PL217086B1 - Sposób modyfikowania komórek eukariotycznych, sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny , genetycznie zmodyfikowany hybrydowy locus genu immunoglobuliny, hybrydowy immunoglobulinowy locus, genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna, mysz, sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała, sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej endogenicznego locus oraz sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny - Google Patents

Sposób modyfikowania komórek eukariotycznych, sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny , genetycznie zmodyfikowany hybrydowy locus genu immunoglobuliny, hybrydowy immunoglobulinowy locus, genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna, mysz, sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała, sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej endogenicznego locus oraz sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny

Info

Publication number
PL217086B1
PL217086B1 PL364281A PL36428102A PL217086B1 PL 217086 B1 PL217086 B1 PL 217086B1 PL 364281 A PL364281 A PL 364281A PL 36428102 A PL36428102 A PL 36428102A PL 217086 B1 PL217086 B1 PL 217086B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
locus
gene
ltvec
site
gene locus
Prior art date
Application number
PL364281A
Other languages
English (en)
Other versions
PL364281A1 (pl
Inventor
Andrew J. Murphy
George D. Yancopoulos
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=25133744&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL217086(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
Publication of PL364281A1 publication Critical patent/PL364281A1/pl
Publication of PL217086B1 publication Critical patent/PL217086B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
    • C07K16/462—Igs containing a variable region (Fv) from one specie and a constant region (Fc) from another
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/15—Humanized animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/20—Pseudochromosomes, minichrosomosomes
    • C12N2800/204—Pseudochromosomes, minichrosomosomes of bacterial origin, e.g. BAC

