TW202337497A - 鼻內調配物及抗sars-cov-2棘蛋白抗體 - Google Patents

鼻內調配物及抗sars-cov-2棘蛋白抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW202337497A
TW202337497A TW112106009A TW112106009A TW202337497A TW 202337497 A TW202337497 A TW 202337497A TW 112106009 A TW112106009 A TW 112106009A TW 112106009 A TW112106009 A TW 112106009A TW 202337497 A TW202337497 A TW 202337497A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
antigen
pharmaceutical composition
antibody
binding fragment
Prior art date
Application number
TW112106009A
Other languages
English (en)
Inventor
黃愛龍
程國鋒
成勇 楊
金艾順
李婷婷
韓曉建
王應明
胡超
羅飛揚
陸冰霞
林翠翠
羅書慧
陸婷婷
Original Assignee
中國大陸商重慶明道浩悅生物科技有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from CN202210151716.6A external-priority patent/CN116655778A/zh
Priority claimed from CN202210151970.6A external-priority patent/CN116650638A/zh
Application filed by 中國大陸商重慶明道浩悅生物科技有限公司 filed Critical 中國大陸商重慶明道浩悅生物科技有限公司
Publication of TW202337497A publication Critical patent/TW202337497A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/14—Quaternary ammonium compounds, e.g. edrophonium, choline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1002—Coronaviridae
    • C07K16/1003—Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 [SARS‐CoV‐2 or Covid-19]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本發明係關於(i)用於遞送蛋白質(諸如抗體)之鼻內及/或黏膜調配物；及(ii)結合至野生型SARS-CoV-2及其變異體(諸如阿伐(alpha) (B.1.1.7)、貝他(beta) (B.1.351)、伽瑪(gamma) (P.1)、德爾塔(delta) (B.1.617.2)及奧密克絨(omicron) (BA.1或BA.2))之棘蛋白的抗體。

Description

鼻內調配物及抗SARS-COV-2棘蛋白抗體
本發明係關於(i)鼻內調配物及施加蛋白質(諸如抗體)；及(ii)能夠結合至SARS-CoV-2之多種變異體之棘蛋白的抗體。
此項技術中需要可經由鼻道向人類個體投與之蛋白質調配物。在此項技術中亦需要將治療或預防SARS-CoV-2感染之RBD-域棘蛋白SARS-CoV-2中和抗體。
在一個態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含：蛋白質、低溫保護劑、保濕劑、乳化劑、控制釋放劑及緩衝劑。
在一個態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包括：活性成分或其前驅物；不超過約40% (w/v)的低溫保護劑；不超過約30% (w/v)的保濕劑；不超過約5% (w/v)的乳化劑；不超過約10% (w/v)的控制釋放劑；及緩衝劑。
在一些實施例中，該醫藥組合物適用於經黏膜向人類投與。在一些實施例中，該醫藥組合物適用於經鼻內向人類投與。
在一些實施例中，低溫保護劑選自由以下組成之群：海藻糖、甘油、二甲亞碸、乙二醇、聚乙二醇及蔗糖或其組合。在一些實施例中，醫藥組合物中之低溫保護劑為： 不超過40% (w/v)的海藻糖； 不超過40% (w/v)的甘油； 不超過10% (w/v)的二甲亞碸； 不超過40% (w/v)的乙二醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇；或 不超過0.5 M的蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物中之低溫保護劑為： 約2%至約8% (w/v)的海藻糖； 約1%至約20% (w/v)的甘油； 約1%至約10% (w/v)的二甲亞碸； 約4%至約30% (w/v)的乙二醇； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇；或 約0.1 M至約0.4 M蔗糖。
在一些實施例中，低溫保護劑為海藻糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約8% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約4% (w/v)的低溫保護劑。
在一些實施例中，保濕劑係選自由以下組成之群：丙三醇(glycerin)、甘露糖醇、聚乙二醇400、聚乙二醇4000、D-山梨糖醇、聚葡萄胺糖、木糖醇及玻尿酸鈉或其組合。
在一些實施例中，醫藥組合物中之保濕劑為： 不超過30% (w/v)的丙三醇； 不超過7% (w/v)的甘露糖醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約15%(w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約3% (w/v)的聚葡萄胺糖； 不超過10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約2.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
在一些實施例中，醫藥組合物中之保濕劑為： 約2%至約6% (w/v)的丙三醇； 約3%至約5% (w/v)的甘露糖醇； 約10%至約18% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約10% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約6% (w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約1% (w/v)的聚葡萄胺糖； 約1%至約10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約1.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
在一些實施例中，保濕劑為丙三醇。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。
在一些實施例中，乳化劑係選自由以下組成之群：TWEEN 80、聚山梨醇酯20、卵磷脂、脫水山梨糖醇酯、單甘油酯及/或二甘油酯及硬脂醯乳酸鈉或其組合。在一些實施例中，乳化劑為TWEEN 80。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.04% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，控制釋放劑係選自由羥丙基甲基纖維素(HPMC)及聚乙烯吡咯啶酮K30或其組合組成之群。在一些實施例中，控制釋放劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約5% (w/v)或約0.01% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)或約0.1% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，控制釋放劑為聚乙烯吡咯啶酮K30。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約10% (w/v)或約3% (w/v)至約6% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，緩衝劑係選自由磷酸鹽緩衝劑、tris緩衝劑及甘胺酸緩衝劑組成之群。
在一些實施例中，醫藥組合物中之緩衝劑為： 約10 mM至約100 mM磷酸鹽； 約10 mM至約100 mM tris；或 約0.1 M至約0.5 M甘胺酸。
在一些實施例中，醫藥組合物中之緩衝劑為： 約10 mM至約40 mM磷酸鹽； 約10 mM至約40 mM tris；或 約0.1 M至約0.2 M甘胺酸。
在一些實施例中，緩衝劑為磷酸鹽緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物中之緩衝劑為約20 mM磷酸鹽或tris。
在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至8或約5至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.0。
在一些實施例中，醫藥組合物包含抗生素。在一些實施例中，抗生素包含苯紮氯銨、苯甲醇、氯丁醇或其組合。
在一些實施例中，醫藥組合物中之抗生素為： 約0.002%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 不超過3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約0.5%至約2.0% (w/v)的氯丁醇。
在一些實施例中，醫藥組合物中之抗生素為： 約0.005%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 約1.0%至約3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約1.0%至2.0% (w/v)的氯丁醇。
在一些實施例中，抗生素為苯紮氯銨。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)或約0.01% (w/v)的抗生素。
在一些實施例中，活性成分或其前驅物在靈長類動物之鼻腔中之平均滯留時間為在經鼻內向靈長類動物投與醫藥組合物之後至少1小時、至少2小時、至少3小時、至少4小時、至少5小時、至少6小時、至少7小時、至少8小時、至少9小時、至少10小時、至少11小時或至少12小時。在一些實施例中，靈長類動物為恆河獼猴。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的低溫保護劑； 約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑； 約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑；及 約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約2%至約8% (w/v)的低溫保護劑； 約1%至約4% (w/v)的保濕劑； 約0.005%至約0.04% (w/v)的乳化劑； 約0.01%至約0.2% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約5.5至6.5。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約1.7%至約2% (w/v)的保濕劑； 約0.01%至約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.02%至約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約2% (w/v)的保濕劑； 約0.01% (w/v)的乳化劑； 約0.02% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約2% (w/v)的保濕劑； 約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
在一些實施例中，醫藥組合物包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約1.7% (w/v)的保濕劑； 約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
在一些實施例中，緩衝劑包含約20 mM磷酸鹽。在一些實施例中，磷酸鹽為磷酸鈉鹽。
在一些實施例中，低溫保護劑為海藻糖，保濕劑為丙三醇，乳化劑為TWEEN 80，控制釋放劑為HPMC。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)的苯紮氯銨。
在一些實施例中，活性成分包含多肽。在一些實施例中，活性成分包含抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至100 mg/ml、約0.5至50 mg/ml、或約1至30 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5 mg/ml。在一些實施例中，抗體或其抗原片段結合至冠狀病毒。在一些實施例中，抗體或其抗原片段結合至SARS-CoV-2。
在一些實施例中，醫藥組合物包含以下中之一或多者： 抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； 抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； 抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； 抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； 抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
在一些實施例中： 該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，(e)抗體D/E或抗原結合片段包含： 重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 其組合。
在一些實施例中，醫藥組合物包含抗體或抗原結合片段中之至少兩者。在一些實施例中，醫藥組合物包含(c)抗體B或其抗原結合片段及(e)抗體D/E或其抗原結合片段。在一些實施例中，(c)抗體B或其抗原結合片段與(e)抗體D/E或其抗原結合片段的比率在約1:2與約1:8之間。在一些實施例中，(c)抗體B或其抗原結合片段與(e)抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1:4。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(d)抗體C或其抗原結合片段。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(f)抗體F或其抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體為IgG、IgM或IgA。
在一些實施例中，醫藥組合物係經由經鼻投與裝置投與。
在一個態樣中，本發明提供一種經鼻或經黏膜投與裝置，其包含本發明之醫藥組合物。
在一個態樣中，本發明提供一種套組，其包含本發明之醫藥組合物及經鼻或經黏膜投與裝置。
在一些實施例中，經鼻投與裝置為定量鼻泵裝置或單位劑量鼻泵裝置。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域(VH)，該重鏈可變域包含重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，其中：HCDR1包含GFTFSGSA (SEQ ID NO: 13)之胺基酸序列；HGFCDR2包含IVVGSGNT (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列；且HCDR3包含AAPYCSSTSCRDGFDI (SEQ ID NO: 15)之胺基酸序列。在一些實施例中，VH包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含輕鏈可變結構域(VL)，其包含輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中：LCDR1包含QSVRSSY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列；LCDR2包含GAS (SEQ ID NO: 11)之胺基酸序列；且LCDR3包含QQYGRSPWT (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列。在一些實施例中，其中VL包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其包含： VH，其包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； VH，其包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； VH，其包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；或 VH，其包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段用於經鼻內投與。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白，視情況其中SARS-CoV-2棘蛋白包含SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108或SEQ ID NO: 110中所示之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體為IgG、IgM或IgA。
在一個態樣中，本發明提供一種編碼本發明之抗體或抗原結合片段的聚核苷酸。
在一個態樣中，本發明提供一種載體，其包含本發明之聚核苷酸。
在一個態樣中，本發明提供一種組合物，其包含本發明之抗體或抗原結合片段、聚核苷酸或載體。
在一個態樣中，本發明提供一種細胞，其包含本發明之聚核苷酸或載體。
在一個態樣中，本發明提供一種產生本發明之抗體或抗原結合片段之方法，其包含培養包含編碼抗體或其抗原結合片段之載體的細胞及自細胞培養基採集抗體或抗原結合片段。
在一個態樣中，本發明提供一種治療或預防有需要個體之SARS-CoV-2感染的方法，其包含向該個體投與有效量之本發明之抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係經鼻內、皮下、靜脈內或肌內投與。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係經鼻內投與。
在一個態樣中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段之組合，其包含以下抗體或其抗原結合片段中之至少兩者： 抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； 抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； 抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； 抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； 抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
在一些實施例中： 該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； 該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，抗體D/E或抗原結合片段包含：重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或其組合。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段之組合包含：抗體B或其抗原結合片段及抗體D/E或其抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體B或其抗原結合片段與抗體D/E或其抗原結合片段的比率在約1:2與約1:8之間。在一些實施例中，抗體B或其抗原結合片段與抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1:4。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段之組合包含抗體C或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段之組合包含抗體F或其抗原結合片段。
在一些實施例中，該組合顯示出針對COVID-19 Omicron BA.2、BA.2.12.1或BA.5病毒株之協同效應。
在一個態樣中，本發明提供一種向個體之鼻腔或黏膜遞送活性成分或其前驅物之方法，其包含向該個體投與本發明之醫藥組合物。
在一個態樣中，本發明提供一種預防有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或組合。
在一個態樣中，本發明提供一種治療有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或組合。
在一些實施例中，向個體之黏膜投與醫藥組合物或抗體或抗原結合片段或組合。
在一些實施例中，經鼻內向個體投與醫藥組合物或抗體或抗原結合片段或組合。
在一些實施例中，每次投與時將約30至150 µl醫藥組合物遞送至個體之鼻腔。在一些實施例中，每次投與時將約70至100 µl醫藥組合物遞送至個體之鼻腔。
在一些實施例中，每次投與時將約0.15 mg至約0.75 mg活性成分或其前驅物遞送至鼻腔。
在一些實施例中，每天約1至6次將抗體或抗原結合片段或組合遞送至個體。在一些實施例中，每天約2至3次將醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或組合遞送至個體。
在一些實施例中，將醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合遞送至個體，持續約7至14天。
在一些實施例中，在任何疾病症狀發作之前開始投與醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合。在一些實施例中，在至少一種疾病症狀發作之後開始投與醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合。
在一些實施例中，症狀為呼吸道症狀。在一些實施例中，疾病包含呼吸道症狀。在一些實施例中，呼吸道症狀為過敏、鼻塞、鼻感染或其組合。
在一些實施例中，疾病係由病毒、細菌、真菌或其組合引起之呼吸道感染。在一些實施例中，疾病為病毒感染。在一些實施例中，疾病為慢性病毒感染。在一些實施例中，疾病為急性病毒感染。在一些實施例中，疾病為冠狀病毒感染。在一些實施例中，疾病為SARS-CoV-2感染。
在一些實施例中，藉由ELISA所量測，在投與之後24小時內，個體鼻腔中之抗體或其抗原結合片段之濃度比個體血液樣本中之抗體或其抗原結合片段之濃度高至少100倍。
在各種實施例中，上文或本文所論述之實施例之特徵或組分中之任一者可組合，且此類組合涵蓋於本發明之範疇內。上文或本文所論述之任何具體值可與上文或本文所論述之另一相關值組合以敍述範圍，其中該等值代表該範圍之上端及下端，且此類範圍涵蓋於本發明之範疇內。
相關申請案之交互參考
本申請案主張2022年2月18日申請的中國申請案第202210151716.6號及2022年2月18日申請的中國申請案第202210151970.6號之優先權及權益，所有該等申請案以全文引用的方式併入本文中。 電子序列表之參考
電子序列表(CMHB_001_02WO_SeqList_ST26.xml；大小：88,220個位元組；及創建日期：2023年2月17日)之內容以全文引用的方式併入本文中。 定義
為了可更完全地理解本申請案，下文闡述若干定義。此類定義意欲涵蓋文法等效物。
術語「約」結合參考數值時可以包括該數值本身及該數值加或減10%的值範圍。舉例而言，量「約10」包括10及自9至11之任何量。
本文所揭示之特定實施例可在申請專利範圍中使用「由...組成」或「基本上由...組成」語言進一步限制。當用於申請專利範圍中時，不論如所申請或根據修正添加，過渡術語「由...組成」排除申請專利範圍中未指定之任何要素、步驟或成分。過渡術語「基本上由……組成」將申請專利範圍之範疇限制於指定材料或步驟及不實質上影響基本及新穎特徵之彼等材料或步驟。因此主張之本發明之實施例固有地或明確地描述且實現於本文中。
除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則在描述本發明之上下文中(尤其在以下申請專利範圍之上下文中)使用的術語「一(a/an)」、「該(the)」及類似指示物均解釋為涵蓋單數及複數兩者。
在描述本發明方法之前，應理解，本發明不限於所描述之特定方法及實驗條件，因為此類方法及條件可變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的而並不意欲為限制性的，因為本發明之範疇將僅由所附申請專利範圍限制。
除非另外規定，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域的一般技術者通常所理解相同之含義。儘管類似於或等效於本文所描述之彼等者之任何方法及材料可用於本發明之實踐或測試中，但現描述較佳方法及材料。本文所提及之所有公開案均以全文引用的方式併入本文中。
術語「冠狀病毒」或「CoV」係指冠狀病毒科中之任何病毒，包括(但不限於) SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV。SARS-CoV-2係指近期出現的冠狀病毒。SARS-CoV-2亦被稱為2019-nCoV及武漢冠狀病毒。不受理論或機制束縛，其經由病毒棘蛋白結合至人類宿主細胞受體血管收縮素轉化酶2 (ACE2)。棘蛋白亦結合至TMPRSS2且由其裂解，如此活化棘蛋白以進行病毒之膜融合。
術語「CoV-S」，亦稱為「S」或「S蛋白」，係指冠狀病毒之棘蛋白，且可以指特異性S蛋白，諸如SARS-CoV-2-S、MERS-CoV S及SARS-CoV S。野生型SARS-CoV-2棘蛋白為1273胺基酸I型膜醣蛋白，其組裝成在包膜冠狀病毒顆粒之表面上構成棘或膜粒的三聚體。該蛋白質具有兩種基本功能：宿主受體結合及膜融合，此歸因於S蛋白的N端(S1)及C端(S2)半部。CoV-S經由存在於S1亞單元中之受體結合域(RBD)結合至其同源受體。野生型SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 70例示。alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 72例示。beta (B.1.351) SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 74例示。gamma (P.1) SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 76例示。delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 78例示。o (BA.1) SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 80例示。除非進一步指定，否則術語「CoV-S」包括自不同CoV分離株分離之CoV棘蛋白的蛋白質變異體以及重組CoV棘蛋白或其片段。術語「alpha CoV-S」或「alpha (B.1.1.7) CoV-S」係指alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2棘蛋白之CoV棘蛋白。術語「beta CoV-S」或「beta (B.1.351) CoV-S」係指beta (B.1.351) SARS-CoV-2棘蛋白之CoV棘蛋白。術語「gamma CoV-S」或「gamma (P.1) CoV-S」係指gamma (P.1) SARS-CoV-2棘蛋白之CoV棘蛋白。術語「delta CoV-S」或「delta (B.1.617.2) CoV-S」係指delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2棘蛋白之CoV棘蛋白。術語「o CoV-S」或「o (BA.1或BA.2) CoV-S」係指o (BA.1或BA.2) SARS-CoV-2棘蛋白之CoV棘蛋白。該術語亦涵蓋與例如組胺酸標籤、小鼠或人類Fc或信號序列(諸如ROR1)偶聯的CoV棘蛋白或其片段。
術語「RBD-CoV-S」，亦稱為「RBD-S」或「RBD-S蛋白」，係指冠狀病毒之RBD域棘蛋白，且可以指S蛋白之特異性RBD域，諸如RBD-SARS-CoV-2-S、RBD-MERS-CoV S及RBD-SARS-CoV S。野生型SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域促進S1次單元與其同源受體之結合。野生型SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域的胺基酸序列由SEQ ID NO: 71例示。alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域的胺基酸序列由SEQ ID NO: 73例示。beta (B.1.351) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域的胺基酸序列由SEQ ID NO: 75例示。gamma (P.1) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域之胺基酸序列由SEQ ID NO: 77例示。delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域的胺基酸序列由SEQ ID NO: 79例示。omicron (BA.1) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域的胺基酸序列由SEQ ID NO: 81例示。除非進一步指定，否則術語「RBD-CoV-S」包括自不同CoV分離株分離之CoV棘蛋白的蛋白質變異體以及重組CoV棘蛋白或其片段的RBD域。術語「alpha RBD-CoV-S」或「alpha (B.1.1.7) RBD-CoV-S」係指alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域。術語「beta RBD-CoV-S」或「beta (B.1.351) RBD-CoV-S」係指beta (B.1.351) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域。術語「gamma CoV-S」或「gamma (P.1) CoV-S」係指gamma (P.1) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域。術語「delta CoV-S」或「delta (B.1.617.2) CoV-S」係指delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域。術語「omicron CoV-S」或「omicron (BA.1或BA.2) CoV-S」係指omicron (BA.1或BA.2) SARS-CoV-2棘蛋白之RBD域。該術語亦涵蓋與例如組胺酸標籤、小鼠或人類Fc或信號序列(諸如ROR1)偶聯的CoV棘蛋白或其片段。
如本文所用，術語「冠狀病毒感染」或「CoV感染」係指感染冠狀病毒，諸如SARS-CoV-2、MERS-CoV或SARS-CoV。該術語包括冠狀病毒呼吸道感染，經常發生在下呼吸道。症狀可能包括高燒、乾咳、呼吸急促、肺炎、胃腸道症狀(諸如腹瀉)、器官衰竭(腎衰竭及腎功能障礙)、感染性休克，以及嚴重病例中之死亡。
如本文所用，術語「alpha冠狀病毒感染」或「SARS-CoV-2感染」係指感染alpha冠狀病毒，諸如alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2。如本文所用，術語「beta冠狀病毒感染」或「beta SARS-CoV-2感染」係指感染beta冠狀病毒，諸如beta (B.1.351) SARS-CoV-2。如本文所用，術語「gamma冠狀病毒感染」或「gamma SARS-CoV-2感染」係指感染gamma冠狀病毒，諸如gamma (P.1) SARS-CoV-2。如本文所用，術語「delta冠狀病毒感染」或「delta SARS-CoV-2感染」係指感染delta冠狀病毒，諸如delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2。如本文所用，術語「o冠狀病毒感染」或「o SARS-CoV-2感染」係指感染o冠狀病毒，諸如o (BA.1或BA.2) SARS-CoV-2。
如本文所用，術語抗體或抗原結合蛋白之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」及其類似術語包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在、可以酶方式獲得、合成或經基因工程改造之多肽或醣蛋白。抗原結合片段之非限制性實例包括：(i) Fab片段；(ii) F(ab')2片段；(iii) Fd片段；(iv) Fv片段；(v)單鏈Fv (scFv)分子；(vi) dAb片段；及(vii)由模擬抗體之高變區的胺基酸殘基組成之最小識別單元(例如，經分離之互補決定區(CDR)，諸如CDR3肽)，或限制性FR3-CDR3-FR4肽。其他經工程改造之分子，諸如域特異性抗體、單域抗體、域缺失抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、微型抗體、奈米抗體(例如，如WO08/020079或WO09/138519中所定義)(例如單價奈米抗體、二價奈米抗體等)、小模組化免疫藥物(SMIP)及鯊魚可變IgNAR域亦涵蓋於如本文所使用之表述「抗原結合片段」內。在一些實施例中，抗原結合片段包含表1之抗體之三個或更多個CDR (例如HCDR1、HCDR2及HCDR3；或LCDR1、LCDR2及LCDR3)。
除非另外指明，否則術語「多肽」與「蛋白質」在本發明中可互換地使用。 病毒
本發明包括用於治療或預防個體之病毒感染之方法。在一些實施例中，病毒感染係由呼吸道感染病毒感染引起。在一些實施例中，呼吸道感染病毒為流感病毒、呼吸道融合細胞病毒、副流感病毒、間質肺炎病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒或波卡病毒(bocavirus)。在一些實施例中，術語「病毒」包括個體體內的感染可藉由投與呼吸道病毒抗原結合蛋白(例如結合至流感病毒抗原、呼吸道融合細胞病毒抗原、副流感病毒抗原、間質肺炎病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒或波卡病毒之抗體或其抗原結合片段)治療或預防的任何病毒。在一些實施例中，術語「病毒」包括個體體內的感染可藉由投與抗病毒抗原結合蛋白質(例如本發明之抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或其抗原結合片段))治療或預防的任何病毒(例如其中病毒之感染力至少部分取決於CoV-S)。在一些實施例中，「病毒」為表現棘蛋白(例如CoV-S)的任何病毒。術語「病毒」亦包括CoV-S依賴性呼吸道病毒，其為感染個體之呼吸道組織(例如，上及/或下呼吸道、氣管、支氣管、肺)且可藉由投與抗CoV-S抗體或其抗原結合片段治療或預防的病毒。例如，在本發明之一個實施例中，病毒包括冠狀病毒、SARS-CoV-2 (嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2)、SARS-CoV (嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒)及MERS-CoV (中東呼吸道症候群(MERS)冠狀病毒)。冠狀病毒可包括alpha冠狀病毒、beta冠狀病毒、gamma冠狀病毒、delta冠狀病毒及/或omicron病毒屬。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段可結合至及/或中和alpha冠狀病毒、beta冠狀病毒、gamma冠狀病毒、delta冠狀病毒及/或omicron病毒。在一些實施例中，此結合及/或中和可對特定冠狀病毒屬或屬之特定亞群具特異性。「病毒感染」係指病毒在個體體內之侵入及增殖。
不受理論或機制束縛，冠狀病毒的病毒體為直徑為約125 nm之球形。冠狀病毒最突出的特徵係自病毒體表面發出的棒狀棘突起。此等棘為病毒體之決定性特徵，且使其具有日冕外觀，因此得名冠狀病毒。病毒體包膜內為核殼體。冠狀病毒具有螺旋對稱的核殼體，其在正義RNA病毒中不常見，但在反義RNA病毒中更為常見。SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV屬於冠狀病毒科。病毒體與宿主細胞之初始附著係由S蛋白與其受體之間的相互作用引發。冠狀病毒S蛋白之S1區內的受體結合域(RBD)位點因病毒而異，有些在S1之C端具有RBD。S蛋白/受體相互作用係冠狀病毒感染宿主物種的主要決定因素，且亦控制病毒之組織趨性。許多冠狀病毒利用肽酶作為其細胞受體。在受體結合之後，病毒必須接下來進入宿主細胞的細胞溶質。此通常藉由組織蛋白酶、TMPRRS2或另一蛋白酶對S蛋白進行酸依賴性蛋白水解裂解，接著融合病毒與細胞膜來完成。 醫藥組合物
在一些實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含：活性成分(例如蛋白質)、低溫保護劑、保濕劑、乳化劑、控制釋放劑及緩衝劑。
在一些實施例中，此類醫藥組合物可在目標位點(例如鼻腔)處長時間保留活性成分或其前驅體。在一些實施例中，當在本發明之醫藥組合物中調配時，活性成分或其前驅物在靈長類動物之目標位點(例如鼻腔)中之平均滯留時間為在向該靈長類動物投與醫藥組合物之後至少1小時、至少2小時、至少3小時、至少4小時、至少5小時、至少6小時、至少7小時、至少8小時、至少9小時、至少10小時、至少11小時或至少12小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少1小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少2小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少2小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少3小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少4小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少5小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少6小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少7小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少8小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少9小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少10小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少11小時。在一些實施例中，平均滯留時間為至少12小時。在一些實施例中，靈長類動物為人類。在一些實施例中，靈長類動物為恆河獼猴。
如本文所用，術語「低溫保護劑」係指組合物中可減緩或防止冰核形成、冰晶成長、冰形成或其組合之物質。因此，低溫保護劑改良組合物中之活性成分的解凍後存活率。
在一些實施例中，低溫保護劑選自由以下組成之群：二甲亞碸(DMSO)、甘油、聚乙二醇(PEG)、多醣、糖及胺基酸或其任何組合。在一些實施例中，低溫保護劑選自由以下組成之群：海藻糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、聚葡萄糖、甘露糖醇及山梨糖醇或其任何組合。低溫保護劑之其他揭示內容可見於例如美國專利第9,707,204號，其以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，低溫保護劑包含海藻糖。
在一些實施例中，低溫保護劑選自由以下組成之群：海藻糖、甘油、二甲亞碸、乙二醇、聚乙二醇及蔗糖或其組合。在一些實施例中，低溫保護劑為海藻糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過40% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約40% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約35% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約30% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約25% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約0.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約20% (w/v)的低溫保護劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.4% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.7% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.8% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.9% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.1% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約4% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約4.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約6.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約8% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約8.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約9% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約9.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約11% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約12% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約13% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約14% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約16% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約17% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約18% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約19% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20% (w/v)的低溫保護劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約4% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3.8% (w/v)至約4.2% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3.5% (w/v)至約4.5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約5% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.5% (w/v)至約6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約8% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約7% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約8% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約10% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.5% (w/v)至約6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約6% (w/v)的低溫保護劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約6% (w/v)的低溫保護劑。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.0001%至40% (w/v)之海藻糖。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為2%至8% (w/v)之海藻糖。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.0001%至40% (w/v)之甘油。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為1%至20% (w/v)之甘油。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.0001%至10% (w/v)之二甲亞碸。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為1%至10% (w/v)之二甲亞碸。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.0001%至40% (w/v)之乙二醇。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為4%至30% (w/v)之乙二醇。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.0001%至20% (w/v)之聚乙二醇。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為5%至15% (w/v)之聚乙二醇。
在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.5 M之蔗糖。在一些實施例中，低溫保護劑為濃度為0.1 M至0.4 M之蔗糖。
如本文所使用，術語「保濕劑」係指促進保持組合物中之濕氣的物質。
在一些實施例中，保濕劑係選自由以下組成之群：丙三醇、二聚丙三醇(diglycerin)、甜菜鹼、二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、丙二醇(propanediol)、1,2-己二醇、D-核糖、葡萄糖、山梨糖醇、右旋糖、尿素、2-吡咯啶酮-5-甲酸及相關鹽、乳酸、依克多因(ectoin)、乳酸、甜菜鹼、乙醇酸及乳糖酸之無機鹽或其任何組合。保濕劑之其他揭示內容可見於例如US2020/0375870中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，保濕劑係選自由以下組成之群：丙三醇、甘露糖醇、聚乙二醇400、聚乙二醇4000、D-山梨糖醇、聚葡萄胺糖、木糖醇及玻尿酸鈉或其組合。在一些實施例中，保濕劑包含丙三醇。在一些實施例中，保濕劑為丙三醇。
在一些實施例中，當醫藥組合物中之低溫保護劑包含或為甘油時，保濕劑不包含丙三醇。
在一些實施例中，當醫藥組合物中之保濕劑包含或為丙三醇時，低溫保護劑不包含甘油。
在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過30% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約30% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約25% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約0.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約20% (w/v)的保濕劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.6% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.7% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.8% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.9% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.6% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.8% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.9% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約3.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約4.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約6% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約6.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約8% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約8.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約9% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約9.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約11% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約12% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約13% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約14% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約16% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約17% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約18% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約19% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20% (w/v)的保濕劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.6% (w/v)至約2.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)至約2.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.4% (w/v)至約2.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.3% (w/v)至約2.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.2% (w/v)至約2.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.1% (w/v)至約2.7% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.6% (w/v)至約1.8% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)至約1.9% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.4% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.3% (w/v)至約2.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.2% (w/v)至約2.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.1% (w/v)至約2.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約2.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.9% (w/v)至約2.1% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.8% (w/v)至約2.2% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)至約2.3% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.6% (w/v)至約2.4% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)至約2.5% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.4% (w/v)至約2.6% (w/v)的保濕劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.3% (w/v)至約2.7% (w/v)的保濕劑。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.0001%至30% (w/v)之丙三醇。在一些實施例中，保濕劑為濃度為2%至6% (w/v)之丙三醇。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.0001%至7% (w/v)之甘露糖醇。在一些實施例中，保濕劑為濃度為3%至5% (w/v)之甘露糖醇。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.0001%至20% (w/v)之聚乙二醇400。在一些實施例中，保濕劑為濃度為10%至18% (w/v)之聚乙二醇400。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為5%至15% (w/v)之聚乙二醇4000。在一些實施例中，保濕劑為濃度為5%至10% (w/v)之聚乙二醇4000。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為3%至15% (w/v)之D-山梨糖醇。在一些實施例中，保濕劑為濃度為3%至6% (w/v)之D-山梨糖醇。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.01%至3% (w/v)之聚葡萄胺糖。在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.01%至1% (w/v)之聚葡萄胺糖。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.0001%至10% (w/v)之木糖醇。在一些實施例中，保濕劑為濃度為1%至10% (w/v)之木糖醇。
