ES2608362T5 - Roedor capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor - Google Patents

Roedor capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor Download PDF

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Description

DESCRIPCIÓN
Roedor capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor
Campo de la invención
El campo de la presente invención es un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón y un procedimiento de fabricación de un anticuerpo humano utilizando dicho ratón. La presente divulgación también se refiere a un procedimiento para realizar y usar vectores de ADN grandes mediante recombinación homóloga y modificar, de cualquier modo deseado, los genes endógenos y loci cromosómico en células eucarióticas. Estos grandes vectores dirigidos de ADN para células eucariotas, denominados LYVEC, derivan de fragmentos de ADN genómico clonado más grande que los usados habitualmente por otros abordajes destinados a realizar la dirección homóloga en células eucariotas. La presente divulgación proporciona además un procedimiento rápido y cómodo de detectar células eucariotas en las que el LTVEC ha llegado correctamente y ha modificado los genes endógenos o locus (loci) cromosómicos deseados. La presente divulgación también se refiere al uso de estas células para generar organismos portadores de la modificación genética, los propios organismos y los procedimientos de uso de los mismos.
Introducción
El uso de LTVEC proporciona ventajas sustanciales sobre los procedimientos actuales. Por ejemplo, dado que derivan de fragmentos de ADN más grandes que los actualmente usados para generar vectores dirigidos, los MTVEC pueden generarse con mayor rapidez y convenientemente a partir de bibliotecas disponibles de fragmentos grandes de ADN genómico (tales como bibliotecas de BAC y PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales. Además, modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se pueden generar más convenientemente que usando las tecnologías actuales. Además, la presente divulgación aprovecha las regiones de homología largas para incrementar la frecuencia para dirigir a los loci "difíciles de llegar" y, también, disminuye los beneficios, si existen, de usar ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
Por tanto, la presente divulgación proporciona un procedimiento rápido, conveniente y simplificado para modificar sistemáticamente casi todos los genes endógenos y loci cromosómicos de un organismo dado.
Antecedentes de la invención
Se ha demostrado que apuntar a genes por medio de recombinación homóloga entre ADN exógeno homólogo y secuencias cromosómicas endógenas es un modo extremadamente valioso para crear deleciones, inserciones, diseñar mutaciones, corregir mutaciones génicas, introducir transgenes o realizar otras modificaciones genéticas en ratones. Los procedimientos actuales implican el uso de vectores dirigidos estándar, con regiones de homología con ADN endógeno que suman normalmente menos de 10-20 kn, para introducir la modificación genética deseada en las células madre embrionarias (ES) de ratón, seguido de la inyección de las células ES alteradas en embriones de ratones para transmitir estas modificaciones genéticas de ingeniería en la línea germinal del ratón (Smithies y col., Nature, 317:230-234,1985; Thomas y col., Cell, 51 :503-512,1987; Koller y col., Proc Natl Acad Sci USA, 86:89278931, 1989; Kuhn y col., Science, 254:707-710,1991; Thomas y col., Nature, 346:847-850,1990; Schwartzberg y col., Science, 246:799-803, 1989; Doetschman y col., Nature, 330:576-578, 1987; Thomson y col., Cell, 5:313-321, 1989; DeChiara y col., Nature, 345:78-80,1990; patente de EE.UU. n° 5,789,215, presentado el 4 de agosto de1998 en representación de GenPharm International). En estos procedimientos actuales, la detección de las células ES raras en las que los vectores dirigidos estándar se han dirigido correctamente y han modificado los gen(es) endógenos o locus(ci) cromosómicos deseados requiere información sobre la secuencia fuera de las secuencias homólogas dirigidos contenidas dentro del vector dirigido. Los ensayos para una dirección con éxito implican transferencia Southern estándar o una PCR larga (Cheng, y col., Nature, 369:684-5,1994; Foord y Rose, PCR Methods Appl, 3:S149-61, 1994; Ponce y Micol, Nucleic Acids Res, 20:623,1992; patente de EE.UU. n° 5,436,149 de Takara Shuzo Co., Ltd.) de las secuencias fuera del vector dirigido y abarcan un brazo de homología completo (véase Definiciones); por tanto, dado las grandes consideraciones que limitan estos procedimientos, el tamaño de los brazos de homología está restringido a menos de 10-20 kb en total (Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999).
La capacidad para usar vectores dirigidos como brazos de homología mayores que los usados en los procedimientos actuales sería extremadamente valiosa. Por ejemplo, dichos vectores dirigidos podrían generarse más rápida y convenientemente a partir de las bibliotecas disponibles que contienen insertos genómicos grandes (p. ej., bibliotecas BAC o PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales en las que los insertos genómicos tienen que caracterizarse extensamente y recortarse antes de usar. Además, modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se podrían generar más convenientemente y en menos etapas que usando las tecnologías actuales. Además, el uso de regiones largas de homología podría aumentar la frecuencia de dirección de los loci “difíciles de apuntar” en células eucariotas, ya que apuntar a la recombinación homologa en células eucariotas parece que está relacionada con la homología total contenida en el vector dirigido (Deng y Capecchi, Mol Cell Biol, 12: 3365-71, 1992). Además, la mayor frecuencia de la dirección obtenida usando brazos largos de homología podría disminuir cualquier posible beneficio que se pueda obtener del uso de ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
El problema de las modificaciones precisas mediante ingeniería en fragmentos genómicos muy grandes, como los clonados en las bibliotecas BAC, se ha resuelto en gran medida mediante el uso de recombinación homóloga en bacterias (Zhang, y col., Nat Genet, 20:123-8, 1998; Yang, y col., Nat Biotechnol, 15:859-65, 1997; Angrand, y col., Nucleic Acids Res, 27:e16,1999; Muyrers, y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Narayanan, y col., Gene Ther, 6:442-7,1999), que permite la construcción de vectores que contienen regiones grandes de homología con los genes endógenos o loci cromosómicos eucariotas. No obstante, una vez fabricados, estos vectores no han sido en general útiles para modificar genes endógenos o loci cromosómicos mediante recombinación homóloga por la dificultad en la detección de acontecimientos dirigidos correctos cuando los brazos de homología son más grandes que 10-20 kb (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999). En consecuencia, los vectores generados usando recombinación homóloga bacteriana de fragmentos genómicos de BC debe recortarse extensamente antes de usar como vectores dirigidos (Hill y col., Genomics, 64:111-3, 2000). Por tanto, existe la necesidad de una metodología rápida y conveniente que hace posible el uso de vectores dirigidos que contienen regiones grandes de homología de modo que se modifican los genes endógenos o los loci cromosómicos en células eucariotas.
El documento WO 99/45962 describe animales no humanos transgénicos que pueden producir anticuerpos heterólogos. El documento WO 91/00906 describe animales quiméricos y transgénicos que pueden producir anticuerpos humanos. El documento US 5 939 598 describe un procedimiento para fabricar ratones transgénicos que carecen de cadenas pesadas endógenas.
Se describen en este documento procedimientos nuevos que permiten el uso de vectores dirigidos que contienen regiones grandes de homología de modo que se modifican los genes endógenos o los loci cromosómicos en células eucariotas mediante recombinación homóloga. Dichos procedimientos superan las limitaciones descritas anteriormente de las tecnologías anteriores. Además, el experto en la técnica reconocerá fácilmente que los procedimientos se adaptan fácilmente para usar con cualquier ADN genómico de cualquier organismo eucariota incluidos, entre otros, animales tales como ratones, ratas, otros roedores o seres humanos, así como plantas tales como soja, maíz y trigo.
Sumario de la invención
La invención proporciona un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón, en donde los segmentos génicos V, D y J de un locus endógeno de región variable de cadena pesada de dicho ratón se reemplazanin situcon segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.
La invención proporciona además un procedimiento para fabricar un anticuerpo humano que comprende:
a) exponer dicho ratón de la invención e n el que adicionalmente los segmentos génicos V y J de un locus de la región variable de la cadena ligera kappa endógena se reemplaza in situ en total o en parte con segmentos del gen V y J de la cadena ligera kappa humana, a estimulación antigénica, de un modo tal que el ratón produce un anticuerpo contra el antígeno;
b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo;
c) unir operativamente la secuencia de ADN que codifica las regiones variables de (b) con ADN que codifica las regiones constantes de las cadenas pesada y ligera en una célula capaz de expresar anticuerpos activos; d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y
e) recuperar el anticuerpo.
De acuerdo con la presente divulgación, los solicitantes han desarrollado un nuevo procedimiento rápido, simple y eficiente para crear y detectar células eucariotas que contienen genes endógenos o loci cromosómicos modificados. Este nuevo procedimiento combina por primera vez:
1. Recombinación homóloga bacteriana para realizar una modificación genérica deseada mediante ingeniería en un fragmento genómico clonado grande, de modo que se crea un vector dirigido grande para usar en células eucariotas (LTVEC);
2. Introducción directa de estos LTEVC en las células eucariotas para modificar el locus cromosómico endógeno de interés en estas células; y
3. Un análisis para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo diana se ha modificado según se desea, que implica un ensayo para la modificación de alelos (MDA) del alelo parental que no requiere información sobre la secuencia fuera de la secuencia de acceso, tal como, por ejemplo PCR cuantitativa.
Se describe en este documento un procedimiento para modificar genómicamente un gen o locus cromosómico endógeno en células eucariotas, que comprende: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homologa bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande para (a) crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucariotas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente.
También se describe en este documento un procedimiento en el que la modificación genética del gen o locus cromosómico endógeno comprende deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; alteración de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; inserción de una nueva secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; creación de un alelo condicional; o sustitución de una secuencia de codificación o segmento génico de una especie con una secuencia de codificación homóloga u ortóloga de una especie diferente.
Además se describe en este documento un procedimiento en el que la alteración de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador comprende una sustitución, adición o fusión, en las que la fusión comprende un marcador epítopo o una proteína bifuncional.
También se describe en este documento un procedimiento en el que el ensayo cuantitativo comprende PCR cuantitativa, hibridación genómica comparativa, amplificación de ADN isotérmica o hibridación cuantitativa con una sonda inmovilizada, en la que la PCR cuantitativa comprende tecnología TaqMan® o PCR cuantitativa que usa balizas moleculares.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento en el que la célula eucariota es una célula madre embrionaria de mamífero y, en particular, en el que la célula madre embrionaria es una célula madre embrionaria de ratón, rata u otro roedor.
Además se describe en este documento un procedimiento en el que el gen o locus cromosómico endógeno es un gen o locus cromosómico de mamífero, preferentemente un gen o locus cromosómico humano o un gen o locus cromosómico de ratón, de rata o de otro roedor.
Adicionalmente se describe en este documento una en el que el LTVEC es capaz de acomodar fragmentos de ADN grandes de tamaño superior a 20 kb y, en particular, fragmentos de ADN grandes de tamaño superior a 100 kb. Además se describe en este documento un de gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente que se produce mediante el procedimiento descrito en este documento.
También se describe en este documento una célula eucariota modificada genéticamente que se produce mediante el procedimiento descrito en este documento.
Además se describe en este documento es un organismo no humano que contiene el gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante el procedimiento descrito en este documento.
También se describe un organismo no humano producido a partir de las células eucariotas genéticamente modificadas o las células madre embrionarias producidas mediante el procedimiento descrito en este documento. Se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande para (a) crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC) para usar en células madre embrionarias; c) introducir el LTVEC de (b) en las células madre embrionarias para modificar el gen o locus endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células madre embrionarias en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) introducir la célula madre embrionaria de (d) en un blastocisto y f) introducir el blastocisto de € en una madre sustituta para la gestación.
Adicionalmente se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucarióticas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) eliminar el núcleo de la célula eucariótica de (d); f) introducir el núcleo de (e) en un oocito y (g) introducir el oocito de (f) en una madre sustituía para la gestación.
Además se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucarióticas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) fusionar la célula eucariótica de (d) con otra célula eucariota; f) introducir la célula eucariota fusionada de (e) en una madre sustituta para la gestación.
Preferiblemente el organismo no humano es un ratón, rata u otro roedor; el blastocisto es un blastocisto de ratón, rata u otro roedor; el oocito es un oocito de ratón, rata u otro roedor; y la madre sustituta es un ratón, rata u otro roedor.
Preferiblemente la célula madre embrionaria es una célula madre embrionaria de mamífero, preferentemente una célula madre embrionaria de ratón, rata u otro roedor.
También se describe en este documento el uso de las células eucariotas modificadas genéticamente de la invención para la producción de un organismo no humano y, en concreto, el uso de la célula madre embrionaria modificada genéticamente descrito en este documento para la producción de un organismo no humano.
Adicionalmente se describe en este documento es un procedimiento para modificar genómicamente un gen o locus cromosómico endógeno de interés en células madre embrionarias de ratón, que comprende: a) obtener un fragmento genómico clonado grande de más de 20 kb que contiene una secuencia de ADN de interés, en el que el fragmento de ADN grande clonado es homólogo al gen o locus cromosómico endógeno; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células madre embrionarias de ratón, en el que la modificación genética es la deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar la modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente, en el que el ensayo cuantitativo es PCR cuantitativa. También se prefiere una célula madre embrionaria de ratón modificada genéticamente producida mediante este procedimiento; un ratón que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido por este procedimiento; y un ratón producir a partir de las células madre embrionarias modificadas genéticamente. Además se describe en este documento es un ratón que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente de interés, producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande de más de 20 kb que contiene una secuencia de ADN de interés, en el que el fragmento de ADN grande clonado es homólogo al gen o locus cromosómico endógeno; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células madre embrionarias de ratón, en el que la modificación genética es la deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar la modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente, en el que el ensayo cuantitativo es PCR cuantitativa; e) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; y f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
También se describe en este documento el uso de la célula madre embrionaria de ratón modificada genéticamente descrita anteriormente para la producción de un ratón.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula eucariota no humana, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con un locus génico humano homólogo u ortólogo que comprende:
a) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene, todo o parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo;
b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de (a) para crear un vector dirigido para usar en células eucariotas (LTVEC);
c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y
d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucariotas en las que el locus génico de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico endógeno humano homólogo u ortólogo.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula eucariota no humana, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con un locus génico humano homólogo u ortólogo que además comprende las etapas de:
e) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene una parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo que difiere del fragmento de (a);
f) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de (e) para crear un segundo LTVEC;
g) introducir el segundo LTVEC de (f) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y
h) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (g) para identificar las células eucariotas en las que el locus génico de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico endógeno humano homólogo u ortólogo.
Otro aspecto del procedimiento anterior es un procedimiento en el que las etapas (e) a (h) se repiten hasta que el locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina se sustituye totalmente o en parte con un locus génico humano homólogo u ortólogo.
Otra realización del procedimiento es uno en el que el locus génico variable de la inmunoglobulina es un locus seleccionado del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
Es preferido un procedimiento en el que el ensayo cuantitativo comprende PCR cuantitativa, FISH, hibridación genómica comparativa, amplificación de ADN isotérmica o hibridación cuantitativa con una sonda inmovilizada y, en concreto, en la que la pCr cuantitativa comprende tecnología TaqMan® o PCR cuantitativa que usa balizas moleculares.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula madre embrionaria, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con su locus génico humano homólogo u ortólogo, que comprende:
a) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene, todo o parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo;
b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido para usar en células madre embrionarias;
c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina en las células; y
d) usar un ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón (d) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus génico endógeno variable se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico humano homólogo u ortólogo.
En otro aspecto descrito en este documento, el procedimiento comprende además:
e) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene una parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo que difiere del fragmento de (a);
f) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de (e) para crear un vector dirigido grande para usar en células madre embrionarias;
g) introducir el vector dirigido grande de (f) en las células madre embrionarias de ratón identificadas en la etapa (d) para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y
h) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (g) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico humano homólogo u ortólogo.
Otro aspecto más preferido es un procedimiento en el que las etapas (e) a (h) anteriores se repiten hasta que el locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina se sustituye totalmente con un locus génico humano homólogo u ortólogo.
También se prefiere un procedimiento en el que el locus génico variable de la inmunoglobulina es un locus seleccionado del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
También se describe en este documento un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido por los procedimientos descritos anteriormente; una célula eucariota modificada genéticamente que comprende un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente; un organismo no humano que comprende un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente; y una célula madre embrionaria de ratón que contiene un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente. También se describe en este documento una célula madre embrionaria en la que el locus de la región variable de la cadena pesada de ratón se ha sustituido, totalmente o en parte, con un locus génico variable de la cadena pesada humana; una célula madre embrionaria de la reivindicación en la que el locus de la región variable de la cadena ligera kappa de ratón se ha sustituido, todo o parte, con un locus de la región variable de la cadena ligera kappa humana; una célula madre embrionaria en la que el locus de la región variable de la cadena ligera lambda de ratón se ha sustituido, totalmente o en parte, con un locus de la región variable de la cadena ligera lambda humana; y una célula madre embrionaria en la que los locus génicos de la región variable de las cadenas ligera y pesada se han sustituido, totalmente o en parte, con sus homólogos u ortólogos humanos.
Adicionalmente se describe en este documento un ratón producido a partir de las células madre embrionarias descritas anteriormente.
Además se describe en este documento un anticuerpo que comprende una región variable humana codificada por el locus génico variable genéticamente modificado descrito anteriormente; un anticuerpo que además comprende una región constante no humana; y un anticuerpo que además comprende una región constante humana.
Adicionalmente se describe en este documento un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende los loci de la región variable de las cadenas pesada y ligera completamente humanas unidos operablemente a los loci de la región constante de ratón completamente endógenos, de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a estimulación antigénica; un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende los loci de la región variable de las cadenas pesada y/o ligera humanas unidos operablemente a los loci de la región constante de ratón endógenos de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a estimulación antigénica; un ratón transgénico que contiene un locus de la región variable endógena que se ha sustituido con un locus variable humano homólogo u ortólogo, produciéndose dicho ratón mediante un procedimiento que comprende:
a) obtener uno o más fragmentos genómicos grandes clonados que contienen, todo o parte, el locus génico de la región variable humana homólogo u ortólogo;
b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el(los) fragmento(s) genómico(s) clonado(s) de (a) para crear un vector(es) dirigido(s) grande(s) para usar en células madre embrionarias de ratón;
c) introducir vector(es) dirigido(s) grande(s) de (b) en las células madre embrionarias de ratón para sustituir, todo el locus endógeno de la región variable en las células; y
d) usar un ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus endógeno de la región variable se ha sustituido con el locus de la región variable humana homólogo u ortólogo; e) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; y
f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
También se describe en este documento un ratón transgénico descrito anteriormente en el que el locus génico de la región variable de la inmunoglobulina comprende uno o más loci seleccionados del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
También se prefieren los procedimientos descritos anteriormente en los que la célula madre embrionaria deriva de un ratón transgénico producido por los procedimientos.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de fabricar un anticuerpo humano que comprende: a) exponer el ratón descrito anteriormente a estimulación antigénica, de un modo tal que el ratón produce un anticuerpo contra el antígeno;
b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo;
c) unir operablemente el ADN que codifica las regiones variables de (b) a ADN que codifica las regiones constantes de las cadenas pesada y ligera en una célula capaz de expresar anticuerpos activos;
d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y
e) recuperar el anticuerpo.
Preferiblemente, la célula descrita anteriormente es una célula CHO.
También se prefiere un procedimiento donde el ADN de la etapa (b) descrito anteriormente se aísla de un hibridoma creado a partir del bazo del ratón expuesto a estimulación antigénica en la etapa (a) descrita anteriormente.
También se prefiere el procedimiento descrito anteriormente en el que el ADN se aísla mediante PCR.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, todo o parte, de un locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina con un locus génico homólogo u ortólogo, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus génico variable; b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus génico variable;
c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota;
d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico de la región variable endógena.
e) crear un vector que contiene secuencias de recombinación específicas de sitio que flanquean todo o parte del locus génico ortólogo u homólogo; y
f) introducir el vector de (e) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) tal como mediante recombinación, el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina está sustituido, todo o en parte, con el locus génico homólogo u ortólogo.
También se describe en este documento un ratón transgénico que contiene un locus endógeno de la región variable de inmunoglobulina que se ha sustituido con un locus de la región variable de inmunoglobulina humana homólogo y ortólogo, produciéndose dicho ratón mediante un procedimiento que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina de ratón;
b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio y un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina de ratón;
c) introducir el LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno de la región variable.
d) crear un vector que contiene secuencias de recombinación específicas de sitio que flanquean todo o parte del locus génico ortólogo u homólogo;
e) introducir el vector de (e) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) tal como mediante recombinación, el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina está sustituido, todo o en parte, con el locus génico homólogo u ortólogo;
f) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; e f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado cadena abajo por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene una región que flanquea al extremo 3' de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus;
b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y
c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (b) en las que el locus génico endógeno está flanqueado cadena abajo por el sitio de recombinación específico de sitio.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado cadena arriba por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene una región que flanquea al extremo 5' de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus;
b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y
c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (b) en las que el locus génico endógeno está flanqueado cadena arriba por el sitio de recombinación específico de sitio.
También se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene una región que flanquea al extremo 3' de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus;
b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene una región que flanquea al extremo 5' de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus;
c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; y
d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende: a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus génico variable; b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y
c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (b) en las que el sitio de recombinación específico de sitio flanquea al extremo cadena abajo del locus génico variable inmunovariable endógeno.
También se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por sitios de recombinación específicos de sitio, que comprende: a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus;
b) introducir el LTVEC de (a) en la célula eucariota; y
c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al extremo cadena arriba del locus génico endógeno de la región variable.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por sitios de recombinación específicos de sitio, que comprende: a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus;
b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo cadena abajo dentro del locus;
c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; y
d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina.
Breve descripción de las figuras
Figura 1:Diagrama esquemático de la generación de un LTEVC típico usando recombinación homologa bacteriana. (hb1 = caja de homología 1; hb2 = caja de homología 2; RE =sitio para enzimas de restricción).Figura 2:Diagrama esquemática de un fragmento donante y LTVEC para OCR10 de ratón.
(hb1 =caja de homología 1; lacZ =ORF de la p-galactosidasa; SV40 poliA = fragmento de ADN derivado del virus simio 40 que contiene un sitio de poliadenilación y una señal; PGKp = promotor de la fosfoglicerato quinasa (PGK) de ratón; EM7= un promotor bacteriano; neo= neomicina fosfotransferasa; PGK poliA) región no traducida en 3' derivada del gen de la PGK y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal; hb2 = caja de homología 2).
Figura 3A-3D:Secuencia del ADNc de OCR10 de ratón, caja de homología 1 (hb1), caja de homología 2 (hb2) y sondas TaqMan® y cebadores usados en el ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en células E diana usando el ÑTVEC de mCOR10.
hb1: Pares de bases 1 a 211
hb2: pares de bases 1586 a 1801
Sonda TaqMan® y el correspondiente conjunto de cebadores para PCR derivados del exón 3 de Mocr10:
sonda TaqMan®: nucleótidos 413 a 439- hebra superior
Cebador ex 3-5': nucleótidos 390 a 410- hebra superior
Cebador ex 3-3': nucleótidos 445 a 461- hebra inferior
Sonda TaqMan® y el correspondiente conjunto de cebadores para PCR derivados del exón 4 de mOCR10:
sonda TaqMan®: nucleótidos 608 a 639- hebra superior
Cebador ex 4-5': nucleótidos 586 a 605- hebra superior
Cebador ex 4-3': nucleótidos 642 a 662- hebra inferior
Figura 4A-4D:Diagrama esquemático de los dos LTVEC construidos para sustituir la región VDJ de ratón con la región VDJ humana.
Figura 4A:Se aíslan clones de inserto grande (BAC) que abarcan la región VDJ completa del locus de la cadena pesada humana
Figura 4B:En este ejemplo se aíslan clones de insertos grandes (BAC) de los extremos de la región VDJ de ratón como fuente de brazos de homología que se usan para dirigir la integración mediante recombinación homóloga de las secuencias VDJ humanas en un procedimiento de dos etapas:
Figura 4C-4D:En la primera etapa, el LTVEC1 (Figura 4D) está construido mediante recombinación homóloga en el LTVEC1 deE. coli.El LTVEC1 contiene, en orden: Un brazo de homología grande de ratón derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-neomicina en este ejemplo); un sitio IoxP; un inserto humano grande que abarca varios segmentos génicos V a través de toda la región DJ; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. En la segunda etapa, el LTVEC2 (Figura 4C) está construido mediante recombinación homóloga bacteriana en el LTVEC2 deE. coli,en orden: Un brazo grande de homología de ratón que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ningún segmento génico V de ratón; un inserto grande que contiene un número grande de segmentos génicos V humanos distales; un sitio IoxP mutante denominado lox511 en orientación opuesta a la de los sitios IoxP de tipo silvestre en LTVEC2 y LTVEC1(este sitio no se recombinará con los sitios IoxP silvestres, pero se recombinarán fácilmente con otros sitios Iox511); un sitio IoxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGK-higromicinaR en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes.
Definiciones
Un “vector dirigido” es una construcción de ADN que contiene secuencias "homólogas" a las secuencias de ácido nucleico cromosómico endógeno que flanquean una(s) modificación(es) genética(s) deseada(s). Las secuencias de homología flanqueantes, denominadas “brazos de homología”, dirigen el vector dirigido a una localización cromosómica específica dentro del genoma en virtud de la homología que existe entre los brazos de homología y la correspondiente secuencia endógena e introducen la modificación genética deseada mediante un procedimiento denominado “recombinación homóloga”.
“Homólogo” significa dos o más secuencias de ácido nucleico que son idénticas o lo bastante similares como para ser capaces de hibridar entre sí o sufrir intercambio intermolecular.
“Direccionalidad génica” es la modificación de un locus cromosómico endógeno mediante la inserción, deleción o sustitución de la secuencia endógena mediante recombinación homóloga usando un vector dirigido.
Una “inactivación de gen" es una modificación genética resultante de la alteración de la información genética codificada en un locus cromosómico.
Una “activación de gen" es una modificación genética resultante de la sustitución de la información genética codificada en un locus cromosómico con una secuencia de ADN diferente.
Un "organismo inactivado” es un organismo en el que una proporción significativa de las células del organismo aloja una inactivación génica.
