KR20170127011A - Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도 - Google Patents

Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도 Download PDF

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알리샤 모리모토
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제넨테크, 인크.
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Abstract

IL-13을 검출 및 정량화하는 방법이 제공된다. 또한, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)인 특정 치료제에 의한 치료를 위해 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 갖는 환자를 진단하고, 선택하고, 확인하는 방법이 제공된다.

Description

IL-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 TH2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2015년 3월 16일에 출원된 미국 가출원 번호 62/133,693의 우선권 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 EFS-웹을 통해 제출되고 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2016년 3월 9일에 생성된 상기 ASCII 카피는 P32675-WO_SL.txt로 명명되고, 20,272 바이트 크기이다.
기술분야
IL-13을 검출 및 정량화하는 방법이 제공된다. 또한, Th2 경로 억제제인 특정 치료제에 의한 치료를 위해 Th2-연관 질환을 갖는 환자를 진단하고, 선택하고, 확인하는 방법이 제공된다.
인터류킨 (IL)-13은 T-헬퍼 제2형 (Th2) 염증의 주요 매개체로 간주되고, IL-13의 상승된 수준은 천식, 염증성 장 질환, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 아토피성 피부염 및 다른 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는 수많은 질환과 연관되어 왔다 (Oh CK, et al., Eur Respir Rev 19:46-54 (2010); Fahy JV, et al., Nat Rev Immunol 15:57-65 [2015]). IL-13은 Th2 세포, 호염기구, 호산구, 및 비만 세포, 뿐만 아니라 기도 상피 세포 및 제2형 선천성 림프성 세포를 포함한 많은 세포 유형에 의해 생산된다. IL-13은 IL-4와 공유되는 이종이량체 수용체, IL-4Rα/IL-13Rα1에 결합하고, STAT-6 신호전달 경로를 활성화한다 (Hershey GK, J Allergy Clin Immunol 111(4):677-90 [2003]). 이는 특정 경우에 점액 생산, 상피하 섬유증, IgE 생산, 평활근 증식증, 뿐만 아니라 염증 세포 동원 및 활성화를 포함한, 천식의 임상 징후와 연관되어 왔다 (Hershey GK, J Allergy Clin Immunol 111(4):677-90 [2003]; Fahy JV, et al., Nat Rev Immunol 15:57-65 [2015]). Th2 염증은 Th2 세포에 더하여 제2형 선천성 림프성 세포 (ILC2)를 포함한 여러 세포 유형의 활성을 수반하기 때문에, "Th2 염증"은 보다 최근에는 과학 문헌에서 "제2형 염증"으로 지칭되어 왔다. Th2 세포에 더하여, ILC2는 시토카인 예컨대 IL-5 및 IL-13의 중요한 공급원으로서 확인된 바 있다. 따라서, 이전에 Th2 시토카인으로서 확인된 바 있는 시토카인 예컨대 IL-13 및 IL-5는 현재 과학 문헌에서 또한 제2형 시토카인으로 지칭된다. 마찬가지로, 이러한 시토카인과 연관된 질환 상태는 현재 또한 제2형-유래 질환 또는 제2형-연관 질환으로 지칭된다. 예를 들어, 문헌 [Noonan et al., J. Allergy Clin Immunol., 132(3): 567-574 (2013); Hanania et al., Thorax 70(8): 748-56 (2015); 및 Cai et al., Bioanalysis 8(4): 323-332 (2016)]을 참조한다. 예를 들어, 과학 문헌에서의 용어 "제2형 천식"의 사용은 천식의 이해에서의 진화를 반영하고, 이는 폐 조직 내 IL-5 및 IL-13을 포함한 인터류킨의 높은 수준을 특징으로 한다. 따라서, "Th2" 및 "제2형"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
IPF는 폐로 제한되는, 미지의 병인의 섬유화성 간질성 폐렴의 특정 형태이고, 다양한 정도의 간질성 섬유증을 특징으로 한다 (Raghu G, et al., Am J Respir Crit Care Med 183:788-824 [2011]). 다중 관찰은 IPF 병리상태에서의 IL-13의 역할을 지지한다 (Zhu Z, et al., J Clin Invest 103:779-88 [1999]; Lee CG, et al., J Exp Med 194:809-22 [2001]; Park SW, et al., J Korean Med Sci 24:614-20 [2009]; Chandriani S, et al., J Immunol 193:111-9 [2014]). IL-13 및 IL-13 수용체의 발현은 건강한 대조군에 비해 IPF를 갖는 환자로부터의 폐 조직 및 기관지폐포 세척액 (BAL)에서 증가된다 (Jakubzick C, et al., Am J Pathol 164:1989-2001 [2004]; Park SW, et al., J Korean Med Sci 24:614-20 [2009]).
주요 병인론적 성분으로서 IL-13에 의한 또 다른 Th2 염증-연관 질환은 아토피성 피부염 (AD)이다. IL-13의 증가된 발현은 AD 피부에서 일관되게 보고되어 왔고 (Hamid Q, et al., J Allergy Clin Immunol 98:225-31 [1996]; Jeong CW, et al., Clin Exp Allergy 33:1717-24 [2003]; Tazawa T, et al., Arch Dermatol Res 295:459-64 [2004]; Neis MM, et al., J Allergy Clin Immunol 118:930-7 [2006]; Suarez-Farinas M, et al., J Allergy Clin Immunol 132:361-70 [2013]; Choy DF, et al., J Allergy Clin Immunol.130:1335-43 [2012]), 일부 보고는 IL-13 발현과 질환의 중증도 사이의 관계를 시사한다 (La Grutta S, et al., Allergy 60:391-5 [2005]). IL-13 및 그의 수용체는 따라서 천식, IPF 및 AD, 뿐만 아니라 다른 Th2-연관 질환의 치료를 위한 치료 표적이 된다 (Corren J, et al., N Eng J Med 365:1088-98 [2011]; Scheerens H, et al., Clin Exp Allergy 44:38-46 [2014]; Beck LA, et al., N Eng J Med 371:130-9 [2014]).
IL-13은 기관지 생검, 폐 생검, 유도된 객담, BAL, 비강 세척액, 비인두 흡인물 및 피부 생검을 포함하여, 천식, IPF 및 AD의 작용 부위에서 검출된 바 있다. 결과는 Th2 염증-연관 질환을 갖는 환자에서의 상승된 IL-13 수준을 입증하였고, 이러한 상승된 IL-13 수준은 그러한 환자를 건강한 대조군과 구별되게 하였다 (Fitzpatrick AM, et al., J Allergy Clin Immunol 125;851-7.e18 [2010]; Becker AB, J Allergy Clin Immunol 109;S533-8 [2002]; Jakubzick C, et al., Am J Pathol 164:1989-2001 [2004]; Noah TL, et al., Ann Allergy Asthma Immunol 96:304-10 [2006]; Feleszko W, et al., J Allergy Clin Immunol 117:97-102 [2006]; Eickmeier O, et al., Cytokine 50:152-157 [2010]). 직접 기도 및 피부 샘플링은, 그러나, 침습적이거나 불편한 수집 절차를 요구한다. 대조적으로, 말초 혈액은 용이하게 접근가능한 조직이고 그의 수집은 덜 침습적인 방법이다. IL-13의 순환 수준이 전형적으로 낮고 이들 낮은 수준을 측정하는 것의 어려움 때문에, 순환 IL-13 수준이 질환 작용 부위에서의 수준과 어떻게 관련되는지 이해가 부족하다. 따라서, 질환 메카니즘에 대한 IL-13 기여의 이해를 용이하게 하기 위해, Th2-유발 질환에서 순환 IL-13 수준을 특징화하기 위한 고도로 민감하고 고도로 특이적인 혈청 IL-13 검정이 필요하다.
천식 및 다른 Th-2 연관 질환을 치료하기 위한 많은 약물이 시장에 존재하거나 개발 중에 있다. 천식 및 Th2-연관 질환을 위한 표적은 시토카인, 예컨대 IL-13, IL-17, IL-5, 및 IL-4, 및 그의 수용체, 뿐만 아니라 알레르기와 연관된 표적, 예컨대 IgE를 포함한다. 천식 치료를 위해 시장에 존재하는 예시적인 치료 분자 및 개발 중인 치료 후보는 오말리주맙 (졸레어(XOLAIR)®) (가용성 IgE를 표적화함) (예를 들어, 문헌 [Chang et al., J Allergy Clin Immunol. 117 (6): 1203-12 (2006); Winchester et al., N. Engl. J. Med. 355 (12): 1281-2 (2006); Brodlie et al., Arch Dis Child. 97 (7): 604-9 (2012); Bousquet et al., Chest 125 (4): 1378-86 (2004); Schulman, ES, Am J Respir Crit Care Med. 164 (8 Pt 2): S6-11 (2001); Chang et al., Adv Immunol. 93: 63-119 (2007)] 참조), 레브리키주맙 (IL-13을 표적화함) (예를 들어, 문헌 [Corren et al. (2011) N Engl J Med 365: 1088-98; Scheerens et al. (2012) Am J Respir Crit Care Med 185: A3960; Jia et al. (2012) J Allergy Clin Immunol 130: 647-654 e10]; WO 2012/083132 참조), 메폴리주맙 (IL-5를 표적화함) (예를 들어, 문헌 [Haldar et al., N Engl J Med. 2009 Mar 5;360(10):973-84; Nair et al., N Engl J Med. 2009 Mar 5;360(10):985-93; Pavord et al., The Lancet 380 (9842): 651-659, doi:10.1016/S0140-6736(12)60988-X] 참조), 퀼리주맙 (막-결합 IgE를 표적화함) (예를 들어, US 특허 공개 번호 2013/0243750 참조) 및 두필리맙 (IL-4Rα 수용체를 표적화함) (예를 들어, 문헌 [Beck LA, et al., N Eng J Med 371:130-9 [2014]] 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
인간 천식은 기도에서의 제2형 시토카인 발현 및 호산구성 염증을 특징으로 하는 알레르기성 장애로 통상적으로 간주되지만, 이는 기도 염증과 관련하여 명백하게 이질적이다. 게놈 접근법은 천식환자 기도에서 제2형 시토카인 발현 및 호산구성 염증의 정도에 해당하는 이질적인 유전자 발현 패턴을 확인하였다. 이들 유전자 발현 패턴은 기관지경검사 또는 객담 유도를 필요로 하지 않는 호산구성 기도 염증의 후보 바이오마커의 확인으로 이어졌다. 예를 들어, WO 2009/124090, WO 2012/083132, 및 PCT/US2014/061759를 참조한다. 제2형 기도 염증의 매개체를 표적화하는 후보 생물학적 요법은 최근 수년간 중등도-중증 천식을 갖는 환자에서의 임상 연구를 통해 진행되어 왔다. 혈청 페리오스틴, 호기 산화질소 농도 (FENO), 및 혈액 호산구 카운트는 IL-13, IL-5, 및 IgE를 표적화하는 생물학적 요법의 임상 연구에서 임상 이익을 풍부화할 수 있는, 잠재적인 예측적 및 약역학적 바이오마커로서 대두되는 바이오마커에 속한다. 문헌 [Arron et al., 2013, DOI: 10.1513/AnnalsATS.201303-047AW].
상기 논의된 바와 같은 이러한 바이오마커는 특정한 치유적 치료에 반응할 가능성이 더 클 수 있는 천식 환자를 확인하는 것에 대한 잠재력이 입증되었지만, 지금까지 어떠한 것도 이러한 용도에 대해 규제 기관으로부터 검증받거나 승인받은 바 없다. 또한, 이전에 확인된 바이오마커는 그의 사용과 연관된 특정 실제적 한계 및 혼동 요인, 예컨대 바이오마커를 측정하기 위한 특정한 장치에 대한 필요, 유의한 환자내 또는 환자간 가변성, 또는 발달 동안 달라질 수 있거나 (예를 들어, 소아 수준이 성인 수준과 비교됨) 병용 의약에 의해 달라질 수 있는 바이오마커 수준을 가질 수 있다. 또한, 임상의 등이 천식 및 다른 Th2-연관 질환의 병리생리학적 측면, 임상 활성, 요법에 대한 반응 예측, 예후, 또는 질환 발생의 위험을 정확하게 규정할 수 있게 하는 어떠한 임상적으로 검증된 진단 마커, 예를 들어 바이오마커도 확인되어 있지 않다. 따라서, 천식 환자 및 Th2-연관 질환을 갖는 환자가 치료를 모색함에 따라, 현재 특정한 환자에 효과적인 치료제(들)에 대한 연구에서 수반되는 상당한 시행 착오가 존재한다. 이러한 시행 착오는 종종, 가장 효과적인 요법을 찾기 위해 환자에 대한 상당한 위험 및 불편을 수반한다.
따라서, 천식 환자 및 다른 Th2-연관 질환 예컨대 예를 들어 비제한적으로 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 비강 폴립증, 호산구성 식도염, 과다호산구성 증후군, COPD, 또는 IBD를 앓고 있는 환자가 치료에 반응할 것인지를 결정하고, 이러한 결정을 천식 및 다른 Th2-연관 질환 환자를 위한 보다 효과적인 치료 요법에 포함시키는데 효과적인 새로운 바이오마커를 확인하는 것에 대한 계속적인 필요가 존재한다. 또한, 이러한 바이오마커와 질환 상태의 연관성과 관련하여 통계적 및 생물학적으로 유의하고 재현가능한 정보는, 예를 들어 특정한 치료제가 임상 연구에서 특정 환자 하위집단에서 치료 이익을 갖는 것으로 밝혀졌거나 밝혀진 바 있는 경우에, 특정한 치료제를 사용한 치료로부터 유의하게 이익을 얻을 것으로 예상되는 환자의 특정 하위세트를 확인하기 위한 노력에서 필수 요소로서 사용될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, IL-13의 순환 수준 (혈청 수준)은 전형적으로 낮고, 따라서 현재 이용가능한 방법에 의해 측정하는 것은 어렵다. 현재 이용가능한 방법은 초고감도인 것으로 기재된 플랫폼, 싱귤렉스(Singulex)® (캘리포니아주 앨러미다)로부터의 에렌나(Erenna)® 플랫폼 및 퀀테릭스(Quanterix)™ (매사추세츠주 렉싱턴)로부터의 시모아(Simoa)™ 플랫폼을 사용하는 2종의 검정을 포함한, 수많은 상이한 면역검정 방법 예컨대 상업적으로 입수가능한 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA) 및 비드-기반 멀티플렉스 검정을 포함한다 (Fischer et al., The AAPS Journal 17:93-101 [2015]). 이러한 검정을 사용하여, 과학 문헌은 아토피성 개체, 천식환자 개체, 및 건강한 대조군에 대해 넓은 범위의 순환 IL-13 수준을 보고하며, 보고는 낮은 pg/mL 내지 pg-미만/mL 수준의 범위이다. 또한, 건강한 대조군에 비해 Th2 염증성 질환을 갖는 환자에서 IL-13 수준이 서로 유사한지 (Silvestri et al., Clin. Exp. Allergy 36:1373 [2006], Pukelsheim K, et al., PLoS One 5:e14299 [2010], Doucet J, et al., Dis Markers 35:465-74 [2013]) 또는 상승되었는지 (Lee YC, et al., J Asthma 38:665-71 [2001]; Gauvreau GM, et al., Am J Resp Crit Care 183:1007-14 [2011], Doucet J, et al., Dis Markers 35:465-74 [2013])에 대한 상충하는 데이터가 존재한다.
하나의 혈청 IL-13 검정이 문헌 [St. Ledger et al., J. Imm. Methods 350:161-70 (2009)]에 기재되어 있고, 이는 고도로 민감한 것으로 최초로 보고되었다. 싱귤렉스®로부터 상표명 에렌나® 하에 상업적으로 입수가능한 이러한 면역검정 방법은, 독점 모노클로날 항-IL-13 항체, 상자성 마이크로입자, 및 단일 분자를 검출하는 디지털 카운팅 시스템을 합체시킨 전문화된 기기 플랫폼을 사용한다 (Id.). 그러나, 후속 공개물은 에렌나® IL-13 면역검정이 매트릭스 간섭에 의해 영향을 받고 매트릭스 간섭의 정도는 감도 뿐만 아니라 특이도에 유의하게 영향을 미친다는 것을 제시하였다. 문헌 [Fraser S, et al., Bioanalysis 6:1123-9 (2014)]. 그러한 후속 보고는 최초 보고로부터의 감도에서 대략 5-배 차이인 0.3 pg/mL의 수정된 정량 하한치 (LLOQ) (Id.)를 제공하였다. 싱귤렉스®는 최근에 에렌나® IL-13 검정의 상업적으로 입수가능한 신규 버전, 버전 2를 제조한 바 있고, 이는 보고된 바로는 0.04 pg/mL의 LLOQ를 갖는다 (에렌나® IL-13 (v2) 면역검정 키트, Cat.# 03-0109-xx 제품 정보 시트, www(dot)singulex(dot)com에서 입수가능함). 그러나, 특이도와 관련하여 어떠한 정보도 공중 이용가능하지 않다. 더욱이, 맞춤화된 싱귤렉스® 검정 시스템을 사용한 조사자들은 LLOQ를 0.1 pg/mL로 보고하였지만, 시험된 천식환자 및 건강한 대조군 샘플의 20-60%에서 IL-13을 검출하지 못했다. 문헌 [Gaye et al., J. Immunol. Methods 426:82-85 (2015)]. 또한, 시모아™ IL-13 면역검정에 대한 제품 문헌은 LLOQ를 0.0114 pg/mL로 보고하지만, 특이도에 대한 어떠한 정보도 제공하지 않는다 (시모아™ IL-13 면역검정 제품 정보 시트, www(dot)quanterix(dot)com에서 입수가능함). 관련 기술분야에서는 에렌나® 및 시모아™ 플랫폼과 같은 초고감도 플랫폼이 특이도에 대해 조심스럽게 평가되어야 하는 것으로 인식된다. 상기 및 문헌 [Fisher et al., The AAPS Journal 17:93-101 (2015)]을 참조한다. 특히 초고감도 플랫폼과 관련하여, 검출된 신호가 분석물의 "참" 측정임을 확실하게 할 필요가 존재한다. 따라서, 경쟁 또는 면역고갈 단계를 통해 신호의 특이도를 입증하고 특정 신호를 억제하는 능력을 예시하는 것이 중요하다. 문헌 [Fisher et al., The AAPS Journal 17:93-101 (2015)]. 따라서, 고도로 민감하면서 또한 고도로 특이적인 IL-13 검정에 대한 필요가 남아있다.
본원에 기재된 본 발명은 특정의 상기 기재된 필요를 충족시키고, 다른 이익을 제공한다.
특허 출원 및 공개를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 임의의 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함된다.
본 발명은, 적어도 부분적으로, 시험된 샘플의 98% 초과에서 펨토그램/mL 수준의 IL-13을 검출하는 고도로 민감하고, 본원에 기재된 바와 같이 고도로 특이적인 IL-13 면역검정 방법을 제공한다. 또한, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제로도 공지됨)인 치유적 치료에 반응할 가능성이 더 큰 상승된 혈청 IL-13 수준을 갖는 환자를 선택 또는 확인하고, 뿐만 아니라 중증 악화를 앓을 가능성이 더 큰 천식 환자를 확인하기 위한, 이러한 고도로 민감하고 고도로 특이적인 면역검정 방법의 사용 방법이 본원에 제공된다.
따라서, 한 측면에서, 샘플에서 IL-13을 검출 및 정량화하기 위한 높은 감도 및 높은 특이도 면역검정 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 샘플은 생물학적 샘플이다. 특정 실시양태에서, 샘플은 혈청이다. 특정 실시양태에서, 샘플은 인간 혈청이다. 일부 실시양태에서, 감도는 정량 하한치 (LLOQ)로 결정된다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 0.1 fg/mL 내지 35 fg/mL 또는 약 0.1 fg/mL 내지 약 35 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 1 fg/mL 내지 30 fg/mL 또는 약 1 fg/mL 내지 약 30 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 5 fg/mL 내지 25 fg/mL 또는 약 5 fg/mL 내지 약 25 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 10 fg/mL 내지 20 fg/mL 또는 약 10 fg/mL 내지 약 20 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 14 fg/mL 또는 약 14 fg/mL이다.
또 다른 측면에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제1 모노클로날 포획 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 모노클로날 검출 항체를 포함하는 샌드위치 면역검정 방법이 제공되며, 여기서 제1 항체는 제2 항체와 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 특이도는 항원 고갈 방법 (면역고갈 방법으로도 지칭됨)에 의해 결정되고, 이는 면역검정 방법을 수행하기 전에 샘플을 과량의 제1 항체와 인큐베이션하는 것을 포함한다. 특정의 이러한 실시양태에서, 샘플에서 항원이 완전히 고갈되어, 면역검정 방법에서 LLOQ 미만의 신호가 생성된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 가용성 IL-13Rα2를 포함하고, 가용성 IL-13Rα2는 면역검정 방법의 감도 또는 특이도를 간섭하지 않는다.
또 다른 측면에서, 면역검정 방법은 서열식별번호(SEQ ID NO): 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 F(ab')2 또는 Fab인 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 Fab, F(ab')2, Fab', 또는 Fv인 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 면역검정 방법은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제2 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 면역검정 방법은 제3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 제3 항체는 제2 항체에 특이적으로 결합하고 검출가능하게 표지된다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 합텐으로 표지되고 제3 항체는 항-합텐 항체이다. 일부 실시양태에서, 합텐은 디곡시게닌이고 항-합텐 항체는 형광 라텍스와 접합된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체이다.
본원에 제공된 바와 같은 치료 및 진단 방법은 천식, 호산구성 장애, 호흡기 장애, IL-13 매개 장애, Th2-연관 장애, 및/또는 IgE-매개 장애, 또는 그러한 장애와 관련된 증상을 앓고 있는 환자에게 적용될 수 있다. 천식으로 진단되지 않은 환자를 포함하여 천식-유사 증상을 앓고 있는 환자는 본원에 제공된 방법에 따라 치료받을 수 있다.
한 실시양태에 따르면, 본원에 제공된 방법에 따라 치료받는 환자는 천식, 호산구성 장애, 호흡기 장애, IL-13 매개 장애, Th2-연관 장애 (유형-2 연관 장애), 및/또는 IgE-매개 장애, 또는 그러한 장애와 관련된 증상을 앓고 있다. 또 다른 실시양태에 따르면, 본원에 제공된 방법에 따라 치료받는 환자는 천식, 호산구성 장애, 호흡기 장애, IL-13 매개 장애, Th2-연관 장애 및/또는 IgE-매개 장애, 또는 그러한 장애와 관련된 증상을 앓고 있으며, 2세 이상, 12세 이상, 18세 이상, 19세 이상, 2 내지 18세, 2 내지 17세, 12-17세, 12 내지 18세, 2 내지 75세, 12 내지 75세, 또는 18 내지 75세이다.
일부 실시양태에서, Th2 경로 억제제에 의한 치료에 반응할 가능성이 있는 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환) 환자를 확인하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자가 참조 수준과 비교하여 상승된 수준의 IL-13을 갖는지 결정하는 것을 포함하며, 여기서 상승된 IL-13은 환자가 Th2 경로 억제제에 의한 치료에 반응할 가능성이 있음을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 중증 악화를 앓을 가능성이 있는 천식 환자 또는 호흡기 장애 환자를 확인하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자가 참조 수준과 비교하여 상승된 수준의 IL-13을 갖는지 결정하는 것을 포함하며, 여기서 상승된 IL-13은 환자가 증가된 중증 악화를 앓을 가능성이 있음을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계, IL-13 수준을 측정하는 단계, 샘플에서 검출된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계, 및 샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 상승된 경우에 환자가 중증 악화를 앓을 가능성이 있는 것으로 예측하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 (a) 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13을 측정하는 단계; (b) (a)에서 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계; 및 (c) (a)에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에, 상기 환자를 중증 악화를 앓을 가능성이 더 큰 것으로서 확인하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 IL-13의 중앙 수준이다.
일부 실시양태에서, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)로 치료받고 있는 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환) 환자를 모니터링하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자가 상승된 수준의 IL-13을 갖는지 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 Th2 경로 억제제에 대한 치료 요법을 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, IL-13 수준의 결정은 Th2 경로 억제제에 의한 연속 요법 또는 Th2 경로 억제제에 의한 불연속 요법을 제시한다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 방법은 a) 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터 수득된 샘플에서 IL-13의 수준을 결정하는 단계; 및 b) 단계 a)에서 결정된 IL-13의 수준을 참조 수준과 비교하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 c) 단계 b)에서 수득된 비교에 기초하여 상기 환자를 반응자 또는 비-반응자의 카테고리로 계층화하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자가 반응자인 경우에 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법을 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)를 포함하는 요법에 대한 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 앓고 있는 환자의 반응을 예측하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계 및 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 샘플에서 검출된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 상승된 경우에 환자가 요법에 반응할 것으로 예측하거나, 또는 샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 감소된 경우에 환자가 요법에 반응하지 않을 것으로 예측하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)에 대한 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자 (제2형-연관 질환)의 반응성을 예측하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 참조 수준과 비교하여 상승된 IL-13 수준은 환자를 Th2 경로 억제제 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 확인시켜준다.
일부 실시양태에서, 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 앓고 있는 환자를 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 있는 것으로서 확인하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에, 상기 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 확인하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 갖는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에, 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 확인하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에 요법을 투여하여, 천식 또는 Th2-연관 질환을 치료하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 환자에서 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 치료하는 방법은 환자에게 치료 유효량의 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 환자로부터 수득된 생물학적 샘플은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13 수준을 갖는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 환자에서 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 치료하는 방법은 환자에게 치료 유효량의 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서의 상승된 IL-13 수준에 기초하여 치료를 위해 선택된다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 IL-13의 중앙, 평균, 또는 에버리지 수준일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 IL-13의 중앙 수준일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 IL-13의 평균 수준일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 IL-13의 에버리지 수준일 수 있다. 비제한적인 예시적 참조 집단은 천식을 갖는 환자, 중등도 내지 중증 천식을 갖는 환자, 특발성 폐 섬유증을 갖는 환자, 아토피성 피부염을 갖는 환자, 건강한 개체, 및 건강한 개체 및 임의의 상기 언급된 환자를 포함하는 군을 포함한다. 일부 실시양태에서, 참조 집단은 중등도 내지 중증 천식을 갖는 환자를 포함한다. 추가의 비제한적인 예시적 참조 집단은 Th2-연관 질환 예컨대 천식, 아토피성 피부염, 특발성 폐 섬유증, 알레르기성 비염, 섬유증, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 크론병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 및 간 섬유증을 갖는 환자를 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-13의 수준이 참조 수준 초과이면, 환자는 반응자 카테고리로 계층화된다.
