UA112062C2 - Cd33-зв'язувальний агент - Google Patents

Abstract

Винахід належить до CD33-зв′язувального агента, який специфічно зв´язується із епітопом, який має амінокислотну послідовність FFHPIPYYDKNSPVHGYW (SEQID NO: 141) людського CD33, фармацевтичної композиції та способу одержання та застосування CD-33-зв′язувального агента.

Description

Галузь техніки, до якої належить винахід

Даний винахід належить до імунотерапій, заснованих на виснаженні мієлоїдних клітин.

Зокрема, даний винахід належить до СОЗЗ3-зв'язуючим агентам, призначеним для застосування в зазначених терапіях, наприклад, для лікування пов'язаних з мієлоїдними клітинами злоякісних захворювань і мієлодиспластичного синдрому (МДС).

Передумови створення винаходу

На початку 1980-их років СОЗЗ був ідентифікований в якості маркера мієлоїдних лейкозів (Апагему5 та ін., Віосй 62, 1983, сс. 24-132). СО3З3 являє собою присутній на клітинній поверхні антиген, специфічно експресуємий на мієлоїдних клітинах, включаючи мієлоїдні лейкозні клітини. Він є найменшим представником сімейства сіглеків (що зв'язують сіалову кислоту родинні Ід лектини). СОЗЗ експресується на ранніх мультилінійних гематопоетичних клітинах- попередниках і мієломоноцитарних клітинах-попередниках. Він відсутній на плюріпотентих гематопоетичних стволових клітинах (Апагему/: і ін., хоигпаї! ої Ехрегітепіа! Меадісіпе 169, 1989, сб. 1721-1731, 1989). Встановлено, що він піддається понижувальній регуляції на зрілих гранулоцитах, але зберігається на макрофагах, моноцитах і дендритних клітинах (Апагем/5 та ін., Віоса 62, 1083, сс. 24-132). Встановлено, що СОЗЗ3 експресується крім мієломоноцитарних клітин також і на людських тучних клітинах і базофілів крові (Маїепі та ін., Віоса 15; 73 (7), 1989, сс. 1778-1785). Моноклональні антитіла до СОЗЗ3 застосовують для діагностування лейкозу, а також для цілеспрямованої терапії та іп міо для очищення кісткового мозку при аутологічній трансплантації при гострому мієлоїдному лейкозі (ГМЛ) (Оци2КаІє та ін., Віої Віооа Ма!тохм/

Тгапзріапі. 9 (6), 2003, сс. 364-372). Перші спроби при створенні цілеспрямованої терапії були сфокусовані на розробці імунотоксинів з використанням антитіла до СОЗ33, кон'югованого з токсином рицину. Підхід, заснований на застосуванні імунотоксинів, був очевидний у зв'язку з швидкою інтерналізацією СОЗЗ при зв'язуванні з антитілом (Ацагап та ін., / Іттипої! Меїпос5. 18811), 1995, сс. 147-154).

СО33 являє собою трансмембранний глікопротеїн з молекулярною масою 67 кдДа.

Зв'язуючий сіалову кислоту позаклітинний домен СОЗ3 бере участь у адгезії за типом клітина- клітина. Внутрішньоклітинні імунорецепторні тирозинзалежні інгібіторні мотиви (ІТІМ) передають інгібіторні сигнали клітині, впливаючи на проліферацію і виживання клітини. Фактичні шляхи передачі сигналів СОЗЗ мало вивчені, але ймовірно, вони включають ІТІМ і ІТІМ-подібні мотиви і рекрутмент тірозінфосфатаз (моп Сипіеп та ін, Апп. МУ Асай. зЗсі. 1143, 2008, сс. 61-82).

Ідентифікований мишачий Ортолог СОЗ3, але його функціональна сумісність з лодським СОЗЗ є спірною (ВгіпКктап-Мап аег Гіпдеп та ін, Мо! Сей ВіоїЇ.,, 23 (12), 2003, сс. 4199-4206).

Функціональна роль людського СОЗЗ3 на здорових і злоякісних лейкоцитах залишається невідомою.

У кількох публікаціях СОЗЗ3 описаний в якості стабільного маркера клітинної поверхні на первинних ГМЛ-ї ХМЛ-клітинах, що експресується у 70-100 95 тестованих пацієнтів (Ріеза та ін,

Сапсег 112 (3), 2007, сс. 572-580; Наийвзмі та ін, Еиг У Сіїп Іпме5і., январь 2007, сс. 73-82;

Ззспеіпрегу та ін, ІеиКетіа, т. З, 1989, сс. 4440-4453. СОЗ33 експресується на злоякісних мієлоїдних бластних клітинах, які являють собою основні злоякісні клітини в периферичній крові та кістковому мозку пацієнтів які страждають на лейкоз, і на лейкозних стволових клітинах, відносно невеликий групі менш диференційованих клітин у кістковому мозку, які відрізняються притаманною їм здатністю до самовідновлення і підтримці лейкозної клональної ієрархії.

Виснаження лейкозних стволових клітин вважається ключовим механізмом забезпечення тривалого вільного від пухлини виживання. Імунотоксин, що надає спрямований вплив на СОЗЗ

Муїоїага?, гуманізоване антитіло ізотипу 954, кон'югованого з токсином халіцеаміціном, застосовують для лікування страждаючих ГМЛ пацієнтів шляхом доставки цього токсичного "корисного вантажу" до СЮОЗЗ-позитивним ГМЛ-клітинам (Атадогі та ін, Сапсег Тгеаї Кем. 34 (1), 2008, сс. 49-60). Лінтузумаб (505М-33, НиМ195), "голе" СОЗ33-специфічне гуманізоване моноклональне антитіло, оцінювали на фазі ІІ клінічних випробувань для лікування ГМЛ і МДС, з урахуванням опублікованих початкових даних про клінічних ознаках ефективності, встановлених на фазі І в досліді з зростаючими дозами, і наявності переносимих небажаних явищ (Кала та ін, реферат Мо 983, 14-ий конгрес ЕНА, 4-7 червня 2009).

Спрямований вплив на клітинні лінії ГМЛ СОЗЗ3-специфічного НимМм195 іп міго призводило до зниження індукованої ТМЕ-а секреції запальних цитокінів типу ІІ -8, МСР-1 і КАМТЕ5 (ЗйПпепгапа та ін, Марзе 1:5, 2009, сс. 481-490). Придатність цього явища для терапії ГМЛ залишається невідомим, але модуляція цитокінового середовища в мікрооточенні пухлини може впливати на терапевтичну ефективність антитіла. Крім того, антитіло індукує антитіло-обумовлену клітинозалежну цитотоксичність (АЮСС) і антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз 60 (АОСР) клітинних ліній ГМЛ іп міго (Зйіпепапа та ін, Мабз 1,5, 2009, сс. 481-490). Вважається,

що АОСС є таким, що має вирішальне значення механізмом протипухлинної активності антитіл при гематологічних злоякісних захворюваннях. Дані, отримані при клінічних випробуваннях

СбОр20-специфічного моноклонального антитіла ритуксимабу, продемонстрували важливість опосередковуваних ефекторними клітинами механізмів дії для лікування В-клітинних злоякісних захворювань щодо відповіді на лікування антитілом (Умепа і І ему, у Сіїп Опсої. 21 (21), 2003, со. 3940-3947).

Таким чином, було встановлено, що антиген СОЗ3 експресується на здорових клітинах мієломоноцитарної клітинної лінії і часто експресується на пухлинних клітинах при мієлоїдних лейкозах. При проведенні фази І випробувань антитіла до СОЗ33 (Лінтузумаба) виявлені перші свідчення ефективності без серйозних небажаних явищ. Проте вивчення в клінічних умовах лінтузумаба було припинено після того, як на фазі ІЇ випробувань було встановлено, що при застосуванні лінтузумаба у поєднанні з хіміотерапією не вдалося досягти очікуваного підвищення ефективності. Таким чином, очевидно, що існує потреба в розробці вдосконалених шляхів лікування, мішенню якого є СОЗ3.

З існуючого рівня техніки випливає, що існує потреба в розробці більш ефективної терапії злоякісних захворювань, пов'язаних з мієлоїдними клітинами, і МДС, насамперед гострого мієлоїдного лейкозу.

Зокрема, існує потреба у створенні більш ефективних антагоністичних зв'язуючих СЮОЗЗ3 агентів, призначених для лікування раку, насамперед ГМЛ.

Короткий виклад суті винаходу

У даному винаході запропоновані нові СОЗЗ-зв'язуючі агенти, які зв'язуються з людським

СОЗ33 і які відрізняються тим, що вони: а) несуть варіабельну область важкого ланцюга, що містить СОКІ, СОК2 і СОКУ, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить СОК4, СОМ5 і СОКб, де СОМКІ має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 1-14, СОК2 має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 14-28, СОКЗ має амінокислотну послідовність, вибрану з 5едію Мо: 29-42,

СОКА має амінокислотну послідовність, вибрану з ЗедіЮ Мо: 43-56, СОК5 має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 57-70, СОКбЄ має амінокислотну послідовність, вибрану з зедір Мо: 71-84, або

Зо б) розпізнають епітоп, розташований усередині амінокислотної послідовності

ЕРЕНРІРУУОКМЗРУНСУМУ (ЗедіЮ Мо: 141) людського СЮОЗ33.

Даний винахід належить і до СОЗЗ-зв'язуючих агентів, де кінетика інтерналізації СО33- зв'язуючих агентів є такою, що щонайменше 30 956, переважно щонайменше 40 95 початкової кількості антитіла залишається на клітинній поверхні НІ 60-клітин через 4 години після інкубації.

Даний винахід належить і до СОЗ33-зв'язуючих агентів, варіабельна область важкого ланцюга яких містить амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 85-98, і варіабельна область легкого ланцюга яких містить амінокислотну послідовність, вибрану з 5едіЮ Мо: 99-112.

Даний винахід належить і до СОЗ3З-зв'язуючих агентів, важкий ланцюг яких містить амінокислотну послідовність, вибрану з Бедію Мо: 113-126, і легкий ланцюг яких містить амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 127-140.

Даний винахід належить і до СОЗ3З-зв'язуючих агентів, які мають мутації в Ес-області, що підвищують АОС.

Інші переважні варіанти здійснення викладені нижче в описі і формулі винаходу.

Встановлено, що СОЗ3-зв'язуючі агенти, запропоновані в даному винаході, мають високу афінність до людського СОЗЗ і також мають кращу кінетику інтерналізації, що відрізняється тривалою присутністю СОЗ3-зв'язуючих агентів, коли вони пов'язані з СОЗЗ на поверхні клітин- мішеней, що призводить до кращої АОСсС-активності.

При створенні винаходу було встановлено також, що СОЗ33-зв'язуючі агенти, запропоновані в даному винаході, зв'язуються з епітопом позаклітинного домену СОЗ3, відмінним від епітопу, з яким зв'язується лінтузумаб. Не вдаючись в яку-небудь конкретну теорію, можна припустити, що це є причиною відмінності кінетики інтерналізації СОЗЗ-зв'язуючих агентів, пропонованих в даному винаході, і лінтузумаба.

Опис креслень

На кресленнях показано: на фіг. 1-3 - дані про інтерналізацію наведених як приклади СОЗЗ-зв'язуючих агентів, запропонованих у винаході, в порівнянні з лінтузумабом на НІ 60-клітинах; на фіг. 4 - дані про швидкість інтерналізації на НІ 60-клітинах двох наведених як приклад антитіл, запропонованих у винаході, в порівнянні з лінтузумабом; на фіг. 5 - дані про ефективність АЮОСС щодо НІ бО-клітин двох наведених як приклад бо антитіл, запропонованих у винаході, в порівнянні з лінтузумабом.

Детальний опис винаходу

СОЗ33-зв'язуючі агенти

Поняття "зв'язуючий агент" в контексті даного опису належить до білка або пептиду, який специфічно зв'язується з антигеном-мішенню. Зв'язуючий агент може представляти собою, наприклад, антитіло, похідне зазначеного антитіла або інший агент, який специфічно зв'язується з антигеном-мішенню. Зв'язуючий агент може представляти собою також білок, що містить Ем- область або її частина (наприклад, МН або Мі або СОК антитіла, яке специфічно зв'язується з антигеном-мішенню). У переважному варіанті здійснення винаходу зв'язує агент являє собою антитіло.

Поняття "СОЗЗ-зв'язуючий агент" в контексті даного опису відноситься до зв'язуючого агенту, який специфічно зв'язується з СОЗЗ3, як правило, фрагментом позаклітинного домену людського СОЗ33.

Поняття "антитіло" у контексті даного опису відноситься до (а) імуноглобулінових поліпептидів і імунологічно активним фрагментів імуноглобулінових поліпептидів (тобто поліпептидів сімейства імуноглобулінів або їх фрагментів, які містять антигензв'язуючий центр, імуноспецифічно зв'язується зі специфічним антигеном-мішенню), або (б) консервативно зміщенням похідним зазначених імуноглобулінових поліпептидів або їх фрагментів, які імуноспецифічно зв'язуються з антигеном-мішенню. Антитіла описані в цілому, наприклад, у

Напоми і І апе, Апііродієв: А Гарогаїогу Мапиаї, вид-во Сода Зргіпуд Нагброг І арогаїгу Ргез5, 1988.

Поняття "антитіло" належить до інтактних моноклональних антитіл, поліклональних антитіл, моноспецифічних антитіл, мультиспецифічних (наприклад, біспеціфічних) антитіл і фрагментів антитіл, які мають необхідну біологічну активність (наприклад, здатність зв'язуватися з антигеном). Антитіло може належати до будь-якого типу або класу (наприклад, Ідс, ЧЕ, І9М, дО та ІДА) або підкласу (наприклад, досі, Ідс2, ІдеЗ, Ідс4, ІДАЇ і ІдАг), переважно Ідос-класу, більш переважно Ідс1. "Інтактне" антитіло являє собою антитіло, яке містить антигензв'язуючу варіабельну область, а також константний домен легкого ланцюга і константні домени важкого ланцюга антитіла відповідного класу. Константні домени можуть мати нативну послідовність константних доменів (наприклад, константні домени, які мають людську нативну послідовність) або її

Зо амінокислотні варіанти. "Фрагмент антитіла" містить частину антитіла, включаючи антигензв'язуючу або варіабельну область або її частину. Прикладами фрагментів антитіла є Рар-, Раб", Е (аб) 2 - і Рм-фрагменти, антигензв'язуючі фрагменти МН і Мі, димерні антитіла (діабоді), тримерні антитіла, тетрамерні антитіла, одноланцюгове антитіло, 5сЕм, 5сЕм-Ес, МІР ("Зтаї! Модшиіаг Іттипорнаптасепшісаїв", малі модульні імунофармацевтичні засоби) і мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагмента (ів) антитіл. "Варіабельна область важкого ланцюга" або "МН" означає частину важкого ланцюга, яка містить СОКІТ, СОК2 і СОКЗ й оточуючі їх каркасні ділянки. "Варіабельна область легкого ланцюга" або "МІ" означає частину легкого ланцюга, яка містить СОК4, СОК5 і СОКВ й оточуючі їх каркасні ділянки. "СОСОК" означає гіперваріабельні ділянки важкого і легкого ланцюга, які визначають компліментарність / специфічність зв'язування антитіла або фрагмента антитіла. Порядок розташування СОК, зазначений в цьому описі, повністю відповідає їх числовій нумерації. "Епітоп" у контексті даного опису означає ділянку антигену, який розпізнається антитілом або фрагментом антитіла. Зокрема, це поняття відноситься до фрагментів СЮОЗ3, які можуть розпізнаватися антитілом. "МАТ" у контексті даного опису означає моноклональні антитіла.

Антитіло може мати одну або кілька "ефекторних функцій", які означають види біологічної активності, властиві Ес-області (Бс-області що має нативну послідовність, або варіанту амінокислотної послідовності Ес-області) антитіла. Прикладами ефекторних функцій антитіл є зв'язування С14д; комплементзалежна цитотоксичність (СОС); зв'язування Ес-рецептора; антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АОСС); фагоцитоз; понижуюча регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора, ВСЕ) і т.д. "Одноланцюгові Ем" або "зсЕм"-фрагменти антитіла представляють собою фрагменти, що містять Мн- і Мі- області антитіла, при цьому області присутні в одного поліпептидного ланцюга.

Поліпептид 5сЕм, як правило, додатково містить поліпептидний лінкер, розташований між Ун- і

Мі- областями для полегшення утворення структури, необхідної 5сЕм для зв'язування з антигеном (див., наприклад, РійсКіпип, в: Те РПагтасоїоду ої топосіопа! Апіїродіє5, т. 113, під ред. Козеприго і Мооге, вид-во Зргіпдег-Мегіад, Мем/ ок, 1991, сс. 269-315).

Зв'язуючий агент, такий як антитіло, який "спрямований до", "який зв'язується з" або "специфічно зв'язується" з що становить інтерес антигеном (тобто антигеном-мішенню), являє собою агент, який має здатність зв'язуватися з зазначеним антигеном з достатньою афінністю, такий, щоб зв'язуючий агент можна було застосовувати для спрямованого впливу на клітину, що експресує антиген. Як правило, зв'язування зв'язує агента характеризується афінністю, становить щонайменше приблизно 1х107 М", та його зв'язування з попередньо визначеним антигеном характеризується афінністю, яка щонайменше в два рази перевищує його афінність зв'язування з неспецифічним антигеном (наприклад, БСА, казеїном), відмінним від попередньо визначеного антигену або близькоспорідненого антигену. "Похідне антитіла" у контексті даного опису належить до антитіла, як воно визначено вище, модифікованому шляхом ковалентного приєднання гетерологічної молекули, наприклад, шляхом приєднання гетерологічного поліпептиду, або шляхом глікозилювання, деглікозилювання, ацетилювання або фосфорилювання або іншої модифікації, яка в нормі не асоційована з антитілом. У деяких варіантах здійснення винаходу гетерологічние молекула не представляє собою терапевтичний засіб. У деяких варіантах здійснення винаходу гетерологічна молекула сама по собі не має цитостатичну або цитотоксичну дію.

В якості ще одного вичерпного посилання, де описані всі поняття і процедури, згадані в цьому описі, слід вказати Ззатргоок та ін, МоїІесшаг Сіопіпуд, вид-во Соїй Зргіпд Нагброг Гарогайгу

Ргезв, 3-е вид., 1 січня 2001 р.

СОЗ33-зв'язуючі агенти специфічно зв'язуються з рецептором СОЗ33, який асоційований з даною популяцією клітин-мішеней. СОЗЗ є представником сімейства, володіє здатністю до адгезії сіалової кислоти (сіалоадгезія), який експресується на клітинах гематопоетичної лінії диференціювання, включаючи мієлоїдні клітини-попередники, моноцити, макрофаги, дендритні клітини і тучні клітини. СОЗЗ3 експресується також на пухлинних клітинах, асоційованих з мієлопроліферативними або тучноклітиними проліферативними захворюваннями, включаючи гострий мієлоїдний лейкоз і мієлопластичні синдроми, і на лейкозних стволових клітинах.

Антитіла, мішенню яких є СОЗ3, і їх застосування, в цілому, описані (див., наприклад, Ріегеїїї та ін, Вг. У. Наетаїййої. 84, 1993, сс. 24-30; Маїшез та ін, Нетаїйої. Опсої. 3, 1985, сс. 179-186; Тайзвід та ін, Віоса 106, 2005, сс. 4086-4092; РіІогіап і др., І еиК. 8 ГГ утрі. 47, 2006, сс. 207-222).

У деяких варіантах здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент являє собою антитіло (наприклад, моноклональне антитіло). Придатні моноклональні антитіла можуть являти собою гомогенні популяції антитіл до СОЗЗ (наприклад, позаклітинного домену людського СОЗ33).

Моноклональних антитіл (МАт) можна отримувати за допомогою будь-якого методу, відомого в даній області. Вони включають (але, не обмежуючись лише ними) метод на основі гібридом, вперше описаний КопПіег і Міївієїп (Маїиге 256, 1957, сс. 495-497), метод на основі людської В- клітинної гібридоми (Кобог та ін, Іттипоіоду Тодау 4, 1983, с. 72) і метод на основі ЕВМ гібридом (Соїе та ін, Мопосіопаї! Апіібодіє5 апа Сапсег Тпегару, під ред. Айап К., вид-во і іб5, Іпс., 1985, сс. 77-96). Зазначені антитіла можуть ставитися до будь-якого класу імуноглобулінів, включаючи Ідс, ЗМ, ЧЕ, ІдА їі Ід40О, і будь-якому їх підкласу. Гібридому, що продукує моноклональне антитіло можна культивувати іп міо або іп мімо.

Прийнятними моноклональними антитілами є (але, не обмежуючись лише ними) людські моноклональні антитіла, гуманізовані моноклональні антитіла, химерні моноклональні антитіла і функціонально активні фрагменти будь-якого із зазначених антитіл.

Придатними антитілами до СОЗЗ є антитіла, які можуть надавати терапевтичну дію за допомогою різних механізмів, відомих в даній області, таких як антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АОСС), антитіло-обумовлений клітинозалежний фагоцитоз (АЮОСР) та / або комплементзалежна цитотоксичність (СОС). Наприклад, антитіло може опосередковувати АОСС шляхом взаємодії з імунними ефекторними клітинами, такими як МК- клітини, моноцити і макрофаги.

Рекомбінантні антитіла, такі як химерні і гуманізовані моноклональні антитіла, містять як людські, так і нелюдські ділянки, їх можна створювати з використанням стандартних методів рекомбінантної ДНК (див., наприклад, СарШу та ін, О5 481567; і Во55 тощо, О5 4816397; зміст обох документів повністю включено в даний опис як посилання). "гуманізовані антитіла" представляють собою молекули антитіл з видів крім людини, які містять один або кілька гіперваріабельних ділянок (СОК) з видів крім людини і каркасну область з молекули людського імуноглобуліну (див., наприклад, Оцеєп, 5 5585089, зміст якого повністю включено в даний опис як посилання). Зазначені химерні і гуманізовані моноклональні антитіла можна отримувати за допомогою методів рекомбінантної ДНК, відомих в даній області, наприклад, з використанням методів, описаних у публікації міжнародної заявки на патент УМО 87/02671; бо публікації європейського патенту 0184187; публікації європейського патенту 0171496; публікації європейського патенту 0173494; публікації міжнародної заявки на патент УУО 86/01533; 5 4816567; публікації європейського патенту 012023; у Вепег та ін, Зсіепсе 240, 1988, сс. 1041- 1043; Ци та ін, Ргос. Маї). Асай 5Зеї. О5А 84, 1987, сс. 3439-3443; І іш та ін, У. Іттипої. 139, 1987, сс. 3521-3526; Зип і ін, Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА 84, 1987, сс. 214-218; Мізпітига та ін, Сапсег.

Кев5. 47, 1987, сс. 999-1005; Мооа та ін, Майиге 314, 1985, сс. 446-449; Зпаму та ін, 9. Май. Сапсег

Іп5ї. 80, 1988, сс. 1553-1559; Моїтізоп, Зсіепсе 229, 1985, сс. 1202-1207; ОЇ та ін, ВіоТесппідне5 4, 1986, с. 214; 005 5225539; Хдопез і ін, Майшге 321, 1986, сс. 552-525; Метпоеуап та ін, Зсіепсе 239, 1988, с. 1534; та Веїдіег та ін, у). Іттипої. 141, 1988, сс. 4053-4060 (зміст кожного документа повністю включено в даний опис як посилання)

Людські моноклональні антитіла можна створювати за допомогою будь-якого з численних методів, відомих у цій галузі (див., наприклад, Тепод та ін, Ргос. Маї!. Асад. Зсі. ОБА. 80, 1983, сс. 7308 7312; Ко?брог та ін, Іттипоіоду Тодау 4, 1983, сс. 72-79; ОїІб550п та ін, Ме. Еп7утої. 92, 1982, сс. 3-16; і 05 5939598 та 5770429).

Повністю людські антитіла можна отримувати з використанням трансгенних мишей, які не можуть експресувати ендогенні гени важких і легких ланцюгів імуноглобулінів, але можуть експресувати гени людських важких і легких ланцюгів. Трансгенних мишей імунізують загальноприйнятим чином за допомогою вибраного антигену, наприклад, з використанням повного поліпептиду СОЗ3З3 або частини. Моноклональні антитіла до антигену можна отримувати з використанням загальноприйнятого методу на основі гібридом. Трансгени людського імуноглобуліну, присутні в організмі трансгенних мишей, піддаються перегрупування в процесі

В-клітинної диференціювання і в результаті піддаються переключенню класу і соматичної мутації. Таким чином, з використанням зазначеного методу можна отримувати терапевтично прийнятні антитіла типу дос, ІДА, ІДМ та ІДЕ. Загальні відомості про застосування зазначеного методу для отримання людських антитіл див., наприклад, у Гопрегод і Низ7аг, Іпі. Кем. Іттипої. 13, 1995, сс. 65-93. Детальний обговорення цього методу для отримання людських антитіл і людських моноклональних антитіл і протоколи отримання зазначених антитіл представлені, наприклад, у 05 5625126; 5633425; 5569825 5661016 і 5545806. Інші людські антитіла, які отримують шляхом імунізації мишей, надходять у продаж, наприклад, від фірми Медагех (Прінстон, шт. Нью-Джерсі).

Повністю людські антитіла, які розпізнають вибраний епітоп, можна створювати також за допомогою методу, позначеного як "спрямована селекція". У цьому підході відібране нелюдське моноклональне антитіло, наприклад, мишаче антитіло, застосовують для спрямованої селекції повністю людського антитіла, що розпізнає той же самий епітоп (див., наприклад, Чезрег» та ін,

ВіотесппоЇоду 12, 1994, сс. 899-903). Людські антитіла можна отримувати також за допомогою різних методів, відомих в даній області, включаючи застосування фагових дисплейних бібліотек (див., наприклад, Ноодепроот і Уміпіег, У. Мої. Віо! 227, 1991, с.381; Магкз5 та ін, У Мої Віо! 222, 1991, сб. 581; Оцап і Сапег, Те гізе ої топосіопа! апіїродіе5 аз І(Шегарешісв, в: Апіі-ІДЕ апа

АйПегодіс бізеазе, під ред. дагаїеи і РісК Уг., вид-во Магсе! ОекКег, Мем ХогКк, МУ, глава 20, 2002, со. 427-469).

Придатні фрагменти антитіл являють собою (але, не обмежуючись лише ними) Е (аб) 2- фрагменти, Рар'-ррагменти, Рарб-фрагменти, Ем, одноланцюгові антитіла (ЗСА) (наприклад, описані в 05 4946778; у Віга, зсіепсе 242, 1988, сс. 423-442; Низвіоп та ін, Ргос. Маї0!. Асай. 5бі.

БА 85, 1988, сс. 5879-5883 і Умага та ін, Маїиге 334, 1989, со. 544-554), всЕм, 5сЕмМ-Ес, Емазгем,

Мінітель, димерні антитіла, тримерні антитіла, тетрамерні антитіла, ЗМІР (див., наприклад, опубліковану заявку на патент США Мо 2005-0238646) і будь-яку іншу молекулу, яка містить один або кілька СОКБ, і які володіють такою ж специфічністю, що і антитіло.

В інших варіантах здійснення винаходу антитіло являє собою злитий білок, що містить антитіло або його функціонально активний фрагмент, зчеплений з іншим білком. Наприклад, антитіло або його фрагмент можна зливати за допомогою ковалентного зв'язку (наприклад, пептидного зв'язку) або на М-кінці, або на С-кінці з амінокислотною послідовністю іншого білка (або його ділянкою, як правило, що містить щонайменше 10, 20 або 50 амінокислот білка), який не являє собою антитіло або фрагмент антитіла. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його фрагмент можна ковалентно пов'язувати з іншим білком на С-кінці варіабельної області або константної області.

Антитіла можна модифікувати, наприклад, шляхом ковалентного приєднання молекули будь-якого типу, якщо зазначене ковалентне приєднання дозволяє зберігати антитілу його специфічність щодо зв'язування антигену. Наприклад, похідне антитіла може являти собою антитіло, додатково модифіковане, наприклад, шляхом глікозилювання, деглікозилювання, ацетилювання, пегілірування, фосфорилювання, амідування, захисту за допомогою відомих бо захисних / блокуючих груп, протеолітичного розщеплення, зв'язування з іншим білком і т.д.

Можна здійснювати будь-яку з численних хімічних модифікацій з використанням відомих методів, таких як (але, не обмежуючись лише ними) специфічне хімічне розщеплення, ацетилювання, формілювання, метаболічний синтез у присутності тунікаміцина або т.п. Крім того, похідне може містити одну або кілька не зустрічаються в природних умовах амінокислот.

У конкретних варіантах здійснення винаходу може виявитися бажаним покращувати афінність зв'язування і / або інші біологічні властивості антитіла (див., наприклад, публікації заявок на патент США Мо Мо 2006-0003412 і 2006-0008882). Варіанти амінокислотних послідовностей антитіл отримують шляхом інтродукції відповідних нуклеотидних замін у нуклеїнову кислоту антитіла або шляхом пептидного синтезу. Зазначені модифікації включають, наприклад, делеції і / або інсерції, та / або заміни залишків у амінокислотних послідовностях антитіла. Будь-яку комбінацію делецій, інсерцій і / або замін здійснюють для отримання кінцевої конструкції, за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики. Амінокислотні заміни можуть також змінювати пост-трансляційні процеси антитіла, наприклад, змінювати кількість або розташування сайтів глікозилювання.

Придатним методом ідентифікації конкретних залишків або областей у антитілі, які представляють собою переважні сайти для мутагенезу, є так званий "аланін-скануючий мутагенез", описаний у Сиппіпопат і УмеїїІ5, Зсіепсе, 244, 1989, сс. 1081-1085. З його допомогою ідентифікують залишок або групу залишків-мішеней (наприклад, заряджені залишки, такі як аго, азр, Пів, Туз і ді) і замінюють на нейтральну чи негативно заряджену амінокислоту (як правило, на аланін або поліаланін) для впливу на взаємодію амінокислот з антигеном. Ті положення амінокислот, для яких продемонстрована функціональна чутливість до замін, потім уточнюють шляхом інтродукції додаткових або інших варіантів в сайти заміни або для сайтів заміни. При цьому, хоча сайт для інтродукції варіації амінокислотної послідовності є наперед визначеним, не є необхідним, щоб природа самої мутації була зумовленою. Наприклад, для аналізу ефективності мутації в розглянутому сайті здійснюють сканування аланіном або неспецифічний мутагенез кодону-мішені або області-мішені і отримані в результаті експресії варіанти антитіла піддають скринінгу щодо необхідної активності.

Інсерції в амінокислотну послідовність можуть включати аміно- та / або карбоксикінцеві злиття різної довжини від одного залишку до поліпептидів, які містять сто або більшу кількість залишків, а також інсерції всередину послідовності одного або декількох амінокислотних залишків. Прикладами кінцевих інсерцій є антитіло з М-кінцевим метіонільним залишком або антитіло, злите з цитотоксичним поліпептидом.

Іншим типом варіанту антитіла є варіант, що включає амінокислотну заміну. У цих варіантах щонайменше один амінокислотний залишок в молекулі антитіла замінений на інший залишок.

Представляють найбільший інтерес сайтами для мутагенезу шляхом замін є гіперваріабельні ділянки, але можна здійснювати також зміни в каркасній області.

Для досягнення істотних модифікацій біологічних властивостей антитіла можна відбирати заміни, які суттєво відрізняються за їх впливом на підтримання (а) структури поліпептидного каркаса в області заміни, наприклад, складчастої або спіральної конформації, (б) заряду або гідрофобності молекули в сайті-мішені або (у) розміру бічних ланцюгів. Такі, що зустрічаються в природних умовах залишки розділяють на групи на основі загальних властивостей бічних ланцюгів: (1) гідрофобні: норлейцин, пеї, аїа, маї, Іейц, Пе; (2) нейтральні гідрофільні: суб, 5ег, ЇПг; (3) кислі: азр, дій; (4) основні: азп, діп, пів, Іує, аго; (5) залишки, які впливають на орієнтацію ланцюга: діу, рго; і (6) ароматичні: ігр, їуг, рпе.

Неконсервативні заміни передбачають заміну представника одного з цих класів на представника іншого класу.

Може виявитися бажаним модифікувати антитіла щодо його ефекторної функції, наприклад, для підвищення антитіло-обумовленої клітинозалежної цитотоксичності (АЮОСС), антитіло- обумовленого клітинозалежного фагоцитозу (АЮСР) та / або комплементзалежної цитотоксичності. Зокрема, АЮСС-активність можна підвищувати шляхом інтродукції амінокислотних мутацій в константну область антитіла (І агаг та ін, РМАБ5 103, 11, 2006, со. 4005-4010). Для цієї мети можна застосовувати інтродукцію однієї або декількох амінокислотних замін в Ес-область антитіла (див. опубліковану заявку на патент США Мо 2006-0160996). В альтернативному або додатковому варіанті залишок (ї) цистеїну можна інтродуціювати в Ес- область антитіла, що призводить до утворення в цій області дисульфідного зв'язку між бо ланцюгами. Отримане таким шляхом гомодимерне антитіло може мати поліпшену здатність до інтерналізації та / або підвищену СОС або АОСС (див. Сагоп та ін, У. Ехр. Мед., 176, 1992, сс. 1191-1195 і Зпорев, .). Іттипої., 148, 1992, сс. 2918-2922). Гомодимерні антитіла з підвищеною протипухлинною активністю можна отримувати також з використанням гетеробіфункціональних перехреснозшиваючих лінкерів, згідно з методикою, описаною у МОЇЙ та ін, Сапсег Кезеагсі, 53, 1993, сс. 2560-2565. В іншому варіанті можна сконструювати антитіло, що має подвійну кількість

Ес-областей, завдяки чому воно може мати підвищену здатність до залежного від комплементу лізису і АОСС (див. 5(емепзоп та ін, Апіі-Сапсег Огид Оезідп, 3, 1989, сс. 219-230).

У даній області, як в наукових публікаціях, так і в патентних документах, описано широке розмаїття модифікацій Ес-області, див., наприклад, ЕР 0307434, МО 93/04173, УМО 97/34631,

МО 97/44362, МО 98/05787, МО 99/43713, МО 99/51642, МО 99/58572, МО 02/060919, МО 03/074679, МО 2004/016750, МО 2004/029207, МО 2004/063351, МО 2004/074455, МО 2004/035752, МО 2004/099249, МО 2005/077981, МО 2005/092925, МО 2006/019447, МО 2006/031994, УМО 2006/047350, УМО 2006/053301, УМО 2006/088494 і УМО 2007/041635.

У кращих варіантах здійснення винаходу антитіла, пропоновані у винаході, несуть варіанти

Ес з амінокислотними замінами в положеннях 332 і / або 239, та / або 236. У кращих варіантах здійснення винаходу антитіла, пропоновані у винаході, мають мутації в Ес-домені, вибрані з групи, що включає

І) одну заміну в положенні 332, бажано ІЗ332Е;

І) комбінацію замін в положеннях 239 і 332, бажано 52390/1332Е;

І) комбінацію замін в положеннях 236 і 332, бажано С2З6А/ІЗ32Е;

ЇМ) комбінацію замін в положеннях 236, 239 і 332, бажано 5236А/52390/332Е.

