MX2013006712A - Diagnostico y tratamientos relacionados con la inhibicion de th2. - Google Patents

Diagnostico y tratamientos relacionados con la inhibicion de th2.

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Abstract

Se proporciona los métodos de diagnosticar y tratar trastornos relacionados con la inhibición de TH2, que incluye pero sin limitación asma. También se proporcionan los métodos de seleccionar o identificar pacientes para el tratamiento con ciertos agentes terapéuticos que son inhibidores de TH2.

Description

DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTOS RELACIONADOS CON LA INHIBICIÓN DE TH2 REFERENCIA CRUZADA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reivindica el beneficio de la prioridad de solicitud U.S. provisional N.° 61/459.760 presentada el 16 de diciembre de 2010, solicitud U.S. provisional N.° 61/465.425 presentada el 18 de marzo de 201 1 , solicitud U.S. provisional N.° 61/484.650 presentada el 10 de mayo de 2011 , solicitud U.S. provisional N.° 61/574.485 presentada el 2 de agosto de 201 1 , y solicitud U.S. provisional N.° 61/557.295 presentada el 8 de noviembre de 201 1 , todos los cuales incorporados por referencia en su totalidad.
LISTADO DE SECUENCIAS La solicitud presente contiene un listado de secuencias que ha remitido en el formato ASCII y por la presente incorporado por referencia en su totalidad. Dicha copia ASCII, creada el 17 de noviembre de 201 1 , se llama P4569R1 .txt y es 73,108 bytes en tamaño.
CAMPO Se proporcionan los métodos de diagnosticar y tratar trastornos relacionados con la inhibición TH2, que incluyen sin limitación a asma. También se proporcionan los métodos de seleccionar o identificar pacientes para el tratamiento con ciertos agentes terapéuticos que son en los inhibidores de la vía de TH2.
ANTECEDENTES El asma es una enfermedad compleja con incidencia mundial creciente. Entre otros eventos, se ha informado inflamación eosinofílica en las vías respiratorias de los pacientes con asma. La fisiopatología de la enfermedad se caracteriza por la obstrucción del flujo de aire variable, inflamación de las vías aéreas, hipersecreción de mucus, y fibrosis subepitelial. Desde el punto de vista clínico, los pacientes pueden presentar tos, sibilancias y dificultad de respirar. Si bien muchos pacientes se tratan adecuadamente con las terapias disponibles actuales, algunos pacientes con asma tienen enfermedad persistente a pesar del uso de terapias actuales.
Una plétora de fármacos está en el mercado o en el desarrollo para tratar el asma. Uno de los numerosos blancos para la terapia del asma es IL-13. IL-13 es una citoquina TH2 pleiotrópico producido por células T activadas, células NKT, basófilos, eosinófilos, y mastocitos, y se ha implicado fuertemente en la patogénesis de asma en modelos preclínicos. A pesar de los muchos vínculos entre IL-13, IL— 4 y asma en la bibliografía, muchas terapias con antagonistas IL13 y/o IL4 han tenido resultados decepcionantes en la clínica. En la actualidad, no se ha aprobado la terapia con antagonista IL-13 o IL— 4 para usar en el asma. Además, los pacientes asmáticos moderados a severas continúan careciendo de buenas opciones de tratamiento alternativo. En consecuencia, se necesita identificar mejores terapias para tratar el asma y mejores métodos para entender cómo tratar los pacientes con asma.
Todas las referencias citadas en la presente, que incluyen solicitudes y publicaciones de de patente, se incorporan por referencia en su totalidad por cualquier propósito.
SÍNTESIS Esta solicitud proporciona agentes terapéuticos para inhibir la vía de TH2 y mejores métodos de usar los mismos. Esta solicitud también proporciona mejores métodos para diagnosticar la enfermedad para usar en el tratamiento de la enfermedad opcionalmente con el inhibidor de la vía del TH2.
Los métodos de tratamiento y diagnóstico como se proporcionan en la presente se pueden aplicar a pacientes que sufren de asma, trastorno eosinofílico, trastornos respiratorios, trastorno mediado por IL-13 y/o trastorno mediado por IgE, o síntomas relacionados con estos trastornos. Los pacientes que sufren de síntomas tipo asma, incluyen pacientes que no sido diagnosticados con asma se pueden tratar de acuerdo con los métodos provistos en la presente.
De acuerdo con una forma de realización, un paciente tratado de acuerdo con los métodos provistos en la presente sufre de asma, un trastorno eosinofílico, un trastorno respiratorio, un trastorno mediado por IL-13 y/o un trastorno mediado por IgE, o síntomas relacionados con estos trastornos, y no tiene cáncer o una neoplasia. De acuerdo con otra forma de realización, el paciente tratado de acuerdo con los métodos provistos en la presente está sufriendo de asma, trastorno eosinofílico, trastornos respiratorios, trastorno mediado por IL-13 y/o trastorno mediado por IgE, o síntomas relacionados con estos trastornos, y tiene 12 años o más, 18 años o más o 19 años o más, o entre 12-17 años o entre 18-75 años.
En una forma de realización, un paciente tratado con un inhibidor de la vía de TH2 de acuerdo con esta invención también se trata con uno, dos, tres o más agentes terapéuticos. En una forma de realización, el paciente es un paciente con asma. De acuerdo con una forma de realización, el paciente se trata con el inhibidor de la vía de TH2 y uno, dos, tres o más agentes terapéuticos, donde al menos un agente terapéutico, diferente del inhibidor de TH2, es un corticoide, un antagonista de leucotrieno, un LABA, una composición de la combinación de corticoide/LABA, una teofilina, cromolín sódico, nedocromilo sódico, omalizumab, un LAMA, un MABA, un inhibidor de proteína activadora de 5-Lipoxigenasa (FLAP), un inhibidor de la enzima PDE-4. De acuerdo con un aspecto de la invención, un inhibidor de la vía de TH2 se administra a un paciente con asma diagnosticado como estado EIP, donde el diagnóstico comprende el uso de un ensayo de EID (solo o en combinación con otros ensayos) para determinar el estado EIP. En una forma de realización adicional, el paciente con asma no está controlado con un corticoide antes del tratamiento. En otra forma de realización, el paciente con asma también se está tratando con un segundo controlador. En una forma de realización, el segundo controlador es un corticoide, un LABA o un antagonista de leucotrieno. En una forma de realización adicional, el paciente con asma está sufriendo de asma moderada a severa. En consecuencia, en una forma de realización, el paciente tratado con el inhibidor de la vía de TH2 es un paciente con asma moderada a severa que no está controlado con un corticoide antes del tratamiento con el inhibidor de la vía de TH2, y luego se trata con el inhibidor de la vía de TH2 y uno, dos, tres o más controladores. En una forma de realización, al menos uno de los controladores es un corticoide. En una forma de realización adicional, tal paciente se trata con un inhibidor de la vía de TH2, un corticoide y otro controlador. En otra forma de realización, el paciente está sufriendo de asma leve pero no se trata con un corticoide. Se debe entender que los agentes terapéuticos pueden tener diferentes ciclos de tratamiento en comparación con el inhibidor de TH2 y, en consecuencia se puede administrar en momentos diferentes en comparación con el inhibidor de TH2 como parte del tratamiento del paciente. En consecuencia, de acuerdo con una forma de realización, un método de tratamiento de acuerdo con esta invención comprende las etapas de administrar a un paciente un inhibidor de la vía de TH2 y opcionalmente, administrar al menos uno, dos o tres agentes terapéuticos adicionales. En una forma de realización, el inhibidor de la vía de TH2 está presente en una composición con otro agente terapéutico. En otra forma de realización, el inhibidor de la vía de TH2 no está presente en una composición con otro agente terapéutico.
De acuerdo con otra forma de realización, la invención comprende un método para tratar asma que comprende administrar un anticuerpo anti-IL-13 que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO: 10 o un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 como una dosis fija. En una forma de realización un anticuerpo anti-IL-13 que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10 se administra como una dosis fija de 125-1000 mg (es decir, no dependiente del peso), por inyección subcutánea o por inyección intravenosa, con una frecuencia de tiempo seleccionada de: cada 2 semanas, cada 3 semanas, y cada 4 semanas. En una forma de realización un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 se administra como una dosis fija de 125-1000 mg (es decir, no dependiente del peso), por inyección subcutánea o por inyección intravenosa, con una frecuencia de tiempo seleccionada de: cada 2 semanas, cada 3 semanas, y cada 4 semanas. En una forma de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es lebrikizumab, que se administra como una dosis fija de 125-1000 mg (es decir, no dependiente del peso), por inyección subcutánea o por inyección intravenosa, con una frecuencia de tiempo seleccionada de: cada 2 semanas, cada 3 semanas, y cada 4 semanas. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con el estado EIP usando un ensayo de periostina total para determinar el estado EIP.
De acuerdo con otra forma de realización, un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10 se administra para tratar asma en una cantidad terapéuticamente efectiva suficiente para reducir la tasa de exacerbaciones del paciente con el tiempo o aumentar FEV1. En aún otra forma de realización, la invención comprende un método para tratar asma que comprende administrar un anticuerpo ant¡-IL-13 que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10 o un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 as a dosis fija (es decir, no dependiente del peso) of 37.5 mg, o una dosis fija de 125 mg, o una dosis fija de 250 mg. En ciertas formas de realización, la dosis se administra por inyección subcutánea una vez cada 4 semanas durante un período de tiempo. En ciertas formas de realización, el período de tiempo es 6 meses, un año, dos años, cinco años, diez años, 15 años, 20 años, o la vida del paciente. En ciertas formas de realización, el asma es asma severa y el paciente se controla inadecuadamente o no controla en los corticoides inhalatorios más una medicación de segundo controlados En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con estado EIP' mediante un ensayo de periostina total para determinar el estado EIP y el paciente se selecciona para el tratamiento con un anticuerpo anti-IL-13 como se describió anteriormente. En otra forma de realización, el método comprende tratar un paciente con asma con un anticuerpo anti-IL-13 como se describió anteriormente donde el paciente se diagnosticó previamente con el estado EIP mediante un ensayo de periostina total para determinar el estado EIP. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 18 o más. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 12 a 17 años y el anti— IL13 se administra como una dosis fija de 250 mg o una dosis fija de 125 mg. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 6 a 11 y el anticuerpo anti-IL-13 se administra como una dosis fija de 125 mg o una dosis fija de 62,5 mg.
La presente invención proporciona un ensayo de periostina. En una forma de realización, el ensayo de periostina es un ensayo de periostina total. En otra forma de realización, el ensayo de periostina total comprende el uso de uno o más de los anticuerpos antiperiostina de esta invención para unirse a la periostina total en una muestra biológica obtenida de un paciente. En aún otra forma de realización de esta invención, la muestra biológica es suero obtenido de sangre entera. En una forma de realización, la muestra biológica se obtiene de un paciente con asma. En una forma de realización adicional, el paciente con asma es un paciente con asma moderada a severa. En otra forma de realización adicional el paciente con asma moderada a severa no está controlado con un corticoide y opcionalmente, se trata con uno, dos, tres o más controladores.
Los ensayos de antiperiostina y ensayos de anticuerpo descriptos en la presente se pueden usar para otras enfermedades en las que la periostina está elevada tal como fibrosis pulmonar idiopática (IPF), neumonía intersticial no específica (NSIP), y cáncer.
La presente invención proporciona un agente terapéutico que es un inhibidor de la vía de TH2 para usar en el tratamiento del asma o un trastorno respiratorio en un paciente, donde el paciente expresa niveles elevados de periostina total. En una forma de realización, el blanco para la inhibición de la vía de TH2 se selecciona de: IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE; y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL-5, receptor alfa de IL-4, receptor alfa de IL-13 y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2, FcepsilonRI y FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE). En una forma de realización, el paciente tratado de acuerdo con los métodos de la presente invención está sufriendo de asma leve a severa, opcionalmente asma moderada a severa, y cuyo asma no está controlado con un corticoide. En una forma de realización adicional, el nivel sérico de la periostina total en el paciente asmático moderado a severa que no está controlado en un corticoide es mayor que 20 ng/ml, 21 ng/ml, 22 ng/ml, 23 ng/ml, 24 ng/ml o 25 ng/ml en un ensayo E4. En otra forma de realización adicional, el paciente se puede tratar adicionalmente tiene niveles de expresión elevados de alguno, combinación o todos los ARNm o proteínas de CEA, TARC (CCL17) y MCP-4 (CCL13). En otra forma de realización adicional, el paciente que se trata además de tener niveles de expresión elevados de periostina como se describe en la presente, tiene un nivel de FENo mayor que 21 ppb, o mayor de 35 ppb.
La presente invención proporciona el uso de un agente terapéutico que une un blanco de la vía de asma inducida por TH2 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un paciente que tiene asma o un trastorno respiratorio, donde el paciente expresa niveles elevados de periostina total, y donde el blanco es IL-9, IL-5, IL-13, IL-4, OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE; y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL-5, receptor alfa de IL-4, receptor alfa de IL-13 y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2, FcepsilonRI o FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE). En una forma de realización, el paciente es EIP. De acuerdo con una forma de realización, se determinó que el paciente tiene EIP por medio de un ensayo de acuerdo con esta invención. En aún otra forma de realización, el ensayo es un ensayo de periostina total. En otra forma de realización, el ensayo mide el nivel de periostina total en una muestra biológica obtenida del paciente. En una forma de realización, el ensayo mide el nivel de proteína de la periostina total en la muestra de suero obtenida del paciente.
La presente invención comprende un kit o artículo para manufactura para diagnosticar un subtipo de asma en un paciente que comprende: (1 ) determinar los niveles de periostina total en una muestra de suero obtenida del paciente y opcionalmente los niveles de expresión de proteína para una o más proteínas seleccionadas de TARC y MCP-4; y (2) instrucciones para medir los niveles de expresión de la periostina total y opcionalmente las proteínas de TARC y/o MCP-4 en la muestra de suero, donde los niveles de expresión elevados de una, combinación o el total de dichas proteínas es indicativa del subtipo de asma.
En aún otra forma de realización, se proporcionan métodos de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que probablemente sea receptivo al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden determinar si el paciente es positivo para la inflamación eosinofílica (EIP) por medio de un ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica (EIDA), donde el estado EIP indica que el paciente probablemente sea receptivo al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2.
En otra forma de realización, se proporcionan métodos de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que es probable que sufra de exacerbaciones severas. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden determinar si el paciente es EIP por medio de EIDA, donde el estado EIP indica que el paciente probablemente sufra de un aumento de exacerbaciones severas.
En otra forma de realización más, se proporcionan métodos de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que es menos probable que sea receptivo al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden determinar si el paciente es negativo para la inflamación eosinofílica (EIN) usando un EIDA, donde el estado EIN indica que el paciente es menos probable que sea receptivo al tratamiento con el inhibidor de la vía de TH2.
En otra forma de realización, se proporcionan métodos de controlar un paciente con asma que se trata con un inhibidor de la vía TH2. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden determinar si el paciente es EIP o EIN usando un EIDA. En una forma de realización, el método comprende determinar un régimen de tratamiento para el inhibidor de la vía de TH2. En una forma de realización, la determinación del EIP indica la continuación de la terapia con el inhibidor de la vía de TH2 y la determinación del EIN indica la discontinuación de la terapia con el inhibidor de la vía de TH2.
En ciertas formas de realización, el EIDA usado en los métodos descriptos anteriormente comprende las etapas de: (a) determinar la cantidad de periostina total en una muestra obtenida de un paciente con asma; (b) comparar la cantidad de periostina total determinada en la etapa (a) con una cantidad de referencia; y (c) clasificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor sobre la base de la comparación obtenida en la etapa (b). En ciertas formas de realización, la periostina total es periostina sérica, tal periostina es una medida usando un inmunoensayo. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich se lleva a cabo en un analizador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich es un ensayo E4. En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 23 ng/ml mayor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa (a). En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 50 ng/ml o mayor cuando se usa el analizador Elecsys® en la etapa (a). En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIN es 21 ng/ml o menor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa (a). En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIN es 48 ng/ml o menor cuando se usa el analizador Elecsys® en la etapa (a).
En ciertas formas de realización, el paciente de acuerdo con los métodos descriptos anteriormente está sufriendo de asma moderada a severa. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con un corticoide. En ciertas formas de realización, el corticoide es un corticoide inhalatorio. En ciertas formas de realización, el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®. En una forma de realización, el paciente también se está tratando con un segundo controlador. En ciertas formas de realización, el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD). En ciertas formas de realización, el LABD es un agonista beta-2 de acción prolongada (LABA), antagonista del receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA), teofilina, o corticoides orales (OCS). En ciertas formas de realización, LABD es Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist™ o Serevent®.
En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 de acuerdo con los métodos anteriores inhibe el blanco ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL— 4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (por ejemplo, XOLAIR, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 104451 1-01-4), receptor alfa de IL— 4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-13 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935), o es un inhibidor de multi-citoquina de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8). En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE. En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-anti-IL-13. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO: 10, un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°; 16 o lebrikizumab. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo biespecífico que también se une a IL— 4. En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti— IgE. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-lgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1' que comprende a cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1' que comprende a cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIAJ; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25 [SQNTLVPWT].
En otro aspecto, los usos de un kit para detectar la periostina total en una muestra obtenida de un paciente con asma para estratificar/clasificar pacientes con asma en probables respondedores y no respondedores para el tratamiento terapéutico con un inhibidor de la vía de TH2. En ciertas formas de realización, la periostina total se detecta usando un EIDA, tal EIDA comprende las etapas de: (a) determinar la cantidad de periostina total en una muestra obtenida de un paciente con asma; (b) comparar la cantidad de periostina total determinada en la etapa (a) con una cantidad de referencia; y (c) clasificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor sobre la base de la comparación obtenida en la etapa (b). En ciertas formas de realización, la periostina total es periostina sérica, tal periostina se mide usando un inmunoensayo. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich se lleva a cabo con un analizador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich es un ensayo E4. En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 23 ng/ml o mayor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa (a). En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 50 ng/ml o mayor cuando se usa el analizador Elecsys® en la etapa (a).
En ciertas formas de realización, el paciente de acuerdo con los usos descriptos en el párrafo anterior está sufriendo de asma moderada a severa. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con un corticoide. En ciertas formas de realización, el corticoide es un corticoide inhalatorio. En ciertas formas de realización, el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®. En una forma de realización, el paciente también se trata con un segundo controlador. En ciertas formas de realización, el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD). En ciertas formas de realización, el LABD es un agonista beta-2 de acción prolongada (LABA), antagonista del receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA), teofilina, o corticoides orales (OCS). En ciertas formas de realización, el LABD es Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist™ o Serevent®.
En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 de acuerdo con los usos anteriores inhibe el blanco ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL— 5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL- 3 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 e IgE (por ejemplo, XOLAIR, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL— 5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 1044511-01-4), receptor alfa de IL-4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-13 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRI I/CD23 (receptorés para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935), o es un inhibidor de multi-citoquina of CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8). En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE. En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-anti— IL-13. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10, un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 o lebrikizumab. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo biespecífico que también une IL— 4. En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-lgE. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-lgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1 ' que comprende a cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1' que comprende a cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25 [SQNTLVPWT].
En otro aspecto más, se proporcionan kits para medir la periostina total en una muestra biológica obtenida de un paciente con asma o un paciente que sufre de un trastorno respiratorio, donde el kit comprende una primera molécula de ácido nucleico que híbrida con una segunda molécula de ácido nucleico, donde la segunda molécula de ácido nucleico codifica la periostina total o una porción de esta, o el kit comprende un anticuerpo que se une a la periostina total. En ciertas formas de realización, el kit comprende un prospecto que contiene información que describe los usos provistos anteriormente.
En aún otro aspecto más, se proporcionan kits para diagnosticar un subtipo de asma en un paciente, los kits que comprenden: (1 ) determinar los niveles de periostina total en una muestra de suero obtenida del paciente y opcionalmente los niveles de expresión de proteína en la muestra de suero para una o más proteínas seleccionadas de TARC y MCP-4; y (2) instrucciones para medir los niveles de la periostina total y opcionalmente TARC y/o MCP-4 en la muestra de suero, donde los niveles de expresión elevados de alguna, combinación o todas estas proteínas es indicativa del subtipo de asma. En ciertas formas de realización, el kit además comprende un prospecto para determinar si un paciente con asma o paciente con trastorno respiratorio es EIP o EIN. En ciertas formas de realización, el kit además comprende un prospecto para determinar si un paciente con asma es probable que responda a un inhibidor de la vía de TH2. En ciertas formas de realización, el kit además comprende un prospecto que contiene Información que describe alguno de los usos provistos anteriormente. En ciertas formas de realización, el kit además comprende un envase vacío para contener una muestra biológica. En ciertas formas de realización, el kit comprende dos anticuerpos antiperiostina para usar en un inmunoensayo para determinar los niveles de periostina total.
En otro aspecto, se proporcionan métodos de tratar un asma o un trastorno respiratorio que comprende administrar un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 1 1 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 a un paciente que sufre de asma o un trastorno respiratorio en una dosis fija 125-500 mg cada 2-8 semanas. En ciertas formas de realización, el paciente está sufriendo de asma moderada a severa. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con un corticoide. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con un corticoide inhalatorio. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con una dosis diaria total de al menos 500 mcg de propionato de fluticasona (FP). En ciertas formas de realización, el corticoide es un corticoide inhalatorio que es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair®, Azmacort®. En ciertas formas de realización, el paciente se está tratando con un segundo controlador. En ciertas formas de realización, el paciente se continúa tratando con un corticoide, opcionalmente un corticoide inhalatorio, durante el tratamiento con el anticuerpo anti-IL-13. En ciertas formas de realización, el paciente se continúa tratando con a segundo controlador durante el tratamiento con el anticuerpo anti-IL-13. En ciertas formas de realización, el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada. En ciertas formas de realización, el dilatador bronquial de acción prolongada es un LABA, LTRA, LAMA, teofilina, o OCS. En ciertas formas de realización, se ha determinado que el paciente es EIP. En ciertas formas de realización, se ha determinado que el paciente es EIP usando un kit descripto anteriormente. En ciertas formas de realización, se ha determinado que el paciente es EIP usando un método como se describió anteriormente. En ciertas formas de realización, el paciente se administra una dosis fija de 125 mg o 250 mg cada cuatro semanas. En ciertas formas de realización, el paciente tiene 18 años o más, o el paciente tiene 12-17 años o 12 años y más, o el paciente tiene 6-11 años o 6 años y más.
En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 se administra en forma subcutánea. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 se administra usando una jeringa precargada o dispositivo autoinyector. En ciertas formas de realización, el paciente con asma que se trata de acuerdo con los métodos anteriores tiene 18 años o más y tiene periostina sérica a= 50 ng/mL y no está controlado con un corticoide inhalatorio y una medicación de segundo controlados En ciertas formas de realización, la periostina sérica se mide usando un inmunoensayo, tal inmunoensayo se selecciona de ensayo de periostina Elecsys® y ensayo E4. En ciertas formas de realización, la periostina sérica se mide usando un kit como se describió anteriormente. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y a VL que comprende la SEQ ID NO:10. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es lebrikizumab. En ciertas formas de realización, el paciente con asma tratado de acuerdo con los métodos descriptos anteriormente tiene 12 años y más y no se controla con un corticoide inhalatorio y una medicación de segundo controlador.
En otro aspecto más, se proporcionan métodos de tratar asma o una enfermedad respiratoria que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de lebrikizumab al paciente. En ciertas formas de realización, el tratamiento produce una mejora relativa del FEV1 de más de 5% en comparación con el tratamiento anterior con lebrikizumab. En ciertas formas de realización, LA mejora relativa del FEV1 es mayor de 8% en comparación con tratamiento anterior con lebrikizumab. En ciertas formas de realización, el tratamiento produce una reducción de las exacerbaciones severas.
En otro aspecto más, se proporcionan métodos de tratar un paciente que sufre de asma o una enfermedad respiratoria que comprende administrar un inhibidor de la vía de TH2 al paciente diagnosticado como EIP. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden la etapa de diagnosticar el paciente como EIP mediante un ensayo de periostina total. En ciertas formas de realización, los métodos además comprenden a etapa de retratar al paciente con el inhibidor de la vía de TH2 si se determina que el paciente es EIP. En ciertas formas de realización, se usa suero para del paciente para determinar si el paciente es EIP.
En ciertas formas de realización, el estado EIP determinado de acuerdo con los métodos anteriores usa un El DA que comprende las etapas de: (a) determinar la cantidad de periostina total en una muestra obtenida del paciente; (b) comparar la cantidad de periostina total determinada en la etapa (a) con una cantidad de referencia; y (c) clasificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor sobre la base de la comparación obtenida en la etapa (b). En ciertas formas de realización, la periostina total es periostina sérica, tal periostina se mide usando un inmunoensayo. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich. En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich se lleva a cabo con un analizador Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). En ciertas formas de realización, el inmunoensayo sándwich es un ensayo E4. En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 23 ng/ml mayor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa (a). En una forma de realización, la cantidad de referencia para EIP es 50 ng/ml o mayor cuando se usa el analizador Elecsys® en la etapa (a).
En ciertas formas de realización, el paciente de acuerdo con los métodos descriptos anteriormente está sufriendo de asma moderada a severa. En ciertas formas de realización, el asma o trastorno respiratorio no está controlado con un corticoide. En ciertas formas de realización, el corticoide es un corticoide inhalatorio. En ciertas formas de realización, el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®. En una forma de realización, el paciente también se trata con un segundo controlador. En ciertas formas de realización, el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD). En ciertas formas de realización, el LABD es un agonista beta-2 de acción prolongada (LABA), antagonista del receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA), teofilina, o corticoides orales (OCS). En ciertas formas de realización, el LABD es Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist™ o Serevent®.
En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 de acuerdo con los métodos anteriores inhibe el blanco ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL— 4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (por ejemplo, XOLAIR®, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 104451 1-01-4), receptor alfa de \L-4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL— 13 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25)', ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935), o es un inhibidor de multi-citoquina de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8). En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE. En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-anti-IL-13. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO: 10, un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, las HVR respectivas que tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 1 1 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 o lebrikizumab. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo biespecífico que también une IL-4.
En ciertas formas de realización, el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-lgE. En ciertas formas de realización, el anticuerpo anti— IgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1 ' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1 ' que comprende a cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25 [SQNTLVPWTJ.
En otro aspecto, se proporcionan métodos para evaluar eventos adversos en un paciente asociado con el tratamiento de asma con lebrikizumab. En ciertas formas de realización, los métodos comprenden las etapas de controlar el número y/o gravedad de eventos que son exacerbaciones, exacerbaciones, neumonía adquirida en la comunidad, anafilaxis, dolores musculoesqueléticos, trastornos musculoesqueléticos, dolores del tejido conectivo o trastornos del tejido conectivo. En ciertas formas de realización, el trastorno musculoesquelético o tejido conectivo es artralgia, dolor lumbar, dolor en extremidades, mialgia, dolor de cuello, artritis, anormalidades del desarrollo óseo, bursitis, costocondritis, exostosis, dolor lateral, dolor torácico musculoesquelético, dolor musculoesquelético, dolor en quijada o tendinitis.
En otro aspecto más, se proporcionan anticuerpos antiperiostina. En ciertas formas de realización, el anticuerpo antiperiostina comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:2. En ciertas formas de realización, el anticuerpo antiperiostina comprende las secuencias de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2. En ciertas formas de realización, el anticuerpo antiperiostina comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y las secuencias de HVR de la SEQ ID N0:4. En ciertas formas de realización, el anticuerpo antiperiostina comprende las secuencias de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4. En ciertas formas de realización, se proporcionan ensayos de periostina total que comprenden el uso de los anticuerpos antiperiostina anteriores.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 proporciona un esquema del ensayo de estimulación con alérgeno descripto en el Ejemplo 1 .
La Figura 2 (que comprende de la figura 2A a la 2B) muestra cambios inducidos por, alérgeno en FEV1 después del estímulo en la selección (A) y en la semana 13 (B). Se mide el FEV1 cada 10 minutos durante los primeros 90 minutos y luego cada hora de 2-8 horas después del estímulo con el alérgeno. Las barras de error representan errores estándares de la media.
La Figura 3 (que comprende de la figura 3A a la figura 3C) muestra niveles séricos de IgE, CCL13 (MCP-4), y CCL17 (TARC). (A) Niveles séricos expresados como % de niveles de predosis con el tiempo en pacientes tratados con placebo y (B) pacientes tratados con lebrikizumab. Las líneas representan los pacientes individuales; las medianas de los grupos no se indican. Las flechas indican la dosificación en las semanas 0, 4, 8, y 12 (días 0, 28, 56 y 84). (C) Las reducciones en IgE, CCL13, y CCL17 en la Semana 13 en pacientes individuales con respecto a los niveles básales de estos marcadores.
La Figura 4 muestra la inhibición inducida por lebrikizumab de la respuesta asmática tardía (LAR) en los subgrupos de pacientes con biomarcador alto y biomarcador bajo. Los datos se expresan como reducción media corregida por placebo de la AUC (área bajo la curva) de la LAR en la Semana 13 (n=5 a 8 pacientes activos/grupo).
La Figura 5 proporciona un esquema de un ensayo de asma descripto en el Ejemplo 2.
La Figura 6 proporciona las características básales de los pacientes que participan en el ensayo de asma del Ejemplo 2.
La Figura 7 proporciona resultados del ensayo de asma del Ejemplo 2.
La Figura 8 (que comprende de la figura 8A a la figura 8B) proporciona FEV1 resultados del ensayo de asma del Ejemplo 2 para todos los sujetos evaluable para eficacias (A) y para los sujetos solo con periostina alta (B).
La Figura 9 proporciona tasas de reducción de las exacerbaciones del ensayo de asma del Ejemplo 2.
La Figura 10 proporciona por ciento de cambio de FENo del ensayo de asma del Ejemplo 2.
La Figura 1 1 proporciona resultados de seguridad del ensayo de asma del Ejemplo 2.
La Figura 12 proporciona un esquema de un ensayo de asma descripto en el Ejemplo 3.
La Figura 13 proporciona un esquema de un estudio observacional de asma descripto en el Ejemplo 5.
La Figura 14 ( que comprende de la figura 14A a la figura 14F) muestra la correlación intrasujeto entre los niveles de periostina sérica durante las múltiples visitas en la cohorte BOBCAT que se describe en el Ejemplo 5. (A) correlación entre la visita 1 y la visita 2; (B) correlación entre la visita 1 y la visita 3; (C) correlación entre la visita 2 y la visita 3; (D) correlación entre la visita 1 y el nivel de periostina sérica promedio durante todas las visitas; (E) correlación entre visita 2 y el nivel de periostina sérica promedio durante todas las visitas; y (F) correlación entre visita 3 y el nivel de periostina sérica promedio durante todas las visitas.
La Figura 15 (que comprende de la figura 15A a la figura 15E) muestra que FENO diferencia los asmáticos moderados a severas no controlados con dosis alta de ICS de acuerdo con la inflamación eosinofílica de las vías respiratorias (cohorte BOBCAT) como se describe en el Ejemplo 5. (A) Asmáticos con > 3% de eosinofilos en esputo tenían FENO significativamente elevado en comparación con los asmáticos con < 3% eosinofilos en esputo (p<0,001 por la prueba de suma de rango de Wilcoxon). (B) Los asmáticos con > 22 eosinófilos/mm2 de tejido bronquial total presentaban una tendencia a FENo elevado en comparación con los asmáticos con < 22 eosinófilos/mm2 de tejido bronquial total (p=0,07 por la prueba de suma de rango de Wilcoxon). (C) Una puntuación de eosinofilos de vías respiratorias del compuesto donde 0 = eosinofilos en esputo <3% y eosinofilos en tejido ("Bx") < 22/mm2; 1 = o eosinofilos en esputo >3% O eosinofilos en tejido > 22/mm2 (excesivo); 2 = AMBOS eosinofilos en esputo >3% Y eosinofilos en tejido > 22/mm2 demostraron una tendencia positiva fuerte a niveles crecientes de FENo con la puntuación de eosinofilos de vías respiratorias compuesto creciente (p=0,001 por regresión logística). El estado de periostina sérica se indica como en las leyendas. (D) La periostina sérica y FENO estaban elevadas en la mayor parte de los sujetos con eosinófilos elevados en esputo o tejido, pero los subconjuntos de sujetos presentaban elevación de periostina sola o FEN.° La mayor parte de los sujetos que carecen de eosinófilos elevados en esputo Y tejido exhibieron baja periostina sérica y bajo FEN.° (E) En análisis de la curva característica del receptor (ROC) de la sensibilidad y especificidad de la periostina sérica, FENO, eosinófilos en sangre, y IgE en suero para el estado de eosinófilos de las vías respiratorias del compuesto. AUC = área bajo la curva.
La Figura 16 proporciona el porcentaje de pacientes sin falla de tratamiento en el ensayo de asma descripto en el Ejemplo 3.
La Figura 17 muestra una comparación entre los niveles de periostina sérica medidos en ensayos similares al Ensayo del Ejemplo 4 (ensayo E4) o el ensayo de periostina Elecsys® (Ejemplo 7) para las muestras obtenidas de los ensayos clínicos descriptos en el Ejemplo 3 y Ejemplo 5.
La Figura 18 (que comprende de la figura 18A a la figura 18B) muestra la farmacodinámica de la periostina sérica en pacientes con periostina baja (A) y en pacientes con periostina alta (B) como se describe en el Ejemplo 2.
La Figura 19 muestra el por ciento de cambio en los niveles de periostina media con el tiempo en los pacientes tratados con placebo y con lebrikizumab como se describe en el Ejemplo 2.
La Figura 20 (que comprende de la figura 20A a la figura 20B) muestra la correlación entre % de cambio en el FEV1 en la semana 12 y peso corporal para los individuos del estudio de Fase II descripto en el Ejemplo 2 (A) y el estudio de Fase II descripto en el Ejemplo 3 (B) como se describe en el Ejemplo 6.
La Figura 21 muestra la proporción predicha de pacientes con concentración mínimas del estado estacionario sobre varios niveles como se describe en el Ejemplo 6.
La Figura 22 (que comprende de la figura 22A a la figura 22B) muestra el efecto de lebrikizumab sobre los niveles séricos de CCL17 (TARC) con el tiempo para el estudio del Ejemplo 2 (A) y para el estudio del Ejemplo 3 (B) como se describe en el Ejemplo 6.
La Figura 23 muestra los perfiles PK de la población simulada en cada una de las dosis de la Fase III, 250 mg cada 4 semanas, 125 mg cada 4 semanas, y 37,5 mg cada 4 semanas como se describe en el Ejemplo 6.
DESCRIPCIÓN DETALLADA A menos que se definan de otro modo, los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado comúnmente entendido por los expertos en la técnica a la que pertenece esta invención. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994), y March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992), proporcionan a los expertos en la técnica una guía general para muchos de los términos usados en la presente solicitud.
CIERTAS DEFINICIONES A los fines de interpretar la presente memoria descriptiva, se aplican las siguientes definiciones, y siempre que corresponda, los términos usados en singular también incluyen el plural y viceversa. En el caso de que cualquier definición establecida a continuación no coincida con cualquier documento incorporado en la presente por referencia, prevalecerá la definición establecida a continuación.
Como se usa en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones anexas, las formas singular "un", "una" y "el/la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. En consecuencia, por ejemplo, la referencia a "una proteína" o un "anticuerpo" incluye una pluralidad de proteínas o anticuerpos, respectivamente; la referencia a "una célula" incluye mezclas de células y similares.