Un "organismo activado” es un organismo en el que una proporción significativa de las células del organismo aloja una activación génica.
Un "marcador" o un "marcador seleccionable" es un marcador de selección que permite el aislamiento de células transfectadas raras que expresan el marcador a partir de la mayoría de las células tratadas en la población. Dichos marcadores génicos incluyen, entre otros, la neomicina fosfotransferasa y la higromicina B fosfotransferasa o proteínas fluorescentes tales como GFP.
Una "célula ES” es una célula madre embrionaria. Esta célula normalmente deriva de la masa de células internas de un embrión en la etapa de blastocisto.
Un “clon de células ES” es una subpoblación de células derivadas de una única célula de la población de células ES tras la introducción de ADN y la posterior selección.
Un “ADN flanqueante” es un segmento de ADN que es colineal y adyacente a un punto de referencia concreto. “LTVEC” son vectores grandes dirigidos a células eucariotas derivados de fragmentos de ADN genómico clonado más grandes que los habitualmente usados por otros abordajes destinados a la direccionalidad homóloga en células eucariotas.
Un “organismo no humano” es un organismo que normalmente no es aceptado por el público como humano.
“Modificación de alelo” (MDA) se refiere a la modificación de la secuencia de ADN exacta de un alelo de un(os) gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) en un genoma. Esta modificación de alelo” (MDA) incluye, entre otras, deleciones, sustituciones o inserciones de tan poco como un único nucleótido o deleciones de muchas kilobases que abarcan un(os) gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) de interés, así como cualquier y todas las modificaciones posibles entre estos dos extremos.
Secuencia “ortóloga” se refiere a una secuencia de una especie que es el equivalente funcional de dicha secuencia en otra especie.
La descripción y los ejemplos que se presentan más adelante se proporcionan para ilustrar la invención sujeto. Un experto en la técnica reconocerá que estos ejemplos se proporcionan a modo de ilustración únicamente y no están incluidos con el fin de limitar la invención.
Descripción detallada de la invención
Los solicitantes han desarrollado un nuevo procedimiento rápido, simple y eficiente para crear y detectar células eucariotas que contienen genes endógenos o loci cromosómicos modificados. En estas células, la modificación puede ser inactivación y activación de gen(es), mutaciones puntuales o grandes inserciones o deleciones genómicos u otras modificaciones. A modo de ejemplo no limitante, estas células pueden ser células madre embrionarias que son útiles para crear organismos inactivos o activos y, en particular, ratones inactivos o activos, con el fin de determinar la función del o los gen(es) que se han alterado, delecionado y/o insertado.
Los nuevos procedimientos descritos en el presente documento combinan por primera vez:
1. Recombinación homóloga bacteriana para realizar una modificación genérica deseada mediante ingeniería en un fragmento genómico de ADN clonado grande, de modo que se crea un vector dirigido grande para usar en células eucariotas (LTVEC);
2. Introducción directa de estos LTEVC en las células eucariotas para modificar el correspondiente gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) endógeno(s) de interés en estas células; y
3. Un análisis para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo diana se ha modificado según se desea, que implica un ensayo cuantitativo para la modificación de alelos (MDA) del alelo parental.
Cabe destacar que los procedimientos anteriores para detectar recombinación homóloga satisfactoria en células eucariotas no se pueden usar junto con los LTVEC de la divulgación_de los solicitantes porque los brazos largos de homología presente en los LTVEC. Usando un LTVEC para modificar deliberadamente genes o loci cromosómicos endógenos en células eucariotas mediante recombinación homóloga se hace posible mediante la nueva aplicación de un ensayo para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo dirigido se ha modificado según se desee, en el que dicho ensayo implica un ensayo cuantitativo para la modificación de alelo (MDA) de un alelo parental, usando, por ejemplo, PCR cuantitativa u otros ensayos cuantitativos adecuados para MDA.
La capacidad para usar vectores dirigidos como brazos de homología mayores que los usados en los procedimientos actuales es extremadamente valiosa por los motivos siguientes:
1. Los vectores dirigidos se pueden generar más rápida y convenientemente a partir de las bibliotecas disponibles que contienen insertos genómicos grandes (p. ej., bibliotecas BAC o PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales en las que los insertos genómicos tienen que caracterizarse extensamente y “recortarse” antes de usar (explicado con detalle más adelante). Además, tiene que conocerse , la información mínima de la secuencia sobre el locus de interés, es decir solo es necesario conocer los aproximadamente 80-100 nucleótidos que se requieren para generar las cajas de homología (descritas con detalle más adelante) y para generar sondas que se puedan usar en ensayos cuantitativos para MDA (descrito con detalle más adelante).
2. Modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se generan más convenientemente y en menos etapas que usando las tecnologías anteriores. Por ejemplo, el procedimiento descrito en este documento posibilita la modificación precisa de loci grandes que no se pueden acomodar mediante vectores dirigidos basados en plásmidos tradicionales por sus limitaciones de tamaño. También posibilita la modificación de cualquier locus dado en múltiples puntos (p. ej., la introducción de mutaciones específicas en diferentes exones de un gen multiexón) en una etapa, de modo que se alivia la necesidad de realizar ingeniería de múltiples vectores diana para realizar ciclos de direccionalidad y detección selectiva de recombinación homóloga en células ES.
3. El uso de regiones largas de homología (brazos de homología largos) aumenta la frecuencia de dirección de los loci “difíciles de apuntar” en células eucariotas, coherente con los hallazgos previos de que dirigir la recombinación homóloga en células eucariotas parece estar relacionada con la homología total contenida en el vector dirigido.
4. La mayor frecuencia de la dirección obtenida usando brazos largos de homología aparentemente disminuye el beneficio, si existe alguno, que se pueda obtener del uso de ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
5. La aplicación de ensayos de MDA cuantitativos para la detección selectiva de células eucariotas para recombinación homóloga no solo refuerza el uso de LTVEC como vectores dirigidos (ventajas indicadas anteriormente) sino que también reduce el tiempo para identificar las células eucariotas modificadas correctamente desde los típicos varios días a unas pocas horas. Además, la aplicación de MDA cuantitativo no requiere el uso de sondas localizadas fuera del gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) endógeno(s) que se están modificando, de modo que se obvia la necesidad de conocer la secuencia que flanquea el(los) gen(es) o locus (loci) modificado(s). Esta es una mejora significativa del modo en el que se ha realizado la detección selectiva en el pasado y lo convierte en un abordaje hace menos trabajoso y mucho más rentable para la detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas.
Procedimientos
Muchas de las técnicas usadas para construir vectores de ADN descritos en el presente documento son técnicas de biología molecular estándar bien conocidas para el experto en la técnica (p. ej., Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vol. 1, 2 y 3, 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Eds. Ausubel, y col., Greene Publ. Assoc., Wiley-Interscience, NY). Toda la secuenciación del ADN se realiza mediante técnicas estándar usando un secuenciador ABI 373A y kit de secuenciación y Taq Dideoxy Terminator (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA).
Etapa 1. Obtención de un clon grande de ADN aenómico que contiene el(los) aen(es) o locus (loci) cromosómico(s) de interés.
Un gen(es) o locus (loci) de interés se puede seleccionar en base a criterios específicos, tal como datos estructurales o funcionales detallados, o se puede seleccionar en ausencia de dicha información detallada ya que los potenciales genes o fragmentos génicos se predicen mediante los esfuerzos de los diversos proyectos de secuenciación genómica. Es importante que cabe destacar que no es necesario conocer la secuencia completa y la estructura génica de un gen(es) de interés para aplicar el procedimiento descrito en este documento_para producir LTVEC. De hecho, la única información de secuencia que se requiere es aproximadamente 80.100 nucleótidos para obtener el clon genómico de interés, así como para generar las cajas de homología usadas en la fabricación del LTEVC (descrito con detalle más adelante) y para fabricar sondas para usar en ensayos de MDA cuantitativos.
Una vez que se ha seleccionado un(os) gen(es) o locus (loci) de interés se obtiene un clon(es) genómico(s) grande(s) que contiene(n) este(os) gen(es) o locus (loci). Este(os) clon(es) se pueden obtener de uno cualquiera de varios modos, incluidos, entre otros, detección selectiva de bibliotecas de ADN adecuadas (p. ej., BAC, PAC, YAC o cósmicos) mediante técnicas hibridación estándar o PCR o mediante cualquier otro procedimiento familiar para el experto en la técnica.
Etapa 2. Fijación de las cajas de homología 1 y 2 a un casete y generación de LTVEC.
Las cajas de homología marcan los sitios de recombinación homologa bacteriana que se usan para generar LTVEC a partir de fragmentos genómicos clonados grandes (Figura 1). Las cajas de homología son segmentos cortos de ADN, generalmente bicatenarios y de al menos 40 nucleótidos, que son homólogos a regiones dentro del fragmento genómico clonado grande que flanquea la “región que se va a modificar". Las cajas de homología se unen al casete de modificación de modo que tras la recombinación homóloga en bacterias, el casete de modificación sustituye a la región que se va a modificar (Figura 1). La técnica de crear un vector dirigido usando recombinación homóloga bacteriana se puede realizar en diversos sistemas (Yang y col., Nat Biotechnol, 15:859-65, 1997; Muyrers y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Angrand y col., Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7, 1999; Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). Un ejemplo de una tecnología favorecida actualmente en uso en la clonación de ET (Zhang y col., Nat Genet, 20:123-8,1998; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7,1999) y variaciones de esta tecnología (Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). ET se refiere al recE (Hall y Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91:3205-9,1994) y las proteínas recT (Kusano y col., Gene, 138:17-25,1994) que portan la reacción de recombinación homóloga. RecE es una exonucleasa que recorta una hebra de ADN bicatenaria lineal (esencialmente el fragmento de ADN donante descrito más adelante) de 5' a 3', dejando detrás un fragmento bicatenario lineal con un saliente monocatenario en 3'. Este saliente monocatenario está recubierto por la proteína recT, que tiene actividad de unión de ADN monocatenario (ssADN) (Kovall y Matthews, Science, 277: 1824-7,1997). La clonación de ET se realiza usandoE. colique expresa de forma transitoria productos génicos deE. coli derecE y recT (Hall y Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91 :3205-9,1994; Clark y col., Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 49: 453-62,1984; Noirot y Kolodner, J Bioi Chem, 273:12274-80,1998; Thresher y col., J Mol Bioi, 254:364-71,1995; Kolodner y col., Mol Microbiol, 11 :23-30,1994; Hall y col., J Bacteriol, 175:277-87,1993) y la proteína Agam del bacteriófago lambda (A) (Murphy, J Bacteriol, 173:5808-21, 1991; Poteete y col., J Bacteriol, 170:2012-21, 1988). La proteína Agam se requiere para proteger el fragmento de ADN donante de la degradación por el sistema de exonucleasas recBC (Myers y Stahl, Annu Rev Genet, 28:49-70,1994) y se requiere para una eficiente clonación de ET en huéspedes recBC+ tal como la cepa DH10b deE. coli.
La región que se va a modificar y sustituir usando recombinación homóloga bacteriana puede variar de cero nucleótidos de longitud (creando una inserción en el locus original) a muchas decenas de kilobases (creando una deleción y/o sustitución del locus original). Dependiendo del casete de modificación, la modificación puede tener como resultado lo siguiente:
(a) deleción de secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores;
(b) alteración(es) de las secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores, incluidas sustituciones, adiciones y fusiones (p. ej., marcadores epítopos o creación de proteínas bifuncionales como las que tiene GFP);
(c) inserción de nuevas secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores, como aquéllas para genes marcadores seleccionables o genes indicadores o colocación de genes nuevos bajo control de la transcripción endógeno;
(d) creación de alelos condicionales mediante, por ejemplo, la introducción de sitios IoxP que flanquean a la región que se va a escindir por la Cre recombinasa (Abremski y Hoess, J Bioi Chem, 259:1509-14, 1984), o sitios FRT que flanquean a la región va a escindir la Flp recombinasa (Andrews y col., Cell, 40:795-803, 1985; Meyer-Leon y col., Cold Spring Harb Symp Quant Bioi, 49:797-804,1984; Cox, Proc Natl Acad Sci USA, 80:4223-7,1983); o
(e) sustitución de secuencias de codificación o segmentos génicos de una especie con secuencias de codificación ortólogas de una especie diferente, por ejemplo sustituyendo un locus genético murino con el locus genético humano ortólogo para someter a ingeniería a un ratón en el que el locus concreto se ha “humanizado”. Cualquiera o todas estas modificaciones se puede incorporar en un LTVEC. Más adelante, en el Ejemplo 1, se proporciona un ejemplo específico no limitante en el que una secuencia de codificación endógena está completamente delecionada y sustituida simultáneamente con un gen indicador así como un marcador seleccionable, además de las ventajas del procedimiento descrito en este documento_en comparación con las tecnologías anteriores.
Etapa 3 (opcional). Verificar que cada LTVEC se ha sometido a ingeniería correctamente.
Verificar que cada LTVEC se ha sometido a ingeniería correctamente mediante:
a. PCR diagnóstico para verificar las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés, Los fragmentos de PCR obtenidos de este modo se pueden secuenciar para verificar adicionalmente las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés,
b. Digestión diagnóstica con enzimas de restricción para garantizar que solo las modificaciones deseadas se han introducido en el LTEVC durante el proceso de recombinación homóloga bacteriana.
c. Secuenciación directa de los LTVEC, en concreto las regiones que abarcan el sitio de modificación para verificar las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés.
Etapa 4. Purificación, preparación y linealización del ADN de LTVEC para introducción en células eucariotas.
a. Preparación de ADN de LTVEC:
Preparar ADN miniprep. (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vols 1,2 y 3, 1989; Tillett and Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572, 1998; http://www.qiagen.com/ literature/handbooks/plkmini/ plm_399.pdf) del LTVEC seleccionada y retransformar el ADN miniprep de LTVEC enE. coliusando electroporación (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1, 2, and 3,1989). Esta etapa es necesaria para deshacerse del plásmido que codifica las proteínas recombinogénicas que se usan para la etapa de recombinación homóloga bacteriana (Zhang y col., Nat Genet, 20:123-8, 1998; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7,1999). Es útil deshacerse de este plásmido (a) porque es un plásmido de un número elevado de copias y puede reducir los rendimientos obtenidos en las preparaciones de LTVEC a gran escala; (b) eliminar la posibilidad de inducir la expresión de las proteínas recombinogénicas y (c) porque puede enmascarar el mapeo físico del LTVEC. Antes de introducir el LTEVC en las células eucariotas se preparan cantidades más grandes de ADN de LTEVC mediante metodología estándar (http://www.qiagen.com/literature/handbooks/plk/plklow.pdf; Sambrook, J., E. F. Fritsch And 1. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vols 1,2 y 3,1989; Tillett and Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572,1998). No obstante, esta etapa se puede sortear si se usa un procedimiento de recombinación homóloga bacteriana que usa un profago recombinogénico, es decir donde los genes que codifican las proteínas recombinogénicas se integran en el cromosoma bacteriano (Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000).
b. Linealización del ADN de LTVEC:
Para preparar el LTVEC para la introducción en células eucariotas, el LTVEC se linealiza preferentemente de un modo que deja el ADN del (los) gen(es) endógeno(s) modificado(s) o el locus (loci) cromosómico flanqueado por brazos largos de homología. Esto se puede conseguir linealizando el LTEVC, preferentemente en la estructura del vector, con cualquier enzima de restricción que solo digiere rara vez. Ejemplos de enzimas de restricción adecuadas incluyen Notl, Pacl, Sfil, Srfl, Swal, Fsel, etc. La elección de la enzima de restricción se puede determinar experimentalmente (es decir, analizando varias cortadoras raras candidatas diferentes) o, si la secuencia del LTVEC se conoce, analizando la secuencia y eligiendo una enzima de restricción adecuada en base al análisis. En situaciones en las que el LTVEC tiene una estructura del vector que contiene sitios ratos tales como CosN, después se puede escindir con enzimas que reconocen dichos sitios, por ejemplo X terminasa (Shizuya y col., Proc Natl Acad Sci USA, 89: 8794-7,1992; Becker y Gold, Proc Natl Acad Sci USA, 75:4199-203,1978; Rackwitz y col. Gene, 40:259-66,1985).
Etapa 5. Introducción del LTVEC en las células eucariotas y selección de células en las que ha tenido lugar la introducción satisfactoria del LTVEC.
El ADN del LTVEC se puede introducir en células eucariotas usando metodología estándar, tal como transfección mediada por fosfato cálcico, lípidos o electroporación (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1,2, y 3,1989). Las células en las que se ha introducido con éxito el LTVEC se pueden seleccionar mediante exposición a agentes de selección, dependiendo del gen del marcador seleccionable que se ha sometido a ingeniería en el LTVEC. Como ejemplo no limitante, si el marcador seleccionable es el gen de la neomicina fosfotransferasa (neo) Beck, y col., Gene, 19:327-36,1982), las células que han captado el LTVEC se pueden seleccionar en medio que contiene G418; las células que no tienen LTVEC morirán, mientras que las células que han captado el LTVEC sobrevivirán (Santerre, y col., Gene, 30:147-56,1984). Otros marcadores seleccionables adecuados incluyen cualquier fármaco que tenga actividad en células eucariotas (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999), tal como higromicina B (Santerre, y col., Gene, 30:147-56,1984; Bernard, y col., Exp Cell Res, 158:237-43, 1985; Giordano y McAllister, Gene, 88:285-8,1990), Blasticidina S (Izumi, y col., Exp Cell Res, 197:229-33, 1991), y otros que son familiares para los expertos en la técnica.
Etapa 6. Detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas usando ensayo cuantitativo para la modificación de alelo (MDA).
Las células eucariotas que se han modificado con éxito dirigiendo el LTVEC en el locus de interés se pueden identificar usando diversos abordajes que pueden detectar la modificación de alelo dentro del locus de interés y que no dependen de ensayos que abarcan la totalidad del brazo o brazos de homología. Dichos abordajes pueden incluir, entre otros:
(a) PCR cuantitativa usando TaqMan® (Lie y Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:43-8, 1998);
(b) Ensayo de MDA cuantitativo usando balizas moleculares (Tan, y col., Chemistry, 6:1107-11,2000)
(c) Hibridación de fluorescencia in situ FISH (Laan, y col., Hum Genet, 96:275-80,1995) o hibridación genómica comparativa (CGH) (Forozan, y col. Trends Genet, 13:405-9, 1997; Thompson y Gray, J Cell Biochem Suppl, 139-43,1993; Houldsworth y Chaganti, Am J Pathol, 145:1253-60, 1994);
(d) Amplificación de ADN isotérmica (Lizardi, y col., Nat Genet, 19:225-32, 1998; Mitra y Church, Nucleic Acids Res, 27:e34, 1999); y
(e) Hibridación cuantitativa con una sonda(s) inmovilizada (s) (Southern, J. Mol. BioI., 98: 503,1975; Kafatos FC; Jones CW; Efstratiadis A, Nucleic Acids Res 7(6):1541 -52,1979).
Los solicitantes proporcionan en el presente documento un ejemplo en el que se usa PCR cuantitativa TaqMan® para la detección selectiva con éxito de células eucariotas diana. En este ejemplo no limitante, se usa TaqMan® para identificar células eucariotas que han sufrido recombinación homóloga en la que una porción de uno de dos alelos endógenos en un genoma diploide se ha sustituido por otra secuencia. En contraste con los procedimientos tradicionales en los que una diferencia en la longitud del fragmento de restricción que abarca la totalidad del brazo o brazos de homología indica la modificación de uno de dos alelos, el procedimiento TaqMan® cuantitativo detectará la modificación de un alelo midiendo la reducción del número de copias (por la mitad) del alelo no modificado. Específicamente, la sonda detecta el alelo no modificado y no el alelo modificado. Por tanto, el procedimiento es independiente de la naturaleza exacta de la modificación y no está limitado a la sustitución de secuencia descrita en este ejemplo. TaqMan se usa para cuantificar el número de copias de un molde de ADN en una muestra de ADN genómico, especialmente por comparación con un gen de referencia (Lie y Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:43-8, 1998). El gen de referencia se cuantifica en la muestra de ADN genómico como el(los) gen(es) o locus (loci) diana. Por tanto se realizan dos amplificaciones TaqMan® (cada uno con su correspondiente sonda). Una sonda TaqMan® determina el "Ct" (ciclo umbral) del gen de referencia, mientras que la otra sonda determina el Ct de la región del (los) gen(es) o locus (loci) diana que se sustituye al funcionar como diana con éxito. El Ct es una cantidad que refleja la cantidad de ADN de partida para cada una de las sondas TaqMan®, es decir una secuencia menos abundante requiere más ciclos de PCR para alcanzar el ciclo umbral. Disminuyendo a la mitad el número de copias de la secuencia molde para una reacción TaqMan® tendrá como resultado un incremento de aproximadamente una unidad Ct. Las reacciones TaqMan® en las células en las que un alelo del gen(es) o locus (loci) diana se ha sustituido mediante recombinación homóloga tendrá como resultado un incremento de un Ct para la reacción TaqMan® diana sin un incremento del Ct para el gen de referencia cuando se compara con el ADN de células no diana. Esto permite la fácil detección de la modificación de un alelo del o los genes de interés en células eucariotas usando LTVEC.
Como se ha indicado antes, la detección selectiva de la modificación de alelo (MDA) es el uso de cualquier procedimiento que detecta la modificación de un alelo para identificar las células que han sufrido recombinación homóloga. No es un requisito que los alelos diana sean idénticos (homólogos) entre sí y, de hecho, pueden contener polimorfismos, como es el caso en la progenie resultante de cruzar dos cepas diferentes de ratones. Además, Una situación especial que también está cubierta por la detección selectiva de MDA es apuntar a los genes que normalmente están presentes como una única copia en las células, tales como algunos de los localizados en los cromosomas sexuales y, en particular, en el cromosoma Y. En este caso, los procedimientos que detectarán la modificación del único alelo diana, tal como PCR cuantitativa, transferencias Southern, etc., se pueden usar para detectar el acontecimiento diana. Está claro que el procedimiento descrito en este documento se puede usar para generar células eucariotas modificadas incluso cuando los alelos son polimórficos o cuando están presentes en una única copia en las células diana.
Etapa 8. Usos de células eucariotas genéticamente modificadas.
(a) Las células eucariotas genéticamente modificadas generadas mediante los procedimientos descritos en las etapas 1 a 7 se pueden usar en cualquier ensayoin vitrooin vivo,en las que cambiar el fenotipo de la célula es deseable.
(b) La célula eucariota modificada genéticamente generada mediante los procedimientos descritos en las etapas 1 a 7 también se pueden usar para generar un organismo portador de la modificación genética. Los organismos genéticamente modificados se pueden generar mediante varias técnicas diferentes, incluidas, entre otras:
1. Células madre embrionarias (ES) modificadas tales como las células ES de rata y de ratón de uso frecuente. Las células ES se pueden usar para crear ratas o ratones modificadas genéticamente mediante tecnología de inyección de blastocistos estándar o técnicas de agregación (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Wood, y col., Nature, 365:87-9, 1993; Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), inyección de blastocistos tetraploides (Wang, y col., Mech Dev, 62: 137-45,1997),o clonación y transferencia nuclear (Wakayama, y col., ProcNatlAcadSci USA,96:14984-9,1999). Las células ES derivadas de otros organismos, como conejos (Wang, y col., Mech Dev, 62: 137-45, 1997; Schoonjans, y col., Mol Reprod Dev, 45:439-43, 1996) o pollos (Pain, y col., Development, 122:2339-48,1996) u otras especies deberán poder sufrir modificación(es) genéticas usando los procedimientos descritos en este documento.
2. Se pueden usar protoplastos modificados para generar plantas modificadas genéticamente (por ejemplo, véase la patente de EE.U<u>. 5.350.689 "Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells", y la patente de EE.UU. 5.508.189 "Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts" y referencias en las mismas).
3. Transferencia nuclear de células eucariotas modificadas a oocitos para generar organismos clonados con alelos modificados (Wakayama, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 96:14984-9,1999; Baguisi, y col., Nat Biotechnol, 17:456-61, 1999; Wilmut, y col., Reprod Fertil Dev, 10:639-43, 1998; Wilmut, y col., Nature, 385:810-3,1997; Wakayama, y col., Nat Genet, 24:108-9,2000; Wakayama, y col., Nature, 394:369-74, 1998; Rideout, y col., Nat Genet, 24: 109-10, 2000; Campbell, y col., Nature, 380:64-6,1996).
4. La fusión de células para transferir el alelo modificado a otra célula, incluida la transferencia de cromosoma(s) sometidos a ingeniería y usos de dichas células para generar organismos portadores del alelo modificado o cromosoma(s) sometidos a ingeniería (Kuroiwa, y col., Nat Biotechnol, 18: 1086-1 090, 2000).
5. Los procedimientos descritos en este documento son también susceptible a cualquier otro abordaje que se ha usado o que todavía está pendiente de descubrir.
Aunque muchas de las técnicas usadas en la práctica de las etapas individuales de los procedimientos descritos en este documento son familiares para el experto en la técnica, los solicitantes compiten con la novedad del procedimiento descrito en este documento reside en la combinación única de las etapas y técnicas acopladas con el procedimiento nunca antes descrito de introducir un LTVEC directamente en células eucariotas para modificar un locus cromosómico, y el uso de ensayos MDA cuantitativos para identificar las células eucariotas que se han modificado adecuadamente. Esta nueva combinación representa una mejora significativa sobre las tecnologías previas para crear organismos que poseen modificaciones de genes o loci cromosómicos endógenos.
Ejemplos
Ejemplo 1: Ingeniería de células ES portadoras de una deleción del gen OCR10.
a. Selección de un clon de ADN genómico grande que contiene mOCR10.
Un clon de cromosoma artificial bacteriano (BAC) portador de un fragmento de ADN genómico grande que contenía la secuencia de codificación del gen de OCR10 de ratón (mOCR10) se obtuvo mediante detección selectiva de una biblioteca BAC de ADN genómico de ratón en matriz (Incyte Genomics) usando PCR. Los cebadores usados para la detección selectiva de esta biblioteca derivaron de la secuencia de ADNc del gen mOCR10.