У цьому контексті найбільш переважно інтродуціювати мутації в одне або кілька положень у

Ес-домені, вибраному (их) з амінокислот у положеннях 332 і / або 239, та / або 236 згідно нумерації ЄЮ за Кеботом. Найбільш бажаними є заміни в положеннях 239 і 332, насамперед з2г390/332Е.

Варіанти Ес в антитілах, пропонованих в даному винаході, визначають по вхідних в них амінокислотних модифікаціях. Так, наприклад, ІЗ32Е являє собою варіант Ес із заміною ІЗ32Е щодо батьківського поліпептиду Ес. Аналогічно цьому 52390/1332Е позначає варіант Ес із замінами 52390 і І332Е, а 52390/1332Е/5236А позначає варіант Ес із замінами 52390, ІЗ332Е і 236А щодо батьківського поліпептиду Ес.

Для подовження часу напівжиття антитіла в сироватці можна включати епітоп, що зв'язується з рецептором порятунку, в антитіло (насамперед у фрагмент антитіла), наприклад, згідно методу, описаного в 05 5739277.У контексті даного опису поняття "епітоп, що зв'язується з рецептором порятунку" відноситься до епітопу в Ес-області молекули Ідс (наприклад, дес,

Ідс2, Їдсз або ідо), відповідальному за подовження часу напівжиття молекули Ідс в сироватці іп мімо.

Антитіла можна глікозилювати в консервативних положеннях в константних областях (див., наприклад, УепПегів і Гипа, Спет. Іттипої. 65, 1997, сс. 111-128; Мугідні і Моїтізоп, ТІБТЕСН 15, 1997, сс. 26-32). Олігосахаридні бічні ланцюги імуноглобулінів можуть впливати на функцію білка (див., наприклад, Воуй та ін, Мої. Іттипої. 32, 1996, сс. 1311-1318; УМійме і Ноумага,

Віоспет. 29, 1990, сс. 4175 4180) і внутрішньомолекулярна взаємодія між ділянками глікопротеїну, що може впливати на конформацію і презентовану тривимірну поверхню глікопротеїну (див., наприклад, УепПегі5 і Гипа, вище; Ууух5 і УМадпег, Ситепі Оріп. Віоїтесй. 7, 1996, сс. 409-416). Олігосахариди можуть служити також для заснованого на специфічних розпізнаваних структурах напрямки даного глікопротетїну до певних молекул. Наприклад, встановлено, що в галактозильованному ідо олігосахаридний залишок "виступає" з інтер-СН2- простору і кінцеві залишки М ацетилглюкозаміну стають доступними для зв'язування зі зв'язуючим манозу білком (див., наприклад, Маїпоїга та ін, Маїиге Меа. 1, 1995, сс. 237-243).

Видалення за допомогою глікопептидаз олігосахаридів з САМРАТН-І1Н (рекомбінантне гуманізоване мишаче моноклональне антитіло типу 901, яке розпізнає антиген СОм52 людських лімфоцитів), яке отримано в клітинах яєчника китайського хом'ячка (СНО), призводить до повної елімінації опосередковуваного комплементом лізису (СМС. або СОС) (Воуа та ін, Мої.

Ітітипої. 32, 131, 1996, сс. січня 1318), в той час як вибіркове видалення залишків сіалової кислоти за допомогою нейрамінідази не приводить до втрати СМС. Встановлено також, що глікозилювання антитіл впливає на АЮОСС. Зокрема, встановлено, що СНоО-клітини з регульованою тетрацикліном експресією ВД (1.4)-ї-ацетилглюкозаминілтрансферази ПІ (пт), глікозілтрансферази, каталізує утворення двурозсікаючого СІСМАс, мають поліпшену АЮОСС- активність (див., наприклад, папа та ін., Маїиге Віоїесп. 17, 1999, сс. 176-180).

Глікозилювання антитіл зазвичай відбувається за допомогою або М-зв'язування, або О- бо зв'язування. М-зв'язування передбачає приєднання вуглеводного фрагмента до бічного ланцюга залишку аспарагіну. Тріпептідні послідовності аспарагін-Х-серин і аспарагін-Х-треонін, де хХ означає будь-яку амінокислоту крім проліну, являють собою розпізнавані послідовності, призначені для ферментативного приєднання вуглеводного фрагмента до бічного ланцюга залишку аспарагіну. Так, присутність будь-якої їх цих тріпептидних послідовностей в поліпептиді створює потенційний сайт глікозилювання. О-пов'язане глікозилювання передбачає приєднання одного з цукрів, таких як М-ацетилгалактозамін, галактоза або ксилоза, до гідроксиамінокислота, найбільш часто до серину або треоніну, хоча можна застосовувати також 5-гідроксипролін або

Б-гідроксилізин.

Варіанти глікозилювання антитіл являють собою варіанти, в яких змінено схему глікозилювання антитіла. Під зміною увазі делецію одного або декількох вуглеводних фрагментів, присутніх у антитілі, додавання одного або декількох вуглеводних фрагментів до антитіла, зміна складу (композиції) глікозилювання (т.е., схеми глікозилювання), ступеня глікозилювання або т.п.

Додавання сайтів глікозилювання в антитіло, як правило, здійснюють шляхом зміни амінокислотної послідовності таким чином, що вона містить одну або декілька зазначених вище тріпептідних послідовностей (для сайтів М-зв'язаного глікозилювання). Зміна можна здійснювати також шляхом додавання або заміни одного чи декількох залишків серину або треоніну в послідовності вихідного антитіла (для сайтів О-пов'язаного глікозилювання). Аналогічно цьому, видалення сайтів глікозилювання можна здійснювати шляхом зміни амінокислот в нативних сайтах глікозилювання антитіла.

Амінокислотну послідовність, як правило, модифікують шляхом зміни що кодує Її нуклеотидної послідовності. Ці методи включають (але, не обмежуючись лише ними) виділення з природного джерела (у разі зустрічаються в природних умовах варіантів амінокислотних послідовностей) або одержання за допомогою мутагенезу з використанням олігонуклеотидів (або сайтнаправленного мутагенезу), ПЛР-мутагенезу або касетного мутагенезу отриманого раніше варіанту або неваріантної версії антитіла.

Глікозилювання (включаючи схему глікозилювання) антитіл можна змінювати також без зміни амінокислотної послідовності або що кодує її нуклеотидної послідовності. Глікозилювання залежить головним чином від клітини-хазяїна, застосовуваної для експресії антитіла. Оскільки тип клітини, застосовуваної для експресії рекомбінантних глікопротеїнів, наприклад, антитіл, в якості потенційних терапевтичних засобів, рідко являє собою нативну клітку, то можна очікувати суттєві варіації в схемі глікозилювання антитіл (див., наприклад, Нбе та ін, ВіоїЇ. Спет. 272, 1997, сс. 9062-9070). Крім вибору клітин-господарів, фактори, які впливають на глікозилювання в процесі рекомбінантного отримання антитіл, включають схему вирощування, склад середовища, щільність культури, оксигенацію, рН, схеми очищення і т.п. Різні методи, запропоновані для зміни схеми глікозилювання в конкретному організмі-хазяїні, включають інтродукцію або надекспресію певних ферментів, що беруть участь у виробництві олігосахаридів (див., наприклад, О5 5047335; 5510261 і 5278299). Глікозилювання або певні типи глікозилювання можна ферментативно усувати в глікопротеїн, наприклад, з використанням ендоглікозідази Н (Епдо Н). Крім того, рекомбіновану клітину-хазяїна можна створювати за допомогою методів генетичної інженерії, наприклад, створюючи в ній порушення процесингу певних типів полісахаридів. Ці та аналогічні методи добре відомі в даній галузі.

Структуру глікозилювання антитіл легко можна аналізувати за допомогою загальноприйнятих методів аналізу вуглеводів, включаючи лектинову хроматографію, ЯМР, мас-спектрометрію, РХВР, гельпроникну хроматографію (СРС), аналіз складу моносахаридів, послідовне ферментативне розщеплення, НРАЕС-РАОЮ (аніонообмінна хроматографія високого тиску з імпульсним амперометричним виявленням), в якій застосовують аніонообмінну хроматографію при високому значенні рН для розділення олігосахаридів на основі заряду.

Відомі також методи вивільнення олігосахаридів для аналітичних цілей, і вони включають (але, не обмежуючись лише ними) ферментативну обробку (яку, як правило, здійснюють з використанням пептид-М-глікозідази ЕЕ / ендо-ВД-галактозидази), елімінацію з використанням жорсткого лужного оточення для вивільнення переважно О-пов'язаних структур і хімічні методи, засновані на застосуванні безводного гідразину для вивільнення як М-, так і О-пов'язаних олігосахаридів.

Антитіла можуть також мати модифікації (наприклад, заміни, делеції або додавання) амінокислотних залишків, які взаємодіють з Ес-рецепторами. Зокрема, антитіла можуть мати модифікації амінокислотних залишків, для яких встановлена здатність брати участь у взаємодії між анти-Рс-доменом і ЕсКп-рецептором (див., наприклад, публікацію міжнародної заявки на патент УМО 97/34631).

Найбільш широким об'єктом даного винаходу є СОЗ3-зв'язуючі агенти, які зв'язуються з людським СОЗЗ і які відрізняються тим, що а) мають варіабельну область важкого ланцюга, яка містить СОКІ, СОК2 і СОН, і варіабельну область легкого ланцюга, яка містить СОК4, СОМК5 і СОКб, де СОКІ має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 1-14, СОК2 має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 15-28, СОКЗ має амінокислотну послідовність, вибрану з 5едію Мо: 29-42,

СОКА має амінокислотну послідовність, вибрану з 5едіО Мо: 43-56, СОК5 має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 57-70, СОКбЄ має амінокислотну послідовність, вибрану з зедір Мо: 71-84, або б) розпізнають епітоп, розташований усередині амінокислотної послідовності

ЕЕРНРІРУМОКМЗРУНОСУМУ (ЗедіЮ Мо: 141) людського СЮОЗ33.

Даний винахід належить і до СОЗЗ-зв'язуючих агентів, що відрізняється тим, що кінетика інтерналізації СОЗЗ3-зв'язуючих агентів є такою, що щонайменше 30 95, переважно щонайменше 40 95 початкової кількості антитіла залишається на клітинній поверхні НІ 60-клітин через 4 год. після інкубації.

При створенні винаходу було встановлено, що СОЗ33-зв'язуючі агенти, запропоновані в даному винаході, зв'язуються з епітопом, відмінним від епітопу лінтузумаба, див. приклад 4 в даному описі. Обидва епітопу (ЗедіЮ Мо: 141 і бедіЮ Мо: 142) не перекриваються. Ймовірно, присутність різних епітопів позаклітинного домену СОЗ3, які розпізнаються СОЗЗ-зв'язуючими агентами, запропонованими в даному винаході, і лінтузумабом, є причиною різної кінетики інтерналізації і АОСС-ефективності СОЗЗ-зв'язуючих агентів, пропонованих в даному винаході, і лінтузумаба (пор. приклади 2 і З в даному описі).

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу щонайменше 40 95 від початкової кількості СОЗЗ-зв'язуючих агентів залишається на клітинній поверхні через 4 години після інкубації.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу варіабельна область важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 85-98, і варіабельна область легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 99-112.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент містить важкий

Зо ланцюг, що має амінокислотну послідовність, вибрану з 5едіюЮ Мо: 113-126, і легкий ланцюг, що має амінокислотну послідовність, вибрану з Зедію Мо: 127-140.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу афінність СОЗЗ-зв'язуючого агента як до людського СЮОЗ3, так і до СОЗЗ мавп ціномолгус (яванський макак-крабоїд), характеризується величиною КО, що дорівнює або є нижчою ніж 1ОнМ.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент є гуманізованим.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент є повністю людським.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент додатково має ефекторну функцію.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу ефекторна функція опосередковується

Ес-доменом.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент містить одну або декілька мутацій в Ес-області, яка () модулюють функцію Ес-доменом.

Згідно з переважним варіантом здійснення винаходу модуляція функції Ес-домену представляє собою підвищення АОСС щонайменше на 10 95, переважно на 50 95 або 100 95.

Найбільш переважні СОЗ3З-зв'язуючі агенти, запропоновані в даному винаході, перераховані в таблиці 1:

Таблиця 1

БЕЗЕЗЕЗЕЗЕ ЗЕ ваЕ

І Мо | СОВІ | СОНВ2 | СОВЗ | СОВА | СОНВ5 | СОВНб Мн М. ланцюг | ланцюг 1 1280-03-08. 1 | 15 29 | 43 | 57 | 71 | 85 99 | 113 | 127 2 |280-21-09Ї 2 | 16 | 30 / 44 | 58 | 72 | 86 /л100| 114 | 128 4 |280-31-01Ї 4 | 18 | 32 46 | 60 | 74 / 88 /102| 116 | 130 лан НЕ НС НС НЕЗННС ЕСУ ЕС ЕС тиї

Продовження таблиці 1

БЕЗЕЗЕЗЕЗЕ Зв

І Мо | СОВІ | СОНВ2 | СОВЗ | СОВА | СОНВ5 | СОВНб Мн М. ланцюг | ланцюг 6 |280-3402| 6 | 20 | 34 | 48 | б2 | 76 | 90 /104| 118 | 1з2 зр ее» ю ні тн рю т т 9 280-61-07! 9 | 23 | 37 | 51 | 65 | 79 | 93 /107| 121 | 135 ло |283-03-03Ї 10 | 24 | 38 | 52 | 66 | 80 / 94 /708| 122 | 136 12 |283-07-03Ї 12 | 26 | 40 | 54 | 68 | 82 96 | л110| 124 | 138 13 283-11-03! 13 | 27 | 41 | 55 | 69 | 83 97 | л111| 125 | 139 (14 |283-14-01| 14 | 28 | 42 | 56 | 70 | 84 | 98 |112| 126 | 140

Лікування раку

У кількох публікаціях СЮОЗ3 описаний в якості маркера клітинної поверхні первинних ГМЛ-ї

ХМЛ-клітин, що експресується на клітинах у 70-100 9о пацієнтів (З5спеїпрегод та ін, 1989; Наизумігі та ін, 2007; Ріеєза та ін, 2007; Мербег та ін, 2008). СОЗ3З експресується на злоякісних мієлоїдних бластних клітинах, які представляють собою основну частину злоякісних клітин у периферичній крові та кістковому мозку які страждають на лейкоз пацієнтів, і на лейкозних стволових клітинах, відносно невеликий групі менш диференційованих клітин у кістковому мозку, які відрізняються притаманною їм здатністю до самовідновлення і підтримці лейкозної клональної ієрархії.

Можливість в клінічних умовах здійснювати спрямований вплив на СОЗЗ із застосуванням антитіл продемонстрована при використанні МуїЇоїагда Ф (гемтузумаба озогаміцін), кон'югату антитіло-каліхеаміцином, який дозволений для лікування пацієнтів з рецидивуючим ГМЛ, що не піддаються лікуванню з використанням інших засобів. Альтернативний підхід спрямованого впливу на СОЗЗ3 пов'язаний із створенням лінтузумаба (505М-33, НиМ195), гуманізованого моноклонального антитіла типу ЇДО1, для якого отримані початкові дані про клінічних ознаках ефективності, встановлених на фазі І випробувань (Ка?а та ін, 2009). У цілому, як у доклінічних, так і в клінічних умовах отримані великі дані, які підкреслюють придатність і можливість застосування спрямованого впливу на СОЗЗ3 при лікуванні ГМЛ та інших СОЗЗ3-позитивних злоякісних захворювань.

Гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ) являє собою злоякісний стан мієлоїдної лінії диференціювання лейкоцитів. Ця гематологічна неоплазія являє собою захворювання крові і кісткового мозку, яке без лікування, як правило, призводить до смерті протягом періоду часу, що складає від декількох тижнів до місяців. Встановлено, що поширеність ГМЛ складає 30000 випадків у США і 47000 випадків у країнах Європейського союзу (дані про поширеність захворювання протягом 10-річного періоду підтверджені Майзоп-Уаск, 2010). ГМЛ є найбільш поширену форму гострого лейкозу у дорослих (приблизно 90 95), що становить приблизно 33 95 від нових випадків лейкозу. Медіанний вік пацієнтів, у яких діагностовано ГМЛ, становить 67 років. На частку ГМЛ припадає приблизно 1,2 95 випадків смерті від раку в США.

ГМЛ характеризується неспецифічними симптомами, такими як втрата ваги, втома,

Зо лихоманка і нічна пітливість. ГМЛ діагностується за результатами аналізу крові, обстеження кісткового мозку і за допомогою лабораторних аналізів, які дозволяють визначати підтип ГМЛ і приймати рішення про шляхи лікування.

Терапія при ГМЛ насамперед залежить від віку та характеристики працездатності пацієнта.

Пацієнтів, які можуть переносити інтенсивну індуктивну (а потім консолідуючу і підтримуючу) хіміотерапію, можна лікувати інтенсивно з використанням комбінації цитотоксичних лікарських засобів. Такі пацієнти мають ймовірність досягнення повної відповіді, що становить приблизно 75 95. Для цієї популяції пацієнтів завданням терапевтичного лікування є лікування. При цьому протягом 1 року після досягнення повної відповіді приблизно у половини пацієнтів має місце рецидив ГМЛ. Довготривалі показники лікування становлять близько 30 95.

Однак більш старший вік у момент діагностування або наявність супутніх хвороб не дозволяє застосовувати інтенсивну індуктивну терапію, тому завданням є паліативне лікування.

Таким чином, рівні ремісії різко знижуються у людей похилого віку, які страждають ГМЛ.

Медіанний показник виживаності для людей похилого віку з ГМЛ складає менше 6 місяців.

Відповідно до одного з об'єктів винаходу СЮОЗЗ-зв'язуючі агенти можна застосовувати для лікування раку, наприклад, для уповільнення прогресування раку та / або зменшення асоційованої з раком кахексії, або попередження або уповільнення рецидиву гематологічного злоякісного захворювання (наприклад, лейкозу) у ссавця, переважно у хворої людини. СОЗ3- зв'язуючий агент можна вводити індивідуально або спільно з іншим терапевтичним засобом. У деяких варіантах здійснення винаходу СЮОЗЗ-зв'язуючий агент вводять спільно зі стандартним лікувальним хіміотерапевтичних засобом. СЮОЗ3З-зв'язуючий агент можна застосовувати в некон'югованій формі (тобто у формі, некон'югованій з цитотоксин) або у вигляді кон'югату.

У цьому підрозділі під поняттям "пацієнт" мається на увазі людина або інший ссавець, якого / яку піддають лікуванню або у якого діагностовано рак.

Згідно з деякими варіантами здійснення винаходу СОЗ3-зв'язуючі агенти можна застосовувати для уповільнення прогресування раку та / або зменшення асоційованої з раком кахексії у пацієнта шляхом введення пацієнтові, який потребує цього, СЮОЗ33-зв'язуючого агента в ефективній дозі. Не вдаючись у будь-який конкретний механізм, прийнято, що СОЗ3-зв'язуючий агент зв'язується з ефекторними або А-клітинами (клітини, що здійснюють кооперативну взаємодію з Т-і В-лімфоцитами) мієлоїдної або моноцитарній лінії диференціювання (наприклад, моноцити, макрофаги, дендритні клітини і нейтрофіли), інгібуючи тим самим або знижуючи виробництво різних цитокінів, хемокінів і факторів росту ефекторними або А- клітинами і / або пухлинними клітинами. Зазначені цитокіни, хемокіни і фактори росту, які можуть прискорювати ріст і проліферацію пухлинних клітин і / або беруть участь у розвитку асоційованої раком кахексії, включають (але, не обмежуючись лише ними) інтерлейкін-1р (ІІ-- 18), фактор некрозу пухлини-са (ТМЕ-а), інтерлейкін-б (ІІ-6), інтерлейкін-8 (ІІ -8), інтерферон-у (ІРМ-у), судинний ендотеліальний фактор росту (МЕС), фактор, що інгібує лейкоз (ПР), моноцитарний хемоаттрактантний білок-1 (МСР-1), КАМТЕЗ5, інтерлейкін-10 (ІІ -10), інтерлейкін- 12 (1-12), матричну металлопротеїіназу 2 (ММР2), ІР-10 і / або запальний білок макрофагів-1с (МІРТо). СО33-зв'язуючі агенти можуть також знижувати міграцію макрофагів в область ракових клітин.

У деяких варіантах здійснення винаходу введення пацієнтові в ефективній дозі СОЗ33- зв'язуючого агента знижує рівень щонайменше одного цитокіну, Хемокіни або фактора росту, де цитокін, хемокіни або фактор росту може прискорювати зростання і проліферацію пухлинних клітин, прискорювати міграцію незлоякісних ефекторних клітин, таких як асоційовані з пухлиною

Зо макрофаги (ТАМ5), в околицю області пухлини та / або брати участь у розвитку асоційованої раком кахексії. У конкретних варіантах здійснення винаходу цитокін, хемокін або фактор зростання являє собою, наприклад, інтерлейкін-1В (І/-1рф8), фактор росту пухлини-а (ТМЕ-а), інтерлейкін-6 (ІІ -6), інтерлейкін-8 (ІІ -8), інтерферон-у (ІЕМ-у), судинний ендотеліальний фактор росту (МЕСЕ), фактор, що інгібує лейкоз (ПЕ), моноцитарний хемоаттрактантний білок -1 (МСР- 1), КАМТЕ5, інтерлейкін-10 (11-10), інтерлейкін-12 (1-12), матричну металлопротеїназу 2 (ММР), ІР-10 і / або запальний білок макрофагів-Та (МІР с).

Іншим варіантом здійснення винаходу є спосіб уповільнення прогресування раку, що полягає в тому, що вводять пацієнтові в ефективному режимі СОЗЗ-зв'язуючий агент, який має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ33. У результаті введення СОЗЗ3-зв'язуючого агента сповільнюється прогресування раку, наприклад, сповільнюється зростання або проліферація пухлинних клітин, зменшуються метастази, знижується рівень щонайменше одного цитокіну, хемокіну або фактора росту, знижується рівень незлоякісних ефекторних клітин біля пухлинних клітин або т.п.

Іншим варіантом здійснення винаходу є спосіб зменшення пухлинного навантаження у пацієнта, що полягає в тому, що вводять пацієнтові в ефективному режимі СОЗЗ-зв'язуючий агент, який має здатність специфічно зв'язуватися з СОЗ33. У результаті введення СОЗ33- зв'язуючого агента пухлинне навантаження в організмі пацієнта залишається на тому ж рівні або знижується, наприклад, в результаті зменшення розміру або маси пухлини, зниження рівня щонайменше одного цитокіну, хемокіну або фактора росту, зниження рівня незлоякісних ефекторних клітин в околиці пухлинних клітин, інгібування міграції макрофагів в околицю пухлинних клітин, зменшення кількості незлоякісних ефекторних клітин (наприклад, ТАМ5 або макрофагів) у пухлини або т.п.

Іншим варіантом здійснення винаходу є спосіб зменшення пухлинного навантаження або сповільнення прогресування раку у пацієнта, що полягає в тому, що вводять пацієнтові в ефективному режимі СОЗЗ-зв'язуючий агент, який має здатність специфічно зв'язуватися з

СО33. У результаті введення СОЗЗ-зв'язуючого агента пухлинне навантаження в організмі пацієнта залишається на тому ж рівні або знижується, наприклад, в результаті рекрутменту імунних ефекторних клітин типу МК-клітин або макрофагів, або моноцитів, які можуть руйнувати пухлинні клітини за допомогою опосередковуваних імунною системою механізмів.

Антитіло-обумовлена клітинозалежна цитотоксичність (АрСС) являє собою опосередковуваний імунними ефекторними клітинами механізм, який може приймати участь у протипухлинній активності моноклональних антитіл (Умеїіпег С.), Мопосіопаї! апіїбоду теспапізть ої асіоп іп сапсег. Іттипо! Нез., 39 (1-3), 2007, сб. 271-276). Роль АОСС в протипухлинній ефективності була продемонстрована на моделях в доклінічних дослідженнях, наприклад, на мишачих моделях пухлин (див., наприклад, Сіупе5 КА, Томег5 ТІ, Ргевіа І, Камеїсп ОМ,

Іппірйогу Ес гесеріої5 тоапшіаге іп мімо суїохісйу адаіп5ві Штог їагдеї5. Маї Меа., 6 (4), квітень 2000 р., сс. 443-446). Дані клінічних випробувань підтверджують роль АОСС в прояві ефективності терапевтичних антитіл в клінічних умовах (див., наприклад, УмМепд МУК, ему К., Ту іттиподіобиїййп сх їадтепі С гесеріог роїутогрпізтв іпаерепаєпіу ргєдісії гезропзе іо пихітаб іп раїйепів м/йп ТтоПісцшаг ІуУтрпота. У Сійп Опсої., 1, 21 (21), листопад 2003 р., сс. 3940-3947.

Електронна публікація від 15 вересня 2003). Взаємодія моноклональних антитіл 3 Ес- рецептором на імунних клітинах бере участь у АОСС. Ес-область антитіл можна модифікувати для того, щоб отримувати підвищену афінність до Ес-рецепторів (див., наприклад, Ргевіа І 0,

Епаіпеегтіпу ої Шегарешіс апіїбодієв (0 тіпітіге іттиподепісйу апа орійтіге Тпсіп. Адм Огид

Оеєїїм Вем., 7, 58 (5-6), серпень 2006 р., сс. 640-656. Електронна публікація від 23 травня 2006 р.о. Зазначена підвищена афінність до Ес-рецепторів призводить до підвищеної АОСС- активності, що може призводити до підвищеної протипухлинної ефективності для пацієнтів.

У різних варіантах здійснення винаходу, описаних у цьому розділі, СОЗЗ-зв'язуючий агент можна застосовувати для лікування СЮОЗ3З-позитивного раку (тобто раку, що включає ракові клітини, на поверхні яких відбувається надекспресія СОЗ33, або в яких відбувається експресія

СОЗ33 в кількостях, які вважаються прийнятними для терапії з використанням антитіл до СОЗ33).

СОЗЗ-зв'язуючий агент можна застосовувати також для лікування раку, при якому не відбувається надекспресія СОЗЗ на незлоякісних ефекторних клітинах порівняно зі здоровою тканиною такого ж типу. Рак може являти собою, наприклад, негематологічне або гематологічне злоякісне захворювання. У конкретних прикладах гематологічне злоякісне захворювання може являти собою СО33-позитивне захворювання і може являти собою, наприклад, гострий лімфоїдний лейкоз, гострий мієлоїдний лейкоз, хронічний мієломоноцитарний лейкоз і еритроцитарний лейкоз, гострий мегакаріобластний лейкоз, гістоцитарну лімфому, мієлоїдну

Зо саркому, проліферативне порушення тучних клітин або мієлодиспластичний синдром (МДС). У деяких варіантах здійснення винаходу гематологічне злоякісне захворювання являє собою

СОЗЗ-позитивне злоякісне захворювання, таке як гострий мієлоїдний лейкоз або мієлодиспластичний синдром (МДС).

У різних варіантах здійснення винаходу, описаних у цьому розділі, СОЗЗ-зв'язуючий агент може представляти собою некон'юговане антитіло до СО33. Наприклад, антитіло може являти собою повністю людське, гуманізоване або химерне антитіло, таке як химерне або гуманізоване антитіло М 195. Антитіло може являти собою також інше антитіло, яке конкурує з антитілом М 195 за специфічне зв'язування з СОЗ33. Антитіло може також зв'язуватися з тим же епітопом, що й антитіло М 195, або з іншим епітопом.

В інших варіантах здійснення винаходу СЮОЗЗ-зв'язуючий агент може бути пов'язаний (тобто кон'югований) з цитотоксином. Цитотоксин може являти собою, наприклад, пептидний токсин, такий як сапорін, рицин, хлоротоксин, екзотоксин Рхендотопавх, ендотоксин Рзхендотопах або дифтерійний токсин. Цитотоксин може являти собою також хімічний (тобто який не має пептидну основу) токсин, такий як каліхеаміцин, доксорубіцин, камптотецин, даунорубіцин або інші ДНК-зв'язуючі агенти. Цитотоксин може являти собою також аурістатін, майтансіноід, доластатін або інші блокуючі мікротрубочки агенти.

СОЗ33-зв'язуючий агент, який представляє собою антитіло до СОЗ33, можна вводити пацієнту внутрішньовенно або підшкірно в дозі від 0,1-менш до приблизно 25 мг / кг, переважно від 1,0 до приблизно 10 мг / кг. СОЗЗ-зв'язуючий агент, який представляє собою фрагмент антитіла до

СсО33 або інший СОЗ33-зв'язуючий білок, можна вводити в дозі, еквівалентній дозі від 0,1 до приблизно 25 мг / кг, від 1,0 до приблизно 10 мг / кг інтактного антитіла. СЮОЗЗ-зв'язуючий агент можна вводити пацієнту внутрішньовенно або підшкірно згідно, наприклад, такою схемою: щодня, щотижня, через два тижні, через три тижні (тобто кожні три тижні) або щомісяця, або застосовувати комбінацію зазначених схем введення. СОЗЗ-зв'язуючий агент можна вводити протягом періоду, що становить щонайменше один місяць, щонайменше два місяці, щонайменше три місяці, щонайменше чотири місяці, щонайменше п'ять місяців, щонайменше шість місяців або при необхідності протягом більш тривалого терміну. У деяких варіантах здійснення винаходу за фазою лікування (див. вище) за допомогою СОЗЗ-зв'язуючого агента слідує підтримуюча фаза, під час якої дози СОЗЗ-зв'язуючого агента вводять рідше, ніж під час 60 фази лікування. Наприклад, підтримуючі дози можна вводити щотижня, через два тижні, через три тижні або щомісяця протягом 1-6 місяців. Під час підтримуючої фази можна застосовувати такі ж дози, що і при здійсненні фази лікування.

Лікування гематологічного злоякісного захворювання на стадії ремісії

Іншим об'єктом винаходу є способи попередження або уповільнення виникнення рецидиву гематологічного злоякісного захворювання (наприклад, лейкозу) у пацієнта, які полягають в тому, що пацієнтові на стадії ремісії гематологічного злоякісного захворювання вводять в ефективній дозі СЮОЗЗ-зв'язуючий агент, що призводить до попередження або уповільнення виникнення рецидиву зазначеного гематологічного злоякісного захворювання. СОЗЗ-зв'язуючий агент специфічно зв'язується з СЮОЗ3З на поверхні гематологічних злоякісних (тобто лейкозних) клітин і / або незлоякісних ефекторних клітин.

У контексті даного опису поняття "пацієнт", як правило, належить до людини, яку піддають лікуванню з приводу гематологічного злоякісного захворювання або у якої діагностовано зазначене захворювання. У деяких варіантах здійснення винаходу гематологічне злоякісне захворювання являє собою СОЗ33-позитивне гематологічне злоякісне захворювання.

Гематологічні злоякісні захворювання включають (але не обмежуючись лише ними) лейкози (наприклад, гострий лімфобластний лейкоз (ГЛЛ), гострий мієлоїдний (мієлогенний) лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлоїдний (мієлогенний) лейкоз (ХМЛ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз, волосковоклітинний лейкоз). Споріднені хвороби крові включають (але, не обмежуючись лише ними) мієлодиспластичний синдром (МДС), мієлофіброзу, мієлпроліферативне захворювання (наприклад, поліцитемія справжня (РУ, РСМ або РЕМУ), ідіопатичний тромбоцитоз (есенціальна тромбоцитемія) (ЕТ)) і амілоїд, пов'язаний з хворобою легких ланцюгів.

Поняття "СОЗЗ-позитивне гематологічне злоякісне захворювання" відноситься до гематологічного злоякісного захворювання, що відрізняється експресією СОЗ3 на поверхні злоякісної клітини. СОЗЗ-позитивні гематологічні злоякісні захворювання включають (але не обмежуючись лише ними) гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлоїдний лейкоз (ХМЛ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз, тромбоцитарний лейкоз, мієлодиспластичний синдром, мієлопроліферативне порушення, рефрактерну анемію, передлейкозний синдром, лімфоїдний лейкоз або недиференційований лейкоз.

У деяких варіантах здійснення винаходу способи полягають у тому, що пацієнтові на стадії

Зо ремісії СОЗЗ-позитивного гематологічного злоякісного захворювання вводять в ефективному режимі СОЗЗ3-зв'язуючий агент, завдяки чому рецидив гематологічного злоякісного захворювання попереджається або його виникнення сповільнюється. У деяких варіантах здійснення винаходу у пацієнта відсутні здатні до виявлення клітини, характерні для гематологічного злоякісного захворювання. У контексті даного опису "відсутність здатних до виявлення клітин" визначають за допомогою стандартних діагностичних або прогностичних методів. Для пацієнта на стадії ремісії ГМЛ, як правило, характерно усунення аномальних клінічних ознак, повернення в норму гемограми і наявність нормального гематопоезу в кістковому мозку з формуванням «5 95 бластних клітин, нейтрофілів у кількості х1000-1500, тромбоцитів у кількості» 100000, і зникненням лейкемічного клона (див., наприклад, Тпе Мегск

Маппиаї, розділ 11, гл. 138 (17-е вид., 1997): Евієу, Сапсег 92(5), 2001, сс. 1059-1073).

СОЗЗ-зв'язуючий агент може представляти собою, наприклад, антитіло, яке специфічно зв'язується з СЮОЗ3, а гематологічне злоякісне порушення може представляти собою гострий мієлоїдний лейкоз (ГМЛ), хронічний мієлоїдний лейкоз (ХМЛ), хронічний мієломоноцитарний лейкоз, пов'язаний з тімоїдом (що нагадує тимус лімфо-епітеліальна структура) лейкоз, мієлодиспластичний синдром, мієлопроліферативне порушення, рефрактерну анемію, передлейкозний синдром, лімфоїдний лейкоз або недиференційований лейкоз.

У деяких варіантах здійснення винаходу пацієнт на стадії ремісії гематологічного злоякісного захворювання піддавався трансплантації кісткового мозку. В інших варіантах здійснення винаходу пацієнт на стадії ремісії гематологічного злоякісного захворювання піддавався трансплантації кісткового мозку. Трансплантат може являти собою або аутотрансплантат, або алотрансплантат кісткового мозку.

Наведені нижче типи раку найбільш придатні для лікування за допомогою антитіл, пропонованих в даному винаході: типи раку кроветворного походження, включаючи (але, не обмежуючись лише ними): гострий лімфобластний лейкоз ("ГЛЛ"), гострий лімфобластний В-клітинний лейкоз, гострий лімфобластний Т-клітинний лейкоз, гострий мієлобластний лейкоз ("ГМЛ"), гострий лейкоз промієлоцитарний ("ГПЛ"), гострий монобластний лейкоз, гострий еритролейкозний лейкоз, гострий мегакаріобластний лейкоз, гострий мієломоноцитарний лейкоз, нелімфоцитарний лейкоз, гострий недиференційований лейкоз, хронічний мієлоцитарний лейкоз ("ХМЛ",, бо хронічний лімфоцитарний лейкоз "ХЛЛ"), волосковоклітинний лейкоз, множинну мієлому.

