ES2369945B1 - Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. - Google Patents
Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2369945B1 ES2369945B1 ES201100867A ES201100867A ES2369945B1 ES 2369945 B1 ES2369945 B1 ES 2369945B1 ES 201100867 A ES201100867 A ES 201100867A ES 201100867 A ES201100867 A ES 201100867A ES 2369945 B1 ES2369945 B1 ES 2369945B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- blood
- application
- growth factors
- blood compound
- document
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 117
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 117
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 101
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 107
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 54
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 32
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 28
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 23
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 claims description 7
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 6
- 108010088880 plasmagel Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 3
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 2
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 claims 2
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 2
- 239000012577 media supplement Substances 0.000 claims 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims 2
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 claims 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 claims 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 23
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 8
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 8
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 7
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 7
- 108010000685 platelet-derived growth factor AB Proteins 0.000 description 7
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 6
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 4
- 210000003239 corneal fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 102000003706 Complement factor D Human genes 0.000 description 3
- 108090000059 Complement factor D Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 2
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 102100031162 Collagen alpha-1(XVIII) chain Human genes 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016275 Fear Diseases 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009227 antibody-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000034196 cell chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003571 opsonizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000000678 plasma activation Methods 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000005092 sublimation method Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000002277 temperature effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento, que comprende las fases de tratar térmicamente un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento para aumentar su temperatura de manera que se elimine el complemento y se reduzcan las inmunoglobulinas presentes en el mismo, de liofilizar el compuesto para conseguir una composición final seca de fácil transporte, manipulación y conservación que facilita los tratamientos periódicos o crónicos con compuestos sanguíneos. Se ha comprobado que, una vez re-suspendida la composición final seca, se obtiene una composición nuevamente húmeda que conserva intactas sus propiedades biológicas.
Description
Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento.
Sector de la técnica
La invención se refiere a un procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento, con la presencia o no de componentes celulares hemáticos (plaquetas, eritrocitos y glóbulos blancos), a partir de un compuesto sanguíneo, y a la composición que contiene factores de crecimiento obtenible por medio de dicho procedimiento.
Estado de la técnica
En el estado de la técnica es conocida de forma muy extensa la preparación de compuestos sanguíneos que contienen factores de crecimiento, obtenidos a partir de la sangre de un paciente. Dichos compuestos sanguíneos con o factores de crecimiento han demostrado ofrecer propiedades biológicas muy importantes, especialmente relacionadas con el desencadenamiento y favorecimiento de la regeneración de tejidos, la disminución del dolor en cierto tipo de dolencias y enfermedades, y otras múltiples utilidades.
A modo de ejemplo, la solicitud de patente WO0044314A1, a favor del propio solicitante, se refiere a un método de preparación de un gel de plasma sanguíneo autólogo, rico en factores de crecimiento, a partir de la propia sangre del paciente, procedimiento que ha sido actualizado en la más reciente solicitud de patente WO2010130851A2, también a favor del propio solicitante. Ambos procedimientos comparten pasos comunes como son el centrifugado de la sangre del paciente, la separación de plasma rico en plaquetas y la adición de cloruro de calcio al plasma rico en plaquetas para producir la activación del plasma (la liberación de factores de crecimiento por parte de las plaquetas contenidas en el plasma) y para producir la coagulación del mismo hasta que el plasma adquiere una consistencia similar a un gel.
También se conoce, por medio de la patente ES2221770B2 un procedimiento de preparación de otro compuesto sanguíneo rico en factores de crecimiento y con propiedades biológicas muy beneficiosas, en este caso en forma líquida. Concretamente, se trata de un sobrenadante de un plasma sanguíneo rico en factores de crecimiento, obtenido a partir de la fase líquida sobrenadante que aparece tras provocar la coagulación y una posterior retracción de dicho plasma rico en factores de crecimiento. En esta patente se describen además diversos usos del sobrenadante, entre los cuales destaca su uso (favorecido por su consistencia líquida) como colirio para el tratamiento de enfermedades o dolencias oculares.
Un gel de plasma que contenga en factores de crecimiento, un sobrenadante o, en general, cualquier compuesto sanguíneo autólogo preparado según métodos conocidos en el estado del arte, independientemente de la aplicación para la cual vaya a utilizarse, presenta el inconveniente de que necesita ser aplicado de forma inmediata para no perder sus propiedades biológicas. Esta necesidad es especialmente crítica si el compuesto sanguíneo contiene factores de crecimiento liberados. Así, los compuestos sanguíneos no están preparados para aguantar a temperatura ambiente largos periodos de tiempo y se recomienda su aplicación inmediata (en el caso de un sobrenadante, en no más de ocho horas desde su preparación) para evitar la degradación y desnaturalización de las proteínas y factores de crecimiento
o la posible contaminación bacteriana del producto.
La inmediatez de uso de los compuestos sanguíneos autólogos no ha sido limitante hasta la fecha ya que las aplicaciones para las cuales han sido utilizados (regeneración de tejidos, cultivo de células, aplicaciones agudas o incluso semanales o quincenales, etc.) han sido compatibles con dicha inmediatez. Sin embargo, en la actualidad están surgiendo posibles nuevas aplicaciones de los compuestos sanguíneos autólogos que contienen factores de crecimiento, que exigen infiltraciones o aplicaciones continuas del compuesto, con un intervalo entre dosificaciones relativamente breve. Los compuestos sanguíneos autólogos (gel, sobrenadante, etc.) tal como son conocidos en la actualidad, exigirían que para estas nuevas aplicaciones se estuviera extrayendo sangre continuamente al paciente, repercutiendo muy negativamente en la calidad de vida del mismo y en la factibilidad de tratamientos a largo plazo para patologías crónicas o degenerativas.
Ejemplos de patologías crónicas o degenerativas que podrían ser tratadas con un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento, pero que actualmente no lo son debido a la inmediatez de uso de los compuestos sanguíneos y a la imposibilidad de su conservación, son múltiples: patologías oculares, patologías del sistema nervioso central, patologías articulares degenerativas y en conjunto todas aquellas enfermedades o patologías que requieran la administración crónica o repetida del compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento.
Entre las patologías enumeradas se encuentran, particularmente pero no solamente, las siguientes: el lupus eritematoso sistémico, que es una enfermedad autoinmune crónica que afecta al tejido conjuntivo y que se caracteriza por que produce una inflamación y un daño de tejidos mediados por el sistema inmunitario, específicamente debidos a la unión de anticuerpos a las células del organismo y al depósito de complejos antígeno-anticuerpo; el síndrome Sjögren, que es una enfermedad autoinmune sistémica que se caracteriza por afectar principalmente a las glándulas exocrinas y que conduce a la aparición de sequedad; la dermatomiositis, que es una enfermedad del tejido conectivo caracterizada por la inflamación de los músculos y de la piel; la artritis reumatoide, la cual se trata de una enfermedad sistémica autoinmune caracterizada por provocar inflamación crónica, principalmente de las articulaciones, y que produce destrucción progresiva con distintos grados de deformidad e incapacidad funcional. Actualmente existen estudios que apuntan a que una composición sanguínea autóloga que contenga factores de crecimiento podría intervenir de forma muy satisfactoria en frenar todas estas patologías si pudiera ser aplicado de forma regular en el paciente.
La presente invención tiene como objetivo diseñar un procedimiento de obtención de una composición que contenga factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento, que permita obtener una composición capaz de ser conservada durante largos periodos de tiempo y transportada de manera sencilla, de forma que la composición resulte apta para ser aplicada no de forma inmediata sino en el momento que se desee o estime necesario. De esta manera, el procedimiento según la invención permitirá obtener una composición que podrá ser utilizada en planteamientos terapéuticos crónicos, de forma periódica, todo ello sin requerir constantes extracciones de sangre del paciente y por lo tanto mejorando la calidad de vida del mismo.
Es también objetivo de la presente invención que la composición obtenida mediante el procedimiento de la invención conserve intactas sus propiedades biológicas.
Es también objetivo de la presente invención que la composición obtenida mediante el procedimiento de la invención conserve unas propiedades biológicas mejoradas, especialmente indicadas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.
Descripción breve de la invención
Es objeto de la invención un procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento, con la presencia o no de componentes celulares hemáticos (plaquetas, eritrocitos y glóbulos blancos), que comprende varias fases.
En primer lugar, el procedimiento comprende la fase de disponer de un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento, liberados o no. El compuesto sanguíneo puede ser de muy diversos tipos: un gel de plasma rico en factores de crecimiento obtenido según la técnica de WO0044314A1, WO2010130851A2 u otra técnica aplicable; un sobrenadante obtenido como el componente líquido que aparece tras producir la coagulación y posterior retracción de un plasma sanguíneo, pudiendo dicho sobrenadante haber sido obtenido por ejemplo según la técnica detallada en la patente ES2221770B2; un suero sanguíneo; o, en general, cualquier compuesto sanguíneo que contenga factores de crecimiento. El compuesto sanguíneo puede contener o no componentes celulares hemáticos (plaquetas, eritrocitos y glóbulos blancos).
