KR20150123250A - 암 약물 내성의 치료 및 예방 방법 - Google Patents

Abstract

FGFR 신호전달의 길항제를 사용하는, 암과 같은 병리학적 상태의 치료를 위한 조합 요법이 본원에 제공된다.

Description

암 약물 내성의 치료 및 예방 방법 {METHODS OF TREATING AND PREVENTING CANCER DRUG RESISTANCE}

관련 출원에 대한 상호 참조

본원은 2013년 3월 6일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/773,720을 우선권 주장하며, 상기 출원은 그의 전문이 참조로 포함된다.

분야

FGFR 신호전달의 길항제를 사용하는, 암과 같은 병리학적 상태의 치료를 위한 조합 요법이 본원에 제공된다.

암 약물에 대한 상대적으로 빠른 내성 획득은 성공적인 암 요법에 대한 주요 장애물로 남아있다. 이러한 약물 내성에 대한 분자적 근거를 설명하기 위한 실질적인 노력은 약물 유출, 표적의 약물 결합-결핍 돌연변이체의 획득, 대안적인 생존 경로의 관여, 후성적 변경을 비롯한 다양한 메카니즘을 밝혀냈다. EGFR 티로신 키나제 억제제를 사용하여 활성화 EGFR 돌연변이를 보유하는 NSCLC 환자를 치료하는 것은 요법에 대한 항종양 반응을 유발하지만, 환자는 궁극적으로 약물 내성의 획득으로 인해 요법을 계속 진행한다. 내성의 공지된 메카니즘은 EGFR 유전자의 이차 돌연변이 (EGFR^T790M) 또는 MET 유전자 증폭을 포함하지만, 사례의 ~40-45%에서 내성의 기저 메카니즘이 여전히 설명되어야 한다. 암 세포 집단 내의 이질성 및 약물 치료에 대한 암 세포 내성의 출현을 성공적으로 다루기 위한 새로운 치료 방법이 필요하다.

FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 사용하는 조합 요법이 본원에 제공된다.

특히, 개체에게 (a) FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제에 대한 암 감수성의 기간을 증가시키고/거나 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키는데 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제를 포함하는 암 치료의 효능을 증가시키는데 유효하다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 효능에 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 반응 (예를 들어, 완전 반응)에 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제에 대한 암 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는데 유효하다.

또한, 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 사용한 치료에 대해 내성이 있는 암 세포를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 추가로, 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 포함하는 암 치료의 효능을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다.

개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는 암 치료이며, 여기서 암 치료는 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 효능을 갖는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

추가로, 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키고/거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다.

EGFR 길항제에 대한 내성이 발생할 가능성이 증가된, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

추가로, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다.

또한, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제 감수성의 기간을 연장시키는 방법이 본원에 제공된다.

암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 반응의 지속기간을 연장시키는 방법이 본원에 제공된다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체 억제제, 소분자 억제제, 결합 폴리펩티드 억제제 및/또는 폴리뉴클레오티드 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드 억제제이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드 억제제는 Fc 도메인에 연결된 FGFR의 세포외 도메인의 영역 (예를 들어, 이뮤노글로불린 힌지 및 Fc 도메인에 연결된 FGFR의 세포외 도메인의 영역)을 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR2 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR3 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR4 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체이다.

일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, 소분자는 N-[2-[[4-(디에틸아미노)부틸]아미노]-6-(3,5-디메톡시페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-7-일]-N'-(1,1-디메틸에틸)-우레아 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, 소분자는 BGJ398 (노파르티스(Novartis)), AZD4547 (아스트라제네카(AstraZeneca)) 및/또는 FF284 (츄가이(Chugai)/데비오팜(Debiopharm) (데비오 1347))이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGF2 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIb 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIc 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR 항체이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민 및/또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민이다. 임의의 방법의 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 N-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일프로폭시)퀴나졸린-4-아민 및/또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 N-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일프로폭시)퀴나졸린-4-아민이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 폐암은 NSCLC이다. 일부 실시양태에서, 암은 상피-중간엽 전이를 겪었다.

도 1a-c. | HCC4006-ER 세포는 에를로티닙에 대해 내성이 있다. a, 모 (HCC4006) 및 에를로티닙-선택 HCC4006 세포 (HCC4006-ER)의 세포 생존율을 나타낸 농도의 에를로티닙의 존재 하에서 72시간에 검정하였다. b, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포를 1μM 에를로티닙으로 또는 그 없이 72시간 동안 처리하고, 아이오딘화프로피듐 (PI) 및 아넥신 V로 염색하고, FACS에 의해 분석하여 아넥신-양성 세포를 정량화하였다. c, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포를 나타낸 농도의 에를로티닙으로 8시간 동안 처리하고, 세포 용해물을 나타낸 항체로 이뮤노블롯팅하였다.
도 2a-d. | HCC4006-ER 세포는 EMT의 특징을 나타낸다. a, 모 및 에를로티닙-내성 HCC4006 세포 용해물을 각각 상피-연관 및 중간엽-연관 단백질, E-카드헤린, 및 비멘틴에 대해 이뮤노블롯팅하였다. b, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포의 이동률을 스크래치 상처 검정으로 측정하였고, 상처 폐쇄를 이매진온(imaginon) 인큐사이트(Incucyte)에 의해 모니터링하였다. c, 세포 침습을 1% 또는 10% 태아 소 혈청 (FBS)의 존재 하에서 트랜스웰 검정으로 측정하였다. d, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포의 세포 생존율을 나타낸 시점에 측정하였다.
도 3a-c. | AXL 억제는 HCC4006-ER 세포에서 에를로티닙에 대한 내성을 극복할 수 없다. a, 모 및 에를로티닙-내성 HCC4006 세포의 세포 생존율을 나타낸 농도의 AXL 키나제 억제제, R428 및/또는 에를로티닙의 존재 하에서 72시간 배양한 후에 측정하였다. b, 에를로티닙-내성 HCC4006-ER 세포의 세포 생존율을 AXL의 siRNA-매개 녹다운 또는 대조 siRNA 처리 후에 나타낸 농도의 에를로티닙의 존재 하에서 측정하였다. c, AXL 발현 수준에 대한 AXL 표적화 siRNA의 효과를 입증하는 이뮤노블롯 대조군.
도 4a-c. | FGFR1 및 특이적 FGF 리간드는 HCC4006-ER 세포에서 유의하게 상승하였다. a, 마이크로어레이 프로파일링을 기준으로 한, HCC4006 세포와 비교하여 HCC4006-ER에서 FGF 패밀리 수용체 및 리간드에 대한 유전자 발현의 배수 변화 (log). b, qRT-PCR에 의한 선택 유전자의 확인. c, FGF2 단백질 수준은 ELISA에 의해 검출 시 HCC4006-ER 세포의 상청액과 용해물 둘 다에서 증가하였다.
도 5a-c. | 리간드-의존성 FGFR 신호전달의 특이적 억제는 HCC4006-ER 세포에서 에를로티닙에 대한 내성을 극복하였다. a, HCC4006 (좌측) 및 HCC4006-ER (우측) 세포의 세포 생존율을 나타낸 농도의 에를로티닙 또는 PD173074의 존재 하에서 72시간에 검정하였다. b, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포를 2시간 동안 나타낸 약물로 처리하고, 세포 용해물을 나타낸 항체로 이뮤노블롯팅하였다. 외인성 FGF2+헤파린을 사용한 세포의 자극은 FGFR 활성화에 대한 양성 대조군의 역할을 하였다. c, FGF 리간드 및 대조군을 중화시키기 위한 재조합 가용성 FGFR-Fc의 존재 하에서 72시간 동안 처리 후에 HCC4006 및 HCC4006-ER 세포의 세포 생존율.
도 6 | FGFR 억제는 HCC4006 세포에서 에를로티닙에 대한 내성의 발생을 억제하였다. 세포 (1x10⁵개)를 고정 및 크리스탈 바이올렛으로의 염색 전에 에를로티닙 (1μM), PD173074 (0.5μM) 또는 조합물로 연속적으로 처리하였다. 비처리 및 PD173074-처리 배양물을 4주에 염색하였고, 반면에 에를로티닙 및 조합물-처리 배양물을 6주에 염색하였다.
도 7a-b. | AXL이 아닌 FGFR 억제는 EMT와 연관된 또 다른 에를로티닙-내성 모델인 HCC827-ER을 EGFR 억제의 생존율 효과에 대해 부분적으로 재감작시켰다. a, HCC827-ER 세포의 세포 생존율을 나타낸 농도의 에를로티닙, R428 또는 PD173074의 존재 하에서 72시간에 검정하였다. b, FGF 리간드 및 대조군을 중화시키기 위한 재조합 가용성 FGFR-Fc의 존재 하에서 72시간 동안 처리 후에 HCC827 및 HCC827-ER 세포의 세포 생존율.
도 8 | 에를로티닙의 존재 또는 부재 하에 HCC4006-ER 세포에서 소분자 억제제의 패널의 스크린은 FGFR 억제제인 PD173074가 에를로티닙에 대한 내성을 역전시킬 수 있다는 것을 밝혔다. 성장 억제제 IC₅₀이 제시되어 있다.

I. 정의

관심 폴리펩티드의 "길항제" ("억제제"로 상호교환가능하게 칭해짐)는 관심 폴리펩티드의 활성화 또는 기능을 방해하는, 예를 들어 관심 폴리펩티드에 의해 매개되는 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 억제하거나 또는 중화시키는 작용제이다. 예를 들어, 폴리펩티드 X의 길항제는 폴리펩티드 X에 의해 매개되는 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 억제하거나 또는 중화시키는 임의의 분자를 지칭할 수 있다. 억제제의 예는 항체; 리간드 항체; 소분자 길항제; 안티센스 및 억제 RNA (예를 들어, shRNA) 분자를 포함한다. 바람직하게는, 억제제는 관심 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 소분자이다. 특정한 실시양태에서, 억제제는 관심 폴리펩티드에 대한 결합 친화도 (해리 상수)가 약 1,000 nM 이하이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제는 관심 폴리펩티드에 대한 결합 친화도가 약 100 nM 이하이다. 또 다른 실시양태에서, 억제제는 관심 폴리펩티드에 대한 결합 친화도가 약 50 nM 이하이다. 특정한 실시양태에서, 억제제는 관심 폴리펩티드에 공유 결합된다. 특정한 실시양태에서, 억제제는 1,000 nM 이하의 IC₅₀으로 관심 폴리펩티드의 신호전달을 억제한다. 또 다른 실시양태에서, 억제제는 500 nM 이하의 IC₅₀으로 관심 폴리펩티드의 신호전달을 억제한다. 또 다른 실시양태에서, 억제제는 50 nM 이하의 IC₅₀으로 관심 폴리펩티드의 신호전달을 억제한다. 특정 실시양태에서, 길항제는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과로 관심 폴리펩티드의 발현 수준 또는 생물학적 활성을 감소시키거나 또는 억제한다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드는 FGFR 수용체 (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)이다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드는 EGFR이다.

