JP2023553888A - Ａ型インフルエンザ感染の治療のための抗体及び方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、インフルエンザＡ型ウイルスの感染を中和する抗体を提供する。本開示はまた、そのような抗体を産生する不死化Ｂ細胞及び培養形質細胞をコードする核酸を提供する。さらに、本開示は、Ａ型インフルエンザ感染の予防及び治療における本開示の抗体の使用を提供する。【選択図】 図１

Description

関連出願の相互参照本出願は、２０２０年１２月８日に出願された米国仮出願第６３／１２２，８９４号に対する優先権を主張するものであり、これは参照により本明細書に援用される。
配列表に関する記述
出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は９３０４８５＿４３１ ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔであり、このテキストファイルは２３．９ｋｂであり、２０２１年１２月４日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出された。

発明の属する技術分野
本開示は、Ａ型インフルエンザ感染を強力に低減する抗体及び当該抗体の使用に関する。特に、本開示は、Ａ型インフルエンザ感染の予防及び治療に関する。

インフルエンザは、毎年の大発生で世界中に拡散されている感染症であり、１年あたり約３～５００万症例の重症疾患及び約２９０，０００～６５０，０００人の呼吸器死をもたらす（非特許文献１）。最も一般的な症状としては、突然の発熱、咳（通常は乾燥）、頭痛、筋肉痛及び関節痛、重度の倦怠感（体調不良）、咽喉炎及び鼻水が挙げられる。インキュベーション期間は１～４日の間で変化するが、通常、症状はウイルスへの曝露後約２日で始まる。インフルエンザの合併症には、肺炎、副鼻腔感染症、及び喘息若しくは心不全等の以前の健康問題の悪化、敗血症、又は慢性基礎疾患の増悪が含まれ得る。

インフルエンザは、マイナス鎖の一本鎖セグメント化ＲＮＡゲノムを含有するオルトミウイルス科のウイルスの抗原的及び遺伝的に多様な群であるインフルエンザウイルスによって誘引される。インフルエンザウイルスの４つの型（Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ）のうち、３つの型（Ａ、Ｂ及びＣ）がヒトに影響を及ぼす。インフルエンザＡ型ウイルスは、最も有毒なヒト病原体であり、最も重篤な病気を誘発する。インフルエンザＡウイルスは、存在する主要な表面タンパク質の異なるサブタイプ：ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）に基づいて分類することができる。それらのヘマグルチニン（「ＨＡ」）タンパク質によって定義される少なくとも１８種のインフルエンザＡサブタイプが存在する。ＨＡは２つのグループに分類することができる。グループ１は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１６及びＨ１７サブタイプを含み、グループ２は、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ７、Ｈ１０、Ｈ１４及びＨ１５サブタイプを含む。全てのサブタイプが鳥類に存在するが、大部分はＨ１、Ｈ２及びＨ３サブタイプがヒトにおいて疾患を誘発する。Ｈ５、Ｈ７及びＨ９サブタイプは、ヒトにおいて散発性の重度の感染症を引き起こし、新たなパンデミックを引き起こし得る。インフルエンザＡウイルスは継続的に進化して新しい変異体を生成するが、これは抗原ドリフトという現象である。結果として、過去のウイルスに応答して産生された抗体は、新しいドリフトウイルスに対してｐｏｏｒｌｙｏｒ非防御性である。その結果、新たなワクチンが、出現すると予測されるＨ１及びＨ３ウイルスに対して毎年産生されなければならず、このプロセスは、非常に費用がかかり、かつ必ずしも効率的ではない。同じことが、Ｈ５インフルエンザワクチンの製造にも当てはまる。

ＨＡは、インフルエンザＡウイルスの主要な表面タンパク質であり、感染又はワクチン接種によって誘導される中和抗体の主な標的である。ＨＡは、膜上のシアル酸を有する細胞（例えば、上気道又は赤血球中の細胞）へのウイルスの結合を担う。さらに、ＨＡは、ｐＨが低下した後に、ウイルスエンベロープとエンドソーム膜との融合を媒介する。ＨＡは、ホモ三量体内在性膜糖タンパク質である。ＨＡ三量体は、３つの同一の単量体から構成され、各々は、２つのジスルフィド架橋によって連結されたＨＡ１及びＨＡ２領域を有するインタクトなＨＡ０単一ポリペプチド鎖から作製される。各ＨＡ２領域は、アルファヘリックスコイルドコイル構造を採用し、主にＨＡの「ステム」又は「ストーク」領域を形成するが、ＨＡ１領域は、α／β構造の混合物を含有する小さな球状ドメイン（ＨＡの「ヘッド」領域）である。球状ＨＡヘッド領域はシアル酸受容体への結合を媒介し、一方、ＨＡステムは、低ｐＨによってエンドソーム内で誘発されるウイルス膜と細胞膜との間のその後の融合を媒介する。免疫優性ＨＡ球状ヘッドドメインは、一定の抗原ドリフトを受ける別個の抗原部位を有する高い可塑性を有するが、ＨＡステム領域は、サブタイプ間で比較的保存されている。現在のインフルエンザワクチンは、主に、ＨＡのステム領域よりも速く進化する免疫優性可変ＨＡヘッド領域に対する免疫反応を誘導する（非特許文献２）。したがって、特定のインフルエンザワクチンは通常、わずか数年しか防御を付与せず、インフルエンザワクチンの再開発は毎年必要である。

これらの問題を克服するために、最近、ＨＡステム中の保存部位を標的とする新しいクラスのインフルエンザ中和抗体が、インフルエンザウイルス治療薬として開発された。ＨＡのステム領域を標的とするこれらの抗体は、通常、ＨＡのヘッド領域を標的とする抗体と比較してより広い中和性である。このより広い中和性があるインフルエンザウイルスＡの抗体は非特許文献３に概説されている。奥野らは、インフルエンザウイルスＡ／奥田／５７（Ｈ２Ｎ２）でマウスを免疫し、ＨＡ２中の保存された立体構造エピトープに結合し、グループ１ Ｈ２、Ｈ１及びＨ５亜型インフルエンザＡウイルスをｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで中和するモノクローナル抗体（Ｃ１７９）を単離した（非特許文献４～６）。ＨＡステム領域標的化抗体のさらなる例としては、ＣＲ６２６１（非特許文献７及び８）、Ｆ１０（非特許文献９）、ＣＲ８０２０（非特許文献１０）、ＦＩ６（非特許文献１１）、及びＣＲ９１１４（非特許文献１２）があげられる。

しかしながら、グループ１及び２サブタイプの両方のＨＡステム領域と反応することができる抗体は非常に稀であり、通常、全てのサブタイプの完全な適用範囲を示さない。最近、抗体ＭＥＤＩ８８５２が記載され、これは、グループ１及び２のインフルエンザＡウイルスを前例のない幅で強力に中和し、抗原進化の８０年超にわたる代表的なウイルスの多様なパネルを中和することができる（非特許文献１３及び１４）。ＭＥＤＩ８８５２は、他の構造的に特徴付けられたステム反応性中和抗体と著しく異なる高度に保存されたエピトープに結合することが示された（非特許文献１３）。

ＷＨＯ，Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（Ｓｅａｓｏｎａｌ）Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ６，２０１８ Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ Ｅ，Ｑｉｕ Ｘ，Ｗｉｌｓｏｎ ＰＣ，Ｂａｈｌ Ｊ，Ｋｒａｍｍｅｒ Ｆ．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｈｅａｄ ｅｖｏｌｖｅｓ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｔａｌｋ ｄｏｍａｉｎ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１８ Ｊｕｌ １１；８（１）：１０４３２ Ｃｏｒｔｉ Ｄ．ａｎｄ Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ．，Ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；３１：７０５－７４２ Ｏｋｕｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｓｍｉｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，１９９９ Ｓｍｉｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｔｈｒｏｓｂｙ Ｍ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｉｎｋ Ｅ，Ｊｏｎｇｅｎｅｅｌｅｎ Ｍ，Ｐｏｏｎ ＬＬＭ，Ａｌａｒｄ Ｐ，Ｃｏｒｎｅｌｉｓｓｅｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｈｅｔｅｒｏｓｕｂｔｙｐｉｃ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｃｒｏｓｓ－Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｈ５Ｎ１ ａｎｄ Ｈ１Ｎ１ Ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ ｆｒｏｍ Ｈｕｍａｎ ＩｇＭ＋ Ｍｅｍｏｒｙ Ｂ Ｃｅｌｌｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ３（１２）：ｅ３９４２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００３９４２ Ｆｒｉｅｓｅｎ ＲＨＥ，Ｋｏｕｄｓｔａａｌ Ｗ，Ｋｏｌｄｉｊｋ ＭＨ，Ｗｅｖｅｒｌｉｎｇ ＧＪ，Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ＪＰＪ，Ｌｅｎｔｉｎｇ ＰＪ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｗ Ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｅｖｅｒｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ：Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ Ｆｅｒｒｅｔｓ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（２）：ｅ９１０６．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００９１０６ Ｓｕｉ Ｊ，Ｈｗａｎｇ ＷＣ，Ｐｅｒｅｚ Ｓ，Ｗｅｉ Ｇ，Ａｉｒｄ Ｄ，Ｃｈｅｎ ＬＭ，Ｓａｎｔｅｌｌｉ Ｅ，Ｓｔｅｃ Ｂ，Ｃａｄｗｅｌｌ Ｇ，Ａｌｉ Ｍ，Ｗａｎ Ｈ，Ｍｕｒａｋａｍｉ Ａ，Ｙａｍｍａｎｕｒｕ Ａ，Ｈａｎ Ｔ，Ｃｏｘ ＮＪ，Ｂａｎｋｓｔｏｎ ＬＡ，Ｄｏｎｉｓ ＲＯ，Ｌｉｄｄｉｎｇｔｏｎ ＲＣ，Ｍａｒａｓｃｏ ＷＡ（Ｍａｒｃｈ ２００９）．"Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂａｓｅｓ ｆｏｒ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓｅｓ．" Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．１６（３）：２６５－７３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｓｍｂ．１５６６ Ｅｋｉｅｒｔ ＤＣ，Ｆｒｉｅｓｅｎ ＲＨＥ，Ｂｈａｂｈａ Ｇ，Ｋｗａｋｓ Ｔ，Ｊｏｎｇｅｎｅｅｌｅｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．２０１１．Ａ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ｇｒｏｕｐ ２ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４４）：８４３－５０ Ｃｏｒｔｉ Ｄ，Ｖｏｓｓ Ｊ，Ｇａｍｂｌｉｎ ＳＪ，Ｃｏｄｏｎｉ Ｇ，Ｍａｃａｇｎｏ Ａ，ｅｔ ａｌ．２０１１．Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ｇｒｏｕｐ １ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ２ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４４）：８５０－５６ Ｄｒｅｙｆｕｓ Ｃ，Ｌａｕｒｓｅｎ ＮＳ，Ｋｗａｋｓ Ｔ，Ｚｕｉｊｄｇｅｅｓｔ Ｄ，Ｋｈａｙａｔ Ｒ，ｅｔ ａｌ．２０１２．Ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７（６１００）：１３４３－４８ Ｋａｌｌｅｗａａｒｄ ＮＬ，Ｃｏｒｔｉ Ｄ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＪ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ Ａｌｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ．Ｃｅｌｌ．２０１６；１６６（３）：５９６－６０８ Ｐａｕｌｅｓ，Ｃ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ Ａ Ｓｔｅｍ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＭＥＤＩ８８５２ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｌｉｍｉｔｓ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｎｄｅｍｉｃ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２１６，３５６－３６５，ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｉｎｆｄｉｓ／ｊｉｘ２９２（２０１７）

上記を考慮して、本開示の目的は、インフルエンザＡウイルスを広く中和し、先行技術の抗体と比較して増強された有効性を提供する新規抗体を提供することである。
この目的は、以下及び添付の特許請求の範囲に記載される主題によって達成される。
以下、添付図面を参照して本発明を詳細に説明する。
以下において、添付の図面の簡単な説明が与えられる。図面は、本開示をより詳細に説明することを意図している。しかしながら、これらは、本開示の主題を何ら限定するものではない。

実施例１について、Ｈ１Ｎ１ ＨＡ ＣＡ０９（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９）に対するＥＬＩＳＡによって評価した、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳのヘマグルチニン（ＨＡ）への結合を示すグラフである。 実施例２について、（Ａ）ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳによるＨ１Ｎ１ ＣＡ０９株（Ａ／カリフォルニア／０７／０９）の中和、並びに（Ｂ）ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥによるＨ３Ｎ２株Ａ／Aichi／２／６８の中和を示すグラフである。 実施例３について、ＢＬＩによって評価した、ヒトＦｃγＲへのＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳの結合を示すグラフである。Ｏｃｔｅｔによって測定される、複数のヒトＦｃｇＲへのＦｌｕＡＢ変異体の結合。２μｇ／ｍｌのＨｉｓタグ付きヒトＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩａ対立遺伝子Ｈ１３１、ＦｃｇＲＩＩａ対立遺伝子Ｒ１３１、ＦｃｇＲＩＩａ対立遺伝子Ｆ１５８、ＦｃｇＲＩＩＩａ対立遺伝子Ｖ１５８及びＦｃｇＲＩＩｂ）を抗ペンタ－Ｈｉｓセンサー上に６分間捕捉した。次いで、ＦｃｇＲをロードしたセンサーを、１μｇ／ｍｌのａｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント特異的（Ｆａｂフラグメントを介して抗体を架橋するため）の存在下で、２μｇ／ｍｌの各ｍＡｂ（プロットの左部分）を含有する動態緩衝液（ｐＨ７．１）の溶液に４分間曝露し、続いて同じ緩衝液中でさらに４分間の解離工程を行った（プロットの右部分）。Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をｆｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて干渉パターンの変化としてリアルタイムで測定した。 実施例４について、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥのＣ１ｑへの結合を示すグラフである。Ｏｃｔｅｔによって測定される、ヒトＣ１ｑへのＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥの結合。抗ヒトＦａｂ（ＣＨ１）センサーを用いて、１０μｇ／ｍｌのＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥの完全ＩｇＧ１をＦａｂ断片を介して１０分間捕捉した。次いで、ＩｇＧをロードしたセンサーを、３μｇ／ｍｌの精製ヒトＣ１ｑを含有する動態緩衝液（ｐＨ７．１）の溶液に４分間曝露し（プロットの左部分）、続いて同じ緩衝液中でさらに４分間の解離工程を行った（プロットの右部分）。 実施例５について、操作されたＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦＡＴ媒介ルシフェラーゼレポーターの受容体連結活性化を使用したヒトＦｃｇＲＩＩＩａのインビトロ活性化を示すグラフである。細胞表面上にＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）由来のＨＡを発現するように安定にトランスフェクトされたＡ５４９－Ｈ１細胞が標的細胞として用いられる、十分に検証された市販のＡＤＣＣアッセイを用いて、ＡＤＣＣを試験した。ＦｌｕＡＢ ｗｔ又はＦｃ変異体の連続希釈物をＨＡ発現細胞に添加した。Ａ５４９－Ｈ１細胞を抗体と共に３７℃で３０分間インキュベートした。ＦｃｇＲＩＩＩａ高親和性対立遺伝子Ｖ１５８（５Ａ）又はＦｃｇＲＩＩＩａ低親和性対立遺伝子Ｆ１５８（５Ｂ）のいずれかを発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をアッセイ緩衝液に再懸濁し、次いでアッセイプレートに添加した（エフェクター細胞対標的細胞比６：１）。３７℃で２０時間インキュベートした後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ－ＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、ルミノメーター（Ｂｉｏ－Ｔｅｋ）を用いて発光を定量した。 実施例５について、操作されたＪｕｒｋａｔ細胞におけるＮＦＡＴ媒介ルシフェラーゼレポーターの受容体連結活性化を使用したヒトＦｃｇＲＩＩａ及びヒトＦｃｇＲＩＩｂのインビトロ活性化を示すグラフである。ＡＤＣＰ Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）由来のＨＡを発現するように安定にトランスフェクトされたＡ５４９－Ｈ１細胞が標的細胞として用いられる、十分に検証された市販のＡＤＣＰアッセイを用いて、ＡＤＣＰを試験した。ＦｌｕＡＢ Ｆｃ ｗｔ又は変異体の連続希釈物をＨＡ発現細胞に添加した。Ａ５４９－Ｈ１細胞を抗体と共に３７℃で３０分間インキュベートした。ＦｃｇＲＩＩａ高親和性対立遺伝子Ｈ１３１又はＦｃｇＲＩＩｂを発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をアッセイ緩衝液に再懸濁し、次いでアッセイプレートに添加した（エフェクター細胞対標的細胞比５：１）。３７℃で２１時間インキュベートした後、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ－ＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、ルミノメーター（ＢｉｏーＴｅｋ）を用いて発光を定量した。 実施例６について、ＦｌｕＡＢ Ｆｃ変異体の存在下でのヒトＮＫ細胞によるＨ１ ＨＡを発現するＡ５４９細胞のインビトロ殺傷を示すグラフである。ＡＤＣＣを、ホモ接合性低（Ｆ１５８）親和性ＦｃγＲＩＩＩａを発現するために以前に遺伝子型決定された１人のドナーから新たに単離されたＮＫ細胞を用いて試験した。ＦｌｕＡＢ ｗｔ又はＦｃ変異体ｍＡｂの連続希釈物をＨＡ発現細胞に添加した。Ａ５４９－Ｈ１細胞を抗体と共に３７℃で３０分間インキュベートした。ＮＫ細胞をアッセイプレートに添加し（エフェクター細胞対標的細胞比６：１）、３７℃で４時間インキュベートした。細胞死は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出を測定することによって決定した。 実施例７について、ＢＬＩによって評価した、ヒトＦｃＲｎへのＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥの結合を示すグラフである。固定化されたＦｌｕＡＢ ｗｔ又はＦｃ変異体への溶液中のヒトＦｃＲｎの結合を、ｐＨ＝６．０でリアルタイムでＯｃｔｅｔによって測定した。時点０秒は、ベースライン緩衝液からヒトＦｃＲｎを含有する緩衝液への切り替えを表す。時点３００秒（赤い垂直点線）は、対応するｐＨでのブランク緩衝液への切り替えを表す。曲線は、干渉パターンにおける変化の会合及び解離プロファイルを示す。 実施例８について、確認されたＡＤＡ応答を有する動物を除くカニクイザルへの静脈内注入後のＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳの血漿中濃度の平均及び標準偏差（ＳＤ）を示すグラフである。 実施例８について、総抗体定量化をＨＡ結合と比較することによる完全性評価を示すグラフである。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（動物Ｃ９０１４２、Ｃ９０１９０）又はＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ（Ｃ９０１５３、Ｃ９０１５６）の血漿中濃度を、抗ＣＨ ２抗体ＥＬＩＳＡを用いて測定して総抗体量を定量するか、又はＨＡ抗原結合性ＥＬＩＳＡを用いてｍＡｂの機能を決定した。グラフは、選択された時点（１、２１、５６、８６、及び１１３日目）における個々の動物についての総抗体定量化とＨＡ結合との間の線形回帰を示す。 実施例９について、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳについての補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示すグラフである。標的細胞の細胞死を、ＬＤＨ放出を測定することによって定量した。パーセント特異的溶解を、以下の式：（特異的放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）×１００を適用することによって決定した。