Posteriormente, el procedimiento según la invención comprende el paso de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo, durante el cual se aumenta la temperatura del mismo. El tratamiento térmico permite eliminar el complemento y reducir la presencia de algunas de las inmunoglobulinas más frecuentes en el compuesto sanguíneo que juegan un papel crítico en reacciones cruzadas desde un punto de vista inmunológico. Dicha eliminación o reducción considerable del complemento presente en el compuesto sanguíneo constituye una importantísima ventaja para la aplicabilidad del mismo a enfermedades del sistema inmune.
Adicionalmente, el procedimiento según la invención comprende una fase en la que se liofiliza el compuesto sanguíneo para conseguir una composición final prácticamente carente de humedad.
De acuerdo con la invención, los pasos de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo y de liofilizar el compuesto sanguíneo se realizan en orden indistinto, es decir, pueden realizarse en cualquier orden.
Adicionalmente, el procedimiento según la invención puede comprender el paso de filtrar el compuesto sanguíneo. Dicho paso se realiza antes de la liofilización (no necesariamente inmediatamente antes, ya que en caso de aplicarse el tratamiento térmico antes de efectuar la liofilización, el filtrado se realiza antes del tratamiento térmico).
El procedimiento de obtención de una composición a partir de un compuesto sanguíneo autólogo permite conseguir una composición final seca que presenta múltiples ventajas sobre el compuesto sanguíneo húmedo convencional. Una ventaja importante es que una composición seca es evidentemente más fácil de manejar y transportar que un compuesto húmedo (líquido, con consistencia de gel más o menos viscoso o con otra consistencia). Asimismo, al no contener agua, la composición seca puede mantenerse a temperatura ambiente e incluso conservarse de forma ilimitada, constituyendo un producto de larga estabilidad (gracias a lo cual puede aplazarse su uso y no ha de ser utilizado necesariamente de forma inmediata, una vez preparado). Adicionalmente, al no contener agua, la composición seca no tiene riesgo de sufrir contaminaciones. Otra ventaja de la composición seca es que puede recuperar rápidamente su estado original; para ello basta con re-suspender la misma en cualquier solvente isotónico que se emplee rutinariamente (por ejemplo agua), proceso que puede efectuarse in situ.
Una ventaja adicional de la composición seca según la invención es que, tal como se ha comprobado, una vez re-suspendida dicha composición para recuperar un estado húmedo y poder ser administrada, la composición resuspendida conserva las propiedades biológicas que caracterizaban al compuesto sanguíneo húmedo antes de realizar el procedimiento según la invención. Es decir, la composición re-suspendida sigue conservando una concentración análoga de factores de crecimiento con actividad biológica; además, los efectos inducidos por la composición seca una vez re-suspendida en la proliferación celular, la migración y quimiotaxis celular y en la síntesis auto y paracrina de factores de crecimiento son idénticos a los del compuesto sanguíneo húmedo. Esta conservación de propiedades biológicas se consigue gracias, entre otros motivos, a la adecuada temperatura a que es sometido el producto durante la ejecución del procedimiento según la invención. Por otra parte, debido a la baja temperatura utilizada en las diferentes fases del procedimiento, la pérdida de constituyentes volátiles comprendidos en el compuesto sanguíneo que pudiera producirse durante la ejecución del procedimiento es mínima. Las bajas temperaturas también permiten mantener un riesgo muy bajo de contaminación microbiana y que la preparación no sufra alteraciones desde un punto de vista enzimático (es ventajoso que las preparaciones que contienen enzimas, como es el caso del compuesto sanguíneo de la presente invención, se mantengan tratadas a bajas temperaturas para que no se vean dañadas).
Otro efecto extremadamente beneficioso de la invención es que la composición seca y, por lo tanto, la composición final re-suspendida son composiciones libres o con una presencia reducida de complemento, lo cual convierte la composición final re-suspendida en una composición particularmente óptima para tratar algunas enfermedades de naturaleza autoinmune.
Todo lo anterior permite que la composición seca pueda ser utilizada para tratamientos no inmediatos, por ejemplo para tratar de forma regular patologías crónicas y, particularmente, patologías crónicas de naturaleza autoinmune. Así, si la composición seca obtenida según la invención se almacena por ejemplo en dosis, el tratamiento crónico con la misma se convierte en un proceso muy sencillo: el paciente crónico puede llevar su dosis (por ejemplo en un envase) a cualquier lugar sin complicaciones ni temores; cuando desea administrarse la dosis, basta con que humedezca (resuspenda) la misma y, una vez recuperada la consistencia húmeda original (líquida u otra), efectúe la aplicación de la forma aplicable.
Todas estas particularidades y ventajas asociadas a la composición obtenida mediante el procedimiento según la invención pueden resumirse en: una estabilidad óptima, una especial indicación para algunas patologías de naturaleza autoinmune; una solubilidad fácil, rápida y completa; una conservación ilimitada; una buena protección contra las influencias externas nocivas y una rápida disponibilidad de uso.
Es asimismo objeto de la invención una composición que contiene factores de crecimiento, comprendiendo o no componentes celulares hemáticos, obtenible por medio del procedimiento según la invención. Dicha composición presenta todas las ventajas descritas con anterioridad.
Descripción breve de las figuras
Los detalles de la invención se aprecian en las figuras que se acompañan, no pretendiendo éstas ser limitativas del alcance de la invención:
- -
- La Figura 1 muestra una gráfica del número de keratocitos por centímetro cuadrado en tres córneas tratadas con sobrenadante de plasma líquido convencional, no sometido a tratamiento térmico, y con sobrenadante tratado térmicamente según la invención.
- -
- La Figura 2 muestra una gráfica de los niveles de PDGF-AB en los sobrenadantes de tres donantes, antes y después de ser tratados térmicamente según la invención.
- -
- La Figura 3 muestra los niveles del factor D del complemento en los sobrenadantes de tres donantes, antes y después de realizar sobre dichos sobrenadantes un tratamiento térmico de acuerdo con la invención.
- -
- La Figura 4 muestra una gráfica del número de fibroblastos por centímetro cuadrado en tres córneas tratadas con sobrenadante de plasma líquido convencional, no sometido a tratamiento térmico, y con sobrenadante tratado térmicamente según la invención.
- -
- La Figura 5 muestra una gráfica de la concentración de factores de crecimiento PDGF-AB y TGF-β1enun sobrenadante sin liofilizar y en un sobrenadante liofilizado según la invención.
- -
- La Figura 6 muestra una gráfica de la concentración de factores de crecimiento VEGF y EGF en un sobrenadante sin liofilizar y en un sobrenadante liofilizado según la invención.
- -
- La Figura 7 muestra una gráfica de la cantidad de fibroblastos conjuntivales contenida por centímetro cuadrado en tres sobrenadantes líquidos, antes y después de realizar un filtrado de los sobrenadantes.
- -
- La Figura 8 muestra una gráfica de la concentración de factores de crecimiento TGF-β1 en sobrenadante filtrado y sin filtrar.
- -
- La Figura 9 muestra una gráfica de la concentración de factores de crecimiento IGF-I en sobrenadante filtrado y sin filtrar.
- -
- La Figura 10 muestra una gráfica del número de células primarias procedentes de keratocitos corneales humanos (HCK) tras 72 horas de tratamiento con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención.
- -
- La Figura 11 muestra una gráfica del número de células primarias procedentes de fibroblastos conjuntivales humanos corneales humanos (HCF) tras 72 horas de tratamiento con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido.
- -
- La Figura 12 muestra una gráfica de la concentración de células en un cultivo de células primarias de keratocitos corneales humanos (HCK) realizado en un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y en un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido.
- -
- La Figura 13 muestra una gráfica de la concentración de células en un cultivo de células primarias de fibroblastos conjuntivales humanos (HCF) realizado en un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y en un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido.