在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.1%至2.0% (w/v)之玻尿酸鈉。在一些實施例中，保濕劑為濃度為0.1%至1.0% (w/v)之玻尿酸鈉。
如本文所使用，術語「乳化劑」係指促進乳液形成及穩定的物質。
在一些實施例中，乳化劑係選自由以下組成之群：聚山梨醇酯、十二烷基硫酸鈉、磷脂、醣脂、三酸甘油酯、卵磷脂、硬脂酸鈉、硬脂酸鉀、硬脂酸銨、油酸鈉、油酸鉀、油酸銨、棕櫚酸鈉、棕櫚酸鉀及棕櫚酸銨或其任何組合。在一些實施例中，乳化劑係選自由以下組成之群：TWEEN 80、TWEEN 60、維生素E、普朗尼克F68、普朗尼克F127、泊洛沙姆407、單硬脂酸甘油酯、棕櫚酸抗壞血酯卵磷脂、蛋黃、磷脂、磷脂醯膽鹼及聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺結合物或其任何組合。乳化劑之其他揭示內容可見於例如US 2018/0206504及US 2011/0144578中，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，乳化劑係選自由以下組成之群：TWEEN 80、聚山梨醇酯20、卵磷脂、脫水山梨糖醇酯、單甘油酯及/或二甘油酯及硬脂醯乳酸鈉或其組合。在一些實施例中，乳化劑包含TWEEN 80。在一些實施例中，乳化劑為TWEEN 80。
在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過5% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約5% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0001% (w/v)至約0.5% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.002% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.003% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.005% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.01% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.003% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.005% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003%(w/v)至約0.01%(w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.005% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.01% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.01% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.4% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0015% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0025% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0035% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.004% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.0045% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.006% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.008% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.009% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.011% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.013% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.014% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.016% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.017% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.018% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.019% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.021% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.022% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.023% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.024% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.025% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.035% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.04% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.045% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.055% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.06% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.065% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.075% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.08% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.085% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.09% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.095% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.12% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.25% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.35% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.4% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.009% (w/v)至約0.011% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.008% (w/v)至約0.012% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.013% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.006% (w/v)至約0.014% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.015% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.004% (w/v)至約0.016% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.017% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.018% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.019% (w/v)至約0.021% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.018% (w/v)至約0.022% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.017% (w/v)至約0.023% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.016% (w/v)至約0.024% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.025% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.014% (w/v)至約0.026% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.013% (w/v)至約0.027% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.028% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.011% (w/v)至約0.029% (w/v)的乳化劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.03% (w/v)的乳化劑。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之TWEEN 80。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之TWEEN 80。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之聚山梨醇酯20。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之聚山梨醇酯20。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之卵磷脂。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之卵磷脂。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之脫水山梨糖醇酯。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之脫水山梨糖醇酯。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之單甘油酯及/或二甘油酯。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之單甘油酯及/或二甘油酯。
在一些實施例中，乳化劑為濃度＜5% (w/v)之硬脂醯乳酸鈉。在一些實施例中，乳化劑為濃度為0.005%至2% (w/v)之硬脂醯乳酸鈉。
如本文所用，術語「控制釋放劑」係指能夠控制組合物中活性成分之釋放的物質。
在一些實施例中，控制釋放劑係選自由以下組成之群：醋酸丁二酸酯、聚乙烯衍生物、聚氧化乙烯、聚丙烯酸、改質澱粉、交聯高直鏈澱粉、羥丙基澱粉、羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、纖維素、微晶纖維素、羧甲基乙基纖維素、醋酸纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸纖維素、醋酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸纖維素、醋酸丙酸纖維素、醋酸丁二酸纖維素、醋酸丁酸纖維素、醋酸苯偏三酸纖維素、泊洛沙姆、聚維酮、海藻酸、海藻酸鈉、聚乙二醇、聚乙二醇海藻酸鹽、膠狀物(例如三仙膠)、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸與丙烯酸乙酯之共聚物、聚甲基乙烯基醚與丙二酸酐之共聚物、聚甲基乙烯基醚與丙二酸或其乙酯、異丙酯、正丁酯之共聚物，及玉米蛋白或其任何組合。控制釋放劑之其他揭示內容可見於例如美國專利第8,486,449號，其以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，控制釋放劑係選自由羥丙基甲基纖維素(HPMC)及聚乙烯吡咯啶酮K30或其組合組成之群。在一些實施例中，控制釋放劑包含羥丙基甲基纖維素。在一些實施例中，控制釋放劑為羥丙基甲基纖維素。
在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過10% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約10% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約9% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約8% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約7% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約6% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約4% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.002% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.005% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.01% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.005% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.01% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.01% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.02% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.02% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約2% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.004% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.006% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.008% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.009% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.014% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.016% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.018% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.022% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.025% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.035% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.04% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.045% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.06% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.08% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.09% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.12% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.14% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.17% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.25% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.4% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.6% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.7% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.8% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.9% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.5% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1.7% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.019% (w/v)至約0.021% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.018% (w/v)至約0.022% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.017% (w/v)至約0.023% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.025% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.013% (w/v)至約0.027% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.03% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.05% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.09% (w/v)至約0.11% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.08% (w/v)至約0.12% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)至約0.13% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.06% (w/v)至約0.15% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.17% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.04% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.03% (w/v)至約0.25% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.3% (w/v)的控制釋放劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。
在一些實施例中，控制釋放劑為濃度為0.1%至5.0% (w/v)之羥丙基甲基纖維素。在一些實施例中，控制釋放劑為濃度為0.1%至1% (w/v)之羥丙基甲基纖維素。
在一些實施例中，控制釋放劑為濃度為2%至10% (w/v)之聚乙烯吡咯啶酮K30。在一些實施例中，控制釋放劑為濃度為3%至6% (w/v)之聚乙烯吡咯啶酮K30。
如本文所用，術語「緩衝劑」係指能夠將組合物之pH維持在預定值或接近預定值的酸或鹼組分(通常為弱酸或弱鹼)。在一些實施例中，緩衝劑存在於弱酸與其共軛鹼之混合物中或存在於弱鹼與其共軛酸之混合物中。當與組合物結合使用時，「緩衝劑(buffer)」係指溶解/混合至組合物中之緩衝劑(buffering agent)。
在一些實施例中，緩衝劑係選自由以下組成之群：碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鎂、乳酸鎂、葡萄糖酸鎂、氧化鎂、鋁酸鎂、碳酸鎂、矽酸鎂、檸檬酸鎂、氫氧化鋁、氫氧化鋁/碳酸鎂、碳酸鉀、檸檬酸鉀、氫氧化鋁/碳酸氫鈉共沈澱物、氫氧化鋁鎂、檸檬酸鈉、酒石酸鈉、乙酸鈉、碳酸鈉、聚磷酸鈉、聚磷酸鉀、焦磷酸鈉、焦磷酸鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸三鈉、磷酸三鉀、偏磷酸鉀、醋酸鈣、甘油磷酸鈣、氫氧化鈣、乳酸鈣、碳酸鈣、葡萄糖酸鈣、碳酸氫鈣、檸檬酸鈣、磷酸鉀及磷酸鈉，或其任何組合。在一些實施例中，緩衝劑係選自由以下組成之群：檸檬酸、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乙酸、磷酸鈉、磷酸、抗壞血酸鈉、酒石酸、順丁烯二酸、甘胺酸、乳酸鈉、乳酸、抗壞血酸、咪唑、碳酸氫鈉及碳酸、丁二酸鈉及丁二酸、組胺酸，及苯甲酸鈉及苯甲酸，及其任何組合。在一些實施例中，緩衝劑為碳酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、鹽酸緩衝劑、乳酸緩衝劑及酒石酸緩衝劑。
在一些實施例中，緩衝劑選自由磷酸鹽緩衝劑、tris緩衝劑及甘胺酸緩衝劑組成之群。在一些實施例中，緩衝劑包含磷酸鹽緩衝鹽水。在一些實施例中，緩衝劑為磷酸鹽緩衝鹽水。
在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至4.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至5.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.5至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.5至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至5.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.5至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至5.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.5至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4至7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5至8。
在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.1。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.2。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.3。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約4.9。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.1。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.2。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.3。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.9。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.1。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.2。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.3。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約6.9。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.1。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.2。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.3。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約7.9。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約8。
在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.9至6.1。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.8至6.2。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.7至6.3。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.6至6.4。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.5至6.5。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.4至6.6。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.3至6.7。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.2至6.8。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5.1至6.9。在一些實施例中，緩衝劑之pH為約5至7。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約5 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約10 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約15 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約20 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約100 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約200 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約300 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約400 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約10 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約15 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約20 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約100 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約200 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約300 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約15 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約20 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約100 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約200 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約20 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約100 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約200 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約300 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約500 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約1 mM至約400 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約500 mM的緩衝劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約15 mM至約25 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM至約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7 mM至約40 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM至約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約2 mM至約100 mM的緩衝劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約5 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約6 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約7 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約8 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約9 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約10 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約12 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約14 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約16 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約18 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約20 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約22 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約25 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約30 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約35 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約40 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約45 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約50 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約60 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約70 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約80 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約90 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約100 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約120 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約140 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約160 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約180 mM的緩衝劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含約200 mM的緩衝劑。
在一些實施例中，緩衝劑為濃度為10至100 mM之磷酸鹽緩衝劑。在一些實施例中，緩衝劑為濃度為10至40 mM之磷酸鹽緩衝劑。
在一些實施例中，緩衝劑為濃度為10至100 mM之tris緩衝劑。在一些實施例中，緩衝劑為濃度為10至40 mM之tris緩衝劑。
在一些實施例中，緩衝劑為濃度為0.1 M至0.5 M之甘胺酸緩衝劑。在一些實施例中，緩衝劑為濃度為0.1 M至0.2 M之甘胺酸緩衝劑。
在一些實施例中，醫藥組合物包含抗生素。在一些實施例中，抗生素係選自由苯紮氯銨、苯甲醇及氯丁醇或其組合組成之群。在一些實施例中，抗生素包含苯紮氯銨。在一些實施例中，抗生素為苯紮氯銨。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約3.0% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約2.5% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約2.0% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約1.5% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約1.0% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.5% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.4% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.3% (w/v)的抗生素。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.002% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.005% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.007% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.01% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.15% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.005% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.007% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.01% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.1% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.007% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.01% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.07% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.01% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.05% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.02% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.015% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.012% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.07% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.15% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.2% (w/v)的抗生素。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.01% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.009% (w/v)至約0.011% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.008% (w/v)至約0.012% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.007% (w/v)至約0.015% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.003% (w/v)至約0.03% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.002% (w/v)至約0.05% (w/v)的抗生素。在一些實施例中，醫藥組合物包含約0.001% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。
在一些實施例中，抗生素為濃度為0.002%至0.02% (w/v)之苯紮氯銨。在一些實施例中，抗生素為濃度為0.005%至0.02% (w/v)之苯紮氯銨。
在一些實施例中，抗生素為濃度為0.001%至3.0% (v/v)之苯甲醇。在一些實施例中，抗生素為濃度為1.0%至3.0% (v/v)之苯甲醇。
在一些實施例中，抗生素為濃度為0.5%至2.0% (w/v)之氯丁醇。在一些實施例中，抗生素為濃度為1.0%至2.0% (w/v)之氯丁醇。
在一些實施例中，活性成分包含蛋白質。在一些實施例中，蛋白質包含抗體。在一些實施例中，蛋白質包含抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，蛋白質能夠治療呼吸道疾病。在一些實施例中，蛋白質為抗體或包含抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，抗體中和SARS-CoV-2。在一些實施例中，蛋白質為本文所描述之抗CoVS抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為表1中描述之抗體。在一些實施例中，蛋白質為或包含抗體B。
在一些實施例中，活性成分在醫藥組合物中之濃度為約0.1至100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約0.2 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約0.5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約1 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約2 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約3 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約7至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約8至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約10至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約20至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約50至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約0.5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約1 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約2 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約3 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約7至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約8至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約10至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約20至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約1 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約2 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約3 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約7至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約8至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約10至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約2 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約3 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約7至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約8至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約3 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約7至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約4 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約6至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約5至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約7 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約20 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約100 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.1至約50 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.2至約100 mg/ml。
在一些實施例中，活性成分在醫藥組合物中之濃度為約5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4.5至約5.5 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約4至約6 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約3至約8 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約2至約10 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約1至約25 mg/ml。在一些實施例中，活性成分之濃度為約0.5至約50 mg/ml。
可用於醫藥組合物中之各種組分的非限制性實例及其非限制性濃度範圍列於下表3中。 表3：調配物組分及濃度範圍之非限制性實例
調配物組分 例示性組分 例示性濃度範圍 例示性較佳濃度範圍 例示性較佳濃度 / 範圍
活性成分 抗體 0.1-100 mg/ml 1-30 mg/ml 5 mg/ml
低溫保護劑 海藻糖 ≤40% (w/v) 2% - 8% (w/v) 4% (w/v)
甘油 ≤40% (w/v) 1-20% (w/v)
二甲亞碸 ≤10% (w/v) 1-10% (w/v)
乙二醇 ≤40% (w/v) 4-30% (w/v)
聚乙二醇 ≤20% (w/v) 5-15% (w/v)
蔗糖 0.5 M 0.1-0.4 M
保濕劑 丙三醇 ≤30% (w/v) 2-6% (w/v) 1.7-2% (w/v)
甘露糖醇 ≤7% (w/v) 3-5% (w/v)
聚乙二醇400 ≤20% (w/v) 10-18% (w/v)
聚乙二醇4000 5-15% (w/v) 5-10% (w/v)
D-山梨糖醇 3-15% (w/v) 3-6% (w/v)
聚葡萄胺糖 0.01-3% (w/v) 0.01-1% (w/v)
木糖醇 ≤10% (w/v) 1-10% (w/v)
玻尿酸鈉 0.1-2.0% (w/v) 0.1-1.0% (w/v)
乳化劑 TWEEN 80 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v) 0.01-0.02% (w/v)
聚山梨醇酯20 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v)
卵磷脂 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v)
脫水山梨糖醇酯 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v)
單甘油酯及/或二甘油酯 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v)
硬脂醯乳酸鈉 ＜5 % (w/v) 0.005-2 % (w/v)
控制釋放劑 羥丙基甲基纖維素 0.1-5.0% (w/v) 0.1-1% (w/v) 0.02-0.1% (w/v)
聚乙烯吡咯啶酮K30 2-10% (w/v) 3-6% (w/v)
緩衝劑 磷酸鹽緩衝劑 10-100 mM 10-40 mM 20 mM
Tris緩衝劑 10-100 mM 10-40 mM
甘胺酸緩衝劑 0.1-0.5 M 0.1-0.2 M
抗生素 苯紮氯銨 0.002-0.02% (w/v) 0.005-0.02% (w/v) 0.01% (w/v)
苯甲醇 ≤3.0% (v/v) 1.0-3.0% (v/v)
氯丁醇 0.5-2.0% (w/v) 1.0-2.0% (w/v)
不受理論或機制束縛，雖然根據本申請案之實例研發的例示性醫藥組合物最初旨在經鼻內投與(例如投與至鼻黏膜)，但本發明之醫藥組合物可用於其他目的，例如經黏膜投與。在一些實施例中，醫藥組合物係用於施加至個體之黏膜。黏膜為填塞消化道、呼吸道及生殖系統中之體管及器官之軟組織。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽喉、耳、生殖器或肛門中。在一些實施例中，黏膜位於食道、肺、胃、腸、膀胱或子宮中。在一些實施例中，黏膜位於口、食道或胃中。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽、氣管或肺中。在一些實施例中，黏膜為鼻黏膜。
在一些實施例中，醫藥組合物適合於經鼻內向個體(例如哺乳動物)投與。在一些實施例中，哺乳動物為人類。
在一些實施例中，低溫保護劑為約1% (w/v)與約8% (w/v)之間的海藻糖，且保濕劑為約0.01% (w/v)與約0.1% (w/v)之間的丙三醇，且乳化劑為約1% (w/v)與約3% (w/v)之間的TWEEN 80，控制釋放劑為約0.01% (w/v)與約0.5% (w/v)之間的羥丙基甲基纖維素，且緩衝劑為約10 mM與約30 mM之間的磷酸鹽緩衝鹽水，且蛋白質為本文中(諸如表1中)所描述之抗體，諸如抗體B。
在一些實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其提供每劑量約0.0001 mg/kg至約2 mg/kg之間的有效劑量的抗體。在一些實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其向人類提供每劑量約0.4 mg之低但有效劑量的抗體。 抗CoV-S抗體及抗原結合片段
本發明提供特異性結合至CoV棘蛋白或其抗原片段之抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段。此類抗原結合蛋白可用作醫藥組合物中之活性成分，用於預防或治療冠狀病毒感染。實例包括：特異性結合至野生型-CoV棘蛋白或其抗原片段之野生型-CoV-S抗原結合蛋白，諸如野生型-CoV-S抗體及其野生型CoV-S抗原結合片段；特異性結合至alpha-CoV棘蛋白或其抗原片段之alpha-CoV-S抗原結合蛋白(alpha (B.1.1.7)-CoV-S抗原結合蛋白)，諸如alpha-CoV-S抗體(alpha (B.1.1.7)-CoV-S抗體)及其alpha-CoV-S抗原結合片段(alpha (B.1.1.7)-CoV-S抗原結合片段)；特異性結合至beta-CoV棘蛋白或其抗原片段之beta-CoV-S抗原結合蛋白(beta (B.1.351)-CoV-S抗原結合蛋白)，諸如beta-CoV-S抗體(beta (B.1.351)-CoV-S抗體)及其beta-CoV-S抗原結合片段(beta (B.1.351)-CoV-S抗原結合片段)；特異性結合至gamma-CoV棘蛋白或其抗原片段之gamma-CoV-S抗原結合蛋白(gamma (P.1)-CoV-S抗原結合蛋白)，諸如gamma-CoV-S抗體(gamma (P.1)-CoV-S抗體)及其gamma-CoV-S抗原結合片段(gamma (P.1)-CoV-S抗原結合片段)；特異性結合至delta-CoV棘蛋白或其抗原片段之delta-CoV-S抗原結合蛋白(delta (B.1.617.2)-CoV-S抗原結合蛋白)，諸如delta-CoV-S抗體(delta (B.1.617.2)-CoV-S抗體)及其delta-CoV-S抗原結合片段(delta (B.1.617.2)-CoV-S抗原結合片段)；特異性結合至omicron-CoV棘蛋白或其抗原片段之omicron-CoV-S抗原結合蛋白(omicron (BA.1或BA.2)-CoV-S抗原結合蛋白)，諸如omicron-CoV-S抗體(omicron (BA.1或BA.2)-CoV-S抗體)及其omicron-CoV-S抗原結合片段(omicron (BA.1或BA.2)-CoV-S抗原結合片段)。本發明提供特異性結合至CoV棘蛋白之RBD域的抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段。