本開示は以下に詳細に記載されるが、本開示は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコル及び試薬に限定されないことが理解されるべきである。なぜなら、これらは変化し得るからである。また、本明細書で用いられる用語は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本開示の範囲を限定するものではないことも理解されたい。他に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味である。
以下、本発明の構成要素について説明する。これらの要素は、ある実施形態と共に列挙されているが、さらなる実施形態を作成するために、いかなる方法及びいかなる数で組み合わせることができることを理解されたい。様々に説明される例及び実施形態は、本開示を明示的に説明される実施形態のみに限定するように解釈されるべきではない。この説明は、明示的に説明された実施形態をいかなる数の開示された要素と組み合わせる実施形態を支持し、包含すると理解されるべきである。さらに、本出願において説明されるすべての要素のいかなる置換及び組合せは、文脈が別段に示さない限り、本出願の説明によって開示されていると見なされるべきである。
本明細書において、いかなる濃度範囲、百分率範囲、比範囲、又は整数範囲は、別段の指示がない限り、列挙された範囲内のいかなる整数の値、及び適当な場合、その分数（整数の１０分の１及び１００分の１等）を含むと理解されるべきである。また、いかなる物理的特徴（例えば、ポリマーサブユニット、サイズ又は厚さ）に関して本明細書中に列挙されるいかなる数の範囲は、他に示されない限り、列挙された範囲内のいかなる整数を含むと理解されるべきである。
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変形は、記載された要素、整数又は工程を含むが、他の記載されていない要素、整数又は工程を排除するものではないことを意味すると理解される。用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」のある実施形態であり、いかなる他の記載されていないメンバー、整数又は工程が除外される。本開示の文脈において、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」を包含する。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」並びに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、Ｘのみからなってもよく、又は何かさらなるもの、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでもよい。用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同等ではなく、特許請求の範囲の指定された材料若しくは工程、又は特許請求される主題の基本的特徴に実質的に影響を及ぼさないものをいう。例えば、タンパク質ドメイン、領域、又はモジュール（例えば、結合ドメイン）又はタンパク質は、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質のアミノ酸配列が、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質の長さの多くとも２０％（例えば、多くとも１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％）に寄与し、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、活性を５０％を超えて、例えば、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、又は１％以下低下させない）伸長、欠失、変異、又はそれらの組み合わせ（例えば、アミノ末端若しくはカルボキシ末端又はドメイン間のアミノ酸）を含む場合、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。
本開示を説明する文脈において（特に特許請求の範囲の文脈において）用いられる用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」指示がない限り、又は文脈によって明確に否定されない限り、単数形及び複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に入る各々の別個の値を個々に言及する省略法として役立つことが意図される。本明細書において別段の指示がない限り、各々の個々の値は、本明細書において個々に列挙されているかのように本明細書に援用される。本明細書におけるいかなる言語も、本開示の実施に不可欠ないかなる特許請求されていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。

選択肢（例えば、「又は」）の使用は、選択肢の一方、両方、又はそれらのいかなる組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。本明細書で用いられる場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、及び「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義的に使用され、これらの用語及びそれらの変形は、非限定的であると解釈されることが意図される。
「場合により」又は「場合によっては」は、その後に記載される要素、構成要素、事象、又は状況が起こっても起こらなくてもよく、その記載が、要素、構成要素、事象、又は状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。
用語「実質的に」は、「完全に」を除外せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要な場合、「実質的に」という語は、本開示の定義から省略されてもよい。
数値ｘに関する用語「約」は、ｘ±１０％、例えば、ｘ±５％、又はｘ±７％、又はｘ±１０％、又はｘ±１２％、又はｘ±１５％、又はｘ±２０％を意味する。

本明細書で用いられる用語「疾患」は、用語「障害」及び「状態」（医学的状態におけるような）と一般的に同義であることが意図され、互換的に使用され、全てが、正常な機能を損なうヒト若しくは動物の身体又はその部分のうちの１つの異常な状態を反映し、通常、特徴的な徴候及び症状によって現れ、ヒト又は動物の寿命又は生活の質を低下させる。

本明細書で用いられる用語、被験体又は患者の「治療」への言及は、防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）、減弱（ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ）、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）及び治療（ｔｈｅｒａｐｙ）を含むことが意図され、一般に、本開示の抗体又は組成物を含む適当な用量又は治療レジメンは、治療的又は予防的利益を誘発するのに十分な量で投与される。治療的又は予防的／防止的利益には、臨床転帰の改善；疾患に関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；無病状態がより長期化すること；疾患の程度の縮小、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延若しくは防止；寛解；生存；生存の延長；又はそれらのいかなる組み合わせが含まれる。用語「被験体」又は「患者」は、ヒトを含むすべての哺乳動物を意味するために本明細書において互換的に用いられる。被験体の例としては、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、及びウサギが挙げられる。ある実施形態では、患者はヒトである。
用量はしばしば、体重に関連して表される。したがって、［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］／ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）として表される用量は、通常、ｋｇ（又はｇ、ｍｇ等）当たりの［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］をいう。用語「体重」が明示的に言及されていない場合であっても、用語「体重」明示的に言及されているものとする。

用語「特異的結合」及び類似の言及は、非特異的付着を包含しない。「特異的結合」とは、１０^５Ｍ^－１（これは、この会合反応についての解離速度［Ｋｏｆｆ］に対する結合速度［Ｋｏｎ］の比に等しい）以上の親和性又はＫａ（すなわち、１／Ｍの単位を有する特定の結合相互作用の平衡結合定数）であるが、試料中のいかなる他の分子又は成分と有意に会合又は一体化しない、抗体の抗原への会合又は一体化であってよい。あるいは、親和性は、Ｍの単位（例えば、１０^－５Ｍ～１０^－１３Ｍ）である特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義されてよい。

本明細書で用いられる用語「抗体」は、本開示による特徴的な特性が保持される限り、全抗体、抗体断片、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、組換え抗体及び遺伝子操作された抗体（変異体又は変異体抗体）を含むがこれらに限定されない様々な形態の抗体を包含する。ある実施形態では、抗体はヒト抗体である。ある実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。例えば、抗体はヒトモノクローナル抗体である。
ヒト抗体は、最新技術において周知である（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体はまた、免疫化の際に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリー又は選択物を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生され得る。このような生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３） ３３４０）．Ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｃａｎ ａｌｓｏ ｂｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）。ある実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、Ｔｒａｇｇｉａｉ Ｅ，Ｂｅｃｋｅｒ Ｓ，Ｓｕｂｂａｒａｏ Ｋ，Ｋｏｌｅｓｎｉｋｏｖａ Ｌ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｙ，Ｇｉｓｍｏｎｄｏ ＭＲ，Ｍｕｒｐｈｙ ＢＲ，Ｒａｐｐｕｏｌｉ Ｒ，Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ．（２００４）：Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌｓ：ｐｏｔｅｎｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．１０（８）：８７１－５に記載されている。本明細書中で用いられる用語「可変領域」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗体の抗原への結合に直接関与する軽鎖及び重鎖の対の各々を示す。

本開示の抗体は、いかなるアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、すなわちα、γ又はμ重鎖）のものであり得る。例えば、抗体はＩｇＧ型である。ＩｇＧアイソタイプ内で、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラス、例えば、ＩｇＧ１であり得る。本開示の抗体には、κ又はλ軽鎖があってよい。ある実施形態では、抗体はＩｇＧ１型であり、κ軽鎖がある。
本開示による抗体は、精製された形態で提供され得る。通常、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０％（重量で）未満、通常は６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される。
本開示による抗体は、ヒト及び／又は非ヒトにおいて免疫原性であり得る。例えば、抗体は、非ヒト宿主では免疫原性であるが、ヒト宿主では免疫原性でないイディオドープがある場合がある。ヒトで用いるための本開示の抗体には、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳動物等の宿主から容易に単離できず、一般にヒト化または異種マウスから得ることができないものが含まれる。

本明細書で用いられる用語「中和抗体」は、宿主における感染を開始及び／又は永続させる病原体の能力を中和、すなわち、防止、阻害、低減、妨害又は干渉し得る抗体である。用語「中和抗体」及び「中和する抗体（単数又は複数）」は、本明細書において互換的に用いられる。これらの抗体は、単独で、又は組み合わせて、適当な製剤化の際の予防剤若しくは治療剤として、能動ワクチン接種と関連して、診断ツールとして、又は本明細書に記載されるような産生ツールとして用いられてよい。

本明細書で用いられる用語「変異」は、参照配列（例えば、対応するゲノム配列）と比較した、核酸配列及び／又はアミノ酸配列における変化に関する。例えば、ゲノム配列と比較した変異は、例えば、（天然に存在する）体細胞変異、自然変異、例えば、酵素、化学物質若しくは放射線によって誘導される誘導変異、又は部位特異的変異誘発（核酸配列及び／又はアミノ酸配列において特異的かつ意図的な変化を作製するための分子生物学的方法）によって得られる変異であり得る。したがって、用語「変異」又は「変異させる」は、例えば、核酸配列又はアミノ酸配列において、物理的に変異を作製することも含むと理解される。変異には、１つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、欠失及び挿入、並びにいくつかの連続するヌクレオチド又はアミノ酸の逆位が含まれる。アミノ酸配列における変異を達成するために、変異は、（組換え）変異ポリペプチドを発現させるために、前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に導入され得る。変異は、例えば、部位特異的変異誘発によって、１つのアミノ酸をコードする核酸分子のコドンを変化させて、異なるアミノ酸をコードするコドンをもたらすことによって、又は配列変異体を合成することによって、例えば、ポリペプチドをコードする核酸分子のヌクレオチド配列を知ることによって、及び核酸分子の１つ又は複数のヌクレオチドを変異させずにポリペプチドの変異体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子の合成を設計することによって、達成することができる。

本明細書で用いられる用語「タンパク質」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸残基のポリマーをいう。タンパク質は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、並びに１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。本開示のタンパク質、ペプチド、及びポリペプチドの変異体も企図される。ある実施形態では、変異体タンパク質、ペプチド、及びポリペプチドは、本明細書に記載される規定又は参照アミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

用語「単離された」は、物質がその元の環境（例えば、それが天然に存在する場合は自然環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に存在する天然に存在する核酸又はポリペプチドは単離されていないが、天然系において共存する物質の一部又は全部から分離された同じ核酸又はポリペプチドは単離されている。このような核酸は、ベクターの一部であり得、そして／又はこのような核酸若しくはポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の一部であり得、そしてこのようなベクター又は組成物が核酸又はポリペプチドについての天然の環境の一部ではないという点でなお単離されている。「単離された」はまた、ある態様では、ヒトの体外にある抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、又は組成物を説明し得る。

用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡ又はＲＮＡのセグメントを意味し、特定の文脈では、コード領域の前及び後の領域（例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び３’ＵＴＲ）並びに個々のコードセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。

本明細書で用いられる用語「組換え（操作された）られた」、「組換え」、又は「非天然」は、少なくとも１つの遺伝子修飾を含むか、又は外因性若しくは異種核酸分子の導入によって修飾されている生物、微生物、細胞、核酸分子、又はベクターをいう、そのような修飾又は修飾は、遺伝子操作（すなわち、ヒトの介入）によって導入される。遺伝子修飾としては、例えば、機能的ＲＮＡ、タンパク質、融合タンパク質若しくは酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する修飾、又は細胞の遺伝物質の他の核酸分子付加、欠失、置換若しくは他の機能的破壊が挙げられる。さらなる修飾としては、例えば、修飾がポリヌクレオチド、遺伝子、又はオペロンの発現を変化させる非コード調節領域が挙げられる。
いくつかの文献が本明細書の本文を通して引用されている。本明細書に引用される文書（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の仕様書、説明書等を含む）の各々は、上記であれ下記であれ、参照によりその全体が本明細書に援用される。本明細書のいずれも、本開示が、先行開示によってそのような開示に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。
本開示は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコール及び試薬に限定されず、これらは変化し得ることが理解されるべきである。また、本明細書で用いられる用語は、ある実施形態のみを説明するためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本開示の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。他に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味である。

抗体
本開示は、他の知見の中でも、Ａ型インフルエンザ感染を低減し、効能が高められた抗体の同定に基づく。治療用抗体の重要な作用機序の１つは、免疫系の動員によるウイルスの標的排除である。これは、通常、抗体のＦｃドメインとＦｃ（複数可）との相互作用によって達成される。g受容体（Ｆｃg）及び／又は補体成分Ｃ１ｑである。本開示の抗体は、増加したエフェクター機能、すなわち、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）等の細胞傷害機能を媒介する増強された機能を示す。
第１の態様では、本開示は、各々配列番号１、配列番号２、及び配列番号３に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；各々配列番号４、配列番号５、及び配列番号６に示される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；並びに重鎖の定常領域における変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、及びＩ３３２Ｅを含む（単離）抗体を提供する。
ある実施形態では、抗体は、重鎖の定常領域に変異Ｓ２３９Ｄを含まない。ある態様では、抗体は、重鎖の定常領域中の２３９位にＳを含む。

一般に、本開示による抗体は、通常、重鎖上に（少なくとも）３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖上に（少なくとも）３つのＣＤＲを含む。一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在する超可変領域である。通常、抗体の重鎖及び連結された軽鎖のＣＤＲが一緒になって抗原受容体を形成する。通常、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、可変ドメインにおいて非連続的に配置される。抗原受容体は、通常、（２つの異なるポリペプチド鎖、すなわち、重鎖及び軽鎖上の）２つの可変ドメインから構成されるので、各抗原受容体について６つのＣＤＲが存在する（重鎖：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３；軽鎖：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）。単一の抗体分子は通常、２つの抗原受容体を有し、したがって１２個のＣＤＲを含有する。重鎖及び／又は軽鎖上のＣＤＲは、フレームワーク領域によって分離されていてもよく、それによってフレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲよりも「可変性」が低い可変ドメイン中の領域である。例えば、鎖（又は各々の鎖）は、３つのＣＤＲによって分離された４つのフレームワーク領域から構成され得る。

ＣＤＲ及びフレームワーク領域の番号付けは、いかなる公知の方法又はスキーム、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＥＵ、ＩＭＧＴ、Ｃｏｎｔａｃｔ、Ｎｏｒｔｈ、Ｍａｒｔｉｎ、及びＡＨｏ番号付けスキーム従ってよい（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，５ ｔｈ ｅｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５，２００３；Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．３０９：６５７－６７０（２００１）；Ｎｏｒｔｈら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（２０１１）４０６：２２８－５６；ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２０１０．１０．０３０；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００８）４５：３８３２－９。０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２００８．０５．０２２）。これらの文献の抗体およびCDRの番号付けシステムは、参照により本明細書に援用される。Ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＡＮＡＲＣＩ）ソフトウェアツール（２０１６，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２９８－３００）を用いて、同等の残基位置に注釈を付け、異なる分子を比較することができる。したがって、1つの番号付けスキームに従って本明細書で提供されるような例示的可変ドメイン（VHまたはVL）配列のCDRの同定は、異なる番号付けスキームを用いて決定される同じ可変ドメインのCDRを含む抗体を排除するものではない。ある実施形態では、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＥＵ、ＩＭＧＴ、Ｍａｒｔｉｎ（Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｏｔｈｉａ）、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＡＨｏ番号付け方法を含むいかなる公知のＣＤＲ番号付け方法に従って、配列番号７に従うＶＨ配列のＣＤＲ、及び配列番号８に従うＶＬ配列のＣＤＲを含む抗体を含む抗体が提供される。ある実施形態では、ＣＤＲは、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）ソフトウェア（ｗｗｗ．ｃｈｅｍｃｏｍｐ．ｃｏｍ）を用いて、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＣＣＧ）によって開発された抗体番号付けに従う。ある実施形態では、CDRはIMGT番号付け法に従う。ある実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｈＨｏ、又は北ナンバリングシステムに従う。

重鎖上に３つの異なるＣＤＲ及び軽鎖上に３つの異なるＣＤＲを含む本開示の例示的な抗体の重鎖及び軽鎖の配列を決定した。ＣＤＲアミノ酸の位置は、別段の指示がない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤに従う。

通常、本開示の抗体は、インフルエンザＡ型ウイルスのヘマグルチニンに結合する。それにより、本開示の抗体は、インフルエンザＡ型ウイルスの感染を中和することができる。本開示による抗体は、ＣＤＲを介して、ＭＥＤＩ８８５２（Ｋａｌｌｅｗａａｒｄ ＮＬ，Ｃｏｒｔｉ Ｄ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＪ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ａｌｌ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ．細胞。２０１６；１６６（３）：５９６－６０８）、それによって、全てのインフルエンザＡサブタイプの様々なインフルエンザＡ血清型に対して同じ広範な防御を提供する。

実験室においてウイルス感染性（又は「中和」）を研究及び定量するために、当業者は、種々の標準的な「中和アッセイ」を知っている。中和アッセイでは通常、動物ウイルスを細胞や細胞株で増殖させる。例えば、中和アッセイにおいて、培養細胞は、試験される抗体の存在下（又は非存在下）で、固定量のインフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）と共にインキュベートされ得る。読み出しとして、例えばフローサイトメトリーを用いることができる。あるいは、他の読み出しも考えられる。

