TWI666447B - 關於ｔｈ２抑制作用之診斷及治療 - Google Patents

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Abstract

本發明提供診斷及治療與TH2抑制作用相關之病症的方法，該等病症包括(但不限於)哮喘。亦提供選擇或鑑別供用作為TH2路徑抑制劑之某些治療劑治療之患者的方法。

Description

關於TH2抑制作用之診斷及治療
提供診斷及治療與TH2抑制作用相關之病症的方法，該等病症包括(但不限於)哮喘。亦提供選擇或鑑別供用作為TH2路徑抑制劑之某些治療劑治療之患者的方法。
本申請案主張2010年12月16日申請之臨時美國申請案第61/459,760號、2011年3月18日申請之臨時美國申請案第61/465,425號、2011年5月10日申請之臨時美國申請案第61/484,650號、2011年8月2日申請之臨時美國申請案第61/574,485號及2011年11月8日申請之臨時美國申請案第61/557,295號之優先權益，所有該等申請案皆據此以全文引用的方式併入本文中。
序列表
本申請案含有已以ASCII格式提交且據此以全文引用的方式併入本文中之序列表。2011年11月17日創建之該ASCII複本命名為P4569R1.txt且大小為73,108位元組。
哮喘為一種全球發病率遞增之複雜疾病。除其他事件外，亦已報導在哮喘患者之氣管中存在嗜伊紅血球性發炎。該疾病之病理生理學之特徵在於可變氣流阻塞、氣管發炎、黏液分泌過多及上皮下纖維化。在臨床上，患者可呈現咳嗽、喘鳴及呼吸急促。儘管許多患者以當前可用療法適當治療，但一些哮喘患者即使使用當前療法亦繼續患病。
大量用於治療哮喘之藥物已上市或正在開發。用於哮喘療法之眾多目標之一為IL-13。IL-13為一種由活化之T細胞、NKT細胞、嗜鹼性血球、嗜伊紅血球及肥大細胞產生之多效性TH2細胞激素，且已在臨床前模型中明確發現其牽涉於哮喘之發病機制中。儘管在文獻中顯示IL-13、IL-4與哮喘之間存在許多關聯，但許多IL13及/或IL4拮抗劑療法在臨床中產生之結果令人失望。當前，尚無IL-13或IL-4拮抗劑療法批准用於哮喘。此外，中度至重度哮喘患者仍缺乏良好的替代性治療選擇。因此，需要鑑別用於治療哮喘之較佳療法及用於瞭解如何治療哮喘患者之改良方法。
本文中引用之所有參考文獻(包括專利申請案及公開案)皆出於任何目的以全文引用的方式併入本文中。
本申請案提供用於抑制TH2路徑之治療劑及其較佳使用方法。本申請案亦提供用於在視情況用TH2路徑抑制劑治療疾病中使用之較佳疾病診斷方法。
如本文提供之治療及診斷方法可應用於罹患哮喘、嗜伊紅血球性病症、呼吸病症、IL-13介導之病症及/或IgE介導之病症或與彼等病症相關之症狀的患者。可根據本文提供之方法治療罹患哮喘樣症狀之患者，包括尚未診斷出哮喘之患者。
根據一個實施例，根據本文提供之方法治療之患者罹患哮喘、嗜伊紅血球性病症、呼吸病症、IL-13介導之病症及/或IgE介導之病症或與彼等病症相關之症狀，且未患癌症或贅瘤。根據另一實施例，根據本文提供之方法治療之患者正罹患哮喘、嗜伊紅血球性病症、呼吸病症、IL-13介導之病症及/或IgE介導之病症或與彼等病症相關之症狀，且為12歲或12歲以上、18歲或18歲以上或19歲或19歲以上、或介於12-17歲之間或介於18-75歲之間。
在一個實施例中，用本發明之TH2路徑抑制劑治療之患者亦用一種、兩種、三種或三種以上治療劑治療。在一個實施例中，患者為哮喘患者。根據一個實施例，患者用TH2路徑抑制劑及一種、兩種、三種或三種以上治療劑治療，其中除TH2抑制劑以外之至少一種治療劑為皮質類固醇、白三烯(leukotriene)拮抗劑、LABA、皮質類固醇/LABA組合組合物、茶鹼(theophylline)、色甘酸鈉(cromolyn sodium)、奈多羅米鈉(nedocromil sodium)、奧馬佐單抗(omalizumab)、LAMA、MABA、5-脂肪加氧酶活化蛋白(FLAP)抑制劑、或酶PDE-4抑制劑。根據本發明之一個態樣，向診斷為EIP狀態之哮喘患者投與TH2路徑抑制劑，其中診斷包含使用EID分析(單獨或與其他分析組合)以確定EIP狀態。在另一實施例中，哮喘患者在治療之前用皮質類固醇未獲得控制。在另一實施例中，哮喘患者亦正用第二控制劑治療。在一個實施例中，第二控制劑為皮質類固醇、LABA或白三烯拮抗劑。在另一實施例中，哮喘患者正罹患中度至重度哮喘。因此，在一個實施例中，欲用TH2路徑抑制劑治療之患者為中度至重度哮喘患者，其在用TH2路徑抑制劑治療之前用皮質類固醇未獲得控制，且接著用TH2路徑抑制劑及一種、兩種、三種或三種以上控制劑治療。在一個實施例中，至少一種控制劑為皮質類固醇。在另一實施例中，此患者用TH2路徑抑制劑、皮質類固醇及另一控制劑治療。在另一實施例中，患者正罹患輕度哮喘且未用皮質類固醇治療。應瞭解治療劑相較於TH2抑制劑可具有不同治療週期，且因此相較於TH2抑制劑可作為患者治療之一部分在不同時間投與。因此，根據一個實施例，本發明之一種治療方法包含向患者投與TH2路徑抑制劑及視情況投與至少一種、兩種或三種其他治療劑之步驟。在一個實施例中，TH2路徑抑制劑與另一治療劑一起存在於組合物中。在另一實施例中，TH2路徑抑制劑不與另一治療劑一起存在於組合物中。
根據另一實施例，本發明包含一種治療哮喘之方法，其包含以均一劑量投與包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗IL-13抗體、或包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列。在一個實施例中，包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗IL13抗體係藉由皮下注射或靜脈內注射以選自每2週、每3週及每4週之時間頻率以125-1000 mg均一劑量(亦即與體重無關)投與。在一個實施例中，包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列，係藉由皮下注射或靜脈內注射以選自每2週、每3週及每4週之時間頻率以125-1000 mg均一劑量(亦即與體重無關)投與。在一個實施例中，抗IL13抗體為來金珠單抗(lebrikizumab)，其係藉由皮下注射或靜脈內注射以選自每2週、每3週及每4週之時間頻率以125-1000 mg均一劑量(亦即與體重無關)投與。在另一實施例中，使用用以確定EIP狀態之總骨母細胞特異性因子-2分析(Total Periostin Assay)診斷患者具有EIP狀態。
根據另一實施例，包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗體以足以降低患者隨時間之惡化率或改良FEV1之治療有效量投與以治療哮喘。在另一實施例中，本發明包含一種治療哮喘之方法，其包含以37.5 mg之均一劑量(亦即與體重無關)或125 mg之均一劑量或250 mg之均一劑量投與包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗IL-13抗體、或包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列。在某些實施例中，劑量係藉由皮下注射每4週投與一次持續一段時期。在某些實施例中，時期為6個月、一年、兩年、五年、十年、15年、20年或患者終生。在某些實施例中，哮喘為重度哮喘且患者用吸入皮質類固醇加第二控制劑藥物未獲得足夠控制或未獲得控制。在另一實施例中，使用用以確定EIP狀態之總骨母細胞特異性因子-2分析診斷患者具有EIP狀態且選擇該患者用於用如上所述之抗IL13抗體治療。在另一實施例中，方法包含用如上所述之抗IL13抗體治療哮喘患者，其中先前使用用以確定EIP狀態之總骨母細胞特異性因子-2分析診斷該患者具有EIP狀態。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為18歲或18歲以上。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為12至17歲且抗IL13係以250 mg之均一劑量或125 mg之均一劑量投與。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為6至11歲且抗IL13抗體係以125 mg之均一劑量或62.5 mg之均一劑量投與。
本發明提供一種骨母細胞特異性因子-2分析。在一個實施例中，骨母細胞特異性因子-2分析為總骨母細胞特異性因子-2分析。在另一實施例中，總骨母細胞特異性因子-2分析包含使用本發明之一或多種抗骨母細胞特異性因子-2抗體以結合自患者獲得之生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2。在本發明之另一實施例中，生物樣品為自全血獲得之血清。在一個實施例中，生物樣品係自哮喘患者獲得。在另一實施例中，哮喘患者為中度至重度哮喘患者。在另一實施例中，中度至重度哮喘患者用皮質類固醇未獲得控制且視情況正用一種、兩種、三種或三種以上控制劑治療。
本文中揭示之抗骨母細胞特異性因子-2分析及抗體分析可用於骨母細胞特異性因子-2升高之其他疾病，諸如特發性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)、非特異性間質性肺炎(non-specific interstitial pneumonia，NSIP)及癌症。
本發明提供一種用於治療患者之哮喘或呼吸病症的作為TH2路徑抑制劑之治療劑，其中該患者之總骨母細胞特異性因子-2之表現量升高。在一個實施例中，TH2路徑中之抑制目標係選自：IL-9、IL-5、IL-13、IL-4、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體、IL-4受體α、IL-13受體α1及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2、FcεRI及FcεRII/CD23(IgE之受體)。在一個實施例中，欲根據本發明方法治療之患者正罹患輕度至重度哮喘，視情況中度至重度哮喘，且其哮喘用皮質類固醇未獲得控制。在另一實施例中，在E4分析中，用皮質類固醇未獲得控制之中度至重度哮喘患者之總骨母細胞特異性因子-2的血清含量大於20 ng/ml、21 ng/ml、22 ng/ml、23 ng/ml、24 ng/ml或25 ng/ml。在另一實施例中，欲治療之患者之CEA、TARC(CCL17)及MCP-4(CCL13)mRNA或蛋白質中的任一者、組合或全部之表現量另外升高。在另一實施例中，除如本文所述骨母細胞特異性因子-2之表現量升高外，欲治療之患者之FENO含量亦大於21 ppb或大於35 ppb。
本發明提供結合TH2誘導之哮喘路徑目標之治療劑的用途，其係用於製備用於治療患有哮喘或呼吸病症之患者之藥劑，其中該患者之總骨母細胞特異性因子-2表現量升高，且其中該目標為IL-9、IL-5、IL-13、IL-4、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體、IL-4受體α、IL-13受體α1及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2、FcεRI或FcεRII/CD23(IgE之受體)。在一個實施例中，患者為EIP。根據一個實施例，藉由使用本發明之分析確定患者具有EIP。在另一實施例中，分析為總骨母細胞特異性因子-2分析。在另一實施例中，該分析量測自患者獲得之生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的含量。在一個實施例中，該分析量測自患者獲得之血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2蛋白質的含量。
本發明包含一種用於診斷患者之哮喘次型之套組或製品，其包含：
(1)測定自該患者獲得之血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的含量及視情況選自TARC及MCP-4之一或多種蛋白質的蛋白質表現量；及
(2)量測血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2及視情況TARC及/或MCP-4蛋白質之表現量的說明書，其中該等蛋白質中之任一者、組合或全部之表現量升高指示該哮喘次型。
在另一實施例中，提供鑑別可能對用TH2路徑抑制劑治療起反應之哮喘患者或呼吸病症患者之方法。在某些實施例中，方法包含使用嗜伊紅血球性發炎診斷分析(Eosinophilic Inflammation Diagnostic Assay；EIDA)確定患者是否為嗜伊紅血球性發炎陽性(Eosinophilic Inflammation Positive；EIP)，其中EIP狀態指示患者可能對用TH2路徑抑制劑治療起反應。
在另一實施例中，提供鑑別可能遭受重度惡化之哮喘患者或呼吸病症患者之方法。在某些實施例中，方法包含使用EIDA確定患者是否為EIP，其中EIP狀態指示患者可能遭受重度惡化增加。
在另一實施例中，提供鑑別對用TH2路徑抑制劑治療起反應之可能性較低之哮喘患者或呼吸病症患者的方法。在某些實施例中，方法包含使用EIDA確定患者是否為嗜伊紅血球性發炎陰性(Eosinophilic Inflammation Negative；EIN)，其中EIN狀態指示患者對用TH2路徑抑制劑治療起反應之可能性較低。
在另一實施例中，提供監測用TH2路徑抑制劑治療之哮喘患者之方法。在某些實施例中，方法包含使用EIDA確定患者為EIP抑或EIN。在一個實施例中，方法包含確定TH2路徑抑制劑之治療方案。在一個實施例中，EIP之確定指示繼續用TH2路徑抑制劑療法且EIN之確定指示停止TH2路徑抑制劑療法。
在某些實施例中，上述方法中所用之EIDA包含以下步驟：(a)測定自哮喘患者獲得之樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的量；(b)比較步驟(a)中測定之總骨母細胞特異性因子-2之量與參照量；及(c)基於步驟(b)中獲得之比較結果將該患者分層至反應者或非反應者類別中。在某些實施例中，總骨母細胞特異性因子-2為血清骨母細胞特異性因子-2，該骨母細胞特異性因子-2係使用免疫分析進行量測。在某些實施例中，免疫分析為夾心式免疫分析。在某些實施例中，夾心式免疫分析係由Elecsys分析器(Roche Diagnostics GmbH)執行。在某些實施例中，夾心式免疫分析為E4分析。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用E4分析時，EIP之參照量為23 ng/ml以上。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用Elecsys分析器時，EIP之參照量為50 ng/ml或50 ng/ml以上。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用E4分析時，EIN之參照量為21 ng/ml或21 ng/ml以下。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用Elecsys分析器時，EIN之參照量為48 ng/ml或48 ng/ml以下。
在某些實施例中，根據上述方法之患者正罹患中度至重度哮喘。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用皮質類固醇未獲得控制。在某些實施例中，皮質類固醇為吸入皮質類固醇。在某些實施例中，吸入皮質類固醇為Qvar、Pulmicort、Symbicort、Aerobid、Flovent、Flonase、Advair或Azmacort。在一個實施例中，患者亦正用第二控制劑治療。在某些實施例中，第二控制劑為長效支氣管擴張劑(LABD)。在某些實施例中，LABD為長效β-2促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效蕈毒鹼拮抗劑(LAMA)、茶鹼或經口皮質類固醇(OCS)。在某些實施例中，LABD為Symbicort、Advair、Brovana、Foradil、PerforomistTM或Serevent。
在某些實施例中，根據以上方法之TH2路徑抑制劑會抑制目標ITK、BTK、IL-9(例如MEDI-528)、IL-5(例如美泊珠單抗(Mepolizumab)，CAS編號196078-29-2；瑞利珠單抗(resilizumab))、IL-13(例如IMA-026、IMA-638(亦稱為安蘆珠單抗(anrukinzumab)，INN編號910649-32-0；QAX-576；IL4/IL13捕捉劑)、曲洛努單抗(tralokinumab)(亦稱為CAT-354，CAS編號1044515-88-9)；AER-001、ABT-308(亦稱為人類化13C5.5抗體)、IL-4(例如AER-001、IL4/IL13捕捉劑)、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE(例如XOLAIR、QGE-031；MEDI-4212)；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體(例如MEDI-563(本拉珠單抗(benralizumab)，CAS編號1044511-01-4)、IL-4受體α(例如AMG-317、AIR-645)、IL-13受體α1(例如R-1671)及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2(例如AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095、ACT129968)、FcεRI、FcεRII/CD23(IgE之受體)、Flap(例如GSK2190915)、Syk激酶(R-343、PF3526299)；CCR4(AMG-761)、TLR9(QAX-935)，或為CCR3、IL5、IL3、GM-CSF之多細胞激素抑制劑(例如TPIASM8)。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IL13/IL4路徑抑制劑或抗IgE結合劑。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗抗IL-13抗體。在某些實施例中，抗IL-13抗體為包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗體、包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列，或來金珠單抗。在某些實施例中，抗IL-13抗體為亦結合IL-4之雙特異性抗體。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IgE抗體。在某些實施例中，抗IgE抗體為(i) XOLAIR抗體、(ii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈為SEQ ID NO: 24且該可變輕鏈為SEQ ID NO: 25、或(iii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈進一步包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且該可變輕鏈進一步包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3且：(a)該HVR-H1為SEQ ID NO: 24之殘基26-35[GFTFSDYGIA]；(b)該HVR-H2為SEQ ID NO: 24之殘基49-66[AFISDLAYTIYYADTVTG]；(c)該HVR-H3為SEQ ID NO: 24之殘基97-106[ARDNWDAMDY]；(d)該HVR-L1為SEQ ID NO: 25之殘基24-39[RSSQSLVHNNANTYLH]；(e)該HVR-L2為SEQ ID NO: 25之殘基55-61[KVSNRFS]；(f)該HVR-L3為SEQ ID NO: 25之殘基94-102[SQNTLVPWT]。
在另一態樣中，使用用於偵測自哮喘患者獲得之樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的套組來將哮喘患者分層/分類為可能之反應者及非反應者以便用TH2路徑抑制劑進行治療性治療。在某些實施例中，總骨母細胞特異性因子-2係使用EIDA進行偵測，該EIDA包含以下步驟：(a)測定自哮喘患者獲得之樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的量；(b)比較步驟(a)中測定之總骨母細胞特異性因子-2之量與參照量；及(c)基於步驟(b)中獲得之比較結果將該患者分層至反應者或非反應者類別中。在某些實施例中，總骨母細胞特異性因子-2為血清骨母細胞特異性因子-2，該骨母細胞特異性因子-2係使用免疫分析進行量測。在某些實施例中，免疫分析為夾心式免疫分析。在某些實施例中，夾心式免疫分析係由Elecsys分析器(Roche Diagnostics GmbH)執行。在某些實施例中，夾心式免疫分析為E4分析。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用E4分析時，EIP之參照量為23 ng/ml以上。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用Elecsys分析器時，EIP之參照量為50 ng/ml或50 ng/ml以上。
在某些實施例中，根據以上段落中描述之用途之患者正罹患中度至重度哮喘。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用皮質類固醇未獲得控制。在某些實施例中，皮質類固醇為吸入皮質類固醇。在某些實施例中，吸入皮質類固醇為Qvar、Pulmicort、Symbicort、Aerobid、Flovent、Flonase、Advair或Azmacort。在一個實施例中，患者亦正用第二控制劑治療。在某些實施例中，第二控制劑為長效支氣管擴張劑(LABD)。在某些實施例中，LABD為長效β-2促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效蕈毒鹼拮抗劑(LAMA)、茶鹼或經口皮質類固醇(OCS)。在某些實施例中，LABD為Symbicort、Advair、Brovana、Foradil、PerforomistTM或Serevent。
在某些實施例中，根據以上用途之TH2路徑抑制劑會抑制目標ITK、BTK、IL-9(例如MEDI-528)、IL-5(例如美泊珠單抗，CAS編號196078-29-2；瑞利珠單抗)、IL-13(例如IMA-026、IMA-638(亦稱為安蘆珠單抗，INN編號910649-32-0；QAX-576；IL4/IL13捕捉劑)、曲洛努單抗(亦稱為CAT-354，CAS編號1044515-88-9)；AER-001、ABT-308(亦稱為人類化13C5.5抗體)、IL-4(例如AER-001、IL4/IL13捕捉劑)、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE(例如XOLAIR、QGE-031；MEDI-4212)；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體(例如MEDI-563(本拉珠單抗，CAS編號1044511-01-4)、IL-4受體α(例如AMG-317、AIR-645)、IL-13受體α1(例如R-1671)及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2(例如AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095、ACT129968)、FcεRI、FcεRII/CD23(IgE之受體)、Flap(例如GSK2190915)、Syk激酶(R-343、PF3526299)；CCR4(AMG-761)、TLR9(QAX-935)，或為CCR3、IL5、IL3、GM-CSF之多細胞激素抑制劑(例如TPIASM8)。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IL13/IL4路徑抑制劑或抗IgE結合劑。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗抗IL-13抗體。在某些實施例中，抗IL-13抗體為包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗體、包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列，或來金珠單抗。在某些實施例中，抗IL-13抗體為亦結合IL-4之雙特異性抗體。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IgE抗體。在某些實施例中，抗IgE抗體為(i)XOLAIR抗體、(ii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1，抗體，其中該可變重鏈為SEQ ID NO: 24且該可變輕鏈為SEQ ID NO: 25、或(iii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈進一步包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且該可變輕鏈進一步包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3且:(a)該HVR-H1為SEQ ID NO: 24之殘基26-35[GFTFSDYGIA]；(b)該HVR-H2為SEQ ID NO: 24之殘基49-66[AFISDLAYTIYYADTVTG]；(c)該HVR-H3為SEQ ID NO: 24之殘基97-106[ARDNWDAMDY]；(d)該HVR-L1為SEQ ID NO: 25之殘基24-39[RSSQSLVHNNANTYLH]；(e)該HVR-L2為SEQ ID NO: 25之殘基55-61[KVSNRFS]；(f)該HVR-L3為SEQ ID NO: 25之殘基94-102[SQNTLVPWT]。
在另一態樣中，提供用於量測自哮喘患者或罹患呼吸病症之患者獲得之生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的套組，其中該套組包含與第二核酸分子雜交之第一核酸分子，其中該第二核酸分子編碼總骨母細胞特異性因子-2或其一部分，或該套組包含結合總骨母細胞特異性因子-2之抗體。在某些實施例中，套組包含含有描述以上提供之用途之資訊的藥品說明書。
在另一態樣中，提供用於診斷患者之哮喘次型之套組，該等套組包含：(1)測定自該患者獲得之血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的含量及視情況該血清樣品中一或多種選自TARC及MCP-4之蛋白質的蛋白質表現量；及(2)用於量測該血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2及視情況TARC及/或MCP-4之含量的說明書，其中該等蛋白質中之任一者、組合或全部之表現量升高指示該哮喘次型。在某些實施例中，套組進一步包含用於確定哮喘患者或呼吸病症患者為EIP抑或EIN之藥品說明書。在某些實施例中，套組進一步包含用於確定哮喘患者是否可能對TH2路徑抑制劑起反應之藥品說明書。在某些實施例中，套組進一步包含含有描述以上提供之任何用途之資訊的藥品說明書。在某些實施例中，套組進一步包含用以容納生物樣品之空容器。在某些實施例中，套組包含用於在測定總骨母細胞特異性因子-2含量之免疫分析中使用之兩種抗骨母細胞特異性因子-2抗體。
在另一態樣中，治療哮喘或呼吸病症之方法包含以125-500 mg均一劑量每2-8週向罹患哮喘或呼吸病症之患者投與包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL-13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列。在某些實施例中，患者正罹患中度至重度哮喘。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用皮質類固醇未獲得控制。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用吸入皮質類固醇未獲得控制。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用總每日劑量至少500 mcg之丙酸氟替卡松(fluticasone propionate，FP)未獲得控制。在某些實施例中，皮質類固醇為吸入皮質類固醇，其為Qvar、Pulmicort、Symbicort、Aerobid、Flovent、Flonase、Advair、Azmacort。在某些實施例中，患者正用第二控制劑治療。在某些實施例中，患者在用抗IL13抗體治療期間繼續用皮質類固醇，視情況吸入皮質類固醇治療。在某些實施例中，患者在用抗IL-13抗體治療期間繼續用第二控制劑治療。在某些實施例中，第二控制劑為長效支氣管擴張劑。在某些實施例中，長效支氣管擴張劑為LABA、LTRA、LAMA、茶鹼或OCS。在某些實施例中，患者已確定為EIP。在某些實施例中，患者已使用上述套組確定為EIP。在某些實施例中，患者已使用如上所述之方法確定為EIP。在某些實施例中，每四週向患者投與125 mg或250 mg之均一劑量。在某些實施例中，患者為18歲或18歲以上，或患者為12-17歲或12歲及12歲以上，或患者為6-11歲或6歲及6歲以上。
在某些實施例中，抗IL-13抗體係皮下投與。在某些實施例中，抗IL-13抗體係使用預填充注射器或自動注射器裝置投與。在某些實施例中，欲根據以上方法治療之哮喘患者為18歲或18歲以上且具有之血清骨母細胞特異性因子-250 ng/mL且用吸入皮質類固醇及第二控制劑藥物未獲得控制。在某些實施例中，血清骨母細胞特異性因子-2係使用免疫分析進行量測，該免疫分析係選自Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析及E4分析。在某些實施例中，血清骨母細胞特異性因子-2係使用如上所述之套組進行量測。在某些實施例中，抗IL-13抗體為包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗體。在某些實施例中，抗IL-13抗體為來金珠單抗。在某些實施例中，欲根據上述方法治療之哮喘患者為12歲及12歲以上且用吸入皮質類固醇及第二控制劑藥物未獲得控制。
在另一態樣中，提供治療哮喘或呼吸疾病之方法，其包含向患者投與治療有效量之來金珠單抗。在某些實施例中，治療使得相較於用來金珠單抗治療之前，FEV1獲得大於5%之相對改良。在某些實施例中，相較於用來金珠單抗治療之前，FEV1之相對改良大於8%。在某些實施例中，治療使得重度惡化減少。
在另一態樣中，提供治療罹患哮喘或呼吸疾病之患者之方法，其包含向診斷為EIP之該患者投與TH2路徑抑制劑。在某些實施例中，方法包含使用總骨母細胞特異性因子-2分析診斷患者為EIP之步驟。在某些實施例中，方法進一步包含若患者確定為EIP，則用TH2路徑抑制劑再治療患者之步驟。在某些實施例中，使用來自患者之血清確定患者是否為EIP。
在某些實施例中，根據以上方法確定之EIP狀態使用EIDA，其包含以下步驟：(a)測定自患者獲得之樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的量；(b)比較步驟(a)中測定之總骨母細胞特異性因子-2之量與參照量；及(c)基於步驟(b)中獲得之比較結果將該患者分層至反應者或非反應者類別中。在某些實施例中，總骨母細胞特異性因子-2為血清骨母細胞特異性因子-2，該骨母細胞特異性因子-2係使用免疫分析進行量測。在某些實施例中，免疫分析為夾心式免疫分析。在某些實施例中，夾心式免疫分析係由Elecsys分析器(Roche Diagnostics GmbH)執行。在某些實施例中，夾心式免疫分析為E4分析。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用E4分析時，EIP之參照量為23 ng/ml以上。在一個實施例中，當在步驟(a)中使用Elecsys分析器時，EIP之參照量為50 ng/ml或50 ng/ml以上。
在某些實施例中，根據上述方法之患者正罹患中度至重度哮喘。在某些實施例中，哮喘或呼吸病症用皮質類固醇未獲得控制。在某些實施例中，皮質類固醇為吸入皮質類固醇。在某些實施例中，吸入皮質類固醇為Qvar、Pulmicort、Symbicort、Aerobid、Flovent、Flonase、Advair或Azmacort。在一個實施例中，患者亦正用第二控制劑治療。在某些實施例中，第二控制劑為長效支氣管擴張劑(LABD)。在某些實施例中，LABD為長效β-2促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效蕈毒鹼拮抗劑(LAMA)、茶鹼或經口皮質類固醇(OCS)。在某些實施例中，LABD為Symbicort、Advair、Brovana、Foradil、PerforomistTM或Serevent。
在某些實施例中，根據以上方法之TH2路徑抑制劑會抑制目標ITK、BTK、IL-9(例如MEDI-528)、IL-5(例如美泊珠單抗，CAS編號196078-29-2；瑞利珠單抗)、IL-13(例如IMA-026、IMA-638(亦稱為安蘆珠單抗(anrukinzumab)，INN編號910649-32-0；QAX-576；IL4/IL13捕捉劑)、曲洛努單抗(亦稱為CAT-354，CAS編號1044515-88-9)；AER-001、ABT-308(亦稱為人類化13C5.5抗體)、IL-4(例如AER-001、IL4/IL13捕捉劑)、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE(例如XOLAIR、QGE-031；MEDI-4212)；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體(例如MEDI-563(本拉珠單抗，CAS編號1044511-01-4)、IL-4受體α(例如AMG-317、AIR-645)、IL-13受體α1(例如R-1671)及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2(例如AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095、ACT129968)、FcεRI、FcεRII/CD23(IgE之受體)、Flap(例如GSK2190915)、Syk激酶(R-343、PF3526299)；CCR4(AMG-761)、TLR9(QAX-935)，或為CCR3、IL5、IL3、GM-CSF之多細胞激素抑制劑(例如TPIASM8)。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IL13/IL4路徑抑制劑或抗IgE結合劑。在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗抗IL-13抗體。在某些實施例中，抗IL-13抗體為包含含有SEQ ID NO: 9之VH及含有SEQ ID NO: 10之VL的抗體、包含HVRH1、HVRH2、HVRH3、HVRL1、HVRL2及HVRL3之抗IL13抗體，各別HVR具有SEQ ID NO.: 11、SEQ ID NO.: 12、SEQ ID NO.: 13、SEQ ID NO.: 14、SEQ ID NO.: 15及SEQ ID NO.: 16之胺基酸序列，或來金珠單抗。在某些實施例中，抗IL-13抗體為亦結合IL-4之雙特異性抗體。
在某些實施例中，TH2路徑抑制劑為抗IgE抗體。在某些實施例中，抗IgE抗體為(i) XOLAIR抗體、(ii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈為SEQ ID NO: 24且該可變輕鏈為SEQ ID NO: 25、或(iii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈進一步包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且該可變輕鏈進一步包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3且：(a)該HVR-H1為SEQ ID NO: 24之殘基26-35[GFTFSDYGIA]；(b)該HVR-H2為SEQ ID NO: 24之殘基49-66[AFISDLAYTIYYADTVTG]；(c)該HVR-H3為SEQ ID NO: 24之殘基97-106[ARDNWDAMDY]；(d)該HVR-L1為SEQ ID NO: 25之殘基24-39[RSSQSLVHNNANTYLH]；(e)該HVR-L2為SEQ ID NO: 25之殘基55-61[KVSNRFS]；(f)該HVR-L3為SEQ ID NO: 25之殘基94-102[SQNTLVPWT]。
在另一態樣中，提供評估患者中之與用來金珠單抗治療哮喘相關之不良事件的方法。在某些實施例中，方法包含監測為惡化、社區型感染肺炎(community-acquiredpneumonia)、全身性過敏反應、肌肉骨骼痛、肌肉骨骼病症、結締組織疼痛或結締組織病症之事件之數目及/或嚴重性的步驟。在某些實施例中，肌肉骨骼或結締組織病症為關節痛、背痛、肢端疼痛、肌痛、頸痛、關節炎、骨發育異常、滑囊炎(bursitis)、肋軟骨炎(costochondritis)、外生骨瘤、側腹疼痛、肌肉骨骼性胸痛、肌肉骨骼痛、頜疼痛或腱炎(tendinitis)。
在另一態樣中，提供抗骨母細胞特異性因子-2抗體。在某些實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 1之HVR序列及SEQ ID NO: 2之HVR序列。在某些實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之序列。在某些實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 3之HVR序列及SEQ ID NO: 4之HVR序列。在某些實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之序列。在某些實施例中，提供包含使用以上抗骨母細胞特異性因子-2抗體之總骨母細胞特異性因子-2分析。
除非另外定義，否則本文中使用之技術及科學術語具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同之含義。Singleton等人，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology第2版，J. Wiley & Sons(New York,N.Y. 1994)及March,Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms and Structure第4版，John Wiley & Sons(New York,N.Y.1992)對熟習此項技術者提供本申請案中使用之許多術語的一般指南。
某些定義
出於說明本說明書之目的，以下定義將適用，且只要適當時，以單數使用之術語亦將包括複數，且反之亦然。若以下闡述之任何定義與以引用的方式併入本文中之任何文獻相悖，則將以以下闡述之定義為準。
除非上下文中另外明確規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。因此，舉例而言，提及「一種蛋白質」或一種「抗體」分別包括複數種蛋白質或抗體；提及「一種細胞」包括細胞之混合物，及其類似表述。
