JP2024512002A - 抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体、及び、その使用方法 - Google Patents

抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体、及び、その使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、概して、ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド（例えば、哺乳動物ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ）に対して特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体、抗体断片など）を含む組成物、ならびに、その必要のある個体の、予防、リスク低減、または、治療における、それら組成物の使用に関する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１８日出願の米国仮出願第６３／１６２，８４９号の優先権の利益を主張するものであり、当該仮出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出物の内容は、その全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する：コンピューターで読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：４５０３＿０１４ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、作成日：２０２２年３月１６日、サイズ１３４，３６５バイト）。
本開示の分野
本開示は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、それら抗体の治療的使用に関する。
本開示の背景
膜貫通タンパク質１０６Ｂ（ＴＭＥＭ１０６Ｂ）は、主に、後期エンドソーム、及び、リソソームの膜内に存在する、タイプ２の１回膜貫通糖タンパク質である。（例えば、Ｌａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２８７：１９３５５－１９３６５（非特許文献1）；Ｃｈｅｎ－Ｐｌｏｔｋｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ， ３２：１１２１３－１１２２７（非特許文献2）；Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ２２：６８５－６９５（非特許文献3）を参照されたい）ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ヒトの組織で広く発現しており、特に興味深いことに、ニューロン、グリア細胞、それに、脳の内皮細胞、及び、血管周囲細胞で発現している。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、哺乳動物で高度に保存されており、ヒトのタンパク質は、カニクイザル変異体とは９９％の配列同一性を、また、マウスのオルソログとは９７％の配列同一性を共有している。
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、アミノ酸残基１～９２（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ；配列番号１）の範囲にあると予測されている細胞質ドメイン、アミノ酸残基９６～１１７の範囲にあると予測されている膜貫通ドメイン、及び、アミノ酸残基１１８～２７４の範囲にあると予測されている内腔ドメインを有する。翻訳後のＮ－グリコシル化部位（Ｎ－Ｘ－Ｔ／Ｓ）の５つの配列モチーフは、その内腔ドメインに及んでいる。単純なグリカンが、３つのアスパラギン残基（Ｎ１４５、Ｎ１５１、及び、Ｎ１６４）に加えられているが、ＴＭＥＭ１０６Ｂの局在性に関しては重要ではない。複雑なグリカンが、最もＣ末端側のモチーフのＮ１８３、及び、Ｎ２５６に加えられており；Ｎ１８３に関する複雑なグリカンを失うと、エンドソーム／リソソームに向かうＴＭＥＭ１０６Ｂの順方向への輸送が機能しなくなり、小胞体で保持されることになる。加えて、複雑なＮ２５６グリコシル化は、適切なＴＭＥＭ１０６Ｂの選別のために必要である。（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ， ２０１６， Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ， １３２：６３９－６５１（非特許文献4）を参照されたい。）
ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能は、完全には特徴決定されていない。最近の報告は、樹状突起に沿ったリソソームの輸送を阻害することで、樹状突起の分岐、形態形成、及び、維持における、ＴＭＥＭ１０６Ｂの役割を示している。（例えば、Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， １２６：６９６－６９８（非特許文献5）；Ｓｃｈｗｅｎｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１４， ＥＭＢＯ Ｊ， ３３：４５０－４６７（非特許文献6）；Ｃｌａｙｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ｂｒａｉｎ １４１（１２）：３４２８－３４４２（非特許文献7）を参照されたい。）
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々なタンパク質と相互作用することが示されており、同タンパク質として、プログラニュリンタンパク質（ＧＲＮ）、ＴＭＥＭ１０６ＡやＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、荷電多発空胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１（ｖ－ＡＴＰａｓｅＡｐ１）などがあるが、これらに限定されない。
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々な障害、及び、疾患、特に、神経変性障害に遺伝的に関連している。そのような障害として、病的ＴＤＰ－４３封入体（すなわち、ＴＤＰ－４３タンパク質症；ｔｒａｎｓａｃｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４３）の存在を特徴とする病態、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）、プログラニュリン（ＧＲＮ）、または、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与するＦＴＬＤ－ＴＤＰなどのＴＤＰ－４３封入体が関与するＦＴＬＤ（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）、ＴＤＰ－４３プロテイノパチー、アルツハイマー病、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、老化の海馬硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）、低髄鞘形成大脳白質萎縮症、及び、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの様々な障害における認知機能障害があるが、これらに限定されない。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、非小細胞肺癌の転移にも関連している（Ｋｕｎｄｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１６；Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ． ２０１８；９： ２７３１（非特許文献8）， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １０７ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ａｂｓｔｒａｃｔ ｎｏ．６８８（非特許文献9））。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＡＴ８タウ沈着、ＣＤ６８細胞密度、及び、ＰＳＤ－９５濃度の変化など、ＣＴＥ患者の慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）関連の神経病理学、及び、認知症とも関連している（Ｃｈｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｃｏｍｍｕｎ． ６：１１５（非特許文献10））。
したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂ活性に関連する様々な疾患、障害、及び、病態を治療するには、ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合する治療用抗体など、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的とする治療法、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質レベルまたは機能を低減して、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンドまたは結合パートナーの１つ以上との結合をブロックまたは低減して、さもなければ、そのリガンドまたは結合パートナーの１つ以上の有効濃度を調節して、ＴＭＥＭ１０６Ｂの活性を阻害することができる治療法が必要である。
特許出願、及び、刊行物を含む、本明細書で引用するすべての文献を、本明細書の一部を構成するものとして、それらの全内容を援用する。
Ｌａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２８７：１９３５５－１９３６５ Ｃｈｅｎ－Ｐｌｏｔｋｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ， ３２：１１２１３－１１２２７ Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ２２：６８５－６９５ Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ａｎｄ Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ， ２０１６， Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ， １３２：６３９－６５１ Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， １２６：６９６－６９８ Ｓｃｈｗｅｎｋ ｅｔ ａｌ．， ２０１４， ＥＭＢＯ Ｊ， ３３：４５０－４６７ Ｃｌａｙｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ｂｒａｉｎ １４１（１２）：３４２８－３４４２ Ｋｕｎｄｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１６；Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ． ２０１８；９： ２７３１ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １０７ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ａｂｓｔｒａｃｔ ｎｏ．６８８ Ｃｈｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｃｏｍｍｕｎ． ６：１１５
本開示の概要
本開示は、概して、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、そのような抗体を使用する方法に関する。本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、または病態を有する個体の、予防、リスク低減、または、治療における使用をもたらす。一部の実施形態では、本発明は、神経変性障害、ＴＤＰ－４３封入体の存在を特徴とする障害、ＴＤＰ－４３タンパク質症、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭葉認知症（ＦＴＤ）、プログラニュリン変異が関与するＦＴＤ、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与するＦＴＤ、ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢に伴う海馬硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、認識機能障害、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、筋萎縮性側索硬化症での認識機能障害、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）での認識機能障害、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現、または、活性の増大に関連した疾患、傷害、及び、病態、低髄鞘形成不全、がん、及び、転移からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または、治療する方法を提供するものであって、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
したがって、本開示の特定の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関するものであり、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞内レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンドまたは結合タンパク質の１つ以上との間の相互作用を阻害または低減する、及び、それらのあらゆる組み合わせ、からなる群から選択される特性を有する。ＴＭＥＭ１０６Ｂとリガンドまたは結合タンパク質との間の相互作用を抗体が阻害する能力は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下及び非存在下でＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質のリガンドまたは結合タンパク質の共免疫沈降を行い、その後にリガンドまたは結合パートナーをウェスタンブロットで検出することによって決定できる。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下でのリガンドまたは結合パートナーの検出量が抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下でのものと比較して減少することが、ＴＭＥＭ１０６Ｂとリガンドまたは結合パートナーとの間の相互作用を抗体が阻害することを示す。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞表面レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞内レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの総レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂのエンドソームレベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂのリソソームレベルを減少させる、または、それらのあらゆる組み合わせである。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ分解、ＴＭＷＭ１０６Ｂ開裂、ＴＭＥＭ１０６Ｂ内在化、ＴＭＥＭ１０６Ｂダウンレギュレーション、または、それらのあらゆる組み合わせを誘発する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、インビボでのＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳内のＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、１つ以上の末梢器官におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳、１つ以上の末梢器官、または、それらのあらゆる組み合わせにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ミクログリアにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ニューロンにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンタンパク質との間、ＴＭＥＭ１０６Ｂ及びＴＭＥＭ１０６Ｃ、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能を調節するあらゆるタンパク質またはポリペプチドなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー間での１つ以上の相互作用を阻害または低減する。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、不連続のＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該不連続のＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または、１０個以上のペプチドを含む。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ペプチドのそれぞれは、配列番号１のアミノ酸配列の、配列番号２のアミノ酸配列の、または、配列番号３のアミノ酸配列の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含み；または、配列番号１のアミノ酸配列の、配列番号２のアミノ酸配列の、または、配列番号３のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に関する５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含む。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの立体配座エピトープに結合する。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ－９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、及びＴＭ－９４、ならびにそれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される抗体のＶＨ及びＶＬを含む１つ以上のリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、競合する。
本開示のその他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関するものであり、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ－９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、及びＴＭ－９４からなる群から選択される抗体の、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ－９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、及びＴＭ－９４からなる群から選択される抗体の、６つのＨＶＲ（例えば、以下の表２及び３に示されるもの）を含む。
本開示のその他の態様は、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ－９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、及びＴＭ－９４からなる群から選択される抗体のＶＨ及びＶＬ（例えば、以下の表４に示されるもの）を含むリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と本質的に同じＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する、単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。
本開示の一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、アミノ酸残基１５１～１６５、及び／または、１８５～１９５の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。本開示の一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基５９～７３、８０～９０、１３９～１４９、及び／または、２４８～２５８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基５～１９、１５６～１６１、２０２～２０７、及び／または、２１９～２３３内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基１２６～１４０、１８５～１９５、及び／または、２６０～２７４の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基２０２～２１２の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基１５１～１６１、及び／または、２２３～２３３の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基５９～６９、１４３～１５３、及び／または、２２３～２２８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基１３３～１４５、及び／または、１９８～２１２の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１）のアミノ酸残基５２～６２、６４～７５、及び／または、２２３～２２８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のそのリガンド、シグナル伝達タンパク質、または、結合タンパク質との間の相互作用を、ａ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用に利用可能なＴＭＥＭ１０６Ｂの有効レベルを低減する；ｂ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の部位をブロックする；ｃ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの適切な処理、及び／または、細胞内局在化に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の翻訳後事象を予防する；ｄ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの分解を誘導する；ｅ）ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、両方の配座を変更して、さらに阻害する。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、それらの組み合わせに対して、特異的に結合する。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂであり、当該第２の抗原は、血液脳関門を通る輸送を促す抗原である。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１、及び、２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質変換ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、及び、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、モノクローナル抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラスの抗体であり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、または、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、哺乳動物ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に関するアミノ酸残基を含むエピトープに対して結合する抗体断片である。本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または、ｓｃＦｖ断片である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体、または、キメラ抗体である。
本開示のその他の態様は、前出の実施形態のあらゆる抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のあらゆる核酸を含む、ベクターに関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のあらゆるベクターを含む、単離された宿主細胞に関する。本開示のその他の態様は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を生産する方法に関するものであり、同方法は、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を生産するように、前出の実施形態のあらゆる宿主細胞を培養する工程を含む。特定の実施形態では、当該方法は、当該宿主細胞が生産した当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を回収する工程をさらに含む。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のあらゆる方法で生産した、単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のあらゆる当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物に関する。
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または、治療する方法に関し、個体に、前出の実施形態のいずれかの、治療有効量の抗ＴＭＥＭ－１６０Ｂ抗体を投与することを含む。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体の、予防、リスク低減、または、治療における使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、転移の予防または低減における使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、がんを有する個体の、予防、リスク低減、または、治療における、使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認識機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体の、予防、リスク低減、または治療のための医薬を製造するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法に関し、個体に、前出の実施形態のいずれかの、治療有効量の抗ＴＭＥＭ－１６０Ｂ抗体を投与することを含む。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体の、予防、リスク低減、または治療における使用のための本明細書で提供される実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体の、予防、リスク低減、または治療のための医薬を製造するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用に関する。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、２つ以上の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を含む。
本明細書に記載の様々な実施形態の１つ、一部、または、全部の特性を組み合わせて、本発明のその他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。本発明のこれらの態様、及び、その他の態様は、当業者には自明である。本発明のこれらの実施形態、及び、その他の実施形態を、以下にさらに詳細に説明する。
本開示の詳細な説明
本開示は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；それら抗体を作る、及び、使用する方法；それら抗体を含む医薬組成物；それら抗体をコードする核酸；及び、それら抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
本明細書で説明または参照した技術や手順は、一般的に、よく理解されており、当業者であれば、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （２００１） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， （２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）に記載されている方法論など、広く利用されている方法論である従来の方法論を進んで使用している。
定義
本明細書では、用語「ＴＭＥＭ１０６Ｂ」または「ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド」を、互換的に使用しており、特に断りがない限り、霊長類（例えば、ヒト、及び、カニクイザル（ｃｙｎｏｓ））、及び、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）などの哺乳類を含む、あらゆる脊椎動物起源の天然のあらゆるＴＭＥＭ１０６Ｂのことを指す。一部の実施形態では、この用語は、野生型配列、及び、天然に存在する変異配列、例えば、スプライス変異、または、対立遺伝子変異の両方を含む。一部の実施形態では、この用語は、「全長」の未処理ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ならびに、細胞内での処理が関与するあらゆる形態のＴＭＥＭ１０６Ｂを含む。一部の実施形態では、当該ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂである。一部の実施形態では、例示的なＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、２００６年６月２７日現在でのＵｎｉｐｒｏｔ受託番号：Ｑ９ＮＵＭ４である。一部の実施形態では、例示的なヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、配列番号１である。
用語「抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体」、「ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体」、及び、「ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合する抗体」は、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的にする診断薬、及び／または、治療薬として有用な抗体であり、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して十分な親和性で結合することができる抗体のことを指す。ある実施形態では、無関係の非ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドに対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で決定したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、異なる種に由来するＴＭＥＭ１０６Ｂの間で保存されているＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープに対して結合する。
標的分子に対する抗体の結合に関して、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、非特異的相互作用とは異なる測定可能な結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定して測定することができる。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰の非標識標的に類似する対照分子と競合させて決定することができる。この事例では、プローブに対する標識した標的の結合を、過剰な非標識標的が競合的に阻害するのであれば、特異的結合を示す。本明細書で使用する用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、例えば、概ね、１０－４Ｍ以下、１０－５Ｍ以下、１０－６Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１１Ｍ以下、１０－１２Ｍ以下のいずれかの標的に関するＫＤ、または、１０－４Ｍ～１０－６Ｍ、または、１０－６Ｍ～１０－１０Ｍ、または、１０－７Ｍ～１０－９Ｍの範囲のＫＤを有する分子として示すことができる。当業者であれば、親和性とＫＤ値は反比例することを理解する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値として表れる。ある実施形態では、用語「特異的結合」とは、分子が、あらゆるその他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対して実質的に結合せずに、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチドに関するエピトープに対して結合する結合のことを指す。
本明細書において、用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、「抗体」と互換的に使用する。本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味で使用しており、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限りは、抗体断片を含む。
「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖、及び、２つの同一の重（「Ｈ」）鎖から構成されている、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合で重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。それぞれの重鎖、及び、それぞれの軽鎖は、規則的な間隔を開けた鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＨ）を有しており、これに、幾つかの定常ドメインが続く。それぞれの軽鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＬ）を有しており、他端に、定常ドメインを有しており；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列しており、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。
異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。
あらゆる脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）、及び、ラムダ（「λ」）と称する２つの明確に異なる種類の内の１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及び、ＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及び、ミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトでは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２を発現する。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造、及び、三次元構成は公知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，ＣｅＬ１ｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）で概説されている。
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインのことを指す。当該重鎖及び軽鎖の可変ドメインを、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称し得る。これらのドメインは、一般的に、（同じクラスのその他の抗体と比較して）最も変化しやすい抗体の部分であり、抗原結合部位を含む。
