CN118414168A - 因子xi a2结构域结合抗体和其使用方法 - Google Patents

因子xi a2结构域结合抗体和其使用方法 Download PDF

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Abstract

本公开提供了与因子XI(FXI)的A2结构域结合的抗体和其使用方法。根据某些实施例，所述抗体是抑制通过内在通路实现的血液凝块形成而不影响止血的拮抗剂抗体，如通过所述拮抗剂抗体在不影响PT的情况下对延长aPTT的影响所示出的。如此，这些拮抗剂抗体可以用于治疗凝血疾病或病症或具有凝块形成作为风险因素，如但不限于心房纤颤的治疗方案。在某些实施例中，本公开包含与FXI结合并介导凝块形成或血栓形成的抗体。本公开的所述抗体可以是完全人的、非天然存在的抗体。

Description

因子XI A2结构域结合抗体和其使用方法
相关申请
本申请要求于2021年10月22日提交的美国临时申请第63/270,629号的优先权的权益，所述美国临时申请的内容通过引用整体明确地并入本文。
序列表
本申请含有已经以XML格式电子提交的序列表，并且特此通过引用整体并入。创建于2022年10月19日的所述XML副本被命名为118003-01020.XML并且大小为45,437字节。
技术领域
本公开涉及与因子XI(FXI)的苹果2(A2)结构域结合的抗体、包括这些抗体的组合物和其使用方法。
背景技术
血液凝块(即，血栓)的形成是通过(a)接触通路或通过(b)外在通路引发的。两种通路通过(c)共同通路汇聚以激活凝血酶，所述凝血酶充当丝氨酸蛋白酶以将可溶性纤维蛋白原转化成不溶性纤维蛋白链。交联的纤维蛋白是血液凝块以及聚集的血小板和红细胞的主要组分。
外在通路缓和血管损伤时的止血。在此，暴露的组织因子(TF)激活因子VII(FVII)以形成FVIIa-TF复合物，所述复合物激活共同通路中的因子X(FX)以产生凝血酶原酶，所述凝血酶原酶产生凝血酶和随后的凝块形成。
接触通路与外在通路的不同之处在于所述接触通路较少涉及止血，但仍然影响凝块形成。在此，凝血是由内在事件引发的，如从血小板释放多磷酸盐或从嗜中性粒细胞挤出组蛋白和DNA负载的嗜中性粒细胞细胞外陷阱(NET)，所述内在事件激活因子XII(FXII)。经激活的FXII(即，FXIIa)进一步激活因子XI(FXI)以形成FXIa，这导致通过共同通路产生凝血酶。凝血酶和血小板产生的多磷酸盐还以前馈方式激活FXI，以放大凝块形成。
FXI是血浆蛋白酶FXIa的酶原，所述酶原通过FIX激活维持凝血酶产生。FXI是一种160kDa的二硫键连接的同源二聚体，其中每个亚基从N末端到C末端由苹果结构域A1-A4和催化结构域(CD)组成。二硫键位于每个亚基的A4结构域之间。FXI亚基通过切割位于A4与CD结构域之间的Arg-Ile键中的一个或两个Arg-Ile键以形成FXIa而被激活。通常据信，Arg-Ile键的切割是由FXIIa和/或凝血酶催化的。
发明内容
本文提供了一种经分离的单克隆抗体和其抗原结合片段，所述经分离的单克隆抗体和其抗原结合片段与因子XI(FXI)的A2结构域结合(例如，特异性结合)。在本文所公开的实施例中的任何实施例中，所述抗体或其抗原结合片段可以与FXI的A2结构域特异性结合。本公开的所述经分离的抗体和抗原结合片段可用于治疗与FXI活性或表达相关的疾病和病症。
在其最广泛的方面，本公开提供了抗FXI抗体，所述抗FXI抗体阻断FXI活性或激活并减少血液凝块形成。这些抗体可以用于预防、治疗、减少有需要的患者的血流或组织中血液凝块形成的发生率或减少所述血液凝块形成的负面影响。优选地，抗FXI抗体减弱血栓形成而不扰乱止血。
在某些实施例中，所述抗FXI抗体可以用于治疗各种凝血病症或疾病，其中所述治疗所述疾病涉及使用抗凝血剂疗法并且其中由于使用抗凝血剂疗法而存在患者出血的风险。那些适应症、病症或疾病包含高风险心房纤颤、原发性静脉血栓栓塞(VTE)预防、延长的VTE治疗、急性冠状动脉综合征后复发性缺血的预防、终末期肾病、医疗装置(例如，机械心脏瓣膜、心室辅助装置、小口径移植物、中心静脉导管等)、体外回路等。
本公开的所述抗体可以是全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或可以仅包括抗原结合部分(例如，Fab、F(ab')2或scFv片段)，并且可以被修饰以影响功能性，例如以消除残余效应子功能(Reddy等人,2000,《免疫学杂志(J.Immunol.)》164:1925-1933)。
本文的表1中列出了本公开的示例性抗FXI抗体。表1列出了所述示例性抗FXI抗体的示例性重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)以及轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符和核酸序列标识符。表1还列出了示例性抗FXI抗体的示例性HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2以及LCDR3的核酸序列标识符。
本公开提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR，所述HCVR包括选自表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括LCVR，所述LCVR包括选自表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，其包括表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任何HCVR氨基酸序列与表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任何LCVR氨基酸序列配对。根据某些实施例，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表1中列出的示例性抗FXI抗体中的任何示例性抗FXI抗体内含有的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
因此，在第一方面，本公开提供了一种经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段与血清凝血因子XI(FXI)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(HCVR)内含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，所述HCVR包括如表1中列出的氨基酸序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列；以及轻链可变区(LCVR)内含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述LCVR包括如表1中列出的氨基酸序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列。
在一个实施例中，所述抗FXI抗体或其抗原结合片段表现出一种或多种选自由以下组成的组的特性：
(a)是拮抗剂抗体；
(b)以小于约35pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的；
(c)以小于约765pM的KD与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的；
(d)以大于约1,000分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的；
(e)以大于约23分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的；
(f)以小于约39pM的IC50抑制正常稀释血浆中FXI对因子Xa(FXa)的激活至少约85％；
(g)以小于约10nM的IC50抑制正常稀释血浆中FXIa对因子Xa(FXa)的激活至少约25％；
(h)相对于全长FXI、PKA1、PKA3和PKA4，与PKA2结构域(即，苹果结构域2或A2)优先结合，如通过无标记生物层干涉测量法所确定的；
(i)与特异性结合FXIPKA2结构域内并与之重叠的表位的抗体竞争与FXI结合；
(j)使灵长类动物中的经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)(其是对内在凝血时间的量度)体内增加至少两倍，而不可测量地影响凝血酶原时间(PT)(其是对外在凝血时间的量度)；
(k)体内抑制灵长类动物中的5％-15％内在通路峰值凝血酶活性；
(l)在不使PT加倍的情况下，以约≤33nM的浓度将人血浆中的aPTT体外延长约两倍；和/或
m)以约≥31nM的浓度体外抑制人血浆中的内在通路凝血酶产生，而在至多约500nM的剂量下对外在通路凝血酶产生没有影响。
在一个实施例中，本公开提供一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与因子XI(FXI)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，所述HCVR包括如表1中列出的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，所述LCVR包括如表1中列出的氨基酸序列。
在一个实施例中，与FXI结合的所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:31的HCVR序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列内含有的三个重链CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及SEQ ID NO:13的LCVR序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列内含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQID NO:3或SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HCVR。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段进一步包括具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的LCVR。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQID NO:3或SEQ ID NO:31的氨基酸序列的HCVR；以及具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的LCVR。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括SEQ IDNO:3/13或SEQ ID NO:31/13的HCVR/LCVR氨基酸序列对的CDR。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链CDR1(HCDR1)，所述HCDR1包括选自表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任何HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链CDR2(HCDR2)，所述HCDR2包括选自表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任何HCDR2氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链CDR3(HCDR3)，所述HCDR3包括选自表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任何HCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1(LCDR1)，所述LCDR1包括选自表1中列出的LCDR1氨基酸序列中的任何LCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR2(LCDR2)，所述LCDR2包括选自表1中列出的LCDR2氨基酸序列中的任何LCDR2氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR3(LCDR3)，所述LCDR3包括选自表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任何LCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，其包括表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任何HCDR3氨基酸序列与表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任何LCDR3氨基酸序列配对。根据某些实施例，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表1中列出的示例性抗FXI抗体中的任何示例性抗FXI抗体内含有的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在某些实施例中，所述HCDR3/LCDR3氨基酸序列对是SEQ ID NO:9/19或SEQ ID NO:37/19。
本公开还提供了与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括表1中列出的示例性抗FXI抗体中的任何示例性抗FXI抗体内含有的一组六个CDR(即，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在某些实施例中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3氨基酸序列组是SEQ ID NO:5、7、9、15、17和19或SEQ ID NO:33、35、37、15、17和19。
用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术在本领域中是熟知的，并且可以用于鉴定本文所公开的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可以用于鉴定CDR边界的示例性规约包含例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义基于序列可变性，Chothia定义基于结构环区的位置，并且AbM定义是Kabat与Chothia方法之间的折衷方案。参见例如，Kabat,“免疫学所关注的蛋白质序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)”,马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(National Institutesof Health,Bethesda,Md.)(1991)；Al-Lazikani等人,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》273:927-948(1997)；以及Martin等人,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》86:9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体内的CDR序列。
在一个实施例中，本公开提供了一种与FXI结合的经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:5-7-9-15-17-19的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一个实施例中，本公开提供了一种与FXI结合的经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:33-35-37-15-17-19的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括与参考抗体竞争与FXI结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述参考抗体与FXI的苹果2(A2或PKA2)优先结合。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括与参考抗体结合同一表位的抗体或其抗原结合片段，其中所述参考抗体与FXI的苹果2(A2或PKA2)优先结合。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约1,000pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约500pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约250pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约100pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约50pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约25pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约10分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约20分钟的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约60分钟的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约2小时的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约5小时的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约10小时的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约15小时的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约16小时的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约1,000分钟的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约100nM的KD与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约10nM的KD与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约1,000pM的KD与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约500pM的KD与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约5分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约10分钟的t1/2与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约15分钟的t1/2与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约20分钟的t1/2与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，所述经分离的抗体或其抗原结合片段以大于约25分钟的t1/2与人FXIa结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约39pM的IC50抑制正常稀释血清中FXI对因子Xa(FXa)的激活至少约85％。