KR20240046322A - 항-sars-cov-2-스파이크 당단백질 항체 및 항원-결합 단편 - Google Patents
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Abstract
본 개시는 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 바이러스 감염(예: 코로나바이러스 감염)을 치료하거나 예방하기 위해 이러한 항체 및 단편을 사용하는 방법을 제공한다.
Description
서열 목록
본 출원은 2022년 7월 12일 생성되어, 11007WO01-서열이라 명명된,1,488,419 바이트를 함유하는, ST.26 XML 포맷의 컴퓨터 판독 가능 서열 목록을 참조로서 포함한다.
기술분야
본 발명은 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 단편, 및 상기 항체 및 단편으로 코로나바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
코로나바이러스와 같은 새롭게 식별된 바이러스는 충분히 특성화되지 않기 때문에 치료하기 어려울 수 있다. 새롭게 식별된 이러한 바이러스의 출현은 신규한 항바이러스 전략의 개발의 필요성을 강조한다. 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)는 중증 급성 호흡기 질환인 COVID-19를 유발하는 새롭게 출현한 코로나바이러스이다. SARS-CoV-2는 중국 우한의 발병으로부터 처음 식별되었으며, 2022년 7월 8일 기준으로, 세계보건기구는 확인된 사례 551,296,228건, 사망 6,345,595건을 보고하였다. COVID-19의 임상적 특징은 발열, 마른 기침, 및 피로를 포함하며, 이 질환은 호흡 부전을 야기하여 사망을 초래할 수 있다.
인간 건강에 대한 지속적인 위협, 특히 SARS-CoV-2 바이러스의 새로운 변이체의 출현을 고려하여, SARS-CoV-2 통제를 위한 예방 및 치료 항바이러스 요법에 대한 긴급한 요구가 여전히 존재한다. 이 바이러스는 표적 세포 내로 진입하려고 세포 수용체 ACE2 및 세린 프로테아제 TMPRSS2와의 상호작용을 위해 바이러스의 스파이크 당단백질을 사용하기 때문에, 이 스파이크 단백질은 항체 치료제에 대한 매력적인 표적을 나타낸다. 특히, 높은 친화도로 SARS-CoV-2-스파이크 단백질(SARS-CoV-2-S)에 특이적으로 결합하고 바이러스 감염성을 억제하는 완전한 인간 항체는 COVID-19의 예방 및 치료에 중요할 수 있다.
중화 치료용 항-SARS-CoV-2-스파이크 단백질(SARS-CoV-2-S) 항체 및 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 이의 용도에 대한 필요성이 있다. 본 개시는, 표 4의 것과 같은, 인간 항-SARS-CoV-2-S 항체, 및 예를 들어, 다른 치료제(예: 항염증제, 항말라리아제, 항바이러스제, 또는 다른 항체 또는 항원 결합 단편)와의 조합을 포함하는 이들의 조합, 및 바이러스 감염을 치료하기 위한 이의 사용 방법을 제공함으로써, 이러한 요구를 부분적으로 다룬다.
본 개시는 SARS-CoV-2-S에 특이적으로 결합하는 중화 인간 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일 측면에서, 코로나바이러스 스파이크 단백질(CoV-S)에 특이적으로 결합하는 단리된 재조합 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본 개시에 제공되며, 여기에서, 항체는 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다: (a) 약 10-8 M 미만의 EC50으로 CoV-S에 결합함; (b) 코로나바이러스-감염 동물에게 투여한 후 상기 투여 없는 유사한 코로나바이러스-감염 동물과 비교했을 때, 코로나바이러스-감염 동물에서 생존율 증가를 입증함; 및/또는 (c) 표 4에 제시된 HCVR에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) 및 표 4에 제시된 LCVR에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함함.
일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역(예, 면역글로불린 HCVR); 및/또는 (b) 표 4의 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역(예, 면역글로불린 LCVR).
일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 표 4의 HCVR 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 표 4의 LCVR 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역.
일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 단일 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 단일 항체의 HCVR 및 LCVR을 포함하는 면역글로불린을 포함한다.
일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 212의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR); (b) 서열번호 214, 216 및 218의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR; (c) 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (d) 서열번호 220의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR); (e) 서열번호 222, 126 및 224 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (f) 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (g) 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); (h) 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (i) 서열번호 212/222의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍; (j) 서열번호 214, 216 및 218의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 222, 126 및 224의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (k) 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; 또는 (l) 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 362의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR); (b) 서열번호 364, 366 및 368의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR; (c) 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (d) 서열번호 370의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR); (e) 서열번호 372, 106 및 374의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (f) 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (g) 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); (h) 서열 번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC; (i) 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (j) 서열번호 362/370의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍; (k) 서열번호 364, 366 및 368의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR , 및 서열번호 372, 106 및 374의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 LCVR; (l) 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (m) 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는 (n) 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC. 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 493의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR); (b) 서열번호 495, 497 및 499의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR; (c) 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (d) 서열번호 501의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR); (e) 서열번호 503, 505 및 507의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 LCVR; (f) 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (g) 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); (h) 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC; (i) 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (j) 서열번호 493/501의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍; (k) 서열번호 495, 497, 및 3499의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 503, 505 및 507의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1,LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (l) 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (m) 서열 번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는 (n) 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 887의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR); (b) 서열번호 889, 891 및 893의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR; (c) 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (d) 서열번호 895의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR); (e) 서열번호 897, 164 및 899의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (f) 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; (g) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC); (h) 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC); (i) 서열번호 887/895의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍; (j) 서열번호 889, 891 및 893의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR 및 서열번호 897, 164 및 899의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR; (k) 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; 또는 (l) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HC및 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
일 측면에서, 본 개시는 CoV-S에 결합하기 위해 상기에서 또는 여기에서 논의한 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의한 항체 또는 항원 결합 단편과, CoV-S 상의, 동일한 에피토프에 결합하거나, 중첩 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
일부 실시예에서, 상기에서 또는 여기에서 논의한 항체 또는 항원 결합 단편은 다중특이적이다.
일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다음 특성 중 하나 이상을 포함한다: (a) 코로나바이러스의 성장을 억제함; (b) 코로나바이러스의 표면에 결합함; (c) 시험관 내에서 세포의 코로나바이러스 감염의 확산을 제한함; 및 (d) 인간 ACE2 또는 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 코로나바이러스 감염에 의해 야기되는 사망 및/또는 체중 감소로부터 보호한다.
상기에서 또는 여기에서 논의된 다양한 실시예 중 어느 하나에서, 상기 CoV-S는 SARS-CoV-2-S일 수 있다.
일 측면에서, 본 개시는 CoV-S 폴리펩티드에 결합된 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 복합체를 제공한다. 일부 경우에, CoV-S는 SARS-CoV-2-S이다.
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다: (a) 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드(예, 이하에서 논의되는 바와 같은, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 쌍)를 숙주 세포에 도입하는 단계; (b) 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (c) 선택적으로, 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장되는 배지로부터 항체 또는 항원 결합 단편을 단리하는 단계. 일부 경우에, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포이다.
일 측면에서, 본 발명은 전술한 방법의 산물인 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다.
일 측면에서, 본 개시는 다음을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다: (a) 표 4에 제시된 HCVR 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 HCVR 도메인의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는 (b) 표 4에 제시된 LCVR 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 LCVR 도메인의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3.
다양한 실시예에서, 본 개시는 전술한 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및/또는 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 다양한 실시예에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 HCVR, LCVR, 또는 HCVR 및 LCVR 둘 다를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. HCVR 및/또는 LCVR은 표 4에 제시된 바와 같이, HCVR 서열, LCVR 서열, 또는 HCVR 서열 및 LCVR 서열 둘 모두에 각각 함유된 CDR에 의해 정의될 수 있다. HCVR 및/또는 LCVR은 또한 표 4에 제시된 바와 같은 중쇄 CDR 서열, 경쇄 CDR 서열, 또는 중쇄 및 경쇄 CDR 서열 둘 모두에 의해 각각 정의될 수 있다. HCVR 및/또는 LCVR은 또한 표 4에 제시된 바와 같이 HCVR 서열, LCVR 서열, 또는 HCVR 및 LCVR 서열 둘 모두에 의해 각각 정의될 수 있다. 다양한 실시예에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체의 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 중쇄 및/또는 경쇄는 표 4에 제시된 바와 같이 중쇄 및 경쇄 서열에 의해 각각 정의될 수 있다. 다양한 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 표 5에 제시된 바와 같은 핵산 서열을 포함한다. 다양한 실시예에서, 본 개시는 상기에서 논의된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 또는 벡터들, 및/또는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터들, 또는 HCVR 또는 LCVR, 또는 조립된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 다양한 실시예에서, 본 개시는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 (a) 상기 제1 폴리뉴클레오티드는 다음을 암호화하고: (i) 표 4의 항체의 HCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 HCVR, (ii) 표 4의 항체에 대해 제시된 바와 같은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 HCVR, (iii) 표 4의 항체의 HCVR 서열을 포함하는 HCVR, 또는 (iv) 표 4의 항체의 HC 서열을 포함하는 중쇄(HC); 및 (b) 제2 폴리뉴클레오티드는 다음을 암호화한다: (i) 표 4의 항체의 LCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 LCVR, (ii) 표 4의 항체에 대해 제시된 바와 같은 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 LCVR, (iii) 표 4의 항체의 LCVR 서열을 포함하는 LCVR, 또는 (iv) 표 4의 항체의 LC 서열을 포함하는 경쇄(LC). 다양한 실시예에서, 본 개시는 전술한 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 각각 포함하는 벡터 쌍, 및/또는 벡터 쌍을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
일부 실시예에서, 상기 한 쌍의 폴리뉴클레오티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 성분을 암호화한다, 예를 들어: (a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 214, 216 및 218의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 222, 126 및 224의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고; (c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; 또는 (d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화한다.
일부 실시예에서, 상기 한 쌍의 폴리뉴클레오티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 성분을 암호화한다, 예를 들어: (a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 364, 366 및 368의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 372, 106 및 374의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고; (c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하고; 또는 (e) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화한다.
일부 실시예에서, 상기 한 쌍의 폴리뉴클레오티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 성분을 암호화한다, 예를 들어: (a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 495, 497 및 499의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 503, 505 및 507의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고; (c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하고; 또는 (e) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화한다.
일부 실시예에서, 상기 한 쌍의 폴리뉴클레오티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 성분을 암호화한다, 예를 들어: (a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고; (b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 889, 891 및 893의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 897, 164 및 899의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고; (c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; 또는 (d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화한다.
일 측면에서, 본 개시는 추가 치료제와 연관되어 상기에서 또는 여기에서 논의된 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 조성물 또는 키트를 제공한다.
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 항원 결합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체 및 선택적으로 추가의 치료제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 경우에, 조성물 또는 키트는 항바이러스 약물 또는 백신인 추가 치료제와 연관되어 있다. 일부 실시예에서, 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 항말라리아제는 클로로퀸 또는 하이드록시클로로퀸이다. 일부 실시예에서, 항염증제는 항체이다. 일부 경우에, 이 항체는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙이다. 일부 경우에, 조성물 또는 키트는 표 4의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는 제2 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 경우에, CoV-S에 결합하는 항체는 카시리비맙 또는 임데비맙이고,
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 항원 결합 단백질 또는 조성물을 포함하는 용기 또는 주사 장치를 제공한다.
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항원 결합 단백질의 치료적 유효량을 투여함으로써, 코로나바이러스 감염증을 치료하거나 예방하는 방법을 필요로 하는 대상체에서 제공한다. 일부 경우에, 코로나바이러스는 SARS-CoV-2, SARS-CoV, 및 MERS-CoV로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 대상체에게는 하나 이상의 추가 치료제가 투여된다. 일부 경우에, 하나 이상의 추가 치료제는 항바이러스 약물 또는 백신이다. 일부 경우에, 하나 이상의 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 항말라리아제는 클로로퀸 또는 하이드록시클로로퀸이다. 일부 실시예에서, 항염증제는 항체이다. 일부 경우에, 이 항체는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙이다. 일부 경우에, 표 4의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는 제2 항체 또는 항원 결합 단편이 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 대상체에게 미국 특허 제10,787,501호에 기술된, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는 제2 항체 또는 항원 결합 단편, 예를 들어, mAb10933, mAb10987, 또는 mAb10985가 투여된다. 일부 경우에, CoV-S에 결합하는 항체는 카시리비맙 또는 임데비맙이고,
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체에 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체에 주사하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 대상체의 신체에 피하, 정맥내 또는 근육내 주사된다.
항체 또는 항원 결합 단편, 조성물, 키트, 복합체, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 상기에서 또는 여기에서 논의된 방법 중 어느 하나의 다양한 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VH3-66 또는 Vk1-33 가변 도메인 서열을 포함할 수 있다.
일 측면에서, 본 개시는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 경우에, HCDR1은 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체를 제공하고, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 경우에, HCDR1은 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체는 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체는 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항체는 IgG1 불변 영역인 면역글로불린 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항체는 재조합 항체이다. 일부 경우에, 단리된 항체는 다중특이적이다.
일 측면에서, 본 개시는 전술한 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 경우에, 약학적 조성물은 제2 치료제를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 경우에, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시예에서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 실시예에서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3. 일부 실시예에서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 실시예에서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 상기 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 (b) 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 경우에, HCDR1은 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체를 제공하고, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 경우에, HCDR1은 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체는 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 항체는 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항체는 IgG1 불변 영역인 면역글로불린 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항체는 재조합 항체이다. 일부 실시예에서, 단리된 항체는 다중특이적이다.
일 측면에서, 본 개시는 전술한 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 경우에, 약학적 조성물은 제2 치료제를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 경우에, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 LCDR3. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체를 제공하고, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 270에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 278에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 실시예에서, HCDR1은 서열번호 272에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 274에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 276에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 280에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 282에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 항체는 서열번호 270에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 278에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 항체는 서열번호 284에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 286에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시예에서, 면역 글로불린 불변 영역은 IgG1 불변 영역이다. 일부 경우에, 항체는 재조합 항체이다. 일부 경우에, 항체는 다중특이적이다.
일 측면에서, 본 개시는 전술한 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
일부 경우에, 약학적 조성물은 제2 치료제를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 다음을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다: a) 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제1 단리된 항체, (여기서, 상기 제1 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다); 및 b) 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 단리된 항체 (여기서, 상기 제2 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 1030에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 1038에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다).
일부 실시예에서, 제1 단리된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 164 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3. 일부 경우에, 제1 단리된 항체는 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 제1 단리된 항체는 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시예에서, 제1 단리된 항체는 IgG1 불변 영역인 면역글로불린 불변 영역을 포함한다. 일부 경우에, 제1 단리된 항체는 재조합 항체이다. 일부 경우에, 제1 단리된 항체는 다중특이적이다.
일부 실시예에서, 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 또는 희석제를 추가로 포함한다.
일부 실시예에서, 제2 단리된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 1032에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 1034에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 1036에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 1040에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 1042에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 1044에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3. 일부 경우에, 제2 단리된 항체는 서열번호 1030에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 1038에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 제2 단리된 항체는 서열번호 1048에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 1048에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시예에서, 약학적 조성물은 제3 단리된 항체를 추가로 포함한다.
일부 실시예에서, 제3 단리된 항체는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하고, 여기서 상기 제3 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 1010에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 1018에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 경우에, 제3 단리된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 1012에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 1014에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 1016에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 1020에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 1022에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 1024에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3. 일부 경우에, 제3 단리된 항체는 서열번호 1010에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 1018에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 제3 단리된 항체는 서열번호 1026에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 1028에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 대상체에서, 오미크론 변이 SARS-CoV-2에 의한 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 제공하며, 표 4에 제시된 HCVR에 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 표 4에 제시된 LCVR에 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 대상체에서, 오미크론 변이 SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 예방하는 방법을 제공하며, 표 4의 HCVR에 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) ; 및 표 4의 LCVR에 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
상기 방법의 일부 실시예에서, 예방은 노출-전 예방요법을 포함한다. 상기 방법의 일부 실시예에서, 예방은 노출 후 예방요법을 포함한다.
일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 (a) 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는 (b) 표 4의 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 표 4의 상기 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
상기 방법의 일부 실시예에서, 대상체에게 하나 이상의 추가 치료제가 투여된다. 일부 경우에, 하나 이상의 추가 치료제는 항바이러스 약물 또는 백신이다. 일부 경우에, 하나 이상의 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 항염증제는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙과 같은 항체이다. 일부 경우에, CoV-S에 결합하는 항체는 카시리비맙 또는 임데비맙이고,
상기 방법의 일부 실시예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 제2 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함한다.
상기 방법의 일부 실시예에서, 투여하는 단계는 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체 내로 주사하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 대상체의 신체에 피하, 정맥내 또는 근육내 주사된다.
일 측면에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 대상체에서, SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) 및 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, HCDR1은 서열번호 364에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 366에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 368에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 372에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 374에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 376에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 378에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 항체 또는 항원 결합 단편을 주사를 통해 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 주사는 정맥내 주사이다. 일부 경우에, 주사는 피하 주사이다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 300mg을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 600mg을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 1200mg을 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 2회 투여량 각각은 300 mg의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 경우에, 2회 투여량은 4주 간격, 5주 간격, 6주 간격, 7주 간격, 8주 간격, 9주 간격, 10주 간격, 11주 간격, 12주 간격, 13주 간격, 14주 간격, 15주 간격, 또는 16주 간격으로 투여된다. 일부 경우에, 2회 투여량은 8-16주 간격으로 투여된다. 일부 경우에, 2회 투여량은 12주 간격으로 투여된다. 일부 경우에, 2회 투여량은 8주 간격으로 투여된다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 상기 대상체에서 SARS-CoV-2의 바이러스 부하를 감소시킨다.
일부 실시예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여는 SARS-CoV-2 감염 전에 발생한다.
일 측면에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 대상체에서, SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HVCR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2회 투여량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 각 투여량은 300 mg의 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 피하 투여이다.
일부 실시예에서, HCDR1은 서열번호 364에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 366에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 368에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 372에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 374에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 376에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 378에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같이 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 또는 HCVR 및/또는 LCVR; 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 개시는 상기에서 또는 여기에서 논의된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 또는 벡터들, 및 상기에서 또는 여기에서 논의된 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들, 및/또는 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포를 추가로 제공한다.
일부 실시예에서, 투여하는 단계는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 600mg을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 투여하는 단계는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 300mg을 투여하는 것을 포함한다.
상기에서 또는 여기에서 논의된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 다양한 실시예 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SARS-CoV-2의 오미크론 변이를 중화시킬 수 있다. 다양한 실시예에서, 오미크론 변이는 BA.1, BA.1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.3, 또는 BA.4/BA.5로부터 선택된다.
다양한 실시예에서, 위에서 또는 여기에서 논의된 실시예의 특징 또는 구성요소 중 임의의 것이 조합될 수 있고, 이러한 조합은 본 개시의 범주 내에 포함된다. 상기에서 또는 여기에서 논의된 임의의 특정 값은 상기에서 또는 여기에서 논의된 다른 관련 값과 조합되어 범위의 상단과 하단을 나타내는 값을 갖는 범위를 열거할 수 있으며, 이러한 범위는 본 개시의 범주 내에 포함된다.
도 1은 고정된 SARS-Cov-2 RBD-MMH (서열번호 1069)에 결합할 때 41 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체들 사이의 교차 경쟁을 보여준다. 적색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰고, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합도 50% 초과만큼 감소되었다. 황색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰지만, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합은 50% 미만만큼 감소되었다.
도 2는 고정된 SARS-Cov-2 RBD-MMH에 결합할 때 15 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체들 사이의 교차 경쟁을 보여준다. 적색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰고, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합도 50% 초과만큼 감소되었다. 황색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰지만, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합은 50% 미만만큼 감소되었다.
도 3은 mAb14256, mAb10987, 및 SARS-CoV-2 스파이크 당단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)의 cryo-EM 구조를, 복합체로 3.9 Å 해상도로 도시한다.
도 4는 mAb14256이 RBD의 상단에서 결합하여 ACE2 결합을 차단하고, mAb14256은 mAb10933(중간 구조) 및 mAb10985(미도시)와 경쟁하는 것을 보여준다.
도 5는 mAb15160, mAb14315, 및 SARS-CoV-2 스파이크 당단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)의 cryo-EM 구조를, 복합체로 3.18 Å 해상도로 도시한다.
도 6은 Wuhan-Hu-1 균주 및 BA.1 계통으로부터 수용체 결합 도메인(RBD)을 갖는 mA b1428 및 mAb15160의 항원 결합 단편의 cryo-EM 구조를 복합체로, 3.3 및 3.4 Å 해상도로 각각 도시한다.
도 2는 고정된 SARS-Cov-2 RBD-MMH에 결합할 때 15 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체들 사이의 교차 경쟁을 보여준다. 적색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰고, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합도 50% 초과만큼 감소되었다. 황색: 사전 결합된 mAb-1은 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2의 결합을 50% 초과만큼 감소시켰지만, mAb-1 및 mAb-2의 결합 순서가 역전되었을 때 SARS-CoV-2 RBD-MMH에 대한 결합은 50% 미만만큼 감소되었다.
도 3은 mAb14256, mAb10987, 및 SARS-CoV-2 스파이크 당단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)의 cryo-EM 구조를, 복합체로 3.9 Å 해상도로 도시한다.
도 4는 mAb14256이 RBD의 상단에서 결합하여 ACE2 결합을 차단하고, mAb14256은 mAb10933(중간 구조) 및 mAb10985(미도시)와 경쟁하는 것을 보여준다.
도 5는 mAb15160, mAb14315, 및 SARS-CoV-2 스파이크 당단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)의 cryo-EM 구조를, 복합체로 3.18 Å 해상도로 도시한다.
도 6은 Wuhan-Hu-1 균주 및 BA.1 계통으로부터 수용체 결합 도메인(RBD)을 갖는 mA b1428 및 mAb15160의 항원 결합 단편의 cryo-EM 구조를 복합체로, 3.3 및 3.4 Å 해상도로 각각 도시한다.
본 발명의 방법을 설명하기 전에, 방법과 실험 조건이 다양할 수 있으므로, 본 발명은 기술된 특정 방법 및 실험 조건에 제한되지 않는 것으로 이해해야 한다. 또한 본 발명의 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 한정되므로 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시예를 기술하기 위한 목적이며, 한정하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속한 당해 기술분야의 통상의 기술을 가진 자에 의해 널리 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 발명에 기재된 방법 및 재료와 유사 또는 동등한 어떠한 방법 및 재료도 본 발명의 실시 또는 검사에 사용될 수 있으나, 바람직한 방법 및 재료를 지금부터 설명한다. 본 발명에 언급된 모든 문헌은 그 전체가 본 발명에 참조로 인용되어 있다.
용어 "코로나바이러스" 또는 "CoV"는 SARS-CoV-2, MERS-CoV, 및 SARS-CoV를 포함하지만 이에 한정되지 않는, 코로나바이러스 과의 임의의 바이러스를 지칭한다. SARS-CoV-2는 2019-nCoV 및 우한 코로나바이러스로도 알려져 있다. 이는 바이러스 스파이크 단백질을 통해 인간 숙주 세포 수용체 안지오텐신 전환 효소 2(ACE2)에 결합한다. 스파이크 단백질은 또한 바이러스의 막 융합을 위해 스파이크 단백질을 활성화시키는 TMPRSS2에 결합하고 이에 의해 절단된다.
"S" 또는 "S 단백질"로도 불리는 용어 "CoV-S"는 코로나바이러스의 스파이크 단백질을 지칭하며, SARS-CoV-2-S, MERS-CoV S, 및 SARS-CoV S와 같은 특이적 S 단백질을 지칭할 수 있다. SARS-CoV-2-스파이크 단백질은 외피형 코로나바이러스 입자의 표면 상의 스파이크 또는 페플로머를 구성하는 삼량체로 조립되는 1273 아미노산 I형 막 당단백질이다. 단백질은 2개의 필수 기능, 즉 숙주 수용체 결합 및 막 융합 기능을 가지며, 이는 S 단백질의 N-말단(S1) 및 C-말단(S2) 절반에 기인한다. CoV-S는 S1 서브유닛에 존재하는 그의 수용체 결합 도메인(RBD)을 통해 동족 수용체에 결합한다. 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열로 예시된다. 용어 "CoV-S"는 상이한 CoV 단리체로부터 단리된 CoV 스파이크 단백질의 단백질 변이체뿐만 아니라 재조합 CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 포함한다. 용어는 또한, 예를 들어, 히스티딘 태그, 마우스 또는 인간 Fc, 또는 ROR1 같은 신호 서열에 결합된 CoV 스파이크 단백질 또는 이의 단편을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "코로나바이러스 감염" 또는 "CoV 감염"은 SARS-CoV-2, MERS-CoV, 또는 SARS-CoV와 같은 코로나바이러스에 의한 감염을 지칭한다. 용어는 종종 하기도에서 코로나바이러스 호흡기 감염을 포함한다. 증상으로는 고열, 마른 기침, 호흡 곤란, 폐렴, 설사와 같은 위장 증상, 기관 부전(신부전 및 신장 기능 장애), 패혈성 쇼크, 및 중증 사례에서의 사망이 포함될 수 있다.
바이러스
본 발명은 대상체에서 바이러스 감염을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "바이러스"는 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여에 의해 대상체의 신체 내 감염이 치료 가능하거나 예방 가능한 임의의 바이러스를 포함한다(예, 바이러스의 감염성은 CoV-S에 적어도 부분적으로 의존함). 본 발명의 일 실시예에서, "바이러스"는 스파이크 단백질(예, CoV-S)을 발현하는 임의의 바이러스이다. 용어 "바이러스"는 또한 대상체의 호흡기 조직(예, 상기도 및/또는 하기도, 기관, 기관지, 폐)을 감염시키는 바이러스이고 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여에 의해 치료 가능하거나 예방 가능한 CoV-S 의존성 호흡기 바이러스를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 바이러스는 코로나바이러스, SARS-CoV-2(중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2), SARS-CoV(중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스), 및 MERS-CoV(중동 호흡기 증후군(MERS) 코로나바이러스)를 포함한다. 코로나바이러스는 알파코로나바이러스, 베타코로나바이러스, 감마코로나바이러스, 및 델타코로나바이러스의 속을 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 알파코로나바이러스, 베타코로나바이러스, 감마코로나바이러스, 및/또는 델타코로나바이러스에 결합하고/하거나 중화시킬 수 있다. 특정 실시예에서, 이러한 결합 및/또는 중화는 코로나바이러스의 특정 속 또는 속의 특정 하위 그룹에 특이적일 수 있다. "바이러스 감염"은 대상체의 신체에서 바이러스의 침입 및 증식을 지칭한다.
코로나바이러스 비리온은 대략 125 nm의 직경을 갖는 구형이다. 코로나바이러스의 가장 두드러진 특징은 비리온의 표면으로부터 나오는 클럽형 스파이크 돌출부이다. 이들 스파이크는 비리온의 정의적인 특징이며, 태양 코로나의 외관을 제공하여, 명칭인 코로나바이러스를 촉발한다. 비리온의 외피 내에 뉴클레오캡시드가 있다. 코로나바이러스는 나선형으로 대칭인 뉴클레오캡시드를 가지는데, 이는 양성-센스 RNA 바이러스에서 흔하지 않지만 음성-센스 RNA 바이러스에서는 훨씬 더 흔하다. SARS-CoV-2, MERS-CoV, 및 SARS-CoV는 코로나바이러스 과에 속한다. 숙주 세포에 대한 비리온의 초기 부착은 S 단백질과 이의 수용체 사이의 상호작용에 의해 개시된다. 코로나바이러스 S 단백질의 S1 영역 내의 수용체 결합 도메인(RBD)의 부위는 바이러스에 따라 달라지며, 일부는 S1의 C-말단에서 RBD를 갖는다. S-단백질/수용체 상호작용은 코로나바이러스가 숙주 종을 감염시키는 주요 결정인자이며 또한 바이러스의 조직 향성을 지배한다. 많은 코로나바이러스는 세포 수용체로서 펩티다아제를 사용한다. 수용체 결합 후, 바이러스는 다음으로 숙주 세포 세포질에 대한 접근을 얻어야 한다. 이는 일반적으로 카텝신, TMPRRS2 또는 다른 프로테아제에 의한 S 단백질의 산 의존성 단백질분해 절단에 의해 달성되고, 이어서 바이러스 막 및 세포 막의 융합에 의해 달성된다.
본원에 기술된 코로나바이러스는 또한 변이체 코로나바이러스를 포함하며, 이는 일부 실시예에서 세계보건기구(WHO)에 의해 "관심 변이(variants of interest)" 또는 "우려 변이(variants of concern)"로서 분류된다. 변이체 코로나바이러스는 이들의 스파이크 당단백질에 돌연변이를 가질 수 있으며, 이는 COVID-19의 중증도 또는 전염성과 같은 바이러스의 특성을 변화시킬 수 있다. WHO는 우려 변이를 야생형으로부터의 다음 변화 중 하나 이상과 연관된 것으로 정의하며, 이는 전세계 공중 보건에 중요한 사안이다: 1) COVID-19 역학의 전염성 증가 또는 유해한 변화; 2) 독성 증가 또는 임상적 질환 발현 변화; 또는 3) 이용 가능한 치료제, 백신 및 진단을 포함하는 공중 보건 조치 및 사회적 조치의 효과 감소. 관심 변이는 WHO에 의해 1)면역 회피, 치료 탈출, 진단 탈출, 전염성 및 질환 중증도를 포함하는 바이러스 특성에 영향을 미칠 것으로 예측되거나 입증된 유전적 변화를 갖고; 2) 여러 국가에서, 상당한 지역사회 전파 또는 여러 COVID-19 클러스터를 유발하는 것으로 확인되었고 시간이 지남에 따라 증가하는 사례 수와 함께 상대적 유병률이 증가하거나, 전 세계 공중 보건에 대한 새로운 위험을 시사하는 다른 역학적 영향이 있는 SARS-CoV-2 바이러스 로서 정의된다. 2021년 12월 13일 기준으로, WHO가 분류한 5가지 우려 변이(알파, 베타, 감마, 델타, 및 오미크론) 및 WHO가 분류한 2가지 관심 변이(람다 및 뮤)가 있다. 각각의 변이체는 야생형 스파이크 당단백질과 비교했을 때 스파이크 당단백질의 돌연변이로 정의될 수 있다. 예를 들어, 오미크론 변이(B.1.1.529로도 분류됨)는 스파이크 당단백질의 다음 돌연변이를 포함한다: A67V, Δ69-70, T95I, G142D /Δ143-145, Δ211/L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K 및 L981F (전장 오미크론 스파이크 당단백질: 서열번호 1072). 또한, 이들 변이체는 관련 바이러스 군을 포함하는 추가 계통을 가질 수 있다. 예를 들어, 2022년 7월 8일 기준으로, 오미크론 변이는 BA.1, BA.1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.3, 및 BA.4/BA.5 계통을 갖는다. 일부 실시예에서, 본원에 기술된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 이들 변이체 및/또는 계통 중 어느 하나에 결합할 수 있다. 추가의 실시예에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 이들 변이체 및/또는 계통을 중화시킬 수 있다.
항- CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편
본 발명은 CoV 스파이크 단백질 또는 이의 항원 단편에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩티드 사슬, 이황화 결합에 의해 상호 연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC) (즉, "완전 항체 분자")를 포함하는 면역글로불린 분자뿐만 아니라, 이의 다량체(예, IgM) 또는 이의 멀티머 지칭한다. 예시적인 항체는, 예를 들어 표 4에 열거된 것들을 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역("HCVR" 또는 "VH") 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함함)을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역("LCVR" 또는 "VL") 및 경쇄 불변 영역(CL)을 포함한다. VH와 VL 영역은, 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는 보다 보존적인 영역이 중간에 끼어 있는 상보성 결정 영역(CDR)으로 지칭되는 초가변 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노 말단에서 카르복시 말단의 방향으로 다음 순서로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 CDR은 HCDR 또는 CDR-H로도 지칭될 수 있고, 전술한 바와 같이 번호가 매겨질 수 있다(예: HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 또는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3). 마찬가지로, 경쇄 CDR은 LCDR 또는 CDR-L로서 지칭될 수 있고, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3, 또는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3로 번호매겨질 수 있다. 본 발명의 특정 실시예에서, 항체(또는 이의 항원 결합 단편)의 FR은 인간 생식세포 서열과 동일하거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형된다. 예시적인 인간 생식세포 서열은 VH3-66 및 Vk1-33을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 본 개시는 VH3-66 또는 Vk1-33 가변 중쇄 또는 경쇄 영역 내에서 표 4의 HCDR 및 LCDR 서열을 포함하는 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 항-SARS-CoV-2-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 제공한다. 본 개시는 IgKV 4-1, IgKV 1-5, IgKV1-9, IgKV1-12, IgKV3-15, IgKV1-16, IgKV1-17, IgKV3-20, IgLV3-21, IgKV2-24, IgKV1-33, IgKV1-39, IgLV1-40, IgLV1-44, IgLV1-51, IgLV3-1, IgKV1-6, IgLV2-8, IgKV3-11, IgLV2-11, IgLV2-14, IgLV2-23, 또는 IgLV6-57로부터 선택된 경쇄, 및 IgHV1-69 IgHV3-64, IgHV4-59, IgHV3-53, IgHV3-48, IgHV4-34, IgHV3-33, IgHV3-30, IgHV3-23, IgHV3-20, IgHV1-18, IgHV3-15, IgHV3-11, IgHV3-9, IgHV1-8, IgHV3-7, IgHV2-5, IgHV1-2, IgHV2-70, IgHV3-66, IgHV5-51, IgHV1-46, IgHV4-39, IgHV4-31, IgHV3-30-3, IgHV2-26, 또는 IgHV7-4-1로부터 선택된 중쇄의 조합 내에 표 4의 HCDR 및 LCDR 서열을 포함하는 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 항-SARS-CoV-2-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 추가 제공한다. 본 개시는 IgKV4-1,IgKV 1-5, IgKV1-9, IgKV1-12, IgKV3-15, IgKV1-16, IgKV1-17, IgKV3-20, IgLV3-21, IgKV2-24, IgKV1-33, IgKV1-39, IgLV1-40, IgLV1-44, IgLV1-51, IgLV3-1, IgKV1-6, IgLV2-8, IgKV3-11, IgLV2-11, IgLV2-14, IgLV2-23, 또는 IgLV6-57로부터 선택된 경쇄, 및 IgHV1-69, IgHV3-64, IgHV4-59, IgHV3-53, IgHV3-48, IgHV4-34, IgHV3-33, IgHV3-30, IgHV3-23, IgHV3-20, IgHV1-18, IgHV3-15, IgHV3-11, IgHV3-9, IgHV1-8, IgHV3-7, IgHV2-5, IgHV1-2, IgHV2-70, IgHV3-66, IgHV5-51, IgHV1-46, IgHV4-39, IgHV4-31, IgHV3-30-3, IgHV2-26, 또는 IgHV7-4-1로부터 선택된 중쇄의 조합 내에 표 4의 HCVR 및 LCVR 서열을 포함하는 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 항-SARS-CoV-2-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 추가 제공한다.
일반적으로, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존적인 프레임워크 영역(FR) 내에 위치한, 상보성 결정 영역(CDR)으로도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. 일반적으로, N-말단에서 C-말단 방향으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 본 발명의 일 실시예에서, 각각의 도메인에 대한 아미노산의 할당은 관심 면역글로불린의 단백질 서열의 정의(Kabat 등; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat 등 (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia 등 (1987) J Mol. Biol. 196:901-917, 또는 Chothia 등 (1989) Nature 342:878-883)에 따른다.
본 발명은 단클론 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 복수의 단리된 단클론 항원 결합 단백질을 포함하는 단클론 조성물을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단의 구성원을 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에 있어서 동일하다. 조성물에서 "복수의" 이러한 단클론 항체 및 단편은 자연에서, 예, 마우스 또는 인간과 같은 숙주 유기체의 혈액에서, 정상적으로 발생하게 될 것보다 높은, 동일한 (즉, 전술한 바와 같이, 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능한 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에 있어서) 항체 및 단편의 농도를 지칭한다.
본 발명의 일 실시예에서, 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편은 예, IgA(예, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG(예, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4) 또는 IgM 형의 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에서, 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편은 예, 카파 또는 람다 형의 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 항체와 같은 용어 "인간" 항원 결합 단백질은, 인간 세포에 존재하거나 비인간 세포, 예, 마우스 세포로 이식되었는지 여부와 상관없이, 인간 생식세포 면역글로불린 서열에서 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 예, US8502018, US6596541 또는 US5789215를 참조한다. 본 발명의 인간 mAb는 인간 생식세포 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예, 시험관 내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체 내 체세포 변이에 의해 도입된 돌연변이)를 예를 들면 CDR에, 특히, CDR3에 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종(예, 마우스)의 생식세포로부터 유도된 CDR 서열이 인간 FR 서열 상에 이식된 mAbs를 포함하도록 의도되지는 않는다. 상기 용어는 비인간 포유동물 또는 비인간 포유동물의 세포에서 재조합적으로 생성되는 항체를 포함한다. 전술한 용어는 인간 대상체로부터 단리되었거나 인간 대상체에서 생성된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다. 아래를 참조한다.
본 발명은 항- CoV-S 키메라 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 이의 사용 방법을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "키메라 항체"는 제1 항체 유래의 가변 도메인 및 제2 항체 유래의 불변 도메인을 갖는 항체이며, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이한 종에서 유래된다. (US4816567; 및 Morrison 등, (1984) Proc. Natl. Acad. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855).
본 발명은 항- CoV-S 하이브리드 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편, 및 이의 사용 방법을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "하이브리드 항체"는 제1 항체로부터의 가변 도메인 및 제2 항체로부터의 불변 도메인을 갖는 항체이며, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이한 동물로부터 유래하거나, 불변 영역은 아니지만 가변 도메인은 제1 동물로부터 유래한다. 예를 들어, 가변 도메인은 인간으로부터 단리된 항체로부터 취해질 수 있고, 그 항체로부터 단리되지 않은 고정 불변 영역으로 발현될 수 있다. 예시적인 하이브리드 항체는 실시예 1에 기술되어 있으며, 이는 각각 중쇄 불변 영역 및 경쇄 가변 영역을 함유하는 발현 벡터 내로 클로닝한 항체 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 유래 PCR 산물을지칭한다. 하이브리드 항체는 이들이 함유하는 가변 및 불변 영역이 단일 천연 공급원으로부터 단리되지 않기 때문에 합성 항체이고 비자연적으로 발생한다.
용어 "재조합" 항원 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예, DNA 스플라이싱 및 형질 전환을 포함하는 재조합 DNA 기술로서 당업계에 알려진 기술 또는 방법에 의해 생성, 발현, 단리 또는 수득된 이러한 분자를 지칭한다. 상기 용어는 비인간 포유동물(형질 전환 비인간 포유동물, 예, 형질 전환 마우스를 포함하는) 또는 세포(예, CHO 세포)발현 시스템, 또는 비인간 세포 발현 시스템에서 발현되거나, 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 재조합 항체는 유기체(예, 마우스 또는 인간)로부터 단리된 항체와 서열을 공유하지만, 재조합 DNA 기술을 통해 발현된다. 이러한 항체는 유기체로부터 단리된 항체와 상이한 번역 후 변형(예, 당질화)을 가질 수 있다.
일부 실시예에서, 본원에 개시된 항체는 그의 불변 영역 당질화에서 푸코오스가 결여되어 있다. 항체 조성물에서 푸코오스를 측정하는 방법은 당업계, 예를 들어, 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 제8,409,838호(Regeneron Pharmaceuticals)에 기술되어 있다. 일부 실시예에서, 푸코오스는 항체 분자 집단을 포함하는 조성물에서 검출될 수 없다. 일부 실시예에서, 푸코오스가 결여된 항체는 향상된 ADCC 활성을 갖는다.
일부 실시예에서, 푸코오스가 결여된 항체는 단백질을 푸코실화하는 능력이 결핍된 세포주, 즉 단백질을 푸코실화하는 능력이 감소되거나 제거되는 세포주를 사용하여 생산될 수 있다. 글리칸의 푸코실화는 신생합성 또는 회수 경로를 통한 GDP-푸코오스의 합성을 필요로 하며, 이들 모두는 여러 효소의 순차적인 기능을 수반하여, 글리칸의 환원 말단의 제1 N-아세틸글루코사민(GlcNAc) 모이어티에 푸코오스 분자를 첨가한다. GDP-푸코오스의 생산을 담당하는 신생합성 경로의 두 가지 주요 효소는 GDP-D-만노스-4,6-탈수효소(GMD) 및 GDP-케토-6-데옥시만노스-3,5-에피머라아제,4-환원효소(FX)이다. 푸코오스가 없는 경우, 이들 2개의 신생합성 효소(GMD 및 FX)는 만노스 및/또는 글루코스를 GDP-푸코오스로 변환한 다음, 9개의 푸코실-전이효소(FUT1-9)가 협력하여 작용하여 글리칸의 제1 GlcNAc 분자를 푸코실화하는 골지 복합체 내로 수송된다. 그러나, 푸코오스의 존재 하에, 회수 경로 효소, 푸코오스-키나아제 및 GDP-푸코오스 피로포스포릴라아제는 푸코오스를 GDP-푸코오스로 변환한다.
