CN107922507B

CN107922507B - 抗pcsk9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者

Info

Publication number: CN107922507B
Application number: CN201680047969.1A
Authority: CN
Inventors: R·C·波尔蒂; G·曼韦连恩
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2015-08-18
Filing date: 2016-08-17
Publication date: 2022-04-05
Anticipated expiration: 2036-08-17
Also published as: AU2016308111A1; US10772956B2; US20170049886A1; JP2022000443A; EP3337828A1; AU2023200378A1; US20210100900A1; MX2018002000A; ZA201800498B; CA2995645A1; MX2022010357A; KR20180034672A; JP2024016218A; IL257425A; US11904017B2; JP2018523684A; CN107922507A; WO2017031151A1; MA42657A; HK1255470A1

Abstract

本发明提供了用于降低或消除患者对脂蛋白单采疗法的需求的方法。本发明的方法包括向患者施用包含PCSK9抑制剂的药物组合物。在某些实施方案中，PCSK9抑制剂是抗PCSK9抗体。本发明的方法可用于治疗目前正在用包含脂蛋白单采(例如，LDL单采或Lp(a)单采)的治疗方案治疗的高脂血症和相关疾病的患者。

Description

抗PCSK9抑制性抗体用来治疗接受脂蛋白单采的高脂血症患者

技术领域

本发明涉及与脂质和脂蛋白水平升高有关的疾病和病症的治疗性治疗领域。更具体而言，本发明涉及PCSK9抑制剂用于治疗目前在用包含脂蛋白单采(lipoproteinapheresis，例如，LDL单采或Lp(a)单采)的治疗方案治疗的高脂血症和相关疾病的患者的用途。

背景

高脂血症是涵盖以血液中脂质和/或脂蛋白水平升高为特征或与之关联的疾病和病症的总称。高脂血症包括高胆固醇血症、高甘油三酯血症、合并高脂血症和升高的脂蛋白a(Lp(a))。高胆固醇血症是许多群体中一种特别常见的高脂血症。

高胆固醇血症，特别是低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(LDL-C)水平的增加，构成了发展动脉粥样硬化和冠心病(CHD)的主要风险(Sharrett等人，2001，Circulation 104：1108-1113)。低密度脂蛋白胆固醇被鉴定为降胆固醇治疗的主要目标，并被接受为有效的取代治疗终点。大量的研究已表明降低LDL-C水平就降低了CHD的风险，LDL-C水平与CHD事件之间存在强烈的直接关系；对于LDL-C中每降低1mmol/L(～40mg/dL)，心血管疾病(CVD)死亡率和发病率降低22％。LDL-C降低越大，造成事件发生率越低，并且强化治疗与标准化他汀治疗的比较数据表明LDL-C水平越低，心血管疾病(CV)风险极高的患者受益越大。

家族性高胆固醇血症(FH)是脂质代谢的遗传性疾病，其使人倾向于过早的严重心血管疾病(CVD)。编码参与低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(LDL-C)肝清除的蛋白质的至少3种不同基因的缺陷可引起FH。这样的缺陷的实例包括编码LDL受体(LDLR)(其从循环中去除LDL-C)的基因的突变，以及作为LDL颗粒的主要蛋白质的载脂蛋白(Apo)B的基因中的突变。在FH的某些情况下，编码前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)(一种参与降解LDLR(功能突变获得)的酶)的基因突变。在所有情况下，FH的特征在于从出生以及腱黄色瘤(xanthomas)、黄瘤(xanthelasmas)、动脉粥样硬化(atheromata)和CVD的后续发展，血浆中的LDL-C积累。取决于个体在相关基因的一个(杂合)或两个(纯合)拷贝中是否具有遗传缺陷，FH可以分为杂合FH(heFH)或纯合FH(hoFH)。

当前的LDL-C降低药物包括他汀类、胆固醇吸收抑制剂、贝特类、烟酸和胆汁酸多价螯合剂(bile acid sequestrants)。他汀类是用于LDL-C降低的常用处方治疗。然而，尽管有这样的降脂治疗可用，许多高危患者未能实现他们的指导目标LDL-C水平(Gitt等人，2010，Clin Res Cardiol 99(11)：723-733)。对于仍然无法实现LDL-C指导目标水平的患者，尽管有可用的脂质调节疗法(lipid-modifying therapy,LMT)，但是有时处理是通过脂蛋白单采(例如LDL单采)来机械去除LDL-C。脂蛋白单采从血液中去除含载脂蛋白B100的脂蛋白。对于进行性心血管疾病和LDL-C持续升高的患者来说，它一般被认为是最后的选择。

然而，LDL单采是对患者来说侵入性且繁重的高昂的操作。一般而言，单采涉及从患者机械移除血液；将血液在体外进行离心、过滤或其他分离步骤以去除不需要的成分，然后再导入回患者。脂蛋白单采使LDL-C浓度急性降低50-75％，这意味着单采术之间LDL-C的时间平均降低约30％。典型的单采过程的特征在于血清脂蛋白浓度的瞬时降低，随着时间推移，脂蛋白水平几乎线性回升至升高的“基线”水平。这种脂蛋白水平的振荡模式是脂蛋白单采疗法的特征，它解释了在个体整个生命周期中需要定期单采疗法。此外，由于在许多地理位置的单采中心稀少，因此许多患者必须旅行相当长的距离才能进行此手术，这一手术进行超过3小时，并且通常每4周给予一次，这取决于患者的LDL-C水平和心血管风险。此外，这个手术可能需要放置用于频繁的血管通路的分流管。低密度脂蛋白单采一般耐受良好，但可能导致低血压、低钙血症、过敏反应和血清蛋白水平急性下降。已经有文献记载，与仅用降脂药物治疗的患者相比，除降脂药物外还接受单采疗法的患者的生活质量(QoL，由问卷确定)较低(Schiel等人，1995，Int J Artif Organs 18：786-793)。因此，尽管接受优化的LMT方案但非LDL-C治疗目标以及需要单采来降低LDL-C的患者，将会从降低或消除单采疗法需求的备选LDL-C降低治疗中获益匪浅。

发明简述

本发明提供了在接受脂蛋白单采疗法的患者中治疗高脂血症的方法。本发明的治疗方法导致血清脂蛋白水平降低，从而起到消除或降低患者对脂蛋白单采的需求。在某些实施方案中，通过应用本发明的治疗方法来降低患者为实现靶标脂蛋白水平(例如，目标LDL-C水平)所需的单采疗法的频率。在某些实施方案中，通过应用本发明的治疗方法消除了患者为实现靶标脂蛋白水平(例如，目标LDL-C水平)对单采的需求。

根据一个方面，本发明的方法包括向正在或已经(例如，在最后六个月内)用脂蛋白单采疗法的患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂，其中向患者施用PCSK9抑制剂导致患者血清中至少一种脂蛋白水平的降低，并因此降低或消除患者对脂蛋白单采疗法的需求。

根据另一个方面，本发明的方法包括选择正在或已经以初始(治疗前)频率用脂蛋白单采疗法的高胆固醇血症患者，并且施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂从而降低患者血清中至少一种脂蛋白的水平，并因此降低患者为实现靶标脂蛋白水平所需的脂蛋白单采的频率。

通过本发明的方法治疗或可治疗的患者包括例如高胆固醇血症患者，包括患有家族性高胆固醇血症(FH)的患者。在某些实施方案中，通过本发明的方法治疗或可治疗的患者是被诊断患有(或者已知患有)纯合FH(hoFH)或杂合FH(heFH)的患者。

根据本发明的某些实施方案，将PCSK9抑制剂作为患者现有降脂疗法的附加疗法(例如，在患者的背景他汀治疗之上)施用于患者。

本发明还提供了包含PCSK9抑制剂的药物组合物，用于降低或消除对脂蛋白单采疗法的需求，或用于降低患者的脂蛋白单采疗法频率。

可用于本发明方法的情境下的示例性PCSK9抑制剂包括例如抗PCSK9抗体、小分子PCSK9抑制剂和基于支架的PCSK9结合分子。

通过阅读随后的详细说明，本发明的其它实施方案将变得显而易见。

附图简述

图1是图示本文实施例2中描述的研究的总体设计的图。该研究包括2周的筛选期，18周的双盲治疗期和任选的8周的随访/开放式延长期。

图2是示出在安慰剂和阿利库单抗(alirocumab)治疗的患者组(ITT群体)中，个体患者从第7周至第18周的单采治疗率降低的瀑布图。只有跳过每个即时检测LDL-C值的单采治疗被视为“未出现单采”。(因任何理由)缺乏从第7周至第18周的单采治疗信息被归于在随访中“发生”的单采治疗的结果。

图3示出安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中从第7周至第18周的标准化单采比率。单采比率是沿着x轴示出的；y轴示出表现相应的单采比率范围的患者的百分比。

图4示出在研究的第7周至第18周的不同时间点在安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中接受单采的患者的百分比。本图中示出的患者是在研究开始时接受每周单采(QW)的患者。

图5示出在研究的第7周至第18周的不同时间点在安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中接受单采的患者的百分比。本图中示出的患者是在研究开始时接受每隔一周单采(Q2W)的患者。

图6示出在研究的第7周至第18周的不同时间点在安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中接受单采的患者的百分比。本图中示出的患者代表参与研究的所有患者。

图7示出在整个研究过程的不同时间点在安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中从基线计算的LDL-C百分比变化。标记为“单采变化”的黑色箭头指示基于LDL-C水平确定个体患者的前方单采频率的时间点。在这个时间点之前，患者根据该个体患者的确定时间表以固定的频率接受单采。

图8示出在整个研究过程的不同时间点在安慰剂和阿利库单抗治疗的患者组中计算的LDL-C水平(以LS-平均值[+/-SE]mg/dL表示)。标记为“单采变化”的黑色箭头指示基于LDL-C水平确定个体患者的前方单采频率的时间点。在这个时间点之前，患者根据该个体患者的确定时间表以固定的频率接受单采。

详细说明

在描述本发明之前先要指出，应该理解，本发明并不限于所述的具体方法和实验条件，因为这些方法和条件是可以改变的。还应理解，本文所用的术语仅出于描述具体实施方案的目的，并非意在限制本发明，因为本发明之范围仅受所附权利要求书的限制。

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语的含义均将与本发明所属技术领域的普通专业人员通常理解的相同。本文中所用的术语“大约”，当用于列出的某一具体数值时，意为该数值可在与所列数值相差不超过1％的范围内变化。例如，本文中所用的表达“约100”包括99和101以及这两者之间所有数值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。

尽管与本文所述的方法和材料类似或相当的任何方法和材料都可用于本发明之实施，但现在说明的是首选的方法和材料。本文所提及的所有出版物均通过引用而以其整体纳入本文。

用于降低或消除对脂蛋白单采的需求的方法

本发明总体上涉及用于降低正在经受或(例如，在最后六个月或更多时间内)已经接受脂蛋白单采以降低血清脂蛋白水平(例如，LDL-C和/或Lp(a))的患者中的脂蛋白水平的方法和组合物。根据某些实施方案，本发明的方法导致这些患者的血清中的脂蛋白水平降低，从而降低或消除对脂蛋白单采的需求。

如本文所用，术语“脂蛋白”意指含有蛋白质和脂质的生物分子颗粒。脂蛋白的实例包括例如低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)和脂蛋白(a)(Lp(a))。

如在本发明的情境中所使用的，“脂蛋白单采”意指涉及从患者机械移除血液，随后通过诸如过滤、吸附、沉淀等过程从患者的血液中除去脂蛋白(例如，LDL-C和/或Lp(a))并且最终将处理过的血液重新导入回患者的血流中的治疗过程。为了本公开的目的，“LDL单采”和“Lp(a)单采”被认为是单采的类型，因此被更广义的定义“脂蛋白单采”所涵盖。

包括在本发明情境中的脂蛋白单采的具体类型包括例如双膜过滤、免疫吸附、肝素诱导的LDL沉淀、脂质的直接吸附、硫酸葡聚糖-纤维素吸附(血浆或全血)、肝素体外LDL沉淀(HELP)系统、DFPP和热过滤血浆单采和血液灌流。

根据某些实施方案，本发明包括用于消除对脂蛋白单采疗法的需求的方法。如本文所用，基于在患者的血清中测量或以其他方式检测的一种或多种脂蛋白(例如，LDL-C和/或Lp(a))的水平，由医生、医生的助手、诊断人员或其他医学专业人员确定特定患者“需要脂蛋白单采疗法”。“需要脂蛋白单采”的患者还可以由其他因素决定或影响，例如患者的家族史、医学背景、目前的治疗状态、以及国家医学协会和医师团体普遍接受的或普遍存在的脂蛋白目标。例如，在某些情境下，大于或等于约70mg/dL的LDL-C水平指示患者“需要脂蛋白单采疗法”。在其他情境下，大于或等于约100mg/dL的LDL-C水平指示患者“需要脂蛋白单采疗法”。在某些情境下，大于或等于约150mg/dL、200mg/dL、250mg/dL、300mg/dL、400mg/dL或更高的LDL-C水平指示患者“需要脂蛋白单采疗法”。又在其他情境下，相对于患者在特定起始点(“基线”)的LDL-C或Lp(a)水平是否满足LDL-C或Lp(a)水平的特定百分比降低可以用于确定患者是否“需要脂蛋白单采”。例如，低于基线的LDL-C或Lp(a)的降低小于50％(例如，小于40％、小于35％、小于30％、小于25％等)可以表示“需要脂蛋白单采”。

