CN102695499A - 小模块免疫药物的冻干制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于小模块免疫药物(SMIPTM)蛋白的稳定制剂。在一些实施方案中，本发明提供了包含小模块免疫药物蛋白的冻干混合物的制剂，其中低于7％的冻干小模块免疫药物蛋白以聚集体形式存在。本发明的制剂可以包含缓冲剂、稳定剂、填充剂、表面活性剂和/或其他赋形剂。本发明还提供用于冻干的制剂、其重建和使用方法。

Description

小模块免疫药物的冻干制剂
相关申请的交叉引用 
本申请要求享有均在2009年6月18日提交的美国临时专利申请系列号61/218,388和61/218,386的优先权，其中每一个均以全文援引加入本文。 
发明背景 
在过去十年，生物技术的发展使得能够产生各种蛋白用于药物应用。因为蛋白比传统有机和无机药物更大和更复杂(即除了复杂的三维结构以外还具有多个功能团)，这类蛋白的制剂、包装与保存均提出了特别的问题。因为临床便利性、患者便利性和制备方便性，液体制剂是通常所希望的。但是，对于许多蛋白来说，液体制剂是不可行的。蛋白的复杂性导致蛋白由于制备、包装和运输期间遇到的压力而降解。某些小模块免疫药物属于这种类型。 
因此，当液体制剂不是选项时，冻干法提供在可接受的运输和储存条件下产生稳定剂型的可靠保证。冻干法通常包括3个主要阶段：冷冻，初次干燥和二次干燥。冷冻将水转化成冰或将一些非晶制剂组分转化成结晶形式。初次干燥是通过在低气压和温度下直接升华从冷冻产物去除冰的加工步骤。二次干燥是利用残余水扩散到蒸发面从产物基质去除结合水的加工步骤。因此，需要正确选择赋形剂和其他制剂组分以防止蛋白受到冷冻和脱水压力并在冻干期间增强蛋白稳定性和/或在保存期间提高冻干产物的稳定性。 
发明概述 
本发明包括以下发现：可以使用缓冲剂、稳定剂、填充剂和/或表面活性剂的组合针对小模块免疫药物蛋白来制备稳定的冻干制剂。因此，本发明提供了包含冻干的小模块免疫药物蛋白的稳定制剂。 
在一个方面，本发明提供了包含小模块免疫药物蛋白的冻干混合物的制剂。在一些实施方案中，小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、 2％、1％或0.5％的冻干小模块免疫药物蛋白以聚集形式存在。在一些实施方案中，当在2-8℃保存至少1个月、3个月、6个月、1年或2年时，小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的冻干小模块免疫药物蛋白以聚集形式存在。在一些实施方案中，当在25℃或室温保存至少1个月、3个月、6个月、1年或2年时，小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的冻干小模块免疫药物蛋白以聚集形式存在。在一些实施方案中，当在40℃保存至少2周、1个月、3个月或6个月时，小于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的冻干小模块免疫药物蛋白以聚集形式存在。 
在一些实施方案中，本发明的制剂包含填充剂、稳定剂和/或缓冲剂。在一些实施方案中，适于本发明的填充剂选自蔗糖、甘露醇、甘氨酸、氯化钠、葡聚糖、海藻糖及其组合。在一些实施方案中，适于本发明的缓冲剂选自组氨酸、醋酸钠、柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、Tris及其组合。在一些实施方案中，适于本发明的稳定剂选自蔗糖、山梨醇、甘露醇、甘氨酸、海藻糖及其组合。 
在一些实施方案中，本发明的制剂还包括等渗剂。在一些实施方案中，适于本发明的等渗剂选自甘氨酸、山梨醇、蔗糖、甘露醇、氯化钠、葡萄糖、精氨酸及其组合。 
在一些实施方案中，本发明的制剂包括非还原糖。在一些实施方案中，非还原糖是蔗糖或海藻糖。在一些实施方案中，非还原糖与小模块免疫药物蛋白的质量比是约0.1∶1、0.2∶1、0.25∶1、0.4∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、2.6∶1、3∶1、4∶1或5∶1。 
在一些实施方案中，本发明的制剂还包括表面活性剂。在一些实施方案中，适于本发明的表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆(poloxamer)、Triton及其组合。 
在一些实施方案中，本发明提供一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、组氨酸和聚山梨醇酯80的冻干混合物。在一些实施方案中，本发明提供一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、甘露醇以及选自组氨酸和/或醋酸钠的缓冲剂的冻干混合物。 
在一些实施方案中，本发明制剂中甘露醇与蔗糖的质量比是约0.1∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1或10∶1。 
在一些实施方案中，本发明提供了小模块免疫药物蛋白、蔗糖、甘氨酸和醋酸钠的冻干混合物。 
在一些实施方案中，本发明的创造性制剂包含小模块免疫药物蛋白，其包括特异性靶向CD20的结合结构域。在一些实施方案中，所述小模块免疫药物蛋白具有与SEQ ID NO：1-59和67-76中任一个具有至少80％相同性的氨基酸序列。 
在多个实施方案中，本发明的冻干小模块免疫药物蛋白在例如2-8℃(例如5℃)或室温(例如25℃)保存期间是稳定的。 
一种制剂，包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、组氨酸和聚山梨醇酯80的冻干混合物。 
在另一个方面，本发明提供本文所述冻干制剂的重建制剂。在一些实施方案中，重建制剂包括稀释剂以及浓度范围为约25mg/ml到约400mg/ml(例如约25mg/ml到约200mg/ml；约50mg/ml到约200mg/ml；约25mg/ml到约150mg/ml；约100mg/ml到约250mg/ml，约100mg/ml到约300mg/ml，约200mg/ml到约400mg/ml，约300mg/ml到约400mg/ml)的小模块免疫药物蛋白。在一些实施方案中，重建制剂包括稀释剂和浓度为大约25mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml、200mg/ml、250mg/ml、300mg/ml、350mg/ml或400mg/ml的小模块免疫药物蛋白。 
在一些实施方案中，重建制剂用于静脉内、皮下、或肌内施用。 
本发明还提供治疗患者的方法，通过施用本发明的重建制剂以及包括容纳本发明冻干制剂的容器的试剂盒或其他制品。 
仍在另一方面，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、非还原糖和缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂选自醋酸钠或组氨酸。在一些实施方案中，缓冲剂的浓度为大约5mM、10mM、15mM、20mM、25mM或30mM。在一些实施方案中，组氨酸的浓度为大约5mM、10mM、15mM、20mM、25mM或30mM。 
在一些实施方案中，制剂还包括甘露醇。在一些实施方案中，制剂还包括甲硫氨酸。在一些实施方案中，甲硫氨酸的浓度为大约10mM。在一些实施方案中，非还原糖是蔗糖。在一些实施方案中，蔗糖的浓度范围为大约0.5％到15％(例如大约1％到10％、5％到15％、5％到10％)。在一些实施方案中，蔗糖的浓度为大约5％。在一些实施方案中，合适的制剂包 含浓度为大约10％的蔗糖和浓度为大约20mM的组氨酸。在一些实施方案中，非还原糖与小模块免疫药物蛋白的质量比是约0.1∶1、0.2∶1、0.25∶1、0.4∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、2.6∶1、3∶1、4∶1或5∶1。 
在一些实施方案中，用于冻干的合适制剂还包括等渗剂。在一些实施方案中，等渗剂是甘氨酸、山梨醇、蔗糖、甘露醇、氯化钠、葡萄糖和/或精氨酸。在一些实施方案中，用于冻干的合适制剂还包括表面活性剂。在一些实施方案中，合适的表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆和/或Triton。 
在不同实施方案中，本发明用于冻干的制剂包含浓度范围为约25mg/ml到约400mg/ml(例如约25mg/ml到约200mg/ml；约50mg/ml到约200mg/ml；约25mg/ml到约150mg/ml；约100mg/ml到约250mg/ml，约100mg/ml到约300mg/ml，约200mg/ml到约400mg/ml，约300mg/ml到约400mg/ml)的小模块免疫药物蛋白。在一些实施方案中，本发明用于冻干的制剂包含浓度为大约25mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml、200mg/ml、250mg/ml、300mg/ml、350mg/ml或400mg/ml的小模块免疫药物蛋白。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含小模块免疫药物蛋白、浓度范围为大约5％到10％的蔗糖、浓度范围为大约10mM到20mM的组氨酸和浓度范围为大约0.001％到0.1％的聚山梨醇酯80。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度为大约25mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度为大约6.5％的蔗糖、浓度为大约50mM的甘氨酸和浓度为大约20mM的醋酸钠。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度范围为大约50mg/ml到100mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度为大约20mM的组氨酸、浓度为大约4％的甘露醇和浓度为大约1％的蔗糖。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度为大约100mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度为大约10％的蔗糖、浓度为大约20mM的组氨酸、浓度为大约0.01％的聚山梨醇酯80。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度为大约100mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度为大约5％的蔗糖、浓度为大约1％的甘氨酸、浓度为大约20mM的组氨酸、浓度为大约0.01％的聚山梨 醇酯80。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度为大约100mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度为大约5％的蔗糖、浓度为大约2.4％的山梨醇、浓度为大约20mM的组氨酸、浓度为大约0.01％的聚山梨醇酯80。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含浓度为大约200mg/ml的小模块免疫药物蛋白、浓度范围为5％到10％的蔗糖、浓度为大约20mM的组氨酸、浓度为大约0.01％的聚山梨醇酯80。 
在一些实施方案中，本发明提供一种用于冻干的制剂，其包含小模块免疫药物蛋白、浓度为大约5％的蔗糖、浓度为大约10mM的组氨酸、浓度为大约10mM的甲硫氨酸和浓度为大约0.01％的聚山梨醇酯80。 
在一些实施方案中，制剂的pH范围是大约5.0到大约7.0。 
在一些实施方案中，制剂具有6.0的pH。 
