JP2024527606A - 抗ｃ－ｃモチーフケモカイン受容体８（ｃｃｒ８）抗体及び使用方法 - Google Patents

抗ｃ－ｃモチーフケモカイン受容体８（ｃｃｒ８）抗体及び使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、抗ＣＣＲ８抗体及び組成物並びにそれらの調製及び使用の方法を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月８日に出願された米国仮出願第６３／２５３，６７６号、及び２０２１年７月１４日に出願された米国仮出願第６３／２２１，７３４号の優先権を主張し、これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、優先権が主張される。
配列表
本出願には、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してｘｍｌフォーマットにて提出された配列表が含まれ、その全体が参照により本明細書に援用される。２０２２年７月１２日に作成された上記ｘｍｌコピーは、００Ｂ２０６．１２９０．ｘｍｌと命名される。
背景
転写因子Ｆｏｘｐ３を発現する制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、末梢免疫寛容を維持し、自己免疫を防止するために重要である。例えば、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２００８）１３３：７７５－７８７を参照されたい。Ｔｒｅｇ細胞はまた、固形がんの免疫浸潤物の主要成分を構成し、免疫抑制性腫瘍微小環境を確立し抗腫瘍免疫応答を減衰させることによって腫瘍の発生及び進行を促進する。例えば、Ｐｌｉｔａｓ ａｎｄ Ｒｕｄｅｎｓｋｙ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．（２０２０）４：４５９－４７７を参照されたい。Ｔｒｅｇ細胞はまた、免疫療法の有効性を妨げる。例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ ａｎｄ Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１４）２７：１－７を参照されたい。腫瘍浸潤リンパ球中のＴｒｅｇ細胞の割合の増加は、いくつかのがん適応症において、より不良な転帰と関連している。例えば、Ｆｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（２００７）１３２：２３２８－２３３９；Ｐｅｔｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ（２００６）１０７：２８６６－２８７２；Ｓｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ－Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１５）５：１５１７９（９ ｐａｇｅｓ）；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（２０１０）１３６：１５８５－１５９５；及びＴａｎａｋａ ａｎｄ Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１９）４９：１１４０－１１４６を参照されたい。
Ｔｒｅｇ細胞の枯渇又は阻害を対象としたいくつかの戦略は、抗腫瘍免疫を増強し、前臨床乳がん、黒色腫及び結腸がんモデルにおいて腫瘍増殖阻害をもたらすことが示されている。例えば、Ｂｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０１３）２４３５－２４４６；Ｋｌａｇｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１０）７０：７７８８－７７９９；及びＰａｓｔｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１４）７４：４２５８－４２６９を参照されたい。しかしながら、Ｔｒｅｇ細胞及びエフェクタＴ細胞（例えば、ＣＤ２５など）の両方で発現される表面受容体を標的とする戦略は、確立された腫瘍において、おそらく抗腫瘍免疫にとって重要なエフェクタＴ細胞の付随する枯渇のために、限られた有効性を示している。例えば、Ｏｎｉｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９９）５９：３１２８－３１３３を参照のこと。
ケモカイン受容体ＣＣＲ８は、７回膜貫通Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）であり、ヒト／マウスＣＣＬ１によって高親和性で連結され、腫瘍微小環境内のＴｒｅｇ細胞によって選択的かつ高発現されるが、末梢Ｔｒｅｇ細胞又はエフェクタＴ細胞にはほとんど存在しない。Ｔｒｅｇ細胞上のＣＣＲ８の高発現は、乳がん患者の進行した病期及び全生存率の低下に関連する。例えば、Ｐｌｉｔａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１６）４５：１１２２－１１３４を参照のこと。したがって、ＣＣＲ８は、がん処置におけるＴｒｅｇ細胞枯渇のための有望で、より安全な標的である。したがって、ＣＣＲ８を認識する薬剤、及びそのような薬剤を使用する方法が望ましい。
概要
本開示は、抗ＣＣＲ８抗体、組成物、並びにそれらを調製及び使用する方法を提供する。
実施形態１．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態２．ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、実施形態１に記載の前述の抗体。
実施形態３．配列番号１０６のアミノ酸残基２～６の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、実施形態１又は２に記載の前述の抗体。
実施形態４．（ａ）配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号４８～５２からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態５．配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、実施形態１～４のいずれか一項に記載の前述の抗体。
実施形態６．（ａ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態７．配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態８．ＶＬが、Ｖ４Ｍ突然変異、Ｐ４３Ａ突然変異、Ｆ４６Ｌ突然変異、Ｃ９０Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態９．ＶＨが、Ｇ４９Ｓ突然変異、Ｋ７１Ｒ突然変異、Ｓ７３Ｎ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態１０．配列番号５５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態１１．配列番号６０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態１２．配列番号１１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態１３．配列番号１１３の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態１４．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体を提供する。
実施形態１５．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体を提供する。
実施形態１６．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態１７．ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、実施形態１６に記載の前述の抗体。
実施形態１８．配列番号１０６のアミノ酸残基９１～１０４及び１７２～１９３の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、実施形態１６又は１７に記載の前述の抗体。
実施形態１９．（ａ）配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号２２～２５からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２０．配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、実施形態１６～１９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２１．（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態１６～２０のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２２．配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む、実施形態１６～２１のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２３．ＶＬがＹ２Ｉ突然変異を含む、実施形態１６～２２のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２４．ＶＨが、Ｓ７３Ｎ突然変異、Ｖ７８Ｌ突然変異、Ｔ７６Ｎ突然変異、Ｆ９１Ｙ突然変異、及びＰ１０５Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態１６～２３のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２５．配列番号５７の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２６．配列番号６１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２７．配列番号１１２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２８．配列番号１１４の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態２９．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体を提供する。
実施形態３０．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２４のＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体を提供する。
実施形態３１．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態３２．（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態３１に記載の前述の抗体。
実施形態３３．配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む、実施形態３１又は３２に記載の前述の抗体。
実施形態３４．配列番号１０１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１００の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態３１～３３のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態３５．配列番号１１５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１００の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態３１～３３のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態３６．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態３７．（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態３６に記載の前述の抗体。
実施形態３８．配列番号９７のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む、実施形態３６又は３７に記載の前述の抗体。
実施形態３９．配列番号１０３の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０２の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態４０．配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０２の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態４１．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態４２．（ａ）配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態４１に記載の前述の抗体。
実施形態４３．配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む、実施形態４１又は４２に記載の前述の抗体。
実施形態４４．配列番号１０５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０４の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態４１～４３のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態４５．配列番号１１７の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０４の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態４１～４４のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態４６．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態４７．配列番号１０６のアミノ酸残基２～６の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、実施形態４６に記載の前述の抗体。
実施形態４８．配列番号１０６のアミノ酸残基９１～１０４及び１７２～１９３の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、実施形態４６に記載の前述の抗体。
実施形態４９．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、マウスＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体を提供する。
実施形態５０．（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び（ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列からなる群から選択される配列を含む、実施形態４９に記載の前述の抗体。
実施形態５１．配列番号７０のＶＨ配列及び配列番号６９のＶＬ配列を含む、実施形態４９又は５０に記載の前述の抗体。
実施形態５２．配列番号７２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１の軽鎖アミノ酸配列を含む、実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態５３．ヒト抗体である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態５４．ヒト化抗体である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態５５．キメラ抗体である、実施形態１～５２のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態５６．ＣＣＲ８に結合する抗体断片である、実施形態１～５５のいずれかに記載の前述の抗体。
実施形態５７．完全長抗体である、実施形態１～５６のいずれかに記載の前述の抗体。
実施形態５８．完全長ＩｇＧ１抗体である、実施形態５７に記載の前述の抗体。
実施形態５９．配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態６０．配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態６１．約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１１Ｍの結合親和性（Ｋｄ）でＣＣＲ８に結合する、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の前述の抗体。
実施形態６２．ＣＣＲ８がヒトＣＣＲ８である、実施形態１～４８のいずれかに記載の前述の抗体。
実施形態６３．抗体がアフコシル化されている、実施形態１～６２のいずれかに記載の前述の抗体。
実施形態６４．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、実施形態１～６３のいずれかの前述の抗体をコードする単離された核酸を提供する。
実施形態６５．ある特定の非限定的な実施形態では、本願で開示された主題は、実施形態６４に記載の前述の核酸を含む宿主細胞を提供する。
実施形態６６．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、抗体の発現に適した条件下で実施形態６５の前述の宿主細胞を培養することを含む、ＣＣＲ８に結合する抗体を産生する方法を提供する。
実施形態６７．宿主細胞から抗体を回収することを更に含む、実施形態６６に記載の方法。
実施形態６８．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、実施形態６７の前述の方法によって産生される抗体を提供する。
実施形態６９．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、実施形態１～６３のいずれかの前述の抗体及び薬学的に許容され得る担体を含む医薬組成物を提供する。
実施形態７０．追加の治療剤を更に含む、実施形態６９に記載の前述の医薬組成物。
実施形態７１．医薬として使用するための実施形態１～６３のいずれか１つに記載の前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つに記載の前述の医薬組成物。
実施形態７２．がんの処置に使用するための実施形態１～６３のいずれか１つに記載の前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つに記載の前述の医薬組成物。
実施形態７３．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、がんを処置するための医薬の製造における、実施形態１～６３のいずれか１つの前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれかの前述の医薬組成物の使用を提供する。
実施形態７４．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、制御性Ｔ細胞を枯渇させるための医薬の製造における、実施形態１～６３のいずれか１つの前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれかの前述の医薬組成物の使用を提供する。
実施形態７５．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法であって、有効量の実施形態１～６３のいずれか１つの前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つの前述の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
実施形態７６．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、がんを有する対象において腫瘍微小環境中の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、腫瘍微小環境中の制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の実施形態１～６３のいずれか１つに記載の前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つに記載の前述の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法を提供する。
実施形態７７．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、がんを有する対象において腫瘍微小環境外の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、腫瘍微小環境外の制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の実施形態１～６３のいずれか１つに記載の前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つに記載の前述の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法を提供する。
実施形態７８．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、がん細胞集団から制御性Ｔ細胞を枯渇させるインビトロ方法であって、細胞集団を、細胞集団から制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な量で、実施形態１～６３のいずれか１つに記載の前述の抗体又は実施形態６９～７０のいずれか１つに記載の前述の医薬組成物と接触させることを含む、インビトロ方法を提供する。
実施形態７９．がんが、膀胱がん、芽細胞腫、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肉腫、皮膚がん、精巣がん及び子宮がんからなる群から選択される、実施形態７３～７８のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８０．がんの前記腫瘍微小環境中に存在する制御性Ｔ細胞が枯渇している、実施形態７４、７６、７８及び７９のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８１．がんの腫瘍微小環境外の制御性Ｔ細胞が枯渇している、実施形態７４、７７、７８及び７９のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８２．追加の治療剤を投与することを更に含む、実施形態７３～８１のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８３．追加の治療剤が抗がん剤である、実施形態８２に記載の前述の使用又は方法。
実施形態８４．抗がん剤が、微小管破壊剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アルキル化剤、ホルモン療法、キナーゼ阻害剤、受容体アンタゴニスト、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤、抗血管新生剤、免疫調節剤、細胞接着の阻害剤、細胞傷害性又は細胞分裂阻害剤、細胞アポトーシスの活性化剤、アポトーシス誘導物質に対する細胞の感受性を増加させる薬剤、サイトカイン、抗がんワクチン又は腫瘍溶解性ウイルス、トール様受容体（ＴＬＲ）剤、二重特異性抗体、細胞療法、及び免疫細胞エンゲージャからなる群から選択される、実施形態８３に記載の前述の使用又は方法。
実施形態８５．抗がん剤がＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである、実施形態８３又は８４に記載の前述の使用又は方法。
実施形態８６．ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストがアテゾリズマブである、実施形態８５に記載の前述の使用又は方法。
実施形態８７．対象がヒトである、実施形態７３～８５のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８８．対象がマウスである、実施形態７３～８５のいずれか１つに記載の前述の使用又は方法。
実施形態８９．特定の非限定的な実施形態では、本開示の主題は、疾患を処置するために、有効量の前述の実施形態４９～５２のいずれか１つのモノクローナル抗体をマウスに投与することを含む、マウスの疾患を処置する方法を提供する。
実施形態９０．マウスが異種移植片を含む、実施形態８９に記載の前述の方法。
実施形態９１．アフコシル化の割合が約８０％～約９５％である、実施形態６３に記載の前述の抗体。
実施形態９２．１日目に静脈内投与された単回の１０ｍｇ／ｋｇ用量後の平均クリアランスが、３５日間にわたって約３～約５ｍＬ／日／ｋｇである、実施形態１～１５及び４６～４８のいずれか１つに記載の前述の抗体。
図１は、ヒト結腸直腸がん解離腫瘍細胞（ＤＴＣ）（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓから入手）からのＴｒｅｇ細胞（Ｔｒｅｇ）に選択的に結合する抗ＣＣＲ８モノクローナル抗体（ｍＡｂ）のスクリーニングの結果を示す。ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ４－として定義される）（丸、）、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８－ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３－）として定義される）（四角、）、及びＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８－ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋として定義される）（三角形、▲）についての平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示す。５つの抗ＣＣＲ８ ｍＡｂクローンＡｂ１～Ａｂ５のうちの３つは、腫瘍内Ｔｒｅｇ細胞を特異的に染色し、従来のＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞を染色せず、ＣＣＲ８ ＭＦＩに基づいてランク付けした：ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１＞ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１＞ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１。 図２Ａ～２Ｂは、腫瘍浸潤ＣＣＲ８発現Ｔｒｅｇの枯渇をもたらすナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の提案された作用機序（図２Ａ）及びさらなる研究のために提案されたヒト／ｃｙｎｏ交差反応性抗ＣＣＲ８ ｍＡｂのＡＤＣＣ活性（図２Ｂ）を示す。ＥＣ５０値を、抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１について、それぞれ０．０２ｎＭ、０．０２ｎＭ及び０．０８ｎＭと決定した。 図３Ａ～３Ｄは、ヒト／ｃｙｎｏ交差反応性抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、並びにコンパレーター抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８抗体、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ））の、アゴニスト活性及びアンタゴニスト活性を示す。図３Ａに示されるように、ＣＣＲ８に対する既知のリガンドであるＣＣＬ１はアゴニスト活性を示すが、どの抗ＣＣＲ８試験ｍＡｂもアゴニスト効果を示さない。図３Ｂのデータは、抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１が、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１（２０ｎＭのリガンド）に対するアンタゴニスト（中和）活性を示すが、抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１が、試験した濃度でリガンド遮断活性を示さない（非中和）ことを示している。図３Ｃのデータは、コンパレーター抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８抗体、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂＬ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ））が、アゴニスト効果を示さないが、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１がアゴニスト効果を示すことを示している。図３Ｄのデータは、コンパレーター抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８抗体、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びマウス抗ヒトＢｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ））が、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１に対するアンタゴニスト（中和）活性を示すことを示している。リガンド遮断活性のＩＣ５０値は、実施例に提供されている。 図４Ａ～４Ｆは、ヒトＧＰＣＲ（ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８、ＣＸＣＲ４、ＡＣＫＲ２、及びＡＣＫＲ４）をコードするＮ末端ＦＬＡＧタグ化プラスミド、ｈＣＣＲ８構築物、又はｔｒａｎｓＩＴ Ｘ２（試薬：ＤＮＡ＝３：１）を用いたモック構築物を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対する、ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１（図４Ａ）、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１（図４Ｂ）、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１（図４Ｃ）、並びに市販の抗ＣＣＲ８ ｍＡｂマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（図４Ｄ）、及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）（図４Ｅ）、及びヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（図４Ｆ）の結合データを示す。各ＧＰＣＲの細胞表面発現は、抗ＦＬＡＧ抗体対照（５ｕｇ／ｍＬ）による染色で確認した。ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１は、ｈＣＣＲ８を含む細胞のみを染色し、ｈＣＣＲ８に対するその特異性が確認された。ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１は、他の複数のＧＰＣＲを染色し、特異性がないことを示した。最も優れたＡＤＣＣ活性を示したＣＣＲ８選択的ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１ ｍＡｂ（図２に記載）を、さらなる研究のために進めた。 図５Ａ～５Ｄは、研究したウサギ（ｒｂ．Ａｂ４）及びヒト化Ａｂ４（Ｌ１～Ｌ４及びＨ１～Ｈ１２）ＣＣＲ８ ｍＡｂの配列の軽鎖可変領域（図５Ａ）及び重鎖可変領域（図５Ｂ～５Ｄ）のアラインメントを示す。軽鎖（Ｌ３）上のＹ２及び重鎖（Ｈ１２）上のＳ７３、Ｔ７６、Ｖ７８、Ｆ９１及びＰ１０５は、バリアント抗体の結合評価に基づいて重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。ＣＤＲ、可変領域、定常領域及び完全長配列は、実施例に提供されている。 図６Ａ～６Ｄは、研究したウサギ（ｒｂ．Ａｂ５）及びヒト化Ａｂ５（Ｌ１～Ｌ５及びＨ１～Ｈ１３）ＣＣＲ８ ｍＡｂの配列の軽鎖可変領域（図６Ａ）及び重鎖可変領域（図６Ｂ～６Ｄ）のアラインメントを示す。ＣＤＲ Ｌ３のＣ９０Ｑ突然変異を導入して、製造中の原因となり得る不対システインを除去した。軽鎖６（Ｌ１）上のＶ４、Ｐ４３及びＦ４６並びに重鎖（Ｈ１３）上のＧ４９、Ｋ７１及びＳ７３は、バリアント抗体の結合評価に基づいて重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。ＣＤＲ、可変領域、定常領域及び完全長配列は、実施例に提供されている。 図７Ａ～７Ｄは、放射性標識ＩｇＧ及びヒトＣＣＲ８又はカニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＣＣＲ８を安定に発現するＣＨＯ細胞株を用いた、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３ ｍＡｂの細胞ベースの親和性測定の結果を示している。このデータは、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１ｍＡｂが、ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に対して同様の親和性を有し、望ましい交差反応性を示すことを示している（図７Ａを図７Ｂと比較し、図７Ｃを図７Ｄと比較する）。これらの研究からのＫｄ（ｎＭ）親和性データを実施例に提供する。 図８Ａ～８Ｂは、硫酸化ＧＰＣＲのパネルに対するｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（図８Ａ）及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（図８Ｂ）ｍＡｂの結合データを示し、図４Ｂ及び図４Ｃで提供されたＡｂ４及びＡｂ５のデータと同様に、これらのＡｂ４及びＡｂ５バリアントがＣＣＲ８に対して選択性を示すことを再確認している。ｈＣＣＲ８のＮ末端ＦＬＡＧタグ（これはＡｂ５のＮ末端エピトープへの結合に影響する；図１６を参照）への結合が弱いため、Ｃ末端ＦＬＡＧを有するＣＣＲ８構築物も図４Ｃに示した。 図９Ａ～９Ｂは、Ｃａ２＋流入アッセイ（図９Ａ）及びＣＣＲ８ ＣＣＬ１リガンド結合（図９Ｂ）によって決定されるＣＣＲ８活性化に対する抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１の効果を示す。図３Ａのデータと同様に、図９Ａは、Ａｂ４抗ＣＣＲ８ ｍＡｂバリアントもＡｂ５抗ＣＣＲ８ ｍＡｂバリアントも、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１の非存在下でアゴニスト効果を示さないことを再確認する。図３Ｂのデータと同様に、図９Ｂは、Ａｂ４バリアントが、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１（２０ｎＭのリガンド）に対するアンタゴニスト効果を示すのに対して、Ａｂ５バリアントは試験した濃度でリガンド遮断活性を示さないことを再確認する。リガンド遮断活性のＩＣ５０値は、実施例に提供されている。 図１０Ａ～１０Ｅは、チロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ）１及びチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ）２を有する（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ）及び有さない（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ）ＣＣＲ８＋ＨＥＫ２９３細胞に対する、ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ ＣＣＲ８ ｍＡｂ及び市販抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と比較した、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１の染色の違いを示す。ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（図１０Ａ）及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（図１０Ｂ）は、両細胞株（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ及びｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ）に対して同様の結合／染色を示し、チロシン硫酸化とは無関係にＣＣＲ８と結合すること（「硫酸化非依存性」）を示している。対照的に、ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ ＣＣＲ８抗体（図１０Ｃ）及び市販抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（図１０Ｄ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）（図１０Ｅ）は、ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ細胞に結合することができず、これらは結合のためにＣＣＲ８のチロシン硫酸化を必要とすることを示し、したがって「硫酸化依存性」と考えられる。 