本開示の抗体は、重鎖の定常領域（ＣＨ２領域）に３つの変異：Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含む。上記で概説したように、ある態様では、抗体は重鎖の定常領域に変異Ｓ２３９Ｄを含まない。抗体の定常領域の文脈において、アミノ酸位置は、当業界で認識されているＥＵ番号付けシステムに従って本明細書において番号付けされている。ＥＵインデックス又はＫａｂａｔ若しくはＥＵ番号付けにおけるようなＥＵインデックスは、ＥＵ抗体の番号付けをいう（Ｅｄｅｌｍａｎ ＧＭ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＡ、Ｇａｌｌ ＷＥ、ゴットリープＰＤ、Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ Ｕ、Ｗａｘｄａｌ ＭＪ．全γＧ免疫グロブリン分子の共有結合構造。Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９６９；６３（１）：７８－８５；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（Ｕ．Ｓ．）Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｒｅｃｔｏｒ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１（参照によりその全体が本明細書に援用される））。添付の実施例に示されるように、３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅにより、抗体のエフェクター機能が高まる。

ある態様では、抗体はまた、重鎖の定常領域中に半減期増加変異を含む。一般に、「半減期を増加させる変異」という表現は、抗体の半減期の増加を媒介する、単一の変異、例えば単一のアミノ酸置換、又は一群の変異、例えば一群の（すなわち、２つ以上、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の）アミノ酸置換をいう得る。このような修飾の例としては、アミノ酸残基２５０、３１４、及び４２８からなる群より選択される重鎖定常領域由来の少なくとも１つのアミノ酸の置換が挙げられるが、これらに限定されない。そのような半減期延長Ｆｃ修飾のさらなる例は、Ｗａｎｇ Ｙ，Ｔｉａｎ Ｚ，Ｔｈｉｒｕｍａｌａｉ Ｄ，Ｚｈａｎｇ Ｘ．新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）：治療抗体及び抗体操作のための新規標的。Ｊ薬物標的。２０１４ Ｍａｙ；２２（４）：２６９－７８に記載されており、その半減期を増加させるＦｃ修飾は、参照により本明細書に援用される。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓ；Ｎ４３４Ｈ；Ｎ４３４Ａ；Ｎ４３４Ｓ；Ｍ２５２Ｙ；Ｓ２５４Ｔ；Ｔ２５６Ｅ；Ｔ２５０Ｑ；Ｐ２５７Ｉ Ｑ３１１Ｉ；Ｄ３７６Ｖ；Ｔ３０７Ａ；Ｅ３８０Ａ（ＥＵ番号付け）のうちのいずれか１つ又は複数を含む。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを含む。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌを含む。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１Ｉを含む。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈを含む。ある実施形態では、半減期増加変異は、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈを含む。ある実施形態では、半減期の増加は、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａを含む。ある態様では、抗体は、重鎖定常領域（ＣＨ３領域）に変異Ｍ４２８Ｌ及び／又はＮ４３４Ｓを含む。
特に、本開示の抗体の重鎖の定常領域における変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅは、添付の実施例に示すように、定常領域における各々の変異の半減期増加効果を損なわない。

ある実施形態では、本開示の抗体はヒト抗体である。ある実施形態では、本開示の抗体はモノクローナル抗体である。例えば、本開示の抗体はヒトモノクローナル抗体である。
本開示の抗体は、いかなるアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、すなわちα、γ又はμ重鎖）のものであり得る。例えば、抗体はＩｇＧ型である。ＩｇＧアイソタイプ内で、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラス、例えば、ＩｇＧ１であり得る。本開示の抗体は、κ又はλ軽鎖があってよい。ある実施形態では、抗体は、カッパ（κ）軽鎖を有する。ある実施形態では、抗体はＩｇＧ１型であり、κ軽鎖がある。
ある態様では、抗体はヒトＩｇＧ１型である。抗体は、いかなるアロタイプのものであり得る。用語「アロタイプ」は、ＩｇＧサブクラスの間で見出される対立遺伝子変異をいう。例えば、抗体は、Ｇ１ｍ１（又はＧ１ｍ（ａ））アロタイプ、Ｇ１ｍ２（又はＧ１ｍ（ｘ））アロタイプ、Ｇ１ｍ３（又はＧ１ｍ（ｆ））アロタイプ、及び／又はＧ１ｍ１７（又はＧｍ（ｚ））アロタイプであり得る。Ｇ１ｍ３及びＧ１ｍ１７アロタイプは、ＣＨ１ドメインの同じ位置（ＥＵ番号付けによる２１４位）に位置する。Ｇ１ｍ３はＲ２１４（ＥＵ）に対応し、Ｇ１ｍ１７はＫ２１４（ＥＵ）に対応する。Ｇ１ｍ１アロタイプは、ＣＨ３ドメイン（３５６位及び３５８位（ＥＵ））に位置し、置換型Ｅ３５６Ｄ及びＭ３５８Ｌをいう。Ｇ１ｍ２アロタイプは、４３１位（ＥＵ）のアラニンのグリシンによる置換をいう。Ｇ１ｍ１アロタイプは、例えば、Ｇ１ｍ３又はＧ１ｍ１７アロタイプと組み合わされ得る。ある態様では、抗体は、Ｇ１ｍ１を有さないアロタイプＧ１ｍ３（Ｇ１ｍ３，－１）である。ある実施形態では、抗体は、Ｇ１ｍ１７，１アロタイプである。ある態様では、抗体はＧ１ｍ３，１アロタイプである。ある態様では、抗体は、Ｇ１ｍ１がないアロタイプＧ１ｍ１７（Ｇ１ｍ１７，－１）である。場合によっては、これらのアロタイプは、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ２７又はＧ１ｍ２８アロタイプと組み合わされ得る（又は組み合わされ得ない）。例えば、抗体は、Ｇ１ｍ１７，１，２アロタイプであり得る。

ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に対して７０％以上（すなわち、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に対して少なくとも７０％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、上記で定義されるＣＤＲ配列（各々、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列；並びに各々、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６に示される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列）が維持される。

配列同一性は、通常、参照配列（すなわち、本出願に記載される配列）の全長に関して計算される。本明細書で言及される同一性比率は、例えば、ＮＣＢＩ（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって指定されるデフォルトパラメータ［Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックス；ギャップオープンペナルティ＝１１及びギャップ伸長ペナルティ＝１］を用いるＢＬＡＳＴを用いて決定することができる。
「配列変異体」は、参照配列中のアミノ酸の１つ以上が欠失若しくは置換されている、及び／又は１つ以上のアミノ酸が参照アミノ酸配列の配列に挿入されている、変化した配列である。修飾の結果として、アミノ酸配列変異体には、参照配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列がある。少なくとも７０％同一である変異体配列は、参照配列の１００アミノ酸あたり３０以下の修飾、すなわち、欠失、挿入又は置換のいかなる組み合わせがある。

一般に、非保存的アミノ酸置換があってよいが、置換は通常、保存的アミノ酸置換であり、置換されたアミノ酸は、参照配列中の対応するアミノ酸と類似の構造的又は化学的特性がある。例として、保存的アミノ酸置換は、１つの脂肪族又は疎水性アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン）の他のアミノ酸での置換；１つのヒドロキシル含有アミノ酸（例えば、セリン及びスレオニン）の他のアミノ酸での置換；１つの酸性残基（例えば、グルタミン酸又はアスパラギン酸）の他の残基での置換；１つのアミド含有残基（例えば、アスパラギン及びグルタミン）の他の残基での置換；１つの芳香族残基（例えば、フェニルアラニン及びチロシン）の他の残基での置換；１つの塩基性残基（例えば、リジン、アルギニン及びヒスチジン）の他の残基での置換；並びに１つの小さなアミノ酸（例えば、アラニン、セリン、スレオニン、メチオニン及びグリシン）の他の残基での置換を含む。
アミノ酸の挿入には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲網の及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、レポーター分子又は酵素に対するアミノ酸配列のＮ又はＣ末端への融合が挙げられる。

ある態様では、本開示の抗体は、配列番号７に対して７５％以上（すなわち、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８に対して少なくとも７５％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記で定義したＣＤＲ配列が維持される。ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に対して８０％以上（すなわち、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に対して少なくとも８０％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、上記で定義されたＣＤＲ配列が維持される。ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に対して８５％以上（すなわち、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に対して少なくとも８５％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、上記で定義したＣＤＲ配列が維持される。ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に対して９０％以上（すなわち、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に対して少なくとも９０％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、上記で定義されたＣＤＲ配列が維持される。ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７に対して９５％以上（すなわち、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性があるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に対して少なくとも９５％の同一性があるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、上記で定義されたＣＤＲ配列が維持される。
ある実施形態、本開示の抗体は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記で定義されるＣＤＲ配列が維持される。
一般に、本開示の抗体は、Ｆｃ領域（例えば、ＣＨ２又はＣＨ３領域）に１つ又は複数のさらなる変異（変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ、並びに場合によっては、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ等の半減期増加変異に加えて）を含むことが可能である。しかしながら、ある実施形態では、本開示の抗体は、（各々の野生型ＣＨ２領域と比較して）そのＣＨ２領域にＧ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含まない。ある実施形態では、本開示の抗体は、（ｉ）そのＣＨ３領域におけるいかなる変異；又は（ｉｉ）そのＣＨ３領域におけるＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓに加えて、（各々の野生型ＣＨ３領域と比較して）いかなるさらなる変異を含まない。ある実施形態では、本開示の抗体は、（各々の野生型Ｆｃ領域と比較して）そのＦｃ領域に、Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ、並びに場合によってはＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓに加えて、いかなるさらなる変異も含まない。本明細書で用いられる用語「野生型」は、例えば天然に存在するような参照配列をいう。特定の例として、用語「野生型」は、天然に存在する最も高い有病率を有する配列をいう得る。

ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。例えば、本開示の抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖があってよい。
ある実施形態では、本開示の抗体は、配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。例えば、本開示の抗体は、配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなる重鎖、及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖があってよい。
ある実施形態では、配列番号９又は１３のアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖とを含む抗体が提供される。
ある実施形態では、各々配列番号９又は１３のアミノ酸配列を含むか又はそれからなる２つの重鎖と、各々配列番号１０を含むか又はそれからなる２つの軽鎖とを含む抗体が提供される。

本開示の抗体はまた、上記で定義される本開示の抗体由来の６つのＣＤＲと、同じ又は異なるエピトープ又は抗原に対する他の抗体由来の１つ又は複数のＣＤＲとを含むハイブリッド抗体分子を含む。ある実施形態では、このようなハイブリッド抗体は、本開示の抗体由来の６つのＣＤＲと、異なるエピトープ又は抗原に対する他の抗体由来の６つのＣＤＲとを含む。
変異体抗体も本開示の範囲内に含まれる。したがって、本出願において列挙される配列の変異体もまた、本開示の範囲内に含まれる。このような修飾体としては、免疫応答の間にインビボで、又は不死化Ｂ細胞クローンの培養の際にインビトロで体細胞変異によって生成される天然の修飾体が挙げられる。あるいは、修飾体は、遺伝子コードの縮重に起因して生じ得るか、又は転写若しくは翻訳におけるエラーに起因して産生され得る。

本開示の抗体は、精製された形態で提供され得る。通常、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０％（重量で）未満、通常は６０％未満、より通常は５０％未満が他のポリペプチドで構成される。
本開示の抗体は、非免疫原性であり得る。特に、抗体は、非ヒト宿主では免疫原性であるが、ヒト宿主では免疫原性でないイディオドープを有することがある。ヒトで用いるための本開示の抗体には、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳動物等の宿主から容易に単離できず、一般にヒト化または異種マウスから得ることができないものが含まれる。

核酸
他の態様では、本開示は、上記の本開示による抗体又はその一部（例えば、ＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、重鎖、又は軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子も提供する。核酸分子及び／又はポリヌクレオチドの例としては、例えば、組換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、若しくはｔＲＮＡ等のＲＮＡ分子、又はｃＤＮＡ等のＤＮＡ分子が挙げられる。ある実施形態では、核酸分子はＤＮＡ又はＲＮＡを含み、ＲＮＡは場合によってはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。核酸分子は、本開示の抗体の軽鎖及び／又は重鎖をコードし得る。換言すれば、抗体の軽鎖及び重鎖は、同じ核酸分子によって（例えば、バイシストロン性様式で）コードされ得る。あるいは、抗体の軽鎖及び重鎖は、異なる核酸分子によってコードされてもよい。
ある実施形態では、核酸分子は、修飾ヌクレオシド、ｃａｐ－１構造、ｃａｐ－２構造、又はそれらのいかなる組み合わせを含む。ある実施形態では、ポリヌクレオチドは、シュードウリジン、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、２－チオウリジン、又はそれらのいかなる組み合わせを含む。ある実施形態では、シュードウリジンは、Ｎ１－メチルシュードウリジンを含む。

遺伝子コードの重複性のために、本開示は、同じアミノ酸配列をコードする核酸配列の配列変異体も含む。抗体（又は完全な核酸分子）をコードするポリヌクレオチドは、抗体の発現のために最適化され得る。例えば、ヌクレオチド配列のコドン最適化を用いて、抗体の産生のための発現系における翻訳効率を改善することができる。さらに、核酸分子は、異種要素（すなわち、抗体（の重鎖又は軽鎖）のコード配列と同じ核酸分子上に天然には存在しない要素）を含み得る。例えば、核酸分子は、異種プロモーター、異種エンハンサー、異種ＵＴＲ（例えば、最適な翻訳／発現のための）、異種ポリＡテール等を含み得る。

核酸分子は、核酸成分を含む分子である。用語「核酸分子」は、通常、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子をいう。それは、用語「ポリヌクレオチド」と同義で用いられてもよく、すなわち、核酸分子は、抗体をコードするポリヌクレオチドからなってもよい。あるいは、核酸分子はまた、抗体をコードするポリヌクレオチドに加えてさらなる要素を含み得る。通常、核酸分子は、糖／リン酸骨格のホスホジエステル結合によって互いに共有結合しているヌクレオチドモノマーを含むか、又はそれからなるポリマーである。用語「核酸分子」は、塩基修飾、糖修飾又は骨格修飾等の修飾核酸分子、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子も包含する。
一般に、核酸分子は、特定の核酸配列を挿入、欠失又は修飾するように組換えられてよい。当該組換えで得られる変化としては、制限部位を導入する変化、コドン使用頻度を修正する変化、転写及び／又は翻訳調節配列を付加又は最適化する変化等が挙げられるが、これらに限定されない。核酸を変化させてコードされるアミノ酸を修飾することも可能である。例えば、１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０等）のＮ－オキシドを導入することが有用であり得る。抗体のアミノ酸配列へのアミノ酸置換、欠失及び／又は挿入。そのような点変異は、エフェクター機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性等を修飾することができ、共有結合基（例えば、標識）の結合のためにアミノ酸を導入することができ、又は（例えば、精製目的のために）タグを導入することができる。あるいは、核酸配列における変異は、「サイレント」であり得る（すなわち、遺伝暗号の重複性のためにアミノ酸配列に反映されない）。一般に、変異は、特定の部位に導入され得るか、又はランダムに導入され得、その後、選択（例えば、分子進化）が続く。例えば、本開示の（例示的な）抗体の軽鎖又は重鎖のいずれかをコードする１つ又は複数の核酸は、コードされたアミノ酸に異なる特性を導入するためにランダムに又は方向的に変異させることができる。このような変化は、最初の変化が保持され、他のヌクレオチド位置で新しい変化が導入される反復プロセスの結果であり得る。さらに、独立した工程で達成された変更を組み合わせてもよい。

ある実施形態では、抗体（又は（完全な）核酸分子）をコードするポリヌクレオチドは、コドン最適化され得る。当業者は、コドン最適化のための様々なツールを認識している。Ｊｕ Ｘｉｎ Ｃｈｉｎ，Ｂｅｖａｎ Ｋａｉ－Ｓｈｅｎｇ Ｃｈｕｎｇ，Ｄｏｎｇ－Ｙｕｐ Ｌｅｅ，Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ＯｎＬｉｎｅ（ＣＯＯＬ）：ａ ｗｅｂ－ｂａｓｅｄ ｍｕｌｔｉ－ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｅｎｅ ｄｅｓｉｇｎ， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ３０，Ｉｓｓｕｅ １５，１ Ａｕｇｕｓｔ ２０１４，Ｐａｇｅｓ ２２１０－２２１２；ｏｒ ｉｎ：Ｇｒｏｔｅ Ａ，Ｈｉｌｌｅｒ Ｋ，Ｓｃｈｅｅｒ Ｍ，Ｍｕｎｃｈ Ｒ，Ｎｏｒｔｅｍａｎｎ Ｂ，Ｈｅｍｐｅｌ ＤＣ，Ｊａｈｎ Ｄ，ＪＣａｔ：ａ ｎｏｖｅｌ ｔｏｏｌ ｔｏ ａｄａｐｔ ｃｏｄｏｎ ｕｓａｇｅ ｏｆ ａ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅ ｔｏ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｈｏｓｔ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５ Ｊｕｌ １；３３（Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５２６－３１；又は、例えば、ＧｅｎｓｃｒｉｐｔのＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）アルゴリズム（米国特許出願公報２０１１／００８１７０８号に記載されている）。
本開示はまた、第１及び第２の核酸分子の組み合わせを提供し、第１の核酸分子は、本開示の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、同じ抗体の対応する軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。したがって、本開示の核酸分子の（一般的な）特徴に関する上記の説明は、組み合わせの第１及び第２の核酸分子に適用される。例えば、抗体の重鎖及び／又は軽鎖（複数可）をコードするポリヌクレオチドの一方又は両方をコドン最適化することができる。

ある実施形態では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４によるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％（すなわち、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性があるポリヌクレオチドを含む。ある態様では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４のポリヌクレオチド配列を含むか又はそれからなる。ある実施形態では、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５によるポリヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％（すなわち、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の同一性があるポリヌクレオチドを含む。ある態様では、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５のポリヌクレオチド配列を含むか又はそれからなる。ある実施形態では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１４のポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなり、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５のポリヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

本開示の実施形態のいずれにおいても、ポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）を含むことができる。ある実施形態では、ＲＮＡはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。