본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 달리 나타내지 않는 한 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 폴리펩티드를 지칭한다. 이 용어는 "전장"의 비프로세싱된 폴리펩티드, 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 생성된 임의의 형태의 폴리펩티드를 포괄한다. 이 용어는 또한 폴리펩티드의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다.

"폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하고, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기 및/또는 그의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해, 또는 합성 반응에 의해 중합체 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 존재하는 경우에 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열에 비-뉴클레오티드 성분이 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 합성 후에, 예컨대 표지와의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은, 예를 들어 하나 이상의 자연 발생 뉴클레오티드를 유사체로 "캡" 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 예를 들어 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카르바메이트 등) 및 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것, 펜던트 모이어티, 예컨대 예를 들어 단백질 (예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)을 함유하는 것, 삽입제 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등)을 갖는 것, 킬레이트화제 (예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)을 함유하는 것, 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)을 갖는 것, 뿐만 아니라 폴리뉴클레오티드(들)의 비변형된 형태를 포함한다. 추가로, 당 내에 통상적으로 존재하는 임의의 히드록실 기가, 예를 들어 포스포네이트 기, 포스페이트 기로 대체되거나, 표준 보호 기로 보호되거나, 추가의 뉴클레오티드에 대한 추가의 연결이 만들어지도록 활성화되거나, 또는 고체 또는 반고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH가 인산화되거나 또는 아민 또는 1 내지 20개 탄소 원자의 유기 캡핑 기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 히드록실이 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 일반적으로 관련 기술분야에 공지된 리보스 또는 데옥시리보스 당의 유사형, 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보시클릭 당 유사체, α-아노머 당, 에피머 당, 예컨대 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비-시클릭 유사체 및 무염기 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 메틸 리보시드를 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포디에스테르 연결이 대안적인 연결 기로 대체될 수 있다. 이들 대안적인 연결 기는 포스페이트가 P(O)S ("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), "(O)NR₂ ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH₂ ("포름아세탈") (여기서 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H이거나 또는 임의로 에테르 (-O-) 연결을 함유하는 치환 또는 비치환 알킬 (1-20 C), 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아랄딜임)로 대체되는 실시양태를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리뉴클레오티드 내의 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 상기 기재는 RNA 및 DNA를 비롯한, 본원에서 언급되는 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.

용어 "소분자"는 약 2000 달톤 이하, 바람직하게는 약 500 달톤 이하의 분자량을 갖는 임의의 분자를 지칭한다.

"단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.

본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 항체 구조를 포괄한다.

용어 관심 항체의 항-폴리펩티드 및 관심 폴리펩티드에 "결합하는 항체"는 항체가 관심 폴리펩티드의 표적화에서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 관심 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 관심 단백질의 관련되지 않은 비-폴리펩티드에 대한 관심 항체의 항-폴리펩티드의 결합 정도는, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 관심 폴리펩티드에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, 관심 폴리펩티드에 결합하는 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10^-8 M 이하, 예를 들어 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 관심 항체의 항-폴리펩티드는 여러 종으로부터의 관심 폴리펩티드들에서 보존되는 관심 폴리펩티드의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드는 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)이다. 일부 실시양태에서, 관심 폴리펩티드는 EGFR이다.

"차단 항체" 또는 "길항제 항체"는 그가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 또는 감소시키는 항체이다. 바람직한 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.

"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내인성 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 표시될 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 비롯한, 관련 기술분야에 공지된 통상의 방법으로 측정될 수 있다. 결합 친화도 측정을 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시양태가 하기 기재된다.

"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는, 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 검정에서 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다.

용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공급원 또는 종으로부터 유래된 반면, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 다른 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.

용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 이러한 집단을 구성하는 개별 항체는 일반적으로 소량으로 존재할 수도 있는, 예를 들어 자연 발생 돌연변이를 포함하거나 모노클로날 항체 제제의 생산 동안 생성되는 가능한 변이체 항체를 제외하고는 동일하고/거나, 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 반대로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 얻은 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로서 간주되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하기 위한 다른 예시적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 사용하여 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명확하게 배제된다.

"인간화" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, CDR)은 비-인간 항체의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 겪은 항체를 지칭한다.

"면역접합체"는 세포독성제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.

"개체 반응" 또는 "반응"은 (1) 질환 진행 (예를 들어, 암 진행)의 어느 정도까지의 억제, 예를 들어 지연 및 완전한 정지; (2) 종양 크기의 감소; (3) 인접한 말초 기관 및/또는 조직으로의 암 세포 침윤의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (4) 전이의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (5) 질환 또는 장애 (예를 들어, 암)와 연관된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 완화; (6) 무진행 생존 기간의 증가; 및/또는 (9) 치료 후 주어진 시점에서의 감소된 사망률을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 개체에게 이익을 나타내는 임의의 종점을 사용하여 평가될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "실질적으로 동일한"은 통상의 기술자가 2개의 값 (예를 들어, Kd 값 또는 발현)에 의해 측정된 생물학적 특성과 관련하여 이들 2개의 값 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 것으로 간주할 정도로, 상기 값 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 값의 함수로서, 예를 들어 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만 및/또는 약 10% 미만이다.

본원에 사용된 어구 "실질적으로 상이한"은 통상의 기술자가 2개의 값 (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특성과 관련하여 이들 2개의 값 사이의 차이를 통계적 유의성이 있는 것으로 간주할 정도로, 상기 값 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 분자에 대한 값의 함수로서, 예를 들어 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과 및/또는 약 50% 초과이다.

물질/분자, 예를 들어 제약 조성물의 "유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기에 유효한 양을 지칭한다.

물질/분자의 "치료 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 중량, 개체에서 원하는 반응을 유도하기 위한 물질/분자의 능력과 같은 인자에 따라 상이할 수 있다. 또한, 치료 유효량은 물질/분자의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료상 유익한 효과가 능가하는 양이다. "예방 유효량"은 원하는 예방 결과 달성에 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 전형적으로, 그러나 반드시는 아니지만, 예방 용량은 질환의 보다 초기 단계 전에 또는 보다 초기 단계에서 대상체에 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 적을 것이다.

용어 "제약 제제"는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 하는 형태로 존재하며, 제제가 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.

"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 다른 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는 염"은 화합물의 제약상 허용되는 유기 또는 무기 염을 지칭한다.

본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료할 개체의 자연적 과정을 변경시키려는 임상 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 예방을 위해 또는 그 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 축소, 전이의 예방, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 지연시키는데 사용된다.

본원에 사용된 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포 사멸 또는 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 이 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹², 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제 또는 약물 (예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아미신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 삽입제), 성장 억제제, 효소 및 그의 단편, 예컨대 핵산분해 효소, 항생제, 및 독소, 예컨대 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적 활성 독소 (그의 단편 및/또는 변이체 포함), 및 하기 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하는 것으로 의도된다. 다른 세포독성제는 하기 기재되어 있다. 종양사멸제는 종양 세포의 파괴를 유발한다.

"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.

용어 "병용"은 개별 치료 효과가 제시간에 중첩되도록 일시적으로 충분히 근접한 둘 이상의 치료제의 투여를 지칭하는 것으로 사용된다. 따라서, 공동 투여는 하나 이상의 작용제(들)의 투여를 하나 이상의 다른 작용제(들)의 투여를 중단한 후에 계속하는 경우의 투여 요법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 병용 투여는 공동으로, 순차적으로, 및/또는 동시에 수행된다.

"감소시키거나 또는 억제하는"은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 전체 감소를 유발하는 능력을 의미한다. 감소시키거나 또는 억제하는은 치료할 장애의 증상, 전이의 존재 또는 크기, 또는 원발성 종양의 크기를 지칭할 수 있다.

용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 상업용 패키지 내에 통상적으로 포함되어 있으며 이러한 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기사항 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 지침서를 지칭하도록 사용된다.

"제조품"은 하나 이상의 시약, 예를 들어 질환 또는 장애 (예를 들어, 암)를 치료하기 위한 의약 또는 본원에 기재된 바이오마커를 특이적으로 검출하기 위한 프로브를 포함하는 임의의 제조품 (예를 들어, 패키지 또는 용기) 또는 키트이다. 특정 실시양태에서, 제조품 또는 키트는 본원에 기재된 방법을 수행하기 위한 유닛으로서 판촉되거나, 배급되거나 또는 판매된다.

통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 본원에서 "약"의 값 또는 파라미터에 대한 지칭은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 실시양태를 포함(하고 이를 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 지칭하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다.

본원에 기재된 본 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태로 "로 이루어지는" 및/또는 "로 본질적으로 이루어지는" 것을 포함하는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 단수 형태는 달리 나타내지 않는 한 복수 대상을 포함한다.

II. 방법 및 용도

FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 이용하는 방법이 본원에 제공된다.

특히, 개체에게 (a) FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제에 대한 암 감수성의 기간을 증가시키고/거나 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키는데 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제를 포함하는 암 치료의 효능을 증가시키는데 유효하다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 효능에 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 반응 (예를 들어, 완전 반응)에 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양은 EGFR 길항제에 대한 암 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는데 유효하다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 사용한 치료에 대해 내성이 있는 암 세포를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

또한, 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

추가로, 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 포함하는 암 치료의 효능을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는 암 치료이며, 여기서 암 치료는 FGFR 신호전달의 길항제 없이 (부재 하에) 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는 표준 치료와 비교하여 증가된 효능을 갖는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 추가로, 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키고/거나 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

EGFR 길항제에 대한 내성이 발생할 가능성이 증가된, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

추가로, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키는 방법이 본원에 제공된다. 추가로, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제 감수성의 기간을 연장시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

또한, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 반응의 지속기간을 연장시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 에를로티닙 또는 게피티닙이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체 억제제, 소분자 억제제, 결합 폴리펩티드 억제제 및/또는 폴리뉴클레오티드 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드 억제제이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드 억제제는 Fc에 연결된 FGFR의 세포외 도메인의 영역 (예를 들어, FP-1039 (파이브 프라임(Five Prime)))을 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR2 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR3 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR4 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체이다.