如本文所用，術語「抗體」係指包含四條多肽鏈(藉由二硫鍵互連之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC))的免疫球蛋白分子(亦即「完整抗體分子」)以及其多聚體(例如IgM)。例示性抗體包括例如表1中所列之抗體。各重鏈包含重鏈可變區(「HVR」或「V H」)及重鏈恆定區(包含域C H1、C H2及C H3)。各輕鏈包含輕鏈可變區(「LVR」或「V L」)及輕鏈恆定區(C L)。V H區及V L區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，穿插稱為構架區(FR)之更保守區。各V H及V L包含三個CDR及四個FR，其自胺基端至羧基端以如下次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈CDR亦可稱為HCDR或CDR-H，且如上所述編號(例如，HCDR1、HCDR2及HCDR3或CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)。同樣，輕鏈CDR可稱為LCDR或CDR-L，且編號為LCDR1、LCDR2及LCDR3，或CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，根據IMGT® (國際免疫遺傳學資訊系統®)之定義(參見www.imgt.org)將胺基酸分配至各域。
在一些實施例中，抗體(或其抗原結合片段)之FR與人類生殖系序列一致，或係經天然或人工修飾的。例示性人類生殖系序列包括(但不限於) VH3-66及Vk1-33。因此，本發明提供包含在VH3-66或Vkl-33可變重鏈或輕鏈區內的表1之HCDR及LCDR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段(例如抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段)。
本發明進一步提供包含表1之HCDR及LCDR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段(例如抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段)。本發明進一步提供包含本文所描述之輕鏈與本文所描述之重鏈之組合內的表1之HVR及LVR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段(例如抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段)。
本發明包括單株抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，以及包含複數種經分離單株抗原結合蛋白之單株組合物。如本文所使用，術語「單株抗體」係指實質上均質的抗體群體，亦即除了可少量存在之可能天然存在之突變以外，包含該群體之抗體分子的胺基酸序列一致。組合物中之「複數種」此類單株抗體及片段係指一致(亦即，如上文所論述，除可以少量存在之可能的天然存在之突變以外，在胺基酸序列方面一致)抗體及片段之濃度，其高於通常在自然界中，例如在宿主生物體(諸如小鼠或人類)之血液中存在之濃度。
在一些實施例中，抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，包含重鏈恆定域，其例如為IgA型(例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)或IgM。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含IgG型重鏈恆定域。
在一些實施例中，IgG為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4型。在一些實施例中，IgG為IgG1。在一些實施例中，IgG為IgG2。在一些實施例中，IgG為IgG3。在一些實施例中，IgG為IgG4。
在一些實施例中，抗原結合蛋白質，例如抗體或抗原結合片段，包含例如κ或λ型之輕鏈恆定域。
在一些實施例中，抗體為人類抗體。如本文所用，術語「人類」抗原結合蛋白，諸如抗體，包括具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體，無論在人類細胞中抑或移植至非人類細胞，例如小鼠細胞中。參見例如US8502018、US6596541或US5789215。本發明之人類mAb可例如在CDR且尤其CDR3中包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼之胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。然而，如本文所用，術語「人類抗體」不意欲包括其中已將衍生自另一哺乳動物物種(例如，小鼠)之生殖系的CDR序列移植至人類FR序列上的mAb。術語包括在非人類哺乳動物或非人類哺乳動物之細胞中以重組方式產生的抗體。該術語不意欲包括自人類個體分離或在人類個體中產生之抗體。參見下文。
本發明包括抗CoV-S嵌合抗原結合蛋白，例如其抗體及抗原結合片段，及其使用方法。如本文中所使用，「嵌合抗體」為具有來自第一抗體之可變域及來自第二抗體之恆定域的抗體，其中該第一抗體及該第二抗體來自不同物種。(US4816567；及Morrison等人，(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855)。
術語「重組」抗原結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段，係指藉由此項技術中稱為重組DNA技術(其包括例如DNA剪接及轉殖基因表現)的技術或方法產生、表現、分離或獲得的此類分子。該術語包括在非人類哺乳動物(包括轉殖基因非人類哺乳動物，例如轉殖基因小鼠)或細胞(例如CHO細胞)表現系統或非人類細胞表現系統中表現或自重組組合人類抗體庫分離之抗體。在一些實施例中，重組抗體與自生物體(例如小鼠或人類)分離之抗體共有序列，但已經由重組DNA技術表現。此類抗體可具有不同於自生物體分離之抗體的轉譯後修飾(例如醣基化)。
在一些實施例中，活性成分包含重組及/或嵌合抗原結合蛋白。
本文所揭示之重組抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及抗原結合片段，亦可在大腸桿菌/T7表現系統中產生。在一些實施例中，編碼本發明之抗CoV-S抗體免疫球蛋白分子之核酸(例如如表1中所見)可插入基於PET之質體中且表現於大腸桿菌/T7系統中。舉例而言，本發明包括用於在宿主細胞(例如細菌宿主細胞，諸如大腸桿菌，諸如BL21或BL21DE3)中表現抗體或其抗原結合片段或其免疫球蛋白鏈的方法，其包含在亦包括編碼可操作地連接於T7啟動子之免疫球蛋白鏈之聚核苷酸的細胞中表現T7 RNA聚合酶。舉例而言，在一些實施例中，細菌宿主細胞，諸如大腸桿菌，包括編碼可操作地連接於 lac啟動子之T7 RNA聚合酶基因的聚核苷酸，且聚合酶及鏈之表現藉由將宿主細胞與IPTG (異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)一起培育誘發。參見US4952496及US5693489或Studier及Moffatt，Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol.，1986年5月5日；189(1): 113-30。
存在若干種產生重組抗體之方法，其為此項技術中已知的。US4816567中揭示了重組產生抗體之方法的一個實例。
轉形可藉由任何已知的用於將聚核苷酸(例如，DNA或RNA，包括mRNA)引入宿主細胞的方法進行。用於將異源聚核苷酸引入哺乳動物細胞之方法為此項技術中熟知的，且包括聚葡萄糖介導之轉染、磷酸鈣沈澱、凝聚胺介導之轉染、原生質體融合、電穿孔、將聚核苷酸封裝於脂質體中、脂質奈米顆粒技術、基因槍注射及將DNA直接顯微注射至核中。另外，核酸分子可藉由諸如慢病毒或腺相關病毒之病毒載體引入哺乳動物細胞。轉形細胞之方法為此項技術中所熟知的。參見例如美國專利第4,399,216號、第4,912,040號、第4,740,461號及第4,959,455號。在一些實施例中，可將本發明之抗體或其抗原結合片段以核酸形式(例如，DNA或RNA，包括mRNA)引入個體，使得個體自身的細胞產生抗體。本發明進一步提供對編碼本文所描述之抗CoV-S抗體之核苷酸序列的修飾，其引起抗體表現增加、抗體穩定性增加、核酸(例如mRNA)穩定性增加或抗體對CoV棘蛋白之親和力或特異性改良。
因此，本發明包括用於製造抗CoV-S抗原結合蛋白(諸如本發明之抗體或其抗原結合片段或其免疫球蛋白鏈)的重組方法，其包含(i)引入本文所描述之一或多個編碼抗原結合蛋白之免疫球蛋白重鏈及/或免疫球蛋白輕鏈或CDR的聚核苷酸，其中該聚核苷酸處於載體中，及/或經整合至宿主細胞染色體及/或可操作地連接於啟動子；(ii)在有利於表現聚核苷酸之條件下培養宿主細胞(例如CHO或畢赤酵母( Pichia)或巴斯德畢赤酵母( Pichiapastoris))；及(iii)視情況自宿主細胞及/或宿主細胞生長於其中之培養基分離抗原結合蛋白(例如抗體或片段)或鏈。例如，聚核苷酸可經由用諸如腺相關病毒(AAV)之載體靶向插入而整合至宿主細胞染色體中，例如，在使用基因編輯系統(例如，CRISPR (例如，CRISPR-Cas9)、TALEN、megaTAL、鋅指或Argonaute)切割染色體之後。例如，可在宿主細胞基因座，諸如白蛋白或免疫球蛋白基因體基因座處進行靶向插入。或者，可在隨機基因座處，例如使用諸如慢病毒之載體插入。當製造包含超過一條免疫球蛋白鏈之抗原結合蛋白(例如，抗體或抗原結合片段)時，例如製造包含兩條免疫球蛋白重鏈及兩條免疫球蛋白輕鏈之抗體時，此等鏈在單一宿主細胞中之共表現引起鏈例如在細胞中或細胞表面上或細胞外之締合(若此類鏈經分泌)，從而形成抗原結合蛋白(例如，抗體或抗原結合片段)。該等方法包括僅表現免疫球蛋白重鏈或免疫球蛋白輕鏈(例如，本文所論述之彼等中之任一者，包括其成熟片段及/或可變域)的方法。此類鏈可用作例如包括此類鏈之抗體或抗原結合片段之表現中的中間物。舉例而言，本發明亦包括抗CoV-S抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段，其包含：由包含本文所描述之核苷酸序列的聚核苷酸編碼之重鏈免疫球蛋白(或其可變域或包含其CDR)；及由本文所描述之核苷酸序列編碼之輕鏈免疫球蛋白(或其可變域或包含其CDR)，該抗CoV-S抗原結合蛋白為此類生產方法及視情況本文所闡述之純化方法的產物。舉例而言，在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含以下之抗體或片段：包含表1中所闡述之胺基酸序列之HVR及包含表1中所闡述之胺基酸序列之LVR，其中HVR及LVR序列係選自表1中所列之單一抗體。在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含以下之抗體或片段：包含表1中所闡述之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3，以及包含表1中所闡述之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中六個CDR序列選自表1中所列之單一抗體。在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含以下之抗體或片段：包含表1中所闡述之HC胺基酸序列的重鏈及包含表1中所闡述之LC胺基酸序列的輕鏈。
真核及原核宿主細胞，包括哺乳動物細胞，可用作表現抗CoV-S抗原結合蛋白之宿主。此類宿主細胞為此項技術中所熟知的且許多可購自美國菌種保藏中心(ATCC)。此等宿主細胞尤其包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞、3T3細胞、HEK293細胞及許多其他細胞株。哺乳動物宿主細胞包括人類、小鼠、大鼠、犬、猴、豬、山羊、牛、馬及倉鼠細胞。其他可使用之細胞株為昆蟲細胞株(例如草地黏蟲( Spodoptera frugiperda)或粉紋夜蛾( Trichoplusia ni))、兩棲動物細胞、細菌細胞、植物細胞及真菌細胞。真菌細胞包括酵母及絲狀真菌細胞，包括例如巴斯德畢赤酵母、芬蘭畢赤酵母( Pichia finlandica)、喜海藻糖畢赤酵母( Pichia trehalophila)、考拉姆畢赤酵母( Pichia koclamae)、膜醭畢赤酵母( Pichia membranaefaciens)、微小畢赤酵母( Pichia minuta) (甲醇誘導型酵母( Ogataea minuta)、林氏畢赤酵母( Pichia lindneri))、仙人掌畢赤酵母( Pichia opuntiae)、耐熱畢赤酵母( Pichia thermotolerans)、千屈菜畢赤酵母( Pichia salictaria)、松櫟畢赤酵母( Pichia guercuum)、皮傑普氏畢赤酵母( Pichia pijperi)、具柄畢赤酵母( Pichia stiptis)、甲醇畢赤酵母( Pichia methanolica)、畢赤酵母屬( Pichia sp.)、釀酒酵母( Saccharomyces cerevisiae)、酵母屬( Saccharomyces sp.)、多形漢遜酵母( Hansenula polymorpha)、克魯維酵母屬( Kluyveromyces sp.)、乳酸克魯維酵母( Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌( Candida albicans)、小巢狀麴菌( Aspergillus nidulans)、黑麴菌( Aspergillus niger)、米麴菌( Aspergillus oryzae)、里氏木黴( Trichoderma reesei)、勒克瑙金孢子菌( Chrysosporium lucknowense)、鐮刀菌屬( Fusarium sp.)、禾穀鐮孢菌( Fusarium gramineum)、鐮孢黴( Fusarium venenatum)、小立碗蘚( Physcomitrella patens)及粗糙脈孢菌( Neurospora crassa)。本發明包括經分離之宿主細胞(例如CHO細胞)，其包含抗原結合蛋白質，諸如表1之抗原結合蛋白質；或編碼此類多肽之聚核苷酸。
術語「特異性結合」係指具有與抗原(諸如CoV-S蛋白(例如，SARS-CoV-2-S)或CoV-S蛋白之RBD域(例如，RBD-SARS-CoV-2-S))之結合親和力的彼等抗原結合蛋白(例如，mAb)，藉由例如在25℃或37℃下的即時免標定生物膜層干涉測量術分析(例如Octet® HTX生物感測器)或藉由表面電漿子共振(例如BIACORETM)或藉由溶液親和力ELISA量測，該結合親和力表示為KD，至少為約10 -8M。本發明包括特異性結合至CoV-S蛋白或CoV-S蛋白之RBD域的抗原結合蛋白質。
在一些實施例中，抗體之抗原結合片段包含至少一個可變域。可變域可為任何尺寸或胺基酸組成且通常將包含與一或多個構架序列相鄰或同框之至少一個CDR。在具有與V L域相關聯的V H域的抗原結合片段中，V H域及V L域可以任何適合的配置相對於彼此定位。舉例而言，可變區可為二聚的且含有V H-V H、V H-V L或V L-V L二聚體。或者，抗體的抗原結合片段可以含有單體V H或V L域。
在一些實施例中，抗體之抗原結合片段可含有至少一個共價連接至至少一個恆定域之可變域。可在本發明之抗體之抗原結合片段內發現的可變域及恆定域之非限制性例示性組態包括：(i) V H-C H1；(ii) V H-C H2；(iii) V H-C H3；(iv) V H-C H1-C H2；(V) V H-C H1-C H2-C H3；(vi) V H-C H2-C H3；(vii) V H-C L；(Viii) V L-C H1；(ix) V L-C H2；(x) V L-C H3；(xi) V L-C H1-C H2；(xii) V L-C H1-C H2-C H3；(xiii) V L-C H2-C H3；及(xiv) V L-C L。在可變域及恆定域之任何組態(包括上文所列之例示性組態中之任一者)中，可變域及恆定域可直接彼此連接或可藉由完全或部分鉸鏈區或連接區連接。鉸鏈區可以由至少2個(例如5、10、15、20、40、60個或更多個)胺基酸組成，該等胺基酸在單一多肽分子中的相鄰可變域及/或恆定域之間產生柔性或半柔性連接。此外，本發明抗體之抗原結合片段可包含上文列出之任何可變域及恆定域組態彼此及/或與一或多個單體V H或V L域(例如藉由二硫鍵)非共價締合之均二聚體或異二聚體。
在一些實施例中，本發明提供一種經分離之蛋白質(例如抗體或其抗原結合片段)。「經分離」抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段、多肽、聚核苷酸及載體至少部分地不含來自產生其之細胞或細胞培養物的其他生物分子。此類生物分子包括核酸、蛋白質、其他抗體或抗原結合片段、脂質、碳水化合物或其他材料，諸如細胞碎片及生長培養基。經分離之抗體或抗原結合片段可進一步至少部分不含表現系統組分，諸如來自宿主細胞或其生長培養基之生物分子。一般而言，術語「經分離」不欲指此類生物分子完全不存在或水、緩衝劑或鹽不存在，或包括該等抗體或片段之醫藥調配物之組分不存在。在一些實施例中，「經分離」抗原結合蛋白質、抗體或其抗原結合片段、多肽、聚核苷酸及載體基本上不含來自產生其之細胞或細胞培養物的其他生物分子。在一些實施例中，「經分離」抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段、多肽、聚核苷酸及載體不含來自產生其之細胞或細胞培養物的其他生物分子。
術語「抗原決定基」係指與抗原結合蛋白之特定抗原結合位點，例如抗體分子之可變區(稱為互補位)相互作用的抗原決定子(例如CoV-S多肽)。單一抗原可具有超過一個抗原決定基。因此，不同抗體可與抗原上之不同區域結合且可具有不同生物作用。術語「抗原決定基」亦指抗原上B細胞及/或T細胞起反應的位點。其亦指抗原由抗體結合之區。抗原決定基可定義為結構性或功能性的。功能性抗原決定基通常為結構性抗原決定基之子組且具有直接有助於相互作用之親和力的彼等殘基。抗原決定基可為線性或構形的，亦即由非線性胺基酸構成。在一些實施例中，抗原決定基可包括作為諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基之分子之化學活性表面基團的決定子，且在一些實施例中，可具有特定三維結構特徵及/或荷質比特徵。
用於測定抗原結合蛋白(例如抗體或片段或多肽)之抗原決定基的方法包括丙胺酸掃描突變分析、肽墨點分析(Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63)、肽裂解分析、結晶研究及NMR分析。另外，可採用諸如抗原決定基切除、抗原決定基提取及抗原化學修飾之方法(Tomer (2000) Prot. Sci. 9:487-496)。可用於鑑別多肽內與抗原結合蛋白(例如抗體或片段或多肽) (例如覆蓋蛋白(coversin))相互作用之胺基酸的另一方法為藉由質譜偵測之氫/氘交換。一般而言，氫/氘交換方法涉及氘標記感興趣的蛋白質，隨後使抗原結合蛋白(例如抗體或片段或多肽)與氘標記之蛋白質結合。接下來，將CoV-S蛋白/抗原結合蛋白複合物轉移至水中，且受抗體複合物保護之胺基酸內的可交換質子以比不為界面之一部分的胺基酸內之可交換質子更慢的速率進行氘-氫反向交換。結果，形成蛋白質/抗原結合蛋白界面之一部分的胺基酸可保留氘，且因此與不包括於界面中之胺基酸相比，展現相對較高的質量。在抗原結合蛋白(例如抗體或片段或多肽)解離之後，對目標蛋白進行蛋白酶裂解誒及質譜分析，由此揭露對應於與抗原結合蛋白相互作用之特定胺基酸的氘標記殘基。參見例如Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259；Engen及Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A。
如本文所用，術語「競爭」係指結合至抗原(例如CoV-S)且抑制或阻斷另一抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)與抗原結合的抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)。該術語亦包括兩種抗原結合蛋白(例如抗體)之間在兩個方向上的競爭，亦即結合且阻斷第二抗體之結合的第一抗體，反之亦然。在一些實施例中，第一抗原結合蛋白(例如抗體)及第二抗原結合蛋白(例如抗體)可結合至同一抗原決定基。或者，第一及第二抗原結合蛋白(例如抗體)可結合至不同但例如重疊的抗原決定基，其中一者之結合例如經由位阻抑制或阻斷第二抗體之結合。抗原結合蛋白(例如抗體)之間的競爭可藉由此項技術中已知的方法來量測，例如藉由即時免標定生物膜層干涉測量術分析來量測。抗原決定基定位(例如，經由丙胺酸掃描或氫-氘交換(HDX))可用於確定兩種或更多種抗體是否為非競爭性的(例如，在棘蛋白受體結合域(RBD)單體上)、競爭相同的抗原決定基，或競爭但具有不同的微抗原決定基(例如，經由HDX鑑別)。在一些實施例中，第一及第二抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體)之間的競爭係藉由量測固定化第一抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體)(最初未與CoV-S蛋白複合)結合至與第二抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體)複合之可溶性CoV-S蛋白的能力來確定。相對於未複合的CoV-S蛋白，第一抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體)與複合的CoV-S蛋白結合之能力降低，表明第一及第二抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體)競爭。競爭程度可表示為結合減少之百分比。此類競爭可使用即時免標定生物膜層干涉測量術分析(例如在Octet RED384生物感測器(Pall ForteBio Corp.)上)、ELISA (酶聯免疫吸附分析)或SPR (表面電漿子共振)來量測。
可使用Octet RED384生物感測器(Pall ForteBio Corp.)上之即時免標定生物膜層干涉測量術分析來確定抗CoV-S抗原結合蛋白(例如單株抗體(mAb))之間的結合競爭。例如，為了確定兩種抗CoV-S單株抗體之間的競爭，可首先將抗CoV-S mAb捕獲至抗hFc抗體塗佈的Octet生物感測器尖端(Pall ForteBio Corp.，# 18-5060)上，其係藉由將尖端浸入抗CoV-S mAb (以下稱為「mAb1」)溶液進行。作為阻斷之陽性對照，隨後可將抗體捕獲之生物感測器尖端用已知的阻斷同型對照mAb (以下稱為「阻斷mAb」)飽和，其係藉由浸入阻斷mAb溶液進行。為了確定mAb2是否與mAb1競爭，隨後可將生物感測器尖端浸入已預先培育一段時間的CoV-S多肽與第二抗CoV-S mAb (以下稱為「mAb2」)之共複合溶液中，且可確定mAb1與CoV-S多肽之結合。生物感測器尖端可在實驗的每個步驟之間用緩衝液清洗。在實驗過程中可監測即時結合反應，且記錄每一步結束時的結合反應。
舉例而言，在一些實施例中，在25℃及約pH 7 (例如7.4)下，例如在緩衝劑、鹽、界面活性劑及非特異性蛋白質(例如牛血清白蛋白)存在下進行競爭分析。
通常，以某一方式經修飾之本發明之抗體或抗原結合片段保持特異性結合於CoV-S之能力，例如在活性以莫耳計表現時保持其CoV-S結合活性之至少10% (當與親本抗體相比時)。較佳地，本發明之抗體或抗原結合片段如同親本抗體一樣保持CoV-S結合親和力之至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多。亦預期本發明之抗體或抗原結合片段可包括不實質上改變其生物活性之保守或非保守胺基酸取代(稱為抗體之「保守性替代物」或「功能保守性替代物」)。
「聚核苷酸之替代物」，諸如免疫球蛋白鏈，係指包含與本文所闡述之參考胺基酸序列(例如，SEQ ID NO: 2、10、18、20、22、30、38、40、42、50、58或60)至少約70%至99.9% (例如70%、72%、74%、75%、76%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.9%)一致或類似的胺基酸序列之多肽；藉由BLAST演算法進行比較，其中演算法之參數經選擇以在各別參考序列之整個長度內在各別序列之間產生最大匹配(例如預計臨限值：10；字長：3；查詢範圍中之最大匹配：0；BLOSUM 62矩陣；間隙成本：存在值11，延伸值1；條件成分評分矩陣調整)。
聚核苷酸之「替代物」係指包含與本文所闡述之參考核苷酸序列(例如，SEQ ID NO: 1、9、17、19、21、29、37、39、41、49、57或59)至少約70%至99.9% (例如至少約70%、72%、74%、75%、76%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%)一致的核苷酸序列之聚核苷酸；藉由BLAST演算法進行比較，其中該演算法之參數經選擇以在各別參考序列之整個長度內在各別序列之間產生最大匹配(例如預期臨限值：10；字長：28；查詢範圍中之最大匹配：0；匹配/不匹配得分：1至2；間隙成本：線性)。
在一些實施例中，抗CoV-S抗原結合蛋白，例如本發明之抗體及其抗原結合片段，保卡重鏈免疫球蛋白可變區，其與表1中所闡述之HVR胺基酸序列具有至少70% (例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)胺基酸序列一致性；及/或輕鏈免疫球蛋白可變區，其與表1中所闡述之LVR胺基酸序列具有至少70% (例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)胺基酸序列一致性。
另外，替代物抗CoV-S抗原結合蛋白可包括多肽，其除了一或多個(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個或更多個)突變(諸如誤義突變(例如，保守取代)、無義突變、缺失或插入)以外包含本文所闡述之胺基酸序列。舉例而言，本發明包括抗原結合蛋白，其包括包含表1中所闡述之LVR胺基酸序列但具有此類突變中之一或多者的免疫球蛋白輕鏈替代物及/或包含表1中所闡述之HVR胺基酸序列但具有此類突變中之一或多者的免疫球蛋白重鏈替代物。在一些實施例中，替代物抗CoV-S抗原結合蛋白包括：包含LCDR1、LCDR2及LCDR3之免疫球蛋白輕鏈替代物，其中一或多個(例如1或2或3個)此類CDR具有一或多個此類突變(例如保守取代)；及/或包含HCDR1、HCDR2及HCDR3之免疫球蛋白重鏈替代物，其中一或多個(例如1或2或3個)此類CDR具有一或多個此類取代(例如保守取代)。取代可在CDR、構架或恆定區中。
本發明進一步提供替代物抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)，其包含本文所闡述之一或多個替代物CDR (例如LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2及/或HCDR3中之任一者或多者)，該等替代物CDR與例如表1之重鏈及輕鏈CDR具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.9%序列一致性。
本發明之實施例亦包括替代物抗原結合蛋白(例如抗CoV-S抗體及其抗原結合片段)，其包含免疫球蛋白VH及VL或HC及LC，其包含與本文具體闡述之對應VH、VL、HC或LC之胺基酸序列具有70%或更大(例如80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大)的總體胺基酸序列一致性或類似性的胺基酸序列，但其中此類免疫球蛋白之LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2及HCDR3不替代物且包含表1中所闡述之CDR胺基酸序列。因此，在此類實施例中，替代物抗原結合蛋白質內之CDR本身不替代物。
保守/功能性修飾之替代物抗CoV-S抗體及其抗原結合片段亦為本發明之一部分。「經保守修飾之替代物」或「保守取代」係指一種其中多肽中存在胺基酸之一或多個取代以及具有類似特徵(例如電荷、側鏈尺寸、疏水性/親水性、主鏈構形及剛性等)之其他胺基酸的替代物。此類變化通常可在不顯著破壞抗體或片段之生物活性的情況下進行。熟習此項技術者認識到，大體上，多肽之非必需區中之單胺基酸取代並不會實質更改生物活性(參見例如Watson等人(1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., 第224頁(第4版))。此外，結構上或功能上類似之胺基酸之取代不大可能顯著破壞生物活性。
具有帶有類似化學特性之側鏈的胺基酸組之實例包括1)脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；2)脂族羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；3)含醯胺側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；6)酸性側鏈：天冬胺酸及麩胺酸，及7)含硫側鏈：半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳的保守性胺基酸取代組為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。或者，保守置換為在Gonnet等人(1992) Science 256: 1443 45中所揭示的PAM250對數似然矩陣中具有正值之任何變化。
抗CoV-S抗體及其抗原結合片段之功能性保守性替代物亦為本發明之一部分。抗CoV-S抗體及其抗原結合片段(如本文所論述)之任何替代物可為「功能保守性替代物」 在一些情況下，此類功能保守性替代物亦可表徵為經保守修飾之替代物。如本文所用，「功能保守性替代物」係指其中一或多個胺基酸殘基已改變而不顯著改變抗體或片段之一或多種功能特性的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段的替代物。在一些實施例中，本發明之功能保守替代物性抗CoV-S抗體或其抗原結合片段包含替代物胺基酸序列且展現以下功能特性中之一或多者： ●  抑制冠狀病毒(例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV及/或MERS-CoV)在ACE2及/或TMPRSS2表現細胞(例如，Calu-3細胞)中之生長； ●  不顯著結合至不表現ACE2及/或TMPRSS2之MDCK/Tet-on細胞； ●  抑制冠狀病毒或冠狀病毒假病毒與ACE2及/或TMPRSS2表現細胞之結合或相互作用。 ●  活體外限制細胞(例如，Calu-3)之冠狀病毒感染(例如，藉由SARS-CoV-2、SARS-CoV及/或MERS-CoV)的傳播；及/或 ●  保護經工程改造以表現人類TMPRSS2及/或ACE2蛋白之小鼠免於由冠狀病毒感染(例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV)引起之死亡，例如其中視情況在與第二治療劑組合時，小鼠感染原本致死劑量之病毒； ●  保護經工程改造以表現人類TMPRSS2及/或ACE2蛋白之小鼠免於由冠狀病毒感染(例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV)引起之體重減輕，例如其中視情況與第二治療劑組合時，小鼠感染原本會導致體重減輕之劑量的病毒； ●  保護倉鼠免於由冠狀病毒感染(例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV)引起之死亡，例如其中視情況在與第二治療劑組合時，動物感染原本致死劑量之病毒； ●  保護倉鼠免於由冠狀病毒感染(例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV)引起之體重減輕，例如其中視情況與第二治療劑組合時，動物感染原本會導致體重減輕之劑量的病毒；及/或 ●  保護人類個體免於冠狀病毒感染。
「中和」或「拮抗劑」抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，係指以任何可偵測程度抑制CoV-S之活性的分子，例如抑制CoV-S與受體(諸如ACE2)結合，經蛋白酶(諸如TMPRSS2)裂解，或介導病毒進入宿主細胞或病毒在宿主細胞中之繁殖的能力。在一些實施例中，中和抗CoV-S抗原結合蛋白抑制CoV-S結合至受體(諸如ACE2)之能力在約15%至約25%之間、或約25%至約35%之間、或約35%至約45%之間、或約45%至約55%之間、或約55%至約65%之間、或約65%至約75%之間、或約65%至約80%之間、或約75%至約85%之間、或約85%至約95%之間、或約95%至約99%之間、或約90%至約99%之間、或約95%至約100%之間。
表1係指抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段，其包含如下文所闡述之重鏈或VH (或其替代物)及輕鏈或VL (或其替代物)；或包含：VH，該VH包含其CDR (HCDR1 (或其替代物)、HCDR2 (或其替代物)及HCDR3 (或其替代物))；及VL，該VL包含其CDR (LCDR1 (或其替代物)、LCDR2 (或其替代物)及LCDR3 (或其替代物))，例如其中免疫球蛋白鏈、可變區及/或CDR包含下文所描述之特異性胺基酸序列。
本文所描述之抗體亦包括其中VH融合至野生型IgG4 (例如其中殘基108為S)或IgG4替代物(例如其中殘基108為P)的實施例。
本發明之抗體及抗原結合片段包含免疫球蛋白鏈，包括本文所闡述之胺基酸序列，以及對抗體之細胞及活體外轉譯後修飾。舉例而言，本發明包括特異性結合於包含本文所闡述之重鏈及/或輕鏈胺基酸序列(例如HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3)之CoV-S的抗體及其抗原結合片段，以及其中一或多個胺基酸殘基經醣基化、一或多個Asn殘基經去醯胺化、一或多個殘基(例如Met、Trp及/或His)經氧化、N端Gln為焦麩胺酸鹽(pyroE)及/或C端離胺酸遺失之抗體及片段。
例示性抗SARS-CoV-2棘蛋白(SARS-CoV-2-S)抗體之胺基酸及核苷酸序列顯示於下表1：例示性序列中。 表1：例示性序列
抗體名稱 組成部分 序列 SEQ ID NO
抗體A (13G9 ；CQTS004) 胺基酸
LVR EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGRSPWTFGQGTKVEIK 16
LCDR1 QSVRSSY 10
LCDR2 GAS 11
LCDR3 QQYGRSPWT 12
HVR QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSGSAVQWVRQARGQRLEWIGWIVVGSGNTNYAQRFQERVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPYCSSTSCRDGFDIWGQGTMVTVSS 18
HCDR1 GFTFSGSA 13
HCDR2 IVVGSGNT 14
HCDR3 AAPYCSSTSCRDGFDI 15
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 17
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 19
抗體A-1 胺基酸
LVR EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGRSPWTFGQGTKVEIK 7
LCDR1 QSVRSSY 1
LCDR2 GAS 2
LCDR3 QQYGRSPWT 3
HVR QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSGSAVQWVRQARGQRLEWIGWIVVGSGDTDYAQRFQERVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPYCSSTSCRDGFDIWGQGTMVTVSS 8
HCDR1 GFTFSGSA 4
HCDR2 IVVGSGDT 5
HCDR3 AAPYCSSTSCRDGFDI 6
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 17
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 9
抗體B (58G6 ；CQTS126) 胺基酸
LVR EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLGWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLESEDFAVYYCQQYDNSPWTFGQGTKVEIK 26
LCDR1 QSVRSSY 20
LCDR2 GAS 21
LCDR3 QQYDNSPWT 22
HVR QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSSSAVQWVRQARGQHLEWIGWIVVGSGNTNYAQKFQERVTLTRDMSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPNCNSTTCHDGFDIWGQGTVVTVSS 28
HCDR1 GFTFSSSA 23
HCDR2 IVVGSGNT 24
HCDR3 AAPNCNSTTCHDGFDI 25
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 27
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 29
抗體C (510A5 ；CQTS147) 胺基酸
LVR DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWFQHKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPYTFGQGTKLEIK 36
LCDR1 QSISSY 30
LCDR2 GAS 31
LCDR3 QQSYSTPPYT 32
HVR EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNSDSIDYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDRGYEILTPASFDYWGQGTLVTVSS 38
HCDR1 GFTFDDYA 33
HCDR2 ISWNSDSI 34
HCDR3 AKDRGYEILTPASFDY 35
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC    37
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 39
抗體D (55A8 ；CQTS093) 胺基酸
LVR DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSHTFGQGTKLEIK 46
LCDR1 QSISSW 40
LCDR2 KAS 41
LCDR3 QQYNSYSHT 42
HVR QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYSFIWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTEYGDYDVSHDWGQGTLVTVSS    48
HCDR1 GGTFSSYS 43
HCDR2 IIPILGIA 44
HCDR3 ARGTEYGDYDVSHD 45
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 47
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 49
抗體E (55A8-LALA) 胺基酸
LVR DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSHTFGQGTKLEIK 50
LCDR1 QSISSW 40
LCDR2 KAS 41
LCDR3 QQYNSYSHT 42
HVR QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYSFIWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTEYGDYDVSHDWGQGTLVTVSS 52
HCDR1 GGTFSSYS 43
HCDR2 IIPILGIA 44
HCDR3 ARGTEYGDYDVSHD 45
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 51
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 53
抗體F (51D3 ；CQTS047) 胺基酸
LVR DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYADLPYTFGQGTKLQIK 66
LCDR1 QDINNY 60
LCDR2 DAS 61
LCDR3 QQYADLPYT 62
HVR EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGITVSSNYMNWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTIARDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGLLVGPTGRGLGMDVWGQGTTVTVSS 68
HCDR1 GITVSSNY 63
HCDR2 IYSGGST 64
HCDR3 AREGLLVGPGRGTLGMDV 65
LCR RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 67
HCR ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 69
其他抗體或抗原結合片段可見於例如中國專利第111909261B號、中國專利第111909263B號、中國專利第111925444B號、中國專利第111909260B號、中國專利第111925440B號、中國專利第111925441B號、中國專利公開案第114989293A號、中國專利第CN111925442B號、中國專利第CN111925443B號、WO2022037616、WO2022036788、WO2022037033中，其中每一者之內容以全文引用的方式併入本文中。其他抗體或抗原結合片段包括包含此等專利及申請案中所揭示之抗體中之任一者之HCDR1、HCDR2、HCDR3及LCDR1、LCDR2、LCDR3的抗體或抗原結合片段。
抗體或抗原結合片段之其他描述可見於研究文章：「Potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies with protective efficacy against newly emerged mutational variants」，Li等人，Nat Commun, 2021年11月2日；12(1):6304；及「A cocktail containing two synergetic antibodies broadly neutralizes SARS-CoV-2 and its variants including Omicron BA.1 and BA.2」(Zhang等人，bioRxiv, doi: 10.1101/2022.04.26.489529)，其中每一者之內容以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域(VH)，其包含： -   包含GFTFSGSA (SEQ ID NO: 13)之胺基酸序列的HCDR1； -   含有IVVGSGNT (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列的HCDR2；及 -   包含AAPYCSSTSCRDGFDI (SEQ ID NO: 15)之胺基酸序列的HCDR3。 在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域(VL)，其包含： -   包含QSVRSSY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列的LCDR1； -   包含GAS (SEQ ID NO: 11)之胺基酸序列的LCDR2；及 -   包含QQYGRSPWT (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列的LCDR3。 在一些實施例中，VH包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。在一些實施例中，VH包含與SEQ ID NO: 18具有至少95%一致性之序列，基本上由其組成或由其組成。在一些實施例中，VL包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。在一些實施例中，VL包含與SEQ ID NO: 16具有至少95%一致性之序列，基本上由其組成或由其組成。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白。在一些實施例中，SARS-CoV-2棘蛋白包含SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 78或SEQ ID NO: 80中所示之胺基酸序列或與其具有至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的序列。
在一些實施例中，抗體為IgG、IgM或IgA。在一些實施例中，抗原結合片段為Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段或單鏈Fv (scFv)分子。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係用於經鼻內、皮下、靜脈內或肌內投與。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段用於經鼻內投與。
本發明進一步提供產生本發明之抗體或抗原結合片段之方法，其包含培養包含編碼抗體或其抗原結合片段之載體的細胞及自細胞培養基收集抗體或抗原結合片段。
本發明提供本發明之抗體或抗原結合片段之組合。在一些實施例中，該組合顯示針對一或多種冠狀病毒株的協同效應。在一些實施例中，該組合顯示出針對COVID-19 Omicron BA.2、BA.2.12.1或BA.5病毒株之協同效應。在一些實施例中，組合包含至少兩種不同抗體或抗原結合片段，其各自包含表1中所列出之抗體中之一者的HCDR及LCDR。在一些實施例中，組合包含下表2中之以下實施例中之一者。在一些實施例中，組合包含至少兩種抗體及/或抗原結合片段，其各自包含根據表2之組合#1至#10中之一者之抗體的HCDR或LCDR。在一些實施例中，組合包含至少三種抗體及/或抗原結合片段，其各自包含根據表2之組合#11至#20中之一者之抗體的HCDR及LCDR。 表2：抗體及/或抗原結合片段之例示性組合
抗體及/ 或抗原結合片段之組合 包含以下之HCDR 及LCDR 之抗體#1 或抗原結合片段#1 ： 包含以下之HCDR 及LCDR 之抗體#2 或抗原結合片段#2： 包含以下之HCDR 及LCDR 之抗體#3 或抗原結合片段#3 ：
組合#1 抗體A或A1 抗體B -
組合#2 抗體A或A1 抗體C -
組合#3 抗體A或A1 抗體D或E -
組合#4 抗體A或A1 抗體F -
組合#5 抗體B 抗體C -
組合#6 抗體B 抗體D或E -
組合#7 抗體B 抗體F -
組合#8 抗體C 抗體D或E -
組合#9 抗體C 抗體F -
組合#10 抗體D或E 抗體F -
組合#11 抗體A或A1 抗體B 抗體C
組合#12 抗體A或A1 抗體B 抗體D或E
組合#13 抗體A或A1 抗體B 抗體F
組合#14 抗體A或A1 抗體C 抗體D或E
組合#15 抗體A或A1 抗體C 抗體F
組合#16 抗體A或A1 抗體D或E 抗體F
組合#17 抗體B 抗體C 抗體D或E
組合#18 抗體B 抗體C 抗體F
組合#19 抗體B 抗體D或E 抗體F
組合#20 抗體C 抗體D或E 抗體F
在一些實施例中，組合包含(i)包含表1中之抗體B之HCDR及LCDR的抗體或抗原結合片段；及(ii)包含表1中之抗體D/E之HCDR及LCDR的抗體或抗原結合片段。參見例如表2中之組合#6、#12、#17及#19中之一者。在一些實施例中，(i)包含表1中之抗體B之HCDR及LCDR的抗體或抗原結合片段與(ii)包含抗體D/E之HCDR及LCDR的抗體或抗原結合片段之比率在約1:1至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:2之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:3之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:4之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:5之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:7至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:8至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:9至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:10至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:15至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:3之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:4之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:5之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:7至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:8至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:9至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:10至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:4之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:5之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:7至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:8至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:9至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:5之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:7至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:8至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:7至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:7之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:6至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:5至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:9之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:4至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:10之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:20之間。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:15之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:20之間。在一些實施例中，該比率為約1:1。在一些實施例中，該比率為約1:1.1。在一些實施例中，該比率為約1:1.3。在一些實施例中，該比率為約1:1.5。在一些實施例中，該比率為約1:1.7。在一些實施例中，該比率為約1:2。在一些實施例中，該比率為約1:2.2。在一些實施例中，該比率為約1:2.5。在一些實施例中，該比率為約1:2.7。在一些實施例中，該比率為約1:3。在一些實施例中，該比率為約1:3.5。在一些實施例中，該比率為約1:4。在一些實施例中，該比率為約1:4.5。在一些實施例中，該比率為約1:5。在一些實施例中，該比率為約1:5.5。在一些實施例中，該比率為約1:6。在一些實施例中，該比率為約1:6.5。在一些實施例中，該比率為約1:7。在一些實施例中，該比率為約1:7.5。在一些實施例中，該比率為約1:8。在一些實施例中，該比率為約1:8.5。在一些實施例中，該比率為約1:9。在一些實施例中，該比率為約1:9.5。在一些實施例中，該比率為約1:10。在一些實施例中，該比率為約1:12。在一些實施例中，該比率為約1:14。在一些實施例中，該比率為約1:16。在一些實施例中，該比率為約1:18。在一些實施例中，該比率為約1:20。在一些實施例中，該比率在約1:1至約1:8之間。在一些實施例中，該比率在約1:2至約1:6之間。在一些實施例中，該比率在約1:3至約1:5之間。在一些實施例中，該比率在約1:3.5至約1:4.5之間。在一些實施例中，該比率為約1:4。 醫藥組合物之製備
在一些實施例中，為了製備本文所描述之醫藥組合物，將本文所描述之蛋白質與本文所描述之低溫保護劑、保濕劑、乳化劑、控制釋放劑及/或緩衝劑摻合。在一些實施例中，為了製備抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體及其抗原結合片段(例如表1))之醫藥組合物，將抗原結合蛋白與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑摻合。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984)；Hardman等人(2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basisof Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.；Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott、Williams及Wilkins, New York, N.Y.；Avis等人(編) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY；Lieberman等人(編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY；Lieberman等人(編) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY；Weiner及Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y。在一些實施例中，醫藥組合物為無菌的。此類組合物為本發明之一部分。