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段以小于约10nM的IC50抑制正常稀释血清中FXIa对因子Xa(FXa)的激活至少约25％。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段相对于全长FXI、PKA1、PKA3和PKA4与PKA2结构域(即，苹果结构域2或A2)优先结合，如通过无标记生物层干涉测量法所确定的。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段与特异性结合FXIPKA2内并与之重叠的表位的抗体竞争与FXI结合。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段使灵长类动物中的经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)(其是对内在凝血时间的量度)体内增加至少两倍，而不可测量地影响凝血酶原时间(PT)(其是对外在凝血时间的量度)。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段将灵长类动物中的内在通路峰值凝血酶活性体内抑制约5％-15％、约1％-20％、约0.5％-25％、约3％-5％、约4％-6％、约5％-7％、约6％-8％、约7％-9％、约8％-10％、约9％-11％、约10％-12％、约11％-13％、约12％-14％、约13％-15％、约14％-16％、约15％-17％、约16％-18％、约17％-19％或约18％-20％。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段以以下浓度将人血浆中的aPTT体外延长约两倍：约100pM-100nM、约1nM-50nM、约5nM-40nM、约10nM-35nM、≤60nM、≤55nM、≤50nM、≤45nM、≤40nM、≤39nM、≤38nM、≤37nM、≤36nM、≤35nM、≤34nM、≤33nM、≤32nM、≤31nM、≤30nM、≤25nM或≤20nM。在此，在不使PT加倍的情况下，所述抗FXI使aPTT延长约两倍。
在一个实施例中，与FXI结合的所述经分离的抗体或其抗原结合片段以以下浓度体外抑制人血浆中的内在通路凝血酶产生：约10nM-100nM、约15nM-500nM、约20nM-60nM、约25nM-50nM、≥25nM、≥26nM、≥27nM、≥28nM、≥29nM、≥30nM、≥31nM、≥32nM、≥33nM、≥34nM、≥35nM、≥36nM、≥37nM、≥38nM、≥39nM或≥40nM。在此，在至多约500nM的剂量下，所述抗FXI抑制内在通路凝血酶产生，而对外在通路凝血酶产生没有影响。
在第二方面，本公开提供了编码抗FXI抗体或其部分的核酸分子。例如，本公开提供了编码表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任何HCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的HCVR核酸序列中的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任何LCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的LCVR核酸序列中的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的HCDR1氨基酸序列中的任何HCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的HCDR1核酸序列中的任何HCDR1核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的HCDR2氨基酸序列中的任何HCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的HCDR2核酸序列中的任何HCDR2核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的HCDR3氨基酸序列中的任何HCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的HCDR3核酸序列中的任何HCDR3核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的LCDR1氨基酸序列中的任何LCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的LCDR1核酸序列中的任何LCDR1核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的LCDR2氨基酸序列中的任何LCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的LCDR2核酸序列中的任何LCDR2核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码表1中列出的LCDR3氨基酸序列中的任何LCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的LCDR3核酸序列中的任何LCDR3核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。
本公开还提供了编码HCVR的核酸分子，其中所述HCVR包括一组三个CDR(即，HCDR1、HCDR2、HCDR3)，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3氨基酸序列组如表1中列出的示例性抗FXI抗体中的任何示例性抗FXI抗体所定义。
本公开还提供了编码LCVR的核酸分子，其中所述LCVR包括一组三个CDR(即，LCDR1、LCDR2、LCDR3)，其中所述LCDR1、LCDR2、LCDR3氨基酸序列组如表1中列出的示例性抗FXI抗体中的任何示例性抗FXI抗体所定义。
本公开还提供了编码HCVR和LCVR两者的核酸分子，其中所述HCVR包括表1中列出的HCVR氨基酸序列中的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括表1中列出的LCVR氨基酸序列中的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施例中，所述核酸分子包括选自表1中列出的HCVR核酸序列中的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列，以及选自表1中列出的LCVR核酸序列中的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列或其与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上类似的序列。在根据本公开的此方面的某些实施例中，所述核酸分子编码HCVR和LCVR，其中所述HCVR和LCVR两者均衍生自表1中列出的同一抗FXI抗体。
在第三方面，本公开提供了能够表达包括抗FXI抗体的重链或轻链可变区的多肽的重组表达载体。例如，本公开包含重组表达载体，所述重组表达载体包括上文所提及的核酸分子中的任何核酸分子，即，编码如表1中列出的HCVR、LCVR和/或CDR序列中的任何HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。还包含在本公开的范围内的是已经引入此类载体的宿主细胞，以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞而产生抗体或其部分并且回收如此产生的抗体和抗体片段的方法。
本公开包含具有经修饰的糖基化模式的抗FXI抗体。在一些实施例中，例如，可使用修饰以去除不期望的糖基化位点，或者在寡糖链上存在的缺乏岩藻糖部分的抗体，以增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等人,(2002)《生物化学杂志(JBC)》277:26733)。在其它应用中，可以进行半乳糖基化的修饰，以便修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在第四方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括与FXI特异性结合的至少一种本公开的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载剂。
在相关方面，本公开的特征在于一种组合物，所述组合物是抗FXI抗体和第二治疗剂的组合。在一个实施例中，所述第二治疗剂是有利地与抗FXI抗体组合的任何药剂。所述第二治疗剂可以用于减轻疾病或病症的至少一种症状。
在第五方面，本公开提供了一种用于增强由FXI介导的生物活性的方法，所述方法包括使FXI与生物学有效量的表1的拮抗剂抗FXI抗体接触或使FXI与含有生物学有效量的表1的拮抗剂抗FXI抗体的药物组合物接触。
在某些实施例中，所述生物活性是凝血或由于内在凝血通路引起的凝血，而不是由于外在(即，例如，组织因子诱导的)通路引起的凝血；并且当FXI或FXIa与拮抗剂抗FXI抗体接触时，凝血或由于内在凝血通路引起的凝血而不是由于外在通路引起的凝血被抑制或以其它方式减少。
在第六方面，本公开提供了用于使用本公开的抗FXI抗体或抗体的抗原结合部分来治疗与FXI活性或表达相关的疾病或病症或与所述疾病或病症相关的至少一种症状的治疗方法。根据本公开的此方面的治疗方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的包括本公开的抗体或抗体的抗原结合片段的药物组合物。所治疗的病症是通过靶向FXI和/或通过使FXI介导的凝血失活而改善、缓解、抑制或预防的任何疾病或病状。
在一个实施例中，本公开的抗FXI抗体可以提供一种治疗病理性内在凝血而不对止血产生不利影响的方法。在一个实施例中，本公开的抗FXI抗体可以提供治疗疾病、病症、以下中的任一种的凝血副作用、间接凝血作用的方法：因子V莱登(Factor V Leiden)；凝血酶原基因突变；防止凝血的天然蛋白质(如抗凝血酶、蛋白C和蛋白S)的缺陷；同型半胱氨酸的水平升高；纤维蛋白原或功能失调纤维蛋白原(血纤维蛋白原异常)的水平升高；因子VIII、因子IX和/或因子XI的水平升高；异常纤溶系统，包含低纤溶酶原血症、异常纤溶酶原血症以及纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)的水平升高；心房纤颤；癌症)；用于治疗癌症的一些药物(如它莫西芬(tamoxifen)、贝伐单抗(bevacizumab)、沙利度胺(thalidomide)和来那度胺(lenalidomide))的副作用；近期创伤或外科手术；中心静脉导管放置；肥胖症；妊娠；补充雌激素使用，包含口服避孕药(节育药))；激素替代疗法；长期卧床休息或不动；心脏病发作；充血性心力衰竭；中风和导致活动减少的其它疾病；肝素诱导的血小板减少症(由于肝素或低分子量肝素制剂引起的血液中血小板减少)；长途飞机旅行；抗磷脂抗体综合征；深静脉血栓形成或肺栓塞；骨髓增殖性病症，如真性红细胞增多症或原发性血小板增多症；夜间发作性血红蛋白尿症；炎性肠综合征；HIV/AIDS；肾病综合征；COVID-19感染或刺突蛋白免疫效应等。
本公开的第七方面提供了一种预防受试者的血栓形成而不对止血产生不利影响的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的表1的FXI拮抗剂抗体或包括治疗有效量的抗体或其抗原结合片段的药物组合物。
在一个实施例中，上述方法可以通过向有需要的受试者施用拮抗剂抗FXI抗体或其抗原结合片段来实现，其中所述拮抗剂抗FXI抗体包括重链可变区(HCVR)内含有的三个重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，所述HCVR包括如表1中列出的氨基酸序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列；以及轻链可变区(LCVR)内含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述LCVR包括如表1中列出的氨基酸序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列。
在一个实施例中，本公开的方法可以通过施用本公开的拮抗剂FXI抗体来实现，其中所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:31的HCVR序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列内含有的三个重链CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及SEQ ID NO:13的LCVR序列或其与其具有至少90％序列同一性的基本上类似的序列内含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR，所述HCVR具有SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括LCVR，所述LCVR具有SEQ IDNO:13的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR，所述HCVR具有SEQ IDNO:3的氨基酸序列；以及LCVR，所述LCVR具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR，所述HCVR具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列；以及LCVR，所述LCVR具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:3/13或SEQ ID NO:31/13的HCVR/LCVR氨基酸序列对的CDR。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:3/13或SEQ ID NO:31/13的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:5-7-9-15-17-19的氨基酸序列的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:33-35-37-15-17-19的氨基酸序列的一组六个CDR(HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在一个实施例中，所述抗体或其抗原结合片段与人FXI特异性结合。
在一个实施例中，待用本公开的抗FXI抗体治疗的疾病或病症是血栓形成以及由血栓形成引起的任何并发症。
据预想，与FXI活性或表达相关的任何疾病或病症适于用本公开的抗体进行治疗。这些病症可以包含有害凝块形成是风险的任何疾病或病状，尤其是但不限于内在凝血和止血对于患者来说是风险的那些病状。
通过阅读随后的详细描述，其它实施例将变得显而易见。
附图说明
图1描绘了示出了aPTT的变化倍数作为抗体的对数浓度的函数的线图。实心锥体描绘了同种型对照抗体(顶部顶点)或本发明的FXI A2抗体REGN9933(底部顶点，标记为H4H29790P2)。实心圆描绘了与FXI A2结合的比较物抗体。
图2描绘了示出了凝血酶活性作为同种型对照抗体(REGN1945)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图3描绘了示出了凝血酶活性作为与FXI A2结合的主题抗体(REGN9933)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图4描绘了示出了凝血酶活性作为与FXI A2结合的比较物抗体(COMP3448)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图5描绘了示出了凝血酶活性作为同种型对照抗体(REGN1945)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图6描绘了示出了凝血酶活性作为与FXI A2结合的主题抗体(REGN9933)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图7描绘了示出了凝血酶活性作为与FXI A2结合的比较物抗体(COMP3448)的浓度随时间推移而变化的函数的线图。
图8A描绘了示出了经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)的变化倍数作为抗体对数浓度的函数的线图。深色阴影描绘了同种型对照。浅色阴影描绘了与FXI A2结合的主题抗体REGN9933。在aPTT凝血测定中，将人供体血浆与2倍连续稀释的REGN9933或IgG4P同种型对照19nM至1200nM一起温育，随后添加鞣花酸(EA)，一种内在凝结通路的特异性激活剂。图8B描绘了示出了凝血酶原时间(PT)的变化倍数作为抗体对数浓度的函数的线图。在PT凝血测定中，将人供体血浆与REGN9933或IgG4P同种型对照在600nM和1200nM下一起温育，随后添加组织因子(TF)，一种外在凝结通路的特异性激活剂。图8B示出了用于PT凝血测定的REGN9933和IgG4P同种型对照的重叠线；因此，不能区分这些线。确定与基线(即，无抗体对照)相比aPTT和PT的变化；针对被测的每种抗体浓度，绘制一式两份样品的平均变化。
图9A描绘了示出了鞣花酸(EA)介导的凝血酶活性作为与FXI A2结合的主题抗体的浓度随时间推移而变化的函数的线图。图9B描绘了示出了EA介导的凝血酶活性作为同种型对照抗体的浓度随时间推移而变化的函数的线图。图9C描绘了示出了组织因子(TF)介导的凝血酶活性作为与FXI A2结合的主题抗体REGN9933的浓度随时间推移而变化的函数的线图。图9D描绘了示出了TF介导的凝血酶活性作为同种型对照抗体的浓度随时间推移而变化的函数的线图。将人供体血浆与2倍连续稀释的主题mAb或IgG4P同种型对照16nM至500nM一起温育，随后添加(图9A和9B)鞣花酸(EA)，一种内在凝结通路的特异性激活剂或(图9B和9C)组织因子(TF)，一种外在凝结通路的特异性激活剂。将所测得的实时凝血酶浓度值相对于时间进行绘制，以产生针对被测的每种抗体浓度以及无抗体对照(即，PBS)的血栓图曲线。
