PL199659B1 - Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2 - Google Patents
Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2Info
- Publication number
- PL199659B1 PL199659B1 PL342497A PL34249799A PL199659B1 PL 199659 B1 PL199659 B1 PL 199659B1 PL 342497 A PL342497 A PL 342497A PL 34249799 A PL34249799 A PL 34249799A PL 199659 B1 PL199659 B1 PL 199659B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- xaa xaa
- fusion protein
- cheese
- val
- antibody
- Prior art date
Links
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 134
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 134
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 title description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 45
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 34
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 34
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 15
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 abstract description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 abstract 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 abstract 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 94
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 6
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N Gly-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)CN FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 4
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 4
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N Trp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 4
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N Arg-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O ZJBUILVYSXQNSW-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 3
- QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 3
- BVLIJXXSXBUGEC-SRVKXCTJSA-N Asn-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BVLIJXXSXBUGEC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N Asp-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YUELDQUPTAYEGM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 3
- NDUSUIGBMZCOIL-ZKWXMUAHSA-N Cys-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CS)N NDUSUIGBMZCOIL-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- ASHTVGGFIMESRD-LKXGYXEUSA-N Cys-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O ASHTVGGFIMESRD-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 3
- ZXCAQANTQWBICD-DCAQKATOSA-N Cys-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CS)N ZXCAQANTQWBICD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- MBRWOKXNHTUJMB-CIUDSAMLSA-N Cys-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MBRWOKXNHTUJMB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- AFWYPMDMDYCKMD-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AFWYPMDMDYCKMD-KBPBESRZSA-N 0.000 description 3
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 description 3
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N Pro-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N 0.000 description 3
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N Thr-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O JLNMFGCJODTXDH-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N Val-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 3
- BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N Val-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 3
- JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N Val-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 3
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- DIBLBAURNYJYBF-XLXZRNDBSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]hexanoyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DIBLBAURNYJYBF-XLXZRNDBSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N Asp-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMEYEQDCCBHTEF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N Glu-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N Gly-Asn-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRIRDMVMJJDZKV-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WMKXFMUJRCEGRP-SRVKXCTJSA-N His-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N WMKXFMUJRCEGRP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DPURXCQCHSQPAN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N Lys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 KNYPNEYICHHLQL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N Phe-Phe-Leu-Tyr Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 JDMKQHSHKJHAHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N Phe-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N Pro-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- PCWLNNZTBJTZRN-AVGNSLFASA-N Pro-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 PCWLNNZTBJTZRN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 2
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- WRQLCVIALDUQEQ-UNQGMJICSA-N Thr-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WRQLCVIALDUQEQ-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N Thr-Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 2
- SSSDKJMQMZTMJP-BVSLBCMMSA-N Trp-Tyr-Val Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CC=C(O)C=C1 SSSDKJMQMZTMJP-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N Val-His-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N Val-Lys-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N KTEZUXISLQTDDQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N Val-Phe-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N 0.000 description 2
- HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010052774 valyl-lysyl-glycyl-phenylalanyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-YXMSTPNBSA-N 0.000 description 1
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N Ala-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)NCC(O)=O SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N Ala-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- DYJJJCHDHLEFDW-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DYJJJCHDHLEFDW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N Arg-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N Arg-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N Arg-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- CGXQUULXFWRJOI-SRVKXCTJSA-N Arg-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CGXQUULXFWRJOI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N Asn-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QUAWOKPCAKCHQL-SRVKXCTJSA-N Asn-His-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N QUAWOKPCAKCHQL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N Asn-His-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O WQLJRNRLHWJIRW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RCFGLXMZDYNRSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PPCORQFLAZWUNO-QWRGUYRKSA-N Asn-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PPCORQFLAZWUNO-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LGCVSPFCFXWUEY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N Asn-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O QNNBHTFDFFFHGC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KBQOUDLMWYWXNP-YDHLFZDLSA-N Asn-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KBQOUDLMWYWXNP-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N Asp-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WSGVTKZFVJSJOG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- ODNWIBOCFGMRTP-SRVKXCTJSA-N Asp-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CN=CN1 ODNWIBOCFGMRTP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NVFSJIXJZCDICF-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N NVFSJIXJZCDICF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N Asp-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N Cys-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZOKPRHVIFAUJPV-GUBZILKMSA-N Cys-Pro-Arg Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O ZOKPRHVIFAUJPV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N Cys-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N ALTQTAKGRFLRLR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N Glu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N Glu-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N Glu-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 BPCLDCNZBUYGOD-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N Gly-Val-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- SDTPKSOWFXBACN-GUBZILKMSA-N His-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SDTPKSOWFXBACN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N Ile-Glu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DFJJAVZIHDFOGQ-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000917703 Leia Species 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- CFVQPNSCQMKDPB-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CFVQPNSCQMKDPB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N Lys-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- YFQSSOAGMZGXFT-MEYUZBJRSA-N Lys-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YFQSSOAGMZGXFT-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- RQILLQOQXLZTCK-KBPBESRZSA-N Lys-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O RQILLQOQXLZTCK-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CDNPIRSCAFMMBE-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CDNPIRSCAFMMBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- WZEWCHQHNCMBEN-PMVMPFDFSA-N Phe-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N WZEWCHQHNCMBEN-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N Pro-Glu-Phe Chemical compound N([C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ULWBBFKQBDNGOY-RWMBFGLXSA-N Pro-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O ULWBBFKQBDNGOY-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N Pro-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XDKKMRPRRCOELJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- ODSAPYVQSLDRSR-LKXGYXEUSA-N Thr-Cys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ODSAPYVQSLDRSR-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- DSLHSTIUAPKERR-XGEHTFHBSA-N Thr-Cys-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DSLHSTIUAPKERR-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- SXAGUVRFGJSFKC-ZEILLAHLSA-N Thr-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SXAGUVRFGJSFKC-ZEILLAHLSA-N 0.000 description 1
- WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N Thr-Lys-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WFAUDCSNCWJJAA-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N Thr-Phe-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N 0.000 description 1
- ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N Thr-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O ZESGVALRVJIVLZ-VFCFLDTKSA-N 0.000 description 1
- BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O BEZTUFWTPVOROW-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- ZQGPWORGSNRQLN-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N ZQGPWORGSNRQLN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SCBITHMBEJNRHC-LSJOCFKGSA-N Val-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N SCBITHMBEJNRHC-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N Val-Glu-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- AHHJARQXFFGOKF-NRPADANISA-N Val-Glu-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N AHHJARQXFFGOKF-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ROLGIBMFNMZANA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N Val-Glu-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 1
- RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N Val-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 1
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N Val-Lys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- HPANGHISDXDUQY-ULQDDVLXSA-N Val-Lys-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N HPANGHISDXDUQY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N Val-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N Val-Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 125000001743 benzylic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N leu-asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70514—CD4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy bia lek fuzyjnych przeciwcia la hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wi azania z przynajmniej jednym receptorem Fc. Takie bia lka fuzyjne maj a wyd lu zony pó lokres trwania w krazeniu. Mog a one równie z zawiera c domen e zdoln a do wi azania receptora chroni acego immuno- globuliny. Wynalazek obejmuje równie z cz asteczk e DNA koduj aca bia lko fuzyjne przeciwcia la hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wi azania z przynajmniej jednym receptorem Fc oraz sposób jego wytwarzania. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są białka fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2. Bardziej szczegółowo, przedmiotem niniejszego wynalazku jest białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, cząsteczka DNA kodująca to białko oraz sposób jego wytwarzania.
Znane jest stosowanie przeciwciał w leczeniu chorób u ludzi, które wraz z rozwojem inżynierii genetycznej, stosowane są na coraz większą skalę. Rozwinięto liczne techniki ułatwiające wykorzystywanie przeciwciał: (1) tworzenie przeciwciał monoklonalnych wyniku fuzji komórek, uzyskując linie hybrydowe, lub w wyniku molekularnego klonowania ciężkich (H) i lekkich (L) łańcuchów w komórkach produkujących przeciwciała; (2) sprzęganie innych cząsteczek z przeciwciałami, uzyskując działanie in vivo tych cząsteczek tylko w pożądanym miejscu, dotyczy to na przykład izotopów promieniotwórczych, toksycznych środków farmaceutycznych, toksyn białkowych i cytokin; (3) manipulacje funkcjami przeciwciał , mają ce na celu uzyskanie zwię kszenia lub osł abienia ich aktywności biologicznej; (4) łączenie na poziomie genetycznym przeciwciał z innymi białkami, takimi jak toksyny i cytokiny, uzyskując białka fuzyjne oparte na przeciwciałach i (5) łączenie na poziomie genetycznym co najmniej jednego zestawu przeciwciał, łącząc ich regiony tak aby uzyskać przeciwciała o podwójnym działaniu.
Połączenie dwóch białek, zarówno w wyniku obróbki chemicznej, jak i genetycznej, często wiąże się z uzyskaniem cząsteczki o nowych, nieprzewidywalnych właściwościach, które uzyska produkt końcowy od cząsteczek macierzystych. Podczas sprzęgania chemicznego połączenie może nastąpić w różnych miejscach cząsteczek. W wyniku tego uzyskuje się cząsteczki o zróżnicowanym stopniu modyfikacji funkcji pochodzących z jednego tub obydwu białek. Podczas sprzęgania genetycznego proces łączenia jest bardziej precyzyjny i w efekcie produkt końcowy zachowuje funkcje obydwu białek tworzących cząsteczkę (patrz, na przykład, Gillies i inni, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89; 1428-1432 (1992) i amerykański opis patentowy Nr 5,650,150).
Niedogodnością znanego sposobu jest ograniczona użyteczność wyprodukowanego metodami rekombinacji, opartego na przeciwciałach, białka fuzyjnego, z uwagi na jego szybkie wypadanie z krążenia in vivo. Na przykład białka fuzyjne przeciwciało-cytokina wykazują istotnie niższy czas pozostawania w krążeniu in vivo niż wolne przeciwciała. Gillies i inni badając róż ne białka fuzyjne przeciwciało-cytokina stwierdzili, że wszystkie badane białka fuzyjne miały fazę α (faza dystrybucji) pozostawania w krążeniu krótszą niż 1,5 godziny. Rzeczywiście, większość białek fuzyjnych opartych na przeciwciałach, najpóźniej w ciągu 2 godzin ulegała usunięciu z krwi do wartości 10% stężenia surowicy wolnego przeciwciała (patrz Gillies i inni Bioni. Chem. str.230-235 (1993). Dlatego też istnieje zapotrzebowanie na opracowanie białek fuzyjnych opartych na przeciwciałach, które będą pozostawać w krążeniu in vivo, przez podobny okres co wyjściowe przeciwciała.
Przeciwciała IgG oddziałują z trzema klasami receptorów Fc (FcR), specyficznymi dla przeciwciał z klasy IgG, a mianowicie: FcyRI, FcyRII i FcyIII. Na przykład obydwa ludzkie IgG1 i IgG3 wiążą się z FcyRI z dużym powinowactwem, podczas gdy IgG4 wiąże się 10-krotnie słabiej, a IgG2 nie wiąże się wcale. Ustalono, że ważne sekwencje dla wiązania IgG z receptorami Fc są zlokalizowane w domenie CH2.
Celem wynalazku jest opracowanie takich białek fuzyjnych opartych na przeciwciałach, które będą pozostawać w krążeniu in vivo, przez podobny okres co wyjściowe przeciwciała i wyeliminuj ą niedogodności znanych dotychczas białek.
Przedmiotem wynalazku jest białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, które zawiera:
(i) region Fc IgG2 lub IgG4 zamiast stałego regionu IgG1 lub IgG3, co prowadzi do zmniejszenia powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego stałe regiony IgG1 lub IgG3, lub (ii) zmodyfikowany region Fc IgG1 lub IgG3, zapewniający zmniejszenie powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego niezmodyfikowanego, gdzie modyfikacja stałego regionu IgG1 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, a modyfikacja stałego regionu IgG3 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282 ,Glu283, Gly284, Asn344 i Pro378. Korzystnie białko fuzyjne ma właściwości cytokiny.