根据某些实施方案，本发明包括用于降低患者中脂蛋白单采疗法频率的方法。如本领域普通技术人员将理解的，可以用特定频率的脂蛋白单采治疗患者，以实现特定的脂蛋白目标(例如，低于100mg/dL的LDL-C水平，低于70mg/dL的LDL-C水平等)。规定的频率是基于患者在特定时间段(例如，每周，每月等)期间为实现并维持患者的脂蛋白目标所需的单采治疗的次数来确定的。示例性的脂蛋白单采频率包括例如每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每月一次、每月两次、每两月一次等。本发明包括通过向患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂来降低患者中脂蛋白单采疗法频率的方法。根据本发明的某些实施方案，施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后，单采的频率比患者的治疗前单采频率降低至少50％。例如，如果在用PCSK9抑制剂治疗之前，患者以每周一次的频率(QW)进行脂蛋白单采治疗方案，并且在用PCSK9抑制剂治疗之后，患者的单采频率减少到每2周一次(Q2W)，那么认为患者在治疗后实现了脂蛋白单采频率降低50％。在某些实施方案中，在施用一个或多个剂量的本发明的PCSK9抑制剂后，单采频率降低75％或100％(即治疗后消除了对脂蛋白单采的需求)。

在本发明的情境中，脂蛋白单采频率可以根据治疗前频率和治疗后频率来表示。“治疗前频率”意指在包含施用PCSK9抑制剂的治疗方案开始之前患者为实现和/或维持特定的靶脂蛋白水平所需的单采疗法的频率。“治疗后频率”意指在包含施用PCSK9抑制剂的治疗方案开始之后患者为实现和/或维持特定的靶脂蛋白水平所需的单采疗法的频率。实现和/或维持特定患者的特定靶脂蛋白水平所需的单采疗法的频率优选由合格的医学专业人员基于本领域普遍接受的标准来确定，包括寻求降低或以其他方式受控的血清脂蛋白水平。

因此，本发明包括治疗方法，其包括向患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂，由此患者的脂蛋白单采的治疗后频率小于患者的脂蛋白单采的治疗前频率。例如，本发明包括治疗方法，其包括向以例如每周一次的治疗前频率正在进行或已经接受脂蛋白单采疗法的患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂，其中在接受一个或更多剂量的PCSK9抑制剂后，患者实现和/或维持特定靶脂蛋白水平(即，治疗后的频率)所需的脂蛋白单采的频率是例如每两周一次、每三周一次、每四周一次、或更不频繁。在一些情况下，在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后，患者实现和/或维持特定的靶脂蛋白水平所需的脂蛋白单采被完全消除。

根据某些实施方案，本发明包括用于降低或消除对脂蛋白单采疗法的需求的方法，其中所述方法包括选择已经在过去1个月、过去2个月、过去3个月、过去4个月、过去5个月、过去6个月或更长时期内用脂蛋白单采疗法治疗过的高脂血症(例如，高胆固醇血症)的患者，并向该患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂。根据本发明的这个方面的方法导致降低患者血清中至少一种脂蛋白的水平，并因此允许降低或消除患者对脂蛋白单采疗法的需求。例如，在本发明的某些实施方案中，在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂之后，

患者的血清LDL-C水平降低至小于限定水平(例如，小于100mg/dL或小于70mg/dL)，使得患者实现和/或维持特定靶脂蛋白水平所需的脂蛋白单采疗法的后处理频率降低，或者得出不再需要脂蛋白单采的结论。

在某些实施方案中，单采的比率(或频率)表示为患者实现和/或维持特定靶标脂蛋白水平所需的单采的归一化比率。如本文中所使用的，对于特定患者的单采的归一化比率被定义为患者在开始抗PCSK9治疗方案之后的限定的时间段中接受的实际单采疗法的数目除以患者在开始抗PCSK9治疗方案之前的相等时间段中接受单采疗法的数目。例如，如果在开始包含施用抗PCSK9抗体的治疗方案之前，患者在8周时间接受8次(例如，每周一次)单采治疗，并且在开始抗PCSK9治疗方案之后，患者在8周的时间内接受2次(例如，每四周一次)单采治疗，那么患者的单采归一化比率为2/8＝0.25。本发明包括这样的方法，通过该方法，施用PCSK9抑制剂后患者的单采归一化比率是例如小于0.9、小于0.8、小于0.7、小于0.6、小于0.5、小于0.4、小于0.3、小于0.2或小于0.1。

根据某些实施方案，可通过本发明的方法治疗的患者具有高胆固醇血症(例如血清LDL-C浓度大于或等于70mg/dL，或血清LDL-C浓度大于或等于100mg/dL)。在某些实施方案中，患者的高胆固醇血症通过他汀类药物治疗得到的控制不足。例如，本发明包括降低或消除具有高胆固醇血症的患者的脂蛋白单采疗法频率的方法，日常剂量的选自阿托伐他汀(包括阿托伐他汀+依折麦布)、罗苏伐他汀、伐伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀(包括辛伐他汀+依折麦布)、普伐他汀及其组合对所述高胆固醇血症的控制不足。本发明还包括用于降低或消除具有高胆固醇血症且表现出他汀不耐受或会对他汀类药物治疗产生不利或不良反应(例如骨骼肌肉痛、疼痛、无力或抽筋[如肌痛、肌病、横纹肌溶解等])的患者。

治疗脂质损伤的方法

本发明进一步涉及用于治疗、逆转或解决高胆固醇血症的物理表现的方法和组合物。根据某些实施方案，本发明提供了用于治疗患有与高胆固醇血症相关的脂质损伤的患者的方法。例如，本发明提供了治疗患有一种或多种黄瘤的患者的方法。根据本发明该方面的方法和组合物包括向有需要的患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂，其中在用PCSK9抑制剂治疗之前存在于患者体内的脂质损伤在向患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后被减少、解决或消除。根据某些实施方案，本发明包括用于治疗患有与高胆固醇血症相关的脂质损伤的患者的方法，其中所述方法包括选择患有脂质损伤(例如黄瘤)的患者，并且向患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂。

患者选择

本发明包括用于治疗正在经受或最近经受(例如，在过去六个月内，在过去12周内，在过去8周内，在过去6周内，在过去4周内，在过去2周内等)脂蛋白单采的患者的方法和组合物。可通过本发明的方法治疗的患者还可以表现一种或多种其他选择标准。例如，如果患者被诊断患有或被鉴定为处于发展高胆固醇血症病状的风险中，例如杂合家族性高胆固醇血症(heFH)、纯合家族性高胆固醇血症(hoFH)、常染色体显性高胆固醇血症(ADH，例如，与PCSK9基因中一个或多个功能获得性突变相关的ADH)、常染色体隐性高胆固醇血症(ARH，例如与LDLRAP1中的突变相关的ARH)、以及与家族性高胆固醇血症不同的高胆固醇血症的情况(nonFH)，那么可将该患者选择用于本发明的方法进行治疗。家族性高胆固醇血症(例如heFH或hoFH)的诊断可以通过基因分型和/或临床标准来进行。对于没有进行基因分型的患者，临床诊断可以基于Simon Broome标准(具有确定的FH标准)或WHO/荷兰血脂网络标准(评分>8分)。

根据某些实施方案，可基于患有冠心病(CHD)的病史来选择患者。如本文所用，“CHD病史”(或“有记录的CHD病史”)包括以下一项或多项：(i)急性心肌梗塞(MI)；(ii)无症状MI；(iii)不稳定型心绞痛；(iv)冠状动脉再血管化手术(例如经皮冠状动脉介入治疗[PCI]或冠状动脉旁路移植术[CABG])；和/或(v)通过侵入性或非侵入性测试(例如冠状动脉造影，使用跑步机的压力测试，负荷超声心动图或核成像)诊断的临床上显著的CHD。

根据某些实施方案，可基于患有非冠心病心血管疾病(“非CHD CVD”)来选择患者。如本文所用，“非CHD CVD”包括以下一项或多项：(i)记录的先前缺血性中风，其具有持续超过24小时的局部缺血性神经缺陷，被认为是动脉粥样血栓形成起源；(ii)外周动脉疾病；(iii)腹主动脉瘤；(iv)动脉粥样硬化性肾动脉狭窄；和/或(v)颈动脉疾病(短暂性缺血性发作或>50％颈动脉阻塞)。

根据某些实施方案，可以基于具有一种或多种额外的风险因素来选择患者，例如(i)如在3个月或更多由30≤eGFR<60mL/min/1.73m2所定义的记录的中度慢性肾病(CKD)；(ii)伴有或不伴有靶器官损伤(例如，视网膜病、肾病、微量白蛋白尿)的1型或2型糖尿病；(iii)计算出的10年致死性CVD风险SCORE≥5％(ESC/EAS血脂异常管理指南，Conroy等人，2003，Eur.Heart J.24：987-1003)。

根据某些实施方式，可以基于具有选自以下的一个或多个额外的风险因素来选择患者：年龄(例如，大于40岁、45岁、50岁、55岁、60岁、65岁、70岁、75岁或80岁)、种族、国籍、性别(男性或女性)、锻炼习惯(例如，常规锻炼者、非锻炼者)，其他预先存在的医学病状(例如，II型糖尿病、高血压等))和目前的药物状态(例如，目前服用β受体阻滞剂、烟酸、依折麦布、贝特类、ω-3脂肪酸、胆汁酸树脂等)。

根据本发明，可以基于前述选择标准或治疗特征中的一个或多个的组合来选择患者。例如，根据某些实施方案，除了正在经受或已经经受(例如在过去六个月内)脂蛋白单采之外，还适合用本发明方法治疗的患者可以进一步基于具有heFH或非FH组合：(i)记录的CHD病史，(ii)非-CHD CVD，和/或(iii)有靶器官损伤的糖尿病来选择；这样的患者也可以基于具有血清LDL-C浓度大于或等于70mg/dL来选择。

根据某些其他实施方案，除了患有日常中等剂量的治疗他汀方案控制不足的高胆固醇血症之外，还适合用本发明的方法治疗的患者可以基于具有heFH或非FH，而没有CHD，或非-CHD CVD，但具有(i)计算的10年致死性CVD风险评分≥5％；或是(ii)没有靶器官损伤的糖尿病来选择；这样的患者也可以基于血清LDL-C浓度大于或等于100mg/dL来选择。

作为附加疗法施用PCSK9抑制剂

本发明包括治疗方法，其中根据特定给药量和频率向正经受或最近接受脂蛋白单采的患者施用PCSK9抑制剂，并且其中所述PCSK9抑制剂作为对患者预先存在的降脂疗法的附加法施用(如果适用的话)，例如患者预先存在的每日治疗他汀方案的附加法。

例如，本发明的方法包括附加治疗方案，其中PCSK9抑制剂作为对患者在接受PCSK9抑制剂之前接受的相同稳定的日常治疗他汀方案(即相同剂量的他汀类药物)的附加法施用。在其它实施方案中，PCSK9抑制剂作为包含他汀类的治疗性他汀类药物疗法的附加法施用，其量大于或小于患者在接受PCSK9抑制剂之前所接受的他汀类的剂量。例如，在开始包含以特定给药频率和量施用的PCSK9抑制剂的治疗方案后，与患者在开始PCSK9抑制剂治疗方案之前服用的每日他汀剂量相比，施用于患者或为患者开具的他汀类的日剂量可以(a)保持相同，(b)增加，或(c)减少(例如，上滴定或下滴定)，这取决于患者的治疗需求。

治疗功效

本发明的方法导致血清水平的一种或多种选自LDL-C、ApoB100、非HDL-C、总胆固醇、VLDL-C、甘油三酯、Lp(a)和残留胆固醇的脂质组分的降低。因此，本发明的治疗方案的降低脂蛋白效果导致为实现患者的靶标脂蛋白水平对脂蛋白单采的减少的频率或消除该需求。例如，根据本发明的某些实施方案，向正经受或最近经脂蛋白单采的患者施用包含PCSK9抑制剂的药物组合物将导致血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)相对于基线的平均百分比降低至少约25％、30％、40％、50％、60％或更多；ApoB100相对于基线的平均百分比降低至少约25％、30％、40％、50％、60％或更多；非HDL-C相对于基线的平均百分比降低至少约25％、30％、40％、50％、60％或更多；总胆固醇相对于基线的平均百分比降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％或更多；VLDL-C相对于基线的平均百分比降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％或更多；甘油三酯相对于基线的平均百分比降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或更多；和/或Lp(a)相对于基线的平均百分比降低至少约5％、10％、15％、20％、25％或更多。

本发明包括用于治疗高胆固醇血症患者的方法，所述方法包括以约75至150mg/剂量的给药量以及约每两周一次的给药频率(或根据本文其他地方描述的递增滴定给药方案的给药方案)向患者施用多剂量的抗PCSK9抗体，其中所述患者正在经受或最近接受脂蛋白单采，并且其中在用抗PCSK9抗体治疗约12、14、16、18、20、22、24或更多周时，患者表现出LDL-C水平从基线降低至少50％，因此导致患者对脂蛋白采血的频率降低或消除该需求。在某些实施方案中，在用抗PCSK9抗体治疗一周或更多周后，患者表现出LDL-C水平从基线降低约55％、60％、70％或更多。