일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 혈장으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈청이다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장이다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 천식 환자로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 상기 기재된 방법에 따른 환자는 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있다. 특정 실시양태에서, 천식 또는 호흡기 장애는 코르티코스테로이드로 비제어된다. 특정 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 흡입용 코르티코스테로이드이다. 특정 실시양태에서, 흡입용 코르티코스테로이드는 큐바르(Qvar)®, 풀미코르트(Pulmicort)®, 심비코르트(Symbicort)®, 에어로비드(Aerobid)®, 플로벤트(Flovent)®, 플로나제(Flonase)®, 애드베어(Advair)® 또는 아즈마코르트(Azmacort)®이다. 한 실시양태에서, 환자는 또한 제2 제어제로 치료받고 있다. 특정 실시양태에서, 제2 제어제는 장기 작용 기관지 확장제 (LABD)이다. 특정 실시양태에서, LABD는 장기 작용 베타-2 효능제 (LABA), 류코트리엔 수용체 길항제 (LTRA), 장기 작용 무스카린성 길항제 (LAMA), 테오필린, 또는 경구 코르티코스테로이드 (OCS)이다. 특정 실시양태에서, LABD는 심비코르트®, 애드베어®, 브로바나(Brovana)®, 포라딜(Foradil)®, 퍼포로미스트(Perforomist)™ 또는 세레벤트(Serevent)®이다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 환자는 0-17세, 2-17세, 2-6세, 6-11세, 8-17세, 12-17세, 2세 이상, 6세 이상, 또는 12세 이상일 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 18세 이상이다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 환자는 인간일 수 있다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, Th2 경로 억제제는 표적 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE (예를 들어, 졸레어, QGE-031; MEDI-4212; 퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)를 억제할 수 있거나, 또는 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제이다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)는 IL-13 억제제, IL-13 및 IL-4 둘 다를 억제하는 작용제, IL-13 및 IL-17 둘 다를 억제하는 작용제, 또는 항 IgE 결합제이다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, Th2 경로 억제제는 항-IL-13 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙이다.
일부 실시양태에서, 환자에게 37.5 mg, 또는 125 mg 또는 250 mg의 균일 용량의 항-IL-13 항체 또는 레브리키주맙이 4주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 사전충전된 시린지 또는 자가주사기 장치를 사용하여 투여된다.
특정 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 또한 IL-4에 결합하는 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 또한 IL-17에 결합하는 이중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13 이중특이적 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 또는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 VH/VL 유닛을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)는 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, Th2 경로 억제제는 항-IgE 항체일 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-IgE 항체는 (i) 졸레어® 항체 또는 (ii) 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함하며 여기서 가변 중쇄 영역이 서열식별번호: 22이고 가변 경쇄 영역이 서열식별번호: 23인 항-IgE 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따라 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)로 치료받는 환자는 또한 1, 2, 3종 또는 그 초과의 치료제로 치료받는다. 한 실시양태에서, 환자는 천식 환자이다. 한 실시양태에 따르면, 환자는 Th2 경로 억제제 및 1, 2, 3종 또는 그 초과의 치료제로 치료받으며, 여기서 Th2 억제제 이외의 적어도 1종의 치료제는 코르티코스테로이드, 류코트리엔 길항제, LABA, 코르티코스테로이드/LABA 조합 조성물, 테오필린, 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 오말리주맙, LAMA, MABA, 5-리폭시게나제 활성화 단백질 (FLAP) 억제제 또는 효소 PDE-4 억제제이다. 본 발명의 한 측면에 따르면, Th2 경로 억제제는 상승된 IL-13을 갖는 것으로 진단된 천식 환자에게 투여되며, 여기서 진단은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것의 사용을 포함한다. 하나의 추가 실시양태에서, 천식 환자는 치료 전에 코르티코스테로이드로 비제어된다. 또 다른 실시양태에서, 천식 환자는 또한 제2 제어제로 치료받고 있다. 한 실시양태에서, 제2 제어제는 코르티코스테로이드, LABA 또는 류코트리엔 길항제이다. 추가 실시양태에서, 천식 환자는 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있다. 따라서, 한 실시양태에서, Th2 경로 억제제로 치료받을 환자는 Th2 경로 억제제로의 치료 전에 코르티코스테로이드로 비제어되는 중등도 내지 중증 천식 환자이고, 이어서 Th2 경로 억제제 및 1, 2, 3종 또는 그 초과의 제어제로 치료받는다. 한 실시양태에서, 제어제 중 적어도 1종은 코르티코스테로이드이다. 추가 실시양태에서, 이러한 환자는 Th2 경로 억제제, 코르티코스테로이드 및 또 다른 제어제로 치료받는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 경도 천식을 앓고 있지만 코르티코스테로이드로 치료받고 있지 않다. 치료제가 Th2 억제제와 비교하여 상이한 치료 사이클을 가질 수 있고, 결과적으로 환자의 치료의 일부로서 Th2 억제제와 비교하여 상이한 시간에 투여될 수 있음을 이해하여야 한다. 따라서, 한 실시양태에 따르면, 본 발명에 따른 치료 방법은 환자에게 Th2 경로 억제제를 투여하는 단계, 및 임의로 적어도 1, 2 또는 3종의 추가의 치료제를 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, Th2 경로 억제제는 또 다른 치료제를 함유하는 조성물 중에 존재한다. 또 다른 실시양태에서, Th2 경로 억제제는 또 다른 치료제를 함유하는 조성물 중에 존재하지 않는다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명은 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙을; 균일 용량으로 투여하는 것을 포함하는 천식을 치료하는 방법을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 37.5 mg의 균일 용량 (즉, 체중 의존적이지 않음), 또는 125 mg의 균일 용량, 또는 250 mg의 균일 용량으로, 피하 주사에 의해 4주마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13을 갖는 것으로 진단된다. 일부 실시양태에서, 환자는 추가적으로 페리오스틴, FeNO, 호산구, 및 IgE로부터 선택된 1종 이상의 Th2-연관 바이오마커의 상승된 수준을 갖는 것으로 진단된다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13 및 상승된 혈액 호산구 수준을 갖는 것으로 진단된다. 일부 실시양태에서, 혈액 호산구 수준은 300개 세포/마이크로리터 이상으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13, 상승된 혈청 페리오스틴 및 상승된 혈액 호산구 수준을 갖는 것으로 진단된다. 일부 실시양태에서, 혈액 호산구 수준은 300개 세포/마이크로리터 이상으로 결정된다.
또 다른 실시양태에 따르면, 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙은 천식을 치료하기 위해 시간의 경과에 따라 환자의 악화율을 감소시키거나 FEV1을 개선시키기에 충분한 치료 유효량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙을 37.5 mg의 균일 용량 (즉, 체중 의존적이지 않음), 또는 125 mg의 균일 용량, 또는 250 mg의 균일 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 천식을 치료하는 방법을 포함한다. 특정 실시양태에서, 용량은 일정 기간 동안 4주마다 1회 피하 주사에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 일정 기간은 6개월, 1년, 2년, 5년, 10년, 15년, 20년, 또는 환자의 수명이다. 특정 실시양태에서, 천식은 중증 천식이고, 환자는 흡입용 코르티코스테로이드 플러스 제2 제어제 의약으로 불충분하게 제어되거나 비제어된다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13을 갖는 것으로 진단되고, 환자는 상기 기재된 바와 같은 항-IL13 항체에 의한 치료를 위해 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 방법은 환자가 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13을 갖는 것으로 이전에 진단된 경우에, 상기 기재된 바와 같은 항-IL13 항체로 천식 환자를 치료하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자는 추가적으로 페리오스틴, FeNO, 호산구, 및 IgE로부터 선택된 1종 이상의 Th2-연관 바이오마커의 상승된 수준을 갖는 것으로 이전에 진단되었다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13 및 상승된 혈액 호산구 수준을 갖는 것으로 이전에 진단되었다. 일부 실시양태에서, 혈액 호산구 수준은 300개 세포/마이크로리터 이상으로 결정되었다. 일부 실시양태에서, 환자는 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 상승된 IL-13, 상승된 혈청 페리오스틴 및 상승된 혈액 호산구 수준을 갖는 것으로 이전에 진단되었다. 일부 실시양태에서, 혈액 호산구 수준은 300개 세포/마이크로리터 이상으로 결정되었다.
본 발명은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하는 것에 의해 결정된 상승된 IL-13 수준을 갖는 환자에서 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 치료하는데 사용하기 위한 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)인 치료제를 제공한다. 일부 실시양태에서, Th2 경로에서의 억제를 위한 표적은 IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE; 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체, IL-4수용체 알파, IL-13수용체알파1 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2, Fc엡실론RI 및 Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체)으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 방법에 따라 치료될 환자는 경도 내지 중증 천식, 임의로 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있고, 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다.
또 다른 측면에서, 천식 환자를 Th2 경로 억제제에 의한 치유적 치료에 대한 가능성 있는 반응자 및 비-반응자로 계층화/분류하기 위한, 천식 환자로부터 수득된 샘플에서 IL-13의 수준을 측정하기 위한 키트의 용도. 특정 실시양태에서, 용도는 a) 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 천식 환자로부터 수득된 샘플에서 IL-13 수준을 결정하는 단계; b) 단계 a)에서 결정된 IL-13의 수준과 참조 수준을 비교하는 단계; 및 c) 단계 b)에서 수득된 비교에 기초하여 상기 환자를 반응자 또는 비-반응자 카테고리로 계층화하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 상기 용도에 따른 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)는 표적 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE (예를 들어, 졸레어, QGE-031; MEDI-4212; 퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)를 억제하거나, 또는 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제이다.
또 다른 측면에서, 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 앓고 있는 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서 IL-13의 수준을 측정하기 위한 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 (i) 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 IL-13 수준을 측정하는 것, (ii) IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 것, 및 (iii) 비교에 기초하여 상기 환자를 반응자 또는 비-반응자의 카테고리로 계층화하는 것에 대한 지침서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 적어도 1, 적어도 2, 또는 적어도 3종의 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 IL-13에 특이적으로 결합하는 제1 모노클로날 포획 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 모노클로날 검출 항체를 포함하며, 여기서 제1 항체는 제2 항체와 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 키트는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 F(ab')2 또는 Fab인 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 Fab, F(ab')2, Fab', 또는 Fv인 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 면역검정 방법은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제2 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 제3 항체를 포함하며, 여기서 제3 항체는 제2 항체에 특이적으로 결합하고 검출가능하게 표지된다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 합텐으로 표지되고 제3 항체는 항-합텐 항체이다. 일부 실시양태에서, 합텐은 디곡시게닌이고 항-합텐 항체는 형광 라텍스와 접합된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 키트는 상기 제공된 용도를 기재한 정보가 담긴 패키지 삽입물을 포함한다.
또 다른 측면에서, (1) 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자로부터 수득된 혈청 샘플에서 IL-13의 수준을 결정하는 단계; 및 (2) 혈청 샘플에서 IL-13의 수준을 측정하는 것에 대한 지침서를 포함하는, 환자에서 천식 하위유형을 진단하기 위한 키트가 제공되며, 여기서 IL-13의 상승된 발현 수준은 천식 하위유형을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 키트는 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환) 환자가 상승된 IL-13 수준을 갖는지 또는 그렇지 않은지 결정하는 것에 대한 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자가 Th2 경로 억제제에 반응할 가능성이 있는지 결정하는 것에 대한 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 상기 제공된 용도 중 임의의 것을 기재한 정보가 담긴 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 생물학적 샘플을 수용하기 위한 빈 용기를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 IL-13의 수준을 결정하기 위한 시약을 포함한다.
또 다른 측면에서, 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된 환자에게 Th2 경로 억제제 (제2형 경로 억제제)를 투여하는 것을 포함하는, 천식 또는 Th2-연관 질환 (제2형-연관 질환)을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 상기 발명의 내용에 기재된 IL-13 면역검정 방법 중 임의의 것을 사용하여 환자가 상승된 IL-13 수준을 갖는 것으로서 진단하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 환자가 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 결정된 경우에, 환자를 Th2 경로 억제제로 재치료하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 또는 혈장은 환자가 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는지 결정하는데 사용된다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, 1종 이상의 Th2-연관 바이오마커 (제2형 연관 바이오마커)의 수준이 IL-13 수준에 더하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 페리오스틴이다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 혈청 페리오스틴이다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 FeNO이다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 호산구이다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 혈액 호산구이다. 일부 실시양태에서, 추가의 Th2-연관 바이오마커는 IgE이다.
도 1. 실시예 2에 기재된 바와 같은 에렌나® IL-13 검정의 감도 및 특이도의 평가. 천식 환자 (n=10)로부터의 혈청 샘플을 과량의 검정 포획 항체와의 사전-인큐베이션의 존재 (우측) 및 부재 (좌측) 하에 측정하였다. 과량의 검정 포획 항체와의 사전-인큐베이션에 의해 보다 높은 IL-13 값 (n=4)이 LLOQ를 초과하여 유지되었다. 점선은 제조업체에 의해 권장된 LLOQ, 0.39 pg/mL를 표시한다.
도 2a 및 2b. 검정 변형은 실시예 2에 기재된 바와 같은 에렌나® IL-13 면역검정의 특이도를 개선시켰지만, 감도는 개선시키지 못했다. 도 2a는 제조업체의 표준 프로토콜 후 (도 2a, 좌측, HV) 및 과량의 포획 항체-코팅된 마이크로입자와의 사전-인큐베이션 후 (도 2a, 우측, HV + 포획 Ab)에 측정된 3종의 건강한 지원자 (HV) 혈청 샘플을 제시한다. 도 2b는 높은 염 완충제에 의한 1:1 (V/V) 희석 후 (도 2b, 좌측, HV) 및 과량의 포획 항체-코팅된 마이크로입자와의 사전-인큐베이션 후 (도 2b, 우측, HV + 포획 Ab)에 측정된 동일한 3종의 HV 샘플을 제시한다. 도 2a 및 도 2b 각각에서 파선은 LLOQ를 나타낸다. 도 2b에서 LLOQ는 높은 염 완충제에 의한 1:1 (V/V) 샘플 희석을 고려하여 도 2a에서의 LLOQ와 비교하여 변형되었음을 주목한다.
도 3. 변형된 검정 조건은 실시예 2에 기재된 바와 같은 에렌나® IL-13 면역검정의 특이도를 개선시켰지만, 인간 혈청 샘플에서 천연 IL-13을 검출하는 능력은 감소시켰다. HV (n=10), 천식 환자 (n=10) 및 IPF 환자 (n=10)로부터의 혈청 샘플을 과량의 포획 항체-코팅된 마이크로입자 사전-인큐베이션의 부재 및 존재 하에 측정하였다. 점선은 변형된 에렌나® IL-13 면역검정 LLOQ 0.78 pg/mL를 표시한다.
도 4. 실시예 3에 기재된 바와 같은 IMACT IL-13 검정의 특이도. 건강한 지원자 및 상이한 Th2-연관 질환을 갖는 환자 (총 n=101)로부터의 혈청을 과량의 검정 제1 포획 항체와의 사전-인큐베이션의 존재 (우측, 혈청 + 포획 Ab) 및 부재 (좌측, 혈청) 하에 측정하였다. 점선은 IMPACT IL-13 검정 LLOQ 0.014 pg/mL를 표시한다.
도 5. 실시예 3에 기재된 바와 같은 IMPACT IL-13 검정에 의한 혈청 IL-13 수준. HV (n=50), 천식 환자 (n=34), IPF 환자 (n=32), 및 아토피성 피부염 환자 (n=25)로부터의 샘플에 대한 개별 값 뿐만 아니라 각각의 군에 대한 중앙값이 표시된다. 점선은 IMPACT IL-13 검정 LLOQ 0.014 pg/mL를 표시한다. 만-휘트니 검정을 수행하여 HV와 천식, IPF 또는 아토피성 피부염 사이의 평균을 각각 비교하였다. **는 각각의 비교에 대한 P 값이 < 0.0001임을 표시한다.
도 6. 실시예 4에 기재된 바와 같은, 기준선 (제0주) 혈청 IL-13 수준과 혈액 호산구 카운트, 혈청 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 수준의 상관관계. 각각의 비교에 대한 스피어만 순위 상관 계수 (ρ)가 각각의 산점도에 표시된다.
도 7a 및 7b. 실시예 4에 기재된 바와 같은 IL-13 상태에 의한 FEV1에서의 기준선과 비교하여 제12주에서의 평균 백분율 변화. 도 7a는 위약, 및 기준선에서 중앙값 이상의 혈청 IL-13을 갖는 대상체인 혈청 IL-13 높은 군에서의 3종의 용량 군 각각 (4주마다 37.5 mg 레브리키주맙, 4주마다 125 mg 레브리키주맙, 또는 4주마다 250 mg 레브리키주맙)에 대한 결과를 제시하고; 도 7b는 위약, 및 기준선에서 중앙값 미만의 혈청 IL-13을 갖는 대상체인 혈청 IL-13 낮은 군에서의 3종의 용량 군 각각 (4주마다 37.5 mg 레브리키주맙, 4주마다 125 mg 레브리키주맙, 또는 4주마다 250 mg 레브리키주맙)에 대한 결과를 제시한다.
도 8. 실시예 4에 기재된 바와 같은, 혈청 IL-13 높은 군 (좌측 4개의 막대) 및 혈청 IL-13 낮은 군 (우측 4개의 막대)에서의 위약 대조 기간에 걸친 천식 악화율. 회색 화살표는 각각의 3개의 용량 군 (4주마다 37.5 mg 레브리키주맙, 4주마다 125 mg 레브리키주맙, 또는 4주마다 250 mg 레브리키주맙) 대 위약에 대한, 레브리키주맙 (LEB)의 경우에 관찰된 악화율 감소, 백분율 (95% CI)을 나타낸다.
특허 출원 및 공개를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 임의의 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문헌 [Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley &　Sons (New York, N.Y. 1994), 및 March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley &　Sons (New York, N.Y. 1992)]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 출원에 사용된 많은 용어에 대한 일반적 지침을 제공한다.
특정 정의
본 명세서를 해석하고자 하는 목적상, 하기 정의가 적용될 것이고, 적절한 경우에는 언제라도 단수형으로 사용된 용어는 복수형을 또한 포함할 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 하기 제시된 임의의 정의가 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에, 하기 제시된 정의가 우선할 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "단백질" 또는 "항체"에 대한 언급은 각각 복수의 단백질 또는 항체를 포함하고; "세포"에 대한 언급은 세포의 혼합물 등을 포함한다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 제공된 범위는 종점 둘 다와, 종점 사이의 모든 지점을 포함한다. 따라서, 예를 들어 2.0 내지 3.0의 범위는 2.0, 3.0, 및 2.0과 3.0 사이의 모든 지점을 포함한다.
용어 "검출하는 것"은 본원에서 표적 분자의 정성적 및 정량적 측정 둘 다를 포함하는 것으로 가장 넓은 의미로 사용된다. 검출하는 것은 샘플 내 표적 분자의 단순한 존재를 확인하는 것 뿐만 아니라 표적 분자가 샘플에 검출가능한 수준으로 존재하는지 결정하는 것을 포함한다.
"포획 항체"는 샘플 중의 표적 분자에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 특정 조건 하에, 포획 항체는 표적 분자와 복합체를 형성하여, 항체-표적 분자 복합체는 샘플의 나머지로부터 분리될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 분리는 포획 항체가 결합하지 않은 샘플 중의 성분 또는 물질을 세척해내는 것을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 포획 항체는 예를 들어 비제한적으로 플레이트 또는 비드와 같은 고체 지지체 표면에 부착될 수 있다.
"검출 항체"는 샘플 또는 샘플-포획 항체 조합 물질 중의 표적 분자에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 특정 조건 하에, 검출 항체는 표적 분자 또는 표적 분자-포획 항체 복합체와 복합체를 형성한다. 검출 항체는 증폭될 수 있는 표지를 통해 직접적으로, 또는 예를 들어 표지 (예를 들어, 검출가능하게 표지)되고 검출 항체에 결합하는 또 다른 항체의 사용을 통해 간접적으로 검출될 수 있다. 직접 표지를 위해, 검출 항체는 전형적으로, 예를 들어 비오틴 또는 루테늄을 포함하나 이에 제한되지는 않는 일부 수단에 의해 검출가능한 모이어티에 접합된다.
용어 "표지" 또는 "검출가능한 표지"는 검출 또는 정량화하고자 하는 물질, 예를 들어 항체에 연결될 수 있는 임의의 화학적 기 또는 모이어티를 지칭한다. 전형적으로, 표지는 물질의 민감한 검출 또는 정량화에 적합한 검출가능한 표지이다. 검출가능한 표지의 예는 발광 표지, 예를 들어 형광, 인광, 화학발광, 생물발광 및 전기화학발광 표지, 방사성 표지, 효소, 입자, 자기 물질, 전기활성 종 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 검출가능한 표지는 특이적 결합 반응에 참여함으로써 그의 존재를 신호전달할 수 있다. 이러한 표지의 예는 합텐, 항체, 비오틴, 스트렙타비딘, his-태그, 니트릴로트리아세트산, 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 글루타티온 등을 포함한다.
용어 "검출 수단"은 검정에서 이후 판독되는 신호 리포팅을 통해 검출가능한 항체의 존재를 검출하는데 사용되는 모이어티 또는 기술을 지칭한다. 전형적으로, 검출 수단은 고정된 표지, 예컨대 마이크로타이터 플레이트 상에 포획된 표지, 예를 들어 아비딘 또는 스트렙타비딘-HRP를 증폭시키는 시약을 사용한다.
"광발광"은 물질 발광에 이어 그러한 물질에 의한 빛 (대안적으로 전자기 방사선으로 불림)의 흡수 공정을 지칭한다. 형광 및 인광은 2종의 상이한 유형의 광발광이다. "화학발광" 공정은 화학 반응에 의한 발광 종의 생성을 수반한다. "전기-화학발광" 또는 "ECL"은 종, 예를 들어 항체가 적절한 주위 화학적 환경에서 전기화학 에너지에의 노출 시 그러한 종이 발광하는 공정이다.
용어 "감도"는 분석물을 검출하는 검정의 능력을 지칭한다. 한 실시양태에서, 감도는 "정량 하한치" 또는 LLOQ에 의해 정의된다. LLOQ는 적합한 정밀도 및 정확도로 정량적으로 결정될 수 있는 샘플 중 분석물의 최저량이다. 본원에 사용된 "높은 감도"는 검정이 분석물의 pg-미만/mL 수준을 검출할 수 있다는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 검정은 분석물의 fg/mL 수준을 검출할 수 있다.
용어 "특이도"는 유사 또는 관련 분자의 존재 하에 오직 관심 분석물만을 검출하는 검정의 능력을 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은 검정을 수행하기 전에 항원 경쟁 또는 면역고갈을 수행하였을 때, 검정에서 적어도 10종의 샘플을 시험하거나, 또는 적어도 20종의 샘플을 시험하거나, 또는 적어도 30종의 샘플을 시험하거나, 또는 적어도 50종의 샘플을 시험하고, 시험된 모든 샘플에서 검정 신호의 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 또는 100%가 LLOQ 이하인 경우에, 본원에 사용된 바와 같이, 검정은 "높은 특이도"를 갖는다. 일부 실시양태에서, 검정은, 관심 분석물과 비교하여 더 높은 농도로 존재할 수 있는 1종 이상의 비관련 분자의 존재 하에 오직 관심 분석물만을 검출할 수 있다.
특정 실시양태에서, 용어 "참조 수준에서"는 참조 수준 또는 참조 수준과 1% 이하, 2% 이하, 3% 이하, 4% 이하, 5% 이하만큼 상이한 수준과 본질적으로 동일한, 개체 또는 환자로부터의 샘플 내 바이오마커의 수준을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 바이오마커의 중앙 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 평균 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 에버리지 수준이다. 비제한적인 예시적 참조 집단은 천식을 갖는 환자, 중등도 내지 중증 천식을 갖는 환자, 특발성 폐 섬유증을 갖는 환자, 아토피성 피부염을 갖는 환자, 건강한 개체, 및 건강한 개체 및 임의의 상기 언급된 환자를 포함하는 군을 포함한다.
특정 실시양태에서, 용어 "참조 수준 초과"는 본원에 기재된 방법에 의해 결정 시, 참조 수준과 비교하여 참조 수준을 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 또는 그 초과만큼 초과하는, 개체 또는 환자로부터의 샘플 내 바이오마커의 수준을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 중앙 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 평균 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 에버리지 수준이다. 비제한적인 예시적 참조 집단은 천식을 갖는 환자, 중등도 내지 중증 천식을 갖는 환자, 특발성 폐 섬유증을 갖는 환자, 아토피성 피부염을 갖는 환자, 건강한 개체, 및 건강한 개체 및 임의의 상기 언급된 환자를 포함하는 군을 포함한다.
특정 실시양태에서, 용어 "참조 수준 미만"은 본원에 기재된 방법에 의해 결정 시, 참조 수준과 비교하여 참조 수준을 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 또는 그 초과만큼 미만인, 개체 또는 환자로부터의 샘플 내 바이오마커의 수준을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 참조 수준은 참조 집단에서의 중앙 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 평균 수준이다. 일부 실시양태에서, 마커의 참조 수준은 참조 집단에서의 마커의 에버리지 수준이다. 비제한적인 예시적 참조 집단은 천식을 갖는 환자, 중등도 내지 중증 천식을 갖는 환자, 특발성 폐 섬유증을 갖는 환자, 아토피성 피부염을 갖는 환자, 건강한 개체, 및 건강한 개체 및 임의의 상기 언급된 환자를 포함하는 군을 포함한다.
용어 "마커" 및 "바이오마커"는 포유동물 조직 또는 세포 내 또는 그 상에서의 그의 발현 또는 존재가 표준 방법 (또는 본원에 개시된 방법)에 의해 검출될 수 있고, 예를 들어 본원에 기재된 Th2 경로 억제제에 의한 Th2 경로 억제에 기초하여 치료 요법에 대한 포유동물 세포 또는 조직의 감수성을 예측, 진단 및/또는 예후할 수 있는, 유전자, 단백질, 탄수화물 구조물, 또는 당지질, 대사물, mRNA, miRNA, 단백질, DNA (cDNA 또는 게놈 DNA)를 포함한 분자, DNA 카피수, 또는 후성적 변화, 예를 들어 증가, 감소 또는 변경된 DNA 메틸화 (예를 들어, 시토신 메틸화, 또는 CpG 메틸화, 비-CpG 메틸화); 히스톤 변형 (예를 들어, (탈)아세틸화, (탈)메틸화, (탈)인산화, 유비퀴틴화, SUMO화, ADP-리보실화); 변경된 뉴클레오솜 위치설정을 지칭하는 것으로 상호교환가능하게 사용된다. 바이오마커는 또한 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 측정될 수 있는 생물학적 또는 임상적 속성, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 혈액 세포 카운트, 예를 들어 혈액 호산구 카운트, FEV1 또는 FeNO일 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 바이오마커의 수준은 참조 집단에 대해 관찰된 것보다 높거나 낮은 것으로 결정된다. 특정 실시양태에서, 혈액 호산구 카운트는 200/μl, 또는 250/μl, 또는 300/μl, 또는 400/μl이다.
