 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Anti-hiv domain antibodies and method of making and using same |
| DE102008010362A1 (de) | 2008-02-18 | 2009-08-20 | Florian Prof. Dr. Lang | Sgk1 als therapeutisches und diagnostisches Target für virale Erkrankungen |
| JP5780951B2 (ja) | 2008-04-24 | 2015-09-16 | ダイアックス コーポレーション | 新規のｈｃｃｄｒ１、ｃｄｒ２、およびｃｄｒ３設計、ならびに新規のｌｃｃｄｒ１、ｃｄｒ２、およびｃｄｒ３設計を含む、遺伝子パッケージのライブラリ |
| CA2736277C (en) | 2008-09-10 | 2016-06-21 | Philochem Ag | Display library for antibody selection |
| WO2010042433A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases |
| US9067986B2 (en) | 2009-04-27 | 2015-06-30 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Method for making heteromultimeric molecules |
| US20120076722A1 (en) | 2009-05-14 | 2012-03-29 | University Of Maryland, Baltimore | Methods for treating cancers and diseases associated with 4-1bb (cd137) expression |
| WO2011009058A2 (en) | 2009-07-17 | 2011-01-20 | Bioatla, Llc | Simultaneous, integrated selection and evolution of antibody/protein performance and expression in production hosts |
| WO2011034605A2 (en) | 2009-09-16 | 2011-03-24 | Genentech, Inc. | Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof |
| US9005619B2 (en) | 2009-12-07 | 2015-04-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy |
| CN103097417B (zh) | 2010-04-20 | 2019-04-09 | 根马布股份公司 | 含异二聚体抗体fc的蛋白及其制备方法 |
| CN105734678B (zh) | 2010-07-16 | 2019-11-05 | 阿迪马布有限责任公司 | 合成多核苷酸文库 |
| MY177065A (en) * | 2010-09-09 | 2020-09-03 | Pfizer | 4-1bb binding molecules |
| US20140178368A1 (en) | 2011-04-19 | 2014-06-26 | Leslie Lynne SHARP | Combinations of anti-4-1bb antibodies and adcc-inducing antibodies for the treatment of cancer |
| CN102760801B (zh) | 2011-04-29 | 2015-04-01 | 清华大学 | 发光二极管的制备方法 |
| PL2771364T3 (pl) | 2011-10-27 | 2020-01-31 | Genmab A/S | Wytwarzanie heterodimerycznych białek |
| US9401875B2 (en) | 2012-06-01 | 2016-07-26 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Packet transfer processing method and packet transfer processing device |
| CN104936982B (zh) | 2012-08-03 | 2020-04-24 | 丹娜法伯癌症研究院 | 抗-pd-l1和pd-l2双结合抗体单一试剂及其使用方法 |
| US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
| DK2961831T3 (da) | 2013-02-26 | 2020-09-07 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Sammensætninger og fremgangsmåder til immunterapi |
| US20160264670A1 (en) | 2013-11-06 | 2016-09-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof |
| RU2769133C2 (ru) | 2013-12-30 | 2022-03-28 | Эпимаб Биотерапьютикс Инк. | Иммуноглобулин с тандемным расположением fab-фрагментов и его применение |
| US10927154B2 (en) | 2014-01-13 | 2021-02-23 | Pieris Pharmaceuticals Gmbh | Multi-specific polypeptide useful for localized tumor immunomodulation |
| US10899840B2 (en) | 2014-02-04 | 2021-01-26 | Pfizer Inc. | Combination of a PD-1 antagonist and a 4-1BB agonist for treating cancer |
| US9300829B2 (en) | 2014-04-04 | 2016-03-29 | Canon Kabushiki Kaisha | Image reading apparatus and correction method thereof |
| UA119352C2 (uk) * | 2014-05-01 | 2019-06-10 | Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд | Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину |
| RU2016146993A (ru) | 2014-05-21 | 2018-06-21 | Пфайзер Инк. | Комбинация антитела к CCR4 и агониста 4-1BB для лечения рака |
| WO2015188047A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-10 | University Of Maryland, Baltimore | ANTI-CD-137 MONOCLONAL ANTIBODIES WITH DISTINCT FcγR BINDING ABILITIES FOR TREATMENT OF CANCER OR AUTOIMMUNITY |
| EP3183269A2 (en) | 2014-08-22 | 2017-06-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Treatment of cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-cd137 antibody |
| BR112017015136A2 (pt) | 2015-01-14 | 2018-01-30 | Compass Therapeutics Llc | polipeptídeo de construto de ligação ao antígeno imunomodulador multiespecífico, construto de ligação ao antígeno imunomodulador multiespecífico, conjugado, composição farmacêutica, método para tratar um indivíduo com câncer, método para inibir ou reduzir o crescimento de câncer, composição, célula, método de fazer um polipeptídeo de construto de ligação ao antígeno imunomodulador multiespecífico, vetor ou conjunto de vetores e kit |
| EP3258959A4 (en) | 2015-02-22 | 2018-10-17 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind cd137 |
| SI3283107T1 (sl) | 2015-04-17 | 2020-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Sestavki vsebujoči kombinacijo ipilimumaba in nivolumaba |
| EP3292148B1 (en) | 2015-05-04 | 2024-01-24 | Pieris Pharmaceuticals GmbH | Anti-cancer fusion polypeptide |
