BR112020024919A2

BR112020024919A2 - Anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, métodos de produção de um anticorpo e de prevenção, redução do risco ou tratamento de câncer e composição farmacêutica

Info

Publication number: BR112020024919A2
Application number: BR112020024919-0A
Authority: BR
Inventors: Patricia Culp; Seung-Joo Lee; Helen Lam; Wei-Hsien Ho; Arnon Rosenthal
Original assignee: Alector Llc
Priority date: 2018-06-08
Filing date: 2019-06-07
Publication date: 2021-03-09
Also published as: JP7382970B2; AU2019282778A1; CN112512638A; EA202092595A1; CA3100626A1; WO2019236965A1; US20210246204A1; JP2021526794A; EP3801767A1; MA52764A; IL279227A; KR20210030341A; MX2020013172A

Abstract

anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, métodos de produção de um anticorpo e de prevenção, redução do risco ou tratamento de câncer e composição farmacêutica. a presente divulgação refere-se, de modo geral, a composições que incluem anticorpos, por exemplo, anticorpos monoclonais, quiméricos, humanizados, fragmentos de anticorpo, etc., que se ligam especificamente a um ou mais epítopos em uma proteína siglec-7, por exemplo, siglec-7 humana ou uma siglec-7 de mamífero, e que possuem características funcionais aprimoradas e/ou intensificadas, e ao uso dessas composições na prevenção, redução do risco ou tratamento de um indivíduo em necessidade.

Description

“ANTICORPOS, ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS DE PRODUÇÃO DE UM ANTICORPO E DE PREVENÇÃO, REDUÇÃO DO RISCO OU TRATAMENTO DE CÂNCER E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA” REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. Nº 62/682,439, depositado em 8 de junho de 2018, que é incorporado a este documento por referência em sua totalidade.

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CAMPO DA INVENÇÃO

[0003] A presente divulgação refere-se a anticorpos anti-Siglec-7 e usos terapêuticos de tais anticorpos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0004] Lectina-7 semelhante a Ig de ligação ao ácido siálico (Siglec- 7), é uma proteína transmembrana tipo 1, semelhante a imunoglobulina, expressa em células imunes e hematopoiéticas, incluindo células mieloides imaturas e maduras, como monócitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, mastócitos e células da microglia, bem como células linfóides, como células natural killer e subconjuntos de células T (Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7: 255–266; Angata e Varki (2000) Glycobiology 10: 4: 431-438, Nicoll et al. (1999) JBC 274: 48: 34089-34095; Falco et al. (1999) J. Exp. Med. 190: 793-802).

[0005] Siglec-7 contém um domínio semelhante a V extracelular N- terminal semelhante a Ig (semelhante a imunoglobulina), dois domínios de conjuntos C2 semelhantes a Ig, bem como um motivo ITIM de consenso e um motivo ITIM distal de membrana não conforme em seu domínio citoplasmático. Siglec-7 demonstrou ligar-se aos glóbulos vermelhos de uma forma dependente do ácido siálico devido à perda de ligação após o tratamento com sialidase. A ligação é pensada para ser mediada por ligações de ácido siálico 2-3 ou 2-6 (Nicoll et al. (1999) JBC 274: 48: 34089-34095; Angata e Varki (2000) Glycobiology 10:4: 431-438). Uma investigação posterior revelou que Siglec-7 se liga mais potentemente aos resíduos de disialil 2-8 com afinidade de 10 nM e demonstra maior afinidade para os resíduos de sialil 2-6 ramificados em comparação com os ácidos siálicos 2-3 ou 2-6 terminais (Yamaji (2002) J. Biol. Chem. 277: 8 6324-6332). Ligantes de Siglec-7in vivo são expressos em gangliosídeos da série b, como GD2, GD3 e GT1b, que podem ser encontrados em células do sistema nervoso central, células de melanoma e subconjuntos de células T (Urmacher et al. (1989) Am. J. Dermatopathol. 11: 577-581, Kniep et al. (1993) Blood 82: 1776-1786). A estrutura cristalina de alta resolução do domínio semelhante a Ig de configuração V N-terminal de Siglec-7 sugere que a especificidade de ligação ao ligante dos membros da família Siglec reside na alça C-C' variável (Alphey et al. (2003) J. Biol. Chem 278:5 3372-3377).

[0006] Vários estudos indicam um papel inibidor para Siglec-7 em função de células natural killer, regulação da sinalização do receptor de células T e atenuação da sinalização em DCs (Crocker et al., (2012) Ann. NY Acad. Sci. 1253, 102– 111; Pillai et al., (2012) Annu. Rev. Immunol. 30, 357-392; von Gunten e Bochner (2008) Ann. NY Acad. Sci. 1143, 61-82; Ikehara et al. (2004) J Biol. Chem. 279: 41 43117-43125; Nicoll et al. (2003) Eur. J. Imm. 33:6:1642-1648; Hudak et al. (2013) Nat. Chem. Biol.; Bax et al. (2007) J. Imm 179: 12: 8216-8224; Lock et al. (2004) Immunobiology 209: 1-2:199-207). Estudos funcionais em células natural killer demonstraram que as células tumorais que expressam ligantes de ácido siálico que se ligam a Siglec-7 inibem a ativação de células NK e a eliminação de células tumorais. Muitos tumores humanos regulam positivamente os ligantes de ácido siálico, o que permite a evasão imunológica e a progressão do câncer ( Jandus et al. (2014) J. Clinic. Invest. 124:4: 1810-1820). Além disso, Hudak et al.realizaram engenharia de glicocálice e mostraram que células revestidas com glicopolímeros de sialosídeo sintéticos estavam protegidas da citotoxicidade de NK. É proposto que a regulação positiva do ácido siálico em tumores facilita um estado de "super self" que inibe fortemente a imunovigilância de células natural killer (Macauley e Paulson (2014) Nat. Chem. Biol. 10: 1: 7-8).

[0007] Não há homólogo de camundongo aparente de Siglec-7; no entanto, o Siglec-E de camundongo é 53% semelhante, portanto, o Siglec relacionado mais próximo. Em camundongos, a inativação genética de Siglec-E não leva a anormalidades óbvias de desenvolvimento, histológicas ou comportamentais; e camundongos deficientes em Siglec-E se reproduzem normalmente, indicando que Siglec-E não é um gene essencial e que sua função pode ser limitada à imunidade inata (McMillan et al. (2013) Blood 121: 11: 2084- 2094). Após o desafio de camundongos deficientes em Siglec-E com aerossol LPS, foi demonstrado um aumento no recrutamento de neutrófilos no pulmão, que pode ser revertido pelo bloqueio do CD11b 2-integrina. Demonstrou-se que os neutrófilos deficientes em Siglec-E possui fosforilação aumentada de Syk e p38 MAPK de uma maneira dependente de CD11b. Estes dados sugerem que o Siglec-E funciona para suprimir o recrutamento de neutrófilos em um modelo de inflamação pulmonar aguda (McMillan et al. (2013) Blood 121:11: 2084-2094).

[0008] Em oncologia, Siglec-7 foi sugerido como um alvo terapêutico para leucemia mielóide aguda e crônica, pois a reticulação Siglec-7 inibiu a proliferação celular (Vitale et al. (1999) PNAS 96: 15091-15096; Vitale et al. (2001) PNAS 98:10: 5764-5769). A atividade de Siglec-7 também demonstrou inibir a proliferação celular induzida por citocinas (Orr et al. (2007) J. Biol. Chem. 282: 3418-3422).

[0009] Os anticorpos para Siglec-7 foram descritos em, por exemplo, WO2011038301, Jandus et al. (2014) J. Clinical Invest. 124: 4: 1810-1820, Varchetta et al. (2012) PLOS One 7: 9: e45821et al. (2012). Falco et al. (1999) J. Exp. Med. 190: 793-802, Nicoll et al (1999) JBC 274:48: 34089-34095, Nicoll et al. (2003) Eur. J. Imm. 33: 1642–1648. No entanto, esses anticorpos não apresentam as características funcionais necessárias para um anticorpo terapêutico.

[0010] Consequentemente, há uma necessidade de anticorpos terapêuticos que se liguem especificamente a Siglec-7 e reduzam a expressão de Siglec-7 na superfície celular, reduzam as interações entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7 e/ou reduzam um ou mais atividades de Siglec- 7 a fim de tratar uma ou mais doenças, distúrbios e condições associadas à atividade indesejada do Siglec-7.

[0011] Todas as referências citadas neste documento, incluindo patentes e pedidos de patente são incorporadas neste documento a título de referência em sua totalidade.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0012] A presente divulgação é geralmente direcionada a composições que incluem anticorpos, por exemplo, anticorpos monoclonais, quiméricos, humanizados, fragmentos de anticorpos, etc., que se ligam especificamente à Siglec-7 humana e aos métodos de uso de tais composições.

[0013] Certos aspectos da presente divulgação são baseados, pelo menos em parte, na identificação de anticorpos anti-Siglec-7 com características funcionais melhoradas e/ou aumentadas (por exemplo, em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência SEQ ID NO: 62). Certos aspectos da presente divulgação são baseados, pelo menos em parte, na identificação de anticorpos anti-Siglec-7 com características funcionais melhoradas e/ou aprimoradas (por exemplo, em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência SEQ ID NO: 50), incluindo, por exemplo, capacidades melhoradas e/ou aprimoradas de diminuir os níveis de Siglec-7 na superfície celular de células imunes primárias humanas e/ou cinética de ligação melhorada e/ou aprimorada. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm um KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 100 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação têm um KD para Siglec-7 humano que é de pelo menos 5,3 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 possuindo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[0014] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação reduzem os níveis de superfície celular de Siglec-7 in vitro com um EC50 que é pelo menos cerca de 50% mais baixo do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação reduzem os níveis da superfície celular de Siglec-7 in vitro com um EC50 que é pelo menos cerca de 10% menor que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, conforme medido por citometria de fluxo. Em algumas modalidades, o anticorpo é pelo menos 4,2 vezes mais potente do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 1,4 vezes mais potente do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, conforme medido por citometria de fluxo. Vantajosamente, os anticorpos anti-Siglec-7 diminuem os níveis celulares de Siglec-7 in vitro com uma concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) que varia de cerca de 33,2 pM a cerca de 25,4 nM, ligam-se a células humanas (tais como células dendríticas primárias humanas), e possui uma constante de dissociação (KD) para Siglec-7 humana que varia de cerca de 124 nM a cerca de 1 pM.

[0015] Por conseguinte, em um aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende: uma HVR-

H1 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula I: GYAFTX1X2WMN (SEQ ID NO: 6), em queX1 é E, M, G, ou A, e X2 é T, A, ou Y; uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula II: RIFPGX 1GHTN (SEQ ID NO: 9), em que X1 é L ou Y; e uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10).

[0016] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia leve compreende: uma HVR-L1 compreendendo um sequência de acordo com a Fórmula III: RX1SX2DX3NTYLN (SEQ ID NO: 15), em que X1 é G ou A, X2 é Q ou E, e X3 é I, T, ou A; uma HVR-L2 compreendendo um sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16); e uma HVR-L3 compreendendo um sequência de acordo com a Fórmula IV: QX 1GX2X3X4PWT (SEQ ID NO: 24), em que X1 é Q ou G, X2 é N ou G, X3 é L, T, V, ou I, e X4 é L ou K; e em que o anticorpo não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo um sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo um sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo um sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

[0017] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende: uma HVR-H1 que compreende sequência de acordo com a Fórmula I: GYAFTX1X2WMN (SEQ ID NO: 6), em queX1 é E, M, G, ou A, e X2 é T, A, ou Y; uma HVR-H2 compreende sequência de acordo com a Fórmula II: RIFPGX1GHTN (SEQ ID NO: 9), em que X1 é L ou Y; e uma HVR-H3 compreende sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10); e a região variável de cadeia leve compreende: uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula III: RX 1SX2DX3NTYLN (SEQ ID NO: 15), em que X1 é G ou A, X2 é Q ou E, e X3 é I, T, ou A; uma HVR- L2 compreendendo uma sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16); e uma HVR- L3 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula IV:

QX1GX2X3X4PWT (SEQ ID NO: 24), em que X1 é Q ou G, X2 é N ou G, X3 é L, T, V, ou I, e X4 é L ou K.

[0018] Em outro aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende: uma HVR-H1 compreendendo um sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 1-5; uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 7-8; e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; e a região variável de cadeia leve compreende: uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 11-14; uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; e uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 17-23. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 compreende a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTMAWMN (SEQ ID NO: 2), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGYGHTN (SEQ ID NO: 8), a HVR -H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNLLPWT (SEQ ID NO: 17). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 compreende a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR -H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDTNTYLN (SEQ ID NO: 12), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20). Em algumas modalidades, um anticorpo anti- Siglec-7 compreende a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos

GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR -H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 compreende a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR -H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[0019] Outros aspectos da presente divulgação referem-se a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende CDRs de Kabat; e/ou a região variável de cadeia leve compreende CDRs de Kabat. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR-H1 compreendendo a sequência de GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma CDR-H2 compreendendo a sequência de RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7); e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende um CDR-L1 compreendendo a sequência de RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), um CDR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16); e um CDR-L3 compreendendo a sequência de QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDR-H1 compreendendo a sequência de GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma CDR-H2 compreendendo a sequência de RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7); e uma CDR-H3 compreendendo a sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10); e a região variável de cadeia leve compreende uma CDR-L1 compreendendo a sequência de RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma CDR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16); e uma CDR-L3 compreendendo a sequência de QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[0020] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma, duas, três ou quatro regiões estruturais selecionadas de VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4, em que: VH FR1 compreende a sequência de QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 25); VH FR2 compreende uma sequência de acordo com a Fórmula V: WVRQAX1GQX2LEWIG (SEQ ID NO: 29), em que X1 é P ou R, e X2 é G ou R; VH FR3 a sequência de YAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 30); e VH FR4 compreende a sequência WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31); e/ou a cadeia leve compreende uma, duas, três ou quatro regiões framework selecionadas de VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4, em que: VL FR1 compreende a sequência de DIQMTQSPSSLSASVG DRVTITC (SEQ ID NO: 32); VL FR2 compreende a sequência de WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 33); VL FR3 compreende a sequência de GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 34); e VL FR4 compreende a sequência de FGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 35). Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a região variável de cadeia pesada compreende uma, duas, três ou quatro regiões estruturais selecionadas de VH FR1, VH FR2, VH FR3 e VH FR4, em que: VH FR1 compreende a sequência de SEQ ID NO: 25; VH FR2 compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 26-28; VH FR3 compreende a sequência de SEQ ID NO: 30; e VH FR4 compreende a sequência de SEQ ID NO: 31; e/ou a cadeia leve compreende uma, duas, três ou quatro regiões framework selecionadas de VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4, em que: VL FR1 compreende a sequência de SEQ ID NO: 32; VL FR2 compreende a sequência de SEQ ID NO: 33; VL FR3 compreende a sequência de SEQ ID NO: 34; e VL FR4 compreende a sequência de SEQ ID NO: 35.

[0021] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 36-48; e/ou uma região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 49-60. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60; ou uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

[0022] Em um aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o aminoácido sequência da SEQ ID NO: 52. Em um aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o aminoácido sequência da SEQ ID NO:

55. Em um aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o aminoácido sequência da SEQ ID NO: 60. Em um aspecto, a presente divulgação se refere a um anticorpo que se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o aminoácido sequência da SEQ ID NO: 60.

[0023] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo é da classe IgG, da classe IgM ou da classe IgA. Em algumas modalidades, o anticorpo é da classe IgG e possui um isotipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.

[0024] Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição P331S, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU. Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácido nas posições L234A, L235A e P331S, em que a numeração da posição do resíduo é de acordo com a numeração EU; a região Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição N297A, em que a numeração da posição do resíduo é de acordo com a numeração EU; ou a região Fc compreende uma substituição de aminoácido nas posições S267E e L328F, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU.

[0025] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a proteína Siglec-7 é uma proteína Siglec-7 de primata não humano ou uma proteína humana. Em algumas modalidades, a proteína Siglec-7 é uma proteína do tipo selvagem. Em algumas modalidades, a proteína Siglec-7 é uma variante que ocorre naturalmente. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, a proteína Siglec-7 é expressa em uma ou mais células selecionadas do grupo que consiste em células dendríticas humanas, macrófagos humanos, monócitos humanos, osteoclastos humanos, neutrófilos humanos, células natural killer (NK) humanas, células T humanas, célula T helper humana, células T citotóxicas humanas, granulócitos humanos e microglia humana.

[0026] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo se liga especificamente a uma proteína Siglec-7 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a uma proteína Siglec-7 humana e não reage de maneira cruzada com um ortólogo ou homólogo de Siglec-7 de outra espécie. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo é um fragmento de anticorpo que se liga a um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos em uma proteína Siglec-7 de primata não humana ou uma proteína Siglec-7 humana. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo é um fragmento de anticorpo que se liga a uma ou mais proteínas humanas selecionadas do grupo que consiste em Siglec-7 humana, uma variante de Siglec-7 humana de ocorrência natural e uma variante da doença de Siglec-7 humana. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo é reticulado a um segundo fragmento de anticorpo que se liga a uma ou mais proteínas humanas selecionadas do grupo consistindo em Siglec-7 humana, uma variante de ocorrência natural de Siglec-7 humana e uma variante de doença de Siglec-7 humana. Em algumas modalidades, o fragmento é um fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv ou scFv.

[0027] Em algumas modalidades que podem ser combinadas a qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo é um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo multivalente, um anticorpo conjugado ou um anticorpo quimérico. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo biespecífico que reconhece um primeiro antígeno e um segundo antígeno. Em algumas modalidades, o primeiro antígeno é Siglec-7 e o segundo antígeno é: um antígeno que facilita o transporte através da barreira hematoencefálica; um antígeno que facilita o transporte através da barreira hematoencefálica selecionada do grupo que consiste em receptor de transferrina (TR), receptor de insulina (HIR), receptor de fator de crescimento semelhante à insulina (IGFR), proteínas 1 e 2 relacionadas ao receptor de lipoproteínas de baixa densidade (LPR-1 e 2), receptor de toxina da difteria, CRM197, um anticorpo de domínio único de llama, TMEM 30(A), um domínio de transdução de proteínas, TAT, Syn-B, penetratina, um peptídeo de poli-arginina, um peptídeo de angiopep e ANG1005; um agente causador de doença selecionado do grupo que consiste em peptídeos ou proteínas causadores de doenças e ácidos nucleicos causadores de doenças, em que os peptídeos ou proteínas causadores de doenças são selecionados do grupo que consiste em beta amiloide, beta amiloide oligomérica, placas beta amiloide, proteína precursora de amiloide ou fragmentos desta, Tau, IAPP, alfa-sinucleína, TDP-43, proteína FUS, C9orf72 (quadro de leitura aberta 72 do cromossomo 9), proteína c9RAN, proteína de príon, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutase, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, corpo de Lewy, fator natriurético atrial, polipeptídeo amiloide das ilhotas, insulina, apolipoproteína AI, amiloide sérico A, super óxido desmutase (SOD), medina, prolactina, transtirretina, lisozima, microglobulina beta 2, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadeia leve de imunoglobulina AL, proteína S-IBM, produtos de tradução não-ATG associados a repetição (RAN), peptídeos de repetição de DiPeptide (DPR), peptídeos de repetição de glicina-alanina (GA), peptídeos de repetição de glicina-prolina (GP), peptídeos de repetição de glicina-arginina (GR), peptídeos de repetição de prolina-alanina (PA), peptídeos de repetição de ubiquitina e prolina-arginina (PR), e os ácidos nucleicos causadores de doenças são o RNA de expansão-repetição anti-sense GGCCCC (G2C4); ligantes e/ou proteínas expressas nas células imunes, em que os ligantes e/ou proteínas selecionados do grupo que consiste em CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor CSF1 e fosfatidilserina; ou uma proteína, lipídeo, polissacarídeo ou glicolipídeo expresso em uma ou mais células tumorais.

[0028] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com quaisquer modalidades anteriores, o anticorpo é usado em combinação com um ou mais anticorpos que se ligam especificamente a um agente causador de doença selecionado do grupo consistindo em peptídeos causadores de doença, proteínas causadoras de doença, beta amiloide, beta amiloide oligomérica, placas beta amiloides, proteína precursora amiloide ou fragmentos desta, Tau, IAPP, alfa-sinucleína, TDP-43, proteína FUS, C9orf72 (quadro de leitura aberto 72 do cromossomo 9), proteína de príon, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutase, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, corpos de Lewy, fator natriurético atrial, polipeptídeo amiloide da ilhota, insulina, apolipoproteína AI, amiloide A sérica, medina, prolactina, transtirretina, lisozima, beta 2 microglobulina, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadeia leve de imunoglobulina AL, super óxido desmutase (SOD), proteína S-IBM, produtos da tradução não-ATG associados à repetição (RAN), peptídeos de repetição de dipeptídeos (DPR), peptídeos de repetição de glicina-alanina (GA), peptídeos de repetição de glicina-prolina (GP), peptídeos de repetição de glicina-arginina (GR), peptídeos de repetição de prolina-alanina (PA), ubiquitina, e peptídeos de repetição de prolina-arginina (PR), e qualquer combinação destes; ou com um ou mais anticorpos que se ligam a uma proteína imunomoduladora selecionada do grupo consistindo em: CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR3, DR5, CD39, CD70, CD73, LAG3, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor de CSF1, fosfatidilserina, ácidos nucleicos causadores de doença, RNA de expansão-repetição GGCCCC (G2C4) antisense, e qualquer combinação destes.

[0029] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo tem uma constante de dissociação (KD) para Siglec-7 humano que é pelo menos 4 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 1 vez menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, em que a KD é determinada por Interferometria de Biocamada. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo possui uma constante de dissociação (KD) para Siglec-7 humana que varia de cerca de 124 nM a cerca de 1 pM, ou menor que cerca de 1 pM, e em que a KD é determinada por Interferometria de Biocamada.

[0030] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo reduz os níveis de Siglec-7 na superfície celular. Em algumas modalidades, a Siglec-7 é expressa na superfície das células dendríticas humanas. Em algumas modalidades, o anticorpo reduz os níveis de Siglec-7 na superfície celular in vitro. Em algumas modalidades, o anticorpo reduz os níveis de Siglec-7 in vitro na superfície celular com uma concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) inferior a 150 pM, conforme medido por citometria de fluxo. Em algumas modalidades, o anticorpo reduz os níveis de superfície celular de Siglec-7 in vitro com um EC50 que é pelo menos 50% menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 10% menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, como medido por citometria de fluxo. Em algumas modalidades, os níveis de superfície celular de Siglec-7 são reduzidos a pelo menos 20%. Em algumas modalidades, o anticorpo é pelo menos 4,2 vezes mais potente do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 1,4 vezes mais potente do que um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, conforme medido por citometria de fluxo.

[0031] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compete com um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado a partir do grupo que consiste em S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB- H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB- H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB- H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes para ligação à Siglec-7.

[0032] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação se liga essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 que um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado a partir do grupo que consiste em S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB- H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB- H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, e S7AB- H8.45.2.

[0033] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a ácidos nucleicos isolados compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica qualquer um dos anticorpos descritos neste documento.

[0034] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a vetores compreendendo qualquer um dos ácidos nucleicos aqui descritos. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor de expressão e/ou um vetor de exibição.

[0035] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a células hospedeiras isoladas compreendendo qualquer um dos ácidos nucleicos ou vetores descritos neste documento.

[0036] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a um método de produção de um anticorpo que se liga a Siglec-7 compreendendo a cultura de qualquer uma das células hospedeiras descritas neste documento, para que o anticorpo seja produzido. Em algumas modalidades, o método compreende ainda a recuperação do anticorpo produzido pela célula.

[0037] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a um anticorpo produzido por qualquer um dos métodos descritos neste documento.

[0038] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a composição farmacêutica compreendendo qualquer um dos anticorpos descritos neste documento e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a presente divulgação refere-se ao uso de qualquer um dos anticorpos descritos neste documento para a preparação de um medicamento.

[0039] Em outro aspecto, a presente divulgação refere-se a um método de prevenção, redução de risco ou tratamento de uma doença, distúrbio ou lesão selecionada do grupo que consiste em demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de taupatia, infecções e câncer, compreendendo a administração a um indivíduo necessitado de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos anticorpos descritos neste documento. Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo consistindo em câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma,

linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfobástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a presente divulgação refere-se ao uso de qualquer um dos anticorpos descritos neste documento para a preparação de um medicamento útil para prevenir, reduzir riscos ou tratar uma doença, distúrbio ou lesão selecionada do grupo que consiste em demência, demência frontotemporal, Doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de taupatia, infecções e câncer. Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou lesão é um câncer. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo consistindo em câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfobástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer expressa níveis aumentados ou altos de ligante de Siglec-7. Em algumas modalidades, o ligante de Siglec-7 é um ou mais dentre ácido siálico ligado a alfa-2,3 e ácido siálico ligado a alfa-2,6, disialogalactosil globosídeo, disialil lactotetraosilceramida e/ou dissialil GalNAc lactotetraoslilceramida. Em algumas modalidades, o câncer possui níveis aumentados ou elevados de infiltração de células NK no tumor.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0040] A FIGURA 1 representa os resultados de um ensaio de citometria de fluxo que mede a ligação de anticorpos Siglec-7 humanizados a células dendríticas derivadas de monócitos humanos primários.

[0041] A FIGURA 2 representa resultados de citometria de fluxo medindo a ligação de anticorpos Siglec-7 humanizados maturados por afinidade a células dendríticas derivadas de monócitos humanos primários.

[0042] A FIGURA 3 representa os resultados de um ensaio de citometria de fluxo medindo os níveis de Siglec-7 na superfície de células dendríticas humanas primárias após o tratamento com anticorpos Siglec-7 maturados por afinidade.

[0043] A FIGURA 4 representa resultados de um ensaio de citometria de fluxo medindo os níveis de Siglec-7 na superfície de células dendríticas humanas primárias após tratamento com diferentes concentrações de anticorpos Siglec-7 contendo diferentes regiões Fc.

[0044] A FIGURA 5A representa resultados de citometria de fluxo medindo os níveis de Siglec-7 humano na superfície de células mieloides em camundongos transgênicos Siglec-7 humanos que foram injetados com anticorpos Siglec-7. A FIGURA 5B representa os resultados da citometria de fluxo medindo os níveis de Siglec-7 humano na superfície de células natural killer (NK) em camundongos transgênicos Siglec-7 humanos que foram injetados com anticorpos Siglec-7.

[0045] A FIGURA 6 mostra os resultados da citometria de fluxo medindo os níveis de Siglec-7 humano na superfície de células CD11b+Gr1+ em circulação em camundongos transgênicos Siglec-7 humanos que foram injetados com anticorpos Siglec-7.

[0046] A FIGURA 7 representa resultados de um ensaio para medir a atividade ADCC de anticorpos Siglec-7.

[0047] A FIGURA 8 representa os resultados de um ensaio CDC na presença de anticorpos Siglec-7.

DESCRIÇÃO DETALHADA Técnicas Gerais

[0048] As técnicas e procedimentos descritos ou referenciados neste documento são geralmente bem compreendidos e comumente empregados usando metodologia convencional por aqueles versados na técnica, tais como, por exemplo, as metodologias amplamente utilizadas descritas em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3ª edição (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); a série Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A

Laboratory Manual, e Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley e Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir e C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd e C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow e D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti e J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); and Cancer: Principles and Practice of Oncology (V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993). Definições

[0049] Conforme usado neste documento, o termo "prevenção" inclui o fornecimento de profilaxia com relação à ocorrência ou recorrência de uma doença, distúrbio ou condição específica em um indivíduo. Um indivíduo pode ser predisposto, suscetível a uma determinada doença, distúrbio ou condição, ou em risco de desenvolver tal doença, distúrbio ou condição, mas ainda não foi diagnosticado com a doença, distúrbio ou condição.

[0050] Conforme usado neste documento, um indivíduo "em risco" de desenvolver uma doença, distúrbio ou condição específica pode ou não ter uma doença ou sintomas da doença detectáveis, e pode ou não ter exibido uma doença ou sintomas detectáveis antes dos métodos de tratamento descritos neste documento. “Em risco” denota que um indivíduo tem um ou mais fatores de risco, que são parâmetros mensuráveis que se correlacionam com o desenvolvimento de uma doença, distúrbio ou condição específica, como conhecido na técnica. Um indivíduo com um ou mais desses fatores de risco tem maior probabilidade de desenvolver uma doença, distúrbio ou condição específica do que um indivíduo sem um ou mais desses fatores de risco.

[0051] Como utilizado neste documento, o termo "tratamento" refere- se à intervenção clínica projetada para alterar o curso natural do indivíduo sendo tratado durante o curso da patologia clínica. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem diminuir a taxa de progressão, melhorar ou diminuir o estado patológico e remissão ou prognóstico aprimorado de uma doença, distúrbio ou condição específica. Um indivíduo é “tratado” com sucesso, por exemplo, se um ou mais sintomas associados a uma doença, distúrbio ou condição específica são mitigados ou eliminados.

[0052] Uma "quantidade eficaz" refere-se a pelo menos uma quantidade eficaz, em doses e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado terapêutico ou profilático desejado. Uma quantidade eficaz pode ser fornecida em uma ou mais administrações. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores como o estado de doença, idade, sexo e peso do indivíduo, e a capacidade dos medicamentos de induzir uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais do anticorpo ou porção de anticorpo são superados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Para uso profilático, resultados benéficos ou desejados incluem resultados tais como a eliminação ou redução do risco, diminuição da gravidade, ou atraso do aparecimento da doença, incluindo sintomas bioquímicos, histológicos e/ou comportamentais da doença, suas complicações e fenótipos patológicos intermediários que se apresentam durante o desenvolvimento da doença. Para uso terapêutico, os resultados benéficos ou desejados incluem resultados clínicos, como redução de um ou mais sintomas resultantes da doença, aumento da qualidade de vida daqueles que sofrem da doença, redução da dose de outros medicamentos necessários para tratar a doença, potencializando o efeito de outro medicamento, como via direcionamento, retardando a progressão da doença e/ou prolongando a sobrevida. Uma quantidade eficaz de droga, composto ou composição farmacêutica é uma quantidade suficiente para realizar o tratamento profilático ou terapêutico, direta ou indiretamente. Como se entende no contexto clínico, uma quantidade eficaz de uma droga, composto ou composição farmacêutica pode ou não ser alcançada em conjunto com outra droga, composto ou composição farmacêutica. Assim, uma "quantidade eficaz" pode ser considerada no contexto da administração de um ou mais agentes terapêuticos e um único agente pode ser considerado como dado em uma quantidade eficaz se, em conjunto com um ou mais outros agentes, um resultado desejável puder ser ou for atingido

[0053] Conforme usado neste documento, a administração "em conjunto" com outro composto ou composição inclui administração simultânea e/ou administração em diferentes momentos. A administração em conjunto também abrange a administração como uma co-formulação ou administração como composições separadas, incluindo em diferentes frequências ou intervalos de dosagem, e usando a mesma via de administração ou diferentes vias de administração.

[0054] Um "indivíduo" para fins de tratamento, prevenção ou redução de risco refere-se a qualquer animal classificado como mamífero, incluindo seres humanos, animais domésticos e de fazenda e zoológico, de esporte ou animais de estimação, como cães, cavalos, coelhos, gado, porcos, hamsters, gerbil, camundongos, furões, ratos, gatos e similares. De preferência, o indivíduo é humano.

[0055] O termo "imunoglobulina" (Ig) é utilizado indistintamente com "anticorpo" neste documento. O termo "anticorpo" é usado neste documento no sentido mais amplo e abrange especificamente anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) formados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos, e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a desejada atividade biológica.

[0056] A unidade de anticorpo de 4 cadeias básica é uma glicoproteína heterotetramérica composta por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. O emparelhamento de uma VH e de uma VL em conjunto forma um único sítio de ligação ao antígeno. Para estrutura e propriedades das diferentes classes de anticorpos, consulte, por exemplo, Basic and Clinical Immunology, 8ª Edição, Daniel P. Sties, Abba I. Terr e Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, página 71 e Capítulo 6.

[0057] A cadeia L de quaisquer espécies de vertebrados pode ser atribuída a um dos dois tipos claramente distintos, chamado kappa (“κ”) e lambda (“λ”), com base nas sequências de aminoácido de seus domínios constantes. Dependendo da sequência de aminoácido do domínio constante de suas cadeias pesadas (CH), as imunoglobulinas podem ser atribuídas a diferentes classes ou isotipos. Existem cinco classes de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, com cadeias pesadas designadas alfa ("α"), delta ("δ"), epsilon ("ε"), gama ("γ") e mu ("μ"), respectivamente. As classes γ e α são ainda divididas em subclasses (isotipos) com base em diferenças relativamente menores na função e sequência de CH, por exemplo: os seres humanos expressam as seguintes subclasses: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, e IgA2. As estruturas de subunidades e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas e geralmente descritas em, por exemplo, Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4a ed. (WB Saunders Co., 2000).

[0058] “Anticorpos nativos" são usualmente glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150,000 daltons, compostas por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Cada cadeia leve está ligada a uma cadeia pesada por uma ligação dissulfeto covalente, enquanto o número de ligações dissulfeto varia entre as cadeias pesadas de diferentes isotipos de imunoglobulina. Cada cadeia pesada e leve tem também pontes de dissulfeto intracadeia espaçadas regularmente. Cada cadeia pesada tem, em uma extremidade, um domínio variável (VH) seguido por um número de domínios constantes. Cada cadeia leve possui um domínio variável em uma extremidade (VL) e um domínio constante na sua outra extremidade; o domínio constante de cadeia leve está alinhado ao primeiro domínio constante de cadeia pesada, e o domínio variável de cadeia leve está alinhado ao domínio variável de cadeia pesada. Acredita-se que os resíduos de aminoácidos específicos formem uma interface entre os domínios variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada.

[0059] Um anticorpo "isolado", como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, é aquele que foi identificado, separado e/ou recuperado de um componente de seu meio de produção (por exemplo, naturalmente ou recombinantemente). De preferência, o polipeptídeo isolado está livre de associação a todos os outros componentes contaminantes do seu meio de produção. Os componentes contaminantes do seu meio de produção, como os resultantes de células transfectadas recombinantes, são materiais que tipicamente interferem nas utilizações diagnósticas, terapêuticas ou de pesquisa para o anticorpo e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteináceos ou não proteináceos. Em modalidades preferidas, o polipeptídeo será purificado (1) até mais de 95% em peso do anticorpo, tal como determinado através de, por exemplo, o método de Lowry, e, em algumas modalidades, até mais de 99% em peso; (2) a um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos da sequência de aminoácidos interna ou N-terminal através da utilização de, por exemplo, um sequenciador de copo giratório, ou (3) até a homogeneidade através de SDS-PAGE sob condições redutoras ou não redutoras usando azul de Coomassie ou, preferencialmente, coloração prata. Anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ dentro de células T recombinantes, visto que pelo menos um componente do meio natural do anticorpo não estará presente. Normalmente, contudo, um polipeptídeo ou anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

[0060] A "região variável" ou "domínio variável" de um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, refere-se aos domínios amino-terminais de cadeia pesada ou leve do anticorpo. Os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve podem ser referidos como "VH" e "VL", respectivamente. Esses domínios geralmente são as partes mais variáveis do anticorpo (em relação a outros anticorpos da mesma classe) e contêm os sítios de ligação a antígenos.

[0061] O termo "variável" refere-se ao fato de que certos segmentos dos domínios variáveis diferem extensivamente em sequência entre os anticorpos, como os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação. O domínio V medeia a ligação ao antígeno e define a especificidade de um anticorpo particular ao seu antígeno específico. No entanto, a variabilidade não é distribuída uniformemente em toda a extensão dos domínios variáveis. Em vez disso, está concentrada em três segmentos denominados regiões hipervariáveis (HVRs), tanto nos domínios variáveis de cadeia leve como nos domínios variáveis de cadeia pesada. As porções mais altamente conservadas dos domínios variáveis são denominadas regiões framework (FR). Os domínios variáveis de cadeias leves e pesadas nativas compreendem cada um quatro regiões FRs, adotando amplamente uma configuração folha-beta, conectada por três HVRs, as quais formam alças que conectam a, e em alguns casos formam parte da, estrutura folha-beta. As HVRs em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas regiões FR e com as HVRs da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de ligação ao antígeno dos anticorpos (consulte Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)). Os domínios constantes não estão envolvidos diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem várias funções efetoras, tais como participação do anticorpo na toxicidade celular dependente de anticorpos.

[0062] O termo “anticorpo monoclonal”, como usado neste documento, refere-se a um anticorpo como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos,isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos, exceto para possíveis mutações de ocorrência natural e/ou modificações pós-translacionais (por exemplo, isomerizações, amidações) que podem estar presentes em menores quantidades. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um ou mais sítios antigênicos. Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal da presente divulgação pode ser um anticorpo biespecífico. Em contraste com preparações de anticorpo policlonal, as quais tipicamente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante nos um ou mais sítios antigênicos. O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método em particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente divulgação podem ser feitos por uma variedade de técnicas, incluindo, por exemplo, tecnologias de exibição de fago (consulte, por exemplo, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5):1073- 1093 (2004); Fellouse, Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 101(34):12467-472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2):119-132 (2004), o método de hibridoma (por exemplo, Kohler e Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª ed. 1988); Hammerling et al., em: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), métodos de DNA recombinante (consulte, por exemplo, Patente U.S. Nº 4,816,567), e tecnologias para a produção de anticorpos humanos ou semelhantes a humanos em animais que têm partes ou todos os loci de imunoglobulina humana ou genes que codificam sequências de imunoglobulina humana (consulte, por exemplo, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); Patente U.S. Nºs 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; e 5,661,016; Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826 (1996); e Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995).

[0063] Os termos "anticorpo completo", "anticorpo intacto" ou "anticorpo inteiro" são usados indistintamente para se referir a um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, em sua forma substancialmente intacta, em oposição a um fragmento de anticorpo. Especificamente, os anticorpos inteiros incluem aqueles com cadeias pesadas e leves, incluindo uma região Fc. Os domínios constantes podem ser domínios constantes de sequência nativa (por exemplo, domínios constantes de sequência nativa humana) ou variantes de sequência de aminoácidos destes. Em alguns casos, o anticorpo intacto pode ter uma ou mais funções efetoras.

[0064] Um "fragmento de anticorpo" compreende uma porção de um anticorpo intacto, de preferência de ligação ao antígeno e/ou à região variável do anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv; diacorpos; anticorpos lineares (consulte Patente US 5,641,870, Exemplo 2; Zapata et al., Protein Eng. 8 (10): 1057-1062 (1995)); moléculas de anticorpos de cadeia única e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.

[0065] A digestão de anticorpos por papaína, como os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, produz dois fragmentos de ligação a antígeno idênticos, chamados fragmentos "Fab" e um fragmento "Fc" residual, uma designação que reflete a capacidade de cristalizar rapidamente. O fragmento Fab consiste de uma cadeia L inteira juntamente com o domínio da região variável de cadeia H (VH), e o primeiro domínio constante de uma cadeia pesada (CH1). Cada fragmento Fab é monovalente em relação à ligação ao antígeno,isto é, ele possui um único sítio de ligação ao antígeno. O tratamento com pepsina de um anticorpo origina um único grande fragmento F(ab')2 que corresponde aproximadamente a dois fragmentos Fab ligados por dissulfureto que possui atividade de ligação ao antígeno diferente e ainda é capaz de ligação cruzada ao antígeno. Os fragmentos Fab' diferem dos fragmentos Fab por possuirem alguns resíduos adicionais no terminal carbóxi do domínio C H1 incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça do anticorpo. Fab'-SH é a designação neste documento para Fab' no qual o(s) resíduo(s) de cisteína dos domínios constantes carregam um grupo tiol livre. Fragmentos de anticorpo F(ab')2 foram originalmente produzidos como pares de fragmentos Fab', os quais têm cisteínas de dobradiça entre eles. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos também são conhecidos.

[0066] O fragmento Fc compreende as porções de terminais carboxi de ambas as cadeias H mantidas juntas por ligações dissulfeto. As funções efetoras de anticorpos são determinadas pelas sequências na região Fc; a região é também reconhecida pelos receptores Fc (FcR) encontrados em determinados tipos de células.

[0067] "Fv" é o fragmento de anticorpo mínimo que contém um sítio de reconhecimento de antígeno e um sítio de ligação. Este fragmento consiste em um dímero de um domínio de região variável de cadeia leve e cadeia pesada em associação estreita, não covalente. A partir da dobra destes dois domínios emanam seis alças hipervariáveis (3 alças cada das cadeias H e L) que contribuem com os resíduos de aminoácido para ligação de antígeno e conferem especificidade de ligação de antígeno ao anticorpo. Entretanto, até mesmo um domínio variável único (ou metade de um Fv que compreende somente três HVRs específicos para um antígeno) possui a habilidade de reconhecer e se ligar ao antígeno, embora com uma afinidade inferior ao sítio de ligação inteiro.

[0068] "Fv de cadeia única", também abreviado como "sFv" ou "scFv" são fragmentos de anticorpo que compreendem os domínios VH e VL de anticorpos ligados numa única cadeia de polipeptídeo. De preferência, o polipeptídeo sFv compreende adicionalmente um ligante polipeptídico entre os domínios VH e VL que permitem ao sFv formar a estrutura desejada para ligação ao antígeno. Para uma análise de sFv, consulte Pluckthun em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

[0069] "Fragmentos funcionais" de anticorpos, como anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação, compreendem uma porção de um anticorpo intacto, geralmente incluindo a ligação ao antígeno ou região variável do anticorpo intacto ou a região F de um anticorpo que retém ou modificou a capacidade de ligação ao FcR. Exemplos de fragmentos de anticorpos incluem anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia simples; e anticorpos multi-específicos formados a partir de fragmentos de anticorpo.

[0070] O termo "diacorpos" refere-se a pequenos fragmentos de anticorpo preparados através da construção de fragmentos sFv (consulte o parágrafo anterior) com ligantes peptídicos curtos (cerca de 5-10 resíduos) entre os domínios VH e VL de tal modo que se obtenha um pareamento inter-cadeia, mas não intra-cadeia, dos domínios V é obtido, resultando em um fragmento bivalente, isto é, um fragmento possuindo dois sítios de ligação a antígeno. Diacorpos biespecíficos são heterodímeros de dois fragmentos sFv "crossover", em que os domínios VH e VL dos dois anticorpos estão presentes em diferentes cadeias polipeptídicas. Diacorpos são descritos em maior detalhe, por exemplo, em EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993).

[0071] Como utilizado neste documento, um "anticorpo quimérico" refere-se a um anticorpo (imunoglobulina), como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, no qual uma porção de cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie específica ou pertencentes a uma classe ou subclasse de anticorpos específica, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é(são) idêntica(s) ou homóloga(s) às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada (Patente US Nº 4,816,567; Morrison et al.,Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81:6851-55 (1984)). Os anticorpos quiméricos de interesse neste documento incluem anticorpos PRIMATIZED® em que a região de ligação ao antígeno do anticorpo é derivada de um anticorpo produzido pela, por exemplo, imunização de macacos Macaca com um antígeno de interesse. Tal como utilizado neste documento, "anticorpo humanizado" é utilizado como um subconjunto de "anticorpos quiméricos."

[0072] Formas "humanizadas" de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos), como anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, são anticorpos quiméricos que contêm sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Em uma modalidade, um anticorpo humanizado é uma imunoglobulina humana (anticorpo receptor) na qual resíduos de uma HVR do receptor são substituídos por resíduos de uma HVR de uma espécie não humana (anticorpo doador), tal como camundongo, rato, coelho ou um primata não humano, que possui a especificidade, afinidade e/ou capacidade desejadas. Em alguns casos, resíduos de FR da imunoglobulina humana são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes. Além disso, anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Essas modificações podem ser feitas para refinar adicionalmente o desempenho do anticorpo, como a afinidade de ligação. Em geral, um anticorpo humanizado compreenderá substancialmente a totalidade de pelo menos um e, tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem aos de uma sequência de imunoglobulina não humana e todas, ou substancialmente todas, as regiões FR são as de uma sequência de imunoglobulina humana, embora as regiões FR possam incluir uma ou mais substituições de resíduos FR individuais que melhoram a performance do anticorpo, como afinidade de ligação, isomeração, imunogenicidade, e semelhantes. O número dessas substituições de aminoácidos na FR é tipicamente não mais do que 6 na cadeia H, e na cadeia L, não mais do que 3. O anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), normalmente o de uma imunoglobulina humana. Para mais detalhes, consulte, por exemplo, Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988); e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Consulte também, por exemplo, Vaswani e Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); e Patente U.S. Nºs 6,982,321 e 7,087,409.

[0073] Um "anticorpo humano" é aquele que possui uma sequência de aminoácidos correspondente à de um anticorpo, como um anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação, produzido por um humano e/ou produzido usando qualquer uma das técnicas para produzir anticorpos humanos como divulgado neste documento. Essa definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado compreendendo resíduos de ligação ao antígeno não humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos utilizando várias técnicas conhecidas na técnica, incluindo bibliotecas de exibição de fago. Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991). Também estão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos métodos descritos em Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J.