如本文所用之術語「總骨母細胞特異性因子-2」至少指骨母細胞特異性因子-2之同功異型物1、2、3及4。根據NCBI資料庫，此項技術中已知人類骨母細胞特異性因子-2同功異型物1、2、3及4分別包含下列胺基酸序列：NP_006466.2(SEQ ID NO: 19)、NP_001129406.1(SEQ ID NO: 20)、NP_001129407.1(SEQ ID NO: 21)及NP_001129408.1(SEQ ID NO: 22)。此外，申請人已偵測到骨母細胞特異性因子-2之另一形式。此新穎同功異型物在本文中稱為「同功異型物5」且已經部分定序。同功異型物5包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列。在一個實施例中，骨母細胞特異性因子-2之同功異型物為人類骨母細胞特異性因子-2。在另一實施例中，除同功異型物1-4之外，術語總骨母細胞特異性因子-2亦包括人類骨母細胞特異性因子-2之同功異型物5。在另一實施例中，總骨母細胞特異性因子-2為總血清骨母細胞特異性因子-2或總血漿骨母細胞特異性因子-2(亦即分別為來自自全血獲得之血清樣品或自全血獲得之血漿樣品之總骨母細胞特異性因子-2，該全血係自患者獲得)。
術語「總骨母細胞特異性因子-2分析」係指量測生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2之含量的分析。在一個實施例中，總骨母細胞特異性因子-2含量係使用抗骨母細胞特異性因子-2抗體進行量測。在另一實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體為本文所述之抗骨母細胞特異性因子-2抗體。在另一實例中，總骨母細胞特異性因子-2含量係使用編碼骨母細胞特異性因子-2同功異型物1-4之mRNA之一或多種反義核酸序列進行量測。在另一實例中，總骨母細胞特異性因子-2分析為實例4中所述之分析(「實例4分析」或「E4分析」)。在一個實施例中，總骨母細胞特異性因子-2分析包含使用(1)包含序列SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之抗體(「25D4」抗體)及/或包含序列SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之抗體(「23B9」抗體)以結合生物樣品中之骨母細胞特異性因子-2，(2)包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之可變區序列的抗體及/或包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之可變區序列的抗體以結合生物樣品中之骨母細胞特異性因子-2，(3)包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之HVR序列的抗體及/或包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列的抗體以結合生物樣品中之骨母細胞特異性因子-2，(4)包含與SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之HVR序列95%或95%以上一致之HVR序列的抗體及/或包含與SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列95%或95%以上一致之HVR序列的抗體。
如本文所用，縮寫為「EIDA」之「嗜伊紅血球性發炎診斷分析」為藉由量測來自患者之生物樣品中之嗜伊紅血球性發炎標記的含量來診斷在體內具有嗜伊紅血球性發炎或在體內具有TH2路徑發炎之患者之分析，其中該標記係選自由以下組成之群:骨母細胞特異性因子-2 mRNA含量或骨母細胞特異性因子-2蛋白質含量、iNOS mRNA含量或iNOS蛋白質含量或FENO含量、或CCL26 mRNA或CCL26蛋白質含量、絲胺酸蛋白酶抑制劑B2(serpinB2)mRNA含量或絲胺酸蛋白酶抑制劑B2蛋白質含量、絲胺酸蛋白酶抑制劑B4 mRNA含量或絲胺酸蛋白酶抑制劑B4蛋白質含量、CST1 mRNA含量或CST1蛋白質含量、CST2 mRNA含量或CST2蛋白質含量、CST4 mRNA含量或CST4蛋白質含量。在一個實施例中，量測總骨母細胞特異性因子-2血清或血漿含量。分析之高度有效實例包括(但不限於)以下實例4中所述之實例(亦稱為E4分析)，或量測生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2之血清或血漿含量的其他骨母細胞特異性因子-2分析。可進行兩種或兩種以上分析以對患者之嗜伊紅血球性發炎作出診斷。在一個實施例中，EID分析包含總骨母細胞特異性因子-2分析與FENO分析組合。在另一實施例中，EID分析包含總骨母細胞特異性因子-2分析+/-FENO含量分析與量測下列標記中之任一者或組合之含量的分析組合：CST1、CST2、CCL26、CLCA1、PRR4、PRB4、絲胺酸蛋白酶抑制劑B2、CEACAM5、iNOS、絲胺酸蛋白酶抑制劑B4、CST4及絲胺酸蛋白酶抑制劑B10。
術語「骨母細胞特異性因子-2抗體」或「抗骨母細胞特異性因子-2抗體」係指結合骨母細胞特異性因子-2之同功異型物之抗體。在一個實施例中，骨母細胞特異性因子-2為人類骨母細胞特異性因子-2。在一個實施例中，抗體包含序列SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2(「25D4」抗體)或包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之序列(「23B9」抗體)。在另一實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之可變區序列或包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之可變區序列。在另一實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之HVR序列或SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列。在另一實施例中，抗體包含與SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之HVR序列95%或95%以上一致的HVR序列及/或抗體包含與SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列95%或95%以上一致的HVR序列。
嗜伊紅血球性發炎陽性(EIP)患者或狀態：係指在已使用E4分析(實例4)分別測試來自某一患者之血清或血漿樣品之血清或血漿骨母細胞特異性因子-2含量之情況下，彼患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量為20 ng/ml或20 ng/ml以上(嗜伊紅血球陽性)。根據一個實施例，EIP患者之血清或血漿中之總骨母細胞特異性因子-2含量可選自由以下組成之群：21 ng/ml或21 ng/ml以上、22 ng/ml或22 ng/ml以上、23 ng/ml或23 ng/ml以上、24 ng/ml或24 ng/ml以上、25 ng/ml或25 ng/ml以上、26 ng/ml或26 ng/ml以上、27 ng/ml或27 ng/ml以上、28 ng/ml或28 ng/ml以上、29 ng/ml或29 ng/ml以上、30 ng/ml或30 ng/ml以上、31 ng/ml或31 ng/ml以上、32 ng/ml或32 ng/ml以上、33 ng/ml或33 ng/ml以上、34 ng/ml或34 ng/ml以上、35 ng/ml或35 ng/ml以上、36 ng/ml或36 ng/ml以上、37 ng/ml或37 ng/ml以上、38 ng/ml或38 ng/ml以上、39 ng/ml或39 ng/ml以上、40 ng/ml或40 ng/ml以上、41 ng/ml或41 ng/ml以上、42 ng/ml或42 ng/ml以上、43 ng/ml或43 ng/ml以上、44 ng/ml或44 ng/ml以上、45 ng/ml或45 ng/ml以上、46 ng/ml或46 ng/ml以上、47 ng/ml或47 ng/ml以上、48 ng/ml或48 ng/ml以上、49 ng/ml或49 ng/ml以上、50 ng/ml或50 ng/ml以上、51 ng/ml或51 ng/ml以上、52 ng/ml或52 ng/ml以上、53 ng/ml或53 ng/ml以上、54 ng/ml或54 ng/ml以上、55 ng/ml或55 ng/ml以上、56 ng/ml或56 ng/ml以上、57 ng/ml或57 ng/ml以上、58 ng/ml或58 ng/ml以上、59 ng/ml或59 ng/ml以上、60 ng/ml或60 ng/ml以上、61 ng/ml或61 ng/ml以上、62 ng/ml或62 ng/ml以上、63 ng/ml或63 ng/ml以上、64 ng/ml或64 ng/ml以上、65 ng/ml或65 ng/ml以上、66 ng/ml或66 ng/ml以上、67 ng/ml或67 ng/ml以上、68 ng/ml或68 ng/ml以上、69 ng/ml或69 ng/ml以上及70 ng/ml或70 ng/ml以上。應瞭解，EIP狀態表示患者之狀況且與用於確定該狀態之分析之類型無關。因此，可使用或開發其他嗜伊紅血球性發炎診斷分析，包括其他骨母細胞特異性因子-2分析(諸如實例7中所示之Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析)以用於測試嗜伊紅血球性發炎陽性狀態。
嗜伊紅血球性發炎陰性(EIN)患者或狀態係指在已使用E4分析分別測試來自某一患者之血清或血漿樣品之血清或血漿骨母細胞特異性因子-2含量之情況下，彼患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量小於20 ng/ml。應瞭解，EIN狀態表示患者之狀況且與用於確定該狀態之分析之類型無關。因此，可使用或開發其他嗜伊紅血球性發炎診斷分析，包括其他骨母細胞特異性因子-2分析(諸如實例7中所示之Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析)以用於測試嗜伊紅血球性發炎陰性狀態。
如本文所用之術語「生物樣品」包括(但不限於)血液、血清、血漿、痰、組織活檢體(例如肺樣品)及鼻樣品，包括鼻拭物(nasal swabs)或鼻息肉(nasal polyps)。
FENO分析係指量測FENO(呼出氧化氮分數(fractional exhaled nitric oxide))含量之分析。此等量可根據由美國胸科學會(American Thoracic Society，ATS)在2005年出版之準則使用例如手持式攜帶型裝置NIOX MINO(Aerocrine,Solna,Sweden)進行評估。FENO可以其他類似方式，例如FeNO或FENO進行記錄，且應瞭解所有此等類似變化形式皆具有相同含義。
欲根據本文提供之方法測試或治療之患者之年齡包括：所有年齡。在一個實施例中，年齡為18歲以上。在另一實施例中，年齡為12歲以上。在另一實施例中，年齡為2歲以上。在一個實施例中，年齡為18-75歲、12-75歲或2-75歲。
哮喘為一種特徵在於症狀可變且具有復發性、可逆氣流阻塞(例如用支氣管擴張藥治療)及可能與或可能不與潛伏性發炎相關之支氣管過度反應的複雜病症。哮喘之實例包括阿司匹靈(aspirin)敏感性/惡化哮喘、異位性哮喘、重度哮喘、輕度哮喘、中度至重度哮喘、未用皮質類固醇治療之哮喘、慢性哮喘、皮質類固醇抗性哮喘、皮質類固醇難治性哮喘、新近診斷及未治療之哮喘、歸因於吸菸之哮喘、用皮質類固醇未獲得控制之哮喘及如J Allergy Clin Immunol(2010) 126(5):926-938中所提及之其他哮喘。
嗜伊紅血球性病症意謂：與過度嗜伊紅血球數目相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內嗜伊紅血球之局部或全身含量或活性而顯現。與過度嗜伊紅血球數目或活性相關之病症包括(但不限於)哮喘(包括阿司匹靈敏感性哮喘)、異位性哮喘、異位性皮炎、過敏性鼻炎(包括季節性過敏性鼻炎)、非過敏性鼻炎、哮喘、重度哮喘、慢性嗜伊紅血球性肺炎(chronic eosinophilic pneumonia)、過敏性支氣管肺麴菌病(allergic bronchopulmonary aspergillosis)、乳糜瀉(coeliac disease)、謝格-司托司症候群(Churg-Strauss syndrome)(結節性加特異性動脈周圍炎(periarteritis nodosa plus atopy))、嗜伊紅血球性肌痛症候群、嗜伊紅白血球增多症候群(hypereosinophilic syndrome)、水腫反應(包括間歇性血管性水腫(episodic angiodema))、蠕蟲感染(helminth infections)(其中嗜伊紅血球可具有保護性作用)、蟠尾絲蟲皮炎(onchocercal dermatitis)及嗜伊紅血球相關性腸胃病症(包括(但不限於)嗜伊紅血球性食道炎、嗜伊紅血球性胃炎、嗜伊紅血球性胃腸炎、嗜伊紅血球性腸炎及嗜伊紅血球性結腸炎)、鼻微息肉病及息肉病、阿司匹靈不耐受、哮喘及阻塞性睡眠呼吸暫停。亦已發現嗜伊紅血球源性分泌產物與促進腫瘤中之血管生成及結締組織形成及見於諸如慢性哮喘、克羅恩氏病(Crohn's disease)、硬皮病(scleroderma)及心內膜心肌纖維化(endomyocardial fibrosis)之病狀中之纖維化反應相關聯(Munitz A,Levi-Schaffer F. Allergy 2004;59: 268-75；Adamko等人Allergy 2005;60: 13-22；Oldhoff等人Allergy 2005;60: 693-6)。其他實例包括癌症(例如神經膠母細胞瘤(glioblastoma)(諸如多形性神經膠母細胞瘤)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL))、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病、肺纖維化(包括特發性肺纖維化(IPF)及繼發於硬化症之肺纖維化)、COPD、肝纖維化。
IL-13介導之病症意謂與過度IL-13含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內IL-13之局部及/或全身含量或活性而顯現。IL-13介導之病症之實例包括：癌症(例如非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤)、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病(例如克羅恩氏病)、肺發炎病症(例如肺纖維化，諸如IPF)、COPD、肝纖維化。
IL-4介導之病症意謂：與過度IL4含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內IL4之局部及/或全身含量或活性而顯現。IL4介導之病症之實例包括：癌症(例如非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤)、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病(例如克羅恩氏病)、肺發炎病症(例如肺纖維化，諸如IPF)、COPD、肝纖維化。
IL-5介導之病症意謂：與過度IL5含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內IL5之局部及/或全身含量或活性而顯現。IL5介導之病症之實例包括：癌症(例如非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤)、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病(例如克羅恩氏病)、肺發炎病症(例如肺纖維化，諸如IPF)、COPD、肝纖維化。
IL-9介導之病症意謂：與過度IL9含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內IL9之局部及/或全身含量或活性而顯現。IL9介導之病症之實例包括：癌症(例如非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤)、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病(例如克羅恩氏病)、肺發炎病症(例如肺纖維化，諸如IPF)、COPD、肝纖維化。
TSLP介導之病症意謂：與過度TSLP含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內TSLP之局部及/或全身含量或活性而顯現。TSLP介導之病症之實例包括：癌症(例如非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤)、異位性皮炎、過敏性鼻炎、哮喘、纖維化、發炎性腸病(例如克羅恩氏病)、肺發炎病症(例如肺纖維化，諸如IPF)、COPD、肝纖維化。
IgE介導之病症意謂：與過度IgE含量或活性相關之病症，其中非典型症狀可歸因於體內IgE之局部及/或全身含量而顯現。此等病症包括哮喘、異位性皮炎、過敏性鼻炎、纖維化(例如肺纖維化，諸如IPF)。
哮喘樣症狀包括選自由以下組成之群之症狀：呼吸急促、咳嗽(痰產生及/或痰品質及/或咳嗽頻率發生變化)、喘鳴、胸悶(chest tightness)、支氣管收縮及歸因於以上一種症狀或此等症狀之組合之夜間覺醒(Juniper等人(2000)Am. J. Respir. Crit. Care Med.,162(4),1330-1334。)。
術語「呼吸病症」包括(但不限於)哮喘(例如過敏性及非過敏性哮喘(例如歸因於感染，例如在幼兒中例如受呼吸道融合性病毒(respiratory syncytial virus，RSV)感染))；支氣管炎(例如慢性支氣管炎)；慢性阻塞性肺病(COPD)(例如氣腫(例如香菸誘發之氣腫))；涉及氣管發炎、嗜伊紅血球增多、纖維化及黏液過度產生之病狀，例如囊腫性纖維化、肺纖維化及過敏性鼻炎。特徵可在於氣管發炎、氣管過度分泌及氣管阻塞之疾病之實例包括哮喘、慢性支氣管炎、支氣管擴張症及囊腫性纖維化。
惡化(通常稱為哮喘發作或急性哮喘)為呼吸急促、咳嗽(痰產生及/或痰品質及/或咳嗽頻率發生變化)、喘鳴、胸悶、歸因於以上一種症狀或此等症狀之組合之夜間覺醒新進或逐漸增加的事件。惡化之特徵常在於呼氣氣流(PEF或FEV1)減小。然而，PEF變化性在惡化期間通常不增加，不過其可能增加從而導致自惡化恢復，或其可在自惡化恢復期間增加。惡化之嚴重性在輕度至危及生命之範圍內且可基於症狀與肺功能兩者進行評估。如本文所述之重度哮喘惡化包括導致為治療哮喘需要進行下列住院治療之任一者或組合的惡化：大量使用皮質類固醇(例如總每日皮質類固醇劑量之四倍或大於或等於500微克FP或等效物之總每日劑量，持續連續三天或三天以上)、或經口/非經腸使用皮質類固醇。
TH2路徑抑制劑為抑制TH2路徑之藥劑。
TH2路徑抑制劑之實例包括選自由以下組成之群之任一目標之活性的抑制劑：ITK、BTK、IL-9(例如MEDI-528)、IL-5(例如美泊珠單抗(Mepolizumab)，CAS編號196078-29-2；瑞利珠單抗(resilizumab))、IL-13(例如IMA-026、IMA-638(亦稱為安蘆珠單抗(anrukinzumab)，INN編號910649-32-0；QAX-576；IL4/IL13捕捉劑)、曲洛努單抗(tralokinumab)(亦稱為CAT-354，CAS編號1044515-88-9)；AER-001、ABT-308(亦稱為人類化13C5.5抗體)、IL-4(例如AER-001、IL4/IL13捕捉劑)、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33及IgE(例如XOLAIR、QGE-031；MEDI-4212)；及受體，諸如：IL-9受體、IL-5受體(例如MEDI-563(本拉珠單抗(benralizumab)，CAS編號1044511-01-4)、IL-4受體α(例如AMG-317、AIR-645)、IL-13受體α1(例如R-1671)及IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2(例如AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095、ACT129968)、FcεRI、FcεRII/CD23(IgE之受體)、Flap(例如GSK2190915)、Syk激酶(R-343、PF3526299)；CCR4(AMG-761)、TLR9(QAX-935)及CCR3、IL5、IL3、GM-CSF之多細胞激素抑制劑(例如TPIASM8)。上述目標之抑制劑之實例揭示於例如WO 2008/086395；WO 2006/085938；US 7,615,213；US 7,501,121；WO 2006/085938；WO 2007/080174；US 7,807,788；WO 2005007699；WO 2007036745；WO 2009/009775；WO 2007/082068；WO 2010/073119；WO 2007/045477；WO 2008/134724；US 2009/0047277；及WO 2008/127,271中。
本文提供之治療劑包括可結合上文鑑別之目標之藥劑，諸如多肽(例如抗體、免疫黏附素(immunoadhesin)或肽體)、適體或可結合於可結合編碼本文鑑別之目標之核酸分子的蛋白質或核酸分子之小分子(亦即siRNA)。
「抗IL13/IL4路徑抑制劑」係指抑制IL-13及/或IL-4信號傳導之治療劑。抗IL13/IL4路徑抑制劑之實例包括IL13及/或IL4與其受體之相互作用之抑制劑，此等抑制劑包括(但不限於)抗IL13結合劑、抗IL4結合劑、抗IL3/IL4雙特異性結合劑、抗IL4受體α結合劑、抗IL13受體α1結合劑及抗IL13受體α2結合劑。明確包括可結合IL13、IL4(包括具有結合IL13之單一域及結合IL4之單一域的雙特異性抗體)、IL-13Rα1、IL-13Rα2或IL-4Rα之單域抗體作為抑制劑。應瞭解包括可結合一種以上目標之分子。
「抗IL4結合劑」係指結合人類IL-4之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，結合劑以介於1 μM-1 pM之間的親和力結合人類IL-4序列。抗IL4結合劑之特定實例可包括可溶性IL4受體α(例如與人類Fc區融合之IL4受體之細胞外域)、抗IL4抗體及可溶性IL13受體α1(例如與人類Fc區融合之IL13受體α1之細胞外域)。
「抗IL4受體α結合劑」係指結合人類IL4受體α之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，結合劑以介於1 μM-1 pM之間的親和力結合人類IL-4受體α序列。抗IL4受體α結合劑之特定實例可包括抗IL4受體α抗體。
「抗IL13結合劑」係指結合人類IL13之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，結合劑以介於1 μM-1 pM之間的親和力結合人類IL-13序列。抗IL13結合劑之特定實例可包括抗IL13抗體、與人類Fc融合之可溶性IL13受體α2、與人類Fc融合之可溶性IL4受體α、與人類Fc融合之可溶性IL13受體α。根據一個實施例，抗IL13抗體包含(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO 11之HVRH1、(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 12之HVRH2、(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13之HVRH3、(4)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14之HVRL1、(5)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15之HVRL2及(6)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 16之HVRL3。在另一實施例中，抗IL-13抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 9之VH域及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 10之VL域。根據一個實施例，抗體為IgG1抗體。根據另一實施例，抗體為IgG4抗體。根據一個實施例，IgG4抗體在其恆定域中包含S228P突變。
「抗IL13受體α1結合劑」係指特異性結合人類IL13受體α1之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，結合劑以介於1 μM-1 pM之間的親和力結合人類IL-13受體α1序列。抗IL13受體α1結合劑之特定實例可包括抗IL13受體α1抗體。
「抗IL13受體α2結合劑」係指特異性結合人類IL13受體α2之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，結合劑以介於1 μM-1 pM之間的親和力結合人類IL-13受體α2序列。抗IL13受體α2結合劑之特定實例可包括抗IL13受體α2抗體。
「抗IgE結合劑」係指特異性結合人類IgE之藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，抗IgE抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 17之VL序列及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 18之VH序列。
「抗M1'結合劑」係指特異性結合在B細胞表面上表現之IgE之膜近端M1'區的藥劑。此等結合劑可包括小分子、適體或多肽。此多肽可包括(但不限於)選自由免疫黏附素、抗體、肽體及肽組成之群之多肽。根據一個實施例，抗IgE抗體包含WO2008/116149中所述之抗體或其變異體。根據另一實施例，抗M1'抗體包含可變重鏈及可變輕鏈，其中該可變重鏈為SEQ ID NO: 24且該可變輕鏈為SEQ ID NO: 25。根據另一實施例，抗IgE/M1'抗體包含可變重鏈及可變輕鏈，其中該可變重鏈進一步包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且該可變輕鏈進一步包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3且：(a)該HVR-H1為SEQ ID NO: 24之殘基26-35[GFTFSDYGIA]；(b)該HVR-H2為SEQ ID NO: 24之殘基49-66[AFISDLAYTIYYADTVTG]；(c)該HVR-H3為SEQ ID NO: 24之殘基97-106[ARDNWDAMDY]；(d)該HVR-L1為SEQ ID NO: 25之殘基24-39[RSSQSLVHNNANTYLH]；(e)該HVR-L2為SEQ ID NO: 25之殘基55-61[KVSNRFS]；(f)該HVR-L3為SEQ ID NO: 25之殘基94-102[SQNTLVPWT]。
術語「小分子」係指分子量介於50道爾頓(Daltons)至2500道爾頓之間的有機分子。
術語「抗體」係以最廣泛意義使用且明確涵蓋例如單株抗體、多株抗體、具有多抗原決定基特異性之抗體、單鏈抗體、多特異性抗體及抗體片段。此等抗體可為嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體及合成抗體。以下更詳細描述此等抗體及其產生方法。
術語「未獲得控制」或「不可控制」係指治療方案不足以使疾病之症狀減至最少。如本文所用，術語「未獲得控制」及「未獲得足夠控制」可互換使用且意欲指相同狀況。患者之控制狀態可由主治醫師基於許多因素，包括患者之臨床病史、對治療之反應性及當前處方治療之程度進行確定。舉例而言，醫師可考慮以下因素:諸如FEV1<75%預測值或個人最佳值、在過去2-4週需要SABA之頻率(例如每週大於或等於兩劑)、在過去2-4週之夜間覺醒/症狀(例如每週少於或等於2夜)、在過去2-4週之活動限制、在過去2-4週之白天症狀。
術語「治療劑」係指用於治療疾病之任何藥劑。
術語「控制劑」或「預防劑」係指用於控制哮喘發炎之任何治療劑。控制劑之實例包括皮質類固醇、白三烯受體拮抗劑(例如抑制白三烯之合成或活性，諸如孟魯司特(montelukast)、齊留通(zileuton)、普魯司特(pranlukast)、紮魯司特(zafirlukast))、LABA、皮質類固醇/LABA組合組合物、茶鹼(包括胺茶鹼(aminophylline))、色甘酸鈉、奈多羅米鈉、奧馬佐單抗、LAMA、MABA(例如雙功能蕈毒鹼拮抗劑-β2促效劑)、5-脂肪加氧酶活化蛋白(FLAP)抑制劑及酶PDE-4抑制劑(例如羅氟司特(roflumilast))。「第二控制劑」通常指與第一控制劑不同之控制劑。
術語「皮質類固醇減量」或「CS」意謂歸因於投與另一治療劑，用於治療服用皮質類固醇以治療某一疾病之患者之該疾病的皮質類固醇之頻率及/或量減小或停止使用皮質類固醇。「CS藥劑」係指可在服用皮質類固醇之患者中引起CS之治療劑。
術語「皮質類固醇」包括(但不限於)氟替卡松(包括丙酸氟替卡松(FP))、倍氯米松(beclometasone)、布地奈德(budesonide)、環索奈德(ciclesonide)、莫米松(mometasone)、氟尼縮松(flunisolide)、倍他米松(betamethasone)及曲安西龍(triamcinolone)。「可吸入皮質類固醇」意謂適於藉由吸入傳遞之皮質類固醇。例示性可吸入皮質類固醇為氟替卡松、二丙酸倍氯米松、布替耐德(budenoside)、呋喃甲酸莫米松、環索奈德、氟尼縮松、曲安奈德(triamcinolone acetonide)及當前可用或將來變得可用之任何其他皮質類固醇。可吸入且與長效β2促效劑組合之皮質類固醇之實例包括(但不限於)：布地奈德/福莫特羅(formoterol)及氟替卡松/沙美特羅(salmeterol)。
皮質類固醇/LABA組合藥物之實例包括呋喃甲酸氟替卡松/三氟甲磺酸維蘭特羅(vilanterol trifenatate)及吲達卡特羅(indacaterol)/莫米松。
術語「LABA」意謂長效β-2促效劑，該促效劑包括例如沙美特羅、福莫特羅、班布特羅(bambuterol)、沙丁胺醇(albuterol)、吲達卡特羅、阿福莫特羅(arformoterol)及克侖特羅(clenbuterol)。
術語「LAMA」意謂長效蕈毒鹼拮抗劑，該等促效劑包括：噻托銨(tiotropium)。
LABA/LAMA組合之實例包括(但不限於)：奧達特羅(olodaterol)噻托銨(Boehringer Ingelheim's)及吲達卡特羅格隆銨(glycopyrronium)(Novartis)。
術語「SABA」意謂短效β-2促效劑，該等促效劑包括(但不限於)沙丁胺醇(salbutamol)、左沙丁胺醇(levosalbutamol)、非諾特羅(fenoterol)、特布他林(terbutaline)、吡布特羅(pirbuterol)、丙卡特羅(procaterol)、比托特羅(bitolterol)、利米特羅(rimiterol)、卡布特羅(carbuterol)、妥布特羅(tulobuterol)及茶丙特羅(reproterol)。
白三烯受體拮抗劑(有時稱為紐卡司特(leukast))(LTRA)為抑制白三烯之藥物。白三烯抑制劑之實例包括孟魯司特、齊留通、普魯司特及紮魯司特。
術語「FEV1」係指在用力呼氣之第一秒呼出之空氣體積。其為氣管阻塞之指標。為誘導FEV1下降20%所需之乙醯甲膽鹼(methacholine)之誘發濃度(PC20)為氣管過度反應之指標。FEV1可以其他類似方式，例如FEV1進行記錄，且應瞭解所有此等類似變化形式皆具有相同含義。
術語「FEV1之相對變化」=(在治療第12週時之FEV1-在開始治療之前之FEV1)除以FEV1。
術語「輕度哮喘」係指患者通常經歷一週少於兩次之症狀或惡化、1個月少於兩次之夜間症狀，且在惡化之間無症狀。輕度間歇性哮喘在必要時常用下列方式進行治療：吸入支氣管擴張藥(短效吸入β2促效劑)；避免已知觸發物；每年進行流感疫苗接種；每6至10年進行肺炎球菌疫苗接種(pneumococcal vaccination)，且在一些情況下，在暴露於已鑑別之觸發物之前用吸入β2促效劑色甘酸鈉或奈多羅米治療。若患者對短效β2促效劑之需要遞增(例如對於急性惡化，1天內使用短效β2促效劑三至四次以上；或對於各症狀，一個月使用一罐以上)，則患者可能需要加強療法。
術語「中度哮喘」通常指以下哮喘：其中患者經歷一週兩次以上惡化且惡化影響睡眠及活動；患者歸因於哮喘而一個月具有兩次以上夜間覺醒；患者具有每日或每隔一天需要短效吸入β2促效劑之慢性哮喘症狀；及患者之治療前基線PEF或FEV1為預測值之百分之60至80且PEF變化性為百分之20至30。
術語「重度哮喘」通常指以下哮喘：其中患者具有幾乎連續之症狀、頻繁惡化、歸因於哮喘之頻繁夜間覺醒、活動受限、PEF或FEV1基線小於預測值之百分之60且PEF變化性為百分之20至30。
救助藥物之實例包括沙丁胺醇、泛得林(ventolin)及其他藥物。
「抗性」係指在用治療劑治療之後疾病顯示極少或不顯示臨床上顯著之改良。舉例而言，需要用高劑量ICS(例如總每日皮質類固醇劑量之四倍或大於或等於500微克FP(或等效物)之總每日劑量，持續至少連續三天或三天以上)或全身皮質類固醇(持續兩週試驗以確定哮喘是否仍然未獲得控制或FEV1是否不改良)治療之哮喘常視為重度難治性哮喘。
如本文提供之治療劑可藉由任何適合方式，包括非經腸、皮下、腹膜內、肺內及鼻內方式進行投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。在一個實施例中，治療劑係吸入。根據另一實施例，給藥係藉由注射，例如靜脈內或皮下注射給與。在另一實施例中，治療劑係使用注射器(例如預填充或未預填充)或自動注射器投與。
對於預防或治療疾病，治療劑之適當劑量可取決於欲治療疾病之類型、疾病之嚴重性及病程、出於預防抑或治療目的投與治療劑、先前療法、患者之臨床病史及對治療劑之反應以及主治醫師之判斷。治療劑適合一次性或歷經一系列治療向患者投與。治療劑組合物將以符合良好醫學規範之方式調配、給藥及投與。在此情形下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑之傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。
用於嗜伊紅血球性疾病(包括哮喘)及用於使用TH2療法治療其他疾病之來金珠單抗之給藥：來金珠單抗可以每公斤患者體重0.1毫克至100毫克進行投與。在一個實施例中，向患者投與之劑量介於每公斤患者體重0.1毫克與20毫克之間。在另一實施例中，劑量為每公斤患者體重1毫克至10毫克。
在一替代性實施例中，來金珠單抗可以均一劑量投與。在一個實施例中，來金珠單抗係藉由皮下注射或藉由靜脈內注射以選自由以下組成之群之時間頻率以125-1000 mg均一劑量(亦即與體重無關)投與：每2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週、13週、14週、15週、16週、1個月、2個月、3個月或4個月。在另一實施例中，若患者超重，則來金珠單抗可例如以每個月3次之頻率以125-250 mg投與。在一個實施例中，來金珠單抗係每4週以125 mg、250 mg或500 mg之均一劑量投與。在另一實施例中，來金珠單抗在>40 kg之患者中每4週以37.5 mg、125 mg、250 mg或500 mg之均一劑量投與。
在一個實施例中，患者為18歲或18歲以上。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為12至17歲且來金珠單抗係以250 mg之均一劑量或125 mg之均一劑量投與。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為6至11歲且來金珠單抗係以125 mg之均一劑量投與。
可使用指示對患者之益處之任何終點來評估「患者反應」或「反應」(及其語法變化形式)，該任何終點包括(但不限於)(1)疾病進展在一定程度上得到抑制，包括減緩及完全遏止；(2)疾病發作及/或症狀之數目降低；(3)病變尺寸降低；(4)疾病細胞浸潤至鄰近周邊器官及/或組織中得到抑制(亦即減少、減緩或完全阻止)；(5)疾病擴散得到抑制(亦即減少、減緩或完全阻止)；(6)自體免疫反應減弱，此可能但並非必定導致疾病病變消退或去除；(7)與病症相關之一或多種症狀在一定程度上減輕；(8)治療後之無病狀態時長增加；及/或(9)在治療後之指定時間點的死亡率降低。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與該分子之結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如抗體與抗原結合臂)之間的1:1相互作用的內在結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(Kd)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法，包括本文所述者進行量測。量測結合親和力之特定說明性及例示性實施例在下文描述。
「親和力成熟」抗體係指相較於在一或多個高變區(HVR)中不具有一或多個變化之親本抗體，在一或多個高變區(HVR)中具有一或多個變化之抗體，此等變化使抗體對抗原之親和力得到改良。
術語「抗目標抗體」及「結合目標之抗體」係指能夠以足夠親和力結合目標之抗體，因此該抗體在靶向該目標中適用作診斷劑及/或治療劑。在一個實施例中，抗目標抗體結合無關非目標蛋白質之程度小於該抗體與目標之結合的約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)或biacore分析所量測。在某些實施例中，結合目標之抗體之解離常數(Kd)1 μM、100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM、0.01 nM或0.001 nM(例如10-8 M或10-8 M以下，例如自10-8 M至10-13 M，例如自10-9 M至10-13 M)。在某些實施例中，抗目標抗體結合目標中在不同物種間保守之抗原決定基。
術語「抗體」在本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所要抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指不同於完整抗體之分子，其包含完整抗體中結合該完整抗體所結合之抗原的部分。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙功能抗體；線抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
與參照抗體「結合相同抗原決定基之抗體」係指在競爭分析中阻斷參照抗體與其抗原之結合達50%或50%以上之抗體，且反之，該參照抗體在競爭分析中阻斷該抗體與其抗原之結合達50%或50%以上。本文提供一種例示性競爭分析。
