CN117700548A

CN117700548A - 抗cd33抗体及其使用方法

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Publication number: CN117700548A
Application number: CN202311258379.1A
Authority: CN
Inventors: P·库普; H·拉姆; A·罗森塔尔; S-J·李; N·P·尼尔森; R·佩切尔
Original assignee: Ai Lituo
Current assignee: Ai Lituo
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2018-08-02
Publication date: 2024-03-15
Also published as: CN110662765A; MA47691A; BR112019023789A2; US20210139581A1; CL2020001619A1; JP2023134445A; CN110662765B; JP2020532947A; CL2019003095A1; US20190040131A1; PE20200486A1; US11254743B2; CR20190486A; CO2019012200A2; US10711062B2; IL289880A; PH12019502463A1; WO2019028283A1; ZA201906366B; AU2018310985A1

Abstract

本公开涉及抗CD33抗体及其使用方法。本公开总体上涉及包含抗体的组合物，所述抗体例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等，所述抗体特异性地结合CD33蛋白、例如人CD33或哺乳动物CD33内的一个或多个表位并且具有改进和/或增强的功能特性；以及此类组合物在预防有需要的个体、降低有需要的个体的风险或治疗有需要的个体中的用途。

Description

抗CD33抗体及其使用方法

本申请是申请日为2018年8月2日、中国申请号为201880027790.9、发明名称为“抗CD33抗体及其使用方法”的发明申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年8月3日提交的美国临时申请号62/541,024以及2018年5月4日提交的美国临时申请号62/667,388的权益，所述临时申请特此以引用的方式整体并入。

关于ASCII文本文件的序列表的提交

关于ASCII文本文件的以下提交的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：735022001740SEQLIST.TXT，记录日期：2018年8月2日，大小：185KB)。

技术领域

本公开涉及抗CD33抗体，以及此类抗体的治疗用途。

背景技术

骨髓细胞表面抗原CD33前体(CD33)(也称为Siglec-3)是在免疫细胞和造血细胞(包括不成熟和成熟骨髓细胞、树突细胞和小神经胶质细胞)上表达的1型免疫球蛋白样跨膜蛋白。(Crocker等人(2007)Nat Rev Immunol.7:255-266；McMillan和Crocker(2008)Carbohydr Res.343:2050-2056；Von Gunten和Bochner(2008)Ann NY Acad Sci.1143:61-82；Handgretinger等人(1993)Immunol Lett.37:223-228；以及Hernández-Caselles等人(2006)J Leukoc Biol.79:46-58)。CD33含有Ig样C2型(免疫球蛋白样)和Ig样V型(免疫球蛋白样)细胞外结构域，以及其细胞质结构域中的两个ITIM样基序。已鉴定出CD33的三种选择性剪接形式(同种型)，包括称为CD33M的较高分子量变体和缺少Ig样V型结构域(配体结合位点)的较小同种型CD33m以及连接V结构域和C结构域的二硫键。

对扩展群组(例如，数千个个体)进行的全基因组关联研究(GWAS)已鉴定了CD33中的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC(AKA rs3826656)和rs3865444AA作为晚期发作阿尔茨海默病(AD)风险的遗传调节剂。在肿瘤学中，已显示导致CD33的表达降低的CD33变体与小儿急性骨髓性白血病(AML)的存活率提高相关。携带变体rs35112940^GG的那些个体从缓解的3年总体存活率为84％+/-8％，其与rs3865444AA变体(与较低的CD33全长表达相关)具有强烈的连锁不平衡。非保护性等位基因的缓解率是68％+/-15％。保护性等位基因的携带者也具有较低的复发风险和优异的无疾病存活。同样，相较于变体CC和CT(52％对31％)的携带者，对于rs12459419的次要变体等位基因纯合(TT)(其与全长CD33的表达降低超过46％相关)的患者更可能具有良好的疾病结果并且具有显著低于其他基因型的诊断性爆发CD33表达。甚至在经历用抗CD33抗体和毒性卡奇霉素-γ(calicheamicin-gamma)衍生物治疗的患者中也是如此(Mortland等人,(2013)Clin Cancer Res；1-8)。2459419^TT等位基因的携带者以及rs12459419^CT等位基因的携带者(其显示全长CD33的表达降低超过25％)也展示降低的阿尔茨海默病风险(Malik M.等人(2015)Human Molecular Genetics,1-14)。这表明CD33的表达或功能性降低可对阿尔茨海默病和癌症有益。

因此，对用于治疗与不期望的CD33活性相关的疾病、病症和疾患的治疗性抗CD33抗体存在需要。

本文引用的所有参考文献(包括专利、专利申请和公布)均特此以引用的方式整体并入。

发明内容

本公开总体上涉及包含特异性地结合人CD33的抗体(例如，单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等)的组合物以及使用此类组合物的方法。

本公开的某些方面至少部分地基于(例如，相对于具有包含序列SEQ ID NO:103的重链可变区和包含序列SEQ ID NO:104的轻链可变区的抗CD33抗体)具有改进和/或增强的功能特性的抗CD33抗体的鉴定，所述改进和/或增强的功能特性包括例如改进和/或增强的降低人原代免疫细胞上CD33的细胞表面水平的能力和/或具有改进和/或增强的结合动力学。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少9倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少3倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ IDNO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少3倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比具有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少约50％的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少约10％的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比具有包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少约10％的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比具有包含SEQID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少约10倍的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平，如通过流式细胞术所测量。有利地，所述抗CD33抗体以在约151.1pM至约4.1pM范围内的半最大有效浓度(EC₅₀)降低体外CD33的细胞水平、结合至人细胞(如人原代树突细胞)并且对人CD33的解离常数(K_D)在约8.57nM至约202pM的范围内。

因此，在一个方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:152)的序列，其中X₁是Y、A或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N；HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II：FIYPX₁NX₂IX₃G(SEQ ID NO:153)的序列，其中X₁是S或A，X₂是G、Q、R或V，并且X₃是T或R；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:154)的序列，其中X₁是T、D、F或S，并且X₂是Y、D或L；并且其中所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ ID NO:155)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T或A；HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:156)的序列，其中X1是A、V或E，X₂是S、V或F，X₃是N、A、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E、G或N；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E；并且其中所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:152)的序列，其中X₁是Y、A或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N；HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II：FIYPX₁NX₂IX₃G(SEQ ID NO:153)的序列，其中X₁是S或A，X₂是G、Q、R或V，并且X₃是T或R；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:154)的序列，其中X₁是T、D、F或S，并且X₂是Y、D或L；并且所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ ID NO:155)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T或A；HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:156)的序列，其中X1是A、V或E，X₂是S、V或F，X₃是N、A、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E、G或N；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E；并且其中所述抗体不是包含以下的抗体：重链可变区，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2和含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2和含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表3A至表3C中所示)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8(如表4A至表4C中所示)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表3A至表3C中所示)；并且所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8(如表4A至表4C中所示)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和含有HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述抗体包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表3A至表3C和表4A至表4C中所示)。

本公开的其他方面涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR；并且/或者所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNGITGYAQKFQ(SEQ ID NO:194)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQ ID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNGITGYAQKFQ(SEQ ID NO:194)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列；并且所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。

本公开的其他方面涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR；并且/或者所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNRITGYAQKFQ(SEQ ID NO:195)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQ ID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNRITGYAQKFQ(SEQ ID NO:195)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列；并且所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。

本公开的其他方面涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含Kabat CDR；并且/或者所述轻链可变区包含Kabat CDR。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNQITGYAQKFQ(SEQ ID NO:196)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含：CDR-H1，所述CDR-H1包含DYNLH(SEQ ID NO:190)的序列；CDR-H2，所述CDR-H2包含FIYPSNQITGYAQKFQ(SEQ ID NO:196)的序列；以及CDR-H3，所述CDR-H3包含YCARSDVD(SEQ ID NO:191)的序列；并且所述轻链可变区包含：CDR-L1，所述CDR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；CDR-L2，所述CDR-L2包含LLIKYAS(SEQ ID NO:192)的序列；以及CDR-L3，所述CDR-L3包含VYYCQHSWE(SEQ ID NO:193)的序列。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含根据式VII：QVQL VQSGAEVKKPGX₁SVKX₂SCKAS(SEQ ID NO:158)的序列，其中X₁是A或S，并且X₂是V或I；VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；VH FR3包含根据式VIII：X₁AX₂X₃X₄X₅X₆RX₇TX₈TVDX₉X₁₀X₁₁STX₁₂YMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:159)的序列，其中X₁是Y或S，X₂是Q或E，X₃是K或D，X₄是F或D，X₅是Q、F、E或T，X₆是G、D或H，X₇是V或A，X₈是M或L，X₉是T、N或Q，X₁₀是S或P，X₁₁是T或A，并且X₁₂是V或A；并且VH FR4包含根据式IX：WGQGTLX₁TVSS(SEQ ID NO:160)的序列，其中X₁是V或L；并且/或者所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含根据式X：X₁IX₂X₃TQSPX₄SLX₅X₆SX₇GX₈RX₉TIX₁₀C(SEQID NO:161)的序列，其中X₁是D或G，X₂是Q或V，X₃是M或L，X₄是S或D，X₅是S、P或A，X₆是A或V，X₇是V或L，X₈是D或E，X₉是V或A，并且X₁₀是T、N或D；VL FR2包含根据式XI：WYQQKPGX₁X₂PKLLIK(SEQ ID NO:162)的序列，其中X₁是K或Q，并且X₂是A或P；VL FR3包含根据式XII：GVPX₁RFSGSGSGTDFTLTISSLQX₂EDX₃AX₄YYC(SEQ ID NO:163)的序列，其中X₁是S或D，X₂是P或A，X₃是F、L或V，并且X₄是T或V；并且VL FR4包含根据式XIII：FGQGTKLEIX₁(SEQ ID NO:164)的序列，其中X₁是K或E。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列；VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；VH FR3包含选自由SEQ ID NO:6-19组成的组的序列；并且VH FR4包含选自由SEQ ID NO:20-21组成的组的序列；并且/或者所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列；VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列；VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列；并且VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77-101组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)；并且/或者所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)，HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)，HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)，HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)，并且HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)；或者HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)，HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)，HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)，HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)，并且HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ IDNO:119)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)；或者所述重链包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77-101组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)；并且/或者所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。在一些实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，并且/或者轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列；或者重链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列，并且/或者轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77、86和102组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的重链可变区(如表7中所示)；并且/或者所述抗体包含抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的轻链可变区(如表8中所示)。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争结合至CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的抗体结合基本上相同的CD33表位：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65和AB-H66。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:186)的序列，其中X₁是Y或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N；HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II：FIYPX₁NX₂IX₃G(SEQ ID NO:153)的序列，其中X₁是S或A，X₂是G、Q、R或V，并且X₃是T或R；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:187)的序列，其中X₁是T、D或F，并且X₂是Y、D或L；并且其中所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ IDNO:188)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T；HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:189)的序列，其中X₁是A或E，X₂是S或F，X₃是N、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E或N；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：HVR-H1，所述HVR-H1包含选自由SEQ ID NO:105和108-114组成的组的氨基酸序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含选自由SEQ ID NO:115-120组成的组的氨基酸序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含选自由SEQ ID NO:121-123和125-126组成的组的氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含：HVR-L1，所述HVR-L1包含选自由SEQID NO:127-128和130-134组成的组的氨基酸序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含选自由SEQ IDNO:135和140-145组成的组的氨基酸序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含选自由SEQ ID NO:146-151组成的组的氨基酸序列。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含根据式VII：QVQLVQSGAEVKKPGX₁SVKX₂SCKAS(SEQ ID NO:158)的序列，其中X₁是A或S，并且X₂是V或I；VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；VH FR3包含根据式VIII：X₁AX₂X₃X₄X₅X₆RX₇TX₈TVDX₉X₁ ₀X₁₁STX₁₂YMELSSLRSEDTAVYY CAR(SEQ ID NO:159)的序列，其中X₁是Y或S，X₂是Q或E，X₃是K或D，X₄是F或D，X₅是Q、F、E或T，X₆是G、D或H，X₇是V或A，X₈是M或L，X₉是T、N或Q，X₁₀是S或P，X₁₁是T或A，并且X₁₂是V或A；并且VH FR4包含根据式IX：WGQGTLX₁TVSS(SEQ ID NO:160)的序列，其中X₁是V或L；并且/或者所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含根据式X：X₁IX₂X₃TQSPX₄SLX₅X₆SX₇GX₈RX₉TIX₁₀C(SEQ IDNO:161)的序列，其中X₁是D或G，X₂是Q或V，X₃是M或L，X₄是S或D，X₅是S、P或A，X₆是A或V，X₇是V或L，X₈是D或E，X₉是V或A，并且X₁₀是T、N或D；VL FR2包含根据式XI：WYQQKPGX₁X₂PKLLIK(SEQID NO:162)的序列，其中X₁是K或Q，并且X₂是A或P；VL FR3包含根据式XII：GVPX₁RFSGSGSGTDFTLTISSLQX₂EDX₃AX₄YYC(SEQ ID NO:163)的序列，其中X₁是S或D，X₂是P或A，X₃是F、L或V，并且X₄是T或V；并且VL FR4包含根据式XIII：FGQGTKLEIX₁(SEQ ID NO:164)的序列，其中X₁是K或E。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列；VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；VH FR3包含选自由SEQ ID NO:6-19组成的组的序列；并且VH FR4包含选自由SEQ ID NO:20-21组成的组的序列；并且/或者所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列；VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列；VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列；并且VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述重链可变区包含VH FR3，所述VH FR3包含选自由SEQ IDNO:12-15组成的组的序列。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:38和40-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:86-101组成的组的氨基酸序列。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQID NO:58的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:86的氨基酸序列的轻链可变区或含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体为IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，所述抗体为IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗体具有IgG4同种型，并且其中所述抗体包含残基位置228处的S228P氨基酸取代、残基位置234处的F234A氨基酸取代和残基位置235处的L235A氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述抗体包含在Fc区中选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y以及它们的任何组合，其中残基的编号是根据EU或Kabat编号。在一些实施方案中，Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置L243A、L235A和P331A处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置L243A、L235A、P331A和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置K322A和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；Fc区包含位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；或者Fc区包含位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号；或者Fc区包含位置L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。

在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQID NO:176的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链和含有SEQID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:184的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:197的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:198的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:199的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:200的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:201的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:202的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:204的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。在另一方面，本公开涉及一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述CD33蛋白是哺乳动物蛋白质或人蛋白质。在一些实施方案中，所述CD33蛋白是野生型蛋白质。在一些实施方案中，所述CD33蛋白是天然存在的变体。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述CD33蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体特异性地结合至人CD33蛋白。在一些实施方案中，所述抗体结合至人CD33蛋白并且不与来自另一物种的CD33直向同源物或同源物交叉反应。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体是结合至包含人CD33或哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基的表位的抗体片段。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体是结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白质的抗体片段：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。在一些实施方案中，所述抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白质：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。在一些实施方案中，所述片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。在一些实施方案中，所述第一抗原是CD33并且所述第二抗原是：促进跨血脑屏障转运的抗原；选自由以下组成的组的促进跨血脑屏障转运的抗原：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽(penetratin)、聚精氨酸肽、血管肽(angiopep peptide)和ANG1005；选自由致病肽或蛋白质和致病核酸组成的组的致病因子，其中所述致病肽或蛋白质是选自由以下组成的组：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白(huntingtin)、降钙素(calcitonin)、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白(ataxin)、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体(Lewy body)、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白(keratoepithelin)、胱抑素(cystatin)、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽，并且所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质是选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体和磷脂酰丝氨酸；以及在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖酯。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体与特异性地结合选自由以下组成的组的致病因子的一种或多种抗体组合使用：致病肽、致病蛋白质、淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽以及它们的任何组合；或与结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合使用：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA以及它们的任何组合。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体对人CD33的解离常数(K_D)比包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少4倍；比包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1倍；或比包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1倍，其中K_D通过表面等离子体共振测定。在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体对人CD33的解离常数(K_D)在约2nM至约200pM范围内或小于约200pM，并且其中K_D通过生物层干涉术(BioLayerInterferometry)测定。

在可与前述实施方案中的任一者组合的一些实施方案中，所述抗体降低CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，CD33在人树突细胞的表面上表达。在一些实施方案中，所述抗体降低体外CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，所述抗体以小于150pM的半最大有效浓度(EC₅₀)降低体外CD33的细胞表面水平，如通过流式细胞术所测量。在一些实施方案中，所述抗体以比包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少50％；比包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10％；比包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10％；或者比包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10倍的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平，如通过流式细胞术所测量。

在另一方面，本公开涉及分离的核酸，所述分离的核酸包含编码本文所述的任何抗体的核酸序列。

在另一方面，本公开涉及包含本文所述的任何核酸的载体。在一些实施方案中，所述载体是表达载体和/或展示载体。

在另一方面，本公开涉及包含本文所述的任何核酸或载体的分离的宿主细胞。

在另一方面，本公开涉及一种产生结合至CD33的抗体的方法，所述方法包括培养本文所述的任何宿主细胞，以使得产生所述抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括回收由所述细胞产生的抗体。

在另一方面，本公开涉及一种通过本文所述的任何方法产生的抗体。

在另一方面，本公开涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的任何抗体和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体用于制备药剂的用途。

在另一方面，本公开涉及一种预防疾病、病症或损伤，降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、tau蛋白病(taupathydisease)、感染和癌症，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所述的任何抗体。在一些实施方案中，所述疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，癌症是选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体用于制备可用于预防疾病、病症或损伤，降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤预防的药剂的用途，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、tau蛋白病、感染和癌症。在一些实施方案中，所述疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，癌症是选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和多发性骨髓瘤。

附图说明

图1描绘来自流式细胞术测定的结果，所述测定测量在用人源化CD33抗体处理后原代人单核细胞源性树突细胞表面上的CD33水平。

图2描绘测量在与不同浓度的亲和力成熟的CD33抗体一起孵育后原代人单核细胞源性树突细胞表面上的CD33水平的流式细胞术结果。

图3描绘来自配体阻断测定的结果，其中评估含有CD33的唾液酸配体的红细胞在不同浓度的CD33抗体存在下结合至CD33的能力。

图4描绘来自流式细胞术测定的结果，所述测定测量在用不同浓度的含有不同Fc区的CD33抗体处理后原代人单核细胞源性树突细胞表面上的CD33水平。

图5描绘测量注射CD33抗体的人源化NSG小鼠中huCD45⁺huCD14⁺细胞表面上的人CD33水平的流式细胞术结果。

图6A描绘测量注射CD33抗体的人CD33转基因小鼠中循环CD11b⁺Gr1⁺细胞表面上的人CD33水平的流式细胞术结果。图6B描绘来自流式细胞术测定的结果，所述测定测量注射CD33抗体的人CD33转基因小鼠中的血液或脾中CD11b⁺Gr1⁺细胞表面上的人CD33水平。

图7描绘来自测量CD33抗体的ADCC活性的测定的结果。

图8描绘来自在CD33抗体存在下CDC测定的结果。

图9A-9D描绘测量在用不同浓度的CD33抗体处理后人CD33和人Siglec-7转基因小鼠中细胞表面上的人CD33和人Siglec-7水平的流式细胞术结果。图9A描绘小神经胶质细胞表面上的人CD33水平，图9B描绘小神经胶质细胞表面上的人Siglec-7水平，图9C描绘循环嗜中性粒细胞表面上的人CD33水平，图9D描绘循环单核细胞表面上的人CD33水平。

具体实施方式

一般技术

本文所述或提及的技术和程序通常众所周知并且常常由本领域的技术人员使用常规方法采用，例如像，描述于以下文献中的广泛利用的方法：Sambrook等人,MolecularCloning:A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编辑(2003))；丛书Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR 2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R.Taylor编辑(1995)),Harlow和Lane编辑(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney编辑(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编辑，1984)；Methods in MolecularBiology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis编辑，1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney)编辑，1987)；Introduction toCell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell andTissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths和D.G.Newell编辑，1993-8)J.Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell编辑)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos编辑，1987)；PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等人编辑，1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等人编辑，1991)；Short Protocols inMolecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.编辑，IRL Press,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean编辑，Oxford University Press,2000)；Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra编辑，Harwood Academic Publishers,1995)；以及Cancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita等人编辑，J.B.LippincottCompany,1993)。

定义

如本文所用，术语“预防”包括提供关于个体的特定疾病、病症或疾患的发生或复发的预防。个体可倾向于、易患特定疾病、病症或疾患，或处于发展这种疾病、病症或疾患的风险，但尚未被诊断出患有所述疾病、病症或疾患。

如本文所用，处于发展特定疾病、病症或疾患的“风险”的个体可以或可以不具有可检测的疾病或疾病症状，并且可在本文所述的治疗方法之前已展示或可未展示可检测的疾病或疾病症状。“处于风险”表示个体具有一种或多种风险因素，所述风险因素是与特定疾病、病症或疾患的发展相关的可测量参数，如本领域中所已知。具有这些风险因素中的一者或多者的个体发展特定疾病、病症或疾患的概率高于不具这些风险因素中的一者或多者的个体。

如本文所用，术语“治疗”是指经设计以改变所治疗个体在临床病理学过程期间的自然过程的临床干预。合乎需要的治疗作用包括降低特定疾病、病症或疾患的进展速率、改善或减轻特定疾病、病症或疾患的病理状态以及缓解或改善特定疾病、病症或疾患的预后。举例而言，如果与特定疾病、病症或疾患相关的一种或多种症状减轻或消除，则个体得到成功“治疗”。

“有效量”是指至少在所需剂量下和在所需时间段内有效实现所需治疗或预防结果的量。有效量可以一次或多次施用来提供。本文的有效量可根据诸如以下的因素而变化：疾疾患态、个体的年龄、性别和体重以及治疗在个体内引发所需应答的能力。有效量也为治疗有益作用胜过治疗的任何毒性或有害作用的量。对于预防性使用而言，有益或所需结果包括诸如以下的结果：消除或降低疾病的风险、减轻疾病的严重程度或延迟疾病(包括所述疾病的生物化学、组织学和/或行为症状、在所述疾病发展期间存在的所述疾病的并发症和中间病理表型)的发作。对于治疗性用途，有利或所需的结果包括诸如以下的临床结果：减少由疾病引起的一种或多种症状、提高患有疾病的患者的生命质量、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、诸如通过靶向来增强另一种药物的效果、延迟疾病进展和/或延长存活。药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景下所理解，药物、化合物或药物组合物的有效量可以或可以不结合另一药物、化合物或药物组合物来实现。因此，可认为“有效量”是在施用一种或多种治疗剂的背景下进行，并且如果结合一种或多种其他剂可实现或实现合乎需要的结果，则可认为单一剂是以有效量给予。

如本文所用，与另一化合物或组合物“结合”施用包括同时施用和/或在不同时间施用。结合施用也涵盖作为共同制剂施用或作为分开的组合物施用，包括以不同给药频率或间隔并且使用相同的施用途径或不同的施用途径。

用于治疗、预防或降低风险目的的“个体”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家养动物和农场动物以及动物园动物、运动型动物或宠物动物，如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。优选地，个体是人。

术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与“抗体”互换使用。本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用并且具体地涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、从至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要其展现所需的生物活性即可。

基础4链抗体单元是由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链构成的异四聚体糖蛋白。V_H与V_L配对一起形成单一抗原结合位点。关于不同类别的抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Stites,Abba I.Terr和TristramG.Parslow(编辑),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。

基于其恒定结构域的氨基酸序列，可将来自任何脊椎动物物种的L链分配为两种明显不同类型(称为κ(“κ”)和λ(“λ”))中的一者。取决于其重链(CH)恒定结构域的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分配为不同类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其重链分别指定为α(“α”)、δ(“δ”)、ε(“ε”)、γ(“γ”)和μ(“μ”)。基于CH序列和功能的相对较小差异将γ和α类别进一步划分成亚类(同种型)，例如人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是众所周知的并且通常描述于例如Abbas等人,Cellular and Molecular Immunology,第4版(W.B.Saunders Co.,2000)中。

“天然抗体”通常为约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，其由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链构成。每一轻链由一个共价二硫键连接至重链，而在不同免疫球蛋白同种型的重链中二硫键联的数目各不相同。每一重链和轻链也具有规律间隔的链内二硫桥。每一重链在一端具有可变结构域(V_H)，之后为多个恒定结构域。每一轻链在一端具有可变结构域(V_L)并且在其另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。据信，特定氨基酸残基在轻链与重链可变结构域之间形成界面。

“分离的”抗体(如本公开的抗CD33抗体)是已自其产生环境的组分(例如，天然或重组)鉴定、分离和/或回收的抗体。优选地，分离的多肽不与来自其产生环境的所有其他污染性组分缔合。来自其产生环境的污染性组分(如源自重组转染细胞的那些组分)是通常将干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的材料，并且可包括酶、激素和其他蛋白质性或非蛋白质性溶质。在优选的实施方案中，将多肽纯化(1)至如通过例如Lowry方法所测定大于95重量％的抗体，并且在一些实施方案中，至大于99重量％；(2)至通过使用旋杯式测序仪足以获得至少15个N末端或内部氨基酸序列残基的程度，或(3)至通过SDS-PAGE在非还原或还原条件下使用考马斯蓝(Coomassie blue)或优选地银染色的均质性。由于抗体天然环境的至少一种组分不会存在，所以分离的抗体包括在重组T细胞内的原位抗体。然而，分离的多肽或抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。

抗体(如本公开的抗CD33抗体)的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“V_H”和“V_L”。这些结构域通常是抗体的最可变部分(相对于相同类别的其他抗体)并且含有抗原结合位点。

术语“可变”是指抗体(如本公开的抗CD33抗体)之间可变结构域的某些区段的序列差异极大的事实。V结构域介导抗原结合并且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在整个可变结构域跨度中并非均匀分布。相反，其在轻链和重链可变结构域二者中均集中于三个称为高变区(HVR)的区段中。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含4个由三个HVR连接的主要采用β折叠构型的FR区，所述HVR形成连接并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分的环。每一链中的HVR通过FR区保持紧密靠近，并且与来自另一链的HVR一起促进形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人,Sequences of Immunological Interest,第5版,National Institute ofHealth,Bethesda,MD(1991))。恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合，但展现各种效应功能，如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同源抗体的群体获得的抗体(如本公开的单克隆抗CD33抗体)，即，除可以少量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)以外，包含所述群体的个别抗体均相同。单克隆抗体具有高度特异性，其针对一个或多个抗原位点。在一些实施方案中，本公开的单克隆抗体可以是双特异性抗体。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每一单克隆抗体是针对一个或多个抗原位点上的单一决定簇。修饰词“单克隆”指示抗体的特征在于自基本上同源的抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任一特定方法来产生所述抗体。举例而言，根据本公开使用的单克隆抗体可通过多种技术来制备，包括例如噬菌体展示技术(参见例如，Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 101(34):12467-472(2004)；以及Lee等人,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004))、杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995)；Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)、酵母呈递技术(参见例如，WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568，和Xu等人,ProteinEng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)，以及用于在具有部分或全部人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人或人样抗体的技术(参见例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；以及5,661,016；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,NatureBiotechnol.14:826(1996)；以及Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。

术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用来指与抗体片段相对的呈其基本上完整形式的抗体(如本公开的抗CD33抗体)。具体地说，全抗体包括具有重链和轻链并且包括Fc区的那些抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可具有一种或多种效应功能。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')₂和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata等人,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子和从抗体片段形成的多特异性抗体。

抗体(如本公开的抗CD33抗体)的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段(称为“Fab”片段)和残余“Fc”片段，其命名反映容易结晶的能力。Fab片段是由整个L链以及H链的可变区结构域(V_H)和一条重链的第一恒定结构域(C_H1)组成。每一Fab片段关于抗原结合均是单价的，即其具有单一抗原结合位点。抗体经胃蛋白酶处理产生单一大F(ab')₂片段，所述片段大致对应于两个二硫键连接的具有不同抗原结合活性的Fab片段，并且仍然能够交联抗原。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在C_H1结构域的羧基末端具有一些额外残基，所述残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文针对恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab'的命名。F(ab')₂抗体片段最初是作为在其间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对产生。也已知抗体片段的其他化学偶联。

Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应功能由Fc区中的序列确定，所述区也通过某些细胞类型上发现的Fc受体(FcR)识别。