本發明之範疇包括包含抗CoV-S抗原結合蛋白(例如，抗體或其抗原結合片段(例如，表1))之乾化(例如，凍乾)組合物或其包括醫藥學上可接受之載劑但實質上無水之醫藥組合物。本發明之範疇亦包括經提供作為水溶液或懸浮液之一部分的蛋白質。
投與模式可變化。在一些實施例中，投與途徑包括鼻內、吸入、吹入及經口。在一些實施例中，投與途徑包括非經腸、肌內及皮下。
在一些實施例中，本發明提供對本文所描述之抗體之鼻內投與。在一些實施例中，本發明提供對本文所描述之抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或其抗原結合片段))之鼻內投與。在一些實施例中，本發明提供對本文所描述之抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或其抗原結合片段))之吸入投與。在一些實施例中，本發明提供對抗原結合蛋白(例如本文所描述之抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或其抗原結合片段))之吹入投與。
在本發明之一實施例中，本發明之抗體(例如本文所描述之抗體(例如表1之抗體))與一或多種其他治療劑聯合投與。
在一些實施例中，本發明之抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)連同另一試劑可調配成單一組合物以例如用於同時遞送，或分別調配成兩種或更多種組合物(例如套組)。各組分可在與投與另一組分時不同的時間投與至個體；例如，每次投與可在給定時段內以各間隔非同時地(例如分開或依序)給予。此外，可藉由相同或不同的途徑將分開的組分投與至個體，例如其中抗CoV-S抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本發明提供一種容器(例如，塑膠或玻璃小瓶，例如具有蓋或層析管柱、空心孔針或注射器筒)，其包含：抗CoV-S抗原結合蛋白中之任一者，例如抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或抗原結合片段)；多肽(例如，表1之HC、LC、VH或VL)；或本文所闡述之聚核苷酸或載體，或其包含藥學上可接受之載劑之醫藥學上可接受之醫藥組合物。
在一些實施例中，本發明亦提供一種注射裝置，其包含一或多種特異性結合至CoV-S之抗原結合蛋白(例如抗體或抗原結合片段)(例如表1之抗原結合蛋白)或其醫藥組合物。注射裝置可包裝成套組。注射裝置為經由非經腸途徑(例如肌內、皮下或靜脈內)將物質引入個體體內之裝置。例如，注射裝置可為注射器(例如，預填充有醫藥組合物，諸如自動注射器)，其例如包括：用於容納待注射流體(例如，包含抗體或其片段或醫藥組合物)之針筒或筒；用於刺穿皮膚及/或血管以注射流體之針；及用於推動流體離開針筒且通過針孔之推桿。在一些實施例中，包含來自本發明之組合之抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)或其醫藥組合物之注射裝置為靜脈內(IV)注射裝置。此種類置可在可與管連接之套管或套管針(trocar)/針中包括抗原結合蛋白或其醫藥組合物，該管可連接至用於容納經由套管或套管針/針引入個體體內之流體(例如，生理食鹽水)的袋或儲集器。在一些實施例中，在套管針及套管插入個體靜脈中之後，可將抗體或片段或其醫藥組合物引入裝置中，且自插入的套管移除套管針。IV裝置可例如插入周邊靜脈(例如，手或臂中)；上腔靜脈或下腔靜脈，或心臟右心房內(例如，中心IV)；或鎖骨下靜脈、頸內靜脈或股靜脈，且例如前進至心臟，直至其到達上腔靜脈或右心房(例如，中心靜脈導管)。在一些實施例中，注射裝置為自動注射器、噴射注射器或外部輸液泵。噴射注射器使用穿透表皮之高壓狹窄液體射流將抗體或片段或其醫藥組合物引入個體體內。外部輸液泵為將抗體或其片段或醫藥組合物以受控量遞送至個體體內的醫療裝置。可以電方式或以機械方式對外部輸注泵供以動力。不同泵以不同方式操作，例如注射器泵將流體保持在注射器之儲集器中，且可移動活塞控制流體遞送，彈性泵將流體保持在可拉伸氣囊儲集器中，且來自氣囊之彈性壁的壓力驅動流體遞送。在蠕動泵中，一組滾筒沿可撓性導管長度向下夾捏，推動流體向前。在多通道泵中，流體可自多個儲集器以多個速率遞送。 投與
本發明提供投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白(例如表1之抗原結合蛋白)的方法，其包含將該抗原結合蛋白質引入個體(例如人類)體內。舉例而言，該方法包含人類個體經由鼻內、吸入或吹入途徑攝入本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白。在一些實施例中，本文所描述之抗體係經鼻內投與至人類個體。在一些實施例中，抗體A或抗體B或抗體C或抗體D或抗體E或抗體F或其任何兩個或三個或四個抗體之組合係經鼻內投與至人類個體。在一些實施例中，抗體B係經鼻內投與至人類個體。
本發明提供投與抗CoV-S抗原結合蛋白(例如抗體或其抗原結合片段)(例如表1之抗體或其抗原結合片段)之方法，其包含將蛋白質引入個體體內。例如，該方法包含用注射器之針刺穿個體身體且將抗原結合蛋白注射至個體體內，例如注射至個體之靜脈、動脈、腫瘤、肌肉組織或皮下組織中。
本發明提供用於向個體之鼻腔或黏膜投與醫藥組合物或一或多種抗體或抗原結合片段之方法。在一些實施例中，醫藥組合物或一或多種抗體或抗原結合片段係向黏膜位置投與。黏膜為填塞消化道、呼吸道及生殖系統中之體管及器官之軟組織。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽喉、耳、生殖器或肛門中。在一些實施例中，黏膜位於食道、肺、胃、腸、膀胱或子宮中。在一些實施例中，黏膜位於口、食道或胃中。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽、氣管或肺中。在一些實施例中，黏膜為鼻黏膜。在一些實施例中，醫藥組合物或一或多種抗體或抗原結合片段係經鼻內投與。 治療方法
在一個態樣中，本發明提供預防有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或其組合。
在一個態樣中，本發明提供治療有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或其組合。
在一些實施例中，醫藥組合物係投與至個體之黏膜。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽喉、耳、生殖器或肛門中。在一些實施例中，黏膜位於食道、肺、胃、腸、膀胱或子宮中。在一些實施例中，黏膜位於口、食道或胃中。在一些實施例中，黏膜位於鼻、口、咽、氣管或肺中。在一些實施例中，黏膜為鼻黏膜。
在一些實施例中，投與為鼻內投與。
在一些實施例中，投與係在任何疾病症狀發作之前開始。
在一些實施例中，醫藥組合物為疫苗。在一些實施例中，疫苗包含蛋白質抗原作為活性成分。
在一些實施例中，醫藥組合物包含中和感染媒介物(例如病毒)之活性成分(例如抗體)。
在一些實施例中，投與係在至少一種疾病症狀發作之後開始。在一些實施例中，症狀為呼吸道症狀。在一些實施例中，呼吸道症狀為過敏、鼻塞、鼻感染或其組合。
在一些實施例中，該疾病係由病毒、細菌、真菌或其組合引起之呼吸道感染。在一些實施例中，疾病為病毒感染。在一些實施例中，疾病為慢性病毒感染。在一些實施例中，疾病為急性病毒感染。在一些實施例中，疾病為冠狀病毒感染。在一些實施例中，疾病為SARS-CoV-2感染。
在一些實施例中，本發明提供治療或預防病毒感染(例如冠狀病毒感染)的方法，該方法係藉由向需要此類治療或預防之個體(例如人類)投與治療有效量之醫藥組合物(例如抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段(例如表1之抗體或抗原結合片段))中之活性成分進行。
可藉由向個體投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白治療或預防個體之冠狀病毒感染。
用於治療或預防病毒感染之抗原結合蛋白(例如抗體或抗原結合片段(例如表1之抗體或抗原結合片段))之有效或治療有效劑量係指足以減輕或預防經治療之個體之感染的一或多種病徵及/或症狀(無論藉由誘導此類病徵及/或症狀之消退或消除抑或藉由抑制此類病徵及/或症狀之進展)的抗體或片段之量。劑量可根據待投與之個體的年齡及身材、目標疾病、病狀、投與途徑及其類似者而變化。在一些實施例中，用於治療或預防例如成人個體之病毒感染的本發明之抗體或其抗原結合片段之有效或治療有效劑量為每劑量約0.01 mg至約200 mg。
在一些實施例中，每次投與時將約0.01 mg至約200 mg之抗原結合蛋白遞送至人類之鼻腔。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.05 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約0.1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約0.2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約0.3 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約2 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約5 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約10 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約30 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約100 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約0.2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約0.3 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約2 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約5 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約10 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約30 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約0.3 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約2 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約5 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約10 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.3 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約2 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約5 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約2 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約10 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約30 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約100 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約200 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.02 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.03 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.04 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.06 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.07 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.08 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.09 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.12 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.14 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.17 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.23 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.27 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.35 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.4 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.45 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.6 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.7 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.8 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.9 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.01 mg至約5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.05 mg至約2 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.1 mg至約1 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.15 mg至約0.75 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.2 mg至約0.6 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.25 mg至約0.5 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.3 mg至約0.4 mg。在一些實施例中，每次投與之劑量為約0.35 mg.
在一些實施例中，向人類鼻腔投與約0.01至2 mL之醫藥組合物；亦即，每次投與之體積為約0.01 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.02 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.04 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.06 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.08 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.8 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.5 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.04 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.06 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.08 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.8 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.06 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.08 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.8 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.08 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.08 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.06 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.04 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.02 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.01 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.05 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.15 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.25 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.3 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.7 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.9 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.3 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.4 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.6 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.7 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約1.9 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.1 mL至約2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.2 mL至約1.5 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.3 mL至約1.2 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.4 mL至約1 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.5 mL至約0.9 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.6 mL至約0.8 mL。在一些實施例中，每次投與之體積為約0.7 mL。
在一些實施例中，藉由噴鼻劑向鼻腔投與約0.01至2 mL之醫藥組合物。
視感染之可能性及/或之嚴重程度而定，可調整治療之頻率及持續時間。在一些實施例中，本發明之醫藥組合物或抗原結合蛋白可以初始劑量投與，隨後以一或多種第二劑量(例如一天一次、一天兩次、一天3次、一天4次，至少一天一次)投與。在一些實施例中，初始劑量之後可投與第二種或複數種後續劑量，其量可與初始劑量之量大致相同或小於初始劑量之量，其中後續劑量間隔至少1天至3天、至少一週、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少7週、至少8週、至少9週、至少10週、至少12週、或至少14週。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至2天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至3天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至4天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至5天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約5至7天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約7至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約10至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約14至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約20至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至3天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至4天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至5天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至7天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約5至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約7至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約10至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約14至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至4天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至5天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至7天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約5至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約7至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約10至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至5天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至7天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約5至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約7至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至7天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約5至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至10天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約4至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至14天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約3至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1至20天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約2至30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與不超過約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天。
在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白經投與約7至14天。
在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約1至10次向個體投與，諸如一天1至2次、1至3次、1至4次、1至5次、1至6次、1至7次、1至8次、1至9次、2至3次、2至4次、2至5次、2至6次、2至7次、2至8次、2至9次、2至10次、3至4次、3至5次、3至6次、3至7次、3至8次、3至9次、3至10次、4至5次、4至6次、4至7次、4至8次、4至9次、4至10次、5至6次、5至7次、5至8次、5至9次、5至10次、6至7次、6至8次、6至9次、6至10次、7至8次、7至9次、7至10次、8至9次、8至10次或9至10次。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約1至6次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約2至4次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約2至3次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約3至4次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約一次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約兩次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約3次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約4次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約5次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天約6次向個體投與。在一些實施例中，醫藥組合物或抗原結合蛋白係一天不超過6次、5次、4次、3次、2次或1次向個體投與。
如本文所用，術語「個體」係指例如需要預防及/或治療疾病或病症(諸如病毒感染或癌症)之哺乳動物(例如，大鼠、小鼠、貓、犬、牛、豬、綿羊、馬、山羊、兔)，較佳人類。個體可具有病毒感染，或易罹患感染。易罹患感染之個體，或感染(例如冠狀病毒或流感病毒)風險可能升高的個體，包括由於自體免疫性疾病而免疫系統受損之個體、接受免疫抑制療法(例如在器官移植之後)之個體、患有人類免疫不全症候群(HIV)或後天性免疫不全症候群(AIDS)之個體、患有消耗或破壞白血球之貧血症類型之個體、接受放射或化學療法之個體或患有發炎性病症之個體。另外，非常年輕(例如，5歲或以下)或老年(例如，65歲或以上)之個體的風險增加。此外，由於接近疾病爆發地，個體可能有被病毒感染之風險，例如個體居住在人口稠密的城市或靠近已確認或疑似感染病毒之個體，或就業選擇，例如醫院工作人員、醫藥研究人員、前往感染地區之旅行者或飛行常客。
「治療(treat/treating)」意謂向具有疾病或感染(例如病毒感染)之一或多種病徵或症狀的個體投與包含活性成分(例如本發明(例如表1)之抗體或抗原結合片段)的組合物，其中活性成分當以有效或治療有效量或劑量向該個體投與時有效(如本文所論述)。
本發明亦涵蓋向由患病(例如病毒感染)風險之個體預防性投與包含活性成分(例如本發明(例如表1)之抗體或其抗原結合片段)之組合物以預防此類疾病。基於被動抗體之免疫預防已被證明為預防個體病毒感染的有效策略。參見例如Berry等人，Passive broad-spectrum influenza immunoprophylaxis. Influenza Res Treat. 2014; 2014:267594. Epub 2014年9月22日；及Jianqiang等人，Passive immune neutralization strategies for prevention and control of influenza A infections, Immunotherapy. 2012年2月；4(2): 175-186；Prabhu等人，Antivir Ther. 2009;14(7):911-21, Prophylactic and therapeutic efficacy of a chimeric monoclonal antibody specific for H5 hemagglutinin against lethal H5N1 influenza。
「預防(prevent/preventing)」意謂向個體投與包含活性成分(例如，本發明(例如表1)之抗體或抗原結合片段)之組合物以抑制個體體內之疾病(例如病毒感染)之表現，其中活性成分當以有效或治療有效量或劑量向個體投與時有效(如本文所論述)。
在一些實施例中，個體病毒感染之病徵或症狀為病毒在個體體內的存活或增殖，例如藉由病毒力價分析測定(例如，冠狀病毒在受精雞蛋中之繁殖或冠狀病毒棘蛋白分析)。本文論述了病毒感染之其他病徵及症狀。
如上所述，在一些實施例中，個體可為非人類動物，且本文所論述之活性成分或抗原結合蛋白(例如抗體及抗原結合片段)可在獸醫學情形下用於治療及/或預防非人類動物(例如，貓、犬、豬、牛、馬、山羊、兔、綿羊及其類似動物)之疾病。
本發明提供一種治療或預防有需要個體(例如人類)中之病毒感染(例如冠狀病毒感染)或誘導病毒感染之至少一種病徵或症狀之消退或消除或抑制其進展的方法，該至少一種病徵或症狀諸如係發熱或感到熱/冷、咳嗽；喉嚨痛；流鼻涕或鼻塞；打噴嚏；肌肉痛或身體痛；頭痛；疲乏(疲倦)；嘔吐；腹瀉；呼吸道感染；胸悶；氣促；支氣管炎；及/或肺炎，該病徵或症狀繼發於病毒感染，該方法係藉由向該個體投與治療有效量之活性成分(例如抗CoV-S抗原結合蛋白(例如表1之抗原結合蛋白))進行，例如藉由向個體體內投與活性成分進行。
在一些實施例中，本發明提供一種治療呼吸道感染之方法，該方法包含經鼻內向患有呼吸道感染之哺乳動物投與本文所描述之活性成分(例如抗體)，由此治療呼吸道感染。在一些實施例中，本發明提供一種治療SARS-CoV-2感染之方法，該方法包含經鼻內向感染SARS-CoV-2之哺乳動物投與本文所描述之活性成分(例如抗體)，由此治療SARS-CoV-2感染。在一些實施例中，本發明提供一種治療SARS-CoV-2感染之方法，該方法包含向感染SARS-CoV-2之哺乳動物投與活性成分(例如抗體)，由此治療SARS-CoV-2感染。在一些實施例中，本發明提供一種向鼻腔中遞送高局部濃度之活性成分(例如抗體)同時在血液循環中暴露較低(全身暴露)的方法。在一些實施例中，活性成分包含抗體或其抗原結合片段。 抗體之診斷用途
本發明(例如表1)之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段，可用於偵測及/或量測樣本中之CoV-S。CoV-S之例示性分析可包括例如使樣本與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白接觸，其中抗CoV-S抗原結合蛋白經可偵測標記或報導分子標記或用作捕獲配位體以自樣本選擇性單離CoV-S。與CoV-S複合之抗CoV-S抗原結合蛋白的存在表明樣本中存在CoV-S。或者，未標記之抗CoV-S抗體可與自身可偵測地標記之二級抗體組合。可偵測標記或報導分子可為放射性同位素，諸如 3H、 14C、 32P、 35S或 125I；螢光或化學發光部分，諸如異硫氰酸螢光素或若丹明(rhodamine)；或酶，諸如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化酶或螢光素酶。可用於偵測或量測樣本中之CoV-S的特定例示性分析包括中和分析、酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)及螢光活化細胞分選(FACS)。因此，本發明包括一種用於偵測樣本中棘蛋白多肽之存在的方法，其包含使樣本與抗CoV-S抗原結合蛋白接觸且偵測CoV-S/抗CoV-S抗原結合蛋白的存在，其中複合物的存在表明存在CoV-S。
本發明(例如表1)之抗原結合蛋白可用於西方墨點法或免疫蛋白質墨點程序中以偵測樣本中CoV-S或其片段之存在。此類程序形成本發明之一部分且包括例如以下步驟： (1)提供包含待測試是否存在CoV-S之樣本的膜或其他固體受質，例如視情況包括以下步驟：使用此項技術中已知之方法(例如半乾墨點法或槽式墨點法)，將來自待測試否存在CoV-S之樣本(例如來自樣本中之蛋白質的PAGE或SDS-PAGE電泳分離)的蛋白質轉移至膜或其他固體受質上；及使待測試是否存在CoV-S或其片段之膜或其他固體受質與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白質接觸。此類膜可以採取例如硝化纖維素或乙烯基類(例如，聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluorid；PVDF))膜的形式，非變性PAGE (聚丙烯醯胺凝膠電泳)凝膠或SDS-PAGE (十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳)凝膠中待測試是否存在CoV-S之蛋白質已轉移至該膜(例如，在凝膠中之電泳分離後)。在使膜與抗CoV-S抗原結合蛋白接觸之前，視情況例如用脫脂奶粉或其類似物阻斷膜以結合膜上的非特異性蛋白結合位點。 (2)將膜洗滌一或多次，以移除未結合的抗CoV-S抗原結合蛋白及其他未結合物質；及 (3)偵測結合的抗CoV-S抗原結合蛋白。
偵測到結合的抗原結合蛋白表明CoV-S蛋白存在於膜或受質上以及樣本中。可藉由使抗原結合蛋白與經可偵測標記之二級抗體(抗免疫球蛋白抗體)結合及隨後偵測二級抗體標記的存在來偵測結合的抗原結合蛋白。
本文所揭示之抗CoV-S抗原結合蛋白(例如，抗體及抗原結合片段(例如表1之抗體及抗原結合片段))亦可用於免疫組織化學。此類方法形成本發明之一部分且包括例如 (1)使待測試是否存在CoV-S蛋白之組織與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白接觸；及 (2)偵測組織上或組織中之抗原結合蛋白。
若抗原結合蛋白本身經可偵測標記，則其可直接偵測。或者，抗原結合蛋白可由可偵測標記之二級抗體結合，其中隨後偵測標記。 套組
本發明進一步提供包含一或多種組分之套組，其包括(但不限於)適合於經鼻內投與的本文所描述之醫藥組合物，及用於精確遞送該鼻內醫藥組合物之經鼻投與裝置。在一些實施例中，經鼻投與裝置為鼻泵裝置。在一些實施例中，經鼻投與裝置藉由單次或多次致動(例如0.1毫升/噴霧)將約0.01毫克/劑量至約20毫克/劑量的本文所描述之鼻內醫藥組合物遞送至各鼻孔，向各鼻孔噴霧兩次1 mg/mL抗體(總計0.4 mL)，得到0.4毫克/劑量。
在一些實施例中，套組包含適合於鼻內投與的本文所描述之醫藥組合物及經鼻投與裝置。在一些實施例中，經鼻投與裝置為鼻泵裝置。在一些實施例中，本發明提供一種套組，其包含適合於鼻內投與的本文所描述之醫藥組合物及經鼻投與裝置以及套組之使用說明書。
當利用適當的產品遞送設計時，本發明之鼻內組合物為最有效的。較佳之產品設計包括遞送系統(諸如瓶及泵)內所含之本發明組合物，該遞送系統用於在投與後經鼻遞送呈噴霧液滴之霧狀物形式之調配物以塗佈鼻腔之黏膜。用於本發明之此類產品之較佳泵為定量多劑量泵；然而，單個單位劑量容器亦為可接受的以將本文所描述之鼻內醫藥組合物遞送至鼻腔。泵之選擇係基於適合於局部遞送至鼻黏膜之所需劑量/噴霧體積及噴霧模式。在本發明之一些實施例中，組合物可有效地容納於包含裝配有蓋子之瓶子的包裝中，且該蓋子可在泵頭上擰緊或扣入或藉由泵頭密封，且藉由設計用於鼻內施用之定量噴霧泵以每次按壓約0.02至0.2 ml之體積遞送。本發明之適合組合物包括以組合物之總重量計約0.02毫克/劑量至約200毫克/劑量的本文所描述之鼻內醫藥調配物。
本發明進一步提供包含一或多種組分之套組，該一或多種組分包括(但不限於)抗CoV-S抗原結合蛋白，例如如本文所論述之抗體或抗原結合片段(例如表1之抗體或抗原結合片段)以及一或多種其他組分，該等其他組分視情況包括另一治療劑。
在一些實施例中，本發明之套組包括用於非經腸投與至個體之醫藥組合物及用於進行此類投與之裝置(例如注射裝置)。舉例而言，套組可包括如上文所論述的含有抗CoV-S抗原結合蛋白(例如本發明之抗體或其抗原結合片段(例如表1之抗體或其抗原結合片段))的一或多種皮下注射針或其他注射裝置。
套組可包括藥品說明書，其包括關於套組中之醫藥組合物及劑型之資訊。一般而言，此類資訊輔助患者及醫師有效且安全地使用所密封之醫藥組合物及劑型。例如，關於本發明組合之以下資訊可在藥品說明書中提供：藥物動力學、藥效學、臨床研究、功效參數、適應症及用法、禁忌症、警告、注意事項、不良反應、過量、適當劑量及投與、如何提供、適當的儲存條件、參考資料、製造商/分銷商資訊以及專利資訊。 棘蛋白序列
野生型SARS-CoV-2之棘蛋白的序列係根據SEQ ID NO: 70： MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTF]KCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
野生型SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 71： RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF
alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2之棘蛋白的序列係根據SEQ ID NO: 72： MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAISGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDI DDTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQ GVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNS HRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIP INFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDIL ARLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITT HNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
alpha (B.1.1.7) SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 73： RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF
beta (B.1.351) SARS-CoV-2之棘蛋白的序列係根據SEQ ID NO: 74： MFVFLVLLPLVSSQCVN FTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRF ANPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVR GLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG NIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGV KGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQ GVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLG VENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVL KGVKLHYT
beta (B.1.351) SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 75： RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG NIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGV KGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF
gamma (P.1) SARS-CoV-2之棘蛋白之序列係根據SEQ ID NO: 76： MFVFLVLLPLVSSQCVN FT NRTQLP SAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCN YPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNL SEFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG TIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGV KGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQ GVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAE YVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAA IKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINAS FVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
gamma (P.1) SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 77： RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG TIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGV KGFNCYFPLQSYGFQPT YGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF
delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2之棘蛋白之序列係根據SEQ ID NO: 78： MFVFLVLLPLVSSQCVNL RTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFL DVYYHKNNKSWMES GVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNY RYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS KPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQ GVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNS RRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQ NVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
delta (B.1.617.2) SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 79： RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNY RYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS KPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF
omicron (BA.1) SARS-CoV-2之棘蛋白之序列係根據SEQ ID NO: 80： MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFH VISGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFAS IEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFL DHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPI IVR EPEDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPF DEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYN LA PF FTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG NIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSN KLDSKV SGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAG NKPCNGV AGFNCYFPL RSY SF RPT YGVG HQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGL KGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQ GVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAE YVNNSYECDIPIGAGICASYQTQT KS HRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQL KRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIK YFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKF KGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVN HNAQALNTLVKQLSS KFGAISSVLNDI FSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT
omicron (BA.1) SARS-CoV-2之棘蛋白之RBD域的序列係根據SEQ ID NO: 81： RVQPTESIVRFPNITNLCPF DEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYN LA PF FTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTG NIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSN KLDSKV SGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAG NKPCNGV AGFNCYFPL RSY SF RPT YGVG HQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNF 實例
提出以下實例以便為一般熟習此項技術者提供如何製得及使用本發明之方法及組合物之完整揭示內容及描述，且不意欲限制本發明人視作其揭示內容之範疇。已努力確保關於所用數字(例如量、溫度等)之準確性，但應考慮一些實驗誤差及偏差。除非另外指明，否則份數為重量份，分子量為平均分子量，溫度以攝氏度計，室溫為約25℃，且壓力為在大氣壓下或接近大氣壓。 實例1  抗體B噴鼻劑組合物
抗體B之活性成分為IgG1抗體，且劑型為噴鼻劑，其規格為5 mg/mL且每次按壓70 μL。賦形劑為：磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、Tween 80、海藻糖、甘油及羥丙基甲基纖維素。所用賦形劑為所有審批通過的具有已知安全性之賦形劑。參見表4A。 表4A.鼻內調配物賦形劑
輔助材料 強度
海藻糖 4% (w/v)
Tween 80 0.02% (w/v)
磷酸鹽緩衝劑 20 mM
丙三醇 1.7% (w/v)
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v)
劑量研究
利用上文之調配物製造不同濃度(1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL及10 mg/mL)之抗體B，如表4B中所示： 表4B：抗體B之調配物
材料 濃度 10 mL 之總量
抗體 1 mg/mL 10 mg
海藻糖 4% (w/v) 0.4 g
Tween 80 0.02% (w/v) 2 mg
磷酸鹽緩衝劑 20mM 10 mL
丙三醇 1.7% (w/v) 0.17 g
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v) 10 mg
材料 濃度 10 mL 之總量
抗體 2 mg/mL 20 mg
海藻糖 4% (w/v) 0.4 g
Tween 80 0.02% (w/v) 2 mg
磷酸鹽緩衝劑 20mM 10 mL
丙三醇 1.7% (w/v) 0.17 g
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v) 10 mg
材料 濃度 10 mL 之總量
抗體 5 mg/mL 50 mg
海藻糖 4% (w/v) 0.4 g
Tween 80 0.02% (w/v) 2 mg
磷酸鹽緩衝劑 20mM 10 mL
丙三醇 1.7% (w/v) 0.17 g
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v) 10 mg
材料 濃度 10 mL 之總量
抗體 10 mg/mL 100 mg
海藻糖 4% (w/v) 0.4 g
Tween 80 0.02% (w/v) 2 mg
磷酸鹽緩衝劑 20mM 10 mL
丙三醇 1.7% (w/v) 0.17 g
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v) 10 mg
材料 濃度 10 mL 之總量
抗體 20 mg/mL 200 mg
海藻糖 4% (w/v) 0.4 g
Tween 80 0.02% (w/v) 2 mg
磷酸鹽緩衝劑 20mM 10 mL
丙三醇 1.7% (w/v) 0.17 g
羥丙基甲基纖維素 0.1% (w/v) 10 mg
將濃度為約5 mg/mL之水溶液中之抗體B一天兩次經鼻噴霧至食蟹獼猴，持續14天，每劑量0.38 mL。收集血液樣本及鼻拭子樣本。測定樣本中抗體B之濃度( 圖 1G)。鼻腔中抗體B之濃度平均比抗體投與12小時內之循環血液中高至少約50倍。經由鼻噴霧投與抗體B在鼻腔中提供高局部濃度之抗體B，該高局部濃度比SARS-CoV-2病毒之50%中和所需的抗體B濃度(IC 50)高約1000倍，而同時保持低全身暴露量以改良安全性。 穩定性測試
為了驗證抗體B是否具有可用作藥物之儲存穩定性，此實驗使用超高效液相層析-尺寸排阻層析法(UPLC-SEC)來測定抗體含量。結果顯示約1 mg/ml之抗體B溶液在37℃下儲存31天之後穩定，且不會發生抗體分解或聚合。 實例2  動物保護實驗— 細胞及病毒
將Vero (目錄號CCL-81, ATCC)、Vero E6 (目錄號ATCC® CRL-1586™)、293T細胞(目錄號GDC187，CCTCC)、L-929 (目錄號GDC034，CCTCC)、HEp-2 (目錄號GDC004，CCTCC)及Huh7細胞(目錄號，GDC134，CCTCC)在37℃及5% CO 2下在具有10% FBS (Gibco)、每毫升100個單位的青黴素及100 μg/ml鏈黴素(Gibco)的DMEM (Gibco)中進行培育。將OVCAR-3細胞(目錄號TCHu228，CCTCC)在37℃及5%CO 2下在具有20%FBS的RPMI培養基1640 (Gibco)中進行培養。使用Freestyle 293表現培養基(Invitrogen)，在培育箱中在37℃及8% CO 2下，隨著以180 rpm/min震盪來培養HEK293F細胞(Thermo)。最初自在2021年6月自印尼至武漢旅遊的33歲男性的拭子樣本中分離出嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2，病毒株：GWHBEBW01000000)。此研究中涉及真正的SARS-CoV-2之所有方法均在生物安全3級(BSL-3)設施中進行。 倫理學陳述
在此研究中，將二十四隻雌性敍利亞黃金倉鼠(五至六週齡)隨機分配至不同組。根據生物安全3級(BSL-3)設施之標準操作程序進行病毒感染。動物實驗之所有程序符合實驗室動物之護理及使用建議。 向倉鼠投與
用異氟醚麻醉之後，在100 μl PBS中用每隻動物10 4個PFU之Delta及Omicron變異體經鼻內攻擊各組6隻雌性敍利亞黃金倉鼠。對於預防組(第1組)，在攻擊之前30 min經鼻內向倉鼠投與100 μl抗體B (針對Delta攻擊為5 mg/kg且針對Omicron攻擊為15 mg/kg)，且在攻擊後24 h及48 h再給予兩個劑量。亦在活體內治療實驗中評定抗體B之活性。或者，在攻擊後3 h經鼻內向倉鼠投與100 μl的5 mg/kg (Delta攻擊)或15 mg/kg (Omicron攻擊)抗體B (第2組)或PBS (第3組，僅在Delta攻擊而非omicron攻擊中確定該組，接著在攻擊後24 h及48 h投與兩劑100 μl 5 mg/kg (Delta攻擊)或15 mg/kg (Omicron攻擊)抗體B。陰性對照組(第4組；此組在Omicron攻擊中命名為第3組)的處理與第2組及第3組，但其中用相等體積之PBS代替抗體。在3 dpi下，將三隻動物安樂死，且收集洗鼻液、咽喉拭子及組織(肺、鼻甲及氣管)用於分析。監測其餘三至倉鼠之體重損失，直至在針對Delta的保護實驗中達到8 dpi或在針對Omicron之保護實驗中達到6 dpi為止。 病毒RNA複本及力價