用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の間で配列が大きく異なるという事実のことを指す。当該可変ドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、当該可変性は、当該可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている３つのセグメントに集中している。可変ドメインにおいて高度に保存されている部分を、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＨＶＲで接続した、ベータシート立体配置を主体とする４つのＦＲ領域を含み、それらは、当該ベータシート構造に接続するループ、及び、一部の事例では、当該ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。それぞれの鎖でのＨＶＲは、ＦＲ領域に非常に近接して一緒に保持され、他方の鎖に由来するＨＶＲと共に、それらの抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。当該定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体集団から得た抗体、例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体のことを指し、すなわち、当該集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る自然発生の変異、及び／または、翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つ以上の抗原部位を指向する。一般的には異なる決定基（エピトープ）を指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、当該抗原の単一の決定基を指向する。それらの特異性に加えて、当該モノクローナル抗体は、その他の免疫グロブリンによる汚染を受けていないハイブリドーマ培養で合成するという点で有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特徴を示すものであって、あらゆる特定の方法で抗体の生産を必要とするものと解釈すべきではない。例えば、本発明にしたがって使用するモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、または、ヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部またはすべてを有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を生産する技術などの様々な技術によって生産し得る。
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または、「全抗体」とは、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体を指すために、互換的に使用している。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、ネイティブ配列の定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列の定常ドメイン）、または、そのアミノ酸配列変異体とし得る。一部の事例では、当該インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
「抗体断片」とは、インタクト抗体が結合する抗原に対して結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子のことを指す。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及び、Ｆｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照されたい）、一本鎖抗体分子、及び、抗体断片から形成した多重特異性抗体がある。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」断片と称する２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した名称を有する残留「Ｆｃ」断片とを生成する。当該Ｆａｂ断片は、軽鎖全体に加えて、重鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と、１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とからなる。それぞれのＦａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体をペプシン処理すると、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られ、このものは、異なる抗原結合活性を有するジスルフィド結合した２つのＦａｂ断片に概ね対応しており、また、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含んだ幾つかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’に関する本明細書での表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、当初は、その断片間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生産された。抗体断片のその他の化学的カップリングも公知である。
当該Ｆｃ断片は、ジスルフィドと共に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域は、特定の細胞型で認められるＦｃ受容体（ＦｃＲ）でも認識される。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の「機能性断片」は、インタクト抗体の一部分を含み、一般的には、インタクト抗体の抗原結合領域または可変領域、または、ＦｃＲ結合能力を保持する、または、改変したＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例として、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び、抗体断片から形成した多重特異性抗体がある。
用語「ダイアボディ」とは、可変ドメインの鎖内ではなく、鎖間のペアリングを達成し、それにより、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０個）の残基）を用いてｓＦｖ断片（前出の段落を参照されたい）を構築して調製した小さな抗体断片のことを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが、異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。
本明細書で使用する「キメラ抗体」とは、本開示のキメラ抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体、または、特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同であり、かつ、その鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する抗体、または、別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同である抗体、ならびに、所望の生物活性を示す限りは、それら抗体の断片のことを指す。本明細書で対象とするキメラ抗体として、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体があり、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫処置して産生した抗体に由来する。本明細書で使用する、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用する。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のヒト化など、非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及び、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び、一般的には、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて、または、実質的にすべてが、非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲのすべて、または、実質的にすべてが、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体とは、ヒト化を受けた抗体のことを指す。
「ヒト抗体」は、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のように、ヒトで産生した抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む抗体、及び／または、本明細書に開示したヒト抗体を作る技術のいずれかを使用して生産した抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、かかる抗体を抗原接種に応答して生産するように修飾されているが、例えば、免疫処置したゼノマウス、ならびに、ヒトＢ細胞ハイブリドーマを介して生成させて、その内因性遺伝子座を無効化したトランスジェニック動物に対して当該抗原を投与して、調製することができる。
本明細書で使用する用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」とは、配列が超可変性であり、かつ／または、構造的に定義されたループを形成する、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の抗体可変ドメインの領域などの抗体可変ドメインの領域のことを指す。一般的に、抗体には、６つのＨＶＲがあり；３つが、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つが、ＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ネイティブ抗体において、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲの内で最も多様性に富んでおり、特に、Ｈ３が、抗体に対して優れた特異性を与える上で独特の役割を果たすものと考えられている。重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖がなくとも機能的で、かつ、安定している。
数多くのＨＶＲの記載を、本明細書で使用しており、かつ、本明細書に含んでいる。一部の実施形態では、これらのＨＶＲは、配列変動性に基づいたＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）とし得、そして、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上掲）。一部の実施形態では、それらのＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲとし得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、どちらかと言えば、構造的ループの位置を指すものである（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７））。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、ＡｂＭ ＨＶＲとし得る。これらのＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の折衷案を示しており、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲとし得る。当該「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれの残基を、以下に示す。
Figure 2024512002000001
ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬでの２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び、８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、及び、ＶＨでの２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び、９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。当該可変ドメイン残基を、これらの伸長ＨＶＲ定義のそれぞれに対して、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上掲に従って付番する。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書で使用する「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含み得る、または、既存のアミノ酸配列変化を含み得る。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９つ以下、８つ以下、７つ以下、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、または、２つ以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨ中に存在する場合、好ましいアミノ酸変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び、７８Ｈの内の３つ、２つ、または、１つのみに生じ；例えば、当該位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または、７８Ａとし得る。ある実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列、または、ヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンのＶＬ配列またはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行う。一般的には、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、ＶＬに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上掲などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、または、カッパＩＶとし得る。さらに、ＶＨに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上掲などのサブグループＩ、サブグループＩＩ、または、サブグループＩＩＩとし得る。
例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のアミノ酸修飾など、指定した位置での「アミノ酸修飾」とは、指定した残基の置換もしくは欠失、または、少なくとも１つのアミノ酸残基を、指定した残基に隣接するように挿入することを指す。指定した残基に「隣接する」挿入とは、そこから１個～２個の残基までに挿入することを意味する。当該挿入は、指定した残基のＮ末端側またはＣ末端側で行い得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
例えば、本開示の親和性成熟抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの「親和性成熟」抗体とは、当該抗体の１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変を有し、その結果、抗原に対する抗体の親和性が、当該改変（複数可）を有しない親抗体と比較して改善した抗体である。ある実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、または、ひいてはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で公知の手法で生産する。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９～７８３（１９９２）は、ＶＨ－及びＶＬ－ドメインのシャッフリングを用いた親和性成熟について記載している。ＨＶＲ、及び／または、フレームワーク残基のランダム変異導入については、例えば、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７～１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４～２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０～９（１９９５）；及び、Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６（１９９２）に記載されている。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位、及び、抗原結合部位を含む、最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと、１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供してこの抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略称される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態で接続したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、当該ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、アミノ酸配列変異Ｆｃ領域）が関与する生物活性のことを指し、抗体のアイソタイプに応じて異なる。
本明細書で使用する用語「Ｆｃ領域」とは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び、変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６、または、Ｐｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端にまで及ぶものと定義される。当該Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムでの残基４４７）は、例えば、抗体の生産もしくは精製の間に、または、抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することで除去し得る。したがって、インタクト抗体の組成は、すべてのＫ４４７残基を除去した抗体集団、Ｋ４４７残基を除去していない抗体集団、及び、Ｋ４４７残基を持つ抗体と持たない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適なネイティブ配列Ｆｃ領域として、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び、ＩｇＧ４がある。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、自然界で認められるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域として、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ、及び、Ａアロタイプ）、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびに、それらの天然変異がある。
「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって、ネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該変異Ｆｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１～約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１～約５のアミノ酸置換を有する。本明細書での変異Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び／または、親ポリペプチドのＦｃ領域に対して、少なくとも約８０％の相同性、及び、最も好ましくは、それらに対して少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらに対して少なくとも約９５％の相同性を有する。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体のことを表す。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合する受容体であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び、ＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変異体、及び、選択的スプライシング形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、同様のアミノ酸配列を有し主にその細胞質ドメインが異なる、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）とＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）とを含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害性モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含む。その他のＦｃＲは、今後同定されるものを含めて、本明細書での用語「ＦｃＲ」に含まれる。また、ＦｃＲは、抗体の血清での半減期を長くすることができる。
ペプチド、ポリペプチド、または、抗体配列に関して本明細書で使用する、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「アミノ酸配列相同性パーセント（％）」は、配列を整列させ、最大配列同一性パーセントを達成するために必要に応じてギャップを導入した後、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換は考慮しない、指定のペプチドまたはポリペプチド配列でのアミノ酸残基と同一である、候補配列でのアミノ酸残基のパーセンテージのことを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲に属する様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、または、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において公知のあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを評価するための適切なパラメーターを決定することができる。
同じエピトープに関して競合する抗体（例えば、中和抗体）の文脈で使用する用語「競合する」とは、試験する抗体が、共通の抗原（例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、その断片）に対するリファレンス分子（例えば、リガンド、または、リファレンス抗体）の特異的結合を予防または阻害（例えば、低減）するアッセイによって決定する抗体間の競合のことを意味する。無数のタイプの競合結合アッセイを使用して、抗体が、別の抗体と競合するか否かを判断でき、例えば；固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９）固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ－１２５ラベルを使用した固相直接ラベルＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６－５５２を参照されたい）；及び、直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２）がある。一般的には、そのようなアッセイは、非標識試験抗体、及び、標識参照抗体のいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定して測定する。通常、当該試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイ（競合抗体）で同定した抗体として、リファレンス抗体と同じエピトープに対して結合する抗体と、立体障害を招くリファレンス抗体が結合するエピトープに対して十分近位の隣接エピトープに対して結合する抗体とがある。競合結合を決定するための方法に関するさらなる詳細を、本明細書の以下の記載と実施例で説明する。通常、競合する抗体が過剰に存在すると、共通抗原に対するリファレンス抗体の特異的結合は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％を阻害（例えば、低減）する。
本明細書で使用するＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質と第２のタンパク質との間の「相互作用」として、タンパク質－タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及び、イオン結合があるが、これらに限定されない。本明細書において、抗体が、２つのタンパク質の間の相互作用を、攪乱、低減、または、完全に解消する場合、当該抗体は、２つのタンパク質の間の「相互作用を阻害する」。その抗体が、２つのタンパク質の内の一方に結合する場合、本開示の抗体は、２つのタンパク質の間の「相互作用を阻害する」。一部の実施形態では、当該相互作用は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％のいずれかで阻害することができる。
用語「エピトープ」として、抗体が結合することができる、あらゆる決定基がある。エピトープは、その抗原を標的とする抗体が結合する抗原の領域であり、また、抗原がポリペプチドである場合、当該抗体と直接に接触する特定のアミノ酸を含む。大抵の場合、エピトープは、ポリペプチドに存在するが、一部の事例では、核酸などのその他の種類の分子に存在することができる。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子に属する化学的に活性な表面を含み、特定の三次元構造特性、及び／または、特定の電荷特性を有することができる。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド、及び／または、高分子の複雑な混合物での標的抗原に関するエピトープを優先的に認識する。
「アゴニスト」抗体、または、「活性化」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、高める）抗体である。
「アンタゴニスト」抗体、または、「ブロッキング」抗体、または、「阻害」抗体とは、当該抗体が、抗原と結合した後に、１つ以上のリガンドに対する抗原結合を低減し、阻害し、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体、及び／または、当該抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を低減し、阻害し、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または、ブロッキング抗体、または、阻害抗体は、１つ以上のリガンドへの抗原結合、及び／または、当該抗原の１つ以上の活性または機能を、実質的または完全に阻害する。
本開示の単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの「単離された」抗体は、その生産環境の成分から（例えば、自然に、または、組換えて）同定、分離、及び／または、回収したものである。好ましくは、当該単離された抗体は、その生産環境に由来するその他のすべての汚染成分とは関連がない。組換えトランスフェクト細胞から得られるものなど、その生産環境に由来する汚染成分は、一般的には、抗体の研究、診断、または、治療への使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、及び、その他のタンパク質性、または、非タンパク質性溶質を含み得る。好ましい実施形態では、抗体を：（１）例えば、ローリー法で決定した抗体の９５重量％を超えるまで、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで；（２）スピニングカップシーケンサーを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または、（３）クーマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用する、非還元または還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥで、均一になるまで精製する。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内の元の位置に抗体を含む。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程で調製する。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体をコードする「単離された」核酸分子とは、それが生産された環境において通常付随する少なくとも１つの汚染核酸分子から、同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、当該単離された核酸は、その生産環境に関連するすべての構成成分とは会合しない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、自然界で認められる形態または状況とは異なる形態で存在する。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする核酸とは区別される。
本明細書で使用する用語「ベクター」とは、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子のことを指す。「プラスミド」は、ベクターの一種であり、さらなるＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡのことを指す。ファージベクターは、別の種類のベクターである。別の種類のベクターとして、ウイルスベクターがあり、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムに対してライゲーションすることができる。特定のベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、及び、エピソーム哺乳動物ベクター）は、導入された宿主細胞で自己複製が可能である。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結した遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書では、「組み換え発現ベクター」、または、簡略して「発現ベクター」と称する。一般的に、組換えＤＮＡ技法で利用する発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが、ベクターの内で最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用し得る。
本明細書で互換的に使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、あらゆる長さのヌクレオチドの重合体のことを指すものであり、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。当該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／または、それらの類似体、あるいは、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、または、合成反応により、重合体に組み込まれ得るあらゆる基質とすることができる。
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになることができる、または、レシピエントになっている個々の細胞、または、細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、その子孫は、自然発生的、偶発的、または、意図的な変異により、元の親細胞と必ずしも完全に（形態学的に、または、ゲノムＤＮＡ相補鎖において）同一でなくともよい。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をインビボでトランスフェクションした細胞を含む。
本明細書で使用する「担体」は、使用する用量及び濃度で、そこに曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である薬学的に許容される担体、賦形剤、または、安定剤を含む。
本細書で使用する用語「予防する」とは、個体における特定の疾患、障害、または病態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害、または病態にかかりやすく、影響を受けやすく、または、そのような疾患、障害、または病態を発症するリスクがあるが、未だに、当該疾患、障害、または病態であると診断されていない。
本明細書で使用する、特定の疾患、障害、または病態を発症する「リスクのある」個体とは、検出可能な疾患または疾患の症状を有し得る、または、有し得ず、本明細書に記載した治療法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示し得る、または、示し得ない。「リスクがある」とは、個体が、特定の疾患、障害、または病態の発症と相関する測定可能なパラメーターである、当該技術分野で公知の１つ以上のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子の１つ以上を持たない個体よりも、特定の疾患、障害、または病態を発症する可能性が高くなる。
本明細書で使用する用語「治療」とは、臨床病理の経過期間で治療を受けている個体の自然な経過を変えるように設計した臨床介入のことを指す。治療の望ましい効果として、進行速度の低下、病的状態の改善または緩和、及び、特定の疾患、障害、または病態の寛解または予後の改善がある。例えば、特定の疾患、障害、または病態に関連する１つ以上の症状が緩和または解消した場合、個体の「治療」は成功している。
「有効量」とは、所望の治療的、または、予防的結果を達成するために必要な投薬量、及び、期間で、少なくとも有効な量のことを指す。有効量は、１回以上の投与で提供することができる。本明細書に記載の有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び、体重、ならびに、個体において所望の応答を誘発する治療の能力などの要因によって変化し得る。有効量は、治療でのあらゆる毒性または有害な作用よりも、治療的に有益な効果が勝る量でもある。予防的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患の生化学的、組織学的、及び／または、行動的症状、その合併症、及び、疾患の進行過程での中間的病理学的表現型など、疾患のリスクの排除または低減、重症度の軽減、または、発症の遅延などの結果がある。治療的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患が関与する１つ以上の症状の減少、疾患を患った方々の生活の質の向上、疾患の治療に必要なその他の薬物の投与量の減少、標的化などを介した別の薬物の効果の改善、疾患の進行の遅延、及び／または、生存期間の延長などがある。薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床の文脈で理解すると、薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または、医薬組成物と組み合わせて達成し得る、または、達成し得ない。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬を投与する状況で考慮し得るものであり、単一の薬剤が、１つ以上のその他の薬剤と組み合わせて、所望の結果を達成し得る、または、達成するのであれば、有効量で与えられると考え得る。
治療、予防、または、リスクの低減を目的とする「個体」とは、ヒト、飼育動物、及び、家畜、ならびに、動物園用動物、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類されるあらゆる動物のことを指す。好ましくは、個体は、ヒトである。
本明細書で使用する、別の化合物または組成物との「併用」投与とは、同時投与、及び／または、異なる時点での投与を含む。また、併用投与は、合剤としての投与、または、別個の組成物としての投与を含み、異なる投与頻度または間隔で、かつ同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む。一部の実施形態では、併用投与は、同じ治療レジメンの一部としての投与である。
本明細書で使用する用語「約」とは、それぞれの数値の通常の誤差範囲のことを指しており、当該技術分野の当業者であれば、容易に理解する。本明細書において「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その数値、または、パラメーターそれ自体を対象にした実施形態を含む（及び、説明する）。
本明細書、及び、添付した特許請求の範囲で使用する単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び、「その（ｔｈｅ）」は、特に断りのない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、１つの抗体から、モル量の数多くの抗体までを指すものであり、当業者に公知のそれらの等価物なども含む。
本明細書で使用する本開示の「ＴＭＥＭ１０６Ｂ」タンパク質として、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、霊長類のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、カニクイザル（ｃｙｎｏ）のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、ラットのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質があるが、これらに限定されない。加えて、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、霊長類のＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザルのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、ラットのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質の１つ以上の中にあるエピトープに結合し得る。
本明細書で説明する本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」、及び、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を含む、ことを理解されたい。
ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質
本明細書では、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対して指向化された抗体を提供する。提供する抗体は、例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ関連障害の診断または治療に有用である。
ある態様では、本開示は、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質内のエピトープに対して結合する単離された（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質として、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、カニクイザルのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質があるが、これらに限定されない。
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂは、２型膜糖タンパク質をコードする２７４個のアミノ酸のタンパク質である。ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの当該アミノ酸配列は、配列番号１に記載している：
ＭＧＫＳＬＳＨＬＰＬＨＳＳＫＥＤＡＹＤＧＶＴＳＥＮＭＲＮＧＬＶＮＳＥＶＨＮＥＤＧＲＮＧＤＶＳＱＦＰＹＶＥＦＴＧＲＤＳＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧＱＥＮＱＬＶＡＬＩＰＹＳＤＱＲＬＲＰＲＲＴＫＬＹＶＭＡＳＶＦＶＣＬＬＬＳＧＬＡＶＦＦＬＦＰＲＳＩＤＶＫＹＩＧＶＫＳＡＹＶＳＹＤＶＱＫＲＴＩＹＬＮＩＴＮＴＬＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩＴＡＱＶＱＦＳＫＴＶＩＧＫＡＲＬＮＮＩＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩＤＹＴＶＰＴＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤＦＣＴＬＩＳＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴＴＴＹＦＧＨＳＥＱＩＳＱＥＲＹＱＹＶＤＣＧＲＮＴＴＹＱＬＧＱＳＥＹＬＮＶＬＱＰＱＱ
。
加えて、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、配列番号２に記載している：
ＧＫＳＬＳＨＬＰＬＨＳＮＫＥＤＧＹＤＧＶＴＳＴＤＮＭＲＮＧＬＶＳＳＥＶＨＮＥＤＧＲＮＧＤＶＳＱＦＰＹＶＥＦＴＧＲＤＳＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧＱＥＮＱＬＶＡＬＩＰＹＳＤＱＲＬＲＰＲＲＴＫＬＹＶＭＡＳＶＦＶＣＬＬＬＳＧＬＡＶＦＦＬＦＰＲＳＩＥＶＫＹＩＧＶＫＳＡＹＶＳＹＤＡＥＫＲＴＩＹＬＮＩＴＮＴＬＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩＴＡＱＶＱＦＳＫＴＶＩＧＫＡＲＬＮＮＩＴＮＩＧＰＬＤＭＫＱＩＤＹＴＶＰＴＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤＦＣＴＬＬＳＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴＴＡＹＦＧＨＳＥＱＩＳＱＥＲＹＱＹＶＤＣＧＲＮＴＴＹＱＬＡＱＳＥＹＬＮＶＬＱＰＱＱ
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加えて、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、配列番号３に記載している：
ＭＧＫＳＬＳＨＬＰＬＨＳＳＫＥＤＡＹＤＧＶＴＳＥＮＭＲＮＧＬＶＮＳＥＶＨＮＥＤＧＲＮＧＤＶＳＱＦＰＹＶＥＦＴＧＲＤＳＶＴＲＰＴＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧＱＥＮＱＬＶＡＬＩＰＹＳＤＱＲＬＲＰＲＲＴＫＬＹＶＭＡＳＶＦＶＣＬＬＬＳＧＬＡＶＦＦＬＦＰＲＳＩＤＶＫＹＩＧＶＫＳＡＹＶＳＹＤＶＱＫＲＴＩＹＬＮＩＴＮＴＬＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩＴＡＱＶＱＦＡＫＴＶＩＧＫＡＲＬＮＮＩＴＨＩＧＰＬＤＭＫＱＩＤＹＴＶＰＴＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤＦＣＴＬＩＳＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴＴＴＹＦＧＨＳＥＱＩＳＱＥＲＹＱＹＶＤＣＧＲＮＴＴＹＱＬＧＱＳＥＹＬＮＶＬＱＰＱＱ
。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞で発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、エンドソーム、及び／または、リソソームで発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドソーム、及び／または、後期リソソームで発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞表面で発現する。
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質として、Ｎ末端内腔ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１１～２７４の範囲であると考えられる；配列番号１を参照されたい）、膜貫通ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基９６～１１７の範囲であると考えられる）、及び、Ｃ末端ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１～９２の範囲であると考えられる）など、これらに限定されない、幾つかのドメインを含む。加えて、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、脳、ニューロン、グリア細胞、内皮細胞、血管周囲細胞、周皮細胞など、これらに限定されないが、数多くの組織、及び、細胞で発現する。
ＴＭＥＭ１０６Ｂ結合パートナー
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、プログラニュリンタンパク質（ＧＲＮ）、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、荷電多発空胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）、微細管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１など、これらに限定されない１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質と相互作用（例えば、結合）することができる。本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その様々なリガンド、及び、結合パートナーとの相互作用に影響を与える。
プログラニュリン
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ニューロン後期エンドリソソームで、プログラニュリンと共局在することが示されており、また、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、プログラニュリンの細胞内レベルを高める（Ｃｈｅｎ－Ｐｌｏｔｋｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３２：１１２１３－１１２２７）。
プログラニュリンには、ＰＧＲＮ、プロエピセリン、グラニュリン－エピセリン前駆体、ＰＣ（前立腺がん）細胞由来成長因子（ＰＣＤＧＦ）、及び、アクログラニンなどの様々な別名がある。プログラニュリンは、５９３個のアミノ酸のタンパク質であり、同タンパク質は、前駆体ＰＧＲＮからタンパク質分解的に開裂され得る、６～２５ｋＤａの範囲の小さなグラニュリン（エピセリン）モチーフの７．５反復を有する６８．５ｋＤの分泌型糖タンパク質をコードする。プログラニュリン開裂産物の例として、グラニュリンＡ／エピテリン１、グラニュリンＢエピテリン２、グラニュリンＣ、グラニュリンＤ、グラニュリンＥ、グラニュリンＦ、グラニュリンＧ、及び、プログラニュリンに由来するその他の公知のペプチド産物があるが、これらに限定されない。
プログラニュリンは、広範に発現しており、非ニューロン細胞では、細胞周期の調節や細胞の運動性、創傷の修復、炎症、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの増殖因子の誘導、腫瘍形成などの様々な事象に関連している。また、プログラニュリンは、初期の神経発生でも広範に発現するが、その後の発生では、大脳皮質ニューロン、海馬錐体ニューロン、プルキンエ細胞などの定義したニューロン集団に限定される。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンとの間の相互作用を、強化または増強する。
その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー
ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーのメンバーと相互作用することが示されている。例えば、ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、そのファミリーメンバーであるＴＭＥＭ１０６Ｃと相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６－２４０を参照されたい。）本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに結合し、ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能、及び、活性を改変する。加えて、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、ＴＭＥＭ１０６Ｃに結合し、ＴＭＥＭ１０６Ｃの機能、及び、活性を改変する。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバーとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、別のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｃとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）または低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーのメンバーとの間の相互作用を強化する、または、高める。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、別のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドとの間の相互作用を強化する、または、高める。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｃとの間の相互作用を強化する、または、高める。
クラスリン重鎖
ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、エンドサイトーシスアダプタータンパク質クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）と相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６－２４０を参照されたい。）ＴＭＥＭ１０６Ｂのエンドリソソーム局在を伴うタンパク質の相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ細胞質ドメインが、リソソームへのエンドサイトーシス捕捉物の送達に関与し得ることを意味する。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＬＴＣとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＬＴＣとの間の相互作用を強化する、または、高める。
脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット
ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、脂肪細胞タンパク質２のエンドサイトーシスアダプタータンパク質μ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）と相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ ｅｔ ａｌ，２０１４、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６－２４０を参照されたい。）ＴＭＥＭ１０６のエンドリソソーム局在を伴うタンパク質の相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ細胞質ドメインが、リソソームへのエンドサイトーシス捕捉物の送達に関与し得ることを意味する。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）との間の相互作用を強化する、または、高める。
荷電多発空胞体タンパク質２ｂ
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、エンドリソソームタンパク質輸送とオートファジー構造形成とを調節するトランスポートＩＩＩ（ＥＳＣＲＴ－ＩＩＩ）複合体に必要なエンドソーム分別複合体のメンバーである荷電多発空胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）に対して直接に結合することが示されている（Ｊｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５、Ｍｏｌ Ｂｒａｉｎ、８：８５）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＨＭＰ２Ｂとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＨＭＰ２Ｂとの間の相互作用を強化する、または、高める。
微小管関連タンパク質６
微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）のＣ末端は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端に対して直接に結合する（Ｓｃｈｗｅｎｋ ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＥＭＢＯ Ｊ，３３：４５０－４６７）。ＭＡＰ６の過剰発現は、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックダウンと同様に、樹状突起の分岐を阻害する。ＭＡＰ６ノックダウンは、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の機能的な相互作用を支持する、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックダウンの樹状表現型を完全に救済する。ＴＭＥＭ１０６Ｂ／ＭＡＰ６相互作用は、おそらくは、逆行性輸送の分子破壊として作用することで、リソソームの樹状輸送を調節する上で重要であることを示した。リソソームの誤経路は、ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク変異を有する患者の神経変性を促し得る。ＭＡＰ６の、ニューロンに豊富なスプライス変異体のＣ末端反復領域は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞質Ｎ末端に対して優先的に結合する。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の相互作用を阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の相互作用を強化する、または、高める。
リソソーム関連膜タンパク質１
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞体の後期エンドソーム／リソソーム小胞、及び、樹状突起においてＬＡＭＰ１と共局在するが、シナプス小胞、または、初期、または、リサイクルエンドソームとは共局在しない。（Ｓｔａｇｉ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６－２４０。）ＬＡＭＰ１（リソソーム関連膜タンパク質１）は、後期エンドソーム／リソソームマーカーである。ＴＭＥＭ１０６Ｂの増大は、そのような輸送を阻害して、リソソームを大量にもたらす一方で、ＴＭＥＭ１０６Ｂの低減は、軸索輸送リソソームを増加させる（運動性を高める）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＬＡＭＰ１との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、軸索輸送リソソームを増加させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、軸索輸送したリソソームの運動性を高める。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＬＡＭＰ１との間の相互作用を強化する、または、高める。
液胞－ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１
ＴＭＥＭ１０６Ｂが、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１（ｖ－ＡＴＰａｓｅ ＡＰ１）に、その内腔（Ｃ末端）ドメインを介して結合することも示されている（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ，９５：２８１－２９６）。Ｖ－ＡＴＰａｓｅは、リソソームの酸性化に関与し；マルチユニットタンパク質複合体の安定化などによるその機能の調節は、リソソームの機能に影響を及ぼす。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、液胞－ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、低減する。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、液胞－ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１との間の相互作用を強化する、または、高める。
本明細書では、ＴＭＥＭ１０６Ｂに結合し、かつ、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＴＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用をブロックする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。一部の実施形態では、ペプチドライブラリーを合成することができ、そこでは、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質を、１つのアミノ酸残基で隔てられた連続する１５ｍｅｒ及び２５ｍｅｒのペプチドに切断し、次いで、フィルター上にスポットする。次いで、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナーの結合が、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下で、ＴＭＥＭ１０６Ｂペプチド、または、ペプチド類と相互作用する能力を、ＳＰＯＴ結合分析で試験をすることができる（例えば、Ｆｒａｎｋ， Ｒ ａｎｄ Ｏｖｅｒｗｉｎ， Ｈ （１９９６） Ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ６６， １４９－１６９；Ｒｅｉｎｅｋｅ， Ｕ ｅｔ ａｌ．， （２００２） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２６７， １３－２６；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ， ＯＳ ｅｔ ａｌ．， （２０１０） Ｊ， ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ２８５， １２２１０－１２２２２）。一部の実施形態では、セルロース支持体は、Ｎ－修飾セルロース－アミノヒドロキシルプロピルエーテル膜として調製することができ、合成の全ラウンドを、ペプチドと膜との間にアラニンリンカーをもたらす９－フルオレニルメトキシカル－ボニルアラニン－ペンタフルフェニルエステルでスポット形成することから始める。例えば、異なるアミノ酸を段階的に加える自動線状合成は、９－フルオレニル－メトキシカルボニルと、成長するペプチド鎖に対する適切な側鎖保護とでＮ末端を保護している。一部の実施形態では、脱保護、活性化、及び、カップリングのパターンを、１６ｍｅｒのペプチドを生成するまで継続し、その結果、そのＣ末端が共有結合でセルロース支持体に固定化され、Ｎ末端遊離端を有するペプチドが、均等に分散しているアレイを生じる。（Ｓｃｈａｒｎ，Ｄ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２，３６１－３６９）。一部の実施形態では、サイド保護基の除去を、２つのステップで行うことができる。まず、膜を、９０％トリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％ Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタンにて）で処理し；次いで、例えば、６０％のトリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％ Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタン）で処理することができる。トリフルオロ酢酸塩を除去するために、Ｈ２Ｏ、エタノール、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、及び、エタノールで、膜を数回洗浄し、乾燥させる。最後に、当該膜を、５％ショ糖を補充したＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ｐＨ８．０）に広げた（ｄｉｌａｔｅｄ）ブロッキングバッファーで２時間ブロッキングしてから、所定のペプチドライブラリーを、リガンド結合分析に供する。一部の実施形態では、セルロース結合ペプチドの結合を研究するために、膜結合ライブラリーを、例えば、４℃で、一晩、ブロッキングバッファーで、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下で、Ｓ－ペプチド、及び、ポリヒスチジンをタグ付けしたリガンドと組み合わせてインキュベートし、続いて、ブロッキングバッファーで、室温で、３時間、１ｍｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質を用いて、２度目のインキュベーションを行うことができる。その後、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、例えば、３回洗浄することができ、その後、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、ＬｕｍｉＩｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行うと、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポット信号強度を提供し得る。あるいは、結合したリガンドの検出は、由来のヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイで行うことができる。標準的なウエスタンブロッティング手順と、スポット検出とを利用して、インキュベートすることができる。
本明細書では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用（例えば、結合）をブロックする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、表面プラズモン共鳴分析（例えば、Ｓｋｅｌｄａｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２８７：４３７９８；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０－１２２２２）を使用して特徴決定し得る。ブロッキング抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下において、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂに対する、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーの直接的な結合の測定を、例えば、ＣａＨＢＳを標準的な移動緩衝剤（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ、及び、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０）として使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）で実行することができる。一部の実施形態では、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＣＭ５）のバイオセンサーチップは、ＮＨＳ／ＥＤＣ法を使用して活性化することができ、続いて、７９ｆｍｏｌ／ｍｍ２のタンパク質の密度にまでＴＭＥＭ１０６Ｂでコーティングすることで、結合パートナーの親和性測定に使用することができる。ｐｒｏ－ＴＭＥＭ１０６Ｂを用いたバイオセンサー表面の調製は、同じ手順に従う。リガンド結合実験のそれぞれのサイクルの後のフローセルの再生は、再生緩衝剤（１０ｍＭ グリシン－ＨＣｌ、ｐＨ４．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＥＤＴＡ、及び、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ２０）の２度の１０μｌパルスと、０．００１％ ＳＤＳの単回の注入とによって行うことができる。親和性推定のためのセンサーグラムの調整は、例えば、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．１を使用して行うことができる。同様のプロトコールに従って、ＨｉｓＳ－ＮＧＦｐｒｏ、または、ＨｉｓＳ－ＢＤＮＦｐｒｏの固定化も、ＮＨＳ／ＥＤＣカップリングキットを使用して、ＣＭ５バイオセンサーチップで行うことができ、それにより、固定化したタンパク質の同様の表面密度（約３００ｆｍｏｌ／ｍｍ２）が得られる。ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナーで固定化したバイオセンサーチップを使用して、競合するＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下または存在下において、ＴＭＥＭ１０６Ｂの結合を調べることもできる。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、プルダウンアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０－１２２２２）。例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂの発現した細胞内または細胞外ドメインは、ＴＭＥＭ１０６Ｂブロッキング抗体の非存在下または存在下において、タグ付けしたＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナーとインキュベートすることができ、１００μｌのグルタチオン（ＧＳＨ）－セファロースビーズを使用して沈殿させる（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１７－０７５６－０１）。使用した受容体ドメインの量は、対照としてＴａｌｏｎビーズを使用した沈殿によって決定することができる。結合したタンパク質を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析で分離し、標準的なウェスタンブロット分析で、抗ヒスチジン抗体を使用して視覚化することができる。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、セルロース結合タンパク質を使用して特徴決定することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０－１２２２２）。例えば、膜結合タンパク質を、Ｓ－ペプチド、及び、ポリヒスチジンをタグ付けしたプログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１、または、別のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナーとインキュベートすることができ；ブロッキング緩衝剤にて、４℃で、一晩、続いて、ブロッキング緩衝剤にて、２回目のインキュベーションを、１μｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質と共に、室温で、３時間行う。その後、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、３回洗浄してから、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、ＬｕｍｉＩｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行って、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポット信号強度を提供する。あるいは、結合したリガンドの検出は、ヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイによって行うことができる。インキュベーションに続いて、標準的なウエスタンブロッティング分析、及び、スポット検出を行うことができる。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、近接ライゲーションアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ｇｕｓｔａｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３３：６４－７１）。例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、そのリガンド、または、結合パートナーを発現する、または、それらに曝露する細胞に対する近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）（ＤｕｏｌｉｎｋＩＩ）は、一次抗体抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、当該結合パートナーに対する抗体を用いて実行することができ、続いて、その後に加える環形成オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、かつ、４０ｎｍ以内に抗原が近接するとローリングサークル増幅を開始する、オリゴヌクレオチドと共役した二次抗体とインキュベーションする。増幅した当該ＤＮＡは、相補的な蛍光標識オリゴヌクレオチドを加えることで、視覚化することができる。
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、細胞結合アッセイでのアルカリホスファターゼをタグ付けしたリガンドを使用して、特徴決定することができる（例えば、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５２９８－５３０４；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ ４０９，３４１－３４６；Ｌａｕｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｎａｔｕｒｅ ４５７，１１２８－１１３２；及び、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎｅｕｒｏｎ ６８，６５４－６６７）。例えば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）をタグ付けしたリガンドを作成して、トランスフェクトした細胞、または、初代ニューロンに関するＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を評価することができる。ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に対するＡＰをタグ付けしたリガンド結合を検出するために、培養物を、例えば、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳナトリウム、ｐＨ７．０５、及び、１ｍｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＨ）で洗浄することができる。次に、それらのプレートを、ＡＰをタグ付けしたリガンドと共に、ＴＭＥＭ１０６Ｂブロッキング抗体の存在下または非存在下において、例えば、ＨＢＨにおいて、２３℃で、２時間インキュベートできる。ＡＰ結合リガンドを、当該技術分野で周知の方法で、検出、及び、定量することができる。
本明細書で提供される実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では：ａ）１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用のために利用可能なＴＭＥＭ１０６Ｂの有効レベルを低減する；ｂ）１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の部位をブロックする；ｃ）１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの適切な処理、及び／または、細胞内局在化に必要であるＴＭＥＭ１０６Ｂに関する１つ以上の翻訳後事象を予防する；ｄ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの分解を招く；ｅ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの配座を変更する、または、両方を行うことで、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンド、シグナル伝達タンパク質、または、結合タンパク質の１つ以上との間の相互作用をさらに阻害する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、それらの組み合わせに対して特異的に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂであり、かつ、当該第２の抗原は、血液脳関門を通る輸送を促す抗原である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質変換ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される。
ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質分解
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、膜内タンパク質分解を受け、膜貫通ドメインと細胞内ドメインとを含むＮ末端断片（ＮＴＦ）へと処理される。この処理は、リソソームプロテアーゼ依存的である。（Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８９：１９６７０－１９６８０）当該ＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ａ（そして、小規模のＳＰＰＬ２Ｂ）が、この膜内開裂事象の原因であることが示されている。しかしながら、特徴決定されていないリソソームプロテアーゼ（複数可）、及び、ＳＰＰＬ２Ａは、Ｎ末端から、それぞれ、約１２７番目、及び、１０６番目のアミノ酸でＴＭＥＭ１０６Ｂを開裂して、ＴＭＥＭ１０６Ｂの２つのＮＴＦを生成することが報告されている（Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４，上掲）。しかしながら、正確な開裂部位は、未だ特定されていない。ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、おそらくは、カスパーゼ活性が媒介するＮＴＦ１７（１～１２７）、及び、ＮＴＦ１３（１～１０６）の出現をもたらした。
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を阻害する。ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が阻害する能力は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下及び非存在下でＴＭＥＭ１０６Ｂ過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のウェスタンブロットを行うことによって決定できる。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下でのＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解断片の検出量が抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下でのものと比較して減少することが、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を抗体が阻害することを示す。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの膜内タンパク質分解を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を阻害し、それにより、Ｎ末端断片へのＴＭＥＭ１０６Ｂの開裂を予防する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ａ開裂を阻害する。その他の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ｂ開裂を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのカスパーゼ媒介的開裂を阻害する。
