BRPI0715115A2

BRPI0715115A2 - anticorpo monoclonal isolado, molÉcula de Ácido nucleico isolada, vetor de expressço, cÉlula hospedeira, mÉtodos para tratar uma doenÇa, e para produzir um anticorpo monoclonal isolado, uso do anticorpo monoclonal isolado, e, composiÇço farmacÊutica

Info

Publication number: BRPI0715115A2
Application number: BRPI0715115-2A
Authority: BR
Inventors: Ernest S Smith; Wei Wang
Original assignee: Vaccinex Inc
Priority date: 2006-08-03
Filing date: 2007-08-03
Publication date: 2013-06-04
Also published as: CO6150192A2; KR20090039801A; AU2007282023A1; CR10563A; KR101479537B1; IL196550A0; EP2064241A2; CN101563365B; NO20090224L; MA30653B1; MX2009001110A; AU2007282023B2; WO2008019061A2; EP2064241B1; CA2657763C; EA200900037A1; US7919095B2; WO2008019061A3; CA2657763A1; ZA200900514B

Abstract

ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR DE EXPRESSçO, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS PARA TRATAR UMA DOENÇA, E PARA PRODUZIR UM ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, USO DO ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, E, COMPOSIÇçO FARMACÊUTICA. A presente invenção fornece novos anticorpos monoclonais que ligam-se especificamente ao IL-6. os anticorpos da invenção compreendem uma região de cadeia pesada variável (VH) selecionada de qualquer das regiões VH divulgadas neste bem como variantes de aminoácido deste, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) selecionada de qualquer das regiões VL divulgadas neste bem como variantes de aminoácido destes. A invenção também fornece métodos de tratamento de doenças e distúrbios associados coma expressão e/ou atividade IL-6.

Description

"ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS PARA TRATAR UMA DOENÇA, E PARA PRODUZIR UM ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, USO DO ANTICORPO MONOCLONAL ISOLADO, E, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA" FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO Campo da invenção

A presente invenção diz respeito ao campo dos anticorpos monoclonais e seu uso no tratamento de doenças e distúrbios. Mais especificamente, a invenção diz respeito aos anticorpos monoclonais que especificamente ligam-se à citocina IL-6, e os usos dos anticorpos para o tratamento das doenças e distúrbios associados com a atividade ou expressão IL-6.

Técnica relatada

A interleucina-6 (IL-6) é uma glicoproteína secretada de 22 a 27 kDa que exibe as atividades de desenvolvimento estimulador e pró- infiamatórios. IL-6 é também conhecido como interferon-P2 (IFN-P2), proteína 26 kDa induzida por IL-1, fator estimulador de hepatócito, fator de diferenciação de célula T citotóxica, e fator estimulador de célula B. (Trikha et al., Clin. Câncer Res. 9:4653-4665 (2003)). IL-6 é secretado por vários tipos de células. IL-6 exercem estas atividades através da ligação por um complexo receptor de alta afinidade que consiste de duas membranas de glicoproteínas: um receptor de componente 80 kDa que liga-se ao IL-6 com menor afinidade (IL-6R) e um componente transdutor de sinal de 130 kDa (gp 130) que não ligam-se ao IL-6 por si mesmo, mas é requerido pela ligação de alta afinidade de IL-6 pelo complexo, (ver FIG. 11; BioCarta). IL-6R pode ser clivado por uma metaloproteinase de transmembrana para produzir o IL-6R solúvel. Os níveis sangüíneos IL-6 são elevados em numerosas infecções, inflamatória, e doenças autoimunes e em câncer em associação com síntese aumentada de outras citocinas estimulada pela infecção, trauma, e desafio imunológico. (Trikha et al, Clin. Câncer Res. 9:4653-4665 (2003)).

IL-6 foi implicado em várias doenças e distúrbios tal como

mieloma múltiplo (Rossi et al., Bone Marrow Transplantation 36:771-779 (2005)), linfomas (Emilie et al., Blood 84:2472-2479 (1994)), distúrbios neurológicos tal como neurodegeneração, astrocitose e angiogênese cerebral (Campbell et al., Proc. Natl. Acad. Sei. 90:10061-10065 (1993)), distúrbios autoimunes (tal como, por exemplo, artrite reumatóide), doenças inflamatórias, doença de Alzheimer, enfarte do miocárdio, doença de Paget, osteoporose, tumores sólidos, cânceres de próstata e de bexiga (Trikha et al., Clin. Câncer Res. 9:4653-4665 (2003)), choque séptico, transplante, infecções agudas do sistema nervoso central, mixoma cardíaco (Wijdenes et al., Mol. Immunol. 28:1183-1192 (1991)), caquexia que induz tumor (Cahlin et al., Câncer Res. 60:5488-5489 (2000)), depressão associada ao câncer, e edema cerebral secundários aos tumores cerebrais (Musselman et al., Am. J. Psychiatry 158:1252-1257 (2001)).

Além disso, os anticorpos anti-IL-6 foram mostrados ser efetivos no tratamento de diversas doenças e distúrbios. Por exemplo, os anticorpos monoclonais anti-IL-6 foram mostrados para bloquear a proliferação das células de mieloma ambas in vivo e in vitro. (Rossi et al., Bone Marrow Transplantation 36:771-779 (2005)). A administração de anticorpos anti-IL-6 para pacientes de artrite reumatóide crônica foi observado para aliviar os sintomas da doença (Wendling et al, J. Rheumatol. 20:259-262 (1993)). Os anticorpos anti-IL-6 também foram mostrados ser efetivos no tratamento de linfoma associado a AIDS (Emilie et al., Blood 84:2472-2479 (1994)), e carcinoma celular renal metastático (Blay et al, Int. J. Câncer 72:424-430 (1997). Os resultados químicos que envolve a administração de anticorpos anti-IL-6 para tratar várias outras doenças e distúrbios são resumidos em Trikha et al, Clin. Câncer Res. 9:4653-4665 (2003).

Os anticorpos anti-IL-6 são conhecidos na técnica. Por exemplo, anticorpos monoclonais anti-IL6 humanos reformados (isto é, humanizados) derivados a partir de um anticorpo monoclonal de camundongo (SK2) são apresentados na Patente US N°. 5.618.700 e 5.856.135. Outros anticorpos anti-IL-6 incluem tanto quanto o anticorpo conhecido CLB-6/8 (Brakenhoff et al, J. Immunol. 145:561-568 (1990)) e uma forma quimérica deste, conhecido como cCLB8 (Van Zaanen et al, J. Clin. Invest. 98:1441- 1448 (1996). Um anticorpo monoclonal IL-6 de murino (mAb) denominado B-E8 foi clinicamente usado para tratar várias doenças e distúrbios associados ao IL-6. (ver, por exemplo, Bataille et al., Blood 86:685-691 (1995), Rossi et al., Bone Marrow Transplantation 36:771-779 (2005), Haddad et al., Blood 15:1590-1597 (2001), e Emilie et al., Blood 84:2472-2479 (1994)).

O uso de anticorpos de murino, incluindo anticorpos anti-IL-6 de murino, é comprometido por problemas tal como seletividade variável para o antígeno alvo, vida média curta do soro, e o desenvolvimento do anti- anticorpos humano de murino (HAMA). Estas séries são reduzidas, até certo ponto, pelo desenvolvimento de anticorpos quiméricos (em que as regiões constates de roedores são substituídas por suas contrapartes humanas) ou anticorpos humanizados/enxertados ou CDR/reformados (em que apenas os CDR são de origem não humana), (ver geralmente, Vaughan et al., Nat. Biotech. 16:535-539 (1998)). Entretanto, diversas limitações práticas são associadas com anticorpos humanizados, tal como (1) o número limitado de opções por vias para a construção eficiente de mAb humanizados, (2) a necessidade para o conhecimento detalhado da estrutura ou modelagem do anticorpo, (3) imunogenicidade não predita devido a um compromisso entre retenção de afinidade e aminoácidos estranhos introduzidos, e (4) limitações no repertórios dos anticorpos ao animal em que o mAb precursor originou-se. (Vaughan et al., Nat. Biotechnol. 16:535-539 (1998)). Estas limitações podem ser intituladas pelo uso de anticorpos monoclonais humanos. (Lonberg, Nat. Biotechnol. 23:1117-1125 (2005)).

Existe, portanto, uma necessidade na técnica para os anticorpos monoclonais adicionais anti-IL-6 por aplicações clínicas, incluir mAb anti-IL-humanos. A presente invenção intitula esta necessidade existente na técnica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece novos anticorpos monoclonais que ligam-se especificamente ao IL-6. Os anticorpos da invenção compreendem uma região de cadeia pesada variável (VH) selecionada de qualquer das regiões VH divulgadas neste bem como variantes de aminoácido deste, e/ou uma região de cadeia leve variável (VL) selecionada de qualquer das regiões VL divulgadas neste bem como variantes de aminoácido deste.

Em uma forma de realização exemplar da invenção, VH múltiplos e regiões VL foram obtidas a partir de uma biblioteca de VH humanos e genes VL. As cadeias pesadas de anticorpos contendo regiões VH humanas obtidas a partir da biblioteca foram formadas em pares com cadeias leves de um mAb anti-IL-6 de murino conhecido (isto é, B-E8). De outra maneira, as cadeias leves de anticorpos contendo regiões VL humanas obtidas a partir da biblioteca foram formadas em pares com cadeias pesadas de um mAb anti-IL-6 de murino conhecido (isto é, B-E8). Os anticorpos resultantes foram avaliados por sua capacidade de ligar-se especificamente a um antígeno IL-6. A partir deste processo, dezoito VL humanos (representado pela SEQ ID N°: 1 a 18) e sete VH humanos (representado pela SEQ ID N°: 19 a 25) foram identificados.

Todos os VL identificados foram formados pares cruzados com todos dos VH identificados. Os anticorpos resultantes foram testados para afinidade da ligação ao IL-6 por ELISA e para a capacidade de bloquear proliferação celular induzida por IL-6. A partir deste processo, 33 VH/VL humanos em formação de pares foram identificados que exibem afinidade de ligação substancial e atividade bloqueadora.

As substituições de aminoácido foram introduzidas em certos VH humanos e VL identificados pelo processo descrito acima. As variantes VH e VL foram formadas em pares com VL e VH humanos, respectivamente, e os anticorpos resultantes foram novamente testados pela afinidade de ligação de IL-6 e atividade bloqueadora. A partir destes experimentos, diversos anticorpos foram identificados com atividades de ligação e bloqueadora comparável aquele do anticorpo B-E8 de murino original (ou uma quimera deste). A presente invenção portanto também inclui anticorpos que compreende qualquer combinação das variantes VH e VL obtidas pelo processo resumido acima e descrito em detalhes nos Exemplos abaixo.

A invenção também inclui moléculas de ácido nucleico que codificam qualquer uma das regiões VH e/ou VL divulgadas neste, e vetores e células hospedeiras que compreende as moléculas de ácido nucleico.

Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção demonstram especificidade de espécies, ligando ou auxiliando na detecção do IL-6 humano. Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção ligam-se ou auxiliam na detecção de IL-6 de macacos e humanos mas não IL-6 de murino ou rato.

Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma de murino B9 (ECACC) ou células de mieloma U266 humanas.

Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção ligam-se ao IL-6 mas não aos outros Membros da super-família IL-6.

Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor.

A invenção também inclui métodos de produção de um da

presente invenção, o método que compreende: (i) cultivar uma célula hospedeira que expressa uma ou mais seqüências de ácidos nucleicos que codificam um anticorpo da presente invenção, e (ii) recuperação de um anticorpo a partir do meio de cultura. A invenção também inclui composições farmacêuticas que

compreende um anticorpo da presente invenção. Este é considerado que a composição farmacêutica ainda pode compreender um veículo farmaceuticamente aceitável, um adjuvante, ou uma combinação destes.

A invenção também inclui métodos de prevenir ou tratar as doenças ou distúrbios associados com a atividade ou expressão IL-6, em que os métodos compreendem administrar um anticorpo da presente invenção a um paciente em necessidade deste. Em uma forma de realização, os métodos compreendem administrar uma quantidade eficaz terapêutica ou profilaticamente da composição farmacêutica que compreende um anticorpo da presente invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável a um paciente em necessidade deste. Em algumas formas de realização, a doença ou distúrbio inclui qualquer doença ou distúrbio mediado por, associados com, ou causado pela ação de IL-6. Em algumas formas de realização, a doença ou distúrbio a ser tratada é selecionada do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associados com angiogênese aberrante ou inapropriada, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopática, e condições fibróticas.

A invenção também inclui o uso de um anticorpo da presente invenção para a fabricação do medicamento para o tratamento da doença ou distúrbio mediado por, associado com, ou causado pela ação de IL-6. Em uma forma de realização particular, a invenção também é direcionada ao uso de um anticorpo da presente invenção para a fabricação do medicamento para o tratamento da doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associado com angiogênese aberrante ou inapropriada, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopática, e condições fibróticas.

A invenção também inclui um anticorpo da presente invenção para o uso no tratamento da doença ou distúrbio mediado por, associado com, ou causado pela ação de IL-6. Em uma forma de realização particular, a invenção também é direcionada ao uso de um anticorpo da presente invenção para a fabricação do medicamento para o tratamento da doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associado com angiogênese aberrante ou inapropriada, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopática, e condições fibróticas. BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

A FIG. 1 mostra um alinhamento das regiões VH humanas exemplares, representado pela SEQ ID N°: 19 a 25, que pode ser incluída dentro dos anticorpos da invenção.

A FIG. 2 mostra os resultados de um ensaio de inibição da ligação de IL-6 em que o IL-6 recombinante humano biotinilado foi incubado com vários anticorpos anti-IL-6, seguido pela adição de células U266 que carregam o receptor IL-6. A análise de citometria de fluxo foi usada para quantificar a inibição percentual da ligação IL-6 em várias concentrações de anticorpo IL-6.

A FIG. 3 descreve um processo geral usado para seleção de afinidade de mAb a partir das bibliotecas geradas pela mutagênese direcionada ao local.

A FIG. 4 mostra os resultados de um ensaio de inibição da ligação de IL-6 em que o IL-6 recombinante humano foi incubado com vários anticorpos anti-IL-6, seguido pela adição de células U266 que carregam o receptor IL-6. Um anticorpo IL-6 de camundongo purificado e um anticorpo secundário anti-cabra policlonal conjugado por APC foram então adicionados. A análise de citometria de fluxo foi usada para quantificar a atividade bloqueadora de IL-6 em várias concentrações de anticorpo IL-6.

As FIGs. 5A e 5B mostram os resultados dos experimentos da especificidade de ligação em que um mAb 88 de controle (B-E8 quimérico) (FIG. 5A), ou um candidato, mAb 1339 humano melhorado pela afinidade (FIG. 5B) foram testados por ELISA para a ligação de um painel de membros da super-família IL-6.

As FIGS. 6A e 7A mostram os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de exibir a interação entre IL-6 e a expressão do receptor IL-6 em células U266, como analisado pela citometria de fluxo. Cada coluna representa um meio de três experimentos +/- separação padrão.

Na FIG. 6A, a concentração de mAb foi de 0,5 μg/ml. Para cada mAb, as quatro colunas da esquerda a direita indicam a inibição percentual da ligação IL-6 ao receptor IL-6 em concentrações IL-6 de 100,0, 50,0, 25,0, e 12,5 ng/ml, respectivamente.

Na FIG. 7A, a concentração de IL-6 foi de 500 ng/ml. Para cada mAb na FIG. 7A, as oito colunas da esquerda a direita indicam a inibição percentual da ligação IL-6 ao receptor IL-6 em concentrações mAb de 5000, 2500, 1250, 625,0, 156,3, 78,1, e 39,1 ng/ml, respectivamente.

As FIGs. 6B e 7B mostram os resultados de experimentos representativos simples em 100 ng/ml de IL-6 que ilustram o efeito inibidor de vários mAbs anti-IL-6 na interação entre IL-6 e a expressão do receptor IL-6 em células U266, como analisado pela citometria de fluxo. As linhas de sólido negro representam 100 ng/ml de IL-6 sozinho na ausência de mAb; as linhas sólidas leves representam 100 ng/ml de IL-6 na presença de mAb; e as linhas tracejadas representam mAb sozinho na ausência de IL-6. Na FIG. 6B, a concentração de mAb, se presente, foi de 0,5 μg/ml de mAb. Na FIG. 7B, a concentração de mAb, se presente, foi de 0,3 μ^ιηΐ de mAb.

A FIG. 8 é um resumo do mapa que mostra os resultados de três ensaios de inibição da ligação IL-6 separados.

A FIG. 9 é um mapa do vetor do gene duplo mAb 1339 (que expressa uma cadeia pesada contendo a região variável da cadeia pesada Hl 579 e uma cadeia leve contendo a região variável da cadeia leve L298).

A FIG. 10 mostra os rendimentos de mAb obtidos com várias linhas celulares com base em CHO isoladas que expressam o vetor do gene duplo mAb 1339.

A FIG. 11 é uma representação esquemática dos caminhos de sinalização IL-6 (disponível em BioCarta).

A FIG. 12 mostra os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de exibirem a proliferação dependente de IL-6 da linha celular de mieloma B9 de murino (ECACC). Capa IgGl e mB-Zl são anticorpos de controle de isotipo IgGl de humano e camundongo, respectivamente. Para cada mAb, as sete colunas da esquerda a direita indicam a inibição percentual da proliferação celular B9 induzida por IL-6 (10 μ§/πι1) em concentrações de mAb de 100, 10, 1, 0,1, 0,01, 0,001, e 0,0001 ng/ml, respectivamente. Cada coluna representa um meio de três experimentos +/- separação padrão.

A FIG. 13 mostra os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de exibirem a proliferação dependente de IL-6 da linha celular de mieloma U266 humano. Para cada mAb, as seis colunas da esquerda a direita indicam a inibição percentual da proliferação celular U266 que induz IL-6 (500 pg/ml) em concentrações mAb de 1000, 333, 111, 37, 12, e 4 ng/ml, respectivamente. Cada coluna representa um meio de três experimentos +/- separação padrão.

As FIGs. 14 e 15 mostram os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de detectar IL-6 de murino (FIG. 14) ou IL-6 de rato (FIG. 15) por ELISA. Os controles de anticorpo policlonal biotinilados (pAb) foram IL-6 anti-humano, IL-6 anti-camundongo, IL-6 anti-rato, e IL-2 anti-humano. Para a amostra "0," nenhum anticorpo foi adicionado. Para cada amostra, as quatro colunas da esquerda a direita indicam a ótima densidade associada com a ligação a 100 ng/ml de IL-6 de murino ou rato em concentrações de anticorpo de 100, 50, 25, e 12,5 ng/ml, respectivamente. Cada coluna representa um meio de dois experimentos +/- separação padrão.

A FIG. 16 mostra os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de detectar IL-6 intracitoplásmico natural em monócitos humanos a partir de células mononucleares sangüíneas periféricas (PBMNC) ativadas por 24 horas com LPS. As linhas espessadoras representam a detecção de mAb de IL-6 a partir de monócitos estimulados por LPS enquanto as linhas mais finas representam ausência de anticorpo adicionado.

As FIG. 17 e 18 mostram os resultados dos experimentos em que os mAb específicos por IL-6 foram testados por sua capacidade de detectar IL-6 a partir do plasma. Uma amostra de "apenas soro" pelo qual nenhum mAb foi adicionado servindo como uma referência. A redução no sinal de densidade óptica nas amostras de anticorpo específico por IL-6 em comparação às amostras "apenas soro" indicam a interação do soro IL-6 com os anticorpos. Os anticorpos foram testados em 5 μg/ml.

Na FIG. 17, as quatro colunas da esquerda a direita indicam a ótima densidade associada com a detecção do IL-6 humano em soro humano em diluições de soro de 1, 1/2, 1/4, e 1/8. Cada coluna representa um meio de dois experimentos +/- separação padrão. Na FIG. 18, as quatro colunas da esquerda a direita indicam a ótima densidade associada com a detecção de IL-6 de macacos no soro do macaco reso em diluições do soro, de 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, e 1/640.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A não ser de outra maneira definida, todos os termos técnicos e científicos usados neste tem um significado comumente entendido por uma pessoa habilitada na técnica, para a técnica pelo qual esta invenção pertence. ANTICORPOS

A presente invenção fornece anticorpos monoclonais que especificamente ligam-se ao IL-6.

Como usados neste, o termo "anticorpo" inclui moléculas de imunoglobulina que compreende quatro cadeias de polipeptídeos, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações de bissulfeto. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada (abreviada neste como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é compreendida de três domínios, CHI, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é compreendida de uma região variável de cadeia leve (abreviada neste como VL) e uma região constante de cadeia leve. As cadeias leves de anticorpos (imunoglobulinas) de qualquer espécie vertebrada pode ser designada por um ou dois tipos claramente distintos, denominado capa (κ) e lambda (λ), com base nas seqüências de aminoácidos de seus domínios constantes. As regiões variáveis de cadeias leves de capa são referidas neste como VK. A expressão VL, como usados neste, é pretendido a incluir ambas as regiões variáveis de cadeias leve e leve do tipo capa (VK) e de cadeias leves do tipo lambda. A região constante da cadeia leve é compreendida de um domínio, CL. As regiões VH e VL incluem regiões de hipervariabilidade, regiões determinadas complementares denominadas (CDRs), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cadum VH e VL é composta de três CDRs e quatro FRs, dispostos a partir do terminal amino ao terminal carbóxi na seguinte ordem: FRl - CDRl - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4.