Гострі та хронічні лейкози, які можна лікувати за допомогою СОЗ33-зв'язуючих агентів, включають: лімфобластний, мієлогенний, лімфоцитарний, мієлоцитарний лейкози («і тромбоцитарний лейкоз. Крім того, за допомогою СОЗ33-зв'язуючих агентів можна лікувати мієлодиспластичний синдром, мієлопроліферативне порушення, рефрактерну анемію, передлейкозний синдром, лімфоїдний лейкоз або недиференційований лейкоз.

Комбінації з іншими активними субстанціями

Залежно від такого, що підлягає лікуванню порушення СОЗ3-зв'язуючі агенти, пропоновані у винаході, можна застосовувати індивідуально або в поєднанні з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами, зокрема вибраними з числа викликаючих пошкодження

ДНК, деметилювання ДНК або тубулінзв'язуючих агентів, або терапевтичними діючими речовинами, які інгібують ангіогенез, шляхи трансдукції сигналів або чекпойнту мітозу в ракових клітинах або що мають імуномодулюючу функцію (речовини класу ІМІО5Ф)).

Додатковий терапевтичний засіб можна вводити одночасно, необов'язково у вигляді компонента одного і того ж фармацевтичного препарату, або до або після введення СО33- зв'язуючого агента.

У деяких варіантах здійснення винаходу додатковий терапевтичний засіб може являти собою (але, не обмежуючись лише ними) один або кілька інгібіторів, вибраних з групи інгібіторів сімейства ЕСЕК, сімейства МЕСЕК, ІСЕ-1К, рецепторів інсуліну, кіназ АгогаА, Ає!йгогав, РІК і

РІЗ, ЕСЕК, РОСОБЕРЕ, Каї, КР або РОКІ.

Іншими прикладами додаткових терапевтичних засобів є інгібітори СОК, АК, 5гс, Всг АБІ, сКії, сМеї / НОР, с-Мус, РІЗ, Н5РОО, антагоністи білка педдепоод, інгібітори УЗАК / 5ТАТ, Мек, ттТог, МЕКаррав, протеосоми, Кпо, інгібітор шляхи передачі сигналу МУпі або шляхи передачі сигналу Моїсі або інгібітор шляху убіквітінізації.

Іншими прикладами додаткових терапевтичних засобів є інгібітори ДНК-полімерази, топоіїзомерази ІІ, мультитаргетні (багатоцільові) інгібітори тирозинкіназ, антагоністи СХСКА4, інгібітори ІЗКА, антагоністи РАК, інгібітори КІК, імунотерапевтичні вакцини, інгібітори ТОВ, індуктори Негр70б, інгібітори сімейства ІАР, інгібітори ДНК-метилтрансферази, інгібітори ТМЕ, інгібітори рецепторної тирозинкінази ЕгОВ1, мультитаргетні інгібітори кіназ, інгібітори УАК2, інгібітори ЕК, індуктори апоптозу, інгібітори НОоРКТАази, антагоністи Н2-рецепторів гістаміну і

Зо агоністи СО25-рецепторів.

Прикладами інгібіторів Аєйгога-кінази є (але, не обмежуючись лише ними) РНА-739358, А70- 1152, АТ 9283, СУС-116, 8-763, УХ-667, МІ М-8045, РЕ-3814735, 5М5 314, УХ 689, С5К 1070916,

ТТР-607, РНА-680626, МІ М-8237, ВІВ47325 ії ЕММО-2076.

Прикладами інгібіторів РІ К є 55К-461364, ВІ2536 і ВІЄТ27.

Прикладами інгібіторів гаї є ВАУ-73-4506 (є також інгібітором МЕСЕК), РІХ 4032, КАБЕ-265 (є також інгібітором МЕСЕК), сорафеніб (є також інгібітором МЕСЕК), ХГ. 281 і невавар (Мемамагї) (є також інгібітором МЕСЕРК) і РІ Х4032.

Прикладами інгібіторів КОР є іспінесіб, АККУ-520, А0О-4877, СК 1122697, 145К 246053А, азк-923295, МК-0731, 58-743921, І М 2523355 і ЕМО-534085.

Прикладами інгібіторів 5гс і / або Брег-арі є дасатініб, А2О-0530, босутініб, Хі 228 (є також інгібітором ІСБ-1К), нілотініб (є також інгібітором РОСОЕК і сКіЮ), іматиніб (є також інгібітором

СК), М5-187, КХ2-391, АР-24534 (є також інгібітором ЕСЕВ, ЕСЕНВ, Тів2, РНЗ), КМ-80 ії І 5-104 (є також інгібітором РІЗ, Чакг).

Прикладом інгібітору РОКІ є АК-12.

Прикладом інгібітору Кпо є ВА-210.

Прикладами інгібіторів РІЗ-кинази є РХ-866, РХ-867, ВЕ7-235 (є також інгібітором ттТог), Хі - 147 їі ХІ -765 (є також інгібітором ттТог), ВОТ-226, СОС-0941.

Прикладами інгібіторів сСмМеї або НО є Хі -184 (є також інгібітором МЕСЕРК, сКії, ЕІЗ), РЕ- 2341066, МК-2461, ХІ -880 (є також інгібітором МЕСЕК), МОСО-265 (є також інгібітором МЕСЕРК,

Воп, Тівєг), 50-11274, РНА-665752, АМО-102, АМ-299, АВТО-197, МеїМАБ, СОЕМ-241, ВМ5- 777607, УМО 38877605, РЕ-4217903, 5БСаХ-126, СЕР-17940, АМО-458, ІМСВ 028060 і Е-7050.

Прикладом інгібітору с-Мус є СХ-3543.

Прикладами інгібіторів РНКЗ є АС-220 (є також інгібітором сКії і РОСЕК), КМУ 2449, І 5-104 (є також інгібітором Бег-арі і дакг2), МО-2002, 58-1317, лестауртініб (є також інгібітором МЕСЕК,

РОСЕВ, РКС), ТОа-101348 (є також інгібітором ЧУАК2), ХІ 999 (є також інгібітором СК, ЕОЕК,

РОСЕРМК і МЕСОБЕК), сунітініб (є також інгібітором РОСЕР, МЕСЕК і сКіЮ і тандутініб (є також інгібітором РОСЕБК і сКіЮ.

Прикладами інгібіторів Н5РОО є танеспіміцін, алвеспіміцін, ІРІ 504, 5ТА 9090, МЕОІ-561,

Аим-922, СМЕ 2024 і 5МХ-5422.

Прикладами інгібіторів ЧАК / БТАТ є СУТ-997 (взаємодіє також з тубуліну), ТО 101 348 (є також інгібітором РІВ) і ХІ -019.

Прикладами інгібіторів МеК є АККУ-142886, А5-703 026, РО-325901, А7О 8330, АВАУ-704,

ВОЕА-119 і ХІ -518.

Прикладами інгібіторів ттТог є темсіролімус, дефоролімус (є також інгібітором МЕСБЕЇГ), еверолімус (є також інгібітором МЕСЕ), ХІ -765 (є також інгібітором РіІЗ-кінази) і ВЕ2-235 (є також інгібітором РІЗ-кінази).

Прикладами інгібіторів АКІ є періфозін, 55К-690693, АХ-0201 і трицірибін.

Прикладами інгібіторів сКії є масітініб, О51-930 (є також інгібітором МЕСЕК), АС-220 (є також інгібітором РІВ і РОСЕР), тандутиніб (є також інгібітором РІЗ і РОСЕР), аксітиніб (є також інгібітором МЕСЕРК і РОСЕК), сунітініб (є також інгібітором РІЗ, РОСЕК, МЕСЕРК) і ХІ -820 (є також інгібітором МЕСЕК і РОСЕК), іматиніб (є також інгібітором Бег-арі), нілотиніб (є також інгібітором Бег-абві і РОСЕК).

Прикладами антагоністів білка педдейод є ІРІ-609, СОВ-61414, 4000-0449, ІРІ 926 і ХІ -139.

Прикладами інгібіторів СОК є селіцікліб, АТ-7519, Р-276, 7К-СОК (є також інгібітором

МЕСНР2 і РОСЕРК), РО-332991, В-547, 5М5-032, РНА-690509, РНА-848125 і БСН-727965.

Прикладами інгібіторів протеосоми є бортезоміб, карфілзоміб і МРІ-0052 (є також інгібітором

МЕКарравВ).

Прикладами інгібіторів протеосоми / інгібіторів шляху МЕКарравВ є бортезоміб, карфілзоміб,

МРІ-0052, СЕР-18770, МІ-М 2238, РА-047, РА-957, АМЕ-8680 і 5РОС-839.

Прикладом інгібітора шляху убіквітінізації є НВХ-41108.

Прикладами агентів що деметилюється є 5-азацітідін і децітабін.

Прикладами антиангіогенних засобів є інгібітори ЕОЕК, РОСЕК і МЕСЕ (Р) і талідомід, вказані засоби вибирають з групи включає (але, не обмежуючись лише ними) бевацизумаб, мотесаніб, СОР-791, 50-14813, телатініб, КЕАМ-951, 2К-СОК (є також інгібітором СОК), АВТ-869,

ВМ5-690514, ВАБР-265, ІМО-КОВ, ІМО-18Е1, ІМіО5, талідомід, СС-4047, леналідомід, ЕММО 0995, ІМО-О11, Кі 23057, бріваніб, цедіраніб, 183, СР 868 596, ІМС 303, К-1530 (є також інгібітором ЕЗ), сунітініб (є також інгібітором сСКИ і ЕКЗ), аксітініб (є також інгібітором сСКІіЮ, лестауртініб (є також інгібітором ЕІІЗ і РКС), ваталаніб, тандутініб (є також інгібітором РІЇЗ і СКіЮ,

Зо пазопаніб, РЕ-337210, афліберцепт, Е-7080, СНІК 258, сорафеніба тозілат (є також інгібітором

Каб), вандетаніб, СР-547632, 051-930, АЕЕ-788 (є також інгібітором ЕСЕРЕ і Нег2), ВАУ-57-9352 (є також інгібітором Ка), ВАМ-73-4506 (є також інгібітором Кай), Хі 880 (є також інгібітором сМеюб, ХІІ. 647 (є також інгібітором ЕСЕК і ЕрпВа.), ХІ. 820 (є також інгібітором сКІіїЮ), нілотініб (є також інгібітором СК і Бго-арі), СМТ-116, РТО-299, ВМ5 584622, СЕР-11981, довітиніб, СУ- 2401401, ЕММО-2976 і ВІВЕ1120.

Додатковий терапевтичний агент можна вибирати також з інгібіторів ЕСЕК, він може представляти собою низькомолекулярний інгібітор ЕСЕК або антитіло до ЕСЕ. Прикладами антитіл до ЕСЕК є (але не обмежуючись лише ними) цетуксимаб, панітумумаб, німотузумаб, залутумумаб; прикладами низькомолекулярних інгібіторів ЕСЕК є гефітиніб, ерлотиніб, вандетаніб (є також інгібітором МЕСЕБК) і афатініб (є також інгібітором Негг2). Іншим прикладом модулятора ЕСЕК є злитий з токсином ЕОР.

Іншими інгібіторами ЕСЕК і / або Нег2, які можна застосовувати в поєднанні з СО33- зв'язуючим агентом, запропонованим у винаході, є лапатініб, трастузумаб, пертузумаб, ХІ. 647, нератініб, ВМ5-599626 АВНУ-334543, АМ 412, МАт В-806, ВМ5 690514, ОМО-26483327, АЕЕ-788 (є також інгібітором МЕСЕК), А2О-8931, АВНУ-380 АНАУ-333786, ІМО-11Е8, земаб, ТАК-285,

А70-4769 і афатініб (подвійний інгібітор Нег2 і ЕСЕВ).

Інгібітори ДНК-полімерази, які можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являють собою Ага-С/цітарабін, клолар (Сіоїаг) / клофарабін.

Інгібітор ДНК-метилтрансферази, який можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ3-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою вайдазу (Мідага) / азацитидін.

Індуктор апоптозу, який можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою трісенокс (Тгізепох) / триоксид миш'яку.

Інгібітори топоізомерази ІЇ, які можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являють собою ідарубіцин, даунорубіцин і мітоксантрон.

Антагоніст КАК, який можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою Весаноїд (Уезапоїа) / третиноїн.

Інгібітор НОРКТАази, який можна застосовувати в поєднанні з СОЗ3-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою Мегсаріо / меркаптопурин.

Антагоніст Н2-рецептора гістаміну, який можна застосовувати в поєднанні з СО33- зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою цеплен (Серіепе) / гістаміну дигідрохлорид.

Агоніст СО25-рецептора, який можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ3-зв'язуючим агентом, що пропонується у винаході, являє собою ІЇ -2.

Додатковий лікарський засіб можна вибирати також з агентів, мішенню яких є ІСЕ 1К та шляхи інсулінового рецептора. До таких агентів відносяться антитіла, які зв'язуються з ІБЕ 1К (наприклад, СР-751871, АМа-479, ІМС-А12, МК 0646, АМЕ 1642, В 1507, ВІІВ 022, СН 717454, пи Мат ІСЕК і нові хімічні субстанції, мішенню яких є кіназного домен ІСЕ1-К (наприклад, О5І- 906 або ВМ5-554417, ХІ -228, ВМ5-754807).

Інші агенти, які доцільно об'єднувати з терапією СОЗ3-зв'язуючим агентом, запропонованим у винаході, є молекули, мішенню яких є СО20, в тому числі специфічні для СО20 антитіла, такі як ритуксимаб, І У-2469298, окрелізумаб, МЕ0БІ-552, ІММО-106, СаИА-101 (тобто К7159), ХтАбБ- 0367, офатумумаб, мічені радіоактивним ізотопом антитіла до СО20 типу тосітумумабу і іорітумомабу тіуксетана або інші білки, мішенню яких є СО20О, типу ЗМІР Тги015, РКО-131921,

ЕВТ АО5, велтузумаба, К-7159.

СОЗ33-зв'язуючі агенти можна об'єднувати з інгібіторами інших розташованих на поверхні антигенів, які експресуються на лейкоцитах, зокрема антитілами або що нагадують антитіла молекулами, наприклад, з антитілом до СО2 (сіплізумаб), антитілом до СО4 (занолімумаб), антитілом до СО19 (МТ 103, МОХ 1342, 5БАК-3419, ХтАБр-5574), антитілом до СО22 (епратузумаб), антитілом до СО23 (луміліксімаб), антитілом до СОЗО (іратумумаб), антитілом до

СОрз2в (МОА-321), антитілом до СОЗ38 (НиМах-СОЗ38), антитілом до СЮО40 (5540), антитілом до

С052 (алемтузумаб), антитілом до СОВ8О (галіксімаб).

Інші агенти, які можна об'єднувати з СОЗЗ-зв'язуючими агентами, являють собою імунотоксинів, такі як ВІ 22 (імунотоксин до СО22), інотузумабу озогаміцин (кон'югат антитіло до

СО23 - каліхеаміцин), КЕТ5.адА (кон'югат А ланцюг токсину рицину - антитіло до СЮО25), 5ОМ-35 (кон'югат антитіло до СОЗО - аурістатін Е) і гемтузумаба озогаміцін (кон'югат антитіло до СЮОЗЗ - каліхеаміцин), МОХ-1411 (кон'югат антитіла до СО70) або мічені радіоактивним ізотопом антитіла типу 90У-епратузумаб (радіоімунокон'югат антитіла до СО22).

Зо Крім того, СОЗЗ-зв'язуючі агенти можна об'єднувати з імуномодуляторами, агентами, наприклад, антитілами, що індукують апоптоз або модифікують шляхи трансдукції сигналів, такими як модулятори ТКАЇЇ-рецептора, наприклад, мапатумумаб (агоніст ТЕАЇІ--1-рецептора), лексатумумаб (агоніст ТЕАЇЇ -2-рецептора), тігатузумаб, апомаб, АМО-951 і АМО-655; антитіло до НІГА-ОК (типу 100923), антитіло до СО74, інгібітор ліганда фактора диференціювання остеокластів (типу деносумаба), антагоніст ВАЕРЕ (типу АМО-623а) або агоніст ТоіІ-подібного рецептора (наприклад, ТІ К 4 або ТІ 8-9).

Інші лікарські засоби, які можна застосовувати в поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючими агентами, запропонованими в даному винаході, вибирають з групи, що включає (але не обмежуючись лише ними) гормони, аналоги гормонів і антигормональні засоби (наприклад, тамоксифен, тореміфен, ралоксіфен, фулвестрант, мегестрола ацетат, флутамід, нілутамід, бікалутамід, ципротерону ацетат, фінастерід, бусереліну ацетат, флудрокортизон, флуоксиместерон, медроксипрогестерон, гідроксипрогестерону капроат, діетілстілбестрол, тестостерону пропіонат, флуоксиместерон / його еквіваленти, остреотід, арзоксіфен, пасіреотід, вапреотід, адренокортикостероїдами / їх антагоністи, преднізон, дексаметазон, аміноглутетимід), інгібітори ароматази (наприклад, анастрозол, летрозол, ліарозол, ексеместан, атаместан, форместан), агоністи і антагоністи ГНЕН (наприклад, госерелін ацетат, леупролід, абарелікс, церторелікс, деслорелін, гістрелін, трипторелін), антіметаболіти (наприклад, антифолатів типу метотрексату, триметрексату, пеметрекседу, аналоги піримідину типу 5 фторурацилу, флуородезоксіурідіна, капецитабіну, децітабіна, неларабіну, 5-азацітідіна і гемцитабіну, аналоги пурину ії аденозину, такі як меркаптопурин, тіогуанін, азатіоприн, кладрибін і пентостатином, цитарабін, рлударабін, клофарабін); протипухлинні антибіотики (наприклад, антрацикліни, такі як доксорубіцин, даунорубіцин, епірубіцин та ідарубіцин, мітоміцин-С, блеоміцину дактіноміцін, плікаміцін, актиноміцин 0, мітоксантрон, мітоксантронідарубіцін, піксантрон, стрептозоцином, афідіколін); похідні платини (наприклад, цисплатин, оксаліплатин, карбоплатин, лобаплатін, сатраплатін); алкілуючі засоби (наприклад, естрамустин, семустин, мехлоретамін, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, дакарбазін, циклофосфамід, іфосфамід, гідроксисечовина, темозоломід, нітрозосечовини, такі як кармустин і ломустін, тіотепа); антімітотичні засоби (наприклад, алкалоїди барвінку типу вінбластину, віндесіна, винорелбина, вінфлуніна і вінкристину; і таксани, такі як паклітаксел, доцетаксел і їх препаративні форми, ларотаксел; сімотаксел і бо епотілони типу іксабепілона, патупілона, 2К-ЕРО); інгібітори топоіїзомерази (наприклад,

епіподофіллотоксіни, такі як етопосід і етопофос, теніпосід, амсакрин, топотекан, іринотекан, баноксантрон, камптотецин) і хіміотерапевтичні агенти різного типу, такі як похідні ретиноєвої кислоти, аміфостин, анагрелід, інтерферон альфа, інтерферон бета, інтерферон гамма, інтерлейкін-2, прокарбазін, М-метилгідразін, мітотан і порфімер, бексаротен, целекоксиб, етиленимін / метілмеламін, тріетіленмеламін, трієтілентіофосфорамід, гексаметілмеламін, і ферменти, такі як І. аспарагіназа, І -аргіназа, і метронідазол, місонідазол, десметілмісонідазол, пімонідазол, етанідазол, німоразол, КО 1069, ЕО9У, КВ 6145, 5К4233, нікотинамід, 5- бромдезоксіурідіна, 5-йоддезоксіурідін, бромдезоксіцітідін, ерітрогідроксіноніладенін, антраценедіон, СКМ 1631 (конкурентний антагоніст матриці теломерази), 5ОХ-101 (агоніст

РРАК), талабостат (інгібітор ОРР), фородезін (інгібітор РМР), атаціцепт (розчинний рецептор представників сімейства ТМЕ Вуз ї АРКІГ), агенти, нейтралізуючі ТМЕ-альфа (енбрел, хуміра, ремікад), ХІ-844 (інгібітор СНКІ / 2), ММР-40101М (ДНК-алкілуючий агент), ЗРСО-2996 (антисмисловий інгібітор Бсі2), обатоклакс (інгібітор рсіг2), ензастаурін (модулятор РКС-бета), воріністат (інгібітор НОАС), ромідепсін (інгібітор НОАС), АТ-101 (інгібітор Всі-2/Всі-х|), плітидепсин (багатофункціональний депсіпептід), 51-11047 (модулятори метаболізму поліамінів).

СОЗ33-зв'язуючі агенти, пропоновані у винаході, можна застосовувати також у поєднанні з іншими шляхами лікування, включаючи хірургію, трансплантацію стволових клітин, променеву терапію, ендокринну терапію, лікування за допомогою модифікаторів біологічної відповіді, гіпертермію і кріотерапію, і з лікуванням за допомогою таких засобів, призначених для зниження яких побічних дій (наприклад, нудоти кошти), 5-СОЕ, ЇМ-С5Е, фотосенсибілізуючі засоби, такі як похідні гематопорфірину, протофрін (Ріоїоїтіп), похідні бензопорфіріну, Мреб, етіопорфірін олова, феоборід-а, бактеріохлорофіл-а, нафталоціаніни, фталоціанін, фталоціанін цинку.

Фармацевтичні композиції і методи введення

СОЗЗ-зв'язуючі агенти можуть перебувати у будь-якій формі, що забезпечує введення композиції пацієнтові. Наприклад, композиція може знаходитися у твердій або рідкій формі.

Переважним шляхом введення є парентеральний, здійснюваний за допомогою інфузії або ін'єкції (внутрішньовенної, внутрішньом'язової, підшкірної, внутрішньоочеревинної, внутрішньошкірної), однак можна застосовувати також інші шляхи введення, наприклад, за

Зо допомогою інгаляції, трансдермальний, інтраназальний, транбуккальний, оральний шлях введення та введення в пухлину. Парентеральне введення включає підшкірні ін'єкції, методи внутрішньовенної, внутрішньом'язової, надчеревній ін'єкції або інфузії. Відповідно до одного з об'єктів винаходу композиції вводять парентерально. Згідно іншому об'єкту винаходу композиції вводять внутрішньовенно.

Фармацевтичні композиції можна готувати у вигляді таких форм, які забезпечують біодоступність сполуки при введенні композиції пацієнтові. Композиції можуть мати форму однієї або декількох стандартних доз, як, наприклад, в тому випадку, коли сполука в аерозольній формі знаходиться в контейнері, який може містити велику кількість стандартних доз.

Продукти, вживані для приготування фармацевтичної композиції, можуть бути нетоксичними в застосовуваних кількостях. Як має бути очевидно звичайному фахівцеві в даній галузі, оптимальна доза діючої речовини / діючих речовин у фармацевтичній композиції повинна залежати від ряду факторів. Відповідні чинники включають (але не обмежуючись лише ними) тип пацієнта (наприклад, чоловік), конкретну форму сполуки, шлях введення і застосовувану композицію.

Фармацевтично прийнятний носій або наповнювач може складатися з (мікро) часток, в результаті чого композиції знаходяться, наприклад, у порошкоподібній формі. Носій (ї) може (уть) бути рідким (и), в результаті чого композиції являють собою, наприклад, призначену для ін'єкції рідину. Композиція може перебувати у формі рідини, наприклад, для парентеральної ін'єкції. У композицію, призначену для введення шляхом ін'єкції, можна включати також одну / один або кілька поверхнево-активних речовин, консервантів, змочувальних агентів, диспергуючих агентів, суспендуючих агентів, буферів, стабілізаторів і агентів що забезпечують ізотонічність.

Рідкі композиції у вигляді розчинів, суспензій або інших подібних форм можуть включати також одну або декілька таких речовин: стерильні розріджувачі, такі як вода для ін'єкцій, соляний розчин, переважно фізіологічний соляний розчин, розчин Рінгера, ізотонічний хлорид натрію, нелеткі олії, такі як синтетичні моно-або дигліцериди, які можуть служити в якості розчинника або суспендуючого середовища, поліетиленгліколі, гліцерин, циклодекстрин, пропіленгліколь або інші розчинники; стабілізатори, такі як амінокислоти; поверхнево-активні 60 речовини, такі як полісорбати; антибактеріальні агенти, такі як бензиловий спирт або метилпарабен; антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота або бісульфіт натрію; хелатуючі агенти, такі як етилендіамінтетраоцтова кислоти; буфери, такі як ацетати, цитрати або фосфати; та агенти для регулювання тонічності, такі як хлорид натрію або декстроза.

Парентеральну композицію можна укладати в ампулу, одноразовий шприц або мультидозовий флакон зі скла, пластику або іншого матеріалу. Прикладом ад'юванта є фізіологічний соляний розчин. Призначена для ін'єкцій композиція переважно є стерильною.

СОЗ33-зв'язуючі агенти можуть перебувати також у висушеній формі (наприклад, отриманої за допомогою сушіння виморожуванням, сушіння розпиленням, комбінованого процесу сушіння розпиленням та сушіння виморожуванням, сушіння за допомогою околокритичних або суперкритичних газів, вакуумного сушіння, повітряної сушки), обложеної або кристалізованої або включеної в мікрокапсули формі, які отримують, наприклад, з використанням методів коацервації або міжфазної полімеризації з використанням, наприклад, гідроксиметилцелюлоза або желатину та полі (метилметакрилату) відповідно, в колоїдних системах для введення лікарських засобів (наприклад, ліпосоми, альбумінові мікросфери, мікроемульсії, наночастинки і нанокапсули), у формі макроемульсій або обложеної або іммобілізованій формі на носіях або поверхнях, наприклад, отриманої за допомогою рсіпс-технології (покриті білком мікрокристали ргоївіп соаїей тісгосгузіа!І5). Зазначені методики описані в: Кетіпдіоп: Те Зсієпсе апа Ргасіїсе ої Рпапгтасу, 21-е вид., Під ред. Непагіскзоп К.

Кількість композиції, що є ефективним щодо лікування конкретного порушення або стану, має залежати від природи порушення або стану, і його можна визначати за допомогою стандартних клінічних методик. Крім того, для полегшення визначення оптимальних діапазонів доз, необов'язково можна застосовувати аналізи іп міго або іп мімо. Точна доза, в якій слід застосовувати композиції повинна залежати також від шляху введення і серйозності захворювання або порушення, і рішення про її застосування повинно залежати від рекомендації практикуючого спеціаліста та обставин, пов'язаних з особливостями кожного пацієнта.

Композиції містять в ефективній кількості лікарський (ї) засіб (а) або агент (и), що дозволяють отримувати прийнятну дозу. Як правило, вказану кількість становить щонайменше приблизно 0,01 95 лікарського засобу або агента в перерахунку на масу композиції. Коли композиція призначена для орального введення, то ця кількість може варіюватися в діапазоні

Зо від приблизно 0,1 95 до приблизно 80 95 у перерахунку на масу композиції. В одному з об'єктів винаходу оральні композиції можуть містити сполуку у кількості від приблизно 4 95 до приблизно 5095 у перерахунку на масу композиції. Згідно іншому об'єкту винаходу композиції, запропоновані в даному винаході, готують таким чином, що парентеральна стандартна доза лікарського засобу містить сполуку у кількості від приблизно 0,01 до приблизно 2 мас. 95.

Призначена для внутрішньовенного введення композиція може містити від приблизно 1 до приблизно 50 мг лікарського засобу або агента на 1 кг ваги тіла пацієнта. В одному з об'єктів винаходу композиція може включати від приблизно 1, 1,5 або 2,5 до приблизно 50 мг лікарського засобу або агента на 1 кг ваги тіла пацієнта. У іншому об'єкті винаходу кількість, що вводиться, повинна знаходитися в діапазоні від приблизно 1, 1,5 або 2,5 до приблизно 25 мг лікарського засобу або агента / кг ваги тіла.

У деяких варіантах здійснення винаходу доза, що вводиться пацієнтові, становить від менш ніж 0,1 мг / кг до приблизно 50 мг / кг ваги тіла пацієнта (для перетворення на мг/мм2 можна приймати, що В5А (область поверхні тіла) становить 1,8 ма і вага тіла становить 80 кг).

Як зазначено в даному описі, СОЗЗ-зв'язуючий агент можна вводити пацієнту внутрішньовенно або підшкірно згідно з графіком, який передбачає, наприклад, введення пацієнту щодня, щотижня, один раз на два тижні, один раз на три тижні або щомісяця.

Наприклад, СОЗ33З-зв'язуючий агент можна вводити щотижня протягом 2-10 тижнів, як правило, 3-6 тижнів. У деяких варіантах здійснення винаходу схема застосування СОЗЗ-зв'язуючого агента забезпечує підтримання концентрації антитіла в сироватці крові, становить щонайменше 5 мкг / мл або щонайменше 10 мкг / мл протягом циклу введення доз. СЮОЗЗ-зв'язуючий агент можна вводити, наприклад, протягом 1-8 або більшої кількості циклів. У деяких варіантах здійснення винаходу СОЗЗ-зв'язуючий агент вводять індивідууму постійно.

Наприклад, винахід включає спосіб лікування раку, такого як мієлоїдний лейкоз, що полягає в тому, що щотижня вводять в кількості від 0,1 до 50 мг / кг, наприклад, приблизно 1,5 8 або 2,5- 8 мг / кг, антитіла до СОЗ33, пропонованого у винаході. Таке лікування можна, як правило, можна продовжувати протягом приблизно 1-3 місяців, як правило, приблизно двох місяців. В одному з варіантів здійснення винаходу схему застосування лікарського засобу зберігають аж до виявлення зменшеного рівня бластних клітин. Наприклад, дозування можна продовжувати аж до приблизно 6 місяців. Після зазначеного лікування можна використовувати схему з менш 60 частим дозуванням, яка включає, наприклад, введення один раз на 2 тижні (або двічі на місяць).

Таку схему застосування можна підтримувати протягом 1, 2, 3, 4, 5, 6 місяців або більше для підтримки зниження кількості бластних клітин і / або ремісії.

У деяких варіантах здійснення винаходу для мінімізації інфузійних реакцій можна застосовувати профілактичний засіб у поєднанні з СОЗЗ-зв'язуючим агентом. Прийнятні профілактичні засоби включають, наприклад, метилпреднізолон, діфенілдрамін, ацетамінофен або інший прийнятний засіб. Профілактичний засіб можна вводити до або приблизно одночасно з СО33-зв'язуючим агентом.

Лікарський (ії) засіб (и) або агент (и), або композиції можна вводити будь-яким загальноприйнятим шляхом, наприклад, за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції, за допомогою абсорбції через епітеліальні або слизово-шкірні вистилки (наприклад, через слизову порожнини рота, слизову прямої кишки і кишечника тощо). Введення може бути системним або місцевим. Відомі різні системи для введення, наприклад, капсуляція в ліпосоми, мікрочастинки, мікрокапсули, капсули і т.д., і їх можна застосовувати для введення сполуки. У деяких варіантах здійснення винаходу пацієнту можна вводити більше одного лікарського засобу або агента або більше однієї композиції.

Може виявитися бажаним застосовувати більше одного лікарського засобу або агента або більше однієї композиції місцево шляхом введення в область, що підлягає лікуванню, якщо це можливо для лікарського засобу або агента. Цієї мети можна досягати, наприклад (але не обмежуючись лише ними), за допомогою місцевої інфузії в процесі хірургічного втручання; місцевого нанесення, наприклад, у поєднанні з перев'язування рани після хірургічного втручання; шляхом ін'єкції; за допомогою катетера; за допомогою супозиторія; або з допомогою імплантату, при цьому імплантат може бути виготовлений з пористого, непористого або гелеподібного матеріалу, включаючи мембрани, такі як сіаластичні мембрани або волокна. В одному з варіантів здійснення винаходу введення можна здійснювати шляхом безпосередньої ін'єкції в область (або колишню область) раку, пухлини або в неопластичних або перед- неопластичну тканину.

Лікарський (ї) засіб (и) або агент (и), або композиції можна вводити за допомогою системи з контрольованим вивільненням, такий як насос або різні полімерні матеріали. Згідно ще одному варіанту здійснення винаходу систему з контрольованим вивільненням можна поміщати в

Зо околиці мішені лікарського (их) засобу (ів) або агента (ів), або композицій, для чого потрібно використовувати тільки частина системної дози (див., наприклад, Соойзоп, в: Меаісаї!

Арріїсаноп5 ої СопігоПеа Кеїеавзе, т. 2, 1984, сс. 115138). Можна застосовувати інші системи з контрольованим вивільненням, обговорення яких представлено в огляді І апдег (Зсіепсе 249, 1990, сс. 1527-1533).

Лікарські засоби або агенти включають в препаративні форми відповідно до загальноприйнятих процедур з отриманням фармацевтичної композиції, адаптованої для внутрішньовенного введення тваринам, перш за все людині, придатної для лікарського засобу або агента. Як правило, носії або наповнювачі для внутрішньовенного введення являють собою стерильні ізотонічні водні буферні розчини. При необхідності композиції можуть включати також солюбілізуючий агент. Композиції для внутрішньовенного введення можуть необов'язково містити місцевий анестетик, такий як лігнокаїн, для зменшення болю в області ін'єкції. Як правило, інгредієнти застосовують або окремо, або їх змішують разом в стандартній лікарській формі, наприклад, у вигляді сухого порошку або безводного концентрату в герметично закритому контейнері, такому як ампула або саше, вказуючи кількість діючої речовини. Коли лікарський засіб або агент підлягає введенню шляхом інфузії, його можна поміщати, наприклад, в інфузійний флакон, що містить стерильну воду або соляний розчин фармацевтичного ступеня чистоти. Коли лікарський засіб або агент вводять шляхом ін'єкції, то можна застосовувати ампулу зі стерильною водою для ін'єкцій або соляним розчином, з якими можна змішувати інгредієнти перед введенням.

Композиції терапевтичних агентів можна застосовувати також у вигляді прийнятних лікарських форм, наприклад, у вигляді таблеток, коржиків, водних або масляних суспензій, гранул, порошків, емульсій, капсул, сиропів або еліксирів. Композиції, що підлягають оральному введенню можуть містити один або кілька необов'язкових агентів, наприклад, підсолоджувальних речовин, таких як фруктоза, аспартам або сахарин; коргіентів, таких як олія м'яти перцевої, олія грушанки або вишневу отдушку; барвників та консервантів для отримання фармацевтичного препарату, що має приємний смак. Крім того, на композицію, якщо вона має форму таблетки або пігулки, можна наносити покриття для уповільнення руйнування і абсорбції в шлунково-кишковому тракті, що забезпечує тривалу дію протягом подовженого періоду часу.

Для впроваджуваних оральним шляхом лікарських засобів або агентів можна застосовувати 60 також такі, що володіють виборчою проникністю мембрани, що оточують осмотично активну таку, що забезпечує введення, сполуку. У цих зазначених останніх платформах рідина з середовища, що оточує капсулу, всмоктується сполукою, що забезпечує введення, що набухає, витісняючи агент або включає агент композицію з отвору. Ці платформи для введення можуть забезпечувати практично нульовий профіль введення на відміну від гострих профілів, характерних для препаративних форм, з яких відбувається негайне вивільнення. Можна застосовувати також уповільнюючий вивільнення матеріал, такий як гліцеролмоностеарат або гліцеролстеарат.

Композиція може включати різні матеріали, які модифікують фізичну форму твердої або рідкої стандартної дози. Наприклад, композиція може включати матеріали, які формують покриваючу оболонку навколо діючих речовин. Матеріали, які утворюють покриваючу оболонку, як правило, є інертними і їх можна вибирати, наприклад, з цукру, шелаку та інших агентів для ентеросолюбільних покриттів. В альтернативному варіанті діючі речовини можна включати в желатинову капсулу.

