KR20200115576A - 항-tmprss2 항체 및 항원-결합 단편 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 바이러스 감염 (예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염)을 치료하거나 예방하기 위한 상기 항체 및 단편을 사용하는 방법을 포함한다.

Description

항-TMPRSS2 항체 및 항원-결합 단편
본 출원은 2018년 1월 26일에 출원된 미국 가특허 출원 62/622,292호의 우선권을 주장하며, 상기 출원은 그 내용 전체가 본원에 참고로 인용된다.
본 발명은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원-결합 단편 및 상기 항체 및 단편을 사용한 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 방법에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 바이러스 뉴라미니다제 (NA) 또는 이온 채널 단백질, 매트릭스 단백질 2 (M2)를 표적화하는 현재 사용되는 약물에 대해 획득된 내성을 갖는다. 약물 내성의 출현은 신규 항바이러스 전략의 개발을 위한 필요성을 강조한다. 숙주 세포 표적화는 회피 돌연변이체의 출현을 감소시키거나 회피할 수 있지만 광범위 발현으로 인해 “싱크”를 생성할 수 있고 독성에 대한 우려를 유발한다. 다수의 호흡기 바이러스 융합 단백질은 활성화를 위해 숙주 프로테아제(들)에 의한 절단을 필요로 하는 것으로 나타났다(문헌참조: Shirato et al. Clinical Isolates of Human Coronavirus 229E Bypass the Endosome for Cell Entry. Journal of Virology. 91, e01387-16 (2017); Reinke et al., Different residues in the SARS-CoV spike protein determine cleavage and activation by the host cell protease TMPRSS2. PLoS ONE. 12, e0179177 (2017); Zhou et al., Protease inhibitors targeting coronavirus and filovirus entry. Antiviral Research. 116, 76-84 (2015); Zmora et al. TMPRSS2 Isoform 1 Activates Respiratory Viruses and Is Expressed in Viral Target Cells. PLoS ONE. 10, e0138380 (2015)), including influenza (Zmora et al., Non-human primate orthologues of TMPRSS2 cleave and activate the influenza virus hemagglutinin. PLoS ONE. 12, e0176597 (2017); Boettcher-Friebertshaeuser et al., Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011); Bertram et al., TMPRSS2 and TMPRSS4 facilitate trypsin-independent spread of influenza virus in Caco-2 cells. Journal of Virology. 84, 10016-10025 (2010); Tarnow et al., TMPRSS2 is a host factor that is essential for pneumotropism and pathogenicity of H7N9 influenza A virus in mice. Journal of Virology (2014), May;88(9):4744-51).
인플루엔자 A 헤마글루티닌 전구체 (HA0)는 활성화를 위해서는 숙주 세린 프로테아제에 의한 HA1 및 HA2로의 절단을 필요로 한다. 예를 들어, 사람 기도 트립신 유사 프로테아제 (HAT) 뿐만 아니라 막관통 프로테아제, 세린 2; TMPRSS2, TMPRSS4 및 TMPRSS11D는 HA 절단에 연루되어있다(문헌참조: Bertram et al., TMPRSS2 and TMPRSS4 facilitate trypsin-independent spread of influenza virus in Caco-2 cells. Journal of Virology. 84, 10016-10025 (2010); Bottcher et al., Proteolytic Activation of Influenza Viruses by Serine Proteases TMPRSS2 and HAT from Human Airway Epithelium. Journal of Virology. 2006 Oct;80(19):9896-8; International patent application publication no. WO2017/151453). 또한, TMPRSS2는 항암 치료요법을 위한 표적이다. 예를 들어, 문헌(참조: WO2008127347 및 WO2002004953)을 참조한다. TMPRSS2와 ERG의 융합 (TMPRSS2:ERG)은 ERα에 의해 유발되거나 ERβ에 의해 억제되는 전립선 발암의 주요 구동체인 것으로 공지된 유전자 융합이다. 문헌참조(Bonkhoff, Estrogen receptor signaling in prostate cancer: Implications for carcinogenesis and tumor progression, Prostate 78(1): 2-10 (2018)).
예를 들어, 면역조직화학을 위해 유용한 TMPRSS2의 소분자 억제제 및 연구 항체가 있지만, 당업계에서는 중화 치료학적 항-TMPRSS2 항체 및 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 이들의 용도가 요구된다. 예를 들어, 문헌(Shen et al. Biochimie 142: 1-10 (2017), WO2008127347; WO2002004953; US9498529; antibody ab92323, available from Abcam (Cambridge, MA) or antibodies sc-515727 and sc-101847 available from Santa Cruz Biotech (Dallas, Tx))을 참조한다. 본 발명은 바이러스 감염을 치료하기 위한 사람 항-사람 TMPRSS2 항체, 예를 들어 H1H7017N, 및 예를 들어, 항-인플루엔자 HA 항체 (예를 들어, 그룹 I HA 또는 그룹 II HA를 포함하는 이의 조합) 및 이의 사용 방법을 제공함에 의해 상기 필요성을 부분적으로 해결한다.
본 발명은 사람 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 중화 사람 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합단편을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 구현예에서, 항원-결합 단백질은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 DR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 및/또는 (b) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3. 본 발명의 구현예에서, 항원-결합 단백질은 다음을 포함한다: (a) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 (b) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역. 본 발명의 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 항원-결합 단백질을 제공한다: (a) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 및/또는 (b) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 항원-결합 단백질은 (a) 아미노산 서열: G F T F S S Y G (서열번호 6)을 포함하는 CDR-H1; (b) 아미노산 서열: I W N D G S Y V (서열번호 8)을 포함하는 CDR-H2: A R E G E W V L Y Y F D Y (서열번호 10)을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 경쇄 면역글로빈 가변 영역; 및 (a) 아미노산 서열: Q S I S S W (서열번호 12)을 포함하는 CDR-L1; (b) 아미노산 서열: K A S (서열번호 14)를 포함하는 CDR-H2; 및/또는 (c) 아미노산 서열: Q Q Y N S Y S Y T(서열번호 16)을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다. 본 발명은 또한 다음을 포함하는 항원-결합 단백질을 제공한다: (a) 서열번호 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 및/또는 (b) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린.
본 발명은 또한 본원에 제시된 임의의 항원-결합 단백질과 TMPRSS2에 결합하는 것에 대해 경쟁하거나 (예를 들어, Octet RED384 바이오센서 (Pall ForteBio Corp.)상에서 실시간 표지 부재 바이오-층 간섭계 검정을 사용함에 의한 측정시); TMPRSS2 (또는 이의 단편) 상에서 본원에 제시된 임의의 항원-결합 단백질과 동일하거나 중복 에피토프에 결합하는 임의의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 TMPRSS2 및 또 다른 항원에 결합하거나 상이한 에피토프에서 TMPRSS2에 결합하는 다중특이적 항원-결합 단백질을 제공한다. 예를 들어, 다중특이적 분자는 (a) TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 도메인; 및 (b) 또 다른 항원 또는 TMPRSS2 또는 상기 제1 항원-결합 도메인의 것과 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 포함한다.
본 발명은 또한 하기의 성질 중 하나 이상을 포함하는 임의의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, 본원에 제시된 서열을 포함하는 항체 또는 항원-결합단편)을 제공한다:
·TMPRSS2-발현 세포(예를 들어, Calu-3 세포)에서 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1))의 성장을 억제하는 것;
·예를 들어, 440pM 또는 1.06nM의 EC50 값으로 TMPRSS-발현 세포 (예를 들어, MDCK/Tet-on)의 표면에 결합하는 것;
·TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의적으로 결합하지 않는 것;
·약 25oC에서 약 2.81 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 37oC에서 약 9.31 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 25oC에서 약 5.60 X 10-8 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 37oC에서 약 1.40 X 10-7 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
·시험관내 세포의 인플루엔자 바이러스 감염의 확산을 제한하는 것; 및/또는
·인플루엔자 바이러스 감염에 의해 유발된 죽음으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 것.
본 발명은 또한 예를 들어, 시험관내 또는 대상체의 체내에서 TMPRSS2 폴리펩타이드에 결합된 본원에 제시된 임의의 항원-결합 단백질을 포함하는 복합체를 제공한다.
본 발명은 또한 하기의 단계를 포함하는 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N) 또는 이의 면역글로불린 쇄를 제조하기 위한 방법을 제공한다: (a) 상기 항원-결합 단백질의 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 도입하는 단계; (b) 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호될 수 있는 조건하에서 상기 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포, 피키아(Pichia) 세포 또는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) 세포)를 배양하는 단계; 및 (c) 임의로 숙주 세포 및/또는 상기 숙주 세포가 성장한 배지로부터 항원-결합 단백질 또는 면역글로불린 쇄를 단리하는 단계. 상기 방법의 생성물인 항원-결합 단백질 또는 면역글로불린 쇄는 본 발명의 일부이다.
(a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 쇄의 VH 도메인의 CDR1, CDR2 및 CDR3; 또는 (b) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 쇄의 VL 도메인의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 폴리펩타이드 (예를 들어, 면역글로불린) (예를 들어, 여기서, 폴리펩타이드는 숙주 세포 내에 있다)는 또한 본 발명의 일부를 형성한다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, DNA 또는 RNA)를 제공한다. 발명의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 2개의 상이한 면역글로불린 쇄(예를 들어, 중쇄 및 경쇄)를 암호화한다. 발명의 구현예에서, 하나의 폴리뉴클레오타이드는 경쇄 면역글로불린을 암호화하고 또 다른 폴리뉴클레오타이드는 중쇄 면역글로불린을 암호화하고, 예를 들어, 상기 쇄들은 숙주 세포 또는 용기 내에 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 벡터 (예를 들어, 플라스미드)내에 있고/있거나 숙주 세포 염색체에 통합된다.
본 발명의 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포, 피키아 세포 또는 피키아 파스토리스 세포)는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N), 이의 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 추가의 치료학적 제제 (예를 들어, 항-바이러스 약물 및/또는 백신)와 연합된 본원에 제시된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N)를 포함하는 조성물 또는 키트를 제공한다. 예를 들어, 상기 조성물은 항원-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체 및 임의로 추가의 치료학적 제제를 포함하는 약제학적 조성물일 수 있다. 추가의 치료학적 제제는 레디파스비르, 소포스부비르, 레디파스비르 및 소포스부비르의 조합물, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a 및/또는 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편일 수 있다. 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B.
발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 연합되어 제공된 추가의 치료학적 제제는 H1H14611N2와 같은 인플루엔자 그룹 I HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H14611N2의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 25-27)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 29-31)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다.
발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 연합되어 제공된 추가의 치료학적 제제는 H1H14612N2와 같은 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H14612N2의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 41-43)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 45-47)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다.
발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 연합되어 제공된 추가의 치료학적 제제는 H1H11729P와 같은 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H11729P의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 33-35)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 37-39)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다.
본 발명은 또한 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N) 또는 이의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함하는 용기 또는 주사 장치를 제공한다.
본 발명은 또한 본원에 제시된 치료학적 유효량의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N)을 투여함을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 사람)에서 인플루엔자 바이러스 감염 이외의 다른 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본원에 제시된 치료학적 유효량의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, H1H7017N)을 투여함을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 사람)에서 암(예를 들어, 전립선 암) 또는 감염, 예를 들어, 바이러스 감염, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-Co 바이러스, MERS-Co 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 사람 메타뉴모바이러스 또는 간염 C 바이러스 (HCV)에 의한 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 제공한다. 예를 들어, 항원-결합 단백질은 하나 이상의 추가의 치료학적 제제 (예를 들어, 항-바이러스 약물 및/또는 백신)와 연합하여 투여된다. 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 레디파스비르, 소포스부비르, 레디파스비르 및 소포스부비르의 조합물, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a 및 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구성원이다. 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다: H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B.
본 발명은 또한 상기 항원-결합 단백질을 비경구적으로 (예를 들어, 피하내, 정맥내 또는 근육내) 대상체(예를 들어, 사람)의 체내에 주사함을 포함하는, 본원에 제시된 항-TMRPSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N)을 대상체 (예를 들어, 사람)의 체내에 투여하기 위한 방법을 제공한다
도 1 (A-B). 외인성 트립신의 부재하에 0.01 (A) 또는 0.001 (B)의 초기 감염 다중도로 상이한 세포주에서 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)-GFP 바이러스 확산의 진행. Calu3 (원형), A549 (사각형), MDCK (삼각형) 및 HepG2 (역삼각형) 세포.
도 2. 감염 주기 동안에 H1H7017N의 적용은 이소타입 대조군 항체, 항체 부재, 항-HA 항체 및 감염되지 않은 대조군과 비교하여, 감염 후 72시간에 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)의 형광성 초점 유닛 (FFU)의 수를 감소시킨다.
도 3 (A-B). 항-TMPRSS2, H1H7017N는 세포 상에서 발현된 사람 및 시노몰구스 몽키 TMPRSS2에 결합한다. (A) 각각 460 pM 및 1.06 nM의 EC50 값으로 MDCK/Tet-on/hTMPRSS2 및 MDCK/Tet-on/mfTMPRSS2에 결합된 H1H7017N은 MDCK/Tet-on 세포로의 유의적인 결합을 보여주지 않았다. (B) 관련 없는 이소타입 대조군 항체인 대조군 mAb1은 시험된 임의의 세포주로의 결합을 보여주지 않았다.
도 4. 예방학적 모델에서 H1N1에 대한 보호를 보여주는 -1일 PI (역삼각형, 점선) 또는 0일 PI (원형, 실선)에 5mg/kg의 H1H7017N으로 처리된, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존률 곡선. 이소타입 대조군 H1H1238N (삼각형, 실선)으로 처리된 마우스는 어떠한 보호를 보여주지 않았다.
도 5. 보호를 입증하는 10 mg/kg H1H7017N으로 처리된, H1N1으로 감염된 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존률 곡선. 마우스는 0일째(다이아몬드, 점선), 1일째(원형, 실선), 2일째(역삼각형, 실선), 또는 3일째 PI (사각형, 점선)상에서 처리하였다. 이소타입 대조군 H1H1238N (삼각형, 실선)은 25% 생존률로 부분 보호를 가졌다.
도 6. H3N2에 대한 보호를 보여주는 1일째 PI (삼각형) 또는 2일째 PI (원형)에 10mg/kg의 H1H7017N으로 처리된 hTPMRSS2 마우스의 생존률 곡선. 비처리된 마우스 (사각형)은 어떠한 보호를 보여주지 않았다.
도 7 (A-B). 야생형 마우스 (A) 또는 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)의 150 PFU (삼각형), 750 PFU (사각형), 또는 1,500 PFU (원형)으로 감염된, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스 (B)의 생존률 곡선. 마우스는 14일 PI까지 매일 칭량하였다.
도 8. 0일째 A/Aichi/2/68 (HA, NA) x A/PR/8/34 (H3N2)으로 감염되고 각각 2.5 mg/kg의 H1H7017N 및 H1H14611N2의 조합물 (다이아몬드), 10 mg/kg의 H1H7017N (삼각형), 10 mg/kg의 H1H14611N2 (사각형), 각각 5 mg/kg의 H1H7017N 및 H1H14611N2의 조합물, 또는 10 mg/kg의 hIgG1 이소타입 대조군 (원형)으로 처리된, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존률 곡선. 마우스는 14일 PI까지 매일 칭량하였다.
도 9. 1일째 PI 상에 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)으로 감염되고 1 mg/kg의 H1H7017N 및 2mg/kg의 H1H11729P의 조합물 (원형), 각각 2.5mg/kg의 H1H7017N 및 H1H11729P의 조합물(역삼각형), 5mg/kg의 H1H11729P (다이아몬드), 5mg/kg의 H1H7017N (사각형), 또는 5mg/kg의 hIgG1 이소타입 대조군 (삼각형)으로 처리된, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존률 곡선. 마우스는 14일 PI까지 매일 칭량하였다.
본 발명의 방법을 기재하기 전에, 방법과 조건들은 다양할 수 있기 때문에, 본 발명은 여기에 기술된 특정한 방법과 실험 조건들에 한정되지 않는다는 점을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 한정될 것이기 때문에, 본원에서 사용된 용어들은 다만 특정한 구현예들을 설명하기 위한 목적일 뿐이지 본 발명의 범위를 한정하려는 것은 아니다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 균등한 임의의 방법과 재료들을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있으나, 바람직한 방법과 재료들을 이제 기술할 것이다. 본원에서 언급한 모든 간행물들은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
또한 “인플루엔자 HA”로 불리우는 용어 “인플루엔자 헤마글루티닌”은 인플루엔자 바이러스의 표면상에 발견된 삼량체 당단백질이고, 이는 바이러스 접착 (α-2,3- 및 α-2,6-시알산으로의 HA1 결합을 통해) 및 숙주 세포로의 진입(형태적 변화를 통해)을 매개한다. HA는 2개의 구조적 도메인으로 구성된다: 수용체 결합 부위 (고빈도로 항원성 돌연변이를 받는)를 함유하는 구형 헤드 도메인 및 스템 영역 (stem region) (인플루엔자 바이러스의 다양한 종 중에서 보다 보존된). 인플루엔자 HA는 단백질용해 가공되어 서로 연합하여 스템/구형 헤드 구조를 형성하는 2개의 서브유닛 (HA1 및 HA2)을 생성하는 전구체 (HAO)로서 합성된다. 바이러스 HA는 바이러스 상에 가장 가변적인 항원이고 스템 (HA2)은 각각의 그룹 내에서 고도로 보존된다.
또한 “인플루엔자 NA”로 불리우는 용어 “인플루엔자 뉴라미니다제”는 엑소시알리다제(EC 3.2.1.18)이고 이는 시알산 (N-아세틸뉴라민산)과 인접한 당 잔기 사이에 α-케토시드산 연결을 절단한다.
전장 인플루엔자 HA의 아미노산 서열은 승인 번호 Fj966082.1로서 GenBank에 제공된 인플루엔자 단리물 H1N1 A/California/04/2009의 아미노산 서열로 예시된다. 용어 “인플루엔자-HA”는 또한 상이한 인플루엔자 단리물, 예를 들어, GQ149237.1, NC_002017, KM972981.1 등으로부터 단리된 인플루엔자 HA의 단백질 변이체를 포함한다. 용어 “인플루엔자-HA“는 또한 재조합 인플루엔자 HA 또는 이의 단편을 포함한다. 상기 용어는 예를 들어, 히스티딘 태그, 마우스 또는 사람 Fc, 또는 신호 서열에 커플링된 인플루엔자 HA 또는 이의 단편도 포함한다.
항-TMPRSS2 “항원-결합 단백질”은 TMPRSS2 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 또는 하나 초과의 폴리펩타이드의 복합체 (예를 들어, 삼량체IgG 항체), 예를 들어, 단일특이적이든 다중특이적이든 상관 없이 항-TMPRSS2 항체 또는 항원-결합 단편이다.
TMPRSS2
TMPRSS2 (막관통 프로테아제 세린 2)는 인플루엔자 바이러스 감염성에 중요한 세린 프로테아제 계열 (II형 막관통 세린 프로테아제 (TTSP))에 속하는, 사람 염색체 21상에 위치한 단백질이다. TMPRSS2는 인플루엔자 바이러스 HA0의 HA1 및 HA2로의 절단을 매개하는 것으로 입증되었다.
사람 TMPRSS2 유전자는 세포질막에 부착되는 492개 아미노산의 예측된 단백질을 암호화한다. 상기 단백질은 Arg255와 Ile256 사이의 자가촉매 절단을 통해 이의 성숙한 형태로 전환된다. 절단 후, 성숙한 프로테아제는 대부분은 막결합되어 있지만 이들의 일부는 세포외 환경으로 유리될 수 있다.
본 발명의 구현예에서, 사람 TMPRSS2 (V160M)는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
MALNSGSPPAIGPYYENHGYQPENPYPAQPTVVPTVYEVHPAQYYPSPVPQYAPRVLTQASNPVVCTQPKSPSGTVCTSKTKKALCITLTLGTFLVGAALAAGLLWKFMGSKCSNSGIECDSSGTCINPSNWCDGVSHCPGGEDENRCVRLYGPNFILQMYSSQRKSWHPVCQDDWNENYGRAACRDMGYKNNFYSSQGIVDDSGSTSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVNLNSSRQSRIVGGESALPGAWPWQVSLHVQNVHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNNPWHWTAFAGILRQSFMFYGAGYQVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLQKPLTFNDLVKPVCLPNPGMMLQPEQLCWISGWGATEEKGKTSEVLNAAKVLLIETQRCNSRYVYDNLITPAMICAGFLQGNVDSCQGDSGGPLVTSKNNIWWLIGDTSWGSGCAKAYRPGVYGNVMVFTDWIYRQMRADG
(서열번호 22; 굵은 폰트에서 메티오닌 160). 발명의 구현예에서, TMPRSS2 폴리펩타이드는 V160M 돌연변이를 포함하지 않는다. 또한 NM_005656.3을 참조한다.