Immunol., 147(1):86-95 (1991). Consulte também van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5:368-74 (2001). Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração do antígeno a um animal transgênico, que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta ao desafio antigênico, mas cujos loci endógenos foram desativados, por exemplo, xenocamundongo imunizado (consulte, por exemplo, Patentes U.S. Nº. 6,075,181 e 6,150,584 em relação a tecnologia XENOMOUSETM). Consulte também, por exemplo, Li et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006) em relação a anticorpos humanos gerados através de uma tecnologia de hibridoma de células B humanas.

[0074] O termo "região hipervariável"", "HVR"; ou "HV", quando utilizado neste documento, refere-se às regiões de um domínio variável de anticorpo, como o de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, que são hipervariáveis em sequência e/ou formar alças estruturalmente definidas. Geralmente os anticorpos compreendem seis HVRs; três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3). Em anticorpos nativos, H3 e L3 exibem a maior diversidade das seis HVRs, e acredita-se que H3, em particular, desempenhe um papel único de conferir boa especificidade a anticorpos. Consulte, por exemplo, Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson e Wu em Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)). Com efeito, os anticorpos de camelídeos de ocorrência natural e que consistem em uma cadeia pesada somente são funcionais e estáveis na ausência da cadeia leve. Consulte, por exemplo, Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993) e Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996).

[0075] Várias delimitações de HVR estão em uso e estão englobadas neste documento. Em algumas modalidades, as HVRs podem ser regiões de Kabat determinantes de complementaridade (CDRs) com base na variabilidade da sequência e são as mais comumente usadas (Kabat et al., supra). Em algumas modalidades, os HVRs podem ser CDRs de Clothia. Chothia refere-se, em vez disso, à localização das alças estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Em algumas modalidades, as HVRs podem ser CDRs de AbM. As HVRs de AbM representam um meio-termo entre as alças estruturais de CDRs de Kabat e Chothia, e são usadas pelo software AbM de modelagem de anticorpo da Oxford Molecular. Em algumas modalidades, as HVRs podem ser CDRs de "contato". As HVRs de "contato" baseiam-se em uma análise das estruturas cristalinas complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma dessas HVRs estão descritos abaixo. Alça Kabat AbM Chothia Contato L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (numeração de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (numeração de Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58 H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101

[0076] HVRs podem compreender "HVRs estendidas" como segue: 24-36 ou 24-34 (L1), 46-56 ou 50-56 (L2) e 89-97 ou 89-96 (L3) no VL, e 26-35 (H1), 50-65 ou 49-65 (uma modalidade preferida) (H2) e 93-102, 94-102 ou 95- 102 (H3) no VH. Os resíduos do domínio variável são numerados de acordo com EU ou Kabat et al., supra,para cada uma dessas definições de HVR estendido.

[0077] Resíduos de "framework" ou "FR" são aqueles resíduos de domínio variável que não são os resíduos de HVR como definidos neste documento.

[0078] A expressão "numeração de resíduo de domínio variável como em Kabat" ou "numeração de posição de aminoácido como em Kabat", e variações destas, refere-se ao sistema de numeração usado para os domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., supra. Usando esse sistema de numeração, a verdadeira sequência de aminoácidos linear pode conter mais ou menos aminoácidos adicionais correspondentes a um encurtamento, ou inserção, em uma FR ou HVR de domínio variável. Por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada pode incluir a inserção de um único aminoácido (resíduo 52a segundo Kabat) depois do resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c etc. segundo Kabat) depois do resíduo 82 da FR de cadeia pesada. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um dado anticorpo pelo alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência de Kabat "padrão" numerada.

[0079] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado quando se refere a um resíduo no domínio variável (aproximadamente os resíduos 1-107 de cadeia leve e os resíduos 1-113 de cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5ª Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). O "sistema de numeração EU" ou "índice EU" é geralmente usado ao se referir a um resíduo em uma região constante de cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice EU relatado em Kabat et al. supra). O "índice EU como em Kabat" refere- se à numeração dos resíduos do anticorpo EU IgG1 humana. Salvo indicação em contrário, as referências aos números de resíduos no domínio variável de anticorpos significam numeração de resíduos pelo sistema de numeração de Kabat. Salvo indicação em contrário neste documento, referências aos números de resíduos no domínio constante de anticorpos significam a numeração de resíduos pelo sistema de numeração EU ou Kabat (por exemplo, ver a Publicação de Patente U.S. Nº 2010-280227).

[0080] Um "framework de aceptor humano" como utilizado neste documento é um framework que compreende a sequência de aminoácidos de um framework de VL ou VH derivado de um framework de imunoglobulina humana ou de um framework de consenso humano. Um framework aceptor humano "derivada de" um framework da imunoglobulina humana ou um framework de consenso humano pode compreender a mesma sequência de aminoácidos desta ou pode conter alterações pré-existentes na sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, o número de alterações de aminoácidos preexistentes são 10 ou menos, 9 ou menos, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos ou 2 ou menos. Onde alterações de aminoácidos preexistentes estão presentes em uma VH,

essas alterações ocorrem preferencialmente em apenas três, duas ou uma das posições 71H, 73H e 78H; por exemplo, os resíduos de aminoácidos nessas posições podem por 71A, 73T e/ou 78A. Em uma modalidade, o framework aceptor humano de VL é idêntico na sequência à sequência de framework da imunoglobulina humana de VL ou à sequência de framework de consenso humana.

[0081] Um "framework de consenso humano" é um framework que representa os resíduos de aminoácidos de ocorrência mais comum em uma seleção de sequências de framework de VL ou VH da imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção das sequências VL ou VH da imunoglobulina humana é de um subgrupo de sequências de domínio variável. Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). Exemplos incluem para o VL, o subgrupo pode ser o subgrupo kappa I, kappa II, kappa III ou kappa IV, como em Kabat et al., supra. Além disso, para VH, o subgrupo pode ser o subgrupo I, subgrupo II ou subgrupo III, como em Kabat et al., supra.

[0082] Uma "modaificação de aminoácidos" na posição especificada, por exemplo, de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, refere-se à substituição ou deleção do resíduo especificado, ou a inserção de pelo menos um resíduo de aminoácido adjacente ao resíduo especificado. A inserção "adjacente" a um resíduo especificado significa a inserção em um a dois dos resíduos dos mesmos. A inserção pode ser de terminal N ou terminal C relativamente ao resíduo especificado. A modificação de aminoácido preferida neste documento é uma substituição.

[0083] Um anticorpo "maturado por afinidade" como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, é um com uma ou mais alterações em uma ou mais HVRs deste, que resultam em melhoria na afinidade do anticorpo para o antígeno, em comparação com um anticorpo parental que não possua esta(s) alteração(ões). Em uma modalidade, um anticorpo maturado por afinidade tem afinidades nanomolares ou mesmo picomolares para o antígeno alvo. Anticorpos maturados por afinidade são produzidos por procedimentos conhecidos na técnica. Marks et al., Bio/Technology 10:779-783, 1992 descreve maturação de afinidade por embaralhamento de domínio VH e VL. A mutagênese aleatória de resíduos de HVR e/ou framework é descrita por, por exemplo: Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); e Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992).

[0084] Como utilizado neste documento, o termo “reconhece especificamente” ou “liga-se especificamente a”refere-se a interações mensuráveis e reproduzíveis, como atração ou ligação entre um alvo e um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, que é determinante da presença do alvo na presença de uma população heterogênea de moléculas incluindo moléculas biológicas. Por exemplo, um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, que se liga específica ou preferencialmente a um alvo ou epítopo é um anticorpo que se liga a esse alvo ou epítopo com maior afinidade, avidez, mais prontamente e/ou com maior duração do que se liga a outros alvos ou outros epítopos do alvo. Também é compreendido pela leitura desta definição que, por exemplo, um anticorpo (ou uma fração) que se liga específica ou preferencialmente a um primeiro alvo pode ou não se ligar específica ou preferencialmente a um segundo alvo. Assim, “ligação específica” ou “ligação preferencial” não requer necessariamente (embora possa ser incluída) uma ligação exclusiva. Um anticorpo que se liga especificamente a um alvo pode ter uma constante de associação de pelo menos cerca de 10 3 M -1 ou 10 4 M -1, às vezes de cerca de 10 5 M -1 ou 10 6 M -1, em outros casos de cerca de 10 6 M -1 ou 10 7 M -1, de cerca de 10 8 M -1 a 10 9 M -1 , ou de cerca de 10 10 M -1 a 10 11 M -1 ou maior. Uma variedade de formatos de imunoensaio pode ser usada para selecionar os anticorpos especificamente imunorreativos com uma proteína em particular. Por exemplo, imunoensaios de ELISA de fase sólida são rotineiramente usados para selecionar anticorpos monoclonais especificamente imunorreativos a uma proteína. Consulte, por exemplo, Harlow e Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, ColdSpring Harbor Publications, Nova Iorque, para uma descrição de formatos de imunoensaio e condições que podem ser usadas para determinar uma imunorreatividade específica.

[0085] Como utilizado neste documento, uma "interação" entre uma proteína Siglec-7 e uma segunda proteína abrange, sem limitação, interação proteína-proteína, interação física, interação química, ligação, ligação covalente e ligação iônica. Como utilizado neste documento, um anticorpo "inibe a interação" entre duas proteínas quando o anticorpo interrompe, reduz ou elimina completamente uma interação entre as duas proteínas. Um anticorpo da presente divulgação, ou fragmento do mesmo, "inibe a interação" entre duas proteínas quando o anticorpo ou fragmento do mesmo se liga a uma das duas proteínas.

[0086] Um anticorpo “agonista” ou um anticorpo “ativador” é um anticorpo, como um anticorpo agonista anti-Siglec-7 da presente divulgação, que induz (por exemplo, aumenta) uma ou mais atividades ou funções do antígeno após o anticorpo se ligar ao antígeno.

[0087] Um anticorpo “bloqueador”, um anticorpo “antagonista” ou um anticorpo “inibidor” é um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, que inibe ou reduz (por exemplo, diminui) a ligação a um ou mais ligantes após o anticorpo se ligar ao antígeno, e/ou que inibe ou reduz (por exemplo, diminui) uma ou mais atividades ou funções do antígeno após o anticorpo se ligar ao antígeno. Em algumas modalidades, os anticorpos de bloqueio ou anticorpos antagonistas, ou anticorpos inibidores inibem substancial ou completamente a ligação do antígeno a um ou mais ligantes e/ou uma ou mais atividades ou funções do antígeno.

[0088] “Funções efetoras” de anticorpos referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc (uma região Fc de variante de sequência de aminoácido ou região Fc de sequência nativa) de um anticorpo e variam com o isotipo do anticorpo.

[0089] O termo "região Fc" é usado neste documento para definir a região de terminal C de uma cadeia pesada de imunoglobulina, incluindo as regiões Fc de sequência nativa e as regiões Fc variantes. Embora os limites da região Fc de uma cadeia pesada de imunoglobulina possam variar, a região Fc de cadeia pesada de IgG humana está habitualmente definida para alongar a partir de um resíduo de aminoácido na posição Cys226, ou desde Pro230, até ao terminal carboxila da mesma. A lisina de terminal C (resíduo 447, de acordo com o sistema de numeração EU) da região Fc pode ser removida, por exemplo, durante a produção ou purificação do anticorpo ou pela modificação recombinante do ácido nucleico que codifica uma cadeia pesada do anticorpo. Consequentemente, uma composição de anticorpos intactos pode compreender populações de anticorpos com todos os resíduos K447 removidos, as populações de anticorpos com nenhum resíduo K447 removido e populações de anticorpo com uma mistura de anticorpos com e sem o resíduo K447. As regiões Fc de sequência nativa adequadas para uso nos anticorpos da presente divulgação incluem a IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 humanas.

[0090] Uma "sequência de região Fc nativa" compreende uma sequência de aminoácidos idêntica à sequência de aminoácidos de uma região Fc encontrada na natureza. Regiões Fc humanas de sequência nativa incluem uma região Fc humana de sequência nativa de IgG1 (alotipos A e não A); região Fc humana de sequência nativa de IgG2; região Fc humana de sequência nativa de IgG3; e região Fc humana de sequência nativa de IgG4 bem como variantes de ocorrência natural da mesma.

[0091] Uma "região Fc variante" compreende uma sequência de aminoácidos que difere da de uma região Fc de sequência nativa em virtude de pelo menos uma modificação de aminoácido, de preferência uma ou mais substituição(ões) de aminoácidos. Preferencialmente, a região Fc variante tem pelo menos uma substituição de aminoácidos em comparação com uma região Fc de sequência nativa ou uma região Fc de um polipeptídeo de origem, por exemplo, de cerca de uma a cerca de dez substituições de aminoácidos, e preferivelmente de cerca de uma a cerca de cinco substituições de aminoácidos em uma região Fc de sequência nativa ou na região Fc do polipéptido de origem.A região Fc variante neste documento, preferencialmente irá possuir pelo menos cerca de 80% de homologia com uma região de sequência nativa de Fc e/ou com uma região Fc de um polipeptídeo de origem e, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 90% de homologia com esta, mais preferencialmente pelo menos cerca de 95% de homologia com esta.

[0092] "Receptor de Fc" ou "FcR" descreve um receptor que se liga à região Fc de um anticorpo. O FcR preferencial é um FcR humano de sequência nativa. Além disso, um FcR preferido é um que se liga a um anticorpo IgG (um receptor gama) e inclui receptores das subclasses FcγRI, FcγRII e FcγRIII, incluindo variantes alélicas e formas alternadas emendadas destes receptores, os receptores FcγRII incluem FcγRIIA (um "receptor ativador ") e FcγRIIB (um" receptor inibidor "), que possuem sequências de aminoácidos semelhantes que diferem principalmente nos seus domínios citoplasmáticos. Receptor de ativação de FcγRIIA contém um motivo de ativação de imunorreceptor baseado em tirosina ("ITAM") no seu domínio citoplasmático. O receptor de inibição FcγRIIB contém um motivo de inibição baseado em tirosina imunorreceptor (“ITIM”) em seu domínio citoplasmático. (consulte, por exemplo, M. Daëron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997)). Os FcRs são revisados em Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); e de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Outros FcRs, incluindo aqueles a serem identificados no futuro, são englobados pelo termo "FcR" neste documento. Os FcRs também podem aumentar a meia-vida sérica dos anticorpos.

[0093] A ligação a FcRn humano in vivo e meia vida sérica dos polipeptídeos humanos de elevada afinidade de ligação a FcRn pode ser ensaiada, por exemplo, em camundongos transgênicos ou linhagem de células humanas transfectadas que expressam FcRn humano ou em primatas aos quais os polipeptídeos com uma região Fc variante são administrados. WO 2004/42072 (Presta) descreve variantes de anticorpos com ligação melhorada ou diminuída a FcRs. Consulte também, por exemplo, Shields et al., J. Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001).

[0094] Conforme usado neste documento, "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" e "homologia" com relação a uma sequência de peptídeo, polipeptídeo ou anticorpo referem-se à porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência específica de peptídeo ou polipeptídeo, após o alinhamento das sequências e a introdução de lacunas, se necessário, para atingir a identidade percentual máxima da sequência e sem considerar quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade da sequência. O alinhamento para fins de determinação do percentual de identidade da sequência de aminoácidos pode ser atingido de muitas formas no estado da técnica, por exemplo, usando software de computador livre, tal como os softwares BLAST, BLAST-2, ALIGN ou MEGALIGNTM(DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar parâmetros apropriados para medir o alinhamento, incluindo quaisquer algoritmos conhecidos na técnica necessários para atingir o alinhamento máximo em relação ao comprimento completo das sequências sendo comparadas.

[0095] Uma célula "isolada" é uma molécula ou uma célula que é identificada e separada de pelo menos uma célula contaminante com a qual está normalmente associada no ambiente em que foi produzida. Em algumas modalidades, a célula isolada está livre de associação a todos os componentes associados ao ambiente de produção. A célula isolada está em uma forma diferente da forma ou configuração em que é encontrada na natureza. As células isoladas se distinguem das células existentes naturalmente em tecidos, órgãos ou indivíduos. Em algumas modalidades, a célula isolada é uma célula hospedeira da presente divulgação.

[0096] Uma molécula de ácido nucleico “isolada” que codifica um anticorpo, como um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação, é uma molécula de ácido nucleico que é identificada e separada de pelo menos uma molécula de ácido nucleico contaminante com a qual está normalmente associada no meio em que foi produzida. De preferência, o ácido nucleico isolado está livre de associação a todos os componentes associados ao meio de produção. As moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam os polipeptídeos e anticorpos deste documento estão em uma forma diferente da forma ou configuração na qual são encontradas na natureza. As moléculas de ácido nucleico isoladas são portanto distinguidas do ácido nucleico que codifica os polipeptídeos e anticorpos deste documento existentes naturalmente nas células.

[0097] O termo "vetor", conforme utilizado neste documento, destina-se a referir-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao qual foi ligada. Um tipo de vetor é um "plasmídeo", que se refere a um DNA de cadeia dupla circular ao qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados. Um outro tipo de vetor é um vetor de fago. Outro tipo de vetor é um vetor viral, em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma viral. Certos vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira em que eles são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos, tendo uma origem bacteriana de replicação e vetores de mamíferos epissômicos). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamíferos não epissômicos) podem ser integrados ao genoma de uma célula hospedeira, mediante a introdução na célula hospedeira e, assim, são replicados junto com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a expressão de genes aos quais estão ligados operativamente. Tais vetores são referidos neste documento como "vetores de expressão recombinantes", ou simplesmente "vetores de expressão". Em geral, os vetores de expressão de utilidade em técnicas de DNA recombinante estão frequentemente na forma de plasmídeos. No presente relatório descritivo, “plasmídeo” e “vetor” podem ser usados indistintamente, uma vez que o plasmídeo é a forma de vetor mais comumente usada.

[0098] "Polinucleotídeo" ou "ácido nucleico", conforme usados intercambiavelmente neste documento, referem-se a polímeros de nucleotídeos de qualquer comprimento e incluem DNA e RNA. Os nucleotídeos podem ser desoxirribonucleotídeos, ribonucleotídeos, nucleotídeos modificados ou bases, e/ou seus análogos ou qualquer substrato que pode ser incorporado a um polímero por DNA ou RNA polimerase ou por uma reação sintética. Um polinucleotídeo pode compreender nucleotídeos modificados, como nucleotídeos metilados e seus análogos. Se estiver presente, a modificação da estrutura do nucleotídeo pode ser transmitida antes ou após a montagem do polímero. A sequência de nucleotídeos pode ser interrompida por componentes não nucleotídeos.

Um polinucleotídeo pode compreender modificação(ões) feita(s) após a síntese, tal como conjugação a um marcador.

Outros tipos de modificações incluem, por exemplo, "caps", substituição de um ou mais dos nucleotídeos de ocorrência natural por um análogo, modificações internucleotídicas, como, por exemplo, aquelas com ligações não carregadas (por exemplo, metil fosfonatos, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) e com ligações carregadas (por exemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), aqueles contendo frações pendentes, tais como, por exemplo, proteínas (por exemplo, nucleases, toxinas, anticorpos, peptídeos de sinal, camada-L-lisina, etc.), aqueles com intercaladores (por exemplo, acridina, psoraleno, etc.), aqueles contendo quelantes (por exemplo, metais, metais radioativos, boro, metais oxidativos, etc.), aqueles contendo alquiladores, aqueles com ligações modificadas (por exemplo, alfa anomérico ácidos nucleicos, etc.), bem como formas não modificadas do(s) polinucleotídeo(s). Além disso, qualquer um dos grupos hidroxila geralmente presente nos açúcares pode ser substituído, por exemplo, por grupos fosfonato, grupos fosfato, protegido por grupos protetores padrão, ou ativado para preparar ligações adicionais para nucleotídeos adicionais, ou pode ser conjugado com suportes sólidos ou semissólidos.

Os terminais OH 5' e 3' podem ser fosforilados ou substituídos por aminas ou frações de grupos orgânicos de capping de 1 a 20 átomos de carbono.

Outras hidroxilas também podem ser derivatizadas de grupos protetores padrão.

Os polinucleotídeos também podem conter formas análogas de açúcares de ribose ou desoxirribose que geralmente são conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, 2'-O-metil-, 2'-O-alil, 2'-fluoro ou 2'-azido-ribose, análogos de açúcar carbocíclico, açúcares alfa-anoméricos, açúcares epiméricos, tais como arabinose, xilose ou lixose, açúcares de piranose, açúcares de furanose, sedoheptuloses, análogos acíclicos e análogos de nucleosídeos básicos, como metil-ribosídeo.

Uma ou mais ligações de fosfodiéster podem ser substituídas por grupos de ligação alternativos.

Esses grupos de ligação alternativos incluem, mas não estão limitados a, modalidades em que o fosfato é substituído por P(O)S (“tioato”), P(S)S (“ditioato”), (O)NR2 (“amidato”), P(O)R, P(O)OR’, CO ou CH2 (“formacetal”), em que cada R ou R' é, independentemente, H ou alquil

(1-20 C) substituído ou não substituído, contendo, opcionalmente, uma ligação (- O-) de éter, aril, alquenil, cicloalquil, cicloalquenil ou araldil. Nem todas as ligações em um polinucleotídeo precisam ser idênticas. A descrição anterior se aplica a todos os polinucleotídeos referidos neste documento, incluindo RNA e DNA.

[0099] Uma "célula hospedeira" inclui uma célula de cultura ou uma célula individual que pode ser ou ter sido um receptor para vetor(es) para a incorporação de inserções de polinucleotídeos. As células hospedeiras incluem a progênie de uma única célula hospedeira e a progênie pode não ser necessariamente completamente idêntica (em morfologia ou em complemento do DNA genômico) à célula de origem original devido a uma mutação natural, acidental ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas in vivo com polinucleotídeo(s) da presente divulgação.

[00100] "Carreadores", conforme usado neste documento, inclui carreadores, excipientes ou estabilizadores farmaceuticamente aceitáveis que não sejam tóxicos para a célula ou para o mamífero exposto a eles nas dosagens e concentrações utilizadas. Frequentemente, o carreador fisiologicamente aceitável é uma solução aquosa tamponada de pH. Os exemplos de carreadores fisiologicamente aceitáveis incluem tampões, como fosfato, citrato e outros ácido orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico; polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como gelatina, imunoglobulinas ou albumina sérica; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona, aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparaginas, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos, e outros carboidratos, incluindo glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; álcoois de açúcar, tais como manitol ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tais como sódio; e/ou surfactantes aniônicos, tais como TWEEN™, polietileno glicol (PEG) e PLURONICS™.

[00101] O termo "cerca de", como utilizado neste documento, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pela pessoa versada neste campo técnico. Referência a "cerca de" um valor ou parâmetro neste documento inclui (e descreve) modalidades que são direcionadas a esse valor ou parâmetro per se.

[00102] Tal como usado neste documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma", e "o", "a" incluem o plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Por exemplo, a referência a um "anticorpo" é uma referência a de um a muitos anticorpos, tais como quantidades molares, e inclui equivalentes dos mesmos conhecidos pelos versados na técnica, e assim por diante.

[00103] Entende-se que aspectos e modalidades da presente divulgação descritos neste documento incluem "compreendendo", "consistindo" e "consistindo essencialmente de" aspectos e modalidades. Perspectiva Geral

[00104] A presente divulgação se refere, em parte, a anticorpos anti-Siglec-7 que exibem uma ou mais características funcionais melhoradas e/ou aprimoradas em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62 ou em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO:

50. Propriedades funcionais melhoradas e/ou aprimoradas não limitantes incluem, por exemplo, anticorpos capazes de se ligar a Siglec-7 com maior afinidade, reduzindo os níveis de superfície celular de Siglec-7, diminuindo a concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) para diminuir os níveis de superfície celular de Siglec-7, melhorando a redução máxima dos níveis de superfície celular de Siglec-7, ou qualquer combinação destes. Também contemplados neste documento estão anticorpos anti-Siglec-7 com diferentes variantes Fc que exibem uma ou mais características funcionais melhoradas e/ou aprimoradas, incluindo a diminuição da concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC 50) para regular negativamente os níveis de superfície celular de Siglec-7, e melhorando a redução máxima dos níveis de superfície celular de Siglec-7.

[00105] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem potências mais elevadas na redução dos níveis de superfície celular de Siglec-7 em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62 ou em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência do SEQ ID NO:

50.

[00106] A presente divulgação refere-se ainda a métodos de produção e uso de anticorpos anti-Siglec-7, como descrito neste documento; composições farmacêuticas contendo tais anticorpos; ácidos nucleicos que codificam esses anticorpos; e células hospedeiras contendo ácidos nucleicos que codificam esses anticorpos.

[00107] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ter uma ou mais atividades que são devidas, pelo menos em parte, à capacidade dos anticorpos para reduzir a expressão celular (por exemplo, expressão da superfície celular) de Siglec-7 por indução de degradação, regulação negativa, clivagem, dessensibilização do receptor e/ou direcionamento lisossômico de Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 exibem uma ou mais das seguintes propriedades: a. possuem uma constante de dissociação (K D ) para Siglec-7 humano que é inferior à de um anticorpo anti-Siglec-7 que possui uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 62; b. ligam-se a células humanas, como células dendríticas humanas primárias; c. diminuem os níveis de superfície celular de Siglec-7 (por exemplo, diminuir os níveis de superfície celular de Siglec-7 em células dendríticas humanas primárias in vitro) com metade da concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) inferior à de um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62; d. possuem uma constante de dissociação (KD) para Siglec-7 humano que pode variar de cerca de 0,001 nM a cerca de 124 nM, por exemplo, quando a KD é determinada por ressonância plasmônica de superfície ou Interferometria de Biocamada; e/ou e. diminuem os níveis de superfície celular de Siglec-7 (por exemplo, diminuem os níveis de superfície celular de Siglec-7 em células dendríticas humanas primárias in vitro) com uma concentração eficaz que induz metade do efeito máximo (EC50) que pode variar de cerca de 33,2 pM a cerca de 25,4 nM, para exemplo, quando o EC50 é determinado in vitro por citometria de fluxo. Conforme divulgado aqui, a concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) refere-se à concentração na qual um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação reduz os níveis celulares de Siglec-7 em uma célula ou em uma célula para a metade do que nas células não tratadas, ou a concentração na qual o anticorpo atinge uma ligação meia-máxima ao Siglec-7 em uma célula.

[00108] Vantajosamente, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação reduzem a expressão da superfície celular (por exemplo , até aproximadamente 30,8 vezes) de Siglec-7 de forma mais potente (por exemplo, com um EC50 inferior) em comparação com um anticorpo controle anti- Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62) (Consulte, por exemplo, Exemplo 3). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação reduzem a expressão da superfície celular (por exemplo , até aproximadamente 10,2 vezes) de Siglec-7 de forma mais potente (por exemplo, com um EC50 inferior) em comparação com um anticorpo controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti- Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO:38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 50) (Consulte, por exemplo, Exemplo 3). Além disso, vantajosamente, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm uma afinidade maior (por exemplo , afinidade até aproximadamente 1.240 vezes maior) para Siglec-7 (por exemplo, um valor KD inferior ao medido por Interferometria de Biocamada) em comparação com um anticorpo controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 62 (Consulte, por exemplo, os Exemplos 1 e 3). Surpreendentemente, a afinidade mais elevada para Siglec-7 não se correlaciona necessariamente com um aumento na capacidade ou potência de redução da expressão da superfície celular de Siglec-7 (consulte, por exemplo, Exemplos 2 e 5). Proteínas Siglec-7

[00109] Em um aspecto, a presente divulgação fornece anticorpos, como anticorpos isolados (por exemplo, monoclonais), que interagem com ou de outra forma se ligam a uma região, como um epítopo, dentro de uma proteína Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, os anticorpos interagem com ou de outra forma se ligam a uma região, como um epítopo, dentro de uma proteína Siglec-7 da presente divulgação com cinética melhorada/aprimorada (por exemplo, em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, os anticorpos interagem com ou de outra forma se ligam a uma região, como um epítopo, dentro de uma proteína Siglec-7 em células humanas, como células dendríticas, com uma concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) que é inferior a de um anticorpo controle (por exemplo, em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a uma proteína Siglec-7 e modulam uma ou mais atividades de Siglec-7 após a ligação à proteína Siglec-7, por exemplo, uma atividade associada à expressão de Siglec-7 em uma célula. As proteínas Siglec-7 da presente divulgação incluem, sem limitação, uma proteína Siglec-7 de mamífero, uma proteína Siglec-7 de primata não humano e uma proteína Siglec-7 humana.

[00110] Siglec-7 é diversamente referida como uma molécula Siglec-7, lectina 7 semelhante a Ig de ligação ao ácido siálico, AIRM1, CD328, CDw328, D-Siglec, QA79, SIGLEC19P, SIGLECP2, p75 e p75/AIRM1.

[00111] Siglec-7 é um receptor semelhante a imunoglobulina expresso principalmente em células imunes e hematopoiéticas, incluindo, sem limitação, monócitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, mastócitos, células microgliais, células linfóides, células natural killer e subconjuntos de células T.

[00112] A sequência de aminoácidos de um Siglec-7 humano é apresentada abaixo como SEQ ID NO: 63: 10 20 30 40 50

MLLLLLLPLL WGRERVEGQ SNRKDYSLT QSSVTVQEG CVHVRCSFS

K M M Y 60 70 80 90 100

PVDSQTDSD VHGYWFRAG DISWKAPVA NNPAWAVQE TRDRFHLLG

P N T E D 110 120 130 140 150

PQTKNCTLSI RDARMSDAG YFFRMEKGN KWNYKYDQL VNVTALTHR

R I S P 160 170 180 190 200

NILIPGTLES GCFQNLTCS PWACEQGTP MISWMGTSV PLHPSTTRS

V P S S 210 220 230 240 250

VLTLIPQPQH HGTSLTCQVT LPGAGVTTN TIQLNVSYPP QNLTVTVFQ

R G 260 270 280 290 300

EGTASTALG SSSLSVLEGQ SLRLVCAVD NPPARLSWT RSLTLYPSQ

N S W P 310 320 330 340 350

SNPLVLELQ HLGDEGEFT RAQNSLGSQ VSLNLSLQQ YTGKMRPVS

V C H E G 360 370 380 390 400

VLLGAVGGA ATALVFLSFC VIFIVVRSCR KKSARPAAD GDIGMKDAN

G V T 410 420 430 440 450

IRGSASQGN TESWADDNP HHGLAAHSS EEREIQYAPL SFHKGEPQD

L R G L 460

SGQEATNNE SEIKIPK Y

[00113] Em algumas modalidades, a Siglec-7 é uma pré- proteína que inclui uma sequência de sinais. Em algumas modalidades, a Siglec-7 é uma proteína madura. Em algumas modalidades, a proteína Siglec-7 madura não inclui uma sequência de sinais. Em algumas modalidades, a proteína Siglec-7 madura é expressa em uma célula. Em algumas modalidades, a proteína Siglec-7 madura é expressa em uma célula, como a superfície de uma célula, incluindo, sem limitação, células dendríticas humanas, macrófagos humanos, monócitos humanos, osteoclastos humanos, neutrófilos humanos, células NK humanas, células T humanas, célula T helper humana, células T citotóxicas humanas, granulócitos humanos e microglia humana. Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem se ligar a qualquer uma das proteínas Siglec-7 da presente divulgação expressas em qualquer célula aqui divulgada.

[00114] As proteínas Siglec-7 da presente divulgação, tal como Siglec-7 humana, contêm vários domínios, incluindo, sem limitação, uma sequência de sinal localizada nos resíduos de aminoácidos 1-18 de SEQ ID NO: 63, um domínio extracelular semelhante a imunoglobulina de tipo variável (IgV) localizado nos resíduos de aminoácidos 39-122 de SEQ ID NO: 63, dois domínios de tipo C2 semelhantes a Ig localizados nos resíduos de aminoácidos 150-233 e 240-336 de SEQ ID NO: 63, um domínio transmembranar localizado nos resíduos de aminoácidos 354-376 da SEQ ID NO: 63, um motivo ITIM 1 localizado nos resíduos de aminoácidos 435-440 da SEQ ID NO: 63 e um motivo ITIM 2 localizado nos resíduos de aminoácidos 459-463 da SEQ ID NO: 63. Como um versado na técnica apreciará, os resíduos inicial e final dos domínios da presente divulgação podem variar dependendo do programa de modelagem por computador usado ou do método usado para determinar o domínio.

[00115] Certos aspectos da presente divulgação fornecem anticorpos anti-Siglec-7 que se ligam a um Siglec-7 humano, ou um homólogo deste, incluindo, sem limitação, uma proteína Siglec-7 de proteína Siglec-7 de primata não humano e ortólogos Siglec-7 de outros espécies de primatas não humanos. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ligam-se a um Siglec-7 humano, ou homólogo deste, com cinética de ligação melhorada/aprimorada (por exemplo, em relação a um anticorpo anti- Siglec-7 tendo uma variável de cadeia pesada região compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62).

[00116] Consequentemente, como utilizado neste documento, uma proteína "Siglec-7" da presente divulgação inclui, sem limitação, uma proteína Siglec-7 de mamífero, uma proteína Siglec-7 de primata não humano, proteína Siglec-7 humana ou uma proteína Siglec-7 de primata. Além disso, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem se ligar a um epítopo dentro de uma proteína Siglec-7 humana ou proteína Siglec-7 de primata. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem se ligar especificamente ao Siglec-7 humano.

[00117] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação podem se ligar a Siglec-7 de maneira dependente do pH. Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação podem se ligar a Siglec-7 a um pH neutro e ser internalizados sem se dissociar da proteína Siglec-7. Alternativamente, a um pH ácido, os anticorpos da presente divulgação podem se dissociar de Siglec-7 uma vez internalizados e depois degradados pela via do endossoma/lisossomo. Em certas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 liga-se à Siglec-7 a um pH que varia de 5,5 a 8,0, de 5,5 a 7,5, de 5,5 a 7,0, de 5,5 a 6,5, de 5,5 a 6,0, de 6,0 a 8,0, de 6,5 a 8,0, de 7,0 a 8,0, de 7,5 a 8,0, de 6,0 a 7,5, de 6,0 a 7,0, de 6,5 a 7,5. Em certas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 se dissocia de Siglec-7 a um pH inferior a 6,0, inferior a 5,5, inferior a 5,0, inferior a 4,5, inferior a 4,0, inferior a 3,5, inferior a 3,0, inferior a 2,5 ou inferior a 2,0.

[00118] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação se ligam a uma proteína Siglec-7 de tipo selvagem da presente divulgação, variantes naturais da mesma e/ou variantes da doença.

[00119] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação que diminuem os níveis celulares de Siglec-7, se ligam a uma proteína Siglec-7 expressa na superfície de uma célula, incluindo, sem limitação, células dendríticas humanas, macrófagos humanos, células NK humanas, monócitos humanos, osteoclastos humanos, neutrófilos humanos, células T humanas, células T auxiliares humanas, células T citotóxicas humanas, granulócitos humanos, células imunossupressoras derivadas de mieloide humano e microglia humana. Em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação que diminuem os níveis celulares de Siglec-7 e/ou inibem a interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou que se ligam ou interagem com Siglec-7, ligam-se a uma proteína Siglec-7 expressa na superfície de uma célula e modula (por exemplo, induzem ou inibem) pelo menos uma atividade Siglec-7 da presente divulgação após ligação à proteína Siglec-7 expressa na superfície. Em algumas modalidades da presente divulgação, o anticorpo anti-Siglec-7 se liga especificamente a uma proteína Siglec-7. Em algumas modalidades da presente divulgação, o anticorpo anti- Siglec-7 se liga ainda a pelo menos uma proteína Siglec adicional. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 modula uma ou mais atividades da pelo menos uma proteína Siglec adicional ou de uma célula que expressa a pelo menos uma proteína Siglec adicional. Ligantes de Siglec-7

[00120] As proteínas Siglec-7 da presente divulgação podem interagir com (por exemplo, ligar-se a) um ou mais ligantes de Siglec-7.

[00121] Ligantes de Siglec-7 exemplares incluem, sem limitação, ácido siálico, glicolipídeos contendo ácido siálico, glicoproteínas contendo ácido siálico, glicolipídeos contendo alfa-2,8-disialil, glicoproteínas contendo ácido siálico ligadas a alfa-2,6 ramificadas, glicolipídeos contendo ácido siálico ligado a alfa-2,6 terminal, glicoproteínas contendo ácido siálico ligado a alfa-2,3 terminal, disialogangliosídeos (por exemplo, gangliosídeos ou glicolipídeos contendo uma ceramida ligada a um glicano sialilado), mucinas secretadas, ligantes de Siglec-7 expressos em hemácias, ligantes de Siglec-7 expressos em células bacterianas, ligantes de Siglec-7 expressos em células apoptóticas, ligantes de Siglec-7 expressos em células nervosas, ligantes de Siglec-7 expressos em células gliais, ligantes de Siglec-7 expressos em microglia, ligantes de Siglec-7 expressos em astrócitos, ligantes de Siglec-7 expressos em células tumorais, ligantes de Siglec-7 expressos em vírus, ligantes de Siglec-7 expressos em células dendríticas, ligantes de Siglec-7 ligados a placas beta amilóides, ligantes de Siglec-7 ligado a emaranhados Tau, ligantes de Siglec-7 em proteínas causadoras de doenças, ligantes de Siglec-7 em peptídeos causadores de doenças, ligantes de Siglec-7 expressos em macrófagos, ligantes de Siglec-7 expressos em macrófagos associados a tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em neutrófilos, ligantes de Siglec-7 expressos em monócitos, ligantes de Siglec-7 expressos em células natural killer, ligantes de Siglec-7 expressos em células T, ligantes de Siglec-7 expressos em células T helper, ligantes de Siglec-7 expressos em células T citotóxicas, Ligantes de Siglec-7 expressos em células B, ligantes de Siglec-7 expressos em células dendríticas imunossupressoras embutidas em tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em macrófagos imunossupressores embutidos em tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em neutrófilos imunossupressores embutidos em tumor, ligantes de Siglec-7 expresso em células NK imunossupressoras incorporadas a tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em células supressoras derivadas de mieloide, ligantes de Siglec-7 expressos em células imunossupressoras derivadas de mieloide e ligantes de Siglec-7 expressos em r células T regulatórias. Em algumas modalidades, os ligantes de Siglec-7 da presente divulgação são gangliosídeos (por exemplo, disialogangliosídeos). Os diasialogangliosídeos geralmente compartilham um núcleo comum de lacto- ceramida e um ou mais resíduos de ácido siálico.

[00122] Outros exemplos de ligantes gangliosídeos adequados (por exemplo, disialogangliosídeos) estão listados na Tabela A.

Geralmente, um gangliosídeo (por exemplo, disialogangliosídeos) é uma molécula composta de um glicoesfingolipídeo com um ou mais ácidos siálicos (por exemplo, ácido n-acetil-neuramínico, NANA) ligados à cadeia de açúcar. Tabela A: Estruturas de ligantes de Siglec-7 gangliosídeo exemplares GM2-1 = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-?)bDGalNAc(1-?)bDGalNAc(1-?)bDGlcp(1-1)Cer GM3 = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GM2,GM2a(?) = bDGalpNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GM2b(?) = aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GM1,GM1a = bDGalp(1-3)bDGalNAc[aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer asialo-GM1,GA1 = bDGalp(1-3)bDGalpNAc(1-4)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer asialo-GM2, GA2 = bDGalpNAc (1-4) bDGalp (1-4) bDGlcp (1-1) Cer GM1b = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GD3 = aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GD2 = bDGalpNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GD1a = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GD1alpha = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-6)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GD1b = bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GT1a = aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1- 4)bDGlcp(1-1)Cer GT1,GT1b = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1- 4)bDGlcp(1-1)Cer OAc-GT1b = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)aXNeu5Ac9Ac(2-8)aNeu5Ac(2- 3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer GT1c = bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1- 4)bDGlcp(1-1)Cer GT3 = aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGal(1-4)bDGlc(1-1)CerGQ1b = aNeu5Ac(2- 8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-3)bDGalNAc(1-4)[aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)]bDGalp(1-4)bDGlcp(1- 1)Cer GGal = aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-1)Cer onde: aNeu5Ac = ácido 5-acetil-alfa-neuramínico aNeu5Ac9Ac = ácido 5,9-diacetil-alfa-neuramínico bDGalp = beta-D-galactopiranose bDGalpNAc = N-acetil-beta-D-galactopiranose bDGlcp = beta-D-glucopiranose Cer = ceramida (esfingóide N-acilado geral) Anticorpos Siglec-7

[00123] Certos aspectos da presente divulgação referem-se a anticorpos anti-Siglec-7 compreendendo uma ou mais características funcionais aprimoradas e/ou melhoradas. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma ou mais características funcionais aprimoradas e/ou melhoradas em relação a um anticorpo de controle (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo o amino sequência de ácido da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-

Siglec-7 da presente divulgação têm uma afinidade para Siglec-7 (por exemplo, Siglec-7 humano) que é maior do que a de um anticorpo controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação ligam-se a células humanas, como células dendríticas, com uma concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) que é inferior à de um anticorpo controle (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação diminuem os níveis celulares (por exemplo, os níveis de superfície celular) de Siglec-7 com uma concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) que é inferior à de um anticorpo controle (por exemplo,um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62).

[00124] Os níveis celulares de Siglec-7 podem referir-se, sem limitação, a níveis de superfície celular de Siglec-7, níveis intracelulares de Siglec- 7 e níveis totais de Siglec-7. Em algumas modalidades, uma diminuição nos níveis celulares de Siglec-7 compreende uma diminuição nos níveis de superfície celular de Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação que diminuem os níveis celulares de Siglec-7 (por exemplo, níveis de superfície celular de Siglec-7) possuem uma ou mais das seguintes características: (1) inibem ou reduzem um ou mais atividades de Siglec-7; (2) a capacidade de inibir ou reduzir a ligação de um Siglec-7 a um ou mais de seus ligantes; (3) a capacidade de reduzir a expressão de Siglec-7 em células que expressam Siglec-7; (4) a capacidade de interagir, ligar-se a ou reconhecer uma proteína Siglec-7; (5) a capacidade de interagir especificamente ou se ligar a uma proteína Siglec-7; e (6) a capacidade de tratar, melhorar ou prevenir qualquer aspecto de uma doença ou distúrbio descrito ou contemplado neste documento.

[00125] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ter afinidades nanomolares ou mesmo picomolares para o antígeno alvo (por exemplo, Siglec-7 humano). Em certas modalidades, a constante de dissociação (KD) do anticorpo é de cerca de 0,001 nM a cerca de 124 nM. Em certas modalidades, a KD do anticorpo é de cerca de 0,001 nM a cerca de 54,1 nM. Em certas modalidades, a KD do anticorpo é de cerca de 0,10 nM a cerca de 2,2 nM. Em certas modalidades, a KD do anticorpo é de cerca de 0,198 nM a cerca de 0,740 nM. Em algumas modalidades, a KD do anticorpo é menor ou igual a cerca de 130 nM, 120nM, 110 nM, 100 nM, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 9,5 nM, 9 nM, 8,5 nM, 8 nM, 7,5 nM, 7 nM, 6,5 nM, 6 nM, 5,5 nM, 5 nM, 4,5 nM, 4 nM, 3,5 nM, 3 nM, 2,5 nM, 2 nM, 1,5 nM, 1 nM, 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM, 0,1 nM, 0,05nM, 0,01 nM, 0,005 nM, 0,004 nM, 0,003 nM, 0,002 nM, ou 0,001 nM. Em algumas modalidades, a KD do anticorpo é inferior a cerca de 46,3 nM. Em algumas modalidades, a KD do anticorpo é maior ou igual a cerca de 0,001 nM, 0,005 nM, 0,01 nM, 0,05 nM, 0,1 nM, 0,2 nM, 0,3 nM, 0,4 nM, 0,5 nM, 0,6 nM, 0,7 nM, 0,8 nM, 0,9 nM, 1 nM, 1,5 nM, 2 nM, 2,5 nM, 3 nM 3,5 nM, 4 nM, 4,5 nM, 5 nM, 5,5 nM, 6 nM, 6,5 nM, 7 nM, 7,5 nM, 8 nM, 8,5 nM, 9 nM, 9,5 nM, 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM, 100 nM, 110 nM, ou 120 nM. Ou seja, a KD do anticorpo pode ser qualquer uma de uma faixa de afinidades com um limite superior de cerca de 130 nM, 120 nM, 110 nM, 100 nM, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM , 30 nM, 20 nM, 10 nM, 9,5 nM, 9 nM, 8,5 nM, 8 nM, 7,5 nM, 7 nM, 6,5 nM, 6 nM, 5,5 nM, 5 nM, 4,5 nM, 4 nM, 3,5 nM, 3 nM, 2,5 nM, 2 nM, 1,5 nM, 1 nM, 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM, 0,1 nM, 0,05 nM, 0,01 nM, 0,005 nM, 0,004 nM, 0,003 nM, 0,002 nM ou 0,001 nM, e um limite inferior selecionado independentemente de cerca de 0,001 nM, 0,005 nM, 0,01 nM, 0,05 nM, 0,1 nM, 0,2 nM, 0,3 nM, 0,4 nM, 0,5 nM, 0,6 nM, 0,7 nM, 0,8 nM, 0,9 nM, 1 nM, 1,5 nM, 2 nM, 2,5 nM, 3 nM 3,5 nM, 4 nM, 4,5 nM, 5 nM, 5,5 nM, 6 nM, 6,5 nM, 7 nM, 7,5 nM, 8 nM, 8,5 nM, 9 nM, 9,5 nM, 10 nM. 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM, 100 nM, 110 nM ou 120 nM, em que o limite inferior é menor que o limite superior. Em algumas modalidades, a KD do anticorpo é qualquer um de cerca de 10 nM, cerca de 9 nM, cerca de 8 nM, cerca de 7 nM, cerca de 6 nM, cerca de 5 nM, cerca de 4 nM, cerca de 3 nM, cerca de 2 nM, cerca de 1 nM, cerca de 900 pM, cerca de 800 pM, cerca de 700 pM, cerca de 600 pM, cerca de 500 pM, cerca de 400 pM, cerca de 300 pM, cerca de 200 pM, cerca de 100 pM, cerca de 90 pM, cerca de 80 pM, cerca de 70 pM, cerca de 60 pM, cerca de 50 pM, cerca de 40 pM, cerca de 30 pM, cerca de 20 pM, cerca de 10 pM, cerca de 9 pM, cerca de 8 pM, cerca de 7 pM, cerca de 6 pM, cerca de 5 pM, cerca de 4 pM, cerca de 3 pM, cerca de 2 pM ou cerca de 1 pM.