Se usaron dos pares de cebadores:
(a) OCR10.RAA (5'-AGCTACCAGCTGCAGATGCGGGCAG -3') y OCR10.PVlrc (5'-CTCCCCAGCCTGGGTCT GAAAGATGACG3') que amplifica un ADN de 102 pb; y
(b) OCR10.TDY (5'-GACCTCACTIGCTACACT GACTAC-3') y OCR10.QETrc (5'-ACTIGTGTAGGC TGCAGAAGGTCTCTIG3'que amplifica un ADN de 1.500.
Este mOCR10 de BAC contenía aproximadamente 180 kb de ADN genómico, incluida la secuencia de codificación de mOCR10 completa. Este clon de BAC se usó para generar un LTVEC que después se usó para delecionar una porción de la región de codificación de mOCR10 al tiempo que introduce de forma simultánea un gen indicador cuyo codón de iniciación sustituyó con precisión al codón de iniciación de OCR10, así como la inserción de un gen de un marcador seleccionable útil para la selección tanto enE. colicomo en células de mamífero tras el gen indicador (Figura 2). El gen indicador (en este ejemplo no limitante LacZ, cuya secuencia está disponible fácilmente para el experto en la técnica) codifica la enzima p-galactosidasa deE. coli.Dada la posición de la inserción de LacZ (su codón de iniciación está en la misma posición que el codón de iniciación de mOCR10), la expresión de LacZ deberá imitar la de Mcor10, como se ha observado en otros ejemplos en los que se realizaron sustituciones similares con LacZ usando tecnologías previas (véase, "Gene trap strategies in ES cells", de W Wurst y A. Gossler, in Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999). El gen LacZ permite realizar un simple ensayo enzimático estándar que pueda revelar sus patrones de expresión in situ, de modo que se proporciona un ensayo sustituto que refleja los patrones de expresión normal del gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) reemplazado(s).
b. Construcción del fragmento donante y generación de LTVEC.
El casete de modificación usado en la construcción del LTEVC de mOCR10 es el casete lacZ-SV40 polyA-PGKp-EM7neo-PGK poliA en el que lacZ es un gen marcador como se ha descrito antes, poli A de SV40 es un fragmento derivado del virus de simios 40 (Subramanian, y col. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol, 19:157-64,1976; Thimmappaya, y col. J Bioi Chem, 253:1613-8,1978; Dhar, y col. Proc Natl Acad Sci USA, 71 :371-5,1974; Reddy, y col. Science, 200:494-502, 1978) y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal (Subramanian, y col., Prog Nucleic Acid Res Mol Biol, 19: 157-64,1976; Thimmappaya, y col., J Bioi Chem, 253: 1613-8, 1978; Dhar, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 71 :371-5, 1974; Reddy, y col., Science, 200:494-502,1978), PGKp es el promotor de la fosfoglicerato quinasa (PGK) de ratón (Adra, y col., Gene, 60:65-74,1987) (que se ha usado ampliamente para dirigir la expresión de genes de resistencia a fármacos en células de mamífero), EM7 es un fuerte promotor bacteriano que tiene la ventaja de permitir la selección positiva en bacterias de la construcción de LTVEC completada dirigiendo la expresión del gen de la neomicina transferasa (neo, neo es un marcador seleccionable que confiere resistencia a kanamicina en células procariotas y resistencia a G418 en células eucariotas (Beck, y col., Gene, 19:327-36, 1982), y PGK poliA es una región no traducida en 3' derivada del gen de PGK y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal (Boer, y col., Biochem Genet, 28:299-308, 1990).
Para construir el LTVEC de mOCR10, en primer lugar se generó un fragmento donante consistente en una caja de homología 1 de mOCR10 (hb1) unida cadena arriba desde el gen de LacZ en el casete de modificación y una caja de homología 2 de mOCR10 (hb2) cadena debajo de la secuencia de neo-PGK poliA en el casete de modificación (Figura 2) usando tecnología de ingeniería genética recombinante estándar. La caja de homología 1 (hb1) consiste en 211 pb de la secuencia no traducida inmediatamente cadena arriba de la metionina de iniciación del marco de lectura abierto de mOCR10 (ORF de mOCR10) (Figura 3A-3D). La caja de homología 2 (hb2) consiste en 216 pb del ORF de mOCR10, que finaliza en el codón de terminación (Figura 3A-3D).
Posteriormente, usando recombinación bacteriana homóloga (Zhang, y col., Nat Genet, 20:123-8,1998; Angrand, y col., Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Muyrers, y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Narayanan, y col., Gene Ther, 6:442-7, 1999; Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000), este fragmento donante se usó para reemplazar con precisión la región de codificación de mOCR10 (desde la metionina de iniciación al codón de terminación) con el casete de inserción, que tiene como resultado la construcción del LTEVEC de mOCR10 (Figura 2). Por tanto, en este LTVEC de mOCR10, la secuencia de codificación de mOCR10 se sustituyó mediante el casete de inserción creando una deleción de aproximadamente 20 kb en el locus de mOCR10 dejando aproximadamente 130 kb de homología cadena arriba (brazo de homología cadena arriba) y 32 kb de homología cadena abajo (brazo de homología cadena abajo).
Es importante observar que los LTEVEC pueden generarse más rápido y convenientemente a partir de bibliotecas BAC disponibles que dirigiendo vectores fabricados usando las tecnologías previas porque solo se requiere una única etapa de recombinación homóloga bacteriana y la única información de secuencia requerida es la necesaria para generar las cajas de homología. En contraste con ello, abordajes previos para generar vectores dirigidos usando recombinación homóloga bacteriana requieren que se "recorten” vectores dirigidos grandes antes de su introducción en células ES (Hill y col., Genomics, 64: 111-3, 2000). Este recorte es necesario por la necesidad de generar brazos de homología lo bastante cortos para acomodar los procedimientos de detección selectiva usados mediante los abordajes anteriores. Una desventaja principal en el procedimiento de Hill y col. es que se requieren dos etapas de recombinación homóloga adicionales simplemente para recortar (uno para recortar la región cadena arriba del locus modificado y uno para recortar la región cadena abajo del locus modificado). Para ello se necesita sustancialmente más información de secuencia, incluida la información de secuencia que abarca los sitios de recorte.
Además, otra ventaja obvia, ilustrada mediante el ejemplo anterior, es que una deleción muy grande que abarca el gen mOCR10 (aproximadamente 20 kb) se puede generar fácilmente en una única etapa. En contraste con ello, usando tecnologías previas, para conseguir la misma tarea pueden ser necesarias varias etapas y puede implicar marcar las regiones cadena arriba y cadena abajo de las secuencias de codificación con sitios IoxP con el fin de usar la Cre recombinasa para eliminar la secuencia flanqueada por estos sitios tras la introducción del locus modificado en células eucariotas. Esto se puede conseguir en una etapa y, por tanto, puede requerir la construcción de dos vectores dirigidos usando diferentes marcadores de selección y dos acontecimientos dirigidos secuenciales en células ES, uno para introducir el sitio IoxP en la región cadena arriba de la secuencia de codificación y otro para introducir el sitio IoxP en la región cadena debajo de la secuencia de codificación. También debe observarse que la creación de deleciones grandes suele producirse con una eficiencia baja usando las tecnologías de dirección anteriores en células eucariotas, porque la frecuencia de conseguir una recombinación homóloga puede ser baja cuando se usan vectores dirigidos que contienen una deleción grande flanqueada por brazos de homología relativamente cortos. La elevada eficiencia obtenida usando el procedimiento descrito en este documentojvéase más adelante) se debe a los brazos de homología muy largos presentes en el LTVEC que incrementan la tasa de recombinación homóloga en células eucariotas.
c. Verificación preparación e introducción del ADN de LTVEC de Mocr10 en células ES.
La secuencia que rodea la unión del casete de inserción y la secuencia de homología se verificaron mediante secuenciación del ADN. El tamaño del LTVEC de mOCR10 se verificó mediante análisis de restricción seguido de electroforesis en gel de campo pulsado ((PFGE) (Cantor, y col., Annu Rev Biophys Chem, 17:287-304,1988; Schwartz y Cantor, Cell, 37:67-75,1984). Se realizó una preparación estándar de plásmidos a gran escala del MTVEC de mOCR10, el ADN del plásmido se digirió con la enzima de restricción Notl, que corta en la estructura del vector del LTVEC de mOCR10 para generar ADN lineal. Después, el ADN linealizado se introdujo en células ES de ratón mediante electroporación (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999; Sambrook y col., Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1, 2, and 3,1989). Las células ES transfectadas con éxito con el LTVEC de mOCR10 se seleccionaron en medio que contiene G418 usando procedimientos de selección estándar (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999).
d. Identificación de clones de células ES diana usando una modificación cuantitativa del ensayo de alelo (MDA).
Para identificar las células ES en las que uno de los dos genes mOCR10 endógenos se han sustituido mediante secuencia de casete de modificación, el ADN de clones de células ES individuales se analizó mediante PCR cuantitativa usando metodología TaqMan® estándar como se ha descrito (Applied Biosystems, TaqMan® Universal PCR Master Mix, número de catálogo PIN 4304437; véase también http://www.pebiodocs.com/pebiodocs/04304449.pdf). Los cebadores y las sondas TaqMan® usados son como se ha descrito en la Figura 3A-3D. Se realizó detección selectiva de un total de 69 células ES independientes y 3 se identificaron como positivas, es decir como clones en los que una de la secuencia de codificación de mOCR10 endógeno se ha sustituido mediante el casete de modificación descrito anteriormente.
Son evidentes varias ventajas del abordaje MDA:
(i) no requiere el uso de una sonda fuera del locus que se está modificando, de modo que se obvia la necesidad de saber la secuencia que flanquea el locus modificado.
(ii) requiere muy poco tiempo en comparación con la metodología de trasferencia Southern convencional que ha sido el procedimiento de elección anterior ((Robertson, Practical Approach Series, 254,1987, Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), de modo que se reduce el tiempo para identificar las células modificadas correctamente desde varios días a solo unas pocas horas.
Esta es una mejora significativa del modo en el que se ha realizado la detección selectiva en el pasado y lo convierte en un abordaje hace menos trabajoso y más rentable para la detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas.
Otra ventaja del procedimiento descrito en este documento es que también es superior a las tecnologías anteriores por su capacidad para apuntar a loci diferentes. Usando las tecnologías anteriores se ha demostrado que para ciertos loci, la frecuencia de apuntar a un objetivo con éxito puede ser tan baja como de 1 en 2.000 acontecimientos de integración, quizá incluso menor. Usando el procedimiento descrito en este documento, los solicitantes han demostrado que estos difíciles loci pueden ser las dianas mucho más eficientemente usando LTVEC que contienen brazos de homología largos (es decir, mayores que los permitidos por las tecnologías previas). Como demuestra el ejemplo no limitante descrito anteriormente, los solicitantes han apuntado al locus OCR10, un locus que anteriormente se ha demostrado que es recalcitrante a ser diana usando tecnología convencional. Usando el procedimiento descrito en este documento, los solicitantes han demostrado que han conseguido con éxito llegar a las diana en 3 de 69 clones de células ES en las que se había integrado el LTVEC de mOCR10 (que contienen más de 160 kb de brazos de homología e introduciendo una deleción de 20 kb), mientras que usando la tecnología anterior para apuntar a las células ES (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999) usando un vector basado en plásmidos con brazos de homología más cortos que 10-20 kb al tiempo que también se introduce una deleción inferior a 15 kb, no se identificaron acontecimientos diana entre más de 600 integrantes del vector. Estos datos demuestran claramente la superioridad del procedimiento descrito en este documento sobre las tecnologías previas.
Ejemplo 2: El incremento de la frecuencia de diana y la anulación de la necesidad de usar ADN isogénico cuando se usan LTVEC como los vectores diana.
Como se ha indicado anteriormente, el incremento de la frecuencia de diana obtenido usando brazos de homología largos deberá disminuir el beneficio, si hay alguno, derivado del uso de ADN genómico en la construcción de LTVEC que es isogénico (es decir, de secuencia idéntica) con el ADN de la célula eucariota diana. Para probar esta hipótesis, los solicitantes han construido numerosos LTVEC usando ADN genómico derivado de la misma subcepa de ratón que la célula eucariota que va a ser la diana (probablemente isogénica) y otros numerosos LTVEC usando ADN genómico derivado de las subcepas de ratón que difieren del de la célula eucariota que va a ser la diana (probablemente no isogénico). Los dos conjuntos de LTVEC exhibieron similares frecuencias de diana, que varían de 1-13 % (Tabla 1), lo que indica que la tasa de apuntar a dianas con éxito usando LTVEC no depende de la isogenicidad.
TABLA 1
RESUMEN DE LOS GENES DIANA USANDO VECTORES DE CLONES BAC
NO ISOGÉNICO __________ Aprox. (Kb)
Gen diana Descripción Origen Célula Tamaño Brazo Brazo 2 Del clones %
de A ES del 1 de dianas DN LTVEC OGH Fusión Svl CJ7 147 50 90 5 4 4
LacZ-ATG
OCR10(A) Fusión SvJ CJ7 150 135 8 20 1 1,4 LacZ-ATG
OCR10(B) Fusión SvJ CJ7 169 130 32 20 3 4,3 LacZ-ATG
MA61 Fusión SvJ CJ7 95 N/D N/D 30 3 4,6 LacZ-ATG
MA16 Fusión SvJ CJ7 120 N/D N/D 8 8 13
LacZ-ATG
ISOGÉNICO
(continuación)
NO ISOGÉNICO __________ Aprox. (Kb)
Gen diana Descripción Origen Célula Tamaño Brazo Brazo 2 Del clones %
de A ES del 1 de dianas DN LTVEC ROR1 Fusión CJ7 CJ7 55 14 14 20 5 5
LacZ
intracel.
ROR1 Fusión CJ7 CJ7 55 14 14 20 2 2
3xmyc
intracel.
ROR2 Mutación CJ7 CJ7 45 11 24 0,5 2 2
braquidactili
a y
marcador
Myc
En resumen, el abordaje de crear LTVEC y usarlos directamente como vectores dirigidos combinado con detección selectiva de MDA para acontecimientos de recombinación homóloga en células ES crea un procedimiento nuevo para loci modificados genéticamente mediante ingeniería que es rápido, económico y representa una mejora significativa sobre los tediosos y laboriosos procedimientos que se usaban anteriormente. Por tanto, abre la posibilidad de un rápido análisis genómico funcional in vivo a escala grande de esencialmente todos y cada uno de los genes en el genoma de un organismo en una fracción del tiempo y de los costes requeridos por las metodologías anteriores.
Ejemplo 3: Uso de LTVEC para producir anticuerpos quiméricos y humanos
a. Introducción
Los anticuerpos están compuestos por dos cadenas, las cadenas ligera y pesada, cada una de las cuales está formada por dos dominios, los dominios variable y constante. La región variable de la proteína del anticuerpo es la porción en N-terminal del anticuerpo que se une al antígeno. El dominio variable de la cadena pesada está codificado por el ADN del locus génico variable de la cadena pesada, que está compuesto por los segmentos génicos variable (V), de diversidad (D) y de unión (J), Los dominios variables de la cadena ligera están codificados por el ADN de los loci génicos variables de la cadena ligera, kappa y lambda, que están compuestos por los segmentos génicos variable (V) y de unión (J).
La reorganización de los genes de la región variable (VDJ/VJ) durante el desarrollo inicial de las células B es el mecanismo principal por el cual el sistema inmunitario produce anticuerpos capaces de reconocer el enorme número de antígenos con los que se puede encontrar. Esencialmente, mediante reorganizaciones de ADN durante el desarrollo de las células B, se ensambla un enorme repertorio de secuencias de la región variable (VDJ/VJ) que después se unen a una región constante (C) para producir cadenas ligera y pesada completas que se ensamblan para formar un anticuerpo. Una vez montados los anticuerpos funcionales, la hipermutación somática que se produce en los órganos linfoides secundarios introduce diversidad adicional que permite que el organismo seleccione y optimice la afinidad del anticuerpo.
La producción de anticuerpos frente a varios antígenos en especies no humanas supuso inicialmente una gran promesa para la producción a gran escala de anticuerpos que podrían usarse como terapéuticos humanos. No obstante, las diferencias de especies conducen a la producción de anticuerpos en los seres humanos que inactivan los anticuerpos extraños y producen reacciones alérgicas. Posteriormente se hicieron intentos para “humanizar” los anticuerpos, de modo que es menos probable que sean reconocidos como extraños en los seres humanos. Inicialmente, este procedimiento implicó combinar las porciones de unión a antígeno de los anticuerpos derivados de ratones con la región constante de anticuerpos humanos, de modo que se crean anticuerpos recombinantes que eran menos inmunogénicos en seres humanos.
Un segundo abordaje que se desarrolló fue la expresión en fagos, de modo que las regiones V humanas se clonan en una biblioteca de expresión en fagos y las regiones con las adecuadas características de unión se unen a las regiones constantes humanas para crear anticuerpos humanos. No obstante, esta tecnología está limitada por la ausencia de desarrollo de anticuerpos y la maduración de la afinidad que se produce de forma natural en las células B.
Más recientemente se han inactivado genes endógenos de ratones y se han sustituido genes con sus homólogos humanos para producir anticuerpos completamente humanos. Por desgracia, el uso de estas construcciones ha destacado la importancia de una región constante endógena en el desarrollo y optimización de los anticuerpos en las células B. Los ratones que producen anticuerpos completamente humanos tienen respuestas inmunitarias reducidas. Esto puede ser porque los anticuerpos humanos producidos por los ratones transgénicos con construcciones completamente humanas tienen una afinidad menor en comparación con sus homólogos de ratón. La menor afinidad podría efectuar maduración y supervivencia de las células B. De acuerdo con esto, los muy elogiados procedimientos de producir anticuerpos humanizados en ratones y otros organismos, en los que las regiones endógenas variables y constantes de los ratones se inactivan y sustituyen con sus homólogos humanos, no ha tenido como resultado anticuerpos óptimos.
Se ha sugerido el uso de anticuerpos quiméricos que usan regiones variables humanas (VDJ/VJ) con las regiones constantes de ratón a través de la maduración de células B, seguido de la posterior ingeniería de los anticuerpos para sustituir las regiones constantes de ratón con sus homólogos humanos (patente de EE.UU. n° 5,770,429 emitida el 23 de junio de 1998). No obstante, la única metodología que ha existido hasta la fecha para elaborar dichas quimeras ha sido el trans-intercambio, en el que la formación de las quimeras es únicamente un acontecimiento raro que solo se produce en las cadenas pesadas. Hasta la fecha no ha habido ningún mecanismo que produjera, en animales transgénicos, sustitución a gran escala de la totalidad de los segmentos de codificación génica variables con genes humanos, de modo que se producen quimeras en las cadenas tanto pesadas como ligeras. Usando la tecnología de los solicitantes, como se ha divulgado en el presente documento, se generan anticuerpos quiméricos que se pueden alterar después mediante tecnología estándar para crear anticuerpos humanos de alta afinidad.
b. Breve descripción
Se crea un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas (VDJ/VJ) y regiones constantes de ratón. Esto se consigue mediante una sustitución directain situde los genes de la región variable de ratón (NDJ/VJ) con sus homólogos humanos. Los loci de inmunoglobulina híbrida resultantes sufrirán el proceso natural de reorganizaciones durante el desarrollo de las células B para producir los anticuerpos híbridos.
Después, los anticuerpos completamente humanos se elaboran reemplazando las regiones constantes del ratón con los homólogos humanos deseados. Este abordaje dará lugar a anticuerpos terapéuticos con mucha mayor eficiencia que los procedimientos anteriores, por ejemplo la “humanización” de los anticuerpos monoclonales de ratón o la generación de anticuerpos completamente humanos en ratones HuMAb. Además, este procedimiento tendrá éxito en la producción de anticuerpos terapéuticos para muchos antígenos para los que los procedimientos anteriores han fallado. Este ratón creará anticuerpos que son una región constante de ratón-humano (VDJ/VJ), que tendrá los beneficios siguientes sobre los ratones HuMAb disponibles anteriormente que producen anticuerpos completamente humanos. Los anticuerpos generados por el nuevo ratón conservarán las regiones Fc murinas que interaccionarán con mayor eficiencia con los otros componentes del complejo del receptor de las células B de ratón, incluidos los componentes de señalización requeridos para la diferenciación adecuada de las células B (tal como Iga e Igb). Adicionalmente, las regiones Fc murinas serán más específicas que las regiones Fc humanas en sus interacciones con los receptores de Fc en las células de ratón, moléculas del complemento etc. Estas Interacciones son importantes para una respuesta inmunitaria fuerte y específica, para la proliferación y maduración de las células B y para la maduración de la afinidad de los anticuerpos.
Dado que existe una sustitución directa de las regiones V-D-J/V-J para las regiones equivalentes de los loci de ratón, todas las secuencias necesarias para la transcripción, recombinación y/o intercambio de base adecuadas permanecerán intactas. Por ejemplo, se ha demostrado que el potenciador intrónico de la cadena pesada de la inmunoglobulina murina, Em, es crucial para la recombinación V-D-J así como la expresión génica de la cadena pesada durante las primeras etapas del desarrollo de células B [Ronai, D. Berru, M., y Shulman, M. J. Mol Cell Bioi 19:7031-7040 (1999)], mientras que la región potenciadora en 3' de la cadena pesada de inmunoglobulina parece ser cicla para el intercambio de clase [Pan, Q., Petit-Frere, C., Stavnezer, J., y Hammarstrom, L. Eur J Immunol 30:1019-1029 (2000)] así como la expresión génica de la cadena pesada en estadios posteriores de la diferenciación de las células B [Ong, J., Stevens, S., Roeder, R. G. y Eckhardt, L. A. J Immunol 160:4896-4903 (1998)]. Dadas estas diversas, aunque cruciales, funciones de los elementos de control de la transcripción, es deseable mantener estas secuencias intactas.
Los acontecimientos de recombinación requeridos que se producen en los loci de inmunoglobulina durante el curso normal de la diferenciación de las células B pueden aumentar la frecuencia de las reorganizaciones de inmunoglobulina no productoras cuando estos loci se insertan en localizaciones cromosómicas inadecuadas o en múltiples copias, como en los ratones actualmente disponibles. Con las reducciones en la reorganización de inmunoglobulina productora y, por tanto, la señalización adecuada en etapas específicas del desarrollo de las células B se eliminan las células aberrantes, Las reducciones del número de células B en estadios precoces del desarrollo disminuyen significativamente la población global final de células B y limita considerablemente las respuestas inmunitarias de los ratones. Dado que solo habrá un locus quimérico de la cadena pesada o ligera (frente a los loci mutados de inmunoglobulina y con loci transgénicos humanos integrados en distintas localizaciones cromosómicas para las cadenas pesada y ligera en los ratones disponibles actualmente), no debería haber trans-corte y empalme o trans-reorganizaciones de los loci que podría tener como resultado reorganizaciones no productoras o anticuerpos quiméricos terapéuticamente irrelevantes ((Willers, J., Kolb, C. y Weiler, E. Immunobiology 200:150-164 (2000); Fujieda, S., Lin, Y. Q., Saxon, A. y Zhang, K. J Immunol 157:3450-3459 (1996)).
Las sustituciones de las regiones V-D-J o V-J humanas en los loci cromosómicos genuinos de inmunoglobulina murina será sustancialmente más estables con mayores tasas de transmisión a la progenie y disminución del mosaicismo de los genotipos de las células B en comparación con los ratones disponibles actualmente (Tomizuka, K., Shinohara, T., Yoshida, H., Uejima, H., Ohguma, A., Tanaka, S., Sato, K., Oshimura, M., e Ishida, I. Proc Natl Acad Sci (USA) 97:722-727 (2000)). Además, la introducción de las regiones variables humanas (VDJ/VJ) en los loci murinos genuinos in vivo mantendrá la regulación global adecuada de la accesibilidad a la cromatina que previamente se había demostrado importante para los acontecimientos de recombinación en el momento adecuado (Haines, B. B., y Brodeur, P. H. Eur J Immunol. 28:4228-4235 (1998)).
Aproximadamente 1/3 de los anticuerpos humanos contiene cadenas ligera lambda en comparación con los ratones en los que solo 1/20 de los anticuerpos murinos contienen cadenas ligera lambda. Por tanto, la sustitución de las secuencias V-J de la cadena ligera lambda murina con las secuencias -J de la cadena ligera lambda derivadas del locus humano servirá para aumentar el repertorio de los anticuerpos, así como concordar más estrechamente la respuesta inmunitaria humana genuina, de modo que se incrementa la probabilidad de obtener anticuerpos terapéuticamente útiles.
Un beneficio adicional de integrar las secuencias humanas en los loci de inmunoglobulina murina genuina es que no se introducen sitios de integración nuevos que podrían dar lugar a alteraciones mutagénicas en el sitio de inserción e impedir el aislamiento de los ratones homocigotos viables. Esto simplifica considerablemente la producción y mantenimiento de una colonia de ratón de cría.
Lo siguiente proporciona un nuevo procedimiento para producir anticuerpos con todas las ventajas adicionales. Un experto en la técnica reconocerá que el procedimiento general descrito en el presente documento se puede modificar para producir resultados equivalentes.
c. Materiales y procedimientos:
La sustitución precisa de la región variable en el locus de la cadena pesada de ratón (VDJ) con su homólogo humano se ejemplifica usando una combinación de recombinación homóloga o específica de sitio en el ejemplo siguiente, que usa un procedimiento de dos etapas. Un experto en la técnica reconocerá que la sustitución del locus de ratón con el locus humano homólogo u ortólogo se puede conseguir en una o más etapas. De acuerdo con esto, la presente divulgación_contempla la sustitución del locus murino, todo o parte, con cada integración mediante recombinación homóloga.