图10A-10B：REGN9933与血浆中的总FXI水平的增加相关。向雌性食蟹猴施用单次静脉内(IV)缓慢团注注射媒剂(对照，n＝3)、1mg/kg的REGN9933(n＝3)、3mg/kg的REGN9933(n＝3)或10mg/kg的REGN9933(n＝3)，并且在给药后监测8周。在给药前以及给药后5分钟、6小时、第2天、第3天、第4天、第6天、第8天、第11天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天和第57天从所有动物收集血液样品。给药前测量结果用作每只动物的基线(图10A和10B)。图10A描绘了示出了在使用小鼠抗人IgG Fc单克隆抗体(mAb)的酶联免疫吸附测定(ELISA)中测量的血清中的总REGN9933的线图。图10在2.1.1处的药物总和描绘了示出了在使用山羊抗人FXI mAb的ELISA中测量的血浆中的总FXI的线图；报告了总FXI的变化倍数(与基线相比)。数据表示为组平均值±平均值的标准误差(SEM)。
图11A-11B：REGN9933延长aPTT，但不延长PT，对持续时间具有剂量依赖性影响。向雌性食蟹猴施用单次静脉内(IV)缓慢团注注射媒剂(对照，n＝3)、1mg/kg的REGN9933(n＝3)、3mg/kg的REGN9933(n＝3)或10mg/kg的REGN9933(n＝3)，并且在给药后监测8周。在给药前以及给药后5分钟、6小时、第2天、第3天、第4天、第6天、第8天、第11天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天和第57天从所有动物收集血液样品。给药前测量结果用作每只动物的基线。(图11A和11B).图11A描绘了示出了EA介导的aPTT作为aPTT的变化倍数(与基线相比)随时间推移而变化的函数的线图。图11B描绘了示出了TF介导的PT作为PT的变化倍数(与基线相比)随时间推移而变化的函数的线图。数据表示为组平均值±平均值的标准误差(SEM)。
图12A-12B REGN9933降低内在和外在凝结通路的内源性凝血酶潜力，对内在通路中的活性的持续时间具有剂量依赖性影响。向雌性食蟹猴施用单次静脉内(IV)缓慢团注注射媒剂(对照，n＝3)、1mg/kg的REGN9933(n＝3)、3mg/kg的REGN9933(n＝3)或10mg/kg的REGN9933(n＝3)，并且在给药后监测8周。在给药前以及给药后5分钟、6小时、第2天、第3天、第4天、第6天、第8天、第11天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天和第57天从所有动物收集血液样品。给药前测量结果用作每只动物的基线。分别使用鞣花酸(EA)和组织因子(TF)作为内在和外在凝结通路的激活剂，对血浆样品进行凝血酶产生测定(TGA)(图12A和12B)。图12A描绘了示出了EA介导的aPTT作为内源性凝血酶潜力(ETP)的变化倍数(与基线相比)随时间推移而变化的函数的线图。图12B描绘了示出了TF介导的PT作为ETP的变化倍数(与基线相比)随时间推移而变化的函数的线图。数据表示为组平均值±平均值的标准误差(SEM)。
具体实施方式
在描述本公开之前，应当理解，本公开不限于所描述的特定方法和实验条件，因为此类方法和条件可以变化。还应当理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，而不旨在是限制性的，因为本公开的范围将仅由所附权利要求限定。
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。如本文所使用的，当用于提及具体列举的数值时，术语“约”意指所述值可以与所列举的值相差不超过1％。例如，如本文所使用的，表述“约100”包含99和101以及其之间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管本公开的实践或测试中可以使用类似于或等效于本文所述的方法和材料的任何方法和材料，但现在描述了优选的方法和材料。本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物均通过引用整体并入本文。
定义
表述“FXI”等(也称为“凝结因子XI”或“因子XI”)是指人血浆丝氨酸蛋白酶(除非指定为来自另一物种)，其包括如在登录号NP_000119.1的氨基酸残基19至625中列出的氨基酸序列(SEQ ID NO:21)。含有myc-myc-六聚组氨酸标签的人FXI被示出为SEQ ID NO:22(其中氨基酸残基1-607是人FXI，并且氨基酸残基608-635是myc-myc-六聚组氨酸标签)。
在某些情况下，制备表达以下的细胞系：FXI蛋白；FXI蛋白的亚基；以及含有一个或多个FXI亚基、标签序列和血浆激肽释放酶蛋白序列的嵌合体蛋白。例如，SEQ ID NO:23(构建体hFXI_PKA1)是在氨基酸1-85处含有人激肽释放酶B1的苹果1结构域(PKA1)(人激肽释放酶B1的氨基酸G20-C104[SEQ ID NO:28])、在氨基酸86-606处含有人FXI(hFXI)的氨基酸H105-V625以及在氨基酸607-634处含有myc-myc-六聚组氨酸标签的嵌合体。
例如，SEQ ID NO:24(构建体hFXI_PKA2)是在氨基酸1-90处含有hFXI的氨基酸E19-S108、在氨基酸91-174处含有hKLKB1的苹果2结构域(PKA2，也称为“A2”)(氨基酸C111-C193 SEQ ID NO:28)、在氨基酸175-605处含有hFXI的氨基酸A195-V625以及在氨基酸606-633处含有myc-myc-六聚组氨酸标签的嵌合体。
例如，SEQ ID NO:25(构建体hFXI_PKA3)是在氨基酸1-180处含有hFXI的氨基酸E19-L198、在氨基酸181-264处含有hKLKB1的苹果3结构域(PKA3)(氨基酸C201-C284 SEQID NO:28)、在氨基酸265-605处含有hFXI的氨基酸H285-V625以及在氨基酸606-633处含有myc-myc-六聚组氨酸标签的嵌合体。
例如，SEQ ID NO:26(构建体hFXI_PKA4)是在氨基酸1-271处含有hFXI的氨基酸E19-V289、在氨基酸272-355处含有hKLKB1的苹果4结构域(PKA4)(氨基酸C292-C375 SEQID NO:28)、在氨基酸356-605处含有hFXI的氨基酸M376-V625以及在氨基酸606-633处含有myc-myc-六聚组氨酸标签的嵌合体。
例如，SEQ ID NO:27(构建体hKLKB1.mmh)是在氨基酸1-619处含有hKLKB1的氨基酸G20-A638以及在氨基酸620-647处含有myc-myc-六聚组氨酸标签的嵌合体。
如本文所使用的，表述“抗FXI抗体”包含具有单一特异性的单价抗体以及包括与FXI结合的第一臂和与第二(靶)抗原结合的第二臂的双特异性抗体两者，其中抗FXI臂包括如本文表1中列出的HCVR/LCVR或CDR序列中的任何HCVR/LCVR或CDR序列。表述“抗FXI抗体”还包含包括与药物或毒素(即，细胞毒性剂)缀合的抗FXI抗体或其抗原结合部分的抗体-药物缀合物(ADC)。表述“抗FXI抗体”还包含包括与放射性核素缀合的抗FXI抗体或其抗原结合部分的抗体-放射性核素缀合物(ARC)。
如本文所使用的，术语“抗FXI抗体”意指包括至少一个互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物，所述至少一个CDR与FXI或FXI的一部分或FXI的苹果2结构域或FXI的苹果2结构域内的表位特异性结合或与之相互作用。术语“抗体”包含免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子包括四条多肽链、通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链以及其多聚体(例如，IgM)。每条重链包括重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包括三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包括轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包括一个结构域(CL1)。可以将VH和VL区进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布有更保守的被称为骨架区(FR)的区。每个VH和VL由从氨基端到羧基端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本公开的不同实施例中，抗FXI抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然的或经人工修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并列分析来定义氨基酸共识序列。
如本文所使用的，术语“抗体”还包含全长抗体分子的抗原结合片段。如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包含与抗原特异性结合以形成复合物的任何可酶促获得的、合成的或经基因工程化的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以使用任何合适的标准技术(如蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗体可变结构域以及任选地恒定结构域的DNA的重组基因工程技术)衍生自例如全抗体分子。此类DNA是已知的和/或易于从例如商业来源、DNA文库(包含例如噬菌体-抗体文库)获得，或者可以被合成。可以通过化学方法或通过使用分子生物学技术对DNA进行测序和操纵，例如，以将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列成合适的构型、或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或缺失氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包含：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)由模拟抗体的高变区(例如，经分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽的氨基酸残基组成的最小识别单位。其它经工程化分子(如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、微抗体、纳米抗体(例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小型模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域)也涵盖在如本文所使用的表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包括至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，并且通常将包括至少一个与具有一个或多个骨架序列的框架相邻或在所述框架内的CDR。在具有与VL结构域相关的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚体，并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可替代地，抗体的抗原结合片段可以含有单体VH或VL结构域。
在某些实施例中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本公开的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包含：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；以及(xiv)VL-CL.在可变结构域和恒定结构域的任何构型，包含上文所列出的示例性构型中的任何构型中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或者可以通过完整或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成，这导致单个多肽分子中的相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本公开的抗体的抗原结合片段可以包括上文所列出的彼此和/或与一个或多个单体VH或VL结构域(例如，通过二硫键)非共价缔合的可变结构域构型和恒定结构域构型中的任何可变结构域构型和恒定结构域构型的同源二聚体或异源二聚体(或其它多聚体)。
与全抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常将包括至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够与单独抗原或同一抗原上的不同表位特异性结合。可以使用本领域中可用的常规技术，使包含本文所公开的示例性双特异性抗体格式的任何多特异性抗体格式适合在本公开的抗体的抗原结合片段的上下文中使用。
在某些情况下，可能令人期望的是拮抗FXI，例如，用于抑制血液凝块的形成。然而，本公开的抗体充当拮抗剂抗体，所述拮抗剂抗体用作FXI或FXIa活性的抑制剂并且同时用作内在通路血栓形成/凝块形成的抑制剂。本公开的抗体可以通过防止FXI与其上游激活剂凝结因子XII(FXII)和/或凝结因子II(FII或凝血酶)之间的相互作用来发挥作用。本公开的抗体还可以通过防止FXI与其下游靶凝结因子IX(FIX)之间的相互作用来发挥作用。本公开的抗体还可以通过从患者的血流中隔绝FXI来发挥作用。
如本文所使用的，术语“人抗体”旨在包含非天然存在的人抗体。所述术语包含在非人哺乳动物或非人哺乳动物的细胞中重组产生的抗体。所述术语并不旨在包含从人受试者中分离或产生的抗体。
在一些实施例中，本公开的抗体可以是重组和/或非天然存在的人抗体。如本文所使用的，术语“重组人抗体”旨在包含通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体所表达的抗体(在下文中进一步描述)、从重组的组合人抗体文库中分离的抗体(在下文中进一步描述)、从对于人免疫球蛋白基因而言是转基因的动物(例如，小鼠)中分离的抗体(参见例如，Taylor等人(1992)《核酸研究(Nucl.Acids Res.)》20:6287-6295)、或通过任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体，所述方式涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列上。在某些实施例中，此类重组人抗体经历体外诱变(或者，当使用针对人Ig序列而转基因的动物时，经历体内体细胞诱变)，并且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是尽管与人种系VH和VL序列相关，但可能并非天然在体内存在于人抗体种系库中。
人抗体可以以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包括大约150-160kDa的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键保持在一起。在第二种形式中，二聚体不通过链间二硫键连接，并且形成约75-80kDa的分子，所述分子由共价偶联的轻链和重链(半抗体)构成。即使在亲和纯化之后，这些形式也极难分离。
以各种完整IgG同种型形式出现第二种形式的频率基于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以将第二种形式(Angal等人(1993)《分子免疫学(Molecular Immunology)》30:105)的出现显著降低到通常使用人IgG1铰链所观察到的水平。本公开涵盖在铰链区、CH2区或CH3区中具有一个或多个突变的抗体，所述抗体可能是例如在产生中令人期望的，以改善期望抗体形式的产量。
术语“与…特异性结合(specifically binds)”或“与…特异性结合(bindsspecifically to)”等意指抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原形成复合物。特异性结合的特征可以在于平衡解离常数为至少约1x 10-6M或更小(例如，更小的KD表示更紧密的结合)。用于确定两个分子是否特异性结合的方法在本领域中是熟知的，并且包含例如平衡透析、表面等离子体共振等。如本文所述，抗体已经通过表面等离子体共振(例如，BIACORETM)鉴定，所述抗体与FXI特异性结合。此外，如本文所使用的，与FXI蛋白和一种或多种另外的抗原结合的多特异性抗体，或与FXI的两个不同区域结合的双特异性抗体仍然被认为是“特异性结合”的抗体。
本公开的抗体可以是经分离的抗体。如本文所使用的，“经分离的抗体”意指已经从其天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，已经从生物体的至少一种组分或从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或去除的抗体是用于本公开的目的的“经分离的抗体”。经分离的抗体还包含重组细胞内的原位抗体。经分离的抗体是已经经历至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施例，经分离的抗体可以基本上不含其它细胞物质和/或化学品。
本文所公开的抗FXI抗体可以在重链和轻链可变结构域的骨架和/或CDR区中包括一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。可以通过将本文所公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的序列进行比较来容易地确定此类突变。一旦获得，就可以容易地测试含有一个或多个突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种期望特性，如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗或拮抗生物学特性(视情况而定)、降低的免疫原性等。以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段被涵盖在本公开内。
本公开还包含抗FXI抗体，其包括具有一个或多个保守取代的本文所公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的变体。例如，本公开包含具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗FXI抗体，相对于本文表1中列出的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，所述HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等保守氨基酸取代。