図１１Ａ～１１Ｄは、エフェクタ細胞としてＮＫ－９２ Ｆ１５８（図１１Ａ）及びＮＫ－９２ Ｖ１５８（図１１Ｂ）を用いて、ｈＣＣＲ８を安定に発現するＣＨＯ細胞に対して、アフコシル化ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３が、それらのフコシル化ＣＣＲ８対応物であるｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３と比較して、ＡＤＣＣ活性の増強（＞１０倍改善）を示しており、ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８抗体と比較してＡＤＣＣ活性が１０～２０倍向上している（図１１Ｃ）。市販の抗ＣＣＲ８ ｍＡｂマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、使用されるアッセイが主にヒトＦｃ領域を含む抗体に関連するので、ＡＤＣＣ活性を（予想通り）示さなかった（図１１Ｃ）。図１１Ｄは、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）が、マウスＦｃ領域及びヒト抗ＣＣＲ８活性を含む抗体に特異的なアッセイを使用してＡＤＣＣ活性を有することを示す。活性データも実施例に提供する。 図１２Ａ～１２Ｄは、アフコシル化、フコシル化（ｈＩｇＧ１）及びアフコシル化アイソタイプ対照ｍＡｂ（「ｇＤ．ａｆｕｃ」）並びにエフェクタ細胞としての初代ＮＫ細胞と共にインキュベートした場合の、ＣＣＲ８発現を誘導するためにＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに移入した後に回収された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来の従来のヒトＣＤ４ Ｔ細胞と比較したヒトＴｒｅｇ細胞に対する選択的ＡＤＣＣ活性を示す。回収されたＴｒｅｇ細胞対回収されたＣＤ８細胞（Ｔｒｅｇ／ＣＤ８）又は従来のＣＤ４ Ｔ細胞対回収されたＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４ｃｏｎｖ／ＣＤ８）の比を計算することによって、Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣ活性を測定した。ＣＣＲ８ ｍＡｂｓ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１２Ｂ）と比較して、Ｔｒｅｇ細胞（図１２Ａ）に対するＡＤＣＣ活性を選択的に媒介し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を示した。同様に、ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１２Ｄ）と比較して、Ｔｒｅｇ細胞（図１２Ｃ）に対するＡＤＣＣ活性を選択的に媒介し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を示した。 図１３Ａ～１３Ｄは、ヒト解離腎細胞癌腫（ＲＣＣ）細胞を、アフコシル化、フコシル化（ｈＩｇＧ１）及びアフコシル化アイソタイプ対照ｍＡｂ（「ｇＤ．ａｆｕｃ」）並びにエフェクタ細胞としての初代ＮＫ細胞と共にインキュベートした場合の、従来のＣＤ４ Ｔ細胞と比較したＴｒｅｇ細胞に対する選択的ＡＤＣＣ活性を示す。回収されたＴｒｅｇ細胞対回収されたＣＤ８細胞（Ｔｒｅｇ／ＣＤ８）又は従来のＣＤ４ Ｔ細胞対回収されたＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４ｃｏｎｖ／ＣＤ８）の比を計算することによって、Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣ活性を測定した。ＣＣＲ８ ｍＡｂｓ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１３Ｂ）と比較して、Ｔｒｅｇ細胞（図１３Ａ）に対するＡＤＣＣ活性を選択的に媒介し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を示した。同様に、ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１３Ｄ）と比較して、Ｔｒｅｇ細胞（図１３Ｃ）に対するＡＤＣＣ活性を選択的に媒介し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を示した。 図１４Ａ～１４Ｅは、ＨＲ／ＦＦ（図１４Ａ）、ＲＲ／ＦＦ（図１４Ｂ）、ＨＲ／ＶＦ（図１４Ｃ）及びＲＲ／ＶＦ（図１４Ｄ）のＦｃｇＲＩＩａ（Ｈ１３１Ｒ）／ＦｃｇＲＩＩＩａ（Ｖ１５８Ｆ）遺伝子型を有する４名の異なるドナーからのＣＤ１４＋単球由来マクロファージにおいて、アフコシル化抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３がフコシル化ｍＡｂ ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３と比較して強化されたＡＤＣＰ活性を示すことを示しており、また、ヒト化抗ヒトＹｏｓｈｉｄａ抗ＣＣＲ８抗体と比較してＡＤＣＰ活性の３～４倍の改善も示す（図１４Ｅ）。活性データも実施例に提供する。 図１５Ａ～１５Ｄは、ＨＲ／ＦＦ（図１５Ａ）、ＲＲ／ＦＦ（図１５Ｂ）、ＨＲ／ＶＦ（図１５Ｃ）、及びＲＲ／ＶＦ（図１５Ｄ）のＦｃｇＲＩＩａ（Ｈ１３１Ｒ）／ＦｃｇＲＩＩＩａ（Ｖ１５８Ｆ）遺伝子型を有する４名の異なるドナーからのＣＤ１４＋単球由来マクロファージにおいて、アフコシル化抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１が、ＦｃｇＲＩＩａ増強Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２ＥバリアントＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１．Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅと比較して、同様の改善されたＡＤＣＰ活性を示すことを示している。 図１６Ａ～１６Ｂは、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（図１６Ａ）及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（図１６Ｂ）ｍＡｂのエピトープマップである。図１６Ａに示すように、Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有するｈＣＣＲ８の２～２４位の個々のアラニン点突然変異をコードする構築物が作製され、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、Ｄ２Ａ、Ｙ３Ａ、Ｌ５Ａ及びＤ６Ａと結合せず、このことはエピトープが少なくともヒトＣＣＲ８ Ｎ末端のＤＹＴＬＤ領域を含むことを示している。図１６Ｂに示すように、ｈＣＣＲ８の異なる細胞外領域を、Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有するＣＣＲ５からの対応する領域と置換したヒトＣＣＲ８．ＣＣＲ５キメラ（Ｎ－ｔｅｒｍ１、Ｎ－ｔｅｒｍ２、ＥＣＬ１、ＥＣＬ２、及びＥＣＬ３）をコードする構築物を作製したところ、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３がＥＣＬ１及びＥＣＬ２キメラに結合しないことから、この抗体のエピトープは少なくともＣＣＲ８のＥＣＬ１及びＥＣＬ２領域を含むことが示された。ｈｕＣＣＲ８ Ｎ末端：ＭＤＹＴＬＤＬＳＶＴＴＶＴＤＹＹＹＰＤＩＦＳＳＰ（配列番号１１０）。 図１７Ａ～１７Ｉは、０．００３～５ｍｇ／ｋｇの濃度が増加するマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの単回投与の注射３日後のＣＴ２６腫瘍保有マウスにおける脾臓（図１７Ｂ）又は腫瘍排出リンパ節（図１７Ｃ）ではなく、腫瘍（図１７Ａ）におけるＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４５＋白血球を有するＴｒｅｇ細胞の割合として測定）の進行性枯渇を示す。抗ＣＣＤ８ ｍＡｂ処置は、ＣＤ４の従来のＴ細胞（図１７Ｄ～１７Ｆ）又はＣＤ８ Ｔ細胞の枯渇をもたらさなかった（図１７Ｇ～Ｉ）。アイソタイプ対照抗体（抗ｇｐ１２０）を使用した。 図１８Ａ～１８Ｄは、抗ＣＤ２５ ｍＡｂ（図１８Ｄ）又はアイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）（図１８Ａ）での処置と比較して、確立されたＣＴ２６同系腫瘍を有するマウスにおけるマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの単回用量（図１８Ｂ）又は週２回投与（図１８Ｃ）での処置後の腫瘍成長阻害を示す。腫瘍が１５０～２５０ｍｍ３の体積に達したときに処置を開始した。腫瘍体積を経時的に測定する。灰色の線は個々のマウスを表し、黒色の線は群のフィッティングを表す。 図１９Ａ～１９Ｅは、腫瘍接種時に投与されたエフェクタ適格マウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（図１９Ｂ）又は１５０～２５０ｍｍ３に達した腫瘍（図１９Ｄ）で観察されたＣＴ２６腫瘍の増殖阻害を示す。同じリガンド遮断抗ＣＣＲ８ ｍＡｂのエフェクタ不適格ＬＡＬＡＰＧバリアントでは腫瘍増殖阻害は観察されない（図１９Ｃ及び図１９Ｅ）。腫瘍体積を経時的に測定する。灰色の線は個々のマウスを表し、黒色の線は群のフィッティングを表す。アイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）を使用した（図１９Ａ）。 図２０Ａ～図２０Ｄは、マウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂと抗ＰＤＬ１ ｍＡｂとの組み合わせ（図２０Ｄ）が、抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ単独（図２０Ｂ）又は抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ単独（図２０Ｃ）よりもＥＭＴ６腫瘍の増殖阻害において予想外に効果的であることを示す。腫瘍が１５０～２５０ｍｍ３に達したときに処置を開始した。腫瘍体積を経時的に測定する。灰色の線は個々のマウスを表し、黒色の線は群のフィッティングを表す。アイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）を使用した（図２０Ａ）。 図２１は、単回投与１０ｍｇ／ｋｇ静脈内ボーラス注射後の、カニクイザルにおける、抗ｇＤ（対照）＿及び試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３の血清薬物動態プロファイル（平均±ＳＤ）を示す。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、投与後３５日間にわたって望ましい持続的な血清中濃度レベルを示し、このことは、より優れた抗がん活性と投与頻度の減少につながる可能性のある、より持続的な標的への関与を引き出すことが期待される。 図２２Ａ～２２Ｃは、静脈内注射により、１０ｍｇ／ｋｇのアフコシル化抗ｇＤ（対照；１００１、１００２、１００３と指定される群１；図２２Ａ）、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（２００１、２００２、２００３と指定される群２；図２２Ｂ）、又はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（３００１、３００２、３００３と指定される群３；図２２Ｃ）を投与した９匹の雄ｃｙｎｏの総Ｔｒｅｇ細胞数についての全血フローサイトメトリー分析の結果を示す。両方の試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂは、投与後８４０時間まで、全血中の総Ｔ－ｒｅｇ細胞絶対数を実質的に減少させなかった。 図２３Ａ～２３Ｉは、アフコシル化抗ｇＤ（対照；１００１（図２３Ａ）、１００２（図２３Ｂ）、１００３（図２３Ｃ）と指定される群１）Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（３００１（図２３Ｄ）、３００２（図２３Ｅ）、３００３（図２３Ｆ）と指定される群３）、又はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（２００１（図２３Ｇ）、２００２（図２３Ｈ）、２００３（図２３Ｉ）と指定される群２）を投与した９匹の雄ｃｙｎｏのＣＣＲ８＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞の減少についての全血フローサイトメトリー分析の結果を示す。投与前（「試験前」）及び１日目の０時間（「投与前」）に各動物から血液を採取した。次いで、各動物に、静脈内注射によって、１０ｍｇ／ｋｇのアフコシル化抗ｇＤ（対照群）、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（群２）又はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（群３）の単回用量を投与した。次いで、動物から血液を採取し、フローサイトメトリー分析の前に以下の処置に供した：（ｉ）いずれの試験ＣＣＲ８ ｍＡｂもスパイクしていない血液試料（「非スパイク」）、（ｉｉ）飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１をさらにスパイクした血液試料、及び（ｉｉｉ）飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３でさらにスパイクした血液試料。その後、非スパイク試料及びスパイク試料のそれぞれを標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で処理し、フローサイトメトリーによって分析した。図２３Ａ～２３Ｃに見られるように、最初に対照（群１）で処理したがスパイクしていない血液のフローサイトメトリーは、総ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の調節を示さなかった。さらに、スパイク血液のフローサイトメトリーもまた、総ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞数にほとんど影響を及ぼさなかった。群３に関して、図２３Ｄ～図２３Ｆに見られるように、３匹の動物のそれぞれで分析した血液のフローサイトメトリーは、投与後１６８時間までＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の減少を示した。群２に関して、図２３Ｇ～図２３Ｉに見られるように、分析した血液のフローサイトメトリーは、動物２００２及び２００３におけるＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の減少を示した。群２及び群３の動物の両方とも、総Ｔｒｅｇ細胞数に対してほとんど又は全く効果を示さなかったが（図２２Ａ～２２Ｃ）、スパイクした又はスパイクしていない投与後の末梢血ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の数の減少を示し（図２３Ｄ～２３Ｉ）、これは提案された作用機序と一致する（図２Ａ参照）。
特定の態様の詳細な説明
Ｉ． 定義
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの態様では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、合計の非共有性相互作用の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する特異的結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表し得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な説明的、例示的な方法もまた、本明細書に記載されている。
「親和性成熟」抗体とは、変更を有しない親抗体と比較して、１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）において１つ又は複数の変更を有し、そのような変更によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
「抗ＣＣＲ８抗体」及び「ＣＣＲ８に結合する抗体」という用語は、ＣＣＲ８の標的化において該抗体が診断剤及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性で、ＣＣＲ８に結合可能である抗体を指す。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体の無関係の非ＣＣＲ８タンパク質への結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される場合、抗体のＣＣＲ８への結合の約１０％未満である。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－１３Ｍ～１０－８Ｍ、例えば、１０－１３Ｍ～１０－９Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１０Ｍ、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１１Ｍ、又は約１×１０－１１Ｍ～約５×１０－１１ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約２×１０－１１ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約５×１０－１２ＭのＫＤを有する。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体はＣＣＲ８に「特異的に結合する」と言われる。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、少なくとも２つの異なる種（例えば、ヒト及びｃｙｎｏ）のＣＣＲ８のエピトープに結合する。
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、及び抗体断片を含む、様々な抗体構造を包含するが、これらに限定されない。
「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ及びｓｃＦａｂ）；単一ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３：１１２６－１１３６を参照されたい。
「エピトープ」との用語は、抗ＣＣＲ８抗体が結合する相手である、タンパク質性又は非タンパク質性のいずれかの、抗原上の部位を示す。エピトープは、連続したアミノ酸ストレッチ部位から形成される場合（線状エピトープ）、又は非連続のアミノ酸を含む場合（立体構造エピトープ）の両方があり、例えば、抗原の折り畳みに起因して（すなわち、タンパク質性抗原の三次折り畳みによって）空間的に近接して形成される。線状エピトープは、典型的には、タンパク質性抗原を変性剤に曝露した後も依然として抗ＣＣＲ８抗体によって結合されているが、コンフォメーションエピトープは、典型的には、変性剤での処理により破壊される。エピトープは、固有の空間的立体配座において少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、又は少なくとも３５、又は３～２５、３～２０、３～１５、３～１０、３～５、３０～４０、３５～４０、又は５～１０個のアミノ酸を含む。
特定のエピトープに結合する抗体（すなわち、同じエピトープに結合する抗体）のスクリーニングは、例えば、限定されないが、アラニンスキャニング、ペプチドブロット（例えば、Ｋｏｂｅｉｓｓｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００４）２４８：４４３－４６３を参照）、ペプチド切断分析、エピトープ切除、エピトープ抽出、抗原の化学的修飾（Ｈｏｃｈｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９（２０００）４８７－４９６を参照）、及びクロスブロッキング（「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．，ＮＹを参照）などの、当該技術分野で慣用の方法を用いて行われ得る。
抗原構造系抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＡＳＡＰ）は、変性促進型プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＭＡＰ）としても知られ、ＣＣＲ８に特異的に結合する多数のモノクローナル抗体を、化学的又は酵素的に修飾された抗原表面に対する多数の抗体のそれぞれの結合プロファイルに基づいて区分けすることができる（例えばＵＳ ２００４／０１０１９２０参照）。区分けされた各抗体は同じエピトープに結合するが、このエピトープは、他の区分けで表されるエピトープとは明確に異なることがあるか、又は部分的に重なっている独特なエピトープであり得る。
また、競合結合は、抗体が参照抗体と同じＣＣＲ８のエピトープに結合するか、又は参照抗ＣＣＲ８抗体との結合について競合するかを容易に決定するために使用することができる。例えば、参照抗ＣＣＲ８抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて参照抗ＣＣＲ８抗体の抗原への結合を５０％以上阻害する抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体の抗原への結合を５０％以上阻害する。また例えば、抗体が参照抗ＣＣＲ８抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和状態でＣＣＲ８に結合させることができる。過剰な参照抗ＣＣＲ８抗体を除去した後、問題の抗ＣＣＲ８抗体のＣＣＲ８に結合する能力が評価される。参照抗ＣＣＲ８抗体の飽和結合後に、抗ＣＣＲ８抗体がＣＣＲ８に結合できる場合、この抗ＣＣＲ８抗体は、参照抗ＣＣＲ８抗体とは異なるエピトープに結合すると結論づけることができる。しかし、参照抗ＣＣＲ８抗体の飽和結合後に、抗ＣＣＲ８抗体がＣＣＲ８に結合できない場合、この抗ＣＣＲ８抗体は、参照抗ＣＣＲ８抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合している可能性がある。問題の抗体が同じエピトープに結合しているのか、又は立体的な理由で結合が妨害されているだけなのかを確認するためには、慣用的な実験を用いることができる（例えば、ペプチド突然変異、及びＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当技術分野で利用可能な任意の他の定量的若しくは定性的な抗体結合アッセイを用いた結合分析）。このアッセイは、２つのセットアップ、すなわち、両方の抗体が飽和抗体である状態で実施されるべきである。両方のセットアップにおいて、第１の（飽和）抗体のみがＣＣＲ８に結合可能な場合、この抗ＣＣＲ８抗体と参照抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８への結合について競合していると結論づけることができる。
いくつかの態様では、競合結合アッセイで測定して、一方の抗体の１、５、１０、２０又は１００倍過剰が他方の結合を少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、さらには９９％以上阻害する場合、２つの抗体は同じ又は重複するエピトープに結合するとみなされる。（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）１４９５－１５０２を参照）。
いくつかの態様では、一方の抗体の結合を低下又は排除する抗原中の実質的に全てのアミノ酸突然変異が他方の抗体の結合も低下又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少又は排除するアミノ酸突然変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を減少又は排除する場合、「重複エピトープ」を有するとみなされる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には、以下の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。特定の態様では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。特定の態様では、抗体は、Ｆｃ領域エフェクタ機能を低下させるためのＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を有するＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の態様では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプのものである。特定の態様では、抗体は、ＩｇＧ４抗体の安定性を改善するためにヒンジ領域にＳ２２８Ｐ突然変異を有するＩｇＧ４アイソタイプのものである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられてもよい。
本出願で使用される場合、「ヒト由来の定常領域」又は「ヒト定常領域」という用語は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４のヒト抗体の定常重鎖領域、及び／又は定常軽鎖カッパ若しくはラムダ領域を示す。そのような定常領域は当該技術分野で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されている（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．，ａｎｄ Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８（２０００）２１４－２１８；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７２（１９７５）２７８５－２７８８も参照）。本明細書で特に明記されない限り、定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＫａｂａｔのＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。
「エフェクタ機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクタ機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
例えば医薬組成物中の薬剤の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投与量及び期間で有効な量を指す。
用語「Ｆｃ領域」とは、本明細書では定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域が含まれる。一態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、完全長重鎖を含んでいてもよく、又は完全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、ＥＵナンバリングシステム）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｌｙｓ４４７）が存在してもよい、又は存在していなくてもよい。一態様では、本発明による抗体に含まれる、本明細書に明記されたＦｃ領域を含む重鎖は、さらなるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＥＵナンバリングシステム）を含む。一態様では、本発明による抗体に含まれる、本明細書で明記されるＦｃ領域を含む重鎖は、さらなるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ナンバリングはＥＵインデックスに従う）を含む。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」という用語は、本明細書で互換的に使用され、天然抗体構造と実質的に類似した構造を有する抗体、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。完全長抗体は、本明細書で定義される重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインと、本明細書で定義されるＦｃ領域とを含むことを理解されたい。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、継代数によらず、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含量でない場合があるが、突然変異を含んでもよい。本明細書では、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異体の子孫が、含まれる。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１～３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、第１～３巻におけるようなサブグループである。一態様では、ＶＬの場合、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）にあるように、サブグループカッパＩである。一態様では、ＶＨの場合、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）にあるように、サブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、そのドメイン中ではＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変可能であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。
特定の態様では、抗体は６つのＣＤＲを含み、３つがＶＨ中にあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、３つがＶＬ中にある（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。特定の態様では、６つのＣＤＲを含む抗体は完全長抗体である。特定の態様では、６つのＣＤＲを含む抗体は抗体断片である。
本明細書の例示的なＣＤＲには、以下が含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；並びに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）及び９３－１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））。
別段示されない限り、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）及びＣｈｏｔｈｉａ（上記）に従って決定される。当業者は、ＣＤＲの表記が、ＭｃＣａｌｌｕｍ（上記）又は他の任意の科学的に認められた命名システムに従っても決定され得ることを理解するだろう。
一態様では、ＣＤＲ残基は、図５Ａ～５Ｄ及び６Ａ～６Ｄ並びに表Ｃ１、Ｃ２、Ｄ１及びＤ２で同定されたものを含む。他の態様では、ＣＤＲ残基は、表Ｎ１、Ｎ２、Ｏ１及びＯ２で特定されるものを含む。
「対象」は哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、並びに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、対象はヒトである。
「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって測定される場合、９５％又は９９％より高い純度になるまで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基で構成され、具体的には、プリン塩基又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基で構成される。多くは、核酸分子は、塩基配列によって記述され、ここで、当該塩基は、核酸分子の一次構造（線形構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’へと表される。本明細書中において、核酸分子という用語は、例えば、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡを含むデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、特にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成形態、及びこれらの分子の２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線状又は環状であってもよい。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖、並びに一本鎖形態及び二本鎖形態の両方を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド又は天然に存在しないヌクレオチドを含むことができる。誘導体化された糖又はホスフェート骨格結合又は化学修飾された残基を含む、天然に存在しないヌクレオチドの例として、修飾されたヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子はまた、本明細書に記載の抗体をインビトロ及び／又はインビボで、例えば宿主又は対象において、直接発現させるためのベクターとして適したＤＮＡ及びＲＮＡ分子を包含する。このようなＤＮＡベクター（例えば、ｃＤＮＡ）又はＲＮＡベクター（例えば、ｍＲＮＡ）は、改変されていなくてもよく、又は改変されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、インビボで抗体を産生するために対象にｍＲＮＡを注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を高めるように化学修飾されてもよい。（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ １２ Ｊｕｎｅ ２０１７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又は欧州特許第２１０１８２３号Ｂ１を参照）。
「単離された」核酸とは、自然環境の構成要素から切り離されている核酸分子を指す。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外、又は天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗ＣＣＲ８抗体をコードする単離された核酸」とは、抗ＣＣＲ８抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
本明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、かつ／又は同一のエピトープと結合しているが、例えば、天然に存在する突然変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは、一般的に微量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。例えば、本開示によるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製されてもよく、このような方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬組成物中に存在していてもよい。
「天然抗体」とは、様々な構造を持つ天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラメリック糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて３つの定常重ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。
「添付文書」という用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、そのような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性率（％）」は、アラインメントの目的で、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較する配列の完全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、パーセント同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、かつ、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。