“Fv”是含有完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由一个重链可变区结构域与一个轻链可变区结构域呈紧密非共价缔合形式的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生6个高变环(各自来自H链和L链的3个环)，所述高变环贡献用于抗原结合的氨基酸残基并且赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域(或Fv的一半，其仅包含三个对抗原具有特异性的HVR)也具有识别并且结合抗原的能力，但其亲和力低于完整结合位点。

也缩写为“sFv”或“scFv”的“单链Fv”是包含连接成单一多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含在V_H与V_L结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成所需的抗原结合结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun,The Pharmacology of MonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)。

抗体(如本公开的抗CD33抗体)的“功能片段”包含完整抗体的一部分，所述部分通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区或抗体的保留或具有修饰的FcR结合能力的F区。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。

术语“双抗体”是指通过以下方式制备的小抗体片段：用V_H与V_L结构域之间的短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(参见前述段落)，以使得实现V结构域的链间而非链内配对，由此产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的V_H和V_L结构域存在于不同多肽链上。双抗体更详细地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 90:6444-48(1993)中。

如本文所用，“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体(免疫球蛋白)(例如本公开的抗CD33抗体)，以及此类抗体的片段，只要其展现所需生物学活性即可(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,81:6851-55(1984))。本文的目标嵌合抗体包括抗体，其中抗体的抗原结合区源自通过例如用目标抗原对猕猴实施免疫所产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”作为“嵌合抗体”的亚组使用。

非人(例如，鼠类)抗体的“人源化”形式(如本公开的抗CD33抗体)是含有最少量源自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的HVR的残基被来自非人物种(如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)的HVR(供体抗体)的具有所需特异性、亲和力和/或能力的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被相应的非人残基置换。此外，人源化抗体可包含接受者抗体或供体抗体中不存在的残基。可进行这些修饰以进一步改善抗体性能，如结合亲和力。通常，人源化抗体将包含基本上全部的至少一个、并且通常两个可变结构域，其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白序列的那些高变环，并且全部或基本上全部的FR区为人免疫球蛋白序列的那些FR区，但FR区可包括改进抗体性能(如结合亲和力、异构化、免疫原性等)的一个或多个个别FR残基取代。FR中的这些氨基酸取代的数量通常在H链中不超过6，并且在L链中不超过3。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。关于其他细节，参见例如Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。也参见例如Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。

“人抗体”是具有对应于由人产生的抗体(如本公开的抗CD33抗体)的氨基酸序列的氨基酸序列和/或使用如本文所公开的用于制备人抗体的技术中的任一者制备的抗体。人抗体的这一定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域中已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)来产生。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。描述于以下文献中的方法也可用于制备人单克隆抗体：Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,AlanR.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)。还参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)。人抗体可通过向转基因动物施用抗原来制备，所述动物已经修饰以响应于抗原激发产生此类抗体，但其内源性基因座已失能，例如，经免疫的异种小鼠(关于XENOMOUSE^TM技术，参见例如美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于经由人B细胞杂交瘤技术所产生的人抗体，还参见例如Li等人,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。或者，人抗体也可通过采用酵母文库和如(例如)WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568；以及Xu等人,Protein Eng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)中所公开的方法来制备。

术语“高变区”、“HVR”或“HV”在本文中使用时是指抗体可变结构域(如本公开的抗CD33抗体的可变结构域)的在序列上高变和/或形成结构上限定环的区。通常，抗体包含6个HVR；3个在VH中(H1、H2、H3)，并且3个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示6个HVR的大部分多样性，并且据信尤其H3在赋予抗体良好特异性方面具有独特作用。参见例如，Xu等人,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu,Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编辑,Human Press,Totowa,NJ,2003))。实际上，仅由重链组成的天然存在的骆驼科动物抗体在不存在轻链下具有功能性并且稳定。参见例如，Hamers-Casterman等人,Nature363:446-448(1993)和Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。

本文使用并且涵盖许多HVR的描述。在一些实施方案中，HVR可以是基于序列可变性的Kabat互补决定区(CDR)并且使用最为广泛(Kabat等人,同上)。在一些实施方案中，HVR可以是Chothia CDR。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，HVR可以是AbM HVR。AbM HVR表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且用于Oxford Molecular的AbM抗体建模软件中。在一些实施方案中，HVR可以是“接触”HVR。“接触”HVR是基于对可获得的复杂晶体结构的分析。来自这些HVR中每一者的残基是如下所述。

HVR可包含如下“延伸HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(优选实施方案)(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些延伸HVR定义中的每一者，根据EU或Kabat等人，同上对可变结构域残基进行编号。

“框架”或“FR”残基是除如本文所定义的HVR残基以外的那些可变结构域残基。

短语“如EU或Kabat中的可变结构域残基编号”或“如EU或Kabat中的氨基酸位置编号”及其变化形式是指用于EU或Kabat等人，同上中的抗体汇编的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用这种编号系统，实际线性氨基酸序列可含有较少或额外的对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或插入的氨基酸。举例而言，重链可变结构域可包括在H2的残基52后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列的同源性区与“标准”Kabat编号序列比对来确定给定抗体残基的EU或Kabat编号。

EU或Kabat编号系统通常在提及可变结构域中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时使用(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。“EU或Kabat编号系统”或“EU索引”通常在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如，Kabat等人,同上中所报告的EU索引)。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。除非本文中另有说明，否则对抗体可变结构域中的残基编号的提及意指Kabat编号系统的残基编号。除非本文中另有说明，否则对抗体恒定结构域中的残基编号的提及意指EU或Kabat编号系统的残基编号(例如，参见美国专利公布号2010-280227)。

如本文所用的“受体人框架”是包含源自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“源自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含其相同氨基酸序列，或其可含有先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，先前存在的氨基酸变化的数目为10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小或2或更小。在VH中存在先前存在的氨基酸变化的情况下，那些变化优选仅发生在位置71H、73H和78H中的三者、两者或一者处；举例而言，那些位置处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体人框架的序列与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列一致。

“人共有框架”是代表在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择是来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。实例包括，对于VL而言，亚组可为如Kabat等人,同上中的亚组κI、κII、κIII或κIV。另外，对于VH而言，亚组可为如Kabat等人,同上中的亚组I、亚组II或亚组III。

在例如本公开的抗CD33抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失或邻近指定残基的至少一个氨基酸残基的插入。“邻近”指定残基插入意指在其一至两个残基内插入。插入可以是至指定残基的N末端或C末端。本文的优选氨基酸修饰是取代。

“亲和力成熟”抗体(如本公开的抗CD33抗体)是在其一个或多个HVR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲本抗体相比，所述改变使得所述抗体对抗原的亲和力有所提高。在一个实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原具有纳摩尔级或甚至皮摩尔级亲和力。亲和力成熟抗体通过本领域中已知的程序来产生。举例而言，Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)描述通过VH和VL结构域改组(shuffling)的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变描述于例如以下文献中：Barbas等人,Proc Nat.Acad.Sci,USA91:3809-3813(1994)；Schier等人,Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人,J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；以及Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。

如本文所用，术语“特异性识别”或”特异性结合”是指可测量并且可再现的相互作用，如靶标与抗体(如本公开的抗CD33抗体)之间的吸引或结合，其决定在异源性分子群体(包括生物分子)存在下靶标的存在。举例而言，特异性或优先结合至靶标或表位的抗体(如本公开的抗CD33抗体)是与其结合至其他靶标或靶标的其他表位相比以更大亲和力、亲合力更容易地和/或以更长持续时间结合此靶标或表位的抗体。通过阅读此定义也应理解，例如，特异性或优先结合至第一靶标的抗体(或部分)可以或可以不特异性或优先结合至第二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(但其可包括)排他性结合。特异性地结合至靶标的抗体可具有至少约10 ³M^-1或10 ⁴M^-1、有时约10 ⁵M^-1或10 ⁶M^-1、在其他情况下约10 ⁶M^-1或10 ⁷M^-1、约10 ⁸M^-1至10 ⁹M^-1或约10 ¹⁰M^-1至10 ¹¹M^-1或更高的缔合常数。可使用多种免疫测定格式来选择与特定蛋白质特异性免疫应答的抗体。举例而言，通常使用固相ELISA免疫测定来选择与蛋白质特异性免疫应答的单克隆抗体。关于对可用于测定特异性免疫应答性的免疫测定格式和条件的说明，参见例如Harlow和Lane(1988),Antibodies,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Publications,New York。

如本文所用，CD33蛋白与第二蛋白质之间的“相互作用”涵盖(但不限于)蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合和离子结合。如本文所用，当抗体破坏、降低或完全消除两种蛋白质之间的相互作用时，所述抗体“抑制所述两种蛋白质之间的相互作用”。当本公开的抗体或其片段结合至两种蛋白质中的一者时，所述抗体或其片段“抑制所述两种蛋白质之间的相互作用”。

“激动剂”抗体或“活化”抗体是在抗体(如本公开的激动剂抗CD33抗体)结合抗原后诱导(例如，增加)所述抗原的一种或多种活性或功能的抗体。

“阻断”抗体、“拮抗剂”抗体或“抑制性”抗体是在抗体(如本公开的抗CD33抗体)结合抗原后抑制或降低(例如，减少)所述抗原结合至一种或多种配体和/或在所述抗体结合抗原后抑制或降低(例如，减少)所述抗原的一种或多种活性或功能的抗体。在一些实施方案中，阻断抗体、拮抗剂抗体或抑制性抗体基本上或完全抑制抗原结合至一种或多种配体和/或抗原的一种或多种活性或功能。

抗体“效应功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物学活性，并且随抗体同种型而有所变化。

术语“Fc区”在本文中用于限定免疫球蛋白重链的C末端区域，其包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可有所变化，但通常将人IgG重链Fc区限定为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸至其羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU或Kabat编号系统的残基447)可在例如抗体的产生或纯化期间或通过重组工程化编码抗体重链的核酸除去。因此，完整抗体的组成可包含除去全部K447残基的抗体群体、未除去K447残基的抗体群体和具有含有和不含有K447残基的抗体混合物的抗体群体。用于本公开的抗体中的适合天然序列Fc区包括人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；以及天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。

“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰、优选地一个或多个氨基酸取代而与天然序列Fc区不同的氨基酸序列。优选地，变体Fc区与天然序列Fc区相比或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中的约1个至约10个氨基酸取代，并且优选约1个至约5个氨基酸取代。本文中的变体Fc区优选将与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％同源性，并且最优选与其具有至少约90％同源性，更优选与其具有至少约95％同源性。

“Fc受体”或“FcR”描述结合至抗体的Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式，FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化性受体”)和FcγRIIB(“抑制性受体”)，两者具有主要在其细胞质结构域上有所不同的类似氨基酸序列。活化性受体FcγRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(“ITAM”)。抑制性受体FcγRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(“ITIM”)。(参见例如，M.Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR综述于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；以及de Haas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中。本文的术语“FcR”涵盖其他FcR，包括将在将来鉴定的那些FcR。FcR也可增加抗体的血清半衰期。

可在例如表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞系中或在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定人FcRn高亲和力结合多肽与FcRn的体内结合和血清半衰期。WO2004/42072(Presta)描述具有改进或减少的与FcR结合的抗体变体。还参见例如Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。

如本文所用，关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指在比对序列并且引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比后，并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分的情况下，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的，比对可以本领域的技术人员所熟知的各种方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域的技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较序列的全长范围内实现最大比对所需的任何算法。

编码抗体(如本公开的抗CD33抗体)的“分离的”核酸分子是自其产生环境中通常与其缔合的至少一种污染性核酸分子鉴定并且分离的核酸分子。优选地，分离的核酸不与同产生环境相关的所有组分缔合。编码本文多肽和抗体的分离的核酸分子的形式不为其在自然界中所发现的形式或设置。因此，分离的核酸分子区别于天然存在于细胞中的编码本文多肽和抗体的核酸。

如本文所用的术语“载体”意图指能够转运与其连接的另一核酸的核酸分子。一类载体为“质粒”，其是指另外的DNA区段可连接至其中的环形双链DNA。另一类载体为噬菌体载体。另一类载体为病毒载体，其中另外的DNA区段可连接至病毒基因组中。某些载体能够在已引入其的宿主细胞中进行自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如非游离型哺乳动物载体)可在引入宿主细胞中时整合至所述宿主细胞的基因组中，并且由此随宿主基因组一同复制。此外，某些载体能够引导与其可操作连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”或简称“表达载体”。一般来说，在重组DNA技术中可用的表达载体通常呈质粒形式。在本说明书中，“质粒”与“载体”可互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。

如本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物或可通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入至聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在，则可在聚合物的组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。非核苷酸组分可中断核苷酸的序列。多核苷酸可包含在合成之后进行的一种或多种修饰，如缀合至标记。其他类型的修饰包括例如“帽”、用类似物取代天然存在的核苷酸中的一者或多者、核苷酸间修饰，例如像具有不带电键联(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和具有带电键联(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些修饰、含有侧接部分(例如像，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)的那些修饰、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些修饰、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些修饰、含有烷化剂的那些修饰、具有修饰的键联(例如，α端基异构核酸等)的那些修饰以及多核苷酸的未修饰形式。此外，通常存在于糖中的羟基中的任一者均可由例如膦酸酯基团、磷酸酯基团置换，由标准保护基团保护，或经活化以制备与额外核苷酸的额外键联，或可缀合至固体或半固体载体。5'和3'末端OH可被磷酸化或被胺或1至20个碳原子的有机封端基团部分取代。其他羟基也可衍生化成标准保护基团。多核苷酸也可含有本领域中通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖(sedoheptulose)、非环类似物和碱性核苷类似物(如甲基核苷)。一个或多个磷酸二酯键联可由替代连接基团置换。这些替代连接基团包括但不限于以下实施方案：其中磷酸酯由P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛”)置换，其中每一R或R'独立地是H或任选地含有醚(-O-)键联的取代或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有键联均需要相同。前述说明适于本文中所提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。

“宿主细胞”包括可为或已为载体的接受者的个别细胞或细胞培养物，所述载体用于并入多核苷酸插入物。宿主细胞包括单一宿主细胞的子代，并且子代可由于天然、偶然或特意突变而不一定与初始亲本细胞完全相同(在形态上或在基因组DNA互补上)。宿主细胞包括在体内用本公开的多核苷酸转染的细胞。

如本文所用的“载体”包括在所采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。通常，生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN^TM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICS^TM。

如本文所用的术语“约”是指为熟练的技术人员容易已知的对应值的一般误差范围。在本文中提及“约”一值或参数包括(并且描述)关于所述值或参数本身的实施方案。

除非上下文另外明确地指示，否则如本文和随附权利要求中所使用，单数形式”一个/种(a/an)”和”所述(the)”包括复数个指示物。举例而言，对“抗体”的提及是对一个至许多个抗体的提及，如摩尔量，并且包括为本领域的技术人员已知的其等效物等。

应理解，本文所述的本公开的方面和实施方案包括“包含”方面和实施方案、“由方面和实施方案组成”和”基本上由方面和实施方案组成”。

概述

本公开部分地涉及展现一种或多种改进和/或增强的功能特性的抗CD33抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)，包括例如能够降低CD33的细胞表面水平和/或以改进/增强的动力学结合CD33的抗体；制备和使用此类抗体的方法；含有此类抗体的药物组合物；编码此类抗体的核酸；以及含有编码此类抗体的核酸的宿主细胞。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有至少部分地归因于所述抗体抑制CD33与一种或多种天然聚糖配体之间的相互作用的能力的一种或多种活性。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可具有至少部分地归因于所述抗体通过诱导CD33的降解、下调、裂解、受体脱敏和/或溶酶体靶向来降低CD33的细胞表达(例如，细胞表面表达)的能力的一种或多种活性。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体展现以下性质中的一者或多者：a.对人CD33的解离常数(K_D)低于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体；b.结合至人细胞，如原代人树突细胞；c.降低CD33的细胞表面水平(例如，降低体外原代人树突细胞上的CD33的细胞表面水平)，其半最大有效浓度(EC₅₀)低于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体；d.对人CD33的解离常数(K_D)可在约8.57nM至约4.1pM的范围内，例如当K_D是通过表面等离子体共振或生物层干涉术测定时；和/或e.降低CD33的细胞表面水平(例如，降低体外原代人树突细胞上的CD33的细胞表面水平)，其半最大有效浓度(EC₅₀)可在约151.1pM至约4.1pM的范围内，例如当EC₅₀是通过流式细胞术在体外测定时。如本文所公开，半最大有效浓度(EC₅₀)是指本公开的抗CD33抗体将细胞上或细胞中的CD33的细胞水平降低至未处理细胞的一半时的浓度或所述抗体实现与细胞上的CD33的半最大结合时的浓度。

有利地，与对照抗CD33抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)相比，本公开的抗CD33抗体更强效地(例如，以较低的EC₅₀)降低CD33的细胞表面表达(例如，高达大约18倍)(参见例如，实施例2)。此外，有利地，与对照抗CD33抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)相比，本公开的抗CD33抗体具有较高(例如，亲和力高高达大约25倍)的对CD33的亲和力(例如，如通过表面等离子体共振所测量的较低的K_D值)(例如，参见实施例1和实施例3)。令人惊讶地，对CD33的较高亲和力不一定与降低CD33的细胞表面表达的能力或功效的增加相关(参见例如，实施例2和实施例5)。

本公开的某些方面至少部分地基于对展现一种或多种改进和/或增强的功能特性的抗CD33抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ IDNO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的鉴定，所述特性包括改进/增强的降低细胞上CD33的细胞表面水平的能力，从而导致一种或多种CD33活性的降低、中和、预防或抑制，所述CD33活性包括但不限于降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；降低由树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的总体功能性；抑制对选自以下的不同类型的癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病(Huntington'sdisease)、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞氏病(Behcet's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征(Shy-Drager syndrome)、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化症；结合至肿瘤细胞上的CD33配体；结合至树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者对肿瘤细胞的杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞转移活性；调节小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者上表达的一种或多种炎性受体(如CD86)的表达；增强免疫阻抑树突细胞、免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞、免疫阻抑嗜中性粒细胞和调控性T细胞中的一者或多者至肿瘤中的浸润；增加肿瘤、外周血或其他淋巴样器官中肿瘤促进骨髓/粒细胞免疫阻抑细胞的数量；增强骨髓源性阻抑细胞的肿瘤促进活性；降低具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；降低具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；增加肿瘤生长速率；增加肿瘤复发率；降低调节抗肿瘤T细胞应答的一种或多种免疫疗法的功效，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向选自以下的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR-5、CD39、CD70、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD447、CSF-1受体以及它们的任何组合，或降低一种或多种化学治疗剂和/或一种或多种癌症疫苗的功效。

在一些实施方案中，利用如本文所述的抗CD33抗体治疗癌症可：(i)增加肿瘤浸润性CD3⁺T细胞的数量；(ii)降低非致瘤性CD14⁺骨髓细胞中CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞存在于血液中；(iii)降低非致瘤性CD14⁺骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞存在于血液中；(iv)降低一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓源性阻抑细胞(MDSC)；(v)降低实体肿瘤的肿瘤生长速率；(vi)降低肿瘤体积；(vii)增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；(viii)增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或它们的任何组合中的一者或多者；(ix)增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环霉素、阿霉素表柔比星/>紫杉烷、紫杉醇/>多西他赛/>5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺/>卡铂/>以及它们的任何组合；(x)增加在非致瘤性骨髓源性阻抑细胞(MDSC)存在下T细胞的增殖；(xi)抑制非致瘤性骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；以及(xii)当缀合至化学或放射性毒素时，杀死实体肿瘤和相关血管中表达CD33的免疫阻抑非致瘤性骨髓细胞和/或非致瘤性表达CD14的细胞。

在一些实施方案中，本公开的骨髓细胞包括但不限于CD45+CD14+骨髓细胞、CD14+骨髓细胞和骨髓源性阻抑细胞(MDSC)。在一些实施方案中，本公开的骨髓细胞是非致瘤性骨髓细胞。免疫阻抑细胞有时也称为骨髓源性阻抑细胞(MDSC)。在人中，MDSC可通过以下标志物组合来定义：(1)CD14+HLA-DR低/-、(2)CD14+IL4Rα+、(3)CD14+HLA-DR-IL4Rα+、(4)CD34+CD14+CD11b+CD33+、(5)CD11b+CD14+CD33+、(6)CD33+HLA-DR-、(7)Lin-HLA-DR-、(8)Lin-HLA-DR-CD33+、(9)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+、(10)Lin-CD33+CD11b+CD15+、(11)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+CD14-CD15+、(12)CD11b+CD14-CD33+、(13)CD11b+CD14-HLA-DR-CD33+CD15+、(14)CD33+HLA-DR-CD15+、(15)CD15+IL4Rα+、(16)CD11b+CD15+CD66b+、(17)CD15+FSC低SSC高、(18)CD15高CD33+、(19)CD11b+CD14-CD15+、(20)CD66b+SSC高和(21)CD11b+CD15+(还参见Solito S等人,Annals of the NY Academy of Sciences,2014)。在小鼠中，MDSC可通过表面标志物CD45+、CD11b+、Gr1+和/或Il4Ra+的表达来定义。另外的示例性免疫阻抑单核细胞谱系是CD45+、CD11b+、Gr1低；以及CD45+、CD11c+。

CD33蛋白

在一个方面，本公开提供抗体，如分离的(例如，单克隆)抗体，所述抗体与本公开的CD33蛋白内的区(如表位)相互作用或以其他方式与其结合。在一些实施方案中，所述抗体以改进/增强的动力学(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)与本公开的CD33蛋白内的区(如表位)相互作用或以其他方式与其结合。在一些实施方案中，所述抗体与人细胞(如树突细胞)上的CD33蛋白内的区(如表位)相互作用或以其他方式与其结合，其半最大有效浓度(EC₅₀)低于对照抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ IDNO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至CD33蛋白并且在结合至CD33蛋白之后调节一种或多种CD33活性，例如与细胞上CD33表达相关的活性。本公开的CD33蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、小鼠CD33蛋白和大鼠CD33蛋白。

CD33不同地称为CD33分子、Siglec3、Siglec-3、CD33抗原(Gp67)、P67、Gp67、结合唾液酸的Ig样凝集素3、骨髓细胞表面抗原CD33或FLJ00391。

CD33是主要在骨髓谱系细胞上表达的免疫球蛋白样受体，所述骨髓谱系细胞包括但不限于巨噬细胞、树突细胞、破骨细胞、单核细胞和小神经胶质细胞。在一些实施方案中，CD33与CD64一起形成受体-信号传导复合物。在一些实施方案中，CD33信号传导导致PI3K或其他细胞内信号的下游抑制。在骨髓细胞上，Toll样受体(TLR)信号对于抑制CD33活性是重要的，例如在感染应答的背景下。TLR在病理性炎症应答中也起关键作用，例如，巨噬细胞和树突细胞上表达的TLR。

人CD33的氨基酸序列如下文SEQ ID NO:1所示：

在一些实施方案中，CD33是包含信号序列的前蛋白。在一些实施方案中，CD33是成熟蛋白质。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白不包含信号序列。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白表达于细胞上。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白表达于细胞(如细胞表面)上，所述细胞包括但不限于人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。本公开的抗CD33抗体可结合本文所公开的任何细胞上表达的本公开的CD33蛋白中的任一者。

本公开的CD33蛋白(如人CD33)含有若干结构域，包括但不限于位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基1-17处的信号序列、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基19-135处的细胞外免疫球蛋白样可变型(IgV)结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基145-228处的Ig样C2型结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基260-282处的跨膜结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基338-343处的ITIM基序1和位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基356-361处的ITIM基序2。如本领域的技术人员将了解，本公开的结构域的开始和结束残基可取决于所用计算机建模程序或用于测定结构域的方法而有所变化。

本公开的某些方面提供结合至人CD33或其同源物的抗CD33抗体，所述同源物包括但不限于哺乳动物CD33蛋白和来自其他物种的Cd33直向同源物。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以改进/增强的结合动力学(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)结合至人CD33或其同源物。

因此，如本文所用，本公开的”CD33”蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、灵长类动物CD33蛋白、小鼠CD33蛋白和大鼠CD33蛋白。另外，本公开的抗CD33抗体可结合人CD33蛋白、灵长类动物CD33内的表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可特异性地结合至人CD33。

在一些实施方案中，本公开的抗体可以pH依赖性方式结合CD33。在一些实施方案中，本公开的抗体可在中性pH下结合至CD33并且在不从CD33蛋白解离的情况下内化。或者，在酸性pH下，本公开的抗体一旦内化即可从CD33解离并且接着通过核内体/溶酶体途径降解。在某些实施方案中，抗CD33抗体在5.5至8.0、5.5至7.5、5.5至7.0、5.5至6.5、5.5至6.0、6.0至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、7.5至8.0、6.0至7.5、6.0至7.0、6.5至7.5范围内的pH下结合CD33。在某些实施方案中，抗CD33抗体在小于6.0、小于5.5、小于5.0、小于4.5、小于4.0、小于3.5、小于3.0、小于2.5或小于2.0的pH下从CD33解离。

在一些实施方案中，本公开的抗体结合至本公开的野生型CD33蛋白、其天然存在的变体和/或其疾病变体。

在一些实施方案中，本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有(C)核苷酸的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444C。在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的抗体结合至人CD33的变体，其中所述变体含有具有(A)核苷酸的SNP rs3865444。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有SNP rs3865444^AC或rs3865444^CC。

在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有GG核苷酸、AA核苷酸或AG核苷酸的SNPrs35112940。在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有CC、CT或TT基因型的SNP rs12459419。在某些实施方案中，受试者的编码SNP为纯合或杂合，rs1803具有GG核苷酸、CG核苷酸或CC核苷酸。

在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的抗体结合至细胞表面上表达的CD33蛋白，所述细胞包括但不限于人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的抗体结合至细胞表面上表达的CD33蛋白并且在结合至表面表达的CD33蛋白后调节(例如，诱导或抑制)本公开的至少一种CD33活性。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体特异性地结合至CD33蛋白。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体进一步结合至至少一种额外Siglec蛋白。在一些实施方案中，抗CD33抗体调节至少一种额外Siglec蛋白或表达至少一种额外Siglec蛋白的细胞的一种或多种活性。

CD33配体

本公开的CD33蛋白可与一种或多种CD33配体相互作用(例如，与其结合)。

示例性CD33配体包括但不限于唾液酸、含唾液酸的糖酯、含唾液酸的糖蛋白、α-2,6连接的含唾液酸的糖酯、α-2,6连接的含唾液酸的糖蛋白、α-2,3连接的含唾液酸的糖酯、α-2,3连接的含唾液酸的糖蛋白、α-1-酸糖蛋白(AGP)、CD24蛋白、神经节苷脂(例如，含有连接至唾液酸化聚糖的神经酰胺的糖酯)、分泌的粘蛋白、红细胞上表达的CD33配体、细菌细胞上表达的CD33配体、凋亡细胞上表达的CD33配体、肿瘤细胞上表达的CD33配体、病毒上表达的CD33配体、树突细胞上表达的CD33配体、神经细胞上表达的CD33配体、神经胶质细胞上表达的CD33配体、小神经胶质细胞上表达的CD33配体、星形胶质细胞上表达的CD33配体、β淀粉样蛋白斑块上的CD33配体、Tau缠结上的CD33配体、致病蛋白质上的CD33配体、致病肽上的CD33配体、巨噬细胞上表达的CD33配体、天然杀伤细胞上表达的CD33配体、T细胞上表达的CD33配体、T辅助细胞上表达的CD33配体、细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、B细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫阻抑巨噬细胞上表达的CD33配体、骨髓源性阻抑细胞上表达的CD33配体和调控性T细胞上表达的CD33配体。在一些实施方案中，本公开的CD33配体是神经节苷脂。神经节苷脂通常共享共同的乳糖神经酰胺(lacto-ceramide)核心和一个或多个唾液酸残基。

适合神经节苷脂配体的其他实例在表A中列出。通常，神经节苷脂是由鞘糖脂与一种或多种连接在糖链上的唾液酸(例如，n-乙酰基-神经氨酸，NANA)构成的分子。

表A：示例性神经节苷脂CD33配体的结构

CD33抗体

本公开的某些方面涉及包含一种或多种改进和/或增强的功能特性的抗CD33抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含相对于对照抗体(例如，包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)一种或多种改进和/或增强的功能特性。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对CD33(例如，人CD33)的亲和力高于对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的半最大有效浓度(EC₅₀)结合至人细胞(如树突细胞)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的半最大有效浓度(EC₅₀)降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)。

