MXPA06007963A - Metodos para el tratamiento de la osteoartritis con anticuerpos anti-il-6 o del receptor anti-il-6 - Google Patents

Abstract

La presente invención hace posibles los métodos para el tratamiento de osteoartritis con antagonistas de IL-6 tales como anticuerpos IL-6.

Description

MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA OSTEOARTRITIS CON ANTICUERPOS ANTI-IL-6 O DEL RECEPTOR ANTI-IL-6 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La osteoartritis es una enfermedad que afecta a millones de personas. Los pacientes de osteoartritis padecen síntomas tales como dolor y rigidez de las articulaciones que conducen a deformidades de las mismas y dismin ución o pérdida de la función de la articulación . La aspiri na y fármacos convencionales anti-inflamatorios no esteroides (los NSAI D) tales como el ibuprofeno, diclofenaco , y naproxeno son agentes típicos utilizados para tratar a enfermos de osteoartritis . Existe una necesidad en la técnica de métodos adicionales de tratamiento de la osteoartritis con agentes terapéuticos.

S U MARIO D E LA INVEN CIÓN En un aspecto , la presente invención se relaciona a métodos para el tratamiento de osteoartritis que comprenden: la administración , a un sujeto que padece de osteoartritis, de una composición farmacéutica q ue com prende un portador farmacéuticamente aceptable y u na cantidad terapéuticamente efectiva de u no o más agentes seleccionados del gru po que consiste de: un anticuerpo contra I L-6 y un anticuerpo contra el receptor de I L-6. En ciertas modalidades, la com posición farmacéutica se administra interarticular o intravenosamente. En ciertas modalidades, el anticuerpo receptor de IL-6 y el anticuerpo receptor de IL-6 son anticuerpos monoclonales. En ciertas modalidades, el anticuerpo receptor de IL-6 es tocilizumab. En otras modalidades, el anticuerpo IL-6 es CNTO 328. En ciertas modalidades, la presente invención se relaciona a la administración adicional de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de la sal de calcio del ácido 6-(5-carboxi-5-metil-hexiloxi)-2,2-dimetil-hexano¡co, agentes anti-inflamatorios no esteroidales, piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, quetoprofeno, ibuprofeno, ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, fenilbutazona, aspirina, celecoxib, parecoxib, valdecoxib, etoricoxib, corticosteroides, hyalgan, y synvisc. En ciertas modalidades, el dolor osteoartrítico se puede tratar con un anticuerpo contra IL-6 o un anticuerpo contra el receptor de IL-6. En ciertas modalidades, la presente invención se relaciona a métodos para el tratamiento de osteoartritis que comprenden: la administración, a un sujeto que padece de osteoartritis, de una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo contra IL-6. En ciertas modalidades, la presente invención se relaciona a métodos para el tratamiento de la osteoartritis que comprenden: la administración, a un sujeto que padece de osteoartritis, de una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo contra el receptor de IL-6. En otro aspecto, la presente invención se relaciona al uso de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de: un anticuerpo contra IL-6 y un anticuerpo contra el receptor de IL-6, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la osteoartritis en sujetos.

