ES2608362T3 - Ratón capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón - Google Patents
Ratón capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón Download PDFInfo
- Publication number
- ES2608362T3 ES2608362T3 ES14172420.3T ES14172420T ES2608362T3 ES 2608362 T3 ES2608362 T3 ES 2608362T3 ES 14172420 T ES14172420 T ES 14172420T ES 2608362 T3 ES2608362 T3 ES 2608362T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- mouse
- gene
- locus
- human
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 134
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 110
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 81
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 claims description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 claims 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 250
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 140
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 109
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 104
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 104
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 69
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 60
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 60
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 57
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 55
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 53
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 49
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 48
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 46
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 46
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 33
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 29
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 29
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 29
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 27
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 24
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 24
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 23
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 22
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 22
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 19
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 19
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 17
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 17
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 16
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 16
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 15
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 14
- 208000024191 minimally invasive lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 14
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 13
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 13
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 10
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 10
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 238000010630 lipid peroxidation (MDA) assay Methods 0.000 description 8
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 6
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 6
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 6
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 6
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 5
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 4
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 4
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100356230 Escherichia coli (strain K12) recT gene Proteins 0.000 description 3
- 101001103036 Homo sapiens Nuclear receptor ROR-alpha Proteins 0.000 description 3
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 101100355997 Bacillus subtilis (strain 168) recA gene Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101100301301 Escherichia coli (strain K12) recE gene Proteins 0.000 description 2
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- 101001103039 Homo sapiens Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Proteins 0.000 description 2
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 101150047627 pgk gene Proteins 0.000 description 2
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108700020911 DNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101001103033 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010068052 Mosaicism Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 102100039616 Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR2 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N carbonyl sulfide Chemical compound O=C=S JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003426 interchromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000013493 large scale plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 210000003765 sex chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 108010040614 terminase Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
- C07K16/462—Igs containing a variable region (Fv) from one specie and a constant region (Fc) from another
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
- C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/20—Pseudochromosomes, minichrosomosomes
- C12N2800/204—Pseudochromosomes, minichrosomosomes of bacterial origin, e.g. BAC
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón, en donde se reemplaza in situ un locus endógeno de región variable de cadena pesada de dicho ratón en su totalidad o en parte con segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.
Description
Ratón capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón
Campo de la invención
El campo de la presente invención es un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón y un procedimiento de fabricación de un anticuerpo humano utilizando dicho ratón. La presente divulgación también se refiere a un procedimiento para realizar y usar vectores de ADN grandes mediante recombinación homóloga y modificar, de cualquier modo deseado, los genes endógenos y loci cromosómico en células eucarióticas. Estos grandes vectores dirigidos de ADN para células eucariotas, denominados LYVEC, dervan d efragmentos de ADN genómico clonado más grande que los usados habitualmente por otros abordajes destinados a realizar la dirección homóloga en células eucariotas. La presente divulgación proporciona además un procedimiento rápido y cómodo de detectar células eucariotas en las que el LTVEC ha llegado correctamente y ha modificado los genes endógenos o locu(loci) cromosómicos deseados. La presente divulgación también se refiere al uso de estas células para generar organismos portadores de la modificación genética, los propios organismos y los procedimientos de uso de los mismos.
Introducción
El uso de LTVEC proporciona ventajas sustanciales sobre los procedimientos actuales. Por ejemplo, dado que derivan de fragmentos de ADN más grandes que los actualmente usados para generar vectores dirigidos, los MTVEC pueden generarse con mayor rapidez y convenientemente a partir de bibiliotecas disponibles de fragmentos grandes de ADN genómico (tales como bibliotecas de BAC y PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales. Además, modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se pueden generar más convenientemente que usando las tecnologías actuales. Además, la presente divulgación aprovecha las regiones de homología largas para incrementar la frecuencia para dirigir a los loci "difíciles de llegar" y, también, disminuye los beneficios, si existen, de usar ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
Por tanto, la presente divulgación proporciona un procedimiento rápido, conveniente y simplificado para modificar sistemáticamente casi todos los genes endógenos y loci cromosómicos de un organismo dado.
Antecedentes de la invención
Se ha demostrado que apuntar a genes por medio de recombinación homóloga entre ADN exógeno homólogo y secuencias cromosómicas endógenas es un modo extremadamente valioso para crear deleciones, inserciones, diseñar mutaciones, corregir mutaciones génicas, introducir transgenes o realizar otras modificaciones genéticas en ratones. Los procedimientos actuales implican el uso de vectores dirigidos estándar, con regiones de homología con ADN endógeno que sunam normalmente menos de 10-20 kn, para introducir la modificación genética deseada en las células madre embrionarias (ES) de ratón, seguiodo de la inyección de las c´leulas ES alteradas en embriones de ratones para transmitir estas modificaciones genéticas de ingeniería en la línea germinal del ratón (Smithies y col., Nature, 317:230-234,1985; Thomas y col., Cell, 51 :503-512,1987; Koller y col., Proc Natl Acad Sci USA, 86:89278931, 1989; Kuhn y col., Science, 254:707-710,1991; Thomas y col., Nature, 346:847-850,1990; Schwartzberg y col., Science, 246:799-803, 1989; Doetschman y col., Nature, 330:576-578, 1987; Thomson y col., Cell, 5:313-321, 1989; DeChiara y col., Nature, 345:78-80,1990; patente de EE.UU. nº 5,789,215, presentado el 4 de agosto de1998 en representación de GenPharm International). En estos procedimientos actuales, la detección de las células ES raras en las que los vectores dirigidos estándar se han dirigido correctamente y han modificado los gen(es) endógenos o locus(ci) cromosómicos deseados require información sobre la secuencia fuera de las secuencias homólogas dirigidos contenidas dentro del vector dirigido. Los ensayos para una dirección con éxito implican transferencia Southern estándar o una PCR larga (Cheng, y col., Nature, 369:684-5,1994; Foord y Rose, PCR Methods Appl, 3:S149-61, 1994; Ponce y Micol, Nucleic Acids Res, 20:623,1992; patente de EE.UU. nº 5,436,149 de Takara Shuzo Co., Ltd.) de las secuencias fuera del vector dirigido y abarcan un brazo de homología completo (véase Definiciones); por tanto, dado las grandes consideraciones que limitan estos procedimientos, el tamaño de los brazos de homología está restringido a menos de 10-20 kb en total (Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999).
La capacidad para usar vectores dirigidos como brazos de homología mayores que los usados en los procedimientos actuales sería extremadamente valiosa. Por ejemplo, dichos vectores dirigidos podrían generarse más rápida y convenientemente a partir de las bibliotecas disponibles que contienen insertos genómicos grandes (p. ej., bibliotecas BAC o PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales en las que los insertos genómicos tienen que caracterizarse extensamente y recortarse antes de usar. Además, modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se podrían generar más convenientemente y en menos etapas que usando las tecnologías actuales. Además, el uso de regiones largas de homología podría aumentar la frecuencia de dirección de los loci “difíciles de apuntar” en células eucariotas, ya que
apuntar a la recombinación homóloga en células eucariotas parece que está relacionada con la homología total contenida en el vector dirigido (Deng y Capecchi, Mol Cell Biol, 12: 3365-71, 1992). Además, la mayor frecuencia de la dirección obtenida usando brazos largos de homología podría disminuir cualquier posible beneficio que se pueda obtener del uso de ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
El problema de las modificaciones precisas mediante ingeniería en fragmentos genómicos muy grandes, como los clonados en las bibliotecas BAC, se ha resuelto en gran medida mediante el uso de recombinación homóloga en bacterias (Zhang, y col., Nat Genet, 20:123-8, 1998; Yang, y col., Nat Biotechnol, 15:859-65, 1997; Angrand, y col., Nucleic Acids Res, 27:e16,1999; Muyrers, y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Narayanan, y col., Gene Ther, 6:442-7,1999), que permite la construcción de vectores que contienen regiones grandes de homología con los genes endógenos o loci cromosómicos eucariotas. No obstante, una vez fabricados, estos vectores no han sido en general útiles para modificar genes endógenos o loci cromosómicos mediante recombinación homóloga por la dificultad en la detección de acontecimientos dirigidos correctos cuando los brazos de homología son más grandes que 10-20 kb (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999). En consecuencia, los vectores generados usando recombinación homóloga bacteriana de fragmentos genómicos de BC debe recortarse extensamente antes de usar como vectores dirigidos (Hill y col., Genomics, 64:111-3, 2000). Por tanto, existe la necesidad de una metodología rápida y conveniente que hace posible el uso de vectores dirigidos que contienen regiones grandes de homología de modo que se modifican los genes endógenos o los loci cromosómicos en células eucariotas.
El documento WO 99/45962 describe animales no humanos transgénicos que pueden producir anticuerpos heterólogos. El documento WO 91/00906 describe animales quiméricos y transgénicos que pueden producir anticuerpos humanos. El documento US 5 939 598 describe un procedimiento para fabricar ratones transgénicos que carecen de cadenas pesadas endógenas.
Se describen en este documento procedimientos nuevos que permiten el uso de vectores dirigidos que contienen regiones grandes de homología de modo que se modifican los genes endógenos o los loci cromosómicos en células eucariotas mediante recombinación homóloga. Dichos procedimientos superan las limitaciones descritas anteriormente de las tecnologías anteriores. Además, el experto en la técnica reconocerá fácilmente que los procedimientos se adaptan fácilmente para usar con cualquier ADN genómico de cualquier organismo eucariota incluidos, entre otros, animales tales como ratones, ratas, otros roedores o seres humanos, así como plantas tales como soja, maíz y trigo.
Sumario de la invención
La invención proporciona un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón, en donde se reemplaza in situ un locus endógeno de región variable de cadena pesada de dicho ratón en su totalidad o en parte con segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.
La invención proporciona además un procedimiento para fabricar un anticuerpo humano que comprende:
a) exponer dicho ratón de la invención e n el que adicionalmente un locus de la región variable de la cadena
ligera kappa endógena se reemplaza in situ en total o en parte con segmentos del gen V y J de la cadena ligera
kappa humana, a estimulación antigénica, de un modo tal que el ratón produce un anticuerpo contra el antígeno;
b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo;
c) unir operativamente la secuencia de ADN que codifica las regiones variables de (b) con ADN que codifica las
regiones constantes de las cadenas pesada y ligera en una célula capaz de expresar anticuerpos activos;
d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y
e) recuperar el anticuerpo.
De acuerdo con la presente divulgación, los solicitantes han desarrollado un nuevo procedimiento rápido, simple y eficiente para crear y detectar células eucariotas que contienen genes endógenos o loci cromosómicos modificados. Este nuevo procedimiento combina por primera vez:
- 1.
- Recombinación homóloga bacteriana para realizar una modificación genérica deseada mediante ingeniería en un fragmento genómico clonado grande, de modo que se crea un vector dirigido grande para usar en células eucariotas (LTVEC);
- 2.
- Introducción directa de estos LTEVC en las células eucariotas para modificar el locus cromosómico endógeno de interés en estas células; y
- 3.
- Un análisis para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo diana se ha modificado según se desea, que implica un ensayo para la modificación de alelos (MDA) del alelo parental que no requiere información sobre la secuencia fuera de la secuencia de acceso, tal como, por ejemplo PCR cuantitativa.
Se describe en este documento un procedimiento para modificar genómicamente un gen o locus cromosómico endógeno en células eucariotas, que comprende: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el
fragmento genómico clonado grande para (a) crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucariotas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente.
También se describe en este documento un procedimiento en el que la modificación genética del gen o locus cromosómico endógeno comprende deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; alteración de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; inserción de una nueva secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; creación de un alelo condicional; o sustitución de una secuencia de codificación o segmento génico de una especie con una secuencia de codificación homóloga u ortóloga de una especie diferente.
Además se describe en este documento un procedimiento en el que la alteración de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador comprende una sustitución, adición o fusión, en las que la fusión comprende un marcador epítopo o una proteína bifuncional.
También se describe en este documento un procedimiento en el que el ensayo cuantitativo comprende PCR cuantitativa, hibridación genómica comparativa, amplificación de ADN isotérmica o hibridación cuantitativa con una sonda inmovilizada, en la que la PCR cuantitativa comprende tecnología TaqMan® o PCR cuantitativa que usa balizas moleculares.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento en el que la célula eucariota es una célula madre embrionaria de mamífero y, en particular, en el que la célula madre embrionaria es una célula madre embrionaria de ratón, rata u otro roedor.
Además se describe en este documento un procedimiento en el que el gen o locus cromosómico endógeno es un gen o locus cromosómico de mamífero, preferentemente un gen o locus cromosómico humano o un gen o locus cromosómico de ratón, de rata o de otro roedor.
Adicionalmente se describe en este documento una en el que el LTVEC es capaz de acomodar fragmentos de ADN grandes de tamaño superior a 20 kb y, en particular, fragmentos de ADN grandes de tamaño superior a 100 kb.
Además se describe en este documento un de gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente que se produce mediante el procedimiento descrito en este documento.
También se describe en este documento una célula eucariota modificada genéticamente que se produce mediante el procedimiento descrito en este documento.
Además se describe en este documento es un organismo no humano que contiene el gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante el procedimiento descrito en este documento.
También se describe un organismo no humano producido a partir de las células eucariotas genéticamente modificadas o las células madre embrionarias producidas mediante el procedimiento descrito en este documento.
Se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande para (a) crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC) para usar en células madre embrionarias; c) introducir el LTVEC de (b) en las células madre embrionarias para modificar el gen o locus endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células madre embrionarias en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) introducir la célula madre embrionaria de (d) en un blastocisto y f) introducir el blastocisto de € en una madre sustituta para la gestación.
Adicionalmente se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucarióticas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) eliminar el núcleo de la célula eucariótica de (d); f) introducir el núcleo de (e) en un oocito y (g) introducir el oocito de (f) en una madre sustituta para la gestación.
Además se describe en este documento un organismo no humano que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande que contiene una secuencia de ADN de interés; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para identificar las células eucarióticas en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente; e) fusionar la célula eucariótica de (d) con otra célula eucariota; f) introducir la célula eucariota fusionada de (e) en una madre sustituta para la gestación.
Preferiblemente el organismo no humano es un ratón, rata u otro roedor; el blastocisto es un blastocisto de ratón, rata u otro roedor; el oocito es un oocito de ratón, rata u otro roedor; y la madre sustituta es un ratón, rata u otro roedor.
Preferiblemente la célula madre embrionaria es una célula madre embrionaria de mamífero, preferentemente una célula madre embrionaria de ratón, rata u otro roedor.
También se describe en este documento el uso de las células eucariotas modificadas genéticamente de la invención para la producción de un organismo no humano y, en concreto, el uso de la célula madre embrionaria modificada genéticamente descrito en este documento para la producción de un organismo no humano.
Adicionalmente se describe en este documento es un procedimiento para modificar genómicamente un gen o locus cromosómico endógeno de interés en células madre embrionarias de ratón, que comprende: a) obtener un fragmento genómico clonado grande de más de 20 kb que contiene una secuencia de ADN de interés, en el que el fragmento de ADN grande clonado es homólogo al gen o locus cromosómico endógeno; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células madre embrionarias de ratón, en el que la modificación genética es la deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar la modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente, en el que el ensayo cuantitativo es PCR cuantitativa. También se prefiere una célula madre embrionaria de ratón modificada genéticamente producida mediante este procedimiento; un ratón que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente producido por este procedimiento; y un ratón producir a partir de las células madre embrionarias modificadas genéticamente.
Además se describe en este documento es un ratón que contiene un gen o locus cromosómico endógeno modificado genéticamente de interés, producido mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) obtener un fragmento genómico clonado grande de más de 20 kb que contiene una secuencia de ADN de interés, en el que el fragmento de ADN grande clonado es homólogo al gen o locus cromosómico endógeno; b) usar recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido grande para usar en las células madre embrionarias de ratón, en el que la modificación genética es la deleción de una secuencia de codificación, segmento génico o elemento regulador; c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para modificar el gen o locus cromosómico endógeno en las células; y (d) usar un ensayo cuantitativo para detectar la modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el gen o locus cromosómico endógeno se ha modificado genéticamente, en el que el ensayo cuantitativo es PCR cuantitativa; e) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; y f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
También se describe en este documento el uso de la célula madre embrionaria de ratón modificada genéticamente descrita anteriormente para la producción de un ratón.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula eucariota no humana, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con un locus génico humano homólogo u ortólogo que comprende:
a) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene, todo o parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo; b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de
(a) para crear un vector dirigido para usar en células eucariotas (LTVEC); c) introducir el LTVEC de (b) en las células eucariotas para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (c) para
identificar las células eucariotas en las que el locus génico de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico endógeno humano homólogo u ortólogo.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula eucariota no humana, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con un locus génico humano homólogo u ortólogo que además comprende las etapas de:
e) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene una parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo que difiere del fragmento de (a); f) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de
(e) para crear un segundo LTVEC; g) introducir el segundo LTVEC de (f) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y h) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células eucariotas de (g) para identificar las células eucariotas en las que el locus génico de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico endógeno humano homólogo u ortólogo.
Otro aspecto del procedimiento anterior es un procedimiento en el que las etapas (e) a (h) se repiten hasta que el locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina se sustituye totalmente o en parte con un locus génico humano homólogo u ortólogo.
Otra realización del procedimiento es uno en el que el locus génico variable de la inmunoglobulina es un locus seleccionado del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
Es preferido un procedimiento en el que el ensayo cuantitativo comprende PCR cuantitativa, FISH, hibridación genómica comparativa, amplificación de ADN isotérmica o hibridación cuantitativa con una sonda inmovilizada y, en concreto, en la que la PCR cuantitativa comprende tecnología TaqMan® o PCR cuantitativa que usa balizas moleculares.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, totalmente o en parte, en una célula madre embrionaria, un locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina con su locus génico humano homólogo u ortólogo, que comprende:
a) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene, todo o parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo; b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado grande de (a) para crear un vector dirigido para usar en células madre embrionarias; c) introducir el vector dirigido grande de (b) en las células madre embrionarias de ratón para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina en las células; y d) usar un ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón (d) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus génico endógeno variable se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico humano homólogo u ortólogo.
En otro aspecto descrito en este documento, el procedimiento comprende además:
e) obtener un fragmento genómico grande clonado que contiene una parte, el locus génico humano homólogo u ortólogo que difiere del fragmento de (a); f) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el fragmento genómico clonado de
- (e)
- para crear un vector dirigido grande para usar en células madre embrionarias; g) introducir el vector dirigido grande de (f) en las células madre embrionarias de ratón identificadas en la etapa
- (d)
- para sustituir, todo o en parte, el locus génico endógeno variable de inmunoglobulina; y h) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre embrionarias de ratón de (g) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina se ha sustituido, todo o en parte, con el locus génico humano homólogo u ortólogo.
Otro aspecto más preferido es un procedimiento en el que las etapas (e) a (h) anteriores se repiten hasta que el locus génico endógeno de la región variable de la inmunoglobulina se sustituye totalmente con un locus génico humano homólogo u ortólogo.
También se prefiere un procedimiento en el que el locus génico variable de la inmunoglobulina es un locus seleccionado del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
También se describe en este documento un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido por los procedimientos descritos anteriormente; una célula eucariota modificada genéticamente que comprende un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente; un organismo no humano que comprende un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente; y una célula madre embrionaria de ratón que contiene un locus génico de la región variable de inmunoglobulina modificado genéticamente producido mediante los procedimientos descritos anteriormente.
También se describe en este documento una célula madre embrionaria en la que el locus de la región variable de la cadena pesada de ratón se ha sustituido, totalmente o en parte, con un locus génico variable de la cadena pesada humana; una célula madre embrionaria de la reivindicación en la que el locus de la región variable de la cadena ligera kappa de ratón se ha sustituido, todo o parte, con un locus de la región variable de la cadena ligera kappa humana; una célula madre embrionaria en la que el locus de la región variable de la cadena ligera lambda de ratón se ha sustituido, totalmente o en parte, con un locus de la región variable de la cadena ligera lambda humana; y una célula madre embrionaria en la que los locus génicos de la región variable de las cadenas ligera y pesada se han sustituido, totalmente o en parte, con sus homólogos u ortólogos humanos.
Adicionalmente se describe en este documento un ratón producido a partir de las células madre embrionarias descritas anteriormente.
Además se describe en este documento un anticuerpo que comprende una región variable humana codificada por el locus génico variable genéticamente modificado descrito anteriormente; un anticuerpo que además comprende una región constante no humana; y un anticuerpo que además comprende una región constante humana.
Adicionalmente se describe en este documento un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende los loci de la región variable de las cadenas pesada y ligera completamente humanas unidos operablemente a los loci de la región constante de ratón completamente endógenos, de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a estimulación antigénica; un ratón transgénico que tiene un genoma que comprende los loci de la región variable de las cadenas pesada y/o ligera humanas unidos operablemente a los loci de la región constante de ratón endógenos de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a estimulación antigénica; un ratón transgénico que contiene un locus de la región variable endógena que se ha sustituido con un locus variable humano homólogo u ortólogo, produciéndose dicho ratón mediante un procedimiento que comprende:
a) obtener uno o más fragmentos genómicos grandes clonados que contienen, todo o parte, el locus génico de
la región variable humana homólogo u ortólogo;
b) usar la recombinación homóloga bacteriana para modificar genéticamente el(los) fragmento(s) genómico(s)
clonado(s) de (a) para crear un vector(es) dirigido(s) grande(s) para usar en células madre embrionarias de
ratón;
c) introducir vector(es) dirigido(s) grande(s) de (b) en las células madre embrionarias de ratón para sustituir,
todo el locus endógeno de la región variable en las células; y
d) usar un ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en las células madre
embrionarias de ratón de (c) para identificar las células madre embrionarias de ratón en las que el locus
endógeno de la región variable se ha sustituido con el locus de la región variable humana homólogo u ortólogo;
e) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; y
f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
También se describe en este documento un ratón transgénico descrito anteriormente en el que el locus locus génico de la región variable de la inmunoglobulina comprende uno o más loci seleccionados del grupo que consiste en:
a) un locus génico variable de la cadena ligera kappa;
b) un locus génico variable de la cadena ligera lambda; y
c) un locus génico variable de la cadena pesada.
También se prefieren los procedimientos descritos anteriormente en los que la célula madre embrionaria deriva de un ratón transgénico producido por los procedimientos.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de fabricar un anticuerpo humano que comprende: 15
a) exponer el ratón descrito anteriormente a estimulación antigénica, de un modo tal que el ratón produce un
anticuerpo contra el antígeno;
b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo;
c) unir operablemente el ADN que codifica las regiones variables de (b) a ADN que codifica las regiones
constantes de las cadenas pesada y ligera en una célula capaz de expresar anticuerpos activos;
d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y
e) recuperar el anticuerpo.
Preferiblemente, la célula descrita anteriormente es una célula CHO.
También se prefiere un procedimiento donde el ADN de la etapa (b) descrito anteriormente se aísla de un hibridoma creado a partir del bazo del ratón expuesto a estimulación antigénica en la etapa (a) descrita anteriormente. También se prefiere el procedimiento descrito anteriormente en el que el ADN se aísla mediante PCR.
Además se describe en este documento un procedimiento de sustituir, todo o parte, de un locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina con un locus génico homólogo u ortólogo, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus génico variable; b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus génico variable; c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico de la región variable endógena. e) crear un vector que contiene secuencias de recombinación específicas de sitio que flanquean todo o parte del locus génico ortólogo u homólogo; y f) introducir el vector de (e) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) tal como mediante recombinación, el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina está sustituido, todo o en parte, con el locus génico homólogo u ortólogo.
También se describe en este documento un ratón transgénico que contiene un locus endógeno de la región variable de inmunoglobulina que se ha sustituido con un locus de la región variable de inmunoglobulina humana homólogo y ortólogo, produciéndose dicho ratón mediante un procedimiento que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina de ratón; b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio y un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina de ratón; c) introducir el LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno de la región variable. d) crear un vector que contiene secuencias de recombinación específicas de sitio que flanquean todo o parte del locus génico ortólogo u homólogo; e) introducir el vector de (e) en las células eucariotas identificadas en la etapa (d) tal como mediante recombinación, el locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina está sustituido, todo o en parte, con el locus génico homólogo u ortólogo; f) introducir la célula madre embrionaria de ratón de (d) en un blastocisto; e f) introducir el blastocisto de (e) en una madre sustituta para la gestación.
Adicionalmente se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado cadena abajo por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene una región que flanquea al extremo 3’ de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus; b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (b) en las que el locus génico endógeno está flanqueado cadena abajo por el sitio de recombinación específico de sitio.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado cadena arriba por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene una región que flanquea al extremo 5’ de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus; b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (b) en las que el locus génico endógeno está flanqueado cadena arriba por el sitio de recombinación específico de sitio.
También se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno flanqueado por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene una región que flanquea al extremo 3’ de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus; b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene una región que flanquea al extremo 5’ de la región del locus génico endógeno y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus; c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; y d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico endógeno para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por un sitio de recombinación específico de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus génico variable; b) introducir los LTVEC de (a) en la célula eucariota; y c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (b) en las que el sitio de recombinación específico de sitio flanquea al extremo cadena abajo del locus génico variable inmunovariable endógeno.
También se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por sitios de recombinación específicos de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena abajo dentro del locus; b) introducir el LTVEC de (a) en la célula eucariota; y c) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al extremo cadena arriba del locus génico endógeno de la región variable.
Además se describe en este documento un procedimiento de crear, en una célula eucariota, un locus génico endógeno variable de inmunoglobulina flanqueado por sitios de recombinación específicos de sitio, que comprende:
a) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena abajo que contiene la región inmediatamente adyacente, pero sin incluir, a los segmentos J del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo de homología cadena arriba dentro del locus; b) crear un LTVEC que comprende un sitio de recombinación específico de sitio, un brazo de homología cadena arriba que contiene la región adyacente al segmento génico V más distal, pero no contiene ninguno de los segmentos génicos V del locus génico de la región variable de inmunoglobulina y un brazo cadena abajo dentro del locus; c) introducir los LTVEC de (a) y (b) en la célula eucariota; y d) usar un ensayo cuantitativo para detectar modificación de alelo (MDA) en el locus génico variable para identificar las células eucariotas en (c) en las que los sitios de recombinación específicos de sitio flanquean al locus génico endógeno de la región variable de inmunoglobulina.
Breve descripción de las figuras
Figura 1: Diagrama esquemático de la generación de un LTEVC típico usando recombinación homóloga
bacteriana. (hb1 = caja de homología 1; hb2 = caja de homología 2; RE =sitio para enzimas de restricción). Figura 2: Diagrama esquemática de un fragmento donante y LTVEC para OCR10 de ratón. (hb1 =caja de homología 1; lacZ =ORF de la B-galactosidasa; SV40 poliA = fragmento de ADN derivado del virus simio 40 que contiene un sitio de poliadenilación y una señal; PGKp = promotor de la fosfoglicerato quinasa (PGK) de ratón; EM7= un promotor bacteriano; neo= neomicina fosfotransferasa; PGK poliA) región no traducida en 3’ derivada del gen de la PGK y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal; hb2 = caja de homología 2). Figura 3A-3D: Secuencia del ADNc de OCR10 de ratón, caja de homología 1 (hb1), caja de homología 2 (hb2) y sondas TaqMan® y cebadores usados en el ensayo de PCR cuantitativa para detectar modificación de alelo (MDA) en células E diana usando el ÑTVEC de mCOR10. hb1: Pares de bases 1 a 211 hb2: pares de bases 1586 a 1801 Sonda TaqMan® y el correspondiente conjunto de cebadores para PCR derivados del exón 3 de Mocr10:
sonda TaqMan®: nucleótidos 413 a 439-hebra superior
Cebador ex 3-5’: nucleótidos 390 a 410-hebra superior
Cebador ex 3-3’: nucleótidos 445 a 461-hebra inferior
Sonda TaqMan® y el correspondiente conjunto de cebadores para PCR derivados del exón 4 de mOCR10: sonda TaqMan®: nucleótidos 608 a 639-hebra superior Cebador ex 4-5’: nucleótidos 586 a 605-hebra superior Cebador ex 4-3’: nucleótidos 642 a 662-hebra inferior
Figura 4A-4D: Diagrama esquemático de los dos LTVEC construidos para sustituir la región VDJ de ratón con
la región VDJ humana. Figura 4A: Se aíslan clones de inserto grande (BAC) que abarcan la región VDJ completa del locus de la cadena pesada humana Figura 4B: En este ejemplo se aíslan clones de insertos grandes (BAC) de los extremos de la región VDJ de ratón como fuente de brazos de homología que se usan para dirigir la integración mediante recombinación homóloga de las secuencias VDJ humanas en un procedimiento de dos etapas: Figura 4C-4D: En la primera etapa, el LTVEC1 (Figura 4D) está construido mediante recombinación homóloga en el LTVEC1 de E. coli. El LTVEC1 contiene, en orden: Un brazo de homología grande de ratón derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-neomicina en este ejemplo); un sitio loxP; un inserto humano grande que abarca varios segmentos génicos V a través de toda la región DJ; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. En la segunda etapa, el LTVEC2 (Figura 4C) está construido mediante recombinación homóloga bacteriana en el LTVEC2 de E. coli, en orden: Un brazo grande de homología de ratón que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ningún segmento génico V de ratón; un inserto grande que contiene un número grande de segmentos génicos V humanos distales; un sitio loxP mutante denominado lox511 en orientación opuesta a la de los sitios loxP de tipo silvestre en LTVEC2 y LTVEC1(este sitio no se recombinará con los sitios loxP silvestres, pero se recombinarán fácilmente con otros sitios lox511); un sitio loxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGK-higromicinaR en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes.
Definiciones
Un “vector dirigido” es una construcción de ADN que contiene secuencias "homólogas" a las secuencias de ácido nucleico cromosómico endógeno que flanquean una(s) modificación(es) genética(s) deseada(s). Las secuencias de homología flanqueantes, denominadas “brazos de homología”, dirigen el vector dirigido a una localización cromosómica específica dentro del genoma en virtud de la homología que existe entre los brazos de homología y la correspondiente secuencia endógena e introducen la modificación genética deseada mediante un procedimiento denominado “recombinación homóloga”.
“Homólogo” significa dos o más secuencias de ácido nucleico que son idénticas o lo bastante similares como para ser capaces de hibridar entre sí o sufrir intercambio intermolecular.
“Direccionalidad génica” es la modificación de un locus cromosómico endógeno mediante la inserción, deleción o sustitución de la secuencia endógena mediante recombinación homóloga usando un vector dirigido.
Una “inactivación de gen" es una modificación genética resultante de la alteración de la información genética codificada en un locus cromosómico.
Una “activación de gen" es una modificación genética resultante de la sustitución de la información genética codificada en un locus cromosómico con una secuencia de ADN diferente.