PCSK9抑制剂

本发明之方法包括给患者施用包含PCSK9抑制剂的治疗组合物。本文所用的术语“PCSK9抑制剂”是在体外或体内与人PCSK9结合或与其相互作用并抑制PCSK9的正常生物功能的任何药剂。PCSK9抑制剂类别的非限制性实例包括小分子PCSK9拮抗剂、PCSK9表达或活性的基于核酸的抑制剂(例如siRNA或反义)、与PCSK9特异性相互作用的基于肽的分子(例如肽体)、与PCSK9特异性相互作用的受体分子、包含LDL受体的配体结合部分的蛋白质、PCSK9结合支架分子(例如，DARPins、HEAT重复蛋白质、ARM重复蛋白质、四重三联体重复蛋白质(tetratricopeptide repeat proteins)、基于纤连蛋白的支架构建体和基于天然存在的重复蛋白质的其他支架等[参见例如Boersma和Pluckthun，2011，Curr.Opin.Biotechnol.22：849-857，和其中引用的参考文献])，以及抗PCSK9适体或其部分。根据某些实施方案，可以在本发明的情境中使用的PCSK9抑制剂是特异性结合人PCSK9的抗PCSK9抗体或抗体的抗原结合片段。

本文所用的术语“人类前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型”，或“人PCSK9”或“hPCSK9”，是指含有序列197所示核酸序列和序列198所示氨基酸序列或其生物活性片段的PCSK9。

本文所用的术语“抗体”意指包含四条多肽链，即两条重(H)链和两条轻(L)链，以二硫键相互连接而组成的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链均包含一个重链可变区(本文简称为HCVR或V_H)和一个重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，C_H1、C_H2和C_H3。每条轻链均包含一个轻链可变区(本文中简称为LCVR或V_L)和一个轻链恒定区。该轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。V_H和V_L区可进一步分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布着较保守的被称为构架区(FR)的区域。每个V_H和V_L均由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施方案中，抗PCSK9抗体(或其抗原结合部分)的FR可能与人类种系序列相同，或可能是天然的或经过人工修饰的。氨基酸共有序列可根据两个或两个以上CDR的并排分析而定义。

本文所用的术语“抗体”还包括完整的抗体分子的抗原结合片段。本文所用的抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等术语，包括与一个抗原特异性结合而形成复合体的任何天然产生的、以酶促方式获得的、合成的或基因改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以利用任何适宜的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变结构域或恒定结构域的DNA之操纵和表达的重组基因改造技术，从例如完整的抗体分子产生。这样的DNA是已知的和/或很容易从例如市售来源、DNA库(包括例如噬菌体-抗体库)获得，或可以合成。该DNA可以测序且以化学方法或分子生物学技术加以操纵，例如将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列成一种适宜的构型，或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或删除氨基酸等。

抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)由模拟抗体高变区的氨基酸残基(例如一个孤立的互补决定区CDR，如CDR3肽)或FR3-CDR3-FR4结构约束肽组成的最小识别单位。本文所用的“抗原结合片段”这一术语还包括其它工程改造的分子，如结构域特异性抗体、单域抗体、结构域删除的抗体、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、双体抗体、三体抗体、四体抗体、微型抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块免疫药物(SMIP)，以及鲨鱼可变IgNAR结构域。

抗体的抗原结合片段通常会包含至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何大小或可具有任何氨基酸组成，且通常会包含至少一个邻近于一个或多个构架序列或位于其中的CDR。在具有与V_L结构域缔合的V_H结构域的抗原结合片段中，该V_H结构域和V_L结构域的相对位置可以任何适宜方式排列。例如，该可变结构域可以是二聚化的且含有V_H-V_H、V_H-V_L或V_L-V_L二聚体。备选地，抗体的抗原结合片段可含有单体V_H结构域或V_L结构域。

在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。在本发明之抗体的抗原结合片段内可发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例构型包括：(i)V_H-C_H1；(ii)V_H-C_H2；(iii)V_H-C_H3；(iv)V_H-C_H1-C_H2；(v)V_H-C_H1-C_H2-C_H3；(vi)V_H-C_H2-C_H3；(vii)V_H-C_L；(viii)V_L-C_H1；(ix)V_L-C_H2；(x)V_L-C_H3；(xi)V_L-C_H1-C_H2；(xii)V_L-C_H1-C_H2-C_H3；(xiii)V_L-C_H2-C_H3；以及(xiv)V_L-C_L。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括上述任何示例构型，可变结构域和恒定结构域可直接相互连接或可由一个完全的或部分的铰链区或连接区连接。一个铰链区可由至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或更多的)氨基酸序列组成，其在一个单一肽分子中相邻的可变结构域和/或恒定结构域之间形成一种柔性或半柔性的连接。此外，本发明之抗体的抗原结合片段可包含上述可变结构域和恒定结构域任何构型的同二聚体或异二聚体(或其它多聚体)，该可变结构域和恒定结构域结构以非共价键相互缔合和/或与一个或多个单一的V_H结构域或V_L结构域(例如通过二硫键)缔合。

如同完整的抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性的(例如双特异性的)。一个抗体的多特异性抗原结合片段通常会包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域都能与分别的抗原或与同一抗原的不同表位特异性结合。对于任何多特异性抗体形式，包括本文所公开的示例性双特异性抗体形式，均可用本领域内现有的惯用技术，使其适应于与本发明之抗体的抗原结合片段相关的用途。

抗体的恒定区对于抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力是很重要的。因此，可在是否需要由抗体介导细胞毒性的基础上选择抗体的同种型。

本文所用的术语“人抗体”意在包括含有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体仍可包括非由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机诱变或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变所引入的突变)，例如可在CDR中尤其是在CDR3中包括这样的氨基酸残基。但是，本文所用的术语“人抗体”并不意图包括其中衍生自另一哺乳动物物种如小鼠的CDR序列被嫁接到人构架序列上的抗体。

本文所用的术语“重组人抗体”意在包括所有以重组方法制备、表达、产生或分离的人抗体，例如用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(将在下文进一步说明)，从重组的、组合人抗体库分离的抗体(将在下文进一步说明)，从人类免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)分离的抗体(参阅例如Taylor等人，(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)，或者以任何其他涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的方法所制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人抗体含有衍生自人类种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是，在某些实施方案中，这类重组人抗体经受体外诱变(或当使用含有人类Ig序列的转基因动物时，经受体内体细胞诱变)，从而使得该重组抗体的V_H区和V_L区的氨基酸序列成为这样的序列：它们虽然衍生自人类种系V_H序列和V_L序列并与它们有亲缘关系，但也许并不天然地存在于体内人抗体种系库中。

人抗体可以两种与铰链异质性有关的形式存在。在第一种形式中，一个免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定的四链构建物，其中二聚体由链间重链二硫键缔合在一起。在第二种形式中，该二聚体不是由链间二硫键连接在一起，而是形成了一种由共价偶联的轻链和重链组成的约75-80kDa的分子(半抗体)。这些形式的分离一直极为困难，甚至在亲和纯化之后也是如此。

第二种形式在各种完整IgG同种型中的出现频率是由于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人类IgG4铰链的铰链区内单个氨基酸取代可将第二种形式(Angal等人，(1993)Molecular Immunology 30:105)的出现频率显著地降低到利用人类IgG1铰链通常观察到的水平。本发明包括在铰链区、C_H2区或C_H3区中含有一个或多个突变的抗体；所述突变可能是合乎需要的，例如在生产中用于提高目的抗体形式的产率。

本文所用的”分离的抗体”意为从其自然环境的至少一个组分鉴定并分离和/或回收的抗体。例如，从一个生物体的至少一个组成部分或从抗体籍以自然存在或自然产生的一种组织或细胞分离或移除的抗体，就是一种符合本发明目的之”分离的抗体”。”分离的抗体”也包括重组细胞内的一种原位抗体。分离的抗体是经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。按照某些实施方案，分离抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。

术语“特异性结合”或类似术语意为抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原形成复合体。确定抗体是否与抗原特异性结合的方法是本领域内众所周知的，并包括例如平衡透析、表面等离子体共振等方法。例如，如本发明之背景下所用的与PCSK9“特异性结合”的抗体包括与PCSK9或其一部分结合的抗体，经表面等离子体共振技术测量，其K_D小于约1000nM、小于约500nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM或小于约0.5nM。但是，与人PCSK9特异性结合的分离抗体对于其它抗原，如源自其它(非人类)物种的PCSK9分子，具有交叉反应性。

与衍生该抗体的相应种系序列相比，可用于本发明之方法的抗PCSK9抗体在重链和轻链可变结构域的构架区和/或CDR区可包含一个或多个氨基酸的取代、插入和/或删除。通过将本文所公开的氨基酸序列与从例如公共抗体序列数据库可获得的种系序列相比，可以轻易地确认这类突变。本发明包括涉及使用某些抗体及其抗原结合片段的方法，该抗体及其抗原结合片段衍生自本文所公开的任何氨基酸序列，其中一个或多个构架区和/或CDR区内的一个或多个氨基酸被突变为衍生该抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一个人类种系序列的相应残基，或突变为相应的种系序列残基的保守氨基酸取代(这类序列变化在本文中统称为“种系突变”)。本发明所属技术领域的普通专业人员从本文公开的重链可变区和轻链可变区序列开始，可很容易产生许多包含一个或多个单个种系突变或其组合的抗体及其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述V_H和/或V_L区内的所有构架和/或CDR残基均回复突变为在衍生该抗体的原始种系序列中发现的残基。在其它实施方案中，只有某些残基才回复突变为原始种系序列，例如，只有在FR1的最先8个氨基酸序列或FR4的最后8个氨基酸序列中发现的突变残基，或只有CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变残基，才能回复突变为原始种系序列。在其他实施方案中，一个或多个构架和/或CDR残基突变为不同种系序列(即不同于最初衍生该抗体的种系序列的种系序列)的相应残基。此外，本发明之抗体可在构架区和/或CDR区内含有两个或多个种系突变的任何组合，例如，其中某些单个残基分别突变为一个特定种系序列的相应残基，而某些其他不同于原始种系序列的残基则保持不变或突变为一个不同种系序列的相应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段之后，就很容易测试其一种或多种所需的特性，例如改善的结合特异性、提高的结合亲和力、改善或增强的拮抗或激动的生物学特性(视情况而定)、降低的免疫原性等。以此一般方式所获的抗体和抗原结合片段的使用均包括在本发明之范围内。

本发明还包括一些方法，其涉及使用含有本文所公开的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列之变异体的抗PCSK9抗体，该变异体具有一个或多个保守的氨基酸取代。例如，本发明包括使用具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗PCSK9抗体，相对于本文所公开的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，该氨基酸序列具有例如10个或以下、8个或以下、6个或以下、4个或以下等保守的氨基酸取代。

本文所用的术语“表面等离子体共振”是指一种光学现象，基于该光学现象可利用例如BIAcore^TM系统(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare,Piscataway,NJ)来检测生物感测器基质中蛋白浓度的变化，从而对实时交互作用进行分析。

本文所用的术语“K_D”意指特定的抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。

术语“表位”是指抗原决定位，其与抗体分子可变区中称为抗原互补位(paratope)的一个特异性抗原结合位点相互作用。单个抗原可以有多于一个的表位。因此，不同的抗体可与一个抗原的不同区域结合并可具有不同的生物学效应。表位可为构象性的，也可为线性的。构象性表位是从线性多肽链不同片段上空间并列的氨基酸产生的。线性表位是由多肽链上邻近的氨基酸残基产生的。在某些情况下，一个表位可包括抗原上的糖类、磷酰基、或磺酰基部分。

根据某些实施方案，用于本发明方法的抗PCSK9抗体是具有pH依赖性结合特征的抗体。如本文所用，表述“pH依赖性结合”意指抗体或其抗原结合片段表现出“与中性pH相比在酸性pH下与PCSK9降低的结合”(为了本公开的目的，两种表述可以互换使用)。例如，“具有pH依赖性结合特征的抗体”包括在中性pH下比在酸性pH下以更高亲和力结合PCSK9的抗体及其抗原结合片段。在某些实施方案中，本发明的抗体和抗原结合片段与PCSK9在中性pH下比在酸性pH下以至少3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、100或更多倍更高的亲和力结合。

根据本发明的这个方面，具有pH依赖性结合特征的抗PCSK9抗体相对于亲本抗PCSK9抗体可具有一个或多个氨基酸变异。例如，具有pH依赖性结合特征的抗PCSK9抗体可以含有一个或多个组氨酸取代或插入，例如在亲本抗PCSK9抗体的一个或多个CDR中。因此，根据本发明的某些实施方案，提供了包括施用抗PCSK9抗体的方法，所述抗PCSK9抗体包含与亲本抗PCSK9抗体的CDR氨基酸序列相同的CDR氨基酸序列(例如，重链和轻链CDR)，除了用组氨酸残基取代亲本抗体的一个或多个CDR的一个或多个氨基酸不同之外。具有pH依赖性结合的抗PCSK9抗体可以具有在亲本抗体的单个CDR内或者分布在整个亲本抗PCSK9抗体的多个(例如2、3、4、5或6个)CDR上的例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多个组氨酸取代。例如，本发明包括使用具有pH依赖性结合的抗PCSK9抗体，其包含亲本抗PCSK9抗体的HCDR1中的一个或多个组氨酸取代，HCDR2中的一个或多个组氨酸取代，HCDR3中的一个或多个组氨酸取代，LCDR1中的一个或多个组氨酸取代，LCDR2中的一个或多个组氨酸取代，和/或LCDR3中的一个或多个组氨酸取代。