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy sposobu modyfikowania komórek eukariotycznych, sposobu modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, genetycznie zmodyfikowanego hybrydowego locus genu immunoglobuliny, hybrydowego immunoglobulinowego locus, genetycznie zmodyfikowanej komórki eukariotycznej, myszy, sposobu wytwarzania ludzkiego przeciwciała, sposobu tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej endogenicznego locus oraz sposobu modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny.
Dziedziną tego wynalazku jest sposób konstruowania i wykorzystywania wielkich wektorów DNA do integracji, poprzez rekombinację homologiczną, i modyfikację, w jakikolwiek pożądany sposób, genów endogenicznych i Ioci chromosomowych w komórkach eukariotycznych. Te wielkie kierunkowe wektory DNA dla komórek eukariotycznych, zwane LTVEC, są otrzymywane z fragmentów klonowanego genomowego DNA, większego niż te zwykle stosowane w innych podejściach przeznaczonych do przeprowadzania integracji homologicznej w komórkach eukariotycznych. Dziedzina wynalazku podaje dodatkowo szybki i wygodny sposób wykrywania komórek eukariotycznych, w których LTVEC prawidłowo zintegrował i zmodyfikował pożądany gen (geny) endogeniczny albo locus (loci) chromosomowy. Dziedzina ta obejmuje także zastosowanie tych komórek do tworzenia organizmów niosących modyfikację genetyczną, organizmów, ich samych, oraz sposobów ich zastosowania.
Zastosowanie LTVEC zapewnia zasadnicze korzyści w stosunku do metod aktualnych. Przykładowo, ponieważ otrzymywane są one z fragmentów DNA większych niż te stosowane aktualnie do tworzenia wektorów kierunkowych, LTVEC można wytwarzać szybciej i wygodniej z dostępnych bibliotek fragmentów genomowego DNA (takich jak biblioteki BAC i PAC) niż wektory kierunkowe wykonane przy użyciu aktualnych technologii. Poza tym większe modyfikacje, jak również modyfikacje rozciągające się na większe regiony genomowe, można tworzyć łatwiej niż przy użyciu aktualnych technologii. Ponadto, niniejszy wynalazek wykorzystuje długie regiony homologii do zwiększania częstotliwości integracji z Ioci trudnymi do wycelowania, a także zmniejsza korzyść, jeśli w ogóle, stosowania izogenicznego DNA w tych wektorach kierunkowych.
Niniejszy wynalazek podaje więc szybki, wygodny i naturalny w przebiegu sposób systematycznego modyfikowania rzeczywiście wszystkich endogenicznych genów i Ioci chromosomowych danego organizmu.
Integracja genów za pomocą rekombinacji homologicznej między homologicznym, egzogenicznym DNA i endogenicznymi sekwencjami chromosomowymi okazały się niezwykle wartościowym sposobem tworzenia delecji, insercji, planowych mutacji, mutacji prawidłowego genu, wprowadzania transgenów albo wykonywania innych modyfikacji genetycznych u myszy. Aktualne metody obejmują stosowanie standardowych wektorów kierunkowych, z regionami homologii w stosunku do endogenicznego DNA zwykle obejmujących całościowo mniej niż 10-20 kb, do wprowadzenia żądanej modyfikacji do mysich, zarodkowych komórek macierzystych (ES), po czym wstrzyknięcia zmienionych komórek ES do mysich zarodków w celu przeniesienia skonstruowanych modyfikacji genetycznych do mysiej linii zarodkowej (Smithies i inni, Nature, 317:230-234, 1985; Thomas i inni, Cell, 51:503-512; Koller i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 86:8927-8931, 1989, 1990; Schwartzenberg i inni, Science, 246:799-803, 1989; Doetschman i inni, Nature, 330:576-578, 1987; Thomson i inni, Cell, 5:313-321, 1989; DeChiara i inni, Nature, 345:78-80, 1990; opis patentowy nr US 5 789 215, złożony 4 sierpnia 1998 w imieniu GenPharm International). W tych aktualnych metodach, wykrywanie rzadkich komórek ES, w których standardowe wektory kierunkowe prawidłowo zintegrowały i zmodyfikowały żądany gen(geny) endogeniczny albo locus (loci) chromosomowy, wymaga informacji o sekwencji poza homologicznymi sekwencjami kierunkowymi zawartymi w wektorze kierunkowym. Testy do zadowalającego wycelowywania obejmują standardowy Southern blotting albo długą PCR (Cheng i inni, Nature, 369:684-5, 1994; Foord i Rose, PCR Methods Appl. 3:S149-61, 1994; Ponce i Micol, Nucleid Acids Res, 20:623, 1992; opis patentowy nr US 5 436 149 wydany Takara Shuzo Co, Ltd.) z sekwencji poza wektorem kierunkowym i rozciągającym się na całe ramię homologii (patrz definicje); tak więc, w zwią zku z rozmiarem, który ogranicza te metody, wielkość ramienia homologii jest ograniczona do poniżej 10-20 kb całkowitej wielkości (Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999).
Możliwość wykorzystywania wektorów kierunkowych z ramionami homologii większymi niż te stosowane w aktualnych metodach, byłaby niezwykle wartościowa. Przykładowo, takie wektory kierunkowe można by szybciej i wygodniej wytwarzać z dostępnych bibliotek zawierających wielkie inserty genomowe (np. biblioteki BAC lub PAC), niż wektory kierunkowe wykonane przy użyciu aktualnych
PL 217 086 B1 technologii, w których takie inserty genomowe muszą być szeroko scharakteryzowane i uporządkowane przed użyciem. Poza tym, wielkie modyfikacje, jak również modyfikacje rozciągające się na większe regiony genomowe mogłyby być wygodniej wytwarzane i w mniejszej ilości etapów niż przy użyciu aktualnych technologii. Ponadto, stosowanie długich regionów homologi mogłoby zwiększyć częstotliwość integrowania z loci trudne do integracji w komórkach eukariotycznych, ponieważ ukierunkowanie rekombinacji homologicznej w komórkach eukariotycznych okazuje się być związane z cał kowitą homologią zawartą w wektorze kierunkowym (Deng i Capecchi, Mol Cell Biol, 12:3365-71, 1992). Oprócz tego, większa częstotliwość integracji uzyskana przy użyciu długich ramion homologii, mogłaby zmniejszyć każdą potencjalną korzyść, którą można by otrzymać przy użyciu izogenicznego DNA w tych wektorach kierunkowych.
Problem konstruowania precyzyjnych modyfikacji w bardzo dużych fragmentach genomu, takich jak te klonowane w bibliotekach BAC, w większości rozwiązano poprzez stosowanie homologicznych rekombinacji w bakteriach (Zhang i inni, Nat Genet, 20:123-8, 1998; Yang i inni, Nat Biotechnol, 15:859-65, 1997; Angrand, i inni, Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Muyrers i inni, Nucleic Acids Res, 27:1555-7, 1999; Narayanan i inni, Gene Ther, 6:422-7, 1999), pozwalające na konstruowanie wektorów zawierających wielkie regiony homologii w stosunku do eukariotycznych genów endogenicznych lub Ioci chromosomowych. Jednak, raz wykonane wektory nie były generalnie użyteczne do modyfikowania genów endogenicznych lub Ioci chromosomowych poprzez rekombinację homologiczną, z powodu trudności w wykrywaniu rzadkich zdarzeń integracji, gdy ramiona homologii są większe niż 10-20 kb (Joyner, The Practical Approach Series, 291, 1999). W konsekwencji, wektory wytworzone przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej z fragmentów genomowych BAC muszą być wciąż szeroko uporządkowywane przed użyciem jako wektory kierunkowe (Hill i inni, Genomics, 64:111-3, 2000). Zatem, wciąż istnieje potrzeba szybkiej i wygodnej metodologii, która umożliwia stosowanie wektorów kierunkowych zawierających wielkie regiony homologii tak, aby modyfikować geny endogeniczne lub Ioci chromosomowe w komórkach eukariotycznych.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem, Zgłaszający podaje nowe sposoby, które umożliwiają stosowanie wektorów kierunkowych zawierających wielkie regiony homologii tak, aby modyfikować geny endogeniczne lub Ioci chromosomowe w komórkach eukariotycznych poprzez rekombinację homologiczną. Takie sposoby omijają wyżej opisane ograniczenia aktualnych technologii. Poza tym, specjalista łatwo pozna, że sposoby według wynalazku są łatwo dostosowywane do wykorzystania z każdym genomowym DNA każdego organizmu eukariotycznego łącznie, lecz bez ograniczenia, ze zwierzętami, takimi jak mysz, szczur, inny gryzoń albo człowiek, jak również rośliny, takie jak soja, kukurydza i pszenica.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem, Zgłaszający opracował nowy, szybki, naturalny w przebiegu i skuteczny sposób tworzenia i przesiewu komórek eukariotycznych, które zawierają zmodyfikowane geny endogeniczne albo Ioci chromosomowe. Ten nowy sposób łączy po raz pierwszy:
1. Bakteryjną rekombinację homologiczną do dokładnego konstruowania żądanej modyfikacji genetycznej w wielkim, klonowanym fragmencie genomowym, tworząc przez to wielkie wektory kierunkowe do wykorzystania w komórkach eukariotycznych (LTVC);
2. Bezpośrednie wprowadzanie tych LTVC do komórek eukariotycznych w celu zmodyfikowania danego endogenicznego locus chromosomowego w tych komórkach; oraz
3. Analizę w celu określenia rzadkich komórek eukariotycznych, w których docelowe allele uległy modyfikacji, zgodnie z oczekiwaniem, obejmującą test modyfikacji allelu (MOA) allelu rodzicielskiego, który nie wymaga informacji o sekwencji poza sekwencją kierunkową, taką jak np. ilościowa PCR.
Przedmiotem wynalazku jest sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, charakteryzujący się tym, że modyfikacja obejmuje zastępowanie endogenicznego locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny w całości ortologicznym locus genów ludzkich albo częściowo poprzez zastąpienie jednego lub więcej z jego segmentów genów V i J, lub V, D i J ortologicznymi segmentami genów V i J, lub V, D i J genu ludzkiego w izolowanej mysiej zarodkowej komórce macierzystej (ES), który to sposób obejmuje:
a) otrzymywanie wielkiego, klonowanego fragmentu genomowego większego niż 20 kb zawierającego ortologiczne segmenty genów ludzkich V i J, lub V, D i J;
b) wykorzystanie bakteryjnej rekombinacji homologicznej do genetycznej modyfikacji klonowanego fragmentu genomowego z (a) do wytworzenia wielkiego wektora kierunkowego do stosowania w mysiej komórce ES eukariotycznych (LTVEC),
PL 217 086 B1
c) wprowadzenie LTVEC z (b) do mysiej komórki ES w celu zastąpienia, w całości lub częściowo, endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, i
d) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny w celu zidentyfikowania mysiej komórki ES, która poddana została rekombinacji homologicznej w celu zastąpienia w całości lub częściowo endogenicznego locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny.
Korzystnie, sposób dodatkowo obejmuje:
e) otrzymywanie wielkiego, klonowanego fragmentu genomowego większego niż 20 kb zawierającego cześć ortologicznego locus genu ludzkiego, który zawiera segmenty V i J, lub V, D i J ludzkiego genu które różnią się od fragmentu z (a),
f) wykorzystanie bakteryjnej rekombinacji homologicznej do genetycznego modyfikowania klonowanego fragmentu genomowego z (e) aby wytworzyć drugi LTVEC,
g) wprowadzenie drugiego LTVEC z (f) do mysiej komórki ES zidentyfikowanej w etapie (d) aby zastąpić, w całości lub częściowo, endogeniczny locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz
h) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny w celu zidentyfikowania mysiej komórki ES, która poddana została rekombinacji homologicznej w celu zastąpienia w całości lub częściowo endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny.
Korzystnie, etapy (e) do (h) są powtarzane aż do zastąpienia endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, w całości albo częściowo, ortologicznym locus genu ludzkiego.
Korzystnie, locus genu zmiennego immunoglobuliny jest locus wybrany z grupy obejmującej:
a) locus genu zmiennego łańcucha lekkiego kappa;
b) locus genu zmiennego łańcucha lekkiego lambda;
c) locus genu zmiennego łańcucha ciężkiego.
Korzystnie, LTVEC zawiera ramiona homologii, które w całości są większe niż 20 kb.
Korzystnie, duży klonowany fragment jest większy niż 100 kb.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, charakteryzujący się tym, że modyfikacja obejmuje zastępowanie endogenicznego regionu zmiennego immunoglobuliny w całości locusem genu ortologicznego lub częściowo poprzez zastąpienie jednego lub więcej jego segmentów genu V i J, lub V, D i J segmentami V i J, lub V, D i J ortologicznego genu ludzkiego, który to sposób obejmuje:
a) utworzenie LTVEC większego niż 20 kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca, ramienia homologii w dół, zawierającego region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramienia homologii w górę wewnątrz locus genu zmiennego;
b) utworzenie LTVEC większego niż 20 kb obejmującego miejsce rekombinacji swoistej wobec miejsca, ramienia homologii, w górę, zawierającego region sąsiadujący z najdalszym segmentem genu V, lecz nie obejmujący żadnego segmentu genu V regionu locus genu zmiennego immunoglobuliny oraz ramienia homologii w dół wewnątrz locus genu zmiennego;
c) wprowadzenie LTVEC z (a) i (b) do mysiej komórki ES,
d) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny w locus genu, w celu identyfikacji tej mysiej komórki ES, w której miejsca rekombinacji swoistej wobec miejsca flankują endogeniczny locus genu regionu zmiennego,
e) utworzenie wektora zawierającego sekwencje rekombinacji swoistej wobec miejsca, flankujące wszystkie albo część locus genu ortologicznego, oraz
f) wprowadzenie wektora z (e) do mysiej komórki ES w etapie (d) tak, że poprzez rekombinację, endogeniczny locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny jest zastąpiony, w całości lub częściowo, homologicznym albo ortologicznym locus genowym.
Korzystnie, specyficzne co do miejsca rekombinacji są wybrane z LoxP, Lox 511 i Lox2272.
Korzystnie, wspomniany LTVEC każdy zawiera ramiona homologii które są większe niż 20 kb.
Korzystnie, wspomniane LTVEC są większe niż 100 kb.
Wynalazek dotyczy także genetycznie zmodyfikowanego hybrydowego locus genu immunoglobuliny otrzymywanego którymkolwiek sposobem wspomnianym powyżej.
PL 217 086 B1
Przedmiotem wynalazku jest hybrydowy immunoglobulin owy locus zawierający ludzkie geny V i J, albo V, D i J, przy czym wspomniany locus moż e się przegrupować z utworzeniem chimerycznych przeciwciał zawierających ludzkie regiony zmienne i mysie regiony stałe.
Korzystnie, locus jest zmodyfikowanym, mysim, endogenicznym locus immunoglobuliny.
Korzystnie, ludzkie segmenty genów V i J, albo V, D i J są połączone funkcjonalnie z endogenicznym mysim regionem stałym w endogenicznym mysim locus chromosomowym immunoglobuliny.
Korzystnie, locus jest locus łańcucha ciężkiego.
Korzystnie, locus jest locus łańcucha lekkiego kappa.
Korzystnie, locus jest locus łańcucha lekkiego lambda.
Przedmiotem wynalazku jest również genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna zawierająca locus zdefiniowany powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest również mysz zawierająca locus zdefiniowany powyżej.
Korzystnie komórką eukariotyczną, jest mysia zarodkowa komórka macierzysta (ES).
Korzystnie, mysi locus regionu zmiennego łańcucha ciężkiego zastępuje się, w całości albo częściowo, ludzkim locus genu zmiennego łańcucha ciężkiego; lub mysi locus regionu zmiennego łańcucha lekkiego kappa zastępuje się, w całości albo częściowo, ludzkim locus genu regionu zmiennego łańcucha kappa; lub mysi locus regionu zmiennego łańcucha lekkiego lambda zastępuje się, w cał o ś ci albo częściowo, ludzkim locus genu regionu zmiennego ł a ń cucha lekkiego lambda.
Korzystnie, loci genu regionu zmiennego łańcucha ciężkiego i lekkiego zastępuje się, w całości albo częściowo, ich ludzkimi homologami albo ontologami.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała obejmujący:
a) poddanie myszy zdefiniowanej powyżej stymulacji antygenowej, w taki sposób, że mysz wytwarza przeciwciała przeciwko temu antygenowi;
b) izolowanie DNA kodującego regiony zmienne łańcucha ciężkiego i łańcucha lekkiego tego przeciwciała,
c) wiązanie operacyjne DNA kodującego regiony zmienne według punktu (b) z DNA kodującym łańcuch ciężki i łańcuch lekki regionów stałych w komórce zdolnej do ekspresji aktywnych przeciwciał;
d) hodowanie komórek w takich warunkach do ekspresji ludzkiego przeciwciała; i
e) odzyskiwanie tego przeciwciała.
Korzystnie, komórkę stanowi komórka CHO.
Korzystnie, wspomniane DNA z etapu (b) jest izolowane z hybrydomy utworzonej ze śledziony myszy poddanej stymulacji antygenowej w etapie (a).
Korzystnie, wspomniany DNA jest izolowany poprzez PCR.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej, endogenicznego locus genu oflankowanego w dół lub w górę lub zarówno w górę jak i w dół przez miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca obejmujący:
a) utworzenie LTVEC większego niż 20 kb obejmującego miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca, ramię homologii w dół zawierające region, który flankuje koniec 3' endogenicznego locus genowego i ramię homologii w górę, wewnątrz locus; i/lub utworzenie LTVEC zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w górę zawierające region, który flankuje koniec 5' endogenicznego regionu locus genowego oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
b) wprowadzenie LTVEC lub LTVEC(ów) z (a) do mysiej komórki ES; i
c) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genowym w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (b), w której ten endogeniczny locus genowy jest oflankowany w dół lub w górę lub zarówno w górę jak i w dół przez miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca.
Korzystnie, wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii które są większe niż 20 kb.
Korzystnie, wspomniane LTVEC(i) są większe niż 100 kb.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, charakteryzujący się tym, że modyfikacja obejmuje tworzenie w mysiej zarodkowej komórce macierzystej (ES) endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny oflankowanego przez miejsca rekombinacji swoistej dla miejsca, obejmujący:
a) utworzenie LTVEC większego niż 20 kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca, i: (I) ramię homologii w dół zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramię homologii w górę wewnątrz locus genu zmiennego; lub (II) ramię homologii w górę zawierające region sąsiadujący z naj6
PL 217 086 B1 odleglejszym segmentem V genu, lecz nie obejmujący żadnego segmentu V locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
b) wprowadzenie LTVEC z (a) do mysiej komórki (ES); oraz
c) wykrywanie modyfikacji allelu w locus genu zmiennego w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (b), w których miejsca rekombinacji swoiste wobec miejsca wprowadzone przez LTVEC z (a) (I) flankują koniec w dół endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny, lub miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca wprowadzone przez LTVEC z (a) (II) flankuje koniec w górę endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny.
Korzystnie, tworzone jest endogeniczne locus genu zmiennego immunoglobuliny oflankowanego przez miejsca rekombinacji swoistej dla miejsca, przy czym wspomniany sposób obejmuje:
a) tworzenie LTVEC większego niż 20 kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w dół zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz ramię homologii w górę wewnątrz locus;
b) tworzenie LTVEC większego niż 20 kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w górę zawierające region sąsiadujący z najodleglejszym segmentem genu V, lecz nie obejmujący żadnego segmentu V locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
c) wprowadzenie LTVEC z (a) i (b) do mysiej komórki ES; oraz
d) wykrywanie modyfikacji allelu w locus genu zmiennego w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (c), w których miejsca rekombinacji swoiste dla miejsca flankują endogeniczny locus regionu genu zmiennego immunoglobuliny.
Korzystnie, każdy wspomniany LTVEC albo wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii w całości większe niż 20 kb.
Korzystnie, każdy wspomniany LTVEC albo wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii większe niż 100 kb.
Korzystnie, miejsca rekombinacji specyficzne wobec miejsca są wybrane z LoxP, Lox5111 i Lox2272.
Korzystnie, sposób zawiera zastosowanie prób ilościowych dla wykrycia modyfikacji allelu
Korzystnie, próba ilościowa zawiera ilościową PCR, FISH, porównawczą hybrydyzację genomową, amplifikację izotermiczną DNA, lub ilościową hybrydyzację z immobilizowaną sondą.
Korzystnie, ilościowa PCR obejmuje ilościową PCR wykorzystującą znaczniki molekularne typu molekular becons.
Krótki opis rycin
Fig. 1: Schemat tworzenia typowego LTVEC przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej.
(hb1 = blok homologii 1; hb2 = blok homologii 2; RE = miejsce enzymu restrykcyjnego).
Fig. 2: Schemat fragmentu donorowego LTVEC dla mysiego OCR10.
(hb1 = blok homologii 1; lacZ = ORF β-galaktozydazy; SV40olyA = fragment DNA otrzymany od wirusa małpiego 40, zawierający miejsce i sygnał poliadenylacji; PGKp = mysi promotor kinazy fosfoglicerynianowej (PGK); EM7 = promotor bakteryjny; neo = fosfotransferaza neomycynowa; PGKpolyA = region 3' nie uległy translacji otrzymany z genu PGK i zawierający miejsce i sygnał poliadenylacji; hb2 = blok homologii 2)
Fig. 3A-4D: Sekwencja mysiego cDNA OCR10, blok homologii 1 (hb1), blok homologii 2 (hb2) oraz sondy i startery TagMan® wykorzystane w ilościowym teście PCR do wykrywania modyfikacji allelu (MOA) w komórkach ES nacelowanych przy użyciu LTVEC mOCR10.
hb1:pary zasad 1 do 211 hb2: pary zasad 1586 do 1801
Sonda TaqMan® i odpowiadający zbiór starterów PCR otrzymany z egzonu 3 mOCR10:
Sonda TagMan®: nukleotydy 413 do 439 - górna nić
Starter ex3-5': nukleotydy 390 do 410 - górna nić
Starter ex3-3': nukleotydy 445 do 461 - dolna nić
Sonda TaqMan® i odpowiadający zbiór starterów PCR otrzymany z egzonu 4 mOCR10:
Sonda TaqMan®: nukleotydy 608 do 639 - górna nić
Starter ex3-5': nukleotydy 586 do 605 - górna nić
Starter ex3-3': nukleotydy 642 do 662 - dolna nić
PL 217 086 B1
Fig. 4A-4D: Schemat dwóch LTVEC skonstruowanych w celu zastąpienia mysiego regionu VDJ ludzkim regionem VDJ.
Fig. 4A: Wyizolowane są wielkie klony insertowe (BAC) rozciągające się na cały region VDJ ludzkiego locus łańcucha ciężkiego.
Fig. 4B: W tym przykładzie, izoluje się wielkie klony insertowe (BAC) z końców mysiego regionu VDJ jako źródło ramion homologii, które stosuje się w bezpośredniej integracji poprzez rekombinację homologiczną ludzkich sekwencji VDJ w dwuetapowym procesie.
Fig. 4C-4D: W pierwszym etapie, konstruuje się LTVEC1 (fig. 4D) za pomocą bakteryjnej rekombinacji homologicznej w E. coli. LTVEC1 zawiera, w kolejności: wielkie mysie ramię homologii otrzymane z regionu w górę od mysiego regionu DJ, lecz których absolutne końce nie są istotne; kaseta kodującą marker selekcji funkcjonalny w komórkach ES (PGK-neomycinR w tym przykładzie); miejsce IoxP; wielki ludzki insert rozciągający się od kilku segmentów genu V poprzez cały region DJ; oraz mysie ramię homologii zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, z mysimi segmentami J. W drugim etapie, konstruuje się LTVEC2 (fig. 4C) za pomocą bakteryjnej rekombinacji homologicznej w E. coli. LTVEC2 zawiera, w kolejności: wielkie mysie ramię homologii zawierające region sąsiadujący z najodleglejszym segmentem mysiego genu V, lecz nie zawierający żadnego mysiego segmentu genu V; wielki insert zawierający wielką liczbę odległych ludzkich segmentów genu V; zmutowane miejsce IoxP zwane lox511 w orientacji odwrotnej do orientacji miejsc IoxP dzikiego typu w LTVEC1 i LTVEC2 (miejsce to nie będzie rekombinować z dzikiego typu miejscami IoxP, lecz będzie łatwo rekombinować z innymi miejscami lox511); dzikiego typu miejsce IoxP; drugi marker selekcji (PGK-hygromycinR w tym przykładzie); oraz mysie ramię homologii otrzymane z regionu V, lecz którego absolutne końce nie są istotne.
Definicje „Wektor kierunkowy oznacza konstrukcję DNA, która zawiera sekwencje „homologiczne do endogenicznych chromosomowych sekwencji kwasu nukleinowego flankujących żądaną modyfikację (modyfikacje) genetyczną. Flankujące sekwencje homologii, przytaczane jako „ramiona homologii, kierują wektor kierunkowy do konkretnego położenia chromosomowego w genomie, dzięki homologii, jaka istnieje między ramionami homologii i odpowiadającą sekwencją endogeniczną, i wprowadzają żądaną modyfikację genetyczną w procesie przytaczanym jako „rekombinacja homologiczna.
„Homologiczny oznacza dwie lub więcej sekwencji kwasu nukleinowego, które są albo identyczne albo podobne wystarczająco aby były zdolne do hybrydyzacji między sobą albo zajścia wymiany wewnątrzcząsteczkowej.
„Integracja genu oznacza modyfikację endogenicznego locus chromosomowego przez insercję, delecję albo zastąpienie sekwencji endogeniczne poprzez rekombinację homologiczną przy użyciu wektora kierunkowego.
„Knockout genu oznacza modyfikację genetyczną wynikają c ą z przerwania informacji genetycznej kodowanej w locus chromosomowym.
„Knockin genu oznacza modyfikację genetyczną wynikająca z zastąpienia informacji genetycznej kodowanej w locus chromosomowym z inną sekwencją DNA.
„Organizm posiadający knockout oznacza organizm, w którym znaczny procent komórek organizmu obejmuje knockout genu.
„Organizm posiadający knockin oznacza organizm, w którym znaczny procent komórek organizmu obejmuje knockin genu.
„Marker albo „marker selekcji oznacza marker selekcji, który pozwala na izolację rzadkich transfekowanych komórek z ekspresją markera, z większości traktowanych komórek w populacji. Takie geny markerowe obejmują, lecz bez ograniczenia, fosfotransferazę neomycynową i fosforansferazę higromycyny B albo białka fluorescencyjne, takie jak GFP.
„Komórka ES oznacza zarodkową komórkę macierzystą. Komórkę tę otrzymuje się zazwyczaj z wewnę trznej masy komórkowej zarodka w fazie blastocysty.
„Klon komórek ES oznacza subpopulację komórek otrzymanych z pojedynczej komórki populacji komórek ES, w następstwie wprowadzenia DNA i dalszej selekcji.
„Flankujący DNA oznacza segment DNA, który jest współliniowy i sąsiaduje z poszczególnym punktem odniesienia.
„LTVEC oznaczają wielkie wektory kierunkowe dla komórek eukariotycznych, które otrzymuje się z fragmentów klonowanego genomowego DNA, większego niż te zazwyczaj wykorzystywane przez inne podejścia w celu przeprowadzenia integracji homologicznej w komórkach eukariotycznych.
PL 217 086 B1 „Organizm nie będący ludzkim oznacza organizm, który nie jest normalnie przyjmowany przez ogół, jako będący człowiekiem.
„Modyfikacja allelu (MOA) odnosi się do modyfikacji dokładnej sekwencji DNA jednego allelu genu(ów) albo locus (loci) chromosomowego w genomie. Ta modyfikacja allelu (MOA) obejmuje, lecz bez ograniczenia, delecje, substytucje lub insercje tak małe jak pojedynczy nukleotyd, albo delecje wielu kilozasad rozciągające się na dany gen (geny) albo locus (loci) chromosomowy, jak również jakikolwiek i wszystkie możliwe modyfikacje między tymi dwoma końcami.
„Ortologiczna sekwencja odnosi się do sekwencji od jednego gatunku, która jest funkcjonalnym równoważnikiem tej sekwencji u drugiego gatunku.
Opis i przykłady przedstawione poniżej podaje się w zilustrowania niniejszego wynalazku. Specjalista pozna, że te przykłady są podane jedynie dla zilustrowania i nie są załączone w celu ograniczenia wynalazku.
Szczegółowy opis wynalazku
Zgłaszający opracowali nowy, szybki, naturalny w przebiegu i skuteczny sposób tworzenia i przesiewu komórek eukariotycznych, które zawierają zmodyfikowane geny endogeniczne albo Ioci chromosomowe. W tych komórkach, modyfikacjami mogą być: knockout genu (genów), knockin, mutacje punktowe albo wielkie insercje genomowe albo delecje lub inne modyfikacje. Jako nieograniczający przykład, komórki te mogą być zarodkowymi komórkami macierzystymi, które są użyteczne do tworzenia organizmów posiadających knockout lub knockin, a w szczególności myszy posiadających knockout lub knockin, w celu określenia funkcji genu(ów), które zostały zmienione, deletowane i/lub wprowadzone.
Nowy sposób opisany w niniejszym łączy po raz pierwszy
1. Bakteryjną rekombinację homologiczną do dokładnego konstruowania żądanej modyfikacji genetycznej w wielkim, klonowanym fragmencie genomowym, tworząc przez to wielkie wektory kierunkowe do wykorzystania w komórkach eukariotycznych (LTVEC);
2. Bezpośrednie wprowadzanie tych LTVEC do komórek eukariotycznych w celu zmodyfikowania danego, odpowiadającego, endogenicznego genu (genów) albo locus (loci) chromosomowego w tych komórkach; oraz
3. Analizę w celu określenia rzadkich komórek eukariotycznych, w których docelowe allele uległy modyfikacji, zgodnie z oczekiwaniem, obejmującą test ilościowy modyfikacji allelu (MOA) allelu rodzicielskiego.
Należy podkreślić, że wcześniejsze metody wykrywania z powodzeniem homologicznej rekombinacji w komórkach eukariotycznych nie są możliwe do wykorzystania w połączeniu z LTVEC według niniejszego wynalazku, z powodu długich ramion homologii występujących w LTVEC. Wykorzystując LTVEC do zamierzonej modyfikacji genów endogenicznych lub Ioci chromosomowych w komórkach eukariotycznych poprzez rekombinację homologiczną, umożliwia nowe zastosowanie testu do wykrywania rzadkich komórek eukariotycznych, w których docelowy allel uległ modyfikacji zgodnie z oczekiwaniem, przy czym taki test obejmuje test ilościowy pod względem modyfikacji allelu (MOA) allelu rodzicielskiego, z wykorzystaniem np. ilościowej PCR albo innych odpowiednich testów ilościowych pod względem MOA.
Możliwość wykorzystania wektorów kierunkowych z ramionami homologii większymi niż te stosowane w aktualnych metodach, jest niezwykle wartościowe, z kilku powodów:
1. Wektory kierunkowe są szybciej i wygodniej tworzone z dostępnych bibliotek zawierających wielkie inserty genomowe (np. biblioteki BAC albo PAC) niż wektory kierunkowe wykonane przy użyciu wcześniejszych technik, w których inserty genomowe muszą być szeroko scharakteryzowane i „opracowane przed użyciem (wyjaśnione szczegółowo poniżej). Poza tym, potrzebna jest minimalna znajomość informacji o sekwencji dotycząca danego locus, czyli trzeba jedynie znać około 80-100 nukleotydów, które są konieczne do utworzenia bloków homologii (wyjaśnione szczegółowo poniżej) i do wytworzenia sond, które można wykorzystać w testach ilościowych pod względem MOA (wyjaśnione szczegółowo poniżej).
2. Większe modyfikacje jak również modyfikacje rozciągające się na większe regiony genomowe tworzy się wygodniej i w mniejszej liczbie etapów niż przy użyciu wcześniejszych technik. Przykładowo, sposób według wynalazku umożliwia dokładną modyfikację wielkich loci, które nie mogą być przyjęte przez tradycyjne wektory kierunkowe na bazie plazmidów, z powodu ograniczeń wielkości. Umożliwia to także modyfikację każdego danego locus w wielu punktach (np. wprowadzenie konkretnej mutacji w różnych egzonach genu o wielu egzonach) w jednym etapie, znosząc potrzebę budowaPL 217 086 B1 nia wielu wektorów kierunkowych i przeprowadzania wielu okrążeń integracji i przesiewu pod względem rekombinacji homologicznej w komórkach ES.
3. Stosowanie długich regionów homologii (długich ramion homologii) zwiększa częstotliwość integracji Ioci „trudnych do integracji w komórkach eukariotycznych, zgodnie z wcześniejszymi odkryciami, że integrowanie z miejscami rekombinacji homologicznych w komórkach eukariotycznych okazuje się związane z całkowitą homologią zawartą w wektorze kierunkowym.
4. Większa częstotliwość integracji uzyskana przy użyciu długich ramion homologii wyraźnie osłabia korzyść, jeśli w ogóle, stosowania izogenicznego DNA w tych wektorach kierunkowych.
5. Stosowanie ilościowych testów MOA do przesiewu komórek eukariotycznych pod względem rekombinacji homologicznej nie tylko potęguje użycie LTVEC jako wektorów kierunkowych (korzyści zarysowane powyżej), lecz także redukuje czas identyfikacji prawidłowo zmodyfikowanych komórek eukariotycznych z typowych kilku dni do paru godzin. Poza tym, stosowanie ilościowej MOA nie wymaga stosowania sond położonych poza genem (genami) endogenicznym albo locus (loci) chromosomowym, które się modyfikuje, omijając przez to potrzebę znajomości sekwencji flankujących modyfikowany gen (geny) albo locus (loci). Jest to znaczący postęp jeśli chodzi o metodę przeprowadzania przesiewu w przeszłości i czyni ją mniej pracochłonna oraz znacznie efektywniejsza pod względem kosztów jeśli chodzi o podejście do przesiewu pod względem zdarzeń rekombinacji homologicznej w komórkach eukariotycznych.
Wiele technik wykorzystanych do konstruowania wektorów DNA opisanych w niniejszym, są standardowymi technikami biologii molekularnej, dobrze znanymi specjalistom (patrz np. Sambrook, J., E.F. Fritsch i T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2 i 3, 1989; Current Protocols in Molecular Biology, wydawcy Ausubel i inni, Greene Publ. Assoc., Wiley Interscience, NY). Wszystkie procesy sekwencjonowania DNA wykonuje się standardowymi technikami przy użyciu sekwenatora DNA ABI 373A oraz zestawu Taq Dideoxy Terminator Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA).
Etap 1. Otrzymywanie wielkiego, genomowego klonu DNA zawierającego dany gen (geny) lub locus (loci) chromosomowy.
Dany gen (geny) albo locus (loci) można wyselekcjonować na podstawie konkretnych kryteriów, takich jak szczegółowe dane strukturalne lub funkcjonalne, albo możne go wyselekcjonować przy braku takich szczegółowych informacji w miarę jak potencjalne geny albo fragmenty genowe stają się przewidywalne poprzez próby z różnymi projektami sekwencjonowania genomu. Co istotne, należy zauważyć, że aby wytworzyć LTVEC, nie jest konieczne stosowanie sposobu według niniejszego wynalazku. W istocie, jedną konieczną informacją o sekwencji jest około 80-100 nukleotydów tak aby otrzymać dany klon genowy, jak również wytworzyć bloki homologii wykorzystywane przy wytwarzaniu LTVEC (opisane szczegółowo poniżej) i wykonać sondy do wykorzystania w ilościowych testach MOA.
Po wybraniu danego genu (genów) albo locus (loci), otrzymuje się wielki, genomowy klon (klony) zawierający ten gen (geny) albo locus (loci). Ten klon (klony) można otrzymać w każdy z kilku sposobów łącznie, lecz nie ograniczając, z przesiewem odpowiednich bibliotek DNA (np. BAC, PAC, YAC lub kosmidowych) poprzez standardową hybrydyzację lub techniki PCR albo każdą inną metodą znaną specjaliście.
Etap 2. Dołączanie bloków homologii 1 i 2 do kasety modyfikacji i utworzenie LTVEC.
Bloki homologii znaczą miejsca bakteryjnej rekombinacji homologicznej, które stosuje się z utworzenia LTVEC z wielkich, klonowanych fragmentów genomowych (fig. 1). Bloki homologii są krótkimi segmentami DNA, generalnie o podwójnej nici i co najmniej 40 nukleotydów długości, które są homologiczne z regionami w wielkim, klonowanym fragmencie genomowym flankującym „region do zmodyfikowania. Bloki homologii dołącza się do kasety modyfikacji tak, że po rekombinacji homologicznej w bakteriach, kaseta modyfikacji zastępuje region do zmodyfikowania (fig. 1). Technikę tworzenia wektora kierunkowego przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej można przeprowadzić w rozmaitych układach (Yang i inni, Nat Biotechnol. 15:859-65, 1997; Muyrers i inni, Nucleic Acids Res, 27:1555-7, 1999; Angrand i inni, Nucleic Acids Res, 27:e16, 1999; Narayanan i inni, Gene Ther. 6:442-7, 1999; Yu i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). Przykładem korzystnej technologii aktualnie w użyciu jest kloning ET (Zhang i inni, Nat Genet, 20:123-8, 1998; Narayanan i inni, Gene Ther. 6:442-7, 1999) oraz odmiany tej technologii (Yu i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000). ET odnosi się do białek recE (Hall i Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91:3205-9, 1994) oraz recT (Kusano i inni, Gene, 138:17-25, 1994), które przeprowadzają reakcję rekombinacji homologicznej. RecE jest egzonukleazą, która uporządkowuje jedną nić liniowego DNA o podwójnej
PL 217 086 B1 nici (zasadniczo donorowego fragmentu DNA opisanego poniżej) 5' do 3', pozostawiając w ten sposób za sobą liniowy fragment o podwójnej nici z nawisem 3' o pojedynczej nici. Ten nawis o pojedynczej nici jest opłaszczony białkiem recT, które posiada aktywność wiązania DNA o pojedynczej nici (ssDNA) (Koval i Matthews, Science, 277:1824-7, 1997). Kloning ET przeprowadza się przy użyciu E. coli, która wykazuje krótkotrwałą ekspresję produktów genowych E. coli recE i recT (Hall i Kolodner, Proc Natl Acad Sci USA, 91:3205-9, 1994; Clark i inni, Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 49:453-62, 1984; Noirot i Kolodner, J Biol Chem, 272:12274-80, 1998; Thersher i inni, Mol Biol, 254:364-71,
1995; Kolodner i inni, Mol Microbiol, 11:23-30, 1994; Hall i inni, J Bacteriol, 175:277-87, 1993) oraz białka bakteriofaga lambda (λ) λgam (Murphy, J Bacteriol, 173:5808-21, 1991; Poteete i inni, J Bacteriol, 170:2012-21, 1988). Białko λgam jest konieczne do zabezpieczenia donorowego fragmentu DNA przed rozkładem przez układ egzonukleaz recBC (Myers i Stahl, Annu Rev Genet, 28:49-70, 1994) i jest konieczne do skutecznego kloningu ET w gospodarzach recBC+, takich jak często stosowany szczep E. coli DH10B.
Region do zmodyfikowania i zastąpienia z użyciem bakteryjnej rekombinacji homologicznej może mieć zakres od zera nukleotydów długości (tworząc insercję do oryginalnego locusa) do wielu dziesiątek kilozasad (tworząc delecję i/lub zastąpienie oryginalnego locus). W zależności od kasety modyfikacji, modyfikacja może spowodować:
(a) delecję sekwencji kodujących, segmentów genowych lub elementów regulatorowych;
(b) zmianę (zmiany) sekwencji kodujących, segmentów genowych lub elementów regulatorowych łącznie z substytucjami, addycjami i fuzjami (np. znaczniki epitopu albo tworzenie białek bifunkcyjnych, takich jak te z GFP);
(c) insercję nowych regionów kodujących, segmentów genowych lub elementów regulatorowych, takich jak te dla genów markera selekcji lub genów reporterowych albo poddawanie nowych genów pod endogeniczną kontrole transkrypcyjną;
(d) tworzenie alleli warunkowych, np. przez wprowadzenie miejsc IoxP flankujących region do wycięcia przez rekombinazę Cre (Abremski i Hoess, J Biol Chem, 259:1509-14, 1984) albo miejsc FRT flankujących region do wycięcia przez rekombinazę Flp (Andrews i inni, Cell, 40:795-803, 1985; Meyer-Leon i inni, Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 49:797-804, 1984; Cox, Proc Natl Acad Sci USA, 80:4223-7, 1983); lub (e) zastąpienie sekwencji kodujących lub segmentów genowych z jednego gatunku ortologicznymi sekwencjami kodującymi z innego gatunku, np. zastąpienie mysich Ioci genetycznych ortologicznym ludzkim locus genetycznym aby zbudować mysz, w której ten poszczególny locus został „humanizowany.
Którąkolwiek albo wszystkie te modyfikacje można wcielić do LTVEC. Konkretny, nieograniczający przykład, w którym endogeniczna sekwencja kodująca ulega delecji i jednocześnie zastąpieniu zarówno genem reporterowym jak również markerem selekcji, jest podany poniżej w przykładzie 1, jak również korzyści sposobu według wynalazku w porównaniu z wcześniejszymi technologiami.
Etap 3 (ewentualny). Weryfikacja, że każdy LTVEC został skonstruowany prawidłowo.
Weryfikacji, że każdy LTVEC został skonstruowany prawidłowo, dokonuje się przez:
a. Diagnostyczną PCR weryfikującą nowe łączenia utworzone przez wprowadzenie donorowego fragmentu do danego genu (genów) albo locus (loci) chromosomowego. Fragmenty PCR otrzymane w ten sposób można sekwencjonować w celu dodatkowej weryfikacji nowych łączeń utworzonych przez wprowadzenie donorowego fragmentu do danego genu (genów) albo locus (loci).
b. Diagnostyczne trawienie enzymem restrykcyjnym, aby upewnić się, że tylko żądane modyfikacje zostały wprowadzone do LTVEC podczas procesu bakteryjnej rekombinacji homologicznej.
c. Bezpośrednie sekwencjonowanie LTVEC, zwłaszcza regionów rozciągających się na miejsce modyfikacji, aby zweryfikować nowe łączenia utworzone przez wprowadzenie donorowego fragmentu do danego genu (genów) albo locus (loci).
Etap 4. Oczyszczanie, sporządzanie i linearyzowanie DNA LTVEC do wprowadzenia do komórek eukariotycznych.
a. Sporządzanie DNA LTVEC:
Sporządzić DNA miniprep (Sambrook, J., E.F.Fritsch i T.Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2 i 3, 1989; Tillett i Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572, 1998;
http://www.qiagen.com/literature/handbooks/plkmini/plm_399.pd
f) wybranych LTVEC i retransformować miniprep DNA LTVEC do E. coli przy użyciu elektroporacji (Sambrook, J., E.F.Fritsch i T.Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2
PL 217 086 B1 i 3, 1989). Ten etap jest konieczny do pozbycia się plazmidu kodującego rekombinowane białka, które wykorzystuje się do etapu bakteryjnej rekombinacji homologicznej (Zhang i inni, Nat Genet, 20:123-8, 1998; Narayanan i inni, Gene Ther, 6:422-7, 1999). Pozbycie się tego plazmidu jest pożyteczne (a) ponieważ jest to plazmid o wielkiej liczbie kopii i może zmniejszyć wydajność otrzymaną w preparatach LTVEC na wielką skalę; (b) aby wyeliminować możliwość indukcji ekspresji białek rekombinogenicznych i (c) ponieważ może zaciemniać fizyczne mapowanie LTVEC. Przed wprowadzeniem LTVEC do komórek eukariotycznych, wytwarza się większe ilości DNA LTVEC za pomocą standardowej metodologii (http://www.qiagen.com/literature/handbooks/plk/plklow.pdf; Sambrook, J., E.F.Fritsch i T.Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2 i 3, 1989; Tillett i Neilan, Biotechniques, 24:568-70, 572, 1998). Jednak ten etap można obejść jeśli stosuje się bakteryjną rekombinację homologiczną, którą wykorzystuje rekombinowanego profaga, czyli jeśli stosuje się geny kodujące rekombinowane białka są zintegrowane z chromosomem bakteryjnym (Yu i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000).
b. Linearyzacja DNA LTVEC:
Aby wytworzyć LTVEC do wprowadzenia do komórek eukariotycznych, LTVEC korzystnie poddaje się linearyzacji w sposób, który pozostawia DNA zmodyfikowanego endogenicznego genu (genów) albo locus (loci) chromosomowego oflankowanego długimi ramionami homologii. Można tego dokonać przez linearyzację LTVEC, korzystnie w szkielecie wektora, z użyciem każdego odpowiedniego enzymu restrykcyjnego, który trawi tylko rzadko. Przykłady odpowiednich enzymów restrykcyjnych obejmują NotI, PacI, SfiI, SrfI, SwaI, FseI itd. Wybór enzymu restrykcyjnego można określić doświadczalnie (to znaczy testując kilka różnych ewentualnych enzymów rzadko tnących) albo, jeśli sekwencja LTVEC jest znana, analizując sekwencję i wybierając odpowiedni enzym restrykcyjny na podstawie tej analizy. W sytuacjach, gdzie LTVEC na szkielet zawierający rzadkie miejsca, takie jak miejsca CosN, można je rozszczepić enzymami rozpoznającymi takie miejsca, np. λ terminazą (Shizuya i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 89:8794-7, 1992; Becker i Gold, Proc Natl Acad Sci USA., 75:4199-203; Rackwitz i inni, Gene, 40:259-66, 1985).
Etap 5. Wprowadzenie LTVEC do komórek eukariotycznych i selekcja komórek, w których miało miejsce zadowalające wprowadzenie LTVEC.
DNA LTVEC można wprowadzić do komórek eukariotycznych przy użyciu standardowej metodyki, takiej jak transfekcja za pośrednictwem fosforanu wapnia, lipidów, czy elektroporacji (Sambrook, J., E.F. Fritsch i T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2 i 3, 1989). Komórki, w których LTVEC został z powodzeniem wprowadzony, można selekcjonować przez ekspozycję wobec czynników różnicujących, w zależności od genu markera selekcji, który można wbudować do LIVEC. Jako nieograniczający przykład, jeśli markerem selekcji jest gen fosfotransferazy neomycynowej (neo) (Beck i inni, Gene, 19:327-36, 1982), wtedy komórki, które wychwyciły LTVEC można selekcjonować na pożywkach zawierających G418; Komórki, które nie mają LTVEC zginą, podczas gdy komórki z wychwyconym LTVEC przeżyją (Santerre i inni, Gene, 30:147-56, 1984). Inne możliwe markery selekcji obejmują każdy lek, który wykazuje aktywność w komórkach eukariotycznych (Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), takie jak higromycyna B (Santerre i inni, Gene, 30:147-56, 1984; Bernard i inni, Exp Cell Res, 158:237-43, 1985; Giordano i McAllister, Gene, 88:285-8, 1990), Blasticidin S (Izumi i inni, Exp Cell Res, 197:229-33, 1991) i inne, które są znane specjalistom.
Etap 6. Przesiew pod względem zajścia rekombinacji homologicznej w komórkach eukariotycznych przy użyciu testu ilościowego do modyfikacji allelu (MOA).
Komórki eukariotyczne, które z powodzeniem zmodyfikowano przez integrację LTVEC z danym locus, można zidentyfikować z użyciem różnych podejść, które mogą wykryć modyfikację allelu w danym locus i które nie zależą od testów rozcią gających się na całe ramię lub ramiona homologii. Takie podejścia mogą obejmować, lecz bez ograniczenia:
(a) ilościową PCR przy użyciu TaqMan® (Lie i Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:43-8,
1998);
(b) ilościowy test MOA przy użyciu znaczników molekularnych (Tan i inni, Chemistry, 6:1107-11,
2000);
(c) fluorescencyjną hybrydyzację in situ FISH (Laan i inni, Hum Genet, 96:275-80, 1995) albo porównawcza hybrydyzacją genomową (CGH) (Forozan i inni, Trends Genet, 13:405-9, 1997; Thompson i Gray, J Cell Biochem Suppl, 139:43, 1993; Houldsworth i Chaganti, Am J Pathol, 145:1253-60, 1994);
PL 217 086 B1 (d) izotermiczną amplifikację DNA (Lizardi i inni, Nat Genet, 19:225-32, 1998; Mitr i Church, Nucleid) Acids Res, 27:e34, 1999); oraz (e) ilościową hybrydyzację z unieruchomioną sondą (sondami) (Southern, J. Mol. Biol. 98:503, 1975; Kafatos FC; Jones CW; Efstratiadis A, Nuckeic Acids Res 7(6):1541-52, 1979).
