TW202321292A

TW202321292A - 抗sars-cov-2-棘醣蛋白抗體及抗原結合片段

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Publication number: TW202321292A
Application number: TW111126340A
Authority: TW
Inventors: 艾麗娜鮑姆; 克里斯托斯凱拉特蘇斯; 喬治揚科波洛斯
Original assignee: 美商再生元醫藥公司
Priority date: 2021-07-14
Filing date: 2022-07-13
Publication date: 2023-06-01
Also published as: US20230125469A1; IL310012A; EP4370210A1; WO2023287875A1; CA3225575A1; BR112024000744A2; AU2022311906A1; CO2024001388A2; KR20240046322A

Abstract

本文提供了特異性結合至冠狀病毒棘蛋白之抗體及其抗原結合片段，以及使用此類抗體及片段治療或預防病毒感染（例如冠狀病毒感染）的方法。

Description

抗SARS-COV-2-棘醣蛋白抗體及抗原結合片段

序列表

本申請案以引用之方式併入ST.26 XML格式之電腦可讀序列表，標題為11007WO01-Sequence，創建於2022年7月12日，且含有1,488,419個位元組。

本發明係關於特異性結合至冠狀病毒棘蛋白之抗體及抗原結合片段，以及用該等抗體及片段治療或預防冠狀病毒感染的方法。

新鑑別之病毒（諸如冠狀病毒）可能難以治療，因為其未經充分表徵。此等新鑑別之病毒的出現凸顯了開發新穎抗病毒策略的需要。嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2（SARS-CoV-2）係一種新出現的冠狀病毒，可導致嚴重急性呼吸道疾病COVID-19。SARS-CoV-2最初在中國武漢之爆發中鑑別，且截至2022年7月8日，世界衛生組織報導了551,296,228例確診病例，導致6,345,595人死亡。COVID-19之臨床特徵包括發燒、乾咳及疲勞，且該疾病可造成呼吸衰竭導致死亡。

鑒於對人類健康的持續威脅，且尤其SARS-CoV-2病毒新變種的出現，仍然迫切需要針對SARS-CoV-2控制的預防性及治療性抗病毒療法。由於此病毒使用其棘醣蛋白與細胞受體ACE2及絲胺酸蛋白酶TMPRSS2相互作用以進入目標細胞，因此此棘蛋白代表了抗體治療之一個有吸引力的目標。特定言之，以高親和力特異性結合至SARS-CoV-2-棘蛋白（SARS-CoV-2-S）且抑制病毒感染性之完全人類抗體可能對COVID-19的預防及治療很重要。

需要中和治療性抗SARS-CoV-2-棘蛋白（SARS-CoV-2-S）抗體及其用於治療或預防病毒感染的用途。本文藉由提供人類抗SARS-CoV-2-S抗體，諸如表4中之彼等抗體及其組合，包括例如與其他治療劑（例如抗炎劑、抗瘧疾劑、抗病毒劑或其他抗體或抗原結合片段）之組合，以及使用其治療病毒感染的方法，部分解決此需要。

本文提供了特異性結合至SARS-CoV-2-S的中和人類抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離重組抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至冠狀病毒棘蛋白（CoV-S），其中該抗體具有以下特徵中之一或多者：（a）以小於約10 ^-8M之EC ₅₀結合至CoV-S；（b）在向感染冠狀病毒之動物投與後，與未進行該投與之可比感染冠狀病毒之動物相比，展現該感染冠狀病毒之動物的存活率提高；及/或（c）包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含表4之抗體之HCDR1、HCDR2及HCDR3的重鏈可變區（例如免疫球蛋白HCVR）；及/或（b）包含表4之抗體之LCDR1、LCDR2及LCDR3的輕鏈可變區（例如免疫球蛋白LCVR）。

在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含與表4之HCVR序列具有至少90%胺基酸序列一致性的胺基酸序列的重鏈免疫球蛋白可變區；及/或（b）包含與表4之LCVR序列具有至少90%胺基酸序列一致性的胺基酸序列的輕鏈免疫球蛋白可變區。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含表4之單一抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含表4之單一抗體的HCVR及LCVR。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（i）包含分別在SEQ ID NO: 212/222之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（j）包含分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（k）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；或（l）包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC；（i）包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（j）包含分別在SEQ ID NO: 362/370之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（k）包含分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（l）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（m）包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC；或（n）包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC及包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 495、497及499之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC；（i）包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（j）包含分別在SEQ ID NO: 493/501之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（k）包含分別包含SEQ ID NO: 495、497及3499之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（l）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（m）包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC；或（n）包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC及包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（i）包含分別在SEQ ID NO: 887/895之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（j）包含分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（k）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；或（l）包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的LC。

在一個態樣中，本文提供了一種抗原結合蛋白，其與如上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段競爭與CoV-S之結合。

在一個態樣中，本文提供了一種抗原結合蛋白，其與上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段結合至相同的CoV-S抗原決定基或CoV-S上的重疊抗原決定基。

在一些實施例中，上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段係多特異性的。

在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含以下特性中之一或多者：（a）抑制冠狀病毒之生長；（b）結合至冠狀病毒表面；（c）活體外限制細胞之冠狀病毒感染的傳播；及（d）保護經工程改造以表現人類ACE2或TMPRSS2蛋白的小鼠免於由冠狀病毒感染引起之死亡及/或體重減輕。

在上文或本文所論述之實施例中之任一者中，該CoV-S可為SARS-CoV-2-S。

在一個態樣中，本文提供了一種複合物，其包含與CoV-S多肽結合的如上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段。在一些情況下，CoV-S為SARS-CoV-2-S。

在一個態樣中，本文提供了一種用於製備如上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段的方法，其包含：（a）將一或多種編碼該抗體或抗原結合片段之多核苷酸（例如，多核苷酸或多核苷酸對，如下文所論述）引入宿主細胞；（b）在有利於一或多種多核苷酸表現之條件下培養宿主細胞；及（c）視情況，自宿主細胞及/或宿主細胞在其中生長的培養基中分離抗體或抗原結合片段。在一些情況下，宿主細胞為中國倉鼠卵巢細胞。

在一個態樣中，本發明提供了一種抗體或抗原結合片段，其為上述方法之產物。

在一個態樣中，本文提供了一種多肽，其包含：（a）包含表4中所示之HCVR胺基酸序列之抗體或抗原結合片段之HCVR域的HCDR1、HCDR2及HCDR3；或（b）包含表4中所示之LCVR胺基酸序列之免疫球蛋白鏈之LCVR域的LCDR1、LCDR2及LCDR3。

在各種實施例中，本文提供了編碼上述多肽之多核苷酸、包含該多核苷酸之載體及/或包含該抗體或抗原結合片段或多肽或多核苷酸或載體的宿主細胞。在各種實施例中，本文提供了編碼如上文或本文所論述之抗體或其抗原結合片段的HCVR、LCVR或HCVR及LCVR兩者的多核苷酸。HCVR及/或LCVR可分別由HCVR序列、LCVR序列或HCVR序列及LCVR序列兩者內所含有的CDR定義，如表4中所列。HCVR及/或LCVR亦可分別由重鏈CDR序列、輕鏈CDR序列或重鏈及輕鏈CDR序列兩者定義，如表4中所列。HCVR及/或LCVR亦可分別由HCVR序列、LCVR序列或HCVR及LCVR序列兩者定義，如表4中所列。在各種實施例中，本文提供了編碼如上文或本文所論述之抗體之重鏈、輕鏈或重鏈及輕鏈兩者的多核苷酸。重鏈及/或輕鏈可分別由重鏈及輕鏈序列定義，如表4中所列。在各種實施例中，多核苷酸包含如表5中所示之核酸序列。在各種實施例中，本文提供了一或多種包含上述多核苷酸之載體，及/或包含如上文或本文所描述之多核苷酸或載體、或HCVR或LCVR、或組裝的抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。在各種實施例中，本文提供了一對多核苷酸，其中（a）第一多核苷酸編碼：（i）包含表4之抗體之HCVR中所含有的CDR序列的HCVR，（ii）包含如表4中的抗體所示之HCDR1、HCDR2及HCDR3序列的HCVR，（iii）包含表4之抗體之HCVR序列的HCVR，或（iv）包含表4之抗體之重鏈（HC）序列的HC；及（b）第二多核苷酸編碼：（i）包含表4之抗體之LCVR中所含有的CDR序列的LCVR，（ii）包含如表4中的抗體所示之LCDR1、LCDR2及LCDR3序列的LCVR，（iii）包含表4之抗體之LCVR序列的LCVR，或（iv）包含表4之抗體之輕鏈（LC）序列的LC。在各種實施例中，本文提供了分別包含上述第一及第二多核苷酸之載體對，及/或包含該載體對之宿主細胞。

在一些實施例中，多核苷酸對編碼抗體或其抗原結合片段之組分，諸如：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 212之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；或（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，多核苷酸對編碼抗體或其抗原結合片段之組分，諸如：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 362之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 370之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC；或（e）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，多核苷酸對編碼抗體或其抗原結合片段之組分，諸如：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 493之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 501之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 495、497及499之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC；或（e）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC。

在一些實施例中，多核苷酸對編碼抗體或其抗原結合片段之組分，諸如：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 887之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 895之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；或（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的LC。

在一個態樣中，本文提供了一種組成物或套組，其包含上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段以及另外的治療劑。

在一個態樣中，本文提供了一種醫藥組成物，其包含上文或本文所論述之抗原結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑，以及視情況選用之另外的治療劑。在一些情況下，組成物或套組與作為抗病毒藥物或疫苗之另外的治療劑結合。在一些實施例中，另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎。在一些實施例中，抗炎劑為抗體。在一些情況下，此抗體為沙利姆單抗（sarilumab）、托珠單抗（tocilizumab）或瑾司魯單抗（gimsilumab）。在一些情況下，組成物或套組包含第二抗體或抗原結合片段，其包含表4之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。在一些情況下，結合至CoV-S之抗體為卡斯瑞韋單抗（casirivimab）或依米得韋單抗（imdevimab）。

在一個態樣中，本文提供了一種容器或注射裝置，其包含上文或本文所論述之抗原結合蛋白或組成物。

在一個態樣中，本文提供了一種經由投與治療有效量之如上文或本文所論述之抗原結合蛋白，在有需要之個體中治療或預防冠狀病毒感染的方法。在一些情況下，冠狀病毒係選自由以下組成之群組：SARS-CoV-2、SARS-CoV及MERS-CoV。

在一些實施例中，向個體投與一或多種另外的治療劑。在一些情況下，一或多種另外的治療劑為抗病毒藥物或疫苗。在一些情況下，一或多種另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎。在一些實施例中，抗炎劑為抗體。在一些情況下，此抗體為沙利姆單抗、托珠單抗或瑾司魯單抗。在一些情況下，向個體投與第二抗體或抗原結合片段，其包含表4之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。在一些情況下，向個體投與包含第二抗體或抗原結合片段，其包含美國專利第10,787,501號中描述之抗體，例如mAb10933、mAb10987或mAb10985的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。在一些情況下，結合至CoV-S之抗體為卡斯瑞韋單抗或依米得韋單抗。

在一個態樣中，本發明提供了一種用於將如上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段投與至個體體內的方法，其包含將抗體或抗原結合片段注射至個體體內。在一些情況下，將抗體或抗原結合片段皮下、靜脈內或肌內注射至個體體內。

在上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段、組成物、套組、複合物、多肽、多核苷酸、載體、細胞或方法的各種實施例中之任一者中，抗體或抗原結合結合片段可包含VH3-66或Vk1-33可變域序列。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體或抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些情況下，HCDR1包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些情況下，HCDR1包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。在一些情況下，經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，其為IgG1恆定區。在一些實施例中，經分離抗體為重組抗體。在一些情況下，經分離抗體係多特異性的。

在一個態樣中，本文提供了一種醫藥組成物，其包含上述經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。在一些情況下，醫藥組成物進一步包含第二治療劑。在一些情況下，第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白；抗炎劑、抗瘧疾劑及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。在一些情況下，第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。在一些實施例中，第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。在一些實施例中，第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。在一些實施例中，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些實施例中，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體或抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些情況下，HCDR1包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，經分離抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些情況下，HCDR1包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。在一些情況下，經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，其為IgG1恆定區。在一些實施例中，經分離抗體為重組抗體。在一些實施例中，經分離抗體係多特異性的。

在一個態樣中，本文提供了一種醫藥組成物，其包含上述經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。在一些情況下，醫藥組成物進一步包含第二治療劑。在一些情況下，第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白；抗炎劑、抗瘧疾劑及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。在一些情況下，第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一個態樣中，本文提供了一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 270中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 278中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 272中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 274中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 276中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 280中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 106中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 282中所示之胺基酸序列。在一些情況下，抗體包含有包含SEQ ID NO: 270中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 278中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，抗體包含有包含SEQ ID NO: 284中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 286中所示之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，免疫球蛋白恆定區為IgG1恆定區。在一些情況下，抗體為重組抗體。在一些情況下，抗體係多特異性的。

在一個態樣中，本文提供了本文提供了一種醫藥組成物，其包含上述經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。

在一些情況下，醫藥組成物進一步包含第二治療劑。在一些情況下，第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白、抗炎劑、抗瘧疾劑，及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中，第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一個態樣中，本文提供了一種醫藥組成物，其包含：a）第一經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第一經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）；以及b）第二經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第二經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 1030中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），及在包含SEQ ID NO: 1038中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些實施例中，第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列的LCDR3。在一些情況下，第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，第一經分離抗體包含：免疫球蛋白恆定區，其為IgG1恆定區。在一些情況下，第一經分離抗體為重組抗體。在一些情況下，第一經分離抗體係多特異性的。

在一些實施例中，醫藥組成物進一步包含醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。

在一些實施例中，第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1032中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 1034中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 1036中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 1040中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 1042中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 1044中所示之胺基酸序列的LCDR3。在一些情況下，第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1030中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 1038中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1048中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1048中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，醫藥組成物進一步包含第三經分離抗體。

在一些實施例中，第三經分離抗體結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第三經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 1010中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 1018中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。在一些情況下，第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1012中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 1014中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 1016中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 1020中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 1022中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 1024中所示之胺基酸序列的LCDR3。在一些情況下，第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1010中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 1018中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1026中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1028中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一個態樣中，本文提供了一種用於在有需要之個體中治療或預防Omicron變異體SARS-CoV-2感染的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一個態樣中，本文提供了一種用於在有需要之個體中預防由感染Omicron變異體SARS-CoV-2引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在該等方法之一些實施例中，預防包含暴露前預防。在該等方法之一些實施例中，預防包含暴露後預防。

在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含：（a）包含表4之抗體之HCDR1、HCDR2及HCDR3的免疫球蛋白重鏈可變區；及/或（b）包含表4之抗體之LCDR1、LCDR2及LCDR3的免疫球蛋白輕鏈可變區。

在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含表4之抗體的HCDR1、HCDR2及HCDR3以及表4之該抗體的LCDR1、LCDR2及LCDR3。

在該等方法之一些實施例中，向個體投與一或多種另外的治療劑。在一些情況下，一或多種另外的治療劑為抗病毒藥物或疫苗。在一些情況下，一或多種另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗炎劑為抗體，諸如沙利姆單抗、托珠單抗或瑾司魯單抗。在一些情況下，結合至CoV-S之抗體為卡斯瑞韋單抗或依米得韋單抗。

在該等方法之一些實施例中，該抗體或抗原結合片段包含表4之第二抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。

在該等方法之一些實施例中，投與包含將抗體或抗原結合片段注射至個體體內。在一些情況下，將抗體或抗原結合片段皮下、靜脈內或肌內注射至個體體內。

在一個態樣中，本文提供了一種用於在有需要之個體中治療或預防由SARS-CoV-2感染引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 364中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 366中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 368中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 372中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 106中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 374中所示之胺基酸序列。在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列的HCVR。在一些情況下，抗體或抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列的LCVR。在一些情況下，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 376中所示之胺基酸序列的重鏈。在一些情況下，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 378中所示之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，投與包含藉由注射投與抗體或抗原結合片段。在一些情況下，注射為靜脈內注射。在一些情況下，注射為皮下注射。

在一些實施例中，投與包含投與300 mg之該抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，投與包含投與600 mg之該抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，投與包含投與1200 mg之該抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中，投與包含投與兩劑該抗體或其抗原結合片段。在一些情況下，兩劑中之各者包含300 mg之抗體或其抗原結合片段。在一些情況下，兩劑相隔4週、相隔5週、相隔6週、相隔7週、相隔8週、相隔9週、相隔10週、相隔11週、相隔12週、相隔13週、相隔14週、相隔15週或相隔16週投與。在一些情況下，兩劑相隔8-16週投與。在一些情況下，兩劑相隔12週投與。在一些情況下，兩劑相隔8週投與。

在一些實施例中，投與降低該個體中SARS-CoV-2之病毒載量。

在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段之投與發生在SARS-CoV-2感染之前。

在一個態樣中，本文提供了一種用於在有需要之個體中治療或預防由SARS-CoV-2感染引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3），其中該投與包含向該個體投與兩劑該抗體或其抗原結合片段，各劑包含300 mg之該抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中，投與為皮下投與。

在一個態樣中，本文提供了編碼抗體或其抗原結合片段之多核苷酸；或HCVR及/或LCVR；或抗體或其抗原結合片段之重鏈及/或輕鏈，如上文或本文所論述。本文進一步提供了包含上文或本文所論述之多核苷酸的一或多種載體，以及包含上文或本文所論述之抗體或抗原結合片段、一或多種多核苷酸及/或一或多種載體的宿主細胞。

在一些實施例中，投與包含投與600 mg之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，投與包含投與300 mg之抗體或其抗原結合片段。

在上文或本文所論述之抗體或其抗原結合片段的各種實施例中之任一者中，抗體或抗原結合片段可以中和SARS-CoV-2的omicron變異體。在各種實施例中，omicron變異體選自BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3或BA.4/BA.5。

在各種實施例中，上文或本文所論述之實施例之特徵或組分中之任一者可組合，且此類組合涵蓋在本文的範疇內。上文或本文所論述之任何具體值可與上文或本文所論述之另一相關值組合以敍述範圍，其中該等值代表該範圍之上端及下端，且此類範圍涵蓋在本文的範疇內。

在描述本發明方法之前，應理解，本發明不限於所描述之特定方法及實驗條件，因為此類方法及條件可變化。亦應理解，本文所使用之術語係僅出於描述特定實施例的目的而並不意欲為限制性的，因為本發明之範疇將僅由隨附申請專利範圍限制。

除非另外規定，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域中一般技術者通常所理解相同的含義。儘管類似或等效於本文所述之方法及材料的任何方法及材料可用於本發明之實踐或測試中，但現在描述較佳方法及材料。本文提及的所有出版物均以全文引用的方式併入本文中。

術語「冠狀病毒」或「CoV」係指冠狀病毒科中之任何病毒，包括但不限於SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV。SARS-CoV-2亦被稱為2019-nCoV及武漢冠狀病毒。其經由病毒棘蛋白結合至人類宿主細胞受體血管收縮素轉換酶2（ACE2）。棘蛋白亦結合至TMPRSS2且由其切割，此活化棘蛋白以進行病毒之膜融合。

術語「CoV-S」，亦稱為「S」或「S蛋白」，係指冠狀病毒之棘蛋白，且可以指特定S蛋白，諸如SARS-CoV-2-S、MERS-CoV S及SARS-CoV S。SARS-CoV-2-棘蛋白係一種1273個胺基酸的第I型膜醣蛋白，其組裝成三聚體，構成有套膜冠狀病毒顆粒表面之棘或膜粒（peplomer）。該蛋白具有兩個基本功能，亦即宿主受體結合及膜融合，此歸因於S蛋白的N端（S1）及C端（S2）半部。CoV-S藉由存在於S1次單元中之受體結合域（RBD）結合至其同源受體。全長SARS-CoV-2棘蛋白之胺基酸序列由SEQ ID NO: 1008中提供之胺基酸序列例示。術語「CoV-S」包括自不同CoV分離株分離之CoV棘蛋白的蛋白質變異體以及重組CoV棘蛋白或其片段。該術語亦涵蓋與例如組胺酸標籤、小鼠或人類Fc或信號序列（諸如ROR1）偶聯的CoV棘蛋白或其片段。

如本文所用，術語「冠狀病毒感染」或「CoV感染」係指感染冠狀病毒，諸如SARS-CoV-2、MERS-CoV或SARS-CoV。該術語包括冠狀病毒呼吸道感染，通常發生在下呼吸道。症狀可能包括高燒、乾咳、呼吸急促、肺炎、胃腸道症狀（諸如腹瀉）、器官衰竭（腎衰竭及腎功能障礙）、感染性休克，以及嚴重病例中之死亡。病毒

本發明包括治療或預防個體之病毒感染的方法。術語「病毒」包括可藉由投與抗CoV-S抗體或其抗原結合片段治療或預防個體體內感染的任何病毒（例如，其中病毒之感染性至少部分依賴於CoV-S）。在本發明之一個實施例中，「病毒」為任何表現棘蛋白（例如，CoV-S）之病毒。術語「病毒」亦包括CoV-S依賴性呼吸道病毒，其為感染個體之呼吸道組織（例如，上及/或下呼吸道、氣管、支氣管、肺）且可藉由投與抗CoV-S抗體或其抗原結合片段治療或預防的病毒。例如，在本發明之一個實施例中，病毒包括冠狀病毒、SARS-CoV-2（嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2）、SARS-CoV（嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒）及MERS-CoV（中東呼吸道症候群（MERS）冠狀病毒）。冠狀病毒可包括α冠狀病毒屬、β冠狀病毒屬、γ冠狀病毒屬及δ冠狀病毒屬。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段可結合至及/或中和α冠狀病毒、β冠狀病毒、γ冠狀病毒及/或δ冠狀病毒。在某些實施例中，此結合及/或中和可對特定冠狀病毒屬或屬之特定亞群具特異性。「病毒感染」係指病毒在個體體內之侵入及增殖。

冠狀病毒病毒體呈球形，直徑為大約125 nm。冠狀病毒最突出的特徵係自病毒體表面發出的棒狀棘突起。此等棘為病毒體之決定性特徵，且使其具有日冕外觀，因此得名冠狀病毒。病毒體套膜內為核殼體。冠狀病毒具有螺旋對稱的核殼體，此在正義RNA病毒中不常見，但在反義RNA病毒中更為常見。SARS-CoV-2、MERS-CoV及SARS-CoV屬於冠狀病毒科。病毒體與宿主細胞之初始附著係由S蛋白與其受體之間的相互作用引發。冠狀病毒S蛋白之S1區內的受體結合域（RBD）位點因病毒而異，有些在S1之C端具有RBD。S蛋白/受體相互作用係冠狀病毒感染宿主物種的主要決定因素，且亦控制病毒之組織趨性。許多冠狀病毒利用肽酶作為其細胞受體。在受體結合之後，病毒必須接下來進入宿主細胞的細胞溶質。此通常藉由組織蛋白酶、TMPRRS2或另一蛋白酶對S蛋白進行酸依賴性蛋白水解切割，接著融合病毒及細胞膜來完成。

本文所描述之冠狀病毒亦包括變異體冠狀病毒，在一些實施例中，其被世界衛生組織（WHO）分類為「感興趣的變異體」或「關注的變異體」。變異體冠狀病毒之棘醣蛋白可能發生突變，此可能會改變病毒之特性，諸如COVID-19的嚴重程度或傳播性。WHO將關注的變異體定義為與以下一或多種自野生型之變化相關的變異體，其變化程度達到具有全球公共衛生意義：1）傳播性提高或COVID-19流行病學之有害變化；2）毒力增加或臨床疾病表現改變；或3）公共衛生措施及社會措施，包括可用的治療方法、疫苗及診斷方法之有效性降低。WHO將感興趣的變異體定義為SARS-CoV-2病毒，其1）具有預測或已證明會影響病毒特徵的基因變化，該等特徵包括免疫逃脫、治療逃脫、診斷逃脫、傳播性及疾病嚴重程度；及2）已被鑑別為在多個國家造成重大社區傳播或多個COVID-19集群，且隨時間推移隨著病例數量的增加而相對盛行率增加，或具有表明全球公共衛生面臨新風險的其他流行病學影響。截至2021年12月13日，WHO分類的關注的變異體有五種（alpha、beta、gamma、delta及omicron），且WHO分類的感興趣的變異體有兩種（lambda及mu）。各變異體可藉由與野生型棘醣蛋白相比其棘醣蛋白的突變來定義。例如，Omicron變異體（亦分類為B.1.1.529）在其棘醣蛋白中包含以下突變：A67V、Δ69-70、T95I、G142D/Δ143-145、Δ211/L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K及L981F（全長omicron棘醣蛋白：SEQ ID NO: 1072）。此外，此等變異體可具有涵蓋一組相關病毒的其他譜系。例如，截至2022年7月8日，Omicron變異體具有BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3及BA.4/BA.5譜系。在一些實施例中，本文所描述之抗體及其抗原結合片段可結合至此等變異體及/或譜系中之任一者。在其他實施例中，抗體及其抗原結合片段可中和此等變異體及/或譜系。抗 CoV-S 抗體及抗原結合片段

本發明提供特異性結合至CoV棘蛋白或其抗原片段之抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段。

如本文所用，術語「抗體」係指包含藉由二硫鍵互連之四條多肽鏈，亦即兩條重鏈（HC）及兩條輕鏈（LC）的免疫球蛋白分子（亦即，「完整抗體分子」），以及其多聚體（例如，IgM）。例示性抗體包括例如表4中所列之彼等。各重鏈包含重鏈可變區（「HCVR」或「V _H」）及重鏈恆定區（包含域C _H1、C _H2及C _H3）。各輕鏈包含輕鏈可變區（「LCVR」或「V _L」）及輕鏈恆定區（C _L）。V _H及V _L區可進一步細分成稱為互補決定區（CDR）之高變區，其間穿插有稱為構架區（FR）之更加保守的區。各V _H及V _L包含自胺基端至羧基端按以下順序排列之三個CDR及四個FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈CDR亦可稱為HCDR或CDR-H，且如上所述編號（例如，HCDR1、HCDR2及HCDR3或HCDR1、HCDR2及HCDR3）。同樣，輕鏈CDR可稱為LCDR或CDR-L，且編號為LCDR1、LCDR2及LCDR3，或LCDR1、LCDR2及LCDR3。在本發明之某些實施例中，抗體（或其抗原結合片段）之FR與人類生殖系序列相同，或經天然或人工修飾。例示性人類生殖系序列包括但不限於VH3-66及Vk1-33。因此，本文提供了在VH3-66或Vk1-33可變重鏈或輕鏈區內包含表4之HCDR及LCDR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段（例如，抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段）。本文進一步提供了在以下之組合內包含表4之HCDR及LCDR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段（例如，抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段）：選自IgKV4-1、IgKV 1-5、IgKV1-9、IgKV1-12、IgKV3-15、IgKV1-16、IgKV1-17、IgKV3-20、IgLV3-21、IgKV2-24、IgKV1-33、IgKV1-39、IgLV1-40、IgLV1-44、IgLV1-51、IgLV3-1、IgKV1-6、IgLV2-8、IgKV3-11、IgLV2-11、IgLV2-14、IgLV2-23或IgLV6-57之輕鏈，以及選自IgHV1-69、IgHV3-64、IgHV4-59、IgHV3-53、IgHV3-48、IgHV4-34、IgHV3-33、IgHV3-30、IgHV3-23、IgHV3-20、IgHV1-18、IgHV3-15、IgHV3-11、IgHV3-9、IgHV1-8、IgHV3-7、IgHV2-5、IgHV1-2、IgHV2-70、IgHV3-66、IgHV5-51、IgHV1-46、IgHV4-39、IgHV4-31、IgHV3-30-3、IgHV2-26或IgHV7-4-1之重鏈。本文進一步提供了在以下之組合內包含表4之HCVR及LCVR序列的抗CoV-S抗體或其抗原結合片段（例如，抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段）：選自IgKV4-1、IgKV 1-5、IgKV1-9、IgKV1-12、IgKV3-15、IgKV1-16、IgKV1-17、IgKV3-20、IgLV3-21、IgKV2-24、IgKV1-33、IgKV1-39、IgLV1-40、IgLV1-44、IgLV1-51、IgLV3-1、IgKV1-6、IgLV2-8、IgKV3-11、IgLV2-11、IgLV2-14、IgLV2-23或IgLV6-57之輕鏈，以及選自IgHV1-69、IgHV3-64、IgHV4-59、IgHV3-53、IgHV3-48、IgHV4-34、IgHV3-33、IgHV3-30、IgHV3-23、IgHV3-20、IgHV1-18、IgHV3-15、IgHV3-11、IgHV3-9、IgHV1-8、IgHV3-7、IgHV2-5、IgHV1-2、IgHV2-70、IgHV3-66、IgHV5-51、IgHV1-46、IgHV4-39、IgHV4-31、IgHV3-30-3、IgHV2-26或IgHV7-4-1之重鏈。

通常，免疫球蛋白重鏈及輕鏈之可變域均包含三個高變區，亦稱為互補決定區（CDR），位於相對保守的構架區（FR）內。通常，自N端至C端，輕鏈及重鏈可變域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。在本發明之一個實施例中，各域之胺基酸分配係根據以下定義：《免疫學感興趣的蛋白質序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest）》, Kabat等人；美國國立衛生研究院（National Institutes of Health），馬里蘭州貝塞斯達（Bethesda, Md.）；第5版；NIH出版物第91-3242號(1991)；Kabat (1978) 《蛋白質化學進展（Adv. Prot.Chem.）》32:1-75；Kabat等人, (1977) 《生物化學雜誌（J. Biol. Chem.）》252:6609-6616；Chothia等人, (1987) 《分子生物學雜誌（J Mol. Biol.）》196:901-917或Chothia等人, (1989) 《自然（Nature）》342:878-883。

本發明包括單株抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，以及包含複數種經分離單株抗原結合蛋白的單株組成物。如本文所用，術語「單株抗體」係指實質上同質的抗體群，亦即除可以少量存在之可能的天然存在之突變以外，構成該群之抗體分子在胺基酸序列上相同。組成物中之「複數種」此類單株抗體及片段係指相同（亦即，如上文所論述，除可以少量存在之可能的天然存在之突變以外，在胺基酸序列上相同）抗體及片段之濃度，其高於通常在自然界中，例如在宿主生物體（諸如小鼠或人類）之血液中存在之濃度。

在本發明之一個實施例中，抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段包含重鏈恆定域，例如，類型為IgA（例如，IgA1或IgA2）、IgD、IgE、IgG（例如，IgG1、IgG2、IgG3及IgG4）或IgM。在本發明之一個實施例中，抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段包含輕鏈恆定域，例如，類型為κ或λ。

如本文所用，術語「人類」抗原結合蛋白，諸如抗體，包括具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體，無論在人類細胞中還是移植至非人類細胞，例如小鼠細胞中。參見例如US8502018、US6596541或US5789215。本發明之人類mAb可包括不由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基（例如，藉由活體外隨機或定點誘變或藉由活體內體細胞突變引入的突變），例如在CDR中且尤其在CDR3中。然而，如本文所用，術語「人類抗體」不意欲包括其中已將衍生自另一哺乳動物物種（例如，小鼠）之生殖系的CDR序列移植至人類FR序列上的mAb。術語包括在非人類哺乳動物或非人類哺乳動物之細胞中以重組方式產生的抗體。術語不意欲包括自人類個體分離或在人類個體中產生之抗體。見下文。

本發明包括抗CoV-S嵌合抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，及其使用方法。如本文所用，「嵌合抗體」為具有來自第一抗體之可變域及來自第二抗體之恆定域的抗體，其中第一及第二抗體來自不同物種。（US4816567；及Morrison等人, (1984)《美國國家科學院院刊（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）》81: 6851-6855）。

本發明包括抗CoV-S雜合抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，以及其使用方法。如本文所用，「雜合抗體」為具有來自第一抗體之可變域及來自第二抗體之恆定域的抗體，其中第一及第二抗體來自不同動物，或其中可變域而非恆定區來自第一動物。例如，可變域可取自分離自人類之抗體且與未自該抗體分離之固定恆定區一起表現。例示性雜合抗體描述於實例1中，其係指抗體重鏈可變區及輕鏈可變區衍生的PCR產物，其被選殖至分別含有重恆定區及輕恆定區之表現載體中。雜合抗體為合成的且非天然存在的，因為其含有的可變區及恆定區並非自單一天然來源分離。

術語「重組」抗原結合蛋白，諸如抗體或其抗原結合片段，係指藉由本領域中稱為重組DNA技術（其包括例如DNA剪接及轉殖基因表現）的技術或方法產生、表現、分離或獲得的此類分子。該術語包括在非人類哺乳動物（包括基因轉殖非人類哺乳動物，例如基因轉殖小鼠）或細胞（例如，CHO細胞）表現系統或非人類細胞表現系統中表現，或自重組組合人類抗體庫分離之抗體。在一些實施例中，重組抗體與自生物體（例如小鼠或人類）分離之抗體共有序列，但已經由重組DNA技術表現。此類抗體可具有不同於自生物體分離之抗體的轉譯後修飾（例如醣基化）。

在一些實施例中，本文所揭示之抗體在其恆定區醣基化中缺乏岩藻糖。量測抗體組成物中之岩藻糖之方法已描述於本領域中，例如，美國專利第8,409,838號（再生元製藥（Regeneron Pharmaceuticals）），其以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，岩藻糖在包含抗體分子群體之組成物中係不可偵測的。在一些實施例中，缺乏岩藻糖之抗體具有增強的ADCC活性。

在一些實施例中，缺乏岩藻糖之抗體可使用缺乏岩藻糖基化蛋白質之能力（亦即，降低或消除岩藻糖基化蛋白質之能力）的細胞株產生。聚糖之岩藻糖基化需要經由從頭路徑或補救路徑合成GDP-岩藻糖，兩種路徑涉及若干酶之依序功能，導致將岩藻糖分子添加至聚糖還原端之第一N-乙醯葡萄糖胺（GlcNAc）部分。負責產生GDP-岩藻糖之從頭路徑之兩種關鍵酶為GDP-D-甘露糖-4,6-去水酶（GMD）及GDP-酮-6-去氧甘露糖-3,5-表異構酶,4-還原酶（FX）。在不存在岩藻糖之情況下，此等兩種從頭路徑酶（GMD及FX）將甘露糖及/或葡萄糖轉化成GDP-岩藻糖，接著將該GDP-岩藻糖轉運至高爾基體複合物中，其中九種岩藻糖基-轉移酶（FUT1-9）協同作用以使聚糖之第一GlcNAc分子岩藻糖基化。然而，在存在岩藻糖之情況下，補救路徑酶、岩藻糖-激酶及GDP-岩藻糖焦磷酸化酶將岩藻糖轉化成GDP-岩藻糖。

本領域中已描述缺乏岩藻糖基化蛋白質能力之細胞株。在一些實施例中，缺乏岩藻糖基化蛋白質能力之細胞株為在內源性FUT1-9基因中之一或多者中包含突變或基因修飾而導致缺乏一或多種功能性岩藻糖基-轉移酶的哺乳動物細胞株（例如，CHO細胞株，諸如CHO K1、DXB-11 CHO、Veggie-CHO）。在一些實施例中，哺乳動物細胞株包含內源性FUT8基因中之突變（例如，FUT8基因剔除細胞株，其中FUT8基因已被破壞，導致細胞株中缺乏功能性α1,6-岩藻糖基轉移酶，如描述於美國專利第7,214,775號（協和醱酵工業株式會社（Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.））及美國專利7,737,725（協和醱酵麒麟株式會社（Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd））中，其以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，哺乳動物細胞株包含內源性GMD基因中之突變或基因修飾，導致描述於例如美國專利7,737,725（協和醱酵麒麟株式會社）中之細胞株（例如，其中GMD基因已被破壞之GMD基因剔除細胞株）中缺乏功能性GMD，該專利以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，哺乳動物細胞株包含內源性Fx基因中之突變或基因修飾，從而導致缺乏功能性Fx蛋白。在一些實施例中，哺乳動物細胞株為其中內源性Fx基因已被破壞之Fx基因剔除細胞株（參見例如美國專利7,737,725（協和醱酵麒麟株式會社），以引用的方式併入本文中）。在一些實施例中，哺乳動物細胞株包含賦予溫度敏感性表型之內源性Fx突變中之突變（如描述於例如美國專利第8,409,838號（再生元製藥）中，該專利以引用的方式併入本文中）。在一些實施例中，缺乏岩藻糖基化蛋白質能力之哺乳動物細胞株為已基於對某些凝集素（例如，小扁豆（Lens culinaris）凝集素）之抗性所選擇的細胞株。參見例如美國專利第8,409,838號（再生元製藥），其以引用的方式併入本文中。

本文所揭示之重組抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及抗原結合片段，亦可在大腸桿菌/T7表現系統中產生。在此實施例中，編碼本發明之抗CoV-S抗體免疫球蛋白分子（例如，如見於表4中）的核酸可插入基於pET之質體中且在大腸桿菌/T7系統中表現。例如，本發明包括在宿主細胞（例如細菌宿主細胞，諸如大腸桿菌，諸如BL21或BL21DE3）中表現抗體或其抗原結合片段或其免疫球蛋白鏈的方法，其包含在細胞中表現T7 RNA聚合酶，該細胞亦包括可操作地連接至T7啟動子之編碼免疫球蛋白鏈的多核苷酸。例如，在本發明之一個實施例中，細菌宿主細胞，諸如大腸桿菌，包括可操作地連接至 lac啟動子之編碼T7 RNA聚合酶基因的多核苷酸，且聚合酶及鏈之表現藉由將宿主細胞與IPTG（異丙基-β-D-硫代哌喃半乳糖苷）一起培育來誘導。參見US4952496及US5693489或Studier及Moffatt, 《使用噬菌體T7 RNA聚合酶指導選殖基因之選擇性高水準表現（Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes）》, 《分子生物學雜誌》 1986年5月5日;189(1): 113-30。

存在若干種產生重組抗體之方法，其為本領域中已知。US4816567中揭示了重組產生抗體之方法的一個實例。

轉形可藉由任何已知的用於將多核苷酸（例如，DNA或RNA，包括mRNA）引入宿主細胞的方法進行。將異源多核苷酸引入哺乳動物細胞的方法係本領域熟知的，且包括葡聚醣介導的轉染、磷酸鈣沈澱、聚凝胺介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、多核苷酸在脂質體中之囊封、脂質奈米顆粒技術、基因槍注射及直接將DNA顯微注射至細胞核中。另外，核酸分子可藉由諸如慢病毒或腺相關病毒之病毒載體引入哺乳動物細胞。轉形細胞之方法係本領域熟知的。參見例如美國專利第4,399,216號；第4,912,040號；第4,740,461號及第4,959,455號。在一些實施例中，可將本文之抗體或其抗原結合片段以核酸形式（例如，DNA或RNA，包括mRNA）引入個體，使得個體自身的細胞產生抗體。本文進一步提供了對編碼本文所描述之抗CoV-S抗體之核苷酸序列的修飾，其引起抗體表現增加、抗體穩定性增加、核酸（例如，mRNA）穩定性增加，或抗體對CoV棘蛋白之親和力或特異性增加。