様々な神経変性障害における疾患標的及びリスク因子としてのＴＭＥＭ１０６Ｂ
２５０９名の対照対象と、一部にＧＲＮ変異を含む、病理学的に確認したＦＴＬＤ－ＴＤＰの５１５名の対象とでゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）を行うことで（ｖａｎ Ｄｅｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４２：２３４－２３９）、ＦＴＤの遺伝的リスク因子としてＴＭＥＭ１０６Ｂが同定された。このＧＷＡＳでは、染色体７ｐ２１．３の６８ｋｂ領域内に３つのＳＮＰが発見されており、これらは、ゲノム全体で有意なＦＴＬＤ－ＴＤＰの発生に関連している（ｒｓ６９６６９１５、ｒｓ１０２００４、及び、トップマーカーＳＮＰ ｒｓ１９９０６２２；ｐ値範囲＝５．００×１０－１１～１．０８×１０－１１）。有意に関連する３つのＳＮＰは、名目関連の９つのその他のＳＮＰと同じ連鎖不平衡（ＬＤ）ブロック内にあり、そのすべてが、ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子座に関係していた。この事例での対照コホートでは、それぞれの有意なＳＮＰのマイナー対立遺伝子が、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ患者で過小評価されており（ｒｓ１９９０６２２マイナーＣ対立遺伝子の対照については、３２．１対４３．６％；ｐ値＝１．０８×１０－１１）、このことは、マイナーＴＭＥＭ１０６Ｂ対立遺伝子を発現する個体では、疾患を発症する可能性が小さいことを示唆している［ｒｓ１９９０６２２マイナー対立遺伝子のオッズ比（ＯＲ）＝０．６１］。ＧＲＮ変異ステータスで当初のＧＷＡＳコホートを層別化すると、上位３つのＳＮＰの関連は、両方のグループで有意なままであったが、非ＧＲＮ保有者（ｒｓ１９９０６２２ ｐ値＝６．９０×１０－７；ＯＲ ０．６８）に対して、ＧＲＮ保有者でのＧＲＮ関連ＦＴＬＤ－ＴＤＰ（ｒｓ１９９０６２２ ｐ値＝１．３４×１０－９；ＯＲ ０．３４）を有する人々で最大であった。これらのＳＮＰは、ＴＭＥＭ１０６ＢとＧＲＮとの間の機能的相互作用を示唆するＧＲＮ変異も保有する患者に最も強いリスクを与えた。ＦＴＬＤ－ＴＤＰを有するＴＭＥＭ１０６Ｂ変異体の遺伝的関連性を、高い信頼性で再現した（Ｃｒｕｃｈａｇａ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｆｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｖａｎｄｅｒ Ｚｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。ＦＴＬＤのリスクを高めることに加えて、ｒｓ１９９０６２２での主要な対立遺伝子は、ＦＴＬＤ発症の年齢も若年化する。（例えば、Ｆｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７６：４６７－４７４；Ｃｒｕｃｈａｇａ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏｌを参照されたい。）
したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々な疾患、障害、及び、病態と関連している。前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）（または、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））は、アルツハイマー病、及び、パーキンソン病に次いで３番目に多い神経変性疾患であり、老人性認知症の２０％を占めている。（例えば、Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ，８：４２３－４３４を参照されたい）。この病態は、脳の前頭葉の進行性の悪化に起因している。時間の経過とともに、当該変性は、側頭葉で進行し得る。臨床症状は多様で、症状として、認知症、行動の変化、ならびに、発話や言語の障害がある。（例えば、Ｃｒｕｔｓ ＆ Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，２００８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６－１９４；Ｎｅａｒｙ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５１：１５４６－１５５４；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５８：１６１５－１６２１を参照されたい。）上部または下部運動ニューロン疾患のさらなる症状が一般的であり、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）との部分的な重複を示す。ＦＴＬＤ症例の大部分は、核ＤＮＡ／ＲＮＡ結合タンパク質ＴＤＰ－４３のニューロン細胞質凝集体（Ｎｅｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１４：１３０－１３３）と、ＴＡＲＤＢＰでの病原性変異を示しており、ＴＤＰ－４３をコードする遺伝子は稀であり、主にＡＬＳを引き起こす（Ｓｒｅｅｄｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１９：１６６８－１６７２）。ＴＤＰ－４３病理を伴う家族型のＦＴＬＤは、主に、Ｃ９ｏｒｆ７２のヘキサヌクレオチド反復拡張（ＤｅＪｅｓｕｓ－Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，２０１１；Ｒｅｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）、及び、成長因子プログラニュリン（ＧＲＮ）の主要な機能喪失型変異に起因している（Ｃｒｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００６、Ｃｕｒｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓ、３：４８５－４９１）。当該疾患の稀な家族性形態に関連する変異を同定したところ、ＦＴＬＤ病因への洞察が得られたが、より一般的な散発性症例の病因は、捉えどころがほとんどなく、臨床、及び、神経病理学的提示における多様性を、さらに複雑にしている。
ＦＴＤ症例の相当な部分は、常染色体優性遺伝様式で受け継がれているが、１つの家族でさえ、症状は、行動障害を伴うＦＴＤから原発性進行性失語症、大脳皮質基底神経節変性にまで及ぶことがある。ＦＴＤは、大部分の神経変性疾患と同様に、罹患した脳における特定のタンパク質凝集体の病的存在をもってして特徴決定することができる。歴史的に、ＦＴＤの最初の報告では、神経原線維の絡み、または、ピック小体における高リン酸化タウタンパク質のニューロン内蓄積の存在を認識していた。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、幾つかの家族でのタウタンパク質をコードする遺伝子の変異の同定によって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３９３：７０２－７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、過リン酸化タウの蓄積を示さないが、ユビキチン（Ｕｂ）、及び、ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）に対する免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８－１３９４）。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ－Ｕ）を有するこれらのＦＴＤ事例の大部分では、プログラニュリン遺伝子に変異があることを示した。
７番染色体で同定した一塩基多型（ＳＮＰ）が、ＴＭＥＭ１０６Ｂをコードするゲノム領域のＳＮＰとして、ＦＴＬＤ－ＴＤＰの第１の遺伝的リスク因子を突き止めた。（Ｖａｎ Ｄｅｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、４２：２３４－２３９。）
ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰを、ＦＴＬＤ－ＴＤＰの疾患リスク因子として評価する最初の研究は、２０１２年に、Ｃ９ｏｒｆ７２反復拡張を発見する前に行われた。この発見以来、２つの独立したグループが、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰが、Ｃ９ｏｒｆ７２変異に起因するＦＴＬＤ、及び／または、ＡＬＳを発症するリスクにも関連していることを突き止めた。（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２７：４０７－４１８；ｖａｎ Ｂｌｉｔｔｅｒｓｗｉｊｋ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ，１２７：３９７－４０６を参照されたい。）これらのＣ９ｏｒｆ７２変異コホートでは、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰのマイナー対立遺伝子［ｒｓ］１９９０６２２、及び／または、ｒｓ３１７３６１５を、ＬＤにて、ｒｓ１９９０６２２と一緒に保有する個体の頻度は大幅に低減したが、ＧＲＮ変異キャリアのコホートほどではなかった。ＦＴＬＤ、ＦＴＬＤ－ＡＬＳ、または、ＡＬＳのいずれかの主要な疾患提示に基づいたグループでのＣ９ｏｒｆ７２反復拡張保有者のさらなる分析では、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰが、ＡＬＳではなく、ＦＴＬＤの発生に対して特異的に保護をするが、リスク対立遺伝子保有者と比較して、保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂ対立遺伝子に関してホモ接合性であるＣ９ｏｒｆ７２拡張体保有者の脳では、ＴＤＰ－４３の負担が少ないことを示した。これらの知見は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰ ｒｓ１９９０６２２、及び、ｒｓ１０２０００４が、疾患リスクと関連していなかったが、ＡＬＳ患者の認知機能と有意に関連していたＡＬＳ患者の臨床コホートにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰの以前の検査と一致しており、ｒｓ１９９０６２２マイナー対立遺伝子についてホモ接合性である個体は、主要なリスク対立遺伝子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である個体よりも認知能力が優れている（Ｖａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２１：３７３－３８０）。
ＴＤＰ－４３凝集体などの神経変性疾患の特徴は、ＦＴＬＤに固有のものではなく、アルツハイマー病（ＡＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、及び、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）などのその他の神経変性疾患で認めらており（Ａｍａｄｏｒ－Ｏｒｔｉｚ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，６１：４３５－４４５；Ｚａｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｐ，８：３６３－３７０）、また、限定的ではあるが、明らかに健康な個体でも認められる（例えば、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８４：９２７－９３４を参照されたい）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク変異は、臨床神経学的診断が無い場合には、ＴＤＰ－４３神経病理学と関連している。同様に、ＡＤ患者の間でＴＤＰ－４３病変の小ささと関連する保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプが、ＡＤの病理学的提示に影響を与えることが認められた（Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：７１７－７１８）。海馬硬化症は、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ、及び、ＡＤなどの認知症の高齢患者における一般的な病理学的特徴でもあり、ＴＤＰ－４３病理と共存することが多い。ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子型は、原発性海馬硬化症（Ａｏｋｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２９：５３－６４）、ならびに、ＡＤ患者の間での海馬硬化症に関連していることが認められており、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、これまでに公知であったＡＤ－ＨｐＳｃｌ、及び、ＨｐＳｃｌの強力な遺伝的指標となった（Ｍｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２８：４１１－４２１）。これらの研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ＳＮＰが、ＡＤ、及び、ＨｐＳｃｌなどの非ＦＴＬＤ障害におけるＴＤＰ－４３タンパク質症の発症、及び、重症度のリスク因子であることを総合的に示唆している。
１５００個を超えるヒトの脳の剖検試料を対象としたゲノミクス研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの一般的な変異を、ヒトの脳の生物学的老化率の主要なゲノム全体の決定因子として同定した：ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子座での２つのリスク対立遺伝子の存在が、その遺伝子発現プロファイルに基づいて、約１２歳に見える個体を、実年齢よりも老けたように見せる（Ｒｈｉｎｎ ａｎｄ Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔ，４：４０４－４１５）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク対立遺伝子のこの効果は、公知の神経疾患を持たない個体、ならびに、アルツハイマー病などの神経変性プロセスを持つ個体でも認められる。加齢におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの役割は、脳と寿命（小脳ではなく大脳皮質、特に、６５歳超）の観点から、非常に選択的であるように考えられる。この効果は、保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプの保有者が、加齢に伴う認知機能低下を示すさらなるコホートにおいて、独立して確認された（Ｒｈｉｎｎ ａｎｄ Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，上掲）。ＴＭＥＭ１０６Ｂ保護的ハプロタイプは、特定の量の脳病変の認知能力の向上に関連することが示されているので、認知能力への影響が確認された（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，ＰＬｏＳ Ｍｅｄ、１４：ｅ１００２２８７）。これらの結果は、神経変性疾患を超えた老化におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの多面的な役割を補強する。
ＴＭＥＭ１０６Ｂ変異体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ｍＲＮＡ、及び、タンパク質発現レベルを高めることで、ＦＴＬＤ－ＴＤＰを発症するリスクを高めるという証拠を示唆している。ＴＭＥＭ１０６Ｂが増えると、細胞あたりの後期エンドソーム／リソソームの平均数が減少し、リソソームが酸性化されなくなり、リソソームの分解も行われなくなる。
ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ－ＴＤＰ）は、利用可能な治療法が無い致命的な神経発生疾患である。プログラニュリンの生産または分泌障害を招くプログラニュリン遺伝子（ＧＲＮ）の変異は、ＦＴＬＤ－ＴＤＰの一般的な原因である。上述したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ゲノム全体の関連付けによって、ＧＲＮ変異を有する、または、ＧＲＮ変異を有しないＦＴＬＤ－ＴＤＰに対して結合している。ＴＭＥＭ１０６Ｂの発現を高めて、疾患をモデル化すると、エンドリソソームの肥大、及び、不十分な酸性化、ならびに、マンノース－６－リン酸受容体輸送の障害を招いた。内因性ニューロンＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドリソソームでのプログラニュリンと共局在し、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、プログラニュリンの細胞内レベルを高める。（Ｃｈｅｎ－Ｐｌｏｔｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３２：１１２１３－１１２２７。）一部の実施形態では、本開示は、その必要のある個体に対して、治療有効量の本開示の抗ＴＭＥＭ－１６０Ｂ抗体を投与することで、ＦＴＬＤ－ＴＤＰを、予防、リスク低減、または、治療する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、提供する。
ＦＴＬＤは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）と共通の病理学的背景を有する疾患として認識されている。ＡＬＳは、上方と下方の両方の運動ニューロンの喪失を特徴とする、不治の運動ニューロン変性疾患である。ＦＴＬＤ患者の約１５％が、運動ニューロン疾患を発症しており、ＡＬＳ患者の１５％以上が認知障害と行動障害とを有する。ＦＴＬＤとＡＬＳの重要な病理学的特徴は、細胞質相互作用性反応ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）封入体である。ＴＤＰ－４３は、ＦＴＬＤ患者（サブタイプＦＴＬＤ－ＴＤＰ）の約５０∧％が、かつ、大部分のＡＬＳ患者が保有している、主要成分である。ゲノム規模での研究、及び、コホート研究は、ＦＴＬＤ－ＴＤＰの遺伝的リスク修飾因子として、ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子領域の３つのＳＮＰ（ｒｅ１９９０６２２、ｒｓ６９６６９１５、及び、ｒｓ１０２０００４）を同定した。当該リスク関連性は、ＧＲＮ、及び、Ｃ９ＯＲＦ７２変異を有するＦＴＬＤ－ＴＤＰ症例において、より顕著である。ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、細胞死を誘発し、酸化ストレス誘発性細胞毒性を高め、細胞をベースとしたモデルを使用して、ＴＤＰ－４３の開裂を引き起こしており、これらのことは、ＴＭＥＭ１０６Ｂのアップレギュレーションが、神経毒性を直接に引き起こすことでＦＴＬＤのリスクを高めることを示唆している。（Ｓｕｚｕｋｉ ａｎｄ Ｍａｔｓｕｏｋａ，２０１６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２９１：２１４４８－２１４６０。）加えて、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＡＬＳの認知機能障害の発症に関与している（Ｖａｓｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２１：３７３－３８０）。
海馬の老化硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）は、高齢者によく認められる罹病率の高い神経変性疾患であり、海馬の形成において、ニューロンの喪失と星状細胞症が認められた場合に神経病理学的に診断され、アルツハイマー病型のプラークと濃縮体に寄与し得るとは考えられていない。この疾患は、アルツハイマー病と同様の臨床経過をたどる。ＨＳ－Ａｇｉｎｇは、ＴＤＰ－４３病理の存在、及び、前頭側頭型認知症の重篤な症状または臨床的兆候の欠如によって、その他の海馬硬化症と区別する。ＨＳ－Ａｇｉｎｇは、ＳＮＰ ｒｓ１９９０６２２（ＴＭＥＭ１０６ｂ）、及び、その他のＳＮＰ、ならびに、ＴＭＥＭ１０６ｂ、ＡＢＣＣ９（ＦＴＬＤと関連しない）、及び、ＧＲＮにおける多型と関連している。（Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ，７４：７５－８４。）一部の実施形態では、本開示は、その必要のある個体に対して、治療有効量の本開示の抗ＴＭＥＭ－１６０Ｂ抗体を投与することで、海馬の老化による硬化を、予防、リスク低減、または、治療する方法を提供する。
最近、ＴＭＥＭ１０６Ｂのマウス遺伝的ノックアウト（Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ ９５，２８１－２９６）が、グラニュリン経路におけるＴＭＥＭ１０６Ｂに対する効果を示した。具体的には、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質の遺伝的ノックアウトにより、リソソームタンパク質のレベルの部分的救済、ならびに、過敏性及び脱抑制などの行動変化の救済など、マウスモデルのＧＲＮノックアウトに関連する一部の病原性表現型を救済することができた。その他の研究が報告しているように、当該ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウト自体は、マウスでは十分に耐性がある。加えて、この研究は、ｖ－ＡＴＰアーゼサブユニットＡＰ１との直接的な相互作用（免疫共沈降を介した）を示すことで、ＴＭＥＭ１０６Ｂの考え得る作用メカニズムを示唆した。当該ｖ－ＡＴＰアーゼ複合体は、リソソームのｐＨを低下させ、タンパク質の分解と再利用を開始する上で重要な役割を果たす。したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂとの相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現に関連するリソソーム表現型の一部を招くものであり、この相互作用を逆にブロックする（または、単にＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルを低減させる）と、この表現型を改善し得る。
上記した分析、及び、さらなる分析は、関連ＴＭＥＭ１０６Ｂと、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異が関与する前頭側頭型認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２変異が関与する前頭側頭型認知症、ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性、ＴＤＰ－４３タンパク質症、海馬硬化症、加齢性海馬硬化症、様々な障害に関連する認識機能障害（筋萎縮性側索硬化症、及び、慢性外傷性脳症の認識機能障害などがあるが、これらに限定されない）、及び、低髄鞘形成障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）など、これらに限定されない様々な疾患、障害、及び、病態を同定する。したがって、本開示は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合して、その機能に影響を与える抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体など、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的とする治療法を提供する。
慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）は、頭部への反復衝撃の病歴を持つ個体で病理学的に診断されている進行性神経変性疾患である。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＣＴＥの進行、特に、ＣＴＥ関連の神経病理学、及び、認知症の重要な因子であることが示されている。具体的には、ＳＮＰ ｒｓ３１７３６１５（Ｔ１８５Ｓコード変異）のマイナー（Ｇ）対立遺伝子の保有者は、ＡＴ８ポジティブのｐ－タウレベルの低下、ＣＤ６８ポジティブ細胞の密度の低下、及び、シナプス喪失の検査によく使用しているシナプス後マーカーであるＰＳＤ－９５のレベルの上昇など、神経病理学のレベルが低下していることが示された。また、Ｇ－対立遺伝子は、死亡前の認知症におけるオッズの６０％の減少と関連していた。いずれの事例でも、Ｇ対立遺伝子の硬化は相加的であり、ＧＧ遺伝子型が最も防御的であった。ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子型は、疾患のリスクに関する効果を奏しておらず；むしろ、疾患の重症化について効果が認められた。
ミクログリアは、中枢神経系（ＣＮＳ）の一次自然免疫細胞である。ミクログリアは、健康なＣＮＳや、様々な病状で異なる炎症環境に応じて、休止状態または活性化状態で存在する。ＴＧＦベータは、ミクログリアの発達と機能における重要な要素であり、また、ミクログリア特異的な恒常性遺伝子シグネチャーの維持に必要である。ＴＧＦベータシグナル伝達、及び、ＴＧＦベータ経路の抑制は、神経変性疾患モデルから単離されたミクログリアの一般的な機能である。加えて、ＴＧＦベータは、ミクログリア／マクロファージが媒介したＣＮＳの病状と神経変性の予防において重要な機能を有する、と説明されている（Ｂｕｔｏｖｓｋｙ ａｎｄ Ｗｅｉｎｅｒ，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ，１９：６２２－６３５，Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９：４２５－４４１）。したがって、ＴＧＦベータの発現、シグナル伝達、及び／または、機能を、直接的または間接的に高める療法は、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、自閉症スペクトラム障害、認知症などの神経変性疾患、及び、障害の治療に利益をもたらす。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、細胞におけるＴＧＦベータレベルを高める上で有効である。
認知症は、非特異的症候群（すなわち、徴候と症状とのセット）であり、通常の加齢から予想し得る範囲を超えて、前々から健常でなかった方々の全般的な認知能力の深刻な喪失として出現する。認知症は、脳全体の独特な損傷の結果として静的であり得る。あるいは、認知症は、進行性であり、その結果、身体の損傷や疾患が関与する長期的な機能低下を招き得る。認知症は、高齢者の集団でごく一般的であるが、６５歳になる前に発症することもある。認知症の影響を受ける認知領域として、記憶、注意持続時間、言語、及び、問題解決があるが、これらに限定されない。一般的に、認知症と診断するまで少なくとも６か月間、症状が存在しなくてはならない。
認知症の例示的な形態として、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味認知症、及び、レビー小体型認知症があるが、これらに限定されない。
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することで、認知症を、予防、リスク低減、及び／または治療することができると考えられる。
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る疾患であり、治療法は無い。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳以上の方で診断される。しかしながら、あまり一般的でない早期発症型アルツハイマー病は、はるかに早期に発症することがある。
アルツハイマー病の一般的な症状として、最近の出来事を思い出せないなどの行動症状；認知症状、錯乱、興奮性と攻撃性、気分のむら、言語の問題、及び、長期記憶喪失がある。この疾患が進行すると、身体の機能が失われ、最終的には死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになる前は、様々な未知の期間にわたって発症し、診断がされることもなく何年も進行することがある。
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または、運動ニューロン疾患、または、ルーゲーリッグ病は、互換的に使用しており、急速に進行する脱力、筋萎縮、及び、束縛、筋痙縮、会話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、及び、呼吸の困難さ（呼吸困難）を特徴とする多様な病因を伴う衰弱性疾患のことを指す。
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーにも関与している。（Ｓｉｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｂｒａｉｎ．）低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーは、早期発症の眼振、運動失調、及び、痙性などの臨床症状を呈する不均一な疾患群である。低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーを有する４名の患者での脳低髄鞘形成は、ＴＭＥＭ１０６Ｂにおいて、同じ優性変異（Ａｐｓ２５２Ａｓｎ）を示しており、このことは、おそらくは、リソソーム機能においてＴＭＥＭ１０６Ｂが果たす役割に起因する、低髄鞘形成障害におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの関連を示唆している。したがって、一部の実施形態では、本開示は、その必要のある個体での低髄鞘形成障害を治療する方法を提供するものであって、当該方法は、個体に対して、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本開示は、その必要のある個体での低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーを治療する方法を提供するものであって、当該方法は、個体に対して、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を投与することを含む。
本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、または病態を有する個体の、予防、リスク低減、または治療における用途を見出す。一部の実施形態では、本発明は、神経変性障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ－４３封入体の存在を特徴とする疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ－４３タンパク質症を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、炎症細胞の破片、または、タンパク質凝集体の存在を特徴とする疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、異常な循環骨髄細胞の存在を特徴とする疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、不健康な老化を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）を有する個体を、予防、リスク低減し、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、プログラニュリン変異を持った前頭側頭型認知症を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、Ｃ９０ｒｆ７２変異を持った前頭側頭型認知症を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ－４３封入体を持った前頭側頭葉変性を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、海馬の老化硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、レビー小体型認知症を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、認識機能障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、加齢性認知機能障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、ＣＴＥ関連認知機能障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、加齢関連脳萎縮を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、炎症、ニューロン脱落、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害など、これらに限定されない加齢関連形質を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症に関連する認知機能障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現、または、増大した活性に関連する疾患、障害、または病態を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、低髄鞘形成障害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、その必要のある個体における転移を低減または阻害する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
一部の実施形態では、本発明は、がんを有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法を提供しており、当該方法は、その必要のある個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
例示的な抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、特定のその他の抗体の実施形態
一部の実施形態では、本明細書では、以下：
（ａ）配列番号７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、及び１４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（ｃ）配列番号１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、
（ｄ）配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、及び２０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｅ）配列番号２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、及び２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに
（ｆ）配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、及び２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、以下：
（ａ）配列番号７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、及び１４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに
（ｃ）配列番号１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、以下：
（ａ）配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、及び２０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｂ）配列番号２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、及び２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに
（ｃ）配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、及び２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、以下：
（ａ）
（ｉ）配列番号７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（ｉｉ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、及び１４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、
（ｂ）
（ｉ）配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、及び２０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｉｉ）配列番号２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、及び２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、及び２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、
を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
一部の実施形態では、本明細書では、以下：
（ａ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、
（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、ならびに
（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体
を提供する。