발명의 구현예에서, 마카카 물라타(Macaca mulatta) TMPRSS2 (S129L, N251S, I415V, R431Q, D492G)는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
MALNSGSPPGVGPYYENHGYQPENPYPAQPTVAPNVYEVHPAQYYPSPVPQYTPRVLTHASNPAVCRQPKSPSGTVCTSKTKKALCVTMTLGAVLVGAALAAGLLWKFMGSKCSDSGIECDSSGTCISLSNWCDGVSHCPNGEDENRCVRLYGPNFILQVYSSQRKSWHPVCRDDWNENYARAACRDMGYKNSFYSSQGIVDNSGATSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVRSNLSRQSRIVGGQNALLGAWPWQVSLHVQNIHVCGGSIITPEWIVTAAHCVEKPLNSPWQWTAFVGTLRQSSMFYEKGHRVEKVISHPNYDSKTKNNDIALMKLHTPLTFNEVVKPVCLPNPGMMLEPEQHCWISGWGATQEKGKTSDVLNAAMVPLIEPRRCNNKYVYDGLITPAMICAGFLQGTVDSCQGDSGGPLVTLKNDVWWLIGDTSWGSGCAQANRPGVYGNVTVFTDWIYRQMRADG
(서열번호 23). 발명의 구현예에서, TMPRSS2 폴리펩타이드는 S129L, N251S, I415V, R431Q 및/또는 D492G 돌연변이를 포함하지 않는다.
발명의 구현예에서, 무스 무스쿨루스(Mus musculus) TMPRSS2 mRNA는 NM_015775.2에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
바이러스
본 발명은 대상체에서 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 포함한다. 용어 “바이러스”는 대상체의 체내 이의 감염이 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여에 의해 치료될 수 있거나 예방될 수 있는 임의의 바이러스 (예를 들어, 여기서, 바이러스의 감염성은 적어도 부분적으로 TMPRSS2에 의존한다)를 포함한다. 발명의 구현예에서, “바이러스”는 이의 단백질용해 절단이 숙주 내 세포에 대한 바이러스의 완전한 감염성을 위해 요구되는 TMPRSS2의 HA0 또는 또 다른 기질을 발현하는 임의의 바이러스이다. 용어 “바이러스”는 또한 대상체의 호흡기 조직 (예를 들어, 상부 및/또는 하부 호흡기관, 기관, 기관지, 폐)을 감염시키고 항-TMPRSS2의 투여에 의해 치료되거나 예방될 수 있는 TMPRSS2-의존성 호흡기 바이러스를 포함한다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-Co 바이러스 (중증의 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스), MERS-Co 바이러스 (중동 호흡기 증후군(MERS) CoV), 파라인플루엔자 바이러스, 센다이 바이러스 (SeV), 사람 메타뉴모바이러스 및/또는 C형 간염 바이러스 (HCV)를 포함한다. “바이러스 감염”은 대상체의 체내에서 바이러스의 침입 및 증식을 언급한다. 본 발명은 “바이러스”가 인플루엔자 바이러스를 배제하는, 예를 들어, 바이러스 감염이 인플루엔자 바이러스 감염을 배제하는 단서를 갖는 구현예를 포함한다.
현재 사람 파라인플루엔자 바이러스 (HPIV)는 2개의 속, 레스피로바이러스(HPIV-1 및 HPIV-3) 및 루불라바이러스 (HPIV-2 및 HPIV-4)가 있다. 상기 속 (파라믹소바이러스) 둘다는 형태적으로 인플루엔자 바이러스로부터 분리될 수 있다.
또한 뮤린 파라인플루엔자 바이러스로서 공지된 센다이 바이러스는 레스피로바이러스 속 중에서의 종 유형이고, 이는 또한 사람 파라인플루엔자 바이러스 3, 소 파라인플루엔자 바이러스 3 및 사람 파라인플루엔자 바이러스 1의 종을 함유한다. TMPRSS2는 파라인플루엔자 바이러스 및 센다이 바이러스 (SeV)와 같은 호흡기 파라인플루엔자 바이러스에 대한 활성화 프로테아제이다. 문헌(Abe et al., J. Virol. 87(21): 11930-11935 (2013))을 참조한다.
사람 메타뉴모바이러스 (HMPV)는 파라믹소비리대 과(family)내 뉴모비리내 아과의 메타뉴모바이러스 속의 제1 사람 구성원으로서 분류된다. 이것은 외피 음성-센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. RNA 게놈은 9개 상이한 단백질을 암호화하는 8개 유전자를 포함한다. HMPV는 또한 메타뉴모바이러스 속에 속하는 조류 뉴모바이러스 (AMPV)에 대한 유전자 체계에서 동일하다. TMPRSS2는 사람 폐 상피에서 발현되고, HMPV F 단백질을 효율적으로 절단하고 HMPV 증식을 지지하며 HMPV-감염된 환자에서 하부 호흡기 관 질병의 발병에 관여할 수 있다. 문헌(Shirogane et al. J Virol. 82(17): 8942-8946 (2008))을 참조한다.
C형 간염 바이러스 (HCV)는 플라비비리대 (Flaviviridae) 과의 작은 외피 양성-센스 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 적어도 6개 유전자형 및 많은 서브타입을 갖는 HCV는 헤파시바이러스(hepacivirus) 속의 구성원이다. TMPRSS2는 결합 후 및 진입 단계에서 HCV 감염을 활성화시킬 수 있다. 문헌(Esumi et al., Hepatology 61(2): 437-446 (2015))을 참조한다.
인플루엔자 바이러스는 오르토믹소비리대 (Orthomyxoviridae) 과의 구성원이다. 이러한 과는 외피 바이러스를 대표하고 이의 게놈은 분절된 음성-센스 단일-가닥 RNA 분절을 갖는다. 상기 과에는 4개의 속이 있다: A형, B형, C형 및 토고토바이러스 (Thogotovirus). 인플루엔자 바이러스 부류, A, B 및 C는 코어 단백질을 기반으로 하고 추가로 바이러스 외피 당단백질 헤마글루티닌 (HA) 및 뉴라미니다제 (NA) (예를 들어, A/H1N1 서브타입)에 의해 결정된 서브타입으로 세분된다. 인플루엔자 서브타입을 정의하기 위해 적어도 18개 인플루엔자 헤마글루티닌 ("HA") 단백질 서브타입(H1-H18 또는 HA1-HA18) 및 적어도 11개 인플루엔자 뉴라미니다제 (NA) 단백질 서브타입(N1-N11 또는 NA1-NA11)이 사용된다. 그룹 1 인플루엔자는 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16, H17 및 H18 서브타입 및 NA8, NA5, Na4 및 NA1 서브타입을 갖는다. 그룹 2는 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 서브타입 및 NA6, NA9, NA7, NA2 및 NA3 서브타입을 갖는다. 인플루엔자 A 바이러스는 광범위한 포유동물 및 조류 종을 감염시키는 반면, B형 및 C형 감염은 대부분 사람으로 제한된다. 인플루엔자 A 및 B 바이러스의 8개 게놈 분절은 핵단백질에 의해 느슨하게 캡시드화되어 있다.
코로나바이러스 비리온은 구형이고 직경은 대략 125 nm이다. 코로나바이러스의 가장 명확한 특성은 비리온의 표면으로부터 돌출된 클럽형 스파이크 돌출부이다. 이들 스파이크는 상기 비리온의 한정된 특성이고 이들에게 태양 코로나의 외형을 부여하여 코로나바이러스라는 명칭을 부여한다. 비리온의 외피 내에는 뉴클레오캡시드가 있다. 코로나바이러스는 나선형의 대칭 뉴클레오캡시드를 갖고, 이는 양성-센스 RNA 바이러스 중에서는 흔하지 않은 것이고 음성-센스 RNA 바이러스에 보다 더 흔한 것이다. MERS-CoV (중동 호흡기 증후군 코로나바이러스) 및 SARS-CoV (중증의 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스)는 코로나바이러스 과에 속한다. 비리온의 숙주 세포로의 초기 접착은 S 단백질과 이의 수용체 간의 상호작용에 의해 개시된다. 코로나바이러스 S 단백질의 S1 영역 내 수용체 결합 도메인 (RBD)의 부위는 바이러스에 따라 다양하고 일부는 S1의 C-말단에 RBD를 갖는다. S-단백질/수용체 상호작용은 코로나바이러스가 숙주 종을 감염시키기 위한 1차 결정인자이고 또한 바이러스의 조직 굴성을 지배한다. 많은 코로나바이러스는 이들의 세포 수용체로서 펩티다제를 사용한다. 수용체 결합 후, 바이러스는 이어서 숙주 세포 시토졸에 접근한다. 이것은 일반적으로 카뎁신, TMPRRS2 또는 또 다른 프로테아제에 의한 S 단백질의 산-의존성 단백질용해 절단에 이어서 바이러스 및 세포 막의 융합에 의해 성취된다.
항-TMPRSS2 항체 및 항원-결합 단편
본 발명은 TMPRSS2 단백질 또는 이의 항원성 단편에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원-결합 단편과 같은 항원-결합 단백질을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 2개의 중쇄 (HC) 및 2개의 경쇄 (LC)가 디설파이드 결합에 의해 상호 연결된 4개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 면역글로불린 분자(즉, “전체 항체 분자”), 및 이의 다량체 (예를 들어, IgM)-예를 들어, H1H7017N을 언급한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (“HCVR” 또는 “VH”) (예를 들어, 서열번호 2) 및 중쇄 불변 영역 (도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어짐)을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (“LCVR 또는 “VL”) (예를 들어, 서열번호 4) 및 경쇄 불변 영역 (CL)으로 구성된다. 상기 VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)이라 불리는 보다 보존된 영역과 교차배치된 상보성 결정 영역 (CDR)이라 불리는 초가변 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 하기의 순서로 아미노 말단에서 카복시 말단으로 정렬된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 발명의 특정 구현예에서, 상기 항체 (또는 이의 항원 결합 단편)의 FR은 사람 생식 세포 계열의 서열과 동일하거나, 또는 천연적으로 또는 인공적으로 변형된다.
전형적으로, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린의 가변 도메인은 또한 상대적으로 보존된 프레임워크 영역 (FR)에 위치한 상보성 결정 영역 (CDR)로 불리우는 3개의 초가변 영역을 포함한다. 일반적으로, N-말단에서 C-말단으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘다는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 발명의 구현예에서, 아미노산의 각각의 도메인으로의 할당은 문헌(참조: Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917 또는 Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883)의 면역학적 관심 대상의 단백질의 서열 정의에 따른다.
본 발명은 모노클로날 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 및 이의 항원-결합 단편, 및 다수의 단리된 모노클로날 항원-결합 단백질을 포함하는 모노클로날 조성물을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균일한 항체 집단을 언급하고, 즉 상기 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연의 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열에서 동일하다. 조성물에서 상기 모노클로날 항체 및 단편의 “다수”는 정상적으로 천연에, 예를 들어, 숙주 유기체, 예를 들어, 마우스 또는 사람에 존재하는 상기 동일한 (즉, 상기 논의된 바와 같이 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연의 돌연변이를 제외한 아미노산 서열에서) 항체 및 단편의 농도를 언급한다.
발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 유형 IgA(예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgD, IgE, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4) 또는 IgM의 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 발명의 구현예에서, 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 카파 또는 람다의 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 항체와 같은 용어 "사람” 항원-결합 단백질은 사람 세포에서든 또는 비-사람 세포, 예를 들어, 마우스 세포에 이식된 것이든 상관 없이 사람 생식 세포 계열의 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 예를 들어, 문헌(US8502018, US6596541 또는 Us5789215)을 참조한다. 본 발명의 사람 mAb는, 예를 들어, CDR에서 및 특히 CDR3에서, 사람 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관 내에서 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발 또는 생체 내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 "사람 항체"라는 용어는, 또 다른 포유동물 종 (예를 들어, 마우스)의 생식세포 계열로부터 유래된 CDR 서열이 사람 FR 서열로 이식된 mAb를 포함하려는 것은 아니다. 상기 용어는 비-사람 포유동물, 또는 비-사람 포유동물의 세포에서 재조합에 의해 제조된 항체를 포함한다. 상기 용어는 사람 대상체로부터 단리되거나 사람 대상체에서 생성된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 하기를 참조한다.
본 발명은 항-TMPRSS2 키메라 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 및 이의 항원-결합 단편 및 이의 사용 방법을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "키메라 항체"는 제1 항체로부터의 가변 도메인 및 제2 항체로부터의 불변 도메인을 갖는 항체이고, 여기서, 상기 제1 및 제2 항체는 상이한 종으로부터 기원한다. (US4816567; and Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855).
항체 또는 이의 항원-결합 단편과 같은 용어 "재조합” 항원-결합 단백질은 DNA 스플라이싱(splicing) 및 전이유전자 발현을 포함하는 재조합 DNA 기법으로 당업계에 공지된 기법 또는 방법들에 의해 생성되거나, 발현되거나, 단리되거나 또는 수득된 분자를 언급한다. 상기 용어는 사람이 아닌 포유동물 (사람이 아닌 유전자전이 포유동물, 예를 들어, 유전자전이 마우스 포함), 또는 세포 (예를 들어, CHO 세포) 발현 시스템에서 발현되거나 또는 재조합 조합형 사람 항체 라이브러리로부터 분리된 항체를 포함한다.
재조합 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본원에 기재된 항체 및 항원-결합 단편은 또한 이.콜리/T7 발현 시스템에서 제조될 수 있다. 이러한 구현예에서, 발명의 항-TMPRSS2 항체 면역글로불린 분자(예를 들어, H1H7017N)를 암호화하는 핵산은 pET-기반 플라스미드에 삽입될 수 있고 이. 콜리/T7 시스템에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 또한 T7 프로모터에 작동적으로 연결된 면역글로불린 쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포에서 T7 RNA 폴리머라제를 발현시킴을 포함하는, 숙주 세포 (예를 들어, BL21 및 BL21DE3과 같은 이. 콜리와 같은 세균 숙주 세포)에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 면역글로불린 쇄를 발현하기 위한 방법을 포함한다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 세균 숙주 세포, 예를 들어, 이. 콜리는 lac 프로모터에 작동적으로 연결된 T7 RNA 폴리머라제 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고 폴리머라제 및 상기 쇄의 발현은 상기 숙주 세포를 IPTG (이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노시드)로 항온처리함에 의해 유도된다. 문헌(US4952496 및 US5693489 또는 Studier & Moffatt, Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes, J. Mol. Biol. 1986 May 5;189(1): 113-30)을 참조한다.
재조합 항체를 제조하기 위한 여러 방법이 당업계에 공지되어 있다. 항체의 재조합 제조를 위한 방법의 하나의 예는 문헌(US4816567)에 기재되어 있다.
형질전환은 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포에 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의한 것일 수 있다. 이종성 폴리뉴클레오타이드를 포유동물 세포로 도입하기 위한 방법은 당업계에 널리 공지되어 있고 덱스트란 매개된 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개된 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포좀 내 폴리뉴클레오타이드(들)의 캡슐화, 바이오리스틱(biolistic) 주사 및 DNA의 핵으로의 직접적인 미세주사를 포함한다. 추가로, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유동물 세포로 도입될 수 있다. 세포를 형질전환시키는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호 및 제4,959,455호를 참조한다.
따라서, 본 발명은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 면역글로불린 쇄를 제조하기 위한 재조합 방법을 포함하고, 상기 방법은 (i) 항원-결합 단백질, 예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N의 경쇄 및/또는 면역글로불린을 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 (예를 들어, 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 또는 15 중 임의의 하나 이상에서 뉴클레오타이드 서열을 포함하는)를 도입하는 단계로서, 예를 들어, 상기 폴리뉴클레오타이드가 벡터에 존재하고/하거나 숙주 세포 염색체로 통합되고/되거나 프로모터에 작동적으로 연결되는, 단계; (ii) 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호될 수 있는 조건하에서 숙주 세포(예를 들어, CHO 또는 피키아(Pichia) 또는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris))를 배양하는 단계 및 (iii) 임의로 상기 숙주 세포 및/또는 상기 숙주 세포가 성장한 배지로부터 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 단편) 또는 쇄를 단리시키는 단계를 포함한다. 하나 초과의 면역글로불린 쇄를 포함하는 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편), 예를 들어, 2개의 중쇄 면역글로불린 및 2개의 경쇄 면역글로불린를 포함하는 항체를 제조하는 경우, 단일 숙주 세포에서 쇄의 동시 발현은 예를 들어, 세포 내에서 또는 세포 표면 상에서 또는 상기 쇄가 분비되는 경우 세포 외부에서 쇄의 연합을 유도하여 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편)을 형성한다. 상기 방법은 단지 중쇄 면역글로불린 또는 단지 경쇄 면역글로불린 (예를 들어, 성숙한 단편 및/또는 이의 가변 도메인을 포함하는 본원에 논의된 임의의 것들)이 발현되는, 방법들을 포함한다. 상기 쇄는 예를 들어, 상기 쇄를 포함하는 항체 또는 항원-결합 단편의 발현에서 중간체로서 유용하다. 예를 들어, 본 발명은 또한 서열번호 1에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 중쇄 면역글로불린 (또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함하는) 및 서열번호 3에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 면역글로불린 (또는 이의 가변 도메인 또는 이의 CDR을 포함하는)을 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편과 같은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 포함하고, 이들은 상기 제조 방법 및 임의로 본원에 제시된 정제 방법의 생성물이다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 상기 방법의 생성물은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질이고 이는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하거나 서열번호 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항체 또는 단편이다.
포유동물 세포를 포함하는 진핵 및 원색 숙주 세포는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질의 발현을 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 상기 숙주 세포는 당업계에 널리 공지되어 있고 많은 세포들은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection (ATCC))으로부터 가용하다. 이들 숙주 세포는 특히 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장 (BHK) 세포, 몽키 신장 세포(COS), 사람 간세포 암종 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포, HEK-293 세포 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 포유동물 숙주 세포는 사람, 마우스, 래트, 개, 몽키, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 세포주는 곤충 세포주(예를 들어, 스포돕테라 프루기퍼다(Spodoptera frugiperda) 또는 트리코플루시아 니 (Trichoplusia ni)), 양서류 세포, 세균 세포, 식물 세포 및 진균류 세포이다. 진균류 세포는 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브란아에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피키아 미누타(Pichia minuta)(오가타에아 미누타(Ogataea minuta), 피키아 린드네리(Pichia lindneri)), 피키아 오푼티아에(Pichia opuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살릭타리아(Pichia salictaria), 피키아 구어쿰(Pichia guercuum), 피키아 피이페리(Pichia pijperi), 피키아 스티프티스(Pichia stiptis), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피키아 종(Pichia sp.), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 종 (Saccharomyces sp.), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스 종(Kluyveromyces sp.), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 캔디다 알비칸스(Candida albicans), 아스퍼길러스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스퍼길러스 나이거(Aspergillus niger), 아스퍼길러스 오리재(Aspergillus oryzae), 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 루크노웬스(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 종(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미늄(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)를 포함하는, 효모 및 사상 진균류를 포함한다. 본 발명은 H1H7017N과 같은 항원-결합 단백질; 또는 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 숙주 세포 (예를 들어, CHO 세포)를 포함한다.
용어 “특이적으로 결합한다”는 예를 들어, 25oC 또는 37oC에서 실시간 표지 부재 생물-층 간섭계 검정, 예를 들어, Octet® HTX 바이오센서에 의한 또는 표면 플라스몬 공명, 예를 들어, BIACORE™에 의한 또는 용액-친화성 ELISA에 의한 측정시 KD가 적어도 약 10-8 M (예를 들어, 2.81 X 10-9 M; 9.31 X 10-9M; 10-9 M; 10-10M, 10-11 M, 또는 10-12 M)으로 나타나는, TMPRSS2 단백질 (예를 들어, 사람 TMPRSS2)과 같은 항원에 대해 결합 친화성을 갖는 항원-결합 단백질을 언급한다. 본 발명은 TMPRSS2 단백질에 특이적으로 결합하는 항원-결합 단백질을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 항체 또는 항원-결합 단백질 등의 “항원 결합부” 또는 “항원-결합 단편”는 임의의 천연적으로 존재하거나, 효소적으로 수득될 수 있거나, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 합성 또는 유전학적으로 가공된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항원 결합 단편의 비제한적 예로는 하기를 포함한다: (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일쇄 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역 (예를 들어, 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 예컨대 CDR3 펩타이드), 또는 제한된(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩타이드를 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인지 단위. 다른 가공된 분자, 예를 들어, 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-이식 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디 (예를 들어, WO08/020079 또는 WO09/138519에 의해 정의된 바와 같이) (예를 들어. 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 소형 모듈러 면역약제(SMIP), 및 샤크 가변 IgNAR 도메인은 또한 본원에 사용된 바와 같은 표현 “항원-결합 단편”에 포함된다. 발명의 구현예에서, 항원-결합 단편은 H1H7017N의 3개 이상의 CDR (예를 들어, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3)을 포함한다.