Zgłaszający podają w niniejszym przykład, w którym ilościową PCR TaqManTM stosuje się do przesiewu pod względem zadowalającej integracji w komórkach eukariotycznych. W tym nieograniczającym przykładzie, TaqMan® wykorzystuje się do identyfikacji komórek eukariotycznych, które przeszły rekombinację homologiczną, przy czym część jednego z dwóch endogenicznych alleli w diploidalnym genomie została zastąpiona inną sekwencją. W przeciwieństwie do tradycyjnych metod, w których różnica długości fragmentu rozciągającego się na całe ramię lub ramiona homologii wskazuje modyfikację jednego z dwóch alleli, ilościowa metoda TaqMan® będzie wykrywać modyfikację jednego allelu przez pomiar redukcji liczby kopii (o połowę) allelu niezmodyfikowanego. Konkretnie, sonda wykrywa niezmodyfikowany allel, a nie allel zmodyfikowany. Zatem, metoda jest niezależna od dokładnego charakteru modyfikacji i nie ogranicza się do zastąpienia sekwencji opisanej w tym przykładzie. TaqMan stosuje się do oceny ilościowej liczby kopii matrycy DNA w próbce genomowego DNA, zwłaszcza przez porównanie z genem odniesienia (Lie i Petropoulos, Curr Opin Biotechnol, 9:43-8, 1998). Gen odniesienia ocenia się ilościowo w tym samym genomowym DNA co gen (geny) docelowy albo locus (loci). Zatem, przeprowadza się dwie amplifikacje TaqMan® (każda z odpowiednią sondą). Jedna sonda TaqMan® określa „Ct (cykl progowy) genu odniesienia, podczas gdy druga sonda określa Ct regionu genu (genów) lub locus (loci) docelowego, który jest zastąpiony w wyniku zadowalającego odnalezienia. Ct stanowi ilość, która odzwierciedla ilość wyjściowego DNA dla każdej z sond TaqMan®, czyli najmniej powszechna sekwencja wymaga więcej cykli PCR aby osiągnąć cykl progowy. Zmniejszają liczbę kopii sekwencji matrycowej dla reakcji TaqMan® o połowę, spowoduje zwiększenie około jednej jednostki Ct. Reakcje TaqMan® w komórkach, w których jeden allel docelowego genu (genów) albo locus (loci) został zastąpiony w wyniku rekombinacji homologicznej, spowoduje zwiększenie jednego Ct dla docelowej reakcji TaqMan® bez zwiększenia Ct dla genu odniesienia, w porównaniu z DNA z komórek nie będących docelowymi. Pozwala to na gotowe wykrycie modyfikacji jednego allelu danego genu (genów) w komórkach eukariotycznych przy użyciu LTVEC.
Jak stwierdzono powyżej, przesiew pod względem modyfikacji allelu (MOA) oznacza wykorzystanie każdej metody, która wykrywa modyfikację jednego allelu w celu identyfikacji komórek, które przeszły rekombinację homologiczną. Nie jest konieczne aby docelowe allele były identyczne (homologiczne) między sobą, i w istocie mogą one zawierać polimorfizmy, jak w przypadku potomstwa z krzyżówki dwóch różnych szczepów myszy. Poza tym, wyjątkową sytuacją także zaliczającą się do przesiewu MOA jest odnajdywanie genów, które normalnie występują w pojedynczej kopii w komórkach, tak jak niektóre położone na chromosomach płci, a w szczególności na chromosomie Y. W tym przypadku, metody, które będą wykrywać modyfikację na pojedynczym allelu docelowym, takie jak ilościowa PCR, Southern blotting, itd., można wykorzystać do wykrywania docelowego zdarzenia. Jest jasne, że sposób według wynalazku można stosować do tworzenia zmodyfikowanych komórek eukariotycznych, nawet gdy allele są polimorficzne albo gdy występują one w pojedynczej kopii w komórkach docelowych.
Etap 8. Zastosowania genetycznie zmodyfikowanych komórek eukariotycznych.
(a) Genetycznie zmodyfikowane komórki wytworzone metodami opisanymi w etapach 1 do 7, można wykorzystać w każdym teście in vitro albo in vivo, gdzie pożądana jest zmiana fenotypu komórki.
(b) Genetycznie zmodyfikowane komórki wytworzone metodami opisanymi w etapach 1 do 7, można wykorzystać także do wytworzenia organizmu niosącego modyfikację genetyczną. Genetycznie zmodyfikowany organizm można wytworzyć kilkoma różnymi technikami, włączając, lecz bez ograniczenia:
1. Zmodyfikowane zarodkowe komórki macierzyste (ES), takie jak często stosowane komórki ES szczurze albo mysie. Komórki ES można wykorzystać do tworzenia genetycznie zmodyfikowanych szczurów albo myszy, poprzez standardową technologię wstrzykiwania do blastocysty albo techniki agregacji (Robertson, Practical Approach Series, 254,1987; Wood i inni, Nature, 365:87-9, 1993; Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), wstrzykiwanie do blastocysty tetraploidalnej (Wang i inni, Mech Dev, 62:137-45, 1997) albo przeniesienie jąder i kloning (Wakayama i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 96:14984-9, 1999). Komórki ES otrzymane od innych organizmów, takich jak króliki (Wang
PL 217 086 B1 i inni, Mech Dev, 62:137-45, 1997; Schoonjans i inni, Mol Reprod Dev, 45:439-43, 1996) albo kurczęta (Pain i inni, Development, 122:2339-48, 1996) albo innych gatunków, powinny także być zdatne do modyfikacji genetycznych (przy użyciu sposobu według wynalazku.
2. Modyfikowane protoplasty można wykorzystać do tworzenia genetycznie zmodyfikowanych roślin (np. patrz opis patentowy nr US 5 350 689 „Zea mays plants and transgenic Zae mays plants regenerated from protoplasts or protoplasts-derived cells i opis patentowy nr US 5 508 189 „Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts i odniesienia w powyższych).
3. Przenoszenie jader ze zmodyfikowanych komórek eukariotycznych do oocytów w celu wytworzenia sklonowanych organizmów ze zmodyfikowanym allelem (Wakayama i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 96:14984-9, 1999; Baguisi i inni, Nat Biotechnol, 17:456-61, 1999; Wilmut i inni, Reprod Fertil Dev, 10:639-43, 1998; Wilmut i inni, Nature, 385:810-3, 1997; Wakayama i inni, Nat Genet, 24:108-9, 2000; Wakayama i inni, Nature, 394:369-74, 1998; Rideout i inni, Nat Genet, 24:109-10, 2000; Campbell i inni, Nature, 380:64-6, 1996).
4. Fuzja komórkowa w celu przeniesienia zmodyfikowanego allelu do innej komórki, łącznie z przenoszeniem zbudowanego chromosomu (chromosomów) oraz zastosowanie takiej komórki (komórek) w celu wytworzenia organizmów niosących zmodyfikowany allelu albo zbudowany chromosomom (chromosomy) (Kuroiwa i inni, Nat Biotechnol, 18:1086-0190, 2000).
5. Sposób według wynalazku jest także zdatny dla każdego innego podejścia, jakie stosowano albo jest jeszcze do odkrycia.
Choć wiele technik stosowanych w praktykowaniu poszczególnych etapów sposobów według wynalazku, jest znanych specjalistom, Zgłaszający utrzymują, że nowość sposobu według wynalazku leży w unikalnej kombinacji tych etapów i technik w połączeniu z nigdy wcześniej nie opisywaną metodą wprowadzania LTVEC bezpośrednio do komórek eukariotycznych w celu zmodyfikowania locus chromosomowego, oraz zastosowaniu ilościowych testów MOA do identyfikacji komórek eukariotycznych, które zostały prawidłowo zmodyfikowane. Ta nowa kombinacja stanowi znaczący postęp w stosunku do wcześ niejszych technologii tworzenia organizmów posiadają cych modyfikację genów endogenicznych lub Ioci chromosomowych.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1: Konstruowanie mysich komórek ES niosących delecję genu OCR10. a. Selekcja wielkiego klonu genomowego DNA zawierającego mOCR10.
Klon bakteryjnego sztucznego chromosomu (BAC) niosącego wielki fragment genomowego
DNA, który zawierał sekwencję kodującą mysi gen OCR10 (mOCR10), otrzymano przez przesiew uszeregowanej bibliotek BAC genomowego DNA (Incyte Genomics) przy użyciu PCR. Startery wykorzystane do przesiewu tej biblioteki otrzymano z sekwencji cDNA genu OCR10.
Wykorzystano dwie pary starterów:
(a) OCR10.RAA (5'-AGCTACCAGCTGCAGATGCGGGCAG-3') oraz
OCR10.PVIrc (5'-CTCCCCAGCCTGGGTCTGAAAGATGACG-3'), który powiela DNA o 102 bp;
oraz (b) OCR10.TDY (5'-GACCTCACTTGCTACACTGACTAC-3') oraz
OCR10.QETrc (5'-ACTTGTGTAGGCTGCAGAAGGTCTCTTG-3'), który powiela DNA o 1500 bp.
Ten BAC OCR10 zawierał około 180 kb genomowego DNA łącznie z kompletną sekwencją kodującą OCR10. Ten klon BAC wykorzystano do utworzenia LTVEC, który później użyto do delecji części regionu kodującego mOCR10, jednocześnie wprowadzając gen reporterowy, którego kodon inicjacyjny dokładnie zastępował kodon inicjacyjny OCR10, jak również insercję genu markera selekcji użytecznego przy selekcji zarówno w komórkach E. coli jak i ssaczych, pod względem genu reporterowego (fig. 2). Gen reporterowy (w tym nieograniczającym przykładzie, LacZ, którego sekwencja jest łatwo dostępna dla specjalistów), koduje enzym β-galaktozydazy E. coli. Z powodu pozycji insercji LacZ (jej kodon inicjacyjny jest w tej samej pozycji co kodon inicjacyjny mOCR10) ekspresja IacZ powinna naśladować tę z mOCR10, jak zauważono w innych przykładach, gdzie przeprowadzono podobne zastąpienia LacZ, przy użyciu wcześniejszych technologii (patrz „Gene trap strategies in ES cells w Wurst i A Gossler, w Hoyner, The practical Approach Series, 293, 1999). Gen LacZ pozwala na przeprowadzenie prostego i standardowego testu enzymatycznego, który może ujawnić jego wzory ekspresji in situ, zapewniając w ten sposób test zastępczy, który odzwierciedla normalne wzory ekspresji zastąpionego genu (genów) albo locus (loci) chromosomowego.
b. Konstrukcja fragmentu donorowego i tworzenie LTVEC.
PL 217 086 B1
Kasetą modyfikacji użytą przy konstruowaniu LIVEC mOCR10 jest kaseta lacZ-SV40 polyAPGKp-EM7-neo-PGKpolyA, w której IacZ jest genem markerowym jaki opisano powyżej, SC40 polyA oznacza fragment otrzymany od wirusa małpiego 40 (Subramanian i inni, Proc Nucleic Acid Res Mol Biol, 19:157-64, 1976; Thimmappaya i inni, J Biol Chem, 253:1613-8, 1978; Dhar i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 71:371-5, 1974; Reddy i inni, Science, 200:494-502, 1978), PGKp oznacza mysi promotor kinazy fosfoglicerynianowej (PGK) (Adra i inni, Gene, 60:65-74, 1987) (który stosowano szeroko do kierowania ekspresją genów oporności lekowej w komórkach ssaków), EM7 oznacza silny promotor bakteryjny, który ma korzystną cechę umożliwiania pozytywnej selekcji kompletnej konstrukcji LTVEC w bakteriach, poprzez kierowanie ekspresją genu fosfotransferazy neomycynowej (neo), przy czym neo jest markerem selekcji, który nadaje oporność wobec kanamycyny w komórkach prokariotycznych, oraz oporność G418 w komórkach eukariotycznych (Beck i inni, Gene, 19:327-36, 1982), a PGK polyA oznacza region 3' nie ulegający translacji, otrzymany z genu PGK i zawierający miejsce i sygnał poliadenylacji (Boer i inni, Biochem Genet, 28:299-308, 1990).
Aby skonstruować LTVEC OCR10, utworzono najpierw fragment donorowy, w skład którego wchodzi blok homologii 1 (hb1) mOCR10 przyłączony w górę od genu IacZ w bloku modyfikacji, oraz blok homologii 2 (hb2) mOCR10 przyłączony w dół od sekwencji neo-PGK polyA w bloku modyfikacji (fig. 2), z użyciem standardowej technologii rekombinowanej inżynierii genetycznej. W skład bloku homologii 1 (hb1) wchodzi sekwencja, która nie ulegała translacji o 211 bp bezpośrednio w górę od początkowej metioniny otwartej ramki odczytu mOCR10 (ORF mOCR10) (fig. 3A-3D). W skład bloku homologii 2 (hb2) wchodzi ORF mOCR10 o 216 bp, kończący się kodonem stop (fig. 3A-3D).
Następnie, przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej (Zhang i inni, Nat Genet, 20:123-8, 1998; Angrand i inni, Nucleic Acid Res, 27:e16, 1999; Muyrers i inni, Nucleic Acids Res, 27:1555-7, 1999; Narayanan i inni, Gene Ther, 6:442-7, 1999; Yu i inni, Proc Natl Acad Sci USA, 97:5978-83, 2000), ten fragment donorowy użyto do dokładnego umieszczenia regionu kodującego mOCR10 (od początkowej metioniny do kodonu stop) z kasetą insercji, uzyskując konstrukcję LTVEC mOCR10 (fig. 2). Tak więc, w tym LTVEC mOCR10, sekwencję kodującą mOCR10 zastąpiono kasetą insercji tworzącą około 20 kb delecję w locus mOCR10, pozostawiając homologię o około 130 kb w górę (ramię homologii w górę) oraz homologię o 32 kb w dół (ramię homologii w dół ).
Należy zauważyć, że LTVEC można wytworzyć łatwiej i wygodniej z dostępnych bibliotek BAC, niż za pomocą wektorów kierunkowych wykonanych przy użyciu wcześniejszych technologii, ponieważ konieczny jest tylko pojedynczy etap bakteryjnej rekombinacji homologicznej aby wytworzyć bloki homologii. Przeciwnie, wcześniejsze podejścia wytwarzania wektorów kierunkowych przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej wymagały aby wielkie wektory kierunkowe były „uporządkowane przed wprowadzeniem ich do komórek ES (Hill i inni, Genomics, 64:111-3, 2000). To uporządkowanie jest konieczne z powodu potrzeby wytworzenia ramion homologii wystarczająco krótkich do przyjęcia metod przesiewowych wykorzystywanych przez wcześniejsze podejścia. Główną wadą metody Hilla i innych, jest to, że do prostego uporządkowania konieczne są dwa dodatkowe etapy rekombinacji homologicznej (jeden do uporządkowania regionu w górę od modyfikowanego locus, i jeden do uporządkowania regionu w dół od zmodyfikowanego locus). Aby tego dokonać konieczna jest większa ilość informacji o sekwencji, łącznie z informacją o sekwencji rozciągającej się na miejsca uporządkowania.
Dodatkowo, inną oczywistą korzyścią, zilustrowaną w powyższym przykładzie, jest to, że można łatwo wytworzyć bardzo wielką delecję rozciągającą się na gen mOCR10 (około 20 kb), w pojedynczym etapie. Przeciwnie, stosując wcześniejsze technologie, aby spełnić takie samo zadanie, może być koniecznych kilka etapów i mogą one obejmować znakowanie regionów w górę i w dół od sekwencji kodujących z miejscami IoxP, w celu wykorzystania rekombinazy Cre do usunięcia sekwencji oflankowanej przez te miejsca, po wprowadzeniu zmodyfikowanego locus do komórek eukariotycznych. Może to być nieosiągalne w jednym etapie, a więc może być konieczne skonstruowanie dwóch wektorów kierunkowych wykorzystujących dwa markery selekcji i dwa kolejne zdarzenia kierunkowe w komórkach ES, jedno do wprowadzenia miejsca IoxP w regionie w górę od sekwencji kodującej i drugie do wprowadzenia miejsca IoxP w regionie w dół od sekwencji kodują cej. Należ y dodatkowo zauważyć, że utworzenie wielkich delecji zachodzi często z niską skutecznością, przy stosowaniu wcześniejszych technologii kierunkowych w komórkach eukariotycznych, ponieważ częstotliwość uzyskiwania rekombinacji homologicznej może być niska przy stosowaniu wektorów kierunkowych zawierających wielką delecję oflankowaną przez względnie krótkie ramiona homologii. Wysoka skuteczność uzyskiwana przy użyciu sposobu według wynalazku (patrz poniżej) jest spowodowana występowaPL 217 086 B1 niem w LTVEC bardzo długich ramion homologii, które zwiększają szybkość rekombinacji homologicznej w komórkach eukariotycznych.
c. Weryfikacja, wytwarzanie i wprowadzenie DNA LTVEC mOCR10 do komórek ES.
Sekwencję otaczającą łączenie kasety insercji i sekwencji homologii zweryfikowano przez sekwencjonowanie DNA. Wielkość LTVEC mOCR10 zweryfikowano za pomocą analizy restrykcji, następnie elektroforezę żelową z impulsami pola (PFGE) (Cantor i inni, Annu Rev Biophys Chem, 17:287-304, 1988; Schwartz i Cantor, Cell, 37:67-75, 1984). Przeprowadzono wytwarzanie plazmidu LTVEC mOCR na wielką skalę, DNA plazmidu trawiono enzymem restrykcyjnym NotI, który tnie szkielet wektora LTVEC mOCR10, tworząc liniowy DNA. Następnie, liniowy DNA wprowadzono do mysich komórek ES, za pomocą elektroporacji (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987, Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999; Sambrook, J., E.F. Fritsch i T. Maniatis. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugie wydanie, tomy 1, 2 i 3, 1989). Komórki ES, z powodzeniem transfekowane LTVEC mOCR10, selekcjonowano w pożywkach zawierających G418, przy użyciu standardowych metod selekcji (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987, Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999).
d. Identyfikacja docelowych komórek ES przy użyciu ilościowego testu modyfikacji allelu (MOA).
Aby zidentyfikować komórki ES, w których jeden z dwóch genów mOCR10 został zastąpiony sekwencją kasety modyfikacji, DNA od poszczególnych klonów komórek ES analizowano za pomocą ilościowej PCR z użyciem standardowej metodyki TaqMan®, zgodnie z opisem (Applied Biosystems, TaqMan® Universal PCR Master Mix, numer katalogowy P/N 4304437; patrz także http://www.pebiodocs.com/pebiodocs/04304449.pdf). Startery i sondy LTVEC użyto takie jak opisano w fig. 3A-3D. Przesiano cał kowitą liczbę 69 niezależ nych klonów komórek ES i 3 zidentyfikowano jako pozytywne, czyli klony, w których endogeniczną sekwencję kodującą mOCR10 zastąpiono kasetą modyfikacji opisaną powyżej.
Widocznych jest kilka zalet podejścia MOA:
(i) Nie wymaga stosowania sondy poza modyfikowanym locus, omijając przez to potrzebę znajomości sekwencji flankującej modyfikowany locus.
(ii) Czas konieczny do przeprowadzenia jest bardzo mały w porównaniu z konwencjonalną metodyką Southern blot, która była wcześniejszą metodą wyboru (Robertson, Practical Approach Series, 254, 1987, Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999), redukując czas identyfikacji prawidłowo zmodyfikowanych komórek z typowych kilku dni do zaledwie paru godzin.
Jest to znaczący postęp w stosunku do sposobu przesiewania jaki przeprowadzano w przeszłości i czyni go podejściem przesiewania znacznie mniej pracochłonnym oraz znacznie efektywniejszym pod względem kosztów, jeśli chodzi o zdarzenia rekombinacji homologicznej w komórkach eukariotycznych.
Jeszcze inną korzyścią sposobu według wynalazku jest to, że ma także przewagę nad wcześniejszymi technologiami z powodu możliwości integracji z trudnymi loci. Przy użyciu wcześniejszych technologii, okazało się, że dla pewnych Ioci częstotliwość powodzenia integracji może być tak niska jak 1 na 2000 zdarzeń integracji, być może nawet mniej. Stosując sposób według wynalazku, Zgłaszający zademonstrował, że takie trudne Ioci można zintegrować znacznie skuteczniej przy użyciu LTVEC, które zawierają długie ramiona homologii (czyli większe niż te zapewniane przez wcześniejsze technologie). Jak nieograniczający przykład opisany powyżej demonstruje, Zgłaszający zintegrował locus OCR10, locus, który wcześniej był uważany za oporny na integrację za pomocą konwencjonalnej technologii. Stosując sposób według wynalazku, Zgłaszający wykazał, że uzyskano zadowalającą integrację w 3 z 69 klonów komórek ES, z którymi zintegrował LTVEC mOCR10 (zawierający ramiona homologii o ponad 160 kb i wprowadzający delecję o 20 kb), podczas gdy przy użyciu wcześniejszej technologii dla integracji komórek ES (Joyner, The Practical Approach Series, 293, 1999) za pomocą wektora na bazie plazmidu z ramionami homologii krótszymi niż 10-20 kb, choć także wprowadzającymi delecję mniejszą niż 15 kb, nie zidentyfikowano żadnych zdarzeń integracji wśród ponad 600 integrantów wektora. Dane te jasno pokazują wyższość sposobu według wynalazku w stosunku do wcześniejszej technologii.
P r z y k ł a d 2: Zwiększenie częstotliwości integracji i zniesienie potrzeby stosowania izogenicznego DNA podczas wykorzystywania LTVEC jako wektorów kierunkowych.
Jak zauważono powyżej, zwiększenie częstotliwości integracji uzyskiwane przy stosowaniu długich ramion homologii, powinno zmniejszyć korzyść, jeśli w ogólne, uzyskiwaną ze stosowania genomowego DNA przy konstruowaniu LTVEC, które jest izogeniczne (czyli identyczne w sekwencji)
PL 217 086 B1 w stosunku do DNA docelowej komórki eukariotycznej. Aby przetestować tę hipotezę, Zgłaszający skonstruował liczne LTVEC przy użyciu genomowego DNA otrzymanego z tego samego odszczepu myszy co docelowa komórka eukariotyczna (przypuszczalnie izogeniczna), oraz liczne inne LTVEC przy użyciu genomowego DNA otrzymanego od podszczepów myszy różniących się od tego z docelowej komórki eukariotycznej (przypuszczalnie nieizogenicznej). Dwa zbiory LTVEC wykazywały podobną częstotliwość integracji, w zakresie od 1-13% (tablica 1), wskazując, że współczynnik zadowalającej integracji przy użyciu LTVEC nie zależy od izogeniczności.
T a b l i c a 1
Omówienie integracji genu przy użyciu wektorów klonu BAC NIEIZOGENICZNE
Gen docelowy Opis Początek DNA Komórka ES Przybliżenie (Kb)
Wiel- kość LTVEC Ramię 1 Ramię 2 Del Klony + % odnalezienia
OGH Fuzja lacZ-ATG SvJ CJ7 147 50 90 5 4 4
OCR10 (A) Fuzja lacZ-ATG SvJ CJ7 150 135 8 20 1 1,4
OCR10 (B) Fuzja lacZ-ATG SvJ CJ7 169 130 32 20 3 4,3
MA61 Fuzja lacZ-ATG SvJ CJ7 95 N/D N/D 30 3 4,6
MA16 Fuzja lacZ-ATG SvJ CJ7 120 N/D N/D 8 8 13
IZOGENICZNE CJ7 CJ7 55 14 14 20 5 5
ROR1 Fuzja wewnątrzkomórkowa-lacZ
ROR1 Fuzja wewnątrzkomórkowa-3xmyc CJ7 CJ7 55 14 14 20 2 2
ROR2 Mutacja krótkich palców i znacznik Myc CJ7 CJ7 45 11 24 0,5 2 2
Podsumowując, podejście wytwarzania LTVEC i bezpośredniego wykorzystywania ich jako wektorów kierunkowych w połączeniu z przesiewem MOA zdarzeń rekombinacji homologicznej w komórkach ES, tworzy nowy sposób konstruowania genetycznie zmodyfikowanych loci, który jest szybki, niedrogi i stanowi znaczący postęp w stosunku do żmudnych, czasochłonnych metod stosowanych wcześniej. Otwiera on zatem możliwość szybkiej analizy na wielką skalę funkcjonujących genomów in vivo, zasadniczo każdego i wszystkich genów w genomie organizmu, w ułamku czasu i kosztów koniecznych we wcześniejszych metodach.
P r z y k ł a d 3: Stosowanie LTVEC do wytwarzania chimerycznych i ludzkich przeciwciał
a. Wprowadzenie
Przeciwciała składają się z dwóch łańcuchów, łańcucha lekkiego i ciężkiego, z których każdy składa się z dwóch domen, zmiennej i stałej. Region zmienny białka przeciwciała jest N-terminalną częścią przeciwciała, która wiąże się z antygenem. Domena zmienna łańcucha ciężkiego jest kodowana przez DNA locus genu zmiennego łańcucha ciężkiego, który składa się z segmentów genowych zmiennego (V), odmienności (D) i łączącego (J). Domeny zmienne łańcucha lekkiego są kodowane przez DNA Ioci genu zmiennego łańcucha lekkiego, kappa i lambda, które zawierają segmenty genu zmiennego (V) i łączącego (J).
Przegrupowanie genów regionu zmiennego (VDJ/VJ) podczas początkowego rozwoju komórek B jest pierwszorzędnym mechanizmem, za pomocą którego układ odpornościowy wytwarza przeciwciała zdolne do rozpoznawania olbrzymiej liczby antygenów, jakie mogą napotkać. Zasadniczo, poprzez przegrupowanie DNA podczas rozwoju komórki B, montowany jest olbrzymi repertuar sekwencji regionu zmiennego (VDJ/VJ), które są następnie dołączane do regionu stałego (C) tworząc kompletne łańcuchy ciężki i lekki, które łączą się tworząc przeciwciało. Po zmontowaniu funkcjonalnych przeciwciał, hipermutacja somatyczna, która następuje w drugorzędowych narządach limfatycznych, wprowadza dodatkową różnorodność ułatwiającą organizmowi selekcję i optymalizację powinowactwa przeciwciała.
PL 217 086 B1
Wytwarzanie przeciwciał wobec różnych antygenów u gatunków nie będących człowiekiem, było początkowo bardzo obiecujące w kontekście produkcji przeciwciał na wielka skalę, które można by stosować jako środki lecznicze dla ludzi. Jednak różnice gatunkowe prowadzą do wytwarzania przeciwciał przez ludzi, które inaktywują obce przeciwciała i powodują reakcje alergiczne. Następnie podejmowano próby „humanizowania przeciwciał, czyniąc je mniej prawdopodobnymi do rozpoznania przez człowieka jako obce. Początkowo, proces ten obejmował łączenie części przeciwciała wiążących antygen, pochodzących od myszy, z regionem stałym przeciwciała ludzkiego, tworząc tym samym przeciwciała rekombinowane, które były mniej immunogeniczne u ludzi. Drugim podejściem, które opracowywano, było wykazanie faga, za pomocą którego ludzkie regiony V klonuje się do biblioteki wykazania faga i regiony z odpowiednimi cechami wiązania łączy z ludzkimi regionami stałymi, tworząc ludzkie przeciwciała. Technologia ta jest jednak ograniczona przez brak rozwoju przeciwciała i dojrzewania powinowactwa, które występuje naturalnie w komórkach B.
Całkiem niedawno, geny endogeniczne poddano knockoutowi z myszy i geny zastąpiono ich ludzkimi odpowiednikami wytwarzając całkowicie ludzkie przeciwciała. Niestety, stosowanie tych konstrukcji naświetliło znaczenie endogenicznego regionu stałego w rozwoju i optymalizacji przeciwciał w komórkach B. Myszy produkujące w pełni ludzkie przeciwciała zmniejszyły odpowiedź opornościową. Przyczyną mogło być to, że ludzkie przeciwciała wytworzone przez transgeniczne myszy z całkowicie ludzkimi konstrukcjami, zredukowały powinowactwo w porównaniu z ich mysimi odpowiednikami. Zredukowane powinowactwo mogło wpływać na dojrzewanie i przeżycie komórek B. W związku z tym, bardzo oklaskiwane metody produkcji humanizowanych przeciwciał w myszach i innych organizmach, gdzie endogeniczne regiony zmienne i stałe mysz ulegają knockoutowi i są zastępowane ludzkimi odpowiednikami, nie dały w efekcie optymalnych przeciwciał.
Sugerowano stosowanie chimerycznych przeciwciał, które wykorzystują ludzkie regiony zmienne (VDJ/VJ) z mysimi regionami stałymi poprzez dojrzewanie komórek B, po czym późniejsze konstruowanie przeciwciała z zastąpionymi regionami stałymi myszy ich ludzkimi odpowiednikami (opis patentowy nr US 5 770 429, przyznany 23 czerwca, 1998). Jednak jedyna metodyka wykonywania takich chimer, która istnieje do dziś, została przełączona, tworzenie chimer jest jedynie rzadkim zdarzeniem, które występuje tylko w łańcuchach ciężkich. Zatem jak dotąd, nie ma mechanizmu w zastępowania zwierzętach transgenicznych, na wielką skalę, całego genu zmiennego kodującego segmenty z ludzkimi genami, z utworzeniem chimer zarówno w łańcuchu ciężkim jak i lekkim. Wykorzystując technologię zgłaszających, jaką opisano w niniejszym, tworzy się chimeryczne przeciwciała, które można potem zmienić, poprzez standardową technologię, aby wytworzyć ludzkie przeciwciała o wysokim powinowactwie.
b. Krótki opis
Wytwarza się transgeniczną mysz, która produkuje hybrydowe przeciwciała zawierające ludzkie regiony zmienne (VDJ/VJ) i mysie regiony stałe. Osiąga się to za pomocą bezpośredniego zastępowania in situ mysich genów regionu zmiennego (VDJ/VJ), ich ludzkimi odpowiednikami. Otrzymane hybrydowe Ioci immunoglobulinowe przejdą naturalny proces przegrupowania podczas rozwoju komórek B, z wytworzeniem hybrydowych przeciwciał.
Następnie, wykonuje się w pełni ludzkie przeciwciała, poprzez zastąpienie mysich regionów stałych, żądanymi odpowiednikami ludzkimi. To podejście będzie wywoływać lecznicze przeciwciała znacznie skuteczniej niż wcześniejsze metody, np. „humanizacji” mysich przeciwciał monoklonalnych albo tworzenia w pełni ludzkich przeciwciała w myszach HuMab. Dodatkowo, sposób ten będzie z powodzeniem wytwarzał przeciwciała lecznicze wobec wielu antygenów, wobec których wcześniejsze metody zawodziły. Ta mysz będzie wytwarzała przeciwciała, które posiadają ludzki (VDJ/VJ)-mysi region stały, który będzie miał następujące korzyści w stosunku do wcześniej dostępnych myszy HuMab, które produkują całkowicie ludzkie przeciwciała. Przeciwciała wytwarzane przez nową mysz będą zachowywać mysie regiony Fc, które będą ulegać skuteczniejszej interakcji z innymi składnikami mysiego kompleksu receptora komórki B, włączając składniki sygnałowe konieczne dla prawidłowego różnicowania komórek B (tak jak Iga i Igb). Poza tym, mysie regiony Fc będą bardziej swoiste niż ludzkie regiony Fc pod względem interakcji z receptorami Fc na mysiej komórce, cząsteczek dopełniacza, itd. Te interakcje są istotne dla silnej i swoistej odpowiedzi odpornościowej, dla proliferacji i dojrzewania komórek B oraz dla dojrzewania powinowactwa przeciwciał.
Ponieważ istnieje bezpośrednia substytucja ludzkich regionów V-D-J/V-J na równoważne regiony Ioci myszy, wszystkie sekwencje konieczne do prawidłowej transkrypcji, rekombinacji i/lub przełączania klasy, pozostaną nienaruszone. Przykładowo, mysi wzmacniacz intronowy łańcucha ciężkiego
PL 217 086 B1 immunoglobuliny, Em, okazał się krytyczny dla rekombinacji V-D-J, jak również ekspresji genu łańcucha ciężkiego we wczesnych etapach rozwoju komórek B [Ronai, D. Berru, M. i Schulman, M.J. Mol Cell Biol 19:7031-7040 (1999)], podczas gdy region wzmacniacza 3' łańcucha ciężkiego immunoglobuliny okazuje się krytyczny dla przełączania klas [Pan, Q., Petit-Frere, C., Stavnezer, J. i Hammarstrom, L. Eur J Immunol 30:1019-1029 (2000)], jak również ekspresji genu łańcucha ciężkiego w póź niejszych stadiach róż nicowania komórek B [Ong, J. Stevens, S., Roeder, R.G. i Eckhardt, L.A. J Immunol 160:4896-4903 (1998)]. Biorą c te róż ne, a mimo to zasadnicze, funkcje elementów kontroli transkrypcji, jest pożądane aby utrzymać je nienaruszone.
Konieczne zdarzenia rekombinacji, jakie występują w Ioci immunoglobulinowych podczas normalnego przebiegu różnicowania komórki B, mogą zwiększać częstotliwość nieprawidłowych, nieproduktywnych przegrupowań immunoglobulinowych, gdy te Ioci są wprowadzane w nieprawidłowych miejscach na chromosomie, albo w wielu kopiach, jak w aktualnie dostępnych myszach. Wraz z redukcją przegrupowań w produktywnej immunoglobulinie, a zatem, prawidłową sygnalizacją w konkrettnych etapach rozwoju komórek B, eliminuje się nieprawidłowe komórki. Zmniejszenie liczby komórek B we wczesnych stadiach rozwojowych, znacznie zmniejsza końcową, całkowitą populację komórek B i bardzo ogranicza odpowiedź odpornoś ciową myszy. Ponieważ bę dzie tylko jeden, chimeryczny locus łańcucha ciężkiego lub lekkiego (w przeciwieństwie do zmutowanych Ioci immunoglobulinowych i z ludzkimi transgenicznymi Ioci zintegrowanymi w różnych miejscach na chromosomie, dla łańcuchów ciężkich i lekkich, w aktualnie dostępnych myszach) nie powinno być żadnego innego splicingu ani innych przegrupowań loci, które mogłyby wywołać nieproduktywne przegrupowania lub terapeutycznie nieistotne przeciwciała chimeryczne (Willers, J., Kolb, C. i Weiler, E. Immunobiology 200:150-164 (2000); Fujieda, S., Lin, Y.Q., Saxon, A i Zhang, K J Immunol 157:3450-3459 (1996)).
Substytucje ludzkich regionów V-D-J lub V-J z autentycznymi mysimi loci chromosomowe immunoglobuliny powinny być zasadniczo bardziej stabilne, o zwiększonym współczynniku transmisji na potomstwo oraz zmniejszonej mozaikowatości genotypów komórek B w porównaniu z aktualnie dostępnymi myszami (Tomizuka, K., Shinohara, T., Yoshida, H., Uejima, H., Ohguma, A., Tanak, S., Sato, K., Oshimura, M. i Ishida, I. Proc Natl Acad Sci (USA) 97:722-727 (2000)). Ponadto, wprowadzenie ludzkich regionów zmiennych (VDJ/VJ) do autentycznych mysich loci in vivo, utrzyma odpowiednią ogólną regulację dostępności chromatyny, która wcześniej okazała się ważna dla odpowiedniego przebiegu w czasie zdarzeń rekombinacji (Haines, B.B. i Brodeur, P.H. Eur J Immunol 28:4228-4235 (1998)).
Około 1/3 ludzkich przeciwciał zawiera łańcuchy lekkie lambda, w porównaniu z myszami, u których tylko 1/20 przeciwciała zawiera łańcuchy lekkie lambda. Zatem, zastąpienie mysich sekwencji V-J łańcucha lekkiego lambda sekwencjami V-J łańcucha lekkiego lambda pochodzącymi z locus ludzkiego, będzie służyć do zwiększenia repertuaru przeciwciał, jak również ściślejszego dopasowania autentycznej ludzkiej odpowiedzi odpornościowej, zwiększając w ten sposób prawdopodobieństwo uzyskania terapeutycznie użytecznych przeciwciał.
Dodatkową korzyścią integracji sekwencji ludzkich z autentycznymi mysimi Ioci immunoglobulinowymi jest to, że nie wprowadza się żadnych nowych miejsc integracji, które mogłyby spowodować wzrost mutagennych przerwań w miejscu insercji i uniemożliwić izolację zdolnych do życia myszy homozygotycznych. Uprości to w dużym stopniu produkcję i utrzymywanie hodowlanej kolonii myszy.
Następujący opis stanowi nowy sposób wytwarzania przeciwciał ze wszystkimi powyższymi korzyściami. Specjalista pozna, że ogólny sposób opisany w niniejszym można modyfikować otrzymując równoważne wyniki.
c. Materiały i metody:
Ilustruje się dokładne zastąpienie mysiego regionu zmiennego locus łańcucha ciężkiego (VDJ) jego ludzkim odpowiednikiem, przy użyciu kombinacji rekombinacji homologicznej i swoistej dla miejsca, w następującym przykładzie, który wykorzystuje proces dwuetapowy. Specjalista pozna, że zastąpienie mysiego locus homologicznym lub ortologicznym ludzkim locus można osiągnąć w jednym lub więcej etapów. W związku z tym, wynalazek rozważa zastąpienie locus myszy, w całości albo częściowo, każdą integracją na drodze rekombinacji homologicznej.
Izoluje się wielkie klony insertowe (BAC) rozciągające się na cały region VDJ ludzkiego locus łańcucha ciężkiego (fig. 4A). Sekwencja tego całego regionu jest dostępna w następujących plikach GenBank (AB019437, AB019438, AB019439, AB019440, AB019441, X97051 i X54713). W tym przykładzie, wielkie klony insertowe (BAC) izoluje się z końców mysiego regionu VDJ jako źródła ramion
PL 217 086 B1 homologii (fig. 4B), które wykorzystuje się do bezpośredniej integracji poprzez rekombinację homologiczną sekwencji VDJ człowieka, w procesie dwuetapowym.
W pierwszym etapie, konstruuje się LTVEC1 (fig. 4D) na drodze bakteryjnej rekombinacji homologicznej w E. coli. LTVEC1 zawiera, kolejno: wielkie mysie ramię homologii pochodzące z regionu w górę od mysiego regionu DJ, lecz którego absolutne końce nie są istotne; kasetę kodującą marker selekcji funkcjonalny w komórkach ES (PGK-noemycinR w tym przykładzie); miejsce LoxP; wielki insert ludzki rozciągający się od kilku segmentów genu V na cały region DJ; oraz mysie ramię homologii zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, z mysimi segmentami J. Koniec 5' ramienia w dół oraz położenie miejsc IoxP określa koniec 3' regionu, który ma być zastąpiony w locus. Mysie komórki ES będą transformowane standardowymi technikami, np. elektroporacją, liniowym LTVEC1. Ponieważ bezpośrednie wprowadzenie LTVEC1 daje modyfikację endogenicznego locus genu zmiennego, kolonie oporne na neomycynę można przesiewać pod względem prawidłowego odnalezienia, przy użyciu testu MOA. Te komórki ES z integracją mogą wywołać u myszy produkcję przeciwciał z hybrydowymi łańcuchami ciężkimi. Jednak korzystne będzie przejść do następnych etapów, które wyeliminują pozostałość mysich segmentów zmiennych.
W drugim etapie konstruuje się LTVEC2 (fig. 4C) na drodze bakteryjnej rekombinacji homologicznej w E. coli. LTVEC2 zawiera kolejno: wielkie mysie ramię homologii zawierające region sąsiadujący do najodleglejszego segmentu mysiego genu V, lecz nie zawierającego żadnego mysiego segmentu genu V; wielki insert zawierający wielką liczbę odległych ludzkich segmentów genu V; zmutowane miejsce IoxP zwane lox511 [Hoess, R.H., Wierzbicki, A. i Abremski, K. Nucleic Acids Res. 14:2287-2300 (1986)] w orientacji przeciwnej do tej dla miejsc loxP dzikiego typu w LTVEC2 i LTVEC1 (miejsce to nie będzie rekombinować z dzikiego typu miejscami IoxP, lecz będzie łatwo rekombinować z innymi miejscami lox511); dzikiego typu miejsce IoxP; drugi marker selekcji (PGK-hygromycinR w tym przykładzie); oraz mysie ramię homologii otrzymane z regionu V, lecz którego absolutne końce nie są istotne. Koniec 3' ramienia homologii w górę oraz położenie miejsc IoxP określają koniec 5' regionu, który ma być zastąpiony, w locus. Mysie komórki ES, w których zaszła prawidłowa integracja z LTVEC1, będą nastę pnie transformowane standardowymi technikami z liniowym LTVEC2, a kolonie oporne wobec higromycyny będą przesiewano pod względem prawidłowej integracji przy użyciu testu MOA do modyfikacji w endogenicznym locus genu zmiennego. Komórki ES z prawidłową integracją wynikające z tej transformacji, będą w niniejszym potem przytaczane jako „podwójnie zintegrowane komórki ES.
Późniejsza krótkotrwała ekspresja rekombinazy CRE w podwójnie zintegrowanych komórkach ES, da w efekcie delecję pozostałości mysiego regionu V. Alternatywnie, podwójnie odnalezione komórki ES można wstrzyknąć do blastocyst gospodarza dla wytworzenia myszy chimerycznych. Hodowla uzyskanych myszy chimerycznych z myszami wykazującymi ekspresję rekombinacji CRE we wczesnym stadium rozwojowym, da w efekcie delecję pozostałości mysiego regionu V u potomstwa F1. Ta ostatnia alternatywa zwiększa prawdopodobieństwo, że locus łańcucha ciężkiego hybrydy będzie przechodził przez linię zarodkową ponieważ obejmuje ona hodowlę komórek ES przez mniej pokoleń.
Włączenie Iox511 do LTVEC2 pozwoli na insercję dodatkowych segmentów ludzkiego genu V do hybrydowego locus. Jednym z podejść byłoby użycie bakteryjnej rekombinacji homologicznej do oflankowania wielkiego klonu genomowego DNA zawierającego wiele dodatkowych segmentów ludzkiego genu V z miejscami Iox511 i IoxP. Kotransformacja takiego zmodyfikowanego wielkiego klonu genomowego DNA do podwójnie odnalezionych komórek ES, plazmidem, który wykazuje krótkotrwałą ekspresję rekombinazy CRE, da w efekcie wprowadzenie dodatkowych segmentów genu V przez wymianę kasety (Bethke, B. i Sauer, B. Nucleic Acids Res. 25:2828-2834 (1997)).
Drugie podejście do wprowadzania dodatkowych segmentów genu V to niezależne odnalezienie wielkiego klonu genomowego DNA zawierającego wiele dodatkowych segmentów ludzkiego genu V w locus mysim, przy uż yciu np. tych samych mysich ramion homologii zawartych w LIVEC2. W tym przypadku, dodatkowe segmenty genu V człowieka byłyby oflankowane przez miejsca lox511 i IoxP, a komórki ES z integracją był yby uż yte do wytworzenia myszy. Myszy otrzymane z podwójnie zintegrowanych komórek ES oraz myszy otrzymane z komórek ES zawierających dodatkowe segmenty genu V, byłyby hodowane z trzecią myszą, która kieruje ekspresją rekombinazy CRE podczas mejozy. Bliskość dwóch rekombinowanych Ioci podczas parowania mejotycznego, dałaby wysoką częstość indukowanych CRE rekombinacji międzychromosomowych, jakie było widać w innych układach (Herault, Y., Rassoulzadegan, M., Cuzin, F. i Duboule, D. Nature Genetics 20:381-384 (1998)).
PL 217 086 B1
Inne podejście jest podobne do tego naszkicowanego powyżej, lecz miejsca IoxP i lox511 są wprowadzane raczej do mysich LTVEC niż ludzkich LTVEC 1 i 2, a potem wykorzystuje się CRE do swoistej integracji w ludzkich loci, poprzez wymianę kasety, za pomocą oflankowania miejsc IoxP i lox511. Metodyka naszkicowana poniżej pokazuje jak technologia LTVEC może być wykorzystana do umieszczenia miejsca flankującego swoiste miejsca rekombinacyjne na końcach każdego danego genu endogenicznego u każdego zwierzęcia nie będącego człowiekiem.
Mysi LTVEC1 zawiera kasetę wprowadzoną przez bakteryjną rekombinację w dół oraz sąsiadująco w stosunku do regionu J. Ta kaseta zawiera miejsce IoxP i bakteryjny/ssaczy marker selekcji, taki jak oporność higromycynowa. LTVEC1, zawiera kolejno: wielkie ramię homologii otrzymane z regionu w górę od mysiego regionu DJ (lecz wewnątrz locus genu zmiennego), lecz które absolutne końce nie są istotne; kasetę kodującą marker selekcji funkcjonalny w komórkach ES (PGK-hygromycinR w tym przykładzie); miejsce IoxP; oraz ramię homologii zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, z mysimi segmentami J. Koniec 5' ramienia homologii w dół oraz umieszczenie miejsc IoxP określają koniec 3' regionu, który ma być zastąpiony w locus. Modyfikacja końca 3' endogenicznego genu zmiennego w miejscu insercji kasety pozwala na wykrycie prawidłowo wprowadzonego LTVEC1 do komórek ES, za pomocą testu MOA. Markery oporności lekowej są oflankowane przez miejsca FRT. Wprowadzenie miejsc FRT pozwala na usunięcie wszystkich pozostałych markerów oporności lekowej przez FLP albo w komórkach ES albo przez skrzyżowanie uzyskanych myszy z myszami, które wykazują ekspresję FLP w komórkach, które mają potencjał linii zarodkowej.
LTVEC2 konstruuje się za pomocą bakteryjnej rekombinacji, aby wprowadzić kasetę w górę od najodleglejszych Ioci regionu V. Kaseta ta zawiera miejsce lox511 i bakteryjny/ssaczy marker selekcji, taki jak oporność neomycynowa. LTVEC2 zawiera kolejno: wielkie ramię homologii zawierające region sąsiadujący z najodleglejszym segmentem mysiego genu V, lecz nie zawierający żadnego mysiego segmentu genu V; miejsce lox511 w orientacji odwrotnej do tej z dzikiego typu miejsc IoxP w LTVEC2 i LIVEC1; dzikiego typu miejsce IoxP; drugi marker selekcji (PGK-neomycinR w tym przykładzie); oraz mysie ramię homologii otrzymane z regionu V (a zatem wewnątrz locus genu zmiennego), lecz których absolutne końce nie są istotne. Koniec 3' ramienia homologii w górę oraz umieszczenie miejsc IoxP określają koniec 5' regionu, który ma być zastąpiony w locus. Modyfikacja końca 5' endogenicznego genu zmiennego w miejscu insercji kasety pozwala na wykrycie prawidłowo wprowadzonego LTVEC2 do komórek ES, za pomocą testu MOA. Te LTVEC wprowadza się razem albo kolejno do komórek ES, stosując standardowe techniki i przesiewa pod względem prawidłowej integracji, przy użyciu testu MOA.
Ludzki BAC zwierający region VDJ/VJ, częściowo albo w całości, modyfikuje się za pomocą bakteryjnej rekombinacji w celu wprowadzenia kaset, które flankują ludzkie sekwencje z miejscami lox511 i IoxP. Kasetę w górę wprowadza się po prostu w górę od regionu, który zastąpi mysi region zmienny i zawiera, w kolejności, miejsce lox511, dalej, bakteryjny/ssaczy marker selekcji, taki jak oporność puromycynowa. Kasetę w dół wprowadza się w dół i sąsiadująco w stosunku do regionu J, i zawiera, w kolejności, miejsce IoxP, następnie marker selekcji dla bakterii, taki jak oporność spektynomycynowa.
Można wykorzystać kilka metod wprowadzania większego kawałka ludzkiego regionu zmiennego niż występuje na pojedynczym BAC wyizolowanym z biblioteki. Kilka z nich opisano poniżej.
Miejsca IoxP i Iox511 można wprowadzić oddzielnie, za pomocą bakteryjnej rekombinacji, na nakładające się BAC, które rekombinują między sobą po transformacji do komórek ES. W tym przypadku, górny BAC ma jedną kasetę, rekombinowaną tuż w górę od regionu, który zastąpi mysi region zmienny, który ma miejsce lox511 za bakteryjnym/ssaczym markerem selekcji, takim jak oporność neomycynowa. Dolny BAC ma jedną kasetę, rekombinowaną tuż w dół i sąsiadująco w stosunku do regionu J, która zawiera bakteryjny/ssaczy marker selekcji, taki jak oporność puromycynowa, następnie miejsce IoxP. Jeśli te dwa BAC nie nakładają się, do schematu wprowadza się dodatkowy BAC, który łączy BAC górny z BAC dolnym przez homologię nakładającą się. Są one modyfikowane przez rekombinację bakteryjną tak aby zawierały bakteryjne/ssacze markery selekcji, takie jak oporność puromycynowa, i BAC górny i dolny modyfikuje się tak aby zawierały kasety IoxP i lox511 niosące markery oporności neomycynowej i higromycynowej.
Ludzkie BAC kotransformuje się rekombinazą CRE do linii komórek ES zawierającej miejsca rekombinacji lox511 i IoxP flankujące region zmienny. Jeśli stosuje się nakładające BAC, rekombinacja homologiczna występuje między nimi tworząc większy fragment DNA, a flankujące miejsca IoxP i lox511 integrują z tym wielkim fragmentem w locus mysim. Komórki selekcjonuje się pod względem
PL 217 086 B1 oporności puromycynowej i przesiewa pod względem zastąpienia mysiego regionu zmiennego. Alternatywnie, sekwencje mysie można najpierw deletować poprzez dwa miejsca IoxP, a następnie wprowadzić sekwencje ludzkie poprzez pozostałe miejsca lox511 i IoxP.
Czwarty BAC można wprowadzić jeśli LIVEC1 zawiera także trzecie miejsce swoiste dla rekombinacji, np. lox2272 (Anal Biochem 15 marca 2001; 290(2): 260-71) tuż w dół za bakteryjnym/ssaczym genem oporności, takim jak oporność puromycynowa, tworząc LTVEC posiadającym, w kolejności, gen oporności puromycynowej, miejsce IoxP oraz miejsce lox2272, następnie sekwencje ludzkie. Po zintegrowaniu tego BAC z mysim locus immunoglobulinowym, miejsca lox511/lox2272 służą jako biorcy w drugim okrążeniu kasety wymiany, przy czym gen oporności puromycynowej jest zastąpiony dodatkową częścią w górę od locus ludzkiego regionu zmiennego immunoglobuliny i innego bakteryjnego/ssaczego genu oporności oflankowanego przez miejsca lox511 i lox2272.
Inną metodą wprowadzania większych odcinków ludzkiego regionu zmiennego jest łączenie sekwencji z wielu BAC in vitro, przy użyciu rzadkich miejsc rozszczepiania przez endonukleazy restrykcyjne. Można to osiągnąć stosując bakteryjną rekombinacje homologiczną wprowadzającą miejsce IoxP i gen oporności spektynomycynowej w dół tuż za ostatnim J z najbardziej dolnego BAC i wprowadzając drugi bakteryjny marker selekcji oraz rzadkie miejsce I-Ceu1 na końcu w górę od sekwencji ludzkich dolnego BAC. Miejsce lox511 oraz bakteryjny/ssaczy marker selekcji, np. oporność puromycynowa, wprowadza się na końcu w górę od drugiego BAC zawierającego region ludzkiego regionu zmiennego od sekwencji w pierwszym BAC. Miejsce I-Ceu1 wprowadza się na końcu w dół drugiego BAC. Po trawieniu obu BAC I-Ceu1 i Not1, które jest unikatowe w części wektora obu modyfikowanych BAC, dwa BAC łączy się przez ligację i rekombinanty selekcjonuje pod względem oporności puromycynowej i spektynomycynowej. Otrzymany większy BAC zawiera, w kolejności, miejsce lox511, sekwencje ludzkie w górę, miejsce I-Ceu1, sekwencje ludzkie w dół, miejsce IoxP i gen oporności spektynomycynowej. Region między miejscem lox511 i miejscem IoxP wprowadza się do mysiego locus immunoglobulinowego za pomocą kasety wymiany i selekcjonuje pod względem puromycyny, jak opisano powyżej.
Trzecią metodą wprowadzania większego odcinka ludzkiego regionu zmiennego jest łączenie sekwencji z wielu BAC jak opisano powyżej, lecz przy użyciu bakteryjnej rekombinacji homologicznej zamiast trawienia restrykcyjnego/ligacji. Stosuje się taką samą selekcję pod względem rekombinantów w bakteriach, z wyjątkiem tego, że tylko jeden z dwóch BAC byłby trawiony, jego końce po trawieniu byłyby zaplanowane jako homologiczne do innego „biorczego BAC, a biorczy BAC byłby w szczepie bakteryjnym tak zmodyfikowany, że umożliwiałby bakteryjną rekombinację homologiczną.
Ostatnie etapy tworzenia myszy produkującej ludzkie zmienne/mysie stałe przeciwciało monoklonalne to przeprowadzenie równoważnych substytucji regionu zmiennego na Ioci łańcucha lekkiego lambda i kappa i hodowle wszystkich trzech hybrydowych loci do homozygotyczności razem w tej samej myszy. Otrzymana mysz transgeniczna będzie posiadać genom zawierający całkowicie ludzkie Ioci genu zmiennego łańcucha ciężkiego i lekkiego operacyjnie połączone z całkowicie mysim regionem stałym tak, że mysz produkuje surowicę zawierającą przeciwciało obejmujące ludzki region zmienny i mysi region stały w odpowiedzi na stymulację antygenową. Taka mysz może więc być wykorzystywana jako źródło DNA kodującego regiony zmienne ludzkich przeciwciał. Przy użyciu standardowej technologii rekombinacyjnej, DNA kodujący regiony zmienne łańcucha ciężkiego i lekkiego przeciwciała, jest operacyjnie związany z DNA kodującym ludzkie łańcuchy ciężkie i lekkie regionów stałych w komórkach, takich jak komórki CHO, które są zdolne do ekspresji aktywnych przeciwciał. Komórki hoduje się w odpowiednich warunkach aby zaszła ekspresja w pełni ludzkich przeciwciał, które następnie odzyskuje się. Sekwencje kodujące region zmienny można wyizolować, np. za pomocą amplifikacji PCR lub kloningu cDNA. W korzystnej postaci realizacji, hybrydomy wykonane z myszy transgenicznych obejmujących niektóre albo wszystkie Ioci ludzkiego regionu zmiennego immunoglobuliny (Kohler i Milstein, Eur. J. Immunol., 6:511-519 (1976) wykorzystuje się jako źródło DNA kodującego ludzkie regiony zmienne.
Podsumowując, podejście tworzenia LTVEC i bezpośredniego wykorzystania ich jako wektorów kierunkowych w połączeniu z przesiewem MOA pod względem zdarzeń rekombinacji homologicznej w komórkach ES, tworzy nowy sposób konstruowania genetycznie zmodyfikowanych loci, który jest szybki, niedrogi i stanowi znaczący postęp w stosunku do żmudnych, czasochłonnych metod stosowanych wcześniej. Otwiera więc możliwość szybkiej analizy na wielką skalę funkcjonalnych genomów in vivo, zasadniczo każdego i wszystkich genów w genomie organizmów, w ułamku czasu i kosztów koniecznych we wcześniejszych metodach.