ベクター
本開示の範囲内にさらに含まれるのは、本開示による核酸分子を含むベクター、例えば、発現ベクターである。通常、ベクターは、上記の核酸分子を含む。
本開示はまた、第１及び第２のベクターの組み合わせを提供し、ここで、第１のベクターは、（核酸分子の組み合わせのための）上記のような第１の核酸分子を含み、第２のベクターは、（核酸分子の組み合わせのための）上記のような第２の核酸分子を含む。
ベクターは通常、天然には存在しない（組換え）核酸分子である。したがって、ベクターは、異種要素（すなわち、天然の異なる起源の配列要素）を含み得る。例えば、ベクターは、マルチクローニング部位、異種プロモーター、異種エンハンサー、異種選択マーカー（前記ベクターを含まない細胞と比較して前記ベクターを含む細胞を同定するため）等を含んでもよい。本開示の文脈におけるベクターは、所望の核酸配列を組み込むか又は保有するのに好適である。そのようなベクターは、貯蔵ベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクター等であり得る。貯蔵ベクターは、核酸分子の便利な貯蔵を可能にするベクターである。したがって、ベクターは、例えば、本開示による所望の抗体（の重鎖及び／又は軽鎖）に対応する配列を含み得る。発現ベクターは、ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ、又はペプチド、ポリペプチド若しくはタンパク質等の発現産物の産生のために用いることができる。例えば、発現ベクターは、（異種）プロモーター配列等のベクターの配列ストレッチの転写に必要な配列を含んでもよい。クローニングベクターは、通常、核酸配列をベクターに組み込むために用いられうるクローニング部位を含有するベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであり得る。導入ベクターは、核酸分子を細胞又は生物に導入するのに適したベクター、例えばウイルスベクターであってもよい。本開示の文脈におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターであり得る。例えば、本出願の意味でのベクターは、クローニング部位、抗生物質耐性因子等の選択マーカー、及び複製起点等のベクターの増殖に適した配列を含む。本出願の文脈におけるベクターは、プラスミドベクターであり得る。

ベクターは、本明細書に開示されるベクターのいずれか１つ以上を含むことができる。ある実施形態では、抗体又はその一部をコードするＤＮＡプラスミド構築物を含むベクターが提供される（例えば、いわゆる「ＤＭＡｂ」；例えば、Ｍｕｔｈｕｍａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２１４（３）：３６９－３７８（２０１６）を参照されたい）。Ｍｕｔｈｕｍａｎｉら、Ｈｕｍ Ｖａｃｃｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ９：２２５３－２２６２（２０１３））。Ｆｌｉｎｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ．５：１２６１６（２０１５）；及びＥｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，ＮＰＪ Ｖａｃｃｉｎｅｓ １８（２０１７）、これらの抗体コードＤＮＡ構築物及びその投与を含む関連する使用方法は、参照により本明細書に組み入れられる）。ある実施形態では、ＤＮＡプラスミド構築物は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はＶＨ及びＶＬ）をコードする単一のオープンリーディングフレームを含み、重鎖をコードする配列及び軽鎖をコードする配列は、場合によっては、プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチドによって、及び／又は自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドによって分離されている。ある態様では、抗体の置換成分は、単一のプラスミドに含まれるポリヌクレオチドによってコードされる。他の実施形態では、抗体の置換成分は、２つ以上のプラスミドに含まれるポリヌクレオチドによってコードされる（例えば、第１のプラスミドは、重鎖、ＶＨ、又はＶＨ＋ＣＨ１をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のプラスミドは、同族軽鎖、ＶＬ、又はＶＬ＋ＣＬをコードするポリヌクレオチドを含む）。ある実施形態では、単一のプラスミドは、本開示の２つ以上の抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。例示的な発現ベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）から入手可能なｐＶａｘ１である。本開示のＤＮＡプラスミドは、例えば、エレクトロポレーション（例えば、筋肉内エレクトロポレーション）によって、又は適当な製剤（例えば、ヒアルロニダーゼ）を用いて、被験体に送達することができる。

ある実施形態では、抗体重鎖、ＶＨ、又はＦｄ（ＶＨ＋ＣＨ１）をコードする第１のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を被験体に投与することと、同族抗体軽鎖、ＶＬ、又はＶＬ＋ＣＬをコードする第２のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を被験体に投与することとを含む方法が提供される。
ある実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）が提供される。ある実施形態では、抗体の２つの重鎖及び２つの軽鎖をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）が提供される。例えば、Ｌｉ，ＪＱ．，Ｚｈａｎｇ，ＺＲ．，Ｚｈａｎｇ，ＨＱ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｒａｎａｓａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ ｍＲＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｓｉｇ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ Ｔａｒｇｅｔ Ｔｈｅｒ ６，３６９（２０２１）を参照されたい。ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１３９２－０２１－００７８３－１を参照されたい。ある実施形態では、ポリヌクレオチドは、アルファウイルスレプリコン粒子（ＶＲＰ）送達系を介して被験体に送達される。ある実施形態では、レプリコンは、２つのサブゲノムプロモーターを含む修飾ＶＥＥＶレプリコンを含む。ある実施形態では、ポリヌクレオチド又はレプリコンは、抗体の重鎖（又はＶＨ若しくはＶＨ＋１）及び軽鎖（又はＶＬ若しくはＶＬ＋ＣＬ）を同時に翻訳することができる。ある実施形態では、そのようなポリヌクレオチド又はレプリコンを被験体に送達する工程を含む方法が提供される。さらなる態様では、本開示はまた、本開示による抗体を発現するか、又は本開示によるベクター若しくはポリヌクレオチドを含むか若しくは含有する宿主細胞を提供する。

細胞
さらなる態様では、本開示はまた、本開示による抗体を発現する；及び／又は本開示によるベクターを含む細胞を提供する。
このような細胞の例としては、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞若しくは植物細胞、又は大腸菌を含む原核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞株等の哺乳動物細胞である。例としては、ヒト細胞、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＨＦＲＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ７７：４２１６（１９８０））、ヒト胎児腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞が挙げられる。ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、例えばＨｅｐａ ＲＧ細胞、骨髄腫細胞又はハイブリドーマ細胞。哺乳動物宿主細胞株の他の例としては、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲ １細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞が挙げられる。抗体産生に適した哺乳動物宿主細胞株としてはまた、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）に記載されるものが挙げられる。

ある実施形態では、宿主細胞は、大腸菌等の原核細胞である。Ｅ．ｃｏｌｉ等の原核細胞におけるペプチドの発現は、十分に確立されている（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５－５５１（１９９１）を参照されたい）。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号；同第５，７８９，１９９号；及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。

本開示の結合タンパク質を発現するのに有用な昆虫細胞は、当該技術分野において公知であり、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ Ｓｆ９細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＢＴＩ－ＴＮ５Ｂ１－４細胞、及びＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ ｓＦＳＷ ０１「Ｍｉｍｉｃ（商標）」細胞が挙げられる。例えば、Ｐａｌｍｂｅｒｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５３（３－４）：１６０－１６６（２０１１）。昆虫細胞と共に、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために用いられうる多数のバキュロウイルス株が同定されている。

糸状菌又は酵母等の真核微生物もまた、タンパク質コードベクターのクローニング又は発現に適した宿主であり、部分的又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす「ヒト化」グリコシル化経路を有する真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；Ｌｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照のこと。

植物細胞もまた、本開示の抗体を発現させるための宿主として利用することができる。例えば、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号；同第６，０４０，４９８号；同第６，４２０，５４８号；同第７，１２５，９７８号；及び同第６，４１７，４２９号に記載されている）は、トランスジェニック植物を用いて抗体を産生する。

ある実施形態では、宿主細胞は哺乳動物細胞を含む。ある実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、骨髄腫細胞、又はハイブリドーマ細胞である。

細胞は、本開示によるベクター、例えば発現ベクターでトランスフェクトされてもよい。用語「トランスフェクション」は、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子等の核酸分子を細胞、例えば、真核細胞又は原核細胞に導入することをいう。本開示の文脈において、用語「トランスフェクション」は、核酸分子を細胞、例えば哺乳動物細胞に導入するための当業者に公知のいかなる方法を包含する。このような方法は、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション（例えば、カチオン性脂質及び／又はリポソームに基づく）、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、又はカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥーデキストラン又はポリエチレンイミン等）に基づくトランスフェクションを包含する。ある実施形態では、導入は非ウイルス性である。

さらに、本開示の細胞は、例えば、本開示による抗体を発現させるために、本開示によるベクターで安定的に又は一過性にトランスフェクトされ得る。ある実施形態では、細胞は、本開示による抗体をコードする本開示によるベクターで安定的にトランスフェクトされる。他の実施形態では、細胞は、本開示による抗体をコードする本開示によるベクターで一過的にトランスフェクトされる。
したがって、本開示はまた、本開示の抗体を異種発現する組換え宿主細胞を提供する。例えば、細胞は、抗体（例えば、ヒト抗体を発現するＣＨＯ細胞）を発現するＣＨＯ細胞）であってもよい。ある実施形態では、細胞の細胞型は、（そのような）抗体を天然に発現しない。さらに、宿主細胞は、天然状態で存在しない抗体に翻訳後修飾（ＰＴＭ；例えば、グリコシル化）を付与してもよく、又は抗体の天然状態で存在する抗体上のＰＴＭを消失させてもよい。そのようなさらなる又は除去されたＰＴＭは、機能的差異（例えば、免疫原性の低下）をもたらし得る。したがって、本開示の抗体は、天然に産生される抗体（例えば、ヒトにおける免疫応答の抗体）とは異なる翻訳後修飾があってよい。

抗体の産生
本開示による抗体は、当業界で公知のいかなる方法によって作製することができる。例えば、ハイブリドーマ技術を用いてモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法論は周知である（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．１９７５；Ｋｏｚｂａｒ ｅｔ ａｌ．１９８３）。ある実施形態では、国際公開第２００４／０７６６７７号に記載されている代替的なＥＢＶ不死化方法が用いられる。
ある実施形態では、参照により本明細書に援用される国際公開第２００４／０７６６７７号に記載されている方法が用いられる。この方法では、本開示の抗体を産生するＢ細胞を、ＥＢＶ及びポリクローナルＢ細胞活性化因子で形質転換する。効率をさらに高めるために、形質転換工程の間に、細胞増殖及び分化のさらなる刺激剤を場合によっては添加してもよい。これらの刺激剤は、ＩＬ－２及びＩＬ－１５等のサイトカインであってもよい。一態様では、ＩＬ－２は、不死化の効率をさらに改善するために不死化工程の間に添加されるが、その使用は必須ではない。次いで、これらの方法を用いて産生された不死化Ｂ細胞は、当業界で公知の方法及びそこから単離された抗体を用いて培養され得る。

他の例示的な方法は、国際公開第２０１０／０４６７７５号に記載されている。この方法では、形質細胞を限られた数で、又は単一の形質細胞としてマイクロウェル培養プレート中で培養する。抗体は、形質細胞培養物から単離することができる。さらに、当業界で公知の方法を用いて、形質細胞培養物からＲＮＡを抽出し、ＰＣＲを行うことができる。抗体のＶＨ及びＶＬ領域は、ＲＴ－ＰＣＲ（逆転写酵素ＰＣＲ）によって増幅され、配列決定され、発現ベクターにクローニングされ得、次いで、これがＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の宿主細胞にトランスフェクトされる。発現ベクターにおける核酸のクローニング、宿主細胞のトランスフェクション、トランスフェクトされた宿主細胞の培養、及び産生された抗体の単離は、当業者に公知のいかなる方法を用いて行うことができる。
所望であれば、濾過、遠心分離、及びＨＰＬＣ又はアフィニティークロマトグラフィー等の様々なクロマトグラフィー法を用いて、抗体をさらに精製することができる。医薬グレードの抗体を産生するための技術を含む、抗体、例えばモノクローナル抗体の精製のための技術は、当業界で周知である。

分子生物学の標準的な技術を用いて、本開示の抗体をコードするＤＮＡ配列を調製することができる。所望のＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成技術を用いて完全に又は部分的に合成され得る。部位特異的変異誘発及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を適宜用いることができる。
いかなる適当な宿主細胞／ベクター系が、本開示の抗体分子をコードする核酸配列の発現のために用いられうる。真核生物（例えば、哺乳動物）宿主細胞発現系は、抗体分子（例えば、完全抗体分子）の産生のために用いられうる。適当な哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＮＳ０、骨髄腫又はハイブリドーマ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を含むがこれに限定されない原核細胞が、本開示の抗体分子をコードする核酸配列の発現のために用いられうる。

本開示はまた、本開示による抗体分子の産生のためのプロセスであって、本開示の抗体分子をコードするＤＮＡからのタンパク質の発現に適した条件下で、本開示の核酸をコードするベクターを含む（異種）宿主細胞を培養することと、抗体分子を単離することとを含むプロセスを提供する。
重鎖及び軽鎖の両方を含む抗体の産生のために、細胞株は、２つのベクター（軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクター及び重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクター）でトランスフェクトされ得る。あるいは、軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードする配列を含む単一のベクターを用いてもよい。

本開示による抗体は、（ｉ）例えば、本開示によるベクターの使用によって、宿主細胞において本開示による核酸配列を発現させ、（ｉｉ）発現された抗体産物を単離することによって産生され得る。さらに、本方法は、（ｉｉｉ）単離された抗体を精製することを含み得る。形質転換されたＢ細胞及び培養された形質細胞は、所望の特異性又は機能の抗体を産生するものについてスクリーニングされ得る。

スクリーニング工程は、いかなるイムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）によって、組織若しくは細胞（トランスフェクトされた細胞を含む）の染色によって、中和アッセイによって、又は所望の特異性若しくは機能を同定するための当業界で公知の多数の他の方法のうちの１つによって、実施され得る。アッセイは、１つ以上の抗原の単純な認識に基づいて選択してもよく、又は所望の機能にさらに基づいて選択してもよく、例えば、単なる抗原結合抗体ではなく中和抗体を選択し、標的細胞の特徴、例えば、それらのシグナル伝達カスケード、それらの形状、それらの増殖速度、他の細胞に影響を及ぼすそれらの能力、他の細胞若しくは他の試薬による影響に対するそれらの応答、又は条件の変化、それらの分化状態等を変化させ得る抗体を選択してもよい。
次いで、個々の形質転換されたＢ細胞クローンを、陽性の形質転換されたＢ細胞培養物から産生し得る。陽性細胞の混合物から個々のクローンを分離するためのクローニング工程は、限界希釈、顕微操作、細胞選別による単一細胞沈着又は当業界で公知の他の方法を用いて行われ得る。
培養された形質細胞からの核酸を単離し、クローニングし、当業界で公知の方法を用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の公知の宿主細胞において発現させることができる。

本開示の不死化Ｂ細胞クローン又はトランスフェクトされた宿主細胞は、様々な方法で、例えば、モノクローナル抗体の供給源として、目的のモノクローナル抗体をコードする核酸（ＤＮＡ又はｍＲＮＡ）の供給源として、研究等のために用いることができる。
本開示はまた、本開示による抗体を産生する不死化Ｂ記憶細胞又はトランスフェクト宿主細胞を含む組成物を提供する。
本開示の不死化Ｂ細胞クローン又は培養形質細胞はまた、その後の組換え発現のための抗体遺伝子のクローニングのための核酸源として用いられてもよい。組換え供給源からの発現は、例えば、安定性、再現性、培養の容易さ等の理由から、Ｂ細胞又はハイブリドーマからの発現よりも薬学的目的のためにより一般的であり得る。

従って、本開示はまた、組換え細胞を調製するための方法を提供し、この方法は、以下の：（ｉ）目的の抗体をコードする１つ以上の核酸（例えば、重鎖ｍＲＮＡ及び／又は軽鎖ｍＲＮＡ）をＢ細胞クローン又は培養された形質細胞から得る工程；（ｉｉ）この核酸を発現ベクターに挿入する工程；及び（ｉｉｉ）このベクターを（異種）宿主細胞にトランスフェクトして、この宿主細胞における目的の抗体の発現を可能にする工程；を包含する。

同様に、本開示はまた、組換え細胞を調製するための方法を提供し、この方法は、以下の：（ｉ）目的の抗体をコードするＢ細胞クローン又は培養された形質細胞由来の核酸を配列決定する工程；及び（ｉｉ）工程（ｉ）からの配列情報を用いて、宿主細胞における目的の抗体の発現を可能にするために、宿主細胞への挿入のための核酸を調製する工程；を包含する。核酸は、制限部位を導入するため、コドン使用頻度を変化させるため、並びに／又は転写及び／若しくは翻訳調節配列を最適化するために、工程（ｉ）と（ｉｉ）との間で操作されてもよいが、必ずしもその必要はない。

さらに、本開示はまた、目的の抗体をコードする１つ以上の核酸で宿主細胞をトランスフェクトする工程を含む、トランスフェクトされた宿主細胞を調製する方法を提供し、ここで、核酸は、本開示の不死化Ｂ細胞クローン又は培養された形質細胞に由来する核酸である。したがって、最初に核酸（複数可）を調製し、次いでそれを用いて宿主細胞をトランスフェクトするための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）において異なる人々によって異なる時間に行うことができる。

次いで、本開示のこれらの組換え細胞は、発現及び培養目的のために用いられうる。それらは、大規模な医薬品製造のための抗体の発現に特に有用である。それらは、医薬組成物の活性成分として用いることもできる。静置培養、ローラーボトル培養、腹水、中空糸型バイオリアクターカートリッジ、モジュラーミニ発酵槽、撹拌タンク、マイクロ担体培養、セラミックコア灌流等を含むがこれらに限定されないいかなる適当な培養技術を用いることができる。

Ｂ細胞又は形質細胞から免疫グロブリン遺伝子を得て配列決定する方法は、当業界において周知である（例えば、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、２０００年の第４章を参照されたい）。
トランスフェクトされた宿主細胞は、酵母及び動物細胞、特に哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６又はＨＫＢ－１１細胞、骨髄腫細胞、又はヒト肝細胞）、並びに植物細胞等のヒト細胞）を含む真核細胞であってもよい。ある実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を含む原核細胞であり得る。ある実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、ヒト細胞等の哺乳動物細胞である。ある態様では、発現宿主は、本開示の抗体を、特にヒトにおいてそれ自体免疫原性ではない炭水化物構造でグリコシル化することができる。ある実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、無血清培地中で増殖することが可能であり得る。さらなる実施形態では、トランスフェクトされた宿主細胞は、動物由来産物の存在なしに培養中で増殖することが可能であり得る。トランスフェクトされた宿主細胞を培養して、細胞株を得ることもできる。

本開示はまた、目的の抗体をコードする１つ又は複数の核酸分子（例えば、重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子）を調製するための方法であって、（ｉ）本開示に従って不死化Ｂ細胞クローンを調製する工程又は形質細胞を培養する工程と、（ｉｉ）Ｂ細胞クローン又は培養形質細胞から、目的の抗体をコードする核酸を得る工程とを含む方法を提供する。さらに、本開示は、目的の抗体をコードする核酸配列を得るための方法であって、（ｉ）本開示に従って不死化Ｂ細胞クローンを調製する工程又は形質細胞を培養する工程と、（ｉｉ）目的の抗体をコードするＢ細胞クローン又は培養形質細胞からの核酸を配列決定する工程とを含む方法を提供する。