在不同的实施方案中，本发明用于冻干的制剂包含小模块免疫药物蛋白，其包含特异性靶向CD20的结合结构域。在某些实施方案中，所述小模块免疫药物蛋白具有与SEQ ID NO：1-59和67-76中任一个具有至少80％相同性的氨基酸序列。 
在另一个方面，本发明提供一种保存小模块免疫药物蛋白的方法，包括将包含小模块免疫药物蛋白的制剂冻干，并在室温或低于室温的温度保存所述冻干制剂。 
在一些实施方案中，本发明的创造性方法被用于保存小模块免疫药物蛋白，其包含特异性靶向CD20的结合结构域。在某些实施方案中，所述小模块免疫药物蛋白具有与SEQ ID NO：1-59和67-76中任一个具有至少80％相同性的氨基酸序列。 
在一些实施方案中，本发明的方法包括在约2-8℃(例如5℃)的温度下保存冻干制剂。在一些实施方案中，本发明的方法包括在大约室温下保存冻干制剂。 
本发明还提供使用本文描述的方法和/或制剂来冻干和/或保存的小模块免疫药物蛋白。 
当用于本申请时，术语“约”和“大约”等同使用。用于本申请的有或没有约/大约的任何数字旨在涵盖相关领域普通技术人员理解的任何正常波动。 例如，感兴趣的值的正常波动可以包括属于指定参照值的任何方向(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小的值的范围，除非另有说明或从上下文显而易见(除了这种数值将超过可能值的100％)。 
在随后的详细说明中，本发明的其他特征、目的和优点将是显而易见的。但是，应当理解，给出详细说明(尽管描述了本发明的实施方案)只是为了解释，而不是用于限制。根据所述详细说明，本发明范围内的各种变化和修饰对本领域技术人员来说是显而易见的。 
附图简述 
附图只是为了说明目的，而不是为了限制。 
图1显示示例性小模块免疫药物蛋白(SMIPTM)的结构。 
图2显示在Hull(Hull Co./SP Industries，Warminster，PA)临床冻干器中进行的于醋酸盐-甘氨酸-蔗糖(″AGS″)制剂中的25mg/ml蛋白的示例性冻干循环。填充体积是10ml小瓶(tubing vial)中4ml。 
图3显示于醋酸盐-甘露醇-蔗糖(″AMS″)和组氨酸-甘露醇-蔗糖(″HMS″)缓冲液中的25mg/ml蛋白的示例性冻干循环。循环在Genesis(VirTis/SPIndustries，Gardiner，NY)实验室冻干器上进行。填充体积是10ml小瓶中4ml。 
图4显示于HMS缓冲液中的50mg/ml蛋白的示例性冻干循环。循环在实验室Genesis(VirTis/SP Industries，Gardiner，NY)冻干器上进行。填充体积是10ml小瓶中4ml。 
图5说明示例性数据，其显示蛋白浓度对HMS制剂中甘露醇结晶的影响。对于高至89mg/ml的蛋白浓度，在从-60℃到-10℃的变温(ramp)期间，可以观察到甘露醇结晶峰。在96到115mg/ml的蛋白浓度下，甘露醇结晶只发生在-10℃的等温维持期间。 
图6显示于HMS缓冲液中的100mg/ml蛋白的示例性冻干循环。 
图7显示于10％蔗糖、5％蔗糖+1％甘氨酸、5％蔗糖+2.4％山梨醇制剂中的100mg/ml蛋白的示例性冻干循环。所有制剂都包含20mM组氨酸。 
图8显示于10％蔗糖+20mM组氨酸缓冲液中的100mg/ml蛋白的示例性重建。注水时间是大约30秒。使用三分钟的恒定混旋来溶解固体。将溶 液去泡少于30秒。 
图9显示于5％蔗糖+1％甘氨酸+20mM组氨酸缓冲液中的100mg/ml蛋白的示例性重建。注水时间是大约30秒。注射后，水停留在块状物顶部，没有进入片剂内的可见渗透。使用至少9分钟的恒定混旋来溶解固体。在溶解期间没有检测到起泡。 
图10显示于5％蔗糖+2.4％山梨醇+20mM组氨酸缓冲液中的100mg/ml蛋白的示例性重建。注水时间是大约30秒。注射后，水停留在块状物顶部，没有进入片剂内的可见渗透。使用至少9分钟的恒定混旋来溶解固体。在溶解期间没有检测到起泡。 
图11显示对于低蔗糖浓度的制剂，于5％蔗糖、10mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中的200mg/ml蛋白的示例性冻干循环过程。 
图12显示于10％蔗糖、10mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中的蛋白浓度为200mg/ml的制剂的示例性冻干循环过程。 
图13显示在包含200mg/ml蛋白的制剂中低(5％)和高(10％)蔗糖的示例性块状物表观。 
图14显示蛋白的示例性冻干循环(基线循环)。 
图15显示冻干蛋白的示例性块状物表观。 
图16显示冻干蛋白的差示扫描量热法(DSC)扫描。变温速率是2℃/分钟，每100秒调幅±0.5℃。 
图17显示在加速温度下pH和赋形剂对蛋白液体稳定性的影响。 
图18显示对蛋白的示例性稳固性(robustness)研究：利用升高水分的循环。 
图19显示对蛋白的示例性稳固性研究：“攻击性循环”#4。 
图20显示冻干蛋白材料的块状物表观的示例性比较：一半块状物塌陷(攻击性循环#4，右瓶)对完整的块状物(基线循环，左瓶)。 
图21显示利用“攻击性”循环#1冻干的蛋白干粉的DSC扫描(表15)。变温速率是2℃/分钟，每100秒调幅±0.5℃。可逆信号(绿色)向基线的迁移代表玻璃化转变，而非可逆信号(蓝色)的放热事件代表一些制剂组分的表观结晶。 
发明详述 
本发明提供了用于小模块免疫药物(SMIPTM)蛋白的冻干制剂，其基于缓冲剂、稳定剂、填充剂、表面活性剂和/或其他赋形剂的组合。本发明的冻干制剂防止蛋白受到冷冻和脱水压力并在冻干期间保持或增强蛋白稳定性和/或在保存期间保持或提高冻干产物的稳定性。本发明还提供了制备稳定冻干制剂的方法及其用途。 
本发明的各个方面详述于下面章节中。使用这些章节不是为了限制本发明。每个章节适用于本发明的任何部分。在本申请中，“或”的使用表示“和/或”，除非另有说明。 
小模块免疫药物 
如本文使用的，小模块免疫药物(SMIPTM)蛋白是指包含一种或多种下列融合结构域的蛋白：结合结构域，免疫球蛋白铰链区或由其衍生的结构域，免疫球蛋白重链CH2恒定区或由其衍生的结构域，以及免疫球蛋白重链CH3恒定区或由其衍生的结构域。SMIPTM蛋白治疗剂优选是单特异性的(即它们识别并粘附单抗原靶以起始生物学活性)。本发明还涉及多特异性和/或多价分子如SCORPIONTM治疗剂，其包括SMIPTM蛋白并且还具有位于分子的SMIPTM蛋白部分的C端的额外结合结构域。优选SCORPION治疗剂的结合结构域各结合不同的靶。适于本发明的小模块免疫药物的结构域是或来源于作为人基因序列产物的多肽，任意其他天然或人工来源，包括遗传工程化和/或突变的多肽。小模块免疫药物亦被称为结合结构域-免疫球蛋白融合蛋白。 
在一些实施方案中，适于SMIPTM的铰链区来源于免疫球蛋白如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE等等。例如，铰链区可以是突变的IgG1铰链区多肽，具有0、1或2个半胱氨酸残基。 
适于SMIPTM的结合结构域可以是任意多肽，其具有特异性识别并结合关联生物分子如抗原、受体(例如CD20)或一种以上分子或组装体或聚集体的复合物的能力。 
结合结构域可以包括至少一种免疫球蛋白可变区多肽，如重链或轻链V区的全部或部分或片段，条件是它能够特异性结合感兴趣的抗原或其他希望的靶结构。在其他实施方案，结合结构域可以包括单链免疫球蛋白衍生的Fv产物，其可以包括至少一种免疫球蛋白轻链V区的全部或部分以及至 少一种免疫球蛋白重链V区的全部或部分，其还包括与V区融合的接头。 
本发明可以用于各种小模块免疫药物。示例性的小模块免疫药物可以靶向受体或其他蛋白，如CD3、CD4、CD8、CD19、CD20和CD34；HER受体家族的成员如EGF受体、HER2、HER3或HER4受体；细胞粘附分子如LFA-1、Mol、p150、p95、VLA-4、ICAM-1、VCAM、生长因子如VEGF；IgE；血型抗原；flk2/flt3受体；肥胖症(OB)受体；蛋白C；EGFR、RAGE、P40、Dkk1、NOTCH1、IL-13、IL-21、IL-4和IL-22等等。 
在一些实施方案中，使用本发明来冻干或保存特异性识别CD20的小模块免疫药物。特异性结合CD20的示例性小模块免疫药物蛋白示于图1。如图1所示，抗CD20SMIPTM蛋白通常是重组同二聚体融合蛋白，其由三个不同结构域组成：(1)嵌合(鼠/人)CD20结合结构域，包括通过15氨基酸接头连接的可变重链(VH)和轻链(VL)片段；(2)修饰的人IgG1铰链结构域和(3)由人IgG1的CH2和CH3结构域组成的IgG效应物结构域(见图1)。 
通常，SMIPTM蛋白以两种明确相关的同二聚体形式存在，主要形式，其是预测的链间二硫键连接的共价同二聚体(CD)，和同二聚体形式，其不具有链间二硫键(可解离二聚体，DD)。可解离二聚体通常是完全有活性的。通常，二聚体的理论分子量为大约106000道尔顿。SMIPTM蛋白还可以形成多价复合物。 
通常，SMIPTM蛋白作为糖蛋白存在。例如，如图1所示，抗CD20SMIPTM蛋白可以在每条蛋白链CH2结构域中N联糖基化共有序列处(例如327NST)用寡糖修饰(见图1)。SMIPTM蛋白还可以包含核心岩藻糖基化唾液酸半乳糖二分支N-联寡糖(core-fucosylated asialoagalacto-biantennary N-linked oligosaccharide，G0F)；每条链上COOH-末端Gly476和NH2-末端焦谷氨酸盐。两种次要糖形，G1F/G0F和G1F/G1F以及其他预期痕量水平的N-联糖形也可能存在。此外，在SMIPTM蛋白的铰链区还观察到低水平的核心1O-聚糖修饰。 
在一些实施方案中，SMIPTM蛋白的等电点(pI或IEP)范围是大约7.0到9.0(例如7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8)。 
本发明可用于将SMIPTM蛋白配制为本文描述的各种形式(例如单体多肽、同二聚体、可解离二聚体或多价复合物)。本发明可用于配制各种修饰的SMIPTM蛋白，如人源化SMIPTM或嵌合SMIPTM蛋白。如本文使用的， 术语“人源化SMIPTM蛋白”是指包括至少一种人源化免疫球蛋白区域(例如人源化免疫球蛋白可变区或恒定区)的SMIPTM蛋白。在一些实施方案中，人源化SMIPTM蛋白包括人源化可变区(包括基本上来自人免疫球蛋白的可变框架区(例如完整的人FR1、FR2、FR3和/或FR4))，并保持靶特异性的一或多个互补决定区(CDR)(例如至少一个CDR、两个CDR或三个CDR)。在一些实施方案中，人源化SMIPTM蛋白包括一或多个人的或人源化的恒定区(例如人免疫球蛋白CH2和/或CH3结构域)。术语“基本上来自人免疫球蛋白或抗体”或“基本上人的”表示当为了对比目的与人免疫球蛋白或抗体氨基序列比对时，所述区域与人框架区或恒定区序列具有至少80-90％、优选90-95％、更优选95-99％相同性(即局部序列相同性)，允许例如保守取代、共有序列取代、种系取代、回复突变等等。如本文使用的，术语“嵌合SMIPTM蛋白”是指其可变区衍生自第一种类及其恒定区衍生自第二种类的SMIPTM蛋白。可以利用属于不同种类的免疫球蛋白基因片段，通过遗传工程构建嵌合SMIPTM蛋白。人源化和嵌合SMIPTM蛋白进一步描述于国际申请公开号WO 2008/156713，其援引加入本文。 
本发明还可以用于配制在铰链、CH2和/或CH3结构域具有修饰的糖基化模式和/或突变(改变效应物功能)的SMIPTM蛋白。在一些实施方案中，SMIPTM蛋白可以在铰链连接区的相邻或相近位点包含突变，其影响受体结合亲和力。此外，本发明可用于配制包括小模块免疫药物多肽或其部分的融合蛋白。 
在一些实施方案中，本发明可用于配制SMIPTM蛋白，其包括SEQ ID NO：1-76(参见示例性SMIPTM序列部分)中任一的氨基酸序列或其变体。在一些实施方案中，本发明可用于配制SMIPTM蛋白，其包含具有SEQ ID NO：1-59中任一的氨基酸序列或其变体的可变结构域。在一些实施方案中，本发明可用于配制SMIPTM蛋白，其包含具有SEQ ID NO：1-59中任一的氨基酸序列或其变体的可变结构域，具有SEQ ID NO：60-64中任一的氨基酸序列或其变体的铰链区，和/或具有SEQ ID NO：65或66的氨基酸序列或其变体的免疫球蛋白恒定区。在一些实施方案中，本发明可用于配制SMIPTM蛋白，其具有SEQ ID NO：67-76中任一的氨基酸序列或其变体。 