Claims (37)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, znamienny tym, że modyfikacja obejmuje zastępowanie endogenicznego locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny w całości ortologicznym locus genów ludzkich albo częściowo poprzez zastąpienie jednego lub więcej z jego segmentów genów V i J, Iub V, D i J ortologicznymi segmentami genów V i J, lub V, D i J genu ludzkiego w izolowanej mysiej zarodkowej komórce macierzystej (ES), który to sposób obejmuje:
    a) otrzymywanie wielkiego, klonowanego fragmentu genomowego większego niż 20 Kb zawierającego ortologiczne segmenty genów ludzkich V i J, lub V, D i J;
    b) wykorzystanie bakteryjnej rekombinacji homologicznej do genetycznej modyfikacji klonowanego fragmentu genomowego z (a) do wytworzenia wielkiego wektora kierunkowego do stosowania w mysiej komórce ES eukariotycznych (LTVEC),
    c) wprowadzenie LTVEC z (b) do mysiej komórki ES w celu zastąpienia, w całości lub częściowo, endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, i
    d) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny w celu zidentyfikowania mysiej komórki ES, która poddana została rekombinacji homologicznej w celu zastąpienia w całości lub częściowo endogenicznego locus genów regionu zmiennego immunoglobuliny.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że dodatkowo obejmuje:
    e) otrzymywanie wielkiego, klonowanego fragmentu genomowego większego niż 20 Kb zawierającego część ortologicznego locus genu ludzkiego, który zawiera segmenty V i J, lub V, D i J ludzkiego genu które różnią się od fragmentu z (a),
    f) wykorzystanie bakteryjnej rekombinacji homologicznej do genetycznego modyfikowania klonowanego fragmentu genomowego z (e) aby wytworzyć drugi LTVEC,
    g) wprowadzenie drugiego LTVEC z (f) do mysiej komórki ES zidentyfikowanej w etapie (d) aby zastąpić, w całości lub częściowo, endogeniczny locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz
    h) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny w celu zidentyfikowania mysiej komórki ES, która poddana została rekombinacji homologicznej w celu zastąpienia w całości lub częściowo endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że etapy (e) do (h) są powtarzane aż do zastąpienia endogenicznego locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, w całości albo częściowo, ortologicznym locus genu ludzkiego.
  4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że locus genu zmiennego immunoglobuliny jest locus wybrany z grupy obejmującej:
    a) locus genu zmiennego łańcucha lekkiego kappa;
    b) locus genu zmiennego łańcucha lekkiego lambda;
    c) locus genu zmiennego łańcucha ciężkiego.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1-4, znamienny tym, że LTVEC zawiera ramiona homologii które w cał o ś ci są większe niż 20 Kb.
  6. 6. Sposób według zastrz. 1-5, znamienny tym, że duży klonowany fragment jest większy niż 100 Kb.
  7. 7. Sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, znamienny tym, że modyfikacja obejmuje zastępowanie endogenicznego regionu zmiennego immunoglobuliny w całości locusem genu ortologicznego lub częściowo poprzez zastąpienie jednego lub więcej jego segmentów genu V i J, lub V, D i J segmentami V i J, lub V, D i J ortologicznego genu ludzkiego, który to sposób obejmuje:
    a) utworzenie LTVEC większego niż 20 Kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca, ramienia homologii w dół, zawierającego region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramienia homologii w górę wewnątrz locus genu zmiennego;
    b) utworzenie LTVEC większego niż 20 Kb obejmującego miejsce rekombinacji swoistej wobec miejsca, ramienia homologii, w górę, zawierającego region sąsiadujący z najdalszym segmentem
    PL 217 086 B1 genu V, lecz nie obejmujący żadnego segmentu genu V regionu locus genu zmiennego immunoglobuliny oraz ramienia homologii w dół wewnątrz locus genu zmiennego;
    c) wprowadzenie LTVEC z (a) i (b) do mysiej komórki ES,
    d) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny w locus genu, w celu identyfikacji tej mysiej komórki ES, w której miejsca rekombinacji swoistej wobec miejsca flankują endogeniczny locus genu regionu zmiennego,
    e) utworzenie wektora zawierającego sekwencje rekombinacji swoistej wobec miejsca, flankujące wszystkie albo część locus genu ortologicznego, oraz
    f) wprowadzenie wektora z (e) do mysiej komórki ES w etapie (d) tak, że poprzez rekombinację, endogeniczny locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny jest zastąpiony, w całości lub częściowo, homologicznym albo ortologicznym locus genowym.
  8. 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że specyficzne co do miejsca rekombinacji są wybrane z LoxP, Lox511 i Lox2272.
  9. 9. Sposób według zastrz. 7 lub 8, znamienny tym, że wspomniany LTVEC każdy zawiera ramiona homologii które są większe niż 20 Kb.
  10. 10. Sposób według zastrz. 7 do 9, znamienny tym, że wspomniane LTVEC są większe niż 100 Kb.
  11. 11. Genetycznie zmodyfikowany hybrydowy locus genu immunoglobuliny otrzymywany sposobem według któregokolwiek z poprzednich zastrzeżeń.
  12. 12. Hybrydowy immunoglobulinowy locus zawierający ludzkie geny V i J, albo V, D i J, przy czym wspomniany locus może się przegrupować z utworzeniem chimerycznych przeciwciał zawierających ludzkie regiony zmienne i mysie regiony stałe.
  13. 13. Locus według zastrz. 12, znamienny tym, że jest zmodyfikowanym, mysim, endogenicznym locus immunoglobuliny.
  14. 14. Locus według zastrz. 12 albo 13, znamienny tym, że ludzkie segmenty genów V i J, albo V, D i J są połączone funkcjonalnie z endogenicznym mysim regionem stał ym w endogenicznym mysim locus chromosomowym immunoglobuliny.
  15. 15. Locus według jednego z zastrz. 11-14, znamienny tym, że jest nim locus łańcucha ciężkiego.
  16. 16. Locus według jednego z zastrz. 11-14, znamienny tym, że jest nim locus łańcucha lekkiego kappa.
  17. 17. Locus według jednego z zastrz. 11-14, znamienny tym, że jest nim locus łańcucha lekkiego lambda.
  18. 18. Genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna zawierająca locus zdefiniowany w jednym z zastrz. 11-17.
  19. 19. Mysz zawierająca locus zdefiniowany w jednym z zastrz. 11-17.
  20. 20. Genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna według zastrz. 18, znamienna tym, że jest nią mysia zarodkowa komórka macierzysta (ES).
  21. 21. Genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna według zastrz. 20, znamienna tym, że mysi locus regionu zmiennego łańcucha ciężkiego zastępuje się, w całości albo częściowo, ludzkim locus genu zmiennego łańcucha ciężkiego; lub mysi locus regionu zmiennego łańcucha lekkiego kappa zastępuje się, w całości albo częściowo, ludzkim locus genu regionu zmiennego łańcucha lekkiego kappa; lub mysi locus regionu zmiennego łańcucha lekkiego lambda zastępuje się, w całości albo częściowo, ludzkim locus genu regionu zmiennego łańcucha lekkiego lambda.
  22. 22. Genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna według zastrz. 20, znamienna tym, że loci genu regionu zmiennego łańcucha ciężkiego i lekkiego zastępuje się, w całości albo częściowo, ich ludzkimi homologami albo ortologami.
  23. 23. Sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała, znamienny tym, że obejmuje:
    a) poddanie myszy zdefiniowanej w zastrz. 19 stymulacji antygenowej, w taki sposób, że mysz wytwarza przeciwciała przeciwko temu antygenowi;
    b) izolowanie DNA kodującego regiony zmienne łańcucha ciężkiego i łańcucha lekkiego tego przeciwciała,
    c) wiązanie operacyjne DNA kodującego regiony zmienne według punktu (b) z DNA kodującym łańcuch ciężki i łańcuch lekki regionów stałych w komórce zdolnej do ekspresji aktywnych przeciwciał;
    d) hodowanie komórek w takich warunkach do ekspresji ludzkiego przeciwciała; i
    e) odzyskiwanie tego przeciwciała.
  24. 24. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że komórkę stanowi komórka CHO.
    PL 217 086 B1
  25. 25. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że wspomniane DNA z etapu (b) jest izolowane z hybrydomy utworzonej ze ś ledziony myszy poddanej stymulacji antygenowej w etapie (a).
  26. 26. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że wspomniany DNA jest izolowany poprzez PCR.
  27. 27. Sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej, endogenicznego locus genu oflankowanego w dół lub w górę lub zarówno w górę jak i w dół przez miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca, znamienny tym, że obejmuje:
    a) utworzenie LTVEC większego niż 20 Kb obejmującego miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca, ramię homologii w dół zawierające region, który flankuje koniec 3' endogenicznego locus genowego i ramię homologii w górę, wewnątrz locus; i/lub utworzenie LTVEC zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w górę zawierające region, który flankuje koniec 5' endogenicznego regionu locus genowego oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
    b) wprowadzenie LTVEC lub LTVEC(ów) z (a) do mysiej komórki ES; i
    c) wykrywanie modyfikacji allelu w endogenicznym locus genowym w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (b), w której ten endogeniczny locus genowy jest oflankowany w dół lub w górę lub zarówno w górę jak i w dół przez miejsce rekombinacji swoistej dla miejsca.
  28. 28. Sposób według zastrz. 27, znamienny tym, że wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii które są większe niż 20 Kb.
  29. 29. Sposób według zastrz. 27 albo 28, znamienny tym, że wspomniane LTVEC(i) są większe niż 100 Kb.
  30. 30. Sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny, znamienny tym, że modyfikacja obejmuje tworzenie w mysiej zarodkowej komórce macierzystej (ES) endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny oflankowanego przez miejsca rekombinacji swoistej dla miejsca, obejmujący:
    a) utworzenie LTVEC większego niż 20 Kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca, i: (I) ramię homologii w dół zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramię homologii w górę wewnątrz locus genu zmiennego; lub (II) ramię homologii w górę zawierające region sąsiadujący z najodleglejszym segmentem V genu, lecz nie obejmujący żadnego segmentu V locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
    b) wprowadzenie LTVEC z (a) do mysiej komórki (ES); oraz
    c) wykrywanie modyfikacji allelu w locus genu zmiennego w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (b), w których miejsca rekombinacji swoiste wobec miejsca wprowadzone przez LTVEC z (a) (I) flankują koniec w dół endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny, lub miejsce rekombinacji swoiste wobec miejsca wprowadzone przez LTVEC z (a) (II) flankuje koniec w górę endogenicznego locus genu zmiennego immunoglobuliny.
  31. 31. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że tworzone jest endogeniczne locus genu zmiennego immunoglobuliny oflankowanego przez miejsca rekombinacji swoistej dla miejsca, przy czym wspomniany sposób obejmuje:
    a) tworzenie LTVEC większego niż 20 Kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w dół zawierające region bezpośrednio sąsiadujący, lecz nie obejmujący, segmentów J locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz ramię homologii w górę wewnątrz locus;
    b) tworzenie LTVEC większego niż 20 Kb zawierającego miejsce rekombinacji swoiste dla miejsca, ramię homologii w górę zawierające region sąsiadujący z najodleglejszym segmentem genu V, lecz nie obejmujący żadnego segmentu V locus genu regionu zmiennego immunoglobuliny, oraz ramię homologii w dół wewnątrz locus;
    c) wprowadzenie LTVEC z (a) i (b) do mysiej komórki ES; oraz
    d) wykrywanie modyfikacji allelu w locus genu zmiennego w celu identyfikacji mysiej komórki ES w (c), w których miejsca rekombinacji swoiste dla miejsca flankują endogeniczny locus regionu genu zmiennego immunoglobuliny.
  32. 32. Sposób według zastrz. 30 albo 31, znamienny tym, że każdy wspomniany LTVEC albo wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii w całości większe niż 20 Kb.
  33. 33. Sposób według jednego z zastrz. 30-32, znamienny tym, że każdy wspomniany LTVEC albo wspomniane LTVEC(i) zawierają ramiona homologii większe niż 100 Kb.
    PL 217 086 B1
  34. 34. Sposób według jednego z zastrz. 27-33, znamienny tym, że miejsca rekombinacji specyficzne wobec miejsca są wybrane z LoxP, Lox5111 i Lox2272.
  35. 35. Sposób według jednego z zastrz. 1 do 10 i 27 do 34, znamienny tym, że zawiera zastosowanie prób ilościowych dla wykrycia modyfikacji allelu.
  36. 36. Sposób według zastrz. 35, znamienny tym, że próba ilościowa zawiera ilościową PCR, FISH, porównawczą hybrydyzację genomową, amplifikację izotermiczną DNA, lub ilościową hybrydyzację z immobilizowaną sondy.
  37. 37. Sposób według zastrz. 36, znamienny tym, że ilościowa PCR obejmuje ilościową PCR wykorzystującą znaczniki molekularne typu molekular becons.
PL364281A 2001-02-16 2002-02-15 Sposób modyfikowania komórek eukariotycznych, sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny , genetycznie zmodyfikowany hybrydowy locus genu immunoglobuliny, hybrydowy immunoglobulinowy locus, genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna, mysz, sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała, sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej endogenicznego locus oraz sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny PL217086B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/784,859 US6596541B2 (en) 2000-10-31 2001-02-16 Methods of modifying eukaryotic cells
PCT/US2002/004500 WO2002066630A1 (en) 2001-02-16 2002-02-15 Methods of modifying eukaryotic cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL364281A1 PL364281A1 (pl) 2004-12-13
PL217086B1 true PL217086B1 (pl) 2014-06-30