特に断りのない限り、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性率の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用するか、又はその後にＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリクスを使用して生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及び、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６により記載されており、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ ｏｒ ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公に利用可能である。あるいは、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバルタンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公共サーバを使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行することができる。アミノ酸同一性パーセントは、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。
「医薬組成物」又は「医薬製剤」という用語は、本明細書では互換的に使用され、内部に含まれる有効成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ医薬組成物が投与される対象が許容できない程度に毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容され得る担体」は、有効成分以外の医薬組成物又は製剤中の成分であって、対象にとって非毒性である成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ＣＣＲ８」という用語は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト、サル（ｃｙｎｏ））及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＣＲ８を指す。この用語は、「完全長」の、未処理ＣＣＲ８、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＣＣＲ８を包含する。この用語は、ＣＣＲ８の天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。特定の態様では、ＣＣＲ８はヒトＣＣＲ８（「ｈＣＣＲ８」又は「ｈｕＣＣＲ８」）である。例示的なヒトＣＣＲ８のアミノ酸配列は、以下の表に示すように、配列番号１０６に示されている。特定の態様では、ＣＣＲ８はカニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＣＣＲ８である。例示的なｃｙｎｏ ＣＣＲ８のアミノ酸配列は、以下の表に示すように、配列番号１０７に示されている。特定の態様では、ＣＣＲ８はマウスＣＣＲ８（「ｍＣＣＲ８」）である。例示的なマウスＣＣＲ８のアミノ酸配列は、以下の表に示すように、配列番号１０８に示されている。
Figure 2024527606000002
本明細書で使用される場合、「処置」（及び「処置する」又は「処置すること」などのその文法的変形）は、処置されている対象における疾患（例えば、がん）の自然経過を変化させる試みでの臨床的介入を指し、予防（「防止的処置」又は「予防的に処置すること」）のために、又は臨床病理の経過中に（「治療的処置」又は「治療的に処置すること」）行うことができる。治療的処置の望ましい効果には、症候の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的病理学的帰結の縮小、がんの転移の防止、疾患進行速度の減少、病状の回復又は寛解、及び緩解又は予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。防止的処置の望ましい効果には、疾患の発生又は再発の防止が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖又は抗体軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい。
「ベクター」という用語は、本明細書では、連結している別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造としてのベクターだけでなく、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。特定のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを本明細書では、「発現ベクター」と呼ぶ。
ＩＩ． 組成物及び方法
一態様では、本開示は、ＣＣＲ８に対する独特かつ改善された結合及び選択性を有する新規抗ＣＣＲ８抗体の発見に部分的に基づく。本開示の抗ＣＣＲ８抗体はまた、改善された抗体安定性（例えば、低凝集、良好な溶解性、及び低粘度）を有する。本開示はさらに、一部には、本開示の抗体のアフコシル化形態が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を増加させたという発見に基づく。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体が提供される。本明細書中に記載されるような抗体は、例えば、がんの処置のために有用である。
Ａ． 例示的な抗ＣＣＲ８抗体
一態様では、本開示は、ＣＣＲ８に結合する抗体を提供する。一態様では、提供される抗体は、ＣＣＲ８に結合する単離された抗体である。一態様では、本開示は、ＣＣＲ８に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０６のアミノ酸残基２～６の１つ又は複数を含むエピトープに結合する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０６のアミノ酸残基９１～１０４及び１７２～１９３の１つ又は複数を含むエピトープに結合する。特定の態様では、ＣＣＲ８は、ヒトＣＣＲ８、マウスＣＣＲ８、又はｃｙｎｏ ＣＣＲ８である。特定の態様では、ＣＣＲ８はヒトＣＣＲ８である。一態様では、本開示は、ＣＣＲ８のチロシン硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する抗体を提供する（「硫酸化非依存性」）。本発明者らが硫酸化非依存性であることを発見した例示的抗体には、Ａｂ４及びＡｂ５が含まれ、以下により詳細にさらに記載される。
特定の態様では、本明細書において提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１０Ｍ、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１１Ｍ、又は約１×１０－１１Ｍ～約５×１０－１１ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約２×１０－１１ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約５×１０－１２ＭのＫＤを有する。一態様では、ＫＤは、放射性標識ＩｇＧ及び抗原を安定に発現するＣＨＯ細胞株を使用して測定される。抗原を発現する安定ＣＨＯ細胞を、冷結合緩衝液（Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ＋２％ ＦＢＳ＋５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２＋０．１％アジ化ナトリウム）に５０，０００細胞／ウェルで播種する。ＮＥＸ２４４ Ｉｏｄｏｇｅｎ法（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用した固定濃度の目的の１２５Ｉ放射性標識抗原を、２０ｎＭ又は５０ｎＭで開始して、目的の連続希釈抗体と混合する。抗体混合物を細胞に添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１２時間インキュベートする。次いで、細胞及び抗体をＭｉｌｌｉｐｏｒｅマルチスクリーンフィルタプレートに移す。フィルタプレートを２５０μＬの冷結合緩衝液で４回洗浄し、少なくとも３０分間乾燥させ、フィルタを５ｍＬポリスチレンチューブに打ち抜く。放射能は、１カウント／分に設定したＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ ２４７０ Ｇａｍｍａ Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて０．８の計数効率で測定する。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおける異種一部位フィットＫｉ競合結合モデルを使用して当てはめる。
特定の態様では、本明細書中に提供される抗体は、１日目に静脈内投与された単回の１０ｍｇ／ｋｇ用量後、３５日間にわたって約３～約５ｍＬ／日／ｋｇの平均クリアランスを示す。例えば、限定するものではないが、そのような投与は、ｍＡｂの単一の１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶボーラスを含むことができる。分析のための血液試料は、例えば０．２５、２、６時間；投与後１、２、７、１４、２１、２８及び３５日で収集することができ；血清を、様々な手段、例えば、適格なＥＬＩＳＡ分析方法を用いてｍＡｂの濃度についてアッセイすることができる。特定の態様では、投与は哺乳動物に対するものである。特定の態様では、投与は霊長類に対するものである。特定の態様では、投与は非ヒト霊長類、例えばｃｙｎｏに対するものである。特定の態様では、投与はヒトに対するものである。
（ｉ）Ａｂ５及びその断片の実施形態
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列のＣＤＲ配列の１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列のＣＤＲ配列の１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列のＣＤＲ配列及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列のＣＤＲ配列を含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号４８のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインの１つ又は複数の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号４７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインの１つ又は複数の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号４８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号４８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列と、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列とを含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下：（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、以下：（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号４７のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下：（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号４８のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４８のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、以下：（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号３５～４７からなる群より選択されるＶＨ配列及び配列番号４８～５２からなる群より選択されるＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。一態様では、抗体は、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
一態様では、ＶＬ配列は、Ｖ４Ｍ突然変異、Ｐ４３Ａ突然変異、Ｆ４６Ｌ突然変異、Ｃ９０Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。一態様では、ＶＨは、Ｇ４９Ｓ突然変異、Ｋ７１Ｒ突然変異、Ｓ７３Ｎ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。
別の態様では、配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む。別の態様では、（ａ）配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインと、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインとを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号５５の重鎖及び配列番号５６の軽鎖を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６０の重鎖及び配列番号５６の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、抗体の重鎖は、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された短縮Ｃ末端を含む。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１１の重鎖及び配列番号５６の軽鎖を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１３の重鎖及び配列番号５６の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、ＣＣＲ８リガンドに結合しない抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体はＣＣＲ８リガンド遮断活性を有さない。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は非中和抗体である。一態様では、ＣＣＲ８リガンドはＣＣＬ１である。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、結合のためのＣＣＲ８のチロシン硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する抗ＣＣＲ８抗体が提供される（すなわち、硫酸化非依存性）。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、アフコシル化抗体バリアントである抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、アフコシル化抗体バリアントは、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合を有する。一態様では、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体バリアントは、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。一態様では、抗ＣＣＲ８アフコシル化抗体バリアントは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、改善された抗体安定性を有する抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、低い凝集、良好な溶解性、及び／又は低い粘度を有する。上記の実施形態のいずれかの特定の態様では、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１１ＭのＫＤを有する抗ＣＣＲ８抗体が提供される。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約５×１０－１２ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約４×１０－１２ＭのＫＤを有する。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約３×１０－１２ＭのＫＤを有する。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は本開示において「ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１」と命名され、これはフコシル化又はアフコシル化することができ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３１Ｅに１つ又は複数の重鎖突然変異を任意に含有し、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された重鎖の短縮Ｃ末端を任意に含む。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｉｉ）Ａｂ４及びその断片の実施形態
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列のＣＤＲ配列の１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列のＣＤＲ配列の１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列のＣＤＲ配列及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列のＣＤＲ配列を含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号２４のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインの１つ又は複数の重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号２１のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２１のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２１のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２１のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインの１つ又は複数の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号２４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号２４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列と、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列とを含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２４のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下：（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、以下：（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号２１のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下：（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号２４のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＬは、以下：（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号１０～２１からなる群より選択されるＶＨ配列及び配列番号２２～２５からなる群より選択されるＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。一態様では、抗体は、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２４のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
一態様では、ＶＬ配列はＹ２Ｉ突然変異を含む。一態様では、ＶＨ配列は、Ｓ７３Ｎ突然変異、Ｖ７８Ｌ突然変異、Ｔ７６Ｎ突然変異、Ｆ９１Ｙ突然変異、及びＰ１０５Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。
別の態様では、配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む。別の態様では、（ａ）配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインと、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインとを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２４のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号５７の重鎖及び配列番号５８の軽鎖を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６１の重鎖及び配列番号５８の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、抗体の重鎖は、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された短縮Ｃ末端を含む。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１２の重鎖及び配列番号５８の軽鎖を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１４の重鎖及び配列番号５８の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、ＣＣＲ８リガンドに結合する抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８リガンドに対してアンタゴニスト効果を有する。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体はＣＣＲ８リガンド遮断活性を有する。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は中和抗体である。一態様では、ＣＣＲ８リガンドはＣＣＬ１である。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、結合のためのＣＣＲ８のチロシン硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する抗ＣＣＲ８抗体が提供される（すなわち、硫酸化非依存性）。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、アフコシル化抗体バリアントである抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、アフコシル化抗体バリアントは、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合を有する。一態様では、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体バリアントは、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。一態様では、抗ＣＣＲ８アフコシル化抗体バリアントは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有する。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗体安定性が改善された抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、低い凝集、良好な溶解性、及び／又は低い粘度を有する。上記の実施形態のいずれかの特定の態様では、約１×１０－１１Ｍ～約５×１０－１１ＭのＫＤを有する抗ＣＣＲ８抗体が提供される。特定の態様では、ＣＣＲ８に結合する抗体は、約２×１０－１１ＭのＫＤを有する。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は本開示において「ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３」と命名され、これはフコシル化又はアフコシル化することができ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３１Ｅに１つ又は複数の重鎖突然変異を任意に含有し、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された重鎖の短縮Ｃ末端を任意に含む。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｉｉｉ）Ａｂ１及びその断片の実施形態
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号９４のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９５のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９５のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９５のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９５のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９４のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９５のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、該抗体は、配列番号９４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９４のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。ある特定の態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
別の態様では、配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む。別の態様では、（ａ）配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインと、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインとを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０１の重鎖及び配列番号１００の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、抗体の重鎖は、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された短縮Ｃ末端を含む。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１５の重鎖及び配列番号１００の軽鎖を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は本開示において「ｈｕ．Ａｂ１．Ｈ１Ｌ１」と命名され、これはフコシル化又はアフコシル化することができ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３１Ｅに１つ又は複数の重鎖突然変異を任意に含有し、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された重鎖の短縮Ｃ末端を任意に含む。さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｉｖ）Ａｂ２及びその断片の実施形態
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号９６のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９７のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９６のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９６のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９６のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９６のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号９７のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９７のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９６のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。ある特定の態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号９７のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
別の態様では、配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む。別の態様では、（ａ）配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインと、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインとを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９７のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０３の重鎖及び配列番号１０２の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、抗体の重鎖は、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された短縮Ｃ末端を含む。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１６の重鎖及び配列番号１０２の軽鎖を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は本開示において「ｈｕ．Ａｂ２．Ｈ１Ｌ１」と命名され、これはフコシル化又はアフコシル化することができ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３１Ｅに１つ又は複数の重鎖突然変異を任意に含有し、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された重鎖の短縮Ｃ末端を任意に含む。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｖ）Ａｂ３及びその断片の実施形態
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、ヒト化抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、ヒトＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体である。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号９８のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９９のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９９のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９９のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９９のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号９８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号９８のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９９のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：配列番号９０又は配列番号９１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号９８のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９８のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。ある特定の態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
別の態様では、配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む。別の態様では、（ａ）配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインと、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインとを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。
別の態様では、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗ＣＣＲ８抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１０５の重鎖及び配列番号１０４の軽鎖を含む。
上記の実施形態のいずれかの別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、抗体の重鎖は、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された短縮Ｃ末端を含む。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号１１７の重鎖及び配列番号１０４の軽鎖を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は本開示において「ｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１」と命名され、これはフコシル化又はアフコシル化することができ、Ｇ２３６Ａ及びＩ３３１Ｅに１つ又は複数の重鎖突然変異を任意に含有し、Ｃ末端アミノ酸残基の１つ又は２つが除去された重鎖の短縮Ｃ末端を任意に含む。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｖｉ）マウス代用物の実施形態
一態様では、本開示は、マウスＣＣＲ８に結合する抗ＣＣＲ８抗体であって、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、又は６つ全てのＣＤＲを含む抗体を提供する。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、前述のＣＤＲの６つ全てを含む。いくつかの態様では、抗ＣＣＲ８抗体は完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、マウスＣＣＲ８に結合する完全長抗体である。特定の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、マウスＣＣＲ８に結合する完全長抗体であり、キメラ抗体（例えば、ウサギとマウスのキメラ）である。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の態様では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。さらなる態様では、抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２とを含む。さらなる態様では、抗体は、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含む抗体を提供する。一態様では、抗体は、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、本明細書に記載の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＣＤＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３からなる群から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＣＤＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、並びに（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗体を提供する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨ配列のＣＤＲ配列を含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬ配列のＣＤＲ配列のうちの１つ又は複数を含む。