Un "organismo inactivado” es un organismo en el que una proporción significativa de las células del organismo aloja una inactivación génica.
Un "organismo activado” es un organismo en el que una proporción significativa de las células del organismo aloja una activación génica.
Un "marcador" o un "marcador seleccionable" es un marcador de selección que permite el aislamiento de células transfectadas raras que expresan el marcador a partir de la mayoría de las células tratadas en la población. Dichos marcadores génicos incluyen, entre otros, la neomicina fosfotransferasa y la higromicina B fosfotransferasa o proteínas fluorescentes tales como GFP.
Una "célula ES” es una célula madre embrionaria. Esta célula normalmente deriva de la masa de células internas de
un embrión en la etapa de blastocisto.
Un “clon de células ES” es una subpoblación de células derivadas de una única célula de la población de células ES
tras la introducción de ADN y la posterior selección.
Un “ADN flanqueante” es un segmento de ADN que es colineal y adyacente a un punto de referencia concreto.
“LTVEC” son vectores grandes dirigidos a células eucariotas derivados de fragmentos de ADN genómico clonado más grandes que los habitualmente usados por otros abordajes destinados a la direccionalidad homóloga en células eucariotas.
Un “organismo no humano” es un organismo que normalmente no es aceptado por el público como humano.
“Modificación de alelo” (MDA) se refiere a la modificación de la secuencia de ADN exacta de un alelo de un(os) gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) en un genoma. Esta modificación de alelo” (MDA) incluye, entre otras, deleciones, sustituciones o inserciones de tan poco como un único nucleótido o deleciones de muchas kilobases que abarcan un(os) gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) de interés, así como cualquier y todas las modificaciones posibles entre estos dos extremos.
Secuencia “ortóloga” se refiere a una secuencia de una especie que es el equivalente funcional de dicha secuencia en otra especie.
La descripción y los ejemplos que se presentan más adelante se proporcionan para ilustrar la invención sujeto. Un experto en la técnica reconocerá que estos ejemplos se proporcionan a modo de ilustración únicamente y no están incluidos con el fin de limitar la invención.
Descripción detallada de la invención
Los solicitantes han desarrollado un nuevo procedimiento rápido, simple y eficiente para crear y detectar células eucariotas que contienen genes endógenos o loci cromosómicos modificados. En estas células, la modificación puede ser inactivación y activación de gen(es), mutaciones puntuales o grandes inserciones o deleciones genómicos u otras modificaciones. A modo de ejemplo no limitante, estas células pueden ser células madre embrionarias que son útiles para crear organismos inactivos o activos y, en particular, ratones inactivos o activos, con el fin de determinar la función del o los gen(es) que se han alterado, delecionado y/o insertado.
Los nuevos procedimientos descritos en el presente documento combinan por primera vez:
- 1.
- Recombinación homóloga bacteriana para realizar una modificación genérica deseada mediante ingeniería en un fragmento genómico de ADN clonado grande, de modo que se crea un vector dirigido grande para usar en células eucariotas (LTVEC);
- 2.
- Introducción directa de estos LTEVC en las células eucariotas para modificar el correspondiente gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) endógeno(s) de interés en estas células; y
- 3.
- Un análisis para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo diana se ha modificado según se desea, que implica un ensayo cuantitativo para la modificación de alelos (MDA) del alelo parental.
Cabe destacar que los procedimientos anteriores para detectar recombinación homóloga satisfactoria en células eucariotas no se pueden usar junto con los LTVEC de la divulgación de los solicitantes porque los brazos largos de homología presente en los LTVEC. Usando un LTVEC para modificar deliberadamente genes o loci cromosómicos endógenos en células eucariotas mediante recombinación homóloga se hace posible mediante la nueva aplicación de un ensayo para determinar las células eucariotas raras en las que el alelo dirigido se ha modificado según se desee, en el que dicho ensayo implica un ensayo cuantitativo para la modificación de alelo (MDA) de un alelo parental, usando, por ejemplo, PCR cuantitativa u otros ensayos cuantitativos adecuados para MDA.
La capacidad para usar vectores dirigidos como brazos de homología mayores que los usados en los procedimientos actuales es extremadamente valiosa por los motivos siguientes:
- 1.
- Los vectores dirigidos se pueden generar más rápida y convenientemente a partir de las bibliotecas disponibles que contienen insertos genómicos grandes (p. ej., bibliotecas BAC o PAC) que los vectores dirigidos fabricados usando las tecnologías actuales en las que los insertos genómicos tienen que caracterizarse extensamente y “recortarse” antes de usar (explicado con detalle más adelante). Además, tiene que conocerse , la información mínima de la secuencia sobre el locus de interés, es decir solo es necesario conocer los aproximadamente 80-100 nucleótidos que se requieren para generar las cajas de homología (descritas con detalle más adelante) y para generar sondas que se puedan usar en ensayos cuantitativos para MDA (descrito con detalle más adelante).
- 2.
- Modificaciones más grandes además de modificaciones que abarcan regiones genómicas más grandes se generan más convenientemente y en menos etapas que usando las tecnologías anteriores. Por ejemplo, el procedimiento descrito en este documento posibilita la modificación precisa de loci grandes que no se pueden acomodar mediante vectores dirigidos basados en plásmidos tradicionales por sus limitaciones de tamaño. También posibilita la modificación de cualquier locus dado en múltiples puntos (p. ej., la introducción de mutaciones específicas en diferentes exones de un gen multiexón) en una etapa, de modo que se alivia la necesidad de realizar ingeniería de múltiples vectores diana para realizar ciclos de direccionalidad y detección selectiva de recombinación homóloga en células ES.
- 3.
- El uso de regiones largas de homología (brazos de homología largos) aumenta la frecuencia de dirección de los loci “difíciles de apuntar” en células eucariotas, coherente con los hallazgos previos de que dirigir la recombinación homóloga en células eucariotas parece estar relacionada con la homología total contenida en el vector dirigido.
- 4.
- La mayor frecuencia de la dirección obtenida usando brazos largos de homología aparentemente disminuye el beneficio, si existe alguno, que se pueda obtener del uso de ADN isogénico en estos vectores dirigidos.
- 5.
- La aplicación de ensayos de MDA cuantitativos para la detección selectiva de células eucariotas para recombinación homóloga no solo refuerza el uso de LTVEC como vectores dirigidos (ventajas indicadas anteriormente) sino que también reduce el tiempo para identificar las células eucariotas modificadas correctamente desde los típicos varios días a unas pocas horas. Además, la aplicación de MDA cuantitativo no requiere el uso de sondas localizadas fuera del gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) endógeno(s) que se están modificando, de modo que se obvia la necesidad de conocer la secuencia que flanquea el(los) gen(es) o locus (loci) modificado(s). Esta es una mejora significativa del modo en el que se ha realizado la detección selectiva en el pasado y lo convierte en un abordaje hace menos trabajoso y mucho más rentable para la detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas.
Procedimientos
Muchas de las técnicas usadas para construir vectores de ADN descritos en el presente documento son técnicas de biología molecular estándar bien conocidas para el experto en la técnica (p. ej., Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vol. 1, 2 y 3, 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Eds. Ausubel, y col., Greene Publ. Assoc., Wiley-Interscience, NY). Toda la secuenciación del ADN se realiza mediante técnicas estándar usando un secuenciador ABI 373A y kit de secuenciación y Taq Dideoxy Terminator (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA).
Etapa 1. Obtención de un clon grande de ADN genómico que contiene el(los) gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) de interés.
Un gen(es) o locus (loci) de interés se puede seleccionar en base a criterios específicos, tal como datos estructurales o funcionales detallados, o se puede seleccionar en ausencia de dicha información detallada ya que los potenciales genes o fragmentos génicos se predicen mediante los esfuerzos de los diversos proyectos de secuenciación genómica. Es importante que cabe destacar que no es necesario conocer la secuencia completa y la estructura génica de un gen(es) de interés para aplicar el procedimiento descrito en este documento para producir LTVEC. De hecho, la única información de secuencia que se requiere es aproximadamente 80.100 nucleótidos para obtener el clon genómico de interés, así como para generar las cajas de homología usadas en la fabricación del LTEVC (descrito con detalle más adelante) y para fabricar sondas para usar en ensayos de MDA cuantitativos.
Una vez que se ha seleccionado un(os) gen(es) o locus (loci) de interés se obtiene un clon(es) genómico(s) grande(s) que contiene(n) este(os) gen(es) o locus (loci). Este(os) clon(es) se pueden obtener de uno cualquiera de varios modos, incluidos, entre otros, detección selectiva de bibliotecas de ADN adecuadas (p. ej., BAC, PAC, YAC o cósmicos) mediante técnicas hibridación estándar o PCR o mediante cualquier otro procedimiento familiar para el experto en la técnica.
Etapa 2. Fijación de las cajas de homología 1 y 2 a un casete y generación de LTVEC.
Las cajas de homología marcan los sitios de recombinación homóloga bacteriana que se usan para generar LTVEC a partir de fragmentos genómicos clonados grandes (Figura 1). Las cajas de homología son segmentos cortos de ADN, generalmente bicatenarios y de al menos 40 nucleótidos, que son homólogos a regiones dentro del fragmento genómico clonado grande que flanquea la “región que se va a modificar". Las cajas de homología se unen al casete
de modificación de modo que tras la recombinación homóloga en bacterias, el casete de modificación sustituye a la región que se va a modificar (Figura 1). La técnica de crear un vector dirigido usando recombinación homóloga bacteriana se puede realizar en diversos sistemas (Yang y col., Nat Biotechnol, 15:859-65, 1997; Muyrers y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Angrand y col., Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7, 1999; Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). Un ejemplo de una tecnología favorecida actualmente en uso en la clonación de ET (Zhang y col., Nat Genet, 20:123-8,1998; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7,1999) y variaciones de esta tecnología (Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). ET se refiere al recE (Hall y Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91 :3205-9,1994) y las proteínas recT (Kusano y col., Gene, 138:17-25,1994) que portan la reacción de recombinación homóloga. RecE es una exonucleasa que recorta una hebra de ADN bicatenaria lineal (esencialmente el fragmento de ADN donante descrito más adelante) de 5' a 3', dejando detrás un fragmento bicatenario lineal con un saliente monocatenario en 3’. Este saliente monocatenario está recubierto por la proteína recT, que tiene actividad de unión de ADN monocatenario (ssADN) (Kovall y Matthews, Science, 277: 1824-7,1997). La clonación de ET se realiza usando E. coli que expresa de forma transitoria productos génicos de E. coli de recE y recT (Hall y Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91 :3205-9,1994; Clark y col., Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 49: 453-62,1984; Noirot y Kolodner, J Bioi Chem, 273:1227480,1998; Thresher y col., J Mol Bioi, 254:364-71,1995; Kolodner y col., Mol Microbiol, 11 :23-30,1994; Hall y col., J Bacteriol, 175:277-87,1993) y la proteína gam del bacteriófago lambda (λ) (Murphy, J Bacteriol, 173:5808-21, 1991; Poteete y col., J Bacteriol, 170:2012-21, 1988). La proteína gam se requiere para proteger el fragmento de ADN donante de la degradación por el sistema de exonucleasas recBC (Myers y Stahl, Annu Rev Genet, 28:49-70,1994) y se requiere para una eficiente clonación de ET en huéspedes recBC+ tal como la cepa DH10b de E. coli.
La región que se va a modificar y sustituir usando recombinación homóloga bacteriana puede variar de cero nucleótidos de longitud (creando una inserción en el locus original) a muchas decenas de kilobases (creando una deleción y/o sustitución del locus original). Dependiendo del casete de modificación, la modificación puede tener como resultado lo siguiente:
- (a)
- deleción de secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores;
- (b)
- alteración(es) de las secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores, incluidas sustituciones, adiciones y fusiones (p. ej., marcadores epítopos o creación de proteínas bifuncionales como las que tiene GFP);
- (c)
- inserción de nuevas secuencias de codificación, segmentos génicos o elementos reguladores, como aquéllas para genes marcadores seleccionables o genes indicadores o colocación de genes nuevos bajo control de la transcripción endógeno;
- (d)
- creación de alelos condicionales mediante, por ejemplo, la introducción de sitios loxP que flanquean a la región que se va a escindir por la Cre recombinasa (Abremski y Hoess, J Bioi Chem, 259:1509-14, 1984), o sitios FRT que flanquean a la región va a escindir la Flp recombinasa (Andrews y col., Cell, 40:795-803, 1985; Meyer-Leon y col., Cold Spring Harb Symp Quant Bioi, 49:797-804,1984; Cox, Proc Natl Acad Sci USA, 80:4223-7,1983); o
- (e)
- sustitución de secuencias de codificación o segmentos génicos de una especie con secuencias de codificación ortólogas de una especie diferente, por ejemplo sustituyendo un locus genético murino con el locus genético humano ortólogo para someter a ingeniería a un ratón en el que el locus concreto se ha “humanizado”.
Cualquiera o todas estas modificaciones se puede incorporar en un LTVEC. Más adelante, en el Ejemplo 1, se proporciona un ejemplo específico no limitante en el que una secuencia de codificación endógena está completamente delecionada y sustituida simultáneamente con un gen indicador así como un marcador seleccionable, además de las ventajas del procedimiento descrito en este documento en comparación con las tecnologías anteriores.
Etapa 3 (opcional). Verificar que cada LTVEC se ha sometido a ingeniería correctamente.
Verificar que cada LTVEC se ha sometido a ingeniería correctamente mediante:
- a.
- PCR diagnóstico para verificar las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés, Los fragmentos de PCR obtenidos de este modo se pueden secuenciar para verificar adicionalmente las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés,
- b.
- Digestión diagnóstica con enzimas de restricción para garantizar que solo las modificaciones deseadas se han introducido en el LTEVC durante el proceso de recombinación homóloga bacteriana.
- c.
- Secuenciación directa de los LTVEC, en concreto las regiones que abarcan el sitio de modificación para verificar las nuevas uniones creadas mediante la introducción del fragmento donante en el o los genes o locus (loci) cromosómicos de interés.
Etapa 4. Purificación, preparación y linealización del ADN de LTVEC para introducción en células eucariotas.
a. Preparación de ADN de LTVEC:
Preparar ADN miniprep. (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vols 1,2 y 3, 1989; Tillett and Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572, 1998; http://www.qiagen.com/ literature/handbooks/plkmini/ plm_399.pdf) del LTVEC seleccionada y retransformar el ADN miniprep de LTVEC en
E. coli usando electroporación (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1, 2, and 3,1989). Esta etapa es necesaria para deshacerse del plásmido que codifica las proteínas recombinogénicas que se usan para la etapa de recombinación homóloga bacteriana (Zhang y col., Nat Genet, 20:123-8, 1998; Narayanan y col., Gene Ther, 6:442-7,1999). Es útil deshacerse de este plásmido (a) porque es un plásmido de un número elevado de copias y puede reducir los rendimientos obtenidos en las preparaciones de LTVEC a gran escala; (b) eliminar la posibilidad de inducir la expresión de las proteínas recombinogénicas y (c) porque puede enmascarar el mapeo físico del LTVEC. Antes de introducir el LTEVC en las células eucariotas se preparan cantidades más grandes de ADN de LTEVC mediante metodología estándar (http://www.qiagen.com/literature/handbooks/plk/plklow.pdf; Sambrook, J., E. F. Fritsch And 1. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edición, Vols 1,2 y 3,1989; Tillett and Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572,1998). No obstante, esta etapa se puede sortear si se usa un procedimiento de recombinación homóloga bacteriana que usa un profago recombinogénico, es decir donde los genes que codifican las proteínas recombinogénicas se integran en el cromosoma bacteriano (Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000).
b. Linealización del ADN de LTVEC:
Para preparar el LTVEC para la introducción en células eucariotas, el LTVEC se linealiza preferentemente de un modo que deja el ADN del (los) gen(es) endógeno(s) modificado(s) o el locus (loci) cromosómico flanqueado por brazos largos de homología. Esto se puede conseguir linealizando el LTEVC, preferentemente en la estructura del vector, con cualquier enzima de restricción que solo digiere rara vez. Ejemplos de enzimas de restricción adecuadas incluyen Notl, Pacl, Sfil, Srfl, Swal, Fsel, etc. La elección de la enzima de restricción se puede determinar experimentalmente (es decir, analizando varias cortadoras raras candidatas diferentes) o, si la secuencia del LTVEC se conoce, analizando la secuencia y eligiendo una enzima de restricción adecuada en base al análisis. En situaciones en las que el LTVEC tiene una estructura del vector que contiene sitios ratos tales como CosN, después se puede escindir con enzimas que reconocen dichos sitios, por ejemplo terminasa (Shizuya y col., Proc Natl Acad Sci USA, 89: 8794-7,1992; Becker y Gold, Proc Natl Acad Sci USA, 75:4199-203,1978; Rackwitz y col. Gene, 40:259-66,1985).
Etapa 5. Introducción del LTVEC en las células eucariotas y selección de células en las que ha tenido lugar la introducción satisfactoria del LTVEC.
El ADN del LTVEC se puede introducir en células eucariotas usando metodología estándar, tal como transfección mediada por fosfato cálcico, lípidos o electroporación (Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1,2, y 3,1989). Las células en las que se ha introducido con éxito el LTVEC se pueden seleccionar mediante exposición a agentes de selección, dependiendo del gen del marcador seleccionable que se ha sometido a ingeniería en el LTVEC. Como ejemplo no limitante, si el marcador seleccionable es el gen de la neomicina fosfotransferasa (neo) Beck, y col., Gene, 19:327-36,1982), las células que han captado el LTVEC se pueden seleccionar en medio que contiene G418; las células que no tienen LTVEC morirán, mientras que las células que han captado el LTVEC sobrevivirán (Santerre, y col., Gene, 30:147-56,1984). Otros marcadores seleccionables adecuados incluyen cualquier fármaco que tenga actividad en células eucariotas (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999), tal como higromicina B (Santerre, y col., Gene, 30:147-56,1984; Bernard, y col., Exp Cell Res, 158:237-43, 1985; Giordano y McAllister, Gene, 88:285-8,1990), Blasticidina S (Izumi, y col., Exp Cell Res, 197:229-33, 1991), y otros que son familiares para los expertos en la técnica.
Etapa 6. Detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas usando ensayo cuantitativo para la modificación de alelo (MDA).
Las células eucariotas que se han modificado con éxito dirigiendo el LTVEC en el locus de interés se pueden identificar usando diversos abordajes que pueden detectar la modificación de alelo dentro del locus de interés y que no dependen de ensayos que abarcan la totalidad del brazo o brazos de homología. Dichos abordajes pueden incluir, entre otros:
- (a)
- PCR cuantitativa usando TaqMan® (Lie y Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:43-8, 1998);
- (b)
- Ensayo de MDA cuantitativo usando balizas moleculares (Tan, y col., Chemistry, 6:1107-11,2000)
- (c)
- Hibridación de fluorescencia in situ FISH (Laan, y col., Hum Genet, 96:275-80,1995) o hibridación genómica comparativa (CGH) (Forozan, y col. Trends Genet, 13:405-9, 1997; Thompson y Gray, J Cell Biochem Suppl, 139-43,1993; Houldsworth y Chaganti, Am J Pathol, 145:1253-60, 1994);
- (d)
- Amplificación de ADN isotérmica (Lizardi, y col., Nat Genet, 19:225-32, 1998; Mitra y Church, Nucleic Acids Res, 27:e34, 1999); y
- (e)
- Hibridación cuantitativa con una sonda(s) inmovilizada (s) (Southern, J. Mol. BioI., 98: 503,1975; Kafatos FC; Jones CW; Efstratiadis A, Nucleic Acids Res 7(6):1541-52,1979).
Los solicitantes proporcionan en el presente documento un ejemplo en el que se usa PCR cuantitativa TaqMan®
para la detección selectiva con éxito de células eucariotas diana. En este ejemplo no limitante, se usa TaqMan® para identificar células eucariotas que han sufrido recombinación homóloga en la que una porción de uno de dos alelos endógenos en un genoma diploide se ha sustituido por otra secuencia. En contraste con los procedimientos tradicionales en los que una diferencia en la longitud del fragmento de restricción que abarca la totalidad del brazo o brazos de homología indica la modificación de uno de dos alelos, el procedimiento TaqMan® cuantitativo detectará la modificación de un alelo midiendo la reducción del número de copias (por la mitad) del alelo no modificado. Específicamente, la sonda detecta el alelo no modificado y no el alelo modificado. Por tanto, el procedimiento es independiente de la naturaleza exacta de la modificación y no está limitado a la sustitución de secuencia descrita en este ejemplo. TaqMan se usa para cuantificar el número de copias de un molde de ADN en una muestra de ADN genómico, especialmente por comparación con un gen de referencia (Lie y Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:438, 1998). El gen de referencia se cuantifica en la muestra de ADN genómico como el(los) gen(es) o locus (loci) diana. Por tanto se realizan dos amplificaciones TaqMan® (cada uno con su correspondiente sonda). Una sonda TaqMan® determina el "Ct" (ciclo umbral) del gen de referencia, mientras que la otra sonda determina el Ct de la región del (los) gen(es) o locus (loci) diana que se sustituye al funcionar como diana con éxito. El Ct es una cantidad que refleja la cantidad de ADN de partida para cada una de las sondas TaqMan®, es decir una secuencia menos abundante requiere más ciclos de PCR para alcanzar el ciclo umbral. Disminuyendo a la mitad el número de copias de la secuencia molde para una reacción TaqMan® tendrá como resultado un incremento de aproximadamente una unidad Ct. Las reacciones TaqMan® en las células en las que un alelo del gen(es) o locus (loci) diana se ha sustituido mediante recombinación homóloga tendrá como resultado un incremento de un Ct para la reacción TaqMan® diana sin un incremento del Ct para el gen de referencia cuando se compara con el ADN de células no diana. Esto permite la fácil detección de la modificación de un alelo del o los genes de interés en células eucariotas usando LTVEC.
Como se ha indicado antes, la detección selectiva de la modificación de alelo (MDA) es el uso de cualquier procedimiento que detecta la modificación de un alelo para identificar las células que han sufrido recombinación homóloga. No es un requisito que los alelos diana sean idénticos (homólogos) entre sí y, de hecho, pueden contener polimorfismos, como es el caso en la progenie resultante de cruzar dos cepas diferentes de ratones. Además, Una situación especial que también está cubierta por la detección selectiva de MDA es apuntar a los genes que normalmente están presentes como una única copia en las células, tales como algunos de los localizados en los cromosomas sexuales y, en particular, en el cromosoma Y. En este caso, los procedimientos que detectarán la modificación del único alelo diana, tal como PCR cuantitativa, transferencias Southern, etc., se pueden usar para detectar el acontecimiento diana. Está claro que el procedimiento descrito en este documento se puede usar para generar células eucariotas modificadas incluso cuando los alelos son polimórficos o cuando están presentes en una única copia en las células diana.
Etapa 8. Usos de células eucariotas genéticamente modificadas.
- (a)
- Las células eucariotas genéticamente modificadas generadas mediante los procedimientos descritos en las etapas 1 a 7 se pueden usar en cualquier ensayo in vitro o in vivo, en las que cambiar el fenotipo de la célula es deseable.
- (b)
- La célula eucariota modificada genéticamente generada mediante los procedimientos descritos en las etapas 1 a 7 también se pueden usar para generar un organismo portador de la modificación genética. Los organismos genéticamente modificados se pueden generar mediante varias técnicas diferentes, incluidas, entre otras:
- 1.
- Células madre embrionarias (ES) modificadas tales como las células ES de rata y de ratón de uso frecuente. Las células ES se pueden usar para crear ratas o ratones modificadas genéticamente mediante tecnología de inyección de blastocistos estándar o técnicas de agregación (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Wood, y col., Nature, 365:87-9, 1993; Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), inyección de blastocistos tetraploides (Wang, y col., Mech Dev, 62: 137-45,1997),o clonación y transferencia nuclear (Wakayama,y col., ProcNatlAcadSci USA,96:14984-9,1999). Las células ES derivadas de otros organismos, como conejos (Wang, y col., Mech Dev, 62: 137-45, 1997; Schoonjans, y col., Mol Reprod Dev, 45:439-43, 1996) o pollos (Pain, y col., Development, 122:2339-48,1996) u otras especies deberán poder sufrir modificación(es) genéticas usando los procedimientos descritos en este documento.
- 2.
- Se pueden usar protoplastos modificados para generar plantas modificadas genéticamente (por ejemplo, véase la patente de EE.UU. 5,350,689 "Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells", y la patente de EE.UU. 5,508,189 "Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts" y referencias en las mismas).
- 3.
- Transferencia nuclear de células eucariotas modificadas a oocitos para generar organismos clonados con alelos modificados (Wakayama, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 96:14984-9,1999; Baguisi, y col., Nat Biotechnol, 17:456-61, 1999; Wilmut, y col., Reprod Fertil Dev, 10:639-43, 1998; Wilmut, y col., Nature, 385:810-3,1997; Wakayama, y col., Nat Genet, 24:108-9,2000; Wakayama, y col., Nature, 394:369-74, 1998; Rideout, y col., Nat Genet, 24: 109-10, 2000; Campbell, y col., Nature, 380:64-6,1996).
- 4.
- La fusión de células para transferir el alelo modificado a otra célula, incluida la transferencia de cromosoma(s) sometidos a ingeniería y usos de dichas células para generar organismos portadores del alelo
modificado o cromosoma(s) sometidos a ingeniería (Kuroiwa, y col., Nat Biotechnol, 18: 1086-1 090, 2000).
5. Los procedimientos descritos en este documento son también susceptible a cualquier otro abordaje que se ha usado o que todavía está pendiente de descubrir.
Aunque muchas de las técnicas usadas en la práctica de las etapas individuales de los procedimientos descritos en este documento son familiares para el experto en la técnica, los solicitantes compiten con la novedad del procedimiento descrito en este documento reside en la combinación única de las etapas y técnicas acopladas con el procedimiento nunca antes descrito de introducir un LTVEC directamente en células eucariotas para modificar un locus cromosómico, y el uso de ensayos MDA cuantitativos para identificar las células eucariotas que se han modificado adecuadamente. Esta nueva combinación representa una mejora significativa sobre las tecnologías previas para crear organismos que poseen modificaciones de genes o loci cromosómicos endógenos.
Ejemplos
Ejemplo 1: Ingeniería de células ES portadoras de una deleción del gen OCR10.
a. Selección de un clon de ADN genómico grande que contiene mOCR10.
Un clon de cromosoma artificial bacteriano (BAC) portador de un fragmento de ADN genómico grande que contenía la secuencia de codificación del gen de OCR10 de ratón (mOCR10) se obtuvo mediante detección selectiva de una biblioteca BAC de ADN genómico de ratón en matriz (Incyte Genomics) usando PCR. Los cebadores usados para la detección selectiva de esta biblioteca derivaron de la secuencia de ADNc del gen mOCR10.
Se usaron dos pares de cebadores:
- (a)
- OCR10.RAA (5'-AGCTACCAGCTGCAGATGCGGGCAG -3') y OCR10.PVlrc (5'-CTCCCCAGCCTGGGTCT GAAAGATGACG3') que amplifica un ADN de 102 pb; y
- (b)
- OCR10.TDY (5'-GACCTCACTIGCTACACTGACTAC-3') y OCR10.QETrc (5'-ACTIGTGTAGGC TGCAGAAGGTCTCTIG3'que amplifica un ADN de 1.500.
Este mOCR10 de BAC contenía aproximadamente 180 kb de ADN genómico, incluida la secuencia de codificación de mOCR10 completa. Este clon de BAC se usó para generar un LTVEC que después se usó para delecionar una porción de la región de codificación de mOCR10 al tiempo que introduce de forma simultánea un gen indicador cuyo codón de iniciación sustituyó con precisión al codón de iniciación de OCR10, así como la inserción de un gen de un marcador seleccionable útil para la selección tanto en E. coli como en células de mamífero tras el gen indicador (Figura 2). El gen indicador (en este ejemplo no limitante LacZ, cuya secuencia está disponible fácilmente para el experto en la técnica) codifica la enzima -galactosidasa de E. coli. Dada la posición de la inserción de LacZ (su codón de iniciación está en la misma posición que el codón de iniciación de mOCR10), la expresión de LacZ deberá imitar la de Mcor10, como se ha observado en otros ejemplos en los que se realizaron sustituciones similares con LacZ usando tecnologías previas (véase, "Gene trap strategies in ES cells", de W Wurst y A. Gossler, in Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999). El gen LacZ permite realizar un simple ensayo enzimático estándar que pueda revelar sus patrones de expresión in situ, de modo que se proporciona un ensayo sustituto que refleja los patrones de expresión normal del gen(es) o locus (loci) cromosómico(s) reemplazado(s).
b. Construcción del fragmento donante y generación de LTVEC.
El casete de modificación usado en la construcción del LTEVC de mOCR10 es el casete lacZ-SV40 polyA-PGKpEM7neo-PGK poliA en el que lacZ es un gen marcador como se ha descrito antes, poli A de SV40 es un fragmento derivado del virus de simios 40 (Subramanian, y col. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol, 19:157-64,1976; Thimmappaya, y col. J Bioi Chem, 253:1613-8,1978; Dhar, y col. Proc Natl Acad Sci USA, 71 :371-5,1974; Reddy, y col. Science, 200:494-502, 1978) y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal (Subramanian, y col., Prog Nucleic Acid Res Mol Biol, 19: 157-64,1976; Thimmappaya, y col., J Bioi Chem, 253: 1613-8, 1978; Dhar, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 71 :371-5, 1974; Reddy, y col., Science, 200:494-502,1978), PGKp es el promotor de la fosfoglicerato quinasa (PGK) de ratón (Adra, y col., Gene, 60:65-74,1987) (que se ha usado ampliamente para dirigir la expresión de genes de resistencia a fármacos en células de mamífero), EM7 es un fuerte promotor bacteriano que tiene la ventaja de permitir la selección positiva en bacterias de la construcción de LTVEC completada dirigiendo la expresión del gen de la neomicina transferasa (neo, neo es un marcador seleccionable que confiere resistencia a kanamicina en células procariotas y resistencia a G418 en células eucariotas (Beck, y col., Gene, 19:327-36, 1982), y PGK poliA es una región no traducida en 3' derivada del gen de PGK y que contiene un sitio de poliadenilación y una señal (Boer, y col., Biochem Genet, 28:299-308, 1990).
Para construir el LTVEC de mOCR10, en primer lugar se generó un fragmento donante consistente en una caja de homología 1 de mOCR10 (hb1) unida cadena arriba desde el gen de LacZ en el casete de modificación y una caja de homología 2 de mOCR10 (hb2) cadena debajo de la secuencia de neo-PGK poliA en el casete de modificación (Figura 2) usando tecnología de ingeniería genética recombinante estándar. La caja de homología 1 (hb1) consiste
en 211 pb de la secuencia no traducida inmediatamente cadena arriba de la metionina de iniciación del marco de lectura abierto de mOCR10 (ORF de mOCR10) (Figura 3A-3D). La caja de homología 2 (hb2) consiste en 216 pb del ORF de mOCR10, que finaliza en el codón de terminación (Figura 3A-3D).