本開示は、本開示の形質転換されたＢ細胞クローン又は培養された形質細胞から得られた核酸を得る工程を含む、目的の抗体をコードする核酸分子（複数可）を調製する方法をさらに提供する。したがって、最初にＢ細胞クローン又は培養形質細胞を得て、次にＢ細胞クローン又は培養形質細胞から核酸（複数可）を得るための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）の異なる人々によって異なる時間に行うことができる。
本開示はまた、（ｉ）目的の抗体を発現する選択されたＢ細胞クローン又は培養された形質細胞から１つ以上の核酸（例えば、重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子）を得る工程及び／又は配列決定する工程；（ｉｉ）核酸を核酸配列に挿入する工程又は核酸配列を用いて発現ベクターを調製する工程；（ｉｉｉ）目的の抗体を発現し得る宿主細胞をトランスフェクトする工程；（ｉｖ）目的の抗体が発現される条件下でトランスフェクトされた宿主細胞を培養又は継代培養する工程；及び場合によっては、（ｖ）目的の抗体を精製する工程を包含する、本開示に従う（例えば、薬学的使用のための）抗体を調製するための方法を包含する。

本開示はまた、目的の抗体を調製する方法を提供し、この方法は、目的の抗体が発現される条件下で、トランスフェクトされた宿主細胞集団（例えば、安定にトランスフェクトされた宿主細胞集団）を培養又は継代培養する工程、及び場合によっては、目的の抗体を精製する工程を包含し、ここで、このトランスフェクトされた宿主細胞集団は、（ｉ）上記のように調製されたＢ細胞クローン又は培養された形質細胞によって産生される、選択された目的の抗体をコードする核酸を提供する工程、（ｉｉ）核酸を発現ベクターに挿入する工程、（ｉｉｉ）目的の抗体を発現し得る宿主細胞においてベクターをトランスフェクトする工程、及び（ｉｖ）目的の抗体を産生するために、挿入された核酸を含むトランスフェクトされた宿主細胞を培養又は継代培養する工程によって調製される。したがって、最初に組換え宿主細胞を調製し、次いでそれを培養して抗体を発現させるための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）において異なる人々によって非常に異なる時間に行うことができる。

医薬組成物
本開示はまた、以下の１つ以上を含む医薬組成物を提供する：
（ｉ） 本開示による抗体；
（ｉｉ） 本開示による抗体をコードする核酸；
（ｉｉｉ） 本開示に係る核酸を含むベクター；及び／又は
（ｉｖ） 本開示による抗体を発現するか、又は本開示によるベクターを含む細胞、
かつ、場合によっては、薬学的に許容される希釈剤又は担体を含む。
換言すれば、本開示はまた、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター及び／又は本開示による細胞を含む医薬組成物を提供する。
医薬組成物はまた、場合によっては、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含み得る。担体又は賦形剤は投与を容易にし得るが、それ自体、組成物を受ける個体に有害な抗体の産生を誘導すべきではない。また毒性であってはならない。適当な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー及び不活性ウイルス粒子のような、大きく、ゆっくりと代謝される高分子であり得る。ある実施形態では、本開示による医薬組成物中の薬学的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤は、インフルエンザＡウイルス感染に関する活性成分ではない。
薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩及び硫酸塩等の鉱酸塩、又は酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩及び安息香酸塩等の有機酸の塩を用いることができる。
医薬組成物中の薬学的に許容される担体は、液体（例えば、水、生理食塩水、グリセロール及びエタノール）をさらに含み得る。さらに、補助物質（例えば、湿潤剤若しくは乳化剤又はｐＨ緩衝物質）が、このような組成物中に存在し得る。このような担体により、医薬組成物が、被験体による摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー及び懸濁物として処方されうる。

本開示の医薬組成物は、様々な形態で調製することができる。例えば、組成物は、液体溶液又は懸濁液のいずれかの注射剤として調製することができる。注射前の液体ビヒクル中の溶液又は懸濁液に適した固体形態も調製することができる（例えば、保存剤を含有する滅菌水で再構成するための、Ｓｙｎａｇｉｓ（商標）及びＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）と同様の凍結乾燥組成物）。組成物は、局所投与用に、例えば、例えば、軟膏、クリーム又は粉末として調製され得る。組成物は、経口投与のために、例えば、錠剤若しくはカプセルとして、スプレーとして、又はシロップ（任意に風味付けされる）として調製されてもよい。この組成物は、肺投与のために、例えば、吸入器として、微粉末又はスプレーを用いて調製され得る。組成物は、坐剤又はペッサリーとして調製することができる。組成物は、経鼻、経耳又は経眼投与用に、例えば滴剤として調製することができる。組成物は、組み合わされた組成物が被験体への投与直前に再構成されるように設計されたキット形態であってもよい。例えば、凍結乾燥された抗体は、滅菌水又は滅菌緩衝液を含むキット形態で提供され得る。
ある実施形態では、組成物中の（唯一の）活性成分は、本開示による抗体である。そのため、胃腸管で分解されやすい可能性がある。したがって、組成物が胃腸管を用いる経路によって投与される場合、組成物は、抗体を分解から保護するが、胃腸管から吸収されると抗体を放出する薬剤を含有してもよい。
薬学的に許容される担体の徹底的な議論は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｊ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２に記載されている。

本開示の医薬組成物のｐＨは、一般に、５．５～８．５であり、ある実施形態では、６～８、例えば約７であり得る。ｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。組成物は、無菌及び／又は発熱物質を含まなくてもよい。組成物は、ヒトに対して等張性であってもよい。ある実施形態では、本開示の医薬組成物は、密封容器で供給される。
本開示の範囲内には、いくつかの投与形態で存在する組成物があり、形態としては、例えば注射又は注入による、例えばボーラス注射又は持続注入による非経口投与に適した形態が挙げられるが、これらに限定されない。製品が注射又は注入用である場合、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンの形態をとってもよく、懸濁化剤、保存剤、安定剤及び／又は分散剤等の製剤化剤を含有してもよい。あるいは、抗体は、使用前に適当な滅菌液で再構成するための乾燥形態であってもよい。

ビヒクルは、通常、薬学的に活性な化合物、特に本開示による抗体等の化合物を貯蔵、輸送、及び／又は投与するのに適した材料であると理解される。例えば、ビヒクルは、薬学的に活性な化合物、特に本開示による抗体を保存、輸送、及び／又は投与するのに適した生理学的に許容される液体であってもよい。製剤化されると、本開示の組成物は、被験体に直接投与することができる。ある実施形態では、組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト被験体）への投与に適合される。

ある実施形態では、組成物は、第１のプラスミドを含む第１のベクターと、第２のプラスミドを含む第２のベクターとを含み、第１のプラスミドは、重鎖、ＶＨ、又はＶＨ＋ＣＨ１をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のプラスミドは、抗体の同族軽鎖、ＶＬ、又はＶＬ＋ＣＬをコードするポリヌクレオチドを含む。ある実施形態では、組成物は、適当な送達ビヒクル又は担体にカップリングされたポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。ヒト被験体への投与のための例示的なビヒクル又は担体としては、脂質又は脂質由来送達ビヒクル、例えば、リポソーム、固体脂質ナノ粒子、油性懸濁液、サブミクロン脂質エマルジョン、脂質マイクロバブル、逆脂質ミセル、蝸牛リポソーム、脂質微小管、脂質マイクロシリンダー、若しくは脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）又はナノスケールプラットフォーム（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｗｉｌｅｒｙ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐ Ｒｅｖ．Ｎａｎｏｍｅｄ Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１（２）：ｅ１５３０（２０１９））。適当なｍＲＮＡを設計し、ｍＲＮＡ－ＬＮＰを製剤化し、それを送達するための原理、試薬、及び技術は、例えば、Ｐａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２１７３４５－３５１（２０１５））Ｔｈｅｓｓら（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２３：１４５６－１４６４（２０１５））。Ｔｈｒａｎら（ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ９（１０）：１４３４－１４４８（２０１７）；コーセーら（Ｓｃｉ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４ ｅａａｗ６６４７（２０１９）；及びＳａｂｎｉｓら（Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２６：１５０９－１５１９（２０１８））に記載されており、これらの技法は、キャッピング、コドン最適化、ヌクレオシド修飾、ｍＲＮＡの精製、安定な脂質ナノ粒子（例えば、イオン化可能なカチオン性脂質／ホスファチジルコリン／コレステロール／ＰＥＧ－脂質；イオン化可能な脂質：ジステアロイルＰＣ：コレステロール：ポリエチレングリコール脂質）へのｍＲＮＡの組み込み、並びにそれらの皮下、筋肉内、皮内、静脈内、腹腔内、及び気管内投与を含み、これらは参照により本明細書に援用される。

本開示の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、局所、皮下、鼻腔内、腸内、舌下、膣内又は直腸経路を含むがこれらに限定されないいかなる数の経路によって投与され得る。ハイポスプレーもまた、本開示の医薬組成物を投与するために用いられうる。場合によっては、この医薬組成物は、経口投与のために（例えば、錠剤、カプセル等として）、局所投与のために、又は注射可能なものとして（例えば、液体溶液又は懸濁液として）調製され得る。ある実施形態では、医薬組成物は注射剤である。注射前の液体ビヒクル中の溶液又は懸濁液に適した固体形態も包含され、例えば、医薬組成物は凍結乾燥形態であってもよい。

医薬組成物は、単位用量当たり所定量の活性成分を含有する単位用量形態で提供され得る。当業者に公知なように、１用量あたりの活性成分の量は、治療される状態、投与経路並びに患者の年齢、体重及び状態に依存する。
投与の容易性及び投薬量の均一性のために、非経口組成物を投薬単位形態で処方することが特に有利である。本明細書中で用いられる場合、投薬単位形態は、治療されるべき哺乳動物被験体のための単位投薬量として適した物理的に別個の単位をいい；各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。

注射（例えば、静脈内、皮膚若しくは皮下注射、又は罹患部位での注射）のために、活性成分は、発熱物質を含まず、適当なｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸加リンゲル注射液等の等張性ビヒクルを用いて、適当な溶液を十分に調製することができる。場合によっては、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤及び／又は他の添加剤を含めることができる。個体に投与されるのが本開示による抗体、ペプチド、核酸分子、又は他の薬学的に有用な化合物であるかどうかにかかわらず、投与は通常、「予防有効量」又は「治療有効量」（場合によって）であり、これは個体に利益を示すのに十分である。本開示の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、又は組成物の治療有効量は、臨床転帰の改善；疾患に関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；より長い無病状態；疾患の程度の縮小、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；又は統計的に有意な様式での生存の延長を含む治療効果をもたらすのに十分な組成物又は分子の量であり得る。投与される実際の量、並びに投与の速度及び時間経過は、例えば、治療されているものの性質及び重症度に依存する。注射のために、本開示による医薬組成物は、例えば、プレフィルドシリンジで提供され得る。

本明細書に記載の医薬組成物はまた、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤又は液剤を含むがこれらに限定されないいかなる経口的に許容される剤形で経口投与されてもよい。経口使用のための錠剤の場合、一般的に用いられる担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤も典型的には添加される。カプセル形態での経口投与について、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液が経口使用のために必要とされる場合、活性成分は乳化剤及び懸濁化剤と組み合わされる。所望であれば、特定の甘味剤、香味剤又は着色剤を添加してもよい。

本明細書に記載される医薬組成物はまた、特に、治療の標的が、局所適用によって容易にアクセス可能な領域又は器官（例えば、アクセス可能な上皮組織を含む）を含む場合、局所的に投与され得る。適当な局所処方物は、これらの領域又は器官の各々について容易に調製される。局所適用のために、医薬組成物は、１つ以上の担体中に懸濁又は溶解された医薬組成物（特に、上記で定義されるようなその成分）を含む適当な軟膏中に処方され得る。局所投与のための担体としては、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、医薬組成物は、適当なローション又はクリーム中に処方され得る。本開示の文脈において、適当な担体としては、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が挙げられるが、これらに限定されない。

投薬治療は、単回用量スケジュール又は複数回用量スケジュールであり得る。特に、医薬組成物は、単回用量製品として提供され得る。ある実施形態では、医薬組成物中の抗体の量は、特に単回投与製品として提供される場合、２００ｍｇを超えず、例えば、１００ｍｇ又は５０ｍｇを超えない。
例えば、本開示による医薬組成物は、毎日、例えば１日１回又は数回、例えば１日１回、２回、３回又は４回、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日又は２１日以上、例えば１ヶ月、２ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月間毎日投与され得る。ある実施形態では、本開示による医薬組成物は、毎週、例えば、１週間に１回若しくは２回、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０若しくは２１週間以上、例えば、毎週、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２年間、又は毎週、２、３、４若しくは５年間投与され得る。さらに、本開示による医薬組成物は、毎月、例えば、１、２、３、４、又は５年以上の間、１カ月に１回又は２カ月に１回投与することができる。投与は、生涯継続してもよい。ある実施形態では、特に特定の適応症に関して、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス感染の予防のために、１回の単回投与のみも想定される。例えば、単回投与（単回用量）が投与され、抗体の力価が不十分であるか、又は防御に不十分であると想定される場合、さらなる用量が１つ以上の後の時点で投与され得る。
単回用量、例えば、毎日、毎週、又は毎月の用量について、本開示による医薬組成物中の抗体の量は、１ｇ又は５００ｍｇを超えなくてもよい。ある実施形態では、単回用量について、本開示による医薬組成物中の抗体の量は、２００ｍｇ、又は１００ｍｇを超えなくてもよい。例えば、単回用量の場合、本開示による医薬組成物中の抗体の量は、５０ｍｇを超えなくてもよい。

医薬組成物は、通常、本開示の１つ以上の抗体の「有効」量、すなわち、所望の疾患若しくは状態を治療、改善、減弱、低減若しくは予防するのに、又は検出可能な治療効果を示すのに十分な量を含む。治療効果はまた、病原性効力又は身体的症状の低減又は減弱を含む。ある実施形態では、有効量は、臨床転帰の改善；疾患に関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；より長い無病状態；疾患の程度の縮小、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；又は統計的に有意な様式での生存の延長をもたらすのに十分な量である。いかなる特定の被験体に対する正確な有効量は、例えば、被験体のサイズ、体重、及び健康、状態の性質及び程度、排出速度、投与の様式及びタイミング、並びに投与のために選択される治療剤又は治療剤の組み合わせに依存し得る。所与の状況に対する有効量は、日常的な実験によって決定され、臨床医の判断の範囲内である。本開示の目的のために、有効用量は、一般に、約０．００５～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００７５～約５０ｍｇ／ｋｇ又は約０．０１～約１０ｍｇ／ｋｇであり得る。ある実施形態では、有効用量は、それが投与される個体の体重（例えば、ｋｇ単位）に対して、約０．０２～約５ｍｇ／ｋｇの本開示の抗体（例えば、医薬組成物中の抗体の量）である。

ある実施形態では、本開示の製剤及び方法による療法の投与後、試験被験体は、プラセボ治療被験体又は他の適当な対照被験体と比較して、治療されている疾患又は障害に関連する１つ又は複数の症状の約１０％～最大約９９％の低減を示す。

さらに、本開示による医薬組成物は、さらなる抗体又は抗体ではない成分であり得るさらなる活性成分も含み得る。例えば、医薬組成物は、１つ以上の抗ウイルス剤（抗体ではない）を含んでもよい。さらに、医薬組成物は、１つ以上の抗体（本開示によるものではない）、例えば、他のインフルエンザウイルス抗原（ヘマグルチニン以外）に対する抗体又は他のインフルエンザウイルスに対する（例えば、Ｂ型インフルエンザウイルスに対する又はＣ型インフルエンザウイルスに対する）抗体も含み得る。したがって、本開示による医薬組成物は、さらなる活性成分のうちの１つ以上を含み得る。

本開示による抗体は、さらなる活性成分と同じ医薬組成物中に存在することができるか、あるいは、本開示による抗体が第１の医薬組成物に含まれ、さらなる活性成分が第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含まれる。したがって、２つ以上のさらなる活性成分が想定される場合、各さらなる活性成分及び本開示による抗体は、異なる医薬組成物中に含まれ得る。そのような異なる医薬組成物は、組み合わせて／同時に、又は別々の時間に、若しくは別々の場所（例えば、身体の別々の部分）に投与されてもよい。
本開示による抗体及びさらなる活性成分は、相加的治療効果、例えば相乗的治療効果を提供し得る。用語「相乗作用」は、各々の活性剤の個々の効果の合計よりも大きい、２つ以上の活性剤の複合効果を説明するために用いられる。したがって、２つ以上の薬剤の併用効果が、活性又はプロセスの「相乗的阻害」をもたらす場合、活性又はプロセスの阻害は、各々の活性薬剤の阻害効果の合計よりも大きいことが意図される。用語「相乗的治療効果」は、治療効果（いくつかのパラメータのいずれかによって測定される）が各々の個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２つ以上の治療の組み合わせで観察される治療効果をいう。

ある実施形態では、本開示の組成物は、本開示の抗体を含んでもよく、抗体は、組成物中の総タンパク質の少なくとも５０重量％（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）を構成してもよい。本開示の組成物において、抗体は精製された形態であってもよい。

本開示はまた、（ｉ）本開示の抗体を調製する工程と、（ｉｉ）精製された抗体を１つ又は複数の薬学的に許容される担体と混合する工程とを含む、医薬組成物を調製する方法を提供する。
他の実施形態では、医薬組成物を調製する方法は、抗体を１つ又は複数の薬学的に許容される担体と混合する工程を含み、抗体は、本開示の形質転換Ｂ細胞又は培養形質細胞から得られたモノクローナル抗体である。
治療目的で抗体又はＢ細胞を送達する代わりに、Ｂ細胞又は培養された形質細胞に由来する目的のモノクローナル抗体をコードする核酸（典型的にはＤＮＡ）を被験体に送達することが可能であり、その結果、核酸を被験体においてインサイチュで発現させて、所望の治療効果を提供することができる。適当な遺伝子治療及び核酸送達ベクターは、当業界で公知である。