Se aíslan clones de inserto grande (BAC) que abarcan la región VDJ completa del locus de la cadena pesada humana (Figura 4A). La secuencia de la totalidad de esta región está disponible en los siguientes archivos de GenBank (AB019437, AB019438, AB019439, AB019440, AB019441, X97051 y X54713). En este ejemplo se aíslan clones de insertos grandes (BAC) de los extremos de la región VDJ de ratón como fuente de brazos de homología (Figura 4B) que se usan para dirigir la integración mediante recombinación homóloga de las secuencias VDJ humanas en un procedimiento de dos etapas:
En la primera etapa, el LTVEC1 (Figura 4D) está construido mediante recombinación homóloga en el LTVEC1 deE. coli.El LTVEC1 contiene, en orden: Un brazo de homología grande de ratón derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-neomicina en este ejemplo); un sitio IoxP; un inserto humano grande que abarca varios segmentos génicos V a través de toda la región DJ; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. El extremo 5' del brazo cadena abajo y la colocación de los sitios IoxP definen el extremo 3' de la región que se va a reemplazar en el locus. Las células ES de ratón se transformarán mediante técnicas estándar, por ejemplo electroporación, con LTVEC1 linealizado. Dado que la introducción directa de LTVEC1 tiene como resultado una modificación del locus génico variable endógeno, las colinas resistentes a neomicina se pueden someter a detección selectiva para una diana correcta usando un ensayo de MDA. Estas células ES diana pueden dar lugar a ratones que producen anticuerpos con cadenas pesadas híbridas. No obstante, será preferible proceder con las posteriores etapas que eliminarán el resto de los segmentos variables del ratón.
En la segunda etapa, el LTVEC2 (Figura 4C) está construido mediante recombinación homóloga bacteriana en el LTVEC2 deE. coli,en orden: Un brazo de homología de ratón grande que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero que no contiene ningún segmento génico V de ratón; un inserto grande que contiene un número elevado de segmentos génicos V humanos distales; un sitio IoxP mutante denominado Iox511 [Hoess, R.H., Wierzbicki,A. y Abremski,K. Nucleic Acids Res. 14: 2287-2300 (1986)] en la orientación opuesta a la de los sitios IoxP silvestre en LTVEC2 y LTVEC1 (este sitio no se recombinará con los sitios IoxP silvestres, pero recombinarán fácilmente con otros sitios Iox511); y un sitio IoxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGK-higromicina R en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes. El extremo 3' del brazo de homología cadena arriba y la colocación de los sitios IoxP definen el extremo 5' de la región que se va a reemplazar en el locus. Las células Es de ratón a las que se dirigió correctamente el LTVEC1 se transformarán después mediante técnicas estándar con LTVEC2 linealizado y colonias resistentes a higromicina se someterán a detección selectiva para apuntar correctamente usando un ensayo de MDA para las modificaciones en el locus génico variable endógeno. Las células ES dianas correctas resultantes de esta transformación se denominarán a continuación “células ES doble diana”.
La posterior expresión transitoria de la CRE recombinasa en las células ES doble diana tendrá como resultado la deleción del resto de la región V de ratón. Como alternativa, las células doble diana se pueden inyectar en los blastocistos huésped para la producción de ratones quiméricos. La cría de los ratones quiméricos resultantes con ratones que expresan la CRE recombinasa al principio del desarrollo tendrá como resultado la deleción del resto de la región V de ratón en la progenie F1. Esta última alternativa aumenta la probabilidad de que el locus de la cadena pesada híbrida se pasará a través de la línea germinal porque implica cultivar las células ES para menos generaciones.
La inclusión de Iox511 en LTVEC1 permitirá la inserción de segmentos génicos V humanos adicionales en el locus híbrido. Un abordaje sería usar la recombinación homóloga bacteriana para flanquear un clon de ADN genómico grande que contiene muchos segmentos génicos V humanos adicionales con sitios Iox511 y IoxP. La cotransformación de dicho clon de ADN genómico grande modificado en las células ES doble diana con un plásmido que expresa transitoriamente CRE recombinasa tendrá como resultado la introducción de segmentos génicos V adicionales mediante intercambio de casete (Bethke, B. y Sauer, B. Nucleic Acids Res. 25:2828-2834 (1997)).
Un segundo abordaje a la incorporación de segmentos génicos V adicionales es apuntar de forma independiente a un clon de ADN genómico diana que contiene muchos segmentos génicos V humanos adicionales en el locus de ratón usando, por ejemplo, los mismos brazos de homología de ratón incluidos en LTVEC2. En este caso, los segmentos génicos V humanos adicionales estarían flanqueados por sitios Iox511 e IoxP y las células ES diana se usarían para crear un ratón. Los ratones derivados de las células ES doble diana y los ratones derivados de las células ES que contienen los segmentos génicos V adicionales se criarían con un tercer ratón que dirige la expresión de la CRE recombinasa durante la meiosis. La estrecha proximidad de los dos loci recombinantes durante el apareamiento meiótico tendría como resultado una frecuencia elevada de recombinación intercromosómica inducida por CRE como se ha visto en otros sistemas (Herault, Y., Rassoulzadegan, M., Cuzin, F. y Duboule, D. Nature Genetics 20: 381-384 (1998)).
Otro abordaje es similar al indicado anteriormente, pero, en lugar de introducir los sitios IoxP e Iox511 con LTVEC 1 y 2 humanos, se introducen en LTVEC de ratón y, después, se usa CRE para apuntar específicamente a los loci humanos mediante intercambio de casete a través de los sitios IoxP e Iox511 flanqueantes. La metodología indicada más adelante demuestra cómo la tecnología de LTVEC se puede usar para colocar el sitio flanqueante sitios de recombinación específicos en los extremos de cualquier gen endógeno de interés en cualquier animal no humano,
El LTVEC1 de ratón contiene un casete insertado mediante recombinación bacteriana cadena abajo, y adyacente, de la región J. Este casete contiene un sitio IoxP y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a higromicina. El LTVEC1 contiene, en orden: un brazo de homología grande derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón (pero dentro del locus génico variable) pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-higromicina en este ejemplo); un sitio IoxP; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. El extremo 5' del brazo de homología cadena abajo y la colocación de los sitios IoxP definen el extremo 3' de la región que se va a reemplazar en el locus. La modificación del extremo 3' del gen variable endógeno en el sitio de la inserción del casete permite la detección de LTVEC1 correctamente insertado en las células ES mediante un ensayo MDA. Los marcadores de resistencia farmacológica están flanqueados por sitios FRT. La introducción de sitios FRT permite la eliminación de cualquier marcador de resistencia farmacológica mediante FLPe en células Es o cruzando los ratones resultantes con un ratón que expresa FLPe en células que tienen potencial de línea germinal.
El LEVRC2 se construye mediante recombinación bacteriana para insertar un casete cadena arriba de la región V más distal de los loci. Este casete contiene un sitio Iox511 y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a neomicina. El LTVEC2 contiene, en orden: un brazo grande de homología que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ningún segmento génico V de ratón; un sitio Iox511 en orientación opuesta a la de los sitios IoxP de tipo silvestre en LTVEC2 y LTVEC1; un sitio IoxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGK-neomicinaR en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V (y, por tanto, dentro del locus génico variable), pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes. El extremo 3' del brazo de homología cadena arriba y la colocación de los sitios IoxP definen el extremo 5' de la región que se va a reemplazar en el locus. La modificación del extremo 5' del gen variable endógeno en el sitio de la inserción del casete permite la detección de LTVEC2 correctamente insertado en las células ES mediante un ensayo MDA. Estos LTVEC se introducen juntos o secuencialmente en las células ES usando técnicas estándar y sometidos a detección selectiva para la diana correcta usando un ensayo MDA.
Un BAC humano que contiene la región VDJ/VJ, parte o toda, se modifica mediante recombinación bacteriana para insertar casetes que flanquean las secuencias humanas con los sitios Iox511 e IoxP. El casete cadena arriba se inserta justo cadena arriba de la región que sustituirá a la región variable de ratón y contiene, en orden, un sitio Iox511 seguido de un marcador seleccionable de bacterias/mamífero, tal como resistencia a puromicina. El casete cadena abajo se inserta cadena abajo, y adyacente a, de la región J y contiene, en orden, un sitio IoxP seguido de un marcador seleccionable de bacterias, tal como resistencia a espectinomicina.
Se pueden usar varios procedimientos para insertar una pieza grande de la región variable humana que se produce en un único BAC aislado de una biblioteca. Unos pocos de estos se describen a continuación.
Los sitios IoxP e Iox511 se pueden insertar por separado mediante recombinación bacteriana sobre BAC solapantes que se recombinan entre sí cuando se transforman en células ES. En este caso, el BAC cadena arriba tiene un casete recombinado justo cadena arriba de la región que sustituirá a la región variable de ratón, que tiene un sitio Iox511 seguido de un marcador seleccionable de bacterias/mamífero, tal como resistencia a neomicina. El BAC cadena abajo tiene un casete recombinado justo cadena abajo, y adyacente a, de la región J, que contiene un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a puromicina seguida de un sitio IoxP. Si estos dos BAC no son solapantes, BAC adicionales que unen los BAC de cadena arriba y cadena abajo mediante homología solapante se incorporan en el esquema. Estos se modifican mediante recombinación bacteriana para contener marcadores seleccionables de bacteria/mamífero, tal como resistencia a puromicina, y las BAC cadena arriba y cadena abajo se modifican para contener casetes IoxP e Iox511 portadores de marcadores de resistencia a neomicina e higromicina.
Los BAC(s) humanos se co-transforman con CRE recombinasa en la línea de células Es que contiene los sitios de recombinación Iox511 e IoxP flanqueantes de la región variable. Si se usan BAC solapantes, la recombinación homóloga se produce entre ellos para crear un fragmento de ADN más grande y los sitios IoxP e Iox511 flanqueantes apuntan a este fragmento grande en el locus de ratón. Las células se seleccionan según la resistencia a puromicina y se someten a detección selectiva para la sustitución de la región variable de ratón. Como alternativa, las secuencias de ratón se pueden delecionar primero mediante los dos sitios IoxP y, después, las secuencias humanas se pueden introducir mediante los sitios IoxP e Iox511 restantes.
Un cuarto BAC se puede insertar su el LTVEC1 también contiene un tercer sitio de recombinación específico de sitio, por ejemplo Iox2272 (Anal Biochem 2001 Mar 15; 290(2):260-71) justo cadena abajo del gen de resistencia bacteriana/de mamífero, tal como resistencia a puromicina, creando un LTVEC con, en orden, el gen de resistencia a puromicina, un sitio IoxP y un sitio Iox2272, seguido de las secuencias humanas. Después, el BAC se integra en el locus de inmunoglobulina de ratón, los sitios Iox511/Iox2272 pueden servir como receptor en una segunda ronda de intercambio de casete, en el que el gen de resistencia a puromicina está sustituido por una porción cadena arriba adicional de la región variable del locus de la inmunoglobulina humana y un gen diferente de resistencia bacteriana/de mamífero flanqueado por los sitios Iox511 e Iox2272.
Otro procedimiento para insertar una tira más grande de la región variable humana es combinar las secuencias de múltiples BAC in vitro usando sitios de escisión de endonucleasas de restricción raras. Esto se consigue usando recombinación homóloga bacteriana para insertar un sitio IoxP y un gen de resistencia a espectinomicina justo cadena abajo del último J del BAC más cadena abajo e insertar un segundo marcador seleccionable bacteriano y un sitio 1-Ceu1 raro en el extremo cadena arriba de las secuencias humanas del BAC cadena abajo. Un sitio Iox511 y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, por ejemplo resistencia a puromicina, se inserta en el extremo cadena arriba de un segundo BAC que contiene una región de la región variable humana cadena arriba de las secuencias en el primer BAC. Un sitio 1-Ceu1 se inserta en el extremo cadena abajo del segundo BAC. Tras la digestión de ambos BAC con 1-Ceu1 y Not1, que es única en la porción de vector de ambos BAC modificados, los dos BAC se unen y se selecciona un recombinante en bacterias para resistencia a puromicina y espectinomicina. El BAC más grande resultante contiene, en orden, un sitio Iox511, secuencias humanas cadena arriba, un sitio 1-Ceu1, secuencias humanas cadena abajo, un sitio IoxP y un gen de resistencia a espectinomicina. La región entre el sitio Iox511 y el sitio IoxP se inserta en el locus de la inmunoglobulina de ratón mediante intercambio de casete y selección de puromicina como se ha descrito anteriormente.
Un tercer procedimiento para insertar una tira más grande de la región variable humana es combinar las secuencias de múltiples BAC como se ha descrito anteriormente, pero usando recombinación homóloga bacteriana en lugar de digestión de restricción/unión. La misma selección para BAC recombinantes se aplica en bacterias, excepto que solo uno de los dos BAC se digeriría, sus extremos tras la digestión se diseñarían para ser homólogos del otro BAC "receptor" y el BAC receptor estaría en una cepa bacteriana modificada para ser permisiva para la recombinación homóloga bacteriana.
Las últimas etapas en la creación del ratón productor de anticuerpos monoclonales constantes de ratón variables humanos serán realizando las sustituciones equivalentes de la región variable sobre los loci de la cadena ligera lambda y kappa y criar los tres loci híbridos con homocigosidad juntos en el mismo ratón. El ratón transgénico resultante tendrá un genoma que comprende los loci génicos variables de la cadena ligera y pesada completamente humanas unidos operablemente a una región constante de ratón completamente endógena de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a la estimulación antigénica. Dicho ratón se puede usar después como fuente de ADN que codifica las regiones variables de anticuerpos humanos. Usando tecnología recombinante estándar, el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo está unido operablemente al ADN que codifica las regiones constantes de las cadenas pesada y ligera humanas en células tal como las células CHO, que son capaces de expresar anticuerpos activos; Las células se cultivan en las condiciones adecuadas para expresar los anticuerpos completamente humanos, que después se recuperan. Las secuencias que codifican regiones variables se pueden aislar mediante, por ejemplo, amplificación por PCR o clonación de ADNc. Hibridomas hechos de ratones transgénicos que comprenden algunos o todos los loci de la región variable de inmunoglobulina humana (Kohler y Milstein, Eur. J. Immunol., 6:511-519 (1976) pueden ser usados_como fuente de ADN que codifica las regiones variables humanas.
En resumen, el abordaje de crear LTVEC y usarlos directamente como vectores dirigidos combinado con detección selectiva de MDA para acontecimientos de recombinación homóloga en células ES crea un procedimiento nuevo para loci modificados genéticamente mediante ingeniería que es rápido, económico y representa una mejora significativa sobre los tediosos y laboriosos procedimientos que se usaban anteriormente. Por tanto, abre la posibilidad de un rápido análisis genómico funcional in vivo a escala grande de esencialmente todos y cada uno de los genes en el genoma de un organismo en una fracción del tiempo y de los costes requeridos por las metodologías anteriores.
Aunque la invención anterior se ha descrito con algún detalle a modo de ilustración y ejemplos, es fácilmente evidente para los expertos en la técnica que se pueden realizar ciertos cambios y modificaciones en las enseñanzas de la invención.

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. Un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón, en donde los segmentos génicos V, D y J de un locus de región variable de cadena pesada de dicho ratón se reemplazanin situcon segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.
2. El ratón transgénico de la reivindicación 1, en donde los segmentos génicos V y J de un locus de región variable de cadena ligera kappa de dicho ratón se reemplazanin situcon segmentos génicos V y J de cadena ligera kappa humana.
3. Un método para producir un anticuerpo humano, que comprende
a) exponer a un ratón de acuerdo con la reivindicación 2 a estimulación antigénica, de tal forma que el ratón produce un anticuerpo contra el antígeno;
b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo;
c) unir operablemente la secuencia de ADN que codifica las regiones variables de (b) a ADN que codifica regiones constantes de cadena pesada y ligera humana en una célula capaz de expresar anticuerpos activos; d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y
e) recuperar el anticuerpo.
4. El método de la reivindicación 3, en donde la célula es una célula CHO.
5. El método de la reivindicación 3 o 4, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla de una célula obtenida del ratón expuesto a estimulación antigénica.
6. El método de la reivindicación 3, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla de un hibridoma creado a partir del bazo de dicho ratón.
7. El método de la reivindicación 3, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla mediante la PCR.
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Families Citing this family (996)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6908744B1 (en) * 2000-03-14 2005-06-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of stimulating cartilage formation
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
GB0115256D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Babraham Inst Mouse light chain locus
WO2003047336A2 (en) 2001-11-30 2003-06-12 Abgenix, Inc. TRANSGENIC ANIMALS BEARING HUMAN Igμ LIGHT CHAIN GENES
JP2006506317A (ja) 2002-01-11 2006-02-23 バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド 治療用リソソーム酵素の送達のための酵素送達系としてのｐ９７の使用
CA2473741C (en) * 2002-01-18 2015-12-22 Morphotek, Inc. A method for generating engineered cells for locus specific gene regulation and analysis
JP4836451B2 (ja) 2002-07-18 2011-12-14 メルス ベー ヴェー 抗体混合物の組換え生産
USRE47770E1 (en) 2002-07-18 2019-12-17 Merus N.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
EP1539946A4 (en) * 2002-09-09 2006-03-15 California Inst Of Techn METHOD AND COMPOSITIONS FOR PRODUCING HUMANIZED MICE
WO2004106375A1 (en) 2003-05-30 2004-12-09 Merus Biopharmaceuticals B.V. I.O. Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
GB2408980B (en) * 2003-12-09 2006-06-07 Nat Biolog Standards Board Genetic reference materials
RU2398882C2 (ru) 2004-07-22 2010-09-10 Эрасмус Юниверсити Медикал Сентр Роттердам СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО ДОМЕНА Vh ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
US7910798B2 (en) * 2006-03-31 2011-03-22 Medarex, Inc. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
ES2398076T3 (es) 2006-06-02 2013-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano
US8323815B2 (en) * 2006-06-16 2012-12-04 Porous Power Technology, LLC Optimized microporous structure of electrochemical cells
US7608693B2 (en) 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
ES2859825T3 (es) 2006-10-02 2021-10-04 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos con alta afinidad para el receptor IL-4 humano
NO347649B1 (no) 2006-12-14 2024-02-12 Regeneron Pharma Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse.
PL2125894T3 (pl) 2007-03-22 2019-08-30 Biogen Ma Inc. Białka wiążące, w tym przeciwciała, pochodne przeciwciał i fragmenty przeciwciał, które swoiście wiążą się z CD154 i ich zastosowania
WO2008151081A1 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Omt, Inc. Compositions and methods for inhibiting endogenous immunoglobulin genes and producing transgenic human idiotype antibodies
JP5588866B2 (ja) * 2007-08-10 2014-09-10 メダレックス エル．エル．シー． Ｈｃｏ３２およびｈｃｏ２７、ならびに関連実施例
EP2572729A3 (en) 2007-08-10 2013-06-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human nerve growth factor
GB0718029D0 (en) * 2007-09-14 2007-10-24 Iti Scotland Ltd Two step cluster deletion and humanisation
KR102225009B1 (ko) 2007-09-26 2021-03-08 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
CA2708776A1 (en) 2007-12-10 2009-06-18 Aliva Biopharmaceuticals, Inc. Methods for sequential replacement of targeted region by homologous recombination
WO2009103082A2 (en) * 2008-02-17 2009-08-20 Porous Power Technologies, Llc Lamination configurations for battery applications using pvdf highly porous film
US20090226683A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Porous Material Uses in Furniture
US20090223155A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Building Construction Applications for Porous Material
EP2098536A1 (en) 2008-03-05 2009-09-09 4-Antibody AG Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins
US20090222995A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Bedding Applications for Porous Material
US20090227163A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Protective Apparel with Porous Material Layer
JP6161233B2 (ja) * 2008-03-31 2017-07-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 喘息の治療及び診断のための組成物及び方法
KR20110020860A (ko) * 2008-05-23 2011-03-03 알리바 바이오파마수티컬스, 아이엔씨. 유전자 삽입동물에서 단일 ｖｌ 도메인 항체를 생산하는 방법
US20100122358A1 (en) * 2008-06-06 2010-05-13 Crescendo Biologics Limited H-Chain-only antibodies
US20090328240A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-31 Sing George L Genetically modified mice as predictors of immune response
EP3456190B1 (en) 2008-06-27 2021-11-24 Merus N.V. Antibody producing transgenic murine animal
AU2014203150C1 (en) * 2008-06-27 2018-10-18 Merus N.V. Antibody producing non-human mammals
DK2346994T3 (da) 2008-09-30 2022-02-28 Ablexis Llc Knock-in-mus til fremstilling af kimære antistoffer
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
CN112680475A (zh) 2008-12-18 2021-04-20 伊拉兹马斯大学鹿特丹医学中心 表达人源化抗体的非人转基因动物及其用途
US20100178567A1 (en) * 2008-12-24 2010-07-15 Porous Power Technologies, Llc Mat Forming Spacers in Microporous Membrane Matrix
GB0905023D0 (en) 2009-03-24 2009-05-06 Univ Erasmus Medical Ct Binding molecules
EP2411411B1 (en) 2009-03-25 2016-08-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Novel anti-alpha5beta1 antibodies and uses thereof
CN102804297A (zh) * 2009-05-20 2012-11-28 多孔渗透电力技术公司 用于微孔膜的处理和胶粘剂
TWI513465B (zh) 2009-06-25 2015-12-21 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法
SG176947A1 (en) 2009-07-03 2012-01-30 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
DK3241435T3 (da) * 2009-07-08 2021-08-23 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
US20120204278A1 (en) * 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US9445581B2 (en) 2012-03-28 2016-09-20 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
AU2010303737B2 (en) * 2009-10-06 2014-05-29 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Genetically modified mice and engraftment
SI2509409T1 (sl) 2009-12-10 2016-12-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miši, ki tvorijo protitelesa težke verige
US20110150885A1 (en) 2009-12-11 2011-06-23 Atyr Pharma, Inc. Aminoacyl trna synthetases for modulating hematopoiesis
AU2010339863B2 (en) 2009-12-21 2014-07-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized FcyR mice
EP2516462B1 (en) 2009-12-23 2015-05-06 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
ES2547142T5 (es) * 2010-02-08 2021-12-09 Regeneron Pharma Cadena ligera común de ratón
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
US20130185821A1 (en) * 2010-02-08 2013-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
US20130045492A1 (en) 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
WO2011101328A2 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Roche Glycart Ag Treatment with a humanized igg class anti egfr antibody and an antibody against insulin like growth factor 1 receptor
EP2536748B1 (en) 2010-02-18 2014-08-20 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
CN102906117B (zh) 2010-03-24 2016-04-06 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗lrp6抗体
EP4345164A2 (en) 2010-03-31 2024-04-03 Ablexis, LLC Genetic engineering of non-human animals for the production of chimeric antibodies
EP2563380B1 (en) 2010-04-26 2018-05-30 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase
JP6294074B2 (ja) 2010-04-27 2018-03-14 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド イソロイシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
AU2011248489B2 (en) 2010-04-28 2016-10-06 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl tRNA synthetases
JP5991963B2 (ja) 2010-04-29 2016-09-14 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド バリルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
AU2011248490B2 (en) 2010-04-29 2016-11-10 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases
EP2566515B1 (en) 2010-05-03 2017-08-02 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
CN103096912A (zh) 2010-05-03 2013-05-08 Atyr医药公司 与苯丙氨酰-α-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的创新发现
JP6008841B2 (ja) 2010-05-03 2016-10-19 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド メチオニルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
CA2798139C (en) 2010-05-04 2019-09-24 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex
WO2011143482A2 (en) 2010-05-14 2011-11-17 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases
CA2800375C (en) 2010-05-27 2021-03-09 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-trna synthetases
MY172702A (en) 2010-06-11 2019-12-10 Regeneron Pharma Production of fertile xy female animals from xy es cells
WO2011159847A2 (en) 2010-06-15 2011-12-22 The Regents Of The University Of California Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ror1) single chain fv antibody fragment conjugates and methods of use thereof
NZ605966A (en) * 2010-06-17 2015-04-24 Kymab Ltd Animal models and therapeutic molecules
WO2011159980A1 (en) 2010-06-18 2011-12-22 Genentech, Inc. Anti-axl antibodies and methods of use
PT3034608T (pt) 2010-06-22 2019-05-28 Regeneron Pharma Ratinhos expressando uma cadeia leve híbrida de imunoglobulina com uma região variável humana
NZ605449A (en) 2010-07-09 2015-03-27 Genentech Inc Anti-neuropilin antibodies and methods of use
EP2593125B1 (en) 2010-07-12 2017-11-01 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-trna synthetases
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
RU2580017C2 (ru) * 2010-07-26 2016-04-10 Трианни, Инк. Трансгенные животные и способы применения
US10662256B2 (en) 2010-07-26 2020-05-26 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
US10793829B2 (en) 2010-07-26 2020-10-06 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
US9516868B2 (en) * 2010-08-02 2016-12-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice that make VL binding proteins
BR112013002535A2 (pt) 2010-08-03 2019-09-24 Hoffmann La Roche biomarcadores de leucemia linfocítica crônica (cll)
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
RU2584597C2 (ru) 2010-08-13 2016-05-20 Рош Гликарт Аг Антитела против а2 тенасцина с и способы их применения
US9011847B2 (en) 2010-08-13 2015-04-21 Roche Glycart, AG Anti-FAP antibodies and methods of use
EP2603525A1 (en) 2010-08-13 2013-06-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibodies to il-1beta and il-18, for treatment of disease
WO2012027611A2 (en) 2010-08-25 2012-03-01 Atyr Pharma, Inc. INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES
SG187886A1 (en) 2010-08-31 2013-04-30 Genentech Inc Biomarkers and methods of treatment
SG189475A1 (en) 2010-11-05 2013-05-31 Transbio Ltd Markers of endothelial progenitor cells and uses thereof
EP3176184B1 (en) 2010-11-10 2020-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-bace1 antibodies for neural disease immunotherapy
US8771696B2 (en) 2010-11-23 2014-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of reducing the severity of stress hyperglycemia with human antibodies to the glucagon receptor
JO3756B1 (ar) 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
CN105175542B (zh) 2010-12-16 2018-12-18 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 与th2抑制相关的诊断和治疗
AU2011349443B2 (en) 2010-12-20 2015-12-24 Genentech, Inc. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
WO2012088313A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
KR20130113493A (ko) 2011-01-03 2013-10-15 에프. 호프만-라 로슈 아게 항―ｄｉｇ 항체 및 펩티드에 접합되어 있는 디그옥시게닌의 복합체의 약학적 조성물
DK3252076T3 (da) 2011-01-14 2019-12-02 Univ California Diagnostisk anvendelse af antistoffer mod ror-1-protein
CN103476796A (zh) 2011-01-28 2013-12-25 赛诺菲 治疗特定受试者组的方法中使用的针对pcsk9的人抗体
EP2650016A1 (en) 2011-01-28 2013-10-16 Sanofi Human antibodies to PSCK9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens (11565)
BR112013020086B1 (pt) 2011-02-08 2020-12-08 Medimmune, Llc Anticorpo isolado ou seu fragmento de ligação a antígeno, composição compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, kit, uso de uma quantidade eficaz de um anticorpo ou seu fragmento de ligação a antígeno e método para inibir a formação da oligômeros de alfatoxina
PT2675271T (pt) 2011-02-15 2018-10-11 Univ Yale Ratinhos humanizados para m-csf
KR101387377B1 (ko) * 2011-02-25 2014-04-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Ａｄａｍ６ 마우스
EP2686016B1 (en) 2011-03-14 2019-05-01 Cellmid Limited Antibody recognizing n-domain of midkine
ES2692268T3 (es) 2011-03-29 2018-12-03 Roche Glycart Ag Variantes de Fc de anticuerpo
TW201249867A (en) 2011-04-01 2012-12-16 Astellas Pharma Inc Novel anti-human il-23 receptor antibody
JP2014516511A (ja) 2011-04-07 2014-07-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｆｇｆｒ４抗体及び使用方法
EP3103810A3 (en) 2011-04-21 2017-03-08 Garvan Institute of Medical Research Modified variable domain molecules and methods for producing and using them
AR088782A1 (es) 2011-04-29 2014-07-10 Sanofi Sa Sistemas de ensayo y metodos para identificar y caracterizar farmacos hipolipemiantes
EP2527842B1 (en) 2011-05-12 2013-06-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Neuropeptide release assay for sodium channels
MX2013013054A (es) 2011-05-12 2014-02-20 Genentech Inc Metodo de monitoreo de lc-ms/ms de reaccion multiple para detectar anticuerpos terapeuticos en muestras de animales utilizando peptidos de firma de estructura.