Posteriormente, usando recombinación bacteriana homóloga (Zhang, y col., Nat Genet, 20:123-8,1998; Angrand, y col., Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Muyrers, y col., Nucleic Acids Res, 27:1555-7,1999; Narayanan, y col., Gene Ther, 6:442-7, 1999; Yu, y col., Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000), este fragmento donante se usó para reemplazar con precisión la región de codificación de mOCR10 (desde la metionina de iniciación al codón de terminación) con el casete de inserción, que tiene como resultado la construcción del LTEVEC de mOCR10 (Figura 2). Por tanto, en este LTVEC de mOCR10, la secuencia de codificación de mOCR10 se sustituyó mediante el casete de inserción creando una deleción de aproximadamente 20 kb en el locus de mOCR10 dejando aproximadamente 130 kb de homología cadena arriba (brazo de homología cadena arriba) y 32 kb de homología cadena abajo (brazo de de homología cadena abajo).
Es importante observar que los LTEVEC pueden generarse más rápido y convenientemente a partir de bibliotecas BAC disponibles que dirigiendo vectores fabricados usando las tecnologías previas porque solo se requiere una única etapa de recombinación homóloga bacteriana y la única información de secuencia requerida es la necesaria para generar las cajas de homología. En contraste con ello, abordajes previos para generar vectores dirigidos usando recombinación homóloga bacteriana requieren que se "recorten” vectores dirigidos grandes antes de su introducción en células ES (Hill y col., Genomics, 64: 111-3, 2000). Este recorte es necesario por la necesidad de generar brazos de homología lo bastante cortos para acomodar los procedimientos de detección selectiva usados mediante los abordajes anteriores. Una desventaja principal en el procedimiento de Hill y col. es que se requieren dos etapas de recombinación homóloga adicionales simplemente para recortar (uno para recortar la región cadena arriba del locus modificado y uno para recortar la región cadena abajo del locus modificado). Para ello se necesita sustancialmente más información de secuencia, incluida la información de secuencia que abarca los sitios de recorte.
Además, otra ventaja obvia, ilustrada mediante el ejemplo anterior, es que una deleción muy grande que abarca el gen mOCR10 (aproximadamente 20 kb) se puede generar fácilmente en una única etapa. En contraste con ello, usando tecnologías previas, para conseguir la misma tarea pueden ser necesarias varias etapas y puede implicar marcar las regiones cadena arriba y cadena abajo de las secuencias de codificación con sitios loxP con el fin de usar la Cre recombinasa para eliminar la secuencia flanqueada por estos sitios tras la introducción del locus modificado en células eucariotas. Esto se puede conseguir en una etapa y, por tanto, puede requerir la construcción de dos vectores dirigidos usando diferentes marcadores de selección y dos acontecimientos dirigidos secuenciales en células ES, uno para introducir el sitio loxP en la región cadena arriba de la secuencia de codificación y otro para introducir el sitio loxP en la región cadena debajo de la secuencia de codificación. También debe observarse que la creación de deleciones grandes suele producirse con una eficiencia baja usando las tecnologías de dirección anteriores en células eucariotas, porque la frecuencia de conseguir una recombinación homóloga puede ser baja cuando se usan vectores dirigidos que contienen una deleción grande flanqueada por brazos de homología relativamente cortos. La elevada eficiencia obtenida usando el procedimiento descrito en este documento (véase más adelante) se debe a los brazos de homología muy largos presentes en el LTVEC que incrementan la tasa de recombinación homóloga en células eucariotas.
c. Verificación preparación e introducción del ADN de LTVEC de Mocr10 en células ES.
La secuencia que rodea la unión del casete de inserción y la secuencia de homología se verificaron mediante secuenciación del ADN. El tamaño del LTVEC de mOCR10 se verificó mediante análisis de restricción seguido de electroforesis en gel de campo pulsado ((PFGE) (Cantor, y col., Annu Rev Biophys Biophys Chem, 17:287-304,1988; Schwartz y Cantor, Cell, 37:67-75,1984). Se realizó una preparación estándar de plásmidos a gran escala del MTVEC de mOCR10, el ADN del plásmido se digirió con la enzima de restricción Notl, que corta en la estructura del vector del LTVEC de mOCR10 para generar ADN lineal. Después, el ADN linealizado se introdujo en células ES de ratón mediante electroporación (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999; Sambrook y col., Sambrook, J., E. F. Fritsch y T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda edición, Vols 1, 2, and 3,1989). Las células ES transfectadas con éxito con el LTVEC de mOCR10 se seleccionaron en medio que contiene G418 usando procedimientos de selección estándar (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987; Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999).
d. Identificación de clones de células ES diana usando una modificación cuantitativa del ensayo de alelo (MDA).
Para identificar las células ES en las que uno de los dos genes mOCR10 endógenos se han sustituido mediante secuencia de casete de modificación, el ADN de clones de células ES individuales se analizó mediante PCR cuantitativa usando metodología TaqMan® estándar como se ha descrito (Applied Biosystems, TaqMan® Universal PCR Master Mix, número de catálogo PIN 4304437; véase también http://www.pebiodocs.com/pebiodocs/04304449.pdf). Los cebadores y las sondas TaqMan® usados son como se ha descrito en la Figura 3A-3D. Se realizó detección selectiva de un total de 69 células ES independientes y 3 se identificaron como positivas, es decir como clones en los que una de la secuencia de codificación de mOCR10
endógeno se ha sustituido mediante el casete de modificación descrito anteriormente.
Son evidentes varias ventajas del abordaje MDA:
5 (i) no requiere el uso de una sonda fuera del locus que se está modificando, de modo que se obvia la necesidad de saber la secuencia que flanquea el locus modificado.
(ii) requiere muy poco tiempo en comparación con la metodología de trasferencia Southern convencional que ha sido el procedimiento de elección anterior ((Robertson, Practical Approach Series, 254,1987, Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), de modo que se reduce el tiempo para identificar las células modificadas
10 correctamente desde varios días a solo unas pocas horas.
Esta es una mejora significativa del modo en el que se ha realizado la detección selectiva en el pasado y lo convierte en un abordaje hace menos trabajoso y más rentable para la detección selectiva de acontecimientos de recombinación homóloga en células eucariotas.
15 Otra ventaja del procedimiento descrito en este documento es que también es superior a las tecnologías anteriores por su capacidad para apuntar a loci diferentes. Usando las tecnologías anteriores se ha demostrado que para ciertos loci, la frecuencia de apuntar a un objetivo con éxito puede ser tan baja como de 1 en 2.000 acontecimientos de integración, quizá incluso menor. Usando el procedimiento descrito en este documento, los solicitantes han
20 demostrado que estos difíciles loci pueden ser las dianas mucho más eficientemente usando LTVEC que contienen brazos de homología largos (es decir, mayores que los permitidos por las tecnologías previas). Como demuestra el ejemplo no limitante descrito anteriormente, los solicitantes han apuntado al locus OCR10, un locus que anteriormente se ha demostrado que es recalcitrante a ser diana usando tecnología convencional. Usando el procedimiento descrito en este documento, los solicitantes han demostrado que han conseguido con éxito llegar a
25 las diana en 3 de 69 clones de células ES en las que se había integrado el LTVEC de mOCR10 (que contienen más de 160 kb de brazos de homología e introduciendo una deleción de 20 kb), mientras que usando la tecnología anterior para apuntar a las células ES (Joyner, The Practical Approach Series, 293,1999) usando un vector basado en plásmidos con brazos de homología más cortos que 10-20 kb al tiempo que también se introduce una deleción inferior a 15 kb, no se identificaron acontecimientos diana entre más de 600 integrantes del vector. Estos datos
30 demuestran claramente la superioridad del procedimiento descrito en este documento sobre las tecnologías previas.
Ejemplo 2: El incremento de la frecuencia de diana y la anulación de la necesidad de usar ADN isogénico cuando se usan LTVEC como los vectores diana.
35 Como se ha indicado anteriormente, el incremento de la frecuencia de diana obtenido usando brazos de homología largos deberá disminuir el beneficio, si hay alguno, derivado del uso de ADN genómico en la construcción de LTVEC que es isogénico (es decir, de secuencia idéntica) con el ADN de la célula eucariota diana. Para probar esta hipótesis, los solicitantes han construido numerosos LTVEC usando ADN genómico derivado de la misma subcepa de ratón que la célula eucariota que va a ser la diana (probablemente isogénica) y otros numerosos LTVEC usando
40 ADN genómico derivado de las subcepas de ratón que difieren del de la célula eucariota que va a ser la diana (probablemente no isogénico). Los dos conjuntos de LTVEC exhibieron similares frecuencias de diana, que varían de 1-13 % (Tabla 1), lo que indica que la tasa de apuntar a dianas con éxito usando LTVEC no depende de la isogenicidad.
45 TABLA 1 RESUMEN DE LOS GENES DIANA USANDO VECTORES DE CLONES BAC NO ISOGÉNICO Aprox. (Kb)
- Gen diana
- Descripción Origen Célula Tamañ Brazo 1 Brazo 2 Del +clones %
- de A
- ES o del de dianas
- DN
- LTVEC
- OGH
- Fusión Svl CJ7 147 50 90 5 4 4
- LacZ-ATG
- OCR10(A)
- Fusión LacZ-ATG SvJ CJ7 150 135 8 20 1,4
- OCR10(B)
- Fusión LacZ-ATG Svl CJ7 169 130 32 20 3 4,3
- MA61
- Fusión LacZ-ATG SvJ CJ7 95 N/D N/D 30 3 4,6
- MA16
- Fusión LacZ-ATG SvJ CJ7 120 N/D N/D 8 8 13
- ISOGÉNICO
- ROR1
- Fusión CJ7 CJ7 55 14 14 20 5 5
- LacZ
- intracel.
ROR1 Fusión CJ7 CJ7 55 14 14 20 2 2
3xmyc
intracel.
ROR2 Mutación CJ7 CJ7 45 11 24 0,5 2 2
braquidactili
a y
marcador
Myc
En resumen, el abordaje de crear LTVEC y usarlos directamente como vectores dirigidos combinado con detección selectiva de MDA para acontecimientos de recombinación homóloga en células ES crea un procedimiento nuevo para loci modificados genéticamente mediante ingeniería que es rápido, económico y representa una mejora significativa sobre los tediosos y laboriosos procedimientos que se usaban anteriormente. Por tanto, abre la posibilidad de un rápido análisis genómico funcional in vivo a escala grande de esencialmente todos y cada uno de los genes en el genoma de un organismo en una fracción del tiempo y de los costes requeridos por las metodologías anteriores.
Ejemplo 3: Uso de LTVEC para producir anticuerpos quiméricos y humanos
a. Introducción
Los anticuerpos están compuestos por dos cadenas, las cadenas ligera y pesada, cada una de las cuales está formada por dos dominios, los dominios variable y constante. La región variable de la proteína del anticuerpo es la porción en N-terminal del anticuerpo que se une al antígeno. El dominio variable de la cadena pesada está codificado por el ADN del locus génico variable de la cadena pesada, que está compuesto por los segmentos génicos variable (V), de diversidad (D) y de unión (J), Los dominios variables de la cadena ligera están codificados por el ADN de los loci génicos variables de la cadena ligera, kappa y lambda, que están compuestos por los segmentos génicos variable (V) y de unión (J).
La reorganización de los genes de la región variable (VDJ/VJ) durante el desarrollo inicial de las células B es el mecanismo principal por el cual el sistema inmunitario produce anticuerpos capaces de reconocer el enorme número de antígenos con los que se puede encontrar. Esencialmente, mediante reorganizaciones de ADN durante el desarrollo de las células B, se ensambla un enorme repertorio de secuencias de la región variable (VDJ/VJ) que después se unen a una región constante (C) para producir cadenas ligera y pesada completas que se ensamblan para formar un anticuerpo. Una vez montados los anticuerpos funcionales, la hipermutación somática que se produce en los órganos linfoides secundarios introduce diversidad adicional que permite que el organismo seleccione y optimice la afinidad del anticuerpo.
La producción de anticuerpos frente a varios antígenos en especies no humanas supuso inicialmente una gran promesa para la producción a gran escala de anticuerpos que podrían usarse como terapéuticos humanos. No obstante, las diferencias de especies conducen a la producción de anticuerpos en los seres humanos que inactivan los anticuerpos extraños y producen reacciones alérgicas. Posteriormente se hicieron intentos para “humanizar” los anticuerpos, de modo que es menos probable que sean reconocidos como extraños en los seres humanos. Inicialmente, este procedimiento implicó combinar las porciones de unión a antígeno de los anticuerpos derivados de ratones con la región constante de anticuerpos humanos, de modo que se crean anticuerpos recombinantes que eran menos inmunogénicos en seres humanos. Un segundo abordaje que se desarrolló fue la expresión en fagos, de modo que las regiones V humanas se clonan en una biblioteca de expresión en fagos y las regiones con las adecuadas características de unión se unen a las regiones constantes humanas para crear anticuerpos humanos. No obstante, esta tecnología está limitada por la ausencia de desarrollo de anticuerpos y la maduración de la afinidad que se produce de forma natural en las células
B.
Más recientemente se han inactivado genes endógenos de ratones y se han sustituido genes con sus homólogos humanos para producir anticuerpos completamente humanos. Por desgracia, el uso de estas construcciones ha destacado la importancia de una región constante endógena en el desarrollo y optimización de los anticuerpos en las células B. Los ratones que producen anticuerpos completamente humanos tienen respuestas inmunitarias reducidas. Esto puede ser porque los anticuerpos humanos producidos por los ratones transgénicos con construcciones completamente humanas tienen una afinidad menor en comparación con sus homólogos de ratón. La menor afinidad podría efectuar maduración y supervivencia de las células B. De acuerdo con esto, los muy elogiados procedimientos de producir anticuerpos humanizados en ratones y otros organismos, en los que las regiones endógenas variables y constantes de los ratones se inactivan y sustituyen con sus homólogos humanos, no ha tenido como resultado anticuerpos óptimos.
Se ha sugerido el uso de anticuerpos quiméricos que usan regiones variables humanas (VDJ/VJ) con las regiones constantes de ratón a través de la maduración de células B, seguido de la posterior ingeniería de los anticuerpos para sustituir las regiones constantes de ratón con sus homólogos humanos (patente de EE.UU. nº 5,770,429
emitida el 23 de junio de 1998). No obstante, la única metodología que ha existido hasta la fecha para elaborar dichas quimeras ha sido el trans-intercambio, en el que la formación de las quimeras es únicamente un acontecimiento raro que solo se produce en las cadenas pesadas. Hasta la fecha no ha habido ningún mecanismo que produjera, en animales transgénicos, sustitución a gran escala de la totalidad de los segmentos de codificación génica variables con genes humanos, de modo que se producen quimeras en las cadenas tanto pesadas como ligeras. Usando la tecnología de los solicitantes, como se ha divulgado en el presente documento, se generan anticuerpos quiméricos que se pueden alterar después mediante tecnología estándar para crear anticuerpos humanos de alta afinidad.
b. Breve descripción
Se crea un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas (VDJ/VJ) y regiones constantes de ratón. Esto se consigue mediante una sustitución directa in situ de los genes de la región variable de ratón (NDJ/VJ) con sus homólogos humanos. Los loci de inmunoglobulina híbrida resultantes sufrirán el proceso natural de reorganizaciones durante el desarrollo de las células B para producir los anticuerpos híbridos.
Después, los anticuerpos completamente humanos se elaboran reemplazando las regiones constantes del ratón con los homólogos humanos deseados. Este abordaje dará lugar a anticuerpos terapéuticos con mucha mayor eficiencia que los procedimientos anteriores, por ejemplo la “humanización” de los anticuerpos monoclonales de ratón o la generación de anticuerpos completamente humanos en ratones HuMAb. Además, este procedimiento tendrá éxito en la producción de anticuerpos terapéuticos para muchos antígenos para los que los procedimientos anteriores han fallado. Este ratón creará anticuerpos que son una región constante de ratón-humano (VDJ/VJ), que tendrá los beneficios siguientes sobre los ratones HuMAb disponibles anteriormente que producen anticuerpos completamente humanos. Los anticuerpos generados por el nuevo ratón conservarán las regiones Fc murinas que interaccionarán con mayor eficiencia con los otros componentes del complejo del receptor de las células B de ratón, incluidos los componentes de señalización requeridos para la diferenciación adecuada de las células B (tal como Iga e Igb). Adicionalmente, las regiones Fc murinas serán más específicas que las regiones Fc humanas en sus interacciones con los receptores de Fc en las células de ratón, moléculas del complemento etc. Estas Interacciones son importantes para una respuesta inmunitaria fuerte y específica, para la proliferación y maduración de las células B y para la maduración de la afinidad de los anticuerpos.
Dado que existe una sustitución directa de las regiones V-D-J/V-J para las regiones equivalentes de los loci de ratón, todas las secuencias necesarias para la transcripción, recombinación y/o intercambio de vlase adecuadas permanecerán intactas. Por ejemplo, se ha demostrado que el potenciador intrónico de la cadena pesada de la inmunoglobulina murina, Em, es crucial para la recombinación V-D-J así como la expresión génica de la cadena pesada durante las primeras etapas del desarrollo de células B [Ronai, D. Berru, M., y Shulman, M. J. Mol Cell Bioi 19:7031-7040 (1999)], mientras que la región potenciadora en 3’ de la cadena pesada de inmunoglobulina parece ser cicla para el intercambio de clase [Pan, Q., Petit-Frere, C., Stavnezer, J., y Hammarstrom, L. Eur J Immunol 30:1019-1029 (2000)] así como la expresión génica de la cadena pesada en estadios posteriores de la diferenciación de las células B [Ong, J., Stevens, S., Roeder, R. G. y Eckhardt, L. A. J Immunol 160:4896-4903 (1998)]. Dadas estas diversas, aunque cruciales, funciones de los elementos de control de la transcripción, es deseable mantener estas secuencias intactas.
Los acontecimientos de recombinación requeridos que se producen en los loci de inmunoglobulina durante el curso normal de la diferenciación de las células B pueden aumentar la frecuencia de las reorganizaciones de inmunoglobulina no productoras cuando estos loci se insertan en localizaciones cromosómicas inadecuadas o en múltiples copias, como en los ratones actualmente disponibles. Con las reducciones en la reorganización de inmunoglobulina productora y, por tanto, la señalización adecuada en etapas específicas del desarrollo de las células B se eliminan las células aberrantes, Las reducciones del número de células B en estadios precoces del desarrollo disminuyen significativamente la población global final de células B y limita considerablemente las respuestas inmunitarias de los ratones. Dado que solo habrá un locus quimérico de la cadena pesada o ligera (frente a los loci mutados de inmunoglobulina y con loci transgénicos humanos integrados en distintas localizaciones cromosómicas para las cadenas pesada y ligera en los ratones disponibles actualmente), no debería haber trans-corte y empalme o trans-reorganizaciones de los loci que podría tener como resultado reorganizaciones no productoras o anticuerpos quiméricos terapéuticamente irrelevantes ((Willers, J., Kolb, C. y Weiler, E. Immunobiology 200:150-164 (2000); Fujieda, S., Lin, Y. Q., Saxon, A. y Zhang, K. J Immunol 157:3450-3459 (1996)).
Las sustituciones de las regiones V-D-J o V-J humanas en los loci cromosómicos genuinos de inmunoglobulina murina será sustancialmente más estables con mayores tasas de transmisión a la progenie y disminución del mosaicismo de los genotipos de las células B en comparación con los ratones disponibles actualmente (Tomizuka, K., Shinohara, T., Yoshida, H., Uejima, H., Ohguma, A., Tanaka, S., Sato, K., Oshimura, M., e Ishida, I. Proc Natl Acad Sci (USA) 97:722-727 (2000)). Además, la introducción de las regiones variables humanas (VDJ/VJ) en los loci murinos genuinos in vivo mantendrá la regulación global adecuada de la accesibilidad a la cromatina que previamente se había demostrado importante para los acontecimientos de recombinación en el momento adecuado (Haines, B. B., y Brodeur, P. H. Eur J Immunol. 28:4228-4235 (1998)).
Aproximadamente 1/3 de los anticuerpos humanos contiene cadenas ligera lambda en comparación con los ratones en los que solo 1/20 de los anticuerpos murinos contienen cadenas ligera lambda. Por tanto, la sustitución de las secuencias V-J de la cadena ligera lambda murina con las secuencias -J de la cadena ligera lambda derivadas del locus humano servirá para aumentar el repertorio de los anticuerpos, así como concordar más estrechamente la respuesta inmunitaria humana genuina, de modo que se incrementa la probabilidad de obtener anticuerpos terapéuticamente útiles.
Un beneficio adicional de integrar las secuencias humanas en los loci de inmunoglobulina murina genuina es que no se introducen sitios de integración nuevos que podrían dar lugar a alteraciones mutagénicas en el sitio de inserción e impedir el aislamiento de los ratones homocigotos viables. Esto simplifica considerablemente la producción y mantenimiento de una colonia de ratón de cría.
Lo siguiente proporciona un nuevo procedimiento para producir anticuerpos con todas las ventajas adicionales. Un experto en la técnica reconocerá que el procedimiento general descrito en le presente documento se puede modificar para producir resultados equivalentes.
c. Materiales y procedimientos:
La sustitución precisa de la región variable en el locus de la cadena pesada de ratón (VDJ) con su homólogo humano se ejemplifica usando una combinación de recombinación homóloga o específica de sitio en el ejemplo siguiente, que usa un procedimiento de dos etapas. Un experto en la técnica reconocerá que la sustitución del locus de ratón con el locus humano homólogo u ortólogo se puede conseguir en una o más etapas. De acuerdo con esto, la presente divulgación contempla la sustitución del locus murino, todo o parte, con cada integración mediante recombinación homóloga.
Se aíslan clones de inserto grande (BAC) que abarcan la región VDJ completa del locus de la cadena pesada humana (Figura 4A). La secuencia de la totalidad de esta región está disponible en los siguientes archivos de GenBank (AB019437, AB019438, AB019439, AB019440, AB019441, X97051 y X54713). En este ejemplo se aíslan clones de insertos grandes (BAC) de los extremos de la región VDJ de ratón como fuente de brazos de homología (Figura 4B) que se usan para dirigir la integración mediante recombinación homóloga de las secuencias VDJ humanas en un procedimiento de dos etapas:
En la primera etapa, el LTVEC1 (Figura 4D) está construido mediante recombinación homóloga en el LTVEC1 de E. coli. El LTVEC1 contiene, en orden: Un brazo de homología grande de ratón derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-neomicina en este ejemplo); un sitio loxP; un inserto humano grande que abarca varios segmentos génicos V a través de toda la región DJ; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. El extremo 5’ del brazo cadena abajo y la colocación de los sitios loxP definen el extremo 3’ de la región que se va a reemplazar en el locus. Las células ES de ratón se transformarán mediante técnicas estándar, por ejemplo electroporación, con LTVEC1 linealizado. Dado que la introducción directa de LTVEC1 tiene como resultado una modificación del locus génico variable endógeno, las colinas resistentes a neomicina se pueden someter a detección selectiva para una diana correcta usando un ensayo de MDA. Estas células ES diana pueden dar lugar a ratones que producen anticuerpos con cadenas pesadas híbridas. No obstante, será preferible proceder con las posteriores etapas que eliminarán el resto de los segmentos variables del ratón.
En la segunda etapa, el LTVEC2 (Figura 4C) está construido mediante recombinación homóloga bacteriana en el LTVEC2 de E. coli, en orden: Un brazo de homología de ratón grande que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero que no contiene ningún segmento génico V de ratón; un inserto grande que contiene un número elevado de segmentos génicos V humanos distales; un sitio loxP mutante denominado lox511 [Hoess, R.H., Wierzbicki,A. y Abremski,K. Nucleic Acids Res. 14: 2287-2300 (1986)] en la orientación opuesta a la de los sitios loxP silvestre en LTVEC2 y LTVEC1 (este sitio no se recombinará con los sitios loxP silvestres, pero recombinarán fácilmente con otros sitios lox511); y un sitio loxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGKhigromicina R en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V, pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes. El extremo 3’ del brazo de homología cadena arriba y la colocación de los sitios loxP definen el extremo 5’ de la región que se va a reemplazar en el locus. Las células ES de ratón a las que se dirigió correctamente el LTVEC1 se transformarán después mediante técnicas estándar con LTVEC2 linealizado y colonias resistentes a higromicina se someterán a detección selectiva para apuntar correctamente usando un ensayo de MDA para las modificaciones en el locus génico variable endógeno. Las células ES dianas correctas resultantes de esta transformación se denominarán a continuación “células ES doble diana”. La posterior expresión transitoria de la CRE recombinasa en las células ES doble diana tendrá como resultado la deleción del resto de la región V de ratón. Como alternativa, las células doble diana se pueden inyectar en los blastocistos huésped para la producción de ratones quiméricos. La cría de los ratones quiméricos resultantes con ratones que expresan la CRE recombinasa al principio del desarrollo tendrá como resultado la deleción del resto de la región V de ratón en la progenie F1. Esta última alternativa aumenta la probabilidad de que el locus de la cadena pesada híbrida se pasará a través de la
línea germinal porque implica cultivar las células ES para menos generaciones.
La inclusión d elox511 en LTVEC1 permitirá la inserción de segmentos génicos V humanos adicionales en el locus híbrido. Un abordaje sería usar la recombinación homóloga bacteriana para flanquear un clon de ADN genómico grande que contiene muchos segmentos génicos V humanos adicionales con sitios lox511 y loxP. La cotransformación de dicho clon de ADN genómico grande modificado en las células ES doble diana con un plásmido que expresa transitoriamente CRE recombinasa tendrá como resultado la introducción de segmentos génicos V adicionales mediante intercambio de casete (Bethke, B. y Sauer, B. Nucleic Acids Res. 25:2828-2834 (1997)).
Un segundo abordaje a la incorporación de segmentos génicos V adicionales es apuntar de forma independiente a un clon de ADN genómico diana que contiene muchos segmentos génicos V humanos adicionales en el locus de ratón usando, por ejemplo, los mismos brazos de homología de ratón incluidos en LTVEC2. En este caso, los segmentos génicos V humanos adicionales estarían flanqueados por sitios lox y loxP y las células ES diana se usarían para crear un ratón. Los ratones derivados de las células ES doble diana y los ratones derivados de las células ES que contienen los segmentos génicos V adicionales se criarían con un tercer ratón que dirige la expresión de la CRE recombinasa durante la meiosis. La estrecha proximidad de los dos loci recombinantes durante el apareamiento meiótico tendría como resultado una frecuencia elevada de recombinación intercromosómica inducida por CRE como se ha visto en otros sistemas (Herault, Y., Rassoulzadegan, M., Cuzin, F. y Duboule, D. Nature Genetics 20: 381-384 (1998)).
Otro abordaje es similar al indicado anteriormente, pero, en lugar de introducir los sitios loxP y lox511 con LTVEC 1 y 2 humanos, se introducen en LTVEC de ratón y, después, se usa CRE para apuntar específicamente a los loci humanos mediante intercambio de casete a través de los sitios loxP y lox511 flanqueantes. Ka metodología indicada más adelante demuestra cómo la tecnología de LTVEC se puede usar para colocar el sitio flanqueante sitios de recombinación específicos en los extremos de cualquier gen endógeno de interés en cualquier animal no humano,
El LTVEC1 de ratón contiene un casete insertado mediante recombinación bacteriana cadena abajo, y adyacente, de la región J. Este casete contiene un sitio loxP y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a higromicina. El LTVEC1 contiene, en orden: un brazo de homología grande derivado de la región cadena arriba de la región DJ de ratón (pero dentro del locus génico variable) pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes; un casete que codifica un marcador seleccionable funcional en las células ES (resistentes a PGK-higromicina en este ejemplo); un sitio loxP; y un brazo de homología de ratón que contiene la región inmediatamente adyacente a, entre otros, los segmentos J de ratón. El extremo 5’ del brazo de homología cadena abajo y la colocación de los sitios loxP definen el extremo 3’ de la región que se va a reemplazar en el locus. La modificación del extremo 3’ del gen variable endógeno en el sitio de la inserción del casete permite la detección de LTVEC1 correctamente insertado en las células ES mediante un ensayo MDA. Los marcadores de resistencia farmacológica están flanqueados por sitios FRT. La introducción de sitios FRT permite la eliminación de cualquier marcador de resistencia farmacológica mediante FLPe en células Es o cruzando los ratones resultantes con un ratón que expresa FLPe en células que tienen potencial de línea germinal.
El LEVRC2 se construye mediante recombinación bacteriana para insertar un casete cadena arriba de la región V más distal de los loci. Este casete contiene un sitio lox511 y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a neomicina. El LTVEC2 contiene, en orden: un brazo grande de homología que contiene la región adyacente al segmento génico V de ratón más distal, pero no contiene ningún segmento génico V de ratón; un sitio lox511 en orientación opuesta a la de los sitios loxP de tipo silvestre en LTVEC2 y LTVEC1; un sitio loxP silvestre; un segundo marcador seleccionable (PGK-neomicinaR en este ejemplo); y un brazo de homología de ratón derivado de la región V (y, por tanto, dentro del locus génico variable), pero cuyos criterios de valoración absolutos no son importantes. El extremo 3’ del brazo de homología cadena arriba y la colocación de los sitios loxP definen el extremo 5’ de la región que se va a reemplazar en el locus. La modificación del extremo 5’ del gen variable endógeno en el sitio de la inserción del casete permite la detección de LTVEC2 correctamente insertado en las células ES mediante un ensayo MDA. Estos LTVEC se introducen juntos o secuencialmente en las células ES usando técnicas estándar y sometidos a detección selectiva para la diana correcta usando un ensayo MDA.
Un BAC humano que contiene la región VDJ/VJ, parte o toda, se modifica mediante recombinación bacteriana para insertar casetes que flanquean las secuencias humanas con los sitios lox511 y loxP. El casete cadena arriba se inserta justo cadena arriba de la región que sustituirá a la región variable de ratón y contiene, en orden, un sitio lox511 seguido de un marcador seleccionable de bacterias/mamífero, tal como resistencia a puromicina. El casete cadena abajo se inserta cadena abajo, y adyacente a, de la región J y contiene, en orden, un sitio loxP seguido de un marcador seleccionable de bacterias, tal como resistencia a espectinomicina.
Se pueden usar varios procedimientos para insertar una pieza grande de la región variable humana que se produce en un único BAC aislado de una biblioteca. Unos pocos de estos se describen a continuación.