PL 199 659 B1
W innej odmianie wynalazku przedmiotem jest czą steczka DNA kodują ca biał ko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, które obejmuje (iii) region Fc IgG2 lub IgG4 zamiast stałego regionu IgG1 lub IgG3, co prowadzi do zmniejszenia powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego stałe regiony IgG1 lub IgG3, lub zmodyfikowany region Fc IgG1 lub IgG3, zapewniający zmniejszenie powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego niezmodyfikowanego, gdzie modyfikacja stałego regionu IgG1 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, a modyfikacja stał ego regionu IgG3 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282, Glu283, Gly284, Asn344 i Pro378. Korzystnie cząsteczka DNA koduje białko fuzyjne o właściwościach cytokiny.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania białka fuzyjnego o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, obejmującego immunoglobulinowy zmienny lekki i ciężki łańcuch oraz stały ciężki łańcuch IgG1 lub IgG3 oraz cytokinę związaną z ciężkim ł a ń cuchem Ig. Sposób ten obejmuje etapy w których:
(iv) zastępuje się stały region IgG1 lub IgG3 ciężkiego łańcucha, stałym regionem IgG2 lub IgG4, lub wprowadza się do ciężkiego łańcucha IgG1, mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, lub wprowadza się do ciężkiego łańcucha IgG3, mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282, Glu283, Gly284, Asn344 i Pro378 oraz (ii) łączy się region IgG2 lub IgG4 lub zmodyfikowany region IgG1 lub IgG3 lub ich część z drugim biał kiem, róż nym od Ig.
Korzystnie w sposobie według wynalazku uzyskuje się przeciwciało hu-KS IL2.
Użyte tutaj określenie „cytokina” określa białka, analogi białek i ich fragmenty, produkowane i wydzielane przez komórkę , które wywoł ują specyficzną odpowiedź komórkową receptora cytokin. Korzystnie cytokiny obejmują interleukiny takie jak interleukina-2 (IL-2), czynniki hematopoetyczne, takie jak czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocydów-makrofagów (GM-CSF), czynnik martwicy nowotworów (TNF), taki jak TNFa i limfokiny takie jak limfotoksyna.
Drugim nieimmunoglobulinowym składnikiem białka fuzyjnego jest białko wiążące ligand niosące biologiczną aktywność. Takie białka wiążące ligand mogą, na przykład, (1) blokować oddziaływania receptor-ligand na powierzchni komórki, lub (2) neutralizować biologiczną aktywność cząsteczki (na przykład cytokiny) w składniku płynnym krwi, i tym samym zapobiegać dostaniu się jej do komórki. Korzystnie, białko wiążące ligand obejmuje CD4, CTLA-4, receptory TNF, względnie receptory interleukiny takie jak receptory IL-1 i IL-4.
Białka fuzyjne według wynalazku łączą specyficzność wiązania antygenu i aktywność przeciwciała z potencjalną aktywnością biologiczną drugiego, nieimmunoglobulinowego, białka, takiego jak cytokina. Białka fuzyjne według wynalazku mogą być zastosowane w selektywnym dostarczaniu do komórki nieimmunoglobulinowego, białka in vivo, tak aby białko to mogło spowodować żądane skutki biologiczne w określonym miejscu organizmu.
Korzystnie białko fuzyjne według wynalazku posiada biologiczną aktywność drugiego nieimmunoglobulinowego białka, ale któremu brak specyficzności wiązania antygenu i aktywności przeciwciała. Według korzystnego rozwiązania wynalazku białko fuzyjne zawiera ponadto sekwencje niezbędne do wiązania receptorów chroniących Fc (FcRp), takich jak noworodkowy receptor transportu jelitowego zawierający β-2 mikroglobulinę.
W korzystnych rozwiązaniach wynalazku, białko fuzyjne zawiera dwa łańcuchy chimerowe zawierające przynajmniej część ciężkiego łańcucha, podczas gdy drugie nieimmuno-globulinowe jest białko połączone przez wiązanie disiarczkowe. Zakres wynalazku obejmuje również linie komórkowe, takie jak na przykład szpiczaka, transfekowane konstruktami zawierającymi DNA według wynalazku. Przedmiot wynalazku, właściwości i zalety przedstawiono na rysunku, na którym:
PL 199 659 B1
Figura 1. Dopasowanie według homologii sekwencji aminokwasów stałych regionów Cy1 i Cy3 białka fuzyjnego według wynalazku, przeprowadzone, tak aby uzyskać maksymalizację identyczności aminokwasów, gdzie niekonserwowane aminokwasy oznaczono ramkami;
Figura 2. Dopasowanie według homologii sekwencji aminokwasów stałych regionów Cy1, Cy2 i Cy4 białka fuzyjnego według wynalazku, przeprowadzone, tak aby uzyskać maksymalizację identyczności aminokwasów, gdzie niekonserwowane aminokwasy oznaczono ramkami;
Figura 3. Rysunkowe prezentacje mapy konstrukcji genetycznego kodowania białka fuzyjnego opartego o przeciwciało według wynalazku pokazujące stosowne miejsca restrykcyjne;
Figura 4. Wykres słupkowy obrazujący wiązanie przeciwciała hu-KS-1/4 i białek fuzyjnych opartych na przeciwciałach, hu-KSY1-IL2 i hu-KSY4-IL2 z receptorami Fc mysich komórek J774 w obecności (pełne słupki), lub nieobecności (mieszane słupki) nadmiaru mysiej IgG;
Figura 5. Wykres zależności od czasu całkowitego stężenia przeciwciał (wolne przeciwciała i białko fuzyjne) w osoczu, dla hu-KSY1-IL2 (zamknięte romby) i hu-KSY4-IL2 (zamknięte trójkąty) oraz stężenia w osoczu nieuszkodzonego białka fuzyjnego dla hu-KSY1-IL2 (otwarte romby) i huKSy4-IL2 (otwarte trójkąty);
Figura 6. Schematyczne przedstawienie protokołu konstrukcji białka fuzyjnego, opartego na przeciwciele z mutacją, która zmniejsza powinowactwo wiązania z receptorami Fc;
Figura 7. Graficzne przedstawienie zależności od czasu zmian stężenia w osoczu in vivo nieuszkodzonego białka fuzyjnego hu-KSY1-IL2 (<>), murtowanego hu-KSY1-IL2 ([]) i hu-KSY4-IL2 (Δ).
Wiadomo, że przyłączenie drugiego białka, takiego jak cytokina do immunoglobulin może zmieniać strukturę przeciwciała, powodując wzrost powinowactwa wiązania dla jednej lub więcej związanych komórek receptorów Fc, co może prowadzić do szybkiego wyeliminowania z krążenia białka fuzyjnego zawierającego przeciwciało. Wynalazek przedstawia białko fuzyjne oparte na przeciwciele, które ma dłuższy czas pozostawania w krążeniu in vivo oraz sposób otrzymywania przez rekombinację DNA takiego białka fuzyjnego.
Białka fuzyjne oparte na przeciwciele według wynalazku mogą być uzyskane przez modyfikację sekwencji niezbędnej dla wiązania receptorów Fc w izotypach, które mają powinowactwo wiązania receptorów Fc, w celu zmniejszenia względnie wyeliminowania wiązania. Jak wspomniano powyżej, cząsteczki IgG oddziałują z trzema klasami receptorów Fc (FcR), a mianowicie FcyRI, FcyRII i FcyRIII, Cy1 i Cy3 wiążą się z FcyRI z dużym powinowactwem, podczas gdy Cy4 i Cy2 mają mniejsze, lub nie mają wcale powinowactwa wiązania z FcyRI. Porównanie Cy1 z Cy3 wskazuje, że pomijając zwiększony segment zawiasowy dla Cy3, sekwencja homologicznych aminokwasów dla tych dwóch izotypów jest bardzo wysoka. Zachodzi to nawet dla tych regionów, które wykazały oddziaływanie z fragmentem C1q dopełniacza i innymi klasami FcyR. Figura 1 przedstawia dopasowanie według homologii sekwencji aminokwasów stałych regionów Cy1 iCY3. Dwa inne izotypy ludzkiej IgG (Cy2 i Cy4) wykazują różnice w sekwencjach, które mają wpływ na wiązanie z FcR. Fig. 2 przedstawia dopasowanie według homologii sekwencji aminokwasów stałych regionów Cy1, Cy2 i Cy4. Ważnymi sekwencjami w wiązaniu z FcyR są Leu-Leu-Gly-Gly (reszty 234 do 237 w CyI) zlokalizowane w domenie CH2 właściwej dla regionu zawiasowego (patrz Canfield i Morrison, J.Exp.Med. 173, str. 1843-1491 (1991)). Ten motyw sekwencji jest zachowywany w Cy1 i Cy3, zgodnie z ich podobnymi biologicznymi właściwościami oraz możliwym zachowaniem farmakokinetycznym, gdy będą one zastosowane w konstrukcji białek fuzyjnych IL-2. Wykonano wiele analiz mutacyjnych dla wykazania wpływu określonych mutacji na wiązanie z FcR, zwłaszcza reszt w pozycjach od 234 do 237, jak i w regionie bliskim segmentowi zawiasowemu, na zgięciu w reszcie Pro331, która jest podstawiona Ser w IgG4. Innym ważnym składnikiem strukturalnym niezbędnym dla skutecznego wiązania z FcR jest obecność łańcucha węglowodorowego kowalencyjnie połączonego przez azot z Asn297. Usunięcie tej struktury na drodze enzymatycznej, bądź też przez mutację reszty Asn istotnie eliminuje, a przynajmniej dramatycznie zmniejsza wiązanie z FcyR wszystkich klas.
Postulowano istnienie zabezpieczenia receptora (FcRp), które mogłoby obniżać szybkość katabolizmu pozostających w krążeniu przeciwciał, przez wiązanie z częścią Fc przeciwciał i, po ich pinocytozie do komórek, mogłoby przywracać je ponownie do krążenia (patrz Brumbell i inni Nature 203, 1352-1355 (1964)). Noworodkowy receptor transportu jelitowego zawierający β-2 mikroglobulinę został ostatnio zidentyfikowany jako FcRp (patrz Junghans i inni, Proc.Natl.Acad.Sci. USA 93; str. 5512-5515 (1996)). Sekwencje niezbędne dla wiązania do tych receptorów są konserwowane we wszystkich czterech klasach ludzkiej IgG i są zlokalizowane na pograniczu domen CH2
PL 199 659 B1 i CH3 (patrz Medesan i inni. Immunolog. 158, 2211-2217 (1997)). Wiadomo, ż e sekwencje te są ważne dla czasu pozostawania w krążeniu in vivo białka fuzyjnego opartego na przeciwciele (patrz zgłoszenie międzynarodowe PCT WO 97/34631). A zatem, białko fuzyjne według wynalazku ma sekwencję niezbędną dla wiązania z FcRp.
Opisano tutaj sposoby syntetyzy rozwiązań według wynalazku, a także testy przydatne do testowania ich farmakokinetycznej aktywności, in vivo i przed klinicznie na modelach zwierzęcych in vivo. Korzystny konstrukt genetyczny kodujący łańcuch chimerowy zawiera, w orientacji 5' do 3' segment DNA, który koduje drugie nieimmunoglobulinowe białko i DNA, który koduje co najmniej część immunoglobuliny. Korzystny gen kodujący łańcuch chimerowy zawiera, w orientacji 5' do 3' segment DNA, który koduje co najmniej część immunoglobuliny. Wprowadzony gen jest wbudowany lub wprowadzony do wektora ekspresyjnego stosowanego do transfekcji odpowiedniej komórki docelowej, gdzie ulega ekspresji.
