CN103261227B - Cd33结合剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及基于髓系细胞清除的免疫疗法。本发明尤其涉及用于所述疗法、例如用于治疗髓系细胞恶性肿瘤及骨髓发育不良综合征(MDS)的CD33结合剂。

Description

CD33结合剂
技术领域
本发明涉及基于髓系细胞清除的免疫疗法。特别是，本发明涉及用于所述疗法中的CD33结合剂，例如，用于治疗髓系细胞恶性肿瘤及骨髓发育不良综合征(MDS)。
现有技术
在1980年代早期，将CD33鉴定为骨髓性白血病的标记(Andrews等人，Blood62,24-132,1983)。CD33是在包括骨髓性白血病细胞在内的髓系细胞上特异性表达的细胞表面抗原。其为涎免凝集素(siglec)(结合唾液酸的Ig相关凝集素)家族的最小成员。CD33在早期多谱系造血祖细胞及骨髓单核细胞前体上表达。其无多潜能造血干细胞(Andrews等人，Journal of ExperimentalMedicine169,1721-1731,1989)。其在成熟粒细胞上下调但保留于巨噬细胞、单核细胞及树突细胞上(Andrews等人，Blood62,24-132,1983)。除骨髓单核细胞性细胞外，发现CD33亦可在人类肥大细胞及血液嗜碱性粒细胞上表达(Valent等人，Blood15;73(7):1778-85,1989)。针对CD33的单克隆抗体用于诊断白血病以及用于治疗性靶向及活体外吹扫骨髓以进行急性骨髓性白血病(AML)中的自体移植(Duzkale等人，Biol Blood Marrow Transplant.9(6):364-72,2003)。治疗性靶向的初始努力聚焦于使用与毒素蓖麻毒素偶联的抗CD33抗体研发免疫毒素。由于CD33在结合抗体时快速内在化(Audran等人，J Immunol Methods.188(1):147-54,1995)，故免疫毒素方法显而易见。
CD33是67KD跨膜糖蛋白。CD33的结合唾液酸的细胞外结构域参与细胞-细胞黏着。细胞内免疫受体酪氨酸基抑制基元(ITIM)赋予细胞抑制信号，从而影响增生及细胞存活。对CD33的实际信号传导路径尚缺乏了解，但认为其涉及ITIM及ITIM样基元及酪氨酸磷酸酶的募集(von Gunten等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.1143:61-82,2008)。已经定义鼠类CD33同源基因，但其与人类CD33的功能可比性仍受到质疑(Brinkman-Van der Linden等人，Mol CellBiol.,23(12):4199-206,2003)。人类CD33对正常及恶性白细胞的功能作用仍未知。
若干出版物已阐述CD33是70%至100%测试患者在原代AML及CML细胞上表达的稳定的细胞表面标记(Plesa等人，Cancer112(3),572-80,2007;Hauswirt等人，Eur J Clin Invest.Jan73-82,2007;Scheinberg等人，Leukemia，第3卷，440-445,1989)。CD33在恶性髓系母细胞(其代表白血病患者的外周血及骨髓中的大多数恶性细胞)及白血病干细胞(即骨髓中的相对较少数量的低分化细胞，其特征在于其能自我更新并维持白血病纯系层级)上表达。白血病干细胞的清除被视为持久无肿瘤存活的关键机制。靶向CD33的免疫毒素(与毒素查敏素(chaliceamicin)偶联的人类化IgG4抗体)用于通过将其毒性有效荷载递送至CD33阳性AML细胞来治疗AML患者(Amadori等人，Cancer Treat Rev.34(1):49-60,2008)。在治疗AML及MDS的II期临床试验中，利用得自I期剂量递增研究的初期临床功效迹象及所报道的可耐受不良事件来评价林妥珠单抗(Lintuzumab)(SGN-33,HuM195，一种“裸”CD33特异性人类化单克隆抗体)(Raza等人摘要第983号，14th EHA Congress，2009年6月4日至7日)。
利用CD33特异性HuM195活体外靶向AML细胞系会减少TNF-α诱导的炎性细胞因子(如IL-8、MCP-1及RANTES)的分泌(Sutherland等人，Mabs1:5,481-490,2009)。针对AML疗法的此效应的相关性尚未知，但调节肿瘤微环境的细胞因子环境可有利于抗体的治疗功效。另外，抗体在活体外诱导AML细胞系的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)及抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)(Sutherland等人，Mabs1:5,481-490,2009)。ADCC被视为血液恶性肿瘤中抗体抗肿瘤活性的决定性机制。利用CD20特异性单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab)的临床试验的数据显示，效应细胞介导的机制对关于响应于抗体治疗的B细胞恶性肿瘤治疗的重要性(Weng及Levy,J ClinOncol.21(21):3940-7,2003)。
总之，已显示，CD33抗原在骨髓单核细胞谱系的正常细胞上表达且时常在骨髓性白血病中的肿瘤细胞上表达。在利用针对CD33的抗体(林妥珠单抗)的I期试验中，观察到第一临床功效迹象而无严重不良事件。然而，在II期试验与化学疗法组合的结果不产生所期望的功效改良后，中断了林妥珠单抗的临床研发。因此，显然需要研发改良的靶向CD33的治疗形式。
鉴于现有技术，需要提供用于髓系细胞恶性肿瘤及MDS、尤其是急性骨髓性白血病的进一步改良的疗法。
特别是，需要提供用于治疗癌症、尤其是AML的针对CD33的进一步改良的拮抗性结合剂。
发明概述
本发明提供结合人类CD33的新颖CD33结合剂，且其通过以下定义
a)具有包含CDR1、CDR2及CDR3的重链可变区及包含CDR4、CDR5及CDR6的轻链可变区，其中CDR1具有选自SeqID No:1-14的氨基酸序列，CDR2具有选自SeqID No:14-28的氨基酸序列，CDR3具有选自SeqIDNo:29-42的氨基酸序列，CDR4具有选自SeqID No:43-56的氨基酸序列，CDR5具有选自SeqID No:57-70的氨基酸序列，CDR6具有选自SeqID No:71-84的氨基酸序列，或
b)识别人类CD33的氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqIDNo:141)内的表位。
本发明进一步提供CD33结合剂，其中CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时抗体初始量的至少30%(优选40%)保留于HL60细胞的细胞表面上。
本发明进一步提供CD33结合剂，其中重链可变区包含选自SeqIDNo:85-98的氨基酸序列且轻链可变区包含选自SeqID No:99-112的氨基酸序列。
本发明进一步提供CD33结合剂，其中重链具有选自SeqID No:113-126的氨基酸序列且轻链具有选自SeqID No:127-140的氨基酸序列。
本发明进一步提供在Fc结构域中具有可增强ADCC的突变的CD33结合剂。
在以下说明书及权利要求中概述更优选的实施方案。
已发现本发明的CD33结合剂对人类CD33具有高亲和力且进一步具有有利内在化动力学，该动力学的特征在于所述CD33结合剂在结合靶细胞表面上的CD33时可长期存在，此可转变成有利ADCC活性。
本发明者亦已发现，与林妥珠单抗相比，本发明的CD33结合剂结合CD33的细胞外结构域的不同表位。不希望受限于任何特定理论，据信此为本发明的CD33结合剂与林妥珠单抗的不同内在化动力学的原因。
附图说明
图1-3显示本发明例示性CD33结合剂与林妥珠单抗相比在HL60细胞上的内在化。
图4显示本发明的两种例示性抗体与林妥珠单抗相比在HL60细胞上的内在化率。
图5显示本发明的两种例示性抗体与林妥珠单抗相比在HL60细胞上的ADCC性能。
发明详述
CD33结合剂
本文所用术语“结合剂”意指特异性结合靶抗原的蛋白质或肽。结合剂可为(例如)抗体、该抗体的衍生物或特异性结合靶抗原的另一试剂。结合剂亦可为包含Fv区或其一部分(例如，特异性结合靶抗原的抗体的VH或VL或CDR)的蛋白质。在本文的优选实施方案中，结合剂是抗体。
本文所用术语“CD33结合剂”是指特异性结合CD33、通常特异性结合人类CD33的细胞外结构域的一部分的结合剂。
本文所用术语“抗体”是指(a)免疫球蛋白多肽及免疫球蛋白多肽的免疫活性部分(即，含有免疫特异性结合特异性靶抗原的抗原结合位点的免疫球蛋白家族的多肽、或其片段)、或(b)免疫特异性结合靶抗原的所述免疫球蛋白多肽或片段的保守取代衍生物。抗体通常阐述于(例如)Harlow及Lane,Antibodies:A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988)中。术语“抗体”是指呈现期望生物活性(例如抗原结合)的完整的单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、及抗体片段。抗体可属于任一类型或类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或子类(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)，优选属于IgG类、更优选IgG1。
“完整”抗体是视抗体类别需要包含抗原结合可变区以及轻链恒定结构域及重链恒定结构域的抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如，人类天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
“抗体片段”包含抗体的一部分，包括抗原结合区或可变区或其一部分。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2、及Fv片段、VH及VL抗原结合片段、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、单链抗体、scFv、scFv-Fc、SMTP、及自抗体片段形成的多特异性抗体。
“重链可变区”或“VH”意指包含CDR1、CDR2及CDR3及周围骨架区的重链的部分。
“轻链可变区”或“VL”意指包含CDR4、CDR5及CDR6及周围骨架区的轻链的部分。
“CDR”意指重链及轻链的超变区，其决定抗体或抗体片段的互补性/结合特异性。本申请案中CDR的次序仅是数字性的。
本文中的“表位”意指抗原的一部分，其由抗体或抗体片段识别。特别是，此术语是指CD33中可由抗体识别的部分。
如本文所用“mAb”是指单克隆抗体。
抗体可具有一或多种“效应子功能”，其是指那些归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的生物活性。抗体效应子功能的实例包括CIq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH及VL结构域，其中所述结构域存在于单一多肽链中。通常，Fv多肽进一步包含位于VH与VL结构域之间的多肽连接子，其使scFv能够形成期望的抗原结合结构。scFv的综述可参见Plückthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore编辑，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。
结合剂，例如“针对”、“结合”或“特异性结合”目标抗原(即靶抗原)的抗体，是能够以足够亲和力结合该抗原以使该结合剂可用于靶向表达抗原的细胞的结合剂。通常，结合剂以至少约1×107M-1的亲和力结合，且以比对结合除预定抗原或紧密相关抗原外的非特异性抗原(例如，BSA、酪蛋白)的亲和力大至少两倍的亲和力结合预定抗原。
如本文所用“抗体衍生物”是指如上文所定义的抗体，其通过共价连接异源分子(例如通过连接异源多肽)、或通过糖基化、去糖基化、乙酰化或磷酸化或通常与抗体无关的其它修饰进行修饰。在一些实施方案中，异源分子并非治疗剂。在一些实施方案中，异源分子本身并不呈现细胞生长抑制或细胞毒性效应。
本文所用所有术语及操作的进一步全面参考文献是Sambrook等人，Molecular Cloning，Cold Spring Harbor Laboratory Press；第3版(2001年1月15日)。
CD33结合剂特异性结合与给定靶细胞群缔合的受体CD33。CD33是唾液酸黏附素家族的成员，其在造血谱系的细胞(包括髓系前体、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞及肥大细胞)上表达。CD33亦在与骨髓增生性或肥大细胞增生性疾病(包括急性骨髓性白血病及骨髓发育不良综合征)相关的肿瘤细胞、及白血病干细胞上表达。已大体阐述靶向CD33的抗体及其用途(例如，参见Pierelli等人，1993,Br.J.Haematol.84:24-30；Matutes等人，1985，Hemaiol.Oncol.3:179-186；Taussig等人，2005，Blood106:4086-4092；Florian等人，2006,Leuk.& Lymph.47:207-222)。
在一些实施方案中，CD33结合剂是抗体(例如单克隆抗体)。有用的单克隆抗体可为与CD33(例如，人类CD33的细胞外结构域)同源的抗体群组。单克隆抗体(mAb)可通过使用本领域已知的任一技术制得。所述技术包括但不限于最初由及Milstein(1975,Nature256:495-497)阐述的杂交瘤技术、人类B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人，1983,Immunology Today4:72)、及EBV-杂交瘤技术(Cole等人，1985,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,AlanR.Liss公司，第77-96页)。所述抗体可属于任一免疫球蛋白类别，包括IgG、IgM、IgE、IgA及IgD及其任一子类。可活体外或活体内培养产生单克隆抗体的杂交瘤。
有用的单克隆抗体包括但不限于人类单克隆抗体、人类化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体及其中的任一者的功能活性抗体片段。
有用的CD33抗体包括可通过本领域已知的各种机制(例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)及/或补体依赖性细胞毒性(CDC))达成治疗效应的抗体。举例而言，抗体可通过与免疫效应细胞(例如NK细胞、单核细胞及巨噬细胞)相互作用来介导ADCC。
重组抗体(例如嵌合及人类化单克隆抗体)包含人类及非人类部分，其可使用标准重组DNA技术制得。(例如，参见Cabilly等人，美国专利第4,816,567号；及Boss等人，美国专利第4,816,397号；两个案件的全文皆以引用方式并入本文中)。“人类化抗体”是具有非人类物种的一或多个互补决定区(CDR)及人类免疫球蛋白分子的骨架区的非人类物种抗体分子。(例如，参见Queen，美国专利第5,585,089号，该案件的全文以引用方式并入本文中)。所述嵌合及人类化单克隆抗体可通过本领域已知的重组DNA技术、例如使用以下中所阐述方法产生：国际公开案第WO87/02671号；欧洲专利公开案第0184187号；欧洲专利公开案第0171496号；欧洲专利公开案第0173494号；国际公开案第WO86/01533号；美国专利第4,816,567号；欧洲专利公开案第012023号；Berter等人，1988,Science240:1041-1043；Liu等人，1987,Proc.Natl.AcadSet.USA84:3439-3443；Liu等人，1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等人，1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:214-218；Nishimura等人，1987,Cancer.Res.47:999-1005；Wood等人，1985，Nature314:446-449；Shaw等人，1988,J.Natl.Cancer Inst.80:1553-1559；Morrison,1985,Science229:1202-1207；Oi等人，1986,BioTechniques4:214；美国专利第5,225,539号；Jones等人，1986,Nature321:552-525；Verhoeyan等人，1988,Science239:1534；及Beidler等人，1988,J.Immunol.141:4053-4060：每一案件的全文皆以引用方式并入本文中。
人类单克隆抗体可通过本领域已知的各种技术中的任一者制得(例如，参见Teng等人，1983,Proc.Nail.Acad.Sci.USA.80:7308-7312；Kozbor等人，1983,Immunology Today4:72-79；Olsson等人，1982,Meth.Enzymol.92:3-16；及美国专利第5,939,598号及第5,770,429号)。
完全人类抗体可使用不能表达内源性免疫球蛋白重链及轻链基因但可表达人类重链及轻链基因的转基因小鼠产生。以正常方式利用所选抗原(例如，CD33多肽的全部或一部分)对转基因小鼠进行免疫。可使用常规杂交瘤技术获得针对抗原的单克隆抗体。转基因小鼠含有的人类免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，且随后经受类别转换及体细胞突变。因此，可使用该技术产生治疗有用的IgG、IgA、IgM及IgE抗体。关于产生人类抗体的此技术的综述，参见(例如)Lonberg及Huszar(1995,Int.Rev.Immunol.13:65-93)。关于产生人类抗体及人类单克隆抗体的此技术及产生所述抗体的方案的详细论述，参见(例如)美国专利第5,625,126号；第5,633,425号；第5,569,825号；第5,661,016号；及第5,545,806号。其它人类抗体可购自(例如)Medarex(Princeton,NJ)，其通过对小鼠进行免疫获得。