Los sitios loxP y lox511 se pueden insertar por separado mediante recombinación bacteriana sobre BAC solapantes que se recombinan entre sí cuando se transforman en células ES. En este caso, el BAC cadena arriba tiene un casete recombinado justo cadena arriba de la región que sustituirá a la región variable de ratón, que tiene un sitio
lox511 seguido de un marcador seleccionable de bacterias/mamífero, tal como resistencia a neomicina. El BAC cadena abajo tiene un casete recombinado justo cadena abajo, y adyacente a, de la región J, que contiene un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, tal como resistencia a puromicina seguida de un sitio loxP. Si estos dos BAC no son solapantes, BAC adicionales que unen los BAC de cadena arriba y cadena abajo mediante homología solapante se incorporan en el esquema. Estos se modifican mediante recombinación bacteriana para contener marcadores seleccionables de bacteria/mamífero, tal como resistencia a puromicina, y las BAC cadena arriba y cadena abajo se modifican para contener casetes loxP y lox511 portadores de marcadores de resistencia a neomicina e higromicina.
Los BAC(s) humanos se co-transforman con CRE recombinasa en la línea de células Es que contiene los sitios de recombinación lox511 y loxP flanqueantes de la región variable. Si se usan BAC solapantes, la recombinación homóloga se produce entre ellos para crear un fragmento de ADN más grande y los sitios loxP y lox511 flanqueantes apuntan a este fragmento grande en el locus de ratón. Las células se seleccionan según la resistencia a puromicina y se someten a detección selectiva para la sustitución de la región variable de ratón. Como alternativa, las secuencias de ratón se pueden delecionar primero mediante los dos sitios loxP y, después, las secuencias humanas se pueden introducir mediante los sitios loxP y lox511 restantes.
Un cuarto BAC se puede insertar su el LTVEC1 también contiene un tercer sitio de recombinación específico de sitio, por ejemplo lox2272 (Anal Biochem 2001 Mar 15; 290(2):260-71) justo cadena abajo del gen de resistencia bacteriana/de mamífero, tal como resistencia a puromicina, creando un LTVEC con, en orden, el gen de resistencia a puromicina, un sitio loxP y un sitio lox2272, seguido de las secuencias humanas. Después, el BAC se integra en el locus de inmunoglobulina de ratón, los sitios lox511/lox2272 pueden servir como receptor en una segunda ronda de intercambio de casete, en el que el gen de resistencia a puromicina está sustituido por una porción cadena arriba adicional de la región variable del locus de la inmunoglobulina humana y un gen diferente de resistencia bacteriana/de mamífero flanqueado por los sitios lox511 y lox2272.
Otro procedimiento para insertar una tira más grande de la región variable humana es combinar las secuencias de múltiples BAC in vitro usando sitios de escisión de endonucleasas de restricción raras. Esto se consigue usando recombinación homóloga bacteriana para insertar un sitio loxP y un gen de resistencia a espectinomicina justo cadena abajo del último J del BAC más cadena abajo e insertar un segundo marcador seleccionable bacteriano y un sitio 1-Ceu1 raro en el extremo cadena arriba de las secuencias humanas del BAC cadena abajo. Un sitio lox511 y un marcador seleccionable bacteriano/de mamífero, por ejemplo resistencia a puromicina, se inserta en el extremo cadena arriba de un segundo BAC que contiene una región de la región variable humana cadena arriba de las secuencias en el primer BAC. Un sitio 1-Ceu1 se inserta en el extremo cadena abajo del segundo BAC. Tras la digestión de ambos BAC con 1-Ceu1 y Not1, que es única en la porción de vector de ambos BAC modificados, los dos BAC se unen y se selecciona un recombinante en bacterias para resistencia a puromicina y espectinomicina. El BAC más grande resultante contiene, en orden, un sitio lox511, secuencias humanas cadena arriba, un sitio 1-Ceu1, secuencias humanas cadena abajo, un sitio loxP y un gen de resistencia a espectinomicina. La región entre el sitio lox511 y el sitio loxP se inserta en el locus de la inmunoglobulina de ratón mediante intercambio de casete y selección de puromicina como se ha descrito anteriormente.
Un tercer procedimiento para insertar una tira más grande de la región variable humana es combinar las secuencias de múltiples BAC como se ha descrito anteriormente, pero usando recombinación homóloga bacteriana en lugar de digestión de restricción/unión. La misma selección para BAC recombinantes se aplica en bacterias, excepto que solo uno de los dos BAC se digeriría, sus extremos tras la digestión se diseñarían para ser homólogos del otro BAC "receptor" y el BAC receptor estaría en una cepa bacteriana modificada para ser permisiva para la recombinación homóloga bacteriana.
Las últimas etapas en la creación del ratón productor de anticuerpos monoclonales constantes de ratón variables humanos serán realizando las sustituciones equivalentes de la región variable sobre los loci de la cadena ligera lambda y kappa y criar los tres loci híbridos con homocigosidad juntos en el mismo ratón. El ratón transgénico resultante tendrá un genoma que comprende los loci génicos variables de la cadena ligera y pesada completamente humanas unidos operablemente a una región constante de ratón completamente endógena de un modo tal que el ratón produce un suero que contiene un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de ratón en respuesta a la estimulación antigénica. Dicho ratón se puede usar después como fuente de ADN que codifica las regiones variables de anticuerpos humanos. Usando tecnología recombinante estándar, el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo está unido operablemente al ADN que codifica las regiones constantes de las cadenas pesada y ligera humanas en células tal como las células CHO, que son capaces de expresar anticuerpos activos; Las células se cultivan en las condiciones adecuadas para expresar los anticuerpos completamente humanos, que después se recuperan. Las secuencias que codifican regiones variables se pueden aislar mediante, por ejemplo, amplificación por PCR o clonación de ADNc. Hibridomas hechos de ratones transgénicos que comprenden algunos o todos los loci de la región variable de inmunoglobulina humana (Kohler y Milstein, Eur. J. Immunol., 6:511-519 (1976) pueden ser usados como fuente de ADN que codifica las regiones variables humanas.
En resumen, el abordaje de crear LTVEC y usarlos directamente como vectores dirigidos combinado con detección
selectiva de MDA para acontecimientos de recombinación homóloga en células ES crea un procedimiento nuevo para loci modificados genéticamente mediante ingeniería que es rápido, económico y representa una mejora significativa sobre los tediosos y laboriosos procedimientos que se usaban anteriormente. Por tanto, abre la posibilidad de un rápido análisis genómico funcional in vivo a escala grande de esencialmente todos y cada uno de
5 los genes en el genoma de un organismo en una fracción del tiempo y de los costes requeridos por las metodologías anteriores.
Aunque la invención anterior se ha descrito con algún detalle a modo de ilustración y ejemplos, es fácilmente evidente para los expertos en la técnica que se pueden realizar ciertos cambios y modificaciones en las enseñanzas 10 de la invención.
Claims (7)
- REIVINDICACIONES1. Un ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regionesconstantes de ratón, en donde se reemplaza in situ un locus endógeno de región variable de cadena pesada de 5 dicho ratón en su totalidad o en parte con segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.
- 2. El ratón transgénico de la reivindicación 1, en donde los segmentos génicos V, D y J del locus de región variable de cadena pesada de dicho ratón se reemplazan in situ con segmentos génicos V, D y J de cadena pesada humana.10 3. El ratón transgénico de la reivindicación 1 o 2, en donde se reemplaza in situ un locus de región variable de cadena ligera kappa endógeno de dicho ratón en su totalidad o en parte con segmentos génicos V y J de cadena ligera kappa humana.
- 4. El ratón transgénico de la reivindicación 3, en donde los segmentos génicos V y J del locus de región variable de15 cadena ligera kappa de dicho ratón se reemplazan in situ con segmentos génicos V y J de cadena ligera kappa humana.
- 5. Un método para producir un anticuerpo humano, que comprende20 a) exponer a un ratón de acuerdo con la reivindicación 3 o 4 a estimulación antigénica, de tal forma que el ratón produce un anticuerpo contra el antígeno; b) aislar el ADN que codifica las regiones variables de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo; c) unir operablemente la secuencia de ADN que codifica las regiones variables de (b) a ADN que codifica regiones constantes de cadena pesada y ligera humana en una célula capaz de expresar anticuerpos activos;25 d) cultivar la célula en condiciones tales que expresen el anticuerpo humano; y e) recuperar el anticuerpo.
- 6. El método de la reivindicación 5, en donde la célula es una célula CHO.30 7. El método de la reivindicación 5 o 6, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla de una célula obtenida del ratón expuesto a estimulación antigénica.
- 8. El método de la reivindicación 5, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla de un hibridomacreado a partir del bazo de dicho ratón. 35
- 9. El método de la reivindicación 5, en donde dicho ADN que codifica la región variable se aísla mediante la PCR.Figura 1FIGURA 3AFIGURA 3BFIGURA 3CFIGURA 3D
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US784859 | 2001-02-16 | ||
US09/784,859 US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2001-02-16 | Methods of modifying eukaryotic cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2608362T3 true ES2608362T3 (es) | 2017-04-10 |
ES2608362T5 ES2608362T5 (es) | 2024-03-27 |
Family
ID=25133744
Family Applications (8)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES16171559T Expired - Lifetime ES2725712T5 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimiento de modificar células eucariotas |
ES14163642T Expired - Lifetime ES2827482T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Uso de un ratón para producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón como fuente de ADN que codifica una región variable humana de dicho anticuerpo |
ES19203913T Expired - Lifetime ES2869225T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón |
ES14172437.7T Expired - Lifetime ES2660749T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de roedor |
ES02709544T Expired - Lifetime ES2391391T5 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimientos de modificar células eucariotas |
ES16171561T Expired - Lifetime ES2744220T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Producción de anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor |
ES14172420T Expired - Lifetime ES2608362T5 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Roedor capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor |
ES10010741.6T Expired - Lifetime ES2556767T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimientos de modificar células eucariotas |
Family Applications Before (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES16171559T Expired - Lifetime ES2725712T5 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimiento de modificar células eucariotas |
ES14163642T Expired - Lifetime ES2827482T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Uso de un ratón para producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón como fuente de ADN que codifica una región variable humana de dicho anticuerpo |
ES19203913T Expired - Lifetime ES2869225T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Ratón transgénico que produce anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón |
ES14172437.7T Expired - Lifetime ES2660749T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de roedor |
ES02709544T Expired - Lifetime ES2391391T5 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimientos de modificar células eucariotas |
ES16171561T Expired - Lifetime ES2744220T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Producción de anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de roedor |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES10010741.6T Expired - Lifetime ES2556767T3 (es) | 2001-02-16 | 2002-02-15 | Procedimientos de modificar células eucariotas |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (21) | US6596541B2 (es) |
EP (9) | EP3626819B1 (es) |
JP (7) | JP4412900B2 (es) |
AU (1) | AU2002244023B2 (es) |
CA (1) | CA2438390C (es) |
CY (8) | CY1113964T1 (es) |
CZ (1) | CZ305619B6 (es) |
DE (6) | DE14172420T1 (es) |
DK (9) | DK2264163T3 (es) |
ES (8) | ES2725712T5 (es) |
HK (4) | HK1146298A1 (es) |
HU (1) | HU231221B1 (es) |
MX (2) | MXPA03007325A (es) |
NZ (1) | NZ527629A (es) |
PL (1) | PL217086B1 (es) |
PT (8) | PT3626819T (es) |
TR (2) | TR201907641T4 (es) |
WO (1) | WO2002066630A1 (es) |
ZA (1) | ZA200306275B (es) |
Families Citing this family (996)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6908744B1 (en) * | 2000-03-14 | 2005-06-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of stimulating cartilage formation |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US20050144655A1 (en) | 2000-10-31 | 2005-06-30 | Economides Aris N. | Methods of modifying eukaryotic cells |
GB0115256D0 (en) | 2001-06-21 | 2001-08-15 | Babraham Inst | Mouse light chain locus |
US7435871B2 (en) | 2001-11-30 | 2008-10-14 | Amgen Fremont Inc. | Transgenic animals bearing human Igλ light chain genes |
US20050158296A1 (en) | 2002-01-11 | 2005-07-21 | Starr Christopher M. | Use of p97 as an enzyme delivery system for the delivery of therapeutic lysosomal enzymes |
CA2473741C (en) * | 2002-01-18 | 2015-12-22 | Morphotek, Inc. | A method for generating engineered cells for locus specific gene regulation and analysis |
DK2314629T4 (da) | 2002-07-18 | 2023-02-06 | Merus Nv | Rekombinant produktion af blandinger af antistoffer |
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
CA2496233A1 (en) * | 2002-09-09 | 2004-03-18 | California Institute Of Technology | Methods and compositions for the generation of humanized mice |
AU2004242614B2 (en) | 2003-05-30 | 2011-09-22 | Merus N.V. | Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs |
US20100069614A1 (en) | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
GB2408980B (en) * | 2003-12-09 | 2006-06-07 | Nat Biolog Standards Board | Genetic reference materials |
PT2311874T (pt) | 2004-07-22 | 2017-08-25 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Moléculas de ligação |
AU2007235496B2 (en) | 2006-03-31 | 2013-11-21 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies |
MY159787A (en) * | 2006-06-02 | 2017-01-31 | Regeneron Pharma | High affinity antibodies to human il-6 receptor |
US8323815B2 (en) * | 2006-06-16 | 2012-12-04 | Porous Power Technology, LLC | Optimized microporous structure of electrochemical cells |
PL2769992T3 (pl) | 2006-10-02 | 2021-08-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Przeciwciała ludzkie o wysokim powinowactwie względem ludzkiego receptora IL-4 |
US7608693B2 (en) | 2006-10-02 | 2009-10-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human IL-4 receptor |
RU2448979C2 (ru) | 2006-12-14 | 2012-04-27 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека |
CA2681530C (en) | 2007-03-22 | 2017-03-28 | Biogen Idec Ma Inc. | Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154 |
DK2602323T3 (en) * | 2007-06-01 | 2018-04-16 | Open Monoclonal Tech Inc | Compositions and Methods for Inhibiting Endogenous Immunoglobin Genes and Producing Transgenic Human Idiotypic Antibodies |
WO2009023540A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human nerve growth factor |
EP3255144A1 (en) * | 2007-08-10 | 2017-12-13 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Recombineering construct for preparing transgenic mice capable of producing human immunoglobulin |
GB0718029D0 (en) * | 2007-09-14 | 2007-10-24 | Iti Scotland Ltd | Two step cluster deletion and humanisation |
KR102467302B1 (ko) | 2007-09-26 | 2022-11-14 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 항체 정상영역 개변체 |
KR20100103810A (ko) | 2007-12-10 | 2010-09-28 | 알리바 바이오파마수티컬스, 아이엔씨. | 동종 재조합에 의한 표적화된 영역의 순차적인 치환 방법 |
US20090208832A1 (en) * | 2008-02-17 | 2009-08-20 | Porous Power Technologies, Llc | Lamination Configurations for Battery Applications Using PVDF Highly Porous Film |
US20090227163A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-10 | Bernard Perry | Protective Apparel with Porous Material Layer |
US20090223155A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-10 | Bernard Perry | Building Construction Applications for Porous Material |
US20090222995A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-10 | Bernard Perry | Bedding Applications for Porous Material |
EP2098536A1 (en) | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 4-Antibody AG | Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins |
US20090226683A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-10 | Bernard Perry | Porous Material Uses in Furniture |
CN112481367A (zh) * | 2008-03-31 | 2021-03-12 | 健泰科生物技术公司 | 用于治疗和诊断哮喘的组合物和方法 |
US20110123527A1 (en) * | 2008-05-23 | 2011-05-26 | Hiroaki Shizuya | Method of generating single vl domain antibodies in transgenic animals |
US20100122358A1 (en) * | 2008-06-06 | 2010-05-13 | Crescendo Biologics Limited | H-Chain-only antibodies |
US20090328240A1 (en) * | 2008-06-24 | 2009-12-31 | Sing George L | Genetically modified mice as predictors of immune response |
KR102261586B1 (ko) * | 2008-06-27 | 2021-06-08 | 메뤼스 엔.페. | 항체 생산 비-인간 포유동물 |
AU2014203150C1 (en) * | 2008-06-27 | 2018-10-18 | Merus N.V. | Antibody producing non-human mammals |
KR102362774B1 (ko) | 2008-09-30 | 2022-02-15 | 아블렉시스, 엘엘씨 | 키메라 항체의 제조를 위한 인간 이외의 포유동물 |
US20130064834A1 (en) | 2008-12-15 | 2013-03-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9 |
JO3672B1 (ar) | 2008-12-15 | 2020-08-27 | Regeneron Pharma | أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9). |
MX2011007660A (es) | 2008-12-18 | 2011-08-17 | Kingdon Craig R | Animales transgenicos no humanos que expresan anticuerpos humanizados y usos de los mismos. |
US20100178567A1 (en) * | 2008-12-24 | 2010-07-15 | Porous Power Technologies, Llc | Mat Forming Spacers in Microporous Membrane Matrix |
GB0905023D0 (en) | 2009-03-24 | 2009-05-06 | Univ Erasmus Medical Ct | Binding molecules |
RU2011142974A (ru) | 2009-03-25 | 2013-04-27 | Дженентек, Инк. | НОВЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ α5β1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ |
CN102804297A (zh) * | 2009-05-20 | 2012-11-28 | 多孔渗透电力技术公司 | 用于微孔膜的处理和胶粘剂 |
TWI513465B (zh) | 2009-06-25 | 2015-12-21 | Regeneron Pharma | 以dll4拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法 |
EP2448966B1 (en) | 2009-07-03 | 2018-11-14 | Avipep Pty Ltd | Immuno-conjugates and methods for producing them |
DK3622813T3 (da) | 2009-07-08 | 2021-05-03 | Kymab Ltd | Dyremodeller og terapeutiske molekyler |
US9445581B2 (en) | 2012-03-28 | 2016-09-20 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
US20120204278A1 (en) * | 2009-07-08 | 2012-08-09 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
ES2908587T3 (es) * | 2009-10-06 | 2022-05-03 | Regeneron Pharma | Ratones modificados genéticamente e injerto |
DK2954779T3 (da) * | 2009-12-10 | 2019-05-13 | Regeneron Pharma | Mus, der frembringer tungkædeantistoffer |
WO2011072266A2 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Atyr Pharma, Inc. | Aminoacyl trna synthetases for modulating hematopoiesis |
RU2549695C2 (ru) | 2009-12-21 | 2015-04-27 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ FCγR МЫШИ |
US9315581B2 (en) | 2009-12-23 | 2016-04-19 | A Vipep Pty Limited | Immuno-conjugates and methods for producing them |
US10143186B2 (en) | 2010-02-08 | 2018-12-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common light chain mouse |
US20130045492A1 (en) | 2010-02-08 | 2013-02-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain |
US9796788B2 (en) | 2010-02-08 | 2017-10-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire |
US20130185821A1 (en) * | 2010-02-08 | 2013-07-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common Light Chain Mouse |
US20120021409A1 (en) | 2010-02-08 | 2012-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common Light Chain Mouse |
MX2012008958A (es) | 2010-02-18 | 2012-08-23 | Genentech Inc | Antagonista de neurogulina y usos de los mismos para el tratamiento contra el cancer. |
WO2011101328A2 (en) | 2010-02-18 | 2011-08-25 | Roche Glycart Ag | Treatment with a humanized igg class anti egfr antibody and an antibody against insulin like growth factor 1 receptor |
US8846041B2 (en) | 2010-03-24 | 2014-09-30 | Genentech, Inc. | Anti-LRP6 antibodies |
KR20210010942A (ko) | 2010-03-31 | 2021-01-28 | 아블렉시스, 엘엘씨 | 키메라 항체의 제조를 위한 비-인간 동물의 유전적 조작 |
AU2011248625B2 (en) | 2010-04-26 | 2017-01-05 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-tRNA synthetase |
CA2797362C (en) | 2010-04-27 | 2020-12-08 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl trna synthetases |
CA2797271C (en) | 2010-04-28 | 2021-05-25 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases |
AU2011248457B2 (en) | 2010-04-29 | 2017-02-16 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl tRNA synthetases |
AU2011248490B2 (en) | 2010-04-29 | 2016-11-10 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases |
CA2797277C (en) | 2010-05-03 | 2021-02-23 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases |
EP2566496B1 (en) | 2010-05-03 | 2018-02-28 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of methionyl-trna synthetases |
US9034321B2 (en) | 2010-05-03 | 2015-05-19 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases |
AU2011248101B2 (en) | 2010-05-04 | 2016-10-20 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-tRNA synthetase complex |
CA2799197C (en) | 2010-05-14 | 2019-10-29 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases |
JP6046607B2 (ja) | 2010-05-27 | 2016-12-21 | エータイアー ファーマ, インコーポレイテッド | グルタミニルtRNA合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見 |
AU2011265306C1 (en) | 2010-06-11 | 2015-01-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Production of fertile XY female animals from XY ES cells |
US9242014B2 (en) | 2010-06-15 | 2016-01-26 | The Regents Of The University Of California | Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) single chain Fv antibody fragment conjugates and methods of use thereof |
CN105695415A (zh) * | 2010-06-17 | 2016-06-22 | 科马布有限公司 | 动物模型及治疗分子 |
JP5940061B2 (ja) | 2010-06-18 | 2016-06-29 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗axl抗体及び使用方法 |
KR20220150430A (ko) | 2010-06-22 | 2022-11-10 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 사람 람다 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 경쇄를 발현하는 마우스 |
CA2803792A1 (en) | 2010-07-09 | 2012-01-12 | Genentech, Inc. | Anti-neuropilin antibodies and methods of use |
AU2011289831C1 (en) | 2010-07-12 | 2017-06-15 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-tRNA synthetases |
WO2012009705A1 (en) | 2010-07-15 | 2012-01-19 | Zyngenia, Inc. | Ang-2 binding complexes and uses thereof |
WO2012010582A1 (en) | 2010-07-21 | 2012-01-26 | Roche Glycart Ag | Anti-cxcr5 antibodies and methods of use |
DK2597945T3 (da) | 2010-07-26 | 2020-09-21 | Trianni Inc | Transgene dyr og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
US10662256B2 (en) | 2010-07-26 | 2020-05-26 | Trianni, Inc. | Transgenic mammals and methods of use thereof |
US10793829B2 (en) | 2010-07-26 | 2020-10-06 | Trianni, Inc. | Transgenic mammals and methods of use thereof |
NZ707327A (en) | 2010-08-02 | 2017-01-27 | Regeneron Pharma | Mice that make binding proteins comprising vl domains |
BR112013002535A2 (pt) | 2010-08-03 | 2019-09-24 | Hoffmann La Roche | biomarcadores de leucemia linfocítica crônica (cll) |
CA2805564A1 (en) | 2010-08-05 | 2012-02-09 | Stefan Jenewein | Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein |
CA2806640A1 (en) | 2010-08-13 | 2012-02-16 | Roche Glycart Ag | Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use |
EP2603525A1 (en) | 2010-08-13 | 2013-06-19 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies to il-1beta and il-18, for treatment of disease |
NO2603530T3 (es) | 2010-08-13 | 2018-04-07 | ||
EP2608801B1 (en) | 2010-08-25 | 2019-08-21 | aTyr Pharma, Inc. | INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES |
RU2013114360A (ru) | 2010-08-31 | 2014-10-10 | Дженентек, Инк. | Биомаркеры и способы лечения |
CA2816763A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | Transbio Ltd | Markers of endothelial progenitor cells and uses thereof |
TW201300417A (zh) | 2010-11-10 | 2013-01-01 | Genentech Inc | 用於神經疾病免疫療法之方法及組合物 |
US8771696B2 (en) | 2010-11-23 | 2014-07-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of reducing the severity of stress hyperglycemia with human antibodies to the glucagon receptor |
JO3756B1 (ar) | 2010-11-23 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون |
KR101615474B1 (ko) | 2010-12-16 | 2016-04-25 | 제넨테크, 인크. | Th2 억제에 관한 진단 및 치료 |
MA34881B1 (fr) | 2010-12-20 | 2014-02-01 | Genentech Inc | Anticorps et immunoconjugués anti-mésothéline |
MA34818B1 (fr) | 2010-12-22 | 2014-01-02 | Genentech Inc | Anticorps anti-pcsk9 et procédés d'utilisation |
WO2012093068A1 (en) | 2011-01-03 | 2012-07-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A pharmaceutical composition of a complex of an anti-dig antibody and digoxigenin that is conjugated to a peptide |
DK2663579T3 (en) | 2011-01-14 | 2017-07-31 | Univ California | THERAPEUTIC ANTIBODIES AGAINST ROR-1 PROTEIN AND PROCEDURES FOR USE THEREOF |
EP2650016A1 (en) | 2011-01-28 | 2013-10-16 | Sanofi | Human antibodies to PSCK9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens (11565) |
BR112013018740A2 (pt) | 2011-01-28 | 2019-01-08 | Sanofi Sa | anticorpos humanos para pcsk9 para uso em métodos de tratamento de grupos específicos de indivíduos |
SI2673373T1 (sl) | 2011-02-08 | 2019-03-29 | Medimmune, Llc | Protitelesa, ki specifično vežejo alfa toksin Staphylococcus aureus in postopki uporabe |
DK3375284T3 (da) | 2011-02-15 | 2023-06-12 | Univ Yale | Humaniserede M-CSF-mus og anvendelser deraf |
DE12192727T1 (de) | 2011-02-25 | 2013-07-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | ADAM6 Mäuse |
EP2686016B1 (en) | 2011-03-14 | 2019-05-01 | Cellmid Limited | Antibody recognizing n-domain of midkine |
ES2692268T3 (es) | 2011-03-29 | 2018-12-03 | Roche Glycart Ag | Variantes de Fc de anticuerpo |
TW201249867A (en) | 2011-04-01 | 2012-12-16 | Astellas Pharma Inc | Novel anti-human il-23 receptor antibody |
CN103596983B (zh) | 2011-04-07 | 2016-10-26 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗fgfr4抗体及使用方法 |
CA2833404A1 (en) | 2011-04-21 | 2012-10-26 | Garvan Institute Of Medical Research | Modified variable domain molecules and methods for producing and using them b |
AR088782A1 (es) | 2011-04-29 | 2014-07-10 | Sanofi Sa | Sistemas de ensayo y metodos para identificar y caracterizar farmacos hipolipemiantes |
JP5987053B2 (ja) | 2011-05-12 | 2016-09-06 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングlc−ms/ms法 |
PT2631654E (pt) | 2011-05-12 | 2015-08-21 | Regeneron Pharma | Ensaio de libertação de neuropéptidos para canais de sódio |
BR112013026266A2 (pt) | 2011-05-16 | 2020-11-10 | Genentech, Inc | método de tratamento, anticorpos isolado e anti-fgfr1, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, formulação farmacêutica, uso do anticorpo e método de tratamento de diabetes em um indivíduo |
CN106432506A (zh) | 2011-05-24 | 2017-02-22 | 泽恩格尼亚股份有限公司 | 多价和单价多特异性复合物及其用途 |
CA2838246C (en) | 2011-06-13 | 2018-07-10 | Csl Limited | Antibodies against g-csfr and uses thereof |
BR112013032235A2 (pt) | 2011-06-15 | 2016-11-22 | Hoffmann La Roche | anticorpos do receptor de epo anti-humano e métodos de uso |
SG194932A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-12-30 | Genentech Inc | Anti-c-met antibody formulations |
HUE029855T2 (en) | 2011-07-05 | 2017-04-28 | Bioasis Technologies Inc | p97 antibody conjugates |
US10040826B2 (en) | 2011-07-05 | 2018-08-07 | Duke University | Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) N-terminal deleted GP120 immunogens |
WO2013015821A1 (en) | 2011-07-22 | 2013-01-31 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the b12-transcobalamin receptor |
US9120858B2 (en) | 2011-07-22 | 2015-09-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the B12-transcobalamin receptor |
AR087305A1 (es) | 2011-07-28 | 2014-03-12 | Regeneron Pharma | Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit |
PT2739649T (pt) | 2011-08-05 | 2018-01-03 | Bioasis Technologies Inc | Fragmentos de p97 com atividade de transferência |
PT3572517T (pt) | 2011-08-05 | 2021-06-23 | Regeneron Pharma | Murganhos da cadeia leve universal humanizada |
JP5376095B2 (ja) | 2011-08-11 | 2013-12-25 | アステラス製薬株式会社 | 新規抗ヒトngf抗体 |
MX2014001766A (es) | 2011-08-17 | 2014-05-01 | Genentech Inc | Anticuerpos de neuregulina y sus usos. |
CN103890008A (zh) | 2011-08-17 | 2014-06-25 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 在顽固性肿瘤中抑制血管发生 |
US9017670B2 (en) | 2011-08-19 | 2015-04-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-Tie2 antibodies and uses thereof |
WO2013026832A1 (en) | 2011-08-23 | 2013-02-28 | Roche Glycart Ag | Anti-mcsp antibodies |
RU2617970C2 (ru) | 2011-08-23 | 2017-04-28 | Рош Гликарт Аг | Антитела, не содержащие fc-фрагмента, включающие два fab-фрагмента, и способы их применения |
JP6159724B2 (ja) | 2011-08-23 | 2017-07-05 | ロシュ グリクアート アーゲー | T細胞活性化抗原に対して特異的な二重特異性抗体及び腫瘍抗原および使用方法 |
RU2014109395A (ru) | 2011-09-15 | 2015-10-20 | Дженентек, Инк. | Способы стимуляции дифференциации |
CN103930444B (zh) | 2011-09-16 | 2020-08-04 | 瑞泽恩制药公司 | 用前蛋白转化酶枯草溶菌素-9(PCSK9)抑制剂降低脂蛋白(a)水平的方法 |
WO2013041845A2 (en) * | 2011-09-19 | 2013-03-28 | Kymab Limited | Animals, repertoires & methods |
ES2612935T3 (es) | 2011-09-19 | 2017-05-19 | Kymab Limited | Anticuerpos, dominios variables y cadenas adaptados para su uso en seres humanos |
BR112014006419A2 (pt) | 2011-09-19 | 2018-08-07 | Genentech Inc | métodos para tratar um paciente com câncer, kit e artigo |