Wynalazek przedstawiono na podanych dalej przykładach zastosowania.
P r z y k ł a d 1
Poprawienie czasu pozostawania w krążeniu białka fuzyjnego przeciwciała IL-2 in vivo przez zmianę klasy stałego regionu IgG z Cy1 do Cy4.
Według wynalazku białko fuzyjne oparte na przeciwciele o przedłużonym czasie pozostawania w krążeniu in vivo może być uzyskane przez konstruowanie białka fuzyjnego opartego na przeciwciele z wykorzystaniem sekwencji z izotypów przeciwciał, które mają mniejsze, lub całkowity brak powinowactwa wiązania z receptorami Fc.
Dla oszacowania czy czasy pozostawania w krążeniu białka fuzyjnego oparte na przeciwciele in vivo mogą zostać wydłużone przez wykorzystanie sekwencji z izotopów przeciwciał, które mają mniejsze, lub całkowity brak powinowactwa wiązania z receptorami Fc, białko fuzyjne przeciwciała IL-2 z ludzkim stałym regionem CYl(region Fc) porównano z białkiem fuzyjnym przeciwciała IL-2 z ludzkim regionem Fc Cy4.
1.1 Konstrukcja białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 ze stałym regionem Cy4 IgG
Konstrukcję białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 ze stałym regionem Cy1 IgG opisano uprzednio. Patrz, na przykład Gillies i inni. Proc. Natl, Acad, USA 89, 1428-1432 (1992) (amerykański opis patentowy N° 5,650,150, którego ujawnienie jest włączone tutaj jako odnośnik).
W celu skonstruowania białka fuzyjnego przeciwciała IL-2 ze stałym regionem Cy1, wektor plazmidowy zdolny do ekspresji białka fuzyjnego humanizowanego przeciwciała IL-2 ze zmiennymi (V) regionami specyficznymi dla ludzkiego antygenu pan-rakowego (KSA) i ludzkim ciężkim łańcuchem Cy1 sprzężonymi z humanizowanym przeciwciałem IL-2, zmodyfikowano przez usunięcie fragmentu genu kodującego Cy1 i zastąpienie go przez odpowiednią sekwencję ludzkiego genu kodującego Cy4. Figura 3 przestawia mapę miejsc restrykcyjnych i lokalizację fragmentu genu kodującego Cy4. Te konstrukcje plazmidowe zawierają wczesny starter cytomegaiowirusa (CMV) transkrypcji mRNA kodującego regiony zmienne (V) lekkich (L) i ciężkich (H) łańcuchów, pochodzące z przeciwciała myszy KS-1/4. Regiony V myszy znanymi metodami zhumanizowano i sekwencje DNA kodujące te regiony zsyntetyzowano chemicznie. Funkcjonalne miejsce odcięcia donora dodano na końcu każdego regionu V, tak, aby można go było użyć w wektorach zawierających geny kodujące stałe regiony łańcuchów L i H. Ludzki gen kodujący lekki łańcuch Ck został wprowadzony poniżej miejsca klonowania genu VL, po którym następował jego endogenny region nie ulegającym translacji 3' oraz miejsce poliadenylacji. Po tej jednostce transkrypcyjnej następowała druga niezależna jednostka transkrypcyjna dla białka fuzyjnego ciężki łańcuch - IL2, również kierowane przez promotor CMV. Sekwencję kodującą VH wprowadzono powyżej fragmentu DNA genu kodującego wybrany ciężki łańcuch Cy, połączony z sekwencją kodująca ludzką IL-2. Takie geny kodujące Cy zawierają miejsce akceptorowe cięcia i składania pierwszego egzonu ciężkiego łańcucha (CH1), tuż poniżej pojedynczego miejsca cięcia Hind III wspólnego dla wszystkich ludzkich genów kodujących Cy. Na końcu sekwencji kodującym IL-2 wprowadzono miejsce nie ulegające translacji 3' i miejsce poliadenylacji z wirusa SV40. Pozostałą część wektora zawierającego bakteryjny plazmid DNA niezbędny do namnażania E.coli i gen kodujący marker selekcyjny (reduktaza dihydrofolanu - dhfr), umożliwiający selekcję stransfekowanych komórek ssaczych.
Wymianę fragmentów Cy1 i Cy4 uzyskano tnąc wyjściowy plasmid DNA zawierający gen kodujący Cy1 enzymami Hind III i Xhol, oczyszczając duży fragment 7,8 kb przez elektroforezę w żelu agarowym. Drugi plazmid, zawierający gen kodujący Cy4, cięto Hind III i Nsil, po czym oczyszczono fragment o 1,75 kb. Trzeci plazmid zawierający ludzki cDNA kodujący IL-2 i miejsce
PL 199 659 B1 poli A SV40 przyłączony do końca karboksylowego ludzkiego genu Cy4 cięto Xho I i Nsi I, po czym oczyszczono mały fragment o 470 kb. Wszystkie trzy fragmenty poddano razem ligacji, w przybliżeniu w jednakowych ilościach molowych, a produkt ligacji użyto do transformacji kompetencyjnych komórek E.coli. Produktem ligacji transformowano komórki kompetencyjne E.coli i kolonie poddano selekcji przez wzrost na płytkach zawierających ampicylinę. Prawidłowo skonstruowane zrekombinowane plazmidy identyfikowano stosując analizę restrykcyjną preparatów plazmidowego DNA z poszczególnych transformantów i cięcie Fsp I zastosowano w celu rozróżnienia pomiędzy wstawką genu kodującego Cy1 (brak miejsc Fsp I) a Cy4 (jedno miejsce). Ostateczny wektor, zawierający wstawkę wymiany ciężkiego łańcucha Cy4-IL-2 został wprowadzony do mysich komórek szpiczaka i stransfekowane komórki zostały wybrane przez wzrost w pożywce zawierającej metotreksat (0,1 μM). Klony komórkowe, w których poziom ekspresji białka fuzyjnego był wysoki poddano namnażaniu i białka fuzyjne oczyszczono z supermatantów hodowli chromatograficznie stosując Sefarozę z białkiem A. Czystość i kompletność białka fuzyjnego Cy4 została określona na żelu poliakryloamidowym SDS. Aktywność IL-2 została zmierzona w teście proliferacji komórek T i stwierdzono, że jest identyczna z aktywnością Cy1.
1.2 Wiązanie z receptorami Fc przeciwciał i białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 ze stałym regionem Cy1 i Cy4 IgG.
W wielu liniach komórkowych myszy i ludzi ulega ekspresji jeden lub więcej receptorów Fc. Na przykład linia komórek typu makrofagów u myszy J774 ulega ekspresji FcRyI, która jest zdolna do wiązania mysiej lub ludzkiej IgG odpowiednich podklas. Analogicznie w ludzkiej erytroleukemicznej linii komórkowej ulega ekspresji FcRyII, ale nie FcRyI. Aby oszacować potencjalny udział receptorów Fc w powstrzymywaniu wycofywania z krążenia białka fuzyjnego według wynalazku, porównano w mysich liniach komórkowych J774 powinowactwo wiązania przeciwciała, białek fuzyjnych Cy1-IL2 i Cy4-IL2.
Dwa białka fuzyjne przeciwciała IL-2 opisane w przykładzie 1, hu-KSY1-IL2 i hu-KSY4-IL2 rozcieńczono do 2 μg/ml w PBS zawierającym 0,1% albuminę z surowicy bydlęcej (BSA) z 2x105 komórkami J774 w końcowej objętości 0,2 ml. Po 20 minutowej inkubacji w lodzie dodawano sprzężone z FITC przeciwciało przeciwko Fc ludzkiej IgG (Fab2) i inkubację kontynuowano przez dalsze 30 minut. Niezwiązane przeciwciała usuwano dwukrotnie przepłukując PBS-BSA i komórki poddano analizie w sorterze komórek aktywowanych fluorescencyjnie (FACS). Kontrolne reakcje zawierały te same komórki zmieszane z przeciwciałami drugiego rzędu znakowanymi FITC lub humanizowanym przeciwciałem KSy1 (bez IL-2).
Tak jak oczekiwano, wiązanie białka fuzyjnego Cy1-IL-2 z komórkami J774 było istotnie niższe niż wiązanie białka fuzyjnego Cy4-IL-2, patrz fig. 4. Nieoczekiwanie obydwa białka fuzyjne, tak Cy1-IL-2, jak i Cy4-IL-2 miały znacząco wyższe wiązanie z komorami J774 niż przeciwciało KSy1 (bez IL-2). To sugeruje, że przyłączenie drugiego białka, takiego jak cytokina, do immunogiobulin może zmieniać strukturę przeciwciała, powodując w efekcie wzrost powinowactwa wiązania do przynajmniej jednego receptora Fc związanego z komórką, i w wyniku tego doprowadzić do szybkiego wycofania białka fuzyjnego lub przeciwciała z krążenia.
Aby określić, czy obserwowane zwiększenie wiązania z białkiem fuzyjnym IL-2 spowodowane zostało obecnością receptorów IL-2, czy też receptorów FcRyI w komórkach, nadmiar mysiej IgG (mlgG) użyto do uzyskania współzawodnictwa w wiązaniu z receptorami Fc. Jak przedstawiono na fig. 4, podstawowe poziomy wiązania obserwowano dla przeciwciała oraz obu białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 w obecności 50 krotnego molowego nadmiaru mlgG. To sugeruje, że wzrost sygnału wiązania białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 spowodowany był wzrostem wiązania z receptorem Fc.
Linie komórkowe, w których zachodzi ekspresja receptorów Fc, zastosowano do testowania powinowactwa wiązania białek fuzyjnych z receptorami Fc, w celu zidentyfikowania białek fuzyjnych opartych na przeciwciele, charakteryzujących się wydłużonym czasem pozostawania w krążeniu in vivo. Uzyskane białka fuzyjne mogą być testowane opisanym sposobem. Uzyskane białka fuzyjne według wynalazku, które wykazują istotnie mniejsze powinowactwo wiązania z receptorami Fc mogą być identyfikowane jako białka fuzyjne o wydłużonym czasie pozostawania w krążeniu.
1.3 Pomiar czasu półtrwania w krążeniu białek fuzyjnych przeciwciała IL-2 ze stałymi regionami Cy1 i Cy4 IgG.
Aby oszacować, czy zastosowanie fragmentu Fc izotypu IgG o mniejszym powinowactwie do receptorów Fc przedłuży czas półtrwania in vivo w krążeniu, białko fuzyjne zawierające ciężki
PL 199 659 B1 łańcuch izotypu Cy1 (to jest hu-KSYl-IL-2) porównywano z białkiem fuzyjnym zawierającym ciężki łańcuch izotypu Cy4 (to jest hu-KSY4-IL-2).