단백질을 푸코실화하는 능력이 결핍된 세포주가 당업계에 기술되었다. 일부 실시예에서, 단백질을 푸코실화하는 능력이 결핍된 세포주는 내인성 FUT1 내지 9 유전자 중 하나 이상에서 돌연변이 또는 유전적 변형을 포함하여 하나 이상의 기능적 푸코실-전이효소가 결여된 포유류 세포주(예, CHO K1, DXB-11 CHO, Veggie-CHO와 같은 CHO 세포주)이다. 일부 실시예에서, 포유류 세포주는 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 제7,214,775호(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.) 및 미국 특허 제7,737,725호(Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.)에 기술된 바와 같이, 내인성 FUT8 유전자(예, FUT8 유전자가 파괴되어 세포주에서 기능적 "1,6-푸코실트랜스퍼라아제가 결여된 FUT8 녹아웃 세포주)에서 돌연변이를 포함한다. 일부 실시예에서, 포유류 세포주는 내인성 GMD 유전자에서의 돌연변이 또는 유전적 변형을 포함하여, 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 제7,737,725호(Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd)에 기술된, 세포주, 예를 들어, GMD 유전자가 파괴된 GMD 녹아웃 세포주에서 기능적 GMD의 결여를 초래한다. 일부 실시예에서, 포유류 세포주는 내인성 Fx 유전자에서 돌연변이 또는 유전적 변형을 포함하여 기능적 Fx 단백질의 결여를 초래한다. 일부 실시예에서, 포유류 세포주는 내인성 Fx 유전자가 파괴된 Fx 녹아웃 세포주이다(예를 들어, 참조로서 본원에 통합된 미국 특허 제7,737,725호(Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd) 참조). 일부 실시예에서, 포유류 세포주는 온도 민감성 표현형을 부여하는 내인성 Fx 돌연변이의 돌연변이를 포함한다(예를 들어, 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 제8,409,838호(Regeneron Pharmaceuticals)에 기술된 바와 같은). 일부 실시예에서, 단백질을 푸코실화하는 능력이 결핍된 포유류 세포주는 특정 렉틴, 예를 들어 렌즈 쿨리나리스 렉틴에 대한 내성에 기초하여 선택된 세포주이다. 예를 들어, 본원에 참조로서 통합된 미국 특허 제8,409,838호(Regeneron Pharmaceuticals)를 참조한다.
본원에 개시된 재조합 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 항원 결합 단편은 또한 E. coli /T7 발현 시스템에서 생산될 수도 있다. 본 실시예에서, 본 발명의 항-CoV-S 항체 면역글로불린 분자를 암호화하는 핵산은 (예, 표 4에서 발견되는 바와 같이) pET-기반 플라스미드 내에 삽입되고 E. coli /T7 시스템에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 숙주 세포(예, E. coli 과 같은 박테리아 숙주 세포, 예컨대 BL21 또는 BL21DE3)에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 면역글로불린 사슬을 발현시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은 세포에서, T7 프로모터에 작동 가능하게 연결된 면역글로불린 사슬을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 또한 포함하는 T7 RNA 중합효소를 발현시키는 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, E. coli 와 같은 박테리아 숙주 세포는 lac 프로모터에 작동 가능하게 연결된 T7 RNA 중합효소 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 중합효소와 사슬의 발현은 숙주 세포를 IPTG(이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노시드)와 함께 인큐베이션함으로써 유도된다. US4952496 및 US5693489 또는 Studier & Moffatt의 문헌(Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol. 1986 May 5;189(1): 113-30)을 참조한다.
재조합 항체를 생산하기 위한 당업계에 알려진 여러 가지 방법이 있다. 항체의 재조합 생산을 위한 하나의 예시적인 방법은 US4816567에 개시되어 있다.
형질전환은 폴리뉴클레오티드(예, mRNA를 포함하는 DNA 또는 RNA)를 숙주 세포 내로 도입하는 임의의 공지된 방법에 의해 이루어질 수 있다. 이종 폴리뉴클레오티드를 포유류 세포 내로 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있고, 덱스트란-매개 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 폴리뉴클레오티드(들)의 리포좀으로의 캡슐화, 지질 나노입자 기술, 유전자총 주사(biolistic injection) 및 핵 내로 DNA의 직접 미세주입을 포함한다. 또한, 핵산 분자는 렌티바이러스 또는 아데노-연관 바이러스와 같은 바이러스 벡터에 의해 포유류 세포 내로 도입될 수 있다. 세포를 형질전환하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호 및 제4,959,455호를 참조한다. 일부 실시예에서, 본 개시의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 핵산 형태(예, mRNA를 포함하는 DNA 또는 RNA)로 대상체에게 도입되어 대상체의 자체 세포가 항체를 생산할 수 있다. 본 개시는 항체 발현 증가, 항체 안정성 증가, 핵산(예, mRNA) 안정성 증가, 또는 CoV 스파이크 단백질에 대한 항체의 친화도 또는 특이성 개선을 초래하는 본원에 기술된 항-CoV-S 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 대한 변형을 추가로 제공한다.
따라서 본 발명은 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 면역글로불린 사슬을 제조하기 위한 재조합 방법을 포함하며, (i) 예, 표 4의 상기 항원 결합 단백질의 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 사슬, 또는 CDR 을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드(예, 표 5의 서열 중 어느 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는)를 도입하는 단계, (예를 들어, 여기서 폴리뉴클레오티드는 벡터 내에 있고; 및/또는 숙주 세포 염색체에 통합되고/되거나 프로모터에 작동 가능하게 연결되고/된다); (ii) 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에서 숙주 세포(예, CHO 또는 피치아 또는 피치아 파스토리스)를 배양하는 단계, 및 (iii) 선택적으로, 항원 결합 단백질, (예, 항체 또는 단편) 또는 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장되는 배지로부터의 사슬을 단리하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어, 유전자 편집 시스템(예, CRISPR(예를 들어, CRISPR-Cas9), TALEN, megaTAL, 아연 집게, 또는 아르고너트(Argonaute))을 사용하여 염색체를 절단한 후, 아데노-연관 바이러스(AAV)와 같은 벡터로 표적화된 삽입을 통해 숙주 세포 염색체에 통합될 수 있다. 표적화된 삽입은, 예를 들어 알부민 또는 면역글로불린 게놈 유전자좌와 같은 숙주 세포 유전자좌에서 발생할 수 있다. 대안적으로, 삽입은, 예를 들어, 렌티바이러스와 같은 벡터를 사용하여 무작위 유전자좌에 있을 수 있다. 하나 이상의 면역글로불린 사슬, 예, 2개의 중쇄 면역글로불린 사슬 및 2개의 경쇄 면역글로불린 사슬을 포함하는 항체를 포함하는 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 항원 결합 단편)을 만들 때, 단일 숙주 세포에서 사슬의 공동 발현은, 예, 세포 내에서, 또는 세포 표면 상에서, 또는 이러한 사슬이 분비되는 경우 세포의 외부에서, 사슬의 결합을 유도하여 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 항원 결합 단편)을 형성한다. 본 발명의 방법은, 세포에서 면역글로불린 중쇄만 발현되거나, 면역글로불린 경쇄만 발현되는 것들(예, 성숙한 단편 및/또는 이의 가변 도메인을 포함하여 본원에서 논의되는 것들 중 어느 하나)를 포함한다. 이러한 사슬들은, 예를 들어, 이러한 사슬을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 발현에 있어서 중간체로서 유용하다. 예를 들어, 본 발명은 또한 표 5에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 중쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함하는)을 포함하는 항체 및 표 5에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 경쇄 면역글로불린(또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함하는)을 포함하며, 이러한 제조 방법의 산물인, 이의 항원 결합 단편과 같은 항-CoV-S 항원 결합 단백질 및 선택적으로, 본원에 제시된 정제 방법을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시예에서, 상기 방법의 산물은 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는 항체 또는 단편인 항-CoV-S 항원 결합 단백질이며, 여기서 HCVR 및 LCVR 서열은 표 4에 열거된 단일 항체로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 방법의 산물은 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하고 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 항체 또는 단편인 항-CoV-S 항원 결합 단백질이며, 여기서 6개의 CDR 서열은 표 4에 열거된 단일 항체로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 방법의 산물은 표 4에 제시된 HC 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 표 4에 제시된 LC 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 단편인 항-CoV-S 항원 결합 단백질이다.
포유류 세포를 포함하여, 진핵 및 원핵 숙주 세포는 항- CoV-S 항원 결합 단백질의 발현을 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 이러한 숙주 세포는 당업계에 잘 알려져 있고, 많은 숙주 세포가 미국형 배양 컬렉션(American Type Culture Collection, ATCC)으로부터 입수 가능하다. 이들 숙주 세포는, 특히, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NS0, SP2 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암 세포(예, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포, HEK-293 세포 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 포유류 숙주 세포는 인간, 마우스, 랫트, 개, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 세포주는 곤충 세포주(예, 스포도프테라 프루기페르다 (Spodoptera frugiperda)) 또는 트리코플루시나 니 (Trichoplusia ni)), 양서류 세포, 박테리아 세포, 식물 세포, 및 진균 세포이다. 진균 세포는 효모 및 사상 진균 세포를 포함하며, 여기에는 예를 들어 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 피치아 핀란디카(Pichia finlandica), 피치아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피치아 코클라메(Pichia koclamae), 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피치아 미누타(Pichia minuta) (오가테아 미누타(Ogataea minuta), 피치아 린드네리(Pichia lindneri), 피치아 오푼티에(Pichia opuntiae), 피치아 테르모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피치아 살릭타리아(Pichia salictaria), 피치아 구에르컴(Pichia guercuum), 피치아 피즈페리(Pichia pijperi), 피치아 스팁티스(Pichia stiptis), 피치아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피치아 종, 사카로마이세스 세리비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 종, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 종, 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 트리코데르마 레에세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 루크노웬제(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움(Fusarium) 종, 푸사리움 그라미네움(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens), 및 네우로스포라 크라사(Neurospora crassa)가 포함된다. 본 발명은 표 4의 것과 같은 항원 결합 단백질; 또는 이러한 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 숙주 세포(예, CHO 세포)를 포함한다.
본원에서 논의된 바와 같이, 폴리뉴클레오티드는 본 개시 전체에 걸쳐 논의된 바와 같이 항체 또는 항원 결합 단편의 전부 또는 일부를 암호화할 수 있다. 일부 경우에서, 단일 폴리뉴클레오티드는 항체 또는 항원 결합 단편의 HCVR 및 LCVR(예, 각각의 아미노산 서열-한정 HCVR 및 LCVR 내에 함유된 CDR을 참조하여 정의되고, HCVR 및 LCVR의 CDR의 아미노산 서열을 참조하여 각각 정의되거나, HCVR 및 LCVR의 아미노산 서열을 참조하여 각각 정의된다) 모두를 암호화할 수 있거나, HCVR 및 LCVR은 별도의 폴리뉴클레오티드(즉, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드)에 의해 암호화될 수 있다. HCVR 및 LCVR이 별도의 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 후자의 경우, 폴리뉴클레오티드는 단일 벡터에 조합될 수 있거나 별도의 벡터(즉, 벡터 쌍)에 함유될 수 있다. 임의의 경우에, 폴리뉴클레오티드(들) 또는 벡터(들)를 발현하는데 사용되는 숙주 세포는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위해 성분 부분의 완전한 보체를 함유할 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 HCVR 및 LCVR을 각각 암호화하는 별도의 벡터를 포함할 수 있다. 유사하게, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들, 및 벡터 또는 벡터들은 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같이 항체의 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 발현하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 단일 벡터를 포함할 수 있거나, 숙주 세포는 상기에서 또는 여기에서 논의된 바와 같이 항체의 중쇄 및 경쇄를 각각 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 별도의 벡터를 포함할 수 있다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 214, 216 및 218의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 213, 215 및 217을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 222, 126 및 224의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 221, 125 및 223을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 211을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 219를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 225를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 227을 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb14315로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위한 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 364, 366 및 368의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 363, 365 및 367을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 372, 106 및 374의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 371, 105 및 373을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 361을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 369를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 375를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 377을 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb15160으로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위해 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 495, 497 및 499의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 494, 496 및 498을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 503, 505 및 507의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 502, 504 및 506을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 492를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 500을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 508을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 510을 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb14284로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위한 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 889, 891 및 893의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 888, 890 및 892를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 897, 164 및 899의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 896, 163 및 898을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 886을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 894를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 900을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 902를 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb14256으로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위해 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 495, 497 및 499의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 494, 496 및 498을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 503, 505 및 507의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 502, 504 및 506을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 492를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 500을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1074를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 510을 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb17090으로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위해 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 364, 366 및 368의 HCDR을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 363, 365 및 367을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 372, 106 및 374의 LCDR을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 371, 105 및 373을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 361을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 369를 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1076을 포함한다). 예시적인 실시예에서, 본 개시는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포)를 제공한다(예, 일 실시예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 377을 포함한다). 일 실시예에서, 본 개시는 본 단락에서 논의된 바와 같이, HCVR 및 LCVR, 또는 HC 및 LC를 각각 암호화하는 한 쌍의 폴리뉴클레오티드 또는 한 쌍의 벡터뿐만 아니라, mAb15160_2로 지정된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하기 위해 쌍 또는 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 쌍을 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
용어 "특이적으로 결합하는"은 이러한 항원 결합 단백질들(예, mAb)이 CoV-S 단백질과 같은 항원에 대해, 예를 들어, 25 ℃ 또는 37 ℃에서, 실시간 무표지 바이오층 간섭계 검정, 예, Octet® HTX 바이오센서에 의해, 또는 표면 플라스몬 공명, 예, BIACORE™에 의해, 또는 용액 친화도 ELISA에 의해 측정했을 때, 적어도 약 10-8 M의 KD로서 표현된 결합 친화도를 갖는 것을 지칭한다. 본 발명은 CoV-S 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체 또는 항원 결합 단백질의 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편" 등 용어는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연 발생적이거나, 효소적으로 수득할 수 있거나, 합성 또는 유전자 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 항원 결합 단편의 비제한적 실시예는: (i) Fab 단편; (ii) F(ab') 2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역(예, CDR3 펩티드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR))을 모방하는 아미노산 잔기, 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩티드로 이루어진 최소 인지 단위를 포함한다. 다른 조작된 분자, 예를 들어, 도메인 특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예, WO08/020079 또는 WO09/138519에 정의된 바와 같이)(예, 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 소형 모듈형 면역약제(SMIP), 및 상어 가변 IgNAR 도메인 등도 본원에서 사용되는 "항원 결합 단편"이란 표현에 포함된다. 본 발명의 일 실시예에서, 항원 결합 단편은 표 4의 항체의 3개 이상의 CDR(예, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3; 또는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
항체의 항원 결합 단편은, 본 발명의 일 실시예에서, 적어도 하나의 가변 도메인을 포함하게 된다. 이러한 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성을 가질 수 있고, 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나 이들과 프레임 내에 있는 적어도 하나의 CDR을 일반적으로 포함하게 된다. VL 도메인과 결합된 VH 도메인을 갖는 항원 결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적절한 배열로 서로에 대해 상대적으로 위치할 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이량체로서, VH - VH, VH - VL 또는 VL - VL 이량체를 포함할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 단량체 VH 또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
특정 실시예에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적 구성은 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 위에서 열거된 임의의 예시적인 구성을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 이러한 가변 및 불변 도메인은 직접적으로 상호간에 연결되거나 또는 전체 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩티드 분자의 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성 또는 반 가요성 연결을 초래하는 적어도 2개(예, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 구성될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편은 위에서 열거된 가변 및 불변 도메인 구성 중 어느 하나의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있으며, 이들은 (예, 이황화 결합(들)에 의해) 서로 비공유 결합되고/되거나, 하나 이상의 단량체 VH 또는 VL 도메인과 비공유 결합된다.
항원 결합 단백질(예, 항체 및 항원 결합 단편)은 단일 특이적이거나 다중특이적(예, 이중특이적)일 수 있다. 다중특이적 항원 결합 단백질은 본원에서 추가로 논의된다.
특정 실시예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 리간드와 같은 모이어티 또는 항바이러스 약물, 제2 항-인플루엔자 항체 또는 바이러스 감염, 예, 인플루엔자 바이러스 감염 치료에 유용한 임의의 다른 치료 모이어티와 같은 치료 모이어티("면역접합체")에 접합될 수 있다. 아래를 참조한다.
또한, 본 발명은 항-CoV-S 항체 또는 단편에 특이적으로 결합하는 CoV-S 폴리펩티드 또는 이의 항원 단편과 및/또는 이차 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 검출 가능하게 표지된 이차 항체)과 복합체화된, 본원에서 논의된 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 복합체를 제공한다. 본 발명의 일 실시예에서, 항체 또는 단편은 복합체는 시험관 내에 있거나 (예, 고형 기재에 고정되어 있다) 대상체의 신체 내에 있다. 본 발명의 일 실시예에서, CoV-S는 시험관 내에 있거나 (예, 고형 기재에 고정되어 있다) 대상체의 신체 내에 있다. 불용성 매트릭스 물질(예, 유리 또는 다당류, 예컨대 아가로오스 또는 세파로오스, 예, 비드 또는 이의 다른 입자)에 공유 연결된 고정화된 항-CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편도 본 발명의 일부이며; 선택적으로, 여기서 고정화된 항체는 CoV-S 또는 이의 항원성 단편 또는 이의 이차 항체 또는 이의 단편과 복합체를 이룬다.
"단리된" 항원 결합 단백질, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드 및 벡터는 이들이 생산되는 세포 또는 세포 배양물에서 유래된 다른 생물학적 분자가 적어도 부분적으로 없다. 이러한 생물학적 분자는 핵산, 단백질, 다른 항체 또는 항원 결합 단편, 지질, 탄수화물, 또는 세포 부스러기 및 성장 배지와 같은 다른 물질을 포함한다. 추가로, 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 숙주 세포 또는 이의 성장 배지에서 유래된 생물학적 분자와 같은 발현 시스템 성분이 적어도 부분적으로 없을 수 있다. 일반적으로, 용어 "단리된"은 이러한 생물학적 분자의 완전한 부재, 또는 물, 완충제, 또는 염의 부재, 또는 항체 또는 단편을 포함하는 약학적 제형 성분을 지칭하도록 의도되지는 않는다.
용어 "에피토프"는 항원 결합 단백질의 특이적 항원 결정 부위, 예, 파라토프로서 알려진, 항체 분자의 가변 영역과 상호 작용하는 (예, CoV-S 폴리펩티드) 항원 결정자를 지칭한다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체는 항원 상의 상이한 영역에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 효능을 가질 수 있다. 용어 "에피토프"는 또한 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 이는 또한 항체에 의해 결합되는 항원의 영역을 지칭한다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 정의될 수도 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 서브 세트이며, 상호 작용의 친화도에 직접 기여하는 잔기들을 갖는다. 에피토프는 선형이거나, 비선형 아미노산으로 이루어진 입체 구조일 수 있다. 특정 실시예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 기 또는 설포닐 기와 같은, 분자들의 화학적으로 활성 표면군인 결정기를 포함할 수 있으며, 소정의 실시예들에서, 특이적인 3차원 구조적 특성, 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수도 있다.
항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드의 에피토프를 결정하는 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩티드 블롯 분석(Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63), 펩티드 절단 분석, 결정학적 연구 및 NMR 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 사용될 수 있다(Tomer (2000), Prot. Sci. 9:487-496 참조). 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드)(예, 커버신)이 상호 작용하는 폴리펩티드 내의 아미노산을 식별하는데 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분석법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로 말하자면, 수소/중수소 교환 방법은 관심 단백질을 중수소-표지하는 단계, 이어서 항원-결합 단백질, 예, 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드를 중수소-표지된 단백질에 결합시키는 단계를 포함한다. 이어서, CoV-S 단백질/항원 결합 단백질 복합체는 물로 전달되고, 항체 복합체에 의해 보호되는 아미노산 내의 교환 가능한 양성자는 계면의 일부가 아닌 아미노산 내의 교환 가능한 양성자보다 느린 속도로 중수소-대-수소 역교환를 거친다. 결과적으로, 단백질/항체 결합 단백질 계면의 일부를 형성하는 아미노산은 중수소를 보유할 수 있고, 따라서 계면에 포함되지 않은 아미노산에 비해 상대적으로 더 높은 질량을 나타낸다. 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 단편 또는 폴리펩티드) 해리 후, 표적 단백질을 대상으로 프로테아제 절단 및 질량 분광 분석을 수행하여, 항원 결합 단백질이 상호 작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 밝혀낸다. 예, Ehring(1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259; Engen 및 Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A를 참조한다.
본원에서 사용되는 용어 "경쟁"은 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이 항원(예, CoV-S)에 결합하여 또 다른 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이 항원에 결합하는 것을 억제하거나 차단하는 것을 지칭한다. 상기 용어는 2개의 항원 결합 단백질예, 항체간의 쌍방 경쟁, 즉, 제1 항체가 결합하여 제2 항체의 결합을 차단하는 것 및 그 반대의 경우도 포함한다. 특정 실시예에서, 제1 항원 결합 단백질(예, 항체) 및 제2 항원 결합 단백질(예, 항체)은 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 제1 및 제2 항원 결합 단백질(예, 항체)은 상이하지만, 예를 들어, 중첩하는 에피토프에 결합할 수 있고, 여기서 한 항체의 결합은, 예, 입체 장애(steric hindrance)에 의해 제2 항체의 결합을 억제하거나 차단한다. 항원 결합 단백질(예, 항체) 간의 경쟁은 당업계에 알려진 방법, 예를 들어, 실시간 비표지 바이오층 간섭계 검정에 의해 측정될 수 있다. (예를 들어, 알라닌 스캐닝 또는 수소-중수소 교환(HDX)을 통한) 에피토프 맵핑은 2개 이상의 항체가 (예를 들어, 스파이크 단백질 수용체 결합 도메인(RBD) 단량체 상에서) 경쟁하지 않는지, 동일한 에피토프에 대해 경쟁하는지, 또는 (예를 들어, HDX를 통해 식별된) 다양한 마이크로-에피토프와 경쟁하는지 여부를 결정하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 제1 및 제2 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체) 간의 경쟁은 제2 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체)과 복합체를 이룬 가용성 CoV-S 단백질에 결합하는 고정화된 제1 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체)(원래 CoV-S 단백질과 복합체를 이루지 않음)의 능력을 측정함으로써 결정된다. 비복합 CoV-S 단백질에 비해 복합 CoV-S 단백질에 결합하는 제1 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체)의 능력의 감소는 제1 및 제2 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체)이 경쟁함을 나타낸다. 경쟁 정도는 결합 감소의 백분율로서 표현될 수 있다. 이러한 경쟁은, 예, Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.), ELISA(효소-결합 면역흡착 검정) 또는 SPR(표면 플라스몬 공명) 상에서 실시간, 비표지 바이오층 간섭계 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
또한, 항- CoV-S 항원 결합 단백질(예, 단클론 항체(mAb)) 간의 결합 경쟁은 Octet RED384 바이오센서(Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간, 비표지 바이오층 간섭계 검정을 사용하여 사용하여 결정할 수 있다. 예를 들어, 2개의 항-CoV-S 단클론 항체 간의 경쟁을 결정하기 위해, 팁을 항-CoV-S mAb(이하 "mAb1"로 지칭됨)의 용액에 침지시킴으로써 항-CoV-S mAb를 먼저 항-hFc 항체 코팅된 Octet 바이오센서 팁(Pall ForteBio Corp., # 18-5060) 상에 포획할 수 있다. 차단을 위한 양성 대조군으로서, 항체 포획 바이오센서 팁은 그런 다음 차단 mAb 용액에 침지함으로써 알려진 차단 이소형 대조군 mAb(이하 "차단 mAb"로 지칭됨)로 포화될 수 있다. mAb2가 mAb1과 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해, 이어서 바이오센서 팁을 일정 기간 동안 사전 배양된 CoV-S 폴리펩티드 및 제2 항-CoV-S mAb(이하 "mAb2"로 지칭됨)의 공동 복합체 용액에 침지할 수 있고, CoV-S 폴리펩티드에 대한 mAb1의 결합이 결정될 수 있다. 실험의 모든 단계 사이에, 완충액에서 바이오센서 팁을 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험의 과정 동안 모니터링하고, 모든 단계가 끝난 후 결합 반응을 기록하였다.
예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 경쟁 검정은 25°C 및 pH 약 7, 예, 7.4에서, 예, 완충액, 염, 계면활성제 및 비-특이적 단백질(예, 소 혈청 알부민)의 존재 하에 수행된다.
일반적으로, 임의의 방식으로 변형되는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 CoV-S에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하며, 예, 그 활성이 몰 기준으로 표현될 때, (부모 항체와 비교했을 때) 그의 CoV-S 결합 활성의 적어도 10%를 보유한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 부모 항체 대비 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100% 또는 이상의 CoV-S 결합 친화도를 보유한다. 또한, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편은 그의 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환(항체의 "보존적 변이체" 또는 "기능 보존 변이체"로서 지칭됨)을 포함할 수 있는 것으로 의도된다.
면역글로불린 사슬(예, mAb8021 VH, VL, HC, 또는 LC, mAb8028 VH, VL, HC, 또는 LC, 또는 8029 VH, VL, HC, 또는 LC)과 같은 폴리펩티드의 "변이체"는, BLAST 알고리즘으로 비교를 수행했을 때, 본원에 제시된 기준 아미노산 서열(예, 서열번호 2, 10, 18, 20, 22, 30, 38, 40, 42, 50, 58, 또는 60)에 대해 적어도 약 70-99.9%(예, 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭하며, 여기서, 알고리즘의 파라미터는 각 기준 서열의 전체 길이에 걸쳐 각 서열 간에 최대 일치를 나타내도록 선택된다(예, 예상 임계값: 10; 단어 크기: 3; 쿼리 범위에서 최대 일치: 0; BLOSUM 62 매트릭스; 갭 비용: 존재 11, 연장 1; 조건부 구성 점수 매트릭스 조정).
폴리뉴클레오티드의 "변이체"는, BLAST 알고리즘으로 비교를 수행했을 때, 본원에 제시된 기준 뉴클레오티드 서열(예, 서열번호 1, 9, 17, 19, 21, 29, 37, 39, 41, 49, 57 또는 59)과 적어도 약 70-99.9%([g2]예[/g2], 적어도 약 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 또는 99.9%) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 지칭하며, 여기서 알고리즘의 파라미터는 각각의 기준 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열 간에 최대 일치(예, 예상 임계값: 10; 단어 크기: 28; 쿼리 범위에서 최대 일치: 0; 일치/불일치 점수: 1, -2; 갭 비용: 선형)를 제공하도록 선택된다.
항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 본 발명의 일 실시예에서, 표 4에 제시된 HCVR 아미노산 서열과 적어도 70%(예,80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 이상)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 중쇄면역글로불린 가변 영역; 및/또는 표 4에 제시된 LCVR 아미노산 서열과 적어도 70%(예, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상)의 아미노산 서열 동일성을 갖는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
또한, 변이체 항- CoV-S 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 미스센스 돌연변이(예, 보존적 치환), 넌센스 돌연변이, 결실, 또는 삽입과 같은 하나 이상의(예, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의) 돌연변이를 제외한, 본원에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 개시는 표 4에 제시된 HCVR 아미노산 서열을 포함하되 이러한 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 중쇄 변이체, 및/또는 표 4에 제시된 LCVR 아미노산 서열을 포함하되 이러한 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 면역글로불린 경쇄 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 본 개시의 일 실시예에서, 변이체 항-CoV-S 항원 결합 단백질은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 변이체(여기서, 이러한 CDR 중 하나 이상(예,1개 또는 2개 또는 3개)은 이러한 돌연변이(예,: 보존적 치환) 중 하나 이상을 가짐) 및/또는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 변이체(여기서, 이러한 CDR 중 하나 이상(예,1개 또는 2개 또는 3개)은 이러한 돌연변이(예,보존적 치환) 중 하나 이상을 가짐)를 포함한다. 치환은 CDR, 프레임워크, 또는 불변 영역에 있을 수 있다.
본 발명은, 예, 표 4의 중쇄 및 경쇄 CDR과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99.9%의 서열 동일성 또는 유사한 본원에 제시된 하나 이상의 변이체 CDR(예, LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 중 임의의 하나 이상)을 포함하는, 변이체 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 추가로 제공한다.
본 발명의 실시예는 또한, 면역글로불린 VH 및 VL를 포함하는 변이체 항원 결합 단백질, 예, 항- CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 본원에 구체적으로 제시된 상응하는 VH, VL, HC 또는 LC의 아미노산 서열과 70% 이상(예, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상)의 전체적인 아미노산 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 아미노산 서열을 포함하지만, 여기서 이러한 면역글로불린의 LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 은 변이체가 아니며, 표 4에 제시된 CDR 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 이러한 실시예에서, 변이체 항원 결합 단백질 내의 CDR 자체는 변이체가 아니다.
항- CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편의 기능 보존적으로 변형된 변이체도 본 발명의 일부이다. "보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 변이체를 지칭하고, 여기서 유사한 특성(예, 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 골격 형태 및 강성 등)을 갖는 다른 아미노산과 폴리펩티드 내에 아미노산의 하나 이상의 치환이 존재한다. 이러한 변화는 항체 또는 단편의 생물학적 활성을 상당히 파괴하지 않고도 빈번하게 이루어질 수 있다. 본 기술분야의 당업자는 일반적으로, 폴리펩티드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인식한다(예, Watson 등 (1987) [Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)] 참조). 또한, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환이 생물학적 활성을 상당히 파괴할 가능성은 적다.
유사한 화학적 성질을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산의 군의 예는 다음을 포함한다: 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 및 이소류신; 2) 지방족-히드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르트산 및 글루탐산; 및 7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌. 바람직한 보존적 아미노산 치환기는: 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루탐산-아스파르트산, 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존적 치환은 Gonnet 등의 문헌에 개시된 PAM250 로그 우도 매트릭스에서 양의 값을 갖는 임의의 변화이다(Gonnet 등 (1992) Science 256: 1443 45).
항- CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편의 기능 보존적 변이체도 본 발명의 일부이다. (본원에서 논의된 바와 같은) 항- CoV-S 항체 및 이의 항원 결합 단편의 임의의 변이체는 "기능 보존적 변이체"일 수 있다. 이러한 기능 보존적 변이체는, 일부 경우에, 보존적으로 변형된 변이체로서 특징을 가질 수도 있다. 본원에서 사용된 "기능 보존적 변이체"는 항체 또는 단편의 하나 이상의 기능적 특성을 유의하게 변화시키지 않고 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경된 항- CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 변이체를 지칭한다. 본 발명의 일 실시예에서, 본 개시의 항- CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 기능 보존적 변이체는 변이체 아미노산 서열을 포함하고, 다음의 기능적 특성 중 하나 이상을 나타낸다:
· ACE2- 및/또는 TMPRSS2-발현 세포(예, Calu-3 세포)에서 코로나바이러스(예, SARS-CoV-2, SARS-CoV, 및/또는 MERS-CoV)의 성장을 억제한다;
· ACE2 및/또는 TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의하게 결합하지 않는다;
· 세포, 예, Calu-3의 코로나바이러스 감염(예, SARS-CoV-2, SARS-CoV, 및/또는 MERS-CoV에 의한), 시험관 내 확산을 제한한다; 및/또는
· 인간 TMPRSS2 및/또는 ACE2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 코로나바이러스 감염(예, SARS-CoV-2, SARS-CoV, 또는 MERS-CoV)에 의해 야기된 사망으로부터 보호하되, 예를 들어, 여기서 마우스는 선택적으로 제2 치료제와 조합될 때, 달리 치사량의 바이러스로 감염된다.
· 인간 TMPRSS2 및/또는 ACE2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 코로나바이러스 감염(예, SARS-CoV-2, SARS-CoV, 또는 MERS-CoV)에 의해 야기되는 체중 감소로부터 보호하되, 예를 들어, 여기서 마우스는 임의로 제2 치료제와 조합될 때, 달리 체중 손실을 야기할 바이러스의 투여량으로 감염된다.
"중화" 또는 "길항제" 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편은 CoV-S의 활성을 임의의 검출 가능한 정도로 억제하는 분자, 예, ACE2와 같은 수용체에 결합하거나, TMPRSS2와 같은 프로테아제에 의해 절단되거나, 숙주 세포 내로의 바이러스 진입 또는 숙주 세포에서의 바이러스 생식을 매개하는 CoV-S의 능력을 억제하는 분자를 지칭한다.
표 4는 항원 결합 단백질을 지칭하며, 예컨대 항체 및 이의 항원 결합 단편, 이는 아래에 제시된 바와 같이 중쇄 또는 VH(또는 이의 변이체) 및 경쇄 또는 VL(또는 이의 변이체)을 포함하고; 또는 이의 CDR(HCDR1(또는 이의 변이체), HCDR2(또는 이의 변이체) 및 HCDR3(또는 이의 변이체)) 및 VH 및 이의 CDR(LCDR1(또는 이의 변이체), LCDR2(또는 이의 변이체) 및 LCDR3(또는 이의 변이체))을 포함하는 VL을 포함하고, 예, 여기서 면역글로불린 사슬, 가변 영역 및/또는 CDR은 후술하는 특정 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기술된 항체는 또한 VH가 야생형 IgG4(예, 잔기 108이 S임) 또는 IgG4 변이체(예, 잔기 108이 P임)에 융합되는 실시예를 포함한다.
본 발명의 항체 및 항원 결합 단편은 본원에 제시된 아미노산 서열뿐만 아니라 항체에 대한 세포 및 시험관 내 번역후 변형을 포함하는 면역글로불린 사슬을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본원에 제시된 중쇄 및/또는 경쇄 아미노산 서열(예, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3)을 포함하는 CoV-S 에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 하나 이상의 아미노산 잔기가 글리코실화되고, 하나 이상의 아스파라긴 잔기가 탈아미드화되고, 하나 이상의 잔기(예, Met, Trp 및/또는 His)가 산화되고, N-말단 글루타민은 피로글루타메이트(pyroE)이고/이거나 C-말단 리신이 소실되는 항체 및 단편도 포함한다. 예시적인 항-SARS-CoV-2-스파이크 단백질(SARS-CoV-2-S) 항체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 아래의 예시적인 서열 표(표 1)에 나타나 있다.
항체의 투여
본 발명은 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 표 4의 것들을 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항원 결합 단백질을 대상체(예, 인간)의 신체 내에 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기 바늘을 대상체의 신체에 찔러 넣는 단계, 및 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내로, 예, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직에 주입하는 단계를 포함한다.
본 발명은 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 표 4의 것들을 포함하는 용기(예, 캡 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공 보어 바늘 또는 주사기 실린더를 갖는 예, 플라스틱 또는 유리 바이알)를 제공한다.
본 발명은 또한 CoV-S에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 항원 결합 단편), 예, 표 4의 것들, 또는 이의 약학적 조성물을 포함하는 주사 장치를 제공한다. 주사 장치는 키트 내에 포장될 수 있다. 주사 장치는 비경구 경로, 예, 근육 내, 피하 또는 정맥내 경로를 통해 대상체의 신체 내에 물질을 도입하는 장치이다. 예를 들어, 주사 장치는, 예를 들어, 주사할 유체(예, 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 포함함)를 담기 위한 실린더나 통(barrel); 유체의 주입을 위해 피부 및/또는 혈관에 찔러 넣기 위한 바늘; 및 주사 바늘 구멍을 통해 유체를 실린더 밖으로 밀어 내기 위한 플런저를 포함하는 주사기(예, 약학적 조성물로 미리 채워진, 예컨대 자동 주사기)일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 본 발명의 조합으로부터의 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 약학적 조성물을 포함하는 주사 장치는 정맥내(IV) 주사 장치이다. 이러한 장치는 캐뉼라 또는 투관침/바늘을 통해 대상체의 신체 내로 도입된 유체(예, 식염수)를 유지하기 위해 백 또는 저장조에 부착될 수 있는 튜브에 부착될 수 있는 캐뉼라 또는 투관침/바늘에 항원 결합 단백질 또는 이의 약학적 조성물을 포함할 수 있다. 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물은, 본 발명의 일 실시예에서, 투관침 및 캐뉼라가 대상체의 정맥 내로 삽입되고 투관침이 삽입된 캐뉼라로부터 제거되면 장치 내로 도입될 수 있다. IV 장치는, 예를 들어 말초 정맥(예, 손 또는 팔); 상대정맥 또는 하대정맥, 또는 심장의 우심방(예, 중심 IV) 내에 삽입될 수 있거나; 쇄골하, 내경정맥, 또는 대퇴정맥 내로 삽입될 수 있고, 예를 들어, 상대정맥 또는 우심방(예, 중심 정맥선)에 도달할 때까지 심장을 향해 전진될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 주사 장치는 자가주사기; 제트 인젝터 또는 외부 주입 펌프이다. 제트 인젝터는 표피를 침투하여 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 대상체의 신체에 도입하는 액체의 고압 좁은 제트를 사용한다. 외부 주입 펌프는 항체 또는 이의 단편 또는 약학적 조성물을 조절된 양으로 대상체의 신체 내로 전달하는 의료 장치이다. 외부 주입 펌프는 전기적으로 또는 기계적으로 전력이 공급될 수 있다. 상이한 펌프는 상이한 방식으로 작동하며, 예를 들어, 주사기 펌프는 주사기의 저장조 내에 유체를 보유하고, 이동식 피스톤은 유체 전달을 제어하고, 탄성중합체 펌프는 신축성 풍선 저장조 내에 유체를 보유하고, 풍선의 탄성 벽으로부터의 압력은 유체 전달을 유도한다. 연동 펌프에서, 롤러 세트는 가요성 튜브의 길이에 핀치 다운되어 유체를 전방으로 밀어낸다. 다중 채널 펌프에서, 유체는 다수의 저장조로부터 다수의 속도로 전달될 수 있다.
인간 항체의 제조
유전자 이식 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 임의의 공지된 방법은 CoV-S에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조하기 위해 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다. 다음 중 어느 하나를 포함하는 면역원은 CoV-S에 대한 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 실시예에서, 본 발명의 항체는 전장, 천연 CoV-S, 또는 생약독화 또는 불활성화된 바이러스, 또는 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA로 면역화된 마우스로부터 수득된다. 대안적으로, CoV-S 단백질 또는 이의 단편은 표준 생화학 기술을 사용하여 생산되고 변형되어 면역원으로서 사용될 수 있다. 일 실시예에서, 면역원은 재조합으로 생성된 CoV-S 단백질 또는 이의 단편이다. 본 발명의 특정 실시예에서, 면역원은 CoV-S 폴리펩티드 백신일 수 있다. 특정 실시예에서, 하나 이상의 부스터 주사가 투여될 수 있다. 특정 실시예에서, 면역원은 E. coli에서 발현되거나 중국 햄스터 난소(CHO) 세포와 같은 임의의 다른 진핵생물 세포 또는 포유동물 세포에서 발현되는 재조합 항원일 수 있다.
단클론 항체를 생성하기 위한 VELOCIMMUNE® 기술(예를 들어, 미국 특허 제6,596,541호, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE® 참조) 또는 임의의 다른 공지된 방법을 사용해, 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, CoV-S 에 대한 고 친화도 키메라 항체를 먼저 단리한다. VELOCIMMUNE® 기술은, 마우스가 항원 자극에 반응하여 인간 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생산하도록, 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동 가능하게 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 가진 형질전환 마우스를 생성하는 것을 포함한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되어 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동 가능하게 연결된다. 그런 다음, DNA는 완전한 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.
일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스에게 관심 항원을 접종하고, 림프 세포(예컨대 B 세포)는 항체를 발현하는 마우스로부터 회수된다. 림프 세포를 골수종 세포주와 융합하여 불멸성 하이브리도마 세포주를 제조할 수 있고, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하여 관심 항원에 대해 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 식별한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 단리하여, 중쇄 및 경쇄의 바람직한 이소형 불변 영역에 연결할 수 있다. 이러한 항체 단백질은 CHO 세포와 같은 세포에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 항원 특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA를 항원 특이적 림프구로부터 직접 단리할 수 있다.
먼저, 고 친화도 키메라 항체를 인간 가변 영역과 마우스 불변 영역을 갖도록 단리한다. 아래의 실험 섹션에서와 같이, 항체의 특성을 분석하여 친화도, 선택도, 에피토프 등을 포함하는 바람직한 특성에 맞게 선택한다. 마우스 불변 영역을 원하는 인간 불변 영역과 교체하여 본 발명의 완전한 인간 항체, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성한다. 선택된 불변 영역은 특이적 용도에 따라 매우 다양할 수 있지만, 고친화도 항원 결합 특성 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.