Dependendo da seqüência de aminoácido do domínio constante de sua cadeia pesada, os anticorpos podem ser designados a diferentes classes. Existem cinco maiores classes de anticorpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, e diversos destes podem ser ainda divididos em sub- classes (isotipos), por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, e IgA2. Os domínios constante de cadeia pesada que correspondem às classes diferentes de anticorpos que são denominadas α, δ, ε, γ, e μ, respectivamente. As estruturas de sub-unidades e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas. A presente invenção inclui anticorpos de qualquer uma das classes ou sub-classes mencionadas acima (isotipos).

O termo "anticorpo" como usado neste também é pretendido abranger anticorpos, fragmentos de digestão, porções especificadas e variantes destas, incluindo anticorpo miméticos ou porções que compreendam anticorpos que imitam a estrutura e/ou função de um anticorpo ou fragmento específico ou porção deste, incluindo fragmentos e anticorpos de cadeia simples destes; cada um contendo pelo menos um CDR. Os fragmentos funcionais incluem fragmentos de ligação de antígenos que ligam-se a um antígeno IL-6. Por exemplo, fragmentos de anticorpos capazes da ligação ao IL-6 ou uma porção deste, incluindo, mas não limitando a fragmentos Fab (por exemplo, pela digestão de papaína), facb (por exemplo, pela digestão de plasmina), pFc' (por exemplo, pela digestão de pepsina ou plasmina), Fd (por exemplo, pela digestão de pepsina, redução parcial e re-agregação), Fv ou scFv (por exemplo, pelas técnicas biológicas moleculares), são abrangidos pela presente invenção. Os fragmentos de anticorpos também são pretendidos incluir, por exemplo, anticorpos anulados pelo domínio, diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpo de cadeia simples, e anticorpos multiespecíficos formado dos fragmentos de anticorpos.

O termo "anticorpo monoclonal," como usado neste, refere-se a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos homogêneos substancialmente, por exemplo, os anticorpos individuais que compreende a população são idênticos substancialmente exceto pelas mutações de ocorrência natural possíveis ou variações menores pós-tradução que pode estar presente. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um local antigênico simples. Além disso, em contraste às preparações de anticorpo convencional (policlonal) que tipicamente incluem anticorpos diferentes direcionados contra determinantes diferentes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um determinante simples no antígeno. O modificador "monoclonal" indica a característica do anticorpo como sendo obtido de uma população de anticorpos homogênea substancialmente, e não será construída como a produção requerida do anticorpo por qualquer método particular. Os anticorpos monoclonais da presente invenção são preferivelmente feitos pelo métodos de DNA recombinantes ou são obtidos pelos métodos de avaliação como descrito em outra parte destes.

O termo "anticorpos monoclonais," como usado neste, inclui anticorpos "quimérico" (imunoglobulinas) em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica com ou homólogo às seqüências correspondentes nos anticorpos derivados a partir de uma espécie particular ou que pertence a uma classe ou sub-classe de anticorpo particular, enquanto como o remanescente das cadeias são idênticas com ou homólogo das seqüências correspondentes em anticorpos derivados a partir de uma outra espécie (por exemplo, camundongo ou rato) ou que permite uma outra classe ou sub-classe de anticorpo, bem como os fragmentos de tais anticorpos, contanto que estas exibem a atividade biológica desejada (Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:6851-6855 (1984)). Os anticorpos quiméricos de interesse neste incluem anticorpos "primatizados" que compreende seqüências de ligação por antígeno de domínio variável derivados a partir de um primata não humano (por exemplo, Old World Monkey, tal como macaco babuíno, reso ou cinomólogo) e seqüências de região constantes humanas (Patente US N°. 5.693.780).

Deste modo, a presente invenção inclui, por exemplo, anticorpos quiméricos monoclonais que compreende uma cadeia pesada quimérica e/ou uma cadeia leve quimérica. A cadeia pesada quimérica pode compreender qualquer uma das regiões variáveis de cadeia pesada (VH) descritas neste ou mutantes ou variantes destes fundidos a uma região constante da cadeia pesada de um anticorpo não humano. A cadeia leve quimérica pode compreender qualquer uma das regiões variáveis da cadeia leve (VL) descritas neste ou mutantes ou variantes deste fundidas a uma região constante de cadeia leve de um anticorpo não humano.

O termo "anticorpo humano", como usado neste, inclui anticorpos tendo regiões variáveis e constantes correspondentes às seqüências de imunoglobulina de linha germinativa humana como descrito por Kabat et al. (ver Kabat, et ai. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department de Health and Human Services, NIH Publication N°. 91-3242). Os anticorpos humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados pela seqüência de imunoglobulina da linha germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas pela mutagênese aleatória ou de local específico in vitro ou pela mutação somática in vivo), por exemplo nos CDR e em particular CDR3. O anticorpo humano pode ter pelo menos uma posição substituída com um resíduo de aminoácido, por exemplo, um resíduo de aminoácido que intensifica a atividade que não é codificada pela seqüência de imunoglobulina da linha germinativa humana. No contexto da presente invenção, o anticorpo humano pode ter até vinte posições substituídas com resíduos de aminoácidos que não são parte da seqüência de imunoglobulina da linha germinativa humana. Em outras formas de realização, até dez, até cinco, até três ou até duas posições são substituídas. Entretanto, o termo "anticorpo humano", como usado neste, não é pretendido a incluir os anticorpos em que as seqüências de CDR derivadas da linha germinativa de uma outra espécie de mamífero, tal como um camundongo, foi enxertado em seqüências estruturais humanas.

A frase "anticorpo humano recombinante" inclui anticorpos humanos que são preparados, expressados, criados ou isolados pelas maneiras recombinantes, tal como anticorpos expressados usando um vetor de expressão recombinante transferido em uma célula hospedeira, anticorpos isolados a partir de um recombinante, biblioteca de anticorpo humano combinatória, anticorpos isolados a partir de um animal que é transgênico por genes de imunoglobulina humano, ou anticorpos preparados, expressados, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolve a união de seqüências do gene de imunoglobulina humano a outras seqüências de DNA. Tais anticorpos humanos recombinantes tem regiões constantes e variáveis derivados das seqüências de imunoglobulina de linha germinativa humana (ver Kabat, Ε. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department de Health and Human Services, NIH Publication N°. 91-3242). De acordo com a presente invenção, os anticorpos humanos recombinantes inclui a seqüência de imunoglobulina da linha germinativa humana que foi submetida à mutagênese in vitro (ou, quando um animal transgênico para as seqüências Ig humanas são usadas, in vivo na mutagênese somática) e deste modo as seqüências de aminoácidos das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são seqüências que, enquanto os derivados a partir de um e que diz respeito as seqüências VH e VL da linha germinativa humana, pode não existir naturalmente dentro do repertório da linha germinativa do anticorpo humano in vivo. Em certas formas de realização, entretanto, tais anticorpos recombinantes são os resultados do método da mutagênese seletiva ou retro-mutação ou ambos.

Os anticorpos da presente invenção podem ser anticorpos isolados. Um "anticorpo isolado," como usado neste, inclui um anticorpo que é substancialmente livre de outros anticorpos tendo diferentes especifícidades antigênicas. Além disso, um anticorpo isolado pode ser substancialmente livre de outros materiais e/ou químicas celulares.

Os anticorpos da presente invenção preferivelmente ligam-se especificamente a um antígeno IL-6. Como usados neste, "um antígeno IL-6" é pretendido a incluir, por exemplo, a proteína ou um fragmento IL-6 completo da proteína IL-6. O termo "antígeno IL-6" é pretendido abranger IL- 6 de ocorrência natural (por exemplo, IL-6 purificado a partir de uma célula que expressa IL-6 sob condições normais) bem como IL-6 recombinante e variantes e mutantes destes. Preferivelmente, o antígeno IL-6 é capaz da ligação ao receptor IL-6.

Um anticorpo da presente invenção liga-se especificamente a um antígeno IL-6 se, por exemplo, o anticorpo liga-se a um antígeno IL-6 e não mostrará qualquer ligação significante de nenhuma molécula IL-6. Em certas formas de realização, um anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6 se este liga-se a um antígeno IL-6 com uma afinidade que é pelo menos 1000 vezes, pelo menos 500 vezes, pelo menos 200 vezes, pelo menos 100 vezes, pelo menos 90 vezes, pelo menos 80 vezes, pelo menos 70 vezes, pelo menos 60 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 40 vezes, pelo menos 30 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 10 vezes ou pelo menos 2 vezes maior do que a afinidade com que este liga-se a um outro antígeno do que um antígeno IL-6.

Se um anticorpo da invenção liga-se especificamente a um antígeno IL-6 pode ser determinado, por exemplo, por um ensaio de ligação tal como um ELISA, utilizando um painel de antígenos incluindo um antígeno IL-6 bem como pelo menos um outro não antígeno IL-6. Um método exemplar para a especificidade avaliada é apresentada no Exemplo 5, abaixo. Existe, um anticorpo anti-IL-6 humano da invenção (mAb 1339) foi testado por ELISA para a ligação de um antígeno não relatado tal como insulina humana, albumina de soro humano, hemoglobina humana, e albumina de soro bovino. Visto que nenhuma ligação ao não antígeno IL-6s foi observado, o mAb 1339 foi considerado ligar-se especificamente ao IL-6.

Em certas formas de realização, um anticorpo da presente invenção liga-se especificamente ao IL-6 mas não a outros membros da super- família IL-6. Em certas formas de realização, um anticorpo da invenção liga- se especificamente a um antígeno IL-6 se este liga-se a um antígeno IL-6 com uma afinidade que é de pelo menos 1000 vezes, pelo menos 500 vezes, pelo menos 200 vezes, pelo menos 100 vezes, pelo menos 90 vezes, pelo menos 80 vezes, pelo menos 70 vezes, pelo menos 60 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 40 vezes, pelo menos 30 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 10 vezes ou pelo menos 2 vezes maior do que a afinidade com que este liga-se a um membro da super-família de IL-6 tal como, por exemplo, CNFT, oncostatina M, IL-Il ou NNT-1. Por exemplo, mAb 1339 foi mostrado por ELISA ligar-se ao IL-6 e mostrou níveis significantes da ligação ao CNFT, oncostatina M, IL-Il ou NNT-1. (ver Exemplo 5 e FIG. 5B). Este ou um ensaio similar pode ser usado para avaliar se qualquer anticorpo especificamente liga-se a um antígeno IL-6.

Em outras formas de realização, um anticorpo da invenção liga-se especificamente a um antígeno IL-6 quando a dissociação constante (Kd) é cerca de IO"8 Μ. O anticorpo, em certas formas de realização, é dito ligar-se especificamente a um antígeno IL-6 com "alta afinidade" quando o Kd é cerca de 5 χ IO"9 Μ, e com "afinidade muito alta" quando o Kd é cerca de χ IO"10 M.

Se um anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6 no contexto da presente invenção também pode ser determinado pelo ensaio funcional. Por exemplo, um ensaio pode ser conduzido em que as células que expressam o receptor IL-6 são incubadas com IL-6 na presença de um anticorpo de teste. Em um ensaio paralelo, as células que expressam um outro receptor são incubados com o ligando para o receptor na presença do anticorpo de teste. Se o anticorpo mostra um efeito inibidor no primeiro ensaio (que inclui IL-6 e as células que expressam o receptor IL-6) mas não mostra um efeito inibidor no segundo ensaio (que inclui um ligando diferente e as células que expressam o receptor pelo ligando), então este pode ser concluído que um anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6. Os ensaios para a determinação se um anticorpo inibe os efeitos biológicos da ligação IL-6 a um receptor IL-6 em células são debatidos em outra parte destes. Por exemplo, o Exemplo 5 mostra a capacidade dos anticorpos humanos anti-IL-6 da invenção para exibir a proliferação celular de mieloma humano induzido por IL-6.

Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana ou B9 de murino (ECACC). Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana de murino B9 (ECACC) em um nível de 100% de inibição (isto é, completa). Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana ou de murino B9 (ECACC) em um nível de 90% ou maior de inibição. Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana ou de murino B9 (ECACC) em um nível de 80% ou maior de inibição. Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção exibem a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana ou de murino B9 (ECACC) em um nível de 70% ou maior, 60% ou maior, 50% ou maior, 40% ou maior, 30% ou maior, 20% ou maior, 10% ou maior, ou 5% ou maior, ou 1% ou maior de inibição.

Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor. Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor em um nível de 100% de inibição (isto é, completa). Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor em um nível de 90% ou maior de inibição. Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor em um nível de 80% ou maior de inibição. Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção ligam-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor em um nível de 70% ou maior, 60% ou maior, 50% ou maior, 40% ou maior, 30% ou maior, 20% ou maior, 10% ou maior, 5% ou maior, ou 1% ou maior de inibição.

Em algumas formas de realização, os anticorpos da presente invenção demonstram especificidade de espécies, ligando ou auxiliando na detecção do IL-6 humano. Em algumas formas de realização, os novos anticorpos monoclonais da presente invenção ligam-se ou auxiliam na detecção de IL-6 de humano ou macaco mas não IL-6 de murino ou rato.

Os anticorpos humanos da invenção podem ser obtidos por uma variedade de métodos. Por exemplo, os anticorpos monoclonais humanos que ligam-se ao IL-6 podem ser selecionados, por exemplo, pela avaliação de uma ou mais bibliotecas cDNUM VL e VH humano com IL-6 ou uma porção deste, tal como pelas técnicas de apresentação de fago. (McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)). Os anticorpos humanos da invenção também pode ser obtidos de animais transgênicos tal como, por exemplo, camundongos transgênicos. (Jakobovits, Curr. Opin. Biotechnol. 6:561-566 (1995)). A presente invenção inclui anticorpos humanos anti-IL-6 que são obtidos por qualquer método conhecido na técnica para fabricação de anticorpos humanos.

Os métodos exemplares que podem ser usados para gerar os anticorpos da invenção que são divulgados, por exemplo, no Pedido de Publicação de Patente N°. 2005/0196755, o conteúdo que é incorporado pela referência em sua totalidade.

A presente invenção deste modo inclui anticorpos monoclonais que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH), em que o VH humano, quando formado em par com uma região de cadeia leve variável (VL) de um anticorpo monoclonal anit-IL-6 não humano (tal como, por exemplo, B-E8), resultando in um anticorpo que liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

A presente invenção também inclui anticorpos monoclonais que compreende uma região variável de cadeia leve humana (VL), em que o VL humano, quando formado em par com uma região de cadeia pesada variável (VH) de um anticorpo monoclonal anit-IL-6 não humano (tal como, por exemplo, B-E8), resultando em um anticorpo que liga-se ao especificamente a um antígeno IL-6. Em certas formas de realização, o VL humano é de um sub-tipo de capa (isto é, VK).

A presente invenção também inclui anticorpos monoclonais que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e a região variável de cadeia leve humana (VL), em que o VH humano, quando formado em par com uma região de cadeia leve variável (VL) de um anticorpo monoclonal anit-IL-6 não humano (tal como, por exemplo, B-E8), resultando em um anticorpo que liga-se especificamente a um antígeno IL-6, e em que o VL humano, quando formado em par com uma região de cadeia pesada variável (VH) de um anticorpo monoclonal anit-IL-6 não humano (tal como, por exemplo, B-ES), resultando em um anticorpo que liga-se ao especificamente a um antígeno IL-6.

Em certas formas de realização, os anticorpos monoclonais da

invenção compreendem uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de H415 (SEQ ID N°: 19), H884 (SEQ ID N°: 20), H1077 (SEQ ID N°: 21), Hl 1078 (SEQ ID N°: 22), H1079 (SEQ ID N°: 23), H1081 (SEQ ID N°: 24), H1089 (SEQ ID N°: 25), H1511 (SEQ ID N°: 26), H1420 (SEQ ID N°: 27), H1432 (SEQ ID N°: 28), Hl515 (SEQ ID N°: 29), H1362 (SEQ ID N°: 30), H1437 (SEQ ID N°: 31), H1461 (SEQ ID N°: 32), H1519 (SEQ ID N°: 38), H1520 (SEQ ID N°: 39), H1521 (SEQ ID N°: 40), H1522 (SEQ ID N°: 41), Hl553 (SEQ ID N°: 42), e H1579 (SEQ ID N°: 43), em que os anticorpos ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

Em certas formas de realização, os anticorpos monoclonais da invenção compreendem uma região de cadeia leve variável (VL ou VK) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de Ll 12 (SEQ ID N°: 1), L151 (SEQ ID N°: 2), L158 (SEQ ID N°: 3), Ll59 (SEQ ID N°: 4), L164 (SEQ ID N°: 5), L165 (SEQ ID N°: 6), L166 (SEQ ID N°: 7), L167 (SEQ ID N°: 8), L168 (SEQ ID N°: 9), L169 (SEQ ID N°: 10), L170 (SEQ IDN°: 11), L171 (SEQIDN0: 12),L172 (SEQ IDN°: 13), L173 (SEQ ID N°: 14), L174 (SEQ ID N°: 15), L175 (SEQ ID N°: 16), L189 (SEQ ID N°: 17), L198 (SEQ ID N°: 18), L314 (SEQ ID N°: 33), L305 (SEQ ID N°: 34), L303 (SEQ ID N°: 35), L298 (SEQ ID N°: 36), e L321 (SEQ ID N°: 37), em que os anticorpos ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

Será entendido por uma pessoa com habilidade comum na técnica que os "anticorpos que compreende uma região de cadeia pesada variável (VH)" e "anticorpos que compreende uma região de cadeia leve variável (VL ou VK)," como descrito no contexto da presente invenção, podem incluir uma ou mais regiões adicionais (ou "domínios") que são normalmente observados em moléculas dos anticorpos, tal como, por exemplo, uma ou mais regiões de cadeia pesada constante (por exemplo, CHI, CH2 e/ou CH3), e/ou uma região de cadeia leve constante (CL).

Os anticorpos da invenção pode, em certas formas de realização, compreender uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico a qualquer um da SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43, em que os anticorpos ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

Os anticorpos da invenção podem, em certas formas de realização, compreender uma região de cadeia leve variável (VL ou VK) que compreende uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico a qualquer um da SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37, em que os anticorpos ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

O termo "idêntico," como usado neste, refere-se a uma conexão entre as seqüências de duas ou mais moléculas de polipeptídeos como determinado pelo alinhamento e comparação das seqüências. A "identidade de percentual" significa o percentual dos resíduos idênticos entre os aminoácidos em moléculas comparadas e é calculado com base no tamanho menores das moléculas sendo comparadas. Para estes cálculos, as fendas em alinhamentos (se qualquer) podem intitular por um modelo matemático particular ou programa de computador (isto é, um "algoritmo"). Os métodos que podem ser usados para calcular a identidade dos polipeptídeos alinhados incluem aqueles descritos em Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), 1988, New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., e Griffín, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press; e Carillo et al., 1988, SIAM J. Applied Math. 48: 1073.

No cálculo da identidade de percentual, as seqüências sendo comparadas são alinhadas em uma maneira que dão o maior ponto entre as seqüências. O programa de computador usado para determinar a identidade de percentual pode ser a embalagem de programa GCG, que inclui GAP (Devereux et al., 1984, Nucl Acid Res 12:387; Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wisc.). O algoritmo GAP do computador é usado para alinhar os dois polipeptídeos pelo qual a identidade da seqüência percentual será determinada. As seqüências são alinhadas por ótimos pontos de ser aminoácido respectivo (o "matched span", como determinado pelo algoritmo). Uma penalidade de abertura na fenda (que é calculada como 3 χ a média diagonal, em que a "média diagonal" é a média do diagonal da matriz de comparação sendo usada; o "diagonal" é a contagem ou número designado para cada ponto de aminoácido perfeito pela matriz de comparação particular) e a penalidade de extensão da fenda (que é usualmente 1/10 vezes a penalidade da abertura da fenda), bem como uma matriz de comparação tal como PAM 250 ou BLOSUM 62 são usadas em conjunção com o algoritmo. Em certas formas de realização, uma matriz de comparação padrão (ver Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352 para a matriz de comparação PAM 250; Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 10915-10919 para a matriz de comparação BLOSUM 62) é também usado pelo algoritmo.

Os parâmetros recomendados para determinação da identidade de percentual por polipeptídeos usando o programa GAP são os seguintes:

Algoritmo: Needleman et al., 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453;

Matriz de comparação: BLOSUM 62 de Henikoffet al., 1992,

supra;

Penalidade da fenda: 12 (mas com nenhuma penalidade para as

fendas finais);

Penalidade de comprimento da fenda: 4;

Princípio da similaridade: 0.

Certos esquemas de alinhamento para alinhar duas seqüências de aminoácidos pode resultar na pontuação de apenas uma região curta de duas seqüências, e esta região pequena alinhada pode ter uma identidade de seqüência muito alta embora ainda não existe nenhum significante da conexão entre os dois comprimentos de seqüência. Conseqüentemente, o método de alinhamento selecionado (Programa GAP) pode ser ajustado se de modo desejado para resultar em um alinhamento que expande-se pelo menos 50 aminoácidos contínuos do polipeptídeo alvo.