Oczyszczone humanizowane białko fuzyjne KS-1/4-IL-2 zawierające ciężki łańcuch izotypu albo Cy1, albo Cy4, poddano wymianie buforu diafiltrację na sól fizjologiczną z buforem fosforanowym (PBS) i rozcieńczeniu do stężenia ~100 μg/ml. Około 20 μg białka fuzyjnego (0,2 ml) wstrzyknięto 6-8 tygodniowym myszom Balb/c w żyłę ogonową, stosując powolne podawanie. Każda grupa obejmowała cztery myszy. W różnych odstępach czasu pobierano niewielkie próbki krwi przez skrwawienie znieczulonych zwierząt z oczodołu. Próbki zbierano w probówkach zawierających bufor cytrynowy chroniący przed skrzepnięciem. Komórki usuwano przez 5 minutowe odwirowanie w wysokoobrotowej stołowej wirówce Eppendorf. Osocze pobrano mikropipetą i zamrożono w -70°C. Stężenie determinant ludzkich przeciwciał w mysiej krwi mierzono testem ELISA. Wychwyt przeciwciał specyficznych dla ludzkich lekkich i ciężkich łańcuchów użyto do wychwycenia z rozcieńczonych próbek osocza białek fuzyjnych. Po 2-godzinnej inkubacji w pokrytej przeciwciałem płytce 96-studzienkowej niezwiązany materiał został usunięty przez trzy płukania z buforem ELIZA (0,01% Tween 80 w PBS). Do drugiego etapu inkubacji używano albo przeciwciała przeciwko ludzkiemu Fc (dla wykrycia zarówno przeciwciał jak i nieuszkodzonego białka fuzyjnego), lub przeciwciała przeciwko ludzkiemu IL-2 (dla wykrycia tylko nieuszkodzonego białka fuzyjnego). Obydwa przeciwciała sprzężono z peroksydazą chrzanową (HRP). Po 1 godzinie inkubacji niezwiązane wykrywające przeciwciało usuwano przez płukanie buforem ELISA i ilość związanej FffR oznaczano przez inkubację z substratem i pomiar w spektrofotometrze.
Jak zilustrowano na fig. 5, faza α czasu półtrwania w krążeniu białka fuzyjnego hu-KSY4-IL2 była istotnie dłuższa, niż faza α czasu półtrwania w krążeniu białka fuzyjnego hu-KSY1-IL2. Dłuższy okres pozostawania w krążeniu jest najlepiej udokumentowany przy znacząco wyższym stężeniu białka fuzyjnego KSy4-IL2 (3,3 μg/ml) w porównaniu do białka fuzyjnego KSy1-IL2 (60 ng/ml) stwierdzonego u myszy po 24 godzinach.
Po szybkiej fazie (α) dystrybucji białka KSy1-IL2 następuje wolniejsza, kataboliczna faza(e), jak przedstawiono wcześniej dla chimerycznego białka fuzyjnego 14.18-IL2 (Gillies i inni, Bioconi. Chem. 4, str. 230-235 (1995)). W badaniach mierzono jedynie determinanty przeciwciał, a więc nie było jasne, czy usuwanie dotyczy nieuszkodzonego białka fuzyjnego, czy też przeciwciała w białku fuzyjnym. Tutaj, próbki mierzono zarówno stosując (1) test ELISA specyficzny dla przeciwciała jak i (2) test ELISA specyficzny dla białka fuzyjnego (to jest ELISA, który wykrywa fizycznie połączone składniki: przeciwciało i IL2), Jak pokazuje fig. 5, u zwierząt, którym wstrzyknięto białko fuzyjne KSy1-IL2, ilość białka fuzyjnego pozostającego w krążeniu była niższa, niż łączna ilość pozostającego w krążeniu przeciwciała, szczególnie po 24 godzinach. To sugeruje, że białko fuzyjne szybciej ulega cięciu proteolitycznemu in vivo, i że uwolnione przeciwciało znajduje się we krwi. Nieoczekiwanie u zwierząt, którym wstrzyknięto białko fuzyjne KSy4-IL2 nie stwierdzono znaczącej różnicy pomiędzy poziomem białek fuzyjnych we krwi a całkowitą ilością krążącego przeciwciała. To sugeruje, że białko fuzyjne KSy4-IL2 nie ulegało szybszemu cięciu proteolitycznemu u tych zwierząt w 24 godzinnym okresie pomiarów.
Jak przedyskutowano powyżej, Cy1 i Cy3 wiążą się z receptorami Fc z dużym powinowactwem, podczas gdy Cy4 i Cy2 mają mniejsze, lub nie mają wcale powinowactwa wiązania z receptorami Fc. W niniejszym przykładzie opisano sposoby wytwarzania białka fuzyjnego według wynalazku z wykorzystaniem regionu Cy4 Fc, izotypu IgG o mniejszym powinowactwie z receptorami Fc i ustalono, że takie białka fuzyjne przez dłuższy czas pozostają w krążeniu. Odpowiednio używając opisanych sposób, biegły w dziedzinie może uzyskać białka fuzyjne z regionem Cy2 Fc, zamiast regionu Cy4 Fc, dla wydłużenia czasu półtrwania w krążeniu białek fuzyjnych. Białko fuzyjne Hu-KS-IL-2 wykorzystujące ludzki region Cy2 może być skonstruowane z zastosowaniem zastąpienia tych samych fragmentów restrykcyjnych i opisanego powyżej sposobu dla białek fuzyjnych Cy4-IL2. Białko fuzyjne może być badane z zastosowaniem opisanych tutaj sposobów, wykazujący wydłużonego czas półtrwania w krążeniu. Białka fuzyjne z regionem Cy2 Fc, lub innym regionem mającym zmniejszone, lub nie mają wcale powinowactwa wiązania z receptorami Fc, będzie miało wydłużony in vivo czas półtrwania w krążeniu w porównaniu do białka fuzyjnego opartego na przeciwciele mającym wysokie powinowactwo wiązania z receptorami Fc.
P r z y k ł a d 2
Mutacje ludzkiego genu kodującego Cy1, lub Cy3 w konstruktach kodujących białka fuzyjne, prowadzące do poprawy ich czasów półtrwania w krążeniu.
PL 199 659 B1
Cząsteczki IgG oddziałują z licznymi cząsteczkami w krążeniu, włącznie ze składnikami układu dopełniacza (np./ fragmentem C1q), a także z trzema klasami FcR. Ważnymi resztami w wiązaniu C1q są : Glu318, Lys3320 i Lys322, które są zlokalizowane w domenach CH2 ludzkich ciężkich łańcuchów ( Tao i inni J. Exp. Med. 178; str. 661 -667 (1993)). W celu odróżnienia pomiędzy wiązaniami FcR i C1q jako mechanizmami szybkiego oczyszczania, podstawiliśmy bardziej drastycznie zmieniony segment bliski segmentowi zawiasowemu Cy2 do ciężkiego łańcucha Cy1. Oczekiwano, że taka mutacja wpłynie na wiązanie z FcR, ale nie wpłynie na wiązanie dopełniacza.
Mutację uzyskano przez klonowanie i adaptowanie małego regionu pomiędzy segmentem zawiasowym a początkiem egzonu CH2 zarodkowej linii niosącej gen Cy1, używając nakładających się reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). Starter PCR został zaprojektowany, tak aby uzyskać podstawienie nowej sekwencji na połączeniu dwóch przylegających fragmentów sąsiadujących PCR obejmującej fragment od Pstl do Drd I (patrz Fig. 6). W pierwszym etapie, dwie odrębne reakcje PCR ze starterami 1 i 2 (odpowiednio Seq Id Nos: 5 i 6), lub starterami 3 i 4 (odpowiednio Seq Id Nos: 7 i 8), zostały przygotowane z użyciem genu kodującego Cy1 jako matrycy. Warunki cyklu dla pierwszej reakcji PCR były następujące: 35 cykli złożonych z: 45 sekund 94°C, annealingu (wtapiania) 45 sekund 48°C, i elongacji pierwotnej w temp. 72°C przez 45 sekund. Produkt każdej reakcji PCR użyto jako matrycę dla drugiego etapu reakcji łączenia. Jedną dziesiątą każdej reakcji pierwotnej zmieszana razem ze starterami 1 i 4 aby zwielokrotnić tyle połączony produkt dwóch pierwotnych PCR. Warunki drugiej PCR były następujące: 1 minuta 94°C, wtapianie 1 minuta 51°C i elongacja pierwotna 1 minuta 72°C. Połączenie następowało w wyniku nakładania się dwóch pojedynczych fragmentów, których końce łączyły się ze sobą, po czym prowadzono denaturację i annealing. Te fragmenty które utworzyły hybrydy przedłużono stosując polimerazę Taq i całkowity, zmutowany produkt, selektywnie zaplifikowano stosując zewnętrzne startery, jak to pokazuje fig. 6. Końcowy produkt PCR sklonowano do wektora plazmidowego i sekwencję sprawdzono analizą sekwencji DNA.
Złożenie zmutowanych genów wykonano wieloetapowo. W pierwszym etapie, wektor klonujący zawierający ludzki gen kodujący Cy1 trawiono PstI i XhoI, aby usunąć niezmutowanych sekwencji kodujących region zawiasowy CH2-CH3. Fragment Drd I do Xho kodujący część CH2-CH3 i sekwencje kodujące ludzką IL-2 uzyskano z wektora Cy1-IL2 opisanego powyżej. Trzeci fragment uzyskano z subklonowanego fragmentu produktu PCR cięcie Pst I i Drd I. Wszystkie trzy fragmenty oczyszczono przez elektroforezę w żelu agarowym i zligowane razem w mieszaninie reakcyjnej. Produkty ligacji użyto do transformacji kompetentnych komórek E. coli i kolonie wyselekcjonowano przez wzrost na płytkach zawierających ampicylinę. Poprawnie połączone rekombinowane plazmidy identyfikowano stosując analizę restrykcyjną DNA plazmidów z wyodrębnionych transformantów i mutacje genowe potwierdzono analizą sekwencji DNA. Fragment Hind III do Xho ze zmutowanego genu kodującego Cy1-IL2 użyto w celu uzyskania pełnego wektora ekspesyjnego kodującego białko fuzyjne przeciwciało hu-KS-IL-2.
Oby określić wpływ ważnych mutacji aminokwasów dla wiązania z FcR, na wydłużenie czasu półtrwania białka w krążeniu in vivo i aby wykluczyć oddziaływanie z FcR lub C1q powodujące szybkie usuwanie z krążenia, porównano stężenie w osoczu in vivo zmutowanego hu-KSY1-IL2 ze stężeniem w osoczu hu-KSY1-IL2 w różnych czasach. Jak pokazuje Fig. 7 szybkość usuwania z krążenia in vivo w przypadku zmutowanego hu-KSY4-IL2 była znacząco niższa niż szybkość oczyszczania hu-KSY1-IL2. Te wyniki sugerują, że białka fuzyjne według wynalazku mogą być uzyskane przez modyfikację sekwencji niezbędnych przy wiązaniu z receptorami Fc w izotypach, które mają wyższe powinowactwo wiązania z receptorami Fc. Ponadto wyniki sugerują, że mechanizm szybkiego usuwania z krążenia wiąże się raczej z wiązaniem z FcR, niż C1q.
Wiadomo, że liczne inne mutacje genów kodujących Cy1, względnie Cy3 mogą być wprowadzane w celu zmniejszenia wiązania z FcR i wydłużenia czasu półtrwania w krążeniu in vivo białka fuzyjnego opartego według wynalazku. Ponadto mutacje mogą być wprowadzone także do genu kodującego Cy4, aby jeszcze bardziej zmniejszyć wiązanie białka fuzyjnego z FcR. Na przykład, dodatkowe możliwe mutacje obejmują mutacje w bliższej fragmentu zawiasowego reszcie aminokwasowej Pro331, względnie przez mutację pojedynczego miejsca glikozylacji przez azot we wszystkich regionach Fc IgG. Miejsce to jest zlokalizowane na reszcie Asn297 jako część sekwencji kanonicznej: Asn-X-Thr/Ser, gdzie drugą pozycją może być dowolny aminokwas (z wyłączeniem Pro), a trzecią pozycją może być Thr lub Ser. Zachowawcza mutacja, na przykład aminokwasu Gln, może mieć niewielki wpływ na białko, ale może zapobiegać przyłączeniu jakiegokolwiek
PL 199 659 B1 łańcucha węglowodorowego lub benzylowego. Strategia mutacji tych reszt może być zgodna a ogólną procedurą opisaną powyżej dla bliskiego regionu zawiasowego. Sposoby uzyskiwania mutacji punktowych w klonowanych sekwencjach DNA są dobrze znane i zestawy licznych przydatnych wektorów są dostępne handlowo.