因此，本發明包括用於製備抗CoV-S抗原結合蛋白，諸如本發明之抗體或其抗原結合片段，或其免疫球蛋白鏈的重組方法，其包含（i）引入一或多種編碼例如表4之抗原結合蛋白的免疫球蛋白輕鏈及/或重鏈或CDR的多核苷酸（例如，包括表5中之任何一或多個序列的核苷酸序列），其中該多核苷酸在載體中；及/或整合至宿主細胞染色體中及/或可操作地連接至啟動子；（ii）在有利於多核苷酸表現之條件下培養宿主細胞（例如，CHO或畢赤酵母（ Pichia）或巴斯德畢赤酵母（ Pichia pastoris）），以及（iii）視情況自宿主細胞及/或宿主細胞在其中生長的培養基中分離抗原結合蛋白（例如，抗體或片段）或鏈。例如，多核苷酸可經由用諸如腺相關病毒（AAV）之載體靶向插入而整合至宿主細胞染色體中，例如，在使用基因編輯系統（例如，CRISPR（例如，CRISPR-Cas9）、TALEN、megaTAL、鋅指或Argonaute）切割染色體之後。例如，可在宿主細胞基因座，諸如白蛋白或免疫球蛋白基因體基因座處進行靶向插入。或者，可在隨機基因座處插入，例如使用諸如慢病毒之載體。當製備包含多於一條免疫球蛋白鏈之抗原結合蛋白（例如，抗體或抗原結合片段），例如包含兩條免疫球蛋白重鏈及兩條免疫球蛋白輕鏈之抗體時，此等鏈在單一宿主細胞中共表現引起鏈之締合，例如在細胞中或細胞表面上或細胞外（若此類鏈經分泌），從而形成抗原結合蛋白（例如，抗體或抗原結合片段）。該等方法包括僅表現免疫球蛋白重鏈或僅表現免疫球蛋白輕鏈（例如，本文所論述之彼等中之任一者，包括其成熟片段及/或可變域）的方法。此類鏈可用作例如包括此類鏈之抗體或抗原結合片段之表現中的中間物。例如，本發明亦包括抗CoV-S抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段，其包含由包含表5中所示之核苷酸序列之多核苷酸編碼的重鏈免疫球蛋白（或其可變域或包含其CDR）及由表5中所示之核苷酸序列編碼的輕鏈免疫球蛋白（或其可變域或包含其CDR），其為此類生產方法及視情況選用之本文所闡述之純化方法的產物。例如，在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含有包含表4中所示之胺基酸序列之HCVR及包含表4中所示之胺基酸序列之LCVR的抗體或片段，其中HCVR及LCVR序列選自表4中所列之單一抗體。在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含有包含表4中所示之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3以及包含表4中所示之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或片段，其中六個CDR序列選自表4中所列之單一抗體。在一些實施例中，該方法之產物為抗CoV-S抗原結合蛋白，其為包含有包含表4中所示之HC胺基酸序列的重鏈及包含表4中所示之LC胺基酸序列的輕鏈的抗體或片段。

真核及原核宿主細胞，包括哺乳動物細胞，可用作表現抗CoV-S抗原結合蛋白之宿主。此類宿主細胞係本領域熟知的且許多可自美國典型培養物保藏中心（ATCC）獲得。此等宿主細胞尤其包括中國倉鼠卵巢（CHO）細胞、NS0、SP2細胞、希拉細胞（HeLa cell）、幼倉鼠腎（BHK）細胞、猴腎細胞（COS）、人類肝細胞癌細胞（例如Hep G2）、A549細胞、3T3細胞、HEK-293細胞及許多其他細胞株。哺乳動物宿主細胞包括人類、小鼠、大鼠、犬、猴、豬、山羊、牛、馬及倉鼠細胞。其他可使用之細胞株為昆蟲細胞株（例如草地貪夜蛾（ Spodoptera frugiperda）或粉紋夜蛾（ Trichoplusia ni））、兩棲動物細胞、細菌細胞、植物細胞及真菌細胞。真菌細胞包括酵母及絲狀真菌細胞，包括例如巴斯德畢赤酵母、芬蘭畢赤酵母（ Pichia finlandica）、海藻畢赤酵母（ Pichia trehalophila）、科克拉馬畢赤酵母（ Pichia koclamae）、膜醭畢赤酵母（ Pichia membranaefaciens）、微小畢赤酵母（ Pichia minuta）（微小緒方酵母（ Ogataea minuta）、林德納畢赤酵母（ Pichia lindneri））、仙人掌畢赤酵母（ Pichia opuntiae）、耐熱畢赤酵母（ Pichia thermotolerans）、柳畢赤酵母（ Pichia salictaria）、松櫟畢赤酵母（ Pichia guercuum）、皮傑普畢赤酵母（ Pichia pijperi）、樹幹畢赤酵母（ Pichia stiptis）、甲醇畢赤酵母（ Pichia methanolica）、畢赤酵母屬（ Pichiasp.）、釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）、酵母菌屬（ Saccharomycessp.）、多形漢遜酵母（ Hansenula polymorpha）、克魯維酵母屬（ Kluyveromycessp.）、乳酸克魯維酵母（ Kluyveromyces lactis）、白色念珠菌（ Candida albicans）、小巢狀麴菌（ Aspergillus nidulans）、黑麴菌（ Aspergillus niger）、米麴菌（ Aspergillus oryzae）、里氏木黴（ Trichoderma reesei）、勒克瑙金孢子菌（ Chrysosporium lucknowense）、鐮菌屬（ Fusariumsp.）、麥類株鐮菌（ Fusarium gramineum）、絲狀鐮菌（ Fusarium venenatum）、小立碗蘚（ Physcomitrella patens）及紅麵包黴（ Neurospora crassa）。本發明包括經分離宿主細胞（例如CHO細胞），其包含抗原結合蛋白，諸如表4中之彼等；或其編碼此多肽之多核苷酸。

如本文所論述，多核苷酸可編碼如在本文通篇中所論述之抗體或抗原結合片段的全部或部分。在一些情況下，單個多核苷酸可編碼抗體或抗原結合片段之HCVR及LCVR兩者（例如，參考在各別胺基酸序列內所含有的CDR定義，定義HCVR及LCVR，分別參考HCVR及LCVR之CDR的胺基酸序列定義，或分別參考HCVR及LCVR之胺基酸序列定義），或HCVR及LCVR可由獨立的多核苷酸（亦即，一對多核苷酸）編碼。在後一種情況下，其中HCVR及LCVR由獨立的多核苷酸編碼，多核苷酸可組合在單個載體中或可含於獨立的載體（亦即，一對載體）中。在任何情況下，用於表現多核苷酸或載體之宿主細胞可含有完整的組成部分以產生抗體或其抗原結合片段。例如，宿主細胞可包含獨立的載體，各載體分別編碼如上文或本文所論述之抗體或其抗原結合片段的HCVR及LCVR。類似地，一或多種多核苷酸及一或多種載體可用於表現如上文或本文所論述之抗體的全長重鏈及全長輕鏈。例如，宿主細胞可包含具有編碼抗體重鏈及輕鏈兩者之多核苷酸的單一載體，或宿主細胞可包含具有分別編碼如上文或本文所論述之抗體之重鏈及輕鏈之多核苷酸的獨立載體。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 214、216及218之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 213、215及217）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 222、126及224之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 221、125及223）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 211）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 219）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 225）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 227）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb14315之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 364、366及368之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 363、365及367）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 372、106及374之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 371、105及373）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 361）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 369）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 375）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 377）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb15160之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 495、497及499之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 494、496及498）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 503、505及507之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 502、504及506）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 492）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 500）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 508）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 510）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb14284之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 889、891及893之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 888、890及892）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 897、164及899之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 896、163及898）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 886）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 894）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 900）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 902）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb14256之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 495、497及499之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 494、496及498）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 503、505及507之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 502、504及506）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 492）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 500）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 1074）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 510）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb17090之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 364、366及368之HCDR之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 363、365及367）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 372、106及374之LCDR之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 371、105及373）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列之HCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 361）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列之LCVR的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 369）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列之重鏈（HC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 1076）。在一個例示性實施例中，本文提供了編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列之輕鏈（LC）的多核苷酸（或包含該多核苷酸之載體，或包含該多核苷酸或該載體之宿主細胞）（例如，在一個實施例中，該多核苷酸包含SEQ ID NO: 377）。在一個實施例中，本文提供了分別編碼HCVR及LCVR或HC及LC之一對多核苷酸或一對載體，如本段所論述，以及含有該多核苷酸對及/或載體對以編碼稱為mAb15160_2之抗體或其抗原結合片段的宿主細胞。

術語「特異性結合」係指對抗原，諸如CoV-S蛋白（例如SARS-CoV-2-S）具有至少約10 ^-8M之表示為K _D之結合親和力的抗原結合蛋白（例如mAb），K _D藉由即時、免標定生物膜層干涉術分析，例如在25℃或37℃下，例如Octet® HTX生物感測器，或藉由表面電漿子共振，例如BIACORE™，或藉由溶液親和ELISA量測。本發明包括特異性結合至CoV-S蛋白之抗原結合蛋白。

如本文所用，術語抗體或抗原結合蛋白之「抗原結合部分」或「抗原結合片段」及其類似術語包括特異性結合抗原以形成複合物的任何天然存在、以酶方式可獲得、合成或經基因工程改造之多肽或醣蛋白。抗原結合片段之非限制性實例包括：（i）Fab片段；（ii）F(ab') ₂片段；（iii）Fd片段；（iv）Fv片段；（v）單鏈Fv（scFv）分子；（vi）dAb片段；及（vii）由模擬抗體之高變區（例如，經分離之互補決定區（CDR），諸如CDR3肽）或限制性FR3-CDR3-FR4肽的胺基酸殘基組成之最小識別單元。其他經工程改造之分子，諸如域特異性抗體、單域抗體、域缺失抗體、嵌合抗體、CDR移植抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、微型抗體、奈米抗體（例如，如WO08/020079或WO09/138519中所定義）（例如單價奈米抗體、二價奈米抗體等）、小模組化免疫藥物（SMIP）及鯊魚可變IgNAR域亦涵蓋在如本文所用之表述「抗原結合片段」內。在本發明之一個實施例中，抗原結合片段包含表4之抗體的三個或更多個CDR（例如，HCDR1、HCDR2及HCDR3；或LCDR1、LCDR2及LCDR3）。

在本發明之一個實施例中，抗體之抗原結合片段將包含至少一個可變域。可變域可具有任何尺寸或胺基酸組成且一般將包含至少一個與一或多個構架序列相鄰或同框之CDR。在具有與V _L域相關之V _H域的抗原結合片段中，V _H及V _L域可以任何適合之排列相對於彼此定位。例如，可變區可為二聚的且含有V _H- V _H、V _H- V _L或V _L- V _L二聚體。替代地，抗體之抗原結合片段可含有單體V _H或V _L域。

在某些實施例中，抗體之抗原結合片段可含有與至少一個恆定域共價連接之至少一個可變域。可發現於本發明之抗體之抗原結合片段內的可變域及恆定域之非限制性例示性組態包括：（i）V _H-C _H1；（ii）V _H-C _H2；（iii）V _H-C _H3；（iv）V _H-C _H1-C _H2；（v）V _H-C _H1-C _H2-C _H3；（vi）V _H-C _H2-C _H3；（vii）V _H-C _L；（viii）V _L-C _H1；（ix）V _L-C _H2；（x）V _L-C _H3；（xi）V _L-C _H1-C _H2；（xii）V _L-C _H1-C _H2-C _H3；（xiii）V _L-C _H2-C _H3；及（xiv）V _L-C _L。在可變域及恆定域之任何組態，包括上文所列之例示性組態中之任一者中，可變域及恆定域可直接彼此連接或可藉由完全或部分鉸鏈區或連接區連接。鉸鏈區可由至少2個（例如5、10、15、20、40、60個或更多個）胺基酸組成，該等胺基酸在單一多肽分子中之相鄰可變域及/或恆定域之間產生可撓性或半可撓性連接。此外，本發明之抗體之抗原結合片段可包含上文所列之可變域及恆定域組態中之任一者之均二聚體或雜二聚體（或其他多聚體），其彼此及/或與一或多個單體V _H或V _L域非共價締合（例如藉由二硫鍵（S））。

抗原結合蛋白（例如抗體及抗原結合片段）可為單特異性的或多特異性的（例如雙特異性的）。本文進一步論述了多特異性抗原結合蛋白。

在特定實施例中，本發明之抗體或抗體片段可結合至諸如配位體或治療部分的部分（「免疫結合物」），治療部分例如抗病毒藥物、第二抗流感抗體或適用於治療病毒感染（例如流感病毒感染）之任何其他治療部分。見下文。

本發明亦提供了一種複合物，其包含本文所論述之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體或抗原結合片段）與CoV-S多肽或其抗原片段及/或與特異性結合至抗CoV-S抗體或片段之二級抗體或其抗原結合片段（例如，可偵測標記之二級抗體）的複合物。在本發明之一個實施例中，抗體或片段在活體外（例如，固定於固體基質）或在個體體內。在本發明之一個實施例中，CoV-S在活體外（例如，固定於固體基質）或在病毒表面上或在個體體內。與不溶性基質材料（例如玻璃或多醣，諸如瓊脂糖或瓊脂糖凝膠，例如珠粒或其他顆粒）共價連接的固定化抗CoV-S抗體及其抗原結合片段亦為本發明的一部分；視情況，其中固定化抗體與CoV-S或其抗原片段或二級抗體或其片段複合。

「經分離」抗原結合蛋白、抗體或其抗原結合片段、多肽、多核苷酸及載體至少部分地不含來自產生其之細胞或細胞培養物的其他生物分子。此類生物分子包括核酸、蛋白質、其他抗體或抗原結合片段、脂質、碳水化合物或其他材料，諸如細胞碎片及生長培養基。經分離抗體或抗原結合片段可進一步至少部分地不含表現系統組分，諸如來自宿主細胞或其生長培養基之生物分子。一般而言，術語「經分離」不欲指此類生物分子完全不存在或水、緩衝液或鹽不存在，或包括該等抗體或片段之醫藥調配物之組分不存在。

術語「抗原決定基」係指與抗原結合蛋白之特定抗原結合位點，例如抗體分子之可變區（稱為互補位）相互作用的抗原決定子（例如CoV-S多肽）。單一抗原可具有超過一個抗原決定基。因此，不同抗體可結合至抗原上之不同區域且可具有不同生物效應。術語「抗原決定基」亦指抗原上B細胞及/或T細胞起反應的位點。其亦指抗原由抗體結合之區。抗原決定基可定義為結構性或功能性的。功能性抗原決定基通常為結構性抗原決定基之子組且具有直接有助於相互作用之親和力的彼等殘基。抗原決定基可為線性或構形的，亦即由非線性胺基酸構成。在某些實施例中，抗原決定基可包括決定子，其為分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基；且在某些實施例中，可具有特定三維結構特徵及/或荷質比特徵。

用於確定抗原結合蛋白（例如抗體或片段或多肽）之抗原決定基的方法包括丙胺酸掃描突變分析、肽墨點分析（Reineke (2004) 《分子生物學方法（Methods Mol. Biol.）》 248: 443-63）、肽切割分析、晶體學研究及NMR分析。另外，可採用諸如抗原決定基切除、抗原決定基提取及抗原化學修飾之方法（Tomer, 2000, 《蛋白質科學（Prot.Sci.）》 9: 487-496）。可用於鑑別多肽內與抗原結合蛋白（例如抗體或片段或多肽）（例如覆蓋蛋白（coversin））相互作用之胺基酸的另一方法為藉由質譜偵測之氫/氘交換。一般而言，氫/氘交換方法涉及氘標記感興趣的蛋白質，隨後使抗原結合蛋白（例如抗體或片段或多肽）與氘標記之蛋白質結合。接下來，將CoV-S蛋白/抗原結合蛋白複合物轉移至水中，且受抗體複合物保護之胺基酸內的可交換質子以比不為界面之一部分的胺基酸內之可交換質子更慢的速率進行氘-氫反向交換。結果，形成蛋白質/抗原結合蛋白界面之一部分的胺基酸可保留氘，且因此與不包括於界面中之胺基酸相比，展現相對較高的質量。在抗原結合蛋白（例如抗體或片段或多肽）解離之後，對目標蛋白進行蛋白酶切割及質譜分析，藉此揭露對應於與抗原結合蛋白相互作用之特定胺基酸的氘標記殘基。參見例如Ehring (1999) 《分析生物化學（Analytical Biochemistry）》 267: 252-259；Engen及Smith (2001) 《分析化學（Anal.Chem.）》 73: 256A-265A。

如本文所用，術語「競爭」係指抗原結合蛋白（例如抗體或其抗原結合片段），其與抗原（例如CoV-S）結合且抑制或阻斷另一抗原結合蛋白（例如抗體或其抗原結合片段）與該抗原結合。該術語亦包括兩種抗原結合蛋白（例如抗體）之間在兩個方向上的競爭，亦即結合且阻斷第二抗體之結合的第一抗體，反之亦然。在某些實施例中，第一抗原結合蛋白（例如抗體）及第二抗原結合蛋白（例如抗體）可結合至相同抗原決定基。或者，第一及第二抗原結合蛋白（例如抗體）可結合至不同但例如重疊的抗原決定基，其中一者之結合例如經由位阻抑制或阻斷第二抗體之結合。抗原結合蛋白（例如抗體）之間的競爭可藉由本領域已知的方法來量測，例如藉由即時、免標定生物膜層干涉術分析。抗原決定基作圖（例如，經由丙胺酸掃描或氫氘交換（HDX））可用於確定兩種或更多種抗體是否為非競爭性的（例如，在棘蛋白受體結合域（RBD）單體上）、競爭相同的抗原決定基，或競爭但具有不同的微抗原決定基（例如，經由HDX鑑別）。在本發明之一個實施例中，第一及第二抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體）之間的競爭藉由量測固定化第一抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體）（最初未與CoV-S蛋白複合）結合與第二抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體）複合之可溶性CoV-S蛋白的能力來確定。相對於未複合的CoV-S蛋白，第一抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體）與複合的CoV-S蛋白結合之能力降低，表明第一及第二抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體）競爭。競爭程度可表示為結合減少之百分比。此競爭可使用即時、免標定生物膜層干涉術分析（例如在Octet RED384生物感測器（Pall ForteBio Corp.）上）、ELISA（酶聯免疫吸附分析）或SPR（表面電漿子共振）來量測。

可使用Octet RED384生物感測器（Pall ForteBio Corp.）上之即時、免標定生物膜層干涉術分析來確定抗CoV-S抗原結合蛋白（例如單株抗體（mAb））之間的結合競爭。例如，為了確定兩種抗CoV-S單株抗體之間的競爭，可首先將抗CoV-S mAb捕獲至抗hFc抗體塗佈的Octet生物感測器尖端（Pall ForteBio Corp.，# 18-5060）上，此藉由將尖端浸入抗CoV-S mAb（以下稱為「mAb1」）溶液進行。作為阻斷之陽性對照，隨後可將抗體捕獲生物感測器尖端用已知的阻斷同型對照mAb（以下稱為「阻斷mAb」）飽和，此藉由浸入阻斷mAb溶液進行。為了確定mAb2是否與mAb1競爭，隨後可將生物感測器尖端浸入已預先培育一段時間的CoV-S多肽及第二抗CoV-S mAb（以下稱為「mAb2」）之共複合溶液中，且可確定mAb1與CoV-S多肽之結合。生物感測器尖端可在實驗的每個步驟之間用緩衝液清洗。在實驗過程中可即時監測結合反應，且記錄每一步結束時的結合反應。

例如，在本發明之一個實施例中，競爭分析在25℃及約pH 7（例如7.4）下，例如在緩衝液、鹽、界面活性劑及非特異性蛋白質（例如牛血清白蛋白）存在下進行。

通常，以某種方式修飾之本發明之抗體或抗原結合片段保留與CoV-S特異性結合的能力，例如當活性基於莫耳表示時，保留其CoV-S結合活性的至少10%（與親本抗體相比時）。較佳地，本發明之抗體或抗原結合片段保留親本抗體之CoV-S結合親和力的至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多。亦意欲本發明之抗體或抗原結合片段可包括不顯著改變其生物活性之保守或非保守胺基酸取代（稱為抗體之「保守變異體」或「功能保守變異體」）。

多肽，諸如免疫球蛋白鏈（例如，mAb8021 V _H、V _L、HC或LC，mAb8028 V _H、V _L、HC或LC，或mAb8029 V _H、V _L、HC或LC）之「變異體」，係指包含與本文所闡述之參考胺基酸序列（例如，SEQ ID NO: 2、10、18、20、22、30、38、40、42、50、58或60）具有至少約70-99.9%（例如，70、72、74、75、76、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.9%）一致性或相似性之胺基酸序列的多肽；當藉由BLAST演算法執行比較時，其中演算法之參數經選擇以在各別參考序列之整個長度上給出各別序列之間的最大匹配（例如，期望臨限值：10；字長：3；查詢範圍內之最大匹配：0；BLOSUM 62矩陣；空位代價：存在11，延伸1；條件組成得分矩陣調整）。

多核苷酸之「變異體」係指包含與本文所闡述之參考核苷酸序列（例如，SEQ ID NO: 1、9、17、19、21、29、37、39、41、49、57或59）具有至少約70-99.9%（例如，至少約70、72、74、75、76、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或99.9%）一致性之核苷酸序列的多核苷酸；當藉由BLAST演算法執行比較時，其中演算法之參數經選擇以在各別參考序列之整個長度上給出各別序列之間的最大匹配（例如，期望臨限值：10；字長：28；查詢範圍內之最大匹配：0；匹配/不匹配得分：1，-2；空位代價：線性）。

在本發明之一個實施例中，本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，包括與表4中所示之HCVR胺基酸序列具有至少70%（例如，80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高）胺基酸序列一致性之重鏈免疫球蛋白可變區；及/或與表4中所示之LCVR胺基酸序列具有至少70%（例如，80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高）胺基酸序列一致性之輕鏈免疫球蛋白可變區。

另外，變異體抗CoV-S抗原結合蛋白可包括包含本文所闡述之胺基酸序列的多肽，例外之處為一或多個（例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個）突變，諸如誤義突變（例如保守取代）、無意義突變、缺失或插入。例如，本發明包括抗原結合蛋白，其包括包含表4中所示之LCVR胺基酸序列但具有一或多個此類突變的免疫球蛋白輕鏈變異體，及/或包含表4中所示之HCVR胺基酸序列但具有一或多個此種突變的免疫球蛋白重鏈變異體。在本發明之一個實施例中，變異體抗CoV-S抗原結合蛋白包括包含LCDR1、LCDR2及LCDR3之免疫球蛋白輕鏈變異體，其中一或多個（例如，1個或2個或3個）此類CDR具有一或多個此類突變（例如，保守取代）及/或包含HCDR1、HCDR2及HCDR3之免疫球蛋白重鏈變異體，其中一或多個（例如，1個或2個或3個）此類CDR具有一或多個此類突變（例如，保守取代）。取代可在CDR、構架或恆定區中。

本發明進一步提供了變異體抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段，其包含本文所闡述之一或多種變異體CDR（例如，LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2及/或HCDR3中之任何一或多者），其與例如表4之重鏈及輕鏈CDR具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.9%序列一致性或相似性。

本發明之實施例亦包括變異體抗原結合蛋白，例如抗CoV-S抗體及其抗原結合片段，其包含免疫球蛋白V _H及V _L；或HC及LC，其包含與本文具體闡述之相應V _H、V _L、HC或LC之胺基酸序列具有70%或更高（例如，80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高）總體胺基酸序列一致性或相似性的胺基酸序列，但其中此類免疫球蛋白之LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2及HCDR3不為變異體且包含表4中所示之CDR胺基酸序列。因此，在此類實施例中，變異體抗原結合蛋白內之CDR本身不為變異體。

經保守修飾之變異體抗CoV-S抗體及其抗原結合片段亦為本發明之一部分。「經保守修飾之變異體」或「保守取代」係指一種變異體，其中多肽中之一或多個胺基酸經具有相似特徵（例如電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構形及剛度等）的其他胺基酸取代。此類變化通常可在不顯著破壞抗體或片段之生物活性的情況下進行。本領域中熟習此項技術者認識到，一般而言，多肽之非必需區中之單個胺基酸取代不會顯著改變生物活性（參見例如，Watson等人(1987) 《基因分子生物學（Molecular Biology of the Gene）》, The Benjamin/Cummings Pub.Co., 第224頁(第4版)）。此外，結構上或功能上類似之胺基酸之取代不大可能顯著破壞生物活性。

具有帶有類似化學特性之側鏈的胺基酸群組之實例包括1）脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；2）脂族羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；3）含醯胺側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；4）芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；5）鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；6）酸性側鏈：天冬胺酸及麩胺酸，及7）含硫側鏈：半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳之保守性胺基酸取代群組為：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。或者，保守置換為在Gonnet等人 (1992) 《科學（Science）》 256: 1443 45中所揭示的PAM250對數似然矩陣中具有正值之任何變化。

抗CoV-S抗體之功能保守變異體及其抗原結合片段亦為本發明之一部分。抗CoV-S抗體及其抗原結合片段（如本文所論述）之任何變異體均可為「功能保守變異體」。在一些情況下，此類功能保守變異體亦可表徵為經保守修飾之變異體。如本文所用，「功能保守變異體」係指抗CoV-S抗體或其抗原結合片段之變異體，其中一或多個胺基酸殘基已經改變，而未顯著改變抗體或片段之一或多個功能特性。在本發明之一個實施例中，本發明之功能保守變異體抗CoV-S抗體或其抗原結合片段包含變異體胺基酸序列且展現以下功能特性中之一或多者： • 抑制冠狀病毒（例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV及/或MERS-CoV）在ACE2及/或TMPRSS2表現細胞（例如，Calu-3細胞）中之生長； • 不顯著結合至不表現ACE2及/或TMPRSS2之MDCK/Tet-on細胞； • 活體外限制細胞（例如，Calu-3）之冠狀病毒感染（例如，藉由SARS-CoV-2、SARS-CoV及/或MERS-CoV）的傳播；及/或 • 保護經工程改造以表現人類TMPRSS2及/或ACE2蛋白之小鼠免於由冠狀病毒感染（例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV）引起之死亡，例如其中小鼠感染原本致死劑量之病毒，視情況與第二治療劑組合時。 • 保護經工程改造以表現人類TMPRSS2及/或ACE2蛋白之小鼠免於由冠狀病毒感染（例如，SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV）引起之體重減輕，例如其中小鼠感染原本會導致體重減輕之劑量的病毒，視情況與第二治療劑組合時。

「中和」或「拮抗劑」抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，係指以任何可偵測程度抑制CoV-S之活性的分子，例如抑制CoV-S與受體（諸如ACE2）結合，經蛋白酶（諸如TMPRSS2）切割，或介導病毒進入宿主細胞或病毒在宿主細胞中之繁殖的能力。

表4提及抗原結合蛋白，諸如抗體及其抗原結合片段，其包含如下所闡述之重鏈或V _H（或其變異體）及輕鏈或V _L（或其變異體）；或包含有包含其CDR（HCDR1（或其變異體）、HCDR2（或其變異體）及HCDR3（或其變異體））的V _H以及包含其CDR（LCDR1（或其變異體)、LCDR2（或其變異體）及LCDR3（或其變異體））的V _L，例如其中免疫球蛋白鏈、可變區及/或CDR包含下述特定胺基酸序列。

本文所描述之抗體亦包括其中V _H與野生型IgG4（例如，其中殘基108為S）或IgG4變異體（例如，其中殘基108為P）融合的實施例。

本發明之抗體及抗原結合片段包含包括本文所闡述之胺基酸序列以及抗體之細胞及活體外轉譯後修飾的免疫球蛋白鏈。例如，本發明包括特異性結合至CoV-S之抗體及其抗原結合片段，其包含本文所闡述之重鏈及/或輕鏈胺基酸序列（例如，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3）；以及抗體及片段，其中一或多個胺基酸殘基經醣基化、一或多個Asn殘基經脫醯胺化、一或多個殘基（例如Met、Trp及/或His）經氧化、N端Gln為焦麩胺酸（pyroE）及/或C端離胺酸缺失。例示性抗SARS-CoV-2-棘蛋白（SARS-CoV-2-S）抗體之胺基酸及核苷酸序列顯示於以下例示性序列表（表1）中。表 1 ：例示性序列表

抗體名稱	組成部分	序列	SEQ ID NO
mAb14256	胺基酸
HCVR	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSHYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSSNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARHYDILTGFDWFDPWGQGTLVTVSS	887
HCDR1	GGSISSHY	889
HCDR2	IYYSGSS	891
HCDR3	ARHYDILTGFDWFDP	893
LCVR	QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTHYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSFDNSLTAPYVFGTGTKVTVL	895
LCDR1	SSNIGTHYD	897
LCDR2	GNS	164
LCDR3	QSFDNSLTAPYV	899
HC	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSHYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSSNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARHYDILTGFDWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	901
LC	QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTHYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSFDNSLTAPYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS	903
核酸
HCVR	caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagtagtcactactggagctggatccggcagcccccagggaagggactggaatggattgggtatatttattacagcgggagctccaactacaacccctccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaagaaccagttctccctgaaactgaattctgtgaccgccgcagacacggccgtgtattactgtgcgagacattacgatattttgactggttttgactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca	886
HCDR1	ggtggctccatcagtagtcactac	888
HCDR2	atttattacagcgggagctcc	890
HCDR3	gcgagacattacgatattttgactggttttgactggttcgacccc	892
LCVR	cagtctgtgctgacgcagccgccctcagtgtcaggggccccagggcagagggtcaccatctcctgcactgggagcagttccaacatcgggacacattatgatgtacactggtaccaacaacttccaggaacagcccccaaactcctcatctatggtaacagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctttgacaacagcctgactgccccttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtccta	894
LCDR1	agttccaacatcgggacacattatgat	896
LCDR2	ggtaacagc	163
LCDR3	cagtcctttgacaacagcctgactgccccttatgtc	898
HC	caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagtagtcactactggagctggatccggcagcccccagggaagggactggaatggattgggtatatttattacagcgggagctccaactacaacccctccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaagaaccagttctccctgaaactgaattctgtgaccgccgcagacacggccgtgtattactgtgcgagacattacgatattttgactggttttgactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatc tccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtccctctccctgtctccgggtaaatga	900
LC	cagtctgtgctgacgcagccgccctcagtgtcaggggccccagggcagagggtcaccatctcctgcactgggagcagttccaacatcgggacacattatgatgtacactggtaccaacaacttccaggaacagcccccaaactcctcatctatggtaacagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctttgacaacagcctgactgccccttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggccagcccaaggccgccccctccgtgaccctgttccccccctcctccgaggagctgcaggccaacaaggccaccctggtgtgcctgatctccgacttctaccccggcgccgtgaccgtggcctggaaggccgactcctcccccgtgaaggccggcgtggagaccaccaccccctccaagcagtccaacaacaagtacgccgcctcctcctacctgtccctgacccccgagcagtggaagtcccaccggtcctactcctgccaggtgacccacgagggctccaccgtggagaagaccgtggcccccaccgagtgctcctga	902
mAb14315	胺基酸
HCVR	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGDTFSTYAINWVRQAPGQGLEWMGRFIHIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELRSLRSEDTAVYYCARDGVDYGDYRPDYWGQGTLVTVSS	212
HCDR1	GDTFSTYA	214
HCDR2	FIHIFGTA	216
HCDR3	ARDGVDYGDYRPDY	218
LCVR	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPERFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLYTFGQGTKLEIK	220
LCDR1	QSVSSNY	222
LCDR2	GAS	126
LCDR3	QQYGSSLYT	224
HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGDTFSTYAINWVRQAPGQGLEWMGRFIHIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELRSLRSEDTAVYYCARDGVDYGDYRPDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	226
LC	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPERFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC	228
核酸
HCVR	caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggagacaccttcagcacctatgctatcaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaagattcatccatatctttggtacagcaaactacgcacagaagttccagggcagagtcaccattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgcgcagcctgagatctgaggacacggccgtttattactgcgcgagagacggagtagactacggtgactaccgacctgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca	211
HCDR1	ggagacaccttcagcacctatgct	213
HCDR2	ttcatccatatctttggtacagca	215
HCDR3	gcgagagacggagtagactacggtgactaccgacctgactac	217
LCVR	gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagcaactacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccagactcctcatctatggtgcatccagcagggccactggcatcccagagaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtatattactgtcagcagtatggtagctcgctgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaa	219
LCDR1	cagagtgttagtagcaactac	221
LCDR2	ggtgcatcc	125
LCDR3	cagcagtatggtagctcgctgtacact	223
HC	caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggagacaccttcagcacctatgctatcaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaagattcatccatatctttggtacagcaaactacgcacagaagttccagggcagagtcaccattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgcgcagcctgagatctgaggacacggccgtttattactgcgcgagagacggagtagactacggtgactaccgacctgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatc tccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtccctctccctgtctccgggtaaatga	225
LC	gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagcaactacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccagactcctcatctatggtgcatccagcagggccactggcatcccagagaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtatattactgtcagcagtatggtagctcgctgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaacgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag	227
mAb15151	胺基酸
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核酸
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核酸
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核酸
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抗體之投與

本發明提供了用於投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如表4中之彼等）的方法，其包含將抗原結合蛋白引入個體（例如，人類）體內。例如，該方法包含用注射器之針刺穿個體身體且將抗原結合蛋白注射至個體體內，例如注射至個體之靜脈、動脈、腫瘤、肌肉組織或皮下組織中。

本發明提供了包含本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如表4中之彼等）的容器（例如塑膠或玻璃小瓶，例如具有蓋，或層析管柱、空心針或注射器筒）。

本發明亦提供了一種注射裝置，其包含一或多種特異性結合至CoV-S之抗原結合蛋白（例如抗體或抗原結合片段），例如表4中之彼等，或其醫藥組成物。注射裝置可包裝成套組。注射裝置為經由非經腸途徑（例如肌內、皮下或靜脈內）將物質引入個體體內之裝置。例如，注射裝置可為注射器（例如，預填充有醫藥組成物，諸如自動注射器），其例如包括用於容納待注射流體（例如，包含抗體或其片段或醫藥組成物）之針筒或筒、用於刺穿皮膚及/或血管以注射流體之針；及用於推動流體離開針筒且通過針孔之推桿。在本發明之一個實施例中，包含來自本發明之組合的抗原結合蛋白（例如抗體或其抗原結合片段）或其醫藥組成物的注射裝置為靜脈內（IV）注射裝置。此種裝置可在可與管連接之套管或套管針/針中包括抗原結合蛋白或其醫藥組成物，該管可連接至用於容納通過套管或套管針/針引入個體體內之流體（例如，鹽水）的袋或儲集器。在本發明之一個實施例中，在套管針及套管插入個體靜脈中後，抗體或片段或其醫藥組成物可引入裝置中，且自插入套管移除套管針。IV裝置可例如插入周邊靜脈（例如，手或臂中）；上腔靜脈或下腔靜脈，或心臟右心房內（例如，中心IV）；或鎖骨下靜脈、頸內靜脈或股靜脈，且例如前進至心臟，直至其達到上腔靜脈或右心房（例如，中心靜脈導管）。在本發明之一個實施例中，注射裝置為自動注射器；噴射注射器或外部輸注泵。噴射注射器使用穿透表皮之高壓狹窄液體射流將抗體或片段或其醫藥組成物引入個體體內。外部輸注泵為將抗體或其片段或醫藥組成物以受控量遞送至個體體內的醫療裝置。可以電方式或以機械方式對外部輸注泵供以動力。不同泵以不同方式操作，例如注射泵將流體保持在注射器之儲集器中，且可移動活塞控制流體遞送，彈性泵將流體保持在可拉伸氣囊儲集器中，且來自氣囊之彈性壁的壓力驅動流體遞送。在蠕動泵中，一組滾筒沿可撓性導管長度向下夾捏，推動流體向前。在多通道泵中，流體可自多個儲集器以多個速率遞送。 人類抗體之製備

在基因轉殖小鼠中產生人類抗體之方法為本領域中已知的。可在本發明之情形下使用任何此類已知方法來製造特異性結合至CoV-S之人類抗體。包含以下中之任一者的免疫原可用於產生針對CoV-S之抗體。在本發明之某些實施例中，本發明之抗體獲自用全長天然CoV-S或用減毒或不活化活病毒或用編碼蛋白質或其片段之DNA免疫的小鼠。或者，CoV-S蛋白或其片段可使用標準生化技術產生，且經修飾並用作免疫原。在本發明之一個實施例中，免疫原為重組產生之CoV-S蛋白或其片段。在本發明之某些實施例中，免疫原可為CoV-S多肽疫苗。在某些實施例中，可投與一或多次加強注射。在某些實施例中，免疫原可為在大腸桿菌或任何其他真核或哺乳動物細胞（諸如中國倉鼠卵巢（CHO）細胞）中表現的重組CoV-S多肽。

使用VELOCIMMUNE®技術（參見例如US 6,596,541，再生元製藥，VELOCIMMUNE®）或任何其他已知用於產生單株抗體之方法，可最初分離具有人類可變區及小鼠恆定區之針對CoV-S的高親和力嵌合抗體。VELOCIMMUNE®技術涉及產生具有基因體之基因轉殖小鼠，該基因體包含可操作地連接至內源性小鼠恆定區基因座之人類重鏈及輕鏈可變區，使得小鼠回應於抗原刺激產生包含人類可變區及小鼠恆定區的抗體。分離編碼抗體重鏈及輕鏈可變區的DNA且將其可操作地連接至編碼人類重鏈及輕鏈恆定區的DNA。接著使DNA在能夠表現完全人類抗體之細胞中表現。

通常，用感興趣的抗原攻擊VELOCIMMUNE®小鼠，且自表現抗體之小鼠中回收淋巴細胞（諸如B細胞）。淋巴細胞可與骨髓瘤細胞株融合以製備永生融合瘤細胞株，且此類融合瘤細胞株經篩選及選擇以鑑別產生對感興趣的抗原具有特異性之抗體的融合瘤細胞株。可分離編碼重鏈及輕鏈之可變區的DNA且將其連接至重鏈及輕鏈之所期望的同型恆定區。此類抗體蛋白質可在諸如CHO細胞之細胞中產生。或者，編碼抗原特異性嵌合抗體或輕鏈及重鏈之可變域的DNA可直接自抗原特異性淋巴細胞分離。

首先，分離具有人類可變區及小鼠恆定區之高親和力嵌合抗體。如在下文實驗部分中，對抗體進行表徵且針對所期望的特徵加以選擇，該等特徵包括親和力、選擇性、抗原決定基等。用所期望的人類恆定區置換小鼠恆定區以產生本發明之完全人類抗體，例如野生型或經修飾IgG1或IgG4。雖然所選恆定區可根據特定用途而變化，但高親和力抗原結合及目標特異性特徵存在於可變區中。包含 Fc 變異體之抗冠狀病毒棘蛋白抗體

根據本發明之某些實施例，提供包含Fc域之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，該Fc域包含一或多個增強或減弱抗體與FcRn受體之結合（例如與中性pH值相比，在酸性pH值下）的突變。舉例而言，本發明包括在Fc域之C _H2或C _H3區中包含突變之抗CoV-S抗體，其中突變增加酸性環境（例如其中pH在約5.5至約6.0範圍內之核內體）中Fc域與FcRn之親和力。此類突變可導致當向動物投與時，抗體之血清半衰期增加。此類Fc修飾之非限制性實例包括例如在位置250（例如E或Q）；250及428（例如L或F）；252（例如L/Y/F/W或T）、254（例如S或T）及256（例如S/R/Q/E/D或T）處之修飾；或在位置428及/或433（例如H/L/R/S/P/Q或K）及/或434（例如A、W、H、F或Y[N434A、N434W、N434H、N434F或N434Y]）處之修飾；或在位置250及/或428處之修飾；或在位置307或308（例如308F、V308F）及434處之修飾。在一個實施例中，修飾包含428L（例如M428L）及434S（例如N434S）修飾；428L、259I（例如V259I）及308F（例如V308F）修飾；433K（例如H433K）及434（例如434Y）修飾；252、254及256（例如252Y、254T及256E）修飾；250Q及428L修飾（例如T250Q及M428L）；及307及/或308修飾（例如308F或308P）。在又一實施例中，修飾包含265A（例如D265A）及/或297A（例如N297A）修飾。

舉例而言，本發明包括抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，其包含Fc域，該Fc域包含一或多對或一或多組選自由以下組成之群組的突變：250Q及248L（例如T250Q及M248L）；252Y、254T及256E（例如M252Y、S254T及T256E）；428L及434S（例如M428L及N434S）；257I及311I（例如P257I及Q311I）；257I及434H（例如P257I及N434H）；376V及434H（例如D376V及N434H）；307A、380A及434A（例如T307A、E380A及N434A）；及433K及434F（例如H433K及N434F）。特定言之，與mAb14286及mAb15160相比，命名為mAb17090及mAb15160_2之抗體各自在重鏈恆定區中含有M252Y、S254T及T256E修飾。

包含如本文所闡述之V _H及/或V _L，包含前述Fc域突變之任何可能組合的抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，涵蓋在本發明之範疇內。