As modificações da seqüência de aminoácido dos anticorpos anti-IL-6 descritas neste são contempladas. Por exemplo, podem ser desejáveis para melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpos anti-IL-6. As variantes da seqüência de aminoácido do anticorpos anti- IL-6 podem ser preparadas pela introdução das mudanças de nucleotídeo apropriados em um ácido nucleico que codifica as cadeias leves e pesadas do anticorpo, ou pela síntese de peptídeo. As modificações exemplares incluem aquelas que alteram as seqüência de aminoácido da região variável da cadeia pesada e/ou leve do anticorpo. Especialmente preferidas são as modificações que alteram as seqüência de aminoácido de um ou mais CDR da região variável da cadeia pesada e/ou leve de um anticorpo da invenção.

As modificações exemplares incluem, por exemplo, anulações de, e/ou inserções em e/ou substituições de, resíduos dentro das seqüências de aminoácidos do anticorpos anti-IL-6. Qualquer combinação de anulação, inserção, e substituição é feita para atingir à construção final, fornecida que uma construção final possui as características desejadas (por exemplo, a capacidade para formar parte de um anticorpo que liga-se especificamente a um antígeno IL-6). As mudanças de aminoácido também podem alterar os processos de pós-tradução do anticorpos anti-IL-6, tal como mudar o número ou posição dos locais de glicosilação.

Um método exemplar para introdução das mudanças de aminoácido nas regiões VH e VL dos anticorpos da invenção é ilustrada no Exemplo 2, abaixo. De acordo com este método, o NNK é introduzido em posições específicas, por exemplo, dentro de um CDR de um VH ou VL, onde N pode ser A, T, G, ou C, e K é T ou G. Usando NNK, todos os 20 aminoácidos e 1 códon interrompido pode ser introduzido em cada posição. Um outro método útil para a identificação de certos resíduos ou regiões das regiões de cadeia pesada variável de anticorpo IL-6 e regiões de cadeia leve variável que são localizações preferidas para a mutagênese que é denominada "mutagênese de varredura de alanina" como descrito por Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085 (1989). Existe, um resíduo ou grupo de resíduos alvos que são identificados (por exemplo, resíduos carregados tal como arg, asp, his, lys, e glu) e substituídos por um aminoácido carregado neutro ou negativamente (mas é preferivelmente alanina ou polialanina). Estas localizações de aminoácidos demonstram a sensibilidade funcional às substituições quando são refinadas pela introdução adicional ou outras variantes em, ou por, o local da substituição. Deste modo, enquanto como os locais para introdução uma variação da seqüência de aminoácido é pre- determinada, a natureza da mutação por si necessita não ser pré-determinada. Por exemplo, para analisar o desempenho de uma mutação em um dado local, a mutagênese de varredura de alanina ou aleatória é conduzida ao códon alvo ou região e as variantes VH expressadas e/ou variantes VL são avaliadas pela atividade desejada quando combinada com uma cadeia pesada variável ou cadeia leve variável, respectivamente.

As inserções da seqüência de aminoácidos incluem fusões do terminal de amino e/ou carboxila variando no comprimento de um resíduo aos polipeptídeos contendo um cem ou mais resíduos, bem como inserções de intra-seqüência resíduos de aminoácidos simples ou múltiplos. Exemplos de inserções de terminais incluem um VH anti-IL-6 ou um VL anti-IL-6 com um resíduo de metionila de terminal N, ou um VH anti-IL-6 ou um VL anti-IL-6 fundidos a um polipeptídeo citotóxico.

Um outro tipo de variante é uma variante de substituição de aminoácido. Estas variantes tem pelo menos um resíduo de aminoácido na molécula VH ou VL substituída por um resíduo diferente. Os locais de maior interesse para a mutagênese de substituição de regiões VH e VL dos anticorpos anti-IL-6 da invenção incluem as regiões hipervariáveis, mas as alterações FR também são considerados.

As substituições conservativas são mostradas na Tabela 1 sob a parte superior das "substituições preferidas". Se tais substituições resultam em uma mudança na atividade biológica, quando mais mudanças substanciais, denominadas "substituições exemplares" na Tabela 1, ou como ainda descrito abaixo na referência as classes de aminoácidos, que podem ser introduzidas e os produtos avaliados.

Tabela 1

Resíduo original Substituições exemplares Substituições preferidas Ala (A) vai; leu; ile Val Arg(R) lys; gin; asn Lys Asn(N) gin; his; asp; lys; arg Gln Asp (D) glu; asn; glu Cys (C) ser; ala ser Gin(Q) asn; glu asn Glu (E) asp; gin asp Gly (G) ala ala His (H) asn, gin, lys, arg arg Ile (I) leu; vai; met; ala; phe; norleucina leu Leu (L) norleucina; ile; vai; met; ala; phe ile Lys (K) arg; gin; asn arg Met (M) leu; phe; ile leu Phe(F) leu; vai; ile; ala; tyr tyr Pro (P) ala ala Ser (S) thr thr Thr(T) ser ser Tpr (W) tyr; phe tyr Tyr(Y) trp; phe; thr; ser phe Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucina leu

As modificações substanciais nas propriedades biológicas do

anticorpos anti-IL-6 da invenção podem ser realizados pela substituições de seleção que diferem-se significantemente no seu efeito em manter (a) a estrutura da cadeia principal de polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como uma conformação de lâmina ou helicoidal, (b) a carga ou hidrofobicidade da molécula no local do site, ou (c) o tamanho da cadeia secundária. Os resíduos de ocorrência natural são divididos nos grupos com base nas propriedades de cadeia secundária comum: (1) hidrofóbico: norleucina, met, ala, vai, leu, ile;

(2) hidrofílico neutro: cys, ser, thr;

(3) ácido: asp, glu;

(4) básico: asn, gin, his, Iys, arg;

(5) resíduos que a orientação da cadeia de influência: gly, pro;

e

(6) aromático: trp, tyr, phe.

Nenhuma das substituições conservativas vinculará a troca de um membro de uma dessas classes por uma outra classe.

Qualquer resíduo de cisteína não envolvido em manter a conformação adequada do anticorpo anti-IL-6 também pode ser substituído, geralmente com serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula e prevenir a reticulação aberrante. Convivência, as ligações de cisteína podem ser adicionadas ao anticorpo anti-IL-6 para melhorar esta estabilidade (particularmente onde o anticorpo anti-IL-6 é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento Fv).

Um tipo particularmente preferido duma variante substitucional envolve a substituição de uma ou mais resíduos de região hipervariável de um anticorpo de origem. Geralmente, as variantes resultantes selecionados pelo desenvolvimento adicional terá propriedades biológicas melhoradas relativo ao anticorpo de origem de que estes são gerados (por exemplo, afinidade melhorada por um antígeno IL-6). Um método exemplar por gerar uma tal variantes substitucionais é maturação de afinidade usando apresentação de fago. Brevemente, diversos locais de região hipervariável (por exemplo, locais 6 a 7) são mudados para gerar todas as substituições de amino possíveis em cada local. Os variantes anticorpo deste modo gerados são apresentados em uma maneira monovalente de partículas de fago filamentosas como fusão ao produto do gene III de Ml3 embalado dentro de cada partícula. As variantes apresentadas por fago são então avaliados por sua atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação) como neste divulgado. A fim de identificar os locais de região hipervariável candidatos para a modificação, a mutagênese de varredura de alanina pode ser realizada para identificar resíduos da região hipervariável que contribui significantemente pela ligação de antígeno. Alternativamente, ou adicionalmente, pode ser benéfico para analisar uma estrutura cristalina do complexo de anticorpo por antígeno para identificar os pontos de contato entre o anticorpo e antígeno. Tais resíduos de contato e resíduos próximos são candidatos para a substituição de acordo às técnicas elaboradas neste. Uma vez tais variantes são geradas, o painel de variantes é submetido à avaliação como descrito neste e anticorpos com propriedades superiores em um ou mais ensaios relevantes que podem ser selecionados pelo desenvolvimento adicional.

Um outro tipo de variante de aminoácido do anticorpos anti- IL-6 apresentado neste refere-se a origem de glicosilação original do anticorpos anti-IL-6. Tal alteração inclui a anulação de uma ou mais porções de carboidrato observado no anticorpo anti-IL-6, e/ou adição de um ou mais locais de glicosilação que não estão presentes no anticorpo anti-IL-6.

A glicosilação dos polipeptídeos é tipicamente ligado ao N ou ligado ao O. O ligado ao N refere-se à ligação da porção de carboidrato à cadeia secundária de um resíduo de asparagina. As seqüências de tripeptídeos de asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são seqüências de reconhecimento pela ligação enzimática da porção de carboidrato à cadeia secundária de asparagina. Deste modo, a presença destas seqüências de tripeptídeos em um peptídeo que cria um loca de glicosilação potencial. A glicosilação ligada por O refere-se à ligação de um dos açúcares N-aceilgalactosamina, galactose, ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5- hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também pode ser usado. A adição de locais de glicosilação a um anticorpo anti-IL-6 é convenientemente realizado pela alteração da seqüência de aminoácido tal que esta contém uma ou mais das seqüências de tripeptídeos descritos acima (para O ligado aos locais de glicosilação Ν). A alteração também pode ser feita pela adição de, ou substituição por, um ou mais resíduos de serina ou treonina à seqüência do anticorpo anti-IL-6 original (por locais de glicosilação ligados por O).

Os domínios YH incluídos nos anticorpos da invenção podem, em certas formas de realização, compreender uma seqüência amino que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43, exceto pela substituição de 1 a 20 aminoácidos. Por exemplo, o VH pode ter uma seqüência de aminoácido que é idêntica à SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43, exceto pela substituição de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos. As substituições podem ser em qualquer posição dentro da seqüência observada na SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43. Em certas formas de realização, as substituições é/são comuns de um ou mais CDR do domínio VH. Por exemplo, as substituições podem ser comuns em CDRl, CDR2 e/ou CDR3.

De outra maneira, os domínios VL incluídos nos anticorpos da invenção podem, em certas formas de realização, compreender uma seqüência amino que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37, exceto pela substituição de 1 a 20 aminoácidos. Por exemplo, o VL pode ter uma seqüência de aminoácido que é idêntica à SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37, exceto pela substituição de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos. As substituições podem ser em qualquer posição dentro da seqüência observada na SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37. Em certas formas de realização, as substituições é/são comuns de um ou mais CDR do domínio VL. Por exemplo, as substituições pode ser comuns em CDRl, CDR2 e/ou CDR3. Os anticorpos anti-IL-6 da presente invenção que compreende uma região VH que diferem-se da SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43 em um ou mais resíduos de aminoácidos e/ou uma região VL que diferem-se da SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37 em uma ou mais resíduos de aminoácidos reterão preferivelmente a capacidade por ligar-se especialmente a um antígeno IL-6.

A presente invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH compreende qualquer um dos CDRl apresentado na Tabela 2:

Tabela 2: Seqüências CDRl VH exemplares

Seqüência CDRl VH SEQ ID N°: tsgmcvs 51 tsgvavg 52 tsgvsvg 53 tsgvgvg 54 tsgvavn 55

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um

domínio VH, em que o VH compreende uma variante CDRl tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 51 a 55, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete) dos aminoácidos da SEQ ID N°: 51 a 55 que é substituída com qualquer outro aminoácido. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDRl ligará especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH compreende qualquer um dos CDR2 apresentados na Tabela 3:

20 Tabela 3: Seqüências CDR2 VH exemplares

Seqüência CDR2 VH SEQ ID N°: LIYWDDDKRYNPSLRS 56 LIFWDDDKHYSPSLKS 57 LVYWDDDRR YNPSLKN 58 LIYWDDDKRYSPSLKN 59 FIFWDDDKYYSPSLES 60 VIY WDDDRRYSPSLS S 61 LIYWDDDKRYSPSLET 97

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH compreende uma variante CDR2 tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 56 a 61 ou 97, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze, treze, quatorze, quinze ou dezesseis) dos aminoácidos das SEQ ID N°: 56 a 61 ou 97 que é substituída com qualquer outro aminoácido.

Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDR2 ligará especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH compreende qualquer um dos CDR3 apresentados na Tabela 4:

Tabela 4: Seqüências CDR3 VH exemplares

Seqüências CDR3 VH (SEQ ID N°: SYDDYLYYALDY 62 FYDDYLYYALDY 63 SADDYLYYALDY 64 SGDDYLYYALDY 65 SYDDYLMYALDY 66 SYDDYL YYSLDY 67 SYDDYLYYAFDY 68 SYDDYLYYALDT 69 SADDYLYYSLDY 70 SADDYLYYAFDY 71 SADDYL YYSFDY 72 SADDYL YYSFDT 73 SHDDYLYYALDY 98

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH compreende uma variante CDR3 tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 62 a 73 ou 98, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, ou doze) dos aminoácidos das SEQ ID N0: 62 a 73 ou 98 que é substituída com qualquer outros aminoácidos. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDR3 ligará especificamente a um antígeno IL-6.

Além disso, a presente invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende a domínio VL, em que o VL compreende qualquer um dos CDRl apresentados na Tabela 5:

Tabela 5: Seqüências CDRl VL exemplares

Seqüências CDRl VL SEQ ID N°: RASQTIDSSYLA 74 RASQDIDNFLA 75 RASQTISSYLN 76 RASQSISIYLN 77 RASQTISDFLN 78 WASQSINDYLN 79

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL compreende uma variante CDRl tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 74 a 79, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, ou doze) dos aminoácidos das SEQ ID N0: 74 a 79 é substituída com qualquer outros aminoácidos. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDRl ligará especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL compreende qualquer um dos CDR2 apresentados na Tabela 6:

Tabela 6: Seqüências de CDR2 VL exemplares

Seqüências de CDR2 VL SEQ ID N°: gassrat 80 kvsslrs 81 aassles 82 atstlqs 83 assnlqs 84 aasnlqi 85

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL compreende uma variante CDR2 tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 80 a 85, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, ou sete) dos aminoácidos das SEQ ID N°: 80 a 85 é substituída com qualquer outros aminoácidos. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDR2 ligará especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL compreende qualquer um dos CDR3 apresentados na Tabela 7:

Tabela 7: Seqüências de CDR3 VL exemplares

Seqüências de CDR3 VL SEQ ID N°: qqyakspit 86 qqtrrfplt 87 qqansfplt 88 qqtyrnlft 89 qqtystlgt 90 QNGHSFPLT 91 QNGHSFPLT 92 QHGHSFPLT 93 QLGHSFPLT 94 QNAHSFPLT 95 QNGWSFPLT 96

A invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL compreende uma variante CDR3 tendo uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma das SEQ ID N°: 86 a 96, exceto que uma ou mais (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, ou nove) dos aminoácidos das SEQ ID N°: 86 a 96 é substituída com qualquer outros aminoácidos. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma variante CDR3 ligará especificamente a um antígeno IL-6.

Como mostrado no Exemplo 1, a primeira geração das regiões de cadeia pesada variável humana (VHs) identificada pela avaliação de um biblioteca de identidade de seqüência significante de forma VH humana com uma outra. As identidades da seqüência amino entre os VH humanos são mostradas na Tabela 10 e são ilustradas na FIG. 1. Por exemplo, os CDRl dos VH humanos identificados de todas as formas das seqüências de aminoácidos T-S-G-Xl-X2-V-X3 (SEQ ID N°: 99). Adicionalmente, os CDR2 do VH humanos identificam todas as formas das seqüência de aminoácidos X1-X2- X3-W-D-D-D-X4-X5-Y-X6-P-S-L-X7-X8 (SEQ ID N°: 100).

Deste modo, a invenção inclui anticorpos monoclonais que compreende um CDR de cadeia pesada variável (CDRl-VH) tendo a seqüência de aminoácidos T-S-G-X1-X2-V-X3 (SEQ ID N°: 99), em que X1, X2 e X3 podem ser qualquer aminoácido. Por exemplo, X1, X2 e/ou X3 pode ser isoleucina (I), leucina (L), valina (V), fenilalanina (P), metionina (M), cisteína (C), alanina (A), glicina (G), prolina (P), treonina (T), serina (S), tirosina (Υ), triptofan (W), glutamina (Q), asparagina (Ν), histidina (Η), ácido glutâmico (Ε), ácido aspártico (D), lisina (Κ), ou arginina (R). Em uma forma de realização exemplar, X1 é metionina (M) ou valina (V). Em uma forma de realização exemplar, X1 é valina (V). Em uma forma de realização exemplar, é cisteína (C), alanina (A), serina (S) ou glicina (G). Em uma forma de realização exemplar, X3 é serina (S) ou glicina (G). Preferivelmente, os anticorpos da invenção que compreende uma CDR de VH tendo a seqüência de aminoácidos TS-G-X1-X2-V-X3 (SEQ ID N°: 99) ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos monoclonais que compreende um CDR2 cadeia pesada variável (CDR2 VH) tendo a seqüência de aminoácido X1-X2-X3-W-D-D-D-X4-X5-Y-X6-P-S-L-X7-X8 (SEQ ID N°: 100), em que X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7 e X8 pode ser qualquer aminoácido. Por exemplo, X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7 e/ou X8 pode ser isoleucina (I), leucina (L), valina (V), fenilalanina (P), metionina (M), cisteína (C), alanina (A), glicina (G), prolina (P), treonina (T), serina (S), tirosina (Y), triptofan (W), glutamina (Q), asparagina (N), histidina (H), ácido glutâmico (E), ácido aspártico (D), lisina (K), ou arginina (R). Em uma forma de realização exemplar, X1 é leucina (L), fenilalanina (F) ou valina (V). Em uma forma de realização exemplar, X1 é leucina (L). Em uma forma de realização exemplar, X2 é isoleucina (I) ou valina (V). Em uma forma de realização exemplar, X2 é isoleucina (I). Em uma forma de realização exemplar, X3 é tirosina (Y) ou fenialanina (F). Em uma forma de realização exemplar, X4 é lisina (K) ou arginina (R). Em uma forma de realização exemplar, X5 é arginina (R), tirosina (Y), ou histidina (H). Em uma forma de realização exemplar, X6 é serina (S) ou asparagina (N). Em uma forma de realização exemplar, em que X6 é serina (S). Em uma forma de realização exemplar, X7 é arginina (R), lisina (K), ácido glutâmico (E) ou serina (S). Em uma forma de realização exemplar, X7 é lisina (K). Em uma forma de realização exemplar, X8 é serina (S) ou asparagina (Ν). Preferivelmente, os anticorpos da invenção que compreende um CDR2 VH tendo a seqüência de aminoácidos X1-X2-Xs-W- D-D-D-X4-X5-Y-X6-P-S-L-X7-X8 (SEQ ID N°: 100) ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VL, em que o VL é idêntico por qualquer uma das SEQ ID N°: Ia 18 ou 33 a 37, exceto que uma ou mais de nenhum CDR (por exemplo, região de estrutura) aminoácidos das SEQ ID N°: 1 a 18 ou 33 a 37 é substituída com qualquer outros aminoácidos. A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende um domínio VH, em que o VH é idêntico por qualquer uma das SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43, exceto que um ou mais dos não CDR (por exemplo, região de estrutura) aminoácidos das SEQ ID N°: 19 a 32 ou 38 a 43 é substituída com qualquer outros aminoácidos. Preferivelmente os anticorpos anti-IL-6 que compreende uma ou mais mudanças de aminoácido nas regiões de estrutura das seqüências VH e/ou VK ligará especificamente a um antígeno IL-6.

A invenção inclui anticorpos que compreende qualquer combinação de:

(1) uma região de cadeia pesada variável (VH) apresentado neste, ou um VH que compreende um ou mais CDR apresentados neste; e

(2) uma região de cadeia leve variável (VL) apresentado neste ou um VL que compreende um ou mais CDR apresentados neste.