[00126] Em algumas modalidades, a KD do anticorpo é igual a cerca de 0,198 nM.

[00127] Vários métodos para medir a afinidade de anticorpos são conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, o uso de ressonância plasmônica de superfície ou Interferometria de Biocamada (Consulte, por exemplo, Exemplo 1 abaixo). Em algumas modalidades, a KDpara Siglec-7 é determinada em uma temperatura de aproximadamente 25°C. Em algumas modalidades, a KD para Siglec-7 é determinada em uma temperatura de aproximadamente 4°C. Em algumas modalidades, a KD é determinada usando um anticorpo monovalente (por exemplo, um Fab) ou um anticorpo de comprimento completo em uma forma monovalente. Em algumas modalidades, a K D é determinada usando um anticorpo bivalente e a proteína Siglec-7 recombinante monomérica.

[00128] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm uma constante de dissociação inferior (K D ) para Siglec-7 do que um anticorpo controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo o sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação têm uma KD para um alvo (por exemplo, Siglec-7 humana) que é pelo menos cerca de 5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 55%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 99% inferior à KD de um anticorpo controle anti-Siglec-7 para o alvo (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o amino sequência de ácido de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm uma KD para um alvo (por exemplo, Siglec-7 humana) que é pelo menos cerca de 1 vez, pelo menos cerca de 1,1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 12,5 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 17,5 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 22,5 vezes, em pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 27,5 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, pelo menos cerca de 100 vezes, pelo menos cerca de 200 vezes, pelo menos cerca de 300 vezes, pelo menos cerca de 400 vezes, pelo menos cerca de 500 vezes, pelo menos cerca de 600 vezes, pelo menos cerca de 700 vezes, pelo menos cerca de 800 vezes, pelo menos cerca de 900 vezes, ou pelo menos cerca de 1000 vezes menor do que a KD de um anticorpo anti-Siglec-7 de controle para o alvo (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[00129] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 100 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 50 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 10 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 5 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 2 - vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 possuindo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ

[00130] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma KD para Siglec-7 humana que é pelo menos 5,3 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50.

[00131] Em algumas modalidades, a afinidade é medida por ressonância plasmônica de superfície. Em algumas modalidades, a afinidade é medida por Interferometria de Biocamada. Em algumas modalidades, a afinidade é medida em uma temperatura de aproximadamente 25°C. Em algumas modalidades, a afinidade é medida em uma temperatura de aproximadamente 4ºC. Em algumas modalidades, a afinidade é medida usando a abordagem experimental, conforme descrito no Exemplo 1 abaixo.

[00132] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem diminuir os níveis celulares (por exemplo, níveis de superfície celular) de Siglec-7 com concentração efetiva que induz metade do efeito máximo (EC50) (por exemplo, quando medido in vitro usando células dendríticas humanas primárias) na faixa picomolar. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 0,1 pM a cerca de 25,4 nM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 30 pM a cerca de 25,4 nM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 25,4 nM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 3,0 nM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 1,0 nM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 500 pM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 400 pM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 300 pM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 200 pM. Em certas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 33,2 pM a cerca de 100 pM.

[00133] Em algumas modalidades, EC50 do anticorpo é menor que cerca ou igual a cerca de 500 pM, 475 pM, 450 pM, 425 pM, 400 pM, 375 pM,

350pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM ou 0,5 pM.

[00134] Em algumas modalidades, EC50 do anticorpo é menor que cerca de 447,0 pM. Em algumas modalidades, EC50 do anticorpo é maior ou igual a cerca de 0,1 pM, 0,5pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, 400 pM, ou 425 pM. Ou seja, EC50 do anticorpo pode ser de qualquer faixa tendo um limite superior de cerca de 425 pM, 400 pM, 375 pM, 350pM, 325 pM, 300 pM, 275 pM, 250 pM, 225 pM, 200 pM, 175 pM, 150 pM, 125 pM, 100 pM, 90 pM, 80 pM, 70 pM, 60 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM, 10 pM, 1 pM, ou 0,5 pM, e um limite inferior selecionado independentemente de cerca de 0,1 pM, 0,5pM, 1 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 125 pM, 150 pM, 175 pM, 200 pM, 225 pM, 250 pM, 275 pM, 300 pM, 325 pM, 350 pM, 375 pM, ou 400 pM, em que o limite inferior é menor do que o limite superior. Em algumas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 15 pM, 20 pM, 25 pM, 30 pM, 35 pM, 40 pM, 45 pM, 50 pM, 55 pM, 60 pM, 65 pM, 70 pM, 75 pM, 80 pM, 85 pM, 90 pM, 95 pM, 100 pM, 105 pM, 110 pM, 115 pM, 120 pM, 125 pM, 130 pM, 135 pM, 140 pM, 145 pM, 150 pM, 155 pM, 160 pM, 165 pM, 170 pM, 175 pM, 180 pM, 185 pM, 190 pM, 195 pM ou 200 pM.

[00135] Em algumas modalidades, EC50 do anticorpo é de cerca de 61,2 pM.

[00136] Vários métodos para medir os valores de anticorpo EC50 são conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, por citometria de fluxo (consulte, por exemplo, Exemplo 2). Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando células dendríticas humanas primárias. Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando monócitos humanos primários. Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando macrófagos humanos primários. Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando células cultivadas transfectadas com Siglec-7 humana. Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 4°C. Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 25°C. Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 35°C. Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 37°C. Em algumas modalidades, EC50 é determinada usando um anticorpo monovalente ( por exemplo, um Fab) ou um anticorpo de comprimento completo em uma forma monovalente. Em algumas modalidades, EC 50 é determinada usando anticorpos contendo regiões constantes que demonstram ligação potencializada com o receptor Fc. Em algumas modalidades, EC50 é determinada usando anticorpos contendo regiões constantes que demonstram ligação reduzida com o receptor Fc.

[00137] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem potências mais elevadas na redução dos níveis de superfície celular de Siglec-7 em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 62 ou em relação a um anticorpo anti-Siglec-7 tendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência do SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação diminuem os níveis celulares (por exemplo, níveis de superfície celular) de Siglec- 7 com uma EC50 inferior (por exemplo, medida in vitro usando células dendríticas humanas primárias) do que um anticorpo controle anti-Siglec-7 ( por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo de controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação diminuem os níveis celulares (por exemplo, níveis de superfície celular) de Siglec-7 com uma EC50 que é pelo menos cerca de

5%, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 55%, em pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 99% mais baixo do que o EC50 de um anticorpo controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo anti-Siglec-7 de controle compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação diminuem os níveis celulares (por exemplo, os níveis de superfície celular) de Siglec-7 com um EC50 que é pelo menos cerca de 1 vez, pelo menos cerca de 1,1 vezes, pelo menos cerca de 1,5 vezes, pelo menos cerca de 2 vezes, pelo menos cerca de 3 vezes, pelo menos cerca de 4 vezes, pelo menos cerca de 5 vezes, pelo menos cerca de 6 vezes, pelo menos cerca de 7 vezes, pelo menos cerca de 8 vezes, pelo menos cerca de 9 vezes, pelo menos cerca de 10 vezes, pelo menos cerca de 12,5 vezes, pelo menos cerca de 15 vezes, pelo menos cerca de 17,5 vezes, pelo menos cerca de 20 vezes, pelo menos cerca de 22,5- vezes, pelo menos cerca de 25 vezes, pelo menos cerca de 27,5 vezes, pelo menos cerca de 30 vezes, pelo menos cerca de 50 vezes, ou pelo menos cerca de 100 vezes menor do que o EC50 de um anticorpo de controle anti-Siglec-7 (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7 de controle compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; e/ou um anticorpo controle anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma EC50 que é pelo menos 30,8 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma EC50 que é pelo menos 10,2 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma EC50 que é pelo menos 16,7 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma EC50 que é pelo menos 5,6 vezes menor do que um anticorpo anti-Siglec-7 com uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50. Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando células dendríticas humanas primárias.

Em algumas modalidades, EC50 é medida in vitro usando monócitos humanos primários.

Em algumas modalidades, EC 50 é medida in vitro usando macrófagos humanos primários.

Em algumas modalidades, EC 50 é medida in vitro usando células cultivadas transfectadas com Siglec-7 humana.

Em algumas modalidades, EC50 é medida por citometria de fluxo.

Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 25°C.

Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 35°C.

Em algumas modalidades, EC50 é medida em uma temperatura de aproximadamente 37°C.

Em algumas modalidades, EC50 é determinada usando anticorpos contendo regiões constantes que demonstram ligação potencializada com o receptor Fc. Em algumas modalidades, EC50 é determinada usando anticorpos contendo regiões constantes que demonstram ligação reduzida com o receptor Fc. Em algumas modalidades, EC50 é medida usando a abordagem experimental, conforme descrito no Exemplo 2 abaixo.

[00138] Qualquer ensaio baseado em células in vitro ou modelo in vivo adequado descrito neste documento ou conhecido na técnica pode ser usado para medir a inibição ou redução da interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem ou reduzem a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7 reduzindo a expressão de Siglec-7 (por exemplo, reduzindo a expressão da superfície celular de Siglec-7). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem ou reduzem a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7 em pelo menos 21%, pelo menos 22%, pelo menos 23%, pelo menos 24%, pelo menos 25%, pelo menos 26%, pelo menos 27%, pelo menos 28%, pelo menos 29%, pelo menos 30%, pelo menos 31%, pelo menos 32%, pelo menos 33%, pelo menos 34%, pelo menos 35%, pelo menos 36%, pelo menos 37%, pelo menos 38%, pelo menos 39%, pelo menos 40%, pelo menos 41%, pelo menos 42%, pelo menos 43%, pelo menos 44%, pelo menos 45%, pelo menos 46%, pelo menos 47%, pelo menos 48%, pelo menos 49%, pelo menos 50%, pelo menos 51%, pelo menos 52%, pelo menos 53%, pelo menos 54%, pelo menos 55%, pelo menos 56%, pelo menos 57%, pelo menos 58%, pelo menos 59%, pelo menos 60%, pelo menos 61%, pelo menos 62%, pelo menos 63%, pelo menos 64%, pelo menos 65%, pelo menos 66%, pelo menos 67%, pelo menos 68%, pelo menos 69%, pelo menos 70%, pelo menos 71%, pelo menos 72%, pelo menos 73%, pelo menos 74%, pelo menos 75%, pelo menos 76%, pelo menos 77%, pelo menos 78%, pelo menos 79%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou mais em concentrações de anticorpos de saturação utilizando qualquer ensaio in vitro ou ensaio de cultura baseado em células descrito neste documento ou conhecido na técnica.

[00139] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem o agrupamento da superfície celular de Siglec-7. Em algumas modalidades, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7, incluindo, sem limitação, a contra-ação de de um ou mais dentre fosforilação de Tyr-437 e Tyr-460 por uma tirosina quinase da família Src, como Syk, LCK, FYM, e/ou ZAP70; recrutamento de e ligação às proteínas fosfatases específicas tirosina SHP1 e SHP2; recrutamento de e ligação a PLC-gama1, que age como um fator de alteração de nucleotídeo de guanina para Dynamini-1; recrutamento de e ligação ao domínio SH2 contendo proteína (por exemplo., Crkl); recrutamento de e ligação à tirosina quinase do baço Syk; recrutamento de e ligação à proteína 2 ligada ao receptor do fator de crescimento SH3-SH2-SH3 (Grb2); recrutamento de e ligação às múltiplas proteínas contendo SH2; fosforilação de Ser-307 e Ser-342 pela proteína quinase C; expressão modulada de uma ou mais citocinas anti- inflamatórias, IL-4, IL-10, IL-13, IL-35, IL-16, TGF-beta, IL-1Ra, G-CSF, e receptores solúveis para TNF, IFN-beta1a, IFN-beta1b, ou IL-6 em monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; diminuição de mobilização de cálcio intracelular; expressão modulada de uma ou mais citocinas pró-inflamatórias IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, membros da família IL-20, LIF, IFN-gama, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, e MIP-1-beta em monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; expressão modulada de uma ou mais proteínas selecionadas dentre C1qa, C1qB, C1qC, C1s, C1R, C4, C2, C3, ITGB2, HMOX1, LAT2, CASP1, CSTA, VSIG4, MS4A4A, C3AR1, GPX1, TyroBP, ALOX5AP, ITGAM, SLC7A7, CD4, ITGAX, PYCARD, CD14, CD16, HLA-DR, e CCR2; inibição de quinase regulada por sinal extracelular (ERK) fosforilação; diminuição da fosforilação de tirosina em múltiplas proteínas celulares; expressão modulada de receptor de quimiocina C-C 7 (CCR7); inibição de quimiotaxia de célula da microglia em direção a células que expressam CCL19 e CCL21; ativação de fosfoinositídeo 3-quinase; redução de crescimento celular de monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas e/ou microglia; redução da proliferação de células T induzida por células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, monócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativida, microglia M2, macrófagos, macrófagos M1, macrófagos M1 ativados, e/ou macrófagos M2; inibição da produção de osteoclasto, taxa diminuída de osteoclastogênese, ou ambas; sobrevivência de neutrófilos diminuída, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, macrófagos, macrófagos M1,macrófagos M1 ativados, macrófagos M2, monócitos, osteoclastos, células T, células T helper, células T citotóxicas, granulócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativada, e/ou microglia M2; proliferação diminuída de neutrófilos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, macrófagos, macrófagos M1,macrófagos M1 ativados, macrófagos M2, monócitos, osteoclastos, células T, células T helper, células T citotóxicas, granulócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativada, e/ou microglia M2; inibição da migração dos neutrófilos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, macrófagos, macrófagos M1,macrófagos M1 ativados, macrófagos M2, monócitos, osteoclastos, células T, células T helper, células T citotóxicas, granulócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativada, e/ou microglia M2; diminuição de uma ou mais funções de neutrófilos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, macrófagos, macrófagos M1,macrófagos M1 ativados, macrófagos M2, monócitos, osteoclastos, células T, células T helper, células T citotóxicas, granulócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativada, e/ou microglia M2; inibição da maturação de neutrófilos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, macrófagos, macrófagos M1,macrófagos M1 ativados, macrófagos M2, monócitos, osteoclastos, células T, células T helper, células T citotóxicas, granulócitos, microglia, microglia M1, microglia M1 ativada, e/ou microglia M2; aumento da morte celular e apoptose de monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; redução da atividade fagocítica de monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; redução da proliferação de monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; redução da funcionalidade geral de monócitos, macrófagos, células T, células dendríticas, neutrófilos, e/ou microglia; fosforilação de um receptor contendo ITAM; fosforilação de moléculas de sinalização que medeiem a sinalização de ITAM; redução da ativação de receptores que reconhecem padrões; redução da ativação de receptores tipo Toll; redução da ativação de depuração de detritos celulares e proteicos associados ao dano; interação entre Siglec-7 e um ou mais dos ligantes deste; interação entre Siglec-7 e um co-receptor; redução de um ou mais tipo de depuração selecionada dentre depuração neuronal apoptótica, depuração de detrito do tecido nervoso, depuração de sinapse disfuncional, depuração de detrito de tecido não nervoso, depuração de bactérias ou outro corpo estranho, depuração de proteína causadora de doença, e depuração de célula tumoral; inibição da fagocitose de um ou mais dentre neurônios apoptóticos, detrito de tecido nervoso, detrito de tecido não nervoso, bactéria, outros corpos estranhos, proteínas causadoras de doença, peptídeos causadores de doença, ácidos nucleicos causadores de doença, lipídeos causadores de doença, ou células tumorais; inibição da depuração de um ácido nucleico causador de doença, como ácido nucleico causador de doença fosse RNA de repetição-expansão antisense GGCCCC (G2C4); ativação de de depuração de, uma proteína causadora de doença selecionada dentre beta amiloide, placas beta amiloide, proteína precursora amiloide ou fragmentos desta, Tau, IAPP, alfa-sinucleína, TDP-43, proteína FUS, C9orf72 (quadro de leitura aberto 72 do cromossomo 9), proteína c9RAN, proteína de príon, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutase, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, corpo de Lewy, fator netriurético atrial, polipeptídeo amiloide da ilhota, insulina, apolipoproteína AI, amiloide sérica A, medina, prolactina, transtirretina, lisozima, beta 2 microglobulina, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadeia leve da imunoglobulina AL, proteína S-IBM, produtos de tradução não-ATG (RAN) associados a repetição, peptídeos de repetição DiPeptide (DPR), peptídeos de repetição glicina-alanina (GA), peptídeos de repetição glicina-prolina (GP), peptídeos de repetição glicina-arginina (GR), peptídeos de repetição prolina- alanina (PA), ubiquitina, peptídeos de repetição proline-arginina (PR); inibição de respostas imunes benéficas a diferentes tipos de câncer selecionados dentre câncer de baxiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer do cólon, câncer retal, câncer endometrial, câncer renal, câncer de célula renal, câncer de pélvis renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, leucemia mieloide aguda, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrosarcoma, e câncer da tireoide; inibição da resposta imune benéfica a diferentes tipos de distúrbios neurológicos selecionados dentre demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu- Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, tremor essencial, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia sistêmica múltipla, síndrome de Shy-Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar cortical basal, encefalomielite aguda disseminada, distúrbios granulomatoso, Sarcoidose, doenças devido ao envelhecimento, convulções, lesões da medula espinhal, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada à idade, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, e esclerose múltipla; inibição da resposta imune benéfica a diferentes tipos de distúrbios inflamatórios e infecciosos selecionados dentre lúpus, colite aguda e crônica, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, infecção do trato respiratório, sepse, infecção do olho, infecção sistêmica, lúpus, artrite, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetróticas, e doença de Paget do osso; ligação a ligante de Siglec-7 em células tumorais; ligação a ligante de Siglec-7 em células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, monócitos, microglia, células T, neutrófilos, e/ou macrófagos; inibição de eliminação de células tumorais por um ou mais dentre microglia, macrófagos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, neutrófilos, células T, células T helper, ou células T citotóxicas; inibição da atividade de proliferação de célula anti-tumoral de um ou mais dentre microglia, macrófagos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, neutrófilos, células T, células T helper, ou células T citotóxicas; inibição de atividade de metástase de células anti-tumoral de um ou mais dentre microglia, macrfagos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, neutrófilos, células T, células T helper, ou células T citotóxicas; promoção de células dendríticas imunosupressoras, macrófagos imunosupressores, células supressoras derivadas de mieloide, macrófagos associados ao tumor, ou células T reguladoras; inibição de um ou mais dentre receptores contendo motivo ITAM, tal como TREM1, TREM2, FcγR, DAP10, e DAP12; inibição de um ou mais receptores contendo o motivo D/Ex0–2YxxL/IX6– 8YxxL/I (SEQ ID NO: 67); inibição da sinalização por um ou mais receptores que reconhcem padrões (PRRs), tais como receptores que identificam padrões moleculares associados a patógeno (PAMPs), e receptores que identificam padrões moleculares associados ao dano (DAMPs); inibição da sinalização de um ou mais receptores tipo; inibição da via de sinalização JAK-STAT; inibição do potenciador de cadeia leve kapa do fator nuclear de células B ativadas (NFκB); inibição da mobilização de PLCγ/PKC/cálcio; inibição de PI3K/Akt, sinalização de Ras/MAPK; expressão reduzida de um ou mais receptores inflamatórios, tais como CD86, expressos em um ou mais dentre microglia, macrófagos, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, neutrófilos, células T, células T helper, ou células T citotóxicas; expressão aumentada de um ou mais dentre genes dependentes de Siglec-7; normalização da expressão de gene dependente de Siglec-7 perturbada; e expressão diminuída de um ou mais genes dependente de ITAM, tais como fatores de transcrição NFAT.

[00140] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 inibem a interação (por exemplo, ligação) entre uma proteína Siglec-7 da presente divulgação e um ou mais ligantes de Siglec-7 incluindo, sem limitação, ligantes de Siglec-7 expressos em hemácias, ligantes de Siglec-7 expressos em células bacterianas, ligantes de Siglec-7 expressos em células apoptóticas, ligantes de Siglec-7 expressos em células tumorais, ligantes de Siglec-7 expressos em vírus, ligantes de Siglec-7 expressos em células dendríticas, ligantes de Siglec-7 expressos em células nervosas, ligantes de Siglec-7 expressos em células gliais, ligantes de Siglec-7 expressos em microglia, ligantes de Siglec-7 expressos em astrócitos, ligantes de Siglec-7 em placas beta amilóides, ligantes de Siglec-7 em emaranhados Tau , ligantes de Siglec-7 em proteínas causadoras de doenças,

ligantes de Siglec-7 em peptídeos causadores de doenças, ligantes de Siglec-7 expressos em macrófagos, ligantes de Siglec-7 expressos em células natural killer, ligantes de Siglec-7 expressos em células T, ligantes de Siglec-7 expressos em células T helper, ligantes de Siglec-7 expressos em células T citotóxicas, ligantes de Siglec-7 expressos em células B, ligantes de Siglec-7 expressos em células dendríticas imunossupressoras embutidas em tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em macrófagos imunossupressores embutidos em tumor, ligantes de Siglec-7 expressos em células supressoras derivadas de mielóide, ligantes de Siglec-7 expressos em células T reguladoras, mucinas secretadas, ácido siálico, glicolipídeos contendo ácido siálico, glicoproteínas contendo ácido siálico, glicolipídeos contendo ácido siálico ligados a alfa-2,6, glicoproteínas contendo ácido siálico ligados a alfa-2,6, glicolipídeos contendo ácido siálico ligadas a alfa- 2,3, glicoproteínas contendo ácido siálico ligadas a alfa-2,3, glicoproteína ácida alfa-1 (AGP), proteína CD24 e gangliosídeos.

[00141] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a uma proteína Siglec-7 da presente divulgação expressa na superfície da célula e os anticorpos nus inibem a interação (por exemplo, ligação) entre a proteína Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação que se ligam a uma proteína Siglec-7 da presente interação de inibição (por exemplo, ligação) entre a proteína Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, reduzindo os níveis efetivos de Siglec-7 que estão disponíveis para interagir com essas proteínas na superfície celular ou no interior da célula. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação que se ligam a uma proteína Siglec-7 da presente interação inibem (por exemplo, ligação) entre a proteína Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7 induzindo a degradação de Siglec-7.

[00142] Conforme utilizado neste documento, os níveis de Siglec-7 podem referir-se a níveis de expressão do gene que codifica Siglec-7; a níveis de expressão de um ou mais transcritos que codificam Siglec-7; aos níveis de expressão da proteína Siglec-7; e/ou à quantidade de proteína Siglec-7 presente nas células e/ou na superfície celular. Quaisquer métodos conhecidos na técnica para medir níveis de expressão gênica, transcrição, tradução e/ou abundância ou localização de proteínas podem ser utilizados para determinar os níveis de Siglec-

7.

[00143] Além disso, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para prevenir, reduzir o risco ou tratar demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu- Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy-Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis,

HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser utilizados para induzir ou promover a sobrevivência, maturação, funcionalidade, migração ou proliferação de uma ou mais células imunes em um indivíduo em necessidade; ou para diminuir a atividade, funcionalidade ou sobrevivência de células T reguladoras, células dendríticas imunossupressoras embutidas em tumor, macrófagos imunossupressores embutidos em tumor, células supressoras derivadas de mieloides, macrófagos associados aos tumores, macrófagos associados aos tumores, células de leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL) e/ou célula de leucemia mieloide crônica (CML) em um indivíduo necessitado. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são anticorpos monoclonais.

[00144] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec- 7isolado da presente divulgação diminui os níveis celulares de Siglec-7 (por exemplo, níveis de superfície celular, níveis intracelulares e/ou níveis totais). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação induz a regulação negativa de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação induz a clivagem de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação induz a internalização de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- Siglec-7isolado da presente divulgação induz a liberação de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação induz a degradação de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- Siglec-7isolado da presente divulgação induz a dessensibilização de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpoanti-Siglec-7 isolado da presente divulgação atua como um ligante mimético para ativar transitoriamente Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação atua como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir uma diminuição nos níveis celulares de Siglec-7 e/ou inibição da interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação age como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a degradação de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec- 7isolado da presente divulgação atua como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a clivagem de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação age como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a degradação internalização de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação atua como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a liberação de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7isolado da presente divulgação age como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a regulação negativa de Siglec-7. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- Siglec-7isolado da presente divulgação atua como um ligante mimético e ativa transitoriamente Siglec-7 antes de induzir a dessensibilização de Siglec-7.

[00145] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 isolado da presente divulgação é um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo multivalente ou um anticorpo quimérico. As descrições exemplificativas de tais anticorpos são encontradas ao longo da presente divulgação.

[00146] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a uma Siglec-7 humana, ou um homólogo desta, incluindo, sem limitação, uma proteína Siglec-7 de mamífero ou uma proteína Siglec-7 de primata não humano. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação podem se ligar especificamente à Siglec-7 humana. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam à Siglec-7 humana e não têm reatividade cruzada a ortólogos ou homólogos da Siglec-7 de outras espécies.

[00147] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a uma proteína Siglec-7 da presente divulgação expressa na superfície de uma célula e modulam (por exemplo, induzem ou inibem) uma ou mais atividades de Siglec-7 da presente divulgação, após a ligação à proteína Siglec-7 expressa em superfície. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são anticorpos inertes.

Anticorpos exemplares anti-Siglec-7

[00148] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a um epítopo de Siglec-7 humana que é o mesmo ou se sobrepõe ao epítopo Siglec-7 ligado por um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ligam- se essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 ligado por um anticorpo anti- Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e um região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62.

[00149] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem competitivamente a ligação de um anticorpo anti- Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação competem com um anticorpo anti-Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo o aminoácido sequência de SEQ ID NO: 62 para ligação a Siglec-7.

[00150] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inibem competitivamente a ligação de pelo menos um anticorpo selecionado a partir de qualquer um dos anticorpos listados nas Tabelas 1-5, 6A-6C, 7A-7C, 8A-8D, 9A-9D, 10 e 11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação inibe a ligação de maneira competitiva de pelo menos um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado a partir S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-

H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB- H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB- H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB- H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB- H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes.

[00151] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compete com um ou mais anticorpos compreendendo a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB- H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB- H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2,e qualquer combinação destes, para ligação a Siglec-7, onde o o anticorpo anti-Siglec-7 reduz a ligação de anticorpos anti-Siglec-7 competidores descritos neste documento a Siglec-7 em uma quantidade que varia de cerca de 50% a 100%, em comparação com a ligação a Siglec-7 na ausência do anticorpo anti-Siglec-7, medido por ressonância plasmônica de superfície. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compete com um ou mais anticorpos pela ligação ao

Siglec-7, onde o anticorpo anti-Siglec-7 reduz a ligação de um ou mais anticorpos anti-Siglec-7 competidores descritos neste documento por pelo menos 50%, pelo menos 55%, por pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou 100%, em comparação com a ligação ao Siglec-7 na ausência do anticorpo anti-Siglec-7, conforme medido pela ressonância plasmônica de superfície.

[00152] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação que reduz a ligação de um ou mais anticorpos anti-Siglec-7 competidores a Siglec-7 em 100% indica que o anticorpo anti-Siglec-7 essencialmente bloqueia completamente a ligação de um ou mais anticorpos que compreendem a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB- H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB- H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB- H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes a Siglec-7, conforme medido por ressonância plasmônica de superfície.

[00153] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação que compete com um anticorpo compreendendo a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB- H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-

H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, e S7AB-H8.45.2, estão presentes em uma quantidade que corresponde a uma razão de 10:1 razão de 9:1, razão de 8:1, razão de 7:1, razão de 6:1, razão de 5:1, razão de 4:1, razão de 3:1, razão de 2:1, razão de 1:1, razão de 0,75:1, razão de 0,5:1, razão de 0,25:1, razão de 0,1:1, razão de 0,075:1, razão de 0,050:1, razão de 0,025:1, razão de 0,01:1, razão de 0,0075:, razão de 0,0050:1, razão de 0,0025:1, razão de 0,001, razão de 0,00075:1, razão de 0,00050:1, razão de 0,00025:1, razão de 0,0001:, razão de 1:10, razão de 1:9, razão de 1:8, razão de 1:7, razão de 1:6, razão de 1:5, razão de 1:4, razão de 1:3, razão de 1:2, razão de 1:0,75, razão de 1:0,5, razão de 1:0,25, razão de 1:0,1, razão de 1:0,075, razão de 1:0,050, razão de 1:0,025, razão de 1:0,01, razão de 1:0,0075, razão de 1:0,0050, razão de 1:0,0025, razão de 1:0,001, razão de 1:0,00075, razão de 1:0,00050, razão de 1:0,00025, ou razão de 1:0,0001 (anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação: anticorpo anti-Siglec-7 competidor descrito neste documento) no ensaio de competição.

[00154] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compete com um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB- H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB- H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19,

S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45 está presente em excesso em um quantidade que varia entre cerca de 1,5 vezes até 100 vezes, ou mais que 100 vezes comparado à quantidade dos um ou mais anticorpos anti-Siglec-7 competidores descritos neste documento no ensaio de competição. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação é cerca de 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 15 vezes, 20 vezes, 25 vezes, 30 vezes, 35 vezes, 40 vezes, 45 vezes, 50 vezes, 55 vezes, 60 vezes, 65 vezes, 70 vezes, 75 vezes, 80 vezes, 85 vezes, 90 vezes, 95 vezes ou 100 vezes maior em abundância em comparação com a quantidade de um ou mais anticorpos anti-Siglec-7 competidores descritos neste documento no ensaio de competição.

[00155] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação se ligam a um epítopo de Siglec-7 humano que é o mesmo ou se sobrepõe ao epítopo Siglec-7 ligado por pelo menos um anticorpo selecionado a partir de qualquer um dos anticorpos listados nas Tabelas 1-5, 6A- 6C, 7A-7C, 8A-8D, 9A-9D, 10 e 11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação se liga a um epítopo de Siglec-7 humano que é o mesmo ou se sobrepõe com o epítopo de Siglec-7 ligado por peli menos um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB- H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22,

S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2.

[00156] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ligam-se essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 ligado por pelo menos um anticorpo selecionado a partir de qualquer um dos anticorpos listados nas Tabelas 1-5, 6A-6C, 7A-7C, 8A -8D, 9A-9D, 10 e 11. Em algumas modalidades, ligar "essencialmente o mesmo epítopo Siglec-7" significa ligar pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% dos resíduos de aminoácidos no epítopo.

[00157] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação se liga ao mesmo epítopo de Siglec-7 humano ligado por pelo menos um anticorpo que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB- H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-

H8.45.2. Os métodos exemplares detalhados para o mapeamento de um epítopo ao qual um anticorpo se liga são fornecidos em Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", em Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).

[00158] Qualquer ensaio de competição adequado ou ensaio de ligação Siglec-7 conhecido na técnica, tal como análise BIAcore, Interferometria de Biocamada, ensaios ELISA ou citometria de fluxo, pode ser utilizado para determinar se um anticorpo anti-Siglec-7 compete com um ou mais anticorpos selecionados dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB- H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB- H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB- H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes, para ligação a Siglec-7

[00159] Em um ensaio de competição exemplificativo, Siglec-7 imobilizada ou células que expressam Siglec-7 na superfície celular são incubadas em uma solução compreendendo um primeiro anticorpo marcado que se liga à Siglec-7 (por exemplo, primata humano ou não humano) e um segundo anticorpo não marcado que está sendo testado pela sua capacidade de competir com o primeiro anticorpo pela ligação à Siglec-7. O segundo anticorpo pode estar presente em um sobrenadante do hibridoma. Como um controle, Siglec-7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 são incubadas em uma solução compreendendo o primeiro anticorpo marcado, mas não o segundo anticorpo não marcado. Após incubação em condições permissivas para a ligação do primeiro anticorpo a Siglec-7, o excesso de anticorpo não ligado é removido e a quantidade de marcador associada a Siglec-7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 é medida. Se a quantidade de marcador associada a Siglec- 7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 for substancialmente reduzida na amostra de teste em relação à amostra de controle, então isso indica que o segundo anticorpo está competindo com o primeiro anticorpo pela ligação a Siglec-7. Consulte Harlow e Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual cap.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). Regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada de anticorpo anti- Siglec-7

[00160] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais ou todas as três) HVRs selecionadas entre HVR-H1, HVR-H2 e HVR -H3 (como mostrado nas Tabelas 6A-6C). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3 (como mostrado nas Tabelas 6A-6C).

[00161] Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência de acordo com a Fórmula I: GYAFTX1X2WMN (SEQ ID NO: 6), em que X1 é E, M, G, ou A, e X2 é T, A, ou Y. Em algumas modalidades, a HVR-H1 compreende uma sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 1-5. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência de acordo com a Fórmula II: RIFPGX1GHTN (SEQ ID NO: 9), em que X1 é L ou Y. Em algumas modalidades, a HVR-H2 compreende uma sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 7-8. Em algumas modalidades, a HVR-H3 compreende uma sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10).

[00162] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 de acordo com a Fórmula I, uma HVR-H2 de acordo com a Fórmula II e uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 1-5, e HVR-H2 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 7-8, e uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 10.

[00163] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende a HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB- H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB- H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação deste (conforme mostrado nas Tabelas 6A a 6C).

[00164] Em algumas modalidades, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada em que a região variável de cadeia pesada compreende um ou mais dentre: (a) uma HVR- H1 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade a uma sequência de aminoácido HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-

H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2; (b) uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade e uma sequência de aminoácido HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2; e (c) uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade e uma sequência de aminoácido de HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB- H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45,

S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2.

[00165] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10).

[00166] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia leve compreendendo uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais ou todas as três) HVRs selecionadas entre HVR-L1, HVR-L2 e HVR -L3 (como mostrado nas Tabelas 7A-7C). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3 (como mostrado nas Tabelas 7A-7C). Em algumas modalidades, o anticorpo não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

[00167] Em algumas modalidades, a HVR-L1 compreende uma sequência de acordo com a Fórmula III: RX1SX2DX3NTYLN (SEQ ID NO: 15), em que X1 é G ou A, X2 é Q ou E, e X3 é I, T, ou A. Em algumas modalidades, a HVR- L1 compreende uma sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 11-14. Em algumas modalidades, a HVR-L2 compreende uma sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16). Em algumas modalidades, a HVR-L3 compreende uma sequência de acordo com a Fórmula IV: QX1GX2X3X4PWT (SEQ ID NO: 24), em que X1 é Q ou G, X2 é N ou G, X3 é L, T, V, ou I, e X4 é L ou K. Em algumas modalidades, a HVR-L3 compreendem uma sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 17-23.

[00168] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 de acordo com a Fórmula III, uma HVR-L2 que compreende uma sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e uma HVR-L3 de acordo com a Fórmula IV, e o anticorpo é não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 11-14, uma HVR-L2 que compreende uma sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e uma HVR-L3 que compreende uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 17-23, e o anticorpo não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

[00169] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende a HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB- H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes (conforme mostrado nas Tabelas 7A a 7C).

[00170] Em algumas modalidades, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia leve em que a região variável de cadeia leve compreende um ou mais dentre: (a) uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos

90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade a uma sequência de aminoácido HVR-L1 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2; (b) uma HVR-L2 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade a uma sequência de aminoácido HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2; e (c) uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácido com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade a uma sequência de aminoácido HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2, e o anticorpo não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

[00171] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[00172] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais ou todas as três) HVRs selecionadas entre HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 (como mostrado nas Tabelas 6A-6C) e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais ou todas as três) HVRs selecionadas entre HVR-L1, HVR-L2 e HVR -L3 (como mostrado nas Tabelas 7A- 7C). Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3 (como mostrado nas Tabelas 6A-6C), e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1, uma HVR- L2 e uma HVR-L3 (como mostrado nas tabelas 7A-7C).

[00173] Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 de acordo com a Fórmula I, uma HVR-H2 de acordo com a Fórmula II e uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10) e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 de acordo com a Fórmula III, uma HVR-L2 compreendendo uma sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e uma HVR-L3 de acordo com a Fórmula IV. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 1-5, e HVR-H2 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 7-8, e uma HVR-H3 compreendendo uma sequência da SEQ ID NO: 10, e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs: 11-14 e HVR-L2 que compreende uma sequência da SEQ ID NO: 16 e uma HVR -L3 compreendendo uma sequência selecionada de SEQ ID NOs: 17-23. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada compreendendo a HVR-H1, HVR-H2, e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB- H8.45.2, e qualquer combinação destes (conforme mostrado nas Tabelas 6A a 6C); e uma região variável de cadeia leve compreendendo a HVR-L1, HVR-L2, e

HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB- H8.45.2, e qualquer combinação destes (conforme mostrado nas Tabelas 7A a 7C).

[00174] Em algumas modalidades, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que o anticorpo compreende a HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2 (conforme mostrado nas Tabelas 6A a 6C e 7A a 7C).

[00175] Em algumas modalidades, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais dentre: (a) uma HVR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB- H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB- H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2; (b) uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB- H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB- H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-

H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2; e (c) uma HVR-H3 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB- H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB- H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2; e em que a região variável de cadeia leve compreende um ou mais dentre: (a) uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR-L1 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-

H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB- H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2; (b) uma HVR-L2 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR- L2 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB- H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB- H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB- H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2; e (c) uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% identidade e uma sequência de aminoácido HVR- L3 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45,

S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB- H8.45.2, e o anticorpo não é um anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de RASQDINTYLN (SEQ ID NO: 65), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

[00176] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação compreende (a) a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTMAWMN (SEQ ID NO: 2), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGYGHTN (SEQ ID NO: 8), a HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNLLPWT (SEQ ID NO: 17); (b) a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDTNTYLN (SEQ ID NO: 12), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e a HVR-L3 compreendendo o sequência de aminoácidos QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20); (c) a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e a HVR-L3 compreendendo o sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23); ou (d) a HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), a HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16) e a HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[00177] Em uma modalidade específica, um anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação inclui uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[00178] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NOs: 36-

48. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB- H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-

H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB- H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado na Tabela 10).

[00179] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10).

[00180] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NOs: 49-

60. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve inclui a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB- H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB- H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado na Tabela 11).

[00181] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação incluem uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

[00182] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação inclui uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 36-48; e/ou uma região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 49-60. Em algumas modalidades, o anticorpo inclui uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 41, 42 e 43; e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 52, 55 e

60. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60; ou uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

[00183] Em um aspecto, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo inclui uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 36-48; e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 49-60. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID

NOs: 41, 42 e 43; e a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 52, 55 e 60. Em algumas modalidades, (a) a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41, e a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52; (b) a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42, e a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55; (c) a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42, e a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60; ou (d) a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43, e a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

[00184] Em um aspecto, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação se liga a uma proteína Siglec-7, em que o anticorpo inclui (a) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52; (b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55; (c) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60; ou (d) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

[00185] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação inclui uma região variável de cadeia pesada possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, e uma região variável de cadeia leve possuindo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60.

[00186] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB- H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB- H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB- H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB- H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado na Tabela 10), e uma região variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB- H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB- H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado na Tabela 11).

[00187] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NOs: 40, 41, 42, 43 e 44. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada de S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13,

S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB-H8.35, S7AB-H8.43, ou S7AB-H8.44 (conforme mostrado na Tabela 10). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada de SEQ ID NOs: 52, 54, 55, 58 e 60. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve de S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13, S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB -H8.35, S7AB-H8.43 ou S7AB-H8.44 (conforme mostrado na Tabela 11). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 40, 41, 42, 43 e 44, e uma região variável da cadeia leve compreendendo um sequência de aminoácidos selecionada dentre SEQ ID NOs: 52, 54, 55, 58 e 60. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada de S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13, S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB -H8.35, S7AB-H8.43, ou S7AB-H8.44 (conforme mostrado na Tabela 10), e uma região variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13, S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB-H8.35, S7AB- H8.43 ou S7AB-H8.44 (conforme mostrado na Tabela 11).

[00188] Qualquer um dos anticorpos da presente divulgação pode ser produzido por uma linhagem celular. Em algumas modalidades, a linhagem celular pode ser uma linha celular de mamífero. Em certas modalidades, a linhagem celular pode ser uma linha celular de hibridoma. Em outras modalidades, a linhagem celular pode ser uma linhagem celular de levedura. Qualquer linhagem celular conhecida na técnica adequada para produção de anticorpos pode ser usada para produzir um anticorpo da presente divulgação. Linhagens celulares exemplificativas para produção de anticorpos são descritas ao longo da presente divulgação.

[00189] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo anti-Siglec-7 monoclonal que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2,

S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB- H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB- H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB- H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB- H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB- H8.45.1 ou S7AB-H8.45.2.

[00190] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com um aminoácido de domínio variável de cadeia leve sequência de ácido do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2, e sequências de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.1. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52, em que o domínio variável de cadeia leve compreende HVR-L1, HVR-L2, e sequências de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.1. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.1 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.1 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.1 ou da SEQ ID NO: 40, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.1, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.1 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.1. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.1 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.1 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.1 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.1 ou da SEQ ID NO: 52, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB-H8.1, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.1 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.1.

[00191] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.2 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com um aminoácido de domínio variável de cadeia leve sequência de ácido do anticorpo S7AB-H8.2 ou para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.2 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2, e sequências de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.2 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52, em que o domínio variável de cadeia leve compreende HVR-L1, HVR-L2, e sequências de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) tendo pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.2 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.2 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.2 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.2 ou da SEQ ID NO: 41, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.2, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.2 e

(c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.2 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.2 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.2 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.2 ou da SEQ ID NO: 52, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB-H8.2, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.2 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.2.

[00192] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%,

pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.11 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com um aminoácido de domínio variável de cadeia leve sequência de ácido do anticorpo S7AB-H8.11 ou para a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos identidade de pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% para uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.11 ou à sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 de anticorpo S7AB-H8.11. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.11 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 54, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2, e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.11 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.11 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.11 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.11 ou da SEQ ID NO: 40, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.11, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.11 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.11. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.11 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.11 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.11 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.11 ou da SEQ ID NO: 54, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.11, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.11 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.11.

[00193] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com um aminoácido de domínio variável de cadeia leve sequência de ácido do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.13. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, de pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.13. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.13 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.13 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.13 ou da SEQ ID NO: 42, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.13, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.13 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.13. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.13 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.13 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.13 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 54. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.13 ou da SEQ ID NO: 54, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.13, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.13 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.13.

[00194] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2, e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.18. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.18. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.18 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.18 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.18 ou da SEQ ID NO: 42, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.18, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.18 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.18. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.18 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.18 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.18 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.18 ou da SEQ ID NO: 55, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.18, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.18 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.18.

[00195] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2, e sequências de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.20. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 55, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.20. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.20 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.20 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.20 ou da SEQ ID NO: 44, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.20, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.20 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.20. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.20 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.20 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.20 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.20 ou da SEQ ID NO: 55, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.20, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.20 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.20.

[00196] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%,

pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 44, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.35. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.35. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.35 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.35 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.35 ou da SEQ ID NO: 44, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.35, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.35 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.35. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.35 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.35 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.35 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.35 ou da SEQ ID NO: 58, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.35, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.35 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.35.

[00197] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.43. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.43. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.43 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.43 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.43 ou da SEQ ID NO: 42, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.43, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.43 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.43. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.43 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.43 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.43 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR. Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.43 ou da SEQ ID NO: 60, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência. Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.43, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.43 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.43.

[00198] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável da cadeia leve e um domínio variável da cadeia pesada, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, em pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, em pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43; e/ou o domínio variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, em pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos

94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, em que o domínio variável de cadeia pesada compreende as sequências de aminoácidos HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.44. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem um domínio variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60, em que o domínio variável de cadeia leve compreende as sequências de aminoácidos HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.44. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende uma sequência do domínio variável de cadeia pesada (VH) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.44 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou deletado na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada do anticorpo S7AB-H8.44 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VH do anticorpo S7AB-H8.44 ou da SEQ ID NO: 43, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-H1 do anticorpo S7AB-H8.44, (b) a sequência de aminoácidos HVR-H2 do anticorpo S7AB-H8.44 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-H3 do anticorpo S7AB-H8.44. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma sequência do domínio variável de cadeia leve (VL) com pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade com uma sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.44 ou com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60 e contém substituições (por exemplo, inserções, deleções ou substituições conservativas em relação à sequência de referência), mas o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende que essa sequência mantém a capacidade de se ligar ao Siglec-7. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.44 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em certas modalidades, um total de 1 a 5 aminoácidos foi substituído, inserido e/ou excluído na sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve do anticorpo S7AB-H8.44 ou na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60. Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas regiões FR). Em algumas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem nas regiões FR.