DEFINICIONES En un entorno clínico, un médico puede evaluar si un paciente padece de osteoartritis por indicadores clínicos estándares, que incluyen métodos radiológicos (por ejemplo, rayos x de las articulaciones afectadas), y determinación de The Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index ("WOMAC") (véase por ejemplo, Creamer et al. (1999) J. Rheumatol. 26: 1785-1792). El término "anticuerpo" se refiere a un polipéptido monomérico (por ejemplo, anticuerpos de cadena sencilla) o multimérico que comprende una región de marco de trabajo de un gen de inmunoglobulina o un fragmento del mismo que específicamente une y reconoce un antígeno. Los genes de inmunoglobulina reconocidos incluyen los genes de regiones constantes kappa, lambda, alfa, gamma, épsilon, y mu, así como los innumerables genes de la región variable de inmunoglobulinas. Las cadenas ligeras se clasifican ya sea como kappa o lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta, o épsilon, lo cual a su vez define las clases de inmunoglobulinas, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. El término "anticuerpo" también incluye polipéptidos que unen antígenos tales como los fragmentos complementarios de determinación de región Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, y fragmentos de región de determinación complementaria (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos quiméricos, y diabodies. El término anticuerpo incluye anticuerpos policlonales y monoclonales a menos que se indique de otra manera. Una unidad estructural de inmunoglobulina ejemplar (anticuerpo) comprende un tetrámero. Cada tetrámero se compone de dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos, cada par tiene una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una "pesada" (aproximadamente 50-70 kDa). El extremo amino de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos responsables principalmente del reconocimiento del antígeno. Los términos cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) se refieren a estas cadena ligera y pesada respectivamente. Como se utiliza en la presente, un fragmento Fd significa un fragmento de anticuerpo que consiste de los dominios VH y CH1; un fragmento Fv consiste de los dominios VL y V de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb (Ward eí al., Nature 341:544-546 (1989)) consiste de un dominio VH. En algunas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo de cadena sencilla (scFv) en el cual dominios VL y VH están apareados para formar una molécula monovalente a través de un conector sintético que los habilita para formar un sola cadena proteica (Bird et al., Science 242:423-426 (1998) y Huston et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)). En algunas modalidades, los anticuerpos son diabodies, es decir, son anticuerpos bivalentes en los cuales los dominios VH y VL se expresan en una cadena de polipéptido simple pero utilizan un conector que es tan corto que permite a los dos dominios aparearse en la misma cadena, de esta manera forzando a los dominios a aparearse con dominios complementarios de otra cadena y creando dos sitios de unión de antígeno. (Véase por ejemplo, Holliger P. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993), y Poljak R. J. et al. Structure 2:1121-1123 (1994)). Un anticuerpo "contra IL-6" es un anticuerpo que une específicamente un polipéptido IL-6. Ejemplos de polipéptidos IL-6 incluyen, pero no se limitan a, un polipéptido IL-6 de ratón (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 2), un polipéptido IL-6 de rata (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 4), y un polipéptido IL-6 de humano (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 6). Un ejemplo de un "anticuerpo contra IL-6" es CNTO 328 (cCLBd), un anticuerpo monoclonal quimérico humano-ratón contra IL-6 (véase por ejemplo, van Zaanen, et al. (1998) Br. J. Haematol. 102: 783-790). Un "anticuerpo contra el receptor de IL-6" es un anticuerpo que une específicamente el dominio extracelular del polipéptido receptor para IL-6. Un ejemplo de un "anticuerpo contra el receptor de IL-6" es MRA (tocilizumab). Ejemplos del polipéptido del dominio extracelular de IL-6R incluyen, pero no se limitan a, un polipéptido IL-6R de ratón (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 8), un polipéptido IL-6R de rata (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 10), y un polipéptido IL-6R de humano (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 12). El término "¡nmunoensayo" es un ensayo que utiliza un anticuerpo para unir específicamente a un antígeno. El inmunoensayo se caracteriza por el uso de las propiedades de unión específica de un anticuerpo particular para aislar, orientar hacia, y/o cuantificar el antígeno. La frase "une específicamente (o selectivamente)" a un anticuerpo o "específicamente (o selectivamente) inmunoreactivo con", cuando se refieren a un antígeno de proteína o péptido, se refiere a la reacción de unión que es determinante de la presencia de una proteína especificada. Típicamente, un anticuerpo une específicamente un antígeno cuando tiene una Kd de al menos aproximadamente 1 µM o menos, más usualmente al menos aproximadamente 0.1 µM o menos, y preferiblemente al menos aproximadamente 10 nM o inferior para ese antígeno. Se pueden utilizar una variedad de formatos de inmunoensayo (por ejemplo, transferencias Western, los ELISA, etc.) para seleccionar anticuerpos específicamente inmunoreactivos con una proteína particular. Por ejemplo, un inmunoensayo de ELISA en fase sólida se utiliza rutinariamente para seleccionar anticuerpos que específicamente inmunoreaccionan con una proteína (véase por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, (1990) para una descripción de formatos y condiciones de inmunoensayos que pueden utilizarse para determinar la inmunoreactividad específica). Como se utiliza en la presente, el término "anticuerpo humano" significa cualquier anticuerpo en el cual las secuencias de dominio variable y constante son secuencias humanas. El término abarca anticuerpos con secuencias que se derivan de genes humanos, pero que se han cambiado, por ejemplo, para disminuir una posible inmunogenicidad, incrementar afinidad, eliminar cisternas que puedan causar plegado indeseable, etc. El término abarca los anticuerpos que se producen de manera recombinante en células no humanas, los cuales pueden impartir glicosilación no típica de las células humanas. Estos anticuerpos se pueden preparar en una variedad de formas, como se describe en lo siguiente. El término "anticuerpo quimérico" como se utiliza en la presente significa un anticuerpo que comprende regiones de dos o más anticuerpos diferentes. En una modalidad, una o más de las CDR se derivan de un anticuerpo huma contra IL-6. En otra modalidad, todas las CDR se derivan de un anticuerpo humano contra IL-6. En otra modalidad, las CDR de más de un anticuerpo humano contra IL-6 se combinan en un anticuerpo quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo IL-6 de humano, una CDR2 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo contra IL-6 y una CDR3 de la cadena ligera de un tercer anticuerpo contra IL-6 de humano, y las CDR de la cadena pesada se pueden derivar de otro u otros anticuerpos contra IL-6. Además, las regiones de marco de trabajo se pueden derivar de uno de los anticuerpos contra IL-6 del cual se están tomando una o más de las CDR o a partir de uno o más de los diferentes anticuerpos humanos. Por ejemplo, una o más de las CDR de un anticuerpo de una especie no humana (por ejemplo, ratón o rata) se puede insertar recombinantemente en un marco de trabajo de anticuerpo humano resultando en un anticuerpo "humanizado".