Композиції можна вводити пацієнту, який потребує цього, з частотою або протягом періоду часу, який визначається лікуючим лікарем. Композиції можна вводити протягом періоду, що становить 1 день, 2 дні, З дні, 5 днів, 7 днів, 10 днів, 14 днів, 21 день, 28 днів, один місяць, два місяці або протягом більш тривалих періодів часу. Повинно бути очевидно, що композиції можна вводити протягом будь-якого періоду часу, тривалістю від 1 дня і до двох або більше місяців.

Отримання антитіл

Антитіла можна отримувати за допомогою будь-якого методу, придатного для синтезу антитіл, такого, зокрема, як рекомбінантна експресія або хімічний синтез.

Рекомбінантна експресія антитіл або їх фрагментів або похідних, як правило, включає конструювання нуклеїнових кислот, які кодують антитіло. Якщо нуклеотидна послідовність є відомою, то нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло або його поліпептид, можна збирати з хімічно синтезованих олігонуклеотидів (наприклад, згідно з методом, описаним у Киїтеїег та ін,

ВіоТесппіднев 17, 1994, с. 242), що включає синтез перекривних олігонуклеотидів, що містять ділянки послідовності, що кодує антитіло, "віджиг" і лігування цих олігонуклеотидів і подальшу ампліфікацію лігованих олігонуклеотидів, наприклад, за допомогою ПЛР.

Зо В альтернативному варіанті молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує антитіло або його поліпептид, можна отримувати з прийнятного джерела. Якщо клон, що містить нуклеїнову кислоту, що кодує конкретне антитіло, не є доступним, але послідовність антитіла є відомою, то нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, можна отримувати з прийнятного джерела (наприклад, бібліотеки кКДНК антитіла або бібліотеки кКДНК, створеної з будь-яких тканин або клітин, експресуючих імуноглобулін) за допомогою, наприклад, ПЛР-ампліфікації з використанням синтетичних праймерів, які можуть гібридизуватися з 3'-і 5'-кінцями послідовності, або шляхом клонування з використанням олігонуклеотидного зонда, специфічного щодо конкретної генної послідовності.

Якщо антитіло, яке специфічно розпізнає конкретний антиген, не надходить у продаж (або не доступне джерело кКДНК-бібліотеки, призначеної для клонування нуклеїнової кислоти, що кодує зазначений імуноглобулін), то антитіла, специфічні щодо конкретної антигену, можна створювати за допомогою будь-якого методу, відомого в даній області, наприклад, шляхом імунізації пацієнта або з використанням прийнятною тваринної моделі, такої як кролик або миша, для створення поліклональних антитіл, або більш переважно шляхом створення моноклональних антитіл, наприклад, згідно з методом, описаним у Копіег і Міїстеїп (Маїиге 256, 1975, сс. 495-497), або описаному у Коброг та ін, (Іттипоїіоду Тодау 4, 1983, с. 72), або у Соїе та ін, (в: Мопосіопа! Апіїродіез апа Сапсег Тпегару, вид-во Аїап К. І і55, Іпс., 1985, сс. 77-96). В альтернативному варіанті клон, який кодує щонайменше Рар-фрагмент антитіла, можна отримувати шляхом скринінгу експресуючих Бар бібліотек (наприклад, згідно з методом, описаним у Низе та ін, Зсіепсе 246, 1989, сб. 1275-1281) щодо клонів Рар-фрагментів, які зв'язуються зі специфічним антигеном, або шляхом скринінгу бібліотек антитіл (див., наприклад,

СіІаскзоп та ін, Майшиге 352, 1991, с. 624; Напе та ін., Ргос. Май. Асаай. 5сі. ОБА 94, 1997, с. 4937).

Після того, як отримана послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує щонайменше варіабельний домен антитіла, її можна інтродуціювати в вектор, що містить нуклеотидну послідовність, що кодує константні області антитіла (див., наприклад, публікації міжнародних заявок на патент УМО 86/05807; МО 89 / 01036 і 05 5122464). Вектори, що містять повний легкий або важкий ланцюг, які забезпечують експресію повної молекули антитіла, є доступними. Потім нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло, можна застосовувати для інтродукції нуклеотидної (их) заміни (н) або делеції (ий), необхідних для заміни (або делеції) одного або декількох залишків бо цистеїну варіабельної області, який (ї) приймає (ють) участь в утворенні всередині ланцюга дисульфідного містка між амінокислотним залишком, який не містить сульфгідрильні групи. Такі модифікації можна здійснювати за допомогою будь-якого відомого в даній області методу інтродукції специфічних мутацій або делецій в нуклеотидну послідовність, такого, наприклад, як (але не обмежуючись лише ними) хімічний мутагенез і сайтнаправленний мутагенез іп міго (див., наприклад, Ниїспіпзоп та ін., 9. ВіоЇ. Спет. 253, 1978, с. 6551).

Крім того, розроблено методики для отримання "химерних антитіл" (див., наприклад,

Могтізоп та ін, Ргос. Майї. Асад. 5сі. ОБА 81, 1984, сс. 851855; Меибрегодег та ін, Майге 312, 1984, сс. 604-608; Такеда та ін, Маїшге 314, 1985, сс. 452-454). Химерне антитіло являє собою молекулу, в якій різні ділянки виводять з різних видів тварин, наприклад, воно має варіабельну область, виведену з мишачого моноклонального антитіла, і константну область людського імуноглобуліну, наприклад, являє собою гуманізоване антитіло.

Після того, як отримана послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує антитіло, можна отримувати вектор для виробництва антитіла за допомогою технології рекомбінантної ДНК з використанням методик, відомих в даній області. Для конструювання експресійних векторів, що містять кодують послідовності антитіла і відповідні контролюючі транскрипцію і трансляцію сигнали, можна застосовувати методи, відомі фахівцям в даній області. Ці методи включають, наприклад, технології рекомбінантної ДНК іп міїго, методи синтезу і генетичну рекомбінацію іп мімо (див., наприклад, методи, описані у затьгоок та ін, МоїІесціаг Сіопіпу, А І арогаїогу Мапиаї. 2-е вид., Вид-во Соїд 5ргіпуд Нагбог І арогайогу, Соїа 5ргіпд Нагбог, МУ, 1990; та Затьгоок та ін,

Моїіесшіаг Сіопіпод, А І абогаїгу Мапиаї, 3-е вид., Вид-во Соїд Зргіпд Нагрог Рибріїхп., Соїд Зргіпд

Нагбог, МУ, 2001; ї в: Сигттепі Ргоїосої5 іп МоїІесшіаг Віоіоду, під ред. А!йзибеї та ін, вид-во допп

УМеу в Бопв5, М.У., 1993-2006).

Експресійний вектор, що містить нуклеотидну послідовність антитіла, або нуклеотидну послідовність антитіла можна переносити в клітину-хазяїна за допомогою загальноприйнятих методів (наприклад, шляхом електропорації, ліпосомної трансфекції, осадження фосфатом кальцію або трансдукції), і що утворилися клітини потім культивувати загальноприйнятими методами для отримання антитіл. У конкретних варіантах здійснення винаходу експресію антитіла регулюють Кк використанням конститутивного, індуцибельного або тканиноспецифічного промотора.

Зо Клітини-господарі, застосовувані для експресії рекомбінантного антитіла, можуть являти собою або бактеріальні клітини, такі як Е5сПегіспіа соїї, або переважно еукаріотичні клітини, насамперед для експресії рекомбінантних молекул імуноглобулінів. Зокрема, клітини ссавців, такі як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), у поєднанні з вектором, що містить основний проміжний ранній генний промотор людського цитомегаловірусу, являють собою ефективну експресійну систему для імуноглобулінів (див., наприклад, Роескіпд та ін, Сепе 45, 1986, с.101; СоскКей та ін, ВіоТесппоіоду 8, 1990, с. 2). Клітинна лінія СНО може являти собою, наприклад, 0044 або СНО-5. Іншим прикладом системи, за допомогою якої можна експресувати антитіло, є система СНЕБК (див., наприклад, 0.5. 5888809.)

Для експресії антитіл можна застосовувати ряд інших систем господар-експресійний вектор.

Зазначені системи господар-експресійний вектор представляють собою носії, за допомогою яких кодують послідовності антитіла можна отримувати і потім очищати, але вони являють собою також клітини, які можуть після трансформації або трансфекції відповідними нуклеотидними такими, що кодують послідовностями, екпресувати іп 5їйи молекулу антитіла у вигляді конкретного імуноглобуліну. Вони включають (але не обмежуючись лише ними) мікроорганізми, такі як бактерії (наприклад, Е. сої і В. вибійї5), трансформовані експресійними векторами на основі рекомбінантного ДНК-бактеріофагу, плазмідної ДНК або космідної ДНК, які містять кодуючі послідовності імуноглобулінів; дріжджі (наприклад, Засспаготусев рісніа), трансформовані рекомбінантними дріжджовими експресійними векторами, несучими кодуючі послідовності антитіл; системи на основі клітин комах, інфікованих вірусними експресійними векторами (наприклад, бакуловірусної), що містять кодуючі послідовності імуноглобулінів; системи на основі клітин рослин, інфікованих рекомбінантними вірусними експресійними векторами (наприклад, на основі вірусу мозаїки кольорової капусти (Саму) і вірусу мозаїки тютюну (ТММ)), або трансформовані рекомбінантними плазмідними експресійними векторами (наприклад, на основі Ті-плазмід), що містять кодуючі послідовності антитіл; або системи на основі клітин ссавців (наприклад, клітин СО5, СНО, СНО-5, ВН, 293, 2937 або 313), несучих рекомбінантні експресійної конструкції, які містять промотори, виведені з генома клітин ссавців (наприклад, промотор металотіонеїну) або з вірусів ссавців (наприклад, пізній промотор аденовірусу; 7,5 К-промотор вірусу коров'ячої віспи).

Для застосування в бактеріальних системах можна вибирати цілий ряд бажаних бо експресійних векторів залежно від передбачуваного застосування експресуємого антитіла.

Наприклад, коли потрібно отримувати велику кількість зазначеного білка, то може виявитися бажаним застосовувати вектори, які забезпечують високі рівні експресії злитих білкових продуктів, що легко піддаються очищенню. Такі вектори включають (але не обмежуючись лише ними) експресійний вектор Е. соїї рОкК278 (Киїпег та ін, ЕМВО .. 2, 1983, сс. 1791-1794), в яких кодуюча послідовність антитіла можна індивідуально вбудовувати шляхом лігування у вектор в рамці зчитування із кодуючою областю ас 2 з отриманням злитого білка; вектори рім (Іпоцує і

Іпопйує, Мисієїс Асід5 Нев. 13, 1985, сс. 3101-3109; Мап Нееке і Зспизгег, 9. ВіоїЇ. Спет. 24, 1989, сс. 5503-5509) і т.п. Можна застосовувати також вектори рОЕХ для експресії чужорідних поліпептидів у вигляді білків, злитих з глутатіон-5-трансферази (С5Т). У цілому, зазначені злиті білки є розчинними і їх легко можна очищати з лізованих клітин шляхом адсорбції та зв'язування з агарозном гранулами з глутатіоновим матриксом з подальшою елюцією у присутності вільного глутатіону. Вектори рРОЕХ створюють так, щоб вони включали сайти протеазного розщеплення тромбіну або фактору Ха, так, щоб клонований цільовий генний продукт можна було вивільняти з 5Т-фрагмента.

У системах на основі комах в якості вектора для експресії чужорідних генів можна застосовувати вірус ядерного поліедроза каліфорнійської совки Ашодгаргна саїїтотіса (АсМРМ) або аналогічний вірус з ЮОгозорпйа теїіаподавзієг. Вірус вирощують в клітинах бродорієега їгидірепіа. Кодуючу послідовність антитіла можна клонувати індивідуально в таких, що не мають вирішального значення областях (наприклад, в гені полієдріну) вірусу і поміщати під контроль промотору АСМРМ (наприклад, промотора полієдріну).

У клітинах-господарях ссавців можна застосовувати ряд експресійних систем на основі вірусів. У випадках, коли в якості експресійного вектора застосовують аденовірус, що представляє інтерес кодуючу послідовність антитіла можна вбудовувати шляхом лігування в аденовірусний контролюючий транскрипцію / трансляцію комплекс, наприклад, пізній промотор і троїсту лідерну послідовність. Цей химерний ген потім можна вбудовувати в геном аденовірусу за допомогою рекомбінації іп міго або іп мімо. Вбудовування в таку, що не має вирішального значення область вірусного генома (наприклад, Еї або ЕЗ) призводить до створення рекомбінантного вірусу, який є життєздатним і має здатність експресувати молекулу імуноглобуліну в інфікованих господарях (див., наприклад, І одап і ЗпепкК, Ргос. Маї!. Асад. зобі.

Зо ЗА 81, 1984, сс. 355-359). Для ефективної трансляції вбудованих кодуючих послідовностей антитіл можуть вимагатися також специфічні ініціюючі сигнали. Ці сигнали включають кодон ініціації АТО ії примикаючі послідовності. Крім того, кодон ініціації функціонально пов'язують з рамкою зчитування необхідної послідовності, що кодує для гарантії трансляції повної вставки.

Ці екзогенні контролюючі трансляцію сигнали і кодони ініціації можуть мати різне походження, являти собою як такі, що зустрічаються в природних умовах, так і синтетичні елементи.

Ефективність експресії можна підвищувати шляхом включення відповідних елементів, що представляють собою енхансери транскрипції, термінатори транскрипції і т.д. (див., наприклад,

ВіЧпег та ін., Мешйод3з іп Еп7утої. 153, 1987, сб. 51-544).

Крім того, можна вибирати штам клітин-хазяїв так, щоб модулювати експресію вбудованих послідовностей або модифікувати та процесувати генний продукт конкретним потрібним чином.

Зазначені модифікації (наприклад, глікозилювання) і процесинг (наприклад, розщеплення) білкових продуктів може бути важливим для функції білка. Різні клітини-господарі мають характеристики і специфічні механізми для пост-трансляційного процесингу і модифікації білків і генних продуктів. Відповідні клітинні лінії або системи-господарі можна вибрати для гарантії правильної модифікації і процесингу чужорідного експресуємого білка. Для цієї мети можна використовувати еукаріотичні клітини-господарі, які мають клітинний механізм для необхідного процесингу первинного транскрипту, глікозилювання і фосфорилювання генного продукту.

Зазначені клітини-хазяї ссавців включають (але не обмежуючись лише ними) СНО (наприклад, роі44 або СНО-5), МЕВУ, ВН, Неїа, СО5, МОСК, 293, 293, 373, МІЗ8, ВТ483, Не578т, НТВаг,

ВТ20 апа т470, СКІ 7030 і Н5е578851.

Для довготривалого виробництва з високим виходом рекомбінантних білків кращою є стабільна експресія. Наприклад, можна створювати клітинні лінії, які стабільно експресують антитіло. Замість застосування експресійних векторів, які містять вірусні сайти ініціації реплікації можна використовувати клітини-хазяї, які трансформують ДНК під контролем відповідних контролюючих експресію елементів (наприклад, промоторні, енхансерні послідовності, термінатори транскрипції, сайти поліаденілювання і т.д.), і використовувати селектуємий маркер. Після інтродукції чужорідної ДНК сконструйованим клітинам можна давати рости протягом 1-2 днів у збагачених середовищах, а потім пересівати в селективні середовища. Селектуємий маркер в рекомбінантній плазміді надає стійкість до фактору селекції бо і дозволяє клітинам стабільно інтегрувати плазміду в їх хромосоми і рости з утворенням осередків, які, у свою чергу, можна клонувати і розмножувати з отриманням клітинних ліній. Цей метод можна з успіхом застосовувати для створення клітинних ліній, що експресують антитіло.

Зазначені сконструйовані клітинні лінії можуть бути особливо цінними для скринінгу і оцінки пухлинних антигенів, які взаємодіють безпосередньо чи опосередковано з антитілом.

Для селекції можна застосовувати цілий ряд систем. Наприклад, можна застосовувати гени тимідинкінази вірусу герпесу простого (див., наприклад, Умідієг та ін, Сеї! 11, 1977, сб. 223), гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазь! (див., наприклад, 572ураїєКа і 57убаїв5Кі, Ргос.

Ма! Асай. 5сі. ОБА 48, 1992, с. 202) іаденинфосфорибозилтрансферазь (див., наприклад, І оугу та ін, СеїІ 22, 1980, с. 817) у ІК -, Нори - або арії - клітинах відповідно. Крім того, можна використовувати стійкість до метаболитам в якості основи для селекції наступних генів: ОНЕР, який надає стійкість до метотрексату (див., наприклад, У/ідіег та ін., Ргос. Маї!. Асаа 5сі. О5А 77, 1980, сс. 3567-3570; О'Наге та ін., Ргос. Май). Асад. Зсі. ОБА 78, 1981, сс. 1527-1531); орі, який надає стійкість до мікофенолової кислоти (див., наприклад, Миїїдап і Вегоу, Ргос. Маї0!. Асай. збі.

ОБА 78, 1981, сб. 2072-2076); пео, який надає стійкість до аміноглікозидів (3-418 (див., наприклад, Сіїпіса! Ріапгтасу 12, сс. 488-505; Уми і УМи, Віоїпегару 3, 1991, сс. 87-95; ТоІвіо5Пем,

Агпт. Кем. Ріаптасої. Тохісої. 32, 1993, сс. 573-596; Миїййдап, Зсіепсе 260, 1993, сс. 926-932;

Могдап і Апдегзоп, Апп. Кему. Віоспет. 62, 1993, сс. 191217; та Мау, ТІВ ТЕСН 11 (5), 1993, сс. 155-215) і пудго, який надає стійкість до гігроміціну (див., наприклад, зЗапіеге та ін, Сепе 30, 1984, сс. 147-150). Загальноприйняті в даній галузі методи на основі технології рекомбінантної

ДНК, які можна використовувати, описані в: Сипепі РгоїосоЇ5 іп МоїЇесшіаг Віоіоду, під ред.

А!йзибеї! та ін, вид-во допп Уміеу 5 5оп5, МУ, 1993-2006; у Кгіедіег, Сепе Тгапетег апа Ехргезвзіоп.

А Іарогаїогу Мапиаї, вид-во 5іосКіоп Ргез5, МУ, 1990 ї в главах 12 їі 13 в: Сштепі Ргоюсої!в іп

Нитап Сепеїіс5, під ред. Огасороїї та ін, вид-во, ЧУопп УМпПеу 5 Боп5, МУ, 1994, і у СоїІреїте-

Сагаріп та ін, Мої. Віої. 150, 7, 1981, сс. 1-14).

Рівні експресії антитіла можна підвищувати шляхом ампліфікації вектора (див. огляд

Вербріпдюп і НепізсеНеї, "Те изе ої месіої5 Базей оп депе атрійісайоп їог Ше ехргезвіоп ої сіопей депе5 іп татіпаїйап сеїї5 іп ОМА сіопіпд", т. 3., Вид-во Асадетіс Рге55, Мем/ ХогК, 1987). Коли маркер у векторній системі, що експресує антитіло, є ампліфікованим, то підвищення рівня інгібітора, присутнього в культурі клітини-хазяїна, повинно приводити до збільшення числа копій

Зо маркерного гена. Оскільки область що ампліфікується асоційована з нуклеотидною послідовністю антитіла, то виробництво антитіла також має збільшуватися (див., наприклад,

Стгоцзе та ін., Мої. СеїІ. Віої. 3, 1983, сс. 257-266).

Клітину-хазяїна можна контрасфектувати двома експресійними векторами, при цьому перший вектор кодує виведений з важкого ланцюга поліпептид, а другий вектор кодує виведений з легкого ланцюга поліпептид. Два вектора можуть містити однакові або різні маркери що селектуються, які дають можливість експресувати в еквівалентних кількостях поліпептиди важкого і легкого ланцюгів. В альтернативному варіанті можна застосовувати один вектор, для того, щоб кодувати поліпептиди важкого і легкого ланцюгів. У таких ситуаціях легкий ланцюг, як правило, поміщають перед важким ланцюгом для того, щоб уникнути надмірної токсичності вільної важкого ланцюга (див., наприклад, Ргоцагоої, Маїшге 322, 1986, сс. 562-565;

Копіег, Ргос. Май. Асай. сі. ОБА 77, 1980, сс. 2197-2199). Кодуючі послідовності важкого і легкого ланцюгів можуть містити КДНК або геномну ДНК.

Після рекомбінантної експресії антитіла його можна очищати за допомогою будь-якого прийнятного методу очищення антитіла, наприклад, шляхом хроматографії (наприклад, іонообмінної, афінної, зокрема на основі афінності до специфічного антигену після здійснення іммобілізації на білку А і колонкової гель-фільтрації), центрифугування, на основі різної розчинності або за допомогою будь-якої іншої стандартної методики очищення білків.

Вичерпний опис всіх стадій, застосовуваних для отримання моноклональних антитіл, пропонованих в даному винаході, представлено у МХоКоуата та ін, "Ргодисіп ої Мопосіопаї

Апііродієв", Сштепі Ргоїосої!5 іп Іттипоіоду, частина 2.5, 2006.

Приклади

Приклад 1: Афінність до СОЗЗ

Афінності СОЗЗ-зв'язуючих агентів як до СОЗЗ людини, так і СОЗЗ3 мавп ціномолгус, характеризуються величинами КО, складовими 1їОнМабо менш, на клітинних лініях НІб60 і

НЕК293-ціномолгусСО33 відповідно.

Чотирнадцять СОЗ3З-зв'язуючих агентів (повністю людські моноклональні антитіла, перераховані в таблиці під Мо Мо 1-14 відповідно) до СОЗЗ людини і мавп ціномолгус оцінювали з використанням аналізу Скетчарда для обробки результатів, отриманих за допомогою ЕАС5, згідно з методом, який описаний у Вгоскної і ін, Суюптеїгу, 17 (1) 1 вересня 1994 р., сс. 75-83), бо на експресуючих СОЗ33 клітинах (виведена з ГМЛ клітинна лінія НІ 60, рекомбінантна клітинна лінія. НЕК293-ціномолгусСО33). У цілому, метод полягав у наступному: наготовлювали розведення СОЗЗ-зв'язуючого агента для дослідження в 96-лунковому планшеті, починаючи з концентрації 100-400нм в першій лунці (80 мкл), після чого здійснювали наступні 11 стадій розведення (1:2, 40-40 мкл). У пробірки для ЕАСЗ-аналізу додавали по 50 мкл розведень СЮОЗ33- зв'язуючого агента, в кожну пробірку для БАСбЗ-аналізу додавали по 150 мкл клітин (0,8х106/мл-1,2х105 клітин/пробірку). Клітини обережно перемішували і інкубували протягом 1 год. на льоду. Потім додавали 50 мкл кон'югованого з ФІТЦ вторинного антитіла (концентрація 15 мкг / мл; мишаче МАт до людського Ідс), перемішували і інкубували протягом 30 хв на льоду.

Потім додавали 4 мл ЗФР, рН 7,2, що містить 0,02 95 кислоти, клітини пеллетували і ресуспендували в 300 мкл ЗФР, рН 7,2, після чого піддавали ГАС5-аналізу з використанням пристрою ВО БАС Сапіо. Всі стадії експериментів здійснювали на вологому льоду, всі розведення СОЗЗ-зв'язуючих агентів наготовлювали в ЗФР / 0,5 95 БСА «з 0,02 95 кислоти. Для калібрування РГАСЗ використовували гранули СОцчапішт РІС МЕЗЕ (Ргетіх) (фірма Вапо5

І арогайфогіе5). Кількісну оцінку всіх зразків здійснювали з використанням однакових параметрів

ЕАС5. Співвідношення пов'язаного дос і вільного Їд0 розраховували на основі величин МРЇ (середня інтенсивність флуоресценції) при різних концентраціях СОЗЗ-зв'язуючих агентів і представляли у вигляді графіка Скетчарда. На основі отриманих даних будували лінію регресії, кут нахилу цієї лінії відповідав від'ємному значенню константи асоціації. Результати представлені в таблиці 2.

Таблиця 2

Людський СОЗЗ3 СО33 мавпа циномолгус мо 1юноюо | ем 73 | 28б29л12 | 77777777717105.......ЮЮ С / |.7717171717171711106СсС1С 76 | 2803402 | --.::-/-(03 7777/1770 С 8 | 2вобБобцтію | 777777771710477777711 11111111 78 1280-6107 | ...ЙюЮюЮю03 2 юЮюДщ Км | (БГ04 г Щ шик Еш хх ЕЛЕ х ЗВНЯ ПОЛО Я: ПОД ПО Ж ПО

Приклад 2: Кінетика інтерналізації

Поняття "Іінтерналізація" антитіла належить до зниження кількості комплексів антитіло / антиген на клітинній поверхні клітини-мішені після інкубації з антитілом. Аналізи інтерналізації здійснювали з використанням що експресує СЮОЗЗ клітинної лінії НІ 60. Клітини інкубували з фіксованою кількістю СОЗ3-зв'язуючого агента (10 мкг / мл повністю людських моноклональних антитіл, перерахованих у таблиці 1 під Мо Мо 1-14), протягом певних періодів часу (0 год., 1 год., 4 год., 24 год.) при 37" С, даючи здійснитися інтерналізації комплексу антитіло / антиген. У зазначені моменти часу в інкубаційну суміш додавали кислоту для запобігання подальшій

Зо інтерналізації. Після цього додавали фіксовану кількість СОЗЗ-зв'язуючого агента для насичення всіх антигенних сайтів СОЗЗ3 на клітинній поверхні. Загальну кількість СОЗ33- зв'язуючого агента, пов'язаного з клітинною поверхнею, визначали за допомогою БАСз-аналізу, використовуючи кон'юговане з ФІТЦ вторинне антитіло до людського дб. Момент часу 0 год. використовували для визначення початкового рівня комплексів антитіло до СОЗЗ/антиген і приймали його за 100 95. Результати представлені на фіг. З та проілюстровані на фіг. 1-3.

Таблиця З

Такі, що залишилися на поверхні клітин комплекси

Клон ІО Мо антитіло до СОЗ3З/антиген після інкубації з антитілом протягом 4 год. (95) 76 17777111 2во-яяг Ї771111111111111111111111441 п: и ЕТО ЕТ ГО ПНЯ ПО ОО 91111111 28в0-61307СЇ1111111111111111111111141

Лінтузумаб застосовували в якості референс-антитіла. Комплекси лінтузумаб/С033 швидко інтерналізувались після зв'язування лінтузумаба, що відповідало опублікованими даними. Після 4-годинного періоду інкубації на клітинній поверхні залишалося тільки приблизно 20 95 початкової кількості комплексів СОЗЗ/лінтузумаб. При створенні винаходу неочікувано було встановлено, що інтерналізація всіх 14 СОЗЗ-зв'язуючих агентів, пропонованих в даному винаході, виявилася сповільненою порівняно з лінтузумабом.

Приклад 3: АОСсС-активність

Уповільнена швидкість інтерналізації обумовлює підвищену АЮОСсС-активність іп міо. Для оцінки впливу сповільненої інтерналізації на АЮОСС-активність СОЗ3З-зв'язуючих агентів (повністю людських моноклональних антитіл, перерахованих у таблиці 1 під Мо Мо 14 січня) клітини-мішені (НІ 60) інкубували з СОЗЗ-зв'язуючим агентів протягом 0, 1, 4 їі 24 г. Потім здійснювали аналіз АЮСС-активності з використанням стимульованих ІЇ/-2 РВМС в якості ефекторних клітин і сенсибілізованих антитілом НІ бО-клітин в якості клітин-мішеней. У всіх експериментах застосовували МАт в концентрації З0 мкг / мл. Спільне культивування ефекторних клітин і клітин-мішеней у присутності СОЗЗ-зв'язуючого агента здійснювали в чотирьох або трьох повторно в 9б-лункових круглодонних титраційних мікропланшетах, використовуючи кінцевий об'єм 200 мкл / лунку середовища аналізу, що містить 10 95 людської сироватки і 195 БСА в КРМІ в співвідношенні 1:11. Спочатку висівали ефекторні клітини (свіжовиділені РВМСО-клітини в 100 мкл 10 95 людської сироватки в КРМІ на лунку), після чого вносили клітини-мішені і розчин СОЗЗ-зв'язуючого агента (розведений в 50 мкл 195 БСА в

КРМІ). В якості контролю ефекторні клітини культивували тільки в середовищі для аналізу (контроль ефекторних клітин), а клітини-мішені культивували або тільки в середовищі для аналізу (спонтанний лізис), або в середовищі для аналізу, доповненому 1 95 Тритон Х-100 (максимальний лізис). Спільну культуру інкубували при 377 С у вологому СО2-інкубаторі протягом З г. Наприкінці періоду інкубації клітини видаляли із культурального середовища шляхом центрифугування (200 х д, тобто 1000 об / хв; 10 хв) при кімнатній температурі.

Безклітинні супернатанти (100 мкл / лунку) переносили у відповідні лунки 9б-лункового

Зо плоскодонного планшета. Для визначення І ОН-активності (лактатдегідрогеназної активності) у ці супернатанти додавали по 100 мкл реакційної суміші (свіжоперемішаний розчин, що містить 250 мкл каталізатору і 11,25 мл барвника) у кожну лунку і інкубували протягом 30 хв при кімнатній температурі в темряві. Потім вимірювали абсорбцію відповідно до описаного нижче методу.

Для вимірювання АЮСсС-активності застосовували набір для визначення цитотоксичності (Суюоїохісйу Оеїесіоп Кі)Ш (СОН; фірма Коспе, 11644793001). Виявлення цитотоксичності засноване на вимірюванні активності ферменту ГОН, вивільненого з клітин з ушкодженою плазматичною мембраною. Вивільнена в клітинні супернатанти ОН відновлювала сіль тетразолію з набору з утворенням формазану. Вимірювали максимальну абсорбцію формазанового барвника при 490 нм відносно абсорбції при довжині референс-хвилі 650 нм з використанням планшет-рідеру для ЕЇГІЗА. Для визначення відсотка клітинозалежної токсичності розраховували середню абсорбцію для чотирьох або трьох повторностей і вичитали фоновий рівень. Ці скориговані величини підставляли в наступне рівняння для розрахунку

АрСС (95): (суміш ефекторних клітин / клітин-мішеней - контроль ефекторних клітин - спонтанне вивільнення), поділений на (максимальне вивільнення - спонтанне вивільнення).

АрсСб-активність в момент часу 0 год. (без попередньої інкубації клітин-мішеней з антитілом) приймали за 100 55 АЮСб-активності. АЮОСС-активність в різні моменти часу після попередньої інкубації з антитілом розраховували щодо активності в момент часу 0 год. і виражали в вигляді відносної цитотоксичності (90).

Уповільнена інтерналізація СОЗ33-зв'язуючих агентів в порівнянні з лінтузумабом приводила до підвищеної АЮСсС-активності в порівнянні з лінтузумабом. Зроблено висновок про те, що уповільнена інтерналізація призводить до підвищеної АОСС -активності. Інтерналізація описаних

СОЗ33-зв'язуючих агентів перебувала в зворотній кореляції з АОСС-активністю СОЗЗ-зв'язуючих агентів, що свідчить про переваги зазначених СОЗ3-зв'язуючих агентів з точки зору клінічної активності. На фіг. 4 продемонстровані результати цих експериментів, що стосуються кінетики інтерналізації, а на фіг. 5 - що стосуються АОСсС-активності.

Приклад 4: Епітопне картування

Зв'язування з епітопами СОЗЗ-зв'язуючих агентів, представлених у даному описі, у порівнянні з епітопом лінтузумаба визначали за допомогою мас-спектрометрії дейтерію- водневого обміну (НХМ5).

Цей метод дозволяє визначати чутливість воднів амідного каркаса білку СОЗЗ до заміни на рго. Експерименти проводили з використанням тільки рекомбінантного білка СОЗЗ і білка СОЗЗ3 з доданим СОЗЗ-зв'язуючим агентом / лінтузумабом (нижче в цьому прикладі варіант позначений як "антитіло / антитіла"). При цьому продемонстрований виражений захист областей білюу СОЗ3 від обміну в результаті зв'язування з антитілом. Роздільна здатність методу визначалася з пептидів, що утворилися в результаті розщеплення пепсином, наприклад, утворена амінокислотна послідовність може бути крупніше, ніж фактичний епітоп антитіла.

Зазначені що утворилися з СОЗЗ3 пептиди ідентифікували за допомогою додаткових контрольних експериментів з які не мають замін зразками, застосовуючи стандартні точні мас- спектрометричні і РХВР МС / МО-технології.

Зо У разі зразка, що містить білок ж антитіло, білок СОЗ3З і антитіло інкубували протягом 15 хв при кімнатній температурі. Кінцеве молярне співвідношення антитіло/СОЗ3З3 становило 2:1. При використанні автоматичної системи (автосемплер) Г ЕАР (планшет для обміну підтримували при 25 "С, планшет для зразка / реакції "гасіння" підтримували при 4 "С) додавали 8 мкл зразка до 80 мкл буфера для обміну (ї0мМ МанегРО: в 020, рН-7 або 10мМ МангРО»х в НО, рн-7), перемішували і давали пройти обміну протягом різних проміжків часу (15, 60, 120, 240 їі 600 с) при 25 "С. Потім 80 мкл цього розчину переносили в 80 мкл буфера для припинення реакції (буфер для "гасіння") (ІМ сечовина, 0,1 М ТСЕР-НСІ) при 4 "С і перемішували. Потім 90 мкл цього розчину переносили в 10 мкл пепсину (4 мг / мл) при 4 "С і перемішували. Через 2 хв 60 мкл цього розчину ін'єктували в картридж що уловлює Міспгот С18. Картридж промивали

НгО-0,195 ТФК протягом 2 хв зі швидкістю 100 мкл / хв. Потім клапан перемикали і вміст картриджа елюювали на колонці Рпепотепех Чиріїег С5, 1,0 х 50 мм, 5 мкм, З0О0А. Рухома фаза

А являла собою воду / ацетонітрил / ТФК (99/0, 95/0, 05), а рухлива фаза Б представляла собою ацетонітрил / воду / ТФК (95/4, 95/0, 05). Швидкість потоку становила 100 мкл / хв.

Використовували наступний градієнт: 0 хв (0 95 Б), 6 хв (40 95 Б), 7 хв (40 95 Б), 8 хв (90 95 Б), 10 хв (90 95 Б), 11 хв (0 95 Б). В системі І ЕАР відбувалося попереднє охолодження рухомої фази до 4 "С і підтримувалася також температура уловлюючої колонки та аналітичної колонки на рівні 4 "С. Для МС-експериментів (які застосовуються для кількісної оцінки обміну з 020- буфером) застосовували метод отримання одного відсканованого зображення при 3000-2000 протягом 14 хв при дозволі 60000. Для МС / МС експериментів (застосовуються для ІО з Н2гО- буфером для обміну) застосовували метод отримання 7 сканованих зображень протягом 14 хв.