如本文使用的，亲本序列的变体包括但不限于与亲本序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％相同性的氨基酸序 列。两条氨基酸序列的百分比相同性可以通过目测检查和数学计算来确定，或更优选通过使用计算机程序如Genetics Computer Group(GCG；Madison，Wis.)Wisconsin包版本10.0程序、″GAP″(Devereux et al.，1984，Nucl.Acids Res.12：387)或其他类似的计算机程序比较序列信息来完成比对。用于″GAP″程序的优选缺省参数包括：(1)Gribskov和Burgess的加权氨基酸比较矩阵((1986)，Nucl.Acids Res.14：6745)，描述于Schwartz和Dayhoff，eds.，Atlas of Polypeptide Sequence and Structure，Naional Biomedical Research Foundation，pp.353-358(1979)，或其他类似的比较矩阵；(2)每个缺口罚30分，对于氨基酸序列来说对每个缺口的每个符号额外罚1分；(3)对于末端缺口没有罚分；和(4)对长缺口没有最大罚分。还可以使用本领域技术人员使用的其他序列比较程序。 
其他的小模块免疫药物进一步描述于例如美国专利公开20030133939，20030118592，20040058445，20050136049，20050175614，20050180970，20050186216，20050202012，20050202023，20050202028，20050202534，20050238646和20080213273；国际专利公开WO 02/056910，WO2005/037989和WO 2005/017148，其均援引加入本文。 
小模块免疫药物的冻干制剂 
冻干或冷冻干燥是通常用于保存蛋白的技术，其用于从感兴趣的蛋白制品中除水。冻干是首先将待干燥材料冷冻然后通过真空环境中升华来去除冰或冰冻溶剂的过程。 
冻干通常包括3个主要阶段：冷冻，初次干燥和二次干燥。冷冻是将水转化成冰或将一些非晶制剂组分转化成结晶形式所必需的。初次干燥是通过在低压和温度下直接升华从冷冻产物去除冰的加工步骤。二次干燥是利用残余水扩散到蒸发面从产物基质去除结合水的加工步骤。二次干燥期间的产物温度通常高于初次干燥期间的。见Tang X.et al.(2004)″Design of freeze-drying processes for pharmaceuticals：Practical advice，″Pharm.Res.，21：191-200；Nail S.L.et al.(2002)″Fundamentals of freeze-drying，″in Development and manufacture of protein pharmaceuticals.Nail SL editors.New York：Kluwer Academic/Plenum Publishers，pp 281-353；Wang et al.(2000)″Lyophilizaion and development of solid protein pharmaceuticals，″Int.J.Pharm.，203：1-60；Williams NA et al.(1984)″The lyophilization of  pharmaceuticals；A literature review.″J.Parenteral Sci.Technol，38：48-59。 
因为冻干过程中的温度和压力变化，需要适当选择赋形剂或其他组分如稳定剂、缓冲剂、填充剂和表面活性剂以防止SMIPTM在冷冻干燥和保存期间降解(例如蛋白聚集、脱酰胺和/或氧化)。 
因此，本发明提供了包含SMIPTM的稳定冻干制剂，其基于稳定剂、缓冲剂、填充剂和/或其他赋形剂的组合。如本文使用的，“稳定”制剂是冻干期间和保存时其中蛋白基本上保留其物理和化学稳定性及完整性的制剂。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术是本领域可以获得的并且综述于Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993)。可以在选定温度(例如0℃、5℃、25℃(室温)、30℃、40℃)保存选定时间段(例如2周、1个月、1.5个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、12个月、18个月、24个月等等)后测量稳定性。为了快速筛选，可以将制剂在40℃保存2周到1个月，在该时间测量稳定性。当制剂将在2-8℃保存时，制剂通常应当在25℃(即室温)或40℃稳定至少1个月和/或在2-8℃稳定至少3个月、6个月、1年或2年。当制剂在30℃保存时，制剂通常应当在30℃稳定至少3个月、6个月、1年或2年和/或在40℃稳定至少2周、1个月、3个月或6个月。在一些实施方案中，可以使用冻干和保存后的聚集程度作为蛋白质稳定性的指示(见本文实施例)。如本文使用的，术语“高分子量(″HMW″)聚集体″是指至少两个蛋白单体的结合。为了本发明的目的，单体是指感兴趣蛋白的任何生物学活性形式的单个单位。例如，小模块免疫药物蛋白的单体可以是单体多肽，或同二聚体，或可解离二聚体，或SMIPTM蛋白多价复合物的单位。结合可以是共价的，非共价的，二硫键，不可还原的交联，或通过其他机制。 
例如，“稳定的”制剂是其中小于约10％(例如小于9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％)和优选小于约5％(例如小于4％、3％、2％、1％、0.5％)的蛋白以聚集体形式存在于所述制剂中(还称为高分子量种类(“HMW”))的制剂。在一些实施方案中，可以通过冻干和保存冻干制剂后聚集体形成的增加来测量稳定性。例如，“稳定的”冻干制剂是当所述冻干制剂在25℃(即室温)或40℃保存至少2周、1个月、3个月或6个月或在2-8℃保存至少3个月、6个月、1年或2年时，冻干制剂中聚集体 的增加低于约5％(例如低于4％、3％、2％、1％、0.5％)和优选低于约3％(例如2％、1％、0.5％、0.2％、0.1％)。聚集体或HMW种类可以使用本领域已知的方法分析，包括但不限于大小排阻HPLC(SE-HPLC)、阳离子交换-HPLC(CEX-HPLC)、反相HPLC(RP-HPLC)、多角度光散射(MALS)、荧光、紫外线吸收、浊度测定法、毛细管电泳(CE)、SDS-PAGE及其组合。 
在一些实施方案中，可以使用生物学活性测定测量蛋白制剂的稳定性。例如，“稳定的”制剂可以是在选定温度(例如0℃、5℃、25℃(室温)、30℃、40℃)冻干或保存选定时间段(例如2周、1个月、1.5个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、12个月、18个月、24个月等等)后保留最初蛋白活性80％(例如85％、90％、92％、94％、96％、98％或99％)的制剂。SMIPTM的生物学活性测定法是本领域已知的。示例性的方法描述于美国专利公开20030133939、20030118592、20050136049和20080213273；国际专利公开WO 02/056910、WO 2005/037989和WO 2005/017148，其均援引加入本文。 
制剂的制备 
待配制的SMIPTM蛋白可以利用本领域已经成熟的技术来制备，包括但不限于重组技术和肽合成或这些技术的组合。SMIPTM蛋白可以获自任何体内或体外蛋白表达系统，包括但不限于生成产物的重组细胞、细菌、真菌细胞、昆虫细胞、转基因植物或植物细胞、转基因动物或动物细胞或动物血清、腹水流体、杂交瘤或骨髓瘤上清液。合适的细菌细胞包括但不限于大肠杆菌细胞。合适大肠杆菌菌株的实例包括：HB101、DH5α、GM2929、JM 109、KW251、NM538、NM539以及不能切割外源DNA的任意大肠杆菌菌株。可以使用的合适真菌宿主细胞包括但不限于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、毕赤酵母(Pichia pastoris)和曲霉(Aspergillus)细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于S2Schneider细胞、D.Mel-2细胞、SF9、SF21、High-5TM、Mimic-SF9、MG1和KC1细胞。合适的示例性重组细胞系包括但不限于BALB/c小鼠骨髓瘤系、人成视网膜细胞(PER.C6)、猴肾细胞、人胚肾系(293)、幼仓鼠肾细胞(BHK)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、小鼠支持细胞、非洲绿猴肾细胞(VERO-76)、人宫颈癌细胞(HeLa)、犬肾细胞、buffalo大鼠肝细胞、人肺细胞、人肝细胞、小鼠乳腺肿瘤细胞、TRI细胞、MRC 5细胞、FS4细胞和人肝癌系(Hep G2)。 
SMIPTM蛋白可以使用本领域已知的各种载体(例如病毒载体)表达，细胞可以在本领域已知的各种条件下(例如补料分批)培养。遗传工程化细胞来产生蛋白的各种方法是本领域公知的。参见例如Ausabel et al.，eds.(1990)，Current Protocols in Molecular Biology(Wiley，New York)。示例性的方法描述于美国专利公开20030133939、20030118592、20050136049和20080213273；国际专利公开WO 02/056910、WO 2005/037989和WO2005/017148，其均援引加入本文。 
在制备感兴趣的SMIPTM后，可以产生“冻干前制剂”(也可称为“用于冻干的制剂”)。根据需要的剂量体积、施用方式等等来确定冻干前制剂中存在的SMIPTM量。 
用于冻干的合适制剂可以包含各种浓度的感兴趣SMIPTM。在一些实施方案中，适于冻干的制剂包含的感兴趣蛋白的浓度范围是约1mg/ml到400mg/ml(例如约1mg/ml到50mg/ml，1mg/ml到60mg/ml，1mg/ml到70mg/ml，1mg/ml到80mg/ml，1mg/ml到90mg/ml，1mg/ml到100mg/ml，100mg/ml到150mg/ml，100mg/ml到200mg/ml，100mg/ml到250mg/ml，100mg/ml到300mg/ml，100mg/ml到350mg/ml，100mg/ml到400mg/ml，25mg/ml到350mg/ml，25mg/ml到400mg/ml，25mg/ml到250mg/ml，25mg/ml到200mg/ml，50mg/ml到200mg/ml，25mg/ml到150mg/ml)。在一些实施方案中，适于冻干的制剂包含的感兴趣蛋白的浓度为大约25mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml、200mg/ml、250mg/ml、300mg/ml、350mg/ml或400mg/ml。 
蛋白通常存在于溶液中。例如，SMIPTM蛋白可以存在于pH为约4-8(例如4.0，4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5和8.0)的pH缓冲液中，以及在一些实施方案中，pH为约5-7。示例性的缓冲剂包括组氨酸、磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷(″Tris″)、柠檬酸盐、醋酸盐、醋酸钠、磷酸盐、琥珀酸盐和其他有机酸。缓冲剂浓度可以为约1mM到约30mM，或约3mM到约20mM，取决于例如缓冲液和制剂(例如重建制剂)所需的等渗性。在一些实施方案中，合适缓冲剂存在的浓度为大约1mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM或50mM。 