일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, 소분자는 N-[2-[[4-(디에틸아미노)부틸]아미노]-6-(3,5-디메톡시페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-7-일]-N'-(1,1-디메틸에틸)-우레아 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, 소분자는 BGJ398 (노파르티스), AZD4547 (아스트라제네카), 및/또는 FF284 (츄가이/데비오팜 (데비오 1347))이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGF2 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIb 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIc 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR 항체이다.

본원에 사용된 요법에 대한 내성을 갖는 암은 요법에 대해 반응성이지 않고/거나 요법에 대해 유의한 반응 (예를 들어, 부분 반응 및/또는 완전 반응)을 생성하는 능력이 감소된 암을 포함한다. 내성은 치료 방법의 도중에 발생하는 획득 내성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 획득 약물 내성은 일시적 및/또는 가역적 약물 내성이다. 요법에 대한 일시적 및/또는 가역적 약물 내성은 치료 방법의 중단 후에 요법에 대한 감수성을 회복시킬 수 있는 약물 내성을 포함한다. 일부 실시양태에서, 획득 내성은 영구적 내성이다. 요법에 대한 영구적 내성은 약물 내성을 부여하는 유전적 변화를 포함한다.

본원에 사용된 요법에 대한 감수성을 갖는 암은 반응성이고/거나 유의한 반응 (예를 들어, 부분 반응 및/또는 완전 반응)를 생성할 수 있는 암을 포함한다.

요법에 대한 내성의 획득 및/또는 감수성의 유지를 평가 결정하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고 실시예에 기재되어 있다. 내성의 획득 및/또는 감수성의 유지의 변화, 예컨대 약물 내성은 실시예 및 샤르마(Sharma) 등의 문헌에 기재된 바와 같이 약물 내성 지속자의 성장을 검정함으로써 평가될 수 있다. 내성의 획득 및/또는 감수성의 유지의 변화, 예컨대 영구적 내성 및/또는 확대된 내성자는 실시예 및 샤르마 등의 문헌에 기재된 바와 같이 약물 내성 확대된 지속자의 성장을 검정함으로써 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 내성은 약물 내성 지속자 및/또는 약물 내성 확대된 지속자에서 IC₅₀, EC₅₀ 또는 종양 성장 감소의 변화에 의해 나타내어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 변화는 약 50%, 100% 및/또는 200% 중 어느 하나보다 더 크다. 추가로, 내성의 획득 및/또는 감수성의 유지의 변화는, 예를 들어 요법에 대한 반응, 반응의 지속기간 및/또는 진행까지의 시간, 예를 들어 부분 반응 및 완전 반응을 평가함으로써 생체내에서 평가될 수 있다. 내성의 획득 및/또는 감수성의 유지의 변화는 개체의 집단에서 요법에 대한 반응, 반응의 지속기간 및/또는 진행까지의 시간의 변화, 예를 들어 부분 반응 및 완전 반응의 수를 기초로 할 수 있다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC))이다. 일부 실시양태에서, 암은 상피 조직의 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 선암종이다. FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 포함하는 치료 방법을 시작할 때 본원에 기재된 임의의 조합 요법 방법에서의 암은 EGFR을 단독으로 포함하는 치료 방법에 대해 감수성 (감수성의 예는 반응성이고/거나 유의한 반응 (예를 들어, 부분 반응 및/또는 완전 반응)을 생성할 수 있는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않음)일 수 있다. FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 포함하는 치료 방법을 시작할 때 본원에 기재된 임의의 조합 요법 방법에서의 암은 EGFR 길항제를 단독으로 포함하는 치료 방법에 대해 내성 (내성의 예는 반응성이지 않고/거나 유의한 반응 (예를 들어, 부분 반응 및/또는 완전 반응)을 생성할 수 없는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않음)이 아닐 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 상피-중간엽 전이 (EMT)를 겪었다. 일부 실시양태에서, EMT는 상피-연관 단백질/RNA (예를 들어, E-카드헤린) 및/또는 중간엽-연관 단백질/RNA (예를 들어, 비멘틴)의 발현을 검정함으로써 검출된다. 일부 실시양태에서, 암은 야생형 EGFR을 갖는다 (즉, 암은 EGFR에서의 돌연변이를 갖지 않는다). 일부 실시양태에서, 암은 EGFR에서의 돌연변이를 갖는다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 개체는 인간일 수 있다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, 상기 언급된 조합 요법은 조합 투여 (여기서 2종 이상의 치료제가 동일한 또는 개별 제제에 포함됨) 및 개별 투여를 포괄하고, 이 경우에 본 발명의 길항제의 투여는 추가의 치료제 및/또는 아주반트의 투여 전에, 동시에, 순차적으로, 공동으로 및/또는 후에 일어날 수 있다. 일부 실시양태에서, 조합 요법은 방사선 요법 및/또는 추가의 치료제를 추가로 포함한다.

FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제는 경구, 비경구, 폐내 및 비강내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 원하는 경우에 국부 치료를 위해 병변내 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 부분적으로는 투여가 단기간인지 또는 장기간인지의 여부에 따라, 임의의 적합한 경로, 예를 들어 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.

본원에 기재된 FGFR 신호전달의 길항제 (예를 들어, 항체, 결합 폴리펩티드 및/또는 소분자) 및 EGFR 길항제는 우수한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제제화되고, 투약되고, 투여될 수 있다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제는 해당 장애를 예방 또는 치료하는데 현재 사용되는 하나 이상의 작용제와 함께 제제화될 필요는 없지만, 임의로 그와 함께 제제화된다. 이러한 기타 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 기타 인자들에 좌우된다. 이는 일반적으로 상기 기재된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량 및 경로로 사용된다.

질환의 예방 또는 치료를 위해, 본원에 기재된 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제의 적절한 투여량 (단독으로, 또는 하나 이상의 다른 추가의 치료제와 조합되어 사용되는 경우에)은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 좌우될 것이다. FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 치료는 일반적으로 상태에 따라 질환 증상의 원하는 저해가 일어날 때까지 지속될 것이다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주 또는 3주마다 투여될 수 있다 (예를 들어, 환자가 약 2회 내지 약 20회, 또는 예를 들어 약 6회 용량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 투여받도록). 보다 높은 초기 부하 용량을 투여한 후, 1회 이상의 보다 낮은 용량을 투여할 수 있다. 예시적인 투여 요법은 투여를 포함한다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.

임의의 상기 제제 또는 치료 방법은 FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제와 같은 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해된다.

III. 치료 조성물

FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 포함하는 조합물이 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 조합물은 단독으로 투여된 표적화된 치료의 효능을 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 조합물은 표적화된 치료 내성 암의 발생을 지연시키고/거나 방지한다. 특정 실시양태에서, 조합물은 암을 가진 개체에서 표적화된 치료 감수성의 기간을 연장시킨다.

본원에 기재된 조합 요법 방법에 유용한 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제는 항체, 결합 폴리펩티드, 결합 소분자 및/또는 폴리뉴클레오티드이다.

다양한 FGFR 및 FGF의 아미노산 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고 공중이 이용가능하다. 예를 들어, FGFR1 (예를 들어, 유니프롯케이비(UniProtKB)/스위스-프롯(Swiss-Prot) P11362-1, P11362-2, P11362-3, P11362-4, P11362-5, P11362-6, P11362-7, P11362-8, P11362-9, P11362-10, P11362-11, P11362-12, P11362-13, P11362-14, P11362-15, P11362-16, P11362-17, P11362-18, P11362-19, P11362-20, 및/또는 P11362-21), FGFR2 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P21802-1 (즉, FGFR2-IIIc), P21802-2, P21802-3 (즉, FGFR2-IIIb), P21802-4, P21802-5, P21802-6, P21802-7, P21802-8, P21802-9, P21802-10, P21802-11, P21802-12, P21802-13, P21802-14, P21802-15, P21802-16, P21802-17, P21802-18, P21802-19, P21802-20, P21802-21, P21802-22, 및/또는 P21802-23), FGFR3 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P22607-1 (즉, FGFR3-IIIc), P22607-2 (즉, FGFR3-IIIb), P22607-3, 및/또는 P22607-4), FGFR4 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P22455-1 및/또는 P22455-2), FGF1 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P05230-1 및/또는 P05230-2), FGF2 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P09038-1, P09038-2, P09038-3, 및/또는 P09038-4), FGF3 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P11487), FGF4 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P08620), FGF5 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P12034-1 및/또는 P12034-2), FGF6 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 10767), FGF7 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P21781), FGF8 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P55075-1, P55075-2, P55075-3 및/또는 P55075-4), FGF9 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P31371), FGF10 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 O15520), FGF11 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q92914), FGF12 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 P61328-1 및/또는 P61328-2), FGF13 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q92913-1, Q92913-2, Q92913-3, Q92913-4, 및/또는 Q92913-5), FGF14 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q92915-1 및/또는 Q92915-2), FGF16 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 O43320), FGF17 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 O60258-1 및/또는 O60258-2), FGF18 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 O76093), FGF19 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 O95750), FGF20 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q9NP95), FGF21 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q9NSA1), FGF22 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q9HCT0), 및/또는 FGF23 (예를 들어, 유니프롯케이비/스위스-프롯 Q9GZV9)을 참조한다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체 억제제, 소분자 억제제, 결합 폴리펩티드 억제제 및/또는 폴리뉴클레오티드 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드 억제제이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드 억제제는 Fc에 연결된 FGFR의 세포외 도메인의 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 항체이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR1 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1-IIIb, FGFR1-IIIc, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGFR1 (예를 들어, FGFR1-IIIb 및/또는 FGFR1-IIIc)에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGF2에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FGF5에 결합하고/거나 그를 억제한다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드는 FGFR1 폴리펩티드의 세포외 도메인 및 융합 파트너를 포함하는 FGFR1 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, FGFR1은 FGFR1-IIIb이다. 일부 실시양태에서, FGFR1은 FGFR1-IIIb이다. 일부 실시양태에서, 세포외 도메인은 FGFR1-IIIc의 아미노산 22 내지 360 또는 22 내지 592를 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR1 융합 단백질은 본원에 전문이 참조로 포함된 US7678890에 기재된 단백질이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGF2 항체이다. 일부 실시양태에서, 융합 파트너는 Fc 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 본원에 전문이 참조로 포함된 US20090304707에 기재된 바와 같은 FGF2 항체로서, 예를 들어 하이브리도마 PTA-8864에 의해 생산된 항체 및/또는 그의 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIb 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 항-FGFR1-IIIc 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR1 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR1 항체이다.

