KR20180034672A

KR20180034672A - 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체

Info

Publication number: KR20180034672A
Application number: KR1020187007719A
Authority: KR
Inventors: 로버트 씨. 포디; 가렌 맨벨리안
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2015-08-18
Filing date: 2016-08-17
Publication date: 2018-04-04
Also published as: JP2018523684A; CN107922507A; ZA201800498B; CA2995645A1; CN107922507B; IL257425A; US20210100900A1; US10772956B2; EP3337828A1; MX2022010357A; AU2016308111A1; MA42657A; AU2023200378A1; WO2017031151A1; MX2018002000A; EA201890519A1; HK1255470A1; US20170049886A1; JP2024016218A; JP2022000443A

Abstract

본 발명은 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 환자의 필요성을 감소시키거나 제거하기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 환자에게 PCSK9 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 소정 실시형태들에서, PCSK9 억제제는 항-PCSK9 항체이다. 본 발명의 방법은 지단백질 분리반출술(예를 들면, LDL 분리반출술 또는 Lp(a) 분리반출술)을 포함하는 치료학적 용법으로 현재 치료받고 있는 고지혈증 및 관련 병태를 갖는 환자를 치료하는데 유용하다.

Description

지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-PCSK9 억제성 항체

본 발명은 지질 및 지단백질의 상승된 수준과 관련된 질환 및 장애의 치료학적 치료 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 지단백질 분리반출술(apheresis)(예를 들면, LDL 분리반출술 또는 Lp(a) 분리반출술)을 포함하는 치료학적 용법으로 현재 치료받고 있는 고지혈증 및 관련 병태를 갖는 환자를 치료하기 위한 PCSK9 억제제의 용도에 관한 것이다.

고지혈증은 혈중 지질 및/또는 지단백질의 상승된 수준을 특징으로 하거나 이와 관련된 질환 및 장애를 포괄하는 일반적인 용어이다. 고지혈증은 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, 복합 고지혈증 및 상승된 지단백질 (Lp(a))를 포함한다. 다수의 집단에서 고지혈증의 특히 우세한 형태는 고콜레스테롤혈증이다.

고콜레스테롤혈증, 특히 저밀도 지단백질(LDL) 콜레스테롤(LDL-C) 수준의 증가는 죽상 동맥경화증 및 관상 심장 질환(CHD)의 발병에 대한 주요 위험 요소로 작용한다(Sharrett et al., 2001, Circulation 104:1108-1113). 저밀도 지단백질 콜레스테롤은 콜레스테롤 저하 치료요법의 주요 표적으로서 확인되어 있고 유효한 대용 치료학적 종점으로서 용인된다. 다수의 연구들에서 LDL-C 수준을 감소시키는 것은 LDL-C 수준과 CHD 발병사건(event) 사이의 강한 직접적 관계로 CHD의 위험을 감소시킨다는 것이 입증되었다; 각각 1mmol/L(약 40mg/dL)의 LDL-C 감소에 대해 심혈관 질환(CVD) 사망율(mortality) 및 이환율(morbidity)은 22% 저하된다. LDL-C가 더 크게 감소되면 발병사건이 더 크게 감소되고, 표준 스타틴 치료에 대한 집중적 치료의 비교 데이터는 LDL-C 수준이 낮을수록 심혈관(CV) 위험이 매우 높은 환자의 이점이 더 커짐을 시사한다.

가족성 고콜레스테롤혈증(FH)은 사람이 조기 중증 심혈관 질환(CVD)에 취약하게 만드는 지질 대사의 유전적 장애이다. 저밀도 지단백질(LDL) 콜레스테롤(LDL-C)의 간 제거에 관여하는 단백질을 암호화하는 적어도 3개의 상이한 유전자의 결함은 FH를 야기할 수 있다. 이러한 결함의 예로는 순환으로부터 LDL-C를 제거하는 LDL 수용체(LDLR)를 암호화하는 유전자에서 그리고 LDL 입자의 주요 단백질인 아포지단백질(Apo) B의 유전자에서의 돌연변이가 포함된다. FH의 소정 경우에, LDLR의 열화(기능 돌연변이의 수득)에 관여하는 효소인 프로단백질(proprotein) 컨버타제 서브틸리신/켁신 타입 9(PCSK9)를 암호화하는 유전자가 돌연변이된다. 모든 경우에, FH는 출생시부터 혈장 중의 LDL-C의 축적과 힘줄 황색종, 황색판종, 죽종 및 CVD의 후속적 발병을 특징으로 한다. FH는 개체가 연루된 유전자의 카피(copy) 하나(이형접합성) 또는 둘 다(동형접합성)에 유전적 결함을 갖는지에 따라 이형접합성 FH(heFH) 또는 동형접합성 FH(hoFH)으로 분류될 수 있다.

현재 LDL-C-저하 의약으로는 스타틴, 콜레스테롤 흡수 억제제, 피브레이트, 니아신 및 담즙산 격리제(sequestrant)가 포함된다. 스타틴은 LDL-C 저하에 일반적으로 처방되는 치료이다. 그러나, 이러한 지질-저하 치료요법의 이용가능성에도 불구하고, 많은 고위험 환자들은 이들의 지침적 표적 LDL-C 수준에 도달하지 못한다(Gitt et al., 2010, Clin Res Cardiol 99(11):723-733). 이용가능한 지질-개질 치료요법(LMT)에도 불구하고 여전히 LDL-C에 대한 지침적 표적 수준을 달성할 수 없는 환자의 경우, 지단백질 분리반출술(예를 들면, LDL 분리반출술)에 의한 LDL-C의 기계적 제거가 때때로 처방된다. 지단백질 분리반출술은 아포단백질 B100-함유 지단백질을 혈액으로부터 제거한다. 이는 일반적으로 진행성 심혈관 질환 및 지속적으로 상승된 LDL-C를 갖는 환자의 최후의 선택으로 간주된다.

그러나, LDL 분리반출술은 환자에게 침습성이고 부담이 되는 고비용 절차이다. 분리반출술은 일반적으로 환자로부터의 기계적 제거 혈액을 포함하고; 혈액은 원심분리, 여과 또는 다른 분리 단계를 거쳐 원하지 않는 구성성분들을 체외로 제거된 다음 환자에게 다시 재도입된다. 지단백질 분리반출술은 LDL-C 농도를 50 내지 75%까지 급격히 저하시키고, 이는 분리반출술 절차들 사이에 대략 30%의 시간-평균 LDL-C 감소를 의미한다. 전형적인 분리반출술 프로세스는 혈청 지단백질 농도가 일시적으로 감소되고, 이어서 시간 경과에 따라 지단백질 수준이 상승된 "기준선" 수준으로 거의 선형으로 되돌아가는 것을 특징으로 한다. 지단백질 분리반출술 치료요법의 특징인 지단백질 수준의 이러한 진동 패턴(oscillating pattern)은 개체의 일생 동안 요구되는 주기적 분리반출술 치료에 대한 필요성을 설명한다. 또한, 다수의 지리적 위치에 분리반출술 센터가 희소하기 때문에, 많은 환자들이 3시간에 걸쳐 투여되고 환자의 LDL-C 수준 및 심혈관적 위험에 따라 전형적으로 매주 내지 4주마다 제공되는 이러한 절차를 위해 상당한 거리를 여행해야만 한다. 또한, 이러한 절차는 빈번한 혈관 접근을 위한 션트(shunt)의 배치를 필요로 할 수 있다. 저밀도 지단백질 분리반출술은 일반적으로 내약성이 좋지만, 저혈압, 저칼슘혈증, 알레르기 반응, 및 혈청 단백질 수준의 급격한 감소를 초래할 수 있다. 지질-저하성 약물만으로 치료받은 환자에 비해 지질-저하성 약물 이외에 분리반출술을 경험한 환자에서 삶의 질(QoL, 설문지에 의해 측정됨)이 더 낮았다는 것이 문서기록되어 있다(Schiel et al., 1995, Int J Artif Organs 18:786-793). 따라서, 최적화된 LMT 용법을 받았음에도 불구하고 LDL-C 목표를 달성하지 못하고 LDL-C를 저하시키기 위한 분리반출술을 필요로 하는 환자들은 분리반출술에 대한 필요성을 감소시키거나 제거할 수 있는 대안의 LDL-C 저하 치료요법으로부터 큰 이익을 얻을 것이다.

본 발명의 간략한 요약

본 발명은 지단백질 분리반출술 치료요법을 받고 있는 환자들에서 고지혈증을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 치료학적 방법은 혈청 지단백질 수준의 저하를 초래하고, 이에 의해 지단백질 분리반출술에 대한 환자의 필요성을 제거하거나 감소시키는 역할을 한다. 소정 실시형태들에서, 표적 지단백질 수준(예를 들면, 표적 LDL-C 수준)을 달성하기 위해 환자에 의해 요구되는 분리반출술 치료의 빈도는 본 발명의 치료학적 방법의 적용에 의해 감소된다. 소정 실시형태들에서, 표적 지단백질 수준(예를 들면, 표적 LDL-C 수준)을 달성하기 위한 분리반출술에 대한 환자의 필요성은 본 발명의 치료학적 방법의 적용에 의해 제거된다.

한 양상에 따르면, 본 발명의 방법은 지단백질 분리반출술로 치료받고 있거나 (예를 들면, 최근 6개월 내에) 치료받은 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자에게의 PCSK9 억제제의 투여는 환자의 혈청 중의 적어도 하나의 지단백질 수준의 저하를 초래하고, 결과적으로 환자에 의한 지단백질 분리반출술에 대한 필요성을 감소시키거나 제거한다.

다른 양상에 따르면, 본 발명의 방법은 초기 (치료-전) 빈도로 지단백질 분리반출술로 치료받고 있거나 치료받은 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자를 선택하는 단계 및 상기 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함하고, 이에 의해 환자의 혈청 중의 적어도 하나의 지단백질의 수준을 저하시키고 결과적으로 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술의 빈도를 감소시켜 표적 지단백질 수준을 달성한다.

본 발명의 방법에 의해 치료되거나 치료가능한 환자로는 예를 들면, 가족성 고콜레스테롤혈증(FH)을 갖는 환자를 포함하는 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자가 포함된다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법에 의해 치료되거나 치료가능한 환자는 동형접합성 FH(hoFH) 또는 이형접합성 FH(heFH)로 진단된(또는 그렇지 않으면 이를 갖는 것으로 알려져 있는) 환자이다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, PCSK9 억제제는 (예를 들면, 환자의 배경 스타틴 치료요법 외에) 환자의 기존 지질-저하 치료요법에 대한 부가 치료요법으로서 환자에게 투여된다.

본 발명은 또한 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성을 감소시키거나 제거하는데 사용하기 위한 또는 환자에 의한 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시키는데 사용하기 위한 PCSK9 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 예시의 PCSK9 억제제로는 예를 들면, 항-PCSK9 항체, 소분자 PCSK9 억제제, 및 스캐폴드-기반 PCSK9-결합 분자가 포함된다.

본 발명의 다른 실시형태들은 후속하는 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용의 검토로부터 명백해질 것이다.

도 1은 본원의 실시예 2에 기술되는 연구의 전체적 고안을 예시하는 도해이다. 이 연구는 2주의 스크리닝 기간, 18주의 이중-맹검 치료 기간, 8주의 추적 연구(follow-up)/개방-표지 연장 기간(open-label extenstion period)을 포함하였다.
도 2는 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹(ITT 집단)에서 7주째 내지 18주째의 분리반출술 치료 비율에서의 개별 환자의 감소를 나타내는 워터폴 플롯(waterfall plot)이다. 현장 진단(point-of-care) LDL-C 값마다 분리반출술 치료 생략(skipping)만이 "분리반출술이 발생하지 않았음"으로 간주된다. 7주째 내지 18주째의 분리반출술 치료 정보의 누락은 (어떠한 이유로든) 방문시 "발생한" 분리반출술 치료의 결과인 것으로 귀속된다.
도 3은 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 7주째 내지 18주째의 표준화된 분리반출 비율을 보여준다. 분리반출 비율은 x-축을 따라 나타내어지고; y-축은 상응하는 분리반출 비율 범위를 나타내는 환자의 백분율을 보여준다.
도 4는 상기 연구의 7주째 내지 18주째의 상이한 시점에서 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 분리반출술을 받는 환자의 백분율을 보여준다. 이 차트에 나타낸 환자들은 연구 시작시 매주(QW) 분리반출술을 받은 환자들이다.
도 5는 상기 연구의 7주째 내지 18주째의 상이한 시점에서 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 분리반출술을 받는 환자의 백분율을 보여준다. 이 차트에 나타낸 환자들은 연구 시작시 격주로(Q2W) 분리반출술을 받은 환자들이다.
도 6은 상기 연구의 7주째 내지 18주째의 상이한 시점에서 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 분리반출술을 받는 환자의 백분율을 보여준다. 이 차트에 나타낸 환자들은 연구에 등록된 모든 환자들을 나타낸다.
도 7은 연구 과정 동안 상이한 시점에서의 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 기저선으로부터의 계산된 LDL-C 백분율 변화를 보여준다. "분리반출술이 변함"이라고 표지된 흑색 화살표는 LDL-C 수준에 기초하여 개별 환자에 대해 앞으로의 분리반출술 빈도가 결정된 시점을 나타낸다. 이 시점 전에, 환자들은 개별 환자의 확립된 스케줄에 기초하여 고정된 빈도로 분리반출술을 받았다.
도 8은 연구 과정 동안 상이한 시점에서의 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자 그룹에서 계산된 LDL-C 수준(LS-평균 [+/- SE] mg/dL로 표현됨)을 보여준다. "분리반출술이 다르다"라고 표지된 흑색 화살표는 LDL-C 수준에 기초하여 개별 환자에 대해 앞으로의 분리반출술 빈도가 결정된 시점을 나타낸다. 이 시점 전에, 환자들은 개별 환자의 확립된 스케줄에 기초하여 고정된 빈도로 분리반출술을 받았다.

본 발명을 기술하기 전에, 본 발명의 방법 및 조건은 다양할 수 있기 때문에 본 발명은 기술된 특정 방법 및 실험 조건에 한정되는 것은 아님을 이해해야만 한다. 또한, 본원에서 사용되는 용어는 본 발명의 범위가 첨부된 청구범위에 의해서만 한정될 것이기 때문에 특정 실시형태들만을 기술할 목적을 위한 것이고 제한되는 것으로 의도되지 않음을 이해해야만 한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 사용되는 용어 "약(about)"이란 특정 인용된 수적 값과 관련하여 사용될 때, 상기 값은 인용된 값으로부터 1% 초과로 벗어나지 않음을 의미한다. 예를 들면, 본원에서 사용되는 표현 "약 100"은 99 및 101, 그리고 이들 사이의 모든 값(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.

본원에 기술된 방법 및 재료와 유사하거나 동일한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시에 사용될 수 있지만, 선호되는 방법 및 재료를 하기에 기술한다. 본원에 언급된 모든 출판물은 이들의 전문이 인용에 의해 본원에 포함된다.

지단백질 분리반출술에 대한 필요성을 감소시키거나 제거하는 방법

본 발명은 일반적으로 혈청 지단백질 수준(예를 들면, LDL-C 및/또는 Lp(a))을 저하시키기 위해 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 경험한 환자들에서의 지단백질 수준을 감소시키기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법은 이러한 환자의 혈청 중의 지단백질 수준의 감소를 초래하여 지단백질 분리반출술에 대한 필요성을 감소시키거나 제거한다.

본원에서 사용되는 용어 "지단백질"은 단백질 및 지질 둘 다를 함유하는 생체분자성 입자를 의미한다. 지단백질의 예로는 예를 들면, 저밀도 지단백질(LDL), 초저밀도 지단백질(VLDL), 중간 밀도 지단백질(IDL), 및 지단백질 (a)(Lp(a))이 포함된다.

본 발명의 맥락에서 사용되는 "지단백질 분리반출술"은 환자로부터의 혈액의 기계적 제거, 이어서, 여과, 흡착, 및 침전 등과 같은 프로세스에 의한 환자의 혈액으로부터의 지단백질(예를 들면, LDL-C 및/또는 Lp(a))의 제거, 및 최종적으로 처리된 혈액의 환자의 혈류로의 재도입에 관련된 치료학적 프로세스를 의미한다. 본 개시의 목적을 위해, "LDL 분리반출술" 및 "Lp(a) 분리반출술"은 분리반출술의 유형으로 고려되고, 따라서 보다 일반적인 정의 "지단백질 분리반출술"의 정의에 포함된다.