El término "periostina total" como se usa en la presente se refiere a al menos isoformas 1 , 2, 3 y 4 de la periostina. Las isoformas de la periostina humana 1 , 2, 3 y 4 son conocidas en la técnica como que comprenden las siguientes secuencias de aminoácidos: NP_006466.2 (SEQ ID NO:19); NP_001129406.1 (SEQ ID NO:20), NP_001129407.1 (SEQ ID NO:21 ), y NP_001129408.1 (SEQ ID NO:22), respectivamente, de acuerdo con la base de datos de NCBI. Además, los solicitantes han detectado una forma adicional de periostina. Esta nueva isoforma se denomina en la presente como "isoforma 5" y se ha secuenciado parcialmente. La isoforma 5 comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:23. En una forma de realización, las isoformas de periostina son periostinas humanas. En una forma de realización adicional, el término periostina total incluye la isoforma 5 de la periostina humana además de las isoformas 1-4. En otra forma de realización, la periostina total es periostina total sérica o periostina plasmática total (es decir, periostina total de una muestra de suero obtenida de sangre entera o una muestra de plasma obtenida de sangre entera, respectivamente, la sangre entera obtenida de un paciente).
La expresión "ensayo de periostina total" se refiere a un ensayo que mide los niveles de periostina total en una muestra biológica. En una forma de realización, los niveles de periostina total se miden usando anticuerpos antiperiostina. En otra forma de realización, los anticuerpos antiperiostina son los anticuerpos antiperiostina descriptos en la presente. En otro ejemplo, los niveles de periostina total se miden usado una o más secuencias de ácidos nucleicos antisentido para el ARNm que codifica las isoformas de periostina 1-4. En otro ejemplo más, el ensayo de periostina total es el ensayo descripto en el Ejemplo 4 ("Ensayo del Ejemplo 4" o "ensayo E4"). En una forma de realización, el ensayo de periostina total comprende el uso de (1 ) un anticuerpo que comprende las secuencias SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 (el anticuerpo "25D4") y/o un anticuerpo que comprende las secuencias de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4 (el anticuerpo "23B9") para unir periostina en una muestra biológica, (2) un anticuerpo que comprende las secuencias de la región variable SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 y/o un anticuerpo que comprende las secuencias de la región variable de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4 para unir periostina en una muestra biológica, (3) un anticuerpo que comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 y/o un anticuerpo que comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID N0:3 y SEQ ID N0:4 para unir periostina en una muestra biológica, (4) un anticuerpo que comprende las secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 y/o un anticuerpo que comprende las secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4.
Como se usa en la presente, "ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica", abreviado "EIDA" es un ensayo que diagnostica un paciente que tiene inflamación eosinofílica en el cuerpo o inflamación de la vía de TH2 en el cuerpo por la medición de los niveles de un marcador de inflamación eosinofílica en una muestra biológica de un paciente, donde el marcador se selecciona del grupo que consiste en niveles de ARNm de periostina o niveles de proteína de periostina, niveles de ARNm de ¡NOS o niveles de proteína de ¡NOS o niveles de FENO O de ARNm CCL26 o niveles proteína de CCL26, niveles de ARNm serpinB2 o niveles de proteína de serpinB2, niveles de ARNm de serpinB4 o niveles de proteína de serpinB4, niveles de ARNm CST1 o niveles de proteína CST1 , niveles de ARNm de CST2 o niveles de proteína de CST2, niveles de ARNm de CST4 o niveles de proteína de CST4. En una forma de realización, se miden los niveles de periostina total en suero o plasma. Los ejemplos de ensayos altamente efectivos incluyen, pero sin limitación, el ejemplo descripto en el siguiente Ejemplo 4 (también mencionado como el ensayo E4), u otros ensayos de periostina que miden los niveles séricos o plasmáticos de periostina total en una muestra biológica. Se pueden realizar dos o más ensayos para hacer un diagnóstico de inflamación eosinofílica en un paciente. En una forma de realización, el ensayo de realización, el ensayo de EID comprende un ensayo de periostina total en combinación con un ensayo FENo- En otra forma de realización, el ensayo de EID comprende un ensayo de periostina total +/- el ensayo de los niveles de FENo en combinación con un ensayo que mide los niveles de alguno o una combinación de los siguientes marcadores: CST1 , CST2, CCL26, CLCA1 , PRR4, PRB4, SERPINB2, CEACAM5, ¡NOS, SERPINB4, CST4, y SERPINB10.
El término "anticuerpo de periostina" o "anticuerpo antiperiostina" se refiere a un anticuerpo que se une a una isoforma de periostina. En una forma de realización, la periostina es periostina humana. En una forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 (el anticuerpo "25D4") o comprende las secuencias de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4 (el anticuerpo "23B9"). En otra forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias de la región variable de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 o comprende las secuencias de la región variable de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4. En otra forma de realización, el anticuerpo que comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 o las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO: En otra forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 y/o un anticuerpo que comprende las secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4.
Paciente o estado positivo para la inflamación eosinofílica (EIP): se refiere a un paciente que, si se ha analizado una muestra de suero o plasma del paciente en para determinar los niveles de periostina en suero o plasma, respectivamente, usando el ensayo E4 (Ejemplo 4), pueden tener niveles periostina sérica total de 20 ng/ml o mayor (eosinofílico positivo). De acuerdo con una forma de realización, los niveles de periostina total en un paciente que es EIP se pueden seleccionar del grupo que consiste en 21 ng/ml o mayor, 22 ng/ml o mayor, 23 ng/ml o mayor, 24 ng/ml o mayor, 25 ng/ml o mayor, 26 ng/ml o mayor, 27 ng/ml o mayor, 28 ng/ml o mayor, 29 ng/ml o mayor, 30 ng/ml o mayor, 31 ng/ml o mayor, 32 ng/ml o mayor, 33 ng/ml o mayor, 34 ng/ml o mayor, 35 ng/ml o mayor, 36 ng/ml o mayor, 37 ng/ml o mayor, 38 ng/ml o mayor, 39 ng/ml o mayor, 40 ng/ml o mayor, 41 ng/ml o mayor, 42 ng/ml o mayor, 43 ng/ml o mayor, 44 ng/ml o mayor, 45 ng/ml o mayor, 46 ng/ml o mayor, 47 ng/ml o mayor, 48 ng/ml o mayor, 49 ng/ml o mayor, 50 ng/ml o mayor, 51 ng/ml o mayor, 52 ng/ml o mayor, 53 ng/ml o mayor, 54 ng/ml o mayor, 55 ng/ml o mayor, 56 ng/ml o mayor, 57 ng/ml o mayor, 58 ng/ml o mayor, 59 ng/ml o mayor, 60 ng/ml o mayor, 61 ng/ml o mayor, 62 ng/ml o mayor, 63 ng/ml o mayor, 64 ng/ml o mayor, 65 ng/ml o mayor, 66 ng/ml o mayor, 67 ng/ml o mayor, 68 ng/ml o mayor, 69 ng/ml o mayor y 70 ng/ml o mayor en suero o plasma. Se debe entender que el estado EIP representa el estado del paciente, y no es dependiente del tipo de ensayo usado para determinar el estado. En consecuencia, se pueden usar o desarrollar para usar otros ensayos diagnósticos de inflamación eosinofílica, que incluyen otros ensayos de periostina tales como el ensayo de periostina Elecsys® que se muestra en el Ejemplo 7, para analizar el estado positivo para la inflamación eosinofílica.
Paciente o estado negativo para la inflamación eosinofílica (EIN) se refiere a un paciente que, si se ha analizado una muestra de suero o plasma del paciente en para determinar los niveles de periostina en suero o plasma, respectivamente, usando el ensayo E4, puede tener niveles de periostina sérica total menor de 20 ng/ml. Se debe entender que el estado EIN representa el estado del paciente, y no es dependiente del tipo de ensayo usado para determinar el estado. En consecuencia, se pueden usar o desarrollar para usar otros ensayos diagnósticos de inflamación eosinofílica, que incluyen otros ensayos de periostina tales como el ensayo de periostina Elecsys® que se muestra en el Ejemplo 7, para analizar estado negativo para la inflamación eosinofílica status.
La expresión "muestra biológica" como se usa en la presente incluye, pero sin limitación, sangre, suero, plasma, esputo, biopsias de tejido (por ejemplo, muestras de pulmón), y muestras nasales que incluyen hisopados nasales o pólipos nasales.
El ensayo FENo se refiere a un ensayo que mide los niveles de FENo (óxido nítrico exhalado fraccionado). Tales niveles se pueden evaluar usando, por ejemplo, un dispositivo portátil manual, NIOX MINO D(Aerocrine, Solna, Suecia), de acuerdo con las pautas publicadas por la American Thoracic Society (ATS) en 2005. El FENO se puede indicar de otras maneras similares, por ejemplo, FeNO o FENO, y se debe entender que todas estas variaciones similares tienen el mismo significado.
La edad de los pacientes analizados o tratados de acuerdo con los métodos provistos en la presente incluyen: todas las edades. En una forma de realización, las edades son 18+ años. En otra forma de realización, las edades son 12+ años.
En aún otra forma de realización, las edades son 2+ años. En una forma de realización, las edades son 18-75 años, 12-75 años o 2-75 años.
El asma es un trastorno complejo caracterizado por síntomas variables y recurrentes, obstrucción del flujo de aire reversible (por ejemplo, por broncodilatador) e hiperreactividad bronquial que puede estar asociada o no con inflamación subyacente. Los ejemplos de asma incluyen asma sensible a aspirina/exacerbado, asma atópica, asma severa, asma leve, asma moderada a severa, asma sin tratamiento con corticoides, asma crónica, asma resistente a corticoides, asma refractaria a corticoides, asma recién diagnosticada y no tratada, asma debido al hábito de fumar, asma no controlada con corticoides y otras asmas mencionadas en J Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938.
Trastorno eosinofílico significa: un trastorno asociado con exceso de cantidad de eosinófilos en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de eosinófilos en forma local o sistémica en el cuerpo. Los trastornos asociados con exceso de cantidad o actividad de eosinófilos incluye pero sin limitación, asma (que incluyen asma sensible a aspirina), asma atópica, dermatitis atópica, rinitis alérgica (que incluye rinitis alérgica estacional), rinitis no alérgica, asma, asma severa, neumonía eosinofílica crónica, aspergilosis broncopulmonar alérgica, enfermedad celíaca, síndrome de Churg-Strauss (periarteritis nodosa más atopia), síndrome de mialgia eosinofílica, síndrome hipereosinofílico, reacciones edematosas que incluye angioedema episódico, infecciones helmínticas, donde los eosinófilos pueden tener un papel protector, dermatitis onchocercal y trastornos gastrointestinal asociados con eosinófilos, que incluyen, pero sin limitación, esofagitis eosinofílica, gastritis eosinofílica, gastroenteritis eosinofílica, enteritis eosinofílica y colitis eosinofílica, micropoliposis y poliposis nasal, intolerancia a la aspirina, asma y apnea obstructiva del sueño. Los productos secretores derivados de eosinófilos también se han asociado con la promoción de la angiogénesis y la formación de tejido conectivo en los tumores y las respuestas fibróticas observadas en condiciones tales como asma crónica, enfermedad de Crohn, esclerodermia y fibrosis endomicárdica (Munitz A, Levi-Schaffer F. Allergy 2004; 59: 268-75, Adamko et al. Allergy 2005; 60: 13-22, Oldhoff, et al. Allergy 2005; 60: 693-6). Otros ejemplos incluyen cáncer (por ejemplo, glioblastoma (tales como glioblastoma multiforme), linfoma no Hodgkin (NHL)), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria, fibrosis pulmonar (que incluye fibrosis pulmonar idiopática (IPF) y fibrosis pulmonar secundaria a esclerosis), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por IL-13 significa un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de IL-13 en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de IL-13 en forma local o sistémica en el cuerpo. Los ejemplos de trastornos mediados por IL-13 incluyen: cánceres (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, glioblastoma), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), trastornos inflamatorios pulmonares (por ejemplo, fibrosis pulmonar tales como IPF), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por IL— 4 significa: un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de IL4 en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de IL4 en forma local o sistémica en el cuerpo. Los ejemplos de trastornos mediados por IL-14 incluyen: cánceres (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, glioblastoma), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), trastornos inflamatorios pulmonares (por ejemplo, fibrosis pulmonar tales como IPF), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por IL-5 significa: un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de IL5 en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de IL5 en forma local o sistémica en el cuerpo. Los ejemplos de trastornos mediados por IL5 incluyen: cánceres (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, glioblastoma), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), trastornos inflamatorios pulmonares (por ejemplo, fibrosis pulmonar tales como IPF), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por IL-9 significa: un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de IL9 en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de IL9 en forma local o sistémica en el cuerpo. Los ejemplos de trastornos mediados por IL9 incluyen: cánceres (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, glioblastoma), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), trastornos inflamatorios pulmonares (por ejemplo, fibrosis pulmonar tales como IPF), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por TSLP significa: un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de TSLP en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles o actividad de TSLP en forma local o sistémica en el cuerpo. Los ejemplos de trastornos mediados por TSLP incluyen: cánceres (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, glioblastoma), dermatitis atópica, rinitis alérgica, asma, fibrosis, enfermedad intestinal inflamatoria (por ejemplo, enfermedad de Crohn), trastornos inflamatorios pulmonares (por ejemplo, fibrosis pulmonar tales como IPF), EPOC, fibrosis hepática.
Trastorno mediado por IgE significa: un trastorno asociado con exceso de niveles o actividad de IgE en el que se pueden manifestar síntomas atípicos debido a los niveles de IgE en forma local o sistémica en el cuerpo. Tales trastornos incluyen, asma, dermatitis atópica, rinitis alérgica, fibrosis (por ejemplo, fibrosis pulmonar, tales como IPF) Síntoma tipo asma incluye un síntoma seleccionado del grupo que consiste en dificultad de respirar, tos (cambios en la producción de esputo y/o calidad del esputo y/o frecuencia de la tos), sibilancia, opresión en el pecho, broncoconstriccion y despertares nocturnos atribuidos a uno de los síntomas anteriores o una combinación de estos síntomas (Juniper et al (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334.).
El término "trastorno respiratorio" incluyen, pero sin limitación asma (por ejemplo, asma alérgico y no alérgico (por ejemplo, debido a la infección, por ejemplo, con virus sincicial respiratorio (RSV), por ejemplo, en niños pequeños)); bronquitis (por ejemplo, bronquitis crónica); enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) (por ejemplo, enfisema (por ejemplo, enfisema inducido por cigarrillo); afecciones que involucran inflamación de las vías respiratorias, eosinofilia, fibrosis y exceso de producción de moco, por ejemplo, fibrosis quística, fibrosis pulmonar, y rinitis alérgica. Los ejemplos de enfermedades que se pueden caracterizar por la inflamación de las vías respiratorias, excesiva secreción de las vías respiratorias, y obstrucción de las vías respiratorias incluyen asma, bronquitis crónica, bronquiectasia, y fibrosis quística.
Exacerbaciones (comúnmente denominadas como ataques de asma o asma agudo) son episodios de nuevo o progresivo aumento en la dificultad de respirar, tos (cambios en la producción de esputo y/o calidad del esputo y/o frecuencia de la tos), sibilancia, opresión en el pecho, broncoconstricción y despertares nocturnos atribuidos a uno de los síntomas anteriores o una combinación de estos síntomas. Las exacerbaciones a menudo se caracterizan por las disminuciones del flujo de aire espiratorio (PEF o FEV1 ). Sin embargo, la variabilidad del PEF no aumenta usualmente durante una exacerbación, si bien puede hacerlo antes o durante la recuperación de una exacerbación. La gravedad de las exacerbaciones varía de leve a mortal y se puede evaluar sobre la base de los síntomas y la función pulmonar. Las exacerbaciones severas del asma descriptas en la presente incluyen exacerbaciones que producen alguna o una de las siguiente hospitalización por el tratamiento del asma, uso alto de corticoides (por ejemplo, cuadruplicación de la dosis diaria total de corticoides o una la dosis diaria total mayor o igual a 500 microgramos de FP o equivalente durante tres días consecutivos o más), o uso de corticoides oral/parenteral.
Un inhibidor de la vía de TH2 es un agente que inhibe la vía de TH2.
Los ejemplos de un inhibidor de la vía de TH2 incluyen lo inhibidores de la actividad de cualquiera de los blancos seleccionados del grupo que consiste en: ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL-4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (por ejemplo, XOLAIR, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como, receptor de IL-9, receptor de IL-5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 104451 1-01-4), receptor alfa de IL- (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-13 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935) y inhibidor de multi-citoquina of CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8). Los ejemplos de los inhibidores de los blancos anteriormente mencionados se describen en, por ejemplo, WO2008/086395; WO2006/085938; US 7.615.213; US 7.501 .121 ; WO2006/085938; WO 2007/080174; US 7.807.788; WO2005007699; WO2007036745; WO2009/009775; WO2007/082068; WO2010/073119; WO2007/045477; WO2008/134724; US2009/0047277; y WO2008/127.271 ).
Un agente terapéutico provisto en la presente incluye un agente que puede unir al blanco identificado anteriormente en la presente, tales como un polipéptido, (por ejemplo, un anticuerpo, una inmunoahesina o un pepeticuerpo), un aptámero o una molécula pequeña que se puede unir a una proteína o una molécula de ácido nucleico que puede unir a una molécula de ácido nucleico que codifica un blanco identificado en la presente (es decir, ARNsi).
"Un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4" se refiere a un agente terapéutico que inhibe la señalización de IL-13 y/o IL— 4. Los ejemplos de inhibidores de la vía de anti— IL13/IL4 incluyen inhibidores de la interacción de IL13 y/o IL4 con su receptor, tales inhibidores incluyen, pero sin limitación, agentes de unión anti-IL13, agentes de unión anti— IL14, agentes biespecíficos de unión anti— IL3/IL4, agentes de unión anti-IL4receptor alfa, agentes de unión anti-IL13receptor alfal y agentes de unión anti— IL13 receptor alfa2. Los anticuerpos de dominio único que pueden unir IL13, IL4, (que incluyen anticuerpo biespecífico con un dominio único de unión a IL13 y un dominio único de unión a IL4), IL— 13Ralfa1 , IL-13Ralfa2 o IL-4Rafa se incluyen específicamente como inhibidores. Se debe entender que se incluyen las moléculas que unen más de un blanco.
"Agentes de unión anti— IL14" se refieren a un agente que se une a IL— 4 humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, un aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el agente de unión se une a la secuencia de IL— 4 humana con una afinidad entre 1 uM - 1 pM. Los ejemplos específicos de los agentes de unión anti— IL14 pueden incluir Receptor alfa soluble de IL4 (por ejemplo, dominio extracelular del Receptor IL4 fusionado a una región de Fe humana), anticuerpo anti-IL4, y receptor alfal IL13 soluble (por ejemplo, dominio extracelular del IL13 receptor alfal fusionado a una región de Fe humana).
"Agentes de unión de anti-receptor alfa IL4" se refiere a un agente que se une a receptor alfa IL4 humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, un aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el agente de unión se une a la secuencia del receptor alfa de IL— 4 humana con una afinidad entre 1 uM - 1 pM. Los ejemplos específicos de agentes de unión de anti-receptor alfa IL4anti-IL4 pueden incluir anticuerpos del receptor alfa anti-IL4.
"Agente de unión anti— IL13" se refiere un agente que se une a IL13 humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el agente de unión se une a una secuencia de IL— 13 humana con una afinidad entre 1 uM - 1 pM. Los ejemplos específicos de los agentes de unión anti— IL13 pueden incluir anticuerpos anti-IL13, receptor alfa 2 de IL13 soluble fusionado a una Fe humana, receptor alfa soluble de IL fusionado a una Fe humana, receptor alfa soluble de IL13 fusionado a una Fe humana. De acuerdo con una forma de realización, el anticuerpo anti-IL-13 comprende (1 ) una HVRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO 1 1 , (2) HVRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12, (3) HVRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:13, (4) HVRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 14, (5) HVRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:15, y (6) HVRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6. En otra forma de realización, el anticuerpo anti-IL-13 comprende un dominio de VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:9 y un dominio de VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:10. De acuerdo con una forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo lgG1 . De acuerdo con otra forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo lgG4. De acuerdo con una forma de realización, el anticuerpo lgG4 comprende una mutación S228P en su dominio constante.
"Agentes de unión de anti-receptor alfa 1 de IL13" se refiere a un agente que se une específicamente al receptor alfa 1 de IL13 humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el agente de unión se une a una secuencia del receptor alfa 1 de IL-13 humana con una afinidad entre 1 uM - 1 pM. Los ejemplos específicos de los agentes de unión de anti-receptor alfa 1 de IL13 pueden incluir anticuerpos anti-receptor alfal de IL13.
"Agentes de unión de anti-receptor alfa2 de IL13" se refiere a un agente que se une específicamente ak receptor alfa 2 de IL-13 humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, un aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el agente de unión se une a una secuencia del receptor alfa 2 de IL-13 humana con una afinidad entre 1 uM - 1 pM. Los ejemplos específicos de agentes de unión de anti-receptor alfa 2 de IL13 pueden incluir anticuerpos anti-receptor alfa2 de IL13.
"Agentes de unión de anti IgE" se refiere a un agente que se une específicamente a IgE humana. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, un aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el anticuerpo anti-lgE comprende una secuencia de VL que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:17 y una secuencia de VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:18.
"Agentes de unión anti-M1"' se refiere a un agente que se une específicamente a la región M1' proximal de la membrana de la IgE expresada en la superficie de las células B. Tales agentes de unión pueden incluir una molécula pequeña, un aptámero o un polipéptido. Tal polipéptido puede incluir, pero sin limitación, un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en una inmunoadhesina, un anticuerpo, un pepticuerpo y un péptido. De acuerdo con una forma de realización, el anticuerpo anti-lgE comprende un anticuerpo descripto en el documento WO 2008/116149 o una variante de esta. De acuerdo con otra forma de realización, el anticuerpo anti-M1' comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25. De acuerdo con otra forma de realización, un anticueropo anti-lgE/M1' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25. [SQNTLVPWT].
La expresión "molécula pequeña" se refiere a una molécula orgánica que tiene un peso molecular entre 50 Dalton a 2500 Dalton.
El término "anticuerpo" se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente los anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos con especificidad poliepitópica, anticuerpos de cadena simple, anticuerpos multiespecíficos y fragmento de anticuerpos. Tales anticuerpos pueden ser quiméricos, humanizados, humanos y sintéticos. Tales anticuerpos y métodos de generarlos se describen con más detalle a continuación.
La expresión "no controla" o "no controlable" se refiere a la inadecuación de un régimen de tratamiento para minimizar un síntoma de una enfermedad. Como se usa en la presente, las expresiones "no controla" y "controla inadecuadamente" se pueden usar de modo indistinto y se refieren al mismo estado. El estado de control de un paciente puede ser determinado por el médico asistente sobre la base de numerosos factores que incluyen la historia clínica del paciente, la receptividad al tratamiento y el nivel de tratamiento actual prescripto. Por ejemplo, un médico puede considerar factores tales como mejor FEV1 <75% predicho o personal, frecuencia de la necesidad de SABA en las últimas 2-4 semanas (por ejemplo, mayor de o igual a dos dosis/semana), despertares nocturnos/síntomas en las últimas 2-4 semanas (por ejemplo, menos de o igual a 2 noches/semana), limitaciones en la actividad en las últimas 2-4 semanas, síntomas diarios en las últimas 2-4 semanas La expresión "agente terapéutico" se refiere a cualquier agente que se usa para tratar una enfermedad.
La expresión "controlador" o "agente de prevención" se refiere a cualquier agente terapéutico que se usa para controla la inflamación del asma. Los ejemplos de controladores incluyen corticoides, antagonistas del receptor de leucotrieno (por ejemplo, inhiben la síntesis o actividad de los leucotrienos tales como montelukast, zileuton, pranlukast, zafirlukast), LABA, composiciones de la combinación de corticoide/LABA, teofilina (que incluye aminofilina), cromolín sódico, nedocromil sódico, omalizumab, LAMA, MABA (por ejemplo, agonista de antagonista beta2 muscarínicos funcionales), inhibidores de la proteína activadora de 5-Lipoxigenasa (FLAP) e inhibidor de la enzima PDE-4 (por ejemplo, roflumilast). Un "segundo controlador" normalmente se refiere a un controlador que no es el mismo que el primer controlador.
El término "ahorrador de corticoides" o "CS" significa la disminución de la frecuencia y/o cantidad o la eliminación de, corticoides usados para tratar una enfermedad en un paciente que toma corticoides para el tratamiento de la enfermedad debido a la administración de otro agente terapéutico. Un "agente CS" se refiere a un agente terapéutico que puede causar CS en un paciente que toma un corticoide.
El término "corticoide" incluye, pero sin limitación fluticasona (que incluye propionato de fluticasona (FP)), beclometasona, budesonida, ciclesonida, mometasona, flunisolida, betametasona y triamcinolona. "Corticoide inhalable" significa un corticoide que es adecuado para la administración por inhalación. Los ejemplos de corticoides inhalables son fluticasona, dipropionato de beclometasona, budenosida, furoato de mometasona, ciclesonida, flunisolida, acetónido de triamcinolona y cualquier otro corticoide actualmente disponible o estén disponibles en el futuro. Los ejemplos de corticoides que se pueden inhalar y se combinan con un agonista beta 2 de acción prolongada incluyen, pero sin limitación: budesonida/formoterol y fluticasona/salmeterol.
Los ejemplos de fármacos de combinación corticoide/LABA incluyen furoato de fluticasona/trifenatato de vilanterol e indacaterol/mometasona.
El término "LABA" significa agonista beta-2 de acción prolongada, tal agonista incluye, por ejemplo, salmeterol, formoterol, bambuterol, albuterol, indacaterol, arformoterol y clenbuterol.
El término "LAMA" significa antagonista muscarínico de acción prolongada, tales agonistas incluyen: tiotropio.
Los ejemplos de combinaciones LABA/LAMA incluyen, pero sin limitación: olodaterol tiotropio (Boehringer Ingelheim's) e indacaterol glicopirronio (Novartis) El término "SABA" significa agonistas beta 2 de acción corta, tales agonistas incluyen, pero sin limitación, salbutamol, levosalbutamol, fenoterol, terbutaline, pirbuterol, procaterol, bitolterol, rimiterol, carbuterol, tulobuterol y reproterol.
Los antagonistas del receptor de leucotrieno (algunas veces denominados como un leukast) (LTRA) son fármacos que inhiben los leucotrienos. Los ejemplos de inhibidores de leucotrieno incluyen montelukast, zileuton, pranlukast, y zafirlukast.
El término "FEV1" se refiere al volumen de aire exhalado en el primer segundo de espiración forzada. Es una medida de la obstrucción de las vías respiratorias. La concentración provocativa de metacolina requerida para inducir un 20% de disminución en el FEV1 (PC20) es una medida de hiperrreactividad de las vías respiratorias. El FEV1 se puede indicar de otras maneras similares, por ejemplo, FEV-?, y se debe entender que todas estas variaciones similares tienen el mismo significado.
El término "cambio relativo del FEV1" = (FEV1 en la semana 12 de tratamiento - FEV1 antes del comienzo del tratamiento) dividido por FEV1 El término "asma leve" se refiere a un paciente que experimenta generalmente síntomas o exacerbaciones menos de dos veces por semana, síntomas nocturnos menos de dos veces por mes y es asintomático entre las exacerbaciones. El asma leve intermitente a menudo se trata según corresponda con los siguientes: broncodilatadores inhalatorios (agonista beta 2 inhalatorios de acción corta); evitación de desencadenantes conocidos; vacunación de gripe anual, vacunación neumocócica cada 6 a 10 años, y en algunos casos, un agonista beta 2 inhalatorio, cromolín, o nedocromilo antes de la exposición a los desencadenantes identificados. Si el paciente tiene una necesidad creciente de agonistas beta de acción prolongada (por ejemplo, usa agonistas beta 2 de acción corta más de tres a cuatro veces en 1 día para una exacerbación aguda o usa más de un recipiente por mes para los síntomas), el paciente puede requerir un refuerzo de la terapia.
La expresión "asma moderada" generalmente se refiere al asma en el que el paciente experimenta exacerbaciones más de dos veces por semana y las exacerbaciones afectan el sueño y la actividad; el paciente tiene despertares en la noche debido al asma más de dos veces por mes; el paciente tiene síntomas crónicos de asma que requieren agonistas beta2 inhalatorios de acción corta diario o día por medio; y el PEF o FEV1 basal de pretratamiento del paciente es 60 a 80 por ciento del predicho y la variabilidad del PEF es de 20 a 30 por ciento.
La expresión "asma severa" generalmente se refiere al en que el paciente tiene síntomas casi continuos, exacerbaciones frecuentes, despertares nocturnos frecuentes debido al asma, actividades limitadas, PEF o FEV1 basal menor de 60 por ciento del predicho y la variabilidad del PEF es de 20 a 30 por ciento.
Los ejemplos de medicaciones de rescate incluyen albuterol, ventolín y otros.
"Resistente" se refiere a una enfermedad que demuestra poca o ninguna mejora clínicamente significativa después del tratamiento con un agente terapéutico. Por ejemplo, el asma que requiere el tratamiento con dosis alta de ICS (por ejemplo, cuadriplicar la dosis diaria total de corticoide o una dosis diaria total mayor o igual a 500 microgramos de FP (o equivalente) durante al menos tres días consecutivos o más, o corticoide sistémico durante un ensayo de dos semanas para establecer si el asma continúa sin controlar o el FEV1 no mejora a menudo se considera asma refractaria severa.
Un agente terapéutico como se proporciona en la presente se puede administrar por cualquier medio adecuado, que incluye parenteral, subcutánea, ¡ntraperitoneal, intrapulmonar, e intranasal. Las infusiones parenterales incluyen administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, ¡ntraperitoneal, o subcutáneo. En una forma de realización, el agente terapéutico es inhalatorio. De acuerdo con otra forma de realización, la dosis se administra por inyecciones, por ejemplo, inyección intravenosa o subcutánea. En aún otra forma de realización, el agente terapéutico se administra usando una jeringa (por ejemplo, precargada o no) o un autoinyector.
Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosis apropiada de un agente terapéutico puede depender del tipo de enfermedad que se trata, la severidad y curso de la enfermedad, si el agente terapéutico se administra para fines preventivos o terapéuticos, previa terapia, la historia clínica de paciente y respuesta al agente terapéutico, y el criterio del médico asistente. El agente terapéutico se administra adecuadamente al paciente a la vez o durante una serie de tratamientos. La composición del agente terapéutico se formulará, dosificará y administrará de una manera compatible con la buena práctica médica. Los factores en consideración en este contexto incluyen el trastorno particular tratado, el mamífero particular tratado, la afección clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el método de administración, el esquema de administración, y otros factores conocidos por los profesionales médicos.
La dosis para lebrikizumab, para enfermedades eosinofílicas (que incluyen asma) y para tratar otras enfermedades usando terapias con TH2: se puede administrar lebrikizumab a razón de 0,1 mg/kg a 100 mg/kg del peso corporal de paciente. En una forma de realización, la dosis administrada a un paciente está entre 0,1 mg/kg y 20 mg/kg del peso corporal de paciente. En otra forma de realización, la dosis es de 1 mg/kg a 10 mg/kg del peso corporal de paciente.
En una forma de realización alternativa, lebrikizumab se puede administrar como una dosis fija. En una forma de realización lebrikizumab se administra como una dosis fija de 125-1000 mg (es decir, no dependiente del peso), por inyección subcutánea o por inyección intravenosa, con una frecuencia de tiempo seleccionada del grupo que consiste en: cada 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses o 4 meses. En otra forma de realización, si el paciente tiene sobrepeso, lebrikizumab se puede administrar, por ejemplo, 125-250 mg a una frecuencia de 3 veces por mes. En una forma de realización, el lebrikizumab se administra as una dosis fija de 125 mg, 250 mg o 500 mg cada 4 semanas. En otra forma de realización, el lebrikizumab se administra en un paciente >40 kg como una dosis fija de 37,5 mg, 125 mg, 250 mg o 500 mg cada 4 semanas.
En una forma de realización, el paciente tiene 18 años o más. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 12 a 17 años y lebrikizumab se administra como una dosis fija de 250 mg o una dosis fija de 125 mg. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 6 a 11 años y lebrikizumab se administra como una dosis fija de 125 mg.
"Respuesta del paciente" o "respuesta" (y sus variaciones gramaticales) se pueden evaluar usando cualquier criterio de valoración que indica un beneficio para el paciente, que incluye, sin limitación, (1 ) inhibición, en alguna medida, de la progresión de la enfermedad, que incluye lentificacion y detención completa; (2) reducción de la cantidad de episodios y/o síntomas de la enfermedad; (3) reducción del tamaño de la lesión; (4) inhibición (es decir, reducción, lentificacion o detención completa) de la infiltración de células enfermas en los órganos y/o tejidos periféricos adyacentes; (5) inhibición (es decir reducción, lentificacion o detención completa) de la propagación de la enfermedad; (6) disminución de la respuesta autoinmune, que puede, pero no necesita, producir la regresión o anulación de la lesión de enfermedad; (7) alivio, en alguna medida de uno o más síntomas asociados con el trastorno; (8) aumento de la extensión de la presentación libre de enfermedad después del tratamiento; y/o (9) reducción de la mortalidad en un punto de tiempo determinado después del tratamiento.
"Afinidad" se refiere a la fuerza de la suma total de interacciones no covalentes entre un solo sitio de unión de una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y su compañero de unión (por ejemplo, un antígeno). A menos que se indique de otro modo, como se usa en la presente, la "afinidad de unión" se refiere a afinidad de unión intrínseca que refleja una interacción 1 :1 entre los miembros de un par de unión (por ejemplo, anticuerpo y rama de unión del antígeno). La afinidad de una molécula X por su pareja Y en general se puede representar con una constante de disociación (Kd). La afinidad se puede medir por métodos comunes en la técnica, que incluyen los que se describen en la presente. Los ejemplos de realizaciones ilustrativas y específicas para medir la afinidad de unión se describen a continuación.
Un anticuerpo de "afinidad madura" es uno con una o más alteraciones en una o más de sus regiones hipervariables (HVR), en comparación con un anticuerpo original que no posee estas alteraciones, tales alteraciones producen una mejora de la afinidad del anticuerpo por el antígeno.
Las expresiones "anticuerpo anti-blanco" y "un anticuerpo que se une al blanco" se refieren a un anticuerpo que es capaz de unirse al blanco con suficiente afinidad para que el anticuerpo sea útil como un agente de diagnóstico y/o terapéutico que se dirige al blanco. En una forma de realización, el grado de unión de un anticuerpo anti-blanco a una proteína no blanco, no relacionada es menor de aproximadamente 10% de la unión del anticuerpo al blanco medido, por ejemplo, por un ensayo de radioinmunoensayo (RIA) o biacore. En ciertas formas de realización, un anticuerpo que se une a un blanco tiene una constante de disociación (Kd) de= 1 µ?, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM,= 0,1 nM, < 0,01 nM, o < 0,001 nM (por ejemplo 10-8 M o menos, por ejemplo de 10-8 M a 10-13 M, por ejemplo, de 10-9 M a 10-13 M). En ciertas formas de realización, un anticuerpo anti-blanco se une a un epítope de un blanco que está conservado entre diferentes especies.
El término "anticuerpo" se usa en la presente en el sentido más amplio y cubre varias estructuras de anticuerpo, que incluyen pero sin limitación anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos), y fragmentos de anticuerpo siempre que ellos exhiban la actividad biológica deseada.
Un "fragmento de anticuerpo" se refiere a una molécula diferente de un anticuerpo intacto que comprende una porción de un anticuerpo intacto, que se une al antígeno al que se une el anticuerpo intacto. Los ejemplos de los fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de cadena única(por ejemplo scFv); y anticuerpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticuerpo.