일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 N-[2-[[4-(디에틸아미노)부틸]아미노]-6-(3,5-디메톡시페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-7-일]-N'-(1,1-디메틸에틸)-우레아 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 BGJ398 (노파르티스, 즉, 3-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시-페닐)-1-{6-[4-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐아미노]-피리미딘-4-일}-1-메틸-우레아 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; CAS# 872511-34-7)이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 AZD4547 (아스트라제네카; 즉, N-(5-(3,5-디메톡시페네틸)-1H-피라졸-3-일)-4-((3S,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 및/또는 그의 제약상 허용되는 염)이다. 일부 실시양태에서, FGFR1 신호전달의 길항제는 FF284 (츄가이/데비오팜 (데비오 1347))이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR2 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 FGFR2-IIIb, FGFR2-IIIc, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF6, FGF7, FGF9, FGF10, FGF17, FGF18 및 FGF22 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 FGFR2 (예를 들어, FGFR2-IIIb 및/또는 FGFR2-IIIc)에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 FGF2에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 FGF9에 결합하고/거나 그를 억제한다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드는 FGFR2 폴리펩티드의 세포외 도메인 및 융합 파트너를 포함하는 FGFR2 융합 단백질이다. 예는 전문이 참조로 포함된 WO2008/065543 및 WO2007/014123에 기재된 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 항-FGFR2 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 항-FGFR2-IIIb 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 항-FGFR2-IIIc 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR2 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR2 항체이다. FGFR2 항체의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 전문이 참조로 포함된 US 8,101,723, US 8,101,721, WO2001/79266, WO2007/144893 및 WO2010/054265에 기재된 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 BGJ398 (노파르티스, 즉, 3-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시-페닐)-1-{6-[4-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐아미노]-피리미딘-4-일}-1-메틸-우레아 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; CAS# 872511-34-7)이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 AZD4547 (아스트라제네카; 즉, N-(5-(3,5-디메톡시페네틸)-1H-피라졸-3-일)-4-((3S,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 및/또는 그의 제약상 허용되는 염)이다. 일부 실시양태에서, FGFR2 신호전달의 길항제는 FF284 (츄가이/데비오팜 (데비오 1347))이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR3 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 FGFR3-IIIb, FGFR3-IIIc, FGF1, FGF2, FGF4, FGF8, FGF9, FGF17, FGF18 및 FGF23 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 FGFR3 (예를 들어, FGFR3-IIIb 및/또는 FGFR3-IIIc)에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 FGF2에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 FGF9에 결합하고/거나 그를 억제한다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드는 FGFR3 폴리펩티드의 세포외 도메인 및 융합 파트너를 포함하는 FGFR3 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 항-FGFR3 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 항-FGFR3-IIIb 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 항-FGFR3-IIIc 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR3 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR3 항체이다. FGFR3 항체의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 전문이 참조로 포함된 US 8,101,721, WO2010/111367, WO2001/79266, WO2002/102854, WO2002/10972, WO2007/144893, WO2010/002862 및/또는 WO2010/048026에 기재된 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 BGJ398 (노파르티스, 즉, 3-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시-페닐)-1-{6-[4-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐아미노]-피리미딘-4-일}-1-메틸-우레아 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; CAS# 872511-34-7)이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 AZD4547 (아스트라제네카; 즉, N-(5-(3,5-디메톡시페네틸)-1H-피라졸-3-일)-4-((3S,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 및/또는 그의 제약상 허용되는 염)이다. 일부 실시양태에서, FGFR3 신호전달의 길항제는 FF284 (츄가이/데비오팜 (데비오 1347))이다. 임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR3 길항제는 브리바닙, 도비티닙 (TKI-258) 및/또는 HM-80871A이다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR4 신호전달의 길항제이다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 FGFR4-IIIb, FGFR4-IIIc, FGF1, FGF2, FGF4, FGF6, FGF8, FGF9, FGF16, FGF17, FGF18 및 FGF19 중 하나 이상에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 FGFR4 (예를 들어, FGFR4-IIIb 및/또는 FGFR4-IIIc)에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 FGF2에 결합하고/거나 그를 억제한다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 FGF9에 결합하고/거나 그를 억제한다.

임의의 방법의 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 결합 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드는 FGFR4 폴리펩티드의 세포외 도메인 및 융합 파트너를 포함하는 FGFR4 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 항-FGFR4 항체이다. 일부 실시양태에서 FGFR4 신호전달의 길항제는 하나 초과의 FGFR 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항-FGFR4 항체이다. FGFR4 항체의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 전문이 참조로 포함된 WO2008/052796 및 WO2005/037235에 기재된 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR4 신호전달의 약한 길항제는 BGJ398 (노파르티스, 즉, 3-(2,6-디클로로-3,5-디메톡시-페닐)-1-{6-[4-(4-에틸-피페라진-1-일)-페닐아미노]-피리미딘-4-일}-1-메틸-우레아 및/또는 그의 제약상 허용되는 염; CAS# 872511-34-7)이다. 일부 실시양태에서, FGFR4의 약한 길항제는 AZD4547 (아스트라제네카; 즉, N-(5-(3,5-디메톡시페네틸)-1H-피라졸-3-일)-4-((3S,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 및/또는 그의 제약상 허용되는 염)이다. 일부 실시양태에서, FGFR4의 약한 길항제는 FF284 (츄가이/데비오팜 (데비오 1347))이다.

예시적인 FGFR 길항제는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 전문이 참조로 포함된 US5288855, US6344546, WO94/21813, US20070274981, WO2005/066211, WO2011/068893, US5229501, US6656728, US7678890, WO95/021258, US6921763, US6713474, US6610688, US6297238, US20130053376, US20130039855, US2013004492, US20120316137, US20120251538, US20120195851, US20110129524, US20110053932, US20050227921, EP1761505, WO2012/125124, WO2012/123585, WO2011/099576, WO2011/035922, WO2009148928, WO2008/149521, WO2005/079390, WO2003/080064, WO2008/075068 (특히 실시예 80), WO2005/080330에 기재된 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제는 FGFR/FGF에 대한 특이적 억제제, 예를 들어 FGFR1의 특이적 억제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제제는 FGFR 신호전달의 길항제가 FGFR/FGF 및 하나 이상의 다른 표적 폴리펩티드 및/또는 하나 이상의 FGFR/FGF를 억제하는 이중 억제제 또는 범 억제제일 수 있다.

또한, 본원에 기재된 방법에 유용한 EGFR 길항제가 본원에 제공된다. EGFR은, 문헌 [Ullrich et al., Nature (1984) 309:418425]에 기재되어 있으며 다르게는 Her-1 및 c-erbB 유전자 생성물로도 지칭되는 수용체 티로신 키나제 폴리펩티드인 표피 성장 인자 수용체, 뿐만 아니라 EGFRvIII과 같은 그의 변이체를 의미한다. EGFR의 변이체는 또한 결실, 치환 및 삽입 변이체, 예를 들어 문헌 [Lynch et al. (NEJM 2004, 350:2129), Paez et al. (Science 2004, 304:1497), Pao et al. (PNAS 2004, 101:13306)]에 기재된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, EGFR은 일반적으로 자연 발생 EGFR 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭하는 야생형 EGFR이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 항체, 결합 폴리펩티드, 결합 소분자 및/또는 폴리뉴클레오티드이다.

예시적인 EGFR 길항제 (항-EGFR 항체)는 항체, 예컨대 니모투주맙 (YM 바이오사이언시스(YM Biosciences))으로 공지된 인간화 모노클로날 항체, 완전 인간 ABX-EGF (파니투무맙, 아브게닉스 인크.(Abgenix Inc.)), 뿐만 아니라 E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 및 E7.6.3으로 공지되어 있으며 US 6,235,883에 기재된 완전 인간 항체; MDX-447 (메다렉스 인크(Medarex Inc))을 포함한다. 페르투주맙 (2C4)은 HER2에 직접적으로 결합하지만 HER2-EGFR 이량체화를 방해하여 EGFR 신호전달을 억제하는 인간화 항체이다. EGFR에 결합하는 항체의 다른 예는 GA201 (RG7160; 로슈 글리카르트 아게(Roche Glycart AG)), MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (미국 특허 번호 4,943,533 (Mendelsohn et al.) 참조) 및 그의 변이체, 예컨대 키메라화 225 (C225 또는 세툭시맙; 에르부틱스(ERBUTIX)®) 및 재형성된 인간 225 (H225) (WO 96/40210 (임클론 시스템즈 인크.(Imclone Systems Inc.)) 참조); IMC-11F8, 완전 인간, EGFR-표적화 항체 (임클론); 유형 II 돌연변이체 EGFR에 결합하는 항체 (미국 특허 번호 5,212,290); 미국 특허 번호 5,891,996에 기재된 바와 같은 EGFR에 결합하는 인간화 및 키메라 항체; 및 EGFR에 결합하는 인간 항체, 예컨대 ABX-EGF (WO98/50433 (아브게닉스) 참조); EMD 55900 (Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A:636-640 (1996)); EGFR 결합에 대해 EGF 및 TGF-알파와 경쟁하는, EGFR에 대해 지시된 인간화 EGFR 항체인 EMD7200 (마투주맙); 및 mAb 806 또는 인간화 mAb 806 (Johns et al., J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004))을 포함한다. 항-EGFR 항체는 세포독성제와 접합될 수 있으며, 이에 따라 면역접합체를 생성한다 (예를 들어, EP659,439A2, 머크 페이턴트 게엠베하(Merck Patent GmbH) 참조). 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 세툭시맙이다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 파니투무맙이다. 일부 실시양태에서, 항-EGFR 항체는 잘루투무맙, 니모투주맙 및/또는 마투주맙이다.