용어 "비교하는 것"은 개체 또는 환자로부터의 샘플 내 바이오마커의 수준을 본 명세서 곳곳에 명시된 바이오마커의 참조 수준과 비교하는 것을 지칭한다. 비교하는 것은 통상적으로 상응하는 파라미터 또는 값의 비교를 지칭하며, 예를 들어 절대량은 절대 참조 양과 비교되는 한편 농도는 참조 농도와 비교되거나, 또는 샘플 내 바이오마커로부터 수득된 강도 신호는 참조 샘플로부터 수득된 동일한 유형의 강도 신호와 비교되는 것으로 이해되어야 한다. 비교는 수동으로 수행될 수 있거나 컴퓨터 보조될 수 있다. 따라서, 비교는 (예를 들어, 본원에 개시된 시스템의) 컴퓨터 장치에 의해 수행될 수 있다. 개체 또는 환자로부터의 샘플에서 바이오마커의 측정되거나 검출된 수준의 값 및 참조 수준은 예를 들어 서로 비교될 수 있고, 상기 비교는 비교에 대한 알고리즘을 실행하는 컴퓨터 프로그램에 의해 자동으로 수행될 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 적합한 출력 형식으로 목적하는 평가를 제공할 것이다. 컴퓨터 보조 비교를 위해, 결정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램에 의해 데이터베이스에 저장된 적합한 참조에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 추가로 비교 결과를 평가할 수 있으며, 즉 적합한 출력 형식으로 목적하는 평가를 자동으로 제공할 수 있다. 컴퓨터 보조 비교를 위해, 결정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램에 의해 데이터베이스에 저장된 적합한 참조에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 추가로 비교 결과를 평가할 수 있으며, 즉 적합한 출력 형식으로 목적하는 평가를 자동으로 제공할 수 있다.
용어 바이오마커의 수준을 "측정하는 것"은 바이오마커의 정량화, 예를 들어 본원의 곳곳에 기재된 적절한 검출 방법을 사용하여 샘플에서 바이오마커의 수준을 결정하는 것을 지칭한다.
용어 "요법의 효능을 모니터링하는 것"은 샘플을 요법 전 및/또는 요법 하의 환자로부터 적어도 1회 (연속 포함) 수득하고, 내부의 1종 이상의 바이오마커를 측정하여 요법이 효과적인지 아닌지의 지표를 수득하는 것을 나타내는 것으로 사용된다.
요법의 효능을 모니터링하는 것에 있어서, 1종 이상의 바이오마커의 수준이 측정되고, 일부 실시양태에서 이는 바이오마커에 대한 참조 수준과 비교되거나, 또는 일부 실시양태에서 이는 동일한 환자로부터 시간상 더 이른 시점에 수득한 샘플 내 바이오마커의 수준과 비교된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 바이오마커의 현재 수준은 동일한 환자로부터의, 상기 환자에서 요법의 시작 전에 수득한 샘플 내 바이오마커의 수준과 비교된다.
어구 "치료를 권장하는 것"은 환자의 샘플에서 본원에 기재된 1종 이상의 바이오마커의 수준 또는 존재와 관련하여 생성된 정보 또는 데이터를 사용하여 환자를 Th2 경로 억제제에 의해 적합하게 치료되는 것 또는 적합하게 치료되지 않는 것으로서 확인하는 것을 지칭한다. 어구 "치료를 권장하는 것"은 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 큰 것 또는 더 작은 것으로 확인되거나 선택된 환자에 대해 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법을 제안하거나 그러한 요법을 선택하기 위해 생성된 정보 또는 데이터를 사용하는 것을 지칭할 수 있다. 사용되거나 생성된 정보 또는 데이터는 서면, 구술 또는 전자의 임의의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생성된 정보 또는 데이터를 사용하는 것은 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 컴퓨터 장치, 분석기 유닛 또는 그의 조합에 의해 수행된다. 일부 추가 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 실험실 또는 의학 전문가에 의해 수행된다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 본원에 기재된 1개 이상의 마커의 수준과 참조 수준의 비교를 포함한다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 환자가 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표, 예를 들어 일부 경우에 환자가 특정한 Th2 경로 억제제, 예컨대 항-IL13 항체 또는 항-IgE 항체를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표를 포함한다.
어구 "환자를 선택하는 것" 또는 "환자를 확인하는 것"은 환자의 샘플에서 본원에 기재된 1개 이상의 마커의 수준과 관련하여 생성된 정보 또는 데이터를 사용하여, 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 더 큰 것으로서 또는 이익을 얻은 가능성이 더 작은 것으로서 확인하거나 선택하는 것을 지칭한다. 사용되거나 생성된 정보 또는 데이터는 서면, 구술 또는 전자의 임의의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생성된 정보 또는 데이터를 사용하는 것은 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 컴퓨터 장치, 분석기 유닛 또는 그의 조합에 의해 수행된다. 일부 추가 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 실험실 또는 의학 전문가에 의해 수행된다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 본원에 기재된 1개 이상의 마커의 수준과 참조 수준의 비교를 포함한다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 환자가 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표, 예를 들어 일부 경우에 환자가 특정한 Th2 경로 억제제, 예컨대 항-IL13 항체 또는 항-IgE 항체를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표를 포함한다.
어구 "요법을 선택하는 것"은 환자의 샘플에서 본원에 기재된 1개 이상의 마커의 수준 또는 존재와 관련하여 생성된 정보 또는 데이터를 사용하여, 환자를 위한 요법을 확인 또는 선택하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 요법은 Th2 경로 억제제를 포함할 수 있다. 사용되거나 생성된 정보 또는 데이터는 서면, 구술 또는 전자의 임의의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생성된 정보 또는 데이터를 사용하는 것은 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 컴퓨터 장치, 분석기 유닛 또는 그의 조합에 의해 수행된다. 일부 추가 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 실험실 또는 의학 전문가에 의해 수행된다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 환자가 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표, 예를 들어 일부 경우에 환자가 특정한 Th2 경로 억제제, 예컨대 항-IL13 항체 또는 IgE 항체를 포함하는 요법에 의해 적합하게 치료되는지 또는 적합하게 치료되지 않는지의 지표를 포함한다.
용어 "생물학적 샘플"은 혈액, 혈청, 혈장, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 객담, 조직 생검 (예를 들면, 폐 샘플), 및 비강 스왑 또는 비강 폴립을 포함한 비강 샘플을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 샘플은 치료 전, 치료 동안 또는 치료후 채취될 수 있다. 샘플은 천식 또는 Th2-연관 질환을 갖는 것으로 의심되거나 천식 또는 Th2-연관 질환을 갖는 것으로 진단되어 치료가 필요할 수 있는 환자로부터, 또는 임의의 장애를 갖는 것으로 의심되지 않는 정상 개체로부터 채취될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈청이다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장이다.
FENO 검정은 FENO (호기 산화질소 농도) 수준을 측정하는 검정을 지칭한다. 이러한 수준은, 예를 들어 2005년에 미국 흉부 학회 (ATS)에 의해 공개된 가이드라인에 따라 핸드-헬드 휴대용 장치, 니옥스 미노(NIOX MINO)® (에어로크린(Aerocrine), 스웨덴 솔나)를 사용하여 평가될 수 있다. FENO는 다른 유사한 방식, 예를 들어 FeNO 또는 FENO로 나타내어질 수 있고, 모든 이러한 유사한 변형이 동일한 의미를 갖는다는 것을 이해하여야 한다.
본원에 제공된 방법에 따라 시험되거나 치료받을 환자의 연령은 모든 연령을 포함한다. 일부 실시양태에서, 연령은 18+ 세이다. 일부 실시양태에서, 연령은 12+ 세이다. 일부 실시양태에서, 연령은 2+ 세이다. 일부 실시양태에서, 연령은 2-18세, 12-18세, 18-75세, 12-75세 또는 2-75세이다.
천식은 가변 및 재발 증상, 가역적 기류 폐쇄 (예를 들어, 기관지확장제에 의함), 및 기저 염증과 연관될 수 있거나 연관되지 않을 수 있는 기관지 과민성을 특징으로 하는 복합 장애이다. 천식의 예는 아스피린 감수성/악화된 천식, 아토피성 천식, 중증 천식, 경도 천식, 중등도 내지 중증 천식, 코르티코스테로이드 나이브 천식, 만성 천식, 코르티코스테로이드 저항성 천식, 코르티코스테로이드 불응성 천식, 새로이 진단된 비치료 천식, 흡연으로 인한 천식, 코르티코스테로이드 비제어 천식, 및 문헌 [J Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938]에서 언급된 바와 같은 다른 천식을 포함한다.
IL-13 매개 장애는 과량의 IL-13 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL-13의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL-13 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 또는 크론병), 폐 염증성 장애 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
IL-4 매개 장애는 과량의 IL4 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL4의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL4 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 또는 크론병), 폐 염증성 장애 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
IL-5 매개 장애는 과량의 IL5 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL5의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL5 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 또는 크론병), 폐 염증성 장애 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
IL-9 매개 장애는 과량의 IL9 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IL9의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. IL9 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 또는 크론병), 폐 염증성 장애 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
TSLP 매개 장애는 과량의 TSLP 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 TSLP의 수준 또는 활성으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. TSLP 매개 장애의 예는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종, 교모세포종), 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식, 섬유증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 또는 크론병), 폐 염증성 장애 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF), COPD, 간 섬유증을 포함한다.
IgE-매개 장애는 과량의 IgE 수준 또는 활성과 연관된 장애를 의미하고, 이러한 체내 국부적 및/또는 전신적 IgE의 수준으로 인해 비정형 증상이 나타날 수 있다. 이러한 장애는 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 섬유증 (예를 들어, 폐 섬유증, 예컨대 IPF)을 포함한다.
천식-유사 증상은 숨가쁨, 기침 (객담 생성 및/또는 객담 질 및/또는 기침 빈도에서의 변화), 천명, 흉부 압박, 기관지수축, 및 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성으로 이루어진 군으로부터 선택된 증상 또는 이들 증상의 조합을 포함한다 (Juniper et al. (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334.).
용어 "호흡기 장애"는 천식 (예를 들어, 알레르기성 및 비-알레르기성 천식 (예를 들어, 보다 어린 어린이에서 예를 들어 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)에 의한 예를 들어 감염으로 인함)); 기관지염 (예를 들어, 만성 기관지염); 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) (예를 들어, 기종 (예를 들어, 담배-유발된 기종)); 기도 염증, 호산구증가증, 섬유증 및 과다 점액 생산을 수반하는 병태, 예를 들어 낭성 섬유증, 폐 섬유증 및 알레르기성 비염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 기도 염증, 과다 기도 분비 및 기도 폐쇄를 특징으로 할 수 있는 질환의 예는 천식, 만성 기관지염, 기관지확장증 및 낭성 섬유증을 포함한다.
악화 (통상적으로 천식 발작 또는 급성 천식으로 지칭됨)는 숨가쁨, 기침 (객담 생성 및/또는 객담 질 및/또는 기침 빈도에서의 변화), 천명, 흉부 압박, 상기 증상 중 하나에 기인한 야간 각성 또는 이들 증상의 조합에서의 신규 에피소드 또는 진행성 증가이다. 악화는 종종 호기 기류 (PEF 또는 FEV1)에서의 감소를 특징으로 한다. 그러나, PEF 가변성은 악화로부터 회복까지 또는 회복 동안에는 증가할 수 있지만, 악화 동안에는 통상적으로 증가하지 않는다. 악화의 중증도는 경도 내지 생명-위협의 범위이고, 증상 및 폐 기능 둘 다를 기초로 하여 평가될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 중증 천식 악화는 하기 천식 치료를 위한 입원, 높은 코르티코스테로이드 사용 (예를 들어, 총 1일 코르티코스테로이드 용량을 4배로 하는 것, 또는 연속 3일 이상 동안 FP 또는 등가물의 500 마이크로그램 이상의 총 1일 용량), 또는 경구/비경구 코르티코스테로이드 사용 중 어느 하나 또는 그의 조합을 야기하는 악화를 포함한다.
제2형 경로 억제제로도 지칭되는 Th2 경로 억제제는 Th2 경로를 억제하는 작용제이다.
Th2 경로 억제제의 억제제는 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33, 가용성 IgE (예를 들어, 졸레어, QGE-031; MEDI-4212) 및 막-결합 IgE (퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)로부터 선택된 표적 중 어느 하나의 활성의 억제제, 및 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제를 포함한다. 상기 언급된 표적의 억제제의 예는, 예를 들어 WO2008/086395; WO2006/085938; US 7,615,213; US 7,501,121; WO2006/085938; WO 2007/080174; US 7,807,788; WO2005007699; WO2007036745; WO2009/009775; WO2007/082068; WO2010/073119; WO2007/045477; WO2008/134724; US2009/0047277; 및 WO2008/127,271에 개시되어 있다.
본원에 제공된 치료제는 본원에서 상기 확인된 표적에 결합할 수 있는 작용제, 예컨대 폴리펩티드(들) (예를 들어, 항체, 이뮤노어드헤신 또는 펩티바디), 단백질에 결합할 수 있는 압타머 또는 소분자, 또는 본원에서 확인된 표적을 코딩하는 핵산 분자에 결합할 수 있는 핵산 분자 (즉, siRNA)를 포함한다.
"항-IL13/IL4 경로 억제제"는 IL-13 및/또는 IL-4 신호전달을 억제하는 치료제를 지칭한다. 항-IL13/IL4 경로 억제제의 예는 IL13 및/또는 IL4와 그의 수용체(들)의 상호작용의 억제제를 포함하고, 이러한 억제제는 항-IL13 결합제, 항-IL4 결합제, 항-IL3/IL4 이중특이적 결합제, 항-IL4수용체알파 결합제, 항-IL13수용체알파1 결합제 및 항-IL13 수용체알파2 결합제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. IL13, IL4, (IL13에 결합하는 단일 도메인 및 IL4에 결합하는 단일 도메인을 갖는 이중특이적 항체 포함), IL-13R알파1, IL-13R알파2 또는 IL-4R알파에 결합할 수 있는 단일 도메인 항체가 억제제로서 구체적으로 포함된다. 1개 초과의 표적에 결합할 수 있는 분자가 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
"항-IL4 결합제"는 인간 IL-4에 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 결합제는 1 uM - 1 pM 사이의 친화도로 인간 IL-4 서열에 결합한다. 항-IL4 결합제의 구체적 예는 가용성 IL4수용체 알파 (예를 들어, 인간 Fc 영역에 융합된 IL4수용체의 세포외 도메인), 항-IL4 항체, 및 가용성 IL13수용체알파1 (예를 들어, 인간 Fc 영역에 융합된 IL13수용체알파1의 세포외 도메인)을 포함할 수 있다.
"항-IL4수용체알파 결합제"는 인간 IL4 수용체알파에 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 결합제는 1 uM - 1 pM 사이의 친화도로 인간 IL-4 수용체 알파 서열에 결합한다. 항-IL4 수용체알파 결합제의 구체적인 예는 항-IL4 수용체 알파 항체를 포함할 수 있다.
"항-IL13 결합제"는 인간 IL13에 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 결합제는 1 uM - 1 pM 사이의 친화도로 인간 IL-13 서열에 결합한다. 항-IL13 결합제의 구체적 예는 항-IL13 항체, 인간 Fc에 융합된 가용성 IL13수용체알파2, 인간 Fc에 융합된 가용성 IL4수용체알파, 인간 Fc에 융합된 가용성 IL13 수용체알파를 포함할 수 있다. 한 실시양태에 따르면, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며, 여기서 각각의 HVR은 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 레브리키주맙이다. 한 실시양태에 따르면, 항체는 IgG1 항체이다. 또 다른 실시양태에 따르면, 항체는 IgG4 항체이다. 한 실시양태에 따르면, IgG4 항체는 그의 불변 도메인에 S228P 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 그의 가변 중쇄 영역에 Q1E 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 그의 가변 경쇄 영역에 M4L 돌연변이를 포함한다.
"항-IL13수용체알파1 결합제"는 인간 IL13 수용체알파1에 특이적으로 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 결합제는 1 uM - 1 pM 사이의 친화도로 인간 IL-13 수용체 알파1 서열에 결합한다. 항-IL13 수용체알파1 결합제의 구체적 예는 항-IL13 수용체 알파1 항체를 포함할 수 있다.
"항-IL13수용체알파2 결합제"는 인간 IL13 수용체알파2에 특이적으로 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 결합제는 1 μM - 1 pM 사이의 친화도로 인간 IL-13 수용체 알파2 서열에 결합한다. 항-IL13 수용체알파2 결합제의 구체적 예는 항-IL13 수용체 알파2 항체를 포함될 수 있다.
"항 IgE 결합제"는 인간 IgE에 특이적으로 결합하는 작용제를 지칭한다. 이러한 결합제는 소분자, 압타머 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리펩티드는 이뮤노어드헤신, 항체, 펩티바디 및 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드(들)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에 따르면, 항-IgE 항체는 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 영역은 서열식별번호: 22이고 가변 경쇄 영역은 서열식별번호: 23이다. 한 실시양태에 따르면, 항-IgE 항체는 졸레어® 항체이다.
"Th2-연관 질환"은 본원에서 "제2형-연관 질환"과 상호교환가능하게 사용되며, T-헬퍼 제2형 세포 (Th2) 및 염증을 수반하고, 예를 들어 IL-4, IL-5, IL-9 및 IL-13을 포함하나 이에 제한되지는 않는 Th2 시토카인과 연관된 다른 병리학적 및 임상 양상, 예컨대 섬유증 또는 점액 생산을 포함할 수 있는 질환이다. 추가의 면역 및/또는 염증 세포 및 이러한 세포에 의해 생산된 시토카인, 효소 및 다른 염증 매개체 (예를 들어, 히스타민, 트립타제, 류코트리엔, IgE)는 염증 및/또는 질환 징후 및 증상에 기여할 수 있다. 이러한 추가의 면역 및/또는 염증 세포는 Th17 세포, 제2형 선천성 림프성 세포, 호산구, 비만 세포, 호염기구, 호중구 및 IgE-생산 B 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. Th2-연관 질환 (본원에서 제2형-연관 질환으로도 지칭됨)의 예는 천식, 아토피성 천식, 알레르기성 천식, 중증 천식, 아토피성 피부염, 알레르기성 비염 (계절성 알레르기성 비염 포함), 식품 과민성, 두드러기, 수포성 피부 질환, 만성 호산구성 폐렴, 알레르기성 기관지폐 아스페르길루스증, 복강 질환, 처그-스트라우스 증후군 (결절성 동맥주위염 플러스 아토피), 호산구성 근육통 증후군, 과다호산구성 증후군, 간헐성 혈관부종을 포함한 부종성 반응, 호산구성 식도염, 호산구성 위염, 호산구성 위장염, 호산구성 장염 및 호산구성 결장염, 비강 미세폴립증 및 폴립증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 및 크론병), 경피증, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 염증성 장애, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 간 섬유증, 심내막심근 섬유증, 만성 기관지염, 기관지확장증, 낭성 섬유증 및 악성종양, 예를 들어 Th2 시토카인, 예컨대 IL-13의 이상 발현과 연관된 암 또는 종양을 포함한다.
용어 "소분자"는 50 달톤 내지 2500 달톤의 분자량을 갖는 유기 분자를 지칭한다.
용어 "항체"는 가장 넒은 의미로 사용되고, 구체적으로 예를 들어 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체, 단일 쇄 항체, 이중특이적 항체를 포함한 다중-특이적 항체, 및 그들이 목적하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포괄한다. 이러한 항체는 키메라, 인간화, 인간 및 합성일 수 있다.
용어 "비제어" 또는 "비제어가능한"은 질환의 증상을 최소화하기 위한 치료 요법의 불충분함을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "비제어" 및 "불충분하게 제어"는 상호교환가능하게 사용될 수 있고, 동일한 상태를 지칭하는 것으로 의도된다. 환자의 제어 상태는 환자의 임상 이력, 치료에 대한 반응성 및 처방된 현행 치료의 수준을 포함한 다수의 인자를 기반으로 하여 담당 의사에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 의사는 FEV1 <75% 예측치 또는 개인 최고 측정치, 과거 2-4주 내 SABA를 필요로 한 빈도 (예를 들어, 2회 용량/주 이상), 과거 2-4주 내 야간 각성/증상 (예를 들어, 2회 야간/주 이하), 과거 2-4주 내 활동에 대한 제한, 과거 2-4주 내 주간 증상과 같은 인자를 고려할 수 있다.
용어 "치료제"는 질환을 치료하는데 사용되는 임의의 작용제를 지칭한다.
용어 "제어제" 또는 "예방제"는 천식 염증을 제어하는데 사용되는 임의의 치료제를 지칭한다. 제어제의 예는 코르티코스테로이드, 류코트리엔 수용체 길항제 (예를 들어, 류코트리엔의 합성 또는 활성을 억제함, 예컨대 몬테루카스트, 질류톤, 프란루카스트, 자피르루카스트), LABA, 코르티코스테로이드/LABA 조합 조성물, 테오필린 (아미노필린 포함), 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 오말리주맙, LAMA, MABA (예를 들어, 이관능성 무스카린성 길항제-베타2 효능제), 5-리폭시게나제 활성화 단백질 (FLAP) 억제제, 및 효소 PDE-4 억제제 (예를 들어, 로플루밀라스트)를 포함한다. "제2 제어제"는 전형적으로 제1 제어제와 동일하지 않은 제어제를 지칭한다.
용어 "코르티코스테로이드 절약" 또는 "CS"는 또 다른 치료제의 투여로 인한, 질환의 치료를 위해 코르티코스테로이드를 제공받는 환자에서 질환을 치료하기 위해 사용된 코르티코스테로이드의 빈도 및/또는 양에서의 감소, 또는 그의 제거를 의미한다. "CS 작용제"는 코르티코스테로이드를 제공받는 환자에서 CS를 유발할 수 있는 치료제를 지칭한다.
용어 "코르티코스테로이드"는 플루티카손 (플루티카손 프로피오네이트 (FP) 포함), 베클로메타손, 부데소니드, 시클레소니드, 모메타손, 플루니솔리드, 베타메타손 및 트리암시놀론을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "흡입가능한 코르티코스테로이드"는 흡입에 의한 전달에 적합한 코르티코스테로이드를 의미한다. 예시적인 흡입가능한 코르티코스테로이드는 플루티카손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데노시드, 모메타손 푸로에이트, 시클레소니드, 플루니솔리드, 트리암시놀론 아세토니드 및 현재 이용가능하거나 미래에 이용가능하게 될 임의의 다른 코르티코스테로이드이다. 흡입될 수 있고 장기 작용 베타2-효능제와 조합되는 코르티코스테로이드의 예는 부데소니드/포르모테롤 및 플루티카손/살메테롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
코르티코스테로이드/LABA 조합 약물의 예는 플루티카손 푸로에이트/빌란테롤 트리페나테이트 및 인다카테롤/모메타손을 포함한다.
용어 "LABA"는 장기 작용 베타-2 효능제를 의미하며, 이러한 효능제는 예를 들어 살메테롤, 포르모테롤, 밤부테롤, 알부테롤, 인다카테롤, 아르포르모테롤 및 클렌부테롤을 포함한다.
용어 "LAMA"는 장기 작용 무스카린성 길항제를 의미하며, 이러한 효능제는 티오트로피움을 포함한다.
LABA/LAMA 조합물의 예는 올로다테롤 티오트로피움 (베링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)) 및 인다카테롤 글리코피로늄 (노파르티스(Novartis))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "SABA"는 단기 작용 베타-2 효능제를 의미하며, 이러한 효능제는 살부타몰, 레보살부타몰, 페노테롤, 테르부탈린, 피르부테롤, 프로카테롤, 비톨테롤, 리미테롤, 카부테롤, 툴로부테롤 및 레프로테롤을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
류코트리엔 수용체 길항제 (때때로 류카스트로 지칭됨) (LTRA)는 류코트리엔을 억제하는 약물이다. 류코트리엔 억제제의 예는 몬테루카스트, 질류톤, 프란루카스트 및 자피르루카스트를 포함한다.
용어 "FEV1"은 강제 호기의 처음 1초간 내쉰 공기의 부피를 지칭한다. 이는 기도 폐쇄의 척도이다. FEV1에서 20% 감소를 유도하는데 필요한 메타콜린의 유발 농도 (PC20)는 기도 과민반응의 척도이다. FEV1은 다른 유사한 방식, 예를 들어 FEV1로 기재될 수 있으며, 모든 이러한 유사한 변형이 동일한 의미를 갖는다는 것을 이해해야 한다.
용어 "FEV1에서의 상대 변화" = (치료 제12주에서의 FEV1 - 치료 시작 전의 FEV1) / FEV1이다.
용어 "경도 천식"은 일반적으로 1주 2회 미만의 증상 또는 악화, 1개월 2회 미만의 야간 증상을 경험하는 환자를 지칭하며, 악화 사이에는 무증상이다. 경도 간헐성 천식은 종종 필요한 경우에 하기로 치료된다: 흡입용 기관지확장제 (단기 작용 흡입용 베타2-효능제); 공지된 유발인자의 회피; 매년 인플루엔자 백신접종; 6 내지 10년마다의 폐렴구균 백신접종, 및 일부 경우에, 흡입용 베타2-효능제, 크로몰린, 또는 확인된 유발인자에 대한 노출 전의 네도크로밀. 환자가 단기 작용 베타2-효능제에 대해 증가하는 필요를 갖는 경우에 (예를 들어, 급성 악화에 대해 1일에 3 내지 4회 초과의 단기 작용 베타2-효능제를 사용하거나, 또는 증상에 대해 1개월 1개 초과의 캐니스터를 사용함), 환자는 요법에서의 증강을 필요로 할 수 있다.
용어 "중등도 천식"은 일반적으로 환자가 1주 2회 초과의 악화를 경험하고, 악화가 수면 및 활동에 영향을 미치고; 환자가 1개월 2회 초과의 천식으로 인한 야간 각성을 갖고; 환자가 매일 또는 격일의 단기 작용 흡입용 베타2-효능제를 필요로 하는 만성 천식 증상을 가지며; 환자의 치료전 기준선 PEF 또는 FEV1이 60 내지 80 퍼센트 예측치이고, PEF 가변성이 20 내지 30 퍼센트인 천식을 지칭한다.
용어 "중증 천식"은 일반적으로 환자가 거의 계속적인 증상, 빈번한 악화, 천식으로 인한 빈번한 야간 각성, 제한된 활동, 60 퍼센트 예측치 미만의 PEF 또는 FEV1 기준선, 및 20 내지 30 퍼센트의 PEF 가변성을 갖는 것인 천식을 지칭한다.
구급 의약의 예는 알부테롤, 벤토린 등을 포함한다.
"저항성"은 치료제로의 치료 후에 임상적으로 유의한 개선을 거의 또는 전혀 나타내지 않는 질환을 지칭한다. 예를 들어, 고용량 ICS로의 치료 (예를 들어, 천식이 비제어로 남아있거나 또는 FEV1이 개선되지 않는 경우에 확립하기 위해 총 1일 코르티코스테로이드 용량을 4배로 하는 것 또는 적어도 연속 3일 이상 동안 FP (또는 등가물) 500 마이크로그램 이상의 총 1일 용량, 또는 2주 동안 전신성 코르티코스테로이드 시행)를 필요로 하는 천식은 종종 중증 불응성 천식으로 간주된다.
본원에 제공된 치료제는 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비강내를 포함한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 흡입된다. 또 다른 실시양태에 따르면, 투여는 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 치료제는 시린지 (예를 들어, 사전충전되거나 그렇지 않음) 또는 자가주사기를 사용하여 투여된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 치료제의 적절한 투여량은 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 치료제가 예방 또는 치료 목적을 위해 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 이력 및 치료제에 대한 반응, 및 담당의의 판단에 의존할 수 있다. 치료제는 적합하게는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. 치료제 조성물은 우수한 의료 행위에 부합하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상 병태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다.