Descripción detallada de la invención
Es objeto de la invención un procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento,
con la presencia o no de componentes celulares hemáticos (plaquetas, eritrocitos y glóbulos blancos), que comprende
las siguientes fases:
a) Disponer de un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento, liberados o no, preparado según cualquier procedimiento de preparación aplicable. Un ejemplo de compuesto sanguíneo con factores de crecimiento liberados es aquel en el que, utilizando el agente que fuere (cloruro cálcico, trombina, sales de calcio, otros agentes que contengan iones divalente o combinaciones de los mismos, o cualquier otro sistema que active la coagulación), se ha liberado el contenido de factores de crecimiento de las plaquetas y se ha activado la cascada de coagulación, logrando un producto rico en proteínas y factores de crecimiento tanto plasmáticos como plaquetarios. El compuesto sanguíneo puede ser de muy diversos tipos: un gel de plasma rico en factores de crecimiento obtenido según la técnica de WO0044314A1, WO2010130851A2 u otra técnica aplicable; un sobrenadante obtenido como el componente líquido que aparece tras producir la coagulación y posterior retracción de un plasma sanguíneo, pudiendo dicho sobrenadante haber sido obtenido por ejemplo según la técnica detallada en la patente ES2221770B2; un suero sanguíneo; o, en general, cualquier compuesto sanguíneo que contenga factores de crecimiento en cualquier cantidad y que haya sido obtenido por cualquier procedimiento. El compuesto sanguíneo puede contener o no componentes celulares hemáticos (plaquetas, eritrocitos y glóbulos blancos).
b) Aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo, de manera que se consigue eliminar el complemento y reducir la presencia de algunas de las inmunoglobulinas más frecuentes del compuesto sanguíneo que juegan un papel crítico en reacciones cruzadas desde un punto de vista inraunológico. Dicha eliminación o reducción considerable del complemento presente en el compuesto sanguíneo constituye una importantísima ventaja para la aplicabilidad del mismo a enfermedades del sistema inmune. Así, se sabe que la presencia del sistema de complemento de un compuesto sanguíneo pudiera ser perjudicial ya que está implicado en la sobre-estimulación del sistema inmune y en muchos casos en la propia sintomatología de la enfermedad que se pretende tratar con el compuesto sanguíneo. El complemento del plasma está relacionado con diversas alteraciones tales como posibles reacciones adversas de enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso, artritis, etc.) mediadas por complemento (vía clásica del complemento) o reacciones adversas derivadas de enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por complemento. Además, parte de los factores del complemento potencian la inflamación y la fagocitosis y actúan produciendo la lisis de células y microorganismos. Por su parte, las inmunoglobulinas (Ig) y más concretamente la IgG es la más presente en el compuesto sanguíneo y entre sus principales funciones biológicas destacan la fijación del complemento, la unión a receptores para Fe en células fagocíticas al opsonizar partículas durante la fogocitosis y la unión a receptores en células NK durante la citotoxicidad mediada por anticuerpos. Por lo tanto, la eliminación o reducción considerable del complemento presente en el compuesto sanguíneo constituye una importantísima ventaja para la aplicabilidad del mismo a enfermedades del sistema inmune. Gracias al tratamiento térmico se puede lograr, entonces, una composición final adaptada a las necesidades de pacientes con problemas del sistema inmune. Además, se ha comprobado que el tratamiento térmico no altera la presencia de factores de crecimiento y proteínas en el compuesto sanguíneo ni modifica o reduce la funcionalidad y potencialidad del mismo. Por su parte, la reducción total o parcial de las inmuglobulinas resulta importante en pacientes con enfermedades auto-inmunes ya que diferentes IgG participan en algunos de los procesos agudos de rechazo y por lo tanto reducir su presencia en la formulación ayuda a tratar distintos tejidos en estos pacientes sin riesgos de rechazo o reacción inmune aguda alguna.
c) Liofilizar el compuesto sanguíneo, para eliminar casi en su totalidad el contenido en agua del mismo y permitir que el compuesto sanguíneo pase a un estado de no humedad que permite su conservación durante largos periodos de tiempo.
La liofilización preferentemente se realiza sin la adición de coadyuvantes (azúcares tales como la trehalosa, componentes químicos, etc.). Los coadyuvantes son necesarios para liofilizar muchas sustancias, pero se ha comprobado que el compuesto sanguíneo consigue liofilizarse correctamente sin ellos y que realizando la liofilización sin añadir ningún coadyuvante se consigue una composición seca final (y por lo tanto una composición re-suspendida para aplicar al paciente) más biocompatible. Por ejemplo, algunos estudios realizados han demostrado que algunos coadyuvantes como la trehalosa actúan negativamente sobre la proliferación celular.
El procedimiento presenta la particularidad, además, de que en principio los pasos de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo y de liofilizar el compuesto sanguíneo se pueden realizar en orden indistinto. Sin embargo, se considera preferente el orden según el cual el paso de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo se realiza antes del paso de liofilizar el compuesto sanguíneo. Este orden preferente obedece a que el producto, al ser tratado térmicamente con anterioridad, contendrá todas las propiedades y potencialidad que se pretenden con este proceso (reducción del complemento e IgG) antes de ser liofilizado. Hay que tener en cuenta que la liofilización se realiza con el ánimo de mejorar la conservación y mantenimiento del preparado por lo tanto es preferente que constituya la etapa final y no la inicial. Por lo tanto, en resumen, primero se pretende optimizar el producto y posteriormente desarrollar su proceso de conservación y mantenimiento.
El tratamiento térmico puede ser cualquier tratamiento que permita elevar convenientemente la temperatura del compuesto sanguíneo, siendo preferente que se someta al compuesto sanguíneo a una temperatura superior a 37ºC durante un tiempo igual o superior a 1 minuto (por ejemplo introduciendo el compuesto sanguíneo en un baño de agua a esta temperatura y durante este tiempo). Dado que la temperatura de 37ºC es la temperatura corporal y la temperatura a la cual el complemento y las inmunoglobulinas ejercen su máxima actividad biológica, es preferente de acuerdo con la invención calentar el compuesto sanguíneo a una temperatura superior a dichos 37ºC para conseguir eliminar alguno de los citados componentes.
De forma especialmente ventajosa, el compuesto sanguíneo se somete a una temperatura de entre 50 y 60ºC (preferentemente a 56ºC), ya que a esa temperatura se consigue optimizar la degradación de componentes del complemento y maximizar la protección de las proteínas y factores de crecimiento que componen el producto. Así, se ha comprobado que temperaturas inferiores a este rango no garantizan que durante la incubación se elimine del compuesto sanguíneo el complemento. Por otro lado, incubar con temperaturas superiores a 60-65ºC produciría la desnaturalización de los factores de crecimiento y de las proteínas contenidas en el compuesto sanguíneo. Además, preferentemente se somete el compuesto sanguíneo a dicha temperatura durante entre 20 y 70 minutos (preferentemente entre 30 y 60 minutos) ya que a esos tiempos nuevamente se consigue optimizar la degradación de componentes del complemento y maximizar la protección de las proteínas y factores de crecimiento que componen el producto.
La fase de liofilización comprende preferentemente los pasos de:
- -
- congelar el compuesto sanguíneo a una temperatura menor de 0ºC durante igual o superior a 1 minuto;
- -
- realizar un secado primario del compuesto sanguíneo a a una temperatura menor o igual a 0ºC y a alto vacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto, de manera que la mayor parte del agua libre contenida en el compuesto sanguíneo pasa a vapor;
- -
- opcionalmente, realizar un secado secundario del compuesto sanguíneo a una temperatura mayor o igual a 0ºC y a alto vacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto, de manera que permite finalmente eliminar las ultimas trazas de vapor de agua, evaporando el agua no congelada contenida en el compuesto sanguíneo hasta conseguir una humedad final de menos del 1%;
- -
- opcionalmente, realizar un secado terciario del compuesto a una temperatura mayor o igual a 0ºC y a alto vacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto, de manera que se elimine la humedad residual que haya quedado en el producto mediante evaporación y reducir su contenido de humedad, lo que mejorará la estabilidad del producto final.
De forma especialmente ventajosa, el compuesto sanguíneo se congela a una temperatura de entre -60 y -40ºC (preferentemente a -50ºC) durante un tiempo superior a 1 hora (preferentemente un tiempo superior a 2 horas) ya que fuera de este rango, especialmente si las temperaturas de congelación son inferiores, aumenta el riesgo de que el compuesto sanguíneo pierda sus propiedades biológicas como consecuencia de la congelación. Además, es conveniente congelar durante el tiempo mínimo de 1 hora para asegurar que el compuesto sanguíneo se congela de forma homogénea (la homogeneidad garantiza la estabilidad de la liofilización y que no se alteren las propiedades biológicas del producto).
A su vez, el secado primario se realiza de forma especialmente ventajosa a entre -60 y -40ºC y entre 0,05 y 0,15 mBar (preferentemente a -50ºC y 0,1 mBar). La utilización de rangos bajos de temperatura se realiza para asegurar que el producto está totalmente congelado durante el proceso de sublimación, así como para preservar las propiedades físicas, químicas, y biológicas del producto inicial, evitando la posible desnaturalización de proteínas del producto liofilizado. La duración concreta del proceso depende de la cantidad de producto a liofilizar y ha sido establecida para asegurar la total sublimación del hielo necesaria para un adecuado secado.