Opcionalmente, o anticorpo anti-Siglec-7 compreende a sequência VL do anticorpo S7AB-H8.44 ou da SEQ ID NO: 60, incluindo modificações pós-tradução dessa sequência.

Em uma modalidade específica, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas dentre: (a) a sequência de aminoácidos HVR-L1 do anticorpo S7AB- H8.44, (b) a sequência de aminoácidos HVR-L2 do anticorpo S7AB-H8.44 e (c) a sequência de aminoácidos HVR-L3 do anticorpo S7AB-H8.44.

[00199] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é o anticorpo monoclonal anti-Siglec-7 S7AB-H8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que se liga essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 que S7AB-H8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal S7AB-H8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H8.

[00200] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é o anticorpo monoclonal anti-Siglec-7 S7AB-H9. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que se liga essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 que S7AB-H9. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal S7AB-H9. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H9. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H9.

[00201] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é o anticorpo monoclonal anti-Siglec-7 S7AB-H11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que se liga essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 que S7AB-H11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal S7AB-H11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H11. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H11.

[00202] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é o anticorpo monoclonal anti-Siglec-7 S7AB-H12. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que se liga essencialmente ao mesmo epítopo Siglec-7 que S7AB-H12. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal S7AB-H12. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H12. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo isolado que compreende a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal S7AB-H12.

[00203] Em certas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo antagonista. Em certas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é um anticorpo agonista ou um anticorpo inerte. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são da classe IgG, da classe IgM ou da classe IgA. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são da classe IgG e possuem um isotipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.

[00204] Os anticorpos anti-Siglec-7 adicionais, por exemplo, anticorpos que se ligam especificamente a uma proteína Siglec-7 da presente divulgação, podem ser identificados, triados e/ou caracterizados por suas propriedades físicas/químicas e/ou atividades biológicas por vários ensaios conhecidos na técnica.

[00205] Anticorpos anti-Siglec-7 capazes de se ligar a receptores gama Fc

[00206] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação mantêm a capacidade de ligar os receptores gama Fc (Fcγ). Em algumas modalidades, esses anticorpos quando possuem a especificidade correta do epítopo que é compatível com a ativação do receptor, podem ter características que permitam se agrupar e estimular transitoriamente, por exemplo, o receptor Siglec-7. Em algumas modalidades, tais anticorpos podem posteriormente atuar como inibidores de longo prazo da expressão de Siglec-7 e/ou uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7 induzindo a degradação de Siglec-7, dessensibilização de Siglec-7, clivagem de Siglec-7, internalização de Siglec-7, liberação de Siglec-7, regulação negativa da expressão de Siglec-7 e/ou degradação lisossomal de Siglec-7.

[00207] In vivo, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem agrupar receptores e ativar transitoriamente o Siglec-7 por qualquer um ou mais dos múltiplos mecanismos potenciais. Alguns isotipos de anticorpos humanos, como IgG2, possuem, devido à sua estrutura única, uma capacidade intrínseca de agrupar receptores ou manter os receptores em uma configuração agrupada, ativando assim receptores tais como Siglec-7 sem ligação a um receptor Fc (por exemplo, White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148).

[00208] Em algumas modalidades, outros anticorpos podem agrupar receptores (por exemplo, Siglec-7) ligando-se a receptores Fc gama em células adjacentes. Em algumas modalidades, a ligação da região constante Fc de IgG do anticorpo com os receptores Fc gama pode levar à agregação dos anticorpos, e os anticorpos, por sua vez, agregam os receptores aos quais se ligam através de sua região variável (Chu et al (2008) Mol Immunol, 45:3926- 3933; e Wilson et al., (2011) Cancer Cell 19, 101–113). Em algumas modalidades, a ligação com o receptor Fc gama inibidor FcγR (FcγRIIB) que não provoca secreção de citocinas, explosão oxidativa, aumento da fagocitose e potencialização da citotoxicidade mediada por células (ADCC) dependente de anticorpo é frequentemente uma maneira preferencial de agrupar anticorpos in vivo, visto que a ligação a FcγRIIB não está associada a efeitos de resposta imune adversos.

[00209] Existem outros mecanismos pelos quais os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem agrupar receptores. Por exemplo, em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo (por exemplo, fragmentos Fab) que são reticulados juntos podem ser usados para agrupar receptores (por exemplo, Siglec-7) de uma maneira semelhante a anticorpos com regiões Fc que se ligam a receptores Fc gama, conforme descrito acima. Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpos reticulados (por exemplo, fragmentos Fab) podem funcionar como anticorpos agonistas se induzirem o agrupamento de receptores na superfície celular e se ligarem a um epítopo apropriado no alvo (por exemplo, Siglec-7).

[00210] Portanto, em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação que se ligam a uma proteína Siglec-7 podem incluir anticorpos que, devido à sua especificidade de epítopo, ligam-se a Siglec-7 e ativam transitoriamente uma ou mais atividades Siglec-7 antes que, por exemplo, diminuam os níveis celulares de Siglec-7, inibir uma ou mais atividades Siglec-7 e/ou inibir a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, tais anticorpos podem se ligar ao sítio de ligação ao ligante no Siglec-7 e imitar transitoriamente a ação de um ligante natural, ou estimular o antígeno alvo a transduzir o sinal através da ligação com um ou mais domínios que não sejam os sítios de ligação ao ligante. Em algumas modalidades, esses anticorpos não interferem na ligação ao ligante. Em algumas modalidades, independentemente de os anticorpos se ligarem ou não ao sítio de ligação ao ligante em Siglec-7, os anticorpos podem posteriormente atuar como inibidores de longo prazo da expressão de Siglec-7 e/ou uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7 induzindo a degradação de Siglec-7, dessensibilização de Siglec-7, clivagem de Siglec-7, internalização de Siglec-7, liberação de Siglec- 7, regulação negativa da expressão de Siglec-7 e/ou degradação lisossomal de Siglec-7.

[00211] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação é um anticorpo que induz transitoriamente uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7. Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser testados quanto à sua capacidade de induzir transitoriamente uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7 utilizando qualquer técnica ou ensaio adequado conhecido na técnica e divulgado neste documento. Independentemente das atividades que tais anticorpos induzem transitoriamente, tais anticorpos podem posteriormente atuar como inibidores de longo prazo da expressão de Siglec-7 e/ou uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7 induzindo a degradação de Siglec-7, dessensibilização de Siglec-7, Clivagem de Siglec-7, internalização de Siglec-7, liberação de Siglec-7, regulação negativa da expressão de Siglec-7 e/ou degradação lisossomal de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz transitoriamente uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7, independentemente da ligação a um receptor Fc.

[00212] As modificações e isotipos Fc de anticorpo exemplificativos são fornecidos na Tabela B abaixo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação que é capaz de se ligar a um receptor gama Fc possui um isotipo Fc listado na Tabela B abaixo. Tabela B: Isotipos Fc de anticorpo anti-Siglec-7exemplificativos que são capazes de se ligar ao receptor gama Fc Isotipo Fc Mutação (esquema de numeração EU) IgG1 N297A IgG1 D265A e N297A IgG1 D270A IgG1 L234A e L235A L234A e G237A L234A e L235A e G237A IgG1 D270A e/ou P238D e/ou L328E e/ou E233D e/ou G237D e/ou H268D e/ou P271G e/ou A330R IgG1 P238D e L328E e E233D e G237D e H268D e P271G e A330R IgG1 P238D e L328E e G237D e H268D e P271G e A330R IgG1 P238D e S267E e L328F e E233D e G237D e H268D e P271G e A330R IgG1 P238D e S267E e L328F e G237D e H268D e P271G e A330R IgG2 V234A e G237A IgG4 L235A e G237A e E318A

Isotipo Fc Mutação (esquema de numeração EU) IgG4 S228P e L236E Híbrido IgG2/4 IgG2 aa 118 a 260 e IgG4 aa 261 a 447 H268Q e V309L; e A330S e P331S IgG1 C226S e C229S e E233P e L234V e L235A IgG1 L234F e L235E e P331S IgG2 C232S ou C233S IgG2 A330S e P331S IgG1 S267E e L328F S267E sozinho IgG2 S267E e L328F IgG4 S267E e L328F IgG2 WT HC com Kappa (cadeia leve) LC HC C127S com LC Kappa Kappa LC C214S Kappa LC C214S e HC C233S Kappa LC C214S e HC C232S Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com as mutações P330S e P331S Fragmento F(ab')2 de WT IgG1 e qualquer uma das mutações listadas acima IgG1 Substituição da constante pesada 1 (CH1) e região de dobradiça de IgG1 por CH1 e região de dobradiça de IGg2

ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS

GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP (SEQ ID NO: 66) Com um Kappa LC

Isotipo Fc Mutação (esquema de numeração EU) IgG1 Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com A330L/A330S e/ou L234F e/ou L235E e/ou P331S IgG1, IgG2 ou Qualquer uma das mutações listadas acima, IgG4 juntamente com M252Y e/ou S254T e/ou T256E IgG1 de Para modelos de doenças de camundongos camundongo, IgG2a de camundongo, IgG2b de camundongo IgG4 WT IgG1 Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, S440W e/ou qualquer combinação das mesmas. IgG2 Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, S440W e/ou qualquer combinação das mesmas.

[00213] Além dos isotipos descritos na Tabela C, e sem desejar se vincular à teoria, acredita-se que os anticorpos com isotipos IgG1 ou IgG3 humanos e mutantes destes (por exemplo, Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 2009, 20:685–691) que ligam os receptores Fc gama I, IIA, IIC, IIIA, IIIB em humanos e/ou receptores Fc gama I, III e IV em camundongos, também podem atuar como anticorpos agonistas transitórios.

[00214] Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc é da classe IgG, da classe IgM ou da classe IgA. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc possui um isotipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um ou mais (por exemplo, um ou mais, dois ou mais, três ou mais, quatro ou mais, cinco ou mais, seis ou mais, sete ou mais, oito ou mais, nove ou mais, 10 ou mais, 11 ou mais, 12 ou mais, ou todas as treze) substituições de aminoácidos na região Fc em uma posição de resíduo selecionada a partir do grupo que consiste em: C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, N297A, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y e qualquer combinação das mesmas (posição do resíduo de acordo com a numeração EU ou Kabat). Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição P331S, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos na posição E430G.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições L234A, L235A e P331S.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos na posição N297A.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições K322A e E430G.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições P331S e E430G.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições A330S, P331S e E430G.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições K322A, A330S e P331S.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições K322A, P331S e E430G.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições S267E e L328F.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos na posição C127S.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácidos nas posições E345R, E430G e S440Y.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação possui um isotipo IgG1 e compreende uma substituição de aminoácido S267E na posição de resíduo 267 e uma substituição de aminoácido L328F na posição de resíduo 328, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

[00215] Em certas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc possui um isotipo IgG2. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc contém uma região constante de IgG2 humana. Em algumas modalidades, a região constante de IgG2 humana inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc se liga a um receptor Fc inibidor. Em certas modalidades, o receptor Fc inibidor é o receptor Fc gama inibidor IIB (FcγIIB). Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo). Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas dentre V234A (Alegre et al., (1994) Transplantation 57: 1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200: 16-26), G237A (Cole et al. (1999) Transplantation, 68: 563- 571), H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armor et al. (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armor et al. (2000) The Hematology Journal 1(Suppl.1):27; Armor et al. (2000) The Hematology Journal 1 (Suppl.1): 27), C232S e/ou C233S (White et al. (2015) Cancer Cell 27, 138-148), S267E, L328F (Chu et al., (2008) Mol Immunol, 45: 3926-3933), M252Y, S254T e/ou T256E, em que a posição do aminoácido está de acordo com o Convenção de numeração EU ou Kabat.

[00216] Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor Fc gama possui um isotipo IgG2 com um domínio constante de cadeia pesada que contém uma substituição de aminoácidos C127S, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; e WO2008079246).

[00217] Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor Fc gama possui um isotipo IgG2 com um domínio constante de cadeia leve Kappa que contém uma substituição de aminoácidos C214S, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al., (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; e WO2008079246).

[00218] Em certas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc possui um isotipo IgG1. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc contém uma região constante de IgG1 de camundongo. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc contém uma região constante de IgG1 humana. Em algumas modalidades, a região constante de IgG1 humano inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc se liga a um receptor Fc inibidor. Em certas modalidades, o receptor Fc inibidor é o receptor Fc gama inibidor IIB (FcγIIB). Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo). Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas de N297A (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23: 403-411), D265A (Shields et al. (2001) RJ Biol. Chem. 276, 6591– 6604), D270A, L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92: 11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57: 1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200: 16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57: 1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200: 16-26), P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchern et al., (2007) Blood, 109: 1185-1192), P331S (Sazinsky et al. (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105: 20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, e/ou T394D, em que a posição dos aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat.

[00219] Em algumas modalidades, o anticorpo inclui um domínio constante de cadeia pesada do isotipo IgG2 1(CH1) e uma região de dobradiça (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138–148). Em certas modalidades, o isotipo IgG2 CH1 e a região dobradiça contêm a sequência de aminoácidos de

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPP CP (SEQ ID NO: 64). Em algumas modalidades, a região Fc do anticorpo contém uma substituição de aminoácidos S267E, uma substituição de aminoácidos

L328F, ou ambas, e/ou uma substituição de aminoácidos N297A ou N297Q, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração da EU ou Kabat.

[00218] Em certas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc possui um isotipo IgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc contém uma região constante de IgG4 humano. Em algumas modalidades, a região constante de IgG4 humana inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc se liga a um receptor Fc inibidor. Em certas modalidades, o receptor Fc inibidor é o receptor Fc gama inibidor IIB (FcγIIB). Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo). Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas dentre L235A, G237A, S228P, L236E (Reddy et al., (2000) J Immunol, 164:1925-1933), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, e/ou T256E, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat.

[00219] Em certas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc possui um isotipo IgG2/4 híbrido. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação ao receptor gama Fc inclui uma sequência de aminoácidos contendo os aminoácidos 118 a 260 de acordo com a numeração EU ou Kabat de IgG2 humano e os aminoácidos 261-447 de acordo com a numeração EU ou Kabat de IgG4 humano (WO 1997/11971; WO 2007/106585).

[00220] Em certas modalidades, o anticorpo contém uma região constante de IgG4 de camundongo (Bartholomaeus, et al. (2014). J. Immunol. 192, 2091–2098).

[00221] Em algumas modalidades, a região Fc contém adicionalmente uma ou mais substituições de aminoácidos adicionais selecionadas dentre A330L, L234F; L235E ou P331S, de acordo com a numeração EU ou Kabat; e qualquer combinação das mesmas.

[00222] Em certas modalidades, o anticorpo contém uma ou mais substituições de aminoácidos na região Fc em uma posição de resíduo selecionada dentre: C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y e qualquer combinação das mesmas, em que a numeração dos resíduos está de acordo com a numeração EU ou Kabat.

Em algumas modalidades, a região Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição P331S, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G, L234A, L235A e P331S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos na posição N297A, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G e P331S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G e K322A, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G, A330S e P331S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G, K322A, A330S e P331S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G, K322A e A330S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E430G, K322A e P331S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições S267E e L328F, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos na posição C127S, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

Em algumas modalidades, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições E345R, E430G e S440Y, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU.

[00223] Em algumas modalidades preferenciais, a região Fc contém uma substituição de aminoácidos nas posições S267E e L328F, em que a numeração da posição de resíduo está de acordo com a numeração EU. Anticorpos inertes

[00224] Outra classe de anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inclui anticorpos inertes. Conforme utilizado neste documento, os anticorpos "inertes" se referem a anticorpos que se ligam especificamente ao antígeno alvo (por exemplo, Siglec-7), mas não modulam (por exemplo, diminuem/inibem ou ativam/induzem) a função antigênica. Por exemplo, no caso de Siglec-7, os anticorpos inertes não modulam os níveis celulares de Siglec-7, não modulam a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou não modulam um ou mais atividades de uma proteína Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos que não têm a capacidade de agrupar Siglec-7 na superfície celular podem ser anticorpos inertes, mesmo que possuam uma especificidade de epítopo que é compatível com a ativação do receptor.

[00225] Em algumas modalidades, os anticorpos que se ligam a uma proteína Siglec-7 podem incluir anticorpos que se ligam a Siglec-7, mas, devido à sua especificidade de epítopo, ou características, não diminuem os níveis celulares de Siglec-7 e/ou inibem a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, esses anticorpos podem ser usados como carga para, por exemplo, transportar toxinas (por exemplo, quimioterápicos) para as células tumorais. Portanto, em algumas modalidades, os anticorpos da presente divulgação são anticorpos inertes que se ligam a Siglec-7, mas são incapazes de diminuir os níveis celulares de Siglec-7, inibindo a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou induzindo uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7.

[00226] Os anticorpos que diminuem ou não diminuem os níveis celulares de Siglec-7 nas células podem ser combinados com uma região Fc inerte que exibe ligação reduzida a um ou mais receptores Fc gama. Exemplos de tais regiões Fc e modificações são fornecidas na Tabela C. Em algumas modalidades, o anticorpo com uma região Fc inerte possui um isotipo Fc listado na Tabela C. Anticorpos anti-Siglec-7 inibidores

[00227] Uma terceira classe de anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação inclui anticorpos que bloqueiam ou inibem de outra forma uma ou mais atividades de Siglec-7. Em algumas modalidades, os anticorpos que se ligam a uma proteína Siglec-7 podem incluir anticorpos que reduzem os níveis celulares de Siglec-7 (por exemplo, níveis de superfície celular de Siglec-7), inibem a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e/ou um ou mais ligantes de Siglec-7 e inibem uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7. Tais anticorpos inibem uma ou mais atividades de uma proteína Siglec-7, seja impedindo a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7 ou impedindo a transdução de sinal do domínio extracelular de Siglec- 7 para a célula citoplasma na presença de um ou mais ligantes de Siglec-7. Os anticorpos também podem inibir uma ou mais atividades de uma proteína Siglec- 7, diminuindo os níveis de superfície celular de Siglec-7 induzindo a degradação de Siglec-7, dessensibilização de Siglec-7, clivagem de Siglec-7, internalização de Siglec-7, liberação de Siglec-7, regulação negativa da expressão de Siglec-7 e/ou degradação lisossomal de Siglec-7. Em algumas modalidades, tais anticorpos anti-Siglec-7 podem não ativar transitoriamente Siglec-7.

[00228] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ter a especificidade do epítopo de um anticorpo anti-Siglec-7 agonista transitório da presente divulgação, mas possuem um domínio Fc que não tem capacidade de se ligar aos receptores de Fc gama e, portanto, é incapaz de, por exemplo, ativar e aglomerar transitoriamente o Siglec-

7.

[00229] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação têm, sem limitação, uma ou mais das seguintes atividades: a capacidade de diminuir a ligação de uma proteína Siglec-7 com um ou mais ligantes de Siglec-7, como glicolipídeos contendo ácido siálico ou glicoproteínas contendo ácido siálico, a capacidade de diminuir a ligação de um supressor de proteína de sinalização de citocina (SOCS) (por exemplo, proteína SOCS3) com uma proteína Siglec-7, a capacidade de aumentar a degradação proteasomal de uma proteína Siglec-7, a capacidade de reduzir a expressão funcional de Siglec-7 na superfície de macrófagos, monócitos, células T, microglia e/ou células dendríticas circulantes, a capacidade de diminuir a fosforilação de Tyr-437 e Tyr-460 por uma tirosina quinase da família Src, como Syk, LCK e FYM e/ou ZAP70, a capacidade para diminuir o recrutamento e a ligação com proteínas tirosina fosfatases específicas SHP1 e SHP2, a capacidade de diminuir o recrutamento e a ligação com PLC-g1, que atua como nucleotídeo de guanina, fator de troca para Dynami n-1, a capacidade de diminuir o recrutamento e a ligação com Crkl, a capacidade de diminuir o recrutamento e a ligação com a tirosina quinase de baço Syk, a capacidade de diminuir o recrutamento e a ligação com a proteína-2 ligada ao receptor do fator de crescimento (Grb2) SH3- SH2-SH3, a capacidade de diminuir o recrutamento e a ligação a várias proteínas contendo SH2, a capacidade de aumentar a mobilização intracelular de cálcio, a capacidade de modular a produção de citocinas pró-inflamatórias IL-1β, IL-8 e TNF-α, a capacidade de diminuir a ativação da fosfoinositida 3-quinase, a capacidade de aumentar o crescimento de monócitos, macrófagos, células dendríticas, células T e/ou micróglia, a capacidade de aumentar a sobrevivência de monócitos, macrófagos, células dendríticas, células T, e/ou micróglia, a capacidade de aumentar a fosforilação da tirosina em várias proteínas celulares, a capacidade de aumentar a atividade fagocítica de monócitos, macrófagos, células dendríticas e/ou micróglia, a capacidade de aumentar o proliferação de células de monócitos, macrófagos, células dendríticas, células T e/ou microglia, a capacidade de aumentar a fosforilação das moléculas de sinalização que medeia a sinalização ITAM, a capacidade de aumentar a função dos receptores de reconhecimento de padrão, a capacidade de aumentar a função de receptores tipo Toll, a capacidade de aumentar a função dos receptores de padrão molecular associado a danos (DAMP), a capacidade de modular a expressão do receptor de quimiocina C-C 7 (CCR7) e a capacidade de aumentar a depuração de resíduos celulares e de proteínas.

[00230] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem uma região Fc que exibe ligação reduzida com um ou mais receptores Fc gama. Exemplos de tais regiões Fc e modificações são fornecidas na Tabela C abaixo. Em algumas modalidades, o anticorpo possui um isotipo Fc listado na Tabela C. Isotipos de anticorpo Fc com ligação reduzida a receptores gama Fc

[00231] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 com ligação reduzida aos receptores gama Fc têm um isotipo Fc listado na Tabela C abaixo. Tabela C: Isotipos Fc de anticorpo anti-Siglec-7 exemplificativos com ligação reduzida ao receptor Fc gama Isotipo Fc Mutação (esquema de numeração EU) IgG1 N297A ou N297Q e/ou D270A IgG1 D265A, D270A e/ou N297A IgG1 L234A e L235A IgG2 V234A e G237A IgG4 F235A e G237A e E318A E233P e/ou F234V N297A ou N297Q IgG4 S228P e L236E S241P S241P e L248E S228P e F234A e L235A IgG2 H268Q e V309L e A330S e P331S IgG1 C220S e C226S e C229S e P238S IgG1 C226S e C229S e E233P e L234V e L235A IgG1 Excluídos os E233P e L234V e L235A e G236 P238A D265A N297A A327Q ou A327G P329A

Isotipo Fc Mutação (esquema de numeração EU) IgG1 K322A e L234A e L235A IgG1 L234F e L235E e P331S IgG1 ou IgG4 T394D IgG2 C232S ou C233S N297A ou N297Q IgG2 V234A e G237A e P238S e H268A e V309L e A330S e P331S IgG1, IgG2 ou IgG4 modificações delta a, b, c, ab, ac, g IgG1 Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com A330L ou L234F e/ou L235E e/ou P331S IgG1, IgG2 ou IgG4 Qualquer uma das mutações listadas acima, juntamente com M252Y e/ou S254T e/ou T256E

[00232] Em certas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 tem um isotipo IgG1. Em algumas modalidades, o anticorpo contém uma região constante de IgG1 de camundongo. Em algumas modalidades, o anticorpo contém uma região constante de IgG1 humano. Em algumas modalidades, a região constante de IgG1 humano inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo).

[00233] Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas de N297A, N297Q (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23: 403-411), D265A, D270A, L234A, L235A (McEarchern et al., (2007) Blood, 109: 1185-1192), C226S, C229S (McEarchern et al., (2007) Blood, 109: 1185-1192), P238S (Davis et al., (2007) J Rheumatol, 34: 2204-2210), E233P, L234V (McEarchern et al., (2007) Blood, 109: 1185-1192), P238A, A327Q, A327G, P329A (Shields RL, et al., (2001) J Biol Chem. 276 (9): 6591-604), K322A, L234F, L235E (Hezareh, et al., (2001) J Virol 75, 12161-12168; Oganesyan et al., (2008). Acta Crystallographica 64, 700-704), P331S

(Oganesyan et al., (2008) Acta Crystallographica 64, 700-704), T394D (Wilkinson et al. (2013) MAbs 5(3): 406-417), A330L, M252Y, S254T e/ou T256E, em que a posição do aminoácido está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat. Em certas modalidades, a região Fc inclui ainda uma exclusão de aminoácidos em uma posição correspondente à glicina 236, de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat.

[00234] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 possui um isotipo IgG1 com uma região constante de cadeia pesada que contém uma substituição de aminoácidos C220S de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat. Em algumas modalidades, a região Fc contém adicionalmente uma ou mais substituições de aminoácidos adicionais selecionadas dentre A330L, L234F; L235E ou P331S, de acordo com a numeração EU ou Kabat. Em certas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 possui um isotipo IgG2. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 contém uma região constante de IgG2 humana. Em algumas modalidades, a região constante de IgG2 humana inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo). Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas dentre P238S, V234A, G237A, H268A, H268Q, H268E, V309L, N297A, N297Q, V309L, A330S, P331S, C232S, C233S, M252Y ou S254T e/ou T256E, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração da EU ou Kabat (Vafa O. et al., (2014) Methods 65:114–126).

[00235] Em certas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 possui um isotipo IgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 contém uma região constante de IgG4 humana. Em algumas modalidades, a região constante de IgG4 humana inclui uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais modificações. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc contém uma ou mais substituições de aminoácidos (por exemplo, em relação a uma região Fc do tipo selvagem do mesmo isotipo). Em algumas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos são selecionadas de E233P, F234V, L235A, G237A, E318A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92: 11980-11984), S228P, L234A/F234A, L236E, S241P, L248E (Reddy et al., (2000) J Immunol, 164: 1925- 1933; Angal et al., (1993) Mol Immunol. 30 (1): 105-8; US 8614299 B2; Vafa O. et al., (2014) Methods 65: 114-126), T394D, M252Y, S254T, T256E, N297A e/ou N297Q, onde a posição do aminoácido está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat. Em algumas modalidades, o anticorpo tem um isotipo IgG4, e compreende uma substituição de aminoácido S228P na posição do resíduo 228, uma substituição de aminoácido F234A na posição do resíduo 234, e uma substituição de aminoácido L235A na posição do resíduo 235, em que a numeração da posição dos resíduos está de acordo com a numeração EU.

[00236] Em algumas modalidades, a região Fc adicionalmente contém uma ou mais substituições de aminoácidos adicionais selecionadas a partir de um M252Y, S254T e/ou T256E, em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração da EU ou Kabat. Mutações IgG adicionais

[00237] Em algumas modalidades, uma ou mais das variantes de IgG1 descritas neste documento podem ser combinadas com uma mutação A330L (Lazar et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010), ou uma ou mais dentre as mutações L234F, L235E e/ou P331S (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172), em que a posição de aminoácidos está de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat, para eliminar a ativação de complemento. Em algumas modalidades, as variantes de IgG descritas neste documento podem ser combinadas com uma ou mais mutações para potencializar a meia-vida do anticorpo anti-Siglec-7 no soro humano (por exemplo, mutações M252Y, S254T, T256E de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat) (Dall’Acqua et al., (2006) J Biol Chem, 281:23514-23524; e Strohl e al., (2009) Current Opinion in Biotechnology, 20:685–691).

[00238] Em algumas modalidades, uma variante de IgG4 da presente divulgação pode ser combinada com uma mutação S228P de acordo com a convenção de numeração EU ou Kabat (Angal et al., (1993) Mol Immunol,

30:105-108) e/ou com um ou mais mutações descritas em Peters et al., (2012) J Biol Chem. 13; 287(29):24525-33) para potencializar a estabilização do anticorpo. Anticorpos Biespecíficos

[00239] Certos aspectos da presente divulgação referem-se a anticorpos biespecíficos que se ligam a um ou mais domínios de uma proteína Siglec-7 da presente divulgação e a um segundo antígeno. Os métodos de geração de anticorpos biespecíficos são bem conhecidos na técnica e descritos neste documento. Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos da presente divulgação se ligam a um ou mais resíduos de aminoácidos de uma proteína Siglec-7 da presente divulgação, tal como um ou mais resíduos de aminoácidos de Siglec-7 humano (SEQ ID NO: 63), ou resíduos de aminoácidos em uma proteína Siglec-7 correspondendo a resíduos de aminoácidos de SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos da presente divulgação reconhecem um primeiro antígeno e um segundo antígeno. Em algumas modalidades, o primeiro antígeno é uma proteína Siglec-7 ou uma variante de ocorrência natural da mesma. Em algumas modalidades, o segundo antígeno também é uma proteína Siglec-7, ou uma variante natural da mesma. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é um antígeno que facilita o transporte através da barreira hematoencefálica (consulte, por exemplo, Gabathuler R., Neurobiol. Dis. 37 (2010) 48-57). Esses segundos antígenos incluem, sem limitação, receptor de transferrina (TR), receptor de insulina (HIR), receptor de fator de crescimento semelhante à insulina (IGFR), proteínas relacionadas ao receptor de lipoproteína de baixa densidade 1 e 2 (LPR-1 e 2), receptor da toxina diftérica, CRM197, um anticorpo de domínio único de lhama, TMEM 30 (A), um domínio de transdução de proteína, TAT, Syn-B, penetratina, um peptídeo de poliarginina, peptídeos de Angiopep como ANG1005 (consulte, por exemplo, Gabathuler, 2010), e outras proteínas da superfície celular que são enriquecidas em células endoteliais da barreira hematoencefálica (consulte, por exemplo, Daneman et al., PLoS One. 29 de outubro de 2010;5(10):e13741). Em algumas modalidades, o segundo antígeno é uma proteína causadora de doença, incluindo, sem limitação, beta amiloide, beta amiloide oligomérica, placas beta amiloide, proteína precursora amiloide ou fragmentos da mesma, Tau, IAPP, alfa-

sinucleína, TDP-43, proteína FUS C9orf72 (quadro de leitura aberto 72 do cromossomo 9), proteína c9RAN, proteína priônica, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutase, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, corpo de Lewy, fator natriurético atrial, polipeptídeo amiloide das ilhotas, insulina, apolipoproteína AI, amiloide sérico A, medina, prolactina, transtiretina, lisozima, microglobulina beta 2, gelsolina, queratoepitelina, cistatina, cadeia leve da imunoglobulina AL, proteína S-IBM, produtos da tradução não-ATG associados à repetição (RAN), peptídeos por repetição de dipeptídeos (DPR), peptídeos de repetição de glicina-alanina (GA), peptídeos de repetição de glicina-prolina (GP), peptídeos de repetição de glicina- arginina (GR), peptídeos de repetição de prolina-alanina (PA), ubiquitina e peptídeos de repetição prolina-arginina (PR). Em algumas modalidades, o segundo antígeno é um ou mais ligantes e/ou proteínas expressas nas células imunes, incluindo, sem limitação, CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4- 1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD -L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor CSF1, CD3 e fosfatidilserina. Em algumas modalidades, o segundo antígeno é uma proteína, lipídeo, polissacarídeo ou glicolipídeo expresso em uma ou mais células tumorais. Fragmentos de Anticorpo

[00240] Certos aspectos da presente divulgação se referem a fragmentos de anticorpo que se ligam a uma ou mais dentre uma proteína Siglec- 7 da presente divulgação, uma variante de ocorrência natural de uma proteína Siglec-7 e uma variante de doença de uma proteína Siglec-7. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo é um fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv ou scFv.

[00241] Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo é usado em combinação com um segundo anticorpo anti-Siglec-7 e/ou com um ou mais anticorpos que se ligam especificamente com uma proteína causadora de doença selecionados dentre: beta amiloide, beta amiloide oligomérica, placas beta amiloides, proteína precursora amiloide ou fragmentos desta, Tau, IAPP, alfa-

sinucleína, TDP-43, proteína FUS, C9orf72 (quadro de leitura aberto 72 do cromossomo 9), proteína c9RAN, proteína do príon, PrPSc, huntingtina, calcitonina, superóxido dismutase, ataxina, ataxina 1, ataxina 2, ataxina 3, ataxina 7, ataxina 8, ataxina 10, corpo de Lewy, fator natriurético atrial, polipeptídeo amiloide da ilhota, insulina, apolipoproteína AI, amiloide sérico A, medina, prolactina, transtirretina, lisozima, beta 2 microglobulina, gelsolina, ceratoepitelina, cistatina, cadeia leve de imunoglobulina AL, super óxido dismutase (SOD), proteína S-IBM, produtos da tradução não-ATG associados à repetição (RAN), peptídeos de repetição de dipeptídeos (DPR), peptídeos de repetição de glicina- alanina (GA), peptídeos de repetição de glicina-prolina (GP), peptídeos de repetição de glicina-arginina (GR), peptídeos de repetição de prolina-alanina (PA), ubiquitina, e peptídeos de repetição de prolina-arginina (PR), e qualquer combinação desta; ou com um ou mais anticorpos que se ligam com uma proteína imunomoduladora selecionada a partir do grupo que consiste em: CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, CD47, receptor de CSF-1, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, fosfatidilserina e qualquer combinação das mesmas.

[00242] Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo da presente divulgação podem ser fragmentos funcionais que se ligam com o mesmo epítopo que qualquer um dos anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo são versões miniaturizadas dos anticorpos anti-Siglec-7 ou fragmentos de anticorpo da presente divulgação que possuem o mesmo epítopo que o anticorpo de comprimento completo correspondente, mas um peso molecular menor. Esses fragmentos de anticorpo anti-Siglec-7 miniaturizados podem possuir melhor capacidade de penetração no cérebro e uma meia-vida mais curta, o que é vantajoso para utilidades de geração de imagens e diagnóstico (consulte, por exemplo, Lütje S et al., Bioconjug Chem. 19 de fevereiro de 2014; 25(2):335-41; Tavaré R et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 21 de janeiro de 2014; 111(3):1108-13; e Wiehr S et al., Prostate. Maio de 2014; 74(7):743 -55). Por conseguinte, em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação possuem melhor penetração no cérebro em comparação com seus anticorpos de comprimento completo correspondentes e/ou têm uma meia-vida mais curta em comparação com seus anticorpos de comprimento completo correspondentes. Frameworks de anticorpo

[00243] Qualquer um dos anticorpos descritos neste documento inclui ainda um framework. Em algumas modalidades, o framework é um framework de imunoglobulina humana. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7) compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades acima e compreende adicionalmente um framework de aceptor humano, por exemplo, um framework de imunoglobulina humana ou um framework de consenso humano. Os frameworks de imunoglobulina humana podem ser parte do anticorpo humano, ou um anticorpo não humano pode ser humanizado pela substituição de um ou mais frameworks endógenos por região(ões) de framework humana(s). As regiões de framework humanas que podem ser usadas para a humanização incluem, mas não estão limitadas a: regiões de framework selecionadas usando o método "best- fit" (vide, por exemplo, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)); regiões de framework derivadas da sequência consenso de anticorpos humanos de um subgrupo específico de regiões variáveis de cadeia leve ou pesada (consulte, por exemplo, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); e Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); regiões de framework (somaticamente mutadas) maduras humanas ou regiões de framework de linhagem germinativa humana (consulte, por exemplo, Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); e regiões de framework derivadas de triagem de bibliotecas FR (consulte, por exemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) e Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).

[00244] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada que compreende uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais, três ou mais ou todas as quatro) regiões de framework selecionadas dentre VH FR1, VH FR2,

VH FR3 e VH FR4 (conforme mostrado nas Tabelas 8A-8D). Em algumas modalidades, a VH FR1 compreende uma sequência de QVQLVQSGAEVKKPGASV KVSCKAS (SEQ ID NO: 25). Em algumas modalidades, a VH FR2 compreende a sequência de acordo com a Fórmula V: WVRQAX1GQX2LEWIG (SEQ ID NO: 29), em que X1 é P ou R, e X2 é G ou R. Em algumas modalidades, VH FR2 compreende uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 26-28. Em algumas modalidades, a VH FR3 compreende uma sequência de YAQKFQGRAT LTEDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 30). Em algumas modalidades, VH FR4 compreende uma sequência de WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31). Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma VH FR1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 25, uma VH FR2 de acordo com a Fórmula V, uma VH FR3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 30, e uma VH FR4 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 31.

[00245] Em algumas modalidades, um anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma VH FR1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 25, uma VH FR2 compreendendo a sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 26-28, uma VH FR3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 30, e uma VH FR4 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 31.

[00246] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma VH FR1, uma VH FR2, uma VH FR3 e VH FR4 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8. 10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB- H8.27, S7AB-H8.28, S7AB- H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8. 35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB- H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45,

S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB- H8.45.2 (conforme mostrado nas Tabelas 8A-8D).

[00247] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada que compreende uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais, três ou mais ou todas as quatro) regiões de framework selecionadas dentre VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4 (conforme mostrado nas Tabelas 9A-9D). Em algumas modalidades, a VL FR1 compreende uma sequência de DIQMTQSPSSLSASVGDR VTITC (SEQ ID NO: 32). Em algumas modalidades, a VL FR2 compreende uma sequência de WYQQ KPGKAPKLLIY(SEQ ID NO: 33). Em algumas modalidades, a VL FR3 compreende uma sequência de GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 34). Em algumas modalidades, a VL FR4 compreende uma sequência de FGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 35). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia leve compreendendo uma VL FR1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 32, uma VL FR2 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 33, uma VL FR3 compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 34 e uma VL FR4 compreendendo a sequência da SEQ ID NO: 35.

[00248] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável da cadeia leve compreendendo uma VL FR1, uma VL FR2, uma VL FR3 e VL FR4 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB- H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8. 10, S7AB-H8.11, S7AB- H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB- H8.27, S7AB-H8.28, S7AB- H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8. 35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB- H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45,

S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB- H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB- H8.45.2 (conforme mostrado nas Tabelas 9A-9D).

[00249] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada que compreende uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, ou todas as quatro) regiões de framework selecionadas dentre VH FR1, VH FR2, VH FR3, e VH FR4 (conforme mostrado nas Tabelas 8A-8D), e uma região variável de cadeia leve que compreende uma ou mais (por exemplo, uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, ou todas as quatro) regiões de framework selecionadas dentre VL FR1, VL FR2, VL FR3 e VL FR4 (conforme mostrado nas Tabelas 9A-9D). Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma VH FR1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 25, uma VH FR2 de acordo com a Fórmula V, uma VH FR3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 30, e uma VH FR4 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 31; e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma VL FR1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 32, uma VL FR2 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 33, uma VL FR3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 34, e uma VL FR4 compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 35. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável de cadeia pesada compreendendo um VH FR1 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 25, uma VH FR2 compreendendo a sequência selecionada dentre SEQ ID NOs: 26- 29, uma VH FR3 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 30, e VH FR4 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 31; uma região variável de cadeia leve compreendendo uma VL FR1 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 32, uma VL FR2 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 33, uma VL FR3 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 34, e VL FR4 compreendendo uma sequência de SEQ ID NO: 35. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação compreendem uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma VH FR1, uma VH FR2, uma VH FR3 e VH FR4 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB- H8. 10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB- H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8. 35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB- H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB- H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado nas Tabelas 8A- 8D), e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma VL FR1, uma VL FR2, uma VL FR3 e VL FR4 do anticorpo S7AB-H8, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8. 5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB- H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB- H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB- H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB- H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8. 30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB- H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB- H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB- H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB-H8.45.2 (conforme mostrado nas Tabelas 9A- 9D). Atividades Siglec-7 Expressão modulada de proteínas relacionadas ao sistema imunológico

[00250] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem modular a expressão de PD-L1, PD-L2, B7-H3,

CD11b, CD200R, CD163 e/ou CD206 após a ligação com uma proteína Siglec-7 expressa em uma célula. A expressão modulada (por exemplo, aumentada ou diminuída) pode incluir, sem limitação, modulação na expressão gênica, modulação na expressão transcricional ou modulação na expressão da proteína. Qualquer método conhecido na técnica para determinar gene, transcrição (por exemplo, mRNA) e/ou expressão de proteínas pode ser usado. Por exemplo, a análise de Northern blot pode ser usada para determinar os níveis de expressão do gene do mediador anti-inflamatório, a RT-PCR pode ser usada para determinar o nível de transcrição do mediador anti-inflamatório e a análise de Western blot pode ser usada para determinar os níveis de proteína do mediador anti- inflamatório.

[00251] Conforme utilizado neste documento, PD-L1, PD-L2, CD11b, B7-H3, CD200R, CD163 e/ou CD206 podem ter expressão modulada se sua expressão em uma ou mais células de um sujeito tratado com anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação for modulada (por exemplo, aumentada ou diminuída) em comparação com a expressão de PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD11b, CD200R, CD163 e/ou CD206 expressa em uma ou mais células de um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode modular a expressão de PD- L1, PD-L2, B7-H3, CD11b, CD200R, CD163 e/ou CD206 em uma ou mais células de um sujeito por pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com a expressão de PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD200R, CD163 e/ou CD206 em uma ou mais células de um sujeito correspondente que é não tratada com o anticorpo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação modula a expressão de PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD11b,

CD200R, CD163 e/ou CD206 em uma ou mais células de um sujeito em pelo menos 1,5 vezes, pelo menos 1,6 vezes, pelo menos 1,7 vezes, pelo menos 1,8 vezes, pelo menos 1,9 vezes, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes, ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com a expressão de PD-L1, PD-L2, B7-H3, CD11b, CD200R, CD163 e/ou CD206 em uma ou mais células de um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo.

[00252] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para prevenção, redução do risco ou tratar condições e/ou doenças associadas com níveis anormais de PD-L1, PD-L2, B7-H2, B7-H3, CD11b, CD200R, CD163 e/ou CD206, incluindo sem limitação demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu-Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy-Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza. O aprimoramento ou normalização da capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas ao antígeno

[00253] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem melhorar e/ou normalizar a capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas do antígeno após a ligação com uma proteína Siglec-7 expressa em uma célula.

[00254] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem potencializar e/ou normalizar a capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas do antígeno em uma ou mais células dendríticas derivadas da medula óssea de um sujeito por pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com a capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas do antígeno em uma ou mais células dendríticas derivadas da medula óssea de um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Em outras modalidades, um anticorpo antagonista anti- Siglec-7 pode potencializar e/ou normalizar a capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas do antígeno em uma ou mais células dendríticas derivadas da medula óssea de um sujeito por pelo menos pelo menos pelo menos 1,5 vezes, pelo menos 1,6 vezes, pelo menos 1,7 vezes, pelo menos 1,8 vezes, pelo menos 1,9 vezes, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, em pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com a capacidade das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas ao antígeno em uma ou mais células dendríticas derivadas da medula óssea de um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo.

[00255] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são benéficos para prevenção, redução do risco ou tratar condições e/ou doenças associadas com a capacidade diminuída e desregulada das células dendríticas derivadas da medula óssea de induzir a proliferação de células T específicas, incluindo sem limitação, demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu-Hakola,

acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy- Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza. Proliferação e sobrevivência de células que expressam Siglec-7

[00256] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem aumentar a proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células Langerhans da pele, células Kupffer, células T, células T auxiliares, células T citotóxicas e células microgliais após ligação com a proteína Siglec-7 expressa em uma célula.

[00257] As células microgliais são um tipo de célula glial que são os macrófagos residentes do cérebro e da medula espinhal e, portanto, atuam como a primeira e principal forma de defesa imunológica ativa no sistema nervoso central (SNC). As células microgliais constituem 20% da população total de células gliais no cérebro. As células microgliais estão constantemente vasculhando o CNS em busca de placas, neurônios danificados e agentes infecciosos. O cérebro e a medula espinhal são considerados órgãos com "privilégios imunológicos", pois são separados do resto do corpo por uma série de células endoteliais conhecidas como barreira hematoencefálica, que impede a maioria das infecções de atingir o tecido nervoso vulnerável. No caso em que agentes infecciosos são introduzidos diretamente no cérebro ou atravessam a barreira hematoencefálica, as células microgliais devem reagir rapidamente para diminuir a inflamação e destruir os agentes infecciosos antes que danifiquem o tecido neural sensível. Devido à indisponibilidade de anticorpos do resto do corpo (poucos anticorpos são pequenos o suficiente para atravessar a barreira hematoencefálica), a micróglia deve ser capaz de reconhecer corpos estranhos, engoli-los e atuar como células apresentadoras de antígenos, ativando as células T. Como esse processo deve ser realizado rapidamente para evitar danos potencialmente fatais, as células microgliais são extremamente sensíveis a pequenas alterações patológicas no CNS. Elas alcançam essa sensibilidade em parte por possuir canais únicos de potássio que respondem a pequenas mudanças no potássio extracelular.

[00258] Como usado neste documento, os macrófagos da presente divulgação incluem, sem limitação, macrófagos M1, macrófagos M1 ativados e macrófagos M2. Conforme utilizado neste documento, as células microgliais da presente divulgação incluem, sem limitação, células microgliais M1, células microgliais M1 ativadas e células microgliais M2.