Fc 변이체를 포함하는 항-코로나바이러스 스파이크 단백질 항체
본 개시의 특정 실시예에 따르면, 예, 중성 pH와 비교해 산성 pH에서, 예를 들어 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 강화시키거나 감쇠시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 본 발명은 Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역에서 돌연변이를 포함하는 항- CoV-S 항체를 포함하되, 돌연변이(들)는 산성 환경에서(예, pH가 약 5.5 내지 6.0 범위인 엔도솜에서) FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화도를 증가시킨다. 이러한 돌연변이는, 동물에게 투여되는 경우 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비제한적인 예는, 예, 위치 250의 변형(예, E 또는 Q); 250 및 428에서의 변형(예, L 또는 F); 252에서의 변형(예, L/Y/F/W 또는 T), 254에서의 변형(예, S 또는 T), 및 256에서의 변형(예, S/R/Q/E/D 또는 T); 또는 위치 428 및/또는 433에서의 변형(예, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434에서의 변형(예, A, W, H, F 또는 Y [N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y]); 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 위치 307 또는 308에서의 변형(예, 308F, V308F), 및 434에서의 변형을 포함한다. 일 실시예에서, 변형은 428L(예, M428L) 및 434S(예, N434S) 변형; 428L, 259I(예, V259I), 및 308F(예, V308F) 변형; 433K(예, H433K) 및 434(예, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256(예, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형(예, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형(예, 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 실시예에서, 변형은 265A(예, D265A) 및/또는 297A(예, N297A) 변형을 포함한다.
예를 들어, 본 발명은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 군을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다: 250Q 및 248L(예, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E(예, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S(예, M428L 및 N434S); 257I 및 311I(예, P257I 및 Q311I); 257I 및 434H(예, P257I 및 N434H); 376V 및 434H(예, D376V 및 N434H); 307A, 380A 및 434A(예, T307A, E380A 및 N434A); 및 433K 및 434F(예, H433K 및 N434F). 특히, mAb17090 및 mAb15160_2로 지정된 항체는 각각, mAb14286 및 mAb15160과 비교하여 중쇄 불변 영역에서 M252Y, S254T 및 T256E 변형을 각각 함유한다.
전술한 Fc 도메인 돌연변이의 임의의 가능한 조합을 포함하는, 본원에 제시된 VH 및/또는 VL을 포함하는 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 본 발명의 범위 내로 고려된다.
본 발명은 또한, 본원에 제시된 VH 및 키메라 중쇄 불변(CH) 영역을 포함하는 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 키메라 CH 영역은 하나 이상의 면역글로불린 이소형의 CH 영역으로부터 유래된 분절을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자에서 유래된 CH3 도메인의 일부 또는 전부와 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자에서 유래된 CH2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 CH 영역을 포함할 수 있다. 특정 실시예에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 CH 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역 유래의 "하부 힌지" 서열(EU 넘버링에 따른 위치 228 내지 236에서의 아미노산 잔기)과 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역 유래의 "상부 힌지" 아미노산 서열(EU 넘버링에 따른 위치 216 내지 227에서의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 실시예에 따르면, 키메라 힌지 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 상부 힌지 유래의 아미노산 잔기, 및 인간 IgG2 하부 힌지 유래의 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 기술된 바와 같은 키메라 CH 영역을 포함하는 항체는, 특정 실시예에서, 항체의 치료 특성 또는 약동학적 특성에 나쁜 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 효과기 기능을 나타낼 수 있다. (예, WO2014/022540 참조).
면역접합체
본 발명은 다른 모이어티, 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하기 위한 톡소이드 또는 항바이러스 약물 같은 예, 치료 모이어티에 접합된 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편("면역접합체")을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에서, 항- CoV-S 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 제시된 추가의 치료제 중 어느 하나에 접합된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역접합체"는 방사성 제제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드 또는 단백질 또는 치료제에 화학적으로 또는 생물학적으로 연결되는 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다. 항원 결합 단백질은 그의 표적(CoV-S)에 결합할 수 있도록, 분자를 따라 임의의 위치에서 방사성 제제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드 또는 치료제에 결합될 수 있다. 면역접합체의 예는 항체 약물 접합체 및 항체-독소 융합 단백질을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에서, 제제는 CoV-S에 특이적으로 결합하는 상이한 제2 항체일 수 있다. 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체 또는 단편)에 접합될 수 있는 치료 모이어티의 유형은 치료될 병태 및 달성될 원하는 치료 효과를 고려할 것이다. 예, Arnon 등, "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld 등 (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom 등, "Antibodies For Drug Delivery", Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson 등 (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", Monoclonal Antibodies 1984: Biological And Clinical Applications, Pinchera 등 (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", Monoclonal Antibody For Cancer Detection And Therapy, Baldwin 등 (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), 및 Thorpe 등, "The Preparation And Cytotoxic Properties of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62: 119-58(1982)을 참조한다.
다중특이적 항체
본 발명은 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편뿐만 아니라, 이의 사용 방법 및 이러한 항원 결합 단백질을 만드는 방법을 포함한다. 용어 "항-CoV-S" 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편은 CoV-S(예, 표 4의 항체로부터의 항원 결합 도메인)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제1 항원 결합 도메인 및 상이한 항원 또는 제1 항원 결합 도메인의 에피토프와 상이한 CoV-S 내의 에피토프에 결합하는 적어도 하나의 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적(예, 이중특이적 또는 이중 파라토프) 분자를 포함한다. 일부 실시예에서, 제1 항원 결합 도메인 및 제2 항원 결합 도메인은 모두 표 4의 항원 결합 도메인으로부터 선택된다. 본 발명의 일 실시예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 본 발명의 또 다른 실시예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 다중특이적 항체는 표 4의 항체의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬을 포함하는 CoV-S에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인, 및 CoV-S의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 IgG 항체(예, IgG1 또는 IgG4)이다. 일부 실시예에서, 이중 특이적 IgG 항체(예, IgG1 또는 IgG4)는 CoV-S에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 숙주 세포 단백질, 예, ACE2 또는 TMPRSS2에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함한다.
표 4의 항체는 이들 항체(본원에 제시된 것과 같은 이의 변이체 포함)의 CDR-H 및 CDR-L, VH 및 VL, 또는 HC 및 LC를 각각 포함하는 다중특이적 분자, 예, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
본 발명의 일 실시예에서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는 CoV-S 에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인은 다음을 포함한다:
(1)
(i) 표 4에 제시된 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열, 및
(ii) 표 4에 제시된 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는,
(2)
(i) 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열, 및
(ii) 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는,
(3)
(i) 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 서열, 및
(ii) 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 서열.
본 발명의 일 실시예에서, 다중특이적 항체 또는 단편은 둘 이상의 상이한 결합 특이성(예, 삼중특이적 분자), 예를 들어, 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인과 동일하거나 상이한 하나 이상의 추가 항원 결합 도메인을 포함한다.
본 발명의 일 실시예에서, 이중 특이적 항원 결합 단편은 제1 에피토프(예, CoV-S)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 scFv(예, 표 4의 VH 및 VL 서열을 포함함) 및 제2 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 scFv를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 제1 및 제2 scFv는 링커, 예, 펩티드 링커(예 , (GGGGS)n(서열번호 834)과 같은 GS 링커, 여기서 n은 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10임)로 테더링된다. 다른 이중특이적 항원 결합 단편은 표 4의 중쇄 및 경쇄 CDR 및 상이한 에피토프에 결합하는 또 다른 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 이중특이적 IgG 항체의 F(ab)2를 포함한다.
치료 방법
본 발명은 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체(예, 인간)에게 (예, 표 4의) 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여함으로써 바이러스 감염(예, 코로나바이러스 감염)을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
코로나바이러스 감염은, 대상체에서, 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질을 대상체에게 투여함으로써 치료되거나 예방될 수 있다. 예시적인 코로나바이러스는 SARS-CoV-2를 포함하며, 이는 알파, 베타, 감마, 델타, 및 오미크론과 같은 변이체를 추가로 포함할 수 있다.
바이러스 감염 치료 또는 예방을 위한 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 항원 결합 단편(예, 표4의)의 유효 투여량 또는 치료적 유효 투여량은, 이러한 징후 및/또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하거나, 이러한 징후 및/또는 증상의 진행을 억제함으로써, 치료된 대상체에서 감염의 하나 이상의 징후 및/또는 증상을 완화하기에 충분한 항체 또는 단편의 양을 지칭한다. 투여량은 투여 대상체의 연령 및 크기, 표적 질환, 상태, 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 예, 성인 인간 대상체에서 바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 유효 투여량 또는 치료적 유효 투여량은 약 0.01 내지 200mg/kg, 예, 최대 약 150mg/kg이다. 본 발명의 일 실시예에서, 투여량은 최대 약 10.8 또는 11 그램(예, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11 그램)이다. 감염의 중증도에 따라, 치료의 빈도와 기간을 조정할 수 있다. 특정 실시예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 초기 투여량으로 투여되고, 이어서 1회 이상의 이차 투여량이 투여될 수 있다. 특정 실시예에서, 초기 투여량에 이어서 항체 또는 항원 결합 단편의 제2 또는 복수의 후속 투여량이 초기 투여량과 거의 동일하거나 적은 양으로 투여될 수 있으며, 여기서 후속 투여량은 적어도 1 내지 3일; 적어도 1주; 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주만큼 간격을 둔다.
일부 실시예에서, mAb10933 및 mAb10987(각각 카시리비맙 및 임데비맙)은 유증상 COVID-19에 대한 예방 방법, 예를 들어 노출 전 예방 방법으로 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시예에서, 대상체는 면역저하된 상태이고, 예를 들어, 원발성 또는 속발성 면역결핍증과 같은 면역결핍증을 갖는다. 일부 실시예에서, 대상체는 COVID-19 백신접종에 대한 효과적인 반응을 나타내지 않았다. 면역 저하와 연관된 예시적인 기준은 다음을 포함한다: 고형 종양 및 혈액암에 대한 활성 또는 최근 치료; 고형 장기 또는 최근의 조혈 줄기 세포 이식의 수령; 중증 원발성 면역결핍증; 진행성 또는 미치료 HIV 감염; 고용량 코르티코스테로이드를 사용한 활성 치료, 알킬화제, 항대사물, 종양-괴사(TNF) 차단제, 및 면역억제성 또는 면역조절성인 다른 생물학적 제제; 및 무비증 및 만성 신장 질환과 같은 만성 의학적 병태, 이러한 병태를 갖는 일부 환자는 다양한 정도의 면역 결핍과 관련이 있을 수 있다. 일부 실시예에서, 대상체는 다음 기준 중 ≥ 1을 충족시킨다:
a. 임의의 면역억제제를 투여받은 고형 장기 이식(SOT) 또는 조혈 혈액 세포 이식(HSCT) 수혜자
b. 활성 혈액암 또는 3개월 이내에 치료를 완료한 환자
c. T 세포 또는 B 세포 면역억제 요법으로 활성 치료를 받는 고형 기관 악성 종양
d. 중등증 또는 중증 원발성 면역결핍증(저감마글로불린혈증, 흔한 가변 면역 결핍증, 중증 복합 면역결핍증 등)
e. HIV 및 CD4 <200 세포/마이크로리터
f. Th1, Th17 또는 B 세포 반응을 조절하는 면역억제 요법을 받는 류마티스 질환, 자가면역 질환, 또는 다발성 경화증 환자
g. 3주를 초과하는 기간 동안 다음 면역억제제 중 어느 하나 투여:
- T 세포 억제제(예: ≥5 mg 프레드니손 등가량/일 >3주 동안), 프로테아좀 억제제(보르테조밉, 레날리도마이드 등), 알렘투주맙, 항흉선세포 글로불린, CAR-T 요법, 칼시뉴린 억제제)
- 알킬화제
- 플루다라빈 또는 클라드리빈과 같은 퓨린 유사체
- 리툭시맙 및 오크렐리주맙과 같은 B 세포 고갈제
- mTOR 억제제
- 미코페놀레이트와 같은 항대사물
- JAK 억제제.
예시적인 투여 요법은 다음을 포함한다:
· mAb10933과 mAb10987의 병용 요법, 1200 mg(mAb 당 600 mg)의 1일차에 공동 투여 후, 4주마다(Q4W) 600 mg(mAb 당 300 mg) 피하(SC);
· mAb10933과 mAb10987 병용 요법, 300 mg(mAb 당 150 mg) SC Q4W의 공동 투여; 및
· mAb10933과 mAb10987 병용 요법, 300 mg(mAb 당 150 mg) SC Q12W의 공동 투여.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물(예, 랫트, 마우스, 고양이, 개, 소, 양, 말, 염소, 토끼), 바람직하게는 인간, 예를 들어 바이러스 감염 또는 암과 같은 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 인간을 지칭한다. 대상체는 바이러스 감염, 예, 인플루엔자 감염증을 가질 수 있거나 감염이 발생하기 쉽다. 감염이 발생하기 쉬운 대상체 또는 감염(예, 코로나바이러스 또는 인플루엔자 바이러스의)이 발생할 위험이 높은 대상체는 자가면역 질환때문에 면역체계가 손상된 대상체, (예를 들어, 장기 이식 후) 면역억제 요법을 투여받고 있는 사람들, 또는 인간 면역 결핍 증후군(HIV) 또는 후천성 면역 결핍증후군(AIDS)에 걸렸거나, 백혈구를 고갈시키거나 파괴하는 특정 형태의 빈혈증에 걸린 사람들, 방사선 또는 화학요법으로 치료 중인 사람들, 또는 염증성 장애에 걸린 사람들을 포함한다. 또한, 매우 어린(예, 5세 이하) 또는 노령(예, 65세 이상)의 대상체는 위험이 증가한다. 또한, 대상체가 질환의 발발 상황에 직면함으로 인해, 예, 대상체가 인구 밀집 도시에 거주하거나, 바이러스 감염이 확진되었거나 의심되는 대상체와 밀접한 근위에 있거나, 직업 선택으로 인해, 예, 병원 근무자, 제약 연구원, 감염된 지역으로의 여행자, 비행이 잦은 경우 바이러스 감염이 발생할 위험이 있다.
"치료" 또는 "치료하는"은 (본원에서 논의된 바와 같은) 유효 또는 치료적 유효량 또는 투여량으로 대상체에게 투여될 때 항원 결합 단백질이 효과적인 질환 또는 감염, 예, 바이러스 감염의 하나 이상의 징후 또는 증상을 갖는 대상체에게, 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편(예, 표 4의)을 투여하는 것을 의미한다.
본 발명은 또한 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)을 바이러스 감염 위험이 있는 대상체에게 예방적으로 투여하여 이러한 감염을 예방하는 단계를 포함한다. 수동 항체 기반 면역예방은 대상체를 바이러스 감염으로부터 예방하는 효과적인 전략을 입증하였다. 예, Berry 등, Passive broad-spectrum influenza immunoprophylaxis. Influenza Res Treat. 2014; 2014:267594. Epub 2014 Sep 22; 및 Jianqiang 등, Passive immune neutralization strategy for prevention and control of influenza A infection, Immunotherapy. 2012년 2월; 4(2): 175-186; Prabhu 등, Antivir Ther. 2009;14(7):911-21, Prophylactic and therapeutic efficacy of a chimeric monoclonal antibody specific for H5 hemagglutinin against lethal H5N1 influenza을 참조한다. "예방하다" 또는 "예방하는"은 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편(예, 표 4의)을 대상체에게 투여하여, (본원에서 논의된 바와 같은) 유효량 또는 치료적 유효량 또는 투여량으로 대상체에게 투여될 때 항원 결합 단백질이 효과적인, 대상체의 신체에서 질환 또는 감염(예, 바이러스 감염)의 발현을 억제하는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 예방은 노출 전 예방(예를 들어, SARS-CoV-2 바이러스에 노출되기 전에 개체에게 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 단편의 투여), 또는 노출 후 예방(예를 들어, SARS-CoV-2 바이러스에 노출되기 전에 개체에게 본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 단편의 투여)일 수 있다. 일부 실시예에서, 노출 후 예방은 SARS-CoV-2 감염에도 불구하고 COVID-19의 하나 이상의 증상을 예방할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 대상체에서 바이러스 감염의 징후 또는 증상은, 예, 바이러스 역가 검정(예, 유정란에서 코로나바이러스 전파 또는 코로나바이러스 스파이크 단백질 검정)에 의해 결정했을 때, 대상체의 신체에서 바이러스의 생존 또는 증식이다. 바이러스 감염의 다른 징후 및 증상은 본원에서 논의된다.
전술한 바와 같이, 일부 실시예에서, 대상체는 비인간 동물일 수 있고, 본원에서 논의된 항원 결합 단백질(예, 항체 및 항원 결합 단편)은 비인간 동물(예, 고양이, 개, 돼지소, 말, 염소, 토끼, 양 등)에서 질환을 치료 및/또는 예방하기 위해 수의학적 맥락에서 사용될 수 있다.
본 발명은 예를 들어, 단백질을 대상체의 신체 내로 주사함으로써, 치료적 유효량의 항-CoV-S 항원 결합 단백질([g2]예[/g2], 표 4의)을 대상체에게 투여함으로써, 바이러스 감염(예, 코로나바이러스 감염)을 치료 또는 예방하거나, 퇴행 또는 제거를 유도하거나, 다음과 같은 바이러스 감염의 적어도 하나의 징후 또는 증상의 진행을 억제하기 위한 방법을 제공하고, 예컨대:
· 발열 또는 발열/오한을 느낌;
· 기침;
· 인후통;
· 콧물 또는 코막힘;
· 재채기;
· 근육통 또는 몸살;
· 두통;
· 피로(피곤함);
· 구토;
· 설사;
· 호흡기 감염;
· 흉부 불편감;
· 호흡곤란;
· 기관지염; 및/또는
· 폐렴,
상기 징후 또는 증상은 이를 필요로 하는 대상체(예, 인간)에서 바이러스 감염에 이차적이다.
조합 및 약학적 조성물
항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 및 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)의 약학적 조성물을 제조하기 위해, 항원 결합 단백질을 약학적으로 허용 가능한 운반체 또는 부형제와 혼합한다. 예, Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984); Hardman 등 (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis 등 (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman 등 (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, 등 (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.를 참조한다. 본 발명의 일 실시예에서, 약학적 조성물은 멸균 상태이다. 이러한 조성물은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 범위는 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(e.g., 표 4의), 또는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하지만 실질적으로 물은 부족한 이의 약학적 조성물을 포함하는 건조된, 예, 동결 건조된 조성물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서, 본원에 개시된 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)과 연계하여 대상체에게 투여되는 추가의 치료제는 의사의 처방 참고집 2003(Physicians' Desk Reference)(Thomson Healthcare; 57th edition (Nov. 1, 2002))에 따라 대상체에게 투여된다.
투여 방법은 다양할 수 있다. 투여 경로는 경구, 직장, 경점막, 장, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 경막내, 직접 뇌실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 안구내, 흡입, 취입, 국소, 피부, 경피, 또는 동맥내를 포함한다.
본 발명은 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)을 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 대상체의 신체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 주사기 바늘을 대상체의 신체에 찔러 넣는 단계, 및 항원 결합 단백질을 대상체의 신체 내로, 예, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직에 주입하는 단계를 포함한다.
본 발명은 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의), 폴리펩티드(예, 표 4의 HC, LC, VH 또는 VL), 또는 폴리뉴클레오티드(예, 표 5의) 또는 본원에 제시된 벡터 중 어느 하나 또는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 이의 약학적 조성물을 포함하는 용기(예, 예를 들어 캡을 갖는, 플라스틱 또는 유리 바이알, 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공 보어 바늘 또는 주사기 실린더)를 제공한다.
본 개시의 일 실시예에서, 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)은 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여된다. 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 그 전체가 참조로서 본원에 특이적으로 통합되는 본원에 기술되거나 미국 특허 제10,787,501호에 기술된 항체)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일부 실시예에서, 항말라리아제는 클로로퀸 또는 하이드록시클로로퀸이다. 일부 실시예에서, 항염증제는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙과 같은 항체이다. 일부 실시예에서, 추가 치료제는, 예, 표 4의 본원에 개시된 제2 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 경우에, CoV-S에 결합하는 항체는 카시리비맙 또는 임데비맙이고, 특정 실시예에서, 표 4의 1, 2, 3, 4개 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 조합하여(예, 동시에 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 특히, 항체의 조합은 실시예 7에 기술된 바와 같이, 항체가 교차 경쟁하지 않도록 선택될 수 있다. 일부 실시예에서, mAb14256은 mAb14315와 조합하여 투여된다. 일부 실시예에서, mAb15151은 mAb14315와 조합하여 투여된다. 일부 실시예에서, 본 개시의 항체(예, 하나의 항체 또는 2개의 항체)는 미국 특허 제10,787,501호("501 특허")에 기술된 항체(예, 하나의 항체 또는 2개의 항체)와 조합될 수 있다. 특정 실시예에서, '501 특허의 mAb10987은 본 개시의 mAb14256 및/또는 mAb15151과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, '501 특허의 mAb10933 및 mAb10987은 본 개시의 mAb14256과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, '501 특허의 mAb10985 및 mAb10987은 본 개시의 mAb15151과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, '501 특허의 mAb10985는 본 개시의 mAb14315 및/또는 mAb15151과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, 본 개시의 mAb15160은 '501 특허의 mAb10987과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, 본 개시의 mAb15160은 '501 특허의 mAb10985와 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, 본 개시의 mAb15160은 '501 특허의 mAb10985 및 mAb10987과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, 본 개시의 mAb15160은 mAb14256, mAb14315, 및 mAb15151 중 임의의 1개, 2개, 또는 3개와 조합하여 투여되고, 선택적으로 mAb10987 및/또는 mAb10985와 추가로 투여된다. 특정 실시예에서, mAb14256, mAb14315, mAb15151, 및 mAb15160 중 4개 중 임의의 1개, 2개, 3개는 i) mAb10933, ii) mAb10987, 또는 iii) mAb10933 및 mAb10987과 조합하여 투여된다. 특정 실시예에서, mAb10933, mAb10987, mAb10985, mAb14256, mAb1435, mAb15151, 및 mAb15160 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 임의의 조합이 병용 투여된다. 특정 실시예에서, mAb10987, mAb14284, mAb14315 및 mAb17090으로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 mAb10933, mAb14256, mAb15160 및 mAb15160_2로부터 선택된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 조합된다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb10987 및 mAb10933을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb10987 및 mAb14256을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb10987 및 mAb15160을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb10987 및 mAb15160_2를 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14284 및 mAb10933을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14284 및 mAb14256을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14284 및 mAb15160을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14284 및 mAb15160_2를 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14315 및 mAb10933을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14315 및 mAb14256을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14315 및 mAb15160을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb14315 및 mAb15160_2를 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb17090 및 mAb10933을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb17090 및 mAb14256을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb17090 및 mAb15160을 포함한다. 특정 실시예에서, 조합은 mAb17090 및 mAb15160_2를 포함한다. 상기에서 또는 본원에서 논의된 조합 중 어느 하나에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4에 식별된 HCVR 및 LCVR 서열 내에 함유된 CDR에 의해, 표 4에 식별된 중쇄 및 경쇄 CDR 서열에 의해, 표 4에 식별된 HCVR 및 LCVR 서열에 의해, 또는 표 4에 식별된 전장 중쇄 및 경쇄 서열에 의해 정의될 수 있고, 이들 특정 조합 각각은 본 개시에 포함된다. 2개의 항체의 특정 예시적인 조합이 아래에 나타나 있다. 일부 실시예에서, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체는 국제 특허 공개 제WO/2019/147831호에 기술된 바와 같이 H1H7017N이다.
| mAb / 조합 번호 |
mAb 10933 | mAb 10985 | mAb 10987 | mAb 14256 | mAb 14315 | mAb 15151 | mAb 14284 | mAb 17090 | mAb 15160 | mAb 15160_2 |
| mAb10933 | X | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| mAb10985 | 10 | X | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |
| mAb10987 | 19 | 20 | X | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 |
| mAb14256 | 28 | 29 | 30 | X | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 |
| mAb14315 | 37 | 38 | 39 | 40 | X | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 |
| mAb15151 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | X | 51 | 52 | 53 | 54 |
| mAb14284 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | X | 61 | 62 | 63 |
| mAb17090 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | X | 71 | 72 |
| mAb15160 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | X | 81 |
| mAb15160_2 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | X |
일부 실시예에서, 상이한 인간 공여자 유래의 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항-SARS-CoV-2-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이 조합될 수 있다. 본 발명은 인간 대상체로부터의 가변 도메인을 포함하는 2개(또는 그 이상)의 항-SARS-CoV-2-S 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 포함하며, 여기서 2개(또는 그 이상)의 항체 또는 항원 결합 단편은 상이한 대상체(예, 2개의 상이한 인간 대상체)로부터 유래된다. 인간 B 세포로부터 유래된 항체 가변 영역은, 예, 실시예 1 및 2(표 6)에서 논의되며, 이는 이러한 B 세포로부터 클로닝된 가변 도메인이 이들 B 세포로부터 유래되지 않은 불변 영역과 조합되어 하이브리드 항체를 생산하는 것을 기술한다.
일부 실시예에서, 추가 치료제는 항바이러스 약물 및/또는 백신이다. 본원에서 사용되는 용어 "항바이러스 약물"은 대상체에서 바이러스 감염증을 치료, 예방 또는 개선하는데 사용되는 임의의 항감염제 또는 요법을 의미한다. 용어 "항바이러스 약물"은 양이온성 스테로이드 항균제, 류펩틴, 아프로티닌, 리바비린, 또는 인터페론-알파2b를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 추가 치료제와 함께 표 4의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여함으로써 상기 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 바이러스(예, 코로나바이러스) 감염을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 일부이다.
예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 추가 치료제는 백신, 예, 코로나바이러스 백신이다. 본 발명의 일 실시예에서, 백신은 불활성화/사멸된 바이러스 백신, 생약독화 바이러스 백신 또는 바이러스 서브유닛 백신이다.
예를 들어, 본 발명의 일 실시예에서, 추가 치료제는 다음과 같다:
(카모스타트 메실레이트);
(나파모스타트 메실레이트);
(브롬헥신 하이드로클로라이드(BHH));
(4-(2-아미노메틸)벤젠설포닐 플루오라이드 하이드로클로라이드(AEBSF));
;
; 또는
(폴리아미드). Shen 등 Biochimie 142: 1-10(2017)을 참조한다.
본 발명의 일 실시예에서, 항바이러스 약물은 코로나바이러스, 예, SARS-CoV-2, SARS-CoV, 또는 MERS-CoV에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예시적인 항-CoV-S 항체는 다음을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다: H4sH15188P; H1H15188P; H1H15211P; H1H15177P; H4sH15211P; H1H15260P2; H1H15259P2; H1H15203P; H4sH15260P2; H4sH15231P2; H1H15237P2; H1H15208P; H1H15228P2; H1H15233P2; H1H15264P2; H1H15231P2; H1H15253P2; H1H15215P; 및 H1H15249P2 -국제특허출원 공개 WO/2015/179535호에 제시된 바와 같음-, 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, 항체 또는 단편은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3(예, 이의 VL 또는 경쇄)을 포함하는 경쇄 면역글로불린; 및 전술한 항-CoV-S 항체 중 어느 하나의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3(예, 이의 VH 또는 중쇄)을 포함하는 중쇄를 포함한다.
본 발명의 특정 실시예에서, 추가 치료제는 아프로티닌, 류펩틴, 양이온성 스테로이드 항균제, 인플루엔자 백신(예, 사멸, 생, 약독화된 전체 바이러스 또는 서브유닛 백신), 또는 인플루엔자 바이러스에 대한 항체(예, 항-헤마글루티닌 항체)가 아니다.
용어 "연계하여(in association with)"는 성분인, 본 발명의 항- CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 이의 항체 또는 항원 결합 단편이 다른 제제와 함께 예, 동시 전달을 위한 단일 조성물로 제형화되거나, 2가지 이상의 조성물(예, 키트)로 별도로 제형화될 수 있음을 나타낸다. 각각의 성분은 다른 성분이 투여되는 시간과 다른 시간에 대상체에게 투여될 수 있으며; 예를 들어, 각각의 투여는 주어진 기간에 걸쳐 간격을 두고 비동시적으로 (예, 개별적으로 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 또한, 별도의 성분은 동일하거나 상이한 경로(예, 항-CoV-S 항체 또는 이의 항원 결합 단편)에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.
키트
본원에서 논의된 바와 같은 추가 치료제를 포함하지만 이에 한정되지 않는 하나 이상의 추가 성분과 관련하여, 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본원에서 논의된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편(예, 표 4의)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 하나 이상의 성분을 포함하는 키트가 추가로 제공된다. 항원 결합 단백질 및/또는 추가 치료제는 단일 조성물로서 제형화되거나, 예, 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 약학적 조성물 중 2개 이상의 조성물로 별도로 제형화될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 키트는 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의), 또는 이의 약학적 조성물을 하나의 용기(예, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 포함하고, 추가 치료제를 다른 용기(예, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 포함한다.
다른 실시예에서, 키트는 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의), 또는 이의 약학적 조성물을 포함하는 본 발명의 조합을 포함하며, 상기 약학적 조성물은 하나의 공통 용기에서 선택적으로 약학적 조성물로 함께 제형화된 하나 이상의 추가 치료제와 조합된다.
키트가 대상체에게 비경구 투여하기 위한 약학적 조성물을 포함하는 경우, 키트는 이러한 투여를 수행하기 위한 장치(예, 주사 장치)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예[/g2], 표 4의)을 함유하는 전술한 바와 같은 하나 이상의 피하 바늘 또는 다른 주사 장치를 포함할 수 있다.
키트는, 키트 내의 약학적 조성물 및 투여 형태에 관한 정보를 포함하는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 정보는 환자 및 의사가 동봉된 약학적 조성물 및 투여 형태를 효과적이고 안전하게 사용하는 것을 돕는다. 예를 들어, 본 발명의 조합에 관한 다음의 정보 중 어느 하나가 삽입물에 제공될 수 있다: 약동학, 약력학, 임상 연구, 효능 파라미터, 적응증 및 용도, 금기 사항, 경고, 주의사항, 부작용, 과다 투여, 적절한 투여량 및 투여, 공급 방법, 적절한 저장 조건, 참조, 제조업체/유통업체 정보 및 특허 정보.
항체의 진단적 사용
항-CoV-S 항원 결합 단백질, 예, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예, 표 4의)은 샘플에서 CoV-S를 검출 및/또는 측정하는 데 사용될 수 있다. CoV-S에 대한 예시적인 검정은, 예, 샘플을 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 항-CoV-S 항원 결합 단백질은 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나 샘플로부터 CoV-S를 선택적으로 단리하기 위한 포획 리간드로서 사용된다. CoV-S와 복합체를 이룬 항-CoV-S 항원 결합 단백질의 존재는 샘플에서 CoV-S의 존재를 나타낸다. 대안적으로, 표지되지 않은 항- CoV-S 항체가 자체적으로 검출 가능하게 표지된 이차 항체와 병용으로 진단 용도에 사용될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 3H, 14C, 32P, 35S 또는 125I와 같은 방사성 동위원소; 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 로다민과 같은 형광 모이어티 또는 화학발광 모이어티; 또는 알칼라인 포스파타아제, 베타-갈락토시다아제, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제, 또는 루시페라아제와 같은 효소일 수 있다. 샘플에서 CoV-S를 검출하거나 측정하는 데 사용할 수 있는 특정 예시적인 검정은 중화항체 검사법, 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성 면역분석(RIA) 및 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 포함한다. 따라서, 본 발명은 샘플에서 스파이크 단백질 폴리펩티드의 존재를 검출하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 샘플을 항-CoV-S 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계 및 CoV-S/항-CoV-S 항원 결합 단백질의 존재를 검출하는 단계를 포함하되, 복합체의 존재는 CoV-S의 존재를 나타낸다.
본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 표 4의)은 샘플에서 CoV-S 또는 이의 단편의 존재를 검출하기 위한 웨스턴 블롯 또는 면역-단백질 블롯 절차에 사용될 수 있다. 이러한 절차는 본 발명의 일부를 형성하며, 예,
■ CoV-S의 존재에 대해 시험될 샘플을 포함하는 막 또는 다른 고체 기질을 제공하는 단계, 예, 선택적으로 CoV-S의 존재에 대해 시험될 샘플로부터 단백질을 (예, 샘플 내 단백질의 PAGE 또는 SDS-PAGE로부터) 당업계에 공지된 방법(예 반-건식 블롯팅 또는 탱크 블롯팅)을 이용하여 막 또는 다른 고체 기질에 전달하는 단계; 및 CoV-S 또는 이의 단편의 존재에 대해 시험될 막 또는 다른 고체 기질을 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함한다.
이러한 막은, 예를 들어, 비-변성 PAGE(폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔 또는 SDS-PAGE(도데실황산나트륨 폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔에서 CoV-S의 존재에 대해 시험될 단백질이 ((예(, 겔에서의 전기영동 분리 후에) 전달된 니트로셀룰로오스 또는 비닐계(예 , 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF)) 막의 형태를 취할 수 있다. 막을 항-CoV-S 항원 결합 단백질과 접촉시키기 전에, 막은 막 상의 비특이적 단백질 결합 부위에 결합하도록 예, 무지방 우유 등으로 선택적으로 차단된다.
(2) 상기 막을 1회 이상 세척하여 미결합 항-CoV-S 항원 결합 단백질 및 다른 미결합 물질을 제거하는 단계; 및
(3) 결합된 항-CoV-S 항원 결합 단백질을 검출하는 단계.
결합된 항원 결합 단백질의 검출은 CoV-S 단백질이 막 또는 기질 상에 및 샘플에 존재함을 나타낸다. 결합된 항원 결합 단백질의 검출은 항원 결합 단백질을 검출 가능하게 표지된 이차 항체(항-면역글로불린 항체)와 결합시킨 다음, 이차 항체 표지의 존재를 검출함으로써 이루어질 수 있다.
본원에 개시된 항-CoV-S 항원 결합 단백질(예, 항체 및 항원 결합 단편(예, 표 4의)은 면역조직화학에 사용될 수도 있다. 이러한 방법은 본 발명의 일부를 형성하며, 예,
· CoV-S 단백질의 존재에 대해 시험될 조직을 본 발명의 항-CoV-S 항원 결합 단백질과 접촉시키는 단계; 및
· 상기 조직 상에서 또는 조직 내에서 상기 항원 결합 단백질을 검출하는 단계를 포함한다.
항원 결합 단백질 자체가 검출 가능하게 표지되는 경우, 이는 직접 검출될 수 있다. 대안적으로, 항원 결합 단백질은 검출 가능하게 표지된 이차 항체에 의해 결합될 수 있으며, 여기서 표지는 그 다음 검출된다.
예
다음 예들은 당업자에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시된 것으로, 본 발명자들이 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력을 기울였으나 약간의 실험 오차와 편차에 대해서는 설명되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부(parts)는 중량 부(parts by weight)이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 실온은 약 25oC이며, 압력은 대기압이거나 거의 대기압이다.
예 1: SARS-CoV-2 스파이크 단백질(SARS-CoV-2-S)에 대한 인간 항체의 생성
인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역 또는 인간 면역글로불린 중쇄 및 람다 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스에서 SARS-CoV-2-스파이크 단백질(SARS-CoV-2-S)에 대한 인간 항체를 생성하였다. 각각의 마우스를 SARS-CoV-2-S 수용체 결합 도메인(RBD)(NCBI 수탁 번호(MN908947.3), 서열번호 1008의 아미노산 1-1273)을 발현하는 벡터로 면역화한 다음, SARS-CoV-2-S 벡터 또는 SARS-CoV-2-S 단백질로 부스터 접종하였다. 항체 면역 반응은 SARS-CoV-2-S-특이적 면역 분석으로 모니터링하였다. 미국 특허 제7582298호(그 전체가 구체적으로 본원에 참조로서 통합됨)에 기술된 바와 같이, 항-SARS-CoV-2-S 항체를 골수종 세포와 융합시키지 않고 항원-양성 B 세포로부터 직접 단리하였다. 이 방법을 사용하여, 완전한 인간 항-SARS-CoV-2-S 항체(즉, 인간 가변 도메인 및 인간 불변 도메인을 갖는 항체)를 수득하였다.
항체 가변 영역을 또한 인간 혈액 샘플로부터 단리하였다. SARS-CoV-2 및 유증상 COVID-19 질환에 대해 실험실에서 확인한 PCR 양성 검사 후 6-8주차에 환자로부터 전혈을 받았다. 염화암모늄 기반 용해 완충액(Life Technologies)을 사용하여 적혈구 세포를 용해시키고, 음성 선택에 의해 B 세포를 농축시켰다. SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합된 단일 B 세포를 형광 활성화 세포 분류(FACS)에 의해 단리하였다. 단리된 B 세포를 단일-웰 플레이팅하고 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역 특이적 PCR 프라이머와 혼합하였다. 각각의 단일 B 세포에 대한 cDNA를 역전사효소(RT) 반응을 통해 합성하였다. 그런 다음, 각각의 생성된 RT 생성물을 분할하고, 후속 항체 중쇄 및 경쇄 PCR을 위해 2개의 상응하는 웰로 옮겼다. 생성된 RT 생성물의 한 세트를 항체 중쇄 가변 영역 리더 서열에 특이적인 5' 퇴화 프라이머 또는 항체 경쇄 가변 영역 리더 서열에 특이적인 5' 퇴화 프라이머 및 항체 불변 영역에 특이적인 3' 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 먼저 증폭시켜 앰플리콘을 형성하였다. 그런 다음, 항체 중쇄 가변 영역 프레임워크 1에 특이적인 5' 퇴화 프라이머 또는 항체 경쇄 가변 영역 프레임워크 1에 특이적인 5' 퇴화 프라이머 및 항체 불변 영역에 특이적인 3' 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 앰플리콘을 다시 증폭시켜 클로닝을 위한 앰플리콘을 생성하였다. 항체 중쇄 및 경쇄 유래 PCR 산물을 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 각각 함유하는 발현 벡터에 클로닝하여, 하이브리드 항체용 발현 벡터를 생산하였다. 전장 중쇄 및 경쇄 쌍을 발현하는 발현 벡터를 CHO 세포에 형질감염시켜 시험용 항체 단백질을 생산하였다.
본 예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항체의 생물학적 특성은 아래에 제시된 예에서 상세히 기술된다.