CD33的细胞水平可指但不限于CD33的细胞表面水平、CD33的细胞内水平和CD33的总水平。在一些实施方案中，CD33的细胞水平的降低包括CD33的细胞表面水平的降低。在一些实施方案中，本公开的降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平)的抗CD33抗体具有以下特性中的一者或多者：(1)抑制或降低一种或多种CD33活性；(2)抑制或降低CD33与其配体中的一者或多者结合的能力；(3)降低表达CD33的细胞中CD33表达的能力；(4)与CD33蛋白相互作用、结合CD33蛋白或识别CD33蛋白的能力；(5)与CD33蛋白特异性相互作用或结合的能力；以及(6)治疗、改善或预防本文所述或涵盖的疾病或病症的任一方面的能力。

本公开的抗CD33抗体可对靶抗原(例如，人CD33)具有纳摩尔级或甚至皮摩尔级亲和力。在某些实施方案中，所述抗体的解离常数(K_D)为约0.001nM至约100nM。在某些实施方案中，所述抗体的K_D为约0.01nM至约10nM。在某些实施方案中，所述抗体的K_D为约0.202nM至约8.57nM。在一些实施方案中，所述抗体的K_D小于约或等于约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM或.005nM。在一些实施方案中，所述抗体的K_D小于约5.22nM。在一些实施方案中，所述抗体的K_D大于约或等于约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM 3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM。即，所述抗体的K_D可是以下亲和力范围中的任一者：具有以下上限：约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM或.005nM和以下独立选择的下限：约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM，其中下限小于上限。在一些实施方案中，所述抗体的K_D为以下中的任一者：约10nM、约9nM、约8nM、约7nM、约6nM、约5nM、约4nM、约3nM、约2nM、约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约200pM或约100pM。测量抗体亲和力的各种方法为本领域中所已知，包括例如使用表面等离子体共振或生物层干涉术(例如，参见下文实施例1)。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测定对CD33的K_D。在一些实施方案中，在大约4℃的温度下测定对CD33的K_D。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或呈单价形式的全长抗体来测定K_D。在一些实施方案中，使用二价抗体和单体重组CD33蛋白来测定K_D。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对CD33的解离常数(K_D)低于对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对靶标(例如，人CD33)的K_D比对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)对所述靶标的K_D低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对靶标(例如，人CD33)的K_D比对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)对所述靶标的K_D低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少9倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少3倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的K_D比具有包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少3倍。在一些实施方案中，通过表面等离子体共振来测量亲和力。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，在大约4℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，使用如下文实施例1中所述的实验方法来测量亲和力。

本公开的抗CD33抗体可降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)，其半最大有效浓度(EC₅₀)(例如，当使用原代人树突细胞在体外测量时)在皮摩尔级范围内。在某些实施方案中，所述抗体的EC₅₀为约0.1至约500pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC₅₀为约1至约250pM。在某些实施方案中，所述抗体的EC₅₀为约4.1至约151.1pM。在一些实施方案中，所述抗体的EC₅₀小于约或等于约500pM、400pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM或0.5pM。在一些实施方案中，所述抗体的EC₅₀小于约74.3pM。在一些实施方案中，所述抗体的EC₅₀大于约或等于约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、300pM或400pM。即，所述抗体的EC₅₀可以是以下范围中的任一者：具有以下上限：约500pM、400pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM或0.5pM和以下独立选择的下限：约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、300pM或400pM，其中下限小于上限。在一些实施方案中，所述抗体的EC₅₀为以下中的任一者：约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、15pM、20pM、25pM、30pM、35pM、40pM、45pM、5-pM、55pM、60pM、65pM、70pM、75pM、80pM、85pM、90pM、95pM、100pM、105pM、110pM、115pM、120pM、125pM、130pM、135pM、140pM、145pM、150pM、155pM、160pM、165pM、170pM、175pM、180pM、185pM、190pM、195pM或200pM。测量抗体EC₅₀值的各种方法为本领域中所已知，包括例如通过流式细胞术(例如，参见下文实施例2)。在一些实施方案中，使用原代人树突细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用原代人单核细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用原代人巨噬细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用用人CD33转染的培养的细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约4℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约35℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约37℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或呈单价形式的全长抗体来测定EC₅₀。在一些实施方案中，使用含有展现增强的Fc受体结合的恒定区的抗体来测定EC₅₀。在一些实施方案中，使用含有展现降低的Fc受体结合的恒定区的抗体来测定EC₅₀。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)，其EC₅₀(例如，如使用原代人树突细胞在体外所测量)低于对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)，其EC₅₀比对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的EC₅₀低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)，其EC₅₀比对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；以及包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的EC₅₀低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC₅₀比具有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.6倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC₅₀比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.05倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC₅₀比具有包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.07倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC₅₀比具有包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.2倍。在一些实施方案中，使用原代人树突细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用原代人单核细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用原代人巨噬细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用用人CD33转染的培养的细胞在体外测量EC₅₀。在一些实施方案中，通过流式细胞术来测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约25℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约35℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，在大约37℃的温度下测量EC₅₀。在一些实施方案中，使用含有展现增强的Fc受体结合的恒定区的抗体来测定EC₅₀。在一些实施方案中，使用含有展现降低的Fc受体结合的恒定区的抗体来测定EC₅₀。在一些实施方案中，使用如下文实施例2中所述的实验方法来测量EC₅₀。

可使用本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型来测量对CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抑制。在一些实施方案中，利用本文所述或本领域中已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，在饱和抗体浓度下，本公开的抗CD33抗体将CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)抑制至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％、至少30％、至少31％、至少32％、至少33％、至少34％、至少35％、至少36％、至少37％、至少38％、至少39％、至少40％、至少41％、至少42％、至少43％、至少44％、至少45％、至少46％、至少47％、至少48％、至少49％、至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33的细胞表面簇集。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于抵消Src家族酪氨酸激酶(如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化中的一者或多者；募集并且结合至酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2；募集并且结合至PLC-γ1，其充当Dynamini-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；募集并且结合至含SH2结构域的蛋白质(例如，Crkl)；募集并且结合至脾酪氨酸激酶Syk；募集并且结合至SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白质2(Grb2)；募集并且结合至含多个SH2的蛋白质；蛋白质激酶C对Ser-307和Ser-342的磷酸化；调节一种或多种抗炎性细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF以及TNF、IFN-β1a、IFN-β1b或IL-6的可溶性受体在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的表达；降低细胞内钙动员；调节一种或多种促炎性细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1和MIP-1-β在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的表达；调节选自C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR和CCR2的一种或多种蛋白质的表达；抑制细胞外信号调控激酶(ERK)磷酸化；降低多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小神经胶质细胞对表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；磷酸肌醇3-激酶的活化；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；降低由树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率或两者；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的细胞死亡和细胞凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的总体功能性；含ITAM的受体的磷酸化；介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化；降低模式识别受体的活化；降低Toll样受体的活化；降低对细胞和蛋白质碎片的损害相关清除、CD33与其配体中的一者或多者之间的相互作用、CD33与共受体(如CD64)之间的相互作用的活化；降低选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、功能障碍突触清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他异物清除、致病蛋白质清除和肿瘤细胞清除的一种或多种类型的清除；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白质、致病肽、致病核酸、致病脂质或肿瘤细胞中的一者或多者的吞噬作用；抑制致病核酸的清除，如所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；活化对选自以下的致病蛋白质的清除：淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽；抑制对选自以下的不同类型的癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化症；抑制对选自以下的不同类型的炎性和感染病症的有益免疫应答：狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病和骨佩吉特氏病(Paget'sdisease of bone)；结合至肿瘤细胞上的CD33配体；结合至树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者对肿瘤细胞的杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫阻抑树突细胞、免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞或调控性T细胞；抑制一种或多种含ITAM基序的受体，如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10和DAP12；抑制一种或多种含有基序D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(SEQ ID NO:165)的受体；抑制通过一种或多种模式识别受体(PRR)的信号传导，所述受体如鉴定病原体相关分子模式(PAMP)的受体和鉴定损害相关分子模式(DAMP)的受体；抑制通过一种或多种Toll样受体的信号传导；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；降低小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者上表达的一种或多种炎性受体(如CD86)的表达；增加一种或多种CD33依赖性基因的表达；使破坏的CD33依赖性基因表达正常化；以及降低一种或多种ITAM依赖性基因(如NFAT转录因子)的表达。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体展现CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于增加肿瘤浸润性CD3⁺T细胞的数量；降低CD14⁺骨髓细胞(如血液中存在的肿瘤浸润性CD14⁺骨髓细胞和CD14⁺骨髓细胞)中CD33的细胞水平；降低CD14⁺骨髓细胞(如血液中存在的肿瘤浸润性CD14⁺骨髓细胞和CD14⁺骨髓细胞)的数量；降低一种或多种细胞(如骨髓源性阻抑细胞(MDSC))中的PD-L1、PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206水平；降低实体肿瘤的肿瘤生长速率；降低肿瘤体积；增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，所述疗法如靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或它们的任何组合中的一者或多者的检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法；增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环霉素、阿霉素表柔比星/>紫杉烷、紫杉醇/>多西他赛/>5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺/>卡铂奥沙利铂/>甲酰四氢叶酸、替莫唑胺/>以及它们的任何组合；增加在骨髓源性阻抑细胞(MDSC)存在下T细胞的增殖；抑制骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；以及当缀合至化学或放射性毒素时，杀死实体肿瘤和相关血管中表达CD33的免疫阻抑非致瘤性骨髓细胞和/或非致瘤性表达CD14的细胞。

在一些实施方案中，所述抗CD33抗体抑制本公开的CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)，所述配体包括但不限于红细胞上表达的CD33配体、细菌细胞上表达的CD33配体、凋亡细胞上表达的CD33配体、肿瘤细胞上表达的CD33配体、病毒上表达的CD33配体、树突细胞上表达的CD33配体、神经细胞上表达的CD33配体、神经胶质细胞上表达的CD33配体、小神经胶质细胞上表达的CD33配体、星形胶质细胞上表达的CD33配体、β淀粉样蛋白斑块上的CD33配体、Tau缠结上的CD33配体、致病蛋白质上的CD33配体、致病肽上的CD33配体、巨噬细胞上表达的CD33配体、天然杀伤细胞上表达的CD33配体、T细胞上表达的CD33配体、T辅助细胞上表达的CD33配体、细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、B细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫阻抑巨噬细胞上表达的CD33配体、骨髓源性阻抑细胞上表达的CD33配体、调控性T细胞上表达的CD33配体、分泌的粘蛋白、唾液酸、含唾液酸的糖酯、含唾液酸的糖蛋白、α-2,6连接的含唾液酸的糖酯、α-2,6连接的含唾液酸的糖蛋白、α-2,3连接的含唾液酸的糖酯、α-2,3连接的含唾液酸的糖蛋白、α-1-酸糖蛋白(AGP)、CD24蛋白质和神经节苷脂。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至细胞表面上表达的本公开的CD33蛋白，并且裸抗体抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，结合至本公开的CD33蛋白的本公开的抗CD33抗体通过降低可用于在细胞表面上或细胞内部与所述蛋白质相互作用的CD33的有效水平来抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，结合至本公开的CD33蛋白的本公开的抗CD33抗体通过诱导CD33的降解来抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。

如本文所用，CD33水平可指编码CD33的基因的表达水平；编码CD33的一种或多种转录物的表达水平；CD33蛋白的表达水平；和/或细胞内和/或细胞表面上存在的CD33蛋白的量。可使用本领域中已知的用于测量基因表达、转录、翻译的水平和/或蛋白质丰度或定位的任何方法来测定CD33水平。

另外，本公开的抗CD33抗体可用于预防以下疾病、降低以下疾病的风险或治疗以下疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫(Trypanosome)感染、克氏锥虫(Cruzi)感染、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染、杜氏利什曼虫(Leishmania donovani)感染、B族链球菌(Streptococcus)感染、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)感染、脑膜炎双球菌(Neisseria meningiditis)感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于诱导或促进有需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖；或用于降低有需要的个体中调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是单克隆抗体。

在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平和/或总水平)。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的下调。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的裂解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的降解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱敏。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作使CD33瞬时活化的配体模拟物。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的细胞水平降低和/或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的降解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的裂解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的内化。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体用作配体模拟物并且使CD33瞬时活化，之后诱导CD33的脱敏。

在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体或嵌合抗体。在整个本公开中可发现此类抗体的示例性说明。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至人CD33或其同源物，包括但不限于哺乳动物CD33蛋白。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体特异性地结合至人CD33。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至人CD33并且不与来自其他物种的CD33直向同源物或同源物交叉反应。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至细胞表面上表达的本公开的CD33蛋白，并且在结合至表面表达的CD33蛋白后调节(例如，诱导或抑制)本公开的一种或多种CD33活性。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是惰性抗体。

抗CD33抗体结合区

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合构象表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合不连续CD33表位。在一些实施方案中，不连续CD33表位包含2种或更多种肽、3种或更多种肽、4种或更多种肽、5种或更多种肽、6种或更多种肽、7种或更多种肽、8种或更多种肽、9种或更多种肽或10种或更多种肽。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合包含一种或多种肽的CD33表位。如本文所公开，CD33表位可包含一种或多种肽，所述肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个或20个或更多个氨基酸残基，或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的哺乳动物CD33蛋白上的5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个或20个或更多个氨基酸残基。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至人CD33的表位，所述表位与包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体所结合的CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合与包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体所结合基本上相同的CD33表位。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体竞争结合至CD33。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制选自表3A至表3C、表4A至表4C、表5A至表5D、表6A至表6D、表7和表8中所列出的任何抗体的至少一种抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制选自以下的至少一种抗体的结合：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合。在一些实施方案中，与在本公开的抗CD33抗体不存在下与CD33的结合相比，当本公开的抗CD33抗体将选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体与CD33的结合降低约50％至100％范围内的量时，所述抗CD33抗体与选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体竞争结合至CD33。在一些实施方案中，与在本公开的抗CD33抗体不存在下与CD33的结合相比，当本公开的抗CD33抗体将选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体与CD33的结合降低至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％时，所述抗CD33抗体与选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体竞争结合至CD33。在一些实施方案中，使选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体与CD33的结合降低100％的本公开的抗CD33抗体指示所述抗CD33抗体基本上完全阻断选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体与CD33的结合。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体和选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体以对应于10:1比率、9:1比率、8:1比率、7:1比率、6:1比率、5:1比率、4:1比率、3:1比率、2:1比率、1:1比率、0.75:1比率、0.5:1比率、0.25:1比率、0.1:1比率、0.075:1比率、0.050:1比率、0.025:1比率、0.01:1比率、0.0075:比率、0.0050:1比率、0.0025:1比率、0.001:比率、0.00075:1比率、0.00050:1比率、0.00025:1比率、0.0001:比率、1:10比率、1:9比率、1:8比率、1:7比率、1:6比率、1:5比率、1:4比率、1:3比率、1:2比率、1:0.75比率、1:0.5比率、1:0.25比率、1:0.1比率、1:0.075比率、1:0.050比率、1:0.025比率、1:0.01比率、1:0.0075比率、1:0.0050比率、1:0.0025比率、1:0.001比率、1:0.00075比率、1:0.00050比率、1:0.00025比率或1:0.0001比率的抗CD33抗体与选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体的量存在。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体以与选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体的量相比过量约1.5倍至100倍范围内或大于100倍的量存在。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体以与选自AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合的一种或多种抗体的量相比过量约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍或100倍的量存在。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至人CD33的表位，所述表位与选自表3A至表3C、表4A至表4C、表5A至表5D、表6A至表6D、表7和表8中所列出的任何抗体的至少一种抗体所结合的CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合至人CD33的表位，所述表位与选自以下的至少一种抗体所结合的CD33表位相同或重叠：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合与选自表3A至表3C、表4A至表4C、表5A至表5D、表6A至表6D、表7和表8中所列出的任何抗体的至少一种抗体所结合基本上相同的CD33表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合与选自以下的至少一种抗体所结合基本上相同的CD33表位：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66。用于定位抗体所结合至的表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”，Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与选自以下的一种或多种抗体竞争结合至CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合。

可利用本领域中已知的任何适合的竞争测定或CD33结合测定(如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞术)来测定抗CD33抗体是否与选自以下的一种或多种抗体竞争结合至CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合。在示例性竞争测定中，将固定化的CD33或在细胞表面上表达CD33的细胞在包含第一标记的抗体(其结合至CD33(例如，人或非人灵长类动物))和第二未标记的抗体(正在测试其与第一抗体竞争结合至CD33的能力)的溶液中孵育。所述第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化的CD33或表达CD33的细胞在包含第一标记的抗体而无第二未标记的抗体的溶液中孵育。在允许第一抗体与CD33结合的条件下孵育后，除去过量未结合的抗体，并且测量与固定化的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量。如果与固定化的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量在测试样品中相对于对照样品样基本上减少，则这指示第二抗体与第一抗体竞争结合至CD33。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

抗CD33抗体轻链和重链可变区

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或所有三个)HVR(如表3A至表3C中所示)。在一些实施方案中，所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表3A至表3C中所示)。在一些实施方案中，所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。

在一些实施方案中，HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:152)的序列，其中X₁是Y、A或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N。在一些实施方案中，HVR-H1包含选自SEQ ID NO:105-114的序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含根据式II：FIYPX₁NX₂IX₃G(SEQ ID NO:153)的序列，其中X₁是S或A，X₂是G、Q、R或V，并且X₃是T或R。在一些实施方案中，HVR-H2包含选自SEQ ID NO:115-120的序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:154)的序列，其中X₁是T、D、F或S，并且X₂是Y、D或L。在一些实施方案中，HVR-H3包含选自SEQ ID NO:121-126的序列。

在一些实施方案中，重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2和根据式III的HVR-H3，并且所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含选自SEQ ID NO:105-114的序列；和HVR-H2，所述HVR-H2包含选自SEQ ID NO:115-120的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含选自SEQ ID NO:121-126的序列；并且所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。

在一些实施方案中，重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15以及它们的任何组合(如表3A至表3C中所示)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，所述HVR-H1包含与以下抗体的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；(b)HVR-H2，所述HVR-H2包含与以下抗体的HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；以及(c)HVR-H3，所述HVR-H3包含与以下抗体的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15，并且所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ IDNO:119)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ IDNO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或所有三个)HVR(如表4A至表4C中所示)。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表4A至表4C中所示)。在一些实施方案中，所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

在一些实施方案中，HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ ID NO:155)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T或A。在一些实施方案中，HVR-L1包含选自SEQ ID NO:127-134的序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:156)的序列，其中X₁是A、V或E，X₂是S、V或F，X₃是N、A、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E、G或N。在一些实施方案中，HVR-L2包含选自SEQ ID NO:135-145的序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E。在一些实施方案中，HVR-L3包含选自SEQID NO:146-151的序列。

在一些实施方案中，轻链可变区包含根据式IV的HVR-L1、根据式V的HVR-L2和根据式VI的HVR-L3，并且所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。在一些实施方案中，轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含选自SEQ ID NO:127-134的序列，和HVR-L2，所述HVR-L2包含选自SEQ ID NO:135-145的序列，以及HVR-L3，所述HVR-L3包含选自SEQ ID NO:146-151的序列；并且所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

在一些实施方案中，轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8以及它们的任何组合(如表4A至表4C中所示)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，所述HVR-L1包含与以下抗体的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；(b)HVR-L2，所述HVR-L2包含与以下抗体的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；以及(c)HVR-L3，所述HVR-L3包含与以下抗体的HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15，并且所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ IDNO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或所有三个)HVR(如表3A至表3C中所示)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个或所有三个)HVR(如表4A至表4C中所示)。在一些实施方案中，所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表3A至表3C中所示)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表4A至表4C中所示)。在一些实施方案中，所述抗体不是包含以下的抗体：重链可变区，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2和含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2和含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。

在一些实施方案中，重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2和根据式III的HVR-H3，并且轻链可变区包含根据式IV的HVR-L1、根据式V的HVR-L2和根据式VI的HVR-L3，并且所述抗体不是包含以下的抗体：重链可变区，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2和含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2和含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含选自SEQ ID NO:105-114的序列，和HVR-H2，所述HVR-H2包含选自SEQ ID NO:115-120的序列，以及HVR-H3，所述HVR-H3包含选自SEQ IDNO:121-126的序列；并且轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含选自SEQ ID NO:127-134的序列，和HVR-L2，所述HVR-L2包含选自SEQ ID NO:135-145的序列，以及HVR-L3，所述HVR-L3包含选自SEQ ID NO:146-151的序列；并且所述抗体不是包含以下的抗体：重链可变区，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2和含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2和含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15以及它们的任何组合(如表3A至表3C中所示)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8以及它们的任何组合(如表4A至表4C中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和含有HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述抗体包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表3A至表3C和表4A至表4C中所示)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，所述HVR-H1包含与以下抗体的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；(b)HVR-H2，所述HVR-H2包含与以下抗体的HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；以及(c)HVR-H3，所述HVR-H3包含与以下抗体的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15，并且所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列；并且其中所述轻链可变区包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，所述HVR-L1包含与以下抗体的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；(b)HVR-L2，所述HVR-L2包含与以下抗体的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：B-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15；以及(c)HVR-L3，所述HVR-L3包含与以下抗体的HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15，并且所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ IDNO:119)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQID NO:118)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)；HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:34-72的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ IDNO:122)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:77-101的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:34-72的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ IDNO:77-101的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)和以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ IDNO:146)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的重链可变区(如表7中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:77、86和102的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的轻链可变区(如表8中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ IDNO:77、86和102的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的重链可变区(如表7中所示)，和抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的轻链可变区(如表8中所示)。

本公开的任何抗体可通过细胞系产生。在一些实施方案中，细胞系可以是哺乳动物细胞系。在某些实施方案中，细胞系可以是杂交瘤细胞系。在其他实施方案中，细胞系可以是酵母细胞系。可使用本领域中已知的适于抗体产生的任何细胞系来产生本公开的抗体。用于抗体产生的示例性细胞系描述于整个本公开中。

在一些实施方案中，所述抗CD33抗体是选自以下的抗CD33单克隆抗体：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:52的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.1的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:58的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.1的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.1的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.1的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.1或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.1的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.1的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.1的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.2的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.2的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:59的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.2的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.2的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.2的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.2或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.2的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.2的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.2的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.3的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.3的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:60的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.3的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.3的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.3的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.3或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.3的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.3的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.3的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.4的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.4的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:61的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:61的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:61的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.4的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.4的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.4的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.4或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.4的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.4的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.4的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.5的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.5的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:62的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:62的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:62的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.5的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.5的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.5的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.5或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.5的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.5的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.5的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.6的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.6的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:63的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:63的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:63的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.6的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.6的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.6的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.6或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.6的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.6的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.6的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.7的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.7的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:64的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:64的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:64的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.7的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.7的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.7的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.7或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.7的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.7的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.7的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.8的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.8的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:65的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:65的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:65的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.8的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.8的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.8的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.8或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.8的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.8的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.8的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.9的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.9的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:66的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.9的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.9的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.9的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.9或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.9的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.9的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.9的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.10的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.10的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:67的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:67的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.10的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.10的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.10的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.10或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.10的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.10的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.10的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.11的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.11的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:68的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:68的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:68的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.11的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.11的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.11的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.11或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.11的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.11的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.11的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.12的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:69的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:69的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:69的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.12的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.12的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.12的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.12或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.12的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.12的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.12的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.13的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.13的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:52的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:52的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.13的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.13的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.13的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.13或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.13的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.13的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.13的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.14的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.14的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:71的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:71的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:71的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.14的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.14的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.14的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.14或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.14的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.14的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.14的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.15的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.15的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:72的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:72的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体CD33或SEQ ID NO:72的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.15的HVR-H1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.15的HVR-H2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.15的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗CD33抗体保留结合至CD33的能力。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:86的氨基酸序列中总计1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中总计1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区中(即，FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.15或SEQ ID NO:86的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)抗体AB-64.1.15的HVR-L1氨基酸序列、(b)抗体AB-64.1.15的HVR-L2氨基酸序列和(c)抗体AB-64.1.15的HVR-L3氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体AB-64.1.2。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其与AB-64.1.2结合基本上相同的CD33表位。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3和轻链可变结构域的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。

在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体AB-64.1.8。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其与AB-64.1.8结合基本上相同的CD33表位。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3和轻链可变结构域的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。

在某些实施方案中，抗CD33抗体是拮抗剂抗体。在某些实施方案中，抗CD33抗体是激动剂抗体或惰性抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体为IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体为IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

可通过本领域中已知的各种测定来鉴定、筛选和/或表征另外的抗CD33抗体(例如，特异性地结合至本公开的CD33蛋白的抗体)的物理/化学性质和/或生物学活性。

能够结合Fcγ受体的抗CD33抗体

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体保留结合Fcγ受体的能力。在一些实施方案中，此类抗体在其具有与受体活化相容的正确表位特异性时，可具有使其能够聚集并且瞬时刺激(例如)CD33受体的特征。在一些实施方案中，此类抗体可随后通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33裂解、CD33内化、CD33脱落、CD33表达的下调和/或CD33的溶酶体降解而用作CD33表达和/或CD33的一种或多种蛋白活性的长期抑制剂。

在体内，本公开的抗CD33抗体可通过多种潜在机制中的任一者或多者来聚集受体并且使CD33瞬时活化。由于其独特结构，人抗体的一些同种型(例如IgG2)具有聚集受体或以聚集构型保留受体的内在能力，由此在不结合至Fc受体的情况下使受体(如CD33)瞬时活化(例如，White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148)。

在一些实施方案中，其他抗体可通过结合至邻近细胞上的Fcg受体来聚集受体(例如，CD33)。在一些实施方案中，抗体的恒定IgG Fc区与Fcg受体的结合可导致抗体集聚，并且抗体进而使经由其可变区结合的受体集聚(Chu等人(2008)Mol Immunol,45:3926-3933；以及Wilson等人,(2011)Cancer Cell 19,101-113)。在一些实施方案中，结合至不会引发细胞因子分泌、氧化爆发、增加的吞噬作用和增强的抗体依赖性、细胞介导的细胞毒性(ADCC)的抑制性Fcg受体FcgR(FcgRIIB)是在体内聚集抗体的优选方式，因为结合至FcgRIIB不与不利免疫应答作用相关。

本公开的抗CD33抗体可通过其他机制聚集受体。举例而言，交联在一起的抗体片段(例如，Fab片段)可用于以与具有结合Fcg受体的Fc区的抗体类似的方式聚集受体(例如，CD33)，如上文所述。在一些实施方案中，如果交联抗体片段(例如，Fab片段)诱导细胞表面上的受体聚集并且结合靶标(例如，CD33)上的适当表位，则其可瞬时起激动剂抗体的作用。