出於本文之目的，「接受體人類構架」為包含來源於人類免疫球蛋白構架或人類共同構架(如以下所定義)之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10個或10個以下、9個或9個以下、8個或8個以下、7個或7個以下、6個或6個以下、5個或5個以下、4個或4個以下、3個或3個以下、或2個或2個以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架在序列上一致。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分來源於特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在5種主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且若干此等類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於免疫球蛋白之不同類別之重鏈恆定域分別稱為α、δ、s、γ及μ。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如甲胺喋呤(methotrexate)、阿德力黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(vinca alkaloids)(長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、小紅莓(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如核分解酶；抗生素；毒素，諸如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物來源之酶促活性毒素，包括其片段及/或變異體；及下文揭示之各種抗腫瘤或抗癌劑。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：Clq結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時間有效達成所要治療或防治結果之量。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈中含有至少一部分恆定區之C端區。該術語包括天然序列Fc區及變異型Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文中另外規定，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「構架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基以外之可變域殘基。可變域之FR通常由4個FR域：FR1、FR2、FR3及FR4組成。因此，HVR及FR序列在VH(或VL)中通常依下列序列出現：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換使用來指代結構實質上類似於天然抗體結構或具有含有如本文所定義之Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且指已引入了外源性核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」，其包括初級轉型細胞及由其獲得之子代而不考慮繼代次數。子代在核酸含量上可能不完全與母細胞相同，而是可能含有突變。本文中包括具有與關於在原始轉型細胞中所篩檢或選擇相同之功能或生物活性的突變型子代。
「人類抗體」為胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生或來源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為在人類免疫球蛋白VL或VH構架序列之選擇中代表最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列之選擇係自可變域序列之子群進行。一般而言，序列子群為如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIH出版物91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之子群。在一個實施例中，對於VL，子群為如Kabat等人(同上)中之子群κ I。在一個實施例中，對於VH，子群為如Kabat等人(同上)中之子群III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域之實質上全部，其中全部或實質上全部HVR(例如CDR)皆對應於非人類抗體之HVR，且全部或實質上全部FR皆對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含來源於人類抗體之抗體恆定區的至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已進行人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中在序列上高度可變及/或形成結構確定之環(「高變環」)的各區。一般而言，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個在VH中(H1、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基，互補決定區通常具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。如本文所用之HVR區包含位於位置24-36(對於HVRL1)、46-56(對於HVRL2)、89-97(對於HVRL3)、26-35B(對於HVRH1)、47-65(對於HVRH2)及93-102(對於HVRH3)內之任何數目之殘基。
「免疫結合物」為與一或多個異源分子，包括(但不限於)細胞毒性劑結合之抗體。
「個體(individual/subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)馴化動物(例如母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體為人類。
「經分離」抗體為已與其天然環境之組分分離之抗體。在一些實施例中，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE電泳、等電聚焦(IEF)電泳、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定，抗體純化至純度大於95%或99%。關於評估抗體純度之方法的回顧，請參見例如Flatman等人，J. Chromatogr. B 848:79-87(2007)。
「經分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括如下核酸分子：該核酸分子含於通常含有該核酸分子之細胞中，但該核酸分子存在於染色體外或不同於其天然染色體位置之染色體位置上。
「編碼抗目標抗體之經分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多種核酸分子，包括單一載體或單獨載體中之此(等)核酸分子及存在於宿主細胞中一或多個位置處之此(等)核酸分子。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體獲得的抗體，亦即除可能之變異型抗體(例如含有天然產生之突變或在產生單株抗體製劑期間出現之變異型抗體，此等變異體通常以較小量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑不同，單株抗體製劑之各單株抗體針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體係自實質上均質之抗體群體獲得之特性，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，欲根據本文提供之方法使用之單株抗體可藉由多種技術製備，該等技術包括(但不限於)融合瘤法、重組DNA法、噬菌體呈現法及利用含有所有或部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物的方法，此等方法及製備單株抗體之其他例示性方法在本文中描述。
「裸抗體」係指未與異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記結合之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然產生之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體為約150,000道爾頓之雜四聚醣蛋白，由經二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈構成。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重域或重鏈可變域，繼而為3個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，繼而為恆定輕(CL)域。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸為稱為κ及λ之兩種類型之一。
術語「藥品說明書」用於指通常包括在治療產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此等治療產品有關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告之資訊。術語「藥品說明書」亦用於指通常包括在診斷產品之商業包裝中含有關於預定用途、測試原理、試劑之製備及處理、試樣收集及製備、分析之校正及分析程序、效能及精確度資料(諸如分析之靈敏性及特異性)之資訊的說明書。
相對於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在對準參照多肽序列與候選序列且必要時引入空隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分的情況下，候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的進行之比對可以此項技術中之技能範圍內的各種方式達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定適於比對序列之參數，包括為在所比較序列之全長上達成最大對準所需要的任何演算法。然而，出於本文之目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech,Inc.創作，且源程式碼已與使用說明書一起在美國版權局(U.S. Copyright Office)(Washington D.C.,20559)存檔，其中在該版權局其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.(South San Francisco,California)公開獲得，或可自源程式碼編譯。ALIGN-2程式應經編譯以供在UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不變化。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情況下，如下計算指定胺基酸序列A對於、與、或相對於指定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(其可替代地表述為指定胺基酸序列A對於、與、或相對於指定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序列一致性%)：
100×分數X/Y，其中X為由序列比對程式ALIGN-2在A與B之彼程式比對中計分為一致匹配之胺基酸殘基的數目，且其中Y為B中胺基酸殘基的總數。應瞭解，當胺基酸序列A之長度與胺基酸序列B之長度不相等時，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確陳述，否則本文中使用之所有胺基酸序列一致性%值皆使用ALIGN-2電腦程式如前一段落中所述獲得。
術語「醫藥調配物」係指以下製劑：其呈使得允許其中所含之活性成分之生物活性有效的形式，且其不含對該調配物將投與之個體具有不可接受之毒性的其他組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指除活性成分以外，醫藥調配物中對個體無毒之成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「目標」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物(諸如靈長類動物(例如人類))及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)之任何天然分子。該術語涵蓋「全長」未加工目標以及目標之由在細胞中加工產生之任何形式。該術語亦涵蓋目標之天然產生之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之天然病程之臨床干預，且可出於防治目的或在臨床病理學之過程中進行。治療之所需效果包括(但不限於)預防疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理學後果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或緩和疾病病況、及好轉或預後改良。在一些實施例中，抗體用於延緩疾病發展或減緩疾病進展。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體與抗原之結合的域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包含4個保守構架區(FR)及3個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等人Kuby Immunology，第6版，W.H. Freeman and Co.，第91頁(2007))。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體的VH或VL域分別篩檢互補VL域或VH域之文庫進行分離。參見例如Portolano等人，J. Immunol. 150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用之術語「載體」係指一種核酸分子，其能夠傳播其所連接之另一核酸。該術語包括呈自我複製型核酸結構(self-replicating nucleic acid structure)形式之載體以及併入其所引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠引導其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
組合物及方法
在一個態樣中，本發明係部分基於新穎診斷分析及較佳治療方法。在某些實施例中，提供結合骨母細胞特異性因子-2之抗體。本發明抗體適用於例如診斷或治療哮喘及其他疾病。
例示性抗體 抗骨母細胞特異性因子-2抗體
在一個態樣中，本發明提供結合骨母細胞特異性因子-2之經分離抗體。在某些實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體可以良好親和力結合人類骨母細胞特異性因子-2之同功異型物1-4。
在一個實施例中，抗體包含序列SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2(「25D4」抗體)或包含序列SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4(「23B9」抗體)。在另一實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之可變區序列或包含SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO:4之可變區序列。在另一實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2之HVR序列或SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列。在另一實施例中，抗體包含與SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO:2之HVR序列95%或95%以上一致的HVR序列及/或抗體包含與SEQ ID NO: 3及SEQ ID NO: 4之HVR序列95%或95%以上一致的HVR序列。
在任何以上實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體可經人類化。在一個實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗骨母細胞特異性因子-2抗體保留結合骨母細胞特異性因子-2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 1中，總計1至10個胺基酸係經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 1中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供一種抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗骨母細胞特異性因子-2抗體保留結合骨母細胞特異性因子-2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 2中，總計1至10個胺基酸係經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 2中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗骨母細胞特異性因子-2抗體保留結合骨母細胞特異性因子-2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 3中，總計1至10個胺基酸係經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 3中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供一種抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗骨母細胞特異性因子-2抗體保留結合骨母細胞特異性因子-2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 4中，總計1至10個胺基酸係經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO: 4中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供一種抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體包含如以上所提供任何實施例中之VH及如以上所提供任何實施例中之VL。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文提供之抗骨母細胞特異性因子-2抗體結合相同抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO: 1之VH序列及SEQ ID NO: 2之VL序列的抗骨母細胞特異性因子-2抗體結合相同抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO: 3之VH序列及SEQ ID NO: 4之VL序列的抗骨母細胞特異性因子-2抗體結合相同抗原決定基的抗體。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗骨母細胞特異性因子-2抗體為單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗骨母細胞特異性因子-2抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施例中，抗體為全長抗體，例如完整IgG1或IgG4抗體或如本文中定義之其他抗體類別或同型。在另一實施例中，抗體為雙特異性抗體。
在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗骨母細胞特異性因子-2抗體可併有任何如以下章節1-7中所述之特徵中的一者或任何該等特徵之組合。
抗IL13抗體
在一個態樣中，本發明提供結合人類IL-13之經分離抗體。
在一個實施例中，抗IL13抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 14之HVR-L1；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 15之HVR-L2；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 16之HVR-L3；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 11之HVR-H1；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 12之HVR-H2；及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 13之HVR-H3。
在另一實施例中，抗體包含可變區序列SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 10。
在任何以上實施例中，抗IL-13抗體可經人類化。在一個實施例中，抗IL-13抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗IL-13抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗IL-13抗體保留結合人類IL-13之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 9中，總計1至10個胺基酸係經取代、改變、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗IL13抗體包含SEQ ID NO: 9中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，提供一種抗IL-13抗體，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 10具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗IL-13抗體保留結合IL-13之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 10中，總計1至10個胺基酸係經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外部之區域中(亦即在FR中)。視情況，抗IL-13抗體包含SEQ ID NO: 10中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。
在另一實施例中，抗IL-13抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO: 10具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VL區及與胺基酸序列SEQ ID NO: 9具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH區。在另一實施例中，抗IL-13抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO: 14之HVR-L1；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 15之HVR-L2；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 16之HVR-L3；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 11之HVR。H1；含有胺基酸序列SEQ ID NO: 12之HVR-H2；及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 13之HVR-H3。
在另一態樣中，提供一種抗IL-13抗體，其中該抗體包含如以上所提供任何實施例中之VH及如以上所提供任何實施例中之VL。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文提供之抗IL-13抗體結合相同抗原決定基的抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種與包含SEQ ID NO: 9之VH序列及SEQ ID NO: 10之VL序列的抗IL-13抗體結合相同抗原決定基或可由該抗IL-13抗體競爭性抑制的抗體。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗IL-13抗體可為單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中，抗IL13抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施例中，抗體為全長抗體，例如完整IgG1或IgG4抗體或如本文中定義之其他抗體類別或同型。根據另一實施例，抗體為雙特異性抗體。在一個實施例中，雙特異性抗體包含HVR或包含上述VH及VL區。
在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗IL-13抗體可併有任何如以下章節1-7中所述之特徵中的一者或任何該等特徵之組合。
1.抗體親和力
在某些實施例中，本文所提供抗體之解離常數(Kd)1 μM、100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM、0.01 nM或0.001 nM(例如10-8 M或10-8 M以下，例如自10-8 M至10-13 M，例如自10-9 M至10-13 M)。
在一個實施例中，藉由用相關抗體之Fab型式及其如關於以下分析所述之抗原進行的放射性標記抗原結合分析(RIA)來量測Kd。藉由在未標記抗原的滴定系列存在下用最小濃度之(125I)標記抗原使Fab平衡，隨後用經抗Fab抗體塗佈之盤捕捉所結合之抗原來量測Fab對抗原之溶液結合親和力(參見例如Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881(1999))。為確立分析條件，將MICROTITER多孔盤(Thermo Scientific)用含5 μg/ml捕捉抗Fab抗體(Cappel Labs)之50 mM碳酸鈉(pH 9.6)塗佈隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2至5小時。在非吸附盤(Nunc #269620)中，將100 pM或26 pM[125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res. 57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗體Fab-12之評估一致)。接著培育相關Fab隔夜；然而，培育可持續較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕捉盤以在室溫下培育(例如1小時)。接著移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20)之PBS將盤洗滌8次。當盤已乾燥時，每孔添加150 μl閃爍體(MICROSCINT-20 TM；Packard)，且在TOPCOUNT TM γ計數器(Packard)上對盤計數10分鐘。選擇各Fab之產生小於或等於最大結合之20%的濃度以供在競爭性結合分析中使用。
根據另一實施例，使用表面電漿子共振分析，使用BIACORE-2000或 BIACORE-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，在25℃下，用固定抗原CM5晶片，在約10個反應單位(RU)下量測Kd。簡言之，根據供應商之說明書，用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE,Inc.)。抗原用10 mM乙酸鈉(pH 4.8)稀釋至5 μg/ml(約0.2 μM)，隨後以5微升/分鐘之流速注射以達成約10個反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原之後，注射1 M乙醇胺以阻斷未反應之基團。在動力學量測中，在25℃下以約25 μl/min之流速注射於含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑之PBS(PBST)中兩倍連續稀釋的Fab(0.78 nM至500 nM)。使用簡單一對一朗繆爾結合模型(Langmuir binding model)(BIACORE 評估軟體第3.2版(BIACORE Evaluation Software version 3.2))藉由同時擬合締合及解離感測器圖譜來計算締合速率(kon)及解離速率(koff)。平衡解離常數(Kd)計算為比率koff/kon。參見例如Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)。若藉由以上表面電漿子共振分析測得締合速率超過106 M-1 s-1，則締合速率可藉由使用螢光淬滅技術進行測定，該技術量測在遞增濃度之抗原存在下，在25℃下於PBS(pH 7.2)中之20 nM抗原抗體(Fab形式)之螢光發射強度(激發=295 nm；發射=340 nm，16 nm帶通)的增加或減小，如在光譜計，諸如配備停流之分光光度計(stop-flow equipped spectrophometer)(Aviv Instruments)或具有攪拌比色管之8000系列SLM-AMINCO TM分光光度計(ThermoSpectronic)中所量測。
2.抗體片段
在某些實施例中，本文提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括(但不限於)Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv片段及下文所述之其他片段。關於某些抗體片段之回顧，請參見Hudson等人Nat. Med. 9:129-134(2003)。關於scFv片段之回顧，請參見例如Pluckthn,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編，(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。關於包含救助受體結合抗原決定基殘基且具有增加之活體內半衰期之Fab及F(ab')2片段的論述，請參見美國專利第5,869,046號。
雙功能抗體為具有2個抗原結合位點之可具有二價或雙特異性的抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134(2003)；及Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448(1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134(2003)中。
單域抗體為包含抗體之全部或部分重鏈可變域或全部或部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製備，包括(但不限於)蛋白水解消化完整抗體以及由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E. coli)或噬菌體)產生，如本文所述。
3.嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體例如描述於美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,81:6851-6855(1984)中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體為人類化抗體。通常，對非人類抗體進行人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)來源於非人類抗體，且FR(或其部分)來源於人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所來源之抗體)之相應殘基取代例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法例如回顧於Almagro及Fransson,Front. Biosci. 13:1619-1633(2008)中，且例如於以下中進一步描述：Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol. Immunol. 28:489-498(1991)(描述「表面重塑(resurfacing)」)；Dall'Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)及Klimka等人，Br. J. Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改組之「導向選擇(guided selection)」方法)。
可用於人類化之人類構架區包括(但不限於)：使用「最佳配合(best-fit)」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人J. Immunol. 151:2296(1993))；來源於特定輕鏈或重鏈可變區子群之人類抗體之共同序列的構架區(參見例如Carter等人Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,89:4285(1992)；及Presta等人J. Immunol.,151:2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front. Biosci. 13:1619-1633(2008))；及由篩檢FR文庫產生之構架區(參見例如Baca等人，J. Biol. Chem. 272:10678-10684(1997)及Rosok等人，J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996))。
4.人類抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術產生。人類抗體大體描述於van Dijk及van de Winkel,Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74(2001)及Lonberg,Curr. Opin. Immunol. 20:450-459(2008)中。
人類抗體可藉由向轉殖基因動物投與免疫原來製備，該轉殖基因動物已經修飾以回應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體。此等動物通常含有置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中之全部或部分人類免疫球蛋白基因座。在此等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常被不活化。關於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法的回顧，請參見Lonberg,Nat. Biotech. 23:1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；描述HUMAB技術之美國專利第5,770,429號；描述K-MMOUSE技術之美國專利第7,041,870號及描述VELOCIMOUSE技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恆定區組合來進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株。(參見例如Kozbor J. Immunol.,133: 3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等人，J. Immunol.,147: 86(1991))。經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,103:3557-3562(2006)中。其他方法包括例如於以下中描述之方法：美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)。人類融合瘤技術(三體雜交瘤(Trioma)技術)亦描述於以下中：Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
人類抗體亦可藉由分離自人類來源噬菌體呈現文庫選擇之Fv純系可變域序列產生。此等可變域序列可接著與所要人類恆定域組合。下文描述自抗體文庫選擇人類抗體之技術。
5.自文庫獲得之抗體
本發明抗體可藉由篩檢組合文庫中具有所要活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知用於產生噬菌體呈現文庫及篩檢此等文庫中具有所要結合特徵之抗體的多種方法。此等方法例如回顧於Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O，Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,2001)中，且例如於以下中進一步描述：McCafferty等人，Nature 348:552-554；Clackson等人，Nature 352: 624-628(1991)；Marks等人，J. Mol. Biol. 222: 581-597(1992)；Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J. Mol. Biol. 338(2): 299-310(2004)；Lee等人，J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093(2004)；Fellouse,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472(2004)；及Lee等人，J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)。
在某些噬菌體呈現方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系且隨機重組於噬菌體文庫中，可接著如Winter等人，Ann. Rev. Immunol.,12: 433-455(1994)中所述篩檢該等噬菌體文庫中之抗原結合噬菌體。噬菌體通常呈現呈單鏈Fv(scFv)片段形式或呈Fab片段形式之抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖(例如自人類選殖)天然譜系以提供針對多種非自體抗原以及自體抗原之抗體的單一來源而不進行任何免疫，如Griffiths等人，EMBO J,12:725-734(1993)所述。最後，亦可藉由自幹細胞選殖未重排之V基因區段且使用含有隨機序列之PCR引子以編碼高度可變CDR3區且達成活體外重排來以合成方式製備天然文庫，如Hoogenboom及Winter,J. Mol. Biol.,227: 381-388(1992)所述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如：美國專利第5,750,373號、及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少2個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性之一係針對IL-13且另一結合特異性係針對任何其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可與IL-13之兩個不同抗原決定基結合。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑定位於細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello,Nature 305: 537(1983))；WO 93/08829；及Traunecker等人，EMBO J. 10: 3655(1991))；及「孔中鈕(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式製備：工程改造靜電牽引效應(electrostatic steering effect)以製備抗體Fc雜二聚分子(WO 2009/089004A1)；交聯兩個或兩個以上抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號，及Brennan等人，Science,229: 81(1985))；使用白胺酸拉鏈以產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人，J. Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用「雙功能抗體」技術以製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90:6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，J. Immunol.,152:5368(1994))；及如例如Tutt等人J. Immunol. 147: 60(1991)中所述製備三特異性抗體。