Th2-연관 질환 (천식 포함)을 위한, 및 Th2 요법을 사용하여 다른 질환을 치료하기 위한, 레브리키주맙의 경우의 투여: 레브리키주맙은 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg 환자 체중으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 환자에게 투여되는 투여량은 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg 환자 체중이다. 또 다른 실시양태에서, 용량은 1 mg/kg 내지 10 mg/kg 환자 체중이다.
대안적 실시양태에서, 레브리키주맙은 균일 용량으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 레브리키주맙은 125-1000 mg의 균일 용량 (즉, 체중 의존적이지 않음), 또는 37.5 mg의 균일 용량, 또는 125 mg의 균일 용량, 또는 250 mg의 균일 용량, 또는 500 mg의 균일 용량으로, 피하 주사에 의해 또는 정맥내 주사에 의해, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 9주마다, 10주마다, 11주마다, 12주마다, 13주마다, 14주마다, 15주마다, 16주마다, 1개월마다, 2개월마다, 3개월마다 또는 4개월마다로 이루어진 군으로부터 선택된 시간 빈도로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 환자가 과체중인 경우에, 레브리키주맙은 예를 들어 125-250 mg으로 1개월에 3회의 빈도로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 레브리키주맙은 125 mg, 250 mg 또는 500 mg의 균일 용량으로 4주마다 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 레브리키주맙은 환자 >40 kg에서 37.5 mg, 125 mg, 250 mg 또는 500 mg의 균일 용량으로 4주마다 투여된다.
한 실시양태에서, 환자는 18세 이상이다. 한 실시양태에서, 천식 환자는 12 내지 17세이고, 레브리키주맙은 250 mg의 균일 용량 또는 125 mg의 균일 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 천식 환자는 6 내지 11세이고, 레브리키주맙은 125 mg의 균일 용량으로 투여된다.
치료제에 대한 "환자 반응" 또는 "반응" (및 그의 문법적 변형)은, 제한 없이, (1) 지연 및 완전한 저지를 포함한 질환 진행의 어느 정도까지의 억제; (2) 질환 에피소드 및/또는 증상의 수에서의 감소; (3) 병변 크기에서의 감소; (4) 인접한 말초 기관 및/또는 조직으로의 면역 또는 염증 세포 침윤의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (5) 질환 확산의 억제 (즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (6) 질환 병변의 퇴행 또는 제거를 야기할 수 있지만 그래야 하는 것은 아닌, 자가면역 반응의 감소; (7) 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 완화; (8) 치료 후 무질환 표출 기간에서의 증가; 및/또는 (9) 치료 후 주어진 시점에서의 감소된 사망률을 포함한, 환자에 대한 이익을 나타내는 임의의 종점을 사용하여 평가될 수 있다.
"친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합계의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원 결합 아암) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내인성 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 포함하여, 관련 기술분야에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시양태가 하기 기재된다.
"친화도 성숙" 항체는 항원에 대한 항체의 친화도에서의 개선을 생성하는 변경을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 하나 이상의 초가변 영역 (HVR)에서 하나 이상의 변경을 갖는 항체를 지칭한다.
용어 "항-표적 항체" 및 "표적에 결합하는 항체"는 항체가 표적을 표적화하는데 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 표적에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 비관련, 비-표적 단백질에 대한 항-표적 항체의 결합의 정도는, 예를 들어 방사성면역검정 (RIA) 또는 비아코어 검정에 의한 측정 시, 표적에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, 표적에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-표적 항체는 상이한 종 사이에서 보존된 표적의 에피토프에 결합한다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 일부를 포함하는, 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 단일 쇄 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 검정에서 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다. 경쟁 검정을 수행하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본원의 목적상 "수용자 인간 프레임워크"는 하기 정의되는 바와 같은, 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 실시양태에서, VL 수용자 인간 프레임워크는 VL 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 공급원 또는 종으로부터 유래된 반면에, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지가 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
항체의 "부류"는 그의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5종의 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 나뉘어질 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에서 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.
작용제, 예를 들어 제약 제제의 "유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 목적하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기에 유효한 양을 지칭한다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실-말단으로 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은, EU 인덱스로도 지칭되는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 본원에 정의된 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환가능하게 사용되고, 외인성 핵산이 도입된 세포 (이러한 세포의 자손 포함)를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 1차 형질전환된 세포 및 계대 횟수와 관계없이 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 사용하는 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의에서 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 구체적으로 제외된다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택 시 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서와 같은 하위군이다. 한 실시양태에서, VL의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 카파 I이다. 한 실시양태에서, VH의 경우에 하위군은 상기 문헌 [Kabat et al.]에서와 같은 하위군 III이다.
"인간화" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, CDR)은 비-인간 항체의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 그것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 거친 항체를 지칭한다.
용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열에서 초가변적이고/거나 구조적으로 한정된 루프 ("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6개의 HVR; VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프로부터의 및/또는 "상보성 결정 영역" (CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 후자는 전형적으로 서열 가변성이 가장 높고/거나 항원 인식에 관여한다. 본원에 사용된 바와 같은 HVR 영역은 위치 24-36 (HVRL1의 경우), 46-56 (HVRL2의 경우), 89-97 (HVRL3의 경우), 26-35B (HVRH1의 경우), 47-65 (HVRH2의 경우) 및 93-102 (HVRH3의 경우) 내에 위치한 임의의 번호의 잔기를 포함한다.
"개체" 또는 "환자" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물은 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 환자 또는 대상체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 본원의 "개체" 또는 "환자" 또는 "대상체"는 천식 또는 호흡기 병태의 하나 이상의 징후, 증상 또는 다른 적응증을 경험하고 있거나 또는 경험한 적이 있는, 치료에 적격인 임의의 단일 인간 대상체이다. 질환의 임의의 임상 징후를 나타내지 않는 임상 연구 시험에 수반된 임의의 대상체, 또는 역학적 연구에 수반된 대상체, 또는 대조군으로서 일단 사용된 대상체가 대상체로서 포함되는 것으로 의도된다. 대상체는 이전에 Th2 경로 억제제 또는 또 다른 약물로 치료받았을 수 있거나, 또는 치료받지 않았을 수 있다. 대상체는 본원의 치료의 시작 시 Th2 억제제에 대해 나이브일 수 있고, 즉 대상체는 "기준선"에서 (즉, 본원의 치료 방법에서 Th2 억제제의 최초 용량을 투여하기 전의 시간상 설정점, 예컨대 치료를 개시하기 전 대상체를 스크리닝한 날에서) 예를 들어 Th2 억제제로 이전에 치료받지 않았을 수 있다. 이러한 "나이브" 대상체는 일반적으로, 이러한 약물(들)을 사용한 치료 후보인 것으로 간주된다.
"소아" 개체 또는 환자 또는 대상체는 생후 18세 (또는 0 내지 18세)까지의 인간이다. 일부 실시양태에서, 소아 개체 또는 환자 또는 대상체는 2 내지 6세, 2 내지 17세, 6 내지 11세, 6 내지 18세, 6 내지 17세, 8 내지 17세, 12 내지 17세, 또는 12 내지 18세이다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분에서 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의한 결정 시 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가를 위한 방법의 검토에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
"단리된" 핵산은 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 통상적으로 함유하는 세포에 함유되어 있는 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항-표적 항체를 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자 (단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 이러한 핵산 분자(들) 및 숙주 세포 내 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들) 포함)를 지칭한다.
용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 상기 집단을 구성하는 개개의 항체는, 일반적으로 소량으로 존재하는 예를 들어 자연 발생 돌연변이를 함유하거나 모노클로날 항체 제제의 생산 동안 생성되는 가능한 변이체 항체를 제외하고, 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 모노클로날 항체 제제의 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 동종인 집단으로부터 수득된 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본원에 제공된 방법에 따라 사용될 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하는 다른 예시적인 방법이 본원에 기재되어 있다.
"네이키드 항체"는 이종 모이어티 (예를 들어, 세포독성 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 제약 제제에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 자연 발생 이뮤노글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디술피드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VH)에 이어서 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VL)에 이어서 불변 경쇄 (CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2가지 유형 중 1가지로 할당될 수 있다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보가 담긴, 이러한 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하는 것으로 사용된다. 용어 "패키지 삽입물"은 또한 의도된 용도, 시험 원리, 시약의 제조 및 취급, 시편 수집 및 제조, 검정 및 검정 절차의 보정, 성능 및 정밀도 데이터, 예컨대 검정의 감도 및 특이도에 대한 정보가 담긴, 진단 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하는 것으로 사용된다.
참조 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열을 정렬시키고 필요한 경우에 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후 임의의 보존적 치환은 서열 동일성 부분으로 간주하지 않으면서 참조 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 관련 기술분야 기술 내의 다양한 방식으로, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈라인(Megalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 통상의 기술자는 비교할 전장 서열에 대한 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적상, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.) 소유로서, 소스 코드는 미국 저작권청 (20559 워싱턴 디.씨.)에 사용자 문서로 제출되어 있고, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크. (캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)로부터 공개적으로 입수가능하거나, 소스 코드로부터 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함한 UNIX 운영 시스템에서의 사용을 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 있으며 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 경우에, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 이를 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라는 어구로 기재될 수 있음)은 하기와 같이 계산된다:
X/Y 분율 x 100
여기서, X는 A 및 B의 프로그램 정렬 시 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우에는 B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성이 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임을 인식할 것이다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 직전 단락에 기재된 바와 같이 수득한다.
용어 "제약 제제"는 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하며, 제제가 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "표적"은 달리 나타내지 않는 한, 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 분자를 지칭한다. 상기 용어는 "전장" 비프로세싱된 표적 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 생성된 임의의 형태의 표적을 포괄한다. 상기 용어는 또한 표적의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다.
용어 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키기 위한 시도로의 임상 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 예방을 위해 또는 그 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 축소, 전이의 예방, 질환 진행률의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 경감 또는 개선된 예후를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 늦추기 위해 사용된다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다. (예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)] 참조.) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하는데 충분할 수 있다. 또한, 특정한 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
용어 "벡터"는, 연결된 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라, 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 통합된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
조성물 및 방법
본 발명은, 적어도 부분적으로, 시험된 샘플의 98% 초과에서 펨토그램/mL 수준의 IL-13을 검출하는 고도로 민감하고, 본원에 기재된 바와 같이 고도로 특이적인 IL-13 면역검정 방법을 제공한다. 또한, Th2 경로 억제제인 치유적 치료에 반응할 가능성이 더 큰 상승된 혈청 IL-13 수준을 갖는 환자를 선택 또는 확인하고, 뿐만 아니라 중증 악화를 앓을 가능성이 더 큰 천식 환자를 확인하기 위한, 이러한 고도로 민감하고 고도로 특이적인 면역검정 방법의 사용 방법이 본원에 제공된다.
예시적인 항체
항-IL13 항체
한 측면에서, 본 발명은 인간 IL-13에 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
예시적인 항-IL13 항체는 공지되어 있고, 예를 들어 레브리키주맙, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 항-IL13 항체 및 IL13의 다른 억제제의 예가, 예를 들어 WO 2005/062967, WO2008/086395, WO2006/085938, US 7,615,213, US 7,501,121, WO2007/036745, WO2010/073119, WO2007/045477, WO 2014/165771에 개시되어 있다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 인간화 IgG4 항체이다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 레브리키주맙이다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 중쇄 HVR, HVR-H1 (서열식별번호: 5), HVR-H2 (서열식별번호: 6), 및 HVR-H3 (서열식별번호: 7)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 경쇄 HVR, HVR-L1 (서열식별번호: 8), HVR-L2 (서열식별번호: 9), 및 HVR-L3 (서열식별번호: 10)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 중쇄 HVR 및 3개의 경쇄 HVR, HVR-H1 (서열식별번호: 5), HVR-H2 (서열식별번호: 6), HVR-H3 (서열식별번호: 7), HVR-L1 (서열식별번호: 8), HVR-L2 (서열식별번호: 9), 및 HVR-L3 (서열식별번호: 10)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 영역, VH를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 영역, VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 영역, VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 영역, VL을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 4를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 25를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 3 및 서열식별번호: 2를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 3 및 서열식별번호: 4를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 3 및 서열식별번호: 25를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 2를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 4를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 가변 영역 서열 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 25를 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 인간화될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 인간 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 1에서 치환, 변경, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 1의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 3의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 24의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
또 다른 측면에서, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 2에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 2의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 4의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 25의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
또 다른 측면에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1의 VH 서열 및 서열식별번호: 2의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 항-IL-13 항체에 의해 경쟁적으로 억제될 수 있는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 포함한 모노클로날 항체일 수 있다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다. 또 다른 실시양태에 따르면, 항체는 이중특이적 항체이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 HVR을 포함하거나, 또는 상기 기재된 VH 및 VL 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 중쇄 HVR, HVR-H1 (서열식별번호: 13), HVR-H2 (서열식별번호: 14), 및 HVR-H3 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 경쇄 HVR, HVR-L1 (서열식별번호: 16), HVR-L2 (서열식별번호: 17), 및 HVR-L3 (서열식별번호: 18)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 3개의 중쇄 HVR 및 3개의 경쇄 HVR, HVR-H1 (서열식별번호: 13), HVR-H2 (서열식별번호: 14), HVR-H3 (서열식별번호: 15), HVR-L1 (서열식별번호: 16), HVR-L2 (서열식별번호: 17), 및 HVR-L3 (서열식별번호: 18)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 영역, VH를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 영역, VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄 영역, VH 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 영역, VL을 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 인간화될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-IL-13 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 추가로 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 인간 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 12에서 치환, 변경, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL13 항체는 서열식별번호: 12의 VH 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
또 다른 측면에서, 서열식별번호: 11의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-IL-13 항체는 IL-13에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 11에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-IL-13 항체는 서열식별번호: 11의 VL 서열 (그러한 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
또 다른 측면에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-IL-13 항체가 제공된다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 12의 VH 서열 및 서열식별번호: 11의 VL 서열을 포함하는 항-IL-13 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 항-IL-13 항체에 의해 경쟁적으로 억제될 수 있는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 포함한 모노클로날 항체일 수 있다. 한 실시양태에서, 항-IL13 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다. 또 다른 실시양태에 따르면, 항체는 이중특이적 항체이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 HVR을 포함하거나, 또는 상기 기재된 VH 및 VL 영역을 포함한다.
추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다:
항-IgE 항체
한 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 항-IgE 항체를 제공한다. 한 실시양태에 따르면, 항-IgE 항체는 졸레어® 항체이다.
이중특이적 항체
한 측면에서, 본 발명은 IL-4 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 이중특이적 항체를 제공한다. 이러한 항-IL-4/항-IL-13 이중특이적 항체는 WO 2014/165771에 기재되어 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 IL-13 및 IL-17에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 이중특이적 항체를 제공한다. 이러한 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 PCT/US2015/017168 및 미국 출원 번호 14/629,449에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 항-IL-17 항체는 IL-17A 동종이량체, IL-17F 동종이량체, 및 IL-17AF 동종이량체에 결합한다.
추가 측면에서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함한다.
추가 측면에서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함한다.
추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다:
1. 항체 친화도
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
한 실시양태에서, Kd는 하기 검정에 의해 기재된 바와 같이 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행된 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터(MICROTITER)® 멀티-웰 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중의 5 μg/ml 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, PBS 중의 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단한다. 비-흡착 플레이트 (눈크(Nunc) #269620)에서는 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만; 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 폴리소르베이트 20 (트윈(TWEEN)-20®)으로 8회 세척한다. 플레이트가 건조된 경우에, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MICROSCINT)-20™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드) 상에서 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁적 결합 검정에 사용한다.
또 다른 실시양태에 따르면, Kd는 ~10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000 (비아코어, 인크., 뉴저지주 피스카타웨이)를 사용하는 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화한다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.8을 사용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질의 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주입한다. 항원의 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 미반응기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2-배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (트윈-20™) 계면활성제를 갖는 PBS (PBST) 내에 주입한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센소그램을 동시에 피팅시켜 회합률 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 koff/kon의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 온-레이트가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106 M- 1 s-1을 초과하는 경우에, 온-레이트는 분광계, 예컨대 정지-유동 설비 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠) 또는 교반 큐벳이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코™ 분광광도계 (써모스펙트로닉)에서 측정되는 바와 같은, 증가하는 농도의 항원의 존재 하에 PBS, pH 7.2 중 20 nM의 항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역-통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하는 것에 의해 결정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의에 대해서는, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 교체된" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 면역원성이 감소되도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 내의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 개선시키기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; 문헌 [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (SDR (a-CDR) 그라프팅 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) ("재표면화" 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) ("FR 셔플링" 기재); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링에 대한 "유도 선택" 접근법 기재)]에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, "최적-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
4. 인간 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하는 것에 의해 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술을 기재하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; 휴맙(HUMAB)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 벨로시마우스(VELOCIMOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시키는 것에 의해 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하는 것에 의해 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기술은 하기 기재된다.
5. 라이브러리-유래 항체
본 발명의 항체는 목적 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 목적하는 결합 특성을 보유하는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에 검토되어 있고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 비재배열 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도의 가변 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공개는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. 다중특이적 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 IL-13에 대한 것이고, 다른 것은 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 IL-13의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포에 세포독성제를 국재화하는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하는 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기적 스티어링 효과를 조작하는 것 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교하는 것 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생성하기 위해 류신 지퍼를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같이 삼중특이적 항체를 제조하는 것에 의해 제조될 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 포함하여, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
본원의 항체 또는 단편은 또한 IL-13 뿐만 아니라 또 다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 참조).
7. 항체 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하는 것에 의해 또는 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있고, 단 최종 구축물은 목적하는 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유한다.
치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 1에서 "보존적 치환"의 표제 하에 제시된다. 보다 실질적인 변화는 표 1에서 "예시적인 치환"의 표제 하에 제공되고, 아미노산 측쇄 부류에 관하여 하기에 추가로 기재된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입될 수 있고, 산물은 목적 활성, 예를 들어 보유/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
<표 1>
Figure pct00001
아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 유형은 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성 (예를 들어, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)에서 변형 (예를 들어, 개선)을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 보유할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하여 편리하게 생성될 수 있는 친화도 성숙 항체이다. 간략하게, 1개 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고, 특정한 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경 (예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체 친화도를 개선시키기 위해 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩된 잔기 (예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 SDR (a-CDR)에서 이루어질 수 있으며, 생성된 변이체 VH 또는 VL는 결합 친화도에 대해 시험된다. 2차 라이브러리로부터 구축 및 재선택하는 것에 의한 친화도 성숙은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))]에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지시된 돌연변이유발)에 의한 성숙을 위해 선택된 가변 유전자로 도입된다. 이어서, 2차 라이브러리가 생성된다. 이어서, 라이브러리를 스크리닝하여 목적 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 수반하며, 여기서 여러 HVR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 수반되는 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 변경이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 1개 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부일 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같이, 돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기의 군 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu)이 확인되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체되어 항체와 항원의 상호작용에 영향을 미치는지 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감수성이 입증된 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조가 사용된다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 치환을 위한 후보로 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 목적하는 특성을 함유하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드의 융합을 포함한다.
글리코실화 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우에, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에의 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, Fc 영역에 (직접 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의한 측정 시, Asn 297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조물)의 합계에 관하여 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균 양을 계산하는 것에 의해 결정된다. Asn297은 Fc 영역 내의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체에서의 부차적 서열 변이로 인해 위치 297의 약 ± 3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294 및 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공개 문헌의 예는 US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]을 포함한다. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11에서), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.
이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체가 추가로 제공되며, 예를 들어 여기서 항체의 Fc 영역에 부착된 이중안테나 올리고사카라이드는 GlcNAc에 의해 이등분된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예가, 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
Fc 영역 변이체
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어, 그에 의해 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 생체내에서 항체의 반감기가 중요하지만 특정의 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 적용에 대해 바람직한 후보가 되게 하는, 모든 이펙터 기능은 아니지만 일부 이펙터 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결여되어 있지만 (따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합 능력은 보유함을 확실하게 하기 위해 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 464페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)] 참조) 및 문헌 [Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)]; 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 사용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 사이토톡스(CytoTox) 96® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 기재된 바와 같이 동물 모델에서 평가될 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 클리어런스/반감기 결정은 또한 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는, 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하여, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 개선되거나 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.)
특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 생성하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
증가된 반감기, 및 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 하나 이상의 치환을 그 내부에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826).
Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.
시스테인 조작된 항체 변이체
특정 실시양태에서, 항체의 1개 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 생성된다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 그에 의해 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 위치하게 되고, 이것을 사용하여 항체를 본원에 추가로 기재된 바와 같이 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 면역접합체를 생성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 어느 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
항체 유도체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 관련 기술분야에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 1개 초과의 중합체가 부착되는 경우에 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선시킬 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 요법에서 규정된 조건 하에 사용될 것인지 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기초로 하여 결정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체, 및 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장의 것일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산할 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 이러한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질전환된다). 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 한 실시양태에서, 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 것 및 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 임의로 회수하는 것을 포함하는, 상기에 제공된 바와 같은 항체를 제조하는 방법이 제공된다.
항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 추가의 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상의 절차를 사용하여 용이하게 단리되고 서열분석될 수 있다 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의함).
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우에, 항체를 박테리아에서 생산할 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조한다. (또한, 이. 콜라이에서 항체 단편의 발현을 기재하는 문헌 [Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참조.) 발현 후에, 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 항체를 단리할 수 있고, 추가로 정제할 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분 또는 완전 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체가 생산되게 하는 진균 및 효모 균주를 포함한 사상 진균 또는 효모가 항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 숙주 발현에 적합하다. 문헌 [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 바큘로바이러스 균주가 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 형질감염시키는데 사용될 수 있는 것으로 확인되어 있다.
식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177; 6,040,498; 6,420,548; 7,125,978; 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플랜티바디스(PLANTIBODIES)™ 기술을 기재함)를 참조한다.
척추동물 세포를 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장시키는데 적합화된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 포함한 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
본 발명은, 적어도 부분적으로, 시험된 샘플의 98% 초과에서 펨토그램/mL 수준의 IL-13을 검출하는 고도로 민감하고, 본원에 기재된 바와 같이 고도로 특이적인 IL-13 면역검정 방법에 기초한다. 또한, Th2 경로 억제제인 치유적 치료에 반응할 가능성이 더 큰 상승된 혈청 IL-13 수준을 갖는 환자를 선택 또는 확인하고, 뿐만 아니라 중증 악화를 앓을 가능성이 더 큰 천식 환자를 확인하기 위한, 이러한 고도로 민감하고 고도로 특이적인 면역검정 방법의 사용 방법이 본원에 제공된다.
따라서, 한 측면에서, 샘플에서 IL-13을 검출 및 정량화하기 위한 높은 감도 및 높은 특이도 면역검정 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 샘플은 생물학적 샘플이다. 특정 실시양태에서, 샘플은 혈청이다. 특정 실시양태에서, 샘플은 인간 혈청이다. 일부 실시양태에서, 감도는 정량 하한치 (LLOQ)로 결정된다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 0.1 fg/mL 내지 35 fg/mL 또는 약 0.1 fg/mL 내지 약 35 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 1 fg/mL 내지 30 fg/mL 또는 약 1 fg/mL 내지 약 30 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 5 fg/mL 내지 25 fg/mL 또는 약 5 fg/mL 내지 약 25 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 10 fg/mL 내지 20 fg/mL 또는 약 10 fg/mL 내지 약 20 fg/mL이다. 특정 실시양태에서, LLOQ는 14 fg/mL이다.
또 다른 측면에서, IL-13에 특이적으로 결합하는 제1 모노클로날 포획 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 모노클로날 검출 항체를 포함하는 샌드위치 면역검정 방법이 제공되며, 여기서 제1 항체는 제2 항체와 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 특이도는 항원 고갈 방법 (면역고갈 방법으로도 지칭됨)에 의해 결정되고, 이는 면역검정 방법을 수행하기 전에 샘플을 과량의 제1 항체와 인큐베이션하는 것을 포함한다. 특정의 이러한 실시양태에서, 샘플에서 항원이 완전히 고갈되어, 면역검정 방법에서 LLOQ 미만의 신호가 생성된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 가용성 IL-13Rα2를 포함하고, 가용성 IL-13Rα2는 면역검정 방법의 감도 또는 특이도를 간섭하지 않는다.
또 다른 측면에서, 면역검정 방법은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 F(ab')2또는 Fab인 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 제1 항체는 Fab, F(ab')2, Fab', 또는 Fv인 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 면역검정 방법은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제2 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함한다.
또 다른 측면에서, 면역검정 방법은 제3 항체를 추가로 포함하며, 여기서 제3 항체는 제2 항체에 특이적으로 결합하고 검출가능하게 표지된다. 일부 실시양태에서, 제2 항체는 합텐으로 표지되고 제3 항체는 항-합텐 항체이다. 일부 실시양태에서, 합텐은 디곡시게닌이고 항-합텐 항체는 형광 라텍스와 접합된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체이다.
본 발명은 또한, 적어도 부분적으로, Th2 경로 억제제에 의한 치유적 치료에 반응할 가능성이 더 크거나 더 작은 대상체를 확인하기 위한 순환 IL-13의 용도를 기초로 한다. 따라서, 개시된 방법은 환자를 치료하는데 적절하거나 효과적인 요법을 평가하는데 유용한 데이터 및 정보를 수득하기 위한 편리하고, 효율적이고, 잠재적으로 비용-효과적인 수단을 제공한다. 예를 들어, 샘플은 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자로부터 수득될 수 있고, IL-13을 측정하고 IL-13의 발현 수준이 참조 집단에서의 발현 수준과 비교하여 증가되었는지 또는 감소되었는지 결정하기 위해 샘플은 본원에 기재된 고도로 민감하고 고도로 특이적인 IL-13 검정에 의해 검사될 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자로부터의 샘플에서 순환 IL-13의 발현 수준이 건강한 개체에서의 발현 수준 이상인 경우에, 환자는 Th2 경로 억제제에 의한 치료로부터 이익을 얻을 가능성이 있다.
특정 실시양태에서, 샘플은 검정된 단백질의 양에 있어서의 차이 및 사용된 단백질 샘플의 품질에 있어서의 가변성 둘 다, 및 검정 실행 사이의 가변성에 대해 정규화된다. 환자당 시험된 샘플당 단백질에 대해 정규화된 발현 수준은 참조 세트에서 측정된 발현 수준의 백분율로서 표현될 수 있다. 분석할 특정한 환자 샘플에서 측정된 발현 수준은 이러한 범위 내의 일부 백분위수에 속할 것이며, 이는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
바이오마커를 포함하는 생물학적 샘플은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 또한, 요법의 진행은 이러한 신체 샘플을 표적 유전자 또는 유전자 산물에 대해 시험함으로써 보다 용이하게 모니터링될 수 있다.