术语“表位”是指与称为互补位的抗体分子的可变区中的特异性抗原结合位点相互作用的抗原决定簇。单个抗原可以具有多于一个表位。因此，不同抗体可以与抗原上的不同区域结合，并且可以具有不同的生物效应。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链的不同区段的空间上并置的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中的相邻氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包含抗原上的糖、磷酰基或磺酰基的部分。
当提及核酸或其片段时，术语“基本同一性”或“基本上相同”指示当通过适当的核苷酸插入或缺失与另一种核酸(或其互补链)进行最佳比对时，核苷酸序列同一性是核苷酸碱基的至少约95％并且更优选地至少约96％、97％、98％或99％，如通过如FASTA、BLAST或Gap等任何熟知的序列同一性算法所测量，如下文所讨论的。在某些情况下，具有与参考核酸分子基本同一性的核酸分子可以编码具有与由参考核酸分子编码的多肽相同或基本上类似的氨基酸序列的多肽。
当应用于多肽时，术语“基本类似性”或“基本上类似”意指当如通过使用默认间隙权重的程序GAP或BESTFIT进行最佳比对时，两个肽序列共享至少95％序列同一性，甚至更优选地至少98％或99％序列同一性。优选地，不相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有类似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守氨基酸取代将不会实质上改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似性程度，以校正取代的保守性质。用于作出此调整的方式是本领域的技术人员所熟知的。参见例如，Pearson(1994)《分子生物学方法(MethodsMol.Biol.)》24:307-331，所述文献通过引用并入本文。具有拥有类似化学特性的侧链的氨基酸基团的实例包含：(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；以及(7)含硫侧链是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，保守替代是在以下文献中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人(1992)《科学(Science)》256:1443-1445，所述文献通过引用并入本文。“适度保守”替代是PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。
通常使用序列分析软件来测量多肽的也称为序列同一性的序列相似性。蛋白质分析软件使用分配给各种取代、缺失和其它修饰(包含保守氨基酸取代)的相似性量度来匹配类似序列。例如，GCG软件含有如Gap和Bestfit等程序，所述程序可以与默认参数一起使用，以确定紧密相关的多肽(如来自不同生物体物种的同源多肽)之间或野生型蛋白质与其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如6.1版GCG。还可以使用使用默认的或推荐的参数的FASTA来比较多肽序列，所述FASTA是6.1版GCG中的程序。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供了询问与搜索序列之间的最佳重叠区的比对和序列同一性百分比(Pearson(2000)，同上文)。当比较本公开的序列与含有大量来自不同生物体的序列的数据库时，另一个优选的算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。参见例如，Altschul等人(1990)《分子生物学杂志》215:403-410以及Altschul等人(1997)《核酸研究》25:3389-402，所述文献各自通过引用并入本文。
抗体的特性
本公开包含以小于约500pM的KD与人FXI的A2结构域结合的抗FXI抗体，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。根据某些实施例，本公开包含以以下KD与人FXI结合的抗FXI抗体：小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约150pM、小于约100pM、小于约80pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约5pM、小于约3pM或小于约1pM。
本公开包含以小于约1,000pM的KD与经激活的人FXI(FXIa)结合的抗FXI抗体，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。根据某些实施例，本公开包含以以下KD与人FXI结合的抗FXI抗体：小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约500pM、小于约250pM、小于约100pM、小于约80pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约5pM、小于约3pM或小于约1pM。
本公开包含以大于约10分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXI结合的抗FXI抗体，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。根据某些实施例，本公开包含以以下t1/2与人FXI结合的抗FXI抗体：大于约20分钟、大于约50分钟、大于约100分钟、大于约120分钟、大于约150分钟、大于约300分钟、大于约350分钟、大于约400分钟、大于约450分钟、大于约500分钟、大于约550分钟、大于约600分钟、大于约700分钟、大于约800分钟、大于约900分钟、大于约1000分钟、大于约1100分钟或大于约1200分钟。
本公开包含以大于约10分钟的解离半衰期(t1/2)与人FXIa结合的抗FXI抗体，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。根据某些实施例，本公开包含以以下t1/2与人FXI结合的抗FXI抗体：大于约20分钟、大于约50分钟、大于约100分钟、大于约120分钟、大于约150分钟、大于约300分钟、大于约350分钟、大于约400分钟、大于约450分钟、大于约500分钟、大于约550分钟、大于约600分钟、大于约700分钟、大于约800分钟、大于约900分钟、大于约1000分钟、大于约1100分钟或大于约1200分钟。
本公开包含可以结合或可以不结合非人FXI的抗FXI抗体。如本文所使用的，当在如表面等离子体共振等抗原结合测定中进行测试时，如果抗体在此类测定中表现出大于约1000nM的KD或不表现出任何抗原结合，则抗体“不结合”特定抗原(例如，猴、小鼠或大鼠FXI)。根据本公开的此方面，可以用于确定抗体是否结合或不结合特定抗原的另一种测定形式是ELISA。
本领域中通常已知的是，经激活的FXI(FXIa)通过选择性切割arg-ala和arg-val肽键来激活因子IX。因子IXa反过来与因子VIIIa形成复合物(FIXa-FVIIIa)并激活因子X。本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体以小于约100pM的IC50抑制血浆中FXI介导的人FX的激活至少约85％。使用实例4中描述的测定形式或基本上类似的测定形式，可以将IC50值计算为将FXI介导的信号传导激活至所观察到的半最大信号所需的抗体浓度。因此，根据某些实施例，本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体以以下IC50介导血浆中人FX的人FXI介导的激活至少约85％：小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM或小于约5pM，如使用本文实例4中描述的测定形式或基本上类似的测定所测量的。
本公开还包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体以小于约50pM的IC50抑制血浆中人FX的FXIa介导的激活至少约25％。使用实例4中描述的测定形式或基本上类似的测定形式，可以将IC50值计算为将FXIa介导的信号传导激活至所观察到的半最大信号所需的抗体浓度。因此，根据某些实施例，本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体以以下IC50介导血浆中人FX的人FXIa介导的激活至少约25％：小于约200pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约9pM、小于约8pM、小于约7pM、小于约6pM、小于约5pM、小于约4pM、小于约3pM、小于约2pM或小于约1pM，如使用本文实例4中描述的测定形式或基本上类似的测定所测量的。
本公开包含与苹果2结构域(A2)优先结合的抗FXI抗体，如通过与A2结构域构建体直接结合或通过与分别如实例5和实例6中所示的一种或多种特异性A2结合抗体竞争所证明的。在一个实施例中，本文所公开的抗体或其抗原结合片段不与FXI的催化结构域结合。
本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体延长人血浆中的经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)(其是对内在通路血栓形成的量度)，而对凝血酶原时间(PT)(其是对外在通路血栓形成的量度)不具有可测量的影响。在一个实施例中，使用止血分析仪测量用鞣花酸处理的合并的人血浆中的aPTT，并且测量用组织因子处理的合并的人血浆中的PT，如实例7中所例示的。本领域中通常已知的是，鞣花酸在体外刺激血栓形成的内在通路，并且组织因子刺激血栓形成的外在通路。在此，在不使PT加倍的情况下，抗FXI抗体以以下浓度使aPTT延长约两倍：小于100nM、小于90nM、小于80nM、小于70nM、小于60nM、小于50nM、小于40nM、小于30nM、小于20nM、小于10nM、1nM-100nM、1nM-100nM、1nM-50nM、100pM-50nM、5nM-50nM、5nM-40nM、5nM-15nM、10nM-20nM、15nM-25nM、20nM-30nM、25nM-35nM、30nM-40nM、35nM-45nM、40nM-50nM、45nM-55nM、50nM-60nM、55nM-65nM、60nM-100nM、65nM-75nM、70nM-80nM、75nM-85nM、80nM-90nM、85nM-95nM、90nM-100nM或95nM-105nM。
本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体在体外抑制通过人血浆中的内在通路(内在凝血酶)实现的凝血酶产生，而对通过外在通路(外在凝血酶)实现的凝血酶产生几乎没有影响。在一个实施例中，通过使用经校准的自动化血栓图的凝血酶产生测定来在体外确定通路特异性凝血酶产生，如实例7中所例示的。在此，生成凝血酶产生曲线，并且在使用和不使用抗FXI抗体的情况下，确定鞣花酸处理的血浆和组织因子处理的血浆中的峰值凝血酶浓度。因此，在一个实施例中，抗FXI抗体以以下浓度抑制内在凝血酶的产生：0.1nM-100nM、1nM-100nM、5nM-500nM、5nM-100nM、10nM-100nM、10nM-50nM、5nM-15nM、10nM-20nM、25nM-35nM、30nM-40nM、35nM-45nM、40nM-50nM、45nM-55nM、50nM-60nM、55nM-65nM、60nM-65nM、≥20nM、≥25nM、≥30nM、≥35nM、≥40nM、≥45nM、≥50nM、≥55nM、≥5nM、≥10nM或≥15nM。在此，在至多500nM的任何浓度下，抗FXI抗体对外在凝血酶的产生没有影响。
本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体使灵长类动物中的经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)体内增加至少两倍，而不可测量地影响凝血酶原时间(PT)。在此，向灵长类动物施用抗FXI抗体，从所述灵长类动物获得血浆，使血浆与鞣花酸或组织因子接触，并且然后在如实例8中所例示的测定中分别确定aPTT或PT。在一个实施例中，灵长类动物是人。在一个实施例中，灵长类动物是猴。
在一个实施例中，抗FXI抗体以以下剂量肠外施用：0.01mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg或约15mg/kg。
在一个实施例中，相对于无抗FXI处理，用抗FXI处理使aPTT延长至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少5.5倍或至少6倍。
在一个实施例中，在接受一定剂量的抗FXI抗体之后，抗FXI介导的aPTT延长效应在受试者体内持续至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月。
本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体体内抑制灵长类动物中的内在通路峰值凝血酶活性，而不可测量地影响外在通路峰值凝血酶活性。在此，向灵长类动物施用抗FXI抗体，从所述灵长类动物获得血浆，使血浆与鞣花酸或组织因子接触，并且然后在如实例8中所例示的凝血酶产生测定中分别确定内在凝血酶或外在凝血酶的产生。在一个实施例中，灵长类动物是人。在一个实施例中，灵长类动物是猴。
在一个实施例中，抗FXI抗体以以下剂量肠外施用：0.01mg/kg-20mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、1mg/kg-10mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg或约15mg/kg。
在一个实施例中，相对于无抗FXI处理，抗FXI处理中的峰值内在凝血酶(即，通过鞣花酸产生的凝血酶)活性被抑制1％-100％、5％-95％、10％-90％、20％-80％、1％-10％、5％-20％、10％-30％、15％-40％、20％-50％、25％-60％、5％-15％、10％-20％、15％-25％、20％-30％、25％-35％、30％-40％、35％-45％、40％-50％、45％-55％、50％-60％、55％-65％、60％-70％、65％-75％、70％-80％、75％-85％、80％-90％、85％-95％、90％-100％、95％-105％或≥100％。
在一个实施例中，在接受一定剂量的抗FXI抗体之后，抗FXI介导的峰值内在凝血酶活性的抑制在受试者体内持续至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月。
当以“通过表面等离子体共振所测量的”的术语公开时，本公开的抗体的结合特性(例如，本文上文所提及的结合特性中的任何结合特性)意指使用表面等离子体共振仪器(例如，仪器，通用电气医疗集团(GE Healthcare))使用如本文实例3中所展示的标准Biacore测定条件或基本上类似的测定形式来测量关于抗体与抗原之间的相互作用的相关结合特性。在某些实施例中，在25℃下测量结合参数，而在其它实施例中，在37℃下测量结合参数。
本公开包含与FXI特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括HCVR和/或LCVR，所述HCVR和/或LCVR包括选自表1中列出的HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的任何HCVR和/或LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。
本公开的抗体可以具有上述生物学特性中的一个或多个生物学特性或其任何组合。本公开的抗体的生物学特性的前述列表并不旨在是穷举的。通过阅读本公开，包含本文的工作实例，本公开的抗体的其它生物学特性对于本领域的普通技术人员而言将是显而易见的。
表位作图和相关技术
本公开的抗体所结合的表位可以由FXI蛋白的3个或更多个(例如，3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个)氨基酸的单个连续序列组成。可替代地，表位可以由FXI的多个非连续氨基酸(或氨基酸序列)组成。在一些实施例中，表位位于FXI的表面上或附近，例如位于与其配体(例如，FXIIa、凝血酶和FIX)中的任何一种配体相互作用的结构域中。在其它实施例中，表位位于FXI的不与FXI配体相互作用的表面上或附近，例如位于FXI的表面上的某一位置处，在所述位置处，当抗体与此类表位结合时，抗体不干扰FXI与其配体之间的相互作用。
可以使用本领域的普通技术人员已知的各种技术来确定抗体是否在多肽或蛋白质内“与一个或多个氨基酸相互作用”。示例性技术包含例如，常规交叉阻断测定(如在《抗体(Antibodies)》,Harlow和Lane(纽约冷泉港的冷泉港出版社(Cold Spring HarborPress,Cold Spring Harb.,NY))中描述的交叉阻断测定)、丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke,2004,《分子生物学方法》248:443-463)和肽切割分析。另外，可以采用如表位切除、表位提取和抗原的化学修饰等方法(Tomer,2000,《蛋白质科学(Protein Science)》9:487-496)。可以用于鉴定与抗体相互作用的多肽内的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测的氢/氘交换。一般来说，氢/氘交换方法涉及对所关注蛋白质进行氘标记，随后将抗体与经氘标记的蛋白质结合。接下来，将蛋白质/抗体复合物转移到水中，以允许在除了受抗体保护的残基(其保持为经氘标记的)之外的所有残基处发生氢-氘交换。在解离抗体之后，对靶蛋白进行蛋白酶切割和质谱分析，由此揭示与抗体相互作用的特定氨基酸相对应的经氘标记的残基。参见例如，Ehring(1999)《分析生物化学(Analytical Biochemistry)》267(2):252-259；Engen和Smith(2001)《分析化学(Anal.Chem.)》73:256A-265A。
本公开包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体与本文所述的特定示例性抗体(例如，包括如本文表1中列出的氨基酸序列中的任何氨基酸序列的抗体)中的任何示例性抗体相同的表位结合。同样地，本公开还包含抗FXI抗体，所述抗FXI抗体与本文所述的特定示例性抗体(例如，包括如本文表1中列出的氨基酸序列中的任何氨基酸序列的抗体)中的任何示例性抗体竞争与FXI结合。