具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之經工程改造抗體(包括「章魚抗體(Octopus antibody)」)亦包括在本文中(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括包含與IL-13以及另一不同抗原結合之抗原結合位點的「雙重作用FAb」或「DAF」(參見例如US 2008/0069820)。
7.抗體變異體
在某些實施例中，涵蓋本文提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成進行製備。此等修飾包括例如在抗體之胺基酸序列內進行殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所要特徵，例如抗原結合。
取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於進行取代突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代展示於表1中之標題「保守性取代」下。更實質性變化提供於表1中之標題「例示性取代」下且如下文關於胺基酸側鏈類別所進一步描述。胺基酸取代可引入相關抗體中且篩檢具有所要活性，例如保留/改良之抗原結合、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC的產物。
胺基酸可根據共有側鏈性質進行分組：
(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)鹼性：His、Lys、Arg；
(5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；
(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將導致一個此等類別之一個成員轉換成另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物性質方面具有改進(例如改良)(例如增加之親和力、降低之免疫原性)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物性質。一種例示性取代變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述之技術)方便地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且在噬菌體上呈現變異型抗體並篩檢具有特定生物活性(例如結合親和力)之變異型抗體。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。此等改變可在HVR「熱點(hotspot)」(亦即由在體細胞成熟過程中以高頻率發生突變之密碼子編碼之殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol. Biol. 207:179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行，且測試所得變異型VH或VL之結合親和力。藉由構築並自二級文庫再選擇來進行親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人，Methods in MolecularBiology 178:1-37(O'Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法之任一者(例如易出錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之突變誘發)將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著產生二級文庫。接著篩檢文庫以鑑別具有所要親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。參與抗原結合之HVR殘基可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來逐一鑑別。尤其常以CDR-H3及CDR-L3為目標。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要此等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如本文所提供之保守性取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR之外部。在以上提供之變異型VH及VL序列之某些實施例中，各HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於鑑別抗體中可作為突變誘發目標之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham及Wells(1989) Science,244:1081-1085所述。在此方法中，鑑別出一個殘基或一組目標殘基(例如帶電荷殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置引入其他取代。或者或另外，利用抗原-抗體複合物之晶體結構來鑑別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基及鄰近殘基可作為取代候選物之目標或排除在取代候選物之外。可篩檢變異體以確定其是否含有所要性質。
胺基酸序列插入物包括長度在一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之範圍內的胺基及/或羧基端融合物、以及具有單一或多個胺基酸殘基之序列內插入物。末端插入物之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與酶(例如對於ADEPT而言)或增加抗體之血清半衰期之多肽的融合物。
糖基化變異體
在某些實施例中，對本文提供之抗體進行改變以增加或減小抗體糖基化之程度。在抗體上添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個糖基化位點來方便地達成。
當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含分支雙觸角(biantennary)寡醣，其通常藉由N-鍵聯連接至Fc區之CH2域的Asn297。參見例如Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及與雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc連接的海藻糖。在一些實施例中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變異體。
在一個實施例中，提供具有缺乏與Fc區連接(直接或間接)之海藻糖之碳水化合物結構的抗體變異體。舉例而言，此抗體中海藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如例如WO 2008/077546中所述，藉由相對於與Asn 297連接之所有醣結構(例如複合、雜交及高甘露糖結構)之總和計算Asn297處糖鏈內海藻糖的平均量來測定海藻糖之量，如藉由MALDI-TOF質譜所量測。Asn297係指大致位於Fc區中位置297(Fc區殘基之Eu編號)處之天冬醯胺殘基；然而，歸因於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可能位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即介於位置294與300之間。此等海藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)；第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變異體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人J. Mol. Biol. 336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech. Bioeng. 87:614(2004)。能夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch. Biochem.Biophys. 249:533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1,Adams等人，尤其在實例11中)及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech. Bioeng. 87:614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol. Bioeng.,94(4): 680-688(2006)；及WO 2003/085107)。
另外提供具有對分寡醣之抗體變異體，例如其中與抗體之Fc區連接之雙觸角寡醣由GlcNAc對分。此等抗體變異體可具有降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供寡醣中至少1個半乳糖殘基連接至Fc區之抗體變異體。此等抗體變異體可具有改良之CDC功能。此等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
Fc區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc區)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變異體，此使得該抗體成為合乎應用需要之候選物，在該等應用中，活體內抗體半衰期較重要，而某些效應功能(諸如補體及ADCC)為不必要或有害的。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/消減。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合(由此可能缺乏ADCC活性)但保留FcRn結合能力。介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FRIII，而單核細胞表現FRI、FRII及FRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991)之第464頁上之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom,I.等人Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc. Nat'1 Acad. Sci. USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J. Exp. Med. 166: 1351-1361(1987))中。或者，可採用非放射性分析方法(參見例如用於流動式細胞測量術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology,Inc. Mountain View,CA)；及CytoTox 96非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。適用於此等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可例如於動物模型，諸如Clynes等人Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656(1998)中所揭示之動物模型中進行活體內評估。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J. Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知之方法進行FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定(參見例如Petkova,S.B.等人，Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769(2006))。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代的抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代的Fc突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合得到改良或減弱之某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312；及Shields等人，J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604(2001))。
在某些實施例中，抗體變異體包含具有改良ADCC之一或多個胺基酸取代，例如Fc區之位置298、333及/或334(殘基之EU編號)處之取代的Fc區。
在一些實施例中，在Fc區中進行產生改變(亦即改良或減弱)之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)的改變，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J. Immunol. 164: 4178-4184(2000)中所述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn)(Guyer等人，J. Immunol. 117:587(1976)及Kim等人，J. Immunol. 24:249(1994))之結合改良的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有改良Fc區與FcRn之結合之一或多個取代的Fc區。此等Fc變異體包括在以下Fc區殘基中之一或多者處具有取代之Fc變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
關於Fc區變異體之其他實例，亦請參見Duncan及Winter,Nature 322:738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。
半胱胺酸工程改造抗體變異體
在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「硫基MAb(thioMAb)」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之可達位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基藉此定位於抗體之可達位點且可用於使抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合以產生如本文中進一步描述之免疫結合物。在某些實施例中，任一或多個以下殘基可用半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。半胱胺酸工程改造抗體可如例如美國專利第7,521,541號中所述來產生。
抗體衍生物
在某些實施例中，本文提供之抗體可進行進一步修飾以含有此項技術中已知且易於獲得之其他非蛋白質部分。適於衍生化抗體之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(N-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其於水中之穩定性而可在製造上具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈。與抗體連接之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則該等聚合物可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於以下考慮因素來確定，該等考慮因素包括(但不限於)欲改良之抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將用於確定條件下之療法等。
在另一實施例中，提供抗體與可藉由暴露於輻射來選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長，且包括(但不限於)不傷害普通細胞但可將非蛋白質部分加熱至可殺死與抗體-非蛋白質部分鄰近之細胞之溫度的波長。
重組方法及組合物
可使用例如如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組合物產生抗體。在一個實施例中，提供編碼本文所述之抗骨母細胞特異性因子-2抗體之經分離核酸。此核酸可編碼包含VL之胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多種包含此核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供包含此核酸之宿主細胞。在一個此實施例中，宿主細胞包含(例如已經以下轉型)：(1)包含編碼包含抗體VL之胺基酸序列及包含抗體VH之胺基酸序列之核酸的載體，或(2)包含編碼包含抗體VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包含編碼包含抗體VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一實施例中，提供一種製備抗骨母細胞特異性因子-2抗體之方法，其中該方法包含在適於表現該抗體之條件下培養如上文所提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
對於重組產生抗骨母細胞特異性因子-2抗體，分離編碼例如如上所述之抗體之核酸且插入一或多個載體中以供在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此核酸可易於使用習知程序(例如藉由使用能夠與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合的寡核苷酸探針)分離及定序。
適於選殖或表現抗體編碼載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可於細菌中產生，特定言之在不需要糖基化及Fc效應功能時。關於在細菌中表現抗體片段及多肽，請參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C. Lo編，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其描述在大腸桿菌中表現抗體片段)。在表現之後，抗體可自細菌細胞漿(bacterial cell paste)分離於可溶性部分中且可進一步純化。
除原核生物外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適於抗體編碼載體之選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人類化」，從而使得所產生之抗體具有部分或完全人類糖基化型態的真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat. Biotech. 22:1409-1414(2004)及Li等人，Nat. Biotech. 24:210-215(2006)。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)獲得。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出眾多可與昆蟲細胞聯合使用，特定言之用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞之桿狀病毒株。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1細胞株(COS-7)；人類胚腎細胞株(293或293細胞，如例如Graham等人，J. Gen Virol. 36:59(1977)中所述)；幼小倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠足細胞(TM4細胞，如例如Mather,Biol. Reprod. 23:243-251(1980)中所述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(HepG2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如例如Mather等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68(1982)中所述；MRC5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216(1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之回顧，請參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C. Lo編，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。
分析
本文提供之抗骨母細胞特異性因子-2抗體可藉由此項技術中已知之各種分析針對其物理/化學性質及/或生物活性進行鑑別、篩檢或表徵。
結合分析及其他分析
在一個態樣中，例如藉由諸如ELISA、西方墨點(Western blot)等之已知方法測試本發明抗體之抗原結合活性。
在另一態樣中，可使用競爭分析來鑑別分別與IL-13或骨母細胞特異性因子-2競爭結合IL13或骨母細胞特異性因子-2之抗體。在某些實施例中，該種競爭抗體結合由來金珠單抗或本文說明之另一抗IL13抗體或本文說明之抗骨母細胞特異性因子-2抗體結合的相同抗原決定基(例如線性抗原決定基或構形抗原決定基)。用於定位抗體所結合之抗原決定基之詳細例示性方法提供於Morris(1996) 「Epitope Mapping Protocols」,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在一例示性競爭分析中，在包含與骨母細胞特異性因子-2結合之第一經標記抗體(例如25D4)以及欲測試與該第一抗體競爭結合骨母細胞特異性因子-2之能力之第二未標記抗體的溶液中培育經固定骨母細胞特異性因子-2。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，經固定骨母細胞特異性因子-2在包含第一經標記抗體但不包含第二未標記抗體之溶液中培育。在允許第一抗體與骨母細胞特異性因子-2結合之條件下培育後，移除過量未結合抗體，且量測與經固定骨母細胞特異性因子-2締合之標記的量。若相對於對照樣品，測試樣品中與經固定骨母細胞特異性因子-2締合之標記的量實質上降低，則指示第二抗體與第一抗體競爭結合骨母細胞特異性因子-2。參見Harlow及Lane(1988) Antibodies: A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
活性分析
在一個態樣中，提供用於鑑別具有生物活性之抗IL-13抗體之分析。生物活性可包括例如在哮喘中之活性。亦提供在活體內及/或在活體外具有此生物活性之抗體。
在某些實施例中，測試本發明抗體之此生物活性。
免疫結合物
本發明亦提供包含本文之抗骨母細胞特異性因子-2抗體與一或多種細胞毒性劑結合之免疫結合物，該等細胞毒性劑諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素；細菌、真菌、植物或動物來源之酶促活性毒素；或其片段)、或放射性同位素。
在一個實施例中，免疫結合物為抗體-藥物結合物(ADC)，其中抗體與一或多種藥物結合，該等藥物包括(但不限於)類美登素(maytansinoid)(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧瑞他汀(auristatin)，諸如單甲基奧瑞他汀(monomethylauristatin)藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；海兔毒素(dolastatin)；卡奇黴素(calicheamicin)或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res. 53:3336-3342(1993)；及Lode等人，Cancer Res. 58:2925-2928(1998))；蒽環黴素(anthracycline)，諸如道諾黴素(daunomycin)或小紅莓(doxorubicin)(參見Kratz等人，Current Med. Chem. 13:477-523(2006)；Jeffrey等人，Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362(2006)；Torgov等人，Bioconj. Chem. 16:717-721(2005)；Nagy等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等人，Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532(2002)；King等人，J. Med. Chem. 45:4336-4343(2002)；及美國專利第6,630,579號)；甲胺喋呤(methotrexate)；長春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)，諸如歐洲紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉諾紫杉醇(larotaxel)、特塞紫杉醇(tesetaxel)及沃塔紫杉醇(ortataxel)；黴菌毒素(trichothecene)；及CC1065。
在另一實施例中，免疫結合物包含如本文所述之抗體與酶促活性毒素或其片段結合，該等毒素包括(但不限於)白喉(diphtheria)A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素(exotoxin)A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、篦麻毒素(ricin)A鏈、相思子毒素(abrin)A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α-帚麴菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、洋商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)及黴菌毒素(tricothecene)。
在另一實施例中，免疫結合物包含如本文所述之抗體與放射性原子結合以形成放射性結合物。多種放射性同位素可用於產生放射性結合物。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。當放射性結合物用於偵測時，其可包含用於閃爍攝影研究之放射性原子，例如tc99m或I123；用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記，諸如再次碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙官能蛋白質偶合劑製備，該等偶合劑諸如N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺基酯之雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺基酯)、醛(諸如戊二醛)、雙疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙-(對二重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)、及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，可如Vitetta等人，Science 238:1098(1987)中所述製備篦麻毒素免疫毒素。經碳-14標記之1-異硫氰基苯甲基-3-甲基二伸乙三胺五乙酸(MX-DTPA)為一種用於結合放射性核苷酸與抗體之例示性螯合劑。參見WO 94/11026。連接子可為有助於細胞毒性藥物在細胞中釋放之「可裂解連接子」。舉例而言，可使用酸不穩定性連接子、肽酶敏感性連接子、光不穩定性連接子、二甲基連接子或含有二硫化物之連接子(Chari等人，Cancer Res. 52:127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。
本文之免疫結合物或ADC明確涵蓋(但不限於)用以下可購得(例如自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A購得)之交聯試劑製備的此等結合物，該等交聯試劑包括(但不限於)BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺酸基-EMCS、磺酸基-GMBS、磺酸基-KMUS、磺酸基-MBS、磺酸基-SIAB、磺酸基-SMCC及磺酸基-SMPB、及SVSB(丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)。
用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中，本文提供之任何抗骨母細胞特異性因子-2抗體皆適用於偵測生物樣品中骨母細胞特異性因子-2之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，諸如血清、血漿、鼻拭物及痰。
在一個實施例中，提供用於在診斷或偵測方法中使用之抗骨母細胞特異性因子-2抗體。在另一態樣中，提供一種偵測生物樣品中骨母細胞特異性因子-2之存在之方法。在某些實施例中，方法包含使生物樣品與如本文所述之抗骨母細胞特異性因子-2抗體在允許抗骨母細胞特異性因子-2抗體與骨母細胞特異性因子-2結合之條件下接觸，及偵測是否在抗骨母細胞特異性因子-2抗體與骨母細胞特異性因子-2之間形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例中，使用抗骨母細胞特異性因子-2抗體來選擇適於用抗I3抗體或任何其他TH2路徑抑制劑進行治療之個體，例如當骨母細胞特異性因子-2為用於選擇患者的生物標記時。
本文提供可使用本發明抗體診斷之例示性病症。
在某些實施例中，提供經標記之抗骨母細胞特異性因子-2抗體。標記包括(但不限於)直接偵測之標記或部分(諸如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)、以及例如經由酶促反應或分子相互作用間接偵測之部分(諸如酶或配體)。例示性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I；螢光團，諸如稀土螯合物或螢光素(fluorescein)及其衍生物；若丹明(rhodamine)及其衍生物；丹磺醯基(dansyl)；傘酮(umbelliferone)；螢光素酶(luceriferase)，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素(luciferin)；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酯酶(alkaline phosphatase)；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，與採用過氧化氫來氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶(lactoperoxidase)或微過氧化酶)偶合；生物素/抗生蛋白(avidin)；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基；及其類似物。
醫藥調配物
如本文所述之抗IL-13抗體或其他TH2路徑抑制劑的醫藥調配物藉由混合具有所要純度之此抗體或分子與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980))來製備成凍乾調配物或水溶液形式。醫藥學上可接受之載劑在所用劑量及濃度下對接受者通常無毒，且包括(但不限於)：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲基銨；氯化六羥季銨(hexamethonium chloride)；氯化苯甲烴銨(benzalkonium chloride)；苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚；丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文之例示性醫藥學上可接受之載劑另外包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性-活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20(HYLENEX，Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡糖胺聚糖酶(glycosaminoglycanase)(諸如軟骨素酶(chondroitinase))組合。
例示性凍乾抗體調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所述之調配物，WO 2006/044908中之調配物包括組胺酸乙酸鹽緩衝劑。
本文之調配物亦可含有一種以上為所治療之特定適應症所必需的活性成分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充性活性的活性成分。舉例而言，可能需要另外與TH2路徑抑制劑一起提供控制劑。此等活性成分適合以有效達成預定目的之量組合存在。
活性成分可包覆在例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製備之微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中；膠態藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中；或巨乳液中。此等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物半透基質，該等基質呈成形物品(例如膜或微膠囊)形式。
欲用於活體內投藥之調配物通常無菌。無菌性可易於例如藉由經由無菌過濾膜過濾來達成。
治療方法及組合物
嗜伊紅血球性發炎與多種疾病(過敏性疾病與非過敏性疾病兩者)相關(Gonlugur(2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45)。發炎為活組織對損傷之恢復性反應。發炎反應之特徵為歸因於組織自身中產生之某些化合物，白血球在損傷組織中累積。嗜伊紅白血球在多種病狀，諸如過敏性病症、蠕蟲感染及贅生性疾病中累積(Kudlacz等人，(2002) Inflammation 26:111-119)。作為免疫系統之組分之嗜伊紅白血球為黏膜表面之防禦性成分。其不僅對抗原而且亦對寄生蟲、化合物及損傷起反應。
組織嗜伊紅血球增多發生在皮膚疾病(諸如濕疹、天疱瘡(pemphigus)、急性蕁麻疹及中毒性表皮壞死溶解)以及異位性皮炎中([Rzany等人，1996])。嗜伊紅血球在IgE介導之過敏性皮膚反應中於組織中累積且排空顆粒蛋白([Nielsen等人，2001])。嗜伊紅血球與肥大細胞組合有可能導致關節發炎(Miossec等人，1997)。嗜伊紅血球性發炎有時伴有關節創傷。滑液嗜伊紅血球增多可與諸如類風濕性關節炎、寄生蟲病、嗜伊紅白血球增多症候群、萊姆病(lyme disease)及過敏性過程之疾病以及關節積血及關節造影相關([Atanes等人，1996])。嗜伊紅血球性發炎亦可影響骨([Yetiser等人，2002])。嗜伊紅血球性肌肉疾病之實例包括嗜伊紅血球性肌周炎(eosinophilic perimyositis)、嗜伊紅血球性多發性肌炎(eosinophilic polymyositis)及局灶性嗜伊紅血球性肌炎(focal eosinophilic myositis)([Lakhanpal等人，1988])。影響骨骼肌之嗜伊紅血球性發炎可能與寄生蟲感染或藥物或某些全身性嗜伊紅血球過多病症(例如特發性嗜伊紅白血球增多症候群及嗜伊紅血球增多-肌痛症候群)之特徵相關。嗜伊紅血球參與對由自體免疫抗體識別之抗原決定基之發炎性反應([Engineer等人，2001])。結締組織疾病可導致嗜中性球性、嗜伊紅血球性或淋巴球性血管發炎([Chen等人，1996])。組織及周邊血液嗜伊紅血球增多可發生在活動性風濕病中。血清ECP含量在僵直性脊椎炎(一種結締組織疾病)中升高表明嗜伊紅血球亦牽涉於潛伏過程中(Feltelius等人，1987)。韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)可罕見地伴隨肺節結、肋膜積液及周邊血液嗜伊紅血球增多一起顯現([Krupsky等人，1993])。
至少400/mm3之周邊血液嗜伊紅血球增多可發生在7%之全身性硬化症病例、31%之局部硬皮病病例及61%之嗜伊紅血球性筋膜炎病例中([Falanga及Medsger,1987])。硬皮病產生密切類似於麥斯南氏(Meissner's)及奧厄巴赫氏神經叢(Auerbach's plexuses)之發炎性過程且在胃腸系統中由肥大細胞及嗜伊紅白血球組成。嗜伊紅血球產生之神經毒素可造成如在硬皮病中所發生之胃腸運動功能障礙([de Schryver Kecskemeti及Clouse,1989])。
嗜伊紅血球可伴隨局部([Varga及Kahari,1997])或全身性([Bouros等人，2002])結締組織增生。其可因抑制纖維母細胞中之蛋白聚糖降解而引起纖維化([Hernnas等人，1992])，且纖維母細胞藉由分泌GM-CSF而介導嗜伊紅血球存活([Vancheri等人，1989])。嗜伊紅血球可見於鼻([Bacherct等人，2001])、支氣管([Arguelles及Blanco,1983])及胃腸息肉組織([Assarian及Sundareson,1985])中。嗜伊紅血球同樣可定位於發炎性假瘤(肌纖維母細胞腫瘤)中。嗜伊紅血球常伴隨眼眶區域中之發炎性假瘤，在此情況下，該病狀可模擬血管性水腫(angioedema)或過敏性鼻結膜炎(allergic rhinoconjunctivitis)([Li等人，1992])。