En cuanto al secado secundario, éste se realiza de manera especialmente ventajosa a entre +15 y +25ºC y entre 0,05 y 0,15 mBar (preferentemente a +20ºC y 0,1 mBar) ya que estas condiciones permiten eliminar la humedad residual que haya quedado en el producto mediante evaporación y reducir su contenido de humedad por debajo del 1% con objeto de mejorar la estabilidad del producto final.
Finalmente, el secado terciario se realiza de manera especialmente ventajosa a entre +15 y +25ºC y vacío total (preferentemente a +20ºC y vacío total), logrando eliminar finalmente toda humedad, lo que proporcionará las óptimas características de estabilidad y uniformidad del producto final.
El procedimiento según la invención puede comprender, además, el paso adicional de filtrar el compuesto sanguíneo para eliminar o evitar la aparición de componentes de alto peso molecular, agregados plaquetarios o restos de fibrina que pudieran alterar la uniformidad del congelado y la estabilidad del liofilizado, lo que repercutiría también negativamente en la re-suspensión de la composición seca (téngase en cuenta que la velocidad de disolución de un liofilizado es inversamente proporcional al tamaño de las partículas que lo constituyen y que partículas gruesas comprendidas en la composición seca podrían producir que la disolución de la composición seca fuera más lenta o simplemente nula). En caso de realizarse, dicho paso adicional de filtrar el compuesto sanguíneo se ejecuta antes de la liofilización, aunque no necesariamente inmediatamente antes. El paso de filtrar el compuesto sanguíneo podrá no ser necesario, por ejemplo, cuando se disponga al comienzo del procedimiento de un compuesto sanguíneo ya filtrado.
Ejemplo de procedimiento
A continuación se describe un ejemplo de procedimiento de preparación de una composición final re-suspendida a partir de una composición seca obtenida a su vez según el procedimiento de la invención y a partir de un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento.
En primer lugar, se prepara un plasma rico en factores de crecimiento a partir de sangre extraída de un paciente, centrifugando en primer lugar la misma para separar la sangre en diferentes fracciones, como es conocido en el estado de la técnica. Entonces, se extrae la fracción de plasma mediante un dispositivo PTD (por sus siglas en inglés “Plasma Transfer Device”) a un tubo de fraccionamiento de 9 ml y se procede a activar el plasma; la activación se realiza estimando el volumen de plasma contenido en el tubo de fraccionamiento y añadiendo posteriormente 50 μl de PRGF® Activator por cada mililitro de plasma. La activación del plasma equivale a la liberación de factores de crecimiento por parte de las plaquetas contenidas en el plasma.
En segundo lugar, se obtiene el sobrenadante a partir del plasma rico en factores de crecimiento. Para ello, el plasma rico en factores de crecimiento, ya activado, se incuba en bloque de calor a 37ºC entre 1 hora y hora y media hasta la completa retracción del coágulo de fibrina. Posteriormente, el tubo de fraccionamiento se centrifuga a 1000 g durante 10 minutos con dos finalidades principales: precipitar el coágulo de fibrina formado, y extraer lo máximo posible el volumen de sobrenadante que podría quedar retenido en el interior del coágulo. Entonces, los tubos centrifugados se introducen en una cabina de flujo laminar, donde pueden ser abiertos para mantener la completa esterilidad de la muestra. Con una jeringuilla de 10 ml a la que se ha acoplado una aguja intramuscular roma, se recoge todo el sobrenadante liberado. Posteriormente, se retira la aguja roma de la jeringuilla y se acopla un filtro de PVDF de 0,22 μm, y se procede a la filtración del sobrenadante. Durante el proceso de filtración, la jeringa con el filtro se conecta a los dispensadores multidosis, administrando 1 ml de sobrenadante filtrado por dispositivo. Finalmente, los dispositivos se cierran herméticamente.
A continuación se ejecuta el procedimiento según la invención, para obtener una composición final seca a partir del sobrenadante líquido filtrado. Así, los dispositivos multidosis, con el sobrenadante filtrado en su interior, son tratados térmicamente, introduciéndose en un baño de agua precalentado previamente a 56ºC y durante entre 30 a 60 minutos. Tras este periodo, se introducen inmediatamente en un liofilizador previamente enfriado a -50ºC para proceder a su congelación donde se mantendrán en un rango de tiempo de entre 2 y 8 horas según el volumen de sobrenadante hasta que las muestras se encuentren congeladas de forma homogénea. Posteriormente, se realiza un secado primario a -50ºC y 0,1 mBar durante como máximo 24 h. Seguidamente, se realiza un secado secundario a +20ºC y 0,1 mBar durante máximo 6 h y finalmente se realiza un secado terciario a +20ºC y vacío total durante como máximo 12 h. El producto resultante es un polvo uniforme y homogéneo que aparece ligeramente compactado y que se puede re-suspender (es decir, diluir volviendo a su consistencia de sobrenadante) tras contacto con una solución acuosa de manera rápida y sencilla.
La composición final seca debe ser re-suspendida para poder ser aplicada. Para ello, el médico o el paciente toma una dosis de composición final seca y la sumerge en un volumen determinado de agua destilada estéril dentro de un contenedor, agitando posteriormente el contenedor hasta conseguir la completa disolución la composición seca y la obtención de una composición final nuevamente húmeda o líquida que conserva las propiedades biológicas del sobrenadante húmedo inicial, previo al tratamiento térmico y la liofilización. Dicha composición final puede entonces ser directamente aplicada al paciente, por ejemplo como colirio en los ojos.
Resultados experimentales
A continuación se describen los resultados de tres estudios experimentales realizados sobre el procedimiento y la composición según la invención, efectuado y obtenida respectivamente a partir de un sobrenadante de plasma sanguíneo rico en factores de crecimiento. Se detallan asimismo las conclusiones técnicas alcanzadas a partir de dichos resultados.
1. Influencia de la temperatura del tratamiento térmico sobre el efecto biológico y los niveles de factores de crecimiento del sobrenadante seco final
Como se ha mencionado, el tratamiento térmico realizado por la presente invención a temperaturas adecuadas permite conservar las propiedades biológicas del sobrenadante, es decir, que la composición seca final presente sustancialmente las mismas propiedades que el sobrenadante líquido inicial.
Pues bien, tras realizarse una experimentación sobre córnea, se ha comprobado que el proceso de tratamiento térmico (baño de agua a 56ºC durante 30 minutos) no afecta a su efecto biológico sobre la proliferación de fibroblastos de córnea y conjuntiva ni de células epiteliales corneales. La multiplicación de dichas células en cultivo in vitro es similar en el caso del sobrenadante no tratado térmicamente. Así, en la Figura 1, que muestra el número keratocitos por centímetro cuadrado en tres córneas tratadas con sobrenadante de plasma líquido convencional, no sometido a tratamiento térmico, y con sobrenadante tratado térmicamente según la invención, se puede observar que la proliferación de fibroblastos de córnea (keratocitos) es prácticamente la misma en respuesta al sobrenadante de plasma líquido convencional, no sometido a tratamiento térmico que al sobrenadante tratado térmicamente según la invención. Lo mismo ocurre en el caso de los fibroblastos conjuntivales y las células epiteliales corneales estudiadas.
También se han analizado los niveles de factores de crecimiento presentes en los sobrenadantes líquidos convencionales y en sobrenadantes tratados térmicamente según la invención. Se ha comprobado que, en el caso de factores plaquetarios como el PDGF-AB o el TGF-β1, el tratamiento térmico no afecta a sus niveles medidos en el sobrenadante final. Por otra parte, se ha comprobado que factores de crecimiento plasmáticos analizados como el IGF-I no varían su concentración por efecto de la temperatura mientras que otros agentes como las inmunoglobulinas G y M (IgG e IgM) presentan un 9% y un 13% de disminución respectivamente en sus valores. También se ha comprobado que el factor D del complemento desaparece totalmente cuando el sobrenadante es sometido a tratamiento técnico. Se pueden observar ejemplos de estos resultados en las siguientes figuras. Así, la Figura 2 muestra los niveles de PDGF-AB en los sobrenadantes de tres donantes, antes y después de realizar sobre dichos sobrenadantes un tratamiento térmico de acuerdo con la invención. Como puede observarse, dichos niveles se mantienen prácticamente constantes (en el primer sobrenadante descienden ligeramente, en el segundo se mantienen constantes y en el tercero aumentan ligeramente). Por otro lado, la Figura 3 muestra los niveles del factor D del complemento en los sobrenadantes de tres donantes, antes y después de realizar sobre dichos sobrenadantes un tratamiento térmico de acuerdo con la invención. Como puede observarse, en los sobrenadantes líquidos iniciales existe una presencia de factor D mientras que en los sobrenadantes tratados térmicamente no se detecta presencia alguna del mismo.