Перше відскановане зображення являло собою відскановане зображення в повному діапазоні від 300-2000 при вирішенні 30000. Наступні скановані зображення представляли собою СІЮ- скановані зображення 6 іонів, що характеризуються найбільшою інтенсивністю, отриманих на сканованому зображенні Мо 1. Ширина виділення становила 1,5 а.е.м., енергія зіткнення складала 35 В, тривалість активації становила 30 мс. Отримані після розщеплення пепсином пептиди ідентифікували з використанням даних про фрагментацію та програмне забезпечення

Ргоївоте Оівсомегег (фірма Тпепто). Ідентифіковані пептиди аналізували з використанням програми, яка є власністю фірми, що дозволяла розраховувати середню масу несучих заміни пептидів.

Всі СО33-зв'язуючі агенти захищали ідентичний пептидний фрагмент, що має амінокислотну послідовність ЕЕНРІРУУХОКМЗРУНСМУМУ (ЗедіЮ Мо: 141) (таблиця 4). Послідовність СОЗ33, що захищається СОЗЗ-зв'язуючими агентами, представленими в даному описі, відрізнялася і не перекривала пептидну послідовність СО33, що захищалася при зв'язуванні лінтузумаба (МОРМЕУМ ОМОЕ, зедію Мо: 142). Використання методу комп'ютерного моделювання ("п віїїсо") із застосуванням кристалічної структури БІС ЕС-5, гомологічного СОЗЗ представника сімейства

ЗІСІГ ЕС, дозволило виявити зв'язуючі епітопи всіх антитіл в найближчому домені білку, при цьому епітоп, з яким зв'язується лінтузумаб, відрізнявся від епітопів СОЗ3-зв'язуються агентів, представлених у даному описі. Таким чином, СОЗЗ-зв'язуючі агенти, описані в даній заявці на патент, зв'язуються з епітопом, відмінним від епітопу лінтузумабу.

Таблиця 4

Ме | 7777 КлонібМмеї//////// | 110 ЕптопСО33Ї///::// Ф 7776 | 2гво-3402 | БЕ РНРІРУУОКМЗРУНОУМЇ З- 778 | 280-50-б1(тию | БЕ РНРІРУУОКМЗРУНОУМ З 7778 2во-61-07,. | БЕ РНРІРУУОКМЗРУНОУМ З -

«110» Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмох «1205 со033-зв'язуючі аганти «1305 12-0321-РСТ «160» 142 «170» РавбепсІп, версія .3 «2105 1 «211» 8 «2122 РЕТ «213» Штучна «20» «223» сов. «4005 1

Ап отр о Аїа Авр Аза Ре Ар І1е 1 5 «2105 2 «2117» 8 «212» РЕТ «213» Штучна «2205 «2232 Сов «4005 2

Авп о ТкЕр А1т1а Авр А1а Рпе Азр І1е 1 З «2105 З «2115 8 «2125 РВТ «213» Штучна «220» «223з СВ

«дом З

Нів Ткр їеєд Авр Аіа Ре Авр І1е 1 5 «210» я 2115 В «2122 рат «РІЗ» Штучна «2832 сок «400» 4. дво тур Ата Авр о АтТа РНе Авр Іїе ї 5 -2105 5 «2115 8 «9122 РВЕ «2135 Штучна «тих «2232 Сов «00 з деп тТтр діа Агро дія Ре Авр ІїВ 1 В «аї0» 6 «8112 В «2125 БВ «2135 Штучна: «гу «823» СЕ «00» в

Авп Тур Аза Авр Лів Рпе Авр І1е 1 5

«2105 7 «2112 В «2127 РЕТ «132 Штучна «202 «223» сов «Ой 7

Авп Тур діа Авр Аїа Ріпа Авр 112 1 5 «8102 8 «-27115 8 «2127 РЕТтТ «213» Штучна «220» «223» сор ка00з в

Авзп ТхроА1а АБр Аза Рке Ар т1е 1 З «2100» з «711» В «212» РЕТ «213» Штучна «вай» «2235 сок «4005 з

Азп отгтр Аза Авр Аза Рпе Авр її 1 5 «210» 10 «211» 10 «2122: РТ

Зо

«8ї33 БжУЧнА «ВИХ «иа СПЕ «чпй» 10 ши: віт Бім Уві вБЮ о Кже ТУ Бе аща ем «вій 31 «ІЗ 0 «іш» рат «І 0 Времозне «вип «ви» се «хх 11

ЗРО бі Бі Уа Ав ТЕ Тут Бе Ав Ден я Ж їв «ВІ» 35 «11 15 «в вх «Вій» шеучна «ах «ВАїх сов «ВПО їх біз спі Бі 83 йвр Ткв тТух Ве йзе Бе

Е 5 їв «21» ІЗ «ії 15 «ій» ват «ВЗ» штучна «а «ий «ВВ

«00» 13 сіз б1у бБіу чаї Авр ТЕрД Тук РАє АБр Бей 1. 5 10 «2107 14 «2112 10 «12з РЕТ. «х213» Штучна «280» «виз» СВК «бом 14 біс сіу біу чаї Авр Тер Туг РПе Авр Тез 1 5 160 «210» 15 «2119 17 «2125 РЕТ «13» Штучна «гий. «723» сов «00ж 15.

Кто І1е Іі Рко Ії їец біу Маї А1їа Авп Тук Аза біп цуз Рре біп 1 З то 15 зу «210» 16 «2115 17 «21272 ВЕтТ «135 Штучна «й «2232 ср «00 16 вАхЯЧ І1їе І1є Рко 112 тТ12 Ап І1І1е А1іа бег Тух Аза піп Або Ре 61 1 5 10 15 свіу «2105 17 «211» 17 «2125 РЕТ «2132 Штучна «20» «223» Сов «4002 17

Аг 112 т1312е Рго Іїе І1їе біу Ії Аїа Авп тук Аіа біп був Рпе біп 1 З 10 15 сіу «2105 18 «211» 17 «2125 РЕТ «213» Штучна «220» «2232 сов «400» 18

АкЧ Іїе Ії Ркго І1е Пес піу Ушаі Азїа Авр Тут Аза біп цув Рів біп 1 5 10 15. с1іу «210» 19 «2117 17

«212» РЕТ «213» Штучна «220» «223» Сов «4100» 15

Акта ч11е І1їе Ро І1е Ппеп біу Уа1і А1а Авр Тут Аза біп Був Рпе сіп 1 З 10 15 в1у «2102 20 «2115 17 «217» РЕТ «213» Штучна «220» «293У сов «100» 20

Агу І1е І1е Ркго Ї1е Ууаї біу І1їеє Уаї Авп Тук Аїа Сіш Був Ріре біп 1 З 10 15 с1у «210» 21 «2112 17 «212» РЕТ «213» Штучна «2209» «223з сОЕ. «і00» 71

Ак Маї Ті Рхко І1е Т1е сіу ч112е А1ї1а Зег Тут Аїа бір Авп Рбе біп 1 5 10 15 ссіу «2105 272 «211» 17 «912» РЕТ «27132 Штучна «2207 «223» сов «4005 22

Атч уаї Т1е Рко Іїе І1е сіу т112е Атіа бБеї Туг Аїа сіп АДвпоРБе б1п 1 В 10 15 оіуУ «2102 23 «2115 17 «2122 РЕТ «213» Штучна «220» «223» сов «4005 23

Ах Уаї І11е Рго Іїе ї1е 51у І116 Аїа бет Тут А1а біп АбБп РпПе 01 1 5 10 15 сіу «210» 24 «2112 17 «2122 РЕ «213з Штучна

«232 срВ «400» 24

Дт тї6 112 Рхо ті Бей АБв Мет діа Ава Тут Аїа бій Ппув Ре вл 1 З 19 15 бБ1У «10» 5 «112 17 «212 РЕТ «13» Штучна «220» «-823» сок «ай» 25

Атд ї1е ї16 Рко Іі Ії сбіу 118 Уаї Авп тує АтТа біп о Був Ре біп 1 со 10 18 бьу «вій» 26 «-811ю» 17 «9125» РЕ «13» Штучна «220 «в»Зх сов «аб» 96

Ака І1е Іч1Ї18 Рго І1є Пе біу Меє Ата АвпоТук діа Сіп фуз Рре біп 1 5 10 15 віу

«105 27 кй11їз 37 «йиї2з РЕВт «щіЗ» Штучна «820» «8232 СсрВ «ай 7 дж тТІіЄ Іїе Рхо ІЗ1е І1є б1у Т12е Уаї Ап Тус о Аза біп Мув РБе сІп,

ХЕ 5 10 5 слу «ріж 28 «вії» «97125 РЕТ «13» Штучна «й» «га: СО «400» 28

АкЧ Ії зіє Рхо І1є Бе біу Іїє Аїа Депо оТут Аза біп уз Рпе біп і З 10 15 біу «810 759 «іа» РЕЖ «2132 Штучна «вий» «223 сок . «Ох 28 :

Авр Тут Діа Іїє бег ї З «21905 30 «в1іТт» 5 жв12з РТ «2135 Штучна «вах «роз срВ «а0бхм 0 бек Тух Вйта Іїе Зв: 1 5 «10» 31 «тут» 5 «2195 РЕЖ «713» Штучна «20» «раз» св «або» 1 бек тут А1іа тІКе БЕ 1 е) «8105 ЗЕ хе «2122 Вт «813» Штучна. «2235 «СО «4і00» 3

АвроТук Ата І12 Ве: 1 5. «210» .33

«21ї» 5 «2105 вв «213» Штучна «бе» «Ор» 33

Азр оТук дід т11е Бех ї 5 «210» 34 «її 5 «12з РЕТ «213» Штучна: «2202 ке23з СрВ. «400» 3 бег Тух Аїа ї18 Бек 1 5 «8102 З5 «вії» 5 «рій» РВТ

Р13» Штучна «880» «823» СВ «ай» 35

Беї тухк Аза ї1є Бех 1 5. «910» ЗБ «11 5. «213» РАТ «213» Штучна «220»

«23 сов «400» 36 веї Тух Аїа т11є Бег 1 З «2102 37 «211» 5 «8122 РЕТ «813» Штучна «2202 «223» Сов «400 37

Бек Тук Аза ІчІ1е Бетг 1 5 «вій» ЗВ «9115. 115 «2127 РВТ «2132 Штучна «220» «223» Сов «400з з8

Бет Тут Аїа 112 Бах: 1 5 «210» 39 «2115 5 «2125 РТ «2132 Штучна «20? «223 СО «00» 39

Вехг Тух Аїа І12е бек ї 5 «9710» 4540 «3115 5. «127: РЕТ «5132» Штучна «220» «223» СВ «4005 40 бБет Тук Аїа І1в Бек 1 в «2102 41 «її 5 «2122 РЕТ «213» Штучна «ва0» «2237 Сов капа» 41

Звт Тут Аза 112 Б5вЕ 1 З «10» 42 «0115 5 «212» РЕТ «2135 Штучна «220 «Ра» СОЕ. «гоп» 47

Зеїг Тук Атїа т1е 56 1 З «210» 43 «2115 8

«2127 вв

«2135 Штучна чит»

«аа» сок

«400» 43 бій піп Ве Двп Бех Яех Ії ТрЕ 1 в

«210» й

«ЖЕ115 8

«12? ВЕВтТ

«2137 Штучна кий»

«223» со

«400» 44 біп біп Впе Авзо бех бек І1їе ТБЕ 1 5

«ій» 45

«її В.

чиЕКгах ЕКТ с--13» Штучна

«23» ср

«4005 45 бів біз рве Авп о бБет ех Ії тах ї 5

«іп» 46

«211» 8

«2127» ВВ

«13» Штучна

«и с «ше32 СВ

«оо» 46 біп біп рве Ап обег бек Іїе Таж 1 5 «210х 47 «25 В «г18х РЕТ -213» Штучна «290» «223» срВ «00» «т віп бів Бе др беж бек Іїє ТНЕ 1 Ко «210» 48 «ії 8 «212» ВВ «214» Штучна «ой» «рий» са «тво» 8 біп сій Ре дай Беї бБет тут таж 1 5 «210» 45 «її» 8 «2195 РЕт «213» Штучна «0» «923» СОК : «100» 48 біп бій Бле Авпо Зак бек І1Є Тах ї. 5

«2105 80 «1» 8 «122 РВЕ «2135 Щетучна «220» «ЖоЗх ОВ «або БО бій бів РП Авр Бет вет Із тах в'я В «2105 81 «11» 8 «йї2» РВЕ «2132 Штучна «2905 ква» СВ кадох 81. бів РНе Ап Зах вх 12 ТВх 1. 5. «2165 50 «Та» РЕ «213» Штучна; «29 доза» СЕ хапох Ба їй вм Ре Ав бЯек Вес 18 ТНЕ- 1. з «РО» З «ої» В

Же185 Вт і

«213» Штучна

«віз сре «005 53 біп бів РБе Авй беж бБетх І12е твхЕ 1 5 «21005 54 чЕ1їз 8 «212» вЕТ «2135 Штучна «ва0» «223» сов «000» 54 бій біп Рбе Двп бек бек о ї1е ТЬЕ 1 5 «210» 55 «ії» 8 «Ви» ВЕТ «24132 Штучна «2205 «?23» ст «00» 55 дпіп бів пе Авп бах бБсх І1ї6є ТНг 1 5 «РО 56 «2112 В «б12з ВАТ «2132 Штучна «»2Их «232 срЕ

«АйО» 56

Бій зій Не двп бек Бас т1Бе ТЕ їі Я «510» 57 «вії» 7 «219» РЕтТ «313» Штучна «990» «0935» сов «ад» 57

Ав о Аіа бек Бек Гей бі бБег ї 5 «0 58 «з» 7 «95185 ВВ: «2135 Штучна «за» «23 свв «ОО» 58 . -АБв Віа Беї БВет пава біз) Бех. 1. 5 «810» 58 «112 7 «9135 ЕТ «2182» Штучна «вах жвази Сов сабо» 55 «АвроВіа Бех Бех ви бім бве ї 5

«210ж БО , «21172 7 «212» РВТ «31379 Штучна «200» «7232 Сов «400» 60

Агр'діа бек бег бе бій Бег 1 5 кеї0» 561 «2112 7 «2122 РЕ: «213» Штучна «220» «223з СсрЕ чЧ«оО02» 61

Авр Аїа беї бБет ІТви біц Бек 1 5 «210» 652 «2115 7 «2122 РЕТ «213» Штучна «20» «223У сов «4а0з 62

АБр А1а Бех Ах цей січ Бех 1 5 «210» 63 «2115 7 «2122 РВТ «213» Штучна

«в «2235 СрЕ «ап» 653

Аа АтТа Бек Бет Беш бій ек 1 5 «2105 64 1195 7 «й» рЕТ : «2135 Штучна ква» «е?З» ср «00-х 64

Аїа АДіа бек бек Геч бій бек 1 5 «105 55 кЕТї 7 кої» ВНТ «?І135 Штучна «дей» «Фе» СсВЕ «40025 55 діа Аїа бек бат Пец 51 Бех 1 в «210» 66 «»115 7 «10» РЕ «211» Штучна «900» «8253» СВ. «00» 66

Авр Аїа бек Бех Без біз Бех ї в мео 65 тії 7 жо РЕЖ «ІЗ» штучна «раб «ра» сов

Аве АтТа бек обех Без бтй бев «рад В жІїіж л чо вВЕтТ «ї3» Штучна жрай дев Мів Явт бек рем біс Бех й 5 «війх 69. «2115 7 «212» ВАТ -5135 Штучна: 020» же» ВЕ «00» 69 «Аве Аіа Бех бег ем бій Бех

«10 70 «112 7 «912з РЕ «ві3» Штучна ково» «23» СВК «ЩО то

Аяр Аїа Бех беї Гви бу бек і 5 «Вій» 71 «2115 її «ета РВТ «13» Штучна ки» «газ» соБ «4002 71

Ака Діаз бБет біп біу ІТе бех бБет Уаї Без Аза 1 5 5 «ВР ОТ. «ії» 4 «177 РЕтТ «ТЗ Штучна «их чив» Сов сс 40 б» по:

Аг Діва Зег бів біу І1е бег бек Аіа Беч Аїа ї 5 10 з хиїож 73 «9113 «2125 РЕТ «213» Штучна

«бах «ваз» св «пах 73 вВхЯ Аза Бех бів біу тТіє Бек бех Ада неп діа 1 ь 10 «510з 74 «8ії» 11 212» РЕ «2132 Штучна «ух савг3» ср «00» 74

Аху дія Звг біл біу І16 бек Вех узі цес діа і З 10 «-2105 75. «й 11 «2125 рат «213» Штучна «790 «УЗ» свв «п0» 75

Ага Аіа Зву біп діу І1є6є Зєї бек Ма) Пво А1а 1 5. 10 «рій 75 «11 15 «таз РЕ . 2135 Штучна «вад» «283 СПБ. ««й005 76 дхз Аза бек Сів біу Іїєе Бек Бек Аїа Пец Діта 1 5 10 «Іа 77 киїіхм 11 «ІЗ РЕитТ «Різ» Штучна «220» «оз СО «400» 77

Аку Віа ех бів біу І1ієе бЗеї Бек Маї Пев Аїа 1 5 то хрій» 7В «1» 11 «212 РТ «йкї3» штучна «ав о «953» сов «00» (78

Ахо вів бек біп біу ІТіїє Зех Бех Уаї їз А1їа ії Бе 19 «Вій 9 «1їз 11 «вт» ВЕ киїї Штучна «вай» «223 Сов «00 78

Ак А1а бек піп с1іу Хі бех Бех Уаі Гви Аа 1 5 10 «в105 80 ше Ії «Ти» ВЕЖ «а.

Ще Уучна: «боб» ковз» ср «оо во дка Аза ек бій бБіу тіє 5бг бат ді тей Лія х 5 їв «2105 81 «гії її 2125 НЕ та» Штучна «2005. деба Ср каб» ВЕ джу Вів Зек бів біу 11 бех бек Аїв Пе Вів ї 5 10 «ІБ Ва «ті» Ії «Вір» БВит. «135 Штуйна. криз со ч«аОп» ВЕ й 5 19. крібж ВЗ ії» 1 жРлож РЕВЕ «гій Штучна хво»

«виї3з со «400» 83

Аку Аза Зех Сіп б1у Іїе Бек бек Віа Пес Аїа 1 5 19 «із А «»112 11 «212» РЕ. «13з Штучнка «220» «вЕЗ3» ср «400з 84

Ака Аіа бех бів Сіу Іїіє Зех Бех АХха Пею дів 1 5 10 «105 85 «2112 117 «912» ВЕЖ «2132: Штучна «20» «223» УН «оз 35 сія Уаз віп Гешп Уві біп беж біу йїа Сів ба1ї Був пуб Рго бБТу бБеї 1 х 10 15 зек Уа1і Дув Уа) бех Сув Пув5 АЛіа зех Бу біу ТПх Рпе бБеїх АБю Тук. 39 дів їїє Бех Ттр Уаії Ах4 біп Діва Ргто біу біп біу їз бін Ткр Меб а сіу АраЯ Іїе Її Ртго Ії Ген осіу Маї Віа Ав Тук Аза біп Був РБе

Бо 55 бо біп біу Акта Уві Те тів ТЬж йіа АвроБув бет ТТ Або Таж Аїа Тух то 75 ва меж стіз Бей Бек ЗвЕ бемодтя Бе бі Ар тв Ав уаї Тух Туг був ж. що: ст дуа Ату Ав Тер вів Авр Аха вве дер тів Тер біу сів сіу тав мех 106 195 Бе

Уві Тнж Маї Беж Бех «гі» 86 хат» «рій Вт їз шеучна жуадо суйаж МН біп Мат бів тю Укі бів бек біу йїа бій Уві Був був ре білу Без ї З 19 Не

ВЕ УВІ пуб уві век був пу слів БЕ бу дв тиж Ре Вес Як Тух о 5; Зо дів тів Бех тир маї Ага буя йія то біу біп'біу ем бій Ткр. Ме зв і 45 біу Аха 116 І1е рРхо ті 116 Ав ї18 Ата Беж Тух Аїа Сіп АвповВе 50 сій біу де Уаі Тит бів ТТН дія яв бує бек ТБж Вп Тк дів Тук: 85. 70 п во.

Меє біп Пец Вег Бег Цей Ага бек біш дер Тйх Аїв Уаі Тук Тук Суб 85 90. а5

Аїа Ахя Авго Ткр АТа Аврой1а Ре Ар І1є Тср біу Сіп біу Твю Меє 106 165 116 чаї Тв уа» Баг Веї 115 к21йз В? «вії» 117 319» ВТ «213» Штучна «баб» «52325 ЧЕ «ап дт вій аї бій пец Уві бій бек бтіу ТУ Бі ві пув пуб Реє біу Бек ї 5 то 15

Бек Уаії був Уаї Бет Сже ПЦув уаї Бет Сіу Ар ТБж РПе бек бек Тук

А1а І1ї1е Бек тж» Чаї Акд біп А18 ВРго сіу біп 61У їПеч С15 Тгр Мес

З5 45 45 біу Ата Ії ї16 Бгто Т1е Бі БІіу І1їе АЇЖ Авио тут Атїа бій Був РНе о вд. се сій сіу ка Уаї Тнж Ті Тв діа Або Бу бас тт Зек Татх Аїа тТух е5 7 5 во

Мес бій Фей беб беж Пей Агу бек біз Авр.тТБЕж Аїа уаї Тує Тук сук 85 80 | 95

Ат Аху Ні ТЕр цей Авр о АтТа РНЄ АБр о Іїе тер оСіу бів біу тт Ме

100 в по: зи те Уж ШЕ век 115 жо вв: ших В жара РЕЖ ех штучна жаб «03 МВ. ««бі» Ве бій Ма; бін пев миї бів бе» бік йза бію уаї був йШук гро БіуУ Бех

Б Ез зв: зв.

Жек мат ожує ат век сує вує дія Звг Сіу сту ТЕЖ РНЕЖ Зв АВр тує вх Б. Зо:

Ака тів бек Тр Чаї Ага Сію АБ Бк біу біп біу цец біш Тюр Мер 0 45 біу АЖО Іі її бо тр БеЯ Сі; Ма Бін ар їОк дія бів дув не хо БВ Ей ів бІуУ АЖ МЕ ТВ її ТВ Аа ар пуює Беж ТМ АЕЩ ЖЕ йза ту де т 78 во:

Мех бій Пву бек бек ву Ак бек бій Авв о Твт Аба Уаї Тує Тух був 85 90. 85;

Віз Ат Ап Тер Аіяа Авр Аїв Ре Авр л1і6 Тжв біх бія бі Тв МеЕ чаї тиж уаі вес Бех 115

«2105 85 «1» 117 «218» ЕТ «2135 Штучна. «боб» «яз Ук «005 Ва бій Уаї бій Беш чаї бій Бек бїіу для біз уні цує вує Рто біу ех ї в ло Ще

Бех Чаї Бу М3і Бежт Сує Бук Атїа Бек біж біу Три Рнє бек йзр Тух 25 25 Зо діа тів 5еж То Уаї Акуу бій Аїа Бто ту ста сту Бе обі тер має 35 40 45 біу АТУ ТІВ І1ї6 РЕФб тіє Пев бІУ Ууяі дів АБ тую АТЯ ОЇ пув вве

За в БО біп біу Аха Уві Тих Іфе Трек Віз Ар Пув Зех ТЕ Аху ТБЕж віа Тух 7 75 85

Має біз Бби бек бек тей АкФ Бк Біп Явр Твя Ат Заі с Тухк Тук був 85 о 95 дів вагу деп Тер Аза АВр ода РНЄ АБр о ї1е ТЕр б1у бій сту Тк Ммеє 195: 105 їїо ча тах Удь бЗег Бех 115 «то 90 «т» лі «РІ?» РЕт 5В

«2135 Штучна жа «5235 Ув «00 90 бів Уаї бій Бей Уаї бів бег сСіу Віа 515 уаї Сіл був Рго біу бек 4 З 19 15-

Беї Чаї був уві бБеї Сув цув А1а бБеї Сіу Авр ТБтІ Бпе Зет Бех Тук 0 В. 30 діа Іїе Бех Тер Маї АБа бій Аза РКО біу бій б1у Бей бій Ткр Ме біу вхо Їїе Ї1е Рко Іїв Уаї біу їїе Уаї Ал Туг А1їа бін муз РБе 5о 55 є бін БІіу деку уаї Твготів Тв оАТа Авровуя Зех Меє беж твЕ Аза ту б 19 т во мес біш Неп беж Бех ви Ак бву бій Авротах Аза уві ту тук був 85 50. і-й

Аїа Ахо АзпоТтроА1а Авр о АТа Рре Авр ї1е тТкр Сіу бів біу Твт Меб 160 165: т10: чаї тнЕ маї Беж вет 115 «зїйм 1 «11 117 к«гі2з РЕВТ «818» Штучна «889 «223» УК

«00 1 бій чаї 51п Бей Уаї біп Бек сіу Аза Біз Ммаї був ув Рха б1іУу Бет ня Бої 18 15

Яех: Уаії Був Уві А1а Суб пуб АтТа Бех Сі Авр ТВх РБе бах бек Тухг і. 55 30

Аіа Ії бех Ткр Уаї Аг біп Аза Рго біу біп біу цей біч Тер Меє йх бпіу АЖЩ Хаї І1є Рто І16є Іїє біу 116 Аїа Бек Тух Аїа біт АБО Рає в 50 біп біу Ага Маі Тр Ізе ТВх А185 Авр Дк9 бек ТВт Звх ТНЕ Аза Тук 65 70 75 во

Меє Аїа Пей беї Беї пем Ат беїх бі Ар ТвІ Аза Уаії Тук Тук Сув 85 50 ре:

Аза Ата зп Ттжр вза АвВроАта Рпе Ар т11е ТтЕр 51у бій біу Ту Мес

То 05. 116

Ма1і Тих Уві ех Бег «8105 ЗЕ «11 117 «РТу» ВЕ «2135 Штучна «220 «3» У «40065 98. біп Уаї бій ей уаї бій Беї сіу Ата бтій Уаї був Буз Бхо бІу Бех 1 5 Ід 15 бо веж чаї Був таї вія сув туз йта вет біу вер ТЕЖ РБЄ Зегк Зет Ту 2-9 ве зе діа їїе Зех Тгроуаі Ак бів Ада Рко біу бій біу Бе бій Тер Мет 35 46 45 бір вка Маї Іі Вже Іів ї1їе Сіх 116 Аза Зех Тук АТа біп Ави: Ре ве ОБ Боб. "біпобіу ду Уяі ТЕ ІТ6 ТНЕ АТа дер Акд бе ТБ бБеї Тих дів тут 65 7 пе во мес діа ьсо Беб Яек рец да беж піх АБ ТВж ді Уві Туд тут Суз діа ка Ап оТбродіа АвроВіа Рпе Авр оті Тюробіу бів бту Твк Меб. тоб то 11й чаї тн уві БЕЖ веж тв «рі0» 83 «ії» 317 212» ВЕТ «0135 Штучна «ага» «053» «4005 (85 бій Маі бій Бей б81 бів век бту Аїв бтТи уаї Бу Був Рто сіу век і 5 10 15

Бевж Мак руз Уаї йта Сув пуб Аа бек СТу АБр о тТЬт Рпе Бех Вес Тук Н 25 30

Аза І18 Бек Тир Уа) дгд бів Аїа РО бІу віп 51У Печ сій ТтТЕВ о МьЕ 35; 40 15 сєїу йго Уаї тіє Рже І18 Іі Ту І1є Аїа бек Тужк діа сів дДвл впе 5О. вх о біз біу дк Уаї Тв І1є ТВи Атїа Авр Ага Бек ТБк Бек тТртг А1а Ту: є тв їв во

Меє Аза Бей Бех ей їв дтєЯ Бвт бій двр ТНК Аїа 7в1 Тут Тук Сув 85 щу 95 діва АЕУ дат тер АтТа дер Аза РНе Ав ті тІр бБ1у біпобі1у ТЕ Меф: 160 105 116. тУаї Тк Уаї Бех Бех 115 «105 8 «гії 1185 «2125 ЕВт «13» Штучна: «590» «98232 хХНн «4005 84

Сіп Уві біз Бей Уві сбїп Бек біу іа Сі Уві Шув Був Рго біу Бех ї. В 10 15

Бех уві пув уві Ве Сув Був Дій Бет Сіу піу ТНж РП Бек Зв Тук зо

А1їа ТТ Бек Ттір Чаї ду біп Аза Рко бту бій б1іу пеш бі Тгр мес ре А 45 сіу АкдФ Тіе тів РКО Ії Беп Авр Ме Аа Авп Тут діа біп Буз Рпе

85 СТ біб бі Ак Уві ТБг її тр Аіа Авр був бег ТБ Тут ТБх Аїа Туг 70 15 80

Мех стій Бей беж бек Бей Аху Бек Бі Авр тк ОАТ1а Маї Тут Тук сСув 85 89 95 вій Аха бій біу біу уві дер отТЕр тую риБ Ар. зей Тео біу АБО су 100 105 16

ТЕтх геп Маї Їйх Уві бех Бек 115 «зд» 95 «11» 115 коло» ВІ к21ї3ж Штучна. «220» «Об» 98

БтІя Мав Ста рен о Уаї біп єї біу Аїа бій чаї пузв буз ро біу б5ег ї 5 то 18

Вег Маї Був Маї Бе Сув пув А13 Бей біч Авр три Ре БЕХ Зак тух

АтТа Іре бет Тер УМаї Ак біп А1а Рто бі бій біу Ппеч бій Тир Меб зЗ5 го. й: сіу Ах Тіє Іїе Рро ЇТе 116 б1у І1е Уаї А5п Тук діа біп дув Ре 50 55 о біп біу Ажа Уві ТБк Т1іє Тр о А1а Аврогув Вбк тб Тук ТНЕ Аза Туг 65 79 15 во

Меб 5їіц Беш бет Бех Те Ак Беї б13 АдББ ТОК Атіїа Чаї Тук Тук Сув 85 90 95 діа АгЧ біц біу біу уві Авр Тур Тук Ріє Авр Гей Тгр біу Ака біу 100 105 110

Тіт опе Уа1! ТпЕ Уа1ї бех Вес

ІЇї5 «210» 86 «2112» 119 «2122 РЕВТ «213» Штучна «220» «23» чн «400» 96 біп Уаї бі пе Маї біт Бек б5і1у Аза біш Уаї Був пуб Рто б1у зег 1 З 10 15

Бег ча1 МПУув Уаі1 бБежх Сув Гув Аїіїа беїх с0сі1у бБі1у ТБж Ре Бех Беї Туг 29 25 30

А1їа Іїе Бех Ттр уаі Аку біп Аза Рго біу бій Сіу їси біч Тр Меє 35. а 45 біу Агу їІ1е І1е Ро Іїеєе Грей біу МеЕ Аїа Азп Туг Аїа біп Пув Рреа зо 55 60 б5іп б1у Акд Чаї ТВс І1е Тпх А1а Авр Гу Бех Типу Тук Тнг Аїа ТУуг 655 70 75 8о

Мес січ Мей баг бер Пей Аку бЗеї Сі) Авр Тпх АТа Уа1ї Тук Тук Сув 85 Зо 95.

Віа Агу бій біу біу Маі Авр о Тгтр о Тух РБе Авр рей тур біу Ак с1у 00 95 11о

ТВк пе; Уаї Твж Уаї Бек ваг 115. «210» 87 «2115 1189 «д125 Рв «ріВЗ» Штучна жег2Ох «риЗ2 УНН «а0б0з 97 біп Уаї біп пей маї сій бЗек біу діа біц Уаї Був Був Рко біу ВЗекг 1 5 10 15 беї Меї рух Уаї Беї Сузв Був іа Бек біц Авр Тйгт Рбє бек Бет Тук 20 25 Зо

А1їа т1е бЗетх ТтІр Уа1ї Ак бій АТа Рко Ссіу біп 5іу пей бі) ТІр Мес 35 40 45 біу Аг І1є ІЗе Рто Ії Іїе біу І1є узі Авп Тут діа біп Пуз РБе 5о 55 БО біп біу Ага Уаї Так Іїе ТБг Аїа Азр був бек Тпх Сув ТЬх Аїа тух

Меї БР Пео Тпрозех Бей Ак Бех 51 Авр їпх Аїа Чаї Ту Тух Сув аг: 95

А1їа АкЧЯч біз С1у сіу Уаї АДвр Тгр тТук Рпе Авєр Бей Тер біу Ак б1у 1980 105 110

Тнжх Бе Уві ТОЖ Маї бек веї 115 «210» 98 «2112 119 «ві2» ВІ «2132» Штучна «гай «а» УК «400» 98 сі Уві бів Бей узі сіп Бест біу Аза біс чаї цу пув Рхо сіу зак 1 їх 10 15

Зек Чаї Був уаі Зек Сув цу дДІв Бех сіу бБ1у ТЕх Рнє Зек Баш тук 20 во 30

Аіїа т18 Бек Ттр У81і Ак бій Ата Рго сіу сіп 5Б1іу Без бій Ттр Меб піу дя їїв лів Ржо ІТї6 рез біу її Ава вп отух вів бів БУ5 віце; 0 же 60.

СІіп біу Агу Уаї ТБх їїе ТтвгроАіїа АвроБувзобек ТБх Тут Тлх Аза Тухг 65 79 78. о

Меж бій бе Бех Бех реп АжЯ бех бій Авр о Тл Аза Маї Тук Тук Суз в 99 55 вій дха бій біу сіу уаї Авр Тер Тук РН дер мем Тер бІу Аж с1іу 00 105 ї1о тп пес уаї Твкх Уві бек Бак 115 «гій» 99

«2115 107 «2185 ЕТ «513» Штучна «2» «ве3» Ух «00» 98

Азр Ії біп Бей ТВЖж бів бе Ро бек бег цей бБеї Атїа бек Чаї біх 1 в 19 7175

Авр вхо чаї Тр ї1іє тТВБт Сув Ак Аїя Бех бій б1у 16 Бет Век Уві 29 25 З

Бецп віза Ткр Тур біп біп Був Бгто біу Пув діа Рго Був пед Цей Ії1е. 20 а5 тук Азв Ага Бек беж песо бі Бех сту уаї Ро Бех ВХ Бпе Зсхк б1у

Б ВЕ. ОО

Бей біу Зек сіб таж дяЮ РВе тТвг Бец тв Ії Зеї бєг Пед біп РКО: 63 709 тв: во

Із дар Рре Аїа Тьт Туг Тут Сув біп біп Рпе Ап бек бек І1є Твіт: 85 90 95

Рне біу біп сіу Тк Був печ бін ї12 руб АкФ 169 05 2105 105. «2172 107 «2125 ВТ «2135 Штучна. к2295 «рЕЗз 1. «а0йоО» 100

Авр т1е 51п Бей ТНжЖ біп бБеї Рто Бек Зек Пес бек Аїа Бет Уаї Ту 1. 5 Іо 15:

АвроАка уві так ІЛВ ТВЕ Суб Аж діа Зетх біб біу тів дет Бех діа о 2 ЗО.