嗜伊紅血球性發炎可見於組織創傷(例如由手術或損傷引起)中。嗜伊紅血球性發炎亦可與心血管疾病(例如嗜伊紅血球性心肌炎、嗜伊紅血球性冠狀動脈炎、缺血性心臟病、急性心肌梗塞、心臟破裂(cardiac rupture))相關。壞死性發炎過程亦可涉及嗜伊紅血球性發炎(多發性肌炎、冠狀動脈剝離、神經白塞氏病(neuro-Behcet's disease)之壞死性病變、癡呆、腦梗塞)。
本文提供藉由量測患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量來鑑別預示會對用TH2路徑抑制劑治療起反應(或將對該治療起反應)之嗜伊紅血球性發炎陽性(EIP)患者的方法。
本文亦提供治療哮喘、嗜伊紅血球性病症、IL-13介導之病症、IL4介導之病症、IL9介導之病症、IL5介導之病症、IL33介導之病症、IL25介導之病症、TSLP介導之病症、IgE介導之病症或哮喘樣症狀之方法，其包含向嗜伊紅血球性發炎陽性患者投與TH2路徑抑制劑，其中該患者係藉由量測該患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量而診斷為EIP。
在某些實施例中，提供治療哮喘、嗜伊紅血球性病症、IL-13介導之病症、IL-4介導之病症或IgE介導之病症之方法，其包含向嗜伊紅血球性發炎陽性患者投與來金珠單抗。
在某些實施例中，提供治療哮喘、嗜伊紅血球性病症、IL-13介導之病症、IL-4介導之病症或IgE介導之病症之方法，其包含每4週向罹患該病症之患者投與125-500 mg均一劑量之來金珠單抗。
亦提供治療哮喘(或呼吸疾病)之方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使FEV1獲得大於5%之相對變化。在另一實施例中，FEV1大於6%、7%、8%、9%或10% FEV1。在另一實施例中，患者已使用總骨母細胞特異性因子-2分析診斷為EIP。在另一實施例中，哮喘患者已用總血清骨母細胞特異性因子-2分析進行診斷。
在某些實施例中，提供治療哮喘(或呼吸疾病)之方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使惡化率降低超過35%(其他實施例超過36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、多達85%；另一實施例，其中患者已診斷為EIP)。
在某些實施例中，提供治療哮喘(或呼吸疾病)之方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使夜間覺醒減少。在一個實施例中，患者係藉由量測患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量進行診斷。在另一實施例中，患者之哮喘用皮質類固醇未獲得控制。在另一實施例中，患者診斷為EIP。
亦提供治療哮喘(或呼吸疾病)之方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使哮喘控制獲得改良。在一個實施例中，患者係藉由量測患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量進行診斷。在另一實施例中，哮喘用皮質類固醇治療未獲得控制。在另一實施例中，患者診斷為EIP。
提供治療哮喘(或呼吸疾病)之方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使肺中之發炎減輕。在一個實施例中，患者係藉由量測患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量進行診斷。在另一實施例中，哮喘用皮質類固醇治療未獲得控制。在另一實施例中，患者診斷為EIP。
在某些實施例中，提供治療罹患嗜伊紅血球性病症且正用皮質類固醇治療之患者之該嗜伊紅血球性病症的方法，其包含向哮喘患者投與治療有效量之來金珠單抗，其中該治療使用於治療該疾病之皮質類固醇治療(量或頻率)降低或停止使用。在一個實施例中，患者係藉由量測患者之總血清骨母細胞特異性因子-2含量進行診斷。在另一實施例中，患者之哮喘用皮質類固醇未獲得控制。在另一實施例中，患者在治療之前診斷為EIP。
亦提供治療罹患哮喘(或呼吸疾病)之患者之方法，其包含使用總骨母細胞特異性因子-2分析診斷該患者為EIP，向該哮喘患者投與治療有效量之TH2路徑抑制劑，診斷患者EIP狀態，及若狀態為EIP則用TH2路徑抑制劑再治療該患者。診斷係使用單獨或與FENO含量組合且視情況與選自：CST1、CST2、CCL26、CLCA1、PRR4、PRB4、絲胺酸蛋白酶抑制劑B2、CEACAM5、iNOS、絲胺酸蛋白酶抑制劑B4、CST4及絲胺酸蛋白酶抑制劑B10之其他生物標記組合之總骨母細胞特異性因子-2分析進行。在另一實施例中，除如本文所述之骨母細胞特異性因子-2之表現量升高外，欲治療之患者之FENO含量亦大於21 ppb。在另一實施例中，除如本文所述之骨母細胞特異性因子-2之表現量升高外，欲治療之患者之FENO含量亦大於35 ppb。
在某些實施例中，提供鑑別嗜伊紅血球性發炎陰性(EIN)患者之方法，其包含量測患者之總骨母細胞特異性因子-2含量及確定該患者為EIN之步驟。
本文提供之任何TH2路徑抑制劑皆可用於本文所述之治療方法中，尤其用於哮喘。在一個實施例中，哮喘患者正用皮質類固醇治療，且已使用本文所述之骨母細胞特異性因子-2分析診斷為可對TH2路徑抑制劑起反應。在另一實施例中，哮喘患者正罹患中度至重度哮喘。在另一實施例中，患者正罹患輕度哮喘，但未用皮質類固醇治療。
本發明抗體(及任何其他治療劑)可藉由任何適合方式投與，該等方式包括非經腸、肺內及鼻內投藥，且必要時對於局部治療，包括病灶內投藥。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。給藥可部分視投藥為短期抑或長期而定藉由任何適合途徑達成，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射。本文涵蓋各種給藥時程，包括(但不限於)單次投藥或歷經多個時間點多次投藥，快速投藥(bolus administration)及脈衝輸注。
本發明抗體將以符合良好醫學規範之方式調配、給藥及投與。在此情形下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑之傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視存在於調配物中之抗體之量、病症類型或治療類型及以上論述之其他因素而定。此等藥劑通常以相同劑量且以如本文所述之投藥途徑使用，或以本文所述劑量之約1%至99%使用，或以任何劑量且藉由憑經驗/臨床確定為適當的任何途徑使用。
對於預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將視欲治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重性及病程、出於預防抑或治療目的投與抗體、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。抗體適合一次性或歷經一系列治療向患者投與。視疾病之類型及嚴重性而定，無論例如藉由一或多次分開投藥抑或藉由連續輸注，均可以約1 μg/kg至15 mg/kg(例如0.1 mg/kg-10 mg/kg)之抗體作為用於向患者投與之初始候選劑量。視以上提及之因素而定，一種典型每日劑量可在約1 μg/kg至100 mg/kg或100 mg/kg以上的範圍內。對於歷經若干天或更長時間的重複投藥，視病狀而定，治療通常將持續直至發生疾病症狀之所要遏制。抗體之一種例示性劑量在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg之範圍內。因此，可向患者投與約0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg或10 mg/kg(或其任何組合)之一或多個劑量。此等劑量可間歇投與，例如每週或每三週投與(例如以使患者接受約兩劑至約二十劑或例如約六劑抗體)。然而，其他給藥方案可能適用。此療法之進展容易藉由習知技術及分析進行監測。
在某些實施例中，本發明抗體係以37.5 mg之均一劑量(亦即與體重無關)、或125 mg之均一劑量、或250 mg之均一劑量投與。在某些實施例中，劑量係藉由每4週皮下注射一次持續一段時期進行投與。在某些實施例中，時期為6個月、一年、兩年、五年、十年、15年、20年或患者終生。在某些實施例中，哮喘為重度哮喘且患者用吸入皮質類固醇加第二控制劑藥物未獲得足夠控制或未獲得控制。在另一實施例中，使用用以確定EIP狀態之總骨母細胞特異性因子-2分析診斷患者具有EIP狀態且選擇該患者供用如上所述之抗IL13抗體進行治療。在另一實施例中，方法包含用如上所述之抗IL13抗體治療哮喘患者，其中先前使用用以確定EIP狀態之總骨母細胞特異性因子-2分析診斷該患者具有EIP狀態。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為18歲或18歲以上。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為12至17歲且抗IL13係以250mg之均一劑量或125 mg之均一劑量投與。在一個實施例中，哮喘患者之年齡為6至11歲且抗IL13抗體係以125 mg之均一劑量投與。
應瞭解任何以上調配或治療方法皆可使用本發明之免疫結合物替代或附加於抗目標抗體或抗骨母細胞特異性因子-2抗體來進行。
製品
在本發明之另一態樣中，提供一種含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之物質的製品。該製品包含容器及位於該容器上或與該容器相關之標籤或藥品說明書。適合容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由多種材料，諸如玻璃或塑膠形成。容器容納單獨或與有效治療、預防及/或診斷病狀之另一組合物組合的組合物，且可具有無菌接取孔(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本發明抗體。標籤或藥品說明書指示組合物用於治療所選病狀。此外，製品可包含(a)內含組合物之第一容器，其中該組合物包含本發明抗體；及(b)內含組合物之第二容器，其中該組合物包含另一細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之此實施例中之製品可進一步包含藥品說明書，其指示組合物可用於治療特定病狀。或者或另外，製品可進一步包含含有醫藥學上可接受之緩衝液(諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液)之第二(或第三)容器。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言合乎需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
應瞭解任何以上製品皆可包括本發明之免疫結合物替代抗目標抗體或抗骨母細胞特異性因子-2抗體，或除抗目標抗體或抗骨母細胞特異性因子-2抗體之外，亦包括本發明之免疫結合物。
實例
實例1-過敏原攻擊臨床研究
第II期隨機化雙盲安慰劑對照研究；5 mg/kg來金珠單抗：安慰劑(1:1比率)，皮下，每4週1次，持續12週。試驗設計之高級概述在表2及圖1中給出。主要結果指標為第13週時過敏原誘導之遲發性哮喘反應(LAR)。在篩檢期期間及在第13週時，患者接受過敏原攻擊，隨後在18-24小時後接受乙醯甲膽鹼攻擊。亦評估血清生物標記以顯示IL13路徑抑制及鑑別自來金珠單抗獲得之益處增加之患者。
研究中所包括之患者為滿足以下條件之輕度哮喘18-55歲患者：(a)在針對房塵蟎(house dust mite)、貓皮屑或豬草進行篩檢時，皮膚測試呈陽性(超過陰性對照>或=3 mm)；(b)在1秒內之用力呼氣體積(FEV1)>或=預測值之70%；及(c)在過敏原攻擊之後5-30分鐘內早發性哮喘反應具有FEV1降低>或=20%，及在攻擊後2-8小時內遲發性哮喘反應(LAR)具有FEV1降低>或=15%。
在主要終點之分析中包括二十八名患者(n=16名安慰劑、12名來金珠單抗)。在第13週時，來金珠單抗抑制LAR。在第13週時，相對於安慰劑，在過敏原攻擊之後2-8小時，來金珠單抗治療患者之FEV1之平均AUC(曲線下面積)(LAR)降低48%(26.3%對50.5%；95% CI：-19至90%)，對早期反應(early phase response；EAR)無影響。在過敏原攻擊後0-2小時之FEV1之平均AUC及FEV1之最大降低在來金珠單抗組與安慰劑組中類似(對於兩個參數而言為27.5%對26.4%；表3)。亦參見圖2。未觀測到來金珠單抗組與安慰劑組之間關於對乙醯甲膽鹼之氣管過度反應的顯著差異。來金珠單抗組中乙醯甲膽鹼倍增劑量之算術平均值比安慰劑組中之算術平均值高0.33個倍增劑量(1.58對1.25，95% CI：-0.64至1.3)，此不視為有臨床意義之抑制。
來金珠單抗治療對Th2發炎之標記明顯施加全身性影響，其中血清IgE、MCP-4/CCL13及TARC/CCL17之經安慰劑校正之平均降低分別為24%、25%及26%(P<0.01)。參見圖3A及3B。在治療之後，血清骨母細胞特異性因子-2含量略微降低(5-10%)。在治療之後，血清IL-13含量大多低於偵測含量(<150 pg/ml)。圖3C展示相對於IgE、CCL13及CCL17標記之基線含量，在第13週時個別患者中之IgE、CCL13及CCL17之降低。一般而言，在來金珠單抗治療之後，骨母細胞特異性因子-2、YKL-40、CEA及血液嗜伊紅血球含量未顯著變化(資料未展示)。
周邊血液嗜伊紅血球、血清IgE或血清骨母細胞特異性因子-2之基線含量高於中值之個體展現的經安慰劑校正之來金珠單抗依賴性LAR降低大於此等生物標記之基線含量低於中值之個體。參見圖4。
基於以下發炎性生物標記之基線含量高於或低於中值含量來將患者分類為「生物標記較高」或「生物標記較低」患者：血清IgE、CLL13、CCL17、CEA、骨母細胞特異性因子-2、YKL-40及周邊血液嗜伊紅血球。如圖4中所示，血清IgE、嗜伊紅血球及骨母細胞特異性因子-2之結果指示基線血清IgE、骨母細胞特異性因子-2升高(相較於中值)或周邊血液嗜伊紅血球增加之患者更有可能對IL13阻斷(例如由來金珠單抗達成)起反應。
總之，研究滿足其主要終點：平均晚期AUC降低48%(90% CI[-19%，90%)])。相較於安慰劑，來金珠單抗顯著降低LAR。在安全性資料中未見安全性信號。IL-13之治療阻斷劑可為過敏性哮喘，特定言之氣管TH2發炎之標記升高之患者的過敏性哮喘之有效治療劑。
實例2-哮喘患者臨床研究I
進行隨機化雙盲安慰劑對照研究以評估來金珠單抗在儘管使用ICS進行長期治療，但哮喘仍未獲得足夠受控制或未獲得控制之患者中的效應。患者繼續其包括吸入皮質類固醇(ICS)且亦可包括LABA之標準護理療法(standard-of-care therapy)。在此兩組研究中，隨機分配患者以接受來金珠單抗或安慰劑6個月。在14-20天之導入期(run-in period)(就診1至就診3)期間，患者必須顯示ICS順應性且顯示其能夠使用為在整個研究期間進行每日監測所必需之設備。接著評估患者之研究適合性且隨機分配(1:1)於研究藥物(來金珠單抗或安慰劑)，其中基於IL-13特徵代用物狀態(以下進一步描述)、LABA使用及研究場所進行分層(stratification)。第一皮下(SC)劑量在隨機分配之24小時內(研究第1天，亦即隨機分配當天，與第一研究藥物投與日期無關)進行。每4週重複投與研究藥物一次持續後續20週(總計六次研究藥物劑量，提供24週治療期)。在治療期期間評估來金珠單抗功效之指標。
藉由在下列時間點進行皮下(SC)注射來將研究藥物投與所選患者：第1天及第4、8、12、16及20週。來金珠單抗之各劑量為250 mg。各安慰劑劑量為無來金珠單抗之2 mL相同流體。皮下注射液投與至手臂、大腿或腹部中。此試驗設計之示意圖可見於圖5中。
在所有(約200名)患者進行了治療且在隨機分配(第1天)後追蹤24週後進行初步分析。在整個研究期間評估安全性。在研究藥物之末次劑量(第20週)之後，再監測患者12週；在末次劑量之後的前4週視為(24週)治療期之一部分，且最後8週構成追蹤期。8週追蹤期以及治療期之最後4週允許監測患者持續末次劑量之後的3-4個半衰期。因此，患者通常參與研究總計約34週。參見圖5。出於作出決定之目的來定義功效可評估患者(n=180)以排除符合以下兩個原因之個體：(1)在關鍵特徵方面不為目標群體之一部分及(2)用以衡量治療效果之基線FEV1不可靠。關於參與此試驗之患者之基線特徵，請參見圖6。
關鍵納入準則包括下列準則：能夠根據研究特定肺功能測試(PFT)手冊在就診1-3時進行肺活量測定；在就診1之12個月內之胸部放射線像片不顯示臨床顯著異常；在就診1-3之間能夠完成研究材料(如藉由願意完成日記及PEF量測所衡量)；基於所有下列準則選擇未獲得控制之哮喘：
-診斷有哮喘>12個月
-在就診1或2時具有支氣管擴張藥反應
-在就診1及3時之支氣管擴張藥前FEV140%且80%預測值
-在就診1之前持續至少連續6個月使用ICS200 μg且1000 μg總每日劑量之丙酸氟替卡松(FP)或等效物
-不論ICS順應性如何，就診3哮喘控制問卷(ACQ)s計分1.5。
關鍵排除準則包括下列準則：
醫學病狀：
-就診1-3檢出哮喘惡化、顯著氣流阻塞或呼吸道感染
-已知惡性疾病或當前評估有潛在惡性疾病
-已知免疫缺乏，包括(但不限於)HIV感染
-先前存在除哮喘以外之肺病，包括活動性感染
-未獲得控制之臨床顯著醫學疾病
暴露：
-當前吸菸者或終生吸菸史>10包年(pack-year)之先前吸菸者
-伴隨藥物(除ICS以外之類固醇、除SABA以外之短效支氣管擴張藥、免疫調節劑)受禁止
-妊娠或不願意使用高效避孕
鑒於量測肺自身之IL-13有實際困難，因此使用周邊血液中之嗜伊紅血球及IgE含量作為代用指標，表示為「IL-13特徵代用物」。IL-13特徵代用物陽性患者定義為總IgE>100 IU/mL且血液嗜伊紅血球0.14×10×e9個細胞/公升之患者，而IL-13特徵代用物陰性患者之總IgE100 IU/mL或血液嗜伊紅血球<0.14×10×e9個細胞/公升。自支氣管上皮細胞中IL-13誘導之基因表現(IL-13特徵)與周邊血液IgE及嗜伊紅血球相關之哮喘患者建立確定患者IL-13特徵代用物狀態的IgE及嗜伊紅血球含量準則(Corren等人，N Engl J Med 365:1088-1098[2011])。
使用多個哮喘活動性指標，包括肺功能(亦即FEV1、峰值流量(包括峰值流量之變化性)、在所選中心對乙醯甲膽鹼之反應、呼出氧化氮分數[FENO])及疾病活動性或控制指標(亦即患者報導之結果[PRO]、救助藥物之使用、惡化率)來評估來金珠單抗之功效。FEV1變化為主要結果。在用來金珠單抗治療之後，下列標記：TARC(CCL17)、MCP-4(CCL13)及IgE用於藥效學分析。
主要功效結果指標
主要功效結果指標為自基線至第12週之支氣管擴張藥前FEV1(體積)相對變化。
次要功效結果指標
次要功效結果指標為下列指標：自基線至第24週之支氣管擴張藥前FEV1(體積)相對變化；具有IL-13特徵代用物陽性狀態之患者自基線至第12週之支氣管擴張藥前FEV1(體積)相對變化；自基線至第12週之哮喘控制問卷(ACQ)計分變化；自基線至第12週之哮喘症狀計分變化(如藉由哮喘控制每日日記(ACDD)所衡量)；自基線至第12週之早晨支氣管擴張藥前峰值流量值變化；在24週治療期期間之哮喘惡化率；在24週治療期期間之重度哮喘惡化率；自基線至第12週之救助藥物使用變化(藉由每天救助藥物或霧化救助藥物之噴藥次數所衡量)。
探索性指標：
評估下列探索性結果指標：自基線至第12週之每週良好控制哮喘天數變化，如藉由ACDD所衡量；自基線至第12週之歸因於哮喘之夜間覺醒的每週頻率變化；自基線至第12週之FENO含量變化。
初始觀測結果
在哮喘控制不良之患者之此研究中，來金珠單抗治療與主要結果變數支氣管擴張藥前FEV1之統計顯著改良相關。在起始治療之後不久出現FEV1改良，指示IL-13抑制相對快速地影響氣流指標。使用Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析(以下描述，歸因於有助於分析之值不可用)，儘管來金珠單抗治療未使方案定義及重度之惡化在統計上顯著降低，但觀測到重度惡化率減小之趨勢，尤其對於骨母細胞特異性因子-2較高患者而言。然而，使用如下所述之E4分析，來金珠單抗治療使得方案定義及重度之惡化在統計上顯著降低(在骨母細胞特異性因子-2較高子群中為84%(95% CI 14%，97%，p=0.03))。亦參見下文。此外，FENO子群分析達成重度惡化在統計上顯著降低(p=0.04)。來金珠單抗治療不改良哮喘症狀，如藉由ACQ5之僅症狀版本(其排除救助SABA使用及FEV1)或每日日記指標所衡量。
血清Th2趨化因子CCL13及CCL17以及IgE之降低支持作為氣管中測得之臨床影響之基礎的來金珠單抗介導的生物效應。血液嗜伊紅血球計數略微增加與在抑制吸引嗜伊紅血球之趨化因子之後，嗜伊紅血球自血液至肺代謝區之總體轉移減少一致。來金珠單抗使FENO減小之研究結果與此跡象一致。然而，來金珠單抗藉由經由IL-13阻斷而間接抑制氧化氮合成酶表現而非藉由改善嗜伊紅血球性發炎(亦認為此舉會影響FENO)來使FENO減小。
此研究之患者適合性準則要求對於400 μg沙丁胺醇之可逆性至少為12%(在就診之前不使用SABA至少4小時且不使用LABA至少12小時)。此欲確保當期望肺功能總體相對變化至少10%時，患者具有「移動空間(room to move)」。此簡單臨床測試可限制將此等資料歸納至未經選擇之更一般哮喘患者群體的能力。實際上，患者不適合之最常見原因為此測試失敗(在篩檢不合格之263名患者中有92名患者)。
在此研究中，吾人首先假設高血清IgE與高血液嗜伊紅血球計數之組合為用於鑑別IL-13相關性基因在肺中之表現增加之患者的代用物(IL-13特徵代用物或Th2較高)。儘管仍然不瞭解資料與治療分配間之對應性，但吾人書寫一份統計分析計劃以使用基於血清骨母細胞特異性因子-2含量之差異。如以下更詳細描述，此子群分析顯示相對於骨母細胞特異性因子-2較低患者，來金珠單抗治療在骨母細胞特異性因子-2較高患者中之有效性增強，如伴隨FEV1更穩固增加及FENO下降更大以及用顯著相互作用測試所觀測。此等研究結果表明預先指定之標記血清骨母細胞特異性因子-2可潛在地用於選擇對來金珠單抗治療可能更具反應性之哮喘患者。
參與研究之患者之基線特徵展示於圖6中。除非另外說明，否則數值係指平均值(SD)。骨母細胞特異性因子-2較高係指根據下述E4分析，患者之基線骨母細胞特異性因子-2高於23 ng/ml。骨母細胞特異性因子-2較低係指根據下述E4分析，患者之基線骨母細胞特異性因子-2低於23 ng/ml。
所治療患者在第12週及第24週時之FEV1(公升)的相對變化(95%信賴區間)展示於圖7中。相較於IL-13特徵陽性患者，骨母細胞特異性因子-2陽性患者經歷之FEV1相對變化較大。
圖7顯示所有參與者自基線至第12週之安慰劑校正FEV1相對變化為5.9%(95% CI 0.9%，10.9%，p=0.2)且骨母細胞特異性因子-2較高子群之該相對變化為10%(95% CI 2.5%，17.5%，p=0.01)。所有參與者自基線至第24週之安慰劑校正FEV1相對變化為4.8%(95% CI 0.3%，9.3%，p=0.04)且骨母細胞特異性因子-2較高子群之該相對變化為6.1%(95% CI-1.4%，13.6%，p=0.11)。圖8展示所有功效可評估個體(A)及單獨骨母細胞特異性因子-2較高個體(B)在整個治療期(32週)期間之FEV1相對變化。在治療之32週時之來金珠單抗功效未減小，表明有可能降低投與來金珠單抗之頻率。
吾人亦檢查來金珠單抗治療對作為探索性結果及氣管重塑之間接代用物之支氣管擴張藥後FEV1的影響。在吸入100 mcg沙丁胺醇四次之後量測在20週時支氣管擴張藥後FEV1之變化。在研究藥物投與之前的基線狀態下，安慰劑組及來金珠單抗組中之平均支氣管擴張藥後FEV1分別為2.50公升(0.71)及2.54公升(0.73)。在該兩個組中，此對應於77.9%預測值。支氣管擴張藥後FEV1之總體安慰劑校正變化為4.9%(95% CI 0.2%至9.6%；p=0.04)。在骨母細胞特異性因子-2較高組中，來金珠單抗治療使20週時之支氣管擴張藥後FEV1增加(8.5%；95% CI 1.1%至16%；p=0.03)。在骨母細胞特異性因子-2較低組中，無支氣管擴張藥後FEV1改良之跡象(1.8%；95% CI-4.1至7.7；p=0.55)。此外，在骨母細胞特異性因子-2較高組中，來金珠單抗使絕對支氣管擴張藥後FEV1增加(170 ml；95% CI 10至320 ml)。吾人得出結論，來金珠單抗在具有Th2氣管發炎增加之跡象(骨母細胞特異性因子-2較高)之未獲得控制之哮喘患者中改良支氣管擴張藥後FEV1。基於此資料，來金珠單抗有可能降低哮喘中之氣管重塑。
圖9展示在治療之24週時觀測到之惡化率及重度惡化率。相較於安慰劑，在來金珠單抗治療之所有參與者中，惡化率降低37%(95% CI-22%，67%，p=0.17)且在骨母細胞特異性因子-2較高子群中降低61%(95% CI-6%，86%，p=0.07)。對於所有參與者而言，重度惡化率降低51%(95% CI-33%，82%，p=0.16)，且在骨母細胞特異性因子-2較高子群中降低84%(95% CI 14%,97%，p=0.03)。吾人亦檢查了在32週(即追蹤期結束、來金珠單抗末次劑量之後12週)時ITT群體中之重度惡化率。如表10中所示，相較於安慰劑，在來金珠單抗治療患者中，在32週時，所有患者之重度惡化率顯著降低50%(p=0.03)。用來金珠單抗治療之骨母細胞特異性因子-2較高患者中之重度惡化率最低(0.13)；然而，在子分析中，與安慰劑相比之比率降低未達到統計顯著性。吾人得出結論，來金珠單抗具有使用ICS未獲得足夠控制之患者中之重度惡化降低的顯著益處。重度惡化之最大降低見於在治療之前骨母細胞特異性因子-2含量較高之患者中。用於捕捉事件之觀測的持續時間在推動研究方面為重要的，因為相較於24週，在約200名個體中偵測至少50%降低可能需要此終點及32週觀測。
表10：在32週(亦即末次劑量後12週)時之重度惡化率。
來金珠單抗滿足其主要終點且極有效降低重度惡化。資料表明患者之骨母細胞特異性因子-2狀態可預示惡化事件且在較小程度上預示FEV1。資料支持預測骨母細胞特異性因子-2含量值可用於確定對來金珠單抗治療之反應。舉例而言，使用E4分析，血清或血漿骨母細胞特異性因子-2含量低於20 ng/ml之彼等患者受益於來金珠單抗之可能性較低，而血清或血漿骨母細胞特異性因子-2含量高於20 ng/ml之彼等患者受益於來金珠單抗之可能性較大。此外，血清或血漿骨母細胞特異性因子-2含量高於23 ng/ml(如藉由E4分析所測定)之彼等患者受益於來金珠單抗治療之可能性甚至更大。
患者報導之結果：ACQ及微型AQLQ未顯示治療組之間的一致差異。在若干次就診之後，ACDD資料顯示治療組之間在良好控制天數、哮喘症狀、夜間覺醒及救助藥物使用之平均計分方面的一些差異，所有皆支持來金珠單抗治療。對於所有ACDD資料(良好控制天數、哮喘症狀、夜間覺醒及救助藥物使用)終點，相較於所有個體，在骨母細胞特異性因子-2較高個體中經安慰劑校正之治療效果較大；然而，在12週時治療組之間無統計顯著差異。
肺功能：在所有來金珠單抗治療個體中在大多數時間點時且對於來金珠單抗治療之骨母細胞特異性因子-2較高個體在所有時間點時，觀測到與基線相比肺功能(PEF)改良。安慰劑治療個體在所有時間點時與基線相比均下降。
肺發炎：在整個研究期間來金珠單抗治療個體及骨母細胞特異性因子-2較高子集中之個體的FENO均下降(改良)，而安慰劑治療個體之FENO增加(惡化)。相對於安慰劑治療個體(n=86)之15%，在12週時來金珠單抗治療個體(n=83)之FENO變化百分比為-20.1%[p<0.01]。相對於安慰劑治療個體(n=44)之17.5%，在12週時來金珠單抗治療個體之FENO變化百分比為-24.2%[p<0.01]。在12週時治療組之間的差異為統計顯著的。參見圖10。在事後分析中，高基線FENO亦與改良FEV1之功效及相較於安慰劑之重度惡化率較低相關。然而，吾人注意到在導入期間，基線FENO展示之患者內變化性大於骨母細胞特異性因子-2(19.8%對5.0%)。
吾人亦檢查資料以確定骨母細胞特異性因子-2較低且FENO較高之患者是否在與骨母細胞特異性因子-2較高患者相同之程度上受益於來金珠單抗治療。在基線時，吾人觀測到FENO與血清骨母細胞特異性因子-2之間的適度關聯(rs=0.31，P<0.001；N=210(具有匹配資料))。使用中間截止值，骨母細胞特異性因子-2及FENO狀態通常但不完全重疊(表11)。對於表11中所示之資料，骨母細胞特異性因子-2截止值為25 ng/mL(使用下述E4分析)且FENO截止值為21 ppb(如使用此項技術中已知之標準方法所量測)。基於複合骨母細胞特異性因子-2及FENO狀態之FEV1評估揭示骨母細胞特異性因子-2與FENO兩者之含量均較高之組在12週時經安慰劑校正之來金珠單抗效果最大(表12)。相反，骨母細胞特異性因子-2較低/FENO較高組中觀測到之治療益處微小(2.3%，P=0.73)。因此，FENO似乎不鑑別受益於來金珠單抗之骨母細胞特異性因子-2較低患者的子集。骨母細胞特異性因子-2及FENO關於對來金珠單抗治療之反應的相對預測值值得進一步研究。
表11：根據基線骨母細胞特異性因子-2及FENO狀態之患者分佈。
根據費雪氏精確檢定(Fisher's exacttest)(單向)，p=0.0004
表12：在12週時ITT患者中與基線FEV1相比之平均相對變化。使用滿足方案定義之准入準則之所有患者的FENO或骨母細胞特異性因子-2之中值基線含量來定義表中所述之子集(高=中值或高於中值；低=小於中值)。
來金珠單抗之藥物動力學特徵類似於已見於先前研究中之特徵。個體之體重對來金珠單抗之藥物動力學有影響。
除血清骨母細胞特異性因子-2含量之外或作為血清骨母細胞特異性因子-2含量之替代物，亦評估若干標記就以上治療益處而言提供預測值之能力。彼等標記包括CEA、IgE、TARC(CCL17)及MCP-4(CCL13)。
此外，吾人假設骨母細胞特異性因子-2較高哮喘患者中之血清骨母細胞特異性因子-2過量係歸因於IL-13之效應。因此，吾人設法在哮喘未獲得控制之安慰劑及來金珠單抗治療患者中評估IL-13對總全身骨母細胞特異性因子-2含量之相對影響。對於此等實驗，吾人使用實例7中所述之Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析量測血清骨母細胞特異性因子-2。如圖18及19中所示，吾人發現在兩個研究組中，大多數(>90%)在基線時骨母細胞特異性因子-2較低之患者保持較低(圖18A)，而72%用安慰劑治療及40%用來金珠單抗治療之骨母細胞特異性因子-2較高患者在第12週時保持骨母細胞特異性因子-2較高(圖18B)。吾人得出結論，在儘管使用ICS但哮喘未獲得控制之成人中，相較於安慰劑，骨母細胞特異性因子-2較高患者在來金珠單抗治療後展現血清骨母細胞特異性因子-2含量顯著降低，但骨母細胞特異性因子-2較低患者顯示未回應於來金珠單抗而顯著降低。此等研究結果表明在未獲得控制之哮喘患者中，血清骨母細胞特異性因子-2過量係歸因於IL-13之活性，且用來金珠單抗抑制IL-13會使血清骨母細胞特異性因子-2含量降低。
四名來金珠單抗治療患者經歷嚴重不良事件(SAE)(哮喘惡化[n=2]、社區型感染肺炎及與車禍相關之創傷性氣胸(traumatic pneumothorax))。六名安慰劑患者經歷七種SAE(哮喘惡化[n=2]、頭痛、硬膜外後之腦脊髓液洩漏、帶狀疱疹(shingles)、帶狀疱疹(herpes zoster)、急性化膿性腦膜炎(acute purulent meningitis)及疼痛藥物成癮)。關於自此試驗獲得之安全性結果，請參見圖11。
在兩個治療組中，總體AE頻率類似(來金珠單抗，74.5%；安慰劑，78.6%)，嚴重AE之頻率亦如此(來金珠單抗，3.8%；安慰劑，5.4%)(表9)。在來金珠單抗之情況下，肌肉骨骼事件更常見(來金珠單抗，13.2%；安慰劑，5.4%；P=0.045)(表9)。二十五名患者(11.5%)提早停止研究，包括12名安慰劑及13名來金珠單抗治療患者。
實例3-哮喘患者研究II(劑量範圍研究)
在不使用吸入皮質類固醇之哮喘患者中進行隨機化雙盲安慰劑對照四組劑量範圍研究以進一步在功效、安全性及耐受性方面來評估來金珠單抗之劑量與反應之間的關係。關於此試驗之示意性設計，請參見圖12。所選患者具有至少15%之支氣管擴張藥反應及60%且85%預測值之支氣管擴張藥前FEV1，其中在導入期期間顯示疾病穩定性。先前用ICS管理之選用於研究之患者在首次研究就診(就診1)之前最少30天不可已接受ICS。研究不具有停藥期(withdrawal period)；出於變得適於研究之唯一目的，患者將不停止服用皮質類固醇。
就診1時之第一研究相關程序開始約2週之導入期。在導入期(就診1-3)期間，評估哮喘控制(如藉由哮喘控制問卷[ACQ]計分所衡量)及肺功能。用皮膚點刺測試(skin prick testing)及包括IgE及周邊血液嗜伊紅血球在內之相關生物標記進一步表徵患者之哮喘。使用IgE及嗜伊紅血球含量基於患者之IL-13特徵代用物狀態對患者進行分類。在導入期結束時，隨機分配(1:1:1:1)適合患者以經由皮下投藥接受三種劑量(500 mg、250 mg或125 mg)之一之來金珠單抗或安慰劑。在12週治療期期間投與研究藥物四次。在研究藥物之末次劑量之後，再監測患者8週追蹤期。因此，在就診1之後大多數患者參與研究總計約22週，在該時間期間，獲得間歇PK樣本。進行密集PK取樣，在研究及追蹤期期間獲得其他PK樣本以及在末次研究藥物投藥之後16週獲得另一PK樣本，直至70名個體完成密集PK取樣。因此，密集PK取樣組中之患者之研究參與在就診1之後持續約26週。在整個研究期間評估安全性且規定治療失敗之預先指定臨限值以便若患者具有臨床顯著退化，則其可停止服用研究藥物以恢復標準療法。
初始觀測結果
功效：對於所有來金珠單抗治療個體，自基線至12週之安慰劑校正FEV1相對變化為4.1%(95% CI-0.4，8.6%；p=0.075)改良。在整個12週治療期期間，所有來金珠單抗治療患者中之估計治療失敗風險比安慰劑治療患者低75%(HR 0.25，95% CI：0.11，0.78；p=0.001)。此等結果視為臨床及統計顯著。無劑量反應之跡象(參見圖16)。
安全性：除注射部位反應(來金珠單抗與安慰劑分別為23%與6%)之外，在來金珠單抗治療患者與安慰劑治療患者之間無臨床上顯著之不均衡。
實例4-骨母細胞特異性因子-2分析(E4分析)
以下描述一種極靈敏(靈敏度1.88 ng/ml)之骨母細胞特異性因子-2捕捉ELISA分析。抗體以nM親和力識別骨母細胞特異性因子-2同功異型物1-4(SEQ ID NO: 5-8)。
用磷酸鹽緩衝鹽水稀釋80 μL經純化單株抗體25D4(塗佈抗體，SEQ ID NO: 1及2，自融合瘤或CHO細胞株表現)至最終濃度2 μg/mL。用每孔100 μL塗佈抗體塗佈微量滴定盤，在2-8℃下覆蓋隔夜。在室溫下每個洗滌緩衝液循環用每孔400 μL洗滌緩衝液(PBS/0.05%吐溫(Tween)(聚山梨醇酯20))將盤洗滌三次。向盤中每孔添加200 μL阻斷緩衝液。在室溫下在振盪下培育經覆蓋之盤1.5小時。
製備重組人類骨母細胞特異性因子-2(rhuPeriostin)標準曲線(重組人類骨母細胞特異性因子-2之標準儲備液=5.25 ng/ml重組人類骨母細胞特異性因子-2同功異型物1(R&D systems #3548-F2)於分析稀釋劑(PBS/0.5%牛血清白蛋白(BSA)/0.05%聚山梨醇酯20/0.05% ProClin300，pH 7.4)中)。標準曲線稀釋劑=PBS/0.5% BSA/0.05%聚山梨醇酯20，0.05% ProClin300，pH 7.4。舉例而言：
製備對照及樣品。三個對照：外加來源對照(重組人類骨母細胞特異性因子-2全長同功異型物1，R&D Systems #3548-F2)、正常基質對照(正常人類血清池，Bioreclamation,Inc.)、高基質對照(正常人類血清池加100 ng/ml重組人類骨母細胞特異性因子-2外加物)。
舉例而言：
10 μL對照(或樣品)血清+1.99 mL樣品/對照稀釋劑=1:200
300 μL I:200稀釋液+300 μL樣品/對照稀釋劑=1:400
300 μL 1:400稀釋液+300 μL樣品/對照稀釋劑=1:800
300 μL 1:800稀釋液+300 μL樣品/對照稀釋劑=1:1600
各稀釋均以單份操作。
使用正常人類血清池構築基質對照。使用未外加之匯合人類血清作為正常對照。藉由將100 ng/mL rhuPOSTN外加至如上所述之匯合血清中來產生高對照。計算每個盤上各對照之四種稀釋液之平均值、標準偏差(SD)及變異數係數%(CV，用百分比表示)。CV為關於重複測定之平均值之重複量測結果變異數的定量量值。%CV=100×(SD/平均值)。評估所有盤的此等平均濃度以確定盤間精確度。此對照表接著用於定義正常對照及高對照通過/失敗準則，從而設定允許變異數為各對照之平均濃度之±20%。
每個循環用每孔400 μL洗滌緩衝液(PBS/0.05%聚山梨醇酯20)將盤洗滌三次。添加經稀釋標準物(雙重複孔)、對照(所有四種稀釋液)及樣品(所有四種稀釋液)至盤中，每孔100 μL。在室溫下在振盪下培育在室溫下覆蓋之盤2小時。用分析稀釋劑稀釋80 μL偵測MAb儲備液I(7.5 μg/ml經生物素標記之鼠類抗人類骨母細胞特異性因子-2 MAb 23B9於分析稀釋劑中)至12 mL，得到50 ng/mL。每個循環用每孔400 μL洗滌緩衝液將盤洗滌四次。添加經稀釋偵測MAb至盤中，每孔100 μL。在室溫下在振盪下培育經覆蓋之盤一小時。用分析稀釋劑稀釋80 μL於分析稀釋劑中以1:80稀釋之抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)-HRP儲備液I(AMDEX抗生蛋白鏈菌素-HRP，GE Healthcare #RPN4401，約1 mg/ml)至12 mL，得到1:12k。每個循環用每孔400 μL洗滌緩衝液將盤洗滌四次。添加經稀釋抗生蛋白鏈菌素-HRP至盤中，每孔100 μL。在室溫下在振盪下培育經覆蓋之盤45分鐘。使克爾凱郭爾(Kirkegaard)及佩里(Perry)(KPL)兩步TMB試劑達到室溫；不組合。每個循環用每孔400 μL洗滌緩衝液將盤洗滌四次。混合相等體積之KPL TMB受質組分且添加至盤中，每孔100 μL。在室溫下在振盪下培育盤20分鐘。添加1 M磷酸至盤中，每孔100 μL。使用450 nm讀取波長及650 nm參照波長對盤進行讀取。此分析或與以上分析類似之分析用於實例3中所述之臨床試驗中。
使用類似抗體捕捉格式，對不同哮喘患者樣品測試使用針對同功異型物1(而非總骨母細胞特異性因子-2)之抗體進行之骨母細胞特異性因子-2分析。初步結果指示，就TH2發炎之標記而言，骨母細胞特異性因子-2同功異型物1不如同總骨母細胞特異性因子-2穩固。
實例5-哮喘患者觀測研究(BOBCAT)
吾人先前基於吾人對儲存於舊金山加州大學(University of California,San Francisco,UCSF)之氣管組織庫(Airway Tissue Bank)中之生物樣品的研究報導某些生物標記研究結果，該等生物樣品係在出於研究目的在健康及哮喘自願者中進行之支氣管鏡檢期間收集。參見例如國際公開案第WO 2009/124090號。為在較大中度至重度哮喘組中驗證此等研究結果且在多個臨床場所對其進行歸納，吾人收集誘導之痰、支氣管內活檢體及周邊血液來對用高劑量ICS(每天>1000 μg氟替卡松DPI或等效物)未獲得控制之中度至重度哮喘患者(ACQ>1.50且FEV1介於40-80%之間)進行多中心3次就診觀測研究(「BOBCAT」)。吾人自59名個體獲得匹配之血液及氣管資料(參見圖13中之研究概述)。研究詳情在下文提供。
BOBCAT(皮質類固醇難治性哮喘中之生物標記之支氣管鏡探索性研究)為在美國、加拿大及英國進行用以收集約60名中度至重度哮喘患者中之匹配氣管及血液樣品的多中心研究。納入準則要求診斷有儘管連同或不連同長效β促效劑一起使用高劑量ICS(每天>1000 μg氟替卡松或等效物)之穩定給藥方案(>6週)，但未獲得控制(如藉由在前一年中惡化至少2次或哮喘控制問卷(ACQ)計分>1.50所確定(Juniper,E.F.等人，Respir Med 100,616-621(2006)))之中度至重度哮喘(藉由FEV1介於預測值之40-80%之間以及有在過去5年內用短效支氣管擴張藥使氣管阻塞可逆性>12%或乙醯甲膽鹼敏感性(PC20)<8 mg/ml的跡象所確認)。允許之伴隨藥物亦包括白三烯受體拮抗劑及經口皮質類固醇。BOBCAT研究流程描繪於圖13中。