藉由如先前所描述之一步式即時RT-PCR定量洗鼻液、咽喉拭子及組織勻漿中之病毒RNA (Feng, L.等人，An adenovirus-vectored COVID-19 vaccine confers protection from SARS-COV-2 challenge in rhesus macaques. Nature communications 11, 1-11 (2020)。簡言之，使用QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen)純化病毒RNA且用具有引子ORF1ab-F (5'-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA-3'；SEQ ID NO: 82)及ORF1ab-R (5'-ACGATTGTGCATCAGCTGA-3'；SEQ ID NO: 83)之HiScript ®II One-Step qRT-PCR SYBR ®Green Kit (Vazyme Biotech Co., Ltd.)對其定量。擴增程序設定如下：50℃，持續3 min；95℃，持續30秒；及40個循環，由95℃持續10秒及60℃持續30秒組成。用補充材料中所示之引子以類似方式測定細胞介素在受感染動物之肺組織中之表現量。
用如先前所述之溶菌斑分析來測定病毒力價，其中有略微修改。(Zhang, Q.等人A serological survey of SARS-CoV-2 in cat in Wuhan. Emerg Microbes Infect 9, 2013-2019, doi:10.1080/22221751.2020.1817796 (2020))。簡言之，將病毒樣本用具有2.5% FBS之DMEM連續10倍稀釋且接種至Vero E6細胞上，所述細胞以1.5×10 5個/孔種於24孔盤中隔夜；在37℃下培育1 h之後，用含有2.5% FBS及0.9%羧甲基纖維素之DMEM替換接種物。將培養盤用8%多聚甲醛固定且在3天後用0.5%結晶紫染色。用10至100個溶菌斑之稀釋梯度計算病毒力價。 組織學分析
用10%中性甲醛固定肺組織以進行H&E染色。根據評估間質性肺炎、II型肺細胞增生、水腫及纖維蛋白沈積以及血管周淋巴套袖(perivascular lymphoid cuffing)之存在的標準化評分系統，按每肺葉對組織學病變嚴重程度進行評分。 統計分析
所有統計分析均在Graphpad Prism 9中進行。使用非配對t檢驗，然後使用不等標準差(SD)之韋爾奇氏校正(Welch's correction)來比較兩組。圖中所示之星號係指顯著性水準(p值之小數點後為零)：*p≤0.05；**p≤0.01；***p≤0.001；****p≤0.0001。 結果 抗體 B 經由鼻內投與在倉鼠模型中顯示出保護功效抗 體 B 有效且廣譜中和不同 SARS-CoV-2 VOC
首先用假模式化SARS-CoV-2病毒(包括SARS-CoV-2 WT、Delta及Omicron變異體)量測抗體B之中和活性( 圖 1B)。抗體B顯示出針對所有測試的假病毒之廣譜中和活性，其中IC 50值在4.75至165 ng/ml範圍內。在活病毒溶菌斑減少分析中，抗體B分別以2.63 ng/ml、3.38 ng/ml及108.6 ng/ml之IC 50值中和真實的SARS-CoV-2 WT、Delta及Omicron ( 圖 1C)。明顯地，抗體B針對omicron之IC 50低於其他所測試抗體之IC 50(Cao Y等人，Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature, (2021))。 經由鼻內投與遞送之抗體 B 在倉鼠模型中顯示出針對 Delta 變異體之活體內保護功效
在吾人之先前研究中，當經腹膜內投與時，抗體B在被SARS-CoV-2 WT及Beta變異體攻擊之hACE2-轉殖基因小鼠(K18小鼠)中展現保護功效。儘管K18小鼠用作用於在大流行早期評估疫苗及治療劑之極其有用的動物模型，但其昂貴得多，具有更有限的供應，且近來已被黃金(敍利亞)倉鼠置替代/或部分替代。SARS-CoV-2可導致K18小鼠死亡，且對包括肺、肝、腎及甚至大腦之各種器官造成嚴重損害(McCray PB, Jr.等人Lethal infection of K18-hACE2 mice infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus. Journal of virology 81, 813-821 (2007))。因此，此模型可能不適合於評估經鼻投與之藥物。黃金(敍利亞)倉鼠可自然地感染SARS-CoV-2，其導致在接種SARS-CoV-2之後在鼻黏膜、支氣管上皮細胞及肺實變區中存在病毒抗原。(Sia SF ,等人Pathogenesis and transmission of SARS-CoV-2 in golden hamsters. Nature 583, 834-838 (2020))。其作為動物模型已被開發針對SARS-CoV-2之疫苗及療法的領域廣泛接受。因此，吾人用倉鼠進行活體內研究。在預防組(第1組)中，在被SARS-CoV-2 Delta攻擊之前30 min經鼻內向倉鼠投與5 mg/kg抗體B且在攻擊後24h及48h再給予兩個劑量( 圖 1A)。在治療功效評定中，在感染後3h經鼻內向倉鼠投與5 mg/kg抗體B (第2組)或僅投與緩衝劑(第3組)。隨後，在感染後24h及48h向此兩組再給予兩個劑量之抗體B。另一組(第4組)設定為第1組，但僅投與緩衝劑而非抗體( 圖 1A)。
吾人監測動物重量且發現具有抗體干預(預防或治療)之各組中的體重並未降低或比未經處理的組恢復得更快( 圖 1B)。藉由一步式即時RT-PCR定量3 dpi下之洗鼻液( 圖 1C)、不同組織勻漿( 圖 1D)及咽喉拭子( 圖 1E)中之病毒RNA含量，而不同組織勻漿( 圖 1F)中之病毒力價係藉由溶菌斑分析測定。大體而言，預防組(第1組)中洗鼻液、所有測試的組織勻漿及咽喉拭子中之病毒RNA含量( 圖 1C 至圖 1E)顯著低於其他組。相符地，預防組中在3 dpi下的病毒力價處於偵測極限(L.O.D.)之下。( 圖 1F)。 抗體 B 減少由 Delta 變異體感染引起之肺損傷
在3 dpi下對來自三個干預組及對照組(緩衝劑)之肺樣本進行組織學分析( 圖 2A)。在蘇木精-伊紅(H&E)染色後，緩衝劑組(第4組)之肺部顯示出肺病理學，伴隨發炎細胞在血管及分支周圍的浸潤增加、廣泛性肺泡壁增寬及增厚，並有少量滲出物。相比之下，第1組(預防組)中未發現血管周發炎細胞之數目增加，且肺病理學之特徵為第2組(3-劑量抗體B組)之血管周發炎細胞之數目略微增加。在第3組(2-劑量抗體B組)中，觀測到血管周發炎細胞之數目的適度增加及肺泡壁的略微增寬及增厚。亦對所有切片進行病理學評分，以用於大體評估組織學變化及炎症進展( 圖 2B)。預防組(第1組)顯示出顯著降低之病理學評分。治療組中之一者(第2組)亦顯示較佳成效，但統計顯著性並不十分明顯。大體而言，此等數據表明，抗體B可經由經鼻遞送而減少SARS-CoV-2感染之後的肺病理學。 經由鼻內投與遞送之抗體 B 在倉鼠模型中亦顯示出針對 Omicron 變異體之活體內保護功效
由於SARS-CoV-2 Omicron變異體的出現對目前經審批通過用於臨床使用之nmAb及處於研發中之nmAb帶來嚴重挑戰，吾人亦進行動物研究以評估抗體B對Omicron之保護功效( 圖 3A 至圖 3E)。除了使用高3倍的抗體劑量且沒有2-劑量抗體B組之外，類似於針對被Delta變異體攻擊的動物所描述之程序進行實驗( 圖 3A)。大體而言，抗體B亦可保護倉鼠免於Omicron變異體攻擊。預防組中洗鼻液、所有測試的組織勻漿及咽喉拭子中之病毒RNA含量( 圖 3B 至圖 3D)顯著低於其他組。相符地，預防組中在3 dpi下的病毒力價顯著低於其他組中或處於L.O.D.之下。( 圖 3E)。吾人在所有組中未觀測到動物體重降低，其與近期報導相符(Diamond M ,等人 ，The SARS-CoV-2 B.1.1.529 Omicron virus causes attenuated infection and disease in mice and hamsters. Research square,  (2021))。因此，抗體B係針對活體內Omicron變異體感染之有前景的候選，但如上文所提及，大多數nmAb失去針對Omicron變異體之中和活性。 論述
吾人之資料表明，當經由經鼻投與遞送時，抗體B可有效中和真實的Delta及Omicron變異體且以低劑量防止活體內病毒感染。因此，抗體B為用於抵抗人類中由新生的SARS-CoV-2變異體(例如Delta及Omicron)引起之感染的良好臨床候選。與當前審批通過之nmAb相比，抗體B可由於動物研究中所使用之低劑量而減輕患者負擔，且由於其便利且安全的經鼻投與而更易被不同患者接受。更重要地，抗體B為廣譜nmAb，其可抑制SARS-CoV-2及所有目前公認之VOC。由於由抗體B識別之RBD中之保守性位點，抗體B極可能能夠中和將來會出現之另外的SARS-CoV-2變異體。 實例3 a) 抗體 B 產生
抗體B為完全人源化單株抗體，其表現於經攜帶其重鏈及輕鏈基因之質體轉染的哺乳動物細胞中。抗體B係由中國倉鼠卵巢細胞CHOK1Q表現。最終細胞庫病毒安全性測試證明外源因子不存在污染風險。
用CD02培養基使CHOK1Q細胞復蘇且在擴增培養之後低溫保藏以建立初代細胞庫。
抗體B之重鏈及輕鏈胺基酸序列展示如下。然後分別展示對應DNA序列。 單株抗體 B 重鏈胺基酸序列
MTRLTVLALLAGLLASSRAQMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSSSAVQWVRQARGQHLEWIGWIVVGSGNTNYAQKFQERVTLTRDMSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAPNCNSTTCHDGFDIWGQGTVTVSS PSTKGPSVFAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDSHEDPEVKEVKFNWYVGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVSVLTVLHQDLNGKEYKCKVSNKALPIEKISKAKGQPREPQ (SEQ ID NO: 84)注意：帶下劃線部分為信號肽序列，黑色非粗體序列係可變區，且黑色粗體序列係恆定區。
單株抗體 B 重鏈 DNA 序列
ATGACAAGACTGACCGTGCTGGCCCTGCTGGCCGGCCTGCTGGCTAGCAGCAGAGCTCAGATGCAGCTGGTGCAGAGCGGCCCTGAGGTGAAGAAACCTGGCACAAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCAGCGCCGTGCAGTGGGTGAGACAAGCTAGAGGACAGCACCTGGAGTGGATCGGCTGGATCGTGGTGGGCAGCGGCAACACCAACTACGCTCAGAAGTTCCAAGAGAGAGTGACCCTGACAAGAGACATGAGCACAAGAACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGCCCCTAACTGCAACAGCACCACCTGCCACGACGGCTTCGACATCTGGGGCCAAGGCACCGTCGTCACCGTGAGCAGC CCTAGCACCAAGGGCCCTAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCTAGCAGCAAGAGCACAAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTCGTCAAGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGACAGTGAGCTGGAATAGCGGCGCCCTGACAAGCGGCGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCTAGCAGCAGCCTGGGCACACAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCTTGCCCTGCCCCTGAGCTGCTGGGCGGCCCTAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCTAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCTGAGGTGACCTGCGTGGTCGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTCCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGACAGCCTAGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCTAGCAGAGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTGAGCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCTAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGACAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAAGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCTGGCAAG (SEQ ID NO: 85)注意：帶下劃線部分為信號肽序列，黑色非粗體序列係可變區，且黑色粗體序列係恆定區。
單株抗體 B 輕鏈胺基酸序列
MTRLTVLALLAGLLASSRAIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLGWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLESEDFAVYYCQQYDNSPWTFGQGTKVEIK RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 86)注意：帶下劃線部分為信號肽序列，黑色非粗體序列係可變區，且黑色粗體序列係恆定區。
單株抗體 B 輕鏈 DNA 序列
ATGACAAGACTGACCGTGCTGGCCCTGCTGGCCGGCCTGCTGGCTAGCAGCAGAGCTGAAATCGTGCTGACACAGAGCCCTGGCACCCTGAGCCTGAGCCCTGGCGAGAGAGCCACCCTGAGCTGCAGAGCTAGCCAAAGCGTGAGAAGCAGCTACCTGGGCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCCAAGCCCCTAGACTGCTGATCTACGGCGCTAGCAGCAGAGCCACCGGCATCCCTGACAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGACTGGAGAGCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGTCAGCAGTACGACAACAGCCCTTGGACCTTCGGCCAAGGCACCAAGGTGGAGATCAAG AGAACCGTGGCCGCCCCTAGCGTGTTCATCTTCCCTCCTAGCGACGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCTAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTAGAGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAAGAGAGCGTGACCGAGCAAGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAAGGCCTGAGCAGCCCTGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGCGAGTGC (SEQ ID NO: 87)注意：帶下劃線部分為信號肽序列，黑色非粗體序列係可變區，且黑色粗體序列係恆定區。
宿主細胞之質體轉染
為了構築工程改造細胞，將攜有目標基因之質體藉由電力轉移轉染至宿主細胞中。將細胞在含有4 mM麩醯胺酸之BalanCD CHO GrowthA培養基中培養3天，稀釋且繼代一次，且在連續培育3天之後取樣並計數。活細胞密度為7.01×10 5個細胞/毫升，且細胞存活率為97.82%。準備好進行電力傳遞。取13 mL宿主細胞懸浮液且在室溫下在200 g下離心5 min。丟棄上清液，再懸浮且與500 μL EX-CELL CD CHO融合物混合以供後續使用。將250 μL EX-CELL CD CHO融合物、10 μg被PvuI消化之線性化B1 HC質體及15 μg被PvuI消化之線性化B2 LC質體添加至新的離心管中且充分混合。充分混合宿主細胞與質體懸浮液且將其添加至電震杯。電壓為300 V，電容為650 µF，且電阻為無限的。 實例4 方法 細胞及病毒
將Vero E6細胞(目錄號ATCC® CRL-1586™) 在37℃及5% CO 2下在具有10% FBS (Gibco)、100個單位/毫升青黴素及100 μg/mL鏈黴素(Gibco)之DMEM (Gibco)中進行培養。最初在2019年自COVID-19患者分離出SARS-CoV-2 WIV04病毒株(GISAID，寄存號EPI_ISL_402124)。自香港的患者之咽喉拭子分離出SARS-CoV-2 Omicron病毒(CCPM-B-V-049-2112-18)。此研究中涉及真實的SARS-CoV-2之所有方法均在BSL-3設施中進行。 ELISA
在4℃下用在0.05 M PBS (pH 9.6)中為4 μg/ml的50微升/孔的SARS-CoV-2 RBD重組蛋白塗佈ELISA盤(corning 96孔透明平底，目錄號9018)，隔夜。將經連續稀釋之抗體B溶液添加至各孔中，且在37℃培育1h。將過氧化酶結合之小鼠抗人類IgG Fc抗體[HRP] (mAb (GenScript，殖株ID 50B4A9))用作偵測抗體。使用微量盤式讀取器在450 nm下量測吸光度。 假模式化 SARS-CoV-2 感染之抑制
如Li T , 等人 Nature Communications 12, 6304 (2021)中所描述進行實驗。簡言之，將體積為50 μl之連續稀釋之mAb與含有假病毒(WT SARS-CoV-2，Delta及Omicron)之相同體積的Lenti-X293T細胞上清液一起在37℃下培育1 h。將此等抗體B混合物添加至表現ACE2之Lenti-X293 T細胞(293 T/ACE2)。72 h後，用Bright-螢光素酶報導分析系統(Promega, E2650)偵測被感染的293T/ACE2細胞之螢光素酶活性。用Varioskan LUX微量盤式分光光度計(ThermoFisher)測定所評估mAb之IC 50值且使用GraphPad Prism 8.0藉由四參數邏輯回歸進行計算。 針對真實 RS-CoV-2 之中和活性
進行真實SARS-CoV-2中和分析，以在BSL-3實驗室中藉由溶菌斑分析評估抗體對病毒附著之抑制。(Zhao, S.等人Identification of potent human neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 implications for development of therapeutics and prophylactics. Nature communications 12, 4887, doi:10.1038/s41467-021-25153-x (2021))。簡言之，將Vero細胞以1.5×10 5個/孔接種於24孔培養盤中隔夜。將抗體樣本在具有2.5% FBS之DMEM中三倍連續稀釋。添加包括600 PFU/ml SARS-CoV-2之相等體積，且在37℃培育抗體-病毒混合物1h。隨後，將混合物添加至含有Vero細胞之24孔培養盤中。及那個經300 PFU/ml SARS-CoV-2感染之細胞及無病毒之細胞分別用作陽性及未感染對照。在37℃再培育1 h之後，取出抗體-病毒混合物，且向培養基補充具有2.5% FBS加0.9%羧甲基纖維素之DMEM。將培養盤用8%多聚甲醛固定且在3天後用0.5%結晶紫染色。 結果 抗體 B 結合至 SARS-CoV2 S 蛋白 RBD 中之保守區
SARS-CoV2 S蛋白為主要抗原性蛋白且為開發中和抗體及疫苗的目標(Walls等人Structure, Function, and Antigenicity of the SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein. Cell 181, 281-292 e286 (2020))。其利用人類血管收縮素轉化酶II (hACE2)作為細胞受體，以經由其受體結合域(RBD)進入宿主(Zhou P等人，A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. Nature 579, 270-273 (2020))。RBD中直接參與RBD與ACE2之間的相互作用之區域稱為受體結合模體(receptor-binding motif；RBM) (Lan J等人，Structure of the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain bound to the ACE2 receptor. Nature 581, 215-220 (2020)；Shang J等人，Structural basis of receptor recognition by SARS-CoV-2. Nature 581, 221-224 (2020)；Wang Q等人，Structural and Functional Basis of SARS-CoV-2 Entry by Using Human ACE2. Cell 181, 894-904 e899 (2020))。儘管大部分突變發生在RBM中，但仍有鑑別識別RBD中之一些保守區之廣譜nmAb的機會(Cameroni E等人，Broadly neutralizing antibodies overcome SARS-CoV-2 Omicron antigenic shift. Nature,  (2021))。藉由單一B細胞分選方法，吾人先前鑑別出可結合至SARS-CoV-2 WT及Alpha、Beta及Gamma變異體之RBD的人類單株抗體(Li T等人，Potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies with protective efficacy against newly emerged mutational variants. Nature communications 12, 6304 (2021))。此處，吾人發現，抗體B保持其結合活性，其中分別地，對於Delta RBD之EC 50值為22.5 ng/ml，且對於SARS-CoV-2 WT RBD之EC 50值為24.3 ng/ml，且抗體B仍強結合至Omicron RBD，其中EC 50為90.0 ng/ml( 圖 4A)。基於吾人的先前研究，抗體B識別RBD中之兩個主要區域( 圖 4A 至圖 4E) (Li T等人，Potent SARS-CoV-2 neutralizing antibodies with protective efficacy against newly emerged mutational variants. Nature communications 12, 6304 (2021))。 論述
nmAb為對抗傳染病之強大武器。迄今為止，已鑑別且表徵一組來自轉殖基因小鼠、恢復期患者及噬菌體呈現之針對SARS-CoV-2的中和抗體。在此等抗體中，其中一些已經審批通過用於治療COVID-19。然而，此等mAb丟失了且顯著降低了其針對兩種最主要VOC、delta及omicron的保護功效。(Cao Y等人，Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature, (2021)；Liu L等人，Striking Antibody Evasion Manifested by the Omicron Variant of SARS-CoV-2. Nature, (2021))。在此等審批通過之mAb中，S309 (VIR-7831) (Tortorici MA等人， Science 370, 950-957 (2020))在假病毒分析中維持其針對Delta及Omicron的中和活性(Cao Y等人 ，Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature, (2021))。目前，S309 (索曲韋單抗(sotrovimab))在緊急使用授權(EUA)下經審批通過用於治療輕度至中度COVID-19。然而，尚未在由於COVID‑19而住院之患者中觀測到用索曲韋單抗治療之益處。因此，仍非常需要產生更好臨床成效之針對SARS-CoV-2之更廣譜的nmAb。 實例5：抗體B之臨床前動物攻擊及藥物動力學測試
抗體B (B066)製劑係澄清無色至淺黃色溶液，其包含於6R小瓶中且可藉由鼻噴霧投與多次。各小瓶中之溶液需要投與至少56次(每次70 μL±14 μL)。為滿足指定投與時間，標示量設定成6.0 mL。關於製劑之組成，參見表5。製備方法中不存在過量進料。 表5：包含抗體B之組合物
活性成分 濃度
抗體B (B066) 5.0 mg/mL
  
輔助材料 量(每mL)
七水合磷酸氫二鈉 0.50 mg
單水合磷酸二氫鈉 2.52 mg
二水合海藻糖 44.21 mg
丙三醇 17.00 mg
羥丙基甲基纖維素 1.00 mg
Tween 80 0.20 mg
苯紮氯銨 0.10 mg
水 填充至1 mL
向原始溶液中添加輔助材料(羥丙基甲基纖維素(HPMC)、丙三醇及苯紮氯銨)，得到滿足多次經鼻噴霧投與之目的的製劑調配物。經由調配物開發，製劑調配物測定如下：5 mg/ml之B066抗體、20 mM之磷酸鹽緩衝劑(PB)、4% (w/v)之海藻糖(藉由無水海藻糖計算)、1.7% (w/v)之丙三醇、0.1% (w/v)之HPMC、0.01% (w/v)之苯紮氯銨及0.02% (w/v)之PS80，pH 6.0。
黃金倉鼠活體內攻擊測試 - Delta病毒株：藉由經鼻滴入向黃金倉鼠投與抗體B冠狀病毒中和抗體(5 mg/mL，100 μL/倉鼠)。Delta病毒株(1×10 4個PFU，總共100 μL，50 μL/鼻孔)用於動物攻擊。在攻擊之前30 min及攻擊之後1天及2天對第1組(G-1)進行投與。在攻擊之後3 h、1天及2天對第2組(G-2)進行投與。在攻擊之後1天及2天對第3組(G-3)進行投與。第4組(G-4)為對照組。收集體重數據以及鼻甲、氣管及肺組織樣本。藉由qRT-PCR偵測組織樣本中之病毒RNA含量且藉由溶菌斑分析測定病毒力價。
結果如下：
體重：在黃金倉鼠感染冠狀病毒Delta病毒株之後3天，G-1、G-2及G-3黃金倉鼠之平均體重增加分別為9.46±3.83%、4.31±2.35%及2.01±3.69%，且對照組(G-4)中黃金倉鼠之平均體重減輕為1.93±7.15%。在感染之後6天，G-1及G2-中黃金倉鼠之體重增加分別為13.88±6.20%及6.15±9.36%，且對照組(G-4)中黃金倉鼠之體重減輕為12.11±10.92%。細節參見 圖 5。
病毒RNA含量：在攻擊之後3天，各組之鼻甲、氣管以及左右肺組織中之病毒RNA負荷Log(複本/公克)如 圖 6中所示。
病毒力價：在攻擊之後第3天，各組之鼻甲、氣管以及左右肺組織中之Log(病毒力價PFU/g)如 圖 7中所示。
黃金倉鼠活體內攻擊測試 - Omicron病毒株：藉由經鼻滴入向黃金倉鼠投與抗體B冠狀病毒中和抗體(100 μL/倉鼠)。Omicron病毒株(1×10 4個PFU，總共100 μL，50 μL/鼻孔)用於動物攻擊。在攻擊前3 h及攻擊後1天及2天分別向G-1、G-2及G-3投與10 mg/mL、5 mg/mL及2 mg/mL抗體B抗體。在攻擊前3 h藉由腹膜內注射向G-4投與10 mg/kg。G-5為對照組。收集體重數據以及氣管及肺組織樣本。藉由qRT-PCR偵測組織樣本中之病毒RNA含量且藉由溶菌斑分析測定病毒力價。
結果如下：
體重：在黃金倉鼠感染冠狀病毒Omicron病菌株之後3天，10 mg/kg、5 mg/kg及2 mg/kg鼻滴投與組的體重增加分別為5.29±2.24%、4.70±0.68%及5.49±2.94%，10 mg/kg腹膜內注射組之體重增加為5.99±1.19%，且對照組之黃金倉鼠的體重增加為4.62±2.32%。細節參見 圖 8。
病毒RNA含量：在攻擊之後3天，各組之氣管以及左右肺組織中之病毒RNA負荷Log(複本/公克)如 圖 9中所示。
病毒力價：在攻擊之後3天，各組之氣管以及左右肺組織中之Log(病毒力價)如 圖 10中所示。 藥物動力學(PK)：
分析方法：對小鼠之血液樣本及組織樣本及食蟹獼猴之鼻拭子樣本中之抗體B的研究係基於酶聯免疫吸附分析(ELISA)。新西蘭家兔中之藥物動力學研究採用放射性藥品之SPECT/CT成像方法。
吸收：抗體B之臨床途徑為經鼻噴霧。作用機制主要經由其在鼻黏膜中之滯留以中和經由鼻腔進入人體之冠狀病毒。
經鼻滴入投與至小鼠：藉由經鼻滴入向小鼠投與抗體B冠狀病毒中和抗體。在此實驗中，將33至C57BL/6雄性小鼠分成5組，6隻小鼠/組，且其他3隻空白小鼠用於抗體B標準曲線樣本之後續稀釋而未加任何處理。抗體B之濃度分別為3 mg/mL、1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.1 mg/mL及0 mg/mL。藉由經鼻滴入給與一次劑量。各劑量包括兩次左右鼻孔經鼻滴入(每次滴入7.5 μL)，每劑總共30 μL。在投與之後6 h及24 h，藉由酶聯免疫吸附分析法(ELISA)偵測抗體B在小鼠之鼻黏膜、血液、氣管、肺及肝組織中之含量。結果表明，在投與之後6 h，在3 mg/mL、1 mg/mL、0.3 mg/mL及0.1 mg/mL劑量組中，鼻黏膜中抗體B的含量為分別為15.1 μg/mL、8.26 μg/mL、1.99 μg/mL及0.443 μg/mL，表明鼻黏膜中抗體B的含量與劑量正相關。氣管中抗體B之含量分別為鼻黏膜中抗體B之含量的2.7%、4.5%、4.5%及15.5%。血液中抗體B之含量分別為鼻黏膜中抗體B之含量的0.28%、0.20%、0.36%及0.85%。在肺及肝中，在3 mg/mL及1 mg/mL劑量組中僅偵測到微量抗體B。其表明，經由經鼻滴入投與之抗體B主要分佈於鼻黏膜中。投與後24h之鼻黏膜中抗體B之含量接近LOB (空白限制) 0.073 μg/mL，且血液中之抗體B無顯著變化，表明經受經鼻滴入投與的小鼠之鼻黏膜維持抗體B抗體之高濃度至少6 h。細節參見 圖 11A 至圖 11C。
新西蘭家兔之SPECT/CT成像：藉由採用化學合成之放射性藥品進行實驗兔(仰臥位置)之SPECT/CT成像。將測試分成 131I-抗體經鼻滴入測試組及Na 131I經鼻滴入對照組。在分別經腹膜內注射水合氯醛進行麻醉之後，進行經鼻滴入。收集在經鼻滴入之後1 h、3 h、6 h、12 h及24 h的效果。結果如下： 131I-抗體B鼻腔在經鼻滴入24 h內維持強放射性，且咽及喉之信號亦高於對照組(Na 131I)之信號。然而，在Na 131I經鼻滴入之後6 h，鼻腔中之放射性顯著降低，且基本上在24 h時消失。咽及喉中不存在顯著放射性濃度，且差異顯著的(細節參見 圖 12A 至圖 12D)。
向食蟹獼猴經鼻噴霧投與：藉由經鼻噴霧以單次劑量向食蟹獼猴(3隻雌性及3隻雄性)投與抗體B冠狀病毒中和抗體(5 mg/mL)。藉由ELISA偵測投與之後在食蟹獼猴之鼻拭子採集溶液中抗體B之含量。結果表明，在向食蟹獼猴單次經鼻噴霧1.4 mg/劑量(5 mg/mL)抗體B之後，鼻拭子之藥物濃度在0.25 h或1 h達到高水準(12554至52424 ng/mL)，在投與之後3 h藥物濃度逐漸降低，且在投與之後6 h藥物濃度降低至相對低水準(194至9693 ng/mL)，其中t1/2為1.35 h，AUC0-6h為86513 ng/mL∙h。細節參見 圖 13。(注意：3h-L表示第二次採集投與之後的左鼻孔，6h-L表示第三次採集投與之後的左鼻孔，且6h-R表示第二次採集投與之後的右鼻孔。0 h鼻拭子之藥物濃度為左鼻拭子與右鼻拭子之平均值。6 h鼻拭子之藥物濃度係右鼻孔之數據。) 論述及結論：
在小鼠及食蟹獼猴中，經由鼻腔投與抗體B中和抗體，以研究其藥物動力學且提供臨床劑量、投與時間及頻率之參考。根據對冠狀病毒之不同病毒株之理解，野生型、Delta及Omicron病毒株之可傳播性、感染力及致病力不同。因此，抗體B設計成在鼻腔中具有目標濃度的產物，其可達到針對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之100%抑制率及針對Omicron病毒株之超過90%抑制率(BA.2.12.1)。
當藉由經鼻滴入(0.1 mg/mL至3 mg/mL，單次，15 μL用於左右鼻孔中之各者)向小鼠投與抗體B時，在投與之後6 h，鼻黏膜中抗體B之含量最高且與劑量正相關。在3 mg/mL之劑量下，鼻腔中之濃度可達到15 μg/mL。此濃度可實現針對野生型冠狀病毒株及Delta病毒株之100%抑制率，及針對Omicron病毒株(BA.2.12.1)之超過90%的抑制率。在投與之後24 h，鼻黏膜中抗體B之含量降低至接近空白樣本之背景值的水準。此表明，在6 h內經受經鼻滴入投與的小鼠之鼻黏膜中的抗體B抗體可維持預定目標濃度(其可滿足白天三次劑量之環境)。
當藉由經鼻噴霧向食蟹獼猴投與抗體B (5 mg/mL，單次劑量280 μL)時，在投與之後15 min至1 h，濃度在鼻腔中達到最高濃度(35 μg/mL)，接著隨時間逐漸降低，且在投與之後3 h達到10 μg/mL。由假病毒中和實驗驗證，此濃度可實現針對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之100%抑制率，及針對Omicron病毒株(BA.2.12.1)之超過95%的抑制率。在投與後6 h，鼻腔中之濃度降低至3 μg/mL。此濃度可實現針對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之100%抑制率，但針對Omicron病毒株(BA.2.12.1)之抑制率降低至80%。因為抗體B之目標係實現針對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之100%抑制及針對Omicron病毒株(BA.2.12.1)之90%抑制率，所以可自以上數據初步推斷出抗體B可在投與後4 h內維持目標濃度。
在經鼻噴霧至健康成年家兔之後，藉由使用經 131I-標記之抗體B ( 131I-抗體B)進行SPECT/CT成像研究。結果類似於藉由向小鼠經鼻滴入及向猴經鼻噴霧進行之以上研究之結果。抗體B主要在經鼻滴入投與之後1至6 h內分佈在鼻腔中，且少量分佈於咽中。濃度自6h至24h快速降低，且接著在24h之後降低至接近背景水準之水準。
藉由向小鼠經鼻滴入投與研究抗體B中和抗體在各種組織中之分佈。在經鼻投與之後6 h (0.1 mg/mL至3 mg/mL，單次劑量，15 μL用於左右鼻孔中之各者)，氣管中抗體B之含量為鼻黏膜中之含量的2.7%至15.4%；血液中抗體B之含量為鼻黏膜中之含量的0.28%至0.84%；在肺及肝中，在高劑量組中僅偵測到少量抗體B (接近偵測下限)。其表明，經由經鼻滴入投與之抗體B主要分佈於鼻黏膜中。在投與之後24 h，鼻黏膜及氣管中抗體B之含量降低至接近空白樣本之背景值的水準，且血液、肺及肝中抗體B之濃度保持在低水準而不會顯著變化。在經鼻腔向食蟹獼猴投與1 h (5 mg/mL，單次劑量280 μL)之後，血液中抗體B之濃度小於鼻腔濃度之1%。在投與後1 h至24 h，血液中抗體B之濃度保持在此低濃度下且變化極少。此等數據表明，在鼻腔投與之後，抗體B中和抗體主要分佈於鼻黏膜中，少量分佈於咽中，且少量分佈於其他組織(諸如肝、肺及血液)中。低劑量系統暴露為抗體B之安全性提供理論數據支援。
藉由靜脈內注射投與抗體B研究血清中藥物分佈之藥物動力學。在小鼠中靜脈內注射1 mg/kg抗體B之後，血清之半衰期為16天，且0至14天AUC為2579.2 μg·h/mLL，AUC (0-∞)為5655.7 μg·h/mL；0至14天清除率CL為0.177 mL/h/kg；分佈體積Vd為98 mL/kg。 實例6：抗體B之臨床試驗
臨床藥理學研究：此研究者起始試驗(IIT)研究為在72位健康個體中關於抗體B中和抗體鼻用噴霧之安全性及耐受性的隨機、雙盲、安慰劑對照的臨床研究。此研究之主要目的為評估健康個體中抗體B中和抗體鼻用噴霧之安全性及耐受性，且次要目的為評估健康個體之血清及鼻拭子及咽拭子中抗體B中和抗體鼻用噴霧之藥物濃度。此試驗為隨機、雙盲、安慰劑對照之臨床研究。包括72位健康個體(雄性及雌性)。在將合格個體篩選至該組中之後，將其隨機分配至第1群組、第2群組及第群3組，且在自投與前1天至最後一次投與之後14天的對應時間點採集血液及鼻咽拭子，用於藥物濃度偵測；在第2天及最後一次投與後14天對第1群組進行安全性檢查，在第4天及最後一次投與後14天對第2群組進行安全性檢查，且在第10天及最後一次投與後14天對第3群組進行安全性檢查。投與劑量及頻率如下：對於測試組，抗體B中和抗體鼻用噴霧；規格：5 mg/mL，5 mL/小瓶，100 μL/噴霧；經鼻投與，以一次劑量的形式向左右鼻孔中之各者噴霧兩次，400 μL/劑；安慰劑組：僅含有賦形劑；規格：0 mg/mL，5 mL/小瓶，100 μL/噴霧；經鼻投與，以一次劑量的形式向左右鼻孔中之各者噴霧兩次，400 μL/劑。僅向第1群組投與1個劑量；連續3天每天向第2群組投與2個劑量；連續7天每天向第3群組投與2個劑量。
主要臨床藥理學特徵：此IIT臨床研究之結果顯示以下藥物動力學特徵： 1. 鼻腔中抗體B中和抗體之濃度可在投與第一劑量之後6 h維持在5至11 μg/mL。根據活體外抗病毒中和活性研究，此範圍內之濃度可實現針對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之超過99%的抑制率及針對Omicron病毒株BA.2之80%抑制率。 2. 在投與第一劑量之後6 h投與第二劑量，且在投與第二劑量之後6 h第二劑量之濃度可維持在5至11 μg/mL。 3. 鼻腔中抗體B中和抗體之濃度在投與之後24 h時降低至背景水準。 4. 72位個體之血液中的抗體濃度在投與之後未顯著增加。考慮到此研究中藥物之經鼻投與，結合在食蟹獼猴之臨床前藥物動力學中觀測到之結果，推測其基本上不會進入血液或僅少量進入人體之血液。 5. 未偵測到72位個體之咽部中的抗體濃度或偵測到的值接近定量下限。推測此產物可在經鼻投與之後充分附著至鼻黏膜之表面，且僅少量可進入咽部及喉部。
臨床藥理學實驗設計：選擇72位健康志願者用於此IIT研究，其冠狀病毒核酸偵測為陰性，年齡為18至65歲(包括臨界值)，具有在19.0至30.0範圍內(包括臨界值)之適當性別比例及體重指數。臨床劑量之選擇主要基於小鼠及食蟹獼猴之臨床前藥物動力學及藥效學研究之結果。抗體B中和抗體對冠狀病毒野生型病毒株S及突變株(Alpha病毒株S、Beta病毒株S、印度病毒株S、Delta病毒株S、Gamma病毒株S1、Lambda病毒株S1及D614G病毒株)之S1重組蛋白質具有高結合能力。抗體B具有針對此等冠狀病毒株的強假病毒中和活性，其中對於Delta病毒株，IC 50小於10 ng/mL，且IC 50僅為1.18 ng/mL。抗體B亦具有針對冠狀病毒野生型病毒株及Beta病毒株活病毒之超強活病毒中和活性，IC 50分別為6.03 ng/mL及1.66 ng/mL。活病毒活體內攻擊測試表明，抗體B對感染冠狀病毒Delta及Omicron病毒株之黃金倉鼠具有高度有效預防性保護能力。在向小鼠經鼻滴注具有不同濃度之抗體B之後，小鼠鼻黏膜中的抗體含量隨劑量增加而增加。在投與之後6 h的0.3 mg/mL 50 μL劑量組中之抗體B的鼻內濃度超過1 μg/mL。在向食蟹獼猴單次經鼻噴霧380 μL 10 mg/mL抗體B3 h之後，鼻腔中抗體B中和抗體之濃度為約39 μg/mL。預測在向人體經鼻噴霧140 μL 5 mg/mL抗體B之後，鼻腔中抗體B之濃度將保持比抗體在6 h內中和冠狀病毒所需的濃度高得多。ICR小鼠中之毒性測試顯示，在經腹膜內注射兩劑150 mg/kg抗體B中和抗體或以每天兩劑且每劑25 μL的形式連續14天藉由經鼻滴入投與5 mg/mL抗體B之後，對一般體徵、血常規、血液生物化學及組織病理學沒有影響。在單劑量靜脈內注射10 mg/kg抗體B之後，食蟹獼猴之血液生物化學、血常規及凝血功能係正常的。在以每天3劑量及每劑380 μL連續14天經鼻噴霧5 mg/mL抗體B之後，食蟹獼猴之臨床狀態係正常的，且血液生物化學、血常規及凝血功能係正常的。在I期臨床試驗設計中，抗體B之各劑量之內容物為0.7 mg (140 μL的5 mg/mL抗體B)，最大量為連續14天每天三劑，總共累積29.4 mg之抗體B，大致合計為0.69 mg/kg。在經鼻滴注至小鼠或食蟹獼猴之後，進入血液循環之抗體B抗體之量小於1/100。即使所有抗體均根據劑量進入血液循環，但抗體B之安全限度分別比在小鼠及食蟹獼猴中之安全限度高300及20倍。因此，對於連續14天經鼻噴霧140 μL 5 mg/mL抗體B，存在足夠的安全限度。
各種臨床研究之概述：在重慶醫科大學之第二附屬醫院(The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical Universit)進行將此IIT研究分成三個群組。參見表6。 表6：抗體B IIT臨床研究之基本資訊
臨床研究編號 藥物 ( 生產批號 ) 研究目的 實驗設計 入選 / 完成的人數 投與 主要藥物動力學參數 信賴區間
AY-60-8001 第1群組 抗體B冠狀病毒中和抗體 (MYDP20211217) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12 抗體B 5mg/mL, 每劑400μL，每天1劑，總共1天 鼻腔 Cmax=7.3ug/mL 0.3-12.4 ug/mL
AY-60-8001 第2群組 抗體B冠狀病毒中和抗體 (MYDP20211217) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12 抗體B 5mg/mL, 每劑400μL，每天2劑，總共3天 鼻腔 Cmax=11.3ug/mL 2.6-12.2 ug/mL
AY-60-8001 第3群組 抗體B冠狀病毒中和抗體 (MYDP20211217) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲安慰劑 平行對照 48/48 抗體B 5mg/mL, 每劑400μL，每天2劑，總共7天 鼻腔 Cmax=5.4ug/mL 0.6-6.2 ug/mL
在第1群組中，血液中的中和抗體之平均濃度在基線期內為1503.0±2508.3 ng/mL，中和抗體之平均濃度在測試之第二天為1427.7±2433.2 ng/mL，且中和抗體之平均濃度在隨訪期內為1482.0±2015.7 ng/mL。儘管個體之間存在較大抗體濃度差異，但在整個測試期間血液中抗體之濃度變化極小且傾向於穩定。投與之後鼻拭子中抗體之濃度數據顯示出測試組與對照組之間的顯著差異，且測試組中鼻拭子中之抗體之濃度隨時間逐漸降低。測試組及對照組中之咽拭子中的中和抗體之濃度數據基本上低於定量下限。
在第2群組中，血液中的中和抗體之平均濃度在基線期內為1435.3±1954.5 ng/mL，中和抗體之平均濃度在測試之第四天為1355.9±1874.1 ng/mL，且中和抗體之平均濃度在隨訪期內為1220.1±1713.3 ng/mL。儘管個體之間存在較大抗體濃度差異，但在整個測試期間血液中抗體之濃度變化極小且傾向於穩定。在基線期內，鼻拭子中的中和抗體之平均濃度為4.28±1.79 ng/mL，且在測試期之第三天(最後一次投與之日)，左鼻中的中和抗體之平均濃度為9323.1±12636 ng/mL，其中安慰劑組之平均值為5.59±0.97 ng/mL，且測試組之平均值為7940.7±15348 ng/mL；在測試期之第四天，測試組之左鼻及右鼻中的中和抗體之平均濃度分別為2780.5±5989.3 ng/mL及6618.0±14222 ng/mL，安慰劑組之左鼻及右鼻中的中和抗體之平均濃度分別為4.86 ng/mL及4.71±2.71 ng/mL。咽拭子中的中和抗體之濃度數據基本上低於定量下限。
在第3群組中，血液中的中和抗體之平均濃度在基線期內為2037.7±4676.6 ng/mL，中和抗體之平均濃度在第八天為2025.0±4305.8 ng/mL，中和抗體之平均濃度在第十天為1984.7±4223.9 ng/mL，中和抗體之平均濃度在隨訪期內為1743.5±3436.0 ng/mL，且雖然個體之間存在顯著的個體間抗體濃度差異，但血液中之抗體的濃度在整個測試期間變化極小且傾向於穩定。鼻拭子中和抗體之平均濃度在基線期內為9.79±10.76 ng/mL；在測試期內的第七天(最後一次投與之日)，左鼻中和抗體之平均濃度為4713.5±6744.3 ng/mL，其中安慰劑組之平均值為10.56±7.14 ng/mL，且測試組之平均值為5418.9±6969.2 ng/mL；在測試期之第八天，右鼻中和抗體的平均濃度為1272.5±2677.0 ng/mL，其中安測試組之平均值為1304.9±2704.1 ng/mL，且安慰劑組之平均值為8.25 ng/mL；在測試期之第九天，左鼻中和抗體之平均濃度為1496.7±8093.3 ng/mL，其中測試組之平均值為1634.5±8462.3 ng/mL，安慰劑組之平均值為27.54±38.31 ng/mL；且測試組與安慰劑組之間存在顯著差異；且在測試期之第十天，左鼻中和抗體之平均濃度為72.36±152.29 ng/mL，且右鼻中和抗體之平均濃度為55.90±124.72 ng/mL，其中測試組之左鼻中和抗體及右鼻中和抗體之平均濃度分別為82.88±161.36 ng/mL及56.97±126.78 ng/mL，安慰劑組之左鼻中和抗體及右鼻中和抗體之平均濃度分別為3.95±1.88 ng/mL及24.89 ng/mL，且測試組與安慰劑組之間存在一定差異。咽拭子中和抗體之濃度數據基本上低於定量下限。
各種臨床研究結果之分析及比較：在此IIT實驗之整個研究期間，個體血液中之抗體濃度變化極小，但個體之間存在較大個體間差異。同時，在未接種冠狀病毒疫苗(M332、M339及M342)之三名患者中幾乎未偵測到抗體濃度，且推測出現有分析方法可能無法有效鑑別MY-596中和抗體及在注射冠狀病毒疫苗之後產生的抗體，且較大個體間抗體差異可能與個人自身的因素、所注射疫苗之類型及注射時間相關。72名個體之血液中抗體之濃度未顯著增加，且考慮到此研究藥物之鼻內投與，推測其實質上不回進入血液或僅極少進入血液。對於72名個體，未偵測到咽部抗體之濃度或偵測到的值接近定量下限，且推測此產物可在鼻內投與之後充分附著至鼻黏液之表面且僅少量可進入咽喉。對於第1群組、第2群組及第3群組，在投與第一劑量之後6小時，鼻抗體B濃度可達到5至11 μg/mL。根據活體外抗病毒中和活性研究，此範圍內之濃度可達到對冠狀病毒野生型病毒株及Delta病毒株之超過99%的抑制率，且亦可達到對Omicron BA.2之80%抑制率。第2群組及第3群組的結果顯示，在每天投與兩種劑量的情況下，在投與期間12小時內，鼻濃度可保持為具有較高病毒中和活性的濃度。在連續投與數天之情況下，鼻腔中不存在大量藥物聚集。對於第1群組D2及第2群組D4，鼻拭子結果顯示：在同一天，左鼻之抗體濃度顯著低於右鼻之抗體濃度，且推測該差異可由在測試前一天自左鼻採集鼻拭子樣本的情況引起。在向三個群組最後一次投與後14天，自所有鼻拭子僅偵測到少量中和抗體，且對於第3群組，在最後一次投與之後，可明顯看出，鼻中之抗體濃度逐漸減小(在最後一次投與之後72 h，抗體量基本上接近基線水準)。可以看出，此研究藥物主要附著於鼻腔部位且抗體濃度隨時間推移逐漸降低。 實例7：抗體B與抗體D的混合物(A8G6)之臨床前實驗 1. 引言
此實施例說明抗體B與抗體D的混合物之臨床前實驗結果。在此實施例中，混合物命名為A8G6；含有抗體B及抗體D，該兩種抗體均藉由以流動方式分選處於恢復期之冠狀病毒患者之周邊血液樣本中的病毒特異性記憶B細胞獲得，且對所分選的個別細胞進行抗體基因分析；接著藉由線性基因卡匣選殖抗體基因序列；且最後，藉由在抗體基因上進行穩定轉染表現來製備用於鼻噴霧之抗體。抗體B及抗體D非競爭性地與SARS-Cov-2棘蛋白之受體結合域(RBD)之不同及互補抗原決定基結合，使得以協同方式阻止病毒經由與人類細胞上的血管收縮素轉移酶2 (ACE2)特異性結合而侵入細胞，且同時，由病毒及中和抗體形成之免疫複合體更易被巨噬細胞細噬及消除，從而實現抑制病毒感染細胞之效應。 2. 藥理學2.1 結合活性
分別對A8G6中所含有之冠狀病毒中和抗體進行下列幾種結合活性研究：
(1)藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)偵測抗體D抗體與野生型病毒株及多種突變株之棘蛋白的結合條件：實驗結果可見於 圖 14中，抗體D與多種冠狀病毒突變株D614G及Gamma (P.1)之S1重組蛋白及野生型病毒株、Alpha病毒株(B.1.1.7)、Beta病毒株(B.1.351)、Kappa病毒株(B.1.617)、Delta病毒株(B.1.617.2)、Omicron BA.1病毒株(BA.1.1.529.1)、Omicron BA.2 (BA.1.1.529.2)、BA.4/5 (BA.1.1.529.4或BA.1.1.529.5)之S重組蛋白具有較高結合活性(EC50＜500 ng/mL)，且其EC50分別為25.39 ng/mL、19.45 ng/mL、43.94 ng/mL、17.82 ng/mL、15.84 ng/mL、254.5 ng/mL、122.4 ng/mL、102.5 ng/mL、89.07 ng/mL及193.7 ng/mL。
(2)藉由ELISA偵測抗體B抗體與野生型病毒株及多種突變株之棘蛋白的結合條件：實驗結果可見於 圖 15中，抗體B與冠狀病毒野生型病毒株及突變株Alpha (B.1.1.7)、Beta (B.1.351)、Gamma (P.1)、Kappa (B.1.617)、Delta (B.1.617.2)、Lambda (C.37)及D614G之重組棘蛋白的結合活性無顯著差異，且IC50分別為5.431 ng/mL、5.574 ng/mL、6.516 ng/mL、6.06 ng/mL、6.411 ng/mL、6.246 ng/mL、6.197 ng/mL及6.509 ng/mL。
(3)藉由生物膜干涉術(BLI)偵測抗體D對冠狀病毒野生型病毒株、Delta病毒株、Omicron BA.1病毒株、Omicron BA.2病毒株及Omicron BA.4/BA.5病毒株的親和力：BLI偵測結果可見於 圖 16中，且結果顯示：抗體D抗體與冠狀病毒野生型病毒株、Delta病毒株、Omicron BA.1病毒株、Omicron BA.2病毒株及Omicron BA.4/BA.5病毒株之棘蛋白的解離常數(KD)分別小於1×10 -3nM、等於2.58 nM、小於1×10 -3nM、小於1×10 -3nM、等於2.22 nM。上述結果表明：抗體D對冠狀病毒野生型病毒株、Delta病毒株、Omicron BA.1病毒株、Omicron BA.2病毒株及Omicron BA.4/BA.5病毒株之棘蛋白具有強親和力(KD ＜ 10 -8M)。
(4)藉由BLI偵測抗體B對冠狀病毒Delta病毒株及Omicron (BA.1及BA.2)病毒株之棘蛋白的親和力：BLI偵測結果可見於 圖 17中，且結果顯示，抗體B抗體與冠狀病毒Delta病毒株及Omicron (BA.1及BA.2)病毒株之棘蛋白的解離常數(KD)分別為0.162 nM、5.86 nM及2.37 nM。解離常數均小於10 -8M。上述結果表明，抗體B對冠狀病毒Delta病毒株及Omicron (BA.1及BA.2)病毒株之棘蛋白具有強親和力。 2.2 活體外中和活性
分別對A8G6中所含有之冠狀病毒中和抗體進行下列幾種活體外中和活性研究：
(1)藉由使用BLI方法來確認A8G6是否可有效地與ACE2競爭，以便阻斷ACE2與冠狀病毒Omicron RBD/S重組蛋白之結合。BLI偵測結果可見於 圖 18中。結果顯示，抗體D與ACE2部分競爭阻斷ACE2與冠狀病毒棘(S)重組蛋白的結合；抗體D不阻斷ACE2與冠狀病毒受體結合域(RBD)重組蛋白之結合；抗體B與ACE2完全競爭阻斷ACE2與冠狀病毒RBD或S重組蛋白的結合；且A8G6與ACE2完全競爭阻斷ACE2與冠狀病毒RBD或S重組蛋白的結合。
(2)藉由冷凍電子顯微術，分析其中抗體B (58G6)/抗體D (55A8)抗體與冠狀病毒突變株Omicron S蛋白結合之抗原決定基及分析分子間相互作用。可自抗體B/抗體D抗原結合片段(下文稱作抗體B/抗體D Fab)與冠狀病毒突變株Omicron棘蛋白(下文稱作S)之複合物觀測到，三個抗體D Fab及一個抗體B Fab結合至S蛋白三聚體之受體結合域(下文稱作RB)，且此等RBD以1個「上」/2個「下」或2個「上」/1個「下」的兩種構形定位；抗體D及抗體B可同時結合於一個「朝上」RBD；且抗體D Fab藉由使用抗體互補決定區(下文稱作CDR) CDRH3、CDRL1及CDRL3鑑別RBD蛋白質S345至352及S440至450之空間抗原決定基，且抗體B Fab藉由使用CDRH2、CDRH3及CDRL1鑑別RBD蛋白質S475至480及483至495之空間抗原決定基。抗體B及抗體D可同時結合至同一Omicron S蛋白。此測試提供分子結構作用機制且說明抗體B/抗體D抗體與S蛋白結合，以便阻斷病毒與受體ACE2結合且藉由不同結合位點產生協同中和活性。
(3)進行關於抗體D對冠狀病毒野生型及突變株Beta、Gamma、Kappa、Delta、Lambda及Mu之假病毒的中和活性的研究：偵測結果顯示：抗體D對野生型(WT)及突變株Beta (B.1. 351)、Gamma (P.1)、Kappa (B.1.617.1)、Delta (B.1.617.2)、Lambda (C.37)及Mu (B.1. 621)之假病毒具有極強中和能力，且其IC 50分別為37.95 ng/mL、15.17 ng/mL、20.42 ng/mL、117.9 ng/mL、194.7 ng/mL、594.8 ng/mL及24.47 ng/mL。實驗結果可見於 圖 19A中。
(4)進行關於抗體B對冠狀病毒野生型及突變株Alpha、Beta、Gamma、Kappa、Delta、Lambda及Mu之假病毒的中和活性的研究：偵測結果顯示：抗體B對野生型及突變株Alpha (B.1.1.7)、Neta (B.1.351)、Gamma (P.1)、Kappa (B.1.617)、Delta (B.1.617.2)、Lambda (C.37)及Mu (B.1. 612)之假病毒具有極強中和能力，且其IC 50分別為3.48 ng/mL、7.89 ng/mL、9.91 ng/mL、0.49 ng/mL、9.78 ng/mL、8.77 ng/mL、0.61 ng/mL及10.13 ng/mL。實驗結果可見於 圖 19B中。
(5)進行關於A8G6對冠狀病毒突變株Delta及Omicron (BA.2、BA.2.12.1及BA.5)之假病毒的中和活性的研究，以便確定A8G6冠狀病毒中和抗體針對冠狀病毒突變株Delta及Omicron (BA.2、BA.2.12.1及BA.5)之中和活性。偵測結果顯示：A8G6冠狀病毒中和抗體對冠狀病毒突變株Delta及Omicron (B.1.1.529、BA.2、BA.2.12.1及BA.5)之假病毒之平均IC 50(平均值±標準差)分別為6.4±1.0 ng/mL、13.3±0.4 ng/mL、13.2±4.9 ng/mL、36.3±6.1 ng/mL及407.6±92.1 ng/mL，且A8G6抗體可有效中和上述冠狀病毒突變株。特定實驗結果列於 圖 20中。
(6)進行抗體B及抗體D組合作用驗證及假病毒中和實驗：為了測定冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧A8G6中之主要活性成分(抗體B及抗體D)的組合作用，展開抗體B及抗體D組合之BA.2冠狀病毒假病毒中和實驗。根據Bliss獨立性模型，藉由分析模板MacSynergy II分析在組合使用抗體B及抗體D之後獲得的假病毒中和實驗數據，以便測定組合作用在此實驗系統中的判斷標準，且分析當抗體B及抗體D組合使用時可能的協同效應及拮抗效應。抗體B及抗體D組合之假病毒中和實驗結果顯示，協同作用體積為263.0 ±31.1 ng/mL 2%且高於MacSyerngy II中所定義之強協同效應之臨限值(協同作用體積＞100 ng/mL 2%)，其指示兩種抗體之組合具有強協同效應；且抗體B及抗體D組合之假病毒中和實驗結果顯示，拮抗作用體積為-0.1±0.1 ng/mL 2%且在由MacSyerngy II定義之添加量之區間範圍(-25 ng/mL 2%至25 ng/mL 2%)內，其指示兩種抗體之組合無拮抗效應。同時，CCK-8細胞活性偵測結果表明，在任何濃度組合之情況下，細胞活性為約100%，其指示當組合使用抗體時，不產生細胞毒性。根據上文，顯示出抗體B與抗體D (冠狀病毒中和抗體)之組合使用具有強協同效應而無拮抗效應。實驗結果可見於表7、 圖 21A及 圖 21B中。 表7：抗體B及抗體D組合BA.2假病毒中和實驗分析結果
假病毒 抗體 協同作用體積* (ng/mL 2%) 拮抗作用體積(ng/mL 2%)
BA.2 A8G6 (抗體B+抗體D) 241 -0.12
285 0
平均體積(平均值±標準差) 263.0±31.1 -0.1±0.1