Бен вдів Ттер Тук біп біп бує Рко біу Був Діа Рго Був Іво рей І1е 46 45

Тут Авр Аїа бек бек їеп бі) бБвг СІіу Уаії Рго Бек Ак Рпа Зак ТУ о 5 бо

Евх бБіу бБеї сСтїу ті Ав ОРпе ТВж без ТИЖ тзе 5еї Беж пем бій рРгО 65 70 та Во

Сій Ар Ре Ака ТБк Тук Тух Су біп біп Ре Авюи бех бек І16. ТБЕ 85 о 45 вне бІу вій б1у Тв уз век біб її пу Ак9 180 ща «210х 101. «2112 107 «19 РВтТ «213» Штучна «520» «2835 У «Оз 1601

АБр тів біп пе ТНг бій Бех то бек Бет цес ех Ала Бех Уді 1у 1 5 їй 15 йвр Дка Уаії Тк її ТВах Сув дко АТа бек бій біу ї1їе бек беж Аїа ху 25 3 ев Аїа Тгробет Сіл біп ув Рхо б51у Був Аїа Рко Був Пец Пец тів з 49 ях

ТЖЕ АБв А1ав 5еї бет їз 91 5 сьу Маї Рко 5ег Ак Рпе Бек біу 55 50

Зак біу Яетх біу твЕ дБр Ре Таж Бей Тв Ії дек бек реа біл РІб 65: 70 т5 о бій Авр Впе Аїа тт Тут Тук Сув сі» Бір Рре Авп бек бек Із ТЕ 85. 50 55. тва сіу сій сіу тн Був реч бій т1є Був АК оо 105 «210» 105 «21їх 107 «Ва» РЕЖ «тіЗ» Штучна хрой» кегЗ МУ ка0Ом 102

Двр Ії біп еп Тк Сіп бет Рко бех Бех цеп Бах Діа бех Уаі1 біу 1 5 10 15

Ар Ага Уаі Тре Іїе ТБе Сув Аку Аза Бех біп біж І1їе Бех бБет Уаї 12 30 тем А1а тТуб о тТук біп біп пуб РЕб біу ув Аа РЕб цув цем бе ТІ 4 5

Тут Азвр о АТа век Бех їйеи біш бек біу Уві Ркб бек Аку Рре беж б1у 53 во бег бБ1іу Бек біу Тих Авр Ріє Тпт Пец Тву Т)е бег бег ем бій Ртб 65: то 75. Во бЗіц Авр РБе А1а ТБЕ Тух Тук Сув біп біп Ріє Авп бег бат І1є Тк 85 о за

Впе біу біп сіу Тк Був Пен бі) 1182 Туз Ах4 100 105 «5505 103 «211х 107 «5125 РЕТ «213» Штучна «Ех «2232 Уь «4005 103

Авр 1182 сіп тей ТБх біп бек Рго бВеб бек Гей Бех Аїа Бех Уаї1і Ш1У 1 5 10 15

Азр Ат Чаї Тих т15 ТБї Сув АхЧ А1з18 беї бів біу І1їе Бех бек Уаї зо

Івп А1їа Тго Ту піп біп Буз Ркго б1у Пуз Аіїа Ргро Був Ппез Темп І1е ав

Тук Азв АТа бег бек БГеч бій Бех біу Уаі! Рго бек Акуд Ре Зеї 01уУ 5О 55 бо беж с1У БВет біу ТіБх Абвр РрБе Тах Пец ТІ І1е Зевс бег Гей біп Рго 65 79 75 80 січ Авр Рів А1та тп о Тук Ту був біп б1й Рпе Авкр беж Бег І1в ТвЕ 85 20 95.

Рпе біу Сіп біу ТНг Гуз Пем бій І1е Цув Аг 100 105

«21125 107 «2125 Рв «2132 Штучна «20» «ва» ЧЕ «005 104

Авр тїе стіп Бей Ти обіп Зет РтО Бек бег їви Бег Аза Бек Уаї сіу ї 5 0 15 дер дод Уві Так І1є Тв Сув дку діа Бех бів сіу Іїє бех БЕ діа 29 2в 30

Тїец Аіїа Тер Тук біт біп Пузв Рго біу Був Атїа Рго Був Бец Бей І1е. а5

Тух Авр Аді Бех Ак вч бтш Бех біу Чаї ро Бек Ах Ре Беж сту ва Ба 5

Яєт Сіу бех біу Твк Авр ВБбе ТБу Бец ТЕ І1є Бех беї Пен біп Руо 65 70 тв. 8 біш ввр впе Так Тк о Тук тук Сув сіб біп Ре Авд бег Зег Тух ТВх 85 90 5 вве біу бій б1іу ТНг Був пб) біб Ії Був Ку «5105 105. «1» 107 «р12У РВЕ. «9135 Штучна «280 «Зх М

«або» 105; деб Іі біп Ір ТВЕ бій бет РтТо бет Бек во Бег дій б5бк уві б1у х. 5 16 ї5

АвроЯсо Уві Твк Ї1е їх Сув ака Вів бек біп Зіу І1їе Бех Бех Уві 26 25 зб її Аїа Тер Тух бів біп пув обко С1іу був Аїа Бко Був Пец Пем Тв. тут Аїа Ажта БЕЖ ББЖ Те біш ВК біу Уаі РЕЮ Бах Атд РН веж щу

Заг біу бвж ОІУ Твт Ар Ра Тит пей Тбт І18 Бех бех цею бій Ре 55 7 7 й вій Ар Ейе А1а Так Тук тує був Біп біп Рье йвп Бет Бек Те тк рие біз бій біу тих Був уві Бій ІТ пуя де іво 105 «210» 106 «811» 107 «рі» ВТ «вра» Штучна. «го» «й» «оби 106

Аев їле біл пен Тв»б біп бег Ро беї Бех цей бек А1їа Бех МУаї біу 1 5 10 15

Авр Ага Уаї Тк їїе тк був Аро Атїа Бек Сіп біу Тіе бек Зег Маг 75 ЗО твч вів Тгр отут бів біп Гуя Рхб сіу пуб дтя Ржо пуд пев пед Т18 35 40 45

Тук А1іа Ата бех бек пец біп бек біу Ук) Рго бек Аку Рпе бах біу 50 55 60 бех біу Бех Сіу Трт Дар Рпе Так рез Тл ї1їе бег бВех іПез бІп Рко 55 "о. 75 8о біз Авр Ра Аза ТнНЕ ТУуЄ тук сСув бій бій РНє Авр 'Зек Бех ї1їє ТЕ вра сіу бів б1у ТАх пуз Маї біз І1є Пух Аху 100 105 «об» 1607 «тіж 197 «віль вет «ока штучна «вдо» «ОЗ» У «00» 107 дво Ії біп Пеп Так біл Бех Рко Бер беж гресп бек Аза Зех Ма) біу 1 В 10 ї5 авзр Ага УВ1 ТАК Ії ТБЖ був Ату Аїа Бех біп бі їїє Зеж Беж Уві зб щен від ттр тує сів бів Був РЕо 51У Був Аїа рКОо Був. Бей ем те

З 40 15

Тук А1їа Аїа Бех бат їей сі Бех біу Уаї Рто Бех Ато Ре Беж б1у си) 85 Бо

Бех біу Бег біу ТВу Авро РБе тТпг пей Тих т11іе 5вї бЗег цей біп Рго

Б 7о не во біч Авзр Рбе А1в Трхг Туг Тур Сув біп бій рРпе дви ву бе 116 Тв 85 50 95

Епе бїу біп б1іу Тнк цПув їец бі 116 уз Ат 160. 105 «2102 108 ж-?11і» 107 «2129 РЕТ «273 Штучна 220» «823» УМ 00» 108

Авр ІТ1еє 5іп Гей ТНК о біп Бех Рко Бест бет Тец Бек А1а бек Уаї біт ї З 10 15

АвБ Ах Уві ТВ тів Тих Суз ду Аїа бех біп біу Ті бах Зехїх Аїа о ЕК зо

Теп Аза Ткро Тут бів біб Був вго біу пух Аїда Рго уз Рце Меї 116 35 49 3)

Тухк Авзр діа бек Зах їви бій Зех біу Хаї Рго Бех Аку Ріьа Чек б1у 50 55 бо

Зех біу бек Б1уУ Тпк Авр Рпе ТВг Цей ТБЕ ТІіе бек бек Гей біп Рко то 75 80 бі Авр о Рпе Аіа ТБж Тут Тут Сув 10 бів Ре Азлобес ет ї11є тТВх 85 зо 95 вВБе 5іу біп б1у Тк Пуз Бем біз І1Те Ббуз Ат о105 1605 жет15 107 «5195 ВЕТ «от Штучна их крав Ми ой» 109

Аве 118 біб дес Тнт біп Зег Рго Бех Зех Бем бек Віа Бек маї біу 1 5 10 18

Аве о Ажа Маї їпх тіе Тв бує йке Аїз Зех бів б1у їіє бек Вех Аве 20; ше: З пев Ата ть тур сля бів цпує виб сту мув Аа рев Був вне ме їх в в; ся

Тут Аве дів. беж бах щей бій Явг б1у Уаї рт век виш вне вх с1у 56 55 56

Зек бїу Чек біу Тих Ар Бе Тк Пен ТБх Ії бек бек їев бій Бо 65 то 75 8о біз АБО РКе дії Твт Тув тує бує бі ТЯ Вве дей ее бе ті Зк в о: вв;

Ве бі бій бір тнж Був Бен біюш тіє іже .-АЕд 190 105 «гів таб жо1тїїю 107 шої РЕЖ жі35 деучна «290.

жошю

Кар Ті БО Меи Твк біпоЯек Рке бег Бех Їїеп Бех Аа Бех Маї біу ї 5 15; їв

Авро вке їЗі Тек їі6 Тне Сув АвБд Ата Бек бій бау їіФ бег Беж йі 85 зо веа Аза ттр тує сів бій пув БгОо БІ Був куа РЕФО Пув Ре меж. тІе

Зв «0 ї8

Тух Ар Вів бЗеїх Бех Пес біз Зек біу вії Бго Бек Ага пе бек сту: з 5. во

Бек сіуУ Бех біу тТвх дер ре Тег рем ТИ Тіє Беб беб Бей біт Бго 65 "ЕВ: В; ВО сій дер вве дій тн тує тую сук стій бій Ре дя Бек свак Те ТИЖ в з 95 пе біу бів біу Тк бує пев бБіч іє Був Ага. 100 105 "жато» 111 «18 05 жв195 ЕТ е0т3х Штучна «вд «Ра3х мь жабОж ЖІ. дер оІ1зб бів ем тве бл бек РеЄ 56Ж Ж пеш Бех Віа Зв Уа ву 1 в. їб Е5

Кер оажхт уві тик ІТе тиж Сує Ася дія беж бій слу т1е беж вх Вів га 25 во

Феш Ата тжр Тук біп біп Був Ркб сіу Був Аїа Рго був Рве Меє Ії8 46 15

Тут АБр Ала бек Бех ей бі Бек бІу Маї Ркб бБет Арч риє Бек сту

БО. 55 во век віу Бак сіу Тпї Авр вБпе Тпх Без Ток Ії Беї Бек Бей бів Еко 65 70 75 во бі) Дер Ре Аїа Твх Тух Тук Сув біп біп Рів Азп о бек бед тів ТЕ 85 50 95.

РБе біу Біб біу ТЕ Був пе бій Ії Ббуз Аг

Ібо 05; : «2105 112 «8115 107 «812з ВВ «2132 Штучна же «ша М «4065 112

Авр о тіє бТп рей Твх СЕпобетх Ріо бек дек пес ет А1іа беї Узі 51У ї 5 о 15 йзр о Агу Заї Тпк їі ТИ Сув Ак АтТа Зак біп сіу 116 Бєк Зх А18 2й 25 .по печ діа Тер Тух біп біп був РЕо біу ув дїа Рто Був РБЄ Меж т16 35 4о 45

Тух Авр Аза Зег беж. Бей бій Бек біу уаї РЕОо бек Аку Рре бек б1у 58 бо зех спіу Бет б1у ТВу Авр РБе Тижх Бе ТК Ізе Бех Бех Пец Суп риє: в то 75 8 бів АБЮ о Ре А1іа Ту Туг Тук оСув бір біп вне двопп бек ес І18в Тег. 85 90 95 бне б1іу бів Сіу ТБт був рем обі) її Буз дк 169 105 «во» КЗ: «115 4547 «9125 РВЕ «2135 Штучна: «Фо «223» УН «400» 113 біп Уві бів їез Мав бів Бех б1і1у Ата біо таї ув пув ВЕо бту Бетг 1 5 15 15 бак Уві Був Уві Бек Су Був 'Аїа ек біУу Бу ТБж Рбе бек Авр о тук 2 25 30 діа І1є Беї ТтІр уаї Аку біп діа Рто Сіу біп біу ем біц ТІр Мех 15 біу Аку І1е Іїє Рто І1е це» біу Маї Віа Аза Тук Ала Сіп Гув Ре

БО 55 г) біп о біу Аку Маї ТВт Ії ТБх Віа Авр Був бег Тдт Ак Ту дів ТУуг 70 75 80

Меє біч Пец Бек Бех Бец Агу Бех біз Авр Тит Ата уві Тух Туш Суб 85 зо 85

А14 Ак АБ Тер Аїа Ав Аза Ре Авр Іїе ТІр с1у зіп сіу ТНг Ме 100 105 110.

Уаї тб Уа1 беїх бек Аїа Бех ТБг Був с1у РІО бБег Уаі РбБе Рко Гей 115 120 125

Атїа Ро Бек Беї Ппув Бек ТЕ Бех сіу сі1у ТК Аїа Аза Пец 51у Сув ї30 ї35 1540

Ген оУаї Ппуз Авр Тут Рре Рто біз Рго уві Тру Уаї Бек Тгр Двп бек 145 150 155 160 5іу діа пем ТВт бек біу уаї Ніз Твх Рне Рго Аїа Уаї рес біп Бех 165 170 Тт5

Зех б1ч1у Бец тує Бех Ів Беї Бех Уаї Уві ТНК Ув1 Ркго 5еї 5еБЕ вег 180 185 199 ївп обі ТБг о біп Так Тугк ІїТа був Авп оУаі Авп оНів Був Рго беж Авп 195 200 205

ТВх Ппув Ма1 Авр цуз Агу Ма1і біш Рхо пув бек Сув Авр о пув ТВтІ Нів 210 215 220

Тих Су Ро Рго Сув Ркро А1їа Рхо біч Без Пе» біу біу БІО бек Увї й ЗО 235 240 вве цей вда орто Рко мув Рго Був Авр ТБт пес Мебї І16 бек АхЯ ТЕ 245 259 253

Рко бій Уа1 ТтвЕ Суз уа1 Уві уді Авр Уа) бет Нія сій Авр РКО СІ 250 55 270 уаї Пув Рре Авп ТІр Тух Уві Авр біу Уаї б5іа Маї Нів АвпоА1їа пуз 215 280. 285

Жвг Був Бо дко бів біб біп Туюк Аво беж Тв Тух йся Уаї Уву Вес 280 з85 зоб

Уаї ївш Тв Меї без Нів бір вро Тхр Бец Аво біу був бід Тук Був за5 зо 315 З2о

Сув Був баї веж Азй цувоАїа їей орто Кта Бо тТ1є Сі був Твж ТТ 325 330 335

Ек вуз дій цуз Сіу бій Ртю дкУ птй РКО Суй баї тую Тмх ей РЕе

Зо заз 386

Во Бек Акт са біш Меє тв бує вп бій Уаі бЯехт їеш ть Сує бе

У Бую Біу Біне Тук РЕ Бек АБр їі Ала Уаї бій Ткр біс Бех дав зт ЗБ. зво сіу бій РКО сій ДеБ до ТУЖ Був тах тВх рхо РТ Маї пев Вер Вей вах зяо 395 400 дер біу беж Рпе РВе без Тух бБет цу рес тах Маі Авр Був Беж Ахо 405 410 415

Ткр біл біп біу Вев Узі Рне бек був Бех Уаї Меє Нів ві Аїа Цех 420 455 430

Нів Авп оНів Тук Тпт піп оБувсобек Пец бек Бе веж Рго біу Був аз чай 445. «Ушоз їй ярів 47 «125 РЕТ . «ВІЗ» Штучна 8о

«йо: «ваз У «ой» 4 біп Ма) Сів Пец Уві сія бек біу АтТа біс: Маї рув ГБуя Рко сіу бек 1 5. 10 І5 бек Уаї Пув Маї бБеї Суз Був Віа бек С1у Авро ТІ Ре БбБег веж Тух в 25 30 дІва її Зех Тер Узі вка Бій Ата Ро Сіу бів біу ви бБІй Тер Ме 465 Ж: біу Ак та ІТе Руб тів Ті Ав ті Аїв Бех тут вта ій деповНВ

З во біп біу Ат Уа) ТБВж І12 Тну Вїа Авр орує бек ТНг Ава ТвеоАТа Тух 65 76 В 8

Мас бір цев цех Бех Бей го бек біб Авр Те Аза Уа) Тук Тук су 85 35 З5

Аїа дкч Ват ТІВ АТ Авв Аза Ре Ав іє тТквр віу бів сту тих має 100 то 110 чаї тв Маї Бет Бех АТ Бех Тнж Буз оту ро Бех Угії РВе РКО цем 715 ї20 125

Вів Рхо Бех Зек Був Зек Тит Зек біу біу Твх дів Ата дез бім сСув: 130 135 120:

Пец Чаї був дер Тух Епе бо сій Рхо чаї тт уві бЗех Тк Ап Зег 145 155 155 166 віу діа гей Та беї ЯКУ чаї Вів ТНЇ вдє веб діа уаї ей сій Бех 165 ї7о 175

355 ЗБ . зво

Ууаї був біу Рпе Тух Рко Бек Авр ч11є Аїа Уаі сій Тер біц Бех Авп 370 375 зво вату біп Рхо бі Ап Ази Тук Бу Тит Так Ро Ро Уаї Те) Азр Бек 85 380 395. 400

Авр пі веж оре Рае Пей Тук Бах був рез ТПпПх ві Авер ув зех ВКФ 495 410 415

ТЕр біл біп біу Ап о Уаї Ре Звтх Сує Век Уаї Меї Нів бій Ата Гей 420 425 430

Нів Авп Нів Туг тах бій Пув Бех Пец бек Бей бек Рго бі пуб 435 449 445 «еї0х 115 «11» а? «2122 РЕТ «9513» Штучна «2205 «283» УНН «аро» 115 біп Уаії бів пей Уа) біо Бек б1у Тпжх бів Маї Був Був Рго біу бег 1 5 19 15 бек Уаї Був Чаї Бех Суб цу Уа1і Баж бБіу Авр ТІ Ре бБеї Бетг Тукг 5. Зо

Атїа тІ1е Бех Ткр Чаї Ак біп Віа рго біу біп біу Без біз тр Ме сіу АкчЧ І1е Ії Рко Ії Ії Сіу ї1іе Аза Авп о Тух Аїа біп бує Ре 55. 60 в2 з55 Зо зво

Уаї Туз шіу Ре Тук Ро Бех др т1є Аіа Маїі біч Тур біо бек Ав

Злі З во б1у б1й Рко біз Авлп Ав Тук пу Тпг ТВуУ Рго Рхо уаї Бе) Авр Бек 385 390 395 400 дно 519 бек Ра Ре Тем Тух Бад Був Без Ту Чаї Авр був бЗетх АгФф 405 410 4ї5

Тгр піп бій біу Азп Уаі Ре Зех Сув ЯЗех Уаі Меб Нів піч Аїа цей 420 425 430

Нів Авп нів Тук Тах біп Пбуб5 Бех Пец бек їй Беїг Рко б5іу Був 38 440 445 «10 115 «211 447 «8122 РВТ «9513» Штучна «Вей» «ва3»М УН «400ж 115 біп Уаї біп цец Уаї біп бег біу Тйх біз уаї йуз Був Рхо біу Бех 1 Кг 19 15 чек Уаї Пув Уві бек Сув МПув Уаі ек БІіу Авр тп Рре Беж Зех Тук 25. за

Аїа І1е бек Тер Уаї Ага біп Аіїа Рго біу біп біУ Бей біз Тер Меє сіу АкЧ І1е Ії Ро Т1е ТТє біу Її1е Аїа Ап Тух Аїа біп був Рпе 6 біп біу Аха УМа1їі Тлх І1е ТВ А1а Авр обу бек ТБЕ бек ТЬр о Аза Туг 65 70 75 о

Меє бій Пеп бех бек Ппей Ага беїг бій Авр ТБг о Аїа Уаї Тух Тухк Сув 8 90 55

Аіа Атго о Нів Ттгр рей Авр А1а Ре Авр Іі Ткр сіу б5іп біу Тпг Меє 100 155 110

Чаї тк уві бек Зек діа 55 Типк Був бБ1у Еко бБет Чаї РНе Рто Бе) 115 1250 125

Аїа Рхо вет Бек Був бек Тіт Беї біу стіїу ТБ А1а Аїа Певж біу Сув 130 135 140 їецп Маї цув Авр о тую Рпе Рг бій Рко Уаї ТВху Уаї бек Тер Авп бБег 145 150 їз5 160 сіу Аїа Бен Тпї Беї біу Уаї Нів ТпПЕ о Епе Ркго Аїа Уві Пец біп Бех ї655 170 175 заї б1у Пен Тут Бек Пец дек Зеї Уаї Чаї Тпх чаї Рхо Беї Бег Бах 180 185 180 їни біу Таг біп Тік Тух її Сув ДбпоУаі Авп о Нів Був Ро Бех Авп 135 200. 205

ТВвх Гу Уа1і Авр Пув Ако Уаї бі Ро Був бек Су Авр о Пув ТВк Нів 216 215 220

Твкх Сув Рго Рко Сув Ро Аїа Ро бій їеч Пец б1іу біу Рко бег Уві 225 230 235 240 вве реп Ре Рге Рко Був Руб Був Дер ТВг їец Меб Ії6 Бех йти ТвВЕ

245 250. 255.

Вхо біз Уаї Твг Сук уаї Уа1 Уві Авр баї Явк Нів бій йвв вто бій 266 зе ето Й

Чаї цув Ре Ап Ткв Тут Уві Авр о біу Уаї біц Уаї Ніє Авл Аїа Був 280 25 тиж Був вто дРШ ПІ бій біп Тух Авій Бех тн Ту Ага уаї чаї 58 289 Фв5 300

Маї бо Тв Укі цем Лів сів двр Тер пен одав сіу був сСьє Тук Був 305 310; 315 320

Сув ув таї бЗес два ув дів зви Ро А1їа Ро І1є біш Був Тіжг Т1е: 325 330 335. бек пув АїТа пу сіу бій Рго Аку О1Ч вЕО біп Уаї Туг тн пев РІЕо. зво за 350 риб ях АК біш сій Меє тТйе пуб йвп о сІіп уаїі бек еп тва Сув опе 355 збо 355

Уаї Був біу РВе тух Рго Бех двБр 116 Аїа Уві бій Ттр Січ Бек Авд. 370 375, Зво біу діп Вко СТ Авзвп о Аво Тут Був Тк Тк оБко Вко Маї пе Авр Бех 385 за вв 406

Ввр біу Бех РБе РЕЯ Бей тую бах пув Беж Тнг о уді Авр вує Беїє вгд 405 4хо 415

Тжв біп сій б51у Азп уні Ре бек був Бех Маї Меє нія біш Аїа Бей 420 425 к30

Ніз Аяп оНія Тух ТБр бій Був Бег еп 5аї цей 86х Рко сіу Був 435. 40 415 евї0з» 116 «11» 447 «210» РЕ «2135 Штучна «8505 «223 УН «400Оз 116 біп Чаї біт бей Чаї ба Беж о біу Аїа біх Уві Цув ув рко сі Бетг 1 5. 10 15

Бек уаї Був уаї бек Су ув Аіїа бех біу біу ТвВтх Ре Бек Авв Тух 20 25 30

Аїа Ії бек Ткр Уві Аку біп Аїа Рхо біу біп біу беб біз Тер Меб

З: 4й. 45 бту Ажа ті ч1зіе РЕО Ії: пн б1іу Маї АКБа Авротук діа бій Туз Ре 50 З5 62 біп сту Ак Ууаї ТвкоІ1їе тнх діа Двр Буз бЗеї ТБт о Агру Ту Атїа Тук 18 175 б

Меж бій Пец Зал бех бен Ага Зак біз Авр о тру діа Уві Тут Тух Суз я5 зо ве.

Віа Агу Авп о Ттр о діа Авр Аза Ре Авр Ії Тер біу біп 01у ТЕ Меє 166 то5 110

Уаї Тв чаї Бех бех Аїа бетх ТБх Бу бІіу Рго Зег Уа1і Рбе Рго цей 115 150 . 155

Аїа Рто бБег бег цЦув Бех ТПУ бег б1у бпіу Тпх А1ї1а Віа це біу Сув .

130 135 140

Бен Уаї був Дзр Тук Ріє Ркго бі Рго Ув1їі Твг Уаї бек Тгр Азп бег 145 159 155 1650 бі1у Атїа Пез ТБпІ Бех 51у Уаї Нів ТІ Ве РБго Аїа Уаї Пей бій 5Зег 165 179 178

Зек сіу цец Тук Зех Бей бБетг Бех Ууаї Уві Тік Чаї рго Бех Бех Бех ї89. 185 190 рем біу ТБ біп Тлх Тук ї1е Су Авп Уаї Ав) Ні Був Рго Бех Авп 1885 200 205 тТвк Був Уаії Азр Був Ак узі біш Рто Був бек Сув Авр о Був ТпЕ нів 210 215 229

Твх Суб Вуб рРго Су Ро А1їа Рго біз пез їн біу біу Рко Бех Уаї 225 230 235 240

Рйе реп Рде Рхо ко цув Рто пуд АвроТБт Без Меї ї1є бег Аг ТНЕ 745 259 255

Рго бі Уаї ТЕ Су Уві уаї Маї Авр о Уаї Бек Нів біш Авр хо бій 250 БУ 275 чаї Був ве сАвп о ТК о тТук маіїі Азов о біуУу Маї бій Ууаї Нів Ав о йта ув 28. 280 285 тат Був Рго Ага бій біз бій Тух Авп бек ТНжХ Тук Аку Чаї Уаі Бак 295 300 таї Пе Тр оУМаї Бей нів бій Авр Тгробео Авп о сіу Буд бі Тук буз 305 19 315 320

Сув Пух Маіїі бек Ап пуб Аі1іа їси Рго Аза Рто Іч11іє біз Був ТВк І18 325 339 335

Зех їув Аїа пух б1іу Сіл оРко Ахо іш Рго бів Уаї Тук ТВпжх Пеюш Рко 340 345 350

Рхо дек Ако бТ10 бі Меж ТрІ Був Авпойів Уві бек Бев Тих буз Гей

З5а зво зви чаї пув б1у Ре тТук Рко Бек Авр Ії Аїа Ув)і бій тв сій зЗвк Авп 370 а75 зво біу біп рто Сіц дД5п А5п Туг пу ТБроТвх Рго Рко Уаї Бей Авр бег 355 зав 385 «00

Авр о біу бБеїг Ріє Рпе Бей Тук Бек Пцув Бей Тих Уаї Авр Буз Бех Аху 405. 419. 415

Тер біп стіп біу Авт Уві Ббре Зег Суз Зех Уві Мебє Ні іч Аза Гви 125 430

Нів Авп Нів Тух тик обіп Буз Бех Пен бетх їм бех Рко б1у Був 435 44о 445 «210» 317 -21ї12 «47 «Фіг» РТ «213» Штучна «его» «вг283» УН «400» 117 бій Маї біп єс уаї бій бет б1у Аїа бій ЧУаіїії був пув Ро Стіу Баг ї 5 10 15

Бех Уа1і пув Ууаї 5еї Сув Бук Аїа Бех сіу с1у Тип Ре Бех АБр тут

А1їа Ії бет Тур Маії Ак біп Аїа Рго Зіу біп біу Тем. біс Ткр Меє біу Ак 116 ІТїе Рко І1їе Пец біу Маї А1ї1а двр Тук дАтіа біп пуз Рпе 5О 55 60 сіп Ту Агя чаї Тв т1е Твт Аза Авб о пув бЗех Трг Акб Твї Ата Тукг 65 то 78 о

Мек бій без Бех Яєт ем о Аго бек бі Авр Тк Ата Маї Тут Тук сСув ве 90 95 діа Акд Авп Тер о Аіїа АвроАТїа Рре дер Ії Тер біу біп Сьу ТІ Ме 7 т95 110

Ууаї Тит Маї Зет беж Атїа Зек ТНх Туя б1іу Ркб бек уаї ЕШе Рто Пе 115 199. 125

Аіа Ро Бех Зек пув Беї ТІ бет б5іу б1іу ТВх Аїз А1т1а пес біу Сув 130 135 140

Бей Уаї Був Авр Тут Рье Рко біш Рко Уа1ї ТБк Уаї Бех ТЕр Авті Бех 145 155 155 бо сіу вів рем тьг БЕК Сію Маї Ні тий Ре Рго Аїа уві цей СІВ Бех 165 170 175;

Бег біу ей Туї Бек їби бек Зех чаї Уаї Ту Уаї Ркбо беї бетх Беї 180 185. 196 пей п1іу ТНК Стій Тпт тую ч11іє Сув Авп оМа1ї АБі нів Пув Рго Бек Ав 195 290 205

ТВі Бйуз Маі Авр Пув Аха Уа1і! біб Рго Пуз бек СувБ Авр о Гуз ТНг Нів 210 215 220

ТВх Сувз Рко Рго Сув Ретв А1з1а Рко біб Пей пей біу п1у Рхо Бег Уаї1і 225 230 235 249

Ре Гец Рпе Рко Ркго Гуз Рго Гуз Авр ТпХх Гпей Меї І1е Бех Ага ТНЕ 245 250 255

Ро бів Уаї Тв Суз Уаї Уа1і Уаї Авр уаії бехтх Нів біц Авр Рго 01 260 255 27о

У7а1 ув Бпа Ап Тір Тут Уаі Авр о б1іу Ма1! 517 Уаії Нівз Авп Аза Був 21 28О 285

Тс о Був Рко Аху 510 бід біп Тук Авпобеїсх ТБг Тук Ак9 Уаї Уаї Бег 290 27935 зо

Чаї цес тах Уаії Тез Нів сіп Авр Тер їей АБпобіу Був біо Тух Був 05 10 315 320

Суз Туш МЗа1і Бек Ав ГПув А1їа Те Рко Аза Рго Ї1е бій уз Тік І1е 379 330 335 ех їув Аї1а Пув біу біп Рго Аго бій Рко біп Уа1і Тух ТБПх Пец Рко 34 345 350

Вко Бек Ак біп біц Меж тТВх Пув Авп о Сіп Уаї Бех БПей ТВвк Сув Бей 355 369 365

Уаї пув б1у Ррпе Тук Рго Бех Авр 11е Аїа Уа1ї с010 Ткр бі) Бек Авп 370 375 380 ш1іу біп Рко сій Ап о АБва Тут Ппув Тк ТПк Рко Рко Уаі Пер Авр Бек 385 зо 395 400

Ар сС1іу бет РБе Бйе їейп Тук бех Ццує Ппей Тпг Маї АДвр був бек ка 405 416 115.

ТЕв бій біт б1іу Авп Уаії Рпе бБет Суз вет Чаї Меж Ніб січ Ата пЕей 420 125 458 нів Ажи піз тук Твї Сів Був Бех пем бек рем Бек Рто СТу Був 435 40 445 «210» 118. «21їз 447 «2125 РЕВТ «5135 йтучна «вай» «рез УНН «ап0» 118 біп Уві біс пен Уві бів Бег с1іу АїТа біш Маї біл ув Рто біу Бех. ї в 18 15

Бек таї був уві Збк Сув вув дій Беїг б1іу дер ТЕ РВЕ Бек Бег тук 29 25. зо дта Ії Бег Ткр Маї Акдф сій Віа Рто біу бій б1у цей бі тер меє

ЗВ. 40; 48: біу Аг І11е Іїє Рхо ІТеє Ма1і біу Ті Уві Авп Тух Аїа біхш Ппув РКе ва 55 бо біп 61у Аку Маї ТБтІ Ії Тиж АТїа Авр Був Бах Меї бБет ТБж Атїа Тух 65. то 15 во

Меї б1іц Пец бех Бех Ге Акад бес бій Азр Тпт Ата Маї Тух Туг- Сув ! 85: 50 95

Віа Аку Авп Тер Аза Авр Діа Рпе Авр 116 Тгр біу Сіпй біу Тв Меє 100 105. 110 уаї1 ТІ Уаї Бех беї АТїа Бех ТВах їв біу Рго бЗву Уаї ББе Рго Пец ї5 120 125

А1їа вто Бех Бех пу Беж ТНЕ беж ту сіу Тв Алта Атїа їви ту суб ї30 135 150 їй Маї був Ар Тух Рпе Рго бі Рго Уаі так уві Бех Тхр Авп о Зех 145 150 155 160

Сіу Аіа бес Тру бек біу Маі НіБ Тк о Рре Рго Аза Уві їец бі Бех 165 ї76 175

Бех бБ1іу Бей Тук Бет Пец Бек Бех Уаї Уаї ТЕ узі Ртго 58 бЄт щвЕ 185 І85 1959 ївц біу Тк біп ТЬБх Тук Іїе Сув Авп Уа1і Авпонів бує Рко Зек Авп 195 206 205

Твх Буз Чаї Авр Бу Ато ча1 біз Рго Був ' Зехк Сув Авр Пув ТЕХ Нів 2109 215 220

Тк обув Рхо Ркхб бух Рхо Аза Ркб Бій БПец о бешч б1у бьу Ржо Бек Уаї 225 23 235 240

Тв Бе вве РКО Рго пув рРеб цув Аво ТП бен Меї Тіє Бех АкоФЧ ТЕХ 245 250 255 рРто бій Уа1і Таж Сув Уаї Маї Уаї Азр Уаї Бех Нів Сі Авр Ехо біц 2вО 255 2170

Уаї Пузв Рпе АвпоТхр о Тук а! Авр біу Уа1 ти Уаї Нія Ава Азїа Був 275 280 285

ТІ пув Ркбоб Ат біз біс біп Тут Авп бек Та Тук Агу Маї Уаї бБег 290 298. зо чаї Пецп Ттвжх Уві Бем нів С1іп Азр Тер цей Авпобіу Туз піп Тук пуб 305 310 315 320

Су цув Маї бек Авп Пув Аїа їв Рто А1їа Рко Із1е Сі Пув Тпх ї12 325 330 335

Беж Пув Аїа пув сіу сіп Рго Ак бій Рхо біп Уаї Тух ТЕ Пей Рго 340 345 зво

Рго 5ег Аха біз бі Месє Тат Був Авп біп Ма1ї Беж Геп Ту Сув пе 355 360 365

УМаії цув сіу Ріе Туг Рго Зер Двр Ті Азїа Уаї біц Тер біб бек Авп 370 375 38О бту іп Ркго зі Авт о Авоп Тут пу ТВпх ТвАг Рто Рко Уаі їе Азр Бех 385 зо 3а5 400 вВвр о сіу 5ат Ріпа Ре Гей Тук Бех пуя Ппеип Тпк Уа1ії Авр Пув бБеї АКцд 405 410 415

Тер біп бів б1у Авп оуаї Рпе Бек Сув Бех Уаї Мебсє нів біч Аїа Геч 420 425 430

Нів АвпоНів Тук ТК біп Був век їечз бек рей Бех Рго Біу цу 435 440 445 «310» 119 «9115 447 «Р12» РВТ «213» Штучна «2202

«го чи «4005 115 біп Маї Зіп єв Уві біп бек Стіу діа січ аз пуб пуз Ркго біУу ех 1 5 10 15 бетгх Маї буз чаї Аїа був Ппуз іа бет біу Авр Трх ВБе бех Бех Тукг 24у 25. 30

Аїа її зве тТтр Маї дк сів Віа рго БІ1У Бій біу ем о бта Тер ОоМеє: о нок дл пішж Ака Маї л3іє Рхо ї1їе 116 бі1у Ії Аїа Зег Тух Аїа біз Ав Рпе 6 сіп біу Агу Маї ТЕ Ї1є тТЬтї Аіз Авр Ак Беї Тахо бек Тк Ата Тух в ЗВ 75. 86

Меє Аїа їєй бБег Бех Пе Ак Бех буш Авр тиж Аза уаї тує Тут Су я о 85

Аїа Ага Ав» Тгр АТа Ар Аза Ре Авр Тіє Тер біу біб біу Тнх Ме 1956 105 110 уаї тн уаї Бек Бех Діва Зек Тнх Був Біу Рко бек Маї Ре Бко їТечй 115 120 125 дій Рхе БЕЖ бег Бу Бвг ТЬг Бах біу біу тах Ата дів бер біу Сув 130. їЇЗ5 140. реп Уа) Був Авр Тук РИ Рго біш Рго Уаї ТБтжх уві бет Тер Ввп Зег 145 1550 155 169 5Іу Аза Без Тит Бет 51 Уаї нів Тіт Риє Ртхо Аїа чаї Беч бій. 5еї 85 то 175

Бек піу реа Тут зт Бецп бек бет Уаї чаї тп маї руб Бех бБет веї їі8о 185 150 цем біу твх бій Тк тух І16 Сув Авпоуаї АвпоНія руб Ркб бБбх: Авп. 1985 200 205

Тв пух уяі двр пу йку Чаї біц Рео Пуз бетх Суз Авроцпуз ТНу Нів 310. 215 220

ТЕ ЄСжш,зв Рхо Ржо Суг Бгто діа Рио бій Тем Пей Сіу біу РКО Бек Уаї 225 о 235 240 те пе Ре Ргб орте Був Рго цув Ар ОТНІ пев Мебс 115 ет Аг ТрЕ аа 250 255.

