JP2008505054A

JP2008505054A - Ｉｌ−６アンタゴニストで骨関節炎を治療する方法

Info

Publication number: JP2008505054A
Application number: JP2006552709A
Authority: JP
Inventors: ボーヴ，スーザン・エリザベス; キルゴア，ケニース・スタンレー
Original assignee: ワーナー−ランバートカンパニーリミテッドライアビリティーカンパニー
Priority date: 2004-02-11
Filing date: 2005-01-31
Publication date: 2008-02-21
Also published as: CA2555688C; ATE464908T1; CA2555688A1; WO2005080429A3; EP1715891A2; US20080145367A1; DE602005020743D1; WO2005080429A2; US20100215654A1; ES2341461T5; ES2341461T3; BRPI0506679A; EP1715891B2; EP1715891B1

Abstract

【課題】治療剤で骨関節炎を治療する追加の方法の提供。
【解決手段】ＩＬ−６抗体のようなＩＬ−６アンタゴニストで、骨関節炎を治療する。
【選択図】なし

Description

骨関節炎は、数百万の人々が発症している疾患である。骨関節炎患者は、関節奇形及び関節機能の減弱又は喪失を引き起こす、関節痛及び関節硬直のような症状に苦しんでいる。アスピリン、及びイブプロフェン、ジクロフェナク及びナプロキセンのような慣用的非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、骨関節炎患者を治療するために使用される、典型的な剤である。治療剤で骨関節炎を治療する追加の方法に対する要求が、当該技術分野で存在する。

発明の要旨

一つの側面において、本発明は、薬学的に許容できる坦体、及び抗ＩＬ−６受容体及び抗ＩＬ−６受容体抗体から成る群より選択される治療有効量の１又はそれを越える剤を含んでなる医薬組成物を、骨関節炎を罹患している対象に投与することを含んでなる、骨関節炎を治療する方法に関する。特定の態様において、医薬組成物は、関節内又は静脈内に投与される。特定の態様において、ＩＬ−６受容体抗体及びＩＬ−６受容体抗体はモノクローナル抗体である。特定の態様において、ＩＬ−６受容体抗体はトシリズマブである。他の態様において、ＩＬ−６抗体はＣＮＴＯ３２８である。特定の態様において、本発明は、６−（５−カルボキシ−５−メチル−ヘキシルオキシ）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸カルシウム塩、非ステロイド性抗炎症薬、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、イブプロフェン、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、フェニルブタゾン、アスピリン、セレコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ、コルチコステロイド、ヒアルガン及びシンビスクから成る群より選択される１又はそれを越える剤をさらに投与することに関する。特定の態様において、骨関節炎痛を、抗ＩＬ−６抗体又は抗ＩＬ−６受容体抗体で治療することができる。特定の態様において、本発明は、薬学的に許容できる坦体及び抗ＩＬ−６抗体の治療有効量を含んでなる医薬組成物を、骨関節炎を罹患している対象に投与することを含んでなる、骨関節炎を治療する方法に関する。特定の態様において、本発明は、薬学的に許容できる坦体及び抗ＩＬ−６受容体抗体の治療有効量を含んでなる医薬組成物を、骨関節炎を罹患している対象に投与することを含んでなる、骨関節炎を治療する方法に関する。

別の側面において、本発明は、対象における骨関節炎の治療のための医薬品の製造における、抗ＩＬ−６抗体及び抗ＩＬ−６受容体抗体からなる群より選択される１又はそれを越える剤の使用に関する。

定義

臨床設定において、医者は、放射線学的方法（例えば、発症した関節のｘ−線）及びThe Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index ("WOMAC") (例えば、Creamer et al. (1999) J. Rheumatol. 26: 1785-1792 、を参照されたい)の決定を含む、標準臨床指標により、患者が骨関節炎を罹患しているかどうかを評価することができる。

用語「抗体」とは、免疫グロブリン遺伝子からのフレームワーク領域、あるいは、抗原を特異的に結合しそして認識するそれらの断片を含んでなる、単量体（例えば、一本鎖抗体）又は多量体ポリペプチドを指す。認識される免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミュー定常部遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変部遺伝子が含まれる。軽鎖は、カッパかあるいはラムダとして分類する。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ又はイプシロンとして分類し、それらは順に各々、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを定義する。用語「抗体」はまた、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂのような抗原結合ポリペプチド、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体及び二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）も包含する。用語、抗体は、特に指示しない限り、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を包含する。

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造ユニットはテトラマーを含んでなる。各テトラマーは、二つの、ポリペプチド鎖の同一の対から構成されており、各対は、一つの「軽」（約２５ｋＤａ）及び一つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有している。各鎖のアミノ末端は、抗原認識に主として関与する、約１００から１１０あるいはそれより多くのアミノ酸の可変部を限定する。用語、可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）は、各々、これらの軽及び重鎖を指す。