亦可使用称作“导向选择”的技术生成识别所选表位的完全人类抗体。在此方法中，所选非人类单克隆抗体(例如小鼠抗体)用于引导识别相同表位的完全人类抗体的选择。(例如，参见Jespers等人，1994,Biotechnology12:899-903)。人类抗体亦可使用本领域已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)产生(例如，参见Hoogenboom及Winter,1991,J.MoI.Biol227:381;Marks等人，1991,JMoI Biol222:581;Quan及Carter,2002,The rise of monoclonal antibodies astherapeutics,In Anti-IgE and Allergic Disease,Jardieu及Fick Jr.编辑，MarcelDekker,New York,NY，第20章，第427-469页)。
有用的抗体片段包括但不限于F(ab')2片段、Fab'片段、Fab片段、Fv、单链抗体(SCA)(例如，如美国专利第4,946,778号：Bird,1988,Science242:423-42；Huston等人，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883；及Ward等人1989，Nature334:544-54中所述)、scFv、scFv-Fc、FvdsFv、微小抗体(minibody)、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、SMIP(例如，参见已公开的美国专利申请案第2005-0238646号)及包含一或多个CDR且具有与抗体相同特异性的任一其它分子。
在其它实施方案中，抗体是连结另一蛋白质的抗体的融合蛋白、或其功能活性片段。举例而言，抗体或抗体片段可经由共价键(例如，肽键)在N末端或C末端与不为该抗体或抗体片段的另一蛋白质(或其部分，通常蛋白质的至少10、20或50个氨基酸部分)的氨基酸序列融合。在一些实施方案中，抗体或其片段可在可变结构域或恒定结构域的C末端共价连接另一蛋白质。
抗体可通过例如共价连接任一类型的分子来修饰，只要该共价连接允许抗体保留其结合抗原的免疫特异性。举例而言，抗体的衍生物可为已经以下进一步修饰者：例如糖基化、去糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、由已知保护/阻断基团去现实化(derealization)、溶蛋白性裂解、与另一蛋白质键联等。多种化学修饰的任一者可通过已知技术实施，包括(但不限于)特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、在衣霉素(tunicamycin)存在下的代谢合成，等等。另外，该衍生物可含有一或多个非天然氨基酸。
在具体实施方案中，可能期望改良该抗体的结合亲和性及/或其它生物特性。(例如，参见美国专利公开案第2006-0003412号及第2006-0008882号)。所述抗体的氨基酸序列变体由向该抗体核酸中引入适宜核苷酸变化或由肽合成而制备。这些修饰包括例如该抗体的氨基酸序列中残基的缺失及/或插入及/或取代。实施缺失、插入及/或取代的任一组合以获得最终构造物，前提是最终构造物具有期望特征。氨基酸变化亦可改变抗体的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数量或位置。
一种用于鉴定抗体中有利诱变位置的某些残基或区域的有用方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham及Wells(1989,Science244:1081-1085)中所述。此处，鉴定目标残基的一个残基或基团(例如带电荷残基，例如arg、asp、his、lys及glu)并由一个中性或带负电荷氨基酸(通常为丙氨酸或聚丙氨酸)替代以影响所述氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在取代位点或针对取代位点引入另外或其它变体来改良所述显示对取代具有功能敏感性的氨基酸位置。因此，在预定引入氨基酸序列变体的位点时，突变本身的性质无需预定。举例而言，为分析给定位点突变的性能，在目标密码子或区实施丙氨酸扫描诱变或随机诱变并以期望活性筛选所表达的抗体变体。
氨基酸序列插入可包括氨基及/或羧基-末端融合(长度介于1个残基至含有上百或更多残基的多肽的范围内)以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N-末端甲硫胺酰基残基的抗体或与细胞毒性多肽融合的抗体。
另一类型的抗体是抗体的氨基酸取代变体。这些变体是抗体分子中至少一个氨基酸残基为不同残基所替代的变体。用于取代诱变的最受关注的位点包括超变区，但亦涵盖骨架区改变。
对抗体生物特性的实质修饰可通过选择在保持下列特征的作用方面显著不同的取代来实现：(a)取代区域中多肽主链的结构，例如，呈薄板或螺旋构象；(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的大小。根据常见侧链特性将天然残基分为以下各类：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gin、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；及
(6)芳香族：trp、tyr、phe。
非保守性取代使得需要将所述类别中一者的成员交换为另一类别。
期望修饰抗体的效应子功能以(例如)增强抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)及/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。特别是，可通过在抗体的恒定区中引入氨基酸突变来增强ADCC活性(Lazar等人，PNAS103,11,4005-4010,2006)。此可通过在抗体的Fc区中引入一或多个氨基酸取代来达成，例如，参见已公开的美国专利申请案第2006-0160996号。或者或另外，可在Fc区中引入半胱氨酸残基，藉此在此区中形成链间二硫键。由此产生的同源二聚体抗体可具有改良的内在化能力及/或增强的CDC及ADCC。(例如，参见Caron等人，1992,J Exp.Med176:1191-1195；及Shopes,1992,J.Immunol.148:2918-2922)。具有增强的抗肿瘤活性的同源二聚体抗体亦可使用异型双功能交联剂制得，如Wolff等人，1993,Cancer Research53:2560-2565中所述，或者，可改造具有双Fc区的抗体，该抗体藉此具有增强的补体溶解及ADCC能力。(例如，参见Stevenson等人，1989,Anti-Cancer Drug Design3:219-230)。
本领域在科学文献及专利文件中均已提出多种对Fc区的修饰，例如EP0307434、WO9304173、WO9734631、WO9744362、WO9805787、WO9943713、WO9951642、WO9958572、WO02060919、WO03074679、WO2004016750、WO2004029207、WO2004063351、WO2004074455、WO2004035752、WO2004099249、WO2005077981、WO2005092925、WO2006019447、WO2006031994、WO2006047350、WO2006053301、WO2006088494及WO2007041635。
在优选实施方案中，本发明的抗体是在位置332及/或239及/或236处具有氨基酸取代的Fc变体。在优选实施方案中，本发明的抗体在Fc结构域中具有选自以下的突变
i)位置332处的单一取代，优选I332E；
ii)位置239及332处的取代的组合，优选S239D/I332E；
iii)位置236及332处的取代的组合，优选G236A/I332E；
iv)位置236、239及332处的取代的组合，优选G236A/S239D/I332E。
在此上下文中，根据Kabat EU编号索引，尤其优选在Fc结构域中选自位置332及/或239及/或236处的氨基酸的一或多个位置处引入突变。位置239及332处的取代、尤其是S239D/I332E是尤其优选的。
根据构成本发明的抗体中的Fc变体的氨基酸修饰对其进行定义。因此，举例而言，I332E是相对亲本Fc多肽具有取代I332E的Fc变体。同样，S239D/I332E定义相对于亲本Fc多肽具有取代S239D和I332E的Fc变体，且S239D/I332E/G236A定义相对于亲本Fc多肽具有取代S239D、I332E及G236A的Fc变体。
为延长抗体的血清半衰期，例如，可向抗体(尤其是抗体片段)中纳入补救受体结合表位，如美国专利第5,739,277号中所述。本文所用术语“补救受体结合表位”是指负责延长IgG分子的活体内血清半衰期的IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)Fc区的表位。
抗体可在其恒定区中的保守位置处糖基化(例如，参见Jefferis及Lund,1997,Chem.Immunol.65:111-128:Wright及Morrison,1997,TibTECH15:26-32)。免疫球蛋白的寡糖侧链可影响蛋白质的功能(例如，参见Boyd等人，1996,MoI.Immunol.32:1311-1318；Wittwe及Howard,1990,Biochem.29:4175-4180)，及糖蛋白各部分之间的分子内相互作用，该作用可影响构象并提供糖蛋白的三维表面(例如，参见Jefferis及Lund，同上；Wyss及Wagner,1996,Current Opin.Biotech.7:409-416)。寡糖亦可用于将给定糖蛋白靶向某些基于特定识别结构的分子。举例而言，已报道，在半乳糖化IgG中，寡糖部分“翻转”出内部-CH2空间且末端N-乙酰葡糖胺残基可用于结合甘露糖结合蛋白(例如，参见Malhotra等人，1995,Nature Med.1:237-243)。由糖肽酶自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中产生的CAMPATH-1H(重组人类化鼠类单克隆IgG1抗体，其识别人类淋巴细胞的CDw52抗原)移除寡糖可完全降低补体介导的溶解(CMCL或CDC)(Boyd等人，1996,MoI.Immunol.32:131,1-1318)，而使用神经氨酸酶选择性移除唾液酸不降低CMCL。亦报道，抗体的糖基化可影响ADCC。特别是，据报道，具有β(1.4)-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶III(GnTIII)(催化等分GIcNAc形成的糖基转移酶)的四环素调控表达的CHO细胞具有改良的ADCC活性(例如，参见Umana等人，1999,Nature Biotech.17:176-180)。
抗体的糖基化通常是N-连接或O-连接。N-连接是指碳水化合物部分连接至天冬酰胺残基侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸及天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X为除脯氨酸外的任何氨基酸)是碳水化合物部分与天冬酰胺侧链酶促连接的识别序列。因此，多肽中存在所述三肽序列中的任一者均可产生潜在糖基化位点。O-连接的糖基化是指N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种糖与羟基氨基酸(最常见为丝氨酸或苏氨酸，但亦可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)的连接。
抗体的糖基化变体是改变抗体的糖基化模式的变体。改变意指清除抗体中发现的一或多个碳水化合物部分、向抗体中增加一或多个碳水化合物部分、改变糖基化的组成(即糖基化模式)、糖基化程度等等。
可通过改变氨基酸序列而使抗体中含有一或多个上述三肽序列来将糖基化位点容易地加入抗体中(对于N-连接糖基化位点)。亦可通过在原始抗体序列中添加一或多个丝氨酸或苏氨酸残基(或用一或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代)来达成改变(对于O-连接糖基化位点)。类似地，可通过抗体的天然糖基化位点内的氨基酸改变完成糖基化位点的移除。
通常通过改变基本(underlying)核酸序列改变氨基酸序列。所述方法包括但不限于将先前制备的变体或非变体形式的抗体自天然来源分离(在天然氨基酸序列变体的情形下)，或通过寡核苷酸介导(或定点)的突变、PCR突变、或盒式突变制备。
亦可改变抗体的糖基化(包括糖基化模式)，而不改变氨基酸序列或基本核苷酸序列。糖基化在很大程度上取决于用于表达抗体的宿主细胞。由于用于表达作为潜在治疗剂的重组糖蛋白(例如抗体)的细胞类型很少为天然细胞，故可期望抗体的糖基化模式的显著变化。(例如，参见Hse等人，1997,Biol.Chem.272:9062-9070)。除宿主细胞的选择外，在抗体的重组产生期间影响糖基化的因素亦包括生长模式、培养基配方、培养密度、氧合、pH、纯化方案等等。已提出改变特定宿主有机体中达成的糖基化模式的各种方法(包括引入涉及寡糖产生的某些酶或使其过表达)(例如，参见美国专利第5,047,335号；第5,510,261号；第5,278,299号)。可使用(例如)糖苷内切酶H(Endo H)以酶方式自糖蛋白移除糖基化、或某些类型的糖基化。另外，可遗传改造重组宿主细胞，例如，使某些类型的多糖的处理产生缺陷。所述技术及类似技术已为本领域所熟知。
可通过常规碳水化合物分析技术(包括凝集素色谱、NMR、质谱法、HPLC、GPC、单糖组成分析、依序酶消化、及基于电荷使用高pH阴离子交换色谱分离寡糖的HPAEC-PAD)容易地分析抗体的糖基化结构。出于分析目的释放寡糖的方法亦已知，且包括(但不限于)酶处理(通常使用肽-N-糖苷酶F/内-β-半乳糖苷酶实施)、使用苛性碱环境以主要释放O-连接的结构的消除、及使用无水肼释放N-连接及O-连接寡糖的化学方法。
抗体中氨基酸残基亦可具有与Fc受体相互作用的修饰(例如，取代、缺失或添加)。特别是，抗体中氨基酸残基可具有鉴定为涉及抗Fc结构域与FcRn受体之间的相互作用的修饰(例如，参见国际公开案第WO97/34631号)。
在本发明的最宽广方面中，本发明涉及结合人类CD33的CD33结合剂，且其通过以下定义
a)具有包含CDR1、CDR2及CDR3的重链可变区及包含CDR4、CDR5及CDR6的轻链可变区，其中CDR1具有选自SeqID No:1-14的氨基酸序列，CDR2具有选自SeqID No:15-28的氨基酸序列，CDR3具有选自SeqIDNo:29-42的氨基酸序列，CDR4具有选自SeqID No:43-56的氨基酸序列，CDR5具有选自SeqID No:57-70的氨基酸序列，CDR6具有选自SeqID No:71-84的氨基酸序列，或
b)识别人类CD33的氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqIDNo:141)内的表位。
本发明进一步提供CD33结合剂，其中CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时抗体初始量的至少30%保留于HL60细胞的细胞表面上。
已发现，本发明的CD33结合剂与林妥珠单抗结合不同表位，参见本文中的实施例4。两个表位(SeqID No:141及SeqID No:142)均为非重迭表位。据信CD33的细胞外结构域上的不同表位(其由本发明的CD33结合剂及林妥珠单抗识别)是本发明的CD33结合剂与林妥珠单抗的内在化行为及ADCC性能不同的原因(参见本文中的实施例2及3)。
在一个优选实施方案中，在培育后4小时时CD33结合剂的初始量的至少40%保留在细胞表面上。
在一个优选实施方案中，重链可变区包含选自SeqID No:85-98的氨基酸序列且轻链可变区包含选自SeqID No:99-112的氨基酸序列。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂含有具有选自SeqID No:113-126的氨基酸序列的重链及具有选自SeqID No:127-140的氨基酸序列的轻链。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂对人类CD33及短尾猴(cynomolgus)CD33二者的亲和力为KD小于或等于10nM。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂是人类化结合剂。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂是完全人类结合剂。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂进一步包含效应子功能。
在一个优选实施方案中，效应子功能是由Fc结构域介导。
在一个优选实施方案中，CD33结合剂的Fc结构域中包含一或多个调节Fc结构域的功能的突变。
在一个优选实施方案中，Fc结构域的功能的调节是ADCC增强至少10%、优选50%或100%。
本发明的尤其优选的CD33结合剂列举于表1中：
表1
癌症治疗
若干出版物已将CD33阐述为在70%至100%患者的恶性细胞上表达的原代AML及CML细胞上的细胞表面标记(Scheinberg等人，1989，Hauswirt等人，2007，Plesa等人，2007，Webber等人，2008)。CD33在恶性髓系母细胞(其代表白血病患者的外周血及骨髓中的大多数恶性细胞)、及白血病干细胞(即骨髓中的相对较少数量的低分化细胞，其特征在于能自我更新并维持白血病纯系层级)上表达。使用抗体靶向CD33的临床可行性已由(吉姆单抗(Gemtuzumab ozogamizin)，经许可用于治疗不适于其它治疗选择的复发AML患者的抗体-刺孢霉素偶联物)得以证实。针对CD33的替代方法是研发林妥珠单抗(SGN-33，HuM195)，一种在I期临床试验中显示早期功效迹象的人类化IgG1单克隆抗体(Raza等人，2009)。总之，存在大量临床前及临床数据，其强调用CD33靶向治疗AML及其它CD33阳性恶性肿瘤的相关性及可行性。