Рто бій Маї Тк о Сув Уаї Хаї Уві Авр Уаї бет Нів біц Авр рРхо бій бо 265 зо

Уві Був вне Авт Ттр Ту Уаї Авр біу Ма ст Маї Ні АБпоАта пу 280 285

ТвЕ був ртхо Ак сій біз біп тує двп о бек Тк Тук Аку Уаї уві бег 240 295 оо

Уві пес Твжх Узі ред Ніз Сіп Авр ТЕр Пец Ап біу пув бій Тук уз 305: 310 315 350

Су Ву чаї бек Авап Був Аїа Пемш Рко Аїа Ро т1іє біш Був Тпх ІТїє 325. Зо з5

Беї Був Аїа Пув з1іу сії РІ дхв віз хо бів Уаі тук тТВу пе РЕ з40 345 350 вко бек АхЯ бі бій Меє Таж Пуз йвп обівп уаї бБег Бей Таж Суб Бей збо 365

Уаї Пйуз с1у Рпе Тух Рго Бет Авр 11е Аіїа Ма1і бі Ттр бій Бек Двп 370 375 З8О біу біп Рхо бій Авп о Авп Тут Тув ТОх Тахо Рко Рго Маї їеєи Дер Вехг 3З65 з9о 385 400

Авр о сіу Бех Рпе Ре Пем Тут Бек Був Пец Тпу Уаї АвзроБуз Бех Ага 405 410 215

Тхр біп біп біу АдвпоУузі Ре бет Сув Бег Уаі Меб Дія біч Аза їву 420 425 430

Нів д5п Ніз Туш Так сіп уз Зех Пе Бек Гей Бех Ртго сіу Пув 435 440 445 «210з 120 «211» 847 к2127 РЕТ «5135 Штучна «2» «2232» УНН «00з 20 сіп Уаї біп Пен Уаії біп Зек біу АЗ1а січ Уві Був Пув Рхо біу Бех 1 5 10 15

Бек Маіїі Гуз Маї Аіїв Сув Пув АтТа Бех сіу Авр ТЬх Рре Бек ех Тукг 29 275 за

А1а тІ1е бБег Тер Уаі Акад б1п Аїа Рхо біу біп б1іу пе біцш Тгр Меєс 30 45

БіУу Ата Уаї ЯХ1іе Рко Іїе тТ18 сіу І1з А1ї1а бек Тук Віз бір Авп о Рпе

БО 55 (те ше віп Ку Ага чаї ТЕ Т1 тп: діа Авр АТ бет Тр беж ТБх Аїа Тукг 65 то т о

МеєЄ Аїа Гей бе б5ет їев Аха чек 610 Авр тії Аза таї Тух Тук Сув 85 90 95

Аїа Ак АвпоТЕр АтТа Авр о Діва тре Авр І1є Тхр б1у ІП бі Тл Мей 100 165 110 уаї Ту Чаї Вех Бех Аїа бек тТипт Був бру Рко Беї Чаї Ріє РхОо Бей 115 1290. 125

Аіа Ро Бех Бех Тув Бет ТП: Бек піу біу Тиї Аїа Аїа Гецп б1у Сув 130 135 ло їз Уві цуз АДвр Тух Рве Бхо бі Бко Уаї Твху Уаї бек Тер Адвп Бех 145 150 155 160. б1іу Атїа Пей Ту Бех ру уві Ні ТУ РВЕ РІб Аза Уаї Меп біпв Бех 165 їло 175 бас біу йец Туг Зек реп бвт бетх Чаї Уаї Тк Ма1і Рто бек Зех бег 180 185 190 рез біу Так бів Тахо Туг І1е Сув Авп оУаї Двп о Ні Був Еко бех Авп 195 200 205

ТВ Був Маї АБр Пув Аку Уві бі) Еко Був Бег Сув АЛер Пув ТпПтх Нів 2480 215 220

ТйтІ Су Ркго Рго Сув Рко Аза Рго біз Бе Бей біу біу Ркго Зет Хаї 225 230 235 240

Рпе Бе Рпе Рко Рго пук Вго Пув Авр оТВх пей Має т116є Бег Ак ТВг 245 25 555

Рто біп Узі Тк Сув уаї Уві Уві Авр Ма1ї бек Нів сіц Авр Рто бій 250 255 270

Уаї Бруз Рре АДап Ткр Тук Уаї Авр біу Уаї бі Уа1ї Нів Деєп А1їа Був

КВ зо 285 тТвж пу Рго Аку біз бій бів Тук Авпобеї ТЕ Тук Агу аї Уаії Бех 290. 295 лай уаі рей тТНІ Уаі ред Ні бій Авр Ткр рец АДвп о сіу пув бі Тук цув 305 310 315 320

Суб Був Уаїі Бех Авп Був Азїа Пед Рко Віа Рко І1іє біз їув ТБхт І1є 325 330 335

Бех Був діа цув Ту піп РЕЄ Аку бі РЕ біп уаї Тук Тайх Гец РІ 340 345 359

Рго бек ДкЧч біо» біш Меє ТВх Пув Аза бів Уаі бек бею ТБх Сув Пен 355 36о 365

Таі1 вуз біу РБе Тужк Рко Бек Авр Ії Аїа Уаії біб Трр біб Ббег Авп 370 8375 Зо сту біп орто бі Авт Авп оТук Гув ТВЕ Тк Рг Рго Уві Бен Аво бет авБ. 3980 395 2400

Ав Б1у бек Рае Рпе рей Ту бек Був Бей Тдж туаї Аве Був цеї Ах 405 410 415

Тхр біп біп біу двп Уаі Рпе бег Суб беї уаї Меї Нів бІй діа Пец 429 425 430 нів АвпоНів Тук Тпжх біп Шув Бег Бей Зежх Без Бех Рго біу Був

435 440 445 -2105 121 «211з 447 «2155 РТ «8Іі3» Штучна «вах «да» МИ «ОО» 171 свїп Уаї бів пес Уаї б)іп Бех З1у АтБа сі» аз Був Був РЖОо б5Б1у Бех 1 в: 10 15

Бех Уа1і Був їаі Аїа Суз цув Віа бЗет біу Авр Трх Ре Бег Бег Тухк зо

АтТа 116 Бек ТІр Уаї Аа біп Аїа Рхо біу бій біу Бео бі Ткр Меє а 45 біуУу Ах Ма) І1іє Рго ї1є І1іє біу Ії ДІВ бег Тух Аза біп Авзп Рве о

Є1їз біу Акд Ууаї Тих Ії тах Аїа Авр АкФЯ Бек Тих Бак ТЕ йіа Тук вЬ та тв 56

Меє Аіа еп Бех бет Пес дтхя беж бій Аве ТВ оАіа Маї Тух Тут Сув 85 зо 95 51іа Аг Авії Трр Аза АБр Аіа Ре Авзр Іїе Тер обіу Зіп С1іу ТіК Меє 100 105 110 уві Тіт Уаії беїх беї А1їа вк Три Був Сіу Рго бак Уві Ре Рхо їец 115 120 125

А1а Ржо Зег Бек був бЗеї ТВтї Зек Біу 5їіу тн С Аїа А1ів без Б1іУу Су 130 35 145

Же Уаї ЦПув дер тує Ре БЕ бім ко Узі Тек оузі ЯЗек тер о Ави Зек 145 159 155 ї6о біу Аі лев Тйх бек бі Узі Нів Трх Ре Рхо Аза Уаї бем бів Бех 165 Мо 179 аж біу Беж тую Бек пев бау бех Уві Шах ТУ Чаї рр Беє Яву Бех 180: 185 ІВО

Шев сту тня сів тв Тут тїв Сує дев ух йши Нія Був орто Беж дей ав: 28. 205: їж рух Маї Дер руз Ака Уаї бі: Рг бує беж Су Авр Був Тир Нів 810 215 вибо

ТкЕ був Бго вже був РО Лів РкЕб біж ен пей о бі1у біу РЕ бек Уві зв 230 238 248 тве беш БВе РТ Ро пув рто Був АВр тиж Бех Ме ті Бех йто тТВЕ 255 258 55

РуІо Бій Уві тах Суж Чаї Уві Жа1ї Дяр: Чаї Бех Ні зт Авр Вжо 51 або: еБ5 20

Чаї ьув Бе Аз Тжр Ту Маї Двр бу Маї бій Чаї Ніз Ап Аїв Пув ет 280 2В8: тТнг Був Бко Акщ бій бій біп ТухоАви Зех Твжх Тук Ах маї Ма) Бех 290 295 300 чахм'їва Тви уаї Вей нів бій Ав тер беш ява б1у ув ств тує руя

З05 зо Зі8 зов сСув вує збі Беж й бує ДІВ ПМ Ро діа РЕ Іра біти зує ТЕ їЗе заз 330 335

Зех Пув А1їа уз біу біп Рко Ахе бій Вхо біп Уаї Тук ТБг цей Рго

Зеб за5 350

Рхго дек Ак сіц Бій Меї ТвжЕ Був Ава біп Уаії Бех Пе Твж Сув Гей 355 360 365 тУаї Був біу Рпе Тух Рго Бех Авзр т11іе Аіа Уаї сій Тгр бі бБег АДеп 370 375 зво б1іу біп Рто біц ДАвєп Або Тух Був Тих Тих Рко Рко УМаї Пецп Дяр бек

З85 зай 395 200

Аврв біу Бег Ре Рне Іей Тухк бБеї Був Гец ТПг Уаї Авр о Пув Бах Аїд 405 410 415

Тер біп бів біу Авп Уаіїі РБе Зек Сув беїг Уаї Меє Нів сій Аїа реч 1420 45 «30

Віз Ава оНів Ту Тих бів Буз Беї Бей беї Бей Зех РХо 51у Був 435 440 445 «210х 192 «2112 848 «Р122 РЕТ «213» Штучна ' «220» «2235 УНН каАдО» 122 сіп Уаї бій Пе) Уаї сій бек біу Аа біш Уаії був Мубв Рго біу бЗег 1 5 10 15 бак Ма1і пПув Уаі! бек Суя Був Аїа бек сіу біу Тік БРле бек бег Туг 20 . 25 30

Аіз ЇЗ1е Бек їхр чаї Ат бів Кін Без 0іу Сів бі цей бів Ткр Меє аа 45 пі ке Її Сі хо їів5 Бей взвБ Меб Лів два ТУх Ві бій бує БЕ во 55 бо віз діт Ах Чаї ТУ Гїє Тву Дів дар Був бек ТВх Тукх ТВх Аів Тух і за те ва

Меє бів без Чех бек їз» Ах Зех бії йзв Ївх ія Уві Тук Тук Сув 85 о З

Аіїа вк із зі бі Чаї вер їж Тух ТБе хр бйем Тгр Сі дка БіЖ мо 05 10 - ЖНу Шев Чаї ТЕ Уві б5Х бЗех біз бек Твт буз бі Вже Беж Уа Ве їм 15 155 то їжа Діаз ре пет Бех БУ беї Тв беб бі» ШьуУ Таж Аза Аза їв 138 135 140 сі Су би Уві Бу Явв о Тух Ва ко Бій бжо таї ТвЕ Уві йех тт» 145 150 155 168

Во Зах 5БіУ діа Гей тТвЕ Зех бі Уві ців ТнЕ вна Кб Ат Уа Бен ї65 їз я бів Зех бак бі Бей ТУую бек Ге бек ех Уві Уві їх Уві РКО бвЕ що 185 150 бех бвт Ге Бі Тв бів Тв Тк Хі Ст дев Таі дев нає бтє РЕо 95 25 «05

Зех Де» Тнх Був Узі Вяю Був йхо Таїі біз Вго буз Беж Суз Авр був

210 215 220

Так Нів ТБк Сув Рко Ркго Сув Рго Аїа Рко бій Тез Бевз біу Сіу Рко 225 230 235 240 зек Уаї Рпе Пец Ре Рго Рко Пув5 Рко ГПув Авр ТпПх Гей Ме ІТе бек 245 250 255

Ака Таж Рго піз Уаіїі тах Сув Маї Хаї Уаі Авр Узі бек Нів сій Авр 260 265 270

Рго 51 Уві Був РБе Ап Тер Туг Ма1ї Авр сіу Уаї зт Ма1ї Нів Аво 275 280 285

А1а пув ТВЖ КГув Рко Аку зі бі біп Тук Авп о беї Тк Тут Ака Уаї 290 295 300 уаі Бек Уаії Беш Тпт Уаії Без Ніз біп Азр Тер пес Азхп біу Був біц 3а5 310 315 320

Тух Цув Сув ГПУ Маї бек Авп ув Аза тей Рко АтТа Рго І1ев бій Був 330 35

Таж І1їе бек цЦув А1а Був біу біп Рко Ага бій Во біб Уаї Тук ТВх 340 345 350 їв о рхо Рхто Бех Ак 6011 бій Мебє Так пух Ази біп Уаї Бвї блем ТЕЕг 355 зво 355

Сув Геч о Уаі Був біу Ріе Тух Рко Бех Азр 116 Аіа Уаії бі Тгр біц зт7а 375 389

Бех Авап зі1у біп Рхто піз Ав а Авп Тух Гу ТВІ ТП Рко Рко Чаї Бе 385 390 395 400

Азр Бех Авр сСїіу бек РБе РПе Бей Тук ет Бпув Гей ТБ Маі1і Авр Був 405 410 415

Бек Ага Тер біп біп сбіу Авпоуаі Ріе бех Су Бек Уаї Меї Нія січ 420 425 430

Аіїа преп Ні Ази Нів Тук Тапх сіп Гуз бек Пец бБетг Пец бек Рго б1іу 435 440 45

Був «210» 123 «211» 449 «212» ВЕ «213» Штучна: «20 «223» У «4002 123 біп Уаї бів пбви Чаї біп бЗег біу Аіа біш ві пув Пух Ркго біу Бех 1 5 195 15

Бех Маї ув Маї Зех Сув бує Афз бек біш Авр Тит ВРБе Бєх бЗеї Тук

Зо

Аїа ті бек тки уві Ага б5ів Аіїва РІсб біу с1іп бБуу Бей біс Ткр Мех

Сіу Ак ТТе Ті рго Іїє І1їє біу чів уві Аяап тух Аза біп Гуз Ре зо 55 бо сіп Біу Ах Уаї Тпкх І1їе Так Аза Авр Був бетх ТПк Тух Тпх А1та Тухк 05 70 В 80

Меї біз Без бег о бек Ппеп Ага Бех бін Авр о ТБу Аїа Уа1ї Тук Тух Сув

85 50 95.

Аіїа Аха біз біу Сіу Маї Авр Тгф Тут Ріє Авр бе Ттгр біу Ага біу 100 105 110

ТВх Бец Уа1 Тв Уаї Бек Бек АДІа бек ТВк Пув біу Рто Бек Уаї РНе ї5 150 25

Рко цепш йіа Рко Зех Беї Був баг ТІ беї С1і1у сіу ТВх Аї13з Аїя ГЦеви 130 135 140 сіу Сув Пез Уаї ув Абр о Тук Рпе Рго бій Рхо Уаї Тпг Маї Зеї Тур 145 150 155 160 дзповет сіу Аїа пе) Тпт бек біу Уаї Ніз ТВх Рпе рРхб Аіа Уаї йец 165 170 179 бів. бет Зех бБіу Пез тут бек Бей бех Бех Уаї УаАії ТУ Ууді Рго бек 180 185 190 бех бег їеп біу Тік біл ТвгоТук Т1іе Сув Авп оМа1 Авп Нів Пуз Ро 1935 200 205 ет Анп Тих пув Маї Авр о цПув дк уа1 біз Рго Пув бат Сув Авр Гу 230 215 22 тпт нів тТптІ Сув РхбО ро Сув РЕб Аіа ро біз Без без 01у бБіу Рко 225 230 235 240 пет Уа1 ВНе Гвуи Рье Рко Рко Гув Рго Був Аяр ТБк Бею Мек І1е бат 245 250 255

Ага Тит Ртга бійш уаї ТВт Сув чаї Уаї Маї Авр уаї бек Нів сій дар 260 265 270 ,

Рго сіц Уаі1і1 Ппув Рпе Авп Тур Тух Маї АБр б1у уаї січ Чаї Ні Авп 275 280 285

Атїа пув ТВг Пув Рго Ага 51 біо б1і1п Тух Авп о бек ТБс Тук Ако Уві 290 295 Зоо

ТУаї Бех Маї Бей ТБтг Уаї Пец Ніз біо Авр Тр Бви Ава бЗ1іу Був сі 305 310 315 3720

Тухк Пув Сув Пузв Уаі Бех Авп ув Ліз Тем Рхо Аза Рхо ІТ1е біз ПУув 3955 330 335

Тс І1е Зех був Аза Пув сі1у біз Ртхо Аку 51 рго біп Уві Тух ТвЕ зав 345 350

Беп Рхо Рко бек АгЧч біч б1й Меб Тпх був Аза біб Уві бетї Пед Так 355 360 365

Сув пез Маї Пйув біу Рпе Тух Рго Бек Авр Ії діа Уаї бій Ткр 19 378 375 зво бБет Авп З1у сіп Рго біц Авоа АвзпоТуг Буз ТБт ТВ Рхто Рхо Уві Ів 385 390 395 400

Авр Беїг Авр о б01у Бех РЬБе Рпе Гей Тут бБег Пув Пе Тр Уві Авр Був 405 110 415

Зег Ага Тхр біп біп біу Авп о Уві Ре бет Су5 Бех Уаї Меєсє нів сій 420 425 430

Азїа без Ніз Азп о Нів Туг ТбПх біп Пув беїх Ге) бБет Тею бек Рхо б1у 435 4460 445 вуз

«210» 194 «2112 449 к»122 РТ «213» Штучна «Два» «б23з УНН «4005 174 сіп Уа1 5158 Пец Уві біб Бех біу Аза Бзіч Уаі Був був Рго біу вет 1 5 10 15

Зех маї ДПуз Уаї Бех Суз Пув АкКа бетх пйіу сіу Тавтх РБе 5екг бек Тук го 25 30

Аіа чІїе Бек Тгтр Уаї Ака бсіп Аза Рхо б5Біу іп бі Без бі. Тер Мес сСіу Ага Ії ї1є Рко Ії Бей о зіу МеС Аїа Авп о Тут Аїа бів Був Епе о 55 бо сів 5Б1у Ахаз Уві ТВБг Т12е Ту віз Авр Гу бех ТВт Туг ТвВг Аза Тук 65 та 75 во

Меє с10п Бе бет Бег Гец Ата бек сі Ар оТНт Аза Уаї Тух Тук Сув 83 Зо 95

А1Та Ах бін біу 5іу Уаї Авр Тхр ТтТук Рае Авр Пец Тер сіу Аку біу 100 125 110

ТЕ пви Уаїі Тк о Уаі Бех бБет Аіїа бБет ТІ Пув сіу Рко бБет Ма1і Ре 115 129 125

Рхо ем Атїа ро бек беї Був бБег ТЬт бЗех біу біу Тпх Аза Атїа Пец 130 135 140 сіу Сув Пец Уаї Був АвроТуї Рпе Рхто піц Рго Уаі Тпїх Уаї бек Тер 145. 150 155 160

Авп бек біу Аїа Тви Тптх бек бТуУу Уаї Нів ТБ Ре Рко діа Уаї1ї Бец 165 170 175 бСіп бек беїх біу Бесй Тук Зек Бей бБег Бех Маї Уаі ТйПт Уаіїі Рко бек 180 185 190

Зекх Бех Пец Ссіу Тк біл Тк Тух Ії Сув Авп оУа1і Авзп Нів Був РКО 185 290 205

Зех Адії Тпх пу Уаїі Авр Гук Ак УМа1ї1 510 Рго Був бБег Сув Авр Гуз 210 215 270

Тррх Нів Тахо Сув Рхо Рго Сув Рко Аіа Рко біп Бец реп б1у біу ВРго 225 230 235 240 бЗек Уаї Ре їесз Ре Рхго Рго Був Рхо Буз Авр ТБ Пес Меє І1В8 Бех 245 250 255

Ак ТБг оРго бій Уді Тк Суб Уаї Уаї Уаї Авр Уві бек Ніз5 510 Авр 260 285 270

Рго біц Уаї пує Рле Ази Тер Тут Ууаі Авр сіу Уа) Сі Уаї Нів Авп 275 280 285

Віа пу ТВптІ Гуз Рхо Ату бі бій біп Тух Азп бех ТБї Тух Аку Уві 290 295 З09

Уаї Бек Уаі Бенп ТпПхг Уві Пе Нів біп Азр Тгр Пец Авзп біу Був Січ 305 310 315 320

Тут Був Сув Був Маі Зетгт Авп Був Аїа Пец Рго АтТа Рко І1е бі ув 325 330 335

ТБІ Іі Зехк Іув5 Аїа пПув Сі1у Сіп Рго Ату бій Рго біп Уа1 Туг Тпх 340 345 350

Іва Вго Рко Бек АкЧч бі) бі Ме Тк пу о Авп о біп Уа1! бек тей ТВЕ 355 350 365

Сув ред Ма1 Пув біу Рпе Тугк Бгто бек Авр І1е Аїа Уаї біч Тгр бі 370 375 Зо бек Авпобіу біп Ркго біц Абзп оАзп Тут Був ТНБ ТБЕ Рго Рго Уаї Тем 385 390 395. 400

Авр бек Азр б1у бБег Рпе Ріе Печ Туг бек Пув Ппецш ТПк Уві Авр Гу 405 419 415 бек Аг Тгробіп сіп б1у Авп о Уа1ї Рбе бех Сувз бек Чаї Меб Нів Січ 420 425 430

Аіїа Тед Нів АБпоНів Тук ТПІ бій Пув бет Пец бек Геи бек РЕо б1у 435 440 445 туз «210» 125 «2115 449 «2127: РЕВТ «2132 Штучна «220 «2232 УН «400» 125 біп Уаї Сіп цес Уаї біп бек Сб1у Аза бі Уаї БПує Пув Ркго біу Бек 1 5 10 15

Бек Меє Пув Маї бек Сув Пув Аїа Бек біц Двр ТЬх Рпе Бет бех Тук

Аїа т1е Бек Тгр Уаї Ат біп Аі1їа Ркго 51у бів біу рей біцш Тер Меє «о 15 51у дк ІТе Іі РКО ї1є ті б1у Т1Є Маї Авип тТух Аїв бів Пув РпПе 5О Ва 50 біп біу Аху уаї Тйх тіє Так Лія Двр Був Бех Тах Сув ТВх Аїа тТух 65 79 158 Во

Мес біс Тед Три Бех Пе Ако Зех бій Авр Тйх Аза Уві Тук Тут Сув 85 Зо 95

Аіїа Ака Зі б5іу спіу Ма1ї Авзр ТІр Тут Рпе Авр Бе Ткр біу Ак Біу 109 105 110

Твг без Маї Так оМаї бет бБег дів Зег Тв Гуз С1у Ркго Вег Уаії Ріе 115 120 125

Рхо Бей Аіїв Ро 5Зеї Бех Буб5 беї Тл Бех сСіу біу Тк Ата Аїа Бей 130 135 140 біу Суб Без МаЗ Був ДвроТук рра Ркб бій рхо Уаї ТнЕ туаї Зехг ТтТтгр 145 159 155 160:

Азп обВетх біу Аїа рей ТК обег біу Маї Ні ТВг Ре Рго Аїа Маії Гей 1655 170 175 біп бБег бБет Біу Гей Тух Бек Тец. бБеї Бек Чаї чаї ТВх Уаваї РЕб бек 180 185 150

ЯЗеробек Ге біу Тпг біп Тк оТує І1е Суз Авп о Уаі Авп Нів Був Рго 195 200 205

Бет АвпоТЬк Був уаї АвроБбув Ах уаї бтіп Ро Був бек Сув Авр Був 219 215 220

ТНІ Нів Тпж Су Ртіб Рхо Суб5 Рко Аза РЕб бій Без ес Сіу біу Рко 239 ЗБ 0

Бек а1 РП Пец РНеЄ Рхто РЕхо 55 Рго бує АвроТтТНЕ Пе Меб ІТе бек т 250 255 бтЯ4 Твт о Бго бі Уві Тиг Сув Уаії Маії Чаї Авр. Уві Бех Ніб бІй Авр ?8о 255 270

РКО біз Уві Пув Ру Ава тер: тТук уві Ав» біу уаї бій аї Нів Авй 175 ВО 285

Аїа Був ТВг о Пув Рко Ака бів біз біп Тує д5п бек ТВх Тут Аха Уаї1 250 295 390 уаїії Зетїт Хаї Шец Тпт Маї реш Пі5 біп Авр о Ттрвр без дви о біу Був БТШ

Зо зо 35 За

Тух Муз Сув Ппув Уді Зеїх Ав ПУ Ат Бей Рка Азіз Ро ІТЄ 013 Гуз 325 330 335

Твж І1є Век Пує АТа Був біу біп Рто Аку біц Рхо біп Маї Тух ТБЕ 340 315 350

Пец Вко Ро бБетг Атя біс біб Меє ТНху Був Авпобіп Ув1ї Бек Бех ТИЖ 355 во 365

Суб їеш Маї Був біу Рре Тук Рго беж Авр її Віа Чаї Сі ТкЕр бій 370 715 й зво

Бех Авп сіу біп Бо сі) Авподет Тут ув Ті Тйх Рко Ртго Ма1ї Бей 385 399 з 95 109 вАвро Зах Ар обі цею Бе Ре цем Тух беї ГПув бац Тит Уаї АБр Був 495 о 415

Беї АкхЯ Тр бій бів сі АБИ Маї опе бех Сув бехт Уві Ме нів сус 4120 ще 430

Аіа гей Ні АвпоНів Тук Тк о біп цуз бек зво о бех бейп бек рхо бу 435 кад «ай

Бук «віз 126 «Мі» па щих АХ «213 Штучна «ай» «вав УН кап 125

Бі маї сіб Меп -1ї бій бек обі лів о бта Уві Був був ка сіУу ЗвЕ 1 х 19 х

Зак чаї був Уаї бЗекх Сув Пух Аїа Бек зЗ1у Б1у Тах РБе бек бБвж Тух ав 25 зо

Аїа тів Бех Тже ува Ата бів Аза то 01 піп блу реч бо тер. Мех ко 45 біУу вхя Ії Тіє Ртгб5 Ті Тез пбІу Іжхе Азїа Азпотук АтТа бій Був овпе що 50 сіп бі Ак Уві ТнНІ Ї1е Тв Аза Авробуз бек Так Тух Тпх Аза Тух то т5 во

Мес бі Гез беї бек Пец Агоа бек сід АвроТаАх АїТа Уа1ї Тухк Тук Сув 85 зо 95

Аіїа Ата бі сіу сбіу Уаі Авр Ткгр Тух Рре Авр Ге Тер б1і1у Аку біу 100 195 110

Тахо Бей Маії ТП Уві бБет Бек Аза бек ТпПІ Був біу Рхто Бех Уві Ре 115 120 125

Бхко ей Аїа Рко бЗеї Бех Пув бет Твї Зех сіу біу ТВвх Аза діа Пец 139 135 140 сіу Сув йео Уаї ГПув Дер Тук Ріе Рго Б5іц Рго Уді Тіт Маї бек Тгр 145 150 155 160

Азповек біу Аза Ппем ТЕ бек біу Ча1 Нів Тпу Ре Рто Аїа Уа1ї Ів 155 170 175

Сі бех бек Сіу Пец Тух бЗеїг Цец бЗег беї Уаї Уві Таж Уаі Рго Зах 180 185 190

Бех Бек Пез о біу ТВйх біб ТВж Тух 116 Сув Авп Уаї Ав нів ГПув Еко 195 200 205

Бех Ав Тит Пув Чаї Авр Був Ако Уві 510 Ехо пу бек Сув Авр Був 219 ! 215 220

ТВтІ Нів Тих Сув Рко Рко Сув Рро А1їа Рко січ Гей цей біу б1у Рко 225 230 235 240

Зех Уаі Ре Пей Рпе Рто Рхо ув Рго уз Авр ТИПк пес Меї Т1є б5ег 245 250 255

Ак Тк оРго біб Уа1 Тріг Сув Уаї Уа1ї Уаї Авр Уві Зег Нів біц Авр 26 265 270 І

Рхо біш Маї Пув Ре Авп Ттр Туг чаї Авр б1іу Узі бій Уаї нів Авп ' 275 280 985 віз цув Тьх Був Рго Агу бі біз бів Туг Аєп Яеїх Тік Тух Ахо уві. 295 255. 7360 чаї Зек Маї зе» Тпх Уаї Те Ні біп Аяєр Ттр пеп Азп о біу Був біле 3а5. 310 315: зай

Тук Цув Суз цув Маії бех йвп Був Аїа Ппец бто діа Рко Іїв бій пув 325 330. 335

Так оТ1їе беж Був АїТа Пув біу бій Рго Агу бід Бко біп Маї Тук ТВЕ зЗа0 345 3590 «Беш РгОо Ехо бех Ат бі бі Меб Тк Був давай бів Узі Беж Пед тре 355 350 з65

Сує цем Чаї йув біу Ре Ту Рхо бек дер І16 дів уЩа1ї бій Тхр бі 379 375 зво

Беї Авп п1іу біп Вхо бій Авп Ап оТухк пув Таж ТВк Рко Бго Уві їец

З85. 380 395 400

Авр о зек Ар бі Зах РБе Випе Бей Тук Зек пу Пес ТБІ Уві Авр Був. 405; 410 415

Бех Ак Ткр бі біл біу Авп о Уаї РіБе бек Сув бек уаї Меж Нів сій 190 425 азо

Аїа пев Нів Авп о Нів Тур ТБ Сіп ПУБ ей Бе бек пеп Баг Ребобіу 435 440 445 уз

«910» 197 «211» із «8125 ВЕТ «213» Штучна «280». «223». ХХ жа» 27

Авр т112е сів пез)» тах бів Бву Рхб'ввк баг Бас бек діа бБетї Уа1ї сі 1 5 10 15

Авр Ага Уді Тік тІ1е Так Сув Ага діа бек біп с1іу т16 бетх бет уві 250 внЯ 30: їем Аїа Тер Тук біп біп Був Рко бі Був Аїа Бко був Ббем цец Іїе 35 40 я

Тут Авр и Аїа цех Бех Пец бів бек б1іу Чаї рхо Бек АкФт Рпе Беж сі 50 55 60 бек біу Бек 01іу Трт Дер Рпе Тих Гви ТНК Ії Бег обех цецп біп РКО 70 75 во бій Авр о Рпе діа Ту Тук Туг Сув біп біп Рре Авзп бек бек І1е ТЕБг 85 90 95

Рпе біу біп сіу ТБжЖ пуз Пе обі т1е Був Абу ТЕ Маї Аза Ата Рего 100 105 110

Зеї УМаі Рре Ті РБе Рко Рхо Бек о АБр біс бій Без Був бек б1іу ТЕ 115 120 125 діа беж Чаї Чаї Суб їем ПепоАєй Авап Ре Тує Бгто АгЯя бій Аза Буз 130 135 140

Чаї біп Тер уз УМаї Авр о АБп Аза Тез біп бех С1у АвБп бек біп біц 145 150 155 160

Зек Маі ТпЕ 511 б1п Авр Бек Був Ар бек Тит Тук Бек Бе Бек Бех 165. 170 175

ТНК без ТВжх рей бБех ув Аза АБр оТук іч пув Нів Був Уаї Тухк Аза 180 185 130

Су бі Уаї Тнжх Нів біп біу Пец бег бет Рго Ма! Тит Пув бЗех РБе 185 200 205

АЗзпоАкго сіу бі)ш Суз 210 «210» 128 «211» 213 «2122 РЕТ «2135 Штучна «в2йх «223» М, «4005 128

Авр тТ1іє біп цецш Твжх біп бек Рко бек Бек Те бетг Аїа бек Уа1ї біу ї З 10 15

Азр Ака Уа1і ТпПт Тіе Типї Сув Ага Аїа бек б1іп біу Ііее Зек Вес Аїа

Тей А1а Тгр Тук біп біп Був Рго сіу Був Аза Рто цув Бей Пец І1е тут Ар Аїа бек Зек Пез бі 5еї біу Ма1і Рко Бек Ага Рпе бек б1у о. 50. 55 Бо

Зех біу бек біу Тдк Авр Рпе Трх Бец ТЬІ Ії беї бер цец біп Рго 65 то 75 80 біз Авр Ре Аїа Таж Тут Тук Сув біп бій Рре Авпобеї Зев І1є ТБЕ 85 ВО 5.