2. Influencia del proceso de liofilización sobre el efecto biológico y los niveles de factores de crecimiento del sobrenadante
Como se ha mencionado en esta descripción, el proceso de liofilización realizado por la presente invención permite conservar las propiedades biológicas del sobrenadante, es decir, que la composición seca final presente sustancialmente las mismas propiedades que el sobrenadante líquido inicial.
Durante la experimentación, se ha analizado el efecto del proceso de liofilización del sobrenadante de plasma sobre la proliferación de fibroblastos conjuntivales y keratocitos. Los resultados del análisis muestran que dicho tratamiento no afecta al crecimiento de dichos tipos celulares en ninguno de los tres sobrenadantes (de respectivos tres donantes) estudiados. Por ejemplo, en la Figura 4, que muestra el número de fibroblastos por centímetro cuadrado en tres córneas tratadas con sobrenadante de plasma líquido convencional, no sometido a tratamiento térmico, y con sobrenadante tratado térmicamente según la invención, se observa que la presencia de fibroblastos se mantiene relativamente constante (en el primer sobrenadante descienden ligeramente, en el segundo aumentan ligeramente y en el tercero descienden ligeramente).
También se han analizado los niveles de factores de crecimiento presentes en los sobrenadantes líquidos convencionales y en sobrenadantes liofilizados según la invención. Se ha comprobado que los niveles de factores de crecimiento analizados no varían tras el proceso de liofilización, tanto el caso de los factores plaquetarios como TGF-β1, PDGF-AB, VEGF y EGF como en caso de factores plasmáticos como IGF-1 o factor D del complemento. A modo de ejemplo, la Figura 5 muestra la concentración de factores de crecimiento PDGF-AB y TGF-β1 en un sobrenadante sin liofilizar y sin tratar térmicamente y en un sobrenadante liofilizado y tratado térmicamente según la invención; en ella se observa cómo la concentración de los primeros aumenta ligeramente, mientras que la concentración de los segundos disminuye ligeramente, siendo la concentración de ambos en el producto final (sobrenadante liofilizado) en cualquier caso elevada. En la Figura 6 se muestran, análogamente, la concentración de factores de crecimiento VEGF y EGF en un sobrenadante sin liofilizar y sin tratar térmicamente y en un sobrenadante liofilizado y tratado térmicamente según la invención; en ella se observa cómo la concentración de ambos disminuye ligeramente, aunque se mantiene en valores elevados.
3. Influencia del proceso de filtración sobre el efecto biológico y los niveles de factores de crecimiento del sobrenadante
Se ha estudiado también si la filtración del sobrenadante pudiera conllevar algún efecto biológico indeseado en el mismo, o si por el contrario no afecta a sus propiedades biológicas.
Pues bien, los resultados obtenidos de los estudios in vitro muestran que el proceso de filtración del sobrenadante no modifica el efecto biológico que ejerce sobre la proliferación de células fíbroblásticas y epiteliales de córnea y conjuntiva (fibroblastos conjuntivales, keratocitos y epiteliales corneales).
Por ejemplo, la Figura 7 muestra la cantidad de fibroblastos conjuntivales contenida por centímetro cuadrado en tres sobrenadantes líquidos, antes y después de realizar un filtrado de los sobrenadantes. Como puede observarse, la proliferación de fibroblastos conjuntivales en el sobrenadante filtrado es similar a la proliferación en el sobrenadante no filtrado.
Por su parte, los niveles de factores de crecimiento medidos en los sobrenadantes filtrados y no filtrados son muy similares para los tres sobrenadantes analizados (provenientes, como en todos los casos, de tres donantes diferentes). La Figura 8 muestra las concentraciones del factor de crecimiento TGF-β1 en los sobrenadantes filtrados y sin filtrar, pudiendo comprobarse que dichas concentraciones no varían de forma importante por el hecho de filtrarse los sobrenadantes. Este hecho no se produce solamente en el caso de los factores de crecimiento contenidos en los gránulos alfa de las plaquetas (por ejemplo TGF-β1, PDGF-AB, VEGF, EGF o TSP-1), sino que también se produce en el caso de factores de crecimiento presentes en el plasma como IGF-I (factor de crecimiento derivado de insulina tipo I) o la endostatina. La Figura 9 muestra, en este sentido, la concentración de factor de crecimiento IGF-I en el sobrenadante de tres donantes, antes y después de realizar un filtrado. Como puede observarse, el nivel de IGF-I se mantiene prácticamente constante en los tres casos.
4. Influencia del procedimiento de la invención, comprendiendo los pasos de filtrar, tratar térmicamente y liofilizar el sobrenadante, sobre diversas propiedades del mismo
La Figura 10 muestra una gráfica de la proliferación de células primarias procedentes de keratocitos corneales humanos (HCK) tras 72 horas de tratamiento con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido. Como puede observarse, el número de células primarias es ligeramente mayor en el caso del sobrenadante obtenido según el procedimiento de la presente invención.
La Figura 11 muestra una gráfica de la proliferación de células primarias procedentes de fibroblastos conjuntivales humanos corneales humanos (HCF) tras 72 horas de tratamiento con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y con un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido. Al igual que en la gráfica anterior, el número de células primarias es ligeramente mayor en el caso del sobrenadante obtenido según el procedimiento de la presente invención.
La Figura 12 muestra el efecto de la aplicación de un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y de un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido, sobre la migración del cultivo de células primarias de keratocitos corneales humanos (HCK). Como puede observarse, el número de células primarias es sólo ligeramente mayor en el caso de utilizarse como medio de cultivo un sobrenadante convencional.
La Figura 13 muestra el efecto de la aplicación de un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) convencional y de un sobrenadante de plasma rico en factores de crecimiento (PRGF) filtrado, tratado térmicamente y liofilizado según la invención, el cual posteriormente ha sido re-suspendido, sobre la migración del cultivo de células primarias de fibroblastos conjuntivales humanos (HCF) tras realizar una incubación de células durante 24 horas. El comportamiento en ambos casos es, como puede comprobarse, muy similar, aunque es ligeramente mejor en el caso del sobrenadante obtenido según la invención.
En resumen, tras analizarse todas las gráficas con resultados experimentales, puede concluirse que el comportamiento y las propiedades la composición final re-suspendida son muy similares (con ligeras variaciones irrelevantes) a los del sobrenadante de aplicación inmediata convencional. Por lo tanto, se puede concluir que el hecho de filtrar, tratar térmicamente y liofilizar un sobrenadante húmedo para obtener un producto seco re-suspendible no afecta a las propiedades del producto y, por otra parte, proporciona las numerosas ventajas enumeradas en el presente documento.
Claims (21)
- REIVINDICACIONES1. Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento, que comprende las fases de:a) disponer de un compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento, liberados o sin liberar,b) aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo, en el cual el compuesto sanguíneo se somete a una temperatura entre 50 y 60ºC durante un tiempo entre 20 y 70 minutos,c) liofilizar el compuesto sanguíneo,donde los pasos de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo y de liofilizar el compuesto sanguíneo se realizan en orden indistinto.
-
- 2.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que la liofilización del compuesto sanguíneo se realiza sin la adición de coadyuvantes.
-
- 3.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el paso de aplicar un tratamiento térmico al compuesto sanguíneo se realiza antes del paso de liofilizar el compuesto sanguíneo.
-
- 4.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que: el compuesto sanguíneo se somete a una temperatura de 56ºC durante un tiempo entre 30 y 60 minutos.
-
- 5.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el paso de liofilizar comprende los pasos de:
- -
- congelar el compuesto sanguíneo a una temperatura menor que 0ºC durante un tiempo igual o superior a 1 minuto,
- -
- realizar un secado primario del compuesto sanguíneo a una temperatura menor o igual a 0ºC y a alto vacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto.
- 6. Procedimiento, según la reivindicación 5, que se caracteriza por que:
- -
- la congelación del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura entre -60 y -40ºC durante un tiempo superior a 1 hora,
- -
- el secado primario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura entre -60 y -40ºC y a una presión entre 0,05 y 0,15 mBar.
- 7. Procedimiento, según la reivindicación 6, que se caracteriza por que:
- -
- la congelación del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura de -50ºC durante un tiempo superior a 2 horas,
- -
- el secado primario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura de -50ºC y a una presión de 0,1 mBar.
- 8. Procedimiento, según la reivindicación 5, que se caracteriza por que el paso de liofilizar comprende el paso adicional de:
- -
- realizar un secado secundario del compuesto sanguíneo a una temperatura mayor o igual a 0ºC y a alto vacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto.
- 9. Procedimiento, según la reivindicación 8, que se caracteriza por que:
- -
- el secado secundario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura entre +15 y +25ºCyauna presión entre 0,05 y 0,15 mBar.
-
- 10.
- Procedimiento, según la reivindicación 9, que se caracteriza por que:
- el secado secundario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura de +20ºC y a una presión de 0,1 mBar. -
- 11.