本明細書で使用される場合、Ｆｄ断片とは、Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインから成る抗体断片を意味し；Ｆｖ断片は、抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_Ｈドメインから成っており；そしてｄＡｂ断片(Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)) はＶ_Ｈドメインから成っている。

いくつかの態様において、抗体は、それらを単一タンパク質鎖として作製されるのを可能にする合成リンカーを経て、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈドメインが対となって一価分子を形成する、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。(Bird et al., Science 242:423-426 (1988) 及びHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988).) いくつかの態様において、抗体は二重特異性抗体、即ち、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインは単一タンパク質鎖上に発現されるが、同一鎖上で二つのドメインの対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用しているので、ドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成するのを強制し、二つの抗原結合部位を作り出している、二価抗体である。（例えば、Holliger P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993), 及び Poljak R. J. et al., Structure 2:1121-1123 (1994) を参照されたい）。

「抗ＩＬ−６」抗体は、ＩＬ−６ポリペプチドを特異的に結合する抗体である。ＩＬ−６ポリペプチドの例には、限定されるわけではないが、マウスＩＬ−６ポリペプチド（例えば、配列番号２）、ラットＩＬ−６ポリペプチド（例えば、配列番号４）及びヒトＩＬ−６ポリペプチド（例えば、配列番号６）が含まれる。「抗ＩＬ−６抗体」の例は、ＣＮＴＯ３２８（ｃＣＬＢ８）、ＩＬ−６に対するヒト−マウスキメラモノクローナル抗体（例えば、van Zaanen, et al. (1998) Br. J. Haematol. 102: 783-790 を参照されたい）である。

「抗ＩＬ−６受容体抗体」は、ＩＬ−６受容体ポリペプチドの細胞外ドメインを特異的に結合する抗体である。「抗ＩＬ−６受容体抗体」の例はＭＲＡ（トシリズマブ）である。ＩＬ−６Ｒ細胞外ドメインの例には、限定されるわけではないが、マウスＩＬ−６Ｒポリペプチド（例えば、配列番号８）、ラットＩＬ−６Ｒポリペプチド（例えば、配列番号１０）及びヒトＩＬ−６Ｒポリペプチド（例えば、配列番号１２）が含まれる。

用語「イムノアッセイ」は、抗原を特異的に結合するために、抗体を使用するアッセイである。イムノアッセイは、抗原を単離する、標的とする及び／又は定量するための、特定の抗体の、特異的結合特性の使用により特徴付けられる。

抗体に「特異的に（又は選択的に）結合する」という表現又は、「特異的に（又は選択的に）免疫反応性である」という表現は、タンパク質又はペプチド抗原について適用する場合、特定されたタンパク質の存在が決定力である、結合反応を指す。典型的には、抗原に対して少なくとも約１μＭ又はそれ以下、より普通には少なくとも約０．１μＭ又はそれ以下、そして好ましくは少なくとも約１０ｎＭ又はそれ以下のＫ_ｄを有している場合、抗体は抗原を特異的に結合する。

多様なイムノアッセイ様式（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡその他）を、特定のタンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するために使用することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応性の抗体を選択するために、日常的に使用されている（特異的免疫反応性を決定するために使用することが可能であるイムノアッセイ様式及び条件の記載については、例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, (1990) を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」とは、可変及び定常ドメイン配列がヒト配列である、いかなる抗体も意味する。本用語は、ヒト遺伝子に由来するが、例えば、潜在的免疫原性を減少させるように、親和性を増加させるように、望まれない折り畳みを起こすかもしれないシステインを除去するように改変されている配列を有する抗体を包含する。本用語は、ヒト細胞では典型的ではないグリコシル化を与えるであろう、非ヒト細胞で組換え的に産生された抗体を包含する。これらの抗体は、以下に記載するように、多様な方法で調製することができる。