본 발명의 맥락에서 포함되는 지단백질 분리반출술의 특정 유형으로는 예를 들면, 이중 막 여과, 면역흡착, 헤파린-유도된 LDL 침전, 지질의 직접적 흡착, 덱스트란 설페이트-셀룰로스 흡착(혈장 또는 전혈), 헤파린 체외 LDL 침전(HELP) 시스템, DFPP 및 열여과 혈장 분리반출술, 및 혈액관류가 포함된다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성을 제거하기 위한 방법을 포함한다. 본원에서 사용되는 특정 환자의 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"은 환자의 혈청에서 측정되거나 그렇지 않으면 검출되는 하나 이상의 지단백질(예를 들면, LDL-C 및/또는 Lp(a))의 수준에 기초하여 의사, 보조 의사, 진단의 또는 다른 의학적 전문가에 의해 결정된다. 환자의 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"은 또한 환자의 가족력, 의학적 배경, 현재의 치료학적 치료 상태, 및 미국 의사 협회 및 의사 그룹에 의해 채택된 일반적으로 허용되거나 우세한 지단백질 표적과 같은 다른 인자들에 의해 결정되거나 영향을 받을 수 있다. 예를 들면, 소정 맥락에서, 약 70mg/dL 이상의 LDL-C 수준은 환자에 의한 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"을 나타낸다. 다른 맥락에서, 약 100mg/dL 이상의 LDL-C 수준은 환자에 의한 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"을 나타낸다. 소정 맥락에서, 약 150mg/dL, 200mg/dL, 250mg/dL, 300mg/dL, 400mg/dL 이상의 LDL-C 수준은 환자에 의한 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"을 나타낸다. 또 다른 맥락에서, 특정 시작점("기저선")에서의 환자의 LDL-C 또는 Lp(a) 수준과 비교하여, LDL-C 또는 Lp(a) 수준의 특정 백분율 감소가 충족되는지의 여부는 환자가 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"을 갖는지의 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 기저선으로부터 50% 미만(예를 들면, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 등)의 LDL-C 또는 Lp(a)의 감소는 "지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성"을 의미할 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 환자에서의 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시키기 위한 방법을 포함한다. 당해 분야 숙련가에 의해 이해될 것인 바와 같이, 환자는 특정 지단백질 목표(예를 들면, 100mg/dL 미만의 LDL-C 수준, 70mg/dL 미만의 LDL-C 수준 등)를 달성하기 위해 특정 빈도로의 지단백질 분리반출술을 이용하여 치료될 수 있다. 환자를 위한 지단백질 목표를 달성하고 유지하기 위해 특정 시간의 기간 동안(예를 들면, 매주, 매달 등) 환자에 의해 요구되는 분리반출술 치료의 수에 기초하여 소정의 빈도가 결정된다. 예시의 지단백질 분리반출술 빈도로는 예를 들면, 매주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 매달 1회, 매달 2회, 2개월마다 1회 등이 포함된다. 본 발명은 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여함으로써 환자에서의 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시키기 위한 방법을 포함한다. 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후 분리반출술의 민도는 환자의 치료-전 분리반출술 빈도로부터 적어도 50% 감소된다. 예를 들면, 환자가 PCSK9 억제제를 이용한 치료 전에 매주 1회(QW)의 빈도로 지단백질 분리반출술 치료 용법을 받고 있고, PCSK9 억제제를 이용한 치료 후에 상기 환자에 대한 분리반출술 빈도가 2주마다 1회(Q2W)로 감소되는 경우, 이어서, 상기 환자는 치료 후 지단백질 분리반출술 빈도의 50% 감소를 달성한다고 한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명에 따른 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후 분리반출술의 빈도는 75% 만큼 또는 100% 만큼(즉, 치료 후 지단백질 분리반출술에 대한 필요성의 제거) 감소된다.

본 발명의 맥락에서, 지단백질 분리반출술 빈도는 치료-전 빈도 및 치료-후 빈도로 표현될 수 있다. "치료-전 빈도"는 PCSK9 억제제의 투여를 포함하는 치료학적 용법의 개시 전에 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 분리반출술 치료요법의 빈도를 의미한다. "치료-후 빈도"는 PCSK9 억제제의 투여를 포함하는 치료학적 용법의 개시 후에 특정 표전 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 분리반출술 치료요법의 빈도를 의미한다. 특정 환자에 대한 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하는데 요구되는 분리반출술 치료요법의 빈도는 감소시키거나 그렇지 않으면 제어하고자 하는 지단백질의 혈청 수준을 포함하는 당해 분야에서 일반적으로 허용되는 기준에 기초하여 자격을 갖춘 의학 전문가에 의해 결정되는 것이 바람직하다.

따라서, 본 발명은 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여를 포함하는 치료 방법을 포함하고, 이로써 환자의 지단백질 분리반출술의 치료-후 빈도가 환자의 지단백질 분리반출술의 치료-전 빈도보다 낮다. 예를 들면, 본 발명은 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 예를 들면, 매주 1회의 치료-전 빈도로 지단백질 분리반출술 치료요법을 경험하고 있거나 경험한 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 치료학적 방법을 포함하고, 여기서, 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 받은 후에, 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술의 빈도(즉, 치료-후 빈도)는 예를 들면, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회이거나 또는 그보다 덜 빈번하다. 몇몇의 경우에, 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술에 대한 필요성은 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후 완전히 제거된다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성을 감소시키거나 제거하기 위한 방법을 포함하고, 여기서, 상기 방법은 지난달, 최근 2개월, 최근 3개월, 최근 4개월, 최근 5개월, 최근 6개월 내에 또는 보다 더 긴 기간 동안 지단백질 분리반출술로 치료되어온 고지혈증(예를 들면, 고콜레스테롤혈증)을 지닌 환자를 선택하는 단계, 및 상기 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 환자의 혈청 중의 적어도 하나의 지단백질의 수준을 저하시키고, 결과적으로 환자에 의한 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 필요성의 감소 또는 제거를 가능하게 한다. 예를 들면, 본 발명의 소정 실시형태들에서 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후에, 환자의 혈청 LDL-C 수준은 정의된 수준 미만(예를 들면, 100mg/dL 미만 또는 70mg/dL 미만)으로 감소되어 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술 치료요법의 치료-후 빈도가 감소되거나, 또는 지단백질 분리반출술이 더 이상 요구되지 않는다고 결론지어진다.

소정 실시형태들에서, 분리반출술의 비율(rate)(또는 빈도)은 특정 표적 지단백질 수준을 달성하고/하거나 유지하기 위해 환자에 의해 요구되는 분리반출술의 정규화된 비율로서 표현된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 특정 환자에 대한 분리반출술의 정규화된 비율은 항-PCSK9 치료학적 용법의 개시 후에 정의된 기간의 시간에 걸쳐 환자가 받은 실제 분리반출술 치료의 수를 항-PCSK9 치료학적 용법의 개시 전에 동일한 기간의 시간에 걸쳐 환자가 받은 분리반출술 치료의 수로 나눈 것으로서 정의된다. 예를 들면, 항-PCSK9 항체의 투여를 포함하는 치료학적 용법을 개시하기 전에, 환자가 8주의 기간에 걸쳐 8회(예를 들면, 매주 1회)의 분리반출술 치료를 받았고, 항-PCSK9 치료학적 용법의 개시 후에 환자가 8주의 기간에 걸쳐 2회(예를 들면, 4주마다 1회)의 분리반출술 치료를 받은 경우, 이어서, 환자의 분리반출술의 정규화된 비율은 2/8 = 0.25이다. 본 발명은 당해 방법에 의해 PCSK9 억제제의 투여 후에 환자에 대한 분리반출술의 정규화된 비율이 예를 들면, 0.9 미만, 0.8 미만, 0.7 미만, 0.6 미만, 0.5 미만, 0.4 미만, 0.3 미만, 0.2 미만 또는 0.1 미만인 방법을 포함한다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 환자는 고콜레스테롤혈증(예를 들면, 70mg/dL 이상의 혈청 LDL-C 농도 또는 100mg/dL 이상의 혈청 LDL-C 농도)을 갖는다. 소정 실시형태들에서, 환자의 고콜레스테롤혈증은 스타틴 치료요법에 의해 부적절하게 제어된다. 예를 들면, 본 발명은 아토르바스타틴(아토르바스타틴 + 에제티미브 포함), 로수바스타틴, 세리바스타틴, 피타바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴(심바스타틴 + 에제티미브 포함), 프라바스타틴, 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 스타틴의 1일 용량에 의해 부적절하게 제어되는 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자에 의해 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시키거나 제거하기 위한 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 고콜레스테롤혈증을 갖고 스타틴 불내증을 나타내거나 그렇지 않으면 스타틴 치료요법에 대한 부작용 또는 바람직하지 못한 반응(들)(예를 들면, 골격근 통증, 동통, 쇠약 또는 경련[예를 들면, 근육통, 근육병, 횡문근융해증 등])을 경험하는 환자에 의한 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시키거나 제거하기 위한 방법을 포함한다.

지질 병변을 치료하기 위한 방법

본 발명은 추가로 고콜레스테롤혈증의 신체적 징후를 치료하거나, 역행(reverse)시키거나 또는 해소하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 고콜레스테롤혈증과 관련된 지질 병변을 갖는 환자를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 예를 들면, 본 발명은 하나 이상의 황색판종을 갖는 환자를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법 및 조성물은 치료를 필요로 하는 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, PCSK9 억제제를 이용한 치료 전에 환자에게 존재하였던 지질 병변은 상기 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후에 감소되거나, 해소되거나, 또는 제거된다. 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 고콜레스테롤혈증과 관련된 지질 병변을 갖는 환자를 치료하기 위한 방법을 포함하고, 여기서, 상기 방법은 지질 병변(예를 들면, 황색판종)을 갖는 환자를 선택하는 단계 및 상기 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함한다.

환자 선택

본 발명은 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 (예를 들면, 최근 6개월 내에, 최근 12주 내에, 최근 8주 내에, 최근 6주 내에, 최근 4주 내에, 최근 2주 내에 등) 최근에 경험한 환자를 치료하는데 유용한 방법 및 조성물을 포함한다. 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 환자는 또한 추가의 선택 기준들 중 하나 이상을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 환자가 고콜레스테롤혈증 병태, 예를 들면, 이종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(heFH), 동종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(hoFH), 상염색체 우성 고콜레스테롤혈증(ADH: Autosomal Dominant Hypercholesterolemia, 예를 들면, PCSK9 유전자에서의 하나 이상의 기능-획득(gain-of-function) 돌연변이와 관련된 ADH), 상염색체 열성 고콜레스테롤혈증(ARH: autosomal recessive hypercholesterolemia, 예를 들면, LDLRAP1에서의 돌연변이와 관련된 ARH), 및 가족성 고콜레스테롤혈증과 별개인(비FH) 고콜레스테롤혈증의 발병으로 진단되었거나 이들 고콜레스테롤혈증 병태를 발병할 위험이 있는 것으로 확인된 경우, 환자는 본 발명의 방법을 이용한 치료를 위해 선택될 수 있다. 가족성 고콜레스테롤혈증(예를 들면, heFH 또는 hoFH)의 진단은 유전형질 분석(genotyping) 및/또는 임상학적 기준에 의해 이루어질 수 있다. 유전형질 분석되지 않은 환자들의 경우, 임상학적 진단은 명확한 FH에 대한 기준과 사이먼 브룸(Simon Broome) 기준 또는 WHO/네덜란드 지질 네트워크(Dutch Lipid Network) 기준에 기초하여 8점 초과의 스코어일 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 환자는 관상 심장 질환(CHD)의 병력을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다. 본원에서 사용되는 "CHD의 병력"(또는 "CHD의 문서기록된 병력")로는 (i) 급성 심근 경색(MI); (ii) 무증상(silent) MI; (iii) 불안정 협심증; (iv) 관상 혈관재형성(revascularization) 절차(예를 들면, 경피 관상동맥 중재술[PCI: percutaneous coronary intervention] 또는 관상 동맥 우회로 이식 수술[CABG: coronary artery bypass graft surgery]; 및/또는 (v) 침습성 또는 비-침습성 시험에 의해 진단된 임상학적으로 유의한 CHD(예를 들면, 관상 혈관조영술, 트레드밀(treadmill)을 이용한 스트레스 테스트, 스트레스 심장초음파 또는 핵 영상화) 중 하나 이상이 포함된다.

소정 실시형태들에 따르면, 환자는 비-관상 심장 질환 심혈관 질환("비-CHD CVD")을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다. 본원에서 사용되는 "비-CHD CVD"로는 (i) 죽상 혈전증 기원인 것으로 간주되는 24시간 초과로 지속되는 국소 허혈성 신경학적 결손을 갖는 문서기록된 이전의 허혈성 뇌졸중; (ii) 말초 동맥 질환; (iii) 복부 대동맥 동맥류; (iv) 죽상 경화성 신장 동맥 협착증; 및/또는 (v) 경동맥 질환(일시적 허혈성 발작 또는 경동맥의 50% 초과의 폐색) 중 하나 이상이 포함된다.

소정 실시형태들에 따르면, 환자는 하나 이상의 추가의 위험 인자들, 예를 들면, (i) 3개월 이상 동안 30 ≤ eGFR < 60mL/min/1.73m2로 정의된 문서기록된 중간 정도의 만성 신장 질환(CKD); (ii) 표적 기관 손상(예를 들면, 망막병증, 신장병증, 미세알부민뇨증)의 존재 또는 부재 하의 1형 또는 2형 진성 당뇨병; (iii) 5% 이상의 계산된 10년 치명적 CVD 위험 스코어(ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidemias, Conroy et al., 2003, Eur. Heart J. 24:987-1003)를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 환자는 연령(예를 들면, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 또는 80세 초과), 인종, 국가적 기원, 성별(남성 또는 여성), 운동 습관(예를 들면, 규칙적인 운동자, 비-운동자), 기타 기존 의학적 병태(예를 들면, II형 당뇨병, 고혈압 등) 및 현재 투약 상태(예를 들면, 현재 복용 중인 베타 차단제, 니아신, 에제티미브, 피브레이트, 오메가-3-지방산, 담즙산 수지 등)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 위험 인자들을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

본 발명에 따르면, 환자는 상기 선택 기준 또는 치료학적 특성 중 하나 이상의 조합에 기초하여 선택될 수 있다. 예를 들면, 소정 실시형태들에 따르면, 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 (예를 들면, 최근 6개월 이내에) 최근 경험하는 것 이외에 본 발명의 방법을 이용한 치료에 적합한 환자는 추가로 (i) 문서기록된 CHD의 병력, (ii) 비-CHD CVD, 및/또는 (iii) 표적 기관 손상을 갖는 진성 당뇨병과 조합하여 heFH 또는 비-FH를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있고; 이러한 환자들은 또한 70mg/dL 이상의 혈청 LDL-C 농도를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

소정의 다른 실시형태들에 따르면, 1일 중간-용량 치료학적 스타틴 용법에 의해 적절하게 제어되지 않는 고콜레스테롤혈증을 갖는 것 이외에 본 발명의 방법을 이용한 치료에 적합한 환자는 추가로 CHD 또는 비-CHD CVD 부재 하의 heFH 또는 비-FH를 갖지만 (i) 5% 이상의 계산된 10년 치명적 CVD 위험 스코어; 또는 (ii) 표적 기관 손상 부재 하의 진성 당뇨병 중 어느 하나를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있고; 이러한 환자는 또한 100mg/dL 이상의 혈청 LDL-C 농도를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

부가적(Add-On) 치료요법으로서의 PCSK9 억제제의 투여

본 발명은, 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 최근에 경험한 환자에게 특정 투약량 및 빈도에 따라 PCSK9 억제제를 투여하고, PCSK9 억제제가 환자의 기존 지질 저하 치료요법에 대한 부가적 치료요법(적용가능한 경우), 예를 들면, 환자의 기존의 매일 치료학적 스타틴 용법에 대한 부가적 치료요법으로서 투여되는, 치료 방법을 포함한다.

예를 들면, 본 발명의 방법은 환자가 PCSK9 억제제를 받기 전에 받고 있었던 동일한 안정한 매일 치료학적 스타틴 용법(즉, 동일한 투약량의 스타틴)에 대한 부가적 치료요법으로서 PCSK9 억제제가 투여되는 부가적 치료학적 용법을 포함한다. 다른 실시형태들에서, PCSK9 억제제는 환자가 PCSK9 억제제를 받기 전에 받고 있었던 스타틴의 용량 초과 또는 상기 용량 미만인 양으로 스타틴을 포함하는 치료학적 스타틴 용법에 대한 부가적 치료요법으로서 투여된다. 예를 들면, 특정 투약 빈도 및 양으로 투여된 PCSK9 억제제를 포함하는 치료학적 용법을 시작한 후, 환자에게 투여되거나 처방된 스타틴의 1일 용량은 환자의 치료학적 요구에 따라, 환자가 PCSK9 억제제 치료학적 용법을 시작하기 전에 복용하고 있었던 1일 스타틴 용량과 비교하여 (a) 동일하게 유지하거나, (b) 증가시키거나, 또는 (c) 감소(예를 들면, 상향-적정(up-titrate) 또는 하향-적정(down-titrate))시킬 수 있다.

치료학적 효능

본 발명의 방법은 LDL-C, ApoB100, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤, VLDL-C, 트리글리세라이드, Lp(a) 및 잔류 콜레스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 지질 구성성분의 혈청 수준에 있어서의 감소를 초래한다. 본 발명의 치료학적 용법의 지단백질-저하 효과는 결과적으로 환자에 의한 표적 지단백질 수준을 달성하기 위해 지단백질 분리반출술에 대한 빈도를 감소시키거나 이에 대한 필요성을 제거한다. 예를 들면, 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 또는 최근에 경험한 환자에게 PCSK9 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 투여는 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 혈청 저밀도 지단백질 콜레스테롤(LDL-C)의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 ApoB100의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 비 HDL-C의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% 또는 그 이상의 총 콜레스테롤의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 그 이상의 VLDL-C의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% 또는 그 이상의 트리글리세라이드의 기저선으로부터의 평균 감소율(%); 및/또는 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 Lp(a)의 기준선으로부터의 평균 감소율(%)을 초래할 것이다.