* Macsynergy使用三個複合孔之原始數據計算一個協同作用體積/拮抗作用體積值。
進行中和分析以使用假病毒且接著使用真實病毒確認協同效應。使用真實的SARS-CoV-2、Delta及Omicron病毒，用溶菌斑減少中和測試(PRNT)量測抗體之中和力價。簡言之，在24孔培養盤之各孔中接種Vero E6細胞(2.5×10 5個)。將細胞在37℃及5% CO 2下培育隔夜。第二天，將各抗體在培養基中連續稀釋5倍，最高濃度為100 μg/ml。將經稀釋抗體在37℃與包括600 PFU/ml SARS-CoV-2之相等體積一起培育1 h，其後將抗體-病毒混合物接種至24孔盤中之預接種Vero E6細胞單層上。在感染1 h之後，取出接種物，且將100 μl雙層培養基(補充有0.8%甲基纖維素、2% FBS及1% P/S之DMEM)添加至各孔中。在37℃培育培養盤96 h之後，將培養盤用8%多聚甲醛固定且用0.5%結晶紫染色。對各孔中之溶菌斑進行計數且以未經抗體治療之對照標準化以計算相對感染力。在GraphPad Prism9中計算PRNT 50值。
個別NAb 55A8 (抗體D)及58G6 (抗體B)可中和假模式化之SARS-CoV-2及Delta、Omicron BA.1及BA.2變異體，及Omicron BA.1+L452R ( 圖 22A)，以及其他SARS-CoV-2變異體(數據未示出)。58G6與55A8之組合展示針對假模式化之Omicron BA.1、BA.1+L452R及BA.2之明顯協同效應( 圖 22A)。此外，組合治療展示針對真實Omicron BA.1之協同效應( 圖 22B)。值得注意地，o BA.1之IC50 (2.81 ng/mL)遠低於所有其他目前已知NAb之IC50值。相比之下，S30917與LY-CoV140418之IC50值分別為191.1及17.30 ng/mL。因此，58G6與55A8之組合呈現增強的中和效力及針對SARS-CoV-2之廣度。
藉由在Omicron BA.4/5及Delta病毒株之不同配比製劑的情況下研究A8G6之兩種抗體之假病毒中和活性而將抗體B:抗體D比率設定為1: 4，使得一直維持目前流行病毒株BA.4/5之中和活性，且可維持Delta樣病毒株之中和活性。
(7)進行A8G6組合比率確定-假病毒中和實驗：為了確定兩種主要活性成分(抗體B及抗體D)於A8G6冠狀病毒中和抗體組合的鼻用噴霧中之組合比率，展開Omicron (BA.2、BA.2.12.1及BA.5)及Delta冠狀病毒假病毒中和實驗，以便確定兩種抗體在A8G6中之組合比率。假病毒中和實驗結果顯示，當冠狀病毒中和抗體(抗體D及抗體B)單獨使用時，冠狀病毒突變株Omicron (BA.2)假病毒之IC50分別為20.4 ng/mL及1951 ng/mL，其表明抗體D對BA.2病毒株之中和活性高於抗體B；且當抗體D及抗體B組合(1:1、3:2及2:1)使用時，BA.2假病毒之平均IC50 (平均值±標準差)分別為32.7±1.6 ng/mL、39.3±2.8 ng/mL及27.9±1.1 ng/mL，其表明藉由組合兩種抗體以供使用，可維持與抗體D分開使用時的中和活性類似的BA.2中和活性(表8； 圖 23A)。 表8：不同抗體B:抗體D組合比率下之BA.2假病毒中和實驗結果
假病毒 抗體 IC50 ng/mL 平均IC50 ng/mL  (平均值±標準差)
BA.2 抗體D 20.4 20.4
抗體B 1951 1951
抗體D+抗體B (1:1) 31.6 32.7±1.6
33.8
抗體D+抗體B (3:2) 37.3 39.3±2.8
41.3
抗體D+抗體B (2:1) 28.7 27.9±1.1
27.1
進一步研究單一抗體及組合抗體之中和活性，且抗體B對BA.2.12.1病毒株之中和活性低於抗體D之中和活性，因此選擇具有高抗體D比例之兩種組合(亦即抗體D+抗體B (3:2及4:1))進行研究。結果顯示，在單獨使用抗體D、單獨使用抗體B且組合使用抗體D與抗體B (3:2及4:1)的情況下，BA.2.12.1假病毒之IC50分別為49.9 ng/mL、811.3 ng/mL、49.5 ng/mL及43.6 ng/mL，其表明組合抗體可維持對BA.2.12.1病毒株的中和活性，其與在單獨使用抗體D之情況下的中和活性類似(表9； 圖 23B)。 表9：不同抗體B:抗體D組合比率下之BA.2.12.1假病毒中和實驗結果
假病毒 抗體 IC50 ng/mL
BA.2.12.1 抗體D 49.9
抗體B 811.3
抗體D+抗體B (3:2) 49.5
抗體D+抗體B (4:1) 43.6
隨著流行病進一步發展，BA.5病毒株已變為主要流行性病毒株，研究BA.5病毒株之組合抗體的中和活性，且結果顯示，在單獨使用抗體D、單獨使用抗體B且組合使用抗體D與抗體B (3:2、2:1及4:1)的情況下，BA.5假病毒的平均IC50 (平均值±標準差)分別為221.8±42.1 ng/mL、＞ 100,000 ng/mL、353.1±42.5 ng/mL、408.5±92.3 ng/mL及229.0±73.5 ng/mL (表10； 圖 23C)。 表10：不同抗體B:抗體D組合比率下之BA.5假病毒中和實驗結果
假病毒 抗體 IC50 ng/mL 平均IC50 ng/mL  (平均值±標準差)
BA.5 抗體D 251.5 221.8±42.1
192.0
抗體B ＞100,000 ＞100,000
＞100,000
抗體D+抗體B (3:2) 383.1 353.1±42.5
323.0
抗體D+抗體B (2:1) 473.7 408.5±92.3
343.2
抗體D+抗體B (4:1) 280.9 229.0±73.5
177.0
同時，考慮到Delta病毒株之強致病力性，研究組合抗體對Delta病毒株之中和活性。結果顯示，在單獨使用抗體D、單獨使用抗體B及組合使用抗體D與抗體B (3:2、2:1及4:1)之情況下Delta假病毒之平均IC50分別為185.7±36.4 ng/mL、0.89±0.06 ng/mL、2.25±0.41 ng/mL、2.14±0.79 ng/mL及1.12±0.68 ng/mL (表11； 圖 23D)。 表11：不同抗體B:抗體D組合比率下之Delta假病毒中和實驗結果
假病毒 抗體 IC50 ng/mL 平均IC50 ng/mL  (平均值±標準差)
Delta 抗體D 211.4 185.7±36.4
159.9
抗體B 0.84 0.89±0.06
0.93
抗體D+抗體B (3:2) 2.54 2.25±0.41
1.96
抗體D+抗體B (2:1) 2.69 2.14±0.79
1.58
抗體D+抗體B (4:1) 1.61 1.12±0.68
0.64
根據上述內容，BA.5及Delta病毒株之活性視為主要選擇標準；假病毒中和實驗結果表明，當抗體D及抗體B按3:2、2:1及4:1之三種比率之中的4:1比率組合使用時，IC50為最高的；當抗體D及抗體B按4:1之比率組合使用時，Omicron (BA.5)病毒株之中和活性相對於單獨使用抗體D的情況保持不變，且Delta病毒株之中和活性相對於單獨使用抗體B的情況保持不變，以確保組合抗體可在當前冠狀病毒變種中保持兩種最重要類型之病毒株的活性，且因此，A8G6製劑中之抗體D:抗體B比率經確定為4:1。
(8) A8G6抗體對冠狀病毒野生型病毒株及Delta及Omicron病毒株活病毒之活體外中和活性：藉由溶菌斑減少中和測試，偵測到A8G6及抗體D對野生型、Delta及Omicron病毒株活病毒之活體外中和活性。結果顯示：抗體D對野生型、Delta及Omicron活病毒之IC50分別為3.03 ng/mL、26.4 ng/mL及8.24 ng/mL；且A8G6對野生型、Delta及Omicron活病毒之IC50分別為1.28 ng/mL、4.37 ng/mL及2.81 ng/mL。據證明，A8G6及抗體D對野生型、Delta及Omicron活病毒具有高中和活性。測試結果可見於 圖 24中。 2.3 活體內中和活性
對A8G6中所含有之冠狀病毒中和抗體進行下列幾種活體內中和活性研究：
(1)進行各抗體針對感染黃金倉鼠之冠狀病毒Omicron病毒株之劑量-效應評估：
圖 25A 至圖 25C顯示在倉鼠模型中55A8、58G6及55A8/58G6混合液針對Omicron之保護功效的結果。將被10 4個PFU的Omicron攻擊之敍利亞黃金倉鼠在感染前1 h及感染後24及48 h用58G6、55A8或兩種抗體混合液進行治療。在治療後第3天採集鼻甲骨、氣管及肺，且藉由病毒力價測定(藉由PFU/g及qRTPCR)分析。所有治療均產生穩定的病毒清除( 圖 25B 及圖 25C)。值得注意地，在組合治療組中藉由在上呼吸道(鼻甲及氣管)及下呼吸道(肺)中量測RNA複本數及PFU偵測到之病毒完全或幾乎完全得到抑制，而可在接受58G6或55A8單藥療法之其他兩個組中偵測到病毒RNA或活病毒。綜合而言，此等結果顯示58G6與55A8之組合可經由協同效應在活體內有效抑制Omicron變異體。
為了優化協同效應，進行更多動物保護實驗。為評定55A8針對Omicron變異體之保護功效，吾人在第0天用10 4個PFU之Omicron BA.1經鼻內攻擊倉鼠。在感染前1 h及感染後24及48 h，各組倉鼠接受使用單獨55A8 (第1組，1000 μg)或55A8與58G6之組合(第3組，各抗體為500 μg)之單一鼻內(IN)治療。在感染後3、24及48 h，各組倉鼠接受使用單獨55A8 (第2組，1000 μg)或55A8與58G6之組合(第4組，各抗體為500 μg)之單一IN治療( 圖 26A)。除了投與緩衝劑而非抗體以外，另一組(第5組)係按照第1組方案進行治療( 圖 26A)。吾人量測單獨的55A8或55A8與58G6之組合對在感染後第3天採集之臨床上相關組織(亦即，鼻甲、氣管及肺)中之Omicron病毒複製之效應。藉由RT-qPCR及溶菌斑分析偵測Omicron病毒複製。
正如預期，用緩衝劑質量之倉鼠在鼻甲及肺中具有顯著的病毒RNA複本數及病毒力價。在感染前1h用55A8或2-混合液預處理，接著兩次劑量投與使肺中之Omicron病毒RNA複本數降低4至5個對數。更值得注意地，在鼻甲中，感染前1 h用55A8及58G6混合物預質量，然後兩次劑量投與(第3組)使Omicron病毒RNA複本數降低六個數量級，產生顯著低於第1組中之複本數的複本數( 圖 26B)。相符地，感染後3天(dpi)時第3組中之病毒力價顯著低於其他組中之病毒力價或在偵測極限(L.O.D.)之下。( 圖 26C)。55A8或2-混合液之保護作用在感染後3 h投與治療且在感染後24及48 h重複時略微下降。此等結果表明，55A8防止IN感染Omicron變異體且組合55A8與58G6增加了在倉鼠中之保護功效。實際上，用58G6與55A8之組合治療之動物與模擬感染之對照(第5組)相比維持較高體重增加( 圖 26D)。此證實55A8/58G6混合液減少Omicron病毒複製且預防疾病症狀，而不會造成額外痛苦。
為測定組合療法中所包括之抗體之保護性劑量，吾人進一步分別用四種不同劑量(各抗體250、100、50及25 μg，每日投與)進行實驗作為第1組、第2組、第3組及第4組；鼻內投與抗體以評估保護功效及評定可能的保護差異( 圖 27A)。另外，僅向另一組(第5組)投與緩衝劑作為對照。所有測試的劑量提供保護( 圖 27B 及圖 27C)。出人意料地，在25 μg劑量組中(第4組)，病毒RNA含量及力價大體上類似於其他干預組中之病毒RNA含量及力價。此等數據顯示，即使在每抗體25 μg之極低劑量下，58G6及55A8之組合亦會賦予保護。因此，2-混合液係對抗活體內Omicron變異體感染之有前景的候選。
(2)進行A8G6針對感染黃金倉鼠之冠狀病毒Omicron病毒株之劑量-效應評估：以經鼻滴入方式將A8G6冠狀病毒中和抗體施用至雌性金倉鼠(每組6隻)，且使用Omicron病毒株進行動物攻擊(1×10 4個PFU，總共100 μL，且每鼻孔50 μL) 在攻擊前3小時、攻擊後1天及在攻擊後2天將G-1、G-2、G-3及G-4分別與10 mg/kg、4 mg/kg、2 mg/kg及1 mg/kg A8G6抗體一起施用；且G-5為對照組。(對於第1至5組，參 見圖 27A)收集體重數據，收集氣管及肺組織樣品本，藉由qRT-PCR偵測組織樣本中之病毒RNA含量，且藉由溶菌斑分析方法量測病毒力價。結果如下：
體重：在黃金倉鼠感染冠狀病毒Omicron病毒株三天之後，A8G6之劑量為10 mg/kg、4 mg/kg、2 mg/kg及1 mg/kg之各組中的黃金倉鼠之體重分別增加8.71±2.39%、8.92±1.91%、9.97±2.15%及7.83±1.86%，而對照組中黃金倉鼠的體重增加7.59±1.57%。結果可見於 圖 27D中。
病毒RNA含量：10 mg/kg經鼻滴入組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷Log10(複本/公克)分別為3.11±1.28、2.10±0.78及2.24±0.62；4 mg/kg經鼻滴入組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷Log10(複本/公克)分別為3.67±1.43、3.00±0.82及2.75±0.57；2 mg/kg經鼻滴入組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷Log10(複本/公克)分別為4.55±1.35、3.83±1.54及3.64±1.45；1 mg/kg經鼻滴入組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷Log10(複本/公克)分別為3.74±1.67、3.02±0.45及2.47±0.84；且對照組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷Log10(複本/公克)分別為7.06±0.57、7.96±0.65及7.20±1.33。在攻擊之後，經鼻滴入投與組中黃金倉鼠之肺組織中之病毒RNA負荷降低3.56-5.86 Log10值且顯著低於對照組。在攻擊之後，經鼻滴入投與組中黃金倉鼠之氣管中之病毒RNA負荷相對於對照組降低2.51至3.95 Log10值。藉由統計分析得出，實驗組及對照組之P值小於0.01且具有顯著差異。以統計方式分析對照組之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷及不同劑量投與組之氣管與左右肺組織中之病毒RNA負荷；結果顯示，數據與正態分佈及方差齊性分析相符；且藉由使用雙向方差分析(2-Way ANOVA)，P值小於0.01且具有顯著的統計差異。參見 圖 27B。
病毒力價：在攻擊之後3天，解剖所有黃金倉鼠，分別採集氣管與左右肺組織以進行病毒力價量測。對照組中黃金倉鼠之氣管與左右肺組織中之Log10(PFU/g)病毒力價之算術平均值分別為4.96±0.79、6.24±1.04及6.25±0.55；10 mg/kg、4 mg/kg及1 mg/kg經鼻滴入組中之氣管及左右肺組織中之Log10 (PFU/g)病毒力價處於偵測極限(1.30)；2 mg/kg經鼻滴入組中之氣管及左右肺組織中Log10 (PFU/g)病毒力價的平均值分別為1.78±1.18、1.71±1.00及1.82±1.27；且與對照組相比，經鼻滴入組中肺組織中之病毒力價降低4.43-4.95 Log10值且氣管中之病毒力價降低3.18-3.66 Log10值。藉由統計分析得出，實驗組及對照組之P值小於0.0001且具有顯著差異。以統計方式分析對照組之氣管及左右肺組織中之病毒力價及不同劑量投與組之氣管及左右肺組織中之病毒力價，且結果顯示數據與方差齊性分析相符；且藉由Kolmogorov-Smirnov測試方法偵測病毒效價數據之正態分佈，且結果顯示，實驗組之數據與接近或低於偵測極限之正態分佈不相符，且對照組之數據與正態分佈相符。藉由使用雙向方差分析(2-Way ANOVA)，P值小於0.0001且具有極其顯著的統計差異。結果可見於 圖 27C中。
肺組織病理學：經Omicron感染之黃金倉鼠之肺病理學損傷不明顯，且比較投與組與對照組且不存在顯著差異。 2.4 免疫學特徵
冠狀病毒突變株B.1.1.7及B.1.351用作研究抗體D是否介導冠狀病毒感染之抗體依賴性增強(ADE)效應的細胞模型，且結果表明抗體D無ADE效應。結合抗體D對冠狀病毒活病毒的活體內及活體外中和活性數據，指出抗體D不介導冠狀病毒感染的ADE效應。同樣，對於抗體B，研究抗體B是否藉由使用(i)冠狀病毒野生型、D614G及基於D614G之多重突變株假病毒及冠狀病毒突變株B.1.1.7、BA.1及BA.2作為細胞模型且使用各種細胞模型(諸如(ii) Raji及Daudi中之冠狀病毒突變株B.1.1.7、BA.2及BA.4)來介導冠狀病毒感染的ADE效應。結果表明抗體B (亦即58G6)沒有ADE效應。結合抗體B對冠狀病毒活病毒之活體內及活體外中和活性數據，指出抗體B不介導冠狀病毒感染之ADE效應。 3. 藥物動力學
主要用C57BL/6小鼠及恆河獼猴進行關於A8G6中和抗體之藥效學研究，以用於吸收及分佈測試。在藥效學研究中，對小鼠之血液樣本及組織樣本以及食蟹獼猴之鼻拭子樣本中之A8G6的研究係基於酶聯免疫吸附分析(ELISA)。 3.1靜脈內注射
藉由靜脈內注射(1 mg/kg，12隻C57BL/6小鼠，一半雄性及一半雌性)投與A8G6冠狀病毒中和抗體。藉由ELISA測試血液中A8G6抗體之含量，且結果顯示，在投與之後0.25 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h、48 h、72 h、168 h (7 d)、336 h (14 d)、504 h (21 d)及672 h (28 d)，小鼠血液中A8G6抗體之平均值分別為26,453±2,730 ng/mL、24,100±3,023 ng/mL、19,814±2,532 ng/mL、15,627±2,245 ng/mL、13,133±831 ng/mL、11,573±1,305 ng/mL、9,098±1,094 ng/mL、8,808±799 ng/mL、7,592±1,372 ng/mL、6,625±1,049 ng/mL、4,448±1,374 ng/mL、2,756±1,149 ng/mL及2,056±914 ng/mL；小鼠血液中A8G6抗體之統計半衰期(24 h-672 h)為271h (11.3 d)；在統計學上，AUC 0-672h為3315.5 μg·h/mL且AUC (0-∞)為4119.9 μg·h/mL；CL為0.243 mL/h/kg；表觀分佈體積(Vd)為94.8 mL/kg。以上結果表明，A8G6在靜脈內注射之後在血液中具有較長半衰期，且主要存在於血液及體液中。 3.2 鼻內投與分佈
(1)在小鼠中經鼻滴入投與A8G6冠狀病毒中和抗體：此實驗使用36隻C57BL/6小鼠(一半雄性及一半雄性)，其中30隻小鼠係在實驗組中(一半雄性及一半雌性)，且其他6隻小鼠(一半雄性及一半雌性)係在空白對照組中且未進行治療以獲得後續稀釋之A8G6標準曲線樣本。A8G6中和抗體之濃度為5 mg/mL；藉由經鼻滴入投與一劑量之A8G6中和抗體(各劑量係在左右鼻孔中之每一者中滴注兩滴(每次7.5 μL/滴))，且各劑量總共為30 μL或150 μg。在投與後0.25 h、1 h、4 h、8 h及24 h藉由ELISA測試小鼠之鼻黏膜、血液、氣管、肺及肝組織中之A8G6含量。結果顯示，在投與之後0.25 h、1 h、4 h、8 h及24 h，血清中A8G6之幾何平均值分別為13.7 ng/mL、15.2 ng/mL、23.4 ng/mL、37.7 ng/mL及26.1 ng/mL，且在投與後0.25 h、1 h、4 h及8 h，血清中之統計AUC 0-24h為0.809 μg·h/mL，鼻黏膜中A8G6之含量分別為55737 ng/ml、43710 ng/ml、3083 ng/ml及1239 ng/ml；在投與後24 h，LOB(空白極限，空白樣本之最高極限)中A8G6之含量為436 ng/mL或低於436 ng/mL，鼻黏膜中A8G6之統計AUC 0-24h為166 μg·h/mL，且小鼠鼻黏膜中A8G6抗體之半衰期(0.25至24 h)為2.71 h；氣管中A8G6之含量分別為254 ng/ml、335 ng/ml、83 ng/ml及87.6 ng/ml，且投與後24 h，LOB中A8G6之含量為53.3 ng/mL或低於53.3 ng/mL；肺及肝組織中之A8G6含量接近LOB。在投與後0.25 h、1 h、4 h及8 h，統計學上，血液中A8G6之含量分別為0.02%、0.03%、0.76%及3.04%，且氣管中A8G6之含量分別為鼻黏膜中抗體含量之0.46%、0.77%、2.69%及7.07%。指出藉由經鼻滴入投與，A8G6抗體主要分佈於鼻黏膜中且維持在高濃度下至少8 h。較少A8G6分佈於氣管中，且A8G6在肺、肝及血液中之分佈極低。 圖 28A 至圖 28C中顯示更多細節。
(2)藉由鼻用噴霧投與後，恆河獼猴中藥物之藥物動力學：選擇12隻恆河猴獼猴且分成2組，每組4隻雌性及2隻雄性。藉由鼻噴霧投與：藥物以一次劑量形式噴霧於左鼻孔中一次且噴霧於右鼻孔中一次。在D1投與一個劑量之藥物。在D5以4 h±5 min之時間間隔投與三次劑量。在D7以4 h±5 min之時間間隔投與三次劑量。如結果中所示，就所測試之鼻拭子藥物濃度而言，在藉由鼻用噴霧投與一次劑量之後，鼻拭子樣本中藥物之濃度快速增加至較高水準，在動物個體之間具有顯著差異。在投與之後0.25 h，平均濃度為50096±10263 ng/mL (36051至67343 ng/mL)且接著緩慢下降。因為在投與之後2 h、4 h、6 h收集之數據來自不同日期治療之不同組，所以鼻拭子藥物濃度會略微顛倒且反覆。在投與之後24 h，鼻拭子中之藥物濃度仍維持在高水準下，平均值為7064±7625 ng/mL (357至20067 ng/mL)，該等藥物等度在投與之後0.25 h降低至平均值之約14.1% (7064對50096 ng/mL)。在藉由鼻用噴霧以每日三次劑量投與之後，藥物濃度在鼻拭子樣本中始終維持高水準，其中在動物個之間具有顯著差異。在以第三劑量投與之後0.25 h，鼻拭子中之藥物濃度達到最大值，平均值為90870±37047 ng/mL (63052至160327 ng/mL)。因為在投與之後2 h、4 h、6 h收集之數據來自不同日期治療之不同組，所以鼻拭子藥物濃度會略微顛倒且反覆。在投與之後24 h，鼻拭子中之藥物濃度仍維持在高水準，平均值為17882±22343 ng/mL (4058-59077 ng/mL)，該等藥物濃度投與之後0.25 h降低至平均值之約19.7% (17882對90870 ng/mL)。就主要PK參數而言，根據藉由鼻用噴霧以每日一次劑量及三次劑量投與之方案，投與部位處之峰值藥物濃度Cmax分別為50096及90870 ng/mL，兩者均在0.25 h之Tmax達到峰值；藥物之半衰期t1/2分別為14.3 h及12.4 h；AUC 0-24h分別為380994 ·ng/mL及872992·ng/mL；AUC 0-∞分別為526542及1193712·ng/mL；藥物之MRT 0-24h分別為9.20 h及8.59 h。以每日三次劑量投與後之Cmax、AUC 0-24h及AUC 0-∞分別比以每日一次劑量投與後之Cmax、AUC 0-24h及AUC 0-∞高1.81、2.29及2.27倍。然而，就Tmax、t 1/2及MRT 0-24h而言，以一次劑量投與且以三次劑量投與類似。指出藥物之PK特徵在以每日三次劑量投與之後並未改變。概言之，在鼻內投與之後，A8G6中和抗體主要分佈於鼻黏膜中，其在諸如肝、肺及血液之其他組織中的含量較低。指出鼻黏膜中A8G6抗體之濃度可維持預定目標濃度，其在藉由經鼻滴入投與後之6至8 h可滿足投與當天三次劑量之環境。 4. 毒理學
進行關於在非GLP條件下藉由經鼻滴入反覆投與至CD-1小鼠及藉由單次靜脈內注射及反覆鼻用噴霧投與至石蟹獼猴之A8G6冠狀病毒中和抗體的藥理學研究。研究結果顯示，在不同物種及劑量之毒理學測試中，A8G6不會引起嚴重不可逆的異常反應。測試結果表明A8G6為高度安全的。
另外，亦在GLP條件下進行向恆河獼猴之反覆鼻用噴霧投與，且各測試組中之動物未明顯具有與測試對象相關之各指數變化。病理學檢查之結果顯示，在各測試組中，在屍檢組織及動物器官中未發現與所測試對象之投與相關的顯著組織病理學變化。免疫原性之結果顯示，A8G6冠狀病毒中和抗體與鼻用噴霧組合之反覆鼻用噴霧投與的組合在反覆鼻用噴霧投與之後引起恆河猴獼猴(血清)之弱免疫原性，且基本上在投與位點(亦即鼻黏膜)處未觀測到免疫原性。指出A8G6具有良好安全性。 5.全面評估及結論
在此實例中，根據A8G6冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧之機制及特徵，研究A8G6冠狀病毒抗體之活體外及活體內藥效學作用。
就活體外活性而言，根據中和效力及結合能力之兩個態樣，考慮到不同流行性病毒株，研究WT、Delta、Omicron病毒株的對應RBD及棘蛋白結合能力，以及假病毒及活病毒之各種病毒株的中和效力。非臨床藥效學研究之結果顯示，A8G6冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧有效地中和鼻腔中之冠狀病毒，從而阻斷冠狀病毒在體內擴散。因此，A8G6具有對抗冠狀病毒感染之功能。
就活體內活性而言，經考慮1)冠狀病毒可在黃金倉鼠之肺及其他呼吸系統中倍增；2)被感染的黃金倉鼠體重減輕，顯示對動物之致病力；及3)黃金倉鼠之肺亦顯示COVID-19患者之肺中可見的相同病變，因此黃金倉鼠用作活體內病毒攻擊之動物模型。在黃金倉鼠之動物模型中，在接種Omicron病毒株之前/之後藉由經鼻滴入向黃金倉鼠投與不同劑量之A8G6，由此在預防及治療黃金倉鼠中之Omicron病毒感染方面評估藉由鼻滴投與A8G6。
非臨床藥效學研究發現，A8G6可有效地結合不同冠狀病毒株之RBD蛋白質，有效地中和不同冠狀病毒假病毒株Delta、Omicron (BA.2、BA.2.12.1及BA.5)，且活病毒實驗亦顯示出A8G6之優良病毒中和效力。
在使用黃金倉鼠感染模型之活體內藥效學研究中，藉由用四種劑量(10 mg/kg、4 mg/kg、2 mg/kg及1 mg/kg)經鼻滴入投與A8G6，肺及氣管組織中之感染性病毒之力價接近於或低於偵測極限，且與對照固相比降低至少4.43及3.18 Log10值，表明藉由經鼻滴入投與A8G6可有效減少冠狀病毒Omicron對黃金倉鼠的感染。
為了研究A8G6之藥物動力學，可以進行對小鼠單次劑量靜脈內注射，藉由不同劑量經鼻滴入向小鼠投與，且藉由鼻用噴霧投與至獼猴恆河猴，以研究在不同投與途徑下A8G6之活體內藥物濃度隨時間推移的變化。藉由鼻用噴霧每次向恆河獼猴投與0.7 mg/劑量之A8G6，且在不同時間點測試鼻拭子樣本中之藥物濃度。另外，在藉由經鼻滴入向CD-1小鼠投與之A8G6之早期毒理學測試中，亦進行對應的毒理動力學研究。在關於食蟹獼猴之早期毒理學研究中，研究在藉由鼻用噴霧及靜脈內注射投與下之毒物動力學。在GLP條件下在關於恆河猴之毒理學研究中研究在鼻用噴霧投與下之毒物動力學。
A8G6冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧每隔一天投與至恆河猴，持續7天，每劑量0.7 mg，其中在D1投與一次劑量，在D3投與一次劑量，在D5以4 h±5 min之時間間隔投與三次劑量，且在D7以4 h±5 min之時間間隔投與三次劑量。在投與期內採集鼻拭子樣本。結果顯示，在用一次劑量及三次劑量之每日鼻噴霧方案中，鼻拭子中之藥物濃度之變化趨勢基本上相同，且在投與之後0.25 h，鼻拭子中之藥物濃度均達到最大值，且在投與之後24 h，鼻拭子中之藥物CL之趨勢基本上相同，其在投與之後0.25 h減少至CL之約14.1%至19.7%。與使用一次劑量之每日鼻噴霧方案相比，使用三次劑量之每日鼻噴霧方案顯著增加藥物濃度。同時，在投與三次劑量之後平均藥物濃度係在投與一次劑量之後的1.4至4.1倍。 圖 29中顯示更多細節。根據藉由鼻用噴霧以每天一次劑量及三次劑量投與之方案，投與部位之峰值藥物濃度Cmax分別為50096及90870 ng/mL，兩者均在0.25 h之Tmax達到峰值；藥物之半衰期t1/2分別為14.3 h及12.4 h；AUC 0-24h分別為380994 ·ng/mL及872992·ng/mL，AUC 0-∞分別為526542及1193712 ng/mL；藥物之MRT 0-24h分別為9.20 h及8.59 h。以每日三次劑量投與後之Cmax、AUC 0-24h及AUC 0-∞分別比以每日一次劑量投與後之Cmax、AUC 0-24h及AUC 0-∞高1.81、2.29及2.27倍。然而，就Tmax、t 1/2及MRT 0-24h而言，以一次劑量投與且以三次劑量投與類似。指出藥物之PK特徵在以每日三次劑量投與之後並未改變。
在黃金倉鼠中之活病毒(Omicron)之活體內攻擊實驗中，藉由用四種劑量(10 mg/kg、4 mg/kg、2 mg/kg及1 mg/kg)經鼻滴入投與A8G6可有效預防冠狀病毒Omicron病毒株感染黃金倉鼠。在恆河獼猴之PK實驗中，在藉由鼻用噴霧以4 h±5 min之時間間隔投與三劑5 mg/mL A8G6之後8 h，A8G6之濃度為39029±20390 ng/ml，其有效地中和當前流行性病毒株。另外，血清中之A8G6濃度極低，指示A8G6鼻用噴霧投與系統之AUC低。因此，預期選擇5 mg/mL之劑量作為臨床計劃劑量，其不僅可有效地預防當前流行性病毒株，而且可極大地降低失去針對未來變異體之中和活性之風險。在以此濃度進行之毒理學實驗中，所有組中之動物均不展現與藥物相關之異常變化。
投與頻率：非臨床藥效學及藥物動力學測試之結果顯示，A8G6冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧可在鼻噴霧投與之後停留於鼻腔中持續一定時間，且維持高濃度。因此，臨床上，可按需要採用每天3次劑量之鼻用噴霧。可認為連續投與時間不超過14天。 實例8：抗體B及抗體D之混合物(A8G6)之臨床實驗的概述
背景概述：自患有冠狀病毒肺炎之恢復期患者之周邊血液淋巴細胞篩選作為冠狀病毒中和抗體A8G6之兩種活性組分的抗體B及抗體D，且自其中分離209種冠狀病毒特異性抗體。經篩選之抗體B係一種超級抗體，其對流行的英國病毒株、印度病毒株、南非病毒株及印度Delta病毒株具有強力且有效的中和作用，且具有針對冠狀病毒的高親和力、高中和效力及廣譜突變活性，且支援優良性抗體結構分析。抗體D係一種針對冠狀病毒(BA.1及BA.2)病毒株具有高親和力及高中和效力的超級抗體。抗體B及抗體D與RBD之結合區不彼此重疊，且抗體B與抗體D之間不存在競爭性關係。相反，抗體B及抗體D對各冠狀病毒株具有一定協同效應。使用兩種抗體B及抗體D協同作用抗體之混合液療法可有效廣譜中和SARS-CoV-2及其變異體，包括Omicron病毒株BA.1及BA.2。在全球目前針對冠狀病毒報導的中和抗體中，A8G6抗體係在針對冠狀病毒的親和力及中和效力方面最佳的抗體之一。
抗體B中和抗體及抗體D中和抗體為A8G6冠狀病毒中和抗體鼻用噴霧中之活性組分。自穩定表現細胞株之培養物上清液中分離且純化抗體B中和抗體及抗體D中和抗體。A8G6之臨床製劑含有5 mg/mL之總抗體含量，其中抗體D中和抗體與抗體B中和抗體之質量比為4:1。臨床製劑中之賦形劑可見於下表12中： 表12：對於A8G6中和抗體鼻用噴霧中之賦形劑之概述
賦形劑之名稱 功能 目標濃度/mL 特性
七水合磷酸氫二鈉  pH調節劑 0.50 mg 具有計劃濃度之緩衝系統可維持製劑之目標pH值。
單水合磷酸二氫鈉  pH調節劑 2.52 mg
二水合海藻糖 蛋白質穩定劑，滲透壓度調節劑(osmolality modifier) 44.21 mg 具有計劃濃度之海藻糖可使製劑中之蛋白質穩定且維持目標滲透壓度。
丙三醇 增濕劑 20.00 mg 具有計劃濃度之丙三醇起到增濕作用。
HPMC 增黏劑 0.20 mg 具有計劃濃度之HPMC可確保製劑之黏度以滿足鼻用噴霧在鼻腔中之滯留性要求。
Tween 80 界面活性劑 0.10 mg 具有計劃濃度之Tween 80可防止由振盪(例如在運輸及處置期間)及其他固液及空氣-液體界面上之表面張力引起聚集體形成。
苯紮氯銨 抑菌劑 0.10 mg 具有計劃濃度之苯紮氯銨可滿足對抑菌功效之要求。
注射用水 溶劑 達到1 mL 其用於溶解抗體及賦形劑。
根據藥物療法要求，標示量設定為4.5 mL以確保鼻用噴霧可總計噴射至少42次。
生物分析方法之確認：研發兩種方法以測試人類血清及鼻拭子中之A8G6中和抗體之濃度。在第一種方法中，進行ELISA以測試總抗RBD抗體濃度。由於大部分個體已接種針對冠狀病毒之疫苗，故血清中存在高及可變濃度之抗RBD基線抗體，因此第一種方法不適用於測試血清樣本中之A8G6濃度。因為鼻腔中之抗RBD基線抗體之濃度極低，所以第一種方法更適合於測試鼻腔中之A8G6濃度。亦研發第二方法，且可特異性測試抗體B在A8G6中之濃度。此方法用於測試血清中抗體B之濃度以估計A8G6之濃度。
臨床樣本測試及分析之概述：總共360個血清樣本提供於此IIT研究中且藉由第一種方法(抗RBD ELISA)進行測試。結果顯示，在整個測試期期間，個體血液中之冠狀病毒抗體濃度在投與之前及之後無顯著變化，但個別個體之間存在顯著差異。有3名尚未接種冠狀病毒疫苗之個體(1c10、1d02、4009)且血液中冠狀病毒抗體之濃度顯著低於其他個體。推測當前測試及分析方法可能無法有效地區分A8G6冠狀病毒中和抗體與接種冠狀病毒疫苗之後產生的抗體。個體之間抗體之巨大差異可與個體因素、所注射疫苗之類型及注射時間相關。當第二抗體B特異性分析用於測試主要來自在多日投與之後第3群組及第4群組之樣本的血清樣本時，結果顯示，所有樣本中之抗體B之濃度低於偵測下限(0.5 ng/mL)，表明A8G6以極低含量進入血液。總共1032個鼻拭子樣本提供於此IIT研究中，且該等樣本符合允收準則。測試結果顯示，個體鼻腔中之基線抗體濃度小於10 ng/mL，其不受冠狀病毒疫苗之疫苗接種狀態影響。在藉由鼻用噴霧投與A8G6抗體之後，鼻腔中之抗體濃度顯著增加。結果表明，由接種疫苗本身產生之抗體在鼻腔中具有低濃度，且當前分析方法可有效地測試鼻腔中之A8G6濃度。
研究結果之概述：關於研究概述，參見下表13。 表13：IIT研究概述
研究報導編號 研究目標 研究設計 用法 個體數目
AY-62-8001 對於A8G6之人類安全性、耐受性及藥物動力學研究 用於評估健康個體中之A8G6中和抗體鼻用噴霧之安全性、耐受性及藥物動力學的隨機、雙盲、安慰劑平行對照之臨床研究 藉由鼻內投與，左右鼻孔中之各者以單次劑量形式噴霧一次(或兩次)，每劑量140 μL (或280 μL)。 108
在開始此IIT研究之前，對A8G6中和抗體進行一系列活體外及臨床前研究以支援臨床研究中劑量之投與持續時間。IIT研究係在108名健康個體(雄性或雌性)中進行A8G6中和抗體鼻用噴霧之安全性、耐受性及藥物動力學的隨機、雙盲、安慰劑平行對照之臨床研究。其主要目標為評估健康個體中A8G6中和抗體鼻用噴霧之安全性及耐受性，且其次要目標為評估健康個體中之血清中之藥物濃度及A8G6中和抗體鼻用噴霧之鼻拭子測試。在自合格個體中篩選出參與者之後，將其分配給第1群組、第2群組、第3群組及第4群組且在自投與前1天至最後一次投與之後3±1天之對應時間點(對於第4群組，7±2天)進行血液及鼻拭子測試。對最後一次投與後第2天及3±1天對第1群組進行安全性檢查；在最後一次投與後第4天及3±1天對第2群組進行安全性檢查；在最後一次投與後第8天及3±1天對第3群組進行安全性檢查；且在最後一次投與後第17天及7±2天對第4群組進行安全性檢查。投與劑量及頻率如下：測試組：A8G6中和抗體鼻用噴霧；規格：5 mg/mL，6 mL/小瓶；鼻內投與，鼻用噴霧以單次劑量(140 μL (或280 μL)/劑量)形式在左鼻及右鼻孔中之各者中噴霧一次(或兩次)；及安慰劑組：僅賦形劑；規格：0 mg/mL，6 mL/小瓶，鼻內投與，賦形劑係以單次劑量(140 μL (或280 μL)/劑量)形式在左鼻及右鼻孔中之各者中噴霧一次(或兩次)。向不同群組投與之劑量如下：
第1a群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天1次劑量，總共持續1天；第1b群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天2次劑量，總共持續1天；第1c群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(280 μL/劑量)形式鼻內投與一次且針對左右鼻孔中之各者重複噴霧一次，每天1次劑量，總共持續1天；及第1d群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天4次劑量，間隔時間4 h，總共持續1天；及第2群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天4次劑量，間隔時間4 h，連續3日；第3群組(12名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天4次劑量，間隔時間4 h，連續7日；及第4群組(36名個體)：向左右鼻孔中之各者以單次劑量(140 μL/劑量)形式鼻內投與一次，每天4次劑量，間隔時間4 h，連續14天；
初始臨床藥理學特徵：IIT臨床研究之結果呈現以下藥物動力學特徵。
鼻腔中之A8G6中和抗體濃度可在投與每天1至2次劑量之後4至8 h維持高於Omicron BA.4/5中和濃度IC90 (5 μg/mL)，但在投與之後12 h不完全高於5 μg/mL。在投與每天4次劑量之後4至12 h，維持Omicron BA.4/5中和濃度IC90 (5 μg/mL)。特別地，12 h後之平均濃度，13至22 μg/mL，比IC90 (5 μg/mL)高得多，其可在一日多次投與之後為鼻腔中之藥物積聚。根據結果，可發現單次劑量投與可在8 h內達成目標濃度覆蓋度。因此，各劑量之間具有8 h時間間隔的每天3次劑量可在一天24h內中達成目標濃度覆蓋度。對A8G6 IIT之鼻拭子樣本進行BA.4/5假病毒中和實驗研究。根據抑制速率，在每天投與4次劑量之後4 h收集鼻拭子樣本，且在1:10稀釋之後可達到對於BA.4/5假病毒之超過90%之抑制率。抑制率基本上對應於鼻腔中之A8G6濃度。一些樣本對於BA.4/5假病毒之抑制率在鼻噴霧之後8 h、12 h及24 h高於80%。假病毒中和實驗證實，A8G6可在鼻腔中維持針對冠狀病毒變異體BA.4/5之有效作用較長時間。
在最後一次投與之後24 h，個體中藉由鼻拭子測試之藥物濃度顯著降低，且大部分個體中藉由鼻拭子測試之藥物濃度低於最後一次投與後3±1天之偵測極限。第4群組之一些個體中藉由鼻拭子測試之藥物濃度低於投與後48 h之偵測極限。
該研究中之所有108名個體的血液藥物濃度在投與之後未顯著增加，而第3群組及第4群組中之個體中之血液中的抗體B冠狀病毒抗體濃度基本上低於投與之前及之後的較低偵測極限。考慮到測試藥物之投與途徑係鼻用噴霧，推測其主要組分、A8G6冠狀病毒中和抗體及其組分很少進入或未進入血流。
總體而言，在IIT中，在經鼻投與之後的藥物動力學研究提供用於進一步最佳化經鼻投與頻率及給藥間隔、在人體中之安全性數據及隨後I期臨床試驗的基礎。
臨床藥理學實驗設計：在IIT研究中，選擇18至65歲(包括臨界值)之108名健康志願者作為健康個體，平均高度為164.16±7.89 cm，平均體重為58.10±11.13 kg且平均BMI為21.42±2.76 kg/m 2。性別比率為適當的。主要基於先前實例中關於臨床前小鼠、食蟹獼猴及恆河獼猴之藥物遺傳學及藥效學研究之結果選擇臨床劑量。A8G6冠狀病毒中和抗體之組合鼻用噴霧具有2種活性成分：抗體B中和抗體及抗體D中和抗體。抗體B及抗體D與冠狀病毒之野生型病毒株S及突變株Alpha、Beta、Indian、Delta、Gamma、Kappa、Lambda及D614G具有高結合及中和能力。對以不同比率混合之抗體D及抗體B進行假病毒中和能力測試，且結果顯示，比率(質量比)為4:1之抗體D與抗體B之混合抗體對BA.4/5假病毒最有效，其中IC50值為407 ng/mL (IC90 = 5073 ng/mL)。藉由分析模板MacSynergy Ⅱ分析在組合投與抗體B及抗體D之後的假病毒中和實驗數據，以根據Bliss獨立性模型測定其在實驗系統下之組合效應的標準，且分析兩種藥物之組合的可能的協同及拮抗效應。結果顯示，兩種冠狀病毒中和抗體(抗體B及抗體D)之組合具有強協同效應而無拮抗效應。冠狀病毒中和抗體A8G6針對冠狀病毒突變株Delta、Omicron (B.1.1.529、BA.2、BA.2.12.1及BA.5)假病毒之平均IC50值(平均值±標準差)分別為6.4±1.0 ng/mL、13.3±0.4 ng/mL、13.2±4.9 ng/mL、36.3±6.1 ng/mL及407.6±92.1 ng/mL，表明A8G6可有效中和以上冠狀病毒突變株。另外，A8G6針對野生型、Delta及Omicron (BA.1)活病毒之IC50值分別為1.28 ng/mL、4.37 ng/mL及2.81 ng/mL。抗體組合顯示極佳協同效應。關於黃金倉鼠之活體內病毒感染測試顯示，與對照相比，在四種劑量濃度(10 mg/mL、4 mg/mL、2 mg/mL及1 mg/mL)下之A8G6之經鼻滴入投與肺組織及氣管組織兩者中之感染性病毒之力價引起接近或低於偵測極限，其下降的Log10值分別為至少4.43及3.18，表明鼻滴投與A8G6可有效減少冠狀病毒Omicron對黃金倉鼠的感染。與抗體B之劑量濃度選擇結合，選擇2 mg/mL及5 mg/mL作為用於A8G6之有效給藥調配濃度之臨床候選。在下一藥物動力學研究中，藉由使用兩個候選濃度中之較高者(5 mg/mL)研究鼻內投與之後恆河獼猴中之藥物動力學，以提供臨床投與濃度及劑量之基礎。藉由鼻用噴霧向恆河獼猴投與A8G6，1劑為140 μL、5 mg/mL (每劑量0.7 mg)，且鼻拭子測試濃度在投與後8至24 h為11457 ± 14054 ng/ml，高達中和冠狀病毒Omicron BA.4/5 IC90所需之抗體濃度的兩倍。藥物動力學研究結果進一步證實5 mg/mL為可行的臨床給藥濃度。毒理學測試結果顯示，在各投與組中經由經鼻滴入向小鼠投與5 mg/mL抗體D、10 mg/mL抗體D、20 mg/mL抗體D及5 mg/mL A8G6以及10 mg/mL A8G6持續2週後，不存在毒性反應及死亡；經由靜脈內注射以1 mg/kg向食蟹獼猴投與抗體D不存在毒性反應及死亡；經由鼻用噴霧向食蟹獼猴投與A8G6組((2.8+2.8) mg/劑量)及抗體D組(2.8 mg/劑量)持續2週不存在毒性反應及死亡；且在經鼻噴霧投與14天之後，抗體D組(24 mg/mL)、組合低劑量組(2 mg/mL)、組合中等劑量組(10 mg/mL)、組合高劑量組(30 mg/mL)中之恆河獼猴不存在毒性反應及死亡。在猴與人類之間的組織交叉反應中，在正常猴組織微陣列中或在正常人類組織微陣列中之相關組織細胞中，不存在與抗體B及抗體D抗體的相同或類似抗原決定子結合。測試結果表明，A8G6具有高安全性。
考慮到組合抗體針對不同病毒株之中和活性、與棘結合之結構特徵、兩種抗體之產率、混合抗體之分析檢定、臨床前安全性及鼻用噴霧抗體之PK特徵，組合調配物之最終總抗體濃度經測定為5 mg/ml。
在此臨床試驗中，A8G6含量為0.7 mg/劑量(140 μL，5 mg/mL，A8G6)，且最高劑量為每天四次劑量，持續14天，累積總共39.2 mg A8G6 (7.84 mg抗體B  + 31.36 mg抗體D)，或約0.65 mg/kg(其中抗體B 0.16 mg/kg，及抗體D 0.49 mg/mL)。在經鼻滴注至小鼠或食蟹獼猴之後，顯示進入血流之抗體B抗體之量小於1/100。即使將完整劑量抗體(抗體B+抗體D)引入至血流中，但就小鼠及食蟹獼猴而言，A8G6之安全限度分別大於300及20倍。因此，每鼻用噴霧140 μL之5 mg/mL A8G6持續14天具有足夠的安全限度。
各臨床研究之概述：對四個群組進行IIT研究，如表14中所示。 表14：A8G6 IIT臨床研究之基本資訊
臨床研究編號 藥物(批號) 研究目標 實驗設計 入選/完成的人數 投與 初級藥物動力學參數 信賴區間 位置
AY-62-8001 第1a群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，單次投與一種劑量(140 μL/劑)，持續1天 鼻腔 Cmax=65.1 μg/mL 42.9-83.0 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 第1b群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，2種劑量(140 μL/劑，各劑量以4 h±5 min之時間間隔投與)，持續1天 鼻腔 Cmax=150 μg/mL 78.6-204 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 第1c群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，單次投與一種劑量(280 μL/劑)，持續1天 鼻腔 Cmax=48.3 μg/mL 47.2-61.4 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 第1d群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，4種劑量(140 μL/劑，各劑量以4 h±5 min投與)，持續1天 鼻腔 Cmax=115 μg/mL 108-132 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 群組2 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，每天4種劑量(140 μL/劑，各劑量以4 h±5 min之時間間隔投與)，總共持續3天 鼻腔Cmax=62.697 μg/mL 34.8-103 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 第3群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 12/12  A8G6 5 mg/mL，每天4種劑量(140 μL/劑，各劑量以4 h±5 min之時間間隔投與)，總共持續7天 鼻腔 Cmax=30.8 μg/mL 14.4-52.5 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
AY-62-8001 第4群組 A8G6冠狀病毒中和抗體(B119-20220501) 安全性及藥物動力學 隨機 雙盲 安慰劑平行對照 36/36  A8G6 5 mg/mL，每天4種劑量(140 μL/劑，各劑量以4 h±5 min之時間間隔投與)，總共持續14天 Cmax=72.7 μg/mL 24.3-77.1 μg/mL 重慶醫科大學第二附屬醫院
在第1a群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為2075.9±3048.7 ng/mL，在試驗之第二天為2406.4±3740.5 ng/mL，且在隨訪期內為2436.3±3656.4 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。在投與後藉由鼻拭子測試之抗體濃度在測試組與對照組之間顯著不同，且在投與後，測試組之藉由鼻拭子測試之抗體濃度隨時間推移逐漸降低。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為3.54±1.15 ng/mL；在D1投與之後15 min，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為54534±22696 ng/mL；在D1投與之後1 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為65062±36064 ng/mL；在D1投與之後4h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為29131±21036 ng/mL；在D1投與之後8 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為14227±8486.2 ng/mL；在D1投與之後24 h，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為984.55±1539.9 ng/mL及1734.5±2596.3；且在隨訪期內，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為138.52±178.43 ng/mL及768.51±1898.6 ng/mL。
在第1b群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為833.90±1283.6 ng/mL，在試驗之第二天為925.47±1440.7 ng/mL，且在隨訪期內為970.30±1584.5 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為23.12 ng/mL；在該試驗期內，在D1投與第二劑量之前15 min，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為29008±24144 ng/mL；在D1投與第二劑量之後1 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為149822±97301 ng/mL；在D1投與第二劑量之後4h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為29823±25443 ng/mL；在D1投與第二劑量之後8 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為40142±70821 ng/mL；在投與第一劑量之後24 h，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為1282.5±2326.4 ng/mL及524.89±766.92；且在隨訪期內，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為76.14±131.73 ng/mL及32.66±44.43 ng/mL。
在第1c群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為642.78±745.23 ng/mL，在試驗之第二天為594.53±737.58 ng/mL，且在隨訪期內為574.35±642.12 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為7.34 ng/mL；在該試驗期內，在第D1投與之後15 min，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為9388.5±5591.2 ng/mL；在D1投與之後1 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為5857.5±4232.6 ng/mL；在D1投與之後4h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為5578.1±3683.3 ng/mL；在D1投與之後8 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為2763.2±2986.2 ng/mL；在投與後24 h，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度為分別355.59±501.31 ng/mL及373.58±682.39 ng/mL；且在隨訪期內，左鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為4.94±4.58 ng/mL及7.81±7.15 ng/mL。
在第1d群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為790.09±852.05 ng/mL，在試驗之第二天為681.38±751.58 ng/mL，且在隨訪期內為669.56±723.34 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為4.63±4.01 ng/mL；在D1投與第四劑量之前15 min，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為41901±42219 ng/mL；在D1投與第四劑量之後1 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為85004±49356 ng/mL；在D1投與第四劑量之後4h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為115448±39702 ng/mL；在D1投與第四劑量之後8 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為22184±19545 ng/mL；在D1投與第四劑量之後24 h，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為22894±29619 ng/mL及13242±13701 ng/mL；且在隨訪期內，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度分別為1194.6±1892.3 ng/mL及775.76±1411.5 ng/mL。
在第2群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為492.48±725.80 ng/mL，在試驗之第四天為479.64±696.08 ng/mL，且在隨訪期內為500.21±742.42 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間低於較低偵測極限；在D1投與第二劑量之前0.5 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為32159±15305 ng/mL；在D3投與第四劑量之前0.5 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為62697±47550 ng/mL；在D4最後一次投與之後12 h，左鼻孔之平均中和抗體濃度為20455±39514 ng/mL；在D4最後一次投與之後24h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為17307±26128 ng/mL；且在隨訪期內，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度為189.22±416.92 ng/mL及1174.7±1669.2 ng/mL。
在第3群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為633.75±807.66 ng/mL，在試驗期間在最後一次投與之後12 h為591.95±729.15 ng/mL，且在隨訪期內為588.58±670.01 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為7.91 ng/mL；在D1投與第二劑量之後0.5 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為30805±18892 ng/mL；在D7投與第四劑量之前0.5 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為19444±12761 ng/mL；在最後一次投與之後12 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為13507±7636.7 ng/mL；在最後一次投與之後24h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為5715.1±5630.7 ng/mL；且在隨訪期內，左右鼻孔中之平均中和抗體濃度為474.62±624.14 ng/mL及233.01±368.99 ng/mL。
在第4群組中，平均血液中和抗體濃度在基線期內為1385.7±2775.5 ng/mL，在試驗期間最後一次投與後12 h為1255.8±2517.3 ng/mL，在最後一次投與之後3天內為1278.9±2620.9 ng/mL ，且在隨訪期內為1276.2±2650.5 ng/mL。儘管抗體濃度在個體之間有很大差異，但在整個試驗中，血液中之抗體濃度的變化不大且傾向於穩定。藉由鼻拭子測試之中和抗體濃度之平均值在基線期間為3.42 ng/mL；在D1投與第二劑量之前0.5 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為36138±23212 ng/mL；在D8投與第二劑量之前0.5 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為53615±81154 ng/mL；在D14投與第四劑量之前15 min，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為54037±53645 ng/mL；在D14投與第四劑量之後1 h，左鼻孔中之平均中和抗體濃度為72717±80364 ng/mL；在D14投與第四劑量之後4h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為28702±25733 ng/mL；在最後一次投與之後12 h，右鼻孔中之平均中和抗體濃度為30625±73799 ng/mL；左鼻孔中之平均中和抗體濃度在D16為12065±39525 ng/mL；左右鼻孔中之中和抗體濃度之平均值在D17分別為2332.4±6804.5 ng/mL及1578.1±4757.1 ng/mL；且在隨訪期內，左右鼻孔中之中和抗體濃度之平均值分別為2841.2±7987.6 ng/mL及1109.4±3455.1 ng/mL。