Family

ID=25133744

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL364281A PL217086B1 (pl) 2001-02-16 2002-02-15 Sposób modyfikowania komórek eukariotycznych, sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny , genetycznie zmodyfikowany hybrydowy locus genu immunoglobuliny, hybrydowy immunoglobulinowy locus, genetycznie zmodyfikowana komórka eukariotyczna, mysz, sposób wytwarzania ludzkiego przeciwciała, sposób tworzenia w mysiej zarodkowej komórce macierzystej endogenicznego locus oraz sposób modyfikowania endogenicznego locus genów immunoglobuliny

Country Status (19)

Country Link
US (21) US6596541B2 (pl)
EP (9) EP3626819B1 (pl)
JP (7) JP4412900B2 (pl)
AU (1) AU2002244023B2 (pl)
CA (1) CA2438390C (pl)
CY (8) CY1113964T1 (pl)
CZ (1) CZ305619B6 (pl)
DE (6) DE14172420T1 (pl)
DK (9) DK2264163T3 (pl)
ES (8) ES2725712T5 (pl)
HK (4) HK1146298A1 (pl)
HU (1) HU231221B1 (pl)
MX (2) MXPA03007325A (pl)
NZ (1) NZ527629A (pl)
PL (1) PL217086B1 (pl)
PT (8) PT3626819T (pl)
TR (2) TR201907641T4 (pl)
WO (1) WO2002066630A1 (pl)
ZA (1) ZA200306275B (pl)