본 발명은 환자에게 항-PCSK9 항체의 다중 용량을 용량당 약 75 내지 150mg의 투약량으로 투여하는 단계, 및 약 2주마다 1회의 빈도(또는 본원의 다른 곳에 기술되어 있는 상향-적정 투약 용법에 따른 투약 용법)로 투약하는 단계를 포함하는, 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 방법을 포함하고, 여기서, 상기 환자는 지단백질 분리반출술을 경험하고 있거나 또는 최근에 경험하였고, 여기서, 항-PCSK9 항체를 이용한 치료의 약 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24주 또는 그 이상 후에 상기 환자는 적어도 50%의 기저선으로부터의 LDL-C 수준의 감소를 나타내고, 따라서 상기 환자에 의한 지단백질 분리반출술에 대한 빈도를 감소시키거나 이에 대한 필요성을 제거한다. 소정 실시형태들에서, 항-PCSK9 항체를 이용한 치료의 1주 이상 후에, 상기 환자는 약 55%, 60%, 70% 또는 그 이상의 기저선으로부터의 LDL-C 수준의 감소를 나타낸다.

PCSK9 억제제

본 발명의 방법은 환자에게 PCSK9 억제제를 포함하는 치료학적 조성물을 투여함을 포함한다. 본원에 사용되는 "PSCK9 억제제"는 사람 PCSK9에 결합하거나 사람 PCSK9와 상호작용하여 시험관내에서 또는 생체내에서 PCSK9의 보통의 생물학적 기능을 억제하는 임의의 제제이다. PCSK9 억제제의 카테고리의 비-제한적 예로는 소분자 PCSK9 길항제, PCSK9 발현 또는 활성의 핵산-기반 억제제(예를 들면, siRNA 또는 안티센스), PCSK9와 특이적으로 상호작용하는 펩타이드-기반 분자(예를 들면, 펩티바디(peptibody)), PCSK9와 특이적으로 상호작용 하는 수용체 분자, LDL 수용체의 리간드-결합부를 포함하는 단백질, PCSK9-결합 스캐폴드 분자(예를 들면, DARPin, HEAT 반복 단백질, ARM 반복 단백질, 테트라트리코펩타이드 반복 단백질, 피브로넥틴-기반 스캐폴드 작제물, 및 천연 발생 반복 단백질에 기초한 기타 스캐폴드 등[예를 들면, 문헌(Boersma and Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol. 22:849-857) 및 이에 인용된 참조문헌을 참조한다], 및 항-PCSK9 압타머(aptamer) 또는 이의 부분이 포함된다. 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 PCSK9 억제제는 사람 PCSK9 항체에 특이적으로 결합하는 항-PCSK9 항체 또는 항원-결합 단편이다.

본원에서 사용되는 용어 "사람 프로단백질(proprotein) 컨버타제(convertase) 서브틸리신/켁신 유형 9" 또는 "사람 PCSK9" 또는 "hPCSK9"는 서열번호 197에 나타낸 핵산 서열 및 서열번호 198의 아미노산 서열을 갖는 PCSK9 또는 이의 생물학적 활성 단편을 말한다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄인 4개의 폴리펩타이드 쇄들을 포함하는 면역글로불린 분자 및 이들의 다량체(예를 들면, IgM)를 나타내도록 의도된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 V_H로서 약기됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, C_H1, C_H2 및 C_H3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(LCVR 또는 V_L로서 약기됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(C_L1)을 포함한다. V_H 및 V_L 영역은 프레임워크 영역(FR: framework region)이라고 칭하는 보다 보존적인 영역들 사이에 간삽된(interspersed) 상보성 결정 영역(CDR)이라고 칭하는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR들 및 4개의 FR들로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시형태들에서, 항-PCSK9 항체(또는 이의 항원-결합부)의 FR들은 사람 생식선 서열과 동일할 수 있거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열은 2개 이상의 CDR들의 사이드-바이-사이드(side-by-side) 분석에 기초하여 정의될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 또한 전장 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합부", 및 항체의 "항원-결합 단편" 등은 임의의 천연 발생, 효소적으로 수득가능한, 합성의 또는 유전적으로 조작된, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 임의의 적합한 표준 기술, 예를 들면, 단백질 가수분해적 소화 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 재조합 유전자 조작 기술을 이용하여 예를 들면, 전장 항체 분자로부터 유도될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들면, 파지-항체 라이브러리를 포함함)로부터 용이하게 입수가능하거나 또는 합성될 수 있다. DNA는 서열분석되고 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 이용하여 조작되어, 예를 들면, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 입체배치(configuration)로 배열하거나, 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산 등을 변형, 부가 또는 결실시킬 수 있다.

항원-결합 단편의 비-제한적 예로는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변성 영역(예를 들면, 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들면, CDR3 펩타이드)을 모방하는 아미노산 잔기들로 이루어진 최소 인식 단위, 또는 제한된(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩타이드가 포함된다. 다른 조작된 분자, 예를 들면, 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-절편이식된 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들면, 1가의 나노바디, 2가의 나노바디 등), 소형 모듈 면역약제(SMIP) 및 상어 가변 IgNAR 도메인은 또한 본원에 사용되는 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.

항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 1개의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성으로 이루어질 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열과 인접하거나 하나 이상의 프레임워크 서열과 프레임 내에 존재하는 적어도 1개의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 관련된 V_H 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, V_H 및 V_L 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체성일 수 있고, V_H-V_H, V_H-V_L 또는 V_L-V_L 이량체를 함유할 수 있다. 대안으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 1개의 불변 도메인에 공유결합적으로 링크된 적어도 1개의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적 예시의 입체배치로는 (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L-C_L이 포함된다. 상기 열거된 예시의 입체배치 중 임의의 것을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 입체배치에서, 가변 및 불변 도메인은 서로에 대해 직접적으로 링크될 수 있거나 전장 또는 부분적 힌지 또는 링커 영역에 의해 링크될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성(flexible) 또는 반-가요성 링크를 초래하는 적어도 2개(예를 들면, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로와의 그리고/또는 (예를 들면, 디설파이드 결합(들)에 의한) 하나 이상의 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인과의 비-공유결합적 회합에서 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 입체배치 중 임의의 것의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 기타 다량체)를 포함할 수 있다.

전장 항체 분자에 관해서, 항원-결합 단편은 단일특이적 또는 다중특이적(예를 들면, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다중특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인들을 포함할 것이고, 여기서, 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시의 이특이적 항체 포맷을 포함하는 임의의 다중특이적 항체 포맷은 당해 분야에서 이용가능한 일상적 기술을 이용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편과 관련하여 사용하기 위해 개작될(adapted) 수 있다.

항체의 불변 영역은 보체를 고착시키고 세포-의존적 세포독성을 매개하는 항체의 능력에 있어서 중요하다. 따라서, 항체의 이소타입은 항체가 세포독성을 매개하는 것이 바람직한지의 여부에 기초하여 선택될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사람 항체는 예를 들면, CDR에 그리고 특히 CDR3에 사람 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기들(예를 들면, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발(mutagenesis)에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)을 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식선으로부터 유도된 CDR 서열들이 사람 프레임워크 서열에 절편이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "재조합 사람 항체"는 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현된 항체와 같은 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 모든 사람 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합 조합적(combinatorial) 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자이식된 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들면, 문헌[Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]을 참조한다) 또는 다른 DNA 서열에의 사람 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이 유발(또는 사람 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이)시키고, 따라서 재조합 항체의 V_H 및 V_L 영역의 아미노산 서열은, 사람 생식선 V_H 및 V_L 서열로부터 유도되고 관련되지만 생체내 사람 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.

사람 항체는 힌지 이질성(heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160kDa의 안정한 4개 쇄 작제물을 포함하고, 여기서 이량체는 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 함께 고정된다. 제2 형태에서, 이량체는 쇄간 디설파이드 결합을 통해 링크되지 않고, 공유결합적으로 커플링된 경쇄 및 중쇄(반(half)-항체)로 이루어진 약 75 내지 80kDa의 분자가 형성된다. 이들 형태는 친화성 정제 후에도 분리하기가 극히 어려웠다.

각종 온전한(intact) IgG 이소타입에서의 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 이소타입과 관련된 구조적 차이로 인한 것이지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역에서의 단일 아미노산 치환은 사람 IgG1 힌지를 이용하여 제2 형태(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105)의 출현을 통상적으로 관찰되는 수준으로 유의하게 감소시킬 수 있다. 본 발명은 힌지, C_H2 또는 C_H3 영역에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함하고, 이는 원하는 항체 형태의 수율을 향상시키기 위해, 예를 들면, 생산시에 바람직할 수 있다.

본원에서 사용되는 "단리된 항체"는 이의 자연 환경의 적어도 하나의 구성성분으로부터 확인되어 분리되고/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 구성성분으로부터, 또는 항체가 자연적으로 존재하거나 자연적으로 생성되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 발명의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포 내의 동일반응계내(in situ) 항체도 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계를 행한 항체이다. 소정 실시형태들에 따르면, 단리된 항체는 실질적으로 다른 세포성 재료 및/또는 화학물질을 포함하지 않을 수 있다.

용어 "특이적으로 결합한다" 등은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생리학적 조건 하에 상대적으로 안정한 항원과 복합체를 형성함을 의미한다. 항체가 항원에 특이적으로 결합하는지를 결정하는 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있고, 이로는 예를 들면, 평형 투석, 및 표면 플라스몬 공명 등이 포함된다. 예를 들면, 본 발명의 맥라에서 사용되는 PCSK9에 "특이적으로 결합하는" 항체로는 표면 플라스몬 공명 검정에 의한 측정시 약 1000nM 미만, 약 500nM 미만, 약 300nM 미만, 약 200nM 미만, 약 100nM 미만, 약 90nM 미만, 약 80nM 미만, 약 70nM 미만, 약 60nM 미만, 약 50nM 미만, 약 40nM 미만, 약 30nM 미만, 약 20nM 미만, 약 10nM 미만, 약 5nM 미만, 약 4nM 미만, 약 3nM 미만, 약 2nM 미만, 약 1nM 미만 또는 약 0.5nM 미만의 K_D로 PCSK9 또는 이의 부분에 결합하는 항체가 포함된다. 그러나, 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예를 들면, 다른 (비-사람) 종 유래의 PCSK9 분자에 대한 교차-반응성을 갖는다.

본 발명의 방법에 유용한 항-PCSK9 항체는 항체가 유도된 상응하는 생식선 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을, 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이터베이스로부터 입수가능한 생식선 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 아미노산 서열들 중 임의의 것으로부터 유도된 항체 및 이의 항원-결합 단편의 사용과 관련된 방법을 포함하고, 여기서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산은 항체가 유도된 생식선 서열의 상응하는 잔기(들) 또는 다른 사람의 생식선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 생식선 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환(이러한 서열 변화 본원에서 총체적으로 "생식선 돌연변이"로서 나타냄)으로 돌연변이된다. 당해 분야 숙련가는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 시작하여, 하나 이상의 각각의 생식선 돌연변이 또는 이들의 조합을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 소정 실시형태들에서, V_H 및/또는 V_L 도메인 내의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기의 전부는 항체가 유도된 본래 생식선 서열에서 발견된 잔기들로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태들에서, 소정 잔기들만이, 예를 들면, FR1의 처음 8개의 아미노산들 내에서 또는 FR4의 마지막 8개의 아미노산들 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이 본래 생식선 서열로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태들에서, 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상은 상이한 생식선 서열(즉, 항체가 본래 유도된 생식선 서열과 상이한 생식선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 또한, 본 발명의 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에 2개 이상의 생식선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있고, 예를 들면, 여기서, 소정의 각각의 잔기들은 특정 생식선 서열의 상응하는 잔기들로 돌연변이되고, 한편 본래 생식선 서열과 상이한 소정의 다른 잔기들은 유지되거나 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 수득되면, 하나 이상의 생식선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 하나 이상의 바람직한 특성, 예를 들면, 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, 개선되거나 향상된 길항작용적(antagonistic) 또는 효능작용적(agonistic) 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편의 사용은 본 발명 내에 포함된다.

본 발명은 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 항-PCSK9 항체의 사용과 관련된 방법을 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 본원에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것에 비하여 예를 들면, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 갖는 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-PCSK9 항체의 용도를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "표면 플라스몬 공명"은 예를 들면, BIAcore™ 시스템(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)을 이용하여 바이오센서 매트릭스 내에서의 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학적 현상을 말한다.

본원에서 사용되는 용어 "K_D"는 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타는 것으로 의도된다.

용어 "에피토프"는 파라토프로서 공지되어 있는 항체 분자의 가변 영역에서 특정 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원성 결정인자를 말한다. 단일 항원은 1개 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체들은 항원 상의 상이한 부위들에 결합할 수 있고, 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 입체구조적이거나 선형일 수 있다. 입체구조적 에피토프는 선형 폴리펩티드 쇄의 상이한 절편들로부터 공간적으로 병치된 아미노산들에 의해 생성된다. 선형 에피토프는 폴리펩티드 쇄에서 인접한 아미노산 잔기들에 의해 생성된 것이다. 소정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 사카라이드, 포스포릴 그룹 또는 설포닐 그룹의 모이어티(moiety)를 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에서 사용된 항-PCSK9 항체는 pH-의존적 결합 특성을 갖는 항체이다. 본원에서 사용되는 표현 "pH-의존적 결합"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 "중성 pH에 비하여 산성 pH에서 PCSK9에 대해 감소된 결합"을 나타냄을 의미한다(본 개시의 목적을 위해 상기 표현 둘 다는 상호교환적으로 사용될 수 있다). 예를 들면, "pH-의존적 결합 특성을 갖는" 항체로는 산성 pH에서보다 중성 pH에서 보다 높은 친화도로 PCSK9에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 포함된다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 항체 및 항원-결합 단편은 산성 pH에서보다 중성 pH에서 적어도 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100배 또는 그 이상 더 높은 친화도로 PCSK9에 결합한다.

본 발명의 이러한 양상에 따르면, pH-의존적 결합 특성을 갖는 항-PCSK9 항체는 모(parental) 항-PCSK9 항체에 비하여 하나 이상의 아미노산 변이를 가질 수 있다. 예를 들면, pH-의존적 결합 특성을 갖는 항-PCSK9 항체는 모 항-PCSK9 항체의 하나 이상의 CDR들에 하나 이상의 히스티딘 치환 또는 삽입을 함유할 수 있다. 따라서, 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 히스티딘 잔기를 갖는 모 항-PCSK9 항체의 하나 이상의 CDR들의 하나 이상의 아미노산의 치환을 제외하고는 모 항-PCSK9 항체의 CDR 아미노산 서열과 동일한 CDR 아미노산 서열(예를 들면, 중쇄 및 경쇄 CDR)을 포함하는 항-PCSK9 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.

pH-의존적 결합을 갖는 항-PCSK9 항체는 모 항체의 단일 CDR 내에, 또는 모 항-PCSK9 항체의 다중(예를 들면, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 CDR들에 걸쳐 분포되는 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 히스티딘 치환을 가질 수 있다. 예를 들면, 본 발명은 모 항-PCSK9 항체의, HCDR1에 하나 이상의 히스티딘 치환, HCDR2에 하나 이상의 히스티딘 치환, HCDR3에 하나 이상의 히스티딘 치환, LCDR1에 하나 이상의 히스티딘 치환, LCDR2에 하나 이상의 히스티딘 치환 및/또는 LCDR3에 하나 이상의 히스티딘 치환을 포함하는 pH-의존적 결합을 갖는 항-PCSK9 항체의 사용을 포함한다.

본원에서 사용되는 표현 "산성 pH"는 6.0 이하(예를 들면, 약 6.0 미만, 약 5.5 미만, 약 5.0 미만 등)의 pH를 의미한다. 표현 "산성 pH"는 약 6.0, 5.95, 5.90, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0 또는 그 이하의 pH 값을 포함한다. 본원에서 사용되는 표현 "중성 pH"는 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 의미한다. 표현 "중성 pH"는 약 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, 및 7.4의 pH 값을 포함한다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 항-PCSK9 항체의 비-제한적 예로는 예를 들면, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 보코시주맙, 로델시주맙, 랄판시주맙, 또는 상기 항체들 중 임의의 것의 항원-결합부가 포함된다.

사람 항체의 제조

유전자이식 마우스에서 사람 항체를 생성시키기 위한 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 임의의 이러한 공지의 방법은 사람 PCSK9에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 제조하기 위해 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다.

VELOCIMMUNE™ 기술(예를 들면, US 6,596,541을 참조한다, Regeneron Pharmaceuticals) 또는 모노클로날 항체를 생성하기 위한 임의의 다른 공지의 방법을 이용하여, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, PCSK9에 대한 고 친화성 키메라 항체를 처음으로 단리한다. VELOCIMMUNE® 기술은 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동가능하게 링크된 사람 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 유전자이식 마우스의 생성을 포함하여, 상기 마우스가 항원성 자극에 반응하여 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생성시키도록 한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되고 사람 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동가능하게 링크된다. 이어서, DNA는 전장 사람 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.

일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스에 목적하는 항원을 이용하여 챌린징하고(challenged), 항체를 발현하는 마우스로부터 림프 세포(예를 들면, B-세포)를 회수한다. 불멸의 하이브리도마 세포주를 제조하기 위해 상기 림프 세포를 골수종 세포주와 융합하고, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하여 목적하는 항원에 대해 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 동정할 수 있다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 단리하여 중쇄 및 경쇄의 바람직한 이소타입 불변 영역에 링크시킬 수 있다. 이러한 항체 단백질은 세포, 예를 들면, CHO 세포에서 생성될 수 있다. 대안으로, 항원-특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA는 항원-특이적 림프구로부터 직접 단리될 수 있다.