항체의 항원-결합 단편은 발명의 구현예에서 적어도 하나의 가변 도메인을 포함한다. 상기 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성의 도메인일 수 있으며, 일반적으로 하나 이상의 골격 서열에 인접하고 있거나 이와 함께 골격을 이루는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 결합된 VH 도메인을 갖는 항원 결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 서로에 대해 임의의 적합한 배열로 위치할 수 있다. 예를 들어, 상기 가변 영역은 이량체여서 VH - VH, VH - VL 또는 VL - VL 이량체를 포함할 수 있다. 다르게는, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 VH 또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적 구성은 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 상기 열거된 예시적 임의의 구성을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접적으로 연결될 수 있거나 완전한 또는 부분적 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 적어도 2개 (예를 들어, 5개, 10개, 15개, 20개, 40개, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있으며, 이는 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에서 가요성 또는 반가요성 결합을 유도한다. 더욱이, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로 및/또는 하나 이상의 단량체성 VH 또는 VL 도메인과 (예를 들어, 디설파이드 결합(들)에 의해) 비공유 연합된, 상기 나열된 임의의 가변 및 불변 도메인 구성의 동종 이량체 또는 이종 이량체 (또는 기타 다량체)를 포함할 수 있다.
항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 및 항원-결합 단편)은 단일 특이적 또는 다중 특이적 (예를 들어, 이중-특이적)일 수 있다. 다중 특이적 항원-결합 단백질은 본원에서 추가로 논의된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 리간드 또는 치료학적 모이어티 ("면역접합체(immunoconjugate)")와 같은 모이어티, 항-바이러스 약물, 제2 항-인플루엔자 항체, 또는 바이러스 감염, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하는데 유용한 임의의 기타 치료학적 모이어티에 접합될 수 있다. 하기를 참조한다.
본 발명은 또한 TMPRSS2T 폴리펩타이드 또는 이의 항원 단편과 복합체화되고/되거나 항-TMPRSS2 항체 또는 단편에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들어, 검출가능하게 표지된 2차 항체)와 복합체화된, 본원에 논의된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 복합체를 제공한다. 발명의 구현예에서, 항체 또는 단편은 시험관내이거나 (예를 들어, 고체 기질에 고정화되어 있다) 대상체의 체내에 있다. 발명의 구현예에서, TMPRSS2는 시험관내이거나 (예를 들어, 고체 기질에 고정화되어 있다) 세포의 표면성에 또는 대상체의 체내에 있다. 불용성 매트릭스 물질 (유리 또는 폴리사카라이드, 예를 들어, 아가로스 또는 세파로스, 예를 들어, 비드 또는 이의 다른 입자)에 공유적으로 연결된 고정화된 항-TMRPSS2 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 본 발명의 일부이고; 임의로, 여기서, 상기 고정화된 항체는 TMPRSS2 또는 이의 항원성 단편 또는 2차 항체 또는 이의 단편과 복합체화되어 있다.
“단리된" 항원-결합 단백질, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드 및 벡터는 적어도 부분적으로 이들이 생성되는 세포 또는 세포 배양물 기원의 다른 생물학적 분자가 없다. 상기 생물학적 분자는 핵산, 단백질, 다른 항체 또는 항원-결합 단편, 지질, 탄수화물, 또는 다른 물질, 예를 들어, 세포 잔해 및 성장 배지를 포함한다. 단리된 항체 또는 항원-결합 단편은 숙주 세포로부터의 생물학적 분자와 같은 발현 시스템 성분 또는 이의 성장 배지가 적어도 부분적으로 부재일 수 있다. 일반적으로 용어 "단리된"은 상기 생물학적 분자의 완전한 부재 또는 물, 완충액 또는 염의 부재 또는 항체 또는 단편을 포함하는 약제학적 제형의 성분을 언급한다.
“에피토프"라는 용어는 파라토프(paratope)로서 공지된, 항원-결합 단백질의 특이적 항원-결합 부위, 예를 들어, 항체 분자의 가변 영역과 상호작용하는 항원 결정기 (예를 들어, TMPRSS2 폴리펩타이드 상에)를 언급한다. 단일 항원은 하나 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체들은 항원 상의 상이한 영역에 결합할 수도 있고 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. "에피토프"라는 용어는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 지칭하기도 한다. 이는 항체에 의해 결합된 항원의 영역을 지칭하기도 한다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 한정될 수도 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 하위세트이고 상호작용의 친화도에 직접적으로 기여하는 잔기들를 가진다. 에피토프는 선형 또는 입체적 구조일 수도 있는데, 즉, 비선형 아미노산으로 구성될 수도 있다. 특정 구현예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 기, 또는 설포닐 기와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹인 결정기를 포함할 수도 있고, 특정 구현예에서는, 특이적인 3차원 구조적 특성 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수도 있다.
항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드의 에피토프를 결정하기 위한 방법은 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩타이드 블롯 분석 (문헌참조: Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248: 443-63), 펩타이드 절단 분석, 결정학적 연구 및 NMR 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법도 사용될 수 있다 (문헌참조: Tomer (2000) ProtTomer (2000) Prot. Sci. 9: 487-496). 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드)(예를 들어, 커버신)이 상호작용하는 폴리펩타이드 내 아미노산을 동정하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분광측정기로 검출되는 수소/중수소 교환법이다. 일반적으로, 상기 수소/중수소 교환법은 관심대상 단백질을 중수소-표지화하고 이어서, 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드를 중수소-표지된 단백질에 결합시키는 단계를 포함한다. 다음으로, 상기 TMPRSS2 단백질/항원-결합 단백질 복합체를 물로 이동시키고 상기 항체 복합체에 의해 보호되는 아미노산 내에서 교환가능한 양성자는 계면의 일부가 아닌 아미노산 내에서 교환가능한 양성자보다 더 느린 속도로 중수소에서 수소로의 역교환을 진행한다. 결과로서, 상기 단백질/항원-결합 단백질 계면의 일부를 형성하는 아미노산은 중수소를 보유할 수 있고 따라서 상기 계면에 포함되지 않은 아미노산에 비해 비교적 더 높은 질량을 나타낸다. 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 단편 또는 폴리펩타이드)의 해리 후, 표적 단백질을 프로테아제 절단 및 질량 분광측정 분석에 적용함으로써, 상기 항원-결합 단백질이 상호작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소-표지된 잔기를 밝혀낸다. 예를 들어, 문헌(Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267: 252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73: 256A-265A)을 참조한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “경쟁한다”는 항원(예를 들어, TMPRSS2)에 결합하고 또 다른 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 항원으로의 결합을 억제하거나 차단시키는 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 언급한다. 상기 용어는 또한 양 방향으로 2개의 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체, 즉, 제2 항체에 결합하여 그의 결합을 차단하거나 이의 반대의 경우를 포함하는 방향으로의 2개의 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체간의 경쟁을 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체) 및 제2 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체)은 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로, 제1 및 제2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체)은 예를 들어, 하나의 결합이, 예를 들어, 입체 장애를 통해 제2 항체의 결합을 억제하거나 차단하도록, 상이하지만, 예를 들어, 중첩된 에피토프에 결합할 수도 있다. 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체)간의 경쟁은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 실시간 무표지 바이오층 간섭굴절측정법(interferometry) 검정에 의해 측정될 수 있다. 발명의 구현예에서, 제1 및 제2 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체) 간의 경쟁은 제2 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체)과 복합체화된 가용성 TMPRSS2 단백질에 결합하는 고정화된 제1 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체) (TMPRSS2 단백질과 처음에 복합체화되지 않은)의 능력을 측정함에 의해 결정된다. 복합체화되지 않은 TMPRSS2 단백질에 상대적으로, 복합체화된 TMPRSS2 단백질에 결합하는 제1 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체)의 능력의 감소는 제1 및 제2 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체)이 경쟁함을 지적한다. 경쟁 정도는 결합에서의 감소 퍼센트로서 표현될 수 있다. 상기 경쟁의 정도는 예를 들어, Octet RED384 바이오센서 (Pall ForteBio Corp.), ELISA (효소-결합된 면역흡착 검정) 또는 SPR (표면 플라스몬 공명) 상에서 실시간의 표지-부재 바이오층 간섭계 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
Octet RED384 바이오센서 (Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간 표지 부재 바이오층 간섭계 검정을 사용하여 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 모노클로날 항체(mAb))들 간의 결합 경쟁을 결정할 수 있다. 예를 들어, 2개의 항-사람 TMPRSS2 모노클로날 항체간의 경쟁을 결정하기 위해, 항-TMPRSS2 mAb는 먼저 팁을 항-사람 TMPRSS2 mAb (후속적으로 “mAb1”으로서 언급됨)의 용액에 침지시킴에 의해 항-hFc 항체 코팅된 Octet 바이오센서 팁(Pall ForteBio Corp., # 18-5060) 상으로 포획될 수 있다. 차단을 위한 양성 대조군으로서, 항체 포획된 바이오센서 팁은 이어서 차단 mAb의 용액에 침지시킴에 의해 공지된 차단 이소타입 대조군 mAb (후속적으로 “차단 mAb”로서 언급됨)으로 포화시킬 수 있다. mAb2가 mAb1과 경쟁하는지를 결정하기 위해, 이어서 바이오센서 팁은 일정 기간 동안 예비-항온처리된 사람 TMPRSS2 폴리펩타이드와 제2 항-사람 TMPRSS2 mAb의 동시 복합체화된 용액에 후속적으로 침지시킬 수 있고 mAb1의 TMPRSS2 폴리펩타이드로의 결합은 결정될 수 있다. 바이오센서 팁은 실험의 모든 단계 사이에서 완충액 중에 세척될 수 있다. 실시간 결합 반응을 실험 과정을 진행하는 동안 모니터링할 수 있고, 매 단계의 종료시마다 결합 반응을 기록할 수 있다.
예를 들어, 발명의 구현예에서, 경쟁 검정은 예를 들어, 완충액, 염, 계면활성제 및 비-특이적 단백질 (예를 들어, 소 혈청 알부민)의 존재하에, 25oC 및 pH 약 7, 예를 들어, 7.4에서 수행된다.
전형적으로, 일부 방식으로 변형된 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하고, 예를 들어, 활성이 몰 기준으로 표현되는 경우 TMPRSS2 결합 활성의 적어도 10% (모 항체와 비교하는 경우)를 보유한다. 바람직하게, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 모 항체와 비교하여 TMPRSS2 결합 친화성의 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 이상을 보유한다. 또한, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 이의 생물학적 활성을 실질적으로 변형시키지 않는 보존성 또는 비-보존성 아미노산 치환 (항체의 “보존성 변이체” 또는 “기능 보존된 변이체”로서 언급되는)을 포함할 수 있는 것으로 의도된다.
면역글로불린 쇄 (예를 들어, H1H7017N VH, VL, HC 또는 LC)와 같은 폴리펩타이드의 “변이체”는 알고리듬의 파라미터가 각각의 참조 서열의 전체 길이를 따라 각각의 서열 간에 최대의 일치 (예를 들어, 예상 역치: 10; 워드 크기: 3; 탐색 범위내 최대 일치: 0; BLOSUM 62 매트릭스; 갭 비용: 연장 11, 연장 1; 조건적 조성 스코어 매트릭스 조정)를 제공하도록 선택되는 BLAST 알고리듬에 의해 비교되는 경우, 본원에 제시된 참조 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 2, 4, 17, 18 또는 19)과 적어도 약 70-99.9% (예를 들어, 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) 동일하거나 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 언급한다.
폴리뉴클레오타이드의 “변이체”는 알고리듬의 파라미터가 각각의 참조 서열의 전체 길이를 따라 각각의 서열 간에 최대의 일치 (예를 들어, 예상 역치: 10; 워드 크기: 28; 탐색 범위내 최대 일치: 0; 일치/불일치 스코어:1, -2; 갭 비용: 선형)를 제공하도록 선택되는 BLAST 알고리듬에 의해 비교되는 경우, 본원에 제시된 참조 뉴클레오타이드 서열 (예를 들어, 서열번호 1 또는 3)과 적어도 약 70-99.9% (예를 들어, 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 언급한다.
항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 발명의 구현예에서 본 발명의 항체 및 항원-결합 단편은 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산과 적어도 70% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산과 적어도 70% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) 아미노산 서열 동일성을 갖는 경쇄 면역글로불린 가변 영역을 포함한다.
추가로, 변이체 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질은 예를 들어, 미스센스 돌연변이 (예를 들어, 보존성 치환), 논-센스 돌연변이, 결실 또는 삽입과 같은 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10)의 돌연변이를 제외하고 본원에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하지만 하나 이상의 상기 돌연변이를 갖는 면역글로불린 경쇄 변이체 및/또는 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하지만 하나 이상의 상기 돌연변이를 갖는 면역글로불린 중쇄 변이체를 포함하는 항원-결합 단백질을 포함한다. 발명의 구현예에서, 변이체 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질은 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 변이체 (여기서, 상기 CDR 중 하나 이상(예를 들어, 1 또는 2 또는 3개)는 상기 하나 이상의 돌연변이 (예를 들어, 보존성 치환)를 갖는다) 및/또는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 변이체 (여기서, 상기 CDR 중 하나 이상(예를 들어, 1 또는 2 또는 3개)는 상기 하나 이상의 돌연변이 (예를 들어, 보존성 치환)를 갖는다)을 포함한다.
본 발명은 추가로 예를 들어, 서열번호 12, 14, 16, 6, 8 및/또는 10과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9% 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 본원에 제시된 하나 이상의 변이체 CDR (예를 들어, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3 중 임의의 하나 이상)을 포함하는, 변이체 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
본 발명의 구현예는 또한 본원에 구체적으로 제시된 상응하는 VH, VL, HC 또는 LC의 아미노산 서열과 70% 이상 (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% 또는 99%)의 전체 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 면역글로불린 VH 및 VL; 또는 HC 및 LC를 포함하는 변이체 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원-결합 단백질을 포함하지만, 여기서, 상기 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3은 변이체가 아니고 각각 서열번호 12, 14, 16, 6, 8 및 10에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 상기 구현예에서, 변이체 항원-결합 단백질 내 CDR은 그 들 자체가 변이체는 아니다.
보존적으로 변형된 변이체 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 본 발명의 일부이다. "보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 폴리펩타이드 내 아미노산들이 유사한 특징 (예를 들어, 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 골격 형태 및 강직성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 하나 이상 치환된 변이체를 언급한다. 상기 변화는 흔히 항체 또는 단편의 생물학적 활성을 유의적으로 억제시키는 것 없이 수행될 수 있다. 당업자는 일반적으로 폴리펩타이드의 비-필수 영역에서 단일 아미노산 치환이 실질적으로 생물학적 활성을 변화시키지 않음을 인지할 것이다(문헌참조: 예를 들어, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)). 추가로, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 유의적으로 억제할 가능성이 적다.
유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 보유하는 아미노산의 기의 예로는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹으로는 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트 및 아스파라긴-글루타민이다. 대안적으로, 보존성 대체는 문헌 [참조: Gonnet et al. (1992) Science 256: 144345]에 개시된 PAM250 로그-우도 매트릭스(log-likelihood matrix)에서 양성 값을 갖는 임의의 변화이다.
항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능-보존성 변이체는 또한 본 발명의 일부이다. 항-TMPRSS2 항체 및 이의 항원-결합 단편 (본원에 논의된 바와 같은)의 임의의 변이체는 “기능-보존성 변이체”일 수 있다. 상기 기능-보존성 변이체는 일부 경우에 또한 보존적으로 변형된 변이체로서 특징 분석될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "기능-보존성 변이체"는 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 변이체를 언급하고, 여기서, 하나 이상의 아미노산 잔기들은 항체 또는 단편의 하나 이상의 기능성 성질을 유의적으로 변경시키는 것 없이 변화되어 있다. 발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 기능-보존성 변이체는 변이체 아미노산 서열을 포함하고 하기의 기능성 성질 중 하나 이상을 나타낸다:
·TMPRSS2-발현 세포(예를 들어, Calu-3 세포)에서 인플루엔자 바이러스 (예를 들어, A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1))의 성장을 억제하는 것;
·예를 들어, 각각 440pM 또는 1.06nM의 EC50 값으로 TMPRSS-발현 세포 (예를 들어, MDCK/Tet-on)의 표면에 결합하는 것;
·TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의적으로 결합하지 않는 것;
·약 25oC에서 약 2.81 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 37oC에서 약 9.31 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 25oC에서 약 5.60 X 10-8 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
·약 37oC에서 약 1.40 X 10-7 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
·시험관내에서 세포, 예를 들어, Calu-3의 인플루엔자 바이러스 감염 (예를 들어, H1_PR34; H1_CA09; H1_Bris; H9N2 또는 H3N2 인플루엔자 바이러스에 의해)의 확산을 제한하는 것; 및/또는
·임의로 항-HA 항체와 조합된 경우, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 인플루엔자 바이러스 감염, 예를 들어, H1N1, 또는 H3N2에 의해 유발된 사망으로부터 보호하는 것 (여기서, 상기 마우스는 다른 치사량의 바이러스로 감염되어 있다).
본 발명은 마우스의 체내에 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편), 예를 들어, H1H7017N 및 H4H7017N을 포함하는 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 포함한다. 국제 특허 출원 공개 번호 WO2017/151453를 참조한다.
“중화” 또는 “길항제” 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 TMPRSS2의 활성을 임의의 검출가능한 정도로 억제하는, 예를 들어, HA; Cbz-Gly-Gly-Arg-AMC (Sigma)(여기서, Cbz는 벤질옥시카보닐이고 AMC는 7-아미노-4-메틸쿠마린이다)와 같은 기질에 대한 TMPRSS2; 인플루엔자 바이러스 HA0; 코로나바이러스 S 단백질; 또는 Arg255와 Ile256 사이에서 자가촉매적으로 절단되는 전구체 TMPRSS2의 프로테아제 활성을 억제하고/하거나 인플루엔자 바이러스의 세포로의 진입을 억제하고/하거나 대상체의 체내에서 인플루엔자 바이러스 생식을 억제하는 분자를 언급한다.
“H1H7017N” 및 “H4H7017N”은 항원-결합 단백질, 예를 들어, 하기에 제시된 바와 같은 중쇄 또는 VH (또는 이의 변이체) 및 하기 제시된 바와 같은 경쇄 또는 VL (또는 이의 변이체)를 포함하거나; 이의 CDR을 포함하는 VH (CDR-H1 (또는 이의 변이체), CDR-H2 (또는 이의 변이체) 및 CDR-H3 (또는 이의 변이체)) 및 이의 CDR을 포함하는 VL (CDR-L1 (또는 이의 변이체), CDR-L2 (또는 이의 변이체) 및 CDR-L3 (또는 이의 변이체))를 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 언급하고, 예를 들어, 여기서, 면역글로불린 쇄, 가변 영역 및/또는 CDR은 하기된 특정 아미노산 서열을 포함한다.
발명의 구현예에서, “H1H7017N” 또는 “H4H7017N”은 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 DR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3; 및 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 언급한다.
발명의 구현예에서, “H1H7017N” 또는 “H4H7017N”은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 언급한다.
발명의 구현예에서, “H1H7017N”은 서열번호 17에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 언급한다.
발명의 구현예에서, “H4H7017N”은 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린을 포함하는 항체 또는 항원-결합 단편을 언급한다. 상기 용어 “H4H7017N”은 또한 상기 VH가 야생형 IgG4와 융합된 구현예를 포함하고, 예를 들어, 잔기 108은 S이다.