DESCRIPCIÓN DETALLADA La presente invención se relaciona a métodos para el tratamiento de un sujeto que padece de osteoartritis al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo contra IL-6 o un anticuerpo contra el receptor de IL-6. Se han descrito métodos para generar anticuerpos IL-6 (véase por ejemplo, Wending et al. (1993) J. Rheumatol. 20:259-262; Patente Norteamericana No. 5,618,700), incluyendo los anticuerpos humanizados contra IL-6 (véase por ejemplo, Patentes Norteamericanas Nos. 6,121,423 y 5,856,135), y anticuerpos IL-6R (véase por ejemplo, Patentes Norteamericanas Nos. 5,795,965 y 5,817,790); MRA (tocilizumab; atilzumab; rhPM-1 (Drugs of the Future (2003) 28: 314-319) (Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) los cuales se derivaron del anticuerpo de ratón contra IL-6R de humano PM1 (véase por ejemplo, Hirata et al. (1999) J. Immunol. 143: 2900-2906). Para preparar anticuerpos monoclonales o policlonales de IL-6 e IL-6R, se puede utilizar la técnica conocida en el arte (véase, por ejemplo, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983) Colé et al., pp. 77-96 en Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985)). Además, se puede utilizar la tecnología de visualización en fago para identificar anticuerpos de cadena sencilla y fragmentos heteroméricos de Fab que se unen específicamente a antígenos seleccionados (véase, por ejemplo, McCafferty et al, Nature 348:552-554 (1990), Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)). Típicamente los polipéptidos IL-6 e IL-6R se emplean para generar anticuerpos IL-6 e 1L-6R, respectivamente en el caso de polipéptidos IL-6, se pueden purificar a partir de fuentes naturales, células que secretan de manera natural polipéptidos IL-6. Alternativamente, se pueden utilizar como inmunógeno péptidos sintéticos derivados de secuencias de IL-6 e IL-6R descritas en la presente y conjugadas a una proteína portadora. Además, los polipéptidos recombinantes de IL-6 o IL-6R se pueden emplear para generar anticuerpos afines. Por ejemplo, polipéptidos recombinantes de IL-6 de ratón (Catálogo No. 206-ML-025), IL-6 de rata (Catálogo No. 506-RL-050) e IL-6 de humano (Catálogo No. 206-IL-010) así como un polipéptido recombinante soluble del dominio extracelular de IL-6R de humano (Catálogo No. 227-SR-025) están comercialmente disponibles de R&D Systems Inc., Minneapolis, MN. Además, se pueden producir o aislar los ácidos nucleicos que codifican IL-6 (véase por ejemplo, Hirano et al. (1986) Nature 324: 73-76; Brakenhoff et al. (1987) J. Immunol. 139: 4116-4121; las SEC. DE IDENT. NOS: 1, 3 y 5) e IL-6R (véase por ejemplo, Yamasaki et al. (1988) Science 241: 825-828; las SEC. DE IDENT. NOS: 7, 9 y 11) utilizando técnicas de rutina en el campo de la genética recombinante y química de los ácidos nucleicos sintéticos. Textos básicos que describen los métodos generales de uso en esta invención incluyen Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed., 1989; Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual, 1990; y Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds., 1998. Los anticuerpos policlonales típicamente se pueden generar mediante inmunización de un animal con el antígeno de elección. La inmunización de los animales puede ser mediante cualquier método conocido en la técnica. Véase, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1990. Métodos para inmunizar animales no humanos tales como ratón, conejos, ratas, oveja, cabras, cerdos, ganado y caballos son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Harlow and Lañe, supra, y Patente Norteamericana 5,994,619. En ciertas modalidades, un antígeno de lL-6 se administra con un adyuvante para estimular la respuesta inmune. Adyuvantes ejemplares incluyen el adyuvante de Freud completo o incompleto, RIBI (dipéptidos de muramilo) o ISCOM (complejos ¡nmunoestimulantes). Preferiblemente, si se administra un polipéptido, el programa de inmunización debe implicar dos o más administraciones del polipéptido, separadas por varias semanas. Después de la inmunización de un animal con un antígeno de IL-6 o IL-6R, los anticuerpos policlonales y/o las células productoras de anticuerpos se pueden obtener del animal. En algunas modalidades se obtiene suero que contiene anticuerpos contra IL-6 o contra IL-6R del animal al desangrar o sacrificar el animal. Se puede utilizar el suero como se obtiene del animal, se puede obtener una fracción de inmunoglobulinas a partir del suero, o se pueden purificar los anticuerpos contra IL-6 o IL-6R a partir del suero. La respuesta inmune del animal a una preparación inmonogénica se puede monitorear tomando muestras sanguíneas y determinando el título de la reactividad con la proteína de elección. Cuando se obtienen títulos apropiadamente altos del anticuerpo contra el inmunógeno, se puede recolectar la sangre del animal y se preparan los antisueros. El nivel de anticuerpos IL- 6 o IL-6R en suero se puede analizar utilizando un inmunoensayo IL-6 o un IL-6R. Los anticuerpos policlonales se pueden purificar a partir del suero de un animal inmunizado utilizando técnicas estándares de purificación de anticuerpos y proteínas. También se pueden preparar anticuerpos monoclonales contra IL-6 e IL-6R. En ciertas modalidades, las técnicas de hibridoma se pueden utilizar para generar anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, se pueden preparar líneas celulares inmortalizadas productoras de anticuerpos de células aisladas del animal inmunizado. Después de la inmunización, el animal se sacrifica y los nodulos linfáticos y/o células B esplénicas se inmortalizan. Los métodos para inmortalizar células incluyen, pero no se limitan a, transfectarlas con oncogenes, infectarlas con un virus oncogénico, cultivarlas bajo condiciones que seleccionan células inmortalizadas, sometiéndolas a compuestos carcinogénicos o mutagénicos, fusionándolas con una célula inmortalizada, por ejemplo, una célula de mieloma, e inactivando un gen supresor de tumores. Véase, por ejemplo, Harlow and Lañe, supra. Si se utiliza la fusión con células de mieloma, las células de mieloma preferiblemente no secretan polipéptidos de inmunoglobulina (una línea celular no secretora). Las células inmortalizadas se pueden tamizar utilizando IL-6 o 1L-6R, o porciones de las mismas, o una célula que exprese IL-6 o IL-6R. En ciertas modalidades, el tamiz inicial se puede llevar a cabo utilizando un inmunoensayo ligado a encima (ELISA) o un radioinmunoensayo. En algunas modalidades, los anticuerpos humanos se producen al inmunizar un animal no humano que comprende en su genoma algunos o todos los loci de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana con un antígeno de IL-6 o IL-6R. En ciertas modalidades, el animal no humano puede ser un animal XENOMOUSE™ (Abgenix Inc., Fremont, CA). Otro animal no humano que se puede utilizar es un HuMAb-Mouse®, un ratón transgénico producido por Medarex (Medarex, Inc., Princeton, NJ). Los ratones XENOMOUSE™ son cepas de ratones diseñadas que comprenden fragmentos grandes de los loci de cadenas ligera y pesada de la inmunoglobulina humana y son deficientes en la producción de anticuerpos de ratón. Véase por ejemplo, Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994) y Patentes Norteamericanas Nos. 5,916,771, 5,939,598, 5,985,615, 5,998,209, 6,075,181, 6,091,001, 6,114,598, 6,130,364, 6,162,963 y 6,150,584. Las células B esplénicas de un XENOMOUSE™ se pueden fusionar con un mieloma de ratón no secretor (por ejemplo, la línea celular de mieloma P3-X63-AG8-653) y pueden identificarse anticuerpos monoclonales de la agrupación resultante de hibridoma. Los anticuerpos IL-6 o IL-6R secretados por un hibridoma se pueden purificar a partir de un cultivo de hibridoma y utilizarse en los métodos de la presente invención. Los ácidos nucleicos que codifican las cadenas ligera y pesada del anticuerpo IL-6 o IL-6R se pueden aislar a partir de un hibridoma y expresarse en una célula huésped, por ejemplo, células NSO, células CHO, etc., para proporcionar una fuente de material a partir de la cual se pueden obtener anticuerpos IL-6 o IL-6. En otra modalidad, el animal transgénico se inmuniza con IL-6 o IL-6R, células primarias, por ejemplo, células esplénicas o células sanguíneas periféricas, se aislan de un animal transgénico inmunizado y se identifican las células individuales que producen anticuerpos específicos para el antígeno deseado. El ARNm poliadenilado de cada célula individual se aisla y se lleva a cabo la reacción en cadena de la polimerasa por transcripción inversa (RT-PCR) utilizando cebadores codificantes que se alinean con secuencias de región variable, por ejemplo, cebadores degenerados que reconocen la mayoría o todas las regiones FR1 de los genes de la región variable de la cadena humana pesada y ligera y cebadores no codificantes que se alinean a secuencias de regiones constantes o empalmadas. Los ADNc de la región variable de las cadenas pesada y ligera son entonces clonados y expresados en cualquier célula huésped adecuada, por ejemplo, una célula de mieloma, como anticuerpos quiméricos con regiones constantes de inmunoglobulina respectivas, tal como la cadena pesada y los dominios constantes K o ?. Véase Babcook, J.S. eí al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:7843-48, 1996, incorporada en la presente para referencia. Los anticuerpos contra IL-6 o IL-6R entonces se pueden identificar y aislar como se describe en la presente.