本發明亦包括抗CoV-S抗原結合蛋白、抗體或抗原結合片段，其包含本文所闡述之V _H及嵌合重鏈恆定（C _H）區，其中嵌合C _H區包含衍生自超過一種免疫球蛋白同型之C _H區的區段。舉例而言，本發明抗體可包含嵌合C _H區，其包含衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4分子之C _H2域中之部分或全部，與衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4分子之C _H3域中之部分或全部組合。根據某些實施例，本發明抗體包含具有嵌合鉸鏈區之嵌合C _H區。舉例而言，嵌合鉸鏈可包含衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4鉸鏈區之「上鉸鏈」胺基酸序列（根據EU編號之位置216至227之胺基酸殘基），以及衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4鉸鏈區之「下鉸鏈」序列（根據EU編號之位置228至236之胺基酸殘基）。根據某些實施例，嵌合鉸鏈區包含衍生自人類IgG1或人類IgG4上鉸鏈之胺基酸殘基及衍生自人類IgG2下鉸鏈之胺基酸殘基。包含如本文所描述之嵌合C _H區之抗體在某些實施例中可展現經改良Fc效應功能而不會不利地影響抗體之治療或藥物動力學特性。（參見例如WO2014/022540）。 免疫結合物

本發明涵蓋抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，其與另一部分，例如治療部分結合（「免疫結合物」），治療部分諸如類毒素或抗病毒藥物，用於治療流感病毒感染。在本發明之一個實施例中，抗CoV-S抗體或片段與本文所闡述之另外的治療劑中之任一者結合。如本文所用，術語「免疫結合物」係指抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，其化學或生物學連接至放射性試劑、細胞介素、干擾素、目標或報導部分、酶、肽或蛋白質或治療劑。抗原結合蛋白可在沿分子之任何位置與放射性試劑、細胞介素、干擾素、目標或報導部分、酶、肽或治療劑連接，只要其能夠結合其目標（CoV-S）即可。免疫結合物之實例包括抗體-藥物結合物及抗體-毒素融合蛋白。在本發明之一個實施例中，該試劑可為特異性結合至CoV-S的第二不同抗體。可與抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體或片段）結合之治療部分的類型將考慮待治療之病症及待達成之所需治療效果。參見例如，Arnon等人, 「用於癌症療法中藥物免疫靶向的單株抗體（Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy）」, 《單株抗體及癌症療法（Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy）》, Reisfeld等人 (編), 第243-56頁 (Alan R. Liss, Inc. 1985)；Hellstrom等人, 「用於藥物遞送之抗體（Antibodies For Drug Delivery）」，《受控藥物遞送（Controlled Drug Delivery）》 (第2版)， Robinson等人 (編), 第623-53頁 (Marcel Dekker, Inc. 1987)；Thorpe, 「癌症療法中細胞毒性藥物之抗體載體：綜述（Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review）」, 《單株抗體1984：生物及臨床應用（Monoclonal Antibodies 1984: Biological And Clinical Applications）》, Pinchera等人 (編)，第475-506頁 (1985)；「放射性標記抗體在癌症療法中之治療用途的分析、結果及未來前景（Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy）」,《用於癌症偵測及療法之單株抗體（Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy）》, Baldwin等人 (編), 第303-16頁 (Academic Press 1985)，及Thorpe等人, 「抗體-毒素結合物之製備及細胞毒性特性（The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates）」, 《免疫學評論（Immunol.Rev.）》, 62: 119-58 (1982)。 多特異性抗體

本發明包括抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段，以及其使用方法及製備此類抗原結合蛋白之方法。術語「抗CoV-S」抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段，包括多特異性（例如，雙特異性或雙互補位）分子，其包括至少一個特異性結合至CoV-S之第一抗原結合域（例如，來自表4之抗體的抗原結合域）及至少一個第二抗原結合域，其結合至不同抗原或CoV-S中不同於第一抗原結合域之抗原決定基的抗原決定基。在一些實施例中，第一抗原結合域及第二抗原結合域均選自表4之抗原結合域。在本發明之一個實施例中，第一及第二抗原決定基重疊。在本發明之另一實施例中，第一及第二抗原決定基不重疊。例如，在本發明之一個實施例中，多特異性抗體為雙特異性IgG抗體（例如，IgG1或IgG4），其包括特異性結合至CoV-S之第一抗原結合域，包括表4之抗體的免疫球蛋白重鏈及輕鏈；以及特異性結合至CoV-S之不同抗原決定基的第二抗原結合域。在一些實施例中，雙特異性IgG抗體（例如IgG1或IgG4）包括特異性結合至CoV-S之第一抗原結合域及結合至宿主細胞蛋白（例如ACE2或TMPRSS2）之第二結合域。

表4之抗體包括多特異性分子，例如抗體或抗原結合片段，其分別包括彼等抗體之CDR-H及CDR-L、V _H及V _L或HC及LC（包括如本文所闡述之其變異體）。

在本發明之一個實施例中，可包括於多特異性分子中之特異性結合至CoV-S的抗原結合域包含：（1）（i）包含表4中所示之HCDR1、HCDR2及HCDR3胺基酸序列的重鏈可變域序列，及（ii）包含表4中所示之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的輕鏈可變域序列；或（2）（i）包含表4中所示之胺基酸序列的重鏈可變域序列，及（ii）包含表4中所示之胺基酸序列的輕鏈可變域序列；或（3）（i）包含表4中所示之胺基酸序列的重鏈免疫球蛋白序列，及（ii）包含表4中所示之胺基酸序列的輕鏈免疫球蛋白序列。

在本發明之一個實施例中，多特異性抗體或片段包括多於兩種不同的結合特異性（例如，三特異性分子），例如一或多個與第一及/或第二抗原結合域相同或不同的額外抗原結合域。

在本發明之一個實施例中，雙特異性抗原結合片段包含對第一抗原決定基（例如，CoV-S）具有結合特異性之第一scFv（例如，包含表4之V _H及V _L序列）及對第二不同抗原決定基具有結合特異性之第二scFv。例如，在本發明之一個實施例中，第一及第二scFv與連接子連接，例如肽連接子（例如GS連接子，諸如(GGGGS) _n（SEQ ID NO: 834），其中n為例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10）。其他雙特異性抗原結合片段包括包含表4之重鏈及輕鏈CDR的雙特異性IgG抗體及結合至不同抗原決定基之另一抗體的F(ab) ₂。 治療方法

本發明提供了藉由向需要此類治療或預防之個體（例如人類）投與治療有效量之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段（例如表4中的）來治療或預防病毒感染（例如，冠狀病毒感染）的方法。

藉由向個體投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，可在個體中治療或預防冠狀病毒感染。例示性冠狀病毒包括SARS-CoV-2，其可進一步包括變異體，諸如alpha、beta、gamma、delta及omicron。

用於治療或預防病毒感染之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段（例如表4中的）之有效或治療有效劑量係指足以減輕經治療之個體之感染的一或多種病徵及/或症狀（無論藉由誘導此類病徵及/或症狀之消退或消除抑或藉由抑制此類病徵及/或症狀之進展）的抗體或片段之量。劑量可根據待投與之個體的年齡及大小、目標疾病、病狀、投與途徑及其類似者而變化。在本發明之一個實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段用於治療或預防病毒感染之有效或治療有效劑量，例如在成人個體中，為約0.01至約200 mg/kg，例如高達約150 mg/kg。在本發明之一個實施例中，劑量高達約10.8或11公克（例如，約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11公克）。視感染之嚴重程度而定，可調整治療之頻率及持續時間。在某些實施例中，可以初始劑量投與本發明之抗原結合蛋白，接著投與一或多次第二劑量。在某些實施例中，可在初始劑量之後以可與初始劑量大致相同或更少的量投與第二或複數次後續劑量之抗體或其抗原結合片段，其中後續劑量間隔至少1天至3天；至少一週，至少2週；至少3週；至少4週；至少5週；至少6週；至少7週；至少8週；至少9週；至少10週；至少12週；或至少14週。

在一些實施例中，mAb10933及mAb10987（分別為卡斯瑞韋單抗及依米得韋單抗）可在針對症狀性COVID-19之預防（例如暴露前預防）方法中投與個體。在一些實施例中，個體免疫功能不全，例如患有免疫缺乏，諸如原發性或繼發性免疫缺乏。在一些實施例中，個體尚未對COVID-19疫苗接種產生有效反應。與免疫功能不全相關之例示性標準包括：對實體腫瘤及血液科惡性疾病之積極或近期治療；接受實體器官或近期造血幹細胞移植；嚴重原發性免疫缺乏；晚期或未經治療之HIV感染；使用大劑量皮質類固醇、烷化劑、抗代謝物、腫瘤壞死（TNF）阻斷劑及其他免疫抑制或免疫調節性生物製劑進行積極治療；以及慢性病狀，諸如無脾及慢性腎病，其中一些患有此等疾病之患者可能與不同程度的免疫缺乏相關。在一些實施例中，個體滿足以下標準中之≥1者： a. 接受任何免疫抑制藥物之實體器官移植（SOT）或造血細胞移植（HSCT）接受者 b. 活動性血液科惡性疾病或在3個月內完成治療 c. 接受T細胞或B細胞免疫抑制療法積極治療的實體器官惡性疾病 d. 中度或重度原發性免疫缺乏（諸如低伽瑪球蛋白血症、普通變異型免疫缺乏、嚴重複合型免疫缺乏） e. HIV及CD4 ＜200個細胞/微升 f. 接受調節Th1、Th17或B細胞反應之免疫抑制療法的風濕性疾病、自體免疫性疾病或多發性硬化症患者 g. 接受以下免疫抑制劑藥物中之任一者超過3週： T細胞抑制劑（例如，在＞3週期間，≥5 mg普賴松（prednisone）當量/天）、蛋白酶體抑制劑（諸如硼替佐米（bortezomib）、來那度胺（lenalidomide））、阿侖單抗（alemtuzumab）、抗胸腺細胞球蛋白、CAR-T療法、鈣調神經磷酸酶抑制劑）烷化劑嘌呤類似物，諸如氟達拉濱（fludarabine）或克拉屈濱（cladribine） B細胞消耗劑，諸如利妥昔單抗（rituximab）及奧瑞珠單抗（ocrelizumab） mTOR抑制劑抗代謝物，諸如黴酚酸酯 JAK抑制劑。

例示性給藥方案包括： • 共同投與mAb10933及mAb10987組合療法，第1天1200 mg（每mAb 600 mg），隨後每四週（Q4W）皮下（SC）600 mg（每mAb 300 mg）； • 共同投與mAb10933及mAb10987組合療法，300 mg（每mAb 150 mg）SC Q4W；及 • 共同投與mAb10933及mAb10987組合療法，300 mg（每mAb 150 mg）SC Q12W。

如本文所用，術語「個體」係指哺乳動物（例如，大鼠、小鼠、貓、犬、牛、豬、綿羊、馬、山羊、兔），較佳人類，例如需要預防及/或治療疾病或病症，諸如病毒感染或癌症。個體可能患有病毒感染，例如流感感染，或易於罹患感染。易於罹患感染之個體，或感染（例如冠狀病毒或流感病毒）風險可能升高的個體，包括由於自體免疫性疾病而免疫系統受損之個體、接受免疫抑制療法（例如在器官移植之後）之個體、患有人類免疫缺乏症候群（HIV）或獲得性免疫缺乏症候群（AIDS）之個體、患有消耗或破壞白細胞之貧血症類型之個體、接受放射或化學療法之個體或患有發炎性病症之個體。另外，非常年輕（例如，5歲或以下）或老年（例如，65歲或以上）之個體的風險增加。此外，由於接近疾病之爆發，個體可能具有感染病毒感染之風險，例如個體居住在人口稠密的城市或靠近已確認或疑似感染病毒之個體，或就業選擇，例如醫院工作人員、醫藥研究人員、前往感染地區之旅行者或常旅客。

「治療（treat/treating）」意謂向具有疾病或感染（例如病毒感染）之一或多種病徵或症狀的個體投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段（例如表4中的），當以有效或治療有效量或劑量（如本文所論述）投與個體時，抗原結合蛋白對其有效。

本發明亦涵蓋向具有病毒感染風險之個體預防性投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的），從而預防此類感染。基於被動抗體之免疫預防已被證明為預防個體病毒感染的有效策略。參見例如Berry等人, 《被動廣譜流感免疫預防（Passive broad-spectrum influenza immunoprophylaxis）》.《流感研究及治療（Influenza Res Treat）》.2014; 2014:267594.電子版2014年9月22日；及Jianqiang等人, 《用於預防及控制A型流感感染之被動免疫中和策略（Passive immune neutralization strategies for prevention and control of influenza A infections）》, 《免疫療法（Immunotherapy）》.2012年2月; 4(2): 175–186；Prabhu等人, 《抗病毒療法（Antivir Ther）》. 2009;14(7):911-21, 《H5血球凝集素特異性嵌合單株抗體對致死性H5N1流感之預防及治療功效（Prophylactic and therapeutic efficacy of a chimeric monoclonal antibody specific for H5 hemagglutinin against lethal H5N1 influenza）》。「預防（prevent/preventing）」意謂向個體投與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段（例如表4中的），以抑制個體體內疾病或感染（例如病毒感染）的表現，當以有效或治療有效量或劑量（如本文所論述）投與個體時，抗原結合蛋白對其有效。如本文所用，預防可為暴露前預防（例如，在暴露於SARS-CoV-2病毒之前向個體投與本文所描述之抗體或抗原結合片段），或暴露後預防（例如，在暴露於SARS-CoV-2病毒之前向個體投與本文所描述之抗體或抗原結合片段）。在一些實施例中，儘管感染了SARS-CoV-2，但暴露後預防可預防COVID-19之一或多種症狀。

在本發明之一個實施例中，個體中病毒感染之病徵或症狀為病毒在個體體內的存活或增殖，例如藉由病毒滴度分析確定（例如，冠狀病毒在受精雞胚中之繁殖或冠狀病毒棘蛋白分析）。本文論述了病毒感染之其他病徵及症狀。

如上所述，在一些實施例中，個體可為非人類動物，且本文所論述之抗原結合蛋白（例如抗體及抗原結合片段）可在獸醫學情形下用於治療及/或預防非人類動物（例如，貓、犬、豬、牛、馬、山羊、兔、綿羊及其類似動物）之疾病。

本發明提供了一種用於治療或預防病毒感染（例如冠狀病毒感染）或用於誘導病毒感染之至少一種病徵或症狀之消退或消除或抑制其進展的方法，病徵或症狀諸如： • 發燒或感覺發燒/發冷； • 咳嗽； • 咽喉痛； • 流鼻涕或鼻塞； • 打噴嚏； • 肌肉或身體疼痛； • 頭痛； • 疲勞（疲倦）； • 嘔吐； • 腹瀉； • 呼吸道感染； • 胸部不適； • 呼吸急促； • 支氣管炎；及/或 • 肺炎，在有需要之個體（例如人類）中，該病徵或症狀繼發於病毒感染，該方法藉由向個體投與治療有效量之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如表4中的），例如藉由將蛋白質注射至個體體內。 組合及醫藥組成物

為了製備抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體及其抗原結合片段（例如表4中的）的醫藥組成物，將抗原結合蛋白與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑混合。參見例如《雷明頓氏醫藥科學（Remington's Pharmaceutical Sciences）》及《美國藥典：國家處方集（U.S. Pharmacopeia: National Formulary）》, Mack Publishing Company, 賓夕法尼亞州伊斯頓（Easton, Pa.）(1984)；Hardman等人 (2001) 《古德曼及吉爾曼氏治療學之藥理學基礎（Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics）》, McGraw-Hill, 紐約州紐約（New York, N.Y.）；Gennaro (2000) 《雷明頓：藥學科學及實踐（Remington: The Science and Practice of Pharmacy）》, Lippincott, Williams, and Wilkins, 紐約州紐約；Avis等人 (編) (1993) 《醫藥劑型：非經腸藥物（Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications）》, Marcel Dekker, 紐約；Lieberman等人 (編) (1990) 《醫藥劑型：錠劑（Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets）》, Marcel Dekker, 紐約；Lieberman等人 (編) (1990) 《藥物劑型：分散系統（Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems）》, Marcel Dekker, 紐約；Weiner及Kotkoskie (2000) 《賦形劑毒性及安全性（Excipient Toxicity and Safety）》, Marcel Dekker, Inc., 紐約州紐約。在本發明之一個實施例中，醫藥組成物為無菌的。此類組成物為本發明之一部分。

本發明之範疇包括乾燥的（例如冷凍乾燥的）組成物，其包含抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的），或其醫藥組成物，其包括醫藥學上可接受之載劑但實質上不含水。

在本發明之另一實施例中，與本文所揭示之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的）結合投與個體之另一治療劑係根據《醫師案頭參考2003（Physicians' Desk Reference 2003）》（Thomson Healthcare；第57版 (2002年11月1日)）投與個體。

投與模式可變化。投與途徑包括經口、直腸、經黏膜、腸道、非經腸；肌內、皮下、皮內、髓內、鞘內、直接室內、靜脈內、腹膜內、鼻內、眼內、吸入、吹入、局部、皮膚、經皮或動脈內。

本發明提供了用於投與抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的）的方法，其包含將蛋白質引入個體體內。例如，該方法包含用注射器之針刺穿個體身體且將抗原結合蛋白注射至個體體內，例如注射至個體之靜脈、動脈、腫瘤、肌肉組織或皮下組織中。

本發明提供了容器（例如塑膠或玻璃小瓶，例如具有蓋，或層析管柱、空心針或注射器筒），其包含抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的）、多肽（例如表4之HC、LC、V _H或V _L）或多核苷酸（例如表5之彼等）或本文所闡述之載體或其包含醫藥學上可接受之載劑的醫藥組成物中之任一者。

在本文之一個實施例中，本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的）與一或多種另外的治療劑結合投與。另一治療劑包括但不限於：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之第二抗體或其抗原結合片段，以及特異性結合至CoV-S之第二抗體或其抗原結合片段（例如，本文所描述之抗體，或美國專利第10,787,501號中所描述之抗體，該專利特此以全文引用的方式併入）。在一些實施例中，抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎。在一些實施例中，抗炎劑為抗體，諸如沙利姆單抗、托珠單抗或瑾司魯單抗。在一些實施例中，另外的治療劑為本文所揭示之例如表4之第二抗體或抗原結合片段。在一些情況下，結合至CoV-S之抗體為卡斯瑞韋單抗或依米得韋單抗，在某些實施例中，表4之一種、兩種、三種、四種或更多種抗體或其抗原結合片段可組合投與（例如同時或依序）。特定言之，抗體之組合可經選擇以使抗體不交叉競爭，如實例7中所描述。在一些實施例中，mAb14256與mAb14315組合投與。在一些實施例中，mAb15151與mAb14315組合投與。在一些實施例中，本文之抗體（例如，一種抗體或兩種抗體）可與美國專利10,787,501（「'501專利」）中所描述之抗體（例如一種抗體或兩種抗體）組合。在某些實施例中，'501專利之mAb10987與本文之mAb14256及/或mAb15151組合投與。在某些實施例中，'501專利之mAb10933及mAb10987與本文之mAb14256組合投與。在某些實施例中，'501專利之mAb10985及mAb10987與本文之mAb15151組合投與。在某些實施例中，'501專利之mAb10985與本文之mAb14315及/或mAb15151組合投與。在某些實施例中，本文之mAb15160與'501專利之mAb10987組合投與。在某些實施例中，本文之mAb15160與'501專利之mAb10985組合投與。在某些實施例中，本文之mAb15160與'501專利之mAb10985及mAb10987組合投與。在某些實施例中，本文之mAb15160與mAb14256、mAb14315及mAb15151中之任何一者、兩者或三者組合投與，視情況進一步與mAb10987及/或mAb10985一起投與。在某些實施例中，mAb14256、mAb14315、mAb15151及mAb15160中之任何一者、兩者、三者、四者與i）mAb10933、ii）mAb10987或iii）mAb10933及mAb10987組合投與。在某些實施例中，組合投與mAb10933、mAb10987、mAb10985、mAb14256、mAb1435、mAb15151及mAb15160中之一者、兩者、三者、四者、五者、六者或七者的任何組合。在某些實施例中，將選自mAb10987、mAb14284、mAb14315及mAb17090之抗體或其抗原結合片段與選自mAb10933、mAb14256、mAb15160及mAb15160_2之抗體或其抗原結合片段組合。在某些實施例中，該組合包含mAb10987及mAb10933。在某些實施例中，該組合包含mAb10987及mAb14256。在某些實施例中，該組合包含mAb10987及mAb15160。在某些實施例中，該組合包含mAb10987及mAb15160_2。在某些實施例中，該組合包含mAb14284及mAb10933。在某些實施例中，該組合包含mAb14284及mAb14256。在某些實施例中，該組合包含mAb14284及mAb15160。在某些實施例中，該組合包含mAb14284及mAb15160_2。在某些實施例中，該組合包含mAb14315及mAb10933。在某些實施例中，該組合包含mAb14315及mAb14256。在某些實施例中，該組合包含mAb14315及mAb15160。在某些實施例中，該組合包含mAb14315及mAb15160_2。在某些實施例中，該組合包含mAb17090及mAb10933。在某些實施例中，該組合包含mAb17090及mAb14256。在某些實施例中，該組合包含mAb17090及mAb15160。在某些實施例中，該組合包含mAb17090及mAb15160_2。在上文或本文所論述之任何組合中，抗體或抗原結合片段可由表4中鑑別之HCVR及LCVR序列內所含有的CDR、表4中鑑別之重鏈及輕鏈CDR序列、表4中鑑別之HCVR及LCVR序列或表4中鑑別之全長重鏈及輕鏈序列定義，且此等特定組合中之各者涵蓋在本文中。兩種抗體之某些例示性組合如下所示。在一些實施例中，特異性結合TMPRSS2之抗體為H1H7017N，如國際專利公開案第WO/2019/147831號中所描述。表 2 ：兩種抗體之例示性組合

mAb/組合編號	mAb 10933	mAb 10985	mAb 10987	mAb 14256	mAb 14315	mAb 15151	mAb 14284	mAb 17090	mAb 15160	mAb 15160_2
mAb10933	X	1	2	3	4	5	6	7	8	9
mAb10985	10	X	11	12	13	14	15	16	17	18
mAb10987	19	20	X	21	22	23	24	25	26	27
mAb14256	28	29	30	X	31	32	33	34	35	36
mAb14315	37	38	39	40	X	41	42	43	44	45
mAb15151	46	47	48	49	50	X	51	52	53	54
mAb14284	55	56	57	58	59	60	X	61	62	63
mAb17090	64	65	66	67	68	69	70	X	71	72
mAb15160	73	74	75	76	77	78	79	80	X	81
mAb15160_2	82	83	84	85	86	87	88	89	90	X

表 3 ：來自美國專利 10,787,501 之例示性序列

抗體名稱	組成部分	序列	SEQ ID NO
mAb10933	胺基酸
HCVR	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYITYSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGTTMVPFDYWGQGTLVTVSS	1010
HCDR1	GFTFSDYY	1012
HCDR2	ITYSGSTI	1014
HCDR3	ARDRGTTMVPFDY	1016
LCVR	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISGLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIK	1018
LCDR1	QDITNY	1020
LCDR2	AAS	1022
LCDR3	QQYDNLPLT	1024
HC	QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYITYSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGTTMVPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	1026
LC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISGLQPEDIATYYCQQYDNLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC	1028
核酸
HCVR	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTACTTATAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAGCTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGCGGTACAACTATGGTCCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA	1009
HCDR1	GGATTCACCTTCAGTGACTACTAC	1011
HCDR2	ATTACTTATAGTGGTAGTACCATA	1013
HCDR3	GCGAGAGATCGCGGTACAACTATGGTCCCCTTTGACTAC	1015
LCVR	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTACCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCGGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATCTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA	1017
LCDR1	CAGGACATTACCAACTAT	1019
LCDR2	GCTGCATCC	1021
LCDR3	CAACAGTATGATAATCTCCCTCTCACT	1023
HC	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTACTTATAGTGGTAGTACCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAGCTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCGCGGTACAACTATGGTCCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCC AAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA	1025
LC	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTACCAACTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCGGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATAATCTCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG	1027
mAb10987	胺基酸
HCVR	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMYWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTEDTAVYYCASGSDYGDYLLVYWGQGTLVTVSS	1030
HCDR1	GFTFSNYA	1032
HCDR2	ISYDGSNK	1034
HCDR3	ASGSDYGDYLLVY	1036
LCVR	QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQSEDEADYYCNSLTSISTWVFGGGTKLTVL	1038
LCDR1	SSDVGGYNY	1040
LCDR2	DVS	1042
LCDR3	NSLTSISTWV	1044
HC	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMYWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRTEDTAVYYCASGSDYGDYLLVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	1046
LC	QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQSEDEADYYCNSLTSISTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS	1048
核酸
HCVR	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGCTATGTACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAACTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGTGGCTCCGACTACGGTGACTACTTATTGGTTTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA	1029
HCDR1	GGATTCACCTTCAGTAACTATGCT	1031
HCDR2	ATATCATATGATGGAAGTAATAAA	1033
HCDR3	GCGAGTGGCTCCGACTACGGTGACTACTTATTGGTTTAC	1035
LCVR	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGTCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAACTCTTTGACAAGCATCAGCACTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA	1037
LCDR1	AGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTAT	1039
LCDR2	GATGTCAGT	1041
LCDR3	AACTCTTTGACAAGCATCAGCACTTGGGTG	1043
HC	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACTATGCTATGTACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAACTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGTGGCTCCGACTACGGTGACTACTTATTGGTTTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCC AAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA	1045
LC	CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGTCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAACTCTTTGACAAGCATCAGCACTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCCAGCCCAAGGCCGCCCCCTCCGTGACCCTGTTCCCCCCCTCCTCCGAGGAGCTGCAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCTCCGACTTCTACCCCGGCGCCGTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGACTCCTCCCCCGTGAAGGCCGGCGTGGAGACCACCACCCCCTCCAAGCAGTCCAACAACAAGTACGCCGCCTCCTCCTACCTGTCCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACCGGTCCTACTCCTGCCAGGTGACCCACGAGGGCTCCACCGTGGAGAAGACCGTGGCCCCCACCGAGTGCTCCTGA	1047
mAb10985	胺基酸
HCVR	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNRGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTALYYCAKDGERWDSVVVPSARNGMDVWGQGTTVTVSS	1050
HCDR1	GFTFDDYA	1052
HCDR2	ISWNRGSI	1054
HCDR3	AKDGERWDSVVVPSARNGMDV	1056
LCVR	QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKVTVL	1058
LCDR1	SSNIGAGYD	1060
LCDR2	GNS	1062
LCDR3	QSYDSSLSGSYV	1064
HC	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISWNRGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTALYYCAKDGERWDSVVVPSARNGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	1066
LC	QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS	1068
核酸
HCVR	GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAGGGGTAGCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAGCAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGCGCAAAAGATGGCGAGAGATGGGATAGTGTAGTAGTACCATCTGCTAGGAACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA	1049
HCDR1	GGATTCACCTTTGATGATTATGCC	1051
HCDR2	ATTAGTTGGAATAGGGGTAGCATA	1053
HCDR3	GCAAAAGATGGCGAGAGATGGGATAGTGTAGTAGTACCATCTGCTAGGAACGGTATGGACGTC	1055
LCVR	CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACATTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGCTCTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA	1057
LCDR1	AGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGAT	1059
LCDR2	GGTAACAGC	1061
LCDR3	CAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGCTCTTATGTC	1063
HC	GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGCAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGATGATTATGCCATGCACTGGGTCCGGCAAGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGGTATTAGTTGGAATAGGGGTAGCATAGGCTATGCGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAGCAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCTTGTATTACTGCGCAAAAGATGGCGAGAGATGGGATAGTGTAGTAGTACCATCTGCTAGGAACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCA GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA	1065
LC	CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACATTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGCTCTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGCCAGCCCAAGGCCGCCCCCTCCGTGACCCTGTTCCCCCCCTCCTCCGAGGAGCTGCAGGCCAACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCTCCGACTTCTACCCCGGCGCCGTGACCGTGGCCTGGAAGGCCGACTCCTCCCCCGTGAAGGCCGGCGTGGAGACCACCACCCCCTCCAAGCAGTCCAACAACAAGTACGCCGCCTCCTCCTACCTGTCCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACCGGTCCTACTCCTGCCAGGTGACCCACGAGGGCTCCACCGTGGAGAAGACCGTGGCCCCCACCGAGTGCTCCTGA	1067

在一些實施例中，可組合來自不同人類供體之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如，抗SARS-CoV-2-S抗體或其抗原結合片段）。本發明包括包含兩種（或更多種）包含來自人類個體之可變域之抗SARS-CoV-2-S抗體或抗原結合片段的組成物，其中兩種（或更多種）抗體或抗原結合片段衍生自不同個體（例如，兩個不同的人類個體）。衍生自人類B細胞之抗體可變區論述於例如實例1及2（表6）中，其描述了自此等B細胞選殖之可變域與並非來自彼等B細胞之恆定區組合以產生雜合抗體。

在一些實施例中，另外的治療劑為抗病毒藥物及/或疫苗。如本文所用，術語「抗病毒藥物」係指用於治療、預防或改善個體之病毒感染的任何抗感染藥物或療法。術語「抗病毒藥物」包括但不限於陽離子類固醇抗微生物劑、白肽素、抑肽酶、利巴韋林（ribavirin）或干擾素-α2b。藉由投與表4之抗體或抗原結合片段結合另外的治療劑來治療或預防需要該治療或預防之個體之病毒（例如冠狀病毒）感染的方法為本發明之一部分。

例如，在本發明之一個實施例中，另外的治療劑為疫苗，例如冠狀病毒疫苗。在本發明之一個實施例中，疫苗為不活化/死病毒疫苗、減毒活病毒疫苗或病毒次單位疫苗。

例如，在本發明之一個實施例中，另外的治療劑為：

（卡莫司他（camostat）甲磺酸鹽）；

（萘莫司他（nafamostat）甲磺酸鹽）；

（溴己新鹽酸鹽（bromhexine hydrochloride，BHH））；

（4-(2-胺基甲基)苯磺醯氟鹽酸鹽（4-(2-aminomethyl)benzenesulfonyl fluoride hydrochloride，AEBSF））；

；

；或

（聚醯胺）。參見Shen等人《生物化學（Biochimie）》 142: 1-10 (2017)。

在本發明之一個實施例中，抗病毒藥物為特異性結合至冠狀病毒，例如SARS-CoV-2、SARS-CoV或MERS-CoV的抗體或抗原結合片段。例示性抗CoV-S抗體包括但不限於：H4sH15188P；H1H15188P；H1H15211P；H1H15177P；H4sH15211P；H1H15260P2；H1H15259P2；H1H15203P；H4sH15260P2；H4sH15231P2；H1H15237P2；H1H15208P；H1H15228P2；H1H15233P2；H1H15264P2；H1H15231P2；H1H15253P2；H1H15215P；及H1H15249P2，如國際專利申請公開案第WO/2015/179535號中所闡述，或其抗原結合片段，例如其中抗體或片段包含包括LCDR1、LCDR2及LCDR3（例如V _L或其輕鏈）的輕鏈免疫球蛋白；以及包括前述抗CoV-S抗體中之任一者之HCDR1、HCDR2及HCDR3（例如V _H或其重鏈）的重鏈。

在本發明之某一實施例中，另外的治療劑不為抑肽酶、白肽素、陽離子類固醇抗微生物劑、流感疫苗（例如，死、活、減毒全病毒或次單位疫苗），或針對流感病毒之抗體（例如，抗血球凝集素抗體）。

術語「結合」指示組分，亦即本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段，連同另一試劑，可調配成單一組成物，例如用於同時遞送，或分開調配成兩種或更多種組成物（例如套組）。各組分可在與投與另一組分時不同的時間投與個體；例如，各投與可在給定時段內之間隔以非同時的方式（例如分開或依序）給予。此外，可藉由相同或不同的途徑將分開的組分投與個體（例如，其中抗CoV-S抗體或其抗原結合片段。套組

進一步提供了包含一或多種組分的套組，該等組分包括但不限於如本文所論述之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或抗原結合片段（例如表4中的），與如本文所論述之一或多種額外組分，包括但不限於另外的治療劑結合。抗原結合蛋白及/或另外的治療劑可調配成單一組成物或分別調配成兩種或更多種組成物，例如與醫藥學上可接受之載劑一起，在醫藥組成物中。

在本發明之一個實施例中，該套組在一個容器中（例如在無菌玻璃或塑膠小瓶中）包括本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的），或其醫藥組成物，且在另一容器中（例如在無菌玻璃或塑膠小瓶中）包括另外的治療劑。

在另一實施例中，套組包含本發明之組合，包括本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的），或其醫藥組成物，與一或多種另外的治療劑組合調配在一起，視情況在醫藥組成物中，在單一共同容器中。

若套組包括用於向個體非經腸投與之醫藥組成物，則套組可包括用於進行此類投與之裝置（例如，注射裝置）。例如，該套組可包括一或多個皮下注射針或上述含有本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的）的其他注射裝置。

套組可包括藥品說明書，其包括關於套組中之醫藥組成物及劑型之資訊。一般而言，此類資訊有助於患者及醫師有效且安全地使用隨附的醫藥組成物及劑型。例如，關於本發明組合之以下資訊可在藥品說明書中提供：藥物動力學、藥效動力學、臨床研究、功效參數、適應症及用法、禁忌症、警告、注意事項、不良反應、過量、適當劑量及投與、如何提供、適當的儲存條件、參考資料、製造商/分銷商資訊以及專利資訊。 抗體之診斷性用途

本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白，例如抗體或其抗原結合片段（例如表4中的），可用於偵測及/或量測樣本中之CoV-S。用於CoV-S之例示性分析可包括例如使樣本與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白接觸，其中該抗CoV-S抗原結合蛋白用可偵測標記或報導分子或用作捕獲配位體，以自樣本中選擇性分離CoV-S。與CoV-S複合之抗CoV-S抗原結合蛋白的存在表明樣本中存在CoV-S。或者，未標記之抗CoV-S抗體可與自身可偵測地標記之二級抗體組合。可偵測標記或報導分子可為放射性同位素，諸如 ³H、 ¹⁴C、 ³²P、 ³⁵S或 ¹²⁵I；螢光或化學發光部分，諸如異硫氰酸螢光素或若丹明（rhodamine）；或酶，諸如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化酶或螢光素酶。可用於偵測或量測樣本中之CoV-S的具體例示性分析包括中和分析、酶聯免疫吸附分析（ELISA）、放射免疫分析（RIA）及螢光激發細胞分選（FACS）。因此，本發明包括一種用於偵測樣本中棘蛋白多肽之存在的方法，其包含使樣本與抗CoV-S抗原結合蛋白接觸且偵測CoV-S/抗CoV-S抗原結合蛋白的存在，其中複合物的存在指示存在CoV-S。

本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如表4中的）可在西方墨點或免疫蛋白墨點程序中使用，以用於偵測樣本中CoV-S或其片段的存在。此種程序構成本發明之一部分且包括例如以下步驟： ▪ 提供包含待測試是否存在CoV-S之樣本的膜或其他固體基質，例如視情況包括將來自待測試是否存在CoV-S之樣本的蛋白質（例如，來自樣本中之蛋白質的PAGE或SDS-PAGE電泳分離）轉移至膜上或使用本領域已知的方法（例如，半乾墨點或槽墨點）或轉移至其他固體基質上；以及使待測試是否存在CoV-S或其片段之膜或其他固體基質與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白接觸。

此種膜可以採取例如硝化纖維素或乙烯基類（例如，聚偏二氟乙烯（PVDF））膜的形式，非變性PAGE（聚丙烯醯胺凝膠電泳）凝膠或SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳）凝膠中待測試是否存在CoV-S之蛋白質已轉移至該膜（例如，在凝膠中之電泳分離後）。在使膜與抗CoV-S抗原結合蛋白接觸之前，視情況例如用脫脂奶粉或其類似物阻斷膜以結合膜上的非特異性蛋白結合位點。（2）將膜洗滌一或多次，以移除未結合的抗CoV-S抗原結合蛋白及其他未結合物質；及（3）偵測結合的抗CoV-S抗原結合蛋白。

偵測到結合的抗原結合蛋白指示CoV-S蛋白存在於膜或基質上以及樣本中。結合抗原結合蛋白之偵測可藉由使抗原結合蛋白與可偵測標記之二級抗體（抗免疫球蛋白抗體）結合，且隨後偵測二級抗體標記的存在。

本文所揭示之抗CoV-S抗原結合蛋白（例如抗體及抗原結合片段（例如表4中的））亦可用於免疫組織化學。此種方法構成本發明的一部分，且包含例如 ● 使待測試是否存在CoV-S蛋白之組織與本發明之抗CoV-S抗原結合蛋白接觸；及 ● 偵測組織上或組織中之抗原結合蛋白。

若抗原結合蛋白本身經可偵測標記，則其可直接偵測。或者，抗原結合蛋白可由可偵測標記之二級抗體結合，其中隨後偵測標記。實例

提出以下實例以便為本領域中一般熟習此項技術者提供如何製造及使用本發明之方法及組成物之完整揭示內容及描述，且不意欲限制本發明人視作其發明之物的範疇。已努力確保關於所用數字（例如量、溫度等）之準確性，但應考慮一些實驗誤差及偏差。除非另外指明，否則份數為重量份，分子量為平均分子量，溫度以攝氏度計，室溫為約25℃，且壓力為在大氣壓下或接近大氣壓。實例 1 ：針對 SARS-CoV-2 棘蛋白（ SARS-CoV-2-S ）之人類抗體的產生

針對SARS-CoV-2-棘蛋白（SARS-CoV-2-S）之人類抗體在VELOCIMMUNE ^®小鼠中產生，該小鼠包含編碼人類免疫球蛋白重鏈及κ輕鏈可變區或人類免疫球蛋白重鏈及λ輕鏈可變區的DNA。各小鼠用表現SARS-CoV-2-S受體結合域（RBD）（NCBI寄存編號（MN908947.3）之胺基酸1-1273，SEQ ID NO: 1008）的載體進行免疫，接著用SARS-CoV-2-S載體或SARS-CoV-2-S蛋白加強免疫。藉由SARS-CoV-2-S特異性免疫分析監測抗體免疫反應。如美國專利7582298中所描述，直接自抗原陽性小鼠B細胞中分離抗SARS-CoV-2-S抗體，未與骨髓瘤細胞融合，該專利以全文引用的方式併入本文中。使用此方法，獲得了完全人類抗SARS-CoV-2-S抗體（亦即，具有人類可變域及人類恆定域之抗體）。

抗體可變區亦自人類血液樣本中分離。在對SARS-CoV-2及症狀性COVID-19疾病的實驗室確認PCR陽性測試後6-8週自患者獲得全血。使用基於氯化銨之裂解緩衝液（Life Technologies）裂解紅血球，且藉由負選擇富集B細胞。藉由螢光激發細胞分選（FACS）分離結合SARS-CoV-2棘蛋白之單個B細胞。將經分離之B細胞單孔塗鋪且與抗體輕可變區及重可變區特異性PCR引子混合。各單個B細胞之cDNA藉由逆轉錄酶（RT）反應合成。隨後將各所得RT產物拆分且轉移至兩個相應孔中，用於隨後的抗體重鏈及輕鏈PCR。首先使用對抗體重可變區前導序列具特異性之5'簡併引子或對抗體輕鏈可變區前導序列具特異性之5'簡併引子及對抗體恆定區具特異性之3'引子藉由PCR擴增一組所得RT產物，形成擴增子。隨後使用對抗體重可變區構架1具特異性之5'簡併引子或對抗體輕鏈可變區構架1具特異性之5'簡併引子及對抗體恆定區具特異性之3'引子藉由PCR再次擴增擴增子，以產生用於選殖之擴增子。將抗體重鏈及輕鏈衍生之PCR產物分別選殖至含有重鏈恆定區及輕鏈恆定區之表現載體中，藉此產生用於雜合抗體之表現載體。將表現全長重鏈及輕鏈對之表現載體轉染至CHO細胞中以產生用於測試之抗體蛋白。

根據此實例之方法產生的例示性抗體之生物學特性在下文闡述之實例中詳細描述。實例 2 ：重鏈及輕鏈可變區胺基酸及核苷酸序列

表4顯示例示性抗SARS-CoV-2-S抗體之重鏈及輕鏈可變區及CDR以及重鏈及輕鏈序列之胺基酸序列標識符。對應核酸序列標識符闡述於表5中。表 4 ：胺基酸序列標識符