如本文所用，表述“酸性pH”意指6.0或更低(例如，小于约6.0，小于约5.5，小于约5.0等)的pH。表述“酸性pH”包括约6.0、5.95、5.90、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的pH值。如本文所用，表述“中性pH”意指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。

可用于本发明情境中的抗PCSK9抗体的非限制性实例包括例如阿利库单抗、依伏库单抗(evolocumab)、bococizumab、罗德希珠单抗(Lodelcizumab)、ralpancizumab或任何前述抗体的抗原结合部分。

人抗体的制备

在转基因小鼠体内产生人抗体的方法是本领域内已知的。任何这类已知的方法均可用于本发明的情景中以制造与人PCSK9特异性结合的人抗体。

采用VELOCIMMUNE^TM技术(参阅例如美国第6,596,541号专利，RegeneronPharmaceuticals)或任何其他产生单克隆抗体的已知技术，初步分离出对PCSK9具有高亲和力的含有人类可变区和小鼠恒定区的嵌合抗体。

技术涉及这样一种转基因小鼠的产生：该小鼠的基因组包含与内源小鼠恒定区基因座有效连接的人重链可变区和轻链可变区，使得该小鼠能响应抗原刺激而产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。将编码该抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA分离出来，并与编码人重链恒定区和轻链恒定区的DNA有效连接。然后在能够表达完全人抗体的细胞中表达该DNA。

通常，用目的抗原攻击

小鼠，并从表达抗体的小鼠回收淋巴细胞(如B细胞)。淋巴细胞可与一个骨髓瘤细胞系融合来制备永生杂交瘤细胞系，然后再对这种杂交瘤细胞系进行筛选和选择来鉴定能产生对目的抗原具有特异性之抗体的杂交瘤细胞系。可将编码重链可变区和轻链可变区的DNA分离出来，并与合乎需要的重链和轻链的同种型恒定区连接。这种抗体蛋白可在细胞如CHO细胞中产生。备选地，编码抗原特异性嵌合抗体或轻链可变结构域和重链可变结构域的DNA可直接从抗原特异性淋巴细胞中分离。

首先，分离具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。该抗体是根据所需的特性，包括亲和力、选择性、表位等，使用本领域内专业人员已知的标准程序予以表征和选择的。用合乎需要的人恒定区取代小鼠恒定区，以产生本发明的完全人抗体，例如野生型或经修饰的IgG1或IgG4。所选择的恒定区可根据特定的用途而变化，而高亲和力抗原结合特性和靶标特异性特征则留存于可变区中。

一般而言，当以与固定在固相或液相的抗原的结合测定时，可用于本发明之方法的抗体具有如上所述的高亲和力。用合乎需要的人恒定区取代小鼠恒定区，以产生本发明之完全人抗体。所选择的恒定区可根据特定的用途而变化，而高亲和力抗原结合特性和靶标特异性特征则留存于可变区中。

可在本发明的方法的情境中使用的特异性结合PCSK9的人抗体或抗体的抗原结合片段的具体例子包括任何包含在重链可变区(HCVR)内的三个重链CDR(HCDR 1、HCDR2和HCDR3)的抗体或抗原结合片段，所述重链可变区(HCVR)具有选自SEQ ID NO：1和11的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。备选地，可以在本发明的方法的情境中使用的特异性结合PCSK9的人抗体或抗体的抗原结合片段的具体实例包括任何包含重链可变区(HCVR)内的三个重链CDR(HCDR1，HCDR2和HCDR3)的抗体或抗原结合片段，所述重链可变区具有选自SEQ ID NOs 37、45、53、61、69、77、85、93、101、109、117、125、133、141、149、157、165、173、181和189的组中的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。抗体或抗原结合片段可包含含有轻链可变区(LCVR)内的三个轻链CDR(LCVR1、LCVR2、LCVR3)，所述轻链可变区具有选自SEQ ID NO：6和15的氨基酸序列，或与其具有至少90％，至少95％，至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。备选地，所述抗体或抗原结合片段可包含含有在轻链可变区(LCVR)内的三个轻链CDR(LCVR1、LCVR2、LCVR3)，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO 41、49、57、65、73、81、89、97、105、113、121、129、137、145、153、161、169、177、185和193组成的组的氨基酸序列，或与其具有至少90％，至少95％，至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

两个氨基酸序列之间的序列同一性是使用两个氨基酸序列之间的最佳序列比对和/或在最佳序列的区域上，在参考氨基酸序列的整个长度来确定，即鉴定为SEQ ID NO的氨基酸序列，其中最佳序列比对可以用本领域已知的工具获得，例如使用标准设置的比对，优选EMBOSS::needle，Matrix：Blosum62，Gap Open 10.0，Gap Extend 0.5。

在本发明的某些实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含来自选自SEQ ID NO：1/6和11/15的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的六个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)。备选地，在本发明的某些实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含来自选自SEQ ID NO：37/41、45/49、53/57、61/65、69/73、77/81、85/89、93/97、101/105、109/113、117/121、125/129、133/137、141/145、149/153、157/161、165/169、173/177、181/185和189/193的重链可变区和轻链可变区氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的六个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)。

在本发明的某些实施方案中，可用于本发明之方法的抗PCSK9抗体或其抗原结合蛋白具有选自下列一组序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3氨基酸序列：SEQID NO：2/3/4/7/8/10(mAb316P)[也称为"REGN727,"或"阿利库单抗"]和SEQ ID NO：12/13/14/16/17/18(mAb300N)(参阅美国专利申请公开号2010/0166768)和SEQ ID NO：12/13/14/16/17/18，其中SEQ ID NO：16包含在氨基酸残基30处组氨酸对亮氨酸的取代(L30H)。

在本发明的某些实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含选自SEQ ID NO：1/6和11/15的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在某些示例性实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含SEQ IDNO：1的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：6的LCVR氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含SEQ ID NO：11的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：15的LCVR氨基酸序列。在某些示例性实施方案中，抗体或抗原结合蛋白包含SEQ ID NO：11的HCVR氨基酸序列和SEQ ID NO：15的LCVR氨基酸序列，所述SEQ ID NO：15的LCVR氨基酸序列包含在氨基酸残基30处组氨酸取代亮氨酸(L30H)。

药物组合物和给药方法

本发明包括给患者施用PCSK9抑制剂的方法，该PCSK9抑制剂被加入一种医药组合物。本发明之医药组合物是与适宜的载体、赋形剂以及赋予药物各种适宜特性如转移、递送、耐受性的其他试剂一起配制的。在这本所有药剂化学师都知道的制剂集里可以找到许多适宜的制剂：雷氏药学大全(Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCompany,Easton,PA)。这些制剂包括，例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶、蜡剂、油剂、脂类、含有脂质(阳离子或阴离子)的泡囊(如LIPOFECTIN^TM)、DNA缀合物、无水吸收性糊剂、水包油或油包水乳剂、乳胶状碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体状凝胶以及含有碳蜡的半固体状混合物。还可参阅Powell等人，“Compendium of excipients for parenteralformulations”,PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238-311。

可用于本发明情境中的保护抗PCSK9抗体的示例性药物制剂包括US8,795,669(特别描述了包含阿利库单抗的示例性制剂)，或WO2013/166448或WO2012/168491中所述的任何制剂。

已知有各种药物递送系统可用于本发明之医药组合物的给药，例如脂质体封装、微颗粒、微胶囊、能表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参阅如Wu等人，1987,J.Biol.Chem.262:4429-4432)。给药方法包括但不限于皮内、肌内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外以及口服。该组合物可经由任何方便的途径给药，例如，输注或快速注射，经上皮或粘膜(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并可与其他生物活性剂一起给药。

本发明的医药组合物可用标准的针头和注射器经皮下或静脉内注射。此外，对于皮下给药，一种笔型给药装置可方便地用于本发明之医药组合物的给药。这种笔型给药装置可以是重复使用型或一次性使用型。可重复使用的笔型给药装置一般采用一种可更换的含医药组合物的药筒。一旦药筒内所有医药组合物均已输出、药筒变空，则可方便地弃置空药筒，并用一个含有医药组合物的新药筒取代。然后，该笔型给药装置即可重复使用。在一次性使用的笔型给药装置中，没有可更换的药筒。而是，该一次性使用的笔型给药装置具有一个预先灌满医药组合物的贮液器。一旦该贮液器内医药组合物用完，整个装置则被弃置。

许多可重复使用的笔型和自动注射给药装置已用于本发明之医药组合物的皮下给药。其实例包括但不限于AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONIC^TM笔(Disetronic Medical Systems,Bergdorf，Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25^TM笔、HUMALOG^TM笔、HUMALIN 70/30^TM笔(Eli Lilly and Co.，Indianapolis,IN)、NOVOPEN^TMI、II和III型(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk，Copenhagen,Denmark)、BD^TM笔(Becton Dickinson，Franklin Lakes,NJ)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM，以及OPTICLIK^TM(sanofi-aventis，Frankfurt,Germany)，此处仅举几例。用于皮下注射本发明之医药组合物的一次性使用的笔型给药装置的实例包括但不限于SOLOSTAR^TM笔(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)、和KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM自动注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLET^TM(Haselmeier,Stuttgart，Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)，以及HUMIRA^TM笔(Abbott Labs,Abbott Park IL)，此处仅举几例。

在某些情况下，该医药组合物可用一种控释系统给药。在一个实施方案中，可使用一种泵(参阅Langer，出处同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一个实施方案中，可采用聚合材料；参阅Medical Applications of Controlled Release,Langer and Wise(编),1974，CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在另一个实施方案中，可将一种控释系统置于该组合物靶标附近，从而只需要使用全身性剂量的一部分(参阅例如，Goodson,1984,在Medical Applications of Controlled Release,上文,vol.2,pp.115-138)。在Langer，1990，Science 249:1527-1533的综述中也讨论了其他控释系统。

注射型制剂可包括静脉、皮下、皮内和肌内注射、滴注输液等剂型。这些注射型制剂可以已知的方法制备。例如，可以将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在无菌水性介质中，或通常用于注射的油性介质中，以此方式制备该注射型制剂。作为注射用的水性介质有例如生理盐水、含葡萄糖和其他助剂的等渗溶液等，可组合使用适当的增溶剂，如醇(如乙醇)、多元醇(如丙二醇、聚乙二醇)，非离子型表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50摩尔)加合物)]等。作为油性介质，可采用例如芝麻油、豆油等，可组合使用增溶剂，如苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等。如此制备的注射液最好是装入一种适当的安瓿瓶中。

有利的是，上述口服或胃肠外使用的药物组合物是制备成单位剂量的剂型，以容纳一次剂量的活性成分。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。

剂量

根据本发明的方法向受试者施用的PCSK9抑制剂(例如抗PCSK9抗体)的量通常是治疗有效量。如本文所用，短语“治疗有效量”意指导致在选自LDL-C、ApoB100、非HDL-C、总胆固醇、VLDL-C，甘油三酯，Lp(a)和残余胆固醇的一个或多个参数的可检测的减少(自基线减少至少约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，50％，55％，60％，65％，70％，75％或更多)，或降低或消除患者对脂蛋白单采的需要或降低患者单采归一化比率(如本文其他地方所定义)的量。

在抗PCSK9抗体的情况下，治疗有效量可以为约0.05mg至约600mg，例如约0.05mg，约0.1mg，约1.0mg，约1.5mg，约2.0mg，约10mg，约20mg，约30mg，约40mg，约50mg，约60mg，约70mg，约80mg，约90mg，约100mg，约110mg，约120mg，约130mg，约140mg，约160mg，约170mg，约180mg，约190mg，约200mg，约210mg，约220mg，约230mg，约240mg，约250mg，约260mg，约270mg，约280mg，约290mg，约300mg，约310mg，约320mg，约330mg，约340mg，约350mg，约360mg，约370mg，约380mg，约390mg，约400mg，约410mg，约420mg，约430mg，约440mg，约450mg，约460mg，约470mg，约480mg，约490mg，约500mg，约510mg，约520mg，约530mg，约540mg，约550mg，约560mg，约570mg，约580mg，约590mg或约600mg的抗PCSK9抗体。根据本发明的某些示例性实施方案，抗PCSK9抗体的治疗有效量是75mg、150mg或300mg(例如在阿利库单抗的情况下)，或者是140mg或420mg(例如在依伏库单抗的情况下)。其他剂量的PCSK9抑制剂对于本领域的普通技术人员将是显而易见的，并且被认为在本发明的范围内。

每次剂量中所含抗PCSK9抗体的量可以毫克抗体/每公斤患者体重(即mg/kg)表示。例如，可以约0.0001至约10mg/kg患者体重的剂量将抗PCSK9抗体施用于患者。