因此，在一些实施方案中，本公开的结合CD33蛋白的抗体可包括由于其表位特异性而结合CD33并且在其例如降低CD33的细胞水平、抑制一种或多种CD33活性和/或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)之前使一种或多种CD33活性瞬时活化的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可结合至CD33上的配体结合位点并且瞬时模拟天然配体的作用，或通过结合至一个或多个不是配体结合位点的结构域来刺激靶抗原转导信号。在一些实施方案中，此类抗体将不会干扰配体结合。在一些实施方案中，不管抗体是结合还是不结合至CD33上的配体结合位点，抗体可随后通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33裂解、CD33内化、CD33脱落、CD33表达的下调和/或CD33的溶酶体降解而用作CD33表达和/或CD33蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。在一些实施方案中，所述抗体在结合至细胞中表达的CD33蛋白后瞬时诱导所述一种或多种活性。在一些实施方案中，CD33蛋白表达于细胞表面上。在一些实施方案中，通过本公开的抗CD33抗体瞬时诱导的CD33蛋白的一种或多种活性可包括但不限于Src家族酪氨酸激酶(如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化；募集并且结合至酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2；募集并且结合至PLC-γ1，其用作Dynamini-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；募集并且结合至含SH2结构域的蛋白质(例如，Crkl)；募集并且结合至脾酪氨酸激酶Syk；募集并且结合至SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白质2(Grb2)；募集并且结合至含多个SH2的蛋白质；蛋白质激酶C对Ser-307和Ser-342的磷酸化；调节一种或多种抗炎性细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF以及TNF、IFN-β1a、IFN-β1b或IL-6的可溶性受体在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的表达；降低细胞内钙动员；调节一种或多种促炎性细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1和MIP-1-β在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中的表达；调节选自C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR和CCR2的一种或多种蛋白质的表达；抑制细胞外信号调控激酶(ERK)磷酸化；降低多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小神经胶质细胞对表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；磷酸肌醇3-激酶的活化；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；降低由树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率或两者；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；抑制嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的细胞死亡和细胞凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的总体功能性；含ITAM的受体的磷酸化；介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化；降低模式识别受体的活化；降低Toll样受体的活化；降低对细胞和蛋白质碎片的损害相关清除、CD33与其配体中的一者或多者之间的相互作用、CD33与共受体(如CD64)之间的相互作用的活化；降低一种或多种类型的选自凋亡神经元清除、功能障碍突触清除、神经组织碎片清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他异物清除、致病蛋白质清除和肿瘤细胞清除的清除；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白质、致病肽、致病核酸、致病脂质或肿瘤细胞中的一者或多者的吞噬作用；抑制致病核酸的清除，如所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；活化对选自以下的致病蛋白质的清除：淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽；抑制对选自以下的不同类型的癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化症；抑制对选自以下的不同类型的炎性和感染病症的有益免疫应答：狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病和骨佩吉特氏病；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、功能障碍突触、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白质、致病肽、致病核酸或肿瘤细胞中的一者或多者的吞噬作用，其中所述致病核酸可以是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA，所述致病蛋白质可包括淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽，并且所述肿瘤细胞可来自选自以下的癌症：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤或甲状腺癌；结合至肿瘤细胞上的CD33配体；结合至树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者对肿瘤细胞的杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫阻抑树突细胞、免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞或调控性T细胞；抑制一种或多种含ITAM基序的受体，例如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10和DAP12；抑制一种或多种含有基序D/Ex0-2YxxL/IX6-8YxxL/I(SEQ ID NO:165)的受体；抑制通过一种或多种模式识别受体(PRR)的信号传导，所述受体例如鉴定病原体相关分子模式(PAMP)的受体和鉴定损害相关分子模式(DAMP)的受体；抑制通过一种或多种Toll样受体的信号传导；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；调节小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓源性树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞或细胞毒性T细胞中的一者或多者上表达的一种或多种炎性受体(如CD86)的表达；增加一种或多种CD33依赖性基因的表达；破坏的CD33依赖性基因表达的正常化；以及降低一种或多种ITAM依赖性基因(如NFAT转录因子)的表达。可利用本领域中已知并且本文所公开的任何适合技术或测定来测试本公开的抗CD33抗体瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的能力。不管此类抗体瞬时诱导的活性如何，此类抗体可随后通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33裂解、CD33内化、CD33脱落、CD33表达的下调和/或CD33的溶酶体降解而用作CD33表达和/或CD33蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。在一些实施方案中，CD33抗体独立于结合至Fc受体而瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性。

示例性抗体Fc同种型和修饰提供于以下表B中。在一些实施方案中，本公开的能够结合Fcγ受体的抗CD33抗体具有以下表B中所列出的Fc同种型。

表B：能够结合Fcγ受体的示例性抗CD33抗体Fc同种型

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除表C中所述的同种型以外并且不希望受限于理论，认为结合人中的Fcg受体I、IIA、IIC、IIIA、IIIB和/或小鼠中的Fcg受体I、III和IV的具有人IgG1或IgG3同种型的抗体和其突变体(例如Strohl(2009)Current Opinion in Biotechnology 2009,20:685-691)也可用作瞬时激动剂抗体。

在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体为IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体在Fc区中选自由以下组成的组的残基位置处包含一个或多个(例如，1个或多个、2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个或所有13个)氨基酸取代：呈任何组合的C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y(残基位置根据EU或Kabat编号)。在一些实施方案中，Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A和P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A、P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置K322A和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置C127S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代。

在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自V234A(Alegre等人,(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Cole等人(1999)Transplantation,68:563-571)、H268Q、V309L、A330S、P331S(US2007/0148167；Armour等人(1999)Eur J Immunol 29:2613-2624；Armour等人(2000)TheHaematology Journal 1(增刊1):27；Armour等人(2000)The Haematology Journal1(增刊1):27)、C232S和/或C233S(White等人(2015)Cancer Cell 27,138-148)、S267E、L328F(Chu等人,(2008)Mol Immunol,45:3926-3933)、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。

在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有重链恒定结构域含有C127S氨基酸取代的IgG2同种型，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例(White等人,(2015)CancerCell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；以及WO2008079246)。

在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有κ轻链恒定结构域含有C214S氨基酸取代的IgG2同种型，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例(White等人,(2015)CancerCell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；以及WO2008079246)。

在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自N297A(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A(Shields等人(2001)R.J.Biol.Chem.276,6591-6604)、D270A、L234A、L235A(Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984；Alegre等人,(1994)Transplantation57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Alegre等人(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人(2000)Cell Immunol,200:16-26)、P238D、L328E、E233D、G237D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P331S(Sazinsky等人,(2008)Proc NatlAcad Sci USA 2008,105:20167-20172)、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A和/或T394D，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。

在一些实施方案中，抗体包括IgG2同种型重链恒定结构域1(CH1)和铰链区(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148)。在某些实施方案中，IgG2同种型CH1和铰链区含有ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:166)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体Fc区含有S267E氨基酸取代、L328F氨基酸取代或两者和/或N297A或N297Q氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。

在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自L235A、G237A、S228P、L236E(Reddy等人,(2000)J Immunol,164:1925-1933)、S267E、E318A、L328F、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。

在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有杂合IgG2/4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包括含有根据人IgG2的EU或Kabat编号的氨基酸118至260和根据人IgG4的EU或Kabat编号的氨基酸261-447的氨基酸序列(WO 1997/11971；WO 2007/106585)。

在某些实施方案中，抗体含有小鼠IgG4恒定区(Bartholomaeus,等人(2014).J.Immunol.192,2091-2098)。

在一些实施方案中，Fc区还含有选自由以下组成的组的一个或多个额外氨基酸取代：根据EU或Kabat编号的A330L、L234F、L235E或P331S以及它们的任何组合。

在某些实施方案中，抗体含有在Fc区中选自以下的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y以及它们的任何组合，其中残基的编号是根据EU或Kabat编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G、L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G和K322A处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G、K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G、K322A和A330S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E430G、K322A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号是根据EU编号。

惰性抗体

本公开的另一类抗CD33抗体包括惰性抗体。如本文所用，“惰性”抗体是指特异性地结合其靶抗原(例如，CD33)但不调节(例如，降低/抑制或活化/诱导)抗原功能的抗体。举例而言，在CD33的情况下，惰性抗体不调节CD33的细胞水平、不调节CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)或不调节CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，不具有在细胞表面上聚集CD33的能力的抗体可以是惰性抗体，即使其具有与受体活化相容的表位特异性。

在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可包括结合CD33、但由于其表位特异性或特性不降低CD33的细胞水平和/或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可用作货物(cargo)以例如将毒素(例如，化学治疗剂)运输至肿瘤细胞中。因此，在一些实施方案中，本公开的抗体是结合CD33但不能降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)或诱导CD33蛋白的一种或多种活性的惰性抗体。

降低或不降低细胞上CD33的细胞水平的抗体可与展示降低的与一种或多种Fcg受体结合的惰性Fc区组合。此类Fc区的实例和修饰提供于以下表D中。在一些实施方案中，具有惰性Fc区的抗体具有以下表D中所列出的Fc同种型。

抑制性抗CD33抗体

本公开的第三类抗CD33抗体包括阻断或以其他方式抑制一种或多种CD33活性的抗体。在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可包括降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平)、抑制CD33和/或一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)并且抑制CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。此类抗体通过防止CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)或通过防止在一种或多种CD33配体存在下信号转导从CD33的细胞外结构域进入细胞质中来抑制CD33蛋白的一种或多种活性。抗体也可通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33裂解、CD33内化、CD33脱落、CD33表达的下调和/或CD33的溶酶体降解来降低CD33的细胞表面水平而抑制CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，此类抗CD33抗体可不使CD33瞬时活化。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可具有本公开的瞬时激动剂抗CD33抗体的表位特异性，但具有不能结合Fcg受体的Fc结构域，并且因此不能例如瞬时聚集并且使CD33活化。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有但不限于以下活性中的一者或多者：降低CD33蛋白结合至一种或多种CD33配体(如含唾液酸的糖酯或含唾液酸的糖蛋白)的能力、降低细胞因子信号传导阻抑剂(SOCS)蛋白(例如，SOCS3蛋白)结合至CD33蛋白的能力、增加CD33蛋白的蛋白酶体降解的能力、降低循环树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞表面上CD33的功能性表达的能力、降低Src家族酪氨酸激酶(如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化的能力、降低募集并且结合至酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的能力、降低募集并且结合至PLC-g1(其用作Dynamin-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子)的能力、降低募集并且结合至Crkl的能力、降低募集并且结合至脾酪氨酸激酶Syk的能力、降低募集并且结合至SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白质2(Grb2)的能力、降低募集并且结合至含多个SH2的蛋白质的能力、增加细胞内钙动员的能力、调节促炎性细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的产生的能力、降低磷酸肌醇3-激酶的活化的能力、增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的生长的能力、增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的存活的能力、增加多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化的能力、增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性的能力、增加单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的细胞增殖的能力、增加介导ITAM信号传导的信号传导分子磷酸化的能力、增加模式识别受体的功能的能力、增加Toll样受体的功能的能力、增加损害相关分子模式(DAMP)受体的功能的能力、调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达的能力和增加对细胞和蛋白质碎片清除的能力。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有展示降低的与一种或多种Fcg受体结合的Fc区。此类Fc区的实例和修饰提供于以下表D中。在一些实施方案中，抗体具有以下表D中所列出的Fc同种型。

与Fcγ受体的结合降低的抗体Fc同种型

在一些实施方案中，与Fcγ受体的结合降低的抗CD33抗体具有以下表C中所列出的Fc同种型。

表C：与Fcγ受体的结合降低的示例性抗CD33抗体Fc同种型

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在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。

在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自N297A、N297Q(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A、D270A、L234A、L235A(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、C226S、C229S(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P238S(Davis等人,(2007)J Rheumatol,34:2204-2210)、E233P、L234V(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P238A、A327Q、A327G、P329A(Shields RL等人,(2001)JBiol Chem.276(9):6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh等人,(2001)J Virol 75,12161-12168；Oganesyan等人,(2008).Acta Crystallographica 64,700-704)、P331S(Oganesyan等人,(2008)Acta Crystallographica 64,700-704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs5(3):406-417)、A330L、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。在某些实施方案中，Fc区还包括根据EU或Kabat编号惯例在对应于甘氨酸236的位置处的氨基酸缺失。

在一些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型，其中重链恒定区含有根据EU或Kabat编号惯例的C220S氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区还含有根据EU或Kabat编号惯例选自A330L、L234F、L235E和/或P331S的一个或多个额外氨基酸取代。在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自P238S、V234A、G237A、H268A、H268Q、H268E、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例(Vafa O.等人,(2014)Methods65:114-126)。

在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一种或多种修饰。举例而言，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代是选自E233P、F234V、L235A、G237A、E318A(Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984)、S228P、L234A/F234A、L236E、S241P、L248E(Reddy等人,(2000)JImmunol,164:1925-1933；Angal等人,(1993)Mol Immunol.30(1):105-8；US 8614299 B2；Vafa O.等人,(2014)Methods 65:114-126)、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A和/或N297Q，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。在一些实施方案中，抗体具有IgG4同种型，并且包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代和在残基位置235处的L235A氨基酸取代(残基位置根据EU编号)。

在一些实施方案中，Fc区还含有选自M252Y、S254T和/或T256E的一个或多个额外氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。

其他IgG突变

在一些实施方案中，本文所述的IgG1变体中的一者或多者可与A330L突变(Lazar等人,(2006)Proc Natl Acad Sci USA,103:4005-4010)或L234F、L235E和/或P331S突变中的一者或多者(Sazinsky等人,(2008)Proc Natl Acad Sci USA,105:20167-20172)组合以消除补体活化，其中氨基酸位置是根据EU或Kabat编号惯例。在一些实施方案中，本文所述的IgG变体可与一种或多种突变组合以增强人血清中的抗CD33抗体半衰期(例如根据EU或Kabat编号惯例的M252Y、S254T、T256E突变)(Dall'Acqua等人,(2006)J Biol Chem,281:23514-23524；以及Strohl等人,(2009)Current Opinion in Biotechnology,20:685-691)。

在一些实施方案中，本公开的IgG4变体可与根据EU或Kabat编号惯例的S228P突变(Angal等人,(1993)Mol Immunol,30:105-108)和/或与Peters等人,(2012)J BiolChem.13；287(29):24525-33)中所述的一种或多种突变组合以增强抗体稳定。

双特异性抗体

本公开的某些方面涉及双特异性抗体，所述双特异性抗体结合至本公开的CD33蛋白上的一个或多个结构域和第二抗原。产生双特异性抗体的方法为本领域中所熟知并且描述于本文中。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体结合至本公开的CD33蛋白的一个或多个氨基酸残基，如人CD33(SEQ ID NO:1)的一个或多个氨基酸残基或CD33蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基的氨基酸残基。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。在一些实施方案中，所述第一抗原是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，所述第二抗原也是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，所述第二抗原是促进跨血脑屏障转运的抗原(例如，参见Gabathuler R.,Neurobiol.Dis.37(2010)48-57)。此类第二抗原包括但不限于转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽、聚精氨酸肽、血管肽(如ANG1005)(例如，参见Gabathuler,2010)和在血脑屏障内皮细胞上富集的其他细胞表面蛋白质(例如，参见Daneman等人,PLoS One.2010年10月29日；5(10):e13741)。在一些实施方案中，第二抗原是致病蛋白质，包括但不限于淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽。在一些实施方案中，第二抗原是免疫细胞上表达的一种或多种配体和/或蛋白质，包括但不限于CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、CD3和磷脂酰丝氨酸。在一些实施方案中，第二抗原是在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖酯。

抗体片段

本公开的某些方面涉及结合至以下中的一者或多者的抗体片段：本公开的CD33蛋白、CD33蛋白的天然存在的变体和CD33蛋白的疾病变体。在一些实施方案中，所述抗体片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。

在一些实施方案中，所述抗体片段与第二CD33抗体和/或与特异性结合选自以下的一种或多种致病蛋白质的抗体组合使用：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽以及它们的任何组合；或与结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合使用：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、CD47、CSF-1受体、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、磷脂酰丝氨酸以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，本公开的抗体片段可以是与本公开的任一抗CD33抗体结合相同表位的功能片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是抗CD33抗体的小型化形式或具有相应全长抗体的相同表位但分子量显著较低的本公开的抗体片段。此类小型化抗CD33抗体片段可具有较佳的脑渗透能力和较短的半衰期，这对于成像和诊断工具是有利的(参见例如，Lütje S等人,Bioconjug Chem.2014年2月19日；25(2):335-41；TavaréR等人,ProcNatl Acad Sci U S A.2014年1月21日；111(3):1108-13；以及Wiehr S等人,Prostate.2014年5月；74(7):743-55)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体片段与其相应全长抗体相比具有较佳的脑渗透和/或与其相应全长抗体相比具有较短的半衰期。

抗体框架

本文所述的抗体中的任一者还包括框架。在一些实施方案中，所述框架是人免疫球蛋白框架。举例而言，在一些实施方案中，抗体(例如，抗CD33抗体)包含如任一上述实施方案中的HVR，并且还包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。人免疫球蛋白框架可以是人抗体的一部分，或可通过用一个或多个人框架区置换一个或多个内源性框架使非人抗体人源化。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见例如，Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993))；源自轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见例如，Almagro和Fransson，Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及源自筛选FR库的框架区(参见例如，Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或所有四个)框架区(如表5A至表5D中所示)。在一些实施方案中，VH FR1包含根据式VII：QVQLVQSGAEVKKPGX₁SVKX₂SCKAS(SEQ ID NO:158)的序列，其中X₁是A或S，并且X₂是V或I。在一些实施方案中，VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列。在一些实施方案中，VH Fr2包含SEQ ID NO:5的序列。在一些实施方案中，VH FR3包含根据式VIII：X₁AX₂X₃X₄X₅X₆RX₇TX₈TVDX₉X₁₀X₁₁STX₁₂YMELSSLRSEDTAVYY CAR(SEQ ID NO:159)的序列，其中X₁是Y或S，X₂是Q或E，X₃是K或D，X₄是F或D，X₅是Q、F、E或T，X₆是G、D或H，X₇是V或A，X₈是M或L，X₉是T、N或Q，X₁₀是S或P，X₁₁是T或A，并且X₁₂是V或A。在一些实施方案中，VH FR3包含选自由SEQ IDNO:6-19组成的组的序列。在一些实施方案中，VH FR4包含根据式IX：WGQGTLX₁TVSS(SEQ IDNO:160)的序列，其中X₁是V或L。在一些实施方案中，VH FR4包含选自由SEQ ID NO:20-21组成的组的序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含根据式VII的VH FR1、包含SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、根据式VIII的VH FR3和根据式IX的VH FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有选自SEQ ID NO:2-4的序列的VH FR1、含有SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、含有选自SEQ ID NO:6-19的序列的VH FR3和含有选自SEQ ID NO:20-21的序列的VH FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的VH FR1、VH FR2、VHFR3和VH FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或所有四个)框架区(如表6A至表6D中所示)。在一些实施方案中，VL FR1包含根据式X：X₁IX₂X₃TQSPX₄SLX₅X₆SX₇GX₈RX₉TIX₁₀C(SEQ ID NO:161)的序列，其中X₁是D或G，X₂是Q或V，X₃是M或L，X₄是S或D，X₅是S、P或A，X₆是A或V，X₇是V或L，X₈是D或E，X₉是V或A，并且X₁₀是T、N或D。在一些实施方案中，VL FR1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR2包含根据式XI：WYQQKPGX₁X₂PKLLIK(SEQ ID NO:162)的序列，其中X₁是K或Q，并且X₂是A或P。在一些实施方案中，VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR3包含根据式XII：GVPX₁RFSGSGSGTDFTLTISSLQX₂EDX₃AX₄YYC(SEQ ID NO:163)的序列，其中X₁是S或D，X₂是P或A，X₃是F、L或V，并且X₄是T或V。在一些实施方案中，VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR4包含根据式XIII：FGQGTKLEIX₁(SEQ ID NO:164)的序列，其中X₁是K或E。在一些实施方案中，VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含根据式X的VL FR1、根据式XI的VL FR2、根据式XII的VL FR3和根据式XIII的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含含有选自SEQ ID NO:22-26的序列的VL FR1、含有选自SEQ IDNO:27-28的序列的VL FR2、含有选自SEQ ID NO:29-31的序列的VL FR3和含有选自SEQ IDNO:32-33的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下抗体的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或所有四个)框架区(如表5A至表5D中所示)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或所有四个)框架区(如表6A至表6D中所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含根据式VII的VH FR1、包含SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、根据式VIII的VH FR3和根据式IX的VH FR4；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含根据式X的VL FR1、根据式XI的VL FR2、根据式XII的VL FR3和根据式XIII的VLFR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有选自SEQ ID NO:2-4的序列的VH FR1、含有SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、含有选自SEQ IDNO:6-19的序列的VH FR3和含有选自SEQ ID NO:20-21的序列的VH FR4；轻链可变区，所述轻链可变区包含含有选自SEQ ID NO:22-26的序列的VL FR1、含有选自SEQ ID NO:27-28的序列的VL FR2、含有选自SEQ ID NO:29-31的序列的VL FR3和含有选自SEQ ID NO:32-33的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表7中所示)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含以下抗体的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表8中所示)。

CD33活性

免疫相关蛋白质的调节的表达

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体在结合至细胞中表达的CD33蛋白后可调节PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达。调节的(例如，增加或降低的)表达可包括但不限于基因表达的调节、转录表达的调节或蛋白质表达的调节。可使用本领域中已知的用于测定基因、转录物(例如，mRNA)和/或蛋白质表达的任何方法。举例而言，RNA印迹(Northern blot)分析可用于测定抗炎介质基因表达水平，RT-PCR可用于测定抗炎介质转录的水平，并且蛋白质印迹(Western blot)分析可用于测定抗炎介质蛋白质水平。

如本文所用，如果PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206在用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达与在未用所述抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中表达的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达相比得以调节(例如，增加或降低)，则其可具有调节的表达。在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206表达相比，所述抗体可将受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206表达调节例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206表达表达相比，所述抗体可将受试者的一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206表达调节例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防与PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的异常水平相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。

骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力的增强或正常化

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体在结合至细胞中表达的CD33蛋白后可使骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强和/或正常化。

在一些实施方案中，与骨髓源性树突细胞在未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，所述抗体可使骨髓源性树突细胞在受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强和/或正常化例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与骨髓源性树突细胞在未用拮抗剂抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，所述抗体可使骨髓源性树突细胞在受试者的一种或多种骨髓源性树突细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强和/或正常化例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与骨髓源性树突细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力降低或失调相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。

表达CD33的细胞的增殖和存活

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体在结合至细胞上表达的CD33蛋白后可增加树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞(Langerhans cell)、库普弗细胞(Kupffer cell)、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞和小神经胶质细胞的增殖、存活和/或功能。

小神经胶质细胞是一类神经胶质细胞，其为脑和脊髓的驻留巨噬细胞，并且因此作为中枢神经系统(CNS)中主动免疫防御的第一和主要形式。小神经胶质细胞构成脑内总神经胶质细胞群体的20％。小神经胶质细胞不断清除CNS中的斑块、受损神经元和传染因子。脑和脊髓被视为“免疫赦免”器官，因为其通过一系列称为血脑屏障的内皮细胞与身体的其他部分分离，这防止大部分病原体到达脆弱的神经组织。在其中传染因子直接引入至脑或跨血脑屏障的情况下，小神经胶质细胞必须快速反应以限制炎症并且在传染因子损害敏感神经组织之前将其破坏。由于来自身体其他部分的抗体不可用(极少抗体足够小以跨血脑屏障)，因此小神经胶质细胞必须能够识别异物，将其吞噬并且用作使T细胞活化的抗原呈递细胞。由于这一过程必须快速完成以防止潜在的致命损害，因此小神经胶质细胞对CNS中即使小的病理性变化也极敏感。其部分地因具有独特钾通道实现这种敏感性，所述钾通道对即使小的细胞外钾变化也有反应。

如本文所用，本公开的巨噬细胞包括但不限于M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞。如本文所用，本公开的小神经胶质细胞包括但不限于M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和M2小神经胶质细胞。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可增加树突细胞、单核细胞和/或巨噬细胞上CD80、CD83和/或CD86的表达。

如本文所用，如果用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能大于未用所述抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能，则巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能可包括增加的表达。在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，所述抗体可使受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，所述抗体可使受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与树突细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、增加的细胞凋亡和/或功能的降低相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病额风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。

免疫细胞的CD33依赖性活化

在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可增加细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体有益于预防与细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性降低相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于肿瘤，包括实体肿瘤，如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌。

在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可诱导T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量的增加。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体在骨髓源性阻抑细胞(MDSC)存在下诱导T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量的增加。

如本文所用，如果用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量大于未用所述抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量，则T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量可包括增加的速率。在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量的水平相比，所述抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量的水平相比，所述抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3⁺T细胞、辅助T细胞、树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤的朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量增加例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

肿瘤相关免疫细胞的CD33依赖性抑制

在一些实施方案中，本公开的激动剂抗CD33抗体可降低活性、降低增殖、降低存活、降低功能性、降低对肿瘤或淋巴样器官(例如，脾和淋巴结)的浸润、CD14⁺骨髓细胞的数量、降低肿瘤生长速率、降低肿瘤体积、降低或抑制骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能和/或促进调控性T细胞或抑制性肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞或肿瘤相关巨噬细胞或骨髓源性阻抑细胞的细胞凋亡。在一些实施方案中，本公开的激动剂抗CD33抗体有益于预防与一种或多种类型的免疫阻抑细胞的活性相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于肿瘤，包括不表达CD33的实体肿瘤，如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、甲状腺癌和表达CD33的血液肿瘤，如白血病细胞。

在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可降低CD14⁺骨髓细胞的数量、降低肿瘤生长速率、降低肿瘤体积或降低或抑制骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能。

在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中CD14⁺骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积或骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化程度、存活和/或一种或多种功能相比，所述抗体可使受试者中CD14⁺骨髓细胞的数量降低、使肿瘤生长速率降低、使肿瘤体积降低或使骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能降低或抑制例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中CD14⁺骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积或骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化程度、存活和/或一种或多种功能相比，所述抗体可使手术者中CD14⁺骨髓细胞的数量降低、使肿瘤生长速率降低、使肿瘤体积降低或使骨髓源性阻抑细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能降低或抑制例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

增加的检查点抑制剂疗法的功效

在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可使一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一者或多者的疗法)的功效增加。

在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一者或多者的疗法)的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性水平相比，所述抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一者或多者的疗法)的受试者中此类一种或多种疗法的功效增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一者或多者的疗法)的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性水平相比，所述抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一者或多者的疗法)的受试者中此类一种或多种疗法的功效增加例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

增加的化学治疗剂的功效

在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可使一种或多种化学治疗剂的功效增加，所述化学治疗剂如吉西他滨、卡培他滨、蒽环霉素、阿霉素表柔比星/>紫杉烷、紫杉醇/>多西他赛/>5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺/>卡铂/>奥沙利铂/>甲酰四氢叶酸和/或替莫唑胺/>

在一些实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种化学治疗剂的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性水平相比，所述抗体可使接受一种或多种化学治疗剂的受试者中此类一种或多种疗法的功效增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种化学治疗剂的相应受试者中此类一种或多种疗法的有效性水平相比，所述抗体可使接受一种或多种化学治疗剂的受试者中此类一种或多种疗法的功效增加例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。

抗体制备

本公开的抗CD33抗体可涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、人源化和嵌合抗体、人抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和F(ab')₂)、双特异性和多特异性抗体、多价抗体、异源缀合抗体、缀合抗体、库源抗体、具有改进的效应子功能的抗体、含有抗体部分的融合蛋白和包括抗原识别位点(如具有本公开的CD33蛋白的氨基酸残基的表位)的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰抗体。抗CD33抗体可为人、鼠类、大鼠或具有任何其他起源(包括嵌合或人源化抗体)。

(1)多克隆抗体

多克隆抗体(如多克隆抗CD33抗体)通常通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂在动物中产生。可能有用的是，使用双官能剂或衍生化剂(例如，马来酰亚胺基苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl₂或R¹N＝C＝NR，其中R和R¹独立地是低剂烷基)使相关抗原(例如，本公开的纯化或重组CD33蛋白)与在待免疫物种体内具有免疫原性的蛋白质(例如，钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂)缀合。可采用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant)和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A、合成海藻糖二霉菌酸酯(trehalose dicorynomycolate))。本领域的技术人员无需过多实验即可选择免疫方案。

通过以下对动物实施针对所需抗原、免疫原性缀合物或衍生物的免疫：将例如100μg(对于兔)或5μg(对于小鼠)的蛋白质或缀合物与3体积的弗氏完全佐剂组合，并且将溶液皮内注射在多个部位。1个月后，通过在多个部位皮下注射用占初始量1/5至1/10的于弗氏完全佐剂中的肽或缀合物对动物加强免疫。7天至14天后，抽取动物的血液并且对血清进行抗体效价测定。对动物加强免疫直至效价达到稳定状态。缀合物也可在重组细胞培养物中作为蛋白融合物来制得。此外，诸如明矾的集聚剂适于增强免疫应答。

(2)单克隆抗体

单克隆抗体(如单克隆抗CD33抗体)是从基本上同源的抗体群体获得，即，除可少量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)外，构成所述群体的个别抗体均相同。因此，修饰语“单克隆”指示抗体的特征而并非分立抗体的混合物。

举例而言，单克隆抗CD33抗体可使用首先由Kohler等人,Nature,256:495(1975)阐述的杂交瘤方法来制得或可通过重组DNA方法(美国专利号4,816,567)来制得。