면역검정 검출을 위해 2가지 일반적 방법; 직접 및 간접 검정이 이용가능하다. 제1 검정에 따르면, 표적 항원에 대한 항체의 결합은 직접 결정된다. 이러한 직접 검정은 추가의 항체 상호작용 없이도 가시화될 수 있는 표지된 시약, 예컨대 형광 태그 또는 효소-표지된 1차 항체를 사용한다. 전형적인 간접 검정에서, 미접합 1차 항체가 항원에 결합한 후에, 표지된 2차 항체가 1차 항체에 결합한다. 2차 항체가 효소적 표지에 접합된 경우에, 발색 또는 형광 기질을 첨가하여 항원의 가시화를 제공한다. 여러 2차 항체가 1차 항체 상의 상이한 에피토프와 반응할 수 있기 때문에, 신호 증폭이 발생한다.
1차 및/또는 2차 항체는 전형적으로 검출가능한 모이어티로 표지될 것이다. 다수의 표지가 이용가능하고, 이는 일반적으로 하기 카테고리로 그룹화될 수 있다:
(a) 방사성동위원소, 예컨대 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I. 항체는 예를 들어 문헌 [Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, New York, Pubs. (1991)]에 기재된 기술을 사용하여 방사성동위원소로 표지될 수 있고, 방사능은 섬광 계수를 사용하여 측정될 수 있다.
(b) 콜로이드성 금 입자.
(c) 희토류 킬레이트 (유로퓸 킬레이트), 텍사스 레드, 로다민, 플루오레세인, 단실, 리사민, 움벨리페론, 피코크리테린, 피코시아닌, 또는 상업적으로 입수가능한 형광단, 예컨대 스펙트럼 오렌지7(SPECTRUM ORANGE7) 및 스펙트럼 그린7(SPECTRUM GREEN7) 및/또는 상기 중 어느 1종 이상의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 형광 표지. 형광 표지는 예를 들어 상기 문헌 [Current Protocols in Immunology]에 개시된 기술을 사용하여 항체에 접합될 수 있다. 형광은 형광계를 사용하여 정량화될 수 있다.
(d) 다양한 효소-기질 표지가 이용가능하고, 미국 특허 번호 4,275,149는 이들 중 일부에 대한 개관을 제공한다. 효소는 일반적으로 발색 기질의 화학적 변경을 촉매하며, 이는 다양한 기술을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 효소는 기질에서 색 변화를 촉매할 수 있고, 이는 분광학적으로 측정될 수 있다. 대안적으로, 효소는 기질의 형광 또는 화학발광을 변경시킬 수 있다. 형광의 변화를 정량화하는 기술은 상기 기재되어 있다. 화학발광 기질은 화학적 반응에 의해 전자적으로 여기된 후에, 측정 (예를 들어, 화학발광측정기 사용)될 수 있는 광을 방출할 수 있거나 또는 에너지를 형광 수용자에게 공여한다. 효소적 표지의 예는 루시페라제 (예를 들어, 반딧불이 루시페라제 및 박테리아 루시페라제; 미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 말레이트 데히드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제, 예컨대 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제 (예를 들어, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제 및 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제), 헤테로시클릭 옥시다제 (예컨대, 우리카제 및 크산틴 옥시타제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등을 포함한다. 효소를 항체에 접합시키는 기술이 문헌 [O'Sullivan et al., Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (ed. J. Langone & H. Van Vunakis), Academic press, New York, 73:147-166 (1981)]에 기재되어 있다.
효소-기질 조합의 예는 예를 들어 하기를 포함한다:
(i) 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRPO)와 기질로서의 수소 퍼옥시다제 (여기서 수소 퍼옥시다제는 염료 전구체 (예를 들어, 오르토페닐렌 디아민 (OPD) 또는 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 히드로클로라이드 (TMB))를 산화시킴);
(ii) 알칼리성 포스파타제 (AP)와 발색 기질로서의 파라-니트로페닐 포스페이트; 및
(iii) β-D-갈락토시다제 (β-D-Gal)와 발색 기질 (예를 들어, p-니트로페닐-β-D-갈락토시다제) 또는 형광 기질 (예를 들어, 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다제.
다수의 다른 효소-기질 조합이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 이용가능하다. 이들의 일반적 검토를 위해, 미국 특허 번호 4,275,149 및 4,318,980을 참조한다. 때때로, 표지는 항체와 간접적으로 접합된다. 통상의 기술자는 이를 달성하기 위한 다양한 기술을 알 것이다. 예를 들어, 항체는 비오틴과 접합될 수 있고, 상기 언급된 4가지 넓은 카테고리의 표지 중 임의의 것이 아비딘과 접합될 수도 있고, 또는 그 반대의 경우도 가능하다. 비오틴은 아비딘에 선택적으로 결합하며, 이에 따라 표지는 이러한 간접 방식으로 항체와 접합될 수 있다. 대안적으로, 표지와 항체의 간접 접합을 달성하기 위해, 항체는 소형 합텐과 접합되고, 상기 언급된 표지의 상이한 유형 중 하나가 항-합텐 항체와 접합된다. 이에 따라, 표지와 항체의 간접 접합이 달성될 수 있다.
임의적 차단 단계 후에, 1차 항체가 샘플 내의 표적 단백질 항원에 결합하도록 하기에 충분한 기간 동안 및 적합한 조건 하에 샘플을 1차 항체에 노출시킨다. 이를 달성하기에 적절한 조건은 상용 실험에 의해 결정될 수 있다. 샘플에 대한 항체의 결합 정도는 상기 논의된 검출가능한 표지 중 어느 하나를 사용함으로써 결정된다. 특정 실시양태에서, 표지는 발색 기질, 예컨대 3,3'-디아미노벤지딘 발색체의 화학적 변경을 촉매하는 효소적 표지 (예를 들어, HRPO)이다. 한 실시양태에서, 효소적 표지는 1차 항체에 특이적으로 결합하는 항체에 접합된다 (예를 들어, 1차 항체는 토끼 폴리클로날 항체이고, 2차 항체는 염소 항-토끼 항체임).
일부 실시양태에서, 샘플을 항체-바이오마커 복합체 형성에 충분한 조건 하에서 상기 바이오마커에 특이적인 항체와 접촉시킨 후에 상기 복합체를 검출할 수 있다. 바이오마커의 존재는 다수의 방법, 예컨대 혈장 및 혈청을 포함하여 매우 다양한 조직 및 샘플을 검정하기 위한 웨스턴 블롯팅 및 ELISA 절차에 의해 검출될 수 있다. 이러한 검정 포맷을 사용한 광범위한 면역검정 기술이 이용가능하고, 예를 들어 미국 특허 번호 4,016,043, 4,424,279 및 4,018,653을 참조한다. 이는 비-경쟁적 유형의 단일-부위 및 2-부위 또는 "샌드위치" 검정 뿐만 아니라, 전통적인 경쟁적 결합 검정 둘 다를 포함한다. 또한, 이들 검정은 표적 바이오마커에 대한 표지된 항체의 직접 결합을 포함한다.
샌드위치 검정은 가장 유용하고 통상적으로 사용되는 검정 중 하나이다. 샌드위치 검정 기술의 수많은 변형이 존재하고, 모두가 본 발명에 의해 포괄되는 것으로 의도된다. 간략하게, 전형적인 전방향 검정에서, 비표지된 항체를 고체 기질 상에 고정시키고, 시험할 샘플을 결합된 분자와 접촉시킨다. 항체-항원 복합체 형성에 충분한 기간 동안의 적합한 인큐베이션 기간 후에, 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 리포터 분자로 표지된, 항원에 특이적인 제2 항체를 첨가하고, 항체-항원-표지된 항체의 또 다른 복합체 형성에 충분한 시간 동안 인큐베이션한다. 임의의 미반응 물질을 세척하고, 항원의 존재를 리포터 분자에 의해 생성된 신호를 관찰하여 결정한다. 결과는 가시적 신호의 단순 관찰에 의한 정성적인 것일 수 있거나, 또는 공지된 양의 바이오마커를 함유하는 대조 샘플과의 비교에 의해 정량화될 수 있다.
정방향 검정의 변형은 샘플 및 표지된 항체 둘 다를 결합된 항체에 동시에 첨가하는 동시 검정을 포함한다. 이들 기술은 용이하게 명백해질 임의의 부차적인 변형을 포함하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 전형적인 정방향 샌드위치 검정에서, 바이오마커에 대해 특이성을 갖는 제1 항체는 고체 표면에 공유 또는 수동 결합된다. 고체 표면은 전형적으로 유리 또는 중합체이고, 가장 통상적으로 사용되는 중합체는 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌이다. 고체 지지체는 튜브, 비드, 마이크로플레이트의 디스크 형태, 또는 면역검정을 수행하는데 적합한 임의의 다른 표면일 수 있다. 결합 과정은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 일반적으로 가교 공유 결합 또는 물리적 흡착으로 이루어지고, 중합체-항체 복합체는 시험 샘플 제조 시 세척된다. 이어서, 시험할 샘플의 분취물은 고체 상 복합체에 첨가되고, 항체에 존재하는 임의의 서브유닛의 결합을 허용하기에 충분한 기간 (예를 들어, 2-40분 또는 보다 편리하게는 밤새) 동안 적합한 조건 (예를 들어, 실온 내지 40℃, 예컨대 25℃ 내지 32℃ 포함) 하에 인큐베이션된다. 인큐베이션 기간 후에, 항체 서브유닛 고체 상은 세척되고, 건조되고, 바이오마커 부분에 특이적인 제2 항체와 함께 인큐베이션된다. 제2 항체는 분자 마커에 대한 제2 항체의 결합을 나타내는데 사용되는 리포터 분자에 연결된다.
대안적 방법은 샘플 내의 표적 바이오마커를 고정시킨 후, 고정된 표적을, 리포터 분자로 표지될 수도 있고 표지되지 않을 수도 있는 특이적 항체에 노출시키는 것을 수반한다. 표적의 양 및 리포터 분자 신호의 강도에 따라, 결합된 표적은 항체를 사용한 직접 표지에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, 제1 항체에 특이적인 제2 표지된 항체를 표적-제1 항체 복합체에 노출시켜 표적-제1 항체-제2 항체의 3차 복합체를 형성시킨다. 상기 복합체는 리포터 분자에 의해 방출되는 신호에 의해 검출된다. 본 명세서에서 사용된 "리포터 분자"는 그의 화학적 성질에 의해 항원-결합된 항체의 검출을 가능하게 하는, 분석적으로 확인가능한 신호를 제공하는 분자를 의미한다. 이러한 유형의 검정에서 가장 통상적으로 사용되는 리포터 분자는 효소, 형광단, 또는 방사선핵종 함유 분자 (즉, 방사성동위원소) 및 화학발광 분자이다.
효소 면역검정의 경우에, 효소는 일반적으로 글루타르알데히드 또는 퍼아이오데이트에 의해 제2 항체에 접합된다. 그러나, 용이하게 인식되는 바와 같이, 통상의 기술자가 용이하게 이용가능한 매우 다양한 상이한 접합 기술이 존재한다. 통상적으로 사용되는 효소는 특히, 양고추냉이 퍼옥시다제, 글루코스 옥시다제, β-갈락토시다제 및 알칼리성 포스파타제를 포함한다. 특이적 효소와 함께 사용될 기질은 일반적으로 상응하는 효소에 의한 가수분해 시 검출가능한 색 변화가 생성되는 것으로 선택된다. 적합한 효소의 예는 알칼리성 포스파타제 및 퍼옥시다제를 포함한다. 상기 언급된 발색 기질보다는 형광 산물을 생성하는 형광 기질을 사용하는 것이 또한 가능하다. 모든 경우에, 효소-표지된 항체는 제1 항체-분자 마커 복합체에 첨가되고, 결합되도록 한 다음, 잉여량의 시약이 세척된다. 이어서, 적절한 기질을 함유하는 용액이 항체-항원-항체의 복합체에 첨가된다. 기질은 제2 항체에 연결된 효소와 반응하여 정성적인 가시적 신호를 제공할 것이고, 이는 통상적으로 분광학적으로 추가로 정량화되어 샘플 내에 존재하는 바이오마커의 양의 표시를 제공할 수 있다. 대안적으로, 플루오레세인 및 로다민과 같은 형광 화합물이 이들의 결합 능력을 변경시키지 않으면서 항체에 화학적으로 커플링될 수 있다. 특정한 파장의 광을 사용한 조명에 의해 활성화될 때, 형광색소-표지된 항체는 광 에너지를 흡수하여 분자를 여기가능 상태로 유도한 후, 광학 현미경에 의해 시각적으로 검출가능한 특징적인 색의 광을 방출한다. EIA에서와 같이, 형광 표지된 항체는 제1 항체-분자 마커 복합체에 결합하도록 허용된다. 미결합 시약을 세척한 후에, 잔류하는 3차 복합체를 적절한 파장의 광에 노출시키고, 관찰되는 형광은 관심 분자 마커의 존재를 나타낸다. 면역형광 및 EIA 기술은 둘 다 관련 기술분야에 널리 확립되어 있다. 그러나, 다른 리포터 분자, 예컨대 방사성동위원소, 화학발광 또는 생물발광 분자가 또한 사용될 수 있다.
시험 결과에 기초한 환자의 IL-13 상태 (예를 들어, 상승, 참조 초과, 또는 참조 미만)는 보고로 제공될 수 있다. 보고는 임의의 형태의 서면 자료 (예를 들어, 종이 또는 디지털 형태, 또는 인터넷 상) 또는 구두 발표(들) (예를 들어, 사람 (육성) 또는 녹음으로서)일 수 있다. 추가로 보고는 건강 전문가 (예를 들어, 의사)에게 환자가 인터페론 억제제 치료로부터 이익을 얻을 수 있거나 이에 반응할 가능성이 있음을 보여줄 수 있다.
본 발명의 키트는 다수의 실시양태를 갖는다. 특정 실시양태에서, 키트는 용기, 상기 용기 상의 라벨, 및 상기 용기 내에 함유된 조성물을 포함하고; 여기서 조성물은 IL-13을 포함한 1종 이상의 바이오마커에 상응하는 1개 이상의 표적 폴리펩티드 서열에 결합하는 1종 이상의 1차 항체, 조성물이 적어도 하나의 유형의 포유동물 세포에서 1종 이상의 표적 단백질의 존재를 평가하는데 사용될 수 있음을 나타내는 용기 상의 라벨, 및 적어도 하나의 유형의 포유동물 세포에서 1종 이상의 표적 단백질의 존재를 평가하기 위해 항체를 사용하는 것에 대한 지침서를 포함한다. 키트는 조직 샘플을 제조하고 항체 및 프로브를 조직 샘플의 동일한 절편에 적용하는 것에 대한 지침서 및 물질의 세트를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 1차 및 2차 항체 둘 다를 포함할 수 있고, 여기서 2차 항체는 표지, 예를 들어 효소적 표지에 접합된다.
용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직, 예컨대 혈청, 혈장, 비강 스왑 및 객담을 포함한다.
제약 제제
본원에 기재된 바와 같은 항-IL-13 항체 또는 다른 Th2 경로 억제제의 제약 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체 또는 분자를 1종 이상의 임의적인 제약상 허용되는 담체 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합하는 것에 의해 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조된다. 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 추가로 간질성 약물 분산액 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 포함한다. rHuPH20을 포함한 특정의 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 1종 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
예시적인 동결건조 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하며, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
또한, 본원의 제제는 치료할 특정한 적응증에 필요한 1종 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 예를 들어, 제어제를 Th2 경로 억제제와 함께 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분은, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼 중의, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균된다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
치료 방법 및 조성물
호산구성 염증은 알레르기성 및 비-알레르기성 둘 다의 다양한 질병과 연관된다 (Gonlugur (2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45). 염증은 손상에 대한 살아있는 조직의 회복성 반응이다. 염증 반응의 특성은 조직 자체에서 생산된 특정 화학물질로 인한 손상된 조직에서의 백혈구의 축적이다. 호산구 백혈구는 매우 다양한 병태, 예컨대 알레르기성 장애, 기생충 감염 및 신생물성 질환에서 축적된다 (Kudlacz et al., (2002) Inflammation 26: 111-119). 면역계의 성분인 호산구 백혈구는 점막 표면의 방어적 성분이다. 이는 항원 뿐만 아니라 기생충, 화학물질 및 외상에도 반응한다.
조직 호산구증가증은 피부 질환, 예컨대 습진, 천포창, 급성 두드러기 및 독성 표피 괴사용해에서 뿐만 아니라 아토피성 피부염에서 발생한다 (Rzany et al., Br. J. Dermatol. 135: 6-11 (1996)). 호산구는 IgE-매개 알레르기성 피부 반응에서 조직 및 비어있는 과립 단백질에 축적된다 (Nielsen et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 85: 489-494 (2001)). 비만 세포와 조합된 호산구는 관절 염증을 유발할 가능성이 있다 (Miossec, J. Clin. Rheumatol. 3: 81-83 (1997)). 호산구성 염증은 때때로 관절 외상을 동반한다. 활액 호산구증가증은 질환, 예컨대 류마티스 관절염, 기생충성 질환, 과다호산구성 증후군, 라임병 및 알레르기성 과정, 뿐만 아니라 혈관절증 및 관절조영과 연관될 수 있다 (Atanes et al., Scand. J. Rheumatol., 25: 183-185 (1996)). 호산구성 염증은 또한 골에도 영향을 미칠 수 있다 (Yetiser et al., Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol., 62: 169-173 (2002)). 호산구성 근육 질환의 예는 호산구성 근주위염, 호산구성 다발근염 및 초점성 호산구성 근염을 포함한다 (Lakhanpal et al., Semin. Arthritis Rheum., 17: 331-231 (1988)). 골격근에 영향을 미치는 호산구성 염증은 기생충 감염 또는 약물, 또는 과다호산구증가증의 일부 전신 장애 (예를 들어, 특발성 과다호산구성 증후군 및 호산구증가증-근육통 증후군)의 특색과 연관될 수 있다. 호산구는 자가면역 항체에 의해 인식된 에피토프에 대한 염증 반응에 참여한다 (Engineer et al., Cytokine, 13: 32-38 (2001)). 결합 조직 질환은 호중구성, 호산구성 또는 림프구성 혈관 염증으로 이어질 수 있다 (Chen et al., J. Am. Acad. Dermatol., 35: 173-182 (1996)). 조직 및 말초 혈액 호산구증가증은 활성 류마티스성 질환에서 발생할 수 있다. 결합 조직 질환의 유형인 강직성 척추염에서 혈청 ECP 수준의 상승은 호산구가 또한 기저 과정에 관여한다는 것을 시사한다 (Feltelius et al., Ann. Rheum. Dis., 46: 403-407 (1987)). 베게너 육아종증은 드물게는 폐 결절, 흉막 삼출, 및 말초 혈액 호산구증가증을 나타낼 수 있다 (Krupsky et al., Chest, 104: 1290-1292 (1993)).
적어도 400/mm3의 말초 혈액 호산구증가증은 전신 경화증 사례의 7%, 국부 경피증 사례의 31%, 및 호산구성 근막염 사례의 61%에서 발생할 수 있다 (Falanga, et al., J. Am. Acad. Dermatol., 17: 648-656 (1987)). 경피증은 마이스너 및 아우어바흐 신경총과 밀접하게 닮은 염증 과정을 일으키며, 위장계에서 비만 세포 및 호산구 백혈구로 이루어진다. 호산구-유래 신경독소는, 경피증에서 발생하는 것과 같은, 위장 운동 기능장애에 기여할 수 있다 (DeSchryver-Kecskemeti, et al. Arch. Pathol. Lab Med., 113: 394-398 (1989)).
호산구는 국부 (Varga, et al., Curr. Opin. Rheumatol., 9: 562-570 (1997)) 또는 전신 (Bouros et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 165: 1581-1586 (2002)) 결합 조직 증식을 동반할 수 있다. 이는 섬유모세포에서 프로테오글리칸 분해를 억제시킴으로써 섬유증을 유발할 수 있고 (Hernnas et al., Eur. J. Cell Biol., 59: 352-363 (1992)), 섬유모세포는 GM-CSF를 분비함으로써 호산구 생존을 매개한다 (Vancheri et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 1: 289-214 (1989)). 호산구는 비강 (Bacherct et al., J. allergy Clin. Immunol., 107: 607-614 (2001)), 기관지 (Arguelles, et al., Arch. Intern. Med., 143: 570-571 (1983)), 및 위장 폴립 조직 (Assarian, et al., Hum. Pathol., 16: 311-312 (1985))에서 발견될 수 있다. 마찬가지로, 호산구는 염증성 가성종양 (근섬유모세포성 종양)에 국재화될 수 있다. 호산구는 종종 안구 영역에서 염증성 가성종양을 동반하고, 이러한 경우에 병태는 혈관부종 또는 알레르기성 비결막염을 모방할 수 있다 (Li et al., Ann. Allergy, 69: 101-105 (1992)).
호산구성 염증은 (예를 들어, 수술 또는 손상의 결과로서) 조직 외상에서 발견될 수 있다. 호산구성 염증은 또한 심혈관 질병 (예를 들어, 호산구성 심근염, 호산구성 관상 동맥염, 허혈성 심장 질환, 급성 심근경색, 심장 파열)과 연관될 수 있다. 괴사성 염증 과정은 또한 호산구성 염증 (다발근염, 관상 동맥 박리, 신경-베체트병의 괴사성 병변, 치매, 뇌경색)을 수반할 수 있다.
그 중 Th2-유래/호산구성 천식 하위표현형의 비침습적 바이오마커는 혈청 페리오스틴, 호기 산화질소 농도 (FeNO), 및 말초 혈액 호산구 카운트이다. 문헌 [Arron et al. (2013) Adv Pharmacol 66: 1-49]을 참조한다. 이들 마커 중에서, 혈청 페리오스틴는 중증 천식의 BOBCAT 관찰 연구 (Jia et al. (2012) J Allergy Clin Immunol 130: 647-654 e10)에서 기도 호산구 상태의 최고의 단일 예측인자였고 (종합적인 객담 및 조직 호산구증가증에 의한 결정 시), MILLY 연구에서 2회의 투여전 방문에 걸쳐 FeNO 또는 혈액 호산구보다 실질적으로 적은 환자내 가변성을 나타내었기 때문에 (Corren et al. (2011) N Engl J Med 365: 1088-98), 레브리키주맙에 대한 예측 진단제로서 진보되었고, 전문화된 진료 현장 기기 (예컨대 FeNO)를 필요로 하지 않고, 기존 임상 실험실에 걸쳐 널리 표준화되어 있지 않은 자동화된 세포 카운터 (예컨대 혈액 호산구)에 의존하지 않는, 표준화된 널리 이용가능한 검정 플랫폼에서 이용가능할 수 있다. 혈청 페리오스틴이 성인 천식의 Th2/호산구성 하위유형에 대한 강건하고 일관된 바이오마커인 것으로 보이지만, 이것이 소아 천식에도 적용될 수 있는지 여부는 공지되어 있지 않다.
MILLY 연구에서, 기준선에서 50 ng/ml 초과의 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 ICS에도 불구하고 불량하게 제어되는 천식을 갖는 성인은 레브리키주맙 치료 12주 후에 혈청 페리오스틴에서 평균 14.4% 감소를 나타낸 한편 (p=0.001), 50 ng/ml 미만의 기준선 혈청 페리오스틴 수준을 갖는 환자는 치료 기간 동안 혈청 페리오스틴에서 비-유의한 2.9% 감소를 나타내었다 (p=0.3). 문헌 [Scheerens et al. (2012) Am J Respir Crit Care Med 185: A3960]을 참조한다. 레브리키주맙 치료 12주 후의 천식 환자에서의 혈청 페리오스틴 수준의 분포는 건강한 대조 성인에서의 혈청 페리오스틴 수준의 분포와 중첩되었다 (Arron et al., Annals Am. Thoracic Soc., in press (2013), , DOI: 10.1513/AnnalsATS.201303-047AW). 이들 결과는, 높은 혈청 페리오스틴을 갖는 성인 천식 환자에서, 배경 수준을 초과하는 과량의 페리오스틴은 기도에서의 IL13의 활성으로 인한 것이고, 이러한 과량은 총 전신 페리오스틴의 약 10-15%를 구성한다는 것을 시사한다.
페리오스틴은 골 매트릭스에 저장된 골모세포의 산물로서 처음 확인되었다. 문헌 [Horiuchi et al. (1999) J Bone Miner Res 14: 1239-49]을 참조한다. 해부학적으로, 골에서의 페리오스틴 발현은 발생 동안 연골내 및 막내 골화 부위에 국재화되었고, 이는 페리오스틴 발현 수준이 골 성장률과 상관관계가 있을 수 있음을 시사한다. 어린 마우스에서 전신 페리오스틴 수준 및 골 전환 마커는 상승되었고, 동물이 성숙함에 따라 감소되어 8주령에서부터 성인기 내내 비교적 안정한 수준을 달성하였다. 문헌 [Contie et al. (2010) Calcif Tissue Int 87: 341-5]을 참조한다. 인간에서, 소아 집단에서의 천식은 성인에서보다 아토피 및 제2형 염증과 보다 통상적으로 연관되었고, 천식환자 어린이에서 호산구성 및 비-호산구성 기도 염증 하위세트에 대한 증거가 남아있다. 문헌 [Baraldo et al. (2011) Eur Respir J 38: 575-83]을 참조한다. 따라서, 증가된 Th2/호산구성 기도 염증을 갖는 천식환자 어린이를 확인시켜주는 바이오마커는 항-IL13 및 제2형 염증을 표적화하는 다른 치료제로부터 임상 이익을 나타낼 환자 선택을 가능하게 하는데 유용할 수 있다.
본원에 기재된 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13의 수준을 측정함으로써 Th2 경로 억제제에 의한 치료에 대한 반응이 예측되는 (또는 그에 대해 반응성일) 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 환자를 확인하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 환자에게 Th2 경로 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 천식, Th2-연관 질환, IL-13 매개 장애, IL4 매개 장애, IL9 매개 장애, IL5 매개 장애, IL33 매개 장애, IL25 매개 장애, TSLP 매개 장애, IgE-매개 장애 또는 천식-유사 증상을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 환자는 본원에 기재된 바와 같은 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 진단되었다.
또한, 천식 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는, 천식을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 상기 치료는 FEV1에서 5% 초과의 상대 변화를 발생시킨다. 또 다른 실시양태에서, FEV1은 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10% FEV1 초과이다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상승된 순환 IL-13을 갖는 것으로 진단된 바 있다.
특정 실시양태에서, 천식 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는 천식을 치료하는 방법이며, 여기서 상기 치료는 악화율에서 35% 초과 (다른 실시양태에서 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51% 초과, 최대 85%; 또 다른 실시양태에서, 환자는 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된 바 있음)의 감소를 발생시키는 것인 방법이 제공된다.
특정 실시양태에서, 천식 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는 천식을 치료하는 방법이며, 여기서 상기 치료는 야간 각성의 감소를 발생시키는 것인 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 환자는 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다.
또한, 천식 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는 천식을 치료하는 방법이며, 여기서 상기 치료는 천식 제어에서 개선을 발생시키는 것인 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 환자는 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다.
천식 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는 천식 (또는 호흡기 질환)을 치료하는 방법이며, 여기서 상기 치료는 폐에서 염증의 감소를 발생시키는 것인 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 환자는 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다.