在一些实施方案中，适于冻干的制剂可以包含稳定剂以保护蛋白。稳定剂也被称为冻干保护剂。通常，合适的稳定剂是非还原糖如蔗糖、棉子 糖、海藻糖、或氨基酸如甘氨酸、精氨酸和甲硫氨酸。冻干前制剂中稳定剂或冻干保护剂的量通常使得重建时获得的制剂是等渗的。但是，高渗的重建制剂也可能是合适的。此外，冻干保护剂的量不能太低，否则在冻干时出现的SMIPTM降解/聚集量将无法接受。当冻干保护剂是糖(如蔗糖或海藻糖)和蛋白是SMIPTM时，冻干前制剂中示例性的冻干保护剂浓度范围是约10mM到约400mM(例如约30mM到约300mM和约50mM到约100mM)，或者，按重量计0.5％到15％(例如1％到10％，5％到15％，5％到10％)。在一些实施方案中，稳定剂与SMIPTM的质量比是约1∶1。在其他实施方案中，稳定剂与SMIPTM的质量比是约0.1∶1、0.2∶1、0.25∶1、0.4∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、2.6∶1、3∶1、4∶1、5∶1、10∶1或20∶1。 
在一些实施方案中，用于冻干的合适制剂还包括一或多种填充剂。“填充剂”是增加冻干混合物质量并有助于冻干块状物的物理结构的化合物。例如，填充剂可以改善冻干块状物的外观(例如基本上均匀的冻干块状物)。合适的填充剂包括但不限于氯化钠、乳糖、甘露醇、甘氨酸、蔗糖、海藻糖、羟乙基淀粉。示例性的填充剂浓度是约1％到约10％(例如1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％，5.0％，5.5％，6.0％，6.5％，7.0％，7.5％，8.0％，8.5％，9.0％，9.5％和10.0％)。 
在一些实施方案中，用于冻干的制剂包含等渗剂以保持冻干前制剂或重建制剂是等渗的。通常，“等渗”表示感兴趣的制剂与人血液具有基本上相同的渗透压。等渗制剂通常具有约240mOsm/kg到约350mOsm/kg的渗透压。等渗性可以使用例如蒸气压或冰点型渗透压计来测量。示例性的等渗剂包括但不限于甘氨酸、山梨醇、甘露醇、氯化钠和精氨酸。在一些实施方案中，存在于冻干前制剂中的合适等渗剂的浓度是按重量计约0.01-5％(例如0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0或5.0％)。 
在一些实施方案中，希望向用于冻干的制剂中添加表面活性剂。示例性的表面活性剂包括非离子型表面活性剂如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、十四烷基-、亚油醇-或硬脂酰-硫代甜菜碱；月桂基-、十四烷基-、亚油醇-或硬脂酰-肌氨酸；亚油醇-、十四烷基、或十六烷基-甜菜碱；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亚油酰胺丙基-、 肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈羟乙酰胺丙基-、或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈羟乙酰胺丙基-、或异硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲椰酰基牛磺酸钠或disodium methyl ofeyl-taurate；以及MONAQUATTM系列(Mona Industries，Inc.，Paterson，N.J.)，聚乙二醇，聚丙二醇以及亚乙基和丙二醇的共聚物(例如Pluronics、PF68等等)。通常，添加的表面活性剂的量是如下程度：其减少重建蛋白的聚集并将重建后的颗粒或起泡形成最小化。例如，冻干前制剂中存在的表面活性剂浓度是约0.001-0.5％(例如约0.005-0.05％或0.005-0.01％)。特别地，冻干前制剂中存在的表面活性剂浓度是大约0.005％、0.01％、0.02％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％等等。或者，或另外，可以向冻干制剂和/或重建制剂中添加表面活性剂。 
在一些实施方案中，使用稳定剂(如蔗糖或海藻糖)和填充剂(例如甘露醇或甘氨酸)的混合物来制备冻干前制剂。在本发明的一些实施方案中，使用稳定剂(如蔗糖或海藻糖)、填充剂(例如甘露醇或甘氨酸)和表面活性剂(例如聚山梨醇酯80)的混合物来制备冻干前制剂。 
冻干前制剂(和/或冻干制剂和/或重建制剂)可以包括其他药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，如Remington′s Pharmaceutical Sciences 16th edition，Osol，A.Ed.(1980)中描述的那些，条件是它们不会对制剂的所需特征产生不利影响。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对受体是无毒的，包括但不限于额外的缓冲剂；防腐剂；共溶剂；抗氧化剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸；螯合剂如EDTA；金属复合物(例如Zn-蛋白复合物)；可生物降解聚合物如聚酯；和/或盐形成平衡离子如钠。 
对于正在接受治疗的特定症候来说，合适情况下本文所述制剂可以包含一种以上蛋白，优选是具有互补活性的那些蛋白(不会对其他蛋白产生不利影响)。 
用于体内施用的制剂必须是无菌的。这可以轻易实现，利用在冻干和重建之前、或之后通过无菌过滤膜过滤进行。 
在将蛋白、稳定剂和其他任选存在的组分混合在一起后，将制剂冻干。已有许多不同的冷冻干燥器可用于这个目的，如Hull中试规模干燥器(SP Industries，USA)、Genesis(SP Industries)实验室冷冻干燥器或能够控制指定冻干过程参数的任何冷冻干燥器。通过将制剂冷冻、随后在适于初次干燥 的温度从冷冻物中升华冰来实现冷冻干燥。初始冷冻使得制剂在通常不超过约4小时(例如不超过3小时，不超过约2.5小时，不超过约2小时)内达到低于约-20℃的温度(例如-50℃、-45℃、-40℃、-35℃、-30℃、-25℃等等)。在这种条件下，产物温度通常低于制剂的低共熔点或崩塌温度。通常，在合适压力下(范围通常为约20到250mTorr)初次干燥的搁板温度范围是约-30到25℃(条件是初次干燥期间产物保持在熔点之下)。制剂，容纳样品的容器(例如小玻璃管)的大小和类型以及液体体积将主要决定干燥所需时间，其范围从数小时到数天。二次干燥阶段在大约0-60℃进行，主要取决于容器的类型和大小以及使用的SMIPTM类型。此外，液体体积将主要决定干燥所需时间，其范围从数小时到数天。 
任选地，可以在产物的初始冷冻期间引入复性步骤。复性步骤可以减少总循环时间。不希望受到任何理论约束，预期复性步骤可以帮助促进赋形剂(尤其是甘露醇)结晶，其进而增加制剂中剩余非晶组分的玻璃化转变温度，允许更高的搁板温度。复性步骤包括冷冻期间温度的区间或波动。例如，冷冻温度可以是-40℃，复性步骤将温度增加至例如-10℃并维持该温度一段时间。复性步骤的时间范围是0.5小时到8小时(例如0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3、4、6和8小时)。复性温度可以是在冰冻温度到0℃之间。 
可以基于产物质量分析、重建时间、重建质量、高分子量、水分和玻璃化转变温度来评价本发明的冻干产物。通常，蛋白质量和干产物分析包括产物降解速率分析，使用以下方法，包括但不限于大小排除HPLC(SE-HPLC)、阳离子交换-HPLC(CEX-HPLC)、X射线衍射(XRD)、调制式差示扫描量热法(mDSC)、反相HPLC(RP-HPLC)、多角度光散射(MALS)、荧光、紫外线吸收、浊度测定法、毛细管电泳(CE)、SDS-PAGE及其组合。在一些实施方案中，本发明冻干产物的评价包括评价块状物外观的步骤。但是，在一些实施方案中，本发明冻干产物的评价不包括评价块状物外观的步骤。 
冻干可以在容器中进行，如管、袋、瓶、槽、小瓶(例如玻璃小瓶)、注射器或任何其他合适的容器。容器可以是一次性的。冻干还可以大规模或小规模进行。在一些情况下，希望在容器中冻干蛋白制剂，可以在所述容器中进行蛋白重建以避免转移步骤。在这种情况下容器可以是例如3、4、5、10、20、50或100cc小瓶。 
作为一般建议，冻干将产生其中含水量小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％和小于约0.5％的冻干制剂。 
根据本发明SMIPTM制剂的实例包括以下： 
1.25mg/ml SMIPTM(例如TRU-015)，于6.5％蔗糖、50mM甘氨酸、20mM醋酸钠中，pH6.0。 
2.50mg/ml SMIPTM(例如TRU-015)，于20mM组氨酸、4％甘露醇、1％蔗糖中，pH 6.0。 
3.100mg/ml SMIPTM(例如TRU-015)，于20mM组氨酸、4％甘露醇、1％蔗糖中，pH 6.0。 
4.100mg/ml SMIPTM，于10％蔗糖、20mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中。 
5.100mg/ml SMIPTM，于5％蔗糖、1％甘氨酸、20mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中。 
6.100mg/ml SMIPTM，于5％蔗糖、2.4％山梨醇、20mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中。 
7.200mg/ml SMIPTM，于5％或10％蔗糖、20mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中。 
其他示例性的制剂描述于实施例部分。 
冻干制剂的保存 
通常，冻干产物可以在室温下保存较长时间段。保存温度范围通常是0℃到45℃(例如4℃、20℃、25℃、45℃等等)。冻干产物可以保存数月到数年。保存时间通常是24个月，12个月，6个月，4.5个月，3个月，2个月或1个月。冻干产物可以直接保存于冻干容器，其可以用做重建容器，消除转移步骤。或者，冻干产物制剂可以称量成较小增量以便保存。保存通常应当避免引起蛋白降解的情况，包括但不限于暴露于日光下，UV辐射，其他形式的电磁辐射，过热或过冷，快速热冲击和机械冲击。 
冻干制剂的重建 
在需要的阶段，通常是给患者施用蛋白的时候，可以用稀释剂重建冻干制剂，这样的话重建制剂中的蛋白浓度是合乎需要的。例如，重建制剂中存在的SMIPTM蛋白浓度是至少25mg/ml(例如从约25mg/ml到约400mg/ml)。在不同实施方案中，重建制剂的蛋白浓度为至少25mg/ml， 至少50mg/ml，至少75mg/ml，至少100mg/ml，至少150mg/ml，至少200mg/ml，至少250mg/ml至少300mg/ml或至少400mg/ml。当计划重建制剂的皮下或肌内输送时，重建制剂的高蛋白浓度被认为是特别有用的。但是，对于其他施用途径，如静脉内施用，可能需要重建制剂中较低的蛋白浓度(例如重建制剂中约5-50mg/ml或约10-40mg/ml蛋白)。 
重建通常在约25℃的温度下发生以确保完全水合，尽管还可以根据需要使用其他温度。重建所需时间将取决于例如稀释剂类型，赋形剂和蛋白的量。示例性的稀释剂包括无菌水，抑菌注射用水(BWFI)，pH缓冲液(例如磷酸盐缓冲液)，无菌盐溶液，Ringer′s溶液或葡萄糖溶液。合适的稀释剂任选可包含防腐剂。示例性的防腐剂包括芳香族醇如苯甲醇或酚醇。通过评价不同防腐剂浓度与蛋白的相容性以及防腐效率试验来确定所用防腐剂的量。例如，如果防腐剂是芳香族醇(如苯甲醇)，其存在的量可以是约0.1-2.0％，约0.5-1.5％，或约1.0-1.2％。 
重建制剂的施用 