예 2: 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 핵산 서열
표 4는 예시적인 항-SARS-CoV-2-S 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR뿐만 아니라 중쇄 및 경쇄 서열의 아미노산 서열 식별자를 제시한다. 상응하는 핵산 서열 식별자는 표 5에 제시된다.
| 서열번호 | ||||||||||
| mAb | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | HC | LC |
| mAb15163 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | 16 | 18 | 20 |
| mAb15164 | 22 | 24 | 26 | 28 | 30 | 32 | 34 | 36 | 38 | 40 |
| mAb15165 | 42 | 44 | 26 | 47 | 49 | 51 | 34 | 36 | 54 | 56 |
| mAb15166 | 58 | 60 | 62 | 64 | 66 | 51 | 68 | 36 | 70 | 72 |
| mAb15167 | 74 | 76 | 78 | 80 | 82 | 84 | 86 | 88 | 90 | 92 |
| mAb15170 | 94 | 96 | 98 | 100 | 102 | 104 | 106 | 108 | 110 | 112 |
| mAb14296 | 114 | 116 | 118 | 120 | 122 | 124 | 126 | 128 | 130 | 132 |
| mAb14297 | 134 | 136 | 138 | 140 | 142 | 144 | 126 | 146 | 148 | 150 |
| mAb14312 | 152 | 154 | 156 | 158 | 160 | 162 | 164 | 166 | 168 | 170 |
| mAb14313 | 172 | 174 | 176 | 178 | 180 | 182 | 184 | 186 | 188 | 190 |
| mAb14314 | 192 | 194 | 196 | 198 | 200 | 202 | 204 | 206 | 208 | 210 |
| mAb14315 | 212 | 214 | 216 | 218 | 220 | 222 | 126 | 224 | 226 | 228 |
| mAb14316 | 230 | 232 | 234 | 236 | 238 | 240 | 242 | 244 | 246 | 248 |
| mAb15150 | 250 | 252 | 254 | 256 | 258 | 260 | 262 | 264 | 266 | 268 |
| mAb15151 | 270 | 272 | 274 | 276 | 278 | 280 | 106 | 282 | 284 | 286 |
| mAb15156 | 288 | 290 | 292 | 294 | 296 | 298 | 300 | 302 | 304 | 306 |
| mAb15157 | 308 | 310 | 312 | 314 | 316 | 318 | 320 | 322 | 324 | 326 |
| mAb15158 | 328 | 330 | 332 | 334 | 336 | 338 | 106 | 340 | 342 | 344 |
| mAb15159 | 346 | 96 | 98 | 350 | 352 | 354 | 106 | 356 | 358 | 360 |
| mAb15160 | 362 | 364 | 366 | 368 | 370 | 372 | 106 | 374 | 376 | 378 |
| mAb15161 | 380 | 382 | 384 | 386 | 388 | 390 | 392 | 394 | 396 | 398 |
| mAb15162 | 400 | 402 | 98 | 405 | 407 | 409 | 242 | 411 | 413 | 415 |
| mAb14280 | 417 | 419 | 421 | 423 | 425 | 427 | 14 | 429 | 431 | 433 |
| mAb14281 | 435 | 437 | 138 | 440 | 442 | 444 | 446 | 448 | 450 | 452 |
| mAb14282 | 454 | 456 | 458 | 460 | 462 | 84 | 465 | 467 | 469 | 471 |
| mAb14283 | 473 | 475 | 477 | 479 | 481 | 483 | 485 | 487 | 489 | 491 |
| mAb14284 | 493 | 495 | 497 | 499 | 501 | 503 | 505 | 507 | 509 | 511 |
| mAb14285 | 513 | 515 | 517 | 519 | 521 | 523 | 525 | 36 | 527 | 529 |
| mAb14286 | 531 | 533 | 535 | 537 | 539 | 483 | 542 | 544 | 546 | 548 |
| mAb14287 | 550 | 552 | 554 | 556 | 558 | 84 | 14 | 560 | 562 | 564 |
| mAb14288 | 566 | 568 | 570 | 572 | 574 | 576 | 578 | 580 | 582 | 584 |
| mAb14289 | 586 | 588 | 590 | 592 | 594 | 596 | 126 | 598 | 600 | 602 |
| mAb14290 | 604 | 606 | 608 | 610 | 612 | 614 | 126 | 616 | 618 | 620 |
| mAb14291 | 622 | 624 | 626 | 628 | 630 | 632 | 634 | 636 | 638 | 640 |
| mAb14292 | 642 | 644 | 646 | 648 | 650 | 652 | 634 | 655 | 657 | 659 |
| mAb14293 | 661 | 663 | 665 | 667 | 669 | 124 | 126 | 671 | 673 | 675 |
| mAb14295 | 677 | 679 | 78 | 682 | 684 | 686 | 126 | 688 | 690 | 692 |
| mAb13459 | 694 | 696 | 698 | 700 | 702 | 704 | 706 | 708 | 710 | 712 |
| mAb14230 | 714 | 696 | 716 | 718 | 720 | 722 | 126 | 724 | 726 | 728 |
| mAb14231 | 730 | 732 | 734 | 736 | 738 | 740 | 106 | 742 | 744 | 746 |
| mAb14232 | 748 | 750 | 497 | 752 | 754 | 756 | 505 | 758 | 760 | 762 |
| mAb14233 | 764 | 766 | 768 | 770 | 772 | 774 | 776 | 778 | 780 | 782 |
| mAb14234 | 784 | 786 | 788 | 790 | 792 | 794 | 796 | 798 | 800 | 802 |
| mAb14235 | 804 | 806 | 497 | 808 | 810 | 812 | 505 | 814 | 816 | 818 |
| mAb14247 | 820 | 822 | 497 | 825 | 827 | 756 | 14 | 829 | 831 | 833 |
| mAb14248 | 835 | 837 | 839 | 841 | 843 | 845 | 847 | 849 | 851 | 853 |
| mAb14249 | 855 | 857 | 859 | 861 | 863 | 865 | 106 | 867 | 869 | 871 |
| mAb14255 | 873 | 76 | 876 | 878 | 880 | 84 | 86 | 36 | 883 | 885 |
| mAb14256 | 887 | 889 | 891 | 893 | 895 | 897 | 164 | 899 | 901 | 903 |
| mAb14257 | 905 | 154 | 908 | 910 | 912 | 914 | 916 | 166 | 918 | 920 |
| mAb14258 | 922 | 924 | 926 | 928 | 930 | 576 | 933 | 935 | 937 | 939 |
| mAb14259 | 941 | 943 | 945 | 947 | 949 | 951 | 634 | 655 | 953 | 955 |
| mAb14260 | 957 | 959 | 961 | 963 | 965 | 967 | 969 | 971 | 973 | 975 |
| mAb13457 | 694 | 696 | 698 | 700 | 977 | 704 | 706 | 979 | 710 | 981 |
| mAb13458 | 694 | 696 | 698 | 700 | 983 | 704 | 706 | 985 | 710 | 987 |
| mAb14294 | 989 | 991 | 993 | 995 | 997 | 999 | 1001 | 1003 | 1005 | 1007 |
| mAb17090 | 493 | 495 | 497 | 499 | 501 | 503 | 505 | 507 | 1075 | 511 |
| mAb15160_2 | 362 | 364 | 366 | 368 | 370 | 372 | 106 | 374 | 1077 | 378 |
| 서열번호 | ||||||||||
| mAb | HCVR | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCVR | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | HC | LC |
| mAb15163 | 1 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | 19 |
| mAb15164 | 21 | 23 | 25 | 27 | 29 | 31 | 33 | 35 | 37 | 39 |
| mAb15165 | 41 | 43 | 45 | 46 | 48 | 50 | 33 | 52 | 53 | 55 |
| mAb15166 | 57 | 59 | 61 | 63 | 65 | 50 | 67 | 52 | 69 | 71 |
| mAb15167 | 73 | 75 | 77 | 79 | 81 | 83 | 85 | 87 | 89 | 91 |
| mAb15170 | 93 | 95 | 97 | 99 | 101 | 103 | 105 | 107 | 109 | 111 |
| mAb14296 | 113 | 115 | 117 | 119 | 121 | 123 | 125 | 127 | 129 | 131 |
| mAb14297 | 133 | 135 | 137 | 139 | 141 | 143 | 125 | 145 | 147 | 149 |
| mAb14312 | 151 | 153 | 155 | 157 | 159 | 161 | 163 | 165 | 167 | 169 |
| mAb14313 | 171 | 173 | 175 | 177 | 179 | 181 | 183 | 185 | 187 | 189 |
| mAb14314 | 191 | 193 | 195 | 197 | 199 | 201 | 203 | 205 | 207 | 209 |
| mAb14315 | 211 | 213 | 215 | 217 | 219 | 221 | 125 | 223 | 225 | 227 |
| mAb14316 | 229 | 231 | 233 | 235 | 237 | 239 | 241 | 243 | 245 | 247 |
| mAb15150 | 249 | 251 | 253 | 255 | 257 | 259 | 261 | 263 | 265 | 267 |
| mAb15151 | 269 | 271 | 273 | 275 | 277 | 279 | 105 | 281 | 283 | 285 |
| mAb15156 | 287 | 289 | 291 | 293 | 295 | 297 | 299 | 301 | 303 | 305 |
| mAb15157 | 307 | 309 | 311 | 313 | 315 | 317 | 319 | 321 | 323 | 325 |
| mAb15158 | 327 | 329 | 331 | 333 | 335 | 337 | 105 | 339 | 341 | 343 |
| mAb15159 | 345 | 347 | 348 | 349 | 351 | 353 | 105 | 355 | 357 | 359 |
| mAb15160 | 361 | 363 | 365 | 367 | 369 | 371 | 105 | 373 | 375 | 377 |
| mAb15161 | 379 | 381 | 383 | 385 | 387 | 389 | 391 | 393 | 395 | 397 |
| mAb15162 | 399 | 401 | 403 | 404 | 406 | 408 | 241 | 410 | 412 | 414 |
| mAb14280 | 416 | 418 | 420 | 422 | 424 | 426 | 13 | 428 | 430 | 432 |
| mAb14281 | 434 | 436 | 438 | 439 | 441 | 443 | 445 | 447 | 449 | 451 |
| mAb14282 | 453 | 455 | 457 | 459 | 461 | 463 | 464 | 466 | 468 | 470 |
| mAb14283 | 472 | 474 | 476 | 478 | 480 | 482 | 484 | 486 | 488 | 490 |
| mAb14284 | 492 | 494 | 496 | 498 | 500 | 502 | 504 | 506 | 508 | 510 |
| mAb14285 | 512 | 514 | 516 | 518 | 520 | 522 | 524 | 52 | 526 | 528 |
| mAb14286 | 530 | 532 | 534 | 536 | 538 | 540 | 541 | 543 | 545 | 547 |
| mAb14287 | 549 | 551 | 553 | 555 | 557 | 83 | 13 | 559 | 561 | 563 |
| mAb14288 | 565 | 567 | 569 | 571 | 573 | 575 | 577 | 579 | 581 | 583 |
| mAb14289 | 585 | 587 | 589 | 591 | 593 | 595 | 125 | 597 | 599 | 601 |
| mAb14290 | 603 | 605 | 607 | 609 | 611 | 613 | 125 | 615 | 617 | 619 |
| mAb14291 | 621 | 623 | 625 | 627 | 629 | 631 | 633 | 635 | 637 | 639 |
| mAb14292 | 641 | 643 | 645 | 647 | 649 | 651 | 653 | 654 | 656 | 658 |
| mAb14293 | 660 | 662 | 664 | 666 | 668 | 123 | 125 | 670 | 672 | 674 |
| mAb14295 | 676 | 678 | 680 | 681 | 683 | 685 | 125 | 687 | 689 | 691 |
| mAb13459 | 693 | 695 | 697 | 699 | 701 | 703 | 705 | 707 | 709 | 711 |
| mAb14230 | 713 | 695 | 715 | 717 | 719 | 721 | 125 | 723 | 725 | 727 |
| mAb14231 | 729 | 731 | 733 | 735 | 737 | 739 | 105 | 741 | 743 | 745 |
| mAb14232 | 747 | 749 | 496 | 751 | 753 | 755 | 504 | 757 | 759 | 761 |
| mAb14233 | 763 | 765 | 767 | 769 | 771 | 773 | 775 | 777 | 779 | 781 |
| mAb14234 | 783 | 785 | 787 | 789 | 791 | 793 | 795 | 797 | 799 | 801 |
| mAb14235 | 803 | 805 | 496 | 807 | 809 | 811 | 504 | 813 | 815 | 817 |
| mAb14247 | 819 | 821 | 823 | 824 | 826 | 755 | 13 | 828 | 830 | 832 |
| mAb14248 | 834 | 836 | 838 | 840 | 842 | 844 | 846 | 848 | 850 | 852 |
| mAb14249 | 854 | 856 | 858 | 860 | 862 | 864 | 105 | 866 | 868 | 870 |
| mAb14255 | 872 | 874 | 875 | 877 | 879 | 83 | 85 | 881 | 882 | 884 |
| mAb14256 | 886 | 888 | 890 | 892 | 894 | 896 | 163 | 898 | 900 | 902 |
| mAb14257 | 904 | 906 | 907 | 909 | 911 | 913 | 915 | 165 | 917 | 919 |
| mAb14258 | 921 | 923 | 925 | 927 | 929 | 931 | 932 | 934 | 936 | 938 |
| mAb14259 | 940 | 942 | 944 | 946 | 948 | 950 | 633 | 654 | 952 | 954 |
| mAb14260 | 956 | 958 | 960 | 962 | 964 | 966 | 968 | 970 | 972 | 974 |
| mAb13457 | 693 | 695 | 697 | 699 | 976 | 703 | 705 | 978 | 709 | 980 |
| mAb13458 | 693 | 695 | 697 | 699 | 982 | 703 | 705 | 984 | 709 | 986 |
| mAb14294 | 988 | 990 | 992 | 994 | 996 | 998 | 1000 | 1002 | 1004 | 1006 |
| mAb17090 | 492 | 494 | 496 | 498 | 500 | 502 | 504 | 506 | 1074 | 510 |
| mAb15160_2 | 361 | 363 | 365 | 367 | 369 | 371 | 105 | 373 | 1076 | 377 |
본원에 개시된 항체는 완전한 인간 가변 영역을 갖지만, 마우스 불변 영역(예를 들어, 마우스 IgG1 Fc 또는 마우스 IgG2 Fc(a 또는 b 이소형)), 또는 인간 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1 Fc 또는 인간 IgG4 Fc)을 가질 수 있다. 당업자가 이해할 수 있듯이, 특정 Fc 이소형을 갖는 항체는 상이한 Fc 이소형을 갖는 항체로 변환될 수 있지만(예를 들어, 마우스 IgG1 Fc를 갖는 항체는 인간 IgG4를 갖는 항체 등으로 변환될 수 있지만), 어떤 경우에도, 표 4 및 표 5에 나타낸 수치 식별자에 의해 표시되는 가변 도메인(CDR 포함)은 동일하게 유지될 것이고, 항원에 대한 결합 특성은 불변 도메인의 성질에 상관없이 동일하거나 실질적으로 유사할 것으로 예상된다.
전술한 바와 같이, 항원-양성 VELOCIMMUNE® 마우스 B 세포로부터 직접 단리하거나 항원-양성 인간 B 세포로부터 클로닝된 가변 영역으로부터 유래하여 항체를 수득하였다. 이들 출처의 요약이 표 6에 나타나 있다.
| mAb | 출처 |
| mAb13457 | 마우스 B 세포 |
| mAb13458 | 마우스 B 세포 |
| mAb13459 | 마우스 B 세포 |
| mAb14230 | 인간 B 세포 |
| mAb14231 | 인간 B 세포 |
| mAb14232 | 인간 B 세포 |
| mAb14233 | 인간 B 세포 |
| mAb14234 | 인간 B 세포 |
| mAb14235 | 인간 B 세포 |
| mAb14247 | 인간 B 세포 |
| mAb14248 | 인간 B 세포 |
| mAb14249 | 인간 B 세포 |
| mAb14255 | 마우스 B 세포 |
| mAb14256 | 마우스 B 세포 |
| mAb14257 | 마우스 B 세포 |
| mAb14258 | 마우스 B 세포 |
| mAb14259 | 인간 B 세포 |
| mAb14260 | 마우스 B 세포 |
| mAb14280 | 인간 B 세포 |
| mAb14281 | 인간 B 세포 |
| mAb14282 | 인간 B 세포 |
| mAb14283 | 인간 B 세포 |
| mAb14284 | 인간 B 세포 |
| mAb14285 | 인간 B 세포 |
| mAb14286 | 인간 B 세포 |
| mAb14287 | 인간 B 세포 |
| mAb14288 | 인간 B 세포 |
| mAb14290 | 인간 B 세포 |
| mAb14289 | 인간 B 세포 |
| mAb14291 | 인간 B 세포 |
| mAb14292 | 인간 B 세포 |
| mAb14293 | 인간 B 세포 |
| mAb14294 | 인간 B 세포 |
| mAb14295 | 인간 B 세포 |
| mAb14296 | 인간 B 세포 |
| mAb14297 | 인간 B 세포 |
| mAb14312 | 마우스 B 세포 |
| mAb14313 | 마우스 B 세포 |
| mAb14314 | 마우스 B 세포 |
| mAb14315 | 인간 B 세포 |
| mAb14316 | 인간 B 세포 |
| mAb15156 | 마우스 B 세포 |
| mAb15157 | 마우스 B 세포 |
| mAb15158 | 인간 B 세포 |
| mAb15159 | 인간 B 세포 |
| mAb15160 | 인간 B 세포 |
| mAb15161 | 인간 B 세포 |
| mAb15162 | 인간 B 세포 |
| mAb15163 | 인간 B 세포 |
| mAb15164 | 인간 B 세포 |
| mAb15165 | 인간 B 세포 |
| mAb15166 | 인간 B 세포 |
| mAb15167 | 인간 B 세포 |
| mAb15170 | 인간 B 세포 |
| mAb15150 | 인간 B 세포 |
| mAb15151 | 인간 B 세포 |
예 3: 정제된 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체의 Biacore 결합 동역학
정제된 CHOt 항-SARS-COV-2 단클론 항체(mAbs)에 결합하는 상이한 SARS-COV-2 RBD 시약에 대한 평형 해리 상수(KD)는, 실시간 표면 플라스몬 공명 기반 Biacore T200/Biacore 8K 바이오센서를 사용하여 결정하였다. 모든 결합 연구는 25℃ 및 37℃에서 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, pH 7.4(HBS-ET) 가동 완충액(running buffer) 중에서 수행하였다. Biacore CM5 센서 칩 표면을 마우스 항-인간 Fc 특이적 항체(Regeneron, mAb2567)와의 아민 결합에 의해 먼저 유도체화하여 항-SARS-COV-2 mAbs를 포획하였다. 결합 연구는 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(SARS-COV-2 RBD-mmH)(단량체 RBD)로 발현된 인간 SARS-COV-2 RBD 세포외 도메인(서열번호 1069), C-말단 마우스 IgG2a Fc(SARS-COV-2 RBD mFc)로 발현된 SARS-COV-2 RBD 세포외 도메인(이량체 RBD)(서열번호 1070), 및 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘(SARS-CoV2 스파이크 ECD 폴돈)으로 발현된 SARS-CoV2 스파이크 세포외 도메인(삼량체 RBD)에 대해 수행하였다. 이들 시약을 사용하면 단량체, 이량체 및 삼량체 RBD 펩티드에 각각 결합하는 항체의 능력을 시험할 수 있게 하였다.
HBS-ET 가동 완충액에서 준비된 hSARS-COV-2 RBD-mmH, SARS-COV-2 RBD mFc 및 SARS-CoV2 스파이크 ECD 폴드온의, 50 nM, 12.5 nM 및 3.12 nM의 3가지 농도를, 50 μL/분의 유속으로 1.5-3분 동안 주사한 반면, mAb 결합 상이한 SARS-COV-2 RBD 시약의 해리를 HBS-ET 가동 완충액에서 5-8분 동안 모니터링하였다. 각 사이클의 종료 시, SARS-COV-2 RBD mAb 포획 표면을 마우스 항-인간 Fc 특이적 mAb 표면에 대해 20mM 인산을 12초 동안 주입하여 재생시켰다. 결합 속도(k a ) 및 해리 속도(k d )는 BiaEvaluation 소프트웨어 v3.1 또는 Biacore Insight Evaluation 소프트웨어 v2.0. 또는 곡선 맞춤 소프트웨어를 사용해 질량 수송에 제한이 있는 1:1 결합 모델에 실시간 결합 센서그램을 피팅하여 결정하였다. 결합 해리 평형 상수(KD) 및 해리 반감기(t½)를 동역학 속도로부터 다음과 같이 계산하였다:
K
D
(M) =
, 및 t½ (분) =
25℃ 및 37℃에서 본 발명의 단량체, 이량체 및 삼량체 SARS-COV-2 RBD 시약에 결합하는 다양한 항-SARS-COV-2 mAb에 대한 결합 동역학 매개변수가 각각 표 7 내지 12에 나와 있다. 이소형 대조군인 mAb1932도 대조군으로서 사용하였다.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서
결합된 RBD 단량체 (RU) |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 468.6±4.6 | 190.8 | 1.53E+06 | 9.29E-04 | 6.06E-10 | 12.4 |
| mAb14260 | 415.3±1.6 | 173.5 | 1.87E+06 | 1.38E-03 | 7.38E-10 | 8.4 |
| mAb14284 | 731.1±1.2 | 236.5 | 6.66E+05 | 5.49E-04 | 8.24E-10 | 21.0 |
| mAb14258 | 423.9±0.4 | 180.2 | 1.89E+06 | 1.61E-03 | 8.54E-10 | 7.2 |
| mAb14294 | 408.7±2.0 | 138.3 | 6.00E+05 | 5.48E-04 | 9.14E-10 | 21.1 |
| mAb14283 | 410.1±8.9 | 171.9 | 1.46E+06 | 1.58E-03 | 1.08E-09 | 7.3 |
| mAb14235 | 340.0±4.0 | 117.1 | 7.89E+05 | 1.05E-03 | 1.33E-09 | 11.0 |
| mAb14289 | 395.1±1.1 | 151 | 1.16E+06 | 1.58E-03 | 1.36E-09 | 7.3 |
| mAb13458 | 435.7±4.4 | 158.4 | 9.09E+05 | 1.39E-03 | 1.53E-09 | 8.3 |
| mAb14313 | 532.2±1.9 | 218.2 | 1.42E+06 | 2.17E-03 | 1.53E-09 | 5.3 |
| mAb14247 | 179.0±0.5 | 63.3 | 8.38E+05 | 1.63E-03 | 1.94E-09 | 7.1 |
| mAb14315 | 465.8±0.9 | 127.1 | 4.07E+05 | 1.02E-03 | 2.49E-09 | 11.4 |
| mAb13459 | 665.7±4.5 | 219.3 | 6.93E+05 | 1.74E-03 | 2.51E-09 | 6.6 |
| mAb13457 | 412.5±7.4 | 148.4 | 7.74E+05 | 2.05E-03 | 2.65E-09 | 5.6 |
| mAb14257 | 518.6±1.0 | 215.1 | 3.40E+06 | 9.52E-03 | 2.80E-09 | 1.2 |
| mAb14255 | 432.4±4.8 | 180.4 | 1.75E+06 | 4.99E-03 | 2.84E-09 | 2.3 |
| mAb14286 | 394.6±5.2 | 158.5 | 3.23E+06 | 1.04E-02 | 3.22E-09 | 1.1 |
| mAb14282 | 414.4±4.7 | 170.1 | 1.93E+06 | 9.57E-03 | 4.97E-09 | 1.2 |
| mAb14281 | 423.6±0.4 | 157.8 | 1.10E+06 | 5.54E-03 | 5.02E-09 | 2.1 |
| mAb14230 | 315.0±0.3 | 113.6 | 1.13E+06 | 8.52E-03 | 7.51E-09 | 1.4 |
| mAb14256 | 440.5±3.6 | 175.4 | 1.11E+06 | 9.27E-03 | 8.32E-09 | 1.2 |
| mAb14285 | 443.1±0.6 | 157.9 | 1.80E+06 | 2.11E-02 | 1.17E-08 | 0.5 |
| mAb14280 | 474.3±0.5 | 177.3 | 1.66E+06 | 2.55E-02 | 1.54E-08 | 0.5 |
| mAb14234 | 458.8±0.9 | 152.8 | 5.50E+05 | 1.13E-02 | 2.05E-08 | 1.0 |
| mAb14232 | 71.6±1.4 | 18.8 | 1.12E+06 | 3.50E-02 | 3.12E-08 | 0.3 |
| mAb14292 | 431.3±0.7 | 11.1 | 4.17E+05 | 1.71E-02 | 4.09E-08 | 0.7 |
| mAb14314 | 597.8±0.8 | 11.6 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14248 | 400.8±1.6 | 269.5 | 7.06E+05 | 2.05E-05 | 2.90E-11 | 564.0 |
| mAb14295 | 441.5±3.7 | 59.8 | 3.01E+05 | ≤1.00E-05 | 3.32E-11 | ≥1155.0 |
| mAb14233 | 492.8±3.4 | 85.7 | 4.94E+05 | 3.66E-05 | 7.41E-11 | 315.5 |
| mAb14287 | 419.8±0.3 | 91.9 | 3.10E+05 | 4.59E-05 | 1.48E-10 | 251.4 |
| mAb14293 | 432.5±0.6 | 119.8 | 2.43E+05 | 8.10E-05 | 3.33E-10 | 142.6 |
| mAb14291 | 391.3±3.3 | 47.8 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14249 | 407.5±1.0 | 42.3 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14316 | 264.7±1.6 | 40 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14296 | 529.6±0.7 | 32.3 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14231 | 407.0±2.2 | 27.3 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14288 | 458.5±2.3 | 24.7 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14297 | 444.0±1.4 | 13.7 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14290 | 378.1±1.2 | 12 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14259 | 335.8±2.8 | 7.8 | IC | IC | IC | IC |
| mAb15156 | 427.3±17.1 | 91 | 2.89E+05 | 1.21E-03 | 4.18E-09 | 9.6 |
| mAb15157 | 291.6±11.5 | 20.3 | 2.78E+05 | 1.25E-03 | 4.49E-09 | 9.3 |
| mAb15158 | 317.3±6.6 | 26.3 | 1.04E+05 | 8.12E-05 | 7.79E-10 | 142.2 |
| mAb15159 | 286.3±16.0 | 62 | 4.89E+04 | 1.30E-04 | 2.66E-09 | 88.8 |
| mAb15160 | 304.2±8.3 | 9.3 | IC | IC | IC | IC |
| mAb15161 | 250.6±15.3 | 40.3 | 1.73E+05 | 2.34E-04 | 1.35E-09 | 49.3 |
| mAb15162 | 287.1±12.2 | 49.6 | 1.16E+05 | 8.50E-04 | 7.30E-09 | 13.6 |
| mAb15163 | 358.2±12.8 | 51 | 2.18E+05 | 1.67E-05 | 7.79E-11 | 693.3 |
| mAb15164 | 315.8±11.1 | 41.2 | 2.28E+05 | 3.49E-04 | 1.53E-09 | 33.1 |
| mAb15165 | 271.1±13.8 | 33.9 | 5.39E+05 | 2.12E-04 | 3.93E-10 | 54.6 |
| mAb15166 | 249.2±11.0 | 13.3 | 2.46E+05 | 5.35E-03 | 2.17E-08 | 2.2 |
| mAb15167 | 329.5±10.9 | 21.8 | 2.65E+05 | 4.14E-03 | 1.56E-08 | 2.8 |
| mAb15170 | 278.8±9.9 | 21.8 | 2.00E+05 | 1.53E-05 | 1.00E-10 | 756.4 |
| mAb15150 | 276.5±9.6 | 33.3 | 7.74E+05 | 4.61E-05 | 5.94E-11 | 250.8 |
| mAb15151 | 354.8±13.2 | 63.4 | 2.00E+05 | 7.78E-04 | 3.89E-09 | 14.8 |
| mAb1932 | 790.6±9.6 | 0.6 | NB | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
≤ 1.00E-05는 현재의 실험 조건 하에서 해리가 관찰되지 않았음을 나타내며, k d 값은 실시간 결합 센서그램을 피팅하면서 1.00E-05 s-1로 수동으로 고정되었다.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서
결합된 RBD 단량체 (RU) |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 543 | 221.2 | 1.57E+06 | 9.88E-04 | 6.31E-10 | 11.7 |
| mAb14260 | 525.5 | 219.6 | 1.95E+06 | 1.44E-03 | 7.41E-10 | 8.0 |
| mAb14284 | 867.3 | 345.3 | 6.44E+05 | 6.05E-04 | 9.40E-10 | 19.1 |
| mAb14258 | 521 | 215.5 | 2.14E+06 | 1.70E-03 | 7.96E-10 | 6.8 |
| mAb14294 | 465.5 | 185.9 | 6.00E+05 | 5.90E-04 | 9.84E-10 | 19.6 |
| mAb14283 | 531.3 | 217.1 | 1.54E+06 | 1.79E-03 | 1.17E-09 | 6.4 |
| mAb14235 | 388.4 | 153.8 | 7.93E+05 | 1.09E-03 | 1.37E-09 | 10.6 |
| mAb14289 | 461.9 | 185.8 | 1.20E+06 | 1.76E-03 | 1.46E-09 | 6.5 |
| mAb13458 | 550.6 | 212.8 | 9.07E+05 | 1.39E-03 | 1.54E-09 | 8.3 |
| mAb14313 | 676 | 272.8 | 2.81E+06 | 2.59E-03 | 9.21E-10 | 4.5 |
| mAb14247 | 222.1 | 91.2 | 8.32E+05 | 1.63E-03 | 1.95E-09 | 7.1 |
| mAb14315 | 581.1 | 193 | 4.35E+05 | 9.85E-04 | 2.26E-09 | 11.7 |
| mAb13459 | 822.4 | 299 | 7.86E+05 | 2.04E-03 | 2.60E-09 | 5.7 |
| mAb13457 | 472.1 | 180.3 | 8.01E+05 | 2.34E-03 | 2.92E-09 | 4.9 |
| mAb14257 | 600.6 | 242.3 | 3.26E+06 | 7.62E-03 | 2.34E-09 | 1.5 |
| mAb14255 | 518.4 | 206 | 1.94E+06 | 5.35E-03 | 2.76E-09 | 2.2 |
| mAb14286 | 436.6 | 169.1 | 3.38E+06 | 1.04E-02 | 3.07E-09 | 1.1 |
| mAb14282 | 492.7 | 186.2 | 1.98E+06 | 1.06E-02 | 5.37E-09 | 1.1 |
| mAb14281 | 486.7 | 182 | 1.12E+06 | 5.82E-03 | 5.20E-09 | 2.0 |
| mAb14230 | 369.8 | 133.2 | 1.15E+06 | 8.76E-03 | 7.61E-09 | 1.3 |
| mAb14256 | 555.8 | 193.4 | 1.40E+06 | 1.15E-02 | 8.24E-09 | 1.0 |
| mAb14285 | 543.5 | 165.6 | 2.09E+06 | 2.74E-02 | 1.31E-08 | 0.4 |
| mAb14280 | 586 | 176.2 | 1.53E+06 | 2.48E-02 | 1.62E-08 | 0.5 |
| mAb14234 | 565.9 | 162 | 5.34E+05 | 1.19E-02 | 2.23E-08 | 1.0 |
| mAb14232 | 98.1 | 21.1 | 4.69E+06 | 3.72E-02 | 7.92E-09 | 0.3 |
| mAb14292 | 507.6 | 10.4 | 3.59E+05 | 2.18E-02 | 6.07E-08 | 0.5 |
| mAb14314 | 693.8 | 12.5 | 4.79E+05 | 1.15E-02 | 2.39E-08 | 1.0 |
| mAb14248 | 509.5 | 491.7 | 7.02E+05 | 1.90E-05 | 2.71E-11 | 607.3 |
| mAb14295 | 558.8 | 196.2 | 5.78E+05 | ≤1.00E-05 | 1.73E-11 | ≥1155.0 |
| mAb14233 | 561.8 | 276.8 | 3.20E+05 | 3.38E-05 | 1.06E-10 | 341.7 |
| mAb14287 | 528.8 | 154.9 | 7.04E+05 | 4.63E-05 | 6.58E-11 | 249.4 |
| mAb14293 | 531 | 166.7 | 9.62E+05 | 8.69E-05 | 9.03E-11 | 132.9 |
| mAb14291 | 516.4 | 224.5 | 3.08E+05 | 4.46E-05 | 1.45E-10 | 258.9 |
| mAb14249 | 482.5 | 143 | 2.38E+05 | 5.34E-05 | 2.25E-10 | 216.5 |
| mAb14316 | 304.6 | 132.1 | 8.05E+05 | ≤1.00E-05 | 1.24E-11 | ≥1155.0 |
| mAb14296 | 672.2 | 91.3 | 1.33E+05 | ≤1.00E-05 | 7.55E-11 | ≥1155.0 |
| mAb14231 | 490.1 | 54.7 | 3.18E+05 | 1.57E-04 | 4.94E-10 | 73.5 |
| mAb14288 | 576.6 | 72.9 | 1.06E+05 | 5.85E-05 | 5.54E-10 | 197.5 |
| mAb14297 | 529.3 | 32.1 | 3.01E+05 | 2.09E-04 | 6.94E-10 | 55.3 |
| mAb14290 | 457.9 | 32.9 | 2.34E+05 | 1.09E-05 | 4.66E-11 | 1057.7 |
| mAb14259 | 395.2 | 9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 463.2±0.7 | 106.9 | 3.73E+05 | 5.35E-03 | 1.44E-08 | 2.2 |
| mAb15157 | 309.1±1 | 65.7 | 3.44E+05 | 3.99E-03 | 1.16E-08 | 2.9 |
| mAb15158 | 298±0.5 | 44.3 | 1.26E+05 | 2.07E-04 | 1.65E-09 | 55.7 |
| mAb15159 | 293.3±1.9 | 42 | 1.46E+05 | 1.76E-04 | 1.21E-09 | 65.6 |
| mAb15160 | 400.6±1.2 | 79.3 | 2.50E+05 | 1.94E-03 | 7.79E-09 | 5.9 |
| mAb15161 | 283.9±0.9 | 61.1 | 2.63E+05 | 8.66E-04 | 3.29E-09 | 13.3 |
| mAb15162 | 322.4±2.9 | 38.9 | 1.03E+05 | 2.99E-03 | 2.92E-08 | 3.9 |
| mAb15163 | 343.6±1.7 | 72.7 | 2.18E+05 | 3.87E-04 | 1.78E-09 | 29.9 |
| mAb15164 | 385±1.1 | 93.4 | 2.83E+05 | 1.79E-03 | 6.33E-09 | 6.5 |
| mAb15165 | 276.1±2.3 | 82.5 | 4.75E+05 | 1.47E-03 | 3.10E-09 | 7.9 |
| mAb15166 | 266.8±0.3 | 19.7 | 3.50E+05 | 3.34E-02 | 9.53E-08 | 0.3 |
| mAb15167 | 405.3±0.6 | 46.8 | 3.52E+05 | 1.95E-02 | 5.55E-08 | 0.6 |
| mAb15170 | 299.4±1.4 | 56.3 | 2.83E+05 | 8.36E-05 | 2.97E-10 | 138.1 |
| mAb15150 | 248.5±1.2 | 64.9 | 4.93E+05 | 7.84E-05 | 1.58E-10 | 147.4 |
| mAb15151 | 595.8±1.6 | 141.4 | 1.80E+05 | 4.42E-03 | 2.46E-08 | 2.6 |
| mAb1932 | 921.8±2 | 1.3 | NB | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
≤ 1.00E-05는 현재의 실험 조건 하에서 해리가 관찰되지 않았음을 나타내며, k d 값은 실시간 결합 센서그램을 피팅하면서 1.00E-05 s-1로 수동으로 고정되었다.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서
결합된 RBD mFc 이량체 |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 465.2±3.8 | 349.2 | 1.68E+06 | 5.60E-05 | 3.34E-11 | 206.4 |
| mAb14260 | 416.5±2.2 | 327.4 | 1.96E+06 | 8.70E-05 | 4.43E-11 | 132.8 |
| mAb14284 | 732.9±0.5 | 482.2 | 8.31E+05 | 2.12E-05 | 2.55E-11 | 544.6 |
| mAb14258 | 420.7±1 | 332.8 | 3.56E+04 | 1.09E-04 | 3.04E-09 | 106.5 |
| mAb14294 | 404.3±5.6 | 291.4 | 9.11E+05 | 2.68E-05 | 2.94E-11 | 430.3 |
| mAb14283 | 417.5±0.6 | 319.6 | 1.55E+06 | 8.14E-05 | 5.24E-11 | 141.9 |
| mAb14235 | 338.6±2.2 | 242.7 | 1.10E+06 | 6.89E-05 | 6.27E-11 | 167.6 |
| mAb14289 | 393.3±2.8 | 295.3 | 1.43E+06 | 8.95E-05 | 6.28E-11 | 129.1 |
| mAb13458 | 439.8±2.5 | 326.7 | 1.18E+06 | 7.55E-05 | 6.40E-11 | 153.1 |
| mAb14313 | 528.5±10.9 | 407.4 | 2.36E+06 | 9.97E-05 | 4.22E-11 | 115.9 |
| mAb14247 | 177.9±0.7 | 135.5 | 1.19E+06 | 1.56E-04 | 1.31E-10 | 73.9 |
| mAb14315 | 455.9±5.0 | 303.7 | 7.99E+05 | 6.26E-05 | 7.84E-11 | 184.4 |
| mAb13459 | 670.8±2.4 | 465.4 | 1.05E+06 | 4.35E-05 | 4.15E-11 | 265.6 |
| mAb13457 | 410.1±7 | 308.2 | 1.33E+06 | 8.59E-05 | 6.45E-11 | 134.5 |
| mAb14257 | 519.6±2.1 | 403.1 | 2.81E+06 | 2.54E-04 | 9.07E-11 | 45.4 |
| mAb14255 | 437.3±0.4 | 340.7 | 2.19E+06 | 1.59E-04 | 7.26E-11 | 72.6 |
| mAb14286 | 393.5±1.5 | 296.8 | 2.95E+06 | 6.55E-04 | 2.22E-10 | 17.6 |
| mAb14282 | 418.3±0.9 | 326.3 | 2.17E+06 | 4.03E-04 | 1.86E-10 | 28.7 |
| mAb14281 | 424.2±0.6 | 305.1 | 1.46E+06 | 2.13E-04 | 1.46E-10 | 54.3 |
| mAb14230 | 315.5±0.6 | 240.6 | 2.00E+06 | 2.86E-04 | 1.42E-10 | 40.5 |
| mAb14256 | 440.9±5.5 | 331.9 | 2.84E+06 | 1.81E-04 | 6.38E-11 | 63.7 |
| mAb14285 | 435.9±1 | 318.7 | 5.78E+06 | 5.02E-04 | 8.68E-11 | 23 |
| mAb14280 | 476.4±0.9 | 358.2 | 3.02E+06 | 3.70E-04 | 1.23E-10 | 31.2 |
| mAb14234 | 458.2±5 | 328.7 | 1.02E+06 | 1.21E-04 | 1.19E-10 | 95.2 |
| mAb14232 | 71.7±1.4 | 52.4 | 1.97E+06 | 1.73E-03 | 8.78E-10 | 6.7 |
| mAb14292 | 431.8±1.4 | 76.8 | 1.04E+06 | 3.51E-02 | 3.36E-08 | 0.3 |
| mAb14314 | 601.8±1.1 | 173.6 | 2.22E+06 | 5.60E-02 | 2.53E-08 | 0.2 |
| mAb14248 | 404.4±1.8 | 4.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 441.3±4.7 | 8.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 491.0±2.3 | 2.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 424.9±3.8 | 9.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 440.5±0.3 | 5.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 391.0±4.3 | 3.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 412.7±1.1 | 4.6 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 266.4±1.7 | 11.4 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14296 | 529.8±1.7 | 4.6 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14231 | 407.8±1 | 4.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 462.8±1.2 | 4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 443.5±1.2 | 6.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 382.1±3.6 | 7.7 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14259 | 339.7±0.5 | 8.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 914.2±2.1 | 493.4 | 1.41E+06 | 5.22E-05 | 3.69E-11 | 221.2 |
| mAb15157 | 543.7±0.5 | 294.3 | 3.57E+05 | 6.67E-05 | 1.87E-10 | 173.2 |
| mAb15158 | 573.9±1.8 | 175.4 | 4.53E+05 | 1.00E-05 | 2.21E-11 | 1,155.0 |
| mAb15159 | 519.6±0.8 | 224.5 | 6.91E+05 | 1.19E-05 | 1.72E-11 | 971.4 |
| mAb15160 | 610.1±1.6 | 268.3 | 2.58E+05 | 1.05E-05 | 4.06E-11 | 1,101.0 |
| mAb15161 | 547.4±0.5 | 328.4 | 1.06E+06 | 1.26E-05 | 1.19E-11 | 913.8 |
| mAb15162 | 771.1±0.3 | 354.1 | 1.29E+06 | 2.30E-04 | 1.79E-10 | 50.2 |
| mAb15163 | 529.5±1.1 | 164.2 | 9.30E+05 | 1.00E-05 | 1.08E-11 | 1,155.0 |
| mAb15164 | 719.6±0.5 | 308.8 | 3.72E+05 | 2.12E-05 | 5.69E-11 | 545.6 |
| mAb15165 | 644.5±6.2 | 222.6 | 3.01E+05 | 3.88E-05 | 1.29E-10 | 297.5 |
| mAb15166 | 715.6±4.0 | 334.4 | 1.02E+06 | 1.62E-05 | 1.60E-11 | 713.0 |
| mAb15167 | 501.7±2.5 | 241.5 | 4.81E+05 | 1.05E-04 | 2.17E-10 | 110.3 |
| mAb15170 | 608.7±2.3 | 237.5 | 3.39E+05 | 1.00E-05 | 2.95E-11 | 1,155.0 |