本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」とは、二つまたはそれより多くの異なった抗体からの領域を含んでなる、抗体を意味する。一つの態様において、１又はそれを越えるＣＤＲが、ヒト抗ＩＬ−６抗体から誘導される。別の態様において、すべてのＣＤＲは、ヒト抗ＩＬ−６抗体から誘導される。別の態様において、１を越えるヒト抗ＩＬ−６抗体からのＣＤＲがキメラ抗体に組み合わされる。例えば、キメラ抗体は、第一のヒト抗ＩＬ−６抗体の軽鎖からのＣＤＲ１、第二のヒト抗ＩＬ−６抗体の軽鎖からのＣＤＲ２及び第三のヒト抗ＩＬ−６抗体の軽鎖からのＣＤＲ３を含んでなることができ、そして重鎖からのＣＤＲは、１又はそれを越える他の抗ＩＬ−６抗体から誘導することができる。さらに、１又はそれを越えるＣＤＲが利用される1の抗ＩＬ−６抗体から、又は１又はそれを越える異なったヒト抗体から、フレームワーク領域を誘導することができる。例えば、非ヒト種（例えば、マウス又はラット）抗体からの１又はそれを越えるＣＤＲを、ヒト抗体フレームワーク内へ組換え的に挿入することができ、「ヒト化」抗体が生じる。

詳細な説明

本発明は、抗ＩＬ−６抗体又は抗ＩＬ−６受容体抗体の治療有効量を投与することによる、骨関節炎を罹患している対象を治療する方法に関する。ヒト化抗ヒトＩＬ−６抗体（例えば、米国特許第６，１２１，４２３及び５，８５６，１３５号を参照されたい）及びＩＬ−６Ｒ抗体（例えば、５，７９５，９６５及び５，８１７，７９０号を参照されたい）を含むＩＬ−６抗体（例えば、Wendling et al. (1993) J. Rheumatol. 20: 259-262; 米国特許第５，６１８，７００号を参照されたい）；マウス抗ヒトＩＬ−６Ｒ抗体ＰＭ１（例えば、Hirata et al. (1999) J. Immunol. 143: 2900-2906 を参照されたい）から誘導されたＭＲＡ（トシリズマブ；アトルズマブ；ｒｈＰＭ−１ (Drugs of the Future (2003) 28: 314-319) (Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.)）、を発生させるための方法が記述されている。

ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体の調製には、当該技術分野で周知の技術を使用することが可能である（例えば、Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985) を参照されたい）。加えて、選択された抗原へ特異的に結合する、一本鎖抗体及びヘテロマーＦａｂ断片を同定するため、ファージディスプレー技術を使用することが可能である（例えば、McCafferty et al, Nature 348:552-554 (1990); Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992) を参照されたい）。典型的には、ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒポリペプチドを、各々ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ抗体を発生させるために用いる。ＩＬ−６ポリペプチドの場合、それは天然原料、天然にＩＬ−６ポリペプチドを分泌する細胞から精製することが可能である。もしくは、本明細書に開示されている、ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒ配列から誘導され、そしてキャリアータンパク質へコンジュゲートされた合成ペプチドを、免疫原として使用することが可能である。加えて、組換えＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒポリペプチドを、同族抗体を発生させるために使用することが可能である。例えば、組換えマウスＩＬ−６（カタログ番号４０６−ＭＬ−０２５）、ラットＩＬ−６（カタログ番号５０６−ＲＬ−０５０）及びヒトＩＬ−６（カタログ番号２０６−ＩＬ−０１０）、ならびに組換え可溶性細胞外ドメインヒトＩＬ−６Ｒポリペプチド（カタログ番号２２７−ＳＲ−０２５）は、R&D Systems Inc., Minneapolis, MN から商業的に入手可能である。加えて、ＩＬ−６をコードする核酸（例えば、Hirano et al. (1986) Nature 324: 73-76; Brakenhoff et al. (1987) J. Immunol. 139: 4116-4121; SEQ ID NOS: 1, 3, and 5) and IL-6R (see e.g., Yamasaki et al. (1988) Science 241: 825-828 を参照されたい; 配列番号７、９及び１１）を、組換え遺伝学及び合成核酸化学の分野の日常的な技術を使用して作製する又は単離することが可能である。本発明で使用する一般法を開示している基本教科書には、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., 1989; Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual, 1990; 及びCurrent Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds., 1998 、が含まれる。

ポリクローナル抗体は典型的には、選択された抗原での動物の免疫化により発生させることが可能である。動物の免疫化は、当該技術分野で周知のいずれかの方法により可能である。例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990 、を参照されたい。マウス、ウサギ、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ及びウマのような非ヒト動物を免疫する方法は当該技術分野で周知である、例えば、Harlow and Lane 、上記文献、及び米国特許第５，９９４，６１９号を参照されたい。

特定の態様において、免疫応答を刺激するため、ＩＬ−６抗原をアジュバントと投与する。アジュバントの例には、完全又は不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラニルジペプチド）又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が含まれる。好ましくは、もしポリペプチドが投与されているとすれば、免疫化スケジュールは、数週間以上に及ぶ、２回又はそれより多くのポリペプチドの投与が含まれるであろう。

ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗原での動物の免疫化後、ポリクローナル抗体及び／又は抗体産生細胞を動物から得ることが可能である。いくつかの態様において、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体含有血清を、動物の放血又は殺すことにより動物から得る。血清は、動物から得られたままで使用することができ、免疫グロブリン分画を血清から得ることができ、又は抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を血清から精製することができる。

免疫原調製試料に対する動物の免疫応答は、試験放血を行い、そして選択されたタンパク質に対する反応性の力価を決定することによりモニターすることが可能である。免疫原に対する抗体の適切に高い力価が得られた時、動物から血液を集め、抗血清を調製する。血清中のＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗体のレベルは、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒイムノアッセイを使用してアッセイすることが可能である。ポリクローナル抗体は、標準抗体及びタンパク質精製技術を使用して、免疫化動物の血清から精製することが可能である。

モノクローナル抗体もまた、ＩＬ−６及びＩＬ−６Ｒに対して調製することが可能である。特定の態様において、モノクローナル抗体を発生させるため、ハイブリドーマ技術を使用することが可能である。例えば、抗体産生不死化細胞株を、免疫化動物より単離された細胞から調製することが可能である。免疫化後、動物を殺し、リンパ節及び／又は脾臓Ｂ細胞を不死化する。細胞を不死化する方法は、限定されるわけではないが、発癌遺伝子でそれらをトランスフェクトし、それらを発癌遺伝子ウイルスに感染させ、不死化細胞を選択する条件下で培養し、発癌性又は突然変異発生化合物にさらし、不死化細胞、例えば、ミエローマ細胞と融合させ、そして腫瘍抑制遺伝子を不活性化することを含む。例えば、Harlow and Lane 、上記文献、を参照されたい。もしミエローマ細胞との融合を使用するならば、ミエローマ細胞は、好ましくは、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌型細胞株）。

不死化細胞は、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ、又はその一部、又はＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒを発現している細胞を使用して、スクリーニングすることが可能である。特定の態様において、最初のスクリーニングを、酵素連結イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）又はラジオイムノアッセイを使用して実行することが可能である。

いくつかの態様において、ヒト抗体を、そのゲノム中に、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗原を有するヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖座位のいくつか又は全てを含んでなる、非ヒト動物を免疫化することにより産生する。特定の態様において、非ヒト動物はＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）動物(Abgenix Inc., Fremont, CA) であることができる。使用することができる別の非ヒト動物は、Medarex (Medarex, Inc., Princeton, NJ) により生産されたトランスジェニックマウス、ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）である。

ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）は、ヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖座位の大きな断片を含んでなる、遺伝子操作されたマウス系統であり、マウス抗体産生を欠いている。例えば、Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994) 及び米国特許第５，９１６，７７１、５，９３９，５９８、５，９８５，６１５、５，９９８，２０９、６，０７５，１８１、６，０９１，００１、６，１１４，５９８、６，１３０，３６４、６，１６２，９６３及び６，１５０，５８４号を参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）からの脾臓Ｂ細胞を、非分泌型マウスミエローマ（例えば、ミエローマ細胞株Ｐ３−Ｘ６３−ＡＧ８−６５３）と融合することが可能であり、そしてモノクローナル抗体を、生じるハイブリドーマのプールから同定することができる。ハイブリドーマにより分泌されたＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗体を、ハイブリドーマ培養物から精製し、そして本発明の方法で使用することができる。ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗体の重及び軽鎖をコードする核酸を、ハイブリドーマから単離し、そして宿主細胞（例えば、ＮＳＯ細胞、ＣＨＯ細胞その他）で発現させることができ、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗体を得ることができる供給源材料を提供する。

別の態様においては、トランスジェニック動物をＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒで免疫し、一次細胞、即ち、脾臓又は末梢血細胞を、免疫したトランスジェニック動物から単離し、所望の抗原に特異的な抗体を産生している個体細胞を同定する。各個の細胞からポリアデニル化ｍＲＮＡを単離し、可変部配列へアニールするセンスプライマー、例えば、ヒト重及び軽鎖可変部遺伝子のＦＲ１領域のほとんど又は全てを認識する縮重プライマー、及び定常又は連結部配列へアニールするアンチセンスプライマーを使用して、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を実行する。重及び軽鎖可変部のｃＤＮＡを次ぎにクローン化し、重鎖及びκ又はλ定常ドメインのような、それぞれの免疫グロブリン定常部を有するキメラ抗体として、いずれかの適した宿主細胞、例えば、ミエローマ細胞中で発現させる。本明細書において援用される、Babcook, J.S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-48, 1996 、を参照されたい。次ぎに、抗ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒ抗体を前記のように同定し、そして単離することができる。