En otro aspecto, la ¡nvención proporciona un método para elaborar anticuerpos contra IL-6 o IL-6R humanizados. En algunas modalidades, se inmunizan ratas o ratones con un antígeno IL-6 o IL-6R como se describe en lo siguiente bajo condiciones que permiten la producción de anticuerpos. Las células productoras de anticuerpos se aislan de los animales, se fusionan con mielomas para producir hibridomas, y los ácidos nucleicos que codifican las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo contra IL-6 o IL-6R de interés se aislan. Estos ácidos nucleicos son subsecuentemente modificados utilizando técnicas conocidas por aquellos expertos en la técnica y como se describe adicionalmente en lo siguiente para reducir la cantidad de secuencia no humana, es decir, para humanizar el anticuerpo, para reducir la respuesta inmune en humanos. En otra modalidad, técnicas de visualización en fago se pueden utilizar para proporcionar bibliotecas que contienen un repertorio de anticuerpos con diferentes afinidades para IL-6 o IL-6R. A modo de ejemplo, un método para preparar la biblioteca de anticuerpos para su utilización en técnicas de visualización en fago comprende el paso de inmunizar un animal no humano que comprende los loci de ¡nmunoglobulina humana con un polipéptido IL-6 o IL-6R para crear una respuesta inmune; extraer las células productoras de anticuerpos del animal inmunizado; aislar el ARN de las células extraídas, retro-transcribir el ARN para producir ADNc, amplificar el ADNc utilizando un cebador, e insertar el ADNc dentro de un vector de visualización en fago de tal manera que los anticuerpos se expresen en el fago. El fago resultante se prueba para inmunoreactividad con un polipéptido IL-6 o IL-6R. Los anticuerpos recombinantes contra IL-6 o IL-6R de la invención se pueden obtener de esta forma. Las técnicas para la identificación de anticuerpos humanos de alta afinidad a partir de tales bibliotecas se describen por ejemplo, en la Patente Norteamericana No. 5,223,409; Solicitudes de PCT Nos. WO 92/18619, WO 91/17271, WO 92/20791, WO 92/15679, WO 93/01288, WO 92/01047, WO 92/09690; Fuchs eí al., BiolTechnology 9:1370-1372 (1991); Hay eí al., Hum. Antibod. Hybridomas 3:1-85 (1992); Huse eí al., Science 246:1275-1281 (1989); McCafferty eí al., Nature 348:522-554 (1990); Griffiths eí al., EMBO J. 12:725-734 (1993); Hawkins eí al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992); Clackson eí al., Nature 352:624-628 (1991); Gram eí al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:3576-3580 (1992); Garrad eí al., BiolTechnology 9:1373-1377 (1991); Hoogenboom eí al., Nuc. Acid Res. 19:4133-4137 (1991); y Barbas eí al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:7978-7982 (1991). Existen equipos comercialmente disponibles para generar bibliotecas de visualización en fago (por ejemplo, el Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catálogo no. 27-9400-01; y el equipo de visualización en fago Stratagene SurfZAP™, catálogo no. 240612) así como sistemas comercialmente disponibles para producir anticuerpos expresados en fago totalmente humanos tales como Cambridge Antibody Technology PLC (Cambridge, Reino Unido) y MorphoSys AG (por ejemplo, HuCAL® GOLD technology, Martinsried, Alemania). Después del tamizado y aislado de un anticuerpo contra IL-6 o IL-6R de una biblioteca de visualización de inmunoglobulina recombinante, los ácidos nucleicos que codifican el anticuerpo seleccionado se pueden recuperar del paquete de visualización (por ejemplo, a partir del genoma del fago) y subclonarse en otros vectores de expresión mediante técnicas estándares de ADN recombinante. Por ejemplo, el ADN que codifica un anticuerpo expresado en fago se puede clonar en un vector de expresión recombinante e introducirse en células huésped de mamífero o células procarióticas como sea apropiado para ese anticuerpo.