| mAb15150 | 433.3±2.1 | 235.9 | 5.07E+05 | 1.00E-05 | 1.97E-11 | 1,155.0 |
| mAb15151 | 1143±2.6 | 491.7 | 9.24E+06 | 3.12E-05 | 3.38E-12 | 369.7 |
| mAb1932 | 1775.9±2.3 | 6.8 | NB | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서
결합된 RBD mFc 이량체 |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 550.3 | 422.3 | 1.67E+06 | 5.80E-05 | 3.47E-11 | 199.1 |
| mAb14260 | 521.7 | 408.3 | 1.93E+06 | 1.04E-04 | 5.40E-11 | 110.6 |
| mAb14284 | 872 | 659.3 | 8.30E+05 | 2.24E-05 | 2.70E-11 | 516.1 |
| mAb14258 | 271.5 | 392.5 | IC | IC | IC | IC |
| mAb14294 | 467.7 | 370.4 | 9.06E+05 | 3.50E-05 | 3.86E-11 | 330.1 |
| mAb14283 | 534.6 | 414.9 | 1.52E+06 | 9.59E-05 | 6.31E-11 | 120.5 |
| mAb14235 | 393.8 | 308.2 | 1.09E+06 | 6.68E-05 | 6.12E-11 | 173 |
| mAb14289 | 467.8 | 372.3 | 1.41E+06 | 1.28E-04 | 9.07E-11 | 90.1 |
| mAb13458 | 548.4 | 425.4 | 1.16E+06 | 9.12E-05 | 7.84E-11 | 126.7 |
| mAb14313 | 703.3 | 538 | 2.52E+06 | 1.46E-04 | 5.82E-11 | 78.9 |
| mAb14247 | 223 | 191.8 | 1.18E+06 | 1.50E-04 | 1.27E-10 | 77 |
| mAb14315 | 577.7 | 416.2 | 8.77E+05 | 7.91E-05 | 9.03E-11 | 145.9 |
| mAb13459 | 830 | 613.1 | 9.85E+05 | 9.24E-05 | 9.39E-11 | 125 |
| mAb13457 | 467.7 | 357.9 | 1.26E+06 | 1.17E-04 | 9.35E-11 | 98.5 |
| mAb14257 | 597.6 | 482 | 2.81E+06 | 3.39E-04 | 1.21E-10 | 34.1 |
| mAb14255 | 523 | 407.4 | 2.12E+06 | 2.50E-04 | 1.18E-10 | 46.2 |
| mAb14286 | 433.2 | 336.7 | 2.94E+06 | 5.28E-04 | 1.80E-10 | 21.9 |
| mAb14282 | 493.7 | 393.8 | 2.21E+06 | 5.46E-04 | 2.47E-10 | 21.1 |
| mAb14281 | 481.8 | 370.1 | 1.34E+06 | 3.65E-04 | 2.71E-10 | 31.7 |
| mAb14230 | 374 | 294.6 | 1.82E+06 | 4.90E-04 | 2.68E-10 | 23.6 |
| mAb14256 | 573.9 | 430.4 | 1.78E+06 | 4.73E-04 | 2.67E-10 | 24.4 |
| mAb14285 | 537 | 386.8 | 4.45E+06 | 1.03E-03 | 2.31E-10 | 11.2 |
| mAb14280 | 589.2 | 444.9 | 2.92E+06 | 7.72E-04 | 2.64E-10 | 15 |
| mAb14234 | 571.3 | 414.8 | 9.80E+05 | 4.02E-04 | 4.10E-10 | 28.8 |
| mAb14232 | 103.7 | 69 | 2.10E+06 | 1.88E-03 | 8.93E-10 | 6.1 |
| mAb14292 | 503.4 | 97.9 | 1.86E+06 | 6.44E-02 | 3.46E-08 | 0.2 |
| mAb14314 | 700.2 | 167.3 | 1.48E+06 | 3.57E-02 | 2.41E-08 | 0.3 |
| mAb14248 | 506.9 | 8.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 555.3 | 13.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 559.6 | 3.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 528.2 | 19.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 532.7 | 9.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 529.1 | 6.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 481 | 6.6 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 303.8 | 14.5 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14296 | 667.7 | 7.6 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14231 | 494.9 | 8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 572.7 | 8.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 525.8 | 12.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 450.6 | 10.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14259 | 395.4 | 9.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 1206.3±2.9 | 672.7 | 1.78E+05 | 1.12E-04 | 6.30E-10 | 103.2 |
| mAb15157 | 689.3±1.8 | 411.9 | 9.22E+05 | 1.07E-04 | 1.16E-10 | 107.9 |
| mAb15158 | 699.6±1.7 | 279.4 | 1.71E+05 | 2.90E-05 | 1.70E-10 | 398.3 |
| mAb15159 | 756.1±1.1 | 314.8 | 2.20E+05 | 2.99E-05 | 1.35E-10 | 386.3 |
| mAb15160 | 913.9±1.3 | 440.3 | 4.36E+05 | 7.90E-05 | 1.81E-10 | 146.2 |
| mAb15161 | 674.7±0.6 | 352.5 | 1.05E+06 | 4.90E-05 | 4.69E-11 | 235.7 |
| mAb15162 | 835.4±2.9 | 322.7 | 2.00E+05 | 1.01E-04 | 5.00E-10 | 114.8 |
| mAb15163 | 778.3±3.3 | 407 | 4.16E+05 | 2.50E-05 | 6.01E-11 | 462.0 |
| mAb15164 | 937.9±2.2 | 466.3 | 1.82E+06 | 9.40E-05 | 5.18E-11 | 122.9 |
| mAb15165 | 716.1±0 | 191.1 | 1.00E+05 | 4.55E-05 | 4.50E-10 | 254.0 |
| mAb15166 | 616.1±2.1 | 350.6 | 7.81E+05 | 9.80E-05 | 1.26E-10 | 117.9 |
| mAb15167 | 993.3±3.2 | 499.8 | 1.40E+06 | 1.24E-04 | 8.90E-11 | 93.1 |
| mAb15170 | 779.1±2.9 | 374.2 | 2.60E+05 | 2.41E-05 | 9.10E-11 | 480.0 |
| mAb15150 | 554±1.8 | 338.7 | 9.46E+05 | 2.80E-05 | 2.96E-11 | 412.5 |
| mAb15151 | 1452±4.1 | 653.6 | 3.70E+06 | 3.10E-03 | 8.50E-10 | 3.7 |
| mAb1932 | 2129.7±4 | 20.6 | NB | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서 결합된
스파이크 삼량체.his |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 463.3±4.0 | 393.4 | 1.93E+06 | 5.24E-05 | 2.72E-11 | 220.5 |
| mAb14260 | 411.6±6.6 | 378.1 | 1.52E+06 | 5.87E-05 | 3.86E-11 | 196.6 |
| mAb14284 | 729.9±1.8 | 469.4 | 8.12E+05 | 1.31E-05 | 1.61E-11 | 883 |
| mAb14258 | 420±1.7 | 406.3 | 2.12E+06 | 4.91E-05 | 2.32E-11 | 235.3 |
| mAb14294 | 400.7±3.8 | 341.7 | 6.97E+05 | 2.29E-05 | 3.29E-11 | 503.7 |
| mAb14283 | 417.4±5.5 | 352.5 | 1.61E+06 | 8.66E-05 | 5.39E-11 | 133.3 |
| mAb14235 | 336.9±1.2 | 297.5 | 7.79E+05 | 3.69E-05 | 4.74E-11 | 312.9 |
| mAb14289 | 387.0±3.9 | 345.3 | 9.12E+05 | 6.35E-05 | 6.96E-11 | 182 |
| mAb13458 | 436.2±3.7 | 340.8 | 1.21E+06 | 4.26E-05 | 3.51E-11 | 271.3 |
| mAb14313 | 528.7±2.2 | 462 | 2.00E+06 | 1.13E-04 | 5.65E-11 | 102.1 |
| mAb14247 | 172±4.9 | 143.3 | 9.44E+05 | 4.91E-05 | 5.21E-11 | 235 |
| mAb14315 | 458.4±1.1 | 335.4 | 6.52E+05 | 3.15E-05 | 4.83E-11 | 366.2 |
| mAb13459 | 668.9±8.1 | 483.2 | 1.41E+06 | 5.46E-05 | 3.89E-11 | 211.5 |
| mAb13457 | 405.4±4.6 | 358.2 | 7.68E+05 | 5.52E-05 | 7.18E-11 | 209.2 |
| mAb14257 | 518.4±1.3 | 535.3 | 2.45E+06 | 1.07E-04 | 4.34E-11 | 108.5 |
| mAb14255 | 431.9±3.2 | 454.1 | 1.96E+06 | 1.38E-04 | 7.06E-11 | 83.5 |
| mAb14286 | 389.5±2.0 | 425 | 2.63E+06 | 8.71E-05 | 3.31E-11 | 132.6 |
| mAb14282 | 413.2±3.4 | 421.7 | 2.14E+06 | 1.33E-04 | 6.24E-11 | 86.6 |
| mAb14281 | 415±5.6 | 310.7 | 8.34E+05 | 8.09E-05 | 9.70E-11 | 142.8 |
| mAb14230 | 313.1±2.6 | 340 | 1.51E+06 | 6.09E-05 | 4.04E-11 | 189.8 |
| mAb14256 | 441.9±6.3 | 356.7 | 1.47E+06 | 1.89E-04 | 1.29E-10 | 61 |
| mAb14285 | 435.7±1.6 | 486.2 | 2.34E+06 | 3.98E-05 | 1.70E-11 | 290.4 |
| mAb14280 | 472.8±1.3 | 458.7 | 1.99E+06 | 2.69E-05 | 1.36E-11 | 428.7 |
| mAb14234 | 455.7±5.8 | 365.5 | 7.07E+05 | 5.48E-05 | 7.75E-11 | 210.7 |
| mAb14232 | 69.7±1 | 72.8 | 7.63E+05 | 1.49E-04 | 1.95E-10 | 77.7 |
| mAb14292 | 429.2±0.5 | 138.4 | 5.84E+05 | 4.21E-03 | 7.21E-09 | 2.7 |
| mAb14314 | 600.4±1.7 | 184 | 4.92E+05 | 4.21E-03 | 8.56E-09 | 2.7 |
| mAb14248 | 403.3±0.4 | 1.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 446.7±2.3 | 2.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 488.5±2.0 | 0.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 421.9±3.0 | 0.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 448.8±0.4 | 2.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 396.1±4.2 | 0.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 413.5±1.6 | -0.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 269.1±1.4 | 3.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14296 | 528.3±1.5 | 1.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14231 | 410.9±1.7 | 0.2 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 459.0±0.8 | 1.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 451.0±0.8 | 1.4 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 379.4±6.1 | 3.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14259 | 340.6±0.2 | 1.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 447.5±29.5 | 204.7 | 3.42E+05 | 6.61E-05 | 1.93E-10 | 174.6 |
| mAb15157 | 303.7±13.3 | 42.5 | 3.02E+05 | 9.28E-05 | 3.08E-10 | 124.5 |
| mAb15158 | 328.2±11.9 | 55.1 | 9.15E+04 | 1.40E-05 | 1.53E-10 | 825.0 |
| mAb15159 | 307.7±25.7 | 147.1 | 8.75E+04 | 2.02E-05 | 2.31E-10 | 571.5 |
| mAb15160 | 318.2±10.2 | 55.8 | 3.04E+05 | 3.10E-05 | 1.02E-10 | 372.6 |
| mAb15161 | 272±25.5 | 127 | 2.80E+05 | 1.38E-05 | 4.90E-11 | 840.0 |
| mAb15162 | 303.6±18 | 115.1 | 1.05E+05 | 6.79E-05 | 6.48E-10 | 170.0 |
| mAb15163 | 373.8±15.3 | 97.6 | 2.14E+05 | 1.15E-05 | 5.62E-11 | 1,002.6 |
| mAb15164 | 331.2±15.7 | 107.4 | 2.98E+05 | 2.58E-05 | 8.65E-11 | 448.0 |
| mAb15165 | 286.2±19.5 | 103.9 | 3.91E+05 | 1.09E-05 | 2.79E-11 | 1,058.7 |
| mAb15166 | 264.4±15.1 | 87 | 2.76E+05 | 1.74E-04 | 6.30E-10 | 66.3 |
| mAb15167 | 348.2±20.2 | 114.1 | 3.36E+05 | 1.59E-04 | 4.72E-10 | 72.8 |
| mAb15170 | 290±10.6 | 48.4 | 1.20E+05 | 1.29E-05 | 1.10E-10 | 893.3 |
| mAb15150 | 290.2±16 | 87.6 | 3.17E+05 | 1.00E-05 | 3.15E-11 | 1,155.0 |
| mAb15151 | 375.4±21.7 | 144.9 | 3.35E+05 | 6.26E-05 | 1.87E-10 | 184.5 |
| mAb1932 | 806.9±10.9 | 2.6 | NB | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
| 포획된 mAb |
mAb
포획 레벨 (RU) |
50nM에서 결합된
스파이크 삼량체.his |
k
a
(1/Ms) |
k
d
(1/s) |
KD
(M) |
t½
(분) |
| mAb14312 | 541.7 | 500 | 9.66E+05 | 5.44E-05 | 5.63E-11 | 212.4 |
| mAb14260 | 519.4 | 495.3 | 9.49E+05 | 5.73E-05 | 6.04E-11 | 201.5 |
| mAb14284 | 865.5 | 631.1 | 8.14E+05 | 2.05E-05 | 2.51E-11 | 564.8 |
| mAb14258 | 518 | 523.9 | 1.02E+06 | 7.93E-05 | 7.76E-11 | 145.7 |
| mAb14294 | 463.8 | 440.6 | 6.94E+05 | 2.29E-05 | 3.30E-11 | 503.9 |
| mAb14283 | 535.5 | 470 | 8.65E+05 | 7.32E-05 | 8.47E-11 | 157.8 |
| mAb14235 | 386.4 | 396.9 | 7.35E+05 | 3.80E-05 | 5.17E-11 | 304 |
| mAb14289 | 463.7 | 455.7 | 9.11E+05 | 6.63E-05 | 7.28E-11 | 174.3 |
| mAb13458 | 548.9 | 466 | 8.15E+05 | 4.08E-05 | 5.00E-11 | 283.2 |
| mAb14313 | 687.8 | 610.7 | 1.01E+06 | 9.94E-05 | 9.84E-11 | 116.2 |
| mAb14247 | 221.2 | 247 | 6.74E+05 | 4.72E-05 | 7.01E-11 | 244.6 |
| mAb14315 | 576.2 | 457.2 | 7.43E+05 | 3.25E-05 | 4.37E-11 | 355.7 |
| mAb13459 | 826.8 | 632.1 | 7.94E+05 | 4.76E-05 | 5.99E-11 | 242.9 |
| mAb13457 | 468.9 | 452.4 | 7.67E+05 | 5.98E-05 | 7.79E-11 | 193.3 |
| mAb14257 | 602.9 | 684.6 | 1.17E+06 | 1.65E-04 | 1.41E-10 | 70.1 |
| mAb14255 | 516.8 | 575.4 | 1.03E+06 | 1.61E-04 | 1.55E-10 | 71.9 |
| mAb14286 | 437.5 | 539.2 | 2.59E+06 | 1.41E-04 | 5.44E-11 | 82 |
| mAb14282 | 497 | 566.5 | 1.05E+06 | 1.71E-04 | 1.62E-10 | 67.7 |
| mAb14281 | 488.8 | 429.8 | 8.34E+05 | 1.16E-04 | 1.39E-10 | 99.7 |
| mAb14230 | 372.3 | 435.6 | 9.06E+05 | 8.97E-05 | 9.91E-11 | 128.7 |
| mAb14256 | 570.7 | 509.1 | 7.96E+05 | 2.42E-04 | 3.04E-10 | 47.7 |
| mAb14285 | 533.8 | 647.3 | 1.16E+06 | 4.18E-05 | 3.59E-11 | 276.3 |
| mAb14280 | 594.3 | 650.1 | 9.85E+05 | 2.86E-05 | 2.90E-11 | 403.7 |
| mAb14234 | 564.5 | 473.8 | 6.99E+05 | 7.16E-05 | 1.02E-10 | 161.4 |
| mAb14232 | 104.1 | 119.6 | 7.51E+05 | 1.33E-04 | 1.77E-10 | 87.1 |
| mAb14292 | 504.7 | 236.7 | 5.92E+05 | 6.82E-03 | 1.15E-08 | 1.7 |
| mAb14314 | 697.7 | 259.4 | 4.59E+05 | 6.48E-03 | 1.41E-08 | 1.8 |
| mAb14248 | 505.9 | 2 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 558.8 | 6.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 558.6 | 1.5 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 523.6 | 5.2 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 537.9 | 3.5 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 511.8 | 1.1 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 478.6 | 2.7 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 306.5 | 4.8 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14296 | 660.5 | 2.5 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14231 | 489.4 | 2 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 571.6 | 2.9 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 530.7 | 2.5 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 457.4 | 4.3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb14259 | 395.1 | 3 | NB | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 463.7±4.1 | 474.1 | 1.89E+06 | 2.12E-04 | 1.12E-10 | 54.5 |
| mAb15157 | 307.2±1.0 | 298.2 | 1.70E+06 | 2.40E-04 | 1.41E-10 | 48.2 |
| mAb15158 | 295.7±1.3 | 224.5 | 7.58E+05 | 4.07E-05 | 5.41E-11 | 283.6 |
| mAb15159 | 293.3±2.0 | 196.2 | 4.67E+05 | 3.22E-05 | 6.86E-11 | 359.1 |
| mAb15160 | 400.3±1.4 | 301.9 | 1.26E+06 | 1.67E-04 | 1.32E-10 | 69.2 |
| mAb15161 | 283.7±0.9 | 281.6 | 1.48E+06 | 9.14E-05 | 6.16E-11 | 126.4 |
| mAb15162 | 323.0±1.5 | 205.5 | 4.40E+05 | 1.87E-04 | 4.25E-10 | 61.7 |
| mAb15163 | 343.6±1.3 | 323.9 | 1.35E+06 | 4.85E-05 | 3.64E-11 | 238.1 |
| mAb15164 | 387.4±1.5 | 379.2 | 1.78E+06 | 1.38E-04 | 7.77E-11 | 84.0 |
| mAb15165 | 279.2±1.5 | 318.7 | 2.12E+06 | 1.15E-04 | 5.42E-11 | 100.2 |
| mAb15166 | 265.2±0.5 | 282.8 | 1.54E+06 | 8.32E-05 | 5.40E-11 | 138.8 |
| mAb15167 | 406.6±1.0 | 446.1 | 1.76E+06 | 9.78E-05 | 5.57E-11 | 118.1 |
| mAb15170 | 303.3±1.4 | 221.3 | 8.46E+05 | 1.00E-05 | 1.18E-11 | 1,155.0 |
| mAb15150 | 249.8±1.8 | 246.8 | 1.68E+06 | 3.42E-05 | 2.02E-11 | 337.6 |
| mAb15151 | 595.2±0.8 | 372.7 | 1.92E+06 | 2.48E-04 | 1.29E-10 | 46.6 |
| mAb1932 | 926.9±3.8 | 11.4 | NB | NB | NB | NB |
hBST: 인간 B 세포 분류 기술
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
예 4: SARS-CoV-2 야생형 및 변이체 스파이크 단백질의 중화
항-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체가 SARS-CoV-2 변이체를 중화시킬 수 있는지 여부를 시험하기 위해, 이들 항체를 야생형 및 변이체 스파이크 단백질을 발현하는 VSV 위형 바이러스 패널에 대해 스크리닝하였다.
재조합 VSV의 생성
천연 바이러스 당단백질(VSV-G) 대신 반딧불 루시페라아제 및 GFP 유전자를 암호화하는 VSV 게놈을 사용하여 비-복제성 유사입자(pseudoparticle)를 생성하였다. VSV-G(VSV-ΔG-Fluc-2A-GFP/VSV-G)로 보완된 감염성 입자를 회수하고 약간의 변형이 있는 표준 기술을 사용하여 생산하였다. HEK293T 세포(ATCC CRL-3216)를 폴리-리신 처리된 플레이트 상에 도말하고, 글루타민이 없는 DMEM(Life Technologies), 10% 소태아 혈청(Life Technologies), 및 1% 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민(Life Technologies)에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 세포를 T7 프로모터 및 VSV-N, VSV-P, VSV-G, VSV-L를 발현하는 헬퍼 플라스미드, 및 T7 RNA 중합효소에 의해 유도된 VSV 게놈 클론으로 리포펙타민 LTX 시약(Life Technologies)으로 형질감염시켰다. 48시간 후, 형질감염된 세포를 글루타민이 없는 DMEM(Life Technologies), 3% 소태아 혈청(Life Technologies), 및 1% 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민(Life Technologies)에서 SE 세포주 4D-Nucleofector X 키트 L(Lonza)을 사용하여 VSV-G로 형질감염된 BHK-21 세포(ATCC CCL-10)와 공동 배양하였다. 바이러스 복제를 나타내는 GFP 발현 또는 세포변성 효과(CPE)에 대해 세포를 모니터링하였다. 그런 다음, VSV-G를 일시적으로 발현하는 BHK-21 세포에서 바이러스를 플라크 정제하고, 증식시키고, 역가를 측정하였다. 완전히 복제성인 VSV-SARS-CoV-2-S 바이러스를, VSV 당단백질을 스파이크 단백질의 잔기 1-1255(NCBI 수탁 번호 MN908947.3)를 암호화하는 고유 SARS-CoV-2 서열로 대체하여 생성하였다. VSV-SARS-CoV-2-스파이크 바이러스를 전술한 바와 같이 회수하였지만, 대신에 HEK293T 세포를 VSV-G 및 hACE2 둘 다로 형질감염된 BHK-21 세포와 공동 배양하였다. VSV-SARS-CoV-2-S 바이러스를 플라크-정제하고 Vero 세포(ATCC CCL-81)에서 역가 결정하고 Vero E6 세포(ATCC CRL-1586)에서 증식시켰다. 수집 후, 두 바이러스의 스톡을 3000xg로 5분 동안 원심분리하여 정화하고, 수크로오스를 완충하여 10배 농축시키고, 분취하고, -80C에서 냉동시켰다.
VSV의 위형화
비-복제성 유사입자를 전술한 바와 같이 생성하였다 (Baum 등, Science 2020). 인간 코돈 최적화된 SARS-CoV-2 스파이크(NCBI 수탁 번호 MN908947.3)를 발현 플라스미드 내로 클로닝하였다. 총 1.2 x 107개의 HEK293T 세포(ATCC CRL-3216)를 10% 열-불활성화 소 태아 혈청(Life Technologies) 및 페니실린-스트렙토마이신-L-글루타민(Life Technologies)을 함유하는 글루타민이 없는 DMEM(Life Technologies)에서 15 cm 접시에 밤새 시딩하였다. 다음 날, 제조사의 프로토콜에 따라 세포를 리포펙타민 LTX(Life Technologies)로 15 μg 스파이크 발현 플라스미드로 형질감염시켰다. 형질감염 후 24시간차에, 세포를 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하고, 10mL Opti-MEM(Life Technologies)에 희석된 VSV-ΔG-Fluc-2A-GFP/VSV-G 바이러스로 MOI 1로 감염시켰다. 세포를 5% CO2로 37C에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 PBS로 3회 세척하여 잔류 투입 바이러스를 제거하고, 0.7% IgG-무함유 BSA(Sigma), 피루브산 나트륨(Life Technologies), 및 겐타마이신(Life Technologies)이 포함된 DMEM으로 오버레이하였다. 5% CO2로 37°C에서 24 시간 후, 유사입자를 함유하는 상청액을 수집하고, 3000xg에서 5분 동안 원심분리하여 정화하고, 분취하고, -80°C에서 냉동시켰다. 변이체를 부위-유도 돌연변이 유발을 사용하여 스파이크 발현 플라스미드 내로 클로닝하고, 전술한 바와 같이 유사입자를 생산하였다.
VSV 기반 유사입자를 이용한 중화 검정.
베로 세포(ATCC: CCL-81)를 검정 24시간 전에 10% 열-불활성화 소 태아 혈청(Life Technologies) 및 1X 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민(Life Technologies)을 함유하는 글루타민(Life Technologies)이 없는 DMEM 배지에서 20,000 세포/웰로 도말된 96-웰 흑색의 투명한 바닥 조직 배양물(Corning: 3904)에 시딩하였다. 검정에 사용하기 전에 세포를 대략 85% 합류(confluence)에 도달시켰다. 항체를 글루타민(Life Technologies), 0.7% 저 IgG BSA(Sigma), 1X 피루브산 나트륨(Life Technologies), 및 0.5% 겐타마이신(Life Technologies)이 포함된 DMEM을 함유하는 감염 배지에서 2X 검정 농도로 희석하고, 3 μg/mL(20 nM)에서 시작하는 검정에서 11-점 희석 곡선을 위해 감염 배지에서 3배 희석하였다. 항체 희석물을 실온에서 30분 동안 유사입자와 1:1로 혼합한 후 Vero 세포에 첨가하였다. 세포를 37 °C, 5% CO2에서 24시간동안 인큐베이션하였다. 100 μL Glo 용해 완충액(Promega)으로 용해시키기 전에 상청액을 세포로부터 제거하였다. 그런 다음, 100 μL 재현탁된 Bright Glo 기질(Promega)을 첨가하고, Spectramax i3x(Molecular Devices) 상에서 발광을 판독하였다. 내보낸 값을 GraphPad Prism(v8.4.1)을 사용하여 분석하였다.
스파이크 단백질(S-wt)의 Wuhan-Hu-1 (NCBI 수탁 번호 MN908947.3) 서열 또는 D614G 스파이크 단백질 변이체(서열번호 1071)을 암호화하는 VSV-SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)-발현 슈도바이러스에 대한 개별 단클론 항체 반수 최대 억제 농도 (IC50)를 Vero 세포에서 결정하였다(표 13). 대부분의 항체는 피코몰 범위(pM)에서 중화 효능을 나타냈고, 일부는 나노몰(nM) 범위에서 중화 효능을 나타냈고, 일부는 중화되지 않았다. 또한, 우려/관심 VSV-SARS-CoV-2 스파이크 단백질(S)-발현 슈도바이러스의 특정 변이체(표 14)에 대해 시험된 개별 모노로날 항체에 대해 IC50을 측정하였는데, Omicron 변이체(표 15의 Omicron에 함유된 개별 돌연변이; 표 16의 Omicron 돌연변이의 완전한 세트, 및 표 17의 mAb10933 및 mAb10987과의 비교 및 조합)를 포함한다. 오미크론 중화 검정에서, mAb15160은 영향을 받지 않은 반면, mAb14315는 중화가 약간 감소하였다. 이들 결과에 기초하여, mAb14315/mAb15160 조합 및 mAb15160/mAb14256 조합은 오미크론 변이의 효과적인 중화를 유지한다. 또한, mAb14284, mAb14235, 및 mAb14287은 강력한 중화제였고, 오미크론 변이에 의해 영향을 받지 않은 반면, mAb15151은 오미크론 변이의 중화에서 반-로그 감소를 나타냈지만, 그럼에도 불구하고 이의 강한 중화 특성에 기초하여 효능을 유지하였다. 표에 나타낸 바와 같이, wt 또는 D614G로부터의 배수 변화가 낮을수록, 오미크론 돌연변이가 중화에 미치는 영향은 더 적다. 추가 mAb15160 및 mAb14284 중화 데이터가 표 18 및 19에 제시되어 있으며, 이는 이들 항체가 오미크론 계통을 포함하는, 상이한 변이체의 강력한 중화제임을 보여준다.
| mAb | IC50 (M) |
| mAb13457 | 2.48E-11 |
| mAb13458 | 2.61E-11 |
| mAb13459 | 3.66E-11 |
| mAb14230 | 2.41E-11 |
| mAb14231 | 1.02E-09 |
| mAb14232 | 6.35E-11 |
| mAb14233 | 5.42E-11 |
| mAb14234 | 3.98E-11 |
| mAb14235 | 3.38E-11 |
| mAb14247 | 5.80E-11 |
| mAb14248 | 6.20E-11 |
| mAb14249 | 1.62E-10 |
| mAb14255 | 3.43E-11 |
| mAb14256 | 5.47E-11 |
| mAb14257 | 2.91E-11 |
| mAb14258 | 5.57E-11 |
| mAb14259 | 3.72E-11 |
| mAb14260 | 9.28E-11 |
| mAb14280 | 2.86E-11 |
| mAb14281 | 3.35E-11 |
| mAb14282 | 3.27E-11 |
| mAb14283 | 5.49E-11 |
| mAb14284 | 3.14E-11 |
| mAb14285 | 3.25E-11 |
| mAb14286 | ~ 2.616E11 |
| mAb14287 | 1.99E-10 |
| mAb14288 | 1.38E-09 |
| mAb14289 | 4.02E-11 |
| mAb14290 | 1.20E-09 |
| mAb14291 | 1.23E-10 |
| mAb14292 | 5.77E-11 |
| mAb14293 | 1.10E-09 |
| mAb14294 | 5.67E-11 |
| mAb14295 | 1.95E-10 |
| mAb14296 | 5.26E-10 |
| mAb14297 | 3.85E-10 |
| mAb14312 | 4.66E-11 |
| mAb14313 | 2.72E-10 |
| mAb14314 | 활성 없음 |
| mAb14315 | 4.76E-11 |
| mAb14316 | 1.29E-10 |
| mAb15156 | 2.09E-11 |
| mAb15157 | 3.72E-11 |
| mAb15158 | 1.24E-10 |
| mAb15159 | 5.78E-11 |
| mAb15160 | 4.58E-11 |
| mAb15161 | 4.91E-11 |
| mAb15162 | 1.11E-10 |
| mAb15163 | 6.28E-11 |
| mAb15164 | 2.48E-11 |
| mAb15165 | 2.96E-11 |
| mAb15166 | 1.61E-11 |
| mAb15167 | 2.95E-11 |
| mAb15170 | 1.22E-10 |
| mAb15150 | 6.21E-11 |
| mAb15151 | 7.09E-12 |
D614G 스파이크 단백질을 사용하여 결정된 밑줄 친 IC50 값.
전체 B.1.1.7 (H69del, V70del, Y145del, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, D1118H), B.1.351 (D80Y, D215Y, L241del, L242del, A243del, L242del, K417N, E484K, N501Y, D614G, A701V), 및 P.1 (L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I, V1176F) 변이체를 평가하였다. B.1.429(L452R) 및 B.1.526(E484K) 계통으로부터의 주요 RBD 잔기를 평가하였다.
효능 배수 감소(FC)를 동일한 검정으로부터 wt 또는 D614G 대조군에 대해 계산하였다
NA: 활성 없음
ND: 결정되지 않음
|
스파이크
단백질 |
mAb14256 | mAb14315 | mAb15160 | mAb10985 |
| WT/D614G (IC50) | 2.606E-11 | 2.95E-11 | 4.58E-11 | 2.17E-10 |
| K417N (FC) | 1.46 | 0.66 | 0.86 | 1.38 |
| N440K (FC) | 2.51 | 0.94 | ND | 1.41 |
| S477N (FC) | 1.01 | 0.60 | 1.01 | 1.32 |
| T478K (FC) | 0.81 | 0.96 | 1.98 | 0.98 |
| Q493R (FC) | 0.86 | 0.45 | ND | 0.38 |
| N501Y (FC) | 1.06 | ND | 1.81 | 1.28 |
이탤릭체: wt 또는 D614G 대조군 스파이크 단백질에 대한 각 항체에 대한 IC50 값
동일한 검정으로부터 wt 또는 D614G 대조군에 대해 효능 배수 감소(FC)를 계산하였다
ND: 결정되지 않음
사용된 오미크론 스파이크 단백질은 서열번호 1073 다음 돌연변이를 포함한다: A67V, Δ69-70, T95I, G142D/Δ143-145, Δ211/L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F
NC: 활성 없음으로 인해 계산된 IC50 없음
FC: D614G 대조군에 대해 계산된 배수 변화
굵은 글씨체와 밑줄로 표시된 값: 배수 변화는 최고 검정 농도/D614G IC50으로 계산했을 때, 적어도 이 값이고; 검정에서 최고 농도는 2.00E-08이었다
| mAb10933 + mAb10987 | mAb15160 |
mAb15160 + mAb10933 + mAb10987 2:1:1
(추론 값) |
||||
| 변이체 a | IC 50 (M) | 기준 바이러스 대비 IC 50 의 배수 감소 b | IC 50 (M) | 기준 바이러스 대비 IC 50 의 배수 감소 b | IC 50 (M) | 기준 바이러스 대비 IC 50 의 배수 감소 b |
| D614G 대조군 | 9.91E-12 | 1.0 | 1.92E-11 | 1.0 | 3.84E-11 | 1.0 |
| B.1.1.529/BA.1 (오미크론) | NC | >2018.98c | 3.18E-11 | 1.65 | 6.36E-11 | 3.3 |
a 아미노산 치환 대 우한 계통 S 단백질: B.1.1.529/BA.1 (A67V, del69-70, T95I, G142D/del143-145, del211/L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F)
b 기준 (ref) D614G 바이러스에 대한 배수 감소는 특정 변이체의 존재 하에 항체(들)에 의해 생성된 IC50 값을 동일한 검정으로부터 기준 바이러스의 존재 하에 항체(들)에 의해 생성된 IC50 값으로 나눔으로써 계산하였다.
c IC50 값을 정확하게 계산할 수 없는 경우, 시험된 최대 항체 농도(20 nM)를 기준 D614G VLP에 대해 계산된 IC50 값으로 나눔으로써 각 돌연변이체의 존재 시 mAb 효능의 변화를 계산하였다. 실제 배수 변화는 적어도 표시된 값의 배수 변화이다.
약어: NC, 중화 불량 또는 부족으로 인해 계산되지 않음
a 감시 중인 변이체 유래 S 단백질의 전체 서열 및/또는 주요 잔기; 전체 S 단백질 서열: B.1.1.7 (H69del, V70del, Y145del, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, D1118H), B.1.351 (D80Y, D215G, L241del, L242del, A243del, K417N, E484K, N501Y, D614G, A701V), P.1 (L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I, V1176F), B.1.617.2 (T19R, G142D, E156G, F157del, R158del, L452R, T478K, D614G, P681R, D950N), B.1.617.1 (T95I, G142D, E154K, L452R, E484Q, D614G, P681R, Q1071H), BA.1 (A67V, del69-70, T95I, G142D/del143-145, del211/L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F), BA.1.1 (BA.1+R346K), BA.2 (T19I, del24-26, A27S, G142D, V213G, G339D, S371F, S373P, S375F, T376A, D405N, R408S, K417N, N440K, S477N, T478K, E484A, Q493R, Q498R, N501Y, Y505H, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, Q954H, N969K); 주요 S 단백질 잔기: AY.1 (K417N+L452R+T478K), AY4.2 (Y145H+A222V+L452R+T478K), B.1.427/B.1.429 (L452R), B.1.526 (E484K), B.1.621 (R346K+E484K+N501Y), AV.1 (N439K+E484K), B.1.619/B.1.619.1/B.1.625 (N440K+E484K), C.1.2 (Y449H+E484K+N501Y).
b IC50 값을 정확하게 계산할 수 없는 경우, 각 돌연변이체의 존재 시 mAb 효능의 변화를, 시험된 최대 항체 농도(20 nM)를 기준 pVSV-SARS-CoV-2-S 유사입자의 존재 시 카시리비맙, 이메디비맙, 또는 카시리비맙+이메디비맙에 대해 계산된 IC50 값으로 나눔으로써 계산하였다.
c mAb15160 및 임데비맙에 의한 이 변이체의 중화에 대한 IC50 및 IC90 값을 카시리비맙 및 카시리비맙+임데비맙과 상이한 기준 바이러스 데이터세트와 비교하였다.
del, 결실; ins, 삽입; NA, 해당 없음; NC, 중화 불량 또는 부족으로 인해 계산되지 않음; NT, 시험되지 않음
D614G 대조군에 대해 계산된 배수 변화
* 표시된 변이체/기준 바이러스에 대해 나타낸 값은 적어도 3개의 복제물 검정으로부터의 기하 평균을 나타낸다.
a 감시 중인 변이체의 전체 S 단백질 서열 및/또는 주요 잔기를 평가하였다. 평가된 주요 잔기 및 이들이 나타내는 계통이 표에 나타나 있다. 전체 서열은 표 내의 각주 'a'로 표시되고 Wuhan-Hu-1 S 단백질 기준 서열에 다음의 치환을 함유한다: B.1.1.7 (H69del, V70del, Y145del, N501Y, A570D, D614G, P681H, T716I, S982A, D1118H), B.1.351 (D80Y, D215G, L241del, L242del, A243del, K417N, E484K, N501Y, D614G, A701V), P.1 (L18F, T20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y, T1027I, V1176F), B.1.617.2 (T19R, G142D, E156G, F157del, R158del, L452R, T478K, D614G, P681R, D950N), B.1.617.1 (T95I, G142D, E154K, L452R, E484Q, D614G, P681R, Q1071H), BA.1 (A67V, del69-70, T95I, G142D/del143-145, del211/L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H, T547K, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, N856K, Q954H, N969K, L981F), BA.1.1 (BA.1+R346K), BA.2 (T19I, del24-26, A27S, G142D, V213G, G339D, S371F, S373P, S375F, T376A, D405N, R408S, K417N, N440K, S477N, T478K, E484A, Q493R, Q498R, N501Y, Y505H, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, Q954H, N969K), BA.2.12.1 (BA.2+L452Q), BA.3 (G142D,G339D, S371F, S373P, S375F, D405N, K417N D614G, H655Y, N679K, P681H, D796Y, Q954H, N969K), BA.4/BA.5 (두 계통 모두 동일한 S 단백질 서열 [T19I, L24del, P25del, P26del, A27S, H69del, V70del, G142D, V213G, G339D, S371F, S373P, S375F, T376A, D405N, R408S, K417N, N440K, L452R, S477N, T478K, E484A, F486V, Q498R, N501Y, Y505H, D614G, H655Y, N679K, P681H, N764K, D796Y, Q954H, N969K]을 가짐)
b IC50 값을 정확하게 계산할 수 없는 경우, 각 돌연변이체의 존재 시 mAb 효능의 변화를, 시험된 최대 항체 농도(20 nM)를 기준 pVSV-SARS-CoV-2-S 유사입자의 존재 시 항체에 대해 계산된 IC50 값으로 나눔으로써 계산하였다.
del, 결실; ins, 삽입; NC, 중화 불량 또는 부족으로 인해 계산되지 않음
mAb14284를 약 300fM 내지 20nM 범위의 농도로 시험하였다. 기준 (ref) 바이러스에 대한 배수 변화는, 특정 변이체의 존재 하에 항체에 대해 결정된 IC50 값을 동일한 검정으로부터 기준 유사입자(D614G 돌연변이로 위형화된 pVSV-SARS-CoV-2)의 존재 하에 항체에 대해 결정된 IC50 값으로 나눔으로써 계산하였다.
예 5: 항-SARS-CoV-2 항체는 ELISA에 의해 결정된 바와 같이 hACE2에 대한 RBD 결합을 차단한다
ELISA 기반 차단 검정을 사용하여 SARS-COV-2 스파이크 단백질 수용체 결합 도메인(RBD)과 그 수용체인 인간 안지오텐신 전환 효소 2(hACE2)의 결합을 차단하는 항-SARS-CoV-2 항체의 능력을 결정했다.
이 검정에 사용된 SARS-CoV-2 단백질은 C-말단 myc-myc-6-히스티딘 태그로 발현된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(아미노산 Arg319-Phe541)의 수용체 결합 도메인(RBD) 부분으로 구성되었다 (SARS-CoV-2 RBD.mmh). 실험에 사용된 인간 ACE-2 단백질은 인간 ACE-2 세포외 도메인(아미노산 Leu18-Ser740)의 일부 및 C-말단 10-히스티딘 태그를 포함하여, R&D Systems로부터 구입하였다 (hACE-2-10His; ACE2 NCBI 수탁 번호 Q9BYF1).
실험은 다음의 절차를 사용하여 수행되었다. hACE-2-10His 수용체를 96-웰 마이크로역가 플레이트 상에서 PBS 중 2 μg/mL의 농도로 4°C에서 밤새 코팅하였다. 후속하여, PBS 중 BSA의 0.5% (w/v) 용액을 사용해 비특이적 결합 부위들을 차단하였다. 다른 마이크로역가 플레이트에서, 일정한 양의 300pM의 SARS-CoV-2 RBD.mmh 단백질을 항-SARS-COV-2-S 항체 또는 PBS + 0.5% BSA 중 1.7pM 내지 100nM의 희석물에서 무관한 인간 IgG1 항체 대조군과 1시간 동안 결합시켰다. SARS-CoV-2 RBD의 고정 농도는 플레이트-부착 hACE-2에 대한 최대 결합의 50%(EC50 값)를 생성하는 농도에 가까운 것으로 선택되었다. 항체-단백질 복합체를 마이크로역가 플레이트 코팅된 hACE-2-10His로 옮겼다. 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 웰을 세척하고, 서양고추냉이 퍼옥시다아제(HRP)(NovusBio)와 접합된 다클론 염소 항-myc 항체로 플레이트-결합 SARS-COV-2 RBD.mmh를 검출하였다. 제조사의 권장 절차에 따라 TMB 기질 용액(BD Biosciences, #51-2606KC 및 #51-2607KC)을 사용하여 플레이트를 성장시키고, Victor X5 플레이트 판독기를 이용하여 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다(PerkinElmer, Shelton CT).