본 방법에 유용한 항-EGFR 항체는 충분한 친화도 및 특이성으로 EGFR에 결합하고 EGFR 활성을 감소시키거나 또는 억제할 수 있는 임의의 항체를 포함한다. 선택된 항체는 통상적으로 EGFR에 대해 충분히 강한 결합 친화도를 가질 것이고, 예를 들어 상기 항체는 100 nM 내지 1 pM의 Kd 값으로 인간 c-met에 결합할 수 있다. 항체 친화도는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 검정 (예컨대 PCT 출원 공개 번호 WO2005/012359에 기재된 바와 같은 비아코어(BIAcore) 검정); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA); 및 경쟁 검정 (예를 들어, RIA)에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항-EGFR 항체는 EGFR/EGFR 리간드 활성이 관여되는 질환 또는 상태를 표적화하고 이를 방해하는데 있어서 치료제로서 사용될 수 있다. 또한, 항체는, 예를 들어 치료제로서의 그의 유효성을 평가하기 위해 다른 생물학적 활성 검정에 적용될 수 있다. 이러한 검정은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 항체에 대한 표적 항원 및 의도된 용도에 좌우된다. 일부 실시양태에서, EGFR 아암은 세포 방어 메카니즘을 EGFR-발현 세포에 집중시키도록 백혈구 상의 유발 분자, 예컨대 T-세포 수용체 분자 (예를 들어, CD2 또는 CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예컨대 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)에 결합하는 아암과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 EGFR을 발현하는 세포에 세포독성제를 국재화시키는데 사용될 수 있다. 이들 항체는 EGFR-결합 아암, 및 세포독성제 (예를 들어, 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)에 결합하는 아암을 갖는다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')₂ 이중특이적 항체)으로 제조될 수 있다.

예시적인 EGFR 길항제는 또한 US5616582, US5457105, US5475001, US5654307, US5679683, US6084095, US6265410, US6455534, US6521620, US6596726, US6713484, US5770599, US6140332, US5866572, US6399602, US6344459, US6602863, US6391874, WO9814451, WO9850038, WO9909016, WO9924037, WO9935146, WO0132651, US6344455, US5760041, US6002008 및/또는 US5747498에 기재된 화합물과 같은 소분자를 포함한다. 특정한 소분자 EGFR 길항제는 OSI-774 (CP-358774, 에를로티닙, OSI 파마슈티칼스(OSI Pharmaceuticals)); PD 183805 (CI 1033, 2-프로펜아미드, N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리닐)프로폭시]-6-퀴나졸리닐]-, 디히드로클로라이드, 화이자 인크.(Pfizer Inc.)); 이레사(Iressa)® (ZD1839, 게피티닙, 아스트라제네카); ZM 105180 ((6-아미노-4-(3-메틸페닐-아미노)-퀴나졸린, 제네카); BIBX-1382 (N8-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-N2-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 베링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)); PKI-166 ((R)-4-[4-[(1-페닐에틸)아미노]-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀); (R)-6-(4-히드록시페닐)-4-[(1-페닐에틸)아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘); CL-387785 (N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-6-퀴나졸리닐]-2-부틴아미드); EKB-569 (N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-3-시아노-7-에톡시-6-퀴놀리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드); 라파티닙 (타이커브(Tykerb), 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)); ZD6474 (작티마(Zactima), 아스트라제네카); CUDC-101 (큐리스(Curis)); 카네르티닙 (CI-1033); AEE788 (6-[4-[(4-에틸-1-피페라지닐)메틸]페닐]-N-[(1R)-1-페닐에틸]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민, WO2003013541, 노파르티스) 및 PKI166 (4-[4-[[(1R)-1-페닐에틸]아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀, WO9702266 노파르티스)을 포함한다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)-4-퀴나졸린아민-HCl)이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 게피티닙 및/또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 라파티닙 및/또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 게피티닙 및/또는 에를로티닙이다.

일부 실시양태에서, EGFR 길항제는 EGFR에 대한 특이적 억제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제제는 EGFR 길항제가 EGFR 및 하나 이상의 다른 표적 폴리펩티드를 억제하는 이중 억제제 또는 범 억제제일 수 있다.

A. 항체

본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR에 결합하는 단리된 항체가 본원에 제공된다. 임의의 상기 실시양태에서, 항체는 인간화된다. 추가로, 임의의 상기 실시양태에 따른 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')₂ 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 "무손상 IgG1" 항체 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다.

추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항체는 하기 섹션에 기재된 바와 같은 임의의 특징을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다:

1. 항체 친화도

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10^-8 M 이하, 예를 들어 10^-8 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-9 M 내지 10^-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 한 실시양태에서, Kd는 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 한 실시양태에서, RIA는 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된다. 예를 들어, 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에서 최소 농도의 (¹²⁵I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터(MICROTITER)® 멀티-웰 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, PBS 중 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단하였다. 비-흡착 플레이트 (눈크(Nunc) #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [¹²⁵I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만; 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 시간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중 0.1% 폴리소르베이트 20 (트윈(TWEEN)-20®)으로 8회 세척한다. 플레이트를 건조시킬 때, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MICROSCINT)-20™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드)로 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁 결합 검정에 사용한다.

또 다른 실시양태에 따르면, Kd는 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 예를 들어, 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000 (비아코어, 인크.(BIAcore, Inc.), 뉴저지주 피스카타웨이)을 사용하는 검정을 ~10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 수행한다. 한 실시양태에서, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.8)을 사용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주사한다. 항원의 주사 후에, 1 M 에탄올아민을 주사하여 미반응기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (트윈-20™) 계면활성제를 갖는 PBS (PBST) 내에 주사한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델 (비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅시켜 회합률 (k_on) 및 해리율 (k_off)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 k_off/k_on의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 상기 표면-플라즈몬 공명 검정에 의한 온-레이트가 10⁶ M^{- 1} s^-1을 초과하는 경우에, 온-레이트는 분광계, 예컨대 정지 유동 설치 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)) 또는 교반 큐벳이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코(AMINCO)™ 분광광도계 (써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정할 때 증가하는 농도의 항원의 존재 하에 PBS (pH 7.2) 중 20 nM의 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm, 방출 = 340 nm, 16 nm 통과 대역)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하여 결정할 수 있다.

2. 항체 단편

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, Fv 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')₂ 단편의 논의에 대해, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다.

디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어 EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.

단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 참조).

항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.

3. 키메라 및 인간화 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 교체된" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.

특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서 인간에 대한 면역원성이 감소하도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 개선하기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.

인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)] (특이성 결정 영역 (SDR) 그라프팅 기재); [Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)] ("재표면화" 기재); [Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)] ("FR 셔플링" 기재); 및 [Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)] (FR 셔플링에 대한 "가이드 선택" 접근법 기재)에 추가로 기재되어 있다.

인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "최적-적합" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

4. 인간 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 항원 시험투여에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하여 제조될 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체 내로 무작위로 통합된 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 (제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술 기재); 미국 특허 번호 5,770,429 (HuMab® 기술 기재); 미국 특허 번호 7,041,870 (K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술 기재), 및 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900 (벨로시마우스(VelociMouse)® 기술 기재)을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시켜 추가로 변형될 수 있다.

인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Hist. & Histopath., 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods Find Exp. Clin. Pharmacol., 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.

인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하여 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술은 하기 기재된다.

5. 라이브러리-유래 항체

항체는 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 원하는 결합 특성을 갖는 항체에 대하여 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. Methods Mol. Biol. 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에 검토되어 있고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods Mol. Biol. 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.

특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위로 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 최종적으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 재배열되지 않은 V-유전자 절편을 클로닝하고 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도로 가변성인 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열을 달성함으로써 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공개문헌은 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.

인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 여겨진다.

6. 다중특이적 항체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR에 대한 것이고, 다른 것은 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR/FGF 및/또는 EGFR의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR을 발현하는 세포에 세포독성제를 국재화시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.

다중특이적 항체를 제조하기 위한 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위해 정전기 조종 효과를 조작하는 것 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교시키는 것 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생산하기 위해 류신 지퍼를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위해 "디아바디" 기술을 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하는 것 (예를 들어 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같이 삼중특이적 항체를 제조하는 것에 의해 다중특이적 항체가 또한 제조될 수 있다.

"옥토퍼스 항체"를 비롯한, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).

본원의 항체 또는 단편은 또한, 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원 (예를 들어, US 2008/0069820 참조)에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다.

7. 항체 변이체

a) 글리코실화 변이체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 또는 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에의 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성시키기 위해 이루어질 수 있다.

한 실시양태에서, Fc 영역에 (직접 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결핍된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의해 측정된 Asn 297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고만노스 구조물)의 합에 비해 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균적인 양을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 나타내지만; Asn297은 또한 항체의 부차적 서열 변이에 의해 위치 297의 약 ± 3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294 내지 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체에 관한 공개문헌의 예는 하기를 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1 (Presta, L); 및 WO 2004/056312 A1 (Adams et al., 특히 실시예 11)), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.

이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체, 예를 들어 항체의 Fc 영역에 부착된 이중안테나 올리고사카라이드가 GlcNAc에 의해 이등분된 항체 변이체가 추가로 제공된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는, 예를 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.

b) Fc 영역 변이체

특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서의 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명은, 항체의 생체내 반감기는 중요하지만 특정 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 적용에 대해 바람직한 후보가 되도록 하는 일부 이펙터 기능 (모든 이펙터 기능은 아님)을 보유하는 항체 변이체를 고려한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결핍되어 있지만 (따라서 아마도 ADCC 활성이 결핍될 것임) FcRn 결합 능력은 보유하고 있는 것을 확인하기 위해 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)] 참조); 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 사용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 시토톡스(CytoTox) 96® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결핍되었는지를 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 클리어런스/반감기 결정을 또한 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).

감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체 (잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는, 소위 "DANA" Fc 돌연변이체 포함)를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).

FcR에 대해 개선된 또는 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재된다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.) 특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 유발하는 변경이 Fc 영역에서 만들어진다.

증가된 반감기, 및 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn) (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))에 대한 개선된 결합을 갖는 항체가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 하나 이상의 치환을 내부에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서의 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826). Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.

c) 시스테인 조작된 항체 변이체

특정 실시양태에서, 항체의 하나 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 생성시키는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 상기 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 일어난다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 이를 사용하여 항체를 본원에 추가로 기재된 바와 같이 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 면역접합체를 생성시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트(Kabat) 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.