联合疗法

如本文其他地方所述，本发明的方法可以包括将PCSK9抑制剂与患者先前开具的降脂疗法(“在其基础上”)组合施用患者。例如，在降低或消除对脂蛋白单采的需求的情况下，可以将PCSK9抑制剂与稳定的每日治疗性他汀方案组合施用患者。本发明的情境下PCSK9抑制剂可与之组合施用的示例性每日治疗性他汀方案包括例如阿托伐他汀(每日10、20、40或80mg)(阿托伐他汀/依折麦布每日10/10或40/10mg)，罗苏伐他汀(每日5mg、10mg或20mg)，西立伐他汀(每日0.4或0.8mg)，匹伐他汀(每日1、2或4mg)，氟伐他汀(每日20、40或80mg)，辛伐他汀(每日5、10、20、40或80mg)，辛伐他汀/依折麦布(每日10/10、20/10、40/10或80/10mg)，洛伐他汀(每日10、20、40或80mg)，普伐他汀(每日10、20、40或80mg)及其组合。本发明的情境下PCSK9抑制剂可与之组合施用的其他降脂疗法包括例如(1)抑制胆固醇摄取和/或胆汁酸再吸收的药剂(例如依折麦布)；(2)增加脂蛋白分解代谢的药剂(如烟酸)；和/或(3)在胆固醇消除如22-羟基胆固醇中起作用的LXR转录因子的激活剂。

根据本发明的某些实施方案，提供了包括向患者联合施用PCSK9抑制剂(例如抗PCSK9抗体，例如阿利库单抗、依伏库单抗、bococizumab、罗德希珠单抗或ralpancizumab)和血管生成素样蛋白3的抑制剂(例如抗ANGPTL3抗体，例如REGN1500)、血管生成素样蛋白4的抑制剂(例如在美国专利号9,120,851中提及的抗ANGPTL4抗体，为抗ANGPTL4抗体“H1H268P”或“H4H284P”)或血管生成素样蛋白8的抑制剂(例如抗ANGPTL8抗体)。

在本发明方法的情境中，可以在PCSK9抑制剂给药之前、同时或之后立即给予另外的治疗活性成分，例如上面列出的任何药剂或其衍生物；(为了本公开的目的，这样的施用方案被认为是PCSK9抑制剂与另外的治疗活性成分“联合”施用)。本发明包括药物组合物及其使用方法，其中PCSK9抑制剂与本文其它地方所述的一种或多种另外的治疗活性成分共同配制。

给药方案

根据本发明的某些实施方案，可在定义的时程内(例如在每日治疗性他汀方案或其他背景降脂疗法之基础上)向受试者施用多剂量PCSK9抑制剂(即，包含PCSK9抑制剂的药物组合物)。根据本发明这一方面的方法包括按顺序给受试者施用多剂PCSK9抑制剂。本文所用的“顺序给药”是指每剂PCSK9抑制剂是在例如不同日子的不同时间，按照预定的时间间隔(例如数小时、数天、数周或数月)施予受试者。本发明包括一些方法，其包括按顺序施予受试者一剂初始剂量PCSK9抑制剂，再施予一剂或多剂第二种剂量PCSK9抑制剂，然后再可选地施予一剂或多剂第三种剂量PCSK9抑制剂。

术语“初始剂量”、“第二种剂量”和“第三种剂量”是指包含PCSK9抑制剂的药物组合物的单独剂量给药的时间顺序。因此，“初始剂量”是指在治疗方案开始时(也被称为“基线剂量”)的给药剂量；“第二种剂量”是指初始剂量之后的给药剂量；“第三种剂量”是指第二种剂量之后的给药剂量。所述初始、第二和第三种剂量都可含有相同量的PCSK9抑制剂，但给药频率一般将互不相同。然而，在某些实施方案中，在治疗过程中，初始、第二和/或第三种剂量所含PCSK9抑制剂的量会互不相同(例如可酌情上调或下调)。在某些实施方案中，在治疗方案开始时将两个或更多个(例如2、3、4或5)剂量作为“负荷剂量”给药，接着以较低频率给予后续剂量(例如“维持剂量”)。

根据本发明的示例性实施方案中，每剂第二种剂量和/或第三种剂量于其前一剂量给药后1至26周(例如1、1¹/₂、2、2¹/₂、3、3¹/₂、4、4¹/₂、5、5¹/₂、6、6¹/₂、7、7¹/₂、8、8¹/₂、9、9¹/₂、10、10¹/₂、11、11¹/₂、12、12¹/₂、13、13¹/₂、14、14¹/₂、15、15¹/₂、16、16¹/₂、17、17¹/₂、18、18¹/₂、19、19¹/₂、20、20¹/₂、21、21¹/₂、22、22¹/₂、23、23¹/₂、24、24¹/₂、25、25¹/₂、26、26¹/₂或以上)给药。本文所用的术语“前一剂量”，是指在一系列多次给药过程中在下一剂给药之前施予患者的一剂抗原结合分子，两剂之间无中间剂量。

根据本发明这一方面的方法可以包括给患者施用任何次数的第二种剂量和/或第三种剂量的PCSK9抑制剂。例如，在某些实施方案中，只施予患者一剂第二种剂量。在其他一些实施方案中，施予患者两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)第二种剂量。同样，在某些实施方案中，只施予患者一剂第三种剂量。在其他一些实施方案中，施予患者两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)第三种剂量。

在一些涉及多剂第二种剂量的实施方案中，每剂第二种剂量都可以与其他第二种剂量相同的频率给药。例如，每剂第二种剂量可在其前一剂量给药后1至2、4、6、8或更多周施予患者。同样，在一些涉及多剂第三种剂量的实施方案中，每剂第三种剂量都可以与其他第三种剂量相同的频率给药。例如，每剂第三种剂量可在其前一剂量给药后1至2、4、6、8或更多周施予患者。备选地，施予患者第二种剂量和/或第三种剂量的给药频率可在治疗方案疗程中改变。在疗程中，也可以由医生在临床检查后根据各患者的需要调整给药频率。

本发明包括包含升高滴定选项(在本文中也称为“剂量改变”)的施用方案。如本文所用，“升高滴定选项”意指在接受特定数量的剂量的PCSK9抑制剂后，如果患者尚未实现一个或多个确定的治疗参数的特定减少，则此后PCSK9抑制剂的剂量增加。例如，在包括以每两周一次的频率向患者施用75mg剂量的抗PCSK9抗体的治疗方案的情况下，如果在8周后(即在第0周、第2周、第4周、第6周和第8周施用5个剂量)，患者未实现低于70mg/dL的血清LDL-C浓度，则此后抗PCSK9抗体的剂量增加至例如每两周一次施用150mg(例如，从第10周或第12周或以后开始)。

在某些实施方案中，抗PCSK9抗体以每两周约75mg的剂量施用于受试者，例如至少三次剂量(或在整个治疗方案的整个过程中跨越数天、数周、数月、或数年)。

在某些实施方案中，抗PCSK9抗体以每两周约150mg的剂量施用于受试者，例如至少三次剂量(或在整个治疗方案的整个过程中跨越数天、数周、数月、或数年)。

在一些实施方案中，抗体以每两周约75mg的剂量施用于受试者12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值小于100mg/dl并且LDL-C降低30％，那么该剂量保持在每两周75mg。

在其他实施方案中，抗体以约75mg的剂量每两周施用于受试者达12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值大于或等于100mg/dl，那么将剂量滴定至每两周约150mg。

在一些实施方案中，抗体以每两周约75mg的剂量施用于受试者12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值小于70mg/dl并且LDL-C降低30％，那么该剂量保持在每两周75mg。

在另一个实施方案中，抗体以每四周约300mg的剂量施用于受试者。

在进一步的实施方案中，抗体以每四周约300mg的剂量施用于受试者，总共三次剂量，并且如果在第8周，受试者没有实现预定的治疗目标，或受试者的LDL-C从基线至少具有30％降低，那么剂量每两周改变为150mg，再持续36周。

在某些实施方案中，抗PCSK9抗体以每四周约150mg的剂量施用于受试者至少三次剂量。

在一些实施方案中，抗体以每四周约150mg的剂量施用于受试者12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值小于100mg/dl并且LDL-C降低30％，那么该剂量维持在每四周150mg。

在其他实施方案中，抗体以每四周约150mg的剂量施用于受试者12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值大于或等于100mg/dl，那么将该剂量滴定至每两周约300mg。

在一些实施方案中，抗体以每四周约150mg的剂量施用于受试者12周，并且如果在第8周时受试者的LDL-C值低于70mg/dl并且LDL-C降低30％，那么该剂量保持在每四周150mg，再维持12周。

在另一个实施方案中，抗体以每四周约300mg的剂量施用给受试者。

在进一步的实施方案中，抗体以每四周约300mg的剂量施用于受试者，总共三次剂量，并且如果在第8周，受试者没有实现预定的治疗目标，或受试者的LDL-C没有从基线至少具有30％降低，那么剂量改变为每两周150mg再持续36周。

实施例

举出以下实施例是为了向本发明所属技术领域的一般专业人员就如何利用本发明之方法和组合物提供一个完整的公开和说明，并非是为了限制本发明人视为其发明的范围。业已作出努力以确保所用数据(例如，量、温度等)的准确性，但也应考虑到某些实验误差和偏差。除非另有说明，份是指重量份，分子量是指平均分子量，温度是指摄氏度，压强是指大气压或接近大气压。

实施例1.人PCSK9的人抗体的产生

如美国专利号8,062,640所述产生人抗PCSK9抗体。以下实施例中使用的示例性PCSK9抑制剂是称为“mAb316P”的人抗PCSK9抗体，也称为“REGN727”或“阿利库单抗”。mAb316P具有以下氨基酸序列特征：包含SEQ ID NO：5的重链和包含SEQ ID NO：9的轻链；包含SEQ ID NO：1的重链可变区(HCVR)和包含SEQ ID NO：6的轻链可变结构域(LCVR)；包含SEQ ID NO：2的重链互补决定区1(HCDR1)，包含SEQ ID NO：3的HCDR2，包含SEQ ID NO：4的HCDR3，包含SEQ ID NO：7的轻链互补决定区1(LCDR1)，包含SEQ ID NO：8的LCDR2和包含SEQID NO：10的LCDR3。

实施例2.在经受脂质单采疗法的杂合家族性高胆固醇血症患者中评价阿利库单抗的功效和安全性的随机、双盲、安慰剂对照的平行组研究

介绍

本研究的目的是评估与安慰剂相比，每两周施用一次阿利库单抗150mg(“Q2W”)对经受LDL单采疗法的HeFH患者的LDL单采疗法频率的影响。

将诊断为患有HeFH的、以每周一次或每两周一次的频率正在经受LDL单采疗法治疗的成年男性和女性纳入本研究。在整个研究过程中，LMT受试者的背景治疗保持不变。在这样的患者中，作为对照的安慰剂的选择适合于本研究的目的，因为它提供了对阿利库单抗的功效和安全性的最稳健的评估。

取决于单采的技术和持续时间，LDL-C值的平均降低范围是从30％至75％(Bambauer等人，Scientific World Journal，2012,2012：1-19)。每周或每两周一次治疗，LDL-C水平可以降低40％至50％。根据本研究，当该随访时的LDL-C值比基线(单采前)LDL-C值低≥30％时，不进行单采。每次单采术后LDL-C水平均向基线水平升高，但未达到原始水平；通过重复的每周或每两周一次的单采，基线水平继续下降直至达到平台(Thompsen等人，Atherosclerosis，2006,189：31-38)。因此，基于LDL-C水平降低30％来确定单采的必要性的标准是合理的，因为如果通过阿利库单抗给药来观察，这种降低将随着时间的推移保持一致，实现在LDL-C中与单采术大致相同的降低水平。

阿利库单抗Q2W(75mg和150mg SC)和Q4W(150mg和300mg SC)给药方案已经在阿利库单抗的其他3期试验中进行了评估。基于2次剂量发现研究的结果，选择Q2W给药方案以在所有患者的整个给药间隔期间保持恒定的LDL-C降低，在12周时由150mg Q2W给药提供了最大功效。杂合家族性高胆固醇血症患者通常具有高的基线LDL-C水平。考虑到这些患者终身暴露于升高的LDL-C，其LDL-C目标为100mg/dL或70mg/dL，这取决于他们的CVD病史或其他危险因素。为了实现并维持他们的LDL-C目标，据推测，这样的患者非常可能需要最有效剂量的阿利库单抗，并且在给药间隔结束时以维持这种效果所需的频率。因此，本研究选择150mg Q2W剂量。

在该研究的双盲治疗期间，将150mg阿利库单抗Q2W给予需要每1周或每2周单采以降低LDL-C的HeFH患者18周，以评价其与筛选前的8周期间的频率相比，从第7周到第18周降低单采频率的能力。患者在开放标签治疗期间接受150mg阿利库单抗Q2W至第76周。

来自2期研究，DFI11565，DFI11566和R727CL1003的初步药代动力学(PK)数据显示，在双盲治疗期后的8周随访期内暴露于阿利库单抗下降，总血清阿利库单抗的浓度仍然可以检测到，但水平非常低。因此，为了确保足够低的无效血清阿利库单抗浓度，在8周的随访期间(即最后一次给药后10周)追踪患者。

研究目标

该研究的主要目的是评估阿利库单抗150mg Q2W与安慰剂相比对经受每周或每两周LDL单采疗法的HeFH患者的LDL单采疗法频率的影响。

该研究的次要目标是：(a)评估阿利库单抗150mg Q2W对经受LDL单采疗法的HeFH患者的LDL-C水平的影响；(b)评估研究期间阿利库单抗150mg Q2W对经受LDL单采疗法的HeFH患者的以下脂质参数的影响：ApoB、非HDL-C、总胆固醇、Lp(a)、HDL-C、TGs和ApoA-1；(c)评估经受LDL单采疗法的HeFH患者阿利库单抗150mg Q2W的安全性和耐受性；(d)评估经受LDL单采疗法的HeFH患者阿利库单抗150mg Q2W的PK(QW vs.Q2W)；(e)评估抗阿利库单抗抗体的发展；(f)评估响应阿利库单抗治疗以及单采前后的PCSK9水平；(g)评估这些患者的生活质量(“QOL”)。