처음으로, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 고 친화성 키메라 항체가 단리된다. 항체를 특성확인하고, 당해 분야 숙련가들에게 공지되어 있는 표준 절차를 이용하여 친화도, 선택성, 에피토프 등을 포함하는 바람직한 특성들에 대해 선택한다. 마우스 불변 영역을 원하는 사람 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 완전한 사람 항체, 예를 들면, 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성시킨다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다를 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.

일반적으로, 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 항체는 고체상에 고정화되거나 용액상 중의 항원에의 결합에 의한 측정시 상기 기술된 바와 같이 높은 친화도를 갖는다. 마우스 불변 영역을 원하는 사람 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 완전한 사람 항체를 생성시킨다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다를 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.

본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 PCSK9에 특이적으로 결합하는 사람 항체 또는 항체의 항원-결합 단편의 구체적인 예로는 서열번호 1 및 서열번호 11로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 임의의 항체 또는 항원-결합 단편이 포함된다. 대안으로, 본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 PCSK9에 특이적으로 결합하는 사람 항체 또는 항체의 항원-결합 단편의 구체적인 예로는 서열번호 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109, 117, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, 및 189로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR) 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 임의의 항체 또는 항원-결합 단편이 포함된다. 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 6 및 서열번호 15로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCVR1, LCVR2, LCVR3)을 포함할 수 있다. 대안으로, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113, 121, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, 및 193으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 이의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR) 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCVR1, LCVR2, LCVR3)을 포함할 수 있다.

2개의 아미노산 서열 사이의 서열 동일성은 기준(reference) 아미노산 서열의 전체 길이, 즉 최상의 서열 정렬을 이용하여 하나의 서열 번호로 식별된 아미노산 서열에 걸쳐 그리고/또는 2개의 아미노산 서열 사이의 최상의 서열 정렬의 영역에 걸쳐 결정되고, 여기서, 최상의 서열 정렬은 당해 분야 공지의 툴(tool), 예를 들면 표준 설정, 바람직하게는 EMBOSS::needle, Matrix: Blosum62, Gap Open 10.0, Gap Extend 0.5를 이용하는 Align을 이용하여 수득할 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에서, 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 1/6 및 서열번호 11/15로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR) 유래의 6개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 대안으로, 본 발명의 소정 실시형태들에서, 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 37/41, 45/49, 53/57, 61/65, 69/73, 77/81, 85/89, 93/97, 101/105, 109/113, 117/121, 125/129, 133/137, 141/145, 149/153, 157/161, 165/169, 173/177, 181/185, 및 189/193으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 쌍(HCVR/LCVR) 유래의 6개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.

본 발명의 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 항-PCSK9 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 2/3/4/7/8/10(mAb316P["REGN727" 또는 "알리로쿠맙"으로서도 나타냄]) 및 서열번호 12/13/14/16/17/18(mAb300N)(US 특허 ㄱ공개 제2010/0166768호 참조) 및 서열번호 16이 아미노산 잔기 30에서의 류신에 대한 히스티딘의 치환(L30H)을 포함하는 서열번호 12/13/14/16/17/18로부터 선택되는 HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명의 소정 실시형태들에서, 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 1/6 및 서열번호 11/15로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다. 소정의 예시의 실시형태들에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 1의 HCVR 아미노산 서열 및 서열번호 6의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 예시의 실시형태들에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 11의 HCVR 아미노산 서열 및 서열번호 15의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 예시의 실시형태들에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 11의 HCVR 아미노산 서열 및 아미노산 잔기 30에서의 류신에 대한 히스티딘의 치환(L30H)을 포함하는 서열번호 15의 LCVR 아미노산 서열을 포함한다.

약제학적 조성물 및 투여 방법

본 발명은 환자에게 약제학적 조성물 내에 함유된 PCSK9 억제제를 투여함을 포함하는 방법을 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적합한 담체, 부형제 및 적합한 이동, 전달, 및 내성 등을 제공하는 기타 제제와 함께 제형화된다. 모든 약제학 화학자들에게 공지되어 있는 처방집: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA에서 여러 가지 적절한 제형을 찾을 수 있다. 이들 제형으로는 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포체를 함유하는 지질(양이온성 또는 음이온성)(예를 들면, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수-중-유 및 유-중-수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(carbowax)(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔 및 카보 왁스를 함유하는 반고체 혼합물이 포함된다. 또한, 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참조한다.

본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 항-PCSK9 항체를 포함하는 예시의 약제학적 제형으로는 US 8,795,669(특히 알리로쿠맙을 포함하는 예시의 제형을 기술함)에 또는 WO2013/166448, 또는 WO2012/168491에 제시되어 있는 제형들 중 임의의 것이 포함된다.

각종 전달 시스템, 예를 들면, 리포솜 내의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 엔도사이토시스(endocytosis)(예를 들면, 문헌[Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432]을 참조한다)가 공지되어 있고, 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는데 사용할 수 있다. 투여 방법으로는 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 및 경구 경로가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 주입 또는 볼루스(bolus) 주사에 의해, 상피 또는 점막 피부 라이닝(예를 들면, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 표준 니들(needle) 및 시린지(syringe)를 이용하여 피하 또는 정맥내 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치는 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는데 용이하게 적용될 수 있다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용가능하거나 일회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 함유하는 대체가능한 카트리지를 이용한다. 일단 카트리지 내의 약제학적 조성물이 전부 투여되어 카트리지가 비워지면, 빈 카트리지는 용이하게 폐기되고 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 대체될 수 있다. 이어서, 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서는 대체가능한 카트리지가 존재하지 않는다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보유된 약제학적 조성물로 미리 채워진다. 일단 저장소에 약제학적 조성물이 비워지면, 전체 장치를 폐기한다.

다수의 재사용가능한 펜 및 오토인젝터(autoinjector) 전달 장치가 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용된다. 예로는 몇몇을 언급하자면 AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, 및 OPTICLIK™(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용되는 일회용 펜 전달 장치의 예로는 몇몇을 언급하자면 SOLOSTAR™ 펜(sanofi-aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ 오토인젝터(Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN(Dey, L.P.), 및 HUMIRA™ 펜(Abbott Labs, Abbott Park IL)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

소정 상황에서, 상기 약제학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 실시형태에서, 펌프가 사용될 수 있다(문헌[Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201]을 참조한다). 다른 실시형태에서, 중합체성 재료가 사용될 수 있고; 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida]을 참조한다. 또 다른 실시형태에서, 제어된 방출 시스템을 상기 조성물의 표적 부근에 위치시킴으로써 전신 용량의 분획만을 필요로 할 수 있다(예를 들면, 문헌[Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138]을 참조한다). 기타 제어된 방출 시스템은 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]에 의해 논의된다.

주사가능한 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 드립 주입 등을 위한 투여형(dosage form)을 포함할 수 있다. 이들 주사가능한 제제는 공지의 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 주사가능한 제제는 상기 기술된 항체 또는 이의 염을 종래 주사용으로 사용되는 멸균 수성 매체 또는 유성 매체에 용해시키거나, 현탁시키거나 또는 유화시킴으로써 조제할 수 있다. 주사용 수성 매체로서, 예를 들면, 생리학적 염수, 글루코스, 및 알코올(예를 들면, 에탄올), 다가 알코올(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온 계면활성제[예를 들면, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소첨가된 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50mol) 부가물)] 등과 같은 적절한 가용화제와 조합하여 사용할 수 있는 기타 보조제 등을 함유하는 등장성 용액이 존재한다. 유성 매체로서, 예를 들면, 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화제와 조합하여 사용할 수 있는 참깨 오일, 대두 오일 등이 사용된다. 이렇게 조제된 주사제는 적절한 앰풀(ampoule)에 충진하는 것이 바람직하다.

유리하게는, 상기에 기술된 경구적 또는 비경구적 사용을 위한 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량에 맞춘 단위 용량의 투여형으로 조제된다. 이러한 단위 용량의 투여형으로는 예를 들면, 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰풀), 좌제 등이 포함된다.

용량

본 발명의 방법에 따라 대상체에게 투여되는 PCSK9 억제제(예를 들면, 항-PCSK9 항체)의 양은 일반적으로 치료학적 유효량이다. 본원에서 사용되는 어구 "치료학적 유효량"은 LDL-C, ApoB100, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤, VLDL-C, 트리글리세라이드, Lp(a) 및 잔류 콜레스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 파라미터에서 검출가능한 감소(기저선으로부터 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 또는 그 이상)를 초래하는 PCSK9 억제제의 용량 또는 지단백질 분리반출술에 대한 환자의 필요성을 감소시키거나 제거하는 양 또는 환자의 분리반출술의 정규화된 비율(본원의 다른 곳에 정의됨)을 감소시키는 양을 의미한다.

항-PCSK9 항체의 경우, 치료학적 유효량은 약 0.05mg 내지 약 600mg, 예를 들면, 약 0.05mg, 약 0.1mg, 약 1.0mg, 약 1.5mg, 약 2.0mg, 약 10mg, 약 20mg, 약 30mg, 약 40mg, 약 50mg, 약 60mg, 약 70mg, 약 80mg, 약 90mg, 약 100mg, 약 110mg, 약 120mg, 약 130mg, 약 140mg, 약 160mg, 약 170mg, 약 180mg, 약 190mg, 약 200mg, 약 210mg, 약 220mg, 약 230mg, 약 240mg, 약 250mg, 약 260mg, 약 270mg, 약 280mg, 약 290mg, 약 300mg, 약 310mg, 약 320mg, 약 330mg, 약 340mg, 약 350mg, 약 360mg, 약 370mg, 약 380mg, 약 390mg, 약 400mg, 약 410mg, 약 420mg, 약 430mg, 약 440mg, 약 450mg, 약 460mg, 약 470mg, 약 480mg, 약 490mg, 약 500mg, 약 510mg, 약 520mg, 약 530mg, 약 540mg, 약 550mg, 약 560mg, 약 570mg, 약 580mg, 약 590mg, 또는 약 600mg의 항-PCSK9 항체일 수 있다. 본 발명의 소정 예시의 실시형태들에 따르면, 항-PCSK9 항체의 치료학적 유효량은 75mg, 150mg 또는 300mg(예를 들면, 알리로쿠맙의 경우) 또는 140mg 또는 420mg(예를 들면, 에볼로쿠맙의 경우)이다. PCSK9의 다른 투약량은 당해 분야 숙련가에게 명백할 것이고, 본 발명의 범위 내에서 고려된다.

각각의 용량 내에 함유된 항-PCSK9 항체의 양은 환자 체중 킬로그램당 항체의 밀리그램(즉, mg/kg)의 단위로 표현될 수 있다. 예를 들면, 항-PCSK9 항체는 환자에게 환자 체중 kg당 약 0.0001 내지 약 10mg의 용량으로 투여될 수 있다.

병용 치료요법

본원 다른 곳에 기술되어 있는 바와 같이, 본 발명의 방법은

환자의 이전에 처방된 지질 저하 치료요법과 병용하여("의 위에") 환자에게 PCSK9 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 지단백질 분리반출술에 대한 필요성을 감소시키거나 제거하는 것과 관련하여, PCSK9 억제제는 안정한 매일 치료학적 스타틴 용법과 병용하여 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명과 관련하여 PCSK9 억제제가 병용하여 투여될 수 있는 예시의 매일 치료학적 스타틴 용법으로는 예를 들면, 아토르바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg), (매일 아토르바스타틴/에제티미브 10/10 또는 40/10mg), 로수바스타틴(매일 5, 10 또는 20mg), 세리바스타틴(매일 0.4 또는 0.8mg), 피타바스타틴(매일 1, 2 또는 4mg), 플루바스타틴(매일 20, 40 또는 80mg), 심바스타틴(매일, 5, 10, 20, 40 또는 80mg), 심바스타틴/에제티미브(매일 10/10, 20/10, 40/10 또는 80/10mg), 로바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg), 프라바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg) 및 이들의 조합이 포함된다. PCSK9 억제제가 본 발명의 맥락에서 병용하여 투여될 수 있는 다른 지질 저하 치료요법으로는 예를 들면, (1) 콜레스테롤 흡수 및 담즙산 재-흡수를 억제하는 제제(예를 들면, 에제티미브); (2) 지단백질 대사를 증가시키는 제제(예를 들면, 니아신); 및/또는 (3) 22-하이드록시콜레스테롤과 같은 콜레스테롤 제거시 역할을 행하는 LXR 전사 인자의 활성화제가 포함된다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 환자에게 PCSK9 억제제(예를 들면, 항-PCSK9 항체, 예를 들면, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 보코시주맙, 로델시주맙, 또는 랄판시주맙)를 안지오포이에틴-유사 단백질 3의 억제제(예를 들면, REGN1500과 같은 항-ANGPTL3 항체), 안지오포이에틴-유사 단백질 4의 억제제(예를 들면, US 특허 제9,120,851호에서 "H1H268P" 또는 "H4H284P"로서 언급된 항-ANGPTL4 항체와 같은 항-ANGPTL4 항체), 또는 안지오포이에틴-유사 단백질 8의 억제제(예를 들면, 항-ANGPTL8 항체)와 병용하여 투여함을 포함하는 방법이 제공된다.

본 발명의 방법의 맥락에서, 추가의 치료학적 활성 구성성분(들), 예를 들면, 상기 열거된 제제들 중 임의의 제제 또는 이들의 유도체는 PCSK9 억제제의 투여 직전에, 이의 투여와 동시에 또는 이의 투여 직후에 투여될 수 있고; (본 개시의 목적을 위해, 이러한 투여 용법은 추가의 치료학적 활성 구성성분"과의 병용으로의" PCSK9 억제제의 투여로 간주된다). 본 발명은 PCSK9 억제제가 본원의 다른 곳에 기술되어 있는 하나 이상의 추가의 치료학적 활성 구성성분(들)과 공동-제형화되는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법을 포함한다.

투여 용법

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 다중 용량의 PCSK9 억제제(즉, PCSK9 억제제를 포함하는 약제학적 조성물)은 (예를 들면, 매일 치료학적 스타틴 용법 또는 기타 배경(background) 지질 저하 치료요법의 위에) 정의된 시간 과정에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 대상체에게 다중 용량의 PCSK9 억제제를 순차적으로 투여함을 포함한다. 본원에서 사용되는 "순차적으로 투여하는"은 PCSK9 억제제의 각각의 용량이 상이한 시점, 예를 들면, 사전 결정된 시간 간격(예를 들면, 시간, 일, 주 또는 개월)에 의해 분리된 상이한 일자에 대상체에게 투여됨을 의미한다. 본 발명은 PCSK9 억제제의 단일 최초 용량을 환자에게 투여하고, 이어서 PCSK9 억제제의 1회 이상의 2차 용량을 투여하고, 그리고 임의로 PCSK9 억제제의 1회 이상의 3차 용량을 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 포함한다.

용어 "최초 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"이란 PCSK9 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 개별 용량의 투여의 임시적 순서를 말한다. 따라서, "최초 용량"은 치료 용법의 시작시에 투여되는 용량("기저선 용량"으로서도 나타냄)이고; "2차 용량"은 상기 최초 용량 후에 투여되는 용량이고; 그리고 "3차 용량"은 상기 2차 용량 후에 투여되는 용량이다. 상기의 최초, 2차 및 3차 용량은 모두 동일한 양의 PCSK9 억제제를 포함할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도에 따라 서로 다를 수 있다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 최초, 2차 및/또는 3차 용량에 포함된 PCSK9 억제제의 양은 치료 과정 동안에 서로 다를 수 있다(예를 들면, 필요에 따라 상향 또는 하향 조정된다). 소정 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4 또는 5회)의 용량이 "부하(loading) 용량"으로서 치료 용법의 시작시에 투여되고, 이어서 후속적 용량은 덜 빈번한 기준으로 투여하게 된다(예를 들면, "유지 용량").

본 발명의 예시의 실시형태들에 따르면, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 직전 용량의 1 내지 26주(예를 들면, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½주, 또는 그 이상) 후에 투여된다. 본원에 사용되는 어구 "직전 용량"은 다중 투여의 순차에서 개재하는(intervening) 용량 없이 순서에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항원-결합 분자의 용량을 의미한다.

본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 PCSK9 억제제의 임의의 횟수의 2차 및/또는 3차 용량을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 소정 실시형태들에서 단일 2차 용량만 환자에게 투여된다. 다른 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 소정 실시형태들에서 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.

다중 2차 용량과 관련된 실시형태들에 있어서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 2, 4, 6, 8주 또는 그 이상 후에 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, 다중 3차 용량과 관련된 실시형태에서, 각각의 3차 용량은 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 1 내지 2, 4, 6, 8주 또는 그 이상 후에 환자에게 투여될 수 있다. 대안으로, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 용법의 과정에 걸쳐서 다를 수 있다. 또한 투여 빈도는 치료 과정 동안 임상 검사 후 개별 환자의 필요에 따라 의사에 의해 조정될 수 있다.

본 발명은 상향-적정(up-titration) 옵션(본원에서는 "용량 조정"으로서도 칭함)을 포함하는 투여 용법(administration regimen)을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "상향-적정 옵션"은 특정 횟수의 PCSK9 억제제의 용량을 받은 후, 환자가 하나 이상의 정의된 치료학적 파라미터에서 특정한 감소를 달성하지 못한 경우, 그 후 상기 PCSK9 억제제의 용량을 증가시키는 것을 의미한다. 예를 들면, 환자에게 75mg 용량의 항-PCSK9 항체를 2주마다 1회의 빈도로 투여하는 것을 포함하는 치료학적 용법의 경우에, 8주(즉, 0주째, 2주째, 4주째, 6주째, 그리고 8주째에 투여한 5회 용량) 후에 상기 환자가 70mg/dL 미만의 혈청 LDL-C 농도를 달성하지 못한 경우, 이어서 그 후에(예를 들면, 10주째 또는 12주째에 또는 그 이후에 시작하여) 항-PCSK9 항체의 용량은 예를 들면, 2주마다 1회 투여되는 150mg으로 증가된다.