B. 면역접합체

본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 하나 이상의 세포독성제, 예컨대 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소 또는 그의 단편) 또는 방사성 동위원소에 접합되어 있는, 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 또는 EGFR에 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체가 본원에 추가로 제공된다.

한 실시양태에서, 면역접합체는, 메이탄시노이드 (미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1 참조); 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF (MMAE 및 MMAF) (미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 그의 유도체 (미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001 및 5,877,296; 문헌 [Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)] 참조); 안트라시클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신 (문헌 [Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)]; 및 미국 특허 번호 6,630,579 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065를 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 약물에 항체가 접합되어 있는 항체-약물 접합체 (ADC)이다.

또 다른 실시양태에서, 면역접합체는, 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄 (슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함하나 이에 제한되지는 않는 효소적 활성 독소 또는 그의 단편에 접합되어 있는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 방사성접합체를 형성하기 위해 방사성 원자에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성접합체의 생산을 위해 이용가능하다. 그 예는 At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성접합체는 검출용으로 사용되는 경우에 신티그래피 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 Tc^99m 또는 I¹²³, 또는 핵 자기 공명 (NMR) 영상화 (또한 자기 공명 영상화, mri로 공지됨)용 스핀 표지, 예컨대 다시 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈 또는 철을 포함할 수 있다.

항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이관능성 단백질 커플링제, 예컨대 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC), 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예컨대 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예컨대 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 (예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체 (예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트 (예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물 (예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 방사성뉴클레오티드를 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO94/11026을 참조한다. 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸 링커 또는 디술피드-함유 링커 (문헌 [Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)]; 미국 특허 번호 5,208,020)가 사용될 수 있다.

본원의 면역접합체 또는 ADC는 상업적으로 입수가능한 (예를 들어, 미국 일리노이주 록포드 소재의 피어스 바이오테크놀로지, 인크.(Pierce Biotechnology, Inc.)로부터) 가교-링커 시약 (BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 술포-EMCS, 술포-GMBS, 술포-KMUS, 술포-MBS, 술포-SIAB, 술포-SMCC 및 술포-SMPB, 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐술폰)벤조에이트)를 포함하나 이에 제한되지는 않음)으로 제조된 이러한 접합체를 명백하게 고려하나 이에 제한되지는 않는다.

C. 결합 폴리펩티드

결합 폴리펩티드는, 본원에 기재된 방법에 사용하기 위해 또한 제공된 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR에 바람직하게는 특이적으로 결합하는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 결합 폴리펩티드는 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 길항제 및/또는 EGFR 길항제이다. 결합 폴리펩티드는 공지된 폴리펩티드 합성 방법을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있거나 또는 재조합 기술을 사용하여 제조 및 정제될 수 있다. 결합 폴리펩티드는 통상적으로는 적어도 약 5개 아미노산의 길이, 대안적으로 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100개 또는 그 초과의 아미노산의 길이이며, 여기서 이러한 결합 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 표적, 예를 들어 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 또는 EGFR에 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있다. 결합 폴리펩티드는 널리 공지된 기술을 사용하여 과도한 실험 없이 확인될 수 있다. 이와 관련하여, 폴리펩티드 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 폴리펩티드에 대해 폴리펩티드 라이브러리를 스크리닝하는 기술이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있음을 주목한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,556,762, 5,750,373, 4,708,871, 4,833,092, 5,223,409, 5,403,484, 5,571,689, 5,663,143; PCT 공개 번호 WO 84/03506 및 WO84/03564; 문헌 [Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985); Geysen et al., in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986); Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987); Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla, S. E. et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378; Lowman, H.B. et al. (1991) Biochemistry, 30:10832; Clackson, T. et al. (1991) Nature, 352: 624; Marks, J. D. et al. (1991), J. Mol. Biol., 222:581; Kang, A.S. et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363, 및 Smith, G. P. (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668] 참조).

펩티드 라이브러리를 생성하고 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 방법이 또한 미국 특허 번호 5,723,286, 5,432,018, 5,580,717, 5,427,908, 5,498,530, 5,770,434, 5,734,018, 5,698,426, 5,763,192, 및 5,723,323에 개시되어 있다.

D. 결합 소분자

상기 기재된 방법에 사용하기 위한 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR의 소분자 길항제로 사용하기 위한 결합 소분자가 본원에 제공된다.

결합 소분자는 바람직하게는, 본원에 기재된 바와 같은 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR에 바람직하게는 특이적으로 결합하는, 본원에 정의된 바와 같은 결합 폴리펩티드 또는 항체와는 다른 유기 분자이다. 결합 유기 소분자는 공지된 방법을 사용하여 확인되고 화학적으로 합성될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개 번호 WO00/00823 및 WO00/39585 참조). 결합 유기 소분자는 통상적으로 약 2000 달톤 미만의 크기, 대안적으로 약 1500, 750, 500, 250 또는 200 달톤 미만의 크기이며, 여기서 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드에 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있는 이러한 유기 소분자는 널리 공지된 기술을 사용하여 과도한 실험 없이 확인될 수 있다. 이와 관련하여, 관심 폴리펩티드에 결합할 수 있는 분자에 대해 유기 소분자 라이브러리를 스크리닝하는 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있음을 주목한다 (예를 들어, PCT 공개 번호 WO00/00823 및 WO00/39585 참조). 결합 유기 소분자는 예를 들어 알데히드, 케톤, 옥심, 히드라존, 세미카르바존, 카르바지드, 1급 아민, 2급 아민, 3급 아민, N-치환된 히드라진, 히드라지드, 알콜, 에테르, 티올, 티오에테르, 디술피드, 카르복실산, 에스테르, 아미드, 우레아, 카르바메이트, 카르보네이트, 케탈, 티오케탈, 아세탈, 티오아세탈, 아릴 할라이드, 아릴 술포네이트, 알킬 할라이드, 알킬 술포네이트, 방향족 화합물, 헤테로시클릭 화합물, 아닐린, 알켄, 알킨, 디올, 아미노 알콜, 옥사졸리딘, 옥사졸린, 티아졸리딘, 티아졸린, 엔아민, 술폰아미드, 에폭시드, 아지리딘, 이소시아네이트, 술포닐 클로라이드, 디아조 화합물, 산 클로라이드 등일 수 있다.

E. 길항제 폴리뉴클레오티드

본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 폴리뉴클레오티드 길항제가 또한 본원에 제공된다. 폴리뉴클레오티드는 안티센스 핵산 및/또는 리보자임일 수 있다. 안티센스 핵산은 관심 유전자, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR 유전자의 RNA 전사체의 적어도 일부에 상보적인 서열을 포함한다. 그러나, 절대 상보성은 바람직하기는 하지만 요구되지는 않는다.

본원에 지칭된 "RNA의 적어도 일부에 상보적인" 서열은 RNA와 혼성화하여 안정한 듀플렉스를 형성할 수 있도록 충분한 상보성을 갖는 서열을 의미하고; 따라서 이중 가닥 안티센스 핵산의 경우에, 듀플렉스 DNA의 단일 가닥을 시험할 수 있거나 또는 트리플렉스 형성을 검정할 수 있다. 혼성화 능력은 안티센스 핵산의 상보성 정도 및 길이 둘 다에 좌우될 것이다. 일반적으로, 혼성화 핵산이 길수록 RNA와의 염기 미스매치가 더 많을 수 있고, 안정한 듀플렉스 (또는 경우에 따라 트리플렉스)를 함유하고 계속 형성할 수 있다. 통상의 기술자는 혼성화된 복합체의 융점을 결정하기 위해 표준 절차를 사용하여 허용가능한 미스매치 정도를 확인할 수 있다.

메시지의 5' 말단, 예를 들어 AUG 개시 코돈까지 및 이를 포함하는 5' 비번역 서열에 상보적인 폴리뉴클레오티드는 번역을 억제하는데 가장 효율적으로 작동해야 한다. 그러나, mRNA의 3' 비번역 서열에 상보적인 서열이 또한 mRNA의 번역을 억제하는데 유효한 것으로 밝혀졌다. 일반적으로, 문헌 [Wagner, R., 1994, Nature 372:333-335]을 참조한다. 따라서, 유전자의 5'- 또는 3'-비-번역, 비-코딩 영역에 상보적인 올리고뉴클레오티드를 안티센스 접근법에 사용하여 내인성 mRNA의 번역을 억제할 수 있다. mRNA의 5' 비번역 영역에 상보적인 폴리뉴클레오티드는 AUG 개시 코돈의 상보체를 포함해야 한다. mRNA 코딩 영역에 상보적인 안티센스 폴리뉴클레오티드는 번역의 보다 덜 효율적인 억제제이지만, 본 발명에 따라 사용될 수 있다. mRNA의 5'-, 3'- 또는 코딩 영역에 혼성화되도록 설계되는지 여부에 관계없이, 안티센스 핵산은 적어도 6개의 뉴클레오티드의 길이를 가져야 하며, 바람직하게는 6 내지 약 50개 뉴클레오티드 범위의 길이를 갖는 올리고뉴클레오티드이다. 구체적 측면에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개의 뉴클레오티드, 적어도 17개의 뉴클레오티드, 적어도 25개의 뉴클레오티드 또는 적어도 50개의 뉴클레오티드이다.

F. 항체 및 결합 폴리펩티드 변이체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체는 항체 및/또는 결합 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하거나 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유하도록, 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있다.

특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체 및/또는 결합 폴리펩티드 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 표제 하에 표 1에 제시된다. 보다 더 실질적인 변화는 "예시적인 치환"의 표제 하에 표 1에 제공되며, 아미노산 측쇄 부류에 관해서는 하기에 추가로 기재된 바와 같다. 아미노산 치환은 관심 항체 및/또는 결합 폴리펩티드 내에 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.

<표 1>

아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 분류될 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.