急性骨髓性白血病(AML)是白血细胞的髓系谱系的恶性肿瘤。此血液肿瘤是一种若不经治疗则通常在数周至数月内致命的血液及骨髓疾病。在美国有30000例AML且在欧盟有47000例AML的估计患病率(由Mattson-Jack，2010确认的10年患病率数据)。AML是成年急性白血病的最流行形式(约90%)，其包含约33%新白血病病例。诊断患有AML的患者的中值年龄系67岁。在美国，AML占癌症死亡的约1.2%。
AML引起非特异性症状，例如体重损失、疲劳、发热及盗汗。AML通过血液测试、骨髓检查及实验室测试来诊断以确定AML亚型及确定治疗决定。
针对AML的疗法高度取决于患者的年龄及体力状况。利用细胞毒性药物的组合强烈地治疗那些可耐受强化诱导(及随后加固及维持)化学疗法的患者。所述患者达成完全响应的可能性约为75%。在此患者群中，治疗目标是治愈。此外，在达成完全响应后一年内约一半患者发生AML复发。长期治愈率在30%范围内。
然而，在共病诊断或存在时，较高年龄不容许给予强化诱导疗法，其导致姑息性治疗目标。因此，患有AML的老年患者中的缓解率显著降低。患有AML的老年患者的中值存活期小于6个月。
在一个方面中，CD33结合剂可用于通过例如在哺乳动物(优选人类患者)中延迟癌症进展及/或减少癌症相关恶病质、或防止或延迟血液恶性肿瘤(例如白血病)的复发来治疗癌症。CD33结合剂可单独给予或与另一治疗剂共给予。在一些实施方案中，CD33结合剂与护理化学治疗的标准物共给予。CD33结合剂可以以未偶联形式(即未与细胞毒素偶联)或偶联物形式给予。
在此部分中，“患者”是进行癌症治疗或已诊断为患有癌症的人类或其它哺乳动物。
在一些实施方案中，CD33结合剂可用于患者中延迟癌症进展及/或减少癌症相关恶病质，通过向有需要的患者给予有效剂量的CD33结合剂。不受限于特定机制，CD33结合剂结合髓系或单核细胞谱系的效应细胞或辅助细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、及嗜中性粒细胞)，藉此抑制或减少各种细胞因子、趋化因子及生长因子自所述效应细胞或辅助细胞及/或肿瘤细胞产生。所述可促进肿瘤细胞生长及增生及/或导致癌症恶病质的细胞因子、趋化因子及生长因子包括(但不限于)白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、干扰素-γ(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、单核细胞化学吸引蛋白-1(MCP-1)、RANTES、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、IP-10及/或巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP1α)。CD33结合剂亦可减少巨噬细胞移动至肿瘤细胞的位点。
在一些实施方案中，向患者给予有效剂量的CD33结合剂可降低至少一种细胞因子、趋化因子或生长因子的含量，该细胞因子、趋化因子或生长因子可促进肿瘤细胞的生长及增生、促进非恶性效应细胞(例如肿瘤相关性巨噬细胞(TAMS))向肿瘤位点附近迁移及/或导致癌症恶病质。在具体实施方案中，细胞因子、趋化因子或生长因子系(例如)白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、干扰素-γ(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)、白血病抑制因子(LIF)、单核细胞化学吸引剂蛋白-1(MCP-1)、RANTES、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、IP-10及/或巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP1α)。
在另一实施方案中，提供通过向患者给予CD33结合剂的有效方案来延迟癌症进展的方法，该CD33结合剂可特异性结合CD33。由于CD33结合剂的给予，通过(例如)减少肿瘤细胞的增生生长、减少转移、降低至少一种细胞因子、趋化因子或生长因子的含量、减少肿瘤细胞附近的非恶性效应细胞等等来延迟癌症进展。
在另一实施方案中，提供通过向患者给予CD33结合剂的有效方案来降低患者中的肿瘤负荷的方法，该CD33结合剂可特异性结合CD33。由于CD33结合剂的给予，通过(例如)减小肿瘤的大小或质量、降低至少一种细胞因子、趋化因子或生长因子的含量、减少肿瘤细胞附近的非恶性效应细胞、抑制肿瘤细胞附近巨噬细胞的迁移、减少肿瘤中的非恶性效应细胞(例如，TAMS或巨噬细胞)的数量等等阻止或减少肿瘤负荷。
在另一实施方案中，提供通过向患者给予CD33结合剂的有效方案而在患者中降低肿瘤负荷或延迟癌症进展的方法，该CD33结合剂可特异性结合CD33。由于CD33结合剂的给予，通过(例如)募集免疫效应细胞(如NK细胞或巨噬细胞或单核细胞)阻止或减少患者中的肿瘤负荷，所述免疫效应细胞可通过免疫介导的机制消灭肿瘤细胞。
抗体依赖性细胞毒性(ADCC)是可使单克隆抗体具有抗肿瘤活性的免疫效应细胞介导的机制(Weiner GJ.Monoclonal antibody mechanisms of action incancer.Immunol Res.2007;39(1-3):271-8)。已以临床前模型(例如，小鼠肿瘤模型)证实ADCC对抗肿瘤功效的相关性(例如，Clynes RA,Towers TL,PrestaLG,Ravetch JV.Inhibitory Fc receptors modulate vivo cytoxicity against tumortargets.Nat Med.，2000年4月；6(4):443-6)。临床试验数据支持ADCC对治疗性抗体的临床功效的相关性(例如，Weng WK,Levy R Two immunoglobulinG fragment C receptor polymorphisms independently predict response torituximab in patients with follicular lymphoma.J Clin Oncol.2003年11月1日；21(21):3940-7.Epub2003年9月15日)。单克隆抗体与Fc受体在免疫细胞上的相互作用有助于ADCC。抗体的Fc可经修饰以对Fc受体表现出更强的亲和力(例如，Presta LG Engineering of therapeutic antibodies to minimizeimmunogenicity and optimize function.Adv Drug Deliv Rev.，2006年8月7日；58(5-6):640-56.Epub，2006年5月23日)。该对Fc受体的更强的亲和力产生增强的ADCC活性，其可导致患者中的抗肿瘤功效增强。
在此部分中所述的各种实施方案中，CD33结合剂可用于治疗CD33阳性癌症(即，包含如下癌细胞的癌症：在其细胞表面上过表达CD33，或以视为对利用CD33抗体的疗法可接受的程度表达CD33)。CD33结合剂亦可用于治疗相对于相同类型的正常组织在非恶性效应细胞上不过表达CD33的癌症。癌症可为(例如)非血液恶性肿瘤或血液恶性肿瘤。在具体实施例中，血液恶性肿瘤可为CD33阳性肿瘤且可为(例如)急性淋巴样白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓单核细胞性白血病、红细胞白血病、急性成巨核细胞白血病、组织细胞性淋巴瘤、髓系肉瘤、肥大细胞增生病症或骨髓发育不良综合征(MDS)。在一些实施方案中，血液恶性肿瘤是CD33阳性恶性肿瘤，例如急性骨髓性白血病或骨髓发育不良综合征(MDS)。
在此段中所述的各种实施方案中，CD33结合剂可为未偶联的抗CD33抗体。举例而言，抗体可为完全人类抗体、人类化抗体或嵌合抗体，例如嵌合或人类化M195抗体。抗体亦可为另一抗体，例如与M195抗体竞争特异性结合CD33的抗体。抗体亦可结合与M195抗体相同或不同的表位。
在其它实施方案中，CD33结合剂可与细胞毒素结合(即偶联)。细胞毒素可为(例如)肽毒素，例如皂草素、蓖麻毒素、氯毒素、假单胞菌(pseudomonas)外毒素、假单胞菌内毒素或白喉毒素。细胞毒素亦可为化学(即非肽基)毒素，例如刺孢霉素(calicheamicin)、多柔比星(doxorubicin)、喜树碱(camptothecin)、柔红霉素(daunorubicin)或其它DNA结合剂。细胞毒素亦可为奥里斯他汀(auristatin)、类美登素(maytansinoid)、多拉司他汀(dolastatin)或其它微管阻断剂。
可以以0.1mg/kg或更小至约25mg/kg、优选1.0mg/kg至约10mg/kg的剂量向患者经静脉内或皮下给予作为抗CD33抗体的CD33结合剂。可以以等效于0.1mg/kg至约25mg/kg、1.0mg/kg至约10mg/kg完整抗体的剂量给予作为抗CD33抗体片段或其他CD33结合蛋白质的CD33结合剂。可按时间表向患者经静脉内或皮下给予CD33结合剂，亦即以(例如)每日、每周、每两周、每三周(即每三个周)或每月或其组合给予患者。根据需要，可给予CD33结合剂达至少一个月、至少两个月、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月的时间或更长时间。在一些实施方案中，在上述CD33结合剂的治疗期之后是维持期，其中以低于治疗期期间的频率给予CD33结合剂的剂量。举例而言，可每周、每两周、每三周或每月给予维持剂量达1至6个月的时段。维持期中的剂量可与治疗期中的剂量相同。
血液恶性肿瘤缓解中的治疗
在另一方面中，提供通过向自血液恶性肿瘤缓解中的患者给予有效剂量的CD33结合剂(此可防止或延迟基本血液恶性肿瘤复发)来防止或延迟患者中的血液恶性肿瘤(例如白血病)的复发的方法。CD33结合剂特异性结合血液恶性肿瘤(即白血病细胞)表面上的CD33及/或结合非恶性效应细胞。
在本发明公开的内容中，“患者”通常是经历血液恶性肿瘤治疗或已诊断为患有血液恶性肿瘤的人类。在一些实施方案中，血液恶性肿瘤是CD33阳性血液恶性肿瘤。血液恶性肿瘤包括但不限于白血病(例如，急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病、毛细胞白血病)。相关血液病症包括但不限于骨髓发育不良综合征(MDS)、骨髓纤维化、骨髓增生性疾病(例如，真性红细胞增多(PV、PCV或PRV)、原发性血小板增多(ET))及轻链性淀粉样病。
术语“CD33阳性血液恶性肿瘤”是指特征在于在恶性细胞表面上表达CD33的血液恶性肿瘤。CD33阳性血液恶性肿瘤包括但不限于急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病、血小板白血病、骨髓发育不良综合征、骨髓增生性病症、难治性贫血、白血病前期综合征、淋巴样白血病、或未分化白血病。
在一些实施方案中，所述方法包括向自CD33阳性血液恶性肿瘤缓解中的患者给予CD33结合剂的有效方案，藉此防止或延迟血液恶性肿瘤复发。在一些实施方案中，患者缺乏血液恶性肿瘤的可检测细胞。如本文所用“缺乏可检测细胞”是通过标准诊断或预后方法确定的。自AML缓解中的患者通常呈现异常临床特征消退、骨髓中恢复正常血液计数及正常血细胞生成(<5%母细胞、嗜中性粒细胞计数>1,000-1,500、血小板计数>100,000)、及白血病纯系消失。例如，参见The Merck Manual,Sec.11,Ch.138(第17版，1997)：Estey,2001,Cancer92(5):1059-1073。
CD33结合剂可为(例如)特异性结合CD33的抗体且血液恶性肿瘤可为急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓单核细胞性白血病、胸腺系(thymoid)白血病、骨髓发育不良综合征、骨髓增生性病症、难治性贫血、白血病前期综合征、淋巴样白血病、或未分化白血病。
在一些实施方案中，自血液恶性肿瘤缓解中的患者不经历骨髓移植。在其它实施方案中，自血液恶性肿瘤缓解中的患者已经历骨髓移植。骨髓移植可为自体骨髓移植或异体骨髓移植。
本发明的抗体尤其适于治疗以下癌症类型：
骨髓癌，包括但不限于：急性淋巴母细胞白血病“ALL”、急性淋巴母细胞B细胞白血病、急性淋巴母细胞T细胞白血病、急性髓母细胞白血病“AML”、急性前髓细胞性白血病“APL”、急性成单核细胞性白血病、急性红白血病、急性成巨核细胞白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化白血病、慢性髓细胞性白血病“CML”、慢性淋巴细胞白血病“CLL”、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤。
适于由CD33结合剂治疗的急性及慢性白血病包括：淋巴母细胞、髓系、淋巴细胞、髓细胞性白血病及血小板白血病。其它脊髓发育不良综合征、骨髓增生性病症、难治性贫血、白血病前期综合征、淋巴样白血病、或未分化白血病可由CD33结合剂治疗。
与其它活性物质的组合
根据拟治疗的病症，本发明的CD33结合剂可单独或与一或多种其它治疗剂组合使用，所述治疗剂尤其选自DNA破坏剂、DNA去甲基化剂或微管蛋白结合剂、或抑制血管生成、信号转导路径或癌细胞有丝分裂检查点或具有免疫调节功能(IMID)的治疗活性化合物。
该其它治疗剂可与CD33结合剂同时给予(任选作为相同医药制剂的组份)，或在该CD33结合剂给予之前或之后给予。
在某些实施方案中，其它治疗剂可为(但不限于)一或多种选自EGFR家族、VEGFR家族、VEGF、IGF-1R、胰岛素受体、AuroraA、AuroraB、PLK及PI3激酶、FGFR、PDGFR、Raf、KSP或PDK1抑制剂的抑制剂。
其它治疗剂的其它实例为CDK、Akt、Src、Bcr-Abl、cKit、cMet/HGF、Her2、Her3、c-Myc、Flt3、HSP90的抑制剂；刺猬拮抗剂；JAK/STAT、Mek、mTor、NFκB、蛋白酶体、Rho的抑制剂；Wnt信号传导抑制剂或Notch信号传导或泛素化路径抑制剂。
其它治疗剂的其它实例为DNA聚合酶、拓扑异构酶II的抑制剂；多重酪氨酸激酶抑制剂、CXCR4拮抗剂、IL3RA抑制剂、RAR拮抗剂、KIR抑制剂、免疫治疗疫苗、TUB抑制剂、Hsp70诱导剂、IAP家族抑制剂、DNA甲基转移酶抑制剂、TNF抑制剂、ErbB1受体酪氨酸激酶抑制剂、多激酶抑制剂、JAK2抑制剂、RR抑制剂、细胞凋亡诱导剂、HGPRTase抑制剂、组胺H2受体拮抗剂及CD25受体激动剂。
Aurora抑制剂的实例为(但不限于)PHA-739358、AZD-1152、AT-9283、CYC-116、R-763、VX-667、MLN-8045、PF-3814735、SNS-314、VX-689、GSK-1070916、TTP-607、PHA-680626、MLN-8237、BI847325及ENMD-2076。
PLK抑制剂的实例为GSK-461364、BI2536及BI6727。
raf抑制剂的实例为BAY-73-4506(亦为VEGFR抑制剂)、PLX-4032、RAF-265(亦为VEGFR抑制剂)、索拉非尼(sorafenib)(亦为VEGFR抑制剂)、XL-281、Nevavar(亦为VEGFR抑制剂)及PLX4032。
KSP抑制剂的实例为伊帕尼西(ispinesib)、ARRY-520、AZD-4877、CK-1122697、GSK-246053A、GSK-923295、MK-0731、SB-743921、LY-2523355及EMD-534085。
src及/或bcr-abl抑制剂的实例为达沙替尼(dasatinib)、AZD-0530、博舒替尼(bosutinib)、XL-228(亦为IGF-1R抑制剂)、尼罗替尼(nilotinib)(亦为PDGFR及cKit抑制剂)、伊马替尼(imatinib)(亦为cKit抑制剂)、NS-187、KX2-391、AP-24534(亦为EGFR、FGFR、Tie2、Flt3抑制剂)、KM-80及LS-104(亦为Flt3、Jak2抑制剂)。
PDK1抑制剂的实例为AR-12。
Rho抑制剂的实例为BA-210。
PI3激酶抑制剂的实例为PX-866、PX-867、BEZ-235(亦为mTor抑制剂)、XL-147、及XL-765(亦为mTor抑制剂)、BGT-226、CDC-0941。
cMet或HGF抑制剂的实例为XL-184(亦为VEGFR、cKit、Flt3抑制剂)、PF-2341066、MK-2461、XL-880(亦为VEGFR抑制剂)、MGCD-265(亦为VEGFR、Ron、Tie2抑制剂)、SU-11274、PHA-665752、AMG-102、AV-299、ARQ-197、MetMAb、CGEN-241、BMS-777607、JNJ-38877605、PF-4217903、SGX-126、CEP-17940、AMG-458、INCB-028060及E-7050。
c-Myc抑制剂的实例为CX-3543。
Flt3抑制剂的实例为AC-220(亦为cKit及PDGFR抑制剂)、KW-2449、LS-104(亦为bcr-abl及Jak2抑制剂)、MC-2002、SB-1317、来他替尼(lestaurtinib)(亦为VEGFR、PDGFR、PKC抑制剂)、TG-101348(亦为JAK2抑制剂)、XL-999(亦为cKit、FGFR、PDGFR及VEGFR抑制剂)、舒尼替尼(sunitinib)(亦为PDGFR、VEGFR及cKit抑制剂)及坦度替尼(tandutinib)(亦为PDGFR及cKit抑制剂)。
HSP90抑制剂的实例为坦螺旋霉素(tanespimycin)、阿螺旋霉素(alvespimycin)、IPI-504、STA-9090、MEDI-561、AUY-922、CNF-2024及SNX-5422。