在杂交瘤方法中，如上文所述对小鼠或其他适当宿主动物(如仓鼠)实施免疫以引发产生或能够产生将与用于免疫的蛋白质(例如，本公开的纯化或重组CD33蛋白)特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，可在体外对淋巴细胞实施免疫。然后，使用适合融合剂(如聚乙二醇)使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding，MonoclonalAntibodies:Principles and Practice，第59-103页(Academic Press,1986))。

免疫剂将通常包括抗原性蛋白(例如，本公开的纯化或重组CD33蛋白)或其融合变体。通常，如果需要人起源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，而如果需要非人哺乳动物来源的细胞，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后，使用适合融合剂(如聚乙二醇)使淋巴细胞与永生化细胞系融合，以形成杂交瘤细胞。Goding，Monoclonal Antibodies:Principlesand Practice,Academic Press(1986)，第59-103页。

永生化细胞系通常为转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿类动物、牛或人起源的骨髓瘤细胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。将由此制备的杂交瘤细胞接种于适合培养基中并且在其中生长，所述培养基优选含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞的生长或存活的一种或多种物质。举例而言，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏酶次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培养基)，所述物质可防止HGPRT缺陷型细胞的生长。

优选的永生化骨髓瘤细胞系有效融合、支持所选抗体产生细胞稳定大量产生抗体并且对培养基(如HAT培养基)敏感的那些细胞。在所述细胞中，优选的是鼠类骨髓瘤系，如源自MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤的那些骨髓瘤系(可自沙克研究院细胞分配中心(SalkInstitute Cell Distribution Center),San Diego,California USA获得)，以及SP-2细胞及其衍生物(例如，X63-Ag8-653)(可自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection),Manassas,Virginia USA获得)。还已阐述将人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤(heteromyeloma)细胞系用于产生人单克隆抗体(Kozbor，J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。

就针对抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体的产生分析生长杂交瘤细胞的培养基。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性是通过免疫沉淀或通过体外结合测定(如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定。

可就针对所需抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体的存在测定培养杂交瘤细胞的培养基。优选地，单克隆抗体的结合亲和力和特异性可通过免疫沉淀或通过体外结合测定(如放射免疫测定(RIA)或酶联测定(ELISA))来测定。此类技术和测定为本领域中所已知。举例而言，结合亲和力可通过Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)的斯卡查德分析(Scatchard analysis)来测定。

在鉴定产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，可通过有限稀释程序对克隆进行亚克隆并且通过标准方法使其生长(Goding，同上)。用于此目的的适合培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，可使杂交瘤细胞作为哺乳动物内的肿瘤在体内生长。

通过常规免疫球蛋白纯化程序以适合方式将由亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基、腹水或血清分离，所述免疫球蛋白纯化程序是例如蛋白质A-琼脂糖色谱法、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析、亲和色谱法和如上文所述的其他方法。

抗CD33单克隆抗体也可通过重组DNA方法制得，如美国专利号4,816,567中所公开和如上文所述的那些方法。编码单克隆抗体的DNA可使用常规程序容易地分离并且测序(例如，通过使用特异性地结合至编码鼠类抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将其转染至否则不产生免疫球蛋白的宿主细胞(如大肠杆菌(E.coli)细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中，以在此类重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述文章包括Skerra等人,Curr.Opin.Immunol.,5:256-262(1993)和Plückthun，Immunol.Rev.130:151-188(1992)。

在某些实施方案中，抗CD33抗体可从使用McCafferty等人,Nature,348:552-554(1990)中所述的技术产生的抗体噬菌体库分离。Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)分别阐述从噬菌体库分离鼠类和人抗体。后续出版物阐述通过链改组(Marks等人,Bio/Technology,10:779-783(1992))以及作为构建极大噬菌体库的策略的组合感染和体内重组(Waterhouse等人,Nucl.AcidsRes.21:2265-2266(1993))来产生高亲和力(纳摩尔级(“nM”)范围)人抗体。因此，所述技术是对用于分离具有所需特异性的单克隆抗体(例如，结合本公开的CD33蛋白的那些抗体)的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方案。

也可例如通过以下方式来修饰编码抗体或其片段的DNA：用人重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源鼠类序列(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.NatlAcad.Sci.USA,81:6851(1984))，或将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列共价接合至免疫球蛋白编码序列。通常，此类非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域，或其取代抗体的一个抗原组合位点的可变结构域以产生嵌合二价抗体，所述嵌合二价抗体包含对抗原具有特异性的一个抗原组合位点和对不同抗原具有特异性的另一抗原组合位点。

本文所述的单克隆抗体(例如，本公开的抗CD33抗体或其片段)可以是单价抗体，其制备为本领域中所熟知。举例而言，一种方法涉及免疫球蛋白轻链和经修饰重链的重组表达。重链通常在Fc区中的任一点处截短以防止重链交联。或者，用另一氨基酸残基取代相关半胱氨酸残基或使其缺失以防止交联。体外方法也适于制备单价抗体。消化抗体以产生其片段、尤其Fab片段可使用本领域中已知的常规技术来完成。

也可使用合成蛋白质化学中的已知方法(包括涉及交联剂的那些方法)在体外制备嵌合或杂合抗CD33抗体。举例而言，可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的适合试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和4-巯基丁酰亚氨酸甲酯。

(3)人源化抗体

本公开的抗CD33抗体或其抗体片段还可包括人源化或人抗体。非人(例如，鼠类)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')₂或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的互补决定区(CDR)的残基由来自例如小鼠、大鼠或兔等非人物种(供体抗体)的CDR并且具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基由相应非人残基置换。人源化抗体也可包含在接受者抗体和引入的CDR或框架序列中均未发现的残基。一般而言，人源化抗体将包含基本上全部的至少一个、并且通常两个可变结构域，其中全部或基本上全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且全部或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体任选地也包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)和Presta，Curr.Opin.Struct.Biol.2:593-596(1992)。

用于人源化非人抗体的方法为本领域中所熟知。通常，人源化抗体具有从非人来源引入至其中的一个或多个氨基酸残基。所述非人氨基酸残基通常称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。人源化可遵循Winter和合作者的方法(Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988))或通过用啮齿类动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来基本上实施。因此，此类“人源化”抗体为嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上少于一个完整人可变结构域已由来自非人物种的相应序列所取代。实际上，人源化抗体通常为人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基由来自啮齿类动物抗体中类似位点的残基所取代。

待用于制备人源化抗体的人可变结构域(轻和重)的选择对于降低抗原性极为重要。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人可变结构域序列的整个库来筛选啮齿类动物抗体的可变结构域的序列。然后接受最接近啮齿类动物序列的人序列作为人源化抗体的人框架(FR)。Sims等人,J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人,J.Mol.Biol.,196:901(1987)。另一方法使用源自轻链或重链的特定子组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同框架可用于若干种不同人源化抗体。Carter等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 89:4285(1992)；Presta等人,J.Immunol.151:2623(1993)。

此外，重要的是人源化抗体应保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物学性质。为实现这一目标，根据优选方法，人源化抗体是通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备。三维免疫球蛋白模型通常可获得并且为本领域的技术人员所熟悉。可使用计算机程序，所述计算机程序说明并且展示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。观察所述展示内容允许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能行使中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白与其抗原结合的能力的残基。以此方式，可从接受者序列和引入序列选择FR残基并且合并使得实现所需抗体特性，如对一种或多种靶抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的亲和力增加。一般而言，CDR残基直接并且最为实质性地参与影响抗原结合。

涵盖人源化抗CD33抗体的各种形式。举例而言，人源化抗CD33抗体可以是抗体片段(如Fab)，其任选地与一种或多种细胞毒素剂缀合以产生免疫缀合物。或者，人源化抗CD33抗体可是完整抗体，如完整IgG1抗体。

(4)抗体片段

在某些实施方案中，有利地使用抗CD33抗体片段而非完整抗CD33抗体。较小的片段大小允许快速清除和更好的脑渗透。

已开发出各种技术用于产生抗体片段。传统上，所述片段是经由蛋白水解消化完整抗体而获得(参见例如，Morimoto等人,J.Biochem.Biophys.Method.24:107-117(1992)；以及Brennan等人,Science 229:81(1985))。然而，例如使用编码本公开的抗CD33抗体的核酸，所述片段现在可由重组宿主细胞直接产生。Fab、Fv和scFv抗体片段全部均可在大肠杆菌中表达并且自其分泌，由此允许大量这些片段的直接产生。抗CD33抗体片段也可从如上文所论述的抗体噬菌体库分离。或者，Fab'-SH片段可从大肠杆菌直接回收并且化学偶联以形成F(ab')₂片段(Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab')₂片段可直接从重组宿主细胞培养物分离。具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab')₂抗体片段的产生阐述于美国专利号5,869,046中。在其他实施方案中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利号5,571,894和美国专利号5,587,458。抗CD33抗体片段也可是“线性抗体”，例如如美国专利5,641,870中所述。此类线性抗体片段可为单特异性或双特异性片段。

(5)双特异性和多特异性抗体

双特异性抗体(BsAb)是对至少两种不同表位(包括在同一或另一蛋白质(例如，一种或多种本公开的CD33蛋白)上的那些表位)具有结合特异性的抗体。或者，BsAb的一部分可臂接以结合至靶CD33抗原，并且另一部分可与结合至第二蛋白质的臂组合。此类抗体可源自全长抗体或抗体片段(例如，F(ab')₂双特异性抗体)。

制备双特异性抗体的方法为本领域中所已知。全长双特异性抗体的传统产生是基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中所述两条链具有不同特异性。Millstein等人,Nature,305:537-539(1983)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，因此这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))产生10种不同抗体分子的可能混合物，其中仅一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和色谱法步骤进行的正确分子的纯化相当繁琐，并且产物产率较低。类似程序公开于WO 93/08829和Traunecker等人,EMBO J.,10:3655-3659(1991)中。

根据不同方法，使具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变结构域融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。融合物优选具有免疫球蛋白重链恒定结构域，所述结构域包含铰链区、C_H2区和C_H3区的至少一部分。优选使含有轻链结合所需位点的第一重链恒定区(C_H1)存在于所述融合物中的至少一者中。将编码免疫球蛋白重链融合物和(如果需要)免疫球蛋白轻链的DNA插入至单独表达载体中，并且共转染至适合宿主生物体中。当用于构建的3种多肽链的不等比率提供最佳产率时，这种共转染可为调整实施方案中3种多肽片段的相互比例提供较大灵活性。然而，当以等比率表达至少2种多肽链可产生高产率时或当所述比率并无重要意义时，可将2种或所有3种多肽链的编码序列插入一个表达载体中。

在这种方法的优选实施方案中，双特异性抗体是由一臂中具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。发现这种不对称结构有助于分离所需双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合，因为仅在一半双特异性分子中存在免疫球蛋白轻链提供容易的分离方式。这种方法公开于WO 94/04690中。关于产生双特异性抗体的其他细节，参见例如Suresh等人,Methods inEnzymology 121:210(1986)。

根据WO 96/27011或美国专利号5,731,168中所述的另一种方法，可工程化一对抗体分子之间的界面以使从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比最大化。优选的界面包含抗体恒定结构域的C_H3区的至少一部分。在这种方法中，来自第一抗体分子的界面的一种或多种小氨基酸侧链被较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)置换。通过用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)置换较大氨基酸侧链来在第二抗体分子的界面上产生尺寸与较大侧链相同或类似的补偿性“空腔”。这提供用于增加异二聚体相对于其他不想要终产物(如同二聚体)的产率的机制。

文献中已阐述从抗体片段产生双特异性抗体的技术。举例而言，双特异性抗体可使用化学连接来制备。Brennan等人,Science 229:81(1985)阐述一种程序，其中完整抗体经蛋白水解裂解以产生F(ab')₂片段。这些片段在二硫醇复合剂亚砷酸钠存在下还原以稳定邻位二硫醇并且防止分子间二硫键形成。接着，将所产生的Fab'片段转化成硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。接着，将Fab'-TNB衍生物中的一者再转化成Fab'-TNB衍生物以形成双特异性抗体。所产生的双特异性抗体可用作选择性固定酶的剂。

Fab'片段可直接从大肠杆菌回收并且化学偶联以形成双特异性抗体。Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225(1992)阐述完全人源化双特异性抗体F(ab')₂分子的产生。每一Fab'片段单独地从大肠杆菌分泌并且在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。由此形成的双特异性抗体能够结合至过表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞，以及触发人细胞毒性淋巴细胞针对人乳房肿瘤靶标的溶胞活性。

也已阐述直接从重组细胞培养物制备和分离二价抗体片段的各种技术。举例而言，已使用亮氨酸拉链产生二价异二聚体。Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。通过基因融合将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽连接至两种不同抗体的Fab'部分。抗体同二聚体在铰链区还原以形成单体并且接着再氧化以形成抗体异二聚体。Hollinger等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)所述的“双抗体”技术提供用于制备双特异性/二价抗体片段的替代机制。所述片段包含通过接头连接至轻链可变结构域(V_L)的重链可变结构域(V_H)，所述接头过短而不允许同一链上的两个结构域之间的配对。因此，迫使一个片段的V_H和V_L结构域与另一片段的互补V_L和V_H结构域进行配对，由此形成两个抗原结合位点。也已报告通过使用单链Fv(sFv)二聚体来制备双特异性/二价抗体片段的另一策略。参见Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994)。

也涵盖具有两个以上化合价的抗体。举例而言，可制备三特异性抗体。Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)。

示例性双特异性抗体可结合至给定分子(例如，本公开的CD33蛋白)上的两个不同表位。或者，靶向CD33信号传导组分的臂可与结合至白细胞上的触发分子(如T细胞受体分子(例如，CD2、CD3、CD28或B7))或IgG的Fc受体(FcγR)(如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16))的臂组合以便将细胞防御机制集中至表达特定蛋白质的细胞。双特异性抗体也可用于将细胞毒性剂定位至表达特定蛋白质的细胞。此类抗体具有蛋白质结合臂和结合细胞毒性剂或放射性核素螯合剂(如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。目标另一双特异性抗体结合目标蛋白质并且进一步结合组织因子(TF)。

(6)多价抗体

多价抗体可比二价抗体更快地由表达与抗体所结合抗原的细胞内化(和/或分解代谢)。本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(不同于IgM类)(例如，四价抗体)，其可通过重组表达编码抗体多肽链的核酸容易地产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含Fc区或铰链区。在这种情况中，抗体将包含Fc区和Fc区氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。本文的优选多价抗体含有3个至约8个、但优选4个抗原结合位点。多价抗体含有至少一条多肽链(并且优选两条多肽链)，其中所述多肽链包含两个或更多个可变结构域。举例而言，所述多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2表示氨基酸或多肽，并且n是0或1。类似地，所述多肽链可包含V_H-C_H1-柔性接头-V_H-C_H1-Fc区链；或V_H-C_H1-V_H-C_H1-Fc区链。本文的多价抗体优选还包含至少两个(并且优选四个)轻链可变结构域多肽。本文的多价抗体可例如包含约2个至约8个轻链可变结构域多肽。本文所涵盖的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域并且任选地还包含CL结构域。多价抗体可识别CD33抗原以及不限于以下的另外抗原：Aβ肽、抗原或α突触核蛋白抗原或Tau蛋白抗原或TDP-43蛋白抗原或朊病毒蛋白抗原或亨庭顿蛋白抗原或RAN、翻译产物抗原，包括由甘氨酸-丙氨酸(GA)、甘氨酸-脯氨酸(GP)、甘氨酸-精氨酸(GR)、脯氨酸-丙氨酸(PA)或脯氨酸-精氨酸(PR)构成的二肽重复序列序列(DPR肽)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、转铁蛋白受体或促进抗体跨血脑屏障转移的任何其他抗原。

(7)异源缀合抗体

异源缀合抗体也在本公开的范围内。异源缀合抗体是由两种共价连接的抗体构成(例如，本公开的抗CD33抗体或其抗体片段)。举例而言，异源缀合物中的一种抗体可与抗生物素蛋白偶联，另一者与生物素偶联。举例而言，已提出此类抗体将免疫系统细胞靶向不想要的细胞，美国专利号4,676,980，并且已用于治疗HIV感染。国际公布号WO 91/00360、WO92/200373和EP 0308936。预期抗体可使用合成蛋白质化学中的已知方法、包括涉及交联剂的那些方法在体外制备。举例而言，可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的适合试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和4-巯基丁酰亚氨酸甲酯和例如美国专利号4,676,980中所公开的那些试剂。异源缀合抗体可使用任何方便的交联方法来制得。适合交联剂为本领域中所熟知，并且公开于美国专利号4,676,980中，以及多种交联技术。

(8)效应子功能工程化

还可期望修饰本公开的抗CD33抗体以改进效应子功能和/或延长抗体的血清半衰期。举例而言，恒定区上的Fc受体结合位点可经修饰或突变以除去或降低与某些Fc受体(如FcγRI、FcγRII和/或FcγRIII)的结合亲和力。在一些实施方案中，通过除去抗体的Fc区(例如，在IgG的CH 2结构域中)的N-糖基化来削弱效应子功能。在一些实施方案中，通过修饰诸如人IgG的233-236、297和/或327-331的区来削弱效应子功能，如PCT WO 99/58572和Armour等人,Molecular Immunology 40:585-593(2003)；Reddy等人,J.Immunology 164:1925-1933(2000)中所述。

为延长抗体的血清半衰期，可将补救受体结合表位并入至抗体(尤其抗体片段)中，如美国专利5,739,277中所述。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄)的Fc区的表位，其负责延长IgG分子的体内血清半衰期。

(9)其他氨基酸序列修饰

也涵盖对本公开的抗CD33抗体或其抗体片段的氨基酸序列修饰。举例而言，可期望改进抗体或抗体片段的结合亲和力和/或其他生物学性质。抗体或抗体片段的氨基酸序列变体是通过将适当核苷酸变化引入至编码所述抗体或抗体片段的核酸中或通过肽合成来制备。此类修饰包括(例如)抗体的氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。可实施缺失、插入和取代的任一组合以实现最终构建体，条件是最终构建体具有所需特性(即，与本公开的CD33蛋白结合或物理相互作用的能力)。氨基酸变化也可改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置。

可用于鉴定抗CD33抗体中为优选诱变位置的某些残基或区的方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells在Science,244:1081-1085(1989)中所述。此处，鉴定残基或靶残基组(例如，带电残基，如arg、asp、his、lys和glu)，并且由中性或带负电的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)置换以实现氨基酸与靶抗原的相互作用。然后通过在取代位点或针对取代位点引入另外或其他变体来改进展现对取代具有功能敏感性的那些氨基酸位置。因此，在预先确定引入氨基酸序列变异的位点时，无需预先确定突变本身的性质。举例而言，为分析给定位点处突变的性能，在靶标密码子或区处进行丙氨酸扫描诱变或随机诱变并且针对所需活性筛选所表达的抗体变体。

氨基酸序列插入包括氨基-(“N”)和/或羧基-(“C”)末端融合物(长度在一个残基至含有上百或更多残基的多肽范围内)，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N-末端甲硫氨酰基残基的抗体或与细胞毒性多肽融合的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N末端或C末端与延长抗体血清半衰期的酶或多肽的融合物。

另一变体类型是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中具有由不同残基置换的至少一个氨基酸残基。取代诱变的最受关注的位点包括高变区，但也涵盖FR改变。保守取代示于下表D中的“优选取代”标题下。如果此类取代引起生物学活性改变，则可引入更重要的改变(表D中命名为“示例性取代”，或如下文参考氨基酸类别所进一步阐述)，并且对产物进行筛选。

表D：氨基酸取代

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对抗体生物学性质的实质性修饰可通过选择在维持以下特性的效应方面显著不同的取代来实现：(a)取代区域中多肽主链的结构，例如，呈折叠或螺旋构型，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。基于常见侧链性质将天然存在的残基分为以下各组：

(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；

(2)中性亲水性：cys、ser、thr；

(3)酸性：asp、glu；

(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；

(5)影响链取向的残基：gly、pro；以及

(6)芳香族：trp、tyr、phe。

非保守性取代使得需要将所述类别中的一者的成员交换为另一类别。

不参与维持抗体的适当构象的任一半胱氨酸残基通常也可被丝氨酸取代，以改进分子的氧化稳定性并且防止异常交联。相反，可将一个或多个半胱氨酸键添加至抗体以改进其稳定性(尤其在抗体是抗体片段(如Fv片段)的情况下)。

取代变体的特别优选的类型涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗CD33抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的一种或多种所得变体将相对于产生所述变体的亲本抗体具有改进的生物学性质。产生此类取代变体的便捷方式涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简言之，使若干高变区位点(例如6-7个位点)突变以在每一位点产生所有可能的氨基取代。由此产生的抗体变体以单价方式以与每一颗粒内所封装的M13的基因III产物的融合物形式从丝状噬菌体颗粒展示。然后针对其生物学活性(例如，结合亲和力)来筛选噬菌体展示的变体，如本文所公开。为鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定显著促进抗原结合的高变区残基。或者或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原(例如，本公开的CD33蛋白)之间的接触点可能是有益的。此类接触残基和邻近残基是根据本文所述的技术取代的候选物。一旦产生此类变体，则如本文所述对变体组进行筛选，并且可选择在一个或多个相关测定中具有优异性质的抗体以供进一步开发。亲和力成熟也可通过采用酵母呈现技术来进行，如WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568；以及Xu等人,Protein Eng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)中所公开的技术。

抗体的另一类氨基酸变体改变抗体的初始糖基化模式。改变意指缺失一个或多个于抗体中发现的碳水化合物部分，和/或增加一个或多个在抗体中不存在的糖基化位点。

抗体的糖基化通常是N连接或O连接。N连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链附接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任一氨基酸)是碳水化合物部分与天冬酰胺侧链酶促附接的识别序列。因此，多肽中存在这些三肽序列中的任一者均可产生潜在糖基化位点。O连接的糖基化是指糖N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一者与羟基氨基酸(最常见为丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)的附接。

将糖基化位点添加至抗体可通过改变氨基酸序列以使其含有上述三肽序列中的一者或多者(对于N连接糖基化位点)方便地完成。也可通过向初始抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基进行取代(对于O连接糖基化位点)来实现所述改变。

编码抗IgE抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域中已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过对抗体(例如，本公开的抗CD33抗体)或抗体片段的先前所制备变体或非变体型式进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。

(10)抗体缀合物

本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可缀合至可检测的标志物、毒素或治疗剂。可使用本领域中已知的用于将分子(如可检测的标志物、毒素或治疗剂)缀合至抗体的任何适合的方法。

举例而言，药物缀合涉及将生物活性细胞毒性(抗癌)有效负载或药物与特异性地靶向某一肿瘤标志物(例如理想地仅发现于肿瘤细胞中或肿瘤细胞上的蛋白质)的抗体偶联。抗体在体内追踪这些蛋白质并且将自身附着至癌细胞表面。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生物化学反应在肿瘤细胞中触发信号，接着所述肿瘤细胞将抗体与细胞毒素一起吸收或内化。在将ADC内化后，细胞毒性药物释放并且杀死癌症。由于这种靶向，因此理想地所述药物具有较低的副作用并且给出比其他化学治疗剂更宽的治疗窗。本领域中已公开并且已知缀合抗体的技术(参见例如，Jane de Lartigue，OncLive 2012年7月5日；ADC Review onantibody-drug conjugates；以及Ducry等人,(2010).Bioconjugate Chemistry 21(1):5-13)。

在一些实施方案中，可将本公开的抗CD33抗体缀合至选自以下的毒素：蓖麻毒素、蓖麻毒素A链、阿霉素、道诺霉素(daunorubicin)、类美登素(maytansinoid)、紫杉醇、溴化乙锭、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙碱(colchicine)、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、放线菌素(actinomycin)、白喉毒素、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素(abrin)、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素(modeccin)A链、α-八叠球菌素(alpha-sarcin)、白树毒素(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(retstrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)、麻疯树毒蛋白(curicin)、巴豆毒素(crotin)、卡奇霉素、肥皂草(Saponaria officinalis)抑制剂、糖皮质激素、奥瑞斯他汀(auristatin)、金霉素(auromycin)、钇、铋、考布他汀(combrestatin)、倍癌霉素(duocarmycin)、尾海兔素(dolastatin)、cc1065和顺铂。

(11)其他抗体修饰

本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可进行进一步修饰以含有本领域中已知并且易于获得的其他非蛋白质性部分。优选地，适于衍生抗体的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇以及其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有稳定性而在制造方面具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可为支链或无支链。附接至抗体的聚合物的数目可变化，并且如果附接多于一种聚合物，则其可为相同或不同分子。一般而言，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可基于包括但不限于以下的考虑因素来确定：待改进抗体的具体性质或功能、抗体衍生物是否将用于所限定条件下的疗法等。此类技术和其他适合的制剂公开于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Alfonso Gennaro编辑,Philadelphia College of Pharmacy and Science(2000)中。

结合测定和其他测定

可测试本公开的抗CD33抗体的抗原结合活性，例如通过已知方法(如ELISA、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹等)来进行。

在一些实施方案中，可使用竞争测定来鉴定与本文所述抗体中的任一者竞争的抗体。在一些实施方案中，可使用竞争测定来鉴定与表3A至表3C、表4A至表34、表5A至表5D、表6A至表6D、表7和表8中所列出或选自以下的抗体中的任一者竞争与CD33结合的抗体：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66。在某些实施方案中，这种竞争性抗体结合至由表3A至表3C、表4A至表4C、表5A至表5D、表6A至表6D、表7和表8中所列出或选自以下的抗体中的任一者所结合的相同表位(例如，线性或构象表位)：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66。用于定位抗体所结合的表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)”Epitope Mapping Protocols”,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。

在示例性竞争测定中，将固定化CD33或在细胞表面上表达CD33的细胞在包含第一经标记抗体(其结合至CD33(例如，人或非人灵长类动物))和第二未经标记的抗体(正在测试其与第一抗体竞争结合至CD33的能力)的溶液中孵育。所述第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化CD33或表达CD33的细胞在包含第一经标记抗体而无第二未经标记抗体的溶液中孵育。在允许第一抗体与CD33结合的条件下孵育后，除去过量未结合抗体，并且测量与固定化CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量。如果与固定化CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量在测试样品中相对于对照样品样基本上减少，则这指示第二抗体与第一抗体竞争结合至CD33。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A LaboratoryManual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

核酸、载体和宿主细胞

本公开的抗CD33抗体可使用重组方法和组合物来产生，例如如美国专利号4,816,567中所述。在一些实施方案中，提供具有编码本公开的任一抗CD33抗体的核苷酸序列的分离的核酸。此类核酸可编码含有抗CD33抗体的VL的氨基酸序列和/或含有抗CD33抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供一种或多种含有此类核酸的载体(例如，表达载体)。在一些实施方案中，还提供含有这种核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞含有以下各项(例如，已用以下各项转化)：(1)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列和含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体，和含有编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。

提供了制备本公开的抗CD33抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适于表达抗CD33抗体的条件下培养含有编码所述抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，所述抗体随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收。

为重组产生本公开的抗CD33抗体，将编码所述抗CD33抗体的核酸分离并且将其插入至一种或多种载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。这种核酸可使用常规程序容易地分离并且测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。

本文所述的含有编码本公开的任一抗CD33抗体或其片段、多肽(包括抗体)的核酸序列的适合载体包括但不限于克隆载体和表达载体。适合的克隆载体可根据标准技术来构建，或可选自本领域中可获得的大量克隆载体。虽然所选择的克隆载体可根据意图使用的宿主细胞而变化，但可用的克隆载体通常具有自我复制的能力，可具有特定限制性核酸内切酶的单一靶标，和/或可携带可用于选择含有所述载体的克隆的标志物的基因。适合的实例包括质粒和细菌病毒，例如，pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA和穿梭载体(例如pSA3和pAT28)。这些和许多其他克隆载体可自商业供货商获得，如BioRad、Strategene和Invitrogen。

表达载体通常是含有本公开的核酸的可复制的多核苷酸构建体。表达载体可在宿主细胞中作为游离基因或作为染色体DNA的整合部分来复制。适合的表达载体包括但不限于质粒、病毒载体，包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒和PCT公布号WO 87/04462中所公开的一种或多种表达载体。载体组分可通常包括但不限于以下中的一者或多者：信号序列；复制起点；一种或多种标志物基因；适合的转录控制元件(如启动子、增强子和终止子)。对于表达(即，翻译)而言，通常还需要一个或多个翻译控制元件，如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。