医薬組成物は、特に複数回投与形式で包装される場合、抗菌剤を含んでもよい。それらは、界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０等のＴｗｅｅｎ（登録商標）（ポリソルベート）を含み得る。界面活性剤は、一般的に低レベル、例えば０．０１％未満で存在する。組成物はまた、張性を与えるためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含み得る。例えば、１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌの濃度が典型的である。

さらに、医薬組成物が凍結乾燥される場合、又は凍結乾燥材料から再構成された材料を含む場合、糖アルコール（例えば、マンニトール）又は二糖（例えば、スクロース又はトレハロース）を例えば約１５～３０ｍｇ／ｍｌ（例えば、２５ｍｇ／ｍｌ）で含み得る。凍結乾燥のための組成物のｐＨは、凍結乾燥前に、５～８、又は５．５～７、又は約６．１に調整され得る。
本開示の組成物はまた、１つ以上の免疫調節剤を含んでもよい。ある実施形態では、免疫調節剤の１つ以上は、アジュバントを含む。

医学的治療及び使用
さらなる態様では、本開示は、（ｉ）インフルエンザＡ型ウイルスによる感染の予防及び／若しくは治療；又は（ｉｉ）インフルエンザＡ型ウイルスによる感染の診断における、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、又は本開示による医薬組成物の使用を提供する。したがって、本開示はまた、治療有効量の本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、又は本開示による医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む、インフルエンザＡ型ウイルス感染を低減する、又はインフルエンザＡ型ウイルス感染のリスクを低下させる方法を提供する。また、本発明は、本発明に係る抗体、本発明に係る核酸、本発明に係るベクター、本発明に係る細胞、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の使用を提供する。

診断の方法は、抗体を試料と接触させることを含み得る。そのような試料は、被験体から単離されてもよく、例えば、摘出組織試料は、例えば、鼻腔、洞腔、唾液腺、肺臓、肝臓、すい臓、腎、耳殻、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚、又は血しょう若しくは漿液等の血しょうから採取される。診断方法はまた、特に抗体を試料と接触させた後の、抗原／抗体複合体の検出を含んでもよい。このような検出工程は、通常、ベンチで、すなわち、ヒト又は動物の身体に接触することなく行われる。検出方法の例は、当業者に周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）を含む。

インフルエンザＡ型ウイルスによる感染の予防は、特に、被験体がインフルエンザＡ型ウイルスによる感染と診断されなかった（診断が実施されなかったか、又は診断結果が陰性であった）、及び／又は被験体がインフルエンザＡ型ウイルスによる感染の症状を示さない予防的設定をいう。インフルエンザＡ型ウイルスによる感染の予防は、感染した場合に重篤な疾患又は合併症の危険性がより高い被験体（例えば、妊婦、小児（例えば、５９ヶ月未満の小児）、高齢者、慢性の医学的状態（例えば、慢性の心臓、肺、腎臓、代謝、神経発達、肝臓又は血液疾患）を有する個体、及び免疫抑制状態（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、化学療法若しくはステロイドを受けている個体、又は悪性疾患）を有する個体）において特に有用である。さらに、インフルエンザＡウイルスによる感染の予防はまた、例えば、曝露の増加に起因してインフルエンザＡウイルス感染を獲得するリスクがより高い被験体、例えば、公共の場で働くか又は滞在する被験体、特に医療従事者において特に有用である。
治療設定では、対照的に、被験体は、通常、Ａ型インフルエンザウイルスに感染しているか、Ａ型インフルエンザウイルス感染と診断されているか、及び／又はＡ型インフルエンザウイルス感染の症状を示している。注目すべきことに、インフルエンザＡ型ウイルス感染の用語「治療」及び「療法」／「治療的」は、インフルエンザＡ型ウイルス感染及び／又は関連症状の（完全な）治癒並びに減弱／低減を含む。一部の事例では、治療又は療法／治療は、被験体の疾患、障害、又は状態の医学的管理をいうことができる。一般に、本開示の抗体又は組成物を含む適当な用量又は治療レジメンは、治療的又は予防的利益を誘発するのに十分な量で投与される。治療的又は予防的／防止的利益には、臨床転帰の改善；疾患に関連する症状の軽減若しくは緩和；症状の発生の減少；生活の質の改善；より長い無病状態；疾患の程度の縮小、疾患状態の安定化；疾患進行の遅延若しくは防止；寛解；生存；生存の延長；又はそれらのいかなる組み合わせが含まれる。
したがって、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物は、インフルエンザＡ型ウイルス感染と診断された被験体又はインフルエンザＡ型ウイルス感染の症状を示す被験体におけるインフルエンザＡ型ウイルス感染の治療のために用いられうる。

本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物はまた、無症候性被験体におけるインフルエンザＡ型ウイルス感染の予防及び／又は治療のために用いられうる。これらの被験体は、インフルエンザＡ型ウイルス感染と診断されてもよく、又は診断されなくてもよい。

さらに、本開示に係る抗体、本開示に係る核酸、本開示に係るベクター、本開示に係る細胞又は本開示に係る医薬組成物は、インフルエンザＡ型ウイルス感染の予防及び／又は治療のために用いられてもよく、抗体、核酸、ベクター、細胞又は医薬組成物は、インフルエンザＡ型感染の最初の症状が生じる最大３か月前又はインフルエンザＡ型感染の最初の症状が生じる最大１か月前、例えば、インフルエンザＡ型感染の最初の症状が生じる最大２週間前又はインフルエンザＡ型感染の最初の症状が生じる最大１週間前に投与される。例えば、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物は、インフルエンザＡ型ウイルス感染の予防及び／又は治療のために使用され、抗体、核酸、ベクター、細胞又は医薬組成物は、インフルエンザＡ型感染の最初の症状が発生する３日前又は２日前までに投与される。

一般に、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の最初の投与の後、１回又は複数回のその後の投与、例えば、１日１回又は２日毎に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間の単回投与が続いてもよい。本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の最初の投与後、１回又は複数回のその後の投与、例えば、１週間に１回又は２回、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１週間の単回投与が続いてもよい。本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の最初の投与後、１回又は複数回のその後の投与、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１週間の間、２又は４週間ごとの単回投与が続いてもよい。本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の最初の投与後、１回又は複数回のその後の投与、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１日間、２カ月又は４カ月ごとの単回用量が続いてもよい。本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の最初の投与後、１回又は複数回のその後の投与、例えば、１年に１回又は２回、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０年間の単回用量が続いてもよい。

ある実施形態では、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物は、０．００５～１００ｍｇ／ｋｇ体重又は０．００７５～５０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量、例えば、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量又は０．０５～５ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される。例えば、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物は、０．１～１ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される。

本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、局所、皮下、鼻腔内、腸内、舌下、膣内又は直腸経路等のいかなる数の経路によって投与することができる。

ある実施形態では、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、又は本開示による医薬組成物は、予防的に、すなわち、Ａ型インフルエンザ感染の診断の前に投与される。

ある実施形態では、本開示の抗体は、Ａ型インフルエンザ感染の即時リスクがある被験体に投与され得る。Ａ型インフルエンザ感染の即時リスクは、通常、Ａ型インフルエンザの流行中に生じる。インフルエンザＡウイルスは、循環し、疾患の季節性流行を誘発することが知られている（ＷＨＯ、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（Ｓｅａｓｏｎａｌ）Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ、２０１８年１１月６日）。温帯気候では、季節性流行は主に冬の間に起こるが、熱帯地域では、インフルエンザは１年を通して起こり、より不規則流行を誘発する可能性がある。例えば、北半球では、インフルエンザＡの流行の危険性は、１１月、１２月、１月、２月及び３月の間に高く、一方、南半球では、インフルエンザＡの流行の危険性は、５月、６月、７月、８月及び９月の間に高い。

併用療法
本開示による方法及び使用における本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の投与は、単独で、又はインフルエンザ感染の予防及び／又は治療に有用であり得る併用剤（本明細書において「さらなる活性成分」ともいう）と組み合わせて行うことができる。
本開示は、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞又は本開示による医薬組成物の投与であって、インフルエンザを治療及び／又は予防するのに有用な併用剤又は他の治療レジメンの前他の治療レジメンの前に、それと同時に、又はその後に被験体に投与される。前記併用剤と組み合わせて投与される前記抗体、核酸、ベクター、細胞又は医薬組成物は、同じ又は異なる組成物（複数可）で、同じ又は異なる投与経路（複数可）によって投与することができる。本明細書で用いられる表現「併用療法」、「併用投与」、「併用して投与される」は、薬物（「併用して」投与される）の併用作用をいうことが意図される。この目的のために、組み合わされた薬物は、通常、同時に及び／又は重複する時間枠で作用部位に存在する。両方の薬物の効果が相互作用し得るように、他の薬物が投与されている間、薬物のうちの１つによって誘発される効果が依然として継続している（薬物自体がもはや存在し得ない場合であっても）ことも可能であり得る。しかしながら、他の薬物が投与されるときにそれがもはや存在しない（又はその効果が継続していない）ように、他の薬物のかなり前に投与された薬物（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月以上又は１年以上）は、通常、「併用」投与されるとはみなされない。例えば、異なるインフルエンザシーズンに投与されるインフルエンザ治療薬は、通常
「併用」されない。

前記他の治療レジメン又は併用剤は、例えば、抗ウイルス剤であってもよい。抗ウイルス剤（又は「抗ウイルス剤」若しくは「抗ウイルス薬」）は、ウイルス感染を治療するために特異的に用いられる薬剤のクラスをいう。細菌に対する抗生物質と同様に、抗ウイルス剤は、様々なウイルスに対して有用な広域スペクトル抗ウイルス剤、又は特定のウイルスに対して用いられる特定の抗ウイルス剤であり得る。ほとんどの抗生物質とは異なり、抗ウイルス薬は通常、それらの標的病原体を破壊せず；代わりに、それらは典型的にはそれらの発生を阻害する。
したがって、本開示の他の態様では、本開示による抗体、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、又は本開示による医薬組成物は、本明細書に記載の（医学的）使用のための抗ウイルス剤と組み合わせて（その前に、同時に、又はその後に）投与される。

一般に、抗ウイルス剤は、広域スペクトル抗ウイルス剤（インフルエンザウイルス及び他のウイルスに対して有用である）又はインフルエンザウイルス特異的抗ウイルス剤であり得る。ある実施形態では、抗ウイルス剤は抗体ではない。例えば、抗ウイルス剤は小分子薬であってもよい。インフルエンザの予防及び／又は治療に有用な小分子抗ウイルス薬の例は、Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されている。Ｗｕ Ｘ，に記載されているように、当業者は、インフルエンザの予防及び／又は治療に有用な様々な抗ウイルス剤に精通している。インフルエンザに有用なさらなる抗ウイルス剤は、Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ｓ．Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｆｒｏｍ Ｎｏｗ ａｎｄ Ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１８；９：１９４６；及びＫｏｓｚａｌｋａ Ｐ，Ｔｉｌｍａｎｉｓ Ｄ，Ｈｕｒｔ ＡＣ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ａｎｔｉｖｉｒａｌｓ ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｉｎ ｌａｔｅ－ｐｈａｓｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｏｔｈｅｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１７；１１（３）：２４０－２４６に記載されている。

インフルエンザの予防及び／又は治療において有用な抗ウイルス剤としては、（ｉ）インフルエンザウイルス自体の機能的タンパク質を標的化する薬剤、及び（ｉｉ）宿主細胞（例えば、上皮）を標的化する薬剤が挙げられる。
宿主細胞標的化剤としては、広域スペクトル抗ウイルス剤のチアゾリドクラス、シアリダーゼ融合タンパク質、ＩＩＩ型インターフェロン、Ｂｃｌ－２（Ｂ細胞リンパ腫２）阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤及び抗酸化剤が挙げられる。広域スペクトル抗ウイルス剤のチアゾリドクラスの例としては、ニタゾキサニド（ＮＴＺ）（これは、血液中で活性代謝形態チゾキサニド（ＴＩｚｏｘａｎｉｄｅ）（ＴＩＺ）に迅速に脱アセチル化される）、及び第２世代チアゾリド化合物（これは、ＲＭ５０６１等のＮＴＺに構造的に関連する）が挙げられる。Ｆｌｕｄａｓｅ（ＤＡＳ１８１）は、シアリダーゼ融合タンパク質の一例である。ＩＩＩ型ＩＦＮとしては、例えば、ＩＦＮγがあげられる。Ｂｃｌ－２阻害剤の非限定的な例としては、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＷＥＨＩ－５３９及びＡ－１３３１８５２（Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ｓ．Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｆｒｏｍ Ｎｏｗ ａｎｄ Ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１８；９：１９４６）があげられる。プロテアーゼ阻害剤の例としては、ナファモスタット、ロイペプチン、エプシロンーアミノカプロン酸、カモスタット及びアプロチニンが挙げられる。Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤としては、ＮｏｒａｋｉｎＲ、ＰａｒｋｏｐａｎＲ、ＡｎｔｉｐａｒｋｉｎＲ及びＡｋｉｎｅｔｏｎＲが挙げられる。抗酸化剤の例は、α－トコフェロールである。

ある実施形態では、抗ウイルス剤は、インフルエンザウイルス自体の機能的タンパク質を標的とする薬剤である。例えば、抗ウイルス剤は、ヘマグルチニンではないインフルエンザウイルスの機能的タンパク質を標的とし得る。一般に、インフルエンザウイルスの機能的タンパク質を標的とする抗ウイルス剤としては、侵入阻害剤、ヘマグルチニン阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、インフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤）、ヌクレオカプシドタンパク質阻害剤、Ｍ２イオンチャネル阻害剤及び塩酸アルビドールが挙げられる。侵入阻害剤の非限定的な例としては、トリテルペノイド誘導体、例えばグリシルリジン酸（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ）（グリシルリジン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ））及びグリシルレチン酸；サポニン；ｕｒａｌｓａｐｏｎｉｎｓ Ｍ－Ｙ（例えばｕｒａｌｓａｐｏｎｉｎｓ Ｍ）；硫酸デキストラン（ＤＳ）；シリマリン；クルクミン；並びにリソソーム作用剤、例えばコンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、及びクロロキンが挙げられる。ヘマグルチニン阻害剤の非限定的な例としては、例えば、ＢＭＹ－２７７０９；スタキフリン；ゴシポール、ルチン、ケルセチン、キシロピン、及びテアフラビン等の天然物；Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されている化合物1等の3価糖ペプチド模倣体；Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されている化合物２等のポドカルピン酸誘導体；Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されている化合物３等の、天然物五環式トリテルペノイド；プレニル化インドールジケトピペラジンアルカロイド、例えばネオエキヌリンBがあげられる。ヌクレオカプシドタンパク質阻害剤の非限定的な例としては、ヌクレオジン、シクロヘキシミド、ナプロキサン及びインガビリンが挙げられる。Ｍ２イオンチャネル阻害剤の非限定的な例としては、承認されたＭ２阻害剤であるアマンタジン及びリマンタジン並びにそれらの誘導体；並びにスペルミン、スペルミジン、スピロピペリジン及びｐｉｎａｎａｍｉｎｅ誘導体等の非アダマンタン誘導体が挙げられる。

ある実施形態では、抗ウイルス剤は、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害剤及びインフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤）から選択される。ノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害剤の非限定的な例としては、ザナミビル；オセルタミビル；ペラミビル；ラニナミビル；Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載のもの、及び二量体ザナミビルコンジュゲート（例えば、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５）；安息香酸誘導体（例えば、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５；化合物１１～１４等）；ピロリジン誘導体（例えば、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５；化合物１５～１８等）；ギンゲチンーシアル酸コンジュゲート；フラバノン及びフラボノイドイソスクテラレイン及びその誘導体（例えば、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５）；ＡＶ５０８０；及びＮ－置換オセルタミビル類似体（例えば、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５）。インフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ））阻害剤の非限定的な例としては、Ｗｕ Ｘ，Ｗｕ Ｘ，Ｓｕｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ．２０１７；７（４）：８２６－８４５；ＰＢ２キャップ結合阻害剤、例えば、ＪＮＪ６３６２３８７２（ＶＸ－７８７）；キャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤、例えば、ｂａｌｏｘａｖｉｒ ｍａｒｂｏｘｉｌ（Ｓ－０３３１８８）；ＰＡエンドヌクレアーゼ阻害剤、例えば、ＡＬ－７９４、ＥＧＣＧ及びその脂肪族類似体、Ｎ－ヒドロキサム酸及びＮ－ヒドロキシイミド、フルチミド及びその芳香族類似体、テトラミン酸誘導体、Ｌ－７４２，００１、ＡＮＡ－０、ポリフェノールカテキン、フェネチルーフェニルフタルイミド類似体、マクロサイクリックｂｉｓｂｉｂｅｎｚｙｌｓ、ピリミジノール、フラーレン、ヒドロキシキノリノン、ヒドロキシピリジノン、ｈｙｄｒｏｘｙｐｙｒｉｄａｚｉｎｏｎｅｓ、トリヒドロキシーフェニル含有化合物、２－ヒドロキシ－ベンズアミド、ヒドロキシ－ピリミジノン、β－ジケト酸及びその生物学的等価化合物、チオセミカルバゾン、ｂｉｓｄｉｈｙｄｒｏｘｙｉｎｄｏｌｅ－カルボキサミド、及びピリド－ピペラジンジオン（Ｅｎｄｏ－１）；並びにヌクレオシド及び核酸塩基類似体阻害剤、例えば、リバビリン、ファビピラビル（Ｔ－７０５）、２’－デオキシ－２’－フルオログアノシン（２’－ｆＤＧ）、２’－置換カルバ－ヌクレオシド類似体、６－メチル－７－置換－７－デアザプリンヌクレオシド類似体、及び２’－デオキシ－２’－フルオロシチジン（２’－ＦＤｃ）。例えば、抗ウイルス薬は、ザナミビル、オセルタミビル又はｂａｌｏｘａｖｉｒであり得る。