如先前所述進行FENO、支氣管鏡檢、BAL、誘導之痰及用於嗜伊紅血球計數之免疫組織化學(Woodruff,P.G.,等人，Am J Respir Crit Care Med 180,388-395(2009)；Boushey,H.A.,等人，N Engl J Med 352,1519-1528(2005)；Brightling,C.E.,等人，Thorax 58,528-532(2003)；Lemiere等人，J Allergy Clin Immunol 118,1033-1039(2006))。所有研究方案皆由相關機構審查委員會批准且在招募之前自所有個體獲得知情同意書。患者人口統計狀況及肺功能資料概述於下表5中。
表5：BOBCAT人口統計及臨床資料。
吾人使用預先指定之與先前研究一致之截止值：針對痰嗜伊紅血球為3%(Green,R.H.等人，Lancet 360,1715-1721(2002)；Haldar,P.等人，N Engl J Med 360,973-984(2009))及每mm2總活檢體面積22個嗜伊紅血球(Miranda,C.,A.等人，J Allergy Clin Immunol 113,101-108(2004)；Silkoff,P.E.,等人，J Allergy Clin Immunol 116,1249-1255(2005))。在涵蓋多達5週之所有三次就診時，在個別個體內，血清骨母細胞特異性因子-2含量極穩定(資料未展示)。相較於「嗜伊紅血球較低」個體，「嗜伊紅血球較高」個體中之平均骨母細胞特異性因子-2含量顯著較高，如藉由痰或組織嗜伊紅血球量測結果(資料未展示)所確定。根據複合計分0(兩者皆無)、1(有任一者)或2(有痰嗜伊紅血球增多與組織嗜伊紅血球增多兩者)分層之個體展現血清骨母細胞特異性因子-2隨嗜伊紅血球計分增加而增加之高度顯著趨勢(資料未展示)。此外，使用上述E4分析，所有組的非嗜伊紅血球性哮喘患者之血清骨母細胞特異性因子-2含量一致低於25 ng/ml。使用25 ng/ml血清骨母細胞特異性因子-2作為截止值，BOBCAT中之「嗜伊紅血球較低」個體與「嗜伊紅血球較高」個體以陽性預測值93%有效區分(表6)。組織嗜中性白血球計數與組織嗜伊紅血球及血清骨母細胞特異性因子-2含量正相關(資料未展示)。總之，此等資料顯示血清骨母細胞特異性因子-2為中度至重度哮喘患者(儘管使用類固醇治療)中之持久氣管嗜伊紅血球增多之全身性生物標記。
表6：BOBCAT中血清骨母細胞特異性因子-2(N=57)及FENO(N=56)之截止值相對於複合氣管嗜伊紅血球狀態的列聯表
比較血清骨母細胞特異性因子-2與作為哮喘生物標記之呼出氧化氮分數(FE NO ) 、周邊血液嗜伊紅血球、血清IgE及血清YKL-40
近年來，已描述哮喘嚴重性及氣管發炎之其他非侵襲性生物標記。四種特別相關之標記為呼出氧化氮分數(FENO)，一種因發炎支氣管黏膜中之酶iNOS(誘導性氧化氮合成酶)之作用而產生的呼出氣體(Pavord,I.D.等人，J Asthma 45,523-531(2008))；周邊血液嗜伊紅血球；血清IgE；及YKL-40，一種可在周邊血液中偵測之殼質酶(chitinase)樣蛋白質(Chupp,G.L.等人，N Engl J Med 357,2016-2027(2007))。吾人量測吾人之哮喘組中之此等生物標記且將值與氣管嗜伊紅血球增多及其他生物標記進行比較。
在BOBCAT中，骨母細胞特異性因子-2、FENO、IgE及血液嗜伊紅血球皆不與ACQ、FEV1、年齡、性別或身體質量指數(BMI)顯著相關。在BOBCAT中，與血清骨母細胞特異性因子-2含量類似，FENO含量通常在多次就診中一致，但FENO在較高程度上變化較大(資料未展示)，而血液嗜伊紅血球顯著更可變(相較於在就診1與就診3之間血清骨母細胞特異性因子-2之r2=0.65，在就診1與就診3之間血液嗜伊紅血球之r2=0.18，未展示)。如圖14A-F中所示，在BOBCAT中，在就診1、2及3時之血清骨母細胞特異性因子-2含量彼此且與所有就診時的平均骨母細胞特異性因子-2含量高度相關。
如表6中所說明針對痰及活檢體嗜伊紅血球狀態進行分層，相較於非嗜伊紅血球性哮喘患者，嗜伊紅血球性哮喘患者中之FENO含量顯著較高。然而，儘管FENO與骨母細胞特異性因子-2兩者均具有高度特異性(對於「嗜伊紅血球較低」個體一致展現低值)，但FENO偵測到較少個體具有組織嗜伊紅血球增多且根據所採用之各指標，顯示在「嗜伊紅血球較低」個體與「嗜伊紅血球較高」個體之間有較大重疊(圖15A-D)。吾人擬合包含年齡、性別、BMI、血液嗜伊紅血球、血清IgE、FENO及血清骨母細胞特異性因子-2(表7)之邏輯回歸模型，且發現骨母細胞特異性因子-2為複合氣管嗜伊紅血球狀態之最顯著單一預測因子(p=0.007)。
表7：BOBCAT研究(N=59)中生物標記相對於嗜伊紅血球狀態之邏輯回歸模型。
使用如先前所述之截止值35 ppb(Dweik,R.A.等人，Am J Respir Crit Care Med 181,1033-1041(2010))，FENO以與骨母細胞特異性因子-2截止值25 ng/ml類似之特異性但小於其之靈敏度區分「嗜伊紅血球較低」哮喘患者與「嗜伊紅血球較高」哮喘患者(表6)。「嗜伊紅血球較高」哮喘患者中之周邊血液嗜伊紅血球趨向於較高，但未達到統計顯著性(資料未展示)。為連續評估各標記之相對效能，吾人進行骨母細胞特異性因子-2、FENO、血液嗜伊紅血球及血清IgE相對於複合氣管嗜伊紅血球狀態之接受者操作特徵(receiver operating characteristic，ROC)分析且發現骨母細胞特異性因子-2之效能優於FENO(AUC分別為0.84及0.79)，而血液嗜伊紅血球及血清IgE之效能實質上較差(圖15 E)。
YKL-40顯示與骨母細胞特異性因子-2及與任何組中之氣管或周邊嗜伊紅血球增多之任何指標皆無顯著關聯(資料未展示)。與呼出及血液生物標記含量之此等研究結果一致，吾人發現骨母細胞特異性因子-2及NOS2(編碼iNOS之基因)之支氣管上皮基因表現量彼此且與IL-13及IL-5之支氣管黏膜表現量顯著相關，而CHI3L1(編碼YKL-40之基因)之表現不與骨母細胞特異性因子-2、IL-13及IL-5相關(表8)。總之，此等資料表明，在涵蓋一定範圍嚴重性及類固醇治療之哮喘患者中，周邊血液骨母細胞特異性因子-2為一種比FENO、血液嗜伊紅血球、血清IgE或YKL-40更可靠之氣管Th2/嗜伊紅血球性發炎指示物。
表8：編碼生物標記及Th2細胞激素之基因之表現量之間的相關性矩陣。
討論
儘管哮喘在傳統上視為一種由Th2驅動之發炎介導之過敏性疾病(1)，但存在新出現病理生理異質性之證據(3-8)。吾人近來已證實，在未使用類固醇治療之輕度至中度哮喘患者中，僅約半數個體在其氣管中具有Th2發炎跡象。「Th2較高」子集係由過敏之標記升高、嗜伊紅血球性氣管發炎、支氣管纖維化及對ICS敏感進行區分(13)。因為Th2細胞激素IL-4、IL-5及IL-13之拮抗劑正作為哮喘治療劑處於積極開發中(35-37)，所以鑑別最可能受益於此等靶向療法之哮喘患者變得愈加重要。儘管支氣管鏡檢、誘導之痰取樣及量測呼出氣體能夠直接表徵氣管中之發炎路徑，但此等模態可為耗時、昂貴、侵襲性的，及/或不可廣泛用於初級護理環境中。此外，分析程序未在具備分析氣管樣品能力之相對少數幾個中心之間進行標準化，此使得在多中心臨床試驗中實施具有挑戰性。因此，為選擇在氣管中具有Th2驅動之嗜伊紅血球性發炎之跡象的患者用於靶向療法，宜開發可在可得分析平台上廣泛使用之Th2驅動之嗜伊紅血球性氣管發炎的非侵襲性生物標記。為滿足此需要，吾人已對哮喘氣管樣品使用基因表現型態分析以使得能夠發現及表徵臨床上適用的Th2驅動之嗜伊紅血球性氣管發炎之周邊生物標記。
骨母細胞特異性因子-2為一種與纖維化相關之分泌型基質細胞蛋白質，其表現在培養支氣管上皮細胞(21、38)及支氣管纖維母細胞(39)中由重組IL-4及IL-13上調。在小鼠哮喘模型(40)、恆河猴哮喘模型(資料未公開)及人類哮喘患者之支氣管上皮細胞(21)及上皮下支氣管層(39)中，其在活體內以升高之含量表現。在人類哮喘患者中，骨母細胞特異性因子-2表現量與網狀基膜厚度(上皮下纖維化之一種指標)相關(23)。骨母細胞特異性因子-2亦在與阿司匹靈敏感性哮喘相關之鼻息肉(41、42)及嗜伊紅血球性食道炎患者之食道上皮細胞中以IL-13依賴性方式(43)過度表現且因此可能在Th2驅動之疾病過程中之嗜伊紅血球的組織浸潤中起作用(44)。亦已在若干類型之上皮源性癌症中觀測到骨母細胞特異性因子-2表現升高(45-49)，且已報導一些癌症患者之血清中之可溶性骨母細胞特異性因子-2的含量升高(24-26、45、46)。哮喘或其他病狀中之局部及全身性骨母細胞特異性因子-2表現是否歸因於IL-13之直接或間接作用迄今尚不清楚且最佳將藉由比較骨母細胞特異性因子-2在治療性阻斷IL-13之前及之後之表現的評估進行闡明。
在非哮喘個體之周邊血液中，可偵測到可觀全身性濃度之骨母細胞特異性因子-2，但在未使用ICS治療之哮喘患者之子集的周邊血液中升高。其在支氣管上皮細胞中之表現因ICS治療而得到遏制(13、21)且相較於未使用ICS之哮喘患者，其在用ICS獲得相對良好控制之中度哮喘患者中之全身性含量通常較低，但具有顯著異質性。鑒於ICS主要在氣管中局部發揮其作用且在進行ICS治療之後，哮喘患者中之全身性骨母細胞特異性因子-2含量(如吾人先前所示，參見例如國際專利公開案第WO 2009/124090號)受遏制，可得出結論，在哮喘患者中，有相當大一部分之全身性骨母細胞特異性因子-2係來源於氣管且因此全身性骨母細胞特異性因子-2含量之10-20%差異就氣管發炎而言具有臨床意義。
FENO與氣管發炎相關且預測ICS在嚴重性不同之哮喘患者中之反應性(11、34)。然而，FENO含量不可靠地反映重度類固醇依賴性哮喘中之氣管嗜伊紅血球增多，且就FENO而言在痰與黏膜嗜伊紅血球定量之間存在差異(29、50)。用以遏制痰嗜伊紅血球計數之滴定ICS治療使重度哮喘惡化率降低(12)，但針對FENO含量之滴定ICS治療並非如此(51)。血清YKL-40已描述為一種哮喘氣管發炎標記，但其含量不與Th2發炎之指標，諸如IgE或嗜伊紅血球相關(33)。因此，在本研究中，吾人發現骨母細胞特異性因子-2及NOS2但非CHI3L1之支氣管上皮基因表現量與支氣管IL-13及IL-5表現相關(表8)。儘管吾人觀測到支氣管或全身性嗜伊紅血球增多與血清骨母細胞特異性因子-2含量之間有相對較強的正相關性，但嗜伊紅血球增多與FENO之間的關聯較弱且吾人未能在所研究之哮喘患者中觀測到血清YKL-40與嗜伊紅血球性發炎之間的關聯。視過敏原暴露、惡化及類固醇治療而定，痰及血液嗜伊紅血球計數及FENO具有顯著時序變化性(50、52、53)。儘管目前未知循環骨母細胞特異性因子-2之半衰期，但若骨母細胞特異性因子-2在血液中相對長命，則有可能全身性骨母細胞特異性因子-2含量可反映一段延長時期內之總氣管Th2發炎的綜合情況。與此可能性一致，吾人觀測到在歷經多達5週之過程中之3次量測中，血清骨母細胞特異性因子-2之個體內變化性相對較小(資料未展示)。未來研究應針對歷經較長時期比較性評估血清骨母細胞特異性因子-2、氣管嗜伊紅血球增多、FENO及Th2發炎之其他候選生物標記的縱向個體內變化性。
用症狀療法(例如β-促效劑)未獲得良好控制之支氣管哮喘之標準護理為吸入皮質類固醇(ICS)。在氣管中之IL-13含量升高的輕度至中度哮喘患者(19)及食道組織中之IL-13表現量升高的嗜伊紅血球性食道炎患者(43)中，ICS治療會實質上降低IL-13及IL-13誘導之基因在受影響組織中之含量。在ICS治療一週後的哮喘患者之氣管上皮細胞中及在培養支氣管上皮細胞中，吾人已顯示皮質類固醇治療會實質上降低IL-13誘導之Th2特徵基因表現量(13、21)。此下調可為ICS介導之IL-13含量降低、ICS介導之目標基因表現減少或兩者之組合的結果。在ICS治療難治性重度哮喘患者中，發現類似分數之個體(約40%)具有達到在未用ICS治療之輕度哮喘患者中所見之含量(19)的可偵測痰IL-13含量，此與吾人已描述(13)之具有支氣管上皮Th2特徵之個體的比例類似。已在BAL(54)及支氣管活檢體及痰中之嗜伊紅血球性發炎(8)中報導IL-4及IL-5表現細胞在類固醇難治性哮喘患者中持久存在的類似觀測結果。此等觀測結果表明，儘管在中度哮喘患者中，Th2驅動之嗜伊紅血球性發炎利用ICS治療遏制，但其會再出現在用類固醇治療未獲得完全控制之重度哮喘患者子集中。另一複雜情況因未完全依從處方ICS療法引起，此可解釋一些重度哮喘患者中之不良控制。因此，未來研究應針對在獲得控制及未獲得控制之哮喘患者中在ICS治療狀態、ICS劑量、固有類固醇敏感性及依從ICS療法之情形下評估血液骨母細胞特異性因子-2含量。
當前，存在眾多處於臨床開發中之靶向IL-13及在哮喘中驅動Th2發炎之相關因子，包括本文所述者的生物治療劑(35-37)。重要的是此等治療劑靶向具有相關分子病變之患者，否則重要治療效果可能被低估；抗IL5療法之研究強調此點(14、15、55)。吾人之研究結果表明，約半數未用類固醇治療之輕度至中度哮喘患者在其氣管中可顯示Th2路徑活性，且類似分數之中度至重度類固醇難治性哮喘患者顯示此路徑之活性。因此，如本文所述，鑑別在氣管中可能具有Th2驅動之發炎之哮喘患者的生物標記可有助於鑑別及選擇最可能對此等實驗性靶向療法起反應之患者。
參考文獻(實例5)
1.　Galli,S.J.,M. Tsai及A.M. Piliponsky,The development of allergic inflammation. Nature 454,445-454(2008)
2.　Haldar,P.及I.D. Pavord,Noneosinophilic asthma: a distinct clinical and pathologic phenotype. J Allergy Clin Immunol 119,1043-1052;quiz 1053-1044(2007)
3.　Anderson,G.P.,Endotyping asthma: new insights into key pathogenic mechanisms in a complex,heterogeneous disease. Lancet 372,1107-1119(2008)
4.　Moore,W.C.,D.A. Meyers,S.E. Wenzel,W.G. Teague,H. Li,X. Li,R. D'Agostino,Jr.,M. Castro,D. Curran-Everett,A.M. Fitzpatrick,B. Gaston,N.N. Jarjour,R. Sorkness,W.J. Calhoun,K.F. Chung,S.A. Comhair,R.A. Dweik,E. Israel,S.P. Peters,W.W. Busse,S.C. Erzurum及E.R. Bleecker,Identification of asthma phenotypes using cluster analysis in the Severe Asthma Research Program. Am J Respir Crit Care Med 181,315-323(2010)
5.　Siddiqui,S.及C.E. Brightling,Airways disease: phenotyping heterogeneity using measures of airway inflammation. Allergy Asthma Clin Immunol 3,60-69(2007)
6.　Simpson,J.L.,R. Scott,M.J. Boyle及P.G. Gibson,Inflammatory subtypes in asthma: assessment and identification using induced sputum. Respirology 11,54-61(2006)
7.　Wardlaw,A.J.,M. Silverman,R. Siva,I.D. Pavord及R. Green,Multi-dimensional phenotyping: towards a new taxonomy for airway disease. Clin Exp Allergy 35,1254-1262(2005)
8.　Wenzel,S.E.,S.J. Szefler,D.Y. Leung,S.I. Sloan,M.D. Rex及R.J. Martin,Bronchoscopic evaluation of severe asthma. Persistent inflammation associated with high dose glucocorticoids. Am J Respir Crit Care Med 156,737-743(1997)
9.　Fahy,J.V.,Eosinophilic and neutrophilic inflammation in asthma: insights from clinical studies. Proc Am Thorac Soc 6,256-259(2009)
10.　Fahy,J.V.,Identifying clinical phenotypes of asthma: steps in the right direction. Am J Respir Crit Care Med 181,296-297(2010)
11.　Cowan,D.C.,J.O. Cowan,R. Palmay,A. Williamson及D.R. Taylor,Effects of steroid therapy on inflammatory cell subtypes in asthma. Thorax 65,384-390(2010)
12.　Green,R.H.,C.E. Brightling,S. McKenna,B. Hargadon,D. Parker,P. Bradding,A.J. Wardlaw及I.D. Pavord,Asthma exacerbations and sputum eosinophil counts: a randomised controlled trial. Lancet 360,1715-1721(2002)
13.　Woodruff,P.G.,B. Modrek,D.F. Choy,G. Jia,A.R. Abbas,A. Ellwanger,L.L. Koth,J.R. Arron及J.V. Fahy,T-helper type 2-driven inflammation defines major subphenotypes of asthma. Am J Respir Crit Care Med 180,388-395(2009)
14.　Haldar,P.,C.E. Brightling,B. Hargadon,S. Gupta,W. Monteiro,A. Sousa,R.P. Marshall,P. Bradding,R.H. Green,A.J. Wardlaw及I.D. Pavord,Mepolizumab and exacerbations of refractory eosinophilic asthma. N Engl J Med 360,973-984(2009)
15.　Nair,P.,M.M. Pizzichini,M. Kjarsgaard,M.D. Inman,A. Efthimiadis,E. Pizzichini,F.E. Hargreave及P.M. O'Byrne,Mepolizumab for prednisone-dependent asthma with sputum eosinophilia. N Engl J Med 360,985-993(2009)
16.　Hershey,G.K.,IL-13 receptors and signaling pathways: an evolving web. J Allergy Clin Immunol 111,677-690;quiz 691(2003)
17.　Berry,M.A.,D. Parker,N. Neale,L. Woodman,A. Morgan,P. Monk,P. Bradding,A.J. Wardlaw,I.D. Pavord及C.E. Brightling,Sputum and bronchial submucosal IL-13 expression in asthma and eosinophilic bronchitis. J Allergy Clin Immunol 114,1106-1109(2004)
18.　Humbert,M.,S.R. Durham,P. Kimmitt,N. Powell,B. Assoufi,R. Pfister,G. Menz,A.B. Kay及C.J. Corrigan,Elevated expression of messenger ribonucleic acid encoding IL-13 in the bronchial mucosa of atopic and nonatopic subjects with asthma. J Allergy Clin Immunol 99,657-665(1997)
19.　Saha,S.K.,M.A. Berry,D. Parker,S. Siddiqui,A. Morgan,R. May,P. Monk,P. Bradding,A.J. Wardlaw,I.D. Pavord及C.E. Brightling,Increased sputum and bronchial biopsy IL-13 expression in severe asthma. J Allergy Clin Immunol 121,685-691(2008)
20.　Truyen,E.,L. Coteur,E. Dilissen,L. Overbergh,L.J. Dupont,J.L. Ceuppens及D.M. Bullens,Evaluation of airway inflammation by quantitative Th1/Th2 cytokine mRNA measurement in sputum of asthma patients. Thorax 6l,202-208(2006)
21.　Woodruff,P.G.,H.A. Boushey,G.M. Dolganov,C.S. Barker,Y.H. Yang,S. Donnelly,A. Ellwanger,S.S. Sidhu,T.P. Dao-Pick,C. Pantoja,D.J. Erle,K.R. Yamamoto及J.V. Fahy,Genome-wide profiling identifies epithelial cell genes associated with asthma and with treatment response to corticosteroids. Proc Natl Acad Sci U S A 104,15858-15863(2007)
22.　Winpenny,J.P.,L.L. Marsey及D.W. Sexton,The CLCA gene family: putative therapeutic target for respiratory diseases. Inflamm Allergy Drug Targets 8,146-160(2009)
23.　Sidhu,S.S.,S. Yuan,A.L. Innes,S. Kerr,P.G. Woodruff,L. Hou,S.J. Muller及J.V. Fahy,Roles of epithelial cell-derived periostin in TGF-{beta} activation,collagen production,and collagen gel elasticity in asthma. Proc Natl Acad Sci U S A(2010)
24.　Sasaki,H.,M. Dai,D. Auclair,I. Fukai,M. Kiriyama,Y. Yamakawa,Y. Fujii及L.B. Chen,Serum level of the periostin,a homologue of an insect cell adhesion molecule,as a prognostic marker in nonsmall cell lung carcinomas. Cancer 92,843-848(2001)
25.　Sasaki,H.,K.M. Lo,L.B. Chen,D. Auclair,Y. Nakashima,S. Moriyama,I. Fukai,C. Tam,M. Loda及Y. Fujii,Expression of Periostin,homologous with an insect cell adhesion molecule,as a prognostic marker in non-small cell lung cancers. Jpn J Cancer Res 92,869-873(2001)
26.　Sasaki,H.,C.Y. Yu,M. Dai,C. Tam,M. Loda,D. Auclair,L.B. Chen及A. Elias,Elevated serum periostin levels in patients with bone metastases from breast but not lung cancer. Breast Cancer Res Treat 77,245-252(2003)
27.　Gibson,P.G.,Inflammatory phenotypes in adult asthma: clinical applications. Clin Respir J 3,198-206(2009)
28.　Chanez,P.,S.E. Wenzel,G.P. Anderson,J.M. Anto,E.H. Bel,L.P. Boulet,C.E. Brightling,W.W. Busse,M. Castro,B. Dahlen,S.E. Dahlen,L.M. Fabbri,S.T. Holgate,M. Humbert,M. Gaga,G.F. Joos,B. Levy,K.F. Rabe,P.J. Sterk,S.J. Wilson及I. Vachier,SeVere asthma in adults: What are the important questions？J Allergy Clin Im munol 119,1337-1348(2007)
29.　Lemiere,C.,P. Ernst,R. Olivenstein,Y. Yamauchi,K. Govindaraju,M.S. Ludwig,J.G. Martin及Q. Hamid,Airway inflammation assessed by invasive and noninvasive means in severe asthma: eosinophilic and noneosinophilic phenotypes. J Allergy Clin Immunol 118,1033-1039(2006)
30.　Miranda,C.,A. Busacker,S. Balzar,J. Trudeau及S.E. Wenzel,Distinguishing severe asthma phenotypes: role of age at onset and eosinophilic inflammation. J Allergy Clin Immunol 113,101-108(2004)
31.　Silkoff,P.E.,A.M. Lent,A.A. Busacker,R.K. Katial,S. Balzar,M. Strand及S.E. Wenzel,Exhaled nitric oxide identifies the persistent eosinophilic phenotype insevere refractory asthma. J Allergy Clin Immunol 116,1249-1255(2005)
32.　Pavord,I.D.及D. Shaw,The use of exhaled nitric oxide in the management of asthma. J Asthma 45,523-531(2008)
33.　Chupp,G.L.,C.G. Lee,N. Jarjour,Y.M. Shim,C.T. Holm,S. He,J.D. Dziura,J. Reed,A.J. Coyle,P. Kiener,M. Cullen,M. Grandsaigne,M.C. Dombret,M. Aubier,M. Pretolani及J.A. Elias,A chitinase-like protein in the lung and circulation of patients with severe asthma. N Engl J Med 357,2016-2027(2007)
34.　Dweik,R.A.,R.L. Sorkness,S. Wenzel,J. Hammel,D. Curran-Everett,S.A. Comhair,E. Bleecker,W. Busse,W.J. Calhoun,M. Castro,K.F. Chung,E. Israel,N. Jarjour,W. Moore,S. Peters,G. Teague,B. Gaston及S.C. Erzurum,Use of exhaled nitric oxide measurement to identify a reactive,at-risk phenotype among patients with asthma. Am J Respir Crit Care Med 181,1033-1041(2010)
35.　Barnes,P.J.,The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease. J Clin Invest 118,3546-3556(2008)
36.　Holgate,S.T.及R. Polosa,Treatment strategies for allergy and asthma. Nat Rev Immunol 8,218-230(2008)
37.　Walsh,G.M.,Emerging drugs for asthma. Expert Opin Emerg Drugs 13,643-653(2008)
38.　Yuyama,N.,D.E. Davies,M. Akaiwa,K. Matsui,Y. Hamasaki,Y. Sumihami,N.L. Yoshida,M. Maeda,A. Pandit,J.L. Lordan,Y. Kamogawa,K. Arima,F. Nagumo,M. Sugimachi,A. Berger,I. Richards,S.L. Roberds,T. Yamashita,F. Kishi,H. Kato,K. Arai,K. Ohshima,J. Tadano,N. Hamasaki,S. Miyatake,Y. Sugita,S.T. Holgate及K. Izuhara,Analysis of novel disease-related genes in bronchial asthma. Cytokine 19,287-296(2002)
39.　Takayama,G.,K. Arima,T. Kanaji,S. Toda,H. Tanaka,S. Shoji,A.N. McKenzie,H. Nagai,T. Hotokebuchi及K. Izuhara,Periostin: a novel component of subepithelial fibrosis of bronchial asthma downstream of IL-4 and IL-13 signals. J Allergy Clin Immunol 118,98-104(2006)
40.　Hayashi,N.,T. Yoshimoto,K. Izuhara,K. Matsui,T. Tanaka及K. Nakanishi,T helper 1 cells stimulated with ovalbumin and IL-18 induce airway hyperresponsiveness and lung fibrosis by IFN-gamma and IL-13 production. Proc Natl Acad Sci U S A 104,14765-14770(2007)
41.　Plager,D.A.,J.C. Kahl,Y.W. Asmann,A.E. Nilson,J.F. Pallanch,O. Friedman及H. Kita,Gene transcription changes in asthmatic chronic rhinosinusitis with nasal polyps and comparison to those in atopic dermatitis. PLoS One 5,e11450(2010)
42.　Stankovic,K.M.,H. Goldsztein,D.D. Reh,M.P. Platt及R. Metson,Gene expression profiling of nasal polyps associated with chronic sinusitis and aspirin-sensitive asthma. Laryngoscope 118,881-889(2008)
43.　Blanchard,C.,M.K. Mingler,M. Vicario,J.P. Abonia,Y.Y. Wu,T.X. Lu,M.H. Collins,P.E. Putnam,S.I. Wells及M.E. Rothenberg,IL-13 involvement in eosinophilic esophagitis: transcriptome analysis and reversibility with glucocorticoids. J Allergy Clin Immunol 120,1292-1300(2007)
44.　Blanchard,C.,M.K. Mingler,M. McBride,P.E. Putnam,M.H. Collins,G. Chang,K. Stringer,J.P. A bonia,J.D. Molkentin及M.E. Rothenberg,Periostin facilitates eosinophil tissue infiltration in allergic lung and esophageal responses. Mucosal Immunol 1,289-296(2008)
45.　Baril,P.,R. Gangeswaran,P.C. Mahon,K. Caulee,H.M. Kocher,T. Harada,M. Zhu,H. Kalthoff,T. Crnogorac-Jurcevic及N.R. Lemoine,Periostin promotes invasiveness and resistance of pancreatic cancer cells to hypoxia-induced cell death: role of the beta4 integrin and the PI3k pathway. Oncogene 26,2082-2094(2007)
46.　Ben,Q.W.,Z. Zhao,S.F. Ge,J. Zhou,F. Yuan及Y.Z. Yuan,Circulating levels of periostin may help identify patients with more aggressive colorectal cancer. Int J Oncol 34,821-828(2009)
47.　Kudo,Y.,I. Ogawa,S. Kitajima,M. Kitagawa,H. Kawai,P.M. Gaffney,M. Miyauchi及T. Takata,Periostin promotes invasion and anchorage-independent growth in the metastatic process of head and neck cancer. Cancer Res 66,6928-6935(2006)
48.　Puglisi,F.,C. Puppin,E. Pegolo,C. Andreetta,G. Pascoletti,F. D'Aurizio,M. Pandolfi,G. Fasola,A. Piga,G. Damante及C. Di Loreto,Expression of periostin in human breast cancer. J Clin Pathol 61,494-498(2008)
49.　Siriwardena,B.S.,Y. Kudo,I. Ogawa,M. Kitagawa,S. Kitajima,H. Hatano,W.M. Tilakaratne,M. Miyauchi及T. Takata,Periostin is frequently overexpressed and enhances invasion and angiogenesis in oral cancer. Br J Cancer 95,1396-1403(2006)
50.　Nair,P.,M. Kjarsgaard,S. Armstrong,A. Efthimiadis,P.M. O'Byrne及F.E. Hargreave,Nitric oxide in exhaled breath is poorly correlated to sputum eosinophils in patients with prednisone-dependent asthma. J Allergy Clin Immunol(2010)
51.　Shaw,D.E.,M.A. Berry,M. Thomas,R.H. Green,C.E. Brightling,A.J. Wardlaw及I.D. Pavord,The use of exhaled nitric oxide to guide asthma management：a randomized controlled trial. Am J Respir Crit Care Med 176,231-237(2007)
52.　Pavord,I.D.,P.K. Jeffery,Y. Qiu,J. Zhu,D. Parker,A. Carlsheimer,I. Naya及N.C. Barnes,Airway inflammation in patients with asthma with high-fixed or low-fixed plus as-needed budesonide/formoterol. J Allergy Clin Immunol 123,1083-1089,1089 e1081-1087(2009)
53.　D'Silva,L.,R.J. Cook,C.J. Allen,F.E. Hargreave及K. Parameswaran,Changing pattern of sputum cell counts during successive exacerbations of airway disease. Respir Med 101,2217-2220(2007)
54.　Leung,D.Y.,R.J. Martin,S.J. Szefler,E.R. Sher,S. Ying,A.B. Kay及Q. Hamid,Dysregulation of interleukin 4,interleukin 5,and interferon gam ma gene expression in steroid-resistant asthma. J Exp Med 181,33-40(1995)
55.　Flood-Page,P.,C. Swenson,I. Faiferman,J. Matthews,M. Williams,L. Brannick,D. Robinson,S. Wenzel,W. Busse,T.T. Hansel及N.C. Barnes,A study to evaluate safety and efficacy of mepolizumab in patients with moderate persistent asthma. Am J Respir Crit Care Med 176,1062-1071(2007).