別の側面において、本発明は、ヒト化抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を作製するための方法を提供する。いくつかの態様において、ラット又はマウスを、抗体産生を可能にする条件下、下記のようにＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒで免疫する。抗体産生細胞を動物から単離し、ミエローマと融合してハイブリドーマを産生し、そして目的の抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体の重及び軽鎖をコードする核酸を単離する。これらの核酸は引き続いて、非ヒト配列の量を減少させるため、即ち、ヒトにおける免疫応答を減少させるために抗体をヒト化するため、当業者には周知の技術を使用して、及び以下にさらに記載するように工学処理する。

別の態様において、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒに対する多様な親和性を有する抗体のレパートリーを含有するライブラリーを提供するため、ファージディスプレー技術を使用することが可能である。例として、ファージディスプレー技術で使用する抗体のライブラリーを調製するための一つの方法は、免疫応答を作り出すため、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒポリペプチドを有するヒト免疫グロブリン座位を含んでなる非ヒト動物を免疫し、免疫化動物から抗体産生細胞を抽出し、抽出した細胞からＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡを生成するためにＲＮＡを逆転写し、プライマーを使用してｃＤＮＡを増幅し、そして抗体がファージ上で発現されるように、ファージディスプレーベクター内へｃＤＮＡを挿入する工程を含んでなる。生じたファージの、ＩＬ−６又はＩＬ−６Ｒポリペプチドに対する免疫反応性を試験する。本発明の組換え抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体は、このように得ることができる。

こうしたライブラリーからの、高親和性ヒト抗体の同定のための技術は、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９１／１７２７１、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９２／１５６７９、ＷＯ９３／０１２８８、ＷＯ９２／０１０４７，ＷＯ９２／０９６９０；Fuchs et al., Bio/Technology 9:1370-1372 (1991); Hay et al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85 (1992); Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989); McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734 (1993); Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Gram et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3576-3580 (1992); Garrad et al., Bio/Technology 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom et al., Nuc. Acid Res. 19:4133-4137 (1991); および Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982 (1991) 、に記載されている。

ファージディスプレーライブラリーを発生するための、商業的に入手可能なキット（例えば、Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, カタログ番号27-9400-01; 及びStratagene SurfZAP(商標) ファージディスプレーキット、カタログ番号240612 ）、ならびにCambridge Antibody Technology PLC (Cambridge, United Kingdom) 及び MorphoSys AG (例えば、HuCAL(商標) GOLD technology, Martinsried, Germany) のような、完全ヒトファージ発現抗体を生成するための、商業的に入手可能なシステムがある。

組換え免疫グロブリンディスプレーライブラリーからの、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体のスクリーニング及び単離に続いて、選択された抗体をコードする核酸を、ディスプレーパッケージから回収し（例えば、ファージゲノムから）、そして標準組換えＤＮＡ技術により、他の発現ベクター内へサブクローン化することが可能である。例えば、ファージ発現抗体をコードするＤＮＡを組換え発現ベクター内へクローン化し、その抗体に適切な哺乳動物宿主細胞又は原核生物細胞内へ導入することが可能である。

医薬組成物
本発明はまた、骨関節炎の治療を必要としている対象の治療のため、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を含んでなる、医薬組成物にも関する。治療は、本発明の１又はそれを越える抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体の、単独での又は薬学的に許容できる担体との投与を含むことができる。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容できる担体」とは、生理学的に適合性である、溶媒、分散媒質、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤など、のいずれか又はすべてを意味する。薬学的に許容できる担体のいくつかの例は、水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせである。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトールのようなポリアルコール、ソルビトール又は塩化ナトリウムが、組成物中に存在することが可能である。薬学的に許容できる物質の追加の例は、抗体の有効期間又は有効性を増強する、湿潤又は乳化剤、保存剤又は緩衝剤のような、湿潤剤又は少量の補助的物質である。

本発明の組成物は、多様な形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能及び注入可能溶液）、分散液又は懸濁液、錠剤、ピル剤、散剤、リポソーム剤及び座剤のような、液体、半固体及び固体剤形であることができる。特定の形は、意図される投与様式及び治療応用に依存する。典型的な組成物は、ヒトの受動免疫に使用するものと類似の組成物のような、注射可能又は注入可能溶液の形である。

治療用組成物は典型的には、製造及び保存の条件下、無菌でありそして安定である。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高薬剤濃度に適した他の規則構造物として製剤することが可能である。無菌注射可能溶液は、上に列挙した成分の一つ又は組み合わせの適切な溶媒中に、必要とされる量の抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を取り込ませ、続いての濾過滅菌により調製することが可能である。一般に、分散液は、基礎分散媒質、及び上に列挙したものからの必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクル内に、活性化合物を取り込むことにより調製する。無菌注射可能溶液の調製のための無菌散剤の場合、調製法は、活性成分に、前の滅菌濾過溶液のいずれかの追加の、所望される成分が加わった粉末を生成する、真空乾燥及び凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散剤の場合の必要とされる粒子サイズの維持により、及び表面活性剤の使用により、維持することが可能である。注射可能溶液の遅延された吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含ませることによりもたらすことが可能である。