研究设计

本研究是在每1周或每2周经受LDL单采疗法的HeFH患者中的随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究。

该研究由4期组成：筛选，双盲治疗期，开放标签治疗期和随访。双盲治疗期包括两个间隔：第1天至第6周(第1天、第15天和第29天有计划的研究药物施用)，单采频率将固定到个体患者的既定时间表，以及第7周至第18周(第43、57、71、85、99和113天有计划的研究药物施用)，根据患者对治疗的反应调整单采频率。

筛选：处于稳定单采时间表(每7或14天)的患者进入2周筛选期，该患者具有在筛选随访之前(第-2周)至少4周稳定的单采设定和在筛选随访(第-2周)之前至少8周稳定的背景医疗LMT。

双盲治疗：符合所有纳入标准且没有排除标准的患者以2:1的比例随机分配接受18周的治疗：阿利库单抗150mg SC Q2W或阿利库单抗SC Q2W的安慰剂组。

在随机化当天(第0周[第1天]/第2次随访)开始，在双盲治疗期间的治疗注射给予Q2W。在首次剂量后，临床监测患者30分钟。如果LDL单采与研究药物施用一致，则在完成LDL单采手术后立即施用研究药物。

从第1天到第6周，将单采频率固定为个体患者既定时间表(QW或Q2W)。从第7周开始，根据该随访时的LDL-C值(通过定点照护(Point-of-care)测定)，施用LDL单采。当该随访的LDL-C值比基线(第1天)的单采前的LDL-C值低至少30％时，不施用LDL单采。基于LDL-C水平降低30％，确定单采的必要性的标准是合理的，因为如果通过阿利库单抗给药的观察，这种降低将随着时间的推移保持一致，达到与单采术相同水平的LDL-C降低。调查人员仍然对LDL-C的定点照护(Point-of-care)实验室值不知情，并且只接受了是否应该施用LDL单采的警报。

开放标签治疗：在开放标签治疗期间，患者接受阿利库单抗150mg SC Q2W。在双盲治疗期间(在第16周的最后一次剂量)至第18周(在开放标签治疗期的第一剂量)至第76周期间，持续不间断地接受最后一剂研究药物的治疗。

在开放标签治疗期间的第一次注射是在第18周随访(开放标签治疗期的第一次随访)作为患者注射训练的一部分施用。随后的注射由患者或指定的护理人员(配偶、亲属等)在患者优选的位置(例如家庭或工作地点)进行。患者也被允许选择返回Q2W现场以由研究人员进行注射。

在研究的开放标签治疗期间不需要单采治疗。根据调查员的判断，患者可以根据需要继续经受单采术。如果计划单采术与临床随访或阿利库单抗给药日一致，则在单采术前进行研究评估，并在单采术后施用阿利库单抗。

随访：在第86周研究随访结束时看望患者。

在整个研究中：临床实验室(脂质和特种脂质组)和PK评估的所有样品立即在LDL单采术之前和之后(如果LDL单采在该随访时施用)和研究药物施用之前获得。

对于那些在随访时未经受LDL单采的患者，在施用研究药物之前获得用于临床实验室评估的所有样品。

通过在预定的时间点监测/评估TEAE、身体检查、生命体征(脉搏率和血压)、心电图(ECG)和临床安全实验室测试来评估总体安全性。评估抗阿利库单抗抗体的潜在出现。在单采之前和之后评估PCSK9水平。

允许使用已知改变血清脂质的所有药物和营养补剂(包括红酵母产品的消耗)，包括(但不限于)他汀类、依折麦布、贝特类、烟酸和胆汁酸树脂，只要该治疗在筛选随访(第－2周)之前稳定至少8周。指导患者在从筛选开始到治疗随防结束的整个研究期间继续服用其背景医疗LMT。

患者的饮食在从筛选开始到治疗随防结束的整个研究期间保持稳定。

患者的运动方案在从筛选开始到治疗随防结束的整个研究期间保持稳定。

患者选择

研究方案要求在美国和德国的多达15个地点招募约63名患者。患者随机分配如下：大约三分之一的招募患者(～21)接受安慰剂；约三分之二的招募患者(约42人)接受阿利库单抗。

研究人群由经受每1周或每2周LDL单采疗法的经诊断患有HeFH的成年男性和女性组成。

随机化分层是根据：单采频率：QW vs Q2W；和基线Lp(a)水平：正常(<30mg/dL)vs升高(≥30mg/dL)。由于一些LDL-C升高的患者也具有升高的Lp(a)水平，所以分层确保在安慰剂/治疗组中足够的代表性。

纳入标准：本研究招募的患者被要求满足条件1-6(以下)以符合纳入研究的条件：

(1)在筛选随访时≥18岁的男性和女性

(2)HeFH的诊断；[注：通过基因分型或临床标准进行HeFH诊断。对于那些没有进行基因分型的患者，可以根据Simon Broome标准的用于有限FH的标准，或WHO/荷兰血脂网络标准的评分>8分作出临床诊断。

(3)在筛选随访(第-2周)之前，目前经受LDL单采疗法QW至少4周或Q2W至少8周，并且在此之前已经开始单采治疗至少5个月；[注：可接受的单采技术是：双膜过滤、免疫吸附、肝素诱导的LDL沉淀、脂质的直接吸附、硫酸葡聚糖吸附(血浆)、硫酸葡聚糖吸附(全血)]；

(4)愿意并能够遵守诊所随访和研究相关程序；

(5)提供签署的知情同意书；和

(6)能够理解并完成与研究有关的问卷。

排除标准：符合以下任何标准的前瞻性患者被排除在研究之外：

(1)纯合FH；

(2)背景医疗LMT(如果适用的话)在筛选随访(第-2周)之前至少8周不稳定；

(3)对于每周经受单采的患者在筛选随访(第-2周)之前至少4周，以及对于每两周(第-2周)经受单采的患者在筛选随访(第-2周)之前至少4周，不稳定的LDL单采疗法时间表/单采设定；

(4)除QW到Q2W以外的LDL单采时间表；

(5)在筛选随访(第-2周)之前8周内开始新的锻炼计划或锻炼；

(6)在筛选随访(第-2周)之前8周内开始新的饮食或饮食不稳定；

(7)使用已知影响脂质的营养制品或非处方疗法，以在筛选随访(第-2周)之前或在筛选和随访之间至少8周内不稳定的剂量/量使用；

(8)存在已知影响血脂或脂蛋白的任何临床上显著的不受控制的内分泌疾病；

(9)甲状腺功能减退的体征和症状(允许甲状腺替代疗法)；

(10)筛选随访(第-2周)前12个月内的对体重超重实施手术的病史；

(11)筛选随访(第-2周)之前的2个月内，不稳定的体重(变化>5kg)；

(12)新诊断的(随机随访[第1天]前3个月内)糖尿病或控制不良(血红蛋白A1c[HbA1c]>9％)糖尿病；

(13)皮质类固醇的系统性使用，除非在随机化之前用作稳定方案的垂体/肾上腺疾病的替代疗法至少6周；局部的、关节内的、鼻腔的、吸入的和眼部的类固醇治疗不被认为是“系统性”使用并且是允许的；

(14)雌激素或睾酮疗法的使用，除非在筛选随访(第-2周)之前的过去6周该方案已经稳定，并且在研究期间没有计划改变方案；

(15)在筛选随访(第-2周)或随机化时间(第1天)时，收缩压>160mm Hg或舒张压>100mmHg[注：如果患者由于单采时间表没有采取或计划不采取，在筛选或随机随访时开具的高血压药物，用于研究资格的血压评估可以在这两次随访之间发生的随访时获得]；

(16)在筛选随访(第-2周)前3月内心肌梗塞(MI)，导致住院的不稳定心绞痛，冠状动脉搭桥手术(CABG)，经皮冠状动脉介入治疗(PCI)，不受控制的心律失常，颈动脉手术或支架置入，中风，短暂性脑缺血攻击或颈动脉再血管化，或在筛选随访(第-2周)前1月内的血管内手术或外周血管疾病的外科手术干预，

(17)筛选随访前12个月内纽约心脏协会III或IV级心力衰竭的病史；

(18)已知的出血性中风病史；

(19)过去5年内癌症的病史，除了充分治疗的基底细胞皮肤癌、鳞状细胞皮肤癌或原位宫颈癌；

(20)人类免疫缺陷病毒阳性测试的已知病史；

(21)在筛选的1个月或5个半衰期内任何活性考察药物的使用，以较长者为准；

(22)在任何其他临床研究中已经用至少1剂阿利库单抗或任何其他抗PCSK9单克隆抗体治疗的患者；

(23)诸如以下的条件/情形：(a)在筛选时鉴定出的任何临床上显著的异常，根据研究者或任何副研究者的判断，将妨碍研究的安全完成或限制终点评估；例如主要的全身性疾病，预期寿命短的患者；或(b)由于任何原因，研究人员或任何副研究员认为不适合本研究，例如：(i)被视为不能满足具体的方案要求，如定期随访；(ii)按照患者或研究者视为不能容忍注射；(iii)直接参与方案实施的任何调查人员或者副研究员、药剂师、研究协调员、其他研究人员或者其他相关人员；(iv)存在研究者认为在研究期间会限制或局限患者参与的任何其他实际或预期的条件(例如地理或社会条件)；

(24)筛选期间的实验室结果(不包括随机化实验室)：(a)乙型肝炎表面抗原和/或丙型肝炎抗体的阳性测试；(b)育龄妇女血清β-hCG阳性或尿妊娠试验；(c)TG>500mg/dL(>5.65mmol/L)(允许1次重复实验)；(d)根据饮食在肾疾病研究方程中的4变量修饰(由Central Lab计算)，eGFR<15mL/min/1.73m2；(e)丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST)>3×正常上限(ULN)(允许1次重复实验)；(f)CPK>3×ULN(允许1次重复实验)；

(25)对单克隆抗体治疗剂或药物产品的任何组分已知的超敏反应；

(26)孕妇或哺乳期妇女；

(27)不受高度有效的节育方法的保护(如知情同意书[ICF]和/或当地议定书增编中所定义的)和/或不愿意或无法进行怀孕测试的育龄妇女。绝经后妇女必须闭经至少12个月。

研究治疗

研究治疗是在腹部、大腿或上臂的外部区域中施用150mg剂量的阿利库单抗或安慰剂的1mL单次SC注射，给药为Q2W，其在自动注射器或预充式注射器中提供。

在双盲治疗期间(第1天至第18周)期间，符合条件的患者随机接受：阿利库单抗150mg SC Q2W或阿利库单抗SC Q2W的安慰剂。

在开放标签治疗期间，患者接受开放标签阿利库单抗150mg SC Q2W，从第18周开始，最后一次在第76周给药。

无菌阿利库单抗药物产品以在组氨酸，pH6.0，聚山梨醇酯20和蔗糖中为150mg/mL的浓度在自动注射器或预充式注射器中提供。

在自动注射器或预充式注射器中以与阿利库单抗相同的制剂提供匹配阿利库单抗的安慰剂，不添加蛋白质。

在给药日选择在临床门之外注射研究药物的所有患者和/或护理人员在施用注射之前由研究人员进行培训。指导患者/护理人员在第18周就诊时施用研究药物，并在第18周就诊时自行施用第一剂开放性治疗期。随后的注射由患者(自我注射)或指定的护理人员(配偶、亲属等)在患者优选的位置(例如家庭或工作地点)施用Q2W。

还可以给患者返回到现场Q2W以令研究人员施用注射的选择。

处理分配方法

患者被随机分配接受安慰剂或阿利库单抗150mg Q2W，比例为1：2，实施置换块设计以确保治疗分配的均匀分布。根据单采术频率(每7天或14天)和Lp(a)水平(正常或升高)对随机分组进行分层。招募设置上限，以便不超过三分之二的患者正在经受单采。

无论双盲治疗期间的治疗分配如何，所有患者在开放标签治疗期间接受阿利库单抗150mg Q2W。

伴随药物

从知情同意时间到随访期间/最终研究随访结束时施用的任何治疗被认为是伴随药物。这包括在研究之前开始并且在研究期间正在进行的药物。在研究期间将伴随药物保持在最低限度。如果认为是对患者的健康必要的并且不太可能干扰研究药物，则允许调查人员酌情给予伴随药物(在研究期间禁止的药物除外)，并且剂量稳定(在可能的情况下)。

禁用药物：禁止在筛选随访(第2周)之前至少8周不稳定的任何背景医学LMT。

允许的药物：允许已知改变血清脂质(包括但不限于他汀类、依折麦布、贝特类、烟酸和胆汁酸树脂)的所有药物和营养补充剂(包括红酵母产品的消耗)的使用只要该疗法在筛选随访(第2周)之前已经稳定了至少8周。指导患者在从筛选开始到治疗随访结束的整个研究期间继续服用其背景医疗LMT。