Prism™ 소프트웨어(GraphPad) 내의 S자형 투여량-반응 모델을 사용하여 결합 데이터를 분석하였다. 플레이트-코팅 hACE2에 대한 SARS-CoV-2 RBD 결합의 50%를 차단시키는 데 필요한 항체의 농도로서 정의되는, 계산된 IC50 값을 차단 효능의 표시자로서 사용하였다. 주어진 농도에서 항-SARS-CoV-2-S 항체의 차단 백분율을 다음 식에 기초하여 계산하였다:
시험된 최고 농도에서 50% 이하의 결합을 차단한 항체를 비-차단제로 분류하였고, 이들 항체에 대한 IC50 값은 보고되지 않았다.
인간 ACE2에 대한 SARS-CoV-2 RBD 결합을 차단하는 항-SARS-CoV-2 항체의 능력을 차단 ELISA를 사용하여 평가하였다. 이 검정에서, 300pM SARS-COV-2 RBD.mmh를 광범위한 농도의 항-SARS-COV-2-S 항체로 적정하였다. SARS-COV-2 항체가 존재하는 가운데, hACE-2에 대한 SARS-COV-2 RBD의 결합 억제를 평가하였다. 플레이트-결합 SARS-COV-2 RBD.mmh를 HRP-접합 염소 항-myc 항체로 검출하였다. SARS-COV-2 항체의 시험된 최고 농도에서의 차단 IC50 차단 백분율은 표 20에 요약되어 있다.
시험된 56개의 항체 중, 42개는 시험된 최고 항체 농도(100 nM)에서 61% 내지 약 100% 범위의 최대 차단으로 hACE-2에 대한 SARS-COV-2 RBD 결합의 항체 농도 의존적 차단을 나타냈다. 식별된 차단 항체에 대한 IC50 값은 102pM 내지 19.7 nM의 범위였다. 나머지 14개의 항체는 시험된 최고 농도에서 50% 미만의 차단 활성을 나타냈고, 비-차단제로 분류하였다. 이소형 대조군인, mAb193281도 대조군으로서 사용하였다.
| mAb# | hACE-2에 대한 300pM SARS-COV-2.mmh 결합을 차단하는 항체 | |
| IC 50 , M | 100nM mAb 농도에서의 차단 % | |
| mAb13457 | 1.97E-08 | 75 |
| mAb13458 | 8.73E-10 | 81 |
| mAb13459 | 4.43E-09 | 78 |
| mAb14230 | 9.97E-09 | 85 |
| mAb14231 | Nbl | 2 |
| mAb14232 | 1.80E-08 | 87 |
| mAb14233 | Nbl | -7 |
| mAb14234 | 4.62E-09 | 92 |
| mAb14235 | 2.34E-10 | 96 |
| mAb14247 | 4.46E-10 | 95 |
| mAb14248 | Nbl | -12 |
| mAb14249 | Nbl | -12 |
| mAb14255 | 1.57E-10 | 92 |
| mAb14256 | 4.80E-10 | 95 |
| mAb14257 | 3.65E-10 | 95 |
| mAb14258 | 1.21E-10 | 93 |
| mAb14259 | 1.03E-08 | 89 |
| mAb14260 | 1.27E-10 | 96 |
| mAb14280 | 1.74E-09 | 98 |
| mAb14281 | 3.97E-10 | 100 |
| mAb14282 | 5.02E-10 | 96 |
| mAb14283 | 3.73E-10 | 97 |
| mAb14284 | 3.67E-10 | 98 |
| mAb14285 | 1.70E-09 | 96 |
| mAb14286 | 6.41E-10 | 94 |
| mAb14287 | Nbl | 2 |
| mAb14288 | Nbl | 5 |
| mAb14290 | Nbl | -1 |
| mAb14289 | 3.78E-10 | 98 |
| mAb14291 | Nbl | -8 |
| mAb14292 | 2.54E-10 | 95 |
| mAb14293 | Nbl | -1 |
| mAb14294 | 2.44E-10 | 94 |
| mAb14295 | Nbl | 5 |
| mAb14296 | Nbl | 20 |
| mAb14297 | Nbl | 16 |
| mAb14312 | 1.34E-10 | 98 |
| mAb14313 | 1.64E-08 | 63 |
| mAb14314 | Nbl | 21 |
| mAb14315 | 1.72E-08 | 61 |
| mAb14316 | Nbl | -9 |
| mAb15156 | 2.69E-10 | 103 |
| mAb15157 | 3.57E-10 | 103 |
| mAb15158 | 3.09E-10 | 103 |
| mAb15159 | 1.56E-10 | 102 |
| mAb15160 | 2.04E-10 | 96 |
| mAb15161 | 5.84E-10 | 94 |
| mAb15162 | 7.56E-10 | 95 |
| mAb15163 | 2.17E-10 | 95 |
| mAb15164 | 2.45E-10 | 99 |
| mAb15165 | 1.89E-10 | 99 |
| mAb15166 | 4.75E-10 | 98 |
| mAb15167 | 1.06E-09 | 96 |
| mAb15170 | 1.02E-10 | 82 |
| mAb15150 | 2.54E-10 | 98 |
| mAb15151 | 6.41E-10 | 98 |
| mAb193281 | Nbl | 15 |
| mAb193281 | Nbl | 16 |
Nbl: 비-차단 - % 차단이 50% 이하임.
예 6: 37°C에서 측정된 단량체 SARS-CoV-2-S RBD 시약에 대한 항-CoV-2-S 단클론 항체 결합의 pH 민감도
중성 및 산성 pH 조건에서 56개의 정제된 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체에 대한 해리 속도 상수(k d )는 실시간 표면 플라스몬 공명(SPR) 기반 Biacore T200 또는 Biacore 4000 바이오센서를 사용하여 결정하였다. 모든 결합 연구는 pH7.4, pH6.0, 및 pH5.0에서 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20-함유 PBS의 실행 완충액(각각 PBS-T-pH7.4, -pH6.0, 및 -pH5.0)을 사용하여 37°C에서 수행하였다. Biacore CM5 센서 칩 표면을 먼저 마우스 항-인간 Fc 특이적 mAb(Regeneron, mAb2567)와의 아민 결합에 의해 유도체화하여 항-SARS-CoV-2 단클론 항체를 포착하였다. 항-SARS-CoV-2 단클론 항체에 대한 결합에 대해 조사된 리간드는 myc-myc-헥사히스티딘의 C-말단 태그로 발현된 SARS-COV-2 RBD 세포외 도메인을 포함하는 재조합 단백질이었다 (SARS-COV-2 RBD-MMH; 서열번호 1069). PBS-T-pH7.4 완충액 중에서 90nM SARS-COV-2 RBD-MMH의 용액을 준비한 다음, 25 μL/분의 유속으로 3분 동안 항체 표면 위에 주입한 다음, pH7.4, pH6.0, 또는 pH5.0의 실행 완충액이 8분 동안 흐르면서 결합된 SARS-COV-2 RBD-MMH의 해리 단계를 가졌다. 이소형 대조군인 mAb1932도 대조군으로서 사용하였다.
세 가지 pH 실행 완충액의 해리 속도 상수(k d )는 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용해 실시간 결합 센서그램을 1:1 결합 모델에 피팅하여 결정하였다. 해리 반감기(t½)를 k d 값으로부터 다음과 같이 계산하였다:
t½ (분) =
37°C에서 pH6.0 및 pH5.0의 항-hFc 표면 상에 포획된 56개의 항-SARS-CoV-2 단클론 항체에 대한 단량체 SARS-COV-2 RBD-MMH의 결합에 대한 결과적인 k d 및 t½ 값이 표 21 및 표 22에 각각 요약되어 있으며, pH7.4에서의 결과는 비교를 위해 두 표 모두에 열거되어 있다.
| 포획된 mAb | mAb 포획 레벨 (RU) | pH 7.4에서 결합된 RBD.mmh (RU) |
pH7.4에서 kd
(1/s) |
pH7.4에
서 t½ (분) |
mAb 포획 레벨 (RU) | pH7.4에서 결합된 RBD.mmh (RU) |
pH6.0에서 Kd
(1/s) |
pH6.0에서 t½
(분) |
t½ 비, pH7.4 내지 pH6.0 |
| mAb14284 | 386.5 | 146.9 | 6.24E-04 | 18.5 | 369.4 | 144.5 | 5.74E-04 | 20.1 | 0.9 |
| mAb14312 | 276.1 | 95.2 | 8.59E-04 | 13.5 | 257.6 | 94.8 | 1.77E-03 | 6.5 | 2.1 |
| mAb14294 | 222.4 | 83.2 | 9.20E-04 | 12.6 | 207 | 91.1 | 5.65E-04 | 20.5 | 0.6 |
| mAb14315 | 238 | 83.3 | 9.80E-04 | 11.8 | 217.5 | 82.5 | 9.46E-04 | 12.2 | 1 |
| mAb14292 | 241.2 | 73.4 | 1.41E-03 | 8.2 | 218.6 | 74 | 1.78E-03 | 6.5 | 1.3 |
| mAb14235 | 202.9 | 71.2 | 1.48E-03 | 7.8 | 185.2 | 80.8 | 1.14E-03 | 10.1 | 0.8 |
| mAb14247 | 137.5 | 40.8 | 1.58E-03 | 7.3 | 107.4 | 43.8 | 1.67E-03 | 6.9 | 1.1 |
| mAb13458 | 290.7 | 96.5 | 1.61E-03 | 7.2 | 265.5 | 98.6 | 1.99E-03 | 5.8 | 1.2 |
| mAb14283 | 246.6 | 87.7 | 1.69E-03 | 6.9 | 224.5 | 86.3 | 2.00E-03 | 5.8 | 1.2 |
| mAb14289 | 246.7 | 86.1 | 1.85E-03 | 6.2 | 224 | 84 | 2.72E-03 | 4.2 | 1.5 |
| mAb14260 | 208 | 74.5 | 1.88E-03 | 6.2 | 192.7 | 83 | 1.66E-03 | 6.9 | 0.9 |
| mAb14258 | 245.1 | 85.9 | 2.13E-03 | 5.4 | 221.1 | 85 | 5.48E-04 | 21.1 | 0.3 |
| mAb13457 | 309 | 103.3 | 2.14E-03 | 5.4 | 279.3 | 100.8 | 3.09E-03 | 3.7 | 1.5 |
| mAb14234 | 133.8 | 37.9 | 2.21E-03 | 5.2 | 103 | 44.5 | 1.43E-03 | 8.1 | 0.6 |
| mAb13459 | 301.6 | 106.8 | 2.29E-03 | 5.1 | 290 | 114.8 | 2.39E-03 | 4.8 | 1.1 |
| mAb14313 | 275.7 | 94.2 | 2.51E-03 | 4.6 | 255 | 97.1 | 4.10E-03 | 2.8 | 1.6 |
| mAb14255 | 288.4 | 97.5 | 4.93E-03 | 2.3 | 262.3 | 96.4 | 5.13E-03 | 2.3 | 1 |
| mAb14281 | 256.9 | 83.5 | 6.59E-03 | 1.8 | 233.5 | 85.2 | 7.34E-03 | 1.6 | 1.1 |
| mAb14230 | 224.5 | 67.6 | 7.71E-03 | 1.5 | 193.5 | 70.7 | 7.97E-03 | 1.4 | 1.1 |
| mAb14257 | 234.8 | 82.3 | 7.78E-03 | 1.5 | 220.2 | 91.3 | 8.42E-03 | 1.4 | 1.1 |
| mAb14286 | 259 | 84.3 | 9.68E-03 | 1.2 | 234.5 | 87.2 | 9.99E-03 | 1.2 | 1 |
| mAb14256 | 258.4 | 80.2 | 1.11E-02 | 1 | 234.3 | 84.4 | 9.55E-03 | 1.2 | 0.8 |
| mAb14282 | 215.3 | 73.5 | 1.26E-02 | 0.9 | 199.9 | 83.5 | 9.85E-03 | 1.2 | 0.8 |
| mAb14280 | 255 | 72.4 | 2.40E-02 | 0.5 | 230.3 | 78.4 | 1.90E-02 | 0.6 | 0.8 |
| mAb14285 | 213 | 64.2 | 2.58E-02 | 0.4 | 200.2 | 77.1 | 1.44E-02 | 0.8 | 0.5 |
| mAb14232 | 58.1 | 8.2 | 3.11E-02 | 0.4 | 34.4 | 23 | 1.24E-02 | 0.9 | 0.4 |
| mAb14259 | 233.1 | 12 | IC | IC | 210.5 | 16.7 | IC | IC | IC |
| mAb14314 | 255.1 | 5.8 | IC | IC | 244.4 | 12.5 | IC | IC | IC |
| mAb14231 | 272 | 0.1 | NB | NB | 244.5 | 5 | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 197 | 1.7 | NB | NB | 164.3 | 3.3 | NB | NB | NB |
| mAb14248 | 230.5 | 0.9 | NB | NB | 205.6 | 5.5 | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 215.1 | 0.2 | NB | NB | 198.1 | 8.7 | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 254.4 | 1.1 | NB | NB | 233 | 4.3 | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 216.2 | 0.9 | NB | NB | 201.3 | 8.8 | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 245 | 0.3 | NB | NB | 223.1 | 5.1 | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 200.5 | 0.9 | NB | NB | 185 | 9.5 | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 257.1 | 1.4 | NB | NB | 233.3 | 5.8 | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 259.7 | 2.1 | NB | NB | 239.1 | 1.6 | NB | NB | NB |
| mAb14296 | 276.5 | 1.7 | NB | NB | 257.1 | 4.1 | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 229 | 2.2 | NB | NB | 214.7 | 9.3 | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 201.7 | 2.1 | NB | NB | 180.1 | 5.6 | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 268.5 | 92.6 | 6.73E-03 | 1.7 | 258.3 | 96.4 | 9.70E-03 | 1.2 | 1.4 |
| mAb15157 | 311.9 | 106.3 | 4.05E-03 | 2.9 | 301.7 | 107.8 | 7.66E-03 | 1.5 | 1.9 |
| mAb15158 | 306.9 | 111.4 | 3.10E-04 | 37 | 294.7 | 118.1 | 2.90E-04 | 40.1 | 0.9 |
| mAb15159 | 92.9 | 31.9 | 2.31E-04 | 50 | 79.8 | 36.3 | 4.12E-04 | 28.1 | 1.8 |
| mAb15160 | 178.8 | 58.2 | 2.18E-03 | 5.3 | 164.8 | 59.9 | 2.83E-03 | 4.1 | 1.3 |
| mAb15161 | 121.5 | 39.8 | 1.13E-03 | 10.3 | 106.2 | 43.7 | 1.07E-03 | 10.8 | 0.9 |
| mAb15162 | 330.8 | 116.4 | 3.00E-03 | 3.9 | 321.2 | 120.1 | 3.54E-03 | 3.3 | 1.2 |
| mAb15163 | 230.9 | 81.9 | 4.94E-04 | 23.4 | 211.7 | 82.4 | 1.04E-03 | 11.1 | 2.1 |
| mAb15164 | 400.6 | 144.9 | 2.26E-03 | 5.1 | 398.3 | 154.4 | 2.10E-03 | 5.5 | 0.9 |
| mAb15165 | 290.4 | 110 | 1.64E-03 | 7.1 | 279.8 | 115 | 1.28E-03 | 9.1 | 0.8 |
| mAb15166 | 244.5 | 65.2 | 3.00E-02 | 0.4 | 234.8 | 66 | 3.01E-02 | 0.4 | 1 |
| mAb15167 | 419.3 | 117.5 | 2.08E-02 | 0.6 | 415.8 | 124.2 | 1.62E-02 | 0.7 | 0.8 |
| mAb15170 | 309.8 | 120.5 | 1.07E-04 | 108.4 | 304.6 | 128.6 | 8.00E-05 | 144.5 | 0.7 |
| mAb15150 | 246.1 | 87.8 | 1.12E-04 | 103.4 | 233.4 | 89.7 | 3.81E-05 | 303.5 | 0.3 |
| mAb15151 | 611.4 | 219.4 | 6.80E-03 | 1.7 | 612.7 | 227.1 | 4.54E-03 | 2.5 | 0.7 |
| mAb1932 | 314 | 0.6 | NB | NB | 294.3 | 7.7 | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
| 포착된 mAb | mAb 포획 레벨 (RU) | pH 7.4에서 결합된 RBD.mmh (RU) | pH5.0에서 kd (1/s) |
pH5.0에서 t½
(분) |
mAb 포획 레벨 (RU) | pH7.4에서 결합된 RBD.mmh (RU) |
pH5.0에서 Kd
(1/s) |
pH5.0에서 t½
(분) |
t½ 비, pH7.4 내지
pH5.0 |
| mAb14284 | 386.5 | 146.9 | 6.24E-04 | 18.5 | 387.2 | 158.8 | 7.36E-04 | 15.7 | 1.2 |
| mAb14312 | 276.1 | 95.2 | 8.59E-04 | 13.5 | 274.5 | 96.7 | 5.58E-03 | 2.1 | 6.4 |
| mAb14294 | 222.4 | 83.2 | 9.20E-04 | 12.6 | 210.4 | 97.6 | 4.52E-04 | 25.5 | 0.5 |
| mAb14315 | 238 | 83.3 | 9.80E-04 | 11.8 | 228.3 | 101.2 | 7.00E-04 | 16.5 | 0.7 |
| mAb14292 | 241.2 | 73.4 | 1.41E-03 | 8.2 | 229.2 | 85 | 2.19E-03 | 5.3 | 1.5 |
| mAb14235 | 202.9 | 71.2 | 1.48E-03 | 7.8 | 184.9 | 80.8 | 1.19E-03 | 9.7 | 0.8 |
| mAb14247 | 137.5 | 40.8 | 1.58E-03 | 7.3 | 107.1 | 51.9 | 1.91E-03 | 6.1 | 1.2 |
| mAb13458 | 290.7 | 96.5 | 1.61E-03 | 7.2 | 270.3 | 90.9 | 4.01E-03 | 2.9 | 2.5 |
| mAb14283 | 246.6 | 87.7 | 1.69E-03 | 6.9 | 237.7 | 91.7 | 5.12E-03 | 2.3 | 3 |
| mAb14289 | 246.7 | 86.1 | 1.85E-03 | 6.2 | 235.5 | 89.3 | 4.60E-03 | 2.5 | 2.5 |
| mAb14260 | 208 | 74.5 | 1.88E-03 | 6.2 | 193.8 | 82.4 | 2.02E-03 | 5.7 | 1.1 |
| mAb14258 | 245.1 | 85.9 | 2.13E-03 | 5.4 | 230.8 | 103.4 | 5.08E-04 | 22.7 | 0.2 |
| mAb13457 | 309 | 103.3 | 2.14E-03 | 5.4 | 293.7 | 104.7 | 4.52E-03 | 2.6 | 2.1 |
| mAb14234 | 133.8 | 37.9 | 2.21E-03 | 5.2 | 98.5 | 40.4 | 1.66E-03 | 7 | 0.7 |
| mAb13459 | 301.6 | 106.8 | 2.29E-03 | 5.1 | 293.9 | 105.8 | 3.70E-03 | 3.1 | 1.6 |
| mAb14313 | 275.7 | 94.2 | 2.51E-03 | 4.6 | 265.2 | 80.8 | 5.73E-03 | 2 | 2.3 |
| mAb14255 | 288.4 | 97.5 | 4.93E-03 | 2.3 | 274.8 | 94.1 | 6.35E-03 | 1.8 | 1.3 |
| mAb14281 | 256.9 | 83.5 | 6.59E-03 | 1.8 | 241 | 51.7 | 1.17E-02 | 1 | 1.8 |
| mAb14230 | 224.5 | 67.6 | 7.71E-03 | 1.5 | 201.1 | 60.3 | 9.24E-03 | 1.3 | 1.2 |
| mAb14257 | 234.8 | 82.3 | 7.78E-03 | 1.5 | 224.7 | 45.2 | 1.72E-02 | 0.7 | 2.1 |
| mAb14286 | 259 | 84.3 | 9.68E-03 | 1.2 | 246.3 | 82.4 | 6.64E-03 | 1.7 | 0.7 |
| mAb14256 | 258.4 | 80.2 | 1.11E-02 | 1 | 239.7 | 54.1 | 9.27E-03 | 1.2 | 0.8 |
| mAb14282 | 215.3 | 73.5 | 1.26E-02 | 0.9 | 201.9 | 62.4 | 6.71E-03 | 1.7 | 0.5 |
| mAb14280 | 255 | 72.4 | 2.40E-02 | 0.5 | 241.4 | 61.7 | 1.03E-02 | 1.1 | 0.5 |
| mAb14285 | 213 | 64.2 | 2.58E-02 | 0.4 | 202 | 51.5 | 2.50E-03 | 4.6 | 0 |
| mAb14232 | 58.1 | 8.2 | 3.11E-02 | 0.4 | 22.3 | 10.1 | 6.56E-04 | 17.6 | 0 |
| mAb14259 | 233.1 | 12 | IC | IC | 214.1 | 1.8 | IC | IC | IC |
| mAb14314 | 255.1 | 5.8 | IC | IC | 252.9 | 3.4 | IC | IC | IC |
| mAb14231 | 272 | 0.1 | NB | NB | 249.9 | -1.3 | NB | NB | NB |
| mAb14233 | 197 | 1.7 | NB | NB | 173.5 | 6.6 | NB | NB | NB |
| mAb14248 | 230.5 | 0.9 | NB | NB | 210.3 | -0.8 | NB | NB | NB |
| mAb14249 | 215.1 | 0.2 | NB | NB | 198.6 | 1.9 | NB | NB | NB |
| mAb14287 | 254.4 | 1.1 | NB | NB | 240.6 | 0.3 | NB | NB | NB |
| mAb14288 | 216.2 | 0.9 | NB | NB | 203.7 | 4 | NB | NB | NB |
| mAb14290 | 245 | 0.3 | NB | NB | 228.9 | -0.6 | NB | NB | NB |
| mAb14291 | 200.5 | 0.9 | NB | NB | 188.5 | 3.2 | NB | NB | NB |
| mAb14293 | 257.1 | 1.4 | NB | NB | 243.1 | -0.2 | NB | NB | NB |
| mAb14295 | 259.7 | 2.1 | NB | NB | 250.3 | 8.7 | NB | NB | NB |
| mAb14296 | 276.5 | 1.7 | NB | NB | 267.7 | -1 | NB | NB | NB |
| mAb14297 | 229 | 2.2 | NB | NB | 218.2 | 3.1 | NB | NB | NB |
| mAb14316 | 201.7 | 2.1 | NB | NB | 181.3 | 0.9 | NB | NB | NB |
| mAb15156 | 268.5 | 92.6 | 6.73E-03 | 1.7 | 259.6 | 103.6 | 1.58E-02 | 0.7 | 2.3 |
| mAb15157 | 311.9 | 106.3 | 4.05E-03 | 2.9 | 301.7 | 107.5 | 7.02E-03 | 1.6 | 1.7 |
| mAb15158 | 306.9 | 111.4 | 3.10E-04 | 37 | 296.4 | 121.6 | 9.70E-05 | 118.9 | 0.3 |
| mAb15159 | 92.9 | 31.9 | 2.31E-04 | 50 | 73.6 | 45.5 | 4.29E-04 | 27 | 1.9 |
| mAb15160 | 178.8 | 58.2 | 2.18E-03 | 5.3 | 160.8 | 61.3 | 2.28E-03 | 5.1 | 1 |
| mAb15161 | 121.5 | 39.8 | 1.13E-03 | 10.3 | 100.8 | 51.4 | 9.80E-04 | 11.8 | 0.9 |
| mAb15162 | 330.8 | 116.4 | 3.00E-03 | 3.9 | 335.3 | 130.8 | 5.40E-03 | 2.1 | 1.8 |
| mAb15163 | 230.9 | 81.9 | 4.94E-04 | 23.4 | 221.3 | 83.2 | 3.77E-03 | 3.1 | 7.6 |
| mAb15164 | 400.6 | 144.9 | 2.26E-03 | 5.1 | 409.6 | 159 | 2.00E-03 | 5.8 | 0.9 |
| mAb15165 | 290.4 | 110 | 1.64E-03 | 7.1 | 289.5 | 126.8 | 9.73E-04 | 11.9 | 0.6 |
| mAb15166 | 244.5 | 65.2 | 3.00E-02 | 0.4 | 233.6 | 60 | 3.50E-02 | 0.3 | 1.2 |
| mAb15167 | 419.3 | 117.5 | 2.08E-02 | 0.6 | 422.4 | 126 | 1.33E-02 | 0.9 | 0.6 |
| mAb15170 | 309.8 | 120.5 | 1.07E-04 | 108.4 | 314.3 | 141.1 | 6.62E-05 | 174.4 | 0.6 |
| mAb15150 | 246.1 | 87.8 | 1.12E-04 | 103.4 | 236.7 | 92.6 | 1.00E-05 | 1155 | 0.1 |
| mAb15151 | 611.4 | 219.4 | 6.80E-03 | 1.7 | 632.9 | 230.7 | 4.39E-03 | 2.6 | 0.6 |
| mAb1932 | 314 | 0.6 | NB | NB | 305.2 | 1.9 | NB | NB | NB |
NB: 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합이 관찰되지 않았음 (NB).
IC: 관찰된 결합은 결합 시뮬레이션 모델에 적합하지 않았으며, 현재의 실험 조건 하에서 아무런 결합 동역학 파라미터가 결정되지 않았음.
예 7: 항-SARS-CoV-2-S 항체 간의 교차 경쟁
41개의 항-SARS-CoV-2-S 단클론 항체(mAbs) 간의 결합 경쟁은 Octet HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간, 비표지 바이오-층 간섭계 분석(BLI)을 사용해 결정하였다. 전체 실험은 25°C에서, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 1 mg/mL BSA, pH7.4 (HBS-EBT)를 함유하는 완충액 중에서, 샘플 플레이트를 1000 rpm의 속도로 진탕시키면서 수행하였다. C-말단 myc-myc-헥사히스티딘(SARS-COV-2 RBD-MMH; SEQ ID NO: 1069) 태그로 발현되는 SARS-COV-2 RBD 세포외 도메인의 각각의 에피토프에 결합하기 위해 mAbs가 서로 경쟁하는지 여부를 평가하기 위해, 10 μg/mL의 SARS-COV-2 RBD-MMH 용액을 함유하는 웰에 바이오센서 팁을 90초 동안 담가서 항-Penta-His 항체가 코팅된 옥텟 바이오센서 팁(Fortebio Inc, # 18-5122)에 ~ 0.52-0.63nm의 SARS-COV-2 RBD-MMH를 먼저 포획하였다. 이어서, SARS-COV-2 RBD-MMH이 포획된 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 mAb-1 용액을 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켜 제1 항-SARS-CoV-2 단클론 항체(mAb-1)로 포화시켰다. 그런 다음, 팁을 50 μg/mL의 제2 항-SARS-CoV-2 단클론 항체(mAb-2)를 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켰다. 단계 사이에, 팁을 HBS-ETB로 헹구었다. 실시간 결합 반응을 실험의 전체 과정 동안 모니터링하고, 모든 단계가 끝난 후 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 사전 복합체화된 SARS-COV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2 결합 반응을 mAb-1이 비결합 이소형 대조군인 경우 mAb-2 결합 신호와 비교하고, mAb-2 결합의 감소 백분율을 계산하였다. mAb-1의 사전 결합이 mAb-2 결합의 > 50% 감소를 초래하고, mAb 쌍에 대한 결합 순서를 역전시키는 것이 또한 결합의 > 50% 감소를 나타내는 경우, mAb-1 및 mAb-2를 경쟁 mAb로서 분류하였다. 도 1은 항-SARS-CoV-2 mAb에 대한 교차 경쟁 연구의 결과를 매트릭스 포맷으로 나타낸다. 표 23은 실험에 포함된 각각의 항-SARS-CoV-2 mAb에 대한 경쟁 mAb를 열거한다.
| mAb-1 | mAb-1과 경쟁하는 mAb-2 |
| mAb14312 | mAb14256 |
| mAb14255 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14281 | |
| mAb14256 | mAb14312 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14284 | |
| mAb10985 | |
| mAb14255 | mAb14312 |
| mAb14258 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb10933 | mAb14258 |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14258 | mAb14255 |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14283 | |
| mAb14257 | mAb14312 |
| mAb14255 | |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb14285 | mAb14312 |
| mAb14255 | |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14286 | mAb14312 |
| mAb14256 | |
| mAb14255 | |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14260 | |
| mAb14280 | mAb14312 |
| mAb14256 | |
| mAb14255 | |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14282 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14282 | mAb14312 |
| mAb14256 | |
| mAb14255 | |
| mAb10933 | |
| mAb14258 | |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14281 | mAb14312 |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14315 | |
| mAb13457 | mAb14285 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb13458 | mAb14285 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb13459 | mAb14285 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14313 | mAb14257 |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14283 | mAb14258 |
| mAb14257 | |
| mAb14285 | |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb10987 | mAb14285 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb14289 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14289 | mAb14285 |
| mAb14286 | |
| mAb14280 | |
| mAb14282 | |
| mAb14281 | |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14294 | mAb13457 |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb14289 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14235 | mAb13457 |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14234 | mAb13457 |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14247 | mAb13457 |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14260 | mAb14286 |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14315 | |
| mAb14230 | |
| mAb14284 | |
| mAb14315 | mAb14281 |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14230 | |
| mAb14230 | mAb13457 |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14315 | |
| mAb14284 | |
| mAb14284 | mAb14256 |
| mAb13457 | |
| mAb13458 | |
| mAb13459 | |
| mAb14313 | |
| mAb14283 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | |
| mAb14234 | |
| mAb14247 | |
| mAb14260 | |
| mAb14230 | |
| mAb10985 | mAb14256 |
실질적으로 전술한 바와 같이 15개의 추가 항-SARS-Cov-2-S 단클론 항체 간의 결합 경쟁을 수행하였다. 경쟁은 Octet HTX 바이오센서 플랫폼(Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간, 비표지 바이오-층 간섭계 분석(BLI)을 사용해 결정하였다. 전체 실험은 25°C에서, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 및 1 mg/mL BSA, pH7.4 (HBS-EBT)를 함유하는 완충액 중에서, 플레이트를 1000 rpm의 속도로 진탕시키면서 수행하였다. C-말단 myc-myc-헥사히스티딘(SARS-COV-2 RBD-MMH; SEQ ID NO: 1069) 태그로 발현되는 SARS-COV-2 RBD 세포외 도메인의 각각의 에피토프에 결합하기 위해 mAbs가 서로 경쟁하는지 여부를 평가하기 위해, 10 μg/mL의 SARS-COV-2 RBD-MMH 용액을 함유하는 웰에 바이오센서 팁을 90초 동안 담가서 항-Penta-His 항체가 코팅된 옥텟 바이오센서 팁(Fortebio Inc, # 18-5122)에 ~0.51nm의 SARS-COV-2 RBD-MMH를 먼저 포획하였다. 이어서, SARS-COV-2 RBD-MMH이 포획된 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 mAb-1 용액을 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켜 제1 항-SARS-CoV-2 단클론 항체(mAb-1)로 포화시켰다. 그런 다음, 바이오센서 팁을 50 μg/mL의 제2 항-SARS-CoV-2 단클론 항체(mAb-2)를 함유하는 웰에 4분 동안 침지시켰다. 단계 사이에, 바이오센서 팁을 HBS-ETB 완충액으로 헹구었다. 실시간 결합 반응을 실험의 전체 과정 동안 모니터링하고, 모든 단계가 끝난 후 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 사전 복합체화된 SARS-COV-2 RBD-MMH에 대한 mAb-2 결합 반응을 mAb-1이 비결합 이소형 대조군인 경우 mAb-2 결합 신호와 비교하고, mAb-2 결합의 감소 백분율을 계산하였다. mAb-1의 사전 결합이 mAb-2 결합의 > 50% 감소를 초래하고, mAb 쌍에 대한 결합 순서를 역전시키는 것이 또한 결합의 > 50% 감소를 나타내는 경우, mAb-1 및 mAb-2를 경쟁 mAb로서 분류하였다. 도 2는 항-SARS-CoV-2 mAb에 대한 교차 경쟁 연구의 결과를 매트릭스 포맷으로 나타낸다. 표 24는 실험에 포함된 각각의 항-SARS-CoV-2 mAb에 대한 경쟁 mAb를 열거한다.
| mAb-1 | mAb-1과 경쟁하는 mAb-2 |
| mAb10934 | mAb10989 |
| mAb15158 | |
| mAb15156 | |
| mAb15157 | |
| mAb15166 | |
| mAb15164 | |
| mAb15165 | |
| mAb15161 | |
| mAb15160 | |
| mAb10933 | |
| mAb15163 | |
| mAb14312 | |
| mAb14232 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
| mAb14230 | |
| mAb14315 | |
| mAb14284 | |
| mAb14235 | |
| mAb14294 | |
| mAb10989 | mAb10934 |
| mAb15158 | |
| mAb15156 | |
| mAb15157 | |
| mAb15166 | |
| mAb15167 | |
| mAb15150 | |
| mAb10954 | |
| mAb15162 | |
| mAb15159 | |
| mAb15170 | |
| mAb15164 | |
| mAb15165 | |
| mAb15151 | |
| mAb15161 | |
| mAb15160 | |
| mAb10933 | |
| mAb15163 | |
| mAb14255 | |
| mAb14256 | |
| mAb14312 | |
| mAb10986 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb15158 | mAb10934 |
| mAb10989 | |
| mAb15156 | |
| mAb15157 | |
| mAb15166 | |
| mAb15167 | |
| mAb15150 | |
| mAb10954 | |
| mAb15162 | |
| mAb15159 | |
| mAb15170 | |
| mAb15164 | |
| mAb15165 | |
| mAb15151 | |
| mAb15161 | |
| mAb15160 | |
| mAb10933 | |
| mAb15163 | |
| mAb14255 | |
| mAb14256 | |
| mAb14312 | |
| mAb10986 | |
| mAb10985 | |
| mAb14289 | |
| mAb15156 | mAb10934 |
| mAb10989 | |
| mAb15158 | |
| mAb15157 | |
| mAb15166 | |
| mAb15167 | |
| mAb15150 | |
| mAb10954 | |
| mAb15162 | |
| mAb15159 | |
| mAb15170 | |
| mAb15164 | |
| mAb15165 | |
| mAb15151 | |
| mAb15161 | |
| mAb15160 | |
| mAb10933 | |
| mAb15163 | |
| mAb14255 | |
| mAb14256 | |
| mAb14312 | |
| mAb10986 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb15157 | mAb10934 |
| mAb10989 | |
| mAb15158 | |
| mAb15156 | |
| mAb15166 | |
| mAb15167 | |
| mAb15150 | |
| mAb10954 | |
| mAb15162 | |
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| mAb15164 | |
| mAb15165 | |
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| mAb14256 | |
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| mAb10954 | |
| mAb15162 | |
| mAb15159 | |
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| mAb14235 | |
| mAb14294 | |
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| mAb14232 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
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| mAb14235 | |
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| mAb15158 | |
| mAb15156 | |
| mAb14232 | |
| mAb10987 | |
| mAb14283 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
| mAb14230 | |
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| mAb14235 | |
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| mAb10989 | |
| mAb15158 | |
| mAb15156 | |
| mAb14312 | |
| mAb14232 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
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| mAb14284 | |
| mAb14235 | |
| mAb14294 | |
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| mAb14232 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb14234 | |
| mAb14230 | |
| mAb14315 | |
| mAb14284 | |
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| mAb10987 | |
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| mAb14234 | |
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| mAb14235 | |
| mAb14294 | |
| mAb14235 | mAb10934 |
| mAb14232 | |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
| mAb14230 | |
| mAb14315 | |
| mAb14284 | |
| mAb14294 | |
| mAb14294 | mAb14232 |
| mAb10987 | |
| mAb14289 | |
| mAb14283 | |
| mAb14247 | |
| mAb14234 | |
| mAb14230 | |
| mAb14315 | |
| mAb14284 | |
| mAb14235 |
예 8: ADCC 대리 분석(FcγR3a Val176 신호전달 검정)에서 항-SARS-CoV-2-S mAb의 특성 분석
SARS-CoV-2의 스파이크 단백질을 표적으로 하는 항체가 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 NK 세포에서 두드러지게 발현되는 Fc 수용체인 FcγR3a와 상호작용하는 능력을, 리포터 세포 및 항체에 결합된 표적 세포를 사용하는 대리 생물검정에서 측정하였다. 이 검정에서, 조작된 Jurkat T 세포는 고친화도 인간 FcγR3a 176Val 동종이형 수용체(Jurkat/NFAT-Luc/hFcγR3a 176Val)와 함께 전사 인자 NFAT(NFAT-Luc)의 조절 하에 리포터 유전자 루시페라아제를 발현시켰다. 표적 세포를 인간 CD20을 발현하는 Jurkat T 세포(인간 IgG1 항체를 표적으로 하는 CD20의 양성 대조군으로서 사용됨)를 단독으로 조작하거나 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 함께 조작하였다. 리포터 세포를 표적 세포와 함께 인큐베이션하고, 표적 세포에 결합된 인간 IgG1 항체의 Fc 도메인을 통한 FcγR3a의 결합은 리포터 세포에서 전사 인자 NFAT의 활성화를 유도하고 루시페라아제의 발현을 유도한 다음 발광 판독을 통해 측정하였다.
표적 세포
Jurkat/hCD20: Jurkat T 세포를 전장 인간 CD20(NCBI 수탁 번호 NP_690605.1의 아미노산 M1-P297)을 구성적으로 발현하도록 조작하였다. Jurkat/hCD20 세포를 CD20 발현에 대해 염색하고 RPMI + 10% FBS + P/S/G + 250 g/ml 하이그로마이신 성장 배지에서 유지했다. 이들 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다.
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크: Jurkat/hCD20 T 세포를 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(NCBI 수탁 번호 YP_009724390.1의 아미노산 M1-T1273)을 구성적으로 발현하도록 조작하였다. Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 세포를 스파이크 단백질의 높은 발현에 대해 분류하고 RPMI + 10% FBS + P/S/G + 1 μg/ml 퓨로마이신 + 250 g/ml 하이그로마이신 성장 배지에서 유지했다.
리포터 세포
Jurkat/NFAT-Luc/FcγR3a 176Val: Jurkat T 세포를 고친화도 인간 FcγR3a 176Val 동종이형 수용체(수탁 번호 P08637 VAR_003960의 아미노산 M1-K254)와 함께 활성화된 T 세포의 핵 인자(NFAT) 루시페라아제 리포터 구성물을 안정적으로 발현하도록 조작하였다. 조작된 리포터 세포를 RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 μg/ml 퓨로마이신 + 500 μg/ml G418 성장 배지에서 유지했다.
검정 설정
실험 1일 전, Jurkat 리포터 세포를 RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 μg/ml 퓨로마이신 + 500 μg/ml G418 성장 배지에서 7.5 x 105 세포/ml로 분할하였다. Jurkat 표적 세포를 RPMI1640 + 10% FBS + P/S/G + 0.5 μg/ml 퓨로마이신 + 250 μg/ml 하이그로마이신 성장 배지에서 5 x 105 세포/ml로 분할하였다.
실험 당일에, 표적 및 리포터 세포를 분석 배지(RPMI + 10% FBS + P/S/G)로 옮기고, 384-웰 백색 마이크로역가 플레이트에 3:2 비율(3 x 104/웰 표적 세포 및 2 x 104/웰 리포터 세포)로 첨가하였다.
항-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체, 음성 이소형 일치 대조군 항체, 및 ADCC에 대한 양성 대조군 항체(항-CD20)를 1.7 pM 내지 100 nM의 최종 농도 범위의 11-점, 1:3 연속 희석물로 적정하고, 마지막 12번째 지점은 항체를 함유하지 않았다. 모든 샘플을 이중 테스트하였다. 플레이트를 37°C/5% CO2에서 5시간 동안 인큐베이션한 다음, 동일한 부피의 ONE-Glo™(Promega) 시약을 첨가하여 세포를 용해시키고 루시페라아제 활성을 검출하였다. 방출된 광을 멀티라벨 플레이트 판독기 Enviosion(PerkinElmer)을 이용해 상대 광 단위(RLU)에서 포획하였다. 항체의 EC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용해 12-점 용량 반응 곡선(배경 신호 포함)에 대한 4-파라미터 로지스틱 방정식으로 결정하였다. 최대 배수 유도는 다음 방정식을 사용하여 계산하였다:
배수 유도 = 각 항체의 시험된 용량 범위 내의 최대 평균 RLU / 평균 RLU (배경 신호 = 항체 없음)
EC50 값 및 배수 유도가 표 25에 요약되어 있다.
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 표적 세포를 이용한 결과
시험된 항-SARS-CoV-2-S 항체 각각은 음성 대조군 항체보다 더 큰 배수 유도를 나타냈다. EC50 값은 60.4 pM 내지 3.4 nM 범위였고, 배수 유도 값은 3.9x 내지 13.5x 범위였다. 양성 CD20 대조군 항체는 18.1 pM의 EC50 값으로 29.9x의 배수 유도를 나타냈다.