Бе б1у п Бу ТЕЖ Був пе СХ т1іе Пуз Ака ТИ Уві Атїа А18 РКО 300 тОо5 1195

Бех Ма1ї1 Рре І1е Рпе Еко Рто Бек Ар Сі біп Бей Ппуз Зег біу ТАх 115 120 155. ів беж Чаї Уаї Сув рей рем Ава АвпоВБНе Тух РКО Акуз бій дів Пув 135 13585 140

УаАїі біп Тхв о пув Ушаі Авр о йяп АтТа ївц біп Зах сп1у Авп Бех біп бій 145 150 155 150

Беїг Уві Так біш біп дер бек Був Авробек Тих Тукг бек Бей Бех Бег кбо5 170 175 тп йем ТВЕ Пей беї був Аїа ВВ о Тук бід пцув Ні цув Маї Тух вїа 180 185 195

Сув бі Узі ТБ Ні бів б5Ту Бецд бек Бек Рто уаї тах цувз Бех Рпе 1955 209 295

Авт Аха біу біч Сув 21й «8105 1989 «2112 213 «212» вит «213» Штучна «280»

«вав» М «00 1955 дер Ії біп їєю Тнробів бех Рхо ех бвж Бей бег дія Як Уаї с1іу ї 5 10 15

Авр Ата Маї Тпх ї1є ТІ Суз Агу Аіа бет біп біу ї1іє Бех Зетх дів зо пїей Аіїа Ткр бек біп бій Був Рго біу Був Аїа ко Був їец Бей Ії ке!

Тук Авр А1а Бек бек Бей 014 Бек біу Уа1ї Ржо Беїг Ата Рпе бет 91Уу 5О 55 6О бек біу Бек Зіу Тк Авр Впе Так рем ТАх Іїе Бех бех Пе піп рко 65 то 15 5о зіз Ар Ре Аза Тк Тує Тух сСуз бі-й бів Рре Авй беж Бех ТІїє ТНЖ 85 ЗЕ 85 тпе вІУу біп біу Тк буз Без бій 116 Бу Ага Тпк о Уаі Аїа Аза рРго 150 105 110

Бех Уаї Ре Тіє Ріє Рхо Рко бек Авробіц біп Гей Туз бек сіу Тр 115 125. ї25

Аїа бЗеї Мах Уаї Сув пез цей АБпоАвпбовпе Тух Ро АКЯ бій Ата ьуУБ 130 135 140

Ууаї біп тр Був Маї Аяр Азвп Аіїа цей біп Бех б1у Авп Бек бів; 51 145 150 155 160

Бек Шаю тах біс бій Авр о бЗеї Був Авр Бех ТОК Тук бер Пец Ббег беїг 165 176 175 тТВЖж Бей ТНк пен баг пу дій Вар тук БІ пу йів тув уах тую діа о ї85 50

Сув сій Уві Тв ну ЗІп бБіУу Бей ек Зеж Рхб Ма) ТВ Був бек рпе

Авп Ах Сіу біз Сув 210 «їі05 136 «тії» 8135 «аг» РЕТ «ВІЗ литуєна. «ах «риЗ» Ух «400» 130

Двр ц1е біп бецп Татх біп Бек Рко бек беж цец бех Дія Бех Уві бю ї 5 19 Т5

АЕрв Ака Уві Таж тіє ТВЕ су Аж Аїа Бек бій зіУу Тіє бБех Зеї уакт о. Я Зо

Івц ВІВ ТЕр Ту» бів бір бує Ро біу Бу ді РЖО Пув феш ем їїв

Тук Авр о Аїа Бех бек цес біп бек біу Уаі Вко бек йко РБє Зех БіуУ 50: 55 бо

Бек біу Бек сту ТМ» дер рме тиж пе ТЕЖ їзе Бак оБек ем обій РКО 5. В. то 85 бім Авр РВе Аа Ту Тук Тух Сув сіп біп Ре Авп бек Зех Ітїе ТВ:

Рпє біу Бій 5їу ТНІ Туз пез сі Іі пуб Аку ТБг оУа1ї А1іа Аїа Рго 190 105 110 бат уаі рве Ії РпЄ Ро РКО бек АзБ біз бра рей Був бек Біу ТЕ 115 129 125

Аїа Бет Узі Ууаї Сув цей обей Авп Ав ББе Тукх Рго Ако Сію Аза Був 1390 135 140

Уаї біг Тер Ппув Уаї Двр Авп о А1їа Пеп бів Бек біу Авп бек бій Сі 150 155 150

Беж Чаї Тпж б) біп Аврозех Був Ав обек Твтх Тук бек Ге Беж б5вЕ 155 ло 175

ТБх Ппецй ТВжх пе Бет Буг Аїя Азр о Тух 610 Буз із Бузв Маї Тут Ача 189. 185 190

Сув сі Уві ТЬе Нів бій біу їв Беж бех Ро Уаіїі Тк Гуз бех Бне 200 205

Ав Ага біу бі сув 210 «10» 131 «2115 213 «17» вВт «2135 Штучна «ий» «22325 ЧЕ «4002 131

Авр оТів біп Сей Тих обіп Зех Рко беж ет Пецп бах Аїа бет Маї біу 1 5 10 15

Авр о Ата Ма1ї ТЬвх Ії Твх Сув АгЯ Аза бех Біп С1іу ІТїе Бек бБег Уві

20 25 39 рем Аїа ТгІр Тух бів сій був Рго біу Бу Аза Рто Був Бец пей І1е 35 40 43

Тух Авр Дів бет бек рен біц бек біу Уаї Руо Яек ду Рпе Зех біу 50 55, 59

Бет сзіу бек біу ТВг о АвроББе Тк обез Тех Іі бак бех БПем біп рхо то 75 80 вій Ав; опе Аїа їпЕ тує туї Сув біп біт Рпе АбБр Бех Бех тТіє ТпЕ в5 Зо 35 пе біу біп бі Ту Був бец біз Ііє Пує Агу Тпх Ха1ї Аїа Аїа Рго 100 105 10 бЗег Уві Рпе Т1е Ре Рто Рго бетх АвБр бій біп Гей Був бек б1іу те 115 129 125

Азїа беж Уа1і Уаї Сув Івії Бе дяп о Ав РпЄ Ту Рко АБУ біз діа Був. 130 135 140 уаї біп Тер був Маї Авр Авп діа їз біп бЗех Сіу йвп бек біп біз 145 155 155 150 бБет Уаї Тих ста сбіп Авробетх пу Авр Бех Тк Тук бек Гей» бек бек 185 ї1та 175

Так Бех отих Без Бех пу А1а Авр тТук бій Ппув5 Ні Буз Уаї Тух Аїа 180 185 1980

Сув біо Уаї Тр Вів біпобіу ей бек бек Рго Маї Таг о Був бек Ве 1955 200 чо

АБп АхЯа біу бБіц був «10» 135 «11» 9513 «12» РЕ «13» Штучна живих «вв М «адО» 132 двр о Т1в біп рем Таро біб беж Рко бех дет цем бег Віа бек Уаї б1іуУу

БІ 5 10 15

Авр Ату Ма» Тв о тїЬе Тит Сув Ак Аза бек біп Су І1е ет бек дра го 25. 30 пем Аіа Ттр Тух біп Сіп Був Ргто біу був Ала Рго Цузв цей Ттец І16е

Тук Авр АДіа бек Акад їй бін бек біу Чаї Рго бек Акд Ра бек біу 5О 55 бо

Бек бБіу Бек С1у Трї Авр Ре Тр Пеп Тк 116 Бех Бех Тим біїп рРЖЕОо бі Авр Бе Тих Тит Тух Тут Су біп біб Ре Авп о бЗву Явх Тух ту 85 80 вк5 тре біу біп біу Тиж Пув Бем біч І1їе Гуз дк Тпг оУа1ї Аїа Аіа Рго 100 105 110 бек Маії Ре І1е Рьє Бко Бхо бек Аввр о пій біп Бей Ппув бБеї сіу Тах 115 150 155 діа бек Маі Уві Сув Пец Пец Ави Авп о РБе Тук Рто Дкя біш Аза: Гу

130 135 14о

Уаї Бій Ткр Пцув УМаї Азр йвп діа їєцш бів Зак біу Двт Бех бід с105 145 150 155 ї60

Бет Чаї тт бій бій Авр бек Був Авр бек ТЕБг Тук Бех Тец Бех бБег 165 170 175

Тву Бей Тпх теє) бБву Пув Аза Авр о Тух 51 пух Нів Гу чаї тТук Аїа 180 185 190

Сув біо Уаії Тпк Нія Сіп б1у реп Бек бек Рго їаї ТБЕ Бу бег Рце

І95 200 305

Аза акта Бі зі Сує 219 «210» 133 21172 213 «2192 РВт «3135 Штучна «вгудх «гай МУ «по» 133

АвБ Бі біп гео Тпж бій бек оРхо Бех Беї Пей бек А1ів Бех Уаі Ту 1 Б 10 15

Авр о АкгЯ Уаі ТЬу Б1е ТБ» був Аква Аза Бехїх біп біу І1іє Яетг Зек Уві

Ко! В 30 їєц Афа Ткгр Тук біп бів Пув Рто сіу Пув АТа Рко Пуж пей Пец Іїв 48:

Тух Аіїа Аїа Зет Бех Гео бій бБег біу Маії Рхо бек Ахк4 Рпе бах С1у во

Бех 619 Бех біу ТЬВж о Авр о вве Тпх Бевз о Твх ї112 бек бек лей біп РКО б 70 7 80 бій Авр ве Аза ТвЕ Тух Тух Сув бій біп Рае АзпБ бек бек Іїе тах 85 980 аз

Ввпе біу біп біу ТПтх Пув уаю біз Ії Був Аго ТБуІ Уа) Аза Аза Бко 100 105 110

Бек Уаії РБе 1їе РБе рго рто Бех Авр біс бів Бе пух бек біу твЕ 115 120 125

Діва бет Уаї Чаї Сув пев Бей Авп Авп оРае Тут рго Аг бі Аїа Був 130 135 140

Ууаї бів тТжр пу Уаї двр о Аяп Аїа Бем б1іп Беї біу АБ бах біп біо 145 150 255 Іб6а

Беж чаї ТВвх 5100 бБіп Ар бес цу Авр оБек ТпЕ Тук беж Пе бех Бех 165 172 175

Тих ре ТБх о Пец Зех Пуз Аіа Авр Тує бі Був Нів цу аї Тут Аїа

І80 185 190

Сув біз уаї тих нів біп біу Тез» бБеб бетг Бго аї ТВЖ Пув беж РкКе 195 200 205

Азп аку 01у Бі Суб 219 «210» 134 «211» 713 «2122 рЕЛ «213» Штучна

«223 М «а00» 1345

Авр Іїе бій Гем Так бій бек Рто бек бек Пец бЗех Аїа Зех уаї бс1у 1 5 10 15

Авр вВхтІЧ Уаі тТпжх Ії тТпк Сук Ак Ата бет пі) б1у Т1е Зеєг бек Уаї

Бец Аїа Ттр Тух біп біп буз Рго біу пу Аїа Рко Пцув Пеш їец І1е 145

Тух Аїа А1їа бек бех Беп бій Бех б1іу Уа1і Ркго Бег Аху Рне Бех п1у зо 5 Бо бЗек піу Бех біуУ Тк Авр РЬБа Ту Пец Тах І1е Бех Бек Пей б3іп РІто 65 70 75 яо 5іч Ар РБе Аїа ТБбг Тух Тук Сув біп біп Рпе АБр бек бек Ії Тік 85 до 95

Ре сіу біп Бу Тпх Гуз Уаі біз Тіе Пуз Ак Тиг Уаї Азїя А1їа Рхто 100 105 119

Бег УМаїії РпПе І1е РБПе Рко Ркго Бек Авр біц біп о Бйед Гуз Бек бі1Уу ТЬг 115 1720 125

Аіїа бБет Ма1ї Уаії Сув цей цей Авп Або о РБе Тухг Рко Агу бій Аїа Туз 130 135 140 уУаї біп Тер пув Уа1ї Авр Авп о Аза твер Сбіп бек б1іу Авп бек б1іп с1ц 145 150 155 150

Зех Маї Трхт біц біп Авр обех Цуз Авр о бег Тіт Тухк бет Гец Зетг бег 165 175 175

Твг опез ТБжх Гей Бех Гув Ата АвроТух біз Був Нів Пув Уа1 Тухїх Аза

І80 185 199

Суз біз уві Твж Ні біп біу тей бек Бех Рхо Уаіїі Твжх Ппувз бєх РНа 195 гава 245

Авп Ах БІ віч Сує 210 «210 135 «2117 913 «2122 РЕЖ «2135 Штучна «22 «223з У «002 135

Азр т1е біп Без ТБІ біп бех Рхо Бек бек Бей Бех Аза Бех Уві біт 1 5 То 75

Авр Ага Уві Те Тї1е ТВх Сув Аку діа бек біп б1у т118 Бех 5Звх Уаваї

Ов Зо їец Аїа ТтроТук біп біп Буя Ркго біу Туз Аїа Рго Був Пед Тви Ті

Тух Аква Ат бЗег Зак Пе бій бек біу Уаї Рко бек Ах4Я4 Ріе бех 01Уу 50 ех Б1У бек 51Уу ТБтх Авр РБае Ту Бей Тк о т11їв бек Звкобей бій Ро З 65 та ть що 510 Азр Рпе Аза ТПг оТук Тук Сув біп.обів Рпе Абп.обЗак бег Її Тих с. 85 зо о За

Ре біу біп б1у Тпт Буз Тез біз їТїе уз Ак Трт Уаї Ата Аїа Рго 100 105 110

Бек Уаі Рпе І1їе РБре Рто Рко бе: Авр бій біп Бен Пув Бек Сіу ТрЕ 126 125

Вів вк Маї тат сув пец пз Ян одуп РН Тут РКО Агу 610 Аїа Був ї30 135 140

Че1 біп Тер пув ві Авр деп Дія пем біп бек біу Явп бек біп січ 145 ї50 155 160

Бех Маї ТБх ІЧ біп Аве бек Гуз АзБ бек Тпї Ту Бех ей Вежх бетг 165; 170 175 тн цем Трт цеп Зет Був Аїа Вр Тук січ Був Нів вує Уаї ТтТук Аїа 1859. 185; 1959

Сув бів Уаї Тіг Нів біп біу ей Бек бек Ро МаІ Тпх Гуз Бех РБе 185 290 205

Ап ВХ ку б1ї сув: 219 «21025 136 «11» 813 «512» РТ «2135 Штучна ко» «из» І кад» 36

Авр їїіе біп Без ТЬу бів Бек Ро Бех Бех Пе Беї Аїа бек Уві 51у в! 5 І0 15

АвроАку Уаії ТВ Іїе Тир Сув Дко дів бек біп біу 116 бек о бЗек Аза зо їеш Аза Тур Тук біп сіп оПпук Рто СІу Був діа Рго Був Ре Мебє тіє

Тух Азр Аіа Бех Беж їм бій беж біу Уаї Рго Зежх Ак Ре бек біу 50. 55 во

Зек біу Бех б1у ТрЕ оАЗрв ре Так пе ТЕ тів бєк Бак ем ба РгО 65 70 78 80: бу Дар о ве лів ТВху Тусг Тух Сув сій сій Ре Авп о бек Бех т1ї1е тах 85 за 55

Бе Біу біп сту Тв Пух вм 014 іє цПув Ашу ТтТпх Уаї Аза. Ата РгОо 100 105 119 бек Маї ЕБе Іїе Рре Рго Ро Зекх Авр бім біп Цез Гу Бех біу Тік: 115 го 125

Аза Бех Хаії Уаї Сув Шен Без Авп Авп РНе Тут Рго Авд біо АтТа Був: 130 135 чо

Маї біп ТІр Був Маї Авр о Авп Аїа ей сій Бех біу Ава Бех біт бій 145 ізо аа 150

Зег Уві Тйх біш бій Азр обет Ппувзв Авробег Тпг Тут баг о Бво бех Бех 165 170 175

ТБх Бей ТАтх пе бек уз Атїа Авр Тугх бій груз Ніз пуз Уаї Тух Аїа 180 185 150

Сув біо уві твк о Нів біп біу їви Яех бех о Ркб уаї Тк пув бек Бе 195 200 | 255 Й

Ап Акта Сіу сій Сув «ТО» 137 ке11» 213 «812» РЕТ «213» Штучна «2202 «сива мМ «4002 137

Авр Тіє бів Мец Трх біп бек Рхо бех Бех Гей Бек Аза бек Уа1ї біу 1 8 ІО 15

Авр Агу Маї Так оТіе Тйжх Сув Ака Аза Беж бій бТу Т1іє Бех Бех д1а 20 2 30

Ів діа Тжр Тук бій бів був Рго біу Був Аа Рго Був Рпе Меї тів 35 40 45

Тук Авр АтТа бет Зех Без С194 бек сіу Уаї Рго бек Аж Рпе бБеї б1У

БО

Бех бі дек б1у Тих Азр Ре ТиЕ Гей ТБ І1є Яех бек Без бій Рто 55 70 75 8о біо Азр Бе дів Ту Тухк Туг Су біп о біп Ре Ава бег Бек І1е Тіт 85 З 95

Рпе біу біп біу ТБг Був бец біо Іч11е Був Акуд ТБк Уаі Аї- Аїв Рко 105 1955 115

Зек Уаі Ре Іїе Ріє Рко Бко Зех Авробіз біп цей Був Бек біу ТЕ 115 120 125

А1їа Бех Уаї Уаї Сув Гец їбец Авєп Авп оре Туг Рго Агад бій Аїд Був 136 135 140 уа1ї бІіпП Тер Пув Маї Ар АвпоА1зТа Тео бій Бех біу Авзп бех біп бій 145 150 155 160 зек Уа1 ТЕ с1з біп Авр бЗеї Був Авр Бех ТІ Тук бетг Гей бег бег 1655 170 175

ТК опе ТВу Гез бек Тув А1ї1а Авр Тук с1п Пуз Ніз цувз Уаї Тух А1а 180 185 190

Сув іш Маії ТьЬх Нів біп біу Пец Бех бек Рко Ма1! Тіт Пув Бек Рне 195 200 205

Азп Аго бі1у піч Сув 210 «210» 158 «211» 2158; «2129 РЕТ -213» Штучна «220» «рР23» Ух «400» 138

Авр 112 біп Тей ТБт о біп Бек Рко бетх бек Гец Бех А1а беї Уаі1 біу 1 5 10 15

Авр Ак Маї Тпт Т1е ТЕ Суб Аг АтТа бек сій Сіу І16 бек бек АЗіа 2 25 0 реч Аза Тур Тук біп бій Був Рго с1у Пув Аза Рхо Був Рпе Меє т1є тТух Авр о А1а Беї Зек Пе Сім дек біу Уаї Рго 5ехг Ак Рпе бех біу

5о 55 бо бек БіУ Бек б1іу ТЬт Азр о Ре Тих Гей Тс ІзЗе Бех Бех Бец біп Рго то же: во сій Ар Рре Аїа Тих Тук Тук Сув біп біп РП Аяп Бах Бвт І1Ле ТвЕ 85 зо 5

Рпе біу Зіп біу ТВжх пу без бі) Ізїе БПув Ака Тюх Уаї Аза діа Рко 105 105 що ет Чаї Ре тів вБНнНесБто Ргб бек Авзвоб1я біп Без Ппув Бех піу ТЕБЕ 115 120 125.

Аїа бек Уаї Уаї Сук Пей Пец Авті Авп Рпе Тух Рко Ага біш Аїа Був 1530 135 150 уаю біп ТЕр був маві Азр дп Атїа Ппем спір Бех б1у Авйп Беї біп сьиа 145 5 155 150

Бек Уаі Тбх біп бід АБор бЗет Був Авробеїх ТВх Тук БбБет Пе) Бехї БвЕ 165 170 175

ТВк Те) Твх Без бех цув А1а Ахр Тук біз Був Нів був Уві Тук А1їа тво 185 190

Суг біз Уві ТБу нів бій спіу Бей Бех беї РЖО Уві ТЬБх пу бех Рне: 195 2о0 255

Азп оАху ту сі Су 210 «910» 139 «215 213 «212» ват " «713» Штучна ке» жравж Мі «00» 1389

Авр ІчІіїе сів ем Твї біп беїг Рго Беж Бех Гей бах А1а бек Уві біу 1 5 10 15 двр Ах маї тт І11е Тит Сув Агу діа беїх бів біу її Бек бек Аї8 20 25 Зо ївз Ата Тур оТух біп Бій цу рРго с1у Був Аіїа рт ув РБе МебБ Іїе 35 40. 45

Туг Авр Аза Зех Зек Пе Сі бек біу Уа1 Рго Вет Дка Рпе Бех с1у 5о в 6о бетї б1у Бек 51У Тиг Авр Рпе Тпх Пец ТвЕ І1є бБетї бет Пец біб Рез 7а 75 во біз Ав о Рле Аіа ТБг Тукг Тут Суз біп біпц РНе Авьп обВеї Зах Ії Тех 85 90. 95

Рре сіу біп біу ТНтї Був Гео» бій ті Був Аху ТБк Уаї іа Аїа Рго 100 105 110 ех уаї РНе 16 Бпе Рко Рко Бек Авр біз біп Гей був бек біу ТВ 115 120 125

А1іа Бех Уа1їі Чаї Сув бец без Авп о АвБп о РБе Тут Рто Аго зі6б АТтїа Гу 130 135 140 маї біп ТкЕр бує Хаї Авр Авт діа пей біп бех біу Авп Заг бів сій 145 Бо 155 160

Бек Уаї ТБх сів біп Авр бек Ппув Авр обег о Тпї Тут бек Бей Зеї 5еї

155 ги Еое 175

Тв Пе) о твЕх їбец Бек пув Аіа Аяр Тук біш Пув Ні Був Уаї Тух А18 180 85 190

Суз бі Ууаї так Нів біп біу без баг Бек Ртго Уаї ТИХ Буг Бег Ріє 195 200 205

Азп о Аку Б1у Ст Сув. 210 «2105 140 «2115 213 «вії» РЕТ гі» Штучна «гм «раЗ» М, «005 140

Авр о І1е біп Бе Тато біп бет Руо деїг бег Кїес Бех Ала бет Уаї біу 1 5 10 15 веб овАкЧ уві ть Ї16 ТВ Суз АгЯ Діва Зех біп біу чле Вт Зек Аїа зо вВез Аїа Ткр Тує бій біп Був Ро Сіу Був Аза Рго вуз Рве Меє І1є

Тук Авр лів бек бек Без бі Явх біу Уа1 Рис бег Ага ВБле бБег біу 5) бек біу бех біу Тік Авр Рпе Тік без Тк ІТ1е беї Бек Пец біп Рко 65 79 т5 89 51з АБр о РНа Аза Тіт о Тук Тут Сув біп бій Ре АДвп Бех бех ї116є ТПХ 85 Зо а5

Рпе біу біп біу ТБЕжЕ цув цеч біп ї11е Був Аха ТБх Уві Аза Аїв Рго 16о 105 110 зеж Маї Рюе І1е Рре Рхко Рго бек Авр бі біп цей Муз Зеї б51у Тпх 115 120 125

А1а бек уві Уві Сув бе Гецй Авп Ап о впе Тук Рхо АгЯ піз Ата Був 130 135 1409 чуаї Бі тЕр пух Уаі Авр Ап оАїа Ге біб бег біу Авйп бек біп б1з 145 150 155. 160

Зех Маї тих біз бій Авр Бех мув Авр о Бех ТтТВК Тут беж пе) бег Бекг 165 170 175

ТВІ Бей ТВх о Ппемз бех йуз Аїа Азр Тук січ Пух Нів Пуз Чаї Туг Аїа 180 185 150

Сув бі Маї Тпж Нів сіп біу Тех беї Беї Рго Уа1і Так Був Бек РПе 95 200 аз

Авп Ака б1у біз Су 210 «210» 141 «21їз 18 ши1їй2 РЕТ «13» Штучна «2202» «2235 Епітопна область «4005 141

Рпє Врпе Нія Рго Їіе Рко Тук Тух Авр був Авп обдежх Рхо УМаї Нів біу 1 5. 16 15

Тук Ткр «210» 142 «21155 11 «2172» РЕТ «2135 Штучна «2902 «2232 Епітопна область «400» 142

Мес Авр Ро Авп о Ре Тер Ге; біп Уаї біп Сів

Claims (5)

1 5 10 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. СО033-зв'язувальний агент, який специфічно зв'язується із епітопом, який має амінокислотну послідовність ЕЕНРІРУМОКМЗРУНОИМУУ (5ЕБЕО І МО: 141) людського СО33, і який вибирають із: антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 1, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 15, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 29, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 43, СОМ, що має ЗЕО І МО: 57 ії СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 71, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 2, СОК2О, що має 5ЕО ІЮО МО: 16, СОКЗ, що має ЗЕО Ір МО: 30, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 44, СОМ5, що має ЗЕО ІО МО: 58 і СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 72, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 3, СОК2, що має 5ЕО ІЮО МО: 17, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 31, СОМК4, що має 5ЕО ІЮО МО: 45, СОМ5, що має ЗЕО І МО: 59 ії СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 73, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5ЕО ІЮ МО: 4, СОК2О, що має 5ЕО ІЮО МО: 18, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 32, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 46, СОМ, що має ЗЕО І МО: 60 ії СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 74, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 5, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 19, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 33, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 47, СОМ, що має ЗЕО ІЮ МО: 61 ії СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 75, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 6, СОК2, що має 5ЕО ІЮО МО: 20, СОКЗ, що має ЗЕО Ір МО: 34, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 48, СОК5, що має ЗЕО ІО МО: 62 і СОКбЄ, що має ЗЕО ІЮ МО: 76, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 7, СОК2О, що має 5ЕО ІЮО МО: 21, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 35, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 49, СОМ, що має ЗЕО І МО: 63 ії СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 77, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5ЕО ІЮ МО: 8, СОК2, що має 5ЕО ІЮО МО: 22, СОКЗ, що має Зо ЗЕО Ір МО: 36, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 50, СОМ, що має ЗЕО ІЮ МО: 64 і СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 78, антитіла, яке містить СОКІ, що має 5БЕО ІЮ МО: 9, СОК2, що має 5ЕО ІЮО МО: 23, СОКЗ, що має ЗЕО І МО: 37, СОМ4, що має 5ЕО ІЮО МО: 51, СОМ, що має ЗЕО І МО: 65 і СОКб, що має ЗЕО ІЮ МО: 79, антитіла, яке містить СОКІ1, що має 5ЕО ІЮО МО: 10, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 24, СОКЗ, що має ЗЕО ІЮ МО: 38, СОМ4, що має ЗЕО ІЮ МО: 52, СОК5, що має 5ЕО ІО МО: 66 і СОРб, що має ЗЕО ІЮ МО: 80,

антитіла, яке містить СОКІ1, що має 5ЕО ІО МО: 11, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 25, СОКЗ, що має 5ЕО ІЮ МО: 39, СОК4, що має ЗЕО ІЮ МО: 53, СОК5, що має ЗЕО ІЮ МО: 67 і СОКб, що має ЗЕО І МО: 81, антитіла, яке містить СОКІ, що має ЗЕО ІЮО МО: 12, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 26, СОКЗ, що має ЗЕО ІЮ МО: 40, СОКА4, що має ЗЕО ІОЮ МО: 54, СОК5, що має ЗЕО ІЮ МО: 68 ії СОКб, що має ЗЕО І МО: 82, антитіла, яке містить СОКІ1, що має 5ЕО ІО МО: 13, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 27, СОКЗ, що має 5ЕО ІО МО: 41, СОК4, що має ЗЕО ІЮ МО: 55, СОК5, що має ЗЕО ІЮ МО: 69 і СОКб, що має ЗЕО І МО: 83, антитіла, яке містить СОКІ1, що має 5ЕО ІО МО: 14, СОК2, що має 5ЕО ІО МО: 28, СОКЗ, що має 5ЕО ІЮ МО: 42, СОК4, що має ЗЕО ІЮ МО: 56, СОК5, що має 5ЕО ІО МО: 70 ії СОМб, що має ЗЕО І МО: 84.

2. бОЗ33-зв'язувальний агент, який специфічно зв'язується із епітопом, який має амінокислотну послідовність ЕЕНРІРУМОКМЗРУНОИМУУ (5ЕБЕО 10 МО: 141) людського СО33, і який вибирають із: антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 85, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 99, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 86, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 100, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має 5ЕБО ІЮО МО: 87, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 101, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 88, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 102, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 89, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 103, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 90, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 104, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 91, |і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 105, З0 антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮО МО: 92, |і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 106, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 93, ії варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 107, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 94, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 108, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 95, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 109, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 96, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 110, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має 5ЕБО ІЮО МО: 97, і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 111, антитіла, яке містить варіабельну область важкого ланцюга, що має ЗЕО ІЮ МО: 98, |і варіабельну область легкого ланцюга, що має 5ЕО ІЮ МО: 112,

3. СОЗ33-зв'язувальний агент, який специфічно зв'язується із епітопом, який має амінокислотну послідовність ЕЕНРІРУМОКМЗРУНОИМУУ (5ЕБЕО 10 МО: 141) людського СО33, і який вибирають із: антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 113, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 127, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 114, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІЮ МО: 128, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 115, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 129, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 116, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 130, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 117, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 131, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 118, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 132, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 119, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІЮ бо МО: 133,

антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 120, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 134, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 121, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 135, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 122, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 136, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 123, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 137, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 124, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІЮ МО: 138, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 125, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 139, антитіла, яке містить важкий ланцюг, що має ЗЕО ІЮ МО: 126, і легкий ланцюг, що має 5ЕО ІО МО: 140.

4. СО33-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де кінетика інтерналізації СО33- зв'язувального агента є такою, що щонайменше 30 95 початкової кількості СОЗЗ-зв'язувального агента зберігається на клітинній поверхні НІ 60 клітин через 4 години після інкубації.

5. СОЗ33-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де кінетика інтерналізації СО33- зв'язувальних агентів є такою, що щонайменше 40 95 початкової кількості СОЗЗ-зв'язувальних агентів зберігається на клітинній поверхні через 4 години після інкубації.

6. СО033-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де СОЗ33-зв'язувальний агент має афінність як до людського СОЗЗ3, так і до СОЗЗ мавп-ціномолгус, при цьому величина Ко дорівнює або нижче ніж 10 нМ.

7. СОЗ33-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де СОЗЗ3-зв'язувальний агент є гуманізованим.

8. СОЗЗ-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де СОЗЗ3-зв'язувальний агент є повністю людським.

9. СОЗЗ-зв'язувальний агент за одним з попередніх пунктів, де СОЗЗ-зв'язувальний агент додатково має ефекторну функцію. Зо 10. СОЗ33-зв'язувальний агент за п. 9, де ефекторна функція опосередковується Еб- доменом.

11. СО33-зв'язувальний агент за п. 9 або п. 10, де СОЗ3-зв'язувальний агент містить одну або декілька мутацій в Ес-домені, яка модулює(ють) функцію Ес-домену.

12. СО33-зв'язувальний агент за п. 11, де модуляція функції Ес-домену являє собою підвищення АЮОСС щонайменше на 10 95.

13. СОЗ33-зв'язувальний агент за одним з пп. 11-12, де мутації в Ес-домені локалізовані в одному або декількох положеннях, вибраних з амінокислот у положеннях 332 і/або 239, і/або 236, згідно із ЕО-нумерацією за Кеботом.

14. СОЗЗ-зв'язувальний агент за одним з пп. 11-13, де мутації в Еє-домені являють собою комбінацію замін в положеннях 239 і 332.

15. СО033-зв'язувальний агент за п. 14, де вказана мутація в Ес-домені являє собою комбінацію мутацій 52390 і ІЗ32Е.

16. Молекула ДНК, що містить область, що кодує варіабельну область важкого ланцюга СО33- зв'язувального агента за одним з попередніх пунктів.

17. Молекула ДНК, що містить область, що кодує варіабельну область легкого ланцюга СО33-зв'язувального агента за одним з пп. 1-15.

18. Експресійний вектор, що містить молекулу ДНК за п. 16 або п. 17.

19. Клітина-хазяїн, яке несе молекулу ДНК за п. 16 і молекулу за п. 17.

20. Спосіб одержання СОЗ3-зв'язувального агента за одним з пп. 1-15, що включає трансфекцію клітини-хазяїна одним або більше векторами за п. 18, культивування клітини-хазяїна і виділення та очистку молекули антитіла.

21. Фармацевтична композиція, що містить як діючу речовину один або декілька СОЗ33- зв'язувальних агентів за одним з пп. 1-15, і щонайменше фізіологічно прийнятний носій.

22. Фармацевтична композиція за п. 21, що містить також один або більше додаткових терапевтичних засобів.

23. Фармацевтична композиція за одним з пп. 21 і 22, призначена для виснаження клітин, які експресують СОЗ33 на їх поверхні.

24. Фармацевтична композиція за одним з пп. 21 і 22, призначена для лікування злоякісних захворювань, пов'язаних з мієлоїдними клітинами, і мієлодиспластичного синдрому 60 (МДО).

25. Фармацевтична композиція за п. 24, де вказане злоякісне захворювання, пов'язане з мієлоїдними клітинами, вибрано з гострого мієлоїдного лейкозу і хронічного мієлоїдного лейкозу.

26. Фармацевтична композиція за одним з пп. 21 і 22, призначена для лікування аутоімунних і запальних захворювань, в патології яких беруть участь мієлоїдні клітини.

27. Спосіб виснаження експресуючих СОЗ3 мієлоїдних клітин у пацієнта, що включає введення вказаному пацієнтові одного або більоше СО33-зв'язувальних агентів за одним з пп. 1-15 або фармацевтичної композиції за одним з пп. 21 і 22.

100. щення ве і сей 2ВО-ОЗ-ОВ х М Кк 80 гу -и-:280-21-09. |- й дх з кох -9-280-29412 |. Е х че Ух і с а КА і бо изд --е-- 280-31-01 -- т ух ! с вче ! ре й -- 280-34-02 о "ж. й Ше чи й - ! 0 тен нти - ар лінтузумаб -- Ф тя -і гу тонні Лот що : З пово 2 20 пасок тич т т- ! Ф ! «в шо 0 ! 8) 5 10 15 20 25 час (г)

Фіг. 1

100 ф-т - | --4--280-50-01| . Е Ж во се -2806107 т й --й - 283-03-03. о зу Є во ех сс: 283-05-01). їх хв шк - щи лінтузумабє т бак тн г ад нн. тя, лю ЗЕ. нини и - плн пд А А і т пн : х т 5 до 20 -- т ' Ф в а 0 і в) 5 10 15 20 25 чає (гі

Фіг. 2 100 ення - ї а 283-07-03 ве К. ш во ач -я- - 280-50-01(ти0 а х --9--: 283-11-03 їй дж, --е-- 283-14-01 то 60 сх а - 280-31-01(ТиО со / а НИ --й лінтузумаб г НД тн : М па ек сх, ШИ Ф УТОтТІти й е 520 -- Н- й т т ! «ш в 0 о 5 10 15 20 25 час (г)

Фіг. З

100 яр р їч «-е-: 280-31-01(ти0 це І. ! - во Це --к-- 280-БО-01(ТиО т т - : ге і --я- м лінтузумаб ! ст Ї ух. їй чи і е ще т 80 ж хг іх Фі ' в | нн щ- 40 з - яти є тя яд. я ЛІ. Н еЕ ша і - пет ! ж тт: Ф 20 й ! т Я Ф ! в в 0 Н (8) 5 10 15 20 25 час (г)

фіг. 4 100 р-н се: 280-31-01(т90 во Й --к- - 280-50-01(ти) з | -- и лінтузумаб і В. в В; у 7 60 г -ї- : й « Ше

5 п. тт во т - - ши пу - а, т - 8 пт Тв 2 20 І тих г ш 0 ! 0 5 10 15 20 25 час (г)

Фіг. 5