SEQ ID NO
mAb	HCVR	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCVR	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HC	LC
mAb15163	2	4	6	8	10	12	14	16	18	20
mAb15164	22	24	26	28	30	32	34	36	38	40
mAb15165	42	44	26	47	49	51	34	36	54	56
mAb15166	58	60	62	64	66	51	68	36	70	72
mAb15167	74	76	78	80	82	84	86	88	90	92
mAb15170	94	96	98	100	102	104	106	108	110	112
mAb14296	114	116	118	120	122	124	126	128	130	132
mAb14297	134	136	138	140	142	144	126	146	148	150
mAb14312	152	154	156	158	160	162	164	166	168	170
mAb14313	172	174	176	178	180	182	184	186	188	190
mAb14314	192	194	196	198	200	202	204	206	208	210
mAb14315	212	214	216	218	220	222	126	224	226	228
mAb14316	230	232	234	236	238	240	242	244	246	248
mAb15150	250	252	254	256	258	260	262	264	266	268
mAb15151	270	272	274	276	278	280	106	282	284	286
mAb15156	288	290	292	294	296	298	300	302	304	306
mAb15157	308	310	312	314	316	318	320	322	324	326
mAb15158	328	330	332	334	336	338	106	340	342	344
mAb15159	346	96	98	350	352	354	106	356	358	360
mAb15160	362	364	366	368	370	372	106	374	376	378
mAb15161	380	382	384	386	388	390	392	394	396	398
mAb15162	400	402	98	405	407	409	242	411	413	415
mAb14280	417	419	421	423	425	427	14	429	431	433
mAb14281	435	437	138	440	442	444	446	448	450	452
mAb14282	454	456	458	460	462	84	465	467	469	471
mAb14283	473	475	477	479	481	483	485	487	489	491
mAb14284	493	495	497	499	501	503	505	507	509	511
mAb14285	513	515	517	519	521	523	525	36	527	529
mAb14286	531	533	535	537	539	483	542	544	546	548
mAb14287	550	552	554	556	558	84	14	560	562	564
mAb14288	566	568	570	572	574	576	578	580	582	584
mAb14289	586	588	590	592	594	596	126	598	600	602
mAb14290	604	606	608	610	612	614	126	616	618	620
mAb14291	622	624	626	628	630	632	634	636	638	640
mAb14292	642	644	646	648	650	652	634	655	657	659
mAb14293	661	663	665	667	669	124	126	671	673	675
mAb14295	677	679	78	682	684	686	126	688	690	692
mAb13459	694	696	698	700	702	704	706	708	710	712
mAb14230	714	696	716	718	720	722	126	724	726	728
mAb14231	730	732	734	736	738	740	106	742	744	746
mAb14232	748	750	497	752	754	756	505	758	760	762
mAb14233	764	766	768	770	772	774	776	778	780	782
mAb14234	784	786	788	790	792	794	796	798	800	802
mAb14235	804	806	497	808	810	812	505	814	816	818
mAb14247	820	822	497	825	827	756	14	829	831	833
mAb14248	835	837	839	841	843	845	847	849	851	853
mAb14249	855	857	859	861	863	865	106	867	869	871
mAb14255	873	76	876	878	880	84	86	36	883	885
mAb14256	887	889	891	893	895	897	164	899	901	903
mAb14257	905	154	908	910	912	914	916	166	918	920
mAb14258	922	924	926	928	930	576	933	935	937	939
mAb14259	941	943	945	947	949	951	634	655	953	955
mAb14260	957	959	961	963	965	967	969	971	973	975
mAb13457	694	696	698	700	977	704	706	979	710	981
mAb13458	694	696	698	700	983	704	706	985	710	987
mAb14294	989	991	993	995	997	999	1001	1003	1005	1007
mAb17090	493	495	497	499	501	503	505	507	1075	511
mAb15160_2	362	364	366	368	370	372	106	374	1077	378

表 5 ：核酸序列標識符

SEQ ID NO
mAb	HCVR	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCVR	LCDR1	LCDR2	LCDR3	HC	LC
mAb15163	1	3	5	7	9	11	13	15	17	19
mAb15164	21	23	25	27	29	31	33	35	37	39
mAb15165	41	43	45	46	48	50	33	52	53	55
mAb15166	57	59	61	63	65	50	67	52	69	71
mAb15167	73	75	77	79	81	83	85	87	89	91
mAb15170	93	95	97	99	101	103	105	107	109	111
mAb14296	113	115	117	119	121	123	125	127	129	131
mAb14297	133	135	137	139	141	143	125	145	147	149
mAb14312	151	153	155	157	159	161	163	165	167	169
mAb14313	171	173	175	177	179	181	183	185	187	189
mAb14314	191	193	195	197	199	201	203	205	207	209
mAb14315	211	213	215	217	219	221	125	223	225	227
mAb14316	229	231	233	235	237	239	241	243	245	247
mAb15150	249	251	253	255	257	259	261	263	265	267
mAb15151	269	271	273	275	277	279	105	281	283	285
mAb15156	287	289	291	293	295	297	299	301	303	305
mAb15157	307	309	311	313	315	317	319	321	323	325
mAb15158	327	329	331	333	335	337	105	339	341	343
mAb15159	345	347	348	349	351	353	105	355	357	359
mAb15160	361	363	365	367	369	371	105	373	375	377
mAb15161	379	381	383	385	387	389	391	393	395	397
mAb15162	399	401	403	404	406	408	241	410	412	414
mAb14280	416	418	420	422	424	426	13	428	430	432
mAb14281	434	436	438	439	441	443	445	447	449	451
mAb14282	453	455	457	459	461	463	464	466	468	470
mAb14283	472	474	476	478	480	482	484	486	488	490
mAb14284	492	494	496	498	500	502	504	506	508	510
mAb14285	512	514	516	518	520	522	524	52	526	528
mAb14286	530	532	534	536	538	540	541	543	545	547
mAb14287	549	551	553	555	557	83	13	559	561	563
mAb14288	565	567	569	571	573	575	577	579	581	583
mAb14289	585	587	589	591	593	595	125	597	599	601
mAb14290	603	605	607	609	611	613	125	615	617	619
mAb14291	621	623	625	627	629	631	633	635	637	639
mAb14292	641	643	645	647	649	651	653	654	656	658
mAb14293	660	662	664	666	668	123	125	670	672	674
mAb14295	676	678	680	681	683	685	125	687	689	691
mAb13459	693	695	697	699	701	703	705	707	709	711
mAb14230	713	695	715	717	719	721	125	723	725	727
mAb14231	729	731	733	735	737	739	105	741	743	745
mAb14232	747	749	496	751	753	755	504	757	759	761
mAb14233	763	765	767	769	771	773	775	777	779	781
mAb14234	783	785	787	789	791	793	795	797	799	801
mAb14235	803	805	496	807	809	811	504	813	815	817
mAb14247	819	821	823	824	826	755	13	828	830	832
mAb14248	834	836	838	840	842	844	846	848	850	852
mAb14249	854	856	858	860	862	864	105	866	868	870
mAb14255	872	874	875	877	879	83	85	881	882	884
mAb14256	886	888	890	892	894	896	163	898	900	902
mAb14257	904	906	907	909	911	913	915	165	917	919
mAb14258	921	923	925	927	929	931	932	934	936	938
mAb14259	940	942	944	946	948	950	633	654	952	954
mAb14260	956	958	960	962	964	966	968	970	972	974
mAb13457	693	695	697	699	976	703	705	978	709	980
mAb13458	693	695	697	699	982	703	705	984	709	986
mAb14294	988	990	992	994	996	998	1000	1002	1004	1006
mAb17090	492	494	496	498	500	502	504	506	1074	510
mAb15160_2	361	363	365	367	369	371	105	373	1076	377

本文所揭示之抗體具有完全人類可變區，但可具有小鼠恆定區（例如，小鼠IgG1 Fc或小鼠IgG2 Fc（a或b同型））或人類恆定區（例如，人類IgG1 Fc或人類IgG4 Fc）。如本領域中一般熟習此項技術者將瞭解，具有特定Fc同型之抗體可轉化為具有不同Fc同型之抗體（例如，具有小鼠IgG1 Fc之抗體可轉化為具有人類IgG4之抗體，等等），但無論如何，由表4及5中所示之數字標識符指示的可變域（包括CDR）將保持不變，且預期與抗原之結合特性相同或實質上相似，而不管恆定域之性質如何。

如上所述，抗體藉由直接自抗原陽性VELOCIMMUNE®小鼠B細胞中分離獲得，或自抗原陽性人類B細胞選殖之可變區衍生。此等來源之概述示於表6中。表 6 ：抗體 / 可變區來源

mAb	來源
mAb13457	小鼠B細胞
mAb13458	小鼠B細胞
mAb13459	小鼠B細胞
mAb14230	人類B細胞
mAb14231	人類B細胞
mAb14232	人類B細胞
mAb14233	人類B細胞
mAb14234	人類B細胞
mAb14235	人類B細胞
mAb14247	人類B細胞
mAb14248	人類B細胞
mAb14249	人類B細胞
mAb14255	小鼠B細胞
mAb14256	小鼠B細胞
mAb14257	小鼠B細胞
mAb14258	小鼠B細胞
mAb14259	人類B細胞
mAb14260	小鼠B細胞
mAb14280	人類B細胞
mAb14281	人類B細胞
mAb14282	人類B細胞
mAb14283	人類B細胞
mAb14284	人類B細胞
mAb14285	人類B細胞
mAb14286	人類B細胞
mAb14287	人類B細胞
mAb14288	人類B細胞
mAb14290	人類B細胞
mAb14289	人類B細胞
mAb14291	人類B細胞
mAb14292	人類B細胞
mAb14293	人類B細胞
mAb14294	人類B細胞
mAb14295	人類B細胞
mAb14296	人類B細胞
mAb14297	人類B細胞
mAb14312	小鼠B細胞
mAb14313	小鼠B細胞
mAb14314	小鼠B細胞
mAb14315	人類B細胞
mAb14316	人類B細胞
mAb15156	小鼠B細胞
mAb15157	小鼠B細胞
mAb15158	人類B細胞
mAb15159	人類B細胞
mAb15160	人類B細胞
mAb15161	人類B細胞
mAb15162	人類B細胞
mAb15163	人類B細胞
mAb15164	人類B細胞
mAb15165	人類B細胞
mAb15166	人類B細胞
mAb15167	人類B細胞
mAb15170	人類B細胞
mAb15150	人類B細胞
mAb15151	人類B細胞

實例 3 ：經純化之抗 SARS-CoV-2-S 單株抗體的 Biacore 結合動力學

使用基於即時表面電漿子共振之Biacore T200/Biacore 8K生物感測器測定不同SARS-COV-2 RBD試劑與經純化之CHOt抗SARS-COV-2單株抗體（mAb）結合的平衡解離常數（K _D）。所有結合研究均在10 mM HEPES、150 mM NaCl、3 mM EDTA及0.05% v/v界面活性劑Tween-20、pH 7.4（HBS-ET）操作緩衝液中在25℃及37℃下進行。Biacore CM5感測器晶片表面首先藉由與小鼠抗人類Fc特異性mAb（再生元，mAb2567）胺偶聯進行衍生化，以捕獲抗SARS-COV-2 mAb。對表現成具有C端myc-myc-六組胺酸標籤之人類SARS-COV-2 RBD胞外域（SARS-COV-2 RBD-mmH）（單體RBD）（SEQ ID NO: 1069）、表現成具有C端小鼠IgG2a Fc之SARS-COV-2 RBD胞外域（SARS-COV-2 RBD mFc）（二聚RBD）（SEQ ID NO: 1070），以及表現成具有C端myc-myc-六組胺酸之SARS-CoV2棘外摺疊子（foldon）三聚體（SARS-CoV2棘ECD摺疊子）（三聚RBD）進行結合研究。使用此等試劑可允許分別測試抗體結合單體、二聚及三聚RBD肽之能力。

將在HBS-ET操作緩衝液中製備之三種濃度，亦即50 nM、12.5 nM及3.12 nM之hSARS-COV-2 RBD-mmH、SARS-COV-2 RBD mFc及SARS-CoV2棘ECD摺疊子以50 µL/min之流速注射1.5-3分鐘，同時在HBS-ET操作緩衝液中監測mAb結合的不同SARS-COV-2 RBD試劑之解離5-8分鐘。在各循環結束時，SARS-COV-2 RBD mAb捕獲表面使用針對小鼠抗人類Fc特異性mAb表面之20 mM磷酸12秒注射進行再生。藉由使用BiaEvaluation軟體v3.1或Biacore Insight Evaluation軟體v2.0或曲線擬合軟體將即時結合感測器圖譜擬合至具有質量傳輸限制之1:1結合模型來確定締合速率（ k _a ）及解離速率（ k _d ）。結合解離平衡常數（K _D）及解離半衰期（t½）自動力學速率計算如下：

，及

不同抗SARS-COV-2 mAb與本發明之單體、二聚及三聚SARS-COV-2 RBD試劑在25℃及37℃下結合的結合動力學參數分別顯示在表7至12中。同型對照mAb1932亦用作對照。表 7 ：抗SARS-COV-2單株抗體與單體SARS-COV-2 RBD-mmH（SEQ ID NO: 1069）在25℃下相互作用的動力學結合參數。

所捕獲之 mAb	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之 RBD 單體（ RU ）	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	468.6±4.6	190.8	1.53E+06	9.29E-04	6.06E-10	12.4
mAb14260	415.3±1.6	173.5	1.87E+06	1.38E-03	7.38E-10	8.4
mAb14284	731.1±1.2	236.5	6.66E+05	5.49E-04	8.24E-10	21.0
mAb14258	423.9±0.4	180.2	1.89E+06	1.61E-03	8.54E-10	7.2
mAb14294	408.7±2.0	138.3	6.00E+05	5.48E-04	9.14E-10	21.1
mAb14283	410.1±8.9	171.9	1.46E+06	1.58E-03	1.08E-09	7.3
mAb14235	340.0±4.0	117.1	7.89E+05	1.05E-03	1.33E-09	11.0
mAb14289	395.1±1.1	151	1.16E+06	1.58E-03	1.36E-09	7.3
mAb13458	435.7±4.4	158.4	9.09E+05	1.39E-03	1.53E-09	8.3
mAb14313	532.2±1.9	218.2	1.42E+06	2.17E-03	1.53E-09	5.3
mAb14247	179.0±0.5	63.3	8.38E+05	1.63E-03	1.94E-09	7.1
mAb14315	465.8±0.9	127.1	4.07E+05	1.02E-03	2.49E-09	11.4
mAb13459	665.7±4.5	219.3	6.93E+05	1.74E-03	2.51E-09	6.6
mAb13457	412.5±7.4	148.4	7.74E+05	2.05E-03	2.65E-09	5.6
mAb14257	518.6±1.0	215.1	3.40E+06	9.52E-03	2.80E-09	1.2
mAb14255	432.4±4.8	180.4	1.75E+06	4.99E-03	2.84E-09	2.3
mAb14286	394.6±5.2	158.5	3.23E+06	1.04E-02	3.22E-09	1.1
mAb14282	414.4±4.7	170.1	1.93E+06	9.57E-03	4.97E-09	1.2
mAb14281	423.6±0.4	157.8	1.10E+06	5.54E-03	5.02E-09	2.1
mAb14230	315.0±0.3	113.6	1.13E+06	8.52E-03	7.51E-09	1.4
mAb14256	440.5±3.6	175.4	1.11E+06	9.27E-03	8.32E-09	1.2
mAb14285	443.1±0.6	157.9	1.80E+06	2.11E-02	1.17E-08	0.5
mAb14280	474.3±0.5	177.3	1.66E+06	2.55E-02	1.54E-08	0.5
mAb14234	458.8±0.9	152.8	5.50E+05	1.13E-02	2.05E-08	1.0
mAb14232	71.6±1.4	18.8	1.12E+06	3.50E-02	3.12E-08	0.3
mAb14292	431.3±0.7	11.1	4.17E+05	1.71E-02	4.09E-08	0.7
mAb14314	597.8±0.8	11.6	IC	IC	IC	IC
mAb14248	400.8±1.6	269.5	7.06E+05	2.05E-05	2.90E-11	564.0
mAb14295	441.5±3.7	59.8	3.01E+05	≤1.00E-05	3.32E-11	≥1155.0
mAb14233	492.8±3.4	85.7	4.94E+05	3.66E-05	7.41E-11	315.5
mAb14287	419.8±0.3	91.9	3.10E+05	4.59E-05	1.48E-10	251.4
mAb14293	432.5±0.6	119.8	2.43E+05	8.10E-05	3.33E-10	142.6
mAb14291	391.3±3.3	47.8	IC	IC	IC	IC
mAb14249	407.5±1.0	42.3	IC	IC	IC	IC
mAb14316	264.7±1.6	40	IC	IC	IC	IC
mAb14296	529.6±0.7	32.3	IC	IC	IC	IC
mAb14231	407.0±2.2	27.3	IC	IC	IC	IC
mAb14288	458.5±2.3	24.7	IC	IC	IC	IC
mAb14297	444.0±1.4	13.7	IC	IC	IC	IC
mAb14290	378.1±1.2	12	IC	IC	IC	IC
mAb14259	335.8±2.8	7.8	IC	IC	IC	IC
mAb15156	427.3±17.1	91	2.89E+05	1.21E-03	4.18E-09	9.6
mAb15157	291.6±11.5	20.3	2.78E+05	1.25E-03	4.49E-09	9.3
mAb15158	317.3±6.6	26.3	1.04E+05	8.12E-05	7.79E-10	142.2
mAb15159	286.3±16.0	62	4.89E+04	1.30E-04	2.66E-09	88.8
mAb15160	304.2±8.3	9.3	IC	IC	IC	IC
mAb15161	250.6±15.3	40.3	1.73E+05	2.34E-04	1.35E-09	49.3
mAb15162	287.1±12.2	49.6	1.16E+05	8.50E-04	7.30E-09	13.6
mAb15163	358.2±12.8	51	2.18E+05	1.67E-05	7.79E-11	693.3
mAb15164	315.8±11.1	41.2	2.28E+05	3.49E-04	1.53E-09	33.1
mAb15165	271.1±13.8	33.9	5.39E+05	2.12E-04	3.93E-10	54.6
mAb15166	249.2±11.0	13.3	2.46E+05	5.35E-03	2.17E-08	2.2
mAb15167	329.5±10.9	21.8	2.65E+05	4.14E-03	1.56E-08	2.8
mAb15170	278.8±9.9	21.8	2.00E+05	1.53E-05	1.00E-10	756.4
mAb15150	276.5±9.6	33.3	7.74E+05	4.61E-05	5.94E-11	250.8
mAb15151	354.8±13.2	63.4	2.00E+05	7.78E-04	3.89E-09	14.8
mAb1932	790.6±9.6	0.6	NB	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。 ≤ 1.00E-05指示在當前實驗條件下未觀測到解離，且 k _d 值在擬合即時結合感測器圖譜時手動固定在1.00E-05 s ^-1。表 8 ：抗SARS-COV-2單株抗體與單體SARS-COV-2 RBD-mmH（SEQ ID NO: 1069）在37℃下相互作用的動力學結合參數。

所捕獲之 mAb	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之 RBD 單體（ RU ）	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	543	221.2	1.57E+06	9.88E-04	6.31E-10	11.7
mAb14260	525.5	219.6	1.95E+06	1.44E-03	7.41E-10	8.0
mAb14284	867.3	345.3	6.44E+05	6.05E-04	9.40E-10	19.1
mAb14258	521	215.5	2.14E+06	1.70E-03	7.96E-10	6.8
mAb14294	465.5	185.9	6.00E+05	5.90E-04	9.84E-10	19.6
mAb14283	531.3	217.1	1.54E+06	1.79E-03	1.17E-09	6.4
mAb14235	388.4	153.8	7.93E+05	1.09E-03	1.37E-09	10.6
mAb14289	461.9	185.8	1.20E+06	1.76E-03	1.46E-09	6.5
mAb13458	550.6	212.8	9.07E+05	1.39E-03	1.54E-09	8.3
mAb14313	676	272.8	2.81E+06	2.59E-03	9.21E-10	4.5
mAb14247	222.1	91.2	8.32E+05	1.63E-03	1.95E-09	7.1
mAb14315	581.1	193	4.35E+05	9.85E-04	2.26E-09	11.7
mAb13459	822.4	299	7.86E+05	2.04E-03	2.60E-09	5.7
mAb13457	472.1	180.3	8.01E+05	2.34E-03	2.92E-09	4.9
mAb14257	600.6	242.3	3.26E+06	7.62E-03	2.34E-09	1.5
mAb14255	518.4	206	1.94E+06	5.35E-03	2.76E-09	2.2
mAb14286	436.6	169.1	3.38E+06	1.04E-02	3.07E-09	1.1
mAb14282	492.7	186.2	1.98E+06	1.06E-02	5.37E-09	1.1
mAb14281	486.7	182	1.12E+06	5.82E-03	5.20E-09	2.0
mAb14230	369.8	133.2	1.15E+06	8.76E-03	7.61E-09	1.3
mAb14256	555.8	193.4	1.40E+06	1.15E-02	8.24E-09	1.0
mAb14285	543.5	165.6	2.09E+06	2.74E-02	1.31E-08	0.4
mAb14280	586	176.2	1.53E+06	2.48E-02	1.62E-08	0.5
mAb14234	565.9	162	5.34E+05	1.19E-02	2.23E-08	1.0
mAb14232	98.1	21.1	4.69E+06	3.72E-02	7.92E-09	0.3
mAb14292	507.6	10.4	3.59E+05	2.18E-02	6.07E-08	0.5
mAb14314	693.8	12.5	4.79E+05	1.15E-02	2.39E-08	1.0
mAb14248	509.5	491.7	7.02E+05	1.90E-05	2.71E-11	607.3
mAb14295	558.8	196.2	5.78E+05	≤1.00E-05	1.73E-11	≥1155.0
mAb14233	561.8	276.8	3.20E+05	3.38E-05	1.06E-10	341.7
mAb14287	528.8	154.9	7.04E+05	4.63E-05	6.58E-11	249.4
mAb14293	531	166.7	9.62E+05	8.69E-05	9.03E-11	132.9
mAb14291	516.4	224.5	3.08E+05	4.46E-05	1.45E-10	258.9
mAb14249	482.5	143	2.38E+05	5.34E-05	2.25E-10	216.5
mAb14316	304.6	132.1	8.05E+05	≤1.00E-05	1.24E-11	≥1155.0
mAb14296	672.2	91.3	1.33E+05	≤1.00E-05	7.55E-11	≥1155.0
mAb14231	490.1	54.7	3.18E+05	1.57E-04	4.94E-10	73.5
mAb14288	576.6	72.9	1.06E+05	5.85E-05	5.54E-10	197.5
mAb14297	529.3	32.1	3.01E+05	2.09E-04	6.94E-10	55.3
mAb14290	457.9	32.9	2.34E+05	1.09E-05	4.66E-11	1057.7
mAb14259	395.2	9	NB	NB	NB	NB
mAb15156	463.2±0.7	106.9	3.73E+05	5.35E-03	1.44E-08	2.2
mAb15157	309.1±1	65.7	3.44E+05	3.99E-03	1.16E-08	2.9
mAb15158	298±0.5	44.3	1.26E+05	2.07E-04	1.65E-09	55.7
mAb15159	293.3±1.9	42	1.46E+05	1.76E-04	1.21E-09	65.6
mAb15160	400.6±1.2	79.3	2.50E+05	1.94E-03	7.79E-09	5.9
mAb15161	283.9±0.9	61.1	2.63E+05	8.66E-04	3.29E-09	13.3
mAb15162	322.4±2.9	38.9	1.03E+05	2.99E-03	2.92E-08	3.9
mAb15163	343.6±1.7	72.7	2.18E+05	3.87E-04	1.78E-09	29.9
mAb15164	385±1.1	93.4	2.83E+05	1.79E-03	6.33E-09	6.5
mAb15165	276.1±2.3	82.5	4.75E+05	1.47E-03	3.10E-09	7.9
mAb15166	266.8±0.3	19.7	3.50E+05	3.34E-02	9.53E-08	0.3
mAb15167	405.3±0.6	46.8	3.52E+05	1.95E-02	5.55E-08	0.6
mAb15170	299.4±1.4	56.3	2.83E+05	8.36E-05	2.97E-10	138.1
mAb15150	248.5±1.2	64.9	4.93E+05	7.84E-05	1.58E-10	147.4
mAb15151	595.8±1.6	141.4	1.80E+05	4.42E-03	2.46E-08	2.6
mAb1932	921.8±2	1.3	NB	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。 ≤ 1.00E-05指示在當前實驗條件下未觀測到解離，且 k _d 值在擬合即時結合感測器圖譜時手動固定在1.00E-05 s ^-1。表 9 ：抗SARS-COV-2單株抗體與二聚SARS-COV-2 RBD mFc（SEQ ID NO: 1070）在25℃下相互作用的動力學結合參數

所捕獲之 mAb	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之 RBD mFc 二聚體	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	465.2±3.8	349.2	1.68E+06	5.60E-05	3.34E-11	206.4
mAb14260	416.5±2.2	327.4	1.96E+06	8.70E-05	4.43E-11	132.8
mAb14284	732.9±0.5	482.2	8.31E+05	2.12E-05	2.55E-11	544.6
mAb14258	420.7±1	332.8	3.56E+04	1.09E-04	3.04E-09	106.5
mAb14294	404.3±5.6	291.4	9.11E+05	2.68E-05	2.94E-11	430.3
mAb14283	417.5±0.6	319.6	1.55E+06	8.14E-05	5.24E-11	141.9
mAb14235	338.6±2.2	242.7	1.10E+06	6.89E-05	6.27E-11	167.6
mAb14289	393.3±2.8	295.3	1.43E+06	8.95E-05	6.28E-11	129.1
mAb13458	439.8±2.5	326.7	1.18E+06	7.55E-05	6.40E-11	153.1
mAb14313	528.5±10.9	407.4	2.36E+06	9.97E-05	4.22E-11	115.9
mAb14247	177.9±0.7	135.5	1.19E+06	1.56E-04	1.31E-10	73.9
mAb14315	455.9±5.0	303.7	7.99E+05	6.26E-05	7.84E-11	184.4
mAb13459	670.8±2.4	465.4	1.05E+06	4.35E-05	4.15E-11	265.6
mAb13457	410.1±7	308.2	1.33E+06	8.59E-05	6.45E-11	134.5
mAb14257	519.6±2.1	403.1	2.81E+06	2.54E-04	9.07E-11	45.4
mAb14255	437.3±0.4	340.7	2.19E+06	1.59E-04	7.26E-11	72.6
mAb14286	393.5±1.5	296.8	2.95E+06	6.55E-04	2.22E-10	17.6
mAb14282	418.3±0.9	326.3	2.17E+06	4.03E-04	1.86E-10	28.7
mAb14281	424.2±0.6	305.1	1.46E+06	2.13E-04	1.46E-10	54.3
mAb14230	315.5±0.6	240.6	2.00E+06	2.86E-04	1.42E-10	40.5
mAb14256	440.9±5.5	331.9	2.84E+06	1.81E-04	6.38E-11	63.7
mAb14285	435.9±1	318.7	5.78E+06	5.02E-04	8.68E-11	23
mAb14280	476.4±0.9	358.2	3.02E+06	3.70E-04	1.23E-10	31.2
mAb14234	458.2±5	328.7	1.02E+06	1.21E-04	1.19E-10	95.2
mAb14232	71.7±1.4	52.4	1.97E+06	1.73E-03	8.78E-10	6.7
mAb14292	431.8±1.4	76.8	1.04E+06	3.51E-02	3.36E-08	0.3
mAb14314	601.8±1.1	173.6	2.22E+06	5.60E-02	2.53E-08	0.2
mAb14248	404.4±1.8	4.9	NB	NB	NB	NB
mAb14295	441.3±4.7	8.4	NB	NB	NB	NB
mAb14233	491.0±2.3	2.3	NB	NB	NB	NB
mAb14287	424.9±3.8	9.4	NB	NB	NB	NB
mAb14293	440.5±0.3	5.8	NB	NB	NB	NB
mAb14291	391.0±4.3	3.3	NB	NB	NB	NB
mAb14249	412.7±1.1	4.6	NB	NB	NB	NB
mAb14316	266.4±1.7	11.4	IC	IC	IC	IC
mAb14296	529.8±1.7	4.6	NB	NB	NB	NB
mAb14231	407.8±1	4.8	NB	NB	NB	NB
mAb14288	462.8±1.2	4	NB	NB	NB	NB
mAb14297	443.5±1.2	6.8	NB	NB	NB	NB
mAb14290	382.1±3.6	7.7	NB	NB	NB	NB
mAb14259	339.7±0.5	8.3	NB	NB	NB	NB
mAb15156	914.2±2.1	493.4	1.41E+06	5.22E-05	3.69E-11	221.2
mAb15157	543.7±0.5	294.3	3.57E+05	6.67E-05	1.87E-10	173.2
mAb15158	573.9±1.8	175.4	4.53E+05	1.00E-05	2.21E-11	1,155.0
mAb15159	519.6±0.8	224.5	6.91E+05	1.19E-05	1.72E-11	971.4
mAb15160	610.1±1.6	268.3	2.58E+05	1.05E-05	4.06E-11	1,101.0
mAb15161	547.4±0.5	328.4	1.06E+06	1.26E-05	1.19E-11	913.8
mAb15162	771.1±0.3	354.1	1.29E+06	2.30E-04	1.79E-10	50.2
mAb15163	529.5±1.1	164.2	9.30E+05	1.00E-05	1.08E-11	1,155.0
mAb15164	719.6±0.5	308.8	3.72E+05	2.12E-05	5.69E-11	545.6
mAb15165	644.5±6.2	222.6	3.01E+05	3.88E-05	1.29E-10	297.5
mAb15166	715.6±4.0	334.4	1.02E+06	1.62E-05	1.60E-11	713.0
mAb15167	501.7±2.5	241.5	4.81E+05	1.05E-04	2.17E-10	110.3
mAb15170	608.7±2.3	237.5	3.39E+05	1.00E-05	2.95E-11	1,155.0
mAb15150	433.3±2.1	235.9	5.07E+05	1.00E-05	1.97E-11	1,155.0
mAb15151	1143±2.6	491.7	9.24E+06	3.12E-05	3.38E-12	369.7
mAb1932	1775.9±2.3	6.8	NB	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。表 10 ：抗SARS-COV-2單株抗體與二聚SARS-COV-2 RBD mFc（SEQ ID NO: 1070）在37℃下相互作用的動力學結合參數。

所捕獲之 mAb	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之 RBD mFc 二聚體	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	550.3	422.3	1.67E+06	5.80E-05	3.47E-11	199.1
mAb14260	521.7	408.3	1.93E+06	1.04E-04	5.40E-11	110.6
mAb14284	872	659.3	8.30E+05	2.24E-05	2.70E-11	516.1
mAb14258	271.5	392.5	IC	IC	IC	IC
mAb14294	467.7	370.4	9.06E+05	3.50E-05	3.86E-11	330.1
mAb14283	534.6	414.9	1.52E+06	9.59E-05	6.31E-11	120.5
mAb14235	393.8	308.2	1.09E+06	6.68E-05	6.12E-11	173
mAb14289	467.8	372.3	1.41E+06	1.28E-04	9.07E-11	90.1
mAb13458	548.4	425.4	1.16E+06	9.12E-05	7.84E-11	126.7
mAb14313	703.3	538	2.52E+06	1.46E-04	5.82E-11	78.9
mAb14247	223	191.8	1.18E+06	1.50E-04	1.27E-10	77
mAb14315	577.7	416.2	8.77E+05	7.91E-05	9.03E-11	145.9
mAb13459	830	613.1	9.85E+05	9.24E-05	9.39E-11	125
mAb13457	467.7	357.9	1.26E+06	1.17E-04	9.35E-11	98.5
mAb14257	597.6	482	2.81E+06	3.39E-04	1.21E-10	34.1
mAb14255	523	407.4	2.12E+06	2.50E-04	1.18E-10	46.2
mAb14286	433.2	336.7	2.94E+06	5.28E-04	1.80E-10	21.9
mAb14282	493.7	393.8	2.21E+06	5.46E-04	2.47E-10	21.1
mAb14281	481.8	370.1	1.34E+06	3.65E-04	2.71E-10	31.7
mAb14230	374	294.6	1.82E+06	4.90E-04	2.68E-10	23.6
mAb14256	573.9	430.4	1.78E+06	4.73E-04	2.67E-10	24.4
mAb14285	537	386.8	4.45E+06	1.03E-03	2.31E-10	11.2
mAb14280	589.2	444.9	2.92E+06	7.72E-04	2.64E-10	15
mAb14234	571.3	414.8	9.80E+05	4.02E-04	4.10E-10	28.8
mAb14232	103.7	69	2.10E+06	1.88E-03	8.93E-10	6.1
mAb14292	503.4	97.9	1.86E+06	6.44E-02	3.46E-08	0.2
mAb14314	700.2	167.3	1.48E+06	3.57E-02	2.41E-08	0.3
mAb14248	506.9	8.1	NB	NB	NB	NB
mAb14295	555.3	13.8	NB	NB	NB	NB
mAb14233	559.6	3.9	NB	NB	NB	NB
mAb14287	528.2	19.8	NB	NB	NB	NB
mAb14293	532.7	9.1	NB	NB	NB	NB
mAb14291	529.1	6.1	NB	NB	NB	NB
mAb14249	481	6.6	NB	NB	NB	NB
mAb14316	303.8	14.5	NB	NB	NB	NB
mAb14296	667.7	7.6	NB	NB	NB	NB
mAb14231	494.9	8	NB	NB	NB	NB
mAb14288	572.7	8.4	NB	NB	NB	NB
mAb14297	525.8	12.4	NB	NB	NB	NB
mAb14290	450.6	10.3	NB	NB	NB	NB
mAb14259	395.4	9.4	NB	NB	NB	NB
mAb15156	1206.3±2.9	672.7	1.78E+05	1.12E-04	6.30E-10	103.2
mAb15157	689.3±1.8	411.9	9.22E+05	1.07E-04	1.16E-10	107.9
mAb15158	699.6±1.7	279.4	1.71E+05	2.90E-05	1.70E-10	398.3
mAb15159	756.1±1.1	314.8	2.20E+05	2.99E-05	1.35E-10	386.3
mAb15160	913.9±1.3	440.3	4.36E+05	7.90E-05	1.81E-10	146.2
mAb15161	674.7±0.6	352.5	1.05E+06	4.90E-05	4.69E-11	235.7
mAb15162	835.4±2.9	322.7	2.00E+05	1.01E-04	5.00E-10	114.8
mAb15163	778.3±3.3	407	4.16E+05	2.50E-05	6.01E-11	462.0
mAb15164	937.9±2.2	466.3	1.82E+06	9.40E-05	5.18E-11	122.9
mAb15165	716.1±0	191.1	1.00E+05	4.55E-05	4.50E-10	254.0
mAb15166	616.1±2.1	350.6	7.81E+05	9.80E-05	1.26E-10	117.9
mAb15167	993.3±3.2	499.8	1.40E+06	1.24E-04	8.90E-11	93.1
mAb15170	779.1±2.9	374.2	2.60E+05	2.41E-05	9.10E-11	480.0
mAb15150	554±1.8	338.7	9.46E+05	2.80E-05	2.96E-11	412.5
mAb15151	1452±4.1	653.6	3.70E+06	3.10E-03	8.50E-10	3.7
mAb1932	2129.7±4	20.6	NB	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。表 11 ：抗SARS-COV-2單株抗體與三聚SARS-CoV2棘ECD摺疊子融合蛋白在25℃下相互作用的動力學結合參數。

所捕獲之 mAb	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之棘三聚體 .his	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	463.3±4.0	393.4	1.93E+06	5.24E-05	2.72E-11	220.5
mAb14260	411.6±6.6	378.1	1.52E+06	5.87E-05	3.86E-11	196.6
mAb14284	729.9±1.8	469.4	8.12E+05	1.31E-05	1.61E-11	883
mAb14258	420±1.7	406.3	2.12E+06	4.91E-05	2.32E-11	235.3
mAb14294	400.7±3.8	341.7	6.97E+05	2.29E-05	3.29E-11	503.7
mAb14283	417.4±5.5	352.5	1.61E+06	8.66E-05	5.39E-11	133.3
mAb14235	336.9±1.2	297.5	7.79E+05	3.69E-05	4.74E-11	312.9
mAb14289	387.0±3.9	345.3	9.12E+05	6.35E-05	6.96E-11	182
mAb13458	436.2±3.7	340.8	1.21E+06	4.26E-05	3.51E-11	271.3
mAb14313	528.7±2.2	462	2.00E+06	1.13E-04	5.65E-11	102.1
mAb14247	172±4.9	143.3	9.44E+05	4.91E-05	5.21E-11	235
mAb14315	458.4±1.1	335.4	6.52E+05	3.15E-05	4.83E-11	366.2
mAb13459	668.9±8.1	483.2	1.41E+06	5.46E-05	3.89E-11	211.5
mAb13457	405.4±4.6	358.2	7.68E+05	5.52E-05	7.18E-11	209.2
mAb14257	518.4±1.3	535.3	2.45E+06	1.07E-04	4.34E-11	108.5
mAb14255	431.9±3.2	454.1	1.96E+06	1.38E-04	7.06E-11	83.5
mAb14286	389.5±2.0	425	2.63E+06	8.71E-05	3.31E-11	132.6
mAb14282	413.2±3.4	421.7	2.14E+06	1.33E-04	6.24E-11	86.6
mAb14281	415±5.6	310.7	8.34E+05	8.09E-05	9.70E-11	142.8
mAb14230	313.1±2.6	340	1.51E+06	6.09E-05	4.04E-11	189.8
mAb14256	441.9±6.3	356.7	1.47E+06	1.89E-04	1.29E-10	61
mAb14285	435.7±1.6	486.2	2.34E+06	3.98E-05	1.70E-11	290.4
mAb14280	472.8±1.3	458.7	1.99E+06	2.69E-05	1.36E-11	428.7
mAb14234	455.7±5.8	365.5	7.07E+05	5.48E-05	7.75E-11	210.7
mAb14232	69.7±1	72.8	7.63E+05	1.49E-04	1.95E-10	77.7
mAb14292	429.2±0.5	138.4	5.84E+05	4.21E-03	7.21E-09	2.7
mAb14314	600.4±1.7	184	4.92E+05	4.21E-03	8.56E-09	2.7
mAb14248	403.3±0.4	1.4	NB	NB	NB	NB
mAb14295	446.7±2.3	2.4	NB	NB	NB	NB
mAb14233	488.5±2.0	0.3	NB	NB	NB	NB
mAb14287	421.9±3.0	0.9	NB	NB	NB	NB
mAb14293	448.8±0.4	2.4	NB	NB	NB	NB
mAb14291	396.1±4.2	0.3	NB	NB	NB	NB
mAb14249	413.5±1.6	-0.1	NB	NB	NB	NB
mAb14316	269.1±1.4	3.9	NB	NB	NB	NB
mAb14296	528.3±1.5	1.1	NB	NB	NB	NB
mAb14231	410.9±1.7	0.2	NB	NB	NB	NB
mAb14288	459.0±0.8	1.9	NB	NB	NB	NB
mAb14297	451.0±0.8	1.4	NB	NB	NB	NB
mAb14290	379.4±6.1	3.8	NB	NB	NB	NB
mAb14259	340.6±0.2	1.9	NB	NB	NB	NB
mAb15156	447.5±29.5	204.7	3.42E+05	6.61E-05	1.93E-10	174.6
mAb15157	303.7±13.3	42.5	3.02E+05	9.28E-05	3.08E-10	124.5
mAb15158	328.2±11.9	55.1	9.15E+04	1.40E-05	1.53E-10	825.0
mAb15159	307.7±25.7	147.1	8.75E+04	2.02E-05	2.31E-10	571.5
mAb15160	318.2±10.2	55.8	3.04E+05	3.10E-05	1.02E-10	372.6
mAb15161	272±25.5	127	2.80E+05	1.38E-05	4.90E-11	840.0
mAb15162	303.6±18	115.1	1.05E+05	6.79E-05	6.48E-10	170.0
mAb15163	373.8±15.3	97.6	2.14E+05	1.15E-05	5.62E-11	1,002.6
mAb15164	331.2±15.7	107.4	2.98E+05	2.58E-05	8.65E-11	448.0
mAb15165	286.2±19.5	103.9	3.91E+05	1.09E-05	2.79E-11	1,058.7
mAb15166	264.4±15.1	87	2.76E+05	1.74E-04	6.30E-10	66.3
mAb15167	348.2±20.2	114.1	3.36E+05	1.59E-04	4.72E-10	72.8
mAb15170	290±10.6	48.4	1.20E+05	1.29E-05	1.10E-10	893.3
mAb15150	290.2±16	87.6	3.17E+05	1.00E-05	3.15E-11	1,155.0
mAb15151	375.4±21.7	144.9	3.35E+05	6.26E-05	1.87E-10	184.5
mAb1932	806.9±10.9	2.6	NB	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到的結合不符合結合模擬模型，在當前實驗條件下沒有確定結合動力學參數。表 12 ：抗SARS-COV-2單株抗體與三聚SARS-CoV2棘ECD摺疊子融合蛋白在37℃下相互作用的動力學結合參數。