特定の態様において、抗体組成物は、移植片、経皮パッチ及びマイクロカプセル化搬送システムを含む制御放出製剤のような、急速な放出に対して抗体を保護するであろう、坦体で調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸のような、生物分解性、生物適合性ポリマーを使用することが可能である。こうした製剤の調製のための多くの方法は、特許請求されているか、又は当業者には一般に知られている。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978) 、を参照されたい。

治療的使用法
別の態様において、本発明は、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を必要とする対象に、その治療有効量を投与することによる、骨関節炎を罹患している対象を治療するための方法を提供する。「治療有効量」とは、特定の対象又は対照集団に、単独で又は別の薬学的剤又は治療と組み合わせて投与した場合、治療している障害又は状態を抑制する、停止する又は改善させるのに十分な量（必要な用量及び期間）を指す。用語「対象」とは、哺乳類綱のメンバーを指す。哺乳類の例には、限定ではなく、ヒト、霊長類、チンパンジー、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、イヌ、ネコ、ヒツジ及びウシが含まれる。例えば、ヒト又は他の哺乳類において、治療有効量は、実験室又は臨床設定において経験的に決定することが可能であり、又は、治療されている特定の疾患及び対象については、米国食品医薬品局又は同等の外国局のガイドラインにより必要とされる量であってもよい。

適切な剤形、投与量及び投与経路の決定は、薬学及び医学分野における通常の技術のレベル内であることを、理解すべきである。抗体の治療有効量は、疾患状態、年齢、性及び個体の体重、及び個体において所望の応答を惹起する抗体の能力のような因子に従って変化してもよい。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が、剤のいずれの毒性又は有害な効果よりも勝っているような量でもある。

抗体は、１回又は複数回で投与することができる。例えば、抗体を、１日３回から６ヶ月又はそれより長い期間毎に１回で投与することができる。投与は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回および６ヶ月に１回のようなスケジュールであることができる。

追加の治療剤と抗体の同時投与（組み合わせ治療）は、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体及び追加の治療剤を含んでなる医薬組成物を投与すること、及び一つが抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体を含んでなり、そして他方（単数又は複数種類）が追加の治療剤（単数又は複数種類）を含んでなる、二つ又はそれより多くの別々の医薬組成物を投与することを包含する。さらに、同時投与又は組み合わせ治療とは、抗体及び追加の治療剤がお互いに同時に投与されている、ならびに、抗体及び追加の治療剤が異なった時に投与される例を指す。例えば、抗体を３日に１回投与することができ、一方、追加の治療剤は１日１回投与する。もしくは、追加の治療剤による障害の治療に先立って又は引き続いて、抗体を投与することができる。抗体及び１又はそれを越える追加の治療剤（組み合わせ治療）は、１回、２回、又は少なくとも状態が治療される、緩和される又は治癒されるまでの期間、投与することができる。

例えば、抗ＩＬ−６又は抗ＩＬ−６Ｒ抗体は、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、ＣＤＰ−８７０及びＨＵＭＩＲＡ（商標）のようなＴＮＦ−α抗体、ＴＮＦα受容体免疫グロブリン融合分子（ＥＮＢＲＥＬ（商標）のような）、ＣＯＸ−２阻害剤（セレコキシブ、ロフェコキシブ、ペレコキシブ、バルデコキシブ及びエトリコキシブのような）、メタロプロテアーゼ−１３阻害剤（好ましくは、ＭＭＰ−１３選択的阻害剤）、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセンのようなプロピオン酸、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン及びイブプロフェン、メフェナム酸のようなフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、フェニルブタゾンのようなピラゾロン、アスピリンのようなサリチル酸、６−（５−カルボキシ−５−メチル−ヘキシルオキシ）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸、カルシウム塩（ゲムカベンカルシウム）、のような非ステロイド性抗炎症薬（「ＮＳＡＩＤ」）、α２δリガンド（ＮＥＵＲＯＴＩＮ（商標）及びＰＲＥＧＡＢＡＬＩＮ（商標）のような）、のような剤、及びコルチコステロイド及びヒアルガン及びシンビスクのようなヒアルロン酸のような関節内治療と同時投与することができる。