P r z y k ł a d 3
Wydłużanie czasu półtrwania w krążeniu białka fuzyjnego opartego na przeciwciele i receptorze.
Liczne doniesienia wskazują, że część Fc ludzkiej IgG może służyć jako użyteczny nośnik dla wielu białek wiążących ligandy, względnie dla receptorów o aktywności biologicznej. Niektóre z tych wiążących ligandy białek łączono z końcem N części Fc Ig, to jest receptory CD4, CTLA-4 i TNF (na przykład Capon i inni Nature 337; str. 525-531 (1989), Linsley i inni J.Exp,Med. 174; str. 561-569 (1991); Wooley i inni J. Immunol; 151:6602-6607 (1993)). Wydłużanie czasu półtrwania w krążeniu białka fuzyjnego opartego na przeciwciele i receptorze może pozwolić białkom wiążącym liandy (to jest drugim białkom nieimmunoglobulinowym) na bardziej skuteczne (1) blokowanie oddziaływania ligand-receptor na powierzchni komórek, lub (2) neutralizowanie biologicznej aktywności cząsteczki (na przykład cytokiny) w płynnym składniku krwi i w ten sposób zapobieganie dostania się aktywnej cząsteczki do komórek. Aby określić, czy obniżenie powinowactwa wiązania białka fuzyjnego opartego na przeciwciele i receptorze, z receptorami IgG wydłuży ich czas półtrwania w krążeniu in vivo, białka fuzyjne z ludzkimi regionami Fc Cy1 były porównane z białkami fuzyjnymi z ludzkimi regionami Fc Cy4.
Aby skonstruować białka fuzyjne CD4-przeciwciało, ektodomenę kodującą ludzki receptor komórkowy CD4 sklonowano z użyciem PCR z ludzkich monocytowych komórek krwi obowdowej (PBMC). Sklonowany receptor CD4 zawiera odpowiednie miejsca restrykcyjne i miejsca łączenia donora opisane w przykładzie 1. Wektor ekspresyjny zawiera charakterystyczne miejsce klonowania XbaI poniżej wczesnego poromotora CMV i geny kodujące ludzki Cy1, lub Cy4 poniżej ich endogennego miejsca Hind III. Pozostała część plazmidu zawiera bakteryjne informacje genetyczne propagacji w komórkach E.coli a także selekcyjny gen markerowy dhfr. Zligowany DNA użyto do transformacji bakterii kompetentnych i zrekombinowany plazmid identyfikowano analizą restrykcyjną z wybranych kolonii bakterii. Otrzymano dwa konstrukty plazmidowe DNA: CD4-Cy1 i CD4-Cy4.
Plazmidy ekspresyjne użyto do transfektowania komórek mysiego szpiczaka przez elektroporację i transfektanty selekcjonowano przez wzrost hodowli w środowisku zawierającym metatreksat (0,1 μM). Transfektanty prowadzące ekspresję białek fuzyjnych identyfikowano techniką ELISA i namnażano w hodowli aby uzyskać białko fuzyjne przez związanie i wymywanie z Sefarozy z białkiem A. Oczyszczone białka w chromatograficznym buforze do wymywania poddano diafiltracji do PBS i rozcieńczono do końcowego stężenia 100 μg/ml. Myszom Balb/c wstrzyknięto 0,2 ml (20 μg) albo białko fuzyjne CD4-Cy1 albo białko fuzyjne CD4-Cy4 i testowano farmakokinetycznie jak podano w przykładzie 1.3. Białko fuzyjne CD4-Cy4 wykazało znacznie dłuższy czas półtrwania w krążeniu niż białko fuzyjne CD4- Cy1.
PL 199 659 B1 <110> GILLIES, Stephen 3 LO, Kin-Ming LAN, Yan
WESOŁOWSKI, John <120> Blałko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IJL2 <130> LEX-003PC <140>
<141>
<150> US 60/075,88?
<151> 1998-02-25 <160> 8 <170> Patentln Vcr. 2.0 <210> 1 <211> 447 <212> PRT <213> człowiek <220>
< 2 2 3 > Region łańcucha C IGG-1
| <400> 1 | Xaa 10 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 15 | Xaa | ||||||||
| Xaa 1 | Xaa | Xaa | Xas | Xaa 5 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | |||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xsa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 35 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Ala | Pro | Ser | Ser | Lys | Ser | Thr | Ser | Gly | Gly | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Prc | Glu | Pro | Val | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His | Thr | Phe | Prc | Ala | Val | Leu | Gin | Ser |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Leu | Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | Val | Val | Thr | Val | Pro | Ser | Ser | Ser |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Leu | Gly | Thr | Gin | Thr | Tyr | Ile | Cys | Asn | Val | Asn | His | Lvs | Prc | Ser | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Lys | Val | Glu | Pro | Lys | Ser | Cys | Asp | Lys | Thr | His |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Thr | Cys | Prc | Pro | Cys | Pro | Ala | Pro | Glu | Leu | Leu | Gly | Gly | Pro | Ser | Val |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Phe | Leu | Phe | Pro | Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | Thr | Leu | Met | Tle | Ser | Arg | Thr |
| 245 | 250 | 255 |
PL 199 659 B1
260 265 270
| Val | Lys | Phe Asn 27S | Trp Tyr Val Asp 280 | Gly | Val | Glu | Val | His 285 | Asn | Ala | Lys |
| Thr | Lys 290 | Pro Arg | Glu Glu Gin Tyr 295 | Asn | Ser | Thr | Tyr 300 | Arg | Val | Val | Ser |
| Val | Leu | Thr Val | Leu His Gin Asp | Trp | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | Lys |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||
| Cys | Lys | Val Ser | Asn Lys Ala Leu | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu | Lys | Thr | Ile |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||
| Ser | Lys | Ala Lys | Gly Gin Pro Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||
| Pro | Ser | Arg Asp | Glu Leu Thr Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||
| Val | Lys | Gly Phe | Tyr Pro Ser Asp | Ile | Ala | val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn |
| 370 | 37 5 | 3B0 | |||||||||
| Gly | Gin | Pro Glu | Asn Asn Tyr Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Val | Leu | Asp | Ser |
| 385 | 390 | 395 | 4CC | ||||||||
| Asp | C-ly | Ser Phe | Phe Leu Tyr Ser | ^ys | Leu | Thr | Val· | Asp | Lys | Ser | Arg |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||
| Trp | Gin | Gin Gly | Asn Val Phe Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||
| His | Asn | His Tyr | Thr Gin Lys Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | |
| 435 | 440 | 445 |
<210> 2 <211> 443 <212> PRT <213> -człowiek <220> . , <223> Region łańcucha C IGG-2 <400> 2
| Xaa 1 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 5 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 10 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 15 | Xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 20 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 25 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 30 | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa 35 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 40 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 45 | Xaa | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa 50 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 55 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 60 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| Xaa 65 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 70 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 75 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 80 |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 85 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 90 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | xaa 95 | xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 100 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 105 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 110 | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa 115 | Xaa | Xaa | Ala | Ser | Thr 120 | Lys | Gly | Pro | Ser | Val 125 | Phe | Pro | Leu |
| Ala | Pro 130 | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr 135 | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala 140 | Ala | Leu | Gly | Cys |
| Leu 145 | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe 150 | Pro | Glu | Pro | Val | Thr 155 | Val | Ser | Trp | Asn | Ser 160 |
| Gly | Ala | Leu | Thr | Ser 165 | Gly | Val | His | Thr | Phe 170 | Pro | Ala | Val | Leu | Gin 175 | Ser |
PL 199 659 B1
| Ser | Gly | Leu | Tyr 180 | Ser | Leu Ser | Ser | Val 185 | Val Thr | Val | Pro | Ser 190 | Ser | Asn | ||
| Phe | Gly | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys | Asn | Val | Asp | His | Lys | Pro | Ser | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Thr | Val | Glu | Arg | Lys | cys | Cys | Val | Glu | Cys | Pro |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Pro | Cys | Pro | Ala | Pro | Pro | Val | Ala | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Leu | Phe | Prc |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | Thr | Leii | Met | Ile | Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | Vai | Thr |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Cys | Val | Val | Val | Asp | Vui | Ser | His | Glu | Asp | Ero | Glu | Val | Gin | Phe | Asn |
| 2 60 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Trp | Tyr | Val | Asp | Gly | Val | Giu | Val | His | Asn | Ala | Lys | Thr | Lys | Pro | Arg |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Glu | Glu | Gin | Phe | Asn | Ser | Thr | Phe | Arg | Val | Val | Ser | Val | Leu | Thr | Val |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| val | His | Gin | Asp | Trp | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu | Tyr | Lys | Cys | Lys | Val | Ser |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Asn | Lys | Gly | Leu | Pro 325 | Ala | Pro | Ile | Glu | Lys 330 | Thr | Ile | Ser | Lys | Thr 335 | Lys |
| Gly | Gin | Pro | Arq | Glu | Pro | Gin | Val | Tyr | Thr | Leu | Pro | Pro | Ser | Arg | Glu |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Glu | Met | Thr | Lys | Asn | Gin | Val | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu | Val | Lys | Gly | Phe |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Tyr | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala | Val | Glu | Trp | Glu | Ser | Asn | Gly | Gin | Pro | Glu |
| 370 | 37 5 | 380 | |||||||||||||
| Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr | Thr | Pro | Pro | Met | Leu | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser | Phe |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Phe | Leu | Tyr | Ser | Lys 405 | Leu | Thr | Val | Asp | Lys 410 | Ser | Arg | Trp | Gin | Gin 415 | Gly |
| Asn | Val | Phe | Ser | Cys | Ser | Val | Met | His | Glu | Ala | Leu | His | Asn | His | Tyr |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Thr | Gin | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Pro | Gly | Lys | |||||
| 435 | 440 |
<210> 3 <211> 494 <212> PRT <213> , · , człowiek <220>
<223> Region łańcucha C IGG-3