JAK/STAT抑制剂的实例为CYT-997(亦与微管蛋白相互作用)、TG-101348(亦为Flt3抑制剂)及XL-019。
Mek抑制剂的实例为ARRY-142886、AS-703026、PD-325901、AZD-8330、ARRY-704、RDEA-119及XL-518。
mTor抑制剂的实例为西罗莫司脂化物(temsirolimus)、德福莫司(deforolimus)(其亦起VEGF抑制剂作用)、依维莫司(everolimus)(亦为VEGF抑制剂)、XL-765(亦为PI3激酶抑制剂)及BEZ-235(亦为PI3激酶抑制剂)。
Akt抑制剂的实例为哌立福辛(perifosine)、GSK-690693、RX-0201及曲西立滨(triciribine)。
cKit抑制剂的实例为马赛替尼(masitinib)、OSI-930(亦起VEGFR抑制剂作用)、AC-220(亦为Flt3及PDGFR抑制剂)、坦度替尼(亦为Flt3及PDGFR抑制剂)、阿西替尼(axitinib)(亦为VEGFR及PDGFR抑制剂)、舒尼替尼(亦为Flt3、PDGFR、VEGFR抑制剂)及XL-820(亦起VEGFR及PDGFR抑制剂作用)、伊马替尼(亦为bcr-abl抑制剂)、尼罗替尼(亦为bcr-abl及PDGFR抑制剂)。
刺猬拮抗剂的实例为IPI-609、CUR-61414、GDC-0449、IPI-926及XL-139。
CDK抑制剂的实例为塞来昔布(seliciclib)、AT-7519、P-276、ZK-CDK(亦抑制VEGFR2及PDGFR)、PD-332991、R-547、SNS-032、PHA-690509、PHA-848125及SCH-727965。
蛋白酶体抑制剂的实例为硼替佐米(bortezomib)、卡菲佐米(carfilzomib)及NPI-0052(亦为NFκB抑制剂)。
蛋白酶体抑制剂/NFκB路径抑制剂的实例为硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)、NPI-0052、CEP-18770、MLN-2238、PR-047、PR-957、AVE-8680及SPC-839。
泛素化路径抑制剂的实例为HBX-41108。
去甲基化剂的实例为5-阿扎胞苷(5-azacitidine)及地西他滨(decitabine)。
抗血管生成剂的实例为FGFR、PDGFR及VEGF(R)的抑制剂及沙立度胺(thalidomide)，所述药物选自(但不限于)贝伐单抗(bevacizumab)、莫替沙尼(motesanib)、CDP-791、SU-14813、替拉替尼(telatinib)、KRN-951、ZK-CDK(亦为CDK抑制剂)、ABT-869、BMS-690514、RAF-265、IMC-KDR、IMC-18F1、IMiD、沙立度胺、CC-4047、来那度胺(lenalidomide)、ENMD-0995、IMC-D11、Ki-23057、布瑞法尼(brivanib)、西地尼布(cediranib)、1B3、CP-868596、IMC-3G3、R-1530(亦为Flt3抑制剂)、舒尼替尼(亦为cKit及Flt3抑制剂)、阿西替尼(亦为cKit抑制剂)、来他替尼(亦为Flt3及PKC抑制剂)、瓦他拉尼(vatalanib)、坦度替尼(亦为Flt3及cKit抑制剂)、帕唑帕尼(pazopanib)、PF-337210、阿柏西普(aflibercept)、E-7080、CHIR-258、索拉非尼甲苯磺酸盐(亦为Raf抑制剂)、凡德他尼(vandetanib)、CP-547632、OSI-930、AEE-788(亦为EGFR及Her2抑制剂)、BAY-57-9352(亦为Raf抑制剂)、BAY-73-4506(亦为Raf抑制剂)、XL-880(亦为cMet抑制剂)、XL-647(亦为EGFR及EphB4抑制剂)、XL-820(亦为cKit抑制剂)、尼罗替尼(亦为cKit及brc-abl抑制剂)、CYT-116、PTC-299、BMS-584622、CEP-11981、多韦替尼(dovitinib)、CY-2401401、ENMD-2976及BIBF1120。
该其它治疗剂亦可选自EGFR抑制剂，其可为小分子EGFR抑制剂或抗-EGFR抗体。抗EGFR抗体的实例为(但不限于)西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、扎妥木单抗(zalutumumab)；小分子EGFR抑制剂的实例为吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、凡德他尼(vandetanib)(亦为VEGFR抑制剂)及阿法替尼(afatinib)(亦为Her2抑制剂)。EGFR调节剂的另一实施例系EGF融合毒素。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的其它EGFR及/或Her2抑制剂是拉帕替尼(lapatinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、XL-647、来那替尼(neratinib)、BMS-599626ARRY-334543、AV-412、mAB-806、BMS-690514、JNJ-26483327、AEE-788(亦为VEGFR抑制剂)、AZD-8931、ARRY-380ARRY-333786、IMC-11F8、Zemab、TAK-285、AZD-4769及阿法替尼(Her2及EGFR的双重抑制剂)。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的DNA聚合酶抑制剂是Ara-C/阿糖胞苷(cytarabine)、Clolar/氯苯吩嗪(clofarabine)。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的DNA甲基转移酶抑制剂是Vidaza/阿扎胞苷。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的细胞凋亡诱导剂是Trisenox/三氧化二砷。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的拓扑异构酶II抑制剂是伊达比星(idarubicin)、柔红霉素及米托蒽醌(mitoxantrone)。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的RAR拮抗剂是Vesanoid/维生素A酸(tretinoin)。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的HGPRTase抑制剂是Mercapto/巯嘌呤(mercaptopurine)。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的组胺H2受体拮抗剂是Ceplene/组胺二盐酸盐。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的CD25受体激动剂是IL-2。
其它药物亦可选自靶向IGF-1R及胰岛素受体路径的药物。所述药物包括与IGF-1R结合的抗体(例如CP-751871、AMG-479、IMC-A12、MK-0646、AVE-1642、R-1507、BIIB-022、SCH-717454、rhu Mab IGFR)及靶向IGF1-R的激酶结构域的新颖化学个体(例如OSI-906或BMS-554417、XL-228、BMS-754807)。
可与本发明的CD33结合剂有利地组合用于疗法中的其它药物是靶向CD20的分子，包括CD20特异性抗体(如利妥昔单抗、LY-2469298、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、MEDI-552、IMMU-106、GA-101(=R7159)、XmAb-0367、奥法妥木单抗(ofatumumab))、放射标记的CD20抗体(如托西莫单抗(tositumumab)及替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan))或其它CD20定向蛋白质(如SMIP Tru015、PRO-131921、FBT-A05、维妥珠单抗(veltuzumab)、R-7159)。
CD33结合剂可与在白细胞上表达的其它表面抗原的抑制剂、尤其是抗体或抗体样分子组合，例如抗CD2(西利珠单抗(siplizumab))、抗CD4(扎木单抗zanolimumab))、抗CD19(MT-103、MDX-1342、SAR-3419、XmAb-5574)、抗CD22(依哌佐单抗(epratuzumab))、抗CD23(鲁昔单抗(lumiliximab))、抗CD30(伊妥木单抗(iratumumab))、抗CD32B(MGA-321)、抗CD38(HuMax-CD38)、抗CD40(SGN40)、抗CD52(阿来组单抗(alemtuzumab))、抗CD80(加利昔单抗(galiximab))。
欲与CD33结合剂组合的其它药物是免疫毒素样BL-22(抗CD22免疫毒素)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)(抗CD23抗体-刺孢霉素偶联物)、RFT5.dgA(A链抗CD25蓖麻毒素毒素)、SGN-35(抗CD30-奥里斯他汀E偶联物)、及吉姆单抗(抗CD33刺孢霉素偶联物)、MDX-1411(抗CD70偶联物)、或放射标记的抗体(如90Y-依哌佐单抗)(抗CD22放射免疫偶联物)。
另外，CD33结合剂可与免疫调节剂、诱导细胞凋亡或修饰信号转导路径的药物(例如抗体)组合，如TRAIL受体调节剂马帕木单抗(mapatumumab)(TRAIL-1受体激动剂)、来沙木单抗(lexatumumab)(TRAIL-2受体激动剂)、替加珠单抗(tigatuzumab)、Apomab、AMG-951及AMG-655；抗HLA-DR抗体(如1D09C3)、抗CD74、破骨细胞分化因子配体抑制剂(如地舒单抗(denosumab))、BAFF拮抗剂(如AMG-623a)或Toll样受体(例如TLR-4或TLR-9)激动剂。
可与本发明的CD33结合剂组合使用的其它药物选自但不限于:激素、激素类似物及抗激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、氟维司群(fulvestrant)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、乙酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、非那雄胺(finasteride)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)、氟氢可的松(fludrocortinsone)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、己酸羟孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、已烯雌酚(diethylstilbestrol)、丙酸睾酮(testosterone propionate)、氟羟甲睾酮(fluoxymesterone)/等效物、奥曲肽(octreotide)、阿佐昔芬(arzoxifene)、帕西瑞肽(pasireotide)、伐普肽(vapreotide)、肾上腺皮质类固醇/拮抗剂、泼尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)、胺鲁米特(aminoglutethimide))、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、利阿唑(liarozole)、依西美坦(exemestane)、阿他美坦(atamestane)、福美坦(formestane))、LHRH激动剂及拮抗剂(例如乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、亮丙瑞林(leuprolide)、阿巴瑞克(abarelix)、西曲瑞克(cetrorelix)、地洛瑞林(deslorelin)、组胺瑞林(histrelin)、曲普瑞林(triptorelin))、抗代谢物(例如，如甲胺蝶呤(methotrexate)、曲美沙特(trimetrexate)、培美曲塞(pemetrexed)等抗叶酸药、如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氟脱氧尿苷(fluorodeoxyuridine)、卡培他滨(capecitabine)、地西他滨、耐拉滨(nelarabine)、5-氮杂胞苷(5-azacytidine)、及吉西他滨(gemcitabine)等嘧啶类似物、例如巯嘌呤、硫鸟嘌呤(thioguanine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、克拉屈滨(cladribine)及喷司他丁(pentostatin)、阿糖胞苷、氟达拉滨(fludarabine)、氯苯吩嗪等嘌呤及腺苷类似物)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环抗生素(anthracycline)，如多柔比星、柔红霉素、表柔比星(epirubicin)及伊达比星、丝裂霉素(mitomycin-C)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、普卡霉素(plicamycin)、splicamycin、放线菌素-D(actimomycinD)、米托蒽醌、米托蒽醌伊达比星、匹杉琼(pixantrone)、链尿霉素(streptozocin)、阿非科林(aphidicolin))；铂衍生物(例如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、洛铂(lobaplatin)、沙铂(satraplatin))；烷化剂(例如雌莫司汀(estramustine)、司莫司汀(semustine)、氮芥(meclorethamine)、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、白消安(busulphan)、达卡巴嗪(dacarbazine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、羟基脲(hydroxyurea)、替莫唑胺(temozolomide)、例如卡莫司汀(carmustine)及洛莫司汀(lomustine)等亚硝基脲类(nitrosoureas)、噻替派(thiotepa))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，如长春碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春氟宁(vinflunine)及长春新碱(vincristine)；及紫杉烷(taxane)，如紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)及其调配物、拉洛他赛(larotaxel)；西莫他赛(simotaxel)及埃博霉素，如伊沙匹隆(ixabepilone)、帕土匹隆(patupilone)、ZK-EPO)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)，如依托泊苷(etoposide)及凡毕复(etopophos)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、巴诺蒽醌(banoxantrone)、喜树碱)及各种化学药物，例如视黄酸衍生物、胺磷汀(amifostine)、阿那格雷(anagrelide)、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、白介素-2、丙卡巴肼(procarbazine)、N-甲基肼、米托坦(mitotane)、及卟菲尔钠(porfimer)、贝沙罗汀(bexarotene)、塞来昔布(celecoxib)、亚乙基亚胺/甲基-密胺、三亚乙基密胺、三亚乙基硫代磷酰胺、六甲基密胺、及酶L-天冬酰胺酶、L-精氨酸酶及甲硝唑(metronidazole)、醚醇硝唑(misonidazole)、去甲基醚醇硝唑(desmethylmisonidazole)、哌莫硝唑(pimonidazole)、依他硝唑(etanidazole)、硝唑吗啉(nimorazole)、RSU1069、EO9、RB6145、SR4233、烟酰胺(nicotinamide)、5-溴脱氧尿苷(5-bromodeozyuridine)、5-碘脱氧尿苷(5-iododeoxyuridine)、溴脱氧胞苷(bromodeoxycytidine)、赤型羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyl-adenine)、蒽二酮(anthracenedione)、GRN-163L(竞争性端粒酶模板拮抗剂)、SDX-101(PPAR激动剂)、他波司他(talabostat)(DPP抑制剂)、呋咯地辛(forodesine)(PNP抑制剂)、阿塞西普(atacicept)(靶向TNF家族成员BLyS及APRIL的可溶性受体)、TNF-α中和剂(Enbrel、Humira、Remicade)、XL-844(CHK1/2抑制剂)、VNP-40101M(DNA烷化剂)、SPC-2996(反义bcl2抑制剂)、奥巴克拉(obatoclax)(bcl2抑制剂)、因扎斯道宁(enzastaurin)(PKCβ调节剂)、伏林司他(vorinistat)(HDAC抑制剂)、罗米地辛(romidepsin)(HDAC抑制剂)、AT-101(Bcl-2/Bcl-xL抑制剂)、普利肽新(plitidepsin)(多作用缩肽)、SL-11047(聚胺代谢调节剂)。