Jurkat/hCD20 표적 세포를 이용한 결과
1개(mAb14312)를 제외한 41개의 항-SARS-CoV-2-S 항체 각각은 최소 활성을 보이는 음성 대조군 항체와 유사하게 거동하였다. mAb14312는 18.4 nM의 EC50 값 및 2.0의 배수 유도 값을 가졌다. 양성 CD20 대조군 항체는 33.7 pM의 EC50 값으로 29.4x의 배수 유도 값을 나타냈다.
| mAb # | Jurkat CD20 | Jurkat/CD20/스파이크 | ||
| EC50 (M) | 배수 유도 | EC50 (M) | 배수 유도 | |
| mAb13457 | ND | 1.2 | 1.50E-10 | 9.1 |
| mAb13458 | ND | 1.2 | 1.43E-10 | 10.2 |
| mAb13459 | ND | 1.2 | 1.42E-10 | 9.9 |
| mAb14230 | ND | 1.1 | 1.79E-10 | 9.8 |
| mAb14231 | ND | 1.2 | 3.25E-09 | 7.9 |
| mAb14232 | ND | 1.2 | 1.31E-10 | 10.8 |
| mAb14233 | ND | 1.1 | 2.80E-10 | 11.0 |
| mAb14234 | ND | 1.1 | 2.69E-10 | 12.6 |
| mAb14235 | ND | 1.0 | 1.43E-10 | 10.8 |
| mAb14247 | ND | 1.0 | 1.79E-10 | 11.3 |
| mAb14248 | ND | 1.0 | 1.79E-10 | 12.8 |
| mAb14249 | ND | 1.2 | 2.51E-10 | 10.3 |
| mAb14255 | ND | 1.0 | 1.67E-10 | 9.5 |
| mAb14256 | ND | 1.0 | 4.48E-10 | 6.1 |
| mAb14257 | ND | 1.0 | 2.39E-10 | 8.8 |
| mAb14258 | ND | 1.0 | 2.82E-10 | 7.5 |
| mAb14259 | ND | 1.0 | 3.94E-10 | 8.7 |
| mAb14260 | ND | 1.1 | 3.63E-10 | 6.0 |
| mAb14280 | ND | 1.1 | 2.67E-10 | 13.5 |
| mAb14281 | ND | 1.1 | 1.65E-10 | 10.3 |
| mAb14282 | ND | 1.1 | 2.57E-10 | 10.7 |
| mAb14283 | ND | 1.1 | 1.39E-10 | 9.1 |
| mAb14284 | ND | 1.1 | 1.56E-10 | 9.0 |
| mAb14285 | ND | 1.1 | 2.43E-10 | 11.0 |
| mAb14286 | ND | 1.0 | 2.04E-10 | 11.0 |
| mAb14287 | ND | 1.0 | 1.23E-09 | 6.2 |
| mAb14288 | ND | 1.0 | 5.10E-10 | 6.7 |
| mAb14289 | ND | 1.0 | 1.30E-10 | 6.3 |
| mAb14290 | ND | 1.0 | 3.42E-09 | 9.5 |
| mAb14291 | ND | 1.1 | 3.02E-10 | 9.7 |
| mAb14292 | ND | 1.0 | 3.86E-10 | 9.2 |
| mAb14293 | ND | 1.1 | 7.88E-10 | 9.3 |
| mAb14294 | ND | 1.0 | 6.04E-11 | 10.5 |
| mAb14295 | ND | 1.0 | 1.93E-10 | 11.5 |
| mAb14296 | ND | 1.0 | 4.11E-10 | 8.1 |
| mAb14297 | ND | 1.0 | 1.24E-10 | 7.9 |
| mAb14312 | 1.84E-08 | 2.0 | 1.68E-10 | 7.5 |
| mAb14313 | ND | 1.1 | 1.55E-10 | 7.1 |
| mAb14314 | ND | 1.1 | NC | 3.9 |
| mAb14315 | ND | 1.1 | 6.24E-11 | 9.3 |
| mAb14316 | ND | 1.0 | 1.89E-10* | 9.1 |
| mAb1932 - 음성 대조군 | ND | 1.3 | ND | 1.5 |
| mAb2959 - 양성 대조군 | 3.37E-11 | 29.4 | 1.81E-11 | 29.9 |
* 고농도에서는 신호가 감소하였다(후크 효과); EC50 결정 전에 후크 상의 지점을 제거하였다
NC: 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음
ND: 농도 의존적 반응이 관찰되지 않았으므로 결정되지 않음
배수 유도 = 각 항체의 시험된 용량 범위 내의 최대 평균 RLU / 평균 RLU (배경 신호 = 항체 없음)
시험된 초기 mAb로부터, 미국 특허 제10,787,501호에 기술된 항체와 함께 실행하기 위한 추가 추적관찰을 위해 선택된 소수를 선택하였다. EC50 값 및 배수 유도가 표 26에 요약되어 있다.
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 표적 세포를 이용한 결과
새롭게 정제된 SARS-CoV-2 스파이크 항체 각각은 음성 대조군 항체보다 더 큰 배수 유도를 나타냈다. 새롭게 정제된 SARS-CoV-2 스파이크 항체의 EC50 값은 188 pM 내지 575 pM의 범위였고, 배수 유도 값은 2.0x 내지 3.2x의 범위였다. 양성 CD20 대조군 항체는 51.8 pM의 EC50 값으로 27.0x의 배수 유도를 나타냈다.
Jurkat/hCD20 표적 세포를 이용한 결과
새롭게 정제된 SARS-CoV-2 스파이크 항체 각각은 최소 활성을 보이는 음성 대조군 항체와 유사하게 거동하였다. 대조적으로, 양성 CD20 대조군 항체는 142 pM의 EC50 값으로 23.5x의 배수 유도 값을 나타냈다.
| mAb # 또는 명칭 | Jurkat CD20 | Jurkat/CD20/스파이크 | ||
| EC50 (M) | 배수 유도 | EC50 (M) | 배수 유도 | |
| mAb14255 | ND | 1.1 | 1.88E-10 | 3.2 |
| mAb14256 | ND | 1.1 | 5.75E-10 | 2.0 |
| mAb14257 | ND | 1.2 | 2.63E-10 | 2.2 |
| mAb14258 | ND | 1.2 | 2.06E-10 | 2.7 |
| mAb10984† | ND | 1.0 | 5.86E-10 | 1.3 |
| mAb10986† | ND | 1.0 | NC | 1.4 |
| mAb10964† | ND | 1.2 | 1.11E-10 | 1.8 |
| mAb10977† | ND | 1.3 | NC | 4.1 |
| mAb10933† | ND | 1.1 | 6.47E-10 | 2.9 |
| mAb10987† | ND | 1.0 | 4.71E-10 | 4.5 |
| mAb10989† | ND | 1.1 | 6.23E-10 | 6.5 |
| mAb1932 - 음성 대조군 | ND | 1.2 | ND | 1.2 |
| mAb2959 - 양성 대조군 | 1.42E-10 | 23.5 | 5.18E-11 | 27.0 |
†미국 특허 제10,787,501호에 기술된 항체
NC: 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음.
ND: 농도 의존적 반응이 관찰되지 않았으므로 결정되지 않음
배수 유도 = 각 항체의 시험된 용량 범위 내의 최대 평균 RLU / 평균 RLU (배경 신호 = 항체 없음)
새롭게 정제된 항체에 대한 후속 라운드의 시험도 수행하였다. EC50 값 및 배수 유도가 표 27에 요약되어 있다.
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 표적 세포를 이용한 결과
새롭게 정제된 항-SARS-CoV-2-S 항체 각각은 음성 대조군 항체보다 더 큰 배수 유도를 나타냈다. SARS-CoV-2 스파이크 항체의 EC50 값은 81.7 pM 내지 905 pM의 범위였고, 배수 유도 값은 4.2x 내지 13.0x의 범위였다. 양성 CD20 대조군 항체는 74.4 pM의 EC50 값으로 46.7x의 배수 유도를 나타냈다.
Jurkat/hCD20 표적 세포를 이용한 결과
새롭게 정제된 모든 SARS-CoV-2-S 항체는 음성 대조군 항체와 유사하게 작용하여, 최소 활성을 보였다. 대조적으로, 양성 CD20 대조군 항체는 145 pM의 EC50 값으로 62.1x의 배수 유도 값을 나타냈다.
| mAb # 또는 명칭 | Jurkat CD20 | Jurkat/CD20/스파이크 | ||
| EC50 (M) | 배수 유도 | EC50 (M) | 배수 유도 | |
| mAb15156 | ND | 1.1 | 3.47E-10 | 4.2 |
| mAb15157 | ND | 1.3 | 3.98E-10 | 4.8 |
| mAb15158 | ND | 1.2 | 3.81E-10 | 7.0 |
| mAb15159 | ND | 1.0 | 4.17E-10 | 5.0 |
| mAb15160 | ND | 1.2 | 2.98E-10 | 5.4 |
| mAb15161 | ND | 1.2 | 4.94E-10 | 5.9 |
| mAb15162 | ND | 1.1 | 9.05E-10 | 5.8 |
| mAb15163 | ND | 1.1 | 3.42E-10* | 8.2 |
| mAb15164 | ND | 1.2 | 2.23E-10* | 12.7 |
| mAb15165 | ND | 1.1 | 2.01E-10 | 13.0 |
| mAb15166 | ND | 1.1 | 8.17E-11 | 9.5 |
| mAb15167 | ND | 1.0 | 1.11E-10 | 7.3 |
| mAb15170 | ND | 1.0 | 6.26E-10 | 5.4 |
| mAb15150 | ND | 1.1 | 4.59E-10 | 5.2 |
| mAb15151 | ND | 1.4 | 3.51E-10 | 6.0 |
| mAb14255§ | ND | 1.1 | 1.37E-10 | 8.6 |
| mAb14256§ | ND | 1.0 | 2.63E-10 | 3.7 |
| mAb14315§ | ND | 1.0 | 9.96E-11* | 11.5 |
| mAb10985† | ND | 1.1 | 4.72E-10 | 3.7 |
| mAb10933† | ND | 1.0 | 8.76E-11 | 7.7 |
| mAb10987† | ND | 1.0 | 7.20E-11 | 10.2 |
| mAb1932 - 음성 대조군 |
ND | 1.2 | ND | 3.7 |
| mAb2959 - 양성 대조군 |
1.45E-10 | 62.1 | 7.44E-11 | 46.7 |
†미국 특허 제10,787,501호에 기술된 항체
§표 25 및/또는 표 26에 기술된 항체
* 고농도에서는 신호가 감소하였다(후크 효과); EC50 결정 전에 후크 상의 지점을 제거하였다
ND: 농도 의존적 반응이 관찰되지 않았으므로 결정되지 않음
배수 유도 = 각 항체의 시험된 용량 범위 내의 최대 평균 RLU / 평균 RLU (배경 신호 = 항체 없음)
예 9: ADCP 검정에서 항-SARS-CoV-2-S mAb의 특성 분석
SARS-CoV-2 전장 스파이크 단백질을 발현하도록 조작된 Jurkat 세포의 식균작용을 유도하는 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질을 표적으로 하는 항체의 능력을 평가하였다. 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF)의 존재 하에 단핵구로부터 분화된 대식세포를 항체 의존성 세포 식균작용(ADCP) 검정에서 효과기 세포로서 사용하였다. 음성 대조군으로서 IgG1 이소형을 병행하여 평가하였다. 식균작용은 Opera Phenix High-Content Screening System을 사용하여 형광 표지된 대식세포와 공동 국소화되는 형광 표지된 표적 세포의 수를 측정하여 평가하였다.
표적 세포
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크: Jurkat T 세포를 전장 인간 CD20(NCBI 수탁 번호 NP_690605.1의 아미노산 M1-P297)뿐만 아니라 전장 SARS-CoV-2 스파이크 단백질(NCBI 수탁 번호 YP_009724390.1의 아미노산 M1-T1273)을 구성적으로 발현하도록 조작하였다. Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 세포를 스파이크 단백질의 높은 발현에 대해 분류하고 RPMI + 10% FBS + P/S/G + 1 μg/ml 퓨로마이신 + 250 μg/ml 하이그로마이신 성장 배지에서 유지했다.
효과기 세포
M-CSF의 존재 하에 단핵구로부터 분화된 대식세포: 동결된 CD14+ 단핵구(Lonza)를 해동하고, 100 ng/ml M-CSF가 보충된, 분석 배지(10% FBS, 100 U/ml 페니실린, 100 μg/ml 스트렙토마이신, 및 292 μg/ml L-글루타민, NaPyr, HEPES, 및 NEAA가 보충된 RPMI 1640)에 재현탁하고, 5.2 x 104 세포/웰로 9일에 걸쳐 대식세포로의 분화를 위해 투명한 바닥의 콜라겐 코팅된 96-웰 블랙 플레이트에 도말하였다.
검정 설정
실험 1일 전에, Jurkat 표적 세포를 각각의 성장 배지에서 5 x 105 세포/ml로 분할하였다.
실험 당일에, 표적 세포 및 단핵구 유래 대식세포를 CellTrace CFSE 염료 또는 CellTrace Violet 염료가 보충된 PBS에서 각각 37°C, 5% CO2에서 15분 동안 인큐베이션하였다.
CFSE-표지된 표적 세포를 세척하고 분석 배지(10% FBS, 100 U/ml 페니실린, 100 μg/ml 스트렙토마이신, 및 292 μg/ml L-글루타민, NaPyr, HEPES, NEAA, 및 10 μM BME가 보충된 RPMI 1640)에 재현탁하고, 5 x 104 세포/웰의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트에 2회 첨가하였다. 항-SARS-CoV-2 스파이크 및 IgG1 대조군 항체를 51 fM 내지 20 nM의 최종 농도 범위의 1:5 연속 희석물로 분석 배지에서 적정하고 플레이트에 첨가하였다. 제로 항체 지점은 GraphPad Prism에서 10 fM으로 표시하였다.
얼음 상에서 15분 동안 인큐베이션한 후, 적정된 항체가 있거나 없는 표적 세포의 혼합물을 보라색 표지된 대식세포가 담긴 플레이트로 옮기고, 플레이트를 37°C, 5% CO2에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 웰을 PBS로 3회 세척한 다음, 2.5 μM DRAQ5가 보충된 PBS 중에 4.21% 포름알데히드를 첨가하였다.
20분 인큐베이션 후, 웰을 PBS로 세척하고, Opera Phenix High-Content Screening System을 사용하여 488 nm(CFSE-표지된 표적 세포) 및 375 nm(보라색-표지된 대식세포) 여기 채널 모두에서 영상화하였다. 영상 분석은 Harmony 소프트웨어에서 수행하였다. 375 nm 여기 채널에서의 이미지 분할을 사용하여 대식세포 모집단을 식별하였다. 488 nm 여기 채널에서의 이미지 분할을 사용하여 표적 세포를 식별하였다. 식균작용은 내부에 표적 세포를 함유하는 대식세포 집단을 식별함으로써 정량화하였다.
식균작용을 겪는 대식세포의 수를 총 대식세포 세포 수와 비교하여 식균작용 백분율을 계산하였다.
EC50 결정을 위해, % ADCP는 항체가 없는 대조군을 포함하여, GraphPad Prism을 이용해 10-점 용량 반응 곡선에 대한 4-파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 분석하였다. 최대(Max) % ADCP는 시험된 용량 범위 내에서 측정된 최고 평균 % ADCP 값으로서 결정하였다. 실험은 복제 없이 수행된 다음의 항체를 제외하고, 단일 공여자를 사용하여 2회 수행하였다: mAb10933, mAb10987, mAb10989, mAb1932, mAb10985, mAb14234, mAb10986, 및 mAb14259.
EC50 값 및 최대(Max) % ADCP가 표 28에 요약되어 있다.
Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 스파이크 세포를 사용한 결과: 21개의 항-SARS-CoV-2 스파이크 항체 각각은 IgG1 대조군 항체와 비교하여 더 큰 최대 % ADCP를 나타냈다. SARS-CoV-2 스파이크 항체의 EC50 값은 5.22 pM 내지 1.12 nM의 범위였고, 최대 % ADCP는 16.72% 내지 39.89%의 범위였다.
| ADCP | ||
| 항체 처리 | 최대 % ADCP | EC50 [M] |
| mAb10933† | 33.12 | 3.88E-11 |
| mAb10987† | 36.30 | 3.19E-11 |
| mAb10989† | 33.02 | 4.82E-11 |
| mAb1932 | 7.69 | ND |
| mAb10985† | 31.80 | 2.17E-10 |
| mAb14234 | 32.84 | 7.27E-11 |
| mAb14249 | 32.60 | 1.69E-10 |
| mAb14255 | 21.17 | 1.73E-11 |
| mAb14256 | 19.50 | NC |
| mAb14287 | 33.24 | NC |
| mAb14288 | 25.86 | 6.14E-10 |
| mAb14290 | 16.72 | NC |
| mAb14291 | 32.85 | 4.12E-10 |
| mAb14295 | 35.30 | 4.57E-10 |
| mAb14296 | 31.60 | 5.07E-10 |
| mAb14312 | 27.77 | 1.69E-11 |
| mAb14314 | 16.72 | 1.12E-09 |
| mAb14315 | 34.80 | 6.30E-11 |
| mAb14316 | 37.72 | 2.54E-10 |
| mAb10964† | 34.03 | 5.22E-12 |
| mAb10986† | 39.89 | 7.13E-11 |
| mAb14259 | 39.56 | NC |
†미국 특허 제10,787,501호에 기술된 항체
ND: 농도 의존적 반응이 관찰되지 않았으므로 결정되지 않음.
NC: 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음.
최대(%ADCP)는 시험된 용량 범위 내의 최고 평균 %ADCP 값이다.
예 10: 항체-결합 스파이크 단백질 및 상호작용의 구조 결정
스파이크 단백질 RBD에 대한 mAb10987 및 mAb14256의 결합을 더 잘 이해하기 위해, 동결 전자 현미경(cryoEM)을 통해 구조 분석을 수행하였다. mAb14256 및 mAb10987의 Fab 단편을 FabALACTICA 키트(Genovis)를 사용하여 단리하였다. 25 μg의 mAb14256 Fab 및 25 μg의 mAb10987 Fab를 15 μg의 SARS-CoV-2-S RBD와 혼합하고 얼음 위에서 30분 동안 인큐베이션하였다. cryoEM 그리드 준비를 위해, 단백질 샘플을 0.94 mg/mL로 희석하고, 0.15% PMAL-C8 앰피폴을 첨가하였다. 3 μL의 단백질을 신선 혈장 세정된 UltrAufoil 그리드(0.6/1.0, 300 메쉬)에 증착하였다. 여과지를 사용하여 과량의 용액을 닦아내고, Vitrobot Mark IV를 사용하여 액체 에탄으로 동결시켰다. cryoEM 그리드를 K3 검출기(Gatan)가 구비된 Titan Krios(Thermo Fisher)로 옮겼다. 0.86 Å의 픽셀 크기에 대응하는 105,000x 배율로 EPU(Thermo Fisher)를 사용하여 동영상을 수집하였다. 초당 픽셀당 15 전자의 선량률을 사용하였고, 각 동영상은 2초로, Å2당 약 40 전자의 총 선량에 해당하였다.
모든 cryoEM 데이터 처리는 cryoSPARC v3.2.0을 사용하여 수행하였다. 6,106개의 정렬된 현미경 사진을 수집하고, 5,735개의 정렬된 현미경 사진을 추정된 디포커스 값 및 CTF 피팅 해상도에 기초하여 추가 처리를 위해 선택하였다. 블롭 피커를 사용하여 추출된 입자의 초기 세트를 2D 분류에 적용하여 템플릿 추출을 위한 템플릿을 생성하였다. 템플릿 추출에 의해 추출된 ~140만 개의 입자를 2D로 여러 차례 분류하여 미결합 Fab 및 불완전한 복합체를 함유하는 입자를 제거하였다. 3개의 부류를 갖는 Ab initio 재구성은 전체 mAb10987 Fab - mAb14256 Fab - RBD 복합체에 상응하는 301,461개의 입자를 함유하는 2개의 부류를 생성하였다. 한 부류가 양호한 품질 맵을 나타내는 반면 다른 부류는 높은 바람직한 배향을 나타내는 이들 두 부류의 이종 정제를 수행하였다. 189,200개의 입자를 함유하는 '양호한' 부류의 입자의 불균일한 정제에 이어서 국부적인 정제를 수행하여, 모델 구축에 사용된 3.86 Å 해상도(FSC=0.143) 맵을 생성하였다. 이 맵에, RBD 모델(PDB 코드 6M0J로부터 취한)을 수동으로 배치하고, 2개의 Fab(이전 항체 구조로부터 취함, PDB 6XDG로부터 취한 mAb10987, 및 다른 mAb14256 모델에서 취한 mAb14256)를 수동으로 배치하였다6XDG. 그런 다음, 이들 모델을 Coot 및 Phenix를 사용하여 맵에 대해 정제된 실제 공간을 사용하여 수동으로 재구성하였다.
위에서 설명한 데이터를 확인하면, mAb14256 및 mAb10987의 Fab 단편에 결합된 SARS-CoV-2 스파이크 RBD의 복합체의 단일 입자 cryoEM은 이 칵테일 내의 2개의 항체가 RBD의 구별되는 영역에 동시에 결합할 수 있음을 보여준다(도 3, 도 4). 3.9 Å의 공칭 해상도를 갖는 복합체의 3D 재구성 맵은, 두 Fab 단편이 RBD의 표면 상의 중첩되지 않는 영역에 결합하였음을 보여주었고, 이는 이들이 경쟁하지 않는 항체임을 확인하였다. mAb14256은 RBD의 상단에 결합하였고, ACE2에 대한 결합 부위와 광범위하게 중첩되었다. 한편, mAb10987에 대한 에피토프는 mAb14256 에피토프로부터 매우 멀리 떨어진 RBD의 측면에 위치하였고, ACE2 결합 부위와 거의 중첩되지 않거나 전혀 중첩되지 않았다. 상기 구조는 또한 mAb14256이 mAb10933 및 mAb10985와 경쟁하였지만, 이들 항체의 조합이 상이한 마이크로에피토프 결합 및 상이한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 변이체에 결합하고 중화시킬 필요성으로 인해 여전히 바람직할 수 있음을 보여주었다.
유사한 기술을 사용하여, SARS-CoV-2 RBD에 결합하는 mAb15160에 대한 구조적 근거를 조사하였다. Cryo-EM을 사용하여 mAb15160 및 mAb14315의 항원 결합(Fab) 단편과 복합체를 이루는 SARS-CoV-2 RBD의 구조를 결정하였다. 생성된 3.18 Å-해상도 구조는 mAb15160이 SARS-CoV-2 RBD의 상단(즉, 표적 세포막에 가장 가까운) 표면 상의 작은 에피토프에 결합한다는 것을 보여주었다(도 5). SARS-CoV-2 RBD와 항체 Fab 단편 사이의 결합 인터페이스를 분석한 결과, mAb15160 Fab가 중쇄(13 잔기-잔기 상호작용) 및 경쇄(13 잔기-잔기 상호작용) 둘 모두와 RBD와 접촉함을 나타낸다. 총 13개의 SARS-CoV-2 RBD 잔기가 mAb15160 결합에 관여한다. 결합 에피토프 내의 다른 치환뿐만 아니라 오미크론 변이에 존재하는 K417N, E484A, 및 Q493R의 기능적 영향을 위에서 논의된 중화 연구에서 평가하였다. mAb15160은 K417N 및 E484A 개별 돌연변이에 대해 중화 효능을 유지하였다. Q493R 개별 돌연변이에 대한 중화 효능에 영향이 있었지만(기준 유사입자와 비교하여 5배 감소); mAb15160의 중화 효능은 기준 유사입자와 비교하여 BA.1, BA.1.1, 및 BA.2(오미크론) 계통의 전체 S 단백질 서열로 위형화된 유사입자에 대해 1.5배 이내였다.
유사한 기술을 사용하여, SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 및 BA.1(오미론 계통) RBD에 결합하는 mAb14284의 구조적 기초를 조사하였다. Cryo-EM을 사용하여 Wuhan-Hu-1 균주 및 BA.1 계통의 RBD와 함께 mAb14284 및 mAb15160의 항원 결합(Fab) 단편의 구조를 결정하였다. 생성된 3.3 및 3.4 Å-해상도 구조 각각은 mAb14284가 ACE2 결합과 경쟁하는 방식으로 Wu-1 및 BA.1 RBD 둘 다 상의 상부 패치에 결합한다는 것을 보여주었다(도 6). mAb14284 Fab 단편과 Wu-1 및 BA.1로부터의 SARS-CoV-2 RBD 사이의 결합 인터페이스 분석에 따르면 mAb14284가 Wu-1 및 BA.1 RBD 상의 동일한 위치에 결합하고, 주변부에 위치한 4개의 변화를 제외하고는 동일한 에피토프 잔기가 있음을 나타낸다(하기 표 29). 조상 Wu-1 균주에 비해 BA.1 변이체(N440K, G446S, Q498R, N501Y)에서 돌연변이된 에피토프 잔기는 항체-항원 계면에서 주요 변화 없이 구조에 수용된다.
| 상호작용 유형 | Wuhan-Hu-1 RBD 잔기 | 표시된 RBD 잔기와 상호작용하는 mAb14284 잔기(들) | BA.1 RBD 잔기 | 표시된 RBD 잔기와 상호작용하는 mAb14284 잔기(들) | ||
| 중쇄 | 경쇄 | 중쇄 | 경쇄 | |||
| 수소 결합/염 브릿지 (<4 Å) | Asn439 | - | Tyr34 | - | - | - |
| Lys444 | Trp55, Asp56 | - | Lys444 | Trp55 | - | |
| Val445 | Arg60 | - | - | - | - | |
| Gly447 | Arg60 | - | Gly447 | Arg60 | - | |
| Gln498* | - | Thr95 | Arg498* | - | Thr95 | |
| - | - | - | Thr500 | - | Val31 | |
| 소수성 (<5 Å) | Asn440* | Ile102, Pro103 | - | Lys440* | Ile102, Pro103 | - |
| Leu441 | Ser32, Gly33 | - | Leu441 | Ser32 | - | |
| Ser443 | Ile102 | - | Ser443 | Ile102 | - | |
| Lys444 | Tyr54, Trp55, Asp56, Asp58, Arg60, Ile102 | - | Lys444 | Tyr54, Trp55, Asp58, Ile102 | - | |
| Val445 | Trp49, Leu52, Tyr54, Arg60, His100 | Tyr93, Ser97, Thr98 | Val445 | Trp49, Leu52, Tyr54, Arg60, His100 | Tyr93, Ser97, Thr98 | |
| Gly446* | Arg60 | Ser96 | Ser446* | Arg60 | Ser96 | |
| Gly447 | Arg60 | - | Gly447 | Arg60 | - | |
| - | - | - | Tyr449 | Arg60 | - | |
| Gln498* | - | Thr95 | Arg498* | - | Thr95 | |
| Pro499 | Ile102 | Tyr34,Tyr93 | Pro499 | Ile102 | Tyr34,Tyr93 | |
| Thr500 | - | Leu29, Gly30, Tyr93, Thr94 | Thr500 | - | Leu29, Thr94, Thr95 | |
| Asn501* | - | Val31 | Tyr501* | - | Val31 | |
| Gly502 | - | Val31 | Gly502 | - | Val31 | |
mAb14284 Fab 중쇄 및 경쇄 잔기와 상호작용하는 SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 및 BA.1 S 단백질 RBD 잔기가 표시됨. 하이픈 "-"는 표시된 RBD 잔기와 표시된 항체 사슬 간에 상호작용이 관찰되지 않았음을 나타냄. 잔기는 원자간 거리가 <4 Å(수소 원자를 포함하지 않음)인 수소 결합/염 브리지 또는 원자간 거리가 <5 Å인 소수성 표면의 존재에 기초하여 선택되었다. 별표 "*"는 BA(오미크론) 계통에서 돌연변이된 RBD 잔기를 나타냄.
현재 돌고 있는 SARS-CoV-2 바이러스에 대해 mAb14284 에피토프의 가변성 정도를 평가하기 위해, 2022년 1월 1일부터 2022년 6월 16일 사이에(즉, 오미크론 파동 동안) 확인된 공개적으로 이용 가능한 SARS-CoV-2 게놈 3,825,870개의 서열을 사용하였다. 이 기간 동안 수집된 서열은 대부분 오미크론 서열로 구성될 수 있지만, 델타와 같은 다른 돌고 있는 변이체도 이 분석에 포함될 수 있다.
2022년 1월 1일부터 2022년 6월 16일 사이에, mAb14284에 의해 결합된 RBD 잔기는 오미크론 변이(즉, BA 계통)에서 돌연변이된 4개의 잔기인 N440, G446, Q498, 및 N501을 제외하고, 각 위치에서 Wuhan-Hu-1 균주에 비해 ≥99.96% 보존되었다(표 30). 이 모니터링 기간에 걸쳐 N440, G446, Q498, 및 N501의 빈도는 각각 22, 59, 13, 및 12%였고; 대신에, 모두 오미크론 변이에 존재하는 N440K, Q498R, 및 N501Y가 우세해졌다. G446이 이 기간 동안 우세한 잔기로 남아 있지만, 서열의 39%는 오미크론 변이의 BA.1 계통에 존재하는 G446S 돌연변이를 함유한다
N440K, G446S, Q498R, 및 N501Y 뿐만 아니라 보존 분석 동안 식별된 결합 에피토프 내의 다른 치환(아래 표 30에 명시됨)의 기능적 영향을 예 4에서 논의된 바와 같이 중화 연구에서 평가하였다. mAb14284는 K444의 돌연변이를 제외하고 시험된 모든 에피토프 잔기 변이체에 대해 중화 효능을 유지하였다. K444L, K444M, K444N, K444Q, 및 K444T 개별 치환은 기준 유사입자와 비교하여 >5배의 변화를 가져왔지만; mAb14284의 중화 효능은 가장 우세한(즉, 0.0141%) K444 변이체 K444R로 위형화된 유사입자에 대해 1.5배 이내였다 (표 19).
| RBD에서의 AA 위치 |
기준 서열
(Wuhan-Hu-1) |
에피토프 변이체에 대해 관찰된 빈도 순서
(높음에서 낮음) |
||||
| 제1 | 제2 | |||||
| 잔기 | 빈도 (%) | 잔기 | 빈도 (%) | 잔기 | 빈도 (%) | |
| 440 | N | 22.3472 | K | 78.1540 | del | 0.0026 |
| 441 | L | 99.9942 | del | 0.0025 | F | 0.0016 |
| 443 | S | 99.9964 | del | 0.0024 | N | 0.0002 |
| 444 | K | 99.9699 | R | 0.0141 | N | 0.0095 |
| 445 | V | 99.9834 | A | 0.0082 | I | 0.0033 |
| 446 | G | 58.9933 | S | 38.6232 | V | 0.0133 |
| 447 | G | 99.9948 | del | 0.0033 | S | 0.0005 |
| 449 | Y | 99.9643 | H | 0.0199 | N | 0.0137 |
| 498 | Q | 12.7255 | R | 87.5676 | L | 0.0115 |
| 499 | P | 99.9840 | del | 0.0095 | R | 0.0025 |
| 500 | T | 99.9832 | del | 0.0097 | S | 0.0031 |
| 501 | N | 12.3329 | Y | 87.9706 | del | 0.0101 |
| 502 | G | 99.9853 | del | 0.0104 | L | 0.0007 |
2022년 1월 1일부터 2022년 6월 16일까지 식별된 공개적으로 이용 가능한 SARS-CoV-2 게놈 총 3,825,870개의 서열을 기준(Wuhan-Hu-1) SARS-CoV-2 게놈에 대해 분석하였다. 이 기간 동안 수집된 데이터는 대부분 오미크론 서열을 반영할 가능성이 있지만, 델타와 같은 다른 돌고 있는 변이체도 이 분석에 포함될 수 있다. (본원에 기술된 구조적 연구에 의해 결정된 바와 같은) mAb14284 에피토프 내의 변이체의 빈도(freq)를 계산하였다. 아미노산(AA) 위치는 SARS-CoV-2 S 단백질 RBD의 잔기를 나타낸다(표 29에 표시됨). 에피토프 내의 각각의 AA 위치에 대해, 기준 잔기 및 2개의 가장 빈번한 변이체 잔기의 빈도가 도시되어 있다. "Del"은 AA 위치에서의 결실을 나타낸다. 2022년 6월 16일까지 평가된 가장 우세한 돌고 있는 에피토프 잔기 변이체(N439K, N439V, N440D, N440K, L441F, L441Q, K444L, K444M, K444N, K444Q, K444R, K444T, V445A, V445T, G446D, G446R, G446S, G446V, G447V, N448S, Y449D, Y449F, Y449H, Y449N, Y449S, Q498H, Q498R, T500A, T500F, T500N, N501T, N501Y)의 기능적 영향을 표 19에 정리하였다.
예 11: mAb15160의 존재 시 시험관 내 VSV-SARS-CoV-2-S 바이러스 탈출 돌연변이체 선택
SARS-CoV-2 탈출 돌연변이체 선택을 평가하기 위해, Vero 세포를 복제 VSV-SARS-CoV-2-S(Wuhan-Hu-1 균주)로 감염시키고, 다양한 농도의 mAb15160 또는 IgG1 이소형 대조군과 함께 4일 동안 인큐베이션하였다. 바이러스 복제에 대한 판독으로서 바이러스 유도 세포병변 효과(CPE)에 대해 감염된 세포를 모니터링하였다. 항체의 농도가 증가하는 가운데 관찰 가능한 CPE에 의해 평가했을 때, 중화 효능의 상실은 탈출 돌연변이체의 잠재적 선택을 나타냈다. 바이러스를 함유하는 상청액을 mAb 농도가 가장 높고 관찰 가능한 CPE를 갖는 웰로부터 수집하고, 동일한 mAb가 있는 상태에서 추가로 계대배양했다. 계대배양 후, 바이러스를 함유하는 상청액을 RNA 서열 분석을 거쳤고, 아미노산 변화가 항-SARS-CoV-2 S 단백질 mAb-처리된 샘플에 존재하지만, 투입 바이러스(접종원) 및 대조군 샘플(IgG1 대조군 또는 무-mAb 대조군)에는 존재하지 않는 경우, S 단백질의 모든 아미노산 변화를 "추정 탈출 돌연변이"로 지정하였다.
≥90%의 CPE는 1차 계대 내에서 0.016 내지 50 μg/mL mAb15160의 존재 하에 관찰되었다. mAb15160으로 선별한 1차 계대 후 바이러스 게놈의 심층 시퀀싱을 통해 mAb15160-F486V 및 Y489H에 대한 SARS-CoV-2 RBD 결합 에피토프에서 2개의 추정 탈출 돌연변이를 식별하였다. 주목할 만한 점은, 이들 개별 돌연변이 중 어느 것도 현저한 오미크론 및 델타 변이체 또는 임의의 다른 이전의 우려 변이체에서 발견되지 않으며, 이는 이들 돌연변이에 대한 현재의 임상적 우려가 없음을 나타낸다.
mAb15160 활성에 대한 각각의 추정 탈출 돌연변이체의 기능적 영향을 전술한 바와 같이, 중화 검정에서 평가하였다. F486V 및 Y489H는 기준 유사입자와 비교하여 mAb15160의 중화 활성을 각각 >531배 및 122배 감소시켰으며, 이는 F486V 및 Y489H가 mAb15160의 탈출 돌연변이임을 확인하였다.
예 12: mAb15160의 시험관 내 효과기 기능 활성
전장 (FL) SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하도록 조작된 형광 표지된 표적 세포(Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL)의 항체 의존성 세포 식균작용(ADCP)을 매개하는 mAb15160의 능력을 대식세포 콜로니 자극 인자(MCSF)로 분화된 2명의 독립적인 공여자로부터의 형광 표지된 1차 MDM 효과기 세포의 존재 하에 평가하였다. 결과는 mAb15160이 피코몰 범위의 EC50 값으로 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 세포의 농도 의존적 ADCP를 매개한 반면(표 31), SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하지 않은 모 세포에서는 ADCP가 관찰되지 않았음을 입증하였다. IgG1 이소형 대조군은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 또는 Jurkat/hCD20 세포주의 ADCP를 매개하지 않은 반면, 항-CD20 IgG1 대조군은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 및 Jurkat/hCD20 세포주 모두의 ADCP를 매개하였는데, 이는 검정에 사용된 효과기 세포가 시험된 세포주 각각을 식균작용하는 능력을 입증한다.
| mAb(들) | MDM 공여자 #1 | MDM 공여자 #2 | ||||||
|
Jurkat/hCD20/
SARS-CoV-2 S FL |
Jurkat/hCD20 |
Jurkat/hCD20/
SARS-CoV-2 S FL |
Jurkat/hCD20 | |||||
| EC 50 (M) | 최대 ADCP a (%) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a (%) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a (%) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a (%) | |
| mAb15160 | 7.81E-11 | 27.5 | ND | 14.7 | 4.76E-11 | 31.1 | ND | 11.1 |
| mAb10933 (카시리비맙) | 9.70E-12 | 28.3 | ND | 14.0 | 2.23E-11 | 28.6 | ND | 11.5 |
| mAb10987 (임데비맙) | 2.91E-11 | 32.3 | ND | 14.8 | 1.98E-11 | 30.4 | ND | 10.7 |
| 카시리비맙+임데비맙 | 1.20E-10 | 49.5 | ND | 15.5 | 5.78E-11 | 48.2 | ND | 15.1 |
| IgG1 이소형 대조군 | ND | 13.1 | ND | 16.9 | ND | 9.6 | ND | 14.6 |
| 항-CD20 IgG1 | 1.01E-09 | 31.1 | 7.75E-10 | 45.4 | 1.49E-10 | 30.3 | 4.67E-10 | 45.2 |
a 최대(max) ADCP는 시험된 농도 범위(0 nM 내지 20nM, 여기서 0nM은 항체가 없는 대조군임) 내에서 관찰된 최고 평균 백분율 ADCP 값으로 정의된다.
ND, 농도 의존적 증가가 관찰되지 않았으므로 결정되지 않음
mAb15160을 3명의 독립적인 공여자의 인간 1차 자연 살해 (NK) 세포를 효과기 세포로서 사용하여 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 및 Jurkat/hCD20 표적 세포에 대한 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 결과는 mAb15160이 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 표적 세포에 대해 ADCC를 매개하지만 SARS-CoV-2 음성 모 세포는 매개하지 않음을 보여주며, 각 NK 기증자(기증자 #3 > 기증자 #2; 기증자 #1은 활성을 나타내지 않았다(표 32). IgG1 대조군은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 또는 Jurkat/hCD20 세포주의 ADCC를 매개하지 않은 반면, 양성 대조군인 항-CD20 IgG1은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 및 Jurkat/hCD20 세포주 모두의 ADCC를 매개하였는데, 이는 각각의 시험된 세포주에 대한 분석에 사용된 모든 NK 세포의 세포독성 가능성을 입증한다.
| mAb(들) | NK 공여자 #1 | NK 공여자 #2 | NK 공여자 #3 | |||||||||
| Jurkat/hCD20/ SARS-CoV-2 S FL | Jurkat/hCD20 | Jurkat/hCD20/ SARS-CoV-2 S FL | Jurkat/hCD20 | Jurkat/hCD20/ SARS-CoV-2 S FL | Jurkat/hCD20 | |||||||
| EC 50 (M) | 최대 세포독성 a ( %) | EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
( %) |
EC 50 (M) | 최대 세포독성 a ( %) | EC 50 (M) | 최대 세포독성 a ( %) | EC 50 (M) | 최대 세포독성 a ( %) | EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
( %) |
|
| mAb15160 | ND | 1.8 | NC | 4.6 | NC | 6.3 | ND | 3.1 | 6.32E-11 | 12.9 | ND | 0.0 |
| mAb10933 (카시리비맙) | ND | 1.4 | NC | 4.7 | NC | 5.0 | NC | 3.6 | 4.89E-11 | 11.1 | ND | 1.2 |
| mAb10987 (임데비맙) | 7.42E-10 | 8.1 | NC | 3.9 | 5.05E-09 | 10.5 | ND | 1.9 | 6.44E-11 | 26.6 | ND | 1.3 |
| 카시리비맙+임데비맙 | ND | 1.6 | ND | 0.8 | NC | 4.1 | ND | 4.8 | 3.60E-11 | 15.4 | ND | 0.0 |
| IgG1 이소형 대조군 | ND | 1.8 | ND | 0.7 | ND | 0.0 | NC | 6.4 | ND | 0.0 | ND | 0.5 |
| 항-CD20 IgG1 | 2.63E-12 | 20.0 | 3.03E-12 | 21.0 | 8.19E-12 | 15.1 | 8.08E-13 | 26.8 | 3.53E-14 | 14.5 | NC | 37.7 |
a 최대(max) 세포독성은 시험된 농도 범위 내에서 관찰된 최고 평균 백분율 세포독성 값으로 정의된다
NC, 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음; ND, 농도 의존적 증가가 관찰되지 않았기 때문에 결정되지 않음.
mAb15160은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 표적 세포가 존재하는 가운데 활성화된 T 세포-루시퍼라아제 리포터 유전자의 핵 인자(NFAT-Luc) 및 인간 FCGR3A(Jurkat/NFAT-Luc/FCGR3A)를 발현하도록 조작된 Jurkat T 세포를 사용하여 대리 ADCC 리포터 생물검정에서 FCGR3A 신호 전달의 활성화를 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 표적 세포에 결합된 인간 IgG1 항체의 Fc 도메인을 통한 FCGR3A의 관여는 NFAT의 활성화를 유도하고 루시페라아제의 발현을 유도하며, 이어서 발광 판독을 통해 측정된다. 1차 NK 세포를 사용한 ADCC 분석의 결과와 일치하게, ADCC 대리 리포터 분석의 결과는 2.97x10-10 M의 EC50인 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 표적 세포의 존재 시에 FCGR3A를 발현하는 리포터 세포로부터 루시페라아제 활성의 농도 의존적 증가를 mAb15160이 매개한다는 것을 입증한다. IgG1 음성 대조군은 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 또는 Jurkat/hCD20 세포주의 존재 시에 FCGR3A를 활성화시키지 않았다.
mAb15160을 5% 풀링된(즉, 여러 공여자로부터의) NHS의 존재 시에 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 및 Jurkat/hCD20 표적 세포에 대한 CDC를 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 결과는 0.95 pM 내지 1 μM 범위의 항체 농도에서 5% NHS의 존재 시에 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 S FL 또는 Jurkat/hCD20 세포에 대한 CDC를 mAb15160이 매개하지 않음을 입증한다. 검정에 사용된 NHS를, 양성 대조군인 항-CD20 IgG1을 사용하여, CDC를 매개하는 능력에 대해 동일한 표적 세포주에서 평가하였다. NHS가 존재할 때, 항-CD20 IgG1은 표적 세포주에 대해 CDC를 농도 의존적 방식으로 매개하였다. NHS가 없을 때, 항-CD20 IgG1은 시험된 모든 표적 세포주에 대해서 용해를 매개하지 않았다.