實例6-哮喘患者研究III(評估安全性、耐受性及功效)
研究將為在儘管每日使用ICS療法(每天500-2000 μg丙酸氟替卡松乾粉吸入劑[DPI]或等效物)加第二控制劑藥物(諸如長效β-促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效蕈毒鹼拮抗劑(LAMA)或茶鹼)，但仍未獲得控制之重度哮喘患者中進行之來金珠單抗隨機化多中心雙盲安慰劑對照平行組研究。此研究亦將評估血清骨母細胞特異性因子-2之基線含量50 ng/mL(如藉由Elecsys分析所量測)之診斷值。在繼續其必須包括ICS及第二控制劑藥物之標準護理療法之情況下，患者將隨機分配於來金珠單抗或安慰劑之三種劑量之一，持續52週安慰劑對照期。
在亦稱為篩檢期之2週導入期(就診1至就診3)期間，將評估患者與其當前哮喘療法之順應性及其使用為在整個研究期間每月臨床就診所必需之設備的能力以及由其標準護理藥物治療提供之哮喘控制程度。報導哮喘控制問卷(ACQ-5)計分1.5及未獲得控制之一或多種哮喘症狀(每週夜晚覺醒次數1次、每週症狀>2天、每週使用SABA>2天及/或每日活動受干擾)的患者將視為未獲得控制。儘管依從控制劑醫藥，但症狀在就診1或2及就診3時仍未獲得控制之患者將適於參與。在依從性資料不全之情況下且對於在就診3時ACQ-5<1.5之患者(若研究者對此患者之感受表明此週對於其疾病而言為非典型的)而言，可延長篩檢期1週。出於所選原因，患者可適於再篩檢多達額外兩次。
在導入(篩檢)期結束時，適合患者將隨機分配(1:1:1:1)於研究藥物(安慰劑或來金珠單抗，37.5 mg皮下每月一次、125 mg皮下每月一次、或250 mg皮下每4週一次)。隨機化將根據如使用Elecsys分析所量測之基線血清骨母細胞特異性因子-2(<42 ng/mL、42至<50 ng/mL、50至<58ng/mL、58 ng/mL)、在最近12個月中之哮喘惡化病史(0、1-2、3個事件)、基線哮喘藥物治療(每天ICS劑量1000 μg丙酸氟替卡松DPI或等效物加LABA[是，否])、及地理區域(美國/加拿大、歐洲、亞洲，世界其餘地區)進行分層。除持續52週接受雙盲研究治療之外，患者亦將繼續其必須包括ICS(每天500-2000 μg丙酸氟替卡松DPI或等效物)及第二控制劑藥物之標準護理療法之穩定劑量。
研究治療之首次皮下注射將在隨機化之同一天(就診3[第1天])進行，且將歷經52週安慰劑對照期每4週重複一次給藥(總計13次研究治療劑量)。將在整個52週安慰劑對照期期間評估安全性、功效及患者報導之結果(PRO)指標。主要功效終點為哮喘惡化率且將歷經52週安慰劑對照期進行評估。
完成52週安慰劑對照期之患者(亦即尚未提前停止研究治療之患者)將繼續進入52週積極治療延長期。
繼續進入52週積極治療延長期研究之所有患者皆將每4週接受125 mg或250 mg劑量之雙盲皮下來金珠單抗。分配在52週安慰劑對照期期間接受125 mg或250 mg來金珠單抗之患者將仍然使用其指定來金珠單抗劑量。分配在52週安慰劑對照期期間每4週接受安慰劑或來金珠單抗(皮下37.5 mg)之患者將以1:1比率隨機化於持續52週積極治療延長期每4週皮下來金珠單抗125 mg或250 mg，其中隨機化係根據基線骨母細胞特異性因子-2含量及先前治療分配進行分層。
在52週積極治療延長期之第76週時，將使用來自三次最近就診(第68、72及76週)之資料評估各患者之哮喘控制。哮喘症狀已連續12週得到控制(在每次評估時，ACQ 50.75)且在前半程積極治療延長期(第52-76週)內尚無惡化之患者將停止來金珠單抗療法並進入追蹤期。在追蹤期間，將在研究藥物之末次劑量後持續24週追蹤患者之安全性。在第76週時仍有症狀(ACQ-5>0.75)或在前半程積極治療延長期(第52-76週)期間已經歷惡化事件之患者將再繼續來金珠單抗治療28週。將在整個52週積極治療延長期期間評估安全性、功效及PRO指標。
在追蹤期中，將在研究治療之末次劑量後持續24週(>藥物之5個半衰期)追蹤所有患者之安全性，該末次劑量可在任何時候進行，如方案中所排定或在較早停止研究治療之情況下。對於截至就診23(第76週)完成研究、控制良好且停止研究治療之患者，就診23將替代安全性追蹤就診1。對於截至就診30(第104週)完成整個研究之患者，就診30將替代安全性追蹤就診1。在此等兩種情況下，追蹤期中之下一就診將為在第12週時之安全性追蹤就診2。對於所有其他患者，首次追蹤就診將為在安全性追蹤期之第4週(研究治療之末次劑量後約4週)時之安全性追蹤就診1。
自就診3(第1天)時隨機化開始之總研究參與時間(包括52週安慰劑對照期、52週積極治療延長期及安全性追蹤期)可長達124週。
在位於全世界之約250個場所將在研究中招募約1400名患者(每個骨母細胞特異性因子-2組[骨母細胞特異性因子-2較高50 ng/mL，骨母細胞特異性因子-2較低<50 ng/mL]每個治療組[皮下來金珠單抗250 mg、125 mg、37.5 mg或安慰劑] 175名患者)。在骨母細胞特異性因子-2較高組(50 ng/mL)中將招募最少650名患者。將招募最少約450名每天使用ICS氟替卡松1000 μg DPI或等效物加LABA之患者。
關鍵納入準則包括下列準則：在篩檢之前診斷有哮喘12個月；支氣管擴張藥反應/可逆性：患者在篩檢期期間回應於四次短效β-促效劑(例如沙丁胺醇(albuterol)或沙丁胺醇(salbutamol))噴藥之支氣管擴張藥反應必須12%；在就診2及就診3時之支氣管擴張藥前FEV1均為預測值之40%-80%；在篩檢之前使用ICS>500(例如500-2000)μg丙酸氟替卡松DPI或等效物(總每日劑量)6個月；在篩檢之前使用第二控制劑藥物治療(例如在處方給藥範圍內之LABA、LAMA、LTRA或茶鹼)6個月；在篩檢期(亦即就診1[第-14天]或就診2[第-7天])期間及在隨機化(就診3[第1天])時均顯示哮喘未獲得控制，如以下定義：ACQ-5計分1.5及基於國家心臟、肺及血液研究所及國家哮喘教育及預防計劃專家組報告3(2007)(National Heart,Lung,and Blood Institute and National Asthma Education and Prevention Program Expert Panel Report 3(2007))及全球哮喘防治創議(2010)(Global Initiative for Asthma(2010))準則，至少一種下列哮喘症狀未獲得控制：
‧　症狀>每週2天
‧　夜晚覺醒次數每週1次
‧　使用SABA作為救助藥物>每週2天
‧　正常每日活動受干擾；
在就診1之前12個月內獲得之胸部X射線或電腦斷層攝影術(CT)掃描或在篩檢期期間之胸部X射線確認不存在其他肺病；及表明在篩檢期期間對控制劑藥物治療之依從性70%(依從性定義為如患者之峰值流量計裝置中所記錄，其肯定答覆其已在篩檢期(就診1至就診3)期間之70%的天數採用其哮喘控制劑療法)。
關鍵排除準則包括下列準則：有對生物藥劑之重度過敏反應或全身過敏反應之病史或已知對來金珠單抗注射液之任何組分過敏；維持經口皮質類固醇療法，定義為在就診1之前3個月內每日或隔日使用經口皮質類固醇維持療法；在篩檢(就診1)之前4週期間或在篩檢期間任何時間時由於包括急性惡化事件之任何原因出現需要全身性(經口、靜脈內(IV)或肌肉內(IM))皮質類固醇的哮喘惡化；出現需要下列任一者之較大感染事件：
1.在篩檢(就診1)之前4週內住院治療>24小時
2.在篩檢(就診1)之4週內用靜脈內抗生素治療
3.在篩檢(就診1)之前2週內使用經口抗生素；
在就診1之前6個月內有活動性寄生蟲感染；在篩檢之前12個月內有需要治療之結核病(允許在完成治療之後12個月中無復發之針對結核病進行治療的患者)；已知有免疫缺乏，包括(但不限於)HIV感染；當前使用免疫調節療法；已知當前有惡性疾病或當前評估有潛在惡性疾病；有活動性B/C型肝炎或不穩定肝病之跡象；在篩檢之前6個月內有活動性寄生蟲感染；AST/ALT升高正常值上限2.0倍；有囊腫性纖維化、慢性阻塞性肺病及/或除哮喘以外之其他臨床顯著肺病之病史；當前吸菸者或吸菸史>10包年；在篩檢之前6個月期間之任何時間使用生物療法；在研究之持續時間不願意使用高效避孕方法或懷孕或哺乳之具有生殖可能性的女性患者；有其他不穩定醫學疾病；身體質量指數>38 kg/m2；體重<40 kg。
第III期給藥基本原理 群體PK分析
發展初步群體PK模型以描述來金珠單抗在成年患者中之PK型態。來自上述研究中之333名來金珠單抗治療患者之總計4914個血清濃度-時間樣本用於產生該模型。未觀測到研究之間有明顯差異，如各研究中之觀測平均PK型態與自歷史資料預測之型態之間的良好一致所證實。
具有一級吸收及消除動力學之兩隔室模型適當描述血清來金珠單抗濃度-時間資料。結構模型參數包括清除率(CL)、中心隔室之分佈體積(V1)、周邊隔室之體積(V2)、隔室間清除率(Q)以及在皮下投藥之後的一級吸收速率(Ka)及生物可用性(F)。除V2及Q(其定為群體平均值)之外的所有參數皆假定為對數常態分佈。
群體平均CL及V1分別估計為0.18公升/天及3.7公升。群體平均生物可用性估計為76%。PK參數之個體間變化性為適度的，在15%至27%之範圍內。發現體重為CL及來金珠單抗分佈體積之顯著共變數，其中體重較高與清除率較高及分佈體積較大相關。約19%之個體間CL變化性及11%之個體間V1變化性係由體重進行說明。估計之群體PK參數概述於表13中。群體PK分析指示來金珠單抗之PK特徵與IgG單株抗體之典型PK特徵一致。
骨母細胞特異性因子-2對PK參數之影響藉由比較實例2研究及實例3研究中之基線骨母細胞特異性因子-2含量在中值以上及以下之患者之間的PK參數之個別事後估計值進行評估。在該兩個研究中，CL(p=0.54，0.11)、V1(p=0.83，0.79)及F(p=0.74，0.37)之差異不顯著(p>0.05)。
表13：來金珠單抗群體PK參數。
均一給藥之基本原理
在上述第II期研究中使用均一給藥。鑒於體重對來金珠單抗之PK型態之影響，較重患者通常具有較低藥物暴露量。然而，在用來金珠單抗治療之個別患者中，未發現體重與FEV1自基線至第12週之比例變化之間有關聯，從而指示體重對暴露量之影響對功效無影響(參見圖20)。此外，此等研究之資料指示在所測試之體重範圍(53-135 kg)內，均一給藥無安全性問題。
為評估均一給藥對來金珠單抗暴露量之總體變化性之影響，進行群體PK模擬以比較均一給藥方案與等效體重基(亦即mg/kg)給藥方案，假定體重分佈類似於上述第II期研究中所見者。在均一給藥方案與體重基給藥方案之間，穩態谷濃度高於各種含量之患者的預測比例類似(參見圖21)，表明基於體重之給藥無明顯優勢。因此，鑒於均一給藥相較於個別化體重基給藥具有使給藥錯誤之風險及操作複雜性(例如藥物準備)降低之優勢，選擇均一給藥用於第III期研究。
目標濃度之基本原理
使用第II期資料進行暴露量-反應分析以獲得目標來金珠單抗濃度來告知第III期研究之劑量選擇。在上述兩個第II期研究中，在用來金珠單抗治療之個別患者中，未發現與基線相比之安慰劑校正FEV1變化與在第12週時之血清谷藥物濃度(資料未展示)之間有明顯關聯，表明來金珠單抗對FEV1之影響在於該兩個研究中測試之暴露量之範圍下飽和。此外，對第II期研究中PD生物標記(FeNO、IgE、CCL17及CCL13)之變化與血清谷藥物濃度之間的關聯之評估表明此等PD反應在該兩個研究中之治療期期間均飽和。骨母細胞特異性因子-2較高組中之結果類似。基於此等結果，提出10 μg/mL之目標血清穩態谷濃度以將該兩個研究中之觀測C谷，第12週範圍(第5-第95百分位數：在實例2研究中為9.6-50 μg/mL；在實例3研究中為9.4-73 μg/mL)之下限歸在一起。此外，鑒於假定之來金珠單抗血清-肺分配(1:500)及基於文獻中之可用資料獲得之肺中IL-13含量，預期10 μg/mL之血清濃度會在哮喘患者中維持肺中足夠高之藥物含量以中和IL 13。因此，預期第III期中之有效劑量將維持血清穩態谷濃度>10 μg/mL。
為選擇第III期中之部分有效劑量，提出5 μg/mL之較低目標穩態谷濃度以確保不與觀測到功效之實例2研究與實例3研究兩者中的觀測C谷，第12週範圍重疊。另外，在該兩個研究中，在平均血清來金珠單抗濃度>5 μg/mL時，來金珠單抗對血清CCL17(TARC)含量之影響在藥物洗脫期間返回至基線(參見圖22；(A)實例2研究，(B)實例3研究)。儘管來金珠單抗對血清CCL17(TARC)之影響不與功效直接相關，但此生物標記之恢復表明在此濃度下對某些生物路徑中之IL-13活性的次最佳遏制。因此，提出部分有效劑量以維持血清穩態谷濃度<5 μg/mL。
提出之第III期劑量之基本原理
鑒於如上所述之實例3研究中缺乏明確劑量反應(亦即劑量125 mg、250 mg及500 mg似乎同樣有效)，選擇第III期劑量以藉由包括有效劑量與部分有效劑量兩者來說明來金珠單抗之劑量反應。為完成此目標，提出之用於第III期計劃之來金珠單抗劑量包括250 mg、125 mg及37.5 mg，每四週(每4週一次(q4wk))藉由皮下注射給與。圖23展示在此等劑量下之模擬群體PK型態，假定體重分佈類似於第II期研究中所見者。
預期每4週一次250 mg(兩次1 mL皮下注射)之最高劑量會在第III期中顯示臨床功效。其為在第II期概念驗證研究(實例2)中研究之唯一劑量方案且顯示具有使儘管使用ICS療法，但哮喘仍未獲得控制之患者(亦即意欲治療之患者群體)中之重度哮喘惡化率降低的功效。儘管連同或不連同另一控制劑一起用ICS治療，但實例2患者之哮喘仍未獲得控制，且實例2中有90%之每天使用ICS500 μg的患者亦在服用LABA藥物。在此劑量方案下，基於群體PK模擬，預測幾乎所有(99%)患者會達成10 μg/mL之目標C谷，ss(參見表14)，此意謂預期會獲得最大功效。因此，將測試此劑量以重複第II期中所見之臨床功效。
表 14：在關於第III期提出之劑量下穩態谷濃度高於目標之患者的預測百分比。
基於在第II期劑量範圍研究(實例3)中在每4週一次125及250 mg下觀測到之類似FEV1改良量值，提出每4週一次之125 mg(一次1 mL皮下注射)之中間劑量。合理地預期在重度哮喘患者之群體中，對於惡化終點而言，相同劑量-反應關係適用，且因此預期125 mg劑量會在第III期中顯示功效。此預期進一步得到群體PK模擬支持，該等模擬表明使用此劑量方案，大多數(78%)患者將達成10 μg/mL之目標C谷，ss(參見表14)。
提出每4週一次之37.5 mg(一次0.3 mL皮下注射)之劑量以說明來金珠單抗之部分有效或臨床無效劑量，其對於建立劑量-反應關係而言為重要的。在考慮下列因素之情況下選擇此劑量方案：
‧能夠在大多數(72%)患者中維持C谷，ss低於5 μg/mL且在幾乎所有(99%)患者中維持C谷，ss低於10 μg/mL(參見表14)
‧與中間劑量合理(3.3倍)分開
‧在來金珠單抗血清暴露量之模擬範圍內與中間劑量之重疊最小(參見表14)以顯示差異臨床反應
‧用以降低可能之給藥錯誤之適宜注射體積(多次0.1 mL)以下描述此第III期試驗之各種結果指標。
結果指標
將在骨母細胞特異性因子-2較高及骨母細胞特異性因子-2較低患者中分別評估各下列終點。當250 mg來金珠單抗組與安慰劑組進行比較時，若在骨母細胞特異性因子-2較高組中滿足主要終點，則試驗將視為陽性。
主要功效結果指標
主要功效結果指標為在52週安慰劑對照期期間之哮喘惡化率。對於此試驗，哮喘惡化將定義為導致用全身性皮質類固醇治療或住院治療之哮喘症狀(包括例如喘鳴、咳嗽、呼吸困難或胸悶或歸因於此等症狀之夜間覺醒)新近出現或增加。此處，用全身性皮質類固醇治療定義為用經口(亦即OCS)或非經腸皮質類固醇治療3天或使用一或多劑非經腸(靜脈內或肌肉內)皮質類固醇之急診部就診。
次要功效結果指標
在第52週時之次要功效結果指標如下：自基線至第52週之支氣管擴張藥前FEV1的相對變化；在52週治療期期間出現首次哮喘惡化之時間；自基線至第52週之氧化氮排出分數(FENO)之變化；自基線至第52週之哮喘特異性健康相關生活品質之變化，藉由標準版哮喘生活品質問卷(Standardized Version of the Asthma Quality of Life Questionnaire，AQLQ(S))之總計分所評估；自基線至第52週之救助藥物使用之變化(藉由每天救助藥物或霧化救助藥物(亦即SABA)之噴藥次數所衡量)；在52週安慰劑對照期期間之緊急哮喘相關健康護理利用(亦即住院治療、急診部就診及急性護理就診)之比率。
探索性結果指標
探索性結果指標將包括下列指標：在52週安慰劑對照期期間未經歷方案定義之哮喘惡化之患者的比例；自基線至第52週之早晨支氣管擴張藥後峰值流量值(L/min)之變化；自基線至第52週之支氣管擴張藥後FEV1之變化；在52週安慰劑對照期期間支氣管擴張藥前FEV1改良150 mL之時間；歷經第4週至第52週之支氣管擴張藥前FEV1(公升)與基線相比的平均相對變化；自基線至第52週之用力肺活量之相對變化；與肺功能下降相關之惡化之比率，該等惡化定義為導致PEF或FEV1<篩檢期(就診1-3)期間之最高值之60%的需要用全身性皮質類固醇治療之惡化；自基線至第52週之工作、求學及活動損害之變化，如藉由工作生產力及活動損害-哮喘問卷(Work Productivity and Activity Impairment-Asthma Questionnaire，WPAI-哮喘)所評估；自基線至第52週之哮喘控制問卷-5(ACQ-5)計分之變化；自基線至第52週之哮喘症狀之變化，如藉由哮喘症狀效用指數(Asthma Symptom Utility Index，ASUI)所衡量；自基線至第52週之健康效用之變化，如藉由EQ-5D所評估；自基線至第52週之整體治療有效性評估(Global Evaluation of Treatment Effectiveness，GETE)之變化。
此等探索性結果指標亦可在52週積極治療延長期及24週追蹤期期間進行評估。其他探索性結果指標可包括暴露於來金珠單抗>52週之患者中之不良事件的頻率及嚴重性；在52週積極治療延長期或24週追蹤期期間介白素-13(IL-13)/哮喘相關PD生物標記之變化；及在52週積極治療延長期或24週追蹤期期間之血清來金珠單抗濃度。
患者報導之結果 標準哮喘生活品質問卷(AQLQ(S))
將使用AQLQ(S)來評估患者之哮喘特異性健康相關生活品質(Juniper 2005)。問卷含有四個領域，包括活動限制、症狀、情感功能及環境刺激。AQLQ(S)已批准用於此研究群體中。AQLQ(S)具有2週之收回規定期(recall specification)。AQLQ(S)將在所有其他非PRO評估之前且在患者在彼評估期間接受任何疾病狀態資訊或研究藥物之前發放給患者。
工作、生產力及活動損害-哮喘(WPAI-哮喘)
為評估在工作、求學方面及與活動有關之損害，將發放WPAI-哮喘問卷(Reilly等人1993,1996)。問卷項目係自WPAI-過敏特異性(WPAI-AS)問卷修改，所出現之術語過敏全部用哮喘替代。WPAI-AS將在所有其他非PRO評估之前且在患者在彼評估期間接受任何疾病狀態資訊或研究藥物之前發放給患者。
歐洲QOL 5D問卷(EQ-5D)
EQ-5D為基於偏好之通用健康相關生活品質問卷，其提供健康狀態之單一指數值(The EuroQol Group 1990)。EQ-5D設計成由患者自行完成。Eq-5D將在所有其他非PRO評估之前且在患者在彼評估期間接受任何疾病狀態資訊或研究藥物之前發放給患者。
哮喘症狀效用指數(ASUI)
ASUI(Revicki 1998)為一種衡量咳嗽、喘鳴、呼吸急促及夜間覺醒之哮喘特異性症狀問卷。ASUI將在所有其他非PRO評估之前且在患者在彼評估期間接受任何疾病狀態資訊或研究藥物之前發放給患者。
實例7-Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析
在自動Roche cobas e601 Elecsys分析器(Roche Diagnostics GmbH)中評估骨母細胞特異性因子-2之定量偵測。測試係以夾心格式進行，其中分析物骨母細胞特異性因子-2夾在結合骨母細胞特異性因子-2上之兩個不同抗原決定基的兩個單株抗體之間。一種抗體經生物素標記且使得能夠將免疫複合物捕捉於抗生蛋白鏈菌素塗佈之磁性珠粒上。第二抗體攜帶錯合釕陽離子作為允許對所結合之免疫複合物進行電壓依賴性電化學發光偵測的信號傳導部分。
詳言之，如下使用試劑：
-珠粒(M)：抗生蛋白鏈菌素塗佈之磁性微粒0.72 mg/mL；防腐劑。
-試劑1(R1)：抗骨母細胞特異性因子-2抗體~生物素：此經純化小鼠單株抗體對應於根據實例4之塗佈抗體25D4且以經生物素標記之形式使用，>1.0 mg/L；TRIS緩衝劑>100 mmol/L，pH 7.0；防腐劑。
-試劑2(R2)：抗骨母細胞特異性因子-2抗體~Ru(bpy)：此經純化小鼠單株抗骨母細胞特異性因子-2抗體對應於根據實例4之偵測抗體23B9且以經標記形式(以參(2,2'-聯吡啶)釕(II)錯合物(Ru(bpy))錯合物標記)使用，>1.0 mg/L；TRIS緩衝劑>100 mmol/L，pH 7.0；防腐劑。
使用兩次培育進行免疫分析。在約9分鐘之第一培育中，20 μL樣品中之骨母細胞特異性因子-2與經生物素標記之單株抗骨母細胞特異性因子-2抗體(R1)形成複合物。在另外9分鐘之第二培育步驟中，添加釕化單株抗骨母細胞特異性因子-2抗體(R2)及抗生蛋白鏈菌素塗佈之微粒(M)至第一培育之小瓶中，使得形成3成員夾心式複合物且經由生物素與抗生蛋白鏈菌素之相互作用變得與固相(微粒)結合。
將反應混合物吸入量測槽中，在其中微粒被磁性捕捉於鉑電極之表面上。洗去未結合物質且槽用含有三丙胺之試劑ProCell沖洗。向電極施加電壓接著會誘導化學發光發射，該發射藉由光電倍增管進行量測。
結果經由藉由2點校正產生之儀器特異性校正曲線及經由試劑條碼提供之主曲線(master curve)進行確定。校正器1不含分析物，而校正器2含有於緩衝基質中之50 ng/mL重組人類骨母細胞特異性因子-2。為驗證校正，採用含有約30及80 ng/mL骨母細胞特異性因子-2之兩個對照。
實例8-E4分析與Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析之比較
使用類似於E4分析(實例4)及類似於Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析(實例7)之方法，量測來自實例2及實例3之各者中所述之臨床試驗的患者血清樣品中之骨母細胞特異性因子-2含量。來自兩個試驗之樣品之結果顯示骨母細胞特異性因子-2值重疊。各分析之間的變化性及分散性類似。一般而言，在中值下，Elecsys分析結果通常=或>E4分析結果之2倍。參見圖17，亦即對於Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析而言，中值為50-51 ng/ml，而對於E4分析而言，中值為23 ng/ml。
儘管已出於清楚理解之目的藉由說明及舉例之方式相當詳細地描述了前述發明，但該等描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文中引用之所有專利及科學文獻之揭示內容明確以全文引用的方式併入本文中。
圖1提供實例1中所述之過敏原攻擊試驗之示意圖。
圖2展示在篩檢(A)中及在第13週時(B)在攻擊之後過敏原誘導之FEV1變化。在過敏原攻擊之後，在前90分鐘每10分鐘量測FEV1且接著在2-8小時每小時量測FEV1。誤差柱條表示平均值標準誤差。
圖3展示IgE、CCL13(MCP-4)及CCL17(TARC)之血清含量。(A)血清含量表示為安慰劑治療患者及(B)來金珠單抗治療患者中隨時間之給藥前含量%。線表示個別患者；群組中值未指示。箭頭指示在第0、4、8及12週(第0、28、56及84天)時之給藥。(C)相對於IgE、CCL13及CCL17之基線含量，在第13週時個別患者中之該等標記降低。
圖4展示生物標記較高及生物標記較低患者子群中由來金珠單抗誘導之對遲發性哮喘反應(LAR)的抑制。資料表示為在第13週時LAR之AUC(曲線下面積)之安慰劑校正平均降低(n=每組5至8名活動性患者)。
圖5提供實例2中所述之哮喘試驗之示意圖。
圖6提供參與實例2之哮喘試驗之患者的基線特徵。
圖7提供實例2之哮喘試驗之結果。
圖8提供所有功效可評估個體(A)及單獨骨母細胞特異性因子-2較高個體(B)之實例2之哮喘試驗的FEV1結果。
圖9提供實例2之哮喘試驗之惡化減少率。
圖10提供實例2之哮喘試驗之FENo變化百分比。
圖11提供實例2之哮喘試驗之安全性結果。
圖12提供實例3中所述之哮喘試驗之示意圖。
圖13提供如實例5中所述之哮喘觀測研究之示意圖。
圖14展示如實例5中所述之BOBCAT組中在多次就診時血清骨母細胞特異性因子-2含量之間的個體內關聯。(A)就診1與就診2之間的關聯；(B)就診1與就診3之間的關聯；(C)就診2與就診3之間的關聯；(D)就診1與所有就診時之平均血清骨母細胞特異性因子-2含量之間的關聯；(E)就診2與所有就診時之平均血清骨母細胞特異性因子-2含量之間的關聯；及(F)就診3與所有就診時之平均血清骨母細胞特異性因子-2含量之間的關聯。
圖15顯示FENO根據如實例5中所述之氣管嗜伊紅血球性發炎(BOBCAT組)區分中度至重度用高劑量ICS未獲得控制之哮喘患者。(A)相較於痰嗜伊紅血球<3%之哮喘患者，痰嗜伊紅血球>3%之哮喘患者之FENO顯著升高(根據威爾卡遜秩和檢定(Wilcoxon rank-sum test)，p<0.001)。(B)相較於每mm2總支氣管組織之嗜伊紅血球<22之哮喘患者，每mm2總支氣管組織之嗜伊紅血球>22之哮喘患者具有FENO升高之趨勢(根據威爾卡遜秩和檢定，p=0.07)。(C)複合氣管嗜伊紅血球計分(其中0=痰嗜伊紅血球<3%且組織(「Bx」)嗜伊紅血球<22/mm2；1=痰嗜伊紅血球>3%或組織嗜伊紅血球>22/mm2(互斥)；2=痰嗜伊紅血球>3%且組織嗜伊紅血球>22/mm2)顯示FENO含量隨複合氣管嗜伊紅血球計分增加而增加的強烈正趨勢(根據邏輯回歸，p=0.001)。血清骨母細胞特異性因子-2狀態係如圖例中所指示。(D)在痰或組織嗜伊紅血球升高之大多數個體中，血清骨母細胞特異性因子-2與FENO均升高，但個體子集具有僅骨母細胞特異性因子-2或FENO升高。痰及組織嗜伊紅血球未升高之大多數個體展現較低血清骨母細胞特異性因子-2及較低FENO。(E)血清骨母細胞特異性因子-2、FENO、血液嗜伊紅血球及血清IgE之針對複合氣管嗜伊紅血球狀態之敏感性及特異性的接受者操作特徵(ROC)曲線分析。AUC=曲線下面積。
圖16提供在實例3中所述之哮喘試驗中無治療失敗之患者的百分比。
圖17展示自實例3及實例5中所述之臨床試驗獲得之樣品的血清骨母細胞特異性因子-2含量之間的比較，該等含量係用與實例4分析(E4分析)或Elecsys骨母細胞特異性因子-2分析(實例7)類似之分析所量測。
圖18展示如實例2中所述之骨母細胞特異性因子-2較低患者(A)及骨母細胞特異性因子-2較高患者(B)中之血清骨母細胞特異性因子-2藥效學。
圖19展示如實例2中所述之經安慰劑及來金珠單抗治療之患者中中值骨母細胞特異性因子-2含量隨時間的變化百分比。
圖20展示實例2中所述之第II期研究(A)及實例3中所述之第II期研究(B)中之個體第12週時之FEV1變化%與體重之間的關聯，如實例6中所述。
圖21展示如實例6中所述之穩態谷濃度高於各種含量之患者的預測比例。
圖22展示實例2研究(A)及實例3研究(B)之來金珠單抗隨時間對血清CCL17(TARC)含量之影響，如實例6中所述。
圖23展示在各第III期劑量、每4週250 mg、每4週125 mg及每4週37.5 mg下之模擬群體PK型態，如實例6中所述。
<110>　美商建南德克公司
<120>　關於TH2抑制作用之診斷及治療
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Claims (82)

  1. 一種套組，其係用於偵測自哮喘患者獲得之生物樣品中之總骨母細胞特異性因子-2(total periostin)，以供將哮喘患者分層/分類為可能之反應者及非反應者，以便用TH2路徑抑制劑進行治療性治療，其中該套組包含結合總骨母細胞特異性因子-2之抗體，且其中該抗體包含(i)SEQ ID NO：1之高變區(hypervariable region，HVR)序列及SEQ ID NO：2之HVR序列，或(ii)SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列。
  2. 如請求項1之套組，其中該抗體包含SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2之序列。
  3. 如請求項1之套組，其中該抗體包含SEQ ID NO：3及SEQ ID NO：4之序列。
  4. 如請求項1之套組，其中該抗體係單株抗體。
  5. 如請求項1之套組，其中該抗體係嵌合抗體。
  6. 如請求項1之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。
  7. 如請求項1之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  8. 如請求項1之套組，其中該抗體包含與SEQ ID NO：1具有至少95%同源性鏈之重鏈可變域序列，及與SEQ ID NO：2具有至少95%同源性鏈之輕鏈可變域序列。
  9. 如請求項1之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。
  10. 如請求項1之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  11. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該抗體係Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。
  12. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  13. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該抗體接合至一標記或部分。
  14. 如請求項13之套組，其中該部分係生物素。
  15. 如請求項13之套組，其中該部分係Ru(bpy)。
  16. 如請求項1之套組，其包含：(i)包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列之第一抗骨母細胞特異性因子-2抗體(anti-periostin antibody)；及(ii)包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列之第二抗骨母細胞特異性因子-2抗體。
  17. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該總骨母細胞特異性因子-2係使用嗜伊紅血球性發炎診斷分析(EIDA)偵測，其中EIDA包含以下步驟：a)測定自哮喘患者獲得之樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的量；b)比較步驟a)中測定之總骨母細胞特異性因子-2之該量與參照量；及c)基於步驟b)中獲得之該比較結果將該患者分層至反應者或非反應者之類別中。
  18. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該總骨母細胞特異性因子-2為血清骨母細胞特異性因子-2，該骨母細胞特異性因子-2係使用免疫分析進行量測。
  19. 如請求項18之套組，其中該免疫分析為夾心式免疫分析(sandwich immunoassay)。
  20. 如請求項19之套組，其中該夾心式免疫分析係由Elecsys®分析儀執行。
  21. 如請求項17之套組，其中當在步驟(a)中使用E4分析時，該反應者之參照量為23ng/ml或23ng/ml以上。
  22. 如請求項17之套組，其中當在步驟(a)中使用Elecsys®分析儀時，該反應者之參照量為50ng/ml或50ng/ml以上。
  23. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該患者罹患中度至重度哮喘。
  24. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該哮喘或呼吸病症用皮質類固醇未獲得控制。
  25. 如請求項24之套組，其中該皮質類固醇係吸入皮質類固醇。
  26. 如請求項25之套組，其中該吸入皮質類固醇為曲安西龍(triamcinolone)、福莫特羅(formoterol)、二丙酸倍氯米松(Qvar®)、布地奈德(Pulmicort®)、布地奈德及福莫特羅(Symbicort®)、氟尼縮松(Aerobid®)、丙酸氟替卡松(Flovent®)、氟替卡松(Flonase®)、丙酸氟替卡松(Advair®)或曲安奈德(triamcinolone acetonide，Azmacort®)。
  27. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該患者亦正用第二控制劑治療。
  28. 如請求項27之套組，其中該第二控制劑為長效支氣管擴張劑(LABD)。
  29. 如請求項28之套組，其中該LABD為長效β-2促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效蕈毒鹼拮抗劑(LAMA)、茶鹼或經口皮質類固醇(OCS)。
  30. 如請求項29之套組，其中該LABD為布地奈德及福莫特羅(Symbicort®、Foradil®、PerforomistTM)、丙酸氟替卡松(Advair®)、酒石酸阿福莫特羅(Brovana®)、福莫特羅(Foradil®)或沙美特羅(Serevent®)。
  31. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該TH2路徑抑制劑會抑制目標ITK、BTK、IL-9、IL-5、IL-13、IL-4、OX40L、TSLP、IL-25、IL-33、IgE、IL-9受體、IL-5受體、IL-4受體α、IL-13受體α1、IL-13受體α2、OX40、TSLP-R、IL-7Rα(TSLP之共受體)、IL17RB(IL-25之受體)、ST2(IL-33之受體)、CCR3、CCR4、CRTH2、FcεRI、FcεRII/CD23(IgE之受體)、Flap、Syk激酶、CCR4或TLR，或為CCR3、IL5、IL3或GM-CSF之多細胞激素抑制劑。
  32. 如請求項31之套組，其中該TH2路徑抑制劑係MEDI-528、美泊珠單抗、瑞利珠單抗、IMA-026、IMA-638(亦稱為安蘆珠單抗)、曲洛努單抗、AER-001、ABT-308、奧馬佐單抗(XOLAIR®)、QGE-031、MEDI-4212、MEDI-563(亦稱為本拉珠單抗)、AMG-317、R-1671、AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095、ACT129968、GSK2190915、R-343、PF3526299、AMG-761、QAX-935或TPIASM8。
  33. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該TH2路徑抑制劑為抗IL13/IL4路徑抑制劑或抗IgE結合劑。
  34. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該TH2路徑抑制劑為抗IL-13抗體。
  35. 如請求項34之套組，其中該抗IL-13抗體為包含含有SEQ ID NO：9之VH及含有SEQ ID NO：10之VL的抗體；包含具有SEQ ID NO.：11之胺基酸序列的HVRH1、具有SEQ ID NO.：12之胺基酸序列的HVRH2、具有SEQ ID NO.：13之胺基酸序列的HVRH3、具有SEQ ID NO.：14之胺基酸序列的HVRL1、具有SEQ ID NO.：15之胺基酸序列的HVRL2及具有SEQ ID NO.：16之胺基酸序列的HVRL3之抗IL13抗體；或來金珠單抗。
  36. 如請求項34之套組，其中該抗IL-13抗體為結合IL-4之雙特異性抗體。
  37. 如請求項1至10中任一項之套組，其中該TH2路徑抑制劑為抗IgE抗體。
  38. 如請求項37之套組，其中該抗IgE抗體為(i)該奧馬佐單抗(XOLAIR®)抗體、(ii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈為SEQ ID NO：24且該可變輕鏈為SEQ ID NO：25、或(iii)包含可變重鏈及可變輕鏈之抗M1'抗體，其中該可變重鏈進一步包含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，且該可變輕鏈進一步包含HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3且：(a)該HVR-H1為SEQ ID NO：24之殘基26-35[GFTFSDYGIA]；(b)該HVR-H2為SEQ ID NO：24之殘基49-66[AFISDLAYTIYYADTVTG]；(c)該HVR-H3為SEQ ID NO：24之殘基97-106[ARDNWDAMDY]；(d)該HVR-L1為SEQ ID NO：25之殘基24-39[RSSQSLVHNNANTYLH]；(e)該HVR-L2為SEQ ID NO：25之殘基55-61[KVSNRFS]；(f)該HVR-L3為SEQ ID NO：25之殘基94-102[SQNTLVPWT]。
  39. 一種用於量測自哮喘患者或罹患呼吸病症之患者獲得之生物樣品中的總骨母細胞特異性因子-2之套組，其中該套組包含結合總骨母細胞特異性因子-2之抗體，其中該抗體包含(i)SEQ ID NO：1之高變區(hypervariable region，HVR)序列及SEQ ID NO：2之HVR序列，或(ii)SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列。
  40. 如請求項39之套組，其中該套組包含藥品說明書，該說明書之資訊描述該套組用於將哮喘患者分層/分類為可能之反應者及非反應者，以便使用TH2路徑抑制劑進行治療性治療。
  41. 如請求項39之套組，其中該抗體包含SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2之序列。
  42. 如請求項39之套組，其中該抗體包含SEQ ID NO：3及SEQ ID NO：4之序列。
  43. 如請求項39之套組，其中該抗體係單株抗體。
  44. 如請求項39之套組，其中該抗體係嵌合抗體。
  45. 如請求項39之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。
  46. 如請求項39之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  47. 如請求項39之套組，其中該抗體包含與SEQ ID NO：1具有至少95%同源性鏈之重鏈可變域序列，及與SEQ ID NO：2具有至少95%同源性鏈之輕鏈可變域序列。
  48. 如請求項39之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。
  49. 如請求項39之套組，其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  50. 如請求項39至49中任一項之套組，其中該抗體係Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。
  51. 如請求項39至49中任一項之套組，其中該抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  52. 如請求項39至49中任一項之套組，其中該抗體接合至一標記或部分。
  53. 如請求項52之套組，其中該部分係生物素。
  54. 如請求項53之套組，其中該部分係Ru(bpy)。
  55. 如請求項39之套組，其包含：(i)包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列之第一抗骨母細胞特異性因子-2抗體；及(ii)包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列之第二抗骨母細胞特異性因子-2抗體。
  56. 一種套組，其用於診斷患者之哮喘次型，其包含：(1)用於測定自該患者獲得之血清樣品中之總骨母細胞特異性因子-2的含量的結合總骨母細胞特異性因子之抗體及視情況用於偵測該血清樣品中之選自TARC及MCP-4之一或多種蛋白質的蛋白質表現量之裝置；及(2)量測該血清樣品中之該總骨母細胞特異性因子-2及視情況選自TARC及MCP-4之一或多種蛋白質之表現量的說明書，其中該等蛋白質中之任一者、組合或全部之表現量升高指示該哮喘次型，其中該抗體包含(i)SEQ ID NO：1之高變區(hypervariable region，HVR)序列及SEQ ID NO：2之HVR序列，或(ii)SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列。
  57. 如請求項56之套組，其中該套組進一步包含用於確定哮喘患者或呼吸病症患者為EIP抑或EIN之藥品說明書。
  58. 如請求項57之套組，其中該套組進一步包含用於確定哮喘患者是否可能對TH2路徑抑制劑起反應之藥品說明書。
  59. 如請求項57之套組，其中該套組進一步包含藥品說明書，該說明書之資訊描述該套組用於將哮喘患者分層/分類為可能之反應者及非反應者，以便使用TH2路徑抑制劑進行治療性治療。
  60. 如請求項39或56之套組，其中該套組進一步包含用以容納生物樣品之空容器。
  61. 如請求項56至59中任一項之套組，其中該套組包含用於在測定總骨母細胞特異性因子-2含量之免疫分析中使用之兩種抗骨母細胞特異性因子-2抗體。
  62. 如請求項61之套組，其包含(i)包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列之第一抗骨母細胞特異性因子-2抗體；及(ii)包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列之第二抗骨母細胞特異性因子-2抗體。
  63. 如請求項61之套組，其包含：(i)第一抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列；及(ii)第二抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  64. 一種抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其能夠偵測總骨母細胞特異性因子-2，其包含：(i)SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列，或(ii)SEQ ID NO：3之HVR序列及列SEQ ID NO：4之HVR序列。
  65. 如請求項64之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列。
  66. 如請求項65之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含SEQ ID NO：1之序列及SEQ ID NO：2之序列。
  67. 如請求項64之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列。
  68. 如請求項67之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含SEQ ID NO：3之序列及SEQ ID NO：4之序列。
  69. 如請求項64至68中任一項之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其能夠與人類骨母細胞特異性因子-2之同功異型物1至4結合。
  70. 如請求項69之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體係單株抗體。
  71. 如請求項69之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體係嵌合抗體。
  72. 如請求項64之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含：與胺基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  73. 如請求項72之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：1具有至少95%同源性鏈之重鏈可變域序列，及與SEQ ID NO：2具有至少95%同源性鏈之輕鏈可變域序列。