本発明の抗体は、経口、経粘膜、頬側、鼻腔内、吸入、静脈内、皮下、筋肉内、非経口又は局所経路を含む、当該技術分野で周知の多様な方法で投与することが可能である。特定の態様において、抗体を、静脈内注入又は注射により投与する。特定の態様において、抗体を、関節内、筋肉内又は皮下注射により投与する。当業者により認められであろうように、投与の経路及び／又は様式は、所望の結果に依存して変化するであろう。

投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように、調整することが可能である。例えば、単一ボーラス（ｂｏｌｕｓ）を投与することが可能であり、数回分割用量を、時間を通して投与することが可能であり、又は用量を、治療状況の緊急性により示されるように、比例して減少させる又は増加させることが可能である。非経口組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬量単位形で製剤することが可能である。本明細書において、投薬量単位形とは、治療されるべき哺乳類対象のための単位投薬量として適した、物理的に分離された単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的坦体が付随し、所望の治療効果を生み出すように計算された、活性化合物の前もって決められた量を含んでいる。

本発明の抗体の、治療有効量の非制限的範囲の例は、１〜４０ｍｇ／ｋｇである。特定の態様において、用量は８〜２０ｍｇである。別の態様において、用量は１０〜１２ｍｇである。特定の態様において、関節内注射のための用量範囲は、１５〜３０ｍｇ／用量であろう。投薬量値は、軽減されるべき状態の型及び重度で変化させることができることに注意するべきである。特定の対象に対し、具体的投与計画は、必要とする個体及び組成物を投与している又は投与を助言している人の専門的判断に従って、時間を通して調整しなければならないこと、そして本明細書に示した投与量範囲は、例示のためのみであり、特許請求された組成物の範囲又は実行を制限することを意図していないことをさらに理解すべきである。

実施例１〜３
材料及び方法
抗ＩＬ−６抗体及び抗ＩＬ−６受容体抗体は、骨関節炎のインビボモデルにおける、定量的又は定性的マーカーを減少させるその能力でアッセイすることが可能である。例えば、骨関節炎のヨード酢酸一ナトリウム−誘導モデル（例えば、Bove et al. (2003) Osteoarthritis and Cartilage 11: 821-830 、を参照されたい）を、荷重アッセイにおけるＩＬ−６抗体の効果を評価するために、ラットにおいて実施することが可能である。

実施例１〜３において、第０日目に、ラットをイソフルオリンで麻酔し、オスＷｉｓｔａｒラットの右後肢膝関節に、膝蓋内靱帯を通して、５０μｌのリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解した１．０ｍｇのモノヨード酢酸（「ＭＩＡ」）を注射し、左後肢膝関節に、膝蓋内靱帯を通して、５０μｌの生理食塩水を注射した。関節内へのＭＩＡの注射は、解糖系の阻害、そして最終的に周囲の軟骨細胞の死を生じる。抗体投与の前日、ＭＩＡ注射後の第６日目又は第１３日目に、オスＷｉｓｔａｒラット（１５０ｇ）の関節炎右後肢関節及び生理食塩水注射左後肢関節間の後足重量差を、モデル２ＫＧ（Linton Instrumentation, Norfolk, United Kingdom ）インキャパシタンステスター（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｃｅｔｅｓｔｅｒ）で決定した。インキャパシタンステスターは、ラット前肢を支える、外向きに傾斜した前壁、二つの重量感受パッド（各後肢について一つ）を備えた、上部チャンバーを有する。

ラットは次ぎに、関節内注射を経て又は腹腔内に、１、３、１０、２０又は３０μｇのポリクローナルヤギ抗ラットＩＬ−６抗体（R&D Systems Inc., Minneapolis, MN ）か又は、ポリクローナル抗ラットＩｇＧ抗体（製品番号 R 5005, Sigma, St. Louis, MO ）を含有する５０μｌのＰＢＳを、ＭＩＡ注射後、第７日目又は第１４日目にさらに投与し、抗体注射０〜２４時間後に後足重量差を測定した。

後足関節機能における変化のパーセント阻害は、同一の時間点で、処理動物対対照動物の後足重量配分におけるパーセント変化として計算した（例えば、注射２時間後での、ポリクローナル抗ＩＬ−６抗体対ポリクローナル抗ＩｇＧ抗体）。例えば、

式中：
ΔＷ_ｃは、注射後第７日目又は第１４日目の特定の時間点（例えば、１、４又は２４時間）で測定した、健康な左肢及び抗ラットＩｇＧ抗体のみを投与した対照動物の関節炎肢間の後肢重量差であり；そして
ΔＷ_Ｇは、ΔＷ_ｃを決定するために使用した同一の時間点で測定した、健康な左肢及び抗ラットＩＬ−６抗体を投与した動物の関節炎肢間の後肢重量差である。