本发明的CD33结合剂亦可与其它疗法组合使用，所述疗法包括外科手术、干细胞移植、放射疗法、内分泌疗法、生物反应调节剂、高温疗法及冷冻疗法、及减少任何不利效应的药物(例如，止吐药)、G-CSF、GM-CSF；例如血卟啉衍生物、Photofrin、苯并卟啉衍生物、Npe6、初卟啉锡(tinetioporphyrin)、pheoboride-a细菌叶绿素-a、萘酞菁、酞菁、锌酞菁等光敏剂。
药物组合物及给予方法
CD33结合剂可呈容许将组合物给予患者的任一形式。举例而言，组合物可呈固态或液体形式。施用的优选方式是通过输注或注射(静脉内、肌内、皮下、腹膜腔内、皮内)的非经肠施用方式，但亦可采用例如吸入、经皮、鼻内、含服、口服及肿瘤内等其它施用方式。非经肠给予包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内(intrastemal)注射或输注技术。在一个方面中，非经肠给予组合物。在又一方面中，静脉内给予化合物。
药物组合物可经调配以使在给予患者组合物时化合物具有生物利用度。组合物可采取一或多个剂量单元形式，例如，其中呈气溶胶形式的化合物的容器可容纳复数个剂量单元。
用于制备药物组合物的材料的所用量可为非毒性。本领域技术人员将明了，药物组合物中的活性成份的最佳剂量将取决于多个因素。相关因素包括但不限于患者类型(例如人类)、化合物的特定形式、给予方式及所用组合物。
医药上可接受的载剂或媒剂可为颗粒，以使组合物呈(例如)粉末形式。载剂可为液体，其中组合物为(例如)可注射液体。组合物可呈(例如)用于非经肠注射的液体形式。在通过注射给予的组合物中，亦可包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、缓冲剂、稳定剂及等渗剂中的一或多者。
液体组合物不管是液体、悬浮液还是其它类似形式均亦可包括以下中的一或多者：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液(优选生理盐水)、林格氏溶液(Ringer's solution)、等渗氯化钠、固定油(例如合成甘油单酯或甘油二酯，其可用作溶剂或悬浮介质)、聚乙二醇、甘油、环糊精、丙二醇或其它溶剂；稳定剂，例如氨基酸；表面活性剂，例如聚山梨醇酯；抗细菌剂，例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢纳；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；及用于调节等渗性的试剂，例如氯化钠或右旋糖。非经肠组合物可封闭于安瓿(由玻璃、塑料或其它材料制得的可弃式唧筒或多剂量小瓶)中。生理盐水是例示性佐剂。可注射组合物优选无菌。
CD33结合剂亦可经干燥(冷冻干燥、喷雾干燥、喷雾冷冻干燥、藉助近临界或超临界气体干燥、真空干燥、风干)、沉淀或结晶或包封于微囊中，所述微囊在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳液、奈米颗粒及奈米胶囊)、粗滴乳液中通过(例如)凝聚技术或界面聚合分别使用(例如)羟甲基纤维素或明胶及聚-(甲基丙烯酸甲酯)制备，或(例如)通过pcmc技术(蛋白质涂覆微晶)沉淀或固定于载剂或表面上。所述技术公开于Remington:TheScience and Practice of Pharmacy，第21版(Hendrickson R.编辑)中。
可有效治疗特定病症或病况的组合物的量将取决于该病症或病况的性质，且可通过标准临床技术测定。另外，可任选采用活体外或活体内分析以有助于确定最佳剂量范围。组合物中所用确切剂量亦将取决于给予途径、及疾病或病症的严重性，且应根据从业医师的判断及各患者的情况来决定。
组合物包含有效量的药物或药剂以使得可获得适宜剂量。通常，此量以组合物的重量计至少为约0.01%的药物或药剂。在意欲口服给予时，此量可变为以组合物的重量计约0.1%至约80%的范围。在一个方面中，口服组合物可包含以组合物的重量计约4%至约50%的化合物。在又一方面中，制备本发明组合物以使非经肠剂量单元含有约0.01重量%至约2重量%化合物。
对于静脉内给予而言，组合物可包含约1mg至约50mg药物或药剂/kg患者体重。在一个方面中，组合物可包括约1mg、1.5mg或2.5mg至约50mg药物或药剂/kg患者体重。在另一方面中，所给予量可在约1mg、1.5mg或2.5mg至约25mg药物或药剂/kg体重范围内。
在一些实施方案中，给予患者的剂量是0.1mg/kg以下至约50mg/kg患者体重。(换算成mg/mm2时，可使用1.8m2的BSA及80kg的体重)。
如本文所论述，可以(例如)每日、每周、每两周、每三周或每月的时间表向患者经静脉内或皮下给予CD33结合剂。举例而言，可每周给予CD33结合剂达2至10周、通常3至6周的时段。在一些实施方案中，CD33结合剂的给药方案将抗体的血清浓度在给药循环期间维持为至少5μg/ml或至少10μg/ml。可给予CD33结合剂(例如)1至8或更多个循环。在一些实施方案中，长期向个体给予CD33结合剂。
举例而言，本发明包括治疗癌症(例如骨髓性白血病)的方法，其通过每周给予0.1mg/kg至50mg/kg、例如约1.5-8或2.5-8mg/kg本发明的抗CD33抗体来完成。此治疗通常可持续约1至3个月、通常约2个月。在一实施方案中，维持给药时间表直至注意到急剧降低。举例而言，给药可持续高达约6个月。此治疗之后可实行较不频繁的给药时间表，包括(例如)每两周给药(或每月两次)。此给予时间表可维持1、2、3、4、5、6个月或更长时间以维持急剧降低及/或缓解。
在一些实施方案中，预防性药物可与CD33结合剂一起给予以使输注反应最小化。适宜的预防性药物包括(例如)甲基泼尼松龙(methyl prednisolone)、苯海拉明(diphenhydramine)、对乙酰氨基酚(acetaminophen)或其他适宜药物。预防性药物可在CD33结合剂之前或同时给予。
可通过任一方便途径(例如，通过输注或推注、通过经由上皮或皮肤黏膜衬里(例如，口腔黏膜、直肠及肠黏膜等)吸收)给予药物或药剂。给予可为全身性或局部给予。已知各种递送系统，例如，囊封于脂质体、微粒、微囊、胶囊等中，且其可用于给予化合物。在某些实施方案中，向患者给予一种以上药物或药剂或组合物。
视药物或药剂的需要，可期望向需要治疗的区域局部给予一或多种药物或药剂或组合物。此可通过(例如，且不限于)在外科手术期间局部输注；在外科手术后外敷施用(例如，结合伤口敷料)；通过注射：借助导管；借助栓剂；或借助植入体，该植入体为多孔、非多孔或凝胶状材料，包括例如硅橡胶膜(sialastic membrane)等膜或纤维)来达成。在一个实施方案中，可为在癌症、肿瘤或瘤形成或瘤形成组织前组织的位点(或前位点)直接注射而达成给予。
药物或药剂或组合物可以控制释放系统(例如帮浦或各种聚合材料)递送。在又一实施方案中，控制释放系统可靠近药物或药剂或组合物的靶放置，因此仅需要全身剂量的一部分(例如，参见Goodson，Medical Applications ofControlled Release，第2卷，第115-138页(1984))。可使用论述于Langer的综述中的其他控制释放系统(1990,Science249:1527-1533)。
视药物或药剂的需要，根据常规操作将药物或药剂调配为适于静脉内给予动物(尤其人类)的药物组合物。通常，用于静脉内给予的载剂或媒剂是无菌等渗缓冲水溶液。若需要，组合物亦可包括增溶剂。用于静脉内给予的组合物可视需要包含局部麻醉剂(例如利多卡因(lignocaine)以减轻注射维持处的疼痛。通常，各成份单独或混合在一起以单位剂型来供应，例如，作为冻干粉末或无水浓缩物存于例如安瓿或药囊等标明活性剂的量的密封容器中。若药物或药剂是通过输注来给予，则可将其分配至(例如)含有无菌医药级水或盐水的输注瓶中。若药物或药剂是通过注射来给予，则可提供含有注射用无菌水或盐水的安瓿以使得可在给予之前混合各成份。
亦可根据接受剂型以(例如)片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、颗粒、粉末、乳液、胶囊、糖浆或酏剂形式给予治疗剂的组合物。口服给予的组合物可含有一或多种可选试剂(例如，甜味剂，例如果糖、天冬甜素或糖精；矫味剂，例如薄荷、冬青油或樱桃；着色剂；及防腐剂)以提供医药上可口的制剂。此外，若呈片剂或丸剂形式，则组合物可经包衣以延迟在胃肠道中的崩解及吸收，藉此在延长时间段内提供持续作用。包围渗透活性驱动化合物(drivingcompounds)的选择性可渗透膜亦适用于口服给予的药物或药剂。在后者这些平台中，通过驱动化合物吸取胶囊周围环境的流体，该驱动化合物会膨胀以经由孔转移该药物或药物组合物。与即刻释放调配物的有尖顶曲线相比，所述递送平台可提供基本上零级的递送曲线。亦可使用例如甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯等延时材料。
组合物可包括修饰固体或液体剂量单元的物理形式的各种材料。举例而言，组合物可包括在活性成份周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性材料且可选自(例如)糖、虫胶或其它肠溶包衣试剂。或者，可将活性成份包封于明胶胶囊中。
可以由主治医师确定的频率或持续时间段向有需要的患者给予组合物。可经1天、2天、3天、5天、7天、10天、14天、21天、28天、1个月、2个月的时间或更长时间给予组合物。应理解，可经介于1天与两个月或更长时间之间的任一时间段给予组合物。
抗体的产生
可使用用于抗体的合成的任一方法、具体而言例如通过重组表达或化学合成产生抗体。
抗体或其片段或衍生物的重组表达通常包括编码抗体的核酸的构建。若已知抗体的核苷酸序列，则编码抗体或其多肽的核酸可自化学合成的寡核苷酸组装(例如，如Kutmeier等人，1994，BioTechniques17:242中所述)，其包括含有编码抗体的序列的部分的重迭寡核苷酸的合成、那些寡核苷酸的退火及连接、及随后通过(例如)PCR使连接的寡核苷酸扩增。
或者，可自适宜的来源生成编码抗体或其多肽的核酸分子。若不能获得含有编码特定抗体的核酸的纯系，但已知抗体的序列，则编码抗体的核酸可自适宜来源(例如，自表达免疫球蛋白的任何组织或细胞生成的抗体cDNA文库、或cDNA文库)通过(例如)使用可与序列的3'及5'末端杂交的合成引物的PCR扩增或通过使用对特定基因序列具有特异性的寡核苷酸探针选殖来获得。
若特异性识别特定抗原的抗体不可购得(或用于选殖编码该免疫球蛋白的核酸的cDNA文库的来源不可购得)，则可通过本领域已知的任一方法(例如，通过对患者进行免疫)、或适宜动物模型(例如兔或小鼠)以生成多克隆抗体、或更优选的通过生成单克隆抗体来生成对特定抗原具有特异性的抗体，如(例如)Kohler及Milstein(1975,Nature256:495-497)所述，或如Kozbor等人(1983,Immunology Today4:72)或Cole等人(1985，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy,Alan R.Liss公司，第77-96页)所述。或者，至少编码抗体的Fab部分的纯系，可通过筛选结合特定抗原的Fab片段的纯系的Fab表达文库(例如，如Huse等人，1989,Science246,1275-1281中所述)或通过筛选抗体文库(例如，参见Clackson等人，1991,Nature352:624；Hane等人，1997,Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:4937)获得。
在获得至少编码抗体的可变结构域的核酸序列后，可将其引入含有编码抗体的恒定区的核苷酸序列的载体中(例如，参见国际公开案第WO86/05807号；第WO89/01036号；及美国专利第5,122,464号)。可获得含有完整轻链或重链，从而可表达完整抗体分子的载体。随后，编码抗体的核酸可用于引入核苷酸取代或缺失，该取代或缺失对用不含巯基的氨基酸残基取代(或缺失)一或多个参与链内二硫键的可变区半胱氨酸残基而言是必需的。所述修饰可通过本领域已知的在核苷酸序列中引入特定突变或缺失的任一方法(例如但不限于化学诱变及活体外定向诱变)来实施(例如，参见Hutchinson等人，1978,J.Biol.Chem.253:6551)。
另外，已研发产生“嵌合抗体”的技术(例如，参见Morrison等人，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:851-855；Neuberger等人，1984,Nature312:604-608；Takeda等人，1985,Nature314:452-454)。嵌合抗体是不同部分源自不同动物物种的分子，例如那些具有源自鼠类单克隆抗体的可变区及人类免疫球蛋白恒定区的分子(例如人类化抗体)。
在获得编码抗体的核酸序列后，可通过使用本领域已知的技术的重组DNA技术产生用于产生抗体的载体。可用本领域技术人员已知来构建含有编码抗体的序列及适当转录及翻译控制信号的表达载体。所述方法包括(例如)活体外重组DNA技术、合成技术及活体内遗传重组。举例而言，参见以下中所述技术：Sambrook等人(1990,Molecular Cloning,A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY；及Sambrook等人，2001；Molecular Cloning,A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring HarborPublish.,Cold Spring Harbor,N.Y.)及Ausubel等人(编辑，1993-2006,CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY)。
可通过常规技术(例如，电穿孔、脂质体异动、磷酸钙沉淀或转导)将包含抗体核苷酸序列或抗体核苷酸序列的表达载体转移至宿主细胞，且随后通过常规技术培养所得细胞以产生抗体。在具体实施方案中，通过组成型、诱导型或组织特异性启动子调控抗体的表达。
尤其对于重组免疫球蛋白分子的表达而言，用于表达重组抗体的宿主细胞可为细菌细胞(例如大肠杆菌(Escherichia coli))或优选真核细胞。特别是，哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞(CHO))与含有来自人类巨细胞病毒的主要中早期基因启动子组件的载体的组合是免疫球蛋白的有效表达系统(例如，参见Foecking等人，1986,Gene45:101；Cockett等人，1990,BioTechnology8:2)。CHO细胞系可为(例如)DG44或CHO-S。在另一实施例中，可使用CHEF系统表达抗体。(例如，参见美国专利第5,888,809号)。
可采用多种其它宿主-表达载体来表达抗体。所述宿主表达系统表示可产生且随后纯化抗体的编码序列的媒剂，但亦表示在利用适当核苷酸编码序列转化或转染时可原位表达抗体免疫球蛋白分子的细胞。所述系统包括但不限于经含有免疫球蛋白编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或黏粒DNA表达载体转化的微生物(例如细菌，例如大肠杆菌及枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；经含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，毕氏酵母(Saccharomyces pichia))；经含有免疫球蛋白编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；经重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒(CaMV)及烟草花叶病毒(TMV))感染或经含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或具有重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如，COS、CHO、CHO-S、BH、293、293T或3T3细胞)，所述构建体含有源自哺乳动物细胞的基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子；疫苗病毒7.5K启动子)。
在细菌系统中，可根据所表达抗体的既定用途有利地选择多种表达载体。举例而言，在欲产生大量该蛋白质时，可期望引导表达大量易纯化融合蛋白产物的载体。所述载体包括但不限于大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等人，1983,EMBOJ.2:1791-94)，其中可将抗体编码序列个别地连接至载体中并与lac Z编码区同框，从而使得可产生融合蛋白；pIN载体(Inouye及Inouye，1985,Nucleic Acids Res.13:3101-3109；Van Heeke及Schuster，1989,J.Biol.Chem.24:5503-5509)；等等。pGEX载体亦可用于将外来多肽表达为与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。一般而言，所述融合蛋白可溶且易于通过以下方式自溶解细胞纯化：吸附并结合至谷胱甘肽-琼脂糖珠粒基质，之后在游离谷胱甘肽存在下洗脱。pGEX载体经设计以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶裂解位点以使得可自GST部分释放所选殖靶基因产物。
在昆虫系统中，苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcNPV)或来自黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的类似病毒可作为载体用于表达外来基因。病毒在福吉斜纹夜蛾(Spodopiera frugipenta)细胞中生长。可将抗体编码序列个别地选殖至病毒的非必需区(例如，多角体蛋白基因)中并置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)控制下。
