ES2221770B2 - Metodo de preparacion de un compuesto para la regeneracion de tejidos. - Google Patents
Metodo de preparacion de un compuesto para la regeneracion de tejidos.Info
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Abstract
Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos. Un método de preparación de un compuesto obtenido a partir de coágulo rico en proteínas y con factores de crecimiento que se utiliza para tratamiento de regeneración de tejidos en diversidad de lesiones.
Description
Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos.
La presente invención se refiere a un método de
preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, que se
obtiene a partir de sangre y se utilizará para la regeneración de
tejidos en general y más concretamente en aquellas lesiones
epidérmicas o subepidérmicas, así como en lesiones de
articulaciones, cartílagos, tendones, ojos, tejido óseo, tejido
graso, etc.
En el estado de la técnica es conocido, por la
patente WO-A-00/44314 del mismo
solicitante, un preparado compuesto obtenido directamente a partir
de la sangre del propio paciente o procedente de un banco de sangre,
con el cual se logra un plasma que es rico en fibrinógeno y
proteínas, entre ellas las citoquinas. Este plasma presenta un
estado inicial líquido y un estado final de coágulo, y en fase de
coágulo se aplica con unos excelentes resultados en la regeneración
del tejido óseo.
Al aplicar la acción de este plasma a otros
tejidos se han encontrado ciertos inconvenientes e, incluso,
contraindicaciones desde el punto de vista de resultados prácticos
de regeneración, tanto si se utiliza en forma de coágulo plasma
viscoso - como en plasma propiamente dicho - todavía en fase líquida
- pero con un alto contenido de fibrinógeno.
Estudiando el comportamiento del coágulo se ha
advertido que si en su propia composición existe una presencia
excesiva de fibrina, hay una cierta dificultad para su aplicación
en algunas situaciones, así como en los resultados prácticos
correspondientes cuando se intenta utilizarlo para la regeneración
de otros tejidos, como por ejemplo, músculos y cartílagos.
Es objeto de la invención un compuesto líquido
obtenido a partir del plasma obtenido según el método
WO-A-00/44314. El compuesto según la
invención presenta cualidades regeneradoras de tejido óseo u otros
tejidos, y puede ser aplicado por ejemplo en circunstancias en las
que el plasma obtenido por el método reivindicado en
WO-A-00/44314 no presenta un
comportamiento óptimo. Además, el compuesto según la invención es
fácil de obtener, cómodo en su preparación y económico en su costo
de obtención.
El compuesto según la invención se obtiene según
un método cuyos pasos iniciales son aquellos descritos en
WO-A-00/44313 para la obtención de
un plasma rico en factores de crecimiento. El método de obtención
del compuesto según la invención es el siguiente:
- 1)
- Según WO-A-00/44313, en primera instancia se extrae sangre del paciente o se utiliza la procedente de un banco de sangre adecuada al caso. Esto se realiza minutos previos al inicio de su utilización ya que la sangre es un compuesto dinámico, es decir, cambiante en función del tiempo.
- 2)
- Según WO-A-00/44313, en tubos esterilizados de 5 ml. por ejemplo donde previamente se ha depositado citrato sódico concentrado al 10% para que actúe como anticoagulante, se introduce la sangre en cuantía entre 10 a 40 cm^{3}, al menos, y se centrifuga todo el contenido de los mencionados tubos a velocidades entre 160 y 800 G - en función de diferentes protocolos a llevar a cabo - alrededor de unos 10 minutos o menos (según la velocidad) y a temperatura ambiente. Como consecuencia, se disgrega el compuesto en:
- -
- glóbulos rojos en la parte inferior del tubo;
- -
- plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C., encima de los glóbulos rojos;
- -
- plasma pobre en factores de crecimiento P.P.F.C., en la parte superior del tubo;
- -
- además, existe una zona situada inmediatamente por encima de los glóbulos rojos que puede ser utilizada, en cuantía de 50 a 80 \mul, para posibles aplicaciones posteriores si las circunstancias así lo requieren.
- 3)
- Según WO-A-00/44313, el plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C. se traspasa a tubos esterilizados de cristal en una cuantía de 1 a 1,2 ml. por tubo añadiendo 50 p.l de cloruro cálcico concentrado al 10%. La acción del cloruro cálcico sobre el plasma forma una proteína denominada trombina que fragmenta el fibrinógeno contenido en el plasma y lo transforma en fibrina durante el proceso de transformación de plasma líquido a coágulo sólido-viscoso Manteniendo de esta forma el plasma se transforma en coágulo de P.R.F.C. en un lapso de tiempo de 5 a 25 minutos.
- Para la obtención instantánea (de 3 a 10 seg.) del coágulo de P.R.F.C., se mezcla el plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C. con cloruro cálcico y trombina.