患者的饮食在从筛选开始直到治疗随访结束整个研究期间保持稳定。

患者的锻炼计划在从筛选开始到治疗随访结束的整个研究期间保持稳定。

研究终点

基线特征将包括每个患者的标准人口统计学(例如，年龄、种族、体重、身高等)、疾病特征(包括病史)和用药史。

主要功效终点：主要功效终点是通过根据每个患者在筛选，第-10周到-2周既定时间表的计划的单采治疗的次数归一化的，在从第7周至第18周的12周期间的单采治疗的比率。

定义每名患者的归一化的单采的比率如下：从第7周至第18周接受的实际单采治疗的数量除以基线的每个随机化分层的计划单采疗法的数量(对于Q2W为6，对于QW为12)。

在第18周之前患者退出的情况下，根据随机化分层将实际的单采术的次数(从第7周到第18周)加到剩余的计划单采治疗的估算次数用于分子。

根据在基线的每个患者的既定时间表，归一化对计划的单采治疗的影响允许以不同单采时间表进入研究的患者(即单采QW或Q2W)均匀化至相同的比率标度。

次要功效终点：对于以下脂质终点，例如在双盲治疗期间从基线至特定的基线后随访的百分比变化，定义2个时间点：在单采术之前和之后。对于关键功效终点，使用在每次单采术之前收集的评估来分析脂质参数。在不按照方案指定的随访进行单采的情况下，计划收集的单一实验室评估用于两个时间点(即，包括关键功效终点)。基线值被定义为研究药物的第一个双盲剂量之前每个参数的最后可用值。

本研究的次要终点如下：

(1)无论是否依从治疗，LDL-C(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(2)从第15周至第18周的4周期间单采治疗的归一化比率，其定义与主要功效终点相似；

(3)无论是否依从治疗，ApoB(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(4)无论是否依从治疗，非HDL-C(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(5)无论是否依从治疗，总胆固醇(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(6)无论是否依从治疗，ApoA-1(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(7)无论是否依从治疗，在第6周LDL-C(单采前)降低≥30％的患者比例；

(8)无论是否依从治疗，在第6周LDL-C(单采前)降低≥50％的患者比例；

(9)无论是否依从治疗，LDL-C(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(10)无论是否依从治疗，ApoB(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(11)无论是否依从治疗，非HDL-C(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(12)无论是否依从治疗，总胆固醇(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(13)无论是否依从治疗，ApoA-1(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(14)无论是否依从治疗，在第18周LDL-C(单采前)降低≥30％的患者的比例；

(15)无论是否依从治疗，在第18周LDL-C(单采前)降低≥50％的患者比例；

(16)无论是否依从治疗，W-BQ22指数分数从基线至第18周的变化；

(17)无论是否依从治疗，Lp(a)(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(18)无论是否依从治疗，HDL-C(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(19)无论是否依从治疗，TG水平(单采前)从基线至第6周的百分比变化；

(20)无论是否依从治疗，Lp(a)(单采前)到第18周的基线变化百分比；

(21)无论是否依从治疗，HDL-C(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(22)无论是否依从治疗，TG水平(单采前)从基线至第18周的百分比变化；

(23)无论是否依从治疗，ApoB/ApoA-1比率(单采前)从基线至第6周的变化；

(24)无论是否依从治疗，ApoB/ApoA-1比率(单采前)从基线至第18周的变化；

(25)从第7周到第10周的4周期间的单采治疗的标准化比率，相应地定义为主要功效终点；

(26)从第11周到第14周的4周期间的单采治疗的标准化比率，相应地定义为主要功效终点；

(27)从第7周开始至第18周结束的12周期间的单采频率和LDL-C值的综合评估(根据它们的LDL-C值和单采比率分级的患者；确定所有患者的平均等级，并且将每个治疗的患者LDL-C水平或单采比率与该变量的平均等级之间的差异表示为百分比；添加基于每个患者的2个变量的百分比差异以提供总计百分比差异。当按治疗组合并分析时，所得数目将指示低LDL-C和/或降低的单采比率)；

(28)无论是否依从治疗，在第6周单采之前实现LDL-C水平<200mg/dL，<130mg/dL，<100mg/dL和<70mg/dL的患者比例；

(29)无论是否依从治疗，在第18周单采之前实现LDL-C水平<200mg/dL，<130mg/dL，<100mg/dL和<70mg/dL的患者比例；

(30)在双盲治疗期间，无论是否依从治疗，原始值，以及LDL-C和其它脂质从基线至每次随访的两个时间点的百分比和绝对变化；

(31)在开放标签治疗期间，无论是否依从治疗，原始值，以及LDL-C和其他脂质从基线到每次随访的百分比和绝对变化；

(32)整个研究中评估的安全性参数(AE[包括判断的心血管事件]、实验室数据、生命体征(vital sign)和ECG)。

其他终点：(1)整个研究中评估的抗阿利库单抗抗体；(2)从基线到第18周和第6周的高敏C反应蛋白(hs-CRP)和HbA1c的百分比变化；(3)单采前后血清总阿利库单抗的浓度；(4)单采前后游离和总PCSK9水平。

研究程序

在施用研究药物剂量之前收集所有实验室样品。如果可能(例如，过夜[至少10小时禁食]，仅供水)，从处于禁食状态的患者收集血液样品用于脂质组的所有临床随访。虽然优选，但禁食不是脂质组样品的先决条件。不允许在采血前48小时内饮酒和吸烟，或在采血前24小时内剧烈运动。

总C、HDL-C、TG、ApoB、ApoA-1和Lp(a)由中心实验室直接测量。使用Friedewald公式计算LDL-C。如果TG值超过400mg/dL(4.52mmol/L)，则中心实验室反射性测量(通过β定量方法)LDL-C而不是计算它。通过从总C中减去HDL-C来计算非HDL-C。计算ApoB/ApoA-1比率。

脂质组(禁食)：在预先规定的时间点禁食至少10小时后收集脂质组(总C、TG、HDL-C和计算的LDL-C)的血液样品。

特种脂质组(禁食)：在预先规定的时间点禁食至少10小时后，收集特种脂质组(ApoB、ApoA-1和Lp[a])的血液样品。

健康问卷：W-BQ22用于在特定时间点评估高胆固醇血症和治疗对健康的影响。

血压和心率：在预先规定的时间点评估血压和心率。优选在标准化的条件下，大致在一天中的同一时间，在相同的手臂上，用相同的装置(在患者舒适地坐在休息位置休息至少5分钟之后)以坐位测量血压。在第一次筛选随访时，测量双臂血压。在此次随访中确定具有最高舒张压的手臂，并在整个研究中在该手臂上测量血压。这个最高值记录在电子病例报告表(eCRF)中。在测量血压时测量心率。

身体检查：在预先规定的时间点进行彻底和完整的身体检查。

体重和身高：体重是在患者穿着内衣或非常轻便的衣服并且没穿鞋子并且具有排空的膀胱的情况下获得的。整个研究中优选使用相同的标尺。如果可能，建议使用校准的平衡标尺。

心电图：在需要抽血的随访期间抽取血液之前进行心电图。标准的12导联ECG在预先规定的时间点进行。12导联ECG在至少10分钟休息后以仰卧位进行。对于整个研究中的每个ECG记录，电极尽可能位于相同的位置。心电图由研究者在本地解释。心电图参数的任何新的和/或临床上显著的变化在作出有关患者的任何决定之前立即重新检查以供确认。如适用，将任何临床上显著的异常记录为AE/SAE。与筛选记录的轨迹相比较，分析每条轨迹。所有的ECG记录都保存为源数据。从心室率记录心率，并记录PR、QRS、RR和QT间隔。

实验室测试：在进行评估之后并且在与给药日对应的随访中施用一剂研究药物之前，收集所有实验室样品(包括PK和ADA样品)。

判定心血管事件：判定的心血管事件包括所有被阳性判定的心血管AEs。判定类别如下：(1)CHD死亡；(2)非致死性MI；(3)致命性和非致命性缺血性中风；(4)需住院的不稳定型心绞痛；(5)需住院的充血性心力衰竭；(6)缺血引起的冠状动脉再血管化手术(PCI，CABG)。

统计分析

据估计，63名患者(阿利库单抗42：安慰剂21)的样本大小将具有至少85％的能力来检测使用双侧显著性水平并假设标准偏差为40％的平均单采比率的33％的差异。

主要功效分析人群是主要意向治疗(ITT)人群，定义为所有随机患者。次要功效分析人群是基于随机化的患者，他们在第一剂研究药物(或随机化，如果患者没有接受任何研究药物)之前具有至少一次单采前计算的LDL-C值，以及在高达第6周的一个单采前分析窗口中具有至少一个计算的LDL-C值。当最后一位患者在第18周完成所有功效评估时进行统计分析。使用Kroon公式对事后分析的LDL-C数据进行分析以估计在第6-18周(在潜在撤回单采疗法后)的LDL-C区间平均值。

使用分级的协方差分析(ANCOVA)模型，通过在12周期间(第7周至第18周)接受的治疗率除以计划治疗的次数(Q2W为6，每周为12)，分析单采治疗的标准化比率。标准化单采比率可以从0到1变化，其中0表示在第7周到第18周之间跳过所有计划的单采治疗的患者，并且1表示接受所有计划的治疗的患者。0.75的比率表明患者接受了75％的计划单采治疗(并且跳过25％的计划的治疗)。按照预先确定的标准计算患者退出率。使用Hodges-Lehmann估计以及使用Moses自由分布置信区间的95％置信区间(CI)确定中位治疗差异。

使用分层推理方法来控制I型误差。由于主要终点分析在5％α水平显著，因此依次测试关键的次要功效终点。

结果

基线特征

研究中招募的患者的基线特征总结于表1至4中。

表1：基线的患者特征

表2：随机化的背景LMT

*患者未使用他汀类或未使用最大日剂量的他汀类的原因：肌肉症状、CPK升高、LFT升高、伴随用药、高龄、低BMI、葡萄糖异常、局部实践、认知障碍的可能性。

表3：单采治疗的历史

表4：基线的脂质参数

76名经受常规每周或Q2W脂蛋白单采的heFH患者提供了同意参与并被筛选。如表1-4所总结的，随机选择总计62名患者(年龄：平均值±SD年龄，58.7±9.7岁)。58.1％的随机患者是男性。在筛选随访时，28名患者因耐受性而未使用他汀类，34名患者表示每日服用他汀类，其中19名服用最大日剂量。所有患者都有动脉粥样硬化性疾病(冠状动脉和/或脑血管和/或外周)，并且56.5％有冠心病家族史。平均患者进行常规脂蛋白单采(平均值±SD)为7.6±7.7年；中位数(最小:最大)：4.9(0.5：32.9)年。单采频率为Q2W(56.5％)和QW(43.5％)。16.1％的患者有糖尿病。1.6％的患者有慢性肾脏疾病。基线平均LDL-C为4.7mmol/L(180.7mg/dL)；中位数(最小:最大)：4.7(1.4：8.2)mmol/L[179.5(53.0：316.0)mg/dL]。基线平均值Lp(a)为43.9mg/dL(中位数[最小:最大]：19.0[1.5：285.0]mg/dL)。

60名患者完成了6周的双盲治疗期(阿利库单抗组中40名[97.6％]和安慰剂组中20名[95.2％])(即，当通过患者既定时间表确定单采比率时)，并且57名完成了18周的双盲治疗期(分别为37[90.2％]和20[95.2％])，此时单采时间表由先前达到的LDL-C值确定。在5名(8.1％)过早停止研究治疗的患者中，1名(4.8％)服用安慰剂(由于不良事件撤回)，4名(9.8％)服用阿利库单抗(2名因不良事件撤回，1名因顺应性差撤回，1名患者撤回同意)。

群体年龄的平均值±标准偏差(SD)是58.7±9.7岁，36名(58.1％)患者是男性，60名(96.8％)是白人。进入研究之前单采治疗的中位数(最小，最大)为4.9(0.5，32.9)岁。

平衡治疗组之间的基线特征。在阿利库单抗组中平均计算的基线LDL-C(在研究进入时)为4.5±1.4mmol/L(175.1mg/dL)，安慰剂组为5.0±1.8mmol/L(191.6mg/dL)(P＝0.35)。27名(43.5％)患者在基线时遵循每周单采时间表，35名(56.5％)患者遵循Q2W时间表。经受每周单采的患者平均LDL-C值分别为3.9±1.3mmol/L(151.3±51.3mg/dL)对5.3±1.4mmol/L(204.9±55.7mg/dL)。38名(61.3％)患者的基线脂蛋白(a)水平正常(<30mg/dL)，并且24名(38.7％)患者的水平升高。筛选中有34名(54.8％)患者服用他汀类，其中19名(55.9％)服用最大日剂量。基线LDL-C值在他汀治疗的患者中为4.0±1.4mmol/L(155.0±54.6mg/dL)，相比之下，未服用他汀的患者为5.4±1.4mmol/L(208.0±53.2mg/dL)。30名患者(48.4％)来自德国而32名(51.6％)来自美国。

注射暴露的平均值±SD持续时间在阿利库单抗组为17.4±2.3周(8.6±1.3次注射)，在安慰剂组为17.5±3.1周(8.4±1.7次注射)。

效果结果

表5至表8总结了功效结果。

表5显示了从第7周到第18周的单采的标准化比率

表5：主要功效分析：第7周至第18周的单采治疗的标准化比率(ITT)