在哺乳动物宿主细胞中，可采用多种基于病毒的表达系统。在使用腺病毒作为表达载体的情形下，可将目标抗体编码序列连接至腺病毒转录/翻译控制复合物(例如，晚期启动子及三联前导序列)。随后可通过活体外或活体内重组将此嵌合基因插入腺病毒基因组中。于病毒基因组的非必需区(例如，区E1或E3)中的插入，产生有活力且能够表达感染宿主中的免疫球蛋白分子的重组病毒。(例如，参见Logan及Shenk，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:355-359)。亦可需要特异性起始信号以便有效翻译插入的抗体编码序列。所述信号包括ATG起始密码子及毗邻序列。此外，起始密码子可操作地与期望编码序列的读码框(reading frame)相关以确保完整插入的翻译。所述外源性翻译控制信号及起始密码子可具有多种天然和合成的起源。可通过纳入适当转录增强子组件、转录终止子等增强表达效率(例如，参见Bittner等人，1987,Methods in Enzymol.153:51-544)。
另外，宿主细胞菌株可经选择以调节插入序列的表达、或以期望的特定方式修饰并处理基因产物。蛋白产物的所述修饰(例如糖基化)及处理(例如裂解)对于蛋白质的功能可为重要的。不同宿主细胞针对蛋白质及基因产物的翻译后处理及修饰具有独特且特异的机制。适当细胞系或宿主系统可经选择以确保所表达外来蛋白质的正确修饰及处理。为此，可使用对初级转录物的适宜加工、基因产物的糖基化及磷酸化具有细胞机制的真核宿主细胞。所述哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO(例如DG44或CHO-S)、VERY、BH、HeIa、COS、MDCK、293、293T、3T3、WI38、BT483、Hs578T、HTB2、BT20及T47D、CRL7030及Hs578Bst。
对于重组蛋白的长期、高产率生产而言，稳定表达为优选。举例而言，可对稳定表达抗体的细胞系进行改造。与其使用含有病毒复制起源的表达载体，宿主细胞可用受适当表达控制组件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等)控制的DNA及可选择标记转化。在引入外来DNA之后，可使经改造的细胞在富集培养基(enriched media)中生长1至2天且随后转换至选择性培养基。重组质粒的可选择标记可赋予针对该选择的抗性并容许细胞将质粒稳定地整合入其染色体中并生长，形成随后可经选殖并扩增成细胞系的转化灶的细胞。此方法可有利地用于改造表达抗体的细胞系。所述经改造细胞系尤其可用于直接或间接与抗体相互作用的肿瘤抗原的筛选及评价。
可使用多种选择系统。举例而言，单纯性疱疹病毒胸苷激酶(例如，参见Wigler等人，1977,Cell11:223)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(例如，参见Szybalska及Szybalski，1992,Proc.Natl Acad.Sci.USA48:202)及腺嘌呤磷酸核糖转移酶(例如，参见Lowy等人，1980,Cell22:817)基因可分别用于tk-、hgprt-或aprt-细胞中。同样，抗代谢物抗性可用作对于下列基因进行选择的基础：DHFR，其赋予甲胺蝶呤抗性(例如，参见Wigler等人，1980,Proc.Natl.AcadSci.USA77:3567-70；O'Hare等人，1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:1527-31)；gpt，其赋予霉酚酸抗性(例如，参见Mulligan及Berg，1981,Proc.Nail.Acad.Sci.USA78:2072-76)；neo，其赋予氨基糖苷G-418抗性(例如，参见Clinical Pharmacy12:488-505；Wu及Wu，1991,Biotherapy3:87-95；Tolstoshev,1993,Arm.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596；Mulligan,1993,Science260:926-932；Morgan及Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62:191-217；及May,1993,TIB TECH11(5):155-215)及hygro，其赋予潮霉素抗性(例如，参见Santerre等人，1984,Gene30:147-50)。重组DNA技术领域公知的可使用的方法阐述于以下文献中：Ausubel等人(编辑，1993-2006，Current Protocolsin Molecular Biology.John Wiley&Sons,NY;Kriegler,1990,Gene Transfer andExpression.A laboratory Manual,Stockton Press,NY；及第12及13章，Dracopoli等人(编辑，1994,Current Protocols in Human Genetics,John Wiley&Sons,NY；及Colberre-Garapin等人，1981,7.MoI.Biol.150:1-14)。
可通过载体扩增提高抗体的表达程度(关于综述，参见Bebbington及Hentschel，The use of vectors based on gene amplification for the expression ofcloned genes in mammalian cells in DNA cloning，第3卷(Academic Press,NewYork,1987))。在表达抗体的载体系统中的标记可扩增时，增加存于宿主细胞的培养物中的抑制剂的含量可增加标记基因的拷贝数。由于该扩增区与抗体的核苷酸序列缔合，因此亦可增加抗体的产量(例如，参见Crouse等人，1983,Mol.Cell.Biol.3:257-66)。
宿主细胞可与两个表达载体共转染，第一载体编码重链衍生的多肽且第二载体编码轻链衍生的多肽。两个载体可含有使得重链及轻链多肽同等表达的相同或不同的可选择标记。或者，单一载体可用于编码重链及轻链两种多肽。在该情况下，通常将轻链置于重链之前以避免毒性游离重链的过量(例如，参见Proudfoot,1986,Nature322:562-65；Kohler,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:2197-9)。重链及轻链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。
在重组表达抗体后，其可使用适于纯化抗体的任一方法来纯化，例如通过色谱(例如，离子交换色谱、亲和色谱(尤其是用于特异性抗原的蛋白A亲和色谱)及分子筛(sizing)柱色谱)、离心、差别性溶解或通过用于纯化蛋白的任一其它标准技术。
用于制备本发明单克隆抗体的所有步骤的全面参考文献是Yokoyama等人，“Production of Monoclonal Antibodies”，Current Protocols in Immunology,Unit2.5,2006。
实施例
实施例1，对CD33的亲和力
在细胞系HL60及HEK293-短尾猴CD33中，CD33结合剂对人类及短尾猴CD33的亲和力KD分别为10nM或更小。
在CD33表达细胞(AML衍生的HL60细胞系、重组HEK293-短尾猴CD33细胞系)上通过FACS斯卡查德分析(Scatchard analysis)(如Brockhoff等人(Cytometry.1994年9月1日；17(1):75-83)所述)来确定针对人类及短尾猴CD33的14种CD33结合剂(如表1中分别列举为1至14号的完全人类单克隆抗体)。简言之，在96孔板中以第一孔中的100-400nM开始制备CD33结合剂稀释物(80μl)，之后进行11个稀释步骤(1:2,40+40μl)。向FACS管中添加50μlCD33结合剂稀释物，向每一FACS管中添加150μl细胞(0.8×106/ml=1.2×105个细胞/管)。轻柔混合各细胞并在冰上培育1小时。其后，添加50μl FITC偶联二级抗体(浓度15μg/ml；小鼠mAb抗人类IgG)，混合并在冰上培育30分钟。其后添加4ml含有0.02%酸的PBS(ph7.2)，使细胞沉淀并重新悬浮于300μl PBS(pH7.2)中并使用BD FACS Canto进行分析。所有实验步骤均为在湿冰上实施，所有CD33结合剂稀释物均在PBS/0.5%BSA+0.02%酸中制得。使用Quantum FITC MESF(Premix)Beads(Bangs Laboratories)实施FACS校正。使用相同FACS参数测量所有试样。在不同CD33结合剂浓度下自MFI值计算结合IgG对游离IgG之比，并将其绘制为斯卡查德图。通过所得数据点绘示回归线，此线的斜率对应于缔合常数的负值。结果列举于表2中。
表2
实施例2：内在化动力学
抗体的内在化是指在与抗体一起培育后靶细胞的细胞表面上的抗体/抗原复合物的量减少。利用表达CD33的HL60细胞系实施内在化测试。在37°C将细胞与固定量的CD33结合剂(10μg/ml的如表1中列举为1至14号的完全人类单克隆抗体)一起培育预定的时间段(0小时、1小时、4小时、24小时)以使抗体/抗原复合物内在化。在指定时间点时，向培育混合物中添加酸以防止进一步内在化。其后，添加固定量的CD33结合剂以使细胞表面上的所有CD33抗原位点饱和。通过FACS分析利用FITC偶联抗人类IgG二级抗体测定结合于细胞表面的CD33结合剂的总量。时间点0小时用于测定表面上的CD33抗体/抗原复合物的初始含量且定义为100%。结果列举于表3中且绘示于图1-3中。
表3
包括林妥珠单抗作为参照抗体。根据公开资料，林妥珠单抗/CD33复合物在林妥珠单抗结合时快速内在化。在4小时培育时段后，仅CD33/林妥珠单抗复合物的初始量的约20%留在细胞表面上。其可证实，出人意料地，与林妥珠单抗相比，本发明的所有14种CD33结合剂的内在化均减速。
实施例3：ADCC活性
内在化速率的减速转变成活体外ADCC活性的增强。为评定减速内在化对CD33结合剂(如表1中列举为1至14号的完全人类单克隆抗体)的ADCC活性的效应，将靶细胞(HL60)与CD33结合剂一起培育0小时、1小时、4小时及24小时。随后，利用IL-2刺激的PBMC作为效应细胞及经抗体涂覆的HL60细胞作为靶细胞实施ADCC分析。对于所有实验而言，使用30μg/ml的mAb浓度。在96孔圆底微量滴定板中在CD33结合剂存在下一式四份或一式三份地共培养效应细胞与靶细胞，其中使用由存于RPMI中的10%人类血清及1%BSA(两者之比为1:1)组成的最终体积200μl/孔的分析培养基。首先，平铺效应细胞(新鲜分离的PBMC细胞，将其置于溶于RPMI中的10%人类血清(100μl/孔)中)，之后平铺靶细胞及CD33结合剂溶液(稀释于溶于RPMI中的1%BSA(50μl)中)。作为对照，在单独分析培养基中培养效应细胞(效应细胞对照)且在单独分析培养基中(自发溶解)或在补充有1%TritonX-100的分析培养基中(最大溶解)培养靶细胞。在37°C将共培养物在湿CO2培育箱中培育3小时。在培育结束时，于室温下通过离心(200×g，即1000rpm；10分钟)自培养基移出培育细胞。将无细胞的上清液(100μl/孔)转移至96孔平底板的相应孔中。为测定所述上清液中的LDH活性，向每一孔中添加100μl反应混合物(新鲜混合的250μl催化剂与11.25ml染料溶液)并在室温于黑暗中培育30分钟。随后如下文所述测量吸光度。
使用细胞毒性检测试剂盒(LDH；Roche11644793001)测量ADCC活性。细胞毒性的检测基于自质膜受损细胞释放的LDH酶活性的测量。释放至培养物上清液中的LDH将试剂盒的四唑盐还原为甲(formazan)。于490nm下针对650nm的参照波长在ELISA板读数器中测量甲染料的最大吸收。为测定细胞介导的细胞毒性百分比，计算一式四份或一式三份的平均吸光度并减去背景。将所述校正值代入以下方程中以计算ADCC(%)：
(效应/靶细胞混合物-效应细胞对照-自发释放)除以(最大释放-自发释放)
将时间点0小时(无靶细胞的抗体预培育)时的ADCC活性定义为100%ADCC活性。相对于时间点0小时计算抗体预培育的不同时间点的ADCC活性并表示为相对细胞毒性(%)。
CD33结合剂与林妥珠单抗相比的减速内在化产生与林妥珠单抗相比增强的ADCC活性。总之，减速内在化导致ADCC活性增强。所述CD33结合剂的内在化与CD33结合剂的ADCC活性呈负相关，其可指示关于所述CD33结合剂的临床活性的优势。针对此实验中的内在化动力学的结果绘示于图4中且针对ADCC活性的结果绘示于图5中。
实施例4：表位的测绘(mapping)
通过氢交换质谱(HXMS)测定相对于林妥珠单抗的表位的本文所述CD33结合剂的结合表位。
此方法测定CD33蛋白质的酰胺骨架氢与D2O交换的易感性。利用单独重组CD33蛋白质及添加有CD33结合剂/林妥珠单抗的CD33蛋白质(在此实施例的下文中称作“抗体”)执行所述实验。由此鉴定CD33蛋白质中由于结合抗体而显示显著抗交换保护的区。通过利用胃蛋白酶消化产生的肽测定该方法的分辨率，例如，所得氨基酸序列可大于抗体的实际表位。通过其它对照实验利用使用标准精确质量及HPLC MS/MS技术的未变化试样鉴定所述CD33衍生的肽。
对于蛋白质+抗体试样而言，于室温下将CD33蛋白质及抗体培育15分钟。抗体/CD33的最终摩尔比为2:1。使用LEAP机器人系统(交换板保持在25°C下，试样/淬灭板保持在4°C下)向80μl交换缓冲液(10mM NaH2PO4，存于D2O中，pH=7或10mM NaH2PO4，存于H2O中，pH=7)中添加8μl试样，混合，并于25°C下交换不同时间(15、60、120、240、及600秒)。随后在4°C将80μl此溶液转移至80μl淬灭缓冲液(1M脲，0.1M TCEP-HCl)并混合。随后在4°C将90μl此溶液转移至10μl胃蛋白酶(4mg/ml)并混合。2分钟后，将60μl此溶液注射至Michrom C18捕集柱上。将该柱用H2O+0.1%TFA以100μl/分钟洗涤2分钟。随后切换阀并将该柱洗脱于PhenomenexJupiter C5柱(1.0×50mm，5μm，300A)上。流动相A是水/乙腈/TFA(99/0.95/0.05)且流动相B是乙腈/水/TFA(95/4.95/0.05)。流速是100μl/分钟。梯度是：0分钟(0%B)、6分钟(40%B)、7分钟(40%B)、8分钟(90%B)、10分钟(90%B)、11分钟(0%B)。LEAP系统将流动相预冷却至4°C并亦维持捕集柱及分析柱在4°C。对于MS实验(用于定量与D2O缓冲液的交换)而言，于60,000分辨率下使用300-2000的单次扫描方法达14分钟。对于MS/MS实验(用于鉴定与H2O缓冲液交换的肽)而言，使用7次扫描的方法达14分钟。第一次扫描是30,000分辨率下300-2000的全范围扫描。随后的扫描是自第1次扫描的6种最强离子的CID扫描。隔离宽度是1.5amu，碰撞能量是35V，活化时间是30msec。使用片段数据及程序Proteome Discoverer(Thermo)鉴定胃蛋白酶肽。使用计算交换肽的平均质量的内部程序分析所鉴定的肽。
所有CD33结合剂均保护具有氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqID No:141)(表4)的相同肽片段。由本文所述CD33结合剂保护的CD33的序列与通过结合林妥珠单抗保护的CD33的肽序列(MDPNFWLQVQE,SeqID No:142)不同且不重迭。在使用SIGLEC-5的晶体结构的计算机建模中，与CD33同源的SIGLEC家族成员揭示蛋白质的近端结构域中的所有抗体的结合表位，其中林妥珠单抗的结合表位不同于本文所述CD33结合剂的结合表位。总之，本专利申请案中阐述的CD33结合剂与林妥珠单抗结合不同表位。
编号 纯系ID编号 CD33表位
1 280-03-08 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
2 280-21-09 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
3 280-29-12 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
4 280-31-01 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
5 280-31-01(mut) FFHPIPYYDKNSPVHGYW
6 280-34-02 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
7 280-50-01 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
8 280-50-01(mut) FFHPIPYYDKNSPVHGYW
9 280-61-07 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
10 283-03-03 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
11 283-05-01 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
12 283-07-03 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
13 283-11-03 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
14 283-14-01 FFHPIPYYDKNSPVHGYW
15 林妥珠单抗 MDPNFWLQVQE
表4

Claims (49)