[00259] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem aumentar a expressão de CD80, CD83 e/ou CD86 em células dendríticas, monócitos e/ou macrófagos.

[00260] Conforme utilizado neste documento, a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de macrófagos, células dendríticas,

monócitos, células T, neutrófilos e/ou micróglia pode incluir expressão aumentada se a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou micróglia em um sujeito tratado com um anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação é maior que a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer, células T, neutrófilos e/ou micróglia em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo.

Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células Langerhans da pele, células Kupffer, células T e/ou micróglia em um sujeito em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células Kupffer, células T e/ou micróglia em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo.

Em outras modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células Langerhans da pele, células Kupffer, células T e/ou micróglia em uma sujeito pelo menos 1,5 vezes, pelo menos 1,6 vezes, pelo menos 1,7 vezes, pelo menos 1,8 vezes, pelo menos 1,9 vezes, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 dobra, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 dobra, pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes, ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com a taxa de proliferação, sobrevivência e/ou função de células dendríticas, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer, células T e/ou micróglia em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo.

[00261] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para prevenção, reduzir o risco ou tratar condições e/ou doenças associadas com a redução na proliferação, sobrevivência, aumento da apoptese e/ou função de células dendríticas, neutrófilos, macrófagos, monócitos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer, células T e/ou microglia incluindo sem limitação, demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu- Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy-Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal,

leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza. Ativação dependente de Siglec-7 de células imunes

[00262] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem aumentar a atividade das células T citotóxicas, células T helper ou ambas. Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação são benéficos para a prevenção, redução do risco ou tratamento de condições e/ou doenças associadas à diminuição da atividade das células T citotóxicas, células T helper ou ambas, incluindo, sem limitação, tumores, incluindo tumores sólidos, como câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma e câncer de tireoide.

[00263] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem induzir um aumento na proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais. Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação induzem um aumento na proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células

T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais na presença de células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC).

[00264] Conforme utilizado neste documento, a taxa de proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais podem incluir uma taxa aumentada se a taxa de proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito tratado com um anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação é maior que a taxa de proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, em pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com o nível de proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas,

macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células de Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito em pelo menos 1,5 vez, pelo menos, pelo menos 1,6 vez, pelo menos 1,7 vez, pelo menos 1,8 vez, pelo menos 1,9 vez, pelo menos 2,0 vezes, em pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com o nível de proliferação, sobrevivência, atividade e/ou número de células T, células T citotóxicas, células T CD3+, células T helper, células dendríticas, macrófagos, monócitos, neutrófilos, osteoclastos, células de Langerhans da pele, células Kupffer e/ou células microgliais em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Inibição de células imunes associadas a tumores dependente de Siglec-7

[00265] Em algumas modalidades, os anticorpos agonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem diminuir a atividade, diminuir a proliferação, diminuir a sobrevivência, diminuir a funcionalidade, diminuir a infiltração em tumores ou órgãos linfoides (por exemplo, baço e linfonodos), o número das células mieloides CD14+, diminuir a taxa de crescimento do tumor, reduzir o volume do tumor, reduzir ou inibir a diferenciação, a sobrevivência e/ou uma ou mais funções das células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) e/ou promover a apoptose de células T reguladoras ou células dendríticas imunossupressoras inibidoras incorporadas ao tumor ou macrófagos associados a tumores ou células supressoras derivadas da linhagem mieloide. Em algumas modalidades, os anticorpos agonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação são benéficos para a prevenção, diminuição do risco ou tratamento das condições e/ou doenças associadas à atividade de um ou mais tipos de células supressoras imunológicas, incluindo, sem limitação, tumores, incluindo tumores sólidos que não expressam Siglec-7, tais como câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, câncer de tireoide e tumores de sangue que expressam Siglec-7, tais como células de leucemia.

[00266] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem diminuir o número de células mieloides CD14+, diminuir a taxa de crescimento do tumor, reduzir o volume do tumor ou reduzir ou inibir a diferenciação, sobrevivência e/ou uma ou mais funções das células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC).

[00267] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode diminuir o número de células mieloides CD14+, diminuir a taxa de crescimento do tumor, reduzir o volume do tumor ou reduzir ou inibir a diferenciação, sobrevivência e/ou uma ou mais funções das células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) em um sujeito em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com o número de células mieloides CD14+, taxa de crescimento do tumor, volume do tumor ou nível de diferenciação, sobrevivência e/ou uma ou mais funções de células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Em outras modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode diminuir o número de células mieloides CD14+, diminuir a taxa de crescimento do tumor, reduzir o volume do tumor ou reduzir ou inibir a diferenciação, sobrevivência e/ou uma ou mais funções das células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) em um sujeito em pelo menos 1,5 vez, pelo menos 1,6 vez, pelo menos 1,7 vez, pelo menos 1,8 vez, pelo menos 1,9 vez, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com o número de células mieloides CD14+, taxa de crescimento do tumor, volume do tumor ou nível de diferenciação, sobrevivência e/ou uma ou mais funções de células supressoras derivadas da linhagem mieloide (MDSC) em um sujeito correspondente que não é tratado com o anticorpo. Maior eficácia das terapias inibidoras de checkpoint

[00268] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem aumentar a eficácia de uma ou mais terapias inibidoras de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, tais como inibidoras de PD-1 ou terapias que direcionam um ou mais CTLA4, via da adenosina, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3 e/ou LAG3.

[00269] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a eficácia de uma ou mais terapias inibidoras de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, como inibidoras de PD-1 ou terapias que direcionam um ou mais CTLA4, a via da adenosina, PD- L1, PD-L2, OX40, TIM3 e/ou LAG3 em um sujeito que recebe uma ou mais terapias em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200%, por exemplo, em comparação com o nível de eficácia de uma ou mais terapias inibidoras de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, tais como inibidoras de PD-1 ou terapias que direcionam um ou mais dos CTLA4, a via da adenosina, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3 e/ou LAG3 em um sujeito correspondente que recebe uma ou mais terapias que não é tratado com o anticorpo.

Em outras modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a eficácia de uma ou mais terapias inibidoras de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, tais como inibidoras de PD-1 ou terapias que direcionam um ou mais CTLA4, a via da adenosina, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3 e/ou LAG3 em um sujeito que recebe uma ou mais terapias por pelo menos 1,5 vez, pelo menos 1,6 vez, pelo menos 1,7 vez, pelo menos 1,8 vez, pelo menos 1,9 vez, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com o nível de eficácia de uma ou mais terapias inibidoras de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, tais como inibidores de PD-1 ou terapias que direcionam um ou mais CTLA4, a via da adenosina, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3 e/ou LAG3 em um sujeito correspondente que recebe tais uma ou mais terapias que não é tratado com o anticorpo.

Maior eficácia dos agentes quimioterapêuticos

[00270] Em algumas modalidades, os anticorpos antagonistas anti-Siglec-7 da presente divulgação podem aumentar a eficácia de um ou mais agentes quimioterápicos, como gencitabina, capecitabina, antraciclinas, doxorrubicina (Adriamycin®), epirrubicina (Ellence®), taxanos, paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®), 5-fluorouracil (5-FU), ciclofosfamida (Cytoxan®), carboplatina (Paraplatin®), oxaliplatina (Elotaxin®), leucovorina, temozolomida (Temodar®), nivolumabe, cetuximabe, rituximabe, conjugado anticorpo-droga anti- PTK7-Auristatina (PF-00647020) e/ou conjugado anti-EFNA4-calicemia.

[00271] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a eficácia de um ou mais agentes quimioterápicos em um sujeito que recebe tais uma ou mais terapias em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 100%, pelo menos 110%, pelo menos 115%, pelo menos 120%, pelo menos 125%, pelo menos 130%, pelo menos 135%, pelo menos 140%, pelo menos 145%, pelo menos 150%, pelo menos 160%, pelo menos 170%, pelo menos 180%, pelo menos 190% ou pelo menos 200% por exemplo, em comparação com o nível de eficácia de um ou mais agentes de quimioterapia em um sujeito correspondente que recebe tais uma ou mais terapias que não é tratado com o anticorpo. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode aumentar a eficácia de um ou mais agentes quimioterápicos em um sujeito que recebe tais uma ou mais terapias em pelo menos 1,5 vez, pelo menos 1,6 vez, pelo menos 1,7 vez, pelo menos 1,8 vez, pelo menos 1,9 vez, pelo menos 2,0 vezes, pelo menos 2,1 vezes, pelo menos 2,15 vezes, pelo menos 2,2 vezes, pelo menos 2,25 vezes, pelo menos 2,3 vezes, pelo menos 2,35 vezes, pelo menos 2,4 vezes, pelo menos 2,45 vezes, pelo menos 2,5 vezes, pelo menos 2,55 vezes, pelo menos 3,0 vezes, pelo menos 3,5 vezes, pelo menos 4,0 vezes, pelo menos 4,5 vezes, pelo menos pelo menos 5,0 vezes, pelo menos 5,5 vezes, pelo menos 6,0 vezes, pelo menos 6,5 vezes, pelo menos 7,0 vezes, pelo menos 7,5 vezes, pelo menos 8,0 vezes, pelo menos 8,5 vezes, pelo menos 9,0 vezes, pelo menos 9,5 vezes ou pelo menos 10 vezes, por exemplo, em comparação com o nível de eficácia de um ou mais agentes de quimioterapia em um sujeito correspondente que recebe tais uma ou mais terapias que não é tratado com o anticorpo. Preparação do anticorpo

[00272] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem abranger anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos humanizados e quiméricos, anticorpos humanos, fragmentos de anticorpos (por exemplo, Fab, Fab'-SH, Fv, scFv e F(ab')2), anticorpos poliespecíficos e biespecíficos, anticorpos multivalentes, anticorpos heteroconjugados, anticorpos conjugados, anticorpos derivados de bibliotecas, anticorpos com funções efetoras modificadas, proteínas de fusão contendo uma porção de anticorpo e qualquer outra configuração modificada da molécula de imunoglobulina que inclui um sítio de reconhecimento de antígeno, como um epítopo com resíduos de aminoácidos de uma proteína Siglec-7 da presente divulgação, incluindo variantes de glicosilação de anticorpos, variantes de sequência de aminoácidos de anticorpos e anticorpos modificados covalentemente. Os anticorpos anti-Siglec-7 podem ser humanos, murinos, de rato ou de qualquer outra origem (incluindo anticorpos quiméricos ou humanizados). (1) Anticorpos policlonais

[00273] Anticorpos policlonais, tais como anticorpos policlonais anti-Siglec-7, são geralmente criados em animais por múltiplas injeções subcutâneas (sc) ou intraperitoneais (ip) do antígeno relevante e um adjuvante. Pode ser útil conjugar o antígeno relevante (por exemplo, uma proteína Siglec-7 purificada ou recombinante da presente divulgação) a uma proteína que é imunogênica nas espécies a serem imunizadas, por exemplo, hemocianina de lapa californiana (KLH), albumina sérica, tiroglobulina bovina, ou inibidor de tripsina de soja, usando um agente bifuncional ou derivatizante, por exemplo, éster de maleimidobenzoil sulfossuccinimida (conjugação através de resíduos de cisteína), N-hidroxissuccinimida (através de resíduos de lisina), glutaraldeído, anidrido succínico, SOCl2 ou R1N=C=NR, onde R e R1 são independentemente grupos alquil inferiores. Os exemplos de adjuvantes que podem ser empregados incluem adjuvante completo de Freund e adjuvante MPL-TDM (monofosforil lipídio A, dicorinomicolato de trealose sintético). O protocolo de imunização pode ser selecionado por um versado na técnica sem experimentação indevida.

[00274] Os animais são imunizados contra o antígeno, conjugados imunogênicos ou derivados desejados combinando, por exemplo, 100 μg (para coelhos) ou 5 μg (para camundongos) da proteína ou conjugado com 3 volumes de adjuvante completo de Freund e injetando a solução intradérmica em vários sítios. Um mês depois, os animais são reforçados com 1/5 a 1/10 da quantidade original de peptídeo ou conjugado em adjuvante completo de Freund por injeção subcutânea em vários sítios. De sete a quatorze dias depois, os animais são sangrados e o soro é ensaiado quanto ao título de anticorpos. Os animais são reforçados até o título atingir um platô. Os conjugados também podem ser feitos em cultura de células recombinantes como fusões de proteínas. Além disso, agentes agregantes, tais como alúmen, são adequados para potencializar a resposta imunológica. (2) Anticorpos monoclonais

[00275] Anticorpos monoclonais, tais como anticorpos monoclonais anti-Siglec-7, são obtidos de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compõem a população são idênticos, exceto por possíveis mutações que ocorrem naturalmente e/ou modificações pós-traducionais (por exemplo, isomerizações, amidações) que podem estar presentes em quantidades menores. Assim, o modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como não sendo uma mistura de anticorpos discretos.

[00276] Por exemplo, os anticorpos monoclonais anti-Siglec-7 podem ser produzidos utilizando o método de hibridoma descrito pela primeira vez por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), ou pode ser feito pelos métodos do DNA recombinante (Patente US Nº 4.816.567).

[00277] No método de hibridoma, um camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado, tal como um hamster, é imunizado como descrito acima para provocar linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que se ligam especificamente à proteína usada para imunização (por exemplo, uma proteína Siglec-7 purificada ou recombinante da presente divulgação). Alternativamente, os linfócitos podem ser imunizados in vitro. Os linfócitos são então fundidos com células de mieloma usando um agente de fusão adequado, tal como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)).

[00278] O agente de imunização incluirá tipicamente a proteína antigênica (por exemplo, uma proteína Siglec-7 purificada ou recombinante da presente divulgação) ou uma variante de fusão desta. Geralmente, linfócitos de sangue periféricos ("PBLs") são usados se células de origem humana forem desejadas, enquanto células de baço ou linfonodos são usadas se fontes de mamíferos não humanos forem desejadas. Os linfócitos são então fundidos com uma linhagem celular imortalizada utilizando um agente de fusão adequado, tal como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma. Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103.

[00279] As linhagens celulares imortalizadas são, normalmente, células de mamíferos transformadas, particularmente células de mieloma originadas de roedores, bovinos ou humanos. Normalmente, linhagens celulares de mieloma de ratos ou camundongos são usadas. As células de hibridoma assim preparadas são semeadas e cultivadas em um meio de cultura adequado que preferencialmente contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou a sobrevivência das células de mieloma precursoras não fundidas. Por exemplo, se as células de mieloma precursoras não possuírem a enzima hipoxantina guanina fosforribosil transferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura para os hibridomas tipicamente incluirá hipoxantina, aminopterina, e timidina (meio HAT), substâncias estas que evitam o crescimento de células deficientes em HGPRT.

[00280] As células de mieloma imortalizadas preferenciais são aquelas que se fundem eficientemente, suportam a produção estável de alto nível de anticorpos pelas células produtoras de anticorpos selecionadas e são sensíveis a um meio, tal como o meio HAT. Entre elas, são preferenciais as linhagens de mieloma murino, como as derivadas de tumores de camundongos MOPC-21 e MPC-11 (disponíveis no Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Califórnia, EUA), bem como células SP-2 e seus derivados (por exemplo, X63-Ag8-653) (disponível na American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, EUA). Foram também descritas linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma de camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos (Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).

[00281] O meio de cultura no qual as células de hibridoma são cultivadas pode ser testado quanto à presença de anticorpos monoclonais direcionados contra o antígeno desejado (por exemplo, uma proteína Siglec-7 da presente divulgação). Preferencialmente, a afinidade e especificidade de ligação do anticorpo monoclonal podem ser determinadas por imunoprecipitação ou por um ensaio de ligação in vitro, tal como radioimunoensaio (RIA) ou ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Tais técnicas e ensaios são conhecidos na técnica. Por exemplo, a afinidade de ligação pode ser determinada pela análise Scatchard de Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980).

[00282] Após as células do hibridoma que produzem anticorpos da especificidade, afinidade e/ou atividade desejada serem identificadas, os clones podem ser subclonados por procedimentos de diluição limitantes e cultivados por métodos padrão (Goding, supra). Os meios de cultura adequados para esse fim incluem, por exemplo, meio D-MEM ou RPMI-1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser cultivadas in vivo como tumores em um mamífero.

[00283] Os anticorpos monoclonais secretados pelos subclones são adequadamente separados do meio de cultura, fluido de ascites, ou soro por procedimentos de purificação de imunoglobulina convencionais, tais como, por exemplo, cromatografia de proteína A-Sefarose, cromatografia por hidroxilapatite, eletroforese em gel, diálise, cromatografia por afinidade e outros métodos, tais como descrito acima.

[00284] Os anticorpos monoclonais anti-Siglec-7 também podem ser produzidos por métodos de DNA recombinante, tais como os divulgados na Patente US Nº 4.816.567, e conforme descrito acima. O DNA que codifica os anticorpos monoclonais é facilmente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que se ligam especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves de anticorpos murinos). As células de hibridoma servem como uma fonte preferencial de tal DNA. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em vetores de expressão, que são transfectados para células hospedeiras, como células de E. coli, células COS símias, células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células de mieloma que, de outra forma, não produzem proteína de imunoglobulina, a fim de sintetizar anticorpos monoclonais em tais células hospedeiras recombinantes. Os artigos de revisão sobre expressão recombinante em bactérias de DNA que codificam o anticorpo incluem Skerra et al., Curr. Opin. Immunol., 5:256-262 (1993) e Plückthun, Immunol. Rev. 130:151-188 (1992).

[00285] Em certas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 podem ser isolados a partir de bibliotecas de fagos de anticorpos gerados usando as técnicas descritas em McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990). Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) e Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991) descreveu o isolamento de anticorpos murinos e humanos, respectivamente, a partir de bibliotecas de fagos. Publicações subsequentes descrevem a produção de anticorpos humanos de alta afinidade (faixa nanomolar ("nM")) por "shuffling" de cadeia (Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)), bem como infecção combinatória e recombinação in vivo como uma estratégia para construir bibliotecas de fagos muito grandes (Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21: 2265-2266 (1993)). Assim, essas técnicas são alternativas viáveis às técnicas tradicionais de hibridoma de anticorpos monoclonais para isolamento de anticorpos monoclonais de especificidade desejada (por exemplo, aqueles que se ligam a uma proteína Siglec-7 da presente divulgação).

[00286] O DNA que codifica anticorpos ou fragmentos dos mesmos também podem ser modificados, por exemplo, substituindo a sequência de codificação para os domínios constantes de cadeia pesada e leve humana no lugar das sequências homólogas de murino (Patente US Nº 4.816.567; Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), ou por ligação covalente à sequência de codificação da imunoglobulina de toda ou parte da sequência de codificação para um polipeptídeo não imunoglobulina. Tipicamente, tais polipeptídeos não imunoglobulina são substituídos pelos domínios constantes de um anticorpo ou são substituídos pelos domínios variáveis de um sítio de combinação de antígeno de um anticorpo para criar um anticorpo bivalente quimérico compreendendo um sítio de combinação de antígeno com especificidade para um antígeno e outro sítio de combinação de antígeno com especificidade para um antígeno diferente.

[00287] Os anticorpos monoclonais descritos neste documento (por exemplo, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ou fragmentos dos mesmos) podem ser monovalentes, cuja preparação é bem conhecida na técnica. Por exemplo, um método envolve a expressão recombinante da cadeia leve de imunoglobulina e uma cadeia pesada modificada. A cadeia pesada é truncada geralmente em qualquer ponto da região Fc, de modo a impedir a reticulação da cadeia pesada. Alternativamente, os resíduos de cisteína relevantes podem ser substituídos por outro resíduo de aminoácido ou são excluídos de modo a impedir a reticulação. Os métodos in vitro também são adequados para preparar anticorpos monovalentes. A digestão de anticorpos para produzir fragmentos destes, particularmente fragmentos Fab, pode ser realizada utilizando técnicas de rotina conhecidas na técnica.

[00288] Os anticorpos anti-Siglec-7 quiméricos ou híbridos também podem ser preparados in vitro usando métodos conhecidos na química de proteínas sintéticas, incluindo aqueles que envolvem agentes de reticulação. Por exemplo, imunotoxinas podem ser construídas usando uma reação de troca de bissulfeto ou pela formação de uma ligação de tioéter. Iminotiolato e metil-4- mercaptobutirimidato são exemplos de reagentes apropriados para esta finalidade. (3) Anticorpos humanizados

[00289] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ou fragmentos de anticorpos destes podem ainda incluir anticorpos humanizados ou humanos. Formas humanizadas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos destes (tais como Fab, Fab’-SH, Fv, scFv, F(ab’)2 ou outras subsequências de ligação a antígeno de anticorpos), as quais contêm uma sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Os anticorpos humanizados incluem imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) nas quais resíduos de uma região determinante de complementaridade (CDR) do recipiente são substituídos por resíduos a partir de uma CDR de uma espécie não humana (anticorpo doador) tal como camundongo, rato ou coelho, possuindo a especificidade, afinidade e capacidade. Em alguns casos, resíduos de framework Fv da imunoglobulina humana são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes. Os anticorpos humanizados também podem ambém conter resíduos que não se encontram nem no anticorpo receptor nem nas sequências de CDR ou de framework importadas. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente a totalidade de pelo menos um e, tipicamente dois, domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todas as regiões de CDR correspondem aos de uma imunoglobulina não humana e todas, ou substancialmente todas, as regiões FR são as de uma sequência de consenso imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado, de maneira ideal, também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), normalmente o de uma imunoglobulina humana. Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988) e Presta, Curr. Opin. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992).

[00290] Os métodos para humanizar anticorpos não humanos são bem conhecidos na técnica. Geralmente, um anticorpo humanizado tem um ou mais resíduos de aminoácidos introduzidos nele de uma fonte que não é humana. Esses resíduos de aminoácidos não humanos são muitas vezes denominados resíduos de "importação", que são tirados normalmente de um domínio variável de "importação". A humanização pode ser essencialmente realizada seguindo o método de Winter e colaboradores, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988), ou substituindo CDRs de roedor ou sequências de CDR pelas sequências correspondentes de um anticorpo humano. Dessa forma, tais anticorpos "humanizados" são anticorpos quiméricos (Patente US Nº 4.816.567) em que substancialmente menos do que um domínio variável humano intacto foi substituído pela sequência correspondente de uma espécie não humana. Na prática, os anticorpos humanizados são anticorpos tipicamente humanos nos quais alguns resíduos da CDR e possivelmente alguns resíduos de FR são substituídos por resíduos de sítios análogos nos anticorpos de roedores.

[00291] A escolha de domínios variáveis humanos, tanto leves como pesados, para serem usados na fabricação de anticorpos humanizados é muito importante para reduzir a antigenicidade. De acordo com o denominado método de "melhor ajuste", a sequência de domínio variável de um anticorpo de roedor é testada contra toda a biblioteca das sequências de domínio variável humano conhecidas. A sequência humana mais próxima da do roedor é então aceita como a região framework humana (FR) para o anticorpo humanizado. Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987). Outro método usa uma estrutura particular derivada da sequência de consenso de todos os anticorpos humanos de um subgrupo particular de cadeias leves ou pesadas. A mesma estrutura pode ser utilizada para vários anticorpos humanizados diferentes. Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993).

[00292] Além disso, também é importante ainda que os anticorpos sejam humanizados com retenção de alta afinidade em relação ao antígeno e outras propriedades biológicas favoráveis. Para alcançar este objetivo, de acordo com um método preferencial, os anticorpos humanizados são preparados por um processo de análise das sequências precursoras e de vários produtos humanizados e manipulados conceituais utilizando modelos tridimensionais das sequências precursoras e humanizadas. Modelos tridimensionais de imunoglobulina estão comumente disponíveis e são familiares aos versados na técnica. Estão disponíveis programas de computador que ilustram e exibem estruturas conformacionais tridimensionais prováveis de sequências de imunoglobulina candidatas selecionadas. A inspeção destas exibições permite a análise do papel provável dos resíduos no funcionamento da sequência de imunoglobulina candidata, ou seja, a análise dos resíduos que influenciam a capacidade da imunoglobulina candidata de ligar seu antígeno. Dessa maneira, os resíduos de FR podem ser selecionados e combinados das sequências receptoras e de importação, para que a característica desejada do anticorpo, tal como afinidade aumentada pelo antígeno ou antígenos alvo (por exemplo, proteínas Siglec-7 da presente divulgação), seja alcançada. Em geral, os resíduos de CDR estão diretamente e mais substancialmente envolvidos em influenciar a ligação a antígeno.

[00293] São contempladas várias formas do anticorpo anti- Siglec-7 humanizado. Por exemplo, o anticorpo anti-Siglec-7 humanizado pode ser um fragmento de anticorpo, tal como um Fab, que é opcionalmente conjugado com um ou mais agentes citotóxicos, a fim de gerar um imunoconjugado. Alternativamente, o anticorpo anti-Siglec-7 humanizado pode ser um anticorpo intacto, tal como um anticorpo IgG1 intacto. (4) Fragmentos de anticorpo

[00294] Em certas modalidades, há vantagens em usar fragmentos de anticorpo anti-Siglec-7, em vez de anticorpos anti-Siglec-7 inteiros. Tamanhos de fragmento menores permitem uma depuração rápida e uma melhor penetração no cérebro.

[00295] Várias técnicas foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpos. Tradicionalmente, esses fragmentos são derivados da digestão proteolítica de anticorpos intactos (consulte, por exemplo, Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Method. 24:107-117 (1992); e Brennan et al., Science 229:81 (1985)). No entanto, esses fragmentos podem agora ser produzidos diretamente por células hospedeiras recombinantes, por exemplo, usando ácidos nucleicos que codificam anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação. Fragmentos de anticorpos Fab, Fv e scFv podem todos ser expressos e secretados a partir de E. coli, permitindo, assim, a produção direta de grandes quantidades desses fragmentos. Os fragmentos de anticorpos anti-Siglec-7 também podem ser isolados das bibliotecas de fago de anticorpos discutidas acima. Alternativamente, os fragmentos Fab'-SH podem ser recuperados diretamente de E. coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos de

F(ab')2 (Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)). De acordo com outra abordagem, fragmentos F(ab')2 podem ser isolados diretamente de uma cultura de células hospedeiras recombinantes. A produção de fragmentos de anticorpo Fab e F(ab')2 com meia-vidas in vivo aumentadas é descrita na Patente US Nº

5.869.046. Em outras modalidades, o anticorpo escolhido é um fragmento Fv de cadeia simples (scFv). Consulte WO 93/16185; Patente US Nº 5.571.894; e Patente US Nº 5.587.458. O fragmento de anticorpo anti-Siglec-7 também pode ser um "anticorpo linear", por exemplo, conforme descrito na Patente US

5.641.870. Tais fragmentos de anticorpos lineares podem ser monoespecíficos ou biespecíficos. (5) Anticorpos biespecíficos e poliespecíficos

[00296] Anticorpos biespecíficos (BsAbs) são anticorpos que possuem especificidades de ligação para pelo menos dois epítopos diferentes, incluindo aqueles na mesma ou em outra proteína (por exemplo, uma ou mais proteínas Siglec-7 da presente divulgação). Alternativamente, uma parte de um BsAb pode ser armada para se ligar ao antígeno Siglec-7 alvo e outra pode ser combinada com um braço que se liga a uma segunda proteína. Tais anticorpos podem ser derivados de anticorpos de comprimento completo ou fragmentos de anticorpos (por exemplo, anticorpos biespecíficos F(ab’)2 ).

[00297] Os métodos para produzir anticorpos biespecíficos são conhecidos na técnica. A produção tradicional de anticorpos biespecíficos de comprimento completo é baseada na coexpressão de dois pares de cadeia pesada/cadeia leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias têm especificidades diferentes. Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983). Devido ao arranjo aleatório de cadeias pesadas e leves de imunoglobulina, esses hibridomas (quadromas) produzem uma mistura em potencial de 10 moléculas de anticorpo diferentes, das quais somente uma possui a estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta, que é usualmente feita por etapas de cromatografia de afinidade, é bastante trabalhosa e os rendimentos de produto são baixos. Procedimentos semelhantes são divulgados no documento WO 93/08829 e em Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991).

[00298] De acordo com uma abordagem diferente, domínios variáveis de anticorpo com as especificidades de ligação desejadas (sítios de combinação anticorpo-antígeno) são fundidos às sequências de domínios constantes de imunoglobulina. A fusão é preferencialmente com um domínio constante de cadeia pesada de imunoglobulina, compreendendo pelo menos parte das regiões de dobradiça, CH2 e CH3. Prefere-se ter a primeira região constante de cadeia pesada (CH1), contendo o sítio necessário para ligação da cadeia leve, presente em pelo menos uma das fusões. Os DNAs que codificam as fusões de cadeia pesada de imunoglobulina e, se desejado, a cadeia leve de imunoglobulina, são inseridos em vetores de expressão separados e são co- transfectados para um organismo hospedeiro adequado. Isso fornece maior flexibilidade no ajuste das proporções mútuas dos três fragmentos polipeptídicos em modalidades quando razões desiguais das três cadeias polipeptídicas utilizadas na construção fornecem os rendimentos ideais. É, no entanto, possível inserir as sequências codificadoras para duas ou para todas as três cadeias polipeptídicas em um vetor de expressão quando a expressão de pelo menos duas cadeias polipeptídicas em proporções iguais resulta em rendimentos elevados ou quando as proporções não têm significado em particular.

[00299] Em uma modalidade preferêncial dessa abordagem, os anticorpos biespecíficos são compostos por uma cadeia pesada de imunoglobulina híbrida com uma primeira especificidade de ligação em um braço, e um par de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina híbrida (provendo uma segunda especificidade de ligação) no outro braço. Verificou-se que essa estrutura assimétrica facilita a separação do composto biespecífico desejado das combinações de cadeias de imunoglobulina indesejadas, uma vez que a presença de uma cadeia leve de imunoglobulina em somente metade das molécula biespecíficas fornece uma forma fácil de separação. Esta abordagem é divulgada no documento WO 94/04690. Para mais detalhes da criação de anticorpos biespecíficos consulte, por exemplo, Suresh et al., Methods in Enzymology 121: 210 (1986).

[00300] De acordo com outra abordagem descrita em WO 96/27011 ou Patente US Nº 5.731.168, a interface entre um par de moléculas de anticorpos pode ser manipulada para maximizar a porcentagem de heterodímeros que são recuperados da cultura celular recombinante. A interface preferencial compreende, pelo menos, uma parte da região CH3 de um domínio constante de anticorpo. Neste método, uma ou mais cadeias laterais pequenas de aminoácidos da interface da primeira molécula de anticorpo são substituídas por cadeias laterais maiores (por exemplo, tirosina ou triptofano). "Cavidades" compensatórias de tamanho idêntico ou semelhante à(s) cadeia(s) lateral(is) grande(s) são criadas na interface da segunda molécula de anticorpo substituindo cadeias laterais de aminoácidos grandes por cadeias menores (por exemplo, alanina ou treonina). Isso fornece um mecanismo para aumentar o rendimento do heterodímero em relação a outros produtos finais indesejados, como homodímeros.

[00301] As técnicas para gerar anticorpos biespecíficos a partir de fragmentos de anticorpos foram descritas na literatura. Por exemplo, anticorpos biespecíficos podem ser preparados utilizando ligação química. Brennan et al., Science 229:81 (1985) descrevem um procedimento em que anticorpos intactos são clivados proteoliticamente para gerar fragmentos F(ab')2. Esses fragmentos são reduzidos na presença do agente complexante de ditiol, arsenito de sódio, para estabilizar ditióis vicinais e evitar a formação de dissulfeto intermolecular. Os fragmentos Fab' gerados são então convertidos em derivados de tionitrobenzoato (TNB). Um dos derivados Fab'-TNB é então reconvertido no derivado Fab'-TNB para formar o anticorpo biespecífico. Os anticorpos biespecíficos produzidos podem ser utilizados como agentes para a imobilização seletiva de enzimas.

[00302] Os fragmentos Fab' podem ser recuperados diretamente de E. coli e acoplados quimicamente para formar anticorpos biespecíficos. Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992) descreve a produção de moléculas totalmente humanizadas de anticorpo biespecífico F(ab')2. Cada fragmento Fab' foi secretado separadamente de E. coli e sujeito a acoplamento químico direto in vitro para formar o anticorpo biespecífico. O anticorpo biespecífico assim formado foi capaz de se ligar a células que superexpressam o receptor ErbB2 e células T humanas normais, bem como desencadear a atividade lítica de linfócitos citotóxicos humanos contra alvos de tumor de mama humano.

[00303] Foram também descritas várias técnicas para produzir e isolar fragmentos de anticorpos bivalentes diretamente de cultura de células recombinantes. Por exemplo, heterodímeros bivalentes foram produzidos usando zíperes de leucina. Kostelny et al. J. Immunol.148 (5): 1547-1553 (1992). Os peptídeos de zíper de leucina das proteínas Fos e Jun foram ligados às porções Fab' de dois anticorpos diferentes por fusão de genes. Os homodímeros de anticorpo foram reduzidos na região da dobradiça para formar monômeros e depois reoxidados para formar os heterodímeros de anticorpo. A tecnologia “diabody” descrita por Hollinger et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993) forneceu um mecanismo alternativo para produzir fragmentos de anticorpos biespecíficos/bivalentes. Os fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) por um ligante peptídico que é curto demais para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia. Por conseguinte, os domínios V H e VL de um fragmento são forçados a emparelhar-se com os domínios complementares VL e VH de outro fragmento, formando, desse modo, dois sítios de ligação ao antígeno. Relatou-se também outra estratégia para preparar fragmentos de anticorpo biespecíficos/bivalentes pela utilização de dímeros Fv(sFv) de cadeia simples. Consulte Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994).

[00304] Os anticorpos com mais de duas valências também são contemplados. Por exemplo, anticorpos triespecíficos podem ser preparados. Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991).

[00305] Anticorpos biespecíficos exemplificativos podem se ligar a dois epítopos diferentes em uma determinada molécula (por exemplo, uma proteína Siglec-7 da presente divulgação). Alternativamente, um braço direcionando um componente de sinalização Siglec-7 pode ser combinado com um braço que se liga a uma molécula desencadeante em um leucócito, tal como uma molécula receptora de célula T (por exemplo, CD2, CD3, CD28 ou B7) ou receptores Fc para IgG (FcγR), tais como FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) e FcγRIII (CD16), de modo a focar os mecanismos de defesa celular na célula que expressa a proteína específica. Os anticorpos biespecíficos também podem ser usados para localizar agentes citotóxicos para células que expressam uma proteína particular. Esses anticorpos possuem um braço de ligação ao antígeno e um braço que liga um agente citotóxico ou um quelante de radionuclídeo, como EOTUBE, DPTA, DOTA ou TETA. Outro anticorpo biespecífico de interesse se liga à proteína de interesse e ainda se liga ao fator tecidual (TF). (6) Anticorpos multivalentes

[00306] Um anticorpo multivalente pode ser internalizado (e/ou catabolizado) mais rapidamente do que um anticorpo bivalente por uma célula que expressa um antígeno ao qual os anticorpos se ligam. Os anticorpos anti- Siglec-7 da presente divulgação ou fragmentos de anticorpo destes podem ser anticorpos multivalentes (que são diferentes que os da classe IgM) com três ou mais sítios de ligação ao antígeno (por exemplo, anticorpos tetravalentes), que podem ser produzidos facilmente por expressão recombinante de ácido nucleico que codifica as cadeias polipeptídicas do anticorpo. O anticorpo multivalente pode compreender um domínio de dimerização e três ou mais sítios de ligação ao antígeno. O domínio de dimerização preferencial compreende uma região Fc ou uma região de dobradiça. Neste cenário, o anticorpo compreenderá uma região Fc e três ou mais sítios de ligação ao antígeno amino-terminal em relação à região Fc. O anticorpo multivalente preferido aqui contém três a cerca de oito, mas de preferência quatro, sítios de ligação ao antígeno. O anticorpo multivalente contém pelo menos uma cadeia polipeptídica (e preferencialmente duas cadeias polipeptídicas), em que a cadeia polipeptídica compreendem dois ou mais domínios variáveis. Por exemplo, a cadeia ou cadeias polipeptídicas podem compreender VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc, em que VD1 é um primeiro domínio variável, VD2 é um segundo domínio variável, Fc é uma cadeia polipeptídica de uma região Fc, X1 e X2 representam um aminoácido ou polipeptídeo e n é 0 ou 1. De modo semelhante, a cadeia ou cadeias polipeptídicas podem compreender a cadeia VH-CH1-ligante peptídico flexível-VH-CH1-região Fc; ou a cadeia VH-CH1-VH- CH1-região Fc. O anticorpo multivalente neste documento compreende preferencialmente ainda pelo menos dois (e preferencialmente quatro) polipeptídeos do domínio variável de cadeia leve. O anticorpo multivalente neste documento pode, por exemplo, compreender de aproximadamente dois a cerca de oito polipeptídeos de domínio variável de cadeia leve. Os polipeptídeos do domínio variável de cadeia leve contemplados neste documento compreendem um domínio variável de cadeia leve e, opcionalmente, compreendem adicionalmente um domínio CL. Os anticorpos multivalentes podem reconhecer o antígeno Siglec-7, bem como, sem limitação, antígenos adicionais de peptídeo A- beta, antígeno ou antígeno da proteína alfa-sinucleína ou antígeno da proteína Tau ou antígeno da proteína TDP-43 ou antígeno da proteína priônica ou antígeno da proteína huntingtina ou RAN, antígeno dos produtos de tradução, incluindo as repetições de dipeptídeo (peptídeos DPRs), compostas por glicina-alanina (GA), glicina-prolina (GP), glicina-arginina (GR), prolina-alanina (PA) ou prolina-arginina (PR), receptor de insulina, receptor de fator de crescimento semelhante à insulina, receptor de transferrina ou qualquer outro antígeno que facilita a transferência de anticorpos através da barreira hematoencefálica. (7) Anticorpos heteroconjugados

[00307] Anticorpos heteroconjugados também estão dentro do escopo da presente divulgação. Os anticorpos heteroconjugados são compostos de dois anticorpos unidos covalentemente (por exemplo, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ou fragmentos de anticorpos dos mesmos). Por exemplo, um dos anticorpos no heteroconjugado pode ser acoplado à avidina, e o outro, à biotina. Tais anticorpos foram, por exemplo, propostos para direcionar células do sistema imunológico para células indesejadas, Patente US Nº 4.676.980, e foram usadas para tratar a infecção pelo HIV. Publicações Internacionais Nos. WO 91/00360, WO 92/200373 e EP 0308936. Contempla-se que os anticorpos podem ser preparados in vitro usando métodos conhecidos na química de proteínas sintéticas, incluindo aqueles envolvendo agentes de reticulação. Por exemplo, imunotoxinas podem ser construídas usando uma reação de troca de bissulfeto ou pela formação de uma ligação de tioéter. Exemplos de reagentes adequados para este fim incluem iminotiolato e metil-4-mercaptobutirimidato e aqueles divulgados, por exemplo, na Patente US. Nº 4.676.980. Os anticorpos heteroconjugados podem ser produzidos utilizando quaisquer métodos de reticulação convenientes. Agentes de reticulação adequados são bem conhecidos na técnica e são divulgados na Patente US Nº 4.676.980, juntamente com várias técnicas de reticulação. (8) Manipulação da função efetora

[00308] Também pode ser desejável modificar um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação para modificar a função efetora e/ou aumentar a meia-vida sérica do anticorpo. Por exemplo, o sítio de ligação ao receptor Fc na região constante pode ser modificado ou mutado para remover ou reduzir a afinidade de ligação a certos receptores Fc, como FcRI, FcRII e/ou FcRIII. Em algumas modalidades, a função efetora é prejudicada pela remoção da N-glicosilação da região Fc (por exemplo, no domínio CH2 da IgG) do anticorpo. Em algumas modalidades, a função efetora é prejudicada pela modificação de regiões, tais como 233-236, 297, e/ou 327-331 de IgG humana, conforme descrito em PCT WO 99/58572 e Armor et al, Molecular Immunology 40:585-593 (2003); Reddy et al., J. Immunology 164:1925-1933 (2000).

[00309] Para aumentar a meia-vida sérica do anticorpo, é possível incorporar um epítopo de ligação ao receptor de recuperação no anticorpo (especialmente um fragmento de anticorpo) conforme descrito na Patente US 5.739.277, por exemplo. Conforme utilizado neste documento, o termo "epítopo de ligação ao receptor de recuperação" refere-se a um epítopo da região Fc de uma molécula de IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, ou IgG4) que é responsável por aumentar a meia-vida sérica in vivo da molécula de IgG. (9) Outras modificações na sequência de aminoácidos

[00310] Modificações na sequência de aminoácidos de anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, ou fragmentos de anticorpos dos mesmos, também são contempladas. Por exemplo, pode ser desejável melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo. As variantes da sequência de aminoácidos dos anticorpos ou fragmentos de anticorpo são preparadas através da introdução de alterações nucleotídicas apropriadas no ácido nucleico que codifica os anticorpos ou fragmentos de anticorpo, ou por síntese peptídica. Tais modificações incluem, por exemplo, deleções de, e/ou inserções em e/ou substituições de resíduos dentro das sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição é feita para chegar ao construto final, desde que o construto final possua as características desejadas (ou seja, a capacidade de se ligar ou interagir fisicamente com uma proteína Siglec-7 da presente divulgação). As alterações de aminoácidos também podem alterar os processos pós- traducionais do anticorpo, tais como alteração do número ou posição dos sítios de glicosilação.

[00311] Um método útil para a identificação de certos resíduos ou regiões do anticorpo anti-Siglec-7 que são locais preferenciais para mutagênese é chamado de "mutagênese de varredura de alanina" conforme descrito por Cunningham e Wells em Science, 244:1081-1085 (1989). Aqui, um resíduo ou grupo de resíduos alvo são identificados (por exemplo, resíduos carregados como arg, asp, his, lys, e glu) e substituídos por um aminoácido neutro ou carregado negativamente (mais preferencialmente alanina ou polialanina) para afetar a interação dos aminoácidos com o antígeno alvo. Esses locais de aminoácidos demonstram sensibilidade funcional às substituições são então refinadas por meio da introdução de variantes adicionais ou outras em, ou para, os sítios de substituição. Desta forma, embora o sítio para introdução de uma variação de sequência de aminoácidos seja predeterminado, a natureza da mutação per se não precisa ser predeterminada. Por exemplo, para analisar o desempenho de uma mutação em um determinado sítio, a varredura de alanina ou mutagênese aleatória é conduzida no códon ou região alvo e as variantes de anticorpos são selecionadas para a atividade desejada.

[00312] As inserções de sequência de aminoácidos incluem fusões amino ("N") e/ou carboxi- ("C") terminais que variam em comprimento de um resíduo a polipeptídeos que contém cem ou mais resíduos, bem como inserções intrassequenciais de resíduos de aminoácidos únicos ou múltiplos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo metionil do terminal N ou o anticorpo fundido com um polipeptídeo citotóxico. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão ao terminal N ou C do anticorpo de uma enzima ou um polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.

[00313] Outro tipo de variante é uma variante de substituição de aminoácidos.

Estas variantes possuem pelo menos um resíduo de aminoácido na molécula de anticorpo substituído por um resíduo diferente.

Os sítios de maior interesse para mutagênese de substituição incluem as regiões hipervariáveis, mas as alterações de FR também são contempladas.

As substituições conservativas são mostradas na Tabela D abaixo, com o título de "substituições preferenciais". Se estas substituições resultam numa alteração na atividade biológica, então alterações mais substanciais, denominadas "substituições exemplificativas" na Tabela D, ou conforme adicionalmente descrito acima em referência a classes de aminoácidos, podem ser introduzidas e os produtos triados.

Tabela D: Substituições de Aminoácidos Resíduo Substituições Exemplificativas Substituições Original Preferenciais Ala (A) val; leu; ile val Arg (R) lys; gln; asn lys Asn (N) gln; his; asp, lys; arg gln Asp (D) glu; asn glu Cys (C) ser; ala ser Gln (Q) asn; glu asn Glu (E) asp; gln asp Gly (G) ala ala His (H) asn; gln; lys; arg arg Ile (I) leu; val; met; ala; phe; norleucina leu Leu (L) norleucina; ile; val; met; ala; phe ile Lys (K) arg; gln; asn arg Met (M) leu; phe; ile leu Phe (F) leu; val; ile; ala; tyr tyr Pro (P) ala ala Ser (S) thr thr Thr (T) Ser ser Trp (W) tyr; phe tyr

Resíduo Substituições Exemplificativas Substituições Original Preferenciais Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucina leu

[00314] Modificações substanciais nas propriedades biológicas do anticorpo são alcançadas por meio de substituições seletivas que se diferem de modo significativo em seus efeitos de manutenção de (a) da estrutura da cadeia principal de polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como uma conformação helical ou de lâmina, (b) da carga ou hidrofobicidade da molécula no sítio alvo ou (c) do total da cadeia lateral. Os resíduos de ocorrência natural estão divididos em grupos com base em propriedades comuns da cadeia lateral: (1) hidrofóbicos: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrofílicos neutros: cys, ser, thr; (3) ácidos: asp, glu; (4) básicos: asn, gln, his, lys, arg; (5) resíduos que influenciam a orientação de cadeia: gly, pro; e (6) aromático: trp, tyr, phe.

[00315] As substituições não conservativas implicam a troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.