특정 실시양태에서, Th2-연관 장애를 앓고 있고 코르티코스테로이드로 치료받고 있는 환자에게 치료 유효량의 레브리키주맙을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 Th2-연관 장애를 치료하는 방법이며, 여기서 상기 치료는 상기 질환을 치료하는데 사용되는 코르티코스테로이드 치료 (양 또는 빈도)의 감소 또는 제거를 발생시키는 것인 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 환자는 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 천식은 코르티코스테로이드로 비제어된다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 상승된 순환 IL-13 수준을 갖는 것으로 진단된다.
또한, IMPACT IL-13 검정을 사용하여 천식 (또는 Th2-연관 질환)을 앓고 있는 환자를 상승된 IL-13 수준을 갖는 것으로서 진단하는 단계, 상기 천식 환자에게 치료 유효량의 Th2 경로 억제제를 투여하는 단계, 환자 IL-13 상태를 진단하는 단계, 및 IL-13 상태가 상승되었거나 참조 수준 초과이면 환자를 Th2 경로 억제제로 재치료하는 단계를 포함하는, 천식 (또는 Th2-연관 질환)을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 진단은 면역검정 (예를 들어, IMPACT IL-13)을 단독으로 또는 FENO 수준, 페리오스틴 수준, 혈액 호산구 수준, 또는 IgE와 조합하여 사용하여 행할 수 있다.
본원에 제공된 임의의 Th2 경로 억제제는 본원에 기재된 치료 방법, 특히 천식에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 천식 환자는 코르티코스테로이드로 치료받고 있고, 본원에 기재된 면역검정을 사용하여 Th2 경로 억제제 반응성인 것으로 진단된 바 있다. 추가 실시양태에서, 천식 환자는 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 경도 천식을 앓고 있지만, 코르티코스테로이드로 치료받고 있지 않다.
본 발명의 항체 (및 임의의 추가의 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 원하는 경우에 국부 치료를 위해 병변내 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 부분적으로는 투여가 단기적인지 또는 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
본 발명의 항체는 우수한 의료 행위와 일치하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료받을 특정한 장애, 치료받을 특정한 포유동물, 개별 환자의 임상 병태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는, 그럴 필요는 없지만, 임의로 해당 장애를 예방 또는 치료하는데 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 함께 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 따라 다르다. 이는 일반적으로 상기 기재된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량으로 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 항체의 적절한 투여량 (단독으로, 또는 1종 이상의 다른 추가의 치료제와 조합되어 사용되는 경우)은 치료받을 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 환자의 임상 이력 및 항체에 대한 반응, 및 담당 의사의 판단에 따라 달라질 것이다. 항체는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여에 의해서든 또는 연속 주입에 의해서든 관계없이, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들어, 0.1mg/kg-10mg/kg)의 항체가 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 1일 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 병태에 따라 치료는 일반적으로 질환 증상의 목적하는 억제가 발생할 때까지 지속될 것이다. 하나의 예시적인 항체 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위 내일 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 그의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주 또는 3주마다 투여될 수 있다 (예를 들어, 환자가 약 2회 내지 약 20회, 또는 예를 들어 약 6회 용량의 항체를 제공받도록). 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상적인 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 37.5 mg의 균일 용량 (즉, 체중 의존적이지 않음), 또는 125 mg의 균일 용량, 또는 250 mg의 균일 용량으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 용량은 기간 동안 4주마다 1회 피하 주사에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 기간은 6개월, 1년, 2년, 5년, 10년, 15년, 20년 또는 환자의 평생이다. 특정 실시양태에서, 천식은 중증 천식이고, 환자는 흡입용 코르티코스테로이드 플러스 제2 제어제 의약으로 불충분하게 제어되거나 비제어된다.
임의의 상기 제제 또는 치료 방법은 항-표적 항체 대신 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해된다.
제조 물품
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 용기 위에 있거나 용기에 결합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 조성물 그 자체를 수용하거나 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합하여 수용하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 본 발명의 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택된 병태의 치료를 위해 사용됨을 나타낸다. 또한, 제조 물품은 (a) 내부에 본 발명의 항체를 포함하는 조성물이 수용된 제1 용기; 및 (b) 내부에 추가의 세포독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 수용된 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 실시양태에서 제조 물품은, 조성물이 특정한 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 제조 물품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함한 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
임의의 상기 제조 물품은 항-표적 항체 대신 또는 이에 더하여 면역접합체를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
실시예
실시예 1 - 면역검정 방법
인간 혈청 샘플: 실시예 1-3에 기재된 실험을 위해, 본 발명자들은 건강한 지원자 (HV)로부터의 혈청 샘플을 사용하여 상업적으로 입수가능한 에렌나® IL-13 면역검정 또는 IMPACT IL-13 검정을 하기 제시된 바와 같이 특징화하였다. 이들 건강한 지원자 샘플은 내부 헌혈 프로그램 (제넨테크, 인크., 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코; 로슈 프로페셔널 다이아그노스틱스(Roche Professional Diagnostics), 독일 펜츠베르크)으로부터 수득하였다. 또한, 하기 제시된 바와 같이, 천식, IPF 또는 아토피성 피부염을 갖는 환자로부터의 혈청 샘플은 바이오리클레메이션아이브이티(BioreclamationIVT) (미국 뉴욕)로부터 구입하였다.
면역학적 다중파라미터 칩 기술 (IMPACT) 플랫폼은 이전에 기재된 바 있다. 예를 들어, WO 2007/039280 및 문헌 [Claudon et al., Clinical Chemistry 54(9):1554-1563]을 참조한다. 하기는 플랫폼의 간략한 일반적 설명 및 일반적 절차, 이어서 IMPACT IL-13 검정의 설명이다.
IMPACT 기술은 스트렙타비딘-비오틴 상호작용을 사용하여 제조된 약 2.5 x 6 mm의 표면적을 갖는 흑색 폴리스티렌 칩을 기반으로 한다. 칩 표면은 스트렙타비딘 층으로 코팅되고, 그 위는 잉크-젯 기술을 사용하여 제1 비오티닐화 포획 항체 (이는 분석물에 특이적으로 결합함)로 스팟팅된다. 각각의 스팟은 약 150 μM 직경이다. 검정 동안, 칩은 분석물, 및 분석물에 특이적으로 결합하는, 제1 항체와 상이한 에피토프 특이성의 제2 디곡시게닐화 모노클로날 항체를 함유하는 시편 샘플과 함께 인큐베이션된다. 제3 검출 항체는 형광 라텍스 접합체와 커플링된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체이다. 이러한 표지를 사용하는 것은, 단일 스팟에서 10개 미만의 개별 결합 사건이 검출될 수 있으므로, 매우 높은 감도를 발생시키는 것으로 이전에 보고되었다 (Claudon et al., Clinical Chemistry 54(9):1554-1563). 칩은 검출 유닛으로 옮겨지고, 전하 커플링된 디바이스 (CCD) 카메라는 전용 소프트웨어를 사용하여 신호 강도로 변환된 영상을 생성한다. 개별 스팟은 사전규정된 위치에 자동 배치되고, 영상 분석에 의해 정량화된다. IMPACT 플랫폼을 사용하여 성공적으로 검출 및 정량화된 바 있는 분석물은 항-CCP 항체, 항핵 항체, 유형 I 콜라겐의 혈청 C-말단 가교된 텔로펩티드, 유형 I 콜라겐의 N-말단 프로펩티드, 오스테오칼신, 및 무손상 부갑상선 호르몬을 포함한다. 단일 검정으로서 실행한 경우에 이들 분석물에 대해 보고된 감도는 (LLOQ로 보고됨) 0.087 μg/L (0.087 ng/mL) 내지 4.9 ng/L (4.9 pg/mL) (Id.) 범위이다.
본 발명자들은 IMPACT IL-13 검정을 위해 각각 포획 시약 및 검출 시약으로서 2종의 상이한 독점 항-IL-13 항체를 사용하였다. 제1 항-IL-13 항체 ("포획" 항체)는 이전에 기재된 바 있는 레브리키주맙 (MILR1444A로도 지칭됨)이다. 예를 들어, WO 2005/062967 및 문헌 [Ultsch et al., J. Mol. Biol. 425:1330-9 (2013)]을 참조한다. 제2 항-IL-13 항체 ("검출" 항체)는 또한 이전에 기재된 바 있는 11H4로, 예를 들어, WO 2014/165771을 참조한다. 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 표준 절차를 사용하여 레브리키주맙의 F(ab')2를 제조하고, 비오티닐화하였다. 비오티닐화된 레브리키주맙 F(ab')2를 상기 기재된 바와 같이 스트렙타비딘-코팅된 폴리스티렌 칩 상에 스팟팅하였고, 각각의 칩은 160 μM 직경의 60개의 동일한 스팟을 가졌다. 검정을 개시하기 위해, 샘플을 샘플 완충제 (75 mM 인산수소이칼륨, 25 mM 인산이수소칼륨, 150 mM NaCl, 0.01% 메틸이소티아졸론, 0.01% 브로니독스(Bronidox)®, 0.16% 트윈(Tween)®20, 0.08% 폴리도칸올, 2 mM EDTA, 2% BSA, 1% 소 IgG, 5% 말 혈청 (시그마(Sigma), Cat. 번호 H1470)로 구성된 샘플 완충제 (pH 7.25))로 희석하였다. 12 μL의 샘플을 28 μL의 샘플 완충제로 희석하고, 칩과 36℃에서 18분 동안 인큐베이션하였다. 칩을 0.8 mL 세척 완충제로 5초 동안 세척하여 반응을 종결시켰다 (세척 완충제 조성물은 하기와 같음: 10 mM 트리스-Cl, pH 8.0, 0.001% 메틸이소티아졸-히드로클로라이드 (MIT), 0.001% 옥시-피리온, 0.01% 폴리도칸올). 제2 항-IL-13 항체, 전장 11H4 (IgG1)를 관련 기술분야에 널리 공지된 표준 방법을 사용하여 디곡시게닌으로 표지하였다. 검출을 위해, 디곡시게닐화 항-IL-13 11H4 항체, 및 형광-태그 표지된 라텍스와 접합된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체를 순차적으로 첨가하였다. 칩을 2.0 mL 세척 완충제로 10초 동안 세척한 다음 흡인을 사용하여 10초 동안 건조시켜 반응을 종결시켰다. CCD-검출기를 사용하여 형광 강도를 검출하고, 상기 기재된 바와 같이 독점 소프트웨어를 사용하여 정량화하였다. 재조합 인간 IL-13 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), MN, 카탈로그 번호 213-ILB/CF)을 사용하여 2 -1000 pg/ml 범위의 표준 곡선을 생성하였고; 재조합 인간 IL-13의 희석은 하기 완충제: 20 mM 인산칼륨 pH 7.35, 50 mM NaCl, 4.0% 수크로스, 2.0% BSA, 0.2% 소 IgG, 0.01% MIT, 0.01% 브로니독스®, 0.2% 트윈®-20 중에서 행하였다.
인간 혈청 및 혈장에서 IL-13 수준을 검출 및 정량화하기 위해 상업적으로 입수가능한 IL-13 검정을 또한 사용하였다. 상업적으로 입수가능한 IL-13 검정은 싱귤렉스® (캘리포니아주 앨러미다)로부터의 에렌나® IL-13 면역검정 키트였다 (버전 1, Cat# 03-0069-00은 더이상 입수가능하지 않고; 버전 2, 상업적으로 입수가능한 Cat# 03-0109-xx는 본원에 기재된 실험에 사용하지 않았고 보고된 LLOQ는 0.04 pg/mL임 [에렌나® IL-13 (v2) 면역검정 키트, Cat.# 03-0109-xx 제품 정보 시트, www(dot)singulex(dot)com)에서 입수가능함]). 명시된 경우를 제외하고, 에렌나® IL-13 면역검정, 버전 1을 제조업체의 지침에 따라 수행하였다.
실시예 2 - 상업적으로 입수가능한 IL-13 검정 및 최적화 노력
제조업체의 권장 검정 조건을 사용하여, 본 발명자들은 천식 환자로부터의 10개의 혈청 샘플을 시험하였다. 그러한 10개의 샘플 중 9개 (90%)는 제조업체에 의해 명시된 LLOQ인, 0.39 pg/mL의 LLOQ를 초과하는 IL-13의 검출가능한 수준을 가졌다. 정량화된 IL-13 수준은 0.64 pg/mL 내지 1.75 pg/mL의 범위였다 (도 1). 샘플을 과량의 포획 항체와 사전-인큐베이션하여 IL-13에 대한 검정 특이도를 시험하였다. 사전-인큐베이션은 실온에서 1시간 동안 수행하였다. 이는 특이도를 평가하기 위한 경쟁 방법 또는 면역고갈 방법으로 지칭된다. 천식환자 혈청 샘플 중 6개로부터의 검정 신호는 이러한 접근법을 사용하여 LLOQ 미만의 수준으로 효과적으로 경쟁하였다 (도 1). 그러나 보다 높은 IL-13 수준을 갖는 천식환자 혈청 샘플 중 4개로부터의 검정 신호는 효과적으로 경쟁하지 않았고, 특이성의 결여를 나타내었다. 이들 샘플에서 명백하게 비-특이적인 신호가 유의하게 나타났고, 0.45 pg/mL 내지 1.28 pg/mL 범위의 신호를 생성하였다 (도 1).
상기 논의된 특이도 평가의 결과는 에렌나® IL-13 면역검정의 특이도가 비-최적임을 시사하였다. 따라서, 본 발명자들은 샘플 희석제 및 최소 요구 희석에 대한 제조업체의 권장 검정 조건의 변형이 특이도를 개선시킬 것인지 연구하였다. 3명의 HV로부터의 혈청 샘플을 제조업체의 권장에 따라 검정하거나 (순수) 또는 대안적으로, 제조업체의 높은 염 완충제로 1:1 (V/V) 희석하였다. 도 2a는, 제조업체의 권장에 따르면, 각각의 HV 샘플에서 IL-13이 LLOQ를 초과하지만, 가장 높은 수준의 IL-13을 함유하는 HV 샘플은 마이크로입자 비드 상에 코팅된 과량의 포획 항체 (25 μg 포획 항체/mg 마이크로입자 비드)와의 사전-인큐베이션에 의해 경쟁할 수 없다는 것을 제시하였다. 따라서, 이 결과는 10개의 천식환자 혈청 샘플을 사용하여 수득한 이전의 결과와 일치하였다 (도 1 및 도 2a 비교). 대조적으로, 높은 염 완충제에 의한 각각의 HV 샘플의 1:1 (V/V) 희석은 검출된 검정 신호가 변형된 검정 LLOQ 0.78 pg/mL 미만이었기 때문에 (도 2b, 우측) 마이크로입자 비드 상에 코팅된 과량의 포획 항체 (25 μg 포획 항체/mg 마이크로입자 비드)와의 사전-인큐베이션에 의한 효과적인 경쟁을 입증하였고, 이는 높은 염이 검정 특이도를 증가시킨다는 것을 시사하였다. 샘플의 2-배 희석을 고려하여 LLOQ는 0.39 pg/mL에서 0.78 pg/mL로 변형되었음에 주목한다. 그러나, HV 샘플 중 단지 1개가 변형된 검정 LLOQ를 초과하는 신호를 제시하였고, 이는 개선된 특이도가 감도를 희생하여 수득되었음을 시사한다 (도 2b, 좌측).
본 발명자들은 다음으로 변형된 검정 조건을 사용하여 천식 (n=10) 및 IPF 환자 (n=10), 및 HV (n=10)로부터의 혈청 샘플에서 IL-13 수준을 측정하였다. IL-13 수준은 천식 환자 샘플 중 단지 40% (n=10), IPF 환자 샘플 중 40% (n=10) 및 HV 샘플 중 10% (n=10)에서 검출가능하였다 (도 3). IL-13에 대한 검정 신호의 특이도는 검정에서 시험하기 전, 마이크로입자 비드 상에 코팅된 과량의 포획 항체 (25 μg 포획 항체/mg 마이크로입자 비드)와의 사전-인큐베이션에 의해 확인하였다. 관찰된 IL-13 수준은 천식 환자 샘플에서 0.78 pg/mL 내지 1.05 pg/mL, IPF 환자 샘플에서 0.89 pg/mL 내지 1.56 pg/mL였고; 오직 1개의 HV 샘플만이 검출가능한 수준의 IL-13, 1.25 pg/mL를 가졌다 (도 3).
상기-기재된 결과에 기초하여, 본 발명자들은 에렌나® IL-13 면역검정이 다양한 Th-2 연관 질환을 앓고 있는 대부분의 환자에서 혈청 IL-13 수준의 검출 및 정확한 정량화를 가능하게 하는데 충분히 민감하지 않고 특이적이지 않다고 결론지었다. 상기 논의된 바와 같이, 혈청 IL-13 수준이 건강한 개체 및 다양한 Th-2 연관 질환 상태에서 정확하게 정량화될 수 있도록 고도로 민감하고 고도로 특이적인 혈청 IL-13 검정에 대한 필요가 존재한다. 혈청 IL-13 수준의 정확한 정량화는 건강한 개체와 다양한 Th-2 연관 질환 상태 사이의 비교를 가능하게 할 것이고, 이는 질환 메카니즘 및 진행에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, IL-13 경로 또는 Th2 경로를 표적화하는 치료적 개입으로부터 가장 이익을 얻을 수 있는 환자를 확인시켜줄 수 있다. 혈청 IL-13 수준의 정확한 정량화는 또한 IL-13을 표적화하는 특정 치료제 뿐만 아니라 Th2 경로의 다른 표적에 대한 특정 치료제의 약역학적 효과의 조사를 용이하게 할 것이다.
실시예 3 - IMPACT IL-13 검정 개발 및 특징화
고도로 민감하고 고도로 특이적인 혈청 IL-13 검정을 개발하기 위해, 본 발명자들은, 일부는 상업적으로 입수가능하고 일부는 제넨테크에 의해 생성된 8종의 상이한 IL-13 항체의 쌍별 조합을 시험함으로써 이를 시작하였다. 하기 표 2는 항체 쌍을 열거한다. 56개의 쌍형성된 조합 각각에 대해, 본 발명자들은 샘플 완충제 중 100 pg/mL 재조합 IL-13을 사용하여 음성 (블랭크) 신호 및 양성 (특이적) 신호 및 양성 신호/음성 신호의 비를 결정하였다 (샘플 완충제 조성물에 대해서는 실시예 1 참조). 최상의 양성 신호/음성 신호 비 (즉, 가장 높은 양성 신호 ["Pos"] 및 가장 낮은 음성 신호 ["Neg"] 또는 신호 대 잡음 비)를 제공하는 항체 쌍 조합은 표 2에서 회색 박스로 확인되고, 추가의 검정 최적화를 위해 선택하였다. 구체적으로, 이러한 최적 항체 쌍 조합은 포획 항체로서의 MILR1444A 및 검출 항체로서의 11H4였다.
표 2. 항-IL-13 항체 쌍에 대한 음성 및 양성 검정 신호
Figure pct00002
a 모든 항체는 달리 나타내지 않는 한 독점 제넨테크 항체이다. 인간화 마우스 항체인 MILR1444A를 제외하고, 모든 항체는 뮤린 항체이다.
b 알앤디 시스템즈, MN, Cat. 번호 MAB213
c 알앤디 시스템즈, MN, Cat. 번호 AF213-NA
표 2에 제시된 바와 같이, 포획 항체로서 228B/C를 사용한 결과는 포획 항체로서 MILR1444A를 사용한 결과와 상이하였다. MILR1444A-11H4 양성/음성 비는 22,753이었고, 228B/C-11H4 양성/음성 비는 316.87이었다. MILR1444A는 228B/C의 인간화 변이체이기 때문에 이들 결과가 상이하다는 것은 놀라운 것이었다. 이들 2종의 항체는 동일한 CDR을 가질 뿐만 아니라 IL-13에 대해 유사한 친화도를 갖고 (예를 들어 WO 2005/062967 참조), 따라서 이는 항원 및/또는 에피토프에 대한 포획 항체 친화도가 검정 양성/음성 비에의 유일한 기여자가 아니라는 것을 나타낸다. 또한, 본 발명자들은 포획 항체가 불변으로 유지되는 경우에 검출 항체가 양성/음성 비에 영향을 미친다는 것을 관찰하였다. 포획 항체로서 MILR1444A 및 상이한 에피토프에 상이한 친화도로 결합하는 상이한 검출 항체 (즉, 14C9, 4D7, 8C11, MAB213 및 AF-213-NA)를 사용하는 것은 넓은 범위의 양성/음성 비를 생성하였다 (표 2). 요약하면, 표 2에 제시된 포획 및 검출 항체의 쌍별 분석은 포획 항체 및 검출 항체의 최적 조합이 실험을 수행하기 전에 항체에 대해 공지된 정보, 예를 들어 에피토프, 친화도로부터 예측될 수 없다는 것을 제시한다.
본 발명자들은 하기 실험에서 샘플 완충제 (샘플 완충제 조성물에 대해서는 실시예 1 참조) 및 검출 완충제 (80 mM TAPS, 500 mM 염화나트륨, 0.01% 메틸 이소 티오아졸론, 0.01% 브로니독스®, 0.08% 트윈®20, 0.04% 폴리도칸올, 0.3% BSA, 0.25% 소 IgG 및 0.1% 카세인을 포함하는 조성물 (pH 8.5))를 사용하였다. 최적 항-IL-13 항체 쌍은 상기 기재된 바와 같이, 제1 (포획) 항체의 경우에 일부 실시양태에서는 F(ab')2이고 일부 실시양태에서는 Fab인 레브리키주맙 (MILR1444A로도 지칭됨) 및 제2 (검출) 항체의 경우에 11H4인 것으로 결정되었다.
최적 항-IL-13 항체 쌍을 선택한 후, 본 발명자들은 검정내 정밀도, 검정간 정밀도, LLOQ, 정확도 및 선형성/병렬성, 및 가용성 IL-13Rα2로부터의 간섭을 결정하기 위해 하기 기재된 바와 같이 진행하였다. 이들 평가를 위해, 본 발명자들은 건강한 지원자로부터의 혈청 샘플을 사용하여 IMPACT IL-13 검정을 특징화하였다. 이들 건강한 지원자 샘플은 내부 헌혈 프로그램 (제넨테크 인크., 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코; 로슈 프로페셔널 다이아그노스틱스, 독일 펜츠베르크)으로부터 수득하였다.
검정내 정밀도는 3종의 상이한 기기 상에서 수행된 적어도 8시간의 지속시간의 실행 내에 분포된 12회의 중복 측정으로 샘플을 측정함으로써 평가하였다. 0.17 pg/mL 내지 7.5 pg/mL의 천연 IL-13 수준을 갖는 6종의 인간 혈청 샘플을 사용하였다. 이들 값은 재조합 IL-13을 표준물로서 사용하여 수득하였다. 2- 및 3-자릿수 pg/mL 농도 범위의 정밀도를 검사하기 위해 2종의 추가의 혈청을 재조합 인간 IL-13에 첨가하였다. 검정내 정밀도는 1.5%-3.8 % CV 범위였고, 검정간 정밀도는 3.1-5.1% 범위였다 (표 3).
표 3. IMPACT IL-13 검정 성능 요약
Figure pct00003
a명시된 경우를 제외하고 천연 IL-13을 함유하는 혈청 샘플을 사용하였다
b천연 IL-13을 함유하는 혈청 샘플을 재조합 IL-13에 첨가하였다
c천연 IL-13 수준의 평균 관찰된 농도 (n=24 실행)
dN.D.; 결정되지 않음
상이한 공여자로부터의 내인성 IL-13과의 일련의 희석물을 사용하고 검출불가능한 수준의 IL-13을 갖는 유체 (말 혈청, 샘플 희석제) 내로 0.002-0.11 pg/mL 범위의 농도로 첨가하여, 검정간 정밀도 (샘플은 이중으로 측정됨, n = 8 실행, 3종의 상이한 기기를 사용함) 특징화에 의해 정량 하한치 (LLOQ)를 결정하였다. LLOQ는 변동 계수 (CV)가 20% 이하인 IL-13의 가장 낮은 농도로 정의된다. 검정의 LLOQ를 결정하기 위해, 천연 IL-13 및 재조합 IL-13 샘플 둘 다의 측정의 정밀도를 평가하였다. LLOQ를 검정간 정밀도에 의해 결정하였고, CV< 20%가 달성된 IL-13의 가장 낮은 농도가 0.014 pg/mL인 것으로 발견되었다 (표 3).
정확도는 30 pg/mL의 재조합 인간 IL-13을 천식 환자 혈청 샘플 내로 첨가하는 것에 의해 평가하였다. 샘플을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, IMPACT IL-13 검정에서 상기 기재된 바와 같이 분석하였다. 검정 희석제로 천식환자 혈청 샘플의 연속 1:1 (V/V) 희석을 수행하여 병렬성을 평가하였다. 이어서 희석된 샘플을 IMPACT IL-13 검정에서 상기 기재된 바와 같이 분석하였다. 회수는 시험된 35개의 천식환자 샘플 중 34개에서 87-102% 범위였다 (표 3). 샘플 희석제를 사용하여 5개의 샘플을 일련의 희석물로 분석하여 병렬성을 평가하였다. 회수는 95-105 % 범위로 허용가능한 병렬성을 입증하였다 (표 3).
과학 문헌에는, 존재하는 경우에 잠재적으로 IL-13 검정을 간섭할 수 있는, 말초 혈액 중 IL-13Rα2 수용체 형태의 존재 또는 부재에 관한 상충하는 보고가 존재한다. 문헌 [Kasaian et al., J. Immunol. 187:561-9 (2011); O'Toole et al., Clin Exp Allergy 38:594-601 (2008)]. 2-1000 pg/mL의 sIL-13Rα2 (알앤디 시스템즈, MN, 카탈로그 번호 614-INS)를 건강한 대조군 혈청 샘플에 첨가하여 sIL-13Rα2가 IL-13의 검출을 간섭할 잠재력을 평가하였다. 샘플을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 IMPACT IL-13 검정에서 상기 기재된 바와 같이 시험하였다. 2-1000 pg/mL sIL-13Rα2의 존재 하에 IL-13을 검출하는 능력에서 어떠한 유의한 간섭도 검출되지 않았다 (데이터는 제시되지 않음).
천식, IPF, 및 아토피성 피부염 환자로부터의 혈청에서의 IMPACT IL-13 검정 특이도 및 IL-13 수준.
천식 또는 IPF를 갖는 환자 및 건강한 지원자 (천식 n=34, IPF n=32, 및 HV n=10)로부터의 혈청 샘플에서 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 IL-13 수준을 결정하였다. 천식 및 IPF 환자 샘플에 더하여 (또한 에렌나® IL-13 면역검정을 사용하여 검사됨), 아토피성 피부염을 갖는 환자 (n=25)로부터의 혈청을 또한 IMPACT IL-13 검정에서 검사하였다. 시험된 모든 샘플은 그들이 Th2-연관 질환을 갖는 환자로부터 또는 건강한 지원자로부터 수득되었는지에 관계없이 검출가능한 수준의 IL-13 수준을 가졌고, 수준은 0.11 pg/mL 내지 4.22 pg/mL 범위였다 (도 4). 이러한 세트의 샘플에서 검출된 가장 낮은 IL-13 수준은 LLOQ보다 9배 초과 더 높은 0.11 pg/mL였다.