항-TMRPS22 항체 또는 항원-결합 단편 H1H7017N 및 H4H7017N
H1H7017N 및 H4H7017N 중쇄 가변 영역 (DNA)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTTCCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGCAAGGGGCTCGAGTGGGTGGCAGTTATATGGAATGATGGAAGTTATGTATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACATTTCCAAGAACACGCTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGGGGGAGTGGGTACTTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
(서열번호 1)
H1H7017N 및 H4H7017N 중쇄 가변 영역(폴리펩타이드)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVIWNDGSYVYYADSVKGRFTISRDISKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCAREGEWVLYYFDYWGQGTLVTVSS
(서열번호 2)
H1H7017N 및 H4H7017N 경쇄 가변 영역 (DNA)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATAAGGCGTCTACTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
(서열번호 3)
H1H7017N 및 H4H7017N 경쇄 가변 영역 (폴리펩타이드)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSYTFGQGTKLEIK
(서열번호 4)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H1 (DNA)
GGA TTC ACC TTC AGT TCC TAT GGC
(서열번호 5)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H1 (폴리펩타이드)
G F T F S S Y G
(서열번호 6 (또는 1, 2, 3 또는 4개의 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H2 (DNA)
ATA TGG AAT GAT GGA AGT TAT GTA
(서열번호 7)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H2 (폴리펩타이드)
I W N D G S Y V
(서열번호 8 (또는 1, 2, 3 또는 4개의 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H3 (DNA)
GCG AGA GAG GGG GAG TGG GTA CTT TAC TAC TTT GAC TAC
(서열번호 9)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-H3 (폴리펩타이드)
A R E G E W V L Y Y F D Y
(서열번호 10 (또는 1, 2, 3 또는 4개의 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L1 (DNA)
CAG AGT ATT AGT AGC TGG
(서열번호 11)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L1 (폴리펩타이드)
Q S I S S W
(서열번호 12 (또는 1, 2, 3 또는 4개의 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L2 (DNA)
AAG GCG TCT
(서열번호 13)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L2 (폴리펩타이드)
K A S
(서열번호 14 (또는 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L3 (DNA)
CAA CAG TAT AAT AGT TAT TCG TAC ACT
(서열번호 15)
H1H7017N 및 H4H7017N CDR-L3 (폴리펩타이드)
Q Q Y N S Y S Y T
(서열번호 16 (또는 1, 2, 3 또는 4개의 점 돌연변이 및/또는 점 결실을 갖는 이의 변이체))
H1H7017N
전장 중쇄-사람 IgG1
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVIWNDGSYVYYADSVKGRFTISRDISKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCAREGEWVLYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
(서열번호 17)
전장 경쇄-사람 카파
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(서열번호 18)
H4H7017N
전장 중쇄-사람 IgG4 (S108P)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQSPGKGLEWVAVIWNDGSYVYYADSVKGRFTISRDISKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCAREGEWVLYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(서열번호 19)
전장 경쇄-사람 카파
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(서열번호 18)
본 발명의 항체 및 항원-결합 단편은 항체에 대한 세포 및 시험관내 해독 후 변형 뿐만 아니라 본원에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 쇄를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 하나 이상의 아미노산 잔기가 당화되어 있고, 하나 이상의 Asn 잔기가 탈아미드화되어 있고, 하나 이상의 잔기 (예를 들어, Met, Trp 및/또는 His)가 산화되어 있고, N-말단 Gln이 피로글루타메이트 (pyroE)이고/이거나 C-말단 라이신이 결실되어 있는 항체 및 단편 뿐만 아니라 본원에 제시된 바와 같은 중쇄 및/ 경쇄 아미노산 서열 (예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3)을 포함하는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 발명은 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N을 포함하는 용기 (예를 들어, 플라스틱 또는 유리 바이알, 예를 들어, 캡 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공 보어 바늘 또는 시린지 실린더)를 제공한다.
본 발명은 또한 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편), 예를 들어, H4H7017N 또는 H1H7017N 또는 이의 약제학적 조성물을 포함하는 주사 장치를 제공한다. 주사 장치는 키트에 팩키징될 수 있다. 주사 장치는 물질을 비경구 경로, 예를 들어, 근육내, 피하 또는 정맥내를 통해 대상체의 체내에 도입하는 장치이다. 예를 들어, 주사 장치는 예를 들어, 주사될 (예를 들어, 항체 또는 단편 또는 이의 약제학적 조성물을 포함하는) 유체를 유지하기 위한 실린더 또는 배럴, 유체의 주사를 위해 피부 및/또는 혈관을 천공하기 위한 바늘; 및 유체를 실린더로부터 및 바늘 보어를 통해 밀어내기 위한 플런저를 포함하는 주사기 (예를 들어, 자동-주사기와 같이 약제학적 조성물로 미리 채워진)일 수 있다. 본 발명의 구현예에서, 본 발명의 조합물 또는 이의 약제학적 조성물로부터의 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 주사 장치는 정맥내 (IV) 주사 장치이다. 상기 장치는 캐뉼라 또는 트로카/바늘을 통해 대상체의 체내로 도입되는 유체 (예를 들어, 식염수)를 유지하기 위한 백 또는 저장소에 부착될 수 있는 튜브에 부착될 수 있는 캐뉼라 또는 트로카/바늘에 항원-결합 단백질 또는 이의 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 항체 또는 단편 또는 이의 약제학적 조성물은 발명의 구현예에서 트로카 및 캐뉼라가 대상체의 정맥에 삽입되고 트로카가 삽입된 캐뉼라로부터 제거되면 장치에 도입될 수 있다. IV 장치는 예를 들어 말초 정맥 내 (예를 들어, 손 또는 팔에서); 상대 정맥 또는 하대 정맥, 또는 심장의 우측 아트리움 내(예를 들어, 중앙 IV); 또는 쇄골하로, 내경(internal jugular), 또는 대퇴 정맥으로 삽입될 수 있고 예를 들어, 이것이 상대정맥 또는 우측 아트리움 (예를 들어, 중심 정맥 라인)에 도달할때까지 심장 쪽으로 진행될 수 있다. 발명의 구현예에서, 주사 장치는 자동주사기; 제트 주사기 또는 외부 주입 펌프이다. 제트 주사기는 항체 또는 단편 또는 이의 약제학적 조성물을 대상체의 체내로 도입하기 위해 상피를 침투하는 액체의 고압 협소 제트를 사용한다. 외부 주입 펌프는 항체 또는 단편 또는 이의 약제학적 조성물을 제어된 양으로 대상체의 체내에 전달하는 의학적 장치이다. 외부 주입 펌프는 전기적으로 또는 기계적으로 가동될 수 있다. 상이한 펌프는 상이한 방식으로 작동하고, 예를 들어, 주사기 펌프는 주사기의 저장소에 유체를 보유하고, 이동가능한 피스톤은 유체 전달을 제어하고, 탄성중합체 펌프는 스트레칭될 수 있는 벌룬 저장소에서 유체를 보유하고, 벌룬의 탄성 벽으로부터의 압력은 유체 전달을 구동한다. 연동 펌프에서, 롤러 세트는 유연한 튜빙의 길이 상에서 조여 유체를 전방으로 밀어낸다. 다중-채널 펌프에서, 유체는 다중 비율로 다중 저장소로부터 전달될 수 있다.
본 발명은 추가로 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, H4H7017N 또는 H1H7017N을 투여하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 대상체 (예를 들어, 사람)의 체내로 상기 항원-결합 단백질을 도입함을 포함한다. 예를 들어, 상기 방법은 대상체의 체내에 시린지 바늘을 천공하고 항원-결합 단백질을 대상체의 체내, 예를 들어, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직으로 주사함을 포함한다.
사람 항체의 제조
유전자전이 마우스에서 사람 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 상기 공지된 방법은 본 발명과 관련하여 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 하기 중 임의의 하나를 포함하는 면역원을 사용하여 TMPRSS2에 대한 항체를 생성할 수 있다. 발명의 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 전장의 본래의 TMPRSS2 또는 상기 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA로 면역화된 마우스로부터 수득된다. 다르게는, 상기 TMPRSS2 단백질 또는 이의 단편은 표준 생화학 기법들을 사용하여 제조되고, 면역원으로 변형 및 사용될 수 있다. 발명의 하나의 구현예에서, 면역원은 재조합적으로 제조된 TMPRSS2 단백질 또는 이의 단편이다. 발명의 특정 구현예에서, 면역원은 TMPRSS2 폴리펩타이드 백신일 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 부스터 주사가 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 면역원은 이. 콜리(E. coli ) 또는 임의의 기타 진핵 또는 포유동물 세포, 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 발현시킨 재조합 TMPRSS2 폴리펩타이드일 수 있다.
VELOCIMMUNE® 기법 [예를 들어, US 6,596,541호, 리제네론 파마슈티컬즈(Regeneron Pharmaceuticals), VELOCIMMUNE® 참조] 또는 모노클로날 항체를 생성하기 위한 임의의 기타 공지된 방법을 사용하여, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, TMPRSS2에 대한 높은 친화도의 키메라 항체를 먼저 단리시킬 수 있다. VELOCIMMUNE® 기법은 마우스가 항원의 자극에 반응하여 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생성하도록 내인성 마우스 불변 영역 유전자 좌에 작동가능하게 연결된 사람 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 유전자전이 마우스의 생성을 수반한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 분리시켜 사람 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동가능하게 연결시킨다. 다음으로, 상기 DNA를 전장 사람 항체를 발현할 수 있는 세포 중에서 발현시킨다.
일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스를 관심대상 항원으로 챌린지하고, 항체를 발현하는 마우스로부터 림프성 세포 (예컨대, B-세포)를 회수한다. 상기 림프성 세포를 골수종 세포주와 융합시켜 불멸성 하이브리도마 세포주를 제조할 수 있으며, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선별하여 관심대상 항원에 특이적인 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 동정한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 단리하여 중쇄 및 경쇄의 목적하는 이소타입 불변 영역에 연결시킬 수 있다. 이러한 항체 단백질은 CHO 세포와 같은 세포에서 생성할 수 있다. 다르게는, 항원 특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA를 항원 특이 림프구로부터 직접 단리할 수도 있다.
처음에, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 높은 친화도 키메라 항체를 단리한다. 하기 실험 섹션에 기재된 바와 같이, 상기 항체는 특징 분석되고 친화성, 선택성, 에피토프 등을 비롯한 목적하는 특징들에 대해 선택된다. 상기 마우스 불변 영역들을 목적하는 사람 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 전장 사람 항체, 예를 들어 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 제조한다. 선택된 불변 영역이 특정 용도에 따라 다양할 수 있지만, 높은 친화성의 항원-결합 및 표적 특이성 특징들은 가변 영역에 남아 있다.
Fc 변이체를 포함하는 항-TMPRSS2 항체
본 발명의 특정 구현예에 따라, 예를 들어 중성 pH에 비하여, 산성 pH에서 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 증진시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 본 발명은 Fc 도메인의 CH2 또는 CH3 영역에서 돌연변이를 포함하는 항-TMPRSS2 항체를 포함하는데, 여기서 상기 돌연변이(들)은 산성 환경 (예를 들어, pH가 약 5.5 내지 약 6.0의 범위에 있는 엔도좀) 내에서 FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화성을 증가시킨다. 상기 돌연변이는 동물에게 투여되는 경우 항체의 혈청 반감기의 증가를 유도할 수 있다. 이러한 Fc 변형의 비제한적인 예로는, 예를 들어, 위치 250 (예를 들어, E 또는 Q); 250 및 428 (예를 들어, L 또는 F); 252 (예를 들어, L/Y/F/W 또는 T), 254 (예를 들어, S 또는 T) 및 256 (예를 들어, S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 위치 428 및/또는 433 (예를 들어, H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434 (예를 들어, A, W, H, F 또는 Y [N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y])에서의 변형; 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 307 또는 308(예를 들어, 308F, V308F) 및 434에서의 변형을 포함한다. 하나의 구현예에서, 상기 변형은 428L (예를 들어, M428L) 및 434S (예를 들어, N434S) 변형; 428L, 259I (예를 들어, V259I), 및 308F (예를 들어, V308F) 변형; 433K (예를 들어, H433K) 및 434 (예를 들어, 434Y) 변형; 252, 254, 및 256 (예를 들어, 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형 (예를 들어, T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형 (예를 들어, 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 변형은 265A (예를 들어, D265A) 및/또는 297A (예를 들어, N297A) 변형을 포함한다.
예를 들어, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이의 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다: 250Q 및 248L (예를 들어, T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E (예를 들어, M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S (예를 들어, M428L 및 N434S); 257I 및 311I (예를 들어, P257I 및 Q311I); 257I 및 434H (예를 들어, P257I 및 N434H); 376V 및 434H (예를 들어, D376V 및 N434H); 307A, 380A 및 434A (예를 들어, T307A, E380A 및 N434A); 및 433K 및 434F (예를 들어, H433K 및 N434F).
항-TMPRSS 항원-결합 단백질, 예를 들어, 이전의 Fc 도메인 돌연변이의 임의의 가능한 조합을 포함하는 본원에 제시된 바와 같은 VH 및/또는 VL을 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본 발명의 범위내에서 고려된다.
또한, 본 발명은 본원에 제시된 VH 및 키메라 중쇄 불변 (CH) 영역을 포함하는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는데, 여기서 상기 키메라 CH 영역은 하나 초과의 면역글로불린 이소타입의 CH 영역으로부터 유래된 분절을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 분자로부터 유래된 CH3 도메인의 일부 또는 전부와 조합된, 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 분자로부터 유래된 CH2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 CH 영역을 포함할 수도 있다. 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 갖는 키메라 CH 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "하부 힌지" 서열 [EU 넘버링(numbering)에 따르면 위치 228 내지 236의 아미노산 잔기)과 조합된, 사람 IgG1, 사람 IgG2 또는 사람 IgG4 힌지 영역으로부터 유래된 "상부 힌지" 아미노산 서열 (EU 넘버링에 따르면 위치 216 내지 227의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 상기 키메라 힌지 영역은 사람 IgG1 또는 사람 IgG4 상부 힌지로부터 유래된 아미노산 잔기 및 사람 IgG2 하부 힌지로부터 유래된 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에서 기술된 바와 같이 키메라 CH 영역을 포함하는 항체는, 특정 구현예에서, 항체의 치료적 특성 또는 약동학적 특성에 부정적인 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 이펙터 기능을 나타낼 수도 있다. (예를 들어, WO2014/022540을 참조한다).
면역접합체
본 발명은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 또 다른 모이어티, 예를 들어, 치료학적 모이어티 (“면역접합체”), 예를 들어, 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하기 위한 톡소이드 또는 항-바이러스 약물에 접합된 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다. 발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항체 또는 단편은 본원에 제시된 임의의 추가의 치료학적 제제와 접합된다. 본원에서 사용된 바와 같은 "면역접합체"라는 용어는 항원-결합 단백질, 예를 들어, 방사능 제제, 사이토킨, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩타이드 또는 단백질 또는 치료학적 제제에 화학적 또는 생물학적으로 결합되는 항체 또는 항원-결합 단편을 언급한다. 항원-결합 단백질은 그의 표적에 결합할 수 있는 한, 해당 분자의 어느 위치에서든 방사능 제제, 사이토킨, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩타이드 또는 치료학적 제제에 결합될 수 있다. 면역접합체의 예는 항체-약물 접합체 및 항체-독소 융합 단백질을 포함한다. 발명의 하나의 구현예에서, 상기 제제는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제2의 상이한 항체일 수 있다. 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 단편)에 접합될 수 있는 치료학적 모이어티의 유형에 대해서는, 치료될 조건 및 성취하고자 하는 목적하는 치료학적 효과를 고려한다. 문헌(예를 들어, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", Monoclonal Antibodies 1984: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), and Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62: 119-58 (1982))을 참조한다.
다중 특이적 항체
본 발명은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 및 이의 항원-결합 단편, 및 이의 사용 방법 및 상기 항원-결합 단백질을 제조하는 방법을 포함한다. 용어 “항-TMPRSS2” 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 제1 항원-결합 도메인 (예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N으로부터의 항원-결합 도메인) 및 상기 제1 항원-결합 도메인의 것과 상이한 TMPRSS2 내 상이한 항원 또는 에피토프에 결합하는 적어도 하나의 제2 항원-결합 도메인 (예를 들어, H1H14611N2, H1H14612N2 또는 H1H11729P 기원의 항원-결합 도메인과 같은 인플루엔자 HA)을 포함하는 다중특이적 (예를 들어, 이특이적 또는 이파라토프적) 분자를 포함한다. 발명의 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 발명의 또 다른 구현예에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 다중특이적 항체는 H1H7017N 또는 H4H7017N의 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 쇄를 포함하는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 도메인, 및 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 도메인(예를 들어, H1H14611N2, H1H14612N2 또는 H1H11729P로부터 기원하는 것과 같은 상이한 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 쇄를 포함하는)을 포함하는 이특이적 IgG 항체(예를 들어, IgG1 또는 IgG4)이다.
“H1H7017N”은 다중특이적 분자, 예를 들어, H1H7017N의 HCDR 및 LCDR, VH 및 VL, 또는 HC 및 LC를 포함하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
“H4H7017N”은 다중특이적 분자, 예를 들어, H4H7017N의 HCDR 및 LCDR, VH 및 VL, 또는 HC 및 LC를 포함하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
발명의 구현예에서, 다중특이적 분자에 포함될 수 있는, TMPRSS에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인은 다음을 포함한다:
(1)
(i) 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열, 및
(ii) 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는,
(2)
(i) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 서열, 및
(ii) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 서열;
또는,
(3)
(i) 서열번호 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 서열, 및
(ii) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 서열.
발명의 구현예에서, 다중특이적 항체 또는 단편은 2개 초과의 상이한 결합 특이성 (예를 들어, 삼특이적 분자), 예를 들어, 제1 및/또는 제2 항원-결합 도메인과 동일하거나 상이한 하나 이상의 추가의 항원-결합 도메인을 포함한다.
발명의 구현예에서, 다중특이적 분자는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위에 추가로, 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체로부터 취해진 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위를 포함한다:
국제 특허 출원 공개 번호 WO2016/100807에 제시된 바와 같은 (예를 들어, CDR-H, VH 또는 이의 중쇄; 및 CDR-L, VL 또는 이의 경쇄), H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B.
발명의 구현예에서, 다중특이적 분자는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위에 추가로 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위를 포함하고, 예를 들어, 이것은 H1H14611N2의 VH 및 VL (예를 들어, 서열번호 24 및 28); 또는 H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 (예를 들어, 서열번호 25-27) 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린(예를 들어, 서열번호 29-31)을 포함한다.
발명의 구현예에서, 다중특이적 분자는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위에 추가로 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위를 포함하고, 예를 들어, 이것은 H1H14612N2의 VH 및 VL (예를 들어, 서열번호 40 및 44); 또는 H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 (예를 들어, 서열번호 41-43) 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린(예를 들어, 서열번호 45-47)을 포함한다.
발명의 구현예에서, 다중특이적 분자는 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위에 추가로 인플루엔자 그룹 I HA 단백질에 특이적으로 결합하는 항원-결합 부위를 포함하고, 예를 들어, 이것은 H1H11729P의 VH 및 VL (예를 들어, 서열번호 32 및 36); 또는 H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 (예를 들어, 서열번호 33-35) 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린(예를 들어, 서열번호 37-39)을 포함한다.
발명의 하나의 구현예에서, 이특이적 항원-결합 단편은 제1 에피토프 (예를 들어, TMPRSS2)에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 scFv (예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N의 VH 및 VL을 포함하는) 및 제2의 상이한 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 제2 scFv (예를 들어, 항-인플루엔자 HA 항체의 VH 및 VL을 포함하는)를 포함한다. 예를 들어, 발명의 하나의 구현예에서, 제1 및 제2 scFv는 링커, 예를 들어, 펩타이드 링커(예를 들어, (GGGGS)n (여기서, n은 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다)과 같은 GS 링커(서열번호 48))로 연결된다. 다른 이특이적 항원-결합 단편은 H1H7017N 또는 H4H7017N 및 상이한 에피토프에 결합하는 또 다른 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 이특이적 IgG 항체의 F(ab)2를 포함한다.
치료학적 방법
본 발명은 치료학적 유효량의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 상기 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 사람)에게 투여함에 의해 바이러스 감염 또는 암 (예를 들어, 전립선 암)을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 제공한다.