Un "anticuerpo que se une al mismo epítope" que un anticuerpo de referencia se refiere a un anticuerpo que bloquea la unión del anticuerpo de referencia a su antígeno en un ensayo de competición en 50% o más, y a la inversa, el anticuerpo de referencia bloquea la unión del anticuerpo a su antígeno en un ensayo de competición en 50% o más. Un ejemplo de ensayo de competición se proporciona en la presente.
Una "estructura humana aceptora" para los fines de la presente es una estructura que comprende la secuencia de aminoácidos de una estructura de dominio variable de. cadena liviana (VL) o una estructura de dominio variable de cadena pesada (VH) derivada de una estructura de inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana. Una estructura humana aceptora "derivada de" una estructura de inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana puede comprender la misma secuencia de aminoácidos de esta, o puede contener cambios de la secuencia de aminoácidos preexistente. En algunas formas de realización, el número de cambios de aminoácidos preexistentes son 10 o menos, 9 o menos, 8 o menos, 7 o menos, 6 o menos, 5 o menos, 4 o menos, 3 o menos, o 2 o menos. En algunas formas de realización, la estructura humana aceptora VL es idéntica en secuencia a la estructura de la secuencia de inmunoglobulina humana aceptora o secuencia de la estructura de consenso humana.
El término anticuerpo "quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que una porción de la cadena pesada y/o liviana deriva de una fuente o especie particular, mientras que el resto de la cadena pesada y/o liviana es deriva de una fuente o especie diferente.
La "clase" de un anticuerpo se refiere al tipo de dominio constante o región constante poseída por su cadena pesada. Existen cinco clases principales de anticuerpos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varios de estos se pueden dividir adicionalmente en subclases (isotipos), por ejemplo, IgGi, lgG2, lgG3) lgG4, IgAi e lgA2. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las clases diferentes de ¡nmunoglobulinas se denominan a, d, e, ?, y µ, respectivamente.
El término "agente citotóxico" como se usa en la presente se refiere a una sustancia que inhibe o impide una función celular y/o causa muerte o destrucción celular. Los agentes citotóxicos incluyen, pero sin limitación, los isótopos radiactivos (por ejemplo, At2 1, I131, 1125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 y los isótopos radiactivos de Lu), agentes o fármacos quimioterapéuticos {por ejemplo, metotrexato, adriamicina, alcaloides de vinca (vincristina, vinblastina, etopósido), doxorrubicina, melfalan, mitomicina C, clorambucilo, daunorrubicina u otros agentes intercalantes, agentes inhibidores del crecimiento; enzimas y sus fragmentos tales como enzimas nucleolíticas, antibióticos; toxinas tales como toxinas de pequeñas moléculas o toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico o animal, que incluyen sus fragmentos y/o variantes, y los diversos agentes antitumorales o anticancerosos que se describen a continuación.
Las "funciones efectoras" se refieren a las actividades biológicas atribuibles a la región Fe de un anticuerpo, que varían con el isotipo del anticuerpo. Los ejemplos de las funciones efectoras del anticuerpo incluyen: unión a C1 q y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC); unión al receptor de Fe; citotoxicidad mediada por células dependiente del anticuerpo (ADCC); fagocitosis; regulación por disminución de los receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de células B); y activación de células B.
Una "cantidad efectiva" de un agente, por ejemplo, una formulación farmacéutica, se refiere a una cantidad efectiva en dosis y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico o profiláctico deseado.
El término "región Fe" de la presente se usa para definir una región C-terminal de una cadena pesada de la inmunoglobulina, que contiene al menos una porción de la región constante. El término incluye regiones Fe de la secuencia nativa y regiones Fe de la variante. En una forma de realización, la región Fe de la cadena pesada de la inmunoglobulina humana se extiende desde Cys226, o desde Pro230, al extremo carboxilo terminal de la cadena pesada. Sin embargo, la lisina C-terminal (Lys447) de la región Fe puede estar presente o no. A menos que se especifique lo contrario en la presente, la numeración de los residuos de aminoácidos de la región Fe o región constante es de acuerdo con el sistema de numeración EU, también llamado el índice EU, que se describe en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"Estructura" o residuos de "FR" se refieren a los residuos del dominio variable diferentes de los residuos de la región hipervariable (HVR). La FR de un dominio variable generalmente consiste en cuatro dominios FR: FR1 , FR2, FR3, y FR4. Por consiguiente, las secuencias de HVR y FR generalmente aparecen en la siguiente secuencia en VH (o VL): FR1-H1(L1 )-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Los términos "anticuerpo de longitud completa" "anticuerpo intacto" y "anticuerpo total" se usan en forma indistinta para referirse a un anticuerpo que tiene una estructura sustancialmente similar a una estructura del anticuerpo nativo o que tiene cadenas pesadas que contienen una región Fe como se definió en la presente.
Las expresiones "célula huésped" "línea celular césped" y "cultivo celular huésped" se usan en forma indistinta y se refieren a células en las que se ha introducido ácido nucleico exógeno, incluyendo la progenie de tales células Las células huésped incluyen "transformantes" y "células transformadas", que incluyen las células primarias transformadas y la progenie derivada de ellas sin tener en cuenta el número de pasajes. La progenie puede no ser exactamente idéntica en el contenido de ácido nucleico a una célula progenitora, pero puede contener mutaciones. Se incluyen en la presente la progenie mutante que tiene la misma función o actividad biológica identificada o seleccionada en la célula originalmente transformada.
Un "anticuerpo humano" es uno que posee una secuencia de aminoácidos que corresponde al de un anticuerpo producido por un ser humano y/o una célula humana derivado de una fuente humana que utiliza repertorios de anticuerpos humanos u otras secuencias que codifica anticuerpos humanos. Esta definición de un anticuerpo humano excluye específicamente un anticuerpo humanizado que comprende residuos de unión al antígeno no humano.
Una "estructura de consenso humana" es una estructura que representa los residuos de aminoácidos más comunes en una selección de secuencias estructurales VL o VH de la inmunoglobulina humana. En general, la selección de las secuencias estructurales VL o VH de la inmunoglobulina humana es de un subgrupo de las secuencias del dominio variable. En general, el subgrupo de las secuencias es un subgrupo de Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edición, NIH Publicatio 91-3242, Bethesda MD (1991 ), vol. 1-3. En una forma de realización, para la VL, el subgrupo es el subgrupo kappa I de Kabat et al., supra. En una forma de realización, para la VH, el subgrupo es el subgrupo III de Kabat et al., supra.
Un anticuerpo "humanizado" se refiere a un anticuerpo quimérico que comprende residuos de aminoácidos de HVR no humanas y residuos de aminoácidos de FR humanas. En ciertas formas de realización, un anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente el total de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que el total o sustancialmente el total de las HVR (por ejemplo, CDR) corresponden a las del anticuerpo no humano, y el total o sustancialmente el total de las FR corresponden a las de un anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado opcionalmente puede comprender al menos una porción de una región constante del anticuerpo derivada de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo no humano, se refiere a un anticuerpo que ha experimentado la humanización.
El término "región hipervariable" o "HVR" como se usa en la presente se refiere a cada una de las regiones de un dominio variable del anticuerpo que son hipervariables en la secuencia y/o forman bucles definidos estructuralmente. En general, los anticuerpos nativos de cuatro cadenas comprenden seis HVR; tres en la VH (H1 , H2, H3) y tres de la VL (L1 , L2, L3). Las HVR generalmente comprenden residuos de aminoácidos de los bucles hipervariables y/o de las "regiones determinantes de complementariedad" (CDR), siendo estas últimas típicamente de la mayor variabilidad de secuencia y/o estando involucradas en el reconocimiento del antígeno. Una región HVR como se usa en la presente comprende cualquier número de residuos ubicados en las posiciones 24-36 (para HVRL1 ), 46-56 (para HVRL2), 89-97 (para HVRL3), 26-35B (para HVRH1 ), 47-65 (para HVRH2), y 93- 02 (para HVRH3).
Un "inmunoconjugado" es un anticuerpo conjugado con una o más moléculas heterólogas que incluyen pero sin limitación un agente citotóxico.
Un "individuo" o "sujeto" es un mamífero. Los mamíferos incluyen pero sin limitación, animales domesticados (por ejemplo, vacas, ovejas, gatos, perros y caballos), primates (por ejemplo, seres humanos y primates no humanos tales como monos), conejos, y roedores (por ejemplo, ratones y ratas. En ciertas formas de realización, el individuo o sujeto es un ser humano.
Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido separado de un componente de su ambiente natural. En algunas formas de realización, un anticuerpo se purifica a más del 95% de pureza determinado, por ejemplo, por métodos electroforéticos (por ejemplo, SDS-PAGE, isoelectroenfoque- (IEF), eletroforesis capilar) o cromatográficos (por ejemplo, intercambio iónico o fase inversa HPLC). Para la revisión de los métodos para la evaluación de la pureza del anticuerpo, ver, por ejemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).
Una molécula de ácido nucleico "aislado" se refiere a una molécula de ácido nucleico que ha sido separada de un componente de su ambiente natural. Un ácido nucleico aislado incluye una molécula de ácido nucleico contenida en la células que normalmente expresa la molécula de ácido nucleico, pero la molécula de ácido nucleico está presente en forma extracromosómica o en una ubicación cromosómica que es diferente de su localización cromosómica natural. "Ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo anti-blanco" se refiere a una o más moléculas de ácido nucleico que codifican las cadenas pesada y liviana del anticuerpo (o sus fragmentos), que incluye tales moléculas de ácido nucleico en un vector solo o vectores separados, y tales moléculas de ácidos presentes en una o más localizaciones en una célula huésped.
El término "anticuerpo monoclonal" como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos y/o se unen al mismo epítope, excepto por posibles variantes de anticuerpos, por ejemplo, que contienen mutaciones naturales o que se originan durante la producción de una preparación de un anticuerpo monoclonal, tales variantes en general están presentes en cantidades menores. En contraste con las preparaciones de anticuerpo policlonal, que normalmente incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes diferentes (epítopes), cada anticuerpo monoclonal de una preparación de anticuerpo monoclonal está dirigido contra un solo determinante en el antígeno. En consecuencia, el modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo que se obtiene de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y no se interpreta que requiere la producción del anticuerpo por ningún método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales usados de acuerdo con los métodos usados en la presente se pueden obtener por una variedad de técnicas, que incluyen, pero sin limitación, el método del hibridoma, métodos de ADN recombinante, métodos de despliegue en fagos y métodos que utilizan animales transgénicos que contienen el total o parte del locus de inmunoglobulina humana, tales métodos y otros ejemplos de métodos para obtener anticuerpos monoclonales se describen en la presente.
Un "anticuerpo desnudo" se refiere a un anticuerpo que no está conjugado con un residuo heterólogo (por ejemplo, un residuo citotóxico) o radiomarca. El anticuerpo desnudo puede estar presente en una formulación farmacéutica.
"Anticuerpos nativos" se refieren a moléculas de inmunoglobulina naturales con estructuras variadas. Por ejemplo, los anticuerpos IgG nativos son glicoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 dalton, compuestas de dos cadenas livianas idénticas y dos cadenas pesadas idénticas que están unidas por disulfuro. Desde el extremo N- a C-terminal, cada cadena pesada tiene una región variable (VH), también llamada un dominio pesado variable o un dominio variable de la cadena pesada, seguida por tres dominios constantes (CH1 , CH2, y CH3). De modo similar, desde el extremo N- a C-terminal, cada cadena liviana tiene una región variable (VL), también llamada dominio liviano variable o un dominio variable de la cadena pesada, seguido por un dominio liviano constante (CL). La cadena liviana de un anticuerpo se puede asignar a uno de dos tipos, llamados kappa ( ) y lambda (?), sobre la base de las secuencias de aminoácidos de su dominio constante.
El término "prospecto del envase" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de los productos terapéuticos, que contienen información acerca de las indicaciones, uso, dosis, administración, terapia de combinación, contraindicaciones y/o advertencias concernientes al uso de tales productos terapéuticos. El término "prospecto" también se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en los envases comerciales de los productos diagnósticos que contienen información acerca del uso deseado, principios del ensayo, preparación y manipulación de reactivos, recolección de especímenes y preparación, calibración del ensayo y el procedimiento de ensayo, datos de rendimiento y precisión tales como sensibilidad y especificidad del ensayo.
"Porcentaje (%) de identidad de secuencia de aminoácidos" con respecto a una secuencia de polipéptidos de referencia se define como el porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidata que son idénticos a los residuos de aminoácidos en la secuencia de polipéptidos de referencia, después de alinear las secuencias e introducir brechas, de ser necesario, a fin de obtener el máximo porcentaje de identidad de secuencia, y sin considerar cualquier sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. El alineamiento a los fines de determinar el porcentaje de identidad de secuencia de aminoácidos se puede lograr de diversas maneras que son conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, mediante el uso de software de computación disponible para el público tales como software BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR). Los expertos en la técnica pueden determinar los parámetros apropiados para alinear secuencias, incluso cualquier algoritmo necesario para obtener el máximo alineamiento para la longitud total de las secuencias que se comparan. A los fines de la presente, sin embargo, los valores del % de identidad de secuencia de aminoácidos son generados mediante el uso del programa de computación para comparación de secuencias ALIGN-2. El programa de computación para comparación de secuencias ALIGN-2 fue autorizado por Genentech, Inc., y el código de fuente se presentó con documentación de usuario en la Oficina de Copyright de los Estados Unidos, Washington D.C., 20559, en donde está registrado con el Registro de Copyright de los Estados Unidos N.° TXU510087. El programa ALIGN-2 está disponible al público de Genentech, Inc., San Francisco Sur, California, o puede ser compilado mediante el código fuente. El programa ALIGN-2 debe ser compilado para su uso en un sistema operativo UNIX, incluyendo UNIX V4.0D digital. Todos los parámetros de comparación de secuencias son fijados por el programa ALIGN-2 y no varían.
En las situaciones en las cuales se emplea ALIGN-2 para las comparaciones de secuencias de aminoácidos, el % de identidad de secuencia de aminoácidos de una secuencia de aminoácidos A dada respecto, con o contra una secuencia de aminoácidos B dada (las cuales se pueden alternativamente parafrasear como secuencia de aminoácidos A dada que tiene o comprende un cierto % de identidad de secuencia de aminoácidos respecto, con o contra una secuencia de aminoácidos B dada) se calcula como sigue: 100 veces la fracción X/Y en donde X es la cantidad de residuos de aminoácidos calificados como coincidencias idénticas por el programa de alineamiento de secuencias ALIGN-2 en el alineamiento de A y B del programa, y en donde Y es la cantidad total de residuos de aminoácido de B. Se apreciará que cuando la longitud de la secuencia de aminoácidos A no es igual a la longitud de la secuencia de aminoácidos B, el % de identidad de secuencia de aminoácidos de A respecto de B no será igual al % de identidad de secuencia de aminoácidos de B respecto de A. A menos que se establezca específicamente otra cosa, la totalidad de los valores de % de identidad de secuencia de aminoácidos usados en la presente se obtienen tal como se describe en el párrafo inmediatamente precedente mediante el uso del programa de computación ALIGN-2.
La expresión "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está en forma tal que permite que la actividad biológica contenida en este sea efectiva, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto al que se debe administrar la formulación.
Un "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un ingrediente en una formulación farmacéutica, diferente de un ingrediente activo, que es no tóxico para un sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable incluye, pero sin limitación, un buffer, excipiente, estabilizantes, o conservante.
El término "blanco" como se usa en la presente, se refiere a cualquier molécula nativa de cualquier fuente de vertebrado, que incluye mamíferos tales como primates (por ejemplo, seres humanos) y roedores (por ejemplo, ratones y ratas), a menos que se indique lo contrario. El término abarca el blanco sin procesar de "longitud completa" así como cualquier formar de blanco que provenga del procesamiento en la célula. El término también abarca las variantes naturales de los blancos, por ejemplo, variantes de empalme o variantes alélicas.
Tal como se usa en la presente, "tratamiento" (y sus variaciones gramaticales tales como "tratar" o "tratado") se refieren a una intervención clínica para intentar alterar el curso natural del individuo tratado, y se puede realizar por prevención o durante el curso de la patología clínica. Los efectos deseables del tratamiento incluyen, pero sin limitación, prevenir la aparición o la recurrencia de la enfermedad, el alivio de los síntomas, la disminución de cualquiera consecuencia patológica directa o indirecta de la enfermedad, prevenir metástasis, disminuir la velocidad del progreso de la enfermedad, aliviar y paliar el estado de enfermedad, y la remisión o el mejoramiento del pronóstico. En algunas formas de realización, los anticuerpos de la invención se usan para retrasar el desarrollo de una enfermedad o trastorno o para frenar la progresión de una enfermedad.
El término "región variable" o "dominio variable" se refiere al dominio de una cadena pesada o liviana del anticuerpo que está involucrada en la unión del anticuerpo al antígeno. Los dominios variables de la cadena pesada y cadena liviana (VH y VL, respectivamente) de un anticuerpo nativo generalmente tienen estructuras similares, con cada dominio que comprende cuatro regiones estructurales conservadas (FR) y tres regiones hipervariables (HVR). (Ver, por ejemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman y Co., página 91 (2007).) Un dominio VH o VL único puede ser suficiente para conferir especificidad de unión al antígeno. Por otra parte, los anticuerpos que unen a un antígeno particular se puede aislar usando un dominio VH o VL de un anticuerpo que se une al antígeno para seleccionar una biblioteca de dominios de VL o VH complementarios, respectivamente. Ver, por ejemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991 ).
El término "vector" como se usa en la presente, se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de propagar otro ácido nucleico al que se ha unido. El término incluye el vector como una estructura de ácido nucleico autorreplicante así como el vector incorporado en el genoma de una célula huésped en que se ha introducido. Ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los ácidos nucleicos a los que se unen operativamente. Tales vectores se denominan en la presente como "vectores de expresión".
COMPOSICIONES Y MÉTODOS En un aspecto, la invención se basa en parte, en nuevos ensayos diagnósticos y mejores métodos de tratamiento. En ciertas formas de realización, se proporcionan anticuerpos que se unen a periostina. Los anticuerpos de la invención son útiles, por ejemplo, para el diagnóstico o tratamiento del asma y otras enfermedades.
Ejemplos de anticuerpos Anticuerpos antiperiostina En un aspecto, la invención proporciona anticuerpos aislados que se unen a periostina. En ciertas formas de realización, un anticuerpo antiperiostina se puede unir a las isoformas 1-4 de la periostina humana con buena afinidad.
En una forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 (el anticuerpo "25D4") o comprende las secuencias de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4 (el anticuerpo "23B9"). En otra forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias de la región variable SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 o comprende las secuencias de la región variable de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4. En otra forma de realización, el anticuerpo que comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 o las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4: En otra forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 y/o un anticuerpo que comprende secuencias de HVR que son 95% o más idénticas a las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4.
En cualquiera de las formas de realización anteriores, un anticuerpo antiperiostina se puede humanizar. En una forma de realización, un anticuerpo antiperiostina comprende las HVR como en cualquiera de las formas de realización anteriores, y además comprende una estructura humana aceptora, por ejemplo, una estructura de la inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana.
En otro aspecto, un anticuerpo antiperiostina comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada (VH) que tiene al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:1. En ciertas formas de realización, una secuencia de VH que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo antiperiostina que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a periostina. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:1. En ciertas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR). Opcionalmente, el anticuerpo antiperiostina comprende la secuencia de VH en la SEQ ID NO:1 , que incluye las modificaciones pos-traducción de esta secuencia.
En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo antiperiostina, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de la cadena liviana (VL) que tiene al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:2. En ciertas formas de realización, una secuencia de VL que tiene al menos 90%, 91%; 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo antiperiostina que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a periostina. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:2. En ciertas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR). Opcionalmente, el anticuerpo antiperiostina comprende la secuencia de VL de la SEQ ID NO:2, que incluye las modificaciones postraducción de esta secuencia.
En otro aspecto, un anticuerpo antiperiostina comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada (VH) que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:3. En ciertas formas de realización, una secuencia de VH que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo antiperiostina que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a periostina. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:3. En ciertas formas de realización, sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR). Opcionalmente, el anticuerpo antiperiostina comprende la secuencia de VH en SEQ ID NO:3, que incluye las modificaciones pos-traducción de esta secuencia.
En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo antiperiostina, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de la cadena liviana (VL) que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:2. En ciertas formas de realización, una secuencia de VL que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo antiperiostina que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a periostina. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:4. En ciertas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR). Opcionalmente, el anticuerpo antiperiostina comprende la secuencia de VL de la SEQ ID NO:4, que incluye las modificaciones postraducción de esta secuencia.
En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo antiperiostina, donde el anticuerpo comprende una VH como en cualquiera de las formas de realización provistas anteriormente, y una VL como en cualquiera de las formas de realización provistas anteriormente.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo que se une al mismo epítope que un anticuerpo antiperiostina provisto en la presente. Por ejemplo, en ciertas formas de realización, se proporciona un anticuerpo que se une al mismo epítope que un anticuerpo antiperiostina que comprende una secuencia de VH de la SEQ ID NO:1 y una secuencia de VL de la SEQ ID NO:2. Por ejemplo, en ciertas formas de realización, se proporciona un anticuerpo que se une al mismo epítope que un anticuerpo antiperiostina que comprende una secuencia de VH de la SEQ ID NO:3 y una secuencia de VL de la SEQ ID NO:4.
En un aspecto adicional de la invención, un anticuerpo antiperiostina de acuerdo con cualquiera de las formas de realización anteriores es un anticuerpo monoclonal, que incluye un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. En una forma de realización, un anticuerpo antiperiostina es un fragmento de anticuerpo, por ejemplo, un fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacuerpo, o F(ab')2. En otra forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa, por ejemplo, un anticuerpo lgG1 o lgG4 intacto u otra clase o isotipo de anticuerpo que se define en la presente. En otra forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico.
En un aspecto adicional, un anticuerpo antiperiostina de acuerdo con cualquiera de las formas de realización anteriores puede incorporan cualquiera de las características, en forma individual o en combinación, que se describen en las siguientes Secciones 1-7: Anticuerpos anti— IL13 En un aspecto, la invención proporciona anticuerpos aislados que se unen a IL-13 humana.
En una forma de realización, el anticuerpo anti— IL— 13 comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:14; una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 15; una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16; una HVR- H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:11 ; una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; y una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
En otra forma de realización, el anticuerpo comprende las secuencias de la región variable SEQ ID NO:9 y SEQ ID NO:10.
En cualquiera de las formas de realización anteriores, un anticuerpo anti-IL-13 se puede humanizar. En una forma de realización, un anticuerpo anti-IL-13 comprende las HVR como en cualquiera de las formas de realización anteriores, y además comprende una estructura humana aceptara, por ejemplo un estructura de la inmunoglobulina humana o una estructura de consenso humana.
En otro aspecto, un anticuerpo anti-IL-13 comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada (VH) que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:9. En ciertas formas de realización, una secuencia de VH que tiene al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo anti-IL-13 que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a IL-13 humana. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, alterado, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:9. En ciertas formas de realización, sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR).
Opcionalmente, el anticuerpo anti-IL-13 comprende la secuencia de VH en SEQ ID NO:9, que incluye las modificaciones pos-traducción de esta secuencia.
En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo anti-IL-13, donde el anticuerpo comprende un dominio variable de la cadena liviana (VL) que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:10. En ciertas formas de realización, una secuencia de VL que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservadoras), inserciones, o supresiones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo anti-IL-13 que comprende esta secuencia retiene la capacidad de unirse a IL-13. En ciertas formas de realización, se ha sustituido, insertado y/o suprimido un total de 1 a 10 aminoácidos en la SEQ ID NO:10. En ciertas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren en las regiones fuera de las HVR (es decir, en las FR). Opcionalmente, el anticuerpo anti-IL-13 comprende la secuencia de VL de la SEQ ID NO: 10, que incluye las modificaciones postraducción de esta secuencia.
En aún otra forma de realización, el anticuerpo anti-IL-13 comprende una región de VL que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:10 y una región de VH que tiene al menos 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID NO:9. En otra forma de realización adicional, el anticuerpo anti-IL-13 comprende una HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:14; una HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:15; una HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16; una HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:11 ; una HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; y una HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo anti-IL-13, donde el anticuerpo comprende una VH como en cualquiera de las formas de realización provistas anteriormente, y una VL como en cualquiera de las formas de realización provistas anteriormente.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo que se une al mismo epítope que un anticuerpo anti-IL-13 provisto en la presente. POr ejemplo, en ciertas formas de realización, se proporciona un anticuerpo que se une al mismo epítope que o se puede inhibir competitivamente con un anticuerpo anti-IL-13 que comprende una secuencia de VH de la SEQ ID NO:9 y una secuencia de VL de la SEQ ID NO:10.
En un aspecto adicional de la invención, un anticuerpo anti-IL-13 de acuerdo con cualquiera de las formas de realización anteriores puede ser un anticuerpo monoclonal, que incluye a anticuerpo quimérico, humanizado o humano. En una forma de realización, un anticuerpo anti-IL-13 es un fragmento de anticuerpo, por ejemplo, un fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacuerpo, o F(ab')2. En otra forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa, por ejemplo, un anticuerpo lgG1 o lgG4 intacto u otra clase o isotipo de anticuerpo que se define en la presente. De acuerdo con otra forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico. En una forma de realización, el anticuerpo biespecífico comprende las HVR o comprende las regiones de VH y VL descriptas anteriormente.
En un aspecto adicional, un anticuerpo anti-IL-13 de acuerdo con cualquiera de las formas de realización anteriores puede incorporar cualquiera de las características, solas o en combinación, que se describen en las siguientes Secciones 1-7: 1. Afinidad de anticuerpo En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente tiene una constante de disociación (Kd) de= 1 µ?,= 100 nM,= 10 nM,= 1 nM,= 0,1 nM, < 0,01 nM, o < 0,001 nM (por ejemplo 10-8 M o menos, por ejemplo de 10-8 M a 10-13 M, por ejemplo, de 10-9 M a 10-13 M).
En una forma de realización, se mide Kd por un ensayo de unión al antígeno radiomarcado (RIA) se realiza con la versión Fab de un anticuerpo de interés y su antígeno se describe con el siguiente ensayo. La afinidad de unión en solución de los Fab para el antígeno se mide al equilibrar el Fab con una concentración mínima de antígeno marcado con (125l) en presencia de una serie de titulación de antígeno no marcado, luego se captura el antígeno unido en una placa cubierta de anticuerpo anti-Fab (ver, por ejemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)). Para establecer las condiciones para el ensayo, las placas multipocillo MICROTITER (Thermo Scientific) se recubren toda la noche con 5 pg/ml de un anticuerpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) en 50 mM de carbonato de sodio (pH 9,6), y posteriormente se bloquea con 2% (p/v) de albúmina sérica bovina en PBS durante dos a cinco horas a temperatura ambiente (aproximadamente 23°C). En una placa no adsorbente (Nunc #269620), 100 pM o 26 pM de antígeno [125l] se mezclan con diluciones seriadas de un Fab de interés (por ejemplo, compatible con la evaluación del anticuerpo anti-VEGF, Fab-12, en Presta et al., Cáncer Res. 57:4593-4599 (1997)). El Fab de interés posteriormente se incuba toda la noche, sin embargo, la incubación puede continuar durante un período más largo (por ejemplo, aproximadamente 65 horas) para asegurar que se alcance el equilibrio. Luego, las mezclas se transfieren a la placa de captura para la incubación a temperatura ambiente (por ejemplo, durante una hora). Luego la solución se elimina y la placa se lava ocho veces con 0,1 % de polisorbato (TWEEN-20™ ) en PBS. Cuando las placas se han secado, se agrega 150 µ?/pocillo de centelleo (MICROSCINT-20™; Packard) y las placas se cuentan en un contador gamma TOPCOUNT™ (Packard) durante diez minutos. Se seleccionan las concentraciones de cada Fab que dan menos o igual a 20% de la unión máxima para usar en los ensayos de unión competitiva.
De acuerdo con otra forma de realización, la Kd se mide por el uso de ensayos de resonancia del plasmón superficial usando un BIACORE®-2000 o un BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25°C con chips de antígeno inmovilizado de CM5 a -10 unidades de respuesta (RU). En breves palabras, los chips del biosensor de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE, Inc.) se activan con clorhidrato de A/-etil-/S/-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. El antígeno se diluye con 10 mM de acetato de sodio, pH 4,8, a 5 pg/ml (-0,2 µ?) antes de la inyección a una velocidad de flujo de 5 µ?/minuto para obtener aproximadamente 10 unidades de respuesta (RU) de la proteína acoplada. Después de la inyección del antígeno, se inyecta 1 M de etanolamina para bloquear los grupos sin reaccionar. Para las mediciones de cinética, se inyectan dos diluciones seriadas dos veces de Fab (0,78 nM a 500 nM) en PBS con 0,05% de tensioactivo polisorbato 20 TWEEN-20™ (PBST) a 25°C con una velocidad de flujo dé aproximadamente 25 µ?/min. Las tasas de asociación (kon) y disociación (koff) se calculan usando un modelo de Langmuir simple uno a uno (programa de computación BIACORE® Evaluación versión 3.2) con ajuste simultáneo de los sensogramas de asociación y disociación. La constante de disociación en equilibrio (Kd) se calcula como la relación koff/kon- Ver, por ejemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Si la tasa de asociación excede 106 M'"1 s"1 por el ensayo de resonancia del plasmón superficial anterior, entonces la tasa de asociación se puede determinar por el uso de una técnica de inactivación fluorescente que mide el aumento o disminución de la inténsidad de emisión de fluorescencia (excitación = 295 nm; emisión = 340 nm, 16 nm de paso de banda) a 25°C de 20 nM de anticuerpo antígeno (forma Fab) en PBS, pH 7,2, en presencia de concentraciones crecientes de antígeno medido en espectrómetro, tal como un espectrofotómetro equipado con flujo de detención (Aviv Instruments) o un espectrofotómetro SLM-AMINCO serie 8000 (ThermoSpectronic) con una cubeta agitada. 2. Fragmentos de anticuerpo En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente es un fragmento de anticuerpo. Los Fragmentos de anticuerpo incluyen, pero sin limitación, los fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, y scFv, y otros fragmentos que se describen a continuación. Para una revisión de ciertos fragmentos de anticuerpo, ver Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Para una revisión de fragmentos scFv, ver, por ejemplo, Pluckthün, en The Pharmacology of Monoclona Antibodies, vol. 1 13, Rosenburg y Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); ver también WO 93/16185; y Patentes U.S. Nros. 5.571.894 y 5.587.458. Para la discusión de los fragmentos Fab y F(ab')2 que comprenden los residuos del epítope de unión al receptor de reciclaje y que tienen vida media larga, ver Patente U.S. N.° 5.869.046.
Los diacuerpos son fragmentos de anticuerpo con dos sitios de unión al antígeno que pueden ser bivalentes o biespecíficos. Ver, por ejemplo, EP 404,097; WO 1993/01 161 ; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); y Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Los triacuerpos y tetracuerpos también se describen en Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).
Los anticuerpos de dominio único son fragmentos de anticuerpo que comprenden el total o una porción del dominio variable de cadena pesada o el total o una porción del dominio variable de cadena liviana de un anticuerpo. En ciertas formas de realización, un anticuerpo de dominio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; ver, por ejemplo, Patente U.S. N.° 6.248.516 B1 ).
Los fragmentos de anticuerpo se pueden obtener por varias técnicas, que incluyen pero sin limitación digestión proteolítico de un anticuerpo intacto así como la producción por células huésped recombinantes (por ejemplo E. coli o fago), como se describen en la presente. 3. Anticuerpos quiméricos y humanizados En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente es un anticuerpo quimérico. Ciertos anticuerpos quiméricos se describen, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 4,816,567; y Morrison et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)). En un ejemplo, un anticuerpo quimérico comprende una región variable no humana (por ejemplo, una región variable derivada de un ratón, rata, hámster, conejo, o primate no humano, tal como un mono) y una región constante humana. En un ejemplo adicional, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo "cambio de clase" en que la clase o subclase ha sido cambiada desde la del anticuerpo original. Los anticuerpos quiméricos incluyen los fragmentos de unión al antígeno de esto.
En ciertas formas de realización, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo humanizado. Normalmente, un anticuerpo no humano es humanizado para reducir la inmunogenicidad en los seres humanos, a la vez que se retiene la especificidad y afinidad del anticuerpo no humano original. Generalmente, un anticuerpo humanizado comprende uno o más dominios variables en los que las HVR, por ejemplo, CDR, (o porciones de estos) derivan de un anticuerpo no humano, y las FR (o porciones de estas) derivan de las secuencias del anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado opcionalmente también comprenderá al menos una porción de una región constante humana. En algunas formas de realización, algunos residuos de la FR en un anticuerpo humanizado se sustituyen con los correspondientes residuos de un anticuerpo no humano (por ejemplo, el anticuerpo del que derivan los residuos de HVR), por ejemplo, para restaurar o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.
Los anticuerpos humanizados y los métodos de obtenerlos se revisan, por ejemplo, en Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), y se describen adicionalmente, por ejemplo, en Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); Patentes U.S. Nros. 5.821.337, 7.527.791 , 6.982.321 , y 7.087.409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (que describen el injerto de SDR (a-CDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991 ) (que describen "revestimiento"); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (que describe "transposición de FR"); y Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) y Klimka et al., Br. J., cáncer 83:252-260 (2000) (que describe el método de "selección guiada" para la transposición de FR).
Las regiones estructurales humanas que se pueden usar para la humanización incluyen pero sin limitación: regiones estructurales seleccionadas usando el método de "mejor ajuste" (ver, por ejemplo, Sims et al. J. Immunol. 151 :2296 (1993)); regiones estructurales derivadas de la secuencia de consenso de los anticuerpos humanos de un subgrupo particular de regiones variables de cadena liviana o pesada (ver, por ejemplo, Cárter et al. Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); y Presta et al. J. Immunol., 151 :2623 (1993)); regiones estructurales maduras humanas (con mutación somática) o regiones estructurales de la línea germinal humana (ver, por ejemplo, Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); y regiones estructurales derivadas de la selección de bibliotecas de FR (ver, por ejemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) y Rosok et al., J. Biol. Chem. 271 :2261 1-22618 (1996)). 4. Anticuerpos humanos En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente es un anticuerpo humano. Los anticuerpos humanos se pueden producir usando varias técnicas conocidas en la materia. Los anticuerpos humanos se describen en general en van Dijk y van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001 ) y Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
Los anticuerpos humanos se pueden preparar por la administración de un inmunogeno a un animal transgénico que se ha modificado para producir anticuerpos humanos intactos o anticuerpos intactos con regiones variables humanas en respuesta al estímulo antigénico. Tales animales normalmente contienen todo o una porción de los locus de la inmunoglobulina humana, que reemplaza los locus de la inmunoglobulina endógena, o que están presentes en forma extracromosómica o integrada aleatoriamente en los cromosomas del animal. En tales ratones transgénicos, se han inactivado los locus de la inmunoglobulina endógena. Para la revisión de los métodos para obtener anticuerpos humanos de los animales transgénicos, ver Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). Ver también, por ejemplo, las Patentes U.S. Nros. 6,075.181 y 6.150.584 que describe tecnología XENOMOUSE'M; Patente U.S. N.° 5.770.429 que describe la tecnología HUMAB®; Patente U.S. N.° 7,041 .870 que describe la tecnología K-M MOUSE®, y Publicación de la solicitud de patente U.S. N.° US 2007/0061900, que describe la tecnología VELOCIMOUSE®). Las regiones variables humanas de los anticuerpos intactos generado por tales animales se pueden modificar adicionalmente, por ejemplo, por la combinación con una región constante humana diferente.