CA2791109C (en) | 2011-09-26 | 2021-02-16 | Merus B.V. | Generation of binding molecules |
EP2761008A1 (en) | 2011-09-26 | 2014-08-06 | Kymab Limited | Chimaeric surrogate light chains (slc) comprising human vpreb |
EP2763699A4 (en) | 2011-10-03 | 2015-05-20 | Univ Duke | VACCINE |
MX2014004074A (es) | 2011-10-05 | 2014-06-05 | Genentech Inc | Metodo de tratamiento de condiciones del higado utilizando antagonistas de notch2. |
EP3461839A1 (en) | 2011-10-14 | 2019-04-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-htra1 antibodies and methods of use |
JP6254087B2 (ja) | 2011-10-15 | 2017-12-27 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 癌を治療するためのscd1アンタゴニスト |
PL2627773T3 (pl) | 2011-10-17 | 2017-11-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Ograniczony łańcuch ciężki immonoglobuliny pochodzącej od myszy |
WO2013059531A1 (en) | 2011-10-20 | 2013-04-25 | Genentech, Inc. | Anti-gcgr antibodies and uses thereof |
RU2661106C2 (ru) | 2011-10-28 | 2018-07-11 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Генетически модифицированные в отношении т-клеточного рецептора мыши |
AU2012327878A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-05-29 | Patrys Limited | PAT-LM1 epitopes and methods for using same |
US9591835B2 (en) | 2011-10-28 | 2017-03-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified major histocompatibility complex animals |
SI2770821T1 (en) | 2011-10-28 | 2018-01-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified major histocompatibility complex of mice |
HUE048511T2 (hu) | 2011-10-28 | 2020-07-28 | Regeneron Pharma | Kiméra fõ hisztokompatibilitási komplex (MHC) II molekulákat expresszáló, genetikailag módosított egerek |
US20140283153A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-09-18 | Trianni, Inc. | Transgenic animals and methods of use |
CN104039340B (zh) | 2011-10-28 | 2017-04-05 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 治疗黑素瘤的方法及治疗剂组合 |
US9043996B2 (en) | 2011-10-28 | 2015-06-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified major histocompatibility complex animals |
GB2496375A (en) * | 2011-10-28 | 2013-05-15 | Kymab Ltd | A non-human assay vertebrate comprising human antibody loci and human epitope knock-in, and uses thereof |
AU2012340826A1 (en) | 2011-11-21 | 2014-05-29 | Genentech, Inc. | Purification of anti-c-met antibodies |
GB201122047D0 (en) | 2011-12-21 | 2012-02-01 | Kymab Ltd | Transgenic animals |
US9253965B2 (en) * | 2012-03-28 | 2016-02-09 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
US20140335084A1 (en) | 2011-12-06 | 2014-11-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibody formulation |
SI2793567T1 (sl) | 2011-12-20 | 2019-05-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Humanizirane lahkoverižne miši |
MX2014007262A (es) | 2011-12-22 | 2014-08-01 | Hoffmann La Roche | Sistema de exhibicion de anticuerpos de longitud completa para celulas eucarioticas y su uso. |
ES2791758T3 (es) | 2011-12-22 | 2020-11-05 | Hoffmann La Roche | Organización de vectores de expresión, procedimientos de generación de células de producción novedosos y su uso para la producción recombinante de polipéptidos |
MX355624B (es) | 2011-12-22 | 2018-04-25 | Hoffmann La Roche | Combinaciones de elementos de vector de expresion, metodos novedosos de generacion de celulas de produccion y su uso para la produccion recombinante de polipeptidos. |
MX345019B (es) * | 2011-12-22 | 2017-01-11 | Astellas Pharma Inc | Nuevo anticuerpo ctgf antihumano. |
AR089434A1 (es) | 2011-12-23 | 2014-08-20 | Genentech Inc | Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas |
CN104066449B (zh) | 2012-01-18 | 2018-04-27 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗lrp5抗体及使用方法 |
EP2804630B1 (en) | 2012-01-18 | 2017-10-18 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of using fgf19 modulators |
ES2753774T3 (es) * | 2012-02-01 | 2020-04-14 | Regeneron Pharma | Ratones humanizados que expresan cadenas pesadas que contienen dominios VL |
US20130209473A1 (en) | 2012-02-11 | 2013-08-15 | Genentech, Inc. | R-spondin translocations and methods using the same |
WO2013120929A1 (en) | 2012-02-15 | 2013-08-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fc-receptor based affinity chromatography |
NZ628126A (en) | 2012-02-16 | 2016-10-28 | Atyr Pharma Inc | Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases |
US9371391B2 (en) | 2012-02-28 | 2016-06-21 | Astellas Pharma Inc. | Anti-human IL-23 receptor antibody and encoding polynucleotides |
SG11201405087PA (en) | 2012-03-02 | 2014-09-26 | Regeneron Pharma | Human antibodies to clostridium difficile toxins |
MX353278B (es) | 2012-03-06 | 2018-01-05 | Regeneron Pharma | Raton con cadena ligera comun. |
EA201400996A1 (ru) | 2012-03-13 | 2015-03-31 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Комбинированная терапия для лечения рака яичника |
RS57414B1 (sr) | 2012-03-16 | 2018-09-28 | Regeneron Pharma | Antitela sa lakim lancem konstruisanim sa histidinom i genetički modifikovani glodari za generisanje istih |
US20140013456A1 (en) | 2012-03-16 | 2014-01-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same |
BR112014022855A2 (pt) | 2012-03-16 | 2017-07-18 | Regeneron Pharma | animal não humano geneticamente modificado, mamífero geneticamente modificado, e, método para fabricar um animal não humano |
CN104302170B (zh) | 2012-03-16 | 2016-09-28 | 瑞泽恩制药公司 | 生产具有ph依赖性结合特性的抗原结合蛋白的小鼠 |
CN104220457A (zh) | 2012-03-27 | 2014-12-17 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 涉及her3抑制剂的诊断和治疗 |
GB2502127A (en) * | 2012-05-17 | 2013-11-20 | Kymab Ltd | Multivalent antibodies and in vivo methods for their production |
WO2013144567A1 (en) | 2012-03-28 | 2013-10-03 | Kymab Limited | Transgenic non-human vertebrate for the expression of class - switched, fully human, antibodies |
US10251377B2 (en) | 2012-03-28 | 2019-04-09 | Kymab Limited | Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies |
AR090549A1 (es) | 2012-03-30 | 2014-11-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados |
TWI619729B (zh) | 2012-04-02 | 2018-04-01 | 再生元醫藥公司 | 抗-hla-b*27抗體及其用途 |
CN114163530A (zh) | 2012-04-20 | 2022-03-11 | 美勒斯公司 | 用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段 |
PL2847335T3 (pl) * | 2012-04-25 | 2019-01-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Celowanie dużymi wektorami do celowania wspomagane nukleazą |
RU2014148162A (ru) | 2012-05-01 | 2016-06-20 | Дженентек, Инк. | Анти-pmel17 антитела и их иммуноконъюгаты |
JO3820B1 (ar) | 2012-05-03 | 2021-01-31 | Regeneron Pharma | أجسام مضادة بشرية لـ fel d1وطرق لاستخدامها |
WO2013170191A1 (en) | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Genentech, Inc. | Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide |
KR101843614B1 (ko) | 2012-05-23 | 2018-03-29 | 제넨테크, 인크. | 치료제의 선택 방법 |
AR092325A1 (es) | 2012-05-31 | 2015-04-15 | Regeneron Pharma | Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit |
CN104582476B (zh) * | 2012-06-05 | 2017-03-08 | 瑞泽恩制药公司 | 使用共同轻链制备完全人双特异性抗体的方法 |
ME03551B (me) | 2012-06-12 | 2020-07-20 | Regeneron Pharma | Humanizovane nehumane živoтinje sa ograničenim lokusima imunoglobulinskog тeškog lanca |
RU2015101113A (ru) | 2012-06-15 | 2016-08-10 | Дженентек, Инк. | Антитела против pcsk9, составы, дозы и способы применения |
CN107082810B (zh) | 2012-07-04 | 2020-12-25 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗茶碱抗体及使用方法 |
JP6247287B2 (ja) | 2012-07-04 | 2017-12-13 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 抗ビオチン抗体および使用方法 |
KR102090849B1 (ko) | 2012-07-04 | 2020-03-19 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 공유 결합된 항원-항체 접합체 |
CA2877009C (en) | 2012-07-05 | 2023-10-03 | Devin TESAR | Expression and secretion system |
JP6297550B2 (ja) | 2012-07-09 | 2018-03-20 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗cd79b抗体を含む免疫複合体 |
AR091700A1 (es) | 2012-07-09 | 2015-02-25 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b |
BR112015000439A2 (pt) | 2012-07-09 | 2017-12-19 | Genentech Inc | imunoconjugado , formulação farmacêutica e métodos de tratamento de um indivíduo e de inibição da proliferação |
EP2869849A1 (en) | 2012-07-09 | 2015-05-13 | Genentech, Inc. | Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies |
EP3210627B1 (en) | 2012-07-12 | 2022-12-21 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd | Conjugates of cell binding molecules with cytotoxic agents |
EP3495387B1 (en) | 2012-07-13 | 2021-09-01 | Roche Glycart AG | Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases |
WO2014018375A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-30 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods |
CA2880162C (en) | 2012-07-31 | 2023-04-04 | Bioasis Technologies, Inc. | Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof |
AU2013299724A1 (en) | 2012-08-07 | 2015-02-26 | Genentech, Inc. | Combination therapy for the treatment of glioblastoma |
PT3470432T (pt) | 2012-08-21 | 2021-12-14 | Regeneron Pharma | Métodos para tratamento ou prevenção da asma por meio de administração de um antagonista de il-4r |
PL2887959T3 (pl) | 2012-08-23 | 2019-04-30 | Agensys Inc | Koniugaty leków i przeciwciał (adc), które wiążą białka 158p1d7 |
EP3838923B1 (en) | 2012-08-24 | 2024-05-01 | The Regents of The University of California | Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis |
EP2703008A1 (en) | 2012-08-31 | 2014-03-05 | Sanofi | Human antibodies to PCSK9 for use in methods of treating particular groups of subjects |
EP2703009A1 (en) | 2012-08-31 | 2014-03-05 | Sanofi | Combination treatments involving antibodies to human PCSK9 |
EP2706070A1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-12 | Sanofi | Combination treatments involving antibodies to human PCSK9 |
EP4193834A1 (en) | 2012-09-07 | 2023-06-14 | Yale University | Genetically modified non-human animals and methods of use thereof |
NZ731864A (en) | 2012-09-07 | 2022-07-01 | Regeneron Pharma | Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist |
CA2879768A1 (en) | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Roche Glycart Ag | Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use |
CA2887133C (en) * | 2012-10-12 | 2022-05-03 | Glycovaxyn Ag | Methods of host cell modification |
WO2014071358A2 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Foundation Medicine, Inc. | Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof |
EP3556206B1 (en) | 2012-11-05 | 2021-06-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified non-human animals and methods of use thereof |
EP2917360B1 (en) | 2012-11-06 | 2020-01-08 | Medlmmune, LLC | Antibodies to s. aureus surface determinants |
CN104755500B (zh) | 2012-11-08 | 2020-10-02 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 结合HER3 β-发夹的HER3抗原结合蛋白 |
CN104968367B (zh) | 2012-11-13 | 2018-04-13 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗血凝素抗体和使用方法 |
TW201438736A (zh) | 2012-11-14 | 2014-10-16 | Regeneron Pharma | 以dll4拮抗劑治療卵巢癌之方法 |
ES2701076T3 (es) | 2012-11-24 | 2019-02-20 | Hangzhou Dac Biotech Co Ltd | Enlazadores hidrofílicos y sus usos para la conjugación de fármacos a las moléculas que se unen a las células |
PT2931030T (pt) | 2012-12-14 | 2020-08-03 | Open Monoclonal Tech Inc | Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem |
WO2014107739A1 (en) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Antibodies against pcsk9 |
CA2898326C (en) | 2013-01-18 | 2022-05-17 | Foundation Medicine, Inc. | Methods of treating cholangiocarcinoma |
WO2014116749A1 (en) | 2013-01-23 | 2014-07-31 | Genentech, Inc. | Anti-hcv antibodies and methods of using thereof |
EP2953452A1 (en) | 2013-02-06 | 2015-12-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | B cell lineage based immunogen design with humanized animals |
CN117843785A (zh) | 2013-02-07 | 2024-04-09 | Csl有限公司 | Il-11r结合蛋白及其应用 |
HUE045478T2 (hu) | 2013-02-20 | 2019-12-30 | Regeneron Pharma | Humanizált T-sejt koreceptorokat expresszáló egerek |
EP2958990B1 (en) | 2013-02-20 | 2019-10-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetic modification of rats |
WO2014130690A1 (en) | 2013-02-20 | 2014-08-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals with modified immunoglobulin heavy chain sequences |
JP2016509045A (ja) | 2013-02-22 | 2016-03-24 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | がんを治療し、薬剤耐性を防止する方法 |
US20150342163A1 (en) | 2013-02-22 | 2015-12-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified major histocompatibility complex mice |
JP6444321B2 (ja) * | 2013-02-22 | 2018-12-26 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドRegeneron Pharmaceuticals, Inc. | ヒト化主要組織適合性遺伝子複合体を発現するマウス |
RU2015140921A (ru) | 2013-02-26 | 2017-04-03 | Роше Гликарт Аг | Антитела к mcsp |
EP2964260A2 (en) | 2013-03-06 | 2016-01-13 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of treating and preventing cancer drug resistance |
CN108464278B (zh) * | 2013-03-11 | 2021-05-04 | 瑞泽恩制药公司 | 表达嵌合的主要组织相容性复合物(mhc)ii类分子的转基因小鼠 |
WO2014160179A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common light chain mouse |
PL3501272T3 (pl) | 2013-03-13 | 2023-07-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mysz eksprymująca ograniczony repertuar lekkiego łańcucha immunoglobuliny |
WO2014160438A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Bioasis Technologies Inc. | Fragments of p97 and uses thereof |
CA2905070A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance |
WO2014159835A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Genentech, Inc. | Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates |
MX369574B (es) | 2013-03-14 | 2019-11-13 | Regeneron Pharma | Anticuerpos humanos contra grem1. |
JP2016515132A (ja) | 2013-03-14 | 2016-05-26 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | Mek阻害剤化合物のher3/egfr阻害剤化合物との組み合わせ及び使用方法 |
US9562099B2 (en) | 2013-03-14 | 2017-02-07 | Genentech, Inc. | Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates |
ES2829376T3 (es) | 2013-03-14 | 2021-05-31 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Mamífero no humano transgénico para la producción de anticuerpos |
US10993420B2 (en) | 2013-03-15 | 2021-05-04 | Erasmus University Medical Center | Production of heavy chain only antibodies in transgenic mammals |
EP2970476A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | F. Hoffmann-La Roche AG | Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers |
EP4356960A2 (en) | 2013-03-15 | 2024-04-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions |
EP2968541A4 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-08 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
MX2015011348A (es) | 2013-03-15 | 2016-01-15 | Regeneron Pharma | Moleculas biologicamente activas, conjugados de las mismas, y usos terapeuticos. |
JP2016520528A (ja) | 2013-03-15 | 2016-07-14 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 癌の治療及び抗癌剤耐性の防止方法 |
WO2014150877A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Ac Immune S.A. | Anti-tau antibodies and methods of use |
US20140328849A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-11-06 | Genentech, Inc. | Anti-crth2 antibodies and methods of use |
EP2968508B1 (en) * | 2013-03-15 | 2022-04-27 | Sanofi Pasteur Biologics, LLC | Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same |
US9788534B2 (en) | 2013-03-18 | 2017-10-17 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
HUE040575T2 (hu) | 2013-04-16 | 2019-03-28 | Regeneron Pharma | A patkány genom célzott módosítása |
WO2014177460A1 (en) | 2013-04-29 | 2014-11-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use |
SG10201810481UA (en) | 2013-04-29 | 2018-12-28 | Hoffmann La Roche | Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases |
EP3878866A1 (en) | 2013-04-29 | 2021-09-15 | F. Hoffmann-La Roche AG | Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use |
US9783618B2 (en) | 2013-05-01 | 2017-10-10 | Kymab Limited | Manipulation of immunoglobulin gene diversity and multi-antibody therapeutics |
US11707056B2 (en) * | 2013-05-02 | 2023-07-25 | Kymab Limited | Animals, repertoires and methods |
US9783593B2 (en) | 2013-05-02 | 2017-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, variable domains and chains tailored for human use |
US20140331339A1 (en) * | 2013-05-03 | 2014-11-06 | Kymab Limited | Transgenic Non-Human Assay Vertebrates, Assays and Kits |
SG11201509566RA (en) | 2013-05-20 | 2015-12-30 | Genentech Inc | Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use |
US10111953B2 (en) | 2013-05-30 | 2018-10-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9) |
TWI682780B (zh) | 2013-05-30 | 2020-01-21 | 美商再生元醫藥公司 | 醫藥組成物用於製造治療與pcsk9功能獲得性突變有關之體染色體顯性高膽固醇血症的藥物之用途 |
EP2810955A1 (en) | 2013-06-07 | 2014-12-10 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
EP2862877A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-22 | Sanofi | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
US10494442B2 (en) | 2013-06-07 | 2019-12-03 | Sanofi Biotechnology | Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9 |
US10059771B2 (en) | 2013-06-21 | 2018-08-28 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating nasal polyposis by administering an IL-4R antagonist |
AU2014296219A1 (en) | 2013-08-01 | 2016-02-25 | Agensys, Inc. | Antibody drug conjugates (ADC) that bind to CD37 proteins |
KR102138723B1 (ko) | 2013-08-07 | 2020-07-29 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Lincrna-결핍 비인간 동물 |
JP6380394B2 (ja) | 2013-08-09 | 2018-08-29 | アステラス製薬株式会社 | 新規抗ヒトtslp受容体抗体 |
CA2922113C (en) | 2013-08-23 | 2023-05-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Diagnostic tests and methods for assessing safety, efficacy or outcome of allergen-specific immunotherapy (sit) |
CN105530942B (zh) | 2013-08-26 | 2019-10-11 | 瑞泽恩制药公司 | 一种包含大环内酯类非对映体的药物组合物、其制备方法和用途 |
AU2014312190A1 (en) | 2013-08-28 | 2016-02-18 | Bioasis Technologies Inc. | CNS-targeted conjugates of antibodies |
US10617755B2 (en) | 2013-08-30 | 2020-04-14 | Genentech, Inc. | Combination therapy for the treatment of glioblastoma |
US10456470B2 (en) | 2013-08-30 | 2019-10-29 | Genentech, Inc. | Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma |
US9988408B2 (en) | 2013-09-02 | 2018-06-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Cytotoxic agents for conjugation to a cell binding molecule |
EP3046940B1 (en) | 2013-09-17 | 2019-07-03 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Methods of using anti-lgr5 antibodies |
MY191512A (en) | 2013-09-18 | 2022-06-28 | Regeneron Pharma | Histidine engineered light chain antibodies and genetically modified non-human animals for generating the same |
DE202014010413U1 (de) * | 2013-09-18 | 2015-12-08 | Kymab Limited | Zellen und Organismen |
CA2925723A1 (en) * | 2013-10-01 | 2015-04-09 | Kymab Limited | Animal models and therapeutic molecules |
BR112016007635A2 (pt) | 2013-10-11 | 2017-09-12 | Genentech Inc | inibidores de nsp4 e métodos de uso |
EP3689913B1 (en) | 2013-10-11 | 2022-03-23 | Sanofi Biotechnology | Use of a pcsk9 inhibitor to treat hyperlipidemia |
KR20160070136A (ko) | 2013-10-18 | 2016-06-17 | 제넨테크, 인크. | 항-rspo2 및/또는 항-rspo3 항체 및 그의 용도 |
CA2924873A1 (en) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | Genentech, Inc. | Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders |
EP3466445A1 (en) | 2013-11-06 | 2019-04-10 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-ccl17 antibodies |
EP3882273A1 (en) | 2013-11-12 | 2021-09-22 | Sanofi Biotechnology | Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors |
EP3783020A1 (en) | 2013-11-21 | 2021-02-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use |
MX2016007654A (es) * | 2013-12-11 | 2017-08-15 | Regeneron Pharma | Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma. |
EP4349980A2 (en) | 2013-12-11 | 2024-04-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the targeted modification of a genome |
SG11201604784XA (en) | 2013-12-13 | 2016-07-28 | Genentech Inc | Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates |
BR112016013963A2 (pt) | 2013-12-17 | 2017-10-10 | Genentech Inc | terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1 |
BR122021025087B1 (pt) | 2013-12-17 | 2023-04-04 | Genentech, Inc | Anticorpo anti-cd3, célula hospedeira procariótica, método de produção do anticorpo biespecífico, imunoconjugado, composição, uso do anticorpo biespecífico e kit |
RU2016128726A (ru) | 2013-12-17 | 2018-01-23 | Дженентек, Инк. | Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20 |
EP3083686B2 (en) | 2013-12-17 | 2023-03-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
TWI728373B (zh) | 2013-12-23 | 2021-05-21 | 美商建南德克公司 | 抗體及使用方法 |
CN105829534B (zh) | 2013-12-24 | 2021-08-03 | 安斯泰来制药株式会社 | 抗人bdca-2抗体 |
MX2016008191A (es) | 2014-01-03 | 2017-11-16 | Hoffmann La Roche | Conjugados de toxina polipeptidica-anticuerpo unidos covalentemente. |
US10561737B2 (en) | 2014-01-03 | 2020-02-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles |
MX2016008189A (es) | 2014-01-03 | 2016-09-29 | Hoffmann La Roche | Conjugados helicoidales-anticuerpo anti-helicoidal unidos covalentemente y usos de los mismos. |
WO2015103549A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
KR20160107190A (ko) | 2014-01-15 | 2016-09-13 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체 |
TWI680138B (zh) | 2014-01-23 | 2019-12-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗pd-l1之人類抗體 |
TWI681969B (zh) | 2014-01-23 | 2020-01-11 | 美商再生元醫藥公司 | 針對pd-1的人類抗體 |
AU2015209154A1 (en) | 2014-01-24 | 2017-02-16 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-STEAP1 antibodies and immunoconjugates |
WO2015116852A1 (en) | 2014-01-29 | 2015-08-06 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating rheumatoid arthritis by administering an il-6r antibody |
AU2015210612B2 (en) | 2014-02-03 | 2020-04-09 | Bioasis Technologies Inc. | P97 fusion proteins |
TW202239429A (zh) | 2014-02-08 | 2022-10-16 | 美商建南德克公司 | 治療阿茲海默症之方法 |
TWI705824B (zh) | 2014-02-08 | 2020-10-01 | 美商建南德克公司 | 治療阿茲海默症之方法 |
ES2685424T3 (es) | 2014-02-12 | 2018-10-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-Jagged1 y procedimientos de uso |
US20150231236A1 (en) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating patients with hypercholesterolemia that is not adequately controlled by moderate-dose statin therapy |
DK3107562T3 (da) | 2014-02-19 | 2019-12-16 | Bioasis Technologies Inc | P97-ids-fusionsproteiner |
MX2016010729A (es) | 2014-02-21 | 2016-10-26 | Genentech Inc | Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos. |
KR102368450B1 (ko) | 2014-02-21 | 2022-02-28 | 사노피 바이오테크놀로지 | Il-4r 길항제의 투여에 의한 천식의 치료 또는 예방 방법 |
US10464955B2 (en) | 2014-02-28 | 2019-11-05 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Charged linkers and their uses for conjugation |
PL3116999T3 (pl) | 2014-03-14 | 2021-12-27 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Sposoby i kompozycje do wydzielania polipeptydów heterologicznych |
WO2015142668A1 (en) | 2014-03-17 | 2015-09-24 | Sanofi | Methods for reducing cardiovascular risk |
CN106255410B (zh) | 2014-03-21 | 2020-01-10 | 瑞泽恩制药公司 | 产生单结构域结合蛋白的非人动物 |
SG10201808083VA (en) | 2014-03-21 | 2018-10-30 | Regeneron Pharma | Vl antigen binding proteins exhibiting distinct binding characteristics |
US20170107294A1 (en) | 2014-03-21 | 2017-04-20 | Nordlandssykehuset Hf | Anti-cd14 antibodies and uses thereof |
CN107002119A (zh) | 2014-03-24 | 2017-08-01 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用c‑met拮抗剂的癌症治疗及前者与hgf表达的关联 |
SG11201608106PA (en) | 2014-03-31 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists |
PE20211291A1 (es) | 2014-03-31 | 2021-07-20 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-ox40 y metodos de uso |
EP3126389A1 (en) | 2014-04-02 | 2017-02-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for detecting multispecific antibody light chain mispairing |
SG11201608194VA (en) | 2014-04-03 | 2016-10-28 | Igm Biosciences Inc | Modified j-chain |
BR112016024319B1 (pt) | 2014-04-18 | 2024-01-23 | Acceleron Pharma Inc | USO DE UMA COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO UM ANTAGONISTA DE ActRII PARA A FABRICAÇÃO DE UM MEDICAMENTO PARA TRATAR OU PREVINIR UMA COMPLICAÇÃO DE ANEMIA FALCIFORME |
WO2015164615A1 (en) | 2014-04-24 | 2015-10-29 | University Of Oslo | Anti-gluten antibodies and uses thereof |
CN106413757B (zh) | 2014-05-01 | 2022-01-14 | 比奥阿赛斯技术有限公司 | p97-多核苷酸结合物 |
DK3841877T3 (da) | 2014-05-19 | 2023-11-27 | Regeneron Pharma | Genetisk modificeret mus, der eksprimerer human EPO |
JP2017522861A (ja) | 2014-05-22 | 2017-08-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗gpc3抗体及びイムノコンジュゲート |
KR20170005016A (ko) | 2014-05-23 | 2017-01-11 | 제넨테크, 인크. | MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법 |
US9497945B2 (en) * | 2014-05-30 | 2016-11-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Humanized dipeptidyl peptidase IV (DPP4) animals |
LT3152312T (lt) | 2014-06-06 | 2020-04-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Tikslinio lokuso modifikavimo būdai ir kompozicijos |
CN106459202A (zh) | 2014-06-11 | 2017-02-22 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗LgR5抗体及其用途 |
AU2015274277B2 (en) | 2014-06-13 | 2021-03-18 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods and compositions for treating ulcers |
CN107073121A (zh) | 2014-06-13 | 2017-08-18 | 基因泰克公司 | 治疗及预防癌症药物抗性的方法 |
HUE049405T2 (hu) | 2014-06-23 | 2020-09-28 | Regeneron Pharma | Nukleáz-közvetített DNS-összeállítás |
TWI713453B (zh) | 2014-06-23 | 2020-12-21 | 美商健生生物科技公司 | 干擾素α及ω抗體拮抗劑 |
HUE041584T2 (hu) | 2014-06-26 | 2019-05-28 | Regeneron Pharma | Célzott genetikai módosítások és alkalmazási módszerek és készítmények |
TW201623329A (zh) | 2014-06-30 | 2016-07-01 | 亞佛瑞司股份有限公司 | 針對骨調素截斷變異體的疫苗及單株抗體暨其用途 |
NZ728041A (en) | 2014-07-10 | 2023-01-27 | Affiris Ag | Substances and methods for the use in prevention and/or treatment in huntington’s disease |
EP3166627A1 (en) | 2014-07-11 | 2017-05-17 | Genentech, Inc. | Notch pathway inhibition |
JP2017523776A (ja) | 2014-07-14 | 2017-08-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 膠芽腫の診断方法及びその治療用組成物 |
JP6912374B2 (ja) | 2014-07-16 | 2021-08-04 | サノフィ・バイオテクノロジー | 高コレステロール血症を有する高心血管リスク患者を処置するための方法 |
CA2955294A1 (en) | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (hefh) |
RU2017108238A (ru) | 2014-08-15 | 2018-09-17 | Эйдинкс, Инк. | Олигонуклеотиды-приманки для лечения боли |
MX2017003022A (es) | 2014-09-12 | 2017-05-12 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados. |
MX2017003126A (es) | 2014-09-12 | 2017-08-28 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados. |
TW201625689A (zh) | 2014-09-12 | 2016-07-16 | 建南德克公司 | 抗-b7-h4抗體及免疫結合物 |
KR20170062466A (ko) | 2014-09-16 | 2017-06-07 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 항-글루카곤 항체 및 그것의 사용 |
CN107124870A (zh) | 2014-09-17 | 2017-09-01 | 基因泰克公司 | 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂*的免疫缀合物 |
WO2016044745A1 (en) | 2014-09-19 | 2016-03-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric antigen receptors |
CA2961517C (en) | 2014-09-23 | 2023-05-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-il-25 antibodies and uses thereof |
DK3262071T3 (da) | 2014-09-23 | 2020-06-15 | Hoffmann La Roche | Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater |
PL3207124T3 (pl) | 2014-10-15 | 2019-11-29 | Regeneron Pharma | Sposoby i kompozycje do wytwarzania lub utrzymywania komórek pluripotencjalnych |
WO2016061389A2 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Genentech, Inc. | Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use |
AU2015336946A1 (en) | 2014-10-23 | 2017-04-13 | La Trobe University | Fn14-binding proteins and uses thereof |
US10626176B2 (en) | 2014-10-31 | 2020-04-21 | Jounce Therapeutics, Inc. | Methods of treating conditions with antibodies that bind B7-H4 |
RU2017119009A (ru) | 2014-11-03 | 2018-12-05 | Дженентек, Инк. | Анализы для обнаружения субпопуляций иммунных т-клеток и способы их применения |
RU2017119231A (ru) | 2014-11-03 | 2018-12-06 | Дженентек, Инк. | Способы и биомаркеры для прогнозирования эффективности и оценки лечения агонистом ох40 |
PT3215528T (pt) | 2014-11-06 | 2019-10-11 | Hoffmann La Roche | Variantes da região fc com ligação modificada ao fcrn e métodos de utilização |
CN107073126A (zh) | 2014-11-06 | 2017-08-18 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 包含ox40结合激动剂和tigit抑制剂的组合疗法 |
WO2016071377A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-05-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties |
WO2016077369A1 (en) | 2014-11-10 | 2016-05-19 | Genentech, Inc. | Animal model for nephropathy and agents for treating the same |
TWI705976B (zh) | 2014-11-10 | 2020-10-01 | 美商建南德克公司 | 抗介白素-33抗體及其用途 |
EP3218412A1 (en) | 2014-11-14 | 2017-09-20 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating chronic sinusitis with nasal polyps by administering an il-4r antagonist |
US10160795B2 (en) | 2014-11-14 | 2018-12-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to Ebola virus glycoprotein and their use |
MA40929A (fr) | 2014-11-14 | 2017-09-20 | Regeneron Pharma | Procédé de production d'anticorps à affinité élevée |
WO2016081384A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
EP3221361B1 (en) | 2014-11-19 | 2021-04-21 | Genentech, Inc. | Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use |
WO2016081639A1 (en) | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy |
CN107001473B (zh) | 2014-11-19 | 2021-07-09 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗-运铁蛋白受体抗体及使用方法 |
DK3221355T3 (da) | 2014-11-20 | 2020-12-07 | Hoffmann La Roche | Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler CD3 og folatreceptor 1 (FolR1) samt PD-1-aksebindende antagonister |
LT3221457T (lt) | 2014-11-21 | 2019-06-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas |
RU2020122439A (ru) | 2014-11-24 | 2020-09-24 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Не относящиеся к человеку животные, экспрессирующие гуманизированный комплекс cd3 |
JP6554280B2 (ja) * | 2014-11-28 | 2019-07-31 | 株式会社デンソーテン | データ処理装置、画像処理方法、及び、プログラム |
MA41119A (fr) | 2014-12-03 | 2017-10-10 | Acceleron Pharma Inc | Méthodes de traitement de syndromes myélodysplasiques et d'anémie sidéroblastique |