通过使用本领域已知的并且本文例示的常规方法，可以容易地确定抗体是否结合与参考抗FXI抗体相同的表位或竞争结合所述参考抗FXI抗体。例如，为了确定测试抗体是否结合与本公开的参考抗FXI抗体相同的表位，允许参考抗体与FXI蛋白结合。接下来，评估测试抗体与FXI分子结合的能力。如果测试抗体能够在与参考抗FXI抗体饱和结合后与FXI结合，则可以得出结论，测试抗体与参考抗FXI抗体结合不同的表位。另一方面，如果测试抗体不能够在与参考抗FXI抗体饱和结合后与抗FXI分子结合，则测试抗体可以结合与由本公开的参考抗FXI抗体结合的表位相同的表位。然后可以进行另外的常规实验(例如，肽突变和结合分析)，以确认所观察到的测试抗体的结合缺乏是否实际上是由于与参考抗体结合同一表位或者是否是空间阻断(或另一种现象)导致所观察到的结合缺乏。可以使用ELISA、RIA、Biacore、流式细胞术或本领域可获得的任何其它定量或定性抗体结合测定来进行这种实验。根据本公开的某些实施例，如果例如一种抗体的1倍、5倍、10倍、20倍或100倍过量将另一种抗体的结合抑制至少50％，但优选地75％、90％或甚至99％，如在竞争性结合测定中所测量的，则两种抗体与同一(或重叠)表位结合(参见例如，Junghans等人,《癌症研究(Cancer Res.)》1990:50:1495-1502)。可替代地，如果抗原中基本上所有减少或消除一种抗体的结合的氨基酸突变减少或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体与同一表位结合。如果仅减少或消除一种抗体的结合的氨基酸突变的子集减少或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体具有“重叠表位”。
为了确定抗体是否与参考抗FXI抗体竞争结合(或交叉竞争结合)，上述结合方法在两个取向上进行：在第一取向上，允许参考抗体在饱和条件下与FXI蛋白结合，随后评估测试抗体与FXI分子的结合。在第二取向上，允许测试抗体在饱和条件下与FXI分子结合，然后评估参考抗体与FXI分子的结合。如果在两个取向上仅第一(饱和)抗体能够与FXI分子结合，则得出结论，测试抗体和参考抗体竞争与FXI结合(参见例如，本文实例中描述的测定形式，其中FXI蛋白被捕获到传感器尖端上，并且将FXI涂覆的传感器尖端用参考抗体[mAb-1]和测试抗FXI抗体[mAb-2]依次并且以两种结合顺序进行处理)。如本领域的普通技术人员将理解的，竞争结合参考抗体的抗体可能不一定结合与参考抗体相同的表位，但是可以通过结合重叠或相邻表位来空间阻断参考抗体的结合。
人抗体的制备
本公开的抗FXI抗体可以是完全人的但非天然存在的抗体。用于产生包含全人单克隆抗体在内的单克隆抗体的方法在本领域中是已知的。在本公开的上下文中可以使用任何此类已知方法来制备与人FXI特异性结合的人抗体。
使用技术(参见例如，US 6,596,541，再生元制药公司(Regeneron Pharmaceuticals)，)或用于产生单克隆抗体的任何其它已知方法，初步分离具有人可变区和小鼠恒定区的针对过敏原的高亲和力嵌合抗体。技术涉及产生转基因小鼠，所述转基因小鼠具有包括与内源性小鼠恒定区基因座可操作地连接的人重链和轻链可变区的基因组，使得所述小鼠响应于抗原刺激而产生包括人可变区和小鼠恒定区的抗体。将编码抗体的重链和轻链的可变区的DNA分离，并且将其与编码人重链和轻链恒定区的DNA可操作地连接。然后，DNA在能够表达全人抗体的细胞中表达。
通常，用所关注抗原攻击小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)。淋巴细胞可以与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，并且对此类杂交瘤细胞系进行筛选和选择以鉴定产生对所关注抗原具有特异性的抗体的杂交瘤细胞系。可以将编码重链和轻链的可变区的DNA分离并且与重链和轻链的期望同种型恒定区连接。此类抗体蛋白可以在如CHO细胞等细胞中产生。可替代地，可以直接从抗原特异性淋巴细胞中分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链的可变结构域的DNA。
如在下面的实验部分中描述的，表征和选择分离的具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体以获得期望特性，包含亲和力、选择性、表位等。然后用期望的人恒定区替代小鼠恒定区以产生本公开的全人抗体，例如野生型或经修饰的IgG1或IgG4。虽然所选择的恒定区可以根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特性存在于可变区中。
在某些实施例中，可能令人期望的是在已经被工程化以表达人FXI受体的小鼠或大鼠中测试抗人FXI抗体。这些小鼠或大鼠在抗FXI抗体可能仅与人FXI结合但将不与小鼠或大鼠FXI交叉反应的情况下可能是有益的。本领域的技术人员已知的任何方法都可以用于产生此类FXI人源化小鼠和大鼠。
通常，当通过与固定在固相上或液相中的抗原结合来测量时，本公开的抗体具有非常高的亲和力，通常具有约10-12至约10-9M的KD。
生物等效物
本公开的抗FXI抗体和抗体片段涵盖具有不同于所描述的抗体的氨基酸序列但保留与人FXI结合的能力的氨基酸序列的蛋白质。与亲本序列相比，此类变体抗体和抗体片段包括氨基酸的一个或多个添加、缺失或取代，但表现出与所描述的抗体的生物活性基本上等效的生物活性。同样地，本公开的编码抗FXI抗体的DNA序列涵盖与所公开的序列相比包括核苷酸的一个或多个添加、缺失或取代但编码与本公开的抗FXI抗体或抗体片段基本上生物等效的抗FXI抗体或抗体片段的序列。上文讨论了此类变体氨基酸和DNA序列的实例。
如果例如两种抗原结合蛋白或抗体是吸收速率和吸收程度在类似的实验条件下以相同的摩尔剂量施用(单次剂量或多次剂量)时不示出显著差异的药物等效物或药物替代物，则所述两种抗原结合蛋白或抗体被认为是生物等效的。如果一些抗体在其吸收程度上等效但在其吸收速率上不等效，则将认为所述抗体是等效物或药物替代物，并且可以认为所述抗体是生物等效的，因为有意的并且反映在标记上的此类吸收速率差异在例如长期使用时对于达到有效的身体药物浓度并非是必需的，并且对于所研究的特定药物产品而言被认为是医学上无关紧要的。
在一个实施例中，如果两种抗原结合蛋白的安全性、纯度和效力不存在临床上有意义的差异，则所述两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施例中，与不存在参考产品与生物产品之间的转换的持续疗法相比，如果患者可以在参考产品与生物产品之间转换一次或多次而没有预期的副作用风险增加(包含免疫原性的临床显著变化或有效性降低)，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施例中，如果两种抗原结合蛋白均通过针对一个或多个使用条件通过一种或多种共同作用机制以此类机制是已知的程度起作用，则所述两种抗原结合蛋白是生物等效的。
生物等效性可以通过体内和体外方法来证明。生物等效性测量包含例如(a)在人或其它哺乳动物中的体内测试，其中在血液、血浆、血清或其它生物流体中测量抗体或其代谢物的浓度随时间的变化；(b)与人体内生物利用度数据相关并可合理预测人体内生物利用度数据的体外测试；(c)在人或其它哺乳动物中的体内测试，其中测量抗体(或其靶标)的适当急性药理作用随时间的变化；以及(d)在确定抗体的安全性、功效或生物利用度或生物等效性的良好控制的临床试验中。
可以通过例如对残基或序列进行各种取代或使非生物活性所需的末端或内部残基或序列缺失来构建本公开的抗FXI抗体的生物等效变体。例如，可以使非生物活性所必需的半胱氨酸残基缺失或用其它氨基酸替代，以防止在复性时形成不必要的或不正确的分子内二硫桥。在其它上下文中，生物等效抗体可以包含抗FXI抗体变体，所述抗FXI抗体变体包括修饰抗体的糖基化特性的氨基酸变化，例如消除或去除糖基化的突变。
物种选择性和物种交叉反应性
根据某些实施例，本公开提供了与人FXI结合但不与来自其它物种的FXI结合的抗FXI抗体。本公开还包含与人FXI结合并且与来自一个或多个非人物种的FXI结合的抗FXI抗体。例如，本公开的抗FXI抗体可以与人FXI结合，并且视情况而定可以与以下中的一种或多种结合或不结合：小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猪、猫、狗、兔、山羊、绵羊、牛、马、骆驼、食蟹猴、狨猴、恒河猴或黑猩猩FXI。根据本公开的某些示例性实施例，提供了与人FXI特异性结合但不与小鼠或大鼠FXI结合或仅与其微弱结合的抗FXI抗体。
多特异性抗体
本公开的抗体可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。多特异性抗体可以对一种靶多肽的不同表位具有特异性，或者可以含有对多于一种靶多肽具有特异性的抗原结合结构域。参见例如，Tutt等人,1991,《免疫学杂志》147:60-69；Kufer等人,2004,《生物技术趋势(Trends Biotechnol.)》22:238-244。本公开的抗FXI抗体可以与另一种功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)连接或共表达。例如，抗体或其片段可以与如另一个抗体或抗体片段等一个或多个其它分子实体功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或以其它方式)，以产生具有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗体。
本公开包含双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂与人FXI结合，并且免疫球蛋白的另一个臂对第二抗原具有特异性。FXI结合臂可以包括如本文表1中列出的HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列中的任何HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列。
可以在本公开的上下文中使用的示例性双特异性抗体形式涉及第一免疫球蛋白(Ig)CH3结构域和第二Ig CH3结构域的使用，其中所述第一和第二Ig CH3结构域彼此相差至少一个氨基酸，并且其中与缺乏氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸差异降低了双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施例中，第一Ig CH3结构域与蛋白A结合，并且第二Ig CH3结构域含有降低或消除蛋白A结合的突变，如H95R修饰(通过IMGT外显子编号；H435R，通过EU编号)。第二CH3可以进一步包括Y96F修饰(通过IMGT；Y436F，通过EU)。可以在第二CH3内找到的另外的修饰包含：在IgG1抗体的情况下，D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(通过IMGT；D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I，通过EU)；在IgG2抗体的情况下，N44S、K52N和V82I(IMGT；N384S、K392N和V422I，通过EU)；以及在IgG4抗体的情况下，Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(通过IMGT；Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I，通过EU)。在本公开的范围内考虑了上述双特异性抗体形式的变化。
可以在本公开的上下文中使用的其它示例性双特异性形式包含但不限于例如基于scFv的或双功能抗体双特异性形式、IgG-scFv融合、双可变结构域(DVD)-Ig、四杂交瘤(Quadroma)、杵臼、共同轻链(例如，具有杵臼的共同轻链等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)body、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双作用Fab(DAF)-IgG以及Mab2双特异性形式(参见例如，Klein等人2012,《单克隆抗体(mAbs)》4:6,1-11和其中引用的参考文献，用于回顾前述形式)。还可以使用肽/核酸缀合构建双特异性抗体，例如，其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸来产生位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，然后将其自组装成具有确定组成、价数和几何形状的多聚体复合物。(参见例如，Kazane等人,《美国化学学会杂志(J.Am.Chem.Soc.)》[电子版:2012年12月4日])。
治疗调配物和施用
本公开提供了包括本公开的抗FXI抗体或其抗原结合片段的药物组合物。将本公开的药物组合物与合适的载剂、赋形剂和提供经改善的转移、递送、耐受性等其它药剂一起调配。许多适当的调配物可以在所有药物化学家已知的处方集中找到：《雷明顿氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》,宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(MackPublishing Company,Easton,PA)。这些调配物包含例如粉末、糊剂、软膏剂、胶冻剂、蜡、油、脂质、含有囊泡的脂质(阳离子或阴离子)(如LIPOFECTINTM，加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命科技公司(Life Technologies,Carlsbad,CA))、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳液、乳液碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有碳蜡的半固体混合物。还参见Powell等人“用于肠外调配物的赋形剂的汇编(Compendium of excipients forparenteral formulations)”PDA(1998)《药物科学与技术杂志(J Pharm Sci Technol)》52:238-311。
施用于患者的抗体的剂量可以根据患者的年龄和体型、目标疾病、病状、施用途径等而变化。通常根据体重或体表面积计算优选的剂量。在成年患者中，可能有利的是，通常以约0.01至约20mg/kg体重、更优选地约0.02至约7mg/kg体重、约0.03至约5mg/kg体重或约0.05至约3mg/kg体重的单剂量静脉内施用本公开的抗体。取决于病状的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。可以凭经验确定用于施用抗FXI抗体的有效剂量和时间表；例如，可以通过定期评估来监测患者进展，并且相应地调整剂量。此外，剂量的种间缩放可以使用本领域中熟知的方法进行(例如，Mordenti等人,1991,《药学研究(Pharmaceut.Res.)》8:1351)。
各种递送系统是已知的，并且可以用于施用本公开的药物组合物，例如，包封在脂质体、微颗粒、微胶囊、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用中(参见例如，Wu等人,1987,《生物化学杂志》262:4429-4432)。引入的方法包含但不限于玻璃体内、眼内、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可以通过任何方便的途径施用组合物，例如通过输注或团注注射、通过经由上皮或皮肤粘膜内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠道粘膜等)吸收，并且可以将其与其它生物活性剂一起施用。施用可以是全身性的或局部的。
可以用标准针头和注射器皮下或静脉内递送本公开的药物组合物。另外，关于皮下递送，笔递送装置易于应用于递送本公开的药物组合物。此类笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔递送装置通常利用含有药物组合物的可更换药筒。一旦已经施用了药筒内的全部药物组合物并且药筒是空的，就可以轻易地丢弃空药筒，并且用含有药物组合物的新药筒进行更换。然后可以重复使用笔递送装置。在一次性笔递送装置中，没有可更换的药筒。相反，一次性笔递送装置预填充有保持在装置内的贮存器中的药物组合物。一旦贮存器中的药物组合物被清空，就丢弃整个装置。
许多可重复使用的笔递送装置和自动注射器递送装置应用于皮下递送本公开的药物组合物。实例包含但不限于AUTOPENTM(英国伍德斯托克的欧曼福德有限公司(OwenMumford,Inc.,Woodstock,UK))、DISETRONICTM笔(瑞士波道夫的Disetronic医疗系统公司(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland))、HUMALOG MIX 75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(印第安纳州印第安纳波利斯的礼来公司(Eli Lilly andCo.,Indianapolis,IN))、NOVOPENTMI、II和III(丹麦哥本哈根的诺和诺德公司(NovoNordisk,Copenhagen,Denmark))、NOVOPEN JUNIORTM(丹麦哥本哈根的诺和诺德公司)、BDTM笔(新泽西州富兰克林湖的贝迪医疗公司(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ))、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM以及OPTICLIKTM(德国法兰克福的赛诺菲-安万特公司(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany))，仅举几例。应用于皮下递送本公开的药物组合物的一次性笔递送装置的实例包含但不限于SOLOSTARTM笔(赛诺菲-安万特公司)、FLEXPENTM(诺和诺德公司)以及KWIKPENTM(礼来公司)、SURECLICKTM自动注射器(加利福尼亚州千橡市的安进公司(Amgen,Thousand Oaks,CA))、PENLETTM(德国斯图加特的Haselmeier公司(Haselmeier,Stuttgart,Germany))、EPIPEN(Dey公司(Dey,L.P.))以及HUMIRATM笔(雅培科技园IL的雅培实验室(Abbott Labs,Abbott Park IL))，仅举几例。
在某些情况下，可以在控释系统中递送药物组合物。在一个实施例中，可以使用泵(参见Langer,同上文；Sefton,1987,《生物医学工程CRC关键参考(CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.)》14:201)。在另一个实施例中，可以使用聚合物材料；参见《控释医学应用(Medical Applications of Controlled Release)》,Langer和Wise(编辑),1974,佛罗里达州波卡拉顿的CRC出版社(CRC Pres.,Boca Raton,Florida)。在又另一个实施例中，控释系统可以放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如，Goodson,1984,《控释医学应用》,同上文,第2卷,第115-138页)。其它控释系统在Langer,1990,《科学》249:1527-1533的评论中讨论。
可注射制剂可以包含用于静脉内、玻璃体内、眼内、皮下、皮内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制剂可以通过公开已知的方法来制备。例如，可注射制剂可以例如通过将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备。作为用于注射的水性介质，存在例如生理盐水、含有葡萄糖和其它助剂等的等渗溶液，其可以与适当的增溶剂组合使用，所述增溶剂如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如，聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等。作为油性介质，采用例如芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。由此制备的注射剂优选地填充在适当的安瓿中。