所捕獲之 Mab	mAb 捕獲水準（ RU ）	在 50 nM 下結合之棘三聚體 .his	*k _a*	*k _d*	KD	t½
（ 1/Ms ）	（ 1/s ）	（ M ）	（分鐘）
mAb14312	541.7	500	9.66E+05	5.44E-05	5.63E-11	212.4
mAb14260	519.4	495.3	9.49E+05	5.73E-05	6.04E-11	201.5
mAb14284	865.5	631.1	8.14E+05	2.05E-05	2.51E-11	564.8
mAb14258	518	523.9	1.02E+06	7.93E-05	7.76E-11	145.7
mAb14294	463.8	440.6	6.94E+05	2.29E-05	3.30E-11	503.9
mAb14283	535.5	470	8.65E+05	7.32E-05	8.47E-11	157.8
mAb14235	386.4	396.9	7.35E+05	3.80E-05	5.17E-11	304
mAb14289	463.7	455.7	9.11E+05	6.63E-05	7.28E-11	174.3
mAb13458	548.9	466	8.15E+05	4.08E-05	5.00E-11	283.2
mAb14313	687.8	610.7	1.01E+06	9.94E-05	9.84E-11	116.2
mAb14247	221.2	247	6.74E+05	4.72E-05	7.01E-11	244.6
mAb14315	576.2	457.2	7.43E+05	3.25E-05	4.37E-11	355.7
mAb13459	826.8	632.1	7.94E+05	4.76E-05	5.99E-11	242.9
mAb13457	468.9	452.4	7.67E+05	5.98E-05	7.79E-11	193.3
mAb14257	602.9	684.6	1.17E+06	1.65E-04	1.41E-10	70.1
mAb14255	516.8	575.4	1.03E+06	1.61E-04	1.55E-10	71.9
mAb14286	437.5	539.2	2.59E+06	1.41E-04	5.44E-11	82
mAb14282	497	566.5	1.05E+06	1.71E-04	1.62E-10	67.7
mAb14281	488.8	429.8	8.34E+05	1.16E-04	1.39E-10	99.7
mAb14230	372.3	435.6	9.06E+05	8.97E-05	9.91E-11	128.7
mAb14256	570.7	509.1	7.96E+05	2.42E-04	3.04E-10	47.7
mAb14285	533.8	647.3	1.16E+06	4.18E-05	3.59E-11	276.3
mAb14280	594.3	650.1	9.85E+05	2.86E-05	2.90E-11	403.7
mAb14234	564.5	473.8	6.99E+05	7.16E-05	1.02E-10	161.4
mAb14232	104.1	119.6	7.51E+05	1.33E-04	1.77E-10	87.1
mAb14292	504.7	236.7	5.92E+05	6.82E-03	1.15E-08	1.7
mAb14314	697.7	259.4	4.59E+05	6.48E-03	1.41E-08	1.8
mAb14248	505.9	2	NB	NB	NB	NB
mAb14295	558.8	6.1	NB	NB	NB	NB
mAb14233	558.6	1.5	NB	NB	NB	NB
mAb14287	523.6	5.2	NB	NB	NB	NB
mAb14293	537.9	3.5	NB	NB	NB	NB
mAb14291	511.8	1.1	NB	NB	NB	NB
mAb14249	478.6	2.7	NB	NB	NB	NB
mAb14316	306.5	4.8	NB	NB	NB	NB
mAb14296	660.5	2.5	NB	NB	NB	NB
mAb14231	489.4	2	NB	NB	NB	NB
mAb14288	571.6	2.9	NB	NB	NB	NB
mAb14297	530.7	2.5	NB	NB	NB	NB
mAb14290	457.4	4.3	NB	NB	NB	NB
mAb14259	395.1	3	NB	NB	NB	NB
mAb15156	463.7±4.1	474.1	1.89E+06	2.12E-04	1.12E-10	54.5
mAb15157	307.2±1.0	298.2	1.70E+06	2.40E-04	1.41E-10	48.2
mAb15158	295.7±1.3	224.5	7.58E+05	4.07E-05	5.41E-11	283.6
mAb15159	293.3±2.0	196.2	4.67E+05	3.22E-05	6.86E-11	359.1
mAb15160	400.3±1.4	301.9	1.26E+06	1.67E-04	1.32E-10	69.2
mAb15161	283.7±0.9	281.6	1.48E+06	9.14E-05	6.16E-11	126.4
mAb15162	323.0±1.5	205.5	4.40E+05	1.87E-04	4.25E-10	61.7
mAb15163	343.6±1.3	323.9	1.35E+06	4.85E-05	3.64E-11	238.1
mAb15164	387.4±1.5	379.2	1.78E+06	1.38E-04	7.77E-11	84.0
mAb15165	279.2±1.5	318.7	2.12E+06	1.15E-04	5.42E-11	100.2
mAb15166	265.2±0.5	282.8	1.54E+06	8.32E-05	5.40E-11	138.8
mAb15167	406.6±1.0	446.1	1.76E+06	9.78E-05	5.57E-11	118.1
mAb15170	303.3±1.4	221.3	8.46E+05	1.00E-05	1.18E-11	1,155.0
mAb15150	249.8±1.8	246.8	1.68E+06	3.42E-05	2.02E-11	337.6
mAb15151	595.2±0.8	372.7	1.92E+06	2.48E-04	1.29E-10	46.6
mAb1932	926.9±3.8	11.4	NB	NB	NB	NB

hBST：人類B細胞分選技術 NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。實例 4 ： SARS-CoV-2 野生型及變異體棘蛋白之中和

為了測試抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體是否可中和SARS-CoV-2變異體，此等抗體針對一組表現野生型及變異體棘蛋白之VSV假型病毒進行篩選。重組 VSV 之產生

使用編碼螢火蟲螢光素酶及GFP基因而非天然病毒醣蛋白之VSV基因體（VSV-G）產生非複製性假顆粒。使用標準技術且稍作修改，回收且產生補充有VSV-G之感染性顆粒（VSV-ΔG-Fluc-2A-GFP/VSV-G）。將HEK293T細胞（ATCC CRL-3216）塗鋪於經聚離胺酸處理之盤上，且在不含麩醯胺酸之DMEM（Life Technologies）、10%胎牛血清（Life Technologies）及1%青黴素/鏈黴素/L-麩醯胺酸（Life Technologies）中培育隔夜。第二天，細胞用由T7啟動子驅動之VSV基因體純系及表現VSV-N、VSV-P、VSV-G、VSV-L及T7 RNA聚合酶之輔助質體與Lipofectamine LTX試劑（Life Technologies）進行轉染。48小時後，經轉染細胞與用VSV-G轉染之BHK-21細胞（ATCC CCL-10）在不含麩醯胺酸之DMEM（Life Technologies）、3%胎牛血清（Life Technologies）及1%青黴素/鏈黴素/L-麩醯胺酸（Life Technologies）中使用SE細胞株4D-Nucleofector X套組L（Lonza）共培養。監測細胞之GFP表現或指示病毒複製的細胞病變效應（CPE）。隨後在短暫表現VSV-G之BHK-21細胞中對病毒進行溶斑純化、擴增及滴定。藉由用編碼棘蛋白殘基1-1255之天然SARS-CoV-2序列（NCBI寄存編號MN908947.3）置換VSV醣蛋白來產生完全複製性VSV-SARS-CoV-2-S病毒。如上所述回收VSV-SARS-CoV-2-棘病毒，但HEK293T細胞則與用VSV-G及hACE2兩者轉染之BHK-21細胞共培養。VSV-SARS-CoV-2-S病毒在非洲綠猴腎細胞（Vero cell）（ATCC CCL-81）中進行溶斑純化及滴定，且在非洲綠猴腎E6細胞（ATCC CRL-1586）中擴增。收集後，將兩種病毒之儲備液以3000×g離心5分鐘以澄清，蔗糖緩衝以濃縮10倍，等分且在-80℃下冷凍。 VSV 之假型化

如前所述（Baum等人, 《科學》 2020）產生非複製性假顆粒。將人類密碼子最佳化之SARS-CoV-2棘（NCBI寄存編號MN908947.3）選殖至表現質體中。將總共1.2×107個HEK293T細胞（ATCC CRL-3216）接種於15 cm培養皿中不含麩醯胺酸之DMEM（Life Technologies）中隔夜，該DMEM含有10%加熱不活化胎牛血清（Life Technologies）及青黴素-鏈黴素-L-麩醯胺酸（Life Technologies）。第二天，按照製造商之方案，利用Lipofectamine LTX（Life Technologies）用15 μg棘表現質體轉染細胞。在轉染後24小時，用磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）洗滌細胞，且用稀釋於10 mL Opti-MEM（Life Technologies）中之VSV-ΔG-Fluc-2A-GFP/VSV-G病毒以MOI 1感染細胞。將細胞在37℃及5% CO2下培育1小時。細胞用PBS洗滌三次以移除殘餘輸入病毒，且用含麩醯胺酸之DMEM（Life Technologies）以及0.7%無IgG BSA （西格瑪（Sigma））、丙酮酸鈉（Life Technologies）及建它黴素（Gentamicin）（Life Technologies）覆蓋。在37℃及5% CO ₂下24小時後，收集含有假顆粒之上清液，以3000×g離心5分鐘以澄清，等分且在-80℃下冷凍。使用定點誘變將變異體選殖至棘表現質體中，且如上所述產生假顆粒。 利用基於 VSV 之假顆粒進行的中和分析。

非洲綠猴腎細胞（ATCC: CCL-81）以20,000個細胞/孔接種於96孔黑色、透明底部組織培養處理盤（康寧（Corning）：3904）中不含麩醯胺酸的DMEM培養基（Life Technologies）中，該培養基含有10%加熱不活化牛血清（Life Technologies）及1×青黴素/鏈黴素/L-麩醯胺酸（Life Technologies），24小時後進行分析。在用於分析之前，使細胞達到大約85%之匯合度。抗體在含有含麩醯胺酸之DMEM（Life Technologies）、0.7%低IgG BSA（西格瑪）、1×丙酮酸鈉（Life Technologies）及0.5%建它黴素（Life Technologies）之感染培養基中稀釋至2×分析濃度，且在感染培養基中3倍向下稀釋，用於自3 µg/mL（20 nM）開始的分析中之11點稀釋曲線。將抗體稀釋液與假顆粒在室溫下1:1混合30分鐘，隨後添加至非洲綠猴腎細胞中。細胞在37℃、5% CO ₂下培育24小時。自細胞移出上清液，隨後用100 µL Glo裂解緩衝液（Promega）裂解。隨後添加100 µL再懸浮Bright Glo受質（Promega），且在Spectramax i3x（Molecular Devices）上讀取發光。使用GraphPad Prism（v8.4.1）分析導出的值。

個別單株抗體針對編碼Wuhan-Hu-1（NCBI寄存編號MN908947.3）棘蛋白序列（S-wt）或D614G棘蛋白變異體（SEQ ID NO: 1071）之VSV-SARS-CoV-2棘蛋白（S）表現假病毒的半最大抑制濃度（IC50）在非洲綠猴腎細胞中確定（表13）。大多數抗體顯示皮莫耳範圍（pM）內之中和效力，一些抗體展現奈莫耳（nM）範圍內之中和效力，而一些為非中和抗體。另外，量測針對受關注/感興趣的VSV-SARS-CoV-2棘蛋白（S）特定變異體表現假病毒測試的個別單株抗體的IC50（表14），包括Omicron變異體（個別突變含於表15中之Omicron；表16中之完整Omicron突變組，以及表17中與mAb10933及mAb10987的比較及組合）。在Omicron中和分析中，mAb15160不受影響，而mAb14315之中和略有下降。基於此等結果，mAb14315/mAb15160組合及mAb15160/mAb14256組合維持對Omicron變異體之有效中和。另外，mAb14284、mAb14235及mAb14287為強效中和劑，且不受Omicron變異體的影響，而mAb15151對Omicron變異體之中和具有半對數降低，但基於其強烈中和特性，仍然維持效力。如表中所示，相對於wt或D614G之變化倍數愈低，Omicron突變對中和之影響愈小。額外的mAb15160及mAb14284中和資料呈現於表18及19中，表明此等抗體為不同變異體（包括Omicron譜系）之強效中和劑。表 13 ：非洲綠猴腎細胞中針對 VSV-SARS-CoV-2-S 假顆粒之野生型或 D614G 病毒株的 mAb 中和效力（ IC50 （ M ））

mAb	IC50 （ M ）
mAb13457	2.48E-11
mAb13458	2.61E-11
mAb13459	3.66E-11
mAb14230	2.41E-11
mAb14231	1.02E-09
mAb14232	6.35E-11
mAb14233	5.42E-11
mAb14234	3.98E-11
mAb14235	3.38E-11
mAb14247	5.80E-11
mAb14248	6.20E-11
mAb14249	1.62E-10
mAb14255	3.43E-11
mAb14256	5.47E-11
mAb14257	2.91E-11
mAb14258	5.57E-11
mAb14259	3.72E-11
mAb14260	9.28E-11
mAb14280	2.86E-11
mAb14281	3.35E-11
mAb14282	3.27E-11
mAb14283	5.49E-11
mAb14284	3.14E-11
mAb14285	3.25E-11
mAb14286	約2.616E11
mAb14287	1.99E-10
mAb14288	1.38E-09
mAb14289	4.02E-11
mAb14290	1.20E-09
mAb14291	1.23E-10
mAb14292	5.77E-11
mAb14293	1.10E-09
mAb14294	5.67E-11
mAb14295	1.95E-10
mAb14296	5.26E-10
mAb14297	3.85E-10
mAb14312	4.66E-11
mAb14313	2.72E-10
mAb14314	無活性
mAb14315	4.76E-11
mAb14316	1.29E-10
mAb15156	2.09E-11
mAb15157	3.72E-11
mAb15158	1.24E-10
mAb15159	5.78E-11
mAb15160	4.58E-11
mAb15161	4.91E-11
mAb15162	1.11E-10
mAb15163	6.28E-11
mAb15164	2.48E-11
mAb15165	2.96E-11
mAb15166	1.61E-11
mAb15167	2.95E-11
mAb15170	1.22E-10
mAb15150	6.21E-11
mAb15151	7.09E-12

斜體之IC50值使用D614G棘蛋白確定。表 14 ：非洲綠猴腎細胞中關注 / 感興趣的變異體（ VOC/VOI ）變異體之假顆粒中和 IC50 （ M ）

mAb	B.1.1.7	B.1.351	P.1	E484K	L452R
	IC50	FC	IC50	FC	IC50	FC	IC50	FC	IC50	FC
mAb 14255	1.8E-11	1.2	3.9E-11	1.9	4.1E-11	1.7	4.5E-11	2.8	2.9E-11	1.4
mAb 14256	4.3E-11	1.0	1.5E-11	0.4	1.3E-11	0.3	1.6E-11	0.8	2.8E-11	0.7
mAb 14257	1.1E-11	1.6	1.7E-08	＞48988	ND	ND	NA	＞2640	ND	ND
mAb 14258	1.0E-10	1.5	NA	＞1754	ND	ND	NA	＞794	ND	ND
mAb 14312	ND	ND	2.9E-10	9.3	ND	ND	ND	ND	7E-11	2.2
mAb 14315	8.0E-11	2.7	9.8E-12	0.3	4.1E-11	0.6	1.5E-11	0.5	4.2E-11	1.0
mAb 15156	3.1E-11	1.5	4.8E-12	0.2	ND	ND	ND	ND	3.7E-11	1.4
mAb 15157	5.7E-11	1.5	1.4E-11	0.4	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15158	1.1E-10	0.9	2.1E-08	172	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15159	7.7E-11	1.3	2.6E-11	0.5	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15160	5.3E-11	1.2	1.1E-11	0.2	ND	ND	ND	ND	5.8E-11	1.6
mAb 15161	7.2E-11	1.5	1.5E-11	0.3	ND	ND	ND	ND	5.9E-11	1.1
mAb 15162	7.5E-11	0.7	4.2E-11	0.4	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15163	6.5E-11	1.0	2.5E-10	4.0	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15164	2.7E-11	1.1	2.6E-11	1.0	ND	ND	ND	ND	3.0E-11	2.0
mAb 15165	2.9E-11	1.0	1.6E-11	0.6	ND	ND	ND	ND	2.9E-11	2.2
mAb 15166	2.4E-11	1.5	1.9E-10	12.0	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15167	2.9E-11	1.0	3.1E-10	10.4	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15170	9.5E-11	0.8	8.9E-11	0.7	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15150	8.3E-11	1.3	5.7E-12	0.1	ND	ND	ND	ND	ND	ND
mAb 15151	1.1E-11	1.0	5.4E-12	0.8	ND	ND	2.3E-11	2.1	2E-11	0.9

評估完整B.1.1.7（H69del、V70del、Y145del、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、D1118H）、B.1.351（D80Y、D215Y、L241del、L242del、A243del、L242del、K417N、E484K、N501Y、D614G、A701V）及P.1（L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、E484K、N501Y、D614G、H655Y、T1027I、V1176F）變異體。評估來自B.1.429（L452R）及B.1.526（E484K）譜系之關鍵RBD殘基。效力之降低倍數（FC）相對於來自相同分析之wt或D614G對照計算 NA：無活性 ND：未確定表 15 ：非洲綠猴腎細胞中變異體之假顆粒中和 IC50 （ M ）及變化倍數

棘蛋白	mAb14256	mAb14315	mAb15160	mAb10985
WT/D614G （ IC50 ）	2.606E-11	2.95E-11	4.58E-11	2.17E-10
K417N（FC）	1.46	0.66	0.86	1.38
N440K（FC）	2.51	0.94	ND	1.41
S477N（FC）	1.01	0.60	1.01	1.32
T478K（FC）	0.81	0.96	1.98	0.98
Q493R（FC）	0.86	0.45	ND	0.38
N501Y（FC）	1.06	ND	1.81	1.28

斜體：各抗體針對wt或D614G對照棘蛋白之IC50值效力之降低倍數（FC）相對於來自相同分析之wt或D614G對照計算 ND：未確定表 16 ：非洲綠猴腎細胞中 Omicron 變異體 SARS-CoV-2 之假顆粒中和 IC50 （ M ）、 IC90 （ M ）及 IC50 變化倍數

SARS-CoV-2 棘醣蛋白	mAb14256	mAb14315	mAb15160	mAb15160 + mAb14315	mAb14256 + mAb15160
D614G（對照）IC50（IC90，若提供）	5.33E-11（4.08E-10）	4.97E-11	2.95E-11	4.76E-11	4.84E-11
Omicron IC50（IC90，若提供）	NC（NC）	1.45E-10	1.71E-11	6.47E-11	1.02E-10
D614G（對照）IC50 FC（log10 FC）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）
Omicron IC50 FC（log10 FC）	375.38 （2.57 ）	2.91（0.46）	0.58（-0.24）	1.36（0.13）	2.10（0.32）

表 16 （續）

SARS-CoV-2 棘醣蛋白	mAb14284	mAb14235	mAb14294	mAb14234	mAb14312
D614G（對照）	8.25E-12	3.79E-12	5.00E-12	2.38E-12	1.00E-12
Omicron	1.03E-11	6.84E-12	6.67E-12	2.62E-12	7.94E-13
D614G（對照）IC50 FC（log10 FC）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）
Omicron IC50 FC（log10 FC）	1.25（0.10）	1.81（0.26）	1418.80（3.15）	21.82（1.34）	5287.59（3.72）

表 16 （續）

SARS-CoV-2 棘醣蛋白	mAb15170	mAb15162	mAb15150	mAb15151	mAb15159	mAb15161
D614G（對照）	6.41E-12	4.31E-12	8.52E-13	7.78E-13	4.34E-12	1.92E-12
Omicron	6.11E-12	7.25E-12	1.23E-12	2.44E-12	5.05E-12	1.08E-12
D614G（對照）IC50 FC（log10 FC）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）
Omicron IC50 FC（log10 FC）	37.20（1.57）	27.88（1.45）	392.47（2.59）	3.14（0.50）	214.77（2.33）	160.43（2.21）

SARS-CoV-2 棘醣蛋白	mAb15157	mAb15156	mAb14287	mAb14297
D614G（對照）	1.01E-12	4.62E-13	2.18E-12	9.72E-12
Omicron	1.15E-12	4.96E-13	4.42E-12	NC
D614G（對照）IC50 FC（log10 FC）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）	1.00（0.00）
Omicron IC50 FC（log10 FC）	19841.27 （4.30 ）	74.72（1.87）	0.20（-0.69）	2058.67 （3.31 ）

所用之Omicron棘蛋白包含SEQ ID NO: 1073以下突變：A67V、Δ69-70、T95I、G142D/Δ143-145、Δ211/L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F NC：由於無活性而未計算IC50 FC：相對於D614G對照計算之變化倍數粗體及帶底線之值：變化倍數為至少此值，計算為最高分析濃度/D614G IC50；分析中之最高濃度為2.00E-08 表 17 ：非洲綠猴腎細胞中 Omicron 變異體（ B.1.1.529/BA.1 ） SARS-CoV-2 之假顆粒中和 IC50 （ M ）及 IC50 變化倍數

	mAb10933 + mAb10987	mAb15160	mAb15160 + mAb10933 + mAb10987 2:1:1 （推斷值）
變異體 ^a	IC ₅₀ （ M ）	相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之降低倍數 ^b	IC ₅₀ （ M ）	相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之降低倍數 ^b	IC ₅₀ （ M ）	相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之降低倍數 ^b
D614G 對照	9.91E-12	1.0	1.92E-11	1.0	3.84E-11	1.0
B.1.1.529/BA.1 （ Omicron ）	NC	＞2018.98 ^c	3.18E-11	1.65	6.36E-11	3.3

^a相對於Wuhan譜系S蛋白之胺基酸取代： B.1.1.529/BA.1（A67V、del69-70、T95I、G142D/del143-145、del211/L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F） ^b相對於參考（ref）D614G病毒之降低倍數藉由將特定變異體存在時由抗體產生之IC ₅₀值除以來自同一分析之參考病毒存在時由抗體產生之IC ₅₀值來計算。 ^c在無法準確計算IC ₅₀值之情況下，各突變體存在時mAb效力之變化藉由將所測試之最大抗體濃度（20 nM）除以針對參考D614G VLP計算之IC ₅₀值來計算。實際變化倍數為至少指示值之變化倍數。縮寫：NC，由於中和不良或缺乏而未計算表 18 ：mAb15160介導之對經S蛋白變異體假型化之pVSV-Luc-SARS-CoV-2-S進入非洲綠猴腎細胞之中和的IC ₅₀及IC ₉₀值

SARS - CoV - 2 S 蛋白變異體

mAb15160

mAb10933 （卡斯瑞韋單抗）

mAb10987 （依米得韋單抗）

卡斯瑞韋單抗+ 依米得韋單抗

IC ₅₀[M]

IC ₉₀[M]

相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之變化倍數

IC ₅₀[M]

IC ₉₀[M]

相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之變化倍數

IC ₅₀[M]

IC ₉₀[M]

相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之變化倍數

IC ₅₀[M]

IC ₉₀[M]

相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之變化倍數

受監測變異體之完整序列或關鍵殘基 ^a 及其他多變異體譜系

B.1.1.7（Alpha）

5.28E-11

2.21E-10

1.15

2.26E-11

2.23E-10

0.69

1.71E-11

9.31E-11

0.41

1.11E-11

9.09E-11

0.46

B.1.351（Beta）

1.07E-11

1.70E-10

0.23

2.87E-09

2.68E-08

87.97

2.12E-11

4.43E-11

0.51

2.67E-11

2.54E-10

1.11

P.1（Gamma）

1.02E-11

6.55E-11

0.48

7.52E-09

3.16E-07

167.54

4.58E-12

6.46E-11

0.18

1.01E-11

7.63E-11

1.16

B.1.617.2（Delta）

2.80E-11

1.55E-10

3.07

4.32E-12

4.23E-11

0.55

1.04E-11

2.11E-10

1.26

7.45E-12

5.02E-11

1.06

K417N+L452R+T478K（AY.1 [Delta]）

5.61E-12

1.04E-10

0.16

1.81E-11

5.01E-10

1.23

8.08E-12

1.46E-10

0.58

7.50E-12

5.53E-11

0.55

L145H+A222V+L452R+T478K（AY4.2 [Delta]）

2.32E-11

1.82E-10

1.73

1.15E-11

8.27E-11

0.70

3.60E-11

6.57E-10

1.94

1.55E-11

7.38E-11

1.51

L452R（B.1.427/B.1.429 [Epsilon]）

5.83E-11

2.24E-10

1.55

5.60E-11

3.17E-10

0.76

7.83E-11

7.26E-10

1.03

4.96E-11

1.64E-10

1.15

E484K ^（ ^{B.1.526 [Iota]} ^）

5.97E-11

4.83E-10

2.84

2.49E-10

3.53E-09

5.55

2.62E-11

4.30E-10

1.01

3.20E-11

1.60E-10

3.67

B.1.617.1（Kappa）

2.98E-11

1.76E-10

2.98

1.14E-10

1.06E-09

22.12

1.51E-11

1.63E-10

1.68

2.45E-11

9.08E-11

3.07

F490S+L452Q（C.37 [Lambda]）

2.64E-11

2.35E-10

0.73

1.37E-11

1.73E-10

0.93

4.23E-11

5.72E-10

3.05

1.53E-11

1.23E-10

1.12

R346K+E484K+N501Y（B.1.621 [Mu]）

2.52E-11

2.95E-10

1.71

2.10E-10

1.74E-09

19.22

9.03E-12

1.00E-10

0.60

1.44E-11

1.54E-10

1.29

BA.1（Omicron）

1.84E-11

1.80E-10

1.05

NC

＞1731.60 ^b

NC

＞754.43 ^b

NC

＞1012.66 ^b

BA.1.1（Omicron）

2.26E-11

1.57E-10

0.96

NC

＞1336.01 ^b

NC

＞1108.65 ^b

NC

＞1460.92 ^b

BA.2（Omicron）

1.46E-11

1.53E-10

2.08

6.80E-09

8.04E-08

461.82

2.19E-09

1.99E-08

158.12

2.60E-09

1.82E-08

190.26

BA.2.12.1 （Omicron）

5.63E-11

4.67E-10

2.22

NC

＞702.26

3.18E-09

1.79E-08

137.46

4.77E-09

1.71E-08

275.13

BA.3 （Omicron）

6.06E-11

1.16E-09

3.34

NC

1258.65

NC

899.69

NC

1456.66

BA.4/BA.5 （Omicron）

NC

＞701.48

NC

652.76

1.38E-09

1.10E-08

54.10

3.67E-09

1.91E-08

200.81

N439K+E484K（AV.1）

3.57E-11

4.00E-10

3.92

1.22E-10

1.98E-09

15.58

NC

＞2417.79 ^b

4.23E-10

2.99E-09

60.04

N440K+E484K（B.1.619, B.1.619.1, B.1.625）

3.25E-11

4.37E-10

3.57

2.03E-10

2.41E-09

25.89

1.85E-09

1.07E-07

223.53

2.76E-10

1.60E-09

39.20

C.1.2

3.75E-11

2.03E-10

2.79

1.76E-10

1.22E-09

10.69

8.62E-12

8.51E-11

0.46

1.57E-11

8.03E-11

1.53

所有單突變變異體

Y145H

1.88E-11

1.03E-10

1.40

1.61E-11

7.83E-11

0.98

2.13E-11

1.51E-10

1.15

1.46E-11

4.36E-11

1.43

W152C

1.24E-11

1.60E-10

0.34

4.99E-12

1.37E-10

0.34

9.60E-12

1.05E-10

0.69

8.86E-12

1.01E-10

0.65

V308L

2.86E-11

2.58E-10

0.79

1.39E-11

1.46E-10

0.95

1.62E-11

1.60E-10

1.17

1.23E-11

1.05E-10

0.90

G339D

5.47E-11

2.42E-10

1.46

2.54E-11

2.26E-10

0.94

2.52E-11

1.98E-10

1.00

2.22E-11

9.66E-11

1.43

E340A

2.16E-11

2.02E-10

0.74

2.36E-11

1.10E-10

0.78

2.13E-11

2.26E-10

0.59

1.48E-11

1.02E-10

1.22

E340K

2.54E-11

1.81E-10

0.86

1.98E-11

1.95E-10

0.65

1.63E-11

4.20E-10

0.45

1.13E-11

1.36E-10

0.93

R346K

3.95E-11

2.56E-10

2.99

2.45E-11

1.48E-10

1.44

2.90E-11

1.85E-10

2.51

2.10E-11

8.42E-11

2.39

R346S

3.21E-11

1.65E-10

1.36

2.31E-11

1.34E-10

1.54

2.76E-11

2.28E-10

1.53

1.90E-11

8.63E-11

1.39

S371L

2.62E-10

1.01E-09

7.00

1.37E-10

3.99E-10

5.07

1.78E-10

6.48E-10

7.07

9.21E-11

2.52E-10

5.96

A372T

3.00E-12

1.57E-10

0.16

2.01E-13

7.46E-12

0.05

4.09E-12

8.55E-11

0.35

3.46E-12

4.35E-11

0.35

S373P

3.58E-11

1.66E-10

0.96

1.90E-11

1.07E-10

0.71

1.88E-11

1.16E-10

0.74

1.26E-11

7.11E-11

0.82

S375F

1.72E-11

7.65E-11

0.46

8.68E-12

1.13E-10

0.32

7.45E-12

2.75E-11

0.30

5.17E-12

4.04E-11

0.33

D389Y

6.90E-12

6.82E-11

0.17

2.24E-12

3.73E-11

0.12

5.74E-12

8.36E-11

0.41

4.69E-12

3.96E-11

0.24

D405N

3.26E-11

2.10E-10

1.38

3.06E-11

2.69E-10

2.04

1.29E-11

1.78E-10

0.71

1.73E-11

7.98E-11

1.27

E406D

1.91E-11

2.51E-10

1.91

5.69E-10

5.05E-09

110.30

2.08E-11

4.32E-10

2.31

3.67E-11

4.50E-10

4.60

E406Q

2.05E-11

1.72E-10

2.07

1.07E-09

6.74E-09

255.89

1.12E-11

1.63E-10

2.32

2.10E-11

2.99E-10

11.37

K417N

2.47E-11

2.29E-10

1.27

8.96E-11

1.15E-09

8.74

6.22E-12

7.65E-11

1.35

1.35E-11

5.16E-11

1.54

K417R ^c

5.04E-12

1.96E-11

2.37

4.10E-09

2.96E-08

61.23

2.92E-11

2.92E-10

1.70

1.24E-10

6.59E-10

2.45

N439K

2.13E-11

1.06E-10

0.57

4.47E-11

4.31E-10

0.60

1.77E-08

1.12E-07

231.51

7.25E-11

2.50E-10

1.69

N440D

5.41E-11

3.94E-10

2.28

1.69E-11

2.09E-10

1.04

1.92E-09

1.42E-08

119.13

6.71E-11

4.36E-10

4.90

N440K

2.44E-11

2.06E-10

1.26

1.02E-11

1.22E-10

0.99

1.34E-09

1.57E-08

291.40

1.88E-11

3.28E-10

2.15

V445T

2.23E-11

1.85E-10

0.94

2.27E-11

1.82E-10

1.52

7.25E-09

6.14E-08

401.72

4.86E-11

4.00E-10

3.55

G446D

1.58E-11

2.80E-10

0.44

1.75E-11

1.79E-10

1.19

7.66E-09

3.38E-08

553.07

3.52E-11

2.71E-10

2.58

G446R

2.59E-11

1.72E-10

1.09

1.09E-11

1.05E-10

0.68

4.41E-09

4.26E-08

273.91

4.36E-11

2.74E-10

3.18

G446S

1.13E-11

1.74E-10

0.58

8.70E-12

7.95E-11

0.85

4.24E-09

1.61E-08

920.25

1.95E-11

2.24E-10

2.23

Y449F

2.03E-11

2.25E-10

0.64

8.48E-12

6.34E-11

0.59

1.07E-11

9.56E-11

0.96

6.23E-12

4.90E-11

0.82

Y449H

3.68E-11

2.12E-10

1.26

2.74E-11

1.56E-10

0.91

3.11E-12

6.68E-11

0.09

1.42E-11

1.43E-10

1.17

Y449N

2.68E-11

2.64E-10

1.13

1.23E-11

1.16E-10

0.82

5.14E-12

3.84E-11

0.28

7.83E-12

3.38E-11

0.57

N450K

4.75E-11

2.88E-10

0.83

4.40E-11

1.97E-10

0.91

2.95E-11

1.60E-10

0.84

3.18E-11

1.07E-10

0.91

L452R

5.83E-11

2.24E-10

1.55

5.60E-11

3.17E-10

0.76

7.83E-11

7.26E-10

1.03

4.96E-11

1.64E-10

1.15

L455F

3.15E-11

3.00E-10

0.78

7.69E-09

9.21E-08

426.00

1.93E-11

1.05E-10

1.39

2.73E-11

2.94E-10

1.39

K458N

4.50E-11

2.76E-10

1.86

1.76E-11

1.89E-10

1.14

1.92E-11

1.38E-10

1.60

1.39E-11

7.82E-11

2.58

K458R

2.20E-11

1.94E-10

2.77

7.59E-12

1.09E-10

1.36

7.71E-12

1.57E-10

0.96

6.58E-12

9.08E-11

1.28

A475V

1.47E-11

1.09E-10

0.61

1.48E-11

1.49E-10

0.96

1.05E-11

8.96E-11

0.88

8.43E-12

5.26E-11

1.56

S477N

3.78E-11

1.47E-10

1.01

9.78E-11

4.22E-10

1.32

6.54E-11

4.44E-10

0.86

4.15E-11

1.68E-10

0.97

S477R

3.87E-11

2.16E-10

1.60

1.29E-11

1.14E-10

0.84

3.19E-11

1.70E-10

2.67

1.19E-11

6.78E-11

2.19

T478I

4.19E-11

2.76E-10

1.73

2.44E-11

1.84E-10

1.58

2.42E-11

1.73E-10

2.02

1.58E-11

9.96E-11

2.93

T478K

2.45E-11

1.87E-10

1.26

7.11E-12

9.04E-11

0.69

1.23E-11

2.96E-10

2.66

6.28E-12

6.43E-11

0.72

P479S

2.63E-11

1.88E-10

1.09

2.31E-11

1.76E-10

1.50

2.12E-11

1.56E-10

1.77

1.03E-11

6.23E-11

1.90

E484A

5.09E-11

2.73E-10

1.36

1.03E-10

7.12E-10

3.83

1.10E-11

1.04E-10

0.43

1.87E-11

1.04E-10

1.21

E484K

5.97E-11

4.83E-10

2.84

2.49E-10

3.53E-09

5.55

2.62E-11

4.30E-10

1.01

3.20E-11

1.60E-10

3.67

G485S

2.30E-11

1.31E-10

0.97

4.24E-11

3.46E-10

2.83

1.23E-11

1.10E-10

0.68

1.93E-11

6.01E-11

1.41

F486V

NC

＞531.21 ^b

NC

＞269.61 ^b

5.75E-11

2.40E-10

0.75

9.85E-11

3.68E-10

2.29

Y489H

2.53E-09

6.61E-09

121.48

NC

＞2311.60 ^b

3.55E-12

7.16E-11

0.35

2.15E-11

2.42E-10

2.57

F490L

5.68E-11

2.08E-10

1.94

2.96E-11

1.69E-10

0.98

2.37E-11

1.51E-10

0.65

1.43E-11

1.53E-10

1.18

F490S

1.76E-11

2.69E-10

0.60

2.53E-11

1.45E-10

0.84

7.24E-12

4.51E-10

0.20

1.65E-11

1.81E-10

1.36

F490Y

1.86E-11

1.67E-10

0.79

9.70E-12

1.47E-10

0.65

1.33E-11

1.51E-10

0.74

1.62E-11

7.39E-11

1.18

Q493E

8.85E-12

6.10E-11

1.11

NC

＞3588.73 ^b

1.34E-11

8.69E-11

1.67

3.05E-11

2.69E-10

5.95

Q493K

4.57E-11

6.68E-10

3.40

6.25E-09

1.31E-07

378.67

1.77E-11

1.53E-10

0.95

4.22E-11

3.40E-10

4.11

Q493R

9.47E-11

5.79E-10

4.88

8.68E-10

8.94E-09

84.71

1.76E-11

1.12E-10

3.82

2.79E-11

2.56E-10

3.18

G496S

4.53E-11

1.72E-10

1.21

2.25E-11

1.07E-10

0.83

1.28E-10

9.49E-10

5.08

2.66E-11

9.64E-11

1.72

Q498R

4.72E-11

2.55E-10

1.26

1.89E-11

2.02E-10

0.70

1.93E-11

2.00E-10

0.77

1.53E-11

7.85E-11

0.99

T500A

1.18E-12

6.09E-10

0.12

3.74E-12

3.45E-10

0.90

4.91E-11

4.77E-10

10.21

9.85E-12

1.05E-10

5.32

T500F

8.35E-12

1.97E-10

0.84

2.76E-12

8.39E-11

0.66

1.70E-12

2.56E-11

0.35

2.54E-12

1.90E-11

1.37

N501Y

5.40E-11

2.79E-10

2.78

2.13E-11

2.08E-10

2.08

6.85E-12

8.63E-11

1.49

1.03E-11

5.18E-11

1.17

Y505F

4.34E-11

3.08E-10

1.07

2.06E-11

2.27E-10

1.14

1.84E-11

1.50E-10

1.32

1.62E-11

1.10E-10

0.82

Y505H

2.84E-11

1.64E-10

0.76

1.40E-11

8.52E-11

0.52

9.54E-12

5.75E-11

0.38

1.40E-11

5.52E-11

0.91

^a來自受監測變異體之S蛋白的完整序列及/或關鍵殘基；完整S蛋白序列： B.1.1.7（H69del、V70del、Y145del、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、D1118H）、 B.1.351（D80Y、D215G、L241del、L242del、A243del、K417N、E484K、N501Y、D614G、A701V）、 P.1（L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、E484K、N501Y、D614G、H655Y、T1027I、V1176F）、 B.1.617.2（T19R、G142D、E156G、F157del、R158del、L452R、T478K、D614G、P681R、D950N）、 B.1.617.1（T95I、G142D、E154K、L452R、E484Q、D614G、P681R、Q1071H）、 BA.1（A67V、del69-70、T95I、G142D/del143-145、del211/L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F）、 BA.1.1（BA.1+R346K）、 BA.2（T19I、del24-26、A27S、G142D、V213G、G339D、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、R408S、K417N、N440K、S477N、T478K、E484A、Q493R、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、Q954H、N969K）；關鍵S蛋白殘基： AY.1（K417N+L452R+T478K）、 AY4.2（Y145H+A222V+L452R+T478K）、 B.1.427/B.1.429（L452R）、 B.1.526（E484K）、 B.1.621（R346K+E484K+N501Y）、 AV.1（N439K+E484K）、 B.1.619/B.1.619.1/B.1.625（N440K+E484K）、 C.1.2（Y449H+E484K+N501Y）。 ^b在無法準確計算IC ₅₀值之情況下，各突變體存在時mAb效力之變化藉由將所測試之最大抗體濃度（20 nM）除以參考pVSV‑SARS-CoV-2-S假顆粒存在時對卡斯瑞韋單抗、依米得韋單抗或卡斯瑞韋單抗+依米得韋單抗計算的IC ₅₀值來計算。 ^cmAb15160及依米得韋單抗中和此變異體之IC ₅₀及IC ₉₀值與不同於卡斯瑞韋單抗及卡斯瑞韋單抗+依米得韋單抗的參考病毒資料集進行比較。 del，缺失；ins，插入；NA，不適用；NC，因中和不良或缺乏而未計算；NT，未測試相對於D614G對照計算之變化倍數表 19 ：REGN14284介導之對經S蛋白變異體假型化之pVSV-Luc-SARS-CoV-2-S進入非洲綠猴腎細胞之中和的IC ₅₀及IC ₉₀值概述