인플루엔자 바이러스 감염은 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 대상체에게 투여함에 의해, 대상체에서 치료되거나 예방될 수 있다. 인플루엔자 바이러스는 이들의 코어 단백질을 기준으로 A, B 및 C형으로 분류된다. 인플루엔자 A 바이러스의 서브타입은 헤마글루티닌 (HA) 또는 뉴라미니다제 (NA) 활성을 갖는 외피 당단백질에 의해 결정된다. 인플루엔 A 바이러스의 여러 HA 서브타입(예를 들어, HA1, HA2, HA3, HA4, HA5, HA6, HA7, HA8, HA9, HA10, HA11, HA12, HA13, HA14, HA15, HA16, HA17 또는 HA18-이들 서브타입은 H1, H2, H3 등으로서 지정될 수 있다) 및 NA 서브타입(예를 들어, NA1, NA2, NA3, NA4, NA5, NA6, NA7, NA8, NA9, NA10 또는 NA11-이들 서브타입은 N1, N2, N3 등으로서 지정될 수 있다)이 인플루엔자 A 서브타입을 지정하기 위해 사용된다. 예를 들어, 인플루엔자 A 바이러스 H1N1 및 H3N2는 통상적으로 공지된 사람 병원체이다. 사람은 통상적으로 서브타입 H1, H2 또는 H3, 및 N1 또는 N2의 바이러스에 의해 감염된다. 본 발명은 본원에서 논의된 인플루엔자 바이러스 서브타입에 의한 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 포함한다. 발명의 구현예에서 TMPRSS2에 결합하는 다중특이적 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 예를 들어, 본원에 제시된 서브타입의 HA/및/또는 NA에 결합한다.
바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)의 유효량 또는 치료학적 유효량은 징후 및/또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하거나 상기 징후 및/또는 증상의 진행을 억제함에 의해서든 상관 없이 치료받은 대상체에서 감염의 하나 이상의 징후 및/또는 증상을 경감시키기에 충분한 항체 또는 단편의 양을 언급한다. 투여 용량은 투여받을 대상체의 나이 및 크기, 표적 질환, 병태, 투여 경로 등에 따라 다양할 수 있다. 발명의 구현예에서, 예를 들어, 성인 사람 대상체에서 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량 또는 치료학적 유효량은 약 0.01 내지 약 200 mg/kg, 예를 들어, 약 150mg/kg 이하이다. 발명의 구현예에서, 용량은 약 10.8 또는 11 그램 이하(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11그램)이다. 감염의 중증도에 의존하여, 치료의 빈도 및 지속기간은 조정될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항원-결합 단백질은 초기 용량에 이어서 하나 이상의 2차 용량으로 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 초기 용량을 투여한 후, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제2 용량 또는 복수의 후속 용량을 상기 초기 용량과 대략 동일하거나 더 적을 수 있는 양으로 투여할 수 있는데, 이 경우, 상기 후속 용량들은 적어도 1일 내지 3일; 적어도 1주, 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주로 나눈다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “대상체”는 예를 들어, 바이러스 감염 또는 암과 같은 질환 또는 장애의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 포유동물(예를 들어, 래트, 마우스, 고양이, 개, 소, 양, 말, 염소, 토끼), 바람직하게 사람을 언급한다. 대상체는 바이러스 감염, 예를 들어, 인플루엔자 감염을 가질 수 있거나 감염을 발병할 성향이 있을 수 있다. 감염을 발병할 성향이 있는 대상체 또는 감염 (예를 들어, 인플루엔자 바이러스의 감염)에 걸릴 상승된 위험에 있을 수 있는 대상체는 자가면역 질환 때문에 손상된 면역계를 갖는 대상체, 면역억제 치료요법 (예를 들어, 기관 이식 후)을 받은 대상체, 사람 면역결핍 증후군 (HIV) 또는 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)에 걸린 대상체, 백혈구 세포를 고갈시키거나 파괴하는 빈혈 형태를 갖는 대상체, 방사선치료 또는 화학치료요법을 받은 대상체 또는 염증성 장애에 걸릴 대상체를 포함한다. 추가로, 매우 어린 연령 (5세 이하) 또는 고령 (예를 들어, 65세 이상)의 대상체는 증가된 위험에 처해 있다. 더욱이, 대상체는 질환 발발 지역 인접으로 인해 바이러스 감염에 걸릴 위험에 있을 수 있고, 예를 들어, 대상체는 밀집 인구 도시 또는 바이러스의 확인되거나 의심되는 감염을 갖는 대상체, 또는 고용 선택, 예를 들어, 병원 근로자, 약제 연구자, 감염 지역으로의 여행자 또는 빈번한 비행사와의 최근접 지역에 거주한다.
"치료한다" 또는 "치료하는"은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을, 이에 대하여 상기 항원-결합 단백질이 유효량 또는 치료학적 유효량 또는 용량 (본원에서 논의된 바와 같이)으로 투여되는 경우 효과적인 질환 또는 감염, 예를 들어, 바이러스 감염의 하나 이상의 징후 또는 증상을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 의미한다.
본 발명은 또한 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 상기 감염을 예방하기 위해 바이러스 감염 위험에 처한 대상체에게 예방학적으로 투여함을 포함한다. 수동 항체-기반 면역예방은 바이러스 감염으로부터 대상체를 예방하기 위해 효과적인 전략임을 입증하였다. 예를 들어, 문헌(Berry et al., Passive broad-spectrum influenza immunoprophylaxis. Influenza Res Treat. 2014 ;2014:267594. Epub 2014 Sep 22; and Jianqiang et al., Passive immune neutralization strategies for prevention and control of influenza A infections, Immunotherapy. 2012 February ; 4(2): 175-186; Prabhu et al., Antivir Ther. 2009;14(7):911-21, Prophylactic and therapeutic efficacy of a chimeric monoclonal antibody specific for H5 hemagglutinin against lethal H5N1 influenza)을 참조한다. “예방한다" 또는 "예방하는"은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을, 이에 대하여 상기 항원-결합 단백질이 유효량 또는 치료학적 유효량 또는 용량 (본원에서 논의된 바와 같이)으로 투여되는 경우 효과적인 대상체의 체내에서 질환 또는 감염(예를 들어, 바이러스 감염)의 증상을 억제하기 위해 대상체에 투여하는 것을 의미한다.
발명의 구현예에서, 대상체내 바이러스 감염의 징후 또는 증상은 예를 들어, 바이러스 역가 검정 (예를 들어, 유정란에서 인플루엔자 바이러스 증식 또는 인플루엔자 바이러스 헤마글루틴화 검정)에 의한 결정시, 대상체의 체내에서 바이러스의 생존 또는 증식이다. 바이러스 감염의 다른 징후 및 증상은 본원에서 논의된다.
본 발명은 치료학적 유효량의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 (예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 대상체에게 투여함에 의해, 예를 들어, 단백질을 대상체의 체내에 주사함에 의해 이를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 사람)에서 바이러스 감염 (예를 들어, 인플루엔자 바이러스 또는 코로나 바이러스 감염)을 치료하거나 예방하기 위한 또는 다음과 같은 바이러스 감염의 적어도 하나의 징후 또는 증상의 퇴행 또는 제거를 유도하거나 이의 진행을 억제하기 위한 방법을 제공한다:
·발열 또는 발열감/오한;
·기침;
·인후염;
·콧물 또는 비한;
·재채기;
·근육통 또는 몸살;
·두통;
·피로 (권태);
·구토;
·설사;
·호흡기 감염;
·흉통;
·숨가쁨;
·기관지염; 및/또는
·폐렴.
상기 이의 징후 또는 증상은 바이러스 감염에 따른 것이다.
본 발명은 또한 대상체에서 치료학적 유효량의 TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 대상체에게 투여함에 의해, 예를 들어, 단백질을 대상체의 체내로 주사함에 의해 대상체에서 암, 예를 들어, 전이성 암, 예를 들어, 전립선 암 (예를 들어, TMPRSS2:ERG 융합체 발현을 특징으로 하는), 결장암, 폐암, 췌장암, 요로암, 유방암, 난소암, 전립선 선암종, 신장 세포 암종, 결장직장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종 및/또는 흉막 중피종을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 포함한다. 발명의 구현예에서, 대상체에 또한 추가의 치료학적 제제, 예를 들어, 항암 치료학적 제제와 연합된 TMPRSS2 항원-결합 단백질이 투여된다. 발명의 구현예에서, 암은 이의 세포가 TMPRSS2 또는 이의 변이체를 발현하는 종양이다.
조합 및 약제학적 조성물
항-TMPSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 및 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)의 약제학적 조성물을 제조하기 위해, 항원-결합 단백질은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합된다. 예를 들어, 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984); Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.)을 참조한다. 발명의 구현예에서, 약제학적 조성물은 멸균성이다. 상기 조성물은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 범위는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 포함하는 건조된, 예를 들어, 동결건조된 조성물, 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하지만 실질적으로 물이 부재인 약제학적 조성물을 포함한다.
발명의 추가의 구현예에서, 본원에 기재된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)과 연합된, 대상체에게 투여되는 추가의 치료학적 제제는 문헌(참조: Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57th edition (Nov. 1, 2002))에 따라 대상체에게 투여된다.
투여 방식은 다양할 수 있다. 투여 경로는 경구, 직장, 경점막, 장, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 척수강내, 직접 심실내, 정맥내, 복막내, 비강내, 안내, 흡입, 통기, 국소, 피부, 경피 또는 동맥내를 포함한다.
본 발명은 단백질을 대상체의 체내로 도입함을 포함하는, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 투여하기 위한 방법을 제공한다. 예를 들어, 상기 방법은 대상체의 체내에 시린지 바늘을 천공하고 항원-결합 단백질을 대상체의 체내, 예를 들어, 대상체의 정맥, 동맥, 종양, 근육 조직 또는 피하 조직으로 주사함을 포함한다.
본 발명은 임의의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N), 폴리펩타이드(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N의 HC, LC, VH 또는 VL) 또는 본원에 제시된 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터 또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 용기(예를 들어, 캡 또는 크로마토그래피 컬럼, 중공 보어 바늘 또는 시린지 실린더를 갖는 플라스틱 또는 유리 바이알)를 제공한다..
발명의 구현예에서, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)은 하나 이상의 추가의 치료학적 제제와 연합되어 있다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 항-바이러스 약물 및/또는 백신이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “항-바이러스 약물”은 대상체에서 바이러스 감염을 치료하거나, 예방하거나 개선시키기 위해 사용되는 임의의 항-감염성 약물 또는 치료요법을 언급한다. 용어 “항-바이러스 약물”은 양이온 스테로이드 항미생물제, 류펩틴, 아프로티닌, 아만타딘, 리만타딘, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린, 또는 인터페론-알파2b를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가의 치료학적 제제와 연합된 H1H7017N 또는 H4H7017N을 투여함에 의해 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 바이러스 (예를 들어, 인플루엔자) 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법은 본 발명의 일부이다.
예를 들어, 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 백신, 예를 들어, 인플루엔자 백신이다. 발명의 구현예에서, 백신은 불활성화되고/사멸된 바이러스 백신, 생약독화된 바이러스 백신 또는 바이러스 서브유닛 백신이다.
예를 들어, 발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 다음과 같다: (폴리아미드).
Figure pct00001
(카모스태트 메실레이트);
Figure pct00002
(나파모스태트 메실레이트);
Figure pct00003
(브롬헥신 하이드로클로라이드 (BHH));
Figure pct00004
(4-(2-아미노메틸)벤젠설포닐 플우로라이드 하이드로클로라이드(AEBSF));
Figure pct00005
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
(폴리아미드)
문헌(Shen et al. Biochimie 142: 1-10 (2017))을 참조한다.
발명의 구현예에서, 항-바이러스 약물은 인플루엔자 바이러스, 예를 들어, 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 예를 들어, 발명의 구현예에서, 항-HA 항체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2016/100807에 제시된 바와 같은, H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N ; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 또는 H1H18335B; 또는 이의 항원-결합 단편 중 어느 하나이고, 예를 들어, 여기서, 상기 항체 또는 단편은 이전 항-인플루엔자 HA 항체 중 어느 하나의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 (예를 들어, 이의 VL 또는 경쇄); 및 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 중쇄 (예를 들어, 이의 VH 또는 중쇄)를 포함한다.
발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 H1H14611N2와 같은 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H14611N2의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H14611N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 25-27)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14611N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 29-31)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다. “H1H14611N2”는 상기 서열을 포함하는 임의의 항-그룹 II HA 항체를 언급한다.
H1H14611N2
중쇄 가변 영역
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSGFSMNWVRQVPGKGLEWVSSISTSGNYMYYADSVKGRFTISRDNAKKSFSLQMNSLRAEDSAIYYCARGGGYNWNLFDYWGQGSLVTVSS (서열번호 24)
CDR-H1: GFTFSGFS (서열번호 25)
CDR-H2: ISTSGNYM (서열번호 26)
CDR-H3: ARGGGYNWNLFDY (서열번호 27)
경쇄 가변 영역
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIP DRFSGSGSGTDFTLTITRLESEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIK (서열번호 28)
CDR-L1: QSLNSNY (서열번호 29)
CDR-L2: GAS (서열번호 30)
CDR-L3: QQYGNSPLT (서열번호 31)
발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 H1H14612N2와 같은 인플루엔자 그룹 II HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H14612N2의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H14612N2의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 41-43)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H14612N2의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 45-47)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다. “H1H14612N2”는 상기 서열을 포함하는 임의의 항-그룹 II HA 항체를 언급한다.
H1H14612N2
중쇄 가변 영역
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSGFSMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSGNYMYY ADSVKGRFTISRDNAKKSFSLQMNSLRAEDSAIYYCARGGGYNWNLFDYWGQGSLVTVSS (서열번호 40)
CDR-H1: GFSFSGFS (서열번호 41)
CDR-H2: ISTSGNYM (서열번호 42)
CDR-H3: ARGGGYNWNLFDY (서열번호 43)
경쇄 가변 영역
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLNSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIP DRFSGSGSGADFTLTISRLESEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIK (서열번호 44)
CDR-L1: QSLNSNY (서열번호 45)
CDR-L2: GAS (서열번호 46)
CDR-L3: QQYGNSPLT (서열번호 47)
발명의 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 H1H11729P와 같은 인플루엔자 그룹 I HA 단백질에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편; 또는 H1H11729P의 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 단편; 또는 H1H11729P의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 (예를 들어, 서열번호 33-35)을 포함하는 중쇄 면역글로불린 및 H1H11729P의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 (예를 들어, 서열번호 37-39)을 포함하는 경쇄 면역글로불린이다. “H1H11729P”는 상기 서열을 포함하는 임의의 항-그룹 I HA 항체를 언급한다.
H1H11729P
중쇄 가변 영역
QVQLVQSGAEVKKSGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTPSY AQKFQDRVTITTDESTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARQQPVYQYNMDVWGQGTTVTVSS (서열번호 32)
CDR-H1: GGTFSSYA (서열번호 33)
CDR-H2: IIPIFGTP (서열번호 34)
CDR-H3: ARQQPVYQYNMDV (서열번호 35)
경쇄 가변 영역
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNNLGWYQQKPLKAPKRLIYAASSLQSGVPS RFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYNNYPWTFGQGTKVEIK (서열번호 36)
CDR-L1: QGIRNN (서열번호 37)
CDR-L2: AAS (서열번호 38)
CDR-L3: LQYNNYPWT (서열번호 39)
발명의 특정 구현예에서, 추가의 치료학적 제제는 아만타딘, 리만타딘, 오셀타미비르, 자나미비르, 아프로티닌, 류펩틴, 양이온성 스테로이드 항미생물제, 인플루엔자 백신(예를 들어, 사멸된, 생존, 약독화된 전체 바이러스 또는 서브유닛 백신), 또는 인플루엔자 바이러스에 대한 항체 (예를 들어, 항-헤마글루티닌 항체)가 아니다.
용어 “와 연합된"은 성분, 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 오셀타미비르와 같은 또 다른 제제와 함께 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단일 조성물로, 예를 들어, 동시 전달을 위해 제형화될 수 있거나 2개 이상의 조성물 (예를 들어, 키트)로 별도로 제형화될 수 있음을 지적한다. 각각의 성분은 다른 성분들이 투여되는 시점과는 다른 시간에 대상체에게 투여될 수 있고; 예를 들어, 각각의 투여는 소정의 기간 동안 일정 간격으로 비-동시적으로 (예를 들어, 별도로 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 더욱이, 별도의 성분은 동일하거나 상이한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다(예를 들어, 여기서, 항-TMPRSS2 항체 또는 이의 항원-결합 단편).
키트
추가로 본원에 논의된 바와 같은 추가의 치료학적 제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 추가의 성분들과 연합된, 본원에서 논의된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)이 제공된다. 항원-결합 단백질 및/또는 추가의 치료학적 제제는 단일 조성물로서 또는 예를 들어, 약제학적 조성물 중에 약제학적으로 호용되는 담체와 함께 2개 이상의 조성물로 별도로 제형화될 수 있다.
발명의 하나의 구현예에서, 키트는 하나의 컨테이너에 (예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알에) 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)또는 이의 약제학적 조성물, 및 또 다른 컨테이너에 (예를 들어, 멸균 유리에 또는 플라스틱 바이알에) 추가의 치료학적 제제를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 키트는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 포함하는 발명의 조합물 또는 임의로 약제학적 조성물 중에 단일의 통상의 컨테이너에 함께 제형화된 하나 이상의 추가의 치료학적 제제와 조합된 약제학적 조성물을 포함한다.
키트가 대상체에 비경구 투여를 위한 약제학적 조성물을 포함하는 경우, 키트는 상기 투여를 수행하기 위한 장치 (예를 들어, 주사 장치)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)을 포함하는, 상기 논의된 바와 같은 하나 이상의 피하 니들 또는 다른 주사 장치를 포함할 수 있다.
키트는 키트 내 약제학적 조성물 및 투여 형태에 관한 정보를 포함하는 팩키지 삽입물을 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 정보는 환자 및 담당의가 봉입된 약제학적 조성물 및 투여 형태를 효과적으로 및 안전하게 사용하도록 도와준다. 예를 들어, 본 발명의 조합물에 관한 하기의 정보는 삽입물에 공급될 수 있다: 약동학, 약력학, 임상 연구, 효능 파라미터, 징후 및 용법, 사용금지 사유, 경고, 주의사항, 부작용, 과다복용, 적당한 용량 및 투여, 공급 방법, 적당한 저장 조건, 참조, 제조사/분배사 정보 및 환자 정보.
항체의 진단적 용도
항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)은 샘플 내 TMPRSS2를 검출하고/하거나 측정하기 위해 사용될 수 있다. TMPRSS2에 대한 예시적 검정은 예를 들어, 샘플을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시킴을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질은 검출가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나 포획 리간드로서 사용되어 샘플로부터 TMPRSS2를 선택적으로 단리한다. TMPRSS2와 복합체화된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질의 존재는 샘플내 TMPRSS2의 존재를 지적한다. 대안적으로, 표지되지 않은 항-TMPRSS2 항체는 자체가 검출가능하게 표지된 2차 항체와 조합하여 사용될 수 있다. 상기 검출가능한 표지 또는 리포터 분자는, 예컨대 3H, 14C, 32P, 35S 또는 125I와 같은 방사성 동위원소; 플루오레세인 이소티오시아네이트 또는 로다민과 같은 형광성 또는 화학발광성 모이어티; 또는 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 호스래디쉬(horseradish) 퍼옥시다제 또는 루시퍼라제와 같은 효소일 수 있다. 샘플 중에서 TMPRSS2를 검출 또는 측정하는데 사용될 수 있는 특정 예시적인 검정은 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 방사성면역검정(RIA) 및 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 포함한다. 따라서, 본 발명은 샘플을 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시키고 bTMPRSS/항-TMPRSS2 항원-결합 단백질의 존재를 검출(여기서, 복합체의 존재는 TMPRSS2의 존재를 지적한다)함을 포함하는 샘플 내 TMPRSS2 폴리펩타이드의 존재를 검출하기 위한 방법을 포함한다.
본 발명은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질, 예를 들어, 본 발명의 항체 및 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N)을 사용하여 세포 상에 TMPRSS2의 존재를 검출하는 세포 기반 ELISA 방법을 포함한다. 발명의 구현예에서, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:
(i) TMPRSS2의 존재에 대해 시험될 고체 표면 (예를 들어, 마이크로플레이트)에 고정화된 세포를 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시키는 단계;
(ii) 임의로 상기 혼합물을 세척하여 결합되지 않은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 제거하는 단계;
(iii) 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질에 결합하는 표지된 2차 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계;
(iv) 임의로 상기 복합체를 세척하여 결합되지 않은 항원-결합 단백질을 제거하는 단계; 및
(v) 2차 항체 또는 단편 상에 표지의 존재를 검출하는 단계로서, 여기서, 상기 표지의 검출이 상기 세포가 TMPRSS2를 함유함을 지적하는 단계. 예를 들어, 본 발명은 샘플 내 TMPRSS2+ 세포를 동정하기 위한 상기 세포-기반 ELISA 방법을 포함한다.