소정 실시형태들에서, 항-PCSK9 항체는 대상체에게 2주마다 약 75mg의 용량으로, 예를 들면, 적어도 3회 용량(또는 수일, 수주, 수개월 또는 수년에 걸친 치료 용법의 과정에 걸쳐) 투여된다.

소정 실시형태들에서, 항-PCSK9 항체는 대상체에게 2주마다 약 150mg의 용량으로, 예를 들면, 적어도 3회 용량(또는 수일, 수주, 수개월 또는 수년에 걸친 치료 용법의 과정에 걸쳐) 투여된다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 2주마다 약 75mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 100mg/dl 미만이고 LDL-C가 30% 감소된 경우 2주마다 75mg으로 유지된다.

다른 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 2주마다 약 75mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 100mg/dl 이상인 경우 2주마다 약 150mg으로 상향 적정된다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 2주마다 약 75mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 70mg/dl 미만이고 LDL-C가 30% 감소된 경우 2주마다 약 75mg으로 유지된다.

다른 실시형태에서, 상기 항체는 대상체에게 4주마다 약 300mg의 용량으로 투여된다.

추가의 실시형태에서, 상기 항체는 대상체에게 총 3회 용량으로 4주마다 약 300mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체가 사전-결정된 치료 목표를 달성하지 못하였거나 대상체가 기저선으로부터 적어도 30%의 LDL-C 감소를 갖지 못한 경우 추가의 36주 동안 2주마다 150mg으로 변경된다.

소정 실시형태들에서, 항-PCSK9 항체는 대상체에게 적어도 3회의 용량으로 4주마다 약 150mg의 용량으로 투여된다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 4주마다 약 150mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 100mg/dl 미만이고 LDL-C가 30% 감소된 경우 4주마다 150mf으로 유지된다.

다른 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 4주마다 약 150mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 100mg/dl 이상인 경우 2주마다 약 300mg으로 상향 적정된다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 항체는 대상체에게 12주 동안 4주마다 약 150mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체의 LDL-C 값이 70mg/dl 미만이고 LDL-C가 30% 감소된 경우에 추가의 12주 동안 4주마다 150mg으로 유지된다.

추가의 실시형태에서, 상기 항체는 대상체에게 총 3회의 용량으로 4주마다 약 300mg의 용량으로 투여되고, 상기 용량은, 8주째에 대상체가 사전-결정된 치료 목표를 달성하지 못하였거나 대상체가 기저선으로부터 적어도 30%의 LDL-C 감소를 갖지 못한 경우 추가의 36주 동안 2주마다 150mg으로 변경된다.

실시예

하기 실시예는 당해 분야 숙련가에게 본 발명의 방법과 조성물의 제조법과 사용 방법에 대한 완전한 개시와 설명을 제공하기 위해 제안되고, 본 발명자들이 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하도록 의도되는 것은 아니다. 사용된 수치(예를 들면, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 확보하기 위한 노력이 이루어져 왔지만, 약간의 실험적 오류와 편차가 고려되어야만 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부(part)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다.

실시예 1. 사람 PCSK9 에 대한 사람 항체의 생성

사람 항-PCSK9 항체는 US 특허 제8,062,640호에 기술된 바와 같이 생성되었다. 하기 실시예에서 사용된 예시의 PCSK9 억제제는 "REGN727" 또는 "알리로쿠맙"으로서도 공지되어 있는 "mAb316P"로 명명된 사람 항-PCSK9 항체이다. mAb316P는 하기 아미노산 서열 특성을 갖는다: 서열번호 5를 포함하는 중쇄 및 서열번호 9를 포함하는 경쇄; 서열번호 1을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 서열번호 6을 포함하는 경쇄 가변 도메인(LCVR); 서열번호 2를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 3을 포함하는 HCDR2; 서열번호 4를 포함하는 HCDR3, 서열번호 7을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 8을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 10을 포함하는 LCDR3.

실시예 2. 지질 분리반출술 치료요법을 경험하고 있는 이종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자에서의 알리로쿠맙의 효능 및 안전성을 평가하기 위한 무작위배정된 이중-맹검 위약-제어된 병행-그룹 연구

도입

본 연구의 목적은 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있는 HeFH를 갖는 환자에서의 LDL 분리반출술 치료의 빈도에 대한 2주마다 1회("Q2W") 투여된 알리로쿠맙 150mg의 효과를 위약과 비교하여 평가하는 것이었다.

매주 1회 또는 2주마다 1회의 빈도로 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있었던 HeFH를 갖는 성인 남성 및 여성이 본 연구에 등록되었다. LMT를 이용한 대상체의 배경 치료는 본 연구에 걸쳐 유지되었다. 이러한 환자들에서, 대조군으로서 위약을 선택하는 것은 알리로쿠맙의 효능 및 안전성의 가장 확고한 평가를 제공하기 때문에 본 연구의 목적에 적합하다.

LDL-C 값의 평균 감소는 분리반출술의 기술 및 지속기간에 따라 30% 내지 75%의 범위이다(Bambauer et al., Scientific World Journal, 2012, 2012:1-19). 매주 또는 격주 치료를 이용하여, LDL-C 수준은 40% 내지 50%까지 감소될 수 있다. 본 발명의 연구에 따르면, 방문시 LDL-C 값이 기저선(분리반출술-전) LDL-C 값보다 30% 이상 더 낮았던 경우 분리반출술을 수행하지 않았다. LDL-C 수준은 각각의 분리반출술 절차 후에 기저선을 향해 상승하지만, 본래 수준에 도달하지 않고; 반복된 매주 또는 격주 분리반출술을 이용하면, 기저선 수준은 플래토(plateau: 안정기)에 도달될 때까지 계속해서 떨어진다(Thompsen et al., Atherosclerosis, 2006, 189:31-38). 이와 같이, LDL-C 수준의 30% 감소에 기초한 분리반출술의 필요성을 결정하는 기준은, 알리로쿠맙의 투여로 관찰된 경우에 이러한 감소가 시간 경과에 따라 일관되어 분리반출술 절차에서와 같이 대략 동일한 수준의 LDL-C의 감소를 달성하기 때문에 정당화된다.

알리로쿠맙 Q2W(75mg 및 150mg SC) 및 Q4W(150mg 및 300mg SC) 투약 용법은 알리로쿠맙의 다른 페이즈(phase) 3 시험에서 평가되었다. 2회 용량 조사 연구(dose finding study)의 결과에 기초하여, Q2W 투약 용법을 선택하여 150mg Q2W 투약에 의해 제공된 12주째의 최대 효능을 갖는 모든 환자들에서 투약 사이 간격 동안 일정한 LDL-C 저하를 유지하였다. 이종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증 환자는 일반적으로 높은 기저선 LDL-C 수준을 갖는다. 이 환자들이 평생 상승된 LDL-C에 노출되어온 것을 고려하여, 이들의 LDL-C 표적은 이들의 CVD 또는 다른 위험 인자의 병력에 따라 100mg/dL 또는 70mg/dL이다. 이들의 LDL-C 표적에 도달하고 이를 유지하기 위해서, 이러한 환자들은 투약 간격의 종료시 이러한 효과를 유지하는데 필요한 빈도 및 가장 잠재적인 용량의 알리로쿠맙을 필요로 할 가능성이 매우 높은 것으로 추측되었다. 따라서, 본 연구에 150mg Q2W 용량을 선택하였다.

본 연구의 이중-맹검 치료 기간에 있어서, LDL-C를 저하시키기 위해 1주 또는 2주마다 분리반출술을 필요로 하는 HeFH를 갖는 환자에게 18주 동안 투여된 150mg의 알리로쿠맙 Q2W을, 스크리닝하기 전에 8주 동안의 분리반출술의 빈도에 비하여 7주 내지 18주의 분리반출술의 빈도를 감소시키는 이의 능력에 대해 평가하였다. 환자들은 개방-표지(open-label) 치료 기간에 76주째 동안 알리로쿠맙 150mg Q2W를 받았다.

페이즈 2 연구로부터의 사전 약동학적(PK) 데이터, DFI11565, DFI11566, 및 R727-CL-1003은, 알리로쿠맙에 대한 노출은 이중-맹검 치료 기간에 이어진 8-주 추적관찰(follow-up) 기간 동안 감소되었고, 여전히 검출가능하지만 매우 낮은 수준으로의 알리로쿠맙의 총 혈청 농도를 가졌음을 나타냈다. 따라서, 충분히 낮고 유효하지 않은 혈청 알리로쿠맙 농도를 확보하기 위해, 8주의 추적관찰 기간(즉, 마지막 용량 후 10주) 동안 환자를 추적관찰하였다.

연구 목적

연구의 1차 목적은 매주 또는 격주 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있는 HeFH를 갖는 환자들에서의 LDL 분리반출술 치료의 빈도에 대한 알리로쿠맙 150mg Q2W의 효과를 위약과 비교하여 평가하는 것이었다.

본 연구의 2차 목적은 (a) LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있는 HeFH를 갖는 환자에서의 LDL-C 수준에 대한 알리로쿠맙 150mg Q2W의 효과를 평가하는 것; (b) 본 연구 동안 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하는 HeFH를 갖는 환자에서의 하기 지질 파라미터: ApoB, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤, Lp(a), HDL-C, TGs 및 ApoA-1에 대한 알리로쿠맙 150mg Q2W의 효과를 평가하는 것; (c) LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있는 HeFH를 갖는 환자에서의 알리로쿠맙 150mg Q2W의 안전성 및 내약성을 평가하는 것; (d) LDL 분리반출술 치료요법(QW 대 Q2W)을 경험하고 있는 HeFH를 갖는 환자에서의 알리로쿠맙 150mg Q2W의 PK를 평가하는 것; (e) 항-알리로쿠맙 항체의 개발을 평가하는 것; (f) 알리로쿠맙 치료요법에 대한 반응으로의 그리고 분리반출술 전 및 후의 PCSK9 수준을 평가하는 것; 및 (g) 이들 환자에서의 삶의 질("QOL")을 평가하는 것이었다.

연구 계획

본 연구는 1주 또는 2주마다 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하는 HeFH를 갖는 환자들에서의 무작위배정, 이중-맹검, 위약-제어된 병행-그룹 연구이었다.

본 연구는 4개의 기간으로 이루어졌다: 스크리닝, 이중-맹검 치료 기간, 개방-표지 치료 기간, 및 추적관찰. 이중-맹검 치료 기간은 2회의 간격을 포함하였다: 분리반출술 빈도가 개별 환자의 확립된 스케쥴로 고정될 경우, 1일 내지 6주(1, 15 및 29일째에 연구 약물 투여가 계획됨), 및 분리반출술 빈도가 치료에 대한 환자의 반응에 기초하여 조정될 경우, 7주 내지 18주(43, 57, 71, 85, 99 및 113일째에 연구 약물 투여가 계획됨)을 포함하였다.

스크리닝: 스크리닝 방문(-2주째) 이전 적어도 4주 동안 안정한 분리반출술 설정 및 스크리닝 방문(-2주째) 이전 적어도 8주 동안 안정한 배경 의학적 LMT를 갖는, (7 또는 14일마다) 안정한 분리반출술 스케쥴을 받아온 환자는 2-주 스크리닝 기간에 진입하였다.

이중- 맹검 치료: 모든 포함 기준을 만족시키고 배제 기준은 만족시키지 않는 환자들은 2:1 비로 무작위로 할당되어 18주의 치료: 알리로쿠맙 150mg SC Q2W 또는 알리로쿠맙 SC Q2W에 대한 위약을 받았다.

이중-맹검 치료 기간 동안 치료 주사는 무작위 배정일에 시작하여 Q2W 투여하였다((0주째[1일째]/2회 방문). 제1 투약 후 30분 동안 임상 현장에서 환자를 모니터링하였다. LDL 분리반출술이 연구 약물 투여와 일치하는 경우, LDL 분리반출술 절차의 완료 직후에 연구 약물을 투여하였다.

1일부터 6주까지, 분리반출술 빈도는 개별 환자의 확립된 스케쥴(QW 또는 Q2W)로 고정되었다. 7주째에 시작하여, 해당 방문시(현장 진단 시험에 의한 측정시) LDL-C 값에 기초하여 LDL 분리반출술을 투여하였다. 해당 방문시 LDL-C 값이 기저선(1일째)에서의 분리반출술-전 LDL-C 값보다 적어도 30% 더 낮았던 경우에는 LDL 분리반출술을 투여하지 않았다. LDL-C 수준의 30% 감소에 기초한 분리반출술의 필요성을 결정하기 위한 기준은, 알리로쿠맙의 투여로 관찰된 경우에 이러한 감소가 시간 경과에 따라 일관되어 분리반출술 절차에서와 같이 대략 동일한 수준의 LDL-C의 감소를 달성하기 때문에 정당화된다. 조사자들은 LDL-C의 현장 진단 실험실 값에 대해 맹검을 유지하였고, 단지 LDL 분리반출술이 투여되어야만 하는지 또는 그렇지 않은지의 여부에 관한 경고를 받았다.

개방-표지 치료: 개방-표지 치료 기간에서, 환자는 알리로쿠맙 150mg SC Q2W를 받았다. 치료는 이중-맹검 치료 기간 동안 연구 약물의 마지막 용량(16주째 마지막 용량) 내지 18주(개방 표지 치료 기간에서의 첫 번째 용량)의 76주에 걸쳐 중단되지 않고 계속되었다.

개방-표지 치료 기간 동안 첫 번째 주사는 환자 주사 훈련의 일환으로 18주째 방문시(개방-표지 치료 기간의 첫 번째 방문시)에 투여되었다. 후속 주사는 환자가 선호하는 위치(예를 들면, 집 또는 직장)에서 환자 또는 지정된 간병인(배우자, 친척 등)에 의해 투여되었다. 또한, 환자들은 연구원에 의한 주사 투여를 위해 Q2W 현장으로 돌아갈 것을 선택하는 것이 허용되었다.

본 연구의 개방-표지 치료 기간에 분리반출술 치료는 요구되지 않았다. 조사자의 재량에 따라, 환자는 필요에 따라 계속해서 분리반출술 절차를 경험하도록 허용되었다. 계획된 분리반출술 절차가 진료소 방문 또는 알리로쿠맙 투약일과 일치한 경우에, 연구 평가는 분리반출술 이전에 행하였고, 알리로쿠맙은 분리반출술 후에 투여하였다.

추적관찰: 환자들은 86주째에 연구 방문 종료시에 나타났다.

연구 전반: 임상 실험실(지질 및 특수 지질 패널) 및 PK 평가에 대한 모든 샘플은 LDL 분리반출술 절차 직전 및 직후(해당 방문시에 LDL 분리반출술이 투여되는 경우)에 그리고 연구 약물 투여 전에 수득되었다.

방문시 LDL 분리반출술을 경험하지 않은 환자들의 경우, 임상 실험실 평가를 위한 모든 샘플은 연구 약물 투여 전에 수득되었다.

전반적인 안전성은 TEAE, 신체 검사, 생체 신호(맥박수 및 혈압), 심전도(ECG) 및 사전에 특정된 시점에서의 임상 안전 실험실 시험의 모니터링/평가에 의해 평가하였다. 항-알리로쿠맙 항체의 잠재적 출현을 평가했다. PCSK9 수준은 분리반출술 이전 및 이후에 평가하였다.

스타틴, 에제티미브, 피브레이트, 니아신, 담즙산 수지(이들에 한정되는 것은 아님)를 포함하는 혈청 지질을 변화시키는 것으로 알려져 있는 모든 의약 및 영양 보충물(적색 효모 제품의 소비 포함)의 사용은 해당 치료요법이 스크리닝 방문(-2주째) 전에 적어도 8주 동안 안정한 한 허용되었다. 환자는 스크리닝시에 시작하여 치료 방문의 종료까지 연구의 지속기간에 걸쳐 이들의 배경 의학적 LMT를 계속해서 복용하도록 지시받았다.

환자의 식이는 스크리닝시에 시작하여 치료 방문의 종료까지 연구의 지속기간에 걸쳐 안정하게 유지하였다.

환자의 운동 용법은 스크리닝시에 시작하여 치료 방문의 종료까지 연구의 지속기간에 걸쳐 안정하게 유지하였다.

환자 선택

본 연구 프로토콜은 US 및 독일의 15개 이하의 장소에서 등록된 대략 63명의 환자들을 필요로 하였다. 환자들은 하기와 같이 무작위배정되었다: 등록된 환자들의 대략 1/3(약 21명)이 위약을 받았고; 등록된 환자들의 약 2/3(약 42명)가 알리로쿠맙을 받았다.

본 연구 집단은 1 또는 2주마다 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있었던 HeFH를 갖는 것으로 진단된 성인 남성 및 여성으로 구성되었다.

무작위배정은 하기에 따라 계층화되었다: 분리반출술 빈도: QW 대 Q2W; 및 기저선 Lp(a) 수준: 정상(30mg/dL 미만) 대 상승(30mg/dL 이상). LDL-C가 상승한 일부 환자들도 Lp(a) 수준을 상승시켰으므로, 계층화는 위약/치료 그룹에서 적당한 제시를 확보하였다.