JP6802158B2 (ja) | 2014-12-05 | 2020-12-16 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗CD79b抗体及び使用方法 |
AU2015360579A1 (en) | 2014-12-10 | 2017-05-18 | Genentech, Inc. | Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use |
RU2707137C2 (ru) | 2014-12-19 | 2019-11-22 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания |
ES2899894T3 (es) | 2014-12-19 | 2022-03-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpos anti-C5 y métodos de uso |
AU2015367224B2 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-10 | Monash University | IL-21 antibodies |
TWI701258B (zh) | 2014-12-19 | 2020-08-11 | 美商再生元醫藥公司 | 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體 |
US20160200815A1 (en) | 2015-01-05 | 2016-07-14 | Jounce Therapeutics, Inc. | Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof |
CN107428823B (zh) | 2015-01-22 | 2021-10-26 | 中外制药株式会社 | 两种以上抗-c5抗体的组合与使用方法 |
TWI710573B (zh) | 2015-01-26 | 2020-11-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體 |
EA201791754A1 (ru) | 2015-02-05 | 2019-01-31 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ЗАВИСЯЩИЙ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН, ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ, IL-8-СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
WO2016130539A2 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Multi-specific antibodies with affinity for human a33 antigen and dota metal complex and uses thereof |
CA2975899A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Biommune Technologies Inc. | Antibodies to l-type voltage gated channels and related methods |
MY178919A (en) | 2015-03-09 | 2020-10-23 | Agensys Inc | Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins |
KR20170127011A (ko) | 2015-03-16 | 2017-11-20 | 제넨테크, 인크. | Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도 |
KR102616160B1 (ko) | 2015-03-16 | 2023-12-22 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 저하된 상위 및 하위 운동 뉴런 기능 및 감각 지각을 나타내는 비-인간 동물 |
CA2979702A1 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals that select for light chain variable regions that bind antigen |
WO2016146833A1 (en) | 2015-03-19 | 2016-09-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance |
US10562960B2 (en) | 2015-03-20 | 2020-02-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to gp120 and their use |
BR112017020054A2 (pt) | 2015-03-23 | 2018-06-05 | Jounce Therapeutics Inc | anticorpos para icos |
EP3273998B1 (en) | 2015-03-27 | 2019-09-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use |
HRP20231039T1 (hr) | 2015-04-06 | 2023-12-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Imunosni odgovori posredovani humaniziranim t stanicama kod ne-humanih životinja |
WO2016164503A1 (en) | 2015-04-06 | 2016-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Alk7:actriib heteromultimers and uses thereof |
MA41919A (fr) | 2015-04-06 | 2018-02-13 | Acceleron Pharma Inc | Hétéromultimères alk4:actriib et leurs utilisations |
MX2017012802A (es) | 2015-04-07 | 2018-04-11 | Alector Llc | Anticuerpos antisortilina y métodos para su uso. |
KR20180002653A (ko) | 2015-04-07 | 2018-01-08 | 제넨테크, 인크. | 효능작용 활성을 갖는 항원 결합 복합체 및 사용 방법 |
JP6752221B2 (ja) | 2015-04-13 | 2020-09-09 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | ヒト化sirpa−il15ノックインマウス及びその使用方法 |
CN107810197B (zh) | 2015-04-24 | 2022-10-25 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 鉴定包含结合多肽的细菌的方法 |
CN107709363A (zh) | 2015-05-01 | 2018-02-16 | 基因泰克公司 | 掩蔽抗cd3抗体和使用方法 |
WO2016179194A1 (en) | 2015-05-04 | 2016-11-10 | Jounce Therapeutics, Inc. | Lilra3 and method of using the same |
US20160346387A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-12-01 | Genentech, Inc. | Compositions and methods of treating lupus nephritis |
PT3294770T (pt) | 2015-05-12 | 2020-12-04 | Hoffmann La Roche | Métodos terapêuticos e diagnósticos para o cancro |
US10395759B2 (en) | 2015-05-18 | 2019-08-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and systems for copy number variant detection |
WO2016196343A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Genentech, Inc. | Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use |
CA2986048C (en) | 2015-05-29 | 2021-10-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals having a disruption in a c9orf72 locus |
IL255372B (en) | 2015-05-29 | 2022-07-01 | Genentech Inc | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
JP2018516933A (ja) | 2015-06-02 | 2018-06-28 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗il−34抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法 |
WO2016196975A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services | Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use |
UA126272C2 (uk) | 2015-06-05 | 2022-09-14 | Дженентек, Інк. | Антитіло проти тау-білка та спосіб його застосування |
WO2016200836A1 (en) | 2015-06-08 | 2016-12-15 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies |
MX2017015937A (es) | 2015-06-08 | 2018-12-11 | Genentech Inc | Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos anti-ox40 y antagonistas de unión al eje de pd-1. |
EP3307771A2 (en) | 2015-06-12 | 2018-04-18 | Alector LLC | Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof |
EP3307779A2 (en) | 2015-06-12 | 2018-04-18 | Alector LLC | Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof |
WO2016205176A1 (en) | 2015-06-15 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Antibodies and immunoconjugates |
AU2016280102B2 (en) | 2015-06-16 | 2022-06-16 | Genentech, Inc. | Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use |
EP3916018A1 (en) | 2015-06-16 | 2021-12-01 | Genentech, Inc. | Anti-cd3 antibodies and methods of use |
EP3310378B1 (en) | 2015-06-16 | 2024-01-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-cll-1 antibodies and methods of use |
WO2016205531A2 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Anti-her2 antibodies and methods of use |
CA2986263A1 (en) | 2015-06-17 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes |
BR112017024610A2 (pt) | 2015-06-24 | 2018-07-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | anticorpos para receptor antitransferrina com afinidade especificada |
CA2989936A1 (en) | 2015-06-29 | 2017-01-05 | Genentech, Inc. | Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation |
CA2991973C (en) | 2015-07-12 | 2021-12-07 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule |
US9839687B2 (en) | 2015-07-15 | 2017-12-12 | Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. | Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule |
CA2994413A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods for treating myeloproliferative disorders |
CA2994825A1 (en) | 2015-08-05 | 2017-02-09 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-cd154 antibodies and methods of using them |
TW201713690A (zh) | 2015-08-07 | 2017-04-16 | 再生元醫藥公司 | 抗angptl8抗體及其用途 |
CN105384825B (zh) | 2015-08-11 | 2018-06-01 | 南京传奇生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用 |
KR20180034672A (ko) | 2015-08-18 | 2018-04-04 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체 |
AU2016311268B2 (en) | 2015-08-24 | 2023-02-02 | Trianni, Inc. | Enhanced production of immunoglobulins |
EP3350202A1 (en) | 2015-09-18 | 2018-07-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Il-8-binding antibodies and uses thereof |
WO2017053807A2 (en) | 2015-09-23 | 2017-03-30 | Genentech, Inc. | Optimized variants of anti-vegf antibodies |
BR112018005931A2 (pt) | 2015-09-24 | 2018-10-09 | Abvitro Llc | composições de anticorpo para hiv e métodos de uso |
RU2732591C2 (ru) | 2015-09-25 | 2020-09-21 | Дженентек, Инк. | Анти-tigit антитела и способы применения |
WO2017059387A1 (en) | 2015-09-30 | 2017-04-06 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified j-chain |
WO2017059196A2 (en) | 2015-09-30 | 2017-04-06 | Janssen Biotech, Inc. | Antagonistic antibodies specifically binding human cd40 and methods of use |
WO2017059380A1 (en) | 2015-09-30 | 2017-04-06 | Igm Biosciences, Inc. | Binding molecules with modified j-chain |
ES2895034T3 (es) | 2015-10-02 | 2022-02-17 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-PD1 y procedimientos de uso |
AR106189A1 (es) | 2015-10-02 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO |
MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
RU2753390C1 (ru) | 2015-10-02 | 2021-08-13 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения |
TWI756187B (zh) | 2015-10-09 | 2022-03-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗lag3抗體及其用途 |
MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
KR20180066236A (ko) | 2015-10-22 | 2018-06-18 | 조운스 테라퓨틱스, 인크. | Icos 발현을 계측하기 위한 유전자 특질 |
EP3184547A1 (en) | 2015-10-29 | 2017-06-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-tpbg antibodies and methods of use |
MA43113B1 (fr) | 2015-10-30 | 2021-06-30 | Hoffmann La Roche | Anticorps anti-htr a1 et méthodes d'utilisation de ceux-ci |
US10407510B2 (en) | 2015-10-30 | 2019-09-10 | Genentech, Inc. | Anti-factor D antibodies and conjugates |
BR112018008891A8 (pt) | 2015-11-03 | 2019-02-26 | Janssen Biotech Inc | anticorpos que se ligam especificamente a pd-1 e tim-3 e seus usos |
EP3371217A1 (en) | 2015-11-08 | 2018-09-12 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Methods of screening for multispecific antibodies |
EP3380121B1 (en) | 2015-11-23 | 2023-12-20 | Acceleron Pharma Inc. | Actrii antagonist for use in treating eye disorders |
US10813346B2 (en) | 2015-12-03 | 2020-10-27 | Trianni, Inc. | Enhanced immunoglobulin diversity |
EP3178848A1 (en) | 2015-12-09 | 2017-06-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies |
CN115920030A (zh) | 2015-12-09 | 2023-04-07 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Ii型抗cd20抗体用于降低抗药物抗体形成 |
BR112018012344A2 (pt) | 2015-12-17 | 2018-12-04 | Janssen Biotech Inc | anticorpos que se ligam especificamente a hla-dr e seus usos |
RU2742606C2 (ru) | 2015-12-18 | 2021-02-09 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Антитела к с5 и способы их применения |
CA3006529A1 (en) | 2016-01-08 | 2017-07-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies |
KR102482103B1 (ko) | 2016-01-13 | 2022-12-28 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 조작된 중쇄 다양성 영역을 갖는 설치류 |
EP3405489A1 (en) | 2016-01-20 | 2018-11-28 | Genentech, Inc. | High dose treatments for alzheimer's disease |
CN114478801A (zh) | 2016-01-25 | 2022-05-13 | 里珍纳龙药品有限公司 | 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法 |
US11053288B2 (en) | 2016-02-04 | 2021-07-06 | Trianni, Inc. | Enhanced production of immunoglobulins |
CN109195443A (zh) * | 2016-02-16 | 2019-01-11 | 雷杰纳荣制药公司 | 具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物 |
MX2018009680A (es) | 2016-02-17 | 2018-09-10 | Regeneron Pharma | Metodos para tratar o prevenir la aterosclerosis administrando un inhibidor de angptl3. |
MX2018010361A (es) | 2016-02-29 | 2019-07-08 | Genentech Inc | Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer. |
MX2018010401A (es) | 2016-03-03 | 2019-03-06 | Regeneron Pharma | Metodos para el tratamiento de pacientes con hiperlipidemia administrando un inhibidor de pcsk9 en combinacion con un inhibidor de angptl3. |
WO2017159699A1 (en) | 2016-03-15 | 2017-09-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies |
EP3433621A1 (en) | 2016-03-25 | 2019-01-30 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay |
CA3018186C (en) | 2016-03-29 | 2023-06-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetic variant-phenotype analysis system and methods of use |
EP3228630A1 (en) | 2016-04-07 | 2017-10-11 | IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH | Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer |
SI3439689T1 (sl) | 2016-04-08 | 2021-12-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Postopki za zdravljenje hiperlipidemije z zaviralcem ANGPTL8 in zaviralcem ANGPTL3 |
WO2017180864A1 (en) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Genentech, Inc. | Anti-rspo3 antibodies and methods of use |
MX2018012492A (es) | 2016-04-15 | 2019-06-06 | Genentech Inc | Métodos para monitorear y tratar el cáncer. |
CN109154027A (zh) | 2016-04-15 | 2019-01-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于监测和治疗癌症的方法 |
MX2018012741A (es) | 2016-04-28 | 2019-05-16 | Regeneron Pharma | Metodos para el tratamiento de pacientes con hipercolesterolemia familiar. |
BR112018069890A2 (pt) | 2016-05-02 | 2019-02-05 | Hoffmann La Roche | polipeptídio de fusão que se liga de forma específica a um alvo, polipeptídio de fusão dimérico, ácido nucleico isolado, par de ácidos nucleicos isolados, célula hospedeira, método para produzir um polipeptídio de fusão, imunoconjugado, formulação farmacêutica, polipeptídio de fusão e uso do polipeptídio de fusão |
CN109071640B (zh) | 2016-05-11 | 2022-10-18 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 经修饰抗生腱蛋白抗体及使用方法 |
TWI755395B (zh) | 2016-05-13 | 2022-02-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗-pd-1抗體與輻射治療癌症之組合 |
ES2858151T3 (es) | 2016-05-20 | 2021-09-29 | Hoffmann La Roche | Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso |
RU2745563C2 (ru) | 2016-05-20 | 2021-03-29 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк |
CN109313200B (zh) | 2016-05-27 | 2022-10-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法 |
EP3252078A1 (en) | 2016-06-02 | 2017-12-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer |
SI3462853T1 (sl) | 2016-06-03 | 2023-05-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Glodavci, ki izražajo eksogeno terminalno deoksinukleotidiltransferazo |
CA3025995C (en) | 2016-06-06 | 2023-08-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fusion proteins for ophthalmology with increased eye retention |
WO2017214089A1 (en) | 2016-06-06 | 2017-12-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals expressing antibodies with human lambda light chains |
EP3464280B1 (en) | 2016-06-06 | 2021-10-06 | F. Hoffmann-La Roche AG | Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use |
GB201610162D0 (en) | 2016-06-10 | 2016-07-27 | Imp Innovations Ltd And Inst Pasteur | Methods |
WO2017218515A1 (en) | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-c5 antibodies and uses thereof |
JP7133477B2 (ja) | 2016-06-24 | 2022-09-08 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗ポリユビキチン多重特異性抗体 |
SG11201811559WA (en) | 2016-06-27 | 2019-01-30 | Univ California | Cancer treatment combinations |
CN109415435B (zh) | 2016-07-04 | 2024-01-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 新型抗体形式 |
EP3496739B1 (en) | 2016-07-15 | 2021-04-28 | Acceleron Pharma Inc. | Compositions comprising actriia polypeptides for use in treating pulmonary hypertension |
TW201815821A (zh) | 2016-07-18 | 2018-05-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗茲卡病毒抗體及使用方法 |
WO2018014260A1 (en) | 2016-07-20 | 2018-01-25 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof |
AU2017302282A1 (en) | 2016-07-27 | 2019-02-07 | Acceleron Pharma Inc. | Methods and compositions for treating myelofibrosis |
KR20190041476A (ko) | 2016-07-29 | 2019-04-22 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | C-절단된 피브릴린-1의 발현을 유도하는 돌연변이를 포함하는 마우스 |
CN109415444B (zh) | 2016-07-29 | 2024-03-01 | 中外制药株式会社 | 显示增加的备选fviii辅因子功能活性的双特异性抗体 |
CN109689099B (zh) | 2016-08-05 | 2023-02-28 | 中外制药株式会社 | 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物 |
US11046776B2 (en) | 2016-08-05 | 2021-06-29 | Genentech, Inc. | Multivalent and multiepitopic antibodies having agonistic activity and methods of use |
CN109476748B (zh) | 2016-08-08 | 2023-05-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于癌症的治疗和诊断方法 |
EP3282019A1 (en) | 2016-08-09 | 2018-02-14 | Medizinische Universität Wien | Genotyping and treatment of cancer, in particular chronic lymphocytic leukemia |
JP7093767B2 (ja) | 2016-08-11 | 2022-06-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート |
EP3497126A4 (en) | 2016-08-12 | 2020-04-08 | Janssen Biotech, Inc. | ANTIBODIES OF FC MODIFIED ANTI-TNFR SUPERFAMILY HAVING IMPROVED AGONIST ACTIVITY AND METHODS OF USE THEREOF |
KR102587941B1 (ko) | 2016-08-12 | 2023-10-11 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 향상된 효능작용 및 이펙터 기능을 갖는 조작된 항체 및 다른 Fc-도메인 함유 분자 |
MX2019002382A (es) | 2016-08-29 | 2019-06-20 | Regeneron Pharma | Anticuerpos anti-gremlin-1 (grem1) y metodos de uso de los mismos para tratar la hipertension arterial pulmonar. |
SG10201607778XA (en) | 2016-09-16 | 2018-04-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use |
EP3515932B1 (en) | 2016-09-19 | 2023-11-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | Complement factor based affinity chromatography |
UA124269C2 (uk) | 2016-09-23 | 2021-08-18 | Дженентек, Інк. | Застосування антагоністу il-13 для лікування атопічного дерматиту |
CA3034105A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Csl Limited | Coagulation factor binding proteins and uses thereof |
WO2018064600A1 (en) | 2016-09-30 | 2018-04-05 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus |
EP4026556A1 (en) | 2016-10-05 | 2022-07-13 | Acceleron Pharma Inc. | Compositions and method for treating kidney disease |
JP7050770B2 (ja) | 2016-10-05 | 2022-04-08 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗体薬物コンジュゲートの調製方法 |
MX2019003934A (es) | 2016-10-06 | 2019-07-10 | Genentech Inc | Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer. |
WO2018068201A1 (en) | 2016-10-11 | 2018-04-19 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4 |
JP7265984B2 (ja) | 2016-10-21 | 2023-04-27 | アディマブ, エルエルシー | 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法 |
JP2020503843A (ja) | 2016-10-21 | 2020-02-06 | アディマブ, エルエルシー | 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法 |
IL303833A (en) | 2016-10-21 | 2023-08-01 | Adimab Llc | Respiratory syncytial virus antibodies and methods for their production and use |
CN110267678A (zh) | 2016-10-29 | 2019-09-20 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗mic抗体和使用方法 |
AU2017348743C1 (en) * | 2016-10-31 | 2022-03-03 | National University Corporation Tottori University | Human antibody–producing non-human animal and method for preparing human antibodies using same |
HUE057559T2 (hu) | 2016-11-02 | 2022-06-28 | Jounce Therapeutics Inc | PD-1 elleni antitestek és alkalmazásaik |
KR102319069B1 (ko) | 2016-11-04 | 2021-11-01 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 조작된 면역글로불린 람다 경쇄 유전자좌를 갖는 비인간 동물 |
JP7330101B2 (ja) | 2016-11-08 | 2023-08-21 | レゲネロン ファーマシューティカルス,インコーポレーテッド | ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート |
KR20220150408A (ko) | 2016-11-14 | 2022-11-10 | 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 | 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용 |
JP7133551B2 (ja) | 2016-11-17 | 2022-09-08 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 抗angptl8抗体を用いて肥満を処置する方法 |
TW201829463A (zh) | 2016-11-18 | 2018-08-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 抗hla-g抗體及其用途 |
US11773163B2 (en) | 2016-11-21 | 2023-10-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the prophylactic treatment of metastases |
EP3548082B1 (en) | 2016-11-29 | 2024-05-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | A pharmaceutical composition for averting opioid addiction |
KR102480773B1 (ko) | 2016-11-30 | 2022-12-23 | 크로다 인터내셔날 피엘씨 | 수성 결합제 시스템, 코팅 조성물 및 코팅 |
EP3551655A2 (en) | 2016-12-07 | 2019-10-16 | Genentech, Inc. | Anti-tau antibodies and methods of their use |
WO2018106781A1 (en) | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Genentech, Inc | Anti-tau antibodies and methods of use |
EP3556773A4 (en) | 2016-12-13 | 2020-08-19 | Astellas Pharma Inc. | ANTIBODIES TO HUMAN CD73 |
EP3559250A1 (en) | 2016-12-21 | 2019-10-30 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Re-use of enzymes in in vitro glycoengineering of antibodies |
JP6850351B2 (ja) | 2016-12-21 | 2021-03-31 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 抗体のインビトロ糖鎖工学 |
KR102293106B1 (ko) | 2016-12-21 | 2021-08-24 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항체의 시험관 내 당조작 방법 |
US11352417B2 (en) | 2016-12-22 | 2022-06-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies |
WO2018124155A1 (ja) * | 2016-12-27 | 2018-07-05 | 国立大学法人群馬大学 | 条件付きノックアウト動物の製造方法 |
TWI781130B (zh) | 2017-01-03 | 2022-10-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗金黃色葡萄球菌溶血素a毒素之人類抗體 |
CA3049980A1 (en) | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 13 (hsd17b13) variants and uses thereof |
US10713373B2 (en) * | 2017-02-09 | 2020-07-14 | Lifesite, Inc. | Computing system with information storage mechanism and method of operation thereof |
EP3580235B1 (en) | 2017-02-10 | 2024-05-01 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use |
US10738131B2 (en) | 2017-02-10 | 2020-08-11 | Genentech, Inc. | Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof |
SG11201907208XA (en) | 2017-02-10 | 2019-09-27 | Regeneron Pharma | Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging |
KR20190134631A (ko) | 2017-03-01 | 2019-12-04 | 제넨테크, 인크. | 암의 진단 및 치료 방법 |
AR111249A1 (es) | 2017-03-22 | 2019-06-19 | Genentech Inc | Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares |
ES2928718T3 (es) | 2017-04-03 | 2022-11-22 | Hoffmann La Roche | Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-PD-1 con una IL-2 mutante o con IL-15 |
BR112019018767A2 (pt) | 2017-04-03 | 2020-05-05 | Hoffmann La Roche | anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, usos, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção |
WO2018184965A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody |
EP4112644A1 (en) | 2017-04-05 | 2023-01-04 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-lag3 antibodies |
US11603407B2 (en) | 2017-04-06 | 2023-03-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stable antibody formulation |
CA3060514A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Atyr Pharma, Inc. | Compositions and methods for treating lung inflammation |
EP3624820A1 (en) | 2017-04-21 | 2020-03-25 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Use of klk5 antagonists for treatment of a disease |
MX2019012793A (es) | 2017-04-27 | 2020-02-13 | Tesaro Inc | Agentes anticuerpos dirigidos contra el gen de activación de linfocitos-3 (lag-3) y usos de los mismos. |
EP3625251A1 (en) | 2017-05-15 | 2020-03-25 | University Of Rochester | Broadly neutralizing anti-influenza monoclonal antibody and uses thereof |
CN110944718A (zh) | 2017-05-18 | 2020-03-31 | 里珍纳龙药品有限公司 | 环糊精蛋白质药物偶联物 |
NZ759513A (en) | 2017-06-01 | 2022-01-28 | Regeneron Pharma | Human antibodies to bet v 1 and methods of use thereof |
KR20200014304A (ko) | 2017-06-02 | 2020-02-10 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 암의 치료를 위한 제ii형 항-cd20 항체 및 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 |
CA3065516A1 (en) | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Janssen Biotech, Inc. | Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use |
CA3065171A1 (en) | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Janssen Biotech, Inc. | Engineered multispecific antibodies and other multimeric proteins with asymmetrical ch2-ch3 region mutations |
US20190031774A1 (en) | 2017-06-09 | 2019-01-31 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating hyperlipidemia in diabetic patients by administering a pcsk9 inhibitor |
AU2018290856A1 (en) | 2017-06-28 | 2020-01-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-human papillomavirus (HPV) antigen-binding proteins and methods of use thereof |
WO2019018770A1 (en) | 2017-07-21 | 2019-01-24 | Trianni, Inc. | SINGLE CHAIN VH-L1-CK1-L2-CH1 ANTIBODY |
US11674962B2 (en) | 2017-07-21 | 2023-06-13 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
MY197688A (en) | 2017-07-24 | 2023-07-05 | Regeneron Pharma | Anti-cd8 antibodies and uses thereof |
WO2019020480A1 (en) | 2017-07-24 | 2019-01-31 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | ANTIBODIES AND PEPTIDES FOR TREATING HCMV RELATED DISEASES |
TWI799432B (zh) | 2017-07-27 | 2023-04-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ctla-4抗體及其用途 |
JP7299160B2 (ja) | 2017-08-03 | 2023-06-27 | アレクトル エルエルシー | 抗cd33抗体及びその使用方法 |
WO2019051164A1 (en) | 2017-09-07 | 2019-03-14 | Augusta University Research Institute, Inc. | ANTIBODIES AGAINST PROTEIN 1 OF PROGRAMMED CELL DEATH |
CR20210381A (es) | 2017-09-29 | 2021-09-09 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | MOLÉCULA DE UNIÓN AL ANTÍGENO MULTIESPECÍFICA QUE TIENE ACTIVIDAD DE SUSTITUCIÓN DE LA FUNCIÓN DE COFACTOR DEL FACTOR VIII DE COAGULACIÓN DE SANGRE (FVIII) Y FORMULACIÓN FARMACÉUTICA QUE CONTIENE TAL MOLÉCULA COMO INGREDIENTE (Divisional Exp. 2020-0158) |
SG11202001160XA (en) | 2017-09-29 | 2020-03-30 | Regeneron Pharma | Bispecific antigen-binding molecules that bind a staphylococcus target antigen and a complement component and uses thereof |
DK3476942T3 (da) | 2017-10-27 | 2022-04-19 | Trianni Inc | Lange kimlinje-dh-gener og antistoffer med lang hcdr3 |
CN111526920A (zh) | 2017-10-30 | 2020-08-11 | 赛诺菲生物技术公司 | 通过施用il-4r拮抗剂来治疗或预防哮喘的方法 |
KR102559706B1 (ko) | 2017-11-01 | 2023-07-25 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Trifab-콘톨스바디 |
CN111295392A (zh) | 2017-11-01 | 2020-06-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Compbody–多价靶结合物 |
WO2019090263A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Genentech, Inc. | Diagnostic and therapeutic methods for cancer |
AU2018375340A1 (en) | 2017-11-30 | 2020-05-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-TrkB monoclonal antibodies and methods of use |
PT3720279T (pt) | 2017-12-05 | 2022-10-06 | Regeneron Pharma | Ratinhos tendo uma cadeia leve lambda de imunoglobulina manipulada e seus usos |
CA3083113A1 (en) | 2017-12-13 | 2019-06-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-c5 antibody combinations and uses thereof |
WO2019126194A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Angptl8 assay and uses thereof |
SG11202005632SA (en) | 2017-12-21 | 2020-07-29 | Hoffmann La Roche | Antibodies binding to hla-a2/wt1 |
AU2018389111A1 (en) | 2017-12-22 | 2020-06-18 | Jounce Therapeutics, Inc. | Antibodies to LILRB2 |
TW201929907A (zh) | 2017-12-22 | 2019-08-01 | 美商建南德克公司 | Pilra結合劑用於治療疾病之用途 |
JP7369127B2 (ja) | 2017-12-28 | 2023-10-25 | ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー,リミテッド | Tigitに対する単一ドメイン抗体及びその変異体 |
US20220135687A1 (en) | 2017-12-28 | 2022-05-05 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Antibodies and variants thereof against pd-l1 |
WO2019133512A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Alector Llc | Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof |
CA3086926A1 (en) | 2018-01-08 | 2019-07-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Steroids and antibody-conjugates thereof |
KR20200120641A (ko) | 2018-01-15 | 2020-10-21 | 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. | Pd-1에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체 |
WO2019143636A1 (en) | 2018-01-16 | 2019-07-25 | Lakepharma, Inc. | Bispecific antibody that binds cd3 and another target |
US20190225689A1 (en) | 2018-01-22 | 2019-07-25 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of treating cancers with antagonistic anti-pd-1 antibodies |
MA46731B1 (fr) | 2018-01-26 | 2021-06-30 | Regeneron Pharma | Anticorps anti-tmprss2 et fragments de liaison à l'antigène |
WO2019147867A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Human antibodies to influenza hemagglutinin |
JP7268038B2 (ja) | 2018-01-31 | 2023-05-02 | アレクトル エルエルシー | 抗ms4a4a抗体及びその使用方法 |
BR112020016169A2 (pt) | 2018-02-08 | 2020-12-15 | Genentech, Inc. | Moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para produzir a molécula de ligação, conjunto de ácidos nucleicos isolados, conjunto de vetores, conjunto de células hospedeiras, imunoconjugado, composição, uso da molécula de ligação, métodos para tratar ou retardar a progressão de um câncer, métodos para aperfeiçoar a função imune e kit |
KR20220098056A (ko) | 2018-02-09 | 2022-07-08 | 제넨테크, 인크. | 비만 세포 매개 염증성 질환에 대한 치료 및 진단 방법 |
TWI829667B (zh) | 2018-02-09 | 2024-01-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合gprc5d之抗體 |
CA3092108A1 (en) | 2018-02-26 | 2019-08-29 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
JP7426940B2 (ja) | 2018-03-06 | 2024-02-02 | サノフィ・バイオテクノロジー | 心血管リスクを低減するためのpcsk9阻害剤の使用 |
US20200040103A1 (en) | 2018-03-14 | 2020-02-06 | Genentech, Inc. | Anti-klk5 antibodies and methods of use |
JP2021518343A (ja) | 2018-03-15 | 2021-08-02 | 中外製薬株式会社 | ジカウイルスに対して交差反応性を有する抗デングウイルス抗体および使用方法 |
EP3940382A1 (en) | 2018-03-24 | 2022-01-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Systems and methods for identifying hla-associated tumor peptides |
CN112040769B (zh) | 2018-03-24 | 2023-05-16 | 瑞泽恩制药公司 | 用于产生针对肽-mhc复合物的治疗抗体的经过基因修饰的非人动物、制造方法和用途 |
MX2020009851A (es) | 2018-03-26 | 2020-11-09 | Regeneron Pharma | Anticuerpos anti-pfrh5 y fragmentos de unión al antígeno de estos. |
CA3093850A1 (en) | 2018-03-26 | 2019-10-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Humanized rodents for testing therapeutic agents |
JP2021519073A (ja) | 2018-03-29 | 2021-08-10 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御 |
AU2019241350A1 (en) | 2018-03-30 | 2020-07-30 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof |
EP3778639A4 (en) | 2018-04-02 | 2021-06-09 | Mab-Venture Biopharm Co., Ltd. | ANTIBODIES BINDING TO LYMPHOCYTAIR ACTIVATION GENE 3 (LAG-3) AND ITS USE |
TW202011029A (zh) | 2018-04-04 | 2020-03-16 | 美商建南德克公司 | 偵測及定量fgf21之方法 |
AR115052A1 (es) | 2018-04-18 | 2020-11-25 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos |
AR114789A1 (es) | 2018-04-18 | 2020-10-14 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos |
WO2019213384A1 (en) | 2018-05-03 | 2019-11-07 | University Of Rochester | Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof |
BR112020022400A2 (pt) | 2018-05-09 | 2021-02-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | anticorpos anti-msr1 e métodos de uso dos mesmos |
MA52777A (fr) | 2018-05-24 | 2021-04-14 | Janssen Biotech Inc | Agents de liaison psma et utilisations correspondantes |
EA202092847A1 (ru) | 2018-05-24 | 2021-04-20 | Янссен Байотек, Инк. | Антитела к cd3 и их применение |
MA52772A (fr) | 2018-05-24 | 2021-04-14 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-tmeff2 monospécifiques et multispécifiques et leurs utilisations |