- 4)
- A partir del plasma obtenido según WO-A-00/44313, y según propone la presente invención, se realiza la retracción del coágulo por un medio adecuado. Durante dicha retracción del coágulo, la trombina actúa sobre la membrana de las plaquetas que están en la malla de fibrina, y provoca cambios en su estructura originando un proceso de desgranulación, con lo cual se vacían de contenido las plaquetas, apareciendo dos fases:
- -
- una fase sólida que es una estructura tridimensional de fibrina, y
- -
- otra fase líquida sobrenadante, que contiene proteínas y metabolitos plaquetarios y plasmáticos.
- El medio adecuado que permite realizar la retracción del coágulo puede ser o bien ninguno (realizándose la retracción de forma espontánea y más lenta), o bien un medio acelerador de la retracción, preferentemente:
- -
- una centrifugación del coágulo, con o sin aportación de calor, o
- -
- una aportación de calor al coágulo a una temperatura de 37ºC.
- 5)
- Según propone la presente invención, se extrae el compuesto sobrenadante líquido obtenido, el cual es rico en proteínas y factores de crecimiento (P.R.G.F.) y está perfectamente preparado para ampliar el espectro de aplicación del producto regenerador de tejido en un sentido muy amplio.
- Como resultado, por término medio, se logra la obtención de 0,8 cm^{3} de compuesto sobrenadante rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos partiendo de 1 cm^{3} de coágulo, cuya retracción aporta también 0,2 cm^{3} de fibrina.
El compuesto obtenido presenta una consistencia
líquida además de las propiedades beneficiosas ya conocidas por el
plasma rico en factores de crecimiento obtenido según el método de
WO-A-00/44313, y puede ser utilizado
de forma ventajosa en diversas aplicaciones.
Por una parte, el compuesto obtenido puede ser
utilizado como regenerador de tejidos y órganos sobre el propio
cuerpo del paciente, y por su consistencia líquida permite alcanzar
lesiones que necesiten tratamiento intra-articular,
intra-muscular y subepidérmico. Además, puede ser
utilizado en aplicaciones intratisulares o en tratamiento ocular o
intra-ocular. También puede ser aplicado mezclado
con otros productos.
Por otra parte, el compuesto obtenido puede ser
utilizado en un medio de cultivo de células extraídas del propio
paciente (de diferentes tejidos, autólogos o heterólogos, de
diferentes líneas celulares, de órganos diferentes, cultivo de
células madre autólogas, a partir de punción, de tejido adiposo,
cordón umbilical del paciente y otros factores de uso) u obtenidas
de bancos de tejidos y/o de órganos, de forma que el compuesto
mejora el cultivo en laboratorio de dichas células de forma
"in vitro", para su posterior implantación o
trasplantación al propio paciente del que se ha extraído el plasma a
partir del cual se ha obtenido el compuesto sobrenadante. En la
práctica, se ha advertido que se obtienen resultados excelentes
utilizando el compuesto líquido sobrenadante proveniente de la
retracción del plasma WO-A-00/44313
en medios de cultivo y regeneración "in vitro" de
tejidos tanto óseos como blandos.
Por otra parte, el compuesto obtenido puede ser
utilizado como colirio, para el tratamiento ocular.
Claims (9)
1. Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento
y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, que se caracteriza
porque comprende las siguientes fases:
- -
- la realización de una retracción por el medio adecuado de una determinada cantidad de coágulo rico en factores de crecimiento (P.R.F.C.) obtenido según el método de WO-A-00/44313, obteniéndose como consecuencia de la retracción una fase sólida y una fase líquida sobrenadan-te,
- -
- la extracción de al menos parte de la fase líquida sobrenadante generada como consecuencia de la retracción, constituyendo dicha fase líquida sobrenadante extraída al menos parte del compuesto.
2. Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de
crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la
reivindicación 1, que se caracteriza porque el medio
adecuado es ninguno, realizándose la retracción del coágulo de forma
espontánea.
3. Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento
y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación
1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio
acelerador de la retracción que comprende un centrifugado con
aportación de calor.
4. Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento
y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación
1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio
acelerador de la retracción que comprende un centrifugado sin
aportación de calor.
5. Método de preparación de un compuesto para la
regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento
y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación
1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio
acelerador de la retracción que comprende la aportación de calor
mantenido a una temperatura de 37ºC.
6. Compuesto para la regeneración de tejidos,
rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos
plaquetarios y plasmáticos, obtenido a partir de un método de
preparación según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores.
7. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 6 para la fabricación de un producto para la
regeneración de tejidos.
8. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 6 como componente de un medio de cultivo de
células.
9. Utilización de un compuesto según la
reivindicación 6 para la fabricación de un producto para el
tratamiento ocular o colirio.
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