したがって、本開示による医薬組成物は、１つ以上のさらなる活性成分を含んでもよい。本開示による抗体は、さらなる活性成分（併用剤）と同じ医薬組成物中に存在し得る。あるいは、本開示による抗体及びさらなる活性成分（併用剤）は、別個の医薬組成物中に含まれる（例えば、同じ組成物中に含まれない）。したがって、２つ以上のさらなる活性成分（併用剤）が想定される場合、各さらなる活性成分（併用剤）及び本開示による抗体は、異なる医薬組成物に含まれ得る。そのような異なる医薬組成物は、組み合わせて／同時に、又は別々の時間に、及び／又は別々の投与経路によって投与することができる。
本開示による抗体及びさらなる活性成分（併用剤）は、相加的又は相乗的治療効果を提供し得る。用語「相乗作用」は、各々の活性剤の個々の効果の合計よりも大きい、２つ以上の活性剤の複合効果を説明するために用いられる。したがって、２つ以上の薬剤の併用効果が、活性又はプロセスの「相乗的阻害」をもたらす場合、活性又はプロセスの阻害は、各々の活性薬剤の阻害効果の合計よりも大きいことが意図される。用語「相乗的治療効果」は、治療効果（いくつかのパラメータのいずれかによって測定される）が各々の個々の治療で観察される個々の治療効果の合計よりも大きい、２つ以上の治療の組み合わせで観察される治療効果をいう。

したがって、本開示はまた、（ｉ）本明細書に記載の本開示の抗体と、（ｉｉ）上記の抗ウイルス剤との組み合わせを提供する。
［実施例］
以下では、本開示の様々な実施形態及び態様を示す特定の例が提示される。しかしながら、本開示は、本明細書に記載されるある実施形態によって範囲が限定されるべきではない。以下の調製例及び実施例は、当業者が本開示をより明確に理解し、実施することを可能にするために与えられる。しかしながら、本開示は、本開示の単一の態様の例示としてのみ意図される例示的な実施形態によって範囲が限定されず、機能的に同等である方法は、本開示の範囲内である。実際に、本明細書に記載されるものに加えて、本開示の様々な修飾が、前述の説明、添付の図面及び以下の実施例から当業者に容易に明らかになるであろう。全てのそのような修飾は、添付の特許請求の範囲内に入る。

本開示に係る抗体のヘマグルチニンへの結合
（ｉ）配列番号１～６に記載のＣＤＲ配列、並びに（ｉｉ）重鎖定常領域における３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含む本開示による抗体を設計し、作製した。より具体的には、抗体は、（ｉ）配列番号７に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び配列番号８に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列；並びに（ｉｉ）重鎖定常領域における３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含む。さらにより具体的には、抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。当該抗体を本明細書では「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」という。特に、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」の定常領域は、いかなる他の変異（Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ以外）を含まない。
これは、その重鎖定常領域において、３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅに加えて、２つの変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓも含むという点においてのみ、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」とは異なる。したがって、この抗体は、配列番号１３に示されるアミノ酸を有する重鎖及び配列番号１０に示されるアミノ酸を有する軽鎖を有し、本明細書において「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」と称される。
比較のために、重鎖定常領域に３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含有しないという点でのみ「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」と異なる「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」を使用した。したがって、比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」は、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。

さらに、２つの変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含むという点でのみ「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」と異なる抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」も比較のために使用した。「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」と同様に、「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、重鎖定常領域に３つの変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅを含まない。したがって、比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。

抗体を、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）に結合するそれらの能力について試験した。この目的のために、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」をインビトロＥＬＩＳＡアッセイで試験した。簡潔に述べると、ハーフエリア（０．１６ ｃｍ ２／ウェル）９６ウェルプレートを、２μｇ／ｍｌの２５μｌ／ウェルのＨＡ抗原（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを、自動洗浄機を用いて２２０μｌ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで１回洗浄した。ブロッキング溶液（１００μｌ／ウェル）を添加し、プレートを室温（ＲＴ）で２時間さらにインキュベートした。ブロッキング溶液を除去し、ブロッキング緩衝液中の２５μｌ／ウェルのｍＡｂ連続１：３希釈物（２～０．１μｇ／ｍｌの濃度範囲；二連で実施）を分注し、プレートを室温（ＲＴ）で１時間インキュベートした。次いで、プレートをＰＢＳ－Ｔ（２２０μｌ／ウェル）で４回洗浄した。ＡＰ二次抗体試薬（０．１６μｇ／ｍｌ、ブロッキング緩衝液中）を添加し、室温で４５分間さらにインキュベートした。ＰＢＳ－Ｔで４回洗浄した後、４０μｌ／ウェルのｐ－ＮＰＰ ＥＬＩＳＡ基質溶液を各ウェルに分注し、プレートを室温で１５分間展開した。ＧｒａｐＨＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおけるｌｏｇ（アゴニスト）対応答の非線形回帰を用いて、ＥＣ５０値を計算した。
結果を図１に示す。全ての試験した抗体、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」、「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、ＨＡ抗原に対して同等の結合を示す。したがって、Ｆｃ修飾は抗体の結合能力を損なわない。

本開示による抗体によるインフルエンザウイルスの中和
次に、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」のインフルエンザウイルス中和能力を、インビトロ中和アッセイで試験した。この目的のために、Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＣＤＫ）細胞を９６ウェルプレート（平底）に３０，０００細胞／ウェルで播種した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。２４時間後、６０μｌの感染培地中の２×ｍＡｂ溶液を、１：２の７点連続希釈を用いて４通りに調製した（開始点：ウェル中の最終濃度１００μｇ／ｍｌ）。インフルエンザウイルスＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／Aichi／２／６８（Ｈ３Ｎ２）のウイルス溶液を、６０μｌ中１２０ ＴＣＩＤ５０の濃度で感染培地中で調製し、ＭＥＭ中で１：１にさらに希釈するか、又はｍＡｂ希釈物と１：１に混合し、３３℃で１時間インキュベートした。細胞を、サプリメントを含まない２００μｌ／ウェルのＭＥＭを用いて２回洗浄し、続いて、感染培地中のｍＡｂ／ウイルスミックス（１００ ＴＣＩＤ ５０／ウェル）を添加し、３３℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。１００μｌ／ウェルの感染培地を添加した後、細胞を３３℃、５％ＣＯ２で７２時間さらにインキュベートした。各ウイルス株について中和アッセイで使用したインプットウイルスの実際のＴＣＩＤ５０を確認するために、ＴＣＩＤ５０ウイルス力価の定量化を並行して行った。このアッセイのために、上記のように調製したウイルス溶液を感染培地（ｍＡｂ溶液を置き換える）と１：１で混合し、感染培地中で２倍連続希釈した。１００ｍｌを４通りのウェルに添加し、マイクロ中和アッセイと並行して３３℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、１００μｌをＭＤＣＫ細胞に添加した。得られた力価を、「Ｋａｒｂｅｒ法」（Ｓｐｅａｒｍａｎ－Ｋａｒｂｅｒ： Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＭＡ， Ｒｕｓｓｏ ＲＣ，Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ＲＶ（１９７７）Ｔｒｉｍｍｅｄ Ｓｐｅａｒｍａｎ－Ｋａｒｂｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １１：７１４－７１９）を用いてＴＣＩＤ５０によって決定し、陽性試料は、細胞単独の平均値を超える＞１０標準偏差を示すものとして定義される。感染後３日目に、２０μＭのｍＵＮＡＮＡ（４－ＭＵＮＡＮＡ（２－（４－メチルウンベリフェリル）－α－Ｄ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム水和物（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）＃６９５８７）溶液をｍＵＮＡＮＡ緩衝液中で調製し、５０μｌ／ウェルを黒色９６ウェルプレートに分注した。５０μｌの中和又はウイルス単独の滴定上清をプレートに移し、３７℃で６０分間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルの０．２ Ｍグリシン／５０％ＥｔＯＨ、ｐＨ１０．７で反応を停止させた。蛍光を、蛍光光度計（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて４６０ ｎｍで定量した。ウイルス中和のパーセントを以下の式に従って計算した。

（式中、ｆｘ＝試料蛍光シグナル（細胞＋ウイルス＋ｍＡｂ）；ｆｍｉｎ＝最小蛍光シグナル（細胞のみ、ウイルスなし）；ｆｍａｘ＝最大蛍光シグナル（細胞＋ウイルスのみ））。
結果を図２に示し、（Ａ）Ｈ１Ｎ１株Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９及び（Ｂ）Ｈ３Ｎ２株Ａ／Aichi／２／６８を中和した。試験した全ての抗体、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」、「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、同等の活性で両方のインフルエンザウイルスを中和することができた。したがって、Ｆｃ修飾は抗体の中和能力を損なわない。

ヒトＦｃへの抗体の結合g受容体
抗体に関して、抗体のＦｃ領域と免疫細胞上のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲｓ；ＦｃガンマＲｓ；ＦｃｇＲ）との、又は補体との相互作用によって媒介されるＦｃ依存性作用機序は、抗体の全体的な効力に重要な寄与をし得る。ＦｃγＲ依存性機構は、ＦｃγＲへの結合を測定することによってインビトロで、並びに抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、又は抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を実証するように設計された抗体依存性細胞傷害アッセイにおいて評価することができる（Ｄｉｌｉｌｌｏ，Ｄ．Ｊ．，Ｔａｎ，Ｇ．Ｓ．，Ｐａｌｅｓｅ，Ｐ．，＆Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．（２０１４）．Ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｓｔａｌｋ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅ ＦｃγＲ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２０（２），１４３－１５１；Ｈｅｎｒｙ Ｄｕｎａｎｄ，Ｃ．Ｊ．，Ｌｅｏｎ，Ｐ．Ｅ．，Ｈｕａｎｇ，Ｍ．，Ｃｈｏｉ，Ａ．，Ｃｈｒｏｍｉｋｏｖａ，Ｖ．，Ｈｏ，Ｉ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ｂｏｔｈ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｄ Ｎｏｎ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ｈ７Ｎ９ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖａｃｃｉｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｃｏｎｆｅｒ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ Ｍｉｃｒｏｂｅ，１９（６），８００－８１３；Ｋａｌｌｅｗａａｒｄ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｏｒｔｉ，Ｄ．，Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｊ．，Ｎｅｕ，Ｕ．，ＭｃＡｕｌｉｆｆｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ Ａｌｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ．Ｃｅｌｌ，１６６（３），５９６－６０８）。

本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって、ヒトＦｃγＲの完全なセット（ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ１５８及びＦ１５８対立遺伝子、ＦｃγＲＩＩａ Ｈ １３１及びＲ１３１対立遺伝子並びにＦｃγＲＩＩｂ）へのそれらの結合能力について並べて比較した。簡潔に述べると、２μｇ／ｍｌのＨｉｓタグ付きヒトＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩａ対立遺伝子Ｈ１３１、ＦｃｇＲＩＩａ対立遺伝子Ｒ１３１、ＦｃｇＲＩＩＩａ対立遺伝子Ｆ１５８、ＦｃｇＲＩＩＩａ対立遺伝子Ｖ１５８、及びＦｃｇＲＩＩｂ）を抗ペンタＨｉｓセンサー上に６分間捕捉した。次いで、ＦｃｇＲをロードしたセンサーを、１μｇ／ｍｌのａｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント特異的（Ｆａｂフラグメントを介して抗体を架橋するため）の存在下で２μｇ／ｍｌの各ｍＡｂを含有する動態緩衝液（ｐＨ７．１）の溶液に４分間曝露し、続いて同じ緩衝液中でさらに４分間解離工程を行った（プロットの右部分）。Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をｆｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて干渉パターンの変化としてリアルタイムで測定した。
結果を図３に示す。「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」と比較して、「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」とＦｃｇＲとの会合の変化は観察されなかった。したがって、「ＭＬＮＳ」変異は、ＦｃｇＲとの会合に影響を及ぼさなかった。対照的に、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」は、ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ１５８及びＦ１５８対立遺伝子、並びにＦｃγＲＩＩａ Ｈ １３１及びＲ１３１対立遺伝子への結合の増強、並びにＦｃγＲＩＩｂへの結合の低減を示した。これらの結果は、本開示の抗体が、ＦｃγＲ対立遺伝子に依存しないＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩａへの増強された結合を示すことを示す。対照的に、本開示の抗体の阻害性ＦｃγＲＩＩｂへの結合は減少する。

補体（Ｃ１ｑ）への抗体の結合
次に、本開示の「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び比較の「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」のヒト補体タンパクＣ１ｑへの結合を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって評価した。簡潔に述べると、抗ヒトＦａｂ（ＣＨ １特異的）センサーを用いて、Ｆａｂ断片を介してｍＡｂの完全ＩｇＧ１を１０μｇ／ｍｌで１０分間捕捉した。次いで、ＩｇＧをロードしたセンサーを、３μｇ／ｍｌの精製ヒトＣ１ｑを含有する動態緩衝液（ｐＨ７．１）の溶液に４分間曝露し（プロットの左部分）、続いて同じ緩衝液中でさらに４分間の解離工程を行った（プロットの右部分）。Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をｆｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて干渉パターンの変化としてリアルタイムで測定した。
結果を図４に示す。比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」はヒト補体タンパク質Ｃ１ｑに結合するが、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」では補体への結合能が消失している。

Ｆｃの活性化に対する抗体の効果g受容体（ＡＤＣＰ及びＡＤＣＣ）
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）は、ウイルスを認識及び中和するように設計された治療用抗体の重要な作用機序である。ＡＤＣＣは主に、ＮＫ細胞上に発現されるＦｃγＲＩＩＩａによって媒介されるが、ＦｃγＲＩＩａはＡＤＣＰに関与する。
Ｆｃの活性化を調査すること。g本開示の抗体によるＲ、並びに本開示の抗体がＡＤＣＰ及びＡＤＣＣを促進するかどうかについて、細胞ベースのレポーターバイオアッセイを使用した。これらのアッセイは、ヒトＦｃγＲの活性化を反映するためにＮＦＡＴ媒介ルシフェラーゼレポーターで操作されたＪｕｒｋａｔ細胞を利用する。
ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＣを評価するために、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」を、ＡＤＣＣアッセイ緩衝液中で０．３μｇ／ｍｌから０．００５μｇ／ｍｌまで３倍連続希釈した。標的細胞（Ａ５４９－Ｈ１）を白色平底９６ウェルプレートに２５μｌ中１２．５×１０３細胞／ウェルで添加し、次いで連続希釈した抗体を各ウェルに添加し（ウェル当たり２５μｌ）、抗体／細胞混合物を室温で１０分間インキュベートした。ＡＤＣＣバイオアッセイのためのエフェクター細胞を解凍し、２５μｌ中７．５×１０４／ウェルの細胞密度で添加し、６：１のエフェクター対標的比を得る。抗体非依存性活性化（標的細胞及びエフェクター細胞を含有するが、抗体を含有しない）及びプレートの自然発光（ＡＤＣＣアッセイ緩衝液のみを含有するウェル）を測定するために使用した対照ウェルも含めた。プレートを５％ＣＯ２、３７℃で２０時間インキュベートした。このバイオアッセイにおけるヒトＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８又はＦ１５８変異体）の活性化は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦＡＴ媒介性発現をもたらす。したがって、発光は、製造業者の指示に従ってＢｉｏ－Ｇｌｏ－ＴＭルシフェラーゼアッセイ試薬を用いてルミノメーターで測定される。データ（すなわち、特異的ＦｃｇＲＩＩＩａ活性化）は、以下の式：（ｍＡｂの濃度ｘにおけるＲＬＵ－バックグラウンドのＲＬＵ）を適用することによって、バックグラウンドに対する相対発光単位（ＲＬＵ）の平均として表される。
結果を図５に示す。比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、同様のＡＤＣＣ（対立遺伝子から独立したＦｃγＲＩＩＩａの同様の機能的活性化）を促進するが、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」は、ＦｃγＲＩＩＩａ（両方の対立遺伝子）の活性化の増強、すなわちＡＤＣＣの増強を示す。
ＦｃγＲＩＩＩａ媒介性ＡＤＣＰを評価するために、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」を、ＡＤＣＰアッセイ緩衝液中で５．０μｇ／ｍｌから０．００８μｇ／ｍｌまで４倍連続希釈した。標的細胞（Ａ５４９－Ｈ１）を白色平底９６ウェルプレートに２５μｌ中１０．０×１０３細胞／ウェルで添加し、次いで連続希釈した抗体を各ウェルに添加し（ウェル当たり２５μｌ）、抗体／細胞混合物を室温で１０分間インキュベートした。ＡＤＣＰバイオアッセイのためのエフェクター細胞を解凍し、２５μｌ中５０．０×１０４／ウェルの細胞密度で添加し、５：１のエフェクター対標的比を得る。抗体非依存性活性化（標的細胞及びエフェクター細胞を含有するが、抗体を含有しない）及びプレートの自然発光（ＡＤＣＰアッセイ緩衝液のみを含有するウェル）を測定するために使用した対照ウェルも含めた。プレートを５％ＣＯ２、３７℃で２０時間インキュベートした。このバイオアッセイにおけるヒトＦｃγＲＩＩａ（Ｈ１３１変異体）の活性化は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦＡＴ媒介性発現をもたらす。したがって、発光は、製造業者の指示に従ってＢｉｏ－Ｇｌｏ－ＴＭルシフェラーゼアッセイ試薬を用いてルミノメーターで測定される。データ（すなわち、特異的ＦｃｇＲＩＩａ活性化）は、以下の式：（ｍＡｂの濃度ｘにおけるＲＬＵ－バックグラウンドのＲＬＵ）を適用することによって、バックグラウンドに対する相対発光単位（ＲＬＵ）の平均として表される。
結果を図６に示す。ＦｃγＲＩＩＩａ媒介ＡＤＣＣと同様に、比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」は、同様のＡＤＣＰ（ＦｃγＲＩＩａの同様の機能的活性化）を促進する。比較すると、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」は、ＦｃγＲＩＩａの活性化の増強、すなわちＡＤＣＰの増強を示す。

ＡＤＣＣに対する抗体の効果
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性も、ホモ接合性低（Ｆ１５８）親和性ＦｃγＲＩＩＩａを発現するために予め遺伝子型決定された１人のドナーのヒト末梢血単核細胞から単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を用いて測定した。単離されたＮＫ細胞を用いて、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」への曝露時のＡ５４９－Ｈ１細胞の死滅を測定した。
この目的のために、ヒトＮＫ細胞を全血から調製した。ＮＫ細胞を、ＭＡＣＳｘｐｒｅｓｓ ＮＫ単離キットを製造業者の指示に従って用いて、全ＥＤＴＡ血液から新たに単離した。簡単に説明すると、抗凝固処理した血液を５０ｍｌチューブ中で１５ｍｌのＮＫ単離カクテルと混合し、約１２回転／分の回転装置を用いて室温で５分間インキュベートする。次いで、チューブをＭＡＣＳｘｐｒｅｓｓ Ｓｅｐａｒａｔｏｒの磁場中に１５分間置く。磁気的に標識された細胞はチューブの壁に付着し、凝集した赤血球は底に沈降する。次いで、チューブがまだＭＡＣＳｘｐｒｅｓｓ Ｓｅｐａｒａｔｏｒの内側にある間に、標的ＮＫ細胞を上清から回収する。ＮＫ細胞を遠心分離し、蒸留水で処理して残留赤血球を除去し、再び遠心分離し、最後にＡＩＭ－Ｖ培地に再懸濁する。
本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」を、ＡＩＭ－Ｖ培地中で１μｇ／ｍｌから０．００１μｇ／ｍｌまで１０倍連続希釈した。標的細胞（Ａ５４９－Ｈ１）を丸底３８４ウェルプレートに２３μｌ中７．５×１０３細胞／ウェルで添加し、次いで連続希釈した抗体を各ウェルに添加し（ウェル当たり２３μｌ）、抗体／細胞混合物を室温で１０分間インキュベートした。インキュベーション後、ヒトＮＫ細胞を２３μｌ中４．５×１０４／ウェルの細胞密度で添加し、６：１のエフェクター対標的比を得た。最大溶解（２３μｌの３％Ｔｒｉｔｏｎ ｘ－１００と共に標的細胞を含有する）及び自然溶解（抗体なしで標的細胞及びエフェクター細胞を含有する）を測定するために使用された対照ウェルも含めた。プレートを５％ＣＯ２、３７℃で４時間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＬＤＨ検出キットを用いて乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出を測定することによって細胞死を決定した。簡単に説明すると、プレートを４００×ｇで４分間遠心分離し、３５μｌの上清をフラット３８４ウェルプレートに移した。ＬＤＨ試薬を調製し、３５μｌを各ウェルに添加した。速度論的プロトコルを用いて、４９０ ｎｍ及び６５０ ｎｍでの吸光度を２分毎に１回、８分間測定した。パーセント特異的溶解を、以下の式：（特異的放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）×１００を適用することによって決定した。
結果を図７に示す。データは、比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」の存在下で、同様の用量依存的な細胞死（殺傷）を示している。比較すると、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」は、増加した用量依存的な細胞死を示した。

本開示の抗体における「ＧＡＡＬＩＥ」変異は、インビトロでの半減期増加Ｆｃ修飾の効果を損なわない
さらなる半減期延長Ｆｃ変異、すなわち「ＭＬＮＳ」に対する本開示の抗体の「ＧＡＡＬＩＥ」変異の効果（Ｚａｌｅｖｓｋｙ Ｊ， Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ ＡＫ，Ｈｏｒｔｏｎ ＨＭ， ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；２８（２）：１５７－１５９）を調査した。この目的のために、酸性環境におけるヒトＦｃＲｎへの試験抗体の結合を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって評価した。エンドソーム区画の酸性環境におけるＦｃＲｎ結合の増加は、循環への抗体の再シャトリングを増加させ、それによってインビボでの半減期の増加をもたらし得る。
簡潔に述べると、本開示の抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」並びに比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」のヒトＦｃＲｎへの結合を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６装置（バイオレイヤー干渉法、ＢＬＩ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で測定した。抗ヒトＦａｂ－ＣＨ１でコーティングされたバイオセンサーを、室温で１０分間、動態緩衝液中で予め水和した。次いで、抗体ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを各々、ｐＨ７．４の動態緩衝液中１μｇ／ｍｌでバイオセンサー上に３０分間ロードした。ベースラインを、ｐＨ＝６．０の動態緩衝液中で４分間測定した。次いで、抗体をロードしたセンサーを、ｐＨ＝６．０の動態緩衝液中の１μｇ／ｍｌのヒトＦｃＲｎの溶液に７分間曝露して、異なる環境におけるＦｃＲｎ ｍＡｂの会合（オンレート）を測定した。次いで、同じｐＨの動態緩衝液中でさらに５分間、解離を測定した（オフ速度）。全ての工程は、３０℃で１０００ ｒｐｍで撹拌しながら行った。会合及び解離プロファイルを、干渉パターンの変化としてリアルタイムで測定した。
結果を図８に示す。「ＭＬＮＳ」－Ｆｃの存在と一致して、抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」は、酸性ｐＨ６．０において「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」と比較してヒトＦｃＲｎに対する結合親和性の増加を示した。酸性環境におけるこの増加した結合は、エンドソーム区画の環境を模倣し、細胞外区画への抗体のシャトリングを媒介すると予想される（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＢＬ，Ｂａｄｉｚａｄｅｇａｎ Ｋ，Ｗｕ Ｚ，Ａｈｏｕｓｅ ＪＣ，Ｚｈｕ Ｘ，Ｓｉｍｉｓｔｅｒ ＮＥ，Ｂｌｕｍｂｅｒｇ ＲＳ，Ｌｅｎｃｅｒ ＷＩ．Ｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ＦｃＲｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＩｇＧ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ａ ｐｏｌａｒｉｚｅｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９９ Ｏｃｔ；１０４（７）：９０３－１１）、したがって、これらのｍＡｂをリソソーム分解から救出し、それによってそれらの半減期を増加させる。対照的に、半減期延長Ｆｃ変異を含まない抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」及び「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ」は、酸性ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに弱く結合しただけであった。注目すべきことに、「ＧＡＡＬＩＥ」変異の存在は、「ＭＬＮＳ」変異によって誘導されるｈｕＦｃＲｎへの増強された結合を変化させなかった。

本開示の抗体における「ＧＡＡＬＩＥ」変異は、インビボでの各々のＦｃ修飾の半減期増加効果を損なわない（例えば、インビトロでの各々のＦｃ修飾の半減期増加効果）
本開示の「ＧＡＡＬＩＥ」変異がインビボでさらなる半減期延長Ｆｃ変異に影響を及ぼすかどうかを調査するために、「ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」（「ＧＡＡＬＩＥ」及び「ＭＬＮＳ」変異を含む）、「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」（「ＭＬＮＳ」変異のみを含む）及び「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」（Ｆｃ修飾なし）を比較した。
抗体を、雌カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に６０分間の注入を介して５ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内投与した。投与後１及び６時間（ｈ）、並びに１、４、７、２１、３５、及び５６日目に、血液を採取し、薬物動態及び免疫原性試験のために血漿に処理した。投与後８６日目及び１１３日目に、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳを受けた群からの２匹の動物の血を採取し、抗体のインビボ統合性を評価するために試験した。
カニクイザル血漿中の抗体ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌのＨｉｓＴａｇ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ＃１１０８５－Ｖ０８Ｈ）を有するインフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９）ヘマグルチニン（ＨＡ）タンパク質抗原（ＩＡＶ－ＨＡ）で、４℃で一晩コーティングした。次いで、試料及び標準を、洗浄及びブロッキングしたプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰコンジュゲート、続いてＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢ基質を添加してプレートを発色させ、ＨＣｌを添加して反応を停止させることによって、検出を達成した。吸光度（光学密度、ＯＤ）は、分光光度計を用いて４５０ ｎｍで測定した（定量範囲：１～４．５ｎｇ／ｍｌ）。

カニクイザル血漿中の抗体の濃度を決定するために、ＥＬＩＳＡデータからのＯＤ値を、Ｇｅｎ５ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ）において濃度に対してプロットした。可変勾配モデル、４つのパラメータ、及び等式：Ｙ＝（Ａ－Ｄ）／（１＋（Ｘ／Ｃ）＾Ｂ）＋Ｄ）を用いて、非線形曲線当てはめを適用した。試料希釈物のＯＤ値は、標準曲線の予測可能なアッセイ範囲内にあった。－曲線の上側、中間、又は下側範囲における品質管理試料によるセットアップ実験において決定されるように－を補間して試料を定量化した。次いで、抗体の血漿中濃度を、試料の最終希釈を考慮して決定した。試料希釈の２つ以上の値が標準曲線の線形範囲内に入る場合、これらの値の平均を使用した。Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて、グラフ化及び統計分析（線形回帰又は外れ値分析）を行った。抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答を発生する動物を除外した。
結果を図９に示す。図９は、カニクイザルへの静脈内注入後の抗体ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの血漿中濃度を示す。投与後５６日までに収集されたカニクイザル血漿試料の分析は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳの両方が、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して延長されたインビボ半減期（ｔ１／２）を有することを実証した。全体として、クリアランスは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳについて同様であった。

インビボでは、抗体薬物の生物学的活性を変化させ得る、抗体の翻訳後修飾が起こり得る。抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳのインビボ整合性を試験するために、薬物動態（ＰＫ）測定を投与後８６日目及び１１３日目まで延長した。投与後１、２１、５６、８６、１１３日目に、ヒトｍＡｂを、上記のＥＬＩＳＡ法並びに血漿中の薬物の総量を測定する他のＥＬＩＳＡ法を用いて定量した（ｉ）。カニクイザル血漿中の総薬物（抗体）を測定するために、ＥＬＩＳＡプレートをマウス抗ヒトＩｇＧ（ヒトＣＨ２ドメイン特異的）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄及びブロッキングした後、標準物質及び試料を添加し、室温で１時間インキュベートした。検出は、ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ、続いてＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢ基質を添加して反応を進行させ、これをＨＣｌを添加することによって停止させることによって達成し、吸光度を４５０ｎｍで測定した。
結果を図１０に示す。両方の定量方法は、カニクイザル血漿中の抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳの同様の濃度を各々もたらした。線形回帰分析により、抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳがインビボで１１３日まで完全であることがさらに確認された。

要約すると、これらのデータは、抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳがインビボで同様に増強された半減期を示すことを示す。したがって、本開示の抗体の「ＧＡＡＬＩＥ」変異は、半減期を増加させるＦｃ変異によって媒介される半減期の増加を損なわない。

本開示の抗体における「ＧＡＡＬＩＥ」変異は、補体依存性細胞傷害（複数可）の低減を媒介する
次に、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をＣＤＣアッセイにおいて調査した。

インフルエンザウイルス感染標的細胞の調製：
インフルエンザウイルス感染標的細胞を調製するために、ＭＤＣＫ細胞を、１０％ＦＢＳ、グルタミン、及び抗生物質を補充した５ｍｌのＭＥＭ中３．２×１０６細胞／フラスコでＴ２５フラスコに播種し、５％ＣＯ２とともに３７℃で一晩インキュベートした。細胞を、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１）に、５のＭＯＩで、フラスコあたり０．８ｍｌの総容量で、３７℃で１時間感染させた。ウイルス吸着後、１０％ＦＢＳ、グルタミン及び抗生物質を補充した４．２ｍｌのＭＥＭを加え、細胞を５％ＣＯ２と共に３７℃で２０時間インキュベートした。感染細胞をＰＢＳで洗浄し、０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡを用いたトリプシン消化により剥離し、回収した。感染細胞を４ｍｌのＡＩＭ－Ｖ培地で２回洗浄し、３５０×ｇで４分間遠心分離した。感染した生存細胞を、Ｎｅｕｂａｕｅｒチャンバーを用いて計数し、補体予備吸着のために１．０×１０^６細胞／ｍｌに調整するか、又は１．０×１０^６細胞／ウェルに調整し、標的細胞として用いるために３７℃で保存した。

補体の調製：
モルモット低毒性補体を１ｍｌの冷ＡＩＭ－Ｖ培地で再構成した。補体を感染ＭＤＣＫ細胞に予め吸着させて、ＭＤＣＫ細胞又はインフルエンザタンパク質に対するモルモット抗体を除去した。簡単に説明すると、１．０×１０^７個のペレット化した感染ＭＤＣＫ細胞を１ｍｌの再構成補体と混合し、氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、混合物を４００×ｇ、４℃で５分間遠心分離し、予め吸着させた補体を含有する上清を収集し、４ｍｌの冷ＡＩＭ－Ｖを添加して、培地溶液に対して１：６の補体を作製した。

補体媒介性死滅の決定：
ｍＡｂをＡＩＭ－Ｖ培地中で１００μｇ／ｍｌから０．００６μｇ／ｍｌまで４倍連続希釈した。感染した標的細胞を、５０μｌ中５．０×１０^４細胞／ウェルで、５０μｌの希釈ｍＡｂと共に平底９６ウェルプレートに添加し、混合物を室温で１０分間インキュベートした。インキュベーション後、ＡＩＭ－Ｖ培地で希釈した予め吸着させたモルモット補体５０μｌを各ウェルに添加した。最大溶解（５０μｌの２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００と共に標的細胞及び補体を含有する）及び自然溶解（標的細胞及び補体のみを含有する）を測定するために使用された対照ウェルも含めた。プレートを５％ＣＯ２、３７℃で３時間インキュベートした。細胞死は、製造業者の指示に従ってＬＤＨ検出キットを用いてＬＤＨ放出を測定することによって定量化した。簡単に説明すると、プレートを４００×ｇで５分間遠心分離し、５０μｌの上清を平底９６ウェルプレートに移した。ＬＤＨ試薬を調製し、各ウェルに５０μｌずつ添加した。速度論的プロトコルを用いて、４９０ｎｍ及び６５０ｎｍでの吸光度を８分間、１分に１回測定した。パーセント特異的溶解を、以下の式：（特異的放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）×１００を適用することによって決定した。
結果を図１１に示す。「ＧＡＡＬＩＥ」変異を有さない抗体とは対照的に、ＦｌｕＡＢ＿ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳは、補体依存性細胞傷害の顕著な減少を示す。従って、補体への結合が破壊されるだけでなく（実施例４に示されるように）、ＣＤＣ殺傷も破壊される。いかなる理論にも束縛されるものではないが、補体が免疫複合体上に沈着して病気の増強をもたらすことが知られているので、本明細書に示されるように、「ＧＡＡＬＩＥ」変異を有する抗体におけるＣＤＣ結合及び死滅の強力な低減は、病気の増強のリスクを有利に排除すると考えられる。

上述の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書で言及された、及び／又は出願データシートに列挙された米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願及び非特許刊行物のすべては、その全体が参照により本明細書に援用される。実施形態の態様は、さらなる実施形態を提供するために様々な特許、出願、及び刊行物の概念を用いる必要がある場合、修正することができる。
これら及び他の変更は、上記の詳細な説明に照らして実施形態に対して行うことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、用いられる用語は、特許請求の範囲を本明細書及び特許請求の範囲に開示されたある実施形態に限定するように解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる均等物の全範囲とともにすべての可能な実施形態を含むように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示によって限定されない。

Claims (37)

1. 各々配列番号１、配列番号２、及び配列番号３として表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖；各々配列番号４、配列番号５、及び配列番号６として表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖；並びに重鎖の定常領域にＧ２３６Ａ変異、Ａ３３０Ｌ変異、及びＩ３３２Ｅ変異を含む、抗体。
2. 重鎖の定常領域にはＳ２３９Ｄ変異が含まれない、請求項１に記載の抗体。
3. インフルエンザＡ型ウイルスのヘマグルチニンに結合する、請求項１又は２に記載の抗体。
4. 抗体は、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染を中和する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
5. 重鎖の定常領域に半減期増加変異を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
6. 重鎖の定常領域にＭ４２８Ｌ変異及びＮ４３４Ｓ変異を含む、請求項５に記載の抗体。
7. 抗体はヒト抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
8. 抗体はモノクローナル抗体である、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
9. 抗体は、ＩｇＧ型である、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体。
10. 抗体はＩｇＧ１型である、請求項９に記載の抗体。
11. 抗体の軽鎖はカッパ軽鎖である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
12. 配列番号７に対して少なくとも同一性が７０％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が７０％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
13. 配列番号７に対して少なくとも同一性が７５％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が７５％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
14. 配列番号７に対して少なくとも同一性が８０％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が８０％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
15. 配列番号７に対して少なくとも同一性が８５％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が８５％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
16. 配列番号７に対して少なくとも同一性が９０％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が９０％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体。
17. 配列番号７に対して少なくとも同一性が９５％であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８に対して少なくとも同一性が９５％であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体。
18. 前記抗体が、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、請求項１に記載のＣＤＲ配列は維持される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体。
19. Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ以外にさらなる変異を含まない、ＣＨ２領域を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体。
20. Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅ、並びに、場合によっては、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓに加えて、さらなる変異を含まないＦｃ領域を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
21. 配列番号９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
22. 配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体。
23. 配列番号９で表されるアミノ酸配列からなる重鎖、及び、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖がある、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体。
24. 配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなる重鎖、及び、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖がある、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体。
25. Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防又は治療で用いるための、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体。
26. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
27. ポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）を含み、前記ＲＮＡは、場合によっては、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む、請求項２６に記載の核酸分子。
28. 修飾ヌクレオシド、ｃａｐ－１構造、ｃａｐ－２構造、又はそれらのいかなる組み合わせを含む、請求項２６又は２７に記載の核酸分子。
29. ポリヌクレオチドは、シュードウリジン、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、２－チオウリジン、又はそれらのいかなる組み合わせを含む、請求項２８に記載の核酸分子。
30. シュードウリジンは、Ｎ１－メチルシュードウリジンを含む、請求項２９に記載の核酸分子。
31. 請求項２６～３０のいずれか１項に記載の核酸分子を含むベクター。
32. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体を発現するか、又は請求項３１に記載のベクターを含む細胞。
33. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３１に記載のベクター、又は請求項３２に記載の細胞、及び場合によっては、薬学的に許容される希釈剤又は担体を含む医薬組成物。
34. 担体分子に封入された請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項３１に記載のベクターを含む組成物であって、前記担体分子は、場合によっては、脂質、リポソーム、脂質由来送達ビヒクル、固体脂質ナノ粒子、油性懸濁液、サブミクロン脂質エマルジョン、脂質マイクロバブル、逆脂質ミセル、蝸牛リポソーム、脂質微小管、脂質マイクロシリンダー、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、又はナノスケールプラットフォームを含む、組成物。
35. インフルエンザＡウイルス感染の予防、治療又は減弱のための医薬の製造における、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３１に記載のベクター、請求項３２に記載の細胞、請求項３３に記載の医薬組成物、又は請求項３４に記載の組成物の使用。
36. Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防又は治療に用いるための、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３１に記載のベクター、請求項３２に記載の細胞、請求項３３に記載の医薬組成物、又は請求項３４に記載の組成物。
37. 治療有効量の請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項３１に記載のベクター、請求項３２に記載の細胞、請求項３３に記載の医薬組成物、又は請求項３４に記載の組成物を、それが必要な被験体に投与することを含む、インフルエンザＡ型ウイルス感染を減少させるか、又はインフルエンザＡ型ウイルス感染のリスクを低下させる、方法。