  74. 如請求項64之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其包含：與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列。
  75. 如請求項64至68及72至74中任一項之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體係Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。
  76. 如請求項64至68及72至74中任一項之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  77. 如請求項64至68及72至74中任一項之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該抗體接合至一標記或部分。
  78. 如請求項77之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該部分係生物素。
  79. 如請求項77之抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該部分係Ru(bpy)。
  80. 一種用於偵測總骨母細胞特異性因子-2之方法，其包含使用(i)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列之第一抗骨母細胞特異性因子-2抗體；或(ii)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列；及與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)序列之第二抗骨母細胞特異性因子-2抗體，其中該第一抗總骨母細胞特異性因子-2抗體包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列，及該第二抗總骨母細胞特異性因子-2抗體包含其包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列。
  81. 一種組合物，其包含如請求項64至79中任一項之抗總骨母細胞特異性因子-2抗體。
  82. 如請求項81之組合物，其包含(i)包含SEQ ID NO：1之HVR序列及SEQ ID NO：2之HVR序列之第一抗總骨母細胞特異性因子-2抗體；及(ii)包含SEQ ID NO：3之HVR序列及SEQ ID NO：4之HVR序列之第二抗總骨母細胞特異性因子-2抗體。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4943161B2 (ja) 2003-12-23 2012-05-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 新規抗ｉｌ１３モノクローナル抗体での癌の処置
EP2631302A3 (en) * 2008-03-31 2014-01-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma
AU2011343570B2 (en) 2010-12-16 2016-11-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to TH2 inhibition
RU2014139546A (ru) * 2012-03-27 2016-05-20 Дженентек, Инк. Методы прогнозирования, диагностики и лечения идиопатического легочного фиброза
JO3623B1 (ar) 2012-05-18 2020-08-27 Amgen Inc البروتينات المرتبطة بمولد المستضاد st2
BR112015021521A2 (pt) 2013-03-15 2017-10-10 Genentech Inc anticorpos anti-crth2 e métodos para seu uso
WO2014151648A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Coronado Biosciences, Inc. Treatment of autoimmune disease using helminthic parasites
ME03403B (me) * 2013-08-12 2020-01-20 Astrazeneca Ab Postupci za povećanje forsiranog ekspiratornog volumena kod asmatičara korišćenjem benralizumaba
SG11201600481UA (en) 2013-08-12 2016-02-26 Medimmune Llc Methods for reducing exacerbation rates of asthma using benralizumab
RU2020123894A (ru) * 2013-08-12 2020-09-18 Астразенека Аб Способы нормализации симптомов астмы с применением бенрализумаба
RU2016107435A (ru) 2013-09-13 2017-10-18 Дженентек, Инк. Композиции и способы обнаружения и количественного определения белка клеток-хозяев в клеточных линиях и рекомбинантные полипептидные продукты
NZ756749A (en) 2013-09-13 2022-05-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
JP6250351B2 (ja) * 2013-09-30 2017-12-20 シスメックス株式会社 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー
AU2014334563A1 (en) * 2013-10-15 2016-04-07 Astrazeneca Ab Methods for treating Chronic Obstructive Pulmonary disease using benralizumab
RU2016119425A (ru) 2013-10-23 2017-11-28 Дженентек, Инк. Способы диагностики и лечения эозинофильных заболеваний
RU2019118984A (ru) 2014-01-10 2019-08-06 Анаптисбайо, Инк. Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33)
WO2015112970A1 (en) 2014-01-27 2015-07-30 Medimmune, Llc Dipeptidyl peptidase-4 (dpp4/cd26) as a peripheral biomarker of il-13 activation in asthmatic lung
CA2936285A1 (en) * 2014-02-07 2015-08-13 Medimmune, Llc Novel assay to detect human periostin
WO2015126750A1 (en) * 2014-02-19 2015-08-27 Array Biopharma Inc. BIOMARKERS PREDICTIVE OF RESPONSIVENESS TO TREATMENT WITH A CRTh2 INHIBITOR
BR112016018980A2 (pt) * 2014-02-21 2017-10-10 Genentech Inc método de tratamento de um distúrbio, anticorpo multiespecífico, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos de produzir um anticorpo, de produção de uma metade de anticorpo ou de um anticorpo multiespecífico e de produção de um anticorpo multiespecífico, imunoconjugado e formulação farmacêutica
CN106536754B (zh) 2014-04-11 2021-04-16 诺华股份有限公司 用il-13拮抗剂选择性治疗哮喘的方法
MA40164A (fr) * 2014-06-27 2017-05-03 Sanofi Sa Anticorps bispécifiques anti-il4-il13
TW201628647A (zh) 2014-06-27 2016-08-16 賽諾菲公司 抗－ｉｌ４－ｉｌ１３雙特異性抗體
CN107073114B (zh) 2014-09-08 2022-01-14 赛福伦公司 使用瑞利珠单抗治疗中度到重度嗜酸细胞性哮喘
EP3194446B1 (en) * 2014-09-18 2022-10-26 Cedars-Sinai Medical Center Compositions and methods for treating fibrosis
JP7231326B2 (ja) * 2014-11-10 2023-03-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｉｌ－３３媒介性障害のための治療及び診断方法
CR20170240A (es) 2014-11-10 2018-04-03 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos
RU2710735C2 (ru) 2014-12-23 2020-01-10 Дженентек, Инк. Композиции и способы лечения и диагностики резистентного к химиотерапии рака
BR112017011724A2 (pt) 2015-01-09 2018-05-15 Medimmune, Llc ensaio para detectar dpp-4 humana
MX2017011486A (es) 2015-03-16 2018-06-15 Genentech Inc Métodos de detección y cuantificación de il-13 y sus usos en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades asociadas a th2.
CA3002761A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Astrazeneca Ab Dipeptidyl peptidase-4 and periostin as predictors of clinical response to eosinophil-targeted therapeutic agents in eosinophilic diseases
WO2017143152A1 (en) * 2016-02-17 2017-08-24 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Nasal biomarkers of asthma
EP3448391A4 (en) 2016-04-27 2019-12-18 AbbVie Inc. METHODS OF TREATING DISEASES IN WHICH IL-13 ACTIVITY IS HARMFUL WITH ANTI-IL-13 ANTIBODIES
MX2018013038A (es) 2016-04-27 2019-03-28 Pfizer Anticuerpos anti-il-33, composiciones, metodos y usos de los mismos.
KR102557643B1 (ko) * 2016-09-23 2023-07-20 제넨테크, 인크. 아토피성 피부염을 치료하기 위한 il-13 길항제의 용도
AR110873A1 (es) 2017-02-10 2019-05-08 Genentech Inc Anticuerpos contra triptasa, composiciones de estos y usos de estos
SG11202007564VA (en) 2018-02-09 2020-09-29 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
CA3093422A1 (en) * 2018-03-19 2019-09-26 Bioventures, Llc Periostin antibodies and methods of using the same
CN108977511A (zh) * 2018-07-03 2018-12-11 张罗 检测鼻腔脱落细胞中cst1基因表达量的方法及应用
CN111415728A (zh) * 2019-11-25 2020-07-14 刘雷 基于cnn和gan的ct图像数据自动分类方法及设备
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
CN113501878B (zh) * 2021-02-03 2022-12-02 北京智仁美博生物科技有限公司 针对人tslp的多种抗体及其用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009124090A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma

Family Cites Families (179)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4578349A (en) 1982-04-08 1986-03-25 Abbott Laboratories Immunoassay for carcinoembryonic antigen (CEA)
US4818709A (en) 1983-01-21 1989-04-04 Primus Frederick J CEA-family antigens, Anti-CEA antibodies and CEA immunoassay
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5231009A (en) 1986-08-13 1993-07-27 Molecular Diagnostics, Inc. Cdnas coding for members of the carcinoembryonic antigen family
US5122599A (en) 1986-08-13 1992-06-16 Molecular Diagnostics, Inc. CDNAS coding for members of the carcinoembryonic antigen family
DE3787864T2 (de) 1986-08-13 1994-02-10 Miles Inc Karzinoembryonisches Antigen kodierende cDNS.
US5274087A (en) 1986-08-13 1993-12-28 Molecular Diagnostics, Inc. cDNA coding for carcinoembryonic antigen (CEA)
US6022958A (en) 1986-08-13 2000-02-08 Bayer Corporation cDNAs coding for members of the carcinoembryonic antigen family
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
GB8800078D0 (en) 1988-01-05 1988-02-10 Ciba Geigy Ag Novel antibodies
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
AU675929B2 (en) 1992-02-06 1997-02-27 Curis, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
JPH05268982A (ja) 1992-03-27 1993-10-19 Hoechst Japan Ltd 骨形成作用を有する新規な蛋白質およびその製造法
AU5010793A (en) 1992-08-21 1994-03-15 Schering Corporation Human interleukin-13
US5596072A (en) 1992-08-21 1997-01-21 Schering Corporation Method of refolding human IL-13
CA2149329C (en) 1992-11-13 2008-07-15 Darrell R. Anderson Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
JPH08511420A (ja) 1993-06-16 1996-12-03 セルテック・セラピューテイクス・リミテッド 抗 体
US5889159A (en) 1993-10-29 1999-03-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies to tumor marker TC1 and methods for use of same
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
ES2277335T3 (es) 1994-10-05 2007-07-01 Immunex Corporation Citoquina designada lerk-6.
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6518061B1 (en) 1995-03-15 2003-02-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services IL-13 receptor specific chimeric proteins and uses thereof
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6911530B1 (en) 1995-10-23 2005-06-28 Amrad Operations, Pty., Ltd. Haemopoietin receptor and genetic sequences encoding same
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
DE19614062A1 (de) 1996-04-09 1997-10-16 Bayer Ag Verfahren zur kontinuierlichen Herstellung von Diarylcarbonaten
US20060073133A1 (en) * 1997-04-02 2006-04-06 Kikly Kristine K Sialoadhesin factor-3 antibodies
CA2291698A1 (en) 1997-05-29 1998-12-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Osf2/cbfa1 compositions and methods of use
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
DE69830315T2 (de) 1997-06-24 2006-02-02 Genentech Inc., San Francisco Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung
EP1000084A4 (en) 1997-07-08 2003-03-26 Human Genome Sciences Inc 123 PROTEIN SEPARATED BY HUMAN
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
ATE419009T1 (de) 1997-10-31 2009-01-15 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
ATE531812T1 (de) 1997-12-05 2011-11-15 Scripps Research Inst Humanisierung von nager-antikörpern
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6482403B1 (en) 1998-05-29 2002-11-19 Heska Corporation Caniney IL-13 immunoregulatory proteins and uses thereof
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
AU2750800A (en) 1999-02-01 2000-08-18 Amgen Canada Inc. Materials and methods to inhibit hodgkin and reed sternberg cell growth
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
AU782626B2 (en) 1999-10-04 2005-08-18 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
EP1229125A4 (en) 1999-10-19 2005-06-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE
AU784983B2 (en) 1999-12-15 2006-08-17 Genentech Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU767394C (en) 1999-12-29 2005-04-21 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
CN100455599C (zh) 2000-03-03 2009-01-28 协和发酵工业株式会社 基因重组抗体及其抗体片段
US7439064B2 (en) 2000-03-09 2008-10-21 Wicell Research Institute, Inc. Cultivation of human embryonic stem cells in the absence of feeder cells or without conditioned medium
ES2528794T3 (es) 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
AU2001284483B2 (en) 2000-09-08 2006-08-10 Asubio Pharma Co., Ltd. Remedies for heart failure
CA2424602C (en) 2000-10-06 2012-09-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
DE60135481D1 (de) 2000-10-20 2008-10-02 Genetics Inst Verwendung von il-13 inhibitoren zur behandlung von tumoren
AU1091802A (en) 2000-10-20 2002-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Degraded agonist antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
JP3523245B1 (ja) 2000-11-30 2004-04-26 メダレックス，インコーポレーテッド ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物
US20030152956A1 (en) * 2000-12-26 2003-08-14 Noriko Ohtani Method of examining allergic disease
US6596240B2 (en) 2001-01-12 2003-07-22 Porex Corporation Pipette tip for easy mounting and ejecting from a pipette
US20050107595A1 (en) 2001-06-20 2005-05-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1992643A3 (en) 2001-06-20 2008-12-10 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7803915B2 (en) 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US7087727B2 (en) * 2001-08-13 2006-08-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Periostin-based diagnostic assays
JP4052515B2 (ja) 2001-08-31 2008-02-27 協和醗酵工業株式会社 ヒト型ｃｄｒ移植抗体およびその抗体断片
US7384736B2 (en) 2001-09-06 2008-06-10 Decode Genetics Ehf. Methods for predicting drug sensitivity in patients afflicted with an inflammatory disease
GB0123951D0 (en) * 2001-10-05 2001-11-28 Glaxo Group Ltd Therapies for treating respiratory diseases
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20040023337A1 (en) 2001-10-26 2004-02-05 Heavner George A. IL-13 mutein proteins, antibodies, compositions, methods and uses
AU2002343601A1 (en) 2001-10-31 2003-05-12 Mds Proteomics, Inc. Proteins involved in regulation of adipocytes and uses related thereto
WO2003072827A1 (en) 2001-10-31 2003-09-04 Children's Hospital Medical Center Method for diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003086451A1 (en) 2002-04-05 2003-10-23 Centocor, Inc. Asthma-related anti-il-13 immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
ATE503829T1 (de) 2002-04-09 2011-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
DE20205500U1 (de) 2002-04-09 2002-07-11 Hurth Ursula Tampon
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
SE522615C2 (sv) 2002-07-09 2004-02-24 Martin Tiberg Med Tiberg Techn En metod och ett system för biometrisk identifiering eller verifiering.
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
DE10304350B3 (de) 2003-02-03 2004-06-09 Sabeu Kunststoffwerk Northeim Gmbh Behälterverschluß
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
KR101224235B1 (ko) 2003-04-11 2013-01-25 메디뮨 엘엘씨 재조합 ｉｌ­９ 항체 및 그의 용도
US8394379B2 (en) * 2003-05-15 2013-03-12 Iogenetics, Llc Targeted cryptosporidium biocides
MXPA05012613A (es) 2003-05-23 2006-05-25 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores de origen glial.
CA2527571A1 (en) 2003-05-29 2004-12-09 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
CA3084542A1 (en) 2003-06-10 2005-01-06 The Trustees Of Boston University Gene expression analysis of airway epithelial cells for diagnosing lung cancer
GB0407315D0 (en) 2003-07-15 2004-05-05 Cambridge Antibody Tech Human antibody molecules
WO2005019471A2 (en) 2003-08-13 2005-03-03 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Periostin-like factor: compositions and methods for making and using the same
US20050053549A1 (en) * 2003-09-10 2005-03-10 Aperon Biosystems Corp. Method for treating airway disorders
US20080241884A1 (en) 2003-10-08 2008-10-02 Kenya Shitara Fused Protein Composition
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
EA036531B1 (ru) 2003-11-05 2020-11-19 Роше Гликарт Аг Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
JP4943161B2 (ja) 2003-12-23 2012-05-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 新規抗ｉｌ１３モノクローナル抗体での癌の処置
MXPA06011199A (es) 2004-03-31 2007-04-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados.
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
US7501121B2 (en) 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
US20070048785A1 (en) 2004-06-09 2007-03-01 Lin Laura L Anti-IL-13 antibodies and complexes
TWI307630B (en) 2004-07-01 2009-03-21 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
EP1791565B1 (en) 2004-09-23 2016-04-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
KR100635540B1 (ko) 2004-10-12 2006-10-18 경북대학교 산학협력단 신규한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006055638A2 (en) * 2004-11-17 2006-05-26 Abgenix, Inc. Fully human monoclonal antibodies to il-13
KR101363777B1 (ko) 2005-09-30 2014-02-14 메디뮨 리미티드 인터루킨―１３ 항체 조성물
EP2532679B1 (en) 2005-10-21 2017-04-12 Novartis AG Human antibodies against il13 and therapeutic uses
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US8017119B2 (en) 2005-12-28 2011-09-13 Daiichi Sankyo Company, Ltd. Antibody against periostin, and a pharmaceutical composition comprising it for preventing or treating a disease in which periostin is involved
JP5019464B2 (ja) * 2005-12-28 2012-09-05 第一三共株式会社 抗ペリオスチン抗体およびそれを含有するペリオスチンが関与する疾患の予防または治療用医薬組成物
US7947648B2 (en) 2006-01-11 2011-05-24 Aerovance, Inc. Methods for treating asthma in human and non human primates using IL-4 mutant compositions
GB0600488D0 (en) 2006-01-11 2006-02-22 Glaxo Group Ltd Immunoglobulins
US20090028793A1 (en) 2006-02-22 2009-01-29 Philogen Spa Vascular Tumor Markers
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
US20070275925A1 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Regents Of The University Of California Asthma diagnosis and therapy
WO2008016356A2 (en) 2006-08-02 2008-02-07 Genizon Biosciences Genemap of the human genes associated with psoriasis
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
ES2902063T3 (es) 2006-09-08 2022-03-24 Abbvie Bahamas Ltd Proteínas de unión a interleucina-13
CA2683109A1 (en) * 2006-10-11 2008-04-17 Fusion Antibodies Limited Combination therapy
JP4369468B2 (ja) 2006-12-15 2009-11-18 日本分光株式会社 不可逆反応測定方法
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CL2008000058A1 (es) 2007-01-09 2008-05-23 Wyeth Corp Formulacion que comprende un anticuerpo anti-il13, un criprotector, y una solucion amortiguadora; composicion farmaceutica que la comprende; metodo para tratar un trastorno relacionado con il13; y formas farmaceuticas que la comprenden.
SI2132230T1 (sl) 2007-03-22 2014-07-31 Genentech, Inc. Apoptotska protitelesa, ki veĹľejo membransko-vezan IgE
MX2009011366A (es) * 2007-04-23 2009-11-05 Wyeth Corp Metodos y composiciones para tratar y monitorear el tratamiento de trastornos asociados con il-13.
WO2008134724A2 (en) 2007-04-30 2008-11-06 Smithkline Beecham Corporation Methods for administering anti-il-5 antibodies
WO2008140455A1 (en) 2007-05-15 2008-11-20 Tanox, Inc. Treatment of radiation and chemo-therapy induced fibrosis using novel anti-il 13 monoclonal antibodies
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
JP5238942B2 (ja) 2007-06-27 2013-07-17 国立大学法人大阪大学 ペリオスチンのＥｘｏｎ−１７部位によりコードされるペプチドに対する抗体を含む癌治療剤
AU2008274938A1 (en) 2007-07-11 2009-01-15 Aerovance, Inc. Pharmaceutical polypeptide dry powder aerosol formulation and method of preparation
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
JP5717178B2 (ja) 2008-06-05 2015-05-13 国立大学法人佐賀大学 特発性間質性肺炎の検出方法
US20110130335A1 (en) 2008-07-18 2011-06-02 MitsubishiChemical Medience Corporation Therapeutic agent and test agent for disease with myocardial necrosis
RU2011113405A (ru) * 2008-09-08 2012-10-20 Оттава Хоспитл Рисерч Инститьют (Ca) Регенерация поджелудочной железы, индуцированная периостином
JP5522717B2 (ja) * 2008-09-19 2014-06-18 国立大学法人佐賀大学 アトピー性皮膚炎の検出方法および予防・治療剤のスクリーニング方法
US20100082438A1 (en) * 2008-10-01 2010-04-01 Ronnie Jack Garmon Methods and systems for customer performance scoring
FR2944448B1 (fr) 2008-12-23 2012-01-13 Adocia Composition pharmaceutique stable comprenant au moins un anticorps monodonal et au moins un polysacharide amphiphile comprenant des substituants derives d'alcools hydrofobes ou d'amines hydrophobes.
FR2946349B1 (fr) * 2009-06-03 2013-10-04 Synarc Sas Sequences, anticorps, procedes et necessaires pour la detection et le dosage in vitro de la periostine, en vue du diagnostic du suivi ou du pronostic de pathologies ou de phenomenes biologiques impliquant la periostine
AU2011343570B2 (en) 2010-12-16 2016-11-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to TH2 inhibition
EP2754672B1 (en) 2011-09-06 2019-02-27 Shino-Test Corporation Antibody capable of binding to specific region of periostin, and method of measuring periostin using the same

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009124090A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating and diagnosing asthma

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Publication number Publication date
KR101923282B1 (ko) 2018-11-28
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