Los anticuerpos humanos también se pueden por métodos basados en hibridoma. Se han descripto líneas celulares de mieloma humano y de heteromieloma ratón-humano para la producción de los anticuerpos humanos monoclonales. (Ver, por ejemplo, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51 -63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); y Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991 ).) Los anticuerpos humanos generados por medio de tecnología de hibridoma de células B humanas también se describen en Li et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006). Los métodos adicionales incluyen a los que se describen, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 7.189.826 (que describe la producción de anticuerpos IgM humanos monoclonales de las líneas celulares del hibridoma) y Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (que describe los hibridomas humano-humano). La tecnología del hibridoma humano (tecnología Trioma) también se describe en Vollmers y Brandiein, Histology y Histopathology, 20(3):927-937 (2005) y Vollmers y Brandiein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005).
Los anticuerpos también se pueden generar por aislamiento de las secuencias del dominio variable del clon Fv seleccionados de las bibliotecas de despliegue en fago derivadas humanas. Tales secuencias del dominio variable luego se pueden combinar con un dominio constante humano deseado. Las técnicas para seleccionar anticuerpos humanos de las bibliotecas del anticuerpo se describen a continuación. 5. Anticuerpos derivados de bibliotecas Los anticuerpos de la invención se pueden aislar por medio de bibliotecas combinatorias de selección de anticuerpos actividad o actividades deseadas. Por ejemplo, una variedad de métodos son conocidos en la técnica para generar bibliotecas de despliegue de fagos y analizar dichas bibliotecas para hallar anticuerpos que posean las características de unión deseadas. Dichos métodos se revisan, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001 ) y se describen adiclonalmente, por ejemplo, en McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991 ); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks y Bradbury, en Methods in Molecular Biology 248:161-17 '5 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 101 (34): 12467-12472 (2004); y Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 1 19-132(2004).
En ciertos métodos de despliegue en fagos, Los repertorios de los genes VH y VL se pueden clonar separadamente por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y recombinar al azar en bibliotecas de fagos, que luego se pueden analizar para hallar clones de unión con el antígeno como se describe en Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Los fagos normalmente despliegan fragmentos de anticuerpo, sea como fragmentos de cadena simple Fv (scFv) o como fragmentos Fab. Las bibliotecas de fuentes inmunizadas proporcionan anticuerpos de alta afinidad para el inmunógeno sin el requisito de la construcción de hibridomas. Alternativamente, el repertorio inactivo se puede clonar (por ejemplo, del ser humano) para proporcionar una fuente única de anticuerpos humanos con una amplia variedad de antígenos no propios y propios sin ninguna inmunización como se describe en Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). Finalmente, las bibliotecas inactivas también se pueden también preparar sintéticamente por clonación de los segmentos génicos V de las células madre, y mediante los cebadores de PCR que contienen secuencias aleatorias para codificar las regiones CDR3 altamente variables y para obtener el cambio de lugar in vitro como se describe en Hoogenboom y Winter, J. Mol. Biol. , 227: 381-388 (1992). Las publicaciones de patente que describen bibliotecas de fago de anticuerpo humano incluyen, por ejemplo: Patente US N.° 5.750.373, y publicaciones de patente US Nros. 2005/0079574, 2005/01 19455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, y 2009/0002360.
Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpo aislados de bibliotecas de anticuerpos humanos se consideren anticuerpos humanos o fragmentos de anticuerpo humanos en la presente. 6. Anticuerpos multiespecíficos En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente es un anticuerpo multiespecífico, por ejemplo un anticuerpo biespecífico. Los anticuerpos multiespecificos son anticuerpos monoclonales que tienen especificidades de unión para al menos dos antígenos diferentes. En ciertas formas de realización, una de las especificidades de unión es para ILR-13 y el otro es para cualquier otro antígeno. En ciertas formas de realización, anticuerpos biespecíficos se pueden unir a dos diferentes de IL-13. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden usar para localizar agentes citotóxicos en las células. Los anticuerpos biespecíficos se pueden preparar como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpo.
Las técnicas para obtener anticuerpos multiespecificos incluyen, pero sin limitación, la coexpresión recombinante de dos pares de cadena pesada -cadena liviana de inmunoglobulina, donde las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades (Milstein y Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, y Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991 )) y, manipulación genética "botón en ojal" (ver, por ejemplo, Patente U.S. N.° 5.731 .168). Los anticuerpos multiespecificos también se pueden obtener por manipulación genética de los efectos inductores electrostáticos para obtener anticuerpo Fc-moléculas heterodiméricas (WO 2009/089004A1 ); entrecruzamiento de dos o más anticuerpos o fragmentos (ver, por ejemplo, Patente US N.° 4.676.980, y Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); usando cierres de leucina para producir anticuerpos biespecíficos (ver, por ejemplo, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)); usando tecnología "diacuerpo" para obtener los fragmentos de anticuerpo biespecífico (ver, por ejemplo, Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); y por el uso de dímeros de cadena única Fv (sFv). (ver, por ejemplo Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); y la preparación de anticuerpos triespecíficos como se describió, por ejemplo, en Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991 ).
Los anticuerpos manipulados genéticamente con tres o más sitios de unión de unión al antígeno funcionales, que incluye "anticuerpos Octopus" también se incluyen en la presente (ver, por ejemplo US 2006/0025576A1 ).
El anticuerpo o fragmento en la presente también incluye un "FAb de acción dual" o "DAF" que comprende un sitio de unión al antígeno que se une a IL-13 así como a otro antígeno diferente (ver, por ejemplo, US 2008/0069820). 7. Variantes de anticuerpos En ciertas formas de realización, se contemplan las variantes de la secuencia de aminoácidos de los anticuerpos provistas en la presente. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo. Las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo se pueden preparar por la introducción de modificaciones apropiadas en la secuencia de nucleotidos que codifica el anticuerpo, o por la síntesis de péptidos. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, supresiones y/o inserciones en y/o sustituciones de residuos dentro de las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. Se puede realizar alguna combinación de supresión, inserción, y sustitución para obtener la construcción final, con la condición que la construcción final posea las características deseadas, por ejemplo, unión al antígeno.
Variantes de la sustitución, inserción v supresión En ciertas formas de realización, se proporcionan otras variantes de anticuerpo que tienen una o más sustituciones de aminoácidos. Los sitios de interés para la mutagénesis por sustitución incluyen las HVR y FR. Las sustituciones conservadoras se muestran en la Tabla 1 bajo el título de "sustituciones preferidas". Los cambios más sustanciales, se proporcionan en la Tabla 1, bajo el título de "ejemplos de sustituciones" o como también se describe más adelante con referencia a las clases de aminoácidos. Las sustituciones de aminoácidos se pueden introducir en un anticuerpo de interés y los productos se analizan, para determinar una actividad deseada, por ejemplo, unión al antígeno retenido/mejorado, reducción de la inmunogenicidad, mejora de ADCC o CDC.
TABLA 1 Los aminoácidos se pueden agrupar de acuerdo con las propiedades de las cadenas laterales: (1 ) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lie; (2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácido: Asp, Glu; (4) ácido: His, Lys, Arg; (5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; (6) aromático: Trp, Tyr, Phe.
Las sustituciones no conservadoras supondrán el intercambio un miembro de uno de estas clases por otra clase.
Un tipo de variante de sustitución involucra sustituir uno o más residuos de la región hipervariable de un anticuerpo original (por ejemplo, un anticuerpo humanizado o humano). En general, las variantes resultantes seleccionadas para posterior desarrollo tendrán modificaciones (por ejemplo, mejoradas) en ciertas propiedades biológicas (por ejemplo, aumento de afinidad, reducción de inmunogenicidad) con respecto al anticuerpo original del cual y/o tendrán ciertas propiedades biológicas sustancialmente retenidas. . Un ejemplo de variante de sustitución es un anticuerpo de afinidad madura, que se puede generar en forma conveniente, por ejemplo, usando técnicas de maduración de afinidad basadas en despliegue de fagos tales como los que se describen en la presente. En breves palabras, uno o más residuos HVR se mutan y las variantes desplegadas en el fago y se analizan para determinar una actividad biológica particular (por ejemplo, afinidad de unión).
Las alteraciones (por ejemplo, sustituciones) se pueden realizar en las HVR, por ejemplo, para mejorar la afinidad del anticuerpo. Tales alteraciones se pueden realizar en "puntos calientes" de la HVR es decir, residuos codificados por codones que experimentan mutación en alta frecuencia durante el proceso de maduración somática (ver, por ejemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), y/o SDR (a-CDR), con la variantes VH o VL resultante que se analiza para determinar la afinidad de unión. La maduración de afinidad por la construcción y reselección de bibliotecas secundarias se ha descripto, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001 ).) En algunas formas de realización de maduración de afinidad, se introduce diversidad en los genes variables elegidos por maduración por alguno de una variedad de métodos (por ejemplo, PCR predispuesta a error, transposición de cadena, o mutagénesis dirigida a oligonucleótidos). Luego se crea una biblioteca secundaria. La biblioteca luego se analiza para identificar cualquier variante de anticuerpo con la afinidad deseada. Otro método para introducir diversidad involucra los abordajes dirigidos a HVR, en los que se aleatorizan varios residuos de la HVR (por ejemplo, 4-6 residuos de una vez). Los residuos de HVR involucrados en la unión al antígeno se pueden identificar específicamente, por ejemplo, usando mutagénesis por barrido de alanina o modelado. A menudo se localiza selectivamente en particular CDR-H3 y CDR-L3.
En ciertas formas de realización, las sustituciones, inserciones, o supresiones ocurren dentro de una o más HVR siempre que tales alteraciones no reduzcan sustancialmente la capacidad del anticuerpo de unirse al antígeno. Por ejemplo, se pueden realizar alteraciones conservadoras (por ejemplo, sustituciones conservadoras provistas en la presente) que no reducen sustancialmente la afinidad de unión en las HVR. Tales alteraciones pueden ser externas de los "puntos calientes" de HVR o SDR. En ciertas formas de realización de las secuencias de la variante de VH y VL provistas anteriormente, cada HVR están no alterada, o contiene no más de una, dos o tres sustituciones de aminoácidos.
Un método útil para la identificación de residuos o regiones del anticuerpo que son localizaciones preferidas para la mutagénesis se llama "mutagénesis por barrido de alanina" descripto por Cunningham y Wells (1989) Science, 244:1081-1085. En este método, se identifican un residuo o un grupo de residuos blanco (por ejemplo, residuos cargados tales como arg, asp, his, lys, y glu) y se reemplaza con un aminoácido neutro o cargado negativamente (por ejemplo, alanina o polialanina) para determinar si se afecta la interacción de los aminoácidos con el antígeno. Se pueden introducir otras sustituciones en las localizaciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional para las sustituciones adicionales. En forma alternativa o adicional, se puede analizar la estructura cristalina del complejo antígeno-anticuerpo para identificar los puntos de contacto entre el anticuerpo y antígeno. Dichos residuos de contacto y residuos vecinos pueden ser localizados selectivamente o eliminados como candidatos para la substitución. Las variantes se pueden analizar para determinar si contienen las propiedades deseadas.
Las inserciones de secuencias de aminoácidos incluyen las fusiones de amino- y/o carboxilo-terminal que varían de extensión desde un residuo a los polipéptidos que contienen cien o más residuos, así como las inserciones intrasecuencia de residuos de aminoácidos únicos o múltiples. Los ejemplos de inserciones terminales incluyen la molécula de anticuerpo con un residuo meciónilo N-terminal. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen la fusión a los extremos N- o C terminales del anticuerpo a una enzima (por ejemplo, para ADEPT) o un polipéptido que aumenta la vida media sérica del anticuerpo.
Variantes de glicosilación En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente se altera para aumentar o disminuir el grado de glicosilación del anticuerpo. La adición o supresión de sitios de glicosilación en un anticuerpo se obtiene en forma conveniente por la alteración de la secuencia de aminoácidos de modo de crear o eliminar una o más de los sitios de glicosilación.
Cuando el anticuerpo comprende una región Fe, el hidrato de carbono adosado se puede alterar. Los anticuerpos nativos producidos por las células de mamífero generalmente comprenden un oligosacárido ramificado con dos antenas que en general está adosado a través de un enlace N a Asn297 del dominio CH2 de la región Fe. Ver, por ejemplo, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). El oligosacárido puede incluir diversos hidratos de carbono, por ejemplo, mañosa, N-acetilglucosamina (GIcNAc), galactosa, y ácido siálico, así como una fucosa adosada a un GIcNAc en el "tallo" de la estructura de oligosacárido con dos antenas. En algunas formas de realización, se pueden hacer modificaciones del oligosacárido en un anticuerpo de la invención a fin de crear variantes de anticuerpo con ciertas propiedades mejoradas.
En una forma de realización, se proporcionan variantes de anticuerpo que tienen una estructura de carbohidrato que carece de mucosa unida (en forma directa o indirecta) a una región Fe. Por ejemplo, la cantidad de mucosa en tal anticuerpo puede ser de 1 % a 80%, de 1 % a 65%, de 5% a 65% o de 20% a 40%. La cantidad de mucosa se determina por el cálculo de la cantidad promedio de mucosa dentro de la cadena de azúcar en Asn297, con respecto a la suma de todas glicoestructuras unidas a Asn 297 (por ejemplo, estructuras de mañosa híbrida y alta, complejas) que se mide por espectrometría de masa MALDI-TOF, que se describe en, por ejemplo, WO 2008/077546. Asn297 se refiere al residuo de asparagina localizado en aproximadamente la posición 297 de la región Fe (numeración de Eu de los residuos de la región de Fe); sin embargo, Asn297 también se puede localizar aproximadamente ± 3 aminoácidos corriente arriba o corriente abajo de la posición 297, es decir, entre las posiciones 294 y 300, debido a variaciones de secuencia menores en los anticuerpos. Tales variantes de fucosilación pueden tener función de ADCC mejorada.. Ver, por ejemplo, Publicaciones de patente US Nros. US 2003/0157108 (Presta, L); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Los ejemplos de publicaciones relacionadas con variantes de anticuerpo "desfucosiladas" o "deficientes en fucosa" incluyen: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621 ; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/01 10282; US 2004/0109865; WO 2003/0851 19; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Los ejemplos de líneas celulares capaces de producir anticuerpos desfucosilados incluyen células CHO Lec13 deficientes en la fucosilación de proteínas (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Solicitud de patente US N.° 2003/0157108 A1 , Presta, L; y WO 2004/056312 A1 , Adams et al., especialmente en el Ejemplo 1 1 ), y líneas de células ¡nactivadas tales como el gen de alfa— 1 ,6-fucosiltransferasa FUT8, células CHO ¡nactivadas (ver, por ejemplo, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); y WO2003/085107).
También se proporcionan variantes de anticuerpos con oligosacáridos bisecados, por ejemplo, en el que un oligosacárido biantenario fijado a la región Fe del anticuerpo se biseca con GIcNAc. Dichas variantes de anticuerpo pueden tener fucosilación reducida y/o función de ADCC mejorada. Se describen ejemplos de dichas variantes de anticuerpo, por ejemplo, en WO 2003/01 878 (Jean-Mairet et al.); Patente US N.° 6,602,684 (Umana et al.); y US 2005/0123546 (Umana er a/.). También se proporcionan variantes de anticuerpo con al menos un residuo de galactosa en el oligosacárido unido a la región Fe. Dichas variantes de anticuerpo pueden tener mejor función de CDC. Dichas variantes de anticuerpo se describen, por ejemplo, en WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); y WO 1999/22764 (Raju, S.).
Variantes de la región Fe En ciertas formas de realización, se pueden introducir una o más modificaciones de aminoácidos en la región Fe de un anticuerpo provisto en la presente, de este modo se genera una variante de la región Fe. La variante de la región Fe puede comprender una secuencia de la región Fe humana (por ejemplo, una región Fe de lgG1 , lgG2, lgG3 o lgG4 humana) que comprende una modificación de aminoácido {por ejemplo, una sustitución) en una o más posiciones de aminoácidos.
En ciertas formas de realización, la invención contempla una variante del anticuerpo que posee algunas pero no todas las funciones efectoras, lo que la convierte en una candidata deseable que para muchas aplicaciones en las que la vida media del anticuerpo in vivo es importante, ya que ciertas funciones efectoras (tales como complemento y ADCC) son innecesarias o perjudiciales. Los ensayos de citotoxicidad in vitro y/o in vivo se pueden realizar para confirmar la reducción/depleción de las actividades de CDC y/o ADCC. Por ejemplo, los ensayos de unión al receptor de Fe (FcR) se pueden realizar para asegurar que el anticuerpo carezca de la unión a FcyR (por consiguiente probablemente que carezca de actividad ADCC), pero retenga la capacidad de unión al FcRn. Las células principales para la mediación de ADCC, las células NK, expresan solo Fc(RIII, mientras que los monocitos expresan Fc(RI, Fc(RII y Fc(RIII. La expresión de FcR en las células hematopoyéticas se sintetiza en la Tabla 3 de la página 464 of Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991 ). Los ejemplos no limitantes de los ensayos in vitro para evaluar la actividad de ADCC de una molécula de interés se describe en la Patente U.S. N.° 5.500.362 (ver, por ejemplo Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) y Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5.821.337· (ver Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). En forma alternativa, se pueden emplear métodos de ensayo no radiactivos (ver, por ejemplo, ensayo de citotoxicidad no radiactiva ACTI™ por citometría de flujo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA¡ y ensayo de citotoxicidad no radiactiva CytoTox 96® (Promega, Madison, Wl). Las células efectoras útiles para dichos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células citolíticas naturales (NK). En forma alternativa o adicional, se puede evaluar la actividad de ADCC de la molécula de interés in vivo, por ejemplo, en un modelo animal tal como se describió en Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998). Los ensayos de unión C1q también se pueden llevar a cabo para confirmar que el anticuerpo es incapaz de unirse a C1 q y por consiguiente carece de actividad de CDC. Ver, por ejemplo, ELISA de unión de C1q y C3c en WO 2006/029879 y WO 2005/100402. Para evaluar la activación del commplemento, se puede realizar un ensayo CDC (ver, por ejemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101 :1045-1052 (2003); y Cragg, M.S. y M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). También se pueden realizar determinaciones de la unión de FcRn y la depuración/vida media in vivo usando métodos conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18( 12): 1759-1769 (2006)).
Los anticuerpos con función efectora reducida incluyen aquellos con sustitución de uno o más residuos de la región Fe 238, 265, 269, 270, 297, 327 y 329 (Patente U.S. N.° 6.737,056). Tales mutantes de Fe incluyen las mutantes de Fe con sustituciones en dos o más de las posiciones de aminoácidos 265, 269, 270, 297 y 327, qie incluyen la llamada mutante de Fe "DANA" con la sustitución de los residuos 265 y 297 para alanina (Patente US N.° 7.332.581 ).
Se describen ciertas variantes de anticuerpo con unión mejorada o disminuida a las FcR. (Ver, por ejemplo, Patente U.S. N.° 6.737,056; WO 2004/056312, y Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001 ).) En ciertas formas de realización, una variante del anticuerpo comprende una región Fe con una o más sustituciones de aminoácidos que mejoran la ADCC, por ejemplo, sustituciones en las posiciones 298, 333, y/o 334 de la región Fe (numeración EU de residuos).
En algunas formas de realización, las alteraciones se realizan en la región Fe que produce unión a Ciq alterada (es decir, mejorada o disminuida) y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), por ejemplo, como se describe en la Patente US N.° 6.194.551 , WO 99/51642, y Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
Los anticuerpos con aumento de vida media y mejor unión al receptor neonatal receptor de Fe (FcRn), que es el responsable de la transferencia de las IgG maternas al feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) y Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), se describen en US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Estos anticuerpos comprenden una región Fe con una o más sustituciones en ella que aumentan la unión de la región Fe a FcRn. Tales variantes de Fe incluyen aquellas con sustituciones en uno o más residuos de la región Fe: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311 , 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 o 434, por ejemplo, substitución del residuo 434 de la región Fe (Patente US N.° 7.371.826).
Ver también Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); Patente U.S. N.° 5.648.260; Patente U.S. N.° 5.624.821 ; y WO 94/29351 con respecto a otros ejemplos de las variantes de la región Fe.
Variantes de anticuerpo con cistina manipulada genéticamente En ciertas formas de realización, se puede desear crear anticuerpos manipulados genéticamente con cisteína, por ejemplo, "tioMAbs", en los que uno o más residuos de un anticuerpo se sustituyen con residuos de cisteína. En formas de realización particulares, los residuos sustituidos aparecen en sitios accesibles del anticuerpo. Al sustituir estos residuos con cisteína, los grupos tiol reactivos en consecuencia se ubican en sitios accesibles del anticuerpo y se pueden usar para conjugar el anticuerpo con otros residuos, tales como residuos de fármaco o residuos de fármaco-ligador, para crear un inmunoconjugado, como se describe adicionalmente en la presente. En ciertas formas de realización, alguno o más de los siguientes residuos se puede sustituir con cisteína: V205 (numeración de Kabat) de la cadena liviana; A118 (numeración de EU) de la cadena pesada; y S400 (numeración de EU) de la cadena pesada de la región Fe. Los anticuerpos manipulados genéticamente con cisteína se pueden generar como se describe, por ejemplo, en la Patente U.S. N.° 7.521.541.
Derivados del anticuerpo En ciertas formas de realización, un anticuerpo provisto en la presente también se puede modificar para contener residuos no proteináceos adicionales que son conocidos en la técnica y fácilmente disponibles. Los residuos adecuados para la derivatización del anticuerpo, incluyen pero sin limitación polímeros hidrosolubles. Los ejemplos no limitantes de polímeros hidrosolubles incluyen pero sin limitación, polietilenglicol (PEG), copolímeros de etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, poli— 1 ,3— dioxolano, poli-1 ,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anhídrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros o copolímeros aleatorios), y dextrano o poli(n-vinil pirrolidona)polietilenglicol, homopolímeros de propropilenglicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol), alcohol polivinílico y sus mezclas. El polietilenglicol propionaldehído puede tener ventajas para la fabricación debida a su estabilidad en agua. El polímero puede ser de cualquier peso molecular y puede ser ramificado o no ramificado. El número de polímeros unidos al anticuerpo puede variar y si más de un polímero se une, estos pueden ser moléculas iguales o diferentes. En general, se puede determinar el número y/o el tipo de los polímeros usados para la derivación sobre la base de las consideraciones que incluyen pero sin limitación, las propiedades o funciones particulares del anticuerpo mejorado, si el derivado del anticuerpo se usará en una terapia en condiciones patológicas definidas, etc.
En otra forma de realización, se proporcionan conjugados de un anticuerpo y residuo no proteináceo que se pueden calentar selectivamente por la exposición a la radiación. En una forma de realización, el residuo no proteináceo es un nanotubo de carbono (Kam et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 102: 1 1600-1 1605 (2005)). La radiación puede ser de cualquier longitud de onda, e incluye pero sin limitación, longitudes de onda que no dañan las células comunes, pero que se calientan el residuo no proteináceo a una temperatura en la que se destruyen las células próximas al anticuerpo-residuo no proteináceo.
Métodos v composiciones recombinantes Los anticuerpos se pueden producir usando métodos y composiciones recombinantes, por ejemplo, como se describe en la Patente U.S. N.° 4.816.567. En una forma de realización, se proporciona el ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo antiperiostina descripto en la presente. Tal ácido nucleico puede codificar una secuencia de aminoácidos que comprende la VL y/o una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo (por ejemplo, las cadenas liviana y/o pesada del anticuerpo). En una forma de realización adicional, se proporcionan uno o más vectores (por ejemplo, vectores de expresión) que comprenden tal ácido nucleico. En una forma de realización adicional, se proporciona una célula huésped que comprende tal ácido nucleico. En tal forma de realización, una célula huésped comprende (por ejemplo, ha sido transformada con): (1) un vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VL del anticuerpo y una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo, o (2) un primer vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VL del anticuerpo y un segundo vector que comprende un ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende la VH del anticuerpo. En una forma de realización, la célula huésped es eucariótica, por ejemplo una célula de ovario de hámster chino (CHO) o célula linfoide (por ejemplo, células YO, NSO, Sp20). En una forma de realización, se proporciona un método de obtener un anticuerpo antiperiostina, donde el método comprende cultivar una célula huésped que comprende un ácido nucleico que codifica el anticuerpo, provisto antes, en las condiciones adecuadas para la expresión del anticuerpo, y opcionalmente recuperar el anticuerpo de la célula huésped (o medio de cultivo de la célula huésped).
Para la producción recombinante de anticuerpo antiperiostina, el ácido nucleico que codifica un anticuerpo, por ejemplo, como se describió anteriormente, se aisla e inserta en uno más vectores para la clonación adicional y/o para expresión en una célula huésped. Tal ácido nucleico se puede aislar fácilmente y secuenciar mediante procedimientos convencionales (por ejemplo, por medio de sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse específicamente a los genes que codifican las cadenas pesadas y livianas del anticuerpo).
Las células huésped adecuadas para la clonación o la expresión de los vectores que codifican el anticuerpo incluyen células procarióticas o eucarioticas que se describen en la presente. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden producir en las bacterias, en particular cuando no se necesitan la glicosilación y función efectora del Fe. Para la expresión de los fragmentos de anticuerpos y polipéptidos en las bacterias, ver, por ejemplo, patentes U.S. Nros. 5.648.237, 5.789.199 y 5.840.523. (Ver también Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C.
Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, que describe la expresión de los fragmentos de anticuerpo en E. coli.) Después de la expresión, el anticuerpo se puede aislar de la pasta celular bacteriana en una fracción soluble y se puede purificar adicionalmente.
Además de procariotas, los microbios eucariótico tales como los hongos filamentosos o levaduras son huésped de clonación o expresión adecuados para los vectores que codifican anticuerpos, que incluyen cepas de hongos y levaduras cuyas vías de glicosilación han sido "humanizadas", lo que origina la producción de un anticuerpo con un patrón de glicosilación parcial o completamente humano. Ver Gerngross, Nal Biotech. 22:1409-1414 (2004), y Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
Las células huésped adecuadas para la expresión de anticuerpos glicosilados también derivan de organismos multicelulares (invertebrados y vertebrados). Los ejemplos de células de invertebrados incluyen células vegetales y de insectos. Se han identificado numerosas cepas y variantes baculovirales que se pueden usar en conjunto con las células de insecto, en particular para la transfección de las células de Spodoptera frugiperda.
Los cultivos celulares también se pueden utilizar como huéspedes. Ver, por ejemplo, Patentes U.S. Nros. 5.959.177, 6,040.498, 6.420.548, 7.125.978, y 6.417.429 (que describe la tecnología PLANTIBODIES™ para producir anticuerpos en plantas transgénicas).
Las células de vertebrados se pueden usar como huéspedes. Por ejemplo, las líneas celulares de mamífero que se adaptan a crecer en suspensión pueden ser útiles. Otros ejemplos de las líneas de células huésped de mamíferos útiles son la línea CV1 del riñon de mono transformadas por SV40 (COS-7), línea de riñon embrionario humano (293 o células 293 como se describió, por ejemplo, en Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de riñon de hámster bebé (BHK,), células de sertoli de ratón (células T 4, como se describe, por ejemplo, en Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de riñon de mono (CV1 ), células de riñon de mono verde africano (VERO-76), células de carcinoma cervical humano (HELA), células de riñon canino (MDCK), células de hígado de rata búfalo (BRL 3A,), células de pulmón humano (W138 ), células de hígado humano (Hep G2); tumor mamario de ratón (MMT 060562), células TRI como se describe, por ejemplo, en Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982), células MRC 5, células FS4. Otras líneas de células huésped de mamífero incluyen las células de ovario de hámster chino (CHO) que incluyen las células DFR-CHO (Uriaub et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)), y líneas celulares de mieloma tales como YO, NSO y Sp2/0. Para una revisión de ciertas líneas celulares huésped de mamífero adecuadas para la producción de anticuerpos, ver, por ejemplo, Yazaki y Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
ENSAYOS Los anticuerpos antiperiostina provistos en la presente se pueden identificar, analizar, o caracterizar por sus propiedades físicas/química y/o actividades biológicas por varios ensayos conocidos en la técnica.
Ensayos de unión y otros ensayos En un aspecto, un anticuerpo de la invención se analizar para determinar su actividad de unión al antígeno por ejemplo, por métodos conocidos tales como ELISA, transferencia Western, etc.
En otro aspecto, los ensayos de competición se pueden usar para identificar un anticuerpo que compite con IL-13 o periostina por la unión a IL13 o periostina, respectivamente. En ciertas formas de realización, tal anticuerpo de competición se une al mismo epítope (por ejemplo, un epítope lineal o conformacional) que se une con lebrikizumab u otro anticuerpo anti-IL-13 especificado en la presente o anticuerpo antiperiostina especificado en la presente. Los ejemplos de métodos para mapeo de un epítope al que se une un anticuerpo se proporcionan en Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," en Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
En un ejemplo de ensayo de competición, periostina inmovilizada se incuba en una solución que comprende un primer anticuerpo marcado que se une a periostina (por ejemplo, 25D4) y un segundo anticuerpo no marcado que se analizar en cuanto a su capacidad de competir con el primer anticuerpo por la unión a periostina. El segundo puede estar presente en un sobrenadante del hibridoma. Como control, la periostina inmovilizada se incuba en una solución que comprende el primer anticuerpo marcado pero no el segundo anticuerpo no marcado. Después de la incubación en condiciones permisivas para la unión del primer anticuerpo a periostina, se elimina el exceso de anticuerpo no unido, y se mide la cantidad de marca asociada con periostina inmovilizada. Si la cantidad de marca asociada con la periostina inmovilizada está sustancialmente reducida en la muestra de ensayo con respecto a la muestra control, entonces esto indica que el segundo anticuerpo está compitiendo con el primer anticuerpo por la unión a periostina. Ver Harlow y Lañe (1988) Anticuerpos: A Laboratory Manual ch,14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
Ensayos de actividad En un aspecto, los ensayos se proporcionan para identificar anticuerpos anti-IL-13 anticuerpos que tienen actividad biológica. La actividad biológica puede incluir, por ejemplo, actividad en el asma. También se proporcionan anticuerpos que tienen tal actividad biológica ¡n vivo y/o in vitro.
En ciertas formas de realización, un anticuerpo de la invención se analiza para determinar tal actividad biológica.
Inmunoconjugados La invención también proporciona inmunoconjugados que comprenden en la presente un anticuerpo antiperiostina conjugado a uno o más agentes citotóxicos tales como un agentes quimioterapéuticos o fármacos, agentes inhibitorios del crecimiento, toxinas (por ejemplo, toxinas proteicas, toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, planta o animal o sus fragmentos), o isótopos radiactivos.
En una forma de realización, un inmunoconjugado es un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) en que un anticuerpo se conjuga a uno o más fármacos, que incluyen, pero sin limitación un maytansinoide (ver Patentes U.S. Nros. 5.208,020, 5.416,064 y Patente Europea EP 0 425 235 B1 ); una auristatina tal como restos DE y DF de monometilauristatina fármaco (MMAE y MMAF) (ver Patentes U.S. Nros. 5.635.483 y 5.780.588, y 7.498.298); una dolastatina; una calicheamicina o derivado de esta (ver Patentes U.S. Nros. 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.770.701 , 5.770.710, 5.773,001 , y 5.877.296; Hinman et al., Cáncer Res. 53:3336-3342 (1993); y Lode et al., Cáncer Res. 58:2925-2928 (1998)); una antraciclina tal como daunomicina o doxorrubicina (ver Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); y Patente U.S. N.° 6,630.579); metotrexato; vindesina; un taxano tal como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel, y ortataxel; un tricoteceno; y CC1065.
En otra forma de realización, un inmunoconjugado comprende un anticuerpo como se describe en la presente conjugado a una toxina enzimáticamente activa y fragmentos de estas que incluyen, pero sin limitación, cadena A de difteria, fragmentos activos de no unión de la toxina de difteria, cadena de exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa), cadena A de ricina, cadena A de abrina, cadena A de modeccina, alfa-sarcina, proteína Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S), inhibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de sapaonaria officinalís, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina y los tricótesenos En otra forma de realización, un inmunoconjugado compren de un anticuerpo que se describe en la presente conjugado a un átomo radiactivo para formar un radioconjugado. Una variedad de isótopos radiactivos están disponibles para la producción de los radioconjugados. Los ejemplos incluyen At211 , I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm 53, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radiactivos de Lu.. Cuando el radioconjugado se usa para la detección, puede comprender un átomo radiactivo para los estudios centellográficos, por ejemplo tc99m o 1123, o una marca de espín para imagen de resonancia magnética nuclear (RMN) (también conocida como imagen de resonancia magnética, mri), tales como nuevamente yodo 123, yodo 131 , indio 11 1 , flúor 19, carbono 13, nitrógeno 15, oxígeno 17, gadolinio, manganeso o hierro.
Los conjugados del anticuerpo y agente citotóxico se preparan por medio una variedad de agentes de acoplamiento de la proteína bifuncional tales como propionato de N— succinimidil— 3— (2— piridilditiol) (SPDP), succinimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imdoésteres (tal como adipimidato de dimetilo HCI), ésteres activos (tal como suberato de disuccinimidilo), aldehidos (tales como glutaraldehído), compuestos bis-azido (tal como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazonio (tal como bis-(p-diazoniobenzoil)-etilendiamina), diisocianatos (tal como 2,6-diisocianato de tolueno), y compuestos de flúor bis-activo (tal como 1 ,5-difluoro-2,4-dínitrobenceno).) Por ejemplo se puede preparar una inmunotoxina de ricina como se describe en Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987). El ácido 1-isotiocianatobencil-3-metildiet¡len triaminopentaacético marcado con carbono 14 (MX-DTPA) es un ejemplo de agente quelante para conjugación del radionucleótido al anticuerpo. Ver WO94/11026. El ligador puede ser un "ligador escindible" que facilita la liberación de un fármaco citotóxico en la célula. Por ejemplo, se puede usar un ligador lábil al ácido, ligador sensible a peptidasa, ligador fotolábil, ligador dimetilo o ligador que contiene disulfuro (Chari et al., Cáncer Res. 52:127-131 (1992); Patente U.S. N.° 5.208,020).
Los inmunoconjugados o ADC de la presente contemplan expresamente, pero sin limitación a tales conjugados preparados con reactivos de entrecruzamiento que incluyen, pero sin limitación, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SlAB, sulfo-SMCC, y sulfo-SMPB, y SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona)benzoato) que están disponibles en el comercio (por ejemplo, en Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, Estados Unidos).
Métodos v composiciones para diagnóstico v detección En ciertas formas de realización, cualquiera de los anticuerpos anti-LRP6 provistos en la presente es útil para detectar la presencia en una muestra biológica. El término "detectar" como se usa en la presente abarca la detección cuantitativa o cualitativa. En ciertas formas de realización, una muestra biológica comprende una célula o tejido, tales como suero, plasma, muestras nasales y esputo.
En una forma de realización, se proporciona un anticuerpo antiperiostina para usar en un método de diagnóstico o detección. En un aspecto adicional, se proporciona un método de detectar la presencia de periostina en una muestra biológica. En ciertas formas de realización, el método comprende poner en contacto la muestra biológica con un anticuerpo antiperiostina que se describe en la presente en condiciones permisivas para la unión del anticuerpo antiperiostina a periostina, y detectar si se forma un complejo entre el anticuerpo antiperiostina y periostina. Tal método puede ser un método in vitro o in vivo. En una forma de realización, un anticuerpo antiperiostina se usa para seleccionar sujetos elegibles para terapia con un anticuerpo 13 u otro inhibidor de la vía de TH2, por ejemplo, donde periostina es un biomarcador para la selección de pacientes.
Los ejemplos de trastornos que se pueden diagnosticar usando un anticuerpo de la invención se proporcionan en la presente.