| <400> 3 Xaa Xaa 1 | Xaa | Xaa | Xaa 5 | /.aa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 10 | Xaa | Xaa Xaa | Xaa | Xaa 15 | Xaa | |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 20 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 25 | Xaa | Xaa | Xaa Xaa | Xaa 30 | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xas | Xaa 35 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 40 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa Xaa 45 | Xaa | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa 50 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 55 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa Xaa 60 | Xaa | Xaa | Xaa |
| Xaa 65 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 70 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 75 | Xaa Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 80 |
PL 199 659 B1
| Χώα | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 85 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 90 | Xaa Xaa | Xaa Xaa | Xaa 95 | Xaa | ||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Ala | Ser | Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Pro | Leu |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Ala | Pro | Cys | Ser | Arę | Ser | Thr | Ser | Gly | Gly | Thr | Ala | Ala | Leu | Gly | Cys |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Leu | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe | Pro | Glu | Pro | Va 1. | Thr | Val | Ser | Trp | Asn | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His | Thr | Phe | Prc | Ala | Val | Leu | Gin | Ser |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Leu | Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | Val | Val | Thr | Val | Pro | Ser | Ser | Ser |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Leu | Gly | Thr | Gin | Thr | Tyr | Thr | Cys | Asn | Val | Asn | His | Lys | Prc | Ser | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Arg | Val | Glu | Leu | Lys | Thr | Pro | Leu | Gly | Asp | Thr |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Thr | His | Thr | Cys | Pro | Arg | Cys | Pro | Glu | Pro | Lys | Ser | Cys | Asp | Thr | Pro |
| 225 | 230 | 235 | 240 |
| Pro | Pro | Cys | Pro | Arg 245 | Cys | Pro | Glu | Pro | Lys 250 | Ser | Cys | Asp | Thr | Pro 255 | Pro |
| Pro | Cys | Pro | Arg 260 | Cys | Pro | Glu | Pio | Lys 265 | Ser | Cys | Asp | Thr | Pro 270 | Pro | Pro |
| Cys | Pro | Arg 275 | Cys | Pro | Ala | Pro | Glu 280 | Leu | Leu | Gly | Gly | Pro 285 | Ser | Val | Phe |
| Leu | Phe 2 90 | Prc | Prc | Lys | Pro | Lys 295 | Asp | Thr | Leu | Met | Ile 300 | Ser | Arg | Thr | Pro |
| Glu 305 | Val | Thr | Cys | Val | Val 310 | Val | Asp | Val | Ser | His 315 | Glu | Asp | Pro | Glu | Val 320 |
| Gin | Phe | Lys | Trp | Tyr 325 | Val | Asp | Gly | Val | Glu 330 | Val | His | Asn | Ala | Lys 335 | Thr |
| Lys | Pro | Arg | Glu 340 | Glu | Gin | Tyr | Asn | Ser 345 | Thr | Phe | Arg | Val | Val 350 | Ser | Val |
| Leu | Thr | Val 355 | Leu | His | Gin | Asp | Trp 360 | Leu | Asn | Gly | Lys | Glu 365 | Tyr | Lys | Cys |
| Lys | Val 370 | Ser | Asn | Lys | Ala | Leu 375 | Pro | Ala | Pro | Ile | Glu 380 | Lys | Thr | Ile | Ser |
| Lys 385 | Thr | Lys | Gly | Gin | Pro 390 | Arg | Glu | Pro | Gin | Val 395 | Tyr | Thr | Leu | Pro | Pro 400 |
| Ser | Arg | Glu | Glu | Met 405 | Thr | Lys | Asn | Gin | Val 410 | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu 415 | Val |
| Lys | Gly | Phe | Tyr 420 | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala 425 | Val | Glu | Trp | Glu | Ser 430 | Ser | Gly |
| Gin | Pro | Glu 4 35 | Asn | Asn | Tyr | Asn | Thr 440 | Thr | Pro | Pro | Met | Leu 445 | Asp | Ser | Asp |
| Gly | Ser 450 | Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser 455 | Lys | Leu | Thr | Val | Asp 460 | Lys | Ser | Arg | Trp |
| Gin 465 | Gin | Gly | Asn | Ile | Phe 470 | Ser | Cys | Ser | Val | Met 475 | His | Glu | Ala | Leu | His 480 |
| Asn | Arg | Phe | Thr | Gin 485 | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu 490 | Ser | Pro | Gly | Lys |
PL 199 659 B1 <210> A <211> iii <212> PRT <zl3> człowiek <223> Region łańcucha C IGG-4 <400 4
| Xaa 1 | Xaa | X&a | xaa | Xaa 5 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | xaa 10 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 15 | Xaa |
| xaa | Xaa | Xaa | Xaa 20 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 25 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 30 | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa 35 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 40 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 45 | Xaa | Xaa | Xaa | |
| Xaa | Xaa 50 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 55 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 60 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa |
| Xaa 65 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 70 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 75 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 80 |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 85 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 90 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 95 | Xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 100 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 105 | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa | Xaa 110 | Xaa | Xaa |
| Xaa | Xaa | Xaa 115 | Xaa | Xaa | Ala | Ser | Thr 120 | Lys | Gly | Pro | Ser | Val 125 | Phe | Pro | Leu |
| Ala | Pro 130 | Cys | Ser | Arg | Ser | Thr 135 | Ser | Glu | Ser | Thr | Ala 140 | Ala | Leu | Gly | Cys |
| Leu 145 | Val | Lys | Asp | Tyr | Phe 150 | Pro Glu | Pro Val Thr Val 155 | Ser | Trp | Asn | Ser 160 | ||||
| Gly | Ala | Leu | Thr | Ser | Gly | Val | His | Thr | Phe | Pro | Ala | Val | Leu | Gin | Ser |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Leu | Tyr | Ser | Leu | Ser | Ser | Val | Val | Thr | Val | Pro | Ser | Ser | Ser |
| ISO | 135 | 190 | |||||||||||||
| Leu | Gly | Thr | Lys | Thr | Tyr | Thr | Cys | Asn | Val | Asp | His | Lys | Pro | Ser | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Thr | Lys | Val | Asp | Lys | Arg | Val | Glu | Ser | Lys | Tyr | Gly | Pro | Pro | Cys | Pro |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Ser | Cys | Pro | Ala | Pro | Glu | Phe | Leu | Gly | Gly | Pro | Ser | Val | Phe | Leu | Phe |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Pro | Pro | Lys | Pro | Lys | Asp | Thr | Leu | Met | Ile | Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | Val |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Thr | Cys | Val | Val | Val | Asp | Val | Ser | Gin | Glu | Asp | Pro | Glu | Val | Gin | Phe |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Asn | Trp | Tyr | Val | Asp | Gly | Vai | Glu | Val | His | Asn | Ala | Lys | Thr | Lys | Pro |
| 275 | 280 | 285 |
Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300
Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin 340 345 350
PL 199 659 B1
| Glu | Glu Met 355 | Thr | Lys | Asn | Gin | Val 360 | Ser | Leu | Thr | Cys | Leu 365 | Val | Lys | Gly | |
| Phe | Τ V1 370 | Pro | Ser | Asp | Ile | Ala 375 | Vai | Glu | Trp | Glu | Ser 330 | Asn | Gly | Gin | Pro |
| Glu 385 | Asn | Asn | Tyr | Lys | Thr 390 | Thr | Pro | Pro | Val | Leu 395 | Asp | Ser | Asp | Gly | Ser 4 00 |
| Phe | Phe | Leu | Tyr | Ser 405 | Arg | Leu | Thr | Val | Asp 410 | Lys | Ser | Arg | Trp | Gin 415 | Glu |
| Gly | Asn | Val | Phe 420 | Ser | Cys | Ser | Val | Met 425 | His | Glu | Ala | Leu | His 430 | Asn | His |
| Tyr | Thr | Gin 435 | Lys | Ser | Leu | Ser | Leu 440 | Ser | Leu | Gly | Lys |
<210> 5 <211> 17 1 <212> DNA <213> Sekwencja sztuczna <220>
<22Opis sekwencji sztucznej: starter l <40D> 5 catcggtctt ccccctg 17 <210> 6 <211> 35 <212> DNA ‘'213; Sekwencja sztuczna <220>
<2z3> Opis sekwencji sztucznej: starter 2 <400> 6 cggccctgcg acęggaggtg ctgaggaaga gatgg 35 <210> 7 <211> 45 <212> DNA <213;· Sekwencja sztuczna <220> ,Λ · , ·· <223> Opis sekwencji sztucznej: starter 3 <400> 7 tcttcctcag cacctcccgt cgcaggaccg tcagtcttcc tcttc 15 <2io> a <211> 17 <212> DNA ''z 13Sekwencj a sztuczna <220>
<223> Opis sekwencji sztucznej: starter 4 <400> 8 gaggcgtggt cttgtag 17
Claims (6)
- Zastrzeżenia patentowe1. Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, znamienne tym, że zawiera:(i) region Fc IgG2 lub IgG4 zamiast stałego regionu IgG1 lub IgG3, co prowadzi do zmniejszenia powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego stałe regiony IgG1 lub IgG3, lub (ii) zmodyfikowany region Fc IgG1 lub IgG3, zapewniający zmniejszenie powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego niezmodyfikowanego, gdzie modyfikacja stałego regionu IgG1 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, a modyfikacja stałego regionuPL 199 659 B1IgG3 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282, Glu283, Gly294, Asn344 i Pro378.
- 2. Białko fuzyjne według zastrz. 1, znamienne tym, że ma właściwości cytokiny.
- 3. Cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, znamienna tym, że obejmuje (i) region Fc IgG2 lub IgG4 zamiast stałego regionu IgG1 lub IgG3, prowadzi do zmniejszenia powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego zawierającego stałe regiony IgG1 lub IgG3, lub (ii) zmodyfikowany region Fc IgG1 lub IgG3, zapewniający zmniejszenie powinowactwa wiązania z receptorem Fc, w porównaniu do białka fuzyjnego niezmodyfikowanego, gdzie modyfikacja stałego regionu IgG1 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, a modyfikacja stałego regionu IgG3 obejmuje mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282,Glu283, Gly284, Asn344 i Pro378.
- 4. Cząsteczka DNA według zastrz. 3, znamienna tym, że koduje białko fuzyjne o właściwościach cytokiny.
- 5. Sposób wytwarzania białka fuzyjnego o zmniejszonym powinowactwie wiązania z przynajmniej jednym receptorem Fc, obejmującego immunoglobulinowy zmienny lekki i ciężki łańcuch oraz stały ciężki łańcuch IgG1 lub IgG3 oraz cytokinę związaną z ciężkim łańcuchem Ig, znamienny tym, że obejmuje etapy w których:(i) zastępuje się stały region IgG1 lub IgG3 ciężkiego łańcucha, stałym regionem IgG2 lub IgG4, lub wprowadza się do ciężkiego łańcucha IgG1, mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 i Pro331, lub wprowadza się do ciężkiego łańcucha IgG3, mutację lub delecję w przynajmniej jednej pozycji aminokwasowej wybranej z grupy obejmującej Leu281, Leu282, Glu283, Gly284, Asn344 i Pro378 oraz (ii) łączy się region IgG2 lub IgG4 lub zmodyfikowany region IgG1 lub IgG3 lub ich część z drugim białkiem, różnym od Ig.