1.一种结合人类CD33的CD33结合剂，该CD33结合剂为特异性结合人类CD33的氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqID No:141)内的表位的抗体或抗体衍生物，其中所述CD33结合剂选自
包含SeqID No:1的CDR1、SeqID No:15的CDR2、SeqID No:29的CDR3、SeqID No:43的CDR4、SeqID No:57的CDR5及SeqID No:71的CDR6的抗体，
包含SeqID No:2的CDR1、SeqID No:16的CDR2、SeqID No:30的CDR3、SeqID No:44的CDR4、SeqID No:58的CDR5及SeqID No:72的CDR6的抗体，
包含SeqID No:3的CDR1、SeqID No:17的CDR2、SeqID No:31的CDR3、SeqID No:45的CDR4、SeqID No:59的CDR5及SeqID No:73的CDR6的抗体，
包含SeqID No:4的CDR1、SeqID No:18的CDR2、SeqID No:32的CDR3、SeqID No:46的CDR4、SeqID No:60的CDR5及SeqID No:74的CDR6的抗体，
包含SeqID No:5的CDR1、SeqID No:19的CDR2、SeqID No:33的CDR3、SeqID No:47的CDR4、SeqID No:61的CDR5及SeqID No:75的CDR6的抗体，
包含SeqID No:6的CDR1、SeqID No:20的CDR2、SeqID No:34的CDR3、SeqID No:48的CDR4、SeqID No:62的CDR5及SeqID No:76的CDR6的抗体，
包含SeqID No:7的CDR1、SeqID No:21的CDR2、SeqID No:35的CDR3、SeqID No:49的CDR4、SeqID No:63的CDR5及SeqID No:77的CDR6的抗体，
包含SeqID No:8的CDR1、SeqID No:22的CDR2、SeqID No:36的CDR3、SeqID No:50的CDR4、SeqID No:64的CDR5及SeqID No:78的CDR6的抗体，
包含SeqID No:9的CDR1、SeqID No:23的CDR2、SeqID No:37的CDR3、SeqID No:51的CDR4、SeqID No:65的CDR5及SeqID No:79的CDR6的抗体，
包含SeqID No:10的CDR1、SeqID No:24的CDR2、SeqID No:38的CDR3、SeqID No:52的CDR4、SeqID No:66的CDR5及SeqID No:80的CDR6的抗体，
包含SeqID No:11的CDR1、SeqID No:25的CDR2、SeqID No:39的CDR3、SeqID No:53的CDR4、SeqID No:67的CDR5及SeqID No:81的CDR6的抗体，
包含SeqID No:12的CDR1、SeqID No:26的CDR2、SeqID No:40的CDR3、SeqID No:54的CDR4、SeqID No:68的CDR5及SeqID No:82的CDR6的抗体，
包含SeqID No:13的CDR1、SeqID No:27的CDR2、SeqID No:41的CDR3、SeqID No:55的CDR4、SeqID No:69的CDR5及SeqID No:83的CDR6的抗体，
包含SeqID No:14的CDR1、SeqID No:28的CDR2、SeqID No:42的CDR3、SeqID No:56的CDR4、SeqID No:70的CDR5及SeqID No:84的CDR6的抗体。
2.一种结合人类CD33的CD33结合剂，该CD33结合剂为特异性结合人类CD33的氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqID No:141)内的表位的抗体或抗体衍生物，其中所述CD33结合剂选自
包含SeqID No:85的重链可变区及SeqID No:99的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:86的重链可变区及SeqID No:100的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:87的重链可变区及SeqID No:101的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:88的重链可变区及SeqID No:102的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:89的重链可变区及SeqID No:103的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:90的重链可变区及SeqID No:104的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:91的重链可变区及SeqID No:105的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:92的重链可变区及SeqID No:106的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:93的重链可变区及SeqID No:107的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:94的重链可变区及SeqID No:108的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:95的重链可变区及SeqID No:109的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:96的重链可变区及SeqID No:110的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:97的重链可变区及SeqID No:111的轻链可变区的抗体，
包含SeqID No:98的重链可变区及SeqID No:112的轻链可变区的抗体。
3.一种结合人类CD33的CD33结合剂，该CD33结合剂为特异性结合人类CD33的氨基酸序列FFHPIPYYDKNSPVHGYW(SeqID No:141)内的表位的抗体或抗体衍生物，其中所述CD33结合剂选自
包含SeqID No:113的重链及SeqID No:127的轻链的抗体，
包含SeqID No:114的重链及SeqID No:128的轻链的抗体，
包含SeqID No:115的重链及SeqID No:129的轻链的抗体，
包含SeqID No:116的重链及SeqID No:130的轻链的抗体，
包含SeqID No:117的重链及SeqID No:131的轻链的抗体，
包含SeqID No:118的重链及SeqID No:132的轻链的抗体，
包含SeqID No:119的重链及SeqID No:133的轻链的抗体，
包含SeqID No:120的重链及SeqID No:134的轻链的抗体，
包含SeqID No:121的重链及SeqID No:135的轻链的抗体，
包含SeqID No:122的重链及SeqID No:136的轻链的抗体，
包含SeqID No:123的重链及SeqID No:137的轻链的抗体，
包含SeqID No:124的重链及SeqID No:138的轻链的抗体，
包含SeqID No:125的重链及SeqID No:139的轻链的抗体，
包含SeqID No:126的重链及SeqID No:140的轻链的抗体。
4.如权利要求1的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少30％保留于HL60细胞的细胞表面上。
5.如权利要求2的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少30％保留于HL60细胞的细胞表面上。
6.如权利要求3的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少30％保留于HL60细胞的细胞表面上。
7.如权利要求1的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少40％保留于HL60细胞表面上。
8.如权利要求2的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少40％保留于HL60细胞表面上。
9.如权利要求3的CD33结合剂，其中所述CD33结合剂的内在化动力学使得在培育后4小时所述CD33结合剂的初始量的至少40％保留于HL60细胞表面上。
10.如权利要求1的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
11.如权利要求2的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
12.如权利要求3的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
13.如权利要求4的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
14.如权利要求5的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
15.如权利要求6的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
16.如权利要求7的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
17.如权利要求8的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
18.如权利要求9的CD33结合剂，其中该CD33结合剂对人类CD33及短尾猴CD33二者具有KD小于或等于10nM的亲和力。
19.如权利要求1-18中任一项的CD33结合剂，其中该CD33结合剂是人类化结合剂。
20.如权利要求1-18中任一项的CD33结合剂，其中该CD33结合剂是完全人类结合剂。
21.如权利要求1-18中任一项的CD33结合剂，其中该CD33结合剂进一步包含效应子功能。
22.如权利要求19的CD33结合剂，其中该CD33结合剂进一步包含效应子功能。
23.如权利要求20的CD33结合剂，其中该CD33结合剂进一步包含效应子功能。
24.如权利要求21的CD33结合剂，其中该效应子功能由Fc结构域介导。
25.如权利要求22的CD33结合剂，其中该效应子功能由Fc结构域介导。
26.如权利要求23的CD33结合剂，其中该效应子功能由Fc结构域介导。
27.如权利要求21的CD33结合剂，其中该CD33结合剂在该Fc结构域中包含一或多个调节该Fc结构域功能的突变。
28.如权利要求22的CD33结合剂，其中该CD33结合剂在该Fc结构域中包含一或多个调节该Fc结构域功能的突变。
29.如权利要求23的CD33结合剂，其中该CD33结合剂在该Fc结构域中包含一或多个调节该Fc结构域功能的突变。
30.如权利要求27的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少10％。
31.如权利要求28的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少10％。
32.如权利要求29的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少10％。
33.如权利要求30的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少50％。
34.如权利要求31的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少50％。
35.如权利要求32的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少50％。
36.如权利要求33的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少100％。
37.如权利要求34的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少100％。
38.如权利要求35的CD33结合剂，其中该Fc结构域功能的调节是ADCC增强至少100％。
39.如权利要求3的CD33结合剂，其中该CD33结合剂在该Fc结构域中包含一或多个调节该Fc结构域功能的突变，该Fc结构域中的突变位于一或多个位置，所述位置选自根据Kabat EU编号索引的位置332及/或239及/或236的氨基酸。
40.如权利要求39的CD33结合剂，其中该Fc结构域中的突变是位置239及332的取代的组合。
41.如权利要求40的CD33结合剂，其中该Fc结构域中的突变是S239D/I332E。
42.一种DNA分子，其包含编码如前述权利要求中任一项的CD33结合剂。
43.一种表达载体，其含有如权利要求42的DNA分子。
44.一种宿主细胞，其携带一或多种如权利要求43的载体。
45.一种生产如权利要求1至41中任一项的CD33结合剂的方法，其包括用一或多种如权利要求43的载体转染宿主细胞、培养该宿主细胞及回收并纯化该抗体分子。
46.一种药物组合物，其包含作为活性成份的一或多种如权利要求1至41中任一项的CD33结合剂及至少一种生理上可接受的载剂。
47.如权利要求46的药物组合物，其进一步包含一或多种其它治疗剂。
48.如权利要求46至47中任一项的药物组合物，其用于清除表面上表达CD33的细胞。
49.如权利要求1至41中任一项的CD33结合剂或如权利要求46至47中任一项的药物组合物在制备用于清除患者中表达CD33的髓系细胞的方法的药物中的用途，所述方法包括向所述患者给予一或多种如权利要求1至41中任一项的CD33结合剂或如权利要求46至47中任一项的药物组合物。
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Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA112062C2 (uk) 2010-10-04 2016-07-25 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Cd33-зв'язувальний агент
KR102037541B1 (ko) 2011-10-28 2019-10-29 테바 파마슈티컬즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 폴리펩티드 구축물 및 이의 용도
ES2924722T3 (es) 2012-05-18 2022-10-10 Aptevo Res & Development Llc Unión de inmunofusión de scFv biespecífico (BIf) a CD123 y CD3
US20130309223A1 (en) * 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
CN104936977B (zh) * 2012-10-24 2019-10-08 开普敦大学 微管修饰化合物
MY175418A (en) * 2013-03-13 2020-06-24 Sanofi Sa Compositions comprising anti-cd38 antibodies and carfilzomib
HUE048842T2 (hu) 2013-07-05 2020-08-28 H Lee Moffitt Cancer Ct & Res Oldható CD33 a Myelodysplasiás szindrómák (MDSZ) kezelésére
AR097648A1 (es) 2013-09-13 2016-04-06 Amgen Inc Combinación de factores epigenéticos y compuestos biespecíficos que tienen como diana cd33 y cd3 en el tratamiento de leucemia mieloide
JP2016536361A (ja) * 2013-11-06 2016-11-24 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｄ３３抗体及び脱メチル剤を含む医薬配合物
AU2014362238A1 (en) * 2013-12-13 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-CD33 antibodies and immunoconjugates
US9212225B1 (en) 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
EP3302555A4 (en) 2015-05-29 2018-07-11 Amphivena Therapeutics, Inc. Methods of using bispecific cd33 and cd3 binding proteins
WO2016201389A2 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
CA2988982A1 (en) * 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
US10590198B2 (en) 2015-08-28 2020-03-17 Alector Llc Anti-siglec-7 antibodies and methods of use thereof