- Procedimiento, según la reivindicación 8, que se caracteriza por que comprende el paso adicional de:
- realizar un secado terciario del compuesto sanguíneo a una temperatura mayor o igual a 0ºCyaaltovacío, durante un tiempo igual o superior a 1 minuto. -
- 12.
- Procedimiento, según la reivindicación 11, que se caracteriza por que:
- el secado terciario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura entre +15 y +25ºC y en vacío total. -
- 13.
- Procedimiento, según la reivindicación 12, que se caracteriza por que: -el secado terciario del compuesto sanguíneo se realiza a una temperatura de +20ºC y en vacío total.
-
- 14.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que comprende el paso adicional de filtrar el compuesto sanguíneo, el cual se realiza antes de la liofilización.
-
- 15.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento es un sobrenadante de plasma sanguíneo.
-
- 16.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento es un gel de plasma sanguíneo.
-
- 17.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el compuesto sanguíneo que contiene factores de crecimiento es un suero sanguíneo.
-
- 18.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el compuesto sanguíneo no comprende ningún componente celular hemático.
-
- 19.
- Procedimiento, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el compuesto sanguíneo comprende algún componente celular hemático.
-
- 20.
- Composición que contiene factores de crecimiento, obtenible según el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones1a19.
OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCASN.º solicitud: 201100867ESPAÑAFecha de presentación de la solicitud: 29.07.2011Fecha de prioridad:INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA51 Int. Cl. : Ver Hoja AdicionalDOCUMENTOS RELEVANTES- Categoría
- Documentos citados Reivindicaciones afectadas
- X
- YANG et al. Preparation of a respiratory syncytial virus human reference serum for use in the quantitation of neutralization antibody. Biologicals: journal of the International Association of Biological Standardization. Junio 2007. Vol. 35, nº 3, páginas 183-187. ISSN 1045-1056 (Impreso). doi:10.1016/j.biologicals.2006.09.004. Ver Resumen y apartado 2.1 de Materiales y Métodos. 1-4,14-20
- Y
- 5-13
- Y
- WO 03026786 A2 (CLEARANT, INC. [US/US]) 03.04.2003, Ejemplos. 5-13
- X
- US 5871997 A (ROTHER, R. P., et al.) 16.02.1999, ejemplo 5. 1,4,15-20
- Y
- 2,5-10,14
- Y
- WO 2008078189 A2 (MAXYGEN HOLDINGS, LTD.) 03.07.2008, ejemplos 1,3. 5-10
- Y
- RODRÍGUEZ FURLÁN L. T., et al.Inulin like lyoprotectant of bovine plasma proteins concentrated by ultrafiltration. Food Research International. Abril 2010. Vol. 43, nº 3, páginas 788-796. ISSN 0963-9969. doi:10.1016/j.foodres.2009.11.015. Ver todo el documento, especialmente Introducción, apartados 2.4 y 2.5 de Materiales y Métodos, y Figuras 1 y 2. 2,14
- Y
- AYACHE, S., et al. Comparison of proteomic profiles of serum, plasma, and modified media supplements used for cell culture and expansion. Journal of translational medicine. 04.06.2006. Vol. 4, nº 40, páginas 1-12. ISSN 1479-5876 (Electrónico). doi:10.1186/1479-5876-4-40. Ver resumen, Introducción, Métodos, y 1er párrafo de Discusión. 1,4,15-20
- Y
- WO 2008048228 A2 (DEPARTMENT OF THE ARMY [US/US]) 24.04.2008, resumen; página 12, líneas 5-10; página 16, líneas 10-17. 1,4,15-20
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
- Fecha de realización del informe 08.11.2011
- Examinador B. Pérez Esteban Página 1/5
INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICANº de solicitud: 201100867CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUDA61K35/16 (2006.01) A61K38/18 (2006.01) A61K9/19 (2006.01)Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)A61KBases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)EPODOC, WPI, TXTUS0, TXTUS1, TXTUS2, TXTUS3, TXTEP1, TXTGB1, TXTWO1, MEDLINE, BIOSIS, NPL, EMBASE, XPESP.Informe del Estado de la Técnica Página 2/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 201100867Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 08.11.2011Declaración- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones 1-20 Reivindicaciones SI NO
- Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)
- Reivindicaciones Reivindicaciones 1-20 SI NO
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).Base de la Opinión.-La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.Informe del Estado de la Técnica Página 3/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 2011008671. Documentos considerados.-A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.- Documento
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
- D01
- YANG et al. Preparation of a respiratory syncytial virus human reference serum for use in the quantitation of neutralization antibody. Biologicals: journal of the International Association of Biological Standardization. Junio 2007. Vol. 35, nº 3, páginas 183-187. ISSN 1045-1056 (Impreso). doi:10.1016/j.biologicals.2006.09.004. Junio 2007
- D02
- WO 03026786 A2 (CLEARANT, INC. [US/US]) 03.04.2003
- D03
- US 5871997 A (ROTHER, R. P., et al.) 16.02.1999
- D04
- WO 2008078189 A2 (MAXYGEN HOLDINGS, LTD.) 03.07.2008
- D05
- RODRÍGUEZ FURLÁN L. T., et al. Inulin like lyoprotectant of bovine plasma proteins concentrated by ultrafiltration. Food Research International. Abril 2010. Vol. 43, nº 3, páginas 788-796. ISSN 0963-9969. doi:10.1016/j.foodres.2009.11.015. Abril 2010
- D06
- AYACHE, S., et al. Comparison of proteomic profiles of serum, plasma, and modified media supplements used for cell culture and expansion. Journal of translational medicine. 04.06.2006. Vol. 4, nº 40, páginas 1-12. ISSN 1479-5876 (Electrónico). doi:10.1186/1479-5876-4-40. 04.06.2006
- D07
- WO 2008/048228 A2 (DEPARTMENT OF THE ARMY [US/US]) 24.04.2008
- 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraciónLa presente solicitud de patente describe y reivindica un procedimiento para la obtención de una composición que contiene factores de crecimiento partiendo de un producto sanguíneo que contiene factores de crecimiento. El producto se somete a un tratamiento térmico para eliminar el complemento y posteriormente se liofiliza en varios pasos (congelación, secado primario, secado secundario y secado terciario), pudiéndose incluir un paso adicional de filtración antes de la liofilización.No se ha encontrado en el estado de la técnica ningún documento que divulgue el procedimiento de la invención tal y como está reivindicado, por lo que la solicitud cumple el requisito de novedad según el artículo 6 de la Ley 11/1986 de Patentes.Existen, sin embargo, varios documentos en el estado de la técnica que describen procedimientos similares al de la solicitud, o algunas de las características técnicas reivindicadas en la misma. Por tanto, la presente solicitud no cumple el requisito de actividad inventiva según el artículo 8 de la mencionada Ley de Patentes.El documento D01 describe un procedimiento de obtención de un suero humano (que comprende los mismos pasos que el procedimiento de la solicitud. Así, en D01 el suero es inactivado térmicamente a 56ºC durante 30 minutos, y posteriormente es filtrado y liofilizado sin añadir ningún coadyuvante a la composición. Aunque en el documento D01 no se indique de forma explícita que se obtiene una composición que contiene factores de crecimiento, se considera conocimiento general en este campo técnico que la sangre contiene factores de crecimiento (ver, por ejemplo, el documento D06), por lo que el suero obtenido con el procedimiento de D01 sería una composición como la de la reivindicación 1 de la presente solicitud. Por tanto, este documento afecta la actividad inventiva de las reivindicaciones 1 a 4, 14, 17 y 20. Además, puesto que resultaría obvio para el experto en la materia utilizar los diferentes compuestos sanguíneos de las reivindicaciones 15, 16, 18 a 19 en lugar de suero, este documento afecta también la actividad inventiva de las reivindicaciones 15, 16, 18 y 19.En el documento D02 se divulga un procedimiento de liofilización de diversos materiales orgánicos en tres pasos. En los ejemplos se concretan las condiciones de la liofilización en D02, que son esencialmente las mismas que las de las reivindicaciones 5 a 13 de la solicitud. Aunque los tiempos y las temperaturas no sean exactamente iguales en ambos casos, las diferencias no son lo suficientemente importantes como para obtener un efecto inesperado. Aunque en ninguno de los ejemplos de D02 se parte de un compuesto sanguíneo, no supondría un esfuerzo