有利的是，将上述用于口服或肠外使用的药物组合物以适于配合一定剂量的活性成分的单位剂量制备成剂型。这种单位剂量的剂型包含例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿)、栓剂等。所含有的上述抗体的量通常为每单位剂量剂型约5mg到约500mg；尤其是在注射形式下，优选的是上述抗体的含量为约5mg至约100mg，并且对于其它剂型，约10mg至约250mg。
抗体的治疗用途
本公开包含向有需要的受试者施用包括抗FXI抗体(例如，包括本文表1中列出的HCVR/LCVR或CDR序列中的任何HCVR/LCVR或CDR序列的抗FXI抗体)的治疗组合物的方法。治疗组合物可以包括本文所公开的抗FXI抗体或其抗原结合片段中的任何一种或多种以及药学上可接受的载剂或稀释剂。
本公开的抗体尤其可用于治疗、预防和/或改善与FXI表达或活性相关的或由其介导的任何疾病或病症。本公开的FXI拮抗剂抗体可以用于治疗或预防血栓形成，尤其是内在通路的血栓形成，同时使对通过外在通路实现的止血和凝块形成的负面影响最小化。
本公开包含通过向需要此类治疗的患者施用抗FXI抗体或其抗原结合片段来治疗或预防血栓形成的方法，如本文其它地方所公开的。
在一个实施例中，本公开的抗FXI抗体可以提供治疗或预防与以下中的任何一种或多种相关的血栓形成的方法：因子V莱登；凝血酶原基因突变；防止凝血的天然蛋白质(如抗凝血酶、蛋白C和蛋白S)的缺陷；同型半胱氨酸的水平升高；纤维蛋白原或功能失调纤维蛋白原(血纤维蛋白原异常)的水平升高；因子VIII、因子IX和/或因子XI的水平升高；异常纤溶系统，包含低纤溶酶原血症、异常纤溶酶原血症以及纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)的水平升高；心房纤颤；癌症)；用于治疗癌症的一些药物(如它莫西芬、贝伐单抗、沙利度胺和来那度胺)的副作用；近期创伤或外科手术；中心静脉导管放置；肥胖症；妊娠；补充雌激素使用，包含口服避孕药(节育药))；激素替代疗法；长期卧床休息或不动；心脏病发作；充血性心力衰竭；中风和导致活动减少的其它疾病；肝素诱导的血小板减少症(由于肝素或低分子量肝素制剂引起的血液中血小板减少)；长途飞机旅行；抗磷脂抗体综合征；深静脉血栓形成或肺栓塞；骨髓增殖性病症，如真性红细胞增多症或原发性血小板增多症；夜间发作性血红蛋白尿症；炎性肠综合征；HIV/AIDS；肾病综合征；COVID-19感染或刺突蛋白免疫效应等。
在本文所述的治疗方法的上下文中，抗FXI抗体可以作为单一疗法(即，作为唯一治疗剂)施用或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。
组合疗法和调配物
本公开包含包括本文所述的抗FXI抗体中的任何抗FXI抗体与一种或多种另外的治疗活性组分的组合的组合物和治疗调配物，以及包括向有需要的受试者施用此类组合的治疗方法。
本公开的抗FXI抗体可以与一种或多种用于治疗以下的药物共同调配：因子V莱登；凝血酶原基因突变；防止凝血的天然蛋白质(如抗凝血酶、蛋白C和蛋白S)的缺陷；同型半胱氨酸的水平升高；纤维蛋白原或功能失调纤维蛋白原(血纤维蛋白原异常)的水平升高；因子VIII、因子IX和/或因子XI的水平升高；异常纤溶系统，包含低纤溶酶原血症、异常纤溶酶原血症以及纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI-1)的水平升高；心房纤颤；癌症)；用于治疗癌症的一些药物(如它莫西芬、贝伐单抗、沙利度胺和来那度胺)的副作用；近期创伤或外科手术；中心静脉导管放置；肥胖症；妊娠；补充雌激素使用，包含口服避孕药(节育药))；激素替代疗法；长期卧床休息或不动；心脏病发作；充血性心力衰竭；中风和导致活动减少的其它疾病；肝素诱导的血小板减少症(由于肝素或低分子量肝素制剂引起的血液中血小板减少)；长途飞机旅行；抗磷脂抗体综合征；深静脉血栓形成或肺栓塞；骨髓增殖性病症，如真性红细胞增多症或原发性血小板增多症；夜间发作性血红蛋白尿症；炎性肠综合征；HIV/AIDS；肾病综合征；COVID-19感染或刺突蛋白免疫效应等。
本公开的抗FXI抗体还可以与抗病毒药物、抗生素、镇痛药、抗氧化剂、COX抑制剂和/或NSAID组合施用和/或共同调配。抗FXI抗体还可以与其它类型的疗法结合使用，包含干细胞疗法、青光眼滤过外科手术、激光外科手术或基因疗法。
可以恰好在施用本公开的抗FXI抗体之前、同时或之后不久施用另外的治疗活性组分，例如，上文列出的药剂中的任何药剂或其衍生物；(出于本公开的目的，此类施用方案被认为是施用抗FXI抗体与另外的治疗活性组分的“组合”)。本公开包含药物组合物，其中本公开的抗FXI抗体与如本文其它地方描述的另外的治疗活性组分中的一种或多种另外的治疗活性组分共同调配。
施用方案
根据本公开的某些实施例，可以在限定的时间过程内向受试者施用多剂量的抗FXI抗体(或包括抗FXI抗体和本文所提及的另外的治疗活性剂中的任何另外的治疗活性剂的组合的药物组合物)。根据本公开的此方面的方法包括向受试者依次施用多剂量的本公开的抗FXI抗体。如本文所使用的，“依次施用”意指将每个剂量的抗FXI抗体在不同时间点，例如在隔开预定间隔(例如，数小时、数天、数周或数月)的不同日期施用于受试者。本公开包含方法，所述方法包括向患者依次施用单一初始剂量的抗FXI抗体，随后施用一个或多个第二剂量的抗FXI抗体，并且任选地随后施用一个或多个第三剂量的抗FXI抗体。
术语“初始剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”是指施用本公开的抗FXI抗体的时间序列。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也被称为“基线剂量”)；“第二剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；并且“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。初始剂量、第二剂量和第三剂量全都可以含有相同量的抗FXI抗体，但通常在施用频率方面可能彼此不同。然而，在某些实施例中，在治疗过程期间，初始剂量、第二剂量和/或第三剂量中含有的抗FXI抗体的量彼此不同(例如，视情况而定向上或向下调整)。在某些实施例中，在治疗方案开始时施用两个或更多个(例如，2个、3个、4个或5个)剂量作为“负荷剂量”，随后是在较不频繁的基础上施用的后续剂量(例如，“维持剂量”)。
在本公开的某些示例性实施例中，紧接着前一剂量之后1至26(例如，1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2或更多)周施用每个第二和/或第三剂量。如本文所使用的，短语“紧接着前一剂量”意指在多次施用的顺序中，在顺序中的紧邻的下一个剂量的施用之前向患者施用的抗FXI抗体的剂量，而没有中间剂量。
根据本公开的此方面的方法可以包括向患者施用任何数量的第二和/或第三剂量的抗FXI抗体。例如，在某些实施例中，仅向患者施用单一第二剂量。在其它实施例中，向患者施用两个或更多个(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个)第二剂量。同样地，在某些实施例中，仅向患者施用单一第三剂量。在其它实施例中，向患者施用两个或更多个(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个)第三剂量。施用方案可以在特定受试者的一生中无限期地进行，或者直到此类治疗不再是治疗上需要的或有利的。
在涉及多个第二剂量的实施例中，每个第二剂量可以按与其它第二剂量相同的频率施用。例如，每个第二剂量可以紧接着前一剂量后1至2周或1至2个月施用于患者。类似地，在涉及多个第三剂量的实施例中，每个第三剂量可以与其它第三剂量相同的频率施用。例如，每个第三剂量可以紧接着前一剂量后2至12周施用于患者。在本公开的某些实施例中，在治疗方案的过程中，向患者施用第二和/或第三剂量的频率可以变化。医生也可以在治疗过程期间调整施用频率，这取决于临床检查后个体患者的需要。
本公开包含施用方案，其中以第一频率(例如，每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次、每两个月一次等)向患者施用2至6个负荷剂量，随后在较不频繁的基础上向患者施用两个或更多个维持剂量。例如，根据本公开的此方面，如果负荷剂量以每月一次的频率施用，则维持剂量可以每六周一次、每两个月一次、每三个月一次等施用于患者。
抗体的诊断用途
本公开的抗FXI抗体也可以用于检测和/或测量样品中的FXI或FXI表达细胞，例如，用于诊断目的。例如，抗FXI抗体或其片段可以用于诊断以FXI的异常表达(例如，过表达、表达不足、缺乏表达等)为特征的病状或疾病。用于FXI的示例性诊断测定可以包括例如使从患者获得的样品与本公开的抗FXI抗体接触，其中抗FXI抗体用可检测的标记或报告分子标记。可替代地，未标记的抗FXI抗体可以与本身被可检测地标记的二级抗体组合用于诊断应用。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素，如3H、14C、32P、35S或125I；荧光或化学发光部分，如荧光素异硫氰酸酯或罗丹明(rhodamine)；或酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或萤光素酶。可以用于检测或测量样品中的FXI的具体示例性测定包含酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和荧光激活细胞分选(FACS)。
可以用于根据本公开的FXI诊断测定中的样品包含可从患者获得的任何组织或流体样品，其在正常或病理条件下含有可检测量的FXI蛋白或其片段。通常，将测量从健康患者(例如，未患有与异常FXI水平或活性相关的疾病或病状的患者)获得的特定样品中的FXI水平，以初步建立FXI的基线或标准水平。然后，可以将此FXI基线水平与在从疑似患有FXI相关疾病或病状的个体获得的样品中测量的FXI水平进行比较。
实例
提出以下实例，以便向本领域的普通技术人员提供如何制备和使用本公开的方法和组合物的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是其公开的范围。已经努力确保关于所使用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。除非另外指示，否则份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，室温是约25℃，并且压力是大气压或接近大气压。
实例1：针对FXI的A2结构域的人抗体的产生
在包括编码人免疫球蛋白重链可变区和κ轻链可变区的DNA的小鼠体内产生了针对FXI的A2结构域的人抗体。在一个实施例中，在小鼠体内产生了人抗体。在一个实施例中，用人FXI免疫(VI)小鼠。通过FXI特异性免疫测定来监测抗体免疫应答。例如，测定血清对经纯化的全长FXI的特异性抗体滴度。使用B细胞分选技术(BST)和杂交瘤方法两者分离抗体产生性克隆。例如，当达到期望免疫应答时，采集脾细胞并使其与小鼠骨髓瘤细胞融合，以保持其活力并且形成杂交瘤细胞系。筛选并选择杂交瘤细胞系以鉴定产生FXI特异性抗体的细胞系。
抗FXI抗体还直接从抗原阳性小鼠B细胞中分离而不与骨髓瘤细胞融合，如美国专利7582298所述，所述美国专利通过引用整体具体并入。使用此方法，获得了若干全人抗FXI抗体(即，具有人可变结构域和人恒定结构域的抗体)。
在下文列出的实例中详细描述了根据此实例的方法产生的示例性抗体、对照和比较物的生物学特性。
实例2：重链和轻链可变区序列
表1的第2列和第4列列出了本公开的示例性抗FXI抗体的重链和轻链可变区以及CDR的氨基酸序列标识符。表1的第3列和第5列中列出了本公开的示例性抗FXI抗体的对应核酸序列标识符。
表1：抗FXI抗体序列标识符
SEQ ID NO:17包括以下单字母氨基酸序列：AAS。
SEQ ID NO:18包括以下核苷酸序列：GCTGCATCC。
示例性全长抗FXI抗体含有全人Fcγ4重链(即，IgG4 Fc)和全人轻链序列。然而，如本领域的普通技术人员将理解的，具有特定Fc同种型的抗体可以转化为具有不同Fc同种型的抗体(例如，具有小鼠IgG1 Fc的抗体可以转化为具有人IgG4的抗体等)，但是无论如何，由表1中所示的数字标识符指示的可变结构域(包含CDR)将保持相同，并且无论Fc结构域的性质如何，预期抗原的结合特性是相同的或基本上类似的。
以下实例中使用的对照构建体
标记为COMP3448的对照构建体(抗FXI A2结构域抗体)包含在本文所公开的实验中，用于比较目的：根据美国专利第8,388,959号的具有抗体“14E11”的VH/VL序列的“对fXI具有特异性的单克隆抗体”，所述美国专利的全部内容通过引用整体明确地并入本文。
实例3：在25℃和37℃下测量的抗FXI单克隆抗体与不同FXI试剂结合的Biacore结合动力学
使用基于实时表面等离子体共振的Biacore 8K生物传感器确定不同FXI试剂与经纯化的抗FXI单克隆抗体结合的平衡解离常数(KD)。所有结合研究均在25℃和37℃下在10mM HEPES、300mM NaCl和0.05％v/v表面活性剂Tween-20，pH 7.4(HBS-P)运行缓冲液中进行。Biacore CM5传感器芯片表面首先通过与小鼠抗人Fc特异性单克隆抗体(柏油村的再生元公司(Regeneron,Tarrytown))进行胺偶联来衍生化，以捕获抗FXI单克隆抗体。对人FXI(酶原；因子XI蛋白，人血浆，印第安纳州南本德的酶研究实验室(Enzyme ResearchLaboratories,South Bend,IN)，目录HFXI 1111)和FXIa(激活的；因子XIa蛋白，人血浆，印第安纳州南本德的酶研究实验室，目录HFXIa 1111a)进行了结合研究。首先在HBS-P运行缓冲液中制备不同浓度的hFXI和hFXIa(25nM-0.39nM；4倍连续稀释)，并且以30微升/分钟的流速在抗人Fc捕获的抗FXI单克隆抗体表面上注射3分钟，同时在HBS-P运行缓冲液中监测单克隆抗体结合的FXI试剂的解离10分钟。缔合速率(ka)和解离速率(kd)是通过使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时结合传感图拟合到具有质量传输限制的1:1结合模型来确定的。结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)是根据动力学速率如下计算的：
等式1：
表2和表3中示出了在25℃和37℃下用于与本公开的主题抗FXI单克隆抗体和同种型对照结合的hFXI或hFXIa的结合动力学参数。
在25℃下，抗FXI单克隆抗体以在35.1pM至7.53pM的范围内的KD值与hFXI结合，如表2中所示。在37℃下，抗hFXI单克隆抗体以在13.7pM至48.3pM的范围内的KD值与hFXI结合，如表2中所示。
在25℃下，抗FXI单克隆抗体以在257pM至269pM的范围内的KD值与hFXIa结合，如表3中所示。在37℃下，抗FXI单克隆抗体以在763pM至893pM的范围内的KD值与hFXIa结合，如表3中所示。
表2：hFXI与抗FXI单克隆抗体和同种型对照的结合动力学参数。
NB：未结合；IC：未确定
表3：hFXIa与抗FXI单克隆抗体和同种型对照的结合动力学参数。
NB：未结合；IC：未确定
实例4：激活部分促凝血酶原激酶时间生物测定
实验程序：
使用BIOPHEN因子XIa试剂盒(法国瓦兹河畔讷维尔的HYPHEN BioMed公司(HYPHENBioMed,Neuville-sur-Oise,FR))，目录号220412)来评估本公开的抗FXI抗体抑制酶原因子FXI(FXI)或导致活性因子Xa(FXa)产生的预激活的FXIa的活性的能力。通过测量由FXa(BIOPHEN试剂盒组分R3)转化的显色底物的量的减少来确定本公开的抗体的抑制。除了试剂1B(人因子IX)和FXIa校准物(Cal)之外，在测定中使用BIOPHEN试剂盒中的所有试剂。
为了测试FXI或FXIa的剂量依赖性活性，将正常人血浆连同无血浆对照一起在所提供的Tris-BSA缓冲液(用作用于测定的稀释缓冲液)中最初稀释至0.65％血浆，并且然后连续稀释低至0.021％血浆。将正常人血浆也稀释至0.13％或0.15％血浆。将抗体(抗FXI、对照和比较物)用单独的缓冲液样品从500nM或300nM的起始浓度连续稀释至5.1pM的浓度。为了抑制酶原FXI，将抗FXI抗体与经稀释的血浆在25℃下一起预温育30分钟，然后与0.32μM aPTT-XL鞣花酸在25℃下一起温育另外30分钟。为了抑制活性FXIa，将经稀释的血浆用0.32μM aPTT-XL鞣花酸在25℃下预激活30分钟，随后与抗FXI抗体在25℃下一起温育30分钟。
在将血浆与鞣花酸和抗体一起温育之后，添加试剂1A(人FX、FVIII:C、纤维蛋白聚合抑制剂)，并且在37℃下温育5分钟。然后，添加试剂2(凝血酶、磷脂和钙)，并且在37℃下温育5分钟。最后，添加试剂3(SXa-11 FXa底物)，并且在37℃下温育30分钟。在FLEXSTATION3酶标仪(加利福尼亚州森尼维尔的分子装置公司(Molecular Devices,Sunnyvale,CA))上在405nm的波长下测量吸光度。使用非线性回归(4参数逻辑)利用软件(加利福尼亚州拉荷亚的GraphPad公司(GraphPad,La Jolla,CA))分析结果，以获得EC50和IC50值。抑制百分比是基于以下等式2计算的：
等式2：
在此等式中，“吸光度稀释血浆”是指稀释血浆(0.13％或0.15％血浆)在405nm处的吸光度测量结果，所述稀释血浆已经用0.32μM aPTT-XL鞣花酸激活以将FXI切割成FXIa而不添加任何抗体。“吸光度抑制”是指来自特定抗体与用0.32μM鞣花酸激活的稀释血浆的剂量应答的在405nm处的最小吸光度测量结果。“吸光度无血浆对照”是指在不存在任何血浆的情况下单独Tris-BSA缓冲液在405nm处的吸光度测量结果。
表4：在aPTT-XL鞣花酸测定中抗FXI/FXIa抗体对FXI激活与FXIa或预激活的FXIa活性的抑制。
如表4中所示，抗FXI/FXIa抗体显示出对稀释正常血浆中的FXI的抑制，其中IC50值在39pM至220pM的范围内(在一个实例中，为39pM)，其中最大抑制在85％至87％的范围内(在一个实例中，为85％)。本公开的抗FXI/FXIa抗体还抑制稀释血浆中的FXIa，其中IC50值在680pM至大于10nM的范围内(在一个实例中，为10nM)，其中最大抑制在22％至25％的范围内(在一个实例中，为25％)。比较物mAb示出了对FXI的抑制，其中IC50值在27pM至29pM的范围内，其中最大抑制在86％至106％的范围内。比较物mAb还示出了对FXIa的抑制，其中IC50值在>10nM至>5nM的范围内，其中最大抑制在35％至38％的范围内。同种型对照mAb未显示出对FXIa的抑制，但在高浓度抗体下显示出对FXI的抑制，其中IC50值在>100nM-120nm的范围内，其中最大抑制在58％-102％抑制的范围内。
实例5：对FXI亚基的抗FXI结合特异性