En ciertas formas de realización, se proporcionan anticuerpos marcados antiperiostina. Las marcas incluyen, pero sin limitación, marcas o residuos que se detectan directamente (tal como marcas fluorescente, cromofórica, electrodensidad, quimioluminiscente y radioactiva), así como residuos, tales como enzimas o ligandos, que se detectan en forma indirecta, por ejemplo, a través de una reacción enzimática o interacción molecular. Los ejemplos de marcas incluyen pero sin limitación, los radioisótopos 32P, 14C, 25l, 3H, y 131l, fluoróforos tales como quelatos de tierras raras o fluoresceína y sus derivados, rhodamina y sus derivados, dansilo, umbeliferona, luceriferasas, por ejemplo luciferasa de luciérnaga y luciferasa bacteriana (patente estadounidense N.° 4.737.456), luciferina, 2,3-dihidroftalazinodionas, peroxidasa de rábano (HRP), fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, glucoamilasa, lisozima, sacárido oxidasas, por ejemplo, glucosa oxidasa, galactosa oxidasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, oxidasas heterocíclicas tales como uricasa y xantina oxidasa, acoplada con una enzima que emplea peróxido de hidrógeno para oxidar un precursor de colorante tal como HRP, lactoperoxidasa, o microperoxidasa, biotina/avidina, marcas de espín, marcas de bacteriófago, radicales libres estables y similares.
Formulaciones farmacéuticas Las formulaciones farmacéuticas de un anticuerpo anti-IL-13 u otros inhibidores de la vía TH2 que se describen en la presente se preparar por la mezcla de tal anticuerpo o molécula que tiene el grado de pureza deseado con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables (Remington's Pharmaceutícal Sciences 16th edición, Osol, A. Ed. (1980)), en la forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los portadores farmacéuticamente aceptables son generalmente no tóxicos para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas e incluyen, pero sin limitación: buffer tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos, antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, fenol, alcohol butílico o bencílico, alquil parabenos tales como metil o propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol, y m-cresol), polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos), polipéptidos, proteínas, tal como albúmina sérica, gelatina, o inmunoglobulinas, polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona, aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina, monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, mañosa, o dextrinas, agentes quelantes tales como EDTA, azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol, contraiones formadores de sales tales como sodio; contraiones formadores de sal tales como sodio, complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteínas), y/o tensioactivos no iónicos tales como TWEEN™, PLURONICS™; y/o tensioactivos no iónicos tales como polietilenglicol (PEG). Los ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables en la presente también incluyen agentes de dispersión intersticial del fármaco tales como glicoproteínas de hialuronidasa activas neuras solubles (sHASEGP), por ejemplo, glicoproteínas de hialuronidasa PH-20 solubles humanas, tales como rHuPH20 (HILENEX®, Baxter Internacional, Inc.)- Ciertos ejemplos de sHASEGPs y métodos de uso, que incluyen rHuPH20, se describen en las Publicaciones de patente US Nros. 2005/0260186 y 2006/0104968. En un aspecto, un sHASEGP se combina con uno o más glicosaminoglicanasas adicionales tales como condroitinasas.
Los ejemplos de formulaciones de anticuerpo liofilizadas se describen en la Patente US N.° 6.267.958. Las formulaciones de anticuerpo acuosas incluyen las que se describen en la Patente US N.° 6.171.586 y WO2006/044908, estas últimas formulaciones incluyen un buffer de histidina-acetato.
La formulación de la presente también puede contener más de un ingrediente activo según sea necesario para la indicación particular que se trata, con preferencia aquellos con actividades complementarias que no se afectan adversamente entre sí. Por ejemplo, puede ser deseable también proporcionar un controlador con el inhibidor de la vía TH2. Tales ingredientes activos están presentes de modo adecuado en combinación con cantidades que son efectivas para el propósito deseado.
Los ingredientes activos también se pueden preparar encerrados en microcápsulas, por ejemplo por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, en sistemas dé administración de fármaco coloidal (por ejemplo liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nano-partículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Tales técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edición, Osol, A. Ed. (1980).
Las preparaciones de liberación sostenida se pueden preparar. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, tales matrices están en forma de artículos definidos, por ejemplo, películas o microcápsulas.
Las formulaciones que se usan para la administración in vivo son en! general estériles. La esterilidad se puede lograr fácilmente, por ejemplo, por filtración a través de membranas de filtración estériles Métodos y composiciones terapéuticas La inflamación eosinofílica se asocia con una variedad de enfermedades, alérgicas y no alérgicas (Gonlugur (2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45). La inflamación es una respuesta restauradora de los tejidos vivos a la lesión. Una característica de las reacciones inflamatorias es la acumulación de leucocitos en el tejido lesionado debido a determinadas sustancias químicas producidas en el tejido mismo. Los leucocitos eosinófilos se acumulan en una amplia variedad de afecciones tales como trastornos alérgicos, infecciones helmínticas, y enfermedades neoplásicas (Kudlacz et al., (2002) Inflammación 26: 1 1-1 9). Los leucocitos eosinófilo, un componente del sistema inmune, son elementos defensivos de las superficies de la mucosa. Ellos responden no solo a los antígenos sino también a los parásitos, sustancias químicas y trauma La eosinofilia tisular se produce en enfermedades cutáneas tales como eczema, pénfigo, urticaria aguda, y necrólisis epidérmica tóxica así como en la dermatitis atópica ([Rzany et al., 1996]). Los eosinófilos se acumulan en el tejido y las proteínas de gránulo vacío en las reacciones cutáneas mediadas por IgE ([Nielsen et al., 2001]). Los eosinófilos combinados con los mastocitos probablemente causan inflamación de las articulaciones (Miossec et al., 1997). La inflamación eosinofílica algunas veces acompaña el trauma articular. La eosinofilia del líquido sinovial se puede asociar con enfermedades tales como artritis reumatoide, enfermedad parasítica, síndrome hipereosinofílico, enfermedad de Lyme, y procesos alérgicos, así como hemartrosis y artrografía ([Atañes et al., 1996]). La inflamación eosinofílica puede afectar los huesos también ([Yetiser et al., 2002]). Los ejemplos de" enfermedad muscular eosinofílica incluyen perimiositis eosinofílica, polimiositis eosinofílica, y miositis eosinofílica focal ([Lakhanpal et al., 1988]). Las inflamaciones eosinofílicas que afectan los músculos esqueléticos se pueden asociar con las infecciones parasitarias o fármacos o características de algunos trastornos sistémicos de hipereosinofilia (por ejemplo, síndrome hipereosinofílico idiopático y síndrome de eosinofilia-mialgia. Los eosinofilos participan en la respuesta inflamatoria a los epítopes reconocidos por los anticuerpos autoinmunes ([Engineer et al., 2001]). Las enfermedades del tejido conectivo pueden llevar a las inflamaciones neutrofílicas, eosinofílicas, o inflamaciones vasculares linfocíticas ([Chen et al., 1996]). La eosinofilia tisular y de sangre periférica se puede producir en las enfermedades reumáticas activas. La elevación de los niveles de ECP sérica en la espondilitis anquilosante, una clase de enfermedad del tejido conectivo, sugiere que los eosinofilos también están involucrados en el proceso subyacente (Feltelius et al., 1987). La granulomatosis de Wegener rara vez pueden presentarse nodulos pulmonares, efusión pleural, y eosinofilia de sangre periférica ([Krupsky et al., 1993]).
La eosinofilia de sangre periférica de al menos 400/mm3 se puede producir en 7% de los casos de esclerosis sistémica, 31% de los casos de esclerodermia localizada, y 61% de los casos de fasciítis eosinofílica ([Falanga y Medsger, 1987]). La esclerodermia produce un proceso inflamatorio que se asemeja mucho a los plexos de Meissner y Auerbach y consiste en mastocitos y leucocitos eosinofilos en el sistema gastrointestinal. Las neurotoxinas derivadas de eosinofilos pueden contribuir a la disfunción gastrointestinal motora, como ocurre en la esclerodermia ([de Schryver Kecskemeti y Clouse, 1989]).
Los eosinófilos pueden acompañar la proliferación del tejido conectivo localizado ([Varga y Kahari, 1997]) o sistémico ([Bouros et al., 2002]). Ellos pueden estimular la fibrosis por la inhibición de la degradación de proteoglicanos en los fibroblastos ([Hernnas et al., 1992]), y los fibroblastos median la supervivencia de los eosinófilos por la secreción de GM-CSF ([Vancheri et al., 1989]). Los eosinófilos se pueden hallar en los tejidos de pólipos nasales ([Bacherct et al., 2001]), bronquiales ([Arguelles y Blanco, 1983]), y gastrointestinales ([Assarian y Sundareson, 1985]). Asimismo, los eosinófilos se pueden localizar en los pseudotumores inflamatorios (tumor miofibroblástico). Los eosinófilos a menudo acompañan los pseudotumores inflamatorios en la región orbital, en tal caso la afección pueden imitar el angioedema o rinoconjuntivitis alérgica ([Li et al., 1992]).
La inflamación eosinofílica se puede hallar en trauma de tejido (por ejemplo, como resultado de la cirugía o lesión). La inflamación eosinofílica también se puede asociar con las enfermedades cardiovasculares (por ejemplo, miocarditis eosinofílica, arteritis coronaria eosinofílica, enfermedad cardíaca isquémica, infarto miocárdico agudo, ruptura cardíaca). Los procesos inflamatorios necróticos también pueden involucrar inflamación eosinofílica (polimiositis, disección arterial coronaria, lesiones necrotizantes de enfermedad de neuro-Behcet, demencia, infarto cerebral).
En la presente se proporcionan métodos para identificar pacientes positivos para la inflamación eosinofílica (EIP) predictivo para una respuesta al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2 (o que será receptivo a) por la medición de niveles de periostina séricas totales en el paciente.
En la presente también se proporcionan métodos para tratar asma, un trastorno eosinofílico, un trastomo mediado por IL-13, un trastorno mediado por IL14, un trastomo mediado por IL9, un trastorno mediado por IL5, un trastomo mediado por IL33, un trastorno mediado por IL25, un trastomo mediado por TSLP, un trastorno mediado por IgE o síntomas tipo asma que comprende administrar un inhibidor de la vía de TH2 a un paciente positivo para la inflamación eosinofílica, donde el paciente se diagnosticó como EIP por la medición de los niveles de periostina sérica total en el paciente.
En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de tratar asma, un trastomo eosinofílico, un trastorno mediado por IL-13, trastorno mediado por IL14 o un trastorno mediado por IgE que comprende administrar lebrikizumab a un paciente positivo para la inflamación eosinofílica.
En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de tratar asma, un trastomo eosinofílico, un trastorno mediado por IL-13, trastorno mediado por IL14 o un trastorno mediado por IgE que comprende administrar una dosis fija de 125-500 mg de lebrikizumab cada 4 semanas al paciente que sufre del trastorno.
También se proporcionan métodos para tratar asma (o enfermedad respiratoria) que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab al paciente con asma, donde el tratamiento produce un cambio relativo del FEV1 de más de 5%. En otra forma de realización, el FEV1 es mayor de 6%, 7%, 8%, 9% o 10% FEV1 . En otra forma de realización, el paciente se ha diagnosticado como EIP mediante un ensayo de periostina total. En otra forma de realización, el paciente con asma se ha diagnosticado con un ensayo de periostina sérica total.
En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de tratar asma (o enfermedad respiratoria) que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab al paciente con asma, donde el tratamiento produce una reducción de la tasa de exacerbación mayor de 35%. (otras formas de realización mayor de 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41 %, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51 %, hasta 85%; otra forma de realización, donde el paciente se ha diagnosticado como EIP).
En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de tratar asma (o enfermedad respiratoria) que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab al paciente con asma, donde el tratamiento produce una reducción de los despertares nocturnos. En una forma de realización, el paciente se diagnostica por la medición de los niveles de periostina sérica total en el paciente. En otra forma de realización, el asma del paciente no está controlado con un corticoide. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con EIP.
También se proporcionan métodos de tratar asma (o Enfermedad respiratoria) que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab' al paciente con asma, donde el tratamiento produce una mejora del control del asma. En una forma de realización, el paciente se diagnostica por la medición de los niveles de periostina sérica total en el paciente. En otra forma de realización, el asma no está controlado por un tratamiento con corticoide. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con EIP Se proporcionan métodos de tratar asma (o enfermedad respiratoria) que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab al paciente con asma, donde el tratamiento produce una reducción de la inflamación en los pulmones. En una forma de realización, el paciente se diagnostica por la medición de los niveles de periostina sérica total en el paciente. En otra forma de realización, el asma es no controlable por un tratamiento con corticoide. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con EIP En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de tratar un trastorno eosinofílico en un paciente que sufre del trastorno eosinofílico y se trata con un corticoide que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de Lebrikizumab al paciente con asma, donde el tratamiento produce una reducción o eliminación del tratamiento con corticoide (cantidad o frecuencia) usado para la tratar la enfermedad. En una forma de realización, el paciente se diagnostica por la medición de los niveles de periostina sérica total en el paciente. En otra forma de realización, el asma del paciente no es controlable con un corticoide. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con EIP antes del tratamiento.
También se proporcionan métodos de tratar un paciente que padece de asma (o enfermedad respiratoria) que comprende diagnosticar al paciente como EIP mediante un ensayo de periostina total, administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del inhibidor de la vía de TH2 al paciente con asma, diagnosticar el estado EIP del paciente, y volver a tratar el paciente con el inhibidor de la vía de TH2 si es estado es EIP. El diagnóstico se realiza usando el ensayo de periostina total solo o en combinación con los niveles de FENO y opcionalmente en combinación con otros biomarcadores seleccionados de: CST1 , CST2, CCL26, CLCA1 , PRR4, PRB4, SERPINB2, CEACAM5, ¡NOS, SERPINB4, CST4, y SERPINB10. En otra forma de realización adicional, el paciente tratado además de tener niveles de expresión elevados de periostina como se describió en la presente, tiene un nivel de FEN0 mayor de 21 ppb. En aún otra forma de realización, el paciente además de tener niveles de expresión elevados de periostina como se describió en la presente, tiene un nivel de FENO mayor de 35 ppb.
En ciertas formas de realización, se proporcionan métodos de identificar pacientes que son negativos para la inflamación eosinofílica (EIN), que comprende la etapa de medir los niveles de periostina total en un paciente y determar que el paciente es EIN.
Cualquiera de los inhibidores de la vía de TH2 provistos en la presente se puede usar en los métodos terapéuticos descriptos en la presente, en especial asma. En una forma de realización, el paciente con asma se trata con un corticoide, y se ha diagnosticado como receptivo a un inhibidor de la vía de TH2 usando un ensayo de periostina descripto en la presente. En una forma de realización adicional, el paciente con asma está sufriendo de asma moderada a severa. En otra forma de realización, el paciente está sufriendo de asma leve pero no se está tratando con un corticoide.
Un anticuerpo de la invención (y cualquier agente terapéutico adicional) se pueden administrar por cualquiera de los medios adecuados, que incluyen administración parenteral, subcutánea, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal, y si se desea para tratamiento local, administración intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, o subcutánea. La dosificación puede ser por cualquier vía, por ejemplo, por inyecciones, tales como inyecciones intravenosas o subcutáneas, que dependen en parte de si la administración es breve o crónica. En la presente se contemplan varios esquemas de dosis, que incluyen, pero sin limitación administraciones únicas o múltiples durante varios puntos de tiempo, administración en bolo, e infusión por pulso.
Los anticuerpos de la invención pueden formular, dosificar y administrar de un modo compatible con la buena práctica médica. Los factores para considerar en este contexto incluye el trastorno particular tratado, el mamífero particular tratado, la condición clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el método de administración, el esquema de administración, y otros factores conocidos para los profesionales médicos. El anticuerpo no necesita, pero opcionalmente se formula con uno o más agentes actualmente usados para prevenir o tratar el trastorno en cuestión. La cantidad efectiva de otros agentes depende de la cantidad de anticuerpo presente en la formulación, el tipo de trastorno o tratamiento y otros factores descriptos anteriormente. En general estos se usan en las mismas dosis y con las vías de administración usadas en la presente con anterioridad o aproximadamente de 1 a 99% de la dosis empleada antes en la presente, o en cualquier dosis y por cualquier vía que se determina en forma empírica/clínica como apropiada.
Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosis apropiada de de un anticuerpo de la invención (cuando se usa solo o en combinación con otros agentes terapéuticos adicionales) dependerá del tipo de enfermedad tratada, el tipo de anticuerpo, la gravedad y curso de la enfermedad, si el anticuerpo se administra con propósitos preventivos o terapéuticos, terapia previa, antecedentes clínicos del paciente y respuesta al anticuerpo y el criterio del médico asistente. El anticuerpo se administra adecuadamente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos. De acuerdo con el tipo y gravedad de la enfermedad, aproximadamente 1 pg/kg a 15 mg/kg {por ejemplo, 0,1 mg/kg-10 mg/kg) del anticuerpo puede ser una dosis inicial candidata para la administración al paciente, sea, por ejemplo por una o más administraciones separadas, o por infusión continua. Una dosis diaria típica podría variar de aproximadamente 1 pg/kg a 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, en general el tratamiento se debe sostener hasta se produzca la supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Un ejemplo de dosis del anticuerpo debe estar en el rango de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. De este modo, una o más dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg o 10 mg/kg (o cualquier combinación de las mismas) se pueden administrar al paciente. Tales dosis se pueden administrar en forma intermitente, por ejemplo, todas las semanas, cada tres semanas (por ejemplo, para que el paciente reciba de aproximadamente dos a aproximadamente veinte, por ejemplo, aproximadamente seis dosis del anticuerpo). Sin embargo, pueden ser útiles otros regímenes posológicos. El progreso de esta terapia se controla fácilmente por técnicas y ensayos convencionales.
En ciertas formas de realización, un anticuerpo de la invención se administra como una dosis fija (es decir, no dependiente del peso) de 37,5 mg, o una dosis fija de 125 mg, o una dosis fija de 250 mg. En ciertas formas de realización, la dosis se administra por inyección subcutánea una vez cada 4 semanas durante un período de tiempo. En ciertas formas de realización, el período de tiempo es 6 meses, un año, dos años, cinco años, diez años, 15 años, 20 años, o la vida del paciente. En ciertas formas de realización, el asma es asma severa y el paciente se controla inadecuadamente o no controla con corticoides inhalatorios más una medicación de segundo controlador. En otra forma de realización, el paciente se diagnostica con estado EIP mediante un ensayo de periostina total para determinar el estado EIP y el paciente se selecciona para el tratamiento con un anticuerpo anti-IL-13 como se describió anteriormente. En otra forma de realización, el método comprende tratar un paciente con asma con un anticuerpo anti-IL-13 como se describió anteriormente donde el paciente se diagnosticó previamente con el estado EIP mediante un ensayo de periostina total para determinar el estado EIP. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 18 o más. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 12 a 17 años y el anti-IL13 se administra como una dosis fija de 250 mg o una dosis fija de 125 mg. En una forma de realización, el paciente con asma tiene 6 a 11 años y el anticuerpo anti-IL-13 se administra como una dosis fija de 125 mg.
Se considera que cualquiera de las anteriores formulaciones o métodos terapéuticos se pueden llevar a cabo usando un inmunoconjugado de la invención en lugar o además de un anticuerpo anti-blanco o un anticuerpo antiperiostina. Artículos de manufactura En otro aspecto de la invención, se proporciona un artículo de manufactura que contiene materiales útiles para el tratamiento, prevención y/o diagnóstico de los trastornos descriptos anteriormente. El artículo de manufactura comprende un recipiente y una etiqueta o prospecto en o asociado con el recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo frascos, viales, jeringas, bolsas de solución IV, etc. Los recipientes pueden estar construidos de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente porta una composición que por sí misma o combinada con otras composiciones efectivas para tratar, prevenir y/o diagnosticar la afección y puede tener una puerta de acceso estéril (por ejemplo el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable por una aguja inyectable hipodérmica). Por lo menos un agente activo de la composición es un anticuerpo de la invención. La etiqueta o prospecto indica que la composición se usa para tratar la afección de elección, tal como asma. Además, el artículo de manufactura puede comprender (a) un primer recipiente con una composición contenida en la misma, donde la composición comprende un anticuerpo de la invención, y (b) un segundo recipiente con una composición contenida en este, en donde la composición comprende además un agente terapéutico citotóxico o de otro modo adicional. El artículo de manufactura de esta forma de realización de la invención puede comprender adicionalrnente un prospecto que indica que las composiciones de anticuerpos se pueden usar para tratar una afección particular. En forma alternativa o adicional, el artículo de manufactura también puede comprender un segundo recipiente (o tercero) que comprende un buffer farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina regulada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. También puede incluir otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, que incluye otros buffer, diluyentes, filtros, agujas y jeringas.
Se entiende que cualquiera de los artículos de manufactura anteriores puede incluir un inmunoconjugado de la invención en lugar de o además de anticuerpo anti-blanco o un anticuerpo antiperiostina EJEMPLOS EJEMPLO 1 - Estudio clínico de estímulo con alérgeno Un estudio controlado por placebo, doble ciego, aleatorizado de Fase II; 5 mg/kg de lebrikizumab:placebo (relación 1 :1 ) por vía subcutánea 4 semanas durante 12 semanas. Una síntesis de nivel alto del diseño de ensayo está en la Tabla 2 y Figura 1. La medición del resultado primario fue respuesta asmática tardía inducida por alérgeno (LAR) en la Semana 13. Los pacientes recibieron un estímulo con alérgeno seguido por un estímulo con metacolina de 18-24 más tarde durante el período de selección y en la semana 13. También se evaluaron los biomarcadores séricos para demostrar la inhibición de la vía de IL13 y para identificar los pacientes con un aumento de beneficio del lebrikizumab.
Tabla 2 Dseño Estudio de dosis múltiple, controlado por placebo, doble ciego y aleatorizado para evaluar el efecto de MILR1444A versus placebo sobre la hiperreactividad de las vías respiratorias al estímulo con alérgeno Población Pacientes de 18-55 años con asma leve Tamaño de muestra 24 (12 por cohorte) Duración del 12 semanas (y 4 meses de seguimiento) estudio Esquema, dosis formulación subcutánea (SQ), Q4w, (1 nivel de dosis activa 5 mg/kg) 1o criterio de AUC LAR (Estímulo con alérgeno) valoración 2o criterio de PC20 (estímulo con alérgeno), FEV1 , PC20 (estímulo valoración con metacolina) Los pacientes incluidos en el estudio son asmáticos leves, 18-55 años, con: (a) Prueba cutánea positiva (> o = 3mm respecto del control negativo) en la selección para ácaros del polvo, caspa del gato o ambrosía; (b) Volumen expiratorio forzado en 1 segundo (FEV1 ) > o = 70% del predicho; y (c) Respuesta asmática temprana de > o = 20% de reducción en el FEV1 en 5-30 minutos después del estímulo con el alérgeno, y una respuesta asmática tardía (LAR) de > o = 15% de reducción en FEV1 en 2-8 horas posestímulo.
Veintiocho pacientes se incluyeron en el análisis del criterio de valoración primario (n=16 placebo, 12 lebrikizumab). En la Semana 13, lebrikizumab inhibió la LAR. La AUC media (área bajo la curva) del FEV1 2-8 horas después del estímulo con alérgeno (LAR) en los pacientes tratados con lebrikizumab se redujo en 48% versus placebo (26,3% versus 50,5%; IC de 95%: -19 a 90%), sin efecto sobre la respuesta de fase temprana (EAR) en la semana 13. La AUC media del FEV1 y la reducción máxima del FEV1 0-2 horas pos-estímulo con alérgeno fueron similares en los grupos con lebrikizumab y placebo (27,5% versus 26,4% para ambos parámetros; Tabla 3). Ver también la Figura 2. No se observó diferencia significativa entre los grupos de lebrikizumab y placebo sobre la hiperreactividad respiratoria a la metacolina. La media aritmética de la dosis de duplicación de metacolina en el grupo de lebrikizumab fue 0,33 dosis duplicadas más altas que en el grupo placebo (1 ,58 versus 1 ,25, IC de 95% -0,64 a 1 ,3), que no se consideró una inhibición clínicamente significativa.
Tabla 3 Selección Semana 13 PB LB (LB- PB LB (LB- N=16 N=12 PB)/PB N=16 N=12 PB)/PB Respuesta asmática temprana % de reducción 30,3 38,0 25,4 25,5 29,6 16,1 máxima en FEV1 AUC FEV1 (0-2h pos- 34,1 39,9 17,0 26,4 27,5 4,2 estímulo), %FEV1 x h Respuesta asmática tardía % de reducción 24,8 30,8 24,2 16,4 13,8 -15,9 máxima en FEV1 AUC de FEV1 (2-8h 73,8 77,0 4,3 50,5 26,3 -47,9 pos-estímulo, % de FEV1 x h) El tratamiento con Lebrikizumab ejerció claramente efectos sistémicos sobre los marcadores de la inflamación Th2, con reducciones ajustadas con placebo promedio de 24%, 25% y 26%, en IgE, MCP-4/CCL13, y TARC/CCL17 séricos, respectivamente (P<0,01 ). Ver las Figuras 3A y 3B. Los niveles de periostina sérica se redujeron ligeramente (5-10%) después del tratamiento. Los niveles de IL-13 séricos estuvieron principalmente por debajo del nivel de detección (<150 pg/ml) después del tratamiento. La Figura 3C muestra reducciones en IgE, CCL13 y CCL17 en la semana 13 en pacientes individuales con respecto a los niveles básales de estos marcadores. En general, los niveles de periostina, YKL-40, CEA y eosinófilos en sangre no cambiaron significativamente después del tratamiento con lebrikizumab (datos no mostrados).
Los sujetos con niveles básales por encima de la media de los eosinófilos de sangre periférica, IgE sérica, o periostina sérica exhibieron una mayor reducción dependiente del lebrikizumab ajustado con placebo en LAR que los sujetos con niveles básales de estos biomarcadores por debajo de la media. Ver la Figura 4.
Los pacientes se categorizaron como "biomarcador alto" o "biomarcador bajo" sobre la base de que tengan niveles medios mayores de o menores de biomarcadores inflamatorios en el nivel inicial: IgE, CLL13, CCL17, CEA, periostina, YKL-40 séricos y eosinófilos de sangre periférica. Como se muestra en la Fig. 4, los resultados para IgE, eosinófilos, y periostina en suero indicaron fue más probable que los pacientes con IgE, periostina séricos básales elevados (en comparación con la media) o aumento de eosinófilos de sangre periférica respondan al bloqueo de IL13 (por ejemplo, por lebrikizumab).
En conclusión, el estudio cumplió su criterio de valoración primario: 48% de reducción (90% Cl [-19%, 90%)]) en la AUC de fase tardía promedio. El Lebrikiuzumab redujo significativamente la LAR en comparación con el placebo. No se observó señal de seguridad en los datos de seguridad. El bloqueo terapéutico de IL-13 puede ser un tratamiento efectivo para el asma alérgico, en particular en pacientes con marcadores elevados de la inflamación de TH2 de las vías respiratorias.
EJEMPLO 2 - Estudio clínico I del paciente con asma Se realizó un estudio controlado por placebo, doble ciego y aleatorizado para evaluar los efectos de lebrikizumab en pacientes con asma que continúan controlados inadecuadamente o no controla mientras que están en terapia crónica con ICS. Los pacientes continuaron su terapia estándar de referencia que incluyó los corticoides inhalatorios (ICS) y también pueden incluir un LABA. En este estudio de la rama de dosis, los pacientes se asignaron aleatoriamente para recibir lebrikizumab o placebo durante 6 meses. Durante un período de prueba de 14-20 días (Visita 1 a Visita 3), los pacientes tenían que demostrar el cumplimiento con ICS y su capacidad de usar el equipo necesario para el control diario a lo largo del estudio. Los pacientes luego se evaluaron por elegibilidad del estudio y se asignaron aleatoriamente (1 :1 ) al fármaco del estudio (lebrikizumab o placebo) con estratificación basada en el estado sustituto distintivo de IL-13 (que se describe adicionalmente más adelante), uso de LABA, y sitio del estudio. La primra dosis SC se produjo dentro de 24 horas de asignación aleatoria (Día del estudio 1 , es decir, el día de la asignación aleatoria, independientemente de la primera fecha de administración del fármaco del estudio). La administración del fármaco del estudio se repitió una vez cada 4 semanas durante las próximas 20 semanas (para un total de seis dosis del fármaco del estudio que proporcionan el período de tratamiento de 24 semanas).Se evaluaron las medidas de la eficacia de lebrikizumab durante el período de tratamiento.
El fármaco del estudio se administró a pacientes seleccionados por inyección subcutánea (SC) en los siguientes puntos de tiempo: Día 1 y en las Semanas 4, 8, 12, 16, y 20. Cada dosis de lebrikizumab fue 250 mg. Cada dosis de placebo fue 2 mL del mismo fluido sin lebrikizumab. Las inyecciones SC se administraron en el brazo, muslo o abdomen. Un esquema de este diseño de ensayo se puede observar en la Figura 5.
El análisis primario se realizó después de que todos los pacientes (aproximadamente 200) se trataron y siguieron durante 24 semanas después de la asignación aleatoria (Día 1 ). Se evaluó la seguridad a lo largo del estudio. Después de la dosis final (Semana 20) del fármaco del estudio, los pacientes se controlaron durante unas 12 semanas adicionales; las primeras 4 semanas después de la dosis final se consideraron parte del período de tratamiento (24 semanas), y las 8 semanas finales constituyeron el período de seguimiento. El período de seguimiento de 8 semanas, junto con las 4 semanas últimas del período de tratamiento, permitieron controlar los pacientes durante 3-4 vidas media después de la dosis última. En consecuencia, los pacientes generalmente participaron en el estudio durante un total de aproximadamente 34 semanas. Ver la Figura 5. Los pacientes evaluables para eficacia (n= 180) se definieron con fines de toma de decisión para excluir los sujetos para dos razones: (1) no son parte de la población en las características clave y (2) FEV1 basal poco confiable a partir del cual medir el efecto del tratamiento. Ver la Figura 6 para las características básales de los pacientes que participan en este ensayo.
Tabla 4 Estudio controlado por placebo, doble ciego y Diseño aleatorizado 1 :1 para evaluar la eficacia y seguridad del lebrikizumab versus placebo Pacientes de 18-65 años con asma que están Población controlados inadecuadamente con corticoides inhalatorios (ICS) de muestra Aproximadamente 218 Período de selección de 2 semanas, período de Duración del tratamiento de 24 semanas, período de seguimiento de estudio seguridad de 8 semanas Dosis 250 mg, cada 28 días, para un total de 6 dosis 1o criterio de Cambio relativo en el FEV1 desde el valor basal a la valoración Semana 12 Cambio relativo en el FEV1 desde el valor basal a la Semana 24.
Cambio relativo en el FEV1 desde el valor basal a la criterios de Semana 12 o pacientes con estado positivo sustituto valoración distintivo IL— 13.
Tasa de exacerbaciones del asma durante el período de 24 semanas.
Los criterios de inclusión clave incluyeron los siguientes: Capacidad para realizar la espirometría en las Visitas 1-3 de acuerdo con el Manual de ensayo de función pulmonar (PFT) específico del estudio; Radiografía del tórax dentro de 12 meses de la Visita 1 sin evidencia de una anormalidad clínicamente significativa; Capacidad de completar materiales de estudio medido por el cumplimiento con el completado del diario y las mediciones de PEF entre las Visitas 1- 3; el asma no controlada se seleccionó con todos los siguientes criterios: - Diagnóstico del asma > 12 meses - Respuesta del broncodilatador en la Visita 1 o 2 - FEV1 prebroncodilatador > 40% y < 80% del predicho en las Visitas 1 y 3 - Uso de ICS > 200 g y < 1000 µg dosis diaria total del propionato de fluticasona (FP) o equivalente para al menos 6 meses consecutivos antes de la Visita 1 - Puntuación del cuestionario control del asma (ACQ) de la Visita 3 > 1 ,5 a pesar del cumplimiento del ICS.
Los criterios de exclusión clave incluyeron los siguientes: Afecciones médicas: - Exacerbación del asma, obstrucción de flujo de aire significativa, o infección respiratoria de las Visitas 1 - 3 - Neoplasia conocida o evaluación actual para una neoplasia potencial - Inmunodeficiencia conocida, que incluye, pero sin limitación infección por VIH - Enfermedad pulmonar preexistente diferente de asma, que incluye infecciones activas - Enfermedad médica clínicamente significativa no controlada Exposiciones: - Fumador habitual o fumador antiguo con una historia de fumador diario de >10 paquetes-años - Medicaciones concomitantes prohibidas (Esteroides diferentes de ICS, broncodilatadores de acción corta diferente del SABA, agentes inmunomoduladores) - Embaraza o no dispuestos al uso de anticoncepción altamente efectiva Debido a las dificultades prácticas para medir IL-13 en el pulmón mismo, se usaron los niveles de eosinófilos e IgE en sangre periférica como una medición sustituta, indicada como "sustituto distintivo de IL-13". Los pacientes positivos al sustituto distintivo de IL-13 se definieron como pacientes con IgE total >100 lU/mL y eosinófilos sanguíneos =D0,14 x 10xe9 células/L, mientras que los pacientes negativos al sustituto distintivo de IL-13 tenían una IgE total =D 100 lU/mL o eosinófilos sanguíneos < 0,14 x 10xe9 células/L. Los criterios para los niveles de IgE y eosinófilos que determinaron el estado de pacientes para sustituto distintivo de IL-13 se establecieron a partir de pacientes con asma en los que la expresión génica inducida por IL-13 en el epitelio bronquial (distintivo de IL-13) se correlacionó con IgE y eosinófilos en sangre (Corren et al., N Engl J Med 365:1088-1098 [201 1]).
Se evaluó la eficacia del lebrikizumab usando múltiples mediciones de la actividad del asma, que incluyen función pulmonar (es decir, FEV1 , flujo máximo que incluye variabilidad en el flujo máximo, respuesta a metacolina en centros seleccionados, óxido nítrico exhalado fraccionado [FENo]) y medida de la actividad o control de enfermedad (es decir, resultados informados por el paciente [PRO], uso de medicación de rescate, tasa de exacerbaciones). El cambio en el FEV1 fue el resultado primario. Los siguientes marcadores después del tratamiento con lebrikizumab: TARC (CCL17), MCP-4 (CCL13) y IgE para análisis farmacodinámicos.
Medida del resultado de la eficacia primaria La medida del resultado de la eficacia primaria fu el cambio relativo en FEV1 pre-broncodilatador (volumen) desde el valor basal a la Semana 12.
Medida del resultado de la eficacia secundaria Las medidas del resultado de la eficacia secundaria fueron los siguientes: Cambio relativo en FEV1 pre-broncodilatador (volumen) desde el valor basal a la Semana 24; Cambio relativo en FEV1 pre-broncodilatador (volumen) desde el valor basal a la Semana 12 para los pacientes con estado positivo de sustituto distintivo de IL-13; Cambio en la puntuación del cuestionario del control del asma (ACQ) desde el valor basal a la Semana 12; Cambio de la puntuación de síntomas del asma medido por el diario control del asma (ACDD) desde el valor basal a la Semana 12; Cambio del valor de flujo máximo pre-broncodilatador de mañana desde el valor basal a la Semana 12; Tasa de exacerbaciones del asma durante el período de tratamiento de 24 semanas; Tasa de exacerbaciones del asma severa durante el período de tratamiento de 24 semanas; Cambio del uso de medicación de rescate (medido por el número de aspiraciones por día de la medicación de rescate o medicación de rescate nebulizada) desde el valor basal a la Semana 12. Medidas exploratorias: Se evaluaron las siguientes medidas de resultados exploratorios: Cambio del número de días por semana con asma bien controlado, medido por el ACDD desde el valor basal a la Semana 12; Cambio de frecuencia semanal del despertar nocturno debido al asma desde el valor basal a la Semana 12; Cambio de los niveles de FENOs desde el valor basal a la Semana 12.