可通过多种适当方式中的任一者将含有目标核酸的载体引入至宿主细胞中，所述方式包括电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质的转染；微粒轰击；脂转染；以及感染(例如，其中载体是感染因子(如痘苗病毒))。引入载体或多核苷酸的选择将通常取决于宿主细胞的特征。在一些实施方案中，载体含有含编码本公开的抗CD33抗体的一个或多个氨基酸序列的核酸。

用于克隆或表达编码抗体的载体的适合宿主细胞包括原核或真核细胞。举例而言，本公开的抗CD33抗体可在细菌中产生，尤其在不需要糖基化和Fc效应功能时。关于抗体片段和多肽在细菌中的表达(例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523；以及Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编辑,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。表达后，可以可溶性部分从细菌细胞糊状物分离抗体并且可将其进一步纯化。

除原核生物以外，真核微生物(如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的适合克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”，从而产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株(例如，Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；以及Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006))。

用于表达糖基化抗体的适合宿主细胞也可源自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴定出可结合昆虫细胞使用、尤其用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的多种杆状病毒株。也可利用植物细胞培养物作为宿主(例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429，其描述用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIES^TM技术。)。

也可使用脊椎动物细胞作为宿主。举例而言，可使用适应于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系。有用哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如(例如)Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如(例如)Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；布法罗大鼠肝细胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如(例如)Mather等人,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods inMolecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编辑,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。

药物组合物

可通过将本公开的抗CD33抗体与适当的药学上可接受的载体或稀释剂组合将所述抗CD33抗体并入至多种制剂中以用于治疗性施用，并且可配制成呈固体、半固体、液体或气态形式的制剂。此类制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊、粉末、颗粒、软膏、溶液、栓剂、注射液、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。取决于所需的制剂，药物组合物可包括药学上可接受、无毒的稀释剂载体，其是通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。对稀释剂进行选择以便不影响组合的生物学活性。此类稀释剂的实例包括但不限于蒸馏水、缓冲水、生理盐水、PBS、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液和汉克氏溶液(Hank'ssolution)。本公开的药物组合物或制剂还可包含其他载体、佐剂或无毒、非治疗性、非免疫原性稳定剂、赋形剂等。所述组合物还可包含接近生理条件的其他物质，如pH调整剂和缓冲剂、毒性调整剂、润湿剂和清洁剂。

本公开的药物组合物还可包含多种稳定剂中的任一者，例如抗氧化剂。当药物组合物包含多肽时，所述多肽可与增强所述多肽的体内稳定性或以其他方式增强其药理学性质(例如，延长所述多肽的半衰期、降低其毒性和增强溶解性或吸收)的各种熟知化合物复合。此类修饰或复合剂的实例包括但不限于硫酸盐、葡萄糖酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐。组合物的多肽也可与增强其体内属性的分子复合。此类分子包括但不限于碳水化合物、聚胺、氨基酸、其他肽、离子(例如，钠、钾、钙、镁、锰)和脂质。

适于各种类型的施用的制剂的其他实例可参见Remington's PharmaceuticalSciences,Mace Publishing Company,Philadelphia,PA,第17版(1985)。关于药物递送方法的简短综述，参见Langer,Science249:1527-1533(1990)。

对于经口施用而言，活性成分可以固体剂型施用，如胶囊、片剂和粉末，或以液体剂型施用，如酏剂、糖浆和悬浮液。所述活性组分可与非活性成分和粉末状载体一起囊封于明胶胶囊中，所述非活性成分和粉状载体如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、淀粉、纤维素或纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸、糖精钠、滑石、碳酸镁。可添加以提供合乎需要的颜色、味道、稳定性、缓冲能力、分散或其他已知的合乎需要的特征的其他非活性成分的实例是红色氧化铁、硅胶、月桂基硫酸钠、二氧化钛和可食用白墨。可使用类似稀释剂来制备压制片剂。片剂和胶囊二者均可制造为持续释放产品以在数小时时段内连续释放药剂。压制片剂可经糖包衣或膜包衣以掩蔽任何令人不愉快的味道并且保护片剂免受大气影响，或经肠溶包衣以选择性地在胃肠道中崩解。用于经口施用的液体剂型可含有着色剂和调味剂以提高患者接受性。

适于胃肠外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和可使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。

用于配制药物组合物的组分优选具有高纯度并且基本上不含潜在有害的污染物(例如，至少为国家食品(NF)级、通常至少为分析级，并且更通常至少为医药级)。此外，意图用于体内使用的组合物通常无菌。就给定化合物必须在使用之前合成而言，所得产品通常基本上不含任何潜在毒性剂，尤其可在合成或纯化过程期间存在的任何内毒素。用于胃肠外施用的组合物也无菌、基本上等渗并且在GMP条件下制得。

制剂可进行优化以在脑或中枢神经系统中保留并且稳定。当将剂施用至颅腔室中时，期望所述剂保留在所述腔室中，并且不扩散或以其他方式跨越血脑屏障。稳定技术包括交联、多聚化或连接至诸如聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白质载体的基团以实现分子量的增加。

用于延长保留的其他策略包括将本公开的抗CD33抗体包埋在生物可降解或生物可侵蚀的植入物中。治疗活性剂的释放速率受穿过聚合基质的运输速率和植入物的生物降解控制。药物穿过聚合物障壁的运输也将受化合物溶解性、聚合物亲水性、聚合物交联的程度、聚合物在吸收水时以使聚合物障壁对药物而言更具渗透性的膨胀、植入物的几何形状等影响。植入物的尺寸与选择作为植入部位的区的大小和形状相称。植入物可以是颗粒、薄片、贴片、斑块、纤维、微胶囊等，并且可具有与所选插入位点相容的任何大小或形状。

植入物可以是整体的，即活性剂均匀地分布在整个聚合基质中，或囊封的，其中活性剂储库由聚合基质囊封。待采用的聚合组合物的选择将随施用部位、所需的治疗时期、患者耐受性、待治疗疾病的性质等变化。聚合物的特性将包括植入部位的生物可降解性、与目标剂的相容性、囊封的容易性、生理环境中的半衰期。

可采用的生物可降解的聚合组合物可以是有机酯或醚，其在降解时产生生理学上可接受的降解产物，包括单体。可使用酸酐、酰胺、原酸酯或诸如此类自身或与其他单体的组合。聚合物将是缩合聚合物。聚合物可交联或不交联。特别感兴趣的是羟基脂肪族羧酸的聚合物(均聚物或共聚物)和多糖。目标聚酯包括D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、聚己内酯以及其组合的聚合物。通过采用L-乳酸盐或D-乳酸盐，实现缓慢生物降解的聚合物，而外消旋物使降解基本上增强。乙醇酸和乳酸的共聚物尤其感兴趣，其中生物降解速率受乙醇酸与乳酸的比率控制。降解最快的共聚物具有大致相等量的乙醇酸和乳酸，其中任一均聚物更耐降解。乙醇酸与乳酸的比率还将影响植入物的脆性，其中对于较大的几何形状而言期望更具柔性的植入物。目标多糖为海藻酸钙和官能化纤维素、尤其特征在于水不溶性、分子量为约5kD至500kD等的羧基甲基纤维素酯。本公开的植入物中也可采用生物可降解的水凝胶。水凝胶通常是共聚物材料，其特征在于能够吸收液体。可采用的示例性生物可降解的水凝胶阐述于Heller,Hydrogels in Medicine and Pharmacy,N.A.Peppes编辑,第III卷,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1987,第137-149页中。

药物剂量

含有本公开的抗CD33抗体的本公开的药物组合物可根据已知方法向需要用所述抗体治疗的个体、优选人施用，所述已知方法如作为浓注静脉内施用或通过经一段时期连续输注、通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、颅内、脊椎内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、经口、局部或吸入途径。

本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可取决于所设想的特定用途而变化。适当剂量或施用途径的确定为本领域的技术人员所熟知。动物实验为确定用于人疗法的有效剂量提供可靠指导。有效剂量的物种间推算(Interspecies scaling)可遵循Mordenti,J.和Chappell,W.”The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics”,Toxicokinetics and New Drug Development,Yacobi等人编辑,Pergamon Press,NewYork 1989,第42-46页中所述的原理实施。

对于体内施用本公开的任一抗CD33抗体而言，正常剂量的量可从每天约10ng/kg直至约100mg/kg个体体重或更多、优选约1mg/kg/天至10mg/kg/天变化，这取决于施用途径。对于在若干天或更长时间内的重复施用而言，取决于待治疗疾病、病症或疾患的严重程度，持续治疗直至实现对症状的所需阻抑为止。

示例性给药方案可包括施用约2mg/kg初始剂量的抗CD33抗体，之后每隔一周为约1mg/kg的每周维持剂量。取决于医师希望实现的药物动力学衰减的模式而定，其他剂量方案也可为有用的。举例而言，本文涵盖每周向个体给药1次至21次。在某些实施方案中，可使用在约3μg/kg至约2mg/kg范围内(如约3μg/kg、约10μg/kg、约30μg/kg、约100μg/kg、约300μg/kg、约1mg/kg和约2mg/kg)的给药。在某些实施方案中，给药频率是每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次或每月一次、每两个月一次、每三个月一次或更长时间。通过常规技术和测定可容易地监测疗法的进展。给药方案(包括所施用的抗CD33抗体)可随时间推移而变化，与所用剂量无关。

特定抗CD33抗体的剂量可在已给予一次或多次抗CD33抗体施用的个体中凭经验确定。给予个体递增剂量的抗CD33抗体。为评价抗CD33抗体的功效，可监测本公开的任何疾病、病症或疾患(例如，额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、长期抑郁、动脉粥样硬化血管疾病和不期望的正常衰老症状)的临床症状。

本公开的抗CD33抗体的施用可是连续的或间歇的，这取决于例如接受者的生理状况、施用目的为治疗性还是预防性和熟练从业者所已知的其他因素。抗CD33抗体的施用可在预选时间段内基本上连续或可呈一系列间隔剂量。

关于具体递送剂量和方法的指导提供于文献中；参见例如美国专利号4,657,760；号5,206,344；或5,225,212。以下在本公开的范围内：不同制剂将对不同治疗和不同病症有效，并且意图治疗特定器官或组织的施用可需要以不同于施用至另一器官或组织的方式递送。此外，剂量可通过一次或多次分开施用或通过连续输注来施用。对于在若干天或更长时间内的重复施用而言，取决于疾患，持续治疗直至疾病症状出现所需阻抑为止。然而，可使用其他剂量方案。通过常规技术和测定可容易地监测这种疗法的进展。

治疗用途

如本文所公开，本公开的抗CD33抗体可用于预防以下各项、降低以下各项的风险或治疗以下各项：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病和癌症包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。在一些实施方案中，所述CD33抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是惰性抗体。在一些实施方案中，所述抗体是拮抗剂抗体。

在一些实施方案中，本公开提供预防以下各项、降低以下各项的风险或治疗以下各项的方法：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病、癌症、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌，所述方法是通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者的抗体来进行。

在一些实施方案中，本公开提供预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症的方法，所述方法是通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者的抗体来进行。在一些实施方案中，所述抗体抑制选自以下的一种或多种CD33活性：(a)促进免疫阻抑树突细胞、免疫阻抑巨噬细胞、免疫阻抑嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞、非致瘤性CD14⁺骨髓细胞和调控性T细胞中的一者或多者的增殖、成熟、迁移、分化和/或功能性；(b)增强免疫阻抑树突细胞、免疫阻抑巨噬细胞、免疫阻抑嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞和调控性T细胞中的一者或多者至肿瘤中的浸润；(c)增加肿瘤、外周血或其他淋巴样器官中肿瘤促进骨髓/粒细胞免疫阻抑细胞和/或非致瘤性CD14⁺骨髓细胞的数量；(d)降低具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；(e)降低具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；(f)增加肿瘤体积；(g)增加肿瘤生长速率；(h)增加转移；(i)增加肿瘤复发率；(j)增加一种或多种PD-1配体的表达；(k)降低调节抗肿瘤T细胞应答的一种或多种免疫疗法的功效，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF-1受体以及它们的任何组合，或降低一种或多种癌症疫苗的功效；以及(l)降低一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环霉素、阿霉素表柔比星紫杉烷、紫杉醇/>多西他赛/>5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺/>卡铂/>奥沙利铂/>甲酰四氢叶酸、替莫唑胺/>以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述抗体展现选自以下的一种或多种活性：(a)增加肿瘤浸润性CD3⁺T细胞的数量；(b)降低非致瘤性CD14⁺骨髓细胞中CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞存在于血液中；(c)降低非致瘤性CD14⁺骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中所述非致瘤性CD14⁺骨髓细胞存在于血液中；(d)降低一种或多种细胞中的PD-L1水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓源性阻抑细胞(MDSC)；(e)降低实体肿瘤的肿瘤生长速率；(f)降低肿瘤体积；(g)增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；(h)增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或它们的任何组合中的一者或多者；(i)增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环霉素、阿霉素/>表柔比星/>紫杉烷、紫杉醇多西他赛/>5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺/>卡铂奥沙利铂/>甲酰四氢叶酸、替莫唑胺/>以及它们的任何组合；以及(j)当缀合至化学或放射性毒素时杀死实体肿瘤和相关血管中表达CD33的免疫阻抑骨髓细胞和/或表达CD14的细胞。

如本文所公开，本公开的抗CD33抗体也可用于诱导和/或促进一种或多种免疫细胞(例如，先天免疫细胞或适应性免疫细胞)的存活、成熟、功能性、迁移或增殖。在一些实施方案中，本公开提供诱导或促进有需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖的方法，所述方法是通过向所述个体施用治疗有效量的本公开的降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者的抗体来进行。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫细胞是选自树突细胞、巨噬细胞、小神经胶质细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，所述抗体是激动剂抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的瞬时激动剂抗CD33抗体，其最初用作激动剂并且接着用作长期拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是惰性抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗体是拮抗剂抗CD33抗体。在一些实施方案中，抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平或总水平)。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的裂解。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导CD33的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导CD33的裂解。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时活化并且接着诱导降低的CD33表达。在某些实施方案中，所述个体具有CD33变体等位基因，所述CD33变体等位基因具有单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC或AC。在某些实施方案中，所述个体具有CD33变体等位基因，所述CD33变体等位基因具有单核苷酸多态性(SNP)2459419CC或CT。

如本文所公开，本公开的抗CD33抗体可进一步用于降低调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活。在一些实施方案中，本公开提供降低有需要的个体中的调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑树突细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑巨噬细胞、骨髓源性阻抑细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活的方法，所述方法是通过向所述个体施用治疗有效量的与CD33结合或相互作用的抗体来进行。在一些实施方案中，所述抗体是选自拮抗剂抗体、惰性抗体或激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体缀合物。在一些实施方案中，抗CD33抗体缀合物包含缀合至可检测的标志物、毒素或治疗剂的抗CD33抗体。

如本文所公开，本公开的抗CD33抗体可用于在体外或体内降低一种或多种细胞上CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者。在一些实施方案中，本公开提供降低有需要的个体中一种或多种细胞上CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者的方法，所述方法是通过向所述个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来进行。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体降低体内CD33的细胞水平。

如本文所公开，本公开的抗CD33抗体可用于降低一种或多种细胞上CD33的细胞水平，所述一种或多种细胞包括但不限于树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞和/或细胞系。在一些实施方案中，本公开提供降低有需要的个体中一种或多种细胞上CD33的细胞水平的方法，所述方法是通过向所述个体施用治疗有效量的本公开的抗CD33抗体来进行。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞是选自树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体降低体内CD33的细胞水平。CD33的细胞水平可指但不限于CD33的细胞表面水平、CD33的细胞内水平和CD33的总水平。在一些实施方案中，CD33的细胞水平降低包括CD33的细胞表面水平降低。如本文所用，CD33的细胞表面水平可通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型来测量。在一些实施方案中，CD33的细胞水平降低包括CD33的细胞内水平降低。如本文所用，CD33的细胞内水平可通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型来测量。在一些实施方案中，CD33的细胞水平降低包括CD33的总水平降低。如本文所用，CD33的总水平可通过本文所述或本领域中已知的任何体外基于细胞的测定或适合体内模型来测量。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33降解、CD33裂解、CD33内化、CD33脱落和/或CD33表达的下调。在一些实施方案中，CD33的细胞水平是在原代细胞(例如，树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞)上或细胞系上利用体外细胞测定来测量。

本公开的其他方面涉及选择有需要的受试者用于利用抗CD33抗体治疗的方法，所述方法包括：a.从所述受试者获得样品(例如，血液样品)；b.检测所述受试者中存在的CD33等位基因；以及c.在具有一种或多种CD33等位基因的受试者中选择受试者用于利用与CD33结合或相互作用的抗体进行治疗，其中所述一种或多种CD33等位基因是选自由rs3865444^AC和rs3865444^CC组成的组。本公开的其他方面涉及评估有需要的受试者对与CD33结合或相互作用的抗体的反应性的方法，所述方法包括：a.测量在向所述受试者施用抗CD33抗体之前从所述个体获得的血液样品中非致瘤性骨髓细胞上CD45⁺和CD14⁺的表达水平；b.向所述受试者施用治疗有效量的抗体；以及c.测量在施用抗CD33抗体之后从所述手术者获得的血液样品中非致瘤性骨髓细胞上CD45⁺和CD14⁺的表达水平，其中在施用抗CD33抗体之后非致瘤性骨髓细胞上的CD45⁺CD14⁺水平降低指示所述受试者对所述剂有反应。可使用用于获得样品(如血液样品)的任何适合的方法。此外，应了解，可使用任何已知的检测CD33变体和/或等位基因的方法，如SNP分析。在一些实施方案中，评估反应性的方法还包括施用一种或多种额外治疗有效量的抗体。在一些实施方案中，受试者是人。

在一些实施方案中，个体具有CD33的变体。在一些实施方案中，变体包括但不限于选自以下的一种或多种多态性：(a)SNP rs3865444^AC；(b)SNP rs3865444^CC；(c)SNPrs35112940^GG,AA,AG；以及(d)SNP rs12459419^CC,CT或^TT；以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，本公开的方法可进一步涉及共施用抗CD33抗体或双特异性抗CD33抗体与结合至模式识别受体的抗体、结合至Toll样受体的抗体、结合至损害相关分子模式(DAMP)受体的抗体和/或结合至细胞因子的抗体或针对白介素的抗体)。

在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体，和/或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体是选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗TNFa抗体、抗Siglec-5抗体、抗Siglec-7抗体、抗Siglec-9抗体、抗Siglec-11抗体、拮抗性抗TREM1抗体、拮抗性抗TREM2抗体以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述一种或多种标准或研究性抗癌疗法是选自放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼(imatinib)疗法、曲妥珠单抗(trastuzumab)疗法、依那西普(etanercept)疗法、过继性细胞转移(ACT)疗法、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)疗法、疫苗疗法和细胞因子疗法。

在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体是选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体是选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动抗TREM1抗体、激动抗TREM2抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子是选自IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、MIP-1-β以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，受试者或个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物，如猴)、兔和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者或个体是人。

痴呆

痴呆是一种非特异性综合征(即，一组病征和症状)，其呈现为先前未受损害的人的总体认知能力严重丧失，超出正常衰老所预期的程度。痴呆可由于独特的全脑损伤而是静态的。或者，痴呆可以是进行性的，从而由于身体的损害或疾病而导致长期下降。虽然痴呆在老年群体中更为常见，但其也可发生在65岁之前。受痴呆影响的认知领域包括但不限于记忆力、注意广度、语言和解决问题。通常，在个体诊断为患有痴呆之前，症状必须存在至少6个月。

痴呆的示例性形式包括但不限于额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、语意型痴呆和路易体痴呆。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防痴呆、降低痴呆的风险和/或治疗痴呆。在一些实施方案中，抗CD33抗体可调节患有痴呆的个体中的一种或多种CD33活性。

额颞叶痴呆

额颞叶痴呆(FTD)是由脑额叶的逐渐恶化所引起的疾患。随着时间推移，变性可发展至颞叶。仅次于阿尔茨海默病(AD)的盛行率，FTD占早老型痴呆病例的20％。FTD的临床特征包括记忆衰退、行为异常、人格改变和语言障碍(Cruts,M.和Van Broeckhoven,C.，Trends Genet.24:186-194(2008)；Neary,D.等人,Neurology 51:1546-1554(1998)；Ratnavalli,E.,Brayne,C.,Dawson,K.和Hodges,J.R.，Neurology 58:1615-1621(2002))。

极大部分FTD病例是以体染色体显性方式遗传，但即使在一个家族中，症状也可跨越具有行为障碍的FTD至原发性进行性失语症至皮质-基底神经节变性的范围。如同大多数神经变性疾病，FTD的特征可在于患病脑中特定蛋白质聚集物的病理性存在。历史上，对FTD的首次描述认识到在神经纤维缠结或皮克体(Pick body)中存在过度磷酸化Tau蛋白的神经元内累积。微管相关蛋白Tau的因果作用是通过鉴定若干家族中编码Tau蛋白的基因中的突变来支持的(Hutton,M.等人,Nature 393:702-705(1998)。然而，大部分FTD脑不显示过度磷酸化Tau的累积，但展现对泛素(Ub)和TAR DNA结合蛋白(TDP43)的免疫应答性(Neumann,M.等人,Arch.Neurol.64:1388-1394(2007))。大部分包括Ub的那些FTD病例(FTD-U)显示在颗粒蛋白前体基因中携带突变。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防FTD、降低FTD的风险和/或治疗FTD。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有FTD的个体中的一种或多种CD33活性。

阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(AD)是痴呆的最常见形式。所述疾病无治愈，其随其进展而恶化并且最终导致死亡。大多数情况下，AD在65岁以上的人中诊断。然而，较不盛行的早发型阿尔茨海默病可更早发生。

阿尔茨海默病的常见症状包括行为症状，例如难以记住近期事件；认知症状、困惑、烦躁和攻击行为、情绪波动、语言障碍和长期记忆丧失。随着疾病进展，身体功能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默病在变得完全明显之前所发展的时间量未知并且可变，并且其可在未诊断的情况下进展多年。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防阿尔茨海默病、降低阿尔茨海默病的风险和/或治疗阿尔茨海默病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有阿尔茨海默病的个体中的一种或多种CD33活性。

帕金森氏病

帕金森氏病可称为特发性或原发性帕金森症(parkinsonism)、运动功能减退的刚性综合症(hypokinetic rigid syndrome，HRS)或震颤性麻痹，是一种影响运动系统控制的神经退行性脑病症。脑中多巴胺产生细胞的进行性死亡导致帕金森氏病的主要症状。大多数情况下，帕金森氏病在超过50岁的人中诊断。帕金森氏病在大多数人中是特发性的(无已知原因)。然而，遗传因素也在所述疾病中起作用。

帕金森氏病的症状包括但不限于手、臂、腿、颌和面部的震颤、四肢和躯干的肌肉强直、移动缓慢(运动徐缓(bradykinesia))、姿势不稳定、走路困难、神经精神问题、言语或行为变化、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉和睡眠问题。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防帕金森氏病、降低帕金森氏病的风险和/或治疗帕金森氏病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有帕金森氏病的个体中的一种或多种CD33活性。

肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)

如本文所用，肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)或运动神经元病或卢伽雷氏病(LouGehrig's disease)可互换使用，并且是指具有不同病因的使人衰弱的疾病，其特征在于快速进行性无力、肌肉萎缩和束缚、肌肉痉挛、说话困难(构音障碍(dysarthria))、吞咽困难(difficulty swallowing或dysphagia)和呼吸困难(difficulty breathing或dyspnea)。

已显示颗粒蛋白前体在ALS中起作用(Schymick,JC等人,(2007)J NeurolNeurosurg Psychiatry.；78:754-6)并且再次保护由ALS引发蛋白(例如TDP-43)所引起的损害(Laird,AS等人,(2010).PLoS ONE5:e13368)。也证实在脊髓损伤后，前NGF诱导p75介导的寡树突细胞和皮质脊髓神经元的死亡(Beatty等人,Neuron(2002),36,第375-386页；Giehl等人,Proc.Natl.Acad.Sci USA(2004),101,第6226-30页)。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防ALS、降低ALS的风险和/或治疗ALS。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有肌萎缩性脊髓侧索硬化症的个体中的一种或多种CD33活性。

亨庭顿氏病

亨庭顿氏病(HD)是由亨庭顿蛋白基因(HTT)中的体染色体显性突变所引起的遗传性神经变性疾病。亨庭顿蛋白基因内细胞因子-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)三连体重复的扩张导致产生由所述基因编码的亨庭顿蛋白(Htt)的突变形式。这种突变型亨庭顿蛋白(mHtt)有毒并且导致神经元死亡。亨庭顿氏病的症状最常出现在35岁与44岁之间，但其可在任何年龄出现。

亨庭顿氏病的症状包括但不限于运动控制问题、急动(jerky)、随机运动(舞蹈症)、异常眼球运动、平衡受损、癫痫发作、咀嚼困难、吞咽困难、认知问题、言语改变(altered speech)、记忆衰退、思考困难、失眠、疲劳、痴呆、人格改变、抑郁、焦虑和强迫行为。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防亨庭顿氏病、降低亨庭顿氏病的风险和/或治疗亨庭顿氏病(HD)。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有亨庭顿氏病的个体中的一种或多种CD33活性。

Tau蛋白病

Tau蛋白病或Tau蛋白病变是一类由脑内微管相关蛋白tau的集聚所引起的神经变性疾病。阿尔茨海默病(AD)是最有名的tau蛋白病，并且涉及以可溶性神经纤维缠结(NFT)的形式在神经元内累积tau蛋白。其他tau蛋白病和病症包括进行性核上性麻痹、拳击手型痴呆(慢性创伤性脑病变)、与染色体17有关的额颞叶痴呆和帕金森症、Lytico-Bodig病(关岛帕金森氏痴呆综合征)、缠结主导型痴呆、神经节神经胶质瘤和神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅中毒脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatz disease)、脂褐质沉积症、皮克氏病、皮质基底变性、嗜银颗粒性病(AGD)、亨廷顿病以及额颞叶变性。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防tau蛋白病、降低tau蛋白病的风险和/或治疗tau蛋白病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有tau蛋白病的个体中的一种或多种CD33活性。

多发性硬化症

多发性硬化症(MS)也可称为播散性硬化(disseminated sclerosis)或性散播脑脊髓炎(encephalomyelitis disseminata)。MS是其中脑和脊髓轴突周围的脂肪髓鞘受损，从而导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛病征和症状的发炎性疾病。MS影响脑和脊髓中的神经细胞彼此有效通信的能力。神经细胞通过沿称为轴突的长纤维发送称为动作电位的电信号来通信，所述长纤维含于称为髓磷脂的绝缘物质内。在MS中，身体自身的免疫系统攻击并且损害髓磷脂。当髓磷脂丢失时，轴突不再能有效地传导信号。MS发作通常发生在年轻人中，并且在女性中更常见。http://en.wikipedia.org/wiki/Multiple_sclerosis-cite_note- pmid18970977-1

MS的症状包括但不限于感觉变化，例如敏感性丧失或麻刺感；刺痛感或麻木，例如感觉迟钝和感觉异常；肌肉无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，例如共济失调；言语问题，例如发音不良，或吞咽问题，例如吞咽困难；视觉问题，例如眼球震颤、包括光幻视的视神经炎和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难；不同程度的认知损害；抑郁的情绪症状或不稳定情绪；乌托夫氏现象(Uhthoff's phenomenon)，其是由于暴露于高于正常的环境温度所致现存症状的恶化；以及莱尔米体征(Lhermitte's sign)，其是在弯曲颈部时自背部向下流动的触电感。

在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防多发性硬化症、降低多发性硬化症的风险和/或治疗多发性硬化症。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有多发性硬化症的个体中的一种或多种CD33活性。

癌症

本公开的其他方面提供用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症的方法，所述方法通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来进行。本公开的任一分离的抗体可用于这些方法中。在一些实施方案中，分离的抗体是本公开的激动剂抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的拮抗剂抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的惰性抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的抗体缀合物。