在OCTETHTX生物传感器(纽约州华盛顿港的颇尔富迪生物公司(Pall ForteBioCorp.,Port Washington,NY))上使用实时无标记生物层干涉法测定来确定各种抗FXI单克隆抗体对人FXI的不同截短的苹果结构域的结合特异性。实验是在板以1000rpm的速度摇动的情况下在25℃下在10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂TWEEN-20、1mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、pH为7.4的(HBS-EBT)缓冲液中进行的。使用以下测试抗FXI单克隆抗体与其在重组人FXI蛋白上的相应表位的结合：人FXI，其用C末端myc-myc-六聚组氨酸标签(hFXI-mmh；SEQ ID NO:22)表达；人FXIPKA1结构域，其用C末端myc-myc-六聚组氨酸标签(hFXI-PKA1-mmh；SEQ ID NO:23)表达；人FXIPKA2结构域，其用C末端myc-myc-六聚组氨酸标签(hFXI-PKA2-mmh；SEQ ID NO:24)表达；人FXIPKA3结构域，其用C末端myc-myc-六聚组氨酸标签(hFXI-PKA3-mmh；SEQ ID NO:25)表达；以及人FXIPKA4结构域，其用C末端myc-myc-六聚组氨酸标签(hFXI-PKA4-mmh；SEQ ID NO:26)表达，统称为FXI-mmh试剂。用PK(血浆激肽释放酶)标记的FXI-mmh试剂已经将经鉴定的苹果结构域替代为对应PK苹果结构域，这意味着结合特异性是通过不与本文所述的重组人FXI蛋白上的抗体的相应表位结合来确定的。例如，当hFXI-PKA2-mmh表达血浆激肽释放酶苹果结构域2时，假定主题mAb仅与hFXI-PKA1-mmh、hFXI-PKA3-mmh和hFXI-PKA4-mmh结合，而不与hFXI-PKA2-mmh结合。
首先，通过将生物传感器尖端浸没在各自含有100nM人FXI-mmh试剂溶液的孔中2分钟来将FXI-mmh试剂单独捕获到抗Penta-His抗体涂覆的OCTET生物传感器尖端(颇尔富迪生物公司，目录号18-5122)上。然后，通过浸入含有133nM抗FXI单克隆抗体溶液的孔中180秒分别用每种抗FXI单克隆抗体使所得抗原捕获的生物传感器尖端饱和。然后，在实验的每个步骤之间将生物传感器尖端在HBS-ETB缓冲液中洗涤。在整个实验过程期间监测实时结合应答，并且记录每个步骤结束时的结合应答。将抗FXI单克隆抗体的结合特异性应答与不同的截短的FXI-mmh试剂进行比较，如表5中所示。
表5：与不同人FXI结构域蛋白结合的抗FXI单克隆抗体。
实例6：竞争测定
6.1：苹果2结构域竞争性结合
在OCTETHTX生物传感器(纽约州华盛顿港的颇尔富迪生物公司)上使用实时无标记生物层干涉法测定来确定抗FXI单克隆抗体之间的结合竞争。整个实验是在板以1000rpm的速度摇动的情况下在25℃下在0.01M HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、0.05％v/v表面活性剂Tween-20、1mg/mL BSA(Octet HBS-P缓冲液)中进行的。为了评估任何2种抗体是否能够彼此竞争与其在人FXI(ERL)上的相应表位的结合(来自人血浆的因子XI蛋白，印第安纳州南本德的酶研究实验室，目录号HFXI 1111)，首先通过将尖端浸没在含有50μg/mL抗人FXI单克隆抗体(随后称为第一mAb)溶液的孔中5分钟来将约1.5-2.8nM的抗人FXI单克隆抗体捕获到抗hFc抗体涂覆的(AHC)OCTET生物传感器尖端(纽约州华盛顿港的颇尔富迪生物公司，#18-5060)上。然后，通过浸入含有50μg/mL阻断mAb溶液的孔中4分钟用阻断H4H同种型(人IgG4)对照单克隆抗体(随后称为阻断mAb)使抗体捕获的生物传感器尖端饱和。然后，将生物传感器尖端随后浸入含有25nM hFXI(ERL，#HFXI 1111)和1μM的第二抗人FXI单克隆抗体(随后称为第二mAb)的共复合溶液的孔中，所述共复合溶液已经被预温育2小时。在实验的每个步骤之间，将生物传感器尖端在Octet HBS-P缓冲液中洗涤。
在实验过程期间监测实时结合应答，并且记录每个步骤结束时的结合应答。针对背景结合校正人FXI预复合的第二mAb与第一mAb结合的应答，比较，并且确定不同抗FXI单克隆抗体的竞争性/非竞争性行为。
表6明确定义了抗体在两个方向上竞争的关系，与结合顺序无关。在此，抗FXI mAbREGN9933与已知与FXI的A2(苹果2)结构域结合的H4H29801P2竞争与血浆源性hFXI结合。
表6：抗体交叉竞争矩阵
6.2：FXI竞争性结合
使用以下材料和方法进行抗FXI单克隆抗体与阴性同种型对照之间的第二结合竞争。
材料
所使用的仪器：Octet HTX 384RED
温度：25℃
运行缓冲液：HBS-P+1mg/ml BSA，pH 7.4
传感器类型：ForteBIO抗hFc
捕获流速/时间：1000rpm，300秒(mAb-1)，300秒缔合(Ag mAb-2预混合)180秒解离mAb-2
方法
通过将α-hFc涂覆的Octet生物传感器浸入含有50μg/mL的α-人FXI mAb的孔中5分钟来捕获大约1.5-2.8nm的α-人FXI mAb。H4H hFc(同种型对照)用作阴性对照。通过浸入含有阻断mAb溶液(50μg/mL的H4H人Fc(同种型对照)1)的孔中4分钟使未占据的α-hFc Octet传感器饱和。将25nM的hFXI(ERL)与1uM的α-FXI mAb在含有50μg/mL的H4H hFc的缓冲液中一起预温育至少1小时。然后，将阻断mAb饱和的Octet生物传感器浸入含有αC5 mAb和hC5的预混合物的孔中5分钟。在每个循环结束时，将α-hFc Octet传感器在10mM HCl中再生。在分析期间，从整个柱中减去自背景信号(mAb与捕获表面结合)。记录mAb-1的结合应答，并且基于其相应的mAb-2结合应答将竞争性/非竞争性mAb进行分箱。
结果和讨论
表7：使用预混合形式(5x 5矩阵)在4导联抗FXI BST上的hFXI(ERL)交叉竞争
*竞争-双向性
**竞争-单向性
表8：交叉竞争研究中的结合相互作用的总结
主题mAb REGN9933和H4H29801P2双向性交叉竞争。
实例7：用于凝血时间和凝血酶产生的功能性血浆测定(TGA)
凝结因子连同血小板是血管损伤期间止血过程中相关的血液组分。众所周知，当调节(即，产生和/或活性)中出现不平衡时，这些组分是血栓形成的驱动因素。血栓形成性疾病被认为主要起因于外在通路(通过组织因子)中的异常激活，但最近，发现在膝关节置换术之前对F11使用反义寡核苷酸的临床研究可预防术后静脉血栓形成(Büller HR,Bethune C,Bhanot S,Gailani D,Monia BP,Raskob GE,Segers A,Verhamme P,Weitz JI.用于预防静脉血栓形成的因子XI反义寡核苷酸(Factor XI antisense oligonucleotidefor prevention of venous thrombosis.)《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》2015年1月15日；372(3):232-40)。因此，抑制FXI活性对于减少血栓形成性凝结是重要的(WeitzJI.因子XI和因子XII作为新抗凝血剂的靶标(Factor XI and factor XII as targetsfor new anticoagulants.)《血栓形成研究(Thromb Res.)》2016年5月；141增刊2:S40-5)。
此实例证明抗FXI抗体在四种功能性血浆测定中结合并抑制人FXI的活性：1)经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)；2)凝血酶原时间(PT)；3)由鞣花酸触发的凝血酶产生测定(TGA)；以及4)由组织因子触发的TGA。aPTT测试通过测量添加钙和鞣花酸后形成凝块的时间来评估凝血级联的内在和共同通路的所有凝血因子，而PT测试评估添加钙和组织因子后凝血级联的外在和共同通路的所有凝血因子。由鞣花酸触发的TGA测量通过内在和共同通路产生的凝血酶的速率和量，而由组织因子触发的TGA测量通过外在和共同通路产生的凝血酶的速率和量。
实验程序：
在Diagnostica STAGO START4止血分析仪(新泽西州帕西帕尼的DaignosticaStago公司(Daignostica Stago,Parsippany,NJ))上以以下方式确定aPTT：在37℃下，将总计50μl的合并的正常人血浆添加到比色皿中。1分钟后，将5μl的含2X连续稀释的测试制品(抗体或小分子抑制剂)的PBS添加到比色皿中，并且允许温育5分钟。然后，在添加50μl的20mM氯化钙(马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技公司(Thermo Scientific,Waltham,MA))以开始反应之前，添加50μl APPT-XL鞣花酸(马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技公司)并且允许温育300秒。将测试制品浓度的所测得的凝血时间相对于基线(无药物)血浆凝血时间归一化，并且针对测试制品的对数摩尔浓度进行绘制。使用非线性回归(4参数逻辑)利用PRISM 5软件(加利福尼亚州拉荷亚的GraphPad公司)分析结果，以获得倍增时间浓度。
在Diagnostica Stago START4止血分析仪(新泽西州帕西帕尼的DaignosticaStago公司)上以以下方式确定PT。在37℃下，将总计50μl的合并的正常人血浆添加到比色皿中。1分钟后，将5μl的含2X连续稀释的测试制品(抗体或小分子抑制剂)的PBS添加到比色皿中，并且允许温育5分钟。然后，添加100ul的组织因子(TriniCLOT PT Excel，新泽西州帕西帕尼的Daignostica Stago公司，目录号T1106)以开始反应。将测试制品浓度的所测得的凝血时间相对于基线(无药物)血浆凝血时间归一化，并且针对测试制品的对数摩尔浓度进行绘制。使用非线性回归(4参数逻辑)利用PRISM 5软件(加利福尼亚州拉荷亚的GraphPad公司)分析结果，以获得倍增时间浓度。
在Diagnostica Stago校准的自动化血栓图(新泽西州帕西帕尼的Stago公司(Stago,Parsippany,NJ))中以以下方式确定内在凝血通路下的凝血酶产生曲线：在37℃下，将总计55μl的合并的正常人血浆添加到微板的孔中。然后，将5μl的含2X连续稀释的测试制品(抗体或小分子抑制剂)的PBS添加到微板的孔中，并且允许温育30分钟。将15ulAPPT-XL鞣花酸(马萨诸塞州沃尔瑟姆的赛默飞世尔科技公司，目录号95059-804)在微颗粒(MP)试剂(Diagnostica Stago公司，目录号86222)中稀释，然后添加到孔中并且允许温育45分钟。然后，在连续90分钟读取微板之前，立即添加15μl Fluo Flu Cal底物(Diagnostica Stago公司，目录号86197)。将所测得的实时凝血酶浓度值相对于时间进行绘制，以产生针对所使用的每种测试制品浓度的血栓图曲线。
在Diagnostica Stago校准的自动化血栓图(新泽西州帕西帕尼的DiagnosticaStago公司)中以以下方式确定外在凝血通路下的凝血酶产生曲线：在37℃下，将总计55μl的合并的正常人血浆添加到微板的孔中。然后，将5μl的含2X连续稀释的测试制品(抗体或小分子抑制剂)的PBS添加到微板的孔中，并且允许温育30分钟。将15μl的组织因子PPP试剂(Diagnostica Stago公司，目录号86194)添加到孔中，并且允许温育45分钟。然后，在连续90分钟读取微板之前，立即添加15μl Fluo Flu Cal底物(Diagnostica Stago公司，目录号86197)。将所测得的实时凝血酶浓度值相对于时间进行绘制，以产生针对所使用的每种测试制品浓度的血栓图曲线。
结果总结和结论：
产生剂量应答曲线以确定每种药物对血浆aPTT和PT的影响。IgG4同种型对照mAb(对照mAb对aPTT(图1)或PT没有影响。REGN9933延长了aPTT(图1)而不增加PT(未示出)。FXI-A2结合比较物mAb(comp mAb)COMP3448也延长了aPTT而不增加PT。
药物抑制凝血活性的效率通过任意的“倍增时间”浓度或C2xt(其是将凝血时间延长超过基线值两倍所需的药物浓度)来索引。对于以下讨论的药物和对照，这些外推C2xt值(即，曲线穿过“倍增时间线”)。对于aPTT(内在通路)，REGN9933在≤33nM的情况下达到C2xt。未发现REGN9933在被测的最大4μM下使PT凝血时间(外在通路)加倍。comp mAbCOMP3448需要62nM以达到aPTT C2xt，但是在4μM的情况下未达到PT C2xt。这些数据示出，与COMP3448相比，REGN9933以显著更低的抗体浓度实现C2xt的优越性。
当血浆被鞣花酸或组织因子触发时，评估这些mAb抑制凝血酶产生(即，检测凝血酶的延长时间＝滞后时间，凝血酶峰值的降低和所产生的凝血酶总量的减少＝内源性凝血酶潜力)的能力的效果。对照mAb对凝血酶产生没有影响(图2)。主题抗FXI/FXIa mAb示出了在16nM下凝血酶产生的轻微减少，但在浓度≥31nM下显著或完全抑制凝血酶产生(图3)，这表明主题抗FXI mAb抑制内在通路激活，这进而防止凝血酶产生。comp mAb在凝血酶产生方面显示出与主题抗FXI/FXIa mAb类似的应答，其中在≥31nM下具有接近完全抑制(图4)。
由组织因子触发的凝血酶产生不受对照同种型mAb的影响(图5)。主题抗FXI/FXIamAb REGN9933对由组织因子触发的凝血酶产生具有轻微至轻度的抑制作用(图6)。compmAb COMP3448对由组织因子触发的凝血酶产生具有最小影响(图7)。
表9中总结了当凝血由鞣花酸或组织因子激活时将滞后时间延长两倍、将凝血酶峰值和凝血酶产生总量减少一半所需的测试制品浓度。
表9：延迟和减少凝血酶产生所需的药物浓度
(-)＝在至多500nM的剂量的情况下对凝血酶产生没有影响
实例8：主题抗FXI抗体药物物质在食蟹猴体内的药代动力学研究
本研究的目的是确定在8周时段内食蟹猴体内的抗FXI单克隆抗体(mAb)的静脉内单剂量药效学/药代动力学(PK/PD)参数。
在开始mAb给药之前，使年龄为2-4岁、体重为2-4kg的雌性食蟹猴(n＝39)适应实验室圈养，持续至少2周。基于已建立的社会组，将动物分配到给药组，其中使用分层随机化方案来合并来自每个社会单位的一只动物的体重，以将动物分配到研究组(表8)。将动物在标准条件下进行圈养(分别为温度为18℃至29℃；相对湿度为30％至70％)，并且维持12小时光照/12小时黑暗循环。每天提供两次食物(PMI LABDIET FIBER-PLUS猴饮食5049饼干，密苏里州圣路易斯的LabDiet公司(LabDiet,St.Louis,MO))，并且随意提供水。
表10：剂量和剂量组的总结
以2mL/kg的体积向对照组(组1)静脉内施用媒剂(10mM组氨酸，pH 6.0)。以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg向组2-7静脉内施用适当的mAb(主题和比较物)。针对每只动物的2mL/kg的剂量体积基于最近的体重测量结果。在8周研究时段内，之前和多次收集(静脉抽血)血液样品。对血液进行血清处理以测量药物水平，并且进行血浆处理以测量靶标水平和凝血活性两者。
使用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量血清中的药物水平，其中小鼠抗人IgG Fc作为捕获mAb并且生物素化抗人Igκ轻链特异性作为检测mAb。使用与辣根过氧化物酶缀合的中性抗生物素蛋白(中性抗生物素蛋白-HRP)来将基于鲁米诺(luminol)的底物转化成与总FXI mAb浓度的浓度成比例的信号。
使用与猴FXI杂交的亲和力生物制剂因子XI ELISA试剂盒(FXI-AG)(安大略省安卡斯特(Ancaster,ON))测量血浆中的靶标(FXI)水平。按照制造商的方案确定猴FXI浓度。
在测量凝血时间和凝血酶产生的功能性测定中确定血浆的凝血活性。使用Diagnostica Stago START 4止血分析仪(新泽西州帕西帕尼的Diagnostica Stago公司)来确定凝血时间，以对测量由内在通路激活剂(鞣花酸)激活的凝血的经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)和测量由外在通路激活剂(组织因子)激活的凝血的凝血酶原时间(PT)进行测量。凝血时间报告为相对于基线的变化倍数。在Stago Diagnostica校准的自动化血栓图(CAT)(新泽西州帕西帕尼的Diagnostica Stago公司)上测量凝血酶产生。用内在通路激活剂鞣花酸(EA)或外在通路激活剂组织因子(TF)进行凝血酶产生测定(TGA)。TGA数据报告为针对以下参数相对于基线的变化百分比：滞后时间、峰值凝血酶浓度和总凝血酶浓度。
结果总结和结论：
使用非隔室分析和群体隔室分析来估计药代动力学(PK)参数。静脉内团注后的mAb浓度-时间曲线的特征在于初始短暂分布阶段，随后是线性β消除阶段和终末靶标介导的消除阶段(表11和12)。通过静脉内施用观察到mAb Cmax呈剂量成比例增加(表13)，并且发现剂量归一化Cmax(Cmax/剂量)跨mAb给药组是相当的。当相对于剂量(AUCinf/剂量)归一化时，发现药物暴露量(AUCinf)在较高剂量下增加，这表明跨组的暴露量大于剂量成比例增加，这将与mAb的非线性动力学一致。这些观察结果与平行线性和非线性靶标介导的清除率(TMC)一致，其中所观察到的清除率下降是剂量增加的函数。除了接受comp mAb COMP3448(A2结合物)的动物之外，所有动物的血浆中的靶标(FXI)相对于基线增加了大约2倍至3倍(表14和15)。较高剂量的mAb未表现出靶标FXI浓度的剂量依赖性保留。
用测量血浆凝血时间或凝血酶产生的功能性测定来评估抗FXI mAb(主题和比较物)的抑制活性。在每个时间点，使用血浆的等分试样来确定凝血时间，如分别通过测量内在和外在凝血活性的凝血活性的经激活部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)和凝血酶原时间(PT)测定所评估的。数据被示出为针对aPTT(表16和17)和PT(表18和19)相对于基线凝血时间的凝血时间。comp mAb和主题抗FXI mAb对aPTT凝血时间显示出类似的2倍延长(即，抑制作用)。PT凝血时间相对于基线的变化不受被测的任何mAb或任何mAb的剂量增加的影响。
还通过测量在被内在通路激活剂(鞣花酸)或外在通路激活剂(组织因子)激活时凝血酶产生曲线来评估凝血活性。来自凝血酶产生曲线的一个所测得参数是滞后时间，所述滞后时间评估在将激活剂添加到血浆中后产生凝血酶所需的时间。数据表示为相对于基线滞后时间值的变化倍数。在用鞣花酸激活的血浆中，1mg/kg剂量的mAb将滞后时间延长了大约2倍，持续约7天(表20和21)。当用鞣花酸激活时，对于3mg/kg和10mg/kg剂量的mAb，滞后时间相对于基线时间延长了约3至4倍，持续至多约3周。当组织因子用作凝血的激活剂时，滞后时间没有延长(表22和23)。
在凝血酶产生测定中测量的第二参数是峰值凝血酶，其评估当凝血酶产生达到峰值时的浓度。数据表示为相对于基线凝血酶峰值的百分比。在所使用的三种mAb浓度下，mAb能够相对于基线将凝血酶峰值浓度(当由鞣花酸诱导时)显著抑制至约5-15％；然而，发现在1mg/kg剂量下的效果是短暂的(约5天)(表24和25)。3mg/kg减少持续至多2周，而10mg/kgmAb剂量减少持续约4周。当组织因子用作激活剂时，mAb对峰值凝血酶的作用是可变的，因为mAb使峰值凝血酶浓度增加和减少了50％(表26和27)。