さらなる態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３アミノ酸配列並びに配列番号６９のＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨドメインの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号７０のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７０のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７０のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨドメインの３つの重鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号７０のＶＨドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬドメインの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列の１つ又は複数と、配列番号６９のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６９のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性のフレームワークとを含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６９のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性のフレームワークとを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬドメインの３つの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列と、配列番号６９のＶＬドメインのフレームワークアミノ酸配列に対して特に少なくとも９８％の配列同一性のフレームワークとを含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、並びに配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン、及び配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。一態様では、ＶＨドメインは、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、ＶＬドメインは、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一態様では、抗体は、配列番号７０のＶＨ配列及び配列番号６９のＶＬ配列を含む抗体の解離定数（ＫＤ）と比較した場合に、最大１０倍減少又は最大１０倍増加した解離定数（ＫＤ）を有するマウスＣＣＲ８に結合する。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、マウスＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号７０のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の態様では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む：配列番号６５又は配列番号６６、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体が提供され、該抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８に結合する能力を保持する。特定の態様では、配列番号６９のアミノ酸配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で起こる。任意に、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号６９のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。ある特定の態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む。
別の態様では、抗ＣＣＲ８抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、配列番号７０のＶＨ配列及び配列番号６９のＶＬ配列を含み、これらの配列の翻訳後修飾を含む。
別の態様では、マウスＣＣＲ８に結合する抗ＣＣＲ８抗体であって、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、抗体が提供される。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７０のＶＨ配列及び配列番号６９のＶＬ配列を含む。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号７２の重鎖及び配列番号７１の軽鎖を含む。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによる抗ＣＣＲ８抗体は、キメラ抗体を含むモノクローナル抗体である。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。
（ｖｉｉ）他の実施形態
さらなる一態様では、上記の態様のいずれかに従う抗ＣＣＲ８抗体は、以下のセクション１～５に記載される特徴のいずれかを、単独又は組み合わせで組み込み得る。
１． 抗体断片
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。
一態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）２断片、特にＦａｂ断片である。インタクトな抗体をパパイン消化は、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨ及びＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合断片（いわゆる「Ｆａｂ」断片）を産生する。よって「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖断片を有する抗体断片のことである。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）と、Ｆｃ領域の一部とを有するＦ（ａｂ’）２断片が得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
別の態様において、抗体断片は、二重特異性抗体、三重特異性抗体又は四重特異性抗体である。ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎら、「Ｎａｔ．Ｍｅｄ．」第９巻第１２９～１３４頁（２００３年）においても説明されている。
更なる態様では、抗体断片は一本鎖Ｆａｂ断片である。「一本鎖Ｆａｂ断片」又は「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、及びリンカーからなるポリペプチドであり、上記抗体ドメイン及び上記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の順序：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、又はｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有する。特に、上記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。当該単鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化されている。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ断片は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔナンバリングによると、可変重鎖の位置４４及び可変軽鎖の位置１００）を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって、更に安定化し得る。
別の態様では、抗体断片は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」は、リンカーにより接続された、抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である。特に、リンカーは、１０～２５個のアミノ酸の短いポリペプチドであり、通常、柔軟性のためにグリシンが、かつ、溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と、又はこの逆のいずれかで、接続させることができる。このタンパク質は、定常領域が取り除かれ、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の抗体の特異性を保持することができる。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。
別の態様では、抗体断片は単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照）。
抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載される、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌）による組み換え産生を含む種々の技術によって作製することができる。
２． キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一つの例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体が、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの態様では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びこれを製造する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に記載され、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフト接合を記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド付き選択」手法を記載する）に記載される。
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照）；並びにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、ＢＢａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照）。
３． ヒト抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して作製され得る。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含むか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに統合されている。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって更に改変され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して作製されるヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージ・ディスプレイ・ライブラリから選択される可変ドメイン配列を単離することによって生成することができる。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
４． 多重特異性抗体
特定の態様では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる部位、すなわち、異なる抗原上の異なるエピトープ又は同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の態様では、多重特異性抗体は、３つ又はそれより多くの結合特異性を有する。特定の態様では、結合特異性の１つはＣＣＲ８に対するものであり、もう１つの特異性は他の任意の抗原に対するものである。ある特定の態様において、二重特異性抗体は、ＣＣＲ８の２つ（又はそれよりも多く）の異なるエピトープに結合し得る。多重特異性（例えば、二重特異性）抗体もまた、細胞障害剤又は細胞をＣＣＲ８を発現する細胞に局在化するために使用され得る。多重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）参照）及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号及びＡｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６（１９９７）参照）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号を参照）；２つ以上の抗体又は断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）；ロイシンジッパーを使用した二重特異性抗体の産生（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）及び国際公開第２０１１／０３４６０５号を参照）；軽鎖のミスペアリング問題を回避するための、一般的な軽鎖技術の使用（例えば、国際公開第９８／５０４３１号を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）；及び例えばＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異性抗体の調製によって作製してもよい。
５． 抗体バリアント
特定の態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
ａ） 置換、挿入及び欠失バリアント
特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。
一態様では、本明細書に開示されるＶＬ配列は、Ｖ４Ｍ突然変異、Ｐ４３Ａ突然変異、Ｆ４６Ｌ突然変異、Ｃ９０Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。一態様では、本明細書に開示される抗体のＶＨ配列は、Ｇ４９Ｓ突然変異、Ｋ７１Ｒ突然変異、Ｓ７３Ｎ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。一態様では、本明細書に開示される抗体のＶＬ配列はＹ２Ｉ突然変異を含む。一態様では、本明細書に開示される抗体のＶＨ配列は、Ｓ７３Ｎ突然変異、Ｖ７８Ｌ突然変異、Ｔ７６Ｎ突然変異、Ｆ９１Ｙ突然変異、及びＰ１０５Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む。
保存的置換が、「保存的置換」という見出しで表２に示される。より実質的な変化は、表２において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載されるとおりである。目的とする抗体中にアミノ酸置換を導入し、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
Figure 2024527606000003
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、更なる研究のために選択される、得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）を有し、及び／又は実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有することになる。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して、簡便に生成され得る。簡潔には、１つ又は複数。ＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて変更（例えば、置換）が行われ得る。そのような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又は抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、それから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、このライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化する、ＣＤＲ指向性アプローチがある。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を用いて、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が、標的にされることが多い。
特定の態様では、置換、挿入又は欠失は、そのような変更が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的な変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＣＤＲにおいて行われてもよい。そのような変更は、例えば、ＣＤＲ中の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の特定のバリアントＶＨ及びＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、又は３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。
突然変異導入の標的となり得る抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニンスキャニング突然変異導入」と呼ばれる。この方法では、残基又は標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が同定され、中性又は負荷電アミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられて、抗体と抗原との相互作用に影響が及ぼされたかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定され得る。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに１個以上のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ治療法のための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端若しくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増大させる。
ｂ） グリコシル化バリアント
特定の態様では、本明細書において提供する抗体を変えて、抗体のグリコシル化の程度を増減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、抗体に付着しているオリゴ糖を変更してもよい。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分オリゴ糖構造の「ステム」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含んでもよい。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体中のオリゴ糖の修飾が、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。
一態様では、非フコシル化オリゴ糖、すなわち、Ｆｃ領域へのフコース結合（直接又は間接）が欠落した、オリゴ糖構造を有する抗体バリアントを提供する。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分岐オリゴ糖構造の幹に第１のＧｌｃＮＡｃが結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖であり、そのような抗体は本明細書ではさらに「アフコシル化抗体」と呼ばれる。一態様では、天然又は親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した抗体バリアントを提供する。例えば、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、又はさらには約１００％（すなわち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であり得る。特定の実施形態では、アフコシル化の割合は、約６５％～約１００％、約８０％～約１００％、又は約８０％～約９５％である。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、国際公開第２００６／０８２５１５号に記載のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定した、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（ＥＵナンバリングのＦｃ領域残基）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体におけるわずかな配列のバリエーションに起因して、２９７位から上流又は下流に±３アミノ酸、すなわち２９４位から３００位の間（例えばＡｓｎ２９９）に位置する場合もある。Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加したこのような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合、及び／又は改善されたエフェクタ機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。
一態様では、本開示は、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合を有するアフコシル化抗体バリアントを提供する。一態様では、本開示は、増強された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有するアフコシル化抗体バリアントを提供する。一態様では、本開示は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を有するアフコシル化抗体バリアントを提供する。
低減したフコシル化を有する抗体を生成することのできる細胞株の例には、タンパク質フコシル化を欠くＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）、又はＧＤＰ－フコース合成若しくは輸送タンパク質が低減若しくは消失した細胞（例えば、米国特許公開第２００４２５９１５０号、同第２００５０３１６１３号、同第２００４１３２１４０号、同第２００４１１０２８２号を参照）が含まれる。Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＢＳ（２０１８）６９３－７１１も参照されたい。
更なる態様では、二分されたオリゴ糖を有する抗体バリアント、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている抗体バリアントが提供される。このような抗体バリアントは、上述のとおり、低下したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。このような抗体バリアントの例は、例えばＵｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００３／０１１８７８号に記載されている。
Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。このような抗体バリアントは、ＣＤＣ機能が改善されている可能性がある。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。
ｃ） Ｆｃ領域バリアント
特定の態様では、１つ以上のアミノ酸改変は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作製する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。
ある特定の態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクタ機能（例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が不必要又は有害である用途に対して望ましい候補にする、全てではないがいくつかのエフェクタ機能を有する抗体バリアントを企図する。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボの細胞毒性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（ゆえにＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；米国特許第５，８２１，３３７号（例えば、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。かかるアッセイに有用なエフェクタ細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又は加えて、目的のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、インビトロで評価され得る。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号における、Ｃ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野で知られる方法を使用しても実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；国際公開第２０１３／１２０９２９号を参照）。
エフェクタ機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ突然変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい）。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少さあせる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２３４及び２３５（残基ＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇをさらに含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照）。別の態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を改善する（それによってエフェクタ機能を改善する）１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば位置における置換を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、Ｇ２３６Ａ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｐ３９６Ｌ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｑ、Ｇ２３６Ｗ、Ｓ２３９Ｍ、Ｈ２６８Ｄ、Ｄ２７０Ｅ、Ｋ３２６Ｄ、Ａ３３０Ｍ、Ｋ３３４Ｅの少なくとも１つのアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む（例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｂａｓｅｌ）（２０２０）；９（４）：６４を参照されたい）。
いくつかの態様では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に開示されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善又は減少のいずれか）をもたらすＦｃ領域において変更がなされる。
半減期が延長され、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合性が改善された、胎児への母性ＩｇＧの移行を担う抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、米国特許公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ又は複数の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１つ又は複数に置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照のこと）。
マウスＦｃ－マウスＦｃＲｎ相互作用に重要なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発によって同定されている（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照されたい）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４及びＨ４３５（残基のＥＵナンバリング）が相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０及びＨ４３５は、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎとの相互作用に重要であることが分かった（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５及びＹ４３６が相互作用に重要であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）において、残基２４８～２５９、及び３０１～３１７、及び３７６～３８２、及び４２４～４３７の様々な突然変異体が報告され、調査されている。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２５３、及び／又は３１０、及び／又は４３５（残基のＥＵナンバリング）における置換を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５３、３１０、及び４３５におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照されたい。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置３１０、及び／又は４３３、及び／又は４３６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、３１０位、４３３位及び４３６位におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａである。（例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照）。
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５２、及び／又は２５４、及び／又は２５６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５２、２５４、及び２５６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
本明細書に報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であってもよい。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうち１つ又は２つが除去された、短くなったＣ末端であってもよい。一態様では、重鎖のＣ末端は、短縮されたＣ末端で終わるＰＧである。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リジンジペプチドを含む（Ｇ４４６及びＫ４４７、アミノ酸位置のＥＵインデックスナンバリング）。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基を含む（Ｇ４４６、アミノ酸位置のＥＵインデックスナンバリング）。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端プロリン残基を含む（Ｐ４４５、アミノ酸位置のＥＵインデックスナンバリング）。
ｄ） システイン改変抗体バリアント
特定の態様では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、それは、本明細書でさらに説明するように、例えば薬物部分又はリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートさせて免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、第８，３０，９３０号、第７，８５５，２７５号、第９，０００，１３０号、又は国際公開第２０１６０４０８５６号に記載されている。
ｅ） 抗体誘導体
ある特定の態様では、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むようにさらに改変され得る。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ：ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に付着しているポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが付着している場合には、それらは同じ分子であっても、異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定することができる。
Ｂ． 組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組み換え法及び組成物を使用して生成されうる。これらの方法のために、抗体をコードする１つ以上の単離された核酸が提供される。
２つの核酸が必要とされる天然抗体又は天然抗体断片の場合、１つは軽鎖又はその断片のためのものであり、１つは重鎖又はその断片のためのものである。そのような核酸（複数可）は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖（複数可））をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター上、又は異なる発現ベクター上にあってもよい。
４つの核酸が必要とされるヘテロ二量体の重鎖を有する二重特異性抗体の場合、１つは第１の軽鎖のため、１つは第１のヘテロモノマーＦｃ領域ポリペプチドを含む第１の重鎖のため、１つは第２の軽鎖のため、及び１つは第２のヘテロモノマーＦｃ領域ポリペプチドを含む第２の重鎖のためのものである。４つの核酸は、１つ以上の核酸分子又は発現ベクターに含まれ得る。このような核酸は、第１のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は第１のヘテロモノマーＦｃ領域を含む第１のＶＨを含むアミノ酸配列及び／又は第２のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体の第２のヘテロモノマーＦｃ領域を含む第２のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の第１及び／若しくは第２の軽鎖並びに／又は第１及び／若しくは第２の重鎖）をコードする。これらの核酸は、同じ発現ベクター又は異なる発現ベクター上にあってもよく、通常、これらの核酸は、２つ又は３つの発現ベクター上に位置しており、すなわち、１つのベクターは、これらの核酸のうち、２つ以上を含んでいてもよい。これらの二重特異性抗体の例は、ＣｒｏｓｓＭａｂである（例えば、Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１１８７－１１９１を参照）。例えば、ヘテロモノマー重鎖の１つは、ＥＵインデックスナンバリングに従って、いわゆる「ノブ突然変異」（Ｔ３６６Ｗと、任意に、Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃのうち１つ）を含み、他方は、いわゆる「ホール突然変異」（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖと、任意に、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃ）を含む（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２（１９９６）７３を参照）。
一態様では、本明細書で報告される方法で使用される抗体をコードする単離された核酸が提供される。
一態様では、抗ＣＣＲ８抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。
抗ＣＣＲ８抗体の組換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング及び／又は宿主細胞内での発現のために、１つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができ、又は組み換え法によって産生することができ、又は化学合成によって得ることができる。
抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクタ機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号、及び米国特許第５，８４０，５２３号を参照されたい。（大腸菌における抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照。）発現後、抗体は、適切なフラクション中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、更に精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９－１４１４；及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０－２１５を参照。
また、（グリコシル化）抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウイルス株が同定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、これを昆虫細胞と組み合わせて使用してもよい。
植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、米国特許第６，０４０，４９８号、米国特許第６，４２０，５４８号、米国特許第７，１２５，９７８号及び米国特許第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照。
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞又は２９３Ｔ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、及び、骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．ａｎｄ Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００４），ｐｐ．２５５－２６８を参照されたい。
１つの態様において、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
Ｃ． アッセイ
本明細書に提供される抗ＣＣＲ８抗体は、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物活性について、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、特定され得るか、スクリーニングされ得るか、又は特徴付けられ得る。
１． 結合アッセイ及びその他のアッセイ
一態様では、本明細書に記載の抗体を、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。
別の態様では、競合アッセイを使用して、ＣＣＲ８への結合について、本開示の主題の抗ＣＣＲ８抗体、例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５と競合する抗体を同定してもよい。特定の態様では、そのような競合抗体は、本開示の主題の抗ＣＣＲ８抗体、例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、及びＡｂ５によって結合される同じエピトープ（例えば、線状エピトープ又は立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示の方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
例示的な競合アッセイでは、固定化ＣＣＲ８を、ＣＣＲ８に結合する第１の標識抗体（例えば、本開示の主題の抗ＣＣＲ８抗体、例えば、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４及びＡｂ５）と、ＣＣＲ８への結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。対照として、固定化したＣＣＲ８を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＣＣＲ８への結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰な未結合抗体は除去され、固定化したＣＣＲ８に結合した標識の量が測定される。対照試料と比較して、固定化したＣＣＲ８に結合した標識の量が試験試料中で実質的に減少している場合、それは、ＣＣＲ８への結合について第２の抗体が第１の抗体と競合していることを示している。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
２． 活性アッセイ
一態様では、生物学的活性を有するその抗ＣＣＲ８抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｔｒｅｇに対するＡＤＣＣ、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、Ｔｒｅｇの枯渇が含まれ得る。かかる生物活性をインビボ及び／又はインビトロで有する抗体も提供される。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体を、抗体のＡＤＣＣを測定するために試験する。ＡＤＣＣアッセイは、いくつかの改変を加えて、Ｋａｍｅｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１９．４６８：ｐ．４９－５４，ａｎｄ Ｓｃｈｎｕｅｒｉｇｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ，ｃｅｌｌ－ｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ＡＤＣＣ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１．４８（１２－１３）：ｐ．１５１２－１７で以前に報告されたように、エフェクタ細胞としてＣＤ１６操作ＮＫ－９２＿Ｆ１５８を使用し、標的細胞としてヒトＣＣＲ８及びＧａ １５サブユニットを安定に発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ１５）を使用して実施される。簡潔には、ＡＤＣＣによる標的細胞の溶解を、カルセイン放出法によって測定する。標的細胞をカルセイン－ＡＭで標識し、次いで洗浄し、３０００ 細胞／ウェルの密度で３８４ウェルプレートに播種する。抗ＣＣＲ８抗体を０．００４～１μｇ／ｍＬの様々な濃度で添加し、続いてＮＫ－９２＿Ｆ１５８細胞を１０：１のエフェクタ：標的（Ｅ：Ｔ）比で添加する。次いで、プレートを３７℃で２．５時間インキュベートする。インキュベーション後、プレートを２００×ｇで３分間遠心分離し、上清を白色不透明な３８４ウェルマイクロプレートに移し、蛍光シグナルを相対蛍光単位（ＲＦＵ）で測定する。標的細胞のみを含むウェルからのシグナルは、標識細胞からのカルセインの自発的放出（自発的放出）を表すのに対して、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で溶解した標的細胞を含むウェルは、利用可能な最大シグナル（最大放出）を提供する。抗体非依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＩＣＣ）を、抗体を添加せずに標的細胞及びエフェクタ細胞を含有するウェルにおいて測定する。試料及び対照は、同じプレートにおいて少なくとも２連で試験される。特異的ＡＤＣＣ活性の程度を以下のように計算する。
％ＡＤＣＣ＝１００×（平均実験放出－平均ＡＩＣＣ）／（平均最大放出－平均自発的放出）
ＡＤＣＣ活性を抗体濃度の関数としてプロットし、データを非対称シグモイド４パラメータロジスティック（４ＰＬ）モデルに当てはめる。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体を、Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣを測定するために試験する。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＴ細胞上のＣＣＲ８発現を誘導するために、１０７個のヒトＰＢＭＣをＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウス（ＪＡＸ）に腹腔内移入し、移入の２～３週間後に脾臓を回収する。ヒトＴ細胞は、ＮＳＧ脾細胞の単一細胞懸濁液から濃縮され、初代ＮＫ細胞はヒトＰＢＭＣから濃縮される。ヒトＴ細胞を０．００１～１μｇ／ｍＬの抗ＣＣＲ８抗体と室温で３０分間インキュベートした後、エフェクタ：標的比２：１で初代ＮＫ細胞を添加する。３７℃で一晩インキュベートした後、細胞を収集し、表面染色し、細胞内染色する。Ｔ細胞集団を定義するために使用される抗体は、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３（ＳＫ７）、ＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、及びＣＤ１４（６３Ｄ３）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、及びＦＯＸＰ３（２３６Ａ／Ｅ７）である。取得前にＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄを各試料に添加される。フローサイトメトリーを行う。絶対細胞数を計算する。回収されたＴｒｅｇ細胞対回収されたＣＤ８細胞（Ｔｒｅｇ／ＣＤ８）又は従来のＣＤ４ Ｔ細胞対回収されたＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４ｃｏｎｖ／ＣＤ８）の比を計算することによって、Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣ活性を測定する。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）フローサイトメトリーによって制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞又はＴｒｅｇ）へのその結合を測定するために試験する。ヒト結腸直腸解離腫瘍細胞（ＤＴＣ）を解凍する。細胞を、４℃で２０分間、ｅＦｌｕｏｒ ７８０コンジュゲートＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ及びＣＣＲ８、ＯＸ４０（陽性対照）、ハーセプチン（陰性対照）、又は抗ｈＩｇＧ（陰性対照）に特異的な２ｕｇ／ｍＬ ｍＡｂで表面染色し、続いて４℃で１０分間、ＡＦ６４７コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃｇ断片特異的で二次検出する。次いで、細胞を細胞内染色する。Ｔ細胞集団を定義するために使用される抗体は、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３（ＳＫ７）、ＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、及びＣＤ１４（６３Ｄ３）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、及びＦＯＸＰ３（２３６Ａ／Ｅ７）である。フローサイトメトリーを実施し、分析する。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体を、抗体のＡＤＣＰを測定するために試験する。ヒＣＤ１４＋単球は、最初に、既知のＦｃｇＲＩＩａ及びＦｃｇＲＩＩＩａ遺伝子型情報を有するドナーの血液から単離される。精製されたＣＤ１４＋単球はマクロファージに分化する。次いで、５０ｎｇ／ｍＬのｈＩＬ－１０を添加して、マクロファージをＡＤＣＰアッセイの前に２４時間分極させる。ＮｕｃＬｉｇｈｔ ＲｅｄトランスフェクトＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ１５標的細胞を、２０ｍｇ／ｍＬの非特異的ヒトＩｇＧの存在下で２０分間抗ＣＣＲ８抗体とプレインキュベートする。次いで、上記の細胞混合物を１：１のＥ：Ｔ比でマクロファージ（エフェクタ細胞）プレートに添加する。細胞画像は、６時間の期間にわたって１時間毎に明視野及び赤色レーザー設定で得られる。各ウェルにおける赤血球数（残りの標的細胞）は、マクロファージ数によって正規化される。ＡＤＣＰ活性は、アイソタイプ対照抗体が存在する場合の陰性対照と比較した各試料における正規化された赤血球数の減少のパーセンテージとして計算される。ＡＤＣＰ活性を抗体濃度の関数としてプロットし、データを非対称シグモイド４パラメータロジスティック（４ＰＬ）モデルに当てはめる。各抗体のＥＣ５０値を、５０％の標的細胞殺傷に達する濃度として決定する。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体（例えば、マウス代用抗体）をインビボでＴｒｅｇ細胞の枯渇を測定するために試験し、確立された腫瘍を有するマウスを抗ＣＣＲ８抗体（例えば、本明細書中に開示されるマウス代用抗体）で処置し、腫瘍、脾臓及び腫瘍排出リンパ節中の白血球の中のＴｒｅｇ細胞、従来のＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の割合を分析する。この目的のために、腫瘍細胞を対数期増殖で採取し、１：１の比でＨＢＳＳ含有マトリゲルに再懸濁する。マウスの脇腹に、１００マイクロリットルのＨＢＳＳ＋マトリゲル中の１０万個の腫瘍細胞を皮下接種する。腫瘍を、確立されて平均腫瘍体積１３０～２３０ｍｍ３に達するまで監視する。次いで、マウスを処置群に無作為化する。抗ＣＣＲ８又は抗ｇｐ１２０アイソタイプ対照Ａｂによる処置を静脈内投与する。３日後、マウスを屠殺し、分析のために腫瘍、脾臓及び腫瘍排出リンパ節を得る。単一細胞懸濁液を生成するために、腫瘍を細かく刻み、消化する。単一細胞懸濁液を蛍光標識抗ＣＤ４５、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体で表面染色し、蛍光標識抗Ｆｏｘｐ３抗体で細胞内染色する。フローサイトメトリーをＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０又はＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙで実行し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析してもよい。
特定の態様では、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体（例えば、マウス代用抗体）を、インビボでの腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の抗ＣＣＲ８媒介枯渇後の腫瘍増殖阻害について試験する。確立された腫瘍を有するマウスをマウス代用抗ＣＣＲ８抗体で処置し、腫瘍増殖について経時的に監視する。
Ｄ． 診断及び検出のための方法及び組成物
特定の態様では、本明細書で提供される抗ＣＣＲ８抗体のいずれも、生物学的試料中のＣＣＲ８の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。特定の態様において、生物学的試料は、腫瘍などの細胞又は組織を含む。
一態様では、診断又は検出の方法で使用するための抗ＣＣＲ８抗体が提供される。更なる態様では、生物学的試料中のＣＣＲ８の存在を検出する方法が提供される。特定の態様では、本方法は、抗ＣＣＲ８抗体とＣＣＲ８との結合を許容する条件下で、生物学的試料を本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体と接触させ、抗ＣＣＲ８抗体とＣＣＲ８との間に複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法又はインビボ法であってもよい。一態様では、例えば、ＣＣＲ８が対象の選択のためのバイオマーカである場合、抗ＣＣＲ８抗体を使用して、抗ＣＣＲ８抗体での療法に適格な対象を選択する。
特定の態様において、標識された抗ＣＣＲ８抗体が提供される。標識には、直接検出される標識又は部分（例えば、蛍光標識、発色団標識、電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識）、並びに、例えば酵素反応又は分子相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドなどの部分が含まれるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）などのルシフェラーゼ類、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン類、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼなどの糖オキシダーゼ、過酸化水素を使用して、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素と結合した、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定フリーラジカルなどが含まれるが、これらに限定されない。
Ｅ． 医薬組成物
さらなる態様において、例えば、以下の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗体のいずれかを含む、医薬組成物が提供される。一態様では、医薬組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。
本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体の医薬組成物（製剤）は、抗体を当業者に公知の薬学的に許容され得る担体又は賦形剤と組み合わせることによって調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０），Ｓｈｉｒｅ Ｓ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｆｉｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ，１ｓｔ Ｅｄ．，Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０１５），§４ ａｎｄ Ｆａｌｃｏｎｅｒ Ｒ．Ｊ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ（２０１９），３７，１０７４１２を参照されたい。本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体の例示的な医薬組成物は、凍結乾燥、水性、凍結などである。
薬学的に許容され得る担体は、一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ヒスチジン、ホスファート、シトラート、アセタート及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
本明細書の医薬組成物はまた、処置されている特定の徴候に必要とされる複数の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものも含みうる。例えば、同じ疾患の処置に有用な追加の治療剤をさらに提供することが望ましい場合がある。かかる有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
インビボ投与に使用される医薬組成物は、一般に無菌である。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成することができる。
Ｆ． 治療方法及び投与経路
本明細書に提供される抗ＣＣＲ８抗体又は免疫複合体のいずれも、治療方法において使用することができる。
一態様では、医薬として使用するための抗ＣＣＲ８抗体が提供される。さらなる態様では、がんの処置における使用のための抗ＣＣＲ８抗体が提供される。特定の態様では、処置方法に使用するための抗ＣＣＲ８抗体が提供される。特定の態様では、本開示は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を対象に投与することを含む、処置を必要とする対象（例えばヒト対象）を処置する方法に使用するための抗ＣＣＲ８抗体を提供する。そのような一態様では、本方法は、例えば以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を対象に投与することをさらに含む。さらなる態様では、本開示は、腫瘍微小環境において制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）を枯渇させるのに使用するための抗ＣＣＲ８抗体を提供する。特定の態様では、本開示は、対象の腫瘍微小環境においてＴｒｅｇを枯渇させる方法において使用するための抗ＣＣＲ８抗体であって、該方法が腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇの枯渇において有効量の抗ＣＣＲ８抗体を対象に投与することを含む、抗体を提供する。
さらなる態様では、本開示は、医薬の製造又は調製における抗ＣＣＲ８抗体の使用を提供する。一態様では、医薬は、がんの処置のためのものである。さらなる態様では、医薬は、有効量の医薬を、それを必要とする対象（例えばヒト対照）に投与することを含む、がんを処置する方法に使用するためのものである。そのような１つの態様において、その方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、下記に記載されるようなものを対象に投与することをさらに含む。さらなる態様では、医薬は、腫瘍微小環境においてＴｒｅｇを枯渇させるためのものである。さらなる態様では、医薬は、腫瘍微小環境中のＴｒｅｇを枯渇させるための有効量の医薬を対象に投与することを含む、対象の腫瘍微小環境中のＴｒｅｇを枯渇させる方法に使用するためのものである。
さらなる態様では、本開示は、がんを処置するための方法を提供する。一態様では、本方法は、がんを処置するために、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を、それを必要とする対象（例えばヒト対象）に投与することを含む。そのような１つの態様において、その方法は、下記に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。
さらなる態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させる際に、例えば腫瘍微小環境の外側又は中で使用するための抗ＣＣＲ８抗体を提供する。例えば、特定の実施形態では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させることを必要とするがんを有する対象（例えばヒト対象）の腫瘍微小環境中のＴｒｅｇ細胞を枯渇させるための方法であって、腫瘍微小環境中のＴｒｅｇ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の抗ＣＣＲ８抗体を対象に投与し、それによりがんを処置することを含む、方法を提供する。特定の態様では、本開示は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させることを必要とするがんを有する対象（例えばヒト対象）の腫瘍微小環境外（例えば循環中）のＴｒｅｇ細胞を枯渇させるための方法であって、腫瘍微小環境外のＴｒｅｇ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の抗ＣＣＲ８抗体を対象に投与し、それによりがんを処置することを含む、方法を提供する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、腫瘍微小環境外のＴｒｅｇ細胞の数を減少させることによって、腫瘍微小環境に浸潤するＴｒｅｇ細胞の数が減少するにつれてがんが処置され、それによって腫瘍微小環境中のＴｒｅｇ細胞の数が減少する。
例示的ながんには、膀胱がん（例えば、尿路上皮がん）、芽細胞腫、血液がん（リンパ腫、例えば、非ホジキンリンパ腫、白血病）、骨がん、脳がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、子宮頸がん、結腸直腸がん（例えば、結腸がん、直腸がん）、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん（例えば、頭頸部の扁平上皮癌腫）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌腫）、肝臓がん（例えば、肝細胞癌腫）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、小細胞肺癌腫）、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肉腫、皮膚がん（例えば、黒色腫、扁平上皮癌腫）、精巣がん及び子宮がんが含まれるが、これらに限定されない。
特定の態様では、がんは、膀胱がん、血液がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、及び皮膚がんである。
特定の態様では、がんは、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、食道がん、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、又は皮膚がんである。
特定の態様では、がんは固形腫瘍である。
特定の態様では、がんはＣＣＲ８を発現する。
特定の態様では、がんは、Ｔ細胞炎症腫瘍であるか、又はＴ細胞炎症腫瘍微小環境を含む。
特定の態様では、がんは、腫瘍微小環境中に制御性Ｔ細胞を含み、本明細書に記載のように、ＣＣＲ８抗体へのがんの曝露は、腫瘍微小環境中の制御性Ｔ細胞の枯渇をもたらす。さらなる態様では、本開示は、例えば上記の治療方法のいずれかで使用するための、本明細書に記載の抗ＣＣＲ８抗体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。一態様では、医薬組成物は、本明細書に提供される抗ＣＣＲ８抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗ＣＣＲ８抗体のいずれかと、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。
本明細書に記載の抗体は、単独で投与することができ、又は併用療法で使用することができ、例えば、がんの処置に有用である。例えば、併用療法には、本明細書に記載の抗体を投与することと、少なくとも１の追加の治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの追加の治療剤）を投与することとが含まれる。
少なくとも１つの追加の治療剤は、処置のために投与することができる任意の薬剤を包含する。特定の態様では、追加の治療剤は、追加の抗がん剤である。例示的な抗がん剤には、微小管破壊剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アルキル化剤、ホルモン療法、キナーゼ阻害剤、受容体アンタゴニスト、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤、抗血管新生剤、免疫調節剤、細胞接着の阻害剤、細胞傷害性又は細胞分裂阻害剤、細胞アポトーシスの活性化剤、アポトーシス誘導物質に対する細胞の感受性を増加させる薬剤、サイトカイン、抗がんワクチン又は腫瘍溶解性ウイルス、トール様受容体（ＴＬＲ）剤、二重特異性抗体、細胞療法、及び免疫細胞エンゲージャが含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、追加の治療剤は、免疫調節性抗がん剤、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ）などのチェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト、又はＰＤ－１結合アンタゴニストである。
「ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ－Ｌ１とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ－１及び／又はＢ７－１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、又は妨害する分子を指す。いくつかの例では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１及び／又はＢ７－１への結合を阻害する。いくつかの例では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ－Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ－１及び／又はＢ７－１との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、又は妨害する他の分子を含む。一例では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全のＴ細胞を機能不全にしないようにする（例えば、抗原認識に対するエフェクタ応答を増強する）ように、ＰＤ－Ｌ１を介するシグナル伝達を介してＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される負の共刺激性シグナルを低減する。いくつかの例では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１に結合する。いくつかの例では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体）である。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体としては、アテゾリズマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）、ＳＨＲ－１３１６、ＣＳ１００１、エンバホリマブ、ＴＱＢ２４５０、ＺＫＡＢ００１、ＬＰ－００２、ＣＸ－０７２、ＩＭＣ－００１、ＫＬ－Ａ１６７、ＡＰＬ－５０２、コシベリマブ、ロダポリマブ、ＦＡＺ０５３、ＴＧ－１５０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＢＣＤ－１３５、ＡＫ－１０６、ＬＤＰ、ＧＲ１４０５、ＨＬＸ２０、ＭＳＢ２３１１、ＲＣ９８、ＰＤＬ－ＧＥＸ、ＫＤ０３６、ＫＹ１００３、ＹＢＬ－００７及びＨＳ－６３６が挙げられる。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、又はＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）である。特定の一態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＭＤＸ－１１０５である。別の特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストはＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）である。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、小分子、例えばＧＳ－４２２４、ＩＮＣＢ０８６５５０、ＭＡＸ－１０１８１、ＩＮＣＢ０９０２４４、ＣＡ－１７０又はＡＢＳＫ０４１であり得、いくつかの例では経口投与され得る。他の例示的なＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストとしては、ＡＶＡ－００４、ＭＴ－６０３５、ＶＸＭ１０、ＬＹＮ１９２、ＧＢ７００３及びＪＳ－００３が挙げられる。一態様では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、アテゾリズマブである。
「ＰＤ－１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ－１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、又は妨害する分子を指す。ＰＤ－１（プログラム死１）は、当技術分野で「プログラム細胞死１」、「ＰＤＣＤ１」、「ＣＤ２７９」、及び「ＳＬＥＢ２」とも呼ばれる。例示的なヒトＰＤ－１は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ１５１１６に示される。いくつかの例では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１の、その結合パートナー農地の１つ以上に対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、又は妨害する他の分子を含む。一例では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、機能不全のＴ細胞を機能不全にしないようにする（例えば、抗原認識に対するエフェクタ応答を増強する）ように、ＰＤ－１を介するシグナル伝達を介してＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減する。いくつかの例では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＰＤ－１に結合する。いくつかの例では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体）である。例示的な抗ＰＤ－１アンタゴニスト抗体としては、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０、ＰＤＲ００１（スパルタリズマブ）、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＢＧＢ－１０８、プロルゴリマブ、カンレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、レチファンリマブ、ササンリマブ、ペンプリマブ、ＣＳ１００３、ＨＬＸ１０、ＳＣＴ－Ｉ１０Ａ、ジンベレリマブ、バルスチリマブ、ゲノリムズマブ、ＢＩ ７５４０９１、セトレリマブ、ＹＢＬ－００６、ＢＡＴ１３０６、ＨＸ００８、ブジカリマブ、ＡＭＧ４０４、ＣＸ－１８８、ＪＴＸ－４０１４、６０９Ａ、Ｓｙｍ０２１、ＬＺＭ００９、Ｆ５２０、ＳＧ００１、ＡＭ０００１、ＥＮＵＭ ２４４Ｃ８、ＥＮＵＭ ３８８Ｄ４、ＳＴＩ－１１１０、ＡＫ－１０３及びｈＡｂ２１が挙げられる。特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＭＫ－３４７５（ペンブロリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合タンパク質、例えばＡＭＰ－２２４である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＭＥＤ１－０６８０である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＰＤＲ００１（スパルタリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＢＧＢ－１０８である。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはプロルゴリマブである。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはカンレリズマブである。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはシンチリマブである。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはチスレリズマブである。別の特定の態様では、ＰＤ－１結合アンタゴニストはトリパリマブである。他の例示的なＰＤ－１結合アンタゴニストとしては、ＢＩＯＮ－００４、ＣＢ２０１、ＡＵＮＰ－０１２、ＡＤＧ１０４及びＬＢＬ－００６が挙げられる。上で述べられたそのような併用療法は、併用投与（２以上の治療剤が、同じ又は別個の医薬組成物に含まれる場合）及び別個の投与を包含し、この場合、本明細書に記載の抗体の投与は、追加の治療剤の投与前、投与と同時及び／又は投与後に行われ得る。一態様では、抗ＣＣＲ８抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約一カ月以内、又は約１、２、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に行われる。一態様では、抗体及び追加の治療剤は、処置の１日目に対象に投与される。本明細書に記載される抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本明細書に記載の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所的な処置に望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに部分的に応じて、例えば、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射又は皮下注射等の注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
本明細書に記載される抗体は、良好な医療行為と一致する様式で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮すべき因子には、処置されている特定の障害、処置されている特定の対象種、対象の臨床症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール、及び医療従事者に知られている他の因子が含まれる。抗体は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を処置するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。このような他の薬剤の有効量は、医薬組成物中に存在する抗体の量、疾患又は処置の種類、及び上述した他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