ES2628385T3 (es) 2011-05-16 2017-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistas de FGFR1 y procedimientos de uso
WO2012162561A2 (en) 2011-05-24 2012-11-29 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
WO2012171057A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Csl Limited Antibodies against g-csfr and uses thereof
US8623666B2 (en) 2011-06-15 2014-01-07 Hoffmann-La Roche Inc. Method for detecting erythropoietin (EPO) receptor using anti-human EPO receptor antibodies
AR086823A1 (es) 2011-06-30 2014-01-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met, metodos
PT2717917T (pt) 2011-07-05 2016-07-27 Bioasis Technologies Inc Conjugados de anticorpos p97
EP2739300B1 (en) 2011-07-05 2019-06-19 Duke University N-terminal deleted gp120 immunogens
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
WO2013015821A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the b12-transcobalamin receptor
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
PL3572517T3 (pl) 2011-08-05 2021-10-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Myszy z humanizowanym uniwersalnym łańcuchem lekkim
ES2654111T3 (es) 2011-08-05 2018-02-12 Bioasis Technologies Inc. Fragmentos p97 con actividad de transferencia
RS56876B1 (sr) 2011-08-11 2018-04-30 Astellas Pharma Inc Novo antitelo protiv humanog ngf
CA2842481A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Genentech, Inc. Inhibition of angiogenesis in refractory tumors
CA2842375A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Erica Jackson Neuregulin antibodies and uses thereof
CN103874709B (zh) 2011-08-19 2016-12-21 瑞泽恩制药公司 抗tie2抗体及其用途
US20130060011A1 (en) 2011-08-23 2013-03-07 Peter Bruenker Fc-free antibodies comprising two fab fragments and methods of use
JP2014534806A (ja) 2011-08-23 2014-12-25 ロシュ グリクアート アーゲー 抗ｍｃｓｐ抗体
WO2013026839A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use
EP2756300A1 (en) 2011-09-15 2014-07-23 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of promoting differentiation
EP3536712B1 (en) 2011-09-16 2023-05-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipoprotein(a) levels by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (pcsk9)
AU2012312515A1 (en) 2011-09-19 2014-03-13 Genentech, Inc. Combination treatments comprising c-met antagonists and B-raf antagonists
JP5813880B2 (ja) 2011-09-19 2015-11-17 カイマブ・リミテッド ヒトへの使用に合わせて作製された抗体、可変ドメインおよび鎖
JP2014531452A (ja) * 2011-09-19 2014-11-27 カイマブ・リミテッド 動物、レパートリーおよび方法
WO2013045916A1 (en) 2011-09-26 2013-04-04 Kymab Limited Chimaeric surrogate light chains (slc) comprising human vpreb
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
EP2763699A4 (en) 2011-10-03 2015-05-20 Univ Duke VACCINE
BR112014008212A2 (pt) 2011-10-05 2017-06-13 Genentech Inc método para tratar uma condição hepática, método de indução por diferenciação hepática e método de redução de proliferação anormal do ducto biliar
EA201490778A1 (ru) 2011-10-14 2014-09-30 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ HtrA1 И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
US9358250B2 (en) 2011-10-15 2016-06-07 Genentech, Inc. Methods of using SCD1 antagonists
US10246509B2 (en) * 2011-10-17 2019-04-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Restricted immunoglobulin heavy chain mice
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
EP2770823A4 (en) 2011-10-28 2015-12-09 Trianni Inc TRANSGENIC ANIMALS AND METHOD FOR THEIR USE
US9043996B2 (en) 2011-10-28 2015-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex animals
KR101926442B1 (ko) 2011-10-28 2018-12-12 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 키메라 주요 조직적합성 복합체 （ｍｈｃ） ｉｉ 분자들을 발현하는 유전자 변형된 마우스
EP4311833A3 (en) 2011-10-28 2024-05-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex mice
US9591835B2 (en) 2011-10-28 2017-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex animals
EP2771351B1 (en) 2011-10-28 2017-06-14 Patrys Limited Pat-lm1 epitopes and methods for using same
GB2496375A (en) * 2011-10-28 2013-05-15 Kymab Ltd A non-human assay vertebrate comprising human antibody loci and human epitope knock-in, and uses thereof
DK3424947T3 (da) * 2011-10-28 2021-02-22 Regeneron Pharma Genmodificerede t-celle-receptor-mus
AR088509A1 (es) 2011-10-28 2014-06-11 Genentech Inc Combinaciones terapeuticas y metodos para tratar el melanoma
RU2014124842A (ru) 2011-11-21 2015-12-27 Дженентек, Инк. Очистка анти-с-мет антител
US9253965B2 (en) * 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
GB201122047D0 (en) * 2011-12-21 2012-02-01 Kymab Ltd Transgenic animals
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
RU2664181C2 (ru) * 2011-12-20 2018-08-15 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Мыши с гуманизированной легкой цепью
SG11201403443WA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Hoffmann La Roche Expression vector element combinations, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
MX2014007262A (es) 2011-12-22 2014-08-01 Hoffmann La Roche Sistema de exhibicion de anticuerpos de longitud completa para celulas eucarioticas y su uso.
SI2794878T1 (sl) 2011-12-22 2020-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Organizacija ekspresijskega vektorja, postopki izdelave nove proizvodne celice in njihova uporaba za rekombinantno proizvodnjo polipeptidov
JP6040943B2 (ja) * 2011-12-22 2016-12-07 アステラス製薬株式会社 新規抗ヒトｃｔｇｆ抗体
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
MX2014008699A (es) 2012-01-18 2014-11-21 Genentech Inc Metodos para utilizar moduladores de fgf19.
AR089752A1 (es) 2012-01-18 2014-09-17 Genentech Inc Anticuerpos anti-lrp5 y metodos de uso
CN104202971B (zh) 2012-02-01 2016-07-06 瑞泽恩制药公司 表达包含vl结构域的重链的人源化啮齿动物的制备方法
BR112014019741A2 (pt) 2012-02-11 2020-12-22 Genentech, Inc Usos de um antagonista da via wnt, uso de uma terapia anticâncer, método de identificação de um indivíduo com câncer, métodos para prever, método de inibição da proliferação de uma célula de câncer, uso de um antagonista da translocação de r-spondina e antagonista da translocação de r-spondina isolado
RU2624128C2 (ru) 2012-02-15 2017-06-30 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Аффинная хроматография с применением fc-рецепторов
EP2814514B1 (en) 2012-02-16 2017-09-13 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
US9371391B2 (en) 2012-02-28 2016-06-21 Astellas Pharma Inc. Anti-human IL-23 receptor antibody and encoding polynucleotides
RU2628305C2 (ru) 2012-03-02 2017-08-15 Регенерон Фармасьютиказ, Инк. Человеческие антитела к токсинам clostridium difficile
JP2015509380A (ja) 2012-03-06 2015-03-30 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 共通の軽鎖のマウス
KR102082363B1 (ko) 2012-03-13 2020-02-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 난소암의 치료를 위한 조합 치료
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
EP2883449B1 (en) * 2012-03-16 2018-02-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine engineered light chain antibodies and genetically modified rodents for generating the same
KR20140134672A (ko) 2012-03-16 2014-11-24 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 pH-의존성 결합 특성을 나타내는 항원-결합 단백질을 생성하는 마우스
CN107361011B (zh) * 2012-03-16 2021-08-27 瑞泽恩制药公司 制备表达ph敏感性免疫球蛋白序列的非人动物的方法
WO2013148315A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
SG11201405059XA (en) 2012-03-28 2014-09-26 Kymab Ltd Transgenic non-human vertebrate for the expression of class - switched, fully human, antibodies
GB2502127A (en) * 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
TWI619729B (zh) 2012-04-02 2018-04-01 再生元醫藥公司 抗－ｈｌａ－ｂ*２７抗體及其用途
PT2838917T (pt) 2012-04-20 2019-09-12 Merus Nv Métodos e meios para a produção de moléculas similares a ig heterodiméricas
EP2847335B1 (en) * 2012-04-25 2018-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
KR20150006000A (ko) 2012-05-01 2015-01-15 제넨테크, 인크. 항-pmel17 항체 및 면역접합체
JO3820B1 (ar) 2012-05-03 2021-01-31 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية لـ fel d1وطرق لاستخدامها
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
KR101843614B1 (ko) 2012-05-23 2018-03-29 제넨테크, 인크. 치료제의 선택 방법
AR092325A1 (es) 2012-05-31 2015-04-15 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit
CN104582476B (zh) * 2012-06-05 2017-03-08 瑞泽恩制药公司 使用共同轻链制备完全人双特异性抗体的方法
NZ717848A (en) * 2012-06-12 2019-03-29 Regeneron Pharma Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci
CA2875096A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
JP6247287B2 (ja) 2012-07-04 2017-12-13 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗ビオチン抗体および使用方法
AU2013285422B2 (en) 2012-07-04 2017-04-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked antigen-antibody conjugates
JP6324376B2 (ja) 2012-07-04 2018-05-16 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗テオフィリン抗体および使用方法
MX356162B (es) 2012-07-05 2018-05-16 Genentech Inc Sistema de expresion y secrecion.
SG11201500096YA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti - cd79b antibodies
SG11201500093TA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
AU2013288929A1 (en) 2012-07-09 2014-12-04 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-CD22 antibodies
SG11201500142RA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
PL2872157T3 (pl) 2012-07-12 2020-07-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Koniugaty wiążących komórkę cząsteczek ze środkami cytotoksycznymi
AU2013288641B2 (en) 2012-07-13 2017-07-06 Roche Glycart Ag Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
CA3140358A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bioasis Technologies, Inc. Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof
SG11201500903XA (en) 2012-08-07 2015-03-30 Genentech Inc Combination therapy for the treatment of glioblastoma
HUE064945T2 (hu) 2012-08-21 2024-04-28 Sanofi Biotechnology Eljárások asztma kezelésére vagy megelõzésére IL-4R antagonista beadásával
TR201900694T4 (tr) 2012-08-23 2019-02-21 Agensys Inc 158p1d7 proteinlerine bağlanan antikor ilaç konjugatları (adc).
CN109369808B (zh) 2012-08-24 2023-11-07 加利福尼亚大学董事会 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗
EP2703009A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
EP2703008A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Human antibodies to PCSK9 for use in methods of treating particular groups of subjects
EP2706070A1 (en) 2012-09-06 2014-03-12 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
RU2768282C2 (ru) 2012-09-07 2022-03-23 Йель Юниверсити Генетически модифицированные не принадлежащие к человеческому роду животные и способ их использования
PL2892927T3 (pl) 2012-09-07 2018-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sposoby leczenia atopowego zapalenia skóry przez podawanie antagonisty IL-4R
RU2015117393A (ru) 2012-10-08 2016-12-10 Роше Гликарт Аг Лишенные fc антитела, содержащие два Fab-фрагмента, и способы их применения
ES2720040T3 (es) * 2012-10-12 2019-07-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de modificación de células hospedadoras
DK3939423T3 (da) 2012-11-05 2024-05-06 Regeneron Pharma Genetisk modificerede ikke-humane dyr og fremgangsmåder til anvendelse deraf
EP2914621B1 (en) 2012-11-05 2023-06-07 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
JP6694269B2 (ja) 2012-11-06 2020-05-13 メディミューン，エルエルシー Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）表面決定基に対する抗体
AU2013343667A1 (en) 2012-11-08 2015-04-02 F. Hoffmann-La Roche Ag HER3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of HER3
TWI657095B (zh) 2012-11-13 2019-04-21 美商建南德克公司 抗血球凝集素抗體及使用方法
AR093445A1 (es) 2012-11-14 2015-06-10 Regeneron Pharma Metodos para tratar el cancer de ovario con antagonistas de dll4
CA2891280C (en) 2012-11-24 2018-03-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
KR102239125B1 (ko) 2012-12-14 2021-04-12 오픈 모노클로날 테크놀로지, 인코포레이티드 인간 이디오타입을 갖는 설치류 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 이를 포함하는 동물
WO2014107739A1 (en) 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
WO2014113729A2 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Foundation Mecicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
SG11201505713YA (en) * 2013-02-06 2015-08-28 Regeneron Pharma B cell lineage based immunogen design with humanized animals
CN104995211B (zh) 2013-02-07 2019-09-13 Csl有限公司 Il-11r结合蛋白及其应用
EP2958938B1 (en) 2013-02-20 2019-04-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing humanized t-cell co-receptors
ES2904803T3 (es) 2013-02-20 2022-04-06 Regeneron Pharma Modificación genética de ratas
PT2840892T (pt) 2013-02-20 2018-07-20 Regeneron Pharma Animais não humanos com sequências da cadeia pesada da imunoglobulina modificada
CN104994879A (zh) 2013-02-22 2015-10-21 霍夫曼-拉罗奇有限公司 治疗癌症和预防药物抗性的方法
US20150342163A1 (en) 2013-02-22 2015-12-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex mice
SI2958937T1 (sl) * 2013-02-22 2018-12-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miš, ki izraža humanizirani poglavitni histokompatibilnostni kompleks
JP2016512489A (ja) 2013-02-26 2016-04-28 ロシュ グリクアート アーゲー 抗ｍｃｓｐ抗体
EP2964260A2 (en) 2013-03-06 2016-01-13 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CN105208855B (zh) * 2013-03-11 2018-04-27 瑞泽恩制药公司 表达嵌合的主要组织相容性复合物(mhc)ii类分子的转基因小鼠
AU2014243816B2 (en) 2013-03-13 2019-01-31 Bioasis Technologies Inc. Fragments of p97 and uses thereof
SG11201506294TA (en) 2013-03-13 2015-09-29 Regeneron Pharma Common light chain mouse
SI2967013T1 (sl) 2013-03-13 2019-03-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miši, ki izražajo omejen repertoar lahke verige imunoglobulina
ES2898620T3 (es) 2013-03-14 2022-03-08 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos contra GREM 1
KR20150127199A (ko) 2013-03-14 2015-11-16 제넨테크, 인크. 항-b7-h4 항체 및 면역접합체
WO2014153030A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
BR112015022576A2 (pt) 2013-03-14 2017-10-24 Genentech Inc produto farmacêutico e seu uso, kit e método para tratar uma disfunção hiperproliferativa
US9980470B2 (en) 2013-03-14 2018-05-29 Erasmus University Medical Center Antibody production
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
US10150800B2 (en) 2013-03-15 2018-12-11 Zyngenia, Inc. EGFR-binding modular recognition domains
WO2014141192A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Erasmus University Medical Center Generation of heavy chain-only antibodies
SG10201706210WA (en) 2013-03-15 2017-09-28 Genentech Inc Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
RU2661111C2 (ru) 2013-03-15 2018-07-11 Ац Иммуне С.А. Антитела к тау и способы применения
EP3633377A1 (en) 2013-03-15 2020-04-08 F. Hoffmann-La Roche AG Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
CN105188766B (zh) 2013-03-15 2019-07-12 瑞泽恩制药公司 生物活性分子、其偶联物及治疗用途
KR20150131177A (ko) 2013-03-15 2015-11-24 제넨테크, 인크. 항-CRTh2 항체 및 그의 용도
WO2014144292A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Sanofi Pasteur Biologics , Llc Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same
BR112015023203A8 (pt) 2013-03-15 2018-01-23 Constellation Pharmaceuticals Inc métodos para tratamento de câncer, método para aumentar a eficiência de um tratamento de câncer, método para retardar e/ou prevenir o desenvolvimento de câncer, método para tratar um indivíduo com câncer, método para aumentar a sensibilidade para um agente de terapia para câncer, método para estender um período de sensibilidade e método para estender a duração da resposta para uma terapia para câncer.
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
PT3456831T (pt) 2013-04-16 2021-09-10 Regeneron Pharma Modificação alvejada do genoma de rato
JP2016528167A (ja) 2013-04-29 2016-09-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ヒトＦｃＲｎ結合改変抗体及び使用方法
WO2014177459A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
TWI653243B (zh) 2013-04-29 2019-03-11 赫孚孟拉羅股份公司 遏止ＦｃＲｎ結合之抗ＩＧＦ－１Ｒ抗體及其治療血管性眼疾之用途
US9783618B2 (en) 2013-05-01 2017-10-10 Kymab Limited Manipulation of immunoglobulin gene diversity and multi-antibody therapeutics
US11707056B2 (en) * 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
US20140331339A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Kymab Limited Transgenic Non-Human Assay Vertebrates, Assays and Kits
EP4324480A3 (en) 2013-05-20 2024-05-08 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
TWI682780B (zh) 2013-05-30 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 醫藥組成物用於製造治療與ｐｃｓｋ９功能獲得性突變有關之體染色體顯性高膽固醇血症的藥物之用途
EP2810955A1 (en) 2013-06-07 2014-12-10 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EA201592267A1 (ru) 2013-06-07 2016-04-29 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы ингибирования атеросклероза посредством введения ингибитора pcsk9
CN111437387A (zh) 2013-06-21 2020-07-24 赛诺菲生物技术公司 通过施用il-4r拮抗剂治疗鼻息肉症的方法
KR20160060634A (ko) 2013-08-01 2016-05-30 어젠시스 인코포레이티드 Ｃｄ37 단백질에 결합하는 항체 약물 컨쥬게이트(ａｄｃ)
KR102138723B1 (ko) 2013-08-07 2020-07-29 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Lincrna-결핍 비인간 동물
JP6380394B2 (ja) 2013-08-09 2018-08-29 アステラス製薬株式会社 新規抗ヒトｔｓｌｐ受容体抗体
EP3564671B1 (en) 2013-08-23 2021-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diagnostic tests and methods for assessing safety, efficacy or outcome of allergen-specific immunotherapy (sit)
EP3038624A1 (en) 2013-08-26 2016-07-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
US20150093399A1 (en) 2013-08-28 2015-04-02 Bioasis Technologies, Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
US10456470B2 (en) 2013-08-30 2019-10-29 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma
US10617755B2 (en) 2013-08-30 2020-04-14 Genentech, Inc. Combination therapy for the treatment of glioblastoma
NZ717003A (en) 2013-09-02 2019-05-31 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Novel cytotoxic agents for conjugation of drugs to cell binding molecule
EP3046940B1 (en) 2013-09-17 2019-07-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of using anti-lgr5 antibodies
CN105637087A (zh) * 2013-09-18 2016-06-01 科马布有限公司 方法、细胞与生物体
KR20200103882A (ko) 2013-09-18 2020-09-02 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 히스티딘 엔지니어링된 경쇄 항체 및 그것을 생성하기 위한 유전자 변형된 비-인간 동물
NL2013554B1 (en) 2013-10-01 2016-01-08 Kymab Ltd Animal models and therapeutic molecules.
US20150140002A1 (en) 2013-10-11 2015-05-21 Sanofi Use of a pcsk9 inhibitor to treat hyperlipidemia
BR112016007635A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-12 Genentech Inc inibidores de nsp4 e métodos de uso
MX2016004802A (es) 2013-10-18 2016-07-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-r-espondina (anti-rspo) y metodos de uso.
CN105849280B (zh) 2013-10-23 2020-11-06 豪夫迈·罗氏有限公司 诊断和治疗嗜酸性粒细胞紊乱的方法
HUE058272T2 (hu) 2013-11-06 2022-07-28 Janssen Biotech Inc Anti-CCL17 antitestek
AU2014348765A1 (en) 2013-11-12 2016-06-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens for use with PCSK9 inhibitors
KR102358311B1 (ko) 2013-11-21 2022-02-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-알파-시누클레인 항체 및 사용 방법
CN105980568B (zh) 2013-12-11 2019-12-03 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
SI3080279T1 (sl) 2013-12-11 2019-01-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Postopki in sestavki za ciljano spremembo genoma
EA201691214A1 (ru) 2013-12-13 2016-12-30 Дженентек, Инк. Антитела к cd33 и иммуноконъюгаты
EP3083686B2 (en) 2013-12-17 2023-03-22 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
WO2015095410A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
DK3083689T3 (da) 2013-12-17 2020-08-03 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
EP3527587A1 (en) 2013-12-17 2019-08-21 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-l1 binding antagonists
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN105829534B (zh) 2013-12-24 2021-08-03 安斯泰来制药株式会社 抗人bdca-2抗体
RU2694981C2 (ru) 2014-01-03 2019-07-18 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Ковалентно связанные конъюгаты хеликар-антитело против хеликара и их применения
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP3089759B1 (en) 2014-01-03 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates
BR112016013849A2 (pt) 2014-01-03 2017-10-10 Hoffmann La Roche conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica
BR112016016416A2 (pt) 2014-01-15 2017-10-03 Hoffmann La Roche VARIANTES DE REGIÕES-"Fc" COM 'FcRn' MODIFICADAS E PROPRIEDADES DE LIGAÇÃO DE PROTEÍNA "A" MANTIDAS
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
WO2015112909A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Genentech, Inc. Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
WO2015116852A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating rheumatoid arthritis by administering an il-6r antibody
AU2015210612B2 (en) 2014-02-03 2020-04-09 Bioasis Technologies Inc. P97 fusion proteins
TWI705824B (zh) 2014-02-08 2020-10-01 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
MX2016010237A (es) 2014-02-08 2017-04-27 Genentech Inc Metodos de tratamiento de enfermedad de alzheimer.
CA2936565C (en) 2014-02-12 2020-08-11 Genentech, Inc. Anti-jagged1 antibodies and methods of use
JP2017506626A (ja) 2014-02-14 2017-03-09 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 中程度用量スタチン療法により適切に管理されない高コレステロール血症を有する患者を処置するための方法
DK3107562T3 (da) 2014-02-19 2019-12-16 Bioasis Technologies Inc P97-ids-fusionsproteiner
BR112016018980A2 (pt) 2014-02-21 2017-10-10 Genentech Inc método de tratamento de um distúrbio, anticorpo multiespecífico, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de produção de uma metade de anticorpo ou de um anticorpo multiespecífico e de produção de um anticorpo multiespecífico, imunoconjugado e formulação farmacêutica
JP6673840B2 (ja) 2014-02-21 2020-03-25 サノフィ・バイオテクノロジー Ｉｌ−４ｒ拮抗薬の投与により喘息を処置または予防するための方法
PT3122757T (pt) 2014-02-28 2023-11-03 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Ligantes carregados e as suas utilizações em conjugação
CA2941687A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Genentech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
CN114558129A (zh) 2014-03-17 2022-05-31 赛诺菲生物技术公司 用于降低心血管风险的方法
KR20210088756A (ko) 2014-03-21 2021-07-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 단일 도메인 결합 단백질을 생산하는 비-인간 동물
BR112016021679A2 (pt) 2014-03-21 2018-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. proteína de ligação ao antígeno, métodos de produção de uma proteína de ligação ao antígeno e de identificação de uma ou mais proteínas de ligação ao antígeno, hibridoma, ácido nucleico, célula, e, animal não humano geneticamente modificado.
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
BR112016021383A2 (pt) 2014-03-24 2017-10-03 Genentech Inc Método para identificar um paciente com câncer que é susceptível ou menos susceptível a responder ao tratamento com um antagonista de cmet, método para identificar um paciente apresentando câncer previamente tratado, método para determinar a expressão do biomarcador hgf, antagonista anti-c-met e seu uso, kit de diagnóstico e seu método de preparo
LT3126394T (lt) 2014-03-31 2020-01-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš ox40 ir jų naudojimo būdai
MX2016012779A (es) 2014-03-31 2017-04-27 Genentech Inc Terapia de combinacion con agentes antiangiogénesis y agonistas de unión a ox40.