G. 항체 및 결합 폴리펩티드 유도체

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 및/또는 결합 폴리펩티드는 관련 기술분야에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체) 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체 및/또는 결합 폴리펩티드에 부착되어 있는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 하나 초과의 중합체가 부착되어 있는 경우에, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체 및/또는 결합 폴리펩티드 유도체가 규정된 조건 하에 요법에서 사용될 것인지의 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기반으로 결정될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 방사선에의 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티에 대한 항체 및/또는 결합 폴리펩티드의 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체 및/또는 결합 폴리펩티드-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

IV. 원하는 기능을 갖는 FGFR 신호전달의 길항제를 스크리닝 및/또는 확인하는 방법

본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 관심 폴리펩티드, 예컨대 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4), FGF (예를 들어, FGF1-23) 및/또는 EGFR의 추가의 길항제 (항체, 결합 폴리펩티드 및/또는 소분자 포함)가 상기에 기재되었다. 본원에 제공된 상기 항체, 결합 폴리펩티드 및/또는 결합 소분자인 추가의 길항제는 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정에 의해 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인, 스크리닝 및/또는 특성화될 수 있다.

특정 실시양태에서, FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드의 원자 좌표를 포함하는 메모리를 포함하는 컴퓨터 시스템이 FGFR 신호전달의 리간드 결합 부위에 결합하는 화합물을 합리적으로 확인하기 위한 모델로서 유용하다. 이러한 화합물은 예를 들어, 신생 설계될 수 있거나, 또는 공지된 화합물의 변형에 의해 설계될 수 있다. 다른 경우에서, 결합 화합물은 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)의 분자 모델과의 "도킹" 여부를 결정하도록 공지의 화합물을 시험함으로써 확인될 수 있다. 이러한 도킹 방법은 일반적으로 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.

FGFR 신호전달 결정 구조 데이터는, 결정 구조 데이터의 분석에 의해 다양한 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)-결합 화합물의 결합 모델을 개발하기 위해 컴퓨터-모델링 기술과 함께 사용될 수 있다. 부위 모델은 부위 표면의 3차원 토포그래피, 뿐만 아니라 반 데르 발스 접촉, 정전기 상호작용 및 수소-결합 기회를 비롯한 인자를 특성화한다. 이어서, 컴퓨터 시뮬레이션 기술을 사용하여, 모델 부위와 상호작용하도록 설계되는 양성자, 히드록실 기, 아민 기, 2가 양이온, 방향족 및 지방족 관능기, 아미드 기, 알콜 기 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관능기에 대한 상호작용 위치를 지도화한다. 이들 기는 후보 화합물이 상기 부위에 특이적으로 결합할 것이라는 기대 하에 약물작용발생단 또는 후보 화합물 내로 설계될 수 있다. 따라서, 약물작용발생단 설계는, 비록 일반적으로 약물작용발생단이 비-공유 메카니즘을 통해 부위와 상호작용하긴 하지만, 수소 결합, 반 데르 발스, 정전기 및 공유 상호작용을 비롯한 임의의 또는 모든 이용가능한 유형의 화학적 상호작용을 통해 부위와 상호작용하기 위한, 약물작용발생단에 속하는 후보 화합물의 능력을 고려하는 것을 수반한다.

FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드에 결합하기 위한 약물작용발생단 또는 후보 화합물의 능력은 컴퓨터 모델링 기술을 사용하는 실제 합성에 추가하여 분석될 수 있다. 단지 표적 (예를 들어, FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드 결합 부위)에 충분한 결합 에너지 (한 예에서, 대략 10^-2 M 또는 보다 더 단단한 표적과의 해리 상수에 상응하는 결합 에너지)로 결합하는, 컴퓨터 모델링에 의해 나타내어지는 후보만이 합성될 수 있고, 이 후보는 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드에 결합하고 FGFR 신호전달을 억제하는 그의 능력, 적용가능한 경우 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고/거나 본원에 기재된 바와 같은 효소 검정을 사용하여 효소 기능을 억제하는 그의 능력에 대해 시험될 수 있다. 따라서, 컴퓨터 평가 단계는 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드에 적절한 친화도로 결합할 가능성이 없는 화합물의 불필요한 합성을 피한다.

FGFR 신호전달 약물작용발생단 또는 후보 화합물은 컴퓨터로 평가될 수 있고, 화학 물질 또는 단편을 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드 상의 개별 결합 표적 부위와 회합하는 그의 능력에 대해 스크리닝 및 선택하는 일련의 단계에 의해 설계될 수 있다. 통상의 기술자는 화학 물질 또는 단편을 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드와, 보다 구체적으로는 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드 상의 표적 부위와 회합하는 그의 능력에 대해 스크리닝하는 여러 방법 중 하나를 사용할 수 있다. 그 방법은 예를 들어 관련 기술분야에 공지된 FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23) 폴리펩티드 좌표 또는 그 좌표의 하위세트를 기반으로 하는 컴퓨터 스크린 상의 표적 부위를 시각적 검사하는 것에 의해 시작될 수 있다.

암 세포 사멸을 유도하는 길항제를 선택하기 위해, 예를 들어 아이오딘화프로피듐 (PI), 트리판 블루 또는 7AAD 흡수에 의해 나타낸 바와 같은 막 완전성의 상실을 참조물에 대비해 평가할 수 있다. PI 흡수 검정은 보체 및 면역 이펙터 세포의 부재 하에 수행될 수 있다. 종양 세포를 단독 배지 또는 적절한 조합 요법제를 함유하는 배지와 인큐베이션한다. 세포를 3일 기간 동안 인큐베이션한다. 각각의 처리 후에 세포를 세척하고, 35 mm 여과기-캡핑된 12x75 튜브 (튜브당 1 ml, 처리군당 튜브 3개)로 분취하여 세포괴를 제거한다. 이어서, 튜브에 PI (10 μg/ml)를 넣는다. 샘플은 팩스캔(FACSCAN)® 유동 세포측정기 및 팩스컨버트(FACSCONVERT)® 셀퀘스트(CellQuest) 소프트웨어 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))를 사용하여 분석될 수 있다. PI 흡수에 의해 결정 시 단독 배지 및/또는 단독요법과 비교하여 통계적으로 유의한 수준의 세포 사멸을 유도하는 길항제가 세포 사멸-유도 항체, 결합 폴리펩티드 또는 결합 소분자로서 선택될 수 있다.

임의의 스크리닝 및/또는 확인 방법의 일부 실시양태에서, FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)의 후보 길항제는 항체, 결합 폴리펩티드, 결합 소분자 또는 폴리뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)의 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, FGFR (예를 들어, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및/또는 FGFR4) 및/또는 FGF (예를 들어, FGF1-23)의 길항제는 소분자이다.

V. 제약 제제

본원에 기재된 바와 같은 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제의 제약 제제는 원하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체를 하나 이상의 임의의 제약상 허용되는 담체 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합하여 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조된다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제는 결합 소분자, 항체, 결합 폴리펩티드 및/또는 폴리뉴클레오티드이다. 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 이는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 간질성 약물 분산액 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 추가로 포함한다. rHuPH20을 비롯한, 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.

예시적인 동결건조 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.

또한, 본원의 제제는 치료할 특정한 적응증에 필요한 하나 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.

활성 성분은 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에서 또는 마크로에멀젼에서 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이러한 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.

생체내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균된다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.

VI. 제조품

본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조품이 제공된다. 제조품은 용기, 및 용기 상에 있거나 용기와 회합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리, 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 조성물 자체를 수용하거나 또는 상기 조성물을 상태의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 또 다른 조성물과 조합하여 수용하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 내 적어도 하나의 활성제는 본원에 기재된 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제이다. 라벨 또는 포장 삽입물은 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 또한, 제조품은 (a) FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제1 용기; 및 (b) 추가의 세포독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 제조품은 용기, 상기 용기 상의 라벨, 및 상기 용기 내에 함유된 조성물을 포함하며; 여기서 조성물은 하나 이상의 시약 (예를 들어, 하나 이상의 바이오마커에 결합하는 일차 항체 또는 본원에 기재된 바이오마커 중 하나 이상에 대한 프로브 및/또는 프라이머), 조성물이 샘플에서 하나 이상의 바이오마커의 존재를 평가하는데 사용될 수 있음을 나타내는 용기 상의 라벨, 및 샘플에서 하나 이상의 바이오마커의 존재를 평가하기 위해 시약을 사용하기 위한 지침서를 포함한다. 제조품은 샘플의 제조 및 시약의 활용에 대한 지침서 및 물질의 세트를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제조품은 시약, 예컨대 일차 및 이차 항체 둘 다를 포함할 수 있으며, 여기서 이차 항체는 표지, 예를 들어 효소 표지에 접합된다. 일부 실시양태에서, 제조품은 본원에 기재된 바이오마커 중 하나 이상에 대한 하나 이상의 프로브 및/또는 프라이머를 포함한다.

임의의 제조품의 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제는 항체, 결합 폴리펩티드, 결합 소분자 또는 폴리뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제는 소분자이다. 일부 실시양태에서, FGFR 신호전달의 길항제 및/또는 EGFR 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간, 인간화 또는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체 단편이고, 항체 단편은 FGFR 신호전달 및/또는 억제제에 결합한다.

본 발명의 이러한 실시양태에서의 제조품은, 조성물이 특정한 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 제조품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 비롯한, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

제조품 중 다른 임의의 성분은 하나 이상의 완충제 (예를 들어, 차단 완충제, 세척 완충제, 기질 완충제 등), 다른 시약, 예컨대 효소 표지에 의해 화학적으로 변경되는 기질 (예를 들어, 발색체), 에피토프 복구 용액, 대조 샘플 (양성 및/또는 음성 대조군), 대조 슬라이드(들) 등을 포함한다.

임의의 상기 제조품이 FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 대신에 또는 이에 더하여 본원에 기재된 면역접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.

실시예

다음은 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기 제공된 일반적 설명에 따라 다양한 다른 실시양태가 실시될 수 있는 것으로 이해된다.