別の態様では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または、１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または、９９％の配列同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意で、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、及び１４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、及び７６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または、１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、及び７６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または、９９％の配列同一性を有するＶＬ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、または７６において、合計で１～１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、または７６において、合計で１～５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意で、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、または７６のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、及び２０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、及び２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、及び２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、から選択される１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶＨ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶＬを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶＨ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶＬを含む。ある実施形態では、当該抗体は、それぞれ配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０、ならびに配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、及び７６の中から選択されるＶＨ配列及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて含む。
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該ＶＨ及びＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６５のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６６のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６７のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６８のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７０のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬ；ならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７６のアミノ酸配列を含むＶＬ、からなる群から選択される。
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂへの結合について、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６７、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、ＴＭ－９４、またはそれらの任意の組み合わせのＶＨ及びＶＬ（例えば、以下の表４に示されるもの）を含む少なくとも１つのリファレンス抗体の結合を競合的に阻害する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂへの結合について、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６７、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、ＴＭ－９４、またはそれらの任意の組み合わせのＶＨ及びＶＬ（例えば、以下の表４に示されるもの）を含む少なくとも１つの抗体が結合するＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープと同じまたは重複するヒトＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する。リファレンス抗体と、ＴＭＥＭ１０６Ｂの「同じエピトープ」に結合する抗体は、リファレンス抗体と同じＴＭＥＭ１０６Ｂ残基のすべてと接触する。リファレンス抗体と「重複する」ＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する抗体は、リファレンス抗体と同じＴＭＥＭ１０６Ｂ残基の少なくともいくつかと接触する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための例示的な方法の詳細は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に示されている。
ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、または、フローサイトメトリーなどの当該技術分野で公知のあらゆる適切な競合アッセイ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂ結合アッセイを利用して、ＴＭＥＭ１０６Ｂへの結合について、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－６７、ＴＭ－６８、ＴＭ－６９、ＴＭ－７０、ＴＭ－７１、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７５、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８１、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－８９、ＴＭ９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、ＴＭ－９４、またはそれらの任意の組み合わせのＶＨ及びＶＬ（例えば、以下の表４に示されるもの）を含む１つ以上の抗体と抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が競合する（または当該１つ以上の抗体の結合を競合的に阻害する）か否かを決定し得る。例示的な競合アッセイでは、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、細胞表面にＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞を、ＴＭＥＭ１０６Ｂ（例えば、ヒト、または、非ヒト霊長類）に対して結合する第１の標識抗体、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する当該第１の抗体と競合する能力に関する試験に供する第２の非標識抗体を含む溶液でインキュベートする。当該第２の抗体は、ハイブリドーマ上清に存在し得る。対照として、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞を、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液でインキュベートする。ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する第１の抗体の結合を許容可能な条件下でインキュベートした後に、未結合の過剰な抗体を除去し、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に関連する標識の量を測定する。固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料で大幅に低減していれば、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、第２の抗体が、第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの様々な領域など、ＴＭＥＭ１０６Ｂの様々な領域に結合し得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂのそのような領域として、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞質ドメイン、または、内腔ドメインＴＭＥＭ１０６Ｂがある。
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの１つ以上の領域またはドメインに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの１つ以上の領域またはドメインに対して結合する。
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト化、及び／または、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、または、Ｆ（ａｂ’）２断片である。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、実質的な全長抗体、例えば、本明細書で定義するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または、その他の抗体クラス、または、アイソタイプである。
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、以下の第１～７節に記載したように、あらゆる特徴を、単独で、または、組み合わせて取り込み得る。
（１）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体結合親和性
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定カロリメトリー（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップト－フロー分析、及び、比色分析、または、蛍光タンパク質融解分析などのあらゆる生化学的または生物物理学的技法など、あらゆる解析技法で決定することができる。一部の実施形態では、Ｋｄを、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定する。一部の実施形態では、ＲＩＡを、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９））に記載された、目的の抗体のＦａｂバージョン、または、その抗原を用いて実施する。一部の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００、または、ＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを使って、約１０反応単位（ＲＵ）の固定化した抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で、Ｋｄの測定を行う。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）、または、完全長抗体を使用して決定する。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価形態の全長抗体を使用して決定する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して、ナノモルまたはピコモルの親和性を有し得る。一部の実施形態では、当該抗体の解離定数（Ｋｄ）は、約０．１ｎＭ～約５００ｎＭである。例えば、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合に関する当該抗体のＫｄは、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約７５ｎＭ、約５０ｎＭ、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約９ｎＭ、約８ｎＭ、約７ｎＭ、約６ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、または、約１ｎＭ～約０．１ｎＭである。
（２）抗体断片
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、抗体断片である。抗体断片として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び、ｓｃＦｖ断片、及び、後述するその他の断片があるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；及び、米国特許第５５７１８９４号、及び、第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ、インビボでの半減期が延びたＦａｂ、及び、Ｆ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、２価、または、二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ、及び、テトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部または一部、または、軽鎖可変ドメインの全部または一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。
抗体断片は、本明細書に記載した通り、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに、組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、または、ファージ）による生産など、これらに限定されない様々な技術で生産することができる。
（３）キメラ、及び、ヒト化抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。ある例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または、サルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）、及び、ヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを、親抗体のものから変更した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性と親和性とを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、標的に対して、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、第５６９３７６１号、第５６９３７６２号、及び、第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施形態では、免疫原性を低減しながら、抗原結合ドメインの本来の親和性を抑制せずに修飾することができる抗体可変ドメインのアミノ酸を同定する。例えば、米国特許第５７６６８８６号、及び、第５８６９６１９号を参照されたい。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（またはその一部）が、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体での一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換する。
ヒト化抗体、及び、それらを生産する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）で概説されており、また、例えば、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び、第７０８７４０９号に記載されている。ヒト化に使用し得るヒトフレームワーク領域として、「ベストフィット」法を使用して選択したフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）；及び、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒトの成熟した（体細胞変異）フレームワーク領域、または、ヒトの生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、及び、ＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）、及び、Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
（４）ヒト抗体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）、及び、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）で説明されている。
ヒト抗体は、抗原接種に応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を生産するように修飾されたトランスジェニック動物に対して免疫原を投与して、調製することができる。そのようなマウスが、マウス抗体の非存在下でヒト抗体を生産するものとして予想して、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片にてマウス抗体生産を欠損しているマウス系統を遺伝子操作することができる。大きなヒトＩｇ断片は、大きな可変遺伝子の多様性、ならびに、抗体の生産と発現の適切な調節を続けることができる。抗体の多様化と選択、及び、ヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如のためのマウス機構を利用することで、これらのマウス系統において再現したヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原などの目的の抗原に対する高親和性完全ヒト抗体を生み出すことができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を、生産及び選択することができる。特定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及び、ＥＰ５４６０７３で説明されている。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６０７５１８１号、及び、第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許番号７０４１８７０号、及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号を参照されたい。そのような動物が生成したインタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせて、さらに改変し得る。
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づいた方法で生産することができる。ヒトモノクローナル抗体の生産のためのヒト骨髄腫、及び、マウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）、及び、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１））。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成したヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１ ０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法として、例えば、（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生産を説明している）米国特許第７１８９８２６号に記載されている方法がある。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７（２００５）、及び、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。また、ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択したＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで生成し得る。次に、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を、以下に説明する。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、インビトロ法、及び／または、所望の１つ以上の活性を有する抗体に関するコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングして単離されたヒト抗体である。適切な例として、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（かつてのＰｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などがあるが、これらに限定されない。特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ、及び、ＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で別々にクローニングし、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているファージライブラリーでランダムに再結合する。例えば、当該技術分野では、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を保有する抗体に関する当該ライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が公知である。Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０、２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及び、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（－２）：１１９－１３２（２００４）も参照されたい。一般的に、ファージは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、または、Ｆａｂ断片のいずれかで抗体断片を提示する。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要がなく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、未処理のレパートリーを、（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているようにして、免疫化処置をせずに、広範囲の非自己抗原、それに、自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配置していないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して可変性に富んだＨＶＲ３領域をコードし、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８、１９９２に記載されているようにして、インビトロでの再配置を達成した。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献として、例えば：米国特許第５７５０３７３号、ならびに、米国特許公開第２００７／０２９２９３６号、及び、第２００９／０００２３６０号がある。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体は、本明細書では、ヒト抗体またはヒト抗体断片と見なす。
（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、Ｆｃを含む。一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／または、ＩｇＧ４アイソタイプである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂ活性を誘導し、または、Ｆｃ受容体に対する結合とは無関係に誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供するあらゆる抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２６０、及び、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１～４４７を含む、アミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
一部の実施形態では、当該Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、クラスタリングを増加させる。一部の実施形態では、当該抗体は、当該抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を修飾して、エフェクター機能を改変すること、及び／または、抗体の血清半減期を長くすることも望ましい。例えば、当該定常領域のＦｃ受容体結合部位を修飾または変異させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／または、ＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去または低減して、抗体依存性細胞性細胞毒性を低減し得る。一部の実施形態では、当該抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインにおける）Ｆｃ領域のＮ－グリコシル化を除去すると、当該エフェクター機能は低下する。一部の実施形態では、ＷＯ９９／５８５７２、及び、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；Ｒａｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６４：１９２５－１９３３（２０００）に記載されているようなヒトＩｇＧの２３３～２３６、２９７、及び／または、３２７～３３１などの領域を修飾すると、当該エフェクター機能は低下する。その他の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を修飾してエフェクター機能を改変し、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を高めて、抗体依存性細胞媒介細胞毒性、及び、抗体依存性細胞食作用などの体液性応答を活性化せずに、隣接細胞でのＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のクラスタリングを増加させることも望ましい。
当該抗体の血清半減期を長くするために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されているようにして、サルベージ受容体結合エピトープを、当該抗体（特に、抗体断片）に組み込み得る。本明細書で使用する用語「サルベージ受容体結合エピトープ」とは、インビボでのＩｇＧ分子の血清中半減期の延長に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、または、ＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープのことを指す。その他のアミノ酸配列の修飾。
（６）多重特異性抗体
多重特異性抗体とは、同じまたは別のポリペプチド（例えば、本開示の１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド）エピトープなど、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体のことである。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、二重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、三重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、四重特異性抗体とすることができる。そのような抗体を、完全長抗体、または、抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来する抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの第１の部位に対して結合する第１の抗原結合領域を含み、かつ、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの第２の部位に対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する第１の抗原結合領域、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。
本明細書では、第１の抗原結合領域を含む多重特異性抗体を提供しており、当該第１の抗原結合領域は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する本明細書に記載の抗体の６つのＨＶＲ、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該第１の抗原結合領域は、本明細書に記載している抗体のＶＨまたはＶＬを含む。
当該多重特異性抗体のいずれかの一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、（ａ）血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及び、ＡＮＧ１００５から選択される血液脳関門を通る輸送を促す抗原；（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、または、その断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される疾患原因タンパク質；（ｄ）免疫細胞で発現するリガンド、及び／または、タンパク質であって、当該リガンド、及び／または、タンパク質を、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンから選択される；及び／または、（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞、及び、それらのあらゆる組み合わせで発現するタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である。
血液脳関門を通る輸送を促す多数の抗原は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ Ｒ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７：４８－５７（２０１０））。そのような第２の抗原として、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性変異体）などのジフテリア毒素、ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、または、ペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン、ポリアルギニン、または、一般的に正電荷を有するペプチド、ＡＮＧ１００５などのアンジオペプペプチド（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）、及び、血液脳関門内皮細胞で濃縮を受けるその他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（１０）：ｅ１３７４１（２０１０）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
当該多価抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗原、ならびに、さらなる抗原Ａβペプチド、抗原またはα－シヌクレインタンパク質抗原、または、Ｔａｕ－タンパク質抗原、または、ＴＤＰ－４３タンパク質抗原、または、プリオンタンパク質抗原、または、ハンチンチンタンパク質抗原、または、ＲＡＮ、グリシン－アラニン（ＧＡ）、グリシン－プロリン（ＧＰ）、グリシン－アルギニン（ＧＲ）、プロリン－アラニン（ＰＡ）、または、プロリン－アルギニン（ＰＲ）、からなるジペプチド反復（ＤＰＲペプチド）を含む翻訳産物抗原、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体などを認識し得るが、これらに限定されない。トランスフェリン受容体、または、抗体の移動を促すその他の抗原は、血液脳関門を通る。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、トランスフェリンである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、タウである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、Ａβである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２である。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、α－シヌクレインである。
当該多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び、好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含み、１つ以上の当該ポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得るものであり、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは、０または１である。同様に、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＨ－ＣＨ１可撓性リンカー－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖；または、ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１－Ｆｃ領域鎖を含む。本明細書の多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（及び、好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２～約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書で企図する軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、また、任意で、ＣＬドメインをさらに含む。
多重特異性抗体を作る技術として、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアの組換え共発現があるが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ Ｎａｔｕｒｅ３ ０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及び、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１））、及び、「ノブ－イン－ホール」遺伝子操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）を参照されたい）。また、ＷＯ２０１３／０２６８３３（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。また、多特異性抗体は、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作る静電ステアリング効果を操作して（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体を架橋して（例えば、米国特許第４６７６９８０号を参照されたい）；ロイシンを使用して；二重特異性抗体断片を作る「ダイアボディ」技術を使用して（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい）；一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用して（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているようにして三重特異性抗体を調製して作り得る。
本明細書は、「オクトパス抗体」などの３つ以上の機能的な抗原結合部位を有する遺伝子操作した抗体も含む（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６を参照されたい）。また、本明細書の抗体は、複数のＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
（７）抗体変異体
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体のアミノ酸配列の変異を企図している。例えば、抗体の結合親和性、及び／または、その他の生物学的特性を改善することが望ましい。
（ｉ）置換、挿入、及び、欠失変異
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体を提供する。抗体のアミノ酸配列変異は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入すること、または、ペプチド合成により調製し得る。そのような修飾として、例えば、当該抗体のアミノ酸配列での残基の欠失、及び／または、挿入、及び／または、残基の置換がある。