예 13: mAb14284의 존재 시에 시험관 내 VSV-SARS-CoV-2-S 바이러스 탈출 돌연변이체 선택
SARS-CoV-2 탈출 돌연변이체 선택을 평가하기 위해, Vero 세포를 복제 위형화 VSV-SARS-CoV-2-S(Wuhan-Hu-1 균주)로 감염시키고, 다양한 농도의 mAb14284 또는 IgG1 이소형 대조군과 함께 4일 동안 인큐베이션하였다. 바이러스 복제에 대한 판독으로서 바이러스 유도 세포병변 효과(CPE)에 대해 감염된 세포를 모니터링하였다. 항체의 농도가 증가하는 가운데 관찰 가능한 CPE에 의해 평가했을 때, 중화 효능의 상실은 탈출 돌연변이체의 잠재적 선택을 나타냈다. 바이러스를 함유하는 상청액을 mAb 농도가 가장 높고 관찰 가능한 CPE를 갖는 웰로부터 수집하고, 동일한 mAb가 있는 상태에서 추가로 계대배양했다. 계대배양 후, 바이러스를 함유하는 상청액을 RNA 서열 분석을 거쳤고, 아미노산 변화가 mAb14284-처리된 샘플에 존재하지만, IgG1 대조군 샘플에는 존재하지 않는 경우, S 단백질의 모든 아미노산 변화를 "추정 탈출 돌연변이"로 지정하였다.
≥90%의 CPE는 1차 계대 내에서 0.016 내지 50 μg/mL mAb14284의 존재 하에 관찰되었다 (표 33). mAb14284으로 선별한 1차 계대 후 바이러스 게놈의 심층 시퀀싱을 통해 REGN14284―K444E, K444N 및 V445D에 대한 SARS-CoV-2 RBD 결합 에피토프에서 3개의 추정 탈출 돌연변이를 식별하였다 (표 34).
mAb14284 활성에 대한 추정 탈출 돌연변이체, K444N의 기능적 영향을 예 4에서 논의한 바와 같이, 중화 검정에서 평가하였다. K444N 변이체는 기준 유사입자와 비교하여 mAb14284 중화 활성의 완전한 상실을 가져왔고(표 19), 이는 K444N이 mAb14284의 탈출 돌연변이임을 확인시켜 준다.
K444E 및 V445D의 기능적 분석이 진행 중이다. 그러나, K444L, K444M, K444N, K444Q, K444T, V445A 및 V445T 돌연변이는 모두 mAb14284 중화 활성을 감소시키거나 완전히 상실시켰고; mAb14284 중화 활성을 K444R 돌연변이에 대해 유지시켰다(표 19).
| 항체 | CPE (%) | ||||||
| 50 μg/mL | 10 μg/mL | 2 μg/mL | 0.4 μg/mL | 0.08 μg/mL | 0.016 μg/mL | mAb 없음 | |
| 계대 1 | |||||||
| mAb14284 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 |
| IgG1 대조군 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 | ≥90 |
mAb14284 또는 IgG1 이소형 대조군 mAb가 존재하는 가운데, 4일 동안 다양한 농도(총 0.016 내지 50 μg/mL)의 VSV-SARS-CoV-2-S 바이러스로 Vero 세포를 감염시켰다. 바이러스 유도 CPE에 대한 모니터링을 통해 바이러스 복제에 대해 세포를 스크리닝하였다. 바이러스를 함유하는 상청액을 최고 항체 농도 및 검출 가능한 바이러스 복제(≥20% CPE)를 갖는 웰로부터 수집하였다. 추정 탈출 돌연변이의 정체를 결정하기 위해 바이러스 RNA의 심층 시퀀싱을 수행하였다. 무항체 대조군(0 μg/mL)을 시퀀싱하여 조직 배양 적응을 모니터링하였다. 굵은 밑줄 친 텍스트는 시퀀싱된 샘플을 나타낸다.
| 게놈 위치 | 4407 | 4409 | 4411 |
| 기준 뉴클레오티드 | A | G | T |
| 변이체 뉴클레오티드 | G | T | A |
| 유전자 위치 | 1330 | 1332 | 1334 |
| 돌연변이 성질 | nSNP | nSNP | nSNP |
| AA 위치 | 444 | 444 | 445 |
| 기준 AA | K | K | V |
| 변이체 AA | E | N | D |
| 접종물 | 0% | 0% | 0% |
| mAb14284 | 7% | 19% | 67% |
| IgG1 이소형 대조군 | 0% | 0% | 0% |
| 항체 없음 | 0% | 0% | 0% |
검출 가능한 CPE를 나타낸 가장 높은 mAb 농도를 갖는 웰로부터의 바이러스 RNA를 감염 후 4일차에 단리하였다. Wuhan-Hu-1 기준 서열에 비해 S 단백질 서열의 변화를 식별하기 위해 심층 시퀀싱을 수행하였다. RBD 변이체만이 이 표에 요약되어 있다.
예 14: mAb14284의 시험관 내 효과기 기능 활성
표적 세포에 결합된 IgG 항체는 대식세포 및 자연 살해(NK) 세포에서 발현된 특이적 FCGR과 상호작용하여 불변(Fc) 영역을 통해 이펙터 기능을 중재할 수 있으며, 이로 인해 항체 의존성 세포 식균작용(ADCP) 및 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)을 각각 유도하거나, 보체 단백질에 결합하여 보체 의존성 세포독성(CDC)을 유도하여, 표적 세포의 파괴를 초래할 수 있다.
일련의 시험관 내 연구를 수행하여 Wuhan-Hu-1 균주(AA 1-1273) 및 BA.1 및 BA.2 오크론 계통(AA 1-1270)으로부터 전장(FL) SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하는 표적 세포에 대해 ADCP, ADCC, 및 CDC를 매개하는 mAb14284의 능력을 평가하였다. 항-CD20 IgG1 양성 대조군 항체의 동시 시험을 가능하게 하기 위해, 표적 세포주를 또한 조작하여 인간 CD20(hCD20)을 안정적으로 발현시켰다.
구체적으로, mAb14284는 1) 효과기 세포로서 단핵구 유래 대식세포(MDM)를 사용하여 표적 세포의 ADCP를 매개하고; 2) 효과기 세포로서 일차 자연 살해(NK) 세포를 사용하여 표적 세포의 ADCC를 매개하고; 3) ADCC 대리 리포터 검정에서 FCGR3A 신호 전달을 활성화시키고; 4) 정상 인간 혈청(NHS)의 존재 시에 표적 세포의 CDC를 매개하는 능력에 대해 평가하였다.
FL Wu-1, BA.1 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 형광 표지된 Jurkat/hCD20 표적 세포의 ADCP를 매개하는 mAb14284의 능력은 대식세포 콜로니-자극 인자(MCSF)로 분화된 2명의 독립적인 공여자로부터의 형광 표지된 1차 MDM 효과기 세포의 존재 시에 평가하였다. mAb14284는 SARS-CoV-2 Wu-1, BA.1 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 Jurkat/hCD20 세포의 농도 의존적 ADCP를 피코몰 범위의 EC50 값을 가지고 매개하는(표 35) 반면, SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하지 않는 모 세포에서는 ADCP가 관찰되지 않았다. IgG1 이소형 대조군은 시험된 세포주 중 어느 하나의 ADCP를 매개하지 않은 반면, 항-CD20 IgG1 대조군은 시험된 모든 세포주의 ADCP를 매개하였는데, 이는 검정에 사용된 효과기 세포가 평가된 각 세포주를 식균작용하는 능력을 입증한다.
| mAb(들) | Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 Wu-1 S | Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.1 S | Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.2 S | Jurkat/hCD20 | ||||
| EC 50 (M) | 최대 ADCP a ( %) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a ( %) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a ( %) | EC 50 (M) | 최대 ADCP a ( %) | |
| MDM 공여자 #1 | ||||||||
| mAb14284 | NC | 38.6 | 3.11E-11 | 44 | 4.37E-11 | 46.5 | ND | 0 |
| IgG1 이소형 대조군 | 8.78E-11 | 45.5 | 7.97E-11 | 61.5 | 2.30E-10 | 37.4 | 1.77E-10 | 54.9 |
| 항-CD20 IgG1 | ND | 2 | ND | 4.4 | ND | 4.1 | ND | 4.5 |
| MDM 공여자 #2 | ||||||||
| mAb14284 | 1.64E-11 | 49.7 | 3.73E-11 | 60.9 | 8.74E-11 | 43.8 | ND | 0 |
| IgG1 이소형 대조군 | 8.10E-11 | 87.3 | 8.21E-11 | 80.4 | 2.23E-10 | 22.5 | 3.18E-10 | 37.9 |
| 항-CD20 IgG1 | ND | 7.4 | ND | 1.5 | ND | 0 | ND | 0 |
a 최대(max) ADCP는 시험된 농도 범위(0 nM 내지 20nM, 여기서 0nM은 항체가 없는 대조군임) 내에서 관찰된 최고 평균 백분율 ADCP 값으로 정의된다.
NC, 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음; ND, 농도 의존적 증가가 관찰되지 않았기 때문에 결정되지 않음
mAb14284는 3명의 공여자로부터 풀링된 인간 1차 NK 세포를 효과기 세포로서 사용하여 FL Wu-1, BA.1, 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 Jurkat/hCD20 표적 세포에 대한 ADCC를 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 결과는 mAb14284가 SARS-CoV-2 Wu-1, BA.1, 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 Jurkat/hCD20에 대해 농도 의존적 ADCC를 피코몰 범위의 EC50 값으로 매개하지만(표 36), SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하지 않는 모 세포에 대해서는 매개하지 않음을 입증한다. IgG1 대조군은 시험된 세포주 중 어느 하나에 대해서도 ADCC를 매개하지 않은 반면, 양성 대조군인 항-CD20 IgG1은 시험된 모든 세포주에 대해 ADCC를 매개하였는데, 이는 평가된 각 세포주에 대한 검정에 사용된 NK 세포의 세포독성 가능성을 입증한다.
| mAb(들) |
Jurkat/hCD20/
SARS-CoV-2 Wu-1 S |
Jurkat/hCD20/
SARS-CoV-2 BA.1 S |
Jurkat/hCD20/
SARS-CoV-2 BA.2 S |
Jurkat/hCD20 | ||||
| EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
(%) |
EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
(%) |
EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
(%) |
EC 50 (M) |
최대 세포독성
a
(%) |
|
| mAb14284 | 6.41E-12 | 7.9 | 2.64E-11 | 8.3 | 5.37E-12 | 8.3 | ND | 0.4 |
| IgG1 이소형 대조군 | ND | 0.6 | ND | 0.2 | ND | 0.6 | ND | 0.6 |
| 항-CD20 IgG1 | 5.83E-12 | 16.9 | 3.03E-12 | 18.8 | 1.49E-11 | 18.7 | 1.17E-11 | 15.1 |
a 최대(max) 세포독성은 시험된 농도 범위 내에서 관찰된 최고 평균 백분율 세포독성 값으로 정의된다
NC, 데이터가 4-파라미터 로지스틱 방정식에 적합하지 않았기 때문에 계산되지 않음; ND, 농도 의존적 증가가 관찰되지 않았기 때문에 결정되지 않음.
mAb14284은 Wu-1, BA.1 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 Jurkat/hCD20 표적 세포가 존재하는 가운데 활성화된 T 세포-루시퍼라아제 리포터 유전자의 핵 인자(NFAT-Luc) 및 인간 FCGR3A(Jurkat/NFAT-Luc/FCGR3A)를 발현하도록 조작된 Jurkat T 세포를 사용하여 대리 ADCC 리포터 생물검정에서 FCGR3A 신호 전달의 활성화를 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 표적 세포에 결합된 인간 IgG1 항체의 Fc 도메인을 통한 FCGR3A의 관여는 NFAT의 활성화를 유도하고 루시페라아제의 발현을 유도하며, 이어서 발광 판독을 통해 측정된다.
1차 NK 세포를 사용한 ADCC 분석의 결과와 일치하게, ADCC 대리 리포터 분석의 결과는 피코몰 EC50인 SARS-CoV-2 Wu-1, BA.1, 또는 BA.2 S 단백질 발현 표적 세포의 존재 시에 FCGR3A를 발현하는 리포터 세포로부터 루시페라아제 활성의 농도 의존적 증가를 mAb14284이 매개하지만 SARS-CoV-2 S 단백질을 발현하지 않는 모 세포에 대해서는 그렇지 않다. IgG1 음성 대조군은 평가된 임의의 세포주의 존재 하에 FCGR3A를 활성화시키지 않았다.
mAb14284를 5% 풀링된(즉, 여러 공여자로부터의) NHS의 존재 하에 Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 Wu-1 S, Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.1 S, Jurkat/hCD20/SARS-CoV-2 BA.2 S, 및 Jurkat/hCD20 표적 세포에 대한 CDC를 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 결과는 mAb14284가 0.95 pM 내지 1 μM 범위의 항체 농도에서 5% NHS의 존재 시에 모 Jurkat/hCD20 세포, 또는 전장 SARS-CoV-2 Wu.1, BA.1, 또는 BA.2 S 단백질을 발현하는 Jurkat/hCD20 세포에 대해 CDC를 매개하지 않았음을 입증한다.
검정에 사용된 NHS를, 양성 대조군인 항-CD20 IgG1을 사용하여, CDC를 매개하는 능력에 대해 동일한 표적 세포주에서 평가하였다. NHS가 존재할 때, 항-CD20 IgG1은 표적 세포주에 대해 CDC를 농도 의존적 방식으로 매개하였다. NHS가 없을 때, 항-CD20 IgG1은 시험된 모든 표적 세포주에 대해서 용해를 매개하지 않았다.
예 15: mAb15160의 안전성과 효능을 평가하는 3상 임상시험
mAb15160으로 치료한 건강한 자원자로부터 안전성 및 내약성 데이터를 얻은 후, 증상이 있는 COVID-19를 예방하기 위한 mAb15160의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 3상, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조 연구를 개시한다 (표 37). 이는 중증 SARS-CoV-2 감염의 위험 인자가 있거나 없는 18세 이상의 약 5,000명의 참여자를 등록할 것으로 예상되는 사례 중심 임상시험이며, 이들은 무작위 배정 시점에 SARS-CoV-2에 대해 PCR 음성이다. 연구 참여자는 6개월에 걸쳐 피하(SC) 주사로 투여되는 2개의 치료군(12주마다 1회(Q12W) 투여되는 300 mg mAb15160 또는 위약) 중 하나에 1:1 비율로 무작위 배정된다.
본 연구의 일차 평가변수는 유증상 RT-qPCR 확인 SARS-CoV-2 감염이다. 이차 평가변수는 mAb15160의 반복된 SC 주사의 안전성 및 내약성을 포함한다. 안전성 평가는 치료 후 발생 이상반응의 수집, 활력 징후, 및 안전성 실험실 검사를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 약물 농도, 면역원성, 및 혈청 중화 역가 측정을 위해 혈액 또한 채취한다. mAb15160의 투여는 위약군과 비교하여 유증상 SARS-CoV-2 감염의 백분율을 감소시킨다.
| 가설: | mAb15160을 사용한 예방은 유증상 SARS-CoV-2 감염을 예방한다. |
| 치료군 및 투여량: | mAb15160 (300 mg SC Q12W x2 투여량) 위약 SC |
| 주요 설계 요소 | 이는 유증상 COVID-19를 예방하기 위한mAb15160의 안전성과 유효성을 평가하기 위한 사례 중심, 3상, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조 임상시험이다 본 임상시험에는 중증 SARS-CoV-2 감염에 대한 위험 인자가 있거나 없는 ≥ 18세의 약 5000명의참가자가 등록된다. 연구 참가자는 6개월에 걸쳐 피하 주사로 투여되는 2개의 치료군(mAb15160 또는 위약) 중 하나에 1:1 비율로 무작위 배정될 것이다. |
| 연구 기간: | 253일 |
| 모집단: | 중증 COVID-19에 대한 위험 인자가 있거나 없는 SARS-CoV-2 음성 RT-qPCR을 가진 18세 이상 |
| 계획된 시험대상자 수: | 약 5000명의 참가자 |
| 일차 평가변수: | 6개월 유효성 평가 기간 동안 유증상 RT-qPCR-확인된 SARS-CoV-2 감염 사례 |
| 이차 평가변수: | mAb15160의 반복된 SC 주사의 안전성 및 내약성 mAb15160의 혈청 농도 및 면역원성 |
Q12W = 12주마다 1회 투여
예 16: 노출 전 예방요법에서 mAb15160의 안전성과 효능을 평가하는 3상 임상시험
이는 COVID-19를 예방하기 위한 노출 전 예방요법으로서 mAb15160의 안전성과 효능을 평가하기 위한 성인 및 청소년을 대상으로 한 3상, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조 연구이다. 본 사례 중심 임상시험에는 ≥ 12세의 약 5000명의 참가자가 등록된다. 연구 참가자는 6개월에 걸쳐 피하 주사로 투여되는 2개의 치료군(mAb15160 또는 위약) 중 하나에 1:1 비율로 무작위 배정된다. 연구는 3개의 기간으로 구성된다: 1 내지 14일 스크리닝 기간, 6개월 예방 및 효능 평가 기간(EAP), 및 3개월 추적관찰 기간 (표 38 참조). mAb15160의 투여는 위약군과 비교하여 유증상 SARS-CoV-2 감염의 백분율을 감소시킨다.
스크리닝/베이스라인
참가자가 사전 동의를 제공한 후, 연구 적격성에 대해 평가한다. 스크리닝 방문은 무작위 배정 및 베이스라인 방문 전 최대 14일 이내에 이루어지며, 일부 대상체에서 스크리닝, 무작위 배정 및 베이스라인 방문은 동일한 날에 이루어질 수 있다. 연구에 포함시키기 위해, 참가자는 베이스라인 방문 후 72시간 이내에 채취한 샘플로부터 얻은 역전사효소 중합효소-연쇄-반응(RT-PCR) 검정으로부터 SARS-CoV-2 음성 검사 결과를 받은 것이 바람직하다. 무작위 배정은 연령 그룹 범주(만 ≥12세 내지 <18세, ≥18세 내지 ≤65세, >65세), 면역 저하 상태(예/아니요), 및 이전 백신접종(예/아니요)에 따라 치료군의 배정을 위해 계층화될 것이다. 등록된 참가자의 약 20% 이상은 면역 저하 상태를 가질 것이다.
치료 및 효능 평가 기간(EAP)
1일차에, 이용 가능한 실험실 결과를 평가하고, 베이스라인 평가, 샘플을 채취하고, 무작위 배정을 완료한 후, 모든 참가자는 연구 약물 첫 번째 용량을 투여받는다. 연구 약물은 맹검 방식으로 2.5 ml 피하(SC) 주사로 투여된다. 참가자는 2개의 치료군 중 하나에 1:1 비율로 무작위 배정된다: mAb15160(300 mg을 8주마다 1회 피하 투여(SC Q8W) 또는 위약을 8주마다 1회 피하 투여.
*****************
| 서열번호 | 서열 |
| 13 | gaggtcagt |
| 14 | EVS |
| 33 | gagggcaat |
| 34 | EGN |
| 67 | gagggcact |
| 68 | EGT |
| 85 | gaggacagt |
| 86 | EDS |
| 105 | gctgcatcc |
| 106 | AAS |
| 125 | ggtgcatcc |
| 126 | GAS |
| 163 | ggtaacagc |
| 164 | GNS |
| 183 | agtaatgat |
| 184 | SND |
| 203 | gacaatgat |
| 204 | DND |
| 241 | gatgcatcc |
| 242 | DAS |
| 261 | ggtgcaaca |
| 262 | GAT |
| 299 | agtgataat |
| 300 | SDN |
| 319 | gtcaataat |
| 320 | VNN |
| 391 | aaggcatct |
| 392 | KAS |
| 445 | gataaaaac |
| 446 | DKN |
| 464 | gaactcact |
| 465 | ELT |
| 484 | gatgtcact |
| 485 | DVT |
| 504 | gaggtcact |
| 505 | EVT |
| 524 | gagggcagt |
| 525 | EGS |
| 541 | gatgtcagt |
| 542 | DVS |
| 577 | gaaaataat |
| 578 | ENN |
| 633 | ttgggttct |
| 634 | LGS |
| 653 | ttgggatct |
| 705 | tctgcatcc |
| 706 | SAS |
| 775 | aaagacagt |
| 776 | KDS |
| 795 | ggtaacacc |
| 796 | GNT |
| 846 | aagatttct |
| 847 | KIS |
| 915 | ggtcacacc |
| 916 | GHT |
| 932 | aggaataat |
| 933 | RNN |
| 968 | tgggcatct |
| 969 | WAS |
| 1000 | ggtgcatcc |
| 1001 | GAS |
| 1021 | gctgcatcc |
| 1022 | AAS |
| 1041 | gatgtcagt |
| 1042 | DVS |
| 1061 | ggtaacagc |
| 1062 | GNS |
본원에 인용된 모든 참조 문헌은 각각의 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원, 또는 특허가 구체적으로 및 개별적으로 참조로서 통합되도록 표시된 것과 동일한 정도로 참조로서 통합된다. 참조에 의한 이러한 통합의 진술은, 비록 이러한 인용이 참조에 의한 통합에 대한 전적인 인용문에 밀접하지는 않더라도, 각각의 그리고 모든 개별 간행물, 데이터베이스 항목(예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원 또는 특허와 관련되도록 출원인에 의해 의도된다. 참조에 의한 전용 인용문의 통합이 본 명세서 내에 포함된 경우, 이는 어떠한 방식으로도 참조에 의한 일반 인용문의 통합을 약화시키지 않는다. 본원에서 참조 문헌의 인용은 해당 참조 문헌이 관련 선행 기술임을 인정하는 것으로 의도되지 않으며, 이들 간행물 또는 문서의 내용 또는 날짜에 대해 인정하는 것으로 간주되지 않는다
Claims (167)
- 코로나바이러스 스파이크 단백질(CoV-S)에 특이적으로 결합하는 단리된 재조합 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체는 다음의 특징 중 하나 이상을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
(a) 약 10-8 M 미만의 EC50으로 CoV-S에 결합함;
(b) 코로나바이러스-감염 동물에게 투여한 후 상기 투여 없는 유사한 코로나바이러스-감염 동물과 비교했을 때, 코로나바이러스-감염 동물에서 생존율 증가를 입증함; 및/또는
(c) 표 4의 HCVR에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 표 4 LCVR에 대해 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함함. - 제1항에 있어서,
(a) 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 표 4의 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
(a) 표 4의 HCVR 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
(b) 표 4의 LCVR 서열과 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 단일 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 표 4의 단일 항체의 HCVR 및 LCVR을 포함하는 면역글로불린을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항에 있어서,
(a) 서열번호 212의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR);
(b) 서열번호 214, 216 및 218의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR;
(c) 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR;
(d) 서열번호 220의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR);
(e) 서열번호 222, 126 및 224의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(f) 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(g) 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC);
(h) 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
(i) 서열번호 212/222의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍;
(j) 서열번호 214, 216 및 218의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 222, 126 및 224의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(k) 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; 또는
(l) 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 LC을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서,
(a) 서열번호 362의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR);
(b) 서열번호 364, 366 및 368의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR;
(c) 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR;
(d) 서열번호 370의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR);
(e) 서열번호 372, 106 및 374의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(f) 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(g) 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC);
(h) 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC;
(i) 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
(j) 서열번호 362/370의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍;
(k) 서열번호 364, 366 및 368의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 372, 106 및 374의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(l) 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(m) 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는
(n) 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서,
(a) 서열번호 493의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR);
(b) 서열번호 495, 497 및 499의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR;
(c) 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR;
(d) 서열번호 501의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR);
(e) 서열번호 503, 505 및 507의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(f) 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(g) 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC);
(h) 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC;
(i) 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
(j) 서열번호 493/501의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍;
(k) 서열번호 495, 497, 및 3499의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 503, 505 및 507의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(l) 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(m) 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는
(n) 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서,
(a) 서열번호 887의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR);
(b) 서열번호 889, 891 및 893의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR;
(c) 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR;
(d) 서열번호 895의 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR);
(e) 서열번호 897, 164 및 899의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(f) 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR;
(g) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC);
(h) 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
(i) 서열번호 887/895의 아미노산 서열 내에 각각 함유된 CDR을 포함하는 HCVR/LCVR 쌍;
(j) 서열번호 889, 891 및 893의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는 HCVR, 및 서열번호 897, 164 및 899의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 LCVR;
(k) 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR; 또는
(l) 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 LC을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서,
(a) 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 표 4의 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편. - CoV-S에 결합하기 위한 상기 항들 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 상기 항들 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과, CoV-S 상의, 동일한 에피토프에 결합하거나, 중첩 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적인 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다음 특성 중 하나 이상을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편:
(a) 코로나바이러스의 성장을 억제함;
(b) 코로나바이러스의 표면에 결합함;
(c) 시험관 내에서 세포의 코로나바이러스 감염의 확산을 제한함;
(d) 인간 ACE2 또는 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 조작된 마우스를 코로나바이러스 감염에 의해 야기되는 사망 및/또는 체중 감소로부터 보호함. - 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CoV-S는 SARS-CoV-2-S인, 항체 또는 항원 결합 단편.
- CoV-S 폴리펩티드에 결합된 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 복합체.
- 제16항에 있어서, 상기 CoV-S는 SARS-CoV-2-S인, 복합체.
- 다음을 포함하는 폴리펩티드:
(a) 표 4에 제시된 HCVR 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편의 HCVR 도메인의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 또는
(b) 표 4에 제시된 LCVR 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 사슬의 LCVR 도메인의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3. - 다음을 암호화하는 폴리뉴클레오티드:
(a) 제18항의 폴리펩티드;
(b) 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편;
(c) 표 4의 HCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 HCVR;
(d) 표 4의 LCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 LCVR;
(e) 표 4의 항체에 대해 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 HCVR;
(f) 표 4의 항체에 대해 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 LCVR;
(g) 표 4의 HCVR/LCVR 쌍에 함유된 CDR 서열을 포함하는 HCVR 및 LCVR;
(h) 표 4의 항체에 대해 제시된 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 각각 포함하는 HCVR 및 LCVR;
(i) 표 4의 항체의 HCVR 서열을 포함하는 HCVR;
(j) 표 4의 항체의 LCVR 서열을 포함하는 LCVR;
(k) 표 4의 항체의 HCVR 및 LCVR 서열을 각각 포함하는 HCVR 및 LCVR;
(l) 표 4의 항체의 HC 서열을 포함하는 중쇄(HC);
(m) 표 4의 항체의 LC 서열을 포함하는 경쇄(LC); 또는
(n) 표 4의 항체의 HC 및 LC 서열을 각각 포함하는 중쇄(HC) 및 경쇄(LC). - 제19항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제1항 내지 제15항, 제19항 및 제20항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 한 쌍의 폴리뉴클레오티드로서,
(a) 제1 폴리뉴클레오티드는:
(i) 표 4의 항체의 HCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 HCVR;
(ii) 표 4의 항체에 대해 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 HCVR;
(iii) 표 4의 항체의 HCVR 서열을 포함하는 HCVR; 또는
(iv) 표 4의 항체의 HC 서열을 포함하는 중쇄(HC);를 암호화하고 및
(b) 제2 폴리뉴클레오티드는:
(i) 표 4의 항체의 LCVR에 함유된 CDR 서열을 포함하는 LCVR;
(ii) 표 4의 항체에 대해 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 LCVR;
(iii) 표 4의 항체의 LCVR 서열을 포함하는 LCVR; 또는
(iv) 표 4의 항체의 LC 서열을 포함하는 경쇄(LC);를 암호화하는, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드. - 제22항에 있어서,
(a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 214, 216 및 218의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 222, 126 및 224의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; 또는
(d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하는, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드. - 제22항에 있어서,
(a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 364, 366 및 368의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 372, 106 및 374의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 362의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 370의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 376의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하고; 또는
(e) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1077의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하는, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드. - 제22항에 있어서,
(a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 495, 497 및 499의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 503, 505 및 507의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 493의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 501의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 509의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하고; 또는
(e) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 1075의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 511의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하는, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드. - 제22항에 있어서,
(a) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR에 함유된 CDR을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR에 함유된 CDR을 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(b) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 889, 891 및 893의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR2 아미노산 서열을 각각 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 897, 164 및 899의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 LCVR을 암호화하고;
(c) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 887의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 895의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 암호화하고; 또는
(d) 제1 폴리뉴클레오티드는 서열번호 901의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 암호화하고, 제2 폴리뉴클레오티드는 서열번호 903의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 암호화하는, 한 쌍의 폴리뉴클레오티드. - 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항의 제1 및 제2 폴리뉴클레오티드를 각각 포함하는 벡터 쌍.
- 제27항의 벡터 쌍을 포함하는, 숙주 세포.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서:
(a) 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 단계;
(b) 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드의 발현에 유리한 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
(c) 선택적으로, 숙주 세포 및/또는 숙주 세포가 성장되는 배지로부터 항체 또는 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법. - 제29항에 있어서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포인, 방법.
- 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 하나 이상의 폴리뉴클레오티드는 제19항에 따른 하나 이상의 폴리뉴클레오티드, 또는 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오티드 쌍인, 방법.
- 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항의 방법의 생성물인, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 추가의 치료제와 연계하여 제1항 내지 제15항 및 제32항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는, 조성물 또는 키트.
- 제1항 내지 제15항 및 제32항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 및 임의로 추가의 치료제를 포함하는 약학적 조성물.
- 제33항 또는 제34항에 있어서, 항바이러스 약물 또는 백신인 추가 치료제와 연계되는, 조성물 또는 키트.
- 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조성물 또는 키트.
- 제36항에 있어서, 상기 항말라리아제는 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸이고/이거나 상기 항염증제는 항체이고, 선택적으로 상기 항체는 사릴루맙, 토실리주맙 또는 김실루맙이고/이거나, CoV-S에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 카시리비맙 또는 임데비맙인, 조성물 또는 키트.
- 제36항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 제2 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는, 조성물 또는 키트.
- 제1항 내지 제15항, 제32항 및 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질 또는 조성물을 포함하는 용기 또는 주사 장치.
- 코로나바이러스 감염증의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 이를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 제1항 내지 제15항 및 제32항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제40항에 있어서, 상기 코로나바이러스는 SARS-CoV-2, SARS-CoV, 및 MERS-CoV로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제40항 또는 제41항에 있어서, 대상체에게 하나 이상의 추가 치료제가 투여되는, 방법.
- 제42항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제는 항바이러스 약물 또는 백신인, 방법.
- 제42항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제44항에 있어서, 상기 항말라리아제는 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸이고/이거나 상기 항염증제는 항체이고, 선택적으로 상기 항체는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙이고/이거나, CoV-S에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 카시리비맙 또는 임데비맙인, 방법.
- 제44항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 제2 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제15항 및 제32항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체 내로 투여하는 방법으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체 내로 주사하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제47항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 대상체의 신체 내로 피하, 정맥내 또는 근육내 주사되는, 방법.
- 상기 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 VH3-66 또는 Vk1-33 가변 도메인 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 조성물, 키트, 복합체, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 방법.
- 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기서 상기 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제50항에 있어서, HCDR1은 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제51항에 있어서, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제51항에 있어서, 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제51항에 있어서, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, HCDR1은 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, 상기 단리된 항체는 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변 영역은 IgG1 불변 영역인, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, 재조합 항체인, 단리된 항체.
- 제55항에 있어서, 다중특이적인, 단리된 항체.
- 제55항의 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
- 제62항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
- 제63항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
- 제63항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 약학적 조성물.
- 제65항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제66항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제67항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제68항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기서 상기 단리된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제70항에 있어서, HCDR1은 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제70항에 있어서, 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제70항에 있어서, 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제70항에 있어서, 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, HCDR1은 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, 상기 단리된 항체는 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변 영역은 IgG1 불변 영역인, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, 재조합 항체인, 단리된 항체.
- 제75항에 있어서, 다중특이적인, 단리된 항체.
- 제75항의 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
- 제82항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
- 제83항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
- 제83항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 약학적 조성물.
- 제85항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제86항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제87항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제88항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 상기 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 270에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 278에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, HCDR1은 서열번호 272에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 274에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 276에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 280에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 282에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, 서열번호 270에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 278에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, 상기 단리된 항체는 서열번호 284에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 286에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, 상기 면역글로불린 불변 영역은 IgG1 불변 영역인, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, 재조합 항체인, 단리된 항체.
- 제90항에 있어서, 다중특이적인, 단리된 항체.
- 제90항의 단리된 항체 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
- 제97항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
- 제98항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항염증제, 항말라리아제, 및 TMPRSS2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
- 제98항에 있어서, 제2 치료제는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 약학적 조성물.
- 제100항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 약학적 조성물.
- 제101항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은: 서열번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 218에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 222에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 126에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 224에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제102항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 220에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제103항에 있어서, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 약학적 조성물로서,
a) 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제1 단리된 항체로, 여기서 상기 제1 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는, 상기 제1 단리된 항체; 및
b) 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 제2 단리된 항체로, 여기서 상기 제2 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 1030에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 서열번호 1038에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는, 상기 제2 단리된 항체를 포함하는, 약학적 조성물. - 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는: 서열번호 889에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 891에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 893에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 897에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 899에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는 서열번호 887에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 895에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는 서열번호 901에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 903에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는 IgG1 불변 영역인 면역글로불린 불변 영역을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는 재조합 항체인, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제1 단리된 항체는 다중특이적인, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제2 단리된 항체는: 서열번호 1032에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 1034에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 1036에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 1040에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 1042에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 1044에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제2 단리된 항체는 서열번호 1030에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 1038에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항에 있어서, 제2 단리된 항체는 서열번호 1048에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 1048에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 제105항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 제3 단리된 항체를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
- 제116항에 있어서, 제3 단리된 항체는 서열번호 1008에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하고, 여기서 상기 제3 단리된 항체는 면역글로불린 불변 영역, 서열번호 1010에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3), 및 서열번호 1018에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제116항에 있어서, 제3 단리된 항체는: 서열번호 1012에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1; 서열번호 1014에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2; 서열번호 1016에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 서열번호 1020에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1; 서열번호 1022에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2; 및 서열번호 1024에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제116항에 있어서, 제3 단리된 항체는 서열번호 1010에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 1018에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는, 약학적 조성물.
- 제116항에 있어서, 제3 단리된 항체는 서열번호 1026에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 1028에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약학적 조성물.
- 이를 필요로 하는 대상체에서, 오미크론 변이 SARS-CoV-2에 의한 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법으로서, 표 4의 HCVR에 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 표 4의 LCVR에 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 이를 필요로 하는 대상체에서, 오미크론 변이 SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 예방하는 방법으로서, 표 4의 HCVR에 적어도 약 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 표 4의 LCVR에 적어도 약 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제122항에 있어서, 상기 예방은 노출-전 예방요법을 포함하는, 방법.
- 제122항에 있어서, 상기 예방은 노출 후 예방요법을 포함하는, 방법.
- 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은:
(a) 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
(b) 표 4의 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법. - 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 항체의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 표 4의 상기 항체의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 방법.
- 제121항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 하나 이상의 추가 치료제가 투여되는, 방법.
- 제127항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제는 항바이러스 약물 또는 백신인, 방법.
- 제127항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 치료제는 항염증제, 항말라리아제, TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 CoV-S에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제129항에 있어서, 상기 항말라리아제는 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸이고/이거나, 상기 항염증제는 항체이고, 선택적으로 상기 항체는 사릴루맙, 토실리주맙, 또는 김실루맙이고/이거나, CoV-S에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 카시리비맙 또는 임데비맙인, 방법.
- 제129항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 표 4의 제2 항체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는, 방법.
- 제121항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체의 신체 내로 주사하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제132항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 대상체의 신체 내로 피하, 정맥내 또는 근육내 주사되는, 방법.
- 이를 필요로 하는 대상체에서, SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) 및 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제134항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 364에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 366에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 368에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 372에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 374에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제134항 및 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HCVR은 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LCVR은 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 376에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 378에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 주사를 통해 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제140항에 있어서, 상기 주사는 정맥내인, 방법.
- 제140항에 있어서, 상기 주사는 피하인, 방법.
- 제134항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 300mg을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 600mg을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 1200mg을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제134항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2회 투여량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제146항에 있어서, 상기 2회 투여량 각각은 300 mg의 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제146항 또는 제147항에 있어서, 상기 2회 투여량은 4주 간격, 5주 간격, 6주 간격, 7주 간격, 8주 간격, 9주 간격, 10주 간격, 11주 간격, 12주 간격, 13주 간격, 14주 간격, 15주 간격, 또는 16주 간격으로 투여되는, 방법.
- 제146항 또는 제147항에 있어서, 상기 2회 투여량은 8-16주 간격으로 투여되는, 방법.
- 제146항 또는 제147항에 있어서, 상기 2회 투여량은 12주 간격으로 투여되는, 방법.
- 제146항 또는 제147항에 있어서, 상기 2회 투여량은 8주 간격으로 투여되는, 방법.
- 제134항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 대상체에서 SARS-CoV-2의 바이러스 부하를 감소시키는, 방법.
- 제134항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 SARS-CoV-2 감염 전에 발생하는, 방법.
- 이를 필요로 하는 대상체에서, SARS-CoV-2 감염으로 인한 하나 이상의 COVID-19 증상을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HVCR) 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR)(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2회 투여량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 각 투여량은 300 mg의 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 방법.
- 제154항에 있어서, 상기 투여는 피하인, 방법.
- 제154항 또는 제155항에 있어서, 상기 HCDR1은 서열번호 364에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 366에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 368에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 372에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 LCDR3은 서열번호 374에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 HCVR은 서열번호 362에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LCVR은 서열번호 370에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 376에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 378에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 600mg을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제154항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여하는 단계는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 300mg을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 폴리뉴클레오티드로서,
(a) 제41항 내지 제52항, 제61항 내지 제72항 또는 제81항 내지 제87항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 또는
(b) 제50항 내지 제61항, 제70항 내지 제81항 또는 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 HCVR 및/또는 LCVR; 또는 중쇄 및/또는 경쇄;를 암호화하는, 폴리뉴클레오티드. - 제163항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
- 제50항 내지 제61항, 제70항 내지 제81항, 제90항 내지 제96항, 제163항 또는 제164항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제1항 내지 제15항, 제32항, 제50항 내지 제61항, 제70항 내지 제81항 또는 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, SARS-CoV-2의 오미크론 변이를 중화시키는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제166항에 있어서, 오미크론 변이는 BA.1, BA.1.1, BA.2, BA.2.12.1, BA.3, 또는 BA.4/BA.5로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
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