[00316] Qualquer resíduo de cisteína não envolvido na manutenção da conformação adequada do anticorpo pode também ser substituído, geralmente por serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula e prevenir reticulação aberrante. Por outro lado, pode ser adicionada ligação(ões) de cisteína ao anticorpo para melhorar a sua estabilidade (particularmente quando o anticorpo é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento Fv).

[00317] Um tipo de variante de substituição particularmente preferencial envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo de origem (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7 humanizado ou humano). Geralmente, a(s) variante(s) resultante(s) selecionada(s) para desenvolvimento posterior terão propriedades biológicas melhoradas em relação ao anticorpo de origem a partir do qual elas são geradas.

Uma maneira conveniente para gerar tais variantes de substituição envolve a maturação por afinidade usando exibição de fagos. Resumidamente, vários sítios de região hipervariáveis (por exemplo, 6-7 sítios) são mutados para gerar todas as substituições de aminoácidos possíveis em cada sítio. As variantes de anticorpos assim geradas são exibidas de uma forma monovalente a partir de partículas de fagos filamentosos como fusões para o produto do gene III de M13 embalado dentro de cada partícula. As variantes exibidas no fago são então triadas quanto à sua atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação) como divulgado neste documento. De modo a identificar os sítios candidatos da região hipervariável para modificação, a mutagênese de varredura de alanina pode ser realizada para identificar resíduos da região hipervariável que contribuem significativamente para a ligação ao antígeno. Alternativamente, ou adicionalmente, pode ser benéfico analisar uma estrutura cristalina do complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno (por exemplo, uma proteína Siglec-7 da presente divulgação). Tais resíduos de contato e resíduos vizinhos são candidatos para substituição de acordo com as técnicas elaboradas neste documento. Uma vez que tais variantes são geradas, o painel de variantes é submetido a triagem conforme descrito neste documento e anticorpos com propriedades superiores em um ou mais ensaios relevantes podem ser selecionados para desenvolvimento posterior.

[00318] Outro tipo de variante de aminoácido do anticorpo altera o padrão de glicosilação original do anticorpo. Por alteração designa-se a exclusão de uma ou mais frações do carboidrato encontrado no anticorpo e/ou adicionar um ou mais locais de glicosilação que não estão presentes no anticorpo.

[00319] A glicosilação de anticorpos é tipicamente ligada a um N ou ligada a um O. Ligada a N se refere à ligação da fração carboidrato a uma cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tripeptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para a ligação enzimática da fração carboidrato à cadeia lateral de asparagina. Assim, a presença de qualquer uma dessas sequências tripeptídicas em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação em potencial. A glicosilação de ligação a O se refere à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser usados.

[00320] A adição de sítios de glicosilação ao anticorpo é realizada convenientemente ao se alterar a sequência de aminoácidos de tal forma que contenha uma ou mais das sequências de tripeptídeo descritas acima (para sítios de glicosilação de ligação a N). A alteração também pode ser pela adição de, ou substituição por, um ou mais resíduos de serina ou treonina à sequência do anticorpo original (para sítios de glicosilação ligada a O).

[00321] As moléculas de ácido nucleico que codificam variantes da sequência de aminoácidos do anticorpo anti-IgE são preparadas por uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Estes métodos incluem, mas não estão limitados a, isolamento de uma fonte natural (no caso de variantes de sequência de aminoácidos de ocorrência natural) ou preparação por mutagênese mediada por oligonucleotídeo (ou dirigida ao local), mutagênese por PCR e mutagênese de cassete de uma variante preparada anteriormente ou uma versão não variante dos anticorpos (por exemplo, anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação) ou fragmentos de anticorpos. (10) Conjugados de anticorpos

[00322] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, ou fragmentos de anticorpo destes, podem ser conjugados com um marcador detectável, uma toxina ou um agente terapêutico. Pode ser utilizado qualquer método adequado conhecido na técnica para conjugar moléculas, tal como um marcador detectável, uma toxina ou um agente terapêutico para anticorpos.

[00323] Por exemplo, a conjugação de droga envolve o acoplamento de uma carga ou droga citotóxica (anticâncer) ativa e biológica a um anticorpo que se direciona especificamente a um determinado marcador tumoral (por exemplo, uma proteína que, idealmente, é encontrada apenas nas ou sobre as células tumorais). Os anticorpos rastreiam essas proteínas no corpo e se ligam à superfície das células cancerígenas. A reação bioquímica entre o anticorpo e a proteína alvo (antígeno) dispara um sinal na célula tumoral, que absorve ou internaliza o anticorpo juntamente com a citotoxina. Depois que o ADC é internalizado, a droga citotóxica é liberada e elimina o câncer. Devido a esse direcionamento, o ideal é que a droga tenha efeitos colaterais menores e proporcione uma janela terapêutica mais ampla do que outros agentes quimioterapêuticos. As técnicas para conjugar anticorpos são divulgadas e conhecidas na técnica (ver, por exemplo, Jane de Lartigue, OncLive 5 de julho de 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; e Ducry et al., (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5–13).

[00324] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode ser conjugado com uma toxina selecionada dentre ricina, cadeia A da ricina, doxorrubicina, daunorrubicina, um maitansinoide, taxol, brometo de etídio, mitomicina, etoposídeo, tenoposídeo, vincristina, vinblastina, colchicina, di-hidroxi-antracina diona, actinomicina, toxina da difteria, exotoxina de Pseudomonas (PE) A, PE40, abrina, cadeia A da abrina, cadeia A da modecina, alfa-sarcina, gelonina, mitogelina, retstrictocina, fenomicina, enomicina, curicina, crotina, caliqueamicina, inibidor de Saponaria officinalis, glicocorticoide, auristatina, auromicina, ítrio, bismuto, combrestatina, duocarmicinas, dolastatina, cc1065 e uma cisplatina. (11) Outras modificações de anticorpos

[00325] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, ou fragmentos de anticorpos dos mesmos, podem ser modificados ainda mais para conter porções não proteicas adicionais que são conhecidas na técnica e prontamente disponíveis. Preferencialmente, as porções adequadas para derivatização do anticorpo são polímeros solúveis em água. Exemplos não- limitantes de polímeros solúveis em água incluem, mas não estão limitados ao polietilenoglicol (PEG), copolímeros de etilenoglicol/propilenoglicol, carboximetilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona, poli-1,3- dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios) e dextrano ou poli(n- vinil pirrolidona)polietilenoglicol, homopolímeros de propilenoglicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, poliois polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico e misturas destes. O propionaldeído de polietilenoglicol pode ter vantagens na fabricação devido à sua estabilidade na água. O polímero pode ser de qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou não ramificado. O número de polímeros ligados ao anticorpo pode variar, e se mais de um polímero for ligado, eles poderão ser moléculas iguais ou diferentes. Em geral, o número e/ou tipo de polímeros usados para derivatização pode ser determinado com base em considerações, incluindo, mas não se limitando às propriedades ou funções específicas do anticorpo a ser melhorado, se o derivado do anticorpo será usado em uma terapia sob condições definidas, etc. Tais técnicas e outras formulações adequadas são divulgadas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20ª Ed., Alfonso Gennaro, Ed., Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000). Ensaios de ligação e outros ensaios

[00326] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser testados para atividade de ligação ao antígeno, por exemplo, por métodos conhecidos como ELISA, ressonância plasmônica de superfície (SPR), Western blot, etc.

[00327] Em algumas modalidades, os ensaios de competição podem ser usados para identificar um anticorpo que compete com qualquer um dos anticorpos descritos neste documento. Em algumas modalidades, os ensaios de competição podem ser usados para identificar um anticorpo que compete com qualquer um dos anticorpos listados nas Tabelas 1-5, 6A-6C, 7A-7C, 8A-8D, 9A- 9D, 10 e 11, ou compreendendo a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB- H9, S7AB- H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB- H8.15, S7AB- H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8. 23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB- H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB- H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB- H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2,

S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB- H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB-H8.45.2 para ligação a Siglec-7. Em certas modalidades, tal anticorpo competidor se liga ao mesmo epítopo (por exemplo, um epítopo linear ou conformacional) ligado a qualquer um dos anticorpos listados nas Tabelas 1-5, 6A-6C, 7A-7C, 8A-8D, 9A-9D, 10 e 11, ou compreendendo a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve de um anticorpo selecionado dentre S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB- H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB- H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB -H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB -H8.30, S7AB- H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB- H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1 ou S7AB-H8.45.2. Métodos exemplares detalhados para mapear um epítopo ao qual um anticorpo se liga são fornecidos em Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” em Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).

[00328] Em um ensaio de competição exemplificativo, Siglec-7 imobilizada ou células que expressam Siglec-7 na superfície celular são incubadas em uma solução compreendendo um primeiro anticorpo marcado que se liga à Siglec-7 (por exemplo, primata humano ou não humano) e um segundo anticorpo não marcado que está sendo testado pela sua capacidade de competir com o primeiro anticorpo pela ligação à Siglec-7. O segundo anticorpo pode estar presente em um sobrenadante do hibridoma. Como um controle, Siglec-7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 são incubadas em uma solução compreendendo o primeiro anticorpo marcado, mas não o segundo anticorpo não marcado. Após incubação em condições permissivas para a ligação do primeiro anticorpo a Siglec-7, o excesso de anticorpo não ligado é removido e a quantidade de marcador associada a Siglec-7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 é medida. Se a quantidade de marcador associada a Siglec- 7 imobilizado ou células que expressam Siglec-7 for substancialmente reduzida na amostra de teste em relação à amostra de controle, então isso indica que o segundo anticorpo está competindo com o primeiro anticorpo pela ligação a Siglec-7. Consulte Harlow e Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual cap.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY). Ácidos Nucleicos, vetores e células hospedeiras

[00329] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser produzidos por meio da utilização de métodos recombinantes e composições, por exemplo, conforme descrito na Patente US Nº 4.816.567. Em algumas modalidades, ácidos nucleicos isolados com uma sequência nucleotídica que codifica qualquer um dos anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação são fornecidos. Tais ácidos nucleicos podem codificar uma sequência de aminoácidos contendo a VL e/ou uma sequência de aminoácidos contendo a VH do anticorpo anti-Siglec-7 (por exemplo, as cadeias leve e/ou pesada do anticorpo). Em algumas modalidades, um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) contendo esses ácidos nucleicos são fornecidos. Em algumas modalidades, uma célula hospedeira contendo esse ácido nucleico também é fornecida. Em algumas modalidades, a célula hospedeira contém (por exemplo, foi transduzida com): (1) um vetor contendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos contendo a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos contendo a VH do anticorpo, ou (2) um primeiro vetor contendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos contendo o VL do anticorpo e um segundo vetor contendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos contendo o VH do anticorpo. Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, por exemplo, uma célula de Ovário de Hamster chinês (CHO) ou células linfoides (por exemplo, células Y0, NS0, Sp20).

[00330] Métodos de produção de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação são fornecidos. Em algumas modalidades, o método inclui cultivar uma célula hospedeira da presente divulgação contendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo anti-Siglec-7, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo. Em algumas modalidades, o anticorpo é subsequentemente recuperado da célula hospedeira (ou meio de cultura de células hospedeiras).

[00331] Para produção recombinante de um anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação, um ácido nucleico que codifica o anticorpo anti- Siglec-7 é isolado e inserido em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Esse ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado por meio da utilização de procedimentos convencionais (por exemplo, utilizando sondas de oligonucleotídeos capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo).

[00332] Os vetores adequados contendo uma sequência de ácido nucleico que codifica qualquer um dos anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação ou fragmentos dos mesmos, polipeptídeos (incluindo anticorpos) descritos neste documento incluem, sem limitação, vetores de clonagem e vetores de expressão. Os vetores de clonagem adequados podem ser construídos de acordo com técnicas padrão ou podem ser selecionados dentre um grande número de vetores de clonagem disponíveis na técnica. Embora o vetor de clonagem selecionado possa variar de acordo com a célula hospedeira que se pretende usar, os vetores de clonagem úteis geralmente têm a capacidade de se auto-replicar, podem possuir um único alvo para uma endonuclease de restrição particular e/ou podem transportar genes para um marcador que pode ser usado na seleção de clones contendo o vetor. Os exemplos adequados incluem plasmídeos e vírus bacterianos, por exemplo, pUC18, pUC19, Bluescript (por exemplo, pBS SK+) e seus derivados, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, DNAs de fago e vetores de transferência, tais como PSA3 e pAT28. Estes e muitos outros vetores de clonagem estão disponíveis a partir de fornecedores comerciais tais como BioRad, Stratagene, e Invitrogen.

[00333] Os vetores de expressão geralmente são construções polinucleotídicas replicáveis que contem um ácido nucleico da presente divulgação. O vetor de expressão pode ser replicável nas células hospedeiras como epissomas ou como parte integrante do DNA cromossômico. Vetores de expressão adequados incluem, mas não estão limitados aos plasmídeos, vetores virais, incluindo adenovírus, adenovírus associados, retrovírus, cosmídeos, e vetor(es) de expressão descritos na Publicação PCT No. WO 87/04462. Os componentes do vetor podem geralmente incluir, mas não estão limitados a um ou mais dos seguintes: uma sequência de sinal; uma origem de replicação; um ou mais genes marcadores; elementos de controle transcricional adequado (tais como promotores, potencializadores e terminador). Para a expressão (ou seja, tradução), um ou mais elementos controladores de translação também são geralmente necessários, tais como sítios de ligação ao ribossomo, sítios de iniciação da tradução, e códons de parada.

[00334] Os vetores que contêm os ácidos nucleicos de interesse podem ser introduzidos na célula hospedeira por qualquer de um número de meios adequados, incluindo eletroporação, transfecção empregando cloreto de cálcio, cloreto de rubídio, fosfato de cálcio, DEAE-dextrano, ou outras substâncias; bombardeamento de micro-projéteis; lipofecção; e infecção (por exemplo, onde o vetor é um agente infeccioso tal como o vírus vaccinia). A opção de introduzir vetores ou polinucleotídeos dependerá frequentemente das características da célula hospedeira. Em algumas modalidades, o vetor contém um ácido nucleico contendo uma ou mais sequências de aminoácidos que codificam um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação.

[00335] As células hospedeiras adequadas para a clonagem ou expressão de vetores que codificam anticorpos incluem as células procarióticas ou eucarióticas. Por exemplo, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser produzidos em bactérias, em particular quando a glicosilação e a função efetora de Fc não são necessárias. Para a expressão de fragmentos de anticorpos e polipeptídeos em bactérias (por exemplo, as Patentes US. Nºs. 5.648.237, 5.789.199 e 5.840.523; e Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, descrevendo a expressão de fragmentos de anticorpos em E. coli.). Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado a partir da massa celular bacteriana em uma fração solúvel e pode ser posteriormente purificado.

[00336] Além de procariotas, microrganismos eucarióticos, como fungos filamentosos ou leveduras, também são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores que codificam anticorpos, incluindo cepas de fungos e leveduras cujas vias de glicosilação foram "humanizadas", resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou totalmente humano (por exemplo, Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004); e Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006)).

[00337] As células hospedeiras adequadas para a expressão do anticorpo glicosilado também podem ser derivadas de organismos multicelulares (invertebrados e vertebrados). Exemplos de células de invertebrados incluem células vegetais e de insetos. Foram identificadas inúmeras cepas de baculovírus que podem ser usadas em conjunto com células de insetos, particularmente para a transfecção de células de Spodoptera frugiperda. As culturas de células vegetais também podem ser utilizadas como hospedeiros (por exemplo, as Patentes US Nºs 5.959.177, 6.040.498, 6.420.548,

7.125.978 e 6.417.429, descrevendo a tecnologia PLANTIBODIES™ para a produção de anticorpos em plantas transgênicas.).

[00338] Células de vertebrados também podem ser usadas como hospedeiras. Por exemplo, linhagens celulares de mamífero que estão adaptadas para crescer em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhas de células hospedeiras de mamífero úteis são a linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293 como descrito, por exemplo, em Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster bebê (BHK); células de Sertoli de camundongo (células TM4 conforme descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células renais caninas (MDCK; células de fígado de rato búfalo (BRL 3A); células de pulmão humano (W138); células de fígado humano (Hep G2); tumor mamário de camundongo (MMT 060562); células TRI, conforme descrito, por exemplo, em Mather et al., Annals NY Acad. Sci. 383: 44-68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens de células hospedeiras de mamífero úteis incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo células DHFR-CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77:4216 (1980)); e linhagens celulares de mieloma, tais como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens de células hospedeiras de mamíferos adequadas para a produção de anticorpos, consulte, por exemplo, Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003). Composições Farmacêuticas

[00339] Os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser incorporados em uma variedade de formulações para administração terapêutica combinando os anticorpos anti-Siglec-7 com carreadores ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis apropriados e podem ser formulados em preparações nas formas sólida, semissólida, líquida ou gasosa. Exemplos de tais formulações incluem, sem limitação, comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, unguentos, soluções, supositórios, injeções, inalantes, géis, microesferas e aerossois. As composições farmacêuticas podem incluir, dependendo da formulação desejada, carreadores de diluentes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, que são veículos comumente usados para formular composições farmacêuticas para administração animal ou humana. O diluente é selecionado para não afetar a atividade biológica da combinação. Exemplos de tais diluentes incluem, sem limitação, água destilada, água tamponada, solução salina fisiológica, PBS, solução de Ringer, solução de dextrose e solução de Hank. Uma composição ou formulação farmacêutica da presente divulgação pode ainda incluir outros carreadores, adjuvantes ou estabilizadores não tóxicos, não terapêuticos, não imunogênicos, excipientes e similares. As composições também podem incluir substâncias adicionais para aproximar condições fisiológicas, tais como agentes de ajuste e tampão de pH, agentes de ajuste de toxicidade, agentes umectantes e detergentes.

[00340] Uma composição farmacêutica da presente divulgação também pode incluir qualquer uma de uma variedade de agentes estabilizadores, como um antioxidante, por exemplo. Quando a composição farmacêutica inclui um polipeptídeo, o polipeptídeo pode ser complexado com vários compostos conhecidos que potencializam a estabilidade in vivo do polipeptídeo ou, de outra forma, potencializam suas propriedades farmacológicas (por exemplo, aumentam a meia-vida do polipeptídeo, reduzem sua toxicidade e potencializam a solubilidade ou absorção). Exemplos de tais modificações ou agentes complexantes incluem, sem limitação, sulfato, gluconato, citrato e fosfato. Os polipeptídeos de uma composição também podem ser complexados com moléculas que aumentam seus atributos in vivo. Tais moléculas incluem, sem limitação, carboidratos, poliaminas, aminoácidos, outros peptídeos, íons (por exemplo, sódio, potássio, cálcio, magnésio, manganês) e lipídios.

[00341] Outros exemplos de formulações que são adequadas para vários tipos de administração podem ser encontrados na Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Filadélfia, PA, 17ª ed. (1985). Para uma breve revisão dos métodos para administração de medicamentos, consulte Langer, Science 249:1527-1533 (1990).

[00342] Para administração oral, o ingrediente ativo pode ser administrado em formas de dosagem sólidas, como cápsulas, comprimidos e pós, ou em formas de dosagem líquidas, como elixires, xaropes e suspensões. O(s) componente(s) ativo(s) pode(m) ser encapsulado(s) em cápsulas de gelatina juntamente com ingredientes inativos e veículos em pó, como glicose, lactose, sacarose, manitol, amido, celulose ou derivados de celulose, estearato de magnésio, ácido esteárico, sacarina sódica, talco, carbonato de magnésio. Exemplos de ingredientes inativos adicionais que podem ser adicionados para fornecer cor, sabor, estabilidade, capacidade de tamponamento, dispersão ou outras características desejáveis conhecidas são óxido de ferro vermelho, sílica gel, lauril sulfato de sódio, dióxido de titânio e tinta branca comestível. Diluentes semelhantes podem ser usados para fazer comprimidos prensados. Tanto os comprimidos quanto as cápsulas podem ser fabricados como produtos de liberação sustentada para fornecer liberação contínua de medicamento por um período de horas. Os comprimidos podem ser revestidos com açúcar ou revestidos com película para mascarar qualquer sabor desagradável e proteger o comprimido da atmosfera, ou com revestimento entérico para desintegração seletiva no trato gastrointestinal. As formas de dosagem líquidas para administração oral podem conter corantes e aromas para aumentar a aceitação do paciente.

[00343] As formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções de injeção estéril isotônicas aquosas e não aquosas, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do destinatário pretendido e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão, solubilizantes, agentes espessantes, estabilizadores e conservantes.

[00344] Os componentes utilizados para formular as composições farmacêuticas são preferencialmente de elevada pureza e estão substancialmente isentos de contaminantes potencialmente prejudiciais (por exemplo, pelo menos de grau National Food (NF), geralmente e pelo menos de grau analítico, e mais tipicamente pelo menos de grau farmacêutico). Além disso, as composições destinadas ao uso in vivo são geralmente estéreis. Na medida em que um determinado composto deve ser sintetizado antes do uso, o produto resultante é tipicamente substancialmente livre de quaisquer agentes potencialmente tóxicos, particularmente quaisquer endotoxinas, que podem estar presentes durante o processo de síntese ou purificação. As composições para administração dos pais também são estéreis, substancialmente isotônicas e feitas sob condições de GMP.

[00345] As formulações podem ser otimizadas para retenção e estabilização no cérebro ou sistema nervoso central. Quando o agente é administrado no compartimento craniano, é desejável que o agente seja retido no compartimento e não difundir ou atravessar a barreira hematoencefálica. As técnicas de estabilização incluem reticulação, multimerização ou ligação a grupos como polietilenoglicol, poliacrilamida, carreadores neutros de proteínas, etc., de modo a obter um aumento no peso molecular.

[00346] Outras estratégias para aprimorar a retenção incluem o aprisionamento do anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação em um implante biodegradável ou bioerodível. A taxa de liberação do agente terapeuticamente ativo é controlada pela taxa de transporte através da matriz polimérica e pela biodegradação do implante. O transporte do fármaco através da barreira polimérica também será afetado pela solubilidade do composto, hidrofilicidade do polímero, extensão da reticulação do polímero, expansão do polímero mediante absorção de água, de modo a tornar a barreira polimérica mais permeável ao fármaco, geometria do implante e similares. Os implantes são de dimensões proporcionais ao tamanho e formato da região selecionada como sítio de implantação. Os implantes podem ser partículas, folhas, adesivos, placas, fibras, microcápsulas e similares e podem ter qualquer tamanho ou forma compatível com o sítio de inserção selecionado.

[00347] Os implantes podem ser monolíticos, ou seja, ter o agente ativo distribuído homogeneamente através da matriz polimérica ou encapsulada, onde um reservatório do agente ativo é encapsulado pela matriz polimérica. A seleção da composição polimérica a ser empregada variará com o sítio da administração, o período de tratamento desejado, a tolerância do paciente, a natureza da doença a ser tratada e similares. As características dos polímeros incluirão biodegradabilidade no sítio da implantação, compatibilidade com o agente de interesse, facilidade de encapsulamento, meia-vida no ambiente fisiológico.

[00348] As composições poliméricas biodegradáveis que podem ser empregadas podem ser ésteres ou éteres orgânicos que, quando degradados, resultam em produtos de degradação fisiologicamente aceitáveis, incluindo os monômeros. Anidridos, amidas, ortoesteres ou outros semelhantes, sozinhos ou em combinação com outros monômeros, podem ser usados. Os polímeros serão polímeros de condensação. Os polímeros podem ser reticulados ou não reticulados. De particular interesse são os polímeros de ácidos carboxílicos hidroxialifáticos quer homo- ou copolímeros e polissacarídeos. Entre os poliésteres de interesse estão incluídos polímeros de ácido d-lático, ácido L- lático, ácido lático racêmico, ácido glicólico, policaprolactona e combinações destes. Ao empregar o L-lactato ou D-lactato, um polímero lentamente biodegradável é alcançado, enquanto a degradação é substancialmente aprimorada com o racemato. Os copolímeros de ácido glicólico e láctico são de particular interesse, onde a velocidade de biodegradação é controlada pela proporção de ácido glicólico para ácido láctico. O copolímero mais rapidamente degradado possui quantidades aproximadamente iguais de ácido glicólico e láctico, onde qualquer homopolímero é mais resistente à degradação. A razão de ácido glicólico para ácido lático também afetará a fragilidade do implante, onde um implante mais flexível é desejável para geometrias maiores. Entre os polissacarídeos de interesse estão o alginato de cálcio e celuloses funcionalizadas, particularmente ésteres de carboximetilcelulose caracterizados por serem insolúveis em água, um peso molecular de cerca de 5 kD a 500 kD, etc. Hidrogéis biodegradáveis também podem ser empregados nos implantes da presente divulgação. Os hidrogéis são tipicamente um material de copolímero, caracterizado pela capacidade de absorver um líquido. Hidrogéis biodegradáveis exemplares que podem ser empregados são descritos em Heller em: Hydrogels in Medicine and Pharmacy, N. A. Peppes ed., Vol. III, CRC Press, Boca Raton, Fla., 1987, pp 137-149. Dosagens farmacêuticas

[00349] As composições farmacêuticas da presente divulgação contendo um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser administradas a um indivíduo em necessidade de tratamento com o anticorpo, preferencialmente um ser humano, de acordo com métodos conhecidos, tais como administração intravenosa como um bolus ou por infusão contínua durante um período de tempo, por via intramuscular, intraperitoneal, intracerobrospinal, intracraniana, intraespinal, subcutânea, intra-articular, intrassinovial, intratecal, oral, tópica ou por inalação.

[00350] As dosagens e a concentração de droga desejadas das composições farmacêuticas da presente divulgação podem variar dependendo da utilização particular prevista. A determinação da dosagem ou via de administração apropriada está dentro das habilidades daquele ordinariamente versado na técnica. Experimentos em animais fornecem orientações confiáveis para a determinação de doses efetivas para terapia humana. O escalonamento de doses eficazes entre espécies pode ser realizado seguindo os princípios descritos em Mordenti, J. e Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics," em Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, Nova York 1989, pp.42-46.

[00351] Para administração in vivo de qualquer um dos anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação, as quantidades de dosagem normais podem variar de cerca de 10 ng/kg até cerca de 100 mg/kg de peso corporal de um indivíduo ou mais por dia, preferencialmente cerca de 1 mg/kg/dia a 10 mg/kg/dia, dependendo da via de administração. Para administrações repetidas por vários dias ou mais, dependendo da gravidade da doença, distúrbio ou condição a ser tratada, o tratamento é mantido até que seja alcançada a supressão desejada dos sintomas.

[00352] Um regime de dosagem exemplificativo pode incluir a administração de uma dose inicial de um anticorpo anti-Siglec-7 de cerca de 2 mg/kg, seguida por uma dose de manutenção semanal de cerca de 1 mg/kg a cada duas semanas. Outros regimes de dosagem podem ser úteis, dependendo do padrão de decaimento farmacocinético que o médico deseje atingir. Por exemplo, a dosagem de um indivíduo de uma a vinte e uma vezes por semana é contemplada aqui. Em certas modalidades, a dosagem que varia de cerca de 3 μg / kg a cerca de 2 mg / kg (como cerca de 3 μg / kg, cerca de 10 μg / kg, cerca de 30 μg / kg, cerca de 100 μg / kg, cerca de 300 μg / kg, cerca de 1 mg / kg e cerca de 2 / mg / kg) pode ser usada. Em certas modalidades, a frequência de dosagem é três vezes por dia, duas vezes por dia, uma vez por dia, uma vez a cada dois dias, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada quatro semanas, uma vez a cada cinco semanas, uma vez a cada seis semanas, uma vez a cada sete semanas, uma vez a cada oito semanas, uma vez a cada nove semanas, uma vez a cada dez semanas ou uma vez por mês, uma vez a cada dois meses, uma vez a cada três meses ou mais. O progresso da terapia é facilmente monitorado por técnicas e ensaios convencionais. O regime de dosagem, incluindo o anticorpo anti-Siglec-7 administrado, pode variar ao longo do tempo, independentemente da dose utilizada.

[00353] As dosagens para um anticorpo anti-Siglec-7 específico podem ser determinadas empiricamente em indivíduos aos quais foi administrada uma ou mais administrações do anticorpo anti-Siglec-7. Os indivíduos recebem doses incrementais de um anticorpo anti-Siglec-7. Para avaliar a eficácia de um anticorpo anti-Siglec-7, um sintoma clínico de qualquer uma das doenças, distúrbios ou condições da presente divulgação (por exemplo, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, convulsões, distrofia retiniana, lesão cerebral traumática, uma lesão medular, depressão de longo prazo, doenças vasculares ateroscleróticas e sintomas indesejáveis do envelhecimento normal) podem ser monitorados.

[00354] A administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode ser contínua ou intermitente, dependendo, por exemplo, da condição fisiológica do receptor, se o objetivo da administração é terapêutico ou profilático e outros fatores conhecidos por profissionais habilidosos. A administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode ser essencialmente contínua durante um período de tempo pré-selecionado ou pode estar em uma série de doses espaçadas.

[00355] Orientação sobre dosagens específicas e métodos de distribuição é fornecida na literatura; consulte, por exemplo, as patentes US Nºs

4.657.760; 5.206.344; ou 5.225.212. Está dentro do escopo da presente divulgação que diferentes formulações serão eficazes para diferentes tratamentos e diferentes distúrbios, e que a administração destinada a tratar um órgão ou tecido específico pode exigir a distribuição de uma maneira diferente daquela para outro órgão ou tecido. Além disso, as dosagens podem ser administradas por uma ou mais administrações separadas ou por infusão contínua. Para administrações repetidas ao longo de muitos dias ou maiores, dependendo da condição, o tratamento é mantido até que ocorra uma supressão desejada dos sintomas de doença. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis. O progresso desta terapia é facilmente monitorado por técnicas e ensaios convencionais. Usos terapêuticos

[00356] Conforme utilizado neste documento, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para prevenir, reduzir o risco ou tratar demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu-Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo,

trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy-Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza. Em algumas modalidades, os anticorpos Siglec-7 são anticorpos agonistas. Em algumas modalidades, os anticorpos são anticorpos inertes. Em algumas modalidades, os anticorpos são anticorpos antagonistas.

[00357] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para prevenir, reduzir o risco ou tratar de demência, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença taupatia, Doença de Nasu-Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatóide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behçet, Doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy- Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar basal cortical, encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão da medula espinhal, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada à idade, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração da retina íon, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget, câncer, câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer de cólon, câncer retal, câncer endometrial, câncer de rim, câncer de células renais, câncer de pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), mieloide agudo leucemia (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mielclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloide, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do SNC, infecções parasitárias, infecção por Tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I e/ou Haemophilus influenza, administrando a um indivíduo em necessidade uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo da presente divulgação que diminui os níveis celulares de Siglec-7, inibe interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou ambos.

[00358] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para prevenir, reduzir o risco ou tratar câncer, administrando a um indivíduo em necessidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo da presente divulgação que diminui os níveis celulares de Siglec-7, inibe a interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou ambos.

Em algumas modalidades, o anticorpo inibe uma ou mais atividades Siglec-7 selecionadas dentre: (a) promoção da proliferação, maturação, migração, diferenciação e/ou funcionalidade de um ou mais dentre células dendríticas imunossupressoras, macrófagos imunossupressores, neutrófilos imunossupressores, não células supressoras tumorigênicas derivadas de mieloides, macrófagos associados a tumor, células mieloides CD14+ não tumorigênicas e células T reguladoras; (b) potencialização da infiltração de uma ou mais células dendríticas imunossupressoras, macrófagos imunossupressores, neutrófilos imunossupressores, células supressoras derivadas de mieloides não tumorigênicas, macrófagos associados a tumor e células T reguladoras em tumores; (c) aumento do número de células imunossupressoras mieloides/granulocíticas promotoras de tumor e/ou células mieloides CD14+ não tumorigênicas em um tumor, no sangue periférico ou em outro órgão linfoide; (d) diminuição da ativação de linfócitos T específicos de tumor com potencial para eliminar tumores; (e) diminuição da infiltração de linfócitos T específicos de tumor com potencial para eliminar tumores; (f) aumento do volume do tumor; (g) aumento da taxa de crescimento do tumor; (h) aumento da metástase; (i) aumento da taxa de recorrência do tumor; (j) aumento da expressão de um ou mais ligantes PD-1; (k) diminuição da eficácia de uma ou mais imunoterapias que modulam as respostas de células T antitumorais, opcionalmente em que uma ou mais imunoterapias são imunoterapias que têm como alvo uma ou mais proteínas selecionadas do grupo que consiste em CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor CSF-1 e qualquer combinação dos mesmos, ou de uma ou mais vacinas contra o câncer; e (l) diminuição da eficácia de um ou mais agentes quimioterápicos, opcionalmente em que um ou mais dos agentes quimioterápicos são gencitabina, capecitabina, antraciclinas, doxorrubicina (Adriamycin®), epirrubicina (Ellence®), taxanos, paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®), 5-

fluorouracil (5-FU), ciclofosfamida (Cytoxan®), carboplatina (Paraplatin®), oxaliplatina (Elotaxin®), leucovorina, temozolmida (Temodar®) e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o anticorpo exibe uma ou mais atividades selecionadas dentre: (a) aumento do número de células T CD3+ que se infiltram no tumor; (b) diminuição dos níveis celulares de Siglec-7 em células mieloides CD14+ não tumorigênicas, opcionalmente em que as células mieloides CD14+ não tumorigênicas são células infiltrantes de tumor ou, opcionalmente, em que as células mieloides CD14+ não tumorigênicas estão presentes no sangue; (c) redução do número de células mieloides CD14+ não tumorigênicas, opcionalmente em que as células mieloides CD14+ não tumorigênicas são células infiltrantes de tumor ou, opcionalmente, em que as células mieloides CD14+ não tumorigênicas estão presentes no sangue; (d) redução dos níveis de PD-L1 em uma ou mais células, opcionalmente em que uma ou mais células são células supressoras derivadas de mieloide não tumorigênicas (MDSC); (e) diminuição da taxa de crescimento tumoral de tumores sólidos; (f) redução do volume do tumor; (g) aumento da eficácia de um ou mais inibidores de PD-1; (h) aumento da eficácia de uma ou mais terapias de inibidor de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica, opcionalmente em que uma ou mais terapias de inibidor de checkpoint e/ou terapias de modulação imunológica têm como alvo um ou mais de CTLA4, a via de adenosina, PD-L1, PD-L2, OX40, TIM3, LAG3 ou qualquer combinação dos mesmos; (i) aumento da eficácia de um ou mais agentes quimioterápicos, opcionalmente em que um ou mais dos agentes quimioterápicos são gencitabina, capecitabina, antraciclinas, doxorrubicina (Adriamycin®), epirrubicina (Ellence®), taxanos, paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®), 5-fluorouracil (5-FU), ciclofosfamida (Cytoxan®), carboplatina (Paraplatin®), oxaliplatina (Elotaxin®), leucovorina, temozolmida (Temodar®) e qualquer combinação dos mesmos; e (j) eliminação das células mielóides imunossupressoras que expressam Siglec-7 e/ou células que expressam CD14 em tumores sólidos e vasos sanguíneos associados quando conjugados com uma toxina química ou radioativa.

[00359] Conforme divulgado neste documento, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação também podem ser utilizados para a indução e/ou promoção da maturação, funcionalidade, migração ou proliferação de sobrevivência de uma ou mais células imunes (por exemplo, células imunes inatas ou células imunes adaptativas). Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos de induzir ou promover a sobrevivência, maturação, funcionalidade, migração ou proliferação de uma ou mais células imunes em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de a presente divulgação que diminui os níveis celulares de Siglec-7, inibe a interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou ambos. Em algumas modalidades, as uma ou mais células imunológicas são selecionadas dentre células dendríticas, macrófagos, micróglia, neutrófilos, células T, células T helper, células T citotóxicas e qualquer combinação destas.

[00360] Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo agonista anti-Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti- Siglec-7 agonista transitório da presente divulgação que atua inicialmente como um agonista e depois atua como um anticorpo antagonista de longo prazo. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-Siglec-7 inerte. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-Siglec-7 antagonista. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 reduz os níveis celulares (por exemplo, superfície celular, intracelular ou total) de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz a degradação de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz a clivagem de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz a internalização de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz a liberação de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 induz a regulação negativa da expressão de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 inibe a interação (por exemplo, ligação) entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a degradação de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a clivagem de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a internalização de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a liberação de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a regulação negativa da expressão de Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 é ativado transitoriamente e, em seguida, induz a diminuição da expressão de Siglec-7. Em certas modalidades, o indivíduo possui um alelo variante Siglec-7.

[00361] Conforme divulgado neste documento, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ainda ser utilizados para diminuir a atividade, funcionalidade ou sobrevivência de células T reguladoras, células dendríticas imunossupressoras incorporadas ao tumor, macrófagos imunossupressores incorporados ao tumor, células supressoras derivadas da linhagem mieloide, macrófagos associados ao tumor, células de leucemia mieloide aguda (LMA), células de leucemia linfocítica crônica (LLC), e/ou células de leucemia mieloide crônica (LMC). Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para a diminuição da atividade, funcionalidade ou sobrevivência de células T reguladoras, células dendríticas imunossupressoras incorporadas ao tumor, macrófagos imunossupressores incorporados ao tumor, células supressoras derivadas da linhagem mieloide, macrófagos associados a tumores, células de leucemia mieloide aguda (LMA), células de leucemia linfocítica crônica (LLC), ou células de leucemia mieloide crônica (LMC) em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo que se liga ou interage com Siglec-7. Em algumas modalidades, o anticorpo é selecionado dentre um anticorpo antagonista, um anticorpo inerte ou um anticorpo agonista. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo anti-Siglec-7 isolado ou conjugado de anticorpo anti- Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, o conjugado de anticorpo anti-Siglec-7 compreende um anticorpo anti-Siglec-7 conjugado com um marcador detectável, uma toxina ou um agente terapêutico.

[00362] Conforme divulgado neste documento, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para diminuir os níveis celulares de Siglec-7, inibir a interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou ambos em uma ou mais células in vitro ou in vivo. Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para diminuir os níveis celulares de Siglec-7, inibir a interação entre Siglec-7 e um ou mais ligantes de Siglec-7, ou ambos em uma ou mais células em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-Siglec-7 isolado da presente divulgação. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-Siglec-7 diminui os níveis celulares de Siglec-7 in vivo.

[00363] Conforme divulgado neste documento, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser utilizados para a diminuir os níveis celulares de Siglec-7 em uma ou mais células, incluindo, sem limitação, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, monócitos, micróglia, células T e macrófagos e/ou linhas de células. Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para a diminuir os níveis celulares de Siglec-7 em uma ou mais células em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, as uma ou mais células são selecionadas dentre células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, monócitos, micróglia, células T e macrófagos e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- Siglec-7 diminui os níveis celulares de Siglec-7 in vivo. Os níveis celulares de Siglec-7 podem referir-se, sem limitação, a níveis de superfície celular de Siglec- 7, níveis intracelulares de Siglec-7 e níveis totais de Siglec-7. Em algumas modalidades, uma diminuição nos níveis celulares de Siglec-7 compreende uma diminuição nos níveis de superfície celular de Siglec-7. Conforme utilizado neste documento, os níveis de superfície celular de Siglec-7 podem ser medidos por qualquer ensaio baseado em células in vitro ou modelo in vivo adequado descrito neste documento ou conhecido na técnica. Em algumas modalidades, uma diminuição nos níveis celulares de Siglec-7 compreende uma diminuição nos níveis intracelulares de Siglec-7. Conforme utilizado neste documento, os níveis intracelulares de Siglec-7 podem ser medidos por quaisquer ensaios baseados em células in vitro ou modelo in vivo adequado descritos neste documento ou conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, uma diminuição nos níveis celulares de Siglec-7 compreende uma diminuição nos níveis totais de Siglec-7. Conforme utilizado neste documento, os níveis totais de Siglec-7 podem ser medidos por quaisquer ensaios baseados em células in vitro ou modelo in vivo adequado descritos neste documento ou conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 induzem a degradação de Siglec-7, clivagem de Siglec-7, internalização de Siglec-7, liberação de Siglec-7 e/ou regulação negativa da expressão de Siglec-7. Em algumas modalidades, os níveis celulares de Siglec-7 são medidos em células primárias (por exemplo, células dendríticas, células dendríticas derivadas da medula óssea, monócitos, micróglia, células T e macrófagos) ou em linhagens celulares utilizando um ensaio celular in vitro.

[00364] Outros aspectos da presente divulgação se referem a um método de seleção de um sujeito em necessidade para tratamento com um anticorpo anti-Siglec-7, o método compreendendo: a. obter uma amostra (por exemplo, amostra de sangue) do sujeito; b. detectar os alelos Siglec-7 presentes no sujeito; e c. selecionar o sujeito para tratamento com o anticorpo que se liga ou interage com Siglec-7 no sujeito que possui um ou mais alelos Siglec-7. Outros aspectos da presente divulgação se referem a um método de avaliação da responsividade de um sujeito em necessidade a um anticorpo que se liga ou interage com Siglec-7, o método compreendendo: a. medir os níveis de expressão de CD45+ e CD14+ em células mieloides não tumorigênicas em uma amostra de sangue obtida do sujeito antes da administração ao sujeito de um anticorpo anti- Siglec-7; b. administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo; e C. medir os níveis de expressão de CD45+ e CD14+ em células mieloides não tumorigênicas em uma amostra de sangue obtida do sujeito após a administração do anticorpo anti-Siglec-7, em que uma redução nos níveis de CD45+ CD14+ em células mieloides não tumorigênicas após a administração do anticorpo anti-Siglec-7 indica que o sujeito responde ao agente. Quaisquer métodos adequados para obter uma amostra, como uma amostra de sangue, podem ser utilizados. Além disso, será apreciado que qualquer método conhecido de detecção de variantes e/ou alelos Siglec-7, como análise de SNP, pode ser utilizado. Em algumas modalidades, o método de avaliação da capacidade de resposta compreende ainda administrar uma ou mais quantidades terapeuticamente eficazes adicionais do anticorpo. Em algumas modalidades, o sujeito é humano.

[00365] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma variante heterozigótica de Siglec-7.

[00366] Em algumas modalidades, os métodos da presente divulgação podem envolver ainda a co-administração de anticorpos anti-Siglec-7 ou anticorpos anti-Siglec-7 biespecíficos, com anticorpos que se ligam a receptores de reconhecimento de padrões, anticorpos que se ligam a receptores do tipo Toll, anticorpos que se ligam a receptores de padrão molecular associado a dano (DAMP) e/ou anticorpos que se ligam a citocinas ou anticorpos a interleucinas).

[00367] Em algumas modalidades, os métodos da presente divulgação podem incluir ainda a administração ao indivíduo de pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint e/ou uma ou mais terapias anticâncer padrão ou de investigação. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint é administrado em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint é selecionado dentre um anticorpo anti-PD-L1, um anticorpo anti-CTLA4, um anticorpo anti-PD-L2, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-B7-H3, um anticorpo anti-B7-H4 e anticorpo anti-HVEM, um anticorpo anti-atenuador de linfócitos B e T (BTLA), um anticorpo anti-receptor inibidor de Killer (KIR), um anticorpo anti-GAL9, anticorpo anti-TIM3, anticorpo anti-A2AR, anticorpo anti-LAG-3, anticorpo anti- fosfatidilserina, anticorpo anti-CD27, anticorpo anti-CD33, anticorpo anti-TNFα, anticorpo anti-Siglec-5, um anticorpo anti-Siglec-9, um anticorpo anti-Siglec-11, um anticorpo antagonista anti-TREM1, um anticorpo antagonista anti-TREM2 e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a uma ou mais terapias anticâncer padrão ou em investigação são selecionadas dentre radioterapia, quimioterapia citotóxica, terapia direcionada, terapia com imatinibe, terapia com trastuzumabe, terapia com etanercepte, terapia de transferência de células adotivas (ACT), terapia de transferência de células T do receptor de antígeno quimérico (CAR-T), terapia vacinal e terapia com citocinas.

[00368] Em algumas modalidades, os métodos da presente divulgação podem incluir ainda a administração ao indivíduo de pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula de citocina inibitória é administrado em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7. Em algumas modalidades, pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória é selecionado dentre um anticorpo anti- CCL2, um anticorpo anti-CSF-1, um anticorpo anti-IL-2 e qualquer combinação destes.

[00369] Em algumas modalidades, os métodos da presente divulgação podem incluir ainda a administração ao indivíduo de pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante é administrado em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante é selecionado dentre um anticorpo agonista anti-CD40, um anticorpo agonista anti-OX40, um anticorpo agonista anti-ICOS, um anticorpo agonista anti-CD28, um anticorpo agonístico anti-TREM1, um anticorpo agonístico anti-TREM2, um anticorpo agonista anti-CD137/4-1BB, um anticorpo agonista anti-CD27, um anticorpo agonista anti-proteína relacionada a TNFR induzida por glucocorticoide GITR, e qualquer combinação dos mesmos.

[00370] Em algumas modalidades, os métodos da presente divulgação podem incluir ainda a administração ao indivíduo de pelo menos uma citocina estimulante. Em algumas modalidades, pelo menos uma citocina estimulante é administrada em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina estimulante é selecionada dentre IFN-a4, IFN-b, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 membros da família,

LIF, IFN-gama, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, CRP, IL-33, MCP-1, MIP-1-beta e qualquer combinação dos mesmos.