Observaciones iniciales En este estudio de pacientes con asma mal controlado, el tratamiento con lebrikizumab se asoció con un aumento estadísticamente significativo del FEV1 pre-broncodilatador, la variable del resultado primario. El aumento del FEV1 se produjo poco después de la iniciación del tratamiento, que indica que la inhibición de IL-13 impactó en las mediciones del flujo de aire en forma relativamente rápida. Si bien el tratamiento con lebrikizumab no produjo reducciones estadísticamente significativas en exacerbaciones definidas por protocolo y severas usando el ensayo de periostina Elecsys® (que se describe a continuación, debido a los valores no disponibles para contribuir al análisis), se observó una tendencia a una disminución de las tasas de exacerbaciones severas, en especial para los pacientes con alto nivel de periostina. Sin embargo, usando el ensayo E4 como se describe a continuación, el tratamiento con lebrikizumab llevó a reducciones estadísticamente significativas en exacerbaciones definidas por protocolo y severas (84% en el subgrupo de nivel alto de periostina (IC de 95% 14%, 97%, p=0,03). Ver también más adelante. Además, el análisis del subgrupo de FENO obtuvo una reducción estadísticamente significativa en exacerbaciones severas (p=0,04). El tratamiento con lebrikizumab no mejoró síntomas del asma medido por la versión solo síntoma del ACQ5 (que excluyó el uso de SABA de rescate y el FEV1 ) o las medidas diarias del diario.
La reducción de las quimioquinas de Th2, CCL13 y CCL17 e IgE en suero respalda el efecto biológico mediado por lebrikizumab que subyace el impacto clínico medido en las vías respiratorias. El ligero aumento del recuento de eosinofilos en sangre es compatible con una reducción total del recuento de eosinofilos desde la sangre al compartimiento pulmonar después de la inhibición de las quimioquinas atrayentes de eosinofilos. El hallazgo de que el lebrikizumab disminuyó el FENO es compatible con esta sugestión. Sin embargo, el lebrikizumab puede tener FENO disminuido por la inhibición directa de la expresión de la sintasa de óxido nítrico por medio del bloqueo de IL-13, más que por la modificación de la inflamación eosinofílica (que también se considera que impacta el FENo).
Los criterios de elegibilidad del paciente para este estudio requirieron la reversibilidad de al menos 12% para 400 pg de albuterol (sin uso de SABA durante al menos 4 horas y sin uso de LABA durante al menos 12 horas antes de las visitas). Esto fue para asegurar que los pacientes tenían "espacio para moverse" cuando se busca un cambio relativo global de al menos 10% de la función pulmonar. Esta simple prueba clínica puede limitar la capacidad para generalizar estos datos en poblaciones de pacientes más generales, no seleccionadas. En efecto, la razón más común para la ineligibilidad del paciente fue el fracaso de esta prueba (en 92 de 263 pacientes que fallaron en la selección).
En este estudio, se postuló primero que la combinación de IgE sérica alta y recuento alto de eosinofilos en sangre fuera un sustituto para identificar pacientes con aumento de expresión de los genes relacionados con IL-13 en el pulmón (sustituto distintivo de IL-13, o Th2 alto). Si bien los datos estaban todavía enmascarados para la asignación del tratamiento, nosotros redactamos un plan de análisis estadístico para usar la diferenciación sobre la base de los niveles de periostina sérica. Como se describe con más detalle a continuación, este análisis del subgrupo mostró que la efectividad del tratamiento con lebrikizumab aumentó en los pacientes con periostina alta con respecto a los pacientes con periostina baja, como se observa con un aumento más robusto del FEV1 y una mayor disminución del FENO, así como una prueba de interacción significativa. Estos hallazgos sugieren que el marcador preespecificado, periostina sérica, se puede usar potencialmente para seleccionar pacientes con asma que pueden ser más receptivos para el tratamiento con lebrikizumab.
Las características básales de los pacientes que participan en el estudio se muestran en la Figura 6. Las cifras se refieren a los promedios (SD) a menos que se indique lo contrario. La periostina alta se refiere a pacientes con valores de periostina básales superiores a 23 ng/ml de acuerdo con el ensayo E4 que se describe a continuación. La periostina baja se refiere a pacientes con valores de periostina básales inferiores a 23 ng/ml de acuerdo con el ensayo E4 que se describe a continuación.
Los cambios relativos del FEV1 (litros) en 12 semanas y 24 semanas (intervalos de confianza de 95%) para pacientes tratados se muestran en la Figura 7. En comparación con los pacientes positivos para el distintivo de IL-13, los pacientes positivos para periostina experimentaron un mayor cambio relativo en el FEV1.
La Figura 7 muestra que el cambio relativo corregido por placebo en el FEV1 desde el valor basal a las 12 semanas para todos los participantes fue 5,9% (IC de 95% 0,9%, 10,9%, p=0,2) y 10% para el subgrupo de periostina alta (IC de 95% 2,5%, 17,5%, p=0,01 )). El cambio relativo corregido por placebo en FEV1 desde el valor basal a las 24 semanas para todos para todos los participantes fue 4,8% (IC de 95% 0,3%, 9,3%, p=0,04) y 6,1 % para el subgrupo de periostina alta (IC de 95% -1 ,4%, 13,6%. p=0,11 ). La Figura 8 muestra el cambio relativo en el FEV1 a lo largo del período de tratamiento (32 semanas) para todos los sujetos evaluables para eficacia (A) y para solamente los sujetos con periostina alta (B). La eficacia de lebrikizumab a 32 semanas de tratamiento no declinó lo que sugiere que es posible disminuir la frecuencia en que se administra el lebrikizumab.
También examinamos el efecto del tratamiento con lebrikizumab sobre el FEV1 pos-broncodilatador como un resultado exploratorio y un sustituto indirecto para la remodelación de las vías respiratorias. El cambio del FEV1 pos-broncodilatador a las 20 semanas se midió después de cuatro inhalaciones de 100 mcg de aibuterol. En el estado basal antes de la administración del fármaco del estudio, el FEV1 pos-broncodilatador promedio fue 2,50 litros (0,71) y 2,54 litros (0,73) en el grupo con placebo y lebrikizumab, respectivamente. Esto correspondió a 77,9% del predicho e ambos grupos. El cambio total del FEV1 pos-broncodilatador corregido por placebo fue 4,9% (IC de 95% 0,2% a 9,6%; p=0,04). En el grupo de periostina alta, el tratamiento con lebrikizumab aumentó el FEV1 pos-broncodilatador a las 20 semanas (8,5%; IC de 95% 1 ,1 % a 16%; p=0,03). NO hubo evidencia de mejora del FEV1 pos-broncodilatador en el grupo de periostina baja (1 ,8%; IC de 95% -4,1 a 7,7; p=0,55). Además, lebrikizumab aumentó el FEV1 pos-broncodilatador absoluto en el grupo de periostina alta (170 mi; IC de 95% 10 a 320 mi). Se concluyó que lebrikizumab aumentó el FEV1 pos-broncodilatador en pacientes con asma no controlada que presentaron evidencia de aumento de inflamación de vías respiratorias Th2 (periostina alta). Sobre la base de estos datos, lebrikizumab puede tener el potencial de reducir la remodelación de vías respiratorias en el asma.
La Figura 9 muestra la tasa de exacerbación y tasa de exacerbación severa observada a las 24 semanas del tratamiento. La tasa de exacerbación se redujo en 37% en los participantes tratados con lebrikizumab en comparación con placebo (IC de 95% -22%, 67%, p=0,17) y en 61 % en el subgrupo con periostina alta (IC de 95% -6%, 86%, p=0,07). La tasa de exacerbación severa se redujo en 51 % (IC de 95% -33%, 82%, p=0,16) para todos los participantes y en 84% en el subgrupo con periostina alta (IC de 95% 14%, 97%, p=0,03). También examinamos las tasas de exacerbaciones severas a las 32 semanas, el fin del período de seguimiento, 12 semanas después de la dosis final de lebrikizumab, en la población ITT. Como se muestra en la Tabla 10, las tasas de exacerbaciones severas en todos los pacientes a las 32 semanas se redujeron significativamente en 50% en pacientes tratados con lebrikizumab en comparación con el placebo (p=0,03). La tasa de exacerbaciones severas fue más baja en los pacientes con periostina alta tratados con lebrikizumab (0,13); sin embargo, la tasa de reducción del placebo no alcanzó significancia estadística en los subanálisis. Se concluyó que el Lebrikizumab tuvo un beneficio significativo en la reducción de las exacerbaciones severas en pacientes controlados inadecuadamente por ICS. La mayor reducción de las exacerbaciones severas se observó en los pacientes con niveles altos de periostina antes del tratamiento. La duración de la observación para capturar eventos es importante para promover estudios para este criterio de valoración y la observación de 32 semanas en comparación con 24 semanas puede ser necesaria para detectar al menos un 50% de reducción en aproximadamente 200 sujetos.
Tabla 10. Tasa de exacerbación severa a 32 semanas, 12 semanas pos-dosis final.
Lebrikizumab cumplió su criterio de valoración primario y fue muy efectiva para reducir las exacerbaciones severas. Los datos sugieren que el estado de periostina de un paciente puede ser pronóstico de eventos de exacerbaciones y en menor medida el FEV1. Los datos sugieren el valor predictivo de los niveles de periostina para determinar la respuesta al tratamiento con lebrikizumab. Por ejemplo, usando el ensayo E4, es menos probable que los pacientes con niveles de periostina en suero o plasma inferiores a 20 ng/ml se beneficien con lebrikizumab mientras es más probable que los pacientes con niveles de periostina en suero o plasma superiores a 20 ng/ml se beneficien de lebrikizumab. Además, los pacientes con niveles de periostina en suero o plasma superiores a 23 ng/ml (determinado por el ensayo E4) tienen aun una mayor probabilidad de beneficiarse con el tratamiento con lebrikizumab.
Resultados informados por el paciente: El ACQ y mini-AQLQ no demostraron diferencias consistentes entre los grupos de tratamiento. Después de varias visitas, los datos de ACDD demostraron algunas diferencias en las puntuaciones promedio entre los grupos de tratamiento en días, síntomas de asma, despertares nocturnos y uso de medicación de rescate bien controlados, todos a favor del tratamiento con lebrikizumab. Para todos los criterios de valoración en los datos de ACDD (días, síntomas de asma, despertares nocturnos y uso de medicación de rescate bien controlados), hubo un mayor efecto del tratamiento corregido por placebo en sujetos con periostina alta en comparación con los sujetos totales; sin embargo, ninguna de las diferencias entre los grupos de tratamiento a 12 semanas fueron estadísticamente significativos.
Función pulmonar: Se observó la mejora de la función pulmonar (PEF) a partir del estado inicial para la mayor parte de los puntos de tiempo en todos los sujetos tratados con lebrikizumab y en todos los puntos de tiempo para los sujetos con periostina alta tratados con lebrikizumab. Los sujetos tratados con placebo declinaron desde el estado inicial en todo los puntos de tiempo.
Inflamación pulmonar: FENo disminuyó (mejoró) a lo largo del estudio para los sujetos tratados con lebrikizumab y los del subconjunto de periostina alta, mientras que los sujetos tratados con placebo presentaron aumentos en el FENo (empeoramiento). El por ciento de cambio del FENO a las 12 semanas fue -20,1 % para los sujetos tratados con lebrikizumab (n=83) versus 15% para los sujetos tratados con placebo (n=86) [p<0,01]. El por ciento de cambio del FEN0 a las 12 semanas fue -24,2% para los sujetos tratados con lebrikizumab versus 17,5% para los sujetos tratados con placebo (n=44) [p<0,01]. Las diferencias entre los grupos de tratamiento a las 12 semanas fueron estadísticamente significativas. Ver la Figura 10. En un análisis retrospectivo, el FENO basal alto también se asoció con eficacia para mejorar el FEV1 y una menor tasa de exacerbación severa en comparación con el placebo. Sin embargo, se observó que el FENO basal mostró mayor variabilidad intra-paciente durante el período de prueba que la periostina (19,8% versus 5,0%).
También se examinaron los datos para determinar si los pacientes que tenían periostina baja y FENo alto se beneficiaron con el tratamiento con lebrikizumab en el mismo grado que los pacientes con periostina alta. En el estado inicial, se observó una correlación moderada entre FENO y periostina sérica (rs = 0,31 , P<0,001 ; N=210 con datos coincidentes). Mediante el uso de valores límite, los estados de periostina y FENO se superpusieron en forma general pero incompleta (Tabla 1 1 ). Para los datos mostrados en la Tabla 11 , el valor límite de periostina fue 25 ng/mL usando el ensayo E4 que se describe más adelante y el valor límite de FENo ue 21 ppb medido usando metodología estándar conocida en la técnica. La evaluación de FEV1 basada en el estado de periostina y FENO compuesto reveló que el efecto ajustado por placebo del lebrikizumab a las 12 semanas fue mayor en el grupo con altos niveles de periostina y FENO (Tabla 12). En contraste, el beneficio del tratamiento observado en el grupo de periostina baja/ FENO alto fue marginal (2,3%, P=0,73). En consecuencia, FENO no parece identificar un subconjunto de pacientes con periostina baja que se benefician con lebrikizumab. El valor predictivo relativo de la periostina y el FE¡ la respuesta al tratamiento con lebrikizumab merece un estudio adicional.
Tabla 11 . Distribución de pacientes de acuerdo con el estado basal de periostina y FENO- Tabla 12. Cambio relativo promedio de FEVi basal a 12 Semanas en pacientes ITT. Los niveles básales promedio de FENO O periostina para todos los pacientes que cumplieron los criterios de entrada definidos en el protocolo se usaron para definir los subconjuntos descriptos en la tabla (alta = valor promedio o alto; baja = menos que el valor promedio).
Las características farmacocinéticas de lebrikizumab fueron similares a las que se habían observado en estudios previos. El peso corporal de los sujetos presentó un impacto sobre la farmacocinética del lebrikizumab.
Se evaluaron varios marcadores en cuanto a su capacidad de proporcionar valor predictivo en términos de beneficio del tratamiento anterior, además de o como una alternativa a los niveles de periostina sérica. Estos marcadores incluyeron CEA, IgE, TARC (CCL 7) y MCP-4 (CCL13).
Además, se postuló que el exceso de periostina sérica en los pacientes con periostina alta con asma se debe a los efectos de IL-13. En consecuencia, se trató de evaluar la contribución relativa de IL-13 a los niveles de periostina sistémica total en pacientes tratados con placebo y lebrikizumab con asma no controlada. Para estos experimentos, se midió la periostina sérica usando el ensayo de periostina Elecsys® que se describe en el Ejemplo 7. Como se muestra en las Figuras 18 y 19, se halló que la mayor parte (>90%) de los pacientes que tenían periostina baja en el estado basal continuaron bajos en ambas ramas del estudio (Fig. 18A), mientras que el 72% de los pacientes con periostina alta tratados con placebo y 40% tratados con lebrikizumab continuaron con periostina alta en la Semana 12 (Fig. 18B). Se concluyó que en los adultos con asma no controlada a pesar del ICS, los pacientes con periostina alta exhibieron una reducción significativa de los niveles de periostina sérica después del tratamiento con lebrikizumab en comparación con el placebo, pero los pacientes con periostina baja no exhibieron una reducción significativa de la respuesta al lebrikizumab. Estos hallazgos sugieren que en los pacientes con asma no controlada, el exceso de periostina sérica se debe a la actividad de IL-13, y que la inhibición de IL-13 con lebrikizumab disminuye los niveles de periostina sérica.
Cuatro pacientes tratados con lebrikizumab experimentaron eventos adversos serios (SAE) (exacerbación del asma [n=2], neumonía adquirida en la comunidad, y neumotorax traumático relacionado con un accidente automovilístico). Seis pacientes con placebo experimentaron siete SAE (exacerbación del asma [n=2], cefalea, pérdida de líquido cefalorraquídeo después de trauma epidural, culebrilla, herpes zoster, meningitis purulenta aguda, y adicción a medicación del dolor). Ver la Figura 11 para los resultados de seguridad de este ensayo.
La frecuencia total de los AE fue similar en ambas ramas de tratamiento (lebrikizumab, 74,5%; placebo, 78,6%), como fueron las frecuencias de los AE serios (lebrikizumab, 3,8%; placebo, 5,4%) (Tabla 9). Los eventos musculoesqueléticos fueron más comunes con lebrikizumab (lebrikizumab, 13,2%; placebo, 5,4%; P=0,045) (Tabla 9). Veinticinco pacientes (11 ,5%) discontinuaron el estudio temprano, incluyendo 12 pacientes tratados con placebo y 13 con lebrikizumab.
Tabla 9 EJEMPLO 3 - Estudio de paciente con asma II (Estudio de rango de dosis) Se realizó un estudio de rango de dosis, de cuatro ramas, controlado por placebo, doble ciego y aleatorizado para evaluar adicionalmente la relación entre la dosis de lebrikizumab y la respuesta en términos de la eficacia, seguridad y tolerabilidad en pacientes con asma que no estaban bajo corticoides inhalatorios.
Ver la Figura 12 para un diseño esquemático de esta prueba. Los pacientes seleccionados presentaron una respuesta al broncodilatador de al menos 15% y un FEV1 pre-broncodilatador >D60% y <D85% del predicho con estabilidad de la enfermedad demostrada en el período de prueba. Los pacientes seleccionados para el estudio previamente tratados con ICS pueden no haber recibido ICS durante un mínimo de 30 días antes de la primera visita del estudio (Visita 1 ). El estudio no presentó período de supresión; a los pacientes no les quitaron los corticoides para el único propósito de ser elegibles para el estudio.
El primer procedimiento relacionado con el estudio en la Visita 1 comenzó en el período de prueba de aproximadamente 2 semanas. Durante el período de prueba (Visitas 1-3), se evaluaron el control del asma (medido por la puntuación del cuestionario de control de asma [ACQ]) y la función pulmonar. El asma de los pacientes se caracterizó adicionalmente con la prueba de pinchazo cutáneo y biomarcadores relevantes que incluyen IgE y eosinófilos de sangre periférica. Los niveles de IgE y eosinófilos se usaron para clasificar los pacientes sobre la base de sus estados de sustituto distintivo de IL-13. En el final del período de prueba; los pacientes elegibles se asignaron aleatoriamente (1 :1 :1 :1 ) para recibir una de tres dosis (500 mg, 250 mg o 125 mg) de lebrikizumab o placebo por medio de administración SC. El fármaco del estudio se administró cuatro veces durante el período de tratamiento de 12 semanas. Después de la dosis final del fármaco del: estudio, los pacientes se controlaron durante un período de seguimiento adicional de 8 semanas. En consecuencia, la mayor parte de los pacientes participaron en el estudio durante un total de aproximadamente 22 semanas después de la Visita 1 , durante la cual se obtuvieron muestras de PK en tiempo intermitentes. El muestreo intensivo de PK se realizó con muestras de PK adicionales obtenidas durante el estudio y el período de seguimiento así como una muestra de PK adicional 16 semanas después de la última administración del fármaco del estudio, hasta que 70 sujetos completaron el muestreo de PK intensivo. En consecuencia, la participación en el estudio para los pacientes del grupo de muestreo PK intensivo dura aproximadamente 26 semanas después de la Visita 1. La seguridad se evaluó a lo largo del estudio y se definieron umbrales pre-especificados para la falla del tratamiento de modo que se puede retirar el fármaco del estudio de los pacientes para reanudar la terapia estándar si ellos tienen un deterioro clínicamente significativo.
Observaciones iniciales Eficacia: El cambio relativo corregido por placebo del FEV1 desde el valor basal a las 12 semanas para todos los sujetos tratados con lebrikizumab fue 4,1 % (IC de 95%-0,4, 8,6%; p = 0,075) de mejora. A lo largo del período de tratamiento de 12 semanas, el riesgo estimado de falla del tratamiento en todos los pacientes tratados con lebrikizumab fue 75% inferior que los pacientes tratados con placebo (HR 0,25, IC de 95%: 0,1 , 0,78; p = 0,001 ). Estos resultados se consideraron clínica y estadísticamente significativos. No hubo evidencia de una respuesta á la dosis (ver Fig. 16).
Seguridad: No hubo desequilibrios clínicamente significativos entre ; los pacientes tratados con lebrikizumab y tratados con placebo excepto por las reacciones del sitio de inyección (23% versus 6%, lebrikizumab a placebo respectivamente).
EJEMPLO 4 - ENSAYO DE PERIOSTINA (ensayo E4) Un ensayo ELISA de captura de periostina que es muy sensible (sensibilidad 1 ,88 ng/ml se describe más adelante. Los anticuerpos reconocen las isoformas de periostina 1-4 con afinidad nM (SEQ ID NOs:5-8)).
Se diluyen 80 uL de anticuerpo monoclonal purificado, 25D4 (Coat Anticuerpo, SEQ ID NOs: 1 y 2 expresados a partir de un hibridoma o una línea celular CHO) con solución salina regulada con fosfato a una concentración final de 2 ug/mL. Las placas de microtitulación Coat se cubren toda la noche a 2~8°C con anticuerpo Coat a razón de 100 pL por pocilio. La placa se lava tres veces con 400 pL de buffer de lavado (PBS/0,05% de Tween (polisorbato 20) por pocilio por ciclo de buffer de lavado a temperatura ambiente. Se añaden 200 pL por pocilio de buffer de bloqueo a la placa. Se incuba la placa cubierta a temperatura ambiente con agitación durante 1 ,5 horas.
Se prepara la curva estándar de rhuPeriostin (patrón estándar de rhuPeriostin = isoforma 2 de rhuPeriostin, sistemas R&D #3548-F2, 5,25 ng/ml, en diluyente de ensayo (PBS/0,5% de albúmina sérica bovina (BSA)/0,05% polisorbato 20/0,05% ProClin300, pH7,4). Diluyente de la curva estándar = PBS/0,5%BSA/0,05% de polisorbato 20, 0,05% de ProClin300, pH 7,4. por ejemplo: Conc del estándar Procedimiento (pg/mL) 80 µ?_ de rhuPeriostin, 5,25 ng/ml en diluyente de ensayo + 620 µ?_ de diluyente de la curva estándar 300 pL 600 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar 300 µ?_ 300 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar 300 pL 150 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar 300 pL 75 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar 300 pL 37,5 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar 300 pL 18,75 pg/mL de rhuPeriostin + 300 pL de diluyente de la curva estándar diluyente de la curva estándar Preparación de controles y muestras. Tres controles: Control de fuente de adición (rhuPeriostin de longitud completa, isoforma 1 , R&D Systems #3548-F2), control de matriz normal (mezcla de suero humano normal, Bioreclamation, Inc.), control de matriz alta (mezcla de suero humano normal, más 100 ng/ml de adición de rhuPeriostin).
Por ejemplo: 10 µ? de suero control (o muestra) + 1 ,99 ml_ de diluyente de muestra/control = 1 :200 300 µ?_ de dilución 1 :200 + 300 µ?_ de diluyente de muestra/control = 1 :400 300 µ?_ de dilución 1 :400 + 300 µ?_ diluyente de muestra/control = 1 :800 300 \ L de dilución 1 :800 + 300 µ?_ diluyente de muestra/control = 1 :1600 Cada dilución se corre por monoplicado Se construyen los controles de matriz usando una mezcla de suero humano normal. Se usa suero humano mezclado no adicionado como control normal. Se genera el control alto por la adición de 100 ng/mL de rhuPOSTN en el suero mezclado como se describió anteriormente. Se calcula la media, desvío estándar (SD), y % de coeficiente de varianza (CV, expresado en por ciento) para las cuatro diluciones para cada control en cada placa. El CV cuantifica la magnitud de la varianza e mediciones replicadas con respecto a la media de los replicados. %CV=100*(SD/media). Se evalúan estas concentraciones promedio en todas las placas para determinar la precisión inter-placa. Esta tabla de control luego se usa para definir los criterios de aprobado/falla de los controles Normal y Alto, ajustando la varianza permisible a ± 20% de la concentración media para cada control.
Se lava la placa tres veces con 400 µ?_ por pocilio por ciclo de buffer de lavado (PBS/0,05% de polisorbato 20). Se añaden los estándares diluidos (pocilios duplicados), controles (las cuatro diluciones), y muestras (las cuatro diluciones) a la placa, a razón de 100 µ?_ por pocilio. Se incuba la placa cubierta, a temperatura ambiente con agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Se diluyen 80 uL de patrón de detección MAb I (antiperiostina humana, murina biotinilada MAb 23B9, 7,5 ug/ml en diluyente de ensayo) a 12 mL con diluyente de ensayo = 50 ng/mL. Se lava la placa cuatro veces con 400 µ?_ por pocilio por ciclo de buffer de lavado. Se añade Mab de detección diluido a la placa, 100 µ?_ por pocilio. Se incuba la placa cubierta a temperatura ambiente durante una hora con agitación. Se diluyen 80 uL de patrón I estreptavidina-HRP (estreptavidina-HRP AMDEX, GE Healthcare #RPN4401 , aproximadamente 1 mg/ml) diluida 1 :80 en diluyente de ensayo a 12 mL con diluyente de ensayo = 1 :12k. Se lava la placa cuatro veces con 400 µ?_ por pocilio por ciclo de buffer de lavado. Se añade estreptavidina-HRP diluida a la placa, 100 µ?_ por pocilio. Se incuba la placa cubierta a temperatura ambiente durante 45 min. con agitación. Se llevan los reactivos TMB de dos etapas de Kirkegaard y Perry (KPL) a temperatura ambiente; no se combina. Se lava la placa cuatro veces con 400 µ?_ por pocilio por ciclo de buffer de lavado. Se; mezclan volúmenes iguales de compuestos de sustrato KPL TMB y se añaden a la placa, 100 pL por pocilio. Se incuba la placa durante 20 minutos a temperatura ambiente con agitación. Se añade ácido fosfórico 1 M a la placa, 100 pL por pocilio. Se lee la placa usando longitud de onda de lectura 450 nm y longitud d onda de referencia 650 nm. Este ensayo o un ensayo similar al anterior ensayo se usó en el ensayo clínico descripto en el Ejemplo 3.
Un ensayo de periostina usando anticuerpos contra la isoforma 1 (no periostina total) se analizó sobre diferentes muestras de pacientes con asma usando un formato de captura de anticuerpo similar. Los resultados preliminares indican que la ¡soforma 1 de periostina no es tan robusta como un marcador para la inflamación TH2 como la periostina total.
EJEMPLO 5 - Estudio observacional de paciente asmático (BOBCAT) Nosotros informamos previamente ciertos hallazgos de biomarcador basados en nuestros estudios de muestras biológicas conservadas en el Airway Tissue Bank de la Universidad de California, San Francisco (UCSF) que se han recolectado durante broncoscopías realizadas con fines de investigación en voluntarios sanos y asmáticos. Ver, por ejemplo, Intn'l Pub. N.° WO2009/124090. Para verificar estos hallazgos en una cohorte grande de asma moderada a severa y generalizarlos a través de múltiples centros, se realizó un estudio observacional multicéntrico de 3 visitas ("BOBCAT") de asmáticos moderados a severas no controlados (ACQ > 1 ,50 y FEV1 entre 40-80%) con dosis altas de ICS (> 1000 pg/día de fluticasona DPI o equivalente) con recolección de esputo inducido, biopsias endobronqulales y sangre periférica. Se obtuvieron datos apareados de sangre y vías respiratorias de 59 sujetos (ver panorama general del estudio en la Fig. 13). Los detalles del estudio se proporcionan a continuación.
BOBCAT (Estudio de investigación exploratoria broncoscópica de Biomarcadores en asma refractaria a corticoides) fue un estudio multicéntrico realizado en los Estados Unidos, Canadá, y Reino Unido para recolectar muestras apareadas de vías respiratorias y sangre en aproximadamente 60 asmáticos moderados a severas. Los criterios de inclusión requirieron un diagnóstico de asma moderada a severa (confirmado por un FEV1 entre 40-80% del predicho así como la evidencia dentro de los últimos 5 años de > 12% de reversibilidad de la obstrucción de las vías respiratorias con broncodilatador de acción corta, o sensibilidad a metacolina (PC20) < 8 mg/ml) que no estaba controlado (definido por al menos 2 exacerbaciones en el año anterior o una puntuación de > 1 ,50 en el cuestionario de control de asma (ACQ) (Juniper, E.F., et al., Respir Med 100, 616-621 (2006)) mientras estaban con un régimen de dosis estable (> 6 semanas) de dosis alta de ICS (> 1000 pg de fluticasona o equivalente por día)) con o sin un beta agonista de acción prolongada. Las medicaciones concomitantes permitidas también incluyeron los antagonistas del receptor de leucotrieno y corticoides orales. Es esquema del estudio BOBCAT se ¡lustra en la Fig. 13.
Se realizaron FENO. broncoscopia, BAL, esputo inducido, e inmunohistoquímica para los recuentos de eosinófilos como se describió previamente (Woodruff, P.G., et al., Am J Respir Crit Care Med 180, 388-395 (2009); Boushey, H.A., et al., N Engl J Med 352, 1519-1528 (2005); Brightling, CE., et al., Thorax 58, 528-532 (2003); Lemiere, et al., J Allergy Clin Immunol 118, 1033-1039 (2006)). Todos los protocolos de investigación fueron aprobados por los comités de ética institucional relevantes y se obtuvieron los consentimientos informados de todos los sujetos antes del enrolamiento. Los datos demográficos y de función pulmonar del paciente se sintetizan en la siguiente Tabla 5.
Tabla 5. Datos demográficos y clínicos de BOBCAT.
N.D., no determinado Valores presentados como media + SD o mediana (rango) * FPI, dipropionato de fluticasona. Relación equivalente de fluticasona:budesonida = 1 :1 ,6 ** De estos, 6 sujetos también estaban con corticoides sistémicos, que reciben entre 4-20 mg de equivalentes de prednisolona/día *** De estos, 7 sujetos también estaban con corticoides sistémicos, que reciben entre 5-40 mg equivalentes de prednisolona/día Se usaron valores límite pre-especificados compatibles con los estudios previos de 3% para eosinófilos en esputo (Green, R.H., et al., Lancet 360, 1715-1721 (2002); Haldar, P., et al., N Engl J Med 360, 973-984 (2009)) y 22 eosinófilos/mm2 por área biopsia total (Miranda, C, A. et al., J Allergy Clin Immunol 113, 101-108 (2004); Silkoff, P.E., et al., J Allergy Clin Immunol 116, 1249-1255 (2005)). Los niveles de periostina sérica fueron muy estables en los sujetos individuales a lo largo de las tres visitas que abarcan hasta 5 semanas (datos no mostrados). Los niveles de periostina promedio fueron significativamente más altos en los sujetos con "eosinófilos altos" en comparación con los de "eosinófilos bajos" definidos por las mediciones de eosinófilos en esputo o tejido (datos no mostrados). Los sujetos estratificados con una puntuación compuesta de 0 para ninguna, 1 para alguna, o 2 para eosinofilia tanto en esputo como tejido exhibieron una tendencia significativamente superior para el aumento de periostina sérica con el aumento de las puntuaciones de eosinófilos (datos no mostrados). Además, los asmáticos no eosinofílicos de todas las cohortes tenían sistemáticamente niveles de periostina sérica por debajo de 25 ng/ml usando el ensayo E4 descripto anteriormente. Usando 25 ng/ml de periostina sérica como valor límite, los sujetos con "eosinófilos bajos" y "eosinófilos altos" en el BOBCAT se diferenciaron efectivamente con un valor predictivo positivo de 93% (Tabla 6). Los recuentos de neutrofilos tisulares se correlacionaron positivamente con los eosinófilos tisulares y los niveles de periostina sérica (datos no mostrados). Tomados en conjunto, estos datos muestran que la periostina sérica es un biomarcador sistémico de eosinofilia persistente en las vías respiratorias en los asmáticos moderados a severas a pesar del tratamiento con esteroides.
Tabla 6. Tabla de contingencia para los valores límite de la periostina sérica (N=57) y FENO (N=56) versus estado compuesto de eosinófilos de las vías respiratorias en BOBCAT.
Eosinófilos bajos: eosinófilos en esputo < 3% Y eosinófilos de biopsia < 22/mm2 Eosinófilos altos: eosinófilos en esputo > 3% O eosinófilos de biopsia > 22/mm2 PPV, valor predictivo positivo NPV, valor predictivo negativo valor p es la prueba exacta de Fisher (2 colas) Comparación de periostina sérica a óxido nítrico exhalado fraccionado (FENO), eosinófilos de sangre periférica, IgE sérica, y YKL-40 sérico como biomarcadores del asma En los últimos años, se han descripto otros biomarcadores no invasivos de severidad del asma e inflamación de las vías respiratorias. Cuatro marcadores de interés particular son óxido nítrico exhalado fraccionado (FENO), un gas exhalado producido por la acción de la enzima ¡NOS (óxido nítrico sintasa inducible) en mucosa bronquial inflamada (Pavord, I.D. et al., J Asma 45, 523-531 (2008)); eosinófilos de sangre periférica; IgE sérica; e YKL-40, una proteína tipo quitinasa detectable en sangre periférica (Chupp, G.L., et al., N Engl J Med 357, 2016-2027 (2007)). Se midieron estos biomarcadores en nuestras cohortes de asmáticos y se compararon los valores con la eosinofilia en las vías respiratorias y otros biomarcadores.
Ni periostina, FENO. IgE, ni los eosinófilos sanguíneos se correlacionaron significativamente con ACQ, FEV1 , edad, género o índice de masa corporal (BMI) en BOBCAT. En BOBCAT, los niveles de FENO como los niveles de periostina sérica, fueron generalmente compatibles en las múltiples visitas, si bien FEN0 varió a niveles más altos (datos no mostrados) mientras que los eosinófilos sanguíneos fueron considerablemente más variable (r2=0,18 para los eosinófilos sanguíneos entre las visitas 1 y 3, no mostrado, en comparación con r2=0,65 para la periostina sérica entre las visitas 1 y 3). Como se muestra en la Fig. 14 A-F, los niveles de periostina sérica en las visitas 1 , 2, y 3 se correlacionaron altamente entre sí y con el nivel de periostina promedio para todas las visitas en BOBCAT.
La estratificación por estado de esputo y eosinófilos de biopsia se indica en la Tabla 6, los niveles de FENO fueron significativamente más altos en los asmáticos eosinofílicos en comparación con asmáticos no eosinofílicos. Sin embargo, si bien tanto FENO y periostina tuvieron un alto grado de especificidad, exhibiendo valores consistentemente bajos para los sujetos con "eosinófilos bajos", FENO detectó pocos sujetos con eosinofilia tisular y exhibió mayor superposición entre los sujetos con "eosinófilos bajos" y "eosinófilos altos" de acuerdo con cada métrica empleada (Figs. 15A-D). Se ajustó un modelo de regresión logística que incorpora edad, sexo, BMI, eosinófilos sanguíneos, IgE sérica, FENo. y periostina sérica (Tabla 7), y se halló que la periostina fue el indicador individual más significativo de estado compuesto de eosinófilos de vías respiratorias (p=0,007).
Tabla 7. Modelo de regresión logística de biomarcadores versus estado de eosinófilos en el estudio BOBCAT (N=59).