実施例１
材料及び方法で上に記載したＭＩＡモデルを、以下のように実施した：上で記載したように、ラットをＭＩＡで誘導し、ＭＩＡ注射後第７日目に、１、３、１０、２０又は３０μｇのポリクローナルＩＬ−６抗体又はポリクローナルＩｇＧ抗体を、５０μｌ容量のＰＢＳで右関節炎膝に、そして５０μｌ容量のＰＢＳを左対照膝に投与した。各用量を、６匹のラットに注射した。抗体注射１時間後、重量差を測定した。ポリクローナルＩｇＧ抗体処理ラットと比較した、ＩＬ−６抗体処理ラットの後足重量配分における変化のパーセント阻害を表１に報告した。ＩＬ−６抗体の２０及び３０マイクログラム用量は、ポリクローナルラットＩｇＧに対して、後足重量配分における変化を有意に阻害した（ｐ＜０．０５）。データは、平均パーセント阻害±平均の標準偏差（ＳＥＭ）として表されている。

実施例２
材料及び方法で上に記載したＭＩＡモデルを、以下のように実施した：上で記載したように、ラットをＭＩＡで誘導し、ＭＩＡ注射後第１４日目に、３０μｇのＩＬ−６抗体を、５０μｌ容量のＰＢＳで右関節炎膝に、そして５０μｌ容量のＰＢＳを左対照膝に投与した。各用量を、８匹のラットに注射した。抗体注射１時間、４時間及び２４時間後、重量配分を測定し、表２に平均±平均の標準偏差として報告した。ＩＬ−６抗体の３０マイクログラム用量は、時間０（抗体注射前）に対して、１、４及び２４時間での後足重量配分における変化を有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。

実施例３
材料及び方法で上に記載したＭＩＡモデルを、以下のように実施した：上で記載したように、ラットをＭＩＡで誘導し、ＭＩＡ注射後第１４日目に、３０μｇのＩＬ−６抗体を、５０μｌ容量のＰＢＳで腹腔内注射により投与した。各用量を、８匹のラットに注射した。重量配分（ΔＷ_Ｇ）を測定し、抗体注射直前、抗体注射１時間後及び４時間後の時点について、表３に、平均ΔＷ_Ｇ±平均の標準偏差として報告した。ＩＬ−６抗体の３０マイクログラム用量は、時間０（抗体注射前）に対する後足重量配分における変化を有意に阻害しなかった。

本明細書に記載された実施例及び態様は、例示の目的のみであり、それらの様相における多様な修正又は変更が当業者には示唆されるであろうが、それらは本出願及び付随する特許請求の範囲の精神及び範囲内に包含されるべきである。本明細書において引用したすべての出版物、特許及び特許出願は、全ての目的のため、その全体が本明細書において援用される。

Claims

骨関節炎を治療する方法であって：
骨関節炎を罹患している対象に、薬学的に許容できる坦体、及び抗ＩＬ−６抗体及び抗ＩＬ−６受容体抗体から成る群より選択される治療有効量の１又はそれを越える剤を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
前記医薬組成物が、関節内又は静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
前記剤が、モノクローナルＩＬ−６受容体抗体である、請求項１に記載の方法。
前記ＩＬ−６受容体抗体が、抗ヒトＩＬ−６受容体抗体である、請求項３に記載の方法。
前記ＩＬ−６受容体抗体が、トシリズマブである、請求項３に記載の方法。
前記剤が、モノクローナルＩＬ−６抗体である、請求項１に記載の方法。
前記ＩＬ−６抗体が、抗ヒトＩＬ−６抗体である、請求項６に記載の方法。
前記ＩＬ−６抗体が、ＣＮＴＯ３２８である、請求項６に記載の方法。
前記医薬組成物が関節内に投与される、請求項６に記載の方法。
前記医薬組成物が静脈内に投与される、請求項６に記載の方法。
６−（５−カルボキシ−５−メチル−ヘキシルオキシ）−２，２−ジメチル−ヘキサン酸カルシウム塩、非ステロイド性抗炎症薬、ピロキシカム、ジクロフェナク、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、イブプロフェン、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、フェニルブタゾン、アスピリン、コルチコステロイド、ヒアルガン及びシンビスクから成る群より選択される１又はそれを越える剤を投与することさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
パレコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ及びエトリコキシブから成る群より選択される１又はそれを越える剤を投与することさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
哺乳類における骨関節炎の治療のための医薬品の製造における、抗ＩＬ−６抗体及び抗ＩＬ−６受容体抗体から成る群より選択される１又はそれを越える剤の使用。