상기 기재된 바와 같은 에렌나® IL-13 면역검정에 의해 관찰된 특이도 이슈를 고려하여, 본 발명자들은 IMPACT IL-13 검정의 특이도를 평가하였다. 특이도는, 상기 기재된 바와 같은 표준 조건 하에 IMPACT IL-13 검정을 실행하기 전, 혈청 샘플을 과량의 수준의 (100 μg/mL) 포획 항체 (제1 항체)와 실온에서 1시간 동안 사전-인큐베이션함으로써 평가하였다. 도 4에 제시된 바와 같이, 시험된 모든 샘플 (n=101)로부터의 IL-13 검정 신호는 LLOQ 수준 미만으로 효과적으로 고갈되었고, 이는 IL-13 측정의 특이도를 확인시켜주었다.
혈청 IL-13 수준의 범위를 검출 및 정량화하였고, 중앙값은 하기와 같았다: 건강한 지원자에서, 범위는 0.11 pg/mL 내지 2.25 pg/mL였고, 중앙은 0.36 pg/mL였고 (n=50); 천식 환자에서, 범위는 0.16 pg/mL 내지 2.73 pg/mL였고, 중앙은 0.64 pg/mL였고 (n=34); IPF 환자에서, 범위는 0.24 pg/mL 내지 2.15 pg/mL였고, 중앙은 0.71 pg/mL였고 (n=32); 아토피성 피부염 환자에서, 범위는 0.17 pg/mL 내지 4.22 pg/mL였고, 중앙은 0.82 pg/mL였다 (n=25) (도 5 참조). 건강한 지원자에서 IL-13의 혈청 수준은 Th2-연관 질환에서의 수준과 중첩되었지만, 각각의 천식, IPF 및 아토피성 피부염 혈청 샘플에서 혈청 IL-13의 중앙 수준은 건강한 지원자의 그것을 초과하였다. HV와 천식, IPF 또는 아토피성 피부염 사이의 평균을 각각 비교하기 위해 만-휘트니 검정을 수행하였다. 각각의 비교에 대한 P 값은 < 0.0001였다. (도 5, 표 4).
표 4. IMPACT IL-13 검정에 의해 결정된 혈청 IL-13 수준.
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에렌나® IL-13 면역검정과 IMPACT IL-13 검정 사이의 비교
에렌나® IL-13 면역검정은 IMPACT IL-13 검정이 사용하는 것과 상이한 항-IL-13 항체를 사용한다는 것을 고려하여, 본 발명자들은 에렌나®와 IMPACT 플랫폼의 분석 특징을 직접적으로 비교할 수 없었다. 예를 들어, 에렌나® IL-13 면역검정에 의해 관찰되는 유의한 매트릭스 간섭은 (Fraser S, et al., Bioanalysis 6:1123-9 [2014]) 포획 및 검출에 사용된 항체 시약의 영향일 수 있다. IMPACT IL-13 검정이 에렌나® IL-13 면역검정과 동일한 분석 시약을 사용한다면 유사한 특이도 이슈가 관찰될 가능성이 있다.
그럼에도 불구하고, 바이오마커 면역검정 방법의 중요한 측면은 대부분의 질환 상태 샘플에서 천연 바이오마커를 검출하는 능력이다. 따라서, 둘 다의 검정의 직접 비교를 위한 실용적인 대안적 접근법은 동일한 코호트의 환자 샘플에서 바이오마커의 천연 형태를 검출하는 둘 다의 방법의 능력을 비교하는 것이다. 변형된 에렌나® IL-13 면역검정 및 IMPACT IL-13 검정에 의해 통상적으로 시험된 30개의 혈청 샘플 (HV [n=10], 천식 환자 [n=10] 및 IPF 환자 [n=10]) 중에서, 9개의 샘플은 둘 다의 검정의 각각의 LLOQ를 초과한 검출가능한 IL-13 수준을 제시하였다. 각각의 검정에 의해 수득된 IL-13 수준의 비교는 피어슨 상관 계수 0.65를 제공하였고, IMPACT IL-13은 변형된 에렌나® IL-13 면역검정과 비교하여 상대적으로 더 높은 수준의 IL-13을 제공하였다 (데이터는 제시되지 않음). IL-13 정량화에서의 차이는 방법에 사용된 참조 물질에서의 차이로 인한 것일 수 있다. 또한, 변형된 에렌나® IL-13 면역검정을 사용한 IL-13의 검출은, 상기 기재된 바와 같이 본 발명자들이 시험된 농도에서의 IMPACT IL-13 검정을 위해 배제한 가능성인 sIL-13Rα2의 존재에 의해 간섭되었을 가능성이 있다.
본 발명자들은 또한 샌드위치 원리를 사용하는 상이한 상업적으로 입수가능한 면역검정을 시험하였고 (알앤디 시스템즈 퀀티킨(Quantikine)® ELISA, 인간 IL-13 면역검정, Cat. # D1300B), 이는 상기 기재된 원래의 에렌나® IL-13 면역검정 또는 변형된 에렌나® IL-13 면역검정보다 적어도 10-배 내지 20-배 더 낮은 감도인 3.46-57.4 pg/mL의 혈청 중 최소 검출가능한 용량의 IL-13을 갖는 것으로 보고되어 있다. 제조업체의 지침에 따라, 본 발명자들은 검정 표준 곡선 정밀도가 125 pg/mL 미만으로 준최적이라는 것을 발견하였다. 더욱이, 알앤디 시스템즈 퀀티킨® ELISA 키트를 사용하면 어떠한 천식 샘플 (25개 중 0개)에서도 IL-13 신호가 검출가능하지 않았고, 그러나 IMPACT IL-13 검정을 사용하면 모든 동일한 천식 샘플 (25개 중 25개)에서 검출가능하였다 (데이터는 제시되지 않음).
요약하면, 본 발명자들은 놀랍고 예측불가능하게도, 고도로 민감하면서 또한 고도로 특이적인 혈청 IL-13의 검출 및 정량화를 위한 면역검정을 개발하였다. 본 발명자들은 본 검정, IMPACT IL-13이 혈청에서 fg/mL 수준의 IL-13을 특이적으로 검출할 수 있고 정확하게 정량화할 수 있다는 것을 입증하였다. 본 발명자들은 이것이 이러한 높은 감도 및 특이도를 갖는 혈청 IL-13에 대한 검정의 최초의 기재임을 믿는다. 수많은 상이한 항-IL-13 항체 쌍을 시험하였고 그러한 쌍 중 오직 1개만이 목적하는 검정 성능 메트릭을 충족시켰기 때문에, IMPACT IL-13 검정에 사용된 분석 시약은 높은 검정 감도 및 특이도를 위한 주요 기여자일 수 있다.
또한, IMPACT IL-13 검정을 사용하여, 본 발명자들은 건강한 지원자 및 Th2-연관 질환, 즉 천식, IPF, 및 또는 아토피성 피부염을 갖는 환자에서 순환 IL-13 수준을 측정하였다. 본 발명자들은 대부분의 건강한 지원자가 Th2-연관 질환을 갖는 환자에서 발견되는 IL-13 수준의 중앙 미만의 IL-13 수준을 갖는다는 것을 발견하였다. 따라서, 이러한 결과는, 다음 실시예에서 연구될 가설인, 혈청 IL-13 수준에 따라 Th2 경로를 표적화하는 치료제에 의한 치료를 위해 환자 계층화가 유용한 접근법일 수 있음을 시사한다.
실시예 4 - 혈청 IL-13 수준은 레브리키주맙 치료에 대한 반응성을 예측하게 하고, 천식 악화에 대한 예후이다
상이한 바이오마커 혈청 페리오스틴, 혈액 호산구, FeNO 및 혈청 IgE가 천식을 갖는 환자에서 Th2 염증의 생물학을 반영한다는 것은 널리 문서화되어 있다. 또한, 각각의 바이오마커가 특정 임상 연구에서 Th2 경로에의 치료적 개입으로부터의 임상 이익을 위해 풍부화되고, 추가적으로 특정 경우에 약물 효능을 반영하는 예후 바이오마커 또는 약역학적 바이오마커라는 것이 제시된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Arron JR, et al., AnnalsATS 2013;10 (supplement):S206-13 [2013]; Nair et al., New Engl. J. Med. 360(10):985-93 [2009]; Pavord et al., Lancet 380(9842):651-9 [2012]; Bel et al., New Engl. J. Med. 371(13):1189-97 [2014]; Ortega et al., New Engl. J. Med. 371(13):1198-207 [2014]; Castro et al., Lancet Resp. Med. 2(11):879-90 [2014]] 참조). 상기 기재된 IMPACT IL-13 검정을 사용하여, 본 발명자들은 말초 IL-13 수준과 다른 Th2 천식 바이오마커 (혈청 페리오스틴, 혈액 호산구, FeNO 및 혈청 IgE) 사이의 관계를 평가하고, 뿐만 아니라 레브리키주맙-예측 및 질환-예후 바이오마커로서 말초 IL-13 수준을 평가하고자 하였다.
레브리키주맙의 제IIb상 임상 연구
반복, 무작위, 다기관, 이중-맹검, 위약 대조 연구인 2회의 제IIb상 연구를 수행하였다. 환자를 1:1:1:1 비로 무작위화하여 레브리키주맙 37.5 mg, 125 mg, 250 mg, 또는 위약을 4주마다 피하로 제공하였다. 무작위화는 기준선 혈청 페리오스틴, 마지막 12개월 이내의 천식 악화의 이력 및 기준선 천식 의약에 의해 계층화되었다. 모든 환자는 500-2000 μg/일 ICS 요법 (플루티카손 프로피오네이트 DPI 또는 등가물) 및 제2 적격 천식 제어제 의약으로 이루어진 그의 표준 관리 요법으로 유지되었다. 연구는 문헌 [Hanania et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, AB402 (2014) (abstract)]에서 결과와 함께 추가로 상세하게 기재되어 있다.
500-2000 μg/일의 플루티카손 프로피오네이트 DPI 또는 등가물 및 제2 천식 제어제 의약의 일상 사용에도 불구하고 비제어로 남아있는, 천식을 갖는 18-75세의 환자가 연구에 포함되는데 적격이다. 적격인 제2 제어제 의약은 장기-작용 β 효능제, 류코트리엔 수용체 길항제, 장기-작용 무스카린성 길항제, 또는 테오필린을 포함한다.
포함 기준은 하기를 포함한다: 천식의 진단 ≥12개월; 기관지확장제 반응 (≥12% 상대적 개선); 기관지확장제전 FEV1 예측치의 40%-80%. 비제어된 천식은 천식 설문지-5 (ACQ-5) 스코어 ≥ 1.5 및 하기 중 적어도 1개로 정의된다: 증상 > 2일/주; 야간 각성 ≥ 1회/주; 구급 의약으로서 단기-작용 β 효능제의 사용 > 2일/주; 또는 정상적인 일상 활동의 간섭. 어떠한 이유로든 이전 3개월 내에 유지 경구 코르티코스테로이드 치료 또는 이전 4주 내에 전신 코르티코스테로이드에 의한 치료를 받은 환자는 배제된다. 배제 기준은 하기를 포함한다: 생물학적 작용제에 대한 중증 알레르기 반응 또는 아나필락시스성 반응 또는 임의의 성분의 레브리키주맙 주사에 대한 공지된 과민성의 이력; 제1 방문 전 3개월 내 매일 또는 격일 경구 코르티코스테로이드 유지 요법으로 정의되는, 유지 경구 코르티코스테로이드 요법; 급성 악화 사건을 포함한 어떠한 이유로든 제1 방문 전 4주 내 또는 스크리닝 기간 동안 임의의 시점에 전신 (예를 들어 경구, IV, 또는 IM) 코르티코스테로이드에 의한 치료, 또는 제1 방문 전 4주 내 또는 스크리닝 기간 동안 임의의 시점에 관절내 코르티코스테로이드에 의한 치료; 감염의 주요 에피소드; HIV 감염을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 공지된 면역결핍; 급성 또는 만성 간염 또는 공지된 간 경변증의 증거; 천식 이외의 낭성 섬유증, COPD 및/또는 다른 임상적으로 유의한 폐 질환의 이력; 공지된 현재의 악성종양 또는 잠재적 악성종양에 대한 현재의 평가; 현재의 흡연자, 또는 > 10갑-년의 흡연 이력을 갖는 이전의 흡연자; 면역조정/면역억제 요법의 현재의 사용 또는 제1 방문 전 3개월 또는 5 약물 반감기 내 과거의 사용; 제1 방문 전 6개월 동안 임의의 시점에서의 오말리주맙을 포함한 생물학적 요법의 사용; 제1 방문 전 4주 동안 임의의 시점에서의 질류톤 또는 로플루밀라스트의 사용; 제1 방문 전 3개월 내 알레르기성 질환 또는 천식의 치료를 위한 전통적인 허브 의약; 제1 방문 전 3개월 내 알레르겐 면역요법의 개시 또는 그의 변화; 제1 방문 전 30일 (또는 임상시험용 작용제의 5 반감기, 어느 것이든 더 긴 것) 내 임상시험용 작용제에 의한 치료; 제1 방문 전 4주 내 생 약독화 백신의 수용; 체질량 지수 > 38 kg/m2; 체중 < 40 kg.
하기 효능 및 안전성 평가를 이들 연구에서 평가하였다. 1차 종점은 위약-대조 기간 동안의 천식 악화율이었다. 천식 악화는 전신 코르티코스테로이드에 의한 치료 또는 입원을 야기하는 신규의 또는 증가된 천식 증상으로 정의되었다. 전신 코르티코스테로이드에 의한 치료는 ≥3일 또는 응급실 방문 동안 ≥1 용량의 정맥내 (IV) 또는 근육내 (IM) 코르티코스테로이드로의 경구, IV 또는 IM 코르티코스테로이드 치료로 정의되었다. 천식 악화는 환자가 마지막 방문 이후 임의의 천식 악화를 경험하였는지 평가하기 위해 각각의 연구 방문 시 조사자에 의해 직접 질문을 사용하여 평가되었다. 1차 및 모든 2차 종점이 페리오스틴-높은 및 페리오스틴-낮은 군 (50 ng/mL 혈청 페리오스틴의 컷-포인트에 기초함)에서 개별적으로 평가될 것임이 사전-명시되었다. 폐활량측정 (기관지확장제-전 및 기관지확장제-후)은 연구 내내 평가되었다. 수집된 폐활량측정 척도는 FEV1, FVC (부피, 리터 단위) 및 PEF (분당 리터)를 포함하였다. 예측 FEV1 및 FVC의 백분율은 이들 부피 측정으로부터 문헌 [Hankinson et al., Am J Respir Crit Care Med 159:179-87 (1999)]에 기재된 바와 같은 국립 보건 및 영양 조사 데이터세트로부터 유도된 방정식을 사용하여 유도하였다. 술기의 그래프 표현을 포함한 데이터의 허용성은 맹검 과다-판독자에 의해 결정되었다. 허용되는 술기의 재현성에 대한 계산을 프로그램화하였다. 단기-작용 기관지확장제의 마지막 용량은 시험의 적어도 4시간 전이어야 하고, LABA의 마지막 용량은 시험의 적어도 12시간 전이어야 하고, LAMA의 마지막 용량은 시험의 적어도 24시간 전이어야 한다. 시험을 위해 적절하게 준비되지 않은 환자의 경우에 (예를 들어 도착 전 기관지확장제를 사용함), 방문을 재스케줄링하였다. 폐활량측정의 측정은 연구의 요건에 따라 구성된 6800 폐활량계가 구비된 컴퓨터 폐활량측정 시스템, 바이탈로그래프(Vitalograph)® 스피로트랙(Spirotrac)® (바이탈로그래프; 아일랜드 에니스) 상에서 폐활량측정의 ATS/ERS 표준화에 의해 공개된 가이드라인 (Miller et al., Eur Respir J 26:319-38 [2005])에 따라 수행하였다. 최고 유량/이다이어리 디바이스를 최고 호기 유량 (PEF)의 1일 1회 측정 (5am 및 11am 사이) 및 천식 구급 의약 및 제어제 사용의 기록에 사용하였다. 연구 동안 1일 1회 PEF 측정 및 천식 구급 및 제어제 의약 사용의 이-다이어리 기록을 위해, 환자에게 핸드-헬드 최고 유량/다이어리 디바이스, 바이탈로그래프® 2120 In2itive 이-다이어리 (바이탈로그래프)를 제공하였다.
사전-명시된 2차 종점은 기준선으로부터 제52주까지의 기관지확장제-전 FEV1에서의 상대 변화, 위약-대조 기간 동안 첫번째 천식 악화까지의 시간, 천식-특이적 건강-관련 삶의 질의 측정, 천식 삶의 질 설문지 (표준화됨; [AQLQ(S)])에서 기준선으로부터 제52주까지의 변화, 기준선으로부터 제52주까지의 천식 구급 의약 사용에서의 변화, 위약-대조 기간 동안 긴급 천식-관련 건강 관리 이용 (즉, 입원, 응급부 방문, 및 급성 관리 방문) 비율이었다. 안전성 종점은 위약-대조 및 추적 기간 동안 유해 사건 (AE)의 비율 및 중증도, 및 연구 동안의 기준선 대비 항-치료 항체 (ATA)의 발생률이었다. 레브리키주맙의 면역원성은 단층식 ATA 분석 전략을 사용하여 평가하였다.
바이오마커 평가는 하기와 같이 수행하였다. FeNO는 기준선 및 각각의 후속 연구 방문 시 핸드-헬드 휴대용 디바이스 (니옥스 미노(NIOX MINO)®, 에어로크린(Aerocrine); 스웨덴 솔나)를 사용하여 미국 흉부 학회 가이드라인 (ATS/ERS Recommendations, Am J Respir Crit Care Med 171:912-30 [2005])에 따라 평가하였다. 페리오스틴 수준을 평가하기 위해 혈청을 스크리닝 시, 기준선에서, 및 각각의 후속 연구 방문 시 수집하였다. 페리오스틴은 샌드위치 원리를 사용하여, 코바스 e601 플랫폼 상에서 전기화학발광 면역검정인 로슈 엘렉시스(Elecsys)® 페리오스틴 검정 (로슈 다이아그노스틱스, 독일 펜츠베르크)을 사용하여 측정하였다. 환자, 의사 및 현장 스탭은 연구 동안 FeNO 및 페리오스틴 값에 대해 맹검상태였다. 말초 혈액 호산구 카운트 및 혈청 IgE 수준을 포함한 혈액 평가를 중앙 실험실을 사용하여 스크리닝 시, 기준선에서, 및 제4주에 시작되는 각각의 후속 연구 방문 시 표준 임상 실험실 절차에 따라 수행하였고, 현장은 무작위 맹검상태였다.
문헌 [Hanania et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology, Volume 133, Issue 2, AB402 (2014) (abstract)]에 보고된 바와 같이, 흡입용 코르티코스테로이드 요법 및 추가의 제어제에도 불구하고 비제어 중증 천식을 갖는 환자에서, 4주마다 피하로 투여된 레브리키주맙은 페리오스틴-높은 환자에서 위약과 비교하여 60% (95% CI 18, 80)만큼 및 페리오스틴-낮은 환자에서 5% (95% CI -81, 47)만큼 천식 악화율을 감소시켰다. 또한, 레브리키주맙은 페리오스틴-높은 환자에서 FEV1에서의 변화에 의한 측정 시, 폐 기능에 긍정적인 영향을 미쳤다. 레브리키주맙은 일반적으로 잘 용인되었고, 어떠한 임상적으로 중요한 안전성 신호도 관찰되지 않았다. 이들 결과는 이전에 기재된 발견을 확장시키고, 기준선 페리오스틴 수준이 레브리키주맙 치료 이익을 예측하게 할 수 있다는 발견을 지지한다.
바이오마커 FeNO, 말초 혈액 호산구, 및 혈청 페리오스틴과 관련하여, 하기 결과가 보고되었다. 기준선 FeNO 수준은 위약 및 레브리키주맙 37.5 mg 군에서 뿐만 아니라, 페리오스틴-낮은 환자에서도 낮았다. 페리오스틴-높은 환자에서 제12주에서의 위약 대비 변화는 상이한 레브리키주맙 용량 군에 걸쳐 -3.9 내지 -12.5 십억분율 (ppb)이었다. 페리오스틴-낮은 환자에서 제12주에서의 FeNO의 평균 사이의 차이는 위약 대비 레브리키주맙 용량 군에 걸쳐 -8.9 내지 -11.0 ppb였다. 말초 혈액 호산구의 기준선 수준은 상이한 치료 부문에 걸쳐 잘 균형을 이루었다. 제12주에, 특히 페리오스틴-높은 대상체에서, 레브리키주맙에 의해 절대 혈액 호산구 수준에서의 작은 증가가 존재하였다. 위약-교정된 변화는 페리오스틴-높은 환자에서 0.29 내지 0.56 x103/μL 및 페리오스틴-낮은 군에서 -0.01 내지 0.07 x103/μL 범위였다. 페리오스틴-높은 군에서, 말초 혈액 호산구에서의 증가는 용량 의존성인 것으로 보였고, 37.5 mg이 가장 작은 변화를 나타내었다. 말초 혈액 호산구 카운트에서의 변화는 이전에 보고된 바 있고 (Corren J, et al., N Engl J Med 365:1088-98 [2011]; Scheerens H, et al., [abstract] Am J Respir Crit Care Med 185:PA3960 [2012]), IL-13 활성의 차단을 반영할 수 있다. 혈액에서 증가된 호산구 카운트는 감소된 화학주성으로 인한 혈액으로부터 기도로의 감소된 이동으로 인한 것일 수 있다 (Blanchard C, et al., Mucosal Immunol 1:289-96 [2008]; Johansson MW, et al., Am J Respir Cell Mol Biol 48:503-10 [2013]). 혈청 페리오스틴의 기준선 수준도 또한 상이한 치료 부문에 걸쳐 잘 균형을 이루었고, 모든 군에 걸친 중앙 (제-7일) 값은 47.9 ng/mL였다. 제12주에, 레브리키주맙 치료 후, 페리오스틴-높은 대상체에서 페리오스틴에서의 3.7-8.3%의 위약-교정된 감소가 존재하였고, 페리오스틴-낮은 대상체에서는 변화가 거의 존재하지 않았다. 페리오스틴 수준에서 용량-의존성 변화의 어떠한 명백한 증거도 존재하지 않았다.
혈청 IL-13 측정 및 분석
IMPACT IL-13 검정을 사용하여 상기 기재된 제IIb상 연구로부터의 총 329개의 환자 혈청 샘플에서 기준선 (제0주) 혈청 IL-13 수준을 결정하였다. 각각의 혈청 샘플을 상기 기재된 IMPACT IL-13 검정 방법에 따라 이중으로 측정하였다. 각각의 샘플에서의 최종 IL-13 수준은 백분율 변동 계수 (% CV) ≤15%를 갖는 이중 측정의 평균 농도로서 보고하였다. % CV > 15%를 갖는 이중 측정은 무효로 간주하고 분석에서 배제하였다. 또한, 각각의 샘플에 대한 첨가 회수를 평가하였다. 재조합 인간 IL-13 30 pg/mL를 검정 절차 전에 각각의 내인성 샘플 분취물에 첨가하였다. < 80% 첨가 회수를 갖는 샘플은 측정 무효로 간주하고 분석에서 배제하였다.
하기 통계적 분석을 수행하였다. JMP 10.0.2 (SAS 인스티튜트, 노스 캐롤라이나주 캐리)를 사용하여 기준선에서의 혈청 IL-13, 혈액 호산구, 혈청 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 수준에 대한 비파라미터 스피어만 순위 상관관계 분석을 수행하였다. 측정된 제IIb상 환자 샘플에서 혈청 IL-13의 중앙 수준에 의해 IL-13 높은 및 IL-13 낮은 하위군을 계층화하였다. 기준선으로부터의 FEV1 평균 (SE) 백분율 변화를 제1주, 제4주, 제8주 및 제12주에 연구 군에 따라 계산하였다. FEV1 효능 평가를 위해 제12주 분석을 사용하였다. 기준선으로부터의 평균 백분율 변화를 각각의 치료군 각각과 위약군 사이에서 부동 분산을 가정하여 t 검정에 의해 비교하였다. 평균 및 연관된 양측 95% 신뢰 구간 사이의 차이를 이에 따라 계산하였다. 위약-대조 치료 기간 동안 천식의 프로토콜-정의된 악화율은 각각의 군에서 치료 기간에 걸친 이러한 악화의 총 수를 치료 기간의 총 시간 (년)으로 나누어 추정하였다. 각각의 치료군 각각과 위약군 사이의 악화율을 포아송 회귀 모델을 사용하여 과분산에 의해 비교하였다. 치료군과 위약군 사이의 악화율 감소에 대한 양측 95% 신뢰 구간을 보고하였다. 예후 분석을 위해, IL-13을 포아송 회귀 모델 피트에 대한 연속 공변량으로서 위약 환자로부터의 데이터에 추가하였다. 이러한 분석을 위해, 과도한 영향을 피하기 위해 42.93 pg/mL IL13의 극단적 관찰은 제거하였다. 8.5 pg/mL의 또 다른 영향력있는 값을 제거한 감도 분석은 일관된 결과를 생성하였다.
혈청 IL-13 결과 및 다른 Th2 바이오마커와의 상관관계
상기 언급된 바와 같이, 본 발명자들은 329개의 환자 샘플에서 혈청 IL-13 수준을 측정하였다. 4개의 샘플은 무효 측정을 가졌고, 구체적으로 검출가능하지 않은 수준을 갖는 1개, 이중 측정 사이에 15% 초과의 % CV를 갖는 1개, 및 80% 미만의 첨가 회수를 갖는 2개는 추가의 분석에서 배제하였다. 따라서, IL-13 검출률은 98.5% (329개 중 324개)로 간주되었다. 이들 324개의 환자 샘플에서의 혈청 IL-13 수준은 0.053 내지 42.935 pg/mL 범위였고, 중앙은 0.785 pg/mL였다. 평균 (95% CI) 수준은 1.172 pg/mL (0.898, 1.446)였다. (표 5).
표 5. 기준선에서의 제IIb상 연구의 바이오마커 수준 분포.
Figure pct00005
본 발명자들은 다음으로 혈청 IL-13 수준과 다른 Th2 바이오마커, 구체적으로 혈액 호산구, 혈청 페리오스틴, FeNO, 혈청 IgE의 상관관계를 평가하였다. 도 6에 제시된 바와 같이, 기준선 (제0주)에서의 혈청 IL-13 수준은 혈액 호산구 카운트와 강하게 상관되었지만, 혈청 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 수준과는 약하게 상관되었다. 혈청 IL-13과 혈액 호산구 사이의 스피어만 순위 상관 계수 (ρ)는 0.66인 한편, IL-13과 혈청 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 사이의 스피어만의 ρ는 각각 0.36, 0.31 및 0.36이었다. 호산구, 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 사이의 약한 상관관계는 이전에 보고된 바 있어서 예상되었지만, 혈청 IL-13 및 혈액 호산구 수준 사이의 강한 상관관계는 놀랍고 예상치 못한 것으로, 본 발명자들의 지식에서 이전에 기재된 바 없다. 이러한 강한 상관관계는, 각각의 바이오마커 단독에 더하여, 혈청 IL-13 및 혈액 호산구 수준의 조합이 Th2-연관 질환 및 Th2 경로를 표적화하는 치료제를 연구하기 위한 특히 정보를 제공하는 바이오마커임을 나타낸다.