根据已知方法，如作为丸剂的静脉内施用或通过一段时间内连续输注，通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径，给需要用蛋白(例如小模块免疫药物蛋白)治疗的对象(例如人)施用重建制剂。 
在一些实施方案中，通过皮下(即皮肤之下)施用给对象施用重建制剂。为此，可以使用注射器注射制剂。但是，用于施用制剂的其他装置是可用的，如注射装置(例如Inject-easeTM和GenjectTM装置)；注射笔(如GenPenTM)，无针装置(例如MediJectorTM和BioJectorTM)和皮下贴片输送系统。 
小模块免疫药物的合适剂量(“治疗有效量”)将取决于例如待治疗的病症，病症的严重性和病程，施用蛋白是为了预防还是治疗目的，先前的疗法，患者临床史及对所述蛋白的反应，使用蛋白的类型以及主治医师的判断。小模块免疫药物适于在一个时间点或一系列治疗期间给患者施用，可以在诊断开始后的任何时间给患者施用。蛋白可以作为单独治疗施用或与对治疗所述病症有用的其他药物或疗法联合施用。 
试剂盒 
本发明提供了试剂盒或其他制品，其包含本发明的冻干制剂并提供了 用于其重建和/或用途的说明书。试剂盒或其他制品可以包括容器。合适的容器包括例如瓶子、小瓶和注射器。容器可以由各种材料形成，如玻璃或塑料。容器容纳冻干制剂，在容器上的标签或与容器结合的标签可以提示用于重建和/或用途的指导。例如，标签可以提示将冻干制剂重建到如上所述的蛋白浓度。标签可以进一步提示制剂可用于或预期用于例如皮下施用。容纳制剂的容器可以是多次使用的小瓶，其允许重建制剂的重复施用(例如2-6次施用)。试剂盒或其他制品还可以包括第二容器，其包括合适的稀释剂(例如BWFI)。当混合稀释剂与冻干制剂时，重建制剂中的最终蛋白浓度通常是至少25mg/ml(例如至少25mg/ml，至少50mg/ml，至少75mg/ml，至少100mg/ml，至少l 50mg/ml，至少200mg/ml，至少250mg/ml，至少300mg/ml或至少400mg/ml)。试剂盒或其他制品还可以包括从商品化和用户立场来看所希望的其他材料，包括其他缓冲液，稀释剂，滤器，针头，注射器以及含使用说明书的包装插页。 
在一些实施方案中，本发明的试剂盒包括小瓶或其他合适的容器，其包含冻干的SMIPTM蛋白和预填充稀释剂的注射器。预填充稀释剂可以是适于重建的任何溶液(例如BWFI，或0.9％氯化钠溶液等等)。合适的注射器可以是塑料或玻璃的，可以是一次性或可重复使用的。合适的注射器可以具有各种大小(例如1ml，2ml，4ml，6ml，8ml，10ml)。在一些实施方案中，注射器可具有与注射器管连接的柱塞杆。在一些实施方案中，注射器具有分离的柱塞杆，其需要用户组装。通常，合适的注射器具有防撬塑料顶盖，其可以在施用前拿走或折断。如果不立即使用重建的SMIPTM蛋白，可以重新盖上盖子以预防可能的污染。包含冻干SMIPTM产物的合适小瓶或其他容器可以是塑料或玻璃的，可以是一次性的或可重复使用的。可以用例如橡胶塞、玻璃和/或塑料盖密封合适的小瓶或其他容器如安瓿。在一些实施方案中，试剂盒包括可用于穿透小瓶塞子的转接头。在一些实施方案中，转接头包括可用于穿透小瓶塞子的针头，适于连接到注射器用于冻干产物的重建和注射。在一些实施方案中，试剂盒可包括多个预填充小瓶，多个预填充注射器，和/或用于施用多个小瓶内含物的更大注射器。通常，试剂盒的组分可以单独包装和灭菌。在一些实施方案中，试剂盒可包括使用说明书，其包含具体重建和/或施用方法。 
参考下列实施例将更全面地理解本发明。但是，不应将它们理解为限 制本发明的范围。所有文献引用都援引加入本文。 
实施例
实施例1：包含25mg/ml TRU-015的醋酸盐-甘氨酸-蔗糖(″AGS″)冻干制剂 
在本实施例中，AGS制剂被设计为冻干浓度为大约25mg/ml的TRU-015。具体地，用于本实施例的AGS制剂包括6.5％蔗糖，50mM甘氨酸，20mM醋酸钠，pH 6.0。蛋白浓度是25mg/ml，每小瓶100mg蛋白。蔗糖用做稳定剂和填充剂，甘氨酸作为稳定剂和等渗剂添加。醋酸钠是缓冲剂。通过调制式差示扫描热计(″DSC″)测量，AGS制剂具有-34.2℃的玻璃化转变。通过冷冻干燥显微镜(″FDM″)测量，发现AGS制剂的崩塌温度是-31.4℃。在实验室规模冻干器中的总冻干过程持续约120小时。在-10℃的任选复性步骤导致在实验室规模缩短的90小时循环时间。将冻干循环放大至在GMP临床设备中运行。临床规模的冻干总循环时间是大约117小时。示例性冻干程序和示例性循环过程显示于表1和图2。 
表1AGS制剂中25mg/ml TRU-015的示例性冻干程序 
Figure DEST_PATH_GSB00000870804200011
如图2所示，初次干燥期间的产物温度低于崩塌温度(图2)。热电偶和皮拉尼传感器指示在二次干燥变温前完成初次干燥。这导致良好块状物外观和低残留水分(1.2％)。干粉冻干物的玻璃化转变温度是65℃，允许在升高的温度下保存。冻干产物的重建时间小于1分钟。示例性的稳定性数据概述于表2。 
表2：AGS制剂中冻干的TRU-015的示例性稳定性数据(％高分子量(″HMW″)，通过SE-HPLC测量) 
Figure BPA00001481527000221
本实施例表明AGS制剂适合于维持TRU-015分子的稳定性。本文描述的示例性冻干循环适合于在AGS缓冲液中冻干TRU-015。 
实施例2：醋酸盐-甘露醇-蔗糖(″AMS″)或组氨酸-甘露醇-蔗糖(″HMS″)制剂 
在本实施例中，开发出两种制剂，AMS和HMS制剂。基于醋酸盐-甘露醇-蔗糖(AMS)的制剂包含20mM醋酸钠作为缓冲剂，4％甘露醇作为填充剂和1％蔗糖作为稳定剂。在组氨酸-甘露醇-蔗糖(HMS)制剂中，使用20mM组氨酸来替代醋酸钠缓冲剂。剩余组分是相同的(例如4％甘露醇，1％蔗糖)。两种制剂的溶液pH均是6.0。两种制剂的等渗性是270mOsm/kg。两种制剂的填充体积是10-ml小瓶中4ml，每小瓶100mg蛋白。在冻干过程中使用-15℃的复性步骤。不希望受到任何理论约束，预期该复性步骤促进甘露醇结晶。对AMS和HMS制剂来说，一旦甘露醇结晶，剩余非晶相的玻璃化转变温度可以从-35℃升高到大约-23℃。直至-16℃均未检测到冻干期间的结构崩塌(针对AMS制剂测量)。与实施例1相比，更高的玻璃化转变和崩塌温度允许在更高的搁板温度下进行冻干循环，显著降低循环长度。示例性冻干程序和示例性循环过程显示于表3和图3。 
表3：AMS和和HMS制剂中25mg TRU-035的示例性冻干程序 
Figure BPA00001481527000222
Figure 648536DEST_PATH_GSB00000870804200021
数据显示在低于崩塌温度的产物温度(例如≤-16℃)下进行初次干燥。通过皮拉尼、露点传感器和产物热电偶显示，在二次干燥变温之前完成初次干燥。对于两种制剂来说，块状物外观均是可接受的。低温DSC显示，与AMS缓冲液相比，HMS缓冲液中甘露醇结晶度更低。由冻干引起的蛋白降解对于两种制剂均是相似的(基于AMS的制剂中0.3％HMW对基于HMS的制剂中0.5％HMW)。 
实施例3：HMS制剂中的50mg/ml TRU-015 
在本实施例中，制剂中TRU-015的浓度从25mg/ml增加至50mg/ml。因此，在10ml小瓶的4.3-ml填充体积中，小瓶中的蛋白含量增加到215mg/小瓶的计算值。使用50-mg/ml剂型的HMS制剂。用于本实施例的HMS制剂包含20mM组氨酸作为缓冲剂，4％甘露醇作为填充剂和1％蔗糖作为稳定剂。制剂pH6.0。通过DSC测量，甘露醇结晶开始于约-23℃。该制剂的复性温度是大约-10℃。复性时间是大约4小时。HMS中50mg/ml TRU-015的玻璃化转变温度是-9℃。初次干燥是在约0℃的搁板温度。示例性循环程序和示例性循环过程显示于表4和图4。 
表4：HMS制剂中50mg/ml TRU-015的示例性冻干程序 
Figure 269190DEST_PATH_GSB00000870804200031
初次干燥期间的产物温度低于玻璃化转变温度。通过皮拉尼、露点传感器和热电偶显示，在二次干燥之前完成初次干燥。块状物外观是可接受的，残留水分低至0.5％。干粉的玻璃化转变温度高于100℃。观察到不完全的甘露醇结晶。在大约45℃的起始温度观察到少量非晶甘露醇结晶。这仍然允许在最高40℃的温度加速保存。重建时间是大约2分钟。为了重建可以向冻干溶液或稀释剂中添加聚山梨醇酯80。填充体积从4ml到4.3ml的增加允许从蛋白浓度大于48mg/ml的单个小瓶输送至少200mg的TRU-015。保存时HMW种类的示例性百分比概述于表5。 
表5：HMS缓冲液中冻干的TRU-015的稳定性 
Figure 468091DEST_PATH_GSB00000870804200032
稳定性趋势的分析显示HMS缓冲液中50mg/ml TRU-015预测在4℃稳定2年。 
实施例4：HMS制剂中的100mg/ml TRU-015 
在本实施例中，开发出适于皮下剂型(″SQ″)的制剂，其通常是新药商业化中有价值的选择。因为注射体积的限制(例如≤1.0ml)，蛋白浓度通常应当为至少100mg/ml。另一限制是缓冲液的等渗性，其范围通常是260到320mOsm/kg。因此，在本实验中，开发蛋白浓度为至少100mg/ml的制剂。具体地，在本制剂中使用HMS缓冲液(20mM组氨酸、4％甘露醇、1％蔗糖，pH＝6.0)，计算的等渗值为270mOsm/kg。DSC显示在高至115mg蛋白每ml的HMS制剂中的可能甘露醇结晶(图5)。 
不希望受任何理论约束，预期结晶甘露醇不只是好的填充剂/块状物形成剂，而且有助于高浓度蛋白的重建。通常，与非晶蛋白-蔗糖-甘露醇混合物相反，包含结晶甘露醇的制剂的溶解要快得多。因此，在蛋白浓度≥100mg/ml的甘露醇结晶证据表明基于HMS的制剂尤其适合于在高浓度(例如50mg/ml到150mg/ml)下冻干TRU-015。DSC还显示甘露醇在-10℃结晶后，玻璃化转变温度升高到-9℃，允许在5℃搁板温度的攻击性(aggressive) 初次干燥。示例性冻干程序和示例性循环分别示于表6和图6。 
表6：HMS制剂中100mg/ml TRU-015的示例性冻干程序 
Figure BPA00001481527000251
在-10℃进行复性步骤。复性步骤的时间可以是3到7小时。块状物外观是可接受的，残留水分为0.5％。在冻干之前向溶液中添加0.01％表面活性剂聚山梨醇酯80允许在70秒内重建。重建一结束，溶液在1分钟内变得澄清。为了说明小瓶容纳体积，将小瓶中的填充体积增加到1.2ml。XRD显示一些非晶甘露醇在冻干后仍保留在HMS中的100mg/ml TRU-015中。 
因此，基于本实验的尤其有用的制剂包括4％甘露醇、1％蔗糖、20mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80、100mg/ml TRU-015，pH 6.0(″HMST″制剂)。来自保存期间该制剂的示例性稳定性数据示于表7。 
表7：HMST缓冲液中100mg/ml TRU-015的示例性稳定性数据 
Figure BPA00001481527000252
实施例5：包含100mg/ml的TRU-015的皮下制剂 
为了进一步改良冻干的TRU-015的稳定性，可以增加非晶稳定剂的量，并维持缓冲液的等渗性。预期稳定剂与蛋白质量比为1∶1可以改良室温下保存的稳定性。因此，本实验使用的基于组氨酸的制剂包括浓度为100mg/ml 的蛋白，浓度为100mg/ml(10％)的蔗糖和浓度为20mM的组氨酸。该制剂的等渗性经计算为约312mOsm/kg。该制剂的玻璃化转变温度是大约-25℃。这种基于10％蔗糖的制剂具有3.9cPs的粘性，与此相比，HMS制剂(20mM组氨酸、4％甘露醇、1％蔗糖，pH 6.0)的粘性经测定为2.3cPs。开发出两种可选择的制剂，一种包含甘氨酸作为稳定剂和等渗剂，另一种包含山梨醇作为稳定剂和等渗剂。为了降低粘性，将蔗糖浓度从10％降低到5％。为了维持缓冲液的等渗性，甘氨酸的浓度是约1％，导致最终制剂299mOsm/kg的计算等渗性。或者，山梨醇的浓度是约2.4％，导致最终制剂298mOsm/kg的计算等渗性。包含甘氨酸的制剂的粘性是约2.7cPs，包含山梨醇的制剂的粘性是约3.4cPs。包含甘氨酸的制剂的玻璃化转变是大约-21℃，包含山梨醇的制剂的玻璃化转变是约-22.5℃。在本实施例中为所有3种制剂设计一种冻干循环以提供低于玻璃化转变温度的足够干燥过程。用于制剂的示例性冻干程序和示例性循环过程分别示于表8和图7。 