- 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że uzyskuje się przeciwciało hu-KS IL2.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US7588798P | 1998-02-25 | 1998-02-25 | |
| PCT/US1999/003966 WO1999043713A1 (en) | 1998-02-25 | 1999-02-24 | Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL342497A1 PL342497A1 (en) | 2001-06-04 |
| PL199659B1 true PL199659B1 (pl) | 2008-10-31 |
Family
ID=22128576
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL342497A PL199659B1 (pl) | 1998-02-25 | 1999-02-24 | Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1060194A1 (pl) |
| JP (1) | JP2002505086A (pl) |
| CN (1) | CN1204147C (pl) |
| AU (1) | AU758240B2 (pl) |
| BR (1) | BR9908226A (pl) |
| CA (1) | CA2320403A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ20003099A3 (pl) |
| HU (1) | HUP0100813A3 (pl) |
| NO (1) | NO20004218L (pl) |
| PL (1) | PL199659B1 (pl) |
| WO (1) | WO1999043713A1 (pl) |
Families Citing this family (152)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030109680A1 (en) | 2001-11-21 | 2003-06-12 | Sunol Molecular Corporation | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| US5986065A (en) | 1997-03-10 | 1999-11-16 | Sunol Molecular Corporation | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| US7749498B2 (en) | 1997-03-10 | 2010-07-06 | Genentech, Inc. | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| US20060235209A9 (en) | 1997-03-10 | 2006-10-19 | Jin-An Jiao | Use of anti-tissue factor antibodies for treating thromboses |
| ES2221717T3 (es) | 1997-12-08 | 2005-01-01 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Proteinas de fusion heterodimeras utiles para inmunoterapia dirigida e inmunoestimulacion general. |
| US6242195B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-06-05 | Genentech, Inc. | Methods for determining binding of an analyte to a receptor |
| US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| KR101077001B1 (ko) | 1999-01-15 | 2011-10-26 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
| US7183387B1 (en) | 1999-01-15 | 2007-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US7067110B1 (en) | 1999-07-21 | 2006-06-27 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens |
| US6617135B1 (en) | 1999-08-09 | 2003-09-09 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Multiple cytokine protein complexes |
| GB9926084D0 (en) * | 1999-11-03 | 2000-01-12 | King S College London | Recombinant fusion molecules |
| CA2391080A1 (en) | 1999-11-12 | 2001-05-25 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Erythropoietin forms with improved properties |
| DK1252192T3 (da) | 2000-02-11 | 2006-11-20 | Merck Patent Gmbh | Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid |
| EP2264072A1 (en) | 2000-04-13 | 2010-12-22 | The Rockefeller University | Enhancement of antibody-mediated cytotoxicity. |
| RU2272644C2 (ru) | 2000-06-29 | 2006-03-27 | Мерк Патент Гмбх | Усиление иммунной реакции, медиатором которой является слитый протеин антитело-цитокин, при помощи комбинированного лечения агентами, увеличивающими поглощение иммуноцитокина |
| DE10045591A1 (de) * | 2000-09-15 | 2002-04-04 | Klaus Pfizenmaier | Ortsspezifische, antikörpervermittelte Aktivierung proapoptotischer Zytokine - AMAIZe (Antibody-Mediated Apoptosis Inducing Zytokine) |
| AU2011253690C1 (en) * | 2000-12-12 | 2018-01-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
| PT1355919E (pt) * | 2000-12-12 | 2011-03-02 | Medimmune Llc | Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações |
| US7658921B2 (en) | 2000-12-12 | 2010-02-09 | Medimmune, Llc | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
| US20030133939A1 (en) | 2001-01-17 | 2003-07-17 | Genecraft, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| US7754208B2 (en) | 2001-01-17 | 2010-07-13 | Trubion Pharmaceuticals, Inc. | Binding domain-immunoglobulin fusion proteins |
| KR100900176B1 (ko) | 2001-03-07 | 2009-06-02 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 하이브리드 이소타입 항체 부분구조를 포함하는 단백질을위한 발현 기술 |
| US6992174B2 (en) | 2001-03-30 | 2006-01-31 | Emd Lexigen Research Center Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
| CA2446087C (en) | 2001-05-03 | 2013-06-18 | Stephen D. Gillies | Recombinant tumor specific antibody and use thereof |
| TWI338009B (en) * | 2001-10-29 | 2011-03-01 | Genentech Inc | Antibodies for inhibiting blood coagulation and methods of use thereof |
| BR0214650A (pt) | 2001-12-04 | 2005-05-03 | Merck Patent Gmbh | Imunocitoquinas com seletividade modulada |
| WO2003089614A2 (en) * | 2002-04-18 | 2003-10-30 | Genencor International, Inc. | Production of functional antibodies in filamentous fungi |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| US8946387B2 (en) | 2002-08-14 | 2015-02-03 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
| US8968730B2 (en) | 2002-08-14 | 2015-03-03 | Macrogenics Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
| US7217798B2 (en) | 2003-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of Fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis |
| US7217797B2 (en) * | 2002-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| DK1562972T3 (da) * | 2002-10-15 | 2010-12-06 | Facet Biotech Corp | Modifikation af FcRn-bindingsaffiniteter eller serumhalveringstider for antistoffer ved mutagenese |
| JP4494977B2 (ja) | 2002-12-17 | 2010-06-30 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｇｄ２に結合するマウス１４．１８抗体のヒト化抗体（ｈ１４．１８）およびそのｉｌ−２融合タンパク質 |
| US7960512B2 (en) | 2003-01-09 | 2011-06-14 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
| EP2368578A1 (en) | 2003-01-09 | 2011-09-28 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
| PT1624891E (pt) | 2003-05-06 | 2010-01-05 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Proteínas quiméricas de factor de coagulação-fc destinadas ao tratamento da hemofilia |
| TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
| JP2005073528A (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-24 | Genetics Inst Llc | 生物学的系における生物学的組織への血球の接着を阻害する方法、ならびにその方法に使用するための組成物 |
| DK1699822T3 (da) | 2003-12-30 | 2008-08-04 | Merck Patent Gmbh | IL-7-fusionsproteiner med antistofdele, fremstilling deraf og anvendelse deraf |
| WO2005063808A1 (en) | 2003-12-31 | 2005-07-14 | Merck Patent Gmbh | Fc-ERYTHROPOIETIN FUSION PROTEIN WITH IMPROVED PHARMACOKINETICS |
| EA011859B9 (ru) | 2004-01-05 | 2013-07-30 | Емд Лексиген Ресерч Сентер Корп. | Соединения для адресной доставки препарата к ткани или органу-мишени |
| US7632497B2 (en) | 2004-11-10 | 2009-12-15 | Macrogenics, Inc. | Engineering Fc Antibody regions to confer effector function |
| ATE465176T1 (de) | 2004-12-09 | 2010-05-15 | Merck Patent Gmbh | Il-7-varianten mit reduzierter immunogenität |
| US11254748B2 (en) | 2005-04-15 | 2022-02-22 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US9963510B2 (en) | 2005-04-15 | 2018-05-08 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| EP3479844B1 (en) | 2005-04-15 | 2023-11-22 | MacroGenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| US9284375B2 (en) | 2005-04-15 | 2016-03-15 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
| ES2460517T3 (es) | 2005-07-25 | 2014-05-13 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Reducción de células b mediante el uso de moléculas de unión específica a cd37 y de unión específica a cd20 |
| CA2618681C (en) | 2005-08-10 | 2015-10-27 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same |
| EP2418223A3 (en) | 2006-06-12 | 2013-01-16 | Emergent Product Development Seattle, LLC | Single-chain multivalent binding proteins with effector function |
| PT2029173T (pt) | 2006-06-26 | 2016-11-02 | Macrogenics Inc | Anticorpos específicos fc rib e seus métodos de uso |
| EP2032159B1 (en) | 2006-06-26 | 2015-01-07 | MacroGenics, Inc. | Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof |
| ATE480568T1 (de) * | 2006-06-30 | 2010-09-15 | Conaris Res Inst Ag | Verbesserte sgp 130fc dimere |
| WO2008140603A2 (en) | 2006-12-08 | 2008-11-20 | Macrogenics, Inc. | METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING |
| TW200907056A (en) * | 2007-03-28 | 2009-02-16 | Astrazeneca Ab | New method |
| PE20140196A1 (es) | 2007-08-09 | 2014-03-19 | Boehringer Ingelheim Int | Anticuerpos anti-cd37 |
| MX2010005104A (es) | 2007-11-09 | 2010-08-04 | Peregrine Pharmaceuticals Inc | Composiciones de anticuerpo anti-factor de crecimiento endotelial vascular y metodos. |
| US8795667B2 (en) | 2007-12-19 | 2014-08-05 | Macrogenics, Inc. | Compositions for the prevention and treatment of smallpox |
| BRPI0907046A2 (pt) | 2008-01-18 | 2015-07-28 | Medimmune Llc | Anticorpo de cisteína engenheirada, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, conjugado de anticorpo, composição farmacêutica, métodos de detecção de câncer, doenças ou distúrbios autoimunes, inflamatórios ou infecciosos em um indivíduo e de inibição de proliferação de uma célula alvo |
| PL2247304T3 (pl) | 2008-04-02 | 2017-01-31 | Macrogenics, Inc. | Przeciwciała specyficzne wobec HER2/neu oraz sposoby ich zastosowania |
| US8669349B2 (en) | 2008-04-02 | 2014-03-11 | Macrogenics, Inc. | BCR-complex-specific antibodies and methods of using same |
| PT2132228E (pt) | 2008-04-11 | 2011-10-11 | Emergent Product Dev Seattle | Imunoterapia de cd37 e sua combinação com um quimioterápico bifuncional |
| TWI440469B (zh) | 2008-09-26 | 2014-06-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Improved antibody molecules |
| US8775090B2 (en) | 2008-12-12 | 2014-07-08 | Medimmune, Llc | Crystals and structure of a human IgG Fc variant with enhanced FcRn binding |
| TWI440470B (zh) * | 2009-03-19 | 2014-06-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | 含改良抗體分子之醫藥配方 |
| EP2233500A1 (en) | 2009-03-20 | 2010-09-29 | LFB Biotechnologies | Optimized Fc variants |
| CA2759333A1 (en) | 2009-04-22 | 2010-10-28 | Merck Patent Gmbh | Antibody fusion proteins with modified fcrn binding sites |
| US20120134984A1 (en) | 2009-06-01 | 2012-05-31 | Olga Lubman | Molecules with extended half-lives and uses thereof |
| WO2011005481A1 (en) | 2009-06-22 | 2011-01-13 | Medimmune, Llc | ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION |
| CN102666874B (zh) | 2009-10-07 | 2016-06-01 | 宏观基因有限公司 | 由于岩藻糖基化程度的改变而表现出改善的效应子功能的含Fc区的多肽及其使用方法 |
| US8722615B2 (en) | 2009-12-02 | 2014-05-13 | Acceleron Pharma, Inc. | Compositions and methods for increasing serum half-life |
| TWI505838B (zh) | 2010-01-20 | 2015-11-01 | 中外製藥股份有限公司 | Stabilized antibody solution containing |
| DK2542256T3 (da) | 2010-03-04 | 2019-08-26 | Macrogenics Inc | Antistoffer reagerende med b7-h3, immunologisk aktive fragmenter deraf og anvendelser deraf |
| PH12012501751A1 (en) | 2010-03-04 | 2012-11-12 | Macrogenics Inc | Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof |
| CA2807127C (en) | 2010-08-02 | 2019-02-12 | Leslie S. Johnson | Covalent diabodies and uses thereof |
| UA112062C2 (uk) | 2010-10-04 | 2016-07-25 | Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх | Cd33-зв'язувальний агент |
| WO2012069433A2 (en) | 2010-11-23 | 2012-05-31 | Glaxo Group Limited | Antigen binding proteins |
| JP2014501725A (ja) | 2010-11-24 | 2014-01-23 | グラクソ グループ リミテッド | Ｈｇｆを標的とする多特異的抗原結合タンパク質 |
| JP6147670B2 (ja) | 2010-12-22 | 2017-06-14 | テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド | 改善された半減期を有する修飾された抗体 |
| BR112013024574B1 (pt) | 2011-03-29 | 2022-08-09 | Roche Glycart Ag | Anticorpo e uso do anticorpo |
| EA201892619A1 (ru) | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