포함 기준: 본 연구에 등록된 환자들은 본 연구에 포함시키기 위해 적격인 조건 1 내지 6(하기)을 충족시킬 것이 요구되었다:

(1) 스크리닝 방문시 연령 18세 이상 남성 및 여성

(2) HeFH의 진단: [주의: HeFH의 진단은 유전형질 분석에 의해 또는 임상학적 기준에 의해 이루어졌다. 유전형질 분석되지 않은 환자들의 경우, 임상학적 진단은 명확한 FH에 대한 기준을 갖는 사이몬 브룸(Simon Broome) 기준 또는 8점 초과의 스코어를 갖는 WHO/Dutch 지질 네트워크 기준에 기초하여 이루어질 수 있다];

(3) 현재 스크리닝 방문(-2주) 전에 적어도 4주 동안 QW 또는 적어도 8주 동안 Q2W LDL 분리반출술 치료요법을 경험하고 있고, 그 전에 적어도 5개월 동안 분리반출술 치료를 시작하였음; [주의: 허용가능한 분리반출술 기술은 이중 막(membrane) 여과, 면역흡착, 헤파린-유도된 LDL 침전, 지질의 직접적 흡착, 덱스 트란 설페이트 흡착(혈장), 덱스트란 설페이트 흡착(전혈)이다];

(4) 진료소 방문 및 연구-관련 절차 준수를 원하고 이를 준수하는 것이 가능함;

(5) 서명한 사전 동의서 제공; 및

(6) 연구-관련 질의를 이해하고 완료할 수 있음.

배제 기준: 하기 기준들 중 임의의 것을 충족시키는 유망한 환자를 연구에서 배제시켰다:

(1) 동종접합성 FH;

(2) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 적어도 8주 동안 안정하지 않았던 배경 의학적 LMT(적용가능한 경우);

(3) 매주 분리반출술을 경험하고 있는 환자들의 경우 스크리닝 방문(-2주) 이전에 적어도 4주 그리고 격주로 분리반출술을 경험하고 있는 환자들의 경우 스크리닝 방문(-2주) 이전에 적어도 8주 동안 안정하지 않았던 LDL 분리반출술 스케쥴/분리반출술 설정;

(4) QW 내지 Q2W 이외의 다른 LDL 분리반출술 스케쥴;

(5) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 8주 이내에 안정한 상태를 유지하지 않았던 새로운 운동 프로그램 또는 운동의 시작;

(6) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 8주 이내에 안정하지 않았던 새로운 식이요법 또는 식이요법의 시작;

(7) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 적어도 8주 동안 또는 스크리닝과 무작위배정 방문 사이에 안정하지 않았던 용량/양으로 지질에 영향을 미치는 것으로 공지되어 있는 영양치료제(nutraceuticals) 또는 일반판매(over-the-counter) 치료요법의 사용;

(8) 혈청 지질 또는 지단백질에 영향을 미치는 것으로 공지되어 있는 임의의 임상학적으로 유의한 제어되지 않는 내분비 질환의 존재;

(9) 갑상선 기능 저하증의 징후와 증상(갑상선 대체 치료요법은 허용됨);

(10) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 12개월 이내의 비만(bariatric) 수술의 이력;

(11) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 2개월 이내의 불안정한 체중(편차 > 5kg);

(12) 진성 당뇨병 또는 좋지 못하게 제어된(헤모글로빈 A1c[HbA1c] > 9%) 당뇨병으로 새롭게 진단됨(무작위배정 방문[1일] 이전에 3개월 이내);

(13) 뇌하수체/부신 질환에 대한 대체 치료요법으로서 사용되지 않는 경우, 무작위배정 이전에 적어도 6주 동안 안정한 용법을 이용한 전신성 코르티코스테로이드의 사용; 국소, 관절내, 비강, 흡입 및 안과 스테로이드 치료요법은 '전신성'으로서 간주되지 않고 허용됨;

(14) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 지난 6주 내에 안정하지 않았고 연구 동안에 용법을 변경할 계획이 없는 경우, 에스트로겐 또는 테스토스테론 치료요법의 사용;

(15) 스크리닝 방문시(-2주) 또는 무작위배정시(1일) 수축기 혈압 > 160mmHg 또는 확장기 혈압 > 100mmHg[주의: 연구 적격성(eligibility)에 대한 혈압 평가는 환자가 분리반출술 스케쥴로 인하여 스크리닝 또는 무작위배정 방문시에 처방된 고혈압 의약을 복용하지 않았거나 복용하지 않기로 계획한 경우에 이들 2회의 방문 사이에 발생하는 방문시 수득할 수 있다];

(16) 스크리닝 방문(-2주) 이전에 3개월 이내의 심근 경색(MI), 입원으로 이어지는 불안정 협심증, 관상 동맥 우회로 이식 수술(CABG), 경피적 관상동맥 중재술(PCI), 제어되지 않은 심장 부정맥, 경동맥 수술 또는 스텐트 시술, 뇌졸중, 일시적인 허혈 발작 또는 경동맥 혈관재형성의 이력, 또는 스크리닝 방문(-2주) 이전에 1개월 이내의 말초 혈관 질환에 대한 혈관내 시술 또는 외과적 개재술;

(17) 스크리닝 방문 이전 12개월 이내의 뉴욕 심장 학회 분류 III 또는 IV 심부전의 병력;

(18) 출혈성 뇌졸중의 공지의 병력;

(19) 적절하게 치료된 기저 세포 피부암, 편평 세포 피부암, 또는 동일반응계내(in situ) 자궁경부암을 제외한 지난 5년 이내의 암의 병력;

(20) 사람 면역결핍 바이러스에 대한 양성 검사의 공지의 병력;

(21) 스크리닝의 1개월 또는 5 반감기 중 더 긴 기간 이내의 임의의 연구조사중인 약물의 사용;

(22) 임의의 다른 임상학적 연구에서 적어도 1회 용량의 알리로쿠맙 또는 임의의 다른 항 PCSK9 모노클로날 항체로 치료받은 환자;

(23) 하기와 같은 조건/상황; (a) 스크리닝시 임의의 임상학적으로 유의한 이상은 조사자 또는 임의의 하위 조사자의 판단으로 연구의 안전한 완료를 불가능하게 하거나 종점 평가를 제한할 수 있음; 예를 들면, 주요 전신성 질환, 기대 수명이 짧은 환자; 또는 (b) 조사자 또는 임의의 하위-조사자에 의해 임의의 이유로 본 연구에 부적합한 것으로 간주됨, 예를 들면, (i) 스케쥴된 방문과 같은 특정 프로토콜 요건을 충족시킬 수 없다고 여겨짐; (ii) 환자 또는 조사자에 따라 주사를 견딜 수 없다고 여겨짐; (iii) 조사자 또는 임의의 하위-조사자, 약사, 연구 조정자, 다른 연구 스태프, 또는 프로토콜 등의 수행에 직접적으로 관여하는 이들의 관계자; (iv) 조사자가 연구 지속기간 동안 환자의 참여를 제한하거나 한정할 것이라고 생각하는 실제의 또는 예상되는 임의의 다른 조건(예를 들면, 지리적 또는 사회적)의 존재;

(24) 스크리닝 기간 동안의 실험실 결과(무작위배정 실험실은 포함하지 않음): (a) B형 간염 표면 항원 및/또는 C형 간염 항체에 대한 양성 검사; (b) 가임기 여성의 양성 혈청 베타-hCG 또는 소변 임신 검사; (c) TG > 500mg/dL(> 5.65mmol/L)(1회 반복 실험이 허용됨); (d) 신장 질환 연구 방정식(Renal Disease Study equation)에서 식이요법의 4-변수 변형에 따른 eGFR < 15mL/min/1.73m2(Central Lab에서 계산됨); (e) 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 또는 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) > 3 x 상한치(ULN)(1회 반복 실험이 허용됨); (f) CPK > 3 x ULN(1회 반복 실험이 허용됨);

(25) 모노클로날 항체 치료제에 또는 약물 제품의 임의의 구성성분에 대한 공지의 과민증;

(26) 임신한 여성 또는 모유수유 여성;

(27) 매우 효과적인 피임법에 의해 보호되지 않을 잠재성이 있는 가임기 여성(사전 동의서 폼[ICF]에 그리고/또는 지방 의정서 부록(local protocol addendum)에 정의된 바와 같음) 및/또는 임신을 시험할 의사가 없거나 시험할 수 없는 여성. 폐경기 여성은 적어도 12개월 동안 무월경이어야만 함.

연구 치료

연구 치료는 Q2W를 투여된 복부, 허벅지 또는 상완의 외측 영역에 투여된, 오토인젝터 또는 사전충전된 시린지에 제공되는 알리로쿠맙 또는 위약의 150mg 용량을 위한 1mL의 단일 SC 주사였다.

이중-맹검 치료 기간(1일 내지 18주) 동안, 적격의 환자들을 알리로쿠맙 150mg SC Q2W, 또는 알리로쿠맙 SC Q2W에 대한 위약을 받도록 무작위배정하였다.

개방-표지 치료 기간 동안 환자들은 18주째에 시작하여 76주째에 마지막 용량을 투여하여 Q2W 개방-표지 알리로쿠맙 150mg SC를 받았다.

멸균의 알리로쿠맙 약물 제품은 오토인젝터 또는 사전충전된 시린지에 히스티딘, pH 6.0, 폴리소르베이트 20 및 슈크로스 중에 150mg/mL의 농도로 공급된다.

알리로쿠맙을 매칭시키는 위약은 오토인젝터 또는 사전충전된 시린지에 단백질을 부가하지 않고 알리로쿠맙과 동일한 제형 중에 공급되었다.

투약일에 임상 연구소 외부에서 연구 약물을 주사하기로 의약품을 주사하는 것으로 선출된 모든 환자들 및/또는 기로 선택한 모든 환자 및/또는 간병인은 주사를 투여하기 전에 연구 스태프에 의해 교육을 받았다. 환자/간병인은 18주째 방문시에 연구 약물의 투여에 대해 지시를 받았고, 18주째 방문시에 개방-표지 치료 기간의 제1 용량을 자기-투여하였다. 후속 주사는 환자-선호 위치(예를 들면, 집 또는 직장)에서 환자(자기-주사) 또는 지정된 간병인(배우자, 친척 등)에 의해 Q2W로 투여하였다.

또한 환자들은 연구원에 의한 주사 투여를 위해 Q2W 현장으로 돌아갈 것을 선택하는 것이 제공되었다.

치료 할당 방법

환자들은 위약, 또는 알리로쿠맙 150mg Q2W를 1:2의 비로 받도록 무작위로 할당되었고, 이는 치료 할당의 균등한 분배를 확보하기 위해 순열식-블록(permuted-block) 디자인을 구현했다. 무작위배정은 분리반출술 절차(7 또는 14일마다)와 Lp(a) 수준(정상 또는 상승됨)의 빈도에 따라 계층화되었다. 환자들의 3분의 2 이상이 분리반출술을 경험하지 못하도록 등록이 제한되었다.

이중-맹검 치료 기간의 치료 할당과 관계없이 모든 환자들은 개방-표지 치료 기간 동안 알리로쿠맙 150mg Q2W를 받았다.

동시 투약

사전 동의 시점부터 추적관찰 기간/최종 연구 방문의 종료까지 투여된 임의의 치료는 동시 투약으로 간주된다. 이는 연구 전에 시작되었고 연구 동안 진행되었던 투약을 포함한다. 동시 투약은 본 연구 동안 최소로 유지되었다. 환자의 복지를 위해 필요한 것으로 간주되고 연구 약물을 간섭할 가능성이 없다면, (본 연구 동안 금지되는 것들 이외의) 동시 투약은 조사자의 재량으로(가능한 경우) 안정한 용량으로 제공하도록 허용되었다.

금지된 투약: 스크리닝 방문(2주째) 전에 적어도 8주 동안 안정하지 않은 임의의 배경 의학적 LMT는 금지되었다.

허용된 투약: 스타틴, 에제티미브, 피브레이트, 니아신, 담즙산 수지(이들에 한정되는 것은 아님)를 포함하는 혈청 지질을 변화시키는 것으로 알려져 있는 모든 의약 및 영양 보충물(적색 효모 제품의 소비 포함)의 사용은 해당 치료요법이 스크리닝 방문(2주째) 전에 적어도 8주 동안 안정한 한 허용되었다. 환자는 스크리닝시에 시작하여 치료 방문의 종료까지 연구의 지속기간에 걸쳐 이들의 배경 의학적 LMT를 계속해서 복용하도록 지시받았다.

환자의 운동 프로그램은 스크리닝시에 시작하여 치료 방문의 종료까지 연구의 지속기간에 걸쳐 안정하게 유지하였다.

연구 종점

기저선 특성은 표준 인구통계(예를 들면, 연령, 인종, 체중, 신장 등), 의학적 병력을 포함하는 질환 특성, 및 각각의 환자의 투약 이력을 포함할 것이다.

1차 효능 종점: 1차 효능 종점은 -10주 내지 -2주의 스크리닝시 각각의 환자의 확립된 스케쥴에 따라 계획된 분리반출술 치료의 횟수에 의해 정규화된 7주 내지 18주의 12주 기간 동안의 분리반출술 치료 비율이다.

분리반출술의 정규화된 비율은 각 환자에 대해 하기와 같이 정의된다: 기저선에서의 무작위배정 단계에 따른 계획된 분리반출술 치료의 횟수(Q2W의 경우 6 또는 QW의 경우 12)로 나눈 7주 내지 18주에 받은 실제 분리반출술 치료의 횟수.

18주째 이전에 환자가 중퇴(dropout)하는 경우, 분리반출술 절차(7주 내지 18주)의 실제 횟수는 분자(numerator)에 관한 무작위배정 단계에 따라 나머지 계획된 분리반출술 치료에 귀속된 수에 더해질 것이다.

기저선에서의 각각의 환자의 확립된 스케쥴에 따른 계획된 분리반출술 치료에 대한 정규화의 영향은 상이한 분리반출술 스케쥴(즉, 분리반출술 QW 또는 Q2W)을 이용한 연구에 진입하는 환자들에 대해 동일한 비율 척도로 균질화시킨다.

2차 효능 종점: 이중-맹검 치료 기간 동안 기저선으로부터 특정 기저선 방문 후까지의 백분율 변화와 같은 이하 지질 종점의 경우, 2개의 시점이 정의된다: 분리반출술 절차 전 및 후. 주요 효능 종점을 위해, 지질 파라미터는 각각의 분리반출술 절차 전에 수집된 평가를 이용하여 분석될 것이다. 프로토콜-지정 방문시에 분리반출술이 수행되지 않은 경우, 수집을 위해 계획된 단일 실험실 평가가 상기 2개의 시점(즉, 주요 효능 종점 포함)에 대해 사용된다. 기저선 값은 연구 약물의 제1 이중-맹검 용량 전에 각각의 파라미터에 대해 마지막으로 이용가능한 값으로서 정의된다.

본 연구의 2차 종점은 하기와 같았다:

(1) 치료에 대한 처방준수(adherence)와 관계없이 LDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(2) 1차 효능 종점에 관해서와 유사하게 정의되는, 15주 내지 18주의 4주 기간 동안 표준화된 분리반출술 치료 비율;

(3) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 ApoB(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(4) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 비-HDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(5) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 총 콜레스테롤(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(6) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 ApoA-1(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(7) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 6주째에 LDL-C(분리반출술-전)의 30% 이상의 감소를 갖는 환자의 비율;

(8) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 6주째에 LDL-C(분리반출술-전)의 50% 이상의 감소를 갖는 환자의 비율;

(9) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 LDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(10) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 ApoB(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(11) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 비-HDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(12) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 총 콜레스테롤(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(13) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 ApoA-1(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(14) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 18주째에 LDL-C(분리반출술-전)의 30% 이상의 감소를 갖는 환자의 비율;

(15) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 18주째에 LDL-C(분리반출술-전)의 50% 이상의 감소를 갖는 환자의 비율;

(16) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 기저선 내지 18주의 W-BQ22 인덱스 스코어의 변화;

(17) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 Lp(a)(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(18) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 HDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(19) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 TG 수준(분리반출술-전)의 기저선 내지 6주의 백분율 변화;

(20) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 Lp(a)(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(21) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 HDL-C(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(22) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 TG 수준(분리반출술-전)의 기저선 내지 18주의 백분율 변화;

(23) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 기저선 내지 6주의 ApoB/ApoA-1(분리반출술-전) 비의 변화;

(24) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 기저선 내지 18주의 ApoB/ApoA-1(분리반출술-전) 비의 변화;

(25) 1차 효능 종점에 따라 정의되는 7주 내지 10주의 4주 기간 동안 표준화된 분리반출술 치료 비율;

(26) 1차 효능 종점에 따라 정의되는 11주 내지 14주의 4주 기간 동안 표준화된 분리반출술 치료 비율;

(27) 7주초 내지 18주말의 12주 기간 동안의 분리반출술의 빈도와 LDL-C 값의 통합된 평가(환자들은 환자들의 LDL-C 값 및 분리반출술 비율에 따라 순위결정되었고; 모든 환자들에 대한 평균 순위가 측정되고, 해당 변수에 대한 평균 순위로부터의 각각의 치료받은 환자 LDL-C 수준 또는 분리반출술 비율의 차이는 백분율로서 표시되고; 환자 기준당 2개의 변수에 대한 백분율 차이는 합산 백분율 차이를 제공하기 위해 가산된다. 치료 그룹당 합하고 분석하는 경우, 얻어진 수치는 낮은 LDL-C 및/또는 감소된 분리반출술 비율을 나타낼 것이다);

(28) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 6주째에 분리반출술 이전에 <200 mg/dL, <130 mg/dL, <100 mg/dL 및 <70 mg/dL의 LDL-C 수준을 달성하는 환자의 비율;

(29) 치료에 대한 처방준수와 관계없이 18주째에 분리반출술 이전에 <200 mg/dL, <130 mg/dL, <100 mg/dL 및 <70 mg/dL의 LDL-C 수준을 달성하는 환자의 비율;

(30) 이중-맹검 치료 기간에서 치료에 대한 처방준수와 관계없이 초기(raw) 값, 및 기저선으로부터 각각의 방문 시점 둘 다까지의 LDL-C 및 기타 지질의 백분율 및 절대값 변화;

(31) 개방-표지 치료 기간에서 치료에 대한 처방준수와 관계없이 초기(raw) 값, 및 기저선으로부터 각각의 방문까지의 LDL-C 및 기타 지질의 백분율 및 절대값 변화;

(32) 연구에 걸쳐 평가된 안전성 파라미터(AE[판정된 심혈관 사건 포함], 실험실 데이터, 생체 신호 및 ECG).