如本文所阐述，已知肿瘤微环境含有异质免疫浸润物，其包括T淋巴细胞、巨噬细胞和骨髓性/粒细胞性谱系的细胞。肿瘤中调控性T细胞、肿瘤包埋的免疫阻抑骨髓细胞和/或M2巨噬细胞的存在和活性与不良预后相关。相比之下，细胞毒性T细胞的存在和活性有益于癌症疗法。预期直接或间接增强细胞毒性T细胞的活性并且降低各种免疫阻抑细胞的数量和活性的疗法提供显著治疗益处。一项开创性临床前研究已显示在靶向免疫阻抑细胞的药物(例如，CSF1/CSF1R阻断抗体)与使细胞毒性T细胞活化的免疫检查点阻断抗体之间具有协同性，这指示操纵两种细胞类型在其中个别疗法效应不佳的肿瘤模型中显示功效(ZhuY；Cancer Res.2014年9月15日；74(18):5057-69)。因此，在一些实施方案中，阻断骨髓细胞、T细胞亚组和肿瘤相关免疫细胞上表达的CD33可刺激有益抗肿瘤免疫应答，从而产生治疗性抗肿瘤免疫应答。

在一些实施方案中，用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗患有癌症的个体的方法还包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体。特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体的实例包括但不限于抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体与本公开的拮抗剂抗CD33抗体组合施用。

在一些实施方案中，待通过本公开的方法预防或治疗的癌症包括但不限于鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌症、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer或stomach cancer)(包括胃肠癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer或renalcancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑素瘤、浅表扩散性黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、肢端着色斑性黑素瘤、结节性黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；多毛细胞白血病；慢性骨髓母细胞性白血病；以及移植后淋巴增殖性病症(PTLD)以及与斑痣性错构瘤病相关的异常血管增殖、水肿(例如与脑肿瘤相关者)、麦格氏综合征(Meigs'syndrome)、脑癌以及头颈癌和相关转移。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症是选自非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、肾细胞癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、乳腺癌、胃癌和肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些实施方案中，癌症可以是原发性肿瘤。在一些实施方案中，癌症可以是在源自以上癌症类型中任一者的第二部位处的转移性肿瘤。

在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症，所述癌症包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠和直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌。

在一些实施方案中，本公开提供预防癌症、降低癌症的风险或治疗患有癌症的个体的方法，所述方法是通过向所述个体施用治疗有效量的本公开的抗CD33抗体来进行。

在一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种特异性地结合至抑制性免疫检查点分子的抗体，和/或另一标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体是选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体以及它们的任何组合。在一些实施方案中，所述标准或研究性抗癌疗法是选自以下的一种或多种疗法：放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼曲妥珠单抗/>过继性细胞转移(ACT)、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)、疫苗疗法和细胞因子疗法。

在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体是选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种特异性地结合至刺激性免疫检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体是选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体以及它们的任何组合。

在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子是选自TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、OSM、CNTF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-8、CRP、IFN-α、IFN-β、IL-2、IL-18、GM-CSF、G-CSF以及它们的任何组合。

药盒/制品

本公开还提供含有本文所述的抗CD33抗体或其功能片段的药盒和/或制品。本公开的药盒和/或制品可包括包含本公开的经纯化抗体的一个或多个容器。在一些实施方案中，所述药盒和/或制品还包括根据本公开的方法使用的说明书。

在一些实施方案中，所述说明书包括根据本公开的任何方法对施用本文所述的抗CD33抗体以预防选自以下的疾病、病症或损伤、降低选自以下的疾病、病症或损伤的风险或治疗患有选自以下的疾病、病症或损伤的个体的说明：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力性脑积水、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、亨庭顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩症、希一德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨硬化病、骨佩吉特氏病和癌症包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥体虫感染、克氏锥虫感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏菌感染、I型HIV和流感嗜血杆菌。

在一些实施方案中，说明书包括对如何检测例如个体、组织样品或细胞中的CD33蛋白的说明。药盒和/或制品还可包括对选择适于治疗的个体的说明，其是基于鉴定所述个体是否患有疾病和疾病分期。

在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括本公开的另一抗体(例如，至少一种特异性地结合至抑制性检查点分子的抗体、至少一种特异性地结合至抑制性细胞因子的抗体和/或至少一种特异性地结合至刺激性检查点蛋白的激动性抗体)和/或至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括根据本公开的任何方法，关于将抗体和/或刺激性细胞因子与本文所述的抗CD33抗体组合使用的说明书、关于将本文所述的抗CD33抗体与抗体和/或刺激性细胞因子组合使用的说明书或关于使用本文所述的抗CD33抗体和抗体和/或刺激性细胞因子的说明书。

说明书通常包括关于用于预期治疗的剂量、给药时间表和施用途径的信息。容器可为单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本公开的药盒和/或制品中供应的说明书通常是标记或包装插页(例如，药盒中所包括的纸页)上的书面说明书，但也可接受机读说明书(例如，载于磁性或光学储存盘上的说明书)。

标记或包装插页指示组合物用于治疗例如本公开的疾病。可提供用于实践本文所述的任何方法的说明书。

本公开的药盒和/或制品是在适合包装中。适合包装包括但不限于小瓶、瓶、广口瓶、柔性包装(例如，密封Mylar或塑料袋)等。也涵盖与特定装置(如吸入器、经鼻施用装置(例如，雾化器)或输注装置(如微型泵)组合使用的包装。药盒和/或制品可具有无菌出入孔(例如，容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器也可具有无菌出入孔(例如，容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本文所述的抗CD33抗体。容器还可包括第二药物活性剂。

药盒和/或制品可任选地提供额外组分，如缓冲液和解释性信息。通常，药盒包括容器和位于所述容器上或与所述容器相连的标记或一个或多个包装插页。

诊断用途

本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)也具有诊断效用。因此，本公开提供使用本公开的抗体或其功能片段用于诊断目的(如检测个体或源自个体的组织样品中的CD33蛋白)的方法。

在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体是患有本公开的疾病、病症或损伤或处于发展本公开的疾病、病症或损伤风险的人患者。在一些实施方案中，诊断方法涉及检测生物样品(如活检试样、组织或细胞)中的CD33蛋白。使本文所述的抗CD33抗体与生物样品接触并且检测抗原结合的抗体。举例而言，活检试样可用本文所述的抗CD33抗体染色以检测和/或量化疾病相关的细胞。检测方法可涉及抗原结合的抗体的定量。生物样品中的抗体检测可利用本领域中已知的任何方法来进行，包括免疫荧光显微术、免疫细胞化学、免疫组织化学、ELISA、FACS分析、免疫沉淀或微型正电子发射断层摄影术。在某些实施方案中，抗体经放射标记(例如用¹⁸F)，并且随后利用微型正电子发射断层摄影术分析进行检测。抗体结合也可通过非侵入性技术在患者中进行量化，所述技术例如正电子发射断层摄影术(PET)、X射线计算机断层摄影术、单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)、计算机断层摄影术(CT)和计算机轴向断层摄影术(CAT)。

在其他实施方案中，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)可用于检测和/或量化例如取自临床前疾病模型(例如，非人疾病模型)的脑试样中的小神经胶质细胞。因此，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)可用于评价与对照相比，在模型中治疗神经系统疾病或损伤(如额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、动脉粥样硬化血管疾病、Nasu-Hakola病或多发性硬化症)后的治疗反应。

通过参考以下实施例将更全面地理解本公开。然而，不应将其解释为限制本公开的范围。整个本公开中的所有引用是以引用的方式明确并入本文中。

实施例

实施例1：鼠类抗CD33抗体的人源化和此类人源化变体的亲和力测量

以下实施例的目的是产生亲本小鼠CD33抗体的人源化变体和测定人源化抗体对CD33的亲和力。亲本小鼠抗CD33抗体含有包含E VQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVKLSHGKSLEWIGFIYPSNGITGYNQKFKNKATLTVDNSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARSTVDYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:103)的序列的重链可变区，和包含DIVLTQSPASLAVSLGQRATMSCRASQSVSTSTYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:104)的序列的轻链可变区。以上含有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的小鼠CD33抗体是鼠类抗CD33抗体2F5.1，其公开于WO 2016/201388中。

通过将亲本小鼠抗体的CDR移植到在序列上最接近小鼠抗体的人种系框架上来使亲本小鼠CD33抗体(鼠类抗CD33抗体2F5.1)人源化。还产生具有一种或多种框架回复突变的抗体。总计产生88种人源化抗体。还制得含有亲本小鼠抗CD33抗体的重链可变区(SEQ IDNO:103)和轻链可变区(SEQ ID NO:104)的嵌合抗体并且用作比较物(嵌合Ab)。还制得嵌合Ab的变体(即2号嵌合Ab)，其中将突变引入至VH-FR3中以除去预测的N连接的糖基化位点。2号嵌合Ab含有重链可变区EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVKLSHGKSLEWIGFIYPSNGITGYNQKFKNKATLTVDTSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARSTVDYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:167)和SEQ ID NO:104的轻链可变区。

根据标准技术在ForteBio测定中通过生物层干涉术测量每一抗体的人源化抗体对人CD33的亲和力(K_D)(Estep等人(2013)MAbs5(2):270-8)。简言之，通过木瓜蛋白酶消化产生每一抗体的Fab，并且如下测量抗体对CD33的单体亲和力：将人CD33固定在传感器尖端上，并且在含有100nM的每一Fab的测定缓冲液中孵育180秒以测量缔合速率，之后将尖端转移至测定缓冲液达180秒以测量解离速率。测定是在室温下进行。

88种人源化抗体中的大多数展现在亲本小鼠抗体3倍内的亲和力(数据未显示在表1中)。所述人源化抗体中的8种(AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65和AB-H66)的数据示于下表1中。

表1：人源化抗体对CD33的单价亲和力

抗体	单价亲和力，K_D(M)：
		嵌合Ab	5.22E-09
AB-H2	3.24E-09
		AB-H9	3.50E-09
AB-H14	3.42E-09
		AB-H15	5.45E-09
AB-H63	4.07E-09
		AB-H64	4.08E-09
AB-H65	8.57E-09
		AB-H66	5.54E-09

在单独实验中通过更灵敏的技术(表面等离子体共振(BIAcore))测量88种人源化抗体中的10种(AB-H1、AB-H3、AB-H6、AB-H11、AB-H22、AB-H24、AB-H26、AB-H63、AB-H64和AB-H71)的亲和力参数，并且与嵌合Ab和2号嵌合Ab进行比较。如下进行BIAcore测量：将人CD33固定在C1芯片的表面上，并且注射Fab达300s以监测缔合，之后在运行缓冲液中流动900s以监测解离。以5种浓度测量Fab：27nM的高浓度和3倍连续稀释。结果显示于下表2中。所述10种人源化抗体的亲和力在1.13nM至6.02nM范围内并且在嵌合Ab的4倍内。

表2：人源化抗体对CD33的单价亲和力

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实施例2：使用人源化抗体的CD33细胞表面下调

以下实施例的目的是测试人源化抗CD33抗体(如实施例1中所述)是否能够降低原代人树突细胞上CD33的细胞表面水平。

使用RosetteSep^TM单核细胞分离抗体混合剂(StemCell Technologies)从来自健康人供体的血液分离单核细胞。利用100ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-4(Peprotech)使分离的单核细胞分化成树突细胞。将树突细胞于2mL补充有10％Hyclone FBS、2mM谷氨酰胺、青霉素/链霉素和非必需氨基酸的RPMI中以200,000个细胞/mL接种于24孔板中，或以500,000个细胞接种于6孔皿中。将抗CD33抗体或同种型对照抗体添加至孔并且在37℃和5％CO₂下孵育24小时。根据标准技术通过FACS分析检测细胞表面受体表达。简言之，使细胞与抗CD33-FITC克隆HIM3-4一起在黑暗中在冰上孵育30分钟。将细胞于FACS缓冲液(PBS+2％FBS,2mM EDTA)中洗涤两次，并且在BD FACS Canto上进行流式细胞术。使用FlowJo软件(Ashland,OR)分析数据，并且将CD33表面表达计算为相对于在抗体不存在下的表达的受体表达的百分比。

所有88种人源化抗体均能降低细胞表面CD33的水平；然而，其展现一系列功效，其中许多抗体在减少细胞表面CD33方面有效性远低于亲本抗体。这是令人惊讶的，因为所述抗体的亲和力在亲本抗体的3倍至4倍内。在所测试的所有抗体中，AB-H64最强效。10种人源化抗体(AB-H1、AB-H3、AB-H6、AB-H11、AB-H22、AB-H24、AB-H26、AB-H63、AB-H64和AB-H71)的对比示于图1中。

所述抗体中每一种的半最大浓度(EC₅₀)和最大下调总结于下表3中。尽管所有抗体均具有类似的结合亲和力，但其展示降低细胞表面CD33水平的能力范围，并且AB-H64是最强效抗体。因此，除亲和力以外的特性有助于抗体内化其细胞表面受体的能力。

表3：人源化抗体的CD33细胞表面下调

虽然与亲本小鼠抗体相比，人源化抗体展现一系列降低细胞表面CD33水平的功效，但8种人源化抗体显示出相对于比较物抗体意外增加的功效。所述8种抗体的数据示于下表4中。在所述抗体中，AB-H63和AB-H64在下调细胞表面CD33方面最强效。

表4：人源化抗体的CD33细胞表面下调

抗体	受体下调，(EC₅₀)(pM)：
		嵌合Ab	74.3
AB-H2	51.7
		AB-H9	23.4
AB-H14	42.0
		AB-H15	58.6
AB-H63	4.1
		AB-H64	13.7
AB-H65	48.1
		AB-H66	39.3

还评价了2号嵌合Ab减少细胞表面CD33的能力。数据总结于上表3中。与亲本抗体嵌合Ab相比，2号嵌合Ab在下调CD33方面意外地较不强效。这些抗体之间的唯一差异在于嵌合Ab中的VH-FR3中存在N连接的糖基化位点。在AB-H64中，N连接的糖基化位点也保留在VH-FR3中，这表明这种抗体中的Fab糖基化可有助于其内化CD33的功效。

实施例3：人源化抗体的亲和力成熟，和此类亲和力成熟抗体的表征

此实施例的目的是产生并且表征亲和力成熟的抗CD33抗体。

通过酵母展示对三种人源化抗体AB-H14、AB-H63和AB-H64进行亲和力成熟。简言之，使编码所述三种人源化抗体的重链或轻链的多核苷酸中的残基诱变并且在酵母中表达。通过若干轮FACS分选选择显示改进的与可溶性重组人CD33蛋白结合的表达突变体的酵母细胞。

总计从AB-H14谱系选出11种亲和力成熟的克隆，从AB-H63谱系选出15种亲和力成熟的克隆并且从AB-H64谱系选出8种克隆。抗体的重链可变区HVR序列描绘于下文的表9A至表9C中。抗体的轻链可变区HVR序列描绘于下文的表10A至表10C中。抗体的重链框架区描绘于下文的表11A至表11D中。抗体的轻链框架区描绘于下文的表12A至表12D中。抗体的重链可变区序列描绘于下表13中。抗体的轻链可变区序列描绘于下表14中。

根据上文实施例1中所述的方法通过Fortebio测定测量AB-H64及其变体(表5)对人CD33的亲和力。

表5A：人源化抗体AB-H64及其变体对人CD33的Fortebio测定亲和力测量

源自人源化抗体AB-H64(AB-64.1至AB-64.8)的亲和力成熟抗体显示3倍至12倍的亲和力改进，如表5A中所示的ForteBio所测量。

在单独实验中，如通过更灵敏的BIAcore技术所测定，根据上文实施例1中所述的方法测量源自人源化抗体AB-H64的亲和力成熟抗体的亲和力参数并且直接与嵌合Ab的亲和力参数进行比较。与嵌合Ab相比，亲和力成熟抗体展现15倍至443倍的亲和力改进，并且与AB-H64相比，显示20倍至586倍的亲和力改进，如表5B中所示。

表5B：人源化抗体AB-H64及其变体对人CD33的BIAcore亲和力测量

对亲和力成熟抗体降低CD33的细胞表面水平的能力进行表征。根据上文实施例2中所述的方法测量AB-H64及其变体(表6A)降低原代人树突细胞上的CD33的半最大有效浓度(EC₅₀)。

表6A：AB-H64及其亲和力成熟变体的CD33细胞表面下调

大多数亲和力成熟抗体相对于亲本抗体展现显著的功效改进。出人意料地，不是最高亲和力抗体的AB-64.1在降低CD33水平方面最有效。

在单独实验中，根据上文实施例2中所述的方法，直接比较显示中等20倍至50倍亲和力改进的两种变体AB-64.1和AB-64.2和具有较大(215倍至340倍)的亲和力改进的两种变体AB-64.6和AB-64.7与亲本人源化抗体AB-H64和嵌合Ab的降低CD33的细胞表面水平的能力。数据示于图2中并且半最大有效浓度(EC₅₀)和最大CD33减少总结于表6B中。

表6B：人源化抗体的CD33细胞表面下调

出人意料地，对于H64谱系抗体，具有最高亲和力的CD33抗体在最大降低细胞表面CD33水平方面并不是最有效的。在亲和力成熟抗体中，具有中等亲和力改进的AB-64.1和AB-64.2显示最优选的最大CD33减少。与嵌合Ab或人源化抗体AB-H64相比，所有亲和力成熟抗体在减少细胞表面CD33方面均展现增加的功效。在所有亲和力成熟抗体中，相对于嵌合Ab和人源化抗体AB-H64，AB-64.1(以及其变体AB-64.1.2)始终展现最优选的功效增强。

实施例4：评估具有额外氨基酸修饰的抗体的亲和力和EC₅₀值。

此实施例的目的是确定经设计以除去潜在制造不利序列的额外氨基酸修饰是否影响抗体对CD33的亲和力或其降低CD33的细胞表面水平的能力。

在AB-64.1中产生额外氨基酸修饰，并且通过ForteBio测定测量所得抗体(AB-64.1.1至AB-64.1.15)的亲和力(参见实施例1的方法)(下表7)。在单独实验中通过BIAcore测量所述抗体中的两种(64.1.2和64.1.8)的亲和力参数，其中将其与亲本抗体AB-64.1、亲本人源化抗体AB-H64和嵌合Ab进行直接比较。数据示于上表5B中。

表7：AB-64.1的经修饰变体的亲和力测量

抗体	单价亲和力，K_D(M)：
		AB-64.1	4.99E-10
AB-64.1.1	4.29E-10
		AB-64.1.2	9.02E-10
AB-64.1.3	6.47E-10
		AB-64.1.4	6.39E-10
AB-64.1.5	6.97E-10
		AB-64.1.6	8.36E-10
AB-64.1.7	3.91E-10
		AB-64.1.8	8.02E-10
AB-64.1.9	1.06E-09
		AB-64.1.10	1.45E-09
AB-64.1.11	1.15E-09
		AB-64.1.12	9.22E-10
AB-64.1.13	1.45E-09
		AB-64.1.14	7.43E-10
AB-64.1.15	4.12E-10

来自FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)至FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)、FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)或FIYPSNVITG(SEQ ID NO:120)的HVR-H2序列的修饰对亲和力并不具有实质性影响，因为含有这些变化的抗体的所测量K_D值是在亲本抗体AB-64.1的3倍内。

来自YAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:12)至YAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:18)、YAQKFQGRATLTVDQSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)、YAQKFQGRATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:16)或YAQKFQGRATLTVDNPTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:19)的VH FR3序列的修饰对亲和力也不具有实质性影响，因为含有这些变化的抗体的所测量K_D值也在亲本抗体AB-64.1的3倍内。

还测试了具有额外氨基酸修饰的抗体降低CD33的细胞表面水平的能力。表8显示在用0.16μg/mL AB-64.1及其变体处理24小时后，保留在原代人树突细胞表面上的CD33的百分比。

表8：AB-64.1及其变体的CD33细胞表面下调

抗体	受体下调，(0.16μg/mL抗体下的保留％)
		AB-64.1	37.2
AB-64.1.1	37.0
		AB-64.1.2	32.4
AB-64.1.3	38.5
		AB-64.1.4	38.0
AB-64.1.5	37.3
		AB-64.1.6	37.0
AB-64.1.7	35.9
		AB-64.1.8	32.7
AB-64.1.9	37.4
		AB-64.1.10	39.8
AB-64.1.11	38.6
		AB-64.1.12	38.5
AB-64.1.13	35.9
		AB-64.1.14	38.4
AB-64.1.15	38.9

来自FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)至FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)、FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)或FIYPSNVITG(SEQ ID NO:120)的HVR-H2序列的修饰对抗体减少细胞表面CD33的能力并不具有实质性影响，因为在与含有这些修饰的抗体一起孵育后，保留在细胞表面上的CD33的百分比是在亲本抗体AB-64.1的5％内。

来自YAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:12)至YAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:18)、YAQKFQGRATLTVDQSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)、YAQKFQGRATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:16)或YAQKFQGRATLTVDNPTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:19)的VH FR3序列的修饰对抗体减少细胞表面CD33的能力也不具有实质性影响，因为在与含有这些修饰的抗体一起孵育后，保留在细胞表面上的CD33的百分比是在亲本抗体AB-64.1的5％内。

在单独实验中，评估所述变体中的两种(AB-64.1.2和AB-64.1.8)降低CD33的能力，并且与亲本抗体AB-64.1、人源化亲本抗体AB-H64和嵌合Ab进行比较。上表6B显示半最大有效浓度(EC₅₀)和在暴露于抗体24小时后原代人树突细胞表面上的最大CD33减少。

来自FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)至FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)或FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)的HVR-H2序列的修饰对抗体减少细胞表面CD33的能力并不具有实质性影响，因为含有这些修饰的抗体的EC₅₀是在亲本抗体AB-64.1的2倍内，并且在与含有这些修饰的抗体一起孵育后，细胞表面上CD33的最大减少是在亲本抗体AB-64.1的5％内。

来自YAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:12)至YAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:18)的VH FR3序列的修饰对抗体减少细胞表面CD33的能力也不具有实质性影响，因为含有这些修饰的抗体的EC₅₀是在亲本抗体AB-64.1的2倍内，并且在与含有这些修饰的抗体一起孵育后，细胞表面上CD33的最大减少是在亲本抗体AB-64.1的5％内。

与AB-64.1.8相比，AB-64.1.2展示功效增加并且细胞表面CD33的最大减少增加。在AB-64.1.2中，VH-FR3中的潜在N连接的糖基化位点保留，而在AB-64.1.8中其已除去，从而表明Fab糖基化可有助于这种抗体减少细胞表面CD33的能力。在与其亲本谱系抗体的对比中，与其亲本抗体AB-64.1相比，AB-64.1.2在减少细胞表面CD33方面具有类似功效，与亲本人源化抗体AB-H64相比，显示功效增加1.5倍，并且与嵌合Ab相比，展现功效增加4.6倍。

表9A：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H1序列

表9B：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H2序列

表9C：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H3序列

/>

表10A：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR L1序列

表10B：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR L2序列

表10C：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR L3序列

/>

表11A：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架1序列

/>

表11B：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架2序列

表11C：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架3序列

/>

表11D：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架4序列

表12A：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架1序列

/>

表12B：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架2序列

/>

表12C：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架3序列

表12D：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架4序列

表13：抗CD33抗体的EU或Kabat重链可变区序列

/>

表14：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链可变区序列

/>

实施例5：AB-H14和AB-H63的亲和力成熟。

根据上文实施例1中所述的方法通过Fortebio测定测量AB-H14及其亲和力成熟变体(表15)以及AB-H63及其亲和力成熟变体(表16)对人CD33的亲和力。

表15：人源化抗体AB-H14及其变体对人CD33的亲和力测量

表16：人源化抗体AB-H63及其变体对人CD33的亲和力测量

源自人源化抗体AB-H14和AB-H63的亲和力成熟抗体分别显示亲和力改进10倍至14倍和3倍至13倍。

根据上文实施例2中所述的方法表征亲和力成熟抗体降低原代树突细胞上CD33的细胞表面水平的能力。

AB-H14及其变体以及AB-H63及其变体的半最大有效浓度(EC₅₀)和最大CD33下调分别示于表17和表18中。大多数亲和力成熟抗体相对于亲本抗体展现显著的功效改进。然而，令人惊讶地，如对H64谱系抗体所观察，具有最高亲和力的CD33抗体不一定在最大降低细胞表面CD33的水平方面最有效。

表17：AB-H14及其亲和力成熟变体的CD33细胞表面下调

抗体	受体下调，(EC₅₀)(pM)：	最大下调(剩余CD33％)
			AB-H14	151.1	15.01
AB-14.1	92.7	18.58
			AB-14.2	55.0	23.77
AB-14.3	43.0	25.36
			AB-14.4	58.2	27.62
AB-14.5	34.2	26.43
			AB-14.6	32.4	24.04
AB-14.7	35.1	23.37
			AB-14.8	23.4	21.16
AB-14.9	39.9	26.12
			AB-14.10	49.4	20.91
AB-14.11	47.0	27.47

表18：AB-H63及其亲和力成熟变体的CD33细胞表面下调

实施例6：CD33抗体与CD33配体竞争与CD33结合的能力的表征

此实施例的目的是测试CD33抗体是否可识别CD33上的配体结合位点并且与结合在CD33受体上的配体竞争。

根据标准方案(Kelm等人,Current Biology,1994)，使用红细胞(RBC)固体粘附测定评价亲和力成熟抗体AB-64.1及其两种变体AB-64.1.2和AB-64.1.8与CD33配体竞争与CD33结合的能力。红细胞高度装饰有含糖蛋白的唾液酸；因此利用抗体阻断RBC与固定化CD33结合的能力来测定配体干扰。简言之，用5μg/mL CD33-Fc将96孔Immunolon板涂覆过夜，接着用PBS洗涤并且用结合缓冲液(含有0.25％BSA和1mM CaCl₂的PBS)封闭1小时。添加CD33抗体并且在室温下在温和摇动下孵育1小时。在将未结合的抗体除去后，将RBC以3.0×10⁶个细胞/mL添加至每一孔并且在室温下孵育1小时。接着通过用PBS洗涤3次小心地将未结合的RBC除去，之后将水添加至每一孔以诱导结合RBC的低渗溶解。将板转移至-80℃达10分钟，之后37℃达15分钟。通过添加TMB将结合的RBC的定量测量为过氧化物酶活性，之后添加2N硫酸以终止反应。在450nm下检测信号。数据计算为在抗体不存在下RBC结合至板结合的CD33-Fc的百分比。结果示于图3中。

实施例7：Fc区对内化CD33抗体的影响的表征

此实施例的目的是评价Fc对CD33抗体在体外和体内降低原代骨髓细胞上CD33的细胞表面水平的能力的影响。

抗体的Fc区可与细胞表面上表达的Fcγ受体相互作用，并且内源性表达CD33的骨髓细胞也表达多种Fcγ受体。因此，测试抗体Fc与细胞表面Fcγ受体之间不同人IgG同种型相互作用的效应、抗体的聚集能力和对抗体内化受体能力的影响。

产生含有AB-64.1可变区和不同人IgG变体的抗体。所测试的Fc包括IgG1，其结合所有的Fcγ受体；IgG1 SELF，其含有S267E和L328F突变并且展现增强的与CD32B和CD32A的R131变体的结合；IgG2，其仅显示与CD32A的实质结合；IgG1 LALAPS，其含有L234A、L235A和P331S突变；以及IgG1 N297A。后两种Fc变体展现对任一Fcγ受体的极少结合或不展现结合。根据实施例1中所述的方法，评价所有5种抗体降低原代人树突细胞上细胞表面CD33水平的能力。数据示于图4中，并且表19总结抗体的半最大有效浓度(EC₅₀)和最大CD33下调。

表19：AB-64.1的Fc变体的CD33细胞表面下调

所测试的所有Fc变体均降低CD33的水平，EC₅₀在彼此的2倍内。此外，人IgG1、人IgG2和人IgG1 SELF展现类似的CD33最大减少。出人意料地，不结合至Fcγ受体的两种Fc展现基本上降低的最大受体下调，从而表明一些Fcγ受体相互作用对于原代人树突细胞上细胞表面CD33水平的最大降低是必需的。

还评价了AB-64.1Fc变体在体内降低骨髓细胞上CD33水平的能力。在一组实验中，使用人源化NSG小鼠(hu-NSG)。所述小鼠植入人CD34+造血干细胞(购自JacksonLaboratory)，并且在植入后16周使用。在第0天以10mg/kg向小鼠施用AB-64.1 huIgG1、AB-64.1huIgG2、AB-64.1 huIgG1 LALAPS或对照抗体的单一腹膜内注射，并且在第1天(给药后24小时)、第6天、第14天和第21天收集血液样品并处理以用于FACS分析。