Figure 2024512002000002
これらの抗体の生物特性の実質的な修飾は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シートまたはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することで達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
に分けられる。
例えば、非保存的置換は、これらのクラスの内の１つのメンバーを、別のクラスのものと交換することを伴う。そのような置換した残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、または、当該分子の非相同領域に導入することができる。
本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変更を加える場合、特定の実施形態では、アミノ酸の疎水性指標を考慮することができる。それぞれのアミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいて、疎水性指標を割り当てている。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸塩（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸塩（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；及び、アルギニン（－４．５）である。
タンパク質に対して相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２）。特定のアミノ酸では、類似の疎水性指標、または、スコアを有するその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、かつ、なおも類似の生物活性を保持することができる、ことは公知である。疎水性指標に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換を含む。特定の実施形態では、±１以内の事例を含み、特定の実施形態では、±０．５以内の事例を含む。
同様に、類似のアミノ酸の置換を、親水性に基づいて効果的に行うことができ、特に、そうして生成した生物学的機能性タンパク質またはペプチドは、本事例のように免疫学的実施形態での使用を意図している、ことも理解されたい。特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性が支配するタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性、及び、抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。
これらのアミノ酸残基には：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸塩（＋３．０±１）；グルタミン酸塩（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）、及び、トリプトファン（－３．４）の親水性値を割り当てている。類似の親水性値に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±１以内のアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±０．５以内のアミノ酸の置換を含む。親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを同定することもできる。これらの領域を、「エピトープコア領域」とも称する。
特定の実施形態において、置換、挿入、または、欠失は、そのような改変が、抗体が抗原に対して結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲで起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲで行い得る。そのような改変は、例えば、ＨＶＲの抗原接触残基の外側で行い得る。前出の変異ＶＨ、及び、ＶＬ配列の特定の実施形態では、それぞれのＨＶＲは改変されておらず、または、１つ、２つ、または、３つ以下のアミノ酸置換を含む。
アミノ酸配列挿入として、１残基～１００以上の残基の長さのポリペプチドまでの範囲のアミノ末端、及び／または、カルボキシル末端融合、ならびに、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体がある。抗体分子のその他の挿入変異体として、（例えば、ＡＤＥＰＴに関しては）抗体のＮ－またはＣ－末端への融合、または、当該抗体の血清半減期を長くするポリペプチドがある。
抗体の適切な立体構造の維持に関与しないシステイン残基も、一般的に、セリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を阻止することができる。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（特に、当該抗体が、Ｆｖ断片などの抗体断片である場合）。
（ｉｉ）グリコシル化変異
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体を改変して、当該抗体がグリコシル化する程度を増加または減少させる。抗体に対するグリコシル化部位の追加または削除は、１つ以上のグリコシル化部位を、生成または除去するように当該アミノ酸配列を改変することで好都合に達成し得る。
抗体のグリコシル化は、一般的に、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の付着のことを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン、及び、アスパラギン－Ｘ－スレオニンであり、式中、Ｘは、プロリン以外のあらゆるアミノ酸であり、これらの配列は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作る。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、または、キシロースの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリン、または、スレオニンに対して付着することを指すが、５－ヒドロキシプロリン、または、５－ヒドロキシリジンも使用し得る。
抗体に対するグリコシル化部位の付加は、（Ｎ－結合グリコシル化部位に関する）上記したトリペプチド配列の１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することで、好都合に達成する。また、当該改変は、（Ｏ－結合型グリコシル化部位に関しては）当初の抗体の配列に対して、１つ以上のセリン、または、スレオニン残基を追加または置換しても達成し得る。
当該抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、そこに付着した炭水化物を改変し得る。哺乳動物細胞が生成するネイティブ抗体は、一般的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ付番法でのＡｓｎ２９７に対するＮ結合で一般的に付着している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。このオリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及び、シアル酸、ならびに、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含み得る。一部の実施形態では、本発明の抗体でのオリゴ糖の修飾を、特定の改善した特性を有する抗体変異体を作るために行い得る。
ある実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的に、または、間接的に）付着したフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体変異体を提供する。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、及び、第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フチコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）がある。脱フコシル化抗体を生産することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｄ ３ ＣＨＯ細胞がある（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及び、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、及び、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８（２００６）を参照されたい）がある。
（ｉｉｉ）修飾された定常領域
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃは、抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾体である。一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾体は、Ｆｃガンマ受容体に対して結合することができる。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾された抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換が、そのアミノ酸位置をＥＵ付番法で定めている、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１－６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ２００８，１０５：２０１６７－２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ番号法でのＤ２６５Ａ、及び、Ｎ２９７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＤ２７０Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異の（すべてを含む）１つ以上を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での１つ以上のＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。一部では ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかの実施形態、Ｆｃは、ＥＵ付番法によるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ変異を含む。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重鎖１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を、ＣＨ１で置換すること、及び、ＩｇＧ２のヒンジ領域（ＥＵ付番法によるＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）を、カッパ軽鎖で置換することを含む。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、抗体クラスター化を高める２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、当該抗体は、位置Ｅ４３０Ｇでのアミノ酸置換、及び、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び、これらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置でのＦｃ領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。
あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、本明細書では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃをさらに含み、かつ、補体の活性化を回避するために、ＥＵ付番規定でのＡ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０（２００６））、または、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓ変異の１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））と組み合わせ得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓの１つ以上をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆるＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番でのＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／または、Ｓ４４０Ｗの１つ以上をさらに含み得る。
本開示のその他の態様は、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。ＦｃｇＲ受容体に対する結合に依存して標的化受容体を活性化させる抗体を、ＦｃｇＲ結合を解消するように遺伝子操作すると、そのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９：１０１－１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；及び、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）を参照されたい）。したがって、当該抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１、及び、ヒンジ領域）由来のＦｃドメイン、または、阻害性ＦｃｇＲＩＩＢｒ受容体、または、その変異体を優先的に結合することができる別のタイプのＦｃドメインを有していれば、適正なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、最小限の副作用で、標的抗原を活性化できると考えられる。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換が、ＥＵ付番規定でのＶ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３－５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／または、Ｃ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３（２００８））；及び、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｖ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ２１９Ｓ、または、Ｃ２２０Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７、１３８－１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）と、ヒンジ領域とを含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５））。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの特定の実施形態では、当該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１、及び、ヒンジ領域は、ＥＵ付番法での１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、または、その両方、及び／または、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び、Ｓ４４０Ｗに１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓをさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２アミノ酸１１８～２６０、及び、ＩｇＧ４アミノ酸２６１～４４７を含む。あらゆるＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓに１つ以上のアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、または、Ｐ３３１Ｓ；及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。
あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。
本明細書で提供するあらゆる抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換が、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５－１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択される。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及び、Ｅ３１８Ａをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ、及び、Ｌ２３５Ｅをさらに含み得る。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆをさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－１０８（１９９３））、及び／または、（Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７（２９）：２４５２５－３３（２０１２））に記載されている１つ以上の変異と組み合わせて、抗体安定性を高め得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。
あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３５Ｅを含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらのあらゆる組み合わせから選択される残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０にアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓにアミノ酸置換を含む。あらゆる当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙにアミノ酸置換を含む。
（８）その他の抗体修飾
あらゆる抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、誘導体である。用語「誘導体」とは、アミノ酸（または、核酸）の挿入、欠失、または、置換以外の化学修飾を含む分子のことを指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または、その他の有機もしくは無機部分を有する化学結合など、これらに限定されない共有結合修飾を含む。特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合タンパク質は、化学修飾を受けていない抗原結合タンパク質よりも循環半減期を長くすることができる。特定の実施形態では、化学修飾された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または、臓器に対する標的化能力を改善することができる。一部の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質が、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、または、ポリプロピレングリコールなど、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾される。例えば、米国特許第４６４０８３５号、第４４９６６８９号、第４３０１１４４号、第４６７０４１７号、第４７９１１９２号、及び、第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー、または、ランダムコポリマーのいずれか）、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、及び、ポリビニルアルコール、ならびに、そのようなポリマーの混合物など、これらに限定されない１つ以上のポリマーを含む。
特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾される。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーを、誘導体の１つ以上の特定の位置、例えば、アミノ末端に対して結合する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖に対してランダムに結合する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、抗原結合タンパク質の治療能力を改善するために使用する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、ヒト化抗体の治療能力を改善するために使用する。このような特定の方法は、例えば、米国特許第６１３３４２６号で論じられており、本明細書の一部を構成するものとして、同文献を、あらゆる目的のために援用する。
ペプチド類似体は、製薬業界では、テンプレートペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬として一般的に使用されている。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と称されている。本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する、Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及び、Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピューター化した分子モデリングを利用して、開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、類似の治療効果、または、予防効果を得ることができる。一般的に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性、または、薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に似ているが、当該技術分野で周知の方法で：－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス、及び、トランス）、－ＣＯＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、及び、－ＣＨ２ＳＯから選択される結合で置換されていてもよい１つ以上のペプチド結合を有する。特定の実施形態では、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸を、同じタイプのＤ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）で体系的に置換すると、安定性が高まったペプチドを生成することができる。加えて、コンセンサス配列、または、実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む固定化したペプチドは、当該技術分野で公知の方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２）、本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する）、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を加えることで、生成することができる。
薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞毒性（抗がん）ペイロード、または、特定の腫瘍マーカーを特異的に標的とする抗体（例えば、理想的には、腫瘍細胞内、または、腫瘍細胞上にだけ認められるポリペプチド）に対する薬物のカップリングに関与する。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、がん細胞の表面に付着する。当該抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、当該腫瘍細胞においてシグナルを発生させ、次いで、当該抗体を、細胞毒素と共に、吸収し、または、内部に取り込む。ＡＤＣを内部に取り込んだ後に、細胞毒性薬を放出して、がんを死滅させる。この標的作用により、理想的には、当該薬物の副作用が小さくなり、かつ、その他の化学療法剤よりも治療ウィンドウが広くなる。抗体をコンジュゲートする技術は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｊａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ ＯｎｃＬｉｖｅ Ｊｕｌｙ ５，２０１２；ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及び、Ｄｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１（１）：５－１３（２０１０）を参照されたい。
核酸、ベクター、及び、宿主細胞
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載の組み換え方法、及び、組成物を使用して生産し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸を提供する。かかる核酸は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／または、ＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、当該抗体の軽鎖、及び／または、重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一部の実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、（１）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または、（２）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、形質導入されている）。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、リンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。また、本開示の宿主細胞として、単離された細胞、インビトロで培養した細胞、及び、エクスビボで培養した細胞があるが、これらに限定されない。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を作る方法を提供する。一部の実施形態では、当該方法は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、当該抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、当該抗体を、その後に、宿主細胞（または、宿主細胞培養培地）から回収する。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を組換え生産するために、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞でのさらなるクローニング、及び／または、発現のために、１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、当該抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離を行い、配列決定し得る。
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、または、細胞表面で発現したその断片、または、ポリペプチド、本明細書に記載したポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターとして、クローニングベクター、及び、発現ベクターがあるが、これらに限定されない。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、または、当該技術分野において入手可能な数多くのクローニングベクターから選択し得る。選択するクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製能を有しており、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有することができ、及び／または、当該ベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例として、プラスミド、及び、細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）、及び、その誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびに、ｐＳＡ３、及び、ｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらのクローニングベクター、及び、数多くのその他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及び、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市販業者から入手可能である。
抗体コーディングベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞として、原核細胞または真核細胞がある。例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌において生産し得る。細菌での抗体断片、及び、ポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号、及び、第５８４０５２３号。発現の後に、当該抗体を、細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離し、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体コーディングベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらとして、グリコシル化経路を「ヒト化」して、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を生産する真菌株及び酵母株がある（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；及び、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物、及び、脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞、及び、昆虫細胞がある。昆虫細胞とともに、特に、ヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる、数多くのバキュロウイルス株が同定されている。また、植物細胞培養物も、宿主として利用することができる（例えば、トランスジェニック植物で抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び、第６４１７４２９号）。
また、脊椎動物細胞も、宿主として使用し得る。例えば、懸濁液で成長するように適合させた哺乳動物細胞株が有用である。有用な宿主哺乳動物細胞株のその他の例として、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞、または、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されたＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及び、ＦＳ４細胞がある。その他の有用な宿主哺乳動物細胞株として、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびに、Ｙ０，ＮＳ０、及び、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株がある。抗体生産に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。
医薬組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物、及び／または、医薬製剤を提供する。
一部の態様では、所望の純度を有する抗体またはその抗原結合断片は製剤中に存在し、こうした製剤は、例えば、生理学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な担体は、好ましくは、使用する用量、及び、濃度でレシピエントに対して無毒である。
非経口投与に好適な製剤として、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張性無菌注射液剤と、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び、防腐剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁剤とがある。
一部の態様では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照のこと）と、を含む。本明細書に記載の医薬組成物は、一部の態様では、医薬として使用するためのものである。インビボ投与に使用すべき組成物は、滅菌されたものであり得る。このことは、濾過（例えば、滅菌濾過膜を介するもの）によって容易に達成される。
本明細書に記載の医薬組成物は、インビボまたはインビトロで生物学的作用（複数可）を与えるために使用され得る。
治療用途
本明細書で開示したように、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、様々な疾患、障害、及び、病態を、予防し、リスクを低減し、または治療するために使用し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異が関与する前頭側頭型認知症、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与する前頭側頭型認知症、ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性症、ＴＤＰ－４３タンパク質症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢性海馬硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）、様々な障害に関連する認識機能障害（筋萎縮性側索硬化症の認識機能障害などがあるが、これに限定されない）、慢性外傷性脳症に関連する認識機能障害、及び、脱髄障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）を、予防し、リスクを低減し、または治療する上で効果的である。
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法であって、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を、個体に対して投与することを含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳内のＴＤＰ－４３封入体を低減し、認知機能及び行動機能の低下を低減させ、認知機能及び行動機能を改善し得る。認知及び／または行動機能の低下の低減の評価、あるいは認知及び／または行動機能の改善の評価は、当業者が利用可能な評価ツールを使用して決定され、こうした評価ツールには、臨床認知症評価尺度の合計（ＣＤＲ－ＳＢ）スコア（ベースラインに対する投与後変化）、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコア（ベースラインに対する投与後変化）、またはアーバンス神経心理テスト（ＲＢＡＮＳ）スコア（ベースラインに対する投与後変化）が含まれる。
一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物として、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及び、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）があるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、当該対象または個体は、ヒトである。
本明細書で提供する抗体（及び、あらゆるさらなる治療薬）を、非経口、肺内、鼻腔内、病巣内投与、脳脊髄内、頭蓋内、髄腔内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、または、吸入経路などのあらゆる適切な手段で投与することができる。非経口注入として、ボーラスとしての筋肉内、静脈内投与、または、一定期間にわたる持続注入、動脈内、関節内、腹腔内、または、皮下投与がある。一部の実施形態では、当該投与は、静脈内投与である。一部の実施形態では、当該投与を、皮下にする。投与時間の長短をも加味して、投与は、適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射で実施できる。本明細書では、単回投与、または、様々な時点に及ぶ複数回投与、ボーラス投与、及び、パルス注入など、これらに限定されない様々な投薬スケジュールを企図している。