Composiciones Farmacéuticas La invención también se relaciona a composiciones farmacéuticas que comprende un anticuerpo contra IL-6 o IL-6R para el tratamiento de sujetos que necesitan el tratamiento para la osteoartritis. El tratamiento puede implicar la administración de uno o más anticuerpos monoclonales de la ¡nvención contra IL-6 o IL-6R, solos o con un portador farmacéuticamente aceptable. Como se utiliza en la presente "portador farmacéuticamente aceptable" significa cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacteriales y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y similares que son compatibles fisiológicamente. Algunos ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables son agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. En muchos casos, agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro de sodio se pueden presentar en la composición. Ejemplos adicionales de sustancias farmacéuticamente aceptables son agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes, conservadores o tampones, los cuales mejoran la vida de anaquel o efectividad del anticuerpo. Las composiciones de esta invención se pueden presentar en una variedad de formas, por ejemplo, formas líquida, semisólida y sólida, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, tabletas, pildoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma particular depende del modo de administración que se pretenda y la aplicación terapéutica. Las composiciones típicas son en las formas de soluciones inyectables o infusibles, tales como composiciones similares a aquellas utilizadas para la inmunización pasiva de humanos. Las composiciones terapéuticas típicamente son estériles y estables bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición se puede formular como una solución, microemulsión, dispersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para altas concentraciones de fármaco. Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar al incorporar el anticuerpo contra IL-6 o IL-6R en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes enumerados previamente, como se requiera, seguido por esterilización por filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan al incorporar el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio básico de dispersión y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados previamente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones estériles inyectables, los métodos de preparación incluyen desecación al vacío y liofilización que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado de una solución previamente esterilizada por filtración del mismo. La fluidez propia de una solución se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de una dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La absorción prolongada de composiciones inyectables puede llevarse a cabo al incluir en la composición un agente que retarda la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina. En ciertas modalidades, la composición de anticuerpo se puede preparar con un portador que protegerá al anticuerpo contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos, y sistemas de liberación microencapsulada. Se pueden utilizar polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como vinilacetato de etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Muchos métodos para la preparación de tales formulaciones están patentados o son generalmente conocidos por aquellos expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978).