Families Citing this family (996)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6908744B1 (en) * 2000-03-14 2005-06-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of stimulating cartilage formation
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
GB0115256D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Babraham Inst Mouse light chain locus
US7435871B2 (en) 2001-11-30 2008-10-14 Amgen Fremont Inc. Transgenic animals bearing human Igλ light chain genes
US20050158296A1 (en) 2002-01-11 2005-07-21 Starr Christopher M. Use of p97 as an enzyme delivery system for the delivery of therapeutic lysosomal enzymes
CA2473741C (en) * 2002-01-18 2015-12-22 Morphotek, Inc. A method for generating engineered cells for locus specific gene regulation and analysis
DK2314629T4 (da) 2002-07-18 2023-02-06 Merus Nv Rekombinant produktion af blandinger af antistoffer
USRE47770E1 (en) 2002-07-18 2019-12-17 Merus N.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
CA2496233A1 (en) * 2002-09-09 2004-03-18 California Institute Of Technology Methods and compositions for the generation of humanized mice
AU2004242614B2 (en) 2003-05-30 2011-09-22 Merus N.V. Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
GB2408980B (en) * 2003-12-09 2006-06-07 Nat Biolog Standards Board Genetic reference materials
PT2311874T (pt) 2004-07-22 2017-08-25 Univ Erasmus Med Ct Rotterdam Moléculas de ligação
AU2007235496B2 (en) 2006-03-31 2013-11-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
MY159787A (en) * 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8323815B2 (en) * 2006-06-16 2012-12-04 Porous Power Technology, LLC Optimized microporous structure of electrochemical cells
PL2769992T3 (pl) 2006-10-02 2021-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Przeciwciała ludzkie o wysokim powinowactwie względem ludzkiego receptora IL-4
US7608693B2 (en) 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
CA2681530C (en) 2007-03-22 2017-03-28 Biogen Idec Ma Inc. Binding proteins, including antibodies, antibody derivatives and antibody fragments, that specifically bind cd154
DK2602323T3 (en) * 2007-06-01 2018-04-16 Open Monoclonal Tech Inc Compositions and Methods for Inhibiting Endogenous Immunoglobin Genes and Producing Transgenic Human Idiotypic Antibodies
WO2009023540A1 (en) 2007-08-10 2009-02-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human nerve growth factor
EP3255144A1 (en) * 2007-08-10 2017-12-13 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Recombineering construct for preparing transgenic mice capable of producing human immunoglobulin
GB0718029D0 (en) * 2007-09-14 2007-10-24 Iti Scotland Ltd Two step cluster deletion and humanisation
KR102467302B1 (ko) 2007-09-26 2022-11-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
KR20100103810A (ko) 2007-12-10 2010-09-28 알리바 바이오파마수티컬스, 아이엔씨. 동종 재조합에 의한 표적화된 영역의 순차적인 치환 방법
US20090208832A1 (en) * 2008-02-17 2009-08-20 Porous Power Technologies, Llc Lamination Configurations for Battery Applications Using PVDF Highly Porous Film
US20090227163A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Protective Apparel with Porous Material Layer
US20090223155A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Building Construction Applications for Porous Material
US20090222995A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Bedding Applications for Porous Material
EP2098536A1 (en) 2008-03-05 2009-09-09 4-Antibody AG Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins
US20090226683A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-10 Bernard Perry Porous Material Uses in Furniture
CN112481367A (zh) * 2008-03-31 2021-03-12 健泰科生物技术公司 用于治疗和诊断哮喘的组合物和方法
US20110123527A1 (en) * 2008-05-23 2011-05-26 Hiroaki Shizuya Method of generating single vl domain antibodies in transgenic animals
US20100122358A1 (en) * 2008-06-06 2010-05-13 Crescendo Biologics Limited H-Chain-only antibodies
US20090328240A1 (en) * 2008-06-24 2009-12-31 Sing George L Genetically modified mice as predictors of immune response
KR102261586B1 (ko) * 2008-06-27 2021-06-08 메뤼스 엔.페. 항체 생산 비-인간 포유동물
AU2014203150C1 (en) * 2008-06-27 2018-10-18 Merus N.V. Antibody producing non-human mammals
KR102362774B1 (ko) 2008-09-30 2022-02-15 아블렉시스, 엘엘씨 키메라 항체의 제조를 위한 인간 이외의 포유동물
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
MX2011007660A (es) 2008-12-18 2011-08-17 Kingdon Craig R Animales transgenicos no humanos que expresan anticuerpos humanizados y usos de los mismos.
US20100178567A1 (en) * 2008-12-24 2010-07-15 Porous Power Technologies, Llc Mat Forming Spacers in Microporous Membrane Matrix
GB0905023D0 (en) 2009-03-24 2009-05-06 Univ Erasmus Medical Ct Binding molecules
RU2011142974A (ru) 2009-03-25 2013-04-27 Дженентек, Инк. НОВЫЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ α5β1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN102804297A (zh) * 2009-05-20 2012-11-28 多孔渗透电力技术公司 用于微孔膜的处理和胶粘剂
TWI513465B (zh) 2009-06-25 2015-12-21 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法
EP2448966B1 (en) 2009-07-03 2018-11-14 Avipep Pty Ltd Immuno-conjugates and methods for producing them
DK3622813T3 (da) 2009-07-08 2021-05-03 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
US9445581B2 (en) 2012-03-28 2016-09-20 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US20120204278A1 (en) * 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
ES2908587T3 (es) * 2009-10-06 2022-05-03 Regeneron Pharma Ratones modificados genéticamente e injerto
DK2954779T3 (da) * 2009-12-10 2019-05-13 Regeneron Pharma Mus, der frembringer tungkædeantistoffer
WO2011072266A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Atyr Pharma, Inc. Aminoacyl trna synthetases for modulating hematopoiesis
RU2549695C2 (ru) 2009-12-21 2015-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ FCγR МЫШИ
US9315581B2 (en) 2009-12-23 2016-04-19 A Vipep Pty Limited Immuno-conjugates and methods for producing them
US10143186B2 (en) 2010-02-08 2018-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
US20130045492A1 (en) 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
US20130185821A1 (en) * 2010-02-08 2013-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
MX2012008958A (es) 2010-02-18 2012-08-23 Genentech Inc Antagonista de neurogulina y usos de los mismos para el tratamiento contra el cancer.
WO2011101328A2 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Roche Glycart Ag Treatment with a humanized igg class anti egfr antibody and an antibody against insulin like growth factor 1 receptor
US8846041B2 (en) 2010-03-24 2014-09-30 Genentech, Inc. Anti-LRP6 antibodies
KR20210010942A (ko) 2010-03-31 2021-01-28 아블렉시스, 엘엘씨 키메라 항체의 제조를 위한 비-인간 동물의 유전적 조작
AU2011248625B2 (en) 2010-04-26 2017-01-05 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-tRNA synthetase
CA2797362C (en) 2010-04-27 2020-12-08 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl trna synthetases
CA2797271C (en) 2010-04-28 2021-05-25 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases
AU2011248457B2 (en) 2010-04-29 2017-02-16 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl tRNA synthetases
AU2011248490B2 (en) 2010-04-29 2016-11-10 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases
CA2797277C (en) 2010-05-03 2021-02-23 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
EP2566496B1 (en) 2010-05-03 2018-02-28 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of methionyl-trna synthetases
US9034321B2 (en) 2010-05-03 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-tRNA synthetases
AU2011248101B2 (en) 2010-05-04 2016-10-20 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-tRNA synthetase complex
CA2799197C (en) 2010-05-14 2019-10-29 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases
JP6046607B2 (ja) 2010-05-27 2016-12-21 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド グルタミニルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
AU2011265306C1 (en) 2010-06-11 2015-01-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Production of fertile XY female animals from XY ES cells
US9242014B2 (en) 2010-06-15 2016-01-26 The Regents Of The University Of California Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1 (ROR1) single chain Fv antibody fragment conjugates and methods of use thereof
CN105695415A (zh) * 2010-06-17 2016-06-22 科马布有限公司 动物模型及治疗分子
JP5940061B2 (ja) 2010-06-18 2016-06-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ａｘｌ抗体及び使用方法
KR20220150430A (ko) 2010-06-22 2022-11-10 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 사람 람다 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 경쇄를 발현하는 마우스
CA2803792A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
AU2011289831C1 (en) 2010-07-12 2017-06-15 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glycyl-tRNA synthetases
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
DK2597945T3 (da) 2010-07-26 2020-09-21 Trianni Inc Transgene dyr og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US10662256B2 (en) 2010-07-26 2020-05-26 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
US10793829B2 (en) 2010-07-26 2020-10-06 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
NZ707327A (en) 2010-08-02 2017-01-27 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
BR112013002535A2 (pt) 2010-08-03 2019-09-24 Hoffmann La Roche biomarcadores de leucemia linfocítica crônica (cll)
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
CA2806640A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use
EP2603525A1 (en) 2010-08-13 2013-06-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibodies to il-1beta and il-18, for treatment of disease
NO2603530T3 (pl) 2010-08-13 2018-04-07
EP2608801B1 (en) 2010-08-25 2019-08-21 aTyr Pharma, Inc. INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES
RU2013114360A (ru) 2010-08-31 2014-10-10 Дженентек, Инк. Биомаркеры и способы лечения
CA2816763A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Transbio Ltd Markers of endothelial progenitor cells and uses thereof
TW201300417A (zh) 2010-11-10 2013-01-01 Genentech Inc 用於神經疾病免疫療法之方法及組合物
US8771696B2 (en) 2010-11-23 2014-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of reducing the severity of stress hyperglycemia with human antibodies to the glucagon receptor
JO3756B1 (ar) 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
KR101615474B1 (ko) 2010-12-16 2016-04-25 제넨테크, 인크. Th2 억제에 관한 진단 및 치료
MA34881B1 (fr) 2010-12-20 2014-02-01 Genentech Inc Anticorps et immunoconjugués anti-mésothéline
MA34818B1 (fr) 2010-12-22 2014-01-02 Genentech Inc Anticorps anti-pcsk9 et procédés d'utilisation
WO2012093068A1 (en) 2011-01-03 2012-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag A pharmaceutical composition of a complex of an anti-dig antibody and digoxigenin that is conjugated to a peptide
DK2663579T3 (en) 2011-01-14 2017-07-31 Univ California THERAPEUTIC ANTIBODIES AGAINST ROR-1 PROTEIN AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
EP2650016A1 (en) 2011-01-28 2013-10-16 Sanofi Human antibodies to PSCK9 for use in methods of treatment based on particular dosage regimens (11565)
BR112013018740A2 (pt) 2011-01-28 2019-01-08 Sanofi Sa anticorpos humanos para pcsk9 para uso em métodos de tratamento de grupos específicos de indivíduos
SI2673373T1 (sl) 2011-02-08 2019-03-29 Medimmune, Llc Protitelesa, ki specifično vežejo alfa toksin Staphylococcus aureus in postopki uporabe
DK3375284T3 (da) 2011-02-15 2023-06-12 Univ Yale Humaniserede M-CSF-mus og anvendelser deraf
DE12192727T1 (de) 2011-02-25 2013-07-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. ADAM6 Mäuse
EP2686016B1 (en) 2011-03-14 2019-05-01 Cellmid Limited Antibody recognizing n-domain of midkine
ES2692268T3 (es) 2011-03-29 2018-12-03 Roche Glycart Ag Variantes de Fc de anticuerpo
TW201249867A (en) 2011-04-01 2012-12-16 Astellas Pharma Inc Novel anti-human il-23 receptor antibody
CN103596983B (zh) 2011-04-07 2016-10-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗fgfr4抗体及使用方法
CA2833404A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Garvan Institute Of Medical Research Modified variable domain molecules and methods for producing and using them b
AR088782A1 (es) 2011-04-29 2014-07-10 Sanofi Sa Sistemas de ensayo y metodos para identificar y caracterizar farmacos hipolipemiantes
JP5987053B2 (ja) 2011-05-12 2016-09-06 ジェネンテック， インコーポレイテッド フレームワークシグネチャーペプチドを用いて動物サンプルにおける治療抗体を検出するための多重反応モニタリングｌｃ−ｍｓ／ｍｓ法
PT2631654E (pt) 2011-05-12 2015-08-21 Regeneron Pharma Ensaio de libertação de neuropéptidos para canais de sódio
BR112013026266A2 (pt) 2011-05-16 2020-11-10 Genentech, Inc método de tratamento, anticorpos isolado e anti-fgfr1, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, formulação farmacêutica, uso do anticorpo e método de tratamento de diabetes em um indivíduo
CN106432506A (zh) 2011-05-24 2017-02-22 泽恩格尼亚股份有限公司 多价和单价多特异性复合物及其用途
CA2838246C (en) 2011-06-13 2018-07-10 Csl Limited Antibodies against g-csfr and uses thereof
BR112013032235A2 (pt) 2011-06-15 2016-11-22 Hoffmann La Roche anticorpos do receptor de epo anti-humano e métodos de uso
SG194932A1 (en) 2011-06-30 2013-12-30 Genentech Inc Anti-c-met antibody formulations
HUE029855T2 (en) 2011-07-05 2017-04-28 Bioasis Technologies Inc p97 antibody conjugates
US10040826B2 (en) 2011-07-05 2018-08-07 Duke University Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) N-terminal deleted GP120 immunogens
WO2013015821A1 (en) 2011-07-22 2013-01-31 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the b12-transcobalamin receptor
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
PT2739649T (pt) 2011-08-05 2018-01-03 Bioasis Technologies Inc Fragmentos de p97 com atividade de transferência
PT3572517T (pt) 2011-08-05 2021-06-23 Regeneron Pharma Murganhos da cadeia leve universal humanizada
JP5376095B2 (ja) 2011-08-11 2013-12-25 アステラス製薬株式会社 新規抗ヒトｎｇｆ抗体
MX2014001766A (es) 2011-08-17 2014-05-01 Genentech Inc Anticuerpos de neuregulina y sus usos.
CN103890008A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 在顽固性肿瘤中抑制血管发生
US9017670B2 (en) 2011-08-19 2015-04-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-Tie2 antibodies and uses thereof
WO2013026832A1 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
RU2617970C2 (ru) 2011-08-23 2017-04-28 Рош Гликарт Аг Антитела, не содержащие fc-фрагмента, включающие два fab-фрагмента, и способы их применения
JP6159724B2 (ja) 2011-08-23 2017-07-05 ロシュ グリクアート アーゲー Ｔ細胞活性化抗原に対して特異的な二重特異性抗体及び腫瘍抗原および使用方法
RU2014109395A (ru) 2011-09-15 2015-10-20 Дженентек, Инк. Способы стимуляции дифференциации
CN103930444B (zh) 2011-09-16 2020-08-04 瑞泽恩制药公司 用前蛋白转化酶枯草溶菌素-9(PCSK9)抑制剂降低脂蛋白(a)水平的方法
WO2013041845A2 (en) * 2011-09-19 2013-03-28 Kymab Limited Animals, repertoires & methods
ES2612935T3 (es) 2011-09-19 2017-05-19 Kymab Limited Anticuerpos, dominios variables y cadenas adaptados para su uso en seres humanos
BR112014006419A2 (pt) 2011-09-19 2018-08-07 Genentech Inc métodos para tratar um paciente com câncer, kit e artigo
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
EP2761008A1 (en) 2011-09-26 2014-08-06 Kymab Limited Chimaeric surrogate light chains (slc) comprising human vpreb
EP2763699A4 (en) 2011-10-03 2015-05-20 Univ Duke VACCINE
MX2014004074A (es) 2011-10-05 2014-06-05 Genentech Inc Metodo de tratamiento de condiciones del higado utilizando antagonistas de notch2.
EP3461839A1 (en) 2011-10-14 2019-04-03 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-htra1 antibodies and methods of use
JP6254087B2 (ja) 2011-10-15 2017-12-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌を治療するためのｓｃｄ１アンタゴニスト
PL2627773T3 (pl) 2011-10-17 2017-11-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ograniczony łańcuch ciężki immonoglobuliny pochodzącej od myszy
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
RU2661106C2 (ru) 2011-10-28 2018-07-11 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Генетически модифицированные в отношении т-клеточного рецептора мыши
AU2012327878A1 (en) 2011-10-28 2014-05-29 Patrys Limited PAT-LM1 epitopes and methods for using same
US9591835B2 (en) 2011-10-28 2017-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex animals
SI2770821T1 (en) 2011-10-28 2018-01-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex of mice
HUE048511T2 (hu) 2011-10-28 2020-07-28 Regeneron Pharma Kiméra fõ hisztokompatibilitási komplex (MHC) II molekulákat expresszáló, genetikailag módosított egerek
US20140283153A1 (en) 2011-10-28 2014-09-18 Trianni, Inc. Transgenic animals and methods of use
CN104039340B (zh) 2011-10-28 2017-04-05 霍夫曼-拉罗奇有限公司 治疗黑素瘤的方法及治疗剂组合
US9043996B2 (en) 2011-10-28 2015-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex animals
GB2496375A (en) * 2011-10-28 2013-05-15 Kymab Ltd A non-human assay vertebrate comprising human antibody loci and human epitope knock-in, and uses thereof
AU2012340826A1 (en) 2011-11-21 2014-05-29 Genentech, Inc. Purification of anti-c-met antibodies
GB201122047D0 (en) 2011-12-21 2012-02-01 Kymab Ltd Transgenic animals
US9253965B2 (en) * 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US20140335084A1 (en) 2011-12-06 2014-11-13 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody formulation
SI2793567T1 (sl) 2011-12-20 2019-05-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanizirane lahkoverižne miši
MX2014007262A (es) 2011-12-22 2014-08-01 Hoffmann La Roche Sistema de exhibicion de anticuerpos de longitud completa para celulas eucarioticas y su uso.
ES2791758T3 (es) 2011-12-22 2020-11-05 Hoffmann La Roche Organización de vectores de expresión, procedimientos de generación de células de producción novedosos y su uso para la producción recombinante de polipéptidos
MX355624B (es) 2011-12-22 2018-04-25 Hoffmann La Roche Combinaciones de elementos de vector de expresion, metodos novedosos de generacion de celulas de produccion y su uso para la produccion recombinante de polipeptidos.
MX345019B (es) * 2011-12-22 2017-01-11 Astellas Pharma Inc Nuevo anticuerpo ctgf antihumano.
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
CN104066449B (zh) 2012-01-18 2018-04-27 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗lrp5抗体及使用方法
EP2804630B1 (en) 2012-01-18 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using fgf19 modulators
ES2753774T3 (es) * 2012-02-01 2020-04-14 Regeneron Pharma Ratones humanizados que expresan cadenas pesadas que contienen dominios VL
US20130209473A1 (en) 2012-02-11 2013-08-15 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
WO2013120929A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
NZ628126A (en) 2012-02-16 2016-10-28 Atyr Pharma Inc Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
US9371391B2 (en) 2012-02-28 2016-06-21 Astellas Pharma Inc. Anti-human IL-23 receptor antibody and encoding polynucleotides
SG11201405087PA (en) 2012-03-02 2014-09-26 Regeneron Pharma Human antibodies to clostridium difficile toxins
MX353278B (es) 2012-03-06 2018-01-05 Regeneron Pharma Raton con cadena ligera comun.
EA201400996A1 (ru) 2012-03-13 2015-03-31 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Комбинированная терапия для лечения рака яичника
RS57414B1 (sr) 2012-03-16 2018-09-28 Regeneron Pharma Antitela sa lakim lancem konstruisanim sa histidinom i genetički modifikovani glodari za generisanje istih
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
BR112014022855A2 (pt) 2012-03-16 2017-07-18 Regeneron Pharma animal não humano geneticamente modificado, mamífero geneticamente modificado, e, método para fabricar um animal não humano
CN104302170B (zh) 2012-03-16 2016-09-28 瑞泽恩制药公司 生产具有ph依赖性结合特性的抗原结合蛋白的小鼠
CN104220457A (zh) 2012-03-27 2014-12-17 霍夫曼-拉罗奇有限公司 涉及her3抑制剂的诊断和治疗
GB2502127A (en) * 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
WO2013144567A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class - switched, fully human, antibodies
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
TWI619729B (zh) 2012-04-02 2018-04-01 再生元醫藥公司 抗－ｈｌａ－ｂ*２７抗體及其用途
CN114163530A (zh) 2012-04-20 2022-03-11 美勒斯公司 用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段
PL2847335T3 (pl) * 2012-04-25 2019-01-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Celowanie dużymi wektorami do celowania wspomagane nukleazą
RU2014148162A (ru) 2012-05-01 2016-06-20 Дженентек, Инк. Анти-pmel17 антитела и их иммуноконъюгаты
JO3820B1 (ar) 2012-05-03 2021-01-31 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية لـ fel d1وطرق لاستخدامها
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
KR101843614B1 (ko) 2012-05-23 2018-03-29 제넨테크, 인크. 치료제의 선택 방법
AR092325A1 (es) 2012-05-31 2015-04-15 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-dll4 y kit
CN104582476B (zh) * 2012-06-05 2017-03-08 瑞泽恩制药公司 使用共同轻链制备完全人双特异性抗体的方法
ME03551B (me) 2012-06-12 2020-07-20 Regeneron Pharma Humanizovane nehumane živoтinje sa ograničenim lokusima imunoglobulinskog тeškog lanca
RU2015101113A (ru) 2012-06-15 2016-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против pcsk9, составы, дозы и способы применения
CN107082810B (zh) 2012-07-04 2020-12-25 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗茶碱抗体及使用方法
JP6247287B2 (ja) 2012-07-04 2017-12-13 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗ビオチン抗体および使用方法
KR102090849B1 (ko) 2012-07-04 2020-03-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 공유 결합된 항원-항체 접합체
CA2877009C (en) 2012-07-05 2023-10-03 Devin TESAR Expression and secretion system
JP6297550B2 (ja) 2012-07-09 2018-03-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７９ｂ抗体を含む免疫複合体
AR091700A1 (es) 2012-07-09 2015-02-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b
BR112015000439A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugado , formulação farmacêutica e métodos de tratamento de um indivíduo e de inibição da proliferação
EP2869849A1 (en) 2012-07-09 2015-05-13 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
EP3210627B1 (en) 2012-07-12 2022-12-21 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugates of cell binding molecules with cytotoxic agents
EP3495387B1 (en) 2012-07-13 2021-09-01 Roche Glycart AG Bispecific anti-vegf/anti-ang-2 antibodies and their use in the treatment of ocular vascular diseases
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
CA2880162C (en) 2012-07-31 2023-04-04 Bioasis Technologies, Inc. Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof
AU2013299724A1 (en) 2012-08-07 2015-02-26 Genentech, Inc. Combination therapy for the treatment of glioblastoma
PT3470432T (pt) 2012-08-21 2021-12-14 Regeneron Pharma Métodos para tratamento ou prevenção da asma por meio de administração de um antagonista de il-4r
PL2887959T3 (pl) 2012-08-23 2019-04-30 Agensys Inc Koniugaty leków i przeciwciał (adc), które wiążą białka 158p1d7
EP3838923B1 (en) 2012-08-24 2024-05-01 The Regents of The University of California Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis
EP2703008A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Human antibodies to PCSK9 for use in methods of treating particular groups of subjects
EP2703009A1 (en) 2012-08-31 2014-03-05 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
EP2706070A1 (en) 2012-09-06 2014-03-12 Sanofi Combination treatments involving antibodies to human PCSK9
EP4193834A1 (en) 2012-09-07 2023-06-14 Yale University Genetically modified non-human animals and methods of use thereof
NZ731864A (en) 2012-09-07 2022-07-01 Regeneron Pharma Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
CA2879768A1 (en) 2012-10-08 2014-04-17 Roche Glycart Ag Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use
CA2887133C (en) * 2012-10-12 2022-05-03 Glycovaxyn Ag Methods of host cell modification
WO2014071358A2 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP3556206B1 (en) 2012-11-05 2021-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified non-human animals and methods of use thereof
EP2917360B1 (en) 2012-11-06 2020-01-08 Medlmmune, LLC Antibodies to s. aureus surface determinants
CN104755500B (zh) 2012-11-08 2020-10-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 结合HER3 β-发夹的HER3抗原结合蛋白
CN104968367B (zh) 2012-11-13 2018-04-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗血凝素抗体和使用方法
TW201438736A (zh) 2012-11-14 2014-10-16 Regeneron Pharma 以ｄｌｌ４拮抗劑治療卵巢癌之方法
ES2701076T3 (es) 2012-11-24 2019-02-20 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores hidrofílicos y sus usos para la conjugación de fármacos a las moléculas que se unen a las células
PT2931030T (pt) 2012-12-14 2020-08-03 Open Monoclonal Tech Inc Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem
WO2014107739A1 (en) 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
CA2898326C (en) 2013-01-18 2022-05-17 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
EP2953452A1 (en) 2013-02-06 2015-12-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. B cell lineage based immunogen design with humanized animals
CN117843785A (zh) 2013-02-07 2024-04-09 Csl有限公司 Il-11r结合蛋白及其应用
HUE045478T2 (hu) 2013-02-20 2019-12-30 Regeneron Pharma Humanizált T-sejt koreceptorokat expresszáló egerek
EP2958990B1 (en) 2013-02-20 2019-10-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetic modification of rats
WO2014130690A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals with modified immunoglobulin heavy chain sequences
JP2016509045A (ja) 2013-02-22 2016-03-24 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療し、薬剤耐性を防止する方法
US20150342163A1 (en) 2013-02-22 2015-12-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified major histocompatibility complex mice
JP6444321B2 (ja) * 2013-02-22 2018-12-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ヒト化主要組織適合性遺伝子複合体を発現するマウス
RU2015140921A (ru) 2013-02-26 2017-04-03 Роше Гликарт Аг Антитела к mcsp
EP2964260A2 (en) 2013-03-06 2016-01-13 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating and preventing cancer drug resistance
CN108464278B (zh) * 2013-03-11 2021-05-04 瑞泽恩制药公司 表达嵌合的主要组织相容性复合物(mhc)ii类分子的转基因小鼠
WO2014160179A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
PL3501272T3 (pl) 2013-03-13 2023-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mysz eksprymująca ograniczony repertuar lekkiego łańcucha immunoglobuliny
WO2014160438A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Bioasis Technologies Inc. Fragments of p97 and uses thereof
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
WO2014159835A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
MX369574B (es) 2013-03-14 2019-11-13 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos contra grem1.
JP2016515132A (ja) 2013-03-14 2016-05-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｍｅｋ阻害剤化合物のｈｅｒ３／ｅｇｆｒ阻害剤化合物との組み合わせ及び使用方法
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
ES2829376T3 (es) 2013-03-14 2021-05-31 Univ Erasmus Med Ct Rotterdam Mamífero no humano transgénico para la producción de anticuerpos
US10993420B2 (en) 2013-03-15 2021-05-04 Erasmus University Medical Center Production of heavy chain only antibodies in transgenic mammals
EP2970476A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
EP4356960A2 (en) 2013-03-15 2024-04-24 F. Hoffmann-La Roche AG Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
EP2968541A4 (en) 2013-03-15 2017-02-08 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
MX2015011348A (es) 2013-03-15 2016-01-15 Regeneron Pharma Moleculas biologicamente activas, conjugados de las mismas, y usos terapeuticos.
JP2016520528A (ja) 2013-03-15 2016-07-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌の治療及び抗癌剤耐性の防止方法
WO2014150877A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Ac Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
US20140328849A1 (en) 2013-03-15 2014-11-06 Genentech, Inc. Anti-crth2 antibodies and methods of use
EP2968508B1 (en) * 2013-03-15 2022-04-27 Sanofi Pasteur Biologics, LLC Antibodies against clostridium difficile toxins and methods of using the same
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
HUE040575T2 (hu) 2013-04-16 2019-03-28 Regeneron Pharma A patkány genom célzott módosítása
WO2014177460A1 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
SG10201810481UA (en) 2013-04-29 2018-12-28 Hoffmann La Roche Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
EP3878866A1 (en) 2013-04-29 2021-09-15 F. Hoffmann-La Roche AG Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
US9783618B2 (en) 2013-05-01 2017-10-10 Kymab Limited Manipulation of immunoglobulin gene diversity and multi-antibody therapeutics
US11707056B2 (en) * 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
US20140331339A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Kymab Limited Transgenic Non-Human Assay Vertebrates, Assays and Kits
SG11201509566RA (en) 2013-05-20 2015-12-30 Genentech Inc Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
TWI682780B (zh) 2013-05-30 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 醫藥組成物用於製造治療與ｐｃｓｋ９功能獲得性突變有關之體染色體顯性高膽固醇血症的藥物之用途
EP2810955A1 (en) 2013-06-07 2014-12-10 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
US10494442B2 (en) 2013-06-07 2019-12-03 Sanofi Biotechnology Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
US10059771B2 (en) 2013-06-21 2018-08-28 Sanofi Biotechnology Methods for treating nasal polyposis by administering an IL-4R antagonist
AU2014296219A1 (en) 2013-08-01 2016-02-25 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (ADC) that bind to CD37 proteins
KR102138723B1 (ko) 2013-08-07 2020-07-29 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Lincrna-결핍 비인간 동물
JP6380394B2 (ja) 2013-08-09 2018-08-29 アステラス製薬株式会社 新規抗ヒトｔｓｌｐ受容体抗体
CA2922113C (en) 2013-08-23 2023-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diagnostic tests and methods for assessing safety, efficacy or outcome of allergen-specific immunotherapy (sit)
CN105530942B (zh) 2013-08-26 2019-10-11 瑞泽恩制药公司 一种包含大环内酯类非对映体的药物组合物、其制备方法和用途
AU2014312190A1 (en) 2013-08-28 2016-02-18 Bioasis Technologies Inc. CNS-targeted conjugates of antibodies
US10617755B2 (en) 2013-08-30 2020-04-14 Genentech, Inc. Combination therapy for the treatment of glioblastoma
US10456470B2 (en) 2013-08-30 2019-10-29 Genentech, Inc. Diagnostic methods and compositions for treatment of glioblastoma
US9988408B2 (en) 2013-09-02 2018-06-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Cytotoxic agents for conjugation to a cell binding molecule
EP3046940B1 (en) 2013-09-17 2019-07-03 F.Hoffmann-La Roche Ag Methods of using anti-lgr5 antibodies
MY191512A (en) 2013-09-18 2022-06-28 Regeneron Pharma Histidine engineered light chain antibodies and genetically modified non-human animals for generating the same
DE202014010413U1 (de) * 2013-09-18 2015-12-08 Kymab Limited Zellen und Organismen
CA2925723A1 (en) * 2013-10-01 2015-04-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
BR112016007635A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-12 Genentech Inc inibidores de nsp4 e métodos de uso
EP3689913B1 (en) 2013-10-11 2022-03-23 Sanofi Biotechnology Use of a pcsk9 inhibitor to treat hyperlipidemia
KR20160070136A (ko) 2013-10-18 2016-06-17 제넨테크, 인크. 항-rspo2 및/또는 항-rspo3 항체 및 그의 용도
CA2924873A1 (en) 2013-10-23 2015-04-30 Genentech, Inc. Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders
EP3466445A1 (en) 2013-11-06 2019-04-10 Janssen Biotech, Inc. Anti-ccl17 antibodies
EP3882273A1 (en) 2013-11-12 2021-09-22 Sanofi Biotechnology Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors
EP3783020A1 (en) 2013-11-21 2021-02-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
MX2016007654A (es) * 2013-12-11 2017-08-15 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma.
EP4349980A2 (en) 2013-12-11 2024-04-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the targeted modification of a genome
SG11201604784XA (en) 2013-12-13 2016-07-28 Genentech Inc Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
BR112016013963A2 (pt) 2013-12-17 2017-10-10 Genentech Inc terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1
BR122021025087B1 (pt) 2013-12-17 2023-04-04 Genentech, Inc Anticorpo anti-cd3, célula hospedeira procariótica, método de produção do anticorpo biespecífico, imunoconjugado, composição, uso do anticorpo biespecífico e kit
RU2016128726A (ru) 2013-12-17 2018-01-23 Дженентек, Инк. Способы лечения злокачественных опухолей с использованием антагонистов связывания по оси pd-1 и антитела против cd20
EP3083686B2 (en) 2013-12-17 2023-03-22 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN105829534B (zh) 2013-12-24 2021-08-03 安斯泰来制药株式会社 抗人bdca-2抗体
MX2016008191A (es) 2014-01-03 2017-11-16 Hoffmann La Roche Conjugados de toxina polipeptidica-anticuerpo unidos covalentemente.
US10561737B2 (en) 2014-01-03 2020-02-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
MX2016008189A (es) 2014-01-03 2016-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados helicoidales-anticuerpo anti-helicoidal unidos covalentemente y usos de los mismos.
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
KR20160107190A (ko) 2014-01-15 2016-09-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
AU2015209154A1 (en) 2014-01-24 2017-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-STEAP1 antibodies and immunoconjugates
WO2015116852A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating rheumatoid arthritis by administering an il-6r antibody
AU2015210612B2 (en) 2014-02-03 2020-04-09 Bioasis Technologies Inc. P97 fusion proteins
TW202239429A (zh) 2014-02-08 2022-10-16 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
TWI705824B (zh) 2014-02-08 2020-10-01 美商建南德克公司 治療阿茲海默症之方法
ES2685424T3 (es) 2014-02-12 2018-10-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos anti-Jagged1 y procedimientos de uso
US20150231236A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with hypercholesterolemia that is not adequately controlled by moderate-dose statin therapy
DK3107562T3 (da) 2014-02-19 2019-12-16 Bioasis Technologies Inc P97-ids-fusionsproteiner
MX2016010729A (es) 2014-02-21 2016-10-26 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos.
KR102368450B1 (ko) 2014-02-21 2022-02-28 사노피 바이오테크놀로지 Ｉｌ-4ｒ 길항제의 투여에 의한 천식의 치료 또는 예방 방법
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
PL3116999T3 (pl) 2014-03-14 2021-12-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposoby i kompozycje do wydzielania polipeptydów heterologicznych
WO2015142668A1 (en) 2014-03-17 2015-09-24 Sanofi Methods for reducing cardiovascular risk
CN106255410B (zh) 2014-03-21 2020-01-10 瑞泽恩制药公司 产生单结构域结合蛋白的非人动物
SG10201808083VA (en) 2014-03-21 2018-10-30 Regeneron Pharma Vl antigen binding proteins exhibiting distinct binding characteristics
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
CN107002119A (zh) 2014-03-24 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 使用c‑met拮抗剂的癌症治疗及前者与hgf表达的关联
SG11201608106PA (en) 2014-03-31 2016-10-28 Genentech Inc Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
PE20211291A1 (es) 2014-03-31 2021-07-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-ox40 y metodos de uso
EP3126389A1 (en) 2014-04-02 2017-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Method for detecting multispecific antibody light chain mispairing
SG11201608194VA (en) 2014-04-03 2016-10-28 Igm Biosciences Inc Modified j-chain
BR112016024319B1 (pt) 2014-04-18 2024-01-23 Acceleron Pharma Inc USO DE UMA COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO UM ANTAGONISTA DE ActRII PARA A FABRICAÇÃO DE UM MEDICAMENTO PARA TRATAR OU PREVINIR UMA COMPLICAÇÃO DE ANEMIA FALCIFORME
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
CN106413757B (zh) 2014-05-01 2022-01-14 比奥阿赛斯技术有限公司 p97-多核苷酸结合物
DK3841877T3 (da) 2014-05-19 2023-11-27 Regeneron Pharma Genetisk modificeret mus, der eksprimerer human EPO
JP2017522861A (ja) 2014-05-22 2017-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｇｐｃ３抗体及びイムノコンジュゲート
KR20170005016A (ko) 2014-05-23 2017-01-11 제넨테크, 인크. MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법
US9497945B2 (en) * 2014-05-30 2016-11-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized dipeptidyl peptidase IV (DPP4) animals
LT3152312T (lt) 2014-06-06 2020-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tikslinio lokuso modifikavimo būdai ir kompozicijos
CN106459202A (zh) 2014-06-11 2017-02-22 豪夫迈·罗氏有限公司 抗LgR5抗体及其用途
AU2015274277B2 (en) 2014-06-13 2021-03-18 Acceleron Pharma, Inc. Methods and compositions for treating ulcers
CN107073121A (zh) 2014-06-13 2017-08-18 基因泰克公司 治疗及预防癌症药物抗性的方法
HUE049405T2 (hu) 2014-06-23 2020-09-28 Regeneron Pharma Nukleáz-közvetített DNS-összeállítás
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
HUE041584T2 (hu) 2014-06-26 2019-05-28 Regeneron Pharma Célzott genetikai módosítások és alkalmazási módszerek és készítmények
TW201623329A (zh) 2014-06-30 2016-07-01 亞佛瑞司股份有限公司 針對骨調素截斷變異體的疫苗及單株抗體暨其用途
NZ728041A (en) 2014-07-10 2023-01-27 Affiris Ag Substances and methods for the use in prevention and/or treatment in huntington’s disease
EP3166627A1 (en) 2014-07-11 2017-05-17 Genentech, Inc. Notch pathway inhibition
JP2017523776A (ja) 2014-07-14 2017-08-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 膠芽腫の診断方法及びその治療用組成物
JP6912374B2 (ja) 2014-07-16 2021-08-04 サノフィ・バイオテクノロジー 高コレステロール血症を有する高心血管リスク患者を処置するための方法
CA2955294A1 (en) 2014-07-16 2016-01-21 Sanofi Biotechnology Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (hefh)
RU2017108238A (ru) 2014-08-15 2018-09-17 Эйдинкс, Инк. Олигонуклеотиды-приманки для лечения боли
MX2017003022A (es) 2014-09-12 2017-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados.
MX2017003126A (es) 2014-09-12 2017-08-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados.
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
KR20170062466A (ko) 2014-09-16 2017-06-07 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항-글루카곤 항체 및 그것의 사용
CN107124870A (zh) 2014-09-17 2017-09-01 基因泰克公司 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂*的免疫缀合物
WO2016044745A1 (en) 2014-09-19 2016-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors
CA2961517C (en) 2014-09-23 2023-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-il-25 antibodies and uses thereof
DK3262071T3 (da) 2014-09-23 2020-06-15 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater
PL3207124T3 (pl) 2014-10-15 2019-11-29 Regeneron Pharma Sposoby i kompozycje do wytwarzania lub utrzymywania komórek pluripotencjalnych
WO2016061389A2 (en) 2014-10-16 2016-04-21 Genentech, Inc. Anti-alpha-synuclein antibodies and methods of use
AU2015336946A1 (en) 2014-10-23 2017-04-13 La Trobe University Fn14-binding proteins and uses thereof
US10626176B2 (en) 2014-10-31 2020-04-21 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind B7-H4
RU2017119009A (ru) 2014-11-03 2018-12-05 Дженентек, Инк. Анализы для обнаружения субпопуляций иммунных т-клеток и способы их применения
RU2017119231A (ru) 2014-11-03 2018-12-06 Дженентек, Инк. Способы и биомаркеры для прогнозирования эффективности и оценки лечения агонистом ох40
PT3215528T (pt) 2014-11-06 2019-10-11 Hoffmann La Roche Variantes da região fc com ligação modificada ao fcrn e métodos de utilização
CN107073126A (zh) 2014-11-06 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和tigit抑制剂的组合疗法
WO2016071377A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties
WO2016077369A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Genentech, Inc. Animal model for nephropathy and agents for treating the same
TWI705976B (zh) 2014-11-10 2020-10-01 美商建南德克公司 抗介白素-33抗體及其用途
EP3218412A1 (en) 2014-11-14 2017-09-20 Sanofi Biotechnology Methods for treating chronic sinusitis with nasal polyps by administering an il-4r antagonist
US10160795B2 (en) 2014-11-14 2018-12-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to Ebola virus glycoprotein and their use
MA40929A (fr) 2014-11-14 2017-09-20 Regeneron Pharma Procédé de production d'anticorps à affinité élevée
WO2016081384A1 (en) 2014-11-17 2016-05-26 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
EP3221361B1 (en) 2014-11-19 2021-04-21 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
WO2016081639A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy
CN107001473B (zh) 2014-11-19 2021-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-运铁蛋白受体抗体及使用方法
DK3221355T3 (da) 2014-11-20 2020-12-07 Hoffmann La Roche Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler CD3 og folatreceptor 1 (FolR1) samt PD-1-aksebindende antagonister
LT3221457T (lt) 2014-11-21 2019-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas
RU2020122439A (ru) 2014-11-24 2020-09-24 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Не относящиеся к человеку животные, экспрессирующие гуманизированный комплекс cd3
JP6554280B2 (ja) * 2014-11-28 2019-07-31 株式会社デンソーテン データ処理装置、画像処理方法、及び、プログラム
MA41119A (fr) 2014-12-03 2017-10-10 Acceleron Pharma Inc Méthodes de traitement de syndromes myélodysplasiques et d'anémie sidéroblastique
JP6802158B2 (ja) 2014-12-05 2020-12-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＤ７９ｂ抗体及び使用方法
AU2015360579A1 (en) 2014-12-10 2017-05-18 Genentech, Inc. Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
RU2707137C2 (ru) 2014-12-19 2019-11-22 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания
ES2899894T3 (es) 2014-12-19 2022-03-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-C5 y métodos de uso
AU2015367224B2 (en) 2014-12-19 2020-12-10 Monash University IL-21 antibodies
TWI701258B (zh) 2014-12-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
CN107428823B (zh) 2015-01-22 2021-10-26 中外制药株式会社 两种以上抗-c5抗体的组合与使用方法
TWI710573B (zh) 2015-01-26 2020-11-21 美商再生元醫藥公司 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體
EA201791754A1 (ru) 2015-02-05 2019-01-31 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ЗАВИСЯЩИЙ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН, ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ, IL-8-СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2016130539A2 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Multi-specific antibodies with affinity for human a33 antigen and dota metal complex and uses thereof
CA2975899A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Biommune Technologies Inc. Antibodies to l-type voltage gated channels and related methods
MY178919A (en) 2015-03-09 2020-10-23 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins
KR20170127011A (ko) 2015-03-16 2017-11-20 제넨테크, 인크. Il-13을 검출 및 정량화하는 방법 및 th2-연관 질환의 진단 및 치료에서의 용도
KR102616160B1 (ko) 2015-03-16 2023-12-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 저하된 상위 및 하위 운동 뉴런 기능 및 감각 지각을 나타내는 비-인간 동물
CA2979702A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals that select for light chain variable regions that bind antigen
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
US10562960B2 (en) 2015-03-20 2020-02-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
BR112017020054A2 (pt) 2015-03-23 2018-06-05 Jounce Therapeutics Inc anticorpos para icos
EP3273998B1 (en) 2015-03-27 2019-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
HRP20231039T1 (hr) 2015-04-06 2023-12-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Imunosni odgovori posredovani humaniziranim t stanicama kod ne-humanih životinja
WO2016164503A1 (en) 2015-04-06 2016-10-13 Acceleron Pharma Inc. Alk7:actriib heteromultimers and uses thereof
MA41919A (fr) 2015-04-06 2018-02-13 Acceleron Pharma Inc Hétéromultimères alk4:actriib et leurs utilisations
MX2017012802A (es) 2015-04-07 2018-04-11 Alector Llc Anticuerpos antisortilina y métodos para su uso.
KR20180002653A (ko) 2015-04-07 2018-01-08 제넨테크, 인크. 효능작용 활성을 갖는 항원 결합 복합체 및 사용 방법
JP6752221B2 (ja) 2015-04-13 2020-09-09 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒト化ｓｉｒｐａ−ｉｌ１５ノックインマウス及びその使用方法
CN107810197B (zh) 2015-04-24 2022-10-25 豪夫迈·罗氏有限公司 鉴定包含结合多肽的细菌的方法
CN107709363A (zh) 2015-05-01 2018-02-16 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
US20160346387A1 (en) 2015-05-11 2016-12-01 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
PT3294770T (pt) 2015-05-12 2020-12-04 Hoffmann La Roche Métodos terapêuticos e diagnósticos para o cancro
US10395759B2 (en) 2015-05-18 2019-08-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for copy number variant detection
WO2016196343A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
CA2986048C (en) 2015-05-29 2021-10-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a disruption in a c9orf72 locus
IL255372B (en) 2015-05-29 2022-07-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer
JP2018516933A (ja) 2015-06-02 2018-06-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−３４抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
UA126272C2 (uk) 2015-06-05 2022-09-14 Дженентек, Інк. Антитіло проти тау-білка та спосіб його застосування
WO2016200836A1 (en) 2015-06-08 2016-12-15 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
MX2017015937A (es) 2015-06-08 2018-12-11 Genentech Inc Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos anti-ox40 y antagonistas de unión al eje de pd-1.
EP3307771A2 (en) 2015-06-12 2018-04-18 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
EP3307779A2 (en) 2015-06-12 2018-04-18 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
WO2016205176A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
AU2016280102B2 (en) 2015-06-16 2022-06-16 Genentech, Inc. Humanized and affinity matured antibodies to FcRH5 and methods of use
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
WO2016205531A2 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and methods of use
CA2986263A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
BR112017024610A2 (pt) 2015-06-24 2018-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag anticorpos para receptor antitransferrina com afinidade especificada
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
CA2991973C (en) 2015-07-12 2021-12-07 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
CA2994413A1 (en) 2015-08-04 2017-02-09 Acceleron Pharma, Inc. Methods for treating myeloproliferative disorders
CA2994825A1 (en) 2015-08-05 2017-02-09 Janssen Biotech, Inc. Anti-cd154 antibodies and methods of using them
TW201713690A (zh) 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
KR20180034672A (ko) 2015-08-18 2018-04-04 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체
AU2016311268B2 (en) 2015-08-24 2023-02-02 Trianni, Inc. Enhanced production of immunoglobulins
EP3350202A1 (en) 2015-09-18 2018-07-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Il-8-binding antibodies and uses thereof
WO2017053807A2 (en) 2015-09-23 2017-03-30 Genentech, Inc. Optimized variants of anti-vegf antibodies
BR112018005931A2 (pt) 2015-09-24 2018-10-09 Abvitro Llc composições de anticorpo para hiv e métodos de uso
RU2732591C2 (ru) 2015-09-25 2020-09-21 Дженентек, Инк. Анти-tigit антитела и способы применения
WO2017059387A1 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Igm Biosciences, Inc. Binding molecules with modified j-chain
WO2017059196A2 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Janssen Biotech, Inc. Antagonistic antibodies specifically binding human cd40 and methods of use
WO2017059380A1 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Igm Biosciences, Inc. Binding molecules with modified j-chain
ES2895034T3 (es) 2015-10-02 2022-02-17 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-PD1 y procedimientos de uso
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
RU2753390C1 (ru) 2015-10-02 2021-08-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела к человеческому cd20/человеческому рецептору трансферрина и способы их применения
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
KR20180066236A (ko) 2015-10-22 2018-06-18 조운스 테라퓨틱스, 인크. Icos 발현을 계측하기 위한 유전자 특질
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
MA43113B1 (fr) 2015-10-30 2021-06-30 Hoffmann La Roche Anticorps anti-htr a1 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
US10407510B2 (en) 2015-10-30 2019-09-10 Genentech, Inc. Anti-factor D antibodies and conjugates
BR112018008891A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a pd-1 e tim-3 e seus usos
EP3371217A1 (en) 2015-11-08 2018-09-12 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of screening for multispecific antibodies
EP3380121B1 (en) 2015-11-23 2023-12-20 Acceleron Pharma Inc. Actrii antagonist for use in treating eye disorders
US10813346B2 (en) 2015-12-03 2020-10-27 Trianni, Inc. Enhanced immunoglobulin diversity
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
CN115920030A (zh) 2015-12-09 2023-04-07 豪夫迈·罗氏有限公司 Ii型抗cd20抗体用于降低抗药物抗体形成
BR112018012344A2 (pt) 2015-12-17 2018-12-04 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a hla-dr e seus usos
RU2742606C2 (ru) 2015-12-18 2021-02-09 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к с5 и способы их применения
CA3006529A1 (en) 2016-01-08 2017-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies
KR102482103B1 (ko) 2016-01-13 2022-12-28 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 조작된 중쇄 다양성 영역을 갖는 설치류
EP3405489A1 (en) 2016-01-20 2018-11-28 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
CN114478801A (zh) 2016-01-25 2022-05-13 里珍纳龙药品有限公司 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法
US11053288B2 (en) 2016-02-04 2021-07-06 Trianni, Inc. Enhanced production of immunoglobulins
CN109195443A (zh) * 2016-02-16 2019-01-11 雷杰纳荣制药公司 具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物
MX2018009680A (es) 2016-02-17 2018-09-10 Regeneron Pharma Metodos para tratar o prevenir la aterosclerosis administrando un inhibidor de angptl3.
MX2018010361A (es) 2016-02-29 2019-07-08 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
MX2018010401A (es) 2016-03-03 2019-03-06 Regeneron Pharma Metodos para el tratamiento de pacientes con hiperlipidemia administrando un inhibidor de pcsk9 en combinacion con un inhibidor de angptl3.
WO2017159699A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies
EP3433621A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
CA3018186C (en) 2016-03-29 2023-06-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetic variant-phenotype analysis system and methods of use
EP3228630A1 (en) 2016-04-07 2017-10-11 IMBA-Institut für Molekulare Biotechnologie GmbH Combination of an apelin antagonist and an angiogenesis inhibitor for the treatment of cancer
SI3439689T1 (sl) 2016-04-08 2021-12-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Postopki za zdravljenje hiperlipidemije z zaviralcem ANGPTL8 in zaviralcem ANGPTL3
WO2017180864A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
MX2018012492A (es) 2016-04-15 2019-06-06 Genentech Inc Métodos para monitorear y tratar el cáncer.
CN109154027A (zh) 2016-04-15 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于监测和治疗癌症的方法
MX2018012741A (es) 2016-04-28 2019-05-16 Regeneron Pharma Metodos para el tratamiento de pacientes con hipercolesterolemia familiar.
BR112018069890A2 (pt) 2016-05-02 2019-02-05 Hoffmann La Roche polipeptídio de fusão que se liga de forma específica a um alvo, polipeptídio de fusão dimérico, ácido nucleico isolado, par de ácidos nucleicos isolados, célula hospedeira, método para produzir um polipeptídio de fusão, imunoconjugado, formulação farmacêutica, polipeptídio de fusão e uso do polipeptídio de fusão
CN109071640B (zh) 2016-05-11 2022-10-18 豪夫迈·罗氏有限公司 经修饰抗生腱蛋白抗体及使用方法
TWI755395B (zh) 2016-05-13 2022-02-21 美商再生元醫藥公司 抗-pd-1抗體與輻射治療癌症之組合
ES2858151T3 (es) 2016-05-20 2021-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso
RU2745563C2 (ru) 2016-05-20 2021-03-29 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк
CN109313200B (zh) 2016-05-27 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
SI3462853T1 (sl) 2016-06-03 2023-05-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Glodavci, ki izražajo eksogeno terminalno deoksinukleotidiltransferazo
CA3025995C (en) 2016-06-06 2023-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion proteins for ophthalmology with increased eye retention
WO2017214089A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals expressing antibodies with human lambda light chains
EP3464280B1 (en) 2016-06-06 2021-10-06 F. Hoffmann-La Roche AG Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
GB201610162D0 (en) 2016-06-10 2016-07-27 Imp Innovations Ltd And Inst Pasteur Methods
WO2017218515A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibodies and uses thereof
JP7133477B2 (ja) 2016-06-24 2022-09-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリユビキチン多重特異性抗体
SG11201811559WA (en) 2016-06-27 2019-01-30 Univ California Cancer treatment combinations
CN109415435B (zh) 2016-07-04 2024-01-16 豪夫迈·罗氏有限公司 新型抗体形式
EP3496739B1 (en) 2016-07-15 2021-04-28 Acceleron Pharma Inc. Compositions comprising actriia polypeptides for use in treating pulmonary hypertension
TW201815821A (zh) 2016-07-18 2018-05-01 美商再生元醫藥公司 抗茲卡病毒抗體及使用方法
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
AU2017302282A1 (en) 2016-07-27 2019-02-07 Acceleron Pharma Inc. Methods and compositions for treating myelofibrosis
KR20190041476A (ko) 2016-07-29 2019-04-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 C-절단된 피브릴린-1의 발현을 유도하는 돌연변이를 포함하는 마우스
CN109415444B (zh) 2016-07-29 2024-03-01 中外制药株式会社 显示增加的备选fviii辅因子功能活性的双特异性抗体
CN109689099B (zh) 2016-08-05 2023-02-28 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
US11046776B2 (en) 2016-08-05 2021-06-29 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic antibodies having agonistic activity and methods of use
CN109476748B (zh) 2016-08-08 2023-05-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
EP3282019A1 (en) 2016-08-09 2018-02-14 Medizinische Universität Wien Genotyping and treatment of cancer, in particular chronic lymphocytic leukemia
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
EP3497126A4 (en) 2016-08-12 2020-04-08 Janssen Biotech, Inc. ANTIBODIES OF FC MODIFIED ANTI-TNFR SUPERFAMILY HAVING IMPROVED AGONIST ACTIVITY AND METHODS OF USE THEREOF
KR102587941B1 (ko) 2016-08-12 2023-10-11 얀센 바이오테크 인코포레이티드 향상된 효능작용 및 이펙터 기능을 갖는 조작된 항체 및 다른 Fc-도메인 함유 분자
MX2019002382A (es) 2016-08-29 2019-06-20 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-gremlin-1 (grem1) y metodos de uso de los mismos para tratar la hipertension arterial pulmonar.
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515932B1 (en) 2016-09-19 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Complement factor based affinity chromatography
UA124269C2 (uk) 2016-09-23 2021-08-18 Дженентек, Інк. Застосування антагоністу il-13 для лікування атопічного дерматиту
CA3034105A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Csl Limited Coagulation factor binding proteins and uses thereof
WO2018064600A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus
EP4026556A1 (en) 2016-10-05 2022-07-13 Acceleron Pharma Inc. Compositions and method for treating kidney disease
JP7050770B2 (ja) 2016-10-05 2022-04-08 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗体薬物コンジュゲートの調製方法
MX2019003934A (es) 2016-10-06 2019-07-10 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
JP7265984B2 (ja) 2016-10-21 2023-04-27 アディマブ， エルエルシー 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法
JP2020503843A (ja) 2016-10-21 2020-02-06 アディマブ， エルエルシー 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法
IL303833A (en) 2016-10-21 2023-08-01 Adimab Llc Respiratory syncytial virus antibodies and methods for their production and use
CN110267678A (zh) 2016-10-29 2019-09-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗mic抗体和使用方法
AU2017348743C1 (en) * 2016-10-31 2022-03-03 National University Corporation Tottori University Human antibody–producing non-human animal and method for preparing human antibodies using same
HUE057559T2 (hu) 2016-11-02 2022-06-28 Jounce Therapeutics Inc PD-1 elleni antitestek és alkalmazásaik
KR102319069B1 (ko) 2016-11-04 2021-11-01 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 조작된 면역글로불린 람다 경쇄 유전자좌를 갖는 비인간 동물
JP7330101B2 (ja) 2016-11-08 2023-08-21 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート
KR20220150408A (ko) 2016-11-14 2022-11-10 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
JP7133551B2 (ja) 2016-11-17 2022-09-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ａｎｇｐｔｌ８抗体を用いて肥満を処置する方法
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
US11773163B2 (en) 2016-11-21 2023-10-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the prophylactic treatment of metastases
EP3548082B1 (en) 2016-11-29 2024-05-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A pharmaceutical composition for averting opioid addiction
KR102480773B1 (ko) 2016-11-30 2022-12-23 크로다 인터내셔날 피엘씨 수성 결합제 시스템, 코팅 조성물 및 코팅
EP3551655A2 (en) 2016-12-07 2019-10-16 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of their use
WO2018106781A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Genentech, Inc Anti-tau antibodies and methods of use
EP3556773A4 (en) 2016-12-13 2020-08-19 Astellas Pharma Inc. ANTIBODIES TO HUMAN CD73
EP3559250A1 (en) 2016-12-21 2019-10-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Re-use of enzymes in in vitro glycoengineering of antibodies
JP6850351B2 (ja) 2016-12-21 2021-03-31 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗体のインビトロ糖鎖工学
KR102293106B1 (ko) 2016-12-21 2021-08-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 항체의 시험관 내 당조작 방법
US11352417B2 (en) 2016-12-22 2022-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies
WO2018124155A1 (ja) * 2016-12-27 2018-07-05 国立大学法人群馬大学 条件付きノックアウト動物の製造方法
TWI781130B (zh) 2017-01-03 2022-10-21 美商再生元醫藥公司 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體
CA3049980A1 (en) 2017-01-23 2018-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 13 (hsd17b13) variants and uses thereof
US10713373B2 (en) * 2017-02-09 2020-07-14 Lifesite, Inc. Computing system with information storage mechanism and method of operation thereof
EP3580235B1 (en) 2017-02-10 2024-05-01 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
US10738131B2 (en) 2017-02-10 2020-08-11 Genentech, Inc. Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
SG11201907208XA (en) 2017-02-10 2019-09-27 Regeneron Pharma Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
KR20190134631A (ko) 2017-03-01 2019-12-04 제넨테크, 인크. 암의 진단 및 치료 방법
AR111249A1 (es) 2017-03-22 2019-06-19 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares
ES2928718T3 (es) 2017-04-03 2022-11-22 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-PD-1 con una IL-2 mutante o con IL-15
BR112019018767A2 (pt) 2017-04-03 2020-05-05 Hoffmann La Roche anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, usos, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção
WO2018184965A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates of il-2 with an anti-pd-1 and tim-3 bispecific antibody
EP4112644A1 (en) 2017-04-05 2023-01-04 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-lag3 antibodies
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
CA3060514A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods for treating lung inflammation
EP3624820A1 (en) 2017-04-21 2020-03-25 H. Hoffnabb-La Roche Ag Use of klk5 antagonists for treatment of a disease
MX2019012793A (es) 2017-04-27 2020-02-13 Tesaro Inc Agentes anticuerpos dirigidos contra el gen de activación de linfocitos-3 (lag-3) y usos de los mismos.
EP3625251A1 (en) 2017-05-15 2020-03-25 University Of Rochester Broadly neutralizing anti-influenza monoclonal antibody and uses thereof
CN110944718A (zh) 2017-05-18 2020-03-31 里珍纳龙药品有限公司 环糊精蛋白质药物偶联物
NZ759513A (en) 2017-06-01 2022-01-28 Regeneron Pharma Human antibodies to bet v 1 and methods of use thereof
KR20200014304A (ko) 2017-06-02 2020-02-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 암의 치료를 위한 제ii형 항-cd20 항체 및 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체
CA3065516A1 (en) 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use
CA3065171A1 (en) 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Engineered multispecific antibodies and other multimeric proteins with asymmetrical ch2-ch3 region mutations
US20190031774A1 (en) 2017-06-09 2019-01-31 Sanofi Biotechnology Methods for treating hyperlipidemia in diabetic patients by administering a pcsk9 inhibitor
AU2018290856A1 (en) 2017-06-28 2020-01-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-human papillomavirus (HPV) antigen-binding proteins and methods of use thereof
WO2019018770A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Trianni, Inc. SINGLE CHAIN VH-L1-CK1-L2-CH1 ANTIBODY
US11674962B2 (en) 2017-07-21 2023-06-13 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
MY197688A (en) 2017-07-24 2023-07-05 Regeneron Pharma Anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2019020480A1 (en) 2017-07-24 2019-01-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) ANTIBODIES AND PEPTIDES FOR TREATING HCMV RELATED DISEASES
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
JP7299160B2 (ja) 2017-08-03 2023-06-27 アレクトル エルエルシー 抗ｃｄ３３抗体及びその使用方法
WO2019051164A1 (en) 2017-09-07 2019-03-14 Augusta University Research Institute, Inc. ANTIBODIES AGAINST PROTEIN 1 OF PROGRAMMED CELL DEATH
CR20210381A (es) 2017-09-29 2021-09-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MOLÉCULA DE UNIÓN AL ANTÍGENO MULTIESPECÍFICA QUE TIENE ACTIVIDAD DE SUSTITUCIÓN DE LA FUNCIÓN DE COFACTOR DEL FACTOR VIII DE COAGULACIÓN DE SANGRE (FVIII) Y FORMULACIÓN FARMACÉUTICA QUE CONTIENE TAL MOLÉCULA COMO INGREDIENTE (Divisional Exp. 2020-0158)
SG11202001160XA (en) 2017-09-29 2020-03-30 Regeneron Pharma Bispecific antigen-binding molecules that bind a staphylococcus target antigen and a complement component and uses thereof
DK3476942T3 (da) 2017-10-27 2022-04-19 Trianni Inc Lange kimlinje-dh-gener og antistoffer med lang hcdr3
CN111526920A (zh) 2017-10-30 2020-08-11 赛诺菲生物技术公司 通过施用il-4r拮抗剂来治疗或预防哮喘的方法
KR102559706B1 (ko) 2017-11-01 2023-07-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Trifab-콘톨스바디
CN111295392A (zh) 2017-11-01 2020-06-16 豪夫迈·罗氏有限公司 Compbody–多价靶结合物
WO2019090263A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
AU2018375340A1 (en) 2017-11-30 2020-05-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-TrkB monoclonal antibodies and methods of use
PT3720279T (pt) 2017-12-05 2022-10-06 Regeneron Pharma Ratinhos tendo uma cadeia leve lambda de imunoglobulina manipulada e seus usos
CA3083113A1 (en) 2017-12-13 2019-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibody combinations and uses thereof
WO2019126194A1 (en) 2017-12-18 2019-06-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angptl8 assay and uses thereof
SG11202005632SA (en) 2017-12-21 2020-07-29 Hoffmann La Roche Antibodies binding to hla-a2/wt1
AU2018389111A1 (en) 2017-12-22 2020-06-18 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to LILRB2
TW201929907A (zh) 2017-12-22 2019-08-01 美商建南德克公司 Pilra結合劑用於治療疾病之用途
JP7369127B2 (ja) 2017-12-28 2023-10-25 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｔｉｇｉｔに対する単一ドメイン抗体及びその変異体
US20220135687A1 (en) 2017-12-28 2022-05-05 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Antibodies and variants thereof against pd-l1
WO2019133512A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Alector Llc Anti-tmem106b antibodies and methods of use thereof
CA3086926A1 (en) 2018-01-08 2019-07-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Steroids and antibody-conjugates thereof
KR20200120641A (ko) 2018-01-15 2020-10-21 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-1에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체
WO2019143636A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
US20190225689A1 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers with antagonistic anti-pd-1 antibodies
MA46731B1 (fr) 2018-01-26 2021-06-30 Regeneron Pharma Anticorps anti-tmprss2 et fragments de liaison à l'antigène
WO2019147867A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to influenza hemagglutinin
JP7268038B2 (ja) 2018-01-31 2023-05-02 アレクトル エルエルシー 抗ｍｓ４ａ４ａ抗体及びその使用方法
BR112020016169A2 (pt) 2018-02-08 2020-12-15 Genentech, Inc. Moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para produzir a molécula de ligação, conjunto de ácidos nucleicos isolados, conjunto de vetores, conjunto de células hospedeiras, imunoconjugado, composição, uso da molécula de ligação, métodos para tratar ou retardar a progressão de um câncer, métodos para aperfeiçoar a função imune e kit
KR20220098056A (ko) 2018-02-09 2022-07-08 제넨테크, 인크. 비만 세포 매개 염증성 질환에 대한 치료 및 진단 방법
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
CA3092108A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
JP7426940B2 (ja) 2018-03-06 2024-02-02 サノフィ・バイオテクノロジー 心血管リスクを低減するためのｐｃｓｋ９阻害剤の使用
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
JP2021518343A (ja) 2018-03-15 2021-08-02 中外製薬株式会社 ジカウイルスに対して交差反応性を有する抗デングウイルス抗体および使用方法
EP3940382A1 (en) 2018-03-24 2022-01-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for identifying hla-associated tumor peptides
CN112040769B (zh) 2018-03-24 2023-05-16 瑞泽恩制药公司 用于产生针对肽-mhc复合物的治疗抗体的经过基因修饰的非人动物、制造方法和用途
MX2020009851A (es) 2018-03-26 2020-11-09 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-pfrh5 y fragmentos de unión al antígeno de estos.
CA3093850A1 (en) 2018-03-26 2019-10-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized rodents for testing therapeutic agents
JP2021519073A (ja) 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
AU2019241350A1 (en) 2018-03-30 2020-07-30 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
EP3778639A4 (en) 2018-04-02 2021-06-09 Mab-Venture Biopharm Co., Ltd. ANTIBODIES BINDING TO LYMPHOCYTAIR ACTIVATION GENE 3 (LAG-3) AND ITS USE
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
WO2019213384A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 University Of Rochester Anti-influenza neuraminidase monoclonal antibodies and uses thereof
BR112020022400A2 (pt) 2018-05-09 2021-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-msr1 e métodos de uso dos mesmos
MA52777A (fr) 2018-05-24 2021-04-14 Janssen Biotech Inc Agents de liaison psma et utilisations correspondantes
EA202092847A1 (ru) 2018-05-24 2021-04-20 Янссен Байотек, Инк. Антитела к cd3 и их применение
MA52772A (fr) 2018-05-24 2021-04-14 Janssen Biotech Inc Anticorps anti-tmeff2 monospécifiques et multispécifiques et leurs utilisations
MX2020011828A (es) 2018-05-25 2021-02-09 Alector Llc Anticuerpos anti proteina alfa reguladora de se?ales (sirpa) y metodos de uso de los mismos.
MX2020011385A (es) 2018-05-31 2021-04-13 Glyconex Inc Anticuerpos terapeuticos que se unen antigenos de lewis b y lewis y biantenarios.
JP2021525806A (ja) 2018-06-01 2021-09-27 タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー， リミテッド 疾患または状態を処置するための組成物およびそれらの使用
EP3811364A1 (en) 2018-06-01 2021-04-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for sparse vector-based matrix transformations
KR102444180B1 (ko) 2018-06-14 2022-09-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 면역글로불린 중쇄 암호화 서열에서 dh-dh 재배열 가능한 비인간 동물
EP3810270A1 (en) 2018-06-19 2021-04-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-factor xii/xiia antibodies and uses thereof
MX2020014091A (es) 2018-06-23 2021-05-27 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer de pulmon con un antagonista de fijacion al eje pd-1, un agente de platino y un inhibidor de la topoisomerasa ii.
CA3099176A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Alector Llc Anti-sirp-beta1 antibodies and methods of use thereof
EP3820891A1 (en) 2018-07-10 2021-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modifying binding molecules to minimize pre-existing interactions
CN111372655A (zh) 2018-07-13 2020-07-03 艾利妥 抗分拣蛋白抗体及其使用方法
JP7386224B2 (ja) 2018-07-16 2023-11-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｉｌ３６ｒ抗体
MX2021000268A (es) 2018-07-17 2021-06-08 Humabs Biomed Sa Anticuerpos contra especies de campylobacter.
EP3823611A1 (en) 2018-07-18 2021-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
BR112021001214A2 (pt) 2018-07-24 2021-04-27 Medimmune, Llc anticorpo dirigido contra o fator de aglutinação a (clfa) de s. aureus
AU2019318031A1 (en) 2018-08-10 2021-02-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CD137 antigen-binding molecule and utilization thereof
US11472870B2 (en) 2018-08-10 2022-10-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical composition for safe and effective treatment of knee and/or hip pain
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
BR112021003206A2 (pt) 2018-08-29 2021-05-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. métodos e composições para tratar indivíduos com artrite reumatoide
TW202016307A (zh) 2018-08-31 2020-05-01 美商阿列克特有限責任公司 抗cd33 抗體及其使用方法
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
EP3849304B1 (en) 2018-09-13 2024-01-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Complement factor h gene knockout rat as a model of c3 glomerulopathy
WO2020061060A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
EP4249917A3 (en) 2018-09-21 2023-11-08 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
US20200109200A1 (en) 2018-10-09 2020-04-09 Genentech, Inc. Methods and systems for determining synapse formation
AU2019357983A1 (en) 2018-10-09 2021-05-27 Medimmune, Llc Combinations of anti-staphylococcus aureus antibodies
CN113196061A (zh) 2018-10-18 2021-07-30 豪夫迈·罗氏有限公司 肉瘤样肾癌的诊断和治疗方法
BR112021004329A2 (pt) 2018-10-23 2021-08-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-npr1 e usos dos mesmos
TW202037381A (zh) 2018-10-24 2020-10-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 綴合化學降解誘導劑及使用方法
JOP20210093A1 (ar) 2018-10-31 2023-01-30 Astellas Pharma Inc جسم مضاد fn14 غير متوافق مع الإنسان
EP3877413A1 (en) 2018-11-06 2021-09-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
EP3883963A1 (en) 2018-11-21 2021-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-staphylococcus antibodies and uses thereof
AU2018451747A1 (en) 2018-12-06 2021-06-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of diffuse large B-cell lymphoma comprising an anti-CD79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-CD20 antibody
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
WO2020120786A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Isolated mhc-derived human peptides and uses thereof for stimulating and activating the suppressive function of cd8+cd45rclow tregs
GB201820547D0 (en) 2018-12-17 2019-01-30 Oxford Univ Innovation Modified antibodies
GB201820554D0 (en) 2018-12-17 2019-01-30 Univ Oxford Innovation Ltd BTLA antibodies
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
EP3883609A2 (en) 2018-12-20 2021-09-29 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
IL301193A (en) 2018-12-20 2023-05-01 Regeneron Pharma Nuclease-mediated repeat expansion
TW202035442A (zh) 2018-12-20 2020-10-01 美商建南德克公司 經修飾之抗體Fc及其使用方法
SG11202106100VA (en) 2018-12-21 2021-07-29 23Andme Inc Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
TW202043256A (zh) 2019-01-10 2020-12-01 美商健生生物科技公司 前列腺新抗原及其用途
TW202043272A (zh) 2019-01-14 2020-12-01 美商建南德克公司 使用pd-1軸結合拮抗劑及rna疫苗治療癌症之方法
SG11202107981VA (en) 2019-01-22 2021-08-30 Genentech Inc Immunoglobulin a antibodies and methods of production and use
JPWO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2021-12-02 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
EA202192090A1 (ru) 2019-02-01 2021-10-20 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Антигенсвязывающие белки против гамма-цепи рецептора il2
MX2021009533A (es) 2019-02-12 2021-11-12 Regeneron Pharma Composiciones y metodos para usar anticuerpos bispecificos para unirse al complemento y a un antigeno objetivo.
EP3924378A4 (en) 2019-02-15 2023-04-05 WuXi Biologics Ireland Limited METHODS FOR THE PRODUCTION OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES WITH IMPROVED HOMOGENEITY
WO2020169472A2 (en) 2019-02-18 2020-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing phenotypic changes in macrophages
CN112400022B (zh) 2019-02-18 2023-06-30 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 具有人源化免疫球蛋白基因座的经遗传修饰的非人动物
JP2022520819A (ja) 2019-02-22 2022-04-01 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 遺伝子改変ナトリウムチャネルを有する齧歯類およびその使用方法
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
CA3131908A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Allogene Therapeutics, Inc. Dll3 targeting chimeric antigen receptors and binding agents
KR20210138588A (ko) 2019-03-08 2021-11-19 제넨테크, 인크. 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법
IL286917B (en) 2019-04-04 2022-09-01 Regeneron Pharma Methods for scar-free insertion of targeted modifications into targeted vectors
IL286905B1 (en) 2019-04-04 2024-02-01 Regeneron Pharma Non-human animals containing the human coagulation factor 12 locus
CA3134258A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies that bind ret and methods of use thereof
WO2020214690A1 (en) 2019-04-15 2020-10-22 Qwixel Therapeutics Fusion protein composition(s) comprising targeted masked type i interferons (ifna and ifnb) and an antibody against tumor antigen, for use in the treatment of cancer
CA3136888A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating prostate cancer with an anti- psma/cd3 antibody
JP2022529154A (ja) 2019-04-19 2022-06-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｍｅｒｔｋ抗体及びその使用方法
KR20220004028A (ko) 2019-04-26 2022-01-11 알로젠 테라퓨틱스 인코포레이티드 동종 car t 세포를 제조하는 방법
WO2020223541A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Sanofi Biotechnology Methods for treating or preventing asthma by administering an il-33 antagonist
US20220227853A1 (en) 2019-05-03 2022-07-21 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
EP3962947A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
BR112021022815A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular, kits, imunoconjugados e polatuzumabe vedotina
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
EP3801011A1 (en) 2019-06-04 2021-04-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use
TW202110323A (zh) 2019-06-05 2021-03-16 美商再生元醫藥公司 具有表現自κ 基因座的有限λ 輕鏈組庫的非人類動物及其用途
KR20220017939A (ko) 2019-06-07 2022-02-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 알부민 좌위를 포함하는 비-인간 동물
TW202112817A (zh) 2019-06-11 2021-04-01 美商阿列克特有限責任公司 抗揀選蛋白抗體之使用方法
CN113966343A (zh) 2019-06-11 2022-01-21 瑞泽恩制药公司 结合PcrV的抗PcrV抗体、包含抗PcrV抗体的组合物及其使用方法
JP2022537142A (ja) 2019-06-12 2022-08-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 骨形成タンパク質６に対するヒト抗体
WO2020257681A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of bispecific antigen-binding molecules that bind psma and cd3 in combination with 4-1bb co-stimulation
JP2022537269A (ja) 2019-06-21 2022-08-25 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｍｕｃ１６およびｃｄ３に結合する二重特異性抗原結合分子の４－１ｂｂ共刺激と組み合わせての使用
CA3145050A1 (en) 2019-06-29 2021-01-07 Robert Zhao Conjugates of tubulysin derivatives and cell binding molecules and methods of making
JP2022538886A (ja) 2019-07-01 2022-09-06 トリアニ・インコーポレイテッド トランスジェニック哺乳動物およびその使用法
CA3144958A1 (en) 2019-07-01 2021-01-07 Trianni, Inc. Transgenic mammals and methods of use thereof
TW202115115A (zh) 2019-07-02 2021-04-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 免疫結合物
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
AU2020315369A1 (en) 2019-07-16 2022-03-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating or preventing asthma by administering an IL-4R antagonist
UY38803A (es) 2019-07-26 2021-01-29 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreína y usos de las mismas
CA3144524A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
CN114174338A (zh) 2019-07-31 2022-03-11 豪夫迈·罗氏有限公司 与gprc5d结合的抗体
EP4003519A2 (en) 2019-07-31 2022-06-01 Alector LLC Anti-ms4a4a antibodies and methods of use thereof
WO2021026205A1 (en) 2019-08-05 2021-02-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
CN114173819A (zh) 2019-08-05 2022-03-11 瑞泽恩制药公司 通过施用il-4r拮抗剂治疗过敏和增强过敏原特异性免疫疗法的方法
US20210047425A1 (en) 2019-08-12 2021-02-18 Purinomia Biotech, Inc. Methods and compositions for promoting and potentiating t-cell mediated immune responses through adcc targeting of cd39 expressing cells
CA3148121A1 (en) 2019-08-15 2021-02-18 Janssen Biotech, Inc. Materials and methods for improved single chain variable fragments
DK3785536T3 (da) 2019-08-28 2022-03-28 Trianni Inc Adam6-knockin-mus
AU2020345913A1 (en) 2019-09-12 2022-02-24 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
CR20220156A (es) 2019-09-18 2022-05-23 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5/klk7 y métodos de uso
AU2020348393A1 (en) 2019-09-20 2022-02-24 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
CA3151406A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 Raymond D. Meng Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
EP4034560A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance antibodies and uses thereof
WO2021058729A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-müllerian inhibiting substance type i receptor antibodies and uses thereof
EP4036116A4 (en) 2019-09-27 2024-01-24 Nanjing Genscript Biotech Co Ltd ANTI-VHH DOMAIN ANTIBODIES AND USE THEREOF
EP4034160A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Janssen Biotech, Inc. Anti-ceacam antibodies and uses thereof
WO2021066869A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 TAE Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
BR112022007216A2 (pt) 2019-10-18 2022-08-23 Genentech Inc Métodos para tratamento de linfoma difuso, kit e imunoconjugado
AU2020374878A1 (en) 2019-10-28 2022-04-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use thereof
CA3155922A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Huang Huang Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
CN114641270A (zh) 2019-11-15 2022-06-17 豪夫迈·罗氏有限公司 防止水性蛋白质溶液中可见颗粒的形成
CR20220220A (es) 2019-11-18 2022-09-20 Janssen Biotech Inc Vacunas basadas en calr y jak2 mutantes y sus usos
WO2021099600A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Inhibitors of adrenomedullin for the treatment of acute myeloid leukemia by eradicating leukemic stem cells
IL293282A (en) 2019-11-25 2022-07-01 Mabloc Llc Yellow fever antiviral antibodies and methods of making and using them
WO2021108363A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele
WO2021113297A1 (en) 2019-12-02 2021-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Peptide-mhc ii protein constructs and uses thereof
EP4069365A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Sanofi Biotechnology Methods for treating copd by administering an il-33 antagonist
JP2023504204A (ja) 2019-12-09 2023-02-01 サノフィ・バイオテクノロジー デジタル的に識別されたｉｌ－４／ｉｌ－１３関連障害を治療する方法
EP3992974A1 (en) 2020-11-02 2022-05-04 Sanofi Biotechnology Methods for treating digitally-identified il-4/il-13 related disorders
MX2022007071A (es) 2019-12-10 2022-07-11 Regeneron Pharma Uso de un inhibidor de pcsk9 para tratar la hipercolesterolemia familiar homocigotica.
US11897968B2 (en) 2019-12-13 2024-02-13 Alector Llc Anti-MerTK antibodies and methods of use thereof
WO2021119505A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
WO2021122875A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a2/mage-a4
IL294045A (en) 2019-12-20 2022-08-01 Hudson Inst Med Res Proteins that bind to cxcl10 and their uses
BR112022011388A2 (pt) 2019-12-23 2022-08-30 Sanofi Biotechnology Métodos para tratar ou prevenir asma alérgica administrando um antagonista de il-33 e/ou um antagonista de il-4r
BR112022011723A2 (pt) 2019-12-27 2022-09-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-ctla-4 e uso do mesmo
CN115280151A (zh) 2020-01-08 2022-11-01 瑞泽恩制药公司 使用氨基酸增强质谱分析中的信号
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
JP2023511956A (ja) 2020-01-24 2023-03-23 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド タンパク質－抗ウイルス化合物コンジュゲート
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
US11639939B2 (en) 2020-01-27 2023-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tandem mass tag multiplexed quantitation of post-translational modifications of proteins
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CN115175559A (zh) 2020-01-28 2022-10-11 瑞泽恩制药公司 包含人源化pnpla3基因座的非人动物及其使用方法
CN115210564A (zh) 2020-01-30 2022-10-18 瑞泽恩制药公司 用于天然液相色谱-质谱的平台
MX2022009411A (es) 2020-01-31 2022-08-25 Regeneron Pharma Identificacion de compuestos de alta confianza mediante cromatografia de liquidos-espectrometria de masas.
MX2022009391A (es) 2020-01-31 2022-09-26 Genentech Inc Metodos para inducir linfocitos t especificos para neoepitopo con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn.
WO2021158521A1 (en) 2020-02-03 2021-08-12 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same
CA3108168A1 (en) 2020-02-05 2021-08-05 Yue Zhang Conjugates of cell-binding molecules with cytotoxic agents
EP4099821A1 (en) 2020-02-07 2022-12-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <smallcaps/>? ? ?klkb1? ? ? ? ?non-human animals comprising a humanizedlocus and methods of use
AU2021219671A1 (en) 2020-02-10 2022-07-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-Tmprss2 Antibodies and Antigen-Binding Fragments
EP4105238A4 (en) 2020-02-10 2024-03-27 Shanghai Escugen Biotechnology Co Ltd CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES AND THEIR USE
KR20220139357A (ko) 2020-02-10 2022-10-14 상하이 에스쿠겐 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드 Cldn18.2 항체 및 그의 사용
CA3167441A1 (en) 2020-02-11 2021-08-19 Vincent J. Idone Anti-acvr1 antibodies and uses thereof
TW202144395A (zh) 2020-02-12 2021-12-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
TW202140012A (zh) 2020-02-12 2021-11-01 比利時商健生藥品公司 用於治療尿路上皮癌的ｆｇｆｒ酪胺酸激酶抑制劑和抗ｐｄ１藥劑
US11692038B2 (en) 2020-02-14 2023-07-04 Gilead Sciences, Inc. Antibodies that bind chemokine (C-C motif) receptor 8 (CCR8)
TW202144389A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途
TW202144388A (zh) 2020-02-14 2021-12-01 美商健生生物科技公司 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途
BR112022017048A2 (pt) 2020-02-26 2022-11-16 Vir Biotechnology Inc Anticorpos contra sars-cov-2 e métodos para usar os mesmos
AU2021225920A1 (en) 2020-02-28 2022-09-15 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-CD137 construct and use thereof
EP4110826A1 (en) 2020-02-28 2023-01-04 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
PE20230001A1 (es) 2020-03-13 2023-01-05 Janssen Biotech Inc Materiales y metodos para la union de siglec-3/cd33
CN115279408A (zh) 2020-03-19 2022-11-01 基因泰克公司 同种型选择性抗TGF-β抗体及使用方法
US20230102342A1 (en) 2020-03-23 2023-03-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use
AU2021242249A1 (en) 2020-03-24 2022-08-18 Genentech, Inc. Tie2-binding agents and methods of use
CN115315512A (zh) 2020-03-26 2022-11-08 基因泰克公司 具有降低的宿主细胞蛋白质的经修饰的哺乳动物细胞
MX2022011730A (es) 2020-03-27 2022-10-13 Regeneron Pharma Metodos para el tratamiento de dermatitis atopica mediante la administracion de un antagonista de il-4r.
JP2023519962A (ja) 2020-03-31 2023-05-15 アレクトル エルエルシー 抗ｍｅｒｔｋ抗体及びその使用方法
CA3170570A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 James J. KOBIE Monoclonal antibodies against the hemagglutinin (ha) and neuraminidase (na) of influenza h3n2 viruses
CN113766928A (zh) 2020-04-02 2021-12-07 瑞泽恩制药公司 抗sars-cov-2纤突糖蛋白抗体和抗原结合片段
WO2021203053A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Vir Biotechnology, Inc. Immunotherapy targeting a conserved region in sars coronaviruses
EP4127724A1 (en) 2020-04-03 2023-02-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CN115461620A (zh) 2020-04-14 2022-12-09 瑞泽恩制药公司 通过正交偏最小二乘法对色谱性能进行紫外线监测
WO2021211775A1 (en) 2020-04-14 2021-10-21 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against sars-cov-2 and methods of using the same
KR20230004494A (ko) 2020-04-15 2023-01-06 에프. 호프만-라 로슈 아게 면역접합체
WO2021211984A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diels-alder conjugation methods
CA3175530A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates
TW202206459A (zh) 2020-04-24 2022-02-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 硫氫基化合物及其衍生物的酶以及途徑調節
JP2023523450A (ja) 2020-04-28 2023-06-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 非小細胞肺がん免疫療法のための方法及び組成物
KR20230002261A (ko) 2020-04-28 2023-01-05 더 락커펠러 유니버시티 항-sars-cov-2 중화 항체 및 이의 사용 방법
CN116963782A (zh) 2020-05-03 2023-10-27 联宁（苏州）生物制药有限公司 包含抗trop-2抗体的抗体药物偶联物
CA3177169A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against sars-cov-2
CN115916335A (zh) 2020-05-12 2023-04-04 瑞泽恩制药公司 抗glp1r拮抗剂抗体及其使用方法
US20230181753A1 (en) 2020-05-12 2023-06-15 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas
JP2023520249A (ja) 2020-05-15 2023-05-16 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 非経口タンパク質溶液中の可視粒子形成の防止方法
CN115605185A (zh) 2020-05-19 2023-01-13 豪夫迈·罗氏有限公司（Ch） 螯合剂用于防止胃肠外蛋白质溶液中形成可见颗粒的用途
MX2022014440A (es) 2020-05-22 2023-02-27 Regeneron Pharma Metodos para el tratamiento de la esofagitis eosinofilica mediante la administracion de un inhibidor de il-4r.
WO2021242815A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-sars-cov-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
CA3184189A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
BR112022024339A2 (pt) 2020-05-29 2022-12-27 23Andme Inc Anticorpos anti cd200r1 e métodos de uso dos mesmos
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
BR112022024629A2 (pt) 2020-06-02 2023-02-23 Dynamicure Biotechnology Llc Construtos anti-cd93 e seus usos
WO2021247925A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Vir Biotechnology, Inc. Structure-guided immunotherapy against sars-cov-2
MX2022015206A (es) 2020-06-08 2023-01-05 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hbv y metodos de uso.
RU2751237C1 (ru) * 2020-06-10 2021-07-12 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Способы и композиции для направленной модификации генома
GB202008860D0 (en) 2020-06-11 2020-07-29 Univ Oxford Innovation Ltd BTLA antibodies
CA3180477A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Elizabeth Alexander Antibody therapies for sars-cov-2 infection
CN115698719A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 基因泰克公司 用于癌症免疫疗法的方法和组合物
WO2021257503A1 (en) 2020-06-16 2021-12-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
IL299103A (en) 2020-06-18 2023-02-01 Regeneron Pharma Formulations of activin A antibody and methods of its use
US20210395366A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
JP2023531222A (ja) 2020-06-22 2023-07-21 アルミラル・ソシエダッド・アノニマ 抗ｉｌ－３６抗体およびその使用方法
US20220041672A1 (en) 2020-06-24 2022-02-10 Genentech, Inc. Apoptosis resistant cell lines
KR20230024822A (ko) 2020-06-25 2023-02-21 주식회사 휴맵 이형접합성 형질전환 동물
AU2021300129A1 (en) 2020-07-01 2022-12-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating allergy using anti-Bet v 1 antibodies
JP2023532764A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 治療用タンパク質製剤の安定剤としての代替界面活性剤
EP4178625A1 (en) 2020-07-13 2023-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in a protein, and their use
WO2022016037A1 (en) 2020-07-17 2022-01-20 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and methods of use
JP2023535409A (ja) 2020-07-21 2023-08-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂｒｍ分解の抗体コンジュゲート化化学的誘導物質及びｂｒｍ分解の方法
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
EP4188550A1 (en) 2020-07-29 2023-06-07 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-cd93 constructs and uses thereof
CA3190307A1 (en) 2020-07-29 2022-02-03 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising hla-g antigen binding domains and their uses
IL300429A (en) 2020-08-07 2023-04-01 Regeneron Pharma Methods of treating refractory hypercholesterolemia with an ANGPTL3 inhibitor
CA3128035A1 (en) 2020-08-13 2022-02-13 Bioasis Technologies, Inc. Combination therapies for delivery across the blood brain barrier
WO2022046925A1 (en) 2020-08-26 2022-03-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies
WO2022047222A2 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Genentech, Inc. Crispr/cas9 multiplex knockout of host cell proteins
CA3187680A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 Yashu Liu Identification and production of antigen-specific antibodies
MX2023002974A (es) 2020-09-14 2023-05-25 Regeneron Pharma Conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden peptidomimeticos glp1 y usos de los mismos.
TW202227496A (zh) 2020-09-14 2022-07-16 瑞士商伊克諾斯科學公司 結合至ｉｌ１ｒａｐ之抗體及其用途
CA3194162A1 (en) 2020-09-28 2022-03-31 Humabs Biomed Sa Antibodies against sars-cov-2
KR20230082650A (ko) 2020-10-05 2023-06-08 사노피 바이오테크놀로지 Il-4r 길항제를 투여하여 소아 대상체에서 천식을 치료하는 방법
CA3193952A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bernard Martin Fine Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2022075793A1 (ko) 2020-10-08 2022-04-14 주식회사 휴맵 인간화 면역글로불린 유전자좌를 포함하는 게놈을 가지는 형질전환 비인간-동물 제조방법
UY39467A (es) 2020-10-13 2022-04-29 Janssen Biotech Inc Inmunidad mediada por células t de bioingeniería, materiales y otros métodos para modular el grupo de diferenciación iv y / o viii
CA3198456A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
WO2022084210A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of pd-1 axis binding antagonists and lrrk2 inhitibors
CA3190569A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Christopher Daly Anti-fgfr2 antibodies and methods of use thereof
WO2022084915A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising delta-like ligand 3 (dll3) antigen binding domains and their uses
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
US20220153842A1 (en) 2020-11-04 2022-05-19 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
CA3196539A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4240758A1 (en) 2020-11-04 2023-09-13 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
JP2023548069A (ja) 2020-11-04 2023-11-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の皮下投薬
US20240002483A1 (en) 2020-11-16 2024-01-04 Hoffmann-La Roche Inc. Fab high mannose glycoforms
AR124063A1 (es) 2020-11-16 2023-02-08 Astellas Pharma Inc Anticuerpo biespecífico anti-tspan8 / anti-cd3 y anticuerpo anti-tspan8
EP4247844A1 (en) 2020-11-23 2023-09-27 VIR Biotechnology, Inc. Antibodies against influenza a viruses
JP2023551667A (ja) 2020-11-23 2023-12-12 ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド 抗－インフルエンザ抗体及びその組合せ
TW202229329A (zh) 2020-11-23 2022-08-01 美商維爾生物科技股份有限公司 針對流感神經胺酸酶的廣泛中和抗體
WO2022115486A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies that bind to multiple betacoronaviruses
WO2022120352A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Alector Llc Methods of use of anti-sortilin antibodies
IL303529A (en) 2020-12-09 2023-08-01 Trianni Inc Heavy chain antibodies only
IL303626A (en) 2020-12-16 2023-08-01 Regeneron Pharma Mice expressing human FC alpha receptors
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
WO2022129120A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hla-g antibodies and use thereof
WO2022133239A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin proteins that bind to npr1 agonists
CA3202429A1 (en) 2020-12-20 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for identification of scrambled disulfides in biomolecules
TW202241934A (zh) 2020-12-23 2022-11-01 美商再生元醫藥公司 編碼錨定修飾抗體之核酸及其用途
CA3197426A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for obtaining antibodies that bind transmembrane proteins and cells that produce the same
WO2022150605A1 (en) 2021-01-08 2022-07-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating peanut allergy and enhancing peanut allergen-specific immunotherapy by administering an il-4r antagonist
WO2022148853A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Immunoconjugates
JPWO2022153997A1 (pl) 2021-01-13 2022-07-21
US20220227844A1 (en) 2021-01-15 2022-07-21 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies
WO2022159842A1 (en) 2021-01-25 2022-07-28 Vir Biotechnology, Inc. Antibody combination therapies for sars-cov-2 infection
US20220242943A1 (en) 2021-01-25 2022-08-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti- pdgf-b antibodies and methods of use for treating pulmonary arterial hypertension (pah)
KR20230137393A (ko) 2021-01-28 2023-10-04 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Psma 결합 단백질 및 이의 용도
JP2024506321A (ja) 2021-02-09 2024-02-13 ヒューマブス・バイオメッド・ソシエテ・アノニム 呼吸器合胞体ウイルスおよび他のパラミクソウイルスに対する抗体およびその使用方法
CN117396502A (zh) 2021-02-09 2024-01-12 佐治亚大学研究基金会有限公司 针对肺炎球菌抗原的人类单克隆抗体
MX2023009244A (es) 2021-02-09 2023-09-11 Us Health Anticuerpos contra la proteina espicular de coronavirus.
CA3210069A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Tong Zhu Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
JP2024509191A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｖｉｓｔａ構築物およびその使用
WO2022187626A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-sars-cov-2-variant-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
AR125074A1 (es) 2021-03-12 2023-06-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5 / klk7 y métodos de uso
JP2024511970A (ja) 2021-03-15 2024-03-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド ループス腎炎の治療の組成物及び方法
JP2024512002A (ja) 2021-03-18 2024-03-18 アレクトル エルエルシー 抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体、及び、その使用方法
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
WO2022204202A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses
JP2024511610A (ja) 2021-03-23 2024-03-14 アレクトル エルエルシー コロナウイルス感染の治療及び予防のための抗ｔｍｅｍ１０６ｂ抗体
TW202304986A (zh) 2021-03-24 2023-02-01 美商健生生物科技公司 靶向cd22及cd79b的抗體
EP4314056A1 (en) 2021-03-24 2024-02-07 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising cd3 antigen binding domains and uses thereof
EP4314049A1 (en) 2021-03-25 2024-02-07 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-igfbp7 constructs and uses thereof
AR125255A1 (es) 2021-04-02 2023-06-28 Regeneron Pharma Métodos de predicción y modulación de la glicación de una proteína
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
WO2022220603A1 (ko) 2021-04-16 2022-10-20 고려대학교 산학협력단 코로나-19 바이러스 표적 인간 항체
EP4326855A1 (en) 2021-04-19 2024-02-28 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
BR112023021256A2 (pt) 2021-04-20 2023-12-12 Regeneron Pharma Anticorpos humanos para artemina e métodos de uso dos mesmos
IL307744A (en) 2021-04-22 2023-12-01 Astellas Pharma Inc Anti-CLDN4/anti-CD137 bispecific antibody
KR20240005691A (ko) 2021-04-30 2024-01-12 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 및 항-cd79b 항체 약물 접합체를 이용한 병용 치료를 위한 투약
WO2022228706A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
AU2022270075A1 (en) 2021-05-04 2023-11-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific fgf21 receptor agonists and their uses
AU2022268937A1 (en) 2021-05-05 2023-10-26 Trianni, Inc. Transgenic rodents expressing chimeric equine-rodent antibodies and methods of use thereof
EP4334343A2 (en) 2021-05-06 2024-03-13 The Rockefeller University Neutralizing anti-sars- cov-2 antibodies and methods of use thereof
US20220411487A1 (en) 2021-05-11 2022-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tmprss6 antibodies and uses thereof
CN117396232A (zh) 2021-05-12 2024-01-12 基因泰克公司 使用抗cd79b免疫缀合物治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤的方法
EP4341385A1 (en) 2021-05-21 2024-03-27 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
AU2022280767A1 (en) 2021-05-24 2024-01-18 Humabs Biomed Sa Engineered polypeptides
CN113278071B (zh) 2021-05-27 2021-12-21 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人干扰素α受体1单克隆抗体及其应用
JP2024520261A (ja) 2021-06-04 2024-05-24 中外製薬株式会社 抗ｄｄｒ２抗体およびその使用
AU2022289684A1 (en) 2021-06-09 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer
WO2022266221A1 (en) 2021-06-16 2022-12-22 Alector Llc Monovalent anti-mertk antibodies and methods of use thereof
EP4355786A1 (en) 2021-06-16 2024-04-24 Alector LLC Bispecific anti-mertk and anti-pdl1 antibodies and methods of use thereof
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
CN117529330A (zh) 2021-06-18 2024-02-06 纳米医疗有限公司 用于治疗癌症的包括所掩蔽的I型干扰素(IFNα和IFNβ)的融合蛋白组合物和其方法
WO2022270611A1 (ja) 2021-06-25 2022-12-29 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体
WO2022270612A1 (ja) 2021-06-25 2022-12-29 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体の使用
AU2022307659A1 (en) 2021-07-05 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Utilization of antibodies to shape antibody responses to an antigen
US20230125469A1 (en) 2021-07-14 2023-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-SARS-CoV-2-Spike Glycoprotein Antibodies and Antigen-Binding Fragments
PE20240638A1 (es) 2021-07-14 2024-03-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-receptor de quimiocinas de motivo c-c 8 (ccr8) y metodos de uso
CN117730102A (zh) 2021-07-22 2024-03-19 豪夫迈·罗氏有限公司 异二聚体Fc结构域抗体
WO2023004386A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Genentech, Inc. Brain targeting compositions and methods of use thereof
KR20240037321A (ko) 2021-07-26 2024-03-21 사노피 바이오테크놀로지 Il-4r 길항제의 투여에 의한 만성 자발성 심마진의 치료 방법
KR20240038928A (ko) 2021-07-28 2024-03-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 단백질-항바이러스 화합물 접합체
WO2023012147A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use
CN117897409A (zh) 2021-08-13 2024-04-16 基因泰克公司 抗类胰蛋白酶抗体的给药
AU2022333073A1 (en) 2021-08-23 2024-04-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
PE20240727A1 (es) 2021-08-27 2024-04-15 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-psma y usos de estos
TW202325727A (zh) 2021-08-30 2023-07-01 美商建南德克公司 抗聚泛素多特異性抗體
WO2023034871A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Vir Biotechnology, Inc. High concentration antibody therapies for sars-cov-2 infection
CA3230613A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Daren J. AUSTIN Antibody therapies for sars-cov-2 infection in pediatric subjects
CN113683694B (zh) 2021-09-03 2022-05-13 江苏荃信生物医药股份有限公司 一种抗人tslp单克隆抗体及其应用
CN113603775B (zh) 2021-09-03 2022-05-20 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用
WO2023039442A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vir Biotechnology, Inc. Broadly neutralizing antibody combination therapies for sars-cov-2 infection
WO2023046322A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Janssen Pharmaceutica Nv Proteins comprising cd20 binding domains, and uses thereof
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
CN118056006A (zh) 2021-10-01 2024-05-17 雅伯希勒拉生物公司 用于细胞系鉴定和富集的转基因啮齿动物
WO2023058705A1 (ja) 2021-10-08 2023-04-13 中外製薬株式会社 抗ｈｌａ－ｄｑ２．５抗体の製剤
WO2023062050A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 F. Hoffmann-La Roche Ag New interleukin-7 immunoconjugates
WO2023062048A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Alternative pd1-il7v immunoconjugates for the treatment of cancer
WO2023069919A1 (en) 2021-10-19 2023-04-27 Alector Llc Anti-cd300lb antibodies and methods of use thereof
US20230183362A1 (en) 2021-10-20 2023-06-15 Sanofi Biotechnology Methods for treating prurigo nodularis by administering an il-4r antagonist
WO2023070097A2 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Factor xi a2 domain-binding antibodies and methods of use thereof
WO2023077053A2 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
CA3235395A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Peter Burrows Transgenic mammals and methods of use thereof
CA3236006A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
WO2023092052A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for reducing centralized pain
WO2023089587A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 Janssen Biotech, Inc. Compositions comprising enhanced multispecific binding agents for an immune response
US20230250170A1 (en) 2021-12-06 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antagonist anti-npr1 antibodies and methods of use thereof
CA3238939A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Gaurang Patel Mutant myocilin disease model and uses thereof
WO2023130010A1 (en) 2021-12-30 2023-07-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist
US20230287138A1 (en) 2022-01-12 2023-09-14 Regneron Pharmaceuticals, Inc. Protein-drug conjugates comprising camptothecin analogs and methods of use thereof
WO2023137443A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Verrucarin a derivatives and antibody drug conjugates thereof
WO2023141445A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use
WO2023147399A1 (en) 2022-01-27 2023-08-03 The Rockefeller University Broadly neutralizing anti-sars-cov-2 antibodies targeting the n-terminal domain of the spike protein and methods of use thereof
TW202332767A (zh) 2022-02-02 2023-08-16 美商雷傑納榮製藥公司 用於治療龐貝氏症之抗ＴｆＲ：ＧＡＡ及抗ＣＤ６３：ＧＡＡ插入
WO2023150798A1 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease
WO2023152581A1 (en) 2022-02-09 2023-08-17 Janssen Biotech, Inc. Method of treating cancer with psmaxcd3 antibody
WO2023154824A1 (en) 2022-02-10 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
WO2023154861A1 (en) 2022-02-11 2023-08-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents
WO2023155902A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Chongqing Mingdao Haoyue Biotechnology Co., Ltd. Intranasal formulations and anti-sars-cov-2-spike protein antibodies
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US20230414750A1 (en) 2022-03-23 2023-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023201256A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 Vir Biotechnology, Inc. High dose antibody therapies for sars-cov-2 infection
TW202404637A (zh) 2022-04-13 2024-02-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體之醫藥組成物及使用方法
US20240002491A1 (en) 2022-04-27 2024-01-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for selecting patients for treatment with an ngf antagonist
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023230445A2 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Humabs Biomed Sa Broadly neutralizing antibodies against influenza neuraminidase
WO2023230448A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Vir Biotechnology, Inc. Combination immunotherapy for influenza
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2023245078A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Humabs Biomed Sa Anti-parvovirus antibodies and uses thereof
WO2024006472A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies that bind to multiple sarbecoviruses
US20240034798A1 (en) 2022-07-08 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic esophagitis by administering an il-4r antagonist
WO2024015816A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to ciliary neurotrophic factor receptor (cntfr) and methods of use thereof
WO2024015897A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020432A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2024020057A1 (en) 2022-07-19 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified animal model and its use to model the human immune system
WO2024020564A1 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024026411A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Humabs Biomed Sa Broadly neutralizing antibodies against rsv and mpv paramyxoviruses
WO2024026474A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for transferrin receptor (tfr)-mediated delivery to the brain and muscle
TW202405020A (zh) 2022-07-29 2024-02-01 美商阿列克特有限責任公司 轉鐵蛋白受體抗原結合域及其用途
WO2024026447A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Anti-gpnmb antibodies and methods of use thereof
WO2024026471A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Alector Llc Cd98hc antigen-binding domains and uses therefor
WO2024026470A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-tfr:payload fusions and methods of use thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024044770A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Core Biotherapeutics, Inc. Oligonucleotides for the treatment of breast cancer
WO2024047021A1 (en) 2022-08-29 2024-03-07 Sanofi Methods for treating chronic inducible cold urticaria by administering an il-4r antagonist
WO2024049949A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024073606A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibody resistant modified receptors to enhance cell-based therapies
US20240130341A1 (en) 2022-09-29 2024-04-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes
WO2024077239A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
WO2024086796A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Alector Llc Anti-ms4a4a antibodies with amyloid-beta therapies
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
US20240150474A1 (en) 2022-10-27 2024-05-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-acvri antibodies and their use in the treatment of trauma-induced heterotopic ossification
WO2024097714A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hand and foot dermatitis by administering an il-4r antagonist
US20240165227A1 (en) 2022-11-04 2024-05-23 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
WO2024098002A1 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Calcium voltage-gated channel auxiliary subunit gamma 1 (cacng1) binding proteins and cacng1-mediated delivery to skeletal muscle
WO2024102369A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Factor xi catalytic domain-binding antibodies and methods of use thereof
WO2024102734A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
US20240158515A1 (en) 2022-11-14 2024-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-fgfr3 antibodies and antigen-binding fragments and methods of use thereof
WO2024107765A2 (en) 2022-11-14 2024-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for fibroblast growth factor receptor 3-mediated delivery to astrocytes