[00371] Em algumas modalidades, um sujeito ou indivíduo é um mamífero. Os mamíferos incluem, sem limitação, animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, humanos e primatas não humanos, como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em certas modalidades, o sujeito ou indivíduo é um ser humano. Demência

[00372] A demência é uma síndrome inespecífica (ou seja, um conjunto de sinais e sintomas) que se apresenta como uma séria perda da capacidade cognitiva global em uma pessoa anteriormente não prejudicada, além do que se pode esperar do envelhecimento normal. A demência pode ser estática como resultado de uma lesão cerebral global única. Alternativamente, a demência pode ser progressiva, resultando em declínio a longo prazo devido a danos ou doenças no corpo. Embora a demência seja muito mais comum na população geriátrica, também pode ocorrer antes dos 65 anos. As áreas cognitivas afetadas pela demência incluem, sem limitação, memória, atenção, linguagem e solução de problemas. Geralmente, os sintomas devem estar presentes por pelo menos seis meses antes de um indivíduo ser diagnosticado com demência.

[00373] Formas exemplificativas de demência incluem, sem limitação, demência frontotemporal, doença de Alzheimer, demência vascular, demência semântica e demência com corpos de Lewy.

[00374] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a demência. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com demência. Demência frontotemporal

[00375] A demência frontotemporal (FTD) é uma condição resultante da deterioração progressiva do lobo frontal do cérebro. Com o tempo, a degeneração pode avançar para o lobo temporal. Perdendo apenas para a doença de Alzheimer (AD) na prevalência, a FTD responde por 20% dos casos de demência pré-senil. As características clínicas da FTD incluem déficits de memória, anormalidades comportamentais, mudanças de personalidade e problemas de linguagem (Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24: 186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51: 1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, JR, Neurology 58: 1615-1621 (2002)).

[00376] Uma porção substancial dos casos da FTD é herdada de maneira autossômica dominante, mas mesmo em uma família, os sintomas podem abranger um espectro, desde FTD com distúrbios comportamentais, até Afasia Progressiva Primária, até Degeneração Ganglionar Corticobasal. A FTD, como a maioria das doenças neurodegenerativas, pode ser caracterizada pela presença patológica de agregados proteicos específicos no cérebro doente. Historicamente, as primeiras descrições da FTD reconheceram a presença de acúmulos intraneuronais da proteína Tau hiperfosforilada em emaranhados neurofibrilares ou corpos de Pick. Uma função causal para a proteína Tau associada ao microtúbulo foi respaldada pela identificação de mutações no gene que codifica a proteína Tau em várias famílias (Hutton, M., et al., Nature 393:702- 705 (1998). No entanto, a maioria dos cérebros com FTD não mostra acúmulo de Tau hiperfosforilada, mas exibe imunorreatividade à ubiquitina (Ub) e à proteína TAR de ligação ao DNA (TDP43) (Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64: 1388- 1394 (2007)). Foi demonstrado que a maioria dos casos de FTD com inclusões de Ub (FTD-U) carrega mutações no gene da Progranulina.

[00377] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a FTD. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti- Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com FTD. Doença de Alzheimer

[00378] A doença de Alzheimer (AD) é a forma mais comum de demência. Não há cura para a doença, que piora à medida que progride e, eventualmente, leva à morte. Na maioria das vezes, a AD é diagnosticada em pessoas com mais de 65 anos. No entanto, o Alzheimer de início precoce menos prevalente pode ocorrer muito mais cedo.

[00379] Os sintomas comuns da doença de Alzheimer incluem sintomas comportamentais, como dificuldade em lembrar eventos recentes; sintomas cognitivos, confusão, irritabilidade e agressão, alterações de humor, problemas de linguagem e perda de memória a longo prazo. À medida que a doença progride, as funções corporais são perdidas, levando à morte. A doença de Alzheimer se desenvolve por um período desconhecido e variável antes de se tornar totalmente aparente, e pode progredir sem diagnóstico por anos.

[00380] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a doença de Alzheimer. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com doença de Alzheimer. Doença de Parkinson

[00381] A doença de Parkinson, que pode ser chamada de parkinsonismo idiopático ou primário, síndrome rígida hipocinética (HRS) ou paralisia agitante, é um distúrbio cerebral neurodegenerativo que afeta o controle do sistema motor. A morte progressiva das células produtoras de dopamina no cérebro leva aos principais sintomas do Parkinson. Na maioria das vezes, a doença de Parkinson é diagnosticada em pessoas com mais de 50 anos de idade. A doença de Parkinson é idiopática (sem causa conhecida) na maioria das pessoas. No entanto, fatores genéticos também desempenham um papel na doença.

[00382] Os sintomas da doença de Parkinson incluem, sem limitação, tremores nas mãos, braços, pernas, mandíbula e face, rigidez muscular nos membros e tronco, lentidão de movimento (bradicinesia), instabilidade postural, dificuldade para caminhar, problemas neuropsiquiátricos, alterações na fala ou comportamento, depressão, ansiedade, dor, psicose, demência, alucinações e problemas de sono.

[00383] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a doença de Parkinson. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com doença de Parkinson. Esclerose lateral amiotrófica (ALS)

[00384] Conforme usado neste documento, esclerose lateral amiotrófica (ALS) ou doença do neurônio motor ou doença de Lou Gehrig são usadas de forma intercambiável e referem-se a uma doença debilitante com etiologia variada caracterizada por fraqueza rapidamente progressiva, atrofia e fasciculações musculares, espasticidade muscular, dificuldade na fala (disartria), dificuldade em engolir (disfagia) e dificuldade em respirar (dispneia).

[00385] Foi demonstrado que a Progranulina desempenha um papel na ALS (Schymick, JC et al., (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754- 6) e protege contra os danos causados por proteínas que causam ALS tal como TDP-43 (Laird, AS et al., (2010). PLoS ONE 5: e13368). Foi também demonstrado que o pro-NGF induz a morte mediada por p75 de oligodendrócitos e neurônios corticospinais após lesão da medula espinhal (Beatty et al., Neuron (2002), 36, pp. 375-386; Giehl et al, Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004), 101, páginas 6226-30).

[00386] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a ALS. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti- Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com esclerose lateral amiotrófica. Doença de Huntington

[00387] A doença de Huntington (HD) é uma doença neurodegenerativa hereditária causada por uma mutação autossômica dominante no gene Huntingtin (HTT). A expansão de uma repetição de tripleto de citocina- adenina-guanina (CAG) no gene Huntingtin resulta na produção de uma forma mutante da proteína Huntingtin (Htt) codificada pelo gene. Essa proteína Huntingtin mutante (mHtt) é tóxica e contribui para a morte neuronal. Os sintomas da doença de Huntington costumam aparecer entre 35 e 44 anos, embora possam aparecer em qualquer idade.

[00388] Os sintomas da doença de Huntington incluem, sem limitação, problemas de controle motor, movimentos aleatórios e espasmódicos (coreia), movimentos oculares anormais, equilíbrio comprometido, convulsões, dificuldade em mastigar, dificuldade em engolir, problemas cognitivos, fala alterada, déficits de memória, dificuldades de pensamento, insônia, fadiga, demência, alterações na personalidade, depressão, ansiedade e comportamento compulsivo.

[00389] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a doença de Huntington (HD). Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com doença de Huntington. Doença tipo Taupatia

[00390] As taupatias, ou tauopatias, são uma classe de doença neurodegenerativa causada pela agregação da proteína tau associada ao microtúbulo no cérebro. A doença de Alzheimer (AD) é a doença tipo taupatia mais conhecida e envolve um acúmulo de proteína tau dentro dos neurônios na forma de emaranhados neurofibrilares insolúveis (NFTs). Outras taupatias e distúrbios incluem paralisia supranuclear progressiva, demência pugilística (encefalopatia traumática crônica), demência frontotemporal e parkinsonismo ligado ao cromossomo 17, doença de Lytico-Bodig (complexo parkinsonismo- demência de Guam), demência com predomínio de emaranhados, ganglioglioma e gangliocitoma, meningioangiomatose, panencefalite esclerosante subaguda, encefalopatia por chumbo, esclerose tuberosa, doença de Hallervorden-Spatz, lipofuscinose, doença de Pick, degeneração corticobasal, doença por grãos argirofílicos (AGD), doença de Huntington, demência frontotemporal e degeneração lobar frontotemporal.

[00391] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a doença tipo taupatia. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com uma doença tipo taupatia.

Esclerose Múltipla

[00392] A esclerose múltipla (MS) também pode ser referida como esclerose disseminada ou encefalomielite disseminada. A MS é uma doença inflamatória na qual as bainhas de mielina ao redor dos axônios do cérebro e da medula espinhal são danificadas, levando à desmielinização e cicatrização, bem como a um amplo espectro de sinais e sintomas. A MS afeta a capacidade das células nervosas do cérebro e da medula espinhal de se comunicarem efetivamente. As células nervosas se comunicam enviando sinais elétricos chamados potenciais de ação por fibras longas chamadas axônios, que estão contidos em uma substância isolante chamada mielina. Na MS, o próprio sistema imunológico do corpo ataca e danifica a mielina. Quando a mielina é perdida, os axônios não podem mais conduzir sinais de maneira efetiva. O início da MS geralmente ocorre em adultos jovens e é mais comum em mulheres (http://en.wikipedia.org/wiki/Multiple_sclerosis - cite_note-pmid18970977-1).

[00393] Os sintomas da MS incluem, sem limitação, alterações na sensação, tais como perda de sensibilidade ou formigamento; ardência ou dormência, tais como hipoestesia e parestesia; fraqueza muscular; clônus; espasmos musculares; dificuldade de se mover; dificuldades com coordenação e equilíbrio, tais como ataxia; problemas na fala, tal como disartria, ou na deglutição, tais como disfagia; problemas visuais, tais como nistagmo, neurite óptica incluindo fosfenos e diplopia; fadiga; dor aguda ou crônica; e dificuldades na bexiga e intestino; comprometimento cognitivo em vários graus; sintomas emocionais de depressão ou humor instável; fenômeno de Uhthoff, que é uma exacerbação dos sintomas existentes devido a uma exposição a temperaturas ambientes mais altas do que as normais; e sinal de Lhermitte, que é uma sensação elétrica que desce pelas costas ao dobrar o pescoço.

[00394] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação pode prevenir, reduzir o risco e/ou tratar a esclerose múltipla. Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-Siglec-7 pode modular uma ou mais atividades Siglec-7 em um indivíduo com esclerose múltipla.

Câncer

[00395] Ainda outros aspectos da presente divulgação fornecem métodos para a prevenção, redução do risco ou tratamento de um indivíduo com câncer, compreendendo administrar ao indivíduo em necessidade desta uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-Siglec-7 isolado da presente divulgação. Qualquer um dos anticorpos isolados da presente divulgação pode ser usado nesses métodos. Em algumas modalidades, o anticorpo isolado é um anticorpo agonista da presente divulgação. Em outras modalidades, o anticorpo isolado é um anticorpo antagonista da presente divulgação. Em outras modalidades, o anticorpo isolado é um anticorpo inerte da presente divulgação. Em outras modalidades, o anticorpo isolado é um conjugado de anticorpo da presente divulgação.

[00396] Conforme descrito neste documento, sabe-se que o microambiente do tumor é conhecido por conter um infiltrado imunológico heterogêneo, que inclui linfócitos T, macrófagos e células da linhagem mieloide/granulocítica. A presença e atividade de células T reguladoras, células mieloides imunossupressoras incorporadas ao tumor e/ou macrófagos M2 em tumores está associada a um mau prognóstico. Por outro lado, a presença e atividade de células T citotóxicas é benéfica para a terapia do câncer. Espera-se que as terapias que potencializam direta ou indiretamente a atividade das células T citotóxicas e reduzem o número e a atividade das várias células imunossupressoras proporcionem benefício terapêutico significativo. Um estudo pré-clínico seminal mostrou sinergias entre drogas que direcionam células imunossupressoras (por exemplo, anticorpos bloqueadores CSF1/CSF1R) e anticorpos bloqueadores de checkpoint imunológico que ativam células T citotóxicas, indicando que a manipulação de ambos os tipos de células mostra eficácia em modelos de tumores nos quais as terapias individuais são pouco eficazes (Zhu Y; Cancer Res. 15 de setembro de 2014; 74(18):5057-69). Portanto, em algumas modalidades, o bloqueio de Siglec-7, que é expresso em células mieloides, subconjunto de células T e células imunológicas associadas a tumores, pode estimular uma resposta imunológica antitumoral benéfica, resultando em uma resposta imunológica antitumoral terapêutica.

[00397] Em algumas modalidades, os métodos para a prevenção, redução o risco ou tratamento um indivíduo com câncer incluem ainda a administração ao indivíduo de pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint. Exemplos de anticorpos que se ligam especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint incluem, sem limitação, um anticorpo anti-PD-L1, um anticorpo anti-CTLA4, um anticorpo anti-PD-L2, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-B7-H3, um anticorpo anti- B7-H4 e anticorpo anti-HVEM, um anticorpo anti-BTLA, um anticorpo anti-GAL9, um anticorpo anti-TIM3, um anticorpo anti-A2AR, um anticorpo anti-LAG-3, um anticorpo anti-fosfatidilserina e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint é administrado em combinação com um anticorpo anti-Siglec-7 antagonista da presente divulgação.

[00398] Em algumas modalidades, um câncer a ser prevenido ou tratado pelos métodos da presente divulgação inclui, sem limitação, câncer de células escamosas (por exemplo, câncer epitelial de células escamosas), câncer do pulmão, incluindo câncer das células pequenas do pulmão, câncer do pulmão de células não-pequenas, adenocarcinoma do pulmão e carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritônio, câncer hepatocelular, câncer gástrico ou do estômago, incluindo câncer gastrintestinal e câncer estromal gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical, câncer do ovário, câncer do fígado, câncer da bexiga, câncer do carcinoma do trato urinário, hepatoma, câncer de mama, câncer do cólon, câncer do reto, câncer colorretal, câncer do endométrio ou uterino, carcinoma da glândula salivar, câncer do rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer da tireoide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pênis, melanoma, melanoma de espalhamento superficial, melanoma lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral, melanomas nodulares, mieloma múltiplo e linfoma de células B; leucemia linfocítica crônica (LLC); leucemia linfoblástica aguda (LLA); leucemia de células pilosas; leucemia mieloblástica crônica; e distúrbio linfoproliferativo pós-transplante (PTLD), bem como a proliferação vascular anormal associada a facomatoses, edema (tal como o associado com tumores cerebrais), síndrome de Meigs, cérebro, bem como câncer da cabeça e pescoço, e metástases associadas. Em algumas modalidades, o câncer é câncer colorretal. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado dentre câncer de pulmão de células não-pequenas, glioblastoma, neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de bexiga, câncer de ovário, melanoma, carcinoma da mama, câncer gástrico e carcinoma hepatocelular. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de mama triplo negativo. Em algumas modalidades, o câncer pode ser um câncer em estágio inicial ou em estágio avançado. Em algumas modalidades, o câncer pode ser um tumor primário. Em algumas modalidades, o câncer pode ser um tumor metastático em um segundo sítio derivado de qualquer um dos tipos acima de câncer.

[00399] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-Siglec-7 da presente divulgação podem ser usados para a prevenção, redução do risco ou tratamento do câncer, incluindo, sem limitação, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer de cólon e do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma e câncer de tireoide.

[00400] Em algumas modalidades, o câncer expressa níveis aumentados ou altos de ligante de Siglec-7. Em algumas modalidades, o ligante de Siglec-7 é um ou mais dentre ácido siálico ligado a alfa-2,3 e ácido siálico ligado a alfa-2,6, disialogalactosil globosídeo, disialil lactotetraosilceramida e/ou dissialil GalNAc lactotetraoslilceramida. Em algumas modalidades, o câncer possui níveis aumentados ou elevados de infiltração de células NK no tumor.

[00401] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece métodos para a prevenção, redução do risco ou tratamento de um indivíduo com câncer, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação.

[00402] Em algumas modalidades, o método inclui ainda administrar ao indivíduo pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula imune inibidora de checkpoint, e/ou outra terapia anticâncer padrão ou em investigação. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint é administrado em combinação com um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint é selecionado dentre um anticorpo anti-PD-L1, um anticorpo anti-CTLA4, um anticorpo anti-PD-L2, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-B7-H3, um anticorpo anti-B7-H4 e anticorpo anti-HVEM, um anticorpo anti-atenuador de linfócito B e T (BTLA), um anticorpo anti-receptor inibidor de Killer (KIR), um anticorpo anti-GAL9, um anticorpo anti-TIM3, um anticorpo anti-A2AR, um anticorpo anti-LAG-3, um anticorpo anti-fosfatidilserina, um anticorpo anti-CD27 e qualquer combinação destes. Em algumas modalidades, a terapia anticâncer padrão ou em investigação é uma ou mais terapias selecionadas entre radioterapia, quimioterapia citotóxica, terapia direcionada, imatinibe (Gleevec®), trastuzumabe (Herceptin®), transferência de células adotivas (ACT), transferência de células T de receptor de antígeno quimérico (CAR-T), terapia vacinal e terapia de citocinas.

[00403] Em algumas modalidades, o método inclui ainda administrar ao indivíduo pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória é administrado em combinação com um anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória é selecionado dentre um anticorpo anti-CCL2, um anticorpo anti- CSF-1, um anticorpo anti-IL-2 e qualquer combinação destes.

[00404] Em algumas modalidades, o método inclui ainda administrar ao indivíduo pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante imunológico. Em algumas modalidades, o pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante é administrado em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimuladora é selecionado dentre um anticorpo agonista anti-CD40, um anticorpo agonista anti-OX40, um anticorpo agonista anti- ICOS, um anticorpo agonista anti-CD28, um anticorpo agonista anti-CD137/4-

1BB, um anticorpo agonista anti-CD27, um anticorpo agonista anti-GITR de proteína relacionado a TNFR induzido por gliconocorticoide e qualquer combinação destes.

[00405] Em algumas modalidades, o método inclui ainda administrar ao indivíduo pelo menos uma citocina estimuladora. Em algumas modalidades, pelo menos uma citocina estimuladora é administrada em combinação com o anticorpo anti-Siglec-7 da presente divulgação. Em algumas modalidades, a pelo menos uma citocina estimuladora é selecionada a partir de IFN-a4, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, membro da família IL-20, LIF, OSM, CNTF, IL-11, IL-12, IL-17, IL-18, CRP, IFN-α, IFN-β, IFN-gama, IL-2, IL-18, GM-CSF, G- CSF, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-beta, e qualquer combinação destes. Kits/Artigos de Fabricação

[00406] A presente divulgação também fornece kits e/ou artigos de fabricação contendo um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento, ou um fragmento funcional deste. Kits e/ou artigos de fabricação da presente divulgação podem incluir um ou mais recipientes compreendendo um anticorpo purificado da presente divulgação. Em algumas modalidades, os kits e/ou artigos de fabricação incluem ainda instruções para uso de acordo com os métodos desta divulgação.

[00407] Em algumas modalidades, essas instruções compreendem uma descrição da administração do anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento para a prevenção, redução do risco ou tratamento de um indivíduo com uma doença, distúrbio ou lesão selecionada a partir de demência, demência frontotemporal, mal de Alzheimer, demência vascular, demência mista, doença de Creutzfeldt-Jakob, hidrocefalia de pressão normal, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, doença tipo taupatia, doença de Nasu-Hakola, acidente vascular cerebral, trauma agudo, trauma crônico, lúpus, colite aguda e crônica, artrite reumatoide, cicatrização de feridas, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, obesidade, malária, tremor essencial, lúpus do sistema nervoso central, doença de Behcet, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, atrofia de múltiplos sistemas, síndrome de Shy- Drager, paralisia supranuclear progressiva, degeneração ganglionar corticobasal,

encefalomielite disseminada aguda, distúrbios granulomatosos, sarcoidose, doenças do envelhecimento, convulsões, lesão medular, lesão cerebral traumática, degeneração macular relacionada ao envelhecimento, glaucoma, retinite pigmentosa, degeneração retiniana, infecção do trato respiratório, sepse, infecção ocular, infecção sistêmica, lúpus, artrite, esclerose múltipla, baixa densidade óssea, osteoporose, osteogênese, doença osteopetrótica, doença óssea de Paget, e câncer incluindo câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer de rim, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de ovário, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), mieloma múltiplo, policitemia vera, trombocitose essencial, mielofibrose primária ou idiopática, mieloesclerose primária ou idiopática, tumores derivados de mieloides, tumores que expressam Siglec-7, câncer de tireoide, infecções, herpes do CNS, infecções parasitárias, infecção por tripanossoma, infecção por Cruzi, infecção por Pseudomonas aeruginosa, infecção por Leishmania donovani, infecção por Streptococcus do grupo B, infecção por Campylobacter jejuni, infecção por Neisseria meningiditis, HIV tipo I, e Haemophilus influenza, de acordo com quaisquer métodos dessa divulgação.

[00408] Em algumas modalidades, as instruções compreendem uma descrição de como detectar a proteína Siglec-7, por exemplo, em um indivíduo, em uma amostra de tecido ou em uma célula. O kit e/ou artigo de fabricação pode compreender ainda uma descrição da seleção de um indivíduo adequado para tratamento com base na identificação se esse indivíduo tem a doença e o estágio da doença.

[00409] Em algumas modalidades, os kits e/ou artigos de fabricação podem incluir ainda outro anticorpo da presente divulgação (por exemplo, pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula inibidora de checkpoint, pelo menos um anticorpo que se liga especificamente a uma citocina inibitória e/ou pelo menos um anticorpo agonístico que se liga especificamente a uma proteína de checkpoint estimulante) e/ou pelo menos uma citocina estimuladora. Em algumas modalidades, os kits e/ou artigos de fabricação podem ainda incluir instruções para o uso do anticorpo e/ou citocina estimuladora em combinação com um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento, instruções para o uso de um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento em combinação com um anticorpo e/ou citocina estimuladora, ou instruções para usar um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento e um anticorpo e/ou citocina estimuladora, de acordo com qualquer método desta divulgação.

[00410] Geralmente, as instruções incluem informações sobre dosagem, cronograma de dosagem e via de administração para o tratamento pretendido. Os recipientes podem ser doses unitárias, embalagens em lote (por exemplo, embalagens multi-dose) ou doses de sub-unidade. As instruções fornecidas nos kits e/ou artigos de fabricação da presente divulgação são normalmente instruções escritas num rótulo ou folheto informativo (por exemplo, uma folha de papel incluída no kit), mas instruções legíveis por máquina (por exemplo, instruções transportadas em um disco de armazenamento magnético ou ótico) também são aceitáveis.

[00411] O rótulo ou folheto informativo indica que a composição é usada para o tratamento, por exemplo, uma doença da presente divulgação. As instruções podem ser fornecidos para a prática de qualquer dos métodos descritos neste documento.

[00412] Os kits e/ou artigos de fabricação desta divulgação estão em embalagens adequadas. Embalagem adequada inclui, mas não está limitada às ampolas, garrafas, jarros, embalagens flexíveis (por exemplo, Mylar selado ou sacos de plástico), e semelhantes. Também estão contempladas as embalagens para o uso em combinação com um dispositivo específico, como um inalador, dispositivo de administração nasal (por exemplo, um atomizador) ou um dispositivo de infusão tal como uma minibomba. Os kits e/ou artigos de fabricação podem também ter uma porta de acesso estéril (por exemplo o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou uma ampola possuindo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). O recipiente pode também ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou uma ampola possuindo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento. O recipiente pode ainda compreender um segundo agente farmaceuticamente ativo.

[00413] Kits e/ou artigos de fabricação podem opcionalmente fornecer componentes adicionais, como tampões e informações interpretativas. Normalmente, o kit compreende um recipiente e um rótulo ou folheto informativo (s) sobre ou associado com o recipiente. Usos Diagnósticos

[00414] Os anticorpos isolados da presente divulgação (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento) também têm utilidade diagnóstica. Portanto, esta divulgação fornece métodos para uso de anticorpos desta divulgação, ou fragmentos funcionais destes, para fins de diagnóstico, tais como a detecção de proteína Siglec-7 em um indivíduo ou em amostras de tecido derivadas de um indivíduo.

[00415] Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um paciente humano que sofre ou corre risco de desenvolver uma doença, distúrbio ou lesão da presente divulgação. Em algumas modalidades, os métodos de diagnóstico envolvem detectar uma proteína Siglec-7 em uma amostra biológica, tal como um espécime de biópsia, um tecido ou uma célula. Um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento é contatado com a amostra biológica e o anticorpo ligado ao antígeno é detectado. Por exemplo, um espécime de biópsia pode ser corado com um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento, a fim de detectar e/ou quantificar células associadas à doença. O método de detecção pode envolver a quantificação do anticorpo ligado ao antígeno. A detecção de anticorpos em amostras biológicas pode ocorrer com qualquer método conhecido na técnica, incluindo microscopia de imunofluorescência, imunocitoquímica, imuno- histoquímica, ELISA, análise FACS, imunoprecipitação ou tomografia por emissão de micro-positrons. Em certas modalidades, o anticorpo é radiomarcado, por exemplo, com 18F e, subsequentemente, detectado utilizando análise de tomografia por emissão de micro-positrons. A ligação de anticorpos também pode ser quantificada em um paciente por técnicas não invasivas, como tomografia por emissão de pósitrons (PET),

tomografia computadorizada por raios-X, tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), tomografia computadorizada (CT) e tomografia axial computadorizada (CAT).

[00416] Em outras modalidades, um anticorpo isolado da presente divulgação (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento) pode ser usado para detectar e/ou quantificar, por exemplo, micróglia em um espécime de cérebro retirado de um modelo de doença pré-clínico (por exemplo, um modelo de doença não humana). Assim, um anticorpo isolado da presente divulgação (por exemplo, um anticorpo anti-Siglec-7 descrito neste documento) pode ser útil na avaliação da resposta terapêutica após o tratamento em um modelo para uma doença ou lesão do sistema nervoso, tal como demência frontotemporal, mal de Alzheimer, demência vascular, convulsões, distrofia retiniana, doenças vasculares ateroscleróticas, doença de Nasu-Hakola, ou esclerose múltipla, em comparação com um controle.

[00417] A presente divulgação será compreendida mais amplamente por meio de referência aos Exemplos a seguir. Eles não devem, no entanto, ser interpretados como limitantes do escopo da presente divulgação. Todas as citações ao longo da divulgação são expressamente incorporadas a este documento por referência.

EXEMPLOS Exemplo 1: Humanização de um anticorpo anti-Siglec-7 de murino e parâmetros de ligação de tais variantes humanizadas

[00418] O objetivo do seguinte exemplo foi gerar variantes humanizadas de um anticorpo Siglec-7 anti-humano de camundongo, S7AB, e caracterizar a ligação dos anticorpos humanizados a Siglec-7. O S7AB continha uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de

QVHLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYAFTNCWMNWVRQRPGKGLDWIGRIFPGN

GHTNYSGKFKDKATLTEDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARDYSDYYFDYWGQ GTTLTVSS (SEQ ID NO: 61), e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de

DVQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDINTYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSG VPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID

NO: 62). S7AB foi previamente divulgado em WO2017/040301 como S7-10B5.1 (SEQ ID NO: 520 e SEQ ID NO: 513).

[00419] S7AB foi humanizado enxertando os CDRs do anticorpo parental de camundongo em frameworks de linhagem germinativa humana mais próximas na sequência do anticorpo de camundongo. Anticorpos com uma ou mais mutações reversas de framework também foram gerados. No total, 12 anticorpos humanizados de S7AB foram produzidos. As sequências da região variável de cadeia pesada dos anticorpos estão representadas na Tabela 10 abaixo. As sequências de região variável de cadeia leve dos anticorpos estão representadas na Tabela 11 abaixo.

[00420] Os 12 anticorpos humanizados de S7AB foram avaliados quanto à ligação a células dendríticas primárias por citometria de fluxo. Os monócitos foram isolados do sangue de doadores humanos saudáveis usando o coquetel de anticorpos para isolamento de monócitos RosetteSepTM (StemCell Technologies). Os monócitos isolados foram diferenciados em células dendríticas com 100 ng/mL de GM- CSF e 100 ng/mL de IL-4 (Peprotech). As células dendríticas foram incubadas com diluições dos anticorpos anti-Siglec-7 por 30 minutos em gelo no escuro, seguido por uma incubação de 30 minutos com um anticorpo secundário IgG anti-humano conjugado por fluorescência. As células foram lavadas duas vezes em tampão FACS (PBS + 2% FBS, 2 mM EDTA) e a citometria de fluxo foi realizada em um BD FACS Canto. Os dados foram analisados usando software FlowJo (Ashland, OR). Os resultados são mostrados na FIG. 1 e a metade da concentração efetiva máxima (EC50) para cada anticorpo está resumida na Tabela 1 abaixo. Tabela 1: Ligação de anticorpos Siglec-7 humanizados a células dendríticas Anticorpo EC50 (nM) S7AB-H1 4,6 S7AB-H2 1,8 S7AB-H3 1,6 S7AB-H4 3,2 S7AB-H5 1,1 S7AB-H6 1,6 S7AB-H7 3,3

S7AB-H8 1,5 S7AB-H9 1,5 S7AB-H10 6,3 S7AB-H11 1,2 S7AB-H12 5,6

[00421] Enquanto todos os 12 anticorpos humanizados se ligaram às células dendríticas, oito anticorpos, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H11 e S7AB-H12, mostraram uma ligação substancialmente melhor em comparação com os outros anticorpos. Os parâmetros de afinidade de quatro anticorpos humanizados que exibiram ligação robusta, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H11 e S7AB-H12, foram medidos por Interferometria BioLayer em um ensaio ForteBio de acordo com técnicas padrão (Estep et al. (2013) MAbs 5(2): 270-8). Neste ensaio, os anticorpos humanizados foram comparados diretamente com S7AB. Resumidamente, os anticorpos foram capturados em biossensores Fc de IgG anti- humano ou anti-camundongo (Pall ForteBio). As concentrações variáveis (0-100 nM) de Siglec-7 humano marcado com histidina (NovoProtein) foram então ligadas à superfície anti-Siglec-7 capturada (tempo de associação de 200 s, tempo de dissociação de 900 s). A análise cinética de multi-concentração foi realizada usando um modelo de interação 1:1 para extrair as constantes de taxa de associação e dissociação (ka e kd, respectivamente) para cada anticorpo. As constantes de afinidade aparente (KD) foram calculadas a partir da razão kd/ka. Os resultados são mostrados na Tabela 2 abaixo. Tabela 2: Parâmetros de afinidade de anticorpos Siglec-7 humanizados kd aparente (s-1) KD aparente Anticorpo ka aparente (Ms)-1 (pM) S7AB 1,95E+5 2,42E-4 1240 S7AB-H8 1,45E+5 1,25E-4 860 S7AB-H9 1,50E+5 1,12E-4 740 S7AB-H11 1,60E+5 1,72E-4 1070 S7AB-H12 1,50E+5 1,52E-4 1010 Exemplo 2: regulação negativa de Siglec-7 da superfície celular usando os anticorpos humanizados

[00422] O objetivo do Exemplo a seguir foi testar se os anticorpos anti-Siglec-7 humanizados (como descrito no Exemplo 1) foram capazes de reduzir o nível de Siglec-7 na superfície celular em células dendríticas humanas primárias.

[00423] <Os monócitos foram isolados do sangue de doadores humanos saudáveis usando o coquetel de anticorpos para isolamento de monócitos RosetteSepTM (StemCell Technologies). Os monócitos isolados foram diferenciados em células dendríticas com 100 ng/mL de GM-CSF e 100 ng/mL de IL-4 (Peprotech). As células dendríticas foram plaqueadas em placas de 96 poços a 100.000 células por poço, em placas de 24 poços a 200.000 células por mL, ou em placas de 6 poços a

500.000 células em 2 mL de RPMI suplementado com 10% de Hyclone FBS, glutamina 2 mM, pen/estrep e aminoácidos não essenciais. Anticorpos anti-Siglec-7, ou anticorpos de controle de isotipo, foram adicionados aos poços e foram incubados por 24 horas a 37 °C com 5% de CO2. A expressão do receptor da superfície celular foi detectada por análise FACS de acordo com técnicas padrão. Resumidamente, as células foram incubadas com clone 6-434 anti-Siglec-7 conjugado com fluorocromo (BioLegend) por 30 minutos em gelo no escuro. As células foram lavadas duas vezes em tampão FACS (PBS + 2% FBS, 2 mM EDTA) e a citometria de fluxo foi realizada em um BD FACS Canto. Os dados foram analisados usando o software FlowJo (Ashland, OR) e a expressão e regulação negativa da superfície de Siglec-7 foi calculada como um percentual da expressão do receptor em relação à expressão na ausência de anticorpo. A metade da concentração efetiva máxima (EC50) de cada anticorpo está resumida na Tabela 3 abaixo. Tabela 3: Regulação negativa da Siglec-7 de superfície celular com anticorpos humanizados Regulação negativa Anticorpo do receptor, (EC50) (pM): S7AB-H8 394,6 S7AB-H9 431,6 S7AB-H11 410,9 S7AB-H12 447,0

[00424] Todos os quatro anticorpos humanizados foram capazes de reduzir os níveis de superfície celular de Siglec-7, sendo S7AB-H8 o mais potente dos anticorpos humanizados. Exemplo 3: Maturação por afinidade de S7AB-H8 e caracterização de tais anticorpos amadurecidos por afinidade

[00425] O objetivo deste exemplo era gerar e caracterizar variantes de S7AB-H8 amadurecidas por afinidade.

[00426] A maturação por afinidade de AB-H8 foi realizada por exibição de fago. Resumidamente, os resíduos nos polinucleotídeos que codificam as cadeias pesadas e/ou leves do anticorpo humanizado foram mutagenizados e expressos no fago. Após várias rodadas de seleção na proteína Siglec-7 humana recombinante, o fago selecionado foi sequenciado e os anticorpos recombinantes foram expressos em células de mamífero e purificados para análise posterior. 45 anticorpos variantes de afinidade amadurecida de S7AB-H8 foram selecionados e gerados, S7AB-H8.1 a S7AB-H8.45. Em um subconjunto de anticorpos amadurecidos por afinidade S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.44, e S7AB- H8.45, mutações adicionais foram introduzidas no domínio variável da cadeia pesada, gerando anticorpos adicionais: S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB- H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB- H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB- H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1 e S7AB-H8.45.2. As sequências HVR da região variável da cadeia pesada dos anticorpos estão representadas nas Tabelas 6A a 6C abaixo. As sequências HVR da região variável da cadeia leve dos anticorpos estão representadas nas Tabelas 7A a 7C abaixo. As regiões de framework de cadeia pesada dos anticorpos estão representadas nas Tabelas 8A a 8D abaixo. As regiões de framework de cadeia leve dos anticorpos estão representadas nas Tabelas 9A a 9D abaixo. As sequências da região variável de cadeia pesada dos anticorpos estão representadas na Tabela 10 abaixo. As sequências de região variável de cadeia leve dos anticorpos estão representadas na Tabela 11 abaixo.

[00427] As afinidades de S7AB-H8 e variantes S7AB-H8.1 a S7AB-H8.45 para Siglec-7 humano foram medidas por Interferometria BioLayer de acordo com o método descrito no Exemplo 1 acima.

Os resultados estão resumidos na Tabela 4 abaixo.

Tabela 4: medições de afinidade de S7AB-H8, e suas variantes, para Siglec-7 humano melhoria de kon koff KD vezes em Anticorpo aparente aparente aparente relação a (Ms)-1 (s-1) (M) S7AB-H8) S7AB-H8 1,66E+05 1,74E-04 1,05E-09 S7AB-H8.1 1,23E+05 7,05E-05 5,74E-10 1,8 S7AB-H8.2 1,42E+05 3,23E-05 2,27E-10 4,6 S7AB-H8.3 2,06E+05 6,05E-05 2,94E-10 3,6 S7AB-H8.4 1,47E+05 3,15E-05 2,14E-10 4,9 S7AB-H8.5 1,16E+05 4,08E-05 3,51E-10 3,0 S7AB-H8.6 2,55E+04 5,71E-05 2,24E-09 0,5 S7AB-H8.7 6,76E+04 4,19E-05 6,20E-10 1,7 S7AB-H8.8 1,71E+05 6,33E-05 3,71E-10 2,8 S7AB-H8.9 9,14E+04 4,82E-05 5,27E-10 2,0 S7AB- H8.10 5,04E+04 8,14E-05 1,62E-09 0,6 S7AB- H8.11 3,14E+03 3,88E-04 1,24E-07 0,01 S7AB- H8.12 3,35E+03 1,55E-04 4,63E-08 0,02 S7AB- H8.13 8,50E+03 3,03E-04 3,57E-08 0,03 S7AB- H8.14 3,26E+03 1,76E-04 5,41E-08 0,02 S7AB- H8.15 2,33E+05 6,07E-04 2,60E-09 0,4

S7AB- H8.16 6,54E+04 1,65E-04 2,53E-09 0,4 S7AB- H8.17 1,28E+05 1,04E-04 8,14E-10 1,3 S7AB- H8.18 1,99E+05 1,42E-04 7,12E-10 1,5 S7AB- H8.19 1,25E+05 1,12E-04 8,98E-10 1,2 S7AB- H8.20 7,99E+04 1,45E-04 1,81E-09 0,6 S7AB- H8.21 1,33E+05 1,25E-04 9,36E-10 1,1 S7AB- H8.22 1,35E+05 <1,00E-07 <1,00E-12 >1000 S7AB- H8.23 2,35E+05 5,53E-05 2,35E-10 4,5 S7AB- H8.24 1,31E+05 4,81E-06 3,68E-11 28,5 S7AB- H8.25 1,04E+05 2,77E-05 2,65E-10 4,0 S7AB- H8.26 1,49E+05 5,90E-05 3,97E-10 2,6 S7AB- H8.27 1,56E+05 1,56E-05 1,00E-10 10,5 S7AB- H8.28 2,21E+05 3,51E-05 1,59E-10 6,6 S7AB- H8.29 1,52E+05 4,00E-05 2,63E-10 4,0 S7AB- H8.30 1,05E+05 4,13E-05 3,95E-10 2,7 S7AB- H8.31 1,45E+05 1,07E-04 7,42E-10 1,4

S7AB- H8.32 1,11E+05 3,93E-05 3,56E-10 2,9 S7AB- H8.33 2,35E+05 7,64E-05 3,26E-10 3,2 S7AB- H8.34 1,19E+05 2,81E-05 2,37E-10 4,4 S7AB- H8.35 1,08E+05 6,57E-05 6,07E-10 1,7 S7AB- H8.36 1,62E+05 9,81E-05 6,05E-10 1,7 S7AB- H8.37 1,86E+05 2,50E-05 1,35E-10 7,8 S7AB- H8.38 2,29E+05 7,40E-05 3,24E-10 3,2 S7AB- H8.39 1,66E+05 3,56E-05 2,15E-10 4,9 S7AB- H8.40 1,48E+05 6,29E-05 4,25E-10 2,5 S7AB- H8.41 1,72E+05 9,12E-05 5,31E-10 2,0 S7AB- H8.42 1,91E+05 2,42E-05 1,26E-10 8,3 S7AB- H8.43 2,28E+05 5,84E-05 2,56E-10 4,1 S7AB- H8.44 1,88E+05 3,71E-05 1,98E-10 5,3 S7AB- H8.45 1,70E+05 7,55E-05 4,44E-10 2,4

[00428] Os anticorpos amadurecidos por afinidade exibiram uma ampla faixa de afinidades, de 0,01 a >1000 vezes de melhoria na afinidade aparente, em comparação com o anticorpo parental, S7AB-H8.

[00429] Os anticorpos amadurecidos por afinidade S7AB-H8.1 a S7AB-H8.45 também foram avaliados quanto à ligação a células dendríticas primárias por citometria de fluxo, de acordo com o método descrito no Exemplo 1 e foram diretamente comparados com o anticorpo parental humanizado S7AB-H8 e um anticorpo quimérico S7AB. Os resultados de ligação para nove dos anticorpos amadurecidos por afinidade, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13, S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB-H8.35, S7AB-H8.43 e S7AB- H8.44; S7AB-H8; e o anticorpo quimérico S7AB, são mostrados na FIG. 2. Os anticorpos amadurecidos por afinidade exibiram uma faixa de ligação a células dendríticas. Alguns anticorpos, exemplificados por S7AB-H8.11 e S7AB-H8.13, ligaram-se menos bem do que o Ab quimérico ou o anticorpo parental humanizado S7AB-H8; alguns anticorpos, exemplificados por S7AB-H8.1, S7AB- H8.2, S7AB-H8.20 e S7AB-H8.35, ligaram-se modestamente melhor do que o anticorpo quimérico S7AB ou S7AB-H8; e alguns anticorpos, incluindo S7AB- H8.43 e S7AB-H8.44, mostraram ligação substancialmente aumentada em comparação com o anticorpo quimérico S7AB e S7AB-H8. Inesperadamente, S7AB-H8.44 e S7AB-H8.43 exibiram ligação aumentada às células em comparação com S7AB-H8.2, embora os três anticorpos tivessem afinidades de ligação semelhantes (KD) para Siglec-7 recombinante, conforme medido por Interferometria BioLayer. Assim, a força da ligação de um anticorpo às células não é necessariamente prevista por sua afinidade com a proteína recombinante.

[00430] Os anticorpos amadurecidos por afinidade foram caracterizados por sua capacidade de diminuir os níveis de superfície celular de Siglec-7 e foram diretamente comparados com S7AB-H8 e com o anticorpo quimérico S7AB. A redução de Siglec-7 em células dendríticas primárias foi realizada conforme descrito no Exemplo 2 acima. A metade da concentração efetiva máxima (EC50) e a redução máxima em Siglec-7 estão resumidas na Tabela 5 abaixo e os resultados para nove dos anticorpos amadurecidos por afinidade, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.11, S7AB-H8.13, S7AB-H8.18, S7AB-H8.20, S7AB-H8.35, S7AB-H8.43 e S7AB-H8.44 são mostrados na FIG. 3. Tabela 5: Regulação negativa da superfície celular Siglec-7 por S7AB, S7AB- H8 e variantes amadurecidas por afinidade

Aumento de Aumento de Regulação Regulação vezes na vezes na negativa negativa do potência em potência em máxima (% Anticorpo receptor, comparação comparação de Siglec-7 (EC50) (pM): com AB-H8 com Ab restante) quimérico S7AB 1024,0 - - 28,6 S7AB-H8 340,0 - 3,0 18,3 S7AB-H8.1 117,2 2,9 8,7 10,9 S7AB-H8.2 87,0 3,9 11,8 3,3 S7AB-H8.3 89,2 3,8 11,5 20,1 S7AB-H8.4 79,5 4,3 12,9 4,5 S7AB-H8.5 87,0 3,9 11,8 9,5 S7AB-H8.6 154,5 2,2 6,6 7,2 S7AB-H8.7 84,7 4,0 12,1 2,1 S7AB-H8.8 89,8 3,8 11,4 19,2 S7AB-H8.9 116,4 2,9 8,8 3,1 S7AB- H8.10 197,2 1,7 5,2 7,0 S7AB- H8.11 7140 0,05 0,1 74,7 S7AB- H8.12 25420 0,01 0,04 61,3 S7AB- H8.13 2269,3 0,1 0,5 43,3 S7AB- H8.14 1954,0 0,2 0,5 45,7 S7AB- H8.15 >3000 n/a n/a 85,0 S7AB- H8.16 348,5 1,0 2,9 10,1

S7AB- H8.17 116,4 2,9 8,8 8,0 S7AB- H8.18 67,3 5,0 15,2 18,9 S7AB- H8.19 97,8 3,5 10,5 6,7 S7AB- H8.20 244,7 1,4 4,2 10,6 S7AB- H8.21 151,7 2,2 6,8 13,6 S7AB- H8.22 108,8 3,1 9,4 3,9 S7AB- H8.23 90,1 3,8 11,4 17,2 S7AB- H8.24 128,7 2,6 8,0 4,3 S7AB- H8.25 189,3 1,8 5,4 9,2 S7AB- H8.26 180,1 1,9 5,7 9,8 S7AB- H8.27 93,7 3,6 10,9 2,9 S7AB- H8.28 74,6 4,6 13,7 17,0 S7AB- H8.29 51,1 6,7 20,0 3,7 S7AB- H8.30 125,5 2,7 8,2 8,2 S7AB- H8.31 142,6 2,4 7,2 10,5 S7AB- H8.32 91,3 3,7 11,2 3,4

S7AB- H8.33 65,3 5,2 15,7 17,2 S7AB- H8.34 117,6 2,9 8,7 3,6 S7AB- H8.35 206,1 1,6 5,0 9,3 S7AB- H8.36 124,6 2,7 8,2 11,4 S7AB- H8.37 71,4 4,8 14,3 3,4 S7AB- H8.38 70,4 4,8 14,5 17,1 S7AB- H8.39 56,8 6,0 18,0 4,3 S7AB- H8.40 115,3 2,9 8,9 9,4 S7AB- H8.41 107,9 3,2 9,5 9,6 S7AB- H8.42 62,6 5,4 16,4 3,3 S7AB- H8.43 33,2 10,2 30,8 17,1 S7AB- H8.44 61,2 5,6 16,7 3,6 S7AB- H8.45 98,6 3,4 10,4 6,9 S7AB- H8.9.1 103,1 3,5 10,5 4,3 S7AB- H8.9.2 117,8 3,1 9,2 4,5 S7AB- H8.10.1 154,0 2,4 7,0 10,7

S7AB- H8.10.2 169,4 2,1 6,4 12,1 S7AB- H8.29.1 53,2 6,8 20,4 5,3 S7AB- H8.29.2 88,9 4,1 12,2 4,9 S7AB- H8.30.1 133,9 2,7 8,1 11,3 S7AB- H8.30.2 114,8 3,2 9,4 10,1 S7AB- H8.34.1 99,5 3,6 10,9 4,4 S7AB- H8.34.2 109,8 3,3 9,9 5,4 S7AB- H8.35.1 184,4 2,0 5,9 10,5 S7AB- H8.35.2 205,3 1,8 5,3 10,8 S7AB- H8.44.1 73,9 4,9 14,7 4,1 S7AB- H8.44.2 76,7 4,7 14,1 3,3 S7AB- H8.45.1 97,0 3,7 11,2 7,8 S7AB- H8.45.2 108,9 3,3 9,9 8,7

[00431] Os anticorpos com afinidade amadurecida exibiram uma ampla faixa de potências em sua capacidade de reduzir os níveis de superfície celular de Siglec-7. Alguns anticorpos, exemplificados por S7AB-H8.11 e S7AB-H8.13, foram substancialmente menos potentes do que S7AB-H8, ou o anticorpo quimérico S7AB; uma série de anticorpos, exemplificados por S7AB- H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.20, e S7AB-H8.35, exibiram um aumento modesto de 1,4 a 4 vezes na potência em comparação com o anticorpo parental, S7AB-H8; e alguns anticorpos, incluindo S7AB-H8.18, S7AB-H8.43, e S7AB-H8.44, mostraram aumento maior que 5 vezes na potência em comparação com S7AB-H8 e aumento mais de 15 vezes na potência em comparação com anticorpo quimérico S7AB. Os anticorpos também exibiram uma faixa de habilidades para reduzir ao máximo os níveis de Siglec-7 na superfície das células dendríticas. O tratamento de células dendríticas com alguns anticorpos, exemplificados por S7AB-H8.11 e S7AB-H8.13, rresultou em mais de 40% de Siglec-7 remanescente na superfície celular; o tratamento com alguns anticorpos, exemplificado por S7AB-H8.1, S7AB- H8.20, S7AB-H8.35, e S7AB-H8.43, resultou em 9-20% de Siglec-7 remanescente na superfície celular, ou melhorou semelhante ou modestamente em comparação com S7AB-H8; o tratamento com outros anticorpos, exemplificado por S7AB-H8.2 e S7AB-H8.44, resultou em menos de 5% de Siglec-7 remanescente na superfície das células dendríticas, uma melhoria substancial em relação a ambos S7AB-H8e anticorpo quimérico S7AB.