기타 종점: (1) 연구에 걸쳐 평가된 항-알리로쿠맙 항체; (2) 기저선으로부터 18주 및 6주까지의 고-민감성 C-반응성 단백질(hs-CRP) 및 HbA1c의 백분율 변화; (3) 분리반출술 이전에 또는 분리반출술 후에 혈청 중의 총 알리로쿠맙의 농도; (4) 분리반출술 이전 그리고 분리반출술 후의 불포함(free) 및 총 PCSK9 수준.

연구 절차

연구 약물의 용량을 투여하기 전에 모든 실험실 샘플을 수집하였다. 지질 패널을 관한 모든 진료소 방문에 대해 가능한 경우, 절식 상태(예를 들면, 밤새[적어도 10시간 절식], 물만 제공)의 환자들로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 절식은 지질 패널을 관한 샘플에 대한 전제조건은 아니었다. 혈액 샘플링에 앞서 48시간 이내의 알코올 소비 및 흡연 또는 24시간 이내의 격렬한 운동은 허용되지 않았다.

총-C, HDL-C, TG, ApoB, ApoA-1 및 Lp(a)는 중앙 실험실에 의해 직접 측정되었다. LDL-C는 프리데발트(Friedewald) 식을 사용하여 계산되었다. TG 값이 400mg/dL(4.52mmol/L)을 초과하면 중앙 실험실은 LDL-C를 계산하기보다는 오히려 반사적으로 (베타 정량화 방법을 통해) LDL-C를 측정하였다. 비-HDL-C는 총-C로부터 HDL-C를 뺌으로써 계산되었다. 비율 ApoB/ApoA-1을 계산하였다.

지질 패널(절식): 지질 패널(총-C, TG, HDL-C 및 계산된 LDL-C)에 대한 혈액 샘플을 사전 지정된 시점에 적어도 10시간 절식 후에 수집하였다.

특수 지질 패널(절식): 특수 지질 패널(ApoB, ApoA-1 및 Lp[a])에 대한 혈액 샘플은 사전 지정된 시점에서 적어도 10시간 절식 후에 수집하였다.

웰빙 (Well-Being) 질의: W-BQ22는 특정 시점에서의 웰빙에 대한 고콜레스테롤혈증 및 치료의 영향을 평가하는데 사용되었다.

혈압 및 심박수: 혈압 및 심박수를 사전 지정된 시점에 평가하였다. 혈압은 동일한 장치를 이용하여, 동일한 팔에서, 대략 동일한 시간에, 표준화된 조건 하에앉은 자세로(환자가 적어도 5분 동안 앉은 자세에서 편안하게 휴식한 후에) 측정하는 것이 바람직하였다. 첫 번째 스크리닝 방문시 양쪽 팔에서 혈압을 측정하였다. 최고 확장기 혈압을 가진 팔이 이 방문에서 측정되었고, 혈압은 연구 전반에 걸쳐이 팔에서 측정되었다. 이러한 최고 값은 전자 사례 보고서 양식(eCRF)에 기록되었다. 혈압 측정시 심박수를 측정하였다.

신체 검사: 사전 지정된 시점에 철저하고 완전한 신체 검사가 수행되었다.

체중 및 신장: 속옷이나 아주 가벼운 의복을 입고 신발을 벗고 소변을 본 상태의 환자의 체중을 수득하였다. 동일한 척도가 연구 전반에 걸쳐 사용되는 것이 바람직하였다. 가능한 경우, 보정된 저울(calibrated balance scale)을 사용하는 것이 추천되었다.

심전도: 채혈을 요구하는 방문 동안 채혈하기 전에 심전도를 실시하였다. 사전 지정된 시점에 표준 12-리드(lead) ECG를 수행하였다. 12-리드 ECG는 적어도 10분의 휴식 후에 반드시 누운 자세로 수행하였다. 연구 전반에 걸쳐 각각의 ECG 기록을 위해 가능한 한 동일한 위치에 전극을 배치하였다. ECG는 조사자에 의해 국지적으로 해석되었다. ECG 파라미터의 임의의 새롭고/새롭거나 임상학적으로 유의한 변화는 해당 환자에 대한 임의의 결정을 내리기 전에 확인을 위해 즉시 재검토되었다. 임의의 임상학적으로 유의한 이상은 적용가능한 경우 AE/SAE로서 문서기록하였다. 각각의 추적(trace)은 스크리닝 기록된 추적과 비교하여 분석되었다. 모든 ECG 추적은 소스 데이터로서 유지되었다. 심박수는 심실 심박수(ventricular rate)로부터 기록되었고, PR, QRS, RR 및 QT 간격이 기록될 것이다.

실험실 시험: 모든 실험실 샘플(PK 및 ADA 샘플 포함)은 평가가 수행된 후에 그리고 투약일과 일치하는 방문시에 연구 약물의 용량이 투여되기 전에 수집되었다.

심혈관 사건 판정: 판정된 심혈관 사건은 양성으로 판정된 모든 심혈관성 AE를 포함하였다. 판정의 범주는 하기와 같았다: (1) CHD 사망; (2) 치명적이지 않은 MI; (3) 치명적 및 치명적이지 않은 허혈성 뇌졸중; (4) 입원을 필요로 하는 불안정 협심증; (5) 입원을 필요로 하는 울혈성 심부전; (6) 허혈-유도된 관상 혈관재형성 절차(PCI, CABG).

통계학적 분석

63명의 환자(알리로쿠맙 42명:위약 21명)의 샘플 크기는 양면 유의성 수준을 이용하고 40%의 표준 편차를 가정하여 평균 분리반출술 비율의 33% 차이를 검출하는데 적어도 85%의 힘을 가질 것으로 추정되었다.

주요 효능 분석 집단은 모든 무작위배정된 환자들로서 정의된 1차 치료 의향(intent-to-treat, ITT) 집단이었다. 2차 효능 분석 집단은, 연구 약물의 제1 투약 전에(또는 환자가 임의의 연구 약물을 받지 않았을 경우) 적어도 하나의 분리반출술-전 계산된 LDL-C 값 및 6주까지 분리반출술-전 분석 윈도우(window) 중 하나에서의 적어도 하나의 계산된 LDL-C 값을 가졌던 무작위배정된 환자들에 기초하였다. 통계학적 분석은 마지막 환자가 18일째 모든 효능 평가를 완료했을 때 수행하였다. LDL-C 데이터는 크룬(Kroon) 식을 이용하여 사후(post-hoc) 분석하여 6 내지 18주(분리반출술 치료요법의 잠재적 철수 후)의 LDL-C의 간격 평균을 추정하였다.

표준화된 분리반출술 치료 비율은 공분산의 순위 분석(ANCOVA) 모델을 이용하여, 계획된 치료의 횟수(Q2W의 경우 6 및 격주의 경우 12)로 나눈 12-주 기간(7 주 내지 18주) 동안 받은 치료 비율을 통해 분석하였다. 표준화된 분리반출술 비율은 0 내지 1의 범위일 수 있고, 0은 환자가 7 내지 18주 사이에 모든 계획된 분리반출술 치료를 생략하였음을 나타내고, 1은 환자가 모든 계획된 치료를 받았음을 나타낸다. 0.75의 비율은 환자가 계획된 분리반출술 치료의 75%를 받았음(계획된 치료의 25%를 생략하였음)을 나타냈다. 환자 중퇴는 사전-결정된 기준에 따라 간주되었다. 치료 차이의 중앙값은 호지스-레만(Hodges-Lehmann) 추정 및 모즈 분포-불포함 신뢰 구간을 이용한 95% 신뢰 구간(CI)을 사용하여 결정되었다.

계층적 추정 접근법은 유형 I 오류를 제어하는데 사용되었다. 1차 종점 분석은 5% 알파 수준으로 유의하였으므로 순차적으로 주요 2차 효능 종점을 시험하였다.

결과

기저선 특성

본 연구에 등록된 환자들의 기저선 특성은 표 1 내지 표 4에 요약된다.

매주 또는 Q2W 지단백질 분리반출술을 받고 있는 heFH를 갖는 76명의 환자들은 참가 동의서를 제공하였 스크리닝되었다. 표 1 내지 표 4에 요약된 바와 같이, 62명의 환자들(연령: 평균±SD 연령, 58.7±9.7세)이 무작위배정되었다. 무작위배정된 환자들 중 58.1%는 남성이었다. 스크리닝 방문시, 28명의 환자들은 내약성으로 인하여 스타틴을 복용하지 않았고, 34명의 환자들은 매일 스타틴을 복용하는 것으로 나타났고, 이들 중 19명은 1일 최대 용량을 복용중이었다. 모든 환자들은 죽상경화성 질환(관상동맥 및/또는 뇌혈관 및/또는 말초)을 가졌고, 56.5%는 관상 심장 질환에 대한 가족력을 가졌다. 평균적으로 환자들은 (평균±SD) 7.6±7.7년; 중앙값(Min:Max): 4.9 (0.5:32.9)년 동안 규칙적인 지단백질 분리반출술을 받았다. 분리반출술 빈도는 Q2W(56.5%) 및 QW(43.5%)였다. 환자들의 16.1%는 당뇨병을 가졌다. 환자들의 1.6%는 만성 신장 질환을 가졌다. 기저선 평균 LDL-C는 4.7mmol/L(180.7mg/dL)이었다; 중앙값 (Min:Max): 4.7 (1.4:8.2)mmol/L [179.5 (53.0:316.0)mg/dL]. 기저선 평균 Lp(a)는 43.9mg/dL이었다(중앙값 [Min:Max]: 19.0[1.5:285.0]mg/dL).

60명의 환자들은 6주의 이중-맹검 치료 기간을 완료하였고(40명[97.6%]의 알리로쿠맙 그룹 및 20명[95.2%]의 위약 그룹)(즉, 분리반출술 비율이 환자들의 확립된 스케쥴에 따라 결정된 경우), 분리반출술 스케쥴이 이전에 달성된 LDL-C 값에 의해 결정된 경우, 57명은 18주의 이중-맹검 치료 기간을 완료하였다(각각 37명[90.2%] 및 20명[95.2%]). 연구 치료를 조기 중단한 환자들 5명(8.1%) 중, 1명(4.8%)은 위약을 복용중이었고(부작용으로 인하여 중단), 4명(9.8%)은 알리로쿠맙을 복용중이었다(2명은 부작용으로 인하여 중단하였고 1명은 저조한 처방준수로 인하여 중단하였고, 1명은 동의를 철회했다).

해당 집단의 평균±표준 편차(SD) 연령은 58.7±9.7세였고, 36명(58.1%)의 환자들은 남성이었으며, 60명(96.8%)은 백인이었다. 연구에 진입하기 전 분리반출술 치료 기간의 중앙값(최소, 최대)은 4.9(0.5, 32.9)년이었다.

기저선 특성은 치료 그룹들 간에 균형을 이루었다. 알리로쿠맙 그룹에서의 평균 산출 기저선 DLD-C (연구 진입시)는 4.5±1.4 mmol/L(175.1mg/dL)였고, 위약 그룹에서는 5.0±1.8 mmol/L(191.6mg/dL)(P=0.35)였다. 27명(43.5%)의 환자들은 기저선에서의 매주 분리반출술 스케쥴에을 따랐고 35명(56.5%)의 환자들은 Q2W 스케쥴에 따랐다. 매주 분리반출술을 경험하는 환자들의 평균 LDL-C 값은 3.9±1.3 mmol/L(151.3±51.3 mg/dL)이었고, 이는 Q2W 분리반출술을 경험하는 환자들에서의 5.3±1.4 mmol/L(204.9±55.7 mg/dL)와 대조된다. 38명(61.3%)의 환자들은 정상 기저선 지단백질 수준(< 30mg/dL)를 보였으며 24명(38.7%)은 상승된 수준을 보였다. 34명(54.8%)의 환자들은 스크리닝시 스타틴을 복용하고 있었고, 이들 중 19명(55.9%)은 1일 최대 용량을 복용중이었다. 스타틴을 복용하지 않은 환자들의 기저선 LDL-C 값 5.4±1.4 mmol/L(208.0±53.2 mg/dL)와 비교하여 스타틴 치료를 받은 환자들 사이의 기저선 LDL-C 값은 (4.0±1.4 mmol/L(155.0±54.6 mg/dL)였다. 30명(48.4%)의 환자들은 독일인이었으며 32명(51.6%)의 환자들은 미국인이었다.

알리로쿠맙 그룹에서의 주사 노출 지속기간 평균±SD은 17.4±2.3주(8.6±1.3회 주사)였고, 위약 그룹에서는 17.5±3.1주(8.4±1.7회 주사)였다.

효능 결과

효능 결과는 표 5 내지 표 8에 요약된다.

표 5는 7주 내지 18주의 표준화된 분리반출술 비율을 보여준다.

1차 효능 종점은 알리로쿠맙-치료받은 환자에게 유리하게, 0.75의 위약에 대한 치료 차이의 호지스-레만의 중앙 추정값으로 통계학적으로 유의한 이점을 달성하였다(95% 신뢰 구간: 0.67-0.83). 따라서, 알리로쿠맙-치료받은 환자들은 위약-치료받은 환자들에 비하여 표준화된 분리반출술 치료 비율에서 0.75(75%)의 추가의 감소를 가졌다(P < 0.0001). 7주 내지 18주의 표준화된 분리반출술 치료 비율의 중앙값 치료 차이는 분리반출술 치료가 이전에 달성된 LDL-C 농도에 의해 결정된 경우, 알리로쿠맙에 유리하게, 매주 분리반출술을 경험한 환자들에 대해 0.75(95% CI 0.58-0.92) 그리고 Q2W 스케쥴을 받은 환자들에 대해 0.67(95% CI 0.50-1.00)이었다.

4주 기간(15주 내지 18주)에 걸친 표준화된 분리반출술 치료 비율의 중앙값 치료 차이는 알리로쿠맙에 유리하게 0.50(95% CI 0.50 내지 1.00; P<0.0001)이었고 이는 위약에 대한 표준화된 분리반출술 치료 비율의 50%을 감소를 나타낸다.

표 5에 나타낸 바와 같이, 알리로쿠맙-치료받은 환자들에서의 평균 분리반출술 치료 비율은 0.128이었고, 반면 위약 그룹에서의 평균 분리반출술 치료 비율은 0.806이었다. 12-주 기간에 걸친 위약 그룹에서의 각각의 환자들과 비교한 각각의 알리로쿠맙-치료받은 환자들에 대한 분리반출술 치료 비율의 감소 백분율의 도시적 표현은 도 2에 나타낸다. 이 기간 동안, 알리로쿠맙을 받은 환자들 중 63.4%가 분리반출술 절차를 갖지 않았고, 92.7%가 절차의 적어도 절반을 회피하였다. 즉, 알리로쿠맙-치료받은 그룹에서 26명의 환자들은 분리반출술 치료 비율의 100% 감소를 달성하였다. 대조적으로, 위약 그룹에서는 분리반출술 치료 비율의 100% 감소를 달성한 환자가 존재하지 않았다. 이들 결과는 본 연구의 7주 내지 18주의 위약 및 알리로쿠맙-치료받은 그룹에서의 환자들에 대한 분리반출술 치료 비율을 도시하는 표 6 및 도 3 내지 도 6에서도 반영된다. 결과는 환자들의 기존 치료 용법에 알리로쿠맙을 추가한 환자들이 위약에 비하여 12주에 걸쳐 75%만큼 이들의 표준화된 분리반출술 치료요법의 빈도를 유의하게 감소시킬 수 있었음을 보여준다(P<0.0001).

표 7 및 도 7 및 도 8은 본 연구의 과정에 걸쳐 혈청 LDL-C 수준에서의 변화의 관점에서 위약과 비교한 알리로쿠맙 치료의 효과를 보여준다. 전반적으로, 알리로쿠맙-치료받은 환자들은 6주째에 50%를 초과하는 기저선으로부터의 평균 LDL-C 감소를 나타냈고, 한편 위약 그룹의 환자들은 임의의 유의한 정도의 LDL-C 감소를 나타내지 않았다.

위약 및 알리로쿠맙-치료받은 환자들에 대한 주요 2차 효능 결과는 표 8에 요약된다.