Métodos Terapéuticos de Uso En otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar a un sujeto que padece de osteoartritis al administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo contra IL-6 o IL-6R a un sujeto con necesidad del mismo. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad, en dosificaciones y durante periodos de tiempos necesarios, suficientes para inhibir, detener, o permitir una mejora en el padecimiento o condición que se va a tratar cuando se administre solo o junto con otro agente farmacéutico o tratamiento en un sujeto particular, o población de sujetos. El término "sujeto" se refiere a un miembro de la clase Mammalia. Ejemplos de mamíferos incluyen, sin limitación, humanos, primates, chimpancés, roedores, ratones, ratas, conejos, caballos, perros, gatos, ovejas, y vacas. Por ejemplo en un humano u otro mamífero, una cantidad terapéuticamente efectiva se puede determinar expep'mentalmente en un ambiente de laboratorio o clínico, o puede ser la cantidad requerida por los lineamientos de la Dirección de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos, o la agencia extranjera equivalente, para la enfermedad particular y el sujeto que se va a tratar. Se deberá apreciar que la determinación de las formas apropiadas de dosificación, cantidades de dosificación, y rutas de administración, están en el nivel de experiencia ordinaria en las técnicas farmacéutica y médica. Una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo puede variar de acuerdo a factores tales como el estado de la enfermedad, edad, sexo, y peso del individuo, y la habilidad del anticuerpo para obtener una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente efectiva también es una en la cual cualquier efecto tóxico o dañino de un agente es superado por los efectos benéficos terapéuticos. El anticuerpo se puede administrar una o múltiples veces. Por ejemplo, el anticuerpo se puede administrar desde tres veces al día hasta una vez cada seis meses o más prolongado. La administración se puede hacer en un programa tal como tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez cada mes, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, y una vez cada seis meses. La co-administración de un anticuerpo con un agente terapéutico adicional (terapia de combinación) abarca la administración de una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo contra IL-6 o contra IL-6R y el agente terapéutico adicional y administrar dos o más composiciones farmacéuticas separadas, una que comprende el anticuerpo contra IL-6 o contra IL-6R y la otra u otras comprenden el o los agentes terapéuticos adicionales. Además, la co-administración o terapia de combinación se refiere al anticuerpo y agentes terapéuticos adicionales siendo administrados al mismo tiempo que el otro, así como casos en los cuales el anticuerpo y el agente terapéutico adicional se administran a tiempos diferentes. Por ejemplo, un anticuerpo se puede administrar una vez cada tres días, mientras que el agente terapéutico adicional se administra una vez al día. Alternativamente, un anticuerpo se puede administrar antes o subsecuente al tratamiento de la enfermedad con el agente terapéutico adicional. Un anticuerpo y uno o más agentes terapéuticos adicionales (la terapia de combinación) pueden administrarse una vez, dos veces o al menos el periodo de tiempo hasta que la condición sea tratada, mitigada o curada. Por ejemplo, los anticuerpos contra IL-6 y/o IL-6R se pueden co-administrar con agentes tales como anticuerpos TNF-a tales como REMICADE™, CDP-870 y HUMIRA™, moléculas de fusión receptor de TNFa inmunoglobulina (tales como ENBREL™), inhibidores de la COX-2 (tales como celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib y etoricoxib), inhibidores de la metaloproteasa-13 (preferiblemente inhibidores selectivos de MMP-13), agentes anti-inflamatorios no esteroides (los "NSAID") tales como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos tales como naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, quetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, ácido 6-(5-carboxi-5-metil-hexiloxi)-2,2-dimetiI-hexanoico, sales de calcio(gemcabeno de calcio), ligandos de a2d (tales como NEUROTIN™ y PREGABALIN™), y terapias intraarticulares tales como corticosteroides y ácidos hialurónicos tales como hyalgan y synvisc. Los anticuerpos de la presente ¡nvención se pueden administrar mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica que incluyen a través de una ruta oral, mucosal, bucal, ¡ntranasal, ¡nhalable, intravenosa, subcutánea, intramuscular, parenteral, o tópica. En ciertas modalidades, el modo de administración es parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular). En ciertas modalidades, el anticuerpo se administra mediante infusión intravenosa o inyección. En una modalidad particular, el anticuerpo se administra mediante inyección intraarticular, intramuscular o subcutánea. Como se apreciará por el técnico experto, la ruta y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, se puede administra un bolo único, se pueden administrar varias dosis divididas a través del tiempo o la dosis se puede reducir o incrementar proporcionalmente como se indique por las exigencias de la situación terapéutica. Las composiciones parenterales se pueden formular en formas de dosis unitaria para fácil administración y uniformidad de la dosificación. Forma de dosificación unitaria como se utiliza en la presente se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas para dosificación unitaria para los sujetos mamíferos que van a ser tratados, cada unidad conteniendo una cantidad predeterminada del compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Un intervalo ejemplar, no limitante para la cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo de la invención es de 1 a 40 mg/kg. En ciertas modalidades, la dosis es 8-20 mg. En otras modalidades, la dosis es 10-12 mg. En ciertas modalidades, un intervalo de dosis para inyección intraarticular puede exceder 15-30 mg/dosis. Se debe observar que los valores de dosificación pueden cambiar con el tipo y severidad de la condición que se va a aliviar. Se debe entender además que para cualquier sujeto en particular, regímenes específicos de dosificación se deben ajustar a través del tiempo de acuerdo a las necesidades individuales y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de dosificación establecidos en la presente son ejemplares solamente y no pretenden limitar el alcance o práctica de la composición reclamada.