inventivo para el experto en la materia aplicar el proceso de liofilización descrito en D02 a compuestos sanguíneos (de hecho, en el párrafo [9] de D02 se incluyen la sangre y sus componentes entre los productos a los que se puede aplicar el proceso de liofilización). Por tanto, resultaría evidente la combinación de los documentos D01 y D02 para incluir el procedimiento de liofilización de D02 en el proceso de D01 y, de este modo, obtener el procedimiento reivindicado en la solicitud, por lo que las reivindicaciones 5 a 13 no tendrían actividad inventiva a la luz de lo divulgado en los documentos D01 y D02.Informe del Estado de la Técnica Página 4/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 201100867En el ejemplo 5 del documento D03 se describe un proceso de inactivación del complemento en muestras de suero humano liofilizado mediante incubación a 56ºC durante 30 minutos. Aunque el uso que se da al suero tratado en D03 no es el mismo que en la solicitud, es obvio que el producto obtenido en D03 es una composición que contiene factores de crecimiento, y sería evidente para el experto en la materia emplear la información divulgada en D03 para obtener la composición reivindicada en la solicitud. Por tanto, este documento afecta la actividad inventiva de las reivindicaciones 1, 4 y 15 a 20 según el artículo 8 de la Ley de Patentes.Hay diferencia entre la solicitud y D03 en el procedimiento de liofilización, que en D03 no se especifica detalladamente. En el documento D04 se describe un proceso de liofilización en 2 pasos que resulta muy similar al proceso reivindicado en las reivindicaciones 5 a 10 de la solicitud (en D04 no se contempla el paso final de secado terciario). Aunque existen ligeras variaciones en los tiempos y temperaturas empleados, el esquema general coincide en ambos casos, y los productos resultantes de cada paso deberían ser los mismos (o muy similares) en los dos procedimientos. Por tanto, el experto en la materia encontraría evidente la combinación del documento D04 con el D03 para obtener el procedimiento de las reivindicaciones 5 a 10 que, por consiguiente, no tienen actividad inventiva según el artículo 8 de la Ley de Patentes.Otro aspecto de la solicitud que no aparece divulgado en D03 es el paso adicional de filtración del producto antes de proceder a la liofilización. En el documento D05 encontramos un proceso de análisis de plasma bovino en el que el plasma es filtrado antes de la liofilización (ver apartados 2.4 y 2.5). El experto en la materia combinaría de forma evidente esta información con el documento D03 para incluir el paso de filtración en el procedimiento, y, de este modo, llegar al procedimiento de la solicitud. Así, la combinación de los documentos D03 y D05 afecta la actividad inventiva de la reivindicación 14 de la presente solicitud. Además, el documento D05 compara la estabilidad de las proteínas del plasma liofilizado en presencia y ausencia de agentes protectores; aunque se observa un mayor porcentaje de proteína desnaturalizada cuando el tratamiento no incluye sustancias protectoras, la información divulgada en D05 indica que es posible la liofilización de compuestos sanguíneos en ausencia de coadyuvantes, por lo que la combinación de D05 con D03 afectaría también la actividad inventiva de la reivindicación 2 de la solicitud según el artículo 8 de la Ley de Patentes.El documento D06 divulga un estudio de los niveles de diversos factores (incluidos factores de crecimiento) en muestras de suero y plasma sanguíneo. El proceso empleado incluye la inactivación del complemento mediante calentamiento a 56ºC durante 1 hora (ver página 2, columna 1, párrafo 5), aunque no contempla el paso de liofilización. Este paso lo encontramos en el documento D07, en el que se describe un procedimiento para la liofilización de plasma sanguíneo. Puesto que resultaría evidente para el experto en la materia combinar los documentos D06 y D07 para llegar al procedimiento de la solicitud, se considera que las reivindicaciones 1, 4 y 15 a 20 de la misma no cumplen el requisito de actividad inventiva del artículo 8 de la Ley de Patentes.Informe del Estado de la Técnica Página 5/5
Priority Applications (16)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201100867A ES2369945B1 (es) | 2011-07-29 | 2011-07-29 | Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. |
| RU2014102729/15A RU2014102729A (ru) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Способ получения композиции, содержащей факторы роста, из соединения крови, и композиция, получаемая указанным способом |
| CA2839973A CA2839973A1 (en) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Procedure for obtaining a composition containing growth factors from a blood compound, and composition obtained by said procedure |
| EP12762017.7A EP2740486A1 (en) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Process for a growth factor containing composition from platelets |
| BR112014001539A BR112014001539A2 (pt) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | processo para obter uma composição contendo fatores de crescimento de um composto do sangue, e composição obtida pelo dito processo |
| KR1020147001440A KR20140057244A (ko) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | 혈소판으로부터 얻어진 조성물을 포함하는 성장 인자를 위한 프로세스 |
| JP2014522123A JP2014521629A (ja) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | 血小板由来の増殖因子含有組成物のためのプロセス |
| MX2014000936A MX2014000936A (es) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Procedimiento de obtencion de una composicion que contiene factores de crecimiento a partir de un compueto sanguineo, composicion obtenible por dicho procedimiento. |
| PCT/ES2012/000196 WO2013017707A1 (es) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de plaquetas |
| PE2013002830A PE20141264A1 (es) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | Procedimiento de obtencion de una composicion que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguineo, y composicion obtenible por dicho procedimiento |
| CN201280036577.7A CN103702679B (zh) | 2011-07-29 | 2012-07-13 | 用于来自血小板的含有生长因子的组合物的方法 |
| TW101125702A TW201309310A (zh) | 2011-07-29 | 2012-07-17 | 自血液複合物獲得含生長因子組成物之方法及自該方法所獲得之組成物 |
| US13/560,389 US8993733B2 (en) | 2011-07-29 | 2012-07-27 | Procedure for obtaining a composition containing growth factors from a blood compound, and composition obtained by said procedure |
| ARP120102761A AR087374A1 (es) | 2011-07-29 | 2012-07-27 | Procedimiento de obtencion de una composicion que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguineo, y composicion obtenible por dicho procedimiento |
| CL2014000163A CL2014000163A1 (es) | 2011-07-29 | 2014-01-21 | Procedimiento de obtencion de una composicion que contiene factores de crecimiento a partir de plaquetas; composición que compre de factores de crecimiento. |
| CO14013982A CO6862109A2 (es) | 2011-07-29 | 2014-01-24 | Procedimiento de obtención una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguineo y composición obtenible por dicho procedimiento |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201100867A ES2369945B1 (es) | 2011-07-29 | 2011-07-29 | Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2369945A1 ES2369945A1 (es) | 2011-12-09 |
| ES2369945B1 true ES2369945B1 (es) | 2012-10-15 |
Family
ID=44996381
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES201100867A Active ES2369945B1 (es) | 2011-07-29 | 2011-07-29 | Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8993733B2 (es) |
| EP (1) | EP2740486A1 (es) |
| JP (1) | JP2014521629A (es) |
| KR (1) | KR20140057244A (es) |
| CN (1) | CN103702679B (es) |
| AR (1) | AR087374A1 (es) |
| BR (1) | BR112014001539A2 (es) |
| CA (1) | CA2839973A1 (es) |
| CL (1) | CL2014000163A1 (es) |
| CO (1) | CO6862109A2 (es) |
| ES (1) | ES2369945B1 (es) |
| MX (1) | MX2014000936A (es) |
| PE (1) | PE20141264A1 (es) |
| RU (1) | RU2014102729A (es) |
| TW (1) | TW201309310A (es) |
| WO (1) | WO2013017707A1 (es) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2778798A1 (es) * | 2019-02-11 | 2020-08-11 | Biotechnology Institute I Mas D Sl | Formulacion o adhesivo tisular obtenida de una composicion sanguinea que contiene plaquetas, y metodo de preparacion de dicha formulacion |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2442242B1 (es) | 2012-08-09 | 2014-11-25 | Biotechnology Institute, I Mas D, S.L. | Composición con factores de crecimiento destinada al tratamiento intranasal de una enfermedad neurodegenerativa u otra patología del sistema nervioso central, y su método de fabricación. |