알리로쿠맙 그룹에서 평균 분리반출술-전 LDL-C 값은 기저선에서의 4.5mmol/L(175mg/dL)로부터 6주째의 2.3mmol/L(90mg/dL)로 감소되었고; 위약 그룹에서의 환자들에 대한 상응하는 데이터는 5.0mmol/L(192mg/dL) 및 4.8mmol/L(185mg/dL)이었다(도 2). 6주째에 기저선으로부터 분리반출술-전 LDL-C의 LS 평균±SE (95% CI) 백분율 변화는 알리로쿠맙 그룹에서 -53.7±2.3(-58.2 내지 -49.2) 그리고 위약 그룹에서 1.6±3.1(-4.7 내지 7.9)이었다(LS 평균±SE 백분율 변화 -55.3±3.9, 95% CI -63.1 내지 -47.5; P<0.0001). 18주까지, 알리로쿠맙 그룹에서의 평균 LDL-C 값은 위약 그룹에서의 4.9mmol/L(191mg/dL)와 비교하여 2.9mmol/L(110mg/dL)로 약간 상승되었다(LS 평균±SE 백분율 차이 -46.4±7.9, 95% CI -62.3 내지 -30.5; P<0.0001).

현장 진단 LDL-C 값과 중앙 실험실 값을 비교하는 교차-검증은 두 측정값 모두 높은 상관관계가 있었음을 보여주었다(피어슨(Pearson) 상관관계 0.86).

지단백질(a)에서 기저선 내지 18주의 백분율 변화는 정상 기저선 값을 갖는 환자들에서 알리로쿠맙에 대해 -5.7% 대 위약에 대해 -3.0%였고, 상승된 기저선 값을 갖는 환자들에서는 각각 4.9% 대 7.6%였다. 7 내지 18주 동안, 분리반출술 치료가 중단된 경우, 알리로쿠맙 치료는 2.4±1.3mmol/L(92.7±50.2mg/dL) 대 위약에 대해 3.8±1.7mmol/L(146.7±65.6mg/dL)의 (잠재적) 분리반출술 간격의 과정에 걸쳐 (크룬 식 18을 이용하여) 보다 낮은 평균±SD 시간-평균된 LDL-C 값과 관련되어 있었다(P<0.0001).

사후 분석에서, 알리로쿠맙-치료받은 환자들의 시간-평균된 LDL-C 값은 위약-치료받은 환자들에서의 값보다 지속적으로 더 낮았다.

안전성

TEAE는 알리로쿠맙 그룹에서 환자들 중 75.6%에 의해 그리고 위약 그룹에서 환자들 중 76.2%에 의해 보고되었고, 이들 중 치명적인 환자는 없었다. 중증의 부작용 비율(알리로쿠맙의 경우 9.8% 및 위약의 경우 9.5%) 및 치료 중단을 초래하는 사건(각각 4.9% 및 4.8%)은 또한 두 그룹에서 유사하였다.

알리로쿠맙 그룹에서 3명의 환자들(7.3%) 그리고 위약 그룹에서 0명은 0.7mmol/L(25mg/dL) 미만의 2개의 연이은 분리반출술-전 계산된 LDL-C 값을 가졌다. 이들 환자들 중 2명은 적어도 하나의 부작용을 가졌고, 이들 중 1명은 몇몇의 중증의 부작용(폐렴, 급성 심근 경색, 급성 호흡 부전, 울혈성 심부전, 패혈증 및 대동맥 판막 협착증)을 가졌다. 27명의 환자들(알리로쿠맙에 대해 23명[56.1%] 및 위약에 대해 4명[19.0%])은 분리반출술 후에 0.7mmol/L 미만의 2개의 연이은 LDL-C 값을 가졌고, 이들 중 각각 15명(65.2%) 및 2명(50.0%)은 부작용을 가졌다. 상기 부작용 중 중증인 것은 없었지만, 1명의 환자(4.3%)는 알리로쿠맙 치료를 중단하였다.

요약 및 결론

본 연구는, 알리로쿠맙을 받은 환자들이 연구 과정에 걸쳐 위약을 받은 환자들에 비하여 분리반출술 치료의 감소된 비율 및 분리반출술 치료의 감소된 횟수를 나타냈음을 보여준다. 특히, 알리로쿠맙 치료는 위약 치료에 비하여 분리반출술 치료 비율의 보다 높은 감소를 0.75 또는 75%의 중앙값 추정치만큼 초래하였다(p < 0.0001).

본 연구는 또한 알리로쿠맙으로 치료받은 환자들의 63.4%가 위약으로 치료받은 환자들에서의 0%와 비교하여 수행된 분리반출술이 없었음을 입증하였다(즉, 위약으로 치료받은 그룹에서는 분리반출술 치료를 완전하게 끝낼 수 있는 환자가 없었고, 반면 알리로쿠맙 치료 아암(arm)의 환자들 중 63.4%는 알리로쿠맙 치료 후 분리반출술 치료를 전부 제거할 수 있었다). 또한, 알리로쿠맙으로 치료받은 환자들 중 92.7%는 위약으로 치료받은 환자들에서의 14.3%에 비하여 적어도 50%의 분리반출술 빈도의 감소를 가졌다. 또한, 알리로쿠맙은 6주째에 175mg/dl 내지 89.5mg/dl로 LDL-C를 55%(PBO 대비) 감소시켰다. apB, 비-HDL-C 및 TC의 유의한 감소가 또한 알리로쿠맙-치료받은 환자에서 관찰되었다. 알리로쿠맙 치료는 15주 내지 18주의 표준화된 분리반출술 치료 비율을 감소시켰다.

안전성에 관해서, 1 또는 2주마다 LDL 분리반출술 치료요법을 경험하는 HeFH를 갖는 환자에서의 알리로쿠맙의 피하 투여는 일반적으로 안전하고 내약성이 좋았다. TEAE 전체 및 AESI를 보고하는 환자들의 수는 치료 그룹간에 비슷하였다.

본 연구의 모든 환자들은 심혈관 위험이 높았고, 스타틴을 포함하여 이전에 LLT를 복용하여 왔다. 스크리닝시, 환자들 중 54.8%만이 스타틴을 복용하였고, 이들 중 55.9%는 최대 내약 용량을 복용중이었다. 전체 집단 중 큰 비율이 내약성 문제(43.5%)로 인해 스타틴 치료의 하향-적정 이력을 보고하였고, 62.9%는 다른 스타틴으로 변경하였음을 보고하였다. 근육 증상 내지 부작용에 대한 불안감, 및 지역적 관행/지방 표지에 이르는, 스타틴을 복용하지 않거나 최대 1일 용량으로 복용하지 않는 것에 대한 각종 원인이 제공되었고, 이는 분리반출술을 받는 heFH를 갖는 환자들은 제한된 치료 선택권으로 다양하고 치료받기 어려운 집단을 나타냄을 나타낸다.

미국의 환자들은 보다 높은 기저선 LDL-C, 보다 큰 스타틴 내약성의 발현, 및 보다 적은 빈도의 분리반출술 용법으로 독일의 환자들과는 상이한 특성을 나타냈다. 미국에서, heFH에 대한 지단백질 분리반출술은 보통 6개월 후에 최대 내약 약물 치료요법에 대해 적절한 반응을 갖지 않고 상승된 LDL-C + 다른 심혈관성 위험 인자를 갖는 환자들에 대해서만 고려된다. 독일에서, 분리반출술 센터가 보다 흔한 경우, 분리반출술은 식이요법 및 LLT의 실패 12개월 이내에 그리고 보다 낮은 LDL-C 역치(threshold)로 고려되고, Q2W 분리반출술보다 매주가 바람직하다. 또한, 유럽에서의 LDL-C 저하에 대한 권고는 위험-계층 치료-대-표적 접근법에 기초하고, 반면 미국 지침은 용량-적응 접근법을 지지한다. 표적 LDL-C 값이 1.8mmol/L(70mg/dL) 미만인 유럽 지침에서 채택된 접근법의 관점에서, 이러한 표적 값을 초과하는 LDL-C를 갖는 알리로쿠맙을 복용중인 독일 환자들은 여전히 분리반출술에 대한 기준을 충족시킬 수 있다. 결과적으로, 알리로쿠맙을 이용한 LLT는, LDL-C가 매우 높거나 표적 LDL-C 값을 충족시키는데 실패한 환자에서 지단백질 분리반출술에 상보적임을 증명할 수 있다.

결론적으로, 본 연구는 1차 효능 종점에서 유의한 감소를 달성하였고, 알리로쿠맙과 같은 PCSK9 억제제가 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 환자의 필요성을 감소시키거나 제거하기 위한 또는 이러한 치료에 대한 요구를 지연시키기 위한 유효한 치료학적 선택권임을 입증한다.

본 발명은 본원에 기술된 특정 실시형태들에 의한 범위에 한정되는 것은 아니다. 실제로, 본원에 기술된 실시형태들 이외에 본 발명의 다양한 변형들은 상기의 설명 및 첨부된 도면들로부터 당해 분야 숙련가들에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위 내인 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> ANTI-PCSK9 INHIBITORY ANTIBODIES FOR TREATING PATIENTS WITH HYPERLIPIDEMIA UNDERGOING LIPOPROTEIN APHERESIS <130> 0431.22/PCT <150> US 62/206,326 <151> 2015-08-18 <150> US 62/264,361 <151> 2015-12-08 <150> US 62/270,790 <151> 2015-12-22 <150> US 62/291,571 <151> 2016-02-05 <150> US 62/311,455 <151> 2016-03-22 <150> US 62/367,374 <151> 2016-07-27 <160> 198 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys His Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH; 1B20 polypeptide <400> 45 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Trp Tyr Lys Pro Leu Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1; 1B20 peptide <400> 46 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Ser 1 5 10 <210> 47 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR2; 1B20 peptide <400> 47 Trp Met 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Sequence: Synthetic AX213 heavy chain CDR2 antibody region peptide <400> 63 Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Gly Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Asn Glu 1 5 10 15 Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr 20 <210> 64 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic AX213 heavy chain CDR3 antibody region peptide <400> 64 Cys Ala Arg Ala Asn Asp Gly Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 1 5 10 15 <210> 65 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic variable light antibody region polypeptide <400> 65 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Gly Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp 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109 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Met 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Glu His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 110 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic anti-PCSK9 monoclonal antibody clones LGT-209, LGT-210 and LGT-211 heavy chain CDR1 peptide <400> 110 Thr Met Tyr Met Ser 1 5 <210> 111 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic anti-PCSK9 monoclonal antibody clones LGT-209, LGT-210 and LGT-211 heavy chain CDR2 peptide <400> 111 Arg Ile Asp Pro Ala Asn Glu His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic anti-PCSK9 monoclonal antibody pJG04(clones LGT-209 and LGT-210) Vh heavy chain complementarity determining region 3 (CDR3) peptide <400> 112 Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr 1 5 <210> 113 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic anti-PCSK9 monoclonal antibody pJG10(clones LGT-209 and LGT-211) Vk light chain variable region (FR1-FR4) polypeptide <400> 113 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Gly Val Phe Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Arg Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala 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<211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic variable light chain CDR peptide <400> 124 Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg Thr 1 5 <210> 125 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 126 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 10 <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn 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Sequence: Synthetic peptide <400> 192 Glu Gly Ile Ser Phe Gln Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Val Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 193 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 193 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Arg 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Ser Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Leu Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Tyr Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 194 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 194 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Ile Thr Tyr Ser Tyr 1 5 10 15 <210> 195 <211> 7 <212> PRT 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gaggtgtatc tcctagacac cagcatacag agtgaccacc gggaaatcga gggcagggtc 600 atggtcaccg acttcgagaa tgtgcccgag gaggacggga cccgcttcca cagacaggcc 660 agcaagtgtg acagtcatgg cacccacctg gcaggggtgg tcagcggccg ggatgccggc 720 gtggccaagg gtgccagcat gcgcagcctg cgcgtgctca actgccaagg gaagggcacg 780 gttagcggca ccctcatagg cctggagttt attcggaaaa gccagctggt ccagcctgtg 840 gggccactgg tggtgctgct gcccctggcg ggtgggtaca gccgcgtcct caacgccgcc 900 tgccagcgcc tggcgagggc tggggtcgtg ctggtcaccg ctgccggcaa cttccgggac 960 gatgcctgcc tctactcccc agcctcagct cccgaggtca tcacagttgg ggccaccaat 1020 gcccaagacc agccggtgac cctggggact ttggggacca actttggccg ctgtgtggac 1080 ctctttgccc caggggagga catcattggt gcctccagcg actgcagcac ctgctttgtg 1140 tcacagagtg ggacatcaca ggctgctgcc cacgtggctg gcattgcagc catgatgctg 1200 tctgccgagc cggagctcac cctggccgag ttgaggcaga gactgatcca cttctctgcc 1260 aaagatgtca tcaatgaggc ctggttccct gaggaccagc gggtactgac ccccaacctg 1320 gtggccgccc tgccccccag cacccatggg gcaggttggc agctgttttg caggactgta 1380 tggtcagcac actcggggcc tacacggatg gccacagccg tcgcccgctg cgccccagat 1440 gaggagctgc tgagctgctc cagtttctcc aggagtggga agcggcgggg cgagcgcatg 1500 gaggcccaag ggggcaagct ggtctgccgg gcccacaacg cttttggggg tgagggtgtc 1560 tacgccattg ccaggtgctg cctgctaccc caggccaact gcagcgtcca cacagctcca 1620 ccagctgagg ccagcatggg gacccgtgtc cactgccacc aacagggcca cgtcctcaca 1680 ggctgcagct cccactggga ggtggaggac cttggcaccc acaagccgcc tgtgctgagg 1740 ccacgaggtc agcccaacca gtgcgtgggc cacagggagg ccagcatcca cgcttcctgc 1800 tgccatgccc caggtctgga atgcaaagtc aaggagcatg gaatcccggc ccctcaggag 1860 caggtgaccg tggcctgcga ggagggctgg accctgactg gctgcagtgc cctccctggg 1920 acctcccacg tcctgggggc ctacgccgta gacaacacgt gtgtagtcag gagccgggac 1980 gtcagcacta caggcagcac cagcgaaggg gccgtgacag ccgttgccat ctgctgccgg 2040 agccggcacc tggcgcaggc ctcccaggag ctccag 2076 <210> 198 <211> 692 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 198 Met Gly Thr Val Ser Ser Arg Arg Ser Trp Trp Pro Leu Pro Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ala Arg 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Claims

지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 환자의 필요성을 제거하거나 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시켜 표적 지단백질 수준을 달성하는 방법으로서, 상기 방법은 초기(치료-전) 빈도로 지단백질 분리반출술로 치료받고 있거나 치료받은 고콜레스테롤혈증을 갖는 환자를 선택하는 단계, 및 상기 환자에게 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제를 투여하는 단계를 포함하고, 이에 의해 환자의 혈청 중의 적어도 하나의 지단백질의 수준을 저하시키고 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술의 빈도를 감소시켜 표적 지단백질 수준을 달성하는, 지단백질 분리반출술 치료요법에 대한 환자의 필요성을 제거하거나 환자에 의해 요구되는 지단백질 분리반출술 치료요법의 빈도를 감소시켜 표적 지단백질 수준을 달성하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 분리반출술의 초기(치료-전) 빈도가 매주 1회 또는 2주마다 1회인, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후 분리반출술의 빈도가 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회이거나 또는 5주마다 1회보다 덜 빈번한, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후에, 상기 환자가 표적 지단백질 수준을 유지하기 위해 분리반출술을 더 이상 필요로 하지 않는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제로의 치료 전에, 상기 환자가 이종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HeFH) 또는 동종접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH) 및/또는 상승된 지단백질(a)(Lp[a])로 진단되는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 지단백질 분리반출술 치료요법이 캐스케이드(cascade) 여과, 면역흡착, 헤파린-유도된 LDL 침전, LDL-흡착(덱스트란 설페이트) 리포소르버(liposorber), LDL 혈액관류, 및 LDL-혈액관류(리포소르버 D)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제로의 치료 전에 또는 이러한 치료시에, 상기 환자가 상기 PCSK9 억제제의 제1 용량을 투여하기 전에 적어도 2주 동안 초기(치료-전) 빈도로 안정한 지단백질 분리반출술 스케쥴 중인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 환자가 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 전에 안정한 배경 지질 개질 치료요법(LMT) 중인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 환자가 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여와 동시에 안정한 배경 지질 개질 치료요법(LMT) 중인, 방법.
제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 안정한 배경 LMT가 저-, 중간- 또는 고-용량 스타틴 치료요법인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 1회 이상의 용량의 PCSK9 억제제의 투여 후 환자의 혈청중에서 저하되는 지단백질이 LDL-C, ApoB, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤 및 Lp(a)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 지단백질인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 표적 지단백질 수준이 200mg/dL 미만, 130mg/dL 미만, 100mg/dL 미만, 또는 70mg/dL 미만의 혈청 LDL-C 수준인, 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PCSK9 억제제가, PCSK9에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제13항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 상기 환자에게 2주마다 1회의 빈도로 약 75mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제13항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 상기 환자에게 2주마다 1회의 빈도로 약 150mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제13항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 상기 환자에게 4주마다 1회의 빈도로 약 300mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제13항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 상기 환자에게 2주마다 1회의 빈도로 약 140mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제13항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 상기 환자에게 4주마다 1회의 빈도로 약 420mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편이 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 보코시주맙, 로델시주맙, 및 랄판시주맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 알리로쿠맙인, 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 단백질이 에볼로쿠맙인, 방법.
제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 1/6을 포함하는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 방법.
제22항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 2, 3, 4, 7, 8 및 10을 갖는 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열들을 포함하는, 방법.
제23항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는, 방법.