Usando un valor límite de 35 ppb como se describió previamente (Dweik, RA, et al., Am J Respir Crit Care Med 181 , 1033-1041 (2010)), FEN0 diferenció asmáticos con "eosinofilos bajos" y "eosinofilos altos" con comparable especificidad pero menor sensibilidad que un valor límite de periostina de 25 ng/ml (Tabla 6). Los eosinofilos de sangre periférica mostraron una mayor tendencia en los asmáticos con "eosinofilos altos" pero no alcanzaron significancia estadística (datos no mostrados). Para evaluar el rendimiento relativo de cada marcador sobre una base continua, se realizó un análisis de características operativas del receptor (ROC) de periostina, FENo> eosinofilos sanguíneos, y IgE sérica versus estado compuesto de eosinofilos de vías respiratorias status y se halló que la periostina se desempeñó en forma favorable para FENO (AUC de 0,84 y 0,79 respectivamente), mientras que los eosinofilos sanguíneos y la IgE sérica se desempeñaron sustancialmente menos (Fig. 15 E).
YKL-40 no mostró correlaciones significativas con periostina ni con ninguna medición de la eosinofilia de vías respiratorias o periférica en ninguna cohorte (datos no mostrados). En forma compatible con estos hallazgos de los niveles de biomarcadores exhalados y sanguíneos, se halló que los niveles de expresión génica epitelial bronquial de periostina y NOS2 (el gen que codifica ¡NOS) se correlacionaron significativamente entre sí y con los niveles de expresión génica de la mucosa bronquial de IL-13 y IL-5 mientras que la expresión de CHI3L1 (el gen que codifica YKL-40) no se correlacionó con la periostina, IL-13, ni IL-5 (Tabla 8). En conjunto, estos datos sugieren que la periostina de sangre periférica es el indicador más confiable de inflamación Th2/eosinofílica de las vías respiratorias que FEN0, eosinófilos sanguíneos, IgE sérica, o YKL-40 en los asmáticos a través de un rango de severidad y tratamiento esteroide.
Tabla 8. Matriz de correlación entre los niveles de expresión de genes que codifican biomarcadores y citoquinas Th2.
Los valores se dan como correlación del rango de Spearman (valor p) Niveles de expresión de IL-13 y IL-5 determinados de las biopsias endobronquiales por qPCR Periostina (POSTN_210809_s_at), NOS2 (NOS2_210037_s_at), y CHI3L1 (CHI3L1_209395_at), el gen que codifica YKL-40, determinado a partir de la micromatriz epitelial bronquial descripta en Truyen, E., L. et al. Thorax 61 , 202-208 (2006).
Discusión Si bien el asma se considera tradicionalmente como una enfermedad alérgica mediada por la inflamación dirigida por Th2(1 ), existe una evidencia nueva de heterogeneidad fisiopatológica(3-8). Recientemente hemos demostrado, que en los asmáticos leves a moderados sin tratamiento con esteroides, solo aproximadamente la mitad de los sujetos presentan evidencia de inflamación Th2 en sus vías respiratorias. El subconjunto de "Th2 alta" se distingue por marcadores elevados de alergia, inflamación de vías respiratorias eosinofílico, fibrosis bronquial, y sensibilidad a ICS(13). Como los antagonistas de las citoquinas Th2, IL— 4, IL-5, e IL-13 están bajo desarrollo activo como terapéuticas para el asma(35-37), será importante identificar los asmáticos que más probablemente se beneficien con estas terapias dirigidas. Si bien la broncoscopía, muestreo de esputo inducido, y la medición de los gases exhalados permiten la caracterización directa de las vías inflamatorias en las vías respiratorias, estas modalidades pueden ser laboriosas, costosas, invasivas, y/o no están ampliamente disponibles en los establecimientos de atención primaria. Por otra parte, los procedimientos de ensayo no están estandarizados en los relativamente pocos centros equipados para analizar muestras de vías respiratorias, lo que hace difícil la implementación en ensayos clínicos multicéntricos. En consecuencia, seleccionar pacientes con evidencia de inflamación eosinofílica dirigida por Th2 en sus vías respiratorias para las terapias dirigidas, será beneficioso desarrollar biomarcadores no invasivos de la inflamación de las vías respiratorias eosinofílica dirigida por Th2 ampliamente disponibles en plataformas de ensayo accesibles. Para tratar esta necesidad, nosotros hemos usado el perfil de expresión génica en muestra de vías respiratorias de asmáticos para permitir el descubrimiento y la caracterización de biomarcadores periféricos clínicamente útiles de la inflamación de las vías respiratorias eosinofílica dirigida por Th2.
La periostina es un proteína matricelular secretada asociada con fibrosis cuya expresión está regulada por aumento por IL— 4 y IL-13 recombinante en células epiteliales bronquiales cultivadas (21 , 38) y fibroblastos bronquiales (39). Esta se expresa en niveles elevados in vivo en un modelos de asma de ratón(40), un modelo de asma de rhesus (datos no publicados), y en células epiteliales bronquiales (21 ) y la capa bronquial subepitelial(39) de los asmáticos humanos. En los asmáticos humanos, los niveles de expresión de periostina se correlacionan con el grosor de la membrana te con mambrana basal reticular, un indicador de la fibrosis subepitelial (23). La periostina también se sobre expresa en pólipos nasales asociados con el asma sensible a aspirina(41 , 42) y en el epitelio esofágico de pacientes con esopfagitis eosinofílica de una manera dependiente de IL— 13(43) y en consecuencia puede cumplir un papel en la infiltración de eosinofilos del tejido de los procesos de enfermedad dirigidos por Th2 (44). La expresión elevada de periostina también se ha observado en varios tipos de cánceres derivados epiteliales (45-49), y se han informado niveles elevados de periostina en el suero de algunos pacientes con cáncer (24-26, 45, 46). Si la expresión local y sistémica de periostina en el asma u otras afecciones se debe a las acciones indirectas de IL-13 es aún poco claro y se tratará mejor con evaluaciones que comparen la expresión de periostina antes y después del bloqueo terapéutico de la IL-13.
La periostina es detectable en concentraciones sistémicas considerables en la sangre periférica de sujetos no asmáticos pero es elevada en la sangre periférica de un subconjunto de asmáticos sin tratamiento con ICS. Su expresión en el epitelio bronquial se suprime con el tratamiento ICS (13, 21 ) y sus niveles, sistémicos son generalmente inferiores en los asmáticos moderados relativamente bien controlados con ICS en comparación con los asmáticos sin ICS, aunque con considerable heterogeneidad. Debido a que ICS ejerce principalmente sus efectos en forma local en las vías respiratorias y los niveles sistémicos de periostina (como mostramos previamente, ver por ejemplo, Pub, patente Internacional N.° WO2009/124090) se suprimen en los asmáticos después de someterse al tratamiento ICS, se puede concluir que una fracción sustancial de la periostina sistémica se origina de las vías respiratorias en los asmáticos y de este modo las diferencias en los niveles sistémicos de periostina de 10-20% son clínicamente significativas con respecto a la inflamación de las vías respiratorias.
FENO se asocia con la inflamación de las vías respiratorias y predice la receptividad a ICS en asmáticos de severidad variada (1 1 , 34). Sin embargo, los niveles de FENo no reflejan de modo confiable la eosinofilia en las vías respiratorias en el asma severa, dependiente de esferoides y existen; discrepancias entre la cuantificación de eosinófilos en esputo y mucosa con respecto a FENo (29, 50). La titulación del tratamiento ICS para suprimir el recuento de eosinófilos en el esputo reduce la tasa de exacerbaciones de asma severa (12), pero la titulación del tratamiento ICS para los niveles de FENo no lo hace(51 ). Se ha descripto a YKL-40 como un marcador de la inflamación de las vías respiratorias en el asmático, pero sus niveles no se correlacionaron con las medidas de la inflamación de Th2 tales como IgE o eosinófilos(33). Por consiguiente, en el presente estudio, se halló que los niveles de expresión génica epitelial bronquial de periostina y NOS2 pero no de CHI3L1 se correlacionaron con la expresión de IL-13 y IL-5 bronquial (Tabla 8). Si bien nosotros observamos correlaciones positivas relativamente fuertes entre la eosinofilia bronquial o sistémica y los niveles de periostina sérica, las correlaciones entre eosinofilia y FENO fueron más débiles y no pudimos observar una correlación entre YKL-40 sérica e inflamación eosinofílica en los asmáticos estudiados. Los recuentos de eosinófilos en esputo y sangre y FE O están sujetos a significativa variabilidad temporal que depende de la exposición al alérgeno, exacerbaciones, y tratamiento esferoide (50, 52, 53). Si bien la vida media de la periostina circulante es desconocido en la actualidad, es posible que, si la periostina tiene vida relativamente larga en la sangre, los niveles sistémicos de periostina pueden reflejar una integración de la inflamación Th2 de las vías respiratorias totales durante un período de tiempo extendido. De acuerdo con esta posibilidad, observamos relativamente poca variabilidad intra-sujeto en la periostina sérica en 3 mediciones durante el curso de hasta 5 semanas (datos no mostrados). Los estudios futuros se deben dirigir a evaluar comparativamente la variabilidad intra-sujeto longitudinal en la periostina sérica, eosinofilia en las vías respiratorias, FEN0, y otros biomarcadores candidatos de la inflamación de Th2 durante períodos de tiempo más largos.
El estándar de atención para el asma bronquial que no está bien controlado en la terapia sintomática (por ejemplo ß-agonistas) es los corticoides inhalatorios (ICS). Rn los asmáticos leves a moderados con niveles elevados de IL-13 en las vías respiratorias(19) y los pacientes con esofagitis eosinofílica con niveles de expresión elevados de IL-13 en el tejido esofágico(43), el tratamiento con ICS reduce sustancialmente el nivel de IL-13 y los genes inducidos por IL-13 en los tejidos afectados. En el epitelio de las vías respiratorias de los asmáticos después de una semana de tratamiento con ICS y en células epiteliales bronquial cultivadas, hemos demostrados que el tratamiento con corticoide reduce sustancialmente los niveles de expresión inducidos por IL-13 de los genes distintivos de Th2 (13, 21 ). Esta regulación por disminución puede ser el resultado de la reducción de los niveles de IL-13 mediada por ICS, reducción mediada por ICS de la expresión del gen blanco, o una combinación de los dos. En asmáticos severos refractaros al tratamiento con ICS, se halló una fracción similar de sujetos (aproximadamente 40%) que tienen niveles de IL-13 detectables en esputo a, los que se observan en los asmáticos leves sin tratamiento con ICS(19), lo qué es comparable a la proporción de sujetos con el distintivo de Th2 epitelial bronquial que hemos descripto (13). Se han informado observaciones análogas para la persistencia de en los asmáticos refractarios a esferoides de células que expresan IL— 4 e IL-5 en BAL(54) e inflamación eosinofílica en biopsias bronquiales y esputo (8). Estas observaciones sugieren que, si bien inflamación eosinofílica dirigida por Th2 se suprime con el tratamiento con ICS en los asmáticos moderados, reaparece en un subconjunto de asmáticos severos controlados en forma incompleta por el tratamiento esteroide. Una complicación adicional es causada por la adherencia incompleta a la terapia de ICS prescripta, que puede ser la razón del escaso control en los asmáticos severos. En consecuencia, los estudios futuros se deben dirigir a evaluar los niveles de periostina en sangre en el contexto del estado del tratamiento con ICS, dosis de ICS, sensibilidad a esteroide intrínseca, y adherencia a la terapia con ICS en asmáticos controlados y no controlados.
En la actualidad, existen numerosas terapéuticas biológicas en el desarrollo clínico que se dirigen a IL-13 y factores relacionados que impulsan la inflamación de Th2 en asma(35-37), que incluyen las descriptas en la presente. Es importante que estos tratamientos se dirijan a los pacientes con patología molecular relevante, de otra manera se puede subestimar importantes efectos del tratamiento; los estudios de la terapia anti-IL5 destacan este punto (14, 15, 55). Nuestros hallazgos sugieren que aproximadamente la mitad de los asmáticos; leves a moderados sin esteroides pueden exhibir actividad de la vía de Th2 en sus vías respiratorias, y una fracción similar de los asmáticos moderados a severas, refractarios a esteroides exhibe actividad de esta vía. En consecuencia, como se : describe en la presente, los biomarcadores que identifican asmáticos que probablemente tengan inflamación dirigida por Th2 en sus vías respiratorias < puedan contribuir a la identificación y selección de pacientes que más probablemente respondan a estas terapias dirigidas experimentales.
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EJEMPLO 6 - Estudio de paciente asmático III (para evaluar seguridad, tolerabilidad y eficacia) El estudio será un estudio aleatorizado, multicéntrico, doble ciego, controlado por placebo, de grupo paralelo de lebrikizumab en pacientes con asma severa que continúa no controlado a pesar de la terapia diaria con ICS (500 -2000 pg/día de propionato de fluticasona con inhalador de polvo seco [DPI] o equivalente) más una medicación de segundo controlador, tal como un ß-agonista de acción prolongada (LABA), antagonista del receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA), o teofilina. Este estudio también evaluará el valor diagnóstico de los niveles de periostina sérica básales > 50 ng/mL (medido por el ensayo de Elecsys®). A la vez que continúan su terapia estándar de atención, que debe incluir ICS y una medicación de segundo controlador, los pacientes se asignarán aleatoriamente a una de las tres dosis de lebrikizumab o placebo durante un período controlado por placebo de 52 semanas.
Durante un período de prueba de 2 semanas, también mencionado como un período de selección, (Visita 1 a Visita 3), los pacientes se evaluarán en cuanto al cumplimiento con su terapia de asma actual y su capacidad para usar el equipo necesario para las visitas clínicas mensuales a lo largo del estudio así como el grado de control del asma provisto por sus medicaciones del estándar de atención. Los pacientes que informan una puntuación del cuestionario de control de asma (ACQ-5)= 1 ,5 y uno o más síntomas de asma que no está controlado (despertar nocturno > 1 vez/semana, síntomas >2 días/semana, uso de SABA > 2 días/semana, y/o interferencia con las actividades diarias) se considerará no controlado. Los pacientes cuyos síntomas continúan sin controlar en la Visita 1 o 2 y Visita 3 a pesar de la adherencia a los medicamentos controladores serán elegibles para participar. El período de selección se puede extender por 1 semana en el caso que los datos de adherencia sean incompletos y para los pacientes cuyo ACQ-5 es < 1 ,5 en la Visita 3, si la experiencia del investigador con este paciente sugiere que esta semana fue atípica para su enfermedad. Losa pacientes pueden ser elegibles para la volver a seleccionar por las razones seleccionadas hasta dos veces adicionales.
Al final del período de prueba (selección), los pacientes elegibles se asignarán aleatoriamente (1 :1 :1 :1 ) al fármaco del estudio (sea placebo o lebrikizumab 37,5 mg SC mensual, 125 mg SC mensual, o 250 mg SC cada 4 semanas). La aleatorización se estratificará por periostina sérica basal medida usando el ensayo Elecsys® (< 42 ng/mL, > 42 a < 50 ng/mL,= 50 a < 58 ng/mL, > 58 ng/mL), antecedentes de exacerbaciones de asma en los últimos 12 meses (?,? 1-2, > 3 eventos), medicaciones de asma básales (dosis de ICS= 1000 pg/día de propionato de fluticasona DPI o equivalente más LABA [yes, no]), y región geográfica (Estados Unidos/Canadá, Europa, Asia, resto del mundo). Los; pacientes continuarán con dosis estables de su terapia de referencia, que debe incluir ICS (500 2000 µg/día de propionato de fluticasona DPI o equivalente) y una medicación de segundo controlador, además de recibir el tratamiento del estudio doble ciego durante 52 semanas.
La primera inyección SC del tratamiento del estudio se producirá en el mismo día que la aleatorización (Visita 3 [Día 1]), y la dosis se repetirá una vez cada 4 semanas durante el período controlado con placebo de 52 semanas (para un total de 13 dosis del tratamiento del estudio). Se evaluarán mediciones de seguridad, eficacia, y resultados informados por el paciente (PRO) a lo largo del período controlado con placebo de 52 semanas. El criterio de valoración de eficacia primaria es la tasa de exacerbaciones de asma y se evaluarán durante el período controlado con placebo de 52 semanas.
Los pacientes que completan el período controlado con placebo de 52 semanas (es decir, pacientes que no han discontinuado prematuramente el tratamiento del estudio) continuarán la extensión del tratamiento activo de 52 semanas.
Todos los pacientes que continuarán en el estudio de extensión del tratamiento activo de 52 semanas recibirán lebrikizumab SC doble ciego a una dosis de 125 mg o 250 mg cada 4 semanas. Los pacientes asignados para recibir 125 mg o 250 mg de lebrikizumab durante el período controlado con placebo de 52 semanas permanecerán con su dosis de lebrikizumab asiganda. Los pacientes asignados para recibir placebo o lebrikizumab 37,5 mg SC cada 4 semanas durante el período controlado con placebo de 52 semanas se aleatorizarán en una relación 1 :1 ratio para lebrikizumab SC 125 mg o 250 mg cada 4 semanas durante la extensión del tratamiento activo de 52 semanas, con aleatorización estratificada por el nivel basal de periostina y la asignación del tratamiento previo.
En la Semana 76 de la extensión del tratamiento activo de 52 semanas, cada paciente se evaluará en cuanto a control del asma usando los daros de las tres visitas más recientes (Semanas 68, 72, y 76). Los pacientes cuyos síntomas de asma se han controlado durante las 12 semanas consecutivas (ACQ 5= 0,75 en cada evaluación) y que no presentaron exacerbaciones en la primera mitad de la extensión del tratamiento activo (Semanas 52-76) discontinuarán la terapia con lebrikizumab e ingresarán en el período de seguimiento. Durante el seguimiento, los pacientes seguirán para la evaluación de seguridad durante r 24 semanas después de la última dosis del fármaco del estudio. Los pacientes que continúan sintomáticos (ACQ-5 > 0,75) en la Semana 76 o que han experimentado un evento de exacerbación durante la primera mitad de la extensión del tratamiento activo (Semanas 52-76) continuarán con el tratamiento con lebrikizumab durante 28 semanas adicionales. Se evaluarán mediciones de seguridad, eficacia, y PRO a lo largo de la extensión del tratamiento activo de 52 semanas.
En el período de seguimiento, todos los pacientes seguirán para determinar la seguridad durante 24 semanas (> 5 vidas medias del fármaco) después de la última dosis del tratamiento del estudio cuando esto pueda ocurrir, sea como está planificado en el protocolo o en el caso de la discontinuación del tratamiento del estudio. En los pacientes que completaron el estudio hasta la Visita 23 (Semana 76), están bien controlados y discontinuaron el tratamiento del estudio, la Visita 23 reemplazará la Visita de seguimiento de seguridad 1. En los pacientes que completaron el estudio hasta la Visita 30 (Semana 104), la Visita 30 reemplazará la Visita de seguimiento de seguridad 1. En ambos casos, la próxima visita del período de seguimiento será la reemplazará la Visita de seguimiento de seguridad 2 en la Semana 12. En todos los otros pacientes, la primera visita de seguimiento será la reemplazará la Visita de seguimiento de seguridad 1 en la Semana 4 (aproximadamente 4 semanas después de la última dosis del tratamiento del estudio) del período de seguimiento de seguridad.
La participación total en el estudio, desde la aleatorización en la Visita 3 (Día 1 ), que incluye el período controlado con placebo de 52 semanas, la extensión del tratamiento activo de 52 semanas y el período de seguimiento de seguridad, may be as long as 124 semanas.
Aproximadamente 1400 pacientes (175 pacientes por grupo de tratamiento [lebrikizumab SC 250 mg, 125 mg, 37,5 mg, o placebo] por grupo de periostina [periostina alta= 50 ng/mL, periostina baja < 50 ng/mL]) se enrolarán en el estudio en aproximadamente 250 centros ubicados globalmente. Un mínimo de 650 pacientes se enrolará en el grupo de periostina alta (> 50 ng/mL). Se enrolará un mínimo de aproximadamente 450 pacientes que tiene fluctuaciones de ICS fluticasona= 1000 pg/día DPI o equivalente más LABA.
Los criterios de inclusión clave incluyen los siguientes: Diagnóstico de asma =12 meses antes de la selección; Respuesta /reversibilidad del broncodilatador: los pacientes deben tener respuesta del broncodilatador=12% en respuesta a cuatro aspiraciones de ß-agonista de acción corta (por ejemplo, albuterol o salbutamol) durante el período de selección; FEV1 pre-broncodilatador 40%-80% del predicho en ambas Visita 2 y Visita 3; con ICS > 500 (por ejemplo, 500 - 2000) g de propionato de fluticasona DPI o equivalente (dosis diaria total) durante=6 meses antes de la selección; con medicación de segundo controlador (por ejemplo, LABA, LAMA, LTRA, o teofilina dentro del rango de dosis prescripto) durante 6 meses antes de la selección; Asma no controlado demostrado durante el período de selección (es decir, Visita 1 [Día - 4] o Visita 2 [Día -7]) y en el momento de la aleatorización (Visita 3 [Día 1]), definidos de la siguiente manera: puntuación ACQ-5= 1 ,5 y al menos uno de los siguientes síntomas de asma que no está controlado sobre la base de las pautas de National Heart, Lung, and Blood, Institute and National Asthma Education and Prevention Program Expert Panel Report 3 (2007) y Global Initiative for Asthma (2010): • Síntomas > 2 días/semana • Despertares nocturnos= 1 vez semana • Use de SABA como medicación de rescate > 2 días/semana • Interferencia en las actividades diarias normales; Radiografía de tórax o el escaneado de la tomografía computada (CT) obtenida dentro de los 12 meses antes de la Visita 1 o la radiografía de tórax durante el período de selección que confirman la ausencia de otra enfermedad pulmonar; y adherencia demostrad a la medicación controladora= 70% durante el período de selección (Adherencia se define como los pacientes que responden; afirmativamente que han tomado su terapia controladora del asma= 70% de días durante el período de selección (Visita 1 a Visita 3) registrado en su dispositivo medidor de flujo máximo).
Los criterios de exclusión incluyen los siguientes: Antecedentes de una reacción alérgica severa o reacción anafiláctica a un agente biológico o hipersensibilidad conocida a cualquier componente de la inyección de lebrikizumab; Mantenimiento de la terapia de corticoide oral, definida como terapia de mantenimiento corticoide oral diaria o día alternado dentro de los 3 meses antes de la Visita 1 ; Exacerbación del asma durante las 4 semanas antes de la selección (Visita 1 ) o en cualquier momento durante selección que requirió corticoides sistémicos (oral, intravenoso (IV) o intramuscular (IM)) por cualquier razón que incluye un evento de exacerbación aguda; un episodio mayor que requiere cualquiera de los siguientes: 1. Hospitalización durante > 24 horas dentro de 4 semanas antes de la selección (Visita 1 ) 2. Tratamiento con antibióticos IV dentro de las 4 semanas de selección (Visita 1) 3. Antibióticos orales dentro de 2 semanas antes de selección (Visita 1 ); Infección parasitaria activa dentro de los 6 meses antes de la Visita 1 ; tuberculosis que requiere tratamiento dentro de los 2 meses antes de la selección (se permiten pacientes tratados por tuberculosis sin recurrencia en los 12 meses después de completar el tratamiento); Inmunodef ¡ciencia conocida, que incluye, pero sin limitación infección con VIH; Uso actual de una terapia ¡nmunomodulatoria; Neoplasia actual conocida o evaluación actual para una neoplasia potencial; Evidencia de hepatitis B/C activa o enfermedad hepática inestable; Infección parasitaria activa dentro de los 6 meses antes de selección; elevación de AST/ALT >2,0 del límite superior normal; Antecedentes de fibrosis quística, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, y/u otras enfermedades pulmonares clínicamente significativas diferentes del asma; Fumador actiual o historia de fumador >10 paquetes-año; Uso de una terapia biológica en cualquier momento durante los 6 meses antes de la selección; Pacientes mujeres con potencial reproductivo que no quieren usar un método de anticoncepción altamente efectivo por la duración del estudio, o que están embarazadas o en lactancia; Otras enfermedades médicas inestables; índice de masa corporal >38 kg/m2; Peso corporal <40 kg.
Fundamento de dosis de Fase III Análisis PK de la población Se desarrolló un modelo PK de la población preliminar para describir el perfil PK de lebrikizumab en pacientes adultos. Se usó un total de 4914 muestras de concentración sérica-tiempo de 333 pacientes tratados con lebrikizumab en los estudios descriptos anteriormente para desarrollar el modelo. No se observaron diferencias evidentes a través de los estudios, evidenciado por la buena concordancia entre el perfil PK observado en cada estudio y el perfil predicho a partir de los datos históricos.
Un modelo de dos compartimentos con cinética de absorción y eliminación de primer orden describió adecuadamente los datos de concentración sérica de lebrikizumab-tiempo. Los parámetros del modelo estructural incluyeron depuración (CL), volumen de distribución del compartimento central (Vi), volumen del compartimento periférico (V2), depuración inter compartimental (Q), así como velocidad de absorción de primer orden (Ka) y biodisponibilidad (F) después de la administración SC. Se asumió que todos los parámetros, excepto V2 y Q (que se fijaron en los valores promedio de la población), se distribuyen en forma log normal.
Los CL y Vi promedio de la población se estimaron en 0,18 L/día y 3,7 L, respectivamente. La biodisponibilidad promedio de la población se estimó en 76%. La variabilidad inter-individual de los parámetros PK fue modesta, variando de 15% a 27%. Se halló que el peso corporal es un covariable significativa para CL y los volúmenes de distribución de lebrikizumab, con mayores pesos asociados con mayores depuraciones y mayores volúmenes de distribución. Aproximadamente 19% de la variabilidad inter-individual en CL y 11% de variabilidad inter-individual en Vi se explicaron por el peso corporal. Los parámetros PK estimados de la población se sintetizan en la Tabla 13. El análisis PK de la población PK indicó que las características PK de lebrikizumab son compatibles con las típicas de un anticuerpo monoclonal IgG.
El efecto de la periostina sobre los parámetros PK se evaluó por la comparación de las estimaciones retrospectivas individuales de los parámetros PK entre los pacientes con niveles básales de periostina por encima y debajo de la media en el estudio de Ejemplo 2 y el estudio de Ejemplo 3. Las diferencias fueron insignificantes (p > 0,05) en ambos estudios para CL (p=0,54, 0,11), V-? (p=0,83, 0,79), y F (p=0,74, 0,37).
Tabla 13. Parámetros PK de la población de Lebrikizumab Descripción del parámetro Estimación Variabilidad media de la interpoblación (% individual (% SE) SE) Depuración, CL (L/día) 0,176 (3,2%) 24,5% (23,3%) Efecto de BW sobre CL 0,864 (10,6%) Volumen de distribución en el compartimento 3,74 (3,4%) 24,6% central, V! (L) (39,6%) Efecto de BW sobre Vi 0,890 (12,1 %) Volumen de distribución en el compartimento 2,01 (4,9%) periférico, V2 (L) Efecto de BW sobre V2 0,316 (34,8%) Depuración de la distribución, Q (L/día) 0,443 (10,2%) Velocidad de absorción de primer orden, Ka 0,213 (5,0%) 26,9% (1/día) (39,4%) Biodisponibilidad, F (%) 75,6 (3,7%) 14,9% (70,9%) Error residual proporcional 13,6% (3,6%) Error residual aditivo (pg/mL) 442 (15,6%) BW=peso corporal; CL=depuración; PK=farmacocinét¡ca; Q= depuración inter- compartimental; SE= error estándar; V-i=volumen de distribución del compartimento central; V2=volumen de distribución del compartimento periférico.
Nota: El efecto del BW se modelo en función de la potencia, TVP/ = 9í*(BW,- /BWflef)02, para el cual TVP es un valor típico del parámetro PK; BW,- se refiere a peso corporal por ith individual, BW/¾f se refiere al peso corporal de referencia, que es el peso corporal promedio de todos los pacientes incluidos en el modelo PK de la población (82 kg), T1 se refiere a la estimación promedio de la población del parámetro PK, y T2 se refiere al efecto del peso corporal sobre el parámetro PK.
Fundamento para la dosis fija Se usó la dosificación fija en los estudios de Fase II descriptos anteriormente. Debido al efecto del peso corporal sobre el perfil PK dé lebrikizumab, los pacientes más pesados generalmente presentaron menor exposición al fármaco. Sin embargo, no se halló correlación entre el peso corporal y el cambio de FEV1 proporcional desde el valor basal a la Semana 12 en los pacientes individuales tratados con lebrikizumab, lo que indica que el efecto del peso corporal sobre la exposición no tuvo impacto sobre la eficacia (ver la Figura 20). Por otra parte, los datos de estos estudios no indicaron problemas de seguridad con la dosis fija dentro del rango de peso corporal analizado (53-135 kg).
Para evaluar el impacto de la dosis fija sobre la variabilidad global de la exposición a lebrikizumab, se realizaron simulaciones PK de la población para comparar la dosis fija y los regímenes de dosis basados en peso corporal equivalentes (es decir, mg/kg), asumiendo una distribución del peso corporal similar a la que se observa en los estudios de Fase II descriptos anteriormente. La proporción de pacientes predicha con concentraciones mínimas del estado estacionario por encima de varios niveles fue similar entre los regímenes de dosis fijas y basados en peso corporal (ver la Figura 21 ), lo que no sugiere ventaja evidente para la dosificación basada en el peso corporal. En consecuencia, se eligió la dosis fija para el estudio de Fase III debido a su ventaja para reducir el riesgo de error de dosificación y complejidad operativa (por ejemplo, preparación del fármaco) en comparación con la dosificación basada en peso corporal individualizada Fundamento para las concentraciones blanco Se realizaron análisis de exposición-respuesta usando los datos de la Fase II para extraer las concentraciones de lebrikizumab blanco para informar la selección de la dosis para los Estudios de Fase III. En ambos estudios de Fase II descriptos anteriormente, no se halló correlación evidente entre el cambio de FEV1 corregido por placebo desde el valor basal y la concentración de fármaco mínima en suero en la Semana 12 (datos no mostrados) en los pacientes individuales tratados con lebrikizumab, lo que sugiere que el efecto de lebrikizumab sobre FEV1 está saturado en el rango de exposición analizado en ambos estudios. Más aún, las evaluaciones de la correlación entre el cambio de los biomarcadores PD (FeNO, IgE, CCL17, y CCL13) y concentraciones de fármaco mínimas en suero en los estudios de Fase II sugirieron la saturación de estas respuestas PD durante el período de tratamiento en ambos estudios. Los resultados fueron similares en el grupo de periostina alta. Sobre la base de estos resultados, se propuso una concentración mínima blanco en estado estacionario en suero de 10 pg/mL para precisar el extremo inferior del rango de Cmínnio,wki2 observado en ambos estudios (5to-95vo percentilo: 9,6-50 pg/mL del estudio del Ejemplo 2, 9,4-73 pg/mL del estudio del Ejemplo 3). Además, se espera que una concentración sérica de 10 pg/mL mantenga un nivel de fármaco suficientemente alto en el pulmón para neutralizar la IL 13 en los pacientes asmáticos, dado la partición suero a pulmón asumida del lebrikizumab (1 :500) y los niveles de IL— 13 en pulmón basados en los datos disponibles en la bibliografía. En consecuencia, se prevé que una dosis efectiva en la Fase III mantenga una concentración mínima sérica en estado estacionario >10 pg/mL.
Para~ seleccionar la dosis parcialmente efectiva en la Fase III, se propuso una concentración mínima blanco en estado estacionario de 5 pg/mL para asegurar ninguna superposición con el rango de Cmín¡ma,wki2 observada en los estudios del Ejemplo 2 y Ejemplo 3, en los que se observó la eficacia. En forma adicional, en ambos estudios, el efecto de lebrikizumab sobre los niveles séricos de CCL17 (TARC) retornaron al valor basal durante el lavado del fármaco (ver la Figura 22; (A) Estudio del Ejemplo 2, (B) Estudio del Ejemplo 3), en concentraciones séricas promedio de lebrikizumab >5 pg/mL. Si bien el efecto de lebrikizumab sobre el CCL 7 (TARC) no se correlacionó directamente con la eficacia, la recuperación de este biomarcador sugiere la supresión subóptima de la actividad de IL-13 en ciertas vías biológicas a esta concentración. En consecuencia, se propone una dosis parcialmente efectiva para mantener una concentración mínima sérica en estado estacionario <5 pg/mL.
Fundamento para las dosis de la Fase III Debido a la falta de una respuesta de dosis clara en el estudio del Ejemplo 3 que se describió anteriormente (es decir que las dosis de 125 mg, 250 mg, y 500 mg parecieron igualmente eficaces), se seleccionaron dosis de Fase III para demostrar una respuesta a la dosis de lebrikizumab por la inclusión de niveles de dosis efectiva y parcialmente efectiva. Para cumplir este objetivo, las dosis propuestas de lebrikizumab para el programa de la Fase III incluyen 250 mg, 125 mg, y 37,5 mg administradas por inyección SC cada cuatro semanas (q4wk). La Figura 23 muestra los perfiles PK de la población simulada en estas dosis, asumiendo una distribución de peso corporal similar a la que se observa en los estudios de Fase II.
Se prevé que la dosis más alta de 250 mg (dos inyecciones CS de 1 mi) q4wk demuestre eficacia clínica en la Fase III. Este es el único régimen de dósis estudiado en el estudio de Fase II de prueba de concepto (Ejemplo 2) y mostró eficacia para reducir la tasa de exacerbaciones de asma severa en pacientes cuyo asma no fue controlado a pesar de la terapia con ICS, la población de pacientes deseada para el tratamiento. Los pacientes del Ejemplo 2 presentaron asma! no controlada a pesar del tratamiento con ICS con o sin otro controlador, y=90% de pacientes del Ejemplo 2 que tenían ICS >500 pg/día también estaban tomando una medicación LABA. En este régimen de dosis, se predice que casi todos los pacientes (99%) alcanzan la Cmín¡ma,ss blanco de 10 pg/mL sobre la base de las simulaciones PK de la población (ver Tabla 14), lo que significa que se espera eficacia máxima. En consecuencia, se analizará esta dosis para replicar la eficacia clínica observada en la Fase II.
Tabla 14. Porcentaje predicho de pacientes con concentración mínima en estado estacionario superior al blanco en las dosis propuestas para la Fase III.
Concentración mínima blanco en estado Dosis estacionario (mg cada 4 semanas) >5 pg/mL >10 pg/mL 250 100% 99% 125 99% 78% 37,5 28% 0,6% Se propone una dosis media de 125 mg (una inyección SC de 1 mi) q4wk sobre la base de magnitudes similares de mejora del FEV1 observadas a 125 y 250 mg q4wk en el estudio de rango de dosis de Fase II (Ejemplo 3). Es razonable esperar que la misma relación de dosis-respuesta se mantenga válida en la población de pacientes con asma severa para el criterio de valoración de exacerbación y en consecuencia, se prevé que la dosis de 125 mg muestre eficacia en la Fase III. Esta expectativa está avalada adicionalmente por las simulaciones PK de la población, que sugieren que una mayor parte de los pacientes (78%) alcanzará la CmÍn¡ma,ss blanco de 10 pg/mL con este régimen de dosis (ver Tabla 14).
Se propone la dosis de 37,5 mg (una inyección SC de 0,3-mL) q4wk a fin de demostrar una dosis de lebrikizumab parcialmente efectiva o clínicamente ineficaz que es importante para establecer una relación de dosis-respuesta. Se elige este régimen de dosis tomando en cuenta las siguientes consideraciones: Capacidad de mantener la Cm¡nima,ss por debajo de 5 pg/mL en la mayoría de los pacientes (72%) y por debajo de 10 pg/mL en casi todos los pacientes (99%) (ver Tabla 14) Razonable separación (3,3 veces) de la dosis media Superposición mínima en el rango simulado de exposición sérica al lebrikizumab con la dosis media (ver Tabla 14) a fin de demostrar las respuestas clínicas diferenciales Un volumen de inyección conveniente (un múltiplo de 0,1 ml_) para reducir posibles errores de dosis Las diversas mediciones de resultados de este ensayo de Fase III son las que se describen a continuación.