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5350689A (en) 1987-05-20 1994-09-27 Ciba-Geigy Corporation Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
FR2646438B1 (fr) 1989-03-20 2007-11-02 Pasteur Institut Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration
WO1991000906A1 (en) 1989-07-12 1991-01-24 Genetics Institute, Inc. Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
EP1690935A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5614396A (en) 1990-06-14 1997-03-25 Baylor College Of Medicine Methods for the genetic modification of endogenous genes in animal cells by homologous recombination
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) * 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5877397A (en) * 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US7041871B1 (en) 1995-10-10 2006-05-09 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993012227A1 (en) 1991-12-17 1993-06-24 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
WO1994002602A1 (en) * 1992-07-24 1994-02-03 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DE4228162C1 (de) 1992-08-25 1994-01-13 Rajewsky Klaus Dr Verfahren zum Ersetzen homologer Genabschnitte aus Säugern in der Keimbahn von nicht-menschlichen Säugern
US5436149A (en) 1993-02-19 1995-07-25 Barnes; Wayne M. Thermostable DNA polymerase with enhanced thermostability and enhanced length and efficiency of primer extension
AU6819494A (en) * 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6096878A (en) 1993-05-10 2000-08-01 Japan Tobacco Inc. Human immunoglobulin VH gene segments and DNA fragments containing the same
US5523226A (en) 1993-05-14 1996-06-04 Biotechnology Research And Development Corp. Transgenic swine compositions and methods
US5508189A (en) 1994-04-26 1996-04-16 Pepperdine University Regeneration of plants from cultured guard cell protoplasts
US6130364A (en) 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6069010A (en) * 1995-09-11 2000-05-30 Axys Pharmaceuticals, Inc. High throughput gene inactivation with large scale gene targeting
US5928914A (en) 1996-06-14 1999-07-27 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Methods and compositions for transforming cells
US5763715A (en) 1996-10-08 1998-06-09 Stone & Webster Engineering Corp. Butadiene removal system for ethylene plants with front end hydrogenation systems
ATE387495T1 (de) 1996-12-03 2008-03-15 Amgen Fremont Inc Vollkommen humane antikörper die egfr binden
US6075859A (en) 1997-03-11 2000-06-13 Qualcomm Incorporated Method and apparatus for encrypting data in a wireless communication system
GB9823930D0 (en) * 1998-11-03 1998-12-30 Babraham Inst Murine expression of human ig\ locus
WO2000046251A2 (en) 1999-02-05 2000-08-10 Buelow Jens Ulrich Human polyclonal antibodies from transgenic nonhuman animals
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
US6355412B1 (en) 1999-07-09 2002-03-12 The European Molecular Biology Laboratory Methods and compositions for directed cloning and subcloning using homologous recombination
WO2001019394A2 (en) 1999-09-15 2001-03-22 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Immunotherapy with substantially human polyclonal antibody preparations purified from genetically engineered birds
GB2356897B (en) 1999-12-01 2003-05-14 Secr Defence Improved nozzle
US20020028488A1 (en) 2000-06-19 2002-03-07 Sujay Singh Transgenic avian species for making human and chimeric antibodies
AU8470301A (en) 2000-08-03 2002-02-18 Wim-Van Schooten Production of humanized antibodies in transgenic animals
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7435871B2 (en) 2001-11-30 2008-10-14 Amgen Fremont Inc. Transgenic animals bearing human Igλ light chain genes
US20050246782A1 (en) 2002-03-22 2005-11-03 Origen Therapeutics Transgenic aves producing human polyclonal antibodies
US20030182675A1 (en) 2002-03-22 2003-09-25 Origen Therapeutics Functional disruption of avian immunoglobulin genes
US20040158880A1 (en) 2003-02-05 2004-08-12 Roland Buelow Suppression of endogenous immunoglobulin expression in transgenic non-human animals expressing humanized or human antibodies
CA2532117C (en) 2003-07-15 2012-07-10 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Humanized immunoglobulin loci
US20050153392A1 (en) 2003-08-11 2005-07-14 Roland Buelow Transgenesis with humanized immunoglobulin loci
US7618403B2 (en) 2004-05-14 2009-11-17 Mcneil-Ppc, Inc. Fluid management device with fluid transport element for use within a body
KR101017301B1 (ko) 2004-12-21 2011-02-28 메드임뮨 리미티드 앤지오포이에틴-2에 대한 항체 및 그의 용도
AU2006231506B2 (en) * 2005-04-04 2012-08-30 Intersect Ent, Inc. Device and methods for treating paranasal sinus conditions
KR101232139B1 (ko) 2005-12-13 2013-02-12 엘지디스플레이 주식회사 액정 표시 장치
MY159787A (en) 2006-06-02 2017-01-31 Regeneron Pharma High affinity antibodies to human il-6 receptor
PL2769992T3 (pl) 2006-10-02 2021-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Przeciwciała ludzkie o wysokim powinowactwie względem ludzkiego receptora IL-4
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
ES2527297T3 (es) 2007-07-31 2015-01-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos humanos para CD20 humano y método para utilizar los mismos
WO2009023540A1 (en) 2007-08-10 2009-02-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human nerve growth factor
US8321568B2 (en) 2008-03-31 2012-11-27 Amazon Technologies, Inc. Content management
US8194152B2 (en) 2008-09-05 2012-06-05 CSR Technology, Inc. Image processing under flickering lighting conditions using estimated illumination parameters
DK3622813T3 (da) 2009-07-08 2021-05-03 Kymab Ltd Dyremodeller og terapeutiske molekyler
JO3182B1 (ar) 2009-07-29 2018-03-08 Regeneron Pharma مضادات حيوية بشرية عالية الالفة مع تولد الاوعية البشرية - 2
US10143186B2 (en) 2010-02-08 2018-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
US20120021409A1 (en) * 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
KR20220150430A (ko) 2010-06-22 2022-11-10 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 사람 람다 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 경쇄를 발현하는 마우스
DE12192727T1 (de) 2011-02-25 2013-07-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. ADAM6 Mäuse
EP3556206B1 (en) 2012-11-05 2021-06-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified non-human animals and methods of use thereof
MX2016007654A (es) 2013-12-11 2017-08-15 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma.
LT3221457T (lt) 2014-11-21 2019-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas

Also Published As

Publication number Publication date
US20110258710A1 (en) 2011-10-20
DE14163642T1 (de) 2014-10-09
DK3085779T3 (da) 2019-06-24
EP3085780A1 (en) 2016-10-26
EP1360287A4 (en) 2004-04-14
US10526630B2 (en) 2020-01-07
DE14172437T1 (de) 2014-11-27
US20140073010A1 (en) 2014-03-13
US10378040B2 (en) 2019-08-13
US20140020124A1 (en) 2014-01-16
ES2744220T3 (es) 2020-02-24
ES2391391T5 (es) 2019-07-19
DK2786657T3 (en) 2018-03-26
EP1360287B1 (en) 2012-09-12
US10227625B2 (en) 2019-03-12
ES2608362T5 (es) 2024-03-27
EP2767588A1 (en) 2014-08-20
EP1360287B2 (en) 2019-04-03
US9388446B2 (en) 2016-07-12
US20140018522A1 (en) 2014-01-16
PT3626819T (pt) 2021-05-25
US9382567B2 (en) 2016-07-05
US20140013457A1 (en) 2014-01-09
US9708635B2 (en) 2017-07-18
CY1113964T1 (el) 2016-07-27
JP2004524841A (ja) 2004-08-19
US20160316731A1 (en) 2016-11-03
AU2002244023B2 (en) 2007-05-10
WO2002066630A1 (en) 2002-08-29
DE14172420T1 (de) 2014-12-04
JP5692863B2 (ja) 2015-04-01
DE19172361T1 (de) 2020-01-16
EP2264163B1 (en) 2015-10-14
DK1360287T3 (da) 2012-10-08
ES2556767T3 (es) 2016-01-20
ZA200306275B (en) 2004-08-13
US20140020125A1 (en) 2014-01-16
JP2012095670A (ja) 2012-05-24
TR201802443T4 (tr) 2018-03-21
PT1360287E (pt) 2012-12-06
US20130130388A1 (en) 2013-05-23
US9376699B2 (en) 2016-06-28
US10378037B2 (en) 2019-08-13
DK3626819T3 (da) 2021-06-28
US6596541B2 (en) 2003-07-22
HK1198259A1 (en) 2015-03-20
CY1118500T1 (el) 2017-07-12
DK2264163T3 (en) 2015-10-26
EP3085780B2 (en) 2023-06-28
US20140017238A1 (en) 2014-01-16
EP3085779B2 (en) 2023-05-31
EP2786657A3 (en) 2015-03-04
EP3085780B1 (en) 2019-06-26
HUP0303187A2 (hu) 2003-12-29
EP2264163A2 (en) 2010-12-22
DK2767588T3 (da) 2020-11-23
US20040018626A1 (en) 2004-01-29
JP2016189796A (ja) 2016-11-10
EP2787075A1 (en) 2014-10-08
ES2827482T3 (es) 2021-05-21
CY1123912T1 (el) 2022-03-24
US10378039B2 (en) 2019-08-13
EP3085779B1 (en) 2019-04-03
DK3572508T3 (en) 2022-12-19
CY1120265T1 (el) 2019-07-10
ES2660749T3 (es) 2018-03-26
US20140017229A1 (en) 2014-01-16
US20140041068A1 (en) 2014-02-06
CZ20032192A3 (en) 2004-03-17
US20140033337A1 (en) 2014-01-30
DK3085780T3 (da) 2019-10-07
CY1122059T1 (el) 2020-11-25
CY1122039T1 (el) 2020-10-14
US10584364B2 (en) 2020-03-10
JP6402368B2 (ja) 2018-10-10
DK2787075T3 (en) 2017-02-27
US20140023637A1 (en) 2014-01-23
US10378038B2 (en) 2019-08-13
EP2264163A3 (en) 2011-07-06
EP3572508B1 (en) 2022-11-23
PT2786657T (pt) 2018-04-04
CY1117254T1 (el) 2017-04-26
PT2767588T (pt) 2020-11-04
US9371553B2 (en) 2016-06-21
DK3626819T1 (en) 2020-03-30
CA2438390A1 (en) 2002-08-29
EP3626819A1 (en) 2020-03-25
DE10010741T1 (de) 2014-08-21
EP3626819B1 (en) 2021-03-31
TR201907641T4 (tr) 2019-06-21
PT3085780T (pt) 2019-09-30
US8791323B2 (en) 2014-07-29
JP2014176391A (ja) 2014-09-25
MX343591B (es) 2016-11-11
US20140017782A1 (en) 2014-01-16
CZ305619B6 (cs) 2016-01-13
DK1360287T4 (da) 2019-06-11
EP3085779A1 (en) 2016-10-26
JP5345463B2 (ja) 2013-11-20
JP2009240331A (ja) 2009-10-22
JP4412900B2 (ja) 2010-02-10
EP1360287A1 (en) 2003-11-12
US9353394B2 (en) 2016-05-31
JP5805056B2 (ja) 2015-11-04
MXPA03007325A (es) 2003-12-04
EP2787075B1 (en) 2016-11-30
US20140017781A1 (en) 2014-01-16
US8502018B2 (en) 2013-08-06
CA2438390C (en) 2014-10-28
EP2786657A2 (en) 2014-10-08
HUP0303187A3 (en) 2010-01-28
EP2767588B1 (en) 2020-08-19
HU231221B1 (hu) 2022-01-28
JP2013090631A (ja) 2013-05-16
ES2725712T3 (es) 2019-09-26
US20110283376A1 (en) 2011-11-17
US20130210137A1 (en) 2013-08-15
US20070061900A1 (en) 2007-03-15
US9528136B2 (en) 2016-12-27
PT2787075T (pt) 2017-01-03
DK3572508T1 (da) 2019-12-09
EP2786657B1 (en) 2018-02-07
ES2608362T3 (es) 2017-04-10
NZ527629A (en) 2005-03-24
ES2869225T3 (es) 2021-10-25
EP3572508A1 (en) 2019-11-27
HK1146298A1 (en) 2011-05-20
US10640800B2 (en) 2020-05-05
ES2391391T3 (es) 2012-11-23
HK1057058A1 (en) 2004-03-12
JP2018108115A (ja) 2018-07-12
US20140033336A1 (en) 2014-01-30
PL364281A1 (pl) 2004-12-13
PT3085779T (pt) 2019-05-31
JP6426670B2 (ja) 2018-11-21
HK1198260A1 (en) 2015-03-20
EP2787075B2 (en) 2023-10-18
CY1124458T1 (el) 2022-07-22
PT2264163E (pt) 2016-01-08
ES2725712T5 (es) 2023-10-31
US20020106629A1 (en) 2002-08-08
DE19203913T1 (de) 2020-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2786657B1 (en) A method of producing an antibody comprising a human variable region and a rodent constant region.
US7105348B2 (en) Methods of modifying eukaryotic cells
AU2002244023A1 (en) Methods of modifying eukaryotic cells

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification