ES2773111T3

ES2773111T3 - Inhibidor de la proproteína convertasa subtilisina/kexina 9 (PCSK9) para su uso en la reducción de los niveles de lipoproteína (a)

Info

Publication number: ES2773111T3
Application number: ES12761864T
Authority: ES
Inventors: Gary Swergold
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2011-09-16
Filing date: 2012-09-12
Publication date: 2020-07-09
Anticipated expiration: 2032-09-12
Also published as: WO2013039969A1; JP2014527967A; KR20140075728A; TWI601740B; JP6158813B2; EP2756004A1; BR112014005522A2; CO6910163A2; AU2012308797A1; CA2848201A1; EP2756004B1; ES2953713T3; EA201490641A1; MY170089A; IL231011B; EP3536712B1; MX363642B; MA35430B1; EA028278B1; EP4252857A2

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PCSK9 para su uso en la reducción de los niveles de lipoproteína (a) (Lp(a)) en un paciente que presenta un nivel de Lp(a) en suero superior a 30 mg/dl y a quien se le diagnostica de o se identifica que está en riesgo de desarrollar una enfermedad o un trastorno cardiovascular antes o en el momento de la administración de la composición, o a quien se le diagnostica de o se identifica que está en riesgo de desarrollar una enfermedad o un trastorno trombótico oclusivo antes o en el momento de la administración de la composición; y en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidor de la proproteína convertasa subtilisina/kexina 9 (PCSK9) para su uso en la reducción de los niveles de lipoproteína (a)

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de los tratamientos terapéuticos de enfermedades y trastornos que están asociados con niveles elevados de lipoproteínas. De manera más específica, la invención se refiere a la administración de inhibidores de PCSK9 para reducir los niveles de Lp(a) en suero en un paciente, en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9.

Antecedentes

La lipoproteína (a) (Lp(a)) es una partícula de tipo lipoproteína de baja densidad formada por la asociación de la apolipoproteína (a) (Apo(a)) con la apopolipoproteína B100 (ApoB100). El componente Apo(a) está unido covalentemente al componente ApoB100 en la partícula de Lp(a) ensamblada a través de un enlace disulfuro. Se ha demostrado que la Lp(a) en suero elevada se correlaciona con una variedad de trastornos ateroscleróticos y trombóticos. (Véanse, por ejemplo, Marcovina y Koschinsky (1998), Am. J. Cardiol. 82:57U-66U; Ignatescu et al. (1998), Thromb. Haemost. 80:231-232; Lippi y Guidi (2000), Q. J. Med. 93:75-84; Bennet et al. (2008), Arch. Intern. Med. 168:598-608; "The Emerging Risk Factors Collaboration" (2009), J. Am. Med. Assoc. 302:412-423; y Lamon-Fava et al. (2011), J. Lpid Res. 52:1181-1187). Por lo tanto, se ha sugerido la reducción terapéutica de los niveles en suero de Lp(a) como un medio para tratar o reducir el riesgo de trastornos cardiovasculares. Hay pocas opciones terapéuticas disponibles para reducir los niveles en suero de Lp(a). Los ejemplos de tratamientos que han sido probados y/o propuestos para reducir la Lp(a) en suero incluyen la administración de ácido acetilsalicílico, L-carnitina, niacina o anacetrapib, o aféresis de LDL. (Véanse, por ejemplo, Parhofer (2011), Curr. Pharm Des 17:871-876). Sin embargo, en la actualidad, no se dispone de tratamientos que proporcionen una terapia adecuada y práctica para la Lp(a) elevada.

La proproteína convertasa subtilisina/kexina de tipo 9 (PCSK9) es una proproteína convertasa que pertenece a la subfamilia de la proteinasa K de la familia de las subtilasas secretoras. El uso de inhibidores de PCSK9 (anticuerpos anti-PCSK9) para reducir el colesterol total en suero, el colesterol LDL y los triglicéridos en suero se describe en la publicación de solicitud de patente de EE.UU. n.° 2010/0166768. Nordestgaard et al., (2010) European Heart Journal 31(23): 2844, describe la asociación entre niveles elevados de Lp(a) y un mayor riesgo cardiovascular. Parhofer (2011), Current Pharmaceutical Design 17: 871-876, indica que se desconoce el efecto de los anticuerpos anti-PCSK-9 sobre la Lp(a). El documento WO2011/028938 describe el uso de inhibidores de PCSK9 para disminuir el LDL, ApoB o colesterol total. No obstante, hasta ahora, no se ha demostrado que los inhibidores de PCSK9 disminuyan los niveles de Lp(a) en pacientes. Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad en la técnica de métodos terapéuticos para reducir los niveles en suero de Lp(a).

Breve sumario de la invención

La presente invención aborda la necesidad anteriormente mencionada en la técnica proporcionando composiciones farmacéuticas para su uso en métodos de reducción de los niveles de Lp(a) en suero en un individuo. El método comprende seleccionar un paciente que muestre un nivel de Lp(a) en suero superior a 30 mg/dl y que haya sido diagnosticado de, o identificado como un paciente que está en riesgo de desarrollar, una enfermedad y un trastorno oclusivo trombótico y/o cardiovascular, y administrar la composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PCSK9 al paciente, en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9. El paciente también puede seleccionarse en función de si presenta factores de riesgo adicionales para dichas enfermedades y trastornos en los que una reducción de los niveles de Lp(a) sería beneficiosa o reduciría el riesgo. Por ejemplo, los pacientes con hipercolesterolemia (por ejemplo, HFHe, no HF, etc.) pueden ser buenos candidatos para el tratamiento con los métodos terapéuticos.

Los ejemplos de anticuerpos anti-PCSK9 específicos que se pueden usar incluyen cualquier anticuerpo o fragmento de unión al antígeno establecido en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° 2010/0166768, y/o desvelado en el presente documento.

El inhibidor de PCSK9 se puede administrar a un sujeto por vía subcutánea o intravenosa. Asimismo, el inhibidor de PCSK9 se puede administrar a un paciente que esté sometido a un régimen terapéutico de estatinas en el momento de la intervención terapéutica.

Otras realizaciones de la presente invención resultarán evidentes a partir de una revisión de la siguiente descripción detallada.

Descripción detallada

Antes de describir la presente invención, debe entenderse que la presente invención no se limita a los métodos ni a las condiciones experimentales particulares que se describen, ya que dichos métodos y condiciones pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en el presente documento únicamente tiene el fin de describir realizaciones particulares y no se pretende que sea limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.

A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende comúnmente un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invención. Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente", cuando se usa en referencia a un valor numérico indicado en particular, significa que el valor puede variar del valor indicado en no más del 1 %. Por ejemplo, como se usa en el presente documento, la expresión "aproximadamente 100" incluye 99 y 101, y todos los valores intermedios (por ejemplo, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, etc.).

Aunque puede usarse cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento en la práctica de la presente invención, ahora se describen los métodos y materiales preferidos.

Niveles elevados de Lp(a) en suero

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para su uso en métodos de reducción de los niveles de Lp(a) en suero en un paciente. Los métodos comprenden seleccionar un paciente que presente una Lp(a) en suero elevada, por encima de 30 mg/dl, y administrar al paciente la composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PCSK9, en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9. Como se usa en el presente documento, las expresiones "Lp(a)" o "lipoproteína (a)" se refieren a una partícula de tipo lipoproteína de baja densidad formada por la asociación de la apolipoproteína (a) (apo(a)) con la apolipoproteína B100 (apoB100).

Como se describe en el presente documento, "Lp(a) elevada en suero" significa un nivel de Lp(a) en suero superior a aproximadamente 14 mg/dl. Se puede considerar que un paciente presenta Lp(a) en suero elevada si el nivel de Lp(a) en suero medido en el paciente es superior a aproximadamente 15 mg/dl, 20 mg/dl, 25 mg/dl, 30 mg/dl, 35 mg/dl, 40 mg/dl, 45 mg/dl, 50 mg/dl, 60 mg/dl, 70 mg/dl, 80 mg/dl, 90 mg/dl, 100 mg/dl, 120 mg/dl, 140 mg/dl, 160 mg/dl, 180 mg/dl o 200 mg/dl. El nivel de Lp(a) en suero se puede medir en un paciente tras las comidas. En algunas realizaciones, el nivel de Lp(a) se mide tras un período de ayuno (por ejemplo, tras ayunar durante 6 horas, 8 h, 10 h, 12 h o más). Un método ilustrativo para medir la Lp(a) en suero en un paciente es mediante inmunonefelometría cinética, aunque puede usarse cualquier método de diagnóstico clínicamente aceptable en el contexto de la presente invención.

Población de pacientes

Los métodos descritos en el presente documento son útiles para reducir los niveles de Lp(a) en suero en sujetos humanos que presentan un nivel elevado de Lp(a) en suero. En algunos casos, el paciente que presenta Lp(a) en suero elevado está, por lo demás, sano. Por ejemplo, el paciente puede que no presente ningún otro factor de riesgo cardiovascular, enfermedades o trastornos trombóticos o de otro tipo en el momento del tratamiento. En otros casos, sin embargo, el paciente se selecciona en función de ser diagnosticado de, o estar en riesgo de desarrollar, una enfermedad o un trastorno causado o correlacionado con niveles elevados de Lp(a) en suero. Por ejemplo, en el momento o antes de la administración de la composición farmacéutica de la presente invención, el paciente puede ser diagnosticado de, o identificado como un paciente en riesgo de desarrollar, una enfermedad o un trastorno cardiovascular, tal como, por ejemplo, arteriopatía coronaria, infarto agudo de miocardio, aterosclerosis carotídea asintomática, apoplejía, enfermedad oclusiva de las arterias periféricas, etc. La enfermedad o el trastorno cardiovascular, en algunos casos, es hipercolesterolemia. Por ejemplo, se puede seleccionar un paciente para el tratamiento si el paciente es diagnosticado de, o identificado como un paciente en riesgo de desarrollar, una afección de hipercolesterolemia tal como, por ejemplo, hipercolesterolemia familiar heterocigótica (HFHe), hipercolesterolemia familiar homocigótica (HFHo), así como incidencias de hipercolesterolemia que son distintas de la hipercolesterolemia familiar (no HF).

En otros casos, en el momento o antes de la administración de la composición farmacéutica de la presente invención, el paciente puede ser diagnosticado de, o identificado como un paciente en riesgo de desarrollar, una enfermedad o un trastorno trombótico oclusivo, tal como, por ejemplo, embolia pulmonar, oclusión de la vena retiniana central, etc. En ciertas realizaciones, el paciente se selecciona en función de ser diagnosticado de, o estar en riesgo de desarrollar, una combinación de dos o más de las enfermedades o trastornos mencionados anteriormente. Por ejemplo, en el momento o antes de la administración de la composición farmacéutica de la presente invención, el paciente puede ser diagnosticado de, o identificado como un paciente que está en riesgo de desarrollar, enfermedad arterial coronaria y embolia pulmonar. Otras combinaciones de diagnóstico (por ejemplo, aterosclerosis y oclusión de la vena central de la retina, HFHe y apoplejía, etc.) también se incluyen en la definición de las poblaciones de pacientes que se pueden tratar.

En otros casos más, el paciente que se va a tratar se selecciona en función de uno o más factores seleccionados del grupo que consiste en la edad (por ejemplo, mayores de 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 u 80 años), la raza, el género (masculino o femenino), los hábitos de ejercicio (por ejemplo, que realiza ejercicio regularmente, sedentario), otras afecciones médicas preexistentes (por ejemplo, diabetes de tipo II, tensión arterial alta, etc.), y el estado actual de medicación (por ejemplo, si toma estatinas actualmente [por ejemplo, cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pitavastatina, rosuvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, etc.], betabloqueantes, niacina, etc.). La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas para su uso en métodos de reducción de los niveles en suero de Lp(a) en pacientes intolerantes, que no responden o que no responde adecuadamente a la terapia convencional con estatinas. Los posibles pacientes pueden seleccionarse/cribarse en función de uno o más de estos factores (por ejemplo, según un cuestionario, una evaluación diagnóstica, etc.) antes de ser tratados.

La presente divulgación también incluye composiciones farmacéuticas para su uso en métodos de aumento de la excreción transintestinal del colesterol (TICE, TransIntestinal Cholesterol Excretion) en un sujeto mediante la administración de la composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PCSK9 al sujeto, en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9, por ejemplo, el anticuerpo denominado en el presente documento "mAb316P". De acuerdo con ciertos aspectos, el método puede comprender identificar a un sujeto para el que sea beneficiosa una mejora de la TICE, o identificar a un sujeto que presente una TICE insuficiente, y administrar el inhibidor de PCSK9 (por ejemplo, mAb316P) al sujeto.

Inhibidores de PCSK9

Como se usa en el presente documento, un "inhibidor de PCSK9" es cualquier agente que se une o interactúa con la PCSK9 humana e inhibe la función biológica normal de la PCSK9 in vitro o in vivo. Los ejemplos no limitantes de categorías de inhibidores de PCSK9 incluyen antagonistas de PCSK9 de molécula pequeña, antagonistas de PCSK9 basados en péptidos (por ejemplo, moléculas de "pepticuerpo") y anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de unión al antígeno que se unen específicamente a la PCSK9 humana.

La expresión "proproteína convertasa subtilisina/kexina de tipo 9 humana" o "PCSK9 humana" o "hPCSK9", como se usa en el presente documento, se refiere a la PCSK9 que tiene la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 754 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 755, o uno de sus fragmentos biológicamente activos.

El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, pretende referirse a moléculas de inmunoglobulina que comprenden cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro, así como multímeros de las mismas (por ejemplo IgM). Cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada (abreviada en el presente documento como HCVR o V^h) y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada comprende tres dominios, C^h1, C^h2 y C^h3. Cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera (abreviada en el presente documento como LCVR o V^l) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera comprende un dominio (C^l1). Las regiones V^hy V^lpueden subdividirse además en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco conservadas (FR). Cada V^hy V^lestá compuesta por tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo amino hasta el extremo carboxilo en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. En diferentes realizaciones de la invención, las FR del anticuerpo anti-PCSK9 (o parte de unión al antígeno del mismo) pueden ser idénticas a las secuencias de la línea germinal humana o pueden modificarse de manera natural o artificial. Una secuencia consenso de aminoácidos se puede definir basándose en un análisis paralelo de dos o más CDR.

El término "anticuerpo", como se usa en el presente documento, también incluye fragmentos de unión al antígeno de moléculas de anticuerpo completas. Las expresiones "parte de unión al antígeno" de un anticuerpo o "fragmento de unión al antígeno" de un anticuerpo, como se usa en el presente documento, incluyen cualquier polipéptido o glicoproteína de origen natural, obtenible enzimáticamente, sintético o modificado por ingeniería genética que se une específicamente a un antígeno para formar un complejo. Los fragmentos de unión al antígeno de un anticuerpo pueden obtenerse, por ejemplo, de moléculas de anticuerpo completas, usando cualquier técnica convencional adecuada tal como digestión proteolítica o técnicas de ingeniería genética recombinante que implican la manipulación y expresión de ADN que codifica dominios variables, y opcionalmente constantes, de anticuerpo. Dicho ADN se conoce y/o se puede adquirir fácilmente de, por ejemplo, fuentes comerciales, genotecas (incluyendo, por ejemplo, fagotecas de anticuerpos), o puede sintetizarse. El ADN puede secuenciarse y manipularse químicamente o usando técnicas de biología molecular, por ejemplo, para disponer uno o más dominios variables y/o constantes en una configuración adecuada, o para introducir codones, crear restos de cisteína, modificar, añadir o suprimir aminoácidos, etc.

Los ejemplos no limitantes de fragmentos de unión al antígeno incluyen: (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas Fv de cadena sencilla (scFv); (vi) fragmentos dAb; y (vii) unidades de reconocimiento mínimas que consisten en los restos de aminoácidos que imitan la región hipervariable de un anticuerpo (por ejemplo, una región determinante de complementariedad (CDR) aislada, tal como un péptido CDR3) o un péptido FR3-CDR3-FR4 restringido. Otras moléculas modificadas por ingeniería genética, tales como anticuerpos específicos de dominio, anticuerpos de un solo dominio, anticuerpos de dominio suprimido, anticuerpos quiméricos, anticuerpos injertados con CDR, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos, minicuerpos, nanocuerpos (por ejemplo, nanocuerpos monovalentes, nanocuerpos bivalentes, etc.), agentes inmunofarmacéuticos modulares pequeños (SMIP) y dominios IgNAR variables de tiburón, también se abarcan dentro de la expresión "fragmento de unión al antígeno", como se usa en el presente documento.

Un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo normalmente comprenderá al menos un dominio variable. El dominio variable puede ser de cualquier tamaño o composición de aminoácidos y, en general, comprenderá al menos una CDR que está adyacente a o en fase con una o más secuencias marco. En fragmentos de unión al antígeno que tienen un dominio V^hasociado con un dominio V^l, los dominios V^hy V^lpueden situarse uno con respecto al otro en cualquier disposición adecuada. Por ejemplo, la región variable puede ser dimérica y contener dímeros V^h-V^h, V^h-V^lo V^l-V^l. Como alternativa, el fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo puede contener un dominio V^ho V^lmonomérico.

En ciertas realizaciones, un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo puede contener al menos un dominio variable unido covalentemente con al menos un dominio constante. Las configuraciones ilustrativas, no limitantes, de dominios variables y constantes que se pueden encontrar dentro de un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo de la presente invención incluyen: (i) V^h-C^h1; (ii) V^h-C^h2; (iii) V^h-C^h3; (iv) V^h-C^h1-C^h2; (v) V^h-C^h1-C^h2-C^h3;

(vi) V^h-C^h2-C^h3; (vii) V^h-C^l; (viii) V^l-C^h1; (ix) V^l-C^h2; (x) V^l-C^h3; (xi) V^l-C^h1-C^h2; (xii) V^l-C^h1-C C^h3; y (xiv) V^l-C^l. En cualquier configuración de dominios variables y constantes, incluyendo cualquiera de las configuraciones ilustrativas enumeradas anteriormente, los dominios variables y constantes pueden estar unidos directamente entre sí o pueden estar unidos mediante una región bisagra o conectora completa o parcial. Una región bisagra puede consistir en al menos 2 (por ejemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 o más) aminoácidos que den lugar a una unión flexible o semiflexible entre dominios variables y/o constantes adyacentes en una única molécula polipeptídica.

Además, un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo de la presente invención puede comprender un homodímero o heterodímero (u otro multímero) de cualquiera de las configuraciones de dominio variable y constante enumeradas anteriormente en asociación no covalente entre sí y/o con uno o más dominios V^ho V^lmonoméricos (por ejemplo, mediante enlace o enlaces disulfuro).

Como ocurre con las moléculas de anticuerpo completas, los fragmentos de unión al antígeno pueden ser monoespecíficos o multiespecíficos (por ejemplo, biespecíficos). Un fragmento de unión al antígeno multiespecífico de un anticuerpo normalmente comprenderá al menos dos dominios variables diferentes, en donde cada dominio variable puede unirse específicamente con un antígeno distinto o con un epítopo diferente en el mismo antígeno.

Cualquier formato de anticuerpo multiespecífico, incluyendo los formatos de anticuerpo biespecífico ilustrativos desvelados en el presente documento, puede adaptarse para su uso en el contexto de un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo de la presente invención usando técnicas rutinarias disponibles en la técnica.

La región constante de un anticuerpo es importante en la capacidad de un anticuerpo de fijar el complemento y mediar la citotoxicidad dependiente de células. Por lo tanto, el isotipo de un anticuerpo puede seleccionarse basándose en si se desea que el anticuerpo medie la citotoxicidad.

La expresión "anticuerpo humano", como se usa en el presente documento, pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos humanos de la invención pueden incluir, no obstante, restos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica in vitro o mediante mutación somática in vivo), por ejemplo, en las CDR y, en particular, CDR3.

Sin embargo, la expresión "anticuerpo humano", como se usa en el presente documento, no pretende incluir anticuerpos en los que las secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como de un ratón, se han injertado en secuencias marco humanas.

La expresión "anticuerpo humano recombinante", como se usa en el presente documento, pretende incluir todos los anticuerpos humanos que se han preparado, expresados, creado o aislado por medios recombinantes, tales como anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante introducido por transfección en una célula hospedadora (descrito en más detalle posteriormente), anticuerpos aislados de un banco combinatorio, recombinante, de anticuerpos humanos (descrito más adelante), anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para genes de inmunoglobulina humana (véase, por ejemplo, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res.

20:6287-6295) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implique el corte y empalme de secuencias génicas de inmunoglobulina humana en otras secuencias de ADN. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes procedentes de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. En ciertas realizaciones, sin embargo, dichos anticuerpos humanos recombinantes se someten a mutagénesis in vitro (o, cuando se usa un animal transgénico para secuencias de Ig humana, mutagénesis somática in vivo) y, por tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones V^hy V^lde los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque proceden de, y están relacionadas con, secuencias de V^hy V^lde línea germinal humana, no pueden existir de forma natural dentro del repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanos in vivo.

Los anticuerpos humanos pueden existir en dos formas que están asociadas con heterogeneidad de bisagra. En una forma, una molécula de inmunoglobulina comprende una construcción de cuatro cadenas estable de aproximadamente

150-160 kDa en la que los dímeros se mantienen juntos por un enlace disulfuro intercatenario de la cadena pesada.

En una segunda forma, los dímeros no están unidos mediante enlaces disulfuro intercatenarios y se forma una molécula de aproximadamente 75-80 kDa compuesta de una cadena ligera y pesada acopladas covalentemente (semianticuerpo). Estas formas han sido extremadamente difíciles de separar, incluso tras purificación por afinidad.

La frecuencia de aparición de la segunda forma en diversos isotipos de IgG intacta se debe a, pero sin limitación, diferencias estructurales asociadas con el isotipo de la región bisagra del anticuerpo. Una sustitución de un único aminoácido en la región bisagra de la bisagra de IgG4 humana puede reducir significativamente la aparición de la segunda forma (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) hasta los niveles normalmente observados usando una bisagra de IgG1 humana. La presente invención incluye anticuerpos que tienen una o más mutaciones en la región bisagra, C^h2 o C^h3, que pueden ser deseables, por ejemplo, en la producción, para mejorar el rendimiento de la forma de anticuerpo deseada.

Un "anticuerpo aislado", como se usa en el presente documento, significa un anticuerpo que se ha identificado y separado y/o recuperado de al menos un componente de su entorno natural. Por ejemplo, un anticuerpo que se ha separado o retirado de al menos un componente de un organismo, o de un tejido o de una célula en donde existe de forma natural o se produce de forma natural el anticuerpo, es un "anticuerpo aislado" para los fines de la presente invención. Un anticuerpo aislado también incluye un anticuerpo in situ dentro de una célula recombinante. Los anticuerpos aislados son anticuerpos que se han sometido a al menos una etapa de purificación o aislamiento. De acuerdo con determinadas realizaciones, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o agentes químicos.

La expresión "se une específicamente", significa que un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo forma un complejo con un antígeno que es relativamente estable en condiciones fisiológicas. Se conocen bien en la técnica métodos para determinar si un anticuerpo se une específicamente con un antígeno e incluyen, por ejemplo, diálisis de equilibrio y resonancia de plasmón superficial. Por ejemplo, un anticuerpo que "se une específicamente" a PCSK9, como se usa en el contexto de la presente invención, incluye anticuerpos que se unen a PCSK9 o parte del mismo con una K^dde menos de aproximadamente 1.000 nM, menos de aproximadamente 500 nM, menos de aproximadamente 300 nM, menos de aproximadamente 200 nM, menos de aproximadamente 100 nM, menos de aproximadamente 90 nM, menos de aproximadamente 80 nM, menos de aproximadamente 70 nM, menos de aproximadamente 60 nM, menos de aproximadamente 50 nM, menos de aproximadamente 40 nM, menos de aproximadamente 30 nM, menos de aproximadamente 20 nM, menos de aproximadamente 10 nM, menos de aproximadamente 5 nM, menos de aproximadamente 4 nM, menos de aproximadamente 3 nM, menos de aproximadamente 2 nM, menos de aproximadamente 1 nM o menos de aproximadamente 0,5 nM, medida en un ensayo de resonancia de plasmón superficial. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a PCSK9 humana, sin embargo, tiene reactividad cruzada con otros antígenos, tales como moléculas de PCSK9 de otras especies (no humanas).

Los anticuerpos anti-PCSK9 pueden comprender una o más sustituciones de aminoácidos, inserciones y/o eliminaciones de aminoácidos en las regiones marco y/o CDR de los dominios variables de cadena pesada y ligera en comparación con las secuencias correspondientes de la línea germinal de las que se obtuvieron los anticuerpos. Dichas mutaciones pueden averiguarse fácilmente comparando las secuencias de aminoácidos desveladas en el presente documento con secuencias de la línea germinal disponibles en, por ejemplo, bases de datos de secuencias de anticuerpos públicas. La presente invención incluye anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno de los mismos, que se obtienen a partir de cualquiera de las secuencias de aminoácidos desveladas en el presente documento, en las que uno o más aminoácidos de dentro de una o más regiones marco y/o CDR están mutados al resto o restos correspondientes de la secuencia de la línea germinal de la que se obtuvo el anticuerpo, o el resto o restos correspondientes de otra secuencia de la línea germinal humana, o a una sustitución de aminoácidos conservativa del resto o restos de la línea germinal correspondientes (dichos cambios de secuencia se mencionan en el presente documento colectivamente como "mutaciones de la línea germinal"). Un experto en la materia, partiendo con las secuencias de la región variable de cadena pesada y ligera desveladas en el presente documento, puede producir fácilmente numerosos anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno que comprenden una o más mutaciones de la línea germinal individuales o combinaciones de las mismas. En ciertas realizaciones, todos los restos marco y/o CDR de dentro de los dominios V^hy/o V^lvuelven a mutar a los restos encontrados en la secuencia de la línea germinal humana de la que se obtuvo el anticuerpo. En otras realizaciones, únicamente determinados restos vuelven a mutar a la secuencia de la línea germinal original, por ejemplo, únicamente los restos mutados encontrados dentro de los 8 primeros aminoácidos de FR1 o dentro de los 8 últimos aminoácidos de FR4, o únicamente los restos mutados encontrados dentro de CDR1, CDR2 o CDR3. En otras realizaciones, uno o más los restos marco y/o de CDR están mutados a los restos correspondientes de una secuencia de línea germinal diferente (es decir, una secuencia de línea germinal que es diferente de la secuencia de línea germinal de la que se obtiene el anticuerpo originalmente). Además, los anticuerpos de la presente invención pueden contener cualquier combinación de dos o más mutaciones de la línea germinal dentro de las regiones marco conservadas y/o CDR, por ejemplo, en donde determinados restos individuales están mutados al resto correspondiente de una secuencia de la línea germinal particular mientras que otros restos determinados que difieren de la secuencia de la línea germinal original se mantienen o están mutados al resto correspondiente de una secuencia de la línea germinal diferente. Una vez obtenidos, los anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno que contienen una o más mutaciones de la línea germinal pueden ensayarse fácilmente para determinar una o más propiedades deseadas tales como, mejor especificidad de unión, mayor afinidad de unión, propiedades biológicas antagonistas o agonistas mejoradas o potenciadas (según pueda ser el caso), menor inmunogenicidad, etc. Dentro de la presente invención se incluyen anticuerpos y fragmentos de unión al antígeno obtenidos de esta manera general.

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos anti-PCSK9 que comprenden variantes de cualquiera de las secuencias de aminoácidos de HCVR, LCVR y/o c Dr desveladas en el presente documento que tienen una o más sustituciones conservativas. Por ejemplo, la presente invención incluye anticuerpos anti-PCSK9 que tienen secuencias de aminoácidos de HCVR, LCVR y/o c Dr con, por ejemplo, 10 o menos, 8 o menos, 6 o menos, 4 o menos, etc. sustituciones conservativas de aminoácidos en relación con cualquiera de las secuencias de aminoácidos de HCVR, LCVR y/o CDR desveladas en el presente documento.

La expresión "resonancia de plasmón superficial", como se usa en el presente documento, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de interacciones en tiempo real por detección de alteraciones en concentraciones de proteína dentro de una matriz biodetectora, por ejemplo, usando el sistema BIAcore™ (Biacore Life Sciences división de GE Healthcare, Piscataway, NJ).

El término "K^d", como se usa en el presente documento, pretende hacer referencia a la constante de disociación en equilibrio de una interacción particular de anticuerpo-antígeno.

El término "epítopo" se refiere a un determinante antigénico que interactúa con un sitio de unión al antígeno específico en la región variable de una molécula de anticuerpo conocida como parátopo. Un único antígeno puede tener más de un epítopo. Por lo tanto, diferentes anticuerpos pueden unirse a diferentes áreas en un antígeno o puede tener diferentes efectos biológicos. Los epítopos pueden ser conformacionales o lineales. Un epítopo conformacional se produce por yuxtaposición espacial de aminoácidos de diferentes segmentos de la cadena de polipéptido lineal. Un epítopo lineal es uno producido por restos de aminoácidos adyacentes en una cadena polipeptídica. En determinadas circunstancias, un epítopo puede incluir restos de sacáridos, grupos fosforilo o grupos sulfonilo en el antígeno.

Preparación de anticuerpos humanos

Los métodos para generar anticuerpos humanos en ratones transgénicos se conocen en la técnica. Cualquiera de dichos métodos conocidos puede usarse en el contexto de la presente invención para preparar anticuerpos humanos que se unan específicamente a PCSK9 humana.

Usando la tecnología VELOCIMMUNE™ (véase, por ejemplo, el documento US 6.596.541, Regeneron Pharmaceuticals) o cualquier otro método conocido para generar anticuerpos monoclonales, inicialmente se aíslan anticuerpos quiméricos de alta afinidad contra PCSK9 que tienen una región variable humana y una región constante de ratón. La tecnología VELOCIMMUNE® implica la generación de un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende regiones variables de cadena pesada y ligera humanas unidas operativamente a locus de regiones constantes de ratón endógenos de modo que el ratón produce un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a la estimulación antigénica. El ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo se aísla y se une operativamente al ADN que codifica las regiones constantes humanas de cadena pesada y ligera. El ADN luego se expresa en una célula capaz de expresar el anticuerpo completamente humano.

En general, un ratón VELOCIMMUNE® se expone al antígeno de interés, y las células linfáticas (tales como los linfocitos B) se extraen de los ratones que expresan anticuerpos. Las células linfáticas pueden fusionarse con una estirpe celular de mieloma para preparar estirpes celulares de hibridoma inmortales, y dichas estirpes celulares de hibridoma se criban y seleccionan para identificar estirpes celulares de hibridoma que produzcan anticuerpos específicos para el antígeno de interés. El ADN que codifica las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera puede aislarse y unirse a regiones isotípicas constantes deseables de la cadena pesada y la cadena ligera. Dicha proteína de anticuerpo se puede producir en una célula, tal como una célula CHO. Como alternativa, el ADN que codifica los anticuerpos quiméricos específicos del antígeno o los dominios variables de las cadenas ligera y pesada pueden aislarse directamente de los linfocitos específicos del antígeno.

Inicialmente, se aíslan anticuerpos quiméricos de alta afinidad que tienen una región variable humana y una región constante de ratón. Los anticuerpos se caracterizan y se seleccionan en función de características deseables, entre las que se incluyen la afinidad, selectividad, epítopo, etc., usando procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la materia. Las regiones constantes de ratón se remplazan por una región constante humana deseada para generar el anticuerpo completamente humano de la invención, por ejemplo, IgG1 o IgG4 de tipo silvestre o modificada. Aunque la región constante seleccionada puede variar de acuerdo con el uso específico, las características de unión al antígeno de alta afinidad y especificidad hacia la diana residen en la región variable.

En general, los anticuerpos que se pueden usar en la presente invención poseen altas afinidades, como se ha descrito anteriormente, medidas mediante la unión al antígeno inmovilizado sobre fase sólida o en fase en solución. Las regiones constantes de ratón se remplazan por regiones constantes humanas deseadas para generar los anticuerpos completamente humanos de la invención. Aunque la región constante seleccionada puede variar de acuerdo con el uso específico, las características de unión al antígeno de alta afinidad y especificidad hacia la diana residen en la región variable.

Los ejemplos específicos de anticuerpos humanos o fragmentos de anticuerpos de unión al antígeno que se unen específicamente a PCSK9 que se pueden usar en el contexto de la presente invención incluyen cualquier anticuerpo o fragmento de unión al antígeno que comprenda las tres CDR de cadena pesada (HCDR1, HCDR2 y HCDR3) contenidas dentro de una región variable de cadena pesada (HCVR) que tenga una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consista en SEQ ID NO: 2, 18, 22, 26, 42, 46, 50, 66, 70, 74, 90, 94, 98, 114, 118, 122, 138, 142, 146, 162, 166, 170, 186, 190, 194, 210, 214, 218, 234, 238, 242, 258, 262, 266, 282, 286, 290, 306, 310, 314, 330, 334, 338, 354, 358, 362, 378, 382, 386, 402, 406, 410, 426, 430, 434, 450, 454, 458, 474, 478, 482, 498, 502, 506, 522, 526, 530, 546, 550, 554, 570, 574, 578, 594, 598, 602, 618, 622, 626, 642, 646, 650, 666, 670, 674, 690, 694, 698, 714, 718, 722, 738 y 742, o una secuencia esencialmente similar de las mismas que tenga al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia. El anticuerpo o fragmento de unión al antígeno puede comprender las tres CDR de cadena ligera (LCVR1, LCVR2, LCVR3) contenidas dentro de una región variable de cadena ligera (LCVR) que tenga una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consista en SEQ ID NO: 10, 20, 24, 34, 44, 48, 58, 68, 72, 82, 92, 96, 106, 116, 120, 130, 140, 144, 154, 164, 168, 178, 188, 192, 202, 212, 216, 226, 236, 240, 250, 260, 264, 274, 284, 288, 298, 308, 312, 322, 332, 336, 346, 356, 360, 370, 380, 384, 394, 404, 408, 418, 428, 432, 442, 452, 456, 466, 476, 480, 490, 500, 504, 514, 524, 528, 538, 548, 552, 562, 572, 576, 586, 596, 600, 610, 620, 624, 634, 644, 648, 658, 668, 672, 682, 692, 696, 706, 716, 720, 730, 740 y 744, o una secuencia esencialmente similar de las mismas que tenga al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia.

En determinadas realizaciones de la presente invención, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende las seis CDR (HCDR1, Hc DR2, HCDR3, LCDR1, Lc Dr 2 y LCDR3) de los pares de secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y ligera (HCVR/LCVR) seleccionados del grupo que consiste en SEQ ID NO: 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402/404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598/600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 y 742/744.

En determinadas realizaciones de la presente invención, el anticuerpo anti-PCSK9, o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se puede usar en la presente invención tiene secuencias de aminoácidos de HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 seleccionadas de SEQ ID NO: 76/78/80/84/86/88 (mAb316P) y 220/222/224/228/230/232 (mAb300N) (véase la publicación de solicitud de patente de EE.UU. n.° 2010/0166768).

En determinadas realizaciones de la presente invención, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende pares de secuencias de aminoácidos de HCVR/LCVR seleccionados del grupo que consiste en SEQ ID NO: 2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260, 262/264, 266/274, 282/284, 286/288, 290/298, 306/308, 310/312, 314/322, 330/332, 334/336, 338/346, 354/356, 358/360, 362/370, 378/380, 382/384, 386/394, 402/404, 406/408, 410/418, 426/428, 430/432, 434/442, 450/452, 454/456, 458/466, 474/476, 478/480, 482/490, 498/500, 502/504, 506/514, 522/524, 526/528, 530/538, 546/548, 550/552, 554/562, 570/572, 574/576, 578/586, 594/596, 598/600, 602/610, 618/620, 622/624, 626/634, 642/644, 646/648, 650/658, 666/668, 670/672, 674/682, 690/692, 694/696, 698/706, 714/716, 718/720, 722/730, 738/740 y 742/744.

Composiciones farmacéuticas y métodos de administración

Las composiciones farmacéuticas de la invención se formulan con vehículos, excipientes y otros agentes adecuados que proporcionan, por ejemplo, una transferencia, administración o tolerancia adecuadas. Puede encontrarse una multitud de formulaciones apropiadas en el formulario conocido para todos los químicos farmacéuticos: "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, PA. Estas formulaciones incluyen, por ejemplo, polvos, pastas, pomadas, gelatinas, ceras, aceites, lípidos, vesículas que contienen lípidos (catiónicos o aniónicos) (tales como LIPOFECTIN™), conjugados de ADN, pastas de absorción anhidras, emulsiones de aceite en agua y de agua en aceite, emulsiones de Carbowax (polietilenglicoles de diversos pesos moleculares), geles semisólidos y mezclas semisólidas que contienen Carbowax. Véase también Powell et al., "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.

Se conocen diversos sistemas de administración y pueden usarse para administrar la composición farmacéutica de la invención, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, células recombinantes capaces de expresar los virus mutantes, endocitosis mediada por receptor (véase, por ejemplo, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem.

262:4429-4432). Los métodos de administración incluyen, aunque sin limitación, la vía intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural y oral. La composición puede administrarse por cualquier vía conveniente, por ejemplo, por infusión o inyección en bolo, por absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.) y pueden administrarse junto con otros agentes biológicamente activos.

Una composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse por vía subcutánea o por vía intravenosa con una aguja y una jeringa convencionales. También, con respecto a la administración subcutánea, un dispositivo de administración de pluma tiene fácilmente aplicaciones en la administración de una composición farmacéutica de la presente invención. Dicho dispositivo de administración de pluma puede ser reutilizable o desechable. Un dispositivo de administración de pluma reutilizable usa, en general, un cartucho reemplazable que contiene una composición farmacéutica. Una vez que se ha administrado toda la composición farmacéutica dentro del cartucho y que el cartucho está vacío, el cartucho vacío puede desecharse fácilmente y remplazarse con un nuevo cartucho que contenga la composición farmacéutica. El dispositivo de administración de pluma puede entonces reutilizarse. En un dispositivo de administración de pluma desechable, no hay cartucho reemplazable. Más bien, el dispositivo de administración de pluma desechable viene precargado con la composición farmacéutica mantenida en un depósito dentro del dispositivo. Una vez que el depósito se vacía de la composición farmacéutica, el dispositivo completo se desecha.

Numerosos dispositivos de administración de pluma y autoinyector reutilizables tienen aplicaciones en la administración subcutánea de una composición farmacéutica de la presente invención. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, RU), DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Suiza), pluma HUMALOG MIX75/25™, pluma HUMALOG™, pluma HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly y Co., Indianápolis, IN), NOVOPEN™ I, II y III (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhague, Dinamarca), pluma BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OpT iPEN STARLET™ y OpTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Alemania), por nombrar solo algunos. Los ejemplos de dispositivos de administración de pluma desechables que tienen aplicaciones en la administración subcutánea de una composición farmacéutica de la presente invención incluyen, aunque sin limitación, la pluma SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), el FLEXPEN™ (Novo Nordisk) y el KWIKPEN™ (Eli Lilly), el autoinyector SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), el PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Alemania), el EPIPEN (Dey, L.P.), y la pluma HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park IL), por nombrar solo algunos.

En determinadas situaciones, la composición farmacéutica puede administrarse en un sistema de liberación controlada. En una realización, puede usarse una bomba (véase Langer, anteriormente citado; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). En otra realización, se pueden usar materiales poliméricos; véase, Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Ratón, Florida. En otra realización más, un sistema de liberación controlada puede ubicarse en las proximidades de la diana de la composición, requiriendo, por tanto, solo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, 1984, en "Medical Applications of Controlled Release", mencionado anteriormente, vol. 2, pág. 115-138). Se analizan otros sistemas de liberación controlada en la revisión de Langer, 1990, Science 249:1527-1533.

Las preparaciones inyectables pueden incluir formas farmacéuticas para inyecciones intravenosas, subcutáneas, intravenosas e intramusculares, infusiones por goteo, etc. Estas preparaciones inyectables pueden prepararse por métodos conocidos. Por ejemplo, las preparaciones inyectables pueden prepararse, por ejemplo, disolviendo, suspendiendo o emulsionando el anticuerpo o su sal descrita anteriormente en un medio acuoso estéril o un medio oleoso usado convencionalmente para inyecciones. Como medio acuoso para inyecciones, existen, por ejemplo, solución salina fisiológica, una solución isotónica que contiene glucosa y otros coadyuvantes, etc., que pueden usarse en combinación con un agente solubilizante apropiado tal como un alcohol (por ejemplo, etanol), un polialcohol (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol), un tensioactivo no iónico [por ejemplo, polisorbato 80, HCO-50 (aducto de polioxietileno (50 mol) de aceite de ricino hidrogenado)], etc. Como medio oleoso, se emplean, por ejemplo, aceite de sésamo, aceite de soja, etc., que pueden usarse en combinación con un agente solubilizante tal como benzoato de bencilo, alcohol bencílico, etc. La inyección preparada de este modo se carga preferentemente en una ampolla apropiada.

De manera ventajosa, las composiciones farmacéuticas para su uso oral o parenteral descritas anteriormente se preparan en formas farmacéuticas en una dosis unitaria adecuada para ajustarse a una dosis de los principios activos. Dichas formas farmacéuticas en una dosis unitaria incluyen, por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas, inyecciones (ampollas), supositorios, etc.

Dosificación

La cantidad de inhibidor de PCSK9 (por ejemplo, anticuerpo anti-PCSK9) administrada a un sujeto es, en general, una cantidad terapéuticamente eficaz. Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una dosis de inhibidor de PCSK9 que produce una reducción detectable en la Lp(a) en suero. Por ejemplo, la "cantidad terapéuticamente eficaz" de un inhibidor de PCSK9 incluye, por ejemplo, una cantidad de inhibidor de PCSK9 que produce una reducción de al menos el 2 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % o más en los niveles de Lp(a) cuando se administra a un paciente humano, por ejemplo, como se ilustra en el Ejemplo 2, en el presente documento. Como alternativa, se pueden usar modelos animales para establecer si una determinada cantidad de un inhibidor de PCSK9 candidato es una cantidad terapéuticamente eficaz.

En el caso de un anticuerpo anti-PCSK9, una cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 0,05 mg a aproximadamente 600 mg, por ejemplo, aproximadamente 0,05 mg, aproximadamente 0,1 mg, aproximadamente 1,0 mg, aproximadamente 1,5 mg, aproximadamente 2,0 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 90 mg, aproximadamente 100 mg aproximadamente 110 mg, aproximadamente 120 mg, aproximadamente 130 mg, aproximadamente 140 mg aproximadamente 150 mg, aproximadamente 160 mg, aproximadamente 170 mg, aproximadamente 180 mg aproximadamente 190 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 210 mg, aproximadamente 220 mg aproximadamente 230 mg, aproximadamente 240 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 260 mg aproximadamente 270 mg, aproximadamente 280 mg, aproximadamente 290 mg, aproximadamente 300 mg aproximadamente 310 mg, aproximadamente 320 mg, aproximadamente 330 mg, aproximadamente 340 mg aproximadamente 350 mg, aproximadamente 360 mg, aproximadamente 370 mg, aproximadamente 380 mg aproximadamente 390 mg, aproximadamente 400 mg, aproximadamente 410 mg, aproximadamente 420 mg aproximadamente 430 mg, aproximadamente 440 mg, aproximadamente 450 mg, aproximadamente 460 mg aproximadamente 470 mg, aproximadamente 480 mg, aproximadamente 490 mg, aproximadamente 500 mg aproximadamente 510 mg, aproximadamente 520 mg, aproximadamente 530 mg, aproximadamente 540 mg aproximadamente 550 mg, aproximadamente 560 mg, aproximadamente 570 mg, aproximadamente 580 mg aproximadamente 590 mg o aproximadamente 600 mg del anticuerpo anti-PCSK9.

La cantidad de anticuerpo anti-PCSK9 contenida dentro de las dosis individuales puede expresarse en términos de miligramos de anticuerpo por kilogramo de peso corporal del paciente (es decir, mg/kg). Por ejemplo, el anticuerpo anti-PCSK9 puede administrarse a un paciente a una dosis de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal del paciente.

Terapias de combinación

De acuerdo con determinadas realizaciones, la composición farmacéutica de la invención puede usarse en un método que comprenda administrar una composición farmacéutica que comprenda un anticuerpo anti-PCSK9 a un paciente que esté sometido a un régimen terapéutico para el tratamiento de la hipercolesterolemia en el momento de, o justo antes de, la administración de la composición farmacéutica de la invención. Por ejemplo, un paciente que ha sido diagnosticado previamente de hipercolesterolemia le pueden haber recetado y estar siendo sometido a un régimen terapéutico estable de otro fármaco antes y/o simultáneamente a la administración de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-PCSK9. El régimen terapéutico previo o simultáneo puede comprender, por ejemplo, (1) un agente que induce un agotamiento celular de la síntesis de colesterol al inhibir la 3-hidroxi-3-metilglutaril (HMG)-coenzima A (CoA) reductasa, tal como una estatina (por ejemplo, cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pitavastatina, rosuvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, etc.); 2) un agente que inhibe la absorción del colesterol y/o la reabsorción de los ácidos biliares; (3) un agente que aumenta el catabolismo de las lipoproteínas (tal como la niacina); y/o (4) activadores del factor de transcripción LXR que desempeña un papel en la eliminación del colesterol, tales como el 22-hidroxicolesterol. En ciertas realizaciones, el paciente, antes o simultáneamente a la administración de un anticuerpo anti-PCSK9, recibe una combinación fija de agentes terapéuticos tales como ezetimiba más simvastatina; una estatina con una resina biliar (por ejemplo, colestiramina, colestipol, colesevelam); niacina más una estatina (por ejemplo, niacina con lovastatina); o con otros agentes reductores de lípidos, tales como los ésteres etílicos de ácidos grasos omega-3 (por ejemplo, omacor).

Regímenes de administración

De acuerdo con determinadas realizaciones de la presente invención, Se pueden administrar múltiples dosis de un inhibidor de PCSK9 a un sujeto durante un curso de tiempo definido. Los métodos de acuerdo con este aspecto de la invención comprenden administrar secuencialmente a un sujeto múltiples dosis de un inhibidor de PCSK9. Como se usa en el presente documento, "administrar secuencialmente" significa que cada dosis de inhibidor de PCSK9 se administra al sujeto en un momento diferente, por ejemplo, en diferentes días separados por un intervalo predeterminado (por ejemplo, horas, días, semanas o meses). La presente invención incluye composiciones farmacéuticas como se define en las reivindicaciones para su uso en métodos que comprenden administrar secuencialmente al paciente una sola dosis inicial de un inhibidor de PCSK9, seguida de una o más dosis secundarias del inhibidor de PCSK9, y opcionalmente, seguidas de una o más dosis terciarias del inhibidor de PCSK9.

Las expresiones "dosis inicial", "dosis secundarias", y "dosis terciarias", se refieren a la secuencia temporal de administración del inhibidor de PCSK9. Por lo tanto, la "dosis inicial" es la dosis que se administra al inicio del régimen de tratamiento (también denominada "dosis basal"); las "dosis secundarias" son las dosis que se administran tras la dosis inicial; y las "dosis terciarias" son las dosis que se administran tras las dosis secundarias. Las dosis iniciales, secundarias y terciarias pueden contener todas la misma cantidad de inhibidor de PCSK9, pero, en general, difieren entre sí en cuanto a la frecuencia de administración. En ciertas realizaciones, sin embargo, la cantidad de inhibidor de PCSK9 contenida en la dosis inicial, secundarias y/o terciarias varían entre sí (por ejemplo, se ajustan al alza o a la baja según lo apropiado) durante el curso de tratamiento.

En una realización ilustrativa de la presente invención, cada dosis secundaria y/o terciaria se administra de 1 a 30 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o más) días después de la dosis inmediatamente anterior. La expresión "la dosis inmediatamente anterior", como se usa en el presente documento, significa, en una secuencia de múltiples administraciones, la dosis de inhibidor de PCSK9 que se administra a un paciente antes de la administración de justo la siguiente dosis en la secuencia sin dosis intermedias.

Los métodos de acuerdo con este aspecto de la invención pueden comprender administrar a un paciente cualquier cantidad de dosis secundarias y/o terciarias de un inhibidor de PCSK9. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, se administra únicamente una sola dosis secundaria al paciente. En otras realizaciones, se administran dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más) dosis secundarias al paciente. De manera análoga, en ciertas realizaciones, se administra únicamente una sola dosis terciaria al paciente. En otras realizaciones, se administran dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más) dosis terciarias al paciente.

En realizaciones que implican múltiples dosis secundarias, cada dosis secundaria puede administrarse a la misma frecuencia que las otras dosis secundarias. Por ejemplo, cada dosis secundaria se puede administrar al paciente de 1 a 29 días después de la dosis inmediatamente anterior. De manera similar, en realizaciones que implican múltiples dosis terciarias, cada dosis terciaria puede administrarse a la misma frecuencia que las otras dosis terciarias. Por ejemplo, cada dosis terciaria se puede administrar al paciente de 1 a 60 días después de la dosis inmediatamente anterior. Como alternativa, la frecuencia a la que se administran las dosis secundarias y/o terciarias a un paciente puede variar en el curso del régimen de tratamiento. La frecuencia de administración también puede ajustarse durante el curso de tratamiento por un médico dependiendo de las necesidades de cada paciente tras un examen clínico.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación y descripción completas de cómo preparar y usar las composiciones de la invención, y no se pretende que limiten el alcance de lo que los inventores consideran su invención. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.) pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. A menos que se indique otra cosa, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio, la temperatura está en grados centígrados y la presión es atmosférica o cercana a la atmosférica.

Ejemplo 1. Generación de anticuerpos humanos contra PCSK9 humana

Los anticuerpos humanos anti-PCSK9 se generaron como se describe en la publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° 2010/0166768. El inhibidor de PCSK9 ilustrativo usado en el siguiente ejemplo es el anticuerpo humano anti-PCSK9 denominado mAb316P. mAb316P tiene las siguientes características de secuencia de aminoácidos: región variable de cadena pesada (HCVR) que comprende la SEQ ID NO: 90; dominio variable de cadena ligera (LCVR) que comprende la SEQ ID NO: 92; región determinante de complementariedad de la cadena pesada 1 (HCDR1) que comprende la SEQ ID NO: 76; HCDR2 que comprende la Se Q ID NO: 78; HCDR3 que comprende la s Eq ID n O: 80; región determinante de la complementariedad de la cadena ligera 1 (LCDR1) que comprende la SEQ ID NO: 84; LCDR2 que comprende la SEQ ID NO: 86; y LCDR3 que comprende la SEQ ID NO: 88.

Ejemplo 2: Ensayos clínicos de un anticuerpo monoclonal anti-PCSK9, como monoterapia o terapia complementaria en la hipercolesterolemia familiar heterocigótica y no familiar

Introducción

Este ejemplo describe los resultados de dos ensayos clínicos en los que se administraron dosis únicas del anticuerpo monoclonal anti-PCSK9 mAb316P por vía intravenosa (IV) o subcutánea (SC) a voluntarios sanos, y un ensayo clínico de múltiples dosis de mAb316P en sujetos con hipercolesterolemia familiar (HF) o no HF, que recibieron dosis estables de atorvastatina o solo intervención dietética.

Métodos

A. Diseño del estudio

Se realizaron tres ensayos clínicos usando mAb316P administrado a pacientes humanos. Dos de los ensayos fueron estudios controlados con placebo de una sola dosis de mAb316P administrada IV o SC, respectivamente. El tercer ensayo fue una evaluación de múltiples dosis ascendentes, controlada con placebo, aleatorizada, con doble ocultación, de mAb316P administrado SC a sujetos con HF o no HF. El tercer ensayo se realizó en dos partes: Parte A y Parte B. En la Parte A del tercer ensayo, cada sujeto recibió un total de 3 administraciones de mAb316P (50 mg, 100 mg o 150 mg) o un placebo equivalente. En la Parte B del tercer ensayo, cada sujeto recibió 2 administraciones de mAb316P (200 mg) o placebo equivalente. En ambas partes del ensayo de múltiples dosis SC, la primera dosis se administró en una unidad de hospitalización donde los sujetos fueron confinados y observados durante 48 horas tras la dosis. Las dosis posteriores se administraron de forma ambulatoria con al menos 2 horas de observación posterior a la dosis.

B. Dosis y escala de dosis

El estudio de una sola dosis IV incluyó 5 cohortes secuenciales (0,3, 1,0, 3,0, 6,0 o 12,0 mg/kg de mAb316P), y el ensayo de una sola dosis SC incluyó 4 cohortes de dosis secuenciales (50, 100, 150 y 250 mg de mAb316P). Según los resultados iniciales de estos ensayos, el tercer ensayo evaluó dosis SC de mAb316P de 50 mg, 100 mg, 150 mg o placebo administradas en los días 1, 29 y 43 a 7 grupos de sujetos con HF o no HF (Parte A), y 200 mg o placebo administradas en los días 1 y 29 a un octavo grupo de sujetos con HF o no HF (Parte B). Las pautas posológicas y las composiciones de los pacientes de los tres ensayos se resumen en la Tabla 1.

Tabla 1

En el ensayo de múltiples dosis SC, cada nivel de dosis comenzó con un grupo centinela de 3 sujetos (HF, no HF o ambas), recibiendo al menos 1, pero no más de 2, sujetos mAb316P. La inscripción de sujetos adicionales a un nivel de dosis dado solo se realizó después de que los 3 sujetos iniciales hubieran completado de manera segura sus evaluaciones del día 3 después del tratamiento. La inscripción en el siguiente nivel de dosis más alta se abrió una vez que 10 sujetos completaron las evaluaciones de seguridad del día 15. La inscripción, una vez iniciada en cada nivel de dosis, continuó independientemente de la decisión de aumento de la dosis y la revisión de seguridad del día 15.

C. Sujetos

Los sujetos de los estudios de una sola dosis eran varones y mujeres sanos (18-65 años de edad, 50-95 kg de peso corporal, índice de masa corporal [IMC] = 18-30 kg/m2) con LDL-C en suero > 100 mg/dl (2,59 mmol/l). A lo largo de estos estudios, se prohibió el uso del resto de agentes para modificar los lípidos ajenos a estos estudios.

Los sujetos del estudio de múltiples dosis tenían HF heterocigótica o no HF (18-65 años de edad, IMC = 18,0 35,0 kg/m2) y estaban en tratamiento estable con atorvastatina (10 a 40 mg por día) con colesterol LDL > 100 mg/dl (2,59 mmol/l), o no HF y estaban con una dieta solo con colesterol LDL > 130 mg/dl (3,36 mmol/l) (Tabla 1). Todos los sujetos revisaron y firmaron un consentimiento informado previamente aprobado por una junta de revisión institucional antes de cualquier procedimiento relacionado con el estudio. Los sujetos del grupo de HF cumplían los criterios de Simon Broome para la HF definida o posible (Simon Broome Register Group (1991), BMJ 303:893-896; Neil et al., (2000), BMJ 321: 148) mientras que los sujetos no HF no lo hacían. Los que tomaron atorvastatina recibieron una dosis estable, de 10 a 40 mg diarios, durante al menos 28 días antes del inicio del estudio, y se mantuvieron con la misma dosis durante todo el estudio. Los pacientes no HF solo sometidos a dieta no podían haber recibido terapia hipolipemiante durante al menos 28 días antes del inicio del estudio, y permanecieron fuera de dicho tratamiento durante todo el estudio. Los pacientes potencialmente elegibles que no recibían atorvastatina podían entrar en un período de preinclusión de 4 semanas durante el que se les cambiaba a una dosis de atorvastatina (10 a 40 mg al día) que probablemente mantendría el colesterol LDL cerca de su nivel previo al estudio y > 100 mg/dl (2,59 mmol/l). Todos los sujetos resultaron tener < 300 mg/dl de triglicéridos y presión arterial controlada con menos de 3 medicamentos antihipertensivos. Los pacientes con antecedentes de enfermedad cerebrovascular, cardiovascular, aterosclerótica vascular periférica, diabetes o trastornos que se sabe que producen elevaciones secundarias del colesterol LDL se excluyeron al igual que aquellos con transaminasas hepáticas (ALT o AST) > 1,2 veces el límite superior del normal (x LSN), > 2+ proteinuria o creatina quinasa (CK) > 3 x LSN, a menos que estuviera claramente relacionado con el ejercicio, en cuyo caso se les exigió repetir la prueba con CK < 3 x LSN.

D. Mediciones y métodos de laboratorio

En el estudio de múltiples dosis, se realizaron pruebas de laboratorio de lípidos en suero (colesterol total, y colesterol HDL, LDL, no HDL y VLDL) y apolipoproteína (Apo) B, A1 y Lp(a), hs-CRP y de seguridad tras 12 horas de ayuno durante la noche (solo agua) en el reconocimiento (día -21 a -3), día -2 (para aquellos que recibieron atorvastatina), día -1, días 1,2, 3, 8, 15, 29, 43, 57, 71, 85, 99, 120 y el final del estudio (día 148). Todas las mediciones de laboratorio fueron realizadas por un laboratorio central que mantuvo la certificación de la Parte III del Programa de Estandarización de Lípidos del c Dc y la acreditación del Colegio de Patólogos estadounidenses. Los triglicéridos y el colesterol se midieron con pruebas colorimétricas enzimáticas (Analizador AU2700 o AU5400 Olympus, Olympus, Center Valley, Pensilvania, EE. UU.) con calibración rastreable directamente con respecto a los procedimientos de referencia del CDC. Las lipoproteínas que contienen Apo B se precipitaron con sulfato de dextrano y se midió el colestero1HDL del sobrenadante. (Warnick et al., (1978), J. Lipid Res. 19:65-76). El colesterol LDL y VLDL se midió tras la ultracentrifugación preparativa (cuantificación beta). Apo A1, B, Lp(a) y la hs-CRP se midieron mediante inmunonefelometría cinética (nefelómetro Dade Behring BNII, Siemens Healthcare Diagnostics, Deerfield, Illinois, EE.UU.). Todos los valores de lípidos, apolipoproteína y hs-CRP fueron ocultados para los investigadores, el personal del estudio y los pacientes después del día -2 para los grupos tratados con atorvastatina o del día -1 para el grupo solo sometido a dieta.

E. Plan estadístico

Los efectos de mAb316P sobre los parámetros lipídicos en los estudios de una sola dosis se evaluaron usando modelos de análisis de covarianza (ANCOVA). Se obtuvieron las medias por mínimos cuadrados de las diferencias entre los grupos de tratamiento y el grupo de placebo agrupado, los intervalos de confianza del 95 % y los valores de p para la comparación entre los grupos de tratamiento frente al placebo por visita en el marco de ANCOVA. La significancia para todas las pruebas se estableció en 0,05.

En el estudio de múltiples dosis, todos los sujetos que recibieron placebo y atorvastatina se agruparon en dos grupos de placebo de sujetos con HF o no HF. Los 6 sujetos de los grupos de placebo HF y no HF (tratados con atorvastatina), y 5 y 8 sujetos de cada uno de los respectivos grupos de dosis tratados con mAb316P HF y H no H proporcionaron al menos un 80 % de potencia para detectar una diferencia de tratamiento del 30 % (DT = 15 %) frente al placebo en el cambio porcentual medio del valor basal de colesterol LDL en cada visita de estudio cuando se comparó cada dosis de placebo con una prueba de 2 aspectos al nivel de significancia del 5 %. No se realizaron ajustes para comparaciones múltiples. Los resultados del grupo 7 se resumieron por separado por tratamiento y placebo, y los dos grupos se compararon individualmente. Se usó ANCOVA con grupo de tratamiento como efecto fijo y el valor basal relevante como covariable para analizar las variables continuas. Los valores perdidos fueron imputados por el método de imputación de la última observación (LOCF). Todos los valores de p, a excepción de los triglicéridos y la Lp(a), que se obtuvieron del análisis basado en el rango de covariables, fueron extraídos del modelo ANCOVA.

Para resumir los efectos de los lípidos y las lipoproteínas, los resultados se seleccionaron a partir del día 57 del estudio, en donde se pudieron observar los efectos de dos períodos de dosificación posteriores de 2 semanas. El estudio no se realizó para una comparación estadística directa de la respuesta de los sujetos con HF con la de los sujetos no HF.

Resultados

A. Población de estudio

Se asignó un total de 40 sujetos al azar al estudio de una sola dosis IV y de 32 al estudio de una sola dosis SC. Para la Parte A del estudio de múltiples dosis SC, se seleccionó un total de 97 sujetos y 62 fueron asignados al azar (21 HF y 41 no HF). Se incluyó un total de 10 sujetos en la Parte B del estudio de múltiples dosis SC (4 HF y 6 no HF). Las características basales de los sujetos de los estudios de una sola dosis y la Parte A del estudio de múltiples dosis se muestran en la Tabla 2A. Las características basales de los sujetos de la Parte B del estudio de múltiples dosis se muestran en la Tabla 2B.

Tabla 2A

continuación

Tabla 2B

B. Respuesta de los lípidos y las lipoproteínas

La administración de una sola dosis IV o SC de mAb316P a voluntarios sanos produjo reducciones porcentuales máximas medias similares en el colesterol LDL, del 55-60 %. El grado y la duración de la reducción del colesterol LDL resultó depender de la dosis, y las reducciones del colesterol LDL se mantuvieron al menos hasta 29 y 22 días después de la administración de niveles de dosis superiores de mAb316P IV o SC, respectivamente. De manera similar, en el estudio de múltiples dosis, la reducción porcentual media desde el valor basal en el colesterol LDL fue dependiente de la dosis y resultó superar el 50 % dos semanas después de la administración de 150 mg en las poblaciones de HF y no HF que recibieron atorvastatina y las poblaciones no HF solo sometidas a dieta. Todos menos 1 sujeto de cada población que recibió 150 mg en el estudio de múltiples dosis experimentó una reducción de al menos el 40 % desde el inicio.

Los niveles de lípidos y apolipoproteínas basales y del día 57 para todos los grupos de tratamiento de la Parte A del estudio de múltiples dosis se muestran en las Tablas 3A (sujetos tratados con atorvastatina) y 3B (solo dieta, sin tratamiento con atorvastatina).

Tabla 3A

Tabla 3B

La respuesta del colesterol LDL en el día 57 fue similar en todos los sujetos independientemente de si eran HF o no HF, tratados con atorvastatina o solo con dieta. También se observaron cambios correspondientes en el colesterol total y no HDL y Apo B (Tablas 3A y 3B). Es importante destacar que también se observaron reducciones en la Lp(a). Además, en los pacientes que tomaron atorvastatina, se observaron cambios favorables tanto en el colestero1HDL como en la apoA1.

Se observaron mejoras similares en los pacientes tratados con mAb316P en la Parte B del estudio de múltiples dosis. Es decir, la administración subcutánea de 200 mg de mAb316P indujo rápidas reducciones sustanciales y sostenidas de LDL-C, colesterol total, no HDL-C, apoB, y en la proporción de apoB/apoA. Los pacientes que recibieron 200 mg de mAb316P SC también parecieron demostrar una tendencia hacia niveles más altos de HDL-C y ApoA1.

Análisis

Este ejemplo describe ensayos en realizados en seres humanos del anticuerpo anti-PCSK9, que se denomina en el presente documento mAb316P, comenzando con dos estudios de una sola dosis ascendente en voluntarios sanos y extendiéndose a un gran ensayo de prueba de concepto de múltiples dosis en pacientes con HF y no HF tratados con una estatina o solo con una dieta. Estos ensayos confirman el potencial de lograr reducciones rápidas y significativas en el colesterol LDL con la inhibición de PCSK9 en la hipercolesterolemia familiar y no familiar, ya sea con una estatina o solo con una dieta. Las poblaciones evaluadas engloban la gran mayoría de los pacientes con hipercolesterolemia.

El efecto potente y reproducible sobre el colesterol LDL de mAb316P a partir de una sola dosis IV, pasando por una sola dosis SC, hasta múltiples dosis SC se observa en un tiempo inesperadamente corto tras la administración, alcanzando un máximo en aproximadamente 2 semanas. Esta rapidez es superior a la de todas las demás modalidades terapéuticas para la hipercolesterolemia distinta de la eliminación del colesterol LDL mediante aféresis, y es mayor que para las estatinas. El hecho de poderse lograr grandes reducciones de colesterol LDL con mAb316P en pacientes que ya reciben dosis relativamente altas de atorvastatina que se sabe que producen reducciones de colesterol LDL del 40 % al 50 %, distingue claramente el potencial de mAb316P de otras terapias de investigación que se han añadido a las estatinas, tales como ezetimiba, secuestrantes de ácidos biliares e inhibidores del escualeno sintasa. La eficacia reductora del colesterol LDL de mAb316P, combinada con la aparente tolerabilidad y seguridad, destaca las sorprendentes ventajas terapéuticas de mAb316P frente a otros varios agentes reductores de Apo B/lDL-C en desarrollo, tales como los inhibidores no codificantes de Apo B, inhibidores de MTP y análogos de la hormona tiroidea. De hecho, el logro en muchos de los sujetos en estos estudios de niveles bajos de colesterol LDL de 50 mg por decilitro (1,29 mmol/l) o inferiores sin ningún aumento en las transaminasas hepáticas está en marcado contraste con los resultados obtenidos con agentes que inhiben la formación de LDLD y LDL hepática. Los estudios epidemiológicos que demuestran que la subexpresión genética o incluso la ausencia de PCSK9 y los bajos niveles de colesterol LDL durante toda la vida parecen no estar asociados con una morbilidad o mortalidad inesperada, proporcionan un nivel de comodidad con respecto al potencial terapéutico de la inhibición farmacológica de PCSK9.

Los anticuerpos anti-PCSK9 de la presente invención, tales como el mAb316P, también proporcionan a los pacientes incapaces de tolerar las estatinas (ahora se estima que es aproximadamente del 5 % al 10 % de todos los pacientes tratados con estatinas) una oportunidad significativa para lograr grandes reducciones (al menos del 50 %) en el colesterol LDL. Para muchos de los aproximadamente 10 millones de pacientes en todo el mundo con HF, los anticuerpos anti-PCSK9 de la invención, incluyendo mAb316P, ofrecen la posibilidad real de que su uso junto con las estatinas finalmente logre un control óptimo del colesterol LDL y pueda reducir aún más su riesgo sustancial de padecer una enfermedad cardiovascular precoz y recurrente. Las metodologías terapéuticas desveladas en el presente documento también pueden ofrecer a muchos pacientes la posibilidad de suspender la aféresis de LDL, un procedimiento costoso e invasivo que se ha de realizar cada 2 semanas y que requiere mucho tiempo, que solo proporciona una reducción a corto plazo del colesterol LDL.

Se observaron efectos beneficiosos inesperados adicionales sobre otros lípidos en el colestero1HDL, la Apo A1 y, lo más sorprendente, la Lp(a) que tendió hacia o alcanzó, la significancia estadística, incluso en los pacientes tratados con atorvastatina. Es importante destacar que antes de ahora, no se ha demostrado clínicamente que los agentes biológicos terapéuticos (por ejemplo, anticuerpos anti-PCSK9) reduzcan la Lp(a), que se creía que no se eliminaba a través del receptor de l Dl . Por lo tanto, los presentes experimentos son la primera demostración de la capacidad de un inhibidor de PCSK9 para reducir los niveles en suero de Lp(a) en pacientes.

En cuanto a la seguridad, las reacciones en el sitio de inyección de mAb316P fueron mínimas. El mAb316P también fue, en general, seguro y bien tolerado, sin tendencia a producir eventos adversos relacionados con el fármaco y sin evidencia de hepatotoxicidad ni miotoxicidad. Las pocas elevaciones de CK que se observaron estaban relacionadas con el ejercicio.

En resumen, este ejemplo muestra que la inhibición de PCSK9 con mAb316P, además de reducir eficazmente el colesterol LDL en pacientes humanos, sorprendentemente también redujo los niveles de Lp(a).

Ejemplo 3: Estudio de 12 semanas, controlado con placebo, con doble ocultación, aleatorizado, sobre la seguridad y eficacia de un anticuerpo monoclonal anti-PCSK9 en pacientes con hipercolesterolemia familiar heterocigótica

Se realizó un ensayo clínico para evaluar la eficacia de diferentes dosis subcutáneas (SC) y pautas posológicas de mAb316P en suero sobre el colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL-C) y otros lípidos/apolipoproteínas (por ejemplo, colesterol total, colesterol de lipoproteínas de alta densidad, triglicéridos, apo B, Apo A1 y Lp [a]) en pacientes con hipercolesterolemia familiar heterocigótica (HFHe).

Población de pacientes

La población de pacientes para este estudio incluía varones y mujeres, de edades 18-75 años, quienes fueron diagnosticados de HFHe, que presentaban niveles de LDL-C de 100 mg/dl o superiores, y que estaban recibiendo una dosis de estatina diaria estable (con o sin ezetimiba) al comienzo del estudio. Se excluyeron los pacientes que estaban tomando cualquier compuesto hipolipemiante adicional tal como fibratos, niacina, ácidos grasos omega-3, resinas de ácidos biliares, estanoles vegetales (por ejemplo, Benecol, aceite de linaza, psyllium) o arroz de levadura roja. Un total de 77 pacientes completó el estudio.

Formulación farmacológica

La formulación farmacológica comprendía 150 mg/ml de mAb316P, histidina 10 mM, polisorbato 20 al 0,2 %, sacarosa al 10 %, y tenía un pH de 6,0.

Método de administración

La formulación farmacológica (o el placebo) se administró a los pacientes mediante inyección subcutánea en el abdomen. Cada tratamiento incluyó dos inyecciones subcutáneas de 1 ml cada una.

Regímenes de administración

Los pacientes fueron divididos en cinco grupos. El Grupo 1 incluía 15 pacientes que recibieron placebo una vez cada dos semanas; el Grupo 2 incluía 16 pacientes que recibieron 150 mg de mAb316P una vez cada dos semanas; el Grupo 3 incluía 15 pacientes que recibieron 150 mg de mAb316P una vez cada cuatro semanas; el Grupo 4 incluía 16 pacientes que recibieron 200 mg de mAb316P una vez cada cuatro semanas; y el Grupo 5 incluía 15 pacientes que recibieron 300 mg de mAb316P una vez cada cuatro semanas. La duración del estudio fue de 12 semanas.

Evaluación de la eficacia

Se recogieron muestras de sangre de los pacientes durante todo el estudio y durante un período de seguimiento de 8 semanas. Las muestras fueron extraídas tras un ayuno de al menos 12 horas (por la mañana antes del consumo de cualquier fármaco). Las mediciones de los siguientes parámetros se determinaron a partir de las muestras de sangre: (1) colesterol total; (2) LDL-C; (3) HDL-C; (4) triglicéridos (TG); (5) Apo B; (6) Apo A1; y (7) Lp(a). La mediana de los cambios porcentuales en estos parámetros en comparación con el placebo al final del estudio (semana 12) se resume en la Tabla 4.

Tabla 4

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Ejemplo 4: Estudio de 12 semanas, controlado con placebo, de grupos paralelos, con doble ocultación, aleatorizado, sobre la seguridad y eficacia de un anticuerpo monoclonal anti-PCSK9 en pacientes con hipercolesterolemia primaria en tratamiento estable con atorvastatina

Se realizó un ensayo clínico para evaluar la eficacia de pautas de cinco dosis y de dos dosis de mAb316P durante 12 semanas en pacientes con hipercolesterolemia primaria y niveles de LDL-C superiores a 100 mg/dl en tratamiento con atorvastatina estable en curso. La eficacia se evaluó en función de los cambios producidos en el colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL-C) y otros lípidos/apolipoproteínas (por ejemplo, colesterol total, colesterol de lipoproteínas de alta densidad, triglicéridos, apo B, Apo A1, y Lp [a]) en el curso del estudio.

Población de pacientes

La población de pacientes para este estudio incluía varones y mujeres, de edades 18-75 años, que habían sido diagnosticados de hipercolesterolemia primaria, que presentaban niveles de LDL-C de 100 mg/dl o superiores, y que habían estado en tratamiento estable con atorvastatina de 10, 20 o 40 mg durante al menos seis semanas antes del inicio del estudio. Se excluyeron los pacientes que estaban tomando cualquier compuesto hipolipemiante adicional tal como fibratos, niacina, ácidos grasos omega-3, resinas de ácidos biliares, estanoles vegetales (por ejemplo, Benecol, aceite de linaza, psyllium) o arroz de levadura roja. Un total de 118 pacientes completó el estudio.

Formulación farmacológica

Método de administración

Regímenes de administración

Los pacientes fueron divididos en seis grupos. El Grupo 1 incluía 20 pacientes que recibieron placebo una vez cada dos semanas; el Grupo 2 incluía 19 pacientes que recibieron 50 mg de mAb316P una vez cada dos semanas; el Grupo 3 incluía 20 pacientes que recibieron 100 mg de mAb316P una vez cada dos semanas; el Grupo 4 incluía 18 pacientes que recibieron 150 mg de mAb316P una vez cada dos semanas; el Grupo 5 incluía 20 pacientes que recibieron 200 mg de mAb316P una vez cada cuatro semanas; y el Grupo 6 incluía 21 pacientes que recibieron 300 mg de mAb316P una vez cada cuatro semanas. La duración del estudio fue de 12 semanas.

Evaluación de la eficacia

Se recogieron muestras de sangre de los pacientes durante todo el estudio y durante un período de seguimiento de 8 semanas. Las muestras fueron extraídas tras un ayuno de al menos 12 horas (por la mañana antes del consumo de cualquier fármaco). Las mediciones de los siguientes parámetros se determinaron a partir de las muestras de sangre: (1) colesterol total; (2) LDL-C; (3) HDL-C; (4) triglicéridos (TG); (5) Apo B; (6) Apo A1; y (7) Lp(a). La mediana de los cambios porcentuales en estos parámetros en comparación con el placebo al final del estudio (semana 12) se resume en la Tabla 5.

Tabla 5

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Ejemplo 5: Estudio de dosis fija, controlado con placebo, de grupos paralelos, con doble ocultación, aleatorizado, sobre la seguridad y eficacia de un anticuerpo monoclonal anti-PCSK9 administrado junto con 80 mg de atorvastatina en pacientes con hipercolesterolemia primaria

Se realizó un ensayo clínico para evaluar la eficacia de mAb316P cuando se administró junto con 80 mg de atorvastatina durante 8 semanas en pacientes con hipercolesterolemia primaria y niveles de LDL-C superiores a 100 mg/dl. La eficacia se evaluó en función de los cambios producidos en el colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL-C) y otros lípidos/apolipoproteínas (por ejemplo, colesterol total, colesterol de lipoproteínas de alta densidad, triglicéridos, apo B, Apo A1, y Lp [a]) en el curso del estudio.

Población de pacientes

La población de pacientes para este estudio incluía varones y mujeres, de edades 18-75 años, que habían sido diagnosticados de hipercolesterolemia primaria, que presentaban niveles de LDL-C de 100 mg/dl o superiores, y que habían estado en tratamiento estable con atorvastatina de 10 mg durante al menos seis semanas antes del inicio del estudio. Se excluyeron los pacientes que estaban tomando cualquier compuesto hipolipemiante adicional tal como fibratos, niacina, ácidos grasos omega-3, resinas de ácidos biliares, estanoles vegetales (por ejemplo, Benecol, aceite de linaza, psyllium) o arroz de levadura roja. Un total de 88 pacientes completó el estudio.

Formulación farmacológica

Método de administración

La formulación farmacológica (o el placebo) se administró a los pacientes mediante inyección subcutánea en el abdomen. Cada tratamiento incluyó una inyección subcutánea de 1 ml.

Regímenes de administración

Los pacientes fueron divididos en tres grupos. El Grupo 1 incluía 29 pacientes que recibieron placebo una vez cada dos semanas más 80 mg de atorvastatina diariamente; el Grupo 2 incluía 30 pacientes que recibieron 150 mg de mAb316P una vez cada dos semanas más 80 mg de atorvastatina al día; y el Grupo 3 incluía 29 pacientes que recibieron 150 mg de mAb316P una vez cada dos semanas más 10 mg de atorvastatina al día. La duración del estudio fue de 8 semanas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PCSK9 para su uso en la reducción de los niveles de lipoproteína (a) (Lp(a)) en un paciente que presenta un nivel de Lp(a) en suero superior a 30 mg/dl y a quien se le diagnostica de o se identifica que está en riesgo de desarrollar una enfermedad o un trastorno cardiovascular antes o en el momento de la administración de la composición, o a quien se le diagnostica de o se identifica que está en riesgo de desarrollar una enfermedad o un trastorno trombótico oclusivo antes o en el momento de la administración de la composición;

y en donde el inhibidor de PCSK9 es un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a PCSK9.

2. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 1, en donde el paciente presenta un nivel de Lp(a) en suero superior a 100 mg/dl.

3. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde la enfermedad o el trastorno cardiovascular se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de las arterias coronarias, infarto agudo de miocardio, aterosclerosis carotídea asintomática, apoplejía y enfermedad oclusiva de las arterias periféricas.

4. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde la enfermedad o el trastorno cardiovascular es hipercolesterolemia.

5. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 4, en donde la hipercolesterolemia es hipercolesterolemia familiar heterocigótica (HFHe), o la hipercolesterolemia no es hipercolesterolemia familiar (no HF).

6. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde la enfermedad o el trastorno oclusivo trombótico se selecciona del grupo que consiste en embolia pulmonar y oclusión de la vena retiniana central.

7. La composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la composición farmacéutica comprende de 20 mg a 200 mg del inhibidor de PCSK9, opcionalmente, de 50 mg a 150 mg del inhibidor de PCSK9.

8. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 7, en donde la composición farmacéutica comprende 50 mg del inhibidor de PCSK9, 100 mg del inhibidor de PCSK9 o 150 mg del inhibidor de PCSK9.

9. La composición farmacéutica para el uso de las reivindicaciones 1-8, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende las CDR de cadena pesada y ligera de un par de secuencias de aminoácidos de HCVR/LCVR seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 90/92 y 218/226.

10. La composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 9, en donde:

(a) el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada y ligera que tienen SEQ ID NO: 220, 222, 224, 228, 230 y 232, opcionalmente, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una HCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 218 y una LCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 226; o (b) el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada y ligera que tienen SEQ ID NO: 76, 78, 80, 84, 86 y 88, opcionalmente, en donde el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo comprende una HCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 90 y una LCVR que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 92.

11. La composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el paciente está sometido a un régimen terapéutico con estatinas en el momento o justo antes de la administración de la composición; opcionalmente, en donde el régimen terapéutico con estatinas comprende una estatina seleccionada del grupo que consiste en cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pitavastatina, rosuvastatina, fluvastatina, lovastatina y pravastatina, preferentemente, atorvastatina.

12. La composición farmacéutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el paciente no está sometido a un régimen terapéutico con estatinas en el momento de la administración de la composición.