US11027021B2 (en) 2016-03-15 2021-06-08 Seagen Inc. Combinations of PBD-based antibody drug conjugates with Bcl-2 inhibitors
US11110179B2 (en) 2016-06-03 2021-09-07 Seagen Inc. Combination of CD33 antibody drug conjugates with chemotherapeutic agents
EP3469001A4 (en) 2016-06-09 2020-05-06 Seattle Genetics, Inc. COMBINATIONS OF PBD-BASED ANTIBODY CONJUGATES WITH FLT3 INHIBITORS
EP3515491A4 (en) 2016-09-21 2020-09-16 Aptevo Research and Development LLC CD123 BINDING PROTEINS AND RELATED COMPOSITIONS AND PROCEDURES
CA3045466A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
CN106834300B (zh) * 2017-03-06 2019-12-31 李斯文 一种抗cd33单链抗体及光敏剂复合物及其制备方法
CA3069558A1 (en) * 2017-07-09 2019-01-17 Biosight Ltd. Combination cancer therapy
KR20200033798A (ko) 2017-08-03 2020-03-30 알렉터 엘엘씨 항-cd33 항체 및 이의 이용 방법
BR112019022752A2 (pt) 2017-08-03 2020-05-19 Alector Llc anticorpos anti-trem2 e métodos de uso dos mesmos
US20210179710A1 (en) * 2018-01-08 2021-06-17 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Combination immunotherapy and chemotherapy for the treatment of a hematological malignancy
EP3740507A4 (en) 2018-01-15 2022-08-24 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. SINGLE DOMAIN ANTIBODIES AND VARIANTS THEREOF AGAINST PD-1
PE20220278A1 (es) 2018-02-08 2022-02-25 Dragonfly Therapeutics Inc Dominios variables de anticuerpos que se dirigen al receptor nkg2d
MX2020008683A (es) * 2018-02-20 2020-12-07 Dragonfly Therapeutics Inc Dominios variables de anticuerpo que se dirigen a cd33 y sus usos.
GB201806084D0 (en) * 2018-04-13 2018-05-30 Berlin Chemie Ag Antibodies
JOP20190116A1 (ar) 2018-05-24 2019-11-24 Janssen Biotech Inc الأجسام المضادة لتكتل التمايز 33 (cd33)، والأجسام المضادة ثنائية النوعية لتكتل التمايز 33 (cd33)/تكتل التمايز 3 (cd3) واستخداماتها
BR112020024919A2 (pt) 2018-06-08 2021-03-09 Alector Llc Anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, métodos de produção de um anticorpo e de prevenção, redução do risco ou tratamento de câncer e composição farmacêutica
SG11202101552SA (en) 2018-08-31 2021-03-30 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
AU2019337759A1 (en) * 2018-09-10 2021-03-11 Legend Biotech Ireland Limited Single-domain antibodies against CD33 and constructs thereof
JP2022501319A (ja) * 2018-09-25 2022-01-06 アカデミア シニカAcademia Sinica 抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体、それを備える薬学的組成物及びその使用
AU2021345124A1 (en) 2020-09-16 2023-03-30 Amgen Inc. Methods for administering therapeutic doses of bispecific T-cell engaging molecules for the treatment of cancer
WO2023081898A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Alector Llc Soluble cd33 as a biomarker for anti-cd33 efficacy
WO2023114499A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Denali Therapeutics Inc. Polypeptide engineering, libraries, and engineered cd98 heavy chain and transferrin receptor binding polypeptides

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1795009A (zh) * 2002-11-07 2006-06-28 伊谬诺金公司 抗－cd33抗体和使用其治疗急性髓性白血病的方法
CN101210048A (zh) * 2006-12-29 2008-07-02 中国医学科学院血液学研究所 用于靶向结合髓系白血病细胞的抗cd33的工程抗体及其表达载体和用途
CN101495516A (zh) * 2005-07-29 2009-07-29 埃朗根-纽伦堡大学 Cd-33特异性的单链免疫毒素及其使用方法

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2036891B (en) 1978-12-05 1983-05-05 Windsor Smith C Change speed gear
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
CH666897A5 (fr) 1983-10-11 1988-08-31 Fidia Spa Fractions d'acide hyaluronique non inflammatoire, procedes et compositions pharmaceutiques.
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
CA1319120C (en) 1985-04-01 1993-06-15 John Henry Kenten Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
EP0247091B1 (en) 1985-11-01 1993-09-29 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
CA2113813C (en) 1991-08-14 2005-04-12 Paula M. Jardieu Immunoglobulin variants for specific fc epsilon receptors
WO1993010260A1 (en) 1991-11-21 1993-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
ZA932523B (en) 1992-04-10 1994-10-08 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against cd33 related surface antigens
US5773001A (en) † 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
AU3968897A (en) 1996-08-02 1998-02-25 Bristol-Myers Squibb Company A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
ATE472599T1 (de) 1997-11-21 2010-07-15 Human Genome Sciences Inc Chemokin alpha-5
BR9908226A (pt) 1998-02-25 2000-10-24 Lexigen Pharm Corp Melhoramento da meia vida de circulação de proteìnas de fusão com base em anticorpo
DK1068241T3 (da) 1998-04-02 2008-02-04 Genentech Inc Antistofvarianter og fragmenter deraf
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
ES2649037T3 (es) 2000-12-12 2018-01-09 Medimmune, Llc Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
CA2495251C (en) 2002-08-14 2018-03-06 Macrogenics, Inc. Fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
AU2003286467B2 (en) 2002-10-15 2009-10-01 Abbvie Biotherapeutics Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
JP2006524039A (ja) 2003-01-09 2006-10-26 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型Ｆｃ領域を含む抗体の同定および作製ならびにその利用法
US20060003412A1 (en) 2003-12-08 2006-01-05 Xencor, Inc. Protein engineering with analogous contact environments
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
EP2471813B1 (en) 2004-07-15 2014-12-31 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20060074225A1 (en) 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
DK1817340T3 (da) 2004-11-12 2012-08-13 Xencor Inc Fc-varianter med ændret binding til fcrn
EP1931709B1 (en) 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
JP2010509234A (ja) 2006-11-02 2010-03-25 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 新生物疾患、自己免疫疾患および炎症性疾患を処置する方法
JP2010524851A (ja) 2007-04-03 2010-07-22 マイクロメット アーゲー 種間特異的結合ドメイン
KR101589759B1 (ko) 2007-04-03 2016-01-29 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 종간 특이적 ｃｄ３―입실론 결합 도메인
PE20090499A1 (es) 2007-08-09 2009-05-18 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
NZ591134A (en) 2008-10-01 2012-08-31 Micromet Ag Cross-species-specific (human and primate) bispecific single chain antibody that binds both cd3 (epsilon) epitope and prostate specific membrane antigen (pmsa)
RU2547600C2 (ru) 2008-10-01 2015-04-10 Эмджен Рисерч (Мьюник) Гмбх Pscaxcd3, cd19xcd3, c-metxcd3, эндосиалинxcd3, epcamxcd3, igf-1rxcd3 или fap-альфаxcd3 биспецифическое одноцепочечное антитело с межвидовой специфичностью
US10981998B2 (en) 2008-10-01 2021-04-20 Amgen Research (Munich) Gmbh Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
BR112012022044A2 (pt) 2010-03-24 2020-08-25 Genentech Inc ''anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica,uso do anticorpo,método de tratamento,anticorpo biespecifico isolado e célula hospedeira''.
BR112012028326A2 (pt) 2010-05-06 2017-03-21 Novartis Ag anticorpo multivalente isolado, anticorpos biparatópicos isolados, ácido nucleico, vetor, composição farmacêutica, método de obtenção dos referidos anticorpos, bem como uso do dos mesmos
UA112062C2 (uk) 2010-10-04 2016-07-25 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Cd33-зв'язувальний агент
WO2014029752A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Glaxo Group Limited Anti lrp6 antibodies

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1795009A (zh) * 2002-11-07 2006-06-28 伊谬诺金公司 抗－cd33抗体和使用其治疗急性髓性白血病的方法
CN101495516A (zh) * 2005-07-29 2009-07-29 埃朗根-纽伦堡大学 Cd-33特异性的单链免疫毒素及其使用方法
CN101210048A (zh) * 2006-12-29 2008-07-02 中国医学科学院血液学研究所 用于靶向结合髓系白血病细胞的抗cd33的工程抗体及其表达载体和用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Biological and immunological features of humanized M195(anti-CD33) monoclonal antibodies;Caron P.等;《Cancer Research》;19921231;第52卷(第24期);第6761-6767页 *
Engineered humanized dimeric forms of IgG are more effective antibodies;Caron P.等;《Journal of Experimental Medicine》;19920101;第176卷(第4期);第1191-1195页 *

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