발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N)은 샘플 내 TMPRSS2 또는 이의 단편의 존재를 검출하기 위한 웨스턴 블롯 또는 면역-단백질 블롯 과정에 사용될 수 있다. 상기 과정은 본 발명의 일부를 형성하고 예를 들어, 하기의 단계를 포함한다:
(1) 예를 들어, 임의로 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, 반-고체 블롯팅 또는 탱크 블롯팅)을 사용하여 막 또는 다른 고체 기질 상으로 TMPRSS2의 존재에 대해 시험될 샘플 기원(예를 들어, 샘플 내 단백질의 PAGE 또는 SDS-PAGE 전기영동 분리로부터)의 단백질을 전달하는 단계를 포함하는 TMPRSS2의 존재에 대해 시험될 샘플을 포함하는 막 또는 다른 고체 기질을 제공하는 단계; 및 TMPRSS2 또는 이의 단편의 존재에 대해 시험될 막 또는 다른 고체 기질을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시키는 단계.
상기 막은 니트로셀룰로스 또는 비닐-기반 (예를 들어, 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF)) 막의 형태를 취할 수 있고, 여기로, 비-변성 PAGE (폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔 또는 SDS-PAGE (나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동) 겔에서 TMPRSS2의 존재에 대해 시험될 단백질이 전달된다(예를 들어, 겔 중에 전기영동 분리 후). 상기 막을 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시키기 전에, 상기 막은 임의로 예를 들어, 비-특이적 단백질 결합 부위를 막 상에 결합시키기 위해 비-지방 건조 밀크 등으로 차단된다.
(2) 상기 막을 1회 이상을 세척하여 결합되지 않은 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질 및 다른 결합되지 않은 기질을 제거하는 단계; 및
(3) 결합된 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질을 검출하는 단계.
결합된 항원-결합 단백질의 검출은 TMPRSS2 단백질이 막 또는 기질 상에 및 샘플 내 존재함을 지적한다. 결합된 항원-결합 단백질의 검출은 항원-결합 단백질을 검출가능하게 표지된 2차 항체 (항-면역글로불린 항체)에 결합시키고 상기 2차 항체 표지의 존재를 검출함에 의한 것일 수 있다.
본원에 기재된 상기 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질(예를 들어, 항체 및 항원-결합 단편(예를 들어, H1H7017N 또는 H4H7017N))은 또한 면역조직화학분석을 위해 사용될 수 있다. 상기 방법은 본 발명의 일부를 형성하고 예를 들어, 하기의 단계를 포함한다:
(1) TMPRSS2 단백질의 존재에 대해 시험될 조직을 본 발명의 항-TMPRSS2 항원-결합 단백질과 접촉시키는 단계; 및
(2) 조직 상에서 또는 조직 내에서 항원-결합 단백질을 검출하는 단계.
항원-결합 단백질 자체가 검출가능하게 표지된 경우, 이것은 직접 검출될 수 있다. 대안적으로, 항원-결합 단백질은 검출가능하게 표지된 2차 항체에 의해 결합될 수 있고, 여기서, 상기 표지는 이어서 검출된다.
실시예
하기의 실시예는 당업자에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 범의 완전한 기재 및 기술을 제공하기 위해 제시된 것이고 발명자가 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 사용되는 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 확실히 정확하게 하기 위해 노력하였지만 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야만 한다. 달리 지시하지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 실온은 약 25℃이며, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다.
실시예 1: 시험관내 다중사이클 복제.
인플루엔자 바이러스, A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)-GFP가 Calu3, A549, MDCK 및 HepG2 세포에서 복제하는 능력을 평가하였다.
[표 1]
Figure pct00008
실험 과정
Calu-3 세포 (ATCC HTB55), A549 세포 (ATCC CCL-185), MDCK 세포 (IRR FR-58) 및 HepG2 세포 (ATCC HB-8065)는 5% FBS를 갖는 DMEM:F12 배지 중 96웰 플레이트에서 40,000 세포/웰로 희석시켰다. 다음 날, NS 분절 내 GFP 리포터 유전자를 함유하는 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)(문헌참조: B. Manicassamy et al., Analysis of in vivo dynamics of influenza virus infection in mice using a GFP reporter virus. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Jun 22;107(25):11531-6)는 3회 세척 후 낮은 IgG BSA를 갖는 DMEM:F12에서 0.1 및 0.01의 MOI (감염 다중도)로 제조하였다. 바이러스는 37℃에서 1시간 동안 세포 상에서 배양하고 이후 바이러스를 제거하고 웰은 3회 초과로 세척하였다. 감염된 세포의 수는 CTL-ImmunoSpot® S6 유니버셜 분석기(Cellular Technology Limited, Cleveland, OH) 상에서 감염 후 24, 48, 72 및 142 시간에 정량하였다.
결과 요약 및 결론
Calu-3은 외인성 트립신의 부재하에 사람 인플루엔자 바이러스의 다중-사이클 복제를 가능하게 하는 것으로 나타난 불멸화된 사람 기도 상피 세포주이다(문헌참조: Zeng et al., Highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses elicit an attenuated type i interferon response in polarized human bronchial epithelial cells. Journal of Virology. 81, 12439-12449 (2007)). 추가로, Calu-3 세포는 적어도 mRNA 수준에서 TMPRSS2 및 TMPRSS4 둘다를 발현하지만 TMPRSS11D (HAT)를 발현하지 않는 것으로 나타났다(문헌참조: Boettcher-Friebertshaeuser et al., Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011)). Calu-3 세포가 일염기성 절단 부위를 갖는 헤마글루티닌을 소유한 인플루엔자 바이러스의 단백질용해 활성화를 지지할 수 있는지를 확인하기 위해, Calu-3 세포 내 H1N1 GFP 리포터 바이러스의 성장을 분석하고 트립신 부재하에 A549 (사람 폐포 기저 상피), MDCK (마딘 다비 개 신장(Madin Darby canine kidney)) 및 HepG2 (사람 간 암종) 세포를 사용하여 시간 경과에 따른 복제를 비교하였다. 세포는 낮은 MOI로 감염시키고 지정된 시점에서 바이러스 역가는 형광성 초점 스팟을 계수함에 의해 결정하였다. 표 2 및 도 1은 A549, MDCK 및 HepG2 세포에서 낮은 감염 수준을 보여주고, Calu-3 세포는 모든 시점에서 유의적으로 증가된 역가를 보여준다. Calu-3 세포는 mRNA 수준에서 TMPRSS2 및 TMPRSS4를 발현하는 것으로 나타났지만, TMPRSS2의 녹다운은 인플루엔자 바이러스 역가를 100- 내지 1,000-배까지 감소시켰다(문헌참조: Boettcher-Friebertshaeuser et al., Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011)). 트립신의 부재하에 A549, MDCK 및 HepG2 세포에서 바이러스 역가의 낮은 수준은 아마도 절단된 바이러스 (트립신으로 유정란으로부터 또는 MDCK 배양물로부터 수거된)의 첨가로 인한 것이지만 또 다른 HA활성화 프로테아제의 존재가 설명일 수 있다.
[표 2]
Figure pct00009
참조문헌
Figure pct00010
Figure pct00011
실시예 2: 항-TMPRSS2 항체 H1H7017N은 시험관내 인플루엔자의 확산을 차단한다.
Calu-3 세포에서 인플루엔자 바이러스 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)의 역가를 감소시키는 다양한 항체의 능력을 평가하였다.
[표 3]
Figure pct00012
실험 과정
Calu-3 세포 (ATCC HTB55)는 5% FBS를 갖는 DMEM:F12 배지 중 96-웰 플레이트에서 40,000 세포/웰로 희석시켰다. 다음날, 모노클로날 항체는 낮은 IgG BSA를 갖는 DMEM:F12 중에서 166.7 nM로 희석시키고 37℃ 및 5% CO2에서 3시간 동안 세포에 첨가하였다. mAb 용액을 제거하였고 세포는 0.001의 MOI로 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)로 감염시켰다. 바이러스는 5% CO2에서 37℃에서 1시간 동안 세포 상에서 배양하고 이후 바이러스를 제거하고 배지는 166.7nM mAb를 함유하는 DMEM:F12로 대체하였다. 24시간 및 48시간 후, 배지는 mAb를 함유하는 새로운 배지로 대체하였고 세포는 72시간에 PBS로 2회 세척하였다. 이어서 세포는 PBS 중에서 4% 파라포름알데하이드로 고정화시키고 바이러스는 1:1000 희석으로 항-NP 1차 항체를 사용하여 검출하였다. 세포는 1시간 동안 배양하고 이어서 세척하고 1:2000 희석으로 2차 항체를 첨가하였다. 감염된 세포의 수는 CTL-ImmunoSpot® S6 유니버셜 분석기(Cellular Technology Limited, Cleveland, OH) 상에서 정량하였다.
결과 요약 및 결론
Calu-3은 외인성 트립신의 부재하에 사람 인플루엔자 바이러스의 다중-사이클 복제를 가능하게 하는 것으로 나타난 불멸화된 사람 기도 상피 세포주이다(문헌참조: Zeng et al., Highly pathogenic avian influenza H5N1 viruses elicit an attenuated type i interferon response in polarized human bronchial epithelial cells. Journal of Virology. 2007, Nov; 81(22):12439-49). 추가로, Calu-3 세포는 적어도 mRNA 수준에서 TMPRSS2 및 TMPRSS4 둘다를 발현하지만 TMPRSS11D (HAT)를 발현하지 않는 것으로 나타났다(문헌참조: Boettcher-Friebertshaeuser et al., Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011)). 이전에 Calu-3 세포가 인플루엔자 바이러스의 단백질용해 활성화를 지지함을 나타냈지만 TMPRSS2-특이적 모노클로날 항체, H1H7017N을 사용한 TMPRSS2의 억제를 여기서 시험하였다. 세포를 166.7 nM의 H1H7017N로 처리한 후 72h 동안 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)의 성장을 분석하였다. 바이러스 역가는 형광성 초점 스팟을 계수함에 의해 결정하였다. 표 4 및 도 2는 항체 H1H7017N으로 처리한 후 감소된 역가를 보여준다. Calu-3 세포는 mRNA 수준에서 TMPRSS2 및 TMPRSS4를 발현하는 것으로 나타났지만, TMPRSS2의 녹다운은 인플루엔자 바이러스 역가를 100- 내지 1,000-배까지 감소시켰다(문헌참조: Boettcher-Friebertshaeuser et al., Inhibition of influenza virus infection in human airway cell cultures by an antisense peptide-conjugated morpholino oligomer targeting the hemagglutinin-activating protease TMPRSS2. Journal of Virology. 85, 1554-1562 (2011)). mAb의 부재하에 기존의 저수준의 바이러스 역가는 아마도 절단된 바이러스 (트립신을 사용하여 유정란으로부터 또는 MDCK 배양물로부터 수거된)의 첨가로 인한 것이었지만 또 다른 HA-활성화 프로테아제의 존재는 또한 항-TMPRSS2 mAb를 사용한 처리에도 불구하고 바이러스의 존재를 설명할 수 있다.
[표 4]
Figure pct00013
참조문헌
Figure pct00014
실시예 3: MDCK/Tet-on, MDCK/Tet-on/hTMPRSS2, 및 MDCK/Tet-on/MfTMPRSS2 세포를 사용한 FACS 분석.
TMPRSS2를 발현하거나 TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK 세포에 결합하는 항-TMPRSS2 항체, H1H7017N의 능력을 평가하였다.
[표 5]
Figure pct00015
실험 과정
세포주는 독시사이클린을 사용한 유도시 MDCK (마딘 다비(Madin Darby) 개 신장) 세포에서 사람 및 시노몰로구스 몽키 TMPRSS2 (hTMPRSS2 및 mfTMPRSS2)를 발현하도록 발육되었다. MDCK 세포는 형질도입하여 변형된 테트라사이클린-제어된 트랜스활성화인자 단백질(Clontech)을 안정하게 발현하도록 하였고 수득한 세포주는 MDCK/Tet-on 세포주로 호칭된다. MDCK/Tet-on 세포주는 유도성 프로모터의 제어하게 hTMPRSS2 (V160M을 갖는 NP_005647.3) 또는 mfTMPRSS2 (S129L, N251S, I415V, R431Q, D492G를 갖는 Ref seq Xp_015302311.1)를 함유하는 작제물로 형질도입하고 세포주는 MDCK/Tet-on/hTMPRSS2 및 MDCK/Tet-on/mfTMPRSS2로 호칭되었다. 안정한 세포주는 10% FBS, 나트륨 피루베이트, 페니실린/스트렙토마이신/글루타민, 2μg/mL 푸로마이신이 존재하거나 부재인 500μg/mL G418이 보충된 DMEM을 함유하는 성장 배지에서 유지하였다.
유동 세포측정기에 의한 세포 결합 분석을 위해, 세포는 성장 배지에 분주하였고 16시간 동안 1μg/mL에서 독시사이클린으로 항온처리하여 TMPRSS2의 발현을 유도하였다. 세포는 아쿠타제를 사용하여 탈착시키고 PBS 중에 1% FBS에서 재현탁하였다. 항체는 연속으로 500 nM에서 25 pM로 희석시키고 각각의 항체 농도는 30분동안 4°C에서 1 X 106 세포로 항온처리하였다. 항체가 세포에 첨가되지 않는 조건이 포함되었다. 1차 항체로 항온처리 후, 세포는 30분동안 4°C에서 1:1000으로 알로피코시아닌 접합된 항-사람 IgG 2차 항체로 염색하였다. 세포는 BD CytoFixTM를 사용하여 고정화시키고 CytoFLEX 유동 세포측정기를 사용하여 분석하였다. 염색되지 않고 2차 항체 단독 대조군은 또한 모든 세포주를 위해 포함시켰다. 생존 세포에 대한 형광성의 기하평균 값은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 결정하였고 상기 결과는 Prism 7 소프트웨어 (GraphPad)를 사용한 비선형 회귀 (4-파라미터 로지스틱)를 사용하여 분석하여 항체에 의한 세포 결합의 EC50 값을 수득하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 항-hTMPRSS2 항체, H1H7017N는 MDCK/Tet-on/hTMPRSS2 및 MDCK/Tet-on/mfTMPRSS2에 결합하고 EC50 값은 각각 460 pM 및 1.06 nM이다. H1H7017N은 MDCK/Tet-on 세포로의 유의적 결합을 보여주지 않았다. 관련 없는 이소타입 대조군 항체인 대조군 mAb1은 시험된 임의의 세포주로의 결합을 보여주지 않았다.
실시예 4: 25°C 및 37°C에서 측정된 상이한 TMPRSS2 시약에 결합하는 항-TMPRSS2 모노클로날 항체의 Biacore 결합 동력학
정제된 항-TMPRSS2 모노클로날 항체로의 상이한 TMPRSS2 시약 결합에 대한 평형 해리 상수 (KD)는 실시간 표면 플라스몬 공명 기반 Biacore 4000 바이오센서를 사용하여 결정하였다. 모든 결합 연구는 25°C 및 37°C에서 10mM HEPES, 150mM NaCl, 3mM EDTA 및 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20 (HBS-ET) 전개 완충액 중에서 수행하였다. 상기 Biacore 센서 칩 표면을 토끼 항-마우스 Fc 특이적 폴리클로날 항체 (GE, Healthcare # BR-1008-38)와의 아민 커플링으로 먼저 유도체화시켜 항-TMPRSS2 모노클로날 항체를 포획하였다. 결합 연구는 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그 (hTMPRSS2.mmh)과 함께 발현되는 사람 TMPRSS2 세포외 도메인, 및 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(mfTMPRSS2.mmh)와 함께 발현된 몽키 TMPRSS2 세포외 도메인에 대해 수행하였다. 상이한 농도의 HMM-hTMPRSS2 및 HMM-mfTMPRSS2 (100nM-6.25nM; 4배 연속 희석)는 먼저 HBS-ET 전개 완충액 중에서 제조하고 30μL/분의 유속으로 2.5분 동안 항-마우스 Fc 포획된 항-TMPRSS2 모노클로날 항체 표면 상에 주입하고, 모노클로날 항체 결합된 TMPRSS2 시약의 해리는 HBS-ET 전개 완충액 중에서 7분동안 모니터링하였다. 결합 속도 (ka) 및 해리 속도(kd)는 스크러버(Scrubber) 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 매쓰 수송이 제한된 1:1 결합 모델에 실시간 결합 센서그램을 피팅함으로써 결정하였다. 결합 해리 평형 상수 (KD) 및 해리 반감기 (t½)는 하기와 같이 동력학 속도로부터 계산하였다:
Figure pct00016
및
Figure pct00017
25°C 및 37°C에서 본 발명의 상이한 항-TMPRSS2 모노클로날 항체로의 HMM-hTMRPRSS2 또는 HMM-mfTMPRSS2 결합에 대한 결합 동력학 파라미터는 표 6 내지 9에 나타낸다.
25°C에서, 항-TMPRSS2 모노클로날 항체들은 표 6에 나타낸 것과 같이 2.81 nM의 KD 값으로 HMM-hTMPRSS2에 결합하였다. 37°C에서, 항-hTMPRSS2 모노클로날 항체들은 표 7에 나타낸 것과 같이 9.31 nM의 KD 값으로 HMM-hTMPRSS2에 결합하였다.
25°C에서, 항-TMPRSS2 모노클로날 항체들은 표 8에 나타낸 것과 같이 56.0 nM의 KD 값으로 HMM-mfTMPRSS2에 결합하였다. 37°C에서, 항-TMPRSS2 모노클로날 항체들은 표 9에 나타낸 것과 같이 140 nM의 KD 값으로 HMM-mfTMPRSS2에 결합하였다.
TMPRSS2 단백질
hTMPRSS2 knob_mmh (W106-R255).mmh:
사람 TMPRSS2의 아미노산 1-150: 아미노산 106 내지 255(V160M을 갖는 승인 번호 NP_005647.3)
아미노산: 151-178: myc-myc-헥사히스티딘 태그
WKFMGSKCSNSGIECDSSGTCINPSNWCDGVSHCPGGEDENRCVRLYGPNFILQMYSSQRKSWHPVCQDDWNENYGRAACRDMGYKNNFYSSQGIVDDSGSTSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVNLNSSRQSREQKLISEEDLGGEQKLISEEDLHHHHHH (서열번호 20; 밑줄친 myc 태그, 이중으로 밑줄친 His6 태그)
mfTMPRSS2 knob_mmh (W106-R255).mmh:
몽키 TMPRSS2의 아미노산 1-150: 아미노산 106-255(S129L, N251S를 갖는 승인 번호 XP_005548700.1)
아미노산 151-178: myc-myc-헥사히스티딘 태그
WKFMGSKCSDSGIECDSSGTCISLSNWCDGVSHCPNGEDENRCVRLYGPNFILQVYSSQRKSWHPVCRDDWNENYARAACRDMGYKNSFYSSQGIVDNSGATSFMKLNTSAGNVDIYKKLYHSDACSSKAVVSLRCIACGVRSNLSRQSREQKLISEEDLGGEQKLISEEDLHHHHHH (서열번호 21; 밑줄친 myc 태그, 이중으로 밑줄친 His6 태그)
결과
[표 6]
Figure pct00018
[표 7]
Figure pct00019
[표 8]
Figure pct00020
[표 9]
Figure pct00021
실시예 5: 인플루엔자 H1, H3 및 FluB 종의 시험관내 인플루엔자 확산.
본 실시예에서, Calu-3 세포의 시험관내 배양물 전반에 걸쳐 확산하는 다양한 유형의 인플루엔자의 능력 및 상기 확산에 대한 항-TMPRSS2 항체의 효과를 결정하였다.
[표 10]
Figure pct00022
Figure pct00023
실험 과정
Calu-3 세포는 5% FBS를 갖는 DMEM:F12 배지 중 96-웰 플레이트에서 40,000 세포/웰로 씨딩하였다. 다음날, 인플루엔자 바이러스 종은 이전에 결정된 MOI로 희석하였고(표 11을 참조한다) 항체는 100 μg/mL로 희석하였다. 이들 실험에서, 항-HA 및 항-TMPRSS2 항체는 상이한 작용 기전을 갖고, 따라서, 실험 과정은 이들을 적절히 시험하기 위해 이들 항체에 대해 상이하다. 항-HA 항체는 별도의 플레이트에서 37ºC에서 1시간 동안 개별 인플루엔자 바이러스 종과 예비 항온처리하였다. 예비 항온처리 기간 후, 항체/바이러스 혼합물을 1시간 동안 Calu-3 세포에 첨가하였다. 항-TMPRSS2 항체는 37°C에서 3시간 동안 감염되지 않은 Calu-3 세포로 예비 항온처리하였다. 예비 항온처리 기간 후, 바이러스는 1시간 동안 항-TMPRSS2 항체로 예비 항온처리된 Calu-3 세포에 첨가하였다. 긴 시간 감염 후, 세포는 PBS로 3회 세척하였고 새로운 항체는 새로운 배지와 함께 각각의 웰에 첨가하였다. 추가의 항체는 감염 후 24 및 48시간에 첨가하였다. 감염 후 72시간에, 세포는 항-NP로 염색하고 CTL-ImmunoSpot® S6 유니버셜 분석기 (Cellular Technology Limited, Cleveland, OH) 상에서 정량하였다.
[표 11A]
Figure pct00024
[표 11B]
Figure pct00025
결과 요약 및 결론
Calu-3은 외인성 트립신의 부재하에 사람 인플루엔자 바이러스의 다중사이클 복제를 가능하게 하는 것으로 나타난 불멸화된 사람 기도 상피 세포주이다(문헌참조: Zeng et al., Journal of Virology 81: 12439-12449 (2007)). 추가로, Calu-3 세포는 항-TMPRSS2 항체가 시험됨으로 이들 실험을 위해 필수적인 TMPRSS2 (Boettcher-Friebertshaeuser et al., Journal of Virology 85: 1554-1562 (2011))를 발현하는 것으로 나타났다. 이들 실험에서, 항-TMPRSS2 항체인 H1H7017N가 인플루엔자의 상이한 종에서의 확산을 예방할 수 있는지의 여부를 조사하였다. 추가로, 양성 대조군으로서 상이한 종에 대한 상응하는 항-HA 항체를 사용하였다. 예상된 바와 같이, 항-TMPRSS2 항체의 존재하에 초기 감염이 있었지만 H1H7017N은 H1_PR34, H1_CA09, H1_Bris, H9N2, 및 H3N2의 감염의 확산을 성공적으로 예방하였다. 이것은 항-TMPRSS2-처리된 세포와 감염된 대조군 간의 감염된 세포 수의 차이를 조사함에 의해 관찰될 수 있다(표 12). 항-TMPRSS2 항체는 대조군과 처리된 웰에서 감염된 세포의 수가 동일하기 때문에 인플루엔자 B 종 중 어느 하나에서의 확산을 예방할 수 없는 것으로 결론지었다. 대조적으로, 항-HA 항체는 바이러스와 예비 항온처리하였고 초기 감염을 예방하였다. 이것은 또한 감염된 세포의 수를 비교함에 의해 나타낼 수 있다. 감염된 세포의 계수는 CTL 기계 상에서 수행하였고 하기 표에서 보고된다.
[표 12A]
Figure pct00026
[표 12B]
Figure pct00027
참조문헌
Figure pct00028
실시예 6: TMPRS22 사람화된 마우스에서 H1H7017N 단독의 처리 효과.
H1N1 인플루엔자 바이러스에 의한 감염으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 항-TMPRSS2 항체의 능력을 평가하였다.
[표 13]
Figure pct00029
[표 14]
Figure pct00030
실험 과정
이들 실험은 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 5 내지 8주령의 수컷 및 암컷 마우스에서 수행하였다. 마우스에 H1N1의 150 플라크-형성 유닛 (PFU)을 챌린지하였다. 마우스는 복막내 주사를 통해 200μL의 케타민:크실라진 (12mg/ml:0.5mg/ml)을 사용하여 진정시키고 이어서 20μL의 바이러스로 비강내 감염시켰다. 항체는 감염 하루 전에 피하 (SC) 또는 감염 후 다양한 (PI) 날에 정맥내 (IV) 전달하였다. 항체 투여 스케줄은 실험 간에 다양하였다(표 15). 체중은 PI 14일까지 매일 수거하고 마우스는 이들이 이들의 출발 체중의 20%를 상실한 경우 희생시켰다. 결과는 % 생존으로서 보고한다.
[표 15A]
Figure pct00031
[표 15B]
Figure pct00032
결과 요약 및 결론
사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스는 치사량의 인플루엔자로 감염될 수 있는 것으로 나타났다. 이들 실험의 목적은 H1H7017N가 인플루엔자 A 그룹 1에 대하여 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호할 수 있음을 입증하는 것이었다. 항체는 예방학적 및 치료학적 모델에서 시험하였다. H1H7017N을 사용한 치료는 실험 둘다에서 이소타입 대조군 (H1H1238N) 처리된 마우스 보다 높은 생존률을 유도하였다(도 4 및 5). 예방학적 실험에서, 생존률은 H1H1238N로 처리된 마우스에 대해 0%였고, PI -1일에 처리된 마우스에 대해 85.7%이었고 H1H7017N으로 PI 0일에 처리된 마우스에 대해 100% 였다. 치료학적 모델을 위해, H1H1238N-처리된 그룹은 25% 생존률을 유도하였고 PI 0 내지 3일에 H1H7017N으로 처리된 그룹은 100% 생존률을 유도하였다. 데이터는 표 16에 요약한다. H1H7017N은 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스에서 효능을 보여준다.
[표 16A]
Figure pct00033
[표 16B]
Figure pct00034
참조문헌
Figure pct00035
Figure pct00036
실시예 7: TMPRSS2 사람화된 마우스 모델에서 항-TMPRSS2 mAb인 H1H7017N 활성.
H3N2 인플루엔자 바이러스에 의한 감염으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 항-TMPRSS2 항체의 능력을 평가하였다.
[표 17]
Figure pct00037
[표 18]
Figure pct00038
실험 과정
사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 11주령의 수컷 및 암컷 마우스에 H3N2의 20,000 플라크-형성 유닛(PFU)을 챌린지하였다. 마우스는 복막내 주사를 통해 200μL의 케타민:크실라진 (12mg/ml:0.5mg/ml)을 사용하여 진정시키고 이어서 20μL의 바이러스로 비강내 감염시켰다. 감염 후 (Pi) 1일 또는 2일째에, 마우스에 항체를 정맥내 주사하였다. 마우스는 감염 후 (PI) 14일까지 매일 칭량하고 관찰하였다. 이들은 이들이 이들의 출발 체중의 25%를 상실한 경우 희생시켰다.
결과 요약 및 결론
폭은 인플루엔자 치료요법을 고려하는 경우 중요한 성질이다. 이것은 이미 항-TMPRSS2 항체 H1H7017N이 인플루엔자 A 그룹 1에 대해 효과적인 것으로 입증되었다. 상기 실험의 목적은 H1H7017N이 인플루엔자 A 그룹 2에 대해 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호할 수 있음을 입증하는 것이다. 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스는 치사량의 H3N2로 감염시키고 PI 1일 및 2일째에 처리하였다. 치료 그룹 둘다는 감염된 대조군 보다 높은 생존률을 가졌다. PI 1일째에 처리된 마우스는 50% 생존률을 갖는 PI 2일째에 처리된 그룹 보다 높은 100%의 생존률을 가졌고, 처리되지 않은 마우스는 0%의 생존률을 가졌다. 모든 마우스는 PI 5 내지 6일 사이에 죽었다. 생존 그래프는 도 6에 나타내고 % 생존률은 표 19에 요약한다. 이들 결과는 H1H7017이 H3N2-치사량 모델에서 결과를 개선시킴을 입증하였다.
[표 19]
Figure pct00039
참조문헌
Figure pct00040
Figure pct00041
실시예 8: 사람 TMPRSS2 단백질 (WT에 비해)을 발현하도록 가공된 마우스의 감염.
H1N1 인플루엔자 바이러스로 감염된, 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존률을 평가하고 야생형 (WT) 마우스의 것과 비교하였다.
[표 20]
Figure pct00042
실험 과정
실험은 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 7.5 내지 8주령의 수컷 및 암컷 마우스 또는 야생형 한배새끼에서 수행하였다. 마우스에 A/Puerto Rico/08/1934 (H1N1)의 150, 750 또는 1,500 플라크-형성 유닛 (PFU)을 챌린지하였다. 마우스는 복막내 주사를 통해 200μL의 케타민:크실라진 (12mg/ml:0.5mg/ml)을 사용하여 진정시키고 이어서 20μL의 바이러스로 비강내 감염시켰다. 체중은 PI 14일까지 매일 수집하고 마우스는 이들이 이들의 출발 체중의 20%를 상실한 경우 희생시켰다. 결과는 % 생존률로서 보고한다 (도 7).
결과 요약 및 결론
사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스는 인플루엔자 싱체내 모델에서 항-TMPRSS2 항체의 치료학적 효능을 시험하기 위해 제조하였다. 상기 실험에서, H1N1의 병력 종 (historical stain)의 150, 750 또는 1,500 PFU로 감염된 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스 및 야생형 마우스의 생존률을 비교하였다. 모든 3개의 감염 그룹에서 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스 및 야생형 마우스에 대한 생존률은 0%였다. 모든 마우스는 PI 5일 및 8일 사이에 죽었고 보다 높은 바이러스 용량을 투여받은 마우스는 보다 낮은 바이러스 용량을 투여받은 것들 보다 일찍이 죽었다. 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스의 생존 패턴은 야생형 마우스와 유사하였다. 이것은 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 인플루엔자 생체내 모델로서 사용하여 TMPRSS2-특이적 항체의 효과를 평가할 수 있음을 보여준다. 표 21을 참조한다.
[표 21]
Figure pct00043
참조문헌
Figure pct00044
Figure pct00045
실시예 9: H3N2를 사용한 감염 후 마우스에서 H1H14611N2 및 H1H7017N의 조합물을 사용한 치료 효과.
H3N2 인플루엔자 바이러스에 의한 감염으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 항-TMPRSS2와 항-인플루엔자 항체의 조합물의 능력을 평가하였다.
[표 22]
Figure pct00046
[표 23]
Figure pct00047
실험 과정
사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 8주령의 수컷 및 암컷 마우스에 A/Aichi/2/68 (HA, NA) x A/PR/8/34, 재분류된 X-31 (H3N2)의 20,000 플라크-형성 유닛(PFU)을 챌린지하였다. 마우스는 복막내 주사를 통해 200μL의 케타민:크실라진 (12mg/ml:0.5mg/ml)을 사용하여 진정시키고 이어서 20μL의 바이러스로 비강내 감염시켰다. 감염 후 (PI) 4일째에, 마우스에 항체를 정맥내 주사하였다. 체중은 PI 14일까지 매일 수집하고 마우스는 이들이 이들의 출발 체중의 25%를 상실한 경우 희생시켰다. 결과는 % 생존으로서 보고한다.
결과 요약 및 결론
개별적으로, TMPRSS2 항체, H1H7017N, 및 광범위 인플루엔자 A 그룹 2 항체, H1H14611N2가 H3N2의 병력 종을 사용한 치사량의 마우스 챌린지에 대한 치료학적 효능을 갖는 것으로 나타났다. 또한, 치사량의 H1N1 챌린지로 감염된 마우스의 생존률은 H1H7017N과 광범위 인플루엔자 A 그룹 1 항체, H1H11729P의 조합물을 통해 단독의 것 보다 적은 총 항체를 사용한 처리 후 유의적으로 증가될 수 있는 것으로 나타났다. 본 실험에 대한 목적은 조합된 H1H7017N과 H1H14611N2의 상승작용 효과를 평가하는 것이다. 도 8에 나타낸 바와 같이, PI 4일째에 hIG1 이소타입 대조군 항체로 처리된 4마리의 마우스 중 3마리는 PI 7일까지 죽었다. 5마리의 동물 중 3마리의 동물은 10 mg/kg의 H1H14611N2를 투여받는 경우 생존하였고 5마리의 동물 중 4마리는 10 mg/kg의 H1H7017N을 투여받는 경우 생존하였다. 각각 5 mg/kg의 H1H14611N2 및 H1H7017N의 항체의 조합물을 투여받는 경우, 생존률이 40% 였다. 각각 2.5 mg/kg의 H1H14611N2 및 H1H7017N 항체로 처리된 마우스의 100퍼센트는 챌린지로부터 생존하였다. 치사량의 H3N2 챌린지로 감염된 마우스의 생존률은 조합된 항체 또는 단독의 항체의 보다 높은 농도와 비교하여 보다 낮은 농도의 H1H7017N과 H1H14611N2의 조합물을 통해 증가하였다. 퍼센트 생존률은 표 24에 요약한다.
[표 24]
Figure pct00048
참조문헌
Figure pct00049
Figure pct00050
실시예 10: H1N1를 사용한 감염 후 마우스에서 H1H11729P 및 H1H7017N의 조합물을 사용한 치료 효과.
H1N1 인플루엔자 바이러스에 의한 감염으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 항-TMPRSS2와 항-인플루엔자 항체의 조합물의 능력을 평가하였다.
[표 25]
Figure pct00051
[표 26]
Figure pct00052
실험 과정
사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 5주령의 수컷 및 암컷 마우스에 H1N1의 1,500 플라크-형성 유닛(PFU)을 챌린지하였다. 바이러스는 마우스를 200μL의 케타민:크실라진 (12mg/ml:0.5mg/ml)을 사용하여 진정시키고 비강내로 20μL의 바이러스를 전달함에 의해 전달하였다. 감염 후 (PI) 3일째에, 마우스에 항체를 정맥내 주사하였다. 체중은 PI 14일까지 매일 수집하고 마우스는 이들이 이들의 출발 체중의 25%를 상실한 경우 희생시켰다.
결과 요약 및 결론
개별적으로, TMPRSS2 항체, H1H7017N, 및 광범위 인플루엔자 A 그룹 1 항체, H1H11729P가 H1N1의 병력 종을 사용한 치사량의 마우스 챌린지에 대한 치료학적 효능을 갖는 것으로 나타났다. 그러나, 본 실험에 대한 목적은 조합된 항체의 상승작용 효과를 평가하는 것이다. PI 3일째에 hIgG1 이소타입 대조군 항체로 처리된 모든 마우스는 PI 6일까지 죽었다. 동물이 5 mg/kg의 H1H11729P 또는 H1H7017N을 투여받는 경우, 동물의 40% 및 0%는 각각 감염으로부터 생존하였다. 그러나, 각각 2.5 mg/kg의 H1H11729P 및 H1H7017N의 항체의 조합물은 생존률 60%를 유도하였다. 1 mg/kg의 H1H7017N 및 2mg/kg의 H1H11729P (총 3mg/kg)의 조합물로 처리된 마우스의 80 퍼센트는 챌린지로부터 생존하였다. 치사량의 H1N1 챌린지로 감염된 마우스의 생존률은 H1H7017N과 H1H11729P의 조합물을 통해 단독의 것 보다 적은 총 항체로 처리 후 유의적으로 증가하였다(도 9 및 표 27 참조).
[표 27]
Figure pct00053
참조문헌
Figure pct00054
Figure pct00055
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본원에 인용된 모든 참조문헌은 각각의 개별 공보, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 엔트리), 특허 출원 또는 특허가 구체적으로 및 개별적으로 참조로 인용되는 것으로 지적된 경우와 동일한 정도로 참조로 인용된다. 참조에 의한 인용의 진술은 상기 인용이 참조로 인용된 진술에 바로 인접해 있지 않은 경우라도 확인된 각각 및 모든 개별 공보, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, Genbank 서열 또는 GeneID 엔트리),특허 출원, 또는 특허와 관련된 것으로 의도된다. 경우에 따라 명세서 내 참조로 인용된 진술서의 내포는 어떠한 방식으로든지 참조문헌으로 인용된 일반적인 진술을 약화시키지 않는다. 본원의 참조문헌의 인용은 참조문헌이 적절한 선행 기술임을 인정하는 것으로 의도되지 않고 이것은 이들 공보 또는 서류의 내용물 또는 날짜에 관한 것을 인정하는 것을 구성하지 않는다.