以下為關於藥物濃度之結論。
假定冠狀病毒中和抗體A8G6 (一種測試藥物之主要組分)可有效地黏著於鼻腔，則可在向個體投與之後藉由鼻拭子測試偵測大量中和抗體。並且，在個體停止接受藥物之後，藉由鼻拭子測試之藥物濃度隨時間逐漸降低；在最後一次投與之後24 h，藉由鼻拭子測試之藥物濃度顯著降低，大部分個體中藉由鼻拭子測試之藥物濃度在最後一次投與之後3±1天內低於偵測極限，且在第4群組中之一些個體中，在投與之後48 h，藉由鼻拭子測試之藥物濃度低於偵測極限。在第1a群組中，可能由於個體間之個體差異(個體1a08中之鼻藥物濃度在投與之後1 h比其他個體高得多)，個體中藉由鼻拭子測試之平均藥物濃度在投與之後1 h最高。據推測，測試藥物主要黏著於鼻區且鼻區中之藥物濃度隨時間推移逐漸降低。
基於第1群組中之個體藉由鼻拭子測試之藥物濃度數據，可以發現維持鼻腔中之中和抗體濃度的時間隨給藥頻率增加：與第1a群組(以140 μL/劑量接受每天1次劑量)、第1b群組(以140 μL/劑量接受每天2次劑量)及第1c群組(以280 μL/劑量接受每天1次劑量)相比，第1d群組(以140 μL/劑量接受每天4次劑量)中之個體在投與之後24 h具有鼻拭子測試的顯著較高藥物濃度。據推測，在投與之後，在鼻部位處藥物濃度存在累積效應，其中在多次投與之後，藉由鼻拭子測試的藥物濃度相較於單次投與或單次高劑量投與維持更長時間。 實例9.抗體B之調配物研發
吾人進行研究以測定用於抗體B之鼻內調配物的緩衝劑系統、乳化劑、保濕劑、低溫保護劑及抗生素，包括： 1)使用高通量篩選系統UNcle研究抗體於磷酸鹽緩衝劑(PB)或組胺酸系統中之熔融溫度(Tm)；熱致變性之起始溫度(Tonset)；及聚集起始溫度(Tagg)。(此等溫度值愈高，則抗體在緩衝劑系統中愈穩定，其隨後用於測定緩衝劑系統及pH)； 2)在鼻內投與之小鼠/大鼠動物研究中使用包含低溫保護劑海藻糖及乳化劑TWEEN 80 (聚山梨醇酯80；PS80)之調配物選擇保濕劑及控制釋放劑； 3)基於滲透壓要求調節海藻糖之濃度； 4)基於抗菌功效及穩定性測定抗生素之濃度。 基於以下研究，測定抗體B之鼻內調配物為：5 mg/ml抗體B抗體、20 mM磷酸鹽緩衝劑、4% (w/v)海藻糖、1.7% (w/v)丙三醇、0.1% (w/v)羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0。吾人隨後使用2至8℃測試、25/40℃加速測試及300 rpm振動測試評估調配物之穩定性。 pH 及緩衝劑系統之測定 ：
吾人比較兩種緩衝系統：(i) 20 mM磷酸鹽緩衝劑(PB)，pH 6.0±0.2；及(ii) 20 mM組胺酸，pH 5.5±0.2，如表15中所示。基於Tm、Tonset及Tagg之結果選擇磷酸鹽緩衝劑系統。 表15：緩衝劑系統之分析
系統 Tm1/ ℃ Tonset/ ℃ Tagg 266/ ℃ 調配物
緩衝劑/pH PB，pH 6.0±0.2 68.0 66.5 68.7 20mM PB，2mg/mL 抗體B抗體；
組胺酸， pH 5.5±0.2 67.0 60.1 66.1 20mM組胺酸，2mg/mL抗體B抗體；
保濕劑及控制釋放劑之測定 ：
為了增強抗體在鼻腔中之滯留性，吾人使用包含20 mM PB (pH 6.0)、8%海藻糖、0.02% PS80之基礎調配物來研究八種添加劑對於大鼠鼻內投與的影響；且使用相同基礎調配物來研究四種添加劑對於小鼠鼻內投與的影響。 大鼠研究 ：
使用包含20 mM PB (pH 6.0)、8%海藻糖及0.02% PS80之基礎調配物，吾人測試以下八種添加劑對抗體B抗體在大鼠鼻腔中之滯留性的影響：聚乙二醇peg (PEG) 400 (PEG400)、PEG4000、聚乙烯吡咯啶酮K30 (PVP-K30)、D-山梨糖醇、丙三醇、甘露糖醇、HPMC及羥乙基纖維素(HEC)。經鼻內向各大鼠投與25 μL/鼻腔(總共50 μL)，且在投與之後4小時收集鼻黏膜樣本且藉由ELISA測定樣本中抗體之量。不同調配物展示於表16中。如 圖 30A中所示，結果表明，含有丙三醇或HPMC之調配物相較於其他調配物使更多抗體保留在鼻腔中。 表 16 ： 調配物之大鼠研究設計
組 調配物中之抗體B抗體(mg/ml) 添加劑 添加劑濃度
A 5 PEG400 18% (v/v)
B 5 PEG4000 6%
C 5 PVP-K30 6%
D 5 D-山梨糖醇 4%
E 5 丙三醇 1.7% (v/v)
F 5 甘露糖醇 4%
G 5 甘露糖醇 2%
H 5 鹼性調配物 /
I 0 鹼性調配物 /
J 5 HPMC 0.1%
K 5 HEC 0.05%
小鼠研究 ：
類似於上述大鼠研究，使用包含20 mMPB (pH 6.0)、8%海藻糖及0.02% PS80之基礎調配物，吾人測試以下四種添加劑對抗體B抗體在小鼠鼻腔中之滯留性的影響：PEG400、丙三醇、甘露糖醇及HPMC。經鼻內向各大鼠投與7.5 μL/鼻腔(總共30 μL)之兩次劑量，且在投與之後6小時收集鼻黏膜樣本且藉由ELISA測定樣本中抗體之量。不同調配物顯示於表17中。如 圖 30B中所示，結果顯示，與其他調配物相比，含有丙三醇或HPMC之調配物使更多抗體滯留在鼻腔中。 表17：調配物之小鼠研究設計
組 抗體B抗體濃度(mg/ml) 添加劑 添加劑濃度
A 5 甘露糖醇 4%
B 5 PEG400 18% (v/v)
C 5 丙三醇 1.7% (v/v)
D 5 HPMC 0.1%
E 5 鹼性調配物 /
F 0 鹼性調配物 /
基於此等研究，吾人選擇HPMC作為控制釋放劑且添加丙三醇作為保濕劑，其可改良抗體投與之後鼻腔/黏膜之濕度。 低溫保護劑 / 滲透壓調節劑之最佳化
為確保調配物之適當滲透壓及抗體穩定性，吾人測試作為低溫保護劑/滲透壓調節劑的海藻糖的濃度。如表18中所示，在包含4%或8% (w/v)海藻糖之兩種調配物中，抗體之Tm、Tonset及Tagg非常相似。因為較高8%濃度之海藻糖會引起調配物之總滲透壓較高(520 mOsm/kg)，其更可能引起鼻腔不適，所以調配物中海藻糖濃度設定為4%，導致總滲透壓為391 mOsm/kg。 表18：海藻糖之不同濃度下之抗體之Tm/Tonset/Tagg及總滲透壓
海藻糖 Tm1/ ℃ Tonset/ ℃ Tagg 266/ ℃ 滲透壓 mOsm/kg 鹼性調配物
低溫保護劑/滲透壓調節劑 海藻糖8% 70.6 61.8 71.5 520 20 mM PB (pH 6.0)、0.1% HPMC、5 mg/mL抗體B抗體、1.7%丙三醇、0.02% PS80、8%海藻糖
海藻糖4% 70.4 61.5 70.4 391 20 mM PB (pH 6.0)、0.1% HPMC、5 mg/mL抗體B抗體、1.7%丙三醇、0.02% PS80、4%海藻糖
抗生素濃度之測定：
抗生素之選擇：進行初始研究以自苯甲醇、氯丁醇及苯紮氯銨中選擇作為調配物之抗生素。苯甲醇及氯丁醇均由於其刺鼻氣味而排除。另一方面，苯紮氯銨為可溶於水且對pH不敏感的經FDA審批通過之抗生素，使其在弱酸性條件下成為適合抗生素。因此，選擇苯紮氯銨用於後續研究。
抗生素濃度：吾人測試在含有不同濃度之抗生素苯紮氯銨之調配物中之抗體穩定性及細菌生長抑制。除苯紮氯銨濃度以外，其他組分在調配物中具有相同濃度。表19顯示在5℃、25℃、40℃或300 rpm振盪條件下之抗體穩定性研究設計。結果顯示於表20中。 表19：關於包含不同濃度之抗生素之調配物的抗體穩定性研究設計
調配物編號. 抗生素濃度(%) 調配物 T0 5 ℃ 25 ℃ 40 ℃ 25 ℃ 振盪300rpm
3 週 4 週 2 週 4 週 2 週 4 週 1 週
DF09 0.01  5 mg/mL抗體B抗體、20 mM PB (pH 6.0)、4%海藻糖、1.7%丙三醇、0.1% HPMC、0.01%苯紮氯銨、0.02% PS80 X, Y X X X, Y X, Y X X, Y X
DF10 0.02  5 mg/mL抗體B抗體、20 mM PB (pH 6.0)、4%海藻糖、1.7%丙三醇、0.1% HPMC、0.02%苯紮氯銨、0.02% PS80 X, Y X X X, Y X, Y X X, Y X
X=外觀；尺寸排阻層析(SEC)；等電聚焦毛細管(CE) (還原/非還原)；蛋白質濃度；pH；Tm/Tagg。 Y=活性。 表20：關於包含不同濃度之抗生素之調配物的抗體穩定性研究之結果
測試 調配物編號 細節 T0 5 ℃ 25 ℃ 40 ℃ 振盪 300rpm 25 ℃
3 週 4 週 2 週 4 週 2 週 4 週 1 週
外觀 DF09 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體
DF10 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體 無色透明液體
SEC/% DF09 HMW 0.12 0.14 1.01 0.24 1.05 1.35 1.18 1.09
主峰 99.41 99.38 96.53 99.09 96.16 96.57 94.19 96.15
LMW 0.47 0.48 2.46 0.67 2.79 2.08 4.63 2.76
DF10 HMW 0.12 0.13 0.94 0.2 1.09 1.67 1.32 1.12
主峰 99.43 99.34 96.64 98.9 95.85 95.94 94.01 96.12
LMW 0.45 0.53 2.43 0.9 3.06 2.39 4.67 2.76
CE/% DF09 非還原 96.88 96.42 94.34 96.17 93.64 92.79 90.32 94.13
還原 96.86 96.64 96.71 96.27 96.2 93.08 94.23 97.27
DF10 還原 96.34 96.27 94.07 95.83 93.38 92.9 90.08 93.61
還原 96.64 96.88 96.98 96.31 96.45 93.04 93.64 96.71
pH DF09 5.9 NA 6.0 NA 6.0 NA 5.9 5.9
DF10 5.9 NA 5.9 NA 5.9 NA 5.9 5.9
蛋白質濃度 DF09 4.7 NA 4.7 4.7 4.7 4.7 4.9 4.7
DF10 5.4 NA 5.4 5.3 5.4 5.4 5.3 5.3
Tm/ Tagg 266 DF09 Tm/℃ 68.6 NA 69.3 70.3 68.7 68.2 69.2 70.9
Tagg/℃ 71.1 NA 70 71.1 69.3 69.4 69.8 71.5
DF10 Tm/℃ 69.7 NA 69.1 69.2 69.2 69.5 69.6 68.9
Tagg/℃ 71.7 NA 70.9 70.8 70.9 71.1 71.3 70.0
結合親和力 DF09 野生型 82.1 NA NA 83.7 82.8 NA 81.8 NA
Delta病毒株 90.4 NA NA 86.6 84.7 NA 83.8 NA
DF10 野生型 92.4 NA NA 91.6 99.7 NA 95.9 NA
Delta病毒株 126.9 NA NA 100.3 92.4 NA 102 NA
使用根據2020版本的中國藥典之抑菌功效測試來量測細菌抑制。研究設計列於表21中，且結果列於表22中。 表21：抑菌功效測試之設計
調配物編號 抗生素濃度 時間點
2 天 7 天 14 天 28 天
DF09 0.01% √ √ √ √
DF10 0.02% √ √ √ √
表22：在不同抗生素濃度下的細菌抑制功效
菌株 * 根據中國藥典之細菌抑制功效時間點/ 對數下降
大腸桿菌 (E. coli) 金黃色葡萄球菌(S. aureus) 綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa) 白色念珠菌(Candida albicans) 黑麴菌(Aspergillus niger) 大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 綠膿桿菌 白色念珠菌 黑麴菌 大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 綠膿桿菌 白色念珠菌 黑麴菌 大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 綠膿桿菌 白色念珠菌 黑麴菌  
調配物編號 2 天 7 天 14 天 28 天
DF09 4.53 4.70 4.25 4.30 2.30 4.53 4.70 4.25 4.30 2.97 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30
DF10 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30 4.53 4.70 4.25 4.30 3.30
抑菌功效測試證明抗生素苯紮氯銨之兩種濃度符合細菌抑制要求。另外，抗體穩定性在兩種抗生素濃度下及在可接受範圍內亦係相似的。因此，抗生素苯紮氯銨之濃度在調配物中經測定為0.01%。
另外，在抗體穩定性研究中測試之調配物亦為用於抗體B之醫藥組合物中之最終調配物。上表中之結果表明，此調配物可在長期穩定性測試及加速穩定性測試下維持抗體穩定性。 實例10.用於A8G6之調配物研發
A8G6調配物之研發係基於針對最後一個實例中之抗體B調配物測試之緩衝劑系統、乳化劑、保濕劑、低溫保護劑及抗生素之結果及選擇。在A8G6調配物之研發期間，吾人研究抗體D及抗體B之最終濃度及相對比率、抗生素濃度對抗體穩定性之影響，及調配物與初級包裝材料之相容性。基於以下結果，A8G6之調配物經測定為1 mg/mL抗體B抗體、4 mg/mL抗體D抗體、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、2% (w/v)丙三醇、0.1% (w/v) HPMC、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0。 活性成分濃度之測定
基於針對BA.5及Delta病毒株中和研究之活性，以三種不同比率(3:2、2:1及4:1)中之4:1比率達成抗體D及抗體B組合之最佳IC50。因此，A8G6調配物中抗體D抗體與抗體B抗體之比率經測定為4:1，且A8G6調配物之其他成分經測定為20 mM磷酸鹽緩衝劑、4% (w/v)海藻糖、2% (w/v)丙三醇(與抗體B調配物中之丙三醇%相比增加0.3%，以改良鼻腔中之抗體滯留率)、0.1% (w/v) HPMC、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0。根據表23中之研究設計，兩種濃度總量分別為5 mg/mL及2 mg/mL之抗體分別經歷穩定性測試。 表23：用以測定總抗體濃度之研究設計
A8G6 濃度 mg/mL T0 溫度( ℃) 室溫，300rpm 振盪
2-8 ℃ 25 ℃ 40 ℃
2 週 4 週 3 個月 2 週 4 週 3 個月 1 週 2 週 4 週 1 週
5 XY NA X XYZ X X XY X X XY XY
2 XY X X XYZ X X XY NA X XY XY
X=外觀；尺寸排阻層析(SEC)；等電聚焦毛細管(CE) (還原性/非還原性)；蛋白質濃度；pH；陽離子交換層析(CEX)；滲透壓。 Y=結合親和力 Z=DSD/SP/PG，細菌抑制功效 NA=未分析
結果展示於表24中，其顯：在5℃儲存條件之3個月時間點處，與包含2 mg/mL抗體之調配物相比，包含5 mg/mL抗體之調配物的穩定性下降程度更低；在25℃儲存條件之4週時間點處，包含2 mg/mL抗體之調配物之SEC主峰的總和下降至95.6%，而包含5 mg/mL抗體之調配物之SEC主峰的總和維持在99.0 mg/mL，表明2 mg/mL抗體濃度在較早期導致更快SEC純度下降。對於藉由CEX量測之純度，25℃及40℃加速條件對於兩種調配物產生類似結果，而在5ºC儲存之3個月時間點處，包含2 mg/mL抗體之調配物具有CEX主峰之約14.3%下降，而包含5 mg/mL抗體之調配物維持CEX主峰。綜合而言，如藉由SEC及CEX兩者分析，包含5 mg/mL抗體之調配物顯示優良穩定性，且因此5 mg/mL總抗體濃度(4 mg/mL抗體D抗體，1 mg/mL抗體B抗體)用於後續調配物開發。 表24：包含不同濃度之抗體的調配物之穩定性測試結果
調配物 實驗條件 時間 外觀 蛋白質濃度mg/ml pH 滲透壓 SEC/% CE% CEX% 結合%
mOsm/kg 聚集體 主峰- 抗體B 主峰- 抗體D 片段 NR R 主峰
4 mg/mL抗體D mAb+1 mg/mL抗體B mAb、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、0.1% (w/v) HPMC、2% (w/v)丙三醇、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0 T0 A 1 5.1 5.9 406 0.27 18.49 81.25 0.00 97.65 98.03 64.32 125
2-8℃ 4週 A NA NA 407 0.28 18.56 81.17 0.00 97.63 98.30 64.03 103
3個月 B 2 5.1 6.0 406 1.22 19.82 78.22 0.74 97.10 98.77 65.18 105
25℃ 2週 A NA NA 408 0.41 19.23 80.10 0.26 97.05 97.69 61.42 NA
4週 B NA NA 407 0.35 18.53 80.46 0.66 97.15 98.29 60.31 101
3個月 B 5.1 5.9 406 3.29 19.40 75.86 1.45 96.19 98.06 55.84 108
40℃ 1週 A NA NA 409 0.89 19.27 77.89 1.95 97.17 96.48 55.60 114
2週 B NA NA 408 0.81 18.86 75.40 4.93 94.45 95.76 50.59 NA
4週 B 5.0 6.0 409 1.06 18.19 74.60 6.15 94.40 95.15 38.12 103
室溫，300rpm振盪 1週 B 5.1 6.0 413 0.29 18.56 80.63 1.07 97.54 98.40 63.69 100
1.6 mg/mL抗體D mAb+0.4mg/mL抗體B mAb、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、0.1% (w/v) HPMC、2% (w/v) 丙三醇、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0 T0 A 2.0 6.0 408 0.18 19.74 79.22 0.85 96.65 97.77 64.05 86
2-8℃ 2週 A NA    407 0.17 19.71 79.03 1.09 96.56 97.61 63.91 NA
4週 A NA    407 0.15 18.76 81.09 0.00 96.26 97.69 63.73 94
3個月 B 2.0 6.0 406 1.52 19.39 76.49 2.60 96.60 98.32 49.75 125
25℃ 2週 A NA    407 0.50 19.63 78.44 1.44 96.04 96.49 60.64 NA
4週 B NA    407 0.29 18.70 76.87 4.15 96.23 96.88 59.08 85
3個月 B 2.0 6.0 406 1.69 19.38 76.50 2.43 96.41 96.63 54.18 80
40℃ 2週 B NA    407 0.49 19.29 77.55 2.66 94.62 96.23 40.36 NA
4週 B 1.9 6.1 409 0.85 18.23 74.48 6.43 94.26 95.08 36.17 96
室溫，300rpm振盪 1週 B 2.0 6.1 412 0.20 19.75 79.23 0.83 96.58 97.35 63.44 81
A：指示無色透明液體，無可見物質； B：指示無色透明液體，長度＜2 mm之少量可見物質； NA：未分析。
A8G6 調配物中之抗生素濃度之測定
根據表24中之結果，A8G6調配物中之0.01%苯紮氯銨不會顯著影響抗體穩定性。基於根據中國藥典之抑菌功效測試(參見表25中之結果)，當A8G6調配物含有0.01%苯紮氯銨時，細菌抑制功效滿足根據中國藥典之要求(對於細菌，2天之後lg下降≥2，7天之後lg下降≥3，且與最後一個時間點相比，28天之後細菌增加量不超過0.5 lg；對於真菌，14天之後lg下降≥2，且與最後一個時間點相比，28天之後細菌增加量不超過0.5 lg)。基於此等結果，確定0.01%苯紮氯銨濃度以滿足調配要求。 表25：抑菌功效測試
lg接種數目 lg 下降
0天 2天 7天 14天 28天
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 5.33 5.33 5.33 5.33 5.33
綠膿桿菌 4.2 4.2 4.2 4.2 4.2
白色念珠菌 4.98 NA NA 4.98 4.98
黑麴菌 3.99 NA NA 3.99 3.99
「lg下降」指示1 mL (g)測試樣本中的菌落數與相應菌落lg數之間的差。 NA：未分析 A8G6 調配物之驗證
此研究測試指定調配物中抗體D抗體及抗體B抗體之代表性批次的穩定性以驗證調配物之穩定性。在各種測試條件下倒轉儲存所有樣本以檢查與包裝材料之相容性，從而確保臨床應用之適用性。研究設計顯示於表26中。 表26：A8G6調配物之驗證
調配物 T0 室溫，300 rpm振盪 5℃ 25℃ 40℃
1週 4週 2週 4週 2週 4週
4 mg/mL抗體D mAb+1mg/mL抗體B mAb、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、0.1% (w/v) HPMC, 2% (w/v)丙三醇、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0 XY XY XY X XY X XY
X：外觀、pH、濃度、SEC、CEX、CE (NR&R)；Y：結合親和力
結果顯示於表27中。對於代表性A8G6調配物樣本，所有量測參數在5℃下穩定持續4週，或在振盪條件下穩定持續1週。且在25℃加速測試之後4週，只有CEX下之純度量測值下降約10%，但活性不受明顯影響(仍在70%至130%範圍內)。因此，1 mg/mL抗體B抗體、4 mg/mL抗體D、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、2% (w/v)丙三醇、0.1% (w/v) HPMC、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80之調配物(pH 6.0)可滿足臨床研究需求且與包裝材料完全相容。 表27：A8G6調配物之驗證
調配物 條件 時間 外觀 蛋白質濃度mg/mL pH 滲透壓 SEC/% CE/% CEX/% 結合 %
mOsm/kg 聚集體 主峰- 抗體B 主峰- 抗體D 片段 NR R 主要
4 mg/mL抗體D mAb+1 mg/mL抗體B mAb、20 mM PB、4% (w/v)海藻糖、0.1% (w/v) HPMC、2.0% (w/v)丙三醇、0.01% (w/v)苯紮氯銨、0.02% (w/v) PS80，pH 6.0 T0 A 5.0 6.1 427 0.60 20.63 78.25 0.52 98.47 98.71 65.48 91
2-8℃ 4週 A 4.9 6.1 414 0.65 20.63 78.07 0.65 97.18 99.34 59.71 91
25℃ 2週 A 4.9 6.1 414 0.87 20.61 77.60 0.92 97.83 98.33 56.31 NA
4週 B 4.9 6.1 411 0.74 20.59 77.48 1.19 97.44 99.32 55.77 85
40℃ 2週 B 4.9 6.1 415 1.16 20.41 76.39 2.05 96.33 97.57 42.24 NA
4週 B 4.9 6.1 411 1.64 20.03 74.49 3.85 92.17 97.79 31.89 89
在RT下300 rpm振盪 1週 B 5.0 6.0 416 0.63 20.50 77.93 0.94 98.07 98.86 62.11 100
A：指示無色至淡黃色液體；澄清至微乳白色；無可見物質 B：指示無色至淡黃色液體；澄清至微乳白色；具有長度＜2 mm之少量可見物質。
吾人亦研究A8G6調配物之小滴尺寸分佈(DSD)。如下測試10個小瓶之A8G6調配物：使用Symapatec H3976確定3 cm或6 cm距離處之DSD，收集≤10 μm直徑及小滴的10% (D10)、50% (D50)、90% (D90)比其小的直徑以及半寬度(D90-D10)/D50 (SPAN)，使用10個樣本之平均值作為表28中所示之最終結果。結果指示A8G6調配物之DSD符合期望。(大多數小滴直徑＞10 μm)。 表28：小滴雷射測試之結果
樣本編號 單次劑量/g 1 平均劑量/g 2 DSD ( 與噴嘴相距3cm) DSD ( 與噴嘴相距6cm)
≤ 10 μm (%) D10 (μm) D50 (μm) D90 (μm) SPAN ≤ 10 μm (%) D10 (μm) D50 (μm) D90 (μm) SPAN
A#-001 0.0771 0.0771 4.92 13.93 39.32 83.53 1.77 6.25 12.58 28.23 56.52 1.56
A#-002 0.0769 0.0777 2.36 16.05 32.14 70.62 1.70 5.99 12.68 28.76 67.29 1.90
A#-003 0.0779 0.0771 1.31 18.25 41.89 89.20 1.69 2.44 17.42 31.22 58.94 1.33
A#-004 0.0749 0.0745 4.99 13.71 39.31 96.84 2.11 7.10 11.81 28.98 62.56 1.75
A#-005 0.0782 0.0780 1.78 16.17 32.11 64.10 1.49 3.23 19.12 31.99 56.81 1.18
A#-006 0.0782 0.0771 5.48 13.31 34.06 67.43 1.59 2.63 17.14 31.29 53.99 1.18
A#-007 0.0780 0.0769 5.58 13.16 34.58 68.80 1.61 3.83 14.90 30.13 59.91 1.49
A#-008 0.0725 0.0759 6.92 11.83 26.36 51.88 1.52 8.04 11.02 24.56 45.49 1.40
A#-009 0.0710 0.0702 6.79 11.98 29.84 59.63 1.60 5.30 13.32 29.33 56.27 1.46
A#-010 0.0771 0.0763 4.54 14.28 35.75 70.93 1.58 5.64 13.45 29.92 59.41 1.54
Min 0.071 0.0702 1.31 11.83 26.36 51.88 1.49 2.44 11.02 24.56 45.49 1.18
Max 0.0782 0.0780 6.92 18.25 41.89 96.84 2.11 8.04 19.12 31.99 67.29 1.90
Average 0.0758 0.0757 4.41 14.40 34.47 72.64 1.69 5.08 14.47 29.25 57.50 1.49
1. 單次劑量：僅進行對一次劑量的量測 2. 平均劑量：進行10次連續噴霧之量測且計算平均值。 其他編號實施例
在以下編號實施例中提供本發明的其他實施例。
實施例1. 一種醫藥組合物，其包含： 活性成分或其前驅物； 不超過約40% (w/v)的低溫保護劑； 不超過約30% (w/v)的保濕劑； 不超過約5% (w/v)的乳化劑； 不超過約10% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑。
實施例2. 如實施例1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物適合於經黏膜向人類投與。
實施例3. 如實施例1或2之醫藥組合物，其中該醫藥組合物適合於經鼻內向人類投與。
實施例4. 如實施例1至3中任一者之醫藥組合物，其中該低溫保護劑選自由以下組成之群：海藻糖、甘油、二甲亞碸、乙二醇、聚乙二醇及蔗糖或其組合。
實施例5. 如實施例4之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該低溫保護劑為： 不超過40% (w/v)的海藻糖； 不超過40% (w/v)的甘油； 不超過10% (w/v)的二甲亞碸； 不超過40% (w/v)的乙二醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇；或 不超過0.5 M的蔗糖。
實施例6. 如實施例4之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該低溫保護劑為： 約2%至約8% (w/v)的海藻糖； 約1%至約20% (w/v)的甘油； 約1%至約10% (w/v)的二甲亞碸； 約4%至約30% (w/v)的乙二醇； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇；或 約0.1 M至約0.4 M蔗糖。
實施例7. 如實施例1至6中任一者之醫藥組合物，其中該低溫保護劑為海藻糖。
實施例8. 如實施例1至7中任一者之醫藥組合物，其包含約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的低溫保護劑。
實施例9. 如實施例1至7中任一者之醫藥組合物，其包含約2% (w/v)至約8% (w/v)的低溫保護劑。
實施例10. 如實施例1至7中任一者之醫藥組合物，其包含約4% (w/v)的低溫保護劑。
實施例11. 如實施例1至10中任一者之醫藥組合物，其中該保濕劑選自由以下組成之群：丙三醇、甘露糖醇、聚乙二醇400、聚乙二醇4000、D-山梨糖醇、聚葡萄胺糖、木糖醇及玻尿酸鈉或其組合。
實施例12. 如實施例11之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該保濕劑為： 不超過30% (w/v)的丙三醇； 不超過7% (w/v)的甘露糖醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約15%(w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約3% (w/v)的聚葡萄胺糖； 不超過10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約2.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
實施例13. 如實施例11之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該保濕劑為： 約2%至約6% (w/v)的丙三醇； 約3%至約5% (w/v)的甘露糖醇； 約10%至約18% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約10% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約6% (w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約1% (w/v)的聚葡萄胺糖； 約1%至約10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約1.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
實施例14. 如實施例1至13中任一者之醫藥組合物，其中該保濕劑為丙三醇。
實施例15. 如實施例1至14中任一者之醫藥組合物，其包含約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑。
實施例16. 如實施例1至14中任一者之醫藥組合物，其包含約1% (w/v)至約4% (w/v)的保濕劑。
實施例17. 如實施例16之醫藥組合物，其包含約1.7% (w/v)至約2% (w/v)的保濕劑。
實施例18. 如實施例1至17中任一者之醫藥組合物，其中該乳化劑係選自由以下組成之群：TWEEN 80、聚山梨醇酯20、卵磷脂、脫水山梨糖醇酯、單甘油酯及/或二甘油酯及硬脂醯乳酸鈉或其組合。
實施例19. 如實施例1至18中任一者之醫藥組合物，其中該乳化劑為TWEEN 80。
實施例20. 如實施例1至19中任一者之醫藥組合物，其包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑。
實施例21. 如實施例1至19中任一者之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約2% (w/v)的乳化劑。
實施例22. 如實施例21之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約0.04% (w/v)的乳化劑。
實施例23. 如實施例21之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的乳化劑。
實施例24. 如實施例1至23中任一者之醫藥組合物，其中控制釋放劑選自由以下組成之群：羥丙基甲基纖維素(HPMC)及聚乙烯吡咯啶酮K30或其組合。
實施例25. 如實施例1至24中任一者之醫藥組合物，其中該控制釋放劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
實施例26. 如實施例1至25中任一者之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約5% (w/v)或約0.01% (w/v)至約1% (w/v)的控制釋放劑。
實施例27. 如實施例1至25中任一者之醫藥組合物，其包含約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。
實施例28. 如實施例1至25中任一者之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的控制釋放劑。
實施例29. 如實施例28之醫藥組合物，其包含約0.02% (w/v)或約0.1% (w/v)的控制釋放劑。
實施例30. 如實施例1至24中任一者之醫藥組合物，其中該控制釋放劑為聚乙烯吡咯啶酮K30。
實施例31. 如實施例1至30中任一者之醫藥組合物，其包含約2% (w/v)至約10% (w/v)或約3% (w/v)至約6% (w/v)的控制釋放劑。
實施例32. 如實施例1至31中任一者之醫藥組合物，其中緩衝劑係選自由磷酸鹽緩衝劑、tris緩衝劑及甘胺酸緩衝劑組成之群。
實施例33. 如實施例32之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之緩衝劑為： 約10 mM至約100 mM磷酸鹽； 約10 mM至約100 mM tris；或 約0.1 M至約0.5 M甘胺酸。
實施例34. 如實施例32之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之緩衝劑為： 約10 mM至約40 mM磷酸鹽； 約10 mM至約40 mM tris；或 約0.1 M至約0.2 M甘胺酸。
實施例35. 如實施例1至34中任一者之醫藥組合物，其中緩衝劑為磷酸鹽緩衝劑。
實施例36. 如實施例1至35中任一者之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之緩衝劑為約20 mM磷酸鹽或tris。
實施例37. 如實施例1至36中任一者之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約4至8，或約5至7。
實施例38. 如實施例1至36中任一者之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約5.5至6.5。
實施例39. 如實施例38之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約6.0。
實施例40. 如實施例1至39中任一者之醫藥組合物，其包含抗生素。
實施例41. 如實施例40之醫藥組合物，其中該抗生素包含苯紮氯銨、苯甲醇、氯丁醇或其組合。
實施例42. 如實施例41之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之抗生素為： 約0.002%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 不超過3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約0.5%至約2.0% (w/v)的氯丁醇。
實施例43. 如實施例41之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之抗生素為： 約0.005%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 約1.0%至約3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約1.0%至2.0% (w/v)的氯丁醇。
實施例44. 如實施例40至43中任一者之醫藥組合物，其中該抗生素為苯紮氯銨。
實施例45. 如實施例40至44中任一者之醫藥組合物，其包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的抗生素。
實施例46. 如實施例45之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)或約0.01% (w/v)的抗生素。
實施例47. 如實施例1至46中任一項之醫藥組合物，其中該活性成分或其前驅物在靈長類動物之鼻腔中之平均滯留時間為在經鼻內向該靈長類動物投與醫藥組合物之後至少1小時、至少2小時、至少3小時、至少4小時、至少5小時、至少6小時、至少7小時、至少8小時、至少9小時、至少10小時、至少11小時或至少12小時。
實施例48. 如實施例47之醫藥組合物，其中該靈長類動物為恆河獼猴。
實施例49. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的低溫保護劑； 約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑； 約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑；及 約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。
實施例50. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約2%至約8% (w/v)的低溫保護劑； 約1%至約4% (w/v)的保濕劑； 約0.005%至約0.04% (w/v)的乳化劑； 約0.01%至約0.2% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約5.5至6.5。
實施例51. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約1.7%至約2% (w/v)的保濕劑； 約0.01%至約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.02%至約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
實施例52. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約2% (w/v)的保濕劑； 約0.01% (w/v)的乳化劑； 約0.02% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
實施例53. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約2% (w/v)的保濕劑； 約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
實施例54. 如實施例1至48中任一者之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的低溫保護劑； 約1.7% (w/v)的保濕劑； 約0.02% (w/v)的乳化劑； 約0.1% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑之pH為約6.0。
實施例55. 如實施例49至54中任一者之醫藥組合物，其中緩衝劑包含約20 mM磷酸鹽，視情況其中該磷酸鹽為磷酸鈉鹽。
實施例56. 如實施例49至55中任一者之醫藥組合物，其中低溫保護劑為海藻糖，保濕劑為丙三醇，乳化劑為TWEEN 80，控制釋放劑為HPMC。
實施例57.  如實施例49至56中任一者之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)的苯紮氯銨。
實施例58. 如實施例1至57中任一者之醫藥組合物，其中該活性成分包含多肽。
實施例59. 如實施例58之醫藥組合物，其中該活性成分包含抗體或其抗原結合片段。
實施例60. 如實施例1至59中任一者之醫藥組合物，其中該活性成分之濃度為約0.1至100 mg/ml、約0.5至50 mg/ml或約1至30 mg/ml。
實施例61. 如實施例60之醫藥組合物，其中該活性成分之濃度為約5 mg/ml。
實施例62. 如實施例59至61中任一者之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原片段結合至冠狀病毒。
實施例63. 如實施例62之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原片段結合至SARS-CoV-2。
實施例64. 如實施例59至63中任一者之醫藥組合物，其包含以下中之一或多者： (a)抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； (b)抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； (c)抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含；包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (d)抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (e)抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 (f)抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
實施例65. 如實施例64之醫藥組合物，其中： (a)該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (b)該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (c)該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (d)該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (e)該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 (f)該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
實施例66. 如實施例64或65之醫藥組合物，其中(e)該抗體D/E或抗原結合片段包含： 重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 其組合。
實施例67. 如實施例64至66中任一者之醫藥組合物，其包含該等抗體或抗原結合片段中之至少兩者。
實施例68. 如實施例67之醫藥組合物，其包含(c)抗體B或其抗原結合片段及(e)抗體D/E或其抗原結合片段。
實施例69. 如實施例68之醫藥組合物，其中(c)抗體B或其抗原結合片段與(e)抗體D/E或其抗原結合片段的比率在約1:2與約1:8之間。
實施例70. 如實施例68之醫藥組合物，其中(c)抗體B或其抗原結合片段與(e)抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1 4。
實施例71. 如實施例64至70中任一者之醫藥組合物，其包含(d)抗體C或其抗原結合片段。
實施例72. 如實施例64至71中任一者之醫藥組合物，其包含(f)抗體F或其抗原結合片段。
實施例73. 如實施例64至72中任一者之醫藥組合物，其中該抗體為IgG、IgM或IgA。
實施例74. 如實施例1至73中任一者之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係經由經鼻投與裝置投與。
實施例75. 一種經鼻或經黏膜投與裝置，其包含如實施例1至74中任一者之醫藥組合物。
實施例76. 一種套組，其包含如實施例1至74中任一者之醫藥組合物及經鼻或經黏膜投與裝置。
實施例77. 如實施例75之經鼻投與裝置或如實施例76之套組，其中該經鼻投與裝置為定量鼻泵裝置或單位劑量鼻泵裝置。
實施例78. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域(VH)，該重鏈可變域包含重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，其中： 該HCDR1包含GFTFSGSA (SEQ ID NO: 13)之胺基酸序列； 該HCDR2包含IVVGSGNT (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列；及 該HCDR3包含AAPYCSSTSCRDGFDI (SEQ ID NO: 15)之胺基酸序列。
實施例79. 如實施例78之抗體或抗原結合片段，其中該VH包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的序列。
實施例80. 如實施例78或79之抗體或抗原結合片段，其包含輕鏈可變域(VL)，該輕鏈可變域包含輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中： 該LCDR1包含QSVRSSY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列； 該LCDR2包含GAS (SEQ ID NO: 11)之胺基酸序列；及 該LCDR3包含QQYGRSPWT (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列。
實施例81. 如實施例78至80中任一者之抗體或抗原結合片段，其中VL包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的序列。
實施例82. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含： (i) VH，其包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (ii) VH，其包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (ii) VH，其包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；或 (iv) VH，其包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
實施例83. 如實施例78至82中任一者之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係用於經鼻內投與。
實施例84. 如實施例78至83中任一者之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白，視情況其中該SARS-CoV-2棘蛋白包含SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108或SEQ ID NO: 110中所示之胺基酸序列。
實施例85. 如實施例78至84中任一者之抗體或抗原結合片段，其中抗體為IgG、IgM或IgA。
實施例86. 一種聚核苷酸，其編碼如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段。
實施例87. 一種載體，其包含如實施例86之聚核苷酸。
實施例88. 一種組合物，其包含如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段、如實施例86之聚核苷酸或如實施例87之載體。
實施例89. 一種細胞，其包含如實施例86之聚核苷酸或如實施例87之載體。
實施例90. 一種產生如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段之方法，其包含培養包含編碼該抗體或其抗原結合片段之載體之細胞及自該細胞之培養基收集該抗體或抗原結合片段。
實施例91. 一種治療或預防有需要個體之SARS-CoV-2感染之方法，其包含向該個體投與有效量的如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段。
實施例92. 如實施例91之方法，其中該抗體或抗原結合片段係經鼻內、皮下、靜脈內或肌內投與。
實施例93. 如實施例92之方法，其中該抗體或抗原結合片段係經鼻內投與。
實施例94. 一種抗體或其抗原結合片段之組合，其包含以下抗體或其抗原結合片段中之至少兩者： (a)抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； (b)抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； (c)抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含；包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (d)抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (e)抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 (f)抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
實施例95. 如實施例94之抗體或抗原結合片段之組合，其中： (a)該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (b)該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (c)該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (d)該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (e)該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 (f)該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
實施例96. 如實施例94或95之抗體或抗原結合片段之組合，其中(e)該抗體D/E或抗原結合片段包含： 重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 其組合。
實施例97. 如實施例94至96中任一者之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(c)抗體B或其抗原結合片段及(e)抗體D/E或其抗原結合片段。
實施例98. 如實施例97之抗體或抗原結合片段之組合，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率在約1:2與約1:8之間。
實施例99. 如實施例98之抗體或抗原結合片段之組合，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1:4。
實施例100. 如實施例94至99中任一者之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(d)抗體C或其抗原結合片段。
實施例101. 如實施例94至100中任一者之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(f)抗體F或其抗原結合片段。
實施例102. 如實施例94至101之抗體或抗原結合片段之組合，其中該組合顯示出針對COVID-19 Omicron BA.2、BA.2.12.1或BA.5病毒株之協同效應。
實施例103. 一種向個體之鼻腔或黏膜遞送活性成分或其前驅物之方法，其包含向該個體投與如實施例1至74中任一者之醫藥組合物。
實施例104. 一種預防有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如實施例1至74中任一者之醫藥組合物、如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段或如實施例94至102中任一者之組合。
實施例105. 一種治療有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如實施例1至74中任一者之醫藥組合物、如實施例78至85中任一者之抗體或抗原結合片段或如實施例94至102中任一者之組合。
實施例106. 如實施例104或105之方法，其中向個體之黏膜投與醫藥組合物或抗體或抗原結合片段或組合。
實施例107. 如實施例104至106中任一者之方法，其中經鼻內向個體投與醫藥組合物或抗體或抗原結合片段或組合。
實施例108. 如實施例103至107中任一者之方法，其中每次投與時將約30至150 µl該醫藥組合物遞送至個體之鼻腔。
實施例109. 如實施例106之方法，其中每次投與時將約70至100 µl該醫藥組合物遞送至個體之鼻腔。
實施例110. 如實施例103至109中任一者之方法，其中每次投與時將約0.15 mg至約0.75 mg活性成分或其前驅物遞送至鼻腔。
實施例111. 如實施例103至110中任一者之方法，其中每天約1至6次將醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或組合遞送至個體。
實施例112. 如實施例111之方法，其中每天約2至3次將醫藥組合物、抗體或抗原結合片段或組合遞送至個體。
實施例113. 如實施例103至112中任一者之方法，其中將醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合遞送至個體，持續約7至14天。
實施例114. 如實施例104至113中任一者之方法，其中在任何疾病症狀發作之前開始投與醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合。
實施例115. 如實施例104至113中任一者之方法，其中在至少一種疾病症狀發作之後開始投與醫藥組合物、抗體或其抗原結合片段或組合。
實施例116. 如實施例114至115中任一者之方法，其中該症狀為呼吸道症狀。
實施例117. 如實施例104至116中任一者之方法，其中該疾病包含呼吸道症狀。
實施例118. 如實施例116或117之方法，其中該呼吸道症狀為過敏、鼻塞、鼻感染或其組合。