表8：100mg/ml TRU-015的示例性冻干程序 
这个循环为所有3种制剂提供可接受的块状物外观。残留水分低；玻璃化转变温度高，允许加速稳定性研究期间的高温保存。示例性冻干的TRU-015制剂的特征总结于表9。 
表9：100mg/ml的TRU-015SQ制剂的示例性冻干粉末的特征。所有制剂都包含20mM组氨酸作为缓冲剂。 
Figure BPA00001481527000271
100mg/ml TRU-015在10％蔗糖-20mM组氨酸制剂中的重建示于图8。从注水开始到溶液不起泡的总重建时间不超过5分钟。 
还研究了聚山梨醇酯80(″Tween″)对SQ溶液重建的作用。利用0.01％Tween和不用Tween将3种SQ(例如100mg/ml蛋白浓度)制剂共同冻干。 
聚山梨醇酯80在重建后有利于阻止溶液起泡。与包含甘氨酸和山梨醇的制剂相比，基于10％蔗糖的制剂显示合理的重建时间。图8-10显示示例性数据，表明不同蔗糖浓度可能对蛋白浓度为100mg/ml的冻干产物的重建具有作用。SQ制剂的示例性稳定性数据示于表10。 
表10：3种SQ制剂中TRU-015的示例性稳定性数据 
Figure BPA00001481527000272
实施例6：用于皮下施用200mg/ml蛋白浓度的TRU-015制剂 
在本实验中，开发制剂以便通过皮下施用输送约200mg/小瓶的蛋白剂量。因此，本实验使用的所有制剂包含大约200mg/ml的蛋白浓度。利用低 (5％)和高(10％)蔗糖浓度作为冻干保护剂(稳定剂)来开发示例性制剂。两种制剂包含10mM组氨酸和0.01％聚山梨醇酯80。预测低蔗糖制剂具有更低粘性。但是，高蔗糖制剂在室温下可能更稳定。基于5％蔗糖的制剂的玻璃化转变是-21℃。含10％蔗糖的制剂具有-26℃的玻璃化转变。开发针对两种制剂的不同冻干程序，示例性的加工步骤示于表11和12。针对每个过程的示例性冻干循环示于图11和12。块状物外观对两种制剂来说都是可接受的，示于图13。 
表11：200mg/ml TRU-015在5％蔗糖、10mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中的示例性冻干程序 
Figure BPA00001481527000281
表12：200mg/ml TRU-015在10％蔗糖、10mM组氨酸、0.01％聚山梨醇酯80中的示例性冻干程序 
Figure BPA00001481527000282
表13：TRU-015在冻干前后的示例性稳定性数据。 
Figure BPA00001481527000291
来自本实验的数据显示，甚至在高达200mg/ml的蛋白浓度，利用本文所述制剂TRU-015可以承受冻干压力。 
实施例7：SBI-087制剂的冻干过程 
在本实施例中，设计制剂以冻干浓度为50mg/ml的SBI-087。制剂包含5％蔗糖、10mM甲硫氨酸、10mM组氨酸和0.01％聚山梨醇酯80，pH 6.0。示例性的冻干程序示于表14。 
表14.SBI-087的示例性冻干程序(基线循环)。 
Figure BPA00001481527000292
示例性过程参数和实验数据还示于图14。 
从图14可见，在这种情况下冻干期间的产物温度不超过SBI-087制剂-15℃的崩塌温度。冻干后观察到一些块状物皱缩(图15)。但是，冻干材料的块状物外观是可接受的。 
冻干材料的残留水分是0.37±0.01％。示例性差示扫描热计(″DSC″)扫描示于图16。 
放热事件的起始发生在大约44℃。玻璃化转变温度是大约89℃。基于冻干产物特性，甚至考虑到保存期间一些水分转移到材料中，预期冻干产物可以在室温下保存而无相变。 
实施例8：聚山梨醇酯80对SBI-087重建的作用 
在本实施例中，向制剂中添加表面活性剂(聚山梨醇酯80)以评估其对重建的作用。在固体溶于包含聚山梨醇酯80的溶液后，SBI-087的重建溶液在1分钟内澄清。在无表面活性剂的小瓶中，溶液保持混浊至少1小时。在含和不含聚山梨醇酯80的材料之间没有检测到蛋白质量的差异。因此，不希望受到任何理论的约束，预期“乳浊(opalescence)”归因于气泡，其在聚山梨醇酯存在下很快消散。 
实施例9：甲硫氨酸对SBI-097稳定性的作用 
在升高的温度下进行液体稳定性研究以确认合适的pH和赋形剂。基本配方是10mM组氨酸、5％蔗糖。检测pH(范围是5.5到6.5)以及添加0.01％聚山梨醇酯80和10mM甲硫氨酸对高分子量种类(″HMW″)形成的作用。如图17所示，SBI-087的最佳pH值范围是pH 5.5-6.0。此外，甲硫氨酸可能有利于减少HMW形成。 
实施例10：SBI-087的稳固性研究 
为了评价制剂对循环偏离的稳固性，在实施例7所述制剂(即5％蔗糖、10mM组氨酸、10mM甲硫氨酸和0.01％聚山梨醇酯80，蛋白浓度为50mg/ml，pH 6.0)中对SBI-087进行额外研究。由于无法预测的过程偏离，冻干材料中的残留水分可能潜在增加到高于正常平均水分水平的水平。因此，合适的制剂应当提供对由水分增加造成的流动性增加的足够“抗性”。为了显示这种制剂提供足够的稳定性，进行表14的冻干循环，但有一处例外：在初次干燥结束时，用塞子塞住小瓶以便留下高于正常含水量的冻干样品。示例性冻干循环示于图18。冻干材料的块状物外观与图15中的类似。 
在商品化冻干期间经历压力和搁板温度偏离不是不常见的。这些偏离(总是不可预见的)可能导致产物温度增加至崩塌温度或甚至超过它。为了检测这些过程偏离，初次干燥期间在升高的搁板温度和压力下进行数次“攻击 性”循环。设计这些循环以在初次干燥期间达到和超过崩塌温度并评价获得的产物质量。示例性冻干循环参数示于表15。攻击性循环(循环#4)的实例还示于图19。SBI-087干粉的DSC实例示于图21。 
表15：“攻击性”冻干循环的示例性过程参数 
Figure BPA00001481527000311
注：1.冷冻步骤与表14所示相同。 
2.产物温度是热电偶与冰失去接触之前的温度值。 
如图19所示，产物温度很快增加至高于崩塌温度的大约-6℃，然后跌至-11℃的最小值。计算的产物温度谱表明产物温度可能潜在超过冰的熔点。块状物结构的崩塌导致材料与小瓶底部之间接触的丧失。因此，从小瓶底部到产物的热流动有可能减少，表现为初次干燥期间温度的降低。图20可见该实施例中崩塌的证据。 
来自稳固性循环的SBI-087干粉样品的示例性残留水分值和示例性热特征示于表16。 
表16.SBI-087的示例性残留水分和DSC数据：冻干循环之间的比较(N/A-不可用) 
Figure BPA00001481527000312
Figure BPA00001481527000321
NA-不可用 
升高的水分循环期间含水量的增加导致玻璃化转变温度降低18度。放热事件的发生也减少。但是，被检材料的所有玻璃化转变仍然高于保存温度，表明非晶相的低流动性。基于水分数据，来自″攻击性″循环2-4的材料的玻璃化转变温度预期在71℃到88℃的范围内。此外，基于水分和DSC数据，预测检验过程偏离将不会显著影响4℃保存期间的降解速率。支持该预测的示例性稳定性数据示于表17。 
表17.使用不同循环制备的冻干SBI-087材料的示例性稳定性 
实施例11：具有预填充稀释剂注射器的试剂盒 
在本实施例中，为了便于重建和施用，开发包含冻干的SMIPTM蛋白产物和预填充稀释剂注射器的试剂盒。具有预填充稀释剂注射器的试剂盒通常包括具有冻干蛋白的小瓶、包含重建缓冲无菌注射水的预填充稀释剂注射器、小瓶转接头和注射器柱塞杆。试剂盒可以包括使用手册。可以根据下列步骤使用预填充稀释剂注射器试剂盒。 
首先，冻干SMIPTM蛋白的小瓶和预填充稀释剂注射器允许达到室温。然后去除包含冻干蛋白的小瓶的塑料掀盖以暴露橡胶塞的中央部分。用杀菌棉拭或织品擦拭小瓶顶部。在清洁后，橡胶塞应不接触任何表面或人以将污染机会降到最低。在整个过程期间应当小心以将污染风险降到最低。 
随后，通过从背后揭开来去除塑料小瓶转接头包装的罩。然后将小瓶转接头置于小瓶上，按压直至转接头的转接头刺针穿透小瓶塞。然后，将柱塞杆穿入稀释剂注射器柱塞，患者或医生在将柱塞杆穿入柱塞时应当避免接触柱塞杆的轴以将污染风险降到最低。随后，通过折断盖上的孔眼，将稀释剂注射器上的塑料、防撬顶盖破坏。应当避免接触注射器顶盖内部。然后将盖子倒置于不可能被污染的位置的清洁表面。如果不立即施用重建溶液，可以重新放上盖子。 
随后，从转接头去除转接头的包装并丢弃。小瓶应当置于平整表面。随后，将稀释剂注射器与小瓶转接头连接，通过将尖端穿入转接头开口直至固定。随后，按压柱塞杆以将全部稀释剂注射入蛋白小瓶。不移除注射器，温和混旋或混合小瓶内含物直至粉末溶解。然后检查溶液中任何不溶粉末。所获溶液应当是澄清和无色的。如果在一次注射中施用一个以上小瓶，包含冻干SMIPTM蛋白的其他小瓶可以按照相同方式重建。 
然后倒置小瓶，将溶液缓慢吸入注射器。如果施用一个以上小瓶的SMIPTM蛋白，应当从小瓶移除注射器，将小瓶转接头与小瓶连接，但不将重建溶液吸入其中。可以连接单独的大luer lock注射器并将重建内容物吸入其中。对于每个小瓶可以重复这种步骤。 
通过温和地逆时针拉转(pulling and turning)注射器可以将注射器与小瓶转接头分离。然后丢弃仍然与转接头连接的小瓶。通常，在室温保存时，重建的SMIPTM蛋白应当在大约3小时内施用。 
示例性SMIPTM序列 
斜体：接头序列 
下划线：CDR序列 
Figure BPA00001481527000331
Figure BPA00001481527000351
Figure BPA00001481527000361
Figure BPA00001481527000371
Figure BPA00001481527000381
Figure BPA00001481527000391
Figure BPA00001481527000401
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Figure BPA00001481527000461
Figure BPA00001481527000471
Figure BPA00001481527000491
Figure BPA00001481527000511
Figure BPA00001481527000521
等同物 
上述内容是本发明的某些非限制性实施方案的说明。仅仅利用常规实验，本领域技术人员就能够识别或能够确定，本文描述的本发明特定实施方案的许多等同物。本领域普通技术人员将理解，可以在不脱离如下面权利要求所限定的本发明精神和范围的情况下对所述说明书进行各种变化和修饰。 
在权利要求中，冠词如“一个”、“一种”和“所述”可以表示一个或一个以上，除非相反指定或另外从上下文中是明确的。在一或多个组成员之间包括“或”的权利要求或说明被认为是满足的，如果一个，超过一个或全部的组成员存在于、应用于指定产品或方法中或另外与指定产品或方法相关，除非相反指定或另外从上下文中是明确的。本发明包括其中恰好一个组成员存在于指定产品或方法，应用于指定产品或方法，或另外与指定产品或方法相关的实施方案。本发明还包括其中一个以上的组成员或全部组成员存在于指定产品或方法，应用于指定产品或方法，或另外与指定产品或方法相关的实施方案。此外，应理解本发明包括所有变化、组合和变更(permutations)，其中来自一或多个权利要求或说明书相关部分的一或多种限制，元件，条款，描述性术语等等被引入另一权利要求。例如，从属于另一权利要求的任何权利要求可以被修饰以包括在从属于相同基本权利要求的任何其他权利要求中发现的一或多种限制。此外，当权利要求叙述组合物时，应理解包括为了本文公开的任何目的使用所述组合物的方法，并且包括根据本文公开的任何制备方法或本领域已知的其他方法来制备所述组合物的方法，除非另外指出或除非本领域普通技术人员明确可知将出现矛盾或不一致。此外，本发明包括根据本文公开的任意制备组合物的方法而 制成的组合物。 