简言之，首先将血液样品于ACK溶解缓冲液中孵育5分钟以溶解红细胞，并且接着用冷FACS缓冲液(PBS,2％FBS,2mM EDTA)充分洗涤。将此程序重复两次。接着使细胞于冷FACS缓冲液中在抗人CD45-APC-Cy7、抗小鼠CD45-FITC、抗人CD3-PE-Cy7、抗人CD14-Pacific Blue、抗人CD11b-PerCP-Cy5.5、抗CD33-PE、抗Siglec-7-APC和活力染料(ThermoFisher，目录号L34957)存在下于冰上在Fc封闭溶液存在下孵育30分钟，并且接着用冷FACS缓冲液洗涤两次。用于PBS中的4％多聚甲醛固定细胞。在BD FACS Fortessa细胞计数器(Becton Dickinson,San Jose,CA)上获得染色的细胞，并且利用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。在huCD45⁺huCD14⁺细胞群体上测定CD33表达水平，并且将CD33水平标准化至来自给药对照抗体的小鼠的样品。

在施用单一剂量的AB-64.1 huIgG1、AB-64.1 huIgG2或AB-64.1 huIgG1 LALAPS的hu-NSG小鼠中，所有组中循环骨髓细胞上的CD33水平均在24小时内基本上降低，如图5中所示。在AB-64.1 huIgG1、AB-64.1 huIgG2或AB-64.1 huIgG1 LALAPS组之间CD33水平无统计学差异，并且CD33的减少维持至少2周。至第21天，所有组中的CD33水平均已恢复至对照水平。

在一组单独实验中，在人CD33转基因免疫活性C57BL/6小鼠中评价AB-64.1Fc变体在体内降低免疫细胞上CD33水平的能力。所述小鼠在骨髓细胞上表达人CD33，其表达水平与人免疫细胞上所观察到的程度类似。在第0天以10mg/kg向小鼠施用AB-64.1 huIgG1、AB-64.1 huIgG2、AB-64.1 huIgG1 LALAPS或对照抗体的单一腹膜内注射，并且在第1天(给药后24小时)、第3天和第6天收集血液样品并处理以用于FACS分析。在第21天处死小鼠，并且加工血液和脾以用于FACS分析。

简言之，首先将血液样品于ACK溶解缓冲液中孵育5分钟以溶解红细胞，并且接着用冷FACS缓冲液(PBS,2％FBS,2mM EDT A)充分洗涤。将此程序重复两次。将脾样品压碎通过细胞过滤器(cell strainer)，并且接着用ACK溶解缓冲液溶解红细胞，之后用冷FACS缓冲液充分洗涤。接着使细胞于冷FACS缓冲液中在抗小鼠CD3-Pacific Blue、抗小鼠-NK1.1-APC-Cy7、抗小鼠-CD11b-PerCP-Cy5.5、抗小鼠-Gr1-PE-Cy7、抗CD33-PE、抗Siglec-7-APC和活力染料(Ther moFisher，目录号L34957)存在下于冰上在Fc封闭溶液存在下孵育30分钟，并且接着用冷FACS缓冲液洗涤两次。用于PBS中的4％多聚甲醛固定细胞。在BD FACSFortessa细胞计数器(Becton Dickins on,San Jose,CA)上获得染色的细胞，并且利用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。在小鼠CD11b⁺小鼠Gr1⁺细胞群体上测定CD33表达水平，并且将CD33水平标准化至来自给药对照抗体的小鼠的样品。

在施用单一剂量的AB-64.1 huIgG1、AB-64.1 huIgG2或AB-64.1 huIgG1 LALAPS的人CD33转基因小鼠中，循环骨髓细胞上的CD33水平在24小时内基本上降低，如图6A中所示。在给药CD33抗体的各组之间降低程度类似。至第6天，所有组中的循环骨髓细胞上的CD33水平均已恢复至对照水平。相比之下，在第21天，虽然循环血液细胞上的CD33水平处于对照水平，但与对照处理的小鼠相比，脾骨髓细胞上的CD33受体水平基本上降低，如图6B中所示。因此，组织驻留免疫细胞上CD33表达的恢复似乎慢于循环细胞上的CD33表达，从而表明组织驻留细胞上CD33的更新较慢。

虽然具有极少或不具Fcγ受体结合的Fc变体在体外不太能降低原代人树突细胞上的CD33水平，但在体内，在表达人和小鼠Fcγ受体二者的人源化小鼠和在仅表达小鼠Fcγ受体的人CD33转基因免疫活性小鼠二者中，huIgG1 LALAPS使CD33水平降低的程度与能够Fcγ受体结合的同种型类似。

实施例8：具有不同Fc变体的CD33抗体的ADCC活性

此实施例的目的是评价AB-64.1抗体的Fc变体在CD33表达细胞上诱导ADCC(抗体依赖性细胞细胞毒性)的能力。已显示ADCC高度依赖于抗体的Fc区与效应细胞上所表达的Fcγ受体之间的相互作用。

评价AB-64.1抗体的四种不同人Fc变体的ADCC：野生型IgG1、IgG2、IgG1 SELF和IgG1 LALAPS。使用两种不同靶标细胞系HL60细胞和U937细胞测试ADCC。HL60和U937细胞二者均表达CD33，其中U937细胞表达CD33的程度高于HL60细胞(数据未示出)。根据制造商的说明书，使用ADCC Reporter Bioassay(Promega)，使用三种不同的效应物:靶标比率6:1、10:1和25:1来进行ADCC测定。简言之，首先用10μg/ml抗体调理靶细胞，之后添加效应细胞并且在37℃和5％CO₂下孵育6小时。通过添加荧光素酶测定试剂量化ADCC活性，并且在亮度计(Biotek)上读板。WO2012/045752中所公开的CD33抗体(克隆280-31-01(mut))作为阳性对照纳入分析中，其已显示具有强效ADCC活性。来自ADCC测定的结果示于图7中。

在HL60细胞和U937细胞二者上并且在所有三种效应物:靶标比率下，阳性对照抗体均诱导ADCC。在AB-64.1Fc变体抗体中，仅野生型人IgG1 Fc诱导任何统计学上显著的ADCC增加，但仅在表达较高的细胞系U937上并且仅在较高的E:T比率下，并且所诱导的ADCC值小于2倍背景。因此，AB-64.1诱导极少ADCC或不诱导ADCC。

实施例9：具有不同Fc变体的CD33抗体的CDC活性

此实施例的目的是评价AB-64.1抗体的Fc变体在CD33表达细胞上诱导CDC(补体依赖性细胞毒性)的潜力。CDC通过经抗体调理的靶标起始，所述抗体可通过其Fc区有效结合并且使补体活化。因此，抗体诱导CDC的能力取决于其同种型：人IgG1和IgG1 SELF通常能够诱导CDC，而IgG2和IgG1 LALAPS在诱导CDC方面通常较弱。

评价AB-64.1抗体的5种不同Fc变体诱导CDC的潜力：野生型人IgG1、人IgG2、人IgG1 SELF、人IgG1 LALAPS和人IgG1 N297A。通过测量CD33表达细胞系U937上的补体活化(C3b沉积)来测试CDC潜力。简言之，使U937细胞与10μg/ml CD33或对照抗体一起在冰上孵育30分钟。以20％的终浓度添加合并的补体人血清(Innovative Research)，并且使细胞在37℃下孵育2小时。将细胞用冷FACS缓冲液(PBS,2％FBS,2mM EDTA)洗涤一次并且接着与抗C3b-APC和活力染料(ThermoFisher，目录号L34957)一起于冰上在Fc封闭溶液存在下孵育30分钟。将细胞用冷FACS缓冲液洗涤两次并且接着用于PBS中的4％多聚甲醛固定。在BDFACS Fortessa细胞计数器(Becton Dickinson,San Jose,CA)上获得染色的细胞，并且利用FlowJo软件(Ashland OR)分析数据。通过U937细胞上C3b的MFI测定C3b沉积程度并且将沉积标准化至来自用对照抗体处理的细胞的样品。结果示于图8中。

令人惊讶地，在所测试的AB-64.1变体中，仅IgG1N297A同种型诱导相对于对照处理样品显著增加的补体活化。IgG1和IgG1 SELF同种型均不诱导高于背景值的CDC活性。因此，AB-64.1诱导极少CDC或不诱导CDC。

实施例10：利用CD33内化抗体下调脑小神经胶质细胞上的CD33水平

此实施例的目的是测试CD33抗体降低脑中小神经胶质细胞上CD33水平的能力。

产生人IgG2Fc的AB-64.1.2抗体(AB-64.1.2-huG2)并且评价其下调如实施例7中所述的人CD33转基因小鼠中脑小神经胶质细胞上和循环细胞上CD33的能力。这些小鼠也是人Siglec-7转基因小鼠。在第0天，向小鼠施用单一剂量的AB-64.1.2-huG2(2mg/kg、10mg/kg或40mg/kg)或对照抗体(40mg/kg)，并且在第1天、第3天、第6天、第10天、第14天、第20天和第28天处死小鼠并且收获血液和脑以用于通过流式细胞术分析。

将脑置入HBSS中并且用杜恩斯均质器(dounce homogenizer)机械解离，之后添加Percoll(GE Healthcare)至30％。使悬浮液在70％Percoll层上分层并且在550g下离心30分钟。从两相的界面收获富集的小神经胶质细胞，接着于HBSS中洗涤并且用抗小鼠CD11bPacific Blue(BioLegend)、抗小鼠CD45 PE-Cy7(eBioscience)、抗人CD33 PE(eBioscience)、抗人Siglec-7 APC(BioLegend)和活力染料在Fc封闭液存在下染色，接着通过流式细胞术进行分析。小神经胶质细胞被门控为CD45^intCD11b⁺细胞。处死时将血液收集于肝素化管中并且在4℃下以2,000g离心10分钟。通过涡旋将细胞团块重新悬浮于含有3mM EDTA的PBS中，之后于冰上用1mL ACK缓冲液将红细胞溶解10分钟，之后在500g下离心10分钟。将细胞用抗小鼠CD11b Pacific Blue、抗小鼠Gr1 PE-Cy7(BioLegend)、抗小鼠Ly6G APC(BioLegend)、抗小鼠Ly6C AF488(BioLegend)、抗人CD33 PE、抗人Siglec-7 APC和活力染料在Fc封闭液存在下染色，并且通过流式细胞术进行分析。嗜中性粒细胞被门控为CD11b^高Ly6G⁺细胞，并且单核细胞被门控为Ly6C^高Ly6G^-CD33⁺细胞。结果示于图9A-9D中。

施用2mg/kg、10mg/kg或40mg/kg单一剂量的AB-64.1.2-huG2导致在给药后24小时内(第1天)小神经胶质细胞上的CD33显著减少。在10mg/kg和40mg/kg下观察到最显著的效应，其中在第1天几乎检测不到小神经胶质细胞上的CD33水平(图9A)。在40mg/kg剂量组中，CD33的显著下调持续至第28天，而在10mg/kg组中，受体水平保持较低直至第14天，然后至第28天恢复至对照水平。以2mg/kg给药导致CD33表达降低，但较更高剂量效应更温和并且更短暂。在任何剂量值下，抗体对小神经胶质细胞上的人Siglec-7水平均无效应(图9B)。在循环嗜中性粒细胞上，以2mg/kg、10mg/kg或40mg/kg施用AB-64.1.2-huG2导致在给药后1天CD33下调大约50％(图9C)。在循环单核细胞上，在所有三个给药组中，CD33水平在第1天几乎完全消融(图9D)。因此，在循环嗜中性粒细胞和单核细胞上，在所测试的最低剂量2mg/kg下观察到最大下调。在两种细胞类型上，在40mg/kg组中CD33受体水平保持较低直至第28天，在10mg/kg组中CD33水平至第28天恢复至对照水平，并且在2mg/kg组中CD33下调更瞬时。因此，单核细胞和嗜中性粒细胞上CD33下调的持久性展现剂量反应效应，并且与小神经胶质细胞上所观察到的效应类似。

这些结果证实AB-64.1.2-huG2有力地降低脑中小神经胶质细胞和循环CD33表达细胞二者上的CD33表达。在小神经胶质细胞上在10mg/kg剂量下观察到最大CD33下调的观察结果出人意料，因为仅约0.1％的循环抗体穿过血脑屏障(Pudoslo等人,PNAS1994)。这些结果突出此抗体下调CD33的功效。这种抗体使CD33的CD33下调的持久性也令人惊讶，因为在10mg/kg或40mg/kg的单一剂量之后，小神经胶质细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞上的CD33水平至少分别在14天或28天内未恢复。相比之下，在用亲本抗体AB-64.1以10mg/kg处理的所述相同小鼠中，在给药后，循环CD33⁺细胞上的CD33下调持续少于6天(图6A)。因此，不影响亲和力的额外氨基酸修饰可影响体内抗体使CD33下调的持久性。

序列

除非另有注明，否则所有多肽序列均呈N末端至C末端。

亲本小鼠抗体重链可变区：

亲本小鼠抗体轻链可变区：

受体基序：

IGg2的CH1和铰链区：

AB-64.1 huIgG1全长抗体序列：

重链：

/>

轻链：

AB-64.1.2 huIgG1全长抗体序列

重链：

/>

轻链：

AB-64.1.8 huIgG1全长抗体序列

重链：

/>

轻链：

AB-64.1 huIgG2全长抗体序列

重链：

轻链：

AB-64.1.2 huIgG2全长抗体序列

重链：

轻链：

/>

AB-64.1.8 huIgG2全长抗体序列

重链：

轻链：

AB-64.1 huIgG1 LALAPS全长抗体序列

重链：

/>

轻链：

AB-64.1.2 huIgG1 LALAPS全长抗体序列

重链：

/>

轻链：

AB-64.1.8 huIgG1 LALAPS全长抗体序列

重链：

/>

轻链：

本公开涉及下述实施方案。

1.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:152)的序列，其中X₁是Y、A或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N；

HVR-H2，所述HVR-H2包含根据式II：FIYPX₁NX₂IX₃G(SEQ ID NO:153)的序列，其中X₁是S或A，X₂是G、Q、R或V，并且X₃是T或R；以及

HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:154)的序列，其中X₁是T、D、F或S，并且X₂是Y、D或L；并且

其中所述抗体不是包含含有以下各项的重链可变区的抗体：HVR-H1，所述HVR-H1包含GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列；HVR-H2，所述HVR-H2包含FIYPSNGITG(SEQ IDNO:115)的序列；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列。

2.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含：

HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ ID NO:155)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T或A；

HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:156)的序列，其中X₁是A、V或E，X₂是S、V或F，X₃是N、A、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E、G或N；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E；并且其中所述抗体不是包含含有以下各项的轻链可变区的抗体：HVR-L1，所述HVR-L1包含RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列；HVR-L2，所述HVR-L2包含YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列。

3.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

所述轻链可变区包含：

HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:156)的序列，其中X₁是A、V或E，X₂是S、V或F，X₃是N、A、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E、G或N；以及

HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E；并且

其中所述抗体不是包含以下的抗体：重链可变区，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2和含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2和含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。

4.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表9A至表9C中所示)。

5.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8(如表10A至表10C中所示)。

6.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表9A至表9C中所示)；并且所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8(如表10A至表10C中所示)。

7.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和含有HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述抗体包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表9A至表9C和表10A至表10C中所示)。

8.如实施方案1-7中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自VH FR1、VHFR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：

VH FR1包含根据式VII：

QVQLVQSGAEVKKPGX₁SVKX₂SCKAS(SEQ ID NO:158)的序列，其中X₁是A或S，并且X₂是V或I；

VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；

VH FR3包含根据式VIII：

X₁AX₂X₃X₄X₅X₆RX₇TX₈TVDX₉X₁₀X₁₁STX₁₂YMELSSLRSEDTA VYYCAR(SEQ ID NO:159)的序列，其中X₁是Y或S，X₂是Q或E，X₃是K或D，X₄是F或D，X₅是Q、F、E或T，X₆是G、D或H，X₇是V或A，X₈是M或L，X₉是T、N或Q，X₁₀是S或P，X₁₁是T或A，并且X₁₂是V或A；并且

VH FR4包含根据式IX：WGQGTLX₁TVSS(SEQ ID NO:160)的序列，其中X₁是V或L；并且/或者

所述轻链包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：

VL FR1包含根据式X：

X₁IX₂X₃TQSPX₄SLX₅X₆SX₇GX₈RX₉TIX₁₀C(SEQ ID NO:161)的序列，其中X₁是D或G，X₂是Q或V，X₃是M或L，X₄是S或D，X₅是S、P或A，X₆是A或V，X₇是V或L，X₈是D或E，X₉是V或A，并且X₁₀是T、N或D；

VL FR2包含根据式XI：WYQQKPGX₁X₂PKLLIK(SEQ ID NO:162)的序列，其中X₁是K或Q，并且X₂是A或P；

VL FR3包含根据式XII：GVPX₁RFSGSGSGTDFTLTISSLQX₂EDX₃AX₄YYC(SEQ ID NO:163)的序列，其中X₁是S或D，X₂是P或A，X₃是F、L或V，并且X₄是T或V；并且

VL FR4包含根据式XIII：

FGQGTKLEIX₁(SEQ ID NO:164)的序列，其中X₁是K或E。

9.如实施方案1-8中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自VH FR1、VHFR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：

VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列；

VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；

VH FR3包含选自由SEQ ID NO:6-19组成的组的序列；并且

VH FR4包含选自由SEQ ID NO:20-21组成的组的序列；并且/或者

VL FR1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列；

VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列；

VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列；并且

VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。

10.如实施方案1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77-101组成的组的氨基酸序列。

11.如实施方案10所述的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表13中所示)；并且/或者所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表14中所示)。

12.如实施方案1-11中任一项所述的抗体，其中：

(a)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ IDNO:146)；或者

(b)所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ IDNO:146)。

13.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：

(a)所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ IDNO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)；或者

(b)所述重链包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)。

14.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77-101组成的组的氨基酸序列。

15.如实施方案14所述的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表13中所示)；并且/或者所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表14中所示)。

16.如实施方案14或实施方案15所述的抗体，其中：

(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，并且/或者所述轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列；或者

(b)所述重链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列，并且/或者所述轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。

17.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:77、86和102组成的组的氨基酸序列。

18.如实施方案17所述的抗体，其中所述抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的重链可变区(如表13中所示)；并且/或者所述抗体包含抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65或AB-H66的轻链可变区(如表14中所示)。

19.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

HVR-H1，所述HVR-H1包含根据式I：GX₁X₂X₃TDYNX₄H(SEQ ID NO:186)的序列，其中X₁是Y或V，X₂是T或A，X₃是F、E或H，并且X₄是L、F、Y或N；

HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:187)的序列，其中X₁是T、D或F，并且X₂是Y、D或L；并且

其中所述轻链可变区包含：

HVR-L1，所述HVR-L1包含根据式IV：X₁X₂SQX₃VX₄X₅STYSYMH(SEQ ID NO:188)的序列，其中X₁是R或K，X₂是A、G或V，X₃是S或D，X₄是S、G或H，并且X₅是T；

HVR-L2，所述HVR-L2包含根据式V：YX₁X₂X₃X₄X₅S(SEQ ID NO:189)的序列，其中X₁是A或E，X₂是S或F，X₃是N、Y或F，X₄是L或V，并且X₅是E或N；以及

HVR-L3，所述HVR-L3包含根据式VI：X₁HSX₂X₃X₄PLX₅(SEQ ID NO:157)的序列，其中X₁是Q或E，X₂是W或E，X₃是E或A，X₄是I或L，并且X₅是T或E。

20.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

HVR-H1，所述HVR-H1包含选自由SEQ ID NO:105和108-114组成的组的氨基酸序列；

HVR-H2，所述HVR-H2包含选自由SEQ ID NO:115-120组成的组的氨基酸序列；以及

HVR-H3，所述HVR-H3包含选自由SEQ ID NO:121-123和125-126组成的组的氨基酸序列；并且

所述轻链可变区包含：

HVR-L1，所述HVR-L1包含选自由SEQ ID NO:127-128和130-134组成的组的氨基酸序列；

HVR-L2，所述HVR-L2包含选自由SEQ ID NO:135和140-145组成的组的氨基酸序列；以及

HVR-L3，所述HVR-L3包含选自由SEQ ID NO:146-151组成的组的氨基酸序列。

21.如实施方案19或实施方案20所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自VHFR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：

VH FR1包含根据式VII：

VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；

VH FR3包含根据式VIII：

VL FR1包含根据式X：

VL FR3包含根据式XII：

GVPX₁RFSGSGSGTDFTLTISSLQX₂EDX₃AX₄YYC(SEQ ID NO:163)的序列，其中X₁是S或D，X₂是P或A，X₃是F、L或V，并且X₄是T或V；并且

VL FR4包含根据式XIII：FGQGTKLEIX₁(SEQ ID NO:164)的序列，其中X₁是K或E。

22.如实施方案19-21中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自VHFR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：

VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列；

VH FR2包含SEQ ID NO:5的序列；

VH FR3包含选自由SEQ ID NO:6-19组成的组的序列；并且

VH FR4包含选自由SEQ ID NO:20-21组成的组的序列；并且/或者

VL FR1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列；

VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列；

VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列；并且

VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。

23.如实施方案19-22中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含VH FR3，所述VH FR3包含选自由SEQ ID NO:12-15组成的组的序列。

24.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:38和40-72组成的组的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:86-101组成的组的氨基酸序列。

25.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ IDNO:65的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区、含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区或含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区。

26.如实施方案1-25中任一项所述的抗体，其中所述抗体为IgG类、IgM类或IgA类。

27.如实施方案26所述的抗体，其中所述抗体为所述IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

28.如实施方案27所述的抗体，其中所述抗体具有IgG4同种型，并且其中所述抗体包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代和在残基位置235处的L235A氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。

29.如实施方案27所述的抗体，其中所述抗体包含在Fc区中在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y以及它们的任何组合，其中残基的编号是根据EU或Kabat编号。

30.如实施方案29所述的抗体，其中：

(a)所述Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(b)所述Fc区包含位置L243A、L235A和P331A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(c)所述Fc区包含位置L243A、L235A、P331A和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(d)所述Fc区包含位置K322A和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(e)所述Fc区包含位置P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(f)所述Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(g)所述Fc区包含位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(h)所述Fc区包含位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(i)所述Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(j)所述Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(k)所述Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(l)所述Fc区包含位置C127S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；

(m)所述Fc区包含位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号；或者

(n)所述Fc区包含位置L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号是根据EU编号。

31.如实施方案1-30中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是哺乳动物蛋白质或人蛋白质。

32.如实施方案1-31中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是野生型蛋白质。

33.如实施方案1-31中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是天然存在的变体。

34.如实施方案1-33中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞以及人小神经胶质细胞。

35.如实施方案1-34中任一项所述的抗体，其中所述抗体特异性地结合至人CD33蛋白。

36.如实施方案1-35中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合至表位的抗体片段，所述表位包含人CD33或哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基。

37.如实施方案1-35中任一项所述的抗体，其中所述抗体是结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白质的抗体片段：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。

38.如实施方案36或实施方案37所述的抗体，其中所述抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段结合至选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白质：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。

39.如实施方案36-38中任一项所述的抗体，其中所述片段是Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv或scFv片段。

40.如实施方案1-39中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。

41.如实施方案1-40中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。

42.如实施方案1-40中任一项所述的抗体，其中所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。

43.如实施方案42所述的抗体，其中所述第一抗原是CD33并且所述第二抗原是：

(a)促进跨血脑屏障转运的抗原；

(b)选自由以下组成的组的促进跨血脑屏障转运的抗原：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽、聚精氨酸肽、血管肽以及ANG1005；

(c)选自由致病肽或蛋白质和致病核酸组成的组的致病因子，其中所述致病肽或蛋白质是选自由以下组成的组：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽，并且所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；

(d)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质是选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体和磷脂酰丝氨酸；以及

(e)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖酯。

44.如实施方案1-43中任一项所述的抗体，其中所述抗体与特异性地结合选自由以下组成的组的致病因子的一种或多种抗体组合使用：致病肽、致病蛋白质、淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、朊病毒蛋白、PrPSc、亨庭顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复序列(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复序列肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复序列肽、泛素和脯氨酸-精氨酸(PR)重复序列肽以及它们的任何组合；或与结合选自由以下组成的组的免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合使用：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA以及它们的任何组合。

45.如实施方案1-44中任一项所述的抗体，其中所述抗体对人CD33的解离常数(K_D)比包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少4倍；比包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1倍；或比包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1倍，其中所述K_D通过表面等离子体共振来测定。

46.如实施方案1-44中任一项所述的抗体，其中所述抗体对人CD33的解离常数(K_D)在约2nM至约200pM的范围内或小于约200pM，并且其中所述K_D通过生物层干涉术来测定。

47.如实施方案1-46中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低CD33的细胞表面水平。

48.如实施方案47所述的抗体，其中所述CD33在人树突细胞的表面上表达。

49.如实施方案47或实施方案48所述的抗体，其中所述抗体降低体外CD33的细胞表面水平。

50.如实施方案47-49中任一项所述的抗体，其中所述抗体以小于150pM的半最大有效浓度(EC₅₀)降低体外CD33的细胞表面水平，如通过流式细胞术所测量。

51.如实施方案47-50中任一项所述的抗体，其中所述抗体以比包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少50％；比包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10％；比包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10％；或比包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少10倍的EC₅₀降低体外CD33的细胞表面水平，如通过流式细胞术所测量。

52.如实施方案1-51中任一项所述的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争结合至CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66以及它们的任何组合。

53.如实施方案1-51中任一项所述的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的抗体结合基本上相同的CD33表位：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65以及AB-H66。

54.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含

(a)包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(b)包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(c)包含SEQ ID NO:177的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(d)包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(e)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(f)包含SEQ ID NO:199的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(g)包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(h)包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(i)包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(j)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(k)包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(l)包含SEQ ID NO:202的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(m)包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(n)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(o)包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(p)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；

(q)包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链；或

(r)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。

55.一种分离的核酸，所述核酸包含编码如实施方案1-54中任一项所述的抗体的核酸序列。

56.一种载体，所述载体包含如实施方案55所述的核酸。

57.一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含如实施方案56所述的载体。

58.一种产生结合至CD33的抗体的方法，所述方法包括培养如实施方案57所述的细胞，以使得产生所述抗体。

59.如实施方案58所述的方法，所述方法还包括回收由所述细胞产生的所述抗体。

60.一种结合至CD33的分离的抗体，所述抗体通过如实施方案58或实施方案59所述的方法产生。

61.一种药物组合物，所述药物组合物包含如实施方案1-54中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。

62.一种预防疾病、病症或损伤，降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、tau蛋白病、感染以及癌症，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的如实施方案1-54中任一项所述的抗体。

63.如实施方案62所述的方法，其中所述疾病、病症或损伤是癌症。

64.如实施方案62或实施方案63所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)以及多发性骨髓瘤。

Claims

HVR-H3，所述HVR-H3包含根据式III：SX₁VDYFDX₂(SEQ ID NO:154)的序列，其中X₁是T、D、F或S，并且X₂是Y、D或L；并且/或者

所述轻链可变区包含：

2.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14或AB-64.1.15(如表9A至表9C中所示)；并且/或者，所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7或AB-64.8(如表10A至表10C中所示)。

3.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：

(a)所述重链可变区包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)；或者

(b)所述重链包含HVR-H1，所述HVR-H1包含氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)；HVR-H2，所述HVR-H2包含氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)；以及HVR-H3，所述HVR-H3包含氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)，并且所述轻链可变区包含HVR-L1，所述HVR-L1包含氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)；HVR-L2，所述HVR-L2包含氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)；以及HVR-L3，所述HVR-L3包含氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ IDNO:146)。

4.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

其中所述轻链可变区包含：

5.一种结合至CD33蛋白的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：

所述轻链可变区包含：

6.一种分离的核酸，所述核酸包含编码如权利要求1-5中任一项所述的抗体的核酸序列。

7.一种载体，所述载体包含如权利要求6所述的核酸。

8.一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求7所述的载体。

9.一种产生结合至CD33的抗体的方法，所述方法包括培养如权利要求8所述的细胞，以使得产生所述抗体。

10.一种预防疾病、病症或损伤，降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、tau蛋白病、感染以及癌症，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的如权利要求1-5中任一项所述的抗体。