기준선 혈청 IL-13 수준은 레브리키주맙 치료에 대한 반응성을 예측하게 한다
혈청 IL-13 중앙 0.785 pg/mL를 사용하여, 환자를 혈청 IL-13 높음 (혈청 IL-13 ≥ 0.785 pg/mL) 또는 혈청 IL-13 낮음 (혈청 IL-13 < 0.785 pg/mL)으로 계층화하였다. 도 7a (혈청 IL-13 높음) 및 도 7b (혈청 IL-13 낮음)는 기준선 FEV1과 비교하여 제12주에서의 FEV1의 평균 백분율 변화를 제시한다. 제12주에, 37.5 mg 및 250 mg 레브리키주맙 부문에서 기준선 FEV1로부터의 위약-정규화된 평균 증가는 혈청 IL-13 낮은 군보다 혈청 IL-13 높은 군에서 더 컸다. 37.5 mg 레브리키주맙 부문의 경우에, 개선은 혈청 IL-13 높은 군에서 3.51% (-4.98, 12.00) 대 혈청 IL-13 낮은 군에서 -5.11% (-11.99, 1.77)였다. 250 mg 레브리키주맙 부문의 경우에, 개선은 혈청 IL-13 높은 군에서 9.04% (-0.54, 18.62) 대 혈청 IL-13 낮은 군에서 1.05% (-7.00, 9.11)였다. 125 mg 레브리키주맙 부문에서 FEV1의 개선은 혈청 IL-13 높은 군 및 혈청 IL-13 낮은 군 사이에 유사하였다. (도 7a 및 도 7b, 표 6).
표 6. 혈청 IL-13 상태에 의한 위약 대비 제12주에서의 FEV1의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화.
Figure pct00006
도 8은 위약-대조 치료 기간 동안의 추정 악화율 감소가 혈청 IL-13 낮은 군보다 혈청 IL-13 높은 군에서 더 크다는 것을 제시한다. 혈청 IL-13 높은 군에서, 악화율 감소는 37.5 mg, 125 mg 및 250 mg 레브리키주맙 부문에서 각각 70% (95% CI: -1%에서 93%), 38% (95% CI: -75%에서 80%) 및 11% (95% CI: -131%에서 67%)였다. 한편 혈청 IL-13 낮은 군에서, 악화율 감소는 37.5 mg, 125 mg 및 250 mg 레브리키주맙 부문에서 각각 10% (95% CI: -200%에서 74%), -17% (95% CI: -263%에서 61%) 및 3% (95% CI: -223%에서 72%)였다.
본 발명자들은 또한 혈청 IL-13 수준이 천식 악화에 대한 예후인지 검사하였다. 위약 부문에서 악화율은 혈청 IL-13 높은 군에서 0.76이었고 혈청 IL-13 낮은 군에서 0.38이었다 (도 8). 이러한 결과는 혈청 IL-13의 기준선 수준이 표준 관리에도 불구하고 비제어된 천식을 갖는 환자에서 악화의 예후 바이오마커임을 시사한다. 이러한 결론을 확인하기 위해, 과분산을 허용하는 포아송 회귀를 위약 환자로부터의 데이터에 피팅시켰다. 이러한 분석은 IL-13에서의 0.1 pg/mL 증가의 경우에 매년 악화율에서의 증가에 대해 1.03 (95% CI: 1.01에서 1.05)의 인자를 산출하여, 혈청 IL-13 수준이 악화에 대한 예후라는 결론을 추가로 지지하였다.
요약하면, 레브리키주맙의 제IIb상 임상 연구에서 329명의 천식 환자로부터의 샘플에서 혈청 IL-13의 기준선 수준은 IMPACT IL-13 검정을 사용하여 측정하였다. 이들 혈청 샘플에서 IL-13 검출률은 98.5%였다 (329개 중 324개). 중앙 수준은 0.785 pg/mL였다. 상기 기재된 바와 같이, 혈청 IL-13의 기준선 수준은 혈액 호산구 카운트와 강하게 상관되었고, 혈청 페리오스틴, FeNO 및 혈청 IgE 수준과 약하게 상관되었다. 또한, 혈청 IL-13 수준은 레브리키주맙 치료에 대한 환자 반응성을 예측하게 하였고: 높은 혈청 IL-13 군의 환자는, 악화율 감소 및 FEV1 개선에 의해 평가된 바와 같이, 낮은 혈청 IL-13 군의 환자보다 레브리키주맙 치료로부터 더 큰 임상 이익을 입증하였다. 마지막으로, 본 발명자들은 또한 혈청 IL-13 수준이 천식 악화에 대한 예후 바이오마커임을 입증하였고, 위약 부문, 높은 혈청 IL-13 군의 환자는 위약 부문, 낮은 혈청 IL-13 군의 환자와 비교하여 더 높은 악화율을 제시하였다.
이전에-기재된 Th2 바이오마커 평가와 연관된 특정 제한 및 불편을 고려하면, 본원에 기재된 바와 같은 높은 감도 및 높은 특이도 둘 다를 갖는 혈청 IL-13 검정의 개발, 및 혈청 IL-13 수준이 Th2 경로를 표적화하는 치료제에 의한 치료 이익을 예측하게 하고 또한 천식 악화에 대한 예후라는 본원의 증거는, 본 분야에서의 중요한 진전을 나타낸다.
서열의 표
Figure pct00007
Figure pct00008
SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC. ET AL. <120> METHODS OF DETECTING AND QUANTIFYING IL-13 AND USES IN DIAGNOSING AND TREATING TH2-ASSOCIATED DISEASES <130> P32675-WO <140> <141> <150> 62/133,693 <151> 2015-03-16 <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln Thr 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ala Tyr Ser 20 25 30 Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala 35 40 45 Met Ile Trp Gly Asp Gly Lys Ile Val Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 50 55 60 Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr 65 70 75 80 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly 85 90 95 Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Ala Met Asp Asn Trp Gly Gln Gly Ser Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> 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Claims (85)

  1. 샘플에서 IL-13을 높은 감도 및 높은 특이도로 검출 및 정량화할 수 있는, IL-13을 검출 및 정량화하기 위한 면역검정 방법.
  2. 제1항에 있어서, 감도가 정량 하한치 (LLOQ)로 결정되고, 여기서 LLOQ가 0.1 fg/mL 내지 35 fg/mL, 또는 1 fg/mL 내지 30 fg/mL, 또는 5 fg/mL 내지 25 fg/mL 또는 10 fg/mL 내지 20 fg/mL인 방법.
  3. 제2항에 있어서, LLOQ가 14 fg/mL인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 샌드위치 면역검정 방법이고, IL-13에 특이적으로 결합하는 제1 모노클로날 포획 항체 및 IL-13에 특이적으로 결합하는 제2 모노클로날 검출 항체를 포함하며, 여기서 제1 항체가 제2 항체와 상이한 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 특이도가 항원 고갈 방법에 의해 결정되고, 여기서 고갈 방법은 면역검정 방법을 수행하기 전에 샘플을 과량의 제1 항체와 인큐베이션하는 것을 포함하는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 샘플에서 항원이 완전히 고갈되어, 면역검정 방법에서 LLOQ 미만의 신호가 생성되는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 가용성 IL-13Rα2를 포함하고, 가용성 IL-13Rα2가 면역검정 방법의 감도 또는 특이도를 간섭하지 않는 것인 방법.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  10. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체가 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 제2 항체가 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  12. 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 항체 단편인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 항체 단편이 Fab, F(ab')2, Fab', 및 Fv로부터 선택된 것인 방법.
  14. 제4항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체에 특이적으로 결합하고 검출가능하게 표지된 제3 항체를 추가로 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 제2 항체가 합텐으로 표지되고 제3 항체가 항-합텐 항체인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 합텐이 디곡시게닌이고 항-합텐 항체가 형광 라텍스와 접합된 항-디곡시게닌 모노클로날 항체인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 혈청인 방법.
  18. 제17항에 있어서, 샘플이 인간 혈청인 방법.
  19. 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계,
    제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 IL-13의 수준을 측정하는 단계,
    샘플에서 검출된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계,
    및
    샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 상승된 경우에 환자가 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 것으로 예측하거나, 또는 샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 감소된 경우에 환자가 상기 요법에 반응하지 않을 것으로 예측하는 단계
    를 포함하는, Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 대한 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자의 반응을 예측하는 방법.
  20. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 것을 포함하며, 여기서 참조 수준과 비교하여 상승된 IL-13 수준은 환자를 Th2 경로 억제제 치료에 반응할 가능성이 있는 것으로서 확인시켜주는 것인, Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 대한 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자의 반응성을 예측하는 방법.
  21. (a) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계;
    (b) (a)에서 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계; 및
    (c) (a)에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에, 상기 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 확인하는 단계
    를 포함하는, 천식 또는 Th2-연관 질환을 앓고 있는 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 있는 것으로서 확인하는 방법.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE (예를 들어, 졸레어®, QGE-031; MEDI-4212; 퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)의 억제제이거나, 또는 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제인 방법.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 IL-13 경로 억제제 또는 항 IgE 결합제인 방법.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IL-13 항체 또는 항-IL-13 이중특이적 항체인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 항-IL-13 항체가 서열식별번호: 1, 3, 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH, 및 서열식별번호: 2, 4, 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙인 방법.
  26. 제24항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 또는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  27. 제24항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 항-IL-4/항-IL-13 이중특이적 항체 또는 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체인 방법.
  28. 제27항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  30. 제23항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IgE 항체인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 항-IgE 항체가 (i) 졸레어® 항체 또는 (ii) 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함하며 여기서 가변 중쇄 영역이 서열식별번호: 22이고 가변 경쇄 영역이 서열식별번호: 23인 항-IgE 항체인 방법.
  32. (a) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 천식 또는 Th2-연관 질환을 갖는 환자로부터의 생물학적 샘플에서 IL-13의 수준을 측정하는 단계;
    (b) (a)에서 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계;
    (c) (a)에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에, 상기 환자를 Th2 경로 억제제를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 확인하는 단계; 및
    (d) (a)에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준 초과인 경우에 요법을 투여하여, 천식 또는 Th2-연관 장애를 치료하는 단계
    를 포함하는, 천식 또는 Th2-연관 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법.
  33. 환자에게 치료 유효량의 Th2 경로 억제제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자로부터 수득된 생물학적 샘플은 참조 집단에서의 IL-13 수준과 비교하여 상승된 IL-13 수준을 갖는 것으로 결정되고, 여기서 IL-13 수준은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 결정된 것인, 환자에서 천식 또는 Th2-연관 질환을 치료하는 방법.
  34. 환자에게 치료 유효량의 Th2 경로 억제제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 참조 집단에서의 IL-13 수준과 비교하여 IL-13의 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서의 상승된 IL-13 수준에 기초하여 치료를 위해 선택되고, 여기서 IL-13 수준은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 결정된 것인, 환자에서 천식 또는 Th2-연관 질환을 치료하는 방법.
  35. 제19항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 참조 수준이 참조 집단에서의 IL-13의 중앙 수준인 방법.
  36. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE (예를 들어, 졸레어®, QGE-031; MEDI-4212; 퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)의 억제제이거나, 또는 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제인 방법.
  37. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 IL-13 경로 억제제 또는 항 IgE 결합제인 방법.
  38. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IL-13 항체 또는 항-IL-13 이중특이적 항체인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 항-IL-13 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙인 방법.
  40. 제38항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 또는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  41. 제38항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 항-IL-4/항-IL-13 이중특이적 항체 또는 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체인 방법.
  42. 제41항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 방법.
  44. 제37항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IgE 항체인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 항-IgE 항체가 (i) 졸레어® 항체 또는 (ii) 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함하며 여기서 가변 중쇄 영역이 서열식별번호: 22이고 가변 경쇄 영역이 서열식별번호: 23인 항-IgE 항체인 방법.
  46. 제19항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있는 것인 방법.
  47. 제19항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 천식 또는 Th2-연관 질환이 코르티코스테로이드로 비제어되는 것인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 코르티코스테로이드가 흡입용 코르티코스테로이드인 방법.
  49. 제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 제2 제어제로 치료받고 있는 것인 방법.
  50. 제19항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인간인 방법.
  51. 제19항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 혈청 또는 혈장인 방법.
  52. 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자를 Th2 경로 억제제에 의한 치유적 치료에 대한 가능성 있는 반응자 및 비-반응자로 계층화하기 위한, 상기 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서 IL-13의 수준을 결정하기 위한 키트의 용도이며, 여기서 IL-13 수준은 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 결정되는 것인 용도.
  53. 제52항에 있어서,
    a) 환자로부터 수득된 샘플에서 IL-13 수준을 측정하는 단계;
    b) 단계 a)에서의 IL-13의 수준과 참조 수준을 비교하는 단계; 및
    c) 단계 b)에서 수득된 비교에 기초하여 상기 환자를 반응자 또는 비-반응자 카테고리로 계층화하는 단계
    를 포함하는 키트의 용도.
  54. 제53항에 있어서, 참조 수준이 참조 집단에서의 IL-13의 중앙 수준인 용도.
  55. 제54항에 있어서, 환자로부터의 샘플에서 IL-13의 수준이 중앙 수준 이상인 경우에, Th2 경로 억제제를 포함하는 요법을 선택하는 단계를 포함하는 용도.
  56. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 중등도 내지 중증 천식을 앓고 있는 것인 용도.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 천식 또는 Th2-연관 질환이 코르티코스테로이드로 비제어되는 것인 용도.
  58. 제57항에 있어서, 코르티코스테로이드가 흡입용 코르티코스테로이드인 용도.
  59. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 또한 제2 제어제로 치료받고 있는 것인 용도.
  60. 제52항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, Th2 경로 억제제가 ITK, BTK, IL-9 (예를 들어, MEDI-528), IL-5 (예를 들어, 메폴리주맙, CAS 번호 196078-29-2; 레실리주맙), IL-13 (예를 들어, IMA-026, IMA-638 (안루킨주맙으로도 지칭됨, INN 번호 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 트랩), 트랄로키누맙 (CAT-354로도 지칭됨, CAS 번호 1044515-88-9); AER-001, ABT-308 (인간화 13C5.5 항체로도 지칭됨), IL-4 (예를 들어, AER-001, IL4/IL13 트랩), IL-17, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 및 IgE (예를 들어, 졸레어®, QGE-031; MEDI-4212; 퀼리주맙); 및 수용체 예컨대: IL-9 수용체, IL-5 수용체 (예를 들어, MEDI-563 (벤랄리주맙, CAS 번호 1044511-01-4), IL-4수용체 알파 (예를 들어, AMG-317, AIR-645, 두필루맙), IL-13수용체알파1 (예를 들어, R-1671) 및 IL-13수용체알파2, OX40, TSLP-R, IL-7R알파 (TSLP에 대한 보조-수용체), IL17RB (IL-25에 대한 수용체), ST2 (IL-33에 대한 수용체), CCR3, CCR4, CRTH2 (예를 들어, AMG-853, AP768, AP-761, MLN6095, ACT129968), Fc엡실론RI, Fc엡실론RII/CD23 (IgE에 대한 수용체), Flap (예를 들어, GSK2190915), Syk 키나제 (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761), TLR9 (QAX-935)의 억제제이거나, 또는 CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (예를 들어, TPI ASM8)의 다중-시토카인 억제제인 용도.
  61. 제60항에 있어서, Th2 경로 억제제가 IL-13 경로 억제제 또는 항 IgE 결합제인 용도.
  62. 제60항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IL-13 항체 또는 항-IL-13 이중특이적 항체인 용도.
  63. 제62항에 있어서, 항-IL-13 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체; HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 항체; 또는 레브리키주맙인 용도.
  64. 제62항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 또는 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL13 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 용도.
  65. 제62항에 있어서, 항-IL-13 이중특이적 항체가 항-IL-4/항-IL-13 이중특이적 항체 또는 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체인 용도.
  66. 제65항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 HVRH1, HVRH2, HVRH3, HVRL1, HVRL2, 및 HVRL3을 포함하며 여기서 각각의 HVR이 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28, 서열식별번호: 29, 서열식별번호: 30, 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 것인 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 용도.
  67. 제66항에 있어서, 항-IL-13/항-IL-17 이중특이적 항체가 서열식별번호: 1, 3 및 24로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 2, 4 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-13 VH/VL 유닛; 및 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-IL-17 VH/VL 유닛을 포함하는 것인 용도.
  68. 제61항에 있어서, Th2 경로 억제제가 항-IgE 항체인 용도.
  69. 제68항에 있어서, 항-IgE 항체가 (i) 졸레어® 항체 또는 (ii) 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 영역을 포함하며 여기서 가변 중쇄 영역이 서열식별번호: 22이고 가변 경쇄 영역이 서열식별번호: 23인 항-IgE 항체인 용도.
  70. 제52항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인간인 용도.
  71. 제52항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 혈청 또는 혈장인 용도.
  72. a) 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자로부터 수득된 샘플에서 IL-13 수준을 측정하기 위한 시약; 및
    b) (i) 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 따라 IL-13 수준을 측정하는 것, (ii) 측정된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 것, 및 (iii) 비교에 기초하여 상기 환자를 반응자 또는 비-반응자의 카테고리로 계층화하는 것에 대한 지침서
    를 포함하는, 천식 환자 또는 Th2-연관 질환 환자를 계층화하기 위한 키트.
  73. 제72항에 있어서, 환자가 Th2 경로 억제제에 반응할 가능성이 있는지 결정하기 위한 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서, 제52항 내지 제71항 중 어느 한 항에 따른 용도를 기재한 정보가 담긴 패키지 삽입물을 추가로 포함하는 키트.
  75. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플을 수용하기 위한 빈 용기를 추가로 포함하는 키트.
  76. 천식 환자로부터 샘플을 수득하는 단계,
    제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 따라 샘플에서 IL-13의 수준을 측정하는 단계,
    샘플에서 검출된 IL-13 수준을 참조 수준과 비교하는 단계,
    및
    샘플에서 측정된 IL-13 수준이 참조 수준과 비교하여 상승된 경우에 환자가 중증 악화를 앓을 가능성이 있는 것으로 예측하는 단계
    를 포함하는, 천식 환자를 중증 악화를 앓을 가능성이 있는 것으로서 확인하는 방법.
  77. 제76항에 있어서, 참조 수준이 참조 집단에서의 IL-13의 중앙 수준인 방법.
  78. 제19항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 페리오스틴, FeNO, 호산구, 및 IgE로부터 선택된 1종 이상의 Th2-연관 바이오마커의 수준을 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법, 또는 용도, 또는 키트.
  79. 제19항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 호산구의 수준을 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법, 또는 용도, 또는 키트.
  80. 제19항 내지 제45항, 제47항 내지 제55항, 제57항 내지 제75항, 제78항 및 제79항 중 어느 한 항에 있어서, Th2-연관 질환이 천식, 아토피성 피부염, 특발성 폐 섬유증, 알레르기성 비염, 섬유증, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 크론병, 만성 폐쇄성 폐 질환, 및 간 섬유증으로부터 선택된 것인 방법, 또는 용도, 또는 키트.
  81. 제80항에 있어서, Th2-연관 질환이 특발성 폐 섬유증 또는 아토피성 피부염인 방법, 용도, 또는 키트.
  82. 제39항에 있어서, 투여하는 단계가 37.5 mg의 항-IL-13 항체를 4주마다 또는 125 mg의 항-IL-13 항체를 4주마다 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  83. 제82항에 있어서, 페리오스틴, FeNO, 호산구, 및 IgE로부터 선택된 1종 이상의 Th2-연관 바이오마커의 수준을 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  84. 제83항에 있어서, Th2-연관 바이오마커가 혈액 호산구인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 혈액 호산구의 수준이 300개 세포/마이크로리터 이상으로 결정된 것인 방법.
KR1020177028752A 2015-03-16 2016-03-15 Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도 KR20170127011A (ko)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200111640A (ko) * 2019-03-19 2020-09-29 에스씨엠생명과학 주식회사 단일 클로날 줄기세포를 이용한 아토피 피부염 치료 방법
US20220058563A1 (en) * 2018-10-18 2022-02-24 Doctor A Company Limited Procedural service matching method

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20170910A1 (es) 2014-11-10 2017-07-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos
CN107109494B (zh) 2014-11-10 2023-10-27 豪夫迈·罗氏有限公司 Il-33介导型疾病的治疗方法和诊断方法
HRP20231015T1 (hr) * 2016-09-23 2023-12-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Upotreba antagonista il-13 u liječenju atopičnog dermatitisa
WO2019097534A1 (en) * 2017-11-15 2019-05-23 Venkata Satya Suresh Attili A device and method to determine the mean/average control of asthma/copd over time and compliance to treatment
CN115605507A (zh) 2020-03-13 2023-01-13 基因泰克公司（Us） 抗白介素-33抗体及其用途
US20220233093A1 (en) * 2021-01-22 2022-07-28 AsthmaTek, Inc. Systems and methods to provide a physician interface that enables a physician to assess asthma of a subject and provide therapeutic feedback
TW202317191A (zh) 2021-07-16 2023-05-01 美商德米拉股份有限公司 用於治療異位性皮炎之il-13抗體
TW202323291A (zh) 2021-08-13 2023-06-16 美商德米拉股份有限公司 用於治療異位性皮膚炎之il-13抗體
WO2023215769A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Dermira, Inc. Il-13 antibodies for the treatment of atopic dermatitis

Family Cites Families (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4424279A (en) 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5196324A (en) * 1989-12-15 1993-03-23 Eli Lilly And Company Monoclonal antibodies reactive with a human atheroma associated antigen
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69334255D1 (de) 1992-02-06 2009-02-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
PT994903E (pt) 1997-06-24 2005-10-31 Genentech Inc Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
JP2002510481A (ja) 1998-04-02 2002-04-09 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体変異体及びその断片
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE458007T1 (de) 1998-04-20 2010-03-15 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2264166B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
US20030180714A1 (en) 1999-12-15 2003-09-25 Genentech, Inc. Shotgun scanning
HUP0300369A2 (hu) 2000-04-11 2003-06-28 Genentech, Inc. Többértékű antitestek és alkalmazásuk
DK2314686T4 (da) 2000-10-06 2023-08-21 Kyowa Kirin Co Ltd Celler, der danner antistofsammensætninger
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
WO2003011878A2 (en) 2001-08-03 2003-02-13 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
WO2003035835A2 (en) 2001-10-25 2003-05-01 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
US20040132140A1 (en) 2002-04-09 2004-07-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
EP1502603A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk AN ANTIBODY COMPOSITION CONTAINING MEDICAMENT FOR PATIENTS WITH Fc gamma RIIIa POLYMORPHISM
CA2481656A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells in which activity of the protein involved in transportation of gdp-fucose is reduced or lost
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
CN103833854B (zh) 2002-12-16 2017-12-12 健泰科生物技术公司 免疫球蛋白变体及其用途
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
KR101224235B1 (ko) 2003-04-11 2013-01-25 메디뮨 엘엘씨 재조합 ｉｌ­９ 항체 및 그의 용도
GB0407315D0 (en) 2003-07-15 2004-05-05 Cambridge Antibody Tech Human antibody molecules
CA2542046A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Fused protein composition
CA2542125A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of .alpha.1,6-fucosyltransferase
SI2380911T1 (en) 2003-11-05 2018-07-31 Roche Glycart Ag ANTIGEN-RELATED PATIENTS WITH INCREASED ATTENTION ON THE RECEPTOR FC AND EFFECTORAL FUNCTION
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
PL1711528T3 (pl) 2003-12-23 2012-11-30 Genentech Inc Leczenie nowotworu nowymi przeciwciałami monoklonalnymi anty-IL13
ES2527292T3 (es) 2004-03-31 2015-01-22 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-TGF-beta humanizados
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US20070048785A1 (en) * 2004-06-09 2007-03-01 Lin Laura L Anti-IL-13 antibodies and complexes
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
SI1791565T1 (sl) 2004-09-23 2016-08-31 Genentech, Inc. Cisteinsko konstruirana protitelesa in konjugati
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
JP2009510046A (ja) 2005-09-30 2009-03-12 メドイミューン・リミテッド インターロイキン−１３抗体組成物
US20070148704A1 (en) 2005-10-06 2007-06-28 Ursula Klause Anti-CCPand antinuclear antibodies in diagnosis of rheumatoid arthritis
CA2625664C (en) 2005-10-21 2016-01-05 Novartis Ag Human antibodies against il13 and therapeutic uses
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
AU2007204879A1 (en) 2006-01-11 2007-07-19 Aerovance, Inc. Methods and compositions for treating asthma in human and non human primates
GB0600488D0 (en) 2006-01-11 2006-02-22 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CN101512008B (zh) 2006-09-08 2015-04-01 艾伯维巴哈马有限公司 白介素-13结合蛋白
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
PE20081610A1 (es) 2007-01-09 2008-12-09 Wyeth Corp Formulaciones de anticuerpos anti-il-13 y usos de los mismos
EP2152310A4 (en) 2007-04-30 2010-05-26 Glaxosmithkline Llc METHODS OF ADMINISTERING ANTI-IL-5 ANTIBODIES
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
WO2009009775A1 (en) 2007-07-11 2009-01-15 Aerovance, Inc. Pharmaceutical polypeptide dry powder aerosol formulation and method of preparation
EP2050764A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-22 sanofi-aventis Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
US20090234202A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-17 Goix Philippe J Method and compositions for highly sensitive detection of molecules
AU2009231733B2 (en) 2008-03-31 2015-12-24 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
KR20110025649A (ko) * 2008-05-05 2011-03-10 노비뮨 에스 에이 항-ｉｌ-１７ａ／ｉｌ-１７ｆ 교차-반응성 항체 및 그의 사용 방법
FR2944448B1 (fr) 2008-12-23 2012-01-13 Adocia Composition pharmaceutique stable comprenant au moins un anticorps monodonal et au moins un polysacharide amphiphile comprenant des substituants derives d'alcools hydrofobes ou d'amines hydrophobes.
TWI666447B (zh) 2010-12-16 2019-07-21 建南德克公司 關於ｔｈ２抑制作用之診斷及治療
AU2013215332A1 (en) 2012-01-31 2014-09-04 Genentech, Inc. Anti-Ig-E M1' antibodies and methods using same
EP2981286A4 (en) 2013-04-05 2016-08-24 Hoffmann La Roche ANTI-IL-4 ANTIBODIES AND BISPECIFIC ANTIBODIES AND USES THEREOF

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220058563A1 (en) * 2018-10-18 2022-02-24 Doctor A Company Limited Procedural service matching method
KR20200111640A (ko) * 2019-03-19 2020-09-29 에스씨엠생명과학 주식회사 단일 클로날 줄기세포를 이용한 아토피 피부염 치료 방법
WO2020190023A3 (ko) * 2019-03-19 2020-12-17 에스씨엠생명과학 주식회사 단일 클로날 줄기세포를 이용한 아토피 피부염 치료 방법

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