| ES2527967B1 (es) * | 2013-08-01 | 2015-12-28 | Biotechnology Institute, I Mas D, S.L. | Formulación de una composición sanguínea rica en plaquetas y/o factores de crecimiento, con proteínas gelificadas y método de preparación de la misma |
| HK1194912A2 (en) * | 2013-09-17 | 2014-10-24 | Bestop Group Holdings Ltd | Growth factor concentrate and the use thereof |
| US10105306B2 (en) * | 2013-09-17 | 2018-10-23 | Bestop Group Holdings Limited | Method of preparing a growth factor concentrate |
| CA2950659A1 (en) * | 2016-12-06 | 2018-06-06 | Antnor Limited | Method for the preparation and prolonged storage of growth factors and cytokines obtained from platelet rich plasma |
| WO2019074886A1 (en) | 2017-10-09 | 2019-04-18 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | LYOPHILIZATION CONTAINER AND METHOD OF USE |
| JP6391872B1 (ja) * | 2018-03-30 | 2018-09-19 | セルソース株式会社 | 成長因子混合物およびその調製方法 |
| ES2782723B2 (es) * | 2019-03-13 | 2021-05-18 | Active Bioregeneration Tech Sl | Procedimiento para obtencion y conservacion de factores de crecimiento de alta pureza y sus usos |
| EP3937878A2 (en) | 2019-03-14 | 2022-01-19 | Terumo BCT Biotechnologies, LLC | Lyophilization loading tray assembly and system |
| EP3881858A1 (en) * | 2020-03-20 | 2021-09-22 | Rok Pangersic | Heat-treated platelet-derived growth factor extract for use in a method of preventing or treating a tissue defect |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5871997A (en) * | 1994-07-21 | 1999-02-16 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for protecting retroviral vector particles and producer cells from inactivation by complement via reduction of the expression or recognition of galactose alpha (1,3) galactosyl epitopes |
| AR022333A1 (es) | 1999-01-26 | 2002-09-04 | Anitua Aldecoa Eduardo | Regenerador de tejido oseo |
| AU2002302814A1 (en) * | 2001-06-08 | 2002-12-23 | Powderject Vaccines, Inc. | Spray freeze-dried compositions |
| US20030068416A1 (en) * | 2001-09-24 | 2003-04-10 | Wilson Burgess | Method of lyophylization to reduce solvent content and enhance product recovery |
| ES2221770B2 (es) | 2002-04-19 | 2006-07-16 | Eduardo Anitua Aldecoa | Metodo de preparacion de un compuesto para la regeneracion de tejidos. |
| US20060004189A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-01-05 | James Gandy | Compositions for treating wounds and processes for their preparation |
| US20060142198A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-06-29 | Wound Care Partners Llc | Compositions for treating wounds and processes for their preparation |
| US7931919B2 (en) * | 2005-08-12 | 2011-04-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method of producing glycine-stabilized, lyophilized plasma |
| JP2008109866A (ja) * | 2006-10-30 | 2008-05-15 | Jms Co Ltd | 培地添加剤、この培地添加剤を含む培地、及びこの培地を用いた細胞の培養方法 |
| JP2010513462A (ja) * | 2006-12-20 | 2010-04-30 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | 第ＶＩＩおよび第ＶＩＩａ因子組成物 |
| KR101162097B1 (ko) * | 2007-03-07 | 2012-07-02 | 가부시끼가이샤 제이엠에스 | 혈청조제방법 및 혈청조제장치 |
| JP2009050297A (ja) * | 2007-08-23 | 2009-03-12 | Tokyo Medical & Dental Univ | 脱細胞処理液、脱細胞化組織の調製方法、移植片、及び培養部材 |
| EP2077118A1 (en) * | 2008-01-07 | 2009-07-08 | Gwo Rei Biomedical Technology Corp. | Clottable concentrate of platelet growth factors and preparation method thereof |
| AU2008359915B2 (en) | 2008-07-31 | 2013-04-04 | Naval Cat Internacional S.A.S. | Flame-retarding arrangement in reinforced-plastic boats |
| CA2761603C (en) | 2009-05-14 | 2018-06-05 | Biotechnology Institute, I Mas D, S.L. | Method for the preparation of at least one compound from blood, and extraction device for use in the execution of said method |
| MX2011013722A (es) * | 2009-06-18 | 2012-05-08 | Wyeth Llc | Formulaciones liofilizadas para inmunofarmaceuticos modulares pequeños. |
| JP2013039036A (ja) * | 2009-12-16 | 2013-02-28 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | ＨＩＦ−２αの発現を抑制する核酸 |
-
2011
- 2011-07-29 ES ES201100867A patent/ES2369945B1/es active Active
-
2012
- 2012-07-13 RU RU2014102729/15A patent/RU2014102729A/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 CA CA2839973A patent/CA2839973A1/en not_active Abandoned
- 2012-07-13 MX MX2014000936A patent/MX2014000936A/es not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 WO PCT/ES2012/000196 patent/WO2013017707A1/es active Application Filing
- 2012-07-13 PE PE2013002830A patent/PE20141264A1/es not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 BR BR112014001539A patent/BR112014001539A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-07-13 JP JP2014522123A patent/JP2014521629A/ja active Pending
- 2012-07-13 EP EP12762017.7A patent/EP2740486A1/en not_active Withdrawn
- 2012-07-13 KR KR1020147001440A patent/KR20140057244A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 CN CN201280036577.7A patent/CN103702679B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-07-17 TW TW101125702A patent/TW201309310A/zh unknown
- 2012-07-27 AR ARP120102761A patent/AR087374A1/es unknown
- 2012-07-27 US US13/560,389 patent/US8993733B2/en active Active
-
2014
- 2014-01-21 CL CL2014000163A patent/CL2014000163A1/es unknown
- 2014-01-24 CO CO14013982A patent/CO6862109A2/es unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2778798A1 (es) * | 2019-02-11 | 2020-08-11 | Biotechnology Institute I Mas D Sl | Formulacion o adhesivo tisular obtenida de una composicion sanguinea que contiene plaquetas, y metodo de preparacion de dicha formulacion |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2014102729A (ru) | 2015-09-10 |
| BR112014001539A2 (pt) | 2017-02-14 |
| PE20141264A1 (es) | 2014-10-09 |
| CL2014000163A1 (es) | 2014-08-01 |
| ES2369945A1 (es) | 2011-12-09 |
| AR087374A1 (es) | 2014-03-19 |
| CN103702679A (zh) | 2014-04-02 |
| CA2839973A1 (en) | 2013-02-07 |
| TW201309310A (zh) | 2013-03-01 |
| EP2740486A1 (en) | 2014-06-11 |
| JP2014521629A (ja) | 2014-08-28 |
| CO6862109A2 (es) | 2014-02-10 |
| CN103702679B (zh) | 2016-06-01 |
| KR20140057244A (ko) | 2014-05-12 |
| US8993733B2 (en) | 2015-03-31 |
| US20130030161A1 (en) | 2013-01-31 |
| WO2013017707A1 (es) | 2013-02-07 |
| MX2014000936A (es) | 2014-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2369945B1 (es) | Procedimiento de obtención de una composición que contiene factores de crecimiento a partir de un compuesto sanguíneo, y composición obtenible por dicho procedimiento. | |
| ES2545193T3 (es) | Extracto de plaquetas inactivado viral, uso y preparación del mismo | |
| El-Anwar et al. | Topical use of autologous platelet rich plasma in myringoplasty | |
| US20080299212A1 (en) | Pharmaceutical Composition for Treating Avellino Cornea Dystrophy Comprising Blood Plasma or Serum | |
| ES2710921T3 (es) | Composiciones para tratar y prevenir lesión y enfermedad tisular | |
| ES2490715T3 (es) | Composiciones que comprenden células fetales no diferenciadas para el tratamiento de trastornos cutáneos | |
| ES2955282T3 (es) | Proceso para preparar un lisado de plaquetas humanas combinadas y su uso para el tratamiento de trastornos neurológicos | |
| US9867852B2 (en) | Viral inactivated biological mixture | |
| CN101730540A (zh) | 含有角蛋白生物材料的伤口愈合组合物 | |
| KR20190035927A (ko) | 안구 내 투여를 위한 에피네프린-기반 안과용 조성물 및 이의 제조방법 | |
| KR101117861B1 (ko) | 포르시토사이드 주사제와 그 제조 방법 | |
| KR20200099201A (ko) | 신경 손상을 치료하기 위한 조성물 및 방법 | |
| JP2003533203A (ja) | 毒性物質が充填された樹状細胞 | |
| US7658950B2 (en) | Material for treating mammalian joint maladies by biological fluid transplantation | |
| JP2023518085A (ja) | 自家生理学的液体から、強化された抗炎症性／抗異化性作用物質を作製するための方法 | |
| EP4188545A1 (en) | Composition for treating damaged epithelial surfaces and method of producing same | |
| Zheng et al. | Heat sterilization of peritoneal dialysis solutions influences ingestive behavior in non-uremic rats | |
| WO2021009659A1 (en) | Compositions for treatment of erectile dysfunction, methods for preparing the same and applications thereof | |
| ES2438640B1 (es) | Composición para la regeneración y reparación de la piel | |
| JPH03505200A (ja) | 治療活性のある、特に傷治療または老人医学に用いる作用物質およびかかる作用物質を含む製剤の製造方法 | |
| RU2225223C1 (ru) | Лиофилизированная антигерпетическая вакцина | |
| RU2014050C1 (ru) | Офтальмологическое средство и способ его получения | |
| RU2007152C1 (ru) | Офтальмологическое средство и способ его получения | |
| US20040170697A1 (en) | Amniotic apoptosis modulating substances | |
| Kumar et al. | The effect of cranberry fruit extract on alpha-synuclein protein expression using immunostaining techniques. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2369945 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20121015 |