| WO2012162068A2 (en) | 2011-05-21 | 2012-11-29 | Macrogenics, Inc. | Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life |
| US8883982B2 (en) | 2011-06-08 | 2014-11-11 | Acceleron Pharma, Inc. | Compositions and methods for increasing serum half-life |
| CN103842380A (zh) | 2011-07-27 | 2014-06-04 | 葛兰素集团有限公司 | 融合至Fc结构域的抗VEGF单可变结构域 |
| DK2771022T3 (da) | 2011-10-11 | 2020-09-28 | Viela Bio Inc | Cd40l-specifikke tn3-afledte skeletter (scaffolds) og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| JP2015502397A (ja) | 2011-12-23 | 2015-01-22 | ファイザー・インク | 部位特異的コンジュゲーションのための操作された抗体定常領域、ならびにそのための方法および使用 |
| EP2872534B1 (en) | 2012-07-13 | 2018-08-08 | Roche Glycart AG | Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases |
| RU2015106812A (ru) * | 2012-08-02 | 2016-09-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Способ получения мономерных и мультимерных молекул и их применение |
| US20140044675A1 (en) | 2012-08-10 | 2014-02-13 | Roche Glycart Ag | Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof |
| EP2888279A1 (en) | 2012-08-22 | 2015-07-01 | Glaxo Group Limited | Anti lrp6 antibodies |
| TWI635098B (zh) | 2013-02-01 | 2018-09-11 | 再生元醫藥公司 | 含嵌合恆定區之抗體 |
| US9487587B2 (en) | 2013-03-05 | 2016-11-08 | Macrogenics, Inc. | Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof |
| EP2968520B1 (en) | 2013-03-14 | 2021-05-12 | MacroGenics, Inc. | Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells that express an activating receptor |
| HRP20201113T1 (hr) | 2013-03-15 | 2020-10-30 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Vežući proteini protiv lag-3 |
| UA116479C2 (uk) | 2013-08-09 | 2018-03-26 | Макродженікс, Інк. | БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ |
| US11384149B2 (en) | 2013-08-09 | 2022-07-12 | Macrogenics, Inc. | Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof |
| EP2840091A1 (en) | 2013-08-23 | 2015-02-25 | MacroGenics, Inc. | Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof |
| EP2839842A1 (en) | 2013-08-23 | 2015-02-25 | MacroGenics, Inc. | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof |
| CN111423513A (zh) | 2014-02-06 | 2020-07-17 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 白介素-2融合蛋白和其用途 |
| GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
| TWI701042B (zh) | 2014-03-19 | 2020-08-11 | 美商再生元醫藥公司 | 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物 |
| CN106413750B (zh) | 2014-05-16 | 2022-04-29 | 免疫医疗有限责任公司 | 具有增强的治疗和诊断特性的带有改变的新生儿Fc受体结合的分子 |
| HK1231496A1 (zh) | 2014-06-20 | 2017-12-22 | 豪夫迈．罗氏有限公司 | 基於chagasin的支架组合物、方法和应用 |
| SG11201700629TA (en) | 2014-08-11 | 2017-02-27 | Delinia Inc | Modified il-2 variants that selectively activate regulatory t cells for the treatment of autoimmune diseases |
| US10717778B2 (en) | 2014-09-29 | 2020-07-21 | Duke University | Bispecific molecules comprising an HIV-1 envelope targeting arm |
| AU2015350075B2 (en) | 2014-11-17 | 2021-06-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for tumor treatment using CD3xCD20 bispecific antibody |
| EP3263132B1 (en) | 2015-02-27 | 2023-12-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Composition for treating il-6-related diseases |
| US10556952B2 (en) | 2015-03-30 | 2020-02-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Heavy chain constant regions with reduced binding to Fc gamma receptors |
| GB201506389D0 (en) * | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506393D0 (en) * | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| WO2017019729A1 (en) | 2015-07-27 | 2017-02-02 | The General Hospital Corporation | Antibody derivatives with conditionally enabled effector function |
| RU2021133819A (ru) | 2015-09-02 | 2021-12-10 | Иммутеп С.A.С. | Анти-lag-3 антитела |
| TWI799366B (zh) | 2015-09-15 | 2023-04-21 | 美商建南德克公司 | 胱胺酸結骨架平臺 |
| MX2018003292A (es) | 2015-09-21 | 2018-08-01 | Aptevo Res & Development Llc | Polipéptidos de unión a cd3. |
| TWI784917B (zh) | 2015-09-23 | 2022-11-21 | 美商再生元醫藥公司 | 最優化抗ｃｄ３雙特異性抗體及其用途 |
| EP3383891A1 (en) | 2015-12-04 | 2018-10-10 | Novartis AG | Antibody cytokine engrafted compositions and methods of use for immunoregulation |
| US20170204154A1 (en) | 2016-01-20 | 2017-07-20 | Delinia, Inc. | Molecules that selectively activate regulatory t cells for the treatment of autoimmune diseases |
| TWI781098B (zh) | 2016-04-15 | 2022-10-21 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 新穎的ｂ７-ｈ３-結合分子、其抗體藥物綴合物及其使用方法 |
| US9567399B1 (en) | 2016-06-20 | 2017-02-14 | Kymab Limited | Antibodies and immunocytokines |
| TWI640536B (zh) | 2016-06-20 | 2018-11-11 | 克馬伯有限公司 | 抗體 |
| WO2018049275A1 (en) | 2016-09-09 | 2018-03-15 | Genentech, Inc. | Selective peptide inhibitors of frizzled |
| JP7213180B2 (ja) * | 2016-10-19 | 2023-01-26 | エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | 免疫コンジュゲートを製造するための方法 |
| US11779604B2 (en) | 2016-11-03 | 2023-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods |
| WO2018089420A1 (en) | 2016-11-08 | 2018-05-17 | Delinia, Inc. | Il-2 variants for the treatment of autoimmune diseases |
| EP3620531A4 (en) | 2017-05-02 | 2021-03-17 | National Center of Neurology and Psychiatry | METHOD OF PREDICTION AND EVALUATION OF THERAPEUTIC EFFECT IN DISEASES RELATING TO IL-6 AND NEUTROPHILS |
| IL322309A (en) | 2017-05-24 | 2025-09-01 | Novartis Ag | IL2 antibody grafted proteins and methods of use in cancer treatment |
| JOP20190271A1 (ar) | 2017-05-24 | 2019-11-21 | Novartis Ag | بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة |
| AU2018347607B2 (en) | 2017-10-14 | 2025-08-21 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof |
| EP3728302A1 (en) | 2017-12-19 | 2020-10-28 | Xencor, Inc. | Engineered il-2 fc fusion proteins |
| IL280875B2 (en) | 2018-08-31 | 2024-12-01 | Regeneron Pharma | Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies |
| US12331119B2 (en) * | 2019-02-22 | 2025-06-17 | Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. | Modified Fc fragment, antibody comprising same, and application thereof |
| NZ784975A (en) | 2019-08-06 | 2025-10-31 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Biopharmacuetical compositions and related methods |
| CN114867749A (zh) * | 2019-12-17 | 2022-08-05 | 安进公司 | 用于疗法中的双重白介素-2/tnf受体激动剂 |
| CN115697404A (zh) | 2020-05-29 | 2023-02-03 | 中外制药株式会社 | 含有抗体的制剂 |
| JP2024521187A (ja) | 2021-05-28 | 2024-05-28 | グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド | ガンの治療のための組み合わせ療法 |
| TW202323822A (zh) | 2021-08-03 | 2023-06-16 | 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司 | 生藥組合物及穩定同位素標記肽之圖譜定位方法 |
| EP4412713A1 (en) | 2021-10-05 | 2024-08-14 | GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd | Combination therapies for treating cancer |
| CN118475353A (zh) | 2021-12-17 | 2024-08-09 | Viiv保健公司 | 用于hiv感染的联合疗法及其用途 |
| JP2025514374A (ja) | 2022-04-29 | 2025-05-02 | ２３アンドミー・インコーポレイテッド | 抗原結合タンパク質 |
| EP4577569A1 (en) | 2022-08-25 | 2025-07-02 | GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd | Antigen binding proteins and uses thereof |
| TW202430564A (zh) | 2022-10-20 | 2024-08-01 | 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產權有限公司 | 抗原結合蛋白 |
| CR20250219A (es) | 2022-11-02 | 2025-09-18 | Viiv Healthcare Uk No 5 Ltd | Proteínas de unión a antígeno |
| AR134489A1 (es) | 2023-11-27 | 2026-01-21 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Proteinas de unión a antígeno |
| TW202544037A (zh) | 2023-12-11 | 2025-11-16 | 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產發展有限公司 | 抗原結合蛋白 |
| WO2025229018A1 (en) | 2024-04-30 | 2025-11-06 | VIIV Healthcare UK (No.5) Limited | Neutralizing antibody constructs against hiv |
| WO2025229019A1 (en) | 2024-04-30 | 2025-11-06 | VIIV Healthcare UK (No.5) Limited | Neutralizing antibody constructs against hiv |
| WO2025242652A1 (en) | 2024-05-23 | 2025-11-27 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Pregnancy associated plasma protein-a (pappa) binding proteins |
| US20260008843A1 (en) | 2024-06-21 | 2026-01-08 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Multispecific antigen binding proteins |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9511935D0 (en) * | 1995-06-13 | 1995-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel compound |
| US6046310A (en) * | 1996-03-13 | 2000-04-04 | Protein Design Labs., Inc. | FAS ligand fusion proteins and their uses |
-
1999
- 1999-02-24 PL PL342497A patent/PL199659B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-02-24 EP EP99908399A patent/EP1060194A1/en not_active Ceased
- 1999-02-24 CA CA002320403A patent/CA2320403A1/en not_active Abandoned
- 1999-02-24 WO PCT/US1999/003966 patent/WO1999043713A1/en not_active Ceased
- 1999-02-24 BR BR9908226-8A patent/BR9908226A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-02-24 CN CN99803277.8A patent/CN1204147C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-24 CZ CZ20003099A patent/CZ20003099A3/cs unknown
- 1999-02-24 HU HU0100813A patent/HUP0100813A3/hu unknown
- 1999-02-24 AU AU27842/99A patent/AU758240B2/en not_active Ceased
- 1999-02-24 JP JP2000533463A patent/JP2002505086A/ja active Pending
-
2000
- 2000-08-23 NO NO20004218A patent/NO20004218L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002505086A (ja) | 2002-02-19 |
| HUP0100813A2 (hu) | 2001-06-28 |
| CZ20003099A3 (cs) | 2002-04-17 |
| NO20004218L (no) | 2000-10-24 |
| AU2784299A (en) | 1999-09-15 |
| BR9908226A (pt) | 2000-10-24 |
| EP1060194A1 (en) | 2000-12-20 |
| HK1036286A1 (en) | 2001-12-28 |
| WO1999043713A1 (en) | 1999-09-02 |
| AU758240B2 (en) | 2003-03-20 |
| NO20004218D0 (no) | 2000-08-23 |
| CN1291995A (zh) | 2001-04-18 |
| HUP0100813A3 (en) | 2003-08-28 |
| PL342497A1 (en) | 2001-06-04 |
| CN1204147C (zh) | 2005-06-01 |
| CA2320403A1 (en) | 1999-09-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL199659B1 (pl) | Białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2, cząsteczka DNA kodująca białko fuzyjne przeciwciała hu-KS IL2 i sposób wytwarzania białka fuzyjnego przeciwciała hu-KS IL2 | |
| US20030105294A1 (en) | Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins | |
| CN113677403B (zh) | 包含脂质运载蛋白突变蛋白的双特异性抗原结合分子 | |
| JP3081641B2 (ja) | 抗体の調製 | |
| AU696664B2 (en) | CTLA4 mutant molecules and uses thereof | |
| EP3998285B1 (en) | Binding molecules to cd38 and pd-l1 | |
| US20020032312A1 (en) | Therapeutic compounds comprised of anti-fc receptor antibodies | |
| JP2004525630A (ja) | ハイブリッド・イソタイプ抗体部分を含有する蛋白質の発現技術 | |
| JP2023530760A (ja) | Ｈｅｒ２を標的とするアゴニストＣＤ２８抗原結合分子 | |
| CN116234831A (zh) | 改善的抗原结合受体 | |
| JP2023531067A (ja) | 抗ｃｄ３／抗ｃｄ２８二重特異性抗原結合分子 | |
| CN116507640A (zh) | 改善的抗原结合受体 | |
| US20220259278A1 (en) | Novel fusion protein and use of same | |
| JP2026048732A (ja) | Ｓｔ２抗原結合タンパク質 | |
| JP2024522340A (ja) | ＥｐＣＡＭを標的とするアゴニストＣＤ２８抗原結合分子 | |
| EP4527850A2 (en) | Scfv-fc dimers that bind transforming growth factor-beta1 with high affinity, avidity and specificity | |
| CN115558023A (zh) | 抗cd3抗体及其用途 | |
| Shin et al. | Hybrid antibodies | |
| EP3623383A1 (en) | Improved bispecific flt3xcd3 antigen binding proteins | |
| WO1995014779A1 (en) | Mutated hig-e fragments and derivative thereof | |
| RU2852786C1 (ru) | Антитела, связывающиеся с cd3 | |
| MXPA00008312A (es) | Metodos para mejorar la vida media en circulacion de proteinas de fusion a base de anticuerpo | |
| RU2776204C1 (ru) | Слитый белок, содержащий рецептор tgf-бета, и его фармацевтическое применение | |
| WO2025224084A1 (en) | Proteins comprising t cell receptor constant domains | |
| HK40073118B (en) | Binding molecules to cd38 and pd-l1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100224 |