[00432] Surpreendentemente, os anticorpos com a melhor potência na capacidade de reduzir os níveis de superfície celular Siglec-7 (S7AB- H8.18, S7AB-H.43 e S7AB-H8.44) e os anticorpos com a melhor redução máxima de Siglec-7 os níveis na superfície das células dendríticas (S7AB-H8.2 e S7AB- H8.44) não mostraram a maior melhoria na ligação ao Siglec-7 humano em relação ao S7AB-H8 entre todos os anticorpos amadurecidos por afinidade testados (ver Tabela 4). Assim, os anticorpos que funcionaram melhor na redução dos níveis de superfície celular do Siglec-7 não foram previstos por suas afinidades de ligação relativas ao Siglec-7.

[00433] Dos 61 anticorpos amadurecidos por afinidade avaliados, S7AB-H8.44 foi um dos poucos anticorpos que exibiu potência substancialmente melhorada e redução máxima de Siglec-7 na superfície de células dendríticas em comparação com o Ab quimérico e o anticorpo humanizado parental, S7AB-H8.

Tabela 6A: Sequências de HVR H1 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) HVR H1 SEQ ID

S7AB-H8.1; S7AB-H8.6; S7AB-H8.11; S7AB-H8.16; S7AB-H8.21; S7AB-H8.26; GYAFTETWMN 1 S7AB-H8.31; S7AB-H8.36; e S7AB-H8.41

S7AB-H8.2; S7AB-H8.7; S7AB-H8.12; S7AB-H8.17; S7AB-H8.22; S7AB-H8.27; GYAFTMAWMN 2 S7AB-H8.32; S7AB-H8.37; e S7AB-H8.42 S7AB-H8.3; S7AB-H8.8; S7AB-H8.13; S7AB-H8.18; S7AB-H8.23; S7AB-H8.28; GYAFTGYWMN 3 S7AB-H8.33; S7AB-H8.38; e S7AB-H8.43

S7AB-H8.4; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB-H8.14; S7AB-H8.19; S7AB-H8.24; S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.34; S7AB- GYAFTAAWMN 4 H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.39; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; e S7AB- H8.44.2 S7AB-H8.5; S7AB-H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.15; S7AB-H8.20; S7AB-H8.25; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.35; S7AB- GYAFTEAWMN 5 H8.35.1; S7AB-H8.35.2; S7AB-H8.40; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB- H8.45.2 GYAFTX1X2WMN Fórmula I X1 é E, M, G, ou A 6 X2 é T, A, ou Y

Tabela 6B: Sequências de HVR H2 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ HVR H2 ID NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.6; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.16; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.21; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.26; S7AB-H8.28; S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; RIFPGLGHTN 7 S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.31; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB- H8.34.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.38; S7AB- H8.39; S7AB-H8.41; S7AB-H8.43; S7AB- H8.44; S7AB-H8.44.1; e S7AB-H8.44.2

S7AB-H8.2; S7AB-H8.5; S7AB-H8.7; S7AB-H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB- H8.10.2; S7AB-H8.12; S7AB-H8.15; S7AB- H8.17; S7AB-H8.20; S7AB-H8.22; S7AB- H8.25; S7AB-H8.27; S7AB-H8.30; S7AB- H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.32; RIFPGYGHTN 8 S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.37; S7AB-H8.40; S7AB- H8.42; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2

RIFPGX1GHTN Fórmula II 9 X1 e L ou Y

Tabela 6C: Sequências de HVR H3 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID HVR H3 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB- H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB- H8.9.2; S7AB-H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB- H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB- H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB- H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB- H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB- H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB- DYSDYYFDY 10 H8.28; S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB- H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB- H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB-H8.32; S7AB- H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB- H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB- H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB- H8.41; S7AB-H8.42; S7AB-H8.43; S7AB- H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB- H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Tabela 7A: Sequências de HVR L1 de cadeia leve de anticorpos anti-Siglec-7 Ab(s) SEQ ID HVR L1 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB- H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB- RGSQDINTYLN 11 H8.9.2; S7AB-H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB- H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-

Ab(s) SEQ ID HVR L1 NO: H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB- H8.31; S7AB-H8.32; S7AB-H8.33; S7AB- H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB- H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB-H8.35.2; S7AB- H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB- H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB- H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB- H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; RGSQDTNTYLN 12 S7AB-H8.19; e S7AB-H8.20 S7AB-H8.21; S7AB-H8.22; S7AB-H8.23; RASEDINTYLN 13 S7AB-H8.24; e S7AB-H8.25 S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; RASQDANTYLN 14 S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; RX1SX2DX3NTYLN X1 é G ou A Fórmula III 15 X2 é Q ou E X3 é I, T, ou A Tabela 7B: Sequências de HVR L2 de cadeia leve de anticorpos anti-Siglec-7 Ab(s) SEQ ID HVR L2 NO:

Ab(s) SEQ ID HVR L2 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB- H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB- H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB-H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB- H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; YTSRLHS 16 S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB-H8.32; S7AB-H8.33; S7AB- H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB- H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB-H8.35.2; S7AB- H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB-H8.42; S7AB- H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB- H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB- H8.45.2 Tabela 7C: Sequências de HVR L3 de cadeia leve de anticorpos anti-Siglec-7 Ab(s)

SEQ ID HVR L3 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB-H8.29; QQGNLLPWT 17 S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB- H8.30; S7AB-H8.30.1; e S7AB-H8.30.2

Ab(s)

SEQ ID HVR L3 NO: S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; QQGNTKPWT 18 S7AB-H8.10; S7AB-H8.10.1; e S7AB- H8.10.2 S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; e S7AB-H8.15 QGGNTLPWT 19 S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; e S7AB-H8.20 QQGNTLPWT 20 S7AB-H8.21; S7AB-H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB-H8.31; S7AB-H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; QQGGTLPWT 21 S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB- H8.35; S7AB-H8.35.1; e S7AB-H8.35.2 S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; e S7AB-H8.40 QQGNVLPWT 22 S7AB-H8.41; S7AB-H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB- QQGNILPWT 23 H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 QX1GX2X3X4PWT X1 é Q ou G Fórmula IV X2 é N ou G 24 X3 é L, T, V, ou I X4 é L ou K

Tabela 8A: Sequências de framework 1 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID VH FR1 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB- H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB- H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB-H8.10; S7AB- H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB- H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB- H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB- H8.21; S7AB-H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB- H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28;

QVQLVQSGAEVKKPGASV S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; 25

KVSCKAS S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB-H8.32; S7AB- H8.33; S7AB-H8.34; S7AB- H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB- H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB- H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2

Tabela 8B: Sequências de framework 2 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ VH FR2 ID NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB- H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.10; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB-H8.22;

WVRQAPGQGLEWI S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; 26

G S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB-H8.29; S7AB-H8.30; S7AB-H8.31; S7AB-H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.35; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB-H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; e S7AB-H8.45 S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.10.1; S7AB- H8.29.1; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.34.1; WVRQAPGQRLEWI 27 S7AB-H8.35.1; S7AB-H8.44.1; e S7AB- G H8.45.1 S7AB-H8.9.2; S7AB-H8.10.2; S7AB- H8.29.2; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.34.2; WVRQARGQRLEWI 28 S7AB-H8.35.2; S7AB-H8.44.2; e S7AB- G H8.45.2 WVRQAX1GQX2LEWI

G Fórmula V 29 X1 é P ou R X2 é G ou R

Tabela 8C: Sequências de framework 3 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID VH FR3 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB- H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB- H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB-H8.10; S7AB- H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB- H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB-H8.15; S7AB- H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB- H8.21; S7AB-H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB- H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; YAQKFQGRATLTEDTS S7AB-H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB- TSTAYMELSSLRSEDTA 30 H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB- VYYCAR H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB- H8.31; S7AB-H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB- H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB- H8.35.1; S7AB-H8.35.2; S7AB- H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB- H8.41; S7AB-H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB- H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB- H8.45.1; e S7AB-H8.45.2

Tabela 8D: Sequências de framework 4 de cadeia pesada de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID VH FR4 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB- H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB- WGQGTLVT 31 H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; VSS S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB- H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Tabela 9A: Sequências de framework 1 de cadeia leve de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID VL FR1 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8;

DIQMTQSPS S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- SLSASVGDR 32 H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.11;

VTITC S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB- H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18;

Ab(s) SEQ ID VL FR1 NO: S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB- H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB- H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Tabela 9B: Sequências de framework 2 de cadeia leve de anticorpos anti- Siglec-7 Ab(s) SEQ ID VL FR2 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB- H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- WYQQKPGK 33 H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; APKLLIY S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB- H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB- H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38;

Ab(s) SEQ ID VL FR2 NO: S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Tabela 9C: Sequências de framework 3 de cadeia leve de anticorpos anti- Siglec-7

SEQ ID Ab(s) VL FR3 NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB- H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB- GVPSRFSGS H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; GSGTDYTLTI 34 S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB- SSLQPEDFAT H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; YYC S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2

Tabela 9D: Sequências de framework 4 de cadeia leve de anticorpos anti- Siglec-7

SEQ Ab(s) VL FR4 ID NO: S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; S7AB-H8.5; S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; S7AB-H8.9.1; S7AB-H8.9.2; S7AB- H8.10; S7AB-H8.10.1; S7AB-H8.10.2; S7AB-H8.11; S7AB-H8.12; S7AB-H8.13; S7AB-H8.14; S7AB- H8.15; S7AB-H8.16; S7AB-H8.17; S7AB-H8.18; S7AB-H8.19; S7AB-H8.20; S7AB-H8.21; S7AB- H8.22; S7AB-H8.23; S7AB-H8.24; S7AB-H8.25; S7AB-H8.26; S7AB-H8.27; S7AB-H8.28; S7AB- FGQGTKLEIK 35 H8.29; S7AB-H8.29.1; S7AB-H8.29.2; S7AB-H8.30; S7AB-H8.30.1; S7AB-H8.30.2; S7AB-H8.31; S7AB- H8.32; S7AB-H8.33; S7AB-H8.34; S7AB-H8.34.1; S7AB-H8.34.2; S7AB-H8.35; S7AB-H8.35.1; S7AB- H8.35.2; S7AB-H8.36; S7AB-H8.37; S7AB-H8.38; S7AB-H8.39; S7AB-H8.40; S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; S7AB-H8.44; S7AB-H8.44.1; S7AB-H8.44.2; S7AB-H8.45; S7AB-H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Tabela 10: Sequências da região variável da cadeia pesada de anticorpos anti-Siglec-7

SEQ ID Ab(s) HCVR NO: S7AB-H1; S7AB-H2; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF e S7AB-H3 TNCWMNWVRQAPGQGLEWMGRIFPGNGH TNYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLR 36

SEDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTV

SS S7AB-H4; S7AB-H5; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF 37 e S7AB-H6 TNCWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGNGHT

NYAQKFQGRVTMTEDTSTSTVYMELSSLRS EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S S7AB-H7; S7AB-H8; QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYAFT e S7AB-H9 NCWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGNGHT NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 38

EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S S7AB-H10; S7AB- QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYAFT H11; e S7AB-H12 NCWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGNGHT NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 39

EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLLTVS

S S7AB-H8.1; S7AB- H8.6; S7AB-H8.11; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.16; S7AB- TETWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGLGHT H8.21; S7AB-H8.26; NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 40 S7AB-H8.31; S7AB- EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS H8.36; e S7AB- S H8.41 S7AB-H8.2; S7AB- H8.7; S7AB-H8.12; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.17; S7AB- TMAWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGYGHT H8.22; S7AB-H8.27; NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 41 S7AB-H8.32; S7AB- EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS H8.37; e S7AB- S H8.42 S7AB-H8.3; S7AB- QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF H8.8; S7AB-H8.13; TGYWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGLGHT 42 S7AB-H8.18; S7AB- NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS H8.23; S7AB-H8.28; EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S7AB-H8.33; S7AB- S H8.38; e S7AB- H8.43 S7AB-H8.4; S7AB- H8.9; S7AB-H8.14; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.19; S7AB- TAAWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGLGHT H8.24; S7AB-H8.29; NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 43 S7AB-H8.34; S7AB- EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS H8.39; e S7AB- S H8.44 S7AB-H8.5; S7AB- H8.10; S7AB-H8.15; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.20; S7AB- TEAWMNWVRQAPGQGLEWIGRIFPGYGHT H8.25; S7AB-H8.30; NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 44 S7AB-H8.35; S7AB- EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS H8.40; e S7AB- S H8.45 S7AB-H8.9.1; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.29.1; TAAWMNWVRQAPGQRLEWIGRIFPGLGHT S7AB-H8.34.1; e NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 45 S7AB-H8.44.1 EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S S7AB-H8.9.2; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.29.2; TAAWMNWVRQARGQRLEWIGRIFPGLGHT S7AB-H8.34.2; e NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 46 S7AB-H8.44.2 EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S S7AB-H8.10.1; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.30.1; TEAWMNWVRQAPGQRLEWIGRIFPGYGHT S7AB-H8.35.1; e NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 47 S7AB-H8.45.1 EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S

S7AB-H8.10.2; QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAF S7AB-H8.30.2; TEAWMNWVRQARGQRLEWIGRIFPGYGHT S7AB-H8.35.2; e NYAQKFQGRATLTEDTSTSTAYMELSSLRS 48 S7AB-H8.45.2 EDTAVYYCARDYSDYYFDYWGQGTLVTVS

S Tabela 11: Sequências da região variável da cadeia leve de anticorpos anti- Siglec-7

SEQ Ab(s) LCVR ID NO: S7AB-H1; S7AB-H4; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD S7AB-H7; e S7AB-H10 INTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHS 49

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFA

TYYCQQGNTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H2; S7AB-H5; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD S7AB-H8; e S7AB-H11 INTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHS 50

GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFA

TYYCQQGNTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H3; S7AB-H6; DVQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQ S7AB-H9; e S7AB-H12 DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH 51

SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF

ATYYCQQGNTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H8.1; S7AB-H8.2; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ S7AB-H8.3; S7AB-H8.4; DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH 52 e S7AB-H8.5 SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF

ATYYCQQGNLLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H8.6; S7AB-H8.7; S7AB-H8.8; S7AB-H8.9; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ S7AB-H8.9.1; S7AB- DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH 53 H8.9.2; S7AB-H8.10; SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF S7AB-H8.10.1; e S7AB- ATYYCQQGNTKPWTFGQGTKLEIK H8.10.2 S7AB-H8.11; S7AB- DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ 54

H8.12; S7AB-H8.13; DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH S7AB-H8.14; e S7AB- SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF H8.15 ATYYCQGGNTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H8.16; S7AB- DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ H8.17; S7AB-H8.18; DTNTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH 55 S7AB-H8.19; e S7AB- SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF H8.20 ATYYCQQGNTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H8.21; S7AB-

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASED H8.22; S7AB-H8.23;

INTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHS S7AB-H8.24; e S7AB- 56

GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFA H8.25

TYYCQQGGTLPWTFGQGTKLEIK S7AB-H8.26; S7AB- H8.27; S7AB-H8.28; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD S7AB-H8.29; S7AB- ANTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLHS 57 H8.29.1; S7AB-H8.29.2; GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFA S7AB-H8.30; S7AB- TYYCQQGNLLPWTFGQGTKLEIK H8.30.1; e S7AB-H8.30.2 S7AB-H8.31; S7AB- H8.32; S7AB-H8.33;

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ S7AB-H8.34; S7AB-

DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH H8.34.1; S7AB-H8.34.2; 58

SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF S7AB-H8.35; S7AB-

ATYYCQQGGTLPWTFGQGTKLEIK H8.35.1; e S7AB-H8.35.2 S7AB-H8.36; S7AB-

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ H8.37; S7AB-H8.38;

DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH S7AB-H8.39; e S7AB- 59

SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF H8.40

ATYYCQQGNVLPWTFGQGTKLEIK

S7AB-H8.41; S7AB- H8.42; S7AB-H8.43; DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQ S7AB-H8.44; S7AB- DINTYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLH 60 H8.44.1; S7AB-H8.44.2; SGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDF S7AB-H8.45; S7AB- ATYYCQQGNILPWTFGQGTKLEIK H8.45.1; e S7AB-H8.45.2 Exemplo 4: Caracterização do impacto da região Fc em um anticorpo Siglec-7 internalizante

[00434] O objetivo deste exemplo foi avaliar o impacto do Fc na capacidade de um anticorpo Siglec-7 para diminuir o nível de superfície celular de Siglec-7 em células mieloides primárias in vitro e in vivo.

[00435] A região Fc de um anticorpo pode interagir com os receptores Fc expressos na superfície das células, e as células mieloides e outras células imunes que expressam Siglec-7 endogenamente também expressam vários receptores Fc. Assim, foi testado o impacto da interação de diferentes isotipos de IgG humana entre o Fc do anticorpo e os receptores Fc da superfície celular e a capacidade de agrupamento dos anticorpos na capacidade do anticorpo de internalizar o receptor.

[00436] Anticorpos contendo a região variável S7AB-H8.44 e diferentes variantes de IgG humana foram gerados. Os Fcs testados incluíram IgG1, que liga todos os receptores de Fc; SELF de IgG1, que contém as mutações S267E e L328F e exibe ligação potencializada a CD32B e à variante R131 de CD32A; IgG2, que mostra ligação substancial apenas a CD32A; LALAPS IgG1, que contém as mutações L234A, L235A e P331S; e IgG1 N297A. As duas últimas variantes de Fc exibem pouca ou nenhuma ligação a qualquer um dos receptores de Fc. Todos os cinco anticorpos foram avaliados quanto à sua capacidade de reduzir o nível de Siglec-7 da superfície celular em células dendríticas humanas primárias, de acordo com o método descrito no Exemplo 2. Os dados são mostrados na FIG. 4, e a Tabela 12 resume a metade da concentração efetiva máxima (EC50) e a regulação negativa máxima de Siglec-7 pelos anticorpos.

Tabela 12: Regulação negativa da superfície celular Siglec-7 com variantes Fc de S7AB-H8.44 Regulação Regulação negativa negativa do máxima (% de Siglec- Anticorpo receptor, (pM, 7 restante) EC50) S7AB-H8.44 huIgG1 33,6 1,0 S7AB-H8.44 huIgG2 43,8 2,8 S7AB-H8.44 huIgG1 SELF 9,1 <0,1 S7AB-H8.44 huIgG1 2,8 67,3

LALAPS S7AB-H8.44 huIgG1 2,9 68,6 N297A

[00437] Os anticorpos com diferentes variantes de Fc exibiram uma faixa de potências em sua capacidade de reduzir os níveis de Siglec-7 na superfície das células dendríticas, com o anticorpo contendo o IgG1 SELF Fc sendo o mais potente, seguido pelo anticorpo com o IgG1 Fc de tipo selvagem, depois o anticorpo com o IgG2 Fc. Os dois Fcs que não se ligam aos receptores Fc exibiram as potências mais fracas na regulação negativa do Siglec-7. Para todas as variantes Fc, a regulação negativa máxima de Siglec-7 resultou em menos de 5% de Siglec-7 restante na superfície celular, embora o tratamento com IgG1 ou IgG1 SELF resultou em menos Siglec-7 restante na superfície celular do que o tratamento com IgG2, IgG1 LALAPS ou IgG1 N297A. Esses dados sugerem que tanto a potência quanto a redução máxima do receptor por um anticorpo Siglec-7 são aumentadas pela interação do anticorpo com um ou mais receptores Fc.

[00438] As variantes S7AB-H8.44 Fc também foram avaliadas quanto à sua capacidade de reduzir os níveis de Siglec-7 em células imunes in vivo. Em um conjunto de experimentos, a capacidade das variantes S7AB-H8.44 Fc de regular negativamente Siglec-7 in vivo foi avaliada em camundongos C57BL/6 imunocompetentes transgênicos para Siglec-7 humano. Estes camundongos expressam Siglec-7 humano em células mieloides, células NK e células T CD8+ em níveis semelhantes aos observados em células imunes humanas (dados não mostrados). Os camundongos receberam uma única injeção intraperitoneal de S7AB-H8.44 huIgG1, S7AB-H8.44 huIgG2, S7AB-H8.44 huIgG1 SELF, S7AB-H8.44 huIgG1 LALAPS, ou um anticorpo de controle a 10 mg/kg no Dia 0, e as amostras de sangue foram coletadas 6 horas após a dosagem, Dia 2, Dia 7 e Dia 14, e foram processadas para análise FACS.

[00439] Resumidamente, as amostras de sangue foram primeiro incubadas por 5 minutos em tampão de lise ACK para lisar os glóbulos vermelhos e depois lavadas extensivamente com tampão FACS frio (PBS, 2% FBS, 2 mM EDTA). Este procedimento foi repetido duas vezes. As células foram então incubadas em tampão FACS frio na presença de CD3-Pacific Blue anti- camundongo, NK1.1-APC-eFluor780 anti-camundongo, CD11b-PerCP-Cy5,5 anti- camundongo, Gr1-PE-Cy7 anti-camundongo, CD33-PE anti-humano, Siglec-7- APC anti-humano e uma matriz de viabilidade (ThermoFisher, Cat# L34957) por 30 minutos em gelo na presença de solução de bloqueio de Fc e depois lavada duas vezes com tampão FACS frio. As células foram fixadas com paraformaldeído a 4% em PBS. As células coradas foram adquiridas em um citômetro BD FACS Fortessa (Becton Dickinson, San Jose, CA) e os dados foram analisados com o software FlowJo (Ashland OR). O nível de expressão de Siglec-7 foi determinado na população de células CD11b+ de camundongo Gr1+ de camundongo e em células NK1.1+ de camundongo, e os níveis de Siglec-7 foram normalizados para amostras de camundongos dosados com o anticorpo de controle.

[00440] Em camundongos transgênicos de Siglec-7 humanos administrados uma dose única de S7AB-H8.44 huIgG1, S7AB-H8.44 huIgG2, S7AB-H8.44 huIgG1 SELF, ou S7AB-H8.44 huIgG1 LALAPS, os níveis de Siglec- 7 em ambas as células mieloides circulantes (FIG. 5A) e as células NK circulantes (FIG. 5B) foram substancialmente reduzidos dentro de 6 horas após a dosagem, com 0-2% do receptor permanecendo nas células NK e 6-29% do receptor permanecendo nas células mieloides. Enquanto os níveis de Siglec-7 em células NK foram reduzidos ao máximo em 6 horas, os níveis de Siglec-7 em células mieloides continuaram a diminuir após 6 horas e foram reduzidos ainda mais em 48 horas. No Dia 14, os níveis de Siglec-7 retornaram aos níveis de controle em ambas as células mieloides e células NK. Todas as quatro variantes Fc do anticorpo exibiram cinética e extensões semelhantes de redução e recuperação do receptor, uma vez que não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos de dosagem.

[00441] Em outro conjunto de experiências, foram usados camundongos NSG humanizados (hu-NSG). Esses camundongos foram enxertados com células-tronco CD34+ hematopoiéticas humanas, adquiridas no Jackson Laboratory e usados 16 semanas após o enxerto. Os camundongos foram administrados com uma única injeção intravenosa de S7AB-H8.44 huIgG1, S7AB-H8.44 huIgG2 ou um anticorpo controle a 10 mg/kg no Dia 0, e as amostras de sangue foram coletadas 2 horas após a dosagem, Dia 6 e Dia 14, e foram processadas para análise FACS.

[00442] Resumidamente, as amostras de sangue foram primeiro incubadas por 5 minutos em tampão de lise ACK para lisar os glóbulos vermelhos e depois lavadas extensivamente com tampão FACS frio (PBS, 2% FBS, 2 mM EDTA). Este procedimento foi repetido duas vezes. As células foram então incubadas em tampão FACS frio na presença de CD45-APC-eFluor780 anti-humano, CD45-FITC anti-camundongo, CD3-PE-Cy7 anti-humano, CD14- Pacific Blue anti-humano, CD11b-PerCP-Cy5,5 anti-humano, CD33-PE anti- humano, Siglec-7-APC anti-humano e um dado de viabilidade (ThermoFisher, Cat# L34957) por 30 minutos em gelo na presença de solução de bloqueio de Fc, e então lavadas duas vezes com tampão FACS frio. As células foram fixadas com paraformaldeído a 4% em PBS. As células coradas foram adquiridas em um citômetro BD FACS Fortessa (Becton Dickinson, San Jose, CA) e os dados foram analisados com o software FlowJo (Ashland OR). O nível de expressão de Siglec- 7 foi determinado na população de células huCD45+huCD14+, e os níveis de Siglec-7 foram normalizados para amostras de camundongos dosados com o anticorpo de controle.

[00443] Em camundongos hu-NSG administrados com uma dose única de S7AB-H8.44 huIgG1 ou S7AB-H8.44 huIgG2, os níveis de Siglec-7 em células mieloides circulantes foram substancialmente reduzidos em 2 horas em ambos os grupos de tratamento, conforme mostrado na FIG. 6, e esta redução foi mantida por pelo menos 6 dias após a dosagem. No Dia 14, os níveis de Siglec-7 em ambos os grupos de tratamento haviam se recuperado para níveis próximos aos dos camundongos tratados com anticorpos de controle. Ambos os isotipos IgG1 humano e IgG2 humano resultaram em cinéticas e extensões semelhantes de regulação negativa de Siglec-7 em camundongos NSG humanizados, uma vez que as diferenças entre os grupos não foram estatisticamente significativas.

[00444] A observação de que S7AB-H8.44 IgG1, um isotipo que envolve receptores Fc, exibiu cinética de regulação negativa e recuperação in vivo de Siglec-7 de forma semelhante à dos isotipos IgG2 e IgG1 LALAPS, que têm substancialmente reduzido ou não a ligação ao receptor Fc foi inesperada, como in vitro, a potência da regulação negativa de Siglec-7 por variantes S7AB- H8.44 Fc foi associada à força das interações dos anticorpos com os receptores Fc. Assim, o anticorpo AB-H8.44 é competente na regulação negativa de Siglec- 7 in vivo em vários isotipos. Exemplo 5: Atividade de ADCC de um anticorpo Siglec-7 contendo diferentes variantes Fc

[00445] O objetivo deste exemplo foi avaliar a capacidade das variantes de Fc do anticorpo S7AB-H8.44 de induzir ADCC (citotoxicidade celular dependente de anticorpo) em células que expressam Siglec-7. A ADCC demonstrou ser altamente dependente da interação entre a região de Fc de um anticorpo e os receptores de Fc expressos nas células efetoras.

[00446] Foram avaliadas quatro variantes de Fc humanas diferentes do anticorpo S7AB-H8.44 para a ADCC: IgG1 do tipo selvagem, IgG2, IgG1 SELF e IgG1 LALAPS. A ADCC foi testada usando duas linhagens celulares alvo diferentes, células HL60 e células U937. As células HL60 e U937 expressam Siglec-7, com as células U937 expressando Siglec-7 em níveis mais altos que as células HL60 (dados não mostrados). O ensaio ADCC foi realizado usando o ADCC Reporter Bioassay (Promega), de acordo com as instruções do fabricante, usando três diferentes efetores: razões alvo, 6:1, 10:1 e 25:1. Resumidamente, as células alvo foram primeiro opsonizadas com anticorpos anti-Siglec-7 a 10 g/mL, após o que as células efetoras foram adicionadas e incubadas por 6 horas a 37

°C com 5% de CO2. A atividade de ADCC foi quantificada por adição do reagente de teste de luciferase e a placa foi lida em um luminômetro (Biotek). Incluído como controle positivo no ensaio estava um anticorpo CD33, clone 280-31-01 (mut), divulgado em WO2012/045752, que demonstrou ter uma atividade ADCC potente. Ambas as células HL60 e U937 expressam CD33 em níveis mais baixos do que Siglec-7 (dados não mostrados). Os resultados do ensaio ADCC são mostrados na FIG. 7.

[00447] Nas células HL60 e U937 e nas três razões efetor:alvo, o anticorpo de controle positivo induziu a ADCC. Inesperadamente, nenhum dos anticorpos Siglec-7 induziu atividade ADCC acima dos níveis de fundo, incluindo o anticorpo com um IgG1 Fc de tipo selvagem, um isotipo que demonstrou induzir ADCC potente para muitos anticorpos. Exemplo 6: atividade de CDC de um anticorpo Siglec-7 com diferentes variantes Fc

[00448] O objetivo deste exemplo foi avaliar o potencial das variantes Fc do anticorpo S7AB-H8.44 para induzir CDC (citotoxicidade dependente do complemento) em células que expressam Siglec-7. A CDC é iniciada por um alvo opsonizado por um anticorpo que pode efetivamente se ligar e ativar o complemento através de sua região de Fc. Assim, a capacidade de um anticorpo para induzir CDC é dependente de seu isotipo: a IgG1 humana e a IgG1 SELF humana são geralmente competentes na indução da CDC, enquanto as IgG2 e IgG1 LALAPS são geralmente mais fracas na indução da CDC.

[00449] Cinco variantes de Fc diferentes do anticorpo S7AB- H8.44 foram avaliadas quanto ao potencial de induzir CDC:IgG1 humana de tipo selvagem, IgG2 humana, SELF de IgG1 humana, LALAPS IgG1 humana e N297A de IgG1 humana. O potencial para CDC foi testado medindo a ativação do complemento, deposição de C3b, na linha celular que expressa Siglec-7, U937. Resumidamente, células U937 foram incubadas com 10 g/mL de anticorpos Siglec-7 por 30 minutos em gelo. Os soros combinados de complemento humano (Innovative Research) foram adicionados a uma concentração final de 20% e as células foram incubadas por 2 horas a 37C. As células foram lavadas uma vez com tampão FACS frio (PBS, 2% FBS, 2mM EDTA) e depois incubadas com anti-

C3b-APC e uma matriz de viabilidade (ThermoFisher, Cat # L34957) por 30 minutos em gelo na presença de solução de bloqueio de Fc. As células foram lavadas duas vezes com tampão FACS frio e depois fixadas com paraformaldeído a 4% em PBS. As células coradas foram adquiridas em um citômetro BD FACS Fortessa (Becton Dickinson, San Jose, CA) e os dados foram analisados com o software FlowJo (Ashland OR). O nível de deposição de C3b foi determinado pela MFI de C3b em células U937 e a deposição foi normalizada para amostras de células tratadas com o anticorpo de controle. Os resultados são mostrados na FIG. 8.

[00450] Surpreendentemente, das variantes S7AB-H8.44 Fc testadas, apenas o isotipo IgG1 N297A induziu um aumento significativo da ativação do complemento em comparação com o anticorpo de controle. Nem os isotipos IgG1 nem o SELF de IgG1 induziram a atividade de CDC acima dos níveis de fundo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende: uma HVR-H1 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula I: GYAFTX1X2WMN (SEQ ID NO: 6), em que X1 é E, M, G, ou A, e X2 é T, A, ou Y; uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula II: RIFPGX1GHTN (SEQ ID NO: 9), em que X1 é L ou Y; e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10); e - a região variável de cadeia leve compreende: uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula III: RX1SX2DX3NTYLN (SEQ ID NO: 15), em que X1 é G ou A, X2 é Q ou E, e X3 é I, T, ou A; uma HVR-L2 compreendendo a sequência de YTSRLHS (SEQ ID NO: 16); e uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de acordo com a Fórmula IV: QX1GX2X3X4PWT (SEQ ID NO: 24), em que X1 é Q ou G, X2 é N ou G, X3 é L, T, V, ou I, e X4 é L ou K.

2. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que a região variável de cadeia pesada compreende: uma HVR-H1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 1-5; uma HVR-H2 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 7-8; e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10; e - a região variável de cadeia leve compreende: uma HVR-L1 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 11-14; uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16; e uma HVR-L3 compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 17-23.

3. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-2, caracterizado por: (a) a HVR-H1 compreender a sequência de aminoácidos GYAFTMAWMN (SEQ ID NO: 2), a HVR-H2 compreende a sequência de aminoácidos RIFPGYGHTN (SEQ ID NO: 8), a HVR-H3 compreende a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos QQGNLLPWT (SEQ ID NO: 17); (b) a HVR-H1 compreender a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreende a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreende a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos RGSQDTNTYLN (SEQ ID NO: 12), a HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20);

(c) a HVR-H1 compreender a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), a HVR-H2 compreende a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreende a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23); ou (d) a HVR-H1 compreender a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), a HVR-H2 compreende a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), a HVR-H3 compreende a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), a HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), a HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e a HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

4. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que: a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTMAWMN (SEQ ID NO: 2), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGYGHTN (SEQ ID NO: 8), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNLLPWT (SEQ ID NO: 17).

5. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que: a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDTNTYLN (SEQ ID NO: 12), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 20).

6. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve, em que: a região variável de cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTGYWMN (SEQ ID NO: 3), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), e a região variável de cadeia leve compreende uma HVR-L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

7. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que: a região variável da cadeia pesada compreende uma HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos GYAFTAAWMN (SEQ ID NO: 4), uma HVR-H2 compreendendo a sequência de aminoácidos RIFPGLGHTN (SEQ ID NO: 7), e uma HVR-H3 compreendendo a sequência de aminoácidos DYSDYYFDY (SEQ ID NO: 10), e a região variável da cadeia leve compreende uma HVR- L1 compreendendo a sequência de aminoácidos RGSQDINTYLN (SEQ ID NO: 11), uma HVR-L2 compreendendo a sequência de aminoácidos YTSRLHS (SEQ ID NO: 16), e uma HVR-L3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQGNILPWT (SEQ ID NO: 23).

8. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 36-48; e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOs: 49-60.

9. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55; uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60; ou uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

10. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7,

caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 52.

11. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 55.

12. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

13. ANTICORPO que se liga a uma proteína Siglec-7, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 60.

14. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-13, caracterizado pelo anticorpo ser da classe IgG, classe IgM ou classe IgA.

15. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo anticorpo ser da classe IgG e ter um isotipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.

16. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por: (a) a região Fc compreender uma substituição de aminoácido na posição P331S, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU.

(b) a região Fc compreender uma substituição de aminoácidos nas posições L234A, L235A e P331S, em que a numeração da posição de resíduo é de acordo com a numeração EU; (c) a região Fc compreender uma substituição de aminoácido na posição N297A, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU; ou (d) a região Fc compreender uma substituição de aminoácido nas posições S267E e L328F, em que a numeração da posição do resíduo está de acordo com a numeração EU.

17. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16, caracterizado pela proteína Siglec-7 ser uma proteína de primata não humano ou uma proteína humana.

18. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado pela proteína Siglec-7 ser uma proteína do tipo selvagem.

19. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, caracterizado pela proteína Siglec-7 ser uma variante de ocorrência natural.

20. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-19, caracterizado pela proteína Siglec-7 ser expressa em uma ou mais células selecionadas do grupo consistindo em células dendríticas humanas, macrófagos humanos, monócitos humanos, osteoclastos humanos, neutrófilos humanos, células natural killer (NK) humanas, células T humanas, células T helper humanas, células T citotóxicas humanas, granulócitos humanos e micróglia humana.

21. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-20, caracterizado pelo anticorpo se ligar especificamente a uma proteína Siglec-7 humana.

22. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-19, caracterizado pelo anticorpo ser um fragmento de anticorpo que se liga a um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos em uma proteína Siglec-7 de primata não humano ou em uma proteína Siglec-7 humana.

23. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, caracterizado pelo anticorpo ser um fragmento de anticorpo que se liga a uma ou mais proteínas humanas selecionadas do grupo consistindo na Siglec-7 humana, uma variante de ocorrência natural da Siglec- 7 humana e uma variante de doença da Siglec-7 humana.

24. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fragmento de anticorpo ser ligado de forma cruzada a um segundo fragmento de anticorpo que se liga a uma ou mais proteínas humanas selecionadas do grupo consistindo na Siglec-7 humana, uma variante de ocorrência natural da Siglec-7 humana, e um variante de doença da Siglec-7 humana.

25. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22-24, caracterizado pelo fragmento de anticorpo ser um fragmento Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv ou scFv.

26. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-25, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico, um anticorpo monoclonal, um anticorpo multivalente, um anticorpo conjugado, ou um anticorpo quimérico.

27. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-26, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo monoclonal.

28. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-26, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo biespecífico que reconhece um primeiro antígeno e um segundo antígeno.

29. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo primeiro antígeno ser Siglec-7 e o segundo antígeno ser: (a) um ligante e/ou uma proteína expressa em células imunológicas, em que o ligante e/ou a proteína são selecionados do grupo consistindo em CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR5, CD39, CD70, CD73, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor de CSF1, e fosfatidilserina; ou (b) uma proteína, um lipídio, um polissacarídeo ou um glicolipídio expresso em uma ou mais células tumorais.

30. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-29, caracterizado pelo anticorpo ser usado em combinação com um ou mais anticorpos que se ligam a uma proteína imunomoduladora selecionada do grupo consistindo em: CD33, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD38, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR3, DR5, CD39, CD70, CD73, LAG3, TREM1, TREM2, Siglec-5, Siglec-9, Siglec-11, SirpA, CD47, receptor de CSF1, fosfatidilserina, ácidos nucleicos causadores de doenças, RNA de expansão de repetição GGCCCC (G2C4) antisense, e qualquer combinação destes.

31. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo anticorpo ter uma constante de dissociação (KD) para a Siglec-7 humana que é pelo menos 4 vezes menor que um anticorpo anti-Siglec-7 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 1 vez menor que o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, em que o KD é determinada por Interferometria de Biocamada ("BioLayer Interferometry").

32. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo anticorpo ter uma constante de dissociação (KD) para a Siglec-7 humana que varia de cerca de 124 nM a cerca de 1 pM, ou menos de cerca de 1 pM, e em que o KD é determinado por Interferometria de Biocamada.

33. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, caracterizado pelo anticorpo reduzir os níveis de Siglec-7 de superfície celular.

34. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pela Siglec-7 ser expressa na superfície de células dendríticas humanas.

35. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 33 ou reivindicação 34, caracterizado pelo anticorpo reduzir os níveis de Siglec-7 de superfície celular in vitro.

36. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 33-35, caracterizado pelo anticorpo reduzir os níveis de Siglec-7 de superfície celular in vitro com uma concentração efetiva máxima (EC50) menor que 150 pM, conforme medido por citometria de fluxo.

37. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 33-36, caracterizado pelo anticorpo reduzir os níveis de Siglec-7 de superfície celular in vitro com uma EC50 pelo menos 50% menor que um anticorpo anti-Siglec-7 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 10% menor que um anticorpo anti-Siglec-7 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, conforme medido por citometria de fluxo.

38. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelos níveis de Siglec-7 de superfície celular serem reduzidos a pelo menos 20%.

39. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo anticorpo ser pelo menos 4,2 vezes mais potente do que o anticorpo anti-Siglec-7 que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 61 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 62; ou pelo menos 1,4 vezes mais potente do que um anticorpo anti- Siglec-7 compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 50, conforme medido por citometria de fluxo.

40. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-39, caracterizado pelo anticorpo competir com um anticorpo que compreende o domínio variável de cadeia pesada e o domínio variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB- H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-

H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB-H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB- H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB-H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB- H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB-H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB- H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2, S7AB-H8.45.1, S7AB-H8.45.2, e qualquer combinação destes pela ligação à Siglec-7.

41. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-40, caracterizado pelo anticorpo se ligar essencialmente ao mesmo epítopo da Siglec-7 que um anticorpo que compreende o domínio variável de cadeia pesada e o domínio variável de cadeia leve de um anticorpo selecionado do grupo consistindo em S7AB-H1, S7AB-H2, S7AB-H3, S7AB-H4, S7AB-H5, S7AB-H6, S7AB-H7, S7AB-H8, S7AB-H9, S7AB-H10, S7AB-H11, S7AB-H12, S7AB-H8.1, S7AB-H8.2, S7AB-H8.3, S7AB-H8.4, S7AB-H8.5, S7AB-H8.6, S7AB-H8.7, S7AB-H8.8, S7AB-H8.9, S7AB-H8.10, S7AB-H8.11, S7AB-H8.12, S7AB-H8.13, S7AB-H8.14, S7AB-H8.15, S7AB-H8.16, S7AB- H8.17, S7AB-H8.18, S7AB-H8.19, S7AB-H8.20, S7AB-H8.21, S7AB-H8.22, S7AB-H8.23, S7AB-H8.24, S7AB-H8.25, S7AB-H8.26, S7AB-H8.27, S7AB- H8.28, S7AB-H8.29, S7AB-H8.30, S7AB-H8.31, S7AB-H8.32, S7AB-H8.33, S7AB-H8.34, S7AB-H8.35, S7AB-H8.36, S7AB-H8.37, S7AB-H8.38, S7AB- H8.39, S7AB-H8.40, S7AB-H8.41, S7AB-H8.42, S7AB-H8.43, S7AB-H8.44, S7AB-H8.45, S7AB-H8.9.1, S7AB-H8.9.2, S7AB-H8.10.1, S7AB-H8.10.2, S7AB-H8.29.1, S7AB-H8.29.2, S7AB-H8.30.1, S7AB-H8.30.2, S7AB-H8.34.1, S7AB-H8.34.2, S7AB-H8.35.1, S7AB-H8.35.2, S7AB-H8.44.1, S7AB-H8.44.2,

S7AB-H8.45.1 e S7AB-H8.45.2.

42. ÁCIDO NUCLEICO isolado caracterizado por compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica o anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-41.

43. VETOR caracterizado por compreender o ácido nucleico de acordo com a reivindicação 42.

44. CÉLULA HOSPEDEIRA isolada caracterizada por compreender o vetor de acordo com a reivindicação 43.

45. MÉTODO DE PRODUÇÃO DE UM ANTICORPO que se liga à Siglec-7, caracterizado por compreender o cultivo da célula de acordo com a reivindicação 44, para que o anticorpo seja produzido.

46. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado por compreender ainda a recuperação do anticorpo produzido pela célula.

47. ANTICORPO isolado que se liga à Siglec-7, caracterizado por ser produzido pelo método de acordo com a reivindicação 45 ou reivindicação 46.

48. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA caracterizada por compreender o anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1- 41, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

49. MÉTODO DE PREVENÇÃO, REDUÇÃO DO RISCO OU TRATAMENTO DE CÂNCER, caracterizado por compreender a administração, a um indivíduo em necessidade, de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-41.

50. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo câncer ser selecionado do grupo consistindo em câncer de bexiga, câncer de cérebro, câncer de mama, câncer de cólon, câncer do reto, câncer do endométrio, câncer renal, câncer de células renais, câncer da pelve renal, leucemia, câncer de pulmão, melanoma, linfoma não-Hodgkin, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer ovariano, fibrossarcoma, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML) e mieloma múltiplo.