MX2020011828A (es) | 2018-05-25 | 2021-02-09 | Alector Llc | Anticuerpos anti proteina alfa reguladora de se?ales (sirpa) y metodos de uso de los mismos. |
MX2020011385A (es) | 2018-05-31 | 2021-04-13 | Glyconex Inc | Anticuerpos terapeuticos que se unen antigenos de lewis b y lewis y biantenarios. |
JP2021525806A (ja) | 2018-06-01 | 2021-09-27 | タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー, リミテッド | 疾患または状態を処置するための組成物およびそれらの使用 |
EP3811364A1 (en) | 2018-06-01 | 2021-04-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and systems for sparse vector-based matrix transformations |
KR102444180B1 (ko) | 2018-06-14 | 2022-09-16 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 면역글로불린 중쇄 암호화 서열에서 dh-dh 재배열 가능한 비인간 동물 |
EP3810270A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-04-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-factor xii/xiia antibodies and uses thereof |
MX2020014091A (es) | 2018-06-23 | 2021-05-27 | Genentech Inc | Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un agente de platino y un inhibidor de la topoisomerasa ii. |
CA3099176A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Alector Llc | Anti-sirp-beta1 antibodies and methods of use thereof |
EP3820891A1 (en) | 2018-07-10 | 2021-05-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Modifying binding molecules to minimize pre-existing interactions |
CN111372655A (zh) | 2018-07-13 | 2020-07-03 | 艾利妥 | 抗分拣蛋白抗体及其使用方法 |
JP7386224B2 (ja) | 2018-07-16 | 2023-11-24 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 抗il36r抗体 |
MX2021000268A (es) | 2018-07-17 | 2021-06-08 | Humabs Biomed Sa | Anticuerpos contra especies de campylobacter. |
EP3823611A1 (en) | 2018-07-18 | 2021-05-26 | Genentech, Inc. | Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent |
BR112021001214A2 (pt) | 2018-07-24 | 2021-04-27 | Medimmune, Llc | anticorpo dirigido contra o fator de aglutinação a (clfa) de s. aureus |
AU2019318031A1 (en) | 2018-08-10 | 2021-02-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-CD137 antigen-binding molecule and utilization thereof |
US11472870B2 (en) | 2018-08-10 | 2022-10-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical composition for safe and effective treatment of knee and/or hip pain |
TW202021618A (zh) | 2018-08-17 | 2020-06-16 | 美商23與我有限公司 | 抗il1rap抗體及其使用方法 |
BR112021003206A2 (pt) | 2018-08-29 | 2021-05-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | métodos e composições para tratar indivíduos com artrite reumatoide |
TW202016307A (zh) | 2018-08-31 | 2020-05-01 | 美商阿列克特有限責任公司 | 抗cd33 抗體及其使用方法 |
GB201814281D0 (en) | 2018-09-03 | 2018-10-17 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic agents |
EP3849304B1 (en) | 2018-09-13 | 2024-01-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Complement factor h gene knockout rat as a model of c3 glomerulopathy |
WO2020061060A1 (en) | 2018-09-19 | 2020-03-26 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer |
EP4249917A3 (en) | 2018-09-21 | 2023-11-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Diagnostic methods for triple-negative breast cancer |
US20200109200A1 (en) | 2018-10-09 | 2020-04-09 | Genentech, Inc. | Methods and systems for determining synapse formation |
AU2019357983A1 (en) | 2018-10-09 | 2021-05-27 | Medimmune, Llc | Combinations of anti-staphylococcus aureus antibodies |
CN113196061A (zh) | 2018-10-18 | 2021-07-30 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 肉瘤样肾癌的诊断和治疗方法 |
BR112021004329A2 (pt) | 2018-10-23 | 2021-08-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | anticorpos anti-npr1 e usos dos mesmos |
TW202037381A (zh) | 2018-10-24 | 2020-10-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 綴合化學降解誘導劑及使用方法 |
JOP20210093A1 (ar) | 2018-10-31 | 2023-01-30 | Astellas Pharma Inc | جسم مضاد fn14 غير متوافق مع الإنسان |
EP3877413A1 (en) | 2018-11-06 | 2021-09-15 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells |
EP3883963A1 (en) | 2018-11-21 | 2021-09-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-staphylococcus antibodies and uses thereof |
AU2018451747A1 (en) | 2018-12-06 | 2021-06-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of diffuse large B-cell lymphoma comprising an anti-CD79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-CD20 antibody |
WO2020123275A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | Genentech, Inc. | Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins |
WO2020120786A1 (en) | 2018-12-14 | 2020-06-18 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs |
GB201820547D0 (en) | 2018-12-17 | 2019-01-30 | Oxford Univ Innovation | Modified antibodies |
GB201820554D0 (en) | 2018-12-17 | 2019-01-30 | Univ Oxford Innovation Ltd | BTLA antibodies |
AR117327A1 (es) | 2018-12-20 | 2021-07-28 | 23Andme Inc | Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos |
EP3883609A2 (en) | 2018-12-20 | 2021-09-29 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof |
IL301193A (en) | 2018-12-20 | 2023-05-01 | Regeneron Pharma | Nuclease-mediated repeat expansion |
TW202035442A (zh) | 2018-12-20 | 2020-10-01 | 美商建南德克公司 | 經修飾之抗體Fc及其使用方法 |
SG11202106100VA (en) | 2018-12-21 | 2021-07-29 | 23Andme Inc | Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof |
TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 前列腺新抗原及其用途 |
TW202043272A (zh) | 2019-01-14 | 2020-12-01 | 美商建南德克公司 | 使用pd-1軸結合拮抗劑及rna疫苗治療癌症之方法 |
SG11202107981VA (en) | 2019-01-22 | 2021-08-30 | Genentech Inc | Immunoglobulin a antibodies and methods of production and use |
JPWO2020153467A1 (ja) | 2019-01-24 | 2021-12-02 | 中外製薬株式会社 | 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体 |
GB201901197D0 (en) | 2019-01-29 | 2019-03-20 | Femtogenix Ltd | G-A Crosslinking cytotoxic agents |
EA202192090A1 (ru) | 2019-02-01 | 2021-10-20 | Регенерон Фармасьютикалз, Инк. | Антигенсвязывающие белки против гамма-цепи рецептора il2 |
MX2021009533A (es) | 2019-02-12 | 2021-11-12 | Regeneron Pharma | Composiciones y metodos para usar anticuerpos bispecificos para unirse al complemento y a un antigeno objetivo. |
EP3924378A4 (en) | 2019-02-15 | 2023-04-05 | WuXi Biologics Ireland Limited | METHODS FOR THE PRODUCTION OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES WITH IMPROVED HOMOGENEITY |
WO2020169472A2 (en) | 2019-02-18 | 2020-08-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods of inducing phenotypic changes in macrophages |
CN112400022B (zh) | 2019-02-18 | 2023-06-30 | 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 | 具有人源化免疫球蛋白基因座的经遗传修饰的非人动物 |
JP2022520819A (ja) | 2019-02-22 | 2022-04-01 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 遺伝子改変ナトリウムチャネルを有する齧歯類およびその使用方法 |
JP2022521773A (ja) | 2019-02-27 | 2022-04-12 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗tigit抗体と抗cd20抗体又は抗cd38抗体とによる処置のための投薬 |
CA3131908A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-10 | Allogene Therapeutics, Inc. | Dll3 targeting chimeric antigen receptors and binding agents |
KR20210138588A (ko) | 2019-03-08 | 2021-11-19 | 제넨테크, 인크. | 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법 |
IL286917B (en) | 2019-04-04 | 2022-09-01 | Regeneron Pharma | Methods for scar-free insertion of targeted modifications into targeted vectors |
IL286905B1 (en) | 2019-04-04 | 2024-02-01 | Regeneron Pharma | Non-human animals containing the human coagulation factor 12 locus |
CA3134258A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Human antibodies that bind ret and methods of use thereof |
WO2020214690A1 (en) | 2019-04-15 | 2020-10-22 | Qwixel Therapeutics | Fusion protein composition(s) comprising targeted masked type i interferons (ifna and ifnb) and an antibody against tumor antigen, for use in the treatment of cancer |
CA3136888A1 (en) | 2019-04-19 | 2020-10-22 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of treating prostate cancer with an anti- psma/cd3 antibody |
JP2022529154A (ja) | 2019-04-19 | 2022-06-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗mertk抗体及びその使用方法 |
KR20220004028A (ko) | 2019-04-26 | 2022-01-11 | 알로젠 테라퓨틱스 인코포레이티드 | 동종 car t 세포를 제조하는 방법 |
WO2020223541A1 (en) | 2019-05-01 | 2020-11-05 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating or preventing asthma by administering an il-33 antagonist |
US20220227853A1 (en) | 2019-05-03 | 2022-07-21 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use |
EP3962947A2 (en) | 2019-05-03 | 2022-03-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody |
BR112021022815A2 (pt) | 2019-05-14 | 2021-12-28 | Genentech Inc | Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina |
US20230085439A1 (en) | 2019-05-21 | 2023-03-16 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use |
EP3801011A1 (en) | 2019-06-04 | 2021-04-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use |
TW202110323A (zh) | 2019-06-05 | 2021-03-16 | 美商再生元醫藥公司 | 具有表現自κ 基因座的有限λ 輕鏈組庫的非人類動物及其用途 |
KR20220017939A (ko) | 2019-06-07 | 2022-02-14 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 인간화 알부민 좌위를 포함하는 비-인간 동물 |
TW202112817A (zh) | 2019-06-11 | 2021-04-01 | 美商阿列克特有限責任公司 | 抗揀選蛋白抗體之使用方法 |
CN113966343A (zh) | 2019-06-11 | 2022-01-21 | 瑞泽恩制药公司 | 结合PcrV的抗PcrV抗体、包含抗PcrV抗体的组合物及其使用方法 |
JP2022537142A (ja) | 2019-06-12 | 2022-08-24 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 骨形成タンパク質6に対するヒト抗体 |
WO2020257681A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Use of bispecific antigen-binding molecules that bind psma and cd3 in combination with 4-1bb co-stimulation |
JP2022537269A (ja) | 2019-06-21 | 2022-08-25 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Muc16およびcd3に結合する二重特異性抗原結合分子の4-1bb共刺激と組み合わせての使用 |
CA3145050A1 (en) | 2019-06-29 | 2021-01-07 | Robert Zhao | Conjugates of tubulysin derivatives and cell binding molecules and methods of making |
JP2022538886A (ja) | 2019-07-01 | 2022-09-06 | トリアニ・インコーポレイテッド | トランスジェニック哺乳動物およびその使用法 |
CA3144958A1 (en) | 2019-07-01 | 2021-01-07 | Trianni, Inc. | Transgenic mammals and methods of use thereof |
TW202115115A (zh) | 2019-07-02 | 2021-04-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 免疫結合物 |
AR119393A1 (es) | 2019-07-15 | 2021-12-15 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a nkg2d |
AU2020315369A1 (en) | 2019-07-16 | 2022-03-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating or preventing asthma by administering an IL-4R antagonist |
UY38803A (es) | 2019-07-26 | 2021-01-29 | Janssen Biotech Inc | Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreína y usos de las mismas |
CA3144524A1 (en) | 2019-07-31 | 2021-02-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies binding to gprc5d |
CN114174338A (zh) | 2019-07-31 | 2022-03-11 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 与gprc5d结合的抗体 |
EP4003519A2 (en) | 2019-07-31 | 2022-06-01 | Alector LLC | Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof |
WO2021026205A1 (en) | 2019-08-05 | 2021-02-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist |
CN114173819A (zh) | 2019-08-05 | 2022-03-11 | 瑞泽恩制药公司 | 通过施用il-4r拮抗剂治疗过敏和增强过敏原特异性免疫疗法的方法 |
US20210047425A1 (en) | 2019-08-12 | 2021-02-18 | Purinomia Biotech, Inc. | Methods and compositions for promoting and potentiating t-cell mediated immune responses through adcc targeting of cd39 expressing cells |
CA3148121A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-18 | Janssen Biotech, Inc. | Materials and methods for improved single chain variable fragments |
DK3785536T3 (da) | 2019-08-28 | 2022-03-28 | Trianni Inc | Adam6-knockin-mus |
AU2020345913A1 (en) | 2019-09-12 | 2022-02-24 | Genentech, Inc. | Compositions and methods of treating lupus nephritis |
CR20220156A (es) | 2019-09-18 | 2022-05-23 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5/klk7 y métodos de uso |
AU2020348393A1 (en) | 2019-09-20 | 2022-02-24 | Genentech, Inc. | Dosing for anti-tryptase antibodies |
CA3151406A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | Raymond D. Meng | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
EP4034560A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-08-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-müllerian inhibiting substance antibodies and uses thereof |
WO2021058729A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof |
EP4036116A4 (en) | 2019-09-27 | 2024-01-24 | Nanjing Genscript Biotech Co Ltd | ANTI-VHH DOMAIN ANTIBODIES AND USE THEREOF |
EP4034160A1 (en) | 2019-09-27 | 2022-08-03 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-ceacam antibodies and uses thereof |
WO2021066869A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | TAE Life Sciences | Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties |
BR112022007216A2 (pt) | 2019-10-18 | 2022-08-23 | Genentech Inc | Métodos para tratamento de linfoma difuso, kit e imunoconjugado |
AU2020374878A1 (en) | 2019-10-28 | 2022-04-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use thereof |
CA3155922A1 (en) | 2019-11-06 | 2021-05-14 | Huang Huang | Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers |
CN114641270A (zh) | 2019-11-15 | 2022-06-17 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 防止水性蛋白质溶液中可见颗粒的形成 |
CR20220220A (es) | 2019-11-18 | 2022-09-20 | Janssen Biotech Inc | Vacunas basadas en calr y jak2 mutantes y sus usos |
WO2021099600A1 (en) | 2019-11-22 | 2021-05-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Inhibitors of adrenomedullin for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells |
IL293282A (en) | 2019-11-25 | 2022-07-01 | Mabloc Llc | Yellow fever antiviral antibodies and methods of making and using them |
WO2021108363A1 (en) | 2019-11-25 | 2021-06-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele |
WO2021113297A1 (en) | 2019-12-02 | 2021-06-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Peptide-mhc ii protein constructs and uses thereof |
EP4069365A1 (en) | 2019-12-06 | 2022-10-12 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating copd by administering an il-33 antagonist |
JP2023504204A (ja) | 2019-12-09 | 2023-02-01 | サノフィ・バイオテクノロジー | デジタル的に識別されたil-4/il-13関連障害を治療する方法 |
EP3992974A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-04 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating digitally-identified il-4/il-13 related disorders |
MX2022007071A (es) | 2019-12-10 | 2022-07-11 | Regeneron Pharma | Uso de un inhibidor de pcsk9 para tratar la hipercolesterolemia familiar homocigotica. |
US11897968B2 (en) | 2019-12-13 | 2024-02-13 | Alector Llc | Anti-MerTK antibodies and methods of use thereof |
WO2021119505A1 (en) | 2019-12-13 | 2021-06-17 | Genentech, Inc. | Anti-ly6g6d antibodies and methods of use |
WO2021122875A1 (en) | 2019-12-18 | 2021-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies binding to hla-a2/mage-a4 |
IL294045A (en) | 2019-12-20 | 2022-08-01 | Hudson Inst Med Res | Proteins that bind to cxcl10 and their uses |
BR112022011388A2 (pt) | 2019-12-23 | 2022-08-30 | Sanofi Biotechnology | Métodos para tratar ou prevenir asma alérgica administrando um antagonista de il-33 e/ou um antagonista de il-4r |
BR112022011723A2 (pt) | 2019-12-27 | 2022-09-06 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticorpo anti-ctla-4 e uso do mesmo |
CN115280151A (zh) | 2020-01-08 | 2022-11-01 | 瑞泽恩制药公司 | 使用氨基酸增强质谱分析中的信号 |
CN110818795B (zh) | 2020-01-10 | 2020-04-24 | 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 | 抗tigit抗体和使用方法 |
JP2023511956A (ja) | 2020-01-24 | 2023-03-23 | レゲネロン ファーマシューティカルス,インコーポレーテッド | タンパク質-抗ウイルス化合物コンジュゲート |
WO2021194481A1 (en) | 2020-03-24 | 2021-09-30 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
US11639939B2 (en) | 2020-01-27 | 2023-05-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Tandem mass tag multiplexed quantitation of post-translational modifications of proteins |
WO2022050954A1 (en) | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies |
CN115175559A (zh) | 2020-01-28 | 2022-10-11 | 瑞泽恩制药公司 | 包含人源化pnpla3基因座的非人动物及其使用方法 |
CN115210564A (zh) | 2020-01-30 | 2022-10-18 | 瑞泽恩制药公司 | 用于天然液相色谱-质谱的平台 |
MX2022009411A (es) | 2020-01-31 | 2022-08-25 | Regeneron Pharma | Identificacion de compuestos de alta confianza mediante cromatografia de liquidos-espectrometria de masas. |
MX2022009391A (es) | 2020-01-31 | 2022-09-26 | Genentech Inc | Metodos para inducir linfocitos t especificos para neoepitopo con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn. |
WO2021158521A1 (en) | 2020-02-03 | 2021-08-12 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same |
CA3108168A1 (en) | 2020-02-05 | 2021-08-05 | Yue Zhang | Conjugates of cell-binding molecules with cytotoxic agents |
EP4099821A1 (en) | 2020-02-07 | 2022-12-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | <smallcaps/>? ? ?klkb1? ? ? ? ?non-human animals comprising a humanizedlocus and methods of use |
AU2021219671A1 (en) | 2020-02-10 | 2022-07-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-Tmprss2 Antibodies and Antigen-Binding Fragments |
EP4105238A4 (en) | 2020-02-10 | 2024-03-27 | Shanghai Escugen Biotechnology Co Ltd | CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES AND THEIR USE |
KR20220139357A (ko) | 2020-02-10 | 2022-10-14 | 상하이 에스쿠겐 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드 | Cldn18.2 항체 및 그의 사용 |
CA3167441A1 (en) | 2020-02-11 | 2021-08-19 | Vincent J. Idone | Anti-acvr1 antibodies and uses thereof |
TW202144395A (zh) | 2020-02-12 | 2021-12-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子 |
TW202140012A (zh) | 2020-02-12 | 2021-11-01 | 比利時商健生藥品公司 | 用於治療尿路上皮癌的fgfr酪胺酸激酶抑制劑和抗pd1藥劑 |
US11692038B2 (en) | 2020-02-14 | 2023-07-04 | Gilead Sciences, Inc. | Antibodies that bind chemokine (C-C motif) receptor 8 (CCR8) |
TW202144389A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途 |
TW202144388A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途 |
BR112022017048A2 (pt) | 2020-02-26 | 2022-11-16 | Vir Biotechnology Inc | Anticorpos contra sars-cov-2 e métodos para usar os mesmos |
AU2021225920A1 (en) | 2020-02-28 | 2022-09-15 | Shanghai Henlius Biotech, Inc. | Anti-CD137 construct and use thereof |
EP4110826A1 (en) | 2020-02-28 | 2023-01-04 | Shanghai Henlius Biotech, Inc. | Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof |
WO2021183849A1 (en) | 2020-03-13 | 2021-09-16 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
PE20230001A1 (es) | 2020-03-13 | 2023-01-05 | Janssen Biotech Inc | Materiales y metodos para la union de siglec-3/cd33 |
CN115279408A (zh) | 2020-03-19 | 2022-11-01 | 基因泰克公司 | 同种型选择性抗TGF-β抗体及使用方法 |
US20230102342A1 (en) | 2020-03-23 | 2023-03-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use |
AU2021242249A1 (en) | 2020-03-24 | 2022-08-18 | Genentech, Inc. | Tie2-binding agents and methods of use |
CN115315512A (zh) | 2020-03-26 | 2022-11-08 | 基因泰克公司 | 具有降低的宿主细胞蛋白质的经修饰的哺乳动物细胞 |
MX2022011730A (es) | 2020-03-27 | 2022-10-13 | Regeneron Pharma | Metodos para el tratamiento de dermatitis atopica mediante la administracion de un antagonista de il-4r. |
JP2023519962A (ja) | 2020-03-31 | 2023-05-15 | アレクトル エルエルシー | 抗mertk抗体及びその使用方法 |
CA3170570A1 (en) | 2020-04-01 | 2021-10-07 | James J. KOBIE | Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses |
CN113766928A (zh) | 2020-04-02 | 2021-12-07 | 瑞泽恩制药公司 | 抗sars-cov-2纤突糖蛋白抗体和抗原结合片段 |
WO2021203053A1 (en) | 2020-04-03 | 2021-10-07 | Vir Biotechnology, Inc. | Immunotherapy targeting a conserved region in sars coronaviruses |
EP4127724A1 (en) | 2020-04-03 | 2023-02-08 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for cancer |
CN115461620A (zh) | 2020-04-14 | 2022-12-09 | 瑞泽恩制药公司 | 通过正交偏最小二乘法对色谱性能进行紫外线监测 |
WO2021211775A1 (en) | 2020-04-14 | 2021-10-21 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same |
KR20230004494A (ko) | 2020-04-15 | 2023-01-06 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 면역접합체 |
WO2021211984A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Diels-alder conjugation methods |
CA3175530A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Genentech, Inc. | Methods of using anti-cd79b immunoconjugates |
TW202206459A (zh) | 2020-04-24 | 2022-02-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 硫氫基化合物及其衍生物的酶以及途徑調節 |
JP2023523450A (ja) | 2020-04-28 | 2023-06-05 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物 |
KR20230002261A (ko) | 2020-04-28 | 2023-01-05 | 더 락커펠러 유니버시티 | 항-sars-cov-2 중화 항체 및 이의 사용 방법 |
CN116963782A (zh) | 2020-05-03 | 2023-10-27 | 联宁(苏州)生物制药有限公司 | 包含抗trop-2抗体的抗体药物偶联物 |
CA3177169A1 (en) | 2020-05-08 | 2021-11-11 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies against sars-cov-2 |
CN115916335A (zh) | 2020-05-12 | 2023-04-04 | 瑞泽恩制药公司 | 抗glp1r拮抗剂抗体及其使用方法 |
US20230181753A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-06-15 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas |
JP2023520249A (ja) | 2020-05-15 | 2023-05-16 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 非経口タンパク質溶液中の可視粒子形成の防止方法 |
CN115605185A (zh) | 2020-05-19 | 2023-01-13 | 豪夫迈·罗氏有限公司(Ch) | 螯合剂用于防止胃肠外蛋白质溶液中形成可见颗粒的用途 |
MX2022014440A (es) | 2020-05-22 | 2023-02-27 | Regeneron Pharma | Metodos para el tratamiento de la esofagitis eosinofilica mediante la administracion de un inhibidor de il-4r. |
WO2021242815A1 (en) | 2020-05-26 | 2021-12-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-sars-cov-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments |
CA3184189A1 (en) | 2020-05-27 | 2021-12-02 | Janssen Biotech, Inc. | Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof |
BR112022024339A2 (pt) | 2020-05-29 | 2022-12-27 | 23Andme Inc | Anticorpos anti cd200r1 e métodos de uso dos mesmos |
CN116529260A (zh) | 2020-06-02 | 2023-08-01 | 当康生物技术有限责任公司 | 抗cd93构建体及其用途 |
BR112022024629A2 (pt) | 2020-06-02 | 2023-02-23 | Dynamicure Biotechnology Llc | Construtos anti-cd93 e seus usos |
WO2021247925A1 (en) | 2020-06-03 | 2021-12-09 | Vir Biotechnology, Inc. | Structure-guided immunotherapy against sars-cov-2 |
MX2022015206A (es) | 2020-06-08 | 2023-01-05 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-hbv y metodos de uso. |
RU2751237C1 (ru) * | 2020-06-10 | 2021-07-12 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Способы и композиции для направленной модификации генома |
GB202008860D0 (en) | 2020-06-11 | 2020-07-29 | Univ Oxford Innovation Ltd | BTLA antibodies |
CA3180477A1 (en) | 2020-06-12 | 2021-12-16 | Elizabeth Alexander | Antibody therapies for sars-cov-2 infection |
CN115698719A (zh) | 2020-06-12 | 2023-02-03 | 基因泰克公司 | 用于癌症免疫疗法的方法和组合物 |
WO2021257503A1 (en) | 2020-06-16 | 2021-12-23 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer |
IL299103A (en) | 2020-06-18 | 2023-02-01 | Regeneron Pharma | Formulations of activin A antibody and methods of its use |
US20210395366A1 (en) | 2020-06-18 | 2021-12-23 | Genentech, Inc. | Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists |
JP2023531222A (ja) | 2020-06-22 | 2023-07-21 | アルミラル・ソシエダッド・アノニマ | 抗il-36抗体およびその使用方法 |
US20220041672A1 (en) | 2020-06-24 | 2022-02-10 | Genentech, Inc. | Apoptosis resistant cell lines |
KR20230024822A (ko) | 2020-06-25 | 2023-02-21 | 주식회사 휴맵 | 이형접합성 형질전환 동물 |
AU2021300129A1 (en) | 2020-07-01 | 2022-12-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating allergy using anti-Bet v 1 antibodies |
JP2023532764A (ja) | 2020-07-07 | 2023-07-31 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 治療用タンパク質製剤の安定剤としての代替界面活性剤 |
EP4178625A1 (en) | 2020-07-13 | 2023-05-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in a protein, and their use |
WO2022016037A1 (en) | 2020-07-17 | 2022-01-20 | Genentech, Inc. | Anti-notch2 antibodies and methods of use |
JP2023535409A (ja) | 2020-07-21 | 2023-08-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | Brm分解の抗体コンジュゲート化化学的誘導物質及びbrm分解の方法 |
GB2597532A (en) | 2020-07-28 | 2022-02-02 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic compounds |
EP4188550A1 (en) | 2020-07-29 | 2023-06-07 | Dynamicure Biotechnology LLC | Anti-cd93 constructs and uses thereof |
CA3190307A1 (en) | 2020-07-29 | 2022-02-03 | Janssen Biotech, Inc. | Proteins comprising hla-g antigen binding domains and their uses |
IL300429A (en) | 2020-08-07 | 2023-04-01 | Regeneron Pharma | Methods of treating refractory hypercholesterolemia with an ANGPTL3 inhibitor |
CA3128035A1 (en) | 2020-08-13 | 2022-02-13 | Bioasis Technologies, Inc. | Combination therapies for delivery across the blood brain barrier |
WO2022046925A1 (en) | 2020-08-26 | 2022-03-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies |
WO2022047222A2 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-03 | Genentech, Inc. | Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins |
CA3187680A1 (en) | 2020-09-11 | 2022-03-17 | Yashu Liu | Identification and production of antigen-specific antibodies |
MX2023002974A (es) | 2020-09-14 | 2023-05-25 | Regeneron Pharma | Conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden peptidomimeticos glp1 y usos de los mismos. |
TW202227496A (zh) | 2020-09-14 | 2022-07-16 | 瑞士商伊克諾斯科學公司 | 結合至il1rap之抗體及其用途 |
CA3194162A1 (en) | 2020-09-28 | 2022-03-31 | Humabs Biomed Sa | Antibodies against sars-cov-2 |
KR20230082650A (ko) | 2020-10-05 | 2023-06-08 | 사노피 바이오테크놀로지 | Il-4r 길항제를 투여하여 소아 대상체에서 천식을 치료하는 방법 |
CA3193952A1 (en) | 2020-10-05 | 2022-04-14 | Bernard Martin Fine | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2022075793A1 (ko) | 2020-10-08 | 2022-04-14 | 주식회사 휴맵 | 인간화 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 게놈을 가지는 형질전환 비인간-동물 제조방법 |
UY39467A (es) | 2020-10-13 | 2022-04-29 | Janssen Biotech Inc | Inmunidad mediada por células t de bioingeniería, materiales y otros métodos para modular el grupo de diferenciación iv y / o viii |
CA3198456A1 (en) | 2020-10-14 | 2022-04-21 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof |
WO2022084210A1 (en) | 2020-10-20 | 2022-04-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhitibors |
CA3190569A1 (en) | 2020-10-22 | 2022-04-28 | Christopher Daly | Anti-fgfr2 antibodies and methods of use thereof |
WO2022084915A1 (en) | 2020-10-22 | 2022-04-28 | Janssen Biotech, Inc. | Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses |
WO2022093981A1 (en) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists |
US20220153842A1 (en) | 2020-11-04 | 2022-05-19 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates |
CA3196539A1 (en) | 2020-11-04 | 2022-05-12 | Chi-Chung Li | Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies |
EP4240758A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-09-13 | The Rockefeller University | Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies |
JP2023548069A (ja) | 2020-11-04 | 2023-11-15 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗cd20/抗cd3二重特異性抗体の皮下投薬 |
US20240002483A1 (en) | 2020-11-16 | 2024-01-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Fab high mannose glycoforms |
AR124063A1 (es) | 2020-11-16 | 2023-02-08 | Astellas Pharma Inc | Anticuerpo biespecífico anti-tspan8 / anti-cd3 y anticuerpo anti-tspan8 |
EP4247844A1 (en) | 2020-11-23 | 2023-09-27 | VIR Biotechnology, Inc. | Antibodies against influenza a viruses |
JP2023551667A (ja) | 2020-11-23 | 2023-12-12 | ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド | 抗-インフルエンザ抗体及びその組合せ |
TW202229329A (zh) | 2020-11-23 | 2022-08-01 | 美商維爾生物科技股份有限公司 | 針對流感神經胺酸酶的廣泛中和抗體 |
WO2022115486A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-06-02 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies that bind to multiple betacoronaviruses |
WO2022120352A1 (en) | 2020-12-02 | 2022-06-09 | Alector Llc | Methods of use of anti-sortilin antibodies |
IL303529A (en) | 2020-12-09 | 2023-08-01 | Trianni Inc | Heavy chain antibodies only |
IL303626A (en) | 2020-12-16 | 2023-08-01 | Regeneron Pharma | Mice expressing human FC alpha receptors |
WO2022132904A1 (en) | 2020-12-17 | 2022-06-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2 |
WO2022129120A1 (en) | 2020-12-17 | 2022-06-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-hla-g antibodies and use thereof |
WO2022133239A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Immunoglobulin proteins that bind to npr1 agonists |
CA3202429A1 (en) | 2020-12-20 | 2022-06-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for identification of scrambled disulfides in biomolecules |
TW202241934A (zh) | 2020-12-23 | 2022-11-01 | 美商再生元醫藥公司 | 編碼錨定修飾抗體之核酸及其用途 |
CA3197426A1 (en) | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for obtaining antibodies that bind transmembrane proteins and cells that produce the same |
WO2022150605A1 (en) | 2021-01-08 | 2022-07-14 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating peanut allergy and enhancing peanut allergen-specific immunotherapy by administering an il-4r antagonist |
WO2022148853A1 (en) | 2021-01-11 | 2022-07-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Immunoconjugates |
JPWO2022153997A1 (es) | 2021-01-13 | 2022-07-21 | ||
US20220227844A1 (en) | 2021-01-15 | 2022-07-21 | The Rockefeller University | Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies |
WO2022159842A1 (en) | 2021-01-25 | 2022-07-28 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibody combination therapies for sars-cov-2 infection |
US20220242943A1 (en) | 2021-01-25 | 2022-08-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti- pdgf-b antibodies and methods of use for treating pulmonary arterial hypertension (pah) |
KR20230137393A (ko) | 2021-01-28 | 2023-10-04 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | Psma 결합 단백질 및 이의 용도 |
JP2024506321A (ja) | 2021-02-09 | 2024-02-13 | ヒューマブス・バイオメッド・ソシエテ・アノニム | 呼吸器合胞体ウイルスおよび他のパラミクソウイルスに対する抗体およびその使用方法 |
CN117396502A (zh) | 2021-02-09 | 2024-01-12 | 佐治亚大学研究基金会有限公司 | 针对肺炎球菌抗原的人类单克隆抗体 |
MX2023009244A (es) | 2021-02-09 | 2023-09-11 | Us Health | Anticuerpos contra la proteina espicular de coronavirus. |
CA3210069A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-09-09 | Tong Zhu | Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody |
JP2024509191A (ja) | 2021-03-05 | 2024-02-29 | ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー | 抗vista構築物およびその使用 |
WO2022187626A1 (en) | 2021-03-05 | 2022-09-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-sars-cov-2-variant-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments |
AR125074A1 (es) | 2021-03-12 | 2023-06-07 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5 / klk7 y métodos de uso |
JP2024511970A (ja) | 2021-03-15 | 2024-03-18 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ループス腎炎の治療の組成物及び方法 |
JP2024512002A (ja) | 2021-03-18 | 2024-03-18 | アレクトル エルエルシー | 抗tmem106b抗体、及び、その使用方法 |
WO2022197877A1 (en) | 2021-03-19 | 2022-09-22 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents |
WO2022204202A1 (en) | 2021-03-23 | 2022-09-29 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses |
JP2024511610A (ja) | 2021-03-23 | 2024-03-14 | アレクトル エルエルシー | コロナウイルス感染の治療及び予防のための抗tmem106b抗体 |
TW202304986A (zh) | 2021-03-24 | 2023-02-01 | 美商健生生物科技公司 | 靶向cd22及cd79b的抗體 |
EP4314056A1 (en) | 2021-03-24 | 2024-02-07 | Janssen Biotech, Inc. | Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof |
EP4314049A1 (en) | 2021-03-25 | 2024-02-07 | Dynamicure Biotechnology LLC | Anti-igfbp7 constructs and uses thereof |
AR125255A1 (es) | 2021-04-02 | 2023-06-28 | Regeneron Pharma | Métodos de predicción y modulación de la glicación de una proteína |
AR125344A1 (es) | 2021-04-15 | 2023-07-05 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo anti-c1s |
WO2022220603A1 (ko) | 2021-04-16 | 2022-10-20 | 고려대학교 산학협력단 | 코로나-19 바이러스 표적 인간 항체 |
EP4326855A1 (en) | 2021-04-19 | 2024-02-28 | Genentech, Inc. | Modified mammalian cells |
BR112023021256A2 (pt) | 2021-04-20 | 2023-12-12 | Regeneron Pharma | Anticorpos humanos para artemina e métodos de uso dos mesmos |
IL307744A (en) | 2021-04-22 | 2023-12-01 | Astellas Pharma Inc | Anti-CLDN4/anti-CD137 bispecific antibody |
KR20240005691A (ko) | 2021-04-30 | 2024-01-12 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 및 항-cd79b 항체 약물 접합체를 이용한 병용 치료를 위한 투약 |
WO2022228706A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody |
AU2022270075A1 (en) | 2021-05-04 | 2023-11-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Multispecific fgf21 receptor agonists and their uses |
AU2022268937A1 (en) | 2021-05-05 | 2023-10-26 | Trianni, Inc. | Transgenic rodents expressing chimeric equine-rodent antibodies and methods of use thereof |
EP4334343A2 (en) | 2021-05-06 | 2024-03-13 | The Rockefeller University | Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof |
US20220411487A1 (en) | 2021-05-11 | 2022-12-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-tmprss6 antibodies and uses thereof |
CN117396232A (zh) | 2021-05-12 | 2024-01-12 | 基因泰克公司 | 使用抗cd79b免疫缀合物治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤的方法 |
EP4341385A1 (en) | 2021-05-21 | 2024-03-27 | Genentech, Inc. | Modified cells for the production of a recombinant product of interest |
AU2022280767A1 (en) | 2021-05-24 | 2024-01-18 | Humabs Biomed Sa | Engineered polypeptides |
CN113278071B (zh) | 2021-05-27 | 2021-12-21 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人干扰素α受体1单克隆抗体及其应用 |
JP2024520261A (ja) | 2021-06-04 | 2024-05-24 | 中外製薬株式会社 | 抗ddr2抗体およびその使用 |
AU2022289684A1 (en) | 2021-06-09 | 2023-10-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer |
WO2022266221A1 (en) | 2021-06-16 | 2022-12-22 | Alector Llc | Monovalent anti-mertk antibodies and methods of use thereof |
EP4355786A1 (en) | 2021-06-16 | 2024-04-24 | Alector LLC | Bispecific anti-mertk and anti-pdl1 antibodies and methods of use thereof |
EP4355785A1 (en) | 2021-06-17 | 2024-04-24 | Amberstone Biosciences, Inc. | Anti-cd3 constructs and uses thereof |
CN117529330A (zh) | 2021-06-18 | 2024-02-06 | 纳米医疗有限公司 | 用于治疗癌症的包括所掩蔽的I型干扰素(IFNα和IFNβ)的融合蛋白组合物和其方法 |
WO2022270611A1 (ja) | 2021-06-25 | 2022-12-29 | 中外製薬株式会社 | 抗ctla-4抗体 |
WO2022270612A1 (ja) | 2021-06-25 | 2022-12-29 | 中外製薬株式会社 | 抗ctla-4抗体の使用 |
AU2022307659A1 (en) | 2021-07-05 | 2024-01-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Utilization of antibodies to shape antibody responses to an antigen |
US20230125469A1 (en) | 2021-07-14 | 2023-04-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-SARS-CoV-2-Spike Glycoprotein Antibodies and Antigen-Binding Fragments |
PE20240638A1 (es) | 2021-07-14 | 2024-03-27 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-receptor de quimiocinas de motivo c-c 8 (ccr8) y metodos de uso |
CN117730102A (zh) | 2021-07-22 | 2024-03-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 异二聚体Fc结构域抗体 |
WO2023004386A1 (en) | 2021-07-22 | 2023-01-26 | Genentech, Inc. | Brain targeting compositions and methods of use thereof |
KR20240037321A (ko) | 2021-07-26 | 2024-03-21 | 사노피 바이오테크놀로지 | Il-4r 길항제의 투여에 의한 만성 자발성 심마진의 치료 방법 |
KR20240038928A (ko) | 2021-07-28 | 2024-03-26 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 단백질-항바이러스 화합물 접합체 |
WO2023012147A1 (en) | 2021-08-03 | 2023-02-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies and methods of use |
CN117897409A (zh) | 2021-08-13 | 2024-04-16 | 基因泰克公司 | 抗类胰蛋白酶抗体的给药 |
AU2022333073A1 (en) | 2021-08-23 | 2024-04-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist |
PE20240727A1 (es) | 2021-08-27 | 2024-04-15 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos anti-psma y usos de estos |
TW202325727A (zh) | 2021-08-30 | 2023-07-01 | 美商建南德克公司 | 抗聚泛素多特異性抗體 |
WO2023034871A1 (en) | 2021-09-01 | 2023-03-09 | Vir Biotechnology, Inc. | High concentration antibody therapies for sars-cov-2 infection |
CA3230613A1 (en) | 2021-09-01 | 2023-03-09 | Daren J. AUSTIN | Antibody therapies for sars-cov-2 infection in pediatric subjects |
CN113683694B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-13 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 一种抗人tslp单克隆抗体及其应用 |
CN113603775B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-20 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用 |
WO2023039442A1 (en) | 2021-09-08 | 2023-03-16 | Vir Biotechnology, Inc. | Broadly neutralizing antibody combination therapies for sars-cov-2 infection |
WO2023046322A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-30 | Janssen Pharmaceutica Nv | Proteins comprising cd20 binding domains, and uses thereof |
WO2023056403A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Genentech, Inc. | Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists |
CN118056006A (zh) | 2021-10-01 | 2024-05-17 | 雅伯希勒拉生物公司 | 用于细胞系鉴定和富集的转基因啮齿动物 |
WO2023058705A1 (ja) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | 中外製薬株式会社 | 抗hla-dq2.5抗体の製剤 |
WO2023062050A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | New interleukin-7 immunoconjugates |
WO2023062048A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer |
WO2023069919A1 (en) | 2021-10-19 | 2023-04-27 | Alector Llc | Anti-cd300lb antibodies and methods of use thereof |
US20230183362A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-06-15 | Sanofi Biotechnology | Methods for treating prurigo nodularis by administering an il-4r antagonist |
WO2023070097A2 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Factor xi a2 domain-binding antibodies and methods of use thereof |
WO2023077053A2 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5 |
WO2023086807A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
CA3235395A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Peter Burrows | Transgenic mammals and methods of use thereof |
CA3236006A1 (en) | 2021-11-16 | 2023-05-25 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab |
WO2023092052A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for reducing centralized pain |
WO2023089587A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Janssen Biotech, Inc. | Compositions comprising enhanced multispecific binding agents for an immune response |
US20230250170A1 (en) | 2021-12-06 | 2023-08-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Antagonist anti-npr1 antibodies and methods of use thereof |
CA3238939A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-15 | Gaurang Patel | Mutant myocilin disease model and uses thereof |
WO2023130010A1 (en) | 2021-12-30 | 2023-07-06 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist |
US20230287138A1 (en) | 2022-01-12 | 2023-09-14 | Regneron Pharmaceuticals, Inc. | Protein-drug conjugates comprising camptothecin analogs and methods of use thereof |
WO2023137443A1 (en) | 2022-01-14 | 2023-07-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Verrucarin a derivatives and antibody drug conjugates thereof |
WO2023141445A1 (en) | 2022-01-19 | 2023-07-27 | Genentech, Inc. | Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use |
WO2023147399A1 (en) | 2022-01-27 | 2023-08-03 | The Rockefeller University | Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof |
TW202332767A (zh) | 2022-02-02 | 2023-08-16 | 美商雷傑納榮製藥公司 | 用於治療龐貝氏症之抗TfR:GAA及抗CD63:GAA插入 |
WO2023150798A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease |
WO2023152581A1 (en) | 2022-02-09 | 2023-08-17 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating cancer with psmaxcd3 antibody |
WO2023154824A1 (en) | 2022-02-10 | 2023-08-17 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses |
WO2023154861A1 (en) | 2022-02-11 | 2023-08-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents |
WO2023155902A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | Chongqing Mingdao Haoyue Biotechnology Co., Ltd. | Intranasal formulations and anti-sars-cov-2-spike protein antibodies |
WO2023173026A1 (en) | 2022-03-10 | 2023-09-14 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody-drug conjugates and uses thereof |
US20230414750A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-12-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy |
WO2023191816A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2023201256A1 (en) | 2022-04-12 | 2023-10-19 | Vir Biotechnology, Inc. | High dose antibody therapies for sars-cov-2 infection |
TW202404637A (zh) | 2022-04-13 | 2024-02-01 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 抗cd20/抗cd3雙特異性抗體之醫藥組成物及使用方法 |
US20240002491A1 (en) | 2022-04-27 | 2024-01-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for selecting patients for treatment with an ngf antagonist |
TW202406934A (zh) | 2022-05-03 | 2024-02-16 | 美商建南德克公司 | 抗Ly6E抗體、免疫結合物及其用途 |
WO2023219613A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2023230445A2 (en) | 2022-05-23 | 2023-11-30 | Humabs Biomed Sa | Broadly neutralizing antibodies against influenza neuraminidase |
WO2023230448A1 (en) | 2022-05-23 | 2023-11-30 | Vir Biotechnology, Inc. | Combination immunotherapy for influenza |
WO2023235699A1 (en) | 2022-05-31 | 2023-12-07 | Jounce Therapeutics, Inc. | Antibodies to lilrb4 and uses thereof |
WO2023240058A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for cancer |
WO2023245078A1 (en) | 2022-06-15 | 2023-12-21 | Humabs Biomed Sa | Anti-parvovirus antibodies and uses thereof |
WO2024006472A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Vir Biotechnology, Inc. | Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses |
US20240034798A1 (en) | 2022-07-08 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r antagonist |
WO2024015816A1 (en) | 2022-07-12 | 2024-01-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies to ciliary neurotrophic factor receptor (cntfr) and methods of use thereof |
WO2024015897A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2024020432A1 (en) | 2022-07-19 | 2024-01-25 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies |
WO2024020057A1 (en) | 2022-07-19 | 2024-01-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified animal model and its use to model the human immune system |
WO2024020564A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Genentech, Inc. | Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof |
WO2024026411A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Humabs Biomed Sa | Broadly neutralizing antibodies against rsv and mpv paramyxoviruses |
WO2024026474A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle |
TW202405020A (zh) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | 美商阿列克特有限責任公司 | 轉鐵蛋白受體抗原結合域及其用途 |
WO2024026447A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Alector Llc | Anti-gpnmb antibodies and methods of use thereof |
WO2024026471A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Alector Llc | Cd98hc antigen-binding domains and uses therefor |
WO2024026470A2 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-tfr:payload fusions and methods of use thereof |
WO2024030829A1 (en) | 2022-08-01 | 2024-02-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase |
WO2024044770A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Core Biotherapeutics, Inc. | Oligonucleotides for the treatment of breast cancer |
WO2024047021A1 (en) | 2022-08-29 | 2024-03-07 | Sanofi | Methods for treating chronic inducible cold urticaria by administering an il-4r antagonist |
WO2024049949A1 (en) | 2022-09-01 | 2024-03-07 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer |
WO2024054929A1 (en) | 2022-09-07 | 2024-03-14 | Dynamicure Biotechnology Llc | Anti-vista constructs and uses thereof |
WO2024054822A1 (en) | 2022-09-07 | 2024-03-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth |
WO2024073606A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Antibody resistant modified receptors to enhance cell-based therapies |
US20240130341A1 (en) | 2022-09-29 | 2024-04-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes |
WO2024077239A1 (en) | 2022-10-07 | 2024-04-11 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies |
WO2024086796A1 (en) | 2022-10-20 | 2024-04-25 | Alector Llc | Anti-ms4a4a antibodies with amyloid-beta therapies |
WO2024091991A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma |
US20240150474A1 (en) | 2022-10-27 | 2024-05-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-acvri antibodies and their use in the treatment of trauma-induced heterotopic ossification |
WO2024097714A1 (en) | 2022-11-01 | 2024-05-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hand and foot dermatitis by administering an il-4r antagonist |
US20240165227A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-23 | Gilead Sciences, Inc. | Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations |
WO2024098002A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Calcium voltage-gated channel auxiliary subunit gamma 1 (cacng1) binding proteins and cacng1-mediated delivery to skeletal muscle |
WO2024102369A1 (en) | 2022-11-07 | 2024-05-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Factor xi catalytic domain-binding antibodies and methods of use thereof |
WO2024102734A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Genentech, Inc. | Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome |
WO2024100170A1 (en) | 2022-11-11 | 2024-05-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies binding to hla-a*02/foxp3 |
US20240158515A1 (en) | 2022-11-14 | 2024-05-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-fgfr3 antibodies and antigen-binding fragments and methods of use thereof |
WO2024107765A2 (en) | 2022-11-14 | 2024-05-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for fibroblast growth factor receptor 3-mediated delivery to astrocytes |
Family Cites Families (70)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5350689A (en) | 1987-05-20 | 1994-09-27 | Ciba-Geigy Corporation | Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells |
US5202238A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
FR2646438B1 (fr) | 1989-03-20 | 2007-11-02 | Pasteur Institut | Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration |
WO1991000906A1 (en) | 1989-07-12 | 1991-01-24 | Genetics Institute, Inc. | Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies |
US6713610B1 (en) | 1990-01-12 | 2004-03-30 | Raju Kucherlapati | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6673986B1 (en) | 1990-01-12 | 2004-01-06 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
EP1690935A3 (en) | 1990-01-12 | 2008-07-30 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
US6657103B1 (en) | 1990-01-12 | 2003-12-02 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5614396A (en) | 1990-06-14 | 1997-03-25 | Baylor College Of Medicine | Methods for the genetic modification of endogenous genes in animal cells by homologous recombination |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US6255458B1 (en) * | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
US5877397A (en) * | 1990-08-29 | 1999-03-02 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US7041871B1 (en) | 1995-10-10 | 2006-05-09 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
WO1993012227A1 (en) | 1991-12-17 | 1993-06-24 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5770429A (en) * | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
WO1993004169A1 (en) | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Genpharm International, Inc. | Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs |
WO1994002602A1 (en) * | 1992-07-24 | 1994-02-03 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
DE4228162C1 (de) | 1992-08-25 | 1994-01-13 | Rajewsky Klaus Dr | Verfahren zum Ersetzen homologer Genabschnitte aus Säugern in der Keimbahn von nicht-menschlichen Säugern |
US5436149A (en) | 1993-02-19 | 1995-07-25 | Barnes; Wayne M. | Thermostable DNA polymerase with enhanced thermostability and enhanced length and efficiency of primer extension |
AU6819494A (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-21 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US6096878A (en) | 1993-05-10 | 2000-08-01 | Japan Tobacco Inc. | Human immunoglobulin VH gene segments and DNA fragments containing the same |
US5523226A (en) | 1993-05-14 | 1996-06-04 | Biotechnology Research And Development Corp. | Transgenic swine compositions and methods |
US5508189A (en) | 1994-04-26 | 1996-04-16 | Pepperdine University | Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts |
US6130364A (en) | 1995-03-29 | 2000-10-10 | Abgenix, Inc. | Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination |
US6069010A (en) * | 1995-09-11 | 2000-05-30 | Axys Pharmaceuticals, Inc. | High throughput gene inactivation with large scale gene targeting |
US5928914A (en) | 1996-06-14 | 1999-07-27 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University | Methods and compositions for transforming cells |
US5763715A (en) | 1996-10-08 | 1998-06-09 | Stone & Webster Engineering Corp. | Butadiene removal system for ethylene plants with front end hydrogenation systems |
ATE387495T1 (de) | 1996-12-03 | 2008-03-15 | Amgen Fremont Inc | Vollkommen humane antikörper die egfr binden |
US6075859A (en) | 1997-03-11 | 2000-06-13 | Qualcomm Incorporated | Method and apparatus for encrypting data in a wireless communication system |
GB9823930D0 (en) * | 1998-11-03 | 1998-12-30 | Babraham Inst | Murine expression of human ig\ locus |
WO2000046251A2 (en) | 1999-02-05 | 2000-08-10 | Buelow Jens Ulrich | Human polyclonal antibodies from transgenic nonhuman animals |
US6833268B1 (en) | 1999-06-10 | 2004-12-21 | Abgenix, Inc. | Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions |
US6355412B1 (en) | 1999-07-09 | 2002-03-12 | The European Molecular Biology Laboratory | Methods and compositions for directed cloning and subcloning using homologous recombination |
WO2001019394A2 (en) | 1999-09-15 | 2001-03-22 | Therapeutic Human Polyclonals, Inc. | Immunotherapy with substantially human polyclonal antibody preparations purified from genetically engineered birds |
GB2356897B (en) | 1999-12-01 | 2003-05-14 | Secr Defence | Improved nozzle |
US20020028488A1 (en) | 2000-06-19 | 2002-03-07 | Sujay Singh | Transgenic avian species for making human and chimeric antibodies |
AU8470301A (en) | 2000-08-03 | 2002-02-18 | Wim-Van Schooten | Production of humanized antibodies in transgenic animals |
US7105348B2 (en) | 2000-10-31 | 2006-09-12 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US6586251B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US20050144655A1 (en) | 2000-10-31 | 2005-06-30 | Economides Aris N. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US7435871B2 (en) | 2001-11-30 | 2008-10-14 | Amgen Fremont Inc. | Transgenic animals bearing human Igλ light chain genes |
US20050246782A1 (en) | 2002-03-22 | 2005-11-03 | Origen Therapeutics | Transgenic aves producing human polyclonal antibodies |
US20030182675A1 (en) | 2002-03-22 | 2003-09-25 | Origen Therapeutics | Functional disruption of avian immunoglobulin genes |
US20040158880A1 (en) | 2003-02-05 | 2004-08-12 | Roland Buelow | Suppression of endogenous immunoglobulin expression in transgenic non-human animals expressing humanized or human antibodies |
CA2532117C (en) | 2003-07-15 | 2012-07-10 | Therapeutic Human Polyclonals, Inc. | Humanized immunoglobulin loci |
US20050153392A1 (en) | 2003-08-11 | 2005-07-14 | Roland Buelow | Transgenesis with humanized immunoglobulin loci |
US7618403B2 (en) | 2004-05-14 | 2009-11-17 | Mcneil-Ppc, Inc. | Fluid management device with fluid transport element for use within a body |
KR101017301B1 (ko) | 2004-12-21 | 2011-02-28 | 메드임뮨 리미티드 | 앤지오포이에틴-2에 대한 항체 및 그의 용도 |
AU2006231506B2 (en) * | 2005-04-04 | 2012-08-30 | Intersect Ent, Inc. | Device and methods for treating paranasal sinus conditions |
KR101232139B1 (ko) | 2005-12-13 | 2013-02-12 | 엘지디스플레이 주식회사 | 액정 표시 장치 |
MY159787A (en) | 2006-06-02 | 2017-01-31 | Regeneron Pharma | High affinity antibodies to human il-6 receptor |
PL2769992T3 (pl) | 2006-10-02 | 2021-08-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Przeciwciała ludzkie o wysokim powinowactwie względem ludzkiego receptora IL-4 |
RU2448979C2 (ru) | 2006-12-14 | 2012-04-27 | Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. | Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека |
ES2527297T3 (es) | 2007-07-31 | 2015-01-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anticuerpos humanos para CD20 humano y método para utilizar los mismos |
WO2009023540A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human nerve growth factor |
US8321568B2 (en) | 2008-03-31 | 2012-11-27 | Amazon Technologies, Inc. | Content management |
US8194152B2 (en) | 2008-09-05 | 2012-06-05 | CSR Technology, Inc. | Image processing under flickering lighting conditions using estimated illumination parameters |
DK3622813T3 (da) | 2009-07-08 | 2021-05-03 | Kymab Ltd | Dyremodeller og terapeutiske molekyler |
JO3182B1 (ar) | 2009-07-29 | 2018-03-08 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2 |
US10143186B2 (en) | 2010-02-08 | 2018-12-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common light chain mouse |
US20120021409A1 (en) * | 2010-02-08 | 2012-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Common Light Chain Mouse |
KR20220150430A (ko) | 2010-06-22 | 2022-11-10 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 사람 람다 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 경쇄를 발현하는 마우스 |
DE12192727T1 (de) | 2011-02-25 | 2013-07-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | ADAM6 Mäuse |
EP3556206B1 (en) | 2012-11-05 | 2021-06-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Genetically modified non-human animals and methods of use thereof |
MX2016007654A (es) | 2013-12-11 | 2017-08-15 | Regeneron Pharma | Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma. |
LT3221457T (lt) | 2014-11-21 | 2019-06-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas |
-
2001
- 2001-02-16 US US09/784,859 patent/US6596541B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-02-15 DE DE14172420.3T patent/DE14172420T1/de active Pending
- 2002-02-15 AU AU2002244023A patent/AU2002244023B2/en not_active Expired
- 2002-02-15 EP EP19203913.9A patent/EP3626819B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 EP EP02709544.7A patent/EP1360287B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 PT PT192039139T patent/PT3626819T/pt unknown
- 2002-02-15 ES ES16171559T patent/ES2725712T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 DE DE14172437.7T patent/DE14172437T1/de active Pending
- 2002-02-15 TR TR2019/07641T patent/TR201907641T4/tr unknown
- 2002-02-15 PT PT16171559T patent/PT3085779T/pt unknown
- 2002-02-15 EP EP19172361.8A patent/EP3572508B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 ES ES14163642T patent/ES2827482T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 ES ES19203913T patent/ES2869225T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 EP EP14172437.7A patent/EP2786657B1/en not_active Revoked
- 2002-02-15 DE DE19203913.9T patent/DE19203913T1/de active Pending
- 2002-02-15 DK DK10010741.6T patent/DK2264163T3/en active
- 2002-02-15 DE DE10010741.6T patent/DE10010741T1/de active Pending
- 2002-02-15 ES ES14172437.7T patent/ES2660749T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 DK DK14172420.3T patent/DK2787075T3/en active
- 2002-02-15 DK DK16171559.4T patent/DK3085779T3/da active
- 2002-02-15 DK DK19203913.9T patent/DK3626819T3/da active
- 2002-02-15 DK DK14163642.3T patent/DK2767588T3/da active
- 2002-02-15 MX MXPA03007325A patent/MXPA03007325A/es active IP Right Grant
- 2002-02-15 PT PT141724377T patent/PT2786657T/pt unknown
- 2002-02-15 NZ NZ527629A patent/NZ527629A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 PT PT141724203T patent/PT2787075T/pt unknown
- 2002-02-15 PT PT141636423T patent/PT2767588T/pt unknown
- 2002-02-15 DK DK19172361.8T patent/DK3572508T3/da active
- 2002-02-15 WO PCT/US2002/004500 patent/WO2002066630A1/en active Application Filing
- 2002-02-15 TR TR2018/02443T patent/TR201802443T4/tr unknown
- 2002-02-15 PT PT100107416T patent/PT2264163E/pt unknown
- 2002-02-15 HU HU0303187A patent/HU231221B1/hu unknown
- 2002-02-15 DE DE14163642.3T patent/DE14163642T1/de active Pending
- 2002-02-15 DK DK14172437.7T patent/DK2786657T3/en active
- 2002-02-15 DE DE19172361.8T patent/DE19172361T1/de active Pending
- 2002-02-15 PT PT16171561T patent/PT3085780T/pt unknown
- 2002-02-15 CZ CZ2003-2192A patent/CZ305619B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-02-15 EP EP14172420.3A patent/EP2787075B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 PT PT2709544T patent/PT1360287E/pt unknown
- 2002-02-15 ES ES02709544T patent/ES2391391T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 EP EP14163642.3A patent/EP2767588B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 PL PL364281A patent/PL217086B1/pl unknown
- 2002-02-15 EP EP16171559.4A patent/EP3085779B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 ES ES16171561T patent/ES2744220T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 EP EP10010741.6A patent/EP2264163B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 EP EP16171561.0A patent/EP3085780B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 DK DK16171561.0T patent/DK3085780T3/da active
- 2002-02-15 ES ES14172420T patent/ES2608362T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 ES ES10010741.6T patent/ES2556767T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 CA CA2438390A patent/CA2438390C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-15 DK DK02709544.7T patent/DK1360287T4/da active
- 2002-02-15 JP JP2002566337A patent/JP4412900B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-07-21 US US10/624,044 patent/US20040018626A1/en not_active Abandoned
- 2003-08-13 ZA ZA200306275A patent/ZA200306275B/en unknown
- 2003-08-15 MX MX2013012216A patent/MX343591B/es unknown
- 2003-12-18 HK HK11100421.6A patent/HK1146298A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2003-12-18 HK HK03109205.9A patent/HK1057058A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-11-09 US US11/595,427 patent/US8791323B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-07-29 JP JP2009177054A patent/JP5345463B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2011
- 2011-06-07 US US13/154,976 patent/US9376699B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2011-06-20 US US13/164,176 patent/US8502018B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-02-17 JP JP2012032592A patent/JP5692863B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2012-12-10 CY CY20121101202T patent/CY1113964T1/el unknown
- 2012-12-10 JP JP2012269458A patent/JP5805056B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2012-12-19 US US13/719,842 patent/US10227625B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-19 US US13/719,819 patent/US9708635B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-09-24 US US14/035,432 patent/US10378037B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-25 US US14/036,514 patent/US9388446B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2013-09-25 US US14/036,518 patent/US10378038B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-25 US US14/036,865 patent/US20140017782A1/en not_active Abandoned
- 2013-09-25 US US14/036,530 patent/US9382567B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2013-09-25 US US14/036,892 patent/US9528136B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2013-09-25 US US14/036,784 patent/US10378040B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-25 US US14/036,774 patent/US10378039B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-25 US US14/036,778 patent/US20140020124A1/en not_active Abandoned
- 2013-10-04 US US14/046,279 patent/US9371553B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2013-10-04 US US14/046,285 patent/US10584364B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-10-04 US US14/046,291 patent/US10526630B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-11-14 US US14/080,114 patent/US9353394B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2014
- 2014-06-16 JP JP2014123104A patent/JP2014176391A/ja not_active Withdrawn
- 2014-10-22 HK HK14110568.5A patent/HK1198260A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2014-10-22 HK HK14110567.6A patent/HK1198259A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-12-22 CY CY20151101177T patent/CY1117254T1/el unknown
-
2016
- 2016-07-19 US US15/213,947 patent/US10640800B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2016-08-19 JP JP2016161032A patent/JP6426670B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2017
- 2017-01-20 CY CY20171100087T patent/CY1118500T1/el unknown
-
2018
- 2018-04-03 JP JP2018071505A patent/JP6402368B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2018-04-26 CY CY20181100437T patent/CY1120265T1/el unknown
-
2019
- 2019-06-05 CY CY20191100592T patent/CY1122059T1/el unknown
- 2019-09-17 CY CY20191100968T patent/CY1122039T1/el unknown
-
2020
- 2020-11-11 CY CY20201101065T patent/CY1123912T1/el unknown
-
2021
- 2021-06-14 CY CY20211100526T patent/CY1124458T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2608362T3 (es) | Ratón capaz de producir anticuerpos híbridos que contienen regiones variables humanas y regiones constantes de ratón | |
US7105348B2 (en) | Methods of modifying eukaryotic cells | |
AU2002244023A1 (en) | Methods of modifying eukaryotic cells |