SARS-CoV-2 S 蛋白變異體	IC ₅₀[M]	IC ₉₀[M]	相對於Ref 病毒IC ₅₀ 之變化倍數
受監測變異體之完整序列或關鍵殘基 ^a 及其他多變異體譜系
Alpha	B.1.1.7 ^a	1.14E-11	7.58E-11	1.14
Beta	B.1.351 ^a	9.73E-12	6.15E-11	0.98
Gamma	P.1 ^a	8.34E-12	7.52E-11	0.84
Delta	B.1.617.2 ^a	6.09E-12	6.07E-11	0.69
K417N+L452R+T478K（AY.1）*	3.42E-12	3.53E-11	0.50
Y145H+A222V+ L452R+T478K（AY4.2）	2.53E-11	2.34E-10	0.75
Epsilon	W152C+L452R（B.1.427/B.1.429）	1.28E-11	9.23E-11	1.18
^Iota	E484K ^（ ^B.1.526 ^）	5.40E-11	5.30E-10	1.61
Kappa	B.1.617.1 ^a	4.24E-11	3.84E-10	1.26
Lambda	F490S+L452Q（C.37）*	1.20E-11	1.58E-10	1.17
Mu	R346K+E484K+N501Y（B.1.621）	9.89E-12	8.66E-11	0.99
Omicron	BA.1 ^a*	8.86E-12	1.09E-10	1.63
BA.1.1 ^a	1.00E-11	1.03E-10	0.58
BA.2 ^a*	1.13E-11	1.54E-10	0.98
BA.2.12.1 ^a*	2.55E-11	2.12E-10	1.40
BA.3 ^a	2.22E-11	4.41E-10	2.52
BA.4/BA.5 ^a*	1.85E-11	1.89E-10	0.79
NA	C.1.2	3.16E-11	3.20E-10	0.94
所有單突變變異體
W152C	9.40E-12	6.46E-11	0.81
S247R	3.70E-12	3.53E-11	0.90
V308L	1.38E-11	1.30E-10	1.19
N334D	6.69E-12	1.75E-10	1.01
G339D	4.01E-11	2.86E-10	1.68
E340A	1.43E-11	1.28E-10	1.86
E340K	1.16E-11	8.07E-11	1.51
R346K	1.04E-11	9.43E-11	1.41
R346S	2.73E-11	1.05E-10	1.59
S371F	4.66E-11	2.80E-10	12.75
S371Y	4.00E-11	3.21E-10	7.78
A372T	1.16E-11	1.14E-10	1.56
T376A	2.64E-12	4.44E-11	0.72
T376S	1.54E-11	1.59E-10	0.65
D405N	8.15E-12	7.93E-11	0.47
E406W	1.67E-11	4.82E-10	1.91
R408S	9.12E-12	6.38E-11	2.49
K417T	6.45E-12	7.44E-11	1.76
Y421F	4.47E-12	8.04E-11	0.51
N439K	4.13E-11	8.23E-10	1.98
N439V	1.59E-11	1.97E-10	0.76
N440D	5.16E-11	5.34E-10	2.47
N440K	3.09E-11	7.31E-10	1.48
L441F	1.80E-11	1.36E-10	0.86
L441Q	2.78E-11	2.69E-10	1.33
K444L	NC	NC	＞957.40 ^b
K444M	5.23E-10	5.92E-09	25.03
K444N	NC	NC	＞957.40 ^b
K444Q	4.93E-09	5.90E-08	236.00
K444R	4.33E-12	4.92E-11	1.54
K444T	NC	NC	＞5599.10 ^b
V445A	1.88E-10	2.81E-09	57.18
V445T	9.18E-10	8.56E-09	53.44
G446D	2.34E-10	1.94E-09	20.28
G446R	3.37E-11	2.51E-10	10.23
G446S	8.96E-12	6.40E-11	2.72
G446V	3.38E-11	7.30E-10	9.46
G447V	2.35E-11	3.12E-10	8.34
N448S	2.62E-12	4.64E-11	0.30
Y449D	8.48E-12	1.01E-10	2.57
Y449F	7.32E-12	4.74E-11	0.85
Y449H	1.04E-11	8.45E-11	1.36
Y449N	7.92E-12	9.05E-11	0.46
Y449S	8.70E-12	8.60E-11	2.64
N450K	8.36E-12	1.19E-10	0.72
L452M	8.87E-12	6.13E-11	2.16
L452Q	2.61E-11	1.79E-10	1.10
L452R	5.49E-11	7.32E-10	1.63
F456L	5.87E-12	1.05E-10	0.67
Y473F	6.01E-12	8.57E-11	0.68
A475V	7.47E-12	8.37E-11	0.65
S477N	1.37E-11	2.02E-10	1.70
T478K	1.34E-11	1.69E-10	1.66
E484A	1.38E-11	1.74E-10	0.58
E484K	5.40E-11	5.30E-10	1.61
E484Q	3.04E-12	4.51E-11	0.35
G485S	8.52E-12	9.47E-11	0.50
G485V	9.62E-12	9.33E-11	1.10
F486S	1.79E-11	5.36E-10	2.03
F486V	6.23E-11	3.18E-10	7.72
Y489H	8.93E-13	4.43E-11	0.15
F490L	2.12E-11	1.41E-10	2.76
F490S	2.04E-11	1.19E-10	2.65
F490Y	1.20E-11	7.26E-11	0.70
Q498H	1.10E-11	1.41E-10	3.09
Q498R	2.24E-11	1.35E-10	0.94
T500A	1.46E-11	1.02E-10	4.07
T500F	8.56E-12	3.85E-11	2.40
T500N	2.28E-11	1.52E-10	3.45
N501T	5.57E-12	3.47E-11	1.69
N501Y	1.22E-11	1.42E-10	1.51
Y505H	2.46E-11	2.00E-10	1.03

*所示變異體/參考病毒之值代表至少3次重複分析的幾何平均值。 ^a受監測變異體之完整S蛋白序列及/或關鍵殘基經評估。經評估之關鍵殘基及其代表之譜系示於表中。完整序列在表中用註腳『a』表示，且在Wuhan-Hu-1 S蛋白參考序列中含有以下取代： B.1.1.7（H69del、V70del、Y145del、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、D1118H）、 B.1.351（D80Y、D215G、L241del、L242del、A243del、K417N、E484K、N501Y、D614G、A701V）、 P.1（L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、E484K、N501Y、D614G、H655Y、T1027I、V1176F）、 B.1.617.2（T19R、G142D、E156G、F157del、R158del、L452R、T478K、D614G、P681R、D950N）、 B.1.617.1（T95I、G142D、E154K、L452R、E484Q、D614G、P681R、Q1071H）、 BA.1（A67V、del69-70、T95I、G142D/del143-145、del211/L212I、ins214EPE、G339D、S371L、S373P、S375F、K417N、N440K、G446S、S477N、T478K、E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、Q954H、N969K、L981F）、 BA.1.1（BA.1+R346K）、 BA.2（T19I、del24-26、A27S、G142D、V213G、G339D、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、R408S、K417N、N440K、S477N、T478K、E484A、Q493R、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、Q954H、N969K）、 BA.2.12.1（BA.2+L452Q）、 BA.3（G142D、G339D、S371F、S373P、S375F、D405N、K417N D614G、H655Y、N679K、P681H、D796Y、Q954H、N969K）、 BA.4/BA.5（兩個譜系具有相同的S蛋白序列[T19I、L24del、P25del、P26del、A27S、H69del、V70del、G142D、V213G、G339D、S371F、S373P、S375F、T376A、D405N、R408S、K417N、N440K、L452R、S477N、T478K、E484A、F486V、Q498R、N501Y、Y505H、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、Q954H、N969K]） ^b在無法準確計算IC ₅₀值之情況下，各突變體存在時mAb效力之變化藉由將所測試之最大抗體濃度（20 nM）除以參考pVSV-SARS-CoV-2-S假顆粒存在時對抗體計算之IC ₅₀值來計算。 del，缺失；ins，插入；NC，由於中和不良或缺乏而未計算 mAb14284在大約300fM至20nM之濃度範圍內測試。相對於參考（ref）病毒之變化倍數藉由將特定變異體存在時確定之抗體的IC ₅₀值除以來自同一分析之參考假顆粒（經D614G突變假型化之pVSV-SARS-CoV-2）存在時確定之抗體的IC ₅₀值來計算。實例 5 ：藉由 ELISA 確定的抗 SARS-CoV-2 抗體阻斷 RBD 與 hACE2 之結合

基於ELISA之阻斷分析用於確定抗SARS-CoV-2抗體阻斷SARS-COV-2棘蛋白受體結合域（RBD）與其受體人類血管收縮素轉換酶2（hACE2）結合的能力。

此分析中使用之SARS-CoV-2蛋白包含SARS-CoV-2棘蛋白之受體結合域（RBD）部分（胺基酸Arg319-Phe541），其表現成具有C端myc-myc-6-組胺酸標籤（SARS-CoV-2 RBD.mmh）。實驗中使用之人類ACE-2蛋白購自R&D Systems，包含人類ACE-2胞外域之一部分（胺基酸Leu18-Ser740）及C端10-組胺酸標籤（hACE-2-10His；ACE2 NCBI寄存編號Q9BYF1)。

使用以下程序進行實驗。將hACE-2-10His受體以2 µg/ml在PBS中塗佈於96孔微量滴定盤上，在4℃下隔夜。隨後使用0.5%（w/v）BSA於PBS中之溶液阻斷非特異性結合位點。在其他微量滴定盤中，恆定量300 pM之SARS-CoV-2 RBD.mmh蛋白與抗SARS-COV-2-S抗體或不相關的人類IgG1抗體對照以1.7 pM至100 nM之稀釋度在PBS + 0.5% BSA中結合一小時。選擇SARS-CoV-2 RBD之固定濃度接近與盤黏附之hACE-2產生最大結合之50%的濃度（EC50值）。將抗體-蛋白質複合物轉移至微量滴定盤塗佈之hACE-2-10His。在室溫下培育1小時後，洗滌孔，且用與辣根過氧化酶（HRP）（NovusBio）結合之多株山羊抗myc抗體偵測盤結合之SARS-COV-2 RBD.mmh。隨後根據製造商推薦之程序使用TMB受質溶液（BD Biosciences，#51-2606KC及#51-2607KC）對盤進行顯影，且在Victor X5讀盤器（PerkinElmer，Shelton CT）上量測450 nm處之吸光度。

使用Prism™軟體（GraphPad）內之S型劑量反應模型分析結合資料。計算出的IC50值定義為阻斷SARS-CoV-2 RBD與盤塗佈之hACE2結合之50%所需的抗體濃度，用作阻斷效力之指標。根據下式計算給定濃度下抗SARS-CoV-2-S抗體之阻斷百分比：

阻斷%	= 100 - (	[實驗信號 ₍ _最高 _Ab _濃度 ₎-背景信號 ₍ _緩衝 ₎]	×100)
[最大信號 ₍ _單獨 _hEGF.mFc)-背景信號 ₍ _緩衝 ₎]

在最高測試濃度下阻斷結合小於或等於50%之抗體被分類為非阻斷劑，且未報告彼等抗體之IC50值。

使用阻斷ELISA評估抗SRS-CoV-2抗體阻斷SARS-CoV-2 RBD與人類ACE2結合之能力。在此分析中，用寬濃度範圍之抗SARS-COV-2-S抗體滴定300 pM SARS-COV-2 RBD.mmh。評估了在SARS-COV-2抗體存在下對SARS-COV-2 RBD與hACE-2結合之抑制。盤結合之SARS-COV-2 RBD.mmh用HRP結合之山羊抗myc抗體偵測。SARS-COV-2抗體之IC50值及在最高測試濃度下之最大阻斷概述於表20中。

在所測試之五十六種抗體中，四十二種顯示對SARS-COV-2 RBD與hACE-2之結合的抗體濃度依賴性阻斷，在所測試之最高抗體濃度（100 nM）下，最大阻斷範圍為61%至約100%。所鑑別之阻斷抗體的IC50值範圍為102 pM至19.7 nM。其餘十四種抗體在所測試之最高濃度下顯示低於50%之阻斷活性，且被分類為非阻斷劑。同型對照mAb193281亦用作對照。表 20 ：抗 SAR-COV-2-S 抗體對棘 RBD-hFc 與固定化人類 ACE-2 結合之阻斷效力

mAb#	阻斷 300 pM SARS-COV-2.mmh 與 hACE-2 結合之抗體
IC ₅₀ ， M	100 nM mAb 濃度下之阻斷 %
mAb13457	1.97E-08	75
mAb13458	8.73E-10	81
mAb13459	4.43E-09	78
mAb14230	9.97E-09	85
mAb14231	Nbl	2
mAb14232	1.80E-08	87
mAb14233	Nbl	-7
mAb14234	4.62E-09	92
mAb14235	2.34E-10	96
mAb14247	4.46E-10	95
mAb14248	Nbl	-12
mAb14249	Nbl	-12
mAb14255	1.57E-10	92
mAb14256	4.80E-10	95
mAb14257	3.65E-10	95
mAb14258	1.21E-10	93
mAb14259	1.03E-08	89
mAb14260	1.27E-10	96
mAb14280	1.74E-09	98
mAb14281	3.97E-10	100
mAb14282	5.02E-10	96
mAb14283	3.73E-10	97
mAb14284	3.67E-10	98
mAb14285	1.70E-09	96
mAb14286	6.41E-10	94
mAb14287	Nbl	2
mAb14288	Nbl	5
mAb14290	Nbl	-1
mAb14289	3.78E-10	98
mAb14291	Nbl	-8
mAb14292	2.54E-10	95
mAb14293	Nbl	-1
mAb14294	2.44E-10	94
mAb14295	Nbl	5
mAb14296	Nbl	20
mAb14297	Nbl	16
mAb14312	1.34E-10	98
mAb14313	1.64E-08	63
mAb14314	Nbl	21
mAb14315	1.72E-08	61
mAb14316	Nbl	-9
mAb15156	2.69E-10	103
mAb15157	3.57E-10	103
mAb15158	3.09E-10	103
mAb15159	1.56E-10	102
mAb15160	2.04E-10	96
mAb15161	5.84E-10	94
mAb15162	7.56E-10	95
mAb15163	2.17E-10	95
mAb15164	2.45E-10	99
mAb15165	1.89E-10	99
mAb15166	4.75E-10	98
mAb15167	1.06E-09	96
mAb15170	1.02E-10	82
mAb15150	2.54E-10	98
mAb15151	6.41E-10	98
mAb193281	Nbl	15
mAb193281	Nbl	16

Nbl：非阻斷-阻斷%小於或等於50%。實例 6 ：在 37 ℃下量測之與單體 SARS-CoV-2-S RBD 試劑結合之抗 SARS-CoV-2-S 單株抗體的 pH 敏感性

使用基於即時表面電漿子共振（SPR）之Biacore T200或Biacore 4000生物感測器測定56種經純化之抗SARS-CoV-2-S單株抗體在中性及酸性pH條件下的解離速率常數（ k _d ）。所有結合研究均在37℃下使用含0.05% v/v界面活性劑Tween-20之PBS在pH 7.4、pH 6.0及pH 5.0之操作緩衝液（分別PBS-T-pH7.4、-pH6.0及-pH5.0）進行。Biacore CM5感測器晶片表面首先藉由與小鼠抗人類Fc特異性mAb（再生元，mAb2567）胺偶聯進行衍生化，以捕獲抗SARS-CoV-2單株抗體。檢查與抗SARS-CoV-2單株抗體結合之配位體為重組蛋白，包含表現成具有myc-myc-六組胺酸之C端標籤的SARS-COV-2 RBD胞外域（SARS-COV-2 RBD-MMH；SEQ ID NO: 1069）。在PBS-T-pH7.4緩衝液中製備90 nM SARS-COV-2 RBD-MMH溶液，隨後將其以25 µL/min之流速注射至抗體表面上3分鐘，接著為結合的SARS-COV-2 RBD-MMH之解離階段，其中pH 7.4、pH 6.0或pH 5.0之操作緩衝液流過8分鐘。同型對照mAb1932亦用作對照。

藉由使用Scrubber 2.0c曲線擬合軟體將即時結合感測器圖譜擬合至1:1結合模型來確定三種pH操作緩衝液中之解離速率常數（ k _d ）。解離半衰期（t½）由 k _d 值計算為：

單體SARS-COV-2 RBD-MMH與抗hFc表面上捕獲之56種抗SARS-CoV-2單株抗體在37℃下在pH 6.0及pH 5.0下之結合的所得 k _d 及t½值分別概述於表21及表22中，且將pH 7.4下之結果列在兩個表中用於比較。表 21 ：單體 SARS-COV-2 RBD-MMH 與抗 SARS-CoV-2 單株抗體在 37 ℃下在 pH 7.4 及 pH 6.0 下相互作用之解離速率常數及解離半衰期的比較。

			pH 7.4與 pH 6.0之t½比率
所捕獲之mAb	mAb捕獲水準（RU）	pH 7.4下結合之RBD.mmh	pH 7.4下之kd	t½	mAb捕獲水準（RU）	pH 7.4下結合之RBD.mmh（RU）	pH 6.0下之Kd	pH 6.0下之t½
（RU）		pH 7.4下
	（1/s）	（分鐘）	（1/s）	（分鐘）
mAb14284	386.5	146.9	6.24E-04	18.5	369.4	144.5	5.74E-04	20.1	0.9
mAb14312	276.1	95.2	8.59E-04	13.5	257.6	94.8	1.77E-03	6.5	2.1
mAb14294	222.4	83.2	9.20E-04	12.6	207	91.1	5.65E-04	20.5	0.6
mAb14315	238	83.3	9.80E-04	11.8	217.5	82.5	9.46E-04	12.2	1
mAb14292	241.2	73.4	1.41E-03	8.2	218.6	74	1.78E-03	6.5	1.3
mAb14235	202.9	71.2	1.48E-03	7.8	185.2	80.8	1.14E-03	10.1	0.8
mAb14247	137.5	40.8	1.58E-03	7.3	107.4	43.8	1.67E-03	6.9	1.1
mAb13458	290.7	96.5	1.61E-03	7.2	265.5	98.6	1.99E-03	5.8	1.2
mAb14283	246.6	87.7	1.69E-03	6.9	224.5	86.3	2.00E-03	5.8	1.2
mAb14289	246.7	86.1	1.85E-03	6.2	224	84	2.72E-03	4.2	1.5
mAb14260	208	74.5	1.88E-03	6.2	192.7	83	1.66E-03	6.9	0.9
mAb14258	245.1	85.9	2.13E-03	5.4	221.1	85	5.48E-04	21.1	0.3
mAb13457	309	103.3	2.14E-03	5.4	279.3	100.8	3.09E-03	3.7	1.5
mAb14234	133.8	37.9	2.21E-03	5.2	103	44.5	1.43E-03	8.1	0.6
mAb13459	301.6	106.8	2.29E-03	5.1	290	114.8	2.39E-03	4.8	1.1
mAb14313	275.7	94.2	2.51E-03	4.6	255	97.1	4.10E-03	2.8	1.6
mAb14255	288.4	97.5	4.93E-03	2.3	262.3	96.4	5.13E-03	2.3	1
mAb14281	256.9	83.5	6.59E-03	1.8	233.5	85.2	7.34E-03	1.6	1.1
mAb14230	224.5	67.6	7.71E-03	1.5	193.5	70.7	7.97E-03	1.4	1.1
mAb14257	234.8	82.3	7.78E-03	1.5	220.2	91.3	8.42E-03	1.4	1.1
mAb14286	259	84.3	9.68E-03	1.2	234.5	87.2	9.99E-03	1.2	1
mAb14256	258.4	80.2	1.11E-02	1	234.3	84.4	9.55E-03	1.2	0.8
mAb14282	215.3	73.5	1.26E-02	0.9	199.9	83.5	9.85E-03	1.2	0.8
mAb14280	255	72.4	2.40E-02	0.5	230.3	78.4	1.90E-02	0.6	0.8
mAb14285	213	64.2	2.58E-02	0.4	200.2	77.1	1.44E-02	0.8	0.5
mAb14232	58.1	8.2	3.11E-02	0.4	34.4	23	1.24E-02	0.9	0.4
mAb14259	233.1	12	IC	IC	210.5	16.7	IC	IC	IC
mAb14314	255.1	5.8	IC	IC	244.4	12.5	IC	IC	IC
mAb14231	272	0.1	NB	NB	244.5	5	NB	NB	NB
mAb14233	197	1.7	NB	NB	164.3	3.3	NB	NB	NB
mAb14248	230.5	0.9	NB	NB	205.6	5.5	NB	NB	NB
mAb14249	215.1	0.2	NB	NB	198.1	8.7	NB	NB	NB
mAb14287	254.4	1.1	NB	NB	233	4.3	NB	NB	NB
mAb14288	216.2	0.9	NB	NB	201.3	8.8	NB	NB	NB
mAb14290	245	0.3	NB	NB	223.1	5.1	NB	NB	NB
mAb14291	200.5	0.9	NB	NB	185	9.5	NB	NB	NB
mAb14293	257.1	1.4	NB	NB	233.3	5.8	NB	NB	NB
mAb14295	259.7	2.1	NB	NB	239.1	1.6	NB	NB	NB
mAb14296	276.5	1.7	NB	NB	257.1	4.1	NB	NB	NB
mAb14297	229	2.2	NB	NB	214.7	9.3	NB	NB	NB
mAb14316	201.7	2.1	NB	NB	180.1	5.6	NB	NB	NB
mAb15156	268.5	92.6	6.73E-03	1.7	258.3	96.4	9.70E-03	1.2	1.4
mAb15157	311.9	106.3	4.05E-03	2.9	301.7	107.8	7.66E-03	1.5	1.9
mAb15158	306.9	111.4	3.10E-04	37	294.7	118.1	2.90E-04	40.1	0.9
mAb15159	92.9	31.9	2.31E-04	50	79.8	36.3	4.12E-04	28.1	1.8
mAb15160	178.8	58.2	2.18E-03	5.3	164.8	59.9	2.83E-03	4.1	1.3
mAb15161	121.5	39.8	1.13E-03	10.3	106.2	43.7	1.07E-03	10.8	0.9
mAb15162	330.8	116.4	3.00E-03	3.9	321.2	120.1	3.54E-03	3.3	1.2
mAb15163	230.9	81.9	4.94E-04	23.4	211.7	82.4	1.04E-03	11.1	2.1
mAb15164	400.6	144.9	2.26E-03	5.1	398.3	154.4	2.10E-03	5.5	0.9
mAb15165	290.4	110	1.64E-03	7.1	279.8	115	1.28E-03	9.1	0.8
mAb15166	244.5	65.2	3.00E-02	0.4	234.8	66	3.01E-02	0.4	1
mAb15167	419.3	117.5	2.08E-02	0.6	415.8	124.2	1.62E-02	0.7	0.8
mAb15170	309.8	120.5	1.07E-04	108.4	304.6	128.6	8.00E-05	144.5	0.7
mAb15150	246.1	87.8	1.12E-04	103.4	233.4	89.7	3.81E-05	303.5	0.3
mAb15151	611.4	219.4	6.80E-03	1.7	612.7	227.1	4.54E-03	2.5	0.7
mAb1932	314	0.6	NB	NB	294.3	7.7	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。表 22 ：單體 SARS-COV-2 RBD-MMH （ SEQ ID NO: 1069 ）與抗 SARS-CoV-2 單株抗體在 37 ℃下在 pH 7.4 及 pH 5.0 下相互作用之解離速率常數及解離半衰期的比較。

所捕獲之mAb	mAb捕獲水準（RU）	pH 7.4下結合之RBD.mmh（RU）	pH 5.0下之kd（1/s）	pH 5.0下之t½	mAb捕獲水準（RU）	pH 7.4下結合之RBD.mmh（RU）	pH 5.0下之Kd	pH 5.0下之t½	pH 7.4與
（分鐘）	（1/s）	（分鐘）	pH 5.0之t½比率
mAb14284	386.5	146.9	6.24E-04	18.5	387.2	158.8	7.36E-04	15.7	1.2
mAb14312	276.1	95.2	8.59E-04	13.5	274.5	96.7	5.58E-03	2.1	6.4
mAb14294	222.4	83.2	9.20E-04	12.6	210.4	97.6	4.52E-04	25.5	0.5
mAb14315	238	83.3	9.80E-04	11.8	228.3	101.2	7.00E-04	16.5	0.7
mAb14292	241.2	73.4	1.41E-03	8.2	229.2	85	2.19E-03	5.3	1.5
mAb14235	202.9	71.2	1.48E-03	7.8	184.9	80.8	1.19E-03	9.7	0.8
mAb14247	137.5	40.8	1.58E-03	7.3	107.1	51.9	1.91E-03	6.1	1.2
mAb13458	290.7	96.5	1.61E-03	7.2	270.3	90.9	4.01E-03	2.9	2.5
mAb14283	246.6	87.7	1.69E-03	6.9	237.7	91.7	5.12E-03	2.3	3
mAb14289	246.7	86.1	1.85E-03	6.2	235.5	89.3	4.60E-03	2.5	2.5
mAb14260	208	74.5	1.88E-03	6.2	193.8	82.4	2.02E-03	5.7	1.1
mAb14258	245.1	85.9	2.13E-03	5.4	230.8	103.4	5.08E-04	22.7	0.2
mAb13457	309	103.3	2.14E-03	5.4	293.7	104.7	4.52E-03	2.6	2.1
mAb14234	133.8	37.9	2.21E-03	5.2	98.5	40.4	1.66E-03	7	0.7
mAb13459	301.6	106.8	2.29E-03	5.1	293.9	105.8	3.70E-03	3.1	1.6
mAb14313	275.7	94.2	2.51E-03	4.6	265.2	80.8	5.73E-03	2	2.3
mAb14255	288.4	97.5	4.93E-03	2.3	274.8	94.1	6.35E-03	1.8	1.3
mAb14281	256.9	83.5	6.59E-03	1.8	241	51.7	1.17E-02	1	1.8
mAb14230	224.5	67.6	7.71E-03	1.5	201.1	60.3	9.24E-03	1.3	1.2
mAb14257	234.8	82.3	7.78E-03	1.5	224.7	45.2	1.72E-02	0.7	2.1
mAb14286	259	84.3	9.68E-03	1.2	246.3	82.4	6.64E-03	1.7	0.7
mAb14256	258.4	80.2	1.11E-02	1	239.7	54.1	9.27E-03	1.2	0.8
mAb14282	215.3	73.5	1.26E-02	0.9	201.9	62.4	6.71E-03	1.7	0.5
mAb14280	255	72.4	2.40E-02	0.5	241.4	61.7	1.03E-02	1.1	0.5
mAb14285	213	64.2	2.58E-02	0.4	202	51.5	2.50E-03	4.6	0
mAb14232	58.1	8.2	3.11E-02	0.4	22.3	10.1	6.56E-04	17.6	0
mAb14259	233.1	12	IC	IC	214.1	1.8	IC	IC	IC
mAb14314	255.1	5.8	IC	IC	252.9	3.4	IC	IC	IC
mAb14231	272	0.1	NB	NB	249.9	-1.3	NB	NB	NB
mAb14233	197	1.7	NB	NB	173.5	6.6	NB	NB	NB
mAb14248	230.5	0.9	NB	NB	210.3	-0.8	NB	NB	NB
mAb14249	215.1	0.2	NB	NB	198.6	1.9	NB	NB	NB
mAb14287	254.4	1.1	NB	NB	240.6	0.3	NB	NB	NB
mAb14288	216.2	0.9	NB	NB	203.7	4	NB	NB	NB
mAb14290	245	0.3	NB	NB	228.9	-0.6	NB	NB	NB
mAb14291	200.5	0.9	NB	NB	188.5	3.2	NB	NB	NB
mAb14293	257.1	1.4	NB	NB	243.1	-0.2	NB	NB	NB
mAb14295	259.7	2.1	NB	NB	250.3	8.7	NB	NB	NB
mAb14296	276.5	1.7	NB	NB	267.7	-1	NB	NB	NB
mAb14297	229	2.2	NB	NB	218.2	3.1	NB	NB	NB
mAb14316	201.7	2.1	NB	NB	181.3	0.9	NB	NB	NB
mAb15156	268.5	92.6	6.73E-03	1.7	259.6	103.6	1.58E-02	0.7	2.3
mAb15157	311.9	106.3	4.05E-03	2.9	301.7	107.5	7.02E-03	1.6	1.7
mAb15158	306.9	111.4	3.10E-04	37	296.4	121.6	9.70E-05	118.9	0.3
mAb15159	92.9	31.9	2.31E-04	50	73.6	45.5	4.29E-04	27	1.9
mAb15160	178.8	58.2	2.18E-03	5.3	160.8	61.3	2.28E-03	5.1	1
mAb15161	121.5	39.8	1.13E-03	10.3	100.8	51.4	9.80E-04	11.8	0.9
mAb15162	330.8	116.4	3.00E-03	3.9	335.3	130.8	5.40E-03	2.1	1.8
mAb15163	230.9	81.9	4.94E-04	23.4	221.3	83.2	3.77E-03	3.1	7.6
mAb15164	400.6	144.9	2.26E-03	5.1	409.6	159	2.00E-03	5.8	0.9
mAb15165	290.4	110	1.64E-03	7.1	289.5	126.8	9.73E-04	11.9	0.6
mAb15166	244.5	65.2	3.00E-02	0.4	233.6	60	3.50E-02	0.3	1.2
mAb15167	419.3	117.5	2.08E-02	0.6	422.4	126	1.33E-02	0.9	0.6
mAb15170	309.8	120.5	1.07E-04	108.4	314.3	141.1	6.62E-05	174.4	0.6
mAb15150	246.1	87.8	1.12E-04	103.4	236.7	92.6	1.00E-05	1155	0.1
mAb15151	611.4	219.4	6.80E-03	1.7	632.9	230.7	4.39E-03	2.6	0.6
mAb1932	314	0.6	NB	NB	305.2	1.9	NB	NB	NB

NB：在當前實驗條件下未觀測到結合（NB）。 IC：觀測到之結合未擬合至結合模擬模型，且在當前實驗條件下未確定結合動力學參數。實例 7 ：抗 SARS-CoV-2-S 抗體之間的交叉競爭

在Octet HTX生物感測器平台（Pall ForteBio Corp.）上使用即時、免標定生物膜層干涉術（BLI）分析確定41種抗SARS-CoV-2-S單株抗體（mAb）之間的結合競爭。整個實驗在25℃下在含有10 mM HEPES、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% v/v界面活性劑Tween-20及1 mg/mL BSA，pH 7.4之緩衝液（HBS-EBT）中進行，其中樣本盤以1000 rpm之速度搖動。為了評估mAb是否相互競爭結合至SARS-COV-2 RBD細胞外域上的其各別抗原決定基，該域表現成具有C端myc-myc-六組胺酸（SARS-COV-2 RBD-MMH；SEQ ID NO: 1069）標籤，首先將約0.52-0.63 nm SARS-COV-2 RBD-MMH捕獲至抗Penta-His抗體塗佈之生物感測器尖端（Fortebio Inc, # 18-5122）上，此藉由將生物感測器尖端浸入含有10 µg/mL SARS-COV-2 RBD-MMH溶液之孔中90秒來進行。隨後，將SARS-COV-2 RBD-MMH捕獲生物感測器尖端用第一抗SARS-CoV-2單株抗體（mAb-1）飽和，此藉由浸入含有50 µg/mL mAb-1之孔中4分鐘來進行。隨後將尖端浸入含有50 µg/mL第二抗SARS-CoV-2單株抗體（mAb-2）之孔中4分鐘。在步驟之間，尖端用HBS-ETB沖洗。在整個實驗過程期間監測即時結合反應，且記錄每一步結束時之結合反應。將mAb-2結合至與mAb-1預複合之SARS-COV-2 RBD-MMH的反應與mAb-1為非結合同型對照時之mAb-2結合信號進行比較，且計算mAb-2結合之減少百分比。若mAb-1之預結合導致mAb-2結合減少＞ 50%，且顛倒mAb對之結合順序亦展現結合減少＞ 50%，則mAb-1及mAb-2被分類為競爭mAb。圖1以矩陣形式顯示抗SARS-CoV-2 mAb之交叉競爭研究的結果。表23列出了實驗中所包括之各抗SARS-CoV-2 mAb的競爭mAb。表 23. 與固定化 SARS-COV-2 RBD-MMH （ SEQ ID NO: 1069 ）結合後之交叉競爭抗 SARS-CoV-2-S 單株抗體

mAb-1	與 mAb-1 競爭之 mAb-2
mAb14312	mAb14256
mAb14255
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb14281
mAb14256	mAb14312
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb14284
mAb10985
mAb14255	mAb14312
mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb10933	mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb14258	mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb14283
mAb14257	mAb14312
mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb14313
mAb14283
mAb14285	mAb14312
mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14286
mAb14280
mAb14282
mAb13457
mAb13458
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14286	mAb14312
mAb14256
mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14280
mAb14282
mAb13457
mAb13458
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14260
mAb14280	mAb14312
mAb14256
mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14282
mAb14281
mAb13457
mAb13458
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14282	mAb14312
mAb14256
mAb14255
mAb10933
mAb14258
mAb14257
mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14281
mAb10987
mAb14289
mAb14281	mAb14312
mAb14280
mAb14282
mAb13457
mAb13458
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14315
mAb13457	mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14281
mAb13458
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14294
mAb14235
mAb14234
mAb14247
mAb14260
mAb14315
mAb14230
mAb14284
mAb13458	mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14281
mAb13457
mAb13459
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14294
mAb14235
mAb14234
mAb14247
mAb14260
mAb14315
mAb14230
mAb14284
mAb13459	mAb14285
mAb14286
mAb14280
mAb14281
mAb13457
mAb13458
mAb14313
mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14294
mAb14235
mAb14234
mAb14247
mAb14260
mAb14315
mAb14230
mAb14284
mAb14313	mAb14257
mAb14285
mAb14286
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mAb14315
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mAb14283
mAb10987
mAb14289
mAb14235
mAb14234
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mAb14284
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mAb14294
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大體上如上所述進行15種另外的抗SARS-Cov-2-S單株抗體之間的結合競爭。在Octet HTX生物感測器平台（Pall ForteBio Corp.）上使用即時、免標定生物膜層干涉術（BLI）分析確定競爭。整個實驗在25℃下在含有10 mM HEPES、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% v/v界面活性劑Tween-20及1 mg/mL BSA，pH 7.4之緩衝液（HBS-EBT）中進行，其中盤以1000 rpm之速度搖動。為了評估mAb是否能夠相互競爭結合至SARS-COV-2 RBD細胞外域上的其各別抗原決定基，該域表現成具有C端myc-myc-六組胺酸（SARS-COV-2 RBD-MMH；SEQ ID NO: 1069）標籤，首先將約0.51 nm SARS-COV-2 RBD-MMH捕獲至抗Penta-His抗體塗佈之生物感測器尖端（Fortebio Inc, # 18-5122）上，此藉由將生物感測器尖端浸入含有10 µg/mL SARS-COV-2 RBD-MMH之孔中90秒來進行。隨後，將SARS-COV-2 RBD-MMH捕獲生物感測器尖端用第一抗SARS-CoV-2單株抗體（mAb-1）飽和，此藉由浸入含有50 µg/mL mAb-1之孔中4分鐘來進行。隨後將生物感測器尖端浸入含有50 µg/mL第二抗SARS-CoV-2單株抗體（mAb-2）之孔中4分鐘。在步驟之間，生物感測器尖端用HBS-ETB緩衝液沖洗。在整個實驗過程期間監測即時結合反應，且記錄每一步結束時之結合反應。將mAb-2結合至與mAb-1預複合之SARS-COV-2 RBD-MMH的反應與mAb-1為非結合同型對照時之mAb-2結合信號進行比較，且計算mAb-2結合之減少百分比。若mAb-1之預結合導致mAb-2之結合減少＞ 50%，且顛倒mAb對之結合順序亦展現結合之減少＞ 50%，則mAb-1及mAb-2被分類為競爭mAb。圖2以矩陣形式顯示抗SARS-Cov-2 mAb之交叉競爭研究的結果。表24列出了實驗中所包括之各抗SARS-CoV-2 mAb的競爭mAb。表 24. 與固定化 SARS-COV-2 RBD-MMH （ SEQ ID NO: 1069 ）結合後之交叉競爭抗 SARS-CoV-2-S 單株抗體

mAb-1	與 mAb-1 競爭之 mAb-2
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mAb15158
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mAb15157
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mAb14315
mAb14284
mAb14235
mAb14294
mAb10989	mAb10934
mAb15158
mAb15156
mAb15157
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mAb14289
mAb14283
mAb15158	mAb10934
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mAb15156
mAb15157
mAb15166
mAb15167
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mAb10954
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mAb15159
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mAb15164
mAb15165
mAb15151
mAb15161
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mAb10933
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mAb10985
mAb14289
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mAb10989
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mAb15157
mAb15166
mAb15167
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mAb10954
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mAb15164
mAb15165
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mAb15161
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mAb10933
mAb15163
mAb14255
mAb14256
mAb14312
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mAb14289
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mAb15158
mAb15156
mAb15166
mAb15167
mAb15150
mAb10954
mAb15162
mAb15159
mAb15170
mAb15164
mAb15165
mAb15151
mAb15161
mAb15160
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mAb14255
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mAb15156
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mAb10954
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mAb15165
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mAb15156
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mAb10986
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mAb15157
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mAb10985
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mAb15158
mAb15156
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mAb15150
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mAb14289
mAb14283
mAb14247
mAb14234
mAb14230
mAb14284
mAb14235
mAb14294
mAb14284	mAb10934
mAb14232
mAb10987
mAb14289
mAb14283
mAb14247
mAb14234
mAb14230
mAb14315
mAb14235
mAb14294
mAb14235	mAb10934
mAb14232
mAb10987
mAb14289
mAb14283
mAb14247
mAb14234
mAb14230
mAb14315
mAb14284
mAb14294
mAb14294	mAb14232
mAb10987
mAb14289
mAb14283
mAb14247
mAb14234
mAb14230
mAb14315
mAb14284
mAb14235

實例 8 ：在 ADCC 替代分析（ FcγR3a Val176 信號傳導分析）中表徵抗 SARS-CoV-2-S mAb

在使用報導細胞及與抗體結合之目標細胞的替代生物分析中量測靶向SARS-CoV-2棘蛋白之抗體與FcγR3a（一種在NK細胞上顯著表現之Fc受體，其可誘導抗體依賴性細胞介導之細胞毒性（ADCC））相互作用的能力。在此分析中，經工程改造之Jurkat T細胞在轉錄因子NFAT（NFAT-Luc）的控制下與高親和力人類FcγR3a 176Val同種異型受體一起表現報導基因螢光素酶（Jurkat/NFAT-Luc/hFcγR3a 176Val）。目標細胞為經工程改造之Jurkat T細胞，其表現單獨的人類CD20（用作利用靶向CD20之人類IgG1抗體之陽性對照）或與全長SARS-CoV-2棘蛋白之組合。報導細胞與目標細胞一起培育，且經由與目標細胞結合之人類IgG1抗體的Fc域與FcγR3a接合引起報導細胞中轉錄因子NFAT之活化，且驅動螢光素酶之表現，其隨後經由發光讀出量測。 目標細胞

Jurkat/hCD20：Jurkat T細胞經工程改造以組成型表現全長人類CD20（NCBI寄存編號NP_690605.1之胺基酸M1-P297）。對Jurkat/hCD20細胞進行CD20表現染色且維持於RPMI + 10% FBS + P/S/G + 250 g/ml濕黴素生長培養基中。此等細胞用作陰性對照。

Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2棘：Jurkat/hCD20 T細胞經工程改造以組成型表現全長SARS-CoV-2棘蛋白（NCBI寄存編號YP_009724390.1之胺基酸M1-T1273）。Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2棘細胞針對棘蛋白之高表現進行分選，且維持於RPMI + 10% FBS + P/S/G + 1 µg/ml嘌呤黴素+ 250 g/ml濕黴素生長培養基中。 報導細胞

Jurkat/NFAT-Luc/FcγR3a 176Val：Jurkat T細胞經工程改造以穩定表現活化T細胞核因子（NFAT）螢光素酶報導構築體以及高親和力人類FcγR3a 176Val同種異型受體（寄存編號P08637 VAR_003960之胺基酸M1-K254）。經工程改造之報導細胞維持於RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 µg/ml嘌呤黴素+ 500 µg/ml G418生長培養基中。 分析設置

實驗前一天，Jurkat報導細胞在RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 µg/ml嘌呤黴素+ 500 µg/ml G418生長培養基中分裂為7.5×10 ⁵個細胞/ml。Jurkat目標細胞在RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 µg/ml嘌呤黴素+ 250 µg/ml濕黴素生長培養基中分裂為5×10 ⁵個細胞/ml。