只有在每个定点照护(Point-of-care)LDL-C值跳过的合理的单采治疗视为“未发生单采”。(出于任何原因)缺乏从第7周至第18周的单采治疗信息被归于在随访中“发生”的单采治疗的结果。单采治疗的标准化比率定义为：实际单采治疗/计划单采治疗的次数(QW为6次，QW为12次)。

表6：从第7周到第18周单采治疗的标准化比率(ITT)

只有在每个定点照护LDL-C值跳过的合理的单采治疗视为“未发生单采”。(出于任何原因)缺乏从第7周至第18周的单采治疗信息被归于在随访中“发生”的单采治疗的结果。2名患者(安慰剂组1名，阿利库单抗1名)在第6周前停止研究治疗，标准化的单采比率为1。

主要功效终点实现了有利于阿利库单抗治疗患者的统计学显著益处，其中治疗差异相对于安慰剂的Hodges-Lehmann中位数估计值为0.75(95％置信区间：0.67-0.83)。因此，阿利库单抗治疗的患者与安慰剂治疗的患者相比，单采治疗的标准化比率具有额外的0.75(75％)降低(P<0.0001)。当由之前实现的LDL-C浓度确定单采治疗时，从第7周至第18周单采治疗标准化比率的中位治疗差异对于经受了每周单采的患者为0.75(95％CI0.58-0.92)并且对于采用Q2W时间表(有利于阿利库单抗)的患者为0.67(95％CI 0.50-1.00)。

4周期间(第15周至第18周)单采治疗的标准化比率的中位治疗差异为0.50(95％CI 0.50至1.00；P<0.0001)，有利于阿利库单抗，表明单采治疗对安慰剂而言的标准化比率降低50％。

如表5中所示，阿利库单抗治疗患者的单采治疗的平均比率为0.128，而安慰剂组的单采治疗的平均比率为0.806。图2显示了个体阿利库单抗治疗患者在12周时间内与安慰剂组的个体患者相比单采治疗率下降百分比的图示。在此期间，服用阿利库单抗的患者中63.4％没有单采术，并且92.7％避免了至少一半的该手术。也就是说，阿利库单抗治疗组的26名患者实现了单采治疗率的100％降低。相反，安慰剂组没有一个患者的单采治疗率实现100％降低。这些结果也反映在表6和图3-6中，说明研究的第7周至第18周安慰剂和阿利库单抗治疗组患者的单采治疗率。结果显示，与安慰剂相比，向现有的治疗方案中加入阿利库单抗的患者能够在12周中使其标准化单采治疗的频率显著降低75％(P<0.0001)。

表7和图7和8显示了与安慰剂相比，阿利库单抗治疗就研究过程中血清LDL-C水平的变化而言的影响。总体讲，阿利库单抗治疗的患者在第6周展现出从基线的平均LDL-C降低大于50％，而安慰剂组患者LDL-C没有展现任何显著程度的LDL-C降低。

表7：第6周时基线分析的LDL-C百分比变化(单采前)：MMRM-ITT

注意：最小二乘法(LS)意指从MMRM(重复测量的混合效应模型)分析中取得的标准误(SE)和p值。该模型包括治疗组的固定分类效应，按IVRS、时间点、逐点治疗的随机分层、和逐点相互作用分层，以及基线计算的LDL-C值的连续固定协变量和基线计算的LDL-C值逐点相互作用。模型中的时间点包括从第2周(单采前)到第18周(单采前)的双周时间点。

表8总结了安慰剂和阿利库单抗治疗患者的关键次要功效结果。

表8：关键次要功效分析结果

在阿利库单抗组中，平均单采前的LDL-C值从基线时的4.5mmol/L(175mg/dL)降至第6周时的2.3mmol/L(90mg/dL)；安慰剂组患者的相应数据为5.0mmol/L(192mg/dL)和4.8mmol/L(185mg/dL)(图2)。单采前LDL-C在从基线到第6周的LS平均±SE(95％CI)百分比变化在阿利库单抗组为-53.7±2.3(-58.2至-49.2)并且在安慰剂组为1.6±3.1(-4.7至7.9)(LS均值±SE百分比差值-55.3±3.9，95％CI-63.1至-47.5；P<0.0001)。到18周时，阿利库单抗组平均LDL-C值略微上升至2.9mmol/L(110mg/dL)，安慰剂组为4.9mmol/L(191mg/dL)(LS平均值±SE百分比差异-46.4±7.9，95％CI-62.3至-30.5；P<0.0001)。

交叉验证，比较定点照护(Point-of-care)LDL-C值与中心实验室值，显示两个测量是高度相关的(皮尔森相关系数0.86)。

在具有正常基线值的患者中，脂蛋白(a)从基线到第18周的百分比变化分别为-5.7％(对于阿利库单抗)对-3.0％(对于安慰剂)并且在具有升高的基线值的患者中分别为4.9％对7.6％。在第7-18周期间，可以撤回单采治疗，阿利库单抗治疗与较低的平均时间的平均值±SD LDL-C值(使用Kroon公式18)相关，在(潜在)单采间期的疗程中为2.4±1.3mmol/L(92.7±50.2mg/dL)对安慰剂3.8±1.7mmol/L(146.7±65.6mg/dL)(P<0.0001)。

在事后分析中，阿利库单抗治疗患者的时间平均LDL-C值始终低于安慰剂治疗患者中的LDL-C值。

安全性

在阿利库单抗组中75.6％的患者和安慰剂组中76.2％的患者报告了TEAE，其中没有一个是致命的。严重不良事件(阿利库单抗9.8％，安慰剂9.5％)和导致治疗中断的事件发生率(分别为4.9％和4.8％)在两组中也相似。

阿利库单抗组中的三名患者(7.3％)和安慰剂组中没有一人具有两次连续的单采前计算的LDL-C值<0.7mmol/L(25mg/dL)。这些患者中两名具有至少一次不良事件，其中一人有几次严重的不良事件(肺炎、急性心肌梗塞、急性呼吸衰竭、心力衰竭充血、败血症和主动脉瓣狭窄)。27名患者(阿利库单抗中23名[56.1％]和安慰剂中4名[19.0％])具有单采后连续两个LDL-C值<0.7mmol/L，其中15名(65.2％)和2名(50.0％)分别有不良事件。没有一个事件是严重的，但有一名患者(4.3％)中断阿利库单抗治疗。

总结和结论

本研究显示与接受安慰剂的患者相比，接受阿利库单抗的患者展现出降低的单采治疗率，以及在整个研究过程中降低的单采治疗次数。特别是与安慰剂治疗相比，阿利库单抗治疗导致单采术治疗率更高的降低，中位估计值为0.75或75％(p<0.0001)。

本研究还证实，用阿利库单抗治疗的患者中有63.4％的患者没有进行单采疗法，相比在安慰剂治疗的患者中为0％(即，安慰剂治疗组中没有患者能够完全放弃单采疗法，而63.4％阿利库单抗治疗组的患者能够在阿利库单抗治疗后完全消除单采治疗)。此外，阿利库单抗治疗组92.7％的患者单采频率降低至少50％，相比之下安慰剂治疗患者降低14.3％。此外，阿利库单抗在第6周时将LDL-C从175mg/dl降低了55％(相对于PBO)至89.5mg/dl。在阿利库单抗治疗的患者中也观察到apoB、非HDL-C和TC的显著降低。阿利库单抗治疗从第15周至第18周降低了单采治疗的标准化比率。

关于安全性，每1周或每2周经受LDL单采疗法的HeFH患者皮下施用阿利库单抗通常安全且耐受良好。总体报告TEAEs的患者数和AESI在不同治疗组之间是可比的。

本研究中的所有患者都具有高心血管风险并且之前已经服用过LLT(包括他汀类)。在筛选中，只有54.8％的患者服用他汀类，其中55.9％服用了最大耐受剂量。总体人群中有很大一部分因耐受性问题(43.5％)报告他汀类治疗的剂量下降的病史，以及62.9％报告改用不同的他汀类。给出了不服用他汀类或不以最大日剂量服用他汀类的各种原因，从肌肉症状到副作用焦虑，以及局部实践/局部标签，表明患有heFH的患者对于单采表现出多样性和难以治疗人群，治疗选择有限。

美国患者表现出与德国患者不同的特征，具有更高的基线LDL-C、更普遍的他汀不耐受性以及不太频繁的单采方案。在美国，通常仅对6个月后对最大耐受药物疗法没有足够反应并且具有升高的LDL-C加上其他心血管危险因素的患者考虑用于heFH的脂蛋白单采。在单采中心更为常见的德国，在饮食和LLT失败12个月内，以及LDL-C阈值较低时，考虑单采，并且相对Q2W单采，优选每周一次单采。此外，来自欧洲的降低LDL-C的建议是基于风险分层治疗-靶向的方法，而美国的指南主张剂量适应的方法。鉴于靶标LDL-C值<1.8mmol/L(70mg/dL)的欧洲指南采用的方法，LDL-C高于此靶标值的服用阿利库单抗的德国患者仍然符合单采标准。因此，可能证明使用阿利库单抗的LLT与具有非常高LDL-C或未能实现靶标LDL-C值的患者的脂蛋白单采相辅相成。

总之，该研究实现了主要功效终点的显著降低，并且证实PCSK9抑制剂(例如阿利库单抗)是降低或消除患者对脂蛋白单采疗法的需求或延迟对这种治疗的需求的有效治疗选择。

本发明之范围将不受本文所述特定实施方案的限制。的确，除了本文所述的实施方案外，对于本发明所属技术领域的专业人员而言，基于上述说明和附图，本发明之各种修改形式也将变得明显。这些修改形式也属于所附的权利要求范围。

Claims

1.PCSK9抑制剂在制备用于消除患者对脂蛋白单采疗法的需求或者降低患者实现靶标脂蛋白水平所需的脂蛋白单采疗法的频率的药物中的用途，其中所述患者是高胆固醇血症患者且正在或已经以初始频率用脂蛋白单采治疗，其中所述初始频率是治疗前频率，其中向患者施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂，从而降低患者血清中至少一种脂蛋白的水平，并降低患者实现靶标脂蛋白水平所需的脂蛋白单采的频率；

其中所述PCSK9抑制剂是特异性结合PCSK9的抗体，且

其中抗体包含如SEQ ID NO：1/6所示的HCVR/LCVR。

2.根据权利要求1所述的用途，其中单采的初始频率是每周一次或每两周一次，其中所述初始频率是治疗前频率。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后的单采的频率为每三周一次。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后的单采的频率为每四周一次。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后的单采的频率为每五周一次。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂后的单采的频率为少于每五周一次。

7.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂之后，患者不再需要单采来维持靶标脂蛋白水平。

8.根据权利要求1所述的用途，其中在用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂治疗之前，患者被诊断为患有杂合家族性高胆固醇血症(HeFH)或纯合家族性高胆固醇血症(HoFH)和/或升高的脂蛋白(a)(Lp(a))。

9.根据权利要求1所述的用途，其中脂蛋白单采疗法选自：级联过滤、免疫吸附、肝素诱导的LDL沉淀、LDL吸附脂质吸附物、硫酸葡聚糖-纤维素吸附和LDL血液灌流。

10.根据权利要求1所述的用途，其中在用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂治疗之前或之时，患者在以初始频率的稳定的脂蛋白单采时间表上至少2周，然后施用第一剂量的PCSK9抑制剂，其中所述初始频率是治疗前频率。

11.根据权利要求1所述的用途，其中患者在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂之前处于稳定的背景脂质调节疗法(LMT)上。

12.根据权利要求1所述的用途，其中患者在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂的同时处于稳定的背景脂质调节疗法(LMT)上。

13.根据权利要求11或12所述的用途，其中稳定的背景LMT是低剂量、中剂量或高剂量他汀类疗法。

14.根据权利要求1所述的用途，其中在施用一个或多个剂量的PCSK9抑制剂之后，患者血清中降低的脂蛋白是选自以下的一种或多种脂蛋白：LDL-C、ApoB、非HDL-C、总胆固醇和Lp(a)。

15.根据权利要求1所述的用途，其中靶标脂蛋白水平是小于200mg/dL的血清LDL-C水平。

16.根据权利要求1所述的用途，其中靶标脂蛋白水平是小于130mg/dL的血清LDL-C水平。

17.根据权利要求1所述的用途，其中靶标脂蛋白水平是小于100mg/dL的血清LDL-C水平。

18.根据权利要求1所述的用途，其中靶标脂蛋白水平是小于70mg/dL的血清LDL-C水平。

19.根据权利要求1所述的用途，其中以每两周一次的频率，约75mg的剂量向患者施用特异性结合PCSK9的抗体。

20.根据权利要求1所述的用途，其中以每两周一次的频率，约150mg的剂量向患者施用特异性结合PCSK9的抗体。

21.根据权利要求1所述的用途，其中以每四周一次的频率，约300mg的剂量向患者施用特异性结合PCSK9的抗体或抗原结合蛋白。

22.根据权利要求19至21中任一项所述的用途，其中抗体是阿利库单抗。

23.根据权利要求1所述的用途，其中抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：2所示的HCDR1、如SEQ ID NO：3所示的HCDR2、如SEQ ID NO：4所示的HCDR3、如SEQ ID NO：7所示的LCDR1、如SEQ ID NO：8所示的LCDR2和如SEQ ID NO：10所示的LCDR3。