SG11201608054YA (en) 2014-04-02 2016-10-28 Hoffmann La Roche Method for detecting multispecific antibody light chain mispairing
SG11201608194VA (en) 2014-04-03 2016-10-28 Igm Biosciences Inc Modified j-chain
AP2016009549A0 (en) 2014-04-18 2016-11-30 Acceleron Pharma Inc Methods for increasing red blood cell levels and treating sickle-cell disease
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
WO2015168521A2 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Bioasis Technologies, Inc. P97-polynucleotide conjugates
RU2711744C1 (ru) 2014-05-19 2020-01-21 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Генетически модифицированные животные, отличные от человека, экспрессирующие epo человека
CA2946662A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
CA2944717A1 (en) 2014-05-23 2015-11-26 Genentech, Inc. Mit biomarkers and methods using the same
RU2648166C1 (ru) * 2014-05-30 2018-03-22 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Животные, содержащие гуманизированную дипептидилпептидазу iv (dpp4)
LT3152312T (lt) * 2014-06-06 2020-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tikslinio lokuso modifikavimo būdai ir kompozicijos
WO2015191715A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Genentech, Inc. Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
JP2017517552A (ja) 2014-06-13 2017-06-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗癌剤耐性の治療及び防止方法
WO2015192111A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Acceleron Pharma, Inc. Methods and compositions for treating ulcers
PT3155099T (pt) 2014-06-23 2018-04-20 Regeneron Pharma Montagem de dna mediada por nuclease
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
RU2771532C2 (ru) 2014-06-26 2022-05-05 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для нацеленных генетических модификаций и способы их применения
TW201623329A (zh) 2014-06-30 2016-07-01 亞佛瑞司股份有限公司 針對骨調素截斷變異體的疫苗及單株抗體暨其用途
WO2016005545A1 (en) 2014-07-10 2016-01-14 Affiris Ag Substances and methods for the use in prevention and/or treatment in huntington's disease
EP3166627A1 (en) 2014-07-11 2017-05-17 Genentech, Inc. Notch pathway inhibition
JP2017523776A (ja) 2014-07-14 2017-08-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 膠芽腫の診断方法及びその治療用組成物
JP2017528427A (ja) 2014-07-16 2017-09-28 サノフィ・バイオテクノロジー ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）を有する患者を処置するための方法
PL3169362T3 (pl) 2014-07-16 2020-12-28 Sanofi Biotechnology Sposoby leczenia pacjentów wysokiego ryzyka sercowo-naczyniowego z hipercholesterolemią
JP6705807B2 (ja) 2014-08-15 2020-06-03 エーダイニクス インコーポレイテッド 疼痛を治療するためのオリゴヌクレオチドデコイ
US9518118B2 (en) 2014-09-12 2016-12-13 Genentech, Inc. Anti-HER2 antibodies and immunoconjugates
JP6943760B2 (ja) 2014-09-12 2021-10-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ４抗体及び免疫複合体
CA2958479A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
KR20170062466A (ko) 2014-09-16 2017-06-07 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항-글루카곤 항체 및 그것의 사용
KR20170055521A (ko) 2014-09-17 2017-05-19 제넨테크, 인크. 항-her2 항체를 포함하는 면역콘주게이트
AU2015317370A1 (en) 2014-09-19 2017-03-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors
AU2015320678B2 (en) 2014-09-23 2021-07-22 Genentech, Inc. Method of using anti-CD79b immunoconjugates
SG11201701712WA (en) 2014-09-23 2017-04-27 Regeneron Pharma Anti-il-25 antibodies and uses thereof
SG11201702309RA (en) 2014-10-15 2017-04-27 Regeneron Pharma Methods and compositions for generating or maintaining pluripotent cells
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
EP3209697A4 (en) 2014-10-23 2018-05-30 La Trobe University Fn14-binding proteins and uses thereof
EP3223865A4 (en) 2014-10-31 2018-10-03 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
EP3215637B1 (en) 2014-11-03 2019-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and biomarkers for predicting efficacy and valuation of an ox40 agonist treatment
EP3215850B1 (en) 2014-11-03 2019-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
LT3215528T (lt) 2014-11-06 2019-10-25 Hoffmann La Roche Fc srities variantai su modifikuota fcrn jungtimi ir naudojimo būdai
AR102522A1 (es) 2014-11-06 2017-03-08 Hoffmann La Roche Variantes de región fc con propiedades modificadas de unión a fcrn y proteína a
US20160152720A1 (en) 2014-11-06 2016-06-02 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
AU2015346460A1 (en) 2014-11-10 2017-03-23 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
EP3552488A1 (en) 2014-11-10 2019-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Animal model for nephropathy and agents for treating the same
WO2016077666A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method for generating high affinity antibodies
KR20230158131A (ko) 2014-11-14 2023-11-17 사노피 바이오테크놀로지 Ｉｌ-4ｒ 길항제의 투여에 의한, 비용종을 동반한 만성 부비동염의 치료 방법
WO2016077789A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
SG10201807625PA (en) 2014-11-17 2018-10-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
JP6779876B2 (ja) 2014-11-19 2020-11-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体抗体及びその使用方法
JP6859259B2 (ja) 2014-11-19 2021-04-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＢＡＣＥｌに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
SI3789402T1 (sl) 2014-11-20 2022-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Kombinirano zdravljenje z bispecifičnimi molekulami, ki vežejo antigen in aktivirajo celice T, ter antagonisti za vezavo osi PD-1
KR20230070319A (ko) 2014-11-21 2023-05-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 쌍 형성된 가이드 rna를 사용하는 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 조성물
LT3689140T (lt) 2014-11-24 2022-08-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Gyvūnai, išskyrus žmones, ekspresuojantys humanizuotą cd3 kompleksą
JP6554280B2 (ja) * 2014-11-28 2019-07-31 株式会社デンソーテン データ処理装置、画像処理方法、及び、プログラム
MA41119A (fr) 2014-12-03 2017-10-10 Acceleron Pharma Inc Méthodes de traitement de syndromes myélodysplasiques et d'anémie sidéroblastique
AR102918A1 (es) 2014-12-05 2017-04-05 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b y métodos de uso
BR112017011234A2 (pt) 2014-12-10 2018-03-27 Genentech Inc anticorpos contra receptor da barreira hematoencefálica e métodos de uso
EP3233120A4 (en) 2014-12-19 2018-05-30 Monash University Il-21 antibodies
BR112017013104A2 (pt) 2014-12-19 2018-05-15 Regeneron Pharma métodos para modificar um locus genômico alvo em uma célula, para intensificar a recombinação homóloga em um locus genômico alvo em uma célula e para produzir uma geração f0 de um animal não humano.
KR102515796B1 (ko) 2014-12-19 2023-03-30 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-c5 항체 및 그의 사용 방법
TWI702229B (zh) 2014-12-19 2020-08-21 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
CN107428823B (zh) 2015-01-22 2021-10-26 中外制药株式会社 两种以上抗-c5抗体的组合与使用方法
TWI710573B (zh) 2015-01-26 2020-11-21 美商再生元醫藥公司 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體
MX2017008978A (es) 2015-02-05 2017-10-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos que comprenden un dominio de union al antigeno dependiente de la concentracion ionica, variantes de la region fc, antiocuerpor de union a interleucina 8 (il-8) y usos de los mismos.
US10988534B2 (en) 2015-02-09 2021-04-27 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Multi-specific antibodies with affinity for human A33 antigen and DOTA metal complex and uses thereof
US20180022803A1 (en) 2015-02-13 2018-01-25 Biommune Technologies Inc. Antibodies to l-type voltage gated channels and related methods
CN107614010A (zh) 2015-03-09 2018-01-19 艾更斯司股份有限公司 结合至flt3蛋白的抗体药物偶联物(adc)
CA2978096C (en) 2015-03-16 2022-06-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animal exhibiting diminished upper and lower motor neuron function and sensory perception
WO2016149276A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Genentech, Inc. Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
CN107438622A (zh) 2015-03-19 2017-12-05 瑞泽恩制药公司 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物
EP3683233A1 (en) 2015-03-20 2020-07-22 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
SG11201707769VA (en) 2015-03-23 2017-10-30 Jounce Therapeutics Inc Antibodies to icos
US20160375147A1 (en) 2015-03-27 2016-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
AU2016246698B2 (en) 2015-04-06 2022-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized T cell mediated immune responses in non-human animals
MA41919A (fr) 2015-04-06 2018-02-13 Acceleron Pharma Inc Hétéromultimères alk4:actriib et leurs utilisations
CN114736307A (zh) 2015-04-06 2022-07-12 阿塞勒隆制药公司 TGF-β超家族I型和II型受体异多聚体及其用途
MX2017012805A (es) 2015-04-07 2018-04-11 Genentech Inc Complejo de unión a antígenos con actividad agonista y métodos de uso.
HRP20211980T1 (hr) 2015-04-07 2022-04-01 Alector Llc Protutijela protiv sortilina i postupci njihove upotrebe
RU2020124128A (ru) 2015-04-13 2020-09-22 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Гуманизированные мыши с нокином sirpa-il15 и способы их использования
JP7044553B2 (ja) 2015-04-24 2022-03-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 結合ポリペプチドを含む細菌を特定する方法
EP3288981A1 (en) 2015-05-01 2018-03-07 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
EP4238994A3 (en) 2015-05-11 2024-02-07 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
LT3294770T (lt) 2015-05-12 2020-12-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Vėžio gydymo ir diagnostikos būdai
US10395759B2 (en) 2015-05-18 2019-08-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for copy number variant detection
EP3302048B1 (en) 2015-05-29 2020-02-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a disruption in a c9orf72 locus
ES2789500T5 (es) 2015-05-29 2023-09-20 Hoffmann La Roche Procedimientos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer
EP3302563A1 (en) 2015-05-29 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
EP3302552A1 (en) 2015-06-02 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP6793134B2 (ja) 2015-06-05 2020-12-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔａｕ抗体及び使用方法
EP3303397A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
EP3303399A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
KR20180033502A (ko) 2015-06-12 2018-04-03 알렉터 엘엘씨 항-cd33 항체 및 그의 사용 방법
EP3307779A2 (en) 2015-06-12 2018-04-18 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
CN108064246A (zh) 2015-06-15 2018-05-22 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
JP6871874B2 (ja) 2015-06-16 2021-05-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
JP2018526972A (ja) 2015-06-16 2018-09-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ３抗体及び使用方法
TW201718647A (zh) 2015-06-16 2017-06-01 建南德克公司 抗-cll-1抗體及使用方法
CN107771076A (zh) 2015-06-17 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 使用pd‑1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗局部晚期或转移性乳腺癌的方法
WO2016205531A2 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and methods of use
PE20221007A1 (es) 2015-06-24 2022-06-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-receptor de transferrina con afinidad disenada
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
EP3319936A4 (en) 2015-07-12 2019-02-06 Suzhou M-conj Biotech Co., Ltd. PLACES OF CONDUCT FOR THE CONJUGATION OF CELL BINDING MOLECULES
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
US9884900B2 (en) 2015-08-04 2018-02-06 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating Janus kinase-associated disorders by administering soluble transforming growth factor beta type II receptor
EA201890434A1 (ru) 2015-08-05 2018-10-31 Янссен Байотек, Инк. Антитела к cd154 и способы их применения
TW201713690A (zh) 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
CN107922507B (zh) 2015-08-18 2022-04-05 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者
IL257411B2 (en) 2015-08-24 2024-05-01 Trianni Inc Improved production of immunoglobulins
KR20230079500A (ko) 2015-09-18 2023-06-07 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8에 결합하는 항체 및 그의 사용
BR112018005737A2 (pt) 2015-09-23 2018-10-09 Genentech Inc anticorpos, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método para produzir o anticorpo, para reduzir ou inibir a angiogênese, para tratar um distúrbio associado à angiogênese, para inibir a permeabilidade vascular, composição, conjugado de anticorpo, proteína de fusão, para identificar uma alteração de resíduos, utilização do anticorpo, utilização do conjugado e utilização da proteína
EP3662930A1 (en) 2015-09-24 2020-06-10 AbVitro LLC Hiv antibody compositions and methods of use
JP6764474B2 (ja) 2015-09-25 2020-09-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体及び使用方法
WO2017059243A2 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Janssen Biotech, Inc. Agonistic antibodies specifically binding human cd40 and methods of use
EP3356401B1 (en) 2015-09-30 2020-06-24 IGM Biosciences, Inc. Binding molecules with modified j-chain
EP3355913A1 (en) 2015-09-30 2018-08-08 IGM Biosciences A/S Binding molecules with modified j-chain
CN114031689A (zh) 2015-10-02 2022-02-11 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗人cd20/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
WO2017055443A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd1 antibodies and methods of use
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
CA2998208A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
US10407510B2 (en) 2015-10-30 2019-09-10 Genentech, Inc. Anti-factor D antibodies and conjugates
CA3001362C (en) 2015-10-30 2020-10-13 Genentech, Inc. Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
AU2016348391A1 (en) 2015-11-03 2018-05-17 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding TIM-3 and their uses
CN108602884A (zh) 2015-11-08 2018-09-28 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
US10550170B2 (en) 2015-11-23 2020-02-04 Acceleron Pharma Inc. Methods for treating vascular eye disorders with actrii antagonists
US10813346B2 (en) 2015-12-03 2020-10-27 Trianni, Inc. Enhanced immunoglobulin diversity
BR112018003984A2 (pt) 2015-12-09 2018-09-25 Hoffmann La Roche anticorpos
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
US20180355043A1 (en) 2015-12-17 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Antibodies Specifically Binding HLA-DR and Their Uses
PE20181402A1 (es) 2015-12-18 2018-09-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-c5 y metodos de uso
IL259588B2 (en) 2016-01-08 2023-09-01 Hoffmann La Roche Methods for the treatment of cea-positive cancer using pd-1 spindle-binding antagonists and bispecific antibodies against anti-cea and anti-cd3
KR102482103B1 (ko) 2016-01-13 2022-12-28 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 조작된 중쇄 다양성 영역을 갖는 설치류
WO2017127764A1 (en) 2016-01-20 2017-07-27 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
MY198605A (en) 2016-01-25 2023-09-08 Regeneron Pharma Maytansinoid derivatives conjugates thereof, and methods of use
KR20180104149A (ko) 2016-02-04 2018-09-19 트리아니, 인코포레이티드 면역글로불린의 증대된 생성
KR20180110107A (ko) * 2016-02-16 2018-10-08 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 돌연변이 키뉴레니나아제 유전자를 갖는 비인간 동물
HRP20230992T1 (hr) 2016-02-17 2023-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Postupci za liječenje ili sprečavanje ateroskleroze davanjem inhibitora angptl3
KR20180119632A (ko) 2016-02-29 2018-11-02 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
AU2017227713B2 (en) 2016-03-03 2022-12-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with hyperlipidemia by administering a PCSK9 inhibitor in combination with an ANGPTL3 inhibitor
TWI759287B (zh) 2016-03-15 2022-04-01 日商中外製藥股份有限公司 使用ｐｄ－１軸結合拮抗劑和抗ｇｐｃ３抗體治療癌症的方法
EP3433621A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
JP2019515369A (ja) 2016-03-29 2019-06-06 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 遺伝的バリアント−表現型解析システムおよび使用方法
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
JP6964090B2 (ja) 2016-04-08 2021-11-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. Ａｎｇｐｔｌ８阻害剤およびａｎｇｐｔｌ３阻害剤を用いて高脂血症を処置するための方法
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
WO2017181079A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
JP2019521641A (ja) 2016-04-15 2019-08-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんを監視及び治療するための方法
AU2017258105A1 (en) 2016-04-28 2018-11-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with familial hypercholesterolemia
RU2018141360A (ru) 2016-05-02 2020-06-03 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Contorsbody - одноцепочечный связывающий мишень агент
WO2017194441A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Modified anti-tenascin antibodies and methods of use
TWI786044B (zh) 2016-05-13 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 藉由投予ｐｄ-１抑制劑治療皮膚癌之方法
WO2017201476A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for breaking immunological tolerance using multiple guide rnas
EP3458101B1 (en) 2016-05-20 2020-12-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Protac antibody conjugates and methods of use
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
CN110603266A (zh) 2016-06-02 2019-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗癌症的ii型抗cd20抗体和抗cd20/cd3双特异性抗体
CN116458475A (zh) 2016-06-03 2023-07-21 瑞泽恩制药公司 表达外源末端脱氧核苷酸转移酶的非人动物
IL262996B2 (en) 2016-06-06 2024-03-01 Hoffmann La Roche Fusion proteins for ophthalmology with increased grip in the eye
WO2017214024A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
WO2017214089A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals expressing antibodies with human lambda light chains
GB201610162D0 (en) 2016-06-10 2016-07-27 Imp Innovations Ltd And Inst Pasteur Methods
AU2017283470B2 (en) 2016-06-14 2024-03-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-C5 antibodies and uses thereof
CN109563160B (zh) 2016-06-24 2023-02-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗聚泛素多特异性抗体
IL299099A (en) 2016-06-27 2023-02-01 Univ California Combinations of cancer treatments
JP6983824B2 (ja) 2016-07-04 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 新規抗体フォーマット
ES2875905T3 (es) 2016-07-15 2021-11-11 Acceleron Pharma Inc Composiciones que comprenden polipéptidos ActRIIA para su uso en el tratamiento de la hipertensión pulmonar
TW201815821A (zh) 2016-07-18 2018-05-01 美商再生元醫藥公司 抗茲卡病毒抗體及使用方法
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
CN109789184A (zh) 2016-07-27 2019-05-21 阿塞勒隆制药公司 用于治疗骨髓纤维化的方法和组合物
CN109415444B (zh) 2016-07-29 2024-03-01 中外制药株式会社 显示增加的备选fviii辅因子功能活性的双特异性抗体
WO2018023014A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice comprising mutations resulting in expression of c-truncated fibrillin-1
US11053308B2 (en) 2016-08-05 2021-07-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for treating IL-8-related diseases
JP2019530434A (ja) 2016-08-05 2019-10-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法
CN109476748B (zh) 2016-08-08 2023-05-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
EP3282019A1 (en) 2016-08-09 2018-02-14 Medizinische Universität Wien Genotyping and treatment of cancer, in particular chronic lymphocytic leukemia
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
CN109863170A (zh) 2016-08-12 2019-06-07 詹森生物科技公司 具有增强的激动作用和效应子功能的工程化抗体及其他含Fc结构域分子
CA3033665A1 (en) 2016-08-12 2018-02-15 Janssen Biotech, Inc. Fc engineered anti-tnfr superfamily member antibodies having enhanced agonistic activity and methods of using them
WO2018044640A1 (en) 2016-08-29 2018-03-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-gremlin-1 (grem1) antibodies and methods of use thereof for treating pulmonary arterial hypertension
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
JP6976315B2 (ja) 2016-09-19 2021-12-08 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 補体因子に基づくアフィニティークロマトグラフィー
AU2017331739A1 (en) 2016-09-23 2019-03-07 Csl Limited Coagulation factor binding proteins and uses thereof
EP3528838B1 (en) 2016-09-23 2023-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Uses of il-13 antagonists for treating atopic dermatitis
SG10202102997UA (en) 2016-09-30 2021-04-29 Regeneron Pharma Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
EP3522934A4 (en) 2016-10-05 2020-04-15 Acceleron Pharma Inc. COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF RENOPATHY
MX2019003934A (es) 2016-10-06 2019-07-10 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
US11479600B2 (en) 2016-10-21 2022-10-25 Adimab, Llc Anti-respiratory syncytial virus antibodies, and methods of their generation and use
JP2020503843A (ja) 2016-10-21 2020-02-06 アディマブ， エルエルシー 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法
IL293585B2 (en) 2016-10-21 2023-11-01 Adimab Llc Respiratory syncytial virus antibodies and methods for their production and use
JP2019535250A (ja) 2016-10-29 2019-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｍｉｃ抗体及び使用方法
US20190254264A1 (en) * 2016-10-31 2019-08-22 National University Corporation Tottori University Human antibody-producing non-human animal and method for preparing human antibodies using same
MY195110A (en) 2016-11-02 2023-01-10 Jounce Therapeutics Inc Antibodies to PD-1 and uses Thereof
LT3407709T (lt) 2016-11-04 2020-10-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Gyvūnai, išskyrus žmogų, turintys sukonstruotą imunoglobulino lambda lengvosios grandinės lokusą
SG10202104259RA (en) 2016-11-08 2021-06-29 Regeneron Pharma Steroids and protein-conjugates thereof
JP7138350B2 (ja) 2016-11-14 2022-09-16 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． 共役連結体、該連結体を含有する細胞結合分子－薬物共役体、並びに該共役体及び連結体の使用及び製造方法
KR20190078650A (ko) 2016-11-17 2019-07-04 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-angptl8 항체를 사용하는 비만의 치료 방법
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
WO2018091720A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the prophylactic treatment of metastases
EA201991283A9 (ru) 2016-11-29 2019-11-27 Фармацевтическая композиция для предотвращения опиоидной зависимости
KR102480773B1 (ko) 2016-11-30 2022-12-23 크로다 인터내셔날 피엘씨 수성 결합제 시스템, 코팅 조성물 및 코팅
JP2020511937A (ja) 2016-12-07 2020-04-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔａｕ抗体及び使用方法
AR110321A1 (es) 2016-12-07 2019-03-20 Genentech Inc Anticuerpos antitau y métodos de uso
JP6996516B2 (ja) 2016-12-13 2022-01-17 アステラス製薬株式会社 抗ヒトｃｄ７３抗体
EP3559249A1 (en) 2016-12-21 2019-10-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Method for in vitro glycoengineering of antibodies
JP6850351B2 (ja) 2016-12-21 2021-03-31 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗体のインビトロ糖鎖工学
BR112019009839A2 (pt) 2016-12-21 2019-09-17 Hoffmann La Roche método para a produção enzimática de um anticorpo e anticorpo
WO2018118713A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies
US11464216B2 (en) 2016-12-27 2022-10-11 National University Corporation Gunma University Production method for conditional knockout animal
TWI781130B (zh) 2017-01-03 2022-10-21 美商再生元醫藥公司 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體
WO2018136702A1 (en) 2017-01-23 2018-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 13 (hsd17b13) variants and uses thereof
US10713373B2 (en) * 2017-02-09 2020-07-14 Lifesite, Inc. Computing system with information storage mechanism and method of operation thereof
EP3580240A1 (en) 2017-02-10 2019-12-18 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
EA201991673A1 (ru) 2017-02-10 2020-01-17 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Меченные радиоактивным изотопом антитела к lag3 для иммуно-пэт-визуализации
WO2018148660A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
ES2953595T3 (es) 2017-03-01 2023-11-14 Hoffmann La Roche Procedimientos diagnósticos y terapéuticos para el cáncer
CR20190481A (es) 2017-03-22 2020-01-06 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizados para el tratamiento de trastornos oculares
CA3055132A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to steap-1
PT3606946T (pt) 2017-04-03 2022-10-17 Hoffmann La Roche Imunoconjugados de um anticorpo anti-pd-1 com uma il-2 mutante ou com il-15
EP3606947B1 (en) 2017-04-03 2022-12-21 F. Hoffmann-La Roche AG Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody
MA49034B1 (fr) 2017-04-05 2022-09-30 Hoffmann La Roche Anticorps anti-lag3
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
EP3612215A4 (en) 2017-04-20 2021-05-26 aTyr Pharma, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF Pneumonia
US20190078160A1 (en) 2017-04-21 2019-03-14 Genentech, Inc. Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
BR112019022515A2 (pt) 2017-04-27 2020-06-16 Tesaro, Inc. Agentes de anticorpo direcionados contra o gene 3 de ativação linfocitária (lag-3) e usos dos mesmos
US11168129B2 (en) 2017-05-15 2021-11-09 University Of Rochester Broadly neutralizing anti-influenza human monoclonal antibody and uses thereof
MX2019013690A (es) 2017-05-18 2020-01-27 Regeneron Pharma Conjugados de farmaco-proteina con ciclodextrina.
EP3630814A1 (en) 2017-06-01 2020-04-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to bet v 1 and methods of use thereof
EP3634486A4 (en) 2017-06-05 2021-03-31 Janssen Biotech, Inc. GENETICALLY PRODUCED MULTISPECIFIC ANTIBODIES AND OTHER MULTIMERIC PROTEINS WITH ASYMMETRIC MUTATIONS OF THE CH2-CH3 REGION
AU2018282094A1 (en) 2017-06-05 2019-12-12 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind PD-1 and methods of use
US20190031774A1 (en) 2017-06-09 2019-01-31 Sanofi Biotechnology Methods for treating hyperlipidemia in diabetic patients by administering a pcsk9 inhibitor
CA3066779A1 (en) 2017-06-28 2019-01-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-human papillomavirus (hpv) antigen-binding proteins and methods of use thereof
US11414478B2 (en) 2017-07-21 2022-08-16 Trianni, Inc. Single chain VH and heavy chain antibodies
TWI823859B (zh) 2017-07-21 2023-12-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
JP7304846B2 (ja) 2017-07-24 2023-07-07 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ８抗体およびその使用
US11174322B2 (en) 2017-07-24 2021-11-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies and peptides to treat HCMV related diseases
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
EP3589658A1 (en) 2017-08-03 2020-01-08 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
JP2020532991A (ja) 2017-09-07 2020-11-19 オーガスタ ユニバーシティ リサーチ インスティテュート，インコーポレーテッド プログラム細胞死タンパク質１に対する抗体
EA202090641A1 (ru) 2017-09-29 2020-08-07 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Мультиспецифическая антиген-связывающая молекула, обладающая замещающей функциональной активностью кофактора коагулирующего фактора крови viii, и фармацевтическая композиция, содержащая указанную молекулу в качестве активного ингредиента
MX2020002976A (es) 2017-09-29 2020-07-24 Regeneron Pharma Moleculas de union a antigeno biespecificas que se unen a un antigeno objetivo de staphylococcus y a un componente de complemento, y usos de las mismas.