在實驗當天，將目標細胞及報導細胞轉移至分析培養基（RPMI + 10% FBS + P/S/G）中，且以3:2之比添加（3×10 ⁴個/孔之目標細胞及2×10 ⁴個/孔之報導細胞）至384孔白色微量滴定盤。

抗SARS-CoV-2棘蛋白抗體、陰性同型匹配對照抗體及ADCC陽性對照抗體（抗CD20）以11點、1:3連續稀釋滴定，範圍為1.7 pM至100 nM最終濃度，最後第12點不含抗體。所有樣本一式兩份進行測試。將盤在37℃/5% CO ₂下培育5小時，接著添加等體積的ONE-Glo™（Promega）試劑以裂解細胞且偵測螢光素酶活性。在多標籤讀盤器Envision（PerkinElmer）上以相對光單位（RLU）捕獲發射的光。使用GraphPad Prism軟體在12點劑量反應曲線（包括背景信號）上由4參數邏輯方程確定抗體之EC50值。使用以下方程計算最大誘導倍數：

誘導倍數=各抗體測試劑量範圍內之最大平均RLU/平均RLU（背景信號=無抗體）

EC50值及誘導倍數概述於表25中。 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 棘目標細胞之結果

所測試之抗SARS-CoV-2-S抗體中之各者顯示比陰性對照抗體更大的誘導倍數。EC50值範圍為60.4 pM至3.4 nM，且誘導倍數值範圍為3.9倍至13.5倍。陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為29.9倍，EC50值為18.1 pM。 Jurkat/hCD20 目標細胞之結果

除一種（mAb14312）外，41種抗SARS-CoV-2-S抗體中之各者的行為與顯示最小活性之陰性對照抗體相似。mAb14312之EC50值為18.4 nM，且誘導倍數值為2.0。陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為29.4倍，EC50值為33.7 pM。表 25 ：替代 ADCC 分析結果

mAb #	Jurkat CD20	Jurkat/CD20/ 棘
EC50（M）	誘導倍數	EC50（M）	誘導倍數
mAb13457	ND	1.2	1.50E-10	9.1
mAb13458	ND	1.2	1.43E-10	10.2
mAb13459	ND	1.2	1.42E-10	9.9
mAb14230	ND	1.1	1.79E-10	9.8
mAb14231	ND	1.2	3.25E-09	7.9
mAb14232	ND	1.2	1.31E-10	10.8
mAb14233	ND	1.1	2.80E-10	11.0
mAb14234	ND	1.1	2.69E-10	12.6
mAb14235	ND	1.0	1.43E-10	10.8
mAb14247	ND	1.0	1.79E-10	11.3
mAb14248	ND	1.0	1.79E-10	12.8
mAb14249	ND	1.2	2.51E-10	10.3
mAb14255	ND	1.0	1.67E-10	9.5
mAb14256	ND	1.0	4.48E-10	6.1
mAb14257	ND	1.0	2.39E-10	8.8
mAb14258	ND	1.0	2.82E-10	7.5
mAb14259	ND	1.0	3.94E-10	8.7
mAb14260	ND	1.1	3.63E-10	6.0
mAb14280	ND	1.1	2.67E-10	13.5
mAb14281	ND	1.1	1.65E-10	10.3
mAb14282	ND	1.1	2.57E-10	10.7
mAb14283	ND	1.1	1.39E-10	9.1
mAb14284	ND	1.1	1.56E-10	9.0
mAb14285	ND	1.1	2.43E-10	11.0
mAb14286	ND	1.0	2.04E-10	11.0
mAb14287	ND	1.0	1.23E-09	6.2
mAb14288	ND	1.0	5.10E-10	6.7
mAb14289	ND	1.0	1.30E-10	6.3
mAb14290	ND	1.0	3.42E-09	9.5
mAb14291	ND	1.1	3.02E-10	9.7
mAb14292	ND	1.0	3.86E-10	9.2
mAb14293	ND	1.1	7.88E-10	9.3
mAb14294	ND	1.0	6.04E-11	10.5
mAb14295	ND	1.0	1.93E-10	11.5
mAb14296	ND	1.0	4.11E-10	8.1
mAb14297	ND	1.0	1.24E-10	7.9
mAb14312	1.84E-08	2.0	1.68E-10	7.5
mAb14313	ND	1.1	1.55E-10	7.1
mAb14314	ND	1.1	NC	3.9
mAb14315	ND	1.1	6.24E-11	9.3
mAb14316	ND	1.0	1.89E-10*	9.1
mAb1932 –陰性對照	ND	1.3	ND	1.5
mAb2959 –陽性對照	3.37E-11	29.4	1.81E-11	29.9

*在高濃度下，信號減弱（鉤狀效應）；在EC50測定之前移除鉤上的點 NC：未計算，因為資料不符合4參數邏輯方程 ND：未確定，因為未觀測到濃度依賴性反應誘導倍數=各抗體測試劑量範圍內之最大平均RLU/平均RLU（背景信號=無抗體）

自所測試之初始mAb中選擇所選少數用於進一步追蹤，以與美國專利第10,787,501號中描述之抗體一起操作。EC50值及誘導倍數概述於表26中。 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 棘目標細胞之結果

新純化之SARS-CoV-2棘抗體中之各者顯示比陰性對照抗體更大的誘導倍數。新純化之SARS-CoV-2棘抗體EC50值範圍為188 pM至575 pM，且誘導倍數值範圍為2.0倍至3.2倍。陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為27.0倍，EC50值為51.8 pM。 Jurkat/hCD20 目標細胞之結果

新純化之SARS-CoV-2棘抗體中之各者的行為與顯示最小活性之陰性對照抗體相似。相比之下，陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為23.5倍，EC50值為142 pM。表 26 ：替代 ADCC 分析結果

mAb # 或名稱	Jurkat CD20	Jurkat/CD20/ 棘
EC50（M）	誘導倍數	EC50（M）	誘導倍數
mAb14255	ND	1.1	1.88E-10	3.2
mAb14256	ND	1.1	5.75E-10	2.0
mAb14257	ND	1.2	2.63E-10	2.2
mAb14258	ND	1.2	2.06E-10	2.7
mAb10984†	ND	1.0	5.86E-10	1.3
mAb10986†	ND	1.0	NC	1.4
mAb10964†	ND	1.2	1.11E-10	1.8
mAb10977†	ND	1.3	NC	4.1
mAb10933†	ND	1.1	6.47E-10	2.9
mAb10987†	ND	1.0	4.71E-10	4.5
mAb10989†	ND	1.1	6.23E-10	6.5
mAb1932 –陰性對照	ND	1.2	ND	1.2
mAb2959 –陽性對照	1.42E-10	23.5	5.18E-11	27.0

†美國專利第10,787,501號中描述之抗體 NC：未計算，因為資料不符合4參數邏輯方程。 ND：未確定，因為未觀測到濃度依賴性反應誘導倍數=各抗體測試劑量範圍內之最大平均RLU/平均RLU（背景信號=無抗體）

亦對新純化之抗體進行隨後一輪測試。EC50值及誘導倍數概述於表27中。 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 棘目標細胞之結果

新純化之抗SARS-CoV-2-S抗體中之各者顯示比陰性對照抗體更大的誘導倍數。SARS-CoV-2棘抗體之EC50值範圍為81.7 pM至905 pM，且誘導倍數值範圍為4.2倍至13.0倍。陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為46.7倍，EC50值為74.4 pM。 Jurkat/hCD20 目標細胞之結果

所有新純化之SARS-CoV-2-S抗體的行為與陰性對照抗體相似，顯示最小活性。相比之下，陽性CD20對照抗體顯示誘導倍數為62.1倍，EC50值為145 pM。表 27 ：替代 ADCC 分析結果

mAb # 或名稱	Jurkat CD20	Jurkat/CD20/ 棘
EC50（M）	誘導倍數	EC50（M）	誘導倍數
mAb15156	ND	1.1	3.47E-10	4.2
mAb15157	ND	1.3	3.98E-10	4.8
mAb15158	ND	1.2	3.81E-10	7.0
mAb15159	ND	1.0	4.17E-10	5.0
mAb15160	ND	1.2	2.98E-10	5.4
mAb15161	ND	1.2	4.94E-10	5.9
mAb15162	ND	1.1	9.05E-10	5.8
mAb15163	ND	1.1	3.42E-10*	8.2
mAb15164	ND	1.2	2.23E-10*	12.7
mAb15165	ND	1.1	2.01E-10	13.0
mAb15166	ND	1.1	8.17E-11	9.5
mAb15167	ND	1.0	1.11E-10	7.3
mAb15170	ND	1.0	6.26E-10	5.4
mAb15150	ND	1.1	4.59E-10	5.2
mAb15151	ND	1.4	3.51E-10	6.0
mAb14255 ^§	ND	1.1	1.37E-10	8.6
mAb14256 ^§	ND	1.0	2.63E-10	3.7
mAb14315 ^§	ND	1.0	9.96E-11*	11.5
mAb10985†	ND	1.1	4.72E-10	3.7
mAb10933†	ND	1.0	8.76E-11	7.7
mAb10987†	ND	1.0	7.20E-11	10.2
mAb1932 –陰性對照	ND	1.2	ND	3.7
mAb2959 –陽性對照	1.45E-10	62.1	7.44E-11	46.7

†美國專利第10,787,501號中描述之抗體 ^§表25及/或表26中描述之抗體 *在高濃度下，信號減弱（鉤狀效應）；在EC50測定之前移除鉤上的點 ND：未確定，因為未觀測到濃度依賴性反應誘導倍數=各抗體測試劑量範圍內之最大平均RLU/平均RLU（背景信號=無抗體）實例 9 ： ADCP 分析中抗 SARS-CoV-2-S mAb 之表徵

評估靶向SARS-CoV-2棘蛋白之抗體誘導經工程改造以表現SARS-CoV-2全長棘蛋白之Jurkat細胞之吞噬作用的能力。在巨噬細胞群落刺激因子（M-CSF）存在下自單核球分化之巨噬細胞用作抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP）分析中的效應細胞。平行評估作為陰性對照之IgG1同型。藉由使用Opera Phenix高內涵篩選系統量測與螢光標記之巨噬細胞共定位之螢光標記目標細胞的數目來評估吞噬作用。 目標細胞

Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2棘：Jurkat T細胞經工程改造以組成型表現全長人類CD20（NCBI寄存編號NP_690605.1之胺基酸M1-P297）以及全長SARS-CoV-2棘蛋白（NCBI寄存編號YP_009724390.1之胺基酸M1-T1273）。Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2棘細胞針對棘蛋白之高表現進行分選，且維持於RPMI + 10% FBS + P/S/G + 1 μg/ml嘌呤黴素+250 μg/ml濕黴素生長培養基中。 效應細胞

在M-CSF存在下自單核球分化之巨噬細胞：將冷凍的CD14+單核球（Lonza）解凍，再懸浮於分析培養基（RPMI 1640，補充有10% FBS、100 U/ml青黴素、100 μg/ml鏈黴素及292 μg/ml L-麩醯胺酸、NaPyr、HEPES及NEAA），補充100 ng/ml M-CSF，且以5.2×10 ⁴個細胞/孔塗鋪於透明底、膠原塗佈之96孔黑色盤中，用於在9天內分化成巨噬細胞。 分析設置

實驗前一天，將Jurkat目標細胞在其各別生長培養基中分裂為5×10 ⁵個細胞/ml。

在實驗當天，將目標細胞及單核球衍生之巨噬細胞在分別補充有CellTrace CFSE染料或CellTrace Violet染料之PBS中，在37℃、5% CO ₂下培育15分鐘。

將CFSE標記之目標細胞洗滌且再懸浮於分析培養基（RPMI 1640，補充有10% FBS、100 U/ml青黴素、100 μg/ml鏈黴素及292 μg/ml L-麩醯胺酸、NaPyr、HEPES、NEAA及10 µM BME），且以5×10 ⁴個細胞/孔之密度一式兩份添加至96孔U型底盤中。抗SARS-CoV-2棘及IgG1對照抗體在分析培養基中以1:5連續稀釋進行滴定，範圍為51 fM至20 nM最終濃度，且添加至盤中。零抗體點在GraphPad Prism中用10 fM表示。

在冰上培育15分鐘後，將帶有或不帶有滴定抗體之目標細胞混合物轉移至含有紫色標記之巨噬細胞的盤中，且將盤在37℃、5% CO2下培育30分鐘。將孔用PBS洗滌3次，接著添加含4.21%甲醛、補充有2.5 µM DRAQ5之PBS。

培育20分鐘後，孔用PBS洗滌，且使用Opera Phenix高內涵篩選系統在488 nm（CFSE標記之目標細胞）及375 nm（紫色標記之巨噬細胞）激發通道中成像。影像分析在Harmony軟體中進行。375 nm激發通道中之影像分割用於鑑別巨噬細胞群。488 nm激發通道中之影像分割用於鑑別目標細胞。藉由鑑別其中含有目標細胞之巨噬細胞群來量化吞噬作用。

藉由比較經歷吞噬作用之巨噬細胞數與巨噬細胞總數來計算吞噬作用百分比。

對於EC ₅₀測定，ADCP%利用GraphPad Prism使用4參數邏輯方程在10點劑量反應曲線上分析，包括無抗體對照。最大（Max）ADCP%確定為在測試劑量範圍內量測之最高平均ADCP%值。實驗使用單個供體一式兩份進行，例外為不重複進行之以下抗體：mAb10933、mAb10987、mAb10989、mAb1932、mAb10985、mAb14234、mAb10986及mAb14259。

EC ₅₀值及最大（Max）ADCP%概述於表28中。

Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2棘細胞之結果：與IgG1對照抗體相比，21種抗SARS-CoV-2棘抗體中之各者顯示更大的Max ADCP%。SARS-CoV-2棘抗體之EC ₅₀值範圍為5.22 pM至1.12 nM，且Max ADCP%範圍為16.72%至39.89%。表 28 ： ADCP 活性

	ADCP
抗體處理	Max ADCP%	EC50 [M]
mAb10933†	33.12	3.88E-11
mAb10987†	36.30	3.19E-11
mAb10989†	33.02	4.82E-11
mAb1932	7.69	ND
mAb10985†	31.80	2.17E-10
mAb14234	32.84	7.27E-11
mAb14249	32.60	1.69E-10
mAb14255	21.17	1.73E-11
mAb14256	19.50	NC
mAb14287	33.24	NC
mAb14288	25.86	6.14E-10
mAb14290	16.72	NC
mAb14291	32.85	4.12E-10
mAb14295	35.30	4.57E-10
mAb14296	31.60	5.07E-10
mAb14312	27.77	1.69E-11
mAb14314	16.72	1.12E-09
mAb14315	34.80	6.30E-11
mAb14316	37.72	2.54E-10
mAb10964†	34.03	5.22E-12
mAb10986†	39.89	7.13E-11
mAb14259	39.56	NC

†美國專利第10,787,501號中描述之抗體 ND：未確定，因為未觀測到濃度依賴性反應。 NC：未計算，因為資料不符合4參數邏輯方程。 Max（ADCP%）為測試劑量範圍內之最高平均ADCP%值。實例 10 ：抗體結合棘蛋白之結構測定及相互作用

為了更好地理解mAb10987及mAb14256與棘蛋白RBD之結合，經由低溫電子顯微鏡術（cryoEM）進行結構分析。使用FabALACTICA套組（Genovis）分離mAb14256及mAb10987之Fab片段。將25 µg mAb14256 Fab及25 µg mAb10987 Fab與15 µg SARS-CoV-2-S RBD混合且在冰上培育30分鐘。對於cryoEM網格製備，將蛋白質樣本稀釋至0.94 mg/mL且添加0.15% PMAL-C8 amphipol。將3 µL蛋白質沈積於新鮮電漿清潔過的UltrAufoil網格（0.6/1.0，300目）上。使用濾紙吸去過量溶液，且使用Vitrobot Mark IV投浸式冷凍於液體乙烷中。將cryoEM網格轉移至配備有K3偵測器（Gatan）之Titan Krios（賽默飛世爾（Thermo Fisher））。影片使用EPU（賽默飛世爾）以105,000倍之放大率收集，對應於0.86 Å之像素大小。使用每秒每像素15個電子之劑量率，且各影片為2秒，對應於每Å ²約40個電子之總劑量。

所有cryoEM資料處理均使用cryoSPARC v3.2.0進行。收集了6,106張對準的顯微照片，且根據所估計之散焦值及CTF擬合解析度選擇了5,735張對準的顯微照片用於進一步處理。使用blob picker挑選之一組初始顆粒進行2D分類以生成模板用於模板挑選。藉由模板挑選而挑選的約140萬個顆粒進行多輪2D分類，以移除未結合Fab及含有不完整複合物之顆粒。三個類別之從頭計算重建生成了兩個類別，其含有301,461個顆粒，對應於完整mAb10987 Fab - mAb14256 Fab - RBD複合物。對此兩類進行了異質細化，其中一類顯示出高品質圖，而另一類顯示出高優先方向。對含有189,200個顆粒之『好』類中之顆粒進行非均勻細化，接著進行局部細化，得到用於模型建構之3.86 Å解析度（FSC=0.143）圖。在此圖中，手動置放RBD模型（取自PDB碼6M0J）及兩個Fab（取自先前抗體結構，來自PDB 6XDG之mAb10987及來自另一mAb14256模型之mAb14256）。隨後使用Coot手動重建此等模型，且使用Phenix針對圖進行真實空間細化。

確認上述資料，SARS-CoV-2棘RBD與mAb14256及mAb10987之Fab片段結合的複合物之單顆粒cryoEM顯示，此混合物中之兩種抗體可同時結合至RBD的不同區（圖3、圖4）。標稱解析度為3.9Å之複合物的3D重建圖顯示，兩個Fab片段與RBD表面上之非重疊區結合，證實其為非競爭性抗體。mAb14256結合在RBD之頂部，與ACE2之結合位點廣泛重疊。另一方面，mAb10987之抗原決定基位於RBD之一側，遠離mAb14256抗原決定基，且與ACE2結合位點幾乎無重疊。該結構亦展現mAb14256與mAb10933及mAb10985競爭，不過由於不同的微抗原決定基結合以及需要結合且中和不同的SARS-CoV-2棘蛋白變異體，此等抗體之組合仍可為期望的。

使用類似的技術，研究了mAb15160與SARS-CoV-2 RBD結合之結構基礎。Cryo-EM用於確定與mAb15160及mAb14315之抗原結合（Fab）片段複合之SARS-CoV-2 RBD的結構。所得3.18 Å解析度結構展現mAb15160與SARS-CoV-2 RBD頂部（亦即，最靠近目標細胞膜）表面之小抗原決定基結合（圖5）。對SARS-CoV-2 RBD與抗體Fab片段之間的結合界面的分析表明，mAb15160 Fab以其重鏈（13個殘基-殘基相互作用）及輕鏈（13個殘基-殘基相互作用）兩者接觸RBD。共有13個SARS-CoV-2 RBD殘基參與mAb15160結合。在上述中和研究中評估了K417N、E484A及Q493R（均存在於Omicron變異體中）以及結合抗原決定基內之其他取代的功能影響。mAb15160保留針對K417N及E484A個別突變之中和效力。對針對Q493R個別突變之中和效力有影響（與參考假顆粒相比降低5倍）；然而，與參考假顆粒相比，針對用來自BA.1、BA.1.1及BA.2（Omicron）譜系之完整S蛋白序列假型化的假顆粒，mAb15160之中和效力在1.5倍以內。

使用類似的技術，研究了mAb14284與SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1及BA.1（omicron譜系）RBD結合的結構基礎。Cryo-EM用於確定mAb14284及mAb15160之抗原結合（Fab）片段與來自Wuhan-Hu-1病毒株及BA.1譜系之RBD的結構。所得3.3及3.4 Å解析度結構分別展現mAb14284以與ACE2結合競爭之方式結合至Wu-1及BA.1 RBD兩者上的上部片（圖6）。對mAb14284 Fab片段與來自Wu-1及BA.1之SARS-CoV-2 RBD之間的結合界面之分析表明mAb14284與Wu-1及BA.1 RBD上的相同位置結合，除位於周邊之4個變化以外，抗原決定基殘基相同（表29，下文）。BA.1變異體中相對於祖先Wu-1病毒株突變的抗原決定基殘基（N440K、G446S、Q498R、N501Y）容納於結構中，而抗體-抗原界面處無重大變化。表 29 ：mAb14284 Fab殘基與SARS-CoV-2 RBD殘基之間的相互作用概述

相互作用類型	Wuhan-Hu-1 RBD 殘基	與指定 RBD 殘基相互作用的 mAb14284 殘基	BA.1 RBD 殘基	與指定 RBD 殘基相互作用的 mAb14284 殘基
重鏈	輕鏈	重鏈	輕鏈
氫鍵/鹽橋（＜4 Å）	Asn439	-	Tyr34	-	-	-
Lys444	Trp55、Asp56	-	Lys444	Trp55	-
Val445	Arg60	-	-	-	-
Gly447	Arg60	-	Gly447	Arg60	-
Gln498*	-	Thr95	Arg498*	-	Thr95
-	-	-	Thr500	-	Val31
疏水性（＜5 Å）	Asn440*	Ile102、Pro103	-	Lys440*	Ile102、Pro103	-
Leu441	Ser32、Gly33	-	Leu441	Ser32	-
Ser443	Ile102	-	Ser443	Ile102	-
Lys444	Tyr54、Trp55、Asp56、Asp58、Arg60、Ile102	-	Lys444	Tyr54、Trp55、Asp58、Ile102	-
Val445	Trp49、Leu52、Tyr54、Arg60、His100	Tyr93、Ser97、Thr98	Val445	Trp49、Leu52、Tyr54、Arg60、His100	Tyr93、Ser97、Thr98
Gly446*	Arg60	Ser96	Ser446*	Arg60	Ser96
Gly447	Arg60	-	Gly447	Arg60	-
-	-	-	Tyr449	Arg60	-
Gln498*	-	Thr95	Arg498*	-	Thr95
Pro499	Ile102	Tyr34、Tyr93	Pro499	Ile102	Tyr34、Tyr93
Thr500	-	Leu29、Gly30、Tyr93、Thr94	Thr500	-	Leu29、Thr94、Thr95
Asn501*	-	Val31	Tyr501*	-	Val31
Gly502	-	Val31	Gly502	-	Val31

與mAb14284 Fab重鏈及輕鏈殘基相互作用之SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1及BA.1 S蛋白RBD殘基係經指出。連字符「-」指示在指定RBD殘基與指定抗體鏈之間未觀測到相互作用。根據原子間距離＜4 Å（不包括氫原子）之氫鍵/鹽橋或原子間距離＜5 Å之疏水性表面的存在來選擇殘基。星號「*」指示在BA（Omicron）譜系中突變的RBD殘基。

為了評估當前循環中的SARS-CoV-2病毒中mAb14284抗原決定基之變異程度，利用在2022年1月1日至2022年6月16日期間（亦即，Omicron波期間）鑑別之3,825,870個公開可用的SARS-CoV-2基因體的序列。在此時段期間收集之序列可能主要由Omicron序列組成，然而，其他循環中的變異體（諸如Delta）亦可能包括於此分析中。

在2022年1月1日與2022年6月16日之間，mAb14284所結合之RBD殘基在各位置相對於Wuhan-Hu-1病毒株≥99.96%保守，例外之處為4個殘基N440、G446、Q498及N501，其在Omicron變異體（亦即，BA譜系）中發生突變（表30）。N440、G446、Q498及N501在此監測時段期間之頻率分別為22%、59%、13%及12%；相反，N440K、Q498R及N501Y（均存在於Omicron變異體中）已成為主導。雖然在此時段期間G446仍為主導殘基，但39%之序列含有G446S突變，其存在於Omicron變異體之BA.1譜系中。

N440K、G446S、Q498R及N501Y以及在保守分析期間鑑別之結合抗原決定基內的其他取代（在下表30中指定）的功能影響在如實例4中所論述之中和研究中進行評估。mAb14284保留針對除K444突變以外所有測試抗原決定基殘基變異體的中和效力。與參考假顆粒相比，K444L、K444M、K444N、K444Q及K444T個別取代引起＞5倍之變化；然而，mAb14284之中和效力針對最主導（亦即，0.0141%）K444變異體K444R假型化之假顆粒在1.5倍範圍內（表19）。表 30 ：2022年1月1日至2022年6月16日公開可用的SARS-CoV-2基因體中REGN14284抗原決定基變異體的頻率概述

RBD 中之AA 位置	參考序列（Wuhan-Hu-1 ）	觀測到的抗原決定基變異體之頻率順序（由高至低）
第1	第2
殘基	Freq （% ）	殘基	Freq （% ）	殘基	Freq （% ）
440	N	22.3472	K	78.1540	del	0.0026
441	L	99.9942	del	0.0025	F	0.0016
443	S	99.9964	del	0.0024	N	0.0002
444	K	99.9699	R	0.0141	N	0.0095
445	V	99.9834	A	0.0082	I	0.0033
446	G	58.9933	S	38.6232	V	0.0133
447	G	99.9948	del	0.0033	S	0.0005
449	Y	99.9643	H	0.0199	N	0.0137
498	Q	12.7255	R	87.5676	L	0.0115
499	P	99.9840	del	0.0095	R	0.0025
500	T	99.9832	del	0.0097	S	0.0031
501	N	12.3329	Y	87.9706	del	0.0101
502	G	99.9853	del	0.0104	L	0.0007

針對參考（Wuhan-Hu-1）SARS-CoV-2基因體分析2022年1月1日至2022年6月16日鑑別之總共3,825,870個公開可用的SARS-CoV-2基因體序列。在此時段期間收集之資料可能主要反映Omicron序列，然而，其他循環中的變異體（諸如Delta）亦可能包括於此分析中。計算了mAb14284抗原決定基內變異體之頻率（freq）（藉由本文所描述之結構研究確定）。胺基酸（AA）位置指示SARS-CoV-2 S蛋白RBD中之殘基（如表29中顯示））。對於抗原決定基內之各AA位置，顯示參考殘基及2個最常見變異體殘基的頻率。「Del」表示在該AA位置處之缺失。截至2022年6月16日評估之最主導循環抗原決定基殘基變異體（N439K、N439V、N440D、N440K、L441F、L441Q、K444L、K444M、K444N、K444Q、K444R、K444T、V445A、V445T、G446D、G446R、G446S、G446V、G447V、N448S、Y449D、Y449F、Y449H、Y449N、Y449S、Q498H、Q498R、T500A、T500F、T500N、N501T、N501Y）的功能影響概述於表19中。實例 11 ： mAb15160 存在下之活體外 VSV-SARS-CoV-2-S 病毒逃脫突變體選擇

為了評估SARS-CoV-2逃脫突變體選擇，非洲綠猴腎細胞用複製的VSV-SARS-CoV-2-S（Wuhan-Hu-1病毒株）感染，且與一系列濃度之mAb15160或IgG1同型對照一起培育4天。監測感染細胞之病毒誘導細胞病變效應（CPE）作為病毒複製之讀數。藉由在抗體濃度增加之情況下可觀測到的CPE評估的中和功效喪失指示逃脫突變體之潛在選擇。自具有最高mAb濃度及可觀測到的CPE之孔中收集含有病毒的上清液，且使其在存在相同mAb之情況下進一步傳代。傳代後，對含有病毒之上清液進行RNA序列分析，且若胺基酸變化在經抗SARS-CoV-2 S蛋白mAb處理之樣本中存在，但在輸入病毒（接種物）及對照樣本（IgG1對照或無mAb對照）兩者中均不存在，則S蛋白中之所有胺基酸變化均指定為「推定逃脫突變」。

在第一次傳代內，在0.016至50 μg/mL mAb15160存在下觀測到≥90%之CPE。在用mAb15160選擇下第一次傳代後，病毒基因體之深度定序鑑別mAb15160之SARS-CoV-2 RBD結合抗原決定基中的2個推定逃脫突變—F486V及Y489H。值得注意的是，在突出的Omicron及Delta變異體或任何其他先前關注的變異體中均未發現此等個別突變，表明當前沒有與此等突變有關的臨床問題。

如上所述，在中和分析中評估了各推定逃脫突變體對mAb15160活性之功能影響。與參考假顆粒相比，F486V及Y489H分別使mAb15160之中和活性降低＞531倍及122倍，證實F486V及Y489H為mAb15160之逃脫突變體。實例 12 ： mAb15160 之活體外效應功能活性

在用巨噬細胞群落刺激因子（MCSF）分化之兩個獨立供體之螢光標記初代MDM效應細胞的存在下，評估mAb15160介導經工程改造以表現全長（FL）SARS-CoV-2 S蛋白之螢光標記目標細胞（Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL）之抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP）的能力。結果證明，mAb15160介導Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL細胞之濃度依賴性ADCP，EC ₅₀值在皮莫耳範圍內（表31），而在不表現SARS-CoV-2 S蛋白之親代細胞中未觀測到ADCP。IgG1同型對照不介導Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL或Jurkat/hCD20細胞株之ADCP，而抗CD20 IgG1對照介導Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL及Jurkat/hCD20細胞株兩者之ADCP，證明分析中使用之效應細胞吞噬各測試細胞株的能力。表 31 ： mAb15160 所介導之目標細胞 ADCP 之 EC ₅₀ 及最大吞噬作用值的概述

mAb	MDM 供體 #1	MDM 供體 #2
Jurkat/hCD20/ SARS - CoV - 2 S FL	Jurkat/hCD20	Jurkat/hCD20/ SARS - CoV - 2 S FL	Jurkat/hCD20
EC ₅₀ （ M ）	Max ADCP ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max ADCP ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max ADCP ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max ADCP ^a （ % ）
mAb15160	7.81E-11	27.5	ND	14.7	4.76E-11	31.1	ND	11.1
mAb10933 （卡斯瑞韋單抗）	9.70E-12	28.3	ND	14.0	2.23E-11	28.6	ND	11.5
mAb10987 （依米得韋單抗）	2.91E-11	32.3	ND	14.8	1.98E-11	30.4	ND	10.7
卡斯瑞韋單抗+依米得韋單抗	1.20E-10	49.5	ND	15.5	5.78E-11	48.2	ND	15.1
IgG1同型對照	ND	13.1	ND	16.9	ND	9.6	ND	14.6
抗CD20 IgG1	1.01E-09	31.1	7.75E-10	45.4	1.49E-10	30.3	4.67E-10	45.2

^a最大（max）ADCP定義為在測試濃度範圍（0 nM至20 nM，其中0 nM為無抗體對照）內觀測到的最高平均ADCP百分比值。 ND，未確定，因為未觀測到濃度依賴性增加

使用來自三個獨立供體之人類初代自然殺手（NK）細胞作為效應細胞，評估mAb15160介導針對Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL及Jurkat/hCD20目標細胞之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性（ADCC）的能力。結果證明，mAb15160介導針對Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL目標細胞之ADCC，但不介導針對SARS-CoV-2陰性親代細胞之ADCC，在各NK供體之情況下展現不同活性（供體#3 ＞供體#2；供體#1未顯示活性（表32）。IgG1對照不介導Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL或Jurkat/hCD20細胞株之ADCC，而陽性對照抗CD20 IgG1介導Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL及Jurkat/hCD20細胞株兩者之ADCC，證明分析中使用之所有NK細胞針對各測試細胞株之細胞毒性潛力。表 32 ： mAb15160 所介導之針對目標細胞的 ADCC 之 EC ₅₀ 及最大細胞毒性值的概述

mAb

NK 供體#1

NK 供體#2

NK 供體#3

Jurkat/hCD20/ SARS -CoV -2 S FL

Jurkat/hCD20

Jurkat/hCD20/ SARS -CoV -2 S FL

Jurkat/hCD20

Jurkat/hCD20/ SARS -CoV -2 S FL

Jurkat/hCD20

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

EC ₅₀ （M ）

Max 細胞毒性 ^a ^（ % ）

mAb15160

ND

1.8

NC

4.6

NC

6.3

ND

3.1

6.32E-11

12.9

ND

0.0

mAb10933（卡斯瑞韋單抗）

ND

1.4

NC

4.7

NC

5.0

NC

3.6

4.89E-11

11.1

ND

1.2

mAb10987（依米得韋單抗）

7.42E-10

8.1

NC

3.9

5.05E-09

10.5

ND

1.9

6.44E-11

26.6

ND

1.3

卡斯瑞韋單抗+ 依米得韋單抗

ND

1.6

ND

0.8

NC

4.1

ND

4.8

3.60E-11

15.4

ND

0.0

IgG1同型對照

ND

1.8

ND

0.7

ND

0.0

NC

6.4

ND

0.0

ND

0.5

抗CD20 IgG1

2.63E-12

20.0

3.03E-12

21.0

8.19E-12

15.1

8.08E-13

26.8

3.53E-14

14.5

NC

37.7

^a最大（max）細胞毒性定義為在測試濃度範圍內觀測到的最高平均細胞毒性百分比值 NC，未計算，因為資料不符合4參數邏輯方程；ND，未確定，因為未觀測到濃度依賴性增加。

在使用經工程改造以表現活化T細胞之核因子-螢光素酶（NFAT-Luc）報導基因及人類FCGR3A的Jurkat T細胞（Jurkat/NFAT-Luc/FCGR3A）的替代ADCC報導生物分析中，在Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL目標細胞存在下，評估mAb15160介導FCGR3A信號傳導活化的能力。FCGR3A經由與目標細胞結合之人類IgG1抗體的Fc域接合引起NFAT之活化且驅動螢光素酶之表現，其隨後經由發光讀出量測。與使用初代NK細胞之ADCC分析的結果一致，ADCC替代報導分析之結果證明在Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL目標細胞存在下，mAb15160介導表現FCGR3A之報導細胞螢光素酶活性的濃度依賴性增加，EC ₅₀為2.97×10 ^-10M。在Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL或Jurkat/hCD20細胞株存在下，IgG1陰性對照不活化FCGR3A。

評估mAb15160在5%合併（亦即，來自若干供體）NHS存在下介導針對Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL及Jurkat/hCD20目標細胞之CDC的能力。結果證明，在抗體濃度範圍為0.95 pM至1 μM時，在5% NHS存在下，mAb15160不介導針對Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL或Jurkat/hCD20細胞的CDC。用於該分析之NHS在相同目標細胞株中使用陽性對照抗CD20 IgG1評估介導CDC之能力。在NHS存在下，抗CD20 IgG1以濃度依賴性方式介導針對目標細胞株之CDC。在不存在NHS之情況下，抗CD20 IgG1不介導針對任何測試目標細胞株之裂解。實例 13 ：在 mAb14284 存在下之活體外 VSV-SARS-CoV-2-S 病毒逃脫突變體選擇

為了評估SARS-CoV-2逃脫突變體選擇，非洲綠猴腎細胞用複製假型化VSV-SARS-CoV-2-S（Wuhan-Hu-1病毒株）感染，且與一系列濃度之mAb14284或IgG1同型對照一起培育4天。監測感染細胞之病毒誘導細胞病變效應（CPE）作為病毒複製之讀數。藉由在抗體濃度增加之情況下可觀測到的CPE評估的中和功效喪失指示逃脫突變體之潛在選擇。自具有最高mAb濃度及可觀測到的CPE之孔中收集含有病毒的上清液，且使其在存在相同mAb之情況下進一步傳代。傳代後，對含有病毒之上清液進行RNA序列分析，且若在經mAb14284處理之樣本中存在胺基酸變化，但在IgG1對照樣本中不存在胺基酸變化，則S蛋白中之所有胺基酸變化均指定為「推定逃脫突變」。

在第一次傳代內，在0.016至50 μg/mL mAb14284存在下觀測到≥90%之CPE（表33）。在用mAb14284選擇下第一次傳代後，病毒基因體之深度定序鑑別REGN14284之SARS-CoV-2 RBD結合抗原決定基中的3個推定逃脫突變—K444E、K444N及V445D（表34）。

推定逃脫突變體K444N對mAb14284活性之功能影響在實例4中論述之中和分析中評估。與參考假顆粒相比，K444N變異體導致mAb14284中和活性完全喪失（表19），證實K444N為mAb14284之逃脫突變體。

K444E及V445D之功能分析正在進行中。然而，K444L、K444M、K444N、K444Q、K444T、V445A及V445T突變均導致mAb14284中和活性降低或完全喪失；針對K444R突變，mAb14284中和活性得到保留（表19）。表 33 ：推定 VSV-SARS-CoV-2-S 病毒逃脫突變體之選擇

抗體	CPE （ % ）
50 μg/mL	10 μg/mL	2 μg/mL	0.4 μg/mL	0.08 μg/mL	0.016 μg/mL	無 mAb
	第 1 次傳代
mAb14284	≥ 90	≥90	≥90	≥90	≥90	≥90	≥90
IgG1對照	≥ 90	≥90	≥90	≥90	≥90	≥90	≥ 90

在一系列濃度（總計0.016至50 μg/mL）之mAb14284或IgG1同型對照mAb存在下，非洲綠猴腎細胞用VSV-SARS-CoV-2-S病毒感染4天。藉由監測病毒誘導之CPE來篩選細胞之病毒複製。自具有最高抗體濃度及可偵測到的病毒複製（≥20% CPE）的孔中收集含有病毒之上清液。對病毒RNA進行深度定序以確定推定逃脫突變之身分。對無抗體對照（0 μg/mL）進行定序以監測組織培養適應。粗體、帶底線本文指示經定序之樣本。表 34 ： 傳代病毒之深度定序鑑別受體結合域中之推定逃脫突變

基因體位置	4407	4409	4411
參考核苷酸	A	G	T
變異體核苷酸	G	T	A
基因位置	1330	1332	1334
突變性質	nSNP	nSNP	nSNP
AA 位置	444	444	445
參考 AA	K	K	V
變異體 AA	E	N	D
接種物	0%	0%	0%
mAb14284	7%	19%	67%
IgG1同型對照	0%	0%	0%
無Ab	0%	0%	0%

感染後4天，自顯示可偵測CPE之具有最高mAb濃度的孔中分離病毒RNA。進行深度定序以鑑別S蛋白序列相對於Wuhan-Hu-1參考序列之變化。僅RBD變異體概述於此表中。實例 14 ： mAb14284 之活體外效應子功能活性

與目標細胞結合之IgG抗體可經由其恆定（Fc）區，藉由與巨噬細胞及自然殺手（NK）細胞上表現之特定FCGR相互作用介導效應功能，分別引起抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP）及抗體依賴性細胞毒性（ADCC），或藉由與補體蛋白結合，引起補體依賴性細胞毒性（CDC），從而引起目標細胞之破壞。

進行一系列活體外研究，以評估mAb14284介導針對表現來自Wuhan-Hu-1病毒株（AA 1-1273）以及BA.1及BA.2 omicron譜系（AA 1-1270）之全長（FL）SARS-CoV-2 S蛋白的目標細胞之ADCP、ADCC及CDC的能力。為了允許同時測試抗CD20 IgG1陽性對照抗體，目標細胞亦經工程改造以穩定表現人類CD20（hCD20）。

具體而言，評估mAb14284之以下能力：1）使用單核球衍生之巨噬細胞（MDM）作為效應細胞介導目標細胞之ADCP；2）以初代自然殺手（NK）細胞作為效應細胞介導目標細胞之ADCC；3）在ADCC替代報導分析中活化FCGR3A信號傳導；4）在正常人類血清（NHS）存在下介導目標細胞之CDC。

在用巨噬細胞群落刺激因子（MCSF）分化之兩個獨立供體之螢光標記初代MDM效應細胞存在下，評估mAb14284介導表現FL Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之螢光標記Jurkat/hCD20目標細胞之ADCP的能力。mAb14284介導表現SARS-CoV-2 Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之Jurkat/hCD20細胞的濃度依賴性ADCP，EC ₅₀值在皮莫耳範圍內（表35），而在不表現SARS-CoV-2 S蛋白之親代細胞情況下未觀測到ADCP。IgG1同型對照不介導任何測試細胞株之ADCP，而抗CD20 IgG1對照介導所有測試細胞株之ADCP，證明分析中使用之效應細胞吞噬各評估細胞株的能力。表 35 ： mAb14284 所介導之目標細胞 ADCP 之 EC ₅₀ 及最大吞噬作用值的概述

mAb	Jurkat/hCD20/SARS -CoV -2 Wu-1 S	Jurkat/hCD20/SARS -CoV -2 BA.1 S	Jurkat/hCD20/SARS -CoV -2 BA.2 S	Jurkat/hCD20
EC ₅₀ （M ）	Max ADCP ^a ^（ % ）	EC ₅₀ （M ）	Max ADCP ^a ^（ % ）	EC ₅₀ （M ）	Max ADCP ^a ^（ % ）	EC ₅₀ （M ）	Max ADCP ^a ^（ % ）
MDM 供體#1
mAb14284	NC	38.6	3.11E-11	44	4.37E-11	46.5	ND	0
IgG1同型對照	8.78E-11	45.5	7.97E-11	61.5	2.30E-10	37.4	1.77E-10	54.9
抗CD20 IgG1	ND	2	ND	4.4	ND	4.1	ND	4.5
MDM 供體#2
mAb14284	1.64E-11	49.7	3.73E-11	60.9	8.74E-11	43.8	ND	0
IgG1同型對照	8.10E-11	87.3	8.21E-11	80.4	2.23E-10	22.5	3.18E-10	37.9
抗CD20 IgG1	ND	7.4	ND	1.5	ND	0	ND	0