Por exemplo, a invenção inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações das regiões VH e regiões VL: H415 (SEQ ID N°: 19) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H415 (SEQ ID N°: 19) e L151 (SEQ ID N°: 2); H415 (SEQ ID N°: 19) e L158 (SEQ ID N°: 3); H415 (SEQ ID N°: 19) e L159 (SEQ ID N°: 4); H415 (SEQ ID N°: 19) e L164 (SEQ ID N°: 5); H415 (SEQ ID N°: 19) e L165 (SEQ ID N°: 6); H415 (SEQ ID N°: 19) e L166 (SEQ ID N°: 7); H415 (SEQ ID N°: 19) e L167 (SEQ ID N°: 8); H415 (SEQ ID N°: 19) e Ll 68 (SEQ ID N°: 9); H415 (SEQ ID N°: 19) e L169 (SEQ ID N°: 10); H415 (SEQ ID N°: 19) e L170 (SEQ ID N°: 11); H415 (SEQ IDN°: 19)eL171 (SEQ IDN°: 12); H415 (SEQ IDN°:

19) e L172 (SEQ ID N°: 13); H415 (SEQ ID N°: 19) e L173 (SEQ ID N°: 14); H415 (SEQ ID N°: 19) e L174 (SEQ ID N°: 15); H415 (SEQ ID N°: 19)

e L175 (SEQ ID N°: 16); H415 (SEQ ID N°: 19) e L189 (SEQ ID N°: 17); H415 (SEQ ID N°: 19) e L198 (SEQ ID N°: 18); H415 (SEQ ID N°: 19) e L314 (SEQ ID N°: 33); H415 (SEQ ID N°: 19) e L305 (SEQ ID N°: 34); H415 (SEQ ID N°: 19) e L303 (SEQ ID N°: 35); H415 (SEQ ID N°: 19) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H415 (SEQ ID N°: 19) e L321 (SEQ ID N°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações das regiões VH e regiões VL: H884 (SEQ ID N°: 20) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H884 (SEQ ID N°: 20) e L151 (SEQ ID N°: 2); H884 (SEQ ID N°: 20) e L158 (SEQ ID N°: 3); H884 (SEQ ID N°: 20) e L159 (SEQ ID N°: 4); H884 (SEQ ID N0: 20) e L164 (SEQ ID N°: 5); H884 (SEQ ID N°: 20) e L165 (SEQ ID N°: 6); H884 (SEQ ID N°: 20) e L166 (SEQ ID N°: 7); H884 (SEQ ID N°: 20) e L167 (SEQ ID N°: 8); H884 (SEQ ID N°: 20) e Ll68 (SEQ ID N°: 9); H884 (SEQ ID N°: 20) e L169 (SEQ ID N°: 10); H884 (SEQ ID N°: 20) e L170 (SEQ ID N°: 11); H884 (SEQ ID N°: 20) e L171 (SEQ ID N°: 12); H884 (SEQ ID N°:

20) e L172 (SEQ ID N°: 13); H884 (SEQ ID N°: 20) e L173 (SEQ ID N°: 14); H884 (SEQ ID N°: 20) e L174 (SEQ ID N°: 15); H884 (SEQ ID N°: 20) e L175 (SEQ ID N0: 16); H884 (SEQ ID N°: 20) e L189 (SEQ ID N°: 17); H884 (SEQ ID N°: 20) e L198 (SEQ ID N°: 18); H884 (SEQ ID N°: 20) e

L314 (SEQ ID N°: 33); H884 (SEQ ID N°: 20) e L305 (SEQ ID N°: 34); H884 (SEQ ID N°: 20) e L303 (SEQ ID N°: 35); H884 (SEQ ID N°: 20) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H884 (SEQ ID N°: 20) e L321 (SEQ ID N°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1077 (SEQ ID N°: 21) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1077 (SEQ ID N0: 21) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1077 (SEQ ID N°:21) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1077 (SEQ ID N 21) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1077 (SEQ ID N°: 21) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1077 (SEQ ID N°: 21) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1078 (SEQ IDN°: 22) e Ll 12 (SEQ IDN°: 1); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L164 (SEQ ID N°: 5); Hl078 (SEQ ID N°: 22) e L165 (SEQ ID N°: 6); Hl 078 (SEQ ID N°: 22) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1078 (SEQ ID N°: 22) e L303 (SEQ ID N°: 35); Hl 078 (SEQ ID N°: 22) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1078 (SEQ ID N°: 22) e L321 (SEQ ID N°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1079 (SEQ ID N0: 23) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1079 (SEQ ID N0: 23) e L166 (SEQ U) N°:7); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L189 (SEQ ID N°: 17); Hl079 (SEQ ID N°: 23) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1079 (SEQ ID N°: 23) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1079 (SEQ ID N°: 23) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1081 (SEQ ID N°: 24) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L165 (SEQ ID N°: 6); Hl081 (SEQ ID N°: 24) e L166 (SEQ ID N°: 7); Hl081 (SEQ ID N°: 24) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L168 (SEQ ID N°: 9); Hl081 (SEQ ID N°: 24) e L169 (SEQ ID N°: 10); Hl 081 (SEQ ID N°: 24) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1081 (SEQ ID N°: 24) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1081 (SEQ ID N°: 24) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1089 (SEQ ID N0: 25) e L112 (SEQ ID N0: 1); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1089 (SEQ ID N°: 25) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1089 (SEQ ID N°: 25) e L321 (SEQIDN0: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1511 (SEQ ID N°: 26) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L151 (SEQIDN0: 2); H1511 (SEQIDN0: 26)eL158 (SEQIDN0: 3); H1511 (SEQ ID N0: 26) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1511 (SEQ IDN0: 26) e L172 (SEQ IDN0: 13); H1511 (SEQ IDN0: 26) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1511 (SEQ IDN0: 26)eL175 (SEQ IDN°: 16); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1511 (SEQ IDN0: 26)eL314(SEQ IDN°: 33); H1511 (SEQ IDN°: 26) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1511 (SEQ ID N°: 26) e L303 (SEQ ID N°: 35); Hl511 (SEQ ID N°: 26) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou Hl511 (SEQ ID N°: 26) e L321 (SEQ IDN°: 37). A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que

compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1420 (SEQ ID N°: 27) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L171 (SEQ ID N°: 12); Hl420 (SEQ ID N°: 27) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1420 (SEQ ID N°: 27) e Ll73 (SEQ ID N°: 14); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L198 (SEQ ID N°: 18);

H1420 (SEQ ID N°:27) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1420 (SEQ ID N°: 27) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1420 (SEQ ID N°: 27) e L321 (SEQ IDN0: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1432 (SEQ ID N°: 28) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1432 (SEQ ID N0 28) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1432 (SEQ ID N°:28) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1432 (SEQ ID N°: 28) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1432 (SEQ ID N°: 28) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1515 (SEQ ID N°: 29) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1515 (SEQ ID Ν°: 29) e Ll51 (SEQ ID N°: 2); Hl515 (SEQ ID N°: 29) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1515 (SEQ ID N0: 29) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1515 (SEQ ID N°:29) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1515 (SEQ ID N°: 29) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1515 (SEQ ID N°: 29) eL321 (SEQIDN0: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1362 (SEQ ID N°: 30) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1362 (SEQ ID N°: 30) e Ll89 (SEQ ID N°: 17); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L198 (SEQ ID N°: 18); Η1362 (SEQ ID N°: 30) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1362 (SEQ ID N°: 30) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1362 (SEQ ID N°: 30) e L321 (SEQ ID N°: 37). A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que

compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: Hl437 (SEQ ID N0: 31) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L167 (SEQ ID N°: 8); HI437 (SEQ ID N°: 31) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L169 (SEQ ID N°: 10);H1437 (SEQ ID N°: 31) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L175 (SEQ ID N°: 16);H1437 (SEQ ID N°: 31) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1437 (SEQ ID N°: 31) e L298 (SEQ IDN°: 36); ou H1437 (SEQ ID N°: 31) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1461 (SEQ ID N°: 32) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L175 (SEQ.ID N°:16);H1461 (SEQ. ID N°:32) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1461 (SEQ ID N°: 32) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1461 (SEQ ID N°: 32) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1519 (SEQ ID N0: 38) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L172 (SEQ ID N°: 13); HI519 (SEQ ID N°: 38) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1519 (SEQ ID N°:38) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1519 (SEQ U) N°:38) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1519 (SEQ ID N°: 38) e L305 (SEQ ID N°: 34); Hl519 (SEQ ID N°: 38) e L303 (SEQ ID N°: 35); Hl519 (SEQ ID N°: 38) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou Hl519 (SEQ ID N°: 38) e L321 (SEQ IDN°: 37). A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1520 (SEQ ID N°: 39) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L167 (SEQ ID N°: 8); HI520 (SEQ ID N°: 39) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1520 (SEQ ID N°:39) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1520 (SEQ ID N0: 39) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1520 (SEQ ID N°: 39) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1520 (SEQ ID N°: 39) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1521 (SEQ ID N°: 40) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L158 (SEQ ID N°: 3); Hl 521 (SEQ ID N°: 40) e L159 (SEQ ID N°: 4);H1521 (SEQ ID N°: 40) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L172 (SEQ ID N°: 13);.H1521 (SEQ ID N°: 40) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1521 (SEQ ID N°: 40) e L305 (SEQ ID N°: 34); Hl521 (SEQ ID N°: 40) e L303 (SEQ ID N°: 35); Hl521 (SEQ ID N°: 40) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou Hl521 (SEQ ID N°: 40) e L321 (SEQ IDN°: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1522 (SEQ ID N°: 41) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L168 (SEQ ID N°: 9);H1522 (SEQ ID N°: 41) e L169 (SEQ ID N°: 10);H1522 (SEQ ID N°: 41) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L189 (SEQ ID N°: 17);. H1522 (SEQ ID N°: 41) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L305 (SEQ ID N°: 34); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1522 (SEQ ID N°: 41) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1522 (SEQ ID N°: 41) eL321 (SEQIDN0: 37).

A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: H1553 (SEQ ID N°: 42) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L158 (SEQ ID N°: 3); Η1553 (SEQ ID N°: 42) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L167 (SEQ ID N0: 8); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1553 (SEQ ID N0: 42) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1553 (SEQ ID N0: 42) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L189 (SEQ ID N°: 17); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L198 (SEQ ID N°: 18); Hl553 (SEQ ID N°: 42) e L314 (SEQ ID N°: 33); Hl553 (SEQ ID N°: 42) e L305 (SEQ ID N°: 34); Hl553 (SEQ ID N°: 42) e L303 (SEQ ID N°: 35); H1553 (SEQ ID N°: 42) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1553 (SEQ ID N°: 42) e L321 (SEQ ID N°: 37). A invenção também inclui anticorpos anti-IL-6 que

compreende qualquer uma das seguintes combinações de regiões VH e regiões VL: Hl579 (SEQ ID N°: 43) e Ll 12 (SEQ ID N°: 1); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L151 (SEQ ID N°: 2); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L158 (SEQ ID N°: 3); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L159 (SEQ ID N°: 4); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L164 (SEQ ID N°: 5); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L165 (SEQ ID N°: 6); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L166 (SEQ ID N°: 7); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L167 (SEQ ID N°: 8); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L168 (SEQ ID N°: 9); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L169 (SEQ ID N°: 10); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L170 (SEQ ID N°: 11); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L171 (SEQ ID N°: 12); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L172 (SEQ ID N°: 13); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L173 (SEQ ID N°: 14); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L174 (SEQ ID N°: 15); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L175 (SEQ ID N°: 16); H1579 (SEQ ID N°: 43) e Ll89 (SEQ ID N°: 17); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L198 (SEQ ID N°: 18); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L314 (SEQ ID N°: 33); H1579 (SEQ ID N°: 43) e L305 (SEQ ID N°: 34); Hl579 (SEQ ID N°: 43) e L303 (SEQ ID N°: 35); Hl579 (SEQ ID N°: 43) e L298 (SEQ ID N°: 36); ou H1579 (SEQ ID N°: 43) e L321 (SEQ IDN°: 37).

Será entendido pela pessoa com habilidade comum na técnica que qualquer dos anticorpos mencionados acima que compreende uma combinação de uma região VH e uma região VL, pode incluir uma ou mais regiões adicionais (ou "domínios") que são normalmente observados em moléculas dos anticorpos, tal como, por exemplo, uma ou mais regiões de cadeia pesada constante (por exemplo, CHI, CH2 e/ou CH3), e/ou uma região de cadeia leve constante (CL). Preferivelmente, um anticorpo que compreende uma combinação de uma região VH e uma região VL, como apresentado neste, ligará especificamente a um antígeno IL-6. MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLEICO, VETORES E CÉLULAS

A presente invenção inclui moléculas de ácido nucleico que codificam um anticorpo anti-IL-6 de cadeia pesada que compreende qualquer uma das regiões VH apresentado neste, incluindo qualquer variante de aminoácido das regiões VH. A invenção também inclui moléculas de ácido nucleico que codificam um anticorpo anti-IL-6 de cadeia leve que compreende qualquer um das regiões VL apresentado neste, incluindo qualquer variantes de aminoácido das regiões VL. Em certas formas de realização, as moléculas de ácido nucleico que codificam uma porção de anticorpo anti-IL-6 de cadeia pesada ou uma porção de um anticorpo anti-IL- 6 de cadeia leve. Por exemplo, a invenção inclui moléculas de ácido nucleico que codificam um polipeptídeo que compreende um ou mais CDR de um anti- IL-6 VH apresentado neste, incluindo qualquer um dos CDR representados pela SEQ ID N°: 51 a 73. A invenção também inclui moléculas de ácido nucleico que codificam um polipeptídeo que compreende um ou mais CDR de um anti-IL-6 VL apresentado neste, incluindo qualquer um dos CDR representados pela SEQ ID N°: 74 a 96. A presente invenção também inclui moléculas de ácido nucleico que codificam qualquer uma das regiões VH apresentado neste, incluindo qualquer um das regiões VH representados pela SEQ ID N°: 19 a 32e38a43.A invenção inclui moléculas de ácido nucleico que codificam a região VH tendo uma seqüência de aminoácido que é pelo menos pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%; pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico a qualquer um da SEQ ID N°: 19 a 32 e 38 a 43, em que um anticorpo que compreende o região VH especificamente liga-se ao IL-6.

A presente invenção também inclui moléculas de ácido

nucleico que codificam qualquer uma das regiões VL apresentado neste, incluindo qualquer uma das regiões VL representado pela SEQ ID N°: 1 a 18 e 33 a 37. A invenção inclui moléculas de ácido nucleico que codificam uma região VL tendo uma seqüência de aminoácido que é pelo menos pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntico a qualquer um da SEQ ID N°: 1 a 18 e 33 a 37, em que um anticorpo que compreende uma região VL especificamente que liga-se ao IL-6.

A invenção também inclui os vetores de expressão que compreende qualquer uma das moléculas de ácido nucleico descritas neste. Vetores exemplares incluem plasmídeos, fagomídeos, cosmídeos, ácidos nucleicos de vírus e fagos ou outras moléculas de ácido nucleico que são capazes de repetir autonomamente ou ser repetida em uma célula procariótica ou eucariótica. Em certas formas de realização, os vetores são capazes de ser repetidos em uma célula de mamífero. Os vetores de expressão típicos contém terminadores de transcrição e tradução, seqüências de iniciação, e promotores úteis para a regulação da expressão das moléculas de ácido nucleico da invenção. Os vetores também podem compreender os cassetes de expressão genético contendo pelo menos uma seqüência terminadora independente, seqüências que permite a replicação do vetor tanto em eucarióticas e procarióticas, isto é, vetores de transporte, e marcadores de seleção tanto para sistemas procarióticos quanto eucarióticos. Os vetores preferivelmente contém um marcador para fornecer um traço fenotípico para a seleção de células hospedeiras transformadas tal como conferir a resistência aos antibióticos tal como ampicilina ou neomicina.

As moléculas de ácido nucleico da invenção pode ser ainda o controle de um ou mais promotores. Por exemplo, as moléculas de ácido nucleico pode ser ainda o controle de um promotor constitutivo ou um inibidor induzido. Promotores exemplares incluem promotores derivados dos citomegalovírus humanos, promotor de metalotionina, promotor precoce de SV-40, promotor posterior de SV-40, promotor do vírus de tumor mamário de murino, promotor do vírus sarcoma de Rous, promotor de poliedrina, ou outros promotores que mostram efetivos para a expressão nas células eucarióticas.

A invenção também inclui células hospedeiras que compreende uma molécula de ácido nucleico ou um vetor da invenção. Pela "célula hospedeira" significa uma célula ou população de células em que uma molécula de ácido nucleico ou vetor da invenção seja introduzida. A célula hospedeira da presente invenção é preferivelmente uma célula eucariótica ou linha celular, preferivelmente uma planta, animal, vertebrado, mamífero, roedor, camundongo, primata, ou célula humana ou linha celular. Por "uma população de células hospedeiras" significa um grupo de células cultivadas em que uma molécula de ácido nucleico ou vetor da presente invenção pode ser introduzido ou expressado. Qualquer célula hospedeira que suportará a expressão de uma molécula de ácido nucleico ou vetor da invenção é pretendida. Embora esta é preferida que a população de células hospedeiras sejam uma monocultura, isto é, onde cada uma célula na população é do mesmo tipo celular, culturas misturadas de células também são consideradas. Células hospedeiras da presente invenção podem ser aderentes, isto é, células hospedeiras que se desenvolvem ligadas a um substrato sólido, ou, alternativamente, as células hospedeiras podem ser em suspensão. As células hospedeiras podem ser células derivadas dos tumores primários, células derivadas dos tumores metastáticos, células primárias, células que tem perda por inibição de contato, células primárias transformadas, células primárias imortalizadas, células que podem sofrer apoptose, e linhas celulares derivadas destas.

A invenção também inclui métodos de produção da presente invenção, o método que compreende: (i) cultivar uma células hospedeira que expressa uma ou mais seqüências de ácidos nucleicos que codificam um anticorpo da presente invenção, e (ii) recuperação de um anticorpo a partir do meio de cultura.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

Os anticorpos anti-IL-6 da invenção podem ser incorporados nas composições farmacêuticas adequadas para a administração a um paciente. Tipicamente, a composição farmacêutica compreende um anticorpo ou porção de anticorpo da invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável. Como usados neste, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, média da dispersão, revestimentos, agentes anti-bacterianos e anti-fungicos, agentes de atraso isotônicos e de absorção, e outros que são compartíveis fisiologicamente. Exemplos de veículos aceitáveis farmaceuticamente incluem um ou mais de água, solução salina, solução salina tamponada por fosfato, dextrose, glicerol, etanol e outros, bem como combinações destes. Em muitos casos, se preferido a incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tal como manitol, sorbitol, ou cloreto de sódio na composição. O veículo farmaceuticamente aceitável ainda pode compreender menos quantidades de substâncias auxiliares tal como agentes umidificantes ou emulsifícantes, preservantes ou tampões, que intensificam a vida de prateleira ou efetividade do anticorpo ou porção de anticorpo.

As composições farmacêuticas desta invenção podem ser em uma variedade de formas. Estes incluem, por exemplo, líquido, semi-sólido e formas de dosagem sólidas, tal como soluções líquidas (por exemplo, soluções injetável e infusíveis), dispersões ou suspensões, tabletes, pílulas, pós, lipossomas e supositórios. A forma preferida depende do modo pretendido da administração e aplicação terapêutico. As composições típicas preferidas são na forma de soluções injetável ou infusível, tal como composições similares por aquele usado para a imunização passiva de humanos com outros anticorpos. O modo preferido da administração é parenteral (por exemplo, intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal, intramuscular). Em uma forma de realização preferida, o anticorpo é administrado pela injeção ou infusão intravenosa. Em uma outra forma de realização, o anticorpo é administrado pela injeção intramuscular ou subcutânea.

As composições terapêuticas tipicamente estéreis e adequadas sob as condições da fabricação e armazenagem. A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, dispersão, lipossoma, ou outras estruturas ordenadas adequadas para alta concentração de medicamento. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparados para incorporar o composto ativo (isto é, anticorpo ou porção de anticorpo) na quantidade requerida em um solvente apropriado com uma ou mais combinação dos ingredientes enumerados acima, como requerido, seguido pela esterilização filtrada. Geralmente, as dispersões são preparadas para incorporar o composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes requeridos daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação das soluções injetáveis estéreis, os métodos preferidos da preparação são secagem à vácuo e secagem por congelamento que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional a partir de uma solução filtrada previamente estéril destes. A própria fluidez de uma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho da partícula requerida no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser levado a cerca de incluir na composição um agente que atrasa a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.

Os anticorpos anti-IL-6 da presente invenção podem ser administrado por uma variedade de métodos conhecidos na técnica, embora por muitas aplicações terapêuticas, a via/modo preferido da administração é injeção ou infusão intravenosa. Como será apreciado pelo técnico habilitado, a via e/ou modo da administração variará dependendo dos resultados desejados. Em certas formas de realização, o composto ativo pode ser preparado com um veículo que protegerá o composto contra a liberação rápida, tal como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes, emplastos transdérmicos, e sistemas de liberação microencapsulados. Os polímeros biocompatíveis, biodegradáveis podem ser usados, tal como acetato de etileno vinil, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, e ácido poliláctico. Muitos métodos para a preparação de tais formulações são patenteadas ou geralmente conhecidas por aqueles habilitados na técnica. Ver, por exemplo, Sustained and the controled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Mareei Dekker, Inc., New York, 1978.

Em certas formas de realização, um anticorpo anti-IL-6 da invenção pode ser administrado oralmente, por exemplo, com um diluente inerte ou um veículo comestível assimilável. O composto (e outros ingredientes, se desejado) também pode ser anexado em uma cápsula de gelatina com a parte externa dura ou macia, comprimido em tabletes, ou incorporados diretamente na dieta dos pacientes. Para a administração terapêutica oral, o composto pode ser incorporado com excipientes e usado na forma de tabletes ingeríveis, tabletes bucais, pastilhas, cápsulas, elixir, suspensões, xaropes, tabletes, e outros. Para administrar um composto da invenção por outros do que administração parenteral, este pode ser necessário para revestir o composto com, ou co-administrar o composto com, um material para prevenir esta inativação.

Os compostos ativos suplementares também podem ser incorporados nas composições. Em certas formas de realização, um anticorpo ou porção de anticorpo da invenção é co-formulado com e/ou co-administrado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas formas de realização, um ou mais agentes terapêuticos adicionais é um agente ou agentes para o tratamento da doença ou condição como descrito neste, em particular a doença ou distúrbio como descrito na sessão intitulada "Usos terapêuticos of anticorpos anti-IL-6 da invenção." Por exemplo, um anticorpo anti-IL-6 da invenção pode ser co-formulado e/ou co-administrado com um ou mais anticorpos adicionais que ligam-se IL-6 ou outros alvos, por exemplo, anticorpos que ligam-se ao receptor IL-6.