本明細書で提供する抗体は、優れた医療行為と一致する方法で、製剤、投薬、及び、投与する。この文脈で考慮すべき要素として、治療する特定の障害、治療を受ける特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び、開業医に公知のその他の要素がある。当該抗体は、必須ではないが、問題の障害の予防または治療のために現在利用されている１つ以上の作用物質を用いて、製剤されてもよい。そのようなその他の作用物質の有効量は、製剤に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び、先述した考察でのその他の要素によって定まる。これらは、一般的には、本明細書に記載したのと同じ用量、及び、投与経路で、または、本明細書に記載した用量の約１～９９％、または、あらゆる用量で、かつ、経験的／臨床的に適切であると決定したあらゆる経路で使用する。
疾患の予防または治療のための（単独で、または、１つ以上のその他のさらなる治療剤と組み合わせて使用する場合の）本発明の抗体の適切な用量は、治療する疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度と経過、当該抗体を予防または治療のいずれの目的で投与するのかの区別、従前の治療、患者の病歴と抗体に対する反応、及び、主治医の裁量によって定まる。当該抗体を、一度に、または、一連の治療において、適切に患者に対して投与する。
診断用途
あらゆる抗体の一部の実施形態では、本明細書で提供するあらゆる抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、試料または個体でのＴＭＥＭ１０６Ｂの存在を検出する上で有用である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のいずれかは、細胞のリソソーム及び／またはエンドソーム区画におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの存在の検出を含めて、細胞におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの存在の検出に有用である。本明細書で使用する用語「検出」とは、定量的または定性的検出を含む。本明細書では、個体、または、個体に由来する組織試料中のＴＭＥＭ１０６Ｂの検出など、診断目的で本開示の抗体を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、当該個体は、ヒトである。一部の実施形態では、当該組織試料は、血液、脳、髄液などである。
当該検出方法は、抗原に結合した抗体の定量が関与し得る。生物学的試料中の抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、または、マイクロ陽電子放射断層撮影など、当該技術分野で公知のあらゆる方法で行い得る。特定の実施形態では、当該抗体を、例えば、１８Ｆで放射性標識し、次いで、マイクロ陽電子放出断層撮影分析を利用して検出する。また、抗体結合も、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピューター断層撮影、単一光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及び、コンピューター断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的手法で、患者において定量し得る。
製造物
本明細書では、本明細書で説明した抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を含む製造物（例えば、キット）を提供する。製造物は、本明細書に記載した抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封したＭｙｌａｒ、または、プラスチックバッグ）など、これらに限定されない、あらゆる適切な包装とし得る。これらの容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または、サブユニット用量とし得る。
一部の実施形態では、これらのキットは、第２の作用物質をさらに含み得る。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び、デキストロース溶液など、これらに限定されない、薬学的に許容可能な緩衝剤または希釈剤である。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、薬学的に活性な作用物質である。
あらゆる製造物の一部の実施形態では、当該製造物は、本開示の方法に従って使用するための指示書をさらに含む。一般的に、当該指示書は、意図した治療のための用量、投薬スケジュール、及び、投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの指示書は、本開示のあらゆる方法に従って、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異が関与する前頭側頭型認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２変異が関与する前頭側頭型認知症、ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性、ＴＤＰ－４３タンパク質症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢性海馬硬化症（ＨＳ－Ａｇｉｎｇ）、様々な障害に関連する認識機能障害（筋萎縮性側索硬化症の認識機能障害などがあるが、これに限定されない）、及び、低髄鞘形成障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）から選択される疾患、障害、または傷害を有する個体の、予防、リスク低減、または、治療のための、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体）の投与の説明を含む。一部の実施形態では、当該指示書は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、第２の作用物質（例えば、薬学的に活性な第２の作用物質）の使用に関する説明を含む。
以下の実施例を参照することで、本開示の理解は十分に深まる。しかしながら、それらを、本開示の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。本開示全体でのすべての引用を、本明細書の一部を構成するものとして、明示的に援用する。
実施例１：ＧＳＴ、及び、マウス－Ｆｃ－コンジュゲートヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの生産
様々なヒトＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド融合タンパク質を、以下のように生成した。様々なＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドの哺乳動物組換え発現は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ ｃＤＮＡに基づいた合成遺伝子を、哺乳動物発現ベクターにクローニングした後に、一過性のトランスフェクションと、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞での発現によって行った。それぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物には、異種シグナルペプチド及びグルタチオンＳ－トランスフェラーゼを含めた。ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＣ末端領域（推定細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１のアミノ酸残基１２２～２７４））を含んでいた。その他のＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物は、可溶性ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質産物のフォールディングを損ないかねないと考えられるＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質内の（おおよそアミノ酸残基２１０～２４０にある）疎水性パッチの発現を回避するために、ＥＣＤの短縮バージョン（配列番号１のアミノ酸残基１２２～２１０）を含んだ。
当該発現構築物で使用するそれぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドのアミノ酸配列を、以下に提供する：
ＧＳＴ融合ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ ＥＣＤ（短縮形態）（配列番号２６６）
Figure 2024512002000003
ＧＳＴ融合ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ ＥＣＤ（配列番号２６７）
Figure 2024512002000004
。
これらの構築物を、ビニングによる抗体の特徴付けのために、以下に記載の一過性トランスフェクション実験に使用した。
実施例２：ＤＮＡ免疫処置のためのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドの構築
ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体を開発するために、ＤＮＡ免疫処置手法を使用した。ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂ（それぞれ、配列番号１、２、及び、３）をコードするｃＤＮＡ配列を、ＤＮＡ免疫処置のために、ｐＣＡＧＧＳ哺乳動物発現ベクター（ＫｅｒａＦＡＳＴ ＥＨ１０１７）にクローニングした。それぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドの発現を、発現構築物のＨＥＫ２９３Ｔ細胞への一過性トランスフェクションに続いて、市販の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体（ＥＭＤ ＭｉＬ１ｉｐｏｒｅ ＭＡＢ－Ｎ４７３、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｃｈｅｒ ＰＡ５－６３３８、Ａｂｃａｍ ａｂ１４０１８５、Ａｂｃａｍ ａｂ１１６０２３、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈ ２０９９５－１－ＡＰ、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＬＳ－Ｃ１４５６０１、Ａｂｇｅｎｔ Ａｌ１２７９６、ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ ＭＢＳ９４１２９８２、Ｓｉｇｍａ ＳＡＢ２１０６７７３、Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｓ Ａ３０３－４３９Ａ）を用いたウェスタンブロットと、細胞内及び細胞外ＦＡＣＳ分析とを行って確認した。次いで、当該発現構築物を、以下に記載したようにして、マウスでのＤＮＡ免疫処置に使用した。
実施例３：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ抗体の生成
ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体を得るために、以下の手順を用いて、ハイブリドーマを生成した。ＮＺＢ／Ｗマウス（ＪＡＸ１００００８，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）、ＳＪＬマウス（ＪＡＸ０００６８６，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｒｅｎｓｓｅｌａｅｒ，ＮＹ）を、乳酸リンゲル液で希釈したｍＦｌｔ３リガンド（ＤＮＡ）、及び、ｍＧＭ－ＣＳＦ（ＤＮＡ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の有無に関係なく、ヒト、カニクイザル、または、マウスの全長ＴＭＥＭ１０６Ｂ（配列番号１、２、及び、３）をコードする５０μｇのプラスミドＤＮＡで、それぞれを、毎週、同時に免疫処置した。ＤＮＡ免疫処置のために、ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドの注射を、合計で５～７回、マウスごとに実施した。最後のＤＮＡ免疫処置の３日後に、マウスから脾臓を採取した。マウスから得た血清は、ヒト、カニクイザル、及び／または、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞を使用して、ＦＡＣＳ分析で、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する反応性について分析した。ヒト、カニクイザル、及び／または、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞に対して強力に結合した血清を持つマウスの脾細胞を、電気融合（ＥＣＭ２００１，ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を介して、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞（ＣＲＬ－１５８０，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合させ、３７℃／５％ ＣＯ２で、一晩、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）でインキュベートした。３ラウンドの融合を行った：融合Ａ、免疫処置したＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウスから得た脾細胞を使用する；融合Ｂ、免疫処置したＳＪＬマウスから得た脾細胞を使用する；及び、融合Ｃ、免疫処置したＮＺＢ／Ｗマウスから得た脾細胞を使用する。
翌日、融合細胞を遠心分離し、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含む１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ培地Ｃに再懸濁し、次いで、メチルセルロースを主成分としＨＡＴコンポーネントを含む、９０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と穏やかに混合した。これらの細胞を、Ｎｕｎｃ Ｏｍｎｉ Ｔｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に置き、３７℃／５％ ＣＯ２で、７日間増殖させた。蛍光コロニーを選択し、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む９６ウェルプレートに移し、次いで、５日後に、ＴＭＥＭ１０６Ｂ反応性をスクリーニングした。
実施例４：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマの一次スクリーニング
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマの最初のスクリーニングを、以下のように行った。最初に、得られたハイブリドーマ由来の組織培養上清を、トランスフェクト細胞と比較して、親（非トランスフェクト）ＨＥＫ２９３細胞に対する結合の程度を比較することで、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ一過性トランスフェクトＨＥＫ２９３細胞に対して特異的に結合する能力をスクリーニングした。前出の実施例１に記載のものに変更を加えた製造業者のプロトコールに従って、リポフェクタミンシステムを使用して、ＴＭＥＭ１０６Ｂ過剰発現細胞を、ＨＥＫ２９３細胞の一過性トランスフェクションを介して生産した。スクリーニング実験全体の再現性を確保するために、トランスフェクションした細胞の大きなバンク（約１×１０９）を、一過性のトランスフェクションの単一のラウンドで準備し、以降のすべてのスクリーニング実験のために等分して凍結した。
ハイブリドーマ細胞培養上清のスクリーニングのために、ヒトＴＭＥＭ１０６ＢトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェル丸底プレート（２×１０５細胞／ウェル）に等分し、氷上で、５０μＬのハイブリドーマ細胞培養上清と、３０分間インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離して上清を除去し、これらの細胞を、１７５μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し；さらに、氷上で、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ，カタログ番号１１５－１３６－０７１）（１：５００に希釈した）と、２０分間、インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、最終体積３０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ カタログ番号５５６４６３）に再懸濁した。セルソーティングを、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、または、ｉＱｕｅ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で行い、ソートゲートは、死滅した（すなわち、ヨウ化プロピジウムポジティブ）細胞を排除するように描画した。ＴＭＥＭ１０６Ｂ＋ＨＥＫ２９３細胞の抗マウスＡＰＣ ＭＦＩの中央蛍光強度（ＭＦＩ）を、それぞれのクローンについて計算し、二次抗体だけのものと十分な比較を行って、バックグラウンドで少なくとも２倍のシグナルを示すものを、さらなる分析と特徴決定のために使用した。
実施例５：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ抗体の分子クローニング
当該ハイブリドーマから得た抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、以下のようにしてサブクローニングした。５×１０５個のハイブリドーマ細胞を、０．５ｍｌ Ｔｒｉｚｏｌ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号１５５９６０２６）に再懸濁した。クロロホルム抽出、及び、エタノール沈殿で、全ＲＮＡを、細胞から抽出した。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ Ｉｎｃ，カタログ番号６３４８５９）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ｃＤＮＡを、細胞から抽出した。ＲＡＣＥキットに提供した５’ＵＰＭプライマー、及び、重鎖定常領域プライマー（５’－ＡＧＣＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡ－３’）［配列番号２６４］と、軽定常領域プライマー（５’－ＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡ－３’）［配列番号２６５］とを使用するタッチダウンＰＣＲによって、可変重免疫グロブリン領域と、軽免疫グロブリン領域とを個別にクローニングした。ＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ，カタログ番号２８１０６）で精製し、ｐＣＲ２．１（登録商標）－ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングベクター（ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に結合し、ＯＮＥＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテント細胞を形質転換した。形質転換した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ））コロニーを単離し、対応するハイブリドーマ細胞株ごとに、可変重鎖（ＶＨ）、及び、可変軽鎖（ＶＬ）の核酸の配列決定を行った。配列決定に続いて、エンドヌクレアーゼ制限部位（ＨＶに関してはＢｓｒＧＩとＢｓｔＥＩＩ、ＬＶに関してはＢｓｓＨＩＩとＢｓｉＷＩ）を含むプライマーを使用して、可変重鎖領域、及び、可変軽鎖領域をＰＣＲで増幅し、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧＫをそれぞれコードするｐＪＧ哺乳動物発現ベクター（Ａｌｅｃｔｏｒ Ｉｎｃ．）に、サブクローニングした。
実施例６：組換え抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の生産
精製したハイブリドーマ由来の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、それらのハイブリドーマを低ＩｇＧ培地、または、化学的に定義した培地で培養した後にプロテインＡを使用して、ハイブリドーマ上清から精製した。ヒトＦｃドメイン（ヒトＩｇＧ１）を含有するキメラ抗体の生産のための組換え発現プラスミドに、それらのハイブリドーマから得た可変遺伝子領域を直接的にクローニングすることで、一部の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体も生産した。当該発現プラスミドを、一過性にＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトし、得られた抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、プロテインＡを介して精製した。
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の組換え生産は、以下のようにして行った。当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ＶＨ及びＶＬ鎖をコードする核酸を含む発現プラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３細胞での組換え抗体発現に使用した。発現プラスミドのトランスフェクションは、製造業者のプロトコールに従って、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ－２９３システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ１４５２４）を使用して実行した。簡単に説明すると、それぞれの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関して、１２μｇの軽鎖プラスミドＤＮＡ、及び、１８μｇの重鎖プラスミドＤＮＡを、８０μＬのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を加えた１．５ｍＬ ＯｐｔｉＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３１９８５０７０）で希釈した。得られた溶液を混合し、室温で、３０分間、インキュベートした後に、１２５ｍＬのフラスコ（ＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＩＳ＃ＰＢＶ１２－５）内にある３０ｍＬの、Ｅｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡ１４５２７）を含むＥｘｐｉ２９３発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ１４３５１０１）に加えた。トランスフェクションの前に、これらの細胞を、約３×１０∧６細胞／ｍｌにまで培養した。Ｅｘｐｉ２９３細胞の培養条件は、３７℃／８％ ＣＯ２にて、１２５ｒｐｍでオービタル振とうした。トランスフェクションの１６～２４時間後に、１５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１、及び、１．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２を、それぞれのフラスコに加えて、組換え抗体の収量を高めた。トランスフェクションの５～７日後に、培養上清を回収し、濾過（０．２ミクロン）し、プロテインＡクロマトグラフィーで精製した。
実施例７：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の交差反応性
上記の初回の選別から得られた抗ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ポジティブクローンを、初回のスクリーニングに使用した方法と同様の方法（但し、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、またはカニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞、ならびに陰性対照としての親ＨＥＫ２９３細胞を使用した）を使用してマウスＴＭＥＭ１０６Ｂ及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する交差反応性についてスクリーニングした。ハイブリドーマクローンから得られた抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を精製し、この試験の結果に基づいてヒト／マウス／カニクイザル交差反応性、ヒトのみ、ヒト／マウス交差反応性、及びヒト／カニクイザル交差反応性として同定した。これらの細胞結合試験及び関連する交差反応性スクリーニングの結果は、以下の表１に示される。このデータは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ｈｕ）、ｃｙｎｏ ＴＭＥＭ１０６Ｂ、またはマウスＴＭＥＭ１０６Ｂ（ｍｕ）のいずれかを一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞への結合の、親ＨＥＫ２９３細胞への結合に対する変化倍率として示される。
Figure 2024512002000005
これらの結果は、得られた単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対して特異的であり、一般的に、ヒト、マウス、及び、カニクイザル起源のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質と交差反応することを示した。一般的に、これらのタンパク質の非常に高い相同性に基づいて予測した通り、これらの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト、及び、カニクイザルに高い交差反応性を示した。
実施例８：抗体の重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列
同定したポジティブハイブリドーマ抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の配列を決定した。標準的な技術を使用して、生成した抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を決定した。以下の表２及び表３には、それぞれ抗体のＫａｂａｔ重鎖ＣＤＲ（ＨＶＲ）アミノ酸配列及びＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ（ＨＶＲ）アミノ配列が示される。以下の表４には、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列が示される。表４では、ＣＤＲ（ＨＶＲ）領域（Ｋａｂａｔによって定義されたもの）は下線付きで示される。
Figure 2024512002000006
Figure 2024512002000007
Figure 2024512002000008
Figure 2024512002000009
Figure 2024512002000010
Figure 2024512002000011
Figure 2024512002000012
Figure 2024512002000013
Figure 2024512002000014
Figure 2024512002000015
Figure 2024512002000016
実施例９：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープビニング
プレミックスエピトープビニング手法を使用してＬａｋｅ Ｐｈａｒｍａ（Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，Ｎｅｖａｄａ，ＵＳＡ）によって抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープビニングを実施した。モノクローナル抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ＣＭＤ ５０Ｍチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＃ ＳＰＭＸＣＭＤ５０Ｍ ロット＃ ＳＣＣＭＤ５０Ｍ０４１６．ａ ｅｘｐ３１．０３．１８．に固定化した。ランニング緩衝剤は、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡを含むＨＢＳ－ＥＰ＋であった。ＧＳＴ－ＴＭＥＭ１０６Ｂ（短縮型）抗原を、最終濃度５５ｎＭ（２μｇ／ｍｌに対応する）で調製し、最終濃度３３３ｎＭ（５０μｇ／ｍｌに対応する）の、競合分析物（抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体）と混合するか、または、緩衝剤対照と比較した。試料をアレイ全体に５分間かけて注入し、サイクルごとに、１分間で、２部のＰｉｅｒｃｅ ＩｇＧ溶出緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号２１００４）と、１部の１０ｍＭグリシン、ｐＨ２．０（Ｃａｒｔｅｒｒａ）とを用いて再生した。
これらの実験の結果は、以下の表５に示される。
Figure 2024512002000017
これらの結果から、上記のように使用したアッセイに基づくと、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が少なくとも４つの異なるコミュニティーに分類されること（例えば、特定のコミュニティーに分類される抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、同じまたは重複するエピトープに結合する）が示された。
実施例１０：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の動力学的特徴決定
様々な方法（以下のように所有アレイＳＰＲ装置（ＭＸ－９６）を使用してＣａｒｔｅｒｒａによって行うものなど）によって、精製抗体の結合動力学の特徴付けを実施する。簡単に言うと、１５０μＬ／ウェルにて、１０ｍＭ酢酸、ｐＨ４．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）で、５μｇ／ｍｌにまで希釈して抗体を調製し、次いで、１１μＬを１００μＬにまで滴定して、さらに１：１０に希釈する。ＣＦＭを使用して、これらの抗体を、ＣＭＤ５０Ｍチップ（Ｘａｎｔｅｃ ＃ＳＰＭＸＣＭＤ５０Ｍ ロット番号ＳＣＣＭＤ５０Ｍ０４１６．ａ ｅｘｐ３１．０３．１８）にプリントする。このチップを、１００ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．５で希釈した、１８ｍＭ ＥＤＣ（Ｓｉｇｍａ Ｂｉｏｘｔｒａ）、及び、４．５ｍＭ Ｓ－ＮＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、７分間かけて活性化し、次いで、これらの抗体を、４５μＬ／分で、１０分間かけてカップリングさせる。カップリングした後に、このチップを、ＭＸ－９６に戻し、１Ｍエタノールアミン ｐＨ８．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を使用して、７分間かけて、反応停止する。
プリントした抗体を、ＧＳＴ－ＴＭＥＭ１０６Ｂ（短縮型）タンパク質（上掲）に対して結合する能力についてプロファイルする。すなわち、２．０ｍｇ／ｍｌの抗原２．７μＬを、２９８μＬのランニング緩衝剤（１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａを含むＨＢＳ－ＥＰ＋、Ｔｅｋｎｏｖａ）に混合して、ＧＳＴ－ＴＭＥＭ１０６Ｂ（短縮型）抗原を、１８μｇ／ｍｌ（５００ｎＭの３６ｋＤａ融合タンパク質）に希釈し、次いで、５０μＬを２００μＬにまで滴定して、５倍連続希釈する。加えて、ＧＳＴ（Ｐｉｅｒｃｅ）に対する結合を、同じ条件下でアッセイして、ＴＭＥＭ１０６Ｂ－ＧＳＴ融合タンパク質のＧＳＴ部分に対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のあらゆる非特異的結合の程度を決定する。再現性を確保するために、それぞれの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の重複測定を行う。
短縮型のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対する結合を示す抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のそれぞれについて、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、及び、ＫＤを算出する。
実施例１１：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープマッピング
いくつかのアッセイ（Ｐｅｐｓｃａｎ（Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によるものなど）のいずれかによって、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープマッピングを実施する。Ｐｅｐｓｃａｎは、独自のＣＬＩＰＳ技術を使用して、線状ペプチドのライブラリー（＞２５００）と、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質のループ状の不連続なエピトープ模倣物を作成する。これらのペプチドは、Ｐｅｐｓｃａｎミニアレイの独自仕様のハイドロゲルにてインサイチュで作成し、また、それぞれのペプチドに対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合は、ＥＬＩＳＡをベースとした方法を使用して測定する。
線状、及び、ＣＬＩＰＳペプチドを、標準的なＦｍｏｃ化学を使用して、標的タンパク質のアミノ酸配列に基づいて合成し、スカベンジャーを含む三フッ化酸を使用して脱保護する。Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ）技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）を使用して、拘束したペプチドを化学的足場に関する合成を施して、立体構造エピトープを再構築する。例えば、単一の環状ペプチドを、ジシステインを含むように合成して、アルファ、アルファ’－ジブロモキシレンで処理して環化し、当該環の大きさを、可変間隔でシステイン残基を導入して変化させる。新たに導入したシステインとは別のシステインが存在する場合、それらを、システイン－アセトアミドメチルで置換する。当該ペプチドでの複数のシステインの側鎖は、クレジットカード形状のポリプロピレンＰＥＰＳＣＡＮカード（４５５ペプチド形式／カード）に、１，３－ビス（ブロモメチル）ベンゼンを含む重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．９）／アセトニトリル（１：１（ｖ／ｖ））などのＣＬＩＰＳテンプレートの０．５ｍＭ溶液と反応させることで、ＣＬＩＰＳテンプレートに結合させる。これらのカードを、溶液で完全に覆った状態で、溶液内で、３０～６０分間、穏やかに振とうする。最後に、これらのカードを、過剰のＨ２Ｏで徹底的に洗浄し、１％ＳＤＳ／０．１％ベータ－メルカプトエタノールを含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）を含有する撹乱緩衝剤で、７０℃で、３０分間、超音波処理した後に、Ｈ２Ｏで、さらに４５分間、超音波処理する。それぞれのペプチドに対する抗体の結合を、ＰＥＰＳＣＡＮをベースとしたＥＬＩＳＡで試験する。共有結合したペプチドを含有する４５５ウェルのクレジットカード形状のポリプロピレンカードを、例えば、１μｇ／ｍｌに希釈したブロッキング溶液、例えば、４％ウマ血清、５％オボアルブミン（ｗ／ｖ）を含むＰＢＳ／１％ Ｔｗｅｅｎからなる１次抗体溶液とインキュベートする。洗浄をした後に、これらのペプチドを、１／１０００希釈の抗体ペルオキシダーゼコンジュゲートと、２５℃で、１時間、インキュベートする。洗浄をした後に、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）と、２μｌの３％ Ｈ２Ｏ２を加える。１時間後に、発色を測定する。この発色を、電荷結合素子（ＣＣＤ）－カメラと、画像処理システムとで（Ｓｌｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９６で初めて説明されたようにして）定量する。
合成したペプチドの６つのセットを、以下のようにして調製する。セット１：１５個のアミノ酸残基長の線状ペプチドを、オフセットの１アミノ酸残基を有するヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列から合成する。セット２：１５個のアミノ酸残基長の線状ペプチドを、１０位及び１１位の残基を、Ａｌａで置換して合成する；ネイティブのＡｌａ残基が、１０位または１１位のいずれかの位置で発生すると、それをＧｌｙで置換する。セット３：ネイティブのＣｙｓ残基を、Ｃｙｓ－アセトアミドメチル（Ｃｙｓ－ａｃｍ）で置換した、１５個のアミノ酸残基長の線状ペプチドを合成する。セット４：１７個のアミノ酸残基長の拘束性ペプチドを合成し、ここで２～１６位は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列に由来する１５ｍｅｒのペプチドであり；Ｃｙｓ残基を１位と１７位の位置に挿入し、ｍＰ２ ＣＬＩＰＳで結合してループ構造を生成させる。前記１５ｍｅｒ内にあるネイティブＣｙｓは、Ｃｙｓ－ａｃｍで置換する。セット５：２２個のアミノ酸長の拘束性ペプチドを構築し、ここで２～２１位は、オフセットの１アミノ酸残基を有するヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列に由来する２０ｍｅｒのペプチドであり；１１位及び１２位の残基を、β－ターン形成を誘導する「ＰＧ」モチーフで置換する。Ｃｙｓ残基を１位と２２位の位置に挿入し、ｍＰ２ ＣＬＩＰＳで結合して、β－鎖様構造を生成させる。これらのペプチド内にあるネイティブＣｙｓは、Ｃｙｓ－ａｃｍで置換する。セット６：３３個のアミノ酸長のコンビナトリアルペプチドであって、２～１６位、及び、１８～３２位は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ配列に由来する１５ｍｅｒペプチドである。Ｃｙｓ残基を１位、１７位、及び、３３位の位置に挿入し、Ｔ３ ＣＬＩＰＳで結合して、二重ループ構造を生成させる。これらのペプチド内にあるネイティブＣｙｓは、Ｃｙｓ－ａｃｍで置換する。合成したペプチドは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの内腔領域と細胞質領域の両方に対応する。