실시예 1

EMT 표현형 및 내성에 대한 자가분비 FGF-FGFR 신호전달에의 의존성과 연관된, 에를로티닙에 대한 내성 획득의 두가지 모델을 확인하였다. 에를로티닙-내성 세포 집단에서의 FGFR 경로 활성화에 대한 증거는 FGF2, FGFR1 및 포스포-FRS2의 증가를 포함하였다. 소분자 키나제 억제제 또는 FGFR1 리간드의 FGFR1-Fc 중화를 사용하는 FGFR 신호전달의 억제는 에를로티닙에 대한 내성 세포를 재감작시켰다. 재감작은 하류 신호전달의 억제를 동반하였다. 대조적으로, 일부 전임상 모델에서 에를로티닙 내성의 EMT-연관 조종자로서 최근에 확인된 키나제인 AXL의 억제는 에를로티닙-내성 세포를 재감작시키지 못하였다. 이러한 발견은 자가분비 FGFR 경로 활성화와 일치하였으며, 외인성 리간드 공급원의 부재 하에서의 FGF 리간드 중화는 에를로티닙에 대해 세포를 재감작시킬 수 있다. 최종적으로, FGFR 경로 억제는 감수성 모 세포에서 에를로티닙에 대한 내성의 발생을 억제하였다. 이들 데이터는 FGFR 활성화가 EMT와 연관된 경우에 에를로티닙에 대한 내성 획득의 메카니즘으로서의 역할을 하고 EGFR 및 FGFR 신호전달의 조합된 억제가 이러한 경우를 처리하는데 유익할 수 있다는 것을 나타냈다.

물질 및 방법

세포 배양

모든 세포를 37℃에서 5% CO₂ 하에 5% 태아 소 혈청 (FBS) 및 L-글루타민으로 보충된 RPMI 배지 (높은 글루코스)에서 유지하였다.

세포 생존율 검정

10³개의 세포를 384-웰 플레이트의 각 웰에 플레이팅하였다. 플레이팅 24시간 후에, 나타낸 농도의 약물을 각 웰에 첨가하였다. 투약 72시간 후에, 셀타이터-글로(CellTiter-Glo) 시약 (셀타이터 글로 발광 세포 생존율 검정, 프로메가)을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 엔비전(EnVision) 2101 다중표지 판독기 (퍼킨엘머(PerkinElmer))에 의해 발광을 기록하였다.

아넥신 V 검정

5x10⁴개의 세포를 10cm² 플레이트에 플레이팅하였다. 플레이팅 24시간 후에, 배지를 제거하고, 72시간 동안 나타낸 농도의 약물을 함유하는 배지로 대체하였다. 세포를 수거하고, 아넥신 V 및 PI (FITC 아넥신 V 아폽토시스 검출 키트, BD 바이오사이언시스(BD Biosciences))로 염색하였다. 세포를 FACS칼리버(FACScalibur) (BD 바이오사이언시스)에 의해 분석하였다.

스크래치 상처 검정

에센 이미지 록(Essen Image Lock) 플레이트를 20 ug/ml 콜라겐 I로 실온에서 30분 동안 코팅하고, 콜라겐 I을 제거하고, 포스페이트 완충 염수 (PBS)로 세척하였다. 6x10⁴개의 세포를 각 웰에 플레이팅하였다. 플레이팅 24시간 후에, 96-웰 운드메이커(WoundMaker) (에센 바이오사이언스(ESSEN Bioscience))를 사용하여 웰을 스크래칭하였다. 상처낸 후에, 각 웰로부터 배지를 흡인하고, 각 웰을 PBS로 2회 세척하였다. 세척 후에, 배지를 첨가하고, 플레이트를 인큐사이트 (인큐사이트 FLR, 에센 바이오사이언스) 내부에 두었다. 상처 영상을 48시간 동안 2시간 간격으로 취하였다. 데이터를 상대적 상처 밀도에 의해 분석하였다.

세포 침습 검정

0.1% BSA RPMI1640 배지 중 1.25x10⁴개의 세포를 BD 인서트 힛츠(Insert Hts) 96W 플레이트 8UM의 상부 웰에 플레이팅하였다. 나타낸 조건 배지 200 μl를 하부 웰에 첨가하였다. 플레이팅 16시간 후에, 상부 및 하부 웰로부터 배지를 제거하였다. 하부 웰 중 세포를 냉 메탄올로 4℃에서 30분 동안 고정시켰다. 메탄올을 흡인하고, 플레이트를 실온에서 건조시키고, 이어서 YO-PRO (라이프 테크놀로지스(Life technologies))로 10분 동안 염색하였다. PBS로 2회 세척하였다. 형광 정량화를 스펙트라맥스(SpecTraMax) M5 (몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices))를 사용하여 485/538nm에서 수행하였다.

클론원성 검정

10⁵개의 세포를 10cm² 플레이트에 플레이팅하였다. 플레이팅 24시간 후에, 배지를 제거하고, 나타낸 약물을 함유하는 배지로 대체하였다. 세포가 전면생장 (4주)에 또는 배양 중단을 위한 6주에 도달할 때까지 3 내지 4일마다 신선한 배지로 대체하였다. 배지를 제거하고, 세포를 PBS로 세척하고, 이어서 실온에서 20분 동안 0.5% 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다. 염료를 제거하고, 세포 단층을 물로 세척하고, 플레이트를 건조시키고, 기록으로서 사진을 찍었다.

에를로티닙 내성 세포주의 생성

약물-감수성 세포 (HCC4006 및 HCC827)를 2개월 동안 2uM 에를로티닙으로 처리하였다. 2uM 에를로티닙을 함유하는 신선한 배지로 3 내지 4 일마다 대체하였다. 에를로티닙-내성 세포로서 생존 세포를 수집하였다.

결과

도 1a-c에 제시된 바와 같이, HCC4006-ER 세포는 에를로티닙에 대한 내성이 있었다. HCC4006-ER 세포는 에를로티닙에 대한 내성이 있을 뿐만 아니라, 도 2a-d에 제시된 바와 같이 EMT의 특징을 나타냈다. HCC4006은 상피-연관 단백질, 예컨대 E-카드헤린을 발현한 반면, HCC4006 에를로티닙-내성 세포는 중간엽-연관 단백질인 비멘틴을 발현하였다. 추가로, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포의 이동률을 스크래치 상처 검정으로 측정하였고, HCC4006 및 HCC4006-ER 세포의 상처 폐쇄, 세포 침습 및 세포 생존율을 측정하였다. HCC4006 세포와 HCC4006-ER 세포 사이의 세포 침습 능력에 현저한 차이가 존재한 반면, 모 세포와 에를로티닙 내성 세포 사이의 전체 생존률에 유의한 차이가 존재하지 않았다. 도 3a-c에 제시된 바와 같이 AXL 키나제 억제제 (R428) 및 siRNA-매개 녹다운의 사용에 의해서는, AXL 억제가 HCC4006-ER 세포에서 에를로티닙에 대한 내성을 극복할 수 없었다.

도 4에 제시된 바와 같이, HCC4006 및 HC4006-ER 세포 분석에서, FGFR1 및 특이적 FGF 리간드는 마이크로어레이 프로파일링을 기준으로 하여 HCC4006-ER 세포에서 유의하게 상승하였고, 이는 qRT-PCR 및 ELISA에 의해 확인되었다. 소분자 억제제의 패널을 에를로티닙의 존재 또는 부재 하에 HCC4006-ER 세포에서 스크리닝하였고, 이는 FGFR 억제제인 PD173074가 에를로티닙에 대한 내성을 역전시킬 수 있다는 것을 밝혔다. 도 8을 참조한다. 소분자 억제제 PD173074 또는 재조합 가용성 FGFR-Fc에 의한 리간드-의존성 FGFR 신호전달의 특이적 억제는 도 5a-c에 제시된 바와 같이 HCC4006-ER 세포에서 에를로티닙에 대한 내성을 극복하였다. 또한, PD173074에 의한 FGFR 억제는 HCC4006 세포에서 에를로티닙에 대한 내성의 발생을 억제할 수 있다. 도 6을 참조한다. 일치하게, 도 7에 제시된 바와 같이 PD173074 또는 재조합 가용성 FGFR-Fc를 사용한, AXL이 아닌 FGFR 억제는 EMT와 연관된 또 다른 에를로티닙-내성 모델인 HCC827-ER을 EGFR 억제의 생존율 효과에 대해 부분적으로 재감작시켰다.

상기 발명은 이해를 명확하게 하고자 하는 목적으로 예시 및 실시예로서 어느 정도 상세하게 기재되었지만, 상기 설명 및 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그의 전문이 명백하게 참조로 포함된다.

Claims (21)

1. 개체에게 (a) FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양이 EGFR 길항제에 대한 암 감수성의 기간을 증가시키고/거나 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키는데 유효한 것인 방법.
3. 제1항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제 및 EGFR 길항제 각각의 양이 EGFR 길항제에 대한 암 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는데 유효한 것인 방법.
4. 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 사용한 치료에 대해 내성이 있는 암 세포를 치료하는 방법.
5. 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암을 치료하는 방법.
6. 개체에게 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 유효량의 EGFR 길항제를 투여하는 것을 포함하는, EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키고/거나 감수성을 복원시키는 방법.
7. 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제를 포함하는 암 치료의 효능을 증가시키는 방법.
8. 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 EGFR 길항제 내성 암의 발생을 지연시키고/거나 예방하는 방법.
9. EGFR 길항제에 대한 내성이 발생할 가능성이 증가된, 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체를 치료하는 방법.
10. 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 감수성을 증가시키는 방법.
11. 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제 감수성의 기간을 연장시키는 방법.
12. 암을 가진 개체에게 (a) 유효량의 FGFR 신호전달의 길항제 및 (b) 유효량의 EGFR 길항제를 병용 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 EGFR 길항제에 대한 반응의 지속기간을 연장시키는 방법.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC))인 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 상피-중간엽 전이를 겪은 것인 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제가 항체 억제제, 소분자 억제제, 결합 폴리펩티드 억제제 및/또는 폴리뉴클레오티드 길항제인 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제가 FGFR1 신호전달의 길항제인 방법.
17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR1 신호전달의 길항제가 FGFR1b, FGFR1c, FGF1, FGF2, FGF3, FGF4, FGF5, FGF6 및 FGF10 중 하나 이상에 결합하는 것인 방법.
18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제가 결합 폴리펩티드 억제제이고, 결합 폴리펩티드 억제제가 Fc에 연결된 FGFR의 세포외 도메인의 영역을 포함하는 것인 방법.
19. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 신호전달의 길항제가 소분자이고, 소분자가 N-[2-[[4-(디에틸아미노)부틸]아미노]-6-(3,5-디메톡시페닐)피리도[2,3-d]피리미딘-7-일]-N'-(1,1-디메틸에틸)-우레아 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 길항제가 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR 길항제가 N-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일프로폭시)퀴나졸린-4-아민 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.

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