^a最大（max）ADCP定義為在測試濃度範圍（0 nM至20 nM，其中0 nM為無抗體對照）內觀測到的最高平均ADCP百分比值。 NC，未計算，因為資料不符合4參數邏輯方程；ND，未確定，因為未觀測到濃度依賴性增加

使用自3個供體合併之人類初代NK細胞作為效應細胞，評估mAb14284介導針對表現FL Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之Jurkat/hCD20目標細胞之ADCC的能力。結果證明，mAb14284介導針對表現SARS-CoV-2 Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之Jurkat/hCD20的濃度依賴性ADCC，EC ₅₀值在皮莫耳範圍內（表36），但不針對不表現SARS-CoV-2 S蛋白之親代細胞介導。IgG1對照不介導針對任何測試細胞株之ADCC，而陽性對照抗CD20 IgG1介導針對所有測試細胞株之ADCC，證明分析中使用之NK細胞對各評估細胞株的細胞毒性潛力。表 36 ： REGN14284 所介導之針對目標細胞之 ADCC 的 EC ₅₀ 及最大細胞毒性值的概述

mAb	Jurkat/hCD20/ SARS - CoV - 2 Wu-1 S	Jurkat/hCD20/ SARS - CoV - 2 BA.1 S	Jurkat/hCD20/ SARS - CoV - 2 BA.2 S	Jurkat/hCD20
EC ₅₀ （ M ）	Max 細胞毒性 ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max 細胞毒性 ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max 細胞毒性 ^a （ % ）	EC ₅₀ （ M ）	Max 細胞毒性 ^a （ % ）
mAb14284	6.41E-12	7.9	2.64E-11	8.3	5.37E-12	8.3	ND	0.4
IgG1同型對照	ND	0.6	ND	0.2	ND	0.6	ND	0.6
抗CD20 IgG1	5.83E-12	16.9	3.03E-12	18.8	1.49E-11	18.7	1.17E-11	15.1

在使用經工程改造以表現活化T細胞之核因子-螢光素酶（NFAT-Luc）報導基因及人類FCGR3A的Jurkat T細胞（Jurkat/NFAT-Luc/FCGR3A）的替代ADCC報導生物分析中，在表現FL SARS-CoV-2 Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之Jurkat/hCD20目標細胞存在下，評估mAb14284介導FCGR3A信號傳導活化的能力。FCGR3A經由與目標細胞結合之人類IgG1抗體的Fc域接合引起NFAT之活化且驅動螢光素酶之表現，其隨後經由發光讀出量測。

與使用初代NK細胞之ADCC分析的結果一致，ADCC替代報導分析之結果證明在表現SARS-CoV-2 Wu-1、BA.1或BA.2 S蛋白之目標細胞存在下，mAb14284以皮莫耳EC ₅₀值介導表現FCGR3A之報導細胞螢光素酶活性的濃度依賴性增加，但不針對不表現SARS-CoV-2 S蛋白之親代細胞。在任何評估細胞株存在下，IgG1陰性對照均未活化FCGR3A。

評估mAb14284在5%合併（亦即，來自若干供體）NHS存在下介導針對Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 Wu-1 S、Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.1 S、Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.2 S及Jurkat/hCD20目標細胞之CDC的能力。結果證明，在抗體濃度範圍為0.95 pM至1 μM時，在5% NHS存在下，mAb14284不介導針對親代Jurkat/hCD20細胞，以及表現全長SARS-CoV-2 Wu.1、BA.1或BA.2 S蛋白之Jurkat/hCD20細胞的CDC。

用於該分析之NHS在相同目標細胞株中使用陽性對照抗CD20 IgG1評估介導CDC之能力。在NHS存在下，抗CD20 IgG1以濃度依賴性方式介導針對目標細胞株之CDC。在不存在NHS之情況下，抗CD20 IgG1不介導針對任何測試目標細胞株之裂解。實例 15 ：評估 mAb15160 之安全性及功效的 3 期臨床試驗

在自經mAb15160治療之健康志願者獲得安全性及耐受性資料後，啟動一項3期、隨機分組、雙盲、安慰劑對照研究，以評估mAb15160預防症狀性COVID-19之安全性及功效（表37）。此為一項事件驅動研究，預計將招募大約5000名年齡≥ 18歲之參與者，此等參與者具有或不具有嚴重SARS-CoV-2感染之風險因素，其在隨機分組時對SARS-CoV-2呈PCR陰性。研究參與者以1:1之比隨機分入2個治療組（300 mg mAb15160每12週投與一次（Q12W）或安慰劑）之一，在6個月內以皮下（SC）注射投藥。

此研究之主要指標為症狀性、經RT-qPCR確認的SARS-CoV-2感染。次要指標包括重複SC注射mAb15160之安全性及耐受性。安全性評估包括但不限於收集治療中出現的不良事件、生命徵象及安全性實驗室測試。亦抽取血液用於藥物濃度、免疫原性及血清中和滴度量測。與安慰劑組相比，投與mAb15160引起症狀性SARS-CoV-2感染百分比降低。表 37 ： 3 期研究設計

假設：	用 mAb15160 進行之預防預防症狀性 SARS-CoV-2 感染。
治療組及劑量：	mAb15160（300 mg SC Q12W×2劑量）安慰劑SC
關鍵設計元素	此為一項事件驅動、3期、隨機分組、雙盲、安慰劑對照研究，用以評估mAb15160預防症狀性COVID-19之安全性及功效此項研究招募大約5000名年齡 ≥18歲之參與者，其具有或不具有嚴重SARS-CoV-2感染之風險因素。研究參與者將以1:1之比隨機分入2個治療組（mAb15160或安慰劑）之一，在6個月內以皮下注射投藥。
持續時間：	253天
群體：	≥18歲，具有SARS-CoV-2陰性RT-qPCR，具有或不具有嚴重COVID-19之風險因素
計劃的個體數目：	大約5000名參與者
主要指標：	6個月功效評估時段期間症狀性、經RT-qPCR確認的SARS-CoV-2感染病例
次要指標：	重複SC注射mAb15160之安全性及耐受性 mAb15160之血清濃度及免疫原性

Q12W =每12週給藥一次實例 16 ：評估 mAb15160 在暴露前預防中之安全性及功效的 3 期臨床試驗

此為一項在成人及青少年中進行之3期、隨機分組、雙盲、安慰劑對照研究，用以評估mAb15160作為預防COVID-19之暴露前預防的安全性及功效。此事件驅動研究招募大約5000名年齡≥ 12歲之參與者。研究參與者以1:1之比隨機分入2個治療組（mAb15160或安慰劑）之一，在6個月內以皮下注射投藥。研究由三個時期組成：1至14天篩選期、6個月預防及功效評估期（EAP）及3個月隨訪期（參見表38）。與安慰劑組相比，投與mAb15160引起症狀性SARS-CoV-2感染百分比降低。篩選/基線

在參與者提供知情同意後，其將針對研究資格進行評估。篩選訪視在隨機分組及基線訪視前至多14天進行，且在某些個體中，篩選、隨機分組及基線訪視可能在同一天進行。為納入研究，參與者具有陰性SARS-CoV-2測試結果，較佳來自基線訪視72小時內收集之樣本的逆轉錄酶聚合酶鏈反應（RT-PCR）分析。隨機分組將按年齡組類別（≥12歲至＜18歲、≥18歲至≤65歲、＞65歲）、免疫功能不全狀態（是/否）及先前疫苗接種（是/否）分層以分配治療組。大約20%或更多的登記參與者將具有免疫功能不全狀態。治療及功效評估期（EAP）

在第1天，在評估可用的實驗室結果、完成基線評估、樣本收集及隨機分組後，所有參與者接受其第一劑研究藥物。研究藥物以2.5 ml皮下（SC）注射形式以盲法投與。參與者以1:1之比例隨機分入兩個治療組之一：mAb15160（每8週一次皮下投與（SC Q8W）300 mg或每8週一次皮下投與安慰劑。表 38 ： 3 期研究設計

假設	用皮下mAb15160進行預防將預防症狀性SARS-CoV-2感染。注意：症狀性 SARS-CoV-2 感染由功效評估期（ EAP ）期間之陽性 SARS-CoV-2 RT-qPCR 結果，伴隨在陽性 RT-qPCR 之 ±10 天內出現至少一種症狀來確定。 EAP 為基線至 6 個月。
研究目標及指標	主要目標：● 評估與安慰劑相比，mAb15160在預防症狀性SARS-CoV-2感染方面的功效。	主要指標：● 功效評估期（EAP）期間症狀性、經RT-PCR確認的SARS-CoV-2感染病例的累積發病率
	次要目標：● 評估在研究群體中重複SC注射mAb15160之安全性及耐受性 ● 評估隨時間推移血清中mAb15160之濃度 ● 評估mAb15160之免疫原性	次要指標：● 在EAP及隨訪期期間具有治療中出現的不良事件（TEAE）的參與者比例 ● 在EAP及隨訪期期間具有導致研究藥物停藥之TEAE的參與者比例 ● 在EAP及隨訪期期間具有治療中出現的嚴重不良事件（SAE）的參與者比例 ● 在EAP期間具有特殊關注不良事件（AESI）的參與者比例 ● 隨時間推移血清中mAb15160濃度之變化 ● 隨時間推移，抗藥物抗體（ADA）之發生率及滴度，以及mAb15160之中和抗體（NAb）的發生率
	探索性目標：● 評估與安慰劑相比，mAb15160臨床功效及疾病預防的其他指標 ● 評估基線及mAb15160投與後對SARS-CoV-2之體液免疫反應 ● 評估mAb15160之血清中和潛力 ● 藉由對基線後感染之參與者中的SARS-CoV-2進行定序來表徵病毒變異體 ● 探索預測或指示mAb15160之安全性及/或功效、COVID-19疫苗反應、SARS-CoV-2感染及免疫反應、COVID-19疾病進展以及mAb15160之臨床結果的生物標記 ● 探索mAb15160暴露與所選功效及安全性指標及/或生物標記之間的關係	探索性指標：● 隨訪期期間症狀性、經RT-PCR確認的SARS-CoV-2感染病例的累積發病率 ● EAP期間經RT-PCR確認的SARS-CoV-2感染病例（無論症狀如何）的累積發病率 ● 在具有嚴重COVID之一或多個風險因素的亞組中，在功效評估期（EAP）期間，症狀性、經RT-PCR確認的SARS-CoV-2感染病例的累積發病率 ● 在EAP及隨訪期期間出現≥1種中度COVID-19症狀的參與者比例 ● 在EAP及隨訪期期間具有COVID-19相關住院、急診室就診、急救中心就診或死亡的參與者比例 ● 在EAP及隨訪期期間具有COVID-19相關住院或死亡的參與者比例 ● 在EAP及隨訪期期間因COVID-19需要補充氧氣的參與者比例 ● 隨訪期結束前因COVID-19入住加護病房（ICU）的參與者比例 ● 隨訪期結束前因COVID-19需要機械通氣的參與者比例 ● 在基線及mAb15160投與後隨時間量測之血清抗SRS-CoV-2抗體（諸如抗核殼體蛋白IgG）的絕對含量、相對於基線之變化及相對於基線之變化百分比 ● 在基線及mAb15160治療後針對D614G及omicron變異體之血清中和抑制稀釋50%（ID50）滴度的絕對值 ● mAb15160治療後針對D614G及omicron變異體之ID50相對於基線的變化

患者群體
個體數目	大約5000名參與者參加此項研究。
研究群體	此項研究招募具有或不具有進展為嚴重COVID-19之風險因素，且在研究開始時呈RT-PCR陰性的參與者。
納入標準	1.篩選時年齡≥12歲注意：年齡 ≥ 12 歲且小於 18 歲之參與者必須免疫功能不全，且僅在當地要求允許之情況下登記。2.在隨機分組前≤72小時收集之樣本或使用當地RT-PCR測試及樣本收集遵循分析標準具有SARS-CoV-2陰性RT-PCR結果。注意：結果應在給藥前應審查且確認為陰性。鼻咽拭子樣本為高度較佳的，但符合當地標準之其他樣本類型（諸如鼻、口咽 \[OP] 或唾液）亦可接受。3.願意且能夠： a.提供由研究參與者或法律上可接受的代表簽署的知情同意書 b.遵守臨床訪視及研究相關程序，包括提供鼻咽拭子樣本 4.由研究者根據病史、體格檢查、生命徵象量測以及在篩選及/或投與研究藥物前進行的實驗室量測，判斷為健康狀況穩定（包括患有慢性穩定病狀之人）
排除標準	1. 預期壽命少於2年 2. 具有與COVID-19一致的症狀（由研究者確定） 3. 具有COVID-19感染史或在隨機分組前90天內接受過SARS-CoV-2研究、授權或批准的疫苗 4. 在EAP期間計劃使用任何研究、授權或批准的COVID-19疫苗 5. 先前、當前或計劃使用以下治療中之任一者：COVID-19恢復期血漿、其他針對SARS-CoV-2之單株抗體（例如，巴尼韋單抗（bamlanivimab）及埃特司韋單抗（etesevimab）、替沙格韋單抗（tixagevimab）及西加韋單抗（cilgavimab）、索托韋單抗（sotrovimab）），或任何其他COVID-19治療（授權、批准或研究）注意：先前使用定義為自篩選過去 30 天或治療之 5 個半衰期內（以較長者為準）6. 計劃開始靜脈內免疫球蛋白（IVIG）或皮下免疫球蛋白（SCIG）療法 7. 已知流感或其他呼吸道病原體之活動性感染，藉由診斷測試確認 8. 當前住院或在篩選訪視之30天內因任何原因住院（亦即，＞24小時） 9. 已知對研究藥物之組分過敏或產生過敏性反應 10. 懷孕或正在哺乳。 11. 在初次給藥/第一次治療開始之前、在研究期間及在最後一次給藥之後至少6個月，不願意採取非常有效的避孕措施的有生育潛力之女性（WOCBP） ¹。非常有效的避孕措施包括： a. 禁慾 ^2,3b. 穩定使用組合（含有雌激素及助孕素）激素避孕（經口、陰道內、經皮）或僅助孕素激素避孕（經口、可注射、可植入），其與抑制在篩選前2個或更多個月經週期開始的排卵相關 c. 子宮內裝置（IUD）或子宮內激素釋放系統（IUS） d. 兩側輸卵管結紮 ¹WOCBP定義為在月經初潮之後直至變為絕經為止可育之女性，除非永久不育。永久絕育方法包括子宮切除術、兩側輸卵管切除術及兩側卵巢切除術。絕經後狀態定義為持續12個月無月經，無替代的醫學原因。絕經後範圍內之高促卵泡激素（FSH）含量可用於確認未使用激素避孕或激素替代療法之女性的絕經後狀態。然而，在不存在12個月之閉經的情況下，單次FSH量測不足以判定絕經後狀態之發生。以上定義係根據臨床試驗促進組（CTFG）指南。已記載做過子宮切除術或輸卵管結紮之女性不需要妊娠測試及避孕。 ²禁慾僅在定義為在與研究藥物相關之整個風險期期間避免異性性交時才視為非常有效的方法。需要關於臨床試驗之持續時間及患者之較佳及常見生活方式評估禁慾之可靠性。 ³週期性禁慾（日曆法、徵狀基礎體溫法、排卵後法）、體外射精（性交中斷）、僅殺精劑及泌乳絕經法（LAM）為不可接受之避孕方法。 12. 正在或計劃進入檢疫中心 13. 為臨床現場研究團隊之成員或其直系親屬

***************** 表 39 ：自 ST.26 格式序列表排除的序列

SEQ ID NO:	序列
13	gaggtcagt
14	EVS
33	gagggcaat
34	EGN
67	gagggcact
68	EGT
85	gaggacagt
86	EDS
105	gctgcatcc
106	AAS
125	ggtgcatcc
126	GAS
163	ggtaacagc
164	GNS
183	agtaatgat
184	SND
203	gacaatgat
204	DND
241	gatgcatcc
242	DAS
261	ggtgcaaca
262	GAT
299	agtgataat
300	SDN
319	gtcaataat
320	VNN
391	aaggcatct
392	KAS
445	gataaaaac
446	DKN
464	gaactcact
465	ELT
484	gatgtcact
485	DVT
504	gaggtcact
505	EVT
524	gagggcagt
525	EGS
541	gatgtcagt
542	DVS
577	gaaaataat
578	ENN
633	ttgggttct
634	LGS
653	ttgggatct
705	tctgcatcc
706	SAS
775	aaagacagt
776	KDS
795	ggtaacacc
796	GNT
846	aagatttct
847	KIS
915	ggtcacacc
916	GHT
932	aggaataat
933	RNN
968	tgggcatct
969	WAS
1000	ggtgcatcc
1001	GAS
1021	gctgcatcc
1022	AAS
1041	gatgtcagt
1042	DVS
1061	ggtaacagc
1062	GNS

本文中所引用之所有參考文獻均以引用的方式併入，其程度如同各個別出版物、資料庫條目（例如Genbank序列或GeneID條目）、專利申請案或專利特定且個別地指示以引用的方式併入一般。申請人意欲此以引用的方式併入之表述與每一個鑑別的出版物、資料庫條目（例如Genbank序列或GeneID條目）、專利申請或專利相關，即使此類引用不緊鄰藉由以引用的方式併入之專用表述。以引用的方式併入之專用表述（若存在）包括於本說明書內不會以任何方式弱化此以引用的方式併入之一般表述。在本文中引用參考文獻不旨在承認該參考文獻為相關先前技術，亦不構成對此等出版物或文獻之內容或日期的任何承認。

無

圖1顯示了41種抗SARS-CoV-2-S單株抗體與固定化SARS-Cov-2 RBD-MMH（SEQ ID NO: 1069）結合後之間的交叉競爭。紅色：預結合mAb-1使mAb-2與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了50%以上，且當mAb-1及mAb-2之結合順序顛倒時，與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合亦減少了50%以上。黃色：預結合mAb-1使mAb-2與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了50%以上，但當mAb-1及mAb-2之結合順序顛倒時，與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了不到50%。

圖2顯示了15種抗SARS-CoV-2-S單株抗體與固定化SARS-Cov-2 RBD-MMH結合後之間的交叉競爭。紅色：預結合mAb-1使mAb-2與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了50%以上，且當mAb-1及mAb-2之結合順序顛倒時，與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合亦減少了50%以上。黃色：預結合mAb-1使mAb-2與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了50%以上，但當mAb-1及mAb-2之結合順序顛倒時，與SARS-CoV-2 RBD-MMH之結合減少了不到50%。

圖3以3.9 Å解析度描繪了mAb14256、mAb10987及SARS-CoV-2棘醣蛋白之受體結合域（RBD）複合物的cryo-EM結構。

圖4顯示了mAb14256在RBD頂部結合，從而阻斷ACE2結合。mAb14256與mAb10933（中間結構）及mAb10985（未描繪）競爭。

圖5以3.18 Å解析度描繪了mAb15160、mAb14315及SARS-CoV-2棘醣蛋白之受體結合域（RBD）複合物的cryo-EM結構。

圖6分別以3.3及3.4 Å解析度描繪了mAb1428及mAb15160的抗原結合片段與來自Wuhan-Hu-1病毒株及BA.1譜系之受體結合域（RBD）複合物的cryo-EM結構。

無

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Claims

一種經分離重組抗體或其抗原結合片段，其特異性結合至冠狀病毒棘蛋白（CoV-S），其中該抗體具有以下特徵中之一或多者：（a）以小於約10 ^-8M之EC ₅₀結合至CoV-S；（b）在向感染冠狀病毒之動物投與後，與未進行該投與之可比感染冠狀病毒之動物相比，展現該感染冠狀病毒之動物的存活率提高；及/或（c）包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含表4之抗體之HCDR1、HCDR2及HCDR3的重鏈可變區；及/或（b）包含表4之抗體之LCDR1、LCDR2及LCDR3的輕鏈可變區。
如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含與表4之HCVR序列具有至少90%胺基酸序列一致性的胺基酸序列的重鏈免疫球蛋白可變區；及/或（b）包含與表4之LCVR序列具有至少90%胺基酸序列一致性的胺基酸序列的輕鏈免疫球蛋白可變區。
如請求項1至3中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含表4之單一抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3。
如請求項1至4中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含免疫球蛋白，該免疫球蛋白包含表4之單一抗體的HCVR及LCVR。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（i）包含分別在SEQ ID NO: 212/222之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（j）包含分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（k）包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；或（l）包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的LC。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC；（i）包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（j）包含分別在SEQ ID NO: 362/370之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（k）包含分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（l）包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（m）包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC；或（n）包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC及包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 495、497及499之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC；（i）包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（j）包含分別在SEQ ID NO: 493/501之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（k）包含分別包含SEQ ID NO: 495、497及3499之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（l）包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（m）包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC；或（n）包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC及包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列內所含有的三個互補決定區（CDR）的重鏈可變區（HCVR）；（b）包含分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR；（c）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR；（d）包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列內所含有的三個CDR的輕鏈可變區（LCVR）；（e）包含分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（f）包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；（g）包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的重鏈（HC）；（h）包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的輕鏈（LC）；（i）包含分別在SEQ ID NO: 887/895之胺基酸序列內所含有的CDR的HCVR/LCVR對；（j）包含分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2及HCDR3的HCVR，以及包含分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2及LCDR3的LCVR；（k）包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR以及包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；或（l）包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的HC以及包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的LC。
如請求項1之抗體或抗原結合片段，其包含：（a）包含表4之抗體之HCDR1、HCDR2及HCDR3的免疫球蛋白重鏈可變區；及/或（b）包含表4之抗體之LCDR1、LCDR2及LCDR3的免疫球蛋白輕鏈可變區。
一種抗體或其抗原結合片段，其與如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段競爭與CoV-S之結合。
一種抗體或其抗原結合片段，其與如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段結合至相同的CoV-S抗原決定基或結合至CoV-S上重疊的抗原決定基。
如請求項1至12中任一項之抗體或抗原結合片段，其係多特異性的。
如請求項1至13中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含以下特性中之一或多者：（a）抑制冠狀病毒之生長；（b）結合至冠狀病毒表面；（c）活體外限制細胞之冠狀病毒感染的傳播；及（d）保護經工程改造以表現人類ACE2或TMPRSS2蛋白的小鼠免於由冠狀病毒感染引起之死亡及/或體重減輕。
如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該CoV-S為SARS-CoV-2-S。
一種複合物，其包含與CoV-S多肽結合的如請求項1至15中任一項之抗體或抗原結合片段。
如請求項16之複合物，其中該CoV-S為SARS-CoV-2-S。
一種多肽，其包含：（a）包含表4中所示之HCVR胺基酸序列之抗體或抗原結合片段之HCVR域的HCDR1、HCDR2及HCDR3；或（b）包含表4中所示之LCVR胺基酸序列之免疫球蛋白鏈之LCVR域的LCDR1、LCDR2及LCDR3。
一種多核苷酸，其編碼：（a）如請求項18之多肽；（b）如請求項1至10中任一項之抗體或其抗原結合片段；（c）包含表4之HCVR中所含有的CDR序列的HCVR；（d）包含表4之LCVR中所含有的CDR序列的LCVR；（e）包含如表4中的抗體所示之HCDR1、HCDR2及HCDR3序列的HCVR；（f）包含如表4中的抗體所示之LCDR1、LCDR2及LCDR3序列的LCVR；（g）包含表4之HCVR/LCVR對中所含有的CDR序列的HCVR及LCVR；（h）分別包含如表4中的抗體所示之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列的HCVR及LCVR；（i）包含表4之抗體之HCVR序列的HCVR；（j）包含表4之抗體之LCVR序列的LCVR；（k）分別包含表4之抗體之HCVR及LCVR序列的HCVR及LCVR；（l）包含表4之抗體之重鏈（HC）序列的HC；（m）包含表4之抗體之輕鏈（LC）序列的LC；或（n）分別包含表4之抗體之重鏈（HC）及輕鏈（LC）序列的HC及LC。
一種載體，其包含如請求項19之多核苷酸。
一種宿主細胞，其包含如請求項1至15、19及20中任一項之抗體或抗原結合片段或多肽或多核苷酸或載體。
一對多核苷酸，其中：（a）第一多核苷酸，其編碼：（i）包含表4之抗體之HCVR中所含有的CDR序列的HCVR；（ii）包含如表4中的抗體所示之HCDR1、HCDR2及HCDR3序列的HCVR；（iii）包含表4之抗體之HCVR序列的HCVR；或（iv）包含表4之抗體之重鏈（HC）序列的HC；及（b）第二多核苷酸，其編碼：（i）包含表4之抗體之LCVR中所含有的CDR序列的LCVR；（ii）包含如表4中的抗體所示之LCDR1、LCDR2及LCDR3序列的LCVR；（iii）包含表4之抗體之LCVR序列的LCVR；或（iv）包含表4之抗體之輕鏈（LC）序列的LC。
如請求項22之多核苷酸對，其中：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在在含有SEQ ID NO: 212之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 220之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 214、216及218之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 222、126及224之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的LCVR；或（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 226之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 228之胺基酸序列的LC。
如請求項22之多核苷酸對，其中：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 362之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 370之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 364、366及368之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 372、106及374之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 362之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列的LCVR；（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC；或（e）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 1077之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列的LC。
如請求項22之多核苷酸對，其中：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 493之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 501之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 495、497及499之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 503、505及507之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列的LCVR；（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC；或（e）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 1075之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列的LC。
如請求項22之多核苷酸對，其中：（a）該第一多核苷酸編碼含有CDR的HCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 887之胺基酸序列之HCVR中，且該第二多核苷酸編碼含有CDR的LCVR，該CDR被涵括在含有SEQ ID NO: 895之胺基酸序列之LCVR中；（b）該第一多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 889、891及893之HCDR1、HCDR2及HCDR2胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼分別包含SEQ ID NO: 897、164及899之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列的LCVR；（c）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 887之胺基酸序列的HCVR，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 895之胺基酸序列的LCVR；或（d）該第一多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 901之胺基酸序列的HC，且該第二多核苷酸編碼包含SEQ ID NO: 903之胺基酸序列的LC。
一對載體，其分別包含如請求項22至26中任一項之第一及第二多核苷酸。
一種宿主細胞，其包含如請求項27之載體對。
一種用於製備如請求項1至15中任一項之抗體或抗原結合片段的方法，其包含：（a）將一或多種編碼該抗體或抗原結合片段之多核苷酸引入宿主細胞；（b）在有利於該一或多種多核苷酸表現之條件下培養該宿主細胞；及（c）視情況，自該宿主細胞及/或該宿主細胞在其中生長的培養基中分離該抗體或抗原結合片段。
如請求項29之方法，其中該宿主細胞為中國倉鼠卵巢細胞。
如請求項29或30之方法，其中該一或多種多核苷酸為一或多種如請求項19之多核苷酸，或如請求項22至26中任一項之多核苷酸對。
一種抗體或抗原結合片段，其為如請求項29至31中任一項之方法的產物。
一種組成物或套組，其包含如請求項1至15及32中任一項之抗體或抗原結合片段以及另外的治療劑。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至15及32中任一項之抗原結合蛋白及醫藥學上可接受之載劑，以及視情況選用之另外的治療劑。
如請求項33或34之組成物或套組，其與為抗病毒藥物或疫苗之另外的治療劑結合。
如請求項33至35中任一項之組成物或套組，其中該另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段，及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。
如請求項36之組成物或套組，其中該抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎，及/或該抗炎劑為抗體，視情況其中該抗體為沙利姆單抗（sarilumab）、托珠單抗（tocilizumab）或瑾司魯單抗（gimsilumab），及/或特異性結合至CoV-S之該抗體或其抗原結合片段為卡斯瑞韋單抗（casirivimab）或依米得韋單抗（imdevimab）。
如請求項36之組成物或套組，其中該抗體或抗原結合片段包含表4之第二抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。
一種容器或注射裝置，其包含如請求項1至15、32及33至38中任一項之抗原結合蛋白或組成物。
一種在有需要之個體中治療或預防冠狀病毒感染的方法，其包含投與治療有效量之如請求項1至15及32中任一項之抗原結合蛋白。
如請求項40之方法，其中該冠狀病毒係選自由以下組成之群組：SARS-CoV-2、SARS-CoV及MERS-CoV。
如請求項40或41之方法，其中向該個體投與一或多種另外的治療劑。
如請求項42之方法，其中該一或多種另外的治療劑為抗病毒藥物或疫苗。
如請求項42之方法，其中該一或多種另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段，及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。
如請求項44之方法，其中該抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎，及/或該抗炎劑為抗體，視情況其中該抗體為沙利姆單抗、托珠單抗或瑾司魯單抗，及/或特異性結合至CoV-S之該抗體或其抗原結合片段為卡斯瑞韋單抗或依米得韋單抗。
如請求項44之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含表4之第二抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。
一種用於將如請求項1至15及32中任一項之抗體或抗原結合片段投與至個體體內的方法，其包含將該抗體或抗原結合片段注射至該個體體內。
如請求項47之方法，其中將該抗體或抗原結合片段皮下、靜脈內或肌內注射至該個體體內。
如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段、組成物、套組、複合物、多肽、多核苷酸、載體、細胞或方法，其中該抗體或抗原結合片段包含VH3-66或Vk1-33可變域序列。
一種經分離抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體或抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項50之經分離抗體或其抗原結合片段，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。
如請求項51之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR。
如請求項51之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項51之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。
一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區、在包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項55之經分離抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。
如請求項55之經分離抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項55之經分離抗體，其中該經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項55之經分離抗體，其中該免疫球蛋白恆定區為IgG1恆定區。
如請求項55之經分離抗體，其為重組抗體。
如請求項55之經分離抗體，其係多特異性的。
一種醫藥組成物，其包含如請求項55之經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
如請求項62之醫藥組成物，其進一步包含第二治療劑。
如請求項63之醫藥組成物，其中該第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白；抗炎劑、抗瘧疾劑，及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。
如請求項63之醫藥組成物，其中該第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。
如請求項65之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項66之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。
如請求項67之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項68之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。
一種經分離抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體或抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項70之經分離抗體或其抗原結合片段，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。
如請求項70之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR。
如請求項70之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項70之經分離抗體或其抗原結合片段，其包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。
一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區、在包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項75之經分離抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。
如請求項75之經分離抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項75之經分離抗體，其中該經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項75之經分離抗體，其中該免疫球蛋白恆定區為IgG1恆定區。
如請求項75之經分離抗體，其為重組抗體。
如請求項75之經分離抗體，其係多特異性的。
一種醫藥組成物，其包含如請求項75之經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
如請求項82之醫藥組成物，其進一步包含第二治療劑。
如請求項83之醫藥組成物，其中該第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白；抗炎劑、抗瘧疾劑，及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。
如請求項83之醫藥組成物，其中該第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。
如請求項85之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項86之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列。
如請求項87之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項88之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。
一種經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區、在包含SEQ ID NO: 270中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 278中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項90之經分離抗體，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 272中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 274中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 276中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 280中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 106中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 282中所示之胺基酸序列。
如請求項90之經分離抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 270中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 278中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項90之經分離抗體，其中該經分離抗體包含有包含SEQ ID NO: 284中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 286中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項90之經分離抗體，其中該免疫球蛋白恆定區為IgG1恆定區。
如請求項90之經分離抗體，其為重組抗體。
如請求項90之經分離抗體，其係多特異性的。
一種醫藥組成物，其包含如請求項90之經分離抗體及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
如請求項97之醫藥組成物，其進一步包含第二治療劑。
如請求項98之醫藥組成物，其中該第二治療劑係選自由以下組成之群組：第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白；抗炎劑、抗瘧疾劑，及結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段。
如請求項98之醫藥組成物，其中該第二治療劑為第二抗體或其抗原結合片段，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列的SARS-CoV-2棘蛋白。
如請求項100之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈CDR（HCDR1、HCDR2及HCDR3），以及在包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項101之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO: 214中所示之胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO: 216中所示之胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO: 218中所示之胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO: 222中所示之胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO: 126中所示之胺基酸序列；及LCDR3，其包含SEQ ID NO: 224中所示之胺基酸序列。
如請求項102之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 212中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 220中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項103之醫藥組成物，其中該第二抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 226中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 228中所示之胺基酸序列的輕鏈。
一種醫藥組成物，其包含： a）第一經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第一經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），及在包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）；以及 b）第二經分離抗體，其結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第二經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 1030中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），及在包含SEQ ID NO: 1038中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 889中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 891中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 893中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 897中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 164中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 899中所示之胺基酸序列的LCDR3。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 887中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 895中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 901中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 903中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體包含：免疫球蛋白恆定區，其為IgG1恆定區。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體為重組抗體。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第一經分離抗體係多特異性的。
如請求項105之醫藥組成物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1032中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 1034中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 1036中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 1040中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 1042中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 1044中所示之胺基酸序列的LCDR3。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1030中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 1038中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項105之醫藥組成物，其中該第二經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1048中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1048中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項105至115中任一項之醫藥組成物，其中該醫藥組成物進一步包含第三經分離抗體。
如請求項116之醫藥組成物，其中該第三經分離抗體結合包含SEQ ID NO: 1008中所示之胺基酸序列之SARS-CoV-2棘蛋白，其中該第三經分離抗體包含免疫球蛋白恆定區，在包含SEQ ID NO: 1010中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3），及在包含SEQ ID NO: 1018中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈互補決定區（CDR）（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項116之醫藥組成物，其中該第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1012中所示之胺基酸序列的HCDR1、包含SEQ ID NO: 1014中所示之胺基酸序列的HCDR2、包含SEQ ID NO: 1016中所示之胺基酸序列的HCDR3、包含SEQ ID NO: 1020中所示之胺基酸序列的LCDR1、包含SEQ ID NO: 1022中所示之胺基酸序列的LCDR2及包含SEQ ID NO: 1024中所示之胺基酸序列的LCDR3。
如請求項116之醫藥組成物，其中該第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1010中所示之胺基酸序列的HCVR及包含SEQ ID NO: 1018中所示之胺基酸序列的LCVR。
如請求項116之醫藥組成物，其中該第三經分離抗體包含：包含SEQ ID NO: 1026中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1028中所示之胺基酸序列的輕鏈。
一種用於在有需要之個體中治療或預防Omicron變異體SARS-CoV-2感染的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
一種用於在有需要之個體中預防由感染Omicron變異體SARS-CoV-2引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有與表4之重鏈可變區（HCVR）具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之HCVR內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含與輕鏈可變區（LCVR）表4具有至少約90%序列一致性的胺基酸序列之LCVR內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項122之方法，其中該預防包含暴露前預防。
如請求項122之方法，其中該預防包含暴露後預防。
如請求項121至124中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含：（a）包含表4之抗體之HCDR1、HCDR2及HCDR3的免疫球蛋白重鏈可變區；及/或（b）包含表4之抗體之LCDR1、LCDR2及LCDR3的免疫球蛋白輕鏈可變區。
如請求項121至124中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含表4之抗體的HCDR1、HCDR2及HCDR3以及表4之該抗體的LCDR1、LCDR2及LCDR3。
如請求項121至126中任一項之方法，其中向該個體投與一或多種另外的治療劑。
如請求項127之方法，其中該一或多種另外的治療劑為抗病毒藥物或疫苗。
如請求項127之方法，其中該一或多種另外的治療劑係選自由以下組成之群組：抗炎劑、抗瘧疾劑、特異性結合TMPRSS2之抗體或其抗原結合片段，及特異性結合至CoV-S之抗體或其抗原結合片段。
如請求項129之方法，其中該抗瘧疾劑為氯奎或羥基氯奎，及/或該抗炎劑為抗體，視情況其中該抗體為沙利姆單抗、托珠單抗或瑾司魯單抗，及/或特異性結合至CoV-S之該抗體或其抗原結合片段為卡斯瑞韋單抗或依米得韋單抗。
如請求項129之方法，其中該抗體或抗原結合片段包含表4之第二抗體的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3序列。
如請求項121至131中任一項之方法，其中該投與包含將該抗體或抗原結合片段注射至該個體體內。
如請求項132之方法，其中將該抗體或抗原結合片段皮下、靜脈內或肌內注射至該個體體內。
一種用於在有需要之個體中治療或預防由SARS-CoV-2感染引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3）。
如請求項134之方法，其中該HCDR1包含SEQ ID NO: 364中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 366中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 368中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 372中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 106中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 374中所示之胺基酸序列。
如請求項134及135中任一項之方法，其中該HCVR包含SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列。
如請求項134至136中任一項之方法，其中該LCVR包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列。
如請求項134至137中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 376中所示之胺基酸序列的重鏈。
如請求項134至138中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 378中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項134至139中任一項之方法，其中該投與包含經由注射投與該抗體或抗原結合片段。
如請求項140之方法，其中該注射為靜脈內注射。
如請求項140之方法，其中該注射為皮下注射。
如請求項134至142中任一項之方法，其中該投與包含投與300 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項134至142中任一項之方法，其中該投與包含投與600 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項134至142中任一項之方法，其中該投與包含投與1200 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項134至142中任一項之方法，其中該投與包含投與兩劑該抗體或其抗原結合片段。
如請求項146之方法，其中該兩劑中之各者包含300 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項146或147之方法，其中該兩劑相隔4週、相隔5週、相隔6週、相隔7週、相隔8週、相隔9週、相隔10週、相隔11週、相隔12週、相隔13週、相隔14週、相隔15週或相隔16週投與。
如請求項146或147之方法，其中該兩劑相隔8至16週投與。
如請求項146或147之方法，其中該兩劑相隔12週投與。
如請求項146或147之方法，其中該兩劑相隔8週投與。
如請求項134至151中任一項之方法，其中該投與降低該個體中SARS-CoV-2之病毒載量。
如請求項134至151中任一項之方法，其中該投與發生在SARS-CoV-2感染之前。
一種用於在有需要之個體中治療或預防由SARS-CoV-2感染引起之一或多種COVID-19症狀的方法，其包含投與治療有效量之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含在含有SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列之重鏈可變區（HCVR）內所含有的三個重鏈互補決定區（CDR）（HCDR1、HCDR2及HCDR3）；及在包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列之輕鏈可變區（LCVR）內所含有的三個輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2及LCDR3），其中該投與包含向該個體投與兩劑該抗體或其抗原結合片段，各劑包含300 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項154之方法，其中該投與為皮下投與。
如請求項154或155之方法，其中該HCDR1包含SEQ ID NO: 364中所示之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 366中所示之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 368中所示之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 372中所示之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 106中所示之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 374中所示之胺基酸序列。
如請求項154至156中任一項之方法，其中該HCVR包含SEQ ID NO: 362中所示之胺基酸序列。
如請求項154至157中任一項之方法，其中該LCVR包含SEQ ID NO: 370中所示之胺基酸序列。
如請求項154至158中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 376中所示之胺基酸序列的重鏈。
如請求項154至158中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 378中所示之胺基酸序列的輕鏈。
如請求項154至160中任一項之方法，其中該投與包含投與600 mg之該抗體或其抗原結合片段。
如請求項154至160中任一項之方法，其中該投與包含投與300 mg之該抗體或其抗原結合片段。
一種多核苷酸，其編碼：（a）如請求項41至52、61至72或81至87中任一項之經分離抗體或其抗原結合片段；或（b）如請求項50至61、70至81或90至96中任一項之抗體或其抗原結合片段的HCVR及/或LCVR；或重鏈及/或輕鏈。
一種載體，其包含如請求項163之多核苷酸。
一種宿主細胞，其包含如請求項50至61、70至81、90至96、163或164中任一項之抗體或其抗原結合片段或多核苷酸或載體。
如請求項1至15、32、50至61、70至81或90至96中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中和SARS-CoV-2之omicron變異體。
如請求項166之抗體或其抗原結合片段，其中該omicron變異體係選自BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3或BA.4/BA.5。