<110> Purcell , Lisa <120> ANTI-TMPRSS2 ANTIBODIES AND ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS <130> 10378-WO <140> To be assigned <141> 2019-01-24 <150> 62/622,292 <151> 2018-01-26 <160> 48 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(360) <400> 1 cag gtg cag ctg gtg gag tct ggg gga ggc gtg gtc cag cct ggg agg 48 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcg tct gga ttc acc ttc agt tcc tat 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 ggc atg cac tgg gtc cgc cag tct cca ggc aag ggg ctc gag tgg gtg 144 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 gca gtt ata tgg aat gat gga agt tat gta tac tat gca gac tcc gtg 192 Ala Val Ile Trp Asn Asp Gly Ser Tyr Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac att tcc aag aac acg ctg ttt 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 ctg caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac acg gct gtg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gcg aga gag ggg gag tgg gta ctt tac tac ttt gac tac tgg ggc cag 336 Ala Arg Glu Gly Glu Trp Val Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 gga acc ctg gtc acc gtc tcc tca 360 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Asn Asp Gly Ser Tyr Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Glu Trp Val Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(321) <400> 3 gac atc cag atg acc cag tct cct tcc acc ctg tct gca tct gtt gga 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 gac aga gtc acc atc act tgc cgg gcc agt cag agt att agt agc tgg 96 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 ttg gcc tgg tat cag cag aaa cca ggg aaa gcc cct aaa ctc ctg atc 144 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tat aag gcg tct act tta gaa agt ggg gtc cca tca agg ttc agc ggc 192 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 agt gga tct ggg aca gaa ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag cct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 gat gat ttt gca act tat tac tgc caa cag tat aat agt tat tcg tac 288 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr 85 90 95 act ttt ggc cag ggg acc aag ctg gag atc aaa 321 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(24) <400> 5 gga ttc acc ttc agt tcc tat ggc 24 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(24) <400> 7 ata tgg aat gat gga agt tat gta 24 Ile Trp Asn Asp Gly Ser Tyr Val 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Homo 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<211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Asn Asp Gly Ser Tyr Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Glu Trp Val Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 18 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 19 <211> 447 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Asn Asp Gly Ser Tyr Val Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Glu Trp Val Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 20 <211> 178 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys Cys Ser Asn Ser Gly Ile Glu Cys Asp 1 5 10 15 Ser Ser Gly Thr Cys Ile Asn Pro Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser 20 25 30 His Cys Pro Gly Gly Glu Asp Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly 35 40 45 Pro Asn Phe Ile Leu Gln Met Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His 50 55 60 Pro Val Cys Gln Asp Asp Trp Asn Glu Asn Tyr Gly Arg Ala Ala Cys 65 70 75 80 Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn Asn Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val 85 90 95 Asp Asp Ser Gly Ser Thr Ser Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly 100 105 110 Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser 115 120 125 Lys Ala Val Val Ser Leu Arg Cys Ile Ala Cys Gly Val Asn Leu Asn 130 135 140 Ser Ser Arg Gln Ser Arg Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 145 150 155 160 Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His 165 170 175 His His <210> 21 <211> 178 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 21 Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys Cys Ser Asp Ser Gly Ile Glu Cys Asp 1 5 10 15 Ser Ser Gly Thr Cys Ile Ser Leu Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser 20 25 30 His Cys Pro Asn Gly Glu Asp Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly 35 40 45 Pro Asn Phe Ile Leu Gln Val Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His 50 55 60 Pro Val Cys Arg Asp Asp Trp Asn Glu Asn Tyr Ala Arg Ala Ala Cys 65 70 75 80 Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn Ser Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val 85 90 95 Asp Asn Ser Gly Ala Thr Ser Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly 100 105 110 Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser 115 120 125 Lys Ala Val Val Ser Leu Arg Cys Ile Ala Cys Gly Val Arg Ser Asn 130 135 140 Leu Ser Arg Gln Ser Arg Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 145 150 155 160 Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His 165 170 175 His His <210> 22 <211> 492 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Ala Leu Asn Ser Gly Ser Pro Pro Ala Ile Gly Pro Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Asn His Gly Tyr Gln Pro Glu Asn Pro Tyr Pro Ala Gln Pro Thr Val 20 25 30 Val Pro Thr Val Tyr Glu Val His Pro Ala Gln Tyr Tyr Pro Ser Pro 35 40 45 Val Pro Gln Tyr Ala Pro Arg Val Leu Thr Gln Ala Ser Asn Pro Val 50 55 60 Val Cys Thr Gln Pro Lys Ser Pro Ser Gly Thr Val Cys Thr Ser Lys 65 70 75 80 Thr Lys Lys Ala Leu Cys Ile Thr Leu Thr Leu Gly Thr Phe Leu Val 85 90 95 Gly Ala Ala Leu Ala Ala Gly Leu Leu Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys 100 105 110 Cys Ser Asn Ser Gly Ile Glu Cys Asp Ser Ser Gly Thr Cys Ile Asn 115 120 125 Pro Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser His Cys Pro Gly Gly Glu Asp 130 135 140 Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly Pro Asn Phe Ile Leu Gln Met 145 150 155 160 Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His Pro Val Cys Gln Asp Asp Trp 165 170 175 Asn Glu Asn Tyr Gly Arg Ala Ala Cys Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn 180 185 190 Asn Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val Asp Asp Ser Gly Ser Thr Ser 195 200 205 Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys 210 215 220 Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser Lys Ala Val Val Ser Leu Arg 225 230 235 240 Cys Ile Ala Cys Gly Val Asn Leu Asn Ser Ser Arg Gln Ser Arg Ile 245 250 255 Val Gly Gly Glu Ser Ala Leu Pro Gly Ala Trp Pro Trp Gln Val Ser 260 265 270 Leu His Val Gln Asn Val His Val Cys Gly Gly Ser Ile Ile Thr Pro 275 280 285 Glu Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Lys Pro Leu Asn Asn 290 295 300 Pro Trp His Trp Thr Ala Phe Ala Gly Ile Leu Arg Gln Ser Phe Met 305 310 315 320 Phe Tyr Gly Ala Gly Tyr Gln Val Glu Lys Val Ile Ser His Pro Asn 325 330 335 Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Asn Asn Asp Ile Ala Leu Met Lys Leu Gln 340 345 350 Lys Pro Leu Thr Phe Asn Asp Leu Val Lys Pro Val Cys Leu Pro Asn 355 360 365 Pro Gly Met Met Leu Gln Pro Glu Gln Leu Cys Trp Ile Ser Gly Trp 370 375 380 Gly Ala Thr Glu Glu Lys Gly Lys Thr Ser Glu Val Leu Asn Ala Ala 385 390 395 400 Lys Val Leu Leu Ile Glu Thr Gln Arg Cys Asn Ser Arg Tyr Val Tyr 405 410 415 Asp Asn Leu Ile Thr Pro Ala Met Ile Cys Ala Gly Phe Leu Gln Gly 420 425 430 Asn Val Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Thr Ser 435 440 445 Lys Asn Asn Ile Trp Trp Leu Ile Gly Asp Thr Ser Trp Gly Ser Gly 450 455 460 Cys Ala Lys Ala Tyr Arg Pro Gly Val Tyr Gly Asn Val Met Val Phe 465 470 475 480 Thr Asp Trp Ile Tyr Arg Gln Met Arg Ala Asp Gly 485 490 <210> 23 <211> 492 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 23 Met Ala Leu Asn Ser Gly Ser Pro Pro Gly Val Gly Pro Tyr Tyr Glu 1 5 10 15 Asn His Gly Tyr Gln Pro Glu Asn Pro Tyr Pro Ala Gln Pro Thr Val 20 25 30 Ala Pro Asn Val Tyr Glu Val His Pro Ala Gln Tyr Tyr Pro Ser Pro 35 40 45 Val Pro Gln Tyr Thr Pro Arg Val Leu Thr His Ala Ser Asn Pro Ala 50 55 60 Val Cys Arg Gln Pro Lys Ser Pro Ser Gly Thr Val Cys Thr Ser Lys 65 70 75 80 Thr Lys Lys Ala Leu Cys Val Thr Met Thr Leu Gly Ala Val Leu Val 85 90 95 Gly Ala Ala Leu Ala Ala Gly Leu Leu Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys 100 105 110 Cys Ser Asp Ser Gly Ile Glu Cys Asp Ser Ser Gly Thr Cys Ile Ser 115 120 125 Leu Ser Asn Trp Cys Asp Gly Val Ser His Cys Pro Asn Gly Glu Asp 130 135 140 Glu Asn Arg Cys Val Arg Leu Tyr Gly Pro Asn Phe Ile Leu Gln Val 145 150 155 160 Tyr Ser Ser Gln Arg Lys Ser Trp His Pro Val Cys Arg Asp Asp Trp 165 170 175 Asn Glu Asn Tyr Ala Arg Ala Ala Cys Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn 180 185 190 Ser Phe Tyr Ser Ser Gln Gly Ile Val Asp Asn Ser Gly Ala Thr Ser 195 200 205 Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly Asn Val Asp Ile Tyr Lys Lys 210 215 220 Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser Lys Ala Val Val Ser Leu Arg 225 230 235 240 Cys Ile Ala Cys Gly Val Arg Ser Asn Leu Ser Arg Gln Ser Arg Ile 245 250 255 Val Gly Gly Gln Asn Ala Leu Leu Gly Ala Trp Pro Trp Gln Val Ser 260 265 270 Leu His Val Gln Asn Ile His Val Cys Gly Gly Ser Ile Ile Thr Pro 275 280 285 Glu Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Lys Pro Leu Asn Ser 290 295 300 Pro Trp Gln Trp Thr Ala Phe Val Gly Thr Leu Arg Gln Ser Ser Met 305 310 315 320 Phe Tyr Glu Lys Gly His Arg Val Glu Lys Val Ile Ser His Pro Asn 325 330 335 Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Asn Asn Asp Ile Ala Leu Met Lys Leu His 340 345 350 Thr Pro Leu Thr Phe Asn Glu Val Val Lys Pro Val Cys Leu Pro Asn 355 360 365 Pro Gly Met Met Leu Glu Pro Glu Gln His Cys Trp Ile Ser Gly Trp 370 375 380 Gly Ala Thr Gln Glu Lys Gly Lys Thr Ser Asp Val Leu Asn Ala Ala 385 390 395 400 Met Val Pro Leu Ile Glu Pro Arg Arg Cys Asn Asn Lys Tyr Val Tyr 405 410 415 Asp Gly Leu Ile Thr Pro Ala Met Ile Cys Ala Gly Phe Leu Gln Gly 420 425 430 Thr Val Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Thr Leu 435 440 445 Lys Asn Asp Val Trp Trp Leu Ile Gly Asp Thr Ser Trp Gly Ser Gly 450 455 460 Cys Ala Gln Ala Asn Arg Pro Gly Val Tyr Gly Asn Val Thr Val Phe 465 470 475 480 Thr Asp Trp Ile Tyr Arg Gln Met Arg Ala Asp Gly 485 490 <210> 24 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Phe 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Thr Ser Gly Asn Tyr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Phe Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Asn Trp Asn Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Gly Phe Thr Phe Ser Gly Phe Ser 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ile Ser Thr Ser Gly Asn Tyr Met 1 5 <210> 27 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Asn Trp Asn Leu Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 28 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Asn Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu 65 70 75 80 Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Ser Leu Asn Ser Asn Tyr 1 5 <210> 30 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Gly Ala Ser 1 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 32 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Ser Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Pro Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Gln Pro Val Tyr Gln Tyr Asn Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Pro 1 5 <210> 35 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Ala Arg Gln Gln Pro Val Tyr Gln Tyr Asn Met Asp Val 1 5 10 <210> 36 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asn 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Leu Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gln Gly Ile Arg Asn Asn 1 5 <210> 38 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Ala Ala Ser 1 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Leu Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 40 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Phe 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Thr Ser Gly Asn Tyr Met Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Phe Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Asn Trp Asn Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Gly Phe Ser Phe Ser Gly Phe Ser 1 5 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Ile Ser Thr Ser Gly Asn Tyr Met 1 5 <210> 43 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Ala Arg Gly Gly Gly Tyr Asn Trp Asn Leu Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 44 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Asn Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Gln Ser Leu Asn Ser Asn Tyr 1 5 <210> 46 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Gly Ala Ser 1 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GS Linker <400> 48 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5

Claims (30)

  1. 사람 TMPRSS2에 특이적으로 결합하는 사람 항원-결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 항원-결합 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (a) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄의 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역
    을 포함하는, 항원-결합 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역
    을 포함하는, 항원-결합 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 2, 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 포함하는 중쇄 면역글로불린의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변영역; 및/또는
    (b) 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열 및 서열번호 4 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 포함하는 경쇄 면역글로불린의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역
    을 포함하는, 항원-결합 단백질.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 항원-결합 단백질:
    (a) 아미노산 서열: Q S I S S W (서열번호 12)을 포함하는 CDR-L1,
    (b) 아미노산 서열: K A S (서열번호 14)를 포함하는 CDR-L2, 및/또는
    (c) 아미노산 서열: Q Q Y N S Y S Y T (서열번호 16)을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 중쇄 면역글로불린 가변 영역; 및/또는
    (a) 아미노산 서열: G F T F S S Y G (서열번호 6)을 포함하는 CDR-H1,
    (b) 아미노산 서열: I W N D G S Y V (서열번호 8)을 포함하는 CDR-H2,
    (c) 아미노산 서열: A R E G E W V L Y Y F D Y (서열번호 10)을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 경쇄 면역글로불린 가변 영역.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 항원-결합 단백질:
    (a) 서열번호 17 또는 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 면역글로불린; 또는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및/또는
    (b) 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 면역글로불린; 또는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질과 TMPRSS2에 결합하는 것에 대해 경쟁하고/하거나 TMPRSS2 상의 동일하거나 중첩 에피토프에 결합하는, 항원-결합 단백질.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 다중특이적인, 항원-결합 단백질.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하기의 성질 중 하나 이상을 포함하는, 항원-결합 단백질:
    ·TMPRSS2-발현 세포에서 인플루엔자 바이러스의 성장을 억제하는 것;
    ·TMPRSS-발현 세포의 표면에 결합하는 것;
    ·TMPRSS2를 발현하지 않는 MDCK/Tet-on 세포에 유의적으로 결합하지 않는 것;
    ·약 25oC에서 약 2.81 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
    ·약 37oC에서 약 9.31 X 10-9 M의 KD로 사람 TMPRSS2에 결합하는 것;
    ·약 25oC에서 약 5.60 X 10-8 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
    ·약 37oC에서 약 1.40 X 10-7 M의 KD로 시노몰구스 TMPRSS2에 결합하는 것;
    ·시험관내 세포의 인플루엔자 바이러스 감염의 확산을 제한하는 것; 및/또는
    ·인플루엔자 바이러스 감염에 의해 유발된 죽음으로부터 사람 TMPRSS2 단백질을 발현하도록 가공된 마우스를 보호하는 것.
  11. TMPRSS2 폴리펩타이드에 결합된, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질을 포함하는 복합체.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질 또는 이의 면역글로불린 쇄를 제조하는 방법으로서,
    (a) 상기 항원-결합 단백질의 면역글로불린 쇄를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 도입하는 단계;
    (b) 폴리뉴클레오타이드의 발현에 선호될 수 있는 조건하에서 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    (c) 임의로 상기 항원-결합 단백질 또는 면역글로불린 쇄를 상기 숙주 세포로부터 및/또는 상기 숙주 세포가 성장한 배지로부터 단리하는 단계
    를 포함하는, 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 숙주 세포가 차이니즈 햄스터 난소 세포인, 방법.
  14. 제12항 또는 제13항의 방법의 생성물인 항원-결합 단백질 또는 면역글로불린 쇄.
  15. 하기를 포함하는 폴리펩타이드:
    (a) 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 쇄의 VH 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3; 또는
    (b) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 쇄의 VL 도메인의 CDR1, CDR2, 및 CDR3.
  16. 제15항의 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
  17. 제16항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
  18. 제1항 내지 제10항 및 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질 또는 면역글로불린 쇄 또는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  19. 추가의 치료학적 제제와 연합된 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질을 포함하는 조성물 또는 키트.
  20. 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체 및 임의로 추가의 치료학적 제제를 포함하는 약제학적 조성물.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 항-바이러스 약물 또는 백신인 추가의 치료학적 제제와 연합된, 조성물 또는 키트.
  22. 제19항 또는 제20항에 있어서, 상기 추가의 치료학적 제제가 레디파스비르, 소포스부비르, 레디파스비르 및 소포스부비르의 조합물, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 항암제, 및 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 및/또는 H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 구성원인, 조성물 또는 키트.
  23. 제1항 내지 제10항, 제14항 및 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질 또는 조성물을 포함하는 용기 또는 주사 장치.
  24. 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 치료학적 유효량의 항원-결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 인플루엔자 바이러스, 코로나바이러스, SARS-Co 바이러스, MERS-Co 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 사람 메타뉴모바이러스 또는 C형 간염 바이러스(HCV)에 의한 암 또는 감염을 치료하거나 예방하기 위한 방법.
  25. 제24항에 있어서, 전립선암, 결장암, 폐암, 췌장암, 요로암, 유방암, 난소암, 전립선 선암종, 신장 세포 암종, 결장직장 선암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종 및/또는 늑막 중피종인 암을 치료하거나 예방하기 위한 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 대상체에게 하나 이상의 추가의 치료학적 제제가 투여되는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 대상체에게 항-바이러스 약물 또는 백신인 하나 이상의 추가의 치료학적 제제가 투여되는, 방법.
  28. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 대상체에게 레디파스비르, 소포스부비르, 레디파스비르 및 소포스부비르의 조합물, 오셀타미비르, 자나미비르, 리바비린 및 인터페론-알파2b, 인터페론-알파2a, 인플루엔자 HA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는; H1H14611N2; H1H14612N2; H1H11723P; H1H11729P; H1H11820N; H1H11829N; H1H11829N2; H2aM11829N; H2M11830N; H1H11830N2; H1H11903N; H1H14571N; H2a14571N; H1H11704P; H1H11711P; H1H11714P; H1H11717P; H1H11724P; H1H11727P; H1H11730P2; H1H11731P2; H1H11734P2; H1H11736P2; H1H11742P2; H1H11744P2; H1H11745P2; H1H11747P2; H1H11748P2; H1H17952B; H1H17953B; H1H17954B; H1H17955B; H1H17956B; H1H17957B; H1H17958B; H1H17959B; H1H17960B; H1H17961B; H1H17962B; H1H17963B; H1H17964B; H1H17965B; H1H17966B; H1H17967B; H1H17968B; H1H17969B; H1H17970B; H1H17971B; H1H17972B; H1H17973B; H1H17974B; H1H17975B; H1H17976B; H1H17977B; H1H17978B; H1H17979B; H1H17980B; H1H17981B; H1H17982B; H1H17983B; H1H17984B; H1H17985B; H1H17986B; H1H17987B; H1H17988B; H1H17989B; H1H17990B; H1H17991B; H1H17992B; H1H17993B; H1H17994B; H1H17995B; H1H17996B; H1H17997B; H1H17998B; H1H17999B; H1H18000B; H1H18001B; H1H18002B; H1H18003B; H1H18004B; H1H18005B; H1H18006B; H1H18007B; H1H18008B; H1H18009B; H1H18010B; H1H18011B; H1H18012B; H1H18013B; H1H18014B; H1H18015B; H1H18016B; H1H18017B; H1H18018B; H1H18019B; H1H18020B; H1H18021B; H1H18022B; H1H18023B; H1H18024B; H1H18025B; H1H18026B; H1H18027B; H1H18028B; H1H18029B; H1H18030B; H1H18031B; H1H18032B; H1H18033B; H1H18034B; H1H18035B; H1H18037B; H1H18038B; H1H18039B; H1H18040B; H1H18041B; H1H18042B; H1H18043B; H1H18044B; H1H18045B; H1H18046B; H1H18047B; H1H18048B; H1H18049B; H1H18051B; H1H18052B; H1H18053B; H1H18054B; H1H18055B; H1H18056B; H1H18057B; H1H18058B; H1H18059B; H1H18060B; H1H18061B; H1H18062B; H1H18063B; H1H18064B; H1H18065B; H1H18066B; H1H18067B; H1H18068B; H1H18069B; H1H18070B; H1H18071B; H1H18072B; H1H18073B; H1H18074B; H1H18075B; H1H18076B; H1H18077B; H1H18078B; H1H18079B; H1H18080B; H1H18081B; H1H18082B; H1H18083B; H1H18084B; H1H18085B; H1H18086B; H1H18087B; H1H18088B; H1H18089B; H1H18090B; H1H18091B; H1H18092B; H1H18093B; H1H18094B; H1H18095B; H1H18096B; H1H18097B; H1H18098B; H1H18099B; H1H18100B; H1H18101B; H1H18102B; H1H18103B; H1H18104B; H1H18105B; H1H18107B; H1H18108B; H1H18109B; H1H18110B; H1H18111B; H1H18112B; H1H18113B; H1H18114B; H1H18115B; H1H18116B; H1H18117B; H1H18118B; H1H18119B; H1H18120B; H1H18121B; H1H18122B; H1H18123B; H1H18124B; H1H18125B; H1H18126B; H1H18127B; H1H18128B; H1H18129B; H1H18130B; H1H18131B; H1H18132B; H1H18133B; H1H18134B; H1H18135B; H1H18136B; H1H18137B; H1H18138B; H1H18139B; H1H18140B; H1H18141B; H1H18142B; H1H18143B; H1H18144B; H1H18145B; H1H18146B; H1H18147B; H1H18148B; H1H18149B; H1H18150B; H1H18151B; H1H18152B; H1H18153B; H1H18154B; H1H18155B; H1H18156B; H1H18157B; H1H18158B; H1H18159B; H1H18160B; H1H18161B; H1H18162B; H1H18163B; H1H18164B; H1H18165B; H1H18166B; H1H18167B; H1H18168B; H1H18169B; H1H18170B; H1H18171B; H1H18172B; H1H18173B; H1H18174B; H1H18175B; H1H18176B; H1H18177B; H1H18178B; H1H18179B; H1H18180B; H1H18181B; H1H18182B; H1H18183B; H1H18184B; H1H18185B; H1H18186B; H1H18187B; H1H18188B; H1H18189B; H1H18190B; H1H18191B; H1H18192B; H1H18193B; H1H18194B; H1H18195B; H1H18196B; H1H18197B; H1H18198B; H1H18199B; H1H18200B; H1H18201B; H1H18202B; H1H18203B; H1H18204B; H1H18205B; H1H18206B; H1H18207B; H1H18208B; H1H18209B; H1H18210B; H1H18211B; H1H18212B; H1H18213B; H1H18214B; H1H18216B; H1H18217B; H1H18218B; H1H18219B; H1H18220B; H1H18221B; H1H18222B; H1H18223B; H1H18224B; H1H18225B; H1H18226B; H1H18227B; H1H18228B; H1H18229B; H1H18230B; H1H18231B; H1H18232B; H1H18233B; H1H18234B; H1H18235B; H1H18236B; H1H18237B; H1H18238B; H1H18239B; H1H18240B; H1H18241B; H1H18242B; H1H18243B; H1H18244B; H1H18245B; H1H18246B; H1H18247B; H1H18248B; H1H18249B; H1H18250B; H1H18251B; H1H18252B; H1H18253B; H1H18254B; H1H18255B; H1H18256B; H1H18257B; H1H18258B; H1H18259B; H1H18261B; H1H18262B; H1H18263B; H1H18264B; H1H18265B; H1H18266B; H1H18267B; H1H18268B; H1H18269B; H1H18270B; H1H18271B; H1H18272B; H1H18274B; H1H18275B; H1H18276B; H1H18277B; H1H18278B; H1H18279B; H1H18280B; H1H18281B; H1H18282B; H1H18283B; H1H18284B; H1H18285B; H1H18286B; H1H18287B; H1H18288B; H1H18289B; H1H18290B; H1H18291B; H1H18292B; H1H18293B; H1H18294B; H1H18295B; H1H18297B; H1H18298B; H1H18299B; H1H18300B; H1H18301B; H1H18302B; H1H18303B; H1H18304B; H1H18305B; H1H18306B; H1H18307B; H1H18308B; H1H18309B; H1H18310B; H1H18311B; H1H18312B; H1H18313B; H1H18314B; H1H18315B; H1H18316B; H1H18317B; H1H18318B; H1H18319B; H1H18320B; H1H18321B; H1H18322B; H1H18323B; H1H18324B; H1H18325B; H1H18326B; H1H18327B; H1H18328B; H1H18329B; H1H18330B; H1H18331B; H1H18332B; H1H18333B; H1H18334B; 및 H1H18335B로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 구성원인 하나 이상의 추가의 치료학적 제제가 투여되는 방법.
  29. 제1항 내지 제10항 및 제14항 중 어느 한 항의 항원-결합 단백질을 대상체의 체내에 주사함을 포함하는, 상기 항원-결합 단백질을 대상체의 체내에 투여하기 위한 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 항원-결합 단백질이 피하, 정맥내 또는 근육내로 대상체의 체내에 주사되는, 방법.
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