本発明の抗体は、好適には、対象に一度に又は一連の処置にわたって投与される。数日以上にわたる反復投与に関しては、病状に応じて、処置は一般に疾患症状の望まれる抑制が起こるまで継続されるものとする。しかしながら、他の投与レジメンが有用であってもよい。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
さらなる実施形態では、例えば、インビトロ又はインビボのツール分子として使用するために、マウス代用物の使用が企図される。例えば、一態様では、疾患を処置するために有効量の本明細書に記載のマウス代用抗体をマウスに投与することを含む、マウスの疾患を処置する方法が提供される。特定の実施形態では、マウスは異種移植片を含む。特定の実施形態では、マウスモデルは、がんモデル、例えば皮膚がんモデルである。
Ｇ． 製造品
別の態様では、上述した障害の処置、防止及び／又は診断に有用な物質を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器上の又は容器に関連付けられたラベル又は添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、症状を処置、防止、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に開示される抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本明細書に開示される抗体を含む組成物が入った第１の容器、及び（ｂ）細胞障害剤又は他の治療剤をさらに含む組成物が入った第２の容器を備えることができる。本明細書に記載されるこの態様の製造品は、組成物が特定の症状を処置するために使用することができることを示す添付文書をさらに含みうる。これに代えて、又はこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器を更に備えていてもよい。製造品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでもよい。
以下は、本明細書中に記載される抗体、方法及び組成物のさらなる非限定的な例である。先に提供した一般的な説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施されてもよいことが理解される。
実施例１．抗ＣＣＲ８モノクローナル抗体の発見及び操作
ニュージーランドホワイトウサギを、組換えｈｕＣＣＲ８、ｈｕＣＣＲ８＋ウサギ細胞株、ｈｕＣＣＲ８を含有する細胞外小胞、並びにｈｕＣＣＲ８のＮ末端領域に由来する硫酸化及び非硫酸化ペプチドで免疫した。Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １５（１２），２０２０に記載のプロトコルに従って単一Ｂ細胞を単離した。次いで、Ｂ細胞培養上清を、ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８＋ＣＨＯ細胞及び対照ＣＨＯ細胞への結合について単一ウェルへのＩｇＧ＋Ｂ細胞の直接フロー活性化細胞選別（ＦＡＣＳ；フローサイトメトリー）によってアッセイした。ＣＣＲ８特異的Ｂ細胞を溶解し、直ちに－８０℃で凍結し、分子クローニングまで保存した。ウサギＢ細胞由来の各モノクローナル抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）を、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １５（１２），２０２０に記載されるように、抽出したｍＲＮＡ由来の発現ベクターにクローニングした。個々の組換えウサギ抗体をＥｘｐｉ ２９３細胞で発現させ、続いてプロテインＡで精製した。
ヒト又はｃｙｎｏ ＣＣＲ８ ＣＨＯ細胞のいずれかに結合する４８０を超える抗ＣＣＲ８抗体が得られた。抗体を、ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８ ＣＨＯ細胞株におけるそれらの相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）及び配列多様性に基づいてさらに選択した。ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８ ＣＨＯ細胞で５倍未満のＭＦＩ差を示した抗体から、５つの固有な抗体群が同定された（Ａｂ１～Ａｂ５と命名）。各群から１つの代表的な配列をヒト化のために選択した。
ウサギモノクローナル抗体のヒト化中に構築されたバリアントをヒトＩｇＧ１の形態で評価した。ウサギ抗体の各々からの超可変領域（すなわち、ＶＬドメインにおける２４～３４位（Ｌ１）、５０～５６位（Ｌ２）、及び８９～９７位（Ｌ３）、並びにＶＨドメインにおける２６～３５位（Ｈ１）、５０～６５位（Ｈ２）、及び９５～１０２位（Ｈ３））を、種々の受容体フレームワークに移植した。残基番号は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による。ウサギ抗体からの全てのＶＬ及びＶＨ Ｖｅｒｎｉｅｒ位置もまた、それぞれのヒト生殖細胞系フレームワークに移植した。Ｖｅｒｎｉｅｒ位置に全てのウサギアミノ酸を有するグラフトをＨ１Ｌ１と呼ぶ。ＣＨＯ－ｈｕＣＣＲ８．Ｇｎａ１５安定細胞株に対するヒト化ＣＣＲ８抗体の結合能を、それらのキメラ親クローンと比較した。バージョンＨ１Ｌ１抗体のウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置をヒト残基に戻して、ｈｕＣＣＲ８への結合に対する各ウサギＶｅｒｎｉｅｒ位置の寄与を評価した。
ｍＡｂを、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）フローサイトメトリーによって制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞又はＴｒｅｇ）への結合について評価した。ヒト結腸直腸解離腫瘍細胞（ＤＴＣ）（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）をベンダーのプロトコルに従って解凍した。細胞を、４℃で２０分間、ｅＦｌｕｏｒ ７８０コンジュゲートＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＣＣＲ８、ＯＸ４０（陽性対照）、ハーセプチン（陰性対照）、又は抗ｈＩｇＧ（陰性対照）に特異的な２ｕｇ／ｍＬ ｍＡｂで表面染色し、続いて４℃で１０分間、ＡＦ６４７コンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃｇ断片特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で二次検出した。次いで、製造業者のプロトコルに従ってｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液セット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して細胞を細胞内染色した。Ｔ細胞集団を定義するために使用される抗体は、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３（ＳＫ７）、ＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、及びＣＤ１４（６３Ｄ３）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製のＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＦＯＸＰ３（２３６Ａ／Ｅ７）であった。フローサイトメトリーをＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バージョン１０．５．３）で分析した。図１には、ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ４－として定義される）（丸、）、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８－ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３－）として定義される）（四角、）、及びＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ１４－ＣＤ３＋ＣＤ８－ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋として定義される）（三角形、▲）についての平均蛍光強度（ＭＦＩ）値が示されている。５つのＣＣＲ８ ｍＡｂクローンのうちの３つは、Ｔｒｅｇ細胞を特異的に染色し、従来のＣＤ４又はＣＤ８ Ｔ細胞を染色せず、ＣＣＲ８ ＭＦＩに従って５００ ＭＦＩ超でランク付けした：ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１＞ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１＞ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１。これらの３つのＣＣＲ８ ｍＡｂクローン、すなわちｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１もまた、ヒト－ｃｙｎｏ交差反応性を保持していることが確認されたので（ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８ ＣＨＯ細胞での差は５倍未満）、これらの抗体はさらなる研究のために進んだ。
例えば、ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１を抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）についてさらに試験した。ｈＩｇＧ１アイソタイプを陰性対照として使用した。図２を参照されたい。ＡＤＣＣアッセイは、いくつかの改変を加えて、Ｋａｍｅｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１９．４６８：ｐ．４９－５４，ａｎｄ Ｓｃｈｎｕｅｒｉｇｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ，ｃｅｌｌ－ｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ＡＤＣＣ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１１．４８（１２－１３）：ｐ．１５１２－１７で以前に報告されたように、エフェクタ細胞としてＣＤ１６操作ＮＫ－９２＿Ｆ１５８を使用し、標的細胞としてヒトＣＣＲ８及びＧ－アルファ１５サブユニットを安定に発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ１５）を使用して実施した。簡潔には、ＡＤＣＣによる標的細胞の溶解を、カルセイン放出法によって測定した。標的細胞を製造者のプロトコルに従ってカルセイン－ＡＭ（Ｃ３１００ＭＰ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、次いで洗浄し、３８４ウェルプレート上に３０００ 細胞／ウェルの密度で播種した。抗ＣＣＲ８抗体を０．００４～１μｇ／ｍＬの様々な濃度で添加し、続いてＮＫ－９２＿Ｆ１５８細胞を１０：１のエフェクタ：標的（Ｅ：Ｔ）比で添加した。次いで、プレートを３７℃で２．５時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを２００×ｇで３分間遠心分離し、上清を白色不透明な３８４ウェルマイクロプレート（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に移し、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して４８５／５２０ｎｍでの励起／発光で相対蛍光単位（ＲＦＵ）で蛍光シグナルを測定した。標的細胞のみを含むウェルからのシグナルは、標識細胞からのカルセインの自発的放出（自発的放出）を示したが、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で溶解した標的細胞を含むウェルは、利用可能な最大シグナル（最大放出）を提供した。抗体非依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＩＣＣ）を、抗体を添加せずに標的細胞及びエフェクタ細胞を含有するウェルにおいて測定した。試料及び対照は、同じプレートにおいて少なくとも２連で試験した。特異的ＡＤＣＣ活性の程度を以下のように計算した。
％ＡＤＣＣ＝１００×（平均実験放出－平均ＡＩＣＣ）／（平均最大放出－平均自発的放出）
ＡＤＣＣ活性を抗体濃度の関数としてプロットし、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いてデータを非対称シグモイド４パラメータロジスティック（４ＰＬ）モデルに当てはめた。図２を参照されたい。ＥＣ５０値を、各個々の抗体の最大ＡＤＣＣ活性の５０％に達する濃度として決定した。ＥＣ５０値も以下に表にする。
Figure 2024527606000004
ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１を、それらのアゴニスト（ＣＣＲ８活性化）及びアンタゴニスト（ＣＣＬ１の阻害；中和）活性についてさらに分析した。ｈＩｇＧ１アイソタイプを陰性対照として使用した。ＣＣＲ８活性化を、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ）ＦＤＳＳ／μＣｅｌｌ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ，Ｊａｐａｎ）を用いてＣａ２＋流入によってモ監視した。簡潔には、ＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ １５細胞に蛍光Ｃａ２＋色素Ｆｌｕｏ－８ ＮＷ（カタログ番号３６３０７、ＡＡＴ Ｂｉｏｑｕｅｓｔ）を負荷し、３７℃で３０分間、次いで室温でさらに３０分間インキュベートした。連続希釈試験抗ＣＣＲ８抗体を透明な３８４ウェルプレート中のＨＨＢＳ緩衝液中で調製し、ＨＨＢＳ緩衝液中のｈＣＣＬ１も透明な３８４ウェルプレート中に等分した。１０秒での抗体添加及び３００秒でのｈＣＣＬ１添加並びに合計５００秒の監視で、ＦＤＳＳ／μＣｅｌｌでのＦＬＩＰＲアッセイを設定する。励起及び発光波長をそれぞれ４８５ｎｍ及び５２５ｎｍに設定する。実行後、陰性対照補正を適用し、データをｈＣＣＬ１シグナル（１００％）に対して正規化し、Ｐｒｉｓｍを用いて抗体濃度の関数としてプロットした。
図３Ａに示されるように、ＣＣＲ８に対する既知のリガンドであるＣＣＬ１はアゴニスト活性を示すが、どの抗ＣＣＲ８試験抗体もアゴニスト効果を示さない。図３Ｂのデータは、抗ＣＣＲ８抗体ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１が、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１（２０ｎＭのリガンド）に対するアンタゴニスト（中和）活性を有するが、抗ＣＣＲ８抗体ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１が、試験した濃度でリガンド遮断活性を示さない（非中和）ことを示している。図３Ｃのデータはさらに、コンパレーター抗ＣＣＲ８抗体（Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ））が、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１によるＣＣＲ８の活性化を遮断することによってアンタゴニスト（中和）活性も示すことを実証している。リガンド遮断活性のＩＣ５０値を表Ｂに示す。Ｖａｎ Ｄａｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ（２０２１），９：ｅ００１７４９に記載のとおり、リガンド遮断単独では、マウス腫瘍におけるＴｒｅｇ細胞枯渇には不十分である。したがって、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１は、リガンド遮断を示さなかったが、これらの２つの抗体は、目標はＣＣＲ８に結合してＴｒｅｇ細胞を枯渇させる選択的抗ＣＣＲ８抗体を見出すことであったので、依然として有望な候補と考えられた。
Figure 2024527606000005
ＣＣＲ８に対する選択性を確認するために、ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１、並びにＹｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８、マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、市販Ａｂ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、市販Ａｂ）を、ＦＬＡＧタグ化された他の関連ヒトＧＰＣＲ（ＣＣＲ２－５、ＣＸＣＲ４、ＡＣＫＲ２、及びＡＣＫＲ４）をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞上のフローサイトメトリーによって特徴付けた。各ＧＰＣＲの細胞表面発現を、抗ＦＬＡＧ抗体対照で染色することによって確認した。図４Ａ～４Ｆを参照されたい。特に、ＨＥＫ２９３細胞を、Ｎ末端ＦＬＡＧタグ化ヒトＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ４、ｈＣＣＲ８構築物、又はｔｒａｎｓＩＴ Ｘ２（試薬：ＤＮＡ＝３：１）を用いたモック構築物で２４時間トランスフェクトし、５ｕｇ／ｍｌの様々な抗ｈＣＣＲ８モノクローナル抗体、又はウサギ抗Ｆｌａｇ ｐＡｂ（Ｓｉｇｍａ）、続いてそれぞれＡＦ６４７抗ｈＩｇＧ又はＡＦ６４７抗ＲｂＩｇＧで表面染色した。抗体ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１は、ｈＣＣＲ８含有細胞のみを染色し、ｈＣＣＲ８に対するそれらの特異性を確認した。抗体ｈｕ．Ａｂ３．Ｈ１Ｌ１は、複数の他のＧＰＣＲの染色を示し、特異性の欠如を示した。したがって、最良のＡＤＣＣ活性を有するＣＣＲ８選択的ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１抗体を進めた。
実施例２．Ａｂ４及びＡｂ５抗ＣＣＲ８抗体の突然変異分析
ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１Ｌ１抗ＣＣＲ８抗体のバリアントをさらに調査し、特徴付けた。図５Ａ～５Ｄは、研究したウサギ（ｒｂ．Ａｂ４）及びヒト化Ａｂ４（Ｌ１～Ｌ４及びＨ１～Ｈ１２）ＣＣＲ８抗体の配列の軽鎖可変領域（図５Ａ）及び重鎖可変領域（図５Ｂ～５Ｄ）のアラインメントを示す。図６Ａ～６Ｄは、研究したウサギ（ｒｂ．Ａｂ５）及びヒト化Ａｂ５（Ｌ１～Ｌ５及びＨ１～Ｈ１３）ＣＣＲ８抗体の配列の軽鎖可変領域（図６Ａ）及び重鎖可変領域（図６Ｂ～６Ｄ）のアラインメントを示す。以下の表Ｃ１～Ｃ３及びＤ１～Ｄ３も参照されたい。表Ｅは、重鎖定常ドメイン及び軽鎖定常ドメインを提供する。
Figure 2024527606000006
Figure 2024527606000007
Figure 2024527606000008
Figure 2024527606000009
Figure 2024527606000010
Figure 2024527606000011
Figure 2024527606000012
Figure 2024527606000013
Figure 2024527606000014
Figure 2024527606000015
Figure 2024527606000016
Figure 2024527606000017
Figure 2024527606000018
ヒト化バリアントとｈＩｇＧ１ ＦｃとのＣＣＲ８結合の評価には、フローサイトメトリーによるスクリーニング、及びヒトＣＣＲ８ ＣＨＯ細胞における相対ＥＣ５０及びＭＦＩを親ウサギ抗体と比較することが含まれた。具体的には、安定なＣＨＯ－ｈｕＣＣＲ８．Ｇｎａ１５細胞を様々な濃度（１０ｕｇ／ｍｌ又は６６．６６ｎＭから開始し、合計８つの濃度点について１：４段階希釈）のＡｂ４及びＡｂ５バリアントで４℃で３０分間染色し、次いでＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ ＢＳＡ及び０．２ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ）で２回洗浄し、続いてＡＦ６４７－抗ｈＩｇＧで４℃で１５分間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ヨウ化プロピジウム（０．５ｕｇ／ｍｌ）を含むＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ｉＱｅ３（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で分析した。
表Ｆ１に示すように、Ａｂ４ ＬＣＬバリアントＬ１～Ｌ４について、Ｙ２Ｉ突然変異を含有するバリアントＬ２及びＬ４は、ＥＣ５０又はＭＦＩのいずれかにおいて有意な変化を示した。したがって、軽鎖上のＹ２が重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。バリアントＬ１及びＬ３はこのＹ２残基を含み、バリアントＬ３をさらなる分析のために選択した。
Figure 2024527606000019
表Ｆ２に示すように、Ａｂ４ ＨＣバリアントＨ２～Ｈ１１について、バリアントＨ６（Ｓ７３Ｎ突然変異を有する）、バリアントＨ７（Ｔ７６Ｎ突然変異を有する）、バリアントＨ８（Ｖ７８Ｌ突然変異を有する）、バリアントＨ９（Ｆ９１Ｙ突然変異を有する）、バリアントＨ１０（Ｐ１０５Ｑ突然変異を有する）、及びバリアントＨ１１（Ｓ７３Ｎ、Ｖ７８Ｌ、Ｆ９１Ｙ、及びＰ１０５Ｑ突然変異を有する）は、ＥＣ５０又はＭＦＩのいずれかにおいて有意な変化を示した。したがって、重鎖上のＳ７３、Ｔ７６、Ｖ７８、Ｆ９１及びＰ１０５が重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。これらの５つの残基を組み合わせて、バリアントＨ１２（ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２）を構築した。
Figure 2024527606000020
表Ｆ３に提供するように、Ａｂ５ ＬＣバリアントＬ２～Ｌ５について、バリアントＬ２（Ｖ４Ｍ突然変異を有する）、バリアントＬ３（Ｐ４３Ａ突然変異を有する）、バリアントＬ４（Ｆ４６Ｌ突然変異を有する）、及びバリアントＬ５（Ｖ４Ｍ、Ｐ４３Ａ及びＦ４６Ｌ突然変異を有する）は、ＥＣ５０又はＭＦＩのいずれかにおいて有意な変化を示した。したがって、軽鎖上のＶ４、Ｐ４３及びＦ４６が重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。全てのバリアントは、ＣＤＲ Ｌ３にＣ９０Ｑ突然変異を含有しており、これは、製造中の原因となり得る不対システインを除去するために導入された。３つ全てのＶ４、Ｐ４３及びＦ４６残基を含むバリアントＬ１をさらなる研究のために選択した。
Figure 2024527606000021
Ａｂ５ ＨＣバリアントＨ２－Ｈ１２については、表Ｆ４に示すように、バリアントＨ５（Ｇ４９Ｓ突然変異を有する）、バリアントＨ６（Ｋ７１Ｒ突然変異を有する）、バリアントＨ７（Ｓ７３Ｎ突然変異を有する）、及びＨ１２（Ｇ４９Ｓ、Ｋ７１Ｒ及びＳ７３Ｎ突然変異を有する）は、ＥＣ５０又はＭＦＩのいずれかにおいて有意な変化を示した。したがって、重鎖上のＧ４９、Ｋ７１及びＳ７３が重要なウサギＶｅｒｎｉｅｒ残基であると決定された。これら３つの残基を組み合わせてバリアントＨ１３を構築した。
Figure 2024527606000022
実施例３．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１バリアントの特徴付け
（ａ） ヒト－ｃｙｎｏ交差反応性
ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３について、放射性標識ＩｇＧ及びヒト又はｃｙｎｏ ＣＣＲ８を安定に発現するＣＨＯ細胞株を用いて、細胞ベースの親和性測定を行った。
Figure 2024527606000023
Figure 2024527606000024
簡潔には、ヒト又はｃｙｎｏ ＣＣＲ８を発現する安定ＣＨＯ細胞を、ウェルあたり５０，０００細胞で冷結合緩衝液（Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ＋２％ ＦＢＳ＋５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２＋０．１％アジ化ナトリウム）に播種した。ＮＥＸ２４４ Ｉｏｄｏｇｅｎ法（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して放射性標識した固定濃度の１２５Ｉ－抗ＣＣＲ８を、２０ｎＭ又は５０ｎＭで開始して段階希釈した抗ＣＣＲ８抗体と混合した。抗体混合物を細胞に添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１２時間インキュベートした。次いで、細胞及び抗体をＭｉｌｌｉｐｏｒｅマルチスクリーンフィルタプレートに移した。フィルタプレートを２５０μＬの冷結合緩衝液で４回洗浄し、少なくとも３０分間乾燥させ、フィルタを５ｍＬポリスチレンチューブに打ち抜いた。放射能は、１カウント／分に設定したＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ ２４７０ Ｇａｍｍａ Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて０．８の計数効率で測定した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにおける異種一部位フィットＫｉ競合結合モデルを使用して当てはめた。
図７Ａ～７Ｄに示すように、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及び ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、ヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８の両方に対して同様の親和性を有しており、望ましい交差反応性を示している。これらの研究からの表にした親和性Ｋｄ（ｎＭ）データを以下に提供する。
Figure 2024527606000025
（ｂ） ＣＣＲ８選択性
Ａｂ４及びＡｂ５バリアントが、対応するＨ１Ｌ１バリアントと比較してＣＣＲ８に対して選択的なままであったことを再確認するために、結合を、図４Ａ及び図４Ｂについて記載した手順に従ってフローサイトメトリーによって分析した。前と同様に、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（図８Ａ）及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（図８Ｂ）は両方とも、ＣＣＲ８発現細胞に選択的に結合した。
（ｃ） ＣＣＲ８活性化及びリガンド遮断
Ａｂ４及びＡｂ５バリアントがＣＣＲ８活性化及びリガンド遮断能に関するそれらの特性を保持していることを再確認するために、実施例１及び図３Ａ～３Ｃに以前に記載されたｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３ 及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１ を用いて実験を行った。図９Ａ～９Ｂを参照されたい。図３Ａと同様に、図９Ａのデータは、Ａｂ４抗ＣＣＲ８抗体バリアントもＡｂ５抗ＣＣＲ８抗体バリアントも、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１の非存在下でアゴニスト効果を示さないことを再確認する。図３Ｂのデータと同様に、図９Ｂのデータは、Ａｂ４バリアントが、ＣＣＲ８リガンドＣＣＬ１（２０ｎＭのリガンド）によるＣＣＲ８の活性を遮断することによってアンタゴニスト効果を示すのに対して、Ａｂ５バリアントは試験した濃度でリガンド遮断活性を示さないことを再確認する。リガンド遮断活性のＩＣ５０値を以下の表に提供する。
Figure 2024527606000026
（ｄ） 硫酸化非依存性
ヒトＣＣＲ８は、Ｎ末端内にチロシン硫酸化の４つの潜在的な部位を含み、既存の証拠は、これらの部位での改変がいくらかの不均一性を示すことを示している（Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ ｅｔ ａｌ．ＪＢＣ ２００４；Ｊｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１０）。したがって、ＣＣＲ８中のこれらの硫酸化チロシンを認識する抗体は、ＣＣＲ８結合の可変性を示し、したがって可変Ｔｒｅｇ細胞枯渇を媒介し得る。チロシン硫酸化を触媒する酵素であるチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ）１及び２を欠くヒトＣＣＲ８＋ＨＥＫ２９３細胞を作製した。次いで、野生型（２９３Ｔ）並びにＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ及びＫＯ細胞への様々な抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの結合を分析した。
特に、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３－ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ及びＨＥＫ２９３－ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ安定細胞株を試験及びコンパレーター抗ＣＣＲ８抗体（１ｕｇ／ｍｌ）で４℃で３０分間染色し、次いで、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ ＢＳＡ及び０．２ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ）で２回洗浄し、続いてＡＦ６４７－抗ｈＩｇＧで４℃で１５分間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ヨウ化プロピジウム（０．５ｕｇ／ｍｌ）を含むＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ又はｉＱｅ３（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で分析した。
図１０Ａ～１０Ｅは、チロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ）１及びチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ）２を有する（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ）及び有さない（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ）ＣＣＲ８＋ＨＥＫ２９３細胞に対する、Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体及び市販抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と比較した、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１の染色の違いを示す。ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（図１０Ａ）及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（図１０Ｂ）は、両細胞株（ｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＮＴＣ及びｈＣＣＲ８．ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ）に対して同様の結合／染色を示し、チロシン硫酸化とは無関係にＣＣＲ８と結合すること（「硫酸化非依存性」）を示している。対照的に、Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体（図１０Ｃ）及び市販抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（図１０Ｄ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）（図１０Ｅ）は、ＴＰＳＴ１／２ ＫＯ細胞に結合することができず、これらは結合のためにＣＣＲ８のチロシン硫酸化を必要とすることを示し、したがって「硫酸化依存性」と考えられる。
実施例４．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３ ａｎｄ ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１アフコシル化バリアント
アフコシル化ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３バリアント（Ｆｃ Ｎ－グリカン位置Ａｓｎ ２９９）及びアフコシル化抗ｇＤ対照を、Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２０１０）１０６：７５１－７６３に記載されているように、ＦＵＴ８ノックアウト（ＫＯ）ＣＨＯ細胞からの発現及び精製によって調製した。
（ａ） アフコシル化パーセント
ＣＨＯ ＦＵＴ８ＫＯの培地中でフコースを滴定すると、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１ のパネルが、様々なレベルのアフコシル化、例えば約１４％～約９３％のアフコシル化ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１で得られた。
以下の表に示すように、１４％から４９％へのアフコシル化レベルの増加は、ＡＤＣＣ活性の４倍超の増加、及びＡＤＣＰ活性の３倍超の増加をもたらした。
アフコシル化ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３をインビトロ及びインビボ実験で研究して、約８０％～約９５％のアフコシル化の含有レベルを追跡した。
Figure 2024527606000027
（ｂ） アフコシル化バリアントのＦｃγＲＩＩＩａ結合の増強
ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３のフコシル化バリアント及びアフコシル化バリアントの、ＥＬＩＳＡによる両方のＦｃｇＲ３ａタンパク質への結合を研究した。簡潔には、抗ＧＳＴ抗体をＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート上にコーティングした。ＧＳＴ－ＦｃｇＲ３ａ．Ｖ１５８及びＧＳＴ－ＦｃｇＲ３ａ．Ｆ１５８は５００ｎｇ／ｍＬで捕捉された。次いで、プレートを洗浄し、次いで、１００ｕｇ／ｍＬで開始して段階希釈した抗ＣＣＲ８抗体をプレート上で室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、結合した抗体をＨＲＰコンジュゲート化抗ヒトＩｇＧ二次抗体によって検出した。４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーによって測定した。データを、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏにおける４パラメータロジスティック曲線を使用して当てはめた。以下の表に示すように、アフコシル化ＩｇＧ１抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、それらのフコシル化対応物ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３と比較して、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ結合活性（結合効力の約１０倍の増加）を示した。
Figure 2024527606000028
（ｃ） アフコシル化バリアントのＡＤＣＣ活性の増強
Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１、及びｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１を、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）について分析した。ＡＤＣＣアッセイを、Ｋａｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１９）４６８：４９－５４、及びＳｃｈｎｕｅｒｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ，ｃｅｌｌ－ｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ＡＤＣＣ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１１）４８：１５１２－１７で以前に報告されたように行い、エフェクタ細胞としてＣＤ１６操作ＮＫ－９２＿Ｆ１５８を使用し、標的細胞としてヒトＣＣＲ８及びＧａ １５サブユニットを安定に発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ１５）を使用して、いくつかの改変を加えた。簡潔には、ＡＤＣＣによる標的細胞の溶解を、カルセイン放出法によって測定した。標的細胞を製造者のプロトコルに従ってカルセイン－ＡＭ（Ｃ３１００ＭＰ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識し、次いで洗浄し、３８４ウェルプレート上に３０００ 細胞／ウェルの密度で播種した。抗ＣＣＲ８抗体を０．００４～１μｇ／ｍＬの様々な濃度で添加し、続いてＮＫ－９２＿Ｆ１５８細胞を１０：１のエフェクタ：標的（Ｅ：Ｔ）比で添加した。次いで、プレートを３７℃で２．５時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを２００×ｇで３分間遠心分離し、上清を白色不透明な３８４ウェルマイクロプレート（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ－３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）に移し、ＥｎＳｉｇｈｔ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して４８５／５２０ｎｍでの励起／発光で相対蛍光単位（ＲＦＵ）で蛍光シグナルを測定した。標的細胞のみを含むウェルからのシグナルは、標識細胞からのカルセインの自発的放出（自発的放出）を示したが、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で溶解した標的細胞を含むウェルは、利用可能な最大シグナル（最大放出）を提供した。抗体非依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＩＣＣ）を、抗体を添加せずに標的細胞及びエフェクタ細胞を含有するウェルにおいて測定した。試料及び対照は、同じプレートにおいて少なくとも２連で試験した。特異的ＡＤＣＣ活性の程度を以下のように計算した。
％ＡＤＣＣ＝１００×（平均実験放出－平均ＡＩＣＣ）／（平均最大放出－平均自発的放出）
ＡＤＣＣ活性を抗体濃度の関数としてプロットし、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いてデータを非対称シグモイド４パラメータロジスティック（４ＰＬ）モデルに当てはめた。図１１Ａ～１１Ｂは、エフェクタ細胞としてＮＫ－９２ Ｆ１５８（図１１Ａ）及びＮＫ－９２ Ｖ１５８（図１１Ｂ）を用いて、ｈＣＣＲ８を安定に発現するＣＨＯ細胞に対して、アフコシル化ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３が、それらのフコシル化対応物であるｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３と比較して、ＡＤＣＣ活性が増強している（＞１０倍改善）ことを示している。
Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３のＡＤＣＣ活性を、Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体並びに市販の抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対しても測定した。図１１Ｃを参照されたい。データは、Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体が、抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１、Ａｆｕｃ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３よりも弱いＡＤＣＣ活性（１０～２０倍未満のＡＤＣＣ活性）を示すことを実証している。マウスＦｃドメインを含む市販の抗体マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、予想通り、この例で用いられるアッセイは主にヒトＦｃドメインを含む抗体に関連するので、ＡＤＣＣ活性を示さなかった。
マウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ ４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８ ｍＡｂ Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、マウスＦｃ領域を含むが抗ヒトＣＣＲ８活性の抗体に関連するアッセイ、すなわちＪｕｒｋａｔ／ｍＦｃｇＲ４安定株をエフェクタ細胞として使用し、ＣＨＯ／ｈＣＣＲ８を標的細胞として使用して、ＡＤＣＣ活性について試験した。ヒトＣＣＲ８（ｈＣＣＲ８）を使用して、ヒトの臨床状況を模倣した。具体的には、アッセイは、マウスＦｃｇＲＩＶ受容体を発現する遺伝子操作されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株と、ＮＦＡＴ応答エレメント（ＮＦＡＴ－ＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターとからなる。標的細胞及び関連する抗体と共培養した場合、ｍＦｃｇＲＩＶエフェクタ細胞は抗体のＦｃドメインに結合し、ｍＦｃｇＲＩＶシグナル伝達及びＮＦＡＴ－ＲＥ媒介ルシフェラーゼ活性をもたらす。材料及び試薬：アッセイ緩衝液：４％低ＩｇＧを補充したフェノールレッドなしのＲＰＭＩ１６４０；９６ウェル白色平底ポリスチレンＴＣ処理マイクロプレート、Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３６０１；Ｂｉｏ－Ｇｌｏ試薬。アッセイ手順：アッセイ緩衝液（１０ポイント１：４で段階希釈した３０ｕｇ／ｍＬで出発して３回調製）中に、２５μＬ／ウェル希釈抗体を添加する。標的細胞をアッセイ緩衝液に再懸濁し、最終密度を１×１０６／ｍｌに調整する；各ウェルに２５μＬ細胞を分注して２５，０００／ウェルの標的細胞密度にする；プレートを室温で２０分間インキュベートする。２５μＬ／ウェルのＪｕｒｋａｔ／ｍＦｃｇＲＩＶ細胞（５×１０６細胞／ｍＬ）を各ウェルに添加して１２５，０００／ウェルのエフェクタ細胞密度にする；プロセス中にリザーバ内の細胞を定期的に再混合して、細胞の底部への沈降を防止する。アッセイプレートを蓋で覆い、プレートを５％ ＣＯ２インキュベータで３７℃で１６時間インキュベートする。インキュベータの内側にプレートを積み重ねない。アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、周囲温度まで１５分間平衡化する。マルチチャンネルピペットを使用して、気泡が生じないように注意しながら、７５μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）試薬をアッセイプレートに添加する。プレートを室温で１５分間インキュベートする。ＥｎＳｉｇｈｔ発光プレートリーダーを使用して発光を測定する。ｍＩｇＧ２ａアイソタイプｈｌｇＧ１及びｒａｔＩｇＧ２ｂを対照として試験した。ヒトＣＣＲ８（ｈＣＣＲ８）を使用して、ヒトの臨床状況を模倣した。データから分かるように、試験した抗ｈＣＣＲ８ ｍＡｂのそれぞれ－Ｌ２６３Ｇ８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及び４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）－は、約１ｎＭの抗体濃度レベルで高い誘導倍率結果を示し－それぞれ約１０倍及び約１２倍を超える誘導倍率結果を示した。これらの抗体のそれぞれについての高い誘導倍率は、約４０ｎＭの抗体濃度レベルでプラトーに達し、誘導倍率値はそれぞれ約１１及び１３である。これらの実験の結果を図１１Ｄに示す。
これらの研究からの活性データも以下の表に提供される。要約すると、ヒト化Ｆｃ領域を有するかマウスＦｃ領域を有するかにかかわらず、試験した各抗体は、抗体アイソタイプが関連するエフェクタレポーター細胞と種適合したアッセイでＡＤＣＣ活性を示した。
Figure 2024527606000029
 ＊活性なし＝特定のＡｂアイソタイプに関連しないアッセイ条件
（ｄ） Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣ増強
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＴｒｅｇ細胞上のＣＣＲ８発現を誘導するために、１０７個のヒトＰＢＭＣをＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウス（ＪＡＸ）に腹腔内移入し、移入の２～３週間後に脾臓を回収した。ヒトＴ細胞を、Ｍｏｕｓｅ Ｌｉｎｅａｇｅ Ｃｅｌｌ Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してＮＳＧ脾細胞の単一細胞懸濁液から濃縮し、別々に初代ＮＫ細胞を、製造業者のプロトコルに従ってＨｕｍａｎ ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してヒトＰＢＭＣから濃縮した。ヒトＴ細胞を０．００１～１ｕｇ／ｍＬのＣＣＲ８ ｍＡｂと室温で３０分間インキュベートした後、エフェクタ：標的比２：１で初代ＮＫ細胞を添加した。３７℃で一晩インキュベートした後、細胞を回収し、表面染色し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液セット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して製造業者のプロトコルに従って細胞内染色した。Ｔ細胞集団を定義するために使用される抗体は、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３（ＳＫ７）、ＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、及びＣＤ１４（６３Ｄ３）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製のＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＦＯＸＰ３（２３６Ａ／Ｅ７）であった。取得前にＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を各試料に添加した。フローサイトメトリーをＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バージョン１０．５．３）で分析した。製造業者のプロトコルに従って絶対細胞数を計算した。
回収された制御性Ｔ細胞対回収されたＣＤ８細胞（Ｔｒｅｇ／ＣＤ８）又は従来のＣＤ４ Ｔ細胞対回収されたＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４ｃｏｎｖ／ＣＤ８）の比を計算することによって、Ｔｒｅｇ細胞に対するＡＤＣＣ活性を測定した。回収されたＣＤ８ Ｔ細胞の数は、試験したＣＣＲ８ ｍＡｂ及びアイソタイプ対照ｍＡｂ（「ｇＤ．ａｆｕｃ」）の全ての濃度にわたって同様であった。図１２Ａ～１２Ｄに示されるように、アフコシル化ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３並びにフコシル化ＣＣＲ８抗体ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、ＡＤＣＣ活性を選択的に媒介し、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１２Ｂ及び図１２Ｄ）と比較して、インビボ混合リンパ球反応（ＭＬＲ）活性化ヒトＰＢＭＣ（図１２Ａ及び図１２Ｃ）からのＴｒｅｇの枯渇が増加し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を媒介した。低レベルのアフコシル化抗ＣＣＲ８媒介ＡＤＣＣが従来のＣＤ４ Ｔ細胞で観察され、これは、ＮＳＧマウスへの移入時の従来のＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＣＲ８の中程度の上方制御と一致した（データは示さず）。
さらなるデータは、アフコシル化ＣＣＲ８ ｍＡｂＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３が、ＲＣＣ腫瘍由来のＴｒｅｇに対して選択的ＡＤＣＣを示すことを実証している。簡潔には、ヒト解離腫瘍細胞（腎細胞癌腫、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）をベンダーのプロトコルに従って解凍した。初代ＮＫ細胞を、製造業者のプロトコルに従ってＨｕｍａｎ ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してヒトＰＢＭＣから濃縮した。ヒト解離腫瘍細胞を０．００１～１ｕｇ／ｍＬのＣＣＲ８ ｍＡｂと室温で３０分間インキュベートした後、エフェクタ：標的比２：１で初代ＮＫ細胞を添加した。３７℃で一晩インキュベートした後、細胞を上記のように処理して、ＣＤ８、従来のＣＤ４、及び制御性Ｔ細胞の絶対細胞数を決定した。
図１３Ａ～１３Ｄに示されるように、アフコシル化ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３並びにフコシル化ＣＣＲ８抗体ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、選択的ＡＤＣＣ活性を媒介し、従来のＣＤ４ Ｔ細胞（図１３Ｂ及び図１３Ｄ）と比較して、ＲＣＣのヒト解離腫瘍細胞（図１３Ａ及び図３Ｃ）からのＴｒｅｇ細胞の枯渇が増加し、アフコシル化バリアントはＡＤＣＣ活性の増加を媒介した。腫瘍内の従来のＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＣＲ８染色の非存在と一致して、ＣＣＲ８ ｍＡｂ媒介ＡＤＣＣ活性は従来のＣＤ４ Ｔ細胞上で観察されず、腫瘍内制御性Ｔ細胞に対するＣＣＲ８ ｍＡｂ媒介ＡＤＣＣの選択性を実証した。
（ｅ） ＡＤＣＰ強化
ＡＤＣＰに対するアフコシル化の影響については矛盾する報告が存在する。例えば、Ｈｅｒｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）１９２：２２５２－２２６０；Ｓｉｌｅｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ（２０１３）６：５２３－５３２；ａｎｄ Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ（２０２０）１２：ｅ１８０３６４５（９頁）を参照されたい。さらに、Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ突然変異体は、ＦｃｇＲ２ａ結合の増強を介してＡＤＣＰを増加させることが以前に示されている。Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８）７：２５１７－２５２７を参照されたい。したがって、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３の両方のフコシル化及びアフコシル化ｈＩｇＧ１．Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ Ｆｃバージョンを調製して、ＡＤＣＰ活性が観察されるかどうかを調べた。Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ突然変異体ｈＩｇＧ１定常ドメインを、Ａｂ４及びＡｂ５ Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅバリアントの完全長重鎖配列と共に、下線を引いた正常なｈＩｇＧ１定常ドメインとの突然変異の違いと共に以下の表に提供する。
Figure 2024527606000030
Figure 2024527606000031
ａＡｂ５Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ５．Ｌ１（配列番号５６）に対応する。ｂＡｂ４ Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ４．Ｌ３（配列番号５８）に対応する。
まず、ＥａｓｙＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＦｃｇＲＩＩａ及びＦｃｇＲＩＩＩａの遺伝子型情報が既知のＧｅｎｅｎｔｅｃｈドナーの血液から、ヒトＣＤ１４＋単球を単離した。精製ＣＤ１４＋単球を、１００ｎｇ／ｍＬ ｈＭ－ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）を含むＲＰＭＩ＋１０％ ＦＢＳ中で５日間マクロファージに分化させた。次いで、５０ｎｇ／ｍＬのｈＩＬ－１０（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）を添加して、マクロファージをＡＤＣＰアッセイの前に２４時間分極させた。ＮｕｃＬｉｇｈｔ ＲｅｄトランスフェクトＣＨＯ／ｈＣＣＲ８．Ｇｎａ１５標的細胞を、２０ｍｇ／ｍＬの非特異的ヒトＩｇＧの存在下で２０分間抗ＣＣＲ８抗体とプレインキュベートした。次いで、上記の細胞混合物を１：１のＥ：Ｔ比でマクロファージ（エフェクタ細胞）プレートに添加した。プレートをＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｚｏｏｍ機器（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ａｎｎ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＩ）内に配置した後、明視野及び赤色レーザー設定で１時間ごとに６時間の期間にわたって細胞画像を得た。各ウェル中の赤血球数（残りの標的細胞）を、機器内蔵ソフトウェアを使用して同じウェル中のマクロファージ数によって正規化した。ＡＤＣＰ活性は、アイソタイプ対照抗体が存在する場合の陰性対照と比較した各試料における正規化された赤血球数の減少のパーセンテージとして計算した。次いで、ＡＤＣＰ活性を抗体濃度の関数としてプロットし、Ｐｒｉｓｍを用いてデータを非対称シグモイド４パラメータロジスティック（４ＰＬ）モデルに当てはめた。各抗体のＥＣ５０値を、５０％の標的細胞殺傷に達する濃度として決定した。
図１４Ａ～１４Ｄに示されるように、ＨＲ／ＦＦ（図１４Ａ）、ＲＲ／ＦＦ（図１４Ｂ）、ＨＲ／ＶＦ（図１４Ｃ）、及びＲＲ／ＶＦ（図１４Ｄ）のＦｃｇＲＩＩａ（Ｈ１３１Ｒ）／ＦｃｇＲＩＩＩａ（Ｖ１５８Ｆ）遺伝子型を有する４名の異なるドナーからのＣＤ１４＋単球由来マクロファージにおいて、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３ は、フコシル化抗体ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３と比較して強化されたＡＤＣＰ活性を示した。結果は、ＣＣＲ８を標的とする抗体との関連において、アフコシル化がＡＤＣＰの増強をもたらすことを示している。
アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３ はまた、Ｙｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体と比較して増強されたＡＤＣＰ活性も示した（３～４倍の改善）（図１４Ｅ）。
これらの研究からの活性データも以下の表に提供される。
Figure 2024527606000032
 ｎ．ｄ．＝未決定
さらに、図１５Ａ～１５Ｄに示されるように、ＨＲ／ＦＦ（図１５Ａ）、ＲＲ／ＦＦ（図１５Ｂ）、ＨＲ／ＶＦ（図１５Ｃ）、及び ＲＲ／ＶＦ（図１５Ｄ）のＦｃｇＲＩＩａ（Ｈ１３１Ｒ）／ＦｃｇＲＩＩＩａ（Ｖ１５８Ｆ）遺伝子型を有する４名の異なるドナーからのＣＤ１４＋単球由来マクロファージにおいて、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１は、ＦｃｇＲＩＩａ増強Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２ＥバリアントＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅと比較して、同様の改善されたＡＤＣＰ活性を示した。アフコシル化ｈＩｇＧ１バリアントとＧ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ突然変異体との間のＡＤＣＰ活性の類似性は、Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅを組み込むことが、抗ＥＰＣＡＭ ｍＡｂではあるが、実質的により高いレベルのＡＤＣＰを媒介するという以前の報告を考えると驚くべきことである。Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８）７：２５１７－２５２７を参照されたい。
（ｆ） Ａｂ４及びＡｂ５抗体の物理的特徴付け
Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３の両方の溶解度、粘度及び熱応力下での挙動（貯蔵寿命安定性）を高濃度で評価した。以下の表に示すように、両方の抗体は、それらの製造及び製剤化に有用な好ましい化学的及び物理的特性を示し、低い凝集、良好な溶解性、低い粘度、及び良好な貯蔵寿命安定性を示した。
Figure 2024527606000033
熱応力条件：抗体試料を２００ｍＭのコハク酸アルギニン（ｐＨ５．５）中１５０ｍｇ／ｍＬで４０℃で２週間インキュベートした。対照試料を－７０℃で保存した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、対照及びストレス試料についてサイズバリアントを評価した。ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）ＵＰ－ＳＷ３０００カラム、４．６ｘ３００ｍｍ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡ）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）でＳＥＣを行った。移動相は、０．２５Ｍ塩化カリウムを含む０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．２）であった。分離を周囲温度で流速０．３ｍＬ／分で行い、カラム溶出液をＵＶ波長２８０ｎｍで監視した。
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）における溶解度：抗体を２００ｍＭコハク酸アルギニン（ｐＨ５．５）中に１５０ｍｇ／ｍＬで製剤化し、３７℃で２４時間、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に透析して、溶解度を決定した。透析後、試料を可視微粒子について目視検査し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２／Ｍ２ｅプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して濁度を決定し、３４０、３４５、３５０、３５５及び３６０ナノメートルで吸光度を測定した。５つの波長における値を平均し、最終的な溶解度値を得た。
粘度決定：２００ｍＭのコハク酸アルギニン（ｐＨ５．５）中の１００、１５０及び１８０ｍｇ／ｍＬの試料の粘度を、ＡＲ Ｇ２レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を使用して決定した。２０ｍｍの円錐形状を使用し、１，０００逆秒の一定の剪断速度で２．５分間にわたって測定を行った。
（ｇ） ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１のエピトープマッピング
フコシル化ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１のマッピングのために、ヒトＣＣＲ８におけるアラニン点突然変異への結合をフローサイトメトリーによって分析した。
Ｃ末端ＦＬＡＧタグを有するｈＣＣＲ８の２～２４位の個々のアラニン点突然変異をコードする構築物を生成した。ＨＥＫ２９３細胞を、突然変異体ｈＣＣＲ８をコードする構築物又はモック構築物でｔｒａｎｓＩＴ Ｘ２（試薬：ＤＮＡ＝３：１）を使用して２４時間トランスフェクトし、ｈｕＣＣＲ８抗体ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（ｈＩｇＧ１）で表面染色し、次いで、固定し、透過処理し、ＦＩＴＣ抗Ｆｌａｇ（Ｓｉｇｍａ Ｆ４０４９）を続けた。
図１６Ａに示すように、ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１はＤ２Ａ、Ｙ３Ａ、Ｌ５Ａ及びＤ６Ａに結合せず、エピトープがヒトＣＣＲ８のＮ末端のＤＹＴＬＤ領域の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むことを示す。
（ｈ） ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３のエピトープマッピング
フコシル化ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３のマッピングのために、ヒトＣＣＲ８のキメラ形態への結合をフローサイトメトリーによって分析した。
ＣＣＲ８の異なる細胞外領域がＣ末端ＦＬＡＧタグを有するＣＣＲ５からの対応する領域で置き換えられたヒトＣＣＲ８．ＣＣＲ５キメラ（Ｎ－ｔｅｒｍ１（ヒトＣＣＲ８のアミノ酸残基１～２３）、Ｎ－ｔｅｒｍ２（ヒトＣＣＲ８のアミノ酸残基１～３６）、ＥＣＬ１（ヒトＣＣＲ８のアミノ酸残基９１～１０４）、ＥＣＬ２（ヒトＣＣＲ８のアミノ酸残基１７２～１９３）、及びＥＣＬ３（ヒトＣＣＲ８のアミノ酸残基２６４～２７１）をコードする構築物を生成した。ＥＣＬは、細胞外ループとして定義される。２９３細胞を、突然変異体ｈＣＣＲ８をコードする構築物又はモック構築物でｔｒａｎｓＩＴ Ｘ２（試薬：ＤＮＡ＝３：１）を使用して２４時間トランスフェクトし、ｈｕＣＣＲ８－Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３．ｈＩｇＧ１で表面染色し、次いで、固定し、透過処理し、ＦＩＴＣ抗Ｆｌａｇ（Ｓｉｇｍａ Ｆ４０４９）を続けた。
図１６Ｂに示すように、ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３はＥＣＬ１及びＥＣＬ２キメラに結合せず、エピトープがＣＣＲ８のＥＣＬ１領域及びＥＣＬ２領域の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むことを示す。
実施例５．マウス結腸がんモデルＣＴ２６におけるマウス代用抗ＣＣＲ８モノクローナル抗体（ｍＡｂ）
（ａ）Ｔｒｅｇ細胞の枯渇
抗ＣＣＲ８ Ａｂが腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞をインビボで枯渇させる能力を実証するために、確立されたＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスをマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂで処理し、腫瘍、脾臓及び腫瘍排出リンパ節における白血球のうちのＴｒｅｇ細胞、従来のＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリーによって分析した。
マウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの軽鎖及び重鎖ＣＤＲ領域、軽鎖及び重鎖可変領域、並びに完全長重鎖及び軽鎖配列を以下の表に提供する。
Figure 2024527606000034
Figure 2024527606000035
Figure 2024527606000036
Figure 2024527606000037
ＣＴ２６腫瘍細胞を対数期増殖で採取し、１：１の比でＨＢＳＳ含有マトリゲルに再懸濁した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの脇腹に、１００マイクロリットルのＨＢＳＳ＋マトリゲル中の１０万個のＣＴ２６細胞を皮下接種した。腫瘍を、確立されて平均腫瘍体積１３０～２３０ｍｍ３に達するまで監視した。次いで、マウスを処置群に無作為化した。マウス代用抗ＣＣＲ８（ｍＩｇＧ２ａ）又は抗ｇｐ１２０アイソタイプ対照Ａｂによる処理を、ヒスチジン緩衝液＃０８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ｐＨ５．５中、０．００３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＣＲ８ Ａｂの用量で静脈内投与した。
３日後、マウスを屠殺し、分析のために腫瘍、脾臓及び腫瘍排出リンパ節を得た。単一細胞懸濁液を生成するために、腫瘍を細かく刻み、１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．２Ｕ／ｍＬリベラーゼＤＬ（Ｓｉｇｍａ）、及び０．２ｍｇ／ｍＬ ＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＲＰＭＩ－１６４０培地中で３７℃で撹拌しながら３０分間消化した。腫瘍細胞を１００ｍｍフィルタに通し、１０％ ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ－１６４０培地で洗浄した。単一細胞懸濁液を蛍光標識抗ＣＤ４５、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８抗体で４℃で１５分間表面染色し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｘｐ３／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ Ｓｅｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造者のプロトコルに従って使用して蛍光標識抗Ｆｏｘｐ３で細胞内染色した。フローサイトメトリーをＦｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
図１７Ａ～１７Ｉは、アイソタイプ処置群と比較して、ＣＴ２６腫瘍保有マウスの脾臓又は腫瘍排出リンパ節（図１７Ａ～１７Ｃ）ではなく、腫瘍におけるＴｒｅｇ細胞の用量依存的枯渇（ＣＤ４５＋白血球のうちのＴｒｅｇ細胞の割合としてグラフ化）を示す。アイソタイプ対照群と比較した従来のＣＤ４ Ｔ細胞（（図１７Ｄ～１７Ｆ））又はＣＤ８ Ｔ細胞（図１７Ｇ～１７Ｉ）の割合の減少は、抗ＣＣＲ８処置では観察されなかった。これらの観察は、腫瘍内Ｔｒｅｇ細胞の抗ＣＣＲ８媒介枯渇の特異性を実証する。
（ｂ） 腫瘍増殖阻害
インビボでの腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の抗ＣＣＲ８媒介枯渇後の腫瘍増殖阻害を実証するために、確立されたＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスをマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂで処置し、腫瘍増殖を経時的に監視した。
ＣＴ２６腫瘍細胞を対数期増殖で採取し、１：１の比でＨＢＳＳ含有マトリゲルに再懸濁した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの脇腹に、１００マイクロリットルのＨＢＳＳ＋マトリゲル中の１０万個のＣＴ２６細胞を皮下接種した。腫瘍を、確立されて平均腫瘍体積１３０～２３０ｍｍ３に達するまで監視した。次いで、マウスを処置群に無作為化した。マウスを、ヒスチジン緩衝液＃０８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ｐＨ５．５中、０．１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＣＲ８（ｍＩｇＧ２ａ）、０．１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＤ２５抗体（クローンＰＣ６１ ｍＩｇＧ２ａ）又は抗ｇｐ１２０アイソタイプ対照Ａｂの週１回又は２回の用量で静脈内処置した（初回は静脈内投与、その後の投与は腹腔内）。Ｕｌｔｒａ Ｃａｌ－ＩＶカリパス（Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏ．）を用いて腫瘍体積を二次元（長さ及び幅）で測定し、以下の式を用いて体積を計算した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５。
図１８Ａ～１８Ｄは、個々のマウス（灰色の線）及び処置群（フィッティングされた曲線、黒色の線）の経時的な腫瘍体積の変化を示す。強力な腫瘍増殖阻害が、ＣＴ２６結腸がんモデルにおいて単回用量（図１８Ｂ）又は週２回（図１８Ｃ）として投与されたマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂで観察された。両方の処置レジメンは、８／９のマウスにおいて完全な腫瘍退縮をもたらした。抗ＣＣＲ８ ｍＡｂによる処置は、３／９のマウスにおいて腫瘍退縮をもたらした抗ＣＤ２５ Ａｂ処置（図１８Ｄ）よりも有効であった。アイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）を使用した（図１８Ａ）。
実施例６．エフェクタ適格及びエフェクタレスマウス代用抗ＣＣＲ８ Ａｂの比較
抗ＣＣＲ８ Ａｂ処置が主にＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ媒介Ｔｒｅｇ細胞枯渇を促進することによって、又はＣＣＲ８のリガンド依存性活性化を阻害することによっても作用するかどうかを評価するために、本発明者らは、リガンド遮断エフェクタ適格ｍＩｇＧ２ａマウス代用抗ＣＣＲ８ Ａｂを、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける同じ抗ＣＣＲ８クローンのリガンド遮断エフェクタレスｍＩｇＧ２ａ．ＬＡＬＡＰＧ突然変異体と比較した。
ＣＴ２６腫瘍細胞を対数期増殖で採取し、１：１の比でＨＢＳＳ含有マトリゲルに再懸濁した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの脇腹に、１００マイクロリットルのＨＢＳＳ＋マトリゲル中の１０万個のＣＴ２６細胞を皮下接種した。第１の処置群では、マウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（ｍＩｇＧ２ａ）又はエフェクタレスｍＩｇＧ２ａ．ＬＡＬＡＰＧ突然変異体抗ＣＣＲ８又は抗ｇｐ１２０アイソタイプ対照ｍＡｂを、ヒスチジン緩衝液＃０８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ｐＨ５．５中、腫瘍接種日から開始して週に２回、５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した（最初の用量は静脈内投与され、その後の全ての用量は腹腔内投与された）。第２の処置群では、腫瘍を、確立されて平均腫瘍体積１３０～２３０ｍｍ３に達するまで監視し、次いで、マウスを処置群に無作為化し、抗ＣＣＲ８（ｍＩｇＧ２ａ）又はエフェクタレスｍＩｇＧ２ａ．ＬＡＬＡＰＧ突然変異体抗ＣＣＲ８ Ａｂを、ヒスチジン緩衝液＃０８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ｐＨ５．５中、５ｍｇ／ｋｇで週２回投与して処置した（最初の投与は静脈内、その後の全ての投与は腹腔内）。Ｕｌｔｒａ Ｃａｌ－ＩＶカリパス（Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏ．）を用いて腫瘍体積を二次元（長さ及び幅）で測定し、以下の式を用いて体積を計算した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５。Ａｄｖｅｎｔｕｒｅｒ Ｐｒｏ ＡＶ８１２スケール（Ｏｈａｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して、マウスの体重を測定した。
図１９Ａ～１９Ｅは、個々のマウス（灰色の線）及び処置群（フィッティングされた曲線、黒色の線）の経時的な腫瘍体積の変化を示す。腫瘍増殖阻害は、エフェクタ適格ｍＩｇＧ２ａマウス代用抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ（図１９Ｂ及び図１９Ｄ）で観察されるが、リガンド遮断エフェクタレスｍＩｇＧ２ａ．ＬＡＬＡＰＧ突然変異体抗ＣＣＲ８ ｍＡｂでは観察されない（図１９Ｃ及び図１９Ｅ）。ｍＩｇＧ２ａ抗ＣＣＲ８ Ａｂは、腫瘍接種時（図１９Ｂ）又は確立された腫瘍（図１９Ｄ）において投与された場合に有効である。これらの知見は、ＣＣＲ８受容体へのリガンド結合の遮断が、抗ＣＣＲ８ ｍＡｂ処置後の腫瘍増殖阻害を媒介するのに十分ではないことを実証している。アイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）を使用した（図１９Ａ）。
実施例７．抗ＣＣＲ８及び抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ処置の併用効果
抗ＣＣＲ８ ｍＡｂとチェックポイント阻害の組み合わせによる腫瘍増殖阻害の増加の可能性を評価するために、確立されたＥＭＴ６腫瘍を有するマウスを抗ＣＣＲ８及び抗ＰＤＬ１ ｍＡｂで個別に又は組み合わせて処置した。
ＥＭＴ６腫瘍細胞を対数期増殖で採取し、１：１の比でＨＢＳＳ含有マトリゲルに再懸濁した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの第５の乳房脂肪パッドに、１００マイクロリットルのＨＢＳＳ＋マトリゲル中の１０万個のＥＭＴ６細胞を皮下接種した。腫瘍を、確立されて１３０～２３０ｍｍ３の平均腫瘍体積に達するまで監視した。次いで、マウスを処置群に無作為化した。マウス代用抗ＣＣＲ８（ｍＩｇＧ２ａ）又はアイソタイプ対照Ａｂを、０．１ｍｇ／ｋｇの単回用量として静脈内投与した。エフェクタレス抗ＰＤＬ１（ｍＩｇＧ２ａ．ＬＡＬＡＰＧ）Ａｂを、週に２回、最初の用量については１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与し、その後の用量については５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。抗体をヒスチジン緩衝液＃０８：２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、ｐＨ５．５で希釈した。腫瘍体積及び体重を週に２回測定した。Ｕｌｔｒａ Ｃａｌ－ＩＶカリパス（Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏ．）を用いて腫瘍体積を二次元（長さ及び幅）で測定し、以下の式を用いて体積を計算した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５。Ａｄｖｅｎｔｕｒｅｒ Ｐｒｏ ＡＶ８１２スケール（Ｏｈａｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して、マウスの体重を測定した。