Como usado aqui, o termos "tratar" e "tratamento" refere-se ao tratamento terapêutico, incluindo medidas profiláticos ou preservantes, em que o objeto é para prevenir ou leve baixa (diminuir) uma mudança fisiológica não desejado associado com a doença ou distúrbio. Os resultados químicos benéficos ou desejados incluem, mas não são limitados a, ao alívio dos sintomas, diminuição da extensão da doença ou distúrbio, estabilização da doença ou distúrbio (isto é, onde a doença ou distúrbio não pioram), atraso ou diminuição da progressão da doença ou distúrbio, melhoria ou alívio da doença ou distúrbio, e remissão (se parcial ou total) da doença ou distúrbio, se detectado ou não detectado. O "tratamento" também pode significar sobrevivência prolongada como comparado a sobrevivência esperada se não receber o tratamento. Aquele em necessidade de tratamento inclui aquele já com a doença ou distúrbio bem como aquele propenso a ter a doença ou distúrbio ou aquele em que a doença ou distúrbio está a ser evitado.

As composições farmacêuticas da invenção podem incluir a "quantidade terapeuticamente eficaz" ou uma "quantidade eficaz profilaticamente" de um anticorpo anti-IL-6 da invenção. A "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e períodos de vezes necessários, para atingir o resultado terapêutico desejado. A quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo pode variar de acordo com os fatores tal como o estado da doença, idade, sexo, e peso do indivíduo, e a capacidade do anticorpo ou porção de anticorpo para concluir uma resposta desejada no indivíduo. A quantidade terapeuticamente eficaz também é um dos quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais do anticorpo ou porção de anticorpos são tem mais valor pelos efeitos benéficos terapeuticamente. A "quantidade eficaz profilaticamente" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e períodos de vezes necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Tipicamente, visto que uma dose profilática é usada em pacientes antes ou na técnica em um estágio precoce da doença, a quantidade eficaz profilaticamente será menos do que a quantidade terapeuticamente eficaz.

Os regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a ótima resposta desejada (por exemplo, uma resposta terapêutica ou profilática). Por exemplo, um bolo simples pode ser administrado, e diversas doses divididas que pode ser administrado em tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada como indicado pelas exigências da situação terapêutica. Este é especialmente vantajoso para formular composições parenterais na forma de unidade de dosagem para facilitar a administração e uniformidade da dosagem. A forma da unidade da dosagem como usado neste refere-se as unidades discretas fisicamente apropriado como dosagens unitários para os pacientes mamíferos a serem tratados; cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada do composto ativo calculado por produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico requerido. A especificação para a forma da unidade de dosagens da invenção são ditados por e diretamente dependendo (a) as características únicas do composto ativo e o efeito particular terapêutico ou profilático a ser atingido, e (b) as limitações inerentes na técnica da composição tal um composto ativo para o tratamento da sensibilidade nos indivíduos.

Um exemplar, a faixa não limitante para uma quantidade eficaz terapêutica ou profilaticamente de um anticorpo anti-IL-6 da invenção é de 0,1 a 20 mg/kg, mais preferivelmente IalO mg/kg. Será notado que os valores da dosagem podem variar com o tipo e gravidade da condição a ser aliviado. Este é ainda entendido que para qualquer pacientes particulares, os regimes específicos de dosagem devem ser ajustados durante o tempo de acordo com a necessidade do indivíduo e o julgamento do profissional da pessoa que administra ou supervisa a administração das composições, e que as faixas de dosagem apresentadas neste são exemplos apenas e não são pretendidas limitar o escopo ou prática da composição reivindicada. USOS TERAPÊUTICOS DOS ANTICORPOS ANTI-IL-6 DA INVENÇÃO

Os anticorpos da presente invenção podem ser usados para tratar qualquer doença ou distúrbio mediado por, associados com, ou causado pela ação de IL-6. Por exemplo, os anticorpos da invenção podem ser usados para tratar a doença ou distúrbio que resulta da ligação de IL-6 a um receptor IL-6. Os anticorpos da invenção podem ser usados para tratar a doença ou distúrbio causado por um evento de sinalização intracelular que resulta, diretamente ou indiretamente, a partir da ligação de IL-6 a um receptor IL-6. Os caminhos de sinalização IL-6 intracelular exemplar são ilustrados na FIG. 11. Os anticorpos da presente invenção podem ser usados para tratar qualquer doença ou distúrbio que é causado por ou é associado com a atividade de qualquer das moléculas ilustradas na FIG. 11, as atividade pelo qual são influenciadas pela ligação de IL-6 a um receptor IL-6.

Deste modo, a presente invenção inclui métodos para o tratamento da doença ou distúrbio mediado por, associado com, ou causado pela ação de IL-6. Os métodos compreendem administrar a um paciente em necessidade deste um anticorpo anti-IL-6 como divulgado neste. A expressão "um anticorpo anti-IL-6 como divulgado neste" é pretendido significar qualquer anticorpo anti-IL-6 que compreender qualquer uma das regiões VH e/ou regiões VL apresentado neste, bem como qualquer anticorpo anti-IL-6 que compreende uma variante de qualquer uma das regiões VH apresentado neste e/ou uma variante de qualquer uma das regiões VL apresentado neste: Um "anticorpo anti-IL-6 como divulgado neste" também é pretendido significar qualquer anticorpo anti-IL-6 que compreende um ou mais CDR VH (por exemplo, CDRl, CDR2, e/ou CDR3) e/ou uma ou mais CDR VL (por exemplo, CDRl, CDR2, e/ou CDR3) divulgados neste. Preferivelmente, os anticorpos ligam-se especificamente a um antígeno IL-6.

Em algumas formas de realização, a doença ou distúrbio a serem tratados é selecionado do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associado com angiogênese aberrante ou inapropriada, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopático, e condições fibróticas.

Em uma forma de realização exemplar, a invenção fornece um método para o tratamento de uma doença ou distúrbio autoimune, em que o método compreende administrar a um paciente em necessidade um anticorpo anti-IL-6 como divulgado neste. Doenças e distúrbios autoimunes exemplares que podem ser tratados com um anticorpo anti-IL-6 da invenção incluem, por exemplo, rejeição de aloenxerto, doença da tireóide autoimune (por exemplo, doença de Grave e tireoidite de Hashimoto), uveoretinite autoimune, arterite celular gigante, doenças inflamatórias do intestino (incluindo, por exemplo, doença de Crohn, colite ulcerativa, enterite regional, enterite granulomatosa, ileíte distai, ileíte regional, e ileíte terminal), diabete melitu dependente de insulina, esclerose múltipla, anemia nociva, psoríase, artrite, artrite reumatóide, sarcoidose, esclerodermia, e eritematose de lupus sistêmico.

A invenção inclui métodos de tratamento doenças e distúrbios associados com angiogênese aberrante ou inapropriada, em que o método compreende administrar a um paciente em necessidade deste anticorpo anti- IL-6 como divulgado neste. As doenças e distúrbios exemplares associados com angiogênese aberrante ou inapropriada que pode ser tratado com um anticorpo anti-IL-6 da invenção incluem, por exemplo, doenças cardiovasculares tal como angioma, angiofibroma, deformidade vascular, aterosclerose, esclerose synechia e edêmica, e doenças oftalmológicas tal como neovascularização após a implantação de córnea, glaucoma neovascular, retinopatia diabética, doença de córnea angiogênica, degeneração macular, pterygium, degeneração da retina, fibroplasia retrolental, e conjuntivite granular. As doenças inflamatórias que são associadas com angiogênese inapropriado que pode ser tratado com um anticorpo anti-IL-6 da invenção incluem, por exemplo, artrite, doenças dermatológicas tal como psoríase, telangiectase, granuloma piogênico, dermatite seborréica, úlcera venosa, acne, rosacea (acne rosacea ou eritematosa), protuberâncias (verrugas), eczema, hemangiomas, e linfangiogênese.

A invenção inclui métodos de tratamento de um câncer, em que o método compreende administrar a um paciente em necessidade deste um anticorpo anti-IL-6 como divulgado neste. Os exemplos de cânceres que podem ser tratados com um anticorpo anti-IL-6 da invenção incluem, por exemplo, cânceres em formação de anomalias celulares imunes, incluindo cânceres mielóides tal como mieloma múltiplo, e leucemia mielogênica (CML), bem como leucemia linfocítica (CLL e ALL) e linfomas, particularmente linfoma não Hodgkin (NHL). Os anticorpos da invenção também podem ser usados para tratar, por exemplo, carcinoma renal, câncer de mama, câncer de próstata, linfoma, linfoma pós-transplante, e doença linfoproliferativa pós-transplante (também denominada distúrbio linfoproliferativo pós-transplantação).

As condições adicionais que podem ser tratadas com os anticorpos anti-IL-6 da invenção incluem, por exemplo, osteoartrite, artrite juvenil idiopático, artrite reumatóide, e condições fibróticas (tal como cicatrização de órgão interno e externo).

A invenção também inclui o uso de um anticorpo da presente invenção para a fabricação do medicamento para o tratamento da doença ou distúrbio como descrito neste.

Será realmente aparente por uma pessoa com habilidade comum nas técnicas relevantes que outras modificações e adaptações adequadas a uma composição, método e aplicação descritas neste sejam óbvias e podem ser feitas sem separação a partir do escopo da invenção ou qualquer forma de realização deste. Tendo agora descrito a presente invenção em detalhes, o mesmo será mais claramente entendido pela referência aos exemplos seguintes, que são incluídos para o propósito apenas da ilustração e não são pretendidos a ser limitantes da invenção. Exemplos Exemplo 1

PRIMEIRA GERAÇÃO DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS HUMANOS QUE LIGAM-SE ESPECIFICAMENTE AO IL-6

O propósito deste Exemplo foi para fazer os anticorpos monoclonais humanos anti-IL-6 de partida do anticorpo IL-6 de murino conhecido como B-E8 (também conhecido como Elsilimomab).

Um processo de avaliação foi realizado usando um vírus de vacina com base no princípio de seleção de anticorpo a fim de identificar regiões VH e VK humanas que, quando formado em par com as regiões VK ou VH do anticorpo B-E8 de murino, os anticorpos formados que ligam-se especificamente ao IL-6. O VH e VK humano selecionado foram então usados para selecionar o VK e VH humano, respectivamente, que ligam-se especificamente ao IL-6. Os detalhes do vírus da vacina com base no princípio da avaliação são divulgados, por exemplo, no Pedido de Publicação de Patente N°. 2005/0196755. Para este processo de avaliação, usando B-E8 de murino ou VH humano, 18 genes VK humanos diferentes foram identificados. As seqüências de ácidos nucleicos dos genes VK humanos identificados e suas seqüências de aminoácidos correspondentes foram determinados. As seqüências de aminoácidos dos genes VK humanos identificados é apresentada na Tabela 8, abaixo: Tabela 8: Seqüências de aminoácidos das regiões VK humanas identificadas

vk Seaüência de aminoácidos seqid no: ll 12 divmtqsp ailjs vtpgdrvslsçra^ liksvsosisgipsrfsgsgsgsdfti^insvepedvgvyyconghsf 1 1 pltfgagtklelk ll 51 eivltospgtlslspgeratlscrasotidssylawyookpgoapr llv ygassratgipdrfsdsgsgtdfílitsrt .fppdf a vyymnv akspitfgqgtkle 2 l158 D VVMTOSPSS VS AS VGDRVTITCRASODIDNFrA wvookpgk apn lliykvsslrsgvpsrfsgsrsgtdftltitslopedfatyfcootrr 3 fpltfgpgtkle l159 drvmtospsslsasvgdrvtitcrasotissylnwyookpgkppíct, liyaasslesgwsrfsgsgsgteftltisslopedlatyycoòans 4 fpltfgggtkle ll 64 diqmtospsslsasvgdrvtitcrasosistylnwvookj.gkapki. uyaasslosgvpsrfsgsgsgtdftltisslopedlatyycoosyr s pltfgggtkxeik ll 65 diomtospsslsasvgdsvtttcrasosisiyt .nwyootcpgk apdt .t. iyatcty^sgvpsrfsgrgsgthftltidslopedfatyycootyrn 6 lftfgqgtkle l166 diomtospsslsasvgdsvtvtcrasokmrtyt hwvqqkpnk ap kllfyd vçflqngvpsrfsgrasgteftltrsdtqpedfatyycoos ydtpltfgqgtkleik 7 ■ VK Seqüência de aminoácidos SEQI» NO: LI67 DWMTQSFSSVSASVGDRVTITCRASOVIDSWLHWYORRPntrAP^ ILrY^AULQSGVPSRFSGSGFGTEFTLTrSGLOPEDFATYFCOOGY SFPnTGQGTRLEIK 8 L168 DV VMTQSPSSLSASVGGRVTITCRASOTIGDYT.NWVOOÍÍ Pr^ APR LLIYSASIYQSGVPSRFSASGSGTDFTLTISSLQPEDFATYSCOOSYS FPL1FGGGTKLEIK - 9 Ll 69 EIVLTQSPSSLS AS AGDTVTiACRASOGIRTAL AWYOOiCPriR ΜΡίΓΤ ^ÊAXBmSGVSPKFSGSGFGTDFTLTINSLQPEDFATYYCOOFND 10 Ll 70 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASOSrSRWLA WYOOKTPr^ A Pfc- LLISKASSLEYGVPSRFSGSGSGTFF AI TISNVQPEDFATYYCQQSF 11 L171 DIQMTQSPSSLS AFVGDGVTMTCWASOSIND YLNWYHOT? PGP AP ELLVFAA,SNLQrGVPSRFRGSGRET YFTITINSLQPEDSGT YPCQQT SSFPLTFGGGTKT .F. 12 Ll 72 DIQMTQSPSSLSASVGDSVTTrCRASOTISDFLNWYOOKPG^ A PITT LIHASSNL^GVPSRFSGSGSGTDFTLTISDLQPEDFATYSCQQIYS TLGTFGQGTRLE ^ 13 Ll 73 DVVMTQSPSSLSASVGGRVTJTCRASOTTGDYLWYOORPGífAPi? g^^^^^SGSGSGTHFTLTrsSLQPEBFATYSCQQSXS 14 L174 DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRNINTYT.NWYOOírpr^AP^ LLVHSASTLQSGAPSRFSGSGYGTEFTLIISSLQPDDFATYYCOOGY NTLTFGPGTKLF. ^ 15 H 75 ErVLTQSPSSI^ASVGDRVTISCRASONIIDYLhlWYOmrPr^xnJTTr ISGTSTLQSGVPSRFSGSGFGTDFTLTISSVQPEDVATYYCOOGITGT 16 mFGGGTKLEIK V W Ll 89 DIQMTQSPSTLS ASVGDR VTITCRASOSMSDYT KTWVOOirPnir Δ P^ LLTYSASGLQS G VPSRFS GS GS GTDFTLTTÍNLQPED VAAYYCQQSF SFPLTFGPGTK-TFre- i^ii- 17 Ll 98 DIQMTQSPSSLS AFVGDGVTMTCWASOSIND YT NWVHnBPHPAP ELLVFAASNLQIGVPSRFRGSGSETYFTLTINSLQPEDSGTYFCONG HSFPLTFGGGTfCT.F.I 18

As seqüências sublinhadas representam CDR 1 a 3, respectivamente.

Além disso, usando o B-E8 de murino ou VK humano, 7 genes VH humanos diferentes foram identificados. As seqüências de ácidos nucleicos dos genes VH humanos identificados e suas seqüências de aminoácidos correspondentes foram determinados. As seqüências de aminoácidos dos genes VH humanos identificados é apresentada na Tabela 9, abaixo: Tabela 9: Seqüências de aminoácidos das regiões VH humanas identificadas

VH Seqüência de aminoácidos SEQIII NO: H415 QVTIJCESGPALVTCPTQTLTLTCTFSGFSLTTSGMCVSWIROPPGK AEE WLALIYWDDDKR WPST R SR T TTTk' TYTSTf wnvv r τκΛΤΤνίωη PVDTATYYCARSYDDYLYYALDYWGOOTT .VT 19 H8S4 QVTLKESGPAI.VKPTQTLTLTCTFSGFSLTTSGMCVSWIROPPGK ALEWLALIYWDDDKRYNPSI RKRT tttifntrkmnwt torwkít» PV0TATYYCARSHDD YLYYALD YWGOGTT.VT 20 H1077 QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLRTSGVSVGWFROPPGK ALEWLALVYWDDDRR YNPST .KNR I .TTTR DTKTOJnVVT tlutwnyt DPVDTATYYCARS YDD YL YYALD ywgogtt .VT 21 Hl 078 QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCIFSGFSFKTSGVSVGWmOPPGK ALEWLALIYWDDDKRYSPSLK>ÍR I .TTTR HTSifNnwt TVTTMM^ pvdtatyycarsyddylyyaldywgogtt.vt 22 Hl 079 qvtlkesgptlvkptqtltltcsfsgfslstsgvgvgwvroppg KALE WLAFIF VTODDKYYSPSI.RSR T.TTTk-DTSIf krn vvt tmtom DPVDTATYYCARS YDD YLYY ALDYW GOGTT .VT 23 Hl 081 QVTLKESGPIXVKPTQTLTLTCTFSGFSLSI^eY^VGWIRQPPGK ALEWLALIFWDDDKHYSPSr.íCSRI.TTTífDTSTrwnX/^vt -nuTMTwn PVDTAT YYCARS YDD YLYYA LDYWGQGTT .VTVSS 24 Hl 089 QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMCVSWIROPPGK AlJEWLTLTYWDDDKJtYSPSLRTRLTrncnTSKMOV\nTMTNnurn PVDTATYYCARSYDDYLYYALDYWGOGTT.VT 25

As seqüências sublinhadas representam CDR 1 a 3, respectivamente.

As seqüências de aminoácidos das regiões VH humanas identificadas exibem a identidade de seqüência significante por um outro como ilustrado na Tabela 10, abaixo:

Tabela 10: Seqüência das identidades dos aminoácidos entre os VH humanos

H1079 H415 HI081 H1078 Hl 089 H1077 H1079 89 94 90 90 89 H415 89 92 90 95 90 H1081 94 92 93 92 91 H1078 90 90 93 90 94 H1089 90 95 92 90 89 H1077 89 90 91 94 89

Um alinhamento das regiões VH humanas identificadas é descrita na FIG. 1.

Todos dos VK humanos identificados foram formados em par

com todos dos VH humanos identificados. Os anticorpos resultantes destas formação em pares foram testados por sua capacidade de ligar-se ao IL-6 por ELISA. Os anticorpos foram também testados pela atividade funcional nos ensaio bloqueadores de proliferação celular induzida por IL-6 ou da ligação IL-6 ao IL-6R.

A afinidade dos anticorpos selecionados por IL-6 foi medido

por ELISA, com base nos procedimentos apresentado em J. of Immunology Metods 77 (1985) 305-319. Brevemente, as placas foram revestidas com 2 μg/ml de mBE4 e a captura do anticorpo no tampão de revestimento, 100 μΐ por reservatório. As placas foram incubadas durante a noite. A seguir, as placas foram lavadas 3 vezes e destampadas secas. As placas foram então bloqueadas com 200 μΐ por reservatório do diluente de ensaio ou 10% de FBS em PBS e incubadas por 2 horas. Enquanto as placas foram bloqueadas, a reação de competição foi apresentada na solução pela pré-incubação de 65 μΐ de Ab a cerca de 2 ng/ml de concentração com 65 μΐ de várias concentrações de rhIL6 (a partir de 5,12 μg/ml a 5 ng/ml em diluições seriais de 1:2 por 12 concentrações diferentes totais incluindo sem um IL-6). A reação foi conduzida a RT por 3 a 4 horas. Portanto, o rhIL6 final na solução de competição foi de 98,46, 49,23, 24,62, 12,31, 6,15, 3,08, 1,54, 0,77, 0,38, 0,19, 0,10 e 0 nM, de acordo com IL-6 como monômero. A seguir, as placas foram lavadas 3 vezes e destampadas secas 50 ng/ml de IL-6 humano recombinante em 100 μΐ foi adicionado para cada reservatório ao BE4 de placas revestidas. As placas foram incubadas por 1 a 2 horas. As placas foram lavadas 3 vezes e destampadas secas. A seguir, 100 μΐ de amostras mAb acima foram adicionados ao IL-6 de placas capturadas. As placas foram incubadas em RT por 2 horas. (Portanto, qualquer não ligação de mAb neste ponto será medido por ELISA). As placas foram então lavadas 5 vezes e destampadas secas. 100 μΐ de detecção de IgG F(ab)'2-HRP anti-humano de cabra Ab (Jackson lab) foi adicionado em diluições 1:20.000 ou diluições 1:40.000 (dependente do lote) e as placas foram incubadas por 1 a 2 horas. As placas foram lavadas 7 vezes e destampadas secas. A seguir, o substrato desenvolvedor (partes iguais de cada reagente no equipamento) foi pré- misturado e deixado aquecer em temperatura ambiente antes do uso. Então 100 μΐ do desenvolvedor foi adicionado para cada reservatório. As placas foram deixadas para desenvolver por 15 minutos não selados em um puxador no escuro. Finalmente, o desenvolvimento foi interrompido pela adição 100 μΐ de 2N de H2SO4 para cada reservatório e as placas foram lidos como ponto final em 450 nm a 570 nm.

O ensaio bloqueador foi conduzido como descrito em outra

parte destes.

A partir da formação em pares VH/VK, a primeira geração de trinta e três mAbs foram identificados. Esta primeira geração mAbs são listados na Tabela 11, abaixo:

Tabela 11: Sumário da primeira geração de anticorpos humanos anti-IL-6

mAb VH VK Afinidade (IC50 itt ΙϊΜ) Atividade bloqueadora em proliferação de células 88* H383 L112 0,5 Ι "! Ί I 123 H884 Ll 12 1,1 179 H415 Ll 12 0,85-0,42 -H- 181 H415 L159 12,9 182 H415 L164 β,3 183 H415 Ll 65 1,75 -H- 184 Η415 Ll 66 2,4 , 185 H41S L167 1,5 186 H415 Ll 68 2,0 187 H415. Ll 69 2,4 188 H415 Ll 70 1,4 189 H415 L171 0,72 190 H415 Ll 72 1,9 4-4· 191 H415 L173 1,5 192 H415 Ll 74 2,3 193 H415 Ll 75 2,7 197 H884 L167 3,7 201 . H884 L171 2,0 202 H884 Ll 72 2,4 BiAb VH VK Afinidade (IC50 In IlM) Atividade bloqueadora da prolileraçao <fe células induzida por IL-6 205 H884 Ll 75 7,4 237 H1077 L15S 6,5 239 HI078 L158 9,6 241 H1079 L158 6,5 242 H1079 Ll 59 2,2 HHh 246 H1081 L151 5,5 247 Hl 081 L158 4,0 248 Hl 081 L159 2,0 265 H415 Ll 89 6,2 273 H884 L171 275 H415 Ll 98 0,7 -H- 285 Hl 089 Ll 58 2,5 286 H108 9 Ll 59 2,5 297 HlOSI Ll 72 11,5 + 416 Hl 079 Ll 98 0,6

*mAb 88 é um anticorpo de controle B-E8 quimérico.

Como na Tabela acima mostra, todos da primeira geração de anticorpos humanos anti-IL-6 obtidos exibem alguns graus de afinidade por IL-6 e atividade funcional no ensaio bloqueador. Brevemente, o IL-6 recombinante humano biotinilado em 12,5 ng/ml foi incubado com anticorpos anti-IL-6 nas concentrações indicadas por 20 minutos em gelo. As células U266 bloqueadas por FcR (cerca de 250.000 células) foram então adicionadas e co-incubadas por um outro 30 minutos em gelo. Após a lavagem, estreptavidina-PE foi adicionada para mostrar a IL-6 ligado à superfície celular. Após a lavagem, as células foram analisadas pela citometria de fluxo.

A capacidade de certos exemplos na primeira geração de mAbs para bloquear a ligação IL-6 ao receptor IL-6 em células U266 é descrita na FIG. 2.

Este Exemplo portanto demonstra a produção de diversas funções biolológicas, os anticorpos monoclonais humanos anti-IL-6. Exemplo 2

MELHORAMENTO DA AFINIDADE DOS ANTICORPOS HUMANOS ANTI-IL-6

A mutagênese foi usada para melhorar a atividade adicional adicional da primeira geração de mAbs humanos identificados no Exemplo 1. Em particular, a mutagênese com base em PCR foi usada para introduzir a seqüência de mudanças de aminoácido no CDR3 de VH (H1079) e VK (LI98), de mAb416.

A fim de introduzir a variabilidade, a seqüência NNK foi introduzida em posições específicas nos genes VH e VK, onde N pode ser A, T, G, ou C, e K é T ou G. Usando NNK, todos os 20 aminoácidos e 1 códon interrompido pode ser introduzido em cada posição (aqui são 32 combinações possíveis 4x4x2 com a seqüência NNK).

Todos dos resíduos CDR3 tanto em Hl079 quanto em L198 foram mudados, um resíduo no período. A cadeia leve (VK) CDR3 tem 9 aminoácidos, e a cadeia pesada (VH) CDR3 tem 12 aminoácidos. Os resíduos selecionados em CDRl e CDR2 de Hl079 foram mudados usando este mesmo processo.

Para criar as mutações, um iniciador anti-sentido que codifica um aminoácido substituído com NNK e amplifica CDR3 e a região de estrutura 4 que foi formada em par com um iniciador de sentido que hibridiza na região de estrutura 1 da cadeia de interesse de uma reação PCR. Cada produto PCR codifica a cadeia VK ou VH inteira e tem uma posição de aminoácido convertido ao NNK.

Os produtos PCR foram clonados em um vetor de expressão de mamífero contendo o domínio constante do gama I humano (por mutantes VH), ou capa (por mutantes VK), neste gerando o comprimento total das cadeias leves e pesadas.

Os clones foram colocados no formato de placa de 96 reservatórios, com 1 clone por reservatório. O DNA de plasmídeo foi purificado a partir de cada clone e então cada clone foi expressado com a cadeia complementar (por exemplo, um VK mutado seria expressado com um VH) pela transfecção nas células CHO. Os ligadores de afinidade mais alta foram selecionados e caracterizados. Um sumário deste procedimento é mostrado na FIG. 3.

Quando mutantes de afinidade mais altos foram identificados, os mutantes foram seqüenciados, o mAb resultante foi produzido pela transfecção em células CHO e então testados para a especificidade, afinidade e função na citometria de fluxo com base no ensaio bloqueador IL-6.

Por este processo, o seguinte H1079 e variantes L198 foram

obtidas:

Tabela 12: As variantes Hl079 obtidas pela mutagênese com base em PCR

Mudança em amino ácido+ § Seqüência SEQID NOi Nova designçâo de VH S95F QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTS GVGVGWVROPFGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTITÍODTSKNOVVLTMTNMDPVDT ATYYCARpjYDDYLYYALDYWGOGTLVT 26 H1511 Y96A QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSIS GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTITKDTSKNQWLTMTNMDPVDT atyycars|ÃJddylyyaldywgogtlvt 27 H1420 Y96G QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSIS GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTITKDTSKNOVVLTMTNMDPVDT ATYYCAJR^GbDYLYYALDYWGOGTLVT 28 H1432 YlOOaM QYTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSIS GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTITKDTSKNOWLTMTNMDPVDT ATYYCARSYDDYLp|YALD YWGOGTLVT 29 H1515 Mudança em amino ácido'*' Seqüência^ SEQID NO: Nova designção de VH AlOOcS QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTS GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTITKDTSKNOVVLTMTNMDPVDT atyycarsyddylyyPldywgogtlvt 30 Hl 362 LlOOdF QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTS GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTrTKDTSKNOWLTMTNMDPVDT ATYYCARS YDDYLYYApjDYWGOGTLVT 31 Hl 437 Y102T QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLS1S GVGVGWVROPPGKALEWLAFIFWDDDKYY SPSLESRLTrTKDTSKNOVVLTMTNMDPVDT ATYYCARSYDDYLYYALDÍrtWGOGTLVT 32 H1461

* O número de aminoácido representa o número Kabat.

§ O resíduo em caixa é o resíduo que foi mudado com relação à seqüência de Hl 079. As seqüências sublinhadas representam os CDRs 1 a 3, respectivamente.

Tabela 13: Variantes L198 pela mutagênese com base em PCR

Mudança de amino- ácidos* Seqüência ® SEQID NO: Neva designação de VK N90S DIOMTOSPSSLS AFVGDGVTMTCWASOSIND YLNWYHORPGEAPELLVFAASNLOIGVPSRF RGSGSETYFTnLTINSLOPEDSGTYFCCfjGHSF PLTFGGGTKLEI 33 L314 N90H DIOMTOSPSSLS AFV GDG VTMTCWASOS1MD YLNWYHORPGEAPELLVFAASNLOIGVPSRF rgsgsetyftltinslopedsgtyfcoPghsf pltfgggtklei 34 L30S N90L DIOMTOSPSSLS AFVGDGVTMTCWASOSIND YLNWYHORPGEAPELLVFAASNLOIGVPSRF RGSGSETYFTLTINSLQPEDSGTYFCQflGHSF PLTFGGGTKLEI 35 L303 G91A DIOMTOSPSSLS AFVGDGVTMTCWASOSIND YLNWYHORPGEAPELLVFAASNLOIGVPSRF RGSGSETYFTLTINSLOPEDSGTYFCONjÃlHSF PLTFGGGTKLEI 36 l298 H92W DIOMTOSPSSLSAFVGDGVTMTCWASOSIND YLNWYHORPGEAPELLVFAASNLOIGVPSRF FPLTFGGGTKLEI 37 L321 * O número de aminoácido representa o número Kabat.

§ O resíduo em caixa é o resíduo que foi mudado com relação à seqüência de L198. As seqüências sublinhadas representam os CDRs 1 a 3, respectivamente.

Os seguintes anticorpos foram feitos usando as variantes H1079 apresentadas na Tabela 12 formando pares com L198: Tabela 14: mAbs feitos pelo formação de par das variantes Hl079 com L198

Designação de mAb

Variante de H1079

VK

Afinidade (IC50 In BlM)

1123 926 963 1127 810 968 992

H1511 H1420 H1432 H1515 Hl 362 Hl 437 Hl 461

L198 LI9S Ll 98 Ll 98

Ll 98 Ll 98 Ll 98

0,11 0,07 0,09 0,09

0,22

0,053

0,065

Os anticorpos monoclonais 416, 926, 810, 963, 968 e 992 foram testados, junto com o controle mAb 88, para a capacidade de bloquear a ligação IL-6 às células que expressam IL-6R. Brevemente, o IL-6 recombinante humano em 1 nM foi incubado com anticorpos anti-IL-6 em 1 μg/ml a 0,1 μg/ml a 10 ng/ml a 0 ng/ml por 30 minutos em gelo. As células U266 bloqueadas por FcR (cerca de 250.000 células) foram então adicionadas e co-incubadas por um outro 30 minutos em gelo. Após a lavagem, um anticorpo de camundongo específico por IL-6 purificado (B-F6) foi adicionado e incubado com as células por 30 minutos em gelo. Finalmente um gama Fc de camundongo anti-cabra policlonal conjugado por APC foi adicionado e incubado por 30 minutos em gelo. Após a lavagem, as células foram analisadas pela citometria de fluxo liberando na população de apenas células livres. Cada uma das amostras iniciadas com 250.000 células. Toda os dados de citometria de fluxo é baseado no mínimo de 10.000 células vivas (PI-negativo). Os resultados destes experimentos são apresentados na FIG. 4.

Os seguintes anticorpos foram feitos usando as variantes L198 apresentadas na Tabela 13 formando pares com H1079: Tabela 15: mAbs feitos pela formação de pares das variantes L198 com H1079

Designação de mAb Variante de L198 VH Afinidade (IC50 ÍO üM) 774 770 765 808 L3Í4 L305 L298 L321 Hl 079 H1079 H1079 Hl 079 0,16 0,12 0,07 0,08

As mutações múltiplas de Hl079 foram também preparados pelo procedimento resumido acima.

Tabela 16: Mutantes múltiplos H1079 obtidos pela mutagênese com base em PCR

Mudanças em amino- ácido*

Seqüência S

SEQ ID NO:

Nova designação

de VH

Y96A AlOOcS

Y96A LlOOdF

Ύ96Α AIOOdS LlOOdF

Y96A AlOOcS LlOOdF Y102T

qvtlkesgptlvkftqtltltcsfsqfslstâ gvgvgwvrqppgkalewlafifwdddkyy SESLíSRLtitkdtsknqwltmtnmdpvdt

SPSLESRLTITKDTSTCMOW ATYYCARSlÃbDYLYY§LD

lYWGQGTLVT

qvtlkesgptlvkptqtltltcsfsgfslsts gvgvgwvrqppgkalewlafifwdddkyy s£slesrltitki>tsknqvvltmtnmdpvdt

atyycarsBddylyya^Idywgogttjvt

qvtlkesgptlvkptqtltltcsfsgfslsts gvgvgwvrqppgkalewlafifwdddkyy spm^rltttkdtsknqwltmthmdpvdt

SPSLESRLTITKDTSKNQW ATYYCARSfÃbDYLYYgiD

YWGQGTLVT

QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSIS GyGYGWVRQPPGKALEWLAFIFWDDDKYY Sm^RLnTKDTSKNQVVLTMTOMDPVDT ATYYCARSl^DYLYYgF|D{j|WGOGTLVT

38

HI519

39

H1520

40

H1521

41

H1522

* O número de aminoácido representa o número Kabat.

§ Os resíduos em caixa são os resíduos que foram mudados com relação à seqüência de H1079.

As seqüências sublinhadas representam os CDRs 1 a 3, respectivamente.

Além disso, uma variante de cadeia pesada, denominado Hl553, foi criado pela fabricação de uma mudança de aminoácido simples (F52W) em CDR2 de Hl079. O Hl553 tem a seguinte seqüência de aminoácido:

QVTLKESGPTLVKPTOTLTLTCSFSGFSLSTSGVGVGWV RQPPGKALEWLAFIWWDDDKYYSPSLESRLTITKDTSKNO VVLTMTN MDPVDTATYYCARSYDDYLYYALDYWGOGTLVT (SEQ ID N°: 42).

Além disso, a mudança do aminoácido observado no CDR2 de Hl553 foi combinado com os quatro substituições de aminoácido CDR3 em Hl522 para criar Hl579, tendo uma seguinte seqüência de aminoácido:

QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGVGVGWV RQPPGKALEWLAFIWWDDDKYYSPSLESRLTITKDTSKNO VVT ,TMTN MDPVDTATYYCARSADDYLYYSFDTWGOGTLVT (SEQ ID N°: 43).

Os seguintes mAbs foram obtidos pela combinação das variantes VH e VK, como mostrado na Tabela 17, abaixo:

Tabela 17: mAbs criados pela combinação das variantes VH e VK:

Defigiufiu Variante Variante Afinidade (IC50 In nM) de mAb de VH de VK 1154 Hl 522 Ll 98 0,027 1155 Hl 522 L305 0,032 1156 Hl 522 L314 0,023 1192 ΗΪ 553 Ll 98 0,029 1259 Hl 579 LI98 0,028 1337 Hl 579 L305 0,047 1338 H1579 L314 0,031 1339 H1579 L298 0,026 1340 H1579 L321 0,028

A afinidade dos mAbs exemplares por IL-6 foi determinado pela IC50 de ELISA e por Biacore, como mostrado na Tabela 18, abaixo. O IC50 de ELISA foi realizado como descrito acima. A análise da afinidade por Biacore foi realizado de acordo com os protocolos do fabricante usando tampão de HBS-EP (Biacore AB). Brevemente, 100 μg/ml de IgG anti- humano de cabra (Sigma-Aldrich Co.) foi imobilizado na superfície de um chip de sensor CM5 (Biacore AB) com afinidade para cada IL-6 mAb determinado pela injeção de 15 μΐ de 5 μg/ml do mAb em uma taxa de fluxo de 5 μΐ/minutos seguido pela injeção de 100 μΐ de 40 nM a 1,25 nM de IL-6 humano (Strathmann Biotec GmbH & Co.KG) em uma taxa de fluxo de 30 μΐ/minutos em um sistema Biacore 2000 (Biacore AB).

Tabela 18: Afinidade de mAbs por IC50 de ELISA e Biacore

mAb Afinidade (nM) por EUSAICSO Afinidade (nM) por Biacore SS (B-E8 quimérico) 1339 1259 1340 1338 1337 926 416 0.01 0.026 0.028 0.028 0.031 0.047 0.033 0-056 0,02 0,071 0,093 não determinado 0,072 não determinado 0,13 0,3

Os anticorpos monoclonais 1259, 1337, 1338, 1339 e 1340 são IgGl de capa. Todos os domínio constantes são os mesmos. Os domínios constantes são nos plasmídeos de expressão e portanto não variam de mAb ao mAb. Apenas os domínios VH e VK foram selecionados da biblioteca.

Este Exemplo portanto ilustra a produção de diversos anticorpos adicionais monoclonais humanos anti-IL-6 que compreende as cadeias de variantes VH e VK obtidas pela mutagênese com base em PCR. Exemplo 3

SEQÜÊNCIAS E VETORES

SEQÜÊNCIAS DE CADEIA LEVE E PESADA EXEMPLARES

As seqüências de nucleotídeos que codificam as cadeias leves e pesadas B-E8 de mAb de murino são descritas na Tabela 19: Tabela 19: seqüências de cadeias leves e pesadas de B-E8

Cadeiapesada de B-ES de mAb

GTCGACCCACGCGTCCGGACatggacaggcttacttcttcattcctgctgctgattgtccctgcatatgtctt

gtccCAAGTTACTCTAAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGAAGCCCTCACAG

ACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTITCACTGAGCACTTCTGGT

ATGGGTGTAGGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGr

TGGCACACATTTGGTGGGATGATGATAAGTACTATAACCCATCCCTGA

AGAGÇCAGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAGAAACCAGGTATTCCTC

AAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACTTACTACTGTGCTCG

ATCCTATGATGACTATCTTTACTATGCTTTGGACTACTGGGGTCAAGGA

ACCTCAGTCACCGTCTCCrrCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTÁTCCACT

GGCCCCTGGATCTGC (SEQIPN0:44) _

Letras minúsculas representam a seqüência líder Seqüências sublinhadas representam CDRs 1-3, respectivamente Letras em itálico representam a seqüência Oy 1 de camundongo Cadeia leve de B-ES de mAb

GTCGACCCACGCGTCCGGAAAATTTGAAGatggtgtccacttctcagctccttggacttttgctttt ctggacttcagcctccagatgtGACATTGTGATGACTCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGT GACTCCAGQAGATAGAGTCTCTCTTTCCTGCAGGGCCAGCCAGAGTATT AGCGACTACTTACA CTGGT ATCAACAAAAATCACATGAGTCTCC AAGGC rrcrCATCAAATCTGTTTCCCAATCCATCTCTGGGATCCCCTCC AGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGTCAGATTTCACTCTCAGTATC AACAGTGTGGAACCTGAAGATGTTOG AGTGT ATTACTGTCAAAATGGTCAC AG CTTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCrG^rGCTTgC ACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCATGCGAGATTCGAACATCT CSEQID KO:45)

Letras minúsculas representam a seqüência líder Seqüências sublinhadas representam CDRs 1-3, respectivamente

Letras em itálico representam a seqüência Cic de camundongo _

As seqüências de aminoácidos das cadeias leve e pesada de mAb 926 humano são descritos na Tabela 20: Tabela 20: Seqüências de cadeias leves e pesadas de mAb 926

Cadeia pesada de mAb 926

MGWSCnLFLVATATGAHSQVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCSFSGFSLSTSGVG

VGwwQppGKALEwLAFffwDDDKYyspsi^iajTITKDTsKNQVVLTMTN

MDPVDTATYYCARSADDYLYYALDYWGQGTLVTVSSASTKGPS WPLAIiSS

KSTSGGTAALG€LVKI)YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV

WWSSSLGTQIYICNVNKKPSlvrre^

SWLFPPKPKIiTlMISRTlWTCVVAnD^^

PREEQWSTYRVVSVLWLHQDWLNGK^YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSRDELTBO^QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKXTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K (SEQ EP NO:46)

Cadeia leve de mAb 926

MGWSCnLFLVATATGVHSDIQMTQSPSSLSAFVGDGVTMTCWASQSINDYL NWYHQRPGEAPELLVFAASNLQIGVPSRFRGSGSETYFTLTfNSLQPEDSGTYF CQNGHSFPLTTGGGTKXEIKRTVAAPSWIFPPSDEQLK^ REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ IP NO:47)

As seqüências de aminoácidos de cadeias leves e pesadas de mAb 1339 humano são descritos na Tabela 21: Tabela 21: Seqüências de cadeias leves e pesadas de mAb 1339 Cadeia pesada de mAb 1339

MGWSCIULFLVATATGAHSQVTLKESGFILVKPIQTLTLTCSFSGFSLSTSGVG VGWVRQPPGKALEWLAITW^WDDDKYYSPSI^SRLTITKDTSKNQVVLTM MDPVDT ATYYCARS ADDYLYYSFDTWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK

STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV_

TWSSSUnXJTYiaNFVN^

VFLFPPKPKDTIJVIISRTPEWCVVVDVSHEDPEVTCF>rWYVDG

REEQYNSTYRVVSVLTVmQDWLNGK£YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQP

REPQWTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENKY3CTTPP

VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNWSraVM^ K

(SEQID NO:4S) _

cadeia leve de mAb 1339

MGWSCni^LVATATGVHSDIQMTQSPSSLSAFVGDGVTMTCWASQSINDYL NWYHQRPGEAPELLVFAASNLQIGVPSRFRGSGSETYFTLTINSLQPEDSGTYF CQNAHSFPLITGGGTKLEIKRTVAAPSVFIEPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP AKVQWKVDNAI^SGNSQESVTEQDSKDSXySI^STLTr^SKAD YEKHKVY ACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ÇSEQID KO:49) _____

CONSTRUÇÃO DE VETOR DE GENE DUPLO EXPRESSANDO AS CADEIAS LEVES E PESADAS DE MAB 1339 CLONE DE CADEIA PESADA Hl 579 EM Pcongl O Hl579 foi subclonado do vetor de expressão original pela digestão da região variável com enzimas de restrição BssHII e BstEII no vetor pesado pACeL. O Hl579 pAcEL-H foi digerido com HindIII /ApaI e ligado no clone HindIII / Apal-cut pConGl. H1579.pConGl foi verificado a seqüência.

CLONAGEM DA CADEIA LEVE L298 EM pCONK2

O L298 foi subclonado do vetor de expressão original pela digestão da região variável com ApaLl /XhoI e ligando em um vetor que transfere a vacina VKE para fornecer os locais de restrição necessários para codificar a seqüência compatível pela clonagem do gene duplo subseqüente. A seqüência variável foi amplificado por PCR ao adicionar o local HindIII na extremidade 5' e local BsiWI na extremidade 3'. O produto de PCR foi clonado no TOPO para facilitar a digestão completa com HindIII e BsiWI na reação de clonagem subseqüente. O L298.TOPO foi verificado a uma seqüência, digerido com HindIII/BsiWI e ligado em HindIII/BsiWI- cut pConK2. L298.pConK2 foi verificado a seqüência. CRIAÇÃO DO VETOR DE GENE DUPLO

O cassete de expressão de cadeia pesada foi liberado com um fragmento NotI/ PvuI com uma digestão de 24 horas de H1579.pConGl. L298.pConK2 foi digerido com AviII para evitar a re-formação de clones parentais, e o cassete da região variável L298 foi liberado com a digestão de PvuI e NotI. Seguindo a purificação em gel, os cassetes de cadeia pesadas e leves foram ligados em uma razão de 1:1 em uma reação de ligação durante a noite a 14° C. As colônias foram avaliadas pela presença de tanto cadeia pesada quanto leve inserido pelo PCR celular total, os clones positivos foram confirmado pelo seqüenciamento. Um mapa do vetor do gene duplo é descrito na FIG. 9. A seqüência do vetor de gene duplo é apresentado na Tabela 22: Tabela 22: Seqüência de nucleotídeo do vetor do gene duplo mAb 1339

1 GCTTTCTCAT AQCTCAOGCT OTAOOTAtCT CACTTCCGTG TAGGTCGTTC QtTPCCAAQCT ei GGGCTOTtrpg CACtJAACCC C CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG 121 TCTTGAflTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG 181 GATTAGCAQA OOOAOGTATO TAGG CGGT GC TACAGAGTTC TTGAAjGTGGT QGCCTAACTA 241 COOCTACACT aoaagaacag tatttggtat CTGCGCTCia CTOAAGCCAO ttaccttcgg 301 AftAAAGAOTT QGTAfiCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTOSTAiGCG GTGGTTTTTT 361 tgtttgcaag CAGCftGATTA CQCQCftOAAA AAAAfiSGATCT CAAGAAG ATC ctttgATCTT 421 TTCTACGQGG TCTGACGCTC AQTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATaAG 4B1 ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATC CT TTTAAATTAA AAATGAAGTT TTAAATCAAT s41 CTAAAQTATA TATGAGTAAA cttggrCtga CftGTTACCAA TG CTTAATCA QTGAGGCACC 601 TATCTCAGCG at ctgtctat TTCGTTCATC CATftGTTOCC TOACT CCCCO T03TGTAGAT eei AACTACGftiTA cgogagggct taccatctgg ccccagtgct gc aatgatac cgcgagaccc 721 acgctcaccg gctccaqatt TATCACCAAT AAACCAGCCA GCCGGAAGGG CCGAGCGCAG 7b1 aaigt ggtcct gcaactttat ccgcct ccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag 841 agtaagtagt TcaccAorrA ATACTTTGCG caacgttgtt gcCATTGCTA caggcatcgt 901 QGT1Q TC ACOC tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc nattcccaac gatcaaggcg 961 AGTTACATGA tcccccatgt tgtgcaaaaa ag cg gttagc TCCTTOGGTC ctccgatcgt 1021 tütcaoaagt aagttggccg cagtgttatc ACTCATGGTT ATGGCAGCAC tgcataattc 1081 tcttactctc atgccatccg taagatgctt ttctotgact g gtcagtact caaccaagtc 1141 attctgagaa tagtgtatgc qgcgaccgag ttoctcttgc c cggcgt caa cacgggataa 1201 taccgcgcca catagcagaa ctttaaaaqt OCTCA.TCATT g gaaaacq tt cttcggggcq 1261 aaaactctca agqatcttac cgctott gaq atccagttcg ATGiT AACCCA CTCG TGCACC 1321 CAACTGATCT tcaccatctt TTACTTTCAC cagcgtttct «gotgagcaa AAACAGGftAG 1381 gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt 1441 CCTTTTTCAA tattattgaa gcatttatca GGGTTATTGT ctcatgagcg gatacatatt IS01, TGAaTGTATT TAGAAAAATA AACAAATAGG ogttccgcgc ACATTTCCCC gaaaagtocc 1561 ACCTGACGTC TAAGAAACCA ttattatcat gacatt AACC tataaaaata isgdgtatcac 1621 gaggccctga tggctctttg cggcacccat cgttcgtaax 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Exemplo 4

CRIAÇÃO DE UMA LINHA CELULAR CHO QUE EXPRESSA MAB 1339

O CHO-Kl HD, uma linha celular que foi adaptada para desenvolver em cultura de suspensão de alta densidade, foi transfectada com vetor de gene duplo mAb 1339 (como descrito no Exemplo 3, acima). As células CHO-Kl HD foram carregadas em suspensão até o período da transfecção. O dia antes da transfecção, as linhas de suspensão foram semeadas em placas de 6 reservatórios na presença de soro deixando a ligação das células.

As quatro transfecções separadas foram realizadas, cada um separado 7 dias, usando as passagens subseqüentes das células CHO-Kl HD e recentemente o DNA purificado e digerido a partir de preparações de DNA de plasmídeos separados. Cada semana, as células foram semeadas em duas placas de 6 reservatórios, um placa para um DNA de 2,5: 1: razão de lipofectamina, e outros por uma razão de 3,0: 1. Portanto, um total de 48 grupos foram transfectados no curso de 4 semanas. Cada grupo foi seguido e desenvolvido e os níveis de produção de anticorpo; não sobreviveram muito grupos na seleção do medicamento. Os grupos são denominados pela seguinte nomenclatura: nome de mAb / número de transfecção, DNA: razão de lipofectamina, letra do reservatório transfectado, e número da placa.

(Exemplo: mAb 1339/grupo 1 2,5 B2).

A produtividade foi medida usando um ensaio de secreção de 3 dias. O dado é apresentado em titulador mAb ^g/ml) e produtividade específica ^g/milhão de células/dia). O titulador e especificidade do anticorpo são determinados por ELISA. Os resultados do ensaio de secreção de todos os 1339 grupos testados são apresentados na Tabela 23.

Tabela 23: A produtividade das células CHO transfectadas

Grupo mAb IL-6 Cone. de mAb SPR Célula final (em ng/ml) (Hg/células E6/dia) fig/células E6 no. (x IO6) TRANSFECÇÃO 1 mAb 1339/1 2.5 Al pool (2E+05) 6,34 1019 9,057 1,400 mAb 1339/1 2.5 Al pool (2E+05) 7,15 2,020 6,059 2,360 mAb 1339/1 25 Al (5E+05) 10,10 3,367 10,100 2,000 mAb 1339/1 2.5 Al(lE+06) 17,68 3,274 9,822 3,600 mAb 1339/1 25A1 #D2 1,60 3,048 9,143 0350 mAb 1339/grupo A2 1 2.5 0,40 0,437 1,311 0,610 mAb 1339/grupo Bl 1 2.51 0,78 0,765 2,294 0,680 mAb 1339/grupo B2 1 2.5 10,18 18,244 54,731 0,372 mAb 1339/1 2.5 B2 (2E+05) 28,81 27,166 81,499 0,707 mAb 1339/1 2.5 B2 (2E+05) 23,95 20,790 62,370 0,768 mAb 1339/1 2.5 B2 (2E+05) 10,58 21,374 64,121 0,330 mAb 1339/1 Z5 82 (5E+05) 54,21 24,255 72,765 1,490 mAb 1339/1 Z5 B2 (5E+05) 37,23 20,683 62,050 1,200 mAb 1339/1 2.5 B2 (1E+06) 77,50 24,603 73,810 2,100 mAb 1339/grupo Cl 4,29 9,226 27,677 0,310 mAb 1339/grupo C2 1 2.5 0,26 0,231 0,692 0,737 mAb 1339/1 25 C2 #D1 0,00 0,000 0,000 1,180 mAb 1339/1 2.5 C2 #D2 0,48 0,281 0,842 1,140 TRANSFECÇÃO 2 mAb 1339/grupo Cl 2 2.5 5,89 3,812 11,437 1,030 mAb b 1339/grupo 2 2.5 C2 2,95 0,624 1,873 3,150 TRANSFECÇÃO 3 mAb 1339/grupo Al 3 2.5 0 0,000 0,000 1,160 mAb 1339/grupo A2 3 2.5 0,56 0,213 0,640 1,750 mAb 1339/grupo Bl 3 2.51 0 0,000 0,000 1,340 mAb 1339/grupo B2 3 2.5 0,35 0,175 0326 1,330 mAb 1339/grupo Cl 3 2.5 0 0,000 0,000 2,040 mAb 1339/grupo C2 3 2,5 0,71 0,601 1,802 0,788 mAb 1339/grupo Al 33.0 0,80 0,368 1,103 1,450 mAb 1339/grupo A2 3 3.0 0 0,000 0,000 0,110 mAb 1339/grupo A2 3 3.0 0 0,000 0,000 0,220 mAb 1339/grupo Bl 3 3.0 0 0,000 0,000 2,730 mAb 1339/grupo B2 3 3.0 0,89 0,436 1,309 1,360 mAb 1339/grupo C2 3 3.0 0 0,000 0,000 1,130

O mAb produziu a partir dos experimentos de secreção de

pequena escala que é descrita na FIG 10. Exemplo 5

ESPECIFICIDADE DE ANTICORPO E ATIVIDADE BIOLÓGICA ESPECIFICIDADE DE ANTICORPO

O mAb 1339 purificado foi testado para confirmar a especificidade por IL-6. O mAb 1339 purificado foi testado por ELISA para a ligação de um painel de antígenos de controle, incluindo insulina humana, albumina de soro humano, hemoglobina humana, e albumina de soro bovino. Nenhuma ligação não específica foi vista nestes antígenos. (Dados não mostrados).

Além disso, o mAb 1339 purificado e o controle mAb 88 foram testados por ELISA para a ligação de um painel de membros da super- família IL-6: CNFT, oncostatina M, IL-11, e NNT-1. Como mostrado nas FIGs. 5A e 5B, nenhum mAb 1339 ou mAb 88 ligam-se a qualquer uma das citocinas no ELISA.

INIBIÇÃO DE PROLIFERAÇÃO CELULAR HUMANA E MURINO INDUZIDO POR IL-6

A fim de avaliar a atividade biológica do mAb anti-IL-6 humano, e sua capacidade para exibir a proliferação celular de mieloma B9 de murino induzido por IL-6 (FIG. 12) e proliferação celular U266 humano induzido por IL-6 (FIG. 13) foi avaliado. A linha celular B9 de murino é IL-6 humano sensível.

Como mostrado na FIG. 12, mAbs 926, 1259, 1337, 1338, 1339 e 1340 todos mostraram um efeito inibidor dependendo da dose na proliferação celular de mieloma induzido por IL-6. Por exemplo, em concentrações mAb de 100 ng/ml, o nível de inibição observado com mAbs 926, 1337, 1338 e 1339 é muito fechado ao nível de inibição observado com o mAb B-E8 de murino.

Como mostrado na FIG. 13, mAbs 416, 926, e 1339 mostraram um efeito inibidor dependente da dose na proliferação celular de mieloma humano induzido por IL-6. INIBIÇÃO DA INTERAÇÃO ENTRE IL-6 E IL-6R

Ainda para avaliar a atividade biológica do mAb anti-IL- humanos, sua capacidade de exibir a interação entre IL-6 e o receptor IL-6 foi avaliado usando citometria de fluxo.

A citometria de fluxo foi realizada usando métodos padrão. Primeiro, bloqueando o receptor Fc em células U266 foi realizado. O U266 é uma linha de plasmacitoma humana produzindo IgE e IL-6. As células U266 foram coletadas e rotacionadas. As células foram contadas e lavadas duas vezes em tampão de fluxo (FB) e ajustadas a aspereza de 120% do número de células finais necessárias para o ensaio, calculando 150.000 células por reservatório de uma placa de 96 reservatórios. As células foram recolocadas em suspensão em FB a 5 χ 10 e 6 células/ml e ajustadas a 0,1 mg hulgG/ml. As células foram misturadas e incubadas em gelo por 20 a 30 minutos. A seguir, 15 volumes de FB foram adicionados e as células foram rotacionadas. O sobrenadante foi descartado e as células foram lavadas duas vezes mais com 20 ml de FB. As células foram então recolocadas em suspensão a uma densidade de 1,5 χ 10 e 6 células/ml e 100 μΐ foi adicionado por reservatório à placa de pré-incubação. A seguir, os mAbs humano IL-6 humano recombinante e IL-6 anti-humano foram co-incubados. Todas as diluições necessárias de mAbs e IL-6 em FB foram primeiro preparados. A seguir 50 μΐ de mAb foi pré-incubado com 50 μΐ de IL-6 (preferivelmente em 1 nM final) por 30 minutos em gelo após a mistura da placa em um turbilhão de placa por segundos em força média. Os reservatórios controlados para cada mAb foram incluídos com no IL-6 ou IL-6 na ausência de anticorpo. A seguir, as células U266 foram co-incubadas com mAbs IL-6 e anti-IL6. As células bloqueadas e lavadas foram adicionadas em 100 μΐ de FB à mistura IL6/MAb acima. O volume da incubação final foi de 200 μΐ. As células foram incubadas por 30 minutos em gelo. As etapas de lavagem entre as incubações foram realizadas como os seguintes: Inicialmente a placa de incubação foi rotacionada em 250 xg por 4 minutos em uma centrífuga apresentando 4o C. As placas foram cuidadosamente agitadas e secadas sem deslocamento dos grânulos. A seguir, as células foram recolocadas em suspensão pelo turbilhonamento da placa por 10 segundos em força máxima. O 220 μΐ de FB foi adicionado e a placa foi novamente rotacionada. Esta etapa de lavagem foi repetida mais uma vez e os grânulos celulares submetidos ao turbilhonamento foram finalmente recolocados em suspensão em 100 μΐ da diluição do anticorpo respectivo. Então as células foram incubadas com o anticorpo B-F6 de anti-IL-6 de camundongo. 100 μΐ do anticorpo [5 μg/ml em FB] foi adicionado diretamente aos grânulos celulares lavados acima que foram perdidos pelo turbilhonamento leve e então cuidadosamente novamente submetidos ao turbilhonamento em força média por 15 segundos. As células foram incubadas por 30 minutos em gelo e lavadas. As próximas células foram incubadas com IgGl anti-camundongo de cabra ligado por APC. Os grânulos celulares lavados, perdidos, foram recolocados em suspensão em 100 μΐ do anticorpo rotulado [2,5 μg de aloficocianina/ml]. As células foram mantidas no escuro e turbilhadas e incubadas em gelo por 30 minutos. As células foram lavadas e recolocadas em suspensão em 200 a 400 μΐ de FB. A análise pela citometria de fluxo foi então conduzida. Primeiro, o iodeto de propídeo (PI) foi adicionado usando uma diluição 150 vezes do estoque de PI. Uma barreira viva com base na exclusão de PI para ver em FI-3 versos FSC foi apresentado. PI foi adicionado apenas para as próximas amostras das células para ajudar a incubação estendida das células com PI.

Como mostrado nas FIGs. 6A e 6B, mAbs 926, 1259, 1337, 1338, 1339 e 1340 todos mostraram um efeito inibidor na ligação IL-6 ao receptor IL-6 em células U266 sob aumento das concentrações de IL-6 com a concentração do anticorpo retendo a constante em 0,5 μg/ml. Um nível notavelmente alto da inibição foi observado com o mAb 1339. Similarmente, as FIGs. 7A e 7B mostraram um efeito inibidor de mAbs 242, 416, 926 e 1339 na ligação IL-6 ao receptor IL-6 em células U266 sob o aumento das concentrações de mAb com a concentração IL-6 retendo a constante em 500 ng/ml.

O efeito inibidor do mAbs também foi demonstrado quando IL-6 biotinilado foi usado (dados não mostrados).

Estes resultados mostram que os mAbs 242, 416, 926, 1259,

1337, 1338, 1339 e 1340 são capazes de inibir a interação entre IL-6 e este receptor e portanto confirmar a atividade biológica destes mAbs.

Finalmente, um ensaio de competição como descrito no Exemplo 2 para a FIG. 4 foi realizado usando os mAbs 416, 926, 1259, 1337,

1338, 1339 e 1340, junto com o controle mAb 88. Como mostrado na FIG. 8, todos os mAbs testados exibiram um efeito inibidor dependendo da dose na ligação IL-6 recombinante humana ao receptor IL-6.

Exemplo 6

ESPECIFICIDADE DE MAB DE MABS 926 E 1339

A reatividade cruzada com IL-6 de murino e rato foi determinado por mAbs 926 e 1339 por ELISA como descrito acima. Os reservatórios foram revestidos com 100 ng/ml de IL-6 de murino ou rato (R&D Systems) em 100 μΐ/reservatório. Para os experimentos usando anticorpos monoclonais humanos, capa IgGl (IgGl de mieloma humano; Sigma-Aldrich Co.) mAb foi usado como um controle. O IgG-HRP anti- humano de coelho (Dako) foi adicionado em uma diluição de 1/10.000 em 100 μΐ/reservatório para a detecção de mAbs. Os controles dos anticorpos policlonais (pAb) incluindo IL-6 anti-humano de cabra biotinilado (Peprotech), anti-IL-6 de murino de cabra biotinilado (Peprotech), e IL-2 anti- humano de cabra biotinilado (Peprotech). Para os pAbs, a estreptavidina-HRP (Prozyme) foi adicionado para a detecção em 100 μΐ/reservatório. Os anticorpos foram aplicados em concentrações de 12,5, 25, 50, e 100 ng/ml. Como mostrado nas FIGS. 14 e 15, respectivamente, os mAbs 926 e 1339 não detectam o IL-6 recombinante de murino ou rato revestido por ELISA.

Exemplo 7

DETECÇÃO DE IL-6 NATURAL DE HUMANO E MACACO

A capacidade de mAbs 926 e 1339 de detectar o IL-6 natural humano foi analisado em monócitos humanos ativados. Os monócitos a partir das células mononucleares sangüíneas periféricas foram ativadas por 24 horas com lipopolissacarídeos (LPS; 20 μg/ml; Sigma-Aldrich Co.) a fim de introduzir a expressão intracitoplásmica de IL-6 (dados não mostrados). As células foram tratadas com 1 μg/ml de Brefeldin A (Sigma-Aldrich Co.) 6 horas antes do final do tratamento de LPS para exibir o transporte de IL-6 ao sobrenadante. As células ativadas foram analisadas pela citometria de fluxo como previamente descrito com 0,8 μg/ml de mAbs biotinilados 88, 1339, 926, B-E8 (IL-6 anti-murino; Diaclone), B-Zl (IgGl de camundongo; Diaclone), e IgGl de capa humano (Sigma-Aldrich Co.). Três experimentos independentes foram realizadas para cada anticorpo. Os experimentos representativos são mostrados na FIG. 16, mostrando que os mAbs 926 e 1339 consideram o IL-6 intracitoplásmico natural. Adicionalmente, a capacidade dos mAbs 926 e 1339 de detectar IL-6 natural humano do soro humano foi determinado por ELISA usando o kit ELISA de IL-6 humano de alta sensibilidade Diaclone de acordo com os protocolos do fabricante. Usando o último kit, a detecção do IL-6 humano foi determinado pela competição de mAb (5 μ^ηιΐ) com o anticorpo IL-6 revestido nos reservatórios de placa de ELISA. A adição do soro contendo IL-6 (batelada 5 de soro AB; Blood Center, Besancon, France) na ausência de um resultado de anticorpo competidor na detecção de IL-6 pelo kit de ELISA. A adição do soro contendo IL-6 na presença de um resultado do anticorpo competidor na redução na capacidade do kit de ELISA de detectar IL-6 no soro. Os anticorpos de controle incluídos B-E8 (IL-6 anti- murino; Diaclone), B-Zl (IgGl de camundongo; Diaclone), e IgGl de capa humano (Sigma-Aldrich Co.). Como mostrado na FIG. 17, os mAbs 926 e 1339 detectam o IL-6 natural do soro do doador saudável.

A capacidade de mAb 1339 de detectar IL-6 natural do macaco a partir do soro do macaco reso (BPRC, Países Baixos) foi determinado por ELISA usando o kit de ELISA IL-6 de macaco U-Cytech (U- Cytech biosciences) de acordo com os protocolos do fabricante. Usando o último kit, a detecção de IL-6 de macacos foi determinado pela competição de mAb (5 μg/ml) com o anticorpo IL-6 revestido nos reservatórios de placa de ELISA. A adição do soro contendo IL-6 na ausência de um resultado do anticorpo competidor na detecção de IL-6 pelo kit de ELISA. A adição do soro contendo IL-6 na presença de um resultado de anticorpo competidor na redução da capacidade do kit ELISA detectando IL-6 no soro. O IgGl de capa de macaco serve como um anticorpo de controle. Como mostrado na FIG. 18, o mAb 1339 detecta o IL-6 natural a partir do soro de macaco.

Tendo agora totalmente descrito na presente invenção em alguns detalhes pelo meio da ilustração e exemplo para o propósito da clareza e entendimento, este será óbvio a uma pessoa comum habilitada na técnica que o mesmo pode ser realizado pela modificação ou mudança na invenção dentro de uma faixa ampla e equivalente das condições, formulações e outros parâmetros sem afetar o escopo da invenção ou qualquer forma de realização específica deste, e que tais modificações ou mudanças são pretendidas a ser abrangidas dentro do escopo das reivindicações anexas.

Todas as publicações, Patentes e Pedidos de Patentes mencionados nesta especificação são indicados no nível daquela pessoa habilitada na técnica pelo qual esta invenção pertence, e são neste incorporado pela referência ao mesmo extensão como se cada publicação individual, Patente ou Pedido de Patente foi especificamente e individualmente indicado a ser incorporada pela referência.

Claims

1. Anticorpo monoclonal isolado, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende: (i) um CDRl-VH que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 51, SEQ ID N°: 52, SEQ ID N°: 53, SEQ ID N°: 54, SEQ ID N°: 55, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 51 a 55 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; (ii) um CDR2-VH que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 56, SEQ ID N°: 57, SEQ ID N°: 58, SEQ ID N°: 59, SEQ ID N°: 60, SEQ ID N°: 61, SEQ ID N0: 97, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 56 a 61 ou 97 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; (iii) um CDR3-VH que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 62, SEQ ID N°: 63, SEQ ID N°: 64, SEQ ID N°: 65, SEQ ID No: 66, SEQ ID N°: 67, SEQ ID N°: 68, SEQ ID N°: 69, SEQ ID N°: 70, SEQ ID N°: 71, SEQ ID N°: 72, SEQ ID N°: 73, SEQ ID N0: 98, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 62 a 73 ou 98 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; e (b) uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende: (i) um VL-CDRl que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 74, SEQ ID N0: 75, SEQ ID N°: 76, SEQ ID N°: 77, SEQ ID N°: 78, SEQ ID N°: 79, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 74 a 79 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos;(ii) um VL-CDR2 que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 80, SEQ ID N°: 81, SEQ ID N°:82, SEQ ID N°: 83, SEQ ID N°: 84, SEQ ID N°: 85, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 80 a 85 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; (iii) um VL-CDR3 que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 86, SEQ ID N°: 87, SEQ ID N°: 88, SEQ ID N°: 89, SEQ ID N°: 90, SEQ ID N°: 91, SEQ ID N°: 92, SEQ ID N°: 93, SEQ ID N°: 94, SEQ ID N°: 95, SEQ ID N°: 96, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 86 a 96 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que o dito anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

2. Anticorpo monoclonal isolado humano, caracterizado pelo fato de que compreende um CDR de cadeia pesada variável (CDR1 VH) tendo a seqüência de aminoácido T-S-G-X1-X2-V-X3 (SEQ ID N°: 99), em que X1, X2 e X3 podem ser qualquer aminoácido e em que o dito anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

3. Anticorpo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X1 é metionina (M) ou valina (V).

4. Anticorpo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que X1 é valina (V).

5. Anticorpo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X2 é cisteína (C), alanina (A), serina (S) ou glicina (G).

6. Anticorpo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que X3 é serina (S) ou glicina (G).

7. Anticorpo monoclonal isolado humano, caracterizado pelo fato de que compreende a cadeia pesada variável CDR2 (CDR2-VH) tendo a seqüência de aminoácido X1-X2-X3-W-D-D-D-X4-X5-Y-X6-P-S-L-X7-X8 (SEQ ID N°: 100), em que X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7 e X8 pode ser qualquer aminoácido e em que o dito anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

8. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X1 é leucina (L), fenilalanina (F) ou valina (V).

9. Anticorpo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que X1 é leucina (L).

10. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X2 é isoleucina (I) ou valina (V).

11. Anticorpo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que X2 é isoleucina (I).

12. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X3 é tirosina (Y) ou fenialanina (F).

13. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X4 é lisina (K) ou arginina (R).

14. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o X5 é arginina (R), tirosina (Y), ou histidina (H).

15. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X6 é serina (S) ou asparagina (N).

16. Anticorpo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que X6 é serina (S).

17. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X7 é arginina (R), lisina (K), ácido glutâmico (E) ou serina (S).

18. Anticorpo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que X7 é lisina (K).

19. Anticorpo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que X8 é serina (S) ou asparagina (N).

20. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica um CDR de cadeia pesada variável (CDRl-VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 51, SEQ ID N°: 52, SEQ ID N°: 53, SEQ ID N°: 54, SEQ ID N°: 55, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N0: 51 a 55 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDRl-VH liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

21. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada variável CDR2 (CDR2-VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 56, SEQ ID N°: 57, SEQ ID N0: 58, SEQ ID N°: 59, SEQ ID N°: 60, SEQ ID N°: 61, SEQ ID N°: 97 e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 56 a 61 ou 97 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDR2-VH liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

22. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada variável CDR3 (CDR3-VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 62, SEQ ID N°: 63, SEQ ID N°: 64, SEQ ID N°: 65, SEQ ID N°: 66, SEQ ID N°: 67, SEQ ID N°: 68, SEQ ID N°: 69, SEQ ID N°: 70, SEQ ID N0: 71, SEQ ID N°: 72, SEQ ID N°:73, SEQ ID N°: 98, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 62 a 73 ou 98 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDR3-VH liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

23. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica um CDRl de cadeia leve variável (CDRl-VL) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N0: 74, SEQ ID N°: 75, SEQ ID N°: 76, SEQ ID N°: 77, SEQ ID N°: 78, SEQ ID N°: 79, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 74 a 79 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDRl-VL liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

24. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica um CDR2 de cadeia leve variável (CDR2-VL) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 80, SEQ ID N°: 81, SEQ ID N°: 82, SEQ ID N°: 83, SEQ ID N°: 84, SEQ ID N°: 85, e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 80 a 85 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDR2-VL liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

25. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica um CDR3 de cadeia leve variável (VL-CDR3) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: SEQ ID N°: 86, SEQ ID N°: 87, SEQ ID N°: 88, SEQ ID N°: 89, SEQ ID N°: 90, SEQ ID N°: 91, SEQ ID N°: 92, SEQ ID N°: 93, SEQ ID N°: 94, SEQ ID N°: 95, SEQ ID N°: 96 e uma seqüência de aminoácido que é idêntica por qualquer uma da SEQ ID N°: 86 a 96 exceto pelas substituições de 1 a 5 aminoácidos; em que uma molécula de anticorpo que compreende o dito CDR3-VL liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

26. Anticorpo monoclonal isolado, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: (1)H415 (SEQIDN0: 19); (2) H884 (SEQID N°: 20); (3) H1077 (SEQ ID N°: 21) (4) H1078 (SEQ ID N°: 22); (5) H1079 (SEQ ID N°: 23); (6) Hl081 (SEQ ID N°: 24); (7) H1089 (SEQ ID N°: 25); e (8) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer um da SEQ ID N°: 19 a 25; e (b) uma região de cadeia leve variável (VL) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: (9) Ll 12 (SEQ ID N°: 1); (10) L151 (SEQ ID N0 :2); (11) L158 (SEQ ID N0 :3); (12) L159 (SEQ ID N°: :4); (13) L164 (SEQ ID N°: :5); (14) L165 (SEQ ID N°: :6); (15) L166 (SEQ ID N°: :7); (16) L167 (SEQ ID N°: 8); (17) L168 (SEQ ID N°: 9); (18) L169 (SEQ ID N°: 10); (19) L170 (SEQ ID N°: ii); (20) L171 (SEQ ID N°: 12) (21) L172 (SEQ ID N°: 13); (22) L173 (SEQ IDN°: 14); (23) L174 (SEQ ID N°: 15); (24) LI75 (SEQ IDN°: 16); (25) L189 (SEQ IDN°: 17); (26) L198 (SEQIDN0: 18); e (27) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer um da SEQID N°: 1 a 18 e em que o dito anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

27. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H415 (SEQ ID N°: 19) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

28. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H884 (SEQ ID N°: 20) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

29. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl 077 (SEQ ID N°: 21) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

30. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl078 (SEQ ID N°: 22) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

31. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl079 (SEQ ID N°: 23) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

32. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl081 (SEQ ID N°: 24) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

33. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl089 (SEQ ID N°: 25) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

34. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H415 (SEQ ID N°: 19) e o dito VL compreende Ll 12 (SEQ ID N°: 1).

35. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H415 (SEQ ID N°: 19) e o dito VL compreende L165 (SEQ ID N0: 6).

36. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H415 (SEQ ID N°: 19) e o dito VL compreende L172 (SEQ ID N°: 13).

37. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H1079 (SEQ ID N°: 23) e o dito VL compreende Ll 59 (SEQ ID N°: 4).

38. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H415 (SEQ ID N°: 19) e o dito VL compreende L198 (SEQ ID N°: 18).

39. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl079 (SEQ ID N°: 23) e o dito VL compreende L198 (SEQ ID N°: 18).

40. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H1081 (SEQ ID N°: 24) e o dito VL compreende L172 (SEQ ID N°: 13).

41. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl077 (SEQ ID N°: 21) e o dito VL compreende L158 (SEQ ID N°: 3).

42. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende H1078 (SEQ ID N°: 22) e o dito VL compreende L158 (SEQ ID N°: 3).

43. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl081 (SEQ ID N°: 24) e o dito VL compreende L159 (SEQ ID N°: 4).

44. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VH é uma variante de Hl 079.

45. Anticorpo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a dita variante de H1079 compreende uma ou mais diferenças de aminoácidos no CDRl, CDR2 ou CDR3 de Hl079.

46. Anticorpo de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que a dita variante de H1079 compreende uma ou mais diferenças de aminoácidos em CDR3 de Hl 079.

47. Anticorpo de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a dita variante de Hl079 é selecionada do grupo que consiste de H1511 (SEQ ID N°: 26); H1420 (SEQ ID N°: 27); H1432 (SEQ ID N°: (28); H1515 (SEQ ID N°: 29); H1362 (SEQ ID N°: 30); H1437 (SEQ ID N°: (31) e H1461 (SEQ ID N°: 32).

48. Anticorpo de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a dita variante de H1079 é selecionada do grupo que consiste de H1519 (SEQ ID N°: 38); H1520 (SEQ ID N°: 39); H1521 (SEQ ID N°: (40); e Hl522 (SEQ ID N°: 41).

49. Anticorpo de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o dito VL é uma variante de L198.

50. Anticorpo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a dita variante de L198 compreende uma ou mais diferenças de aminoácidos no CDR1, CDR2 ou CDR3 de Ll 98.

51. Anticorpo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a dita variante de L198 compreende uma ou mais diferenças de aminoácidos no CDR3 de L198.

52. Anticorpo de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que a dita variante de Ll 98 é selecionada do grupo que consiste de L314 (SEQ ID N°: 33); L305 (SEQ ID N°: 34); L303 (SEQ ID N°: 35); L298 (SEQ ID N°: 36); e L321 (SEQ ID N0: 37).

53. Anticorpo de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a dita variante de Hl079 é Hl553 (SEQ ID N°: 42) ou Hl579 (SEQ ID N°: 43).

54. Anticorpo monoclonal isolado, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma região de cadeia pesada variável (VH) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: (1) H1522 (SEQ ID N°: 41); (2) Hl553 (SEQ ID N°: 42); (3) Hl579 (SEQ ID N°: 43); e (4) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer um da SEQ ID N°: 41 a 43; e (b) uma região de cadeia leve variável (VE) que compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: (5) L198 (SEQIDN0: 18) (6) L305 (SEQ ID N°: 34) (7) L314 (SEQ ID N°: 33) (8) L298 (SEQ ID N°: 36) (9) L321 (SEQ ID N°: 37); e (10) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer um da SEQ ID N°: 18, 33, 34, 36 ou 37; e em que o dito anticorpo liga-se especificamente a um antígeno IL-6.

55. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl522 (SEQ ID N°: 41) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

56. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl553 (SEQ ID N°: 42) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80%) idêntica a este.

57. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) ou uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a este.

58. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl522 (SEQ ID N°: 41) e o dito VL compreende L198 (SEQ ID N°: 18).

59. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl522 (SEQ ID N°: 41) e o dito VL compreende L305 (SEQ ID N°: 34).

60. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl522 (SEQ ID N°: 41) e o dito VL compreende L314 (SEQ ID N°: 33).

61. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl553 (SEQ ID N°: 42) e o dito VL compreende L198 (SEQ ID N°: 18).

62. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) e o dito VL compreende L198 (SEQ ID N°: 18).

63. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) e o dito VL compreende L305 (SEQ ID N°: 34).

64. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) e o dito VL compreende L314 (SEQ ID N°: 33).

65. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) e o dito VL compreende L298 (SEQ ID N°: 36).

66. Anticorpo de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o dito VH compreende Hl579 (SEQ ID N°: 43) e o dito VL compreende L321 (SEQ ID N°: 37).

67. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica uma região de anticorpo anti-IL-6 de cadeia pesada variável (VH), em que o dito VH compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste (7) H1089 (SEQ ID N°: 25); (8) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer uma da SEQ ID N°: 19 a 25.

68. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica uma região de anticorpo anti-IL-6 de cadeia leve variável (VL), em que o dito VL compreende uma seqüência de aminoácido selecionado do grupo que consiste de: (1) H415 (SEQ ID N°: 19); (2) H884 (SEQ ID N°: 20); (3) H1077 (SEQ ID N°: 21) (4) H1078 (SEQ ID N°: 22); (5) H1079 (SEQ ID N°: 23); (6) H1081 (SEQ ID N°: 24); de: (1)Ll 12 (SEQ IDN°: 1) (2) L151 (SEQ ID N°: 2) (3) L158 (SEQ ID N°: 3) (4) L159 (SEQ ID N°: 4) (5) L164 (SEQ IDN°: 5) (6) L165 (SEQ ID N°: 6) (7) L166 (SEQ ID N°: 7) (8) L167 (SEQ ID N°: 8) (9) L168 (SEQ ID N°: 9) (10) L169 (SEQIDN0: 10); (11) L170 (SEQIDN0: 11); (12) L171 (SEQIDN0: 12) (13) L172 (SEQIDN0: 13); (14) L173 (SEQIDN0: 14); (15) L174 (SEQIDN0: 15); (16) L175 (SEQIDN0: 16); (17) L189 (SEQIDN0: 17); (18) L198 (SEQIDN0: 18); e (19) uma seqüência de aminoácido que é pelo menos 80% idêntica a qualquer um da SEQ ID N°: 1 ao 18.

69. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica uma região determinante complementar (CDR) de uma região de anticorpo anti-IL-6 cadeia pesada variável (VH) selecionado do grupo que consiste de: (1)H415 (SEQIDN0: 19); (2) H884 (SEQIDN0: 20); (3) Hl077 (SEQ ID N°: 21) (4) H1078 (SEQ ID N°: 22); (5) H1079 (SEQ ID N°: 23); (6) H1081 (SEQ ID N°: 24); e (7) H1089 (SEQ ID N°: 25).

70. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 69, caracterizada pelo fato de que a dita seqüência de nucleotídeo codifica um CDR3 de uma região de anticorpo anti-IL-6 cadeia pesada variável (VH) selecionado do grupo que consiste de:: (1) H415 (SEQ ID N°: 19); (2) H884 (SEQ ID N°: 20); (3) H1077 (SEQ ID N°: 21) (4) H1078 (SEQ ID N°: 22); (5) H1079 (SEQ ID N°: 23); (6) H1081 (SEQ ID N°: 24); e (7) H1089 (SEQID N°: 25).

71. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende a seqüência de nucleotídeo que codifica uma região determinante complementar (CDR) de uma região de anticorpo anti-IL-6 de cadeia leve variável (VL) selecionado do grupo que consiste de: (1)Ll 12 (SEQ IDN°: 1); (2) Ll51 (SEQ IDN°: 2); (3) L158 (SEQ ID N°: 3); (4) L159 (SEQ ID N°: 4); (5) L164 (SEQ ID N°: 5); (6) L165 (SEQ ID N°: 6); (7) L166 (SEQ ID N°: 7); (8) L167 (SEQ ID N°: 8); (9) L168 (SEQ ID N°: 9); (10) L169 (SEQ IDN°: 10); (11) L170 (SEQ IDN°: 11); (12) L171 (SEQIDN0: 12) (13) L172 (SEQIDN0: 13); (14) L173 (SEQ ID N°: 14); (15) L174 (SEQIDN0: 15); (16) L175 (SEQIDN0: 16); (17) L189 (SEQIDN0: 17); e (18) L198 (SEQIDN0: 18).

72. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 71, caracterizada pelo fato de que a dita seqüência de nucleotídeo codifica um CDR3 de uma região de anticorpo anti-IL-6 de cadeia leve variável (VL) selecionado do grupo que consiste de: (I)Ll 12 (SEQ ID N°: 1); (2) L151 (SEQ IDN°: 2); (3) L158 (SEQ ID N°: 3); (4) L159 (SEQ ID N°: 4); (5) L164 (SEQ ID N°: 5); (6) L165 (SEQ ID N°: 6); (7) L166 (SEQ ID N°: 7); (8) L167 (SEQ ID N°: 8); (9) L168 (SEQ ID N°: 9); (10) L169 (SEQ ID Nc : 10); (11) L170 (SEQ ID Nc :H); (12) L171 (SEQIDN0 : 12) (13) L172 (SEQ ID N0 : 13); (14) L173 (SEQ ID N0 : 14); (15) L174 (SEQ ID N0 = 15); (16) L175 (SEQIDN0 : 16); (17) L189 (SEQ ID N0 :17); (18) L198 (SEQIDN0 : 18)- fato de que reivindicação fato de que reivindicação fato de que reivindicação fato de que reivindicação

73. Vetor de expressão, caracterizado pelo compreende uma molécula de ácido nucleico como definida na 67.

74. Vetor de expressão, caracterizado pelo compreende uma molécula de ácido nucleico como definida na 68.

75. Vetor de expressão, caracterizado pelo compreende uma molécula de ácido nucleico como definida na 69.

76. Vetor de expressão, caracterizado pelo compreende uma molécula de ácido nucleico como definida na

77. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor de expressão como definido na reivindicação 73.

78. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor de expressão como definido na reivindicação 74.

79. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor de expressão como definido na reivindicação 75.

80. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende um vetor de expressão como definido na reivindicação 76.

81. Método para tratar uma doença sendo uma doença inflamatória, o dito método, caracterizado pelo fato de que compreende administrar um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou 26 a 66 a um paciente em necessidade deste.

82. Método para tratar uma doença sendo uma doença autoimune, o dito método, caracterizado pelo fato de que compreende administrar um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66 a um paciente em necessidade deste.

83. Método de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que a doença autoimune é artrite reumatóide.

84. Método para tratar uma doença sendo um câncer, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende administrar um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66 a um paciente em necessidade deste.

85. Método de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o dito câncer é mieloma múltiplo.

86. Método de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o dito câncer é selecionado do grupo que consiste de carcinoma renal, câncer de mama, câncer de próstata, linfoma e linfoma pós- transplante.

87. Método para tratar uma doença sendo artrite juvenil idiopática, o dito método, caracterizado pelo fato de que compreende administrar um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66 a um paciente em necessidade deste.

88. Método para produzir um anticorpo monoclonal isolado como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende: (i) cultivar uma célula hospedeira que expressa uma ou mais seqüências de ácidos nucleicos codificando o dito anticorpo e (ii) recuperação do dito anticorpo a partir do meio de cultura.

89. Uso do anticorpo monoclonal isolado como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associado com angiogênese aberrante ou inapropriada, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopática, e condições fibróticas.

90. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo monoclonal isolado como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou 26 a 66 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

91. Anticorpo monoclonal isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66, caracterizado pelo fato de que é para o uso como um medicamento no tratamento da doença ou distúrbio selecionado do grupo que consiste de uma doença ou distúrbio autoimune, a doença ou distúrbio associado com angiogênese aberrante ou inapropriado, câncer, osteoartrite, artrite juvenil idiopático e condições fibróticas.

92. Anticorpo monoclonal isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo inibe a proliferação induzida por IL-6 de células tal como células de mieloma U266 humana ou de murino B9 (ECACC) em um nível de 80% ou maior de inibição.

93. Anticorpo monoclonal isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 19 ou de 26 a 66, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo liga-se especificamente ao IL-6, inibindo a ligação do IL-6 a este receptor em um nível de 80% ou maior de inibição.