在凝血酶产生测定中测量的第三参数是内源性凝血酶潜力，其评估在活性期间所产生的凝血酶的总浓度。数据表示为相对于基线总凝血酶产生的百分比。mAb对总凝血酶产生的抑制的效果与当鞣花酸用于激活凝血时对峰值凝血酶抑制的效果类似(表28和29)。类似地，当组织因子用作激活剂时，结果是可变的(表30和31)。
表11：comp mAb COMP3448的所测得的血浆浓度
BLQ＝低于定量限度
表12：主题抗FXI mAb REGN9933的所测得的血浆浓度
表13：针对i.v.施用的每种mAb的所计算的PK参数
Cmax＝最大浓度；Cmax/剂量＝剂量归一化的Cmax；AUCinf＝暴露量；AUCinf/剂量＝剂量归一化的暴露量；AUCinf％Extrapolated＝暴露量的外推百分比；t1/2＝半衰期并且CL＝清除率
表14：在服用comp mAb COMP3448的动物中总猴FXI的所测得的血浆浓度
表15：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中总猴FXI的所测得的血浆浓度
表16：在服用comp mAb COMP3448的动物中aPTT的所测得的变化倍数
表17：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中aPTT的所测得的变化倍数
表18：在服用comp mAb COMP3448的动物中PT的所测得的变化倍数
表19：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中PT的所测得的变化倍数
表20：在服用comp mAb COMP3448的动物中由鞣花酸诱导的滞后时间的所测得的变化倍数
表21：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由鞣花酸诱导的滞后时间的所测得的变化倍数
表22：在服用comp mAb COMP3448的动物中由组织因子诱导的滞后时间的所测得的变化倍数
表23：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由组织因子诱导的滞后时间的所测得的变化倍数
表24：在服用comp mAb COMP3448的动物中由鞣花酸诱导的峰值凝血酶产生的所测得的变化百分比
表25：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由鞣花酸诱导的峰值凝血酶产生的所测得的变化百分比
表26：在服用comp mAb COMP3448的动物中由组织因子诱导的峰值凝血酶产生的所测得的变化百分比
表27：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由组织因子诱导的峰值凝血酶产生的所测得的变化百分比
表28：在服用comp mAb COMP3448的动物中由鞣花酸诱导的总凝血酶产生的所测得的变化百分比
表29：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由鞣花酸诱导的总凝血酶产生的所测得的变化百分比
表30：在服用comp mAb COMP3448的动物中由组织因子诱导的总凝血酶产生的所测得的变化百分比
表31：在服用主题抗FXI mAb REGN9933的动物中由组织因子诱导的总凝血酶产生的所测得的变化百分比
实例9：初级药效学
9.1：体外药理学
进行了一系列研究以使用体外测定评估REGN9933的功效和安全性。体外研究的目标包含：(a)确定REGN9933对来自人和非人物种以及来自人FXIa的FXI的结合亲和力和特异性；(b)表征REGN9933介导的对来自人和食蟹猴供体血浆中的内在和外在凝结通路的阻断；(c)评估主题mAb REGN9933-FXI和主题mAb REGN9933-FXIa免疫复合物与C1q的结合；以及(d)评估IgG4P抗体(如REGN9933)诱导外周血单核细胞(PBMC)增殖和细胞因子释放的潜在风险。
使用基于表面等离子体共振(SPR)的测定来评估REGN9933与人、食蟹猴、兔和小鼠FXI或人FXIa之间的结合相互作用。在这些测定中，REGN9933以次纳摩尔亲和力与人FXI和FXIa以及食蟹猴FXI结合。REGN9933也与兔FXI微弱结合，但不与小鼠FXI结合(实例9.1.1)。
使用凝血测定和凝血酶产生测定(TGA)在体外评估REGN9933阻断来自人或食蟹猴供体的合并血浆中的凝结通路的能力。在这些测定中，REGN9933对人合并的血浆中的内在凝结通路发挥浓度依赖性影响，并且对外在通路具有微妙影响。REGN9933还对食蟹猴合并血浆中的内在而非外在凝结通路发挥浓度依赖性影响(实例9.1.2.1)。
REGN9933不太可能形成能够与C1q结合的免疫复合物，因为其含有铰链稳定的IgG4源性重链片段可结晶(Fc)恒定结构域(称为IgG4P)，并且IgG4不像IgG1那样与C1q结合(Patel,2015)。尽管如此，进行酶免疫吸附测定(EIA)以评估REGN9933-FXI和REGN9933-FXIa复合物与C1q结合的潜力。在此测定中，REGN9933-FXI和REGN9933-FXIa复合物未显示出与C1q的阳性结合(实例9.1.2.2)。
来自基于细胞的体外实验的结果证明，不特异性靶向免疫细胞表面分子的IgG4P抗体(如REGN9933)具有低诱导细胞因子释放或PBMC增殖的潜力(实例9.1.3)。
主题mAb的体外功能性表征
9.1.1：确定主题mAb相互作用与来自人、食蟹猴、兔和小鼠的FXI以及来自人的FXIa的相互作用的动力学和平衡结合参数
在本研究中，使用SPR技术来确定REGN9933对源自血浆的人FXI和FXIa蛋白以及对用C末端myc-myc-六聚组氨酸(mmH)标签产生的重组人、食蟹猴、兔和小鼠FXI蛋白的结合亲和力。人FXI(E19-V625)分别与食蟹猴、兔和小鼠FXI共享96％、86％和79％氨基酸序列同一性。在25℃和pH 7.4下，将不同浓度的可溶性FXI或FXIa蛋白注射到表面捕获的REGN9933上，随后是解离阶段。使用具有质量传输限制的1:1结合模型来确定人、食蟹猴和小鼠蛋白的动力学结合参数；使用1:1稳态结合模型来确定对兔蛋白的结合亲和力。
在使用血浆源性人蛋白的测试中，REGN9933与人FXI(hFXI)和FXIa(hFXIa)结合，其中平衡解离常数(KD)分别为14.4pM和141pM(数据未示出)。
在使用用mmH标签产生的所产生蛋白的测试中，主题抗FXI mAb REGN9933分别以144pM和104pM的KD值与重组人(hFXI.mmH)和食蟹猴(食蟹猕猴(Macaca fascicularis))(MfFXI.mmH)FXI结合，并且示出了以171nM的KD值与重组兔FXI(rbFXI.mmH)的弱但可检测的结合。直到被测的最高浓度(50nM)，主题抗FXI mAb REGN9933未显示出与重组小鼠FXI(mFXI.mmH)的可检测结合(数据未示出)。
9.1.2.1：体外评估主题抗FXI抗体药物物质阻断合并的人或食蟹猴血浆中的凝结通路的能力
在本研究中，使用凝血测定和TGA在体外评估REGN9933阻断来自人或食蟹猴供体的合并血浆中的凝血通路的能力。在这些测定中，通过EA或TF在血浆中诱导凝结，以分别测量REGN9933对内在或外在凝结通路的影响。
表32中提供了使用人和食蟹猴血浆的凝血测定和TGA的结果的总结。
表32：主题抗FXI mAb REGN9933对人和食蟹猴血浆中的内在和外在凝结通路的影响的总结
a跨被测的抗体浓度的最大变化(凝血测定：19nM至1.2μM；TGA：16nM至500nM)
b在凝血测定或TGA中未观察到浓度依赖性变化。

Claims (29)

1.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段与凝结因子XI(FXI)的苹果2(A2)结构域结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(HCVR)，所述HCVR包括重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3；以及轻链可变区(LCVR)，所述LCVR包括轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3，其中
(a)所述HCDR1包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列；
(b)所述HCDR2包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列；
(c)所述HCDR3包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列；
(d)所述LCDR1包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)所述LCDR2包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列；并且
(f)所述LCDR3包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或者
其中
(a)所述HCDR1包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列；
(b)所述HCDR2包括SEQ ID NO:35的氨基酸序列；
(c)所述HCDR3包括SEQ ID NO:37的氨基酸序列；
(d)所述LCDR1包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)所述LCDR2包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列；并且
(f)所述LCDR3包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述HCVR包括与SEQID NO:3具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括与SEQ ID NO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列，或者
其中所述HCVR包括与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括与SEQ ID NO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述HCVR包括包含SEQID NO:3的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，或者
其中所述HCVR包括包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括包含SEQID NO:13的氨基酸序列。
4.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段与凝结因子XI(FXI)的苹果2(A2)结构域结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包括
重链可变区(HCVR)，所述HCVR包括与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及轻链可变区(LCVR)，所述LCVR包括与SEQ ID NO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列，或
重链可变区(HCVR)，所述HCVR包括与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及轻链可变区(LCVR)，所述LCVR包括与SEQ ID NO:13具有至少90％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述HCVR包括包含SEQID NO:3的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，或者
其中所述HCVR包括包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包括包含SEQID NO:13的氨基酸序列。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)HCDR1，所述HCDR1包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列；
(b)HCDR2，所述HCDR2包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列；
(c)HCDR3，所述HCDR3包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列；
(d)LCDR1，所述LCDR1包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2，所述LCDR2包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列；以及
(f)LCDR3，所述LCDR3包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或
所述经分离的抗体或其抗原结合片段包括
(a)HCDR1，所述HCDR1包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列；
(b)HCDR2，所述HCDR2包括SEQ ID NO:35的氨基酸序列；
(c)HCDR3，所述HCDR3包括SEQ ID NO:37的氨基酸序列；
(d)LCDR1，所述LCDR1包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(e)LCDR2，所述LCDR2包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列；并且
(f)LCDR3，所述LCDR3包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
7.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约1,000pM的KD与人FXI结合，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
8.根据权利要求7所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以选自由以下组成的组的KD与人FXI结合：小于约800pM、小于约500pM、小于约100pM或小于约50pM，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
9.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以选自由以下组成的组的解离半衰期(t1/2)与人FXI结合：大于约10分钟、大于约60分钟、大于约500分钟或大于约1,000分钟，如通过在25℃或37℃下的表面等离子体共振所测量的。
10.根据权利要求1所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约10nM的IC50抑制人凝结因子X(FX)的激活。
11.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约40pM的IC50抑制人凝结因子X(FX)的激活。
12.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段使经激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)增加至少两倍。
13.根据权利要求12所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不增加凝血酶原时间(PT)。
14.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制FXIa介导的凝血酶活性至少5％、至少10％、至少15％或5％-15％。
15.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以≤100nM、≤75nM或≤50nM的浓度使人血浆中的aPTT延长至少两倍。
16.根据权利要求15所述的经分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不延长PT。
17.根据前述权利要求中任一项所述的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以至少10nM、至少25nM或至少50nM的浓度抑制通过人血浆中的内在凝结通路实现的凝血酶产生或激活，而不影响通过外在凝结通路实现的凝血酶产生或激活。
18.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段与根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段竞争结合。
19.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，所述经分离的抗体或其抗原结合片段与根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段结合同一表位。
20.一种药物组合物，其包括根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载剂或稀释剂。
21.一种经分离的核酸分子，其包括编码根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸序列。
22.一种载体，其包括根据权利要求21所述的核酸分子。
23.一种细胞，其包括根据权利要求22所述的载体或根据权利要求21所述的核酸分子。
24.一种用于抑制由FXI介导的生物活性的方法，所述方法包括：
使FXI或FXIa与生物学有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求20所述的药物组合物接触。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述生物活性是血栓形成，并且其中在FXI与所述抗体或其抗原结合片段接触时，血栓形成受到抑制。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述接触使得血浆中的aPTT延长或凝血酶活性降低。
27.一种治疗或预防受试者的与FXI活性或表达相关的疾病或病症、或用于缓解与所述与FXI活性或表达相关的疾病或病症相关的至少一种症状的方法，所述方法包括向需要此类治疗的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或根据权利要求20所述的药物组合物。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述疾病或病症是所述受试者的血液凝结疾病或病症、或患上血栓形成风险增加的疾病或病症。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述疾病或病症是心房纤颤。
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