MEDICIONES DE RESULTADOS Cada uno de los siguientes criterios de valoración se evaluarán pór separado en los pacientes con periostina alta y periostina baja. El ensayo se considerará positivo si se cumple el criterio de valoración primario en el grupo de periostina alta cuando el grupo de 250 mg de lebrikizumab se compara con él grupo placebo.
MEDICIÓN DE RESULTADOS DE EFICACIA PRIMARIA La medición de resultados de eficacia primaria es la tasa de exacerbaciones de asma durante el período controlado con placebo de 52 semanas. En este ensayo, las exacerbaciones de asma se definirán como síntomas de asma nuevos o aumentados (que incluye, por ejemplo, sibilancia, tos, disnea, u opresión en el pecho o despertares nocturnos debido a estos síntomas) que llevan al tratamiento con corticoides sistémicos o a la hospitalización. En la presente, el tratamiento con corticoides sistémicos se define como tratamiento con corticoides orales (es decir OCS) o parenterales durante=3 días o una visita al departamento de emergencia con una o más dosis de corticoides parenterales (IV o IM).
MEDICIONES DE RESULTADOS DE EFICACIA SECUNDARIA Las mediciones de resultados de eficacia secundaria en la Semana 52 son las siguientes: Cambio relativo del FEV1 pre-broncodilatador desde el valor basal a la Semana 52; Tiempo hasta la primera exacerbación del asma durante el período de tratamiento de 52 semanas; Cambio de excreción fraccionada de óxido nítrico (FENO) desde el valor basal a la Semana 52; Cambio de calidad de vida relacionada con la salud específica del asma, evaluada por la puntuación total de la versión estandarizada del cuestionario de calidad de vida del asma (AQLQ(S)) desde el momento inicial a la Semana 52; Cambio de uso de medicación : de rescate (medido por el número de aspiraciones por día de la medicación de rescate o medicación de rescate nebulizada (es decir, SABA)) desde el momento inicial a la Semana 52; Tasa de utilización de la atención de salud relacionada con el asma urgente( es decir, hospitalizaciones, visitas al departamento de emergencia, y vistas de atención aguda) durante el período controlado con placebo de 52 semanas.
MEDICIONES DE RESULTADOS EXPLORATORIOS Las mediciones de resultados exploratorios incluirán los siguientes: Proporción de pacientes que no experimentaron una exacerbación del asma definida en el protocolo durante el período controlado con placebo de 52 semanas; Cambio del valor de flujo máximo pos-broncodilatador matinal (L/min) desde el valor basal a la Semana 52; Cambio de FEV1 pos-broncodilatador desde el valor basal a la Semana 52; Tiempo al aumento de 150-mL en el FEV1 pre-broncodilatador durante el período controlado con placebo de 52 semanas; Cambio relativo en el FEV1 pre-broncodilatador (litros) desde el valor basal promediado durante las Semanas 4 a 52; Cambio relativo en capacidad vital forzada desde el valor basal a la Semana 52; tasa de exacerbaciones que se asocian con declinación de la función pulmonar, definida como una exacerbación resultante en PEF o FEV1 <60% del valor más alto durante el período de selección (Visitas 1-3) que requiere el tratamiento con corticoides sistémicos; Cambio de trabajo, deterioro escolar y de la actividad evaluado por el Cuestionario de productividad laboral y deterioro de actividad por asma (WPAI-Asma) desde el valor inicial a la Semana 52; Cambio de la puntuación del Cuestionario de control de asma-5 (ACQ-5) desde el valor inicial a la Semana 52; Cambio de síntomas de asma, medidos por el índice de utilidad de síntomas de asma (ASUl) desde el valor inicial a la Semana 52; Cambio de utilidades de salud, evaluado por el EQ- 5D, desde el valor inicial a la Semana 52; Cambio de la Evaluación global de la efectividad del tratamiento (GETE) desde el valor inicial a la Semana 52.
Estas mediciones de resultados exploratorios también se deben evaluar durante la extensión del tratamiento activo de 52 semanas y el período de seguimiento de 24 semanas. Las mediciones de resultados exploratorios adicionales pueden incluir la frecuencia y severidad de los eventos adversos en los pacientes expuestos a lebrikizumab durante > 52 semanas; cambio de; interleuquibna-13 (IL— 13)/ biomarcadores PD relacionados con el asma durante la extensión del tratamiento activo del período de seguimiento de 52 semanas o 24 semanas; y concentraciones séricas de lebrikizumab durante la extensión del tratamiento activo de 52 semanas o el período de seguimiento de 24 semanas. RESULTADOS INFORMADOS POR EL PACIENTE Cuestionario de calidad de vida - estandarizado (AQLQ(S)) El AQLQ(S) se usará para la calidad de vida relacionada con la salud específica del asma (Juniper 2005). El cuestionario contiene cuatro dominios que! incluyen las limitaciones de actividad, síntomas, función emocional, y estímulos! ambientales. El AQLQ(S) ha sido validado para usar en esta población de estudio.! El AQLQ(S) tiene una especificación de recuerdo de 2 semanas. El AQLQ(S) se administrará al paciente antes de las otras evaluaciones no PRO y antes de que el! paciente reciba cualquier información del estado de enfermedad o fármaco del estudio durante esta evaluación.
Trabajo, productividad, y deterioro de la actividad por el asma (WP Al-Asma) Para evaluar el deterioro en el trabajo, escuela u en las actividades, se administrará el cuestionario WPAI-Asma (Reilly et al. 1993, 1996). Los puntos del cuestionario se adaptan del cuestionario específico de WPAI-Alergia (WPAI-AS), sustituyendo todas las apariciones del término alergia con asma. El WPAI-AS se administrará al paciente antes de las otras evaluaciones no PRO y antes de que el paciente reciba cualquier información del estado de enfermedad o fármaco del estudio durante esta evaluación.
Cuestionario Euro-QOL 5D (EQ-5D) El EQ-5D es un cuestionario genérico de calidad de vida relacionado con la salud basado en preferencia que proporciona un valor de índice único para el estado de salud (The EuroQol Group 1990). El EQ-5D se diseña para el auto-completado por los pacientes. El Eq-5D se administrará al paciente antes de las otras evaluaciones no PRO y antes de que el paciente reciba cualquier información del estado de enfermedad o fármaco del estudio duranté esta evaluación. índice de utilidad de síntomas de asma (ASUi) El ASUI (Revicki 1998) es un cuestionario de síntomas específicos del asma que mide tos, sibilancia, dificultad de respirar y despertar nocturno. El ASUI se administrará al paciente antes de las otras evaluaciones no PRO y antes de que el paciente reciba cualquier información del estado de enfermedad o fármaco del estudio durante esta evaluación.
EJEMPLO 7 - Ensayo de periostina Elecsys® La detección cuantitativa de periostina se mide en un analizador Roche cobas e601 auromatizado Elecsys® (Roche Diagnostics GmbH). La prueba se realiza en el formato sandwich donde el analito periostina se intercala entre dos anticuerpos monoclonales que se une a dos epítopes diferentes de la periostina. Un anticuerpo está biotinilado y permite la captura del complejo inmune en las microesferas magnéticas recubiertas con estreptavidina. El segundo anticuerpo porta un catión de rutenio complejado como el residuo de señalización que permite una detección electroqiumioluniscente dependiente del voltaje detección del complejo inmune unido.
En detalle, se usaron los siguientes reactivos: - Microesferas (M): Micropartículas magnéticas recubiertas con estreptavidina 0,72 mg/mL; conservante.
-Reactivo 1 (R1 ): Anti-periostina-anticuerpo-biotina: Este anticuerpo monoclonal de ratón purificado corresponde al anticuerpo 25D4 recubierto de acuerdo con el ejemplo 4 y se usa en forma biotinilada >1 ,0 mg/L; buffer TRIS >100 mmol/L, pH 7,0; conservante.
-Reactivo 2 (R2): Anti-periostina-anticuerpo~Ru(bpy) : Este anticuerpo monoclonal de ratón purificado antiperiostiná corresponde al anticuerpo de detección 23B9 de acuerdo con el ejemplo 4 y se usa en forma marcada (marcado con un complejo (Tris(2,2'-bipiridil)rutenio(ll)-complejo (Ru(bpy))) >1 ,0 mg/L; buffer TRIS >100 mmol/L, pH 7,0; conservante.
El ¡nmunoensayo se realiza usando dos incubaciones. En la primera incubación de aproximadamente 9 minutos, la periostina en 20 pL de muestra y el anticuerpo monoclonal antiperiostina (R1) biotinilado forman un complejo. En la segunda etapa de incubación durante 9 minutos adicionales, el anticuerpo monoclonal antiperiostina (R2) rutenilado y micropartículas recubiertas con estreptavidina (M) se añaden al vial de la primera incubación de modo que se forma un complejo sándwich de 3 miembros y se une a la fase sólida (micropartículas) por medio de la interacción de biotina y estreptavidina.
La mezcla de reacción se aspira en la celda de medición donde las micropartículas se capturan magnéticamente en la superficie un electrodo de platino. Las sustancias no unidas se lavan y la celda se limpia con ProCell, un reactivo que contiene tripropilamina. La aplicación de un voltaje al electrodo luego induce una emisión quimioluminiscente que se mide con un fotomultiplicador.
Los resultados se determinan por medio de una curva de calibración específica del instrumento que se genera con una calibración de 2 puntos y una curva maestra provista por medio del código de barras del reactivo. El calibrador 1 está libre de analito, mientras que el calibrador 2 contiene 50 ng/mL de periostina humana recombinante en una matriz regulada. Para verificar la calibración, sé emplean dos controles con aproximadamente 30 y 80 ng/mL de periostina.
EJEMPLO 8 - Comparación del ensayo de periostina E4 y el ensayo de Elecsys® Los niveles de periostina se midieron en las muestras de suero del paciente de los ensayos clínicos descriptos en cada Ejemplo 2 y Ejemplo 3 usando métodos similares al ensayo de periostina E4 (Ejemplo 4) y el ensayo Elecsys® (Ejemplo 7). Los resultados de las muestras de ambos ensayos mostraron que los valores de la periostina se superpusieron. La variabilidad y dispersión fue comparable en todos los ensayos. En general, en la media, los resultados del ensayo Elecsys® fueron típicamente = o > 2 veces más altos que los resultados del ensayo E4. Ver la Figura 17, es decir, la media fue 50-51 ng/ml para el ensayo de periostina Elecsys® y la media fue 23 ng/ml para el ensayo E4.
Si bien la invención precedente se a descripto con detalle a modo de ilustración y ejemplo para los fines de claridad de comprensión, las descripciones y ejemplos no se deben interpretar como limitación del alcance de la invención. Las descripciones de todas patentes y bibliografía científica citada en la presente están expresamente incorporadas en su totalidad por referencia.
LISTADO DE SECUENCIAS CLAVE SEQ Secuencia ID NO: QVHLQQSGAELAKPGASVHMSCKASGYTFTTYWMHWVKQRPGQG LEWIGYINPNTGYADYNQKFRDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDS TVYFCARRRTGTSYFDYWGQGTTLTVSSTKTTPPSV QTVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVTYMHWYQQKPGSSPKP WIFATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWT SNPLTFGAGTK QVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYSFTHYWMQWVKQRPGQG LEWIGAIYPGDGDTRYTQRLKGKATLTADKSSSTAYMELSSLASEDS AVYYCAREGEGNSAMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSV DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGSSVAWFQQKPGQSP KTLIYSASYRDSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSEDLTDYFCLQY GTYPYTFGGGTR MIPFLPMFSL LLLLIVNPIN ANNHYDKILA HSRIRGRDQG PNVCALQQIL GTKKKYFSTCKNWYKKSICG QKTTVLYECC PGYMRMEGMK GCPAVLPIDH VYGTLGIVGA TTTQRYSDAS KLREEIEGKG SFTYFAPSNE AWDNLDSDIR RGLESNVNVE LLNALHSHMI NKRMLTKDLK NGMIIPSMYN NLGLFINHYP NGWTVNCAR IIHGNQIATN GWHVIDRVL TQIGTSIQDF KLPRGVLERI MGDKVASEALMKYHILNTLQ CSESIMGGAV FETLEGNTIE IGCDGDSITV NGIKMVNKKD IVTNNGVIHLIDQVLIPDSA KQVIELAGKQ QTTFTDLVAQ LGLASALRPD GEYTLLAPVN NAFSDDTLSMDQRLLKLILQ NHILKVKVGL NELYNGQILE TIGGKQLRVF VYRTAVCIEN SCMEKGSKQGRNGAIHIFRE IIKPAEKSLH EKLKQDKRFS TFLSLLEAAD LKELLTQPGD WTLFVPTNDAFKGMTSEEKE ILIRDKNALQ NIILYHLTPG VFIGKGFEPG VTNILKTTQG SKIFLKEVNDTLLVNELKSK ESDIMTTNGV IHWDKLLYP ADTPVGNDQL LEILNKLIKY IQIKFVRGSTFKEIPVTVYK PIIKKYTKII DGVPVEITEK ETREERIITG PEIKYTRIST GGGETEETLK KLLQEEVTKV TKFIEGGDGH LFEDEEIKRL LQGDTPVRKL QANKKVQGSR RRLREGRSQ MIPFLPMFSL LLLLIVNPIN ANNHYDKILA HSRIRGRDQG PNVCALQQIL GTKKKYFSTCKNW YKKS I CG QKTTVLYECC PGYMRMEGMK GCPAVLPIDH VYGTLGIVGA TTTQRYSDAS KLREEIEGKG SFTYFAPSNE AWDNLDSDIR RGLESNVNVE LLNALHSHMI NKRMLTKDLKNGMIIPSMYN NLGLFINHYP NGWTVNCAR IIHGNQIATN GWHVIDRVL TQIGTSIQDF IEAEDDLSSF RAAAITSDIL EALGRDGHFT LFAPTNEAFE KLPRGVLERI MGDKVASEALMKYHILNTLQ CSESIMGGAV FETLEGNTIE IGCDGDSITV NGIKMVNKKD

Claims (120)

REIVINDICACIONES Habiendo así especialmente descrito y determinado la naturaleza de la presente invención y la forma como la misma ha de ser llevada a la práctica, se declara reivindicar como de propiedad y derecho exclusivo:
1. Un método de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que probablemente sea receptivo al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2 que comprende determinar si el paciente es positivo para la inflamación eosinofílica (EIP) por medio de un ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica (EIDA), donde el estado EIP indica que el paciente probablemente sea receptivo al tratamiento con el inhibidor de la vía de TH2.
2. Un método de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que probablemente sufre de exacerbaciones severas que comprende determinar si el paciente es positivo para la inflamación eosinofílica (EIP) mediante un ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica (EIDA), donde el estado EIP indica que el paciente es probable que sufra de un aumento de las exacerbaciones severas.
3. Un método de identificar un paciente con asma o un paciente con trastorno respiratorio que es menos probable que sea receptivo al tratamiento con un inhibidor de la vía de TH2 que comprende determinar si el paciente es Negativo para la inflamación eosinofílica (EIN) mediante un ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica (EIDA), donde el estado EIN indica que el paciente es menos probable que sea receptivo al tratamiento con el inhibidor de la vía de TH2.
4. Un método de controlar un paciente con asma que se trata con un inhibidor de la vía TH2, que comprende determinar si el paciente es positivo para la inflamación eosinofílica (EIP) o negativo para la inflamación eosinofílica (EIN) mediante un ensayo diagnóstico de inflamación eosinofílica (El DA).
5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, que además comprende determinar un régimen de tratamiento para el inhibidor de la vía de TH2.
6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, donde la determinación de EIP indica continuar la terapia con el inhibidor de la vía de TH2 y la determinación de EIN indica discontinuar la terapia con el inhibidor de la vía de TH2.
7. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, donde el EIDA comprende las etapas de: a) determinar la cantidad de periostina total en una muestra obtenida de un paciente con asma; b) comparar la cantidad de la periostina total determinado en la etapa a) a una cantidad de referencia; y c) clasificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor sobre la base de la comparación obtenida en la etapa b).
8. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la periostina total es; periostina sérica, tal periostina se medición mediante un inmunoensayo.
9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, donde el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich.
10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, donde el inmunoensayo; sándwich es un ensayo E4 o se realiza en un analizador Elecsys®.
11. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la cantidad de referencia para EIP es 23 ng/ml o mayor cuando se usa un ensayo E4 en la etapa (a).
12. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la cantidad de referencia para EIP es 50 ng/ml o mayor cuando se usa un analizador Elecsys® en la etapa (a).
13. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la cantidad de referencia para EIN es 21 ng/ml o menor cuando se usa un ensayo E4 en la etapa (a).
14. El método de acuerdo con la reivindicación 7, donde la cantidad de referencia para EIN es 48 ng/ml o menor cuando se usa un analizador Elecsys® en la etapa (a).
15. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el paciente está padeciendo de asma moderada a severa.
16. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el asma o trastorno respiratorio es no está controlado con un corticoide.
17. El método de acuerdo con la reivindicación 16, donde el corticoide es un corticoide inhalatorio.
18. El método de acuerdo con la reivindicación 17, donde el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®.
19. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el paciente también se trata con un segundo controlados
20. El método de acuerdo con la reivindicación 19, donde el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD).
21 . El método de acuerdo con la reivindicación 20, donde LABD es un agonista beta-2 de acción prolongada (LABA), antagonista del receptor de leucotrieno (LTRA), antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA), teofilina, o corticoides orales (OCS).
22. El método de acuerdo con la reivindicación 20, donde el LABD es Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, Perforomist™ o Serevent®.
23. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde el inhibidor de la vía de TH2 inhibe el blanco de ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL— 4 (pór ejemplo, AER-001 , trampa IL4/IL13), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (pór ejemplo, XOLAIR®, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como: receptor IL-9, receptor IL— 5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 104451 1-01-4), receptor alfa de IL— 4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-1|3 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralfa (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRI I/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK21909 5), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935), o es un inhibidor de multi-citoquina de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8).
24. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde el inhibidor de la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE.
25. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti— IL— 13.
26. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO: 10, un anticuerpo anti— IL— 13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, donde las HVR respectivas tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 o lebrikizumab.
27. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo biespecífico que también se une a IL— 4.
28. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, donde el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-lgE.
29. El método de acuerdo con la reivindicación 28, donde el anticuerpo anti-lgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 es los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]- (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25 [SQNTLVPWT].
30. Uso de un kit para detectar la periostina total en una muestra biológica obtenida de un paciente con asma para estratificar/clasificar los pacientes con asma en probables respondedores y no respondedores para el tratamiento terapéutico con un inhibidor de la vía de TH2.
31. El uso de acuerdo con la reivindicación 30, donde la periostina total se detecta usando un EIDA, tal EIDA compren de las etapas de: a) determinar la cantidad de periostina total en una muestra obtenida de un paciente con asma b) comparar la cantidad de la periostina total determinada en la etapa a) en una cantidad de referencia. c) estratificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor basado en la comparación obtenida en la etapa b).
32. El uso de acuerdo con la reivindicación 30 o reivindicación 31 , donde la periostina total es periostina sérica, tal periostina es una que se medición por medio de un inmunoensayo.
33. El uso de acuerdo con la reivindicación 32, donde el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich.
34. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, donde el inmunoensayo sándwich se realiza con un analizador Elecsys®.
35. El uso de acuerdo con la reivindicación 31 , donde la cantidad de referencia para un respondedor es 23 ng/ml o mayor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa a.
36. El uso de acuerdo con la reivindicación 31 , donde la cantidad de referencia para un respondedor es 50 ng/ml o mayor cuando se usa el ensayo de periostina de Elecsys® en la etapa a.
37 El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30-36, donde el paciente está padeciendo de asma moderada a severa.
38. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30-36, donde el asma o trastorno respiratorio no está controlada con un corticoide.
39. El método de acuerdo con la reivindicación 38, donde el corticoide es un corticoide inhalatorio
40. El método de acuerdo con la reivindicación 39, donde el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®.
41 . El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30-39, donde el paciente también se trata con un segundo controlador.
42. El uso de acuerdo con la reivindicación 41 , donde el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD).
43. El uso de acuerdo con la reivindicación 42, donde el LABD es un LABA, LTRA, LAMA, teofilina, o OCS.
44. El uso de acuerdo con la reivindicación 43, donde el LABD es Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, PerforomistTM o Serevent®.
45. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 30-43, donde el inhibidor de la vía de TH2 inhibe el blanco ITK, BTK , IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN N.° 910649^ 32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CATr-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-001 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL— 4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (por ejemplo, XOLAIR, QGE-031 ; MEDI-4212); y receptores tales como: receptor de IL— 9, receptor de IL— 5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 104451 1-01-4), receptor alfa de IL— 4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-13 (por ejemplo, R-1671 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralfa (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, AMG-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRII/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935) o es un inhibidor de multi-citoquina de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8).
46. El uso de acuerdo con la reivindicación 30-43, donde la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE.
47. El uso de acuerdo con la reivindicación 30-43, anti- anticuerpo anti— IL— 13.
48. El uso de acuerdo con la reivindicación 47, donde el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10, un anticuerpo anti— IL— 13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, donde las HVR respectivas tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 1 1 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 o lebrikizumab.
49. El uso de acuerdo con la reivindicación 47, donde el anticuerpo anti— IL— 13 es un anticuerpo biespecífico que también se une a IL— 4.
50. El uso de acuerdo con la reivindicación 30-43, donde el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-lgE.
51 . El uso de acuerdo con la reivindicación 50, donde el anticuerpo anti-lgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1 ' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1 ' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR- L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 de la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25. [SQNTLVPWTJ.
52. Un kit para medir la periostina total en una muestra biológica obtenida de un paciente con asma o un paciente que sufre de un trastorno respiratorio, donde el kit comprende (1 ) una primera molécula de ácido nucleico que se híbrida con una segunda molécula de ácido nucleico, donde la segunda molécula de ácido nucleico codifica la periostina total o una porción de esta, o (2) el kit comprende un anticuerpo que se une a la periostina total.
53. El kit de acuerdo con la reivindicación 52, que comprende un prospecto que contiene información que describe los usos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 30-51.
54. Un kit para diagnosticar un subtipo de sama en un paciente que comprende: (1 ) determinar los niveles de periostina total en una muestra de suero obtenida del paciente y opcionalmente los niveles de expresión de proteína en la muestra de suero para una o más proteínas seleccionadas de TARC y MCP-4; y (2) instrucciones para medir los niveles de expresión de la periostina total y opcionalmente una o más proteínas seleccionadas de TARC y MCP-4 en ' la muestra de suero, donde los niveles de expresión elevados de alguna, combinación o todas las proteínas son indicativos del subtipo de asma.
55. El kit de acuerdo con la reivindicación 54, donde el kit además comprende un prospecto para determinar si un paciente con asma o paciente con trastorno respiratorio es EIP o EIN.
56. El kit de acuerdo con la reivindicación 55, donde el kit además comprende un prospecto para determinar si un paciente con asma es probable que responda a un inhibidor de la vía de TH2.
57. El kit de acuerdo con la reivindicación 55, donde el kit además comprende un prospecto que contiene información que describe los usos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 30-51 .
58. El kit de acuerdo con las reivindicaciones 52-56, que además comprende un recipiente vacío para contener una muestra biológica.
59. El kit de acuerdo con las reivindicaciones 52-56, donde el kit comprende dos anticuerpos antiperiostina para usar en un inmunoensayo para determinar los niveles de periostina total.
60. Un método de tratar un asma o un trastorno respiratorio que comprende administrar un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, donde las HVR respectivas tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 1 1 , SEQ ID N.°: 12, SEQ ID N.°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 a un paciente que padece de asma o un trastorno respiratorio en una dosis fija de 125-500 mg cada 2-8 semanas.
61. El método de acuerdo con la reivindicación 60, donde el paciente está padeciendo de asma moderada a severa.
62. El método de acuerdo con la reivindicación 60 ó 61 , donde el asma o trastorno respiratorio está no controlado con un corticoide.
63. El método de acuerdo con la reivindicación 62, donde el asma o trastorno respiratorio está no controlado con un corticoide inhalatorio.
64. El método de acuerdo con la reivindicación 62, donde el asma o trastorno respiratorio está no controlado con una dosis diaria total de al menos 500 mcg de propionato de fluticasona (FP).
65. El método de acuerdo con la reivindicación 63, donde el corticoide es un corticoide inhalatorio que es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair®, Azmacort®.
66. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-65, donde el paciente is being treated con a segundo controlador.
67. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-66, donde el paciente se continúa tratando con un corticoide, opcionalmente un corticoide inhalatorio, durante el tratamiento con el anticuerpo anti-IL-13.
68. El método de acuerdo con la reivindicación 67, donde el paciente se continúa tratando con un segundo controlador durante el tratamiento con el anticuerpo anti-IL-13.
69. El método de acuerdo con la reivindicación 66 o reivindicación 68, donde el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada.
70. El método de acuerdo con la reivindicación 69, donde el dilatador bronquial de acción prolongada es un LABA, LTRA, LAMA, teofilina, o OCS.
71. El método de acuerdo con la reivindicación 70, donde se ha determinado que el paciente es EIP.
72. El método de acuerdo con la reivindicación 70, donde se ha determinado que el paciente es EIP mediante el kit de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 50-59.
73. El método de acuerdo con la reivindicación 70, donde se ha determinado que el paciente es EIP mediante el método de cualquiera de las reivindicaciones 7-12.
74. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-73, donde el paciente se administra en una dosis fija de 125 mg o 250 mg cada cuatro semanas.
75. El método de acuerdo con la reivindicación 74, donde el paciente tiene 18 años o más.
76. El método de acuerdo con la reivindicación 74, donde el paciente tiene 12-17 años o 12 años y más.
77. El método de acuerdo con la reivindicación 74, donde el paciente es 6-11 años o 6 años y más.
78. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-77, donde el anticuerpo anti-IL-13 se administra por vía subcutánea.
79. El método de acuerdo con la reivindicación 78, donde el anticuerpo anti-IL-13 se administra mediante una jeringa precargada o dispositivo autoinyector.
80. El método de acuerdo con la reivindicación 60, donde el paciente con asma tratado es 18 años o más y tiene periostina sérica at= 50 ng/mL y está no controlado con un corticoide inhalatorio y una medicación de segundo controlador.
81 . El método de acuerdo con la reivindicación 78, donde la periostina sérica se medición usando el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-10 y 12.
82. El método de acuerdo con la reivindicación 78, donde la periostina sérica se medición usando el kit de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 52-59.
83. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-82, donde el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y a VL que comprende la SEQ ID NO:10.
84. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 60-82, donde el anticuerpo anti-IL-13 es lebrikizumab.
85. El método de acuerdo con la reivindicación 76, donde el paciente con asma tiene 12 años y superior y no controlado con un corticoide inhalatorio y una medicación de segundo controlador.
86. Un método de tratar asma o una enfermedad respiratoria que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de lebrikizumab al paciente, donde el tratamiento produce una mejora relativa de FEV1 de mayor de 5% en comparación con antes del tratamiento con lebrikizumab.
87. El método de acuerdo con la reivindicación 86, donde la mejora relativa del FEV1 es mayor de 8% en comparación con antes del tratamiento con lebrikizumab.
88. Un método de tratar asma o una enfermedad respiratoria que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de lebrikizumab al paciente, donde el tratamiento produce una reducción en las exacerbaciones severas.
89. Un método de tratar de un paciente que padece de asma o una enfermedad respiratoria que comprende administrar un inhibidor de la vía de TH2 al paciente diagnosticado como EIP.
90. El método de acuerdo con la reivindicación 89 que además comprende la etapa de diagnosticar el paciente como EIP usando un ensayo de periostina total.
91. El método de acuerdo con la reivindicación 89 o reivindicación 90, que además comprende la etapa de retratar el paciente con el inhibidor de la vía de TH2 si el paciente se determina con EIP.
92. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 89-91 , donde el suero del paciente se usa para determinar si el paciente es EIP.
93. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 89-91 , donde el estado EIP se diagnostica mediante un EIDA en que el ensayo comprende las etapas de: a) determinar la cantidad de la periostina total en una muestra obtenida del paciente; b) comparar la cantidad de periostina total determinada en la etapa a) a una cantidad de referencia; y c) estratificar dicho paciente en la categoría de respondedor o no respondedor basado en la comparación obtenida en la etapa (b).
94. El método de acuerdo con la reivindicación 93, donde la periostina total es periostina sérica, la periostina es una medida usando un inmunoensayo.
95. El método de acuerdo con la reivindicación 94, donde el inmunoensayo es un inmunoensayo sándwich.
96. El método de acuerdo con la reivindicación 95, donde el inmunoensayo sándwich se realiza con un analizador Elecsys®.
97. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 93-96, donde la cantidad de referencia es 23 ng/ml o mayor cuando se usa el ensayo E4 en la etapa (a).
98. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 93-96, donde la cantidad de referencia es 50 ng/ml o mayor cuando se usa el ensayo de periostina de Elecsys® en la etapa a.
99. El método de acuerdo con las reivindicaciones 89-98, donde el paciente está padeciendo de asma moderada a severa.
100. El método de acuerdo con las reivindicaciones 89-99, donde el asma o trastorno respiratorio está controlado en un corticoide.
101. El método de acuerdo con la reivindicación 100, donde el corticoide es un corticoide inhalatorio.
102. El método de acuerdo con la reivindicación 101 , donde el corticoide inhalatorio es Qvar®, Pulmicort®, Symbicort®, Aerobid®, Flovent®, Flonase®, Advair® o Azmacort®.
103. El método de acuerdo con las reivindicaciones 89-101 , donde el paciente también se trata con un segundo controlador.
104. El método de acuerdo con la reivindicación 103, donde el segundo controlador es un dilatador bronquial de acción prolongada (LABD).
105. El método de acuerdo con la reivindicación 104, donde el LABD es un LABA, LTRA, LAMA, teofilina, o OCS.
106. El método de acuerdo con la reivindicación 104, donde el LABD és Symbicort®, Advair®, Brovana®, Foradil®, PerforomistTM o Serevent®.
107. El método de acuerdo con la reivindicación 88-101 , donde el inhibidor de la vía de TH2 inhibe el blanco ITK, BTK, IL-9 (por ejemplo, MEDI-528), IL-5 (por ejemplo, Mepolizumab, CAS N.° 196078-29-2; resilizumab), IL-13 (por ejemplo, IMA-026, IMA-638 (también mencionado como, anrukinzumab, INN Ñ.° 910649-32-0; QAX-576; IL4/IL13 trap), tralokinumab (también mencionado como CAT-354, CAS N.° 1044515-88-9); AER-00 , ABT-308 (también mencionado como anticuerpo 13C5.5 humanizado), IL— 4 (por ejemplo, AER-001 , IL4/IL13 trap), OX40L, TSLP, IL-25, IL-33 y IgE (por ejemplo, XOLAIR, QGE-031 ; MEDj-4212); y receptores tales como: receptor de IL-9, receptor de IL-5 (por ejemplo, MEDI-563 (benralizumab, CAS N.° 1044511-01-4), receptor alfa de IL-4 (por ejemplo, AMG-317, AIR-645), receptor alfa de IL-13 (por ejemplo, R-167 ) y receptor alfa2 de IL-13, OX40, TSLP-R, IL-7Ralpha (un correceptor para TSLP), IL17RB (receptor para IL-25), ST2 (receptor para IL-33), CCR3, CCR4, CRTH2 (por ejemplo, A G-853, AP768, AP-761 , MLN6095, ACT129968), FcepsilonRI, FcepsilonRI I/CD23 (receptores para IgE), Flap (por ejemplo, GSK2190915), Syk quinasa (R-343, PF3526299); CCR4 (AMG-761 ), TLR9 (QAX-935) o es un inhibidor de multi-citoquina de CCR3, IL5, IL3, GM-CSF (por ejemplo, TPI ASM8).
108. El método de acuerdo con la reivindicación 88-106, donde la vía de TH2 es un inhibidor de la vía de anti— IL13/IL4 o un agente de unión de anti IgE.
109. El método de acuerdo con la reivindicación 108, donde el inhibidor de la vía anti— IL— 13/IL4 es un anticuerpo anti-IL-13.
110. El método de acuerdo con la reivindicación 109, donde el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo que comprende una VH que comprende la SEQ ID NO:9 y VL que comprende la SEQ ID NO:10, un anticuerpo anti-IL-13 que comprende HVRH1 , HVRH2, HVRH3, HVRL1 , HVRL2, y HVRL3, donde las HVR respectivas tienen la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID N.°: 11 , SEQ l;D N.°: 12, SEQ ID N:°: 13, SEQ ID N.°: 14, SEQ ID N.°: 15, y SEQ ID N.°: 16 io lebrikizumab.
111. El método de acuerdo con la reivindicación 109, donde el anticuerpo anti-IL-13 es un anticuerpo biespecífico que también une IL— 4.
112. El método de acuerdo con la reivindicación 108, donde el inhibidor de la vía de TH2 es un anticuerpo anti-lgE. 1
113. El método de acuerdo con la reivindicación 112, donde el anticuerpo anti-lgE es (i) el anticuerpo XOLAIR®, (ii) anticuerpo anti-M1' que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable es la SEQ ID NO:24 y la cadena liviana variable es la SEQ ID NO:25 o (iii) un anticuerpo anti-M1', que comprende una cadena pesada variable y una cadena liviana variable, donde la cadena pesada variable además comprende una HVR-H1 , HVR-H2 y HVR-H3, y la cadena liviana variable además comprende y HVR-L1 , HVR, L2 y HVR-L3 y: (a) la HVR-H1 tiene los residuos 26-35 de la SEQ ID NO:24, [GFTFSDYGIA]; (b) la HVR-H2 tiene los residuos 49-66 de la SEQ ,ID NO:24, [AFISDLAYTIYYADTVTG]; (c) la HVR-H3 tiene los residuos 97-106 dé la SEQ ID NO:24, [ARDNWDAMDY]; (d) la HVR-L1 tiene los residuos 24-39 de la SEQ ID NO:25, [RSSQSLVHNNANTYLH]; (e) la HVR-L2 tiene los residuos 55-61 de la SEQ ID NO:25, [KVSNRFS]; (f) la HVR-L3 tiene los residuos 94-102 de la SEQ ID NO:25 [SQNTLVPWTJ.
114. Un método para evaluar eventos adversos en un paciente asociado con tratamiento de asma con lebrikizumab que comprende las etapas de controlar el número y/o gravedad de eventos que son exacerbaciones, neumonía adquirida en la comunidad, anafilaxis, dolores musculoesqueléticos, trastornos musculoesqueléticos, dolores del tejido conectivo o trastornos del tejido conectivo,
115. El método de acuerdo con la reivindicación 114, donde el trastorno musculoesquelético o tejido conectivo es artralgia, dolor lumbar, dolor en extremidades, mialgia, dolor de cuello, artritis, anormalidades del desarrollo óseó, bursitis, costocondritis, exostosis, dolor lateral, dolor torácico musculoesqueletico, dolor musculoesqueletico, dolor en quijada o tendinitis.
1 16. Un anticuerpo antiperiostina que comprende las secuencias HVR de la SEQ ID NO:1 y las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:2.
1 17. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 16, donde el anticuerpo comprende las secuencias de la SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2.
1 18. Un anticuerpo antiperiostina que comprende las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:3 y las secuencias de HVR de la SEQ ID NO:4.
1 19. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 18, donde el anticuerpo comprende las secuencias de la SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4.
120. Un ensayo de periostina total que comprende el uso de los anticuerpos de las reivindicaciones 1 16 y 1 18.
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