実施例１３：細胞株における、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体による細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂのダウンレギュレーション
様々な細胞株でのＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞表面、及び、総細胞タンパク質レベルを低減またはダウンレギュレートする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の能力を、以下のように評価する。そのようなダウンレギュレーション実験に有用な細胞株は、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現することが文献で確認されており、かつ、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に対する有意な結合を示すものとして上記した実験で確認されたものである。実験は、例えば、以下の細胞株を使用して行う：腺がんＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ ＣＴＬ－２）、神経膠芽腫Ｕ２５１細胞（Ｓｉｇｍａカタログ番号０９０６３００１）、Ａ５４９ヒト肺がん株（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１８５）、及び、マウス神経芽細胞腫細胞株Ｎｅｕｒｏ２ａ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１３１）。好ましくは、実験は、上記したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂの高発現を示すＡ５４９細胞を使用して行う。これらの細胞株を、様々な濃度または量の本発明の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と共に様々な期間でインキュベートし、次いで、それらの細胞と関連を保っているＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルを、ＦＡＣＳ（細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルの変化を測定する）、または、ウェスタンブロット（全細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）のいずれかを使用して測定する。
ＨｅＬａ細胞、Ｕ２５１細胞、及び、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞を、Ｅａｇｌｅ’ｓ最小必須培地（ＥＭＥＭ）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）で培養し、Ａ５４９細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳで培養し、それぞれの細胞は、Ｔ７５またはＴ１５０フラスコのいずれかで培養した。細胞が、８０％超のコンフルエンスに達したら、３７Ｃで、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して細胞を剥離させ、培地（ＦＢＳを含む）で酵素を失活させ、新鮮な培地で洗浄し、これらの細胞を、ＦＡＣＳ分析用の９６ウェルプレート（１０μＬで１×１０∧５個の細胞／ウェル）、または、ウェスタンブロット読取用の２４ウェルプレート（１ｍＬで４×１０∧５個の細胞／ウェル）に分配した。プレートに置いて２４時間後に、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をウェルに加え（例えば、０．１～１０μｇ／ｍｌの最終抗体濃度を使用する）、３７ｏＣで、標的細胞と一晩インキュベートする。ＦＡＣＳアッセイの場合、残存ＴＭＥＭ１０６Ｂの検出は、先に同定した直接－色素光－６５０コンジュゲート非競合抗体を使用して行う。ウェスタンブロット検出の場合、Ａ５４９細胞を、培地の除去の際に剥離させ、ＰＢＳで洗浄し、続いて、トリプシン－ＥＤＴＡを加える（３７℃で、１０分）。次いで、トリプシン－ＥＤＴＡを、培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）で反応停止し、細胞を９６ウェルの丸底プレートから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、次いで、５０μＬの溶解緩衝剤（ＲＩＰＡ溶解緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８９９００）＋１：１００ ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８７７８６）を加えて溶解する。溶解物での総タンパク質レベルを、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号２３２２５）で決定することができ、同等レベルのタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにロードし、次いで、ウェスタンブロット分析（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのｉＢｒｉｇｈｔシステムを使用する化学発光）のためのニトロセルロース膜に移す。
ＦＡＣＳ実験の場合、ＴＭＥＭ１０６Ｂのダウンレギュレーションは、第２の非競合色素光－コンジュゲート抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合の低減に関連している。一晩のインキュベーションの間の、抗ＴＭＥＭ１０６ｂ抗体の存在下、及び、非存在下でのＡ５４９細胞に対する結合のＭＦＩの差異から、パーセントダウンレギュレーションを計算する。ウェスタンブロット実験の場合、化学発光シグナルのレベルに基づいて総タンパク質レベルを直接アッセイし、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体で処理した細胞と、未処理の細胞とのシグナルの比率で、パーセントダウンレギュレーションを決定する。
実施例１４：初代細胞培養物における、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体による細胞ＴＭＥＭ１０６ｂのダウンレギュレーション
本発明の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、初代細胞培養物における細胞表面／細胞発現を低減またはダウンレギュレートする能力は、以下のように評価する。マウス初代大脳皮質ニューロンを、生後の早い段階（０～３日目）で採取し、当該技術分野で標準的な方法に従って培養する（Ｍａｘｉｍｏｖ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｎｅｕ．Ｍｅｔｈ．，１６１ ７５－８７）。次いで、培養したニューロンを、様々な条件（１～２０μｇ／ｍｌ、２～４８時間）で抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体とインキュベートし、回収し、ＦＡＣＳ（細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）、または、ウェスタンブロット（全細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）のいずれかを使用して、総ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルを定量する。
初代大脳皮質ニューロンを、次のようにして単離する。すなわち、Ｐ０マウスの仔の大脳皮質、海馬、または、線条体の細胞を、６ｍｇ／ｍｌトリプシン（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｔ１００５－１Ｇ）、０．５ｍｇ／ｍｌ ＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｄ５０２５）、及び、１３７ｎＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、７ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４、及び、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ、ｐＨ７．２を含有する消化溶液で、７分間、３７℃でインキュベートして解離させる。次いで、ニューロンを含有する解離した細胞を、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で１回洗浄した後に、無血清ＨＢＳで２回洗浄し、１２ｍＭ ＭｇＳＯ４と０．５ｍｇ／ｍｌ ＤＮＡｓｅとを含むＨＢＳで穏やかにピペッティングしてさらに解離させる。当該細胞懸濁液を、１６０ｇで、１０分間遠心分離し、Ｂ２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号１７５０４－０４４）、グルコース、トランスフェリン、及び、５％ウシ胎児血清を補充したＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，カタログ番号８７１－２７５－０００４）でコーティングした円形ガラスカバースリップに置いた。大脳皮質培養では、単一の脳の大脳皮質から得た細胞懸濁液を使用して、２４ウェルプレートの１２ウェルに播種する。すべての培養で、播種時の初期細胞密度（グリアを含む）は、１５００～２５００個の細胞／平方ミリメートルの間で変化する。培養物でのグリア細胞のコンフルエンシーが、約４０～５０％（通常は、播種から２日後）に達すると、馴化培地の５０％を、４ｍＭ Ａｒａ－Ｃ（Ｓｉｇｍａ）を含有する新鮮な培地と交換する。これらの培養物は、実験まで（１３～１８ＤＩＶ）、２ｍＭ Ａｒａ－Ｃを含有する培地で、３７℃、及び、５％ＣＯ２で維持する。
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を用いた治療は、１～７日間で、かつ、０．００１～１０μｇ／ｍｌの濃度範囲で実施し得る。簡単に説明すると、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を培地で希釈し、細胞培養物に加え、続いて、標準培養条件で、１～７日間のインキュベーション／培養を行う。次いで、当該神経培養物を、トリプシン－ＥＤＴＡで剥離し、先述したＦＡＣＳ、または、ウェスタンブロット分析のいずれかに向けて準備する。
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルをダウンレギュレートする能力は、非ブロッキングＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を使用したＦＡＣＳ分析で決定した低度の細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂレベル、または、ウェスタンブロット分析を使用して検出した低度の全体的な細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルのいずれかを示す、ことによって決定する。
実施例１５：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体によるインビボでのＴＭＥＭ１０６Ｂのダウンレギュレーション
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂダウンレギュレーション抗体の活性を、２つのインビボマウスモデルシステムを使用して、さらに研究する。ヒト／マウス交差反応性抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、野生型マウスで試験するが、その天然エンハンサー下でヒトＴＭＥＭ１０６Ｂを発現するＢＡＣトランスジェニック系統は、ヒトのみ、及び、ヒト／カニクイザル交差反応性抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の試験に使用する。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を腹腔内注射してマウスに投与し、その後、ウェスタンブロットを介して様々な組織タイプ（肝臓、及び、前頭大脳皮質単離株）から、ＦＡＣＳを介して単離細胞（肝細胞）から、総ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質レベルの変化を評価する。
実施例１６：ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｂ結合パートナーとの間の相互作用の特徴決定
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドソーム／リソソーム区画に関連する様々なタンパク質などの様々なタンパク質と相互作用することが示されている。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、プログラニュリンタンパク質、ＴＭＥＭ１０６ＢやＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１など、これらに限定されない様々な結合パートナーのいずれかとの相互作用をブロックまたは阻害する、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用を試験し得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂと、あらゆるその結合パートナーとの結合を抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体がブロックする規模または程度を、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下にてＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質を共免疫沈降させ、続いて、当該結合パートナーを、ウェスタンブロットで検出して測定する。あるいは、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞株に抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を施し、次いで、ＴＭＥＭ１０６Ｂと結合パートナーを両方とも染色し、タンパク質レベルには共局在や蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）などの読み出しを使用する。
実施例１７：ＦＴＬＤマウスモデルにおけるプログラニュリンノックアウトが関与する病理に関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
プログラニュリン（ＧＲＮ）ノックアウトマウスは、ヒトＧＲＮ依存型ＦＴＬＤで利用可能な最も身近な動物モデルである。このマウスモデルは、この障害の表現型の幾つかを備えている。当該マウスは、リソソーム異常、リポフスチン蓄積、網膜変性、前頭側頭型痴呆様行動、及び、神経病理学の進行性の発達を示す。また、当該マウスは、ミクログリアと星状細胞の活性化の亢進も、海馬と視床ニューロンにおけるリン酸化トランス活性化応答要素ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）のユビキチン化及び細胞質蓄積も示す。１８ヶ月齢までに、当該マウスは、空間学習と記憶の障害を示す。これらのマウスを抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体で処置すると、この障害の様々な表現型、及び、態様を改善するものと期待されている。
ＧＲＮ－／－マウスを、６～１２ヶ月まで成長させ、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、毎週、ＩＶ経由で、１４週間注射する。様々な時点で、当該マウスを、グラニュリンノックアウトが関与することが公知である行動異常、及び、表現型異常についてアッセイを行い、そこでは、Ｏｐｅｎ Ｆｉｅｌｄ Ｔｅｓｔ、または、Ｅｌｅｖａｔｅｄ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅなどを使用して測定をする。治療の成功は、行動アッセイでのパフォーマンスの改善、または、低下率の抑制に関連している。加えて、これらのマウスが死亡した後の脳を、ミクログリオーシス、リソソームタンパク質レベル、一般的なリソソーム活性、ＴＤＰ－４３凝集体、及び、ニューロンにおけるリポフスチン蓄積について検査を行い、ＰＧＲＮホモ接合型マウスも同様の方法で試験して、ノックアウトマウスで認められたものよりも重症度が低いリソソーム表現型と、その行動に関するＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果の特徴を決定する。
実施例１８：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病の動物モデルにおける抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療上の有用性も、様々な障害の動物モデル、例えば、前出の老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病などの動物モデルにおいて試験する（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ ３６，３７５－３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６－７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９－５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０－２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２－１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１１８３，３２－４２；Ｗｅｉ，Ｙ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９－１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ １１８，８７－９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ ４２７，８４３－８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６－６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５－５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９－１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０－９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０－２３９０；Ａｌ－Ｓｈａｗｉ，Ｒ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３－２１１４；及び、Ｙａｎｏ，Ｈ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０－１４８０２）。
これらの動物モデルのいずれかを使用して、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、様々な量で、様々な期間にわたって動物に対して投与する。その後の様々な時点で、これらの動物を、ヒトの疾患のそれぞれの特定の動物モデルに関連する行動異常、及び、表現型異常の改善についてアッセイする。治療の成功は、行動アッセイのパフォーマンスの向上、または、低下率の抑制に関連している。

Claims (29)

  1. 単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体であって、
    前記抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭ－５４、ＴＭ－５６、ＴＭ－５９、ＴＭ－６０、ＴＭ－６１、ＴＭ－６２、ＴＭ－６３、ＴＭ－６４、ＴＭ－６５、ＴＭ－６６、ＴＭ－７０、ＴＭ－７２、ＴＭ－７３、ＴＭ－７４、ＴＭ－７６、ＴＭ－７７、ＴＭ－７８、ＴＭ－７９、ＴＭ－８０、ＴＭ－８２、ＴＭ－８３、ＴＭ－８４、ＴＭ－８５、ＴＭ－８６、ＴＭ－８７、ＴＭ－８８、ＴＭ－９０、ＴＭ－９１、ＴＭ－９２、ＴＭ－９３、及びＴＭ－９４からなる群から選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含み、
    任意で、前記ＨＶＲが、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、ＡｂＭ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、またはＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲである、
    前記単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体。
  2. ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、
    前記抗体が、重鎖可変領域、及び、軽鎖可変領域を含み、
    前記重鎖可変領域が、以下：
    配列番号７７～１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
    配列番号１０７～１４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
    配列番号１４３～１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
    を含み、かつ、
    前記軽鎖可変領域が、以下：
    配列番号１７６～２０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
    配列番号２０９～２３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び、
    配列番号２３２～２６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
    を含む、前記抗体。
  3. 前記ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３が、以下：
    （ａ）それぞれ配列番号７７、１０７、１４３、１７６、２０９、及び２３２、
    （ｂ）それぞれ配列番号７８、１０８、１４４、１７７、２１０、及び２３３、
    （ｃ）それぞれ配列番号７８、１０９、１４４、１７８、２１０、及び２３３、
    （ｄ）それぞれ配列番号７９、１１０、１４５、１７６、２０９、及び２３４、
    （ｅ）それぞれ配列番号８０、１１１、１４６、１７９、２１１、及び２３５、
    （ｆ）それぞれ配列番号８１、１１２、１４７、１８０、２１２、及び２３６、
    （ｇ）それぞれ配列番号８２、１１３、１４８、１８１、２１０、及び２３７、
    （ｈ）それぞれ配列番号７８、１１４、１４９、１８２、２１０、及び２３８、
    （ｉ）それぞれ配列番号８３、１１５、１５０、１８３、２１３、及び２３９、
    （ｊ）それぞれ配列番号８４、１１６、１５１、１８４、２１４、及び２４０、
    （ｋ）それぞれ配列番号８５、１１７、１５２、１８５、２１０、及び２４１、
    （ｌ）それぞれ配列番号８６、１１８、１５３、１８６、２０９、及び２４２、
    （ｍ）それぞれ配列番号８４、１１９、１５４、１８７、２１５、及び２４３、
    （ｎ）それぞれ配列番号８４、１１９、１５４、１８２、２１６、及び２３８、
    （ｏ）それぞれ配列番号８７、１２０、１５５、１８２、２１６、及び２３８、
    （ｐ）それぞれ配列番号８８、１２１、１５６、１８８、２１７、及び２４４、
    （ｑ）それぞれ配列番号８９、１２２、１５７、１８９、２１８、及び２４５、
    （ｒ）それぞれ配列番号９０、１２３、１５８、１９０、２１９、及び２４６、
    （ｓ）それぞれ配列番号９１、１２４、１５９、１９１、２２０、及び２４７、
    （ｔ）それぞれ配列番号９２、１２５、１６０、１９２、２２１、及び２４８、
    （ｕ）それぞれ配列番号９３、１２６、１５５、１９３、２１０、及び２３８、
    （ｖ）それぞれ配列番号９４、１２７、１６１、１９４、２２２、及び２４９、
    （ｗ）それぞれ配列番号９５、１２８、１４８、１９５、２１０、及び２５０、
    （ｘ）それぞれ配列番号７８、１２９、１６２、１９６、２２３、及び２５１、
    （ｙ）それぞれ配列番号９６、１３０、１６３、１９７、２２４、及び２５２、
    （ｚ）それぞれ配列番号９７、１３１、１６４、１９８、２０９、及び２５３、
    （ａａ）それぞれ配列番号９８、１３２、１６５、１９９、２２５、及び２５４、
    （ｂｂ）それぞれ配列番号９９、１３３、１６６、２００、２２６、及び２５５、
    （ｃｃ）それぞれ配列番号１００、１３４、１６７、１７９、２１１、及び２５６、
    （ｄｄ）それぞれ配列番号１０１、１３５、１６８、２０１、２２７、及び２５７、
    （ｅｅ）それぞれ配列番号１０２、１３６、１６９、２０２、２２８、及び２５８、
    （ｆｆ）それぞれ配列番号９６、１３７、１７０、２０３、２２９、及び２５９、
    （ｇｇ）それぞれ配列番号７９、１３８、１７１、２０４、２３０、及び２６０、
    （ｈｈ）それぞれ配列番号１０３、１３９、１７２、２０５、２２６、及び２５５、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号１０４、１４０、１７３、２０６、２２７、及び２６１、
    （ｊｊ）それぞれ配列番号１０５、１４１、１７４、２０７、２３１、及び２６２、または
    （ｋｋ）それぞれ配列番号１０６、１４２、１７５、２０８、２０９、及び２６３
    のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体。
  4. 前記重鎖可変領域が、配列番号４～４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４１～７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２または３に記載の抗体。
  5. 前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、以下：
    （ａ）それぞれ配列番号４及び４１、
    （ｂ）それぞれ配列番号５及び４２、
    （ｃ）それぞれ配列番号６及び４３、
    （ｄ）それぞれ配列番号７及び４４、
    （ｅ）それぞれ配列番号８及び４５、
    （ｆ）それぞれ配列番号９及び４６、
    （ｇ）それぞれ配列番号１０及び４７、
    （ｈ）それぞれ配列番号１１及び４８、
    （ｉ）それぞれ配列番号１２及び４９、
    （ｊ）それぞれ配列番号１３及び５０、
    （ｋ）それぞれ配列番号１４及び５１、
    （ｌ）それぞれ配列番号１５及び５２、
    （ｍ）それぞれ配列番号１６及び５３、
    （ｎ）それぞれ配列番号１７及び５４、
    （ｏ）それぞれ配列番号１８及び５４、
    （ｐ）それぞれ配列番号１９及び５５、
    （ｑ）それぞれ配列番号２０及び５６、
    （ｒ）それぞれ配列番号２１及び５７、
    （ｓ）それぞれ配列番号２２及び５８、
    （ｔ）それぞれ配列番号２３及び５９、
    （ｕ）それぞれ配列番号２４及び６０、
    （ｖ）それぞれ配列番号２５及び６１、
    （ｗ）それぞれ配列番号２６及び６２、
    （ｘ）それぞれ配列番号２７及び６３、
    （ｙ）それぞれ配列番号２８及び６４、
    （ｚ）それぞれ配列番号２９及び６５、
    （ａａ）それぞれ配列番号３０及び６６、
    （ｂｂ）それぞれ配列番号３１及び６７、
    （ｃｃ）それぞれ配列番号３２及び６８、
    （ｄｄ）それぞれ配列番号３３及び６９、
    （ｅｅ）それぞれ配列番号３４及び７０、
    （ｆｆ）それぞれ配列番号３５及び７１、
    （ｇｇ）それぞれ配列番号３６及び７２、
    （ｈｈ）それぞれ配列番号３７及び７３、
    （ｉｉ）それぞれ配列番号３８及び７４、
    （ｊｊ）それぞれ配列番号３９及び７５、または
    （ｋｋ）それぞれ配列番号４０及び７６
    のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体。
  6. ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体の１つ以上と競合する、前記抗体。
  7. ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、請求項６のいずれか１項に記載の抗体と本質的に同じであるかまたは重複するＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに対して結合する、前記抗体。
  8. ＴＭＥＭ１０６Ｂと、少なくとも１つのＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーとの相互作用を阻害する、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。
  9. 前記ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、または、結合パートナーが、プログラニュリン、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＴＭ１０６Ｃ、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１からなる群から選択される、請求項８に記載の抗体。
  10. ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を阻害する、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体。
  11. ＴＤＰ－４３封入体を低減する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体。
  12. 認知機能及び行動機能の低下を低減させ、かつ／または、認知機能及び行動機能を改善する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体。
  13. モノクローナル抗体である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体。
  14. ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  15. ＩｇＧクラスの抗体であり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、または、ＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１４に記載の抗体。
  16. 前記抗体が、抗体断片であり、任意で、前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または、ｓｃＦｖ断片である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体。
  17. 全長抗体である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体。
  18. 以下：
    （ａ）血液脳関門を通る輸送を促す抗原；
    （ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ－１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ－Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通る輸送を促す抗原；
    （ｃ）疾患の原因となるペプチドもしくはタンパク質または疾患の原因となる核酸からなる群から選択される、疾患の原因となる作用物質であって、疾患の原因となる前記核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復増幅ＲＮＡであり、疾患の原因となる前記タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質またはそれらの断片、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ－ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン－アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン－プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン－アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン－アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及び、プロリン－アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、疾患の原因となる前記作用物質；
    （ｄ）免疫細胞で発現するリガンド及び／またはタンパク質であって、前記リガンド及び／またはタンパク質が、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ－３、及び、ホスファチジルセリンからなる群から選択される、免疫細胞で発現する前記リガンド及び／またはタンパク質；ならびに
    （ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上で発現するタンパク質、脂質、多糖、または、糖脂質
    をさらに含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体。
  19. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  20. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  21. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  22. 請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸を含む、ベクター。
  23. （ａ）請求項１９～２１のいずれか１項に記載の単離されたポリヌクレオチド、
    （ｂ）請求項２２に記載のベクター、または
    （ｃ）請求項２０に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び請求項２１に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクター
    を含む、単離された宿主細胞。
  24. ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体を生産する方法であって、以下：
    請求項２３に記載の細胞を培養する工程であって、それにより前記抗体が生産される、工程
    を含む、前記方法。
  25. 前記細胞が生産した前記抗体を単離する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
  26. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
  27. 神経変性障害、ＴＤＰ－４３封入体の存在を特徴とする障害、ＴＤＰ－４３タンパク質症、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、ＴＤＰ－４３封入体が関与する前頭側頭葉型変性症、プログラニュリン変異が関与する前頭側頭型認知症、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与する前頭側頭型認知症、海馬硬化症、加齢に伴う海馬硬化症、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、認識機能障害、筋萎縮性側索硬化症に関連した認識機能障害、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）での認識機能障害、及び、がんからなる群から選択される疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法であって、
    その必要のある個体に対して、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体または請求項２６に記載の医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含む、前記方法。
  28. 炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢関連脳萎縮、加齢関連形質、加齢関連炎症、加齢関連ニューロン喪失、加齢関連認識機能障害、低髄鞘形成障害、及び、転移に関連した障害からなる群から選択される疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法であって、
    その必要のある個体に対して、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体または請求項２６に記載の医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含む、前記方法。
  29. ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現または増大した活性が引き起こす、または、それらに関連する疾患、障害、病態、または傷害を有する個体を、予防、リスク低減、または治療する方法であって、
    その必要のある個体に対して、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体または請求項２６に記載の医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含む、前記方法。
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