DK3476942T3 (da) 2017-10-27 2022-04-19 Trianni Inc Lange kimlinje-dh-gener og antistoffer med lang hcdr3
EP3703818B1 (en) 2017-10-30 2023-11-01 Sanofi Biotechnology Il-4r antagonist for use in a method for treating or preventing asthma
WO2019086394A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag The compbody - a multivalent target binder
BR112020008031A2 (pt) 2017-11-01 2020-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag anticorpo multiespecíficos, método para a preparação do anticorpo multiespecífico, conjunto de ácidos nucleicos, vetor de expressão, célula hospedeira e composição farmacêutica
CN111213059B (zh) 2017-11-06 2024-01-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的诊断和治疗方法
WO2019108662A1 (en) 2017-11-30 2019-06-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-trkb monoclonal antibodies and methods of use
CA3084049A1 (en) * 2017-12-05 2019-06-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having an engineered immunoglobulin lambda light chain and uses thereof
JP2021506241A (ja) 2017-12-13 2021-02-22 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 抗ｃ５抗体組み合わせ物およびその使用
WO2019126194A1 (en) 2017-12-18 2019-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angptl8 assay and uses thereof
MA51302A (fr) 2017-12-21 2021-03-31 Hoffmann La Roche Anticorps se liant à hla-a2/wt1
TW201929907A (zh) 2017-12-22 2019-08-01 美商建南德克公司 Pilra結合劑用於治療疾病之用途
JP7391868B2 (ja) 2017-12-22 2023-12-05 ジョウンセ セラピューティクス， インク． Ｌｉｌｒｂ２に対する抗体
JP7383617B2 (ja) 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
AU2018396970A1 (en) 2017-12-28 2020-08-13 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against TIGIT
EP3732193A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 Alector LLC Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
KR20200108002A (ko) 2018-01-08 2020-09-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 스테로이드 및 이의 항체-접합체
EP3740507A4 (en) 2018-01-15 2022-08-24 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. SINGLE DOMAIN ANTIBODIES AND VARIANTS THEREOF AGAINST PD-1
EP3740505A1 (en) 2018-01-16 2020-11-25 Lakepharma Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
US20190225689A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-pd-1 antibodies
MX2020007888A (es) 2018-01-26 2020-09-07 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-tmprss2 y fragmentos de union a antigeno.
MA51681A (fr) 2018-01-26 2021-05-05 Regeneron Pharma Anticorps humains contre l'hémagglutinine de la grippe
US11472874B2 (en) 2018-01-31 2022-10-18 Alector Llc Anti-MS4A4A antibodies and methods of use thereof
MA51793A (fr) 2018-02-08 2020-12-16 Hoffmann La Roche Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène et procédés d'utilisation
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
CA3226165A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
CN111836831A (zh) 2018-02-26 2020-10-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit拮抗剂抗体和抗pd-l1拮抗剂抗体治疗的给药
JP7426940B2 (ja) 2018-03-06 2024-02-02 サノフィ・バイオテクノロジー 心血管リスクを低減するためのｐｃｓｋ９阻害剤の使用
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
CN112119090B (zh) 2018-03-15 2023-01-13 中外制药株式会社 对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法
EP3940382A1 (en) 2018-03-24 2022-01-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for identifying hla-associated tumor peptides
WO2019190922A1 (en) 2018-03-24 2019-10-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified non-human animals for generating therapeutic antibodies against peptide-mhc complexes, methods of making and uses thereof
KR20210004994A (ko) 2018-03-26 2021-01-13 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제를 시험하기 위한 인간화된 설치류
AU2019241978A1 (en) 2018-03-26 2020-11-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PfRH5 antibodies and antigen-binding fragments thereof
AU2019245243A1 (en) 2018-03-29 2020-09-03 Genentech, Inc Modulating lactogenic activity in mammalian cells
EP3774917A4 (en) 2018-03-30 2022-01-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. SINGLE DOMAIN ANTIBODIES AGAINST LAG-3 AND USES THEREOF
EP3778639A4 (en) 2018-04-02 2021-06-09 Mab-Venture Biopharm Co., Ltd. ANTIBODIES BINDING TO LYMPHOCYTAIR ACTIVATION GENE 3 (LAG-3) AND ITS USE
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
JP7402541B2 (ja) 2018-05-03 2023-12-21 ユニバーシティ オブ ロチェスター 抗インフルエンザノイラミニダーゼモノクローナル抗体およびその使用
EP3790899A1 (en) 2018-05-09 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof
EP3802609A2 (en) 2018-05-24 2021-04-14 Janssen Biotech, Inc. Psma binding agents and uses thereof
EP3802607A2 (en) 2018-05-24 2021-04-14 Janssen Biotech, Inc. Monospecific and multispecific anti-tmeff2 antibodies and there uses
BR112020023508A2 (pt) 2018-05-24 2021-03-30 Janssen Biotech, Inc. Anticorpos anti-cd3 e usos dos mesmos
EP3802602A1 (en) 2018-05-25 2021-04-14 Alector LLC Anti-sirpa antibodies and methods of use thereof
EP3802604A1 (en) 2018-05-31 2021-04-14 Glyconex Inc. Therapeutic antibodies binding to biantennary lewis b and lewis y antigens
SG11202011778QA (en) 2018-06-01 2020-12-30 Regeneron Pharma Methods and systems for sparse vector-based matrix transformations
US11987629B2 (en) 2018-06-01 2024-05-21 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
KR102617284B1 (ko) 2018-06-14 2023-12-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 면역글로불린 중쇄 암호화 서열에서 dh-dh 재배열 가능한 비인간 동물
MA52966A (fr) 2018-06-19 2021-04-28 Regeneron Pharma Anticorps anti-facteur xii/xiia et leurs utilisations
EP3810653A1 (en) 2018-06-23 2021-04-28 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
MA53015A (fr) 2018-06-29 2021-05-05 Alector Llc Anticorps anti-sirp-bêta1 et procédés d'utilisation associés
KR20210030378A (ko) 2018-07-10 2021-03-17 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 기존 상호작용을 최소화하는 결합 분자의 변형
HUE061841T2 (hu) 2018-07-13 2023-08-28 Alector Llc Anti-sortilin antitestek és felhasználásuk módszerei
SG11202012360YA (en) 2018-07-16 2021-01-28 Regeneron Pharma Anti-il36r antibodies
US20210284718A1 (en) 2018-07-17 2021-09-16 Humabs Biomed Sa Antibodies against campylobacter species
CN112839644A (zh) 2018-07-18 2021-05-25 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法
WO2020023644A2 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Medimmune, Llc Antibody directed against s. aureus clumping factor a (clfa)
US11472870B2 (en) 2018-08-10 2022-10-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical composition for safe and effective treatment of knee and/or hip pain
BR112021002037A2 (pt) 2018-08-10 2021-05-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha molécula de ligação de antígeno anti-cd137 e uso da mesma
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
JP2022502350A (ja) 2018-08-29 2022-01-11 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. 関節リウマチを有する対象を治療するための方法および組成物
KR20210070986A (ko) 2018-08-31 2021-06-15 알렉터 엘엘씨 항-cd33 항체 및 이의 사용 방법
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
JP7222075B2 (ja) 2018-09-13 2023-02-14 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｃ３糸球体症のモデルとしての補体因子ｈ遺伝子ノックアウトラット
AU2019342099A1 (en) 2018-09-19 2021-04-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
PL3857230T3 (pl) 2018-09-21 2023-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby diagnostyczne dla potrójnie ujemnego raka piersi
TW202028244A (zh) 2018-10-09 2020-08-01 美商建南德克公司 用於確定突觸形成之方法及系統
AU2019357983A1 (en) 2018-10-09 2021-05-27 Medimmune, Llc Combinations of anti-staphylococcus aureus antibodies
EP3867646A1 (en) 2018-10-18 2021-08-25 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
BR112021004329A2 (pt) 2018-10-23 2021-08-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-npr1 e usos dos mesmos
CA3115110A1 (en) 2018-10-24 2020-04-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
EP3875114A4 (en) 2018-10-31 2022-08-10 Astellas Pharma Inc. ANTIBODIES AGAINST HUMAN FN14
US20220025058A1 (en) 2018-11-06 2022-01-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
JP2022512904A (ja) 2018-11-21 2022-02-07 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ抗体およびその使用
MX2021006573A (es) 2018-12-06 2021-07-15 Genentech Inc Tratamiento conjunto de linfoma difuso de linfocitos b grandes que comprende un inmunoconjugado anti-cd79b, un agente alquilante y un anticuerpo anti-cd20.
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
WO2020120786A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs
GB201820554D0 (en) 2018-12-17 2019-01-30 Univ Oxford Innovation Ltd BTLA antibodies
GB201820547D0 (en) 2018-12-17 2019-01-30 Oxford Univ Innovation Modified antibodies
JP7449291B2 (ja) 2018-12-20 2024-03-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヌクレアーゼ媒介リピート伸長
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
WO2020132214A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
JP2022514950A (ja) 2018-12-21 2022-02-16 ２３アンドミー・インコーポレイテッド 抗ｉｌ－３６抗体およびその使用方法
TW202043256A (zh) 2019-01-10 2020-12-01 美商健生生物科技公司 前列腺新抗原及其用途
JP2022518399A (ja) 2019-01-14 2022-03-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ－１軸結合アンタゴニスト及びｒｎａワクチンを用いてがんを処置する方法
CN113329763A (zh) 2019-01-22 2021-08-31 豪夫迈·罗氏有限公司 免疫球蛋白a抗体以及制备和使用方法
JPWO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2021-12-02 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
CN113474370A (zh) 2019-02-01 2021-10-01 瑞泽恩制药公司 抗IL2受体γ抗原结合蛋白
JP2022519631A (ja) 2019-02-12 2022-03-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 補体および標的抗原に結合する二重特異性抗体を使用するための組成物および方法
KR20210125034A (ko) 2019-02-15 2021-10-15 우시 바이올로직스 아일랜드 리미티드 동질성이 개선된 항체-약물 콘쥬게이트의 제조방법
WO2020169472A2 (en) 2019-02-18 2020-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing phenotypic changes in macrophages
CN112400022B (zh) * 2019-02-18 2023-06-30 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 具有人源化免疫球蛋白基因座的经遗传修饰的非人动物
EP3927153A1 (en) 2019-02-22 2021-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents having genetically modified sodium channels and methods of use thereof
AU2020228383A1 (en) 2019-02-27 2021-09-23 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-CD20 or anti-CD38 antibodies
US11673953B2 (en) 2019-03-01 2023-06-13 Allogene Therapeutics, Inc. DLL3 targeting chimeric antigen receptors and binding agents
EP3935385A1 (en) 2019-03-08 2022-01-12 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for detecting and quantifying membrane-associated proteins on extracellular vesicles
WO2020206139A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized coagulation factor 12 locus
KR102487901B1 (ko) 2019-04-04 2023-01-12 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 표적화된 변형의 표적화 벡터로의 무흔적 도입을 위한 방법
US20220185900A1 (en) 2019-04-10 2022-06-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies that bind ret and methods of use thereof
JP2022529943A (ja) 2019-04-15 2022-06-27 クウィクセル セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー がんの処置における使用のための、標的指向性のマスクされたｉ型インターフェロン（ｉｆｎａおよびｉｆｎｂ）と腫瘍抗原に対する抗体とを含む融合タンパク質組成物
KR20220002899A (ko) 2019-04-19 2022-01-07 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-psma/cd3 항체로 전립선암을 치료하는 방법
MX2021012692A (es) 2019-04-19 2021-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk y sus metodos de uso.
WO2020219812A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 Allogene Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing allogeneic car t cells
EP3962515A1 (en) 2019-05-01 2022-03-09 Sanofi Biotechnology Methods for treating or preventing asthma by administering an il-33 antagonist
CA3133821A1 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
WO2020227228A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
BR112021022815A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
JP2022534867A (ja) 2019-06-04 2022-08-04 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ベータスリップ変異を有するヒト化ｔｔｒ遺伝子座を含む非ヒト動物と使用方法
AU2020289554A1 (en) 2019-06-05 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
BR112021022722A2 (pt) 2019-06-07 2022-01-04 Regeneron Pharma Animal não humano, célula de animal não humana, genoma de animal não humano, gene de albumina animal não humana humanizada, vetor de alvejamento, método de avaliação da atividade de um reagente, e, método de otimização da atividade de um reagente
TW202112817A (zh) 2019-06-11 2021-04-01 美商阿列克特有限責任公司 抗揀選蛋白抗體之使用方法
WO2020252029A1 (en) 2019-06-11 2020-12-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcrv antibodies that bind pcrv, compositions comprising anti-pcrv antibodies, and methods of use thereof
WO2020251924A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to bone morphogenetic protein 6
MA56515A (fr) 2019-06-21 2022-04-27 Regeneron Pharma Utilisation de molécules de liaison à l'antigène bispécifiques se liant à psma et cd3 en combinaison avec une co-stimulation de 4-1bb
AU2020294790A1 (en) 2019-06-21 2021-12-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of bispecific antigen-binding molecules that bind MUC16 and CD3 in combination with 4-1BB co-stimulation
EP3991752A4 (en) 2019-06-29 2023-03-29 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd CELL BINDING MOLECULE-TUBULYSIN DERIVATIVE CONJUGATE AND METHOD OF PREPARATION THEREOF
AU2020298458A1 (en) 2019-07-01 2022-01-20 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
KR20220025838A (ko) 2019-07-01 2022-03-03 트리아니, 인코포레이티드 유전자이식 포유동물 및 사용 방법
CN114051500A (zh) 2019-07-02 2022-02-15 豪夫迈·罗氏有限公司 包含白细胞介素-2突变体和抗cd8抗体的免疫缀合物
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
CA3147436A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Sanofi Biotechnology Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist
TW202118788A (zh) 2019-07-26 2021-05-16 美商健生生物科技公司 包含血管舒緩素相關肽酶2抗原結合域之蛋白質及其用途
CR20220019A (es) 2019-07-31 2022-02-11 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se fijan a gprc5d
EP4003519A2 (en) 2019-07-31 2022-06-01 Alector LLC Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof
EP4004045A1 (en) 2019-07-31 2022-06-01 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to gprc5d
WO2021026205A1 (en) 2019-08-05 2021-02-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
IL289613B2 (en) 2019-08-05 2023-09-01 Regeneron Pharma IL-4R antagonist in combination with a scit regimen to increase immunotherapeutic efficacy and tolerability to a grass-specific allergen
US20210047425A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Purinomia Biotech, Inc. Methods and compositions for promoting and potentiating t-cell mediated immune responses through adcc targeting of cd39 expressing cells
PE20220299A1 (es) 2019-08-15 2022-03-07 Janssen Biotech Inc Materiales y metodos para fragmentos variables de cadena unica mejorados
DK3785536T3 (da) 2019-08-28 2022-03-28 Trianni Inc Adam6-knockin-mus
AU2020345913A1 (en) 2019-09-12 2022-02-24 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
CR20220156A (es) 2019-09-18 2022-05-23 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5/klk7 y métodos de uso
US20220348687A1 (en) 2019-09-20 2022-11-03 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
CN114829401A (zh) 2019-09-27 2022-07-29 南京金斯瑞生物科技有限公司 抗vhh域抗体及其用途
EP4034160A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Janssen Biotech, Inc. Anti-ceacam antibodies and uses thereof
CN114555116A (zh) 2019-09-27 2022-05-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit和抗pd-l1拮抗剂抗体治疗的给药
WO2021058729A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof
CN114450304B (zh) 2019-09-27 2023-12-12 国家医疗保健研究所 抗苗勒管抑制物质抗体及其用途
WO2021066869A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 TAE Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
CN114945386A (zh) 2019-10-18 2022-08-26 基因泰克公司 使用抗CD79b免疫缀合物治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法
KR20220088446A (ko) 2019-10-28 2022-06-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항-헤마글루티닌 항체 및 이의 사용 방법
MX2022005400A (es) 2019-11-06 2022-05-24 Genentech Inc Metodos de diagnostico y terapeuticos para el tratamiento de canceres hematologicos.
WO2021094508A1 (en) 2019-11-15 2021-05-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Prevention of visible particle formation in aqueous protein solutions
IL293051A (en) 2019-11-18 2022-07-01 Janssen Biotech Inc calr and jak2 mutant-based vaccines and their uses
EP4061944A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Inhibitors of adrenomedullin for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
CN114867744A (zh) 2019-11-25 2022-08-05 迈博洛克有限责任公司 抗黄热病病毒抗体及其产生和使用方法
WO2021108363A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele
JP2023504172A (ja) 2019-12-02 2023-02-01 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ペプチド－ｍｈｃ ｉｉタンパク質構築物およびそれらの使用
CN114786775A (zh) 2019-12-06 2022-07-22 赛诺菲生物技术公司 通过施用il-33拮抗剂治疗copd的方法
BR112022011098A2 (pt) 2019-12-09 2022-09-20 Sanofi Biotechnology Métodos para tratamento de distúrbios relacionados a il-4/il-13 digitalmente identificados
EP3992974A1 (en) 2020-11-02 2022-05-04 Sanofi Biotechnology Methods for treating digitally-identified il-4/il-13 related disorders
CN115066272A (zh) 2019-12-10 2022-09-16 再生元制药公司 Pcsk9抑制剂治疗纯合家族性高胆固醇血症的用途
IL293827A (en) 2019-12-13 2022-08-01 Alector Llc Anti-mertko antibodies and methods of using them
MX2022007158A (es) 2019-12-13 2022-07-11 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y metodos de uso.
CN114828965A (zh) 2019-12-18 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与hla-a2/mage-a4结合的抗体
IL294045A (en) 2019-12-20 2022-08-01 Hudson Inst Med Res Proteins that bind to cxcl10 and their uses
EP4081544A1 (en) 2019-12-23 2022-11-02 Sanofi Biotechnology Methods for treating or preventing allergic asthma by administering an il-33 antagonist and/or an il-4r antagonist
US20230058982A1 (en) 2019-12-27 2023-02-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ctla-4 antibody and use thereof
WO2021142137A1 (en) 2020-01-08 2021-07-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of amino acids to enhance signal in mass spectral analyses
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
MX2022008901A (es) 2020-01-24 2022-08-16 Regeneron Pharma Conjugados de proteinas-compuestos antivirales.
CA3165212A1 (en) 2020-01-27 2021-08-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tandem mass tag multiplexed quantitation of post-translational modifications of proteins
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
AU2021212668A1 (en) 2020-01-28 2022-08-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized PNPLA3 locus and methods of use
MX2022009356A (es) 2020-01-30 2022-12-13 Regeneron Pharma Plataforma para cromatografía líquida-espectrometría de masas nativa.
BR112022015077A2 (pt) 2020-01-31 2022-10-04 Genentech Inc Métodos para induzir células t cd8+ específicas de neoepítopos em um indivíduo com um tumor e para induzir o tráfico de células t cd8+, vacinas de rna, vacina de rna para uso e antagonistas de ligação
MX2022009411A (es) 2020-01-31 2022-08-25 Regeneron Pharma Identificacion de compuestos de alta confianza mediante cromatografia de liquidos-espectrometria de masas.
CA3166627A1 (en) 2020-02-03 2021-08-12 Davide Corti Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same
CA3108168A1 (en) 2020-02-05 2021-08-05 Yue Zhang Conjugates of cell-binding molecules with cytotoxic agents
US20230081547A1 (en) 2020-02-07 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized klkb1 locus and methods of use
CN115461373B (zh) 2020-02-10 2024-03-29 上海诗健生物科技有限公司 密蛋白18.2的抗体及其用途
JP2023513400A (ja) 2020-02-10 2023-03-30 上海詩健生物科技有限公司 Ｃｌｄｎ１８．２抗体及びその使用
MX2022009476A (es) 2020-02-10 2022-08-22 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-tmprss2 y fragmentos de union a antigeno.
EP4103617A1 (en) 2020-02-11 2022-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-acvr1 antibodies and uses thereof
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
TW202140012A (zh) 2020-02-12 2021-11-01 比利時商健生藥品公司 用於治療尿路上皮癌的ｆｇｆｒ酪胺酸激酶抑制劑和抗ｐｄ１藥劑
WO2021163064A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
TW202144388A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途
TW202144389A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途
TW202146442A (zh) 2020-02-26 2021-12-16 美商維爾生物科技股份有限公司 抗sars-cov-2抗體及使用其之方法
CN115066440A (zh) 2020-02-28 2022-09-16 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗cd137构建体及其用途
JP2023516941A (ja) 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト、多重特異性抗体及びその使用
KR20220154728A (ko) 2020-03-13 2022-11-22 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Siglec-3/cd33을 결합시키기 위한 물질 및 방법
PE20230252A1 (es) 2020-03-13 2023-02-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos de estos
CN117510630A (zh) 2020-03-19 2024-02-06 基因泰克公司 同种型选择性抗TGF-β抗体及使用方法
EP4125348A1 (en) 2020-03-23 2023-02-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use
CN115867649A (zh) 2020-03-24 2023-03-28 基因泰克公司 Tie2结合剂及其使用方法
CA3169908A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
KR20220158821A (ko) 2020-03-27 2022-12-01 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Il-4r 길항제를 투여함에 의해 아토피 피부염을 치료하기 위한 방법
WO2021202590A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Alector Llc Anti-mertk antibodies and methods of use thereof
US20230107644A1 (en) 2020-04-01 2023-04-06 University Of Rochester Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses
PE20221893A1 (es) 2020-04-02 2022-12-13 Regeneron Pharma Anticuerpos contra glicoproteina de espicula anti-sars-cov-2 y fragmentos de union al antigeno
EP4127724A1 (en) 2020-04-03 2023-02-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021203053A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Vir Biotechnology, Inc. Immunotherapy targeting a conserved region in sars coronaviruses
US20240059757A1 (en) 2020-04-14 2024-02-22 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same
CA3173338A1 (en) 2020-04-14 2021-10-21 Eric Shierly Ultraviolet monitoring of chromatography performance by orthogonal partial least squares
JP2023521238A (ja) 2020-04-15 2023-05-23 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 免疫複合体
JP2023521885A (ja) 2020-04-16 2023-05-25 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ディールス－アルダーコンジュゲーション方法
KR20230005172A (ko) 2020-04-24 2023-01-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 설프히드릴 화합물 및 이의 유도체를 사용한 효소 및 경로 조절
BR112022021441A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-13 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células b e kits
EP3921034A2 (en) 2020-04-28 2021-12-15 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies and methods of use thereof
JP2023523450A (ja) 2020-04-28 2023-06-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物
AU2021267995A1 (en) 2020-05-03 2022-12-08 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (ADCs) comprising an anti-Trop-2 antibody, compositions comprising such ADCs, as well as methods of making and using the same
JP2023525039A (ja) 2020-05-08 2023-06-14 ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２に対する抗体
EP4149558A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas
MX2022014090A (es) 2020-05-12 2023-02-27 Regeneron Pharma Anticuerpos antagonistas anti-glp1r y metodos de uso de los mismos.
EP4149421A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 F. Hoffmann-La Roche AG Prevention of visible particle formation in parenteral protein solutions
JP2023525898A (ja) 2020-05-19 2023-06-19 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 非経口タンパク質溶液における可視粒子の形成を防止するためのキレート剤の使用
EP4153300A1 (en) 2020-05-22 2023-03-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r inhibitor
AU2021282179A1 (en) 2020-05-26 2023-01-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-SARS-CoV-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
KR20230017841A (ko) 2020-05-27 2023-02-06 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Cd3 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도
AU2021281417A1 (en) 2020-05-29 2022-12-08 23Andme, Inc. Anti-CD200R1 antibodies and methods of use thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
AU2021283345A1 (en) 2020-06-02 2023-02-02 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-CD93 constructs and uses thereof
WO2021247925A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Vir Biotechnology, Inc. Structure-guided immunotherapy against sars-cov-2
EP4161644A2 (en) 2020-06-08 2023-04-12 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hbv antibodies and methods of use
RU2751237C1 (ru) * 2020-06-10 2021-07-12 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Способы и композиции для направленной модификации генома
GB202008860D0 (en) 2020-06-11 2020-07-29 Univ Oxford Innovation Ltd BTLA antibodies
BR112022025229A2 (pt) 2020-06-12 2023-03-07 Vir Biotechnology Inc Terapias de anticorpos para infecção por sars-cov-2
EP4165415A1 (en) 2020-06-12 2023-04-19 Genentech, Inc. Methods and compositions for cancer immunotherapy
MX2022015877A (es) 2020-06-16 2023-01-24 Genentech Inc Metodos y composiciones para tratar cancer de mama triple negativo.
AU2021293507A1 (en) 2020-06-18 2023-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Treatment with anti-TIGIT antibodies and PD-1 axis binding antagonists
BR112022025700A2 (pt) 2020-06-18 2023-02-28 Regeneron Pharma Formulações de anticorpo de activina a e métodos de uso das mesmas
JP2023531222A (ja) 2020-06-22 2023-07-21 アルミラル・ソシエダッド・アノニマ 抗ｉｌ－３６抗体およびその使用方法
KR20230026491A (ko) 2020-06-24 2023-02-24 제넨테크, 인크. 아폽토시스 내성 세포주
EP4173480A4 (en) 2020-06-25 2024-04-17 Humab Co Ltd HETEROZYGOUS TRANSGENIC ANIMAL
IL299207A (en) 2020-07-01 2023-02-01 Regeneron Pharma Methods of allergy treatment using anti-BET V 1 antibodies
CN116133689A (zh) 2020-07-07 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 作为治疗性蛋白质制剂的稳定剂的替代表面活性剂
MX2023000544A (es) 2020-07-13 2023-02-13 Regeneron Pharma Conjugados de proteina-farmaco que comprenden analogos de camptotecina y metodos de uso de los mismos.