当元件以列表形式(例如以马库什组形式)显示时，应理解还公开了元件的每个亚组，并且可以从组中去除任何元件。还应注意术语“包括”旨在表示是开放式的，允许包括额外的元件或步骤。应理解，通常，当本发明或本发明的一些方面被描述为包括特定元件、特征、步骤等等时，本发明的一些实施方案或本发明的一些方面由这类元件、特征、步骤等等组成或基本上由它们组成。为了简单起见，这些实施方案在本文中没有用这些词语(in haec verba)具体阐述。因此对于包括一或多种元件、特征、步骤等等的本发明的每个实施方案，本发明还提供了由这些元件、特征、步骤等等组成或基本上由它们组成的实施方案。 
当指定范围时，包括端点。此外，应理解除非另外指出或另外从上下文和/或本领域普通技术人员的理解是明确的，表示为范围的值可以假定位于本发明不同实施方案中指定范围内的任意具体值，到所述范围下限的十分之一单位，除非上下文明确另外指出。还应理解除非另外指出或另外从上下文和/或本领域普通技术人员的理解是明确的，表达为范围的值可以假定位于指定范围内的任意子范围，其中所述子范围的端点与范围下限的十分之一单位以相同的精确度表示。 
此外，应理解本发明的任意特定实施方案可以从任意一项或多项权利要求中明确排除。本发明组合物和/或方法的任何实施方案、元件、特征、应用或方面可以从任何一项或多项权利要求中排除。为了简短起见，全部实施方案(其中一或多种元件、特征、目的或方面被排除)不在本文明确阐述。 
援引加入 
本申请引用的全部出版物和专利文献为了所有目的以相同程度以全文援引加入本文，就如各个单独出版物或者专利文献的内容被引入本文一样。 

Claims (62)

1.一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白的冻干混合物，其中低于7％的冻干的小模块免疫药物蛋白以聚集体形式存在。
2.权利要求1的制剂，还包括填充剂和/或缓冲剂。
3.权利要求1的制剂，还包括非还原糖。
4.权利要求3的制剂，其中所述非还原糖是蔗糖。
5.权利要求3的制剂，其中所述非还原糖是海藻糖。
6.权利要求3的制剂，其中非还原糖与小模块免疫药物蛋白的质量比是0.1∶1、0.2∶1、0.25∶1、0.4∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、2.6∶1、3∶1、4∶1或5∶1。
7.权利要求2的制剂，其中所述填充剂选自蔗糖、甘露醇、甘氨酸、氯化钠、葡聚糖、海藻糖及其组合。
8.权利要求2的制剂，其中所述缓冲剂选自组氨酸、醋酸钠、柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、Tris及其组合。
9.权利要求8的制剂，其中所述缓冲剂是组氨酸。
10.权利要求8的制剂，其中所述缓冲剂是醋酸钠。
11.权利要求1-10任一项的制剂，其中所述制剂还包括稳定剂。
12.权利要求11的制剂，其中所述稳定剂选自蔗糖、山梨醇、甘露醇、甘氨酸、海藻糖及其组合。
13.权利要求12的制剂，其中所述稳定剂是蔗糖。
14.权利要求1-13任一项的制剂，其中所述制剂还包括等渗剂。
15.权利要求14的制剂，其中所述等渗剂选自甘氨酸、山梨醇、蔗糖、甘露醇、氯化钠、葡萄糖、精氨酸及其组合。
16.权利要求1-15任一项的制剂，其中所述制剂还包括表面活性剂。
17.权利要求16的制剂，其中所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、Triton及其组合。
18.一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、组氨酸和聚山梨醇酯80的冻干混合物。
19.一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、甘露醇和缓冲剂的冻干混合物，所述缓冲剂选自组氨酸或醋酸钠。
20.权利要求19的制剂，其中甘露醇与蔗糖的质量比是2∶1、3∶1、4∶1或5∶1。
21.一种制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、蔗糖、甘氨酸和醋酸钠的冻干混合物。
22.权利要求1-21任一项的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白包括特异性靶向CD20的结合结构域。
23.权利要求22的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白包括与SEQ IDNO：1-59和67-76任一具有至少80％相同性的氨基酸序列。
24.权利要求1-23任一项的制剂，其中所述冻干的小模块免疫药物蛋白在室温是稳定的。
25.一种试剂盒，其包括容纳权利要求1-24任一项的制剂的容器。
26.一种重建制剂，其包括用稀释剂重建的权利要求1-24任一项的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白以25mg/ml到400mg/ml的浓度范围存在于所述重建的制剂中。
27.权利要求26的重建制剂用于静脉内、皮下或肌内施用。
28.一种治疗患者的方法，包括施用权利要求26或27的重建制剂。
29.一种用于冻干的制剂，其包括小模块免疫药物蛋白、非还原糖和缓冲剂。
30.权利要求29的制剂，其中所述缓冲剂选自醋酸钠或组氨酸。
31.权利要求29或30的制剂，其中所述缓冲剂的浓度为大约10mM。
32.权利要求29或30的制剂，其中所述缓冲剂的浓度为大约20mM。
33.权利要求29-32任一项的制剂，其还包括甘露醇。
34.权利要求29-33任一项的制剂，其还包括甲硫氨酸。
35.权利要求34的制剂，其中所述甲硫氨酸的浓度为大约10mM。
36.权利要求29-35任一项的制剂，其中所述非还原糖是蔗糖。
37.权利要求26的制剂，其中所述蔗糖的浓度范围是1％到10％。
38.权利要求37的制剂，其中所述蔗糖的浓度为大约5％。
39.权利要求29-35任一项的制剂，其中所述非还原糖是海藻糖。
40.权利要求29-39任一项的制剂，其中所述非还原糖与所述小模块免疫药物蛋白的质量比是大约0.1∶1、0.2∶1、0.25∶1、0.4∶1、0.5∶1、1∶1、2∶1、2.6∶1、3∶1、4∶1或5∶1。
41.权利要求36的制剂，其中所述蔗糖的浓度为大约10％以及所述组氨酸的浓度为大约20mM。
42.权利要求29-41任一项的制剂，其中所述制剂还包括等渗剂。
43.权利要求42的制剂，其中所述等渗剂是甘氨酸或山梨醇。
44.权利要求29-43任一项的制剂，其中所述制剂还包括表面活性剂。
45.权利要求44的制剂，其中所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆、Triton及其组合。
46.权利要求45的制剂，其中所述蔗糖的浓度范围是大约5％到10％，组氨酸的浓度范围是大约10mM到20mM，以及聚山梨醇酯80的浓度范围是大约0.001％到0.1％。
47.权利要求29-46任一项的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度范围是大约25mg/ml到400mg/ml。
48.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度为大约25mg/ml，蔗糖的浓度为大约6.5％，甘氨酸的浓度为大约50mM，以及醋酸钠的浓度为大约20mM。
49.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度范围是大约50mg/ml到100mg/ml，组氨酸的浓度为大约20mM，甘露醇的浓度为大约4％，以及蔗糖的浓度为大约1％。
50.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度为大约100mg/ml，蔗糖的浓度为大约10％，组氨酸的浓度为大约20mM，以及聚山梨醇酯80的浓度为大约0.01％。
51.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度为大约100mg/ml，蔗糖的浓度为大约5％，甘氨酸的浓度为大约1％，组氨酸的浓度为大约20mM，以及聚山梨醇酯80的浓度为大约0.01％。
52.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度为大约100mg/ml，蔗糖的浓度为大约5％，山梨醇的浓度为大约2.4％，组氨酸的浓度为大约20mM，以及聚山梨醇酯80的浓度为大约0.01％。
53.权利要求47的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白的浓度为大约200mg/ml，蔗糖的浓度范围是大约5％到10％，组氨酸的浓度为大约20mM，以及聚山梨醇酯80的浓度为大约0.01％。
54.权利要求47的制剂，其中所述蔗糖的浓度为大约5％，组氨酸的浓度为大约10mM，甲硫氨酸的浓度为大约10mM，以及聚山梨醇酯80的浓度为大约0.01％。
55.权利要求29-54任一项的制剂，其中所述制剂的pH范围是大约5.0到大约7.0。
56.权利要求55的制剂，其中所述制剂具有6.0的pH。
57.权利要求29-56任一项的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白包括特异性靶向CD20的结合结构域。
58.权利要求57的制剂，其中所述小模块免疫药物蛋白包括与SEQ IDNO：1-59和67-76任一具有至少80％相同性的氨基酸序列。
59.一种保存小模块免疫药物蛋白的方法，包括：
将权利要求29-58任一项的包括小模块免疫药物蛋白的制剂冻干，以及
在室温或低于室温的温度下保存所述冻干的制剂。
60.权利要求59的方法，其中所述保存温度是2-8℃。
61.权利要求59的方法，其中所述保存温度是室温。
62.一种根据权利要求59-61任一项方法保存的小模块免疫药物蛋白。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105189559A (zh) * 2013-03-15 2015-12-23 塔科达有限责任公司 抗体制剂及其用途
CN106714833A (zh) * 2014-08-15 2017-05-24 昂考梅德药品有限公司 Rspo1结合剂及其用途
CN107088224A (zh) * 2017-02-10 2017-08-25 温州医科大学 人fgf21冻干制剂
CN109069595A (zh) * 2016-02-24 2018-12-21 生物马林药物股份有限公司 标靶医疗性溶酶体酵素融合蛋白质、其相关调配物与用途
TWI651100B (zh) * 2013-11-21 2019-02-21 協和梅德庫斯股份有限公司 甲硫胺酸之用途、血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法、血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用標準品、其製造方法與應用
CN109843920A (zh) * 2016-08-29 2019-06-04 迪赞纳生命科学公开有限公司 抗cd3抗体制剂
CN110022855A (zh) * 2016-10-07 2019-07-16 瑞泽恩制药公司 室温稳定的冻干蛋白质

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8158757B2 (en) 2007-07-02 2012-04-17 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
CA3101298A1 (en) 2010-03-01 2011-09-09 Bayer Healthcare Llc Optimized monoclonal antibodies against tissue factor pathway inhibitor (tfpi)
PE20140372A1 (es) 2011-01-28 2014-03-24 Sanofi Sa Composiciones farmaceuticas que comprenden anticuerpos humanos frente a pcsk9
BR112013023609A8 (pt) 2011-03-15 2018-04-03 Biogen Idec Inc Método para a redução de sintomas parecidos com a gripe associado com a administração intramuscular de interferon ao usar um regime de dosagem escalonado de titulação rápida
CN106167526A (zh) 2011-07-15 2016-11-30 昂考梅德药品有限公司 Rspo结合剂和其应用
AR087305A1 (es) * 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
ES2369945B1 (es) * 2011-07-29 2012-10-15 Eduardo Anitua Aldecoa Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento.
JP6158813B2 (ja) 2011-09-16 2017-07-05 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン−９（ＰＣＳＫ９）の阻害剤を投与することによってリポタンパク質（ａ）レベルを低下させる方法
MX2015000565A (es) 2012-07-13 2015-04-10 Oncomed Pharm Inc Agentes de union de proteina de r-espondina humana (rspo3) y usos de los mismos.
US9592297B2 (en) 2012-08-31 2017-03-14 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
TWI615158B (zh) 2012-11-06 2018-02-21 拜耳製藥股份有限公司 多肽之調配物
EP2968498A4 (en) 2013-03-15 2016-09-07 Biogen Ma Inc PREPARATIONS CONTAINING FACTOR IX POLYPEPTIDE
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
CA2914721A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of pcsk9
MX2016006226A (es) 2013-11-12 2016-09-07 Sanofi Biotechnology Regimenes de dosificacion para uso con inhibidores de pcsk9.
EP3123090A4 (en) 2014-03-24 2017-12-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Lyophilized factor ix formulations
US9937239B2 (en) 2014-05-21 2018-04-10 The Johns Hopkins University Preservation and reconstitution of cell-free protein expression systems
CA2952609A1 (en) * 2014-06-26 2015-12-30 Amgen Inc. Solid protein formulations comprising stabilizer, sugar alcohol, sugar and surfactant
PL3169353T3 (pl) 2014-07-16 2020-06-01 Sanofi Biotechnology SPOSOBY LECZENIA PACJENTÓW Z HETEROZYGOTYCZNĄ HIPERCHOLESTEROLEMIĄ RODZINNĄ (heFH)
CA2961374A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Treatment of fibrotic diseases
US10772956B2 (en) 2015-08-18 2020-09-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing or eliminating the need for lipoprotein apheresis in patients with hyperlipidemia by administering alirocumab
GB201608323D0 (en) * 2016-05-12 2016-06-29 Ucb Biopharma Sprl Pharmaceutical compositions
MA50501A (fr) * 2017-05-02 2020-09-09 Merck Sharp & Dohme Formulations stables d'anticorps anti-ctla4 seuls et en combinaison avec des anticorps anti-récepteur de mort programmée 1 (pd-1) et leurs procédés d'utilisation
CN112739323A (zh) 2018-05-10 2021-04-30 瑞泽恩制药公司 含有高浓度vegf受体融合蛋白的制剂
UY38238A (es) * 2018-05-25 2019-12-31 Genzyme Corp Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de la deficiencia de esfingomielinasa ácida
KR102649069B1 (ko) 2018-05-31 2024-03-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물
CN112261871B (zh) 2018-07-28 2022-05-17 韩国外泌体生技有限公司 用于使外排体冻干的方法
KR102163806B1 (ko) 2018-07-30 2020-10-07 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물
US20210079111A1 (en) * 2018-08-04 2021-03-18 AbCyte Therapeutics Inc. Cd19-cd20 bispecific and dual passway car-t and methods for use thereof
CR20210435A (es) 2019-02-18 2021-09-20 Lilly Co Eli Formulación de anticuerpos terapéuticos
JP2024522116A (ja) * 2021-05-28 2024-06-11 エックスワイワン セラピューティクス インコーポレイテッド Ｍｕｃ１－ｃ／細胞外ドメイン（ｍｕｃ１－ｃ／ｅｃｄ）に対する多重特異性抗体構築物
CN116479088A (zh) * 2022-11-15 2023-07-25 江苏默乐生物科技股份有限公司 一种生物试剂冻干保存的试剂组合、试剂盒、方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030202972A1 (en) * 1995-07-27 2003-10-30 Genentech, Inc. Protein formulation
WO2008157409A1 (en) * 2007-06-14 2008-12-24 Elan Pharmaceutical, Inc. Lyophilized immunoglobulin formulations and methods of preparation

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
PT917879E (pt) * 1997-11-22 2002-12-31 Roche Diagnostics Gmbh Processo melhorado para estabilizacao de proteinas
KR20080071192A (ko) * 2005-11-22 2008-08-01 와이어쓰 면역글로불린 융합 단백질 제형
RU2491094C2 (ru) * 2007-03-30 2013-08-27 Медиммун, Ллк Препарат антитела
CA2726837A1 (en) * 2008-06-26 2009-12-30 Wyeth Llc Lyophilization cycle robustness strategy

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030202972A1 (en) * 1995-07-27 2003-10-30 Genentech, Inc. Protein formulation
WO2008157409A1 (en) * 2007-06-14 2008-12-24 Elan Pharmaceutical, Inc. Lyophilized immunoglobulin formulations and methods of preparation

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105189559A (zh) * 2013-03-15 2015-12-23 塔科达有限责任公司 抗体制剂及其用途
CN105189559B (zh) * 2013-03-15 2021-07-13 塔科达有限责任公司 抗体制剂及其用途
TWI651100B (zh) * 2013-11-21 2019-02-21 協和梅德庫斯股份有限公司 甲硫胺酸之用途、血清或血漿中低密度脂蛋白因冷凍乾燥所致的變性之抑制方法、血清或血漿中低密度脂蛋白中之成分定量用標準品、其製造方法與應用
CN106714833A (zh) * 2014-08-15 2017-05-24 昂考梅德药品有限公司 Rspo1结合剂及其用途
CN109069595A (zh) * 2016-02-24 2018-12-21 生物马林药物股份有限公司 标靶医疗性溶酶体酵素融合蛋白质、其相关调配物与用途
US11345904B2 (en) 2016-02-24 2022-05-31 Biomarin Pharmaceutical Inc. Targeted therapeutic lysosomal enzyme fusion proteins, associated formulations and uses thereof
CN109843920A (zh) * 2016-08-29 2019-06-04 迪赞纳生命科学公开有限公司 抗cd3抗体制剂
CN109843920B (zh) * 2016-08-29 2023-01-13 迪赞纳生命科学公开有限公司 抗cd3抗体制剂
CN110022855A (zh) * 2016-10-07 2019-07-16 瑞泽恩制药公司 室温稳定的冻干蛋白质
CN107088224A (zh) * 2017-02-10 2017-08-25 温州医科大学 人fgf21冻干制剂

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