實施例119. 如實施例104至118中任一者之方法，其中該疾病係由病毒、細菌、真菌或其組合引起之呼吸道感染。
實施例120. 如實施例104至119中任一者之方法，其中該疾病為病毒感染。
實施例121. 如實施例120之方法，其中該疾病為慢性病毒感染。
實施例122. 如實施例120之方法，其中該疾病為急性病毒感染。
實施例123. 如實施例120之方法，其中該疾病為冠狀病毒感染。
實施例124. 如實施例123之方法，其中該疾病為SARS-CoV-2感染。
實施例125. 如實施例104至124中任一者之方法，其中藉由ELISA所量測，在投與之後24小時內，該個體之鼻腔中之抗體或其抗原結合片段之濃度比該個體之血液樣本中之抗體或其抗原結合片段之濃度高至少100倍。
本文中所引用之所有參考文獻均以引用方式併入，其程度如同各個別公開案、資料庫條目(例如Genbank序列或GeneID條目)、專利申請案或專利特定且個別地指示以引用的方式併入一般。申請人意欲此以引用的方式併入之表述與每一個鑑別的出版物、資料庫條目(例如Genbank序列或GeneID條目)、專利申請或專利相關，即使此類引用不緊鄰藉由以引用的方式併入之專用表述。以引用的方式併入之專用表述(若存在)包括於本說明書內不會以任何方式弱化此以引用的方式併入之一般表述。在本文中引用參考文獻不旨在承認該參考文獻為相關先前技術，亦不構成對此等出版物或文獻之內容或日期的任何承認。
圖 1A 至圖 1F顯示在倉鼠模型中抗體B針對SARS-CoV-2病毒之Delta變異體(Delta變異體)的保護功效。 圖 1A ：動物實驗流程。 圖 1B ：體重變化。 圖 1C ：在感染後第3天(dpi)在被Delta變異體攻擊之倉鼠的洗鼻液中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/毫升))。 圖 1D ：在3 dpi時在被Delta變異體攻擊之倉鼠的呼吸道中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/公克))。 圖 1E ：在3 dpi時在被Delta變異體攻擊之倉鼠的咽喉拭子中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/毫升))。 圖 1F ：在3 dpi時藉由Vero E6細胞中之病毒溶菌斑分析量測呼吸道中之感染性病毒之數目(PFU)。 圖 1G顯示食蟹獼猴研究中之鼻腔中或循環血液中之抗體B濃度。
圖 2A 至圖 2B顯示在3 dpi時在被△變異體攻擊之倉鼠之肺中的組織病理學變化。 圖 2A ：在△變異體攻擊後第3天的第1組、第2組、第3組及第4組倉鼠之經H&E染色之肺組織的代表性影像。在任何程度上，在支氣管結構中不存在明顯異常。肺泡壁由具有透明結構之單層上皮構成。未觀測到明顯的發炎性變化(第1組，預防組)。肺組織顯示肺泡壁增厚伴少量嗜中性白血球浸潤之小病灶(黑色箭頭)；血管充血及擴張為常見的(綠色箭頭) (第2組，3劑抗體治療組)。肺組織顯示輕度肺泡壁增厚伴嗜中性白血球浸潤(黑色箭頭)；支氣管中有時存在一些壞死上皮細胞、淋巴細胞及嗜中性白血球(紫色箭頭)(第3組，2劑抗體處理組)。肺組織中可見肺泡壁中之彌漫性出血(紅色箭頭)；常在支氣管中發現大量血球(綠色箭頭)；發現肺泡壁之多病灶增厚伴嗜中性白血球浸潤(黑色箭頭) (第4組，無抗體之對照組)。 圖 2B ：全面評估切片之組織學變化及發炎進展。
圖 3A 至圖 3E顯示在倉鼠模型中抗體B針對omicron之保護功效。 圖 3A ：動物實驗流程。 圖 3B ：在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的洗鼻液中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/毫升))。 圖 3C ：在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的呼吸道中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/公克))。 圖 3D ：在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的咽喉拭子中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/毫升))。 圖 3E ：在3 dpi時藉由Vero E6細胞中之病毒溶菌斑分析量測呼吸道中之感染性病毒之數目(PFU)。
圖 4A 至圖 4E顯示抗體B之活性。 圖 4A ：藉由ELISA所量測的抗體B與不同RGD之結合。 圖 4B ：藉由抗體B中和假模式化SARS-CoV-2野生型(WT)及不同變體。藉由掃描螢光溶菌斑來計算感染抑制率 圖 4C ：評估抗體B針對活SARS-CoV-2 WT與Delta及Omicron變異體之中和活性。 圖 4D ：抗體B之結合區。比對來自WWT SARS-CoV-2之RBD與Alpha、Beta、Gamma、Delta及Omicron變異體線條指示抗體B之結合區。 圖 4E ：抗體B Fab結合至SARS-CoV-2 RBD上之複合體的結構。在左側，RBD之二級結構元件及抗體B Fab之重鏈及輕鏈之別為綠色、青色及紫色。RBD之表面為綠色。Delta變異體之突變殘基為藍色(中間)，而來自Omicron之突變殘基為紅色(右)。
圖 5顯示黃金倉鼠在被攻擊之後的體重變化(*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001)。
圖 6顯示在感染後第3天(dpi)指定組織中之病毒RNA含量。L.O.D=偵測極限為1.649。
圖 7顯示在感染後第3天(dpi)指定組織中之病毒力價。(**p＜0.01；****p＜0.0001)。L.O.D=偵測極限為1.3。
圖 8顯示黃金倉鼠在被攻擊之後的體重變化。
圖 9顯示各組中黃金倉鼠組織在被攻擊之後的病毒負荷量。(****p＜0.0001)。L.O.D=偵測極限為1.649。
圖 10顯示各組中黃金倉鼠組織在被攻擊之後的病毒力價。(****p＜0.0001)
圖 11A顯示小鼠鼻黏膜中抗體(抗體B)之量。 圖 11B顯示小鼠血液中抗體(抗體B)之量。 圖 11C顯示小鼠氣管中抗體(抗體B)之量。
圖 12A顯示在經鼻滴入抗體( 131I-抗體B)及Na 131I之後24h內健康成年兔之鼻腔中的放射性滯留性。對於各時間點，左側之條代表 131I-抗體條帶之值，右側之條代表Na 131I之值。 圖 12B顯示在經鼻滴入抗體( 131I-抗體B)及Na 131I之後24h內健康成年兔之鼻腔中的放射性滯留性的下降趨勢。 圖 12C顯示在經鼻滴入抗體( 131I-抗體B)及Na 131I之後24h內健康成年兔之鼻腔及咽部中的放射性滯留性。對於各時間點，左側之條代表 131I-抗體條帶之值，右側之條代表Na 131I之值。 圖 12D顯示在經鼻滴入抗體( 131I-抗體B)及Na 131I之後24h內健康成年兔之鼻腔及咽部中的放射性滯留性的下降趨勢。
圖 13顯示在經鼻噴霧之後食蟹獼猴之鼻拭子中之藥物含量。
圖 14顯示抗體D與冠狀病毒之野生型及各種突變型病毒株之重組蛋白的結合能力。
圖 15顯示抗體B與冠狀病毒之野生型及各種突變型病毒株之重組蛋白的結合能力。
圖 16顯示抗體(抗體D)與野生型、Delta、Omicron BA.1、Omicron BA.2及Omicron BA.4/5冠狀病毒之間的親和力結果。
圖 17顯示抗體(抗體B)與冠狀病毒Delta及Omicron (BA.1及BA.2)之間的親和力結果。
圖 18顯示經由抗體(抗體D、抗體B及A8G6)阻斷Omicron RBD/S與ACE2結合。上圖顯示抗體與Omicron RBD競爭結合至ACE2重組蛋白。下圖顯示抗體與Omicron S競爭結合至ACE2重組蛋白。自左至右之圖式依序代表抗體B、抗體D及A8G6。黑色曲線代表對照組。當不添加抗體時，ACE2可結合至塗佈在晶片上之RBD或S，且反應值隨時間增加，曲線顯示上升趨勢(藍色曲線)；紅色曲線顯示在提前添加抗體以結合至晶片上之RBD或S之後，ACE2可不再結合至晶片上之RBD或S，且反應值不隨時間增加。此證明如下：1.抗體D與ACE2部分競爭以阻斷其與共冠狀病毒之棘蛋白(S)之重組蛋白之結合；抗體D不與ACE2競爭且不能阻斷其與冠狀病毒之受體結合域(RBD)之重組蛋白之結合。2.抗體B與ACE2完全競爭以阻斷其與冠狀病毒RBD或S重組蛋白之結合。3. A8G6與ACE2完全競爭以阻斷其與冠狀病毒RBD或S重組蛋白之結合。
圖 19A顯示抗體B針對冠狀病毒之野生型及各種突變型病毒株的假病毒中和能力測試。 圖 19B顯示抗體B針對冠狀病毒之野生型及各種突變型病毒株的假病毒中和能力測試。
圖 20顯示A8G6冠狀病毒中和抗體之假病毒中和測試結果。
圖 21A顯示在抗體B及抗體D的聯合使用下之BA.2假病毒中和測試之3D協同作用95%模式-20220811。 圖 21B顯示在抗體B及抗體D的聯合使用下之BA.2假病毒中和測試之3D協同作用95%模式-20220816。
圖 22A：用假病毒中和分析量測單獨的58G6、單獨的55A8、或58G6及55A8與SARS-CoV-2的組合，以及Delta、Omicron BA.1、Omicron BA.1+L452R及Omicron BA.2變異體的中和效力。短劃線指示病毒中和降低0%或50%。數據呈現為平均值。 圖 22B：針對真實SARS-CoV-2、Delta及Omicron BA.1病毒之中和。
圖 23A顯示在不同比率之抗體B及抗體D的聯合使用下的BA.2假病毒中和測試結果。 圖 23B顯示在不同比率之抗體B及抗體D的聯合使用下的BA.2.12.1假病毒中和測試結果。 圖 23C顯示在不同比率之抗體B及抗體D的聯合使用下的BA.5假病毒中和測試結果。 圖 23D顯示在不同比率之抗體B及抗體D的聯合使用下的Delta假病毒中和測試結果。
圖 24顯示A8G6及抗體D針對野生型、Delta及Omicron病毒株之活病毒的中和活性。
圖 25A顯示動物實驗流程。 圖 25B顯示在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的呼吸道中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/公克))。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組。 圖 25C顯示在3 dpi時藉由用Vero E6細胞進行之病毒溶菌斑分析量測呼吸道中之感染性病毒之數目(PFU)。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組。
圖 26A 至圖 26D顯示在倉鼠模型中55A8/58G6混合液針對Omicron之保護功效的結果。 圖 26A顯示動物實驗流程。 圖 26B顯示在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的呼吸道中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/公克))。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組。 圖 26C顯示在3 dpi時藉由用Vero E6細胞進行之病毒溶菌斑分析量測呼吸道中之感染性病毒之數目(PFU)。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組。 圖 26D顯示用2-混合液質量之倉鼠模型中的體重變化作為針對Omicron之保護功效的量度。
圖 27A 至圖 27D顯示在倉鼠模型中55A8/58G6混合液針對Omicron之預防劑量的結果。 圖 27A顯示動物實驗流程。圖27B顯示在3 dpi時在被Omicron變異體攻擊之倉鼠的呼吸道中偵測到的病毒RNA (log10(RNA複本/公克))(**p＜0.01；****p＜0.0001；L.O.D 偵測極限)為1.30)。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組。 圖 27C顯示在3 dpi時藉由用Vero E6細胞進行之病毒溶菌斑分析量測呼吸道中之感染性病毒之數目(PFU)(****p＜0.0001；L.O.D (偵測極限)為1.30)。對於各位置之長條圖，次序自左至右為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組。 圖 27D顯示在用2-混合液治療之後的倉鼠模型中的體重變化作為定義有效抵抗Omicron之預防劑量的量度。
圖 28A顯示小鼠鼻黏膜中之A8G6抗體含量。 圖 28B顯示小鼠血液中之A8G6抗體含量。 圖 28C顯示小鼠氣管中之A8G6抗體含量。
圖 29顯示在每日將A8G6冠狀病毒中和抗體經鼻噴霧至恆河猴的不同時間之後，鼻拭子之平均藥物濃度-時間曲線。
圖 30A顯示在投與後4小時大鼠黏膜樣本中之抗體(抗體B)濃度。LOB為空白對照(第I組)之最大值。 圖 30B顯示投與後6小時小鼠黏膜樣本中之抗體(抗體B)濃度。丙三醇組中之兩隻動物及HPMC組中之一隻動物具有高於偵測上限之抗體含量。LOB為空白對照(第F組)之最大值。
TW202337497A_112106009_SEQL.xml

Claims (125)

  1. 一種醫藥組合物，其包含： 活性成分或其前驅物； 不超過約40% (w/v)的低溫保護劑； 不超過約30% (w/v)的保濕劑； 不超過約5% (w/v)的乳化劑； 不超過約10% (w/v)的控制釋放劑；及 緩衝劑。
  2. 如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物適合於經黏膜向人類投與。
  3. 如請求項1或2之醫藥組合物，其中該醫藥組合物適合於經鼻內向人類投與。
  4. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中該低溫保護劑選自由以下組成之群：海藻糖、甘油、二甲亞碸、乙二醇、聚乙二醇及蔗糖或其組合。
  5. 如請求項4之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該低溫保護劑為： 不超過40% (w/v)的海藻糖； 不超過40% (w/v)的甘油； 不超過10% (w/v)的二甲亞碸； 不超過40% (w/v)的乙二醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇；或 不超過0.5 M的蔗糖。
  6. 如請求項4之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該低溫保護劑為： 約2%至約8% (w/v)的海藻糖； 約1%至約20% (w/v)的甘油； 約1%至約10% (w/v)的二甲亞碸； 約4%至約30% (w/v)的乙二醇； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇；或 約0.1 M至約0.4 M蔗糖。
  7. 如請求項1至6中任一項之醫藥組合物，其中該低溫保護劑為海藻糖。
  8. 如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其包含約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的該低溫保護劑。
  9. 如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其包含約2% (w/v)至約8% (w/v)的該低溫保護劑。
  10. 如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其包含約4% (w/v)的該低溫保護劑。
  11. 如請求項1至10中任一項之醫藥組合物，其中該保濕劑選自由以下組成之群：丙三醇、甘露糖醇、聚乙二醇400、聚乙二醇4000、D-山梨糖醇、聚葡萄胺糖、木糖醇及玻尿酸鈉或其組合。
  12. 如請求項11之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該保濕劑為： 不超過30% (w/v)的丙三醇； 不超過7% (w/v)的甘露糖醇； 不超過20% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約15% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約15% (w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約3% (w/v)的聚葡萄胺糖； 不超過10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約2.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
  13. 如請求項11之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該保濕劑為： 約2%至約6% (w/v)的丙三醇； 約3%至約5% (w/v)的甘露糖醇； 約10%至約18% (w/v)的聚乙二醇400； 約5%至約10% (w/v)的聚乙二醇4000； 約3%至約6% (w/v)的D-山梨糖醇； 約0.01%至約1% (w/v)的聚葡萄胺糖； 約1%至約10% (w/v)的木糖醇；或 約0.1%至約1.0% (w/v)的玻尿酸鈉。
  14. 如請求項1至13中任一項之醫藥組合物，其中該保濕劑為丙三醇。
  15. 如請求項1至14中任一項之醫藥組合物，其包含約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的該保濕劑。
  16. 如請求項1至14中任一項之醫藥組合物，其包含約1% (w/v)至約4% (w/v)的該保濕劑。
  17. 如請求項16之醫藥組合物，其包含約1.7% (w/v)至約2% (w/v)的該保濕劑。
  18. 如請求項1至17中任一項之醫藥組合物，其中該乳化劑係選自由以下組成之群：TWEEN 80、聚山梨醇酯20、卵磷脂、脫水山梨糖醇酯、單甘油酯及/或二甘油酯及硬脂醯乳酸鈉或其組合。
  19. 如請求項1至18中任一項之醫藥組合物，其中該乳化劑為TWEEN 80。
  20. 如請求項1至19中任一項之醫藥組合物，其包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的該乳化劑。
  21. 如請求項1至19中任一項之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約2% (w/v)的該乳化劑。
  22. 如請求項21之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約0.04% (w/v)的該乳化劑。
  23. 如請求項21之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約0.02% (w/v)的該乳化劑。
  24. 如請求項1至23中任一項之醫藥組合物，其中該控制釋放劑選自由羥丙基甲基纖維素(HPMC)及聚乙烯吡咯啶酮K30或其組合組成之群。
  25. 如請求項1至24中任一項之醫藥組合物，其中該控制釋放劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
  26. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約5% (w/v)或約0.01% (w/v)至約1% (w/v)的該控制釋放劑。
  27. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其包含約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的該控制釋放劑。
  28. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)至約0.2% (w/v)的該控制釋放劑。
  29. 如請求項28之醫藥組合物，其包含約0.02% (w/v)或約0.1% (w/v)的該控制釋放劑。
  30. 如請求項1至24中任一項之醫藥組合物，其中該控制釋放劑為聚乙烯吡咯啶酮K30。
  31. 如請求項1至30中任一項之醫藥組合物，其包含約2% (w/v)至約10% (w/v)或約3% (w/v)至約6% (w/v)的該控制釋放劑。
  32. 如請求項1至31中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑係選自由磷酸鹽緩衝劑、tris緩衝劑及甘胺酸緩衝劑組成之群。
  33. 如請求項32之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該緩衝劑為： 約10 mM至約100 mM磷酸鹽； 約10 mM至約100 mM tris；或 約0.1 M至約0.5 M甘胺酸。
  34. 如請求項32之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該緩衝劑為： 約10 mM至約40 mM磷酸鹽； 約10 mM至約40 mM tris；或 約0.1 M至約0.2 M甘胺酸。
  35. 如請求項1至34中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑為磷酸鹽緩衝劑。
  36. 如請求項1至35中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該緩衝劑為約20 mM磷酸鹽或tris。
  37. 如請求項1至36中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約4至8，或約5至7。
  38. 如請求項1至36中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約5.5至6.5。
  39. 如請求項38之醫藥組合物，其中該緩衝劑之pH為約6.0。
  40. 如請求項1至39中任一項之醫藥組合物，其包含抗生素。
  41. 如請求項40之醫藥組合物，其中該抗生素包含苯紮氯銨、苯甲醇、氯丁醇或其組合。
  42. 如請求項41之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該抗生素為： 約0.002%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 不超過3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約0.5%至約2.0% (w/v)的氯丁醇。
  43. 如請求項41之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該抗生素為： 約0.005%至約0.02% (w/v)的苯紮氯銨； 約1.0%至約3.0% (v/v)的苯甲醇；或 約1.0%至2.0% (w/v)的氯丁醇。
  44. 如請求項40至43中任一項之醫藥組合物，其中該抗生素為苯紮氯銨。
  45. 如請求項40至44中任一項之醫藥組合物，其包含約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的該抗生素。
  46. 如請求項45之醫藥組合物，其包含約0.005% (w/v)至約0.02% (w/v)或約0.01% (w/v)的該抗生素。
  47. 如請求項1至46中任一項之醫藥組合物，其中該活性成分或其前驅物在靈長類動物之鼻腔中之平均滯留時間為在經鼻內向該靈長類動物投與該醫藥組合物之後至少1小時、至少2小時、至少3小時、至少4小時、至少5小時、至少6小時、至少7小時、至少8小時、至少9小時、至少10小時、至少11小時或至少12小時。
  48. 如請求項47之醫藥組合物，其中該靈長類動物為恆河獼猴。
  49. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約0.3% (w/v)至約12% (w/v)的低溫保護劑； 約0.2% (w/v)至約10% (w/v)的保濕劑； 約0.002% (w/v)至約0.1% (w/v)的乳化劑；及 約0.004% (w/v)至約0.4% (w/v)的控制釋放劑。
  50. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約2%至約8% (w/v)的該低溫保護劑； 約1%至約4% (w/v)的該保濕劑； 約0.005%至約0.04% (w/v)的該乳化劑； 約0.01%至約0.2% (w/v)的該控制釋放劑；及 該緩衝劑之pH為約5.5至6.5。
  51. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的該低溫保護劑； 約1.7%至約2% (w/v)的該保濕劑； 約0.01%至約0.02% (w/v)的該乳化劑； 約0.02%至約0.1% (w/v)的該控制釋放劑；及 該緩衝劑之pH為約6.0。
  52. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的該低溫保護劑； 約2% (w/v)的該保濕劑； 約0.01% (w/v)的該乳化劑； 約0.02% (w/v)的該控制釋放劑；及 該緩衝劑之pH為約6.0。
  53. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的該低溫保護劑； 約2% (w/v)的該保濕劑； 約0.02% (w/v)的該乳化劑； 約0.1% (w/v)的該控制釋放劑；及 該緩衝劑之pH為約6.0。
  54. 如請求項1至48中任一項之醫藥組合物，其包含： 約4% (w/v)的該低溫保護劑； 約1.7% (w/v)的該保濕劑； 約0.02% (w/v)的該乳化劑； 約0.1% (w/v)的該控制釋放劑；及 該緩衝劑之pH為約6.0。
  55. 如請求項49至54中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑包含約20 mM磷酸鹽，視情況其中該磷酸鹽為磷酸鈉鹽。
  56. 如請求項49至55中任一項之醫藥組合物，其中該低溫保護劑為海藻糖，該保濕劑為丙三醇，該乳化劑為TWEEN 80，該控制釋放劑為HPMC。
  57. 如請求項49至56中任一項之醫藥組合物，其包含約0.01% (w/v)苯紮氯銨。
  58. 如請求項1至57中任一項之醫藥組合物，其中該活性成分包含多肽。
  59. 如請求項58之醫藥組合物，其中該活性成分包含抗體或其抗原結合片段。
  60. 如請求項1至59中任一項之醫藥組合物，其中該活性成分之濃度為約0.1至100 mg/ml、約0.5至50 mg/ml或約1至30 mg/ml。
  61. 如請求項60之醫藥組合物，其中該活性成分之濃度為約5 mg/ml。
  62. 如請求項59至61中任一項之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原片段結合至冠狀病毒。
  63. 如請求項62之醫藥組合物，其中該抗體或其抗原片段結合至SARS-CoV-2。
  64. 如請求項59至63中任一項之醫藥組合物，其包含以下中之一或多者： (a)    抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； (b)    抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； (c)    抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (d)    抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (e)    抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 (f)    抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
  65. 如請求項64之醫藥組合物，其中： (a)    該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (b)    該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (c)    該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (d)    該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (e)    該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 (f)    該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
  66. 如請求項64或65之醫藥組合物，其中(e)該抗體D/E或抗原結合片段包含： 重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 其組合。
  67. 如請求項64至66中任一項之醫藥組合物，其包含該等抗體或抗原結合片段中之至少兩者。
  68. 如請求項67之醫藥組合物，其包含(c)該抗體B或其抗原結合片段及(e)該抗體D/E或其抗原結合片段。
  69. 如請求項68之醫藥組合物，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率在約1:2與約1:8之間。
  70. 如請求項68之醫藥組合物，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1:4。
  71. 如請求項64至70中任一項之醫藥組合物，其包含(d)該抗體C或其抗原結合片段。
  72. 如請求項64至71中任一項之醫藥組合物，其包含(f)該抗體F或其抗原結合片段。
  73. 如請求項64至72中任一項之醫藥組合物，其中該抗體為IgG、IgM或IgA。
  74. 如請求項1至73中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係經由經鼻投與裝置投與。
  75. 一種經鼻或經黏膜投與裝置，其包含如請求項1至74中任一項之醫藥組合物。
  76. 一種套組，其包含如請求項1至74中任一項之醫藥組合物及經鼻或經黏膜投與裝置。
  77. 如請求項75之經鼻投與裝置或如請求項76之套組，其中該經鼻投與裝置為定量鼻泵裝置或單位劑量鼻泵裝置。
  78. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變域(VH)，該重鏈可變域包含重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，其中： 該HCDR1包含GFTFSGSA (SEQ ID NO: 13)之胺基酸序列； 該HCDR2包含IVVGSGNT (SEQ ID NO: 14)之胺基酸序列；及 該HCDR3包含AAPYCSSTSCRDGFDI (SEQ ID NO: 15)之胺基酸序列。
  79. 如請求項78之抗體或抗原結合片段，其中該VH包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 18之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的序列。
  80. 如請求項78或79之抗體或抗原結合片段，其包含輕鏈可變域(VL)，該輕鏈可變域包含輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中： 該LCDR1包含QSVRSSY (SEQ ID NO: 10)之胺基酸序列； 該LCDR2包含GAS (SEQ ID NO: 11)之胺基酸序列；及 該LCDR3包含QQYGRSPWT (SEQ ID NO: 12)之胺基酸序列。
  81. 如請求項78至80中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該VL包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：SEQ ID NO: 16之胺基酸序列或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的序列。
  82. 一種抗體或其抗原結合片段，其包含： (i)     VH，其包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (ii)    VH，其包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (iii)   VH，其包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；或 (iv)   VH，其包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及VL，其包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
  83. 如請求項78至82中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係用於經鼻內投與。
  84. 如請求項78至83中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段能夠結合至SARS-CoV-2棘蛋白，視情況其中該SARS-CoV-2棘蛋白包含SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 108或SEQ ID NO: 110中所示之胺基酸序列。
  85. 如請求項78至84中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體為IgG、IgM或IgA。
  86. 一種聚核苷酸，其編碼如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段。
  87. 一種載體，其包含如請求項86之聚核苷酸。
  88. 一種組合物，其包含如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段、如請求項86之聚核苷酸或如請求項87之載體。
  89. 一種細胞，其包含如請求項86之聚核苷酸或如請求項87之載體。
  90. 一種產生如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段之方法，其包含培養包含編碼該抗體或其抗原結合片段之載體之細胞及自該細胞之培養基收集該抗體或抗原結合片段。
  91. 一種治療或預防有需要個體之SARS-CoV-2感染之方法，其包含向該個體投與有效量的如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段。
  92. 如請求項91之方法，其中該抗體或抗原結合片段係經鼻內、皮下、靜脈內或肌內投與。
  93. 如請求項92之方法，其中該抗體或抗原結合片段係經鼻內投與。
  94. 一種抗體或其抗原結合片段之組合，其包含以下抗體或其抗原結合片段中之至少兩者： (a)    抗體A或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 13之HCDR1、包含SEQ ID NO: 14之HCDR2及包含SEQ ID NO: 15之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 10之LCDR1、包含SEQ ID NO: 11之LCDR2及包含SEQ ID NO: 12之LCDR3； (b)    抗體A-1或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 4之HCDR1、包含SEQ ID NO: 5之HCDR2及包含SEQ ID NO: 6之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 1之LCDR1、包含SEQ ID NO: 2之LCDR2及包含SEQ ID NO: 3之LCDR3； (c)    抗體B或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 23之HCDR1、包含SEQ ID NO: 24之HCDR2及包含SEQ ID NO: 25之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 20之LCDR1、包含SEQ ID NO: 21之LCDR2及包含SEQ ID NO: 22之LCDR3； (d)    抗體C或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 33之HCDR1、包含SEQ ID NO: 34之HCDR2及包含SEQ ID NO: 35之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 30之LCDR1、包含SEQ ID NO: 31之LCDR2及包含SEQ ID NO: 32之LCDR3； (e)    抗體D/E或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 43之HCDR1、包含SEQ ID NO: 44之HCDR2及包含SEQ ID NO: 45之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 40之LCDR1、包含SEQ ID NO: 41之LCDR2及包含SEQ ID NO: 42之LCDR3；及 (f)    抗體F或其抗原結合片段，其包含(i) VH，該VH包含：包含SEQ ID NO: 63之HCDR1、包含SEQ ID NO: 64之HCDR2及包含SEQ ID NO: 65之HCDR3；及(ii) VL，該VL包含：包含SEQ ID NO: 60之LCDR1、包含SEQ ID NO: 61之LCDR2及包含SEQ ID NO: 62之LCDR3。
  95. 如請求項94之抗體或抗原結合片段之組合，其中： (a)    該抗體A或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 18或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 16或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (b)    該抗體A-1或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 8或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 7或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (c)    該抗體B或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 28或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 26或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (d)    該抗體C或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 38或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 36或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列； (e)    該抗體D/E或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 48或52或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 46或50或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及/或 (f)    該抗體F或其抗原結合片段包含：VH，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 68或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及VL，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 66或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列。
  96. 如請求項94或95之抗體或抗原結合片段之組合，其中(e)該抗體D/E或抗原結合片段包含： 重鏈恆定區(HCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 49或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及輕鏈恆定區(LCR)，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 47或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 HCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 53或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；及LCR，其包含以下或由以下組成：SEQ ID NO: 51或與其具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之序列；或 其組合。
  97. 如請求項94至96中任一項之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(c)該抗體B或其抗原結合片段及(e)該抗體D/E或其抗原結合片段。
  98. 如請求項97之抗體或抗原結合片段之組合，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率在約1:2與約1:8之間。
  99. 如請求項98之抗體或抗原結合片段之組合，其中(c)該抗體B或其抗原結合片段與(e)該抗體D/E或其抗原結合片段之比率為約1:4。
  100. 如請求項94至99中任一項之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(d)該抗體C或其抗原結合片段。
  101. 如請求項94至100中任一項之抗體或抗原結合片段之組合，其包含(f)該抗體F或其抗原結合片段。
  102. 如請求項94至101之抗體或抗原結合片段之組合，其中該組合顯示出針對COVID-19 Omicron BA.2、BA.2.12.1或BA.5病毒株之協同效應。
  103. 一種向個體之鼻腔或黏膜遞送活性成分或其前驅物之方法，其包含向該個體投與如請求項1至74中任一項之醫藥組合物。
  104. 一種預防有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如請求項1至74中任一項之醫藥組合物、如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項94至102中任一項之組合。
  105. 一種治療有需要個體之疾病的方法，其包含向該個體投與如請求項1至74中任一項之醫藥組合物、如請求項78至85中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項94至102中任一項之組合。
  106. 如請求項104或105之方法，其中該醫藥組合物或該抗體或抗原結合片段或該組合係投與至該個體之黏膜。
  107. 如請求項104至106中任一項之方法，其中該醫藥組合物或該抗體或抗原結合片段或該組合係經鼻內向該個體投與。
  108. 如請求項103至107中任一項之方法，其中每次投與時將約30至150 µl該醫藥組合物遞送至該個體之鼻腔。
  109. 如請求項106之方法，其中每次投與時將約70至100 µl該醫藥組合物遞送至該個體之該鼻腔。
  110. 如請求項103至109中任一項之方法，其中每次投與時將約0.15 mg至約0.75 mg之該活性成分或其前驅物遞送至該鼻腔。
  111. 如請求項103至110中任一項之方法，其中每天約1至6次將該醫藥組合物、該抗體或抗原結合片段或該組合遞送至該個體。
  112. 如請求項111之方法，其中每天約2至3次將該醫藥組合物、該抗體或抗原結合片段或該組合遞送至該個體。
  113. 如請求項103至112中任一項之方法，其中將該醫藥組合物、該抗體或其抗原結合片段或該組合遞送至該個體持續約7至14天。
  114. 如請求項104至113中任一項之方法，其中在該疾病之任何症狀發作之前開始投與該醫藥組合物、該抗體或其抗原結合片段或該組合。
  115. 如請求項104至113中任一項之方法，其中在該疾病之至少一種症狀發作之後開始投與該醫藥組合物、該抗體或其抗原結合片段或該組合。
  116. 如請求項114至115中任一項之方法，其中該症狀為呼吸道症狀。
  117. 如請求項104至116中任一項之方法，其中該疾病包含呼吸道症狀。
  118. 如請求項116或117之方法，其中該呼吸道症狀為過敏、鼻塞、鼻感染或其組合。
  119. 如請求項104至118中任一項之方法，其中該疾病係由病毒、細菌、真菌或其組合引起之呼吸道感染。
  120. 如請求項104至119中任一項之方法，其中該疾病為病毒感染。
  121. 如請求項120之方法，其中該疾病為慢性病毒感染。
  122. 如請求項120之方法，其中該疾病為急性病毒感染。
  123. 如請求項120之方法，其中該疾病為冠狀病毒感染。
  124. 如請求項123之方法，其中該疾病為SARS-CoV-2感染。
  125. 如請求項104至124中任一項之方法，其中藉由ELISA所量測，在該投與之後24小時內，該個體之鼻腔中之該抗體或其抗原結合片段之濃度比該個體之血液樣本中之該抗體或其抗原結合片段之濃度高至少100倍。
TW112106009A 2022-02-18 2023-02-18 鼻內調配物及抗sars-cov-2棘蛋白抗體 TW202337497A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2022101519706 2022-02-18
CN202210151716.6A CN116655778A (zh) 2022-02-18 2022-02-18 抗sars-cov-2-刺突蛋白抗体和抗原结合片段
CN2022101517166 2022-02-18
CN202210151970.6A CN116650638A (zh) 2022-02-18 2022-02-18 鼻内给药制剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202337497A true TW202337497A (zh) 2023-10-01

Family

ID=85570301

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112106009A TW202337497A (zh) 2022-02-18 2023-02-18 鼻內調配物及抗sars-cov-2棘蛋白抗體

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202337497A (zh)
WO (1) WO2023155902A1 (zh)

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US5693489A (en) 1984-03-30 1997-12-02 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US4952496A (en) 1984-03-30 1990-08-28 Associated Universities, Inc. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2922029C (en) 2006-03-22 2017-11-28 Medigene Ag A combination of a cationic liposomal preparation comprising an antimitotic agent and a non-liposomal preparation comprising an antimitotic agent
US8629244B2 (en) 2006-08-18 2014-01-14 Ablynx N.V. Interleukin-6 receptor binding polypeptides
RU2010151725A (ru) 2008-05-16 2012-06-27 Аблинкс Нв (Be) Аминокислотные последовательности, направленные против cхcr4 и других gpcr, и соединения, включаюшие их
JP5667575B2 (ja) 2008-12-16 2015-02-12 パラディン ラブス インコーポレーテッド 誤用を防止する放出制御製剤
US20110144578A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Stephen Pacetti Hydrophobic therapueutic agent and solid emulsifier coating for drug coated balloon
US10674732B2 (en) 2015-04-29 2020-06-09 The State Of Israel, Ministry Of Agriculture & Rural Development Agricultural Research Organization Anti-phytopathogenic compositions
JP6720293B2 (ja) * 2015-08-19 2020-07-08 アストラゼネカ・アクチエボラーグＡｓｔｒａｚｅｎｅｃａ Ａｋｔｉｅｂｏｌａｇ 安定な抗ｉｆｎａｒ１製剤
KR20180123036A (ko) 2016-02-12 2018-11-14 로단 앤드 필즈, 엘엘씨 보습용 조성물 및 이의 용도
WO2020053301A1 (en) * 2018-09-11 2020-03-19 Ichnos Sciences S.A. Compositions comprising a bispecific antibody, bufffer and one or more stabilizing agents
WO2022032139A1 (en) * 2020-08-07 2022-02-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Neutralizing antibodies that bind the sars-cov-2 s protein
CN117801098A (zh) 2020-08-19 2024-04-02 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN115477698A (zh) 2020-08-19 2022-12-16 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
WO2022036788A1 (zh) 2020-08-19 2022-02-24 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体及其线性抗原表位和应用
CN115340602A (zh) 2020-08-19 2022-11-15 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN115925898A (zh) 2020-08-19 2023-04-07 重庆医科大学 新型冠状病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN111925441B (zh) 2020-08-19 2022-10-04 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN111909260B (zh) 2020-08-19 2022-06-21 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN117003862A (zh) 2020-08-19 2023-11-07 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN111909261B (zh) 2020-08-19 2022-10-04 重庆医科大学 新冠病毒rbd特异性单克隆抗体和应用
CN115925900B (zh) 2020-08-19 2024-06-25 重庆医科大学 新型冠状病毒rbd特异性单克隆抗体和应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023155902A1 (en) 2023-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7041708B2 (ja) ウイルス性肺炎治療のためのＣ５ａの阻害剤
ES2688941T3 (es) Antagonistas del receptor 1 del factor de necrosis tumoral para tratar enfermedades respiratorias
JP7104629B2 (ja) インフルエンザウイルスに対する抗体分子の製剤
US11246928B2 (en) Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
JP2017524339A (ja) 中東呼吸器症候群−コロナウイルススパイクタンパク質に対するヒト抗体
KR20150138236A (ko) 향상된 치료 효능을 위해 비강내로 전달되는 중화 항체에 기반한 조성물 및 방법
US20230416343A1 (en) Neutralizing Antibodies that Bind the SARS-COV-2 S Protein
CA2864830A1 (en) Anti-big-endothelin-1 (big-et-1) antibodies and uses thereof
US11440952B2 (en) Compositions for preventing or treating viral and other microbial infections
JP2023525506A (ja) Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２ ｓタンパク質に結合する中和抗体
US20220226470A1 (en) Antibodies and methods for treatment of influenza a infection
US10047145B2 (en) Antibodies that potently neutralize RSV and uses thereof
CN115666649A (zh) 一种新型冠状病毒抗体的药物组合物及其用途
US10639370B2 (en) Antibodies useful in passive influenza immunization, and compositions, combinations and methods for use thereof
TW202337497A (zh) 鼻內調配物及抗sars-cov-2棘蛋白抗體
US20230312684A1 (en) Neuropilin and angiotensin converting enzyme 2 fusion peptides for treating viral infections
JP2023553888A (ja) Ａ型インフルエンザ感染の治療のための抗体及び方法
CN116650638A (zh) 鼻内给药制剂
TW202321292A (zh) 抗sars-cov-2-棘醣蛋白抗體及抗原結合片段
WO2023201306A1 (en) Compositions for preventing or treating influenza infections