Ejemplos 1-3 MATERIALES y MÉTODOS Los anticuerpos contra IL-6 y los anticuerpos contra el receptor de lL-6 se pueden analizar para su habilidad para disminuir marcadores cuantitativos o cualitativos en modelos in vivo de osteoartritis. Por ejemplo, un modelo de osteoartritis inducido por yodoacetado monosódico (véase por ejemplo, Bove et al. (2003) Osteoarthritis and Cartilage 11:821-830) se pueden llevar a cabo en ratas para evaluar el efecto de los anticuerpos IL-6 en un análisis de relación de peso. En los Ejemplos 1-3 en el Día 0 las ratas se anestesiaron con isofloruro, y la articulación de la rodilla de la pata derecha trasera de una rata Wistar macho se inyectó con 1.0 mg de mono-yodoacetato ("MÍA") en 50 µl de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a través del ligamento infrapatelar y la articulación de la rodilla de la pata izquierda trasera se inyectó con 50 µl de solución salina a través del ligamento infrapatelar. La inyección de MÍA en la articulación resulta en la inhibición de la glicólisis y la eventual muerte de los condrocitos circundantes. En el día antes de la administración del anticuerpo, Día 6 o Día 13 post-inyección de MÍA, la diferencia de peso en la garra trasera entre la articulación artrítica derecha trasera y la articulación izquierda trasera inyectada con solución salina de las ratas Wistar macho (150 g) se determinó con un probador de incapacidad, modelo 2KG (Linton Instrumentation, Norfolk, Reino Unido). El probador de incapacidad tiene una cámara en la parte superior con una pared frontal inclinada hacia delante que soporta las extremidades frontales de una rata, y dos almohadillas de detección de peso, una para cada garra trasera. Las ratas después se administraron además a través de una inyección intra-articular o intraperitonealmente con 50 µl de PBS que contiene 1, 3, 10, 20 ó 30 µg de ya sea un anticuerpo policlonal de cabra contra IL-6 de rata (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN) o un anticuerpo policlonal contra IgG de rata (Producto No. R 5005, Sigma, St. Louis, MO) en el día 7 o el día 14 post-ínyección de MÍA y la diferencia en peso de garra trasera se medió a 0-24 horas post-inyección de anticuerpo. El porcentaje de inhibición de un cambio en la función de la articulación en garra trasera se calculó como el porcentaje de cambio en la distribución de peso de garra trasera para animales tratados contra animales control en el mismo punto de tiempo (por ejemplo, anticuerpo policlonal contra IL-6 contra anticuerpo policlonal contra IgG a 2 horas post-inyección). Por ejemplo, El porcentaje de inhibición de un cambio en la distribución de peso de garra trasera en donde: Wc es la diferencia en peso en garra trasera entre la extremidad izquierda sana y la extremidad artrítica del animal control administrado con anticuerpo contra IgG de rata solo, como se mide en un punto de tiempo particular (por ejemplo, 1 , 4 ó 24 horas) Día 7 o Día 14 post inyección; y WG es la diferencia de peso en la garra trasera entre la extremidad izquierda sana y la extremidad artrítica del animal administrado con anticuerpo contra IL-6 de rata, como se mide en el mismo punto de tiempo utilizado para determinar Wc.