CR20230087A (es) 2020-07-17 2023-03-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch2 y métodos de uso
CA3188649A1 (en) 2020-07-21 2022-01-27 Genentech, Inc. Antibody-conjugated chemical inducers of degradation of brm and methods thereof
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
AU2021315665A1 (en) 2020-07-29 2023-03-16 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-CD93 constructs and uses thereof
AR123083A1 (es) 2020-07-29 2022-10-26 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno hla-g y sus usos
EP4192446A1 (en) 2020-08-07 2023-06-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating refractory hypercholesterolemia involving an angptl3 inhibitor
EP3954393A1 (en) 2020-08-13 2022-02-16 Bioasis Technologies Inc. Combination therapies for delivery across the blood brain barrier
US20220064270A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies
WO2022047222A2 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Genentech, Inc. Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins
CA3187680A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 Yashu Liu Identification and production of antigen-specific antibodies
JP2023541627A (ja) 2020-09-14 2023-10-03 イシュノス サイエンシズ ソシエテ アノニム Ｉｌ１ｒａｐに結合する抗体及びその使用
KR20230070337A (ko) 2020-09-14 2023-05-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Glp1 펩티도미메틱을 포함하는 항체-약물 접합체 및 이의 용도
CA3194162A1 (en) 2020-09-28 2022-03-31 Humabs Biomed Sa Antibodies against sars-cov-2
AU2021358031A1 (en) 2020-10-05 2023-05-04 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
KR20230082650A (ko) 2020-10-05 2023-06-08 사노피 바이오테크놀로지 Il-4r 길항제를 투여하여 소아 대상체에서 천식을 치료하는 방법
KR20230084157A (ko) 2020-10-08 2023-06-12 주식회사 휴맵 인간화 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 게놈을 가지는 형질전환 비인간-동물 제조방법
JP2023544890A (ja) 2020-10-13 2023-10-25 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 分化抗原群ｉｖ及び／又はｖｉｉｉを調節するための生物工学的に作製されたｔ細胞媒介免疫、材料及び他の方法
EP4228764A1 (en) 2020-10-14 2023-08-23 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
CA3190782A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhibitors
CN116406379A (zh) 2020-10-22 2023-07-07 瑞泽恩制药公司 抗fgfr2抗体和其使用方法
EP4232479A1 (en) 2020-10-22 2023-08-30 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
JP2023548878A (ja) 2020-11-04 2023-11-21 ザ ロックフェラー ユニバーシティー 中和抗ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２抗体
KR20230100732A (ko) 2020-11-04 2023-07-05 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이성 항체의 피하 투여
EP4240492A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
IL302217A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies and anti-CD79B drug antibody conjugates
CN116615231A (zh) 2020-11-16 2023-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 Fab高甘露糖糖型
WO2022102768A1 (ja) 2020-11-16 2022-05-19 アステラス製薬株式会社 抗ｔｓｐａｎ８－抗ｃｄ３二重特異性抗体及び抗ｔｓｐａｎ８抗体
WO2022109309A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 Vir Biotechnology, Inc. Broadly neutralizing antibodies against influenza neuraminidase
US20240141021A1 (en) 2020-11-23 2024-05-02 Vir Biotechnology, Inc. Anti-influenza antibodies and combinations thereof
MX2023005653A (es) 2020-11-23 2023-07-31 Vir Biotechnology Inc Anticuerpos contra los virus de la influenza a.
JP2023550785A (ja) 2020-11-25 2023-12-05 ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド 複数のベータコロナウイルスに結合する抗体
WO2022120352A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Alector Llc Methods of use of anti-sortilin antibodies
EP4258865A1 (en) 2020-12-09 2023-10-18 Trianni, Inc. Heavy chain-only antibodies
KR20230147048A (ko) 2020-12-16 2023-10-20 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 Fc 알파 수용체를 발현하는 마우스
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
EP4263609A1 (en) 2020-12-17 2023-10-25 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hla-g antibodies and use thereof
CA3202629A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin proteins that bind to npr1 agonists
IL303371A (en) 2020-12-20 2023-08-01 Regeneron Pharma Methods for the identification of degraded disulfides in biocompounds
US20220195014A1 (en) 2020-12-23 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding anchor modified antibodies and uses thereof
TW202242114A (zh) 2020-12-23 2022-11-01 美商再生元醫藥公司 用於獲得結合至跨膜蛋白之抗體以及抗體生成細胞的方法
WO2022150605A1 (en) 2021-01-08 2022-07-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating peanut allergy and enhancing peanut allergen-specific immunotherapy by administering an il-4r antagonist
WO2022148853A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates
WO2022153997A1 (ja) 2021-01-13 2022-07-21 アステラス製薬株式会社 ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ及びＦｎ１４に結合する多重特異性抗体
EP4277926A1 (en) 2021-01-15 2023-11-22 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
WO2022159842A1 (en) 2021-01-25 2022-07-28 Vir Biotechnology, Inc. Antibody combination therapies for sars-cov-2 infection
MX2023008691A (es) 2021-01-25 2023-08-01 Regeneron Pharma Anticuerpos anti- pdgf-b y metodos de su uso para tratar la hipertension arterial pulmonar (pah).
WO2022162518A2 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Janssen Biotech, Inc. Psma binding proteins and uses thereof
CA3210753A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
JP2024506321A (ja) 2021-02-09 2024-02-13 ヒューマブス・バイオメッド・ソシエテ・アノニム 呼吸器合胞体ウイルスおよび他のパラミクソウイルスに対する抗体およびその使用方法
JP2024506315A (ja) 2021-02-09 2024-02-13 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ コロナウイルスのスパイクタンパク質を標的とする抗体
EP4301418A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
WO2022187863A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2022187626A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-sars-cov-2-variant-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
EP4304732A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
TW202300521A (zh) 2021-03-15 2023-01-01 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎的組成物及方法
US20240174746A1 (en) 2021-03-18 2024-05-30 Alector Llc Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
WO2022204202A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses
JP2024511610A (ja) 2021-03-23 2024-03-14 アレクトル エルエルシー コロナウイルス感染の治療及び予防のための抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体
BR112023019458A2 (pt) 2021-03-24 2023-12-05 Janssen Biotech Inc Proteínas que compreendem domínios de ligação ao antígeno de cd3 e usos dos mesmos
IL306103A (en) 2021-03-24 2023-11-01 Janssen Biotech Inc The antibody targets CD22 and CD79B
EP4314049A1 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
AR125255A1 (es) 2021-04-02 2023-06-28 Regeneron Pharma Métodos de predicción y modulación de la glicación de una proteína
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
EP4324848A1 (en) 2021-04-16 2024-02-21 Korea University Research and Business Foundation Human antibody targeting covid-19 virus
CA3215965A1 (en) 2021-04-19 2022-10-27 Amy Shen Modified mammalian cells
JP2024515627A (ja) 2021-04-20 2024-04-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド アルテミンに対するヒト抗体及びその使用方法
AR125398A1 (es) 2021-04-22 2023-07-12 Astellas Pharma Inc Anticuerpo biespecífico anti-cldn4 / anti-cd137
EP4330282A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
JP2024509664A (ja) 2021-04-30 2024-03-05 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体による治療のための投薬
US20220372168A1 (en) 2021-05-04 2022-11-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific fgf21 receptor agonists and their uses
CN117440753A (zh) 2021-05-05 2024-01-23 特里安尼公司 表达嵌合马科动物-啮齿动物抗体的转基因啮齿动物及其使用方法
WO2022235867A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof
IL308375A (en) 2021-05-11 2024-01-01 Regeneron Pharma Antibodies against TMPRSS6 and uses thereof
CA3218170A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Jamie Harue HIRATA Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
CN117396599A (zh) 2021-05-21 2024-01-12 基因泰克公司 用于生产目的重组产物的经修饰的细胞
JP2024521131A (ja) 2021-05-24 2024-05-28 ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド 操作されたポリペプチド
CN113278071B (zh) 2021-05-27 2021-12-21 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人干扰素α受体1单克隆抗体及其应用
WO2022255440A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
TW202313045A (zh) 2021-06-09 2023-04-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於癌症治療之組合療法
WO2022266221A1 (en) 2021-06-16 2022-12-22 Alector Llc Monovalent anti-mertk antibodies and methods of use thereof
EP4355786A1 (en) 2021-06-16 2024-04-24 Alector LLC Bispecific anti-mertk and anti-pdl1 antibodies and methods of use thereof
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
IL308959A (en) 2021-06-18 2024-01-01 Nammi Therapeutics Inc Fusion protein composition(s) containing masked type I interferons (IFNalpha and IFNbeta) for use in cancer therapy and methods thereof
JP7472405B2 (ja) 2021-06-25 2024-04-22 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体
EP4361176A1 (en) 2021-06-25 2024-05-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Use of anti-ctla-4 antibody
AU2022307659A1 (en) 2021-07-05 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Utilization of antibodies to shape antibody responses to an antigen
US20230125469A1 (en) 2021-07-14 2023-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-SARS-CoV-2-Spike Glycoprotein Antibodies and Antigen-Binding Fragments
CR20240074A (es) 2021-07-14 2024-03-08 Genentech Inc Anticuerpos anti-receptor de quimiocinas de motivo c-c 8 (ccr8) y métodos de uso
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
CA3219606A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
WO2023009437A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Sanofi Biotechnology Methods for treating chronic spontaneous urticaria by administering an il-4r antagonist
AU2022320713A1 (en) 2021-07-28 2023-11-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Protein-antiviral compound conjugates
WO2023012147A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use
CN117897409A (zh) 2021-08-13 2024-04-16 基因泰克公司 抗类胰蛋白酶抗体的给药
KR20240049351A (ko) 2021-08-23 2024-04-16 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Il-4r 길항제를 투여함에 의해 아토피 피부염을 치료하기 위한 방법
IL311070A (en) 2021-08-27 2024-04-01 Janssen Biotech Inc Anti-PSMA antibodies and uses thereof
WO2023034750A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
WO2023034871A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Vir Biotechnology, Inc. High concentration antibody therapies for sars-cov-2 infection
WO2023034866A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Vir Biotechnology, Inc. Antibody therapies for sars-cov-2 infection in pediatric subjects
CN113683694B (zh) 2021-09-03 2022-05-13 江苏荃信生物医药股份有限公司 一种抗人tslp单克隆抗体及其应用
CN113603775B (zh) 2021-09-03 2022-05-20 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用
WO2023039442A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vir Biotechnology, Inc. Broadly neutralizing antibody combination therapies for sars-cov-2 infection
WO2023046322A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Janssen Pharmaceutica Nv Proteins comprising cd20 binding domains, and uses thereof
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
AU2022357559A1 (en) 2021-10-01 2024-05-02 Abcellera Biologics Inc. Transgenic rodents for cell line identification and enrichment
WO2023058723A1 (ja) 2021-10-08 2023-04-13 中外製薬株式会社 プレフィルドシリンジ製剤の調製方法
WO2023062048A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer
CA3234731A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 F. Hoffmann-La Roche Ag New interleukin-7 immunoconjugates
WO2023069919A1 (en) 2021-10-19 2023-04-27 Alector Llc Anti-cd300lb antibodies and methods of use thereof
US20230183362A1 (en) 2021-10-20 2023-06-15 Sanofi Biotechnology Methods for treating prurigo nodularis by administering an il-4r antagonist
WO2023070097A2 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Factor xi a2 domain-binding antibodies and methods of use thereof
WO2023077053A2 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
WO2023086815A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
WO2023092052A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for reducing centralized pain
WO2023089587A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Janssen Biotech, Inc. Compositions comprising enhanced multispecific binding agents for an immune response
WO2023107957A1 (en) 2021-12-06 2023-06-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antagonist anti-npr1 antibodies and methods of use thereof
CA3238939A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Gaurang Patel Mutant myocilin disease model and uses thereof
WO2023130010A1 (en) 2021-12-30 2023-07-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist
US20230287138A1 (en) 2022-01-12 2023-09-14 Regneron Pharmaceuticals, Inc. Protein-drug conjugates comprising camptothecin analogs and methods of use thereof
US20230277682A1 (en) 2022-01-14 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Verrucarin a derivatives and antibody drug conjugates thereof
WO2023141445A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use
WO2023147399A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
WO2023150623A2 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:gaa and anti-cd63:gaa insertion for treatment of pompe disease
WO2023150798A1 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease
WO2023152581A1 (en) 2022-02-09 2023-08-17 Janssen Biotech, Inc. Method of treating cancer with psmaxcd3 antibody
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
WO2023154861A1 (en) 2022-02-11 2023-08-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents
WO2023155902A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Chongqing Mingdao Haoyue Biotechnology Co., Ltd. Intranasal formulations and anti-sars-cov-2-spike protein antibodies
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2023180353A1 (en) 2022-03-23 2023-09-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023201256A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Vir Biotechnology, Inc. High dose antibody therapies for sars-cov-2 infection
JP2024517042A (ja) 2022-04-13 2024-04-19 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の薬学的組成物及び使用方法
WO2023212586A1 (en) 2022-04-27 2023-11-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for selecting patients for treatment with an ngf antagonist
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023230448A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Vir Biotechnology, Inc. Combination immunotherapy for influenza
WO2023230445A2 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Humabs Biomed Sa Broadly neutralizing antibodies against influenza neuraminidase
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023245078A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Humabs Biomed Sa Anti-parvovirus antibodies and uses thereof
WO2024006472A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses
US20240034798A1 (en) 2022-07-08 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r antagonist
WO2024015816A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to ciliary neurotrophic factor receptor (cntfr) and methods of use thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020057A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified animal model and its use to model the human immune system
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024026411A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Humabs Biomed Sa Broadly neutralizing antibodies against rsv and mpv paramyxoviruses
WO2024026471A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Cd98hc antigen-binding domains and uses therefor
US20240052051A1 (en) 2022-07-29 2024-02-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:payload fusions and methods of use thereof
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle
WO2024026447A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Anti-gpnmb antibodies and methods of use thereof
TW202405020A (zh) 2022-07-29 2024-02-01 美商阿列克特有限責任公司 轉鐵蛋白受體抗原結合域及其用途
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024044770A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Core Biotherapeutics, Inc. Oligonucleotides for the treatment of breast cancer
WO2024047021A1 (en) 2022-08-29 2024-03-07 Sanofi Methods for treating chronic inducible cold urticaria by administering an il-4r antagonist
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024073606A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibody resistant modified receptors to enhance cell-based therapies
US20240130341A1 (en) 2022-09-29 2024-04-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
WO2024086796A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies with amyloid-beta therapies
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
US20240150474A1 (en) 2022-10-27 2024-05-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-acvri antibodies and their use in the treatment of trauma-induced heterotopic ossification
WO2024097714A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hand and foot dermatitis by administering an il-4r antagonist
WO2024098002A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Calcium voltage-gated channel auxiliary subunit gamma 1 (cacng1) binding proteins and cacng1-mediated delivery to skeletal muscle
US20240165227A1 (en) 2022-11-04 2024-05-23 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
WO2024102369A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Factor xi catalytic domain-binding antibodies and methods of use thereof
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
WO2024107759A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-fgfr3 antibodies and antigen-binding fragments and methods of use thereof
WO2024107765A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for fibroblast growth factor receptor 3-mediated delivery to astrocytes

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5350689A (en) 1987-05-20 1994-09-27 Ciba-Geigy Corporation Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FR2646438B1 (fr) 1989-03-20 2007-11-02 Pasteur Institut Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration
WO1991000906A1 (en) * 1989-07-12 1991-01-24 Genetics Institute, Inc. Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
SG48759A1 (en) * 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5614396A (en) * 1990-06-14 1997-03-25 Baylor College Of Medicine Methods for the genetic modification of endogenous genes in animal cells by homologous recombination
US7041871B1 (en) * 1995-10-10 2006-05-09 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) * 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993004169A1 (en) * 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
AU3328493A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
AU675661B2 (en) * 1992-07-24 1997-02-13 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DE4228162C1 (de) 1992-08-25 1994-01-13 Rajewsky Klaus Dr Verfahren zum Ersetzen homologer Genabschnitte aus Säugern in der Keimbahn von nicht-menschlichen Säugern
US5436149A (en) 1993-02-19 1995-07-25 Barnes; Wayne M. Thermostable DNA polymerase with enhanced thermostability and enhanced length and efficiency of primer extension
JPH08509612A (ja) * 1993-04-26 1996-10-15 ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
US6096878A (en) 1993-05-10 2000-08-01 Japan Tobacco Inc. Human immunoglobulin VH gene segments and DNA fragments containing the same
US5523226A (en) 1993-05-14 1996-06-04 Biotechnology Research And Development Corp. Transgenic swine compositions and methods
US5508189A (en) 1994-04-26 1996-04-16 Pepperdine University Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts
US6130364A (en) * 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6069010A (en) * 1995-09-11 2000-05-30 Axys Pharmaceuticals, Inc. High throughput gene inactivation with large scale gene targeting
US5928914A (en) * 1996-06-14 1999-07-27 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Methods and compositions for transforming cells
US5763715A (en) 1996-10-08 1998-06-09 Stone & Webster Engineering Corp. Butadiene removal system for ethylene plants with front end hydrogenation systems
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
US6075859A (en) 1997-03-11 2000-06-13 Qualcomm Incorporated Method and apparatus for encrypting data in a wireless communication system
GB9823930D0 (en) * 1998-11-03 1998-12-30 Babraham Inst Murine expression of human ig\ locus
WO2000046251A2 (en) 1999-02-05 2000-08-10 Buelow Jens Ulrich Human polyclonal antibodies from transgenic nonhuman animals
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
US6355412B1 (en) 1999-07-09 2002-03-12 The European Molecular Biology Laboratory Methods and compositions for directed cloning and subcloning using homologous recombination
WO2001019394A2 (en) 1999-09-15 2001-03-22 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Immunotherapy with substantially human polyclonal antibody preparations purified from genetically engineered birds
GB2356897B (en) 1999-12-01 2003-05-14 Secr Defence Improved nozzle
US20020028488A1 (en) 2000-06-19 2002-03-07 Sujay Singh Transgenic avian species for making human and chimeric antibodies
AU8470301A (en) 2000-08-03 2002-02-18 Wim-Van Schooten Production of humanized antibodies in transgenic animals
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
WO2003047336A2 (en) 2001-11-30 2003-06-12 Abgenix, Inc. TRANSGENIC ANIMALS BEARING HUMAN Igμ LIGHT CHAIN GENES
US20030182675A1 (en) 2002-03-22 2003-09-25 Origen Therapeutics Functional disruption of avian immunoglobulin genes
WO2003081993A2 (en) 2002-03-22 2003-10-09 Origen Therapeutics Transgenic aves producing human polyclonal antibodies
US20040158880A1 (en) 2003-02-05 2004-08-12 Roland Buelow Suppression of endogenous immunoglobulin expression in transgenic non-human animals expressing humanized or human antibodies
CN1852925A (zh) 2003-07-15 2006-10-25 人类多克隆治疗公司 人源化免疫球蛋白基因座
US20050153392A1 (en) 2003-08-11 2005-07-14 Roland Buelow Transgenesis with humanized immunoglobulin loci
US7618403B2 (en) 2004-05-14 2009-11-17 Mcneil-Ppc, Inc. Fluid management device with fluid transport element for use within a body
RU2394839C2 (ru) 2004-12-21 2010-07-20 Астразенека Аб Антитела против ангиопоэтина-2 и их применение
JP5247428B2 (ja) * 2005-04-04 2013-07-24 インターセクト エント， インコーポレイテッド 副鼻腔の症状を治療するための装置および方法
KR101232139B1 (ko) 2005-12-13 2013-02-12 엘지디스플레이 주식회사 액정 표시 장치
ES2398076T3 (es) 2006-06-02 2013-03-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos de alta afinidad contra el receptor de IL-6 humano
ES2859825T3 (es) 2006-10-02 2021-10-04 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos con alta afinidad para el receptor IL-4 humano
NO347649B1 (no) 2006-12-14 2024-02-12 Regeneron Pharma Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse.
CN101809037B (zh) 2007-07-31 2014-01-15 瑞泽恩制药公司 人cd20的人抗体及其使用方法
EP2572729A3 (en) 2007-08-10 2013-06-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human nerve growth factor
US8321568B2 (en) 2008-03-31 2012-11-27 Amazon Technologies, Inc. Content management
US8194152B2 (en) 2008-09-05 2012-06-05 CSR Technology, Inc. Image processing under flickering lighting conditions using estimated illumination parameters
DK3241435T3 (da) 2009-07-08 2021-08-23 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
JO3182B1 (ar) 2009-07-29 2018-03-08 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2
ES2547142T5 (es) 2010-02-08 2021-12-09 Regeneron Pharma Cadena ligera común de ratón
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
PT3034608T (pt) 2010-06-22 2019-05-28 Regeneron Pharma Ratinhos expressando uma cadeia leve híbrida de imunoglobulina com uma região variável humana
KR101387377B1 (ko) 2011-02-25 2014-04-21 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Ａｄａｍ６ 마우스
DK3939423T3 (da) 2012-11-05 2024-05-06 Regeneron Pharma Genetisk modificerede ikke-humane dyr og fremgangsmåder til anvendelse deraf
CN105980568B (zh) 2013-12-11 2019-12-03 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
KR20230070319A (ko) 2014-11-21 2023-05-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 쌍 형성된 가이드 rna를 사용하는 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
ES2869225T3 (es) 2021-10-25
JP2009240331A (ja) 2009-10-22
JP2018108115A (ja) 2018-07-12
TR201802443T4 (tr) 2018-03-21
ES2556767T3 (es) 2016-01-20
EP3085779B1 (en) 2019-04-03
ES2391391T5 (es) 2019-07-19
EP3085780B2 (en) 2023-06-28
CY1123912T1 (el) 2022-03-24
US10584364B2 (en) 2020-03-10
JP2004524841A (ja) 2004-08-19
US6596541B2 (en) 2003-07-22
DE14163642T1 (de) 2014-10-09
DK1360287T4 (da) 2019-06-11
HK1198259A1 (en) 2015-03-20
CA2438390A1 (en) 2002-08-29
EP3626819A1 (en) 2020-03-25
EP2786657A2 (en) 2014-10-08
JP2012095670A (ja) 2012-05-24
DK2787075T3 (en) 2017-02-27
CA2438390C (en) 2014-10-28
PT2767588T (pt) 2020-11-04
DK1360287T3 (da) 2012-10-08
CY1118500T1 (el) 2017-07-12
US10378037B2 (en) 2019-08-13
EP3085780A1 (en) 2016-10-26
ES2725712T5 (es) 2023-10-31
US9376699B2 (en) 2016-06-28
EP2787075B2 (en) 2023-10-18
US10227625B2 (en) 2019-03-12
PT3626819T (pt) 2021-05-25
JP2014176391A (ja) 2014-09-25
ES2660749T3 (es) 2018-03-26
ZA200306275B (en) 2004-08-13
HUP0303187A3 (en) 2010-01-28
WO2002066630A1 (en) 2002-08-29
US20140033336A1 (en) 2014-01-30
HK1146298A1 (en) 2011-05-20
EP2767588A1 (en) 2014-08-20
US20110283376A1 (en) 2011-11-17
US20140017781A1 (en) 2014-01-16
CY1113964T1 (el) 2016-07-27
CZ305619B6 (cs) 2016-01-13
CZ20032192A3 (en) 2004-03-17
PT1360287E (pt) 2012-12-06
US20140013457A1 (en) 2014-01-09
US10378038B2 (en) 2019-08-13
EP3085779A1 (en) 2016-10-26
US20160316731A1 (en) 2016-11-03
ES2608362T3 (es) 2017-04-10
US20020106629A1 (en) 2002-08-08
ES2725712T3 (es) 2019-09-26
US10378040B2 (en) 2019-08-13
EP1360287A4 (en) 2004-04-14
DE10010741T1 (de) 2014-08-21
DK3085780T3 (da) 2019-10-07
PT2786657T (pt) 2018-04-04
HUP0303187A2 (hu) 2003-12-29
US20130130388A1 (en) 2013-05-23
DK3626819T1 (en) 2020-03-30
PT2787075T (pt) 2017-01-03
DE19172361T1 (de) 2020-01-16
MX343591B (es) 2016-11-11
CY1122039T1 (el) 2020-10-14
EP2787075A1 (en) 2014-10-08
US20140041068A1 (en) 2014-02-06
JP5692863B2 (ja) 2015-04-01
US10526630B2 (en) 2020-01-07
TR201907641T4 (tr) 2019-06-21
EP1360287A1 (en) 2003-11-12
PL364281A1 (en) 2004-12-13
EP2767588B1 (en) 2020-08-19
US20130210137A1 (en) 2013-08-15
US9382567B2 (en) 2016-07-05
DK2767588T3 (da) 2020-11-23
DK3572508T3 (en) 2022-12-19
US9353394B2 (en) 2016-05-31
US20070061900A1 (en) 2007-03-15
US20140073010A1 (en) 2014-03-13
EP1360287B1 (en) 2012-09-12
EP3626819B1 (en) 2021-03-31
EP2786657B1 (en) 2018-02-07
ES2391391T3 (es) 2012-11-23
EP3572508B1 (en) 2022-11-23
EP3572508A1 (en) 2019-11-27
PT3085779T (pt) 2019-05-31
MXPA03007325A (es) 2003-12-04
JP6426670B2 (ja) 2018-11-21
PL217086B1 (pl) 2014-06-30
ES2827482T3 (es) 2021-05-21
JP6402368B2 (ja) 2018-10-10
JP2013090631A (ja) 2013-05-16
AU2002244023B2 (en) 2007-05-10
DK3626819T3 (da) 2021-06-28
DK3085779T3 (da) 2019-06-24
US9371553B2 (en) 2016-06-21
EP2264163B1 (en) 2015-10-14
PT3085780T (pt) 2019-09-30
JP2016189796A (ja) 2016-11-10
PT2264163E (pt) 2016-01-08
EP3085780B1 (en) 2019-06-26
US9388446B2 (en) 2016-07-12
HK1057058A1 (en) 2004-03-12
EP1360287B2 (en) 2019-04-03
EP2264163A2 (en) 2010-12-22
DK2786657T3 (en) 2018-03-26
NZ527629A (en) 2005-03-24
US20140018522A1 (en) 2014-01-16
EP2264163A3 (en) 2011-07-06
DE19203913T1 (de) 2020-05-14
EP2787075B1 (en) 2016-11-30
JP5345463B2 (ja) 2013-11-20
HK1198260A1 (en) 2015-03-20
EP3085779B2 (en) 2023-05-31
DK3572508T1 (da) 2019-12-09
US20110258710A1 (en) 2011-10-20
ES2744220T3 (es) 2020-02-24
DE14172420T1 (de) 2014-12-04
US20040018626A1 (en) 2004-01-29
US20140020125A1 (en) 2014-01-16
CY1122059T1 (el) 2020-11-25
CY1124458T1 (el) 2022-07-22
US20140017238A1 (en) 2014-01-16
US20140033337A1 (en) 2014-01-30
US9708635B2 (en) 2017-07-18
CY1120265T1 (el) 2019-07-10
JP4412900B2 (ja) 2010-02-10
US10378039B2 (en) 2019-08-13
US20140023637A1 (en) 2014-01-23
US20140020124A1 (en) 2014-01-16
CY1117254T1 (el) 2017-04-26
US10640800B2 (en) 2020-05-05
HU231221B1 (hu) 2022-01-28
US20140017229A1 (en) 2014-01-16
US8791323B2 (en) 2014-07-29
US9528136B2 (en) 2016-12-27
EP2786657A3 (en) 2015-03-04
JP5805056B2 (ja) 2015-11-04
US20140017782A1 (en) 2014-01-16
DK2264163T3 (en) 2015-10-26
DE14172437T1 (de) 2014-11-27
US8502018B2 (en) 2013-08-06

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