図２０Ａ～２０Ｄは、個々のマウス（灰色の線）及び処置群（フィッティングされた曲線、黒色の線）の経時的な腫瘍体積の変化を示す。マウス代用抗ＣＣＲ８及び抗ＰＤＬ１ ｍＡｂは、単一処置として部分的な腫瘍増殖阻害をもたらすが（図２０Ｂ～２０Ｃ）、両方のｍＡｂの組み合わせ（図２０Ｄ）は予想外に完全な腫瘍拒絶をもたらす。アイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ｇｐ１２０）を使用した（図２０Ａ）。
実施例８．Ａｂ１－Ａｂ３ Ｈ１Ｌ１バリアント及び抗ＣＣＲ８抗体コンパレーター
（ｉ）Ａｂ１～Ａｂ３ Ｈ１Ｌ１バリアント
Ａｂ１～Ａｂ３ Ｈ１Ｌ１バリアントの軽鎖及び重鎖ＣＤＲ領域、軽鎖及び重鎖可変領域、並びに完全長重鎖及び軽鎖配列を以下の表に提供する。
Figure 2024527606000038
Figure 2024527606000039
Figure 2024527606000040
Figure 2024527606000041
Figure 2024527606000042
（ｉｉ）抗ＣＣＲ８抗体コンパレーター
本明細書において検討されたＹｏｓｈｉｄａヒト化抗ヒトＣＣＲ８抗体の完全長重鎖及び完全長軽鎖配列は、ＵＳＳＮ １６／１８３，２１６の審査中の２０１９年１０月３０日に提出された米国デクラレーションに開示されている（米国特許出願公開第２０１９／００７１５０８号として公開され、後に米国特許第１０，５５０，１９１号として付与された）。この同じ抗体の軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、重鎖可変領域及び重鎖定常領域は、配列５９、５２、４１及び５３としてＰＣＴ出願公開番号ＷＯ ２０２０１３８４８９に開示された。Ｙｏｓｈｉｄａ抗体をヒトｈＩｇＧ１抗体として発現させた（すなわち、ヒトＦｃ領域を有する）。市販のマウス抗ヒトＣＣＲ８抗体４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びマウス抗ヒトＣＣＲ８抗体Ｌ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）をこれらの研究のために購入した。４３３Ｈ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＬ２６３Ｇ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプＦｃ領域を含むマウスモノクローナル抗体である。Ｍｕｔａｌｉｔｈａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｌｌｅｒｇｙ（２０１０）４０：１１７５（４３３Ｈ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｍｉｔｓｏｎ－Ｓａｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１６）９０７－９１８（Ｌ２６３Ｇ８，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びｗｗｗ．ｌａｂｏｍｅ．ｃｏｍ／ｒｅｖｉｅｗ／ｇｅｎｅ／ｈｕｍａｎ／ＣＣＲ８－ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ（Ｌ２６３Ｇ８，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）も参照されたい。
実施例９：Ａｂ１～Ａｂ５の末端リジンバリアント
本開示の抗ＣＣＲ８抗体のさらなるＦｃバリアントが企図され、親抗体の重鎖のＣ末端は、Ｃ末端リジンが除去された短縮Ｃ末端であり、短縮Ｃ末端で終わるＰＧが得られる。Ａｂ１～Ａｂ－５の末端リジンバリアントを以下の表Ｐに提供する。
Ａｂ５末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ５．Ｌ１（配列番号５６）に対応する。
Ａｂ４末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ４．Ｌ３（配列番号５８）に対応する。
Ａｂ５Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ５．Ｌ１（配列番号５６）に対応する。
Ａｂ４Ｇ２３６Ａ．Ｉ３３２Ｅ末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ４．Ｌ３（配列番号５８）に対応する。
Ａｂ１末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ１．Ｌ１（配列番号１００）に対応する。
Ａｂ２末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ２．Ｌ１（配列番号１０２）に対応する。
Ａｂ３末端リジンバリアントの軽鎖完全長配列は、ｈｕ．Ａｂ３．Ｌ１（配列番号１０４）に対応する。
Figure 2024527606000043
Figure 2024527606000044
Figure 2024527606000045
Figure 2024527606000046
実施例１０．Ｃｙｎｏにおける試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの血清濃度及びＡＤＡ
抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及び対照抗ｇＤをこの研究に使用した。３つの投与群にはそれぞれ３匹のオスのカニクイザルがいた－対照：１００１、１００２、１００３と指定；Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１：２００１、２００２、２００３と指定；及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３：３００１、３００２、３００３と指定。それぞれに、抗ｇＤ又は試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの単一の１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶボーラスを与えた。分析のための血液試料を０．２５、２、及び６時間；投与後１、２、７、１４、２１、２８及び３５日で、血清を、適格なＥＬＩＳＡ分析方法を用いて抗ｇＤ（対照群）及び抗ＣＣＲ８抗体の濃度についてアッセイした。アッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は０．０１５６２５μｇ／ｍＬであった。ＰＫパラメータは、ＩＶボーラス投与と一致する非コンパートメント分析を使用してＰｈｏｅｎｉｘ １．４（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ薬物動態ソフトウェアバージョン６．４）（Ｃｅｒｔａｒａ，ＵＳＡ）を使用して推定した。抗薬物抗体（ＡＤＡ）分析のための血液試料を投与前並びに１、８、１５、２２、２９及び３６日目に採取し、適格なＥＬＩＳＡアッセイを使用して試験項目に対する抗体について血清を分析した。
単回１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ投与後のカニクイザルにおける抗ｇＤ抗体、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１又はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３の血清中濃度プロファイルを図２１に示す。全身曝露は、抗ｇＤ及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１群の間で同等であることが見出され；投与後３５日間にわたって持続的な血清濃度レベルを示し、それぞれの平均クリアランスは、３．９６±０．４１２ｍＬ／日／ｋｇ及び４．３８±０．２９１ｍＬ／日／ｋｇであった。対照的に、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３は、同じ投与後３５日間にわたってより低い曝露を示し、平均クリアランスは９．００±１．０１ｍＬ／日／ｋｇであった。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１によって示されるように、より長い期間にわたって、より遅いクリアランスで血清濃度レベルを維持することは、より優れた抗がん活性と投与頻度の減少につながる可能性のある、より持続的な標的への関与を引き出すことが期待される。
抗ｇＤ及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１と比較してＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３群について観察された全身曝露の差は、より後の時点で、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３処置群における抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在によって部分的に説明することができた。例えば、抗ｇＤを投与した動物１００１、１００２及び１００３は、ＡＤＡの存在について陰性であった。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１の投与後、動物２００１はＡＤＡ陽性であったが、ＡＤＡの存在は、他の２つのＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１を投与したＡＤＡ陰性の動物（Ｎｏ．２００２及び２００３）と比較した場合、曝露に影響を及ぼさないようであった。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３の投与後、動物３００２及び３００３はＡＤＡ陽性であることが見出され、ＡＤＡの存在は、ＡＤＡ陰性動物３００１と比較した場合、全身曝露に影響を及ぼすと思われた。
実施例１１．ＣｙｎｏにおけるＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞のレベルのモニタリング
抗ＣＣＲ８抗体Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及び対照抗ｇＤをこの研究に使用した。３つの投与群にはそれぞれ３匹のオスのカニクイザルがいた－対照群：１００１、１００２、１００３と指定；Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１群２：２００１、２００２、２００３と指定；及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３群３：３００１、３００２、３００３と指定。１日目の投与前（「試験前」）及び１日目の０時間（「投与前」）に各動物から血液を採取した。次いで、各動物に、静脈内注射によって、１０ｍｇ／ｋｇのアフコシル化抗ｇＤ（対照群）、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１（群２）又はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３（群３）の単回用量を投与した。試験ＣＣＲ８ ｍＡｂの初期用量を含有する血液を、１日目から始まる投与後の以下の時点：６、２４、４８、１６８、３３６、５０４、６６８及び８４０時間で採取し、フローサイトメトリー分析の前に以下の処置に供した：（ｉ）いずれの試験ＣＣＲ８ ｍＡｂもスパイクしていない血液試料（「非スパイク」）、（ｉｉ）飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１をさらにスパイクした血液試料、及び（ｉｉｉ）飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３でさらにスパイクした血液試料。次いで、非スパイク試料及びスパイク試料のそれぞれを、試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂのｃｙｎｏＣＣＲ８への結合を検出する標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で処理し、フローサイトメトリーによって分析した。
表現型マーカー抗原に対する特異的抗体を使用してＴ細胞サブセットを同定した。具体的には、制御性Ｔ（Ｔ－ｒｅｇ）細胞をＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋細胞として同定した。薬物結合ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞を、非スパイク血液試料を使用して同定した。
両方の試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂは、非スパイク試料で観察されるように、投与後８４０時間まで、全血中の総Ｔ－ｒｅｇ細胞絶対数を実質的に減少させなかった。図２２Ａ～２２Ｃを参照されたい。両方の試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂはまた、投与後合計８４０時間まで、全血中の総リンパ球数を実質的に減少させなかった（データは示さず）。
前述のように、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３はともにＣＣＲ８に結合し、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３及びＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１はともに互いに非競合的なＣＣＲ８結合剤として作用し、Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３はヒト及びｃｙｎｏ ＣＣＲ８に対してわずかに高い親和性を有する。例えば、図１６Ａ～１６Ｂ、及び表Ｇ３に提供される親和性Ｋｄ（ｎＭ）データを参照されたい。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３はまた、より後の時点でＡＤＡ形成の傾向が増加している。実施例１０を参照されたい。
図２３Ａ～２３Ｃに見られるように、対照（群１）で最初に処理したｃｙｎｏ由来の非スパイク血液のフローサイトメトリー分析は、総ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の調節を示さなかった。さらに、スパイクした血液（すなわち、最初に対照（群１）で処理し、次いで飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１をスパイクした血液、又は最初に対照（群１）で処理し、次いで飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３をスパイクした血液）のフローサイトメトリーも、総ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞数にほとんど影響を与えなかった。相対的パーセンテージは、試験抗ＣＣＲ８ ｍＡｂの各々によって検出されるＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞のパーセントを指す。Ａｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３はＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１に比べて親和性がやや高いため、スパイクされたＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３試料の相対的パーセンテージは、より高いパーセンテージが検出される。
群３に関して、図２３Ｄ～２３Ｆに見られるように、（ｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３で処理した血液（「非スパイク」）、（ｉｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３で処理し、次いでＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１をスパイクした血液、又は（ｉｉｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３で処理し、次いでＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３をスパイクした血液のフローサイトメトリーは、３種類の動物それぞれにおいて、投与後１６８時間までＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の減少が実証された。ＣＣＲ８＋Ｔｒｅｇ細胞の頻度の部分的な回復が、おそらくＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３に対するＡＤＡの存在の増加に起因して、投与の３３６時間後に開始して動物のうちの２匹において認められた。
群２に関して、図２３Ｇ～２３Ｉに見られるように、（ｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１で処理した血液（「非スパイク」）、（ｉｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１で処理し、次いで飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１をスパイクした血液、又は（ｉｉｉ）最初にＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ５．Ｈ１３Ｌ１で処理し、次いで飽和濃度のＡｆｕｃ．ｈｕ．Ａｂ４．Ｈ１２Ｌ３をスパイクした血液のフローサイトメトリーは、動物２００２及び動物２００３においてＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の減少を示した。
群２及び群３の動物の両方とも、総Ｔｒｅｇ細胞数に対してほとんど又は全く効果を示さなかったが（図２２Ａ～２２Ｃ）、スパイクした又はスパイクしていない投与後の末梢血ＣＣＲ８＋Ｔ－ｒｅｇ細胞の数の減少を示し（図２３Ｄ～２３Ｉ）、これは提案された作用機序と一致する（図２Ａ参照）。
他の実施形態
上記は、理解を明確にする目的で、説明及び実施例によってある程度詳細に記載してきたが、その記載及び実施例は、本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書中に引用される全ての特許及び科学文献は、その全体が参照により明示的に援用される。

Claims (92)

  1. Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体８（ＣＣＲ８）に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号２９又は配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  2. ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、請求項１に記載の抗体。
  3. 配列番号１０６のアミノ酸残基２～６の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. （ａ）配列番号３５～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号４８～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
  5. 配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
  6. （ａ）配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
  7. 配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
  8. 前記ＶＬが、Ｖ４Ｍ突然変異、Ｐ４３Ａ突然変異、Ｆ４６Ｌ突然変異、Ｃ９０Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
  9. 前記ＶＨが、Ｇ４９Ｓ突然変異、Ｋ７１Ｒ突然変異、Ｓ７３Ｎ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. 配列番号５５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  11. 配列番号６０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  12. 配列番号１１１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  13. 配列番号１１３の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  14. 配列番号３５～４７からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号４８～５２からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体。
  15. 配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体。
  16. ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号４又は配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  17. ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、請求項１６に記載の抗体。
  18. 配列番号１０６のアミノ酸残基９１～１０４及び１７２～１９３の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、請求項１６又は１７に記載の抗体。
  19. （ａ）配列番号１０～２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号２２～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の抗体。
  20. 配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の抗体。
  21. （ａ）配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項１６～２０のいずれか一項に記載の抗体。
  22. 配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列を含む、請求項１６～２１のいずれか一項に記載の抗体。
  23. 前記ＶＬがＹ２Ｉ突然変異を含む、請求項１６～２２のいずれか一項に記載の抗体。
  24. 前記ＶＨが、Ｓ７３Ｎ突然変異、Ｖ７８Ｌ突然変異、Ｔ７６Ｎ突然変異、Ｆ９１Ｙ突然変異、及びＰ１０５Ｑ突然変異、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１６～２３のいずれか一項に記載の抗体。
  25. 配列番号５７の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６～２４のいずれか一項に記載の抗体。
  26. 配列番号６１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６～２４のいずれか一項に記載の抗体。
  27. 配列番号１１２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６～２４のいずれか一項に記載の抗体。
  28. 配列番号１１４の重鎖アミノ酸配列及び配列番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１６～２４のいずれか一項に記載の抗体。
  29. 配列番号１０～２１からなる群から選択されるＶＨ配列及び配列番号２２～２５からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体。
  30. 配列番号２１のＶＨ配列及び配列番号２４のＶＬ配列を含む、ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体。
  31. ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号８２又は配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  32. （ａ）配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
  33. 配列番号９５のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む、請求項３１又は３２に記載の抗体。
  34. 配列番号１０１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１００の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
  35. 配列番号１１５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１００の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
  36. ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号８６又は配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  37. （ａ）配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項３６に記載の抗体。
  38. 配列番号９７のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む、請求項３６又は３７に記載の抗体。
  39. 配列番号１０３の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の抗体。
  40. 配列番号１１６の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０２の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の抗体。
  41. ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号９０又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  42. （ａ）配列番号９９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項４１に記載の抗体。
  43. 配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む、請求項４１又は４２に記載の抗体。
  44. 配列番号１０５の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０４の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の抗体。
  45. 配列番号１１７の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０４の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項４１～４４のいずれか一項に記載の抗体。
  46. ＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、ＣＣＲ８の硫酸化とは無関係にＣＣＲ８に結合する、モノクローナル抗体。
  47. 配列番号１０６のアミノ酸残基２～６の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、請求項４６に記載の抗体。
  48. 配列番号１０６のアミノ酸残基９１～１０４及び１７２～１９３の１つ又は複数を含むエピトープに結合する、請求項４６に記載の抗体。
  49. マウスＣＣＲ８に結合するモノクローナル抗体であって、（ａ）配列番号６５又は配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｄ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、モノクローナル抗体。
  50. （ａ）配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＨ配列；
    （ｂ）配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の同一性を有するＶＬ配列；及び
    （ｃ）（ａ）で定義されるＶＨ配列と（ｂ）で定義されるＶＬ配列
    からなる群から選択される配列を含む、請求項４９に記載の抗体。
  51. 配列番号７０のＶＨ配列及び配列番号６９のＶＬ配列を含む、請求項４９又は５０に記載の抗体。
  52. 配列番号７２の重鎖アミノ酸配列及び配列番号７１の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の抗体。
  53. ヒト抗体である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の抗体。
  54. ヒト化抗体である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の抗体。
  55. キメラ抗体である、請求項１～５２のいずれか一項に記載の抗体。
  56. ＣＣＲ８に結合する抗体断片である、請求項１～５５のいずれか一項に記載の抗体。
  57. 完全長抗体である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の抗体。
  58. 完全長ＩｇＧ１抗体である、請求項５７に記載の抗体。
  59. 配列番号５３又は配列番号５９のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１定常ドメインを含む、請求項１～５８のいずれか一項に記載の抗体。
  60. 配列番号５４のアミノ酸配列を含むカッパ定常ドメインを含む、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体。
  61. 約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－１１Ｍの結合親和性（Ｋｄ）でＣＣＲ８に結合する、請求項１～６０のいずれか一項に記載の抗体。
  62. 前記ＣＣＲ８がヒトＣＣＲ８である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の抗体。
  63. 前記抗体がアフコシル化されている、請求項１～６２のいずれか一項に記載の抗体。
  64. 請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  65. 請求項６４に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  66. ＣＣＲ８に結合する抗体を産生する方法であって、請求項６５に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に適した条件下で培養することを含む、方法。
  67. 前記抗体を前記宿主細胞から回収することを更に含む、請求項６６に記載の方法。
  68. 請求項６７に記載の方法によって産生される、抗体。
  69. 請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬組成物。
  70. 追加の治療剤を更に含む、請求項６９に記載の医薬組成物。
  71. 医薬として使用するための、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物。
  72. がんの処置における使用のための、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物。
  73. がんを処置するための医薬の製造における、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物の使用。
  74. 制御性Ｔ細胞を枯渇させるための医薬の製造における、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物の使用。
  75. がんの処置を必要とする対象においてがんを処置する方法であって、有効量の請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  76. がんを有する対象において腫瘍微小環境中の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、前記腫瘍微小環境中の前記制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  77. がんを有する対象において腫瘍微小環境外の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、前記腫瘍微小環境外の前記制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な有効量の請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  78. がん細胞集団から制御性Ｔ細胞を枯渇させるインビトロ方法であって、前記細胞集団を、前記細胞集団から前記制御性Ｔ細胞を枯渇させるのに十分な量で、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６９若しくは７０に記載の医薬組成物と接触させることを含む、インビトロ方法。
  79. 前記がんが、膀胱がん、芽細胞腫、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、頭頸部がん、腎臓がん、肝臓がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、肉腫、皮膚がん、精巣がん及び子宮がんからなる群から選択される、請求項７３～７８のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  80. 前記がんの前記腫瘍微小環境中に存在する前記制御性Ｔ細胞が枯渇している、請求項７４、７６、７８及び７９のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  81. 前記がんの前記腫瘍微小環境外の前記制御性Ｔ細胞が枯渇している、請求項７４、７７、７８及び７９のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  82. 追加の治療剤を投与することを更に含む、請求項７３～８１のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  83. 前記追加の治療剤が抗がん剤である、請求項８２に記載の使用又は方法。
  84. 前記抗がん剤が、微小管破壊剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アルキル化剤、ホルモン療法、キナーゼ阻害剤、受容体アンタゴニスト、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤、抗血管新生剤、免疫調節剤、細胞接着の阻害剤、細胞傷害剤又は細胞分裂阻害剤、細胞アポトーシスの活性化剤、アポトーシス誘導物質に対する細胞の感受性を増加させる薬剤、サイトカイン、抗がんワクチン又は腫瘍溶解性ウイルス、トール様受容体（ＴＬＲ）剤、二重特異性抗体、細胞療法、及び免疫細胞エンゲージャからなる群から選択される、請求項８３に記載の使用又は方法。
  85. 前記抗がん剤がＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項８３又は８４に記載の使用又は方法。
  86. 前記ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストがアテゾリズマブである、請求項８５に記載の使用又は方法。
  87. 前記対象がヒトである、請求項７３～８５のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  88. 前記対象がマウスである、請求項７３～８５のいずれか一項に記載の使用又は方法。
  89. マウスにおいて疾患を処置する方法であって、有効量の請求項４９～５２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体を前記マウスに投与して前記疾患を処置することを含む、方法。
  90. 前記マウスが異種移植片を含む、請求項８９に記載の方法。
  91. アフコシル化の割合が約８０％～約９５％である、請求項６３に記載の抗体。
  92. １日目に静脈内投与された単回の１０ｍｇ／ｋｇ用量後の平均クリアランスが、３５日間にわたって約３～約５ｍＬ／日／ｋｇである、請求項１～１５及び４６～４８のいずれか一項に記載の抗体。
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