EJEMPLO 1 El modelo de MÍA se llevó a cabo como se describe previamente en Materiales y Métodos, como sigue: las ratas fueron inducidas con MÍA como se describe previamente, y se administraron 1, 3, 10, 20 ó 30 µg del anticuerpo policlonal IL-6 o el anticuerpo policlonal IgG en la rodilla artrítica derecha en un volumen de PBS de 50 µl y un volumen de PBS de 50 µl en la rodilla izquierda control en el día 7 post-inyección de MÍA. Seis ratas fueron inyectadas en cada dosis. Después de la inyección una hora post-anticuerpo, se midió la diferencia en peso. El porcentaje de inhibición de un cambio en la distribución de peso de la garra trasera de las ratas tratadas con anticuerpo IL-6 comparado con las ratas tratadas con anticuerpo policlonal IgG se reporta en la Tabla 1. Las dosis de 20 y 30 microgramos de anticuerpo IL-6 inhiben significantemente (p<0.05) el cambio en la distribución de peso en garra trasera contra el policlonal IgG de rata. Los datos se presentan como el porcentaje promedio de inhibición ± el error estándar de la media (SEM).

Tabla 1 p<0.05 contra IgG policlonal de rata (ANCOVA de un Factor seguido por el procedimiento de Hochberg) EJEMPLO 2 El modelo de MÍA se llevó a cabo como se describe previamente en Materiales y Métodos, como sigue: las ratas fueron inducidas con MÍA como se describe previamente, y se administraron 30 µg de anticuerpo IL-6 en la rodilla artrítica derecha en un volumen de PBS de 50 µl y un volumen de 50 µl de PBS en la rodilla izquierda control en el día 14 post-inyección de MÍA. Se inyectaron ocho ratas en cada dosis. Después de una hora, cuatro horas y 24 horas post-inyección de anticuerpo, la diferencia en peso se midió y se reportó como la media ± el error estándar de la media en la Tabla 2. La dosis de 30 µg de anticuerpo IL-6 disminuyó significativamente (p<0.05) el cambio en distribución de peso de la garra izquierda a 1 , 4 y 24 contra el tiempo cero (pre-inyección de anticuerpo).

Tabla 2 p<0.05 contra tiempo cero (prueba t por pares seguida por el procedimiento de Hochberg) EJEMPLO 3 El modelo MÍA se llevo a cabo como se describe previamente en Materiales y Métodos como sigue: las ratas fueron inducidas con MÍA como se describe previamente, y se administraron 30 µg del anticuerpo IL-6 a través de inyección intraperitoneal en un volumen de PBS de 50 µl en el día 14 post-inyección de MÍA. Se inyectaron ocho ratas en cada dosis. La diferencia de peso ( WG) se midió y reportó como la media WG ± el error estándar de la media en la Tabla 3 durante los puntos de tiempo exactamente antes de la inyección de anticuerpo, a una hora, y a 4 horas post-inyección de anticuerpo. La dosis de 30 microgramos de anticuerpo IL-6 no inhibe significativamente el cambio en la disposición de peso de la garra trasera contra el tiempo cero (pre-inyección de anticuerpo).

Tabla 3 Se entiende que los ejemplos y modalidades descritos en la presente son para propósitos ilustrativos solamente y que varias modificaciones o cambios en vista de la misma serán propuestos a personas expertas en la técnica y estarán incluidos dentro del espíritu y competencia de esta solicitud y el alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en la presente son incorporadas por este medio para referencia en su totalidad para todos los propósitos.

Claims (13)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar osteoartritis caracterizado porque comprende: administrar, a un sujeto que padece de osteoartritis, una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de anticuerpo contra IL-6 y anticuerpo contra el receptor de IL-6.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición farmacéutica se administra interarticular o intravenosamente.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente es un anticuerpo monoclonal del receptor IL-6.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el anticuerpo del receptor IL-6 es un anticuerpo contra IL-6 de humano.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el anticuerpo del receptor IL-6 es tocilizumab. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente es un anticuerpo monoclonal de IL-
6. 6.
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el anticuerpo IL-6 es un anticuerpo contra IL-6 de humano.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el anticuerpo IL-6 es CNTO 328.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la composición farmacéutica se administra interarticularmente.
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la composición farmacéutica se administra intravenosamente.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende la administración de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de: sal de calcio del ácido 6-(5-carboxi-5-metil-hexilox¡)-2,2-dimetil-hexanoico, agentes anti-inflamatorios no esteroides, piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, quetoprofeno, ibuprofeno, ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, fenilbutazona, aspirina, corticosteroides, hyalgan y synvisc.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende la administración de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de: parecoxib, celecoxib, valdecoxib y etoricoxib.
13. 13. El uso de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de: un anticuerpo contra IL-6 y un anticuerpo contra el receptor de IL-6, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la osteoartritis en mamíferos.