| WO2016185016A1 (en) | 2015-05-21 | 2016-11-24 | Alligator Bioscience Ab | Novel polypeptides |
| EP3313186A4 (en) * | 2015-06-29 | 2019-04-03 | Biomed Valley Discoveries, Inc. | COMBINATION OF LPT-723 INHIBITORS AND IMMUNE CONTROL POINT AND METHODS OF TREATMENT |
| JP2018524404A (ja) | 2015-07-07 | 2018-08-30 | インセルム（インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ リシェルシェ メディカル） | Ｎｋ細胞殺傷活性を増強する方法および医薬組成物 |
| US20180251548A1 (en) | 2015-09-14 | 2018-09-06 | Compass Therapeutics Llc | Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-beta |
| MY193013A (en) * | 2015-10-07 | 2022-09-22 | Hoffmann La Roche | Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory tnf receptor |
| US20190031785A1 (en) | 2016-01-13 | 2019-01-31 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs |
| US20190031765A1 (en) | 2016-01-25 | 2019-01-31 | Pfizer Inc. | Combination of an ox40 agonist and a 4-1bb agonist monoclonal antibody for treating cancer |
| CN109072191B (zh) | 2016-04-04 | 2024-03-22 | 苏黎世联邦理工学院 | 用于蛋白生产和文库产生的哺乳动物细胞系 |
| US11104739B2 (en) | 2016-04-14 | 2021-08-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination therapy using an anti-fucosyl-GM1 antibody and an anti-CD137 antibody |
| US10875921B2 (en) | 2016-05-27 | 2020-12-29 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-4-1BB antibodies and their uses |
| US10174122B2 (en) | 2017-01-06 | 2019-01-08 | Eutilex Co., Ltd. | Anti-human 4-1BB antibodies and uses thereof |
| MX2019012223A (es) | 2017-04-13 | 2019-12-09 | Agenus Inc | Anticuerpos anti-cd137 y metodos de uso de los mismos. |
| CA3069438A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Compass Therapeutics Llc | Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
| KR20210158420A (ko) | 2017-08-01 | 2021-12-30 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 항-cd137 항체 |
| WO2019036855A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Adagene Inc. | ANTI-CD137 MOLECULES AND THEIR USE |
| WO2020006605A1 (en) | 2018-07-04 | 2020-01-09 | Honeycomb Media Pty Ltd | Method and system for providing incentives to users |
-
2018
- 2018-07-11 CA CA3069438A patent/CA3069438A1/en active Pending
- 2018-07-11 SG SG10201913144TA patent/SG10201913144TA/en unknown
- 2018-07-11 CN CN201880058511.5A patent/CN111278858A/zh active Pending
- 2018-07-11 WO PCT/US2018/041612 patent/WO2019014328A2/en unknown
- 2018-07-11 PE PE2020000046A patent/PE20200757A1/es unknown
- 2018-07-11 NZ NZ760841A patent/NZ760841A/en unknown
- 2018-07-11 AU AU2018301393A patent/AU2018301393A1/en active Pending
- 2018-07-11 EP EP18746519.0A patent/EP3652209A2/en active Pending
- 2018-07-11 BR BR112020000719-6A patent/BR112020000719A2/pt unknown
- 2018-07-11 TW TW107123988A patent/TWI820031B/zh active
- 2018-07-11 KR KR1020207003970A patent/KR20200035966A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-07-11 MY MYPI2020000124A patent/MY202336A/en unknown
- 2018-07-11 JP JP2020501322A patent/JP7402521B2/ja active Active
- 2018-07-11 SG SG11201913137VA patent/SG11201913137VA/en unknown
- 2018-07-11 MX MX2020000342A patent/MX2020000342A/es unknown
- 2018-07-11 MA MA049565A patent/MA49565A/fr unknown
- 2018-07-11 SG SG10201913147WA patent/SG10201913147WA/en unknown
- 2018-09-06 US US16/123,742 patent/US10716851B2/en active Active
- 2018-11-09 US US16/185,398 patent/US10279038B2/en active Active
- 2018-12-13 US US16/219,117 patent/US10279039B2/en active Active
- 2018-12-21 US US16/230,134 patent/US10279040B1/en active Active
-
2019
- 2019-04-03 US US16/374,412 patent/US10350292B1/en active Active
- 2019-05-23 US US16/420,511 patent/US10434175B2/en active Active
- 2019-10-30 US US16/669,061 patent/US20200046833A1/en not_active Abandoned
- 2019-12-24 IL IL271696A patent/IL271696A/en unknown
-
2020
- 2020-01-10 CO CONC2020/0000214A patent/CO2020000214A2/es unknown
- 2020-06-08 US US16/895,239 patent/US11752207B2/en active Active
-
2022
- 2022-11-10 JP JP2022180410A patent/JP2023015262A/ja active Pending
-
2023
- 2023-08-04 US US18/365,745 patent/US20240181050A1/en active Pending
-
2024
- 2024-02-08 JP JP2024017824A patent/JP2024042106A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11752207B2 (en) | Agonist antibodies that bind human CD137 and uses thereof | |
| US20240002525A1 (en) | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof | |
| US11332524B2 (en) | Anti-IL-27 antibodies and uses thereof | |
| US20220259299A1 (en) | Anti-il-27 antibodies and uses thereof | |
| US11851497B2 (en) | CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof | |
| TW202128752A (zh) | 抗ｉｌ﹘２７抗體及其用途 | |
| US20220111047A1 (en) | Formulations of antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal |