JP2023511956A - タンパク質－抗ウイルス化合物コンジュゲート - Google Patents

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Abstract

本明細書に提供されるのは、VX-787及びその誘導体、バロキサビル及びその誘導体、並びにバロキサビルマルボキシル及びその誘導体、並びにこれらのタンパク質(例えば、抗体)薬物コンジュゲートを含む、インフルエンザと関連する疾患及び障害の治療のための化合物、組成物、及び方法である。【選択図】なし

Description

(政府ライセンス権)
本発明は、米国保健福祉省(U.S. Department of Health and Human Services)によって授与された契約HHSO100201700020Cの下で政府による支援を受けて行われた。政府は、本発明における一定の権利を有する。
(関連出願の相互参照)
本出願は、米国特許法第119条の下、2020年1月24日に出願された米国仮出願第62/965,735号;及び2020年10月20日に出願された米国仮出願第63/094,285号の恩典を主張するものであり、これらの内容は、引用により本明細書中に完全に組み込まれる。
(分野)
本明細書に提供されるのは、抗ウイルス化合物及びそのタンパク質コンジュゲート、並びに種々の疾患、障害、及び状態を治療する方法であって、該抗ウイルス化合物及びそのタンパク質コンジュゲートを投与することを含む、方法である。
(背景)
インフルエンザは、世界的流行、流行、再発生、及び大流行の波を特徴とする長い歴史を有する接触伝染性の高い疾患である。毎年のワクチン接種の努力にもかかわらず、インフルエンザ感染の結果として、相当な罹病率及び死亡率がもたらされる。
インフルエンザウイルスは、A、B、及びCという3つの主要な型からなる。A型インフルエンザウイルスは、宿主細胞へのウイルスの付着及び侵入に必要とされるヘマグルチニン(HA)及びノイラミニダーゼ(NA)という表面糖タンパク質をコードする2つの遺伝子の抗原性領域におけるアレル変異に基づく亜型に分類することができる。
ヘマグルチニンは、(頻繁な抗原性ドリフトを受ける)受容体結合部位からなる球状ヘッドドメインと(インフルエンザウイルスの様々な株の間でより保存されている)ステム領域という2つの構造ドメインを含有する三量体糖タンパク質である。HAタンパク質は、前駆体(HA0)として合成され、これがタンパク質分解性プロセシングを受けて、2つのサブユニット(HA1及びHA2)を産生し、これらが互いに会合して、ステム/球状ヘッド構造を形成する。HA1ペプチドは、細胞表面へのウイルスの付着に関与する。HA2ペプチドは、エンドソーム内でのウイルスと細胞膜の融合を媒介し、細胞質中へのリボヌクレオタンパク質複合体の放出を可能にするステム様構造を形成する。
現在、そのヘマグルチニンタンパク質によって規定される18種の亜型(H1～H18)が存在する。18種のHAは、2つのグループに分類することができる。グループ1は、H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17、及びH18亜型からなり、グループ2は、H3、H4、H7、H10、H14、及びH15亜型を含む。
数十年に及ぶ研究にもかかわらず、A型インフルエンザウイルス感染を広範に中和もしくは阻害し、又はA型インフルエンザウイルスによって引き起こされる疾患を軽減する市販の抗体又は抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は存在しない。それゆえ、A型インフルエンザウイルスの複数の亜型を中和し、かつA型インフルエンザ感染の予防又は治療のための薬剤として使用することができる新しい抗体及びADCを同定する必要がある。
(概要)
本明細書に提供されるのは、例えば、抗ウイルス治療において有用な化合物である。ある実施態様において、該化合物としては、VX-787及びその誘導体、バロキサビル及びその誘導体、並びに/又はバロキサビルマルボキシル及びその誘導体が挙げられる。一実施態様において、提供されるのは、本明細書に記載されるペイロード(例えば、抗ウイルス化合物)、リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)、及び/又は化合物にコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含む抗体-薬物コンジュゲートである。
ある実施態様において、提供されるのは、以下の構造を有する化合物である
Figure 2023511956000001
 (ここで、Lは、リンカーであり; BAは、結合剤であり;かつkは、1～30の整数である)。
ある実施態様において、提供されるのは、以下の構造
Figure 2023511956000002
 (ここで、Lは、リンカーであり;かつRGは、反応性部分である)
又はその医薬として許容し得る塩を有するリンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)である。
別の実施態様において、本明細書に記載されるのは、本明細書に記載されるペイロードもしくは化合物、リンカー-ペイロード、又は抗体-薬物コンジュゲート、及び組成物を作製する方法である。
別の実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における、本明細書に記載される感染と関連する疾患、障害、又は状態の治療、予防、軽減、又は阻害のための方法であって、該対象に、本明細書に記載されるペイロード(例えば、抗ウイルス化合物)、リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)、抗体-薬物コンジュゲート、又は医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法である。
(図面の簡単な説明)
図1Aは、11729-Q295-11についてのLC-MSによって測定された強度加重平均リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)ローディングを示している。図1Bは、アイソタイプ対照-Q295-11についてのLC-MSによって測定された強度加重平均リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)ローディングを示している。
図2Aは、11729-HC-Cterm-11についてのLC-MSによって測定された強度加重平均リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)ローディングを示している。図2Bは、アイソタイプ対照-HC-Cterm-11についてのLC-MSによって測定された強度加重平均リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)ローディングを示している。
図3は、A型インフルエンザ感染細胞に対する11729-HC-Cterm-11、11729-HC-Nterm-11、11729-LC-Cterm-11、及び11729-LC-Nterm-11のELISAサブナノモル濃度特異的結合を示している。
図4は、11729-HC-Cterm-11、11729-LC-Cterm-11、11729-LC-Nterm-11、mAb11729とアイソタイプ対照抗体及びアイソタイプ対照-HC-Cterm-11との間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図5は、72時間後のヒト血漿及びサル血漿における11729-HC-Cterm-11のインビトロ安定性(すなわち、リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物)損失の不在;又はDAR減少の欠如)を示している。
図6は、11729-HC-Cterm-11とアイソタイプ対照抗体及びアイソタイプ対照-HC-Cterm-11との間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図7は、11729-HC-Cterm-6、11729-LC-Cterm-6、mAb11729とアイソタイプ対照抗体、アイソタイプ対照-HC-Cterm-6抗体、及びアイソタイプ対照-LC-Cter-6抗体との間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図8は、11729-HC-Cterm-45a、11729-LC-Cterm-45a、11729-HC-Cterm-34、11729-LC-Cterm-34、mAb11729とアイソタイプ対照抗体及びアイソタイプ対照-抗体-薬物コンジュゲートとの間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図9は、5385-HC-Cterm-11、5385-LC-Cterm-11、mAb11729とアイソタイプ対照抗体及びアイソタイプ対照-抗体-薬物コンジュゲートとの間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図10は、11729-HC-Cterm-45dとmAb11729とアイソタイプ対照抗体とアイソタイプ対照-HC-Cterm-45dとの間でのA型インフルエンザ感染に対する抗ウイルス効力の比較を示している。
図11は、A型インフルエンザ感染細胞に対する11729-HC-Cterm-45dの特異的結合を示している。
(例示的な実施態様の説明)
本明細書に提供されるのは、例えば、対象におけるインフルエンザ感染を治療するのに有用な化合物、組成物、及び方法である。
(定義)
本明細書に提供される化合物に言及する場合、別途指示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有する。別途定義されない限り、本明細書で使用される技術的及び科学的用語は全て、当業者によって一般に使用されるものと同じ意味を有する。本明細書に提供される用語について複数の定義が存在する場合、別途明記されない限り、これらの定義が優先される。
「インフルエンザHA」とも呼ばれる「インフルエンザヘマグルチニン」という語句は、宿主細胞へのウイルスの付着(a-2,3-及びa-2,6-シアル酸へのHA1結合を介するもの)及び侵入(立体構造変化を介するもの)を媒介するインフルエンザビリオンの表面に見られる三量体糖タンパク質のことである。HAは、2つの構造ドメイン:(高頻度の抗原性突然変異を受ける)受容体結合部位を含有する球状ヘッドドメインと(インフルエンザウイルスの様々な種の間でより保存されている)ステム領域から構成される。インフルエンザHAは、前駆体(HA0)として合成され、これがタンパク質分解性プロセシングを受けて、2つのサブユニット(HA1及びHA2)を産生し、これらが互いに会合して、ステム/球状ヘッド構造を形成する。ウイルスHAは、ウイルス上の最も可変性の高い抗原であるが(18種の亜型を2つのグループに分類することができる)、ステム(HA2)は、各々のグループで高度に保存されている。
全長インフルエンザHAのアミノ酸配列は、アクセッション番号FJ966082.1としてGenBankに提供されているインフルエンザ分離株H1 N1 A/カリフォルニア/04/2009のアミノ酸配列によって例示される。「インフルエンザ-HA」という語句は、異なるインフルエンザ分離株から単離されたインフルエンザHAのタンパク質変異体、例えば、GQ149237.1、NC_002017、KM972981.1なども含む。「インフルエンザ-HA」という語句は、組換えインフルエンザHA又はその断片も含む。この語句は、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトFc、又はシグナル配列にカップリングしたインフルエンザHA又はその断片も包含する。
「flu」としても特徴付けられる、本明細書で使用される「インフルエンザ感染」という語句は、インフルエンザウイルスによって引き起こされる重症急性呼吸器疾患を指す。この語句は、気道感染、並びに高熱、頭痛、全身の疼き及び痛み、疲労及び衰弱、ある症例では、極度の疲労、鼻詰まり、くしゃみ、咽頭痛、胸部不快感、咳、息切れ、気管支炎、肺炎、及び重症例では、死亡を含む、症状を含む。
本明細書で使用される場合、「アルキル」は、一価の飽和炭化水素ラジカル部分を指す。アルキルは、任意に置換されており、線状、分岐状、又は環状、すなわち、シクロアルキルであることができる。アルキルとしては、1～20個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C1-20アルキル; 1～12個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C1-12アルキル; 1～8個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C1-8アルキル; 1～6個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C1-6アルキル;及び1～3個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C1-3アルキルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル部分の例としては、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、s-ブチル、t-ブチル、i-ブチル、ペンチル部分、ヘキシル部分、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。ペンチル部分としては、n-ペンチル及びi-ペンチルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘキシル部分としては、n-ヘキシルが挙げられるが、これに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アルキレン」は、二価アルキル基を指す。別途指定されない限り、アルキレンは、1～20個の炭素原子を含むが、これらに限定されない。アルキレン基は、アルキルについて本明細書に記載されているように任意に置換されている。いくつかの実施態様において、アルキレンは、置換されていない。
その立体化学を特定しないアミノ酸又はアミノ酸残基の表記は、L型の該アミノ酸、D型の該アミノ酸、又はこれらのラセミ混合物を包含することが意図される。
本明細書で使用される場合、「ハロアルキル」は、上で定義されているようなアルキルを指し、ここで、該アルキルは、ハロゲン、例えば、フッ素(F)、塩素(Cl)、臭素(Br)、又はヨウ素(I)から選択される少なくとも1つの置換基を含む。ハロアルキルの例としては、-CF3、-CH2CF3、-CCl2F、及び-CCl3が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、少なくとも2つの炭素原子及び1以上の非芳香族炭素-炭素二重結合を含有する一価炭化水素ラジカル部分を指す。アルケニルは、任意に置換されており、線状、分岐状、又は環状であることができる。アルケニルとしては、2～20個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-20アルケニル; 2～12個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-12アルケニル; 2～8個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-8アルケニル; 2～6個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-6アルケニル;及び2～4個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-4アルケニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル部分の例としては、ビニル、プロペニル、ブテニル、及びシクロヘキセニルが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、少なくとも2つの炭素原子及び1以上の炭素-炭素三重結合を含有する一価炭化水素ラジカル部分を指す。アルキニルは、任意に置換されており、線状、分岐状、又は環状であることができる。アルキニルとしては、2～20個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-20アルキニル; 2～12個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-12アルキニル; 2～8個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-8アルキニル; 2～6個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-6アルキニル;及び2～4個の炭素原子を有するラジカル、すなわち、C2-4アルキニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル部分の例としては、エチニル、プロピニル、及びブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アルコキシ」は、一価の飽和炭化水素ラジカル部分を指し、ここで、該炭化水素は、酸素原子への単結合を含み、かつここで、該ラジカルは、酸素原子上に位置し、例えば、エトキシの場合、CH3CH2-O・である。アルコキシ置換基は、それが置換する化合物に該アルコキシ置換基のこの酸素原子を介して結合する。アルコキシは、任意に置換されており、線状、分岐状、又は環状、すなわち、シクロアルコキシであることができる。アルコキシとしては、1～20個の炭素原子を有するもの、すなわち、C1-20アルコキシ; 1～12個の炭素原子を有するもの、すなわち、C1-12アルコキシ; 1～8個の炭素原子を有するもの、すなわち、C1-8アルコキシ; 1～6個の炭素原子を有するもの、すなわち、C1-6アルコキシ;及び1～3個の炭素原子を有するもの、すなわち、C1-3アルコキシが挙げられるが、これらに限定されない。アルコキシ部分の例としては、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プロポキシ、n-ブトキシ、s-ブトキシ、t-ブトキシ、i-ブトキシ、ペントキシ部分、ヘキソキシ部分、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペントキシ、及びシクロヘキソキシが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ハロアルコキシ」は、上で定義されているようなアルコキシを指し、ここで、該アルコキシは、ハロゲン、例えば、F、Cl、Br、又はIから選択される少なくとも1つの置換基を含む。
本明細書で使用される場合、「アリール」は、環原子が炭素原子である芳香族化合物のラジカルである一価部分を指す。アリールは、任意に置換されており、単環式又は多環式、例えば、二環式もしくは三環式であることができる。アリール部分の例としては、6～20個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-20アリール; 6～15個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-15アリール、及び6～10個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-10アリールが挙げられるが、これらに限定されない。アリール部分の例としては、フェニル、ナフチル、フルオレニル、アズレニル、アントリル、フェナントリル、及びピレニルが挙げられるが、これらに限定される。
本明細書で使用される場合、「アリールアルキル」は、アルキル化合物のラジカルである一価部分を指し、ここで、該アルキル化合物は、芳香族置換基で置換されており、すなわち、該芳香族化合物は、アルキル基への単結合を含み、かつ該ラジカルは、該アルキル基上に位置する。アリールアルキル基は、アルキル基を介して、例示される化学構造に結合する。アリールアルキルは、構造、例えば、
Figure 2023511956000003
 (ここで、Bは、芳香族部分、例えば、アリール又はフェニルである)によって表すことができる。アリールアルキルは、任意に置換されており、すなわち、アリール基及び/又はアルキル基は、本明細書に開示されているように置換されることができる。アリールアルキルの例としては、ベンジルが挙げられるが、これに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アルキルアリール」は、アリール化合物のラジカルである一価部分を指し、ここで、該アリール化合物は、アルキル置換基で置換されており、すなわち、該アリール化合物は、アルキル基への単結合を含み、かつ該ラジカルは、該アリール基上に位置する。アルキルアリール基は、アリール基を介して、例示される化学構造に結合する。アルキルアリールは、構造、例えば、
Figure 2023511956000004
 (ここで、Bは、芳香族部分、例えば、フェニルである)によって表すことができる。アルキルアリールは、任意に置換されており、すなわち、アリール基及び/又はアルキル基は、本明細書に開示されているように置換されることができる。アルキルアリールの例としては、トルイルが挙げられるが、これに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アリールオキシ」は、環原子が炭素原子であり、かつ該環が酸素ラジカルで置換されている芳香族化合物のラジカルである一価部分を指し、すなわち、該芳香族化合物は、酸素原子への単結合を含み、かつ該ラジカルは、該酸素原子上に位置し、例えば、フェノキシの場合、
Figure 2023511956000005
 である。アリールオキシ置換基は、それが置換する化合物に、この酸素原子を介して結合する。アリールオキシは、任意に置換されている。アリールオキシとしては、6～20個の環炭素原子を有するラジカル、すなわち、C6-20アリールオキシ; 6～15個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-15アリールオキシ、及び6～10個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-10アリールオキシが挙げられるが、これらに限定されない。アリールオキシ部分の例としては、フェノキシ、ナフトキシ、及びアントロキシが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「アリーレン」は、環原子が炭素原子のみである芳香族化合物の二価部分を指す。アリーレンは、任意に置換されており、単環式又は多環式、例えば、二環式もしくは三環式であることができる。アリーレン部分の例としては、6～20個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-20アリーレン; 6～15個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-15アリーレン、及び6～10個の環炭素原子を有するもの、すなわち、C6-10アリーレンが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキル」は、1以上の炭素原子がヘテロ原子によって置換されているアルキルを指す。本明細書で使用される場合、「ヘテロアルケニル」は、1以上の炭素原子がヘテロ原子によって置換されているアルケニルを指す。本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキニル」は、1以上の炭素原子がヘテロ原子によって置換されているアルキニルを指す。好適なヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄原子が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、及びヘテロアルキニルは、任意に置換されている。ヘテロアルキル部分の例としては、アミノアルキル、スルホニルアルキル、及びスルフィニルアルキルが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアルキル部分の例としては、メチルアミノ、メチルスルホニル、及びメチルスルフィニルも挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」は、環原子が炭素原子及び少なくとも1つの酸素、硫黄、窒素、又はリン原子を含有する芳香族化合物のラジカルである一価部分を指す。ヘテロアリール部分の例としては、5～20個の環原子; 5～15個の環原子;及び5～10個の環原子を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールは、任意に置換されている。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリーレン」は、芳香環の1以上の環原子が酸素、硫黄、窒素、又はリン原子と置換されている二価ヘテロアリールを指す。ヘテロアリーレンは、任意に置換されている。
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」は、1以上の炭素原子がヘテロ原子によって置換されているシクロアルキルを指す。好適なヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄原子が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルは、任意に置換されている。ヘテロシクロアルキル部分の例としては、モルホリニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ジオキソラニル、ジチオラニル、オキサニル、又はチアニルが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ルイス酸」は、孤立電子対を受け入れる分子又はイオンを指す。本明細書に記載される方法で使用されるルイス酸は、プロトン以外のものである。ルイス酸としては、非金属酸、金属酸、硬いルイス酸、及び軟らかいルイス酸が挙げられるが、これらに限定されない。ルイス酸としては、アルミニウム、ホウ素、鉄、スズ、チタン、マグネシウム、銅、アンチモン、リン、銀、イッテルビウム、スカンジウム、ニッケル、及び亜鉛のルイス酸が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なルイス酸としては、AlBr3、AlCl3、BCl3、三塩化ホウ素メチルスルフィド、BF3、三フッ化ホウ素メチルエーテラート、三フッ化ホウ素メチルスルフィド、三フッ化ホウ素テトラヒドロフラン、ジシクロヘキシルホウ素トリフルオロメタンスルホネート、臭化鉄(III)、塩化鉄(III)、塩化スズ(IV)、塩化チタン(IV)、チタン(IV)イソプロポキシド、Cu(OTf)2、CuCl2、CuBr2、塩化亜鉛、ハロゲン化アルキルアルミニウム(RnAlX3-n(ここで、Rは、ヒドロカルビルである))、Zn(OTf)2、ZnCl2、Yb(OTf)3、Sc(OTf)3、MgBr2、NiCl2、Sn(OTf)2、Ni(OTf)2、及びMg(OTf)2が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「N-含有ヘテロシクロアルキル」は、1以上の炭素原子がヘテロ原子によって置換されており、かつ少なくとも1つの置換ヘテロ原子が窒素原子であるシクロアルキルを指す。窒素の他に好適なヘテロ原子としては、酸素及び硫黄原子が挙げられるが、これらに限定されない。N-含有ヘテロシクロアルキルは、任意に置換されている。N-含有ヘテロシクロアルキル部分の例としては、モルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、又はチアゾリジニルが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、ラジカル部分を説明するために使用される「任意に置換された」、例えば、任意に置換されたアルキルは、そのような部分が1以上の置換基に任意に結合していることを意味する。そのような置換基の例としては、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、任意に置換されたハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アジド、エポキシ、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、
Figure 2023511956000006
 (ここで、RA、RB、及びRCは、出現する毎に独立に、水素原子、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクロアルキルであるか、又はRA及びRBは、それらが結合している原子と一緒に、飽和もしくは不飽和炭素環を形成し、ここで、該環は、任意に置換されており、かつ1以上の環原子は、ヘテロ原子で任意に置換されている)が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施態様において、ラジカル部分が、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、又は任意に置換された飽和もしくは不飽和炭素環で任意に置換されている場合、該任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、又は任意に置換された飽和もしくは不飽和炭素環上の置換基は、それらが置換されている場合、さらなる置換基でさらに任意に置換されている置換基で置換されていることはない。いくつかの実施態様において、本明細書に記載される基が任意に置換されている場合、該基に結合している置換基は、別途規定されない限り、置換されていない。
本明細書で使用される場合、「結合剤」は、所与の結合パートナー、例えば、抗原と特異性を伴って結合することができる任意の分子、例えば、タンパク質、抗体、又はその断片を指す。
本明細書で使用される場合、「リンカー」は、結合剤を、本明細書に記載される1以上の化合物、例えば、ペイロード又は抗ウイルス化合物及び強化剤に共有結合的に連結させるか、又は(例えば、反応基を介して)共有結合的に連結させることができる二価、三価、又は多価部分を指す。
本明細書で使用される場合、「アミド合成条件」は、例えば、カルボン酸、活性化カルボン酸、又はアシルハライドとアミンとの反応によって、アミドの形成を達成するために好適な反応条件を指す。いくつかの例において、アミド合成条件は、カルボン酸とアミンとの間のアミド結合の形成を達成するために好適な反応条件を指す。これらの例のいくつかにおいて、カルボン酸を、まず、活性化カルボン酸に変換し、その後、該活性化カルボン酸がアミンと反応して、アミドを形成する。アミドの形成を達成するための好適な条件としては、限定されないが、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)、(ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(BOP)、(ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBOP)、(7-アザベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyAOP)、ブロモトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(PyBrOP)、O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)、O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(TBTU)、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム 3-オキシドヘキサフルオロホスフェート(HATU)、N-エトキシカルボニル-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリン(EEDQ)、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダゾリジニウムヘキサフルオロホスフェート(CIP)、2-クロロ-4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン(CDMT)、カルボニルジイミダゾール(CDI)、及び1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノ-モルホリノ-カルベニウムヘキサフルオロホスフェート(COMU)を含む、カルボン酸とアミンとの反応を達成するための試薬を利用するものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、カルボン酸を、まず、活性化カルボン酸エステルに変換し、その後、該活性化カルボン酸エステルをアミンで処理して、アミド結合を形成させる。ある実施態様において、カルボン酸を試薬で処理する。試薬は、カルボン酸を脱プロトン化することにより、カルボン酸を活性化し、その後、脱プロトン化されたカルボン酸によるプロトン化された試薬への求核攻撃の結果として、該脱プロトン化されたカルボン酸との生成物複合体を形成する。その後、特定のカルボン酸の活性化されたカルボン酸エステルは、カルボン酸が活性化される前よりも、アミンによる求核攻撃に対して感受性が高い。この結果として、アミド結合形成が生じる。したがって、カルボン酸は、活性化されたと記載される。例示的な試薬としては、DCC及びDICが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「残基」という用語は、化学反応の後に残る化合物内の化学的部分を指す。例えば、「アミノ酸残基」又は「N-アルキルアミノ酸残基」という用語は、アミノ酸又はN-アルキルアミノ酸の好適なカップリングパートナーへのアミドカップリング又はペプチドカップリングの生成物を指し;ここで、例えば、水分子は、該アミノ酸又はN-アルキルアミノ酸のアミド又はペプチドカップリングの後に排出されて、該アミノ酸残基又はN-アルキルアミノ酸残基がその中に取り込まれた生成物が生じる。
本明細書で使用される場合、「構造異性体」は、同じ分子式を有するが、原子の配列のされ方に起因する異なる化学構造を有する化合物を指す。例示的な構造異性体としては、n-プロピル及びイソプロピル; n-ブチル、sec-ブチル、及びtert-ブチル;並びにn-ペンチル、イソペンチル、及びネオペンチルなどが挙げられる。
特定の基、部分、置換基、及び原子は、それを介して該基、部分、置換基、原子が結合している原子を示すために、結合(単数又は複数)と交差する波線を用いて描かれている。例えば、
Figure 2023511956000007
 として描かれたイソプロピル基で置換されているフェニル基は、以下の構造:
Figure 2023511956000008
 を有する。本明細書で使用される場合、環原子の間の結合を介して環状基(例えば、芳香族、ヘテロ芳香族、縮合環、及び飽和又は不飽和のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル)に結合した置換基を示す図は、別途指定されない限り、該環状基が、本明細書に記載されているか又は本開示が関連する分野で公知である技法に従って、該環状基内の任意の環位置の又は該縮合環基内の任意の環上のその置換基と置換され得ることを示すことを意味する。例えば、基
Figure 2023511956000009
 (ここで、下付き文字qは、0～4の整数であり、置換基R1の位置は、一般的に記載されている、すなわち、結合線構造の任意の頂点、すなわち、特定の環炭素原子に直接的には結合していない)は、該置換基R1が特定の環炭素原子に結合している以下の非限定的な基の例を含む:
Figure 2023511956000010
 。
本明細書で使用される場合、「反応性リンカー」という語句又は「RL」という略語は、例えば、
Figure 2023511956000011
 (ここで、RGは、反応基であり、かつSPは、スペーサー基である)として示される、反応基(「RG」)及びスペーサー基(「SP」)を含む一価の基を指す。本明細書に記載される場合、反応性リンカーは、複数の反応基及び複数のスペーサー基を含み得る。スペーサー基は、反応基をペイロード(例えば、抗ウイルス化合物)などの別の基に架橋する任意の二価部分である。反応性リンカー(RL)は、それが結合しているペイロード(例えば、抗ウイルス化合物)とともに、本明細書に記載される抗体コンジュゲートの調製のための合成前駆体として有用な中間体(「リンカー-ペイロード」(LP)(例えば、リンカー-抗ウイルス化合物))を提供する。本明細書で使用される場合、ペイロードは、抗ウイルス化合物であることができ、これらの抗ウイルス化合物を組み込んでいるリンカー-ペイロードは、「リンカー-抗ウイルス化合物」と称することができる。反応性リンカーは、別の基、例えば、抗体、修飾抗体、又はその抗原結合断片の反応性部分と反応することができる官能基又は官能部分である反応基を含む。反応基と抗体、修飾抗体、又はその抗原結合断片との反応の結果として生じる部分は、連結基とともに、本明細書に記載されるコンジュゲートの「結合剤リンカー」(「BL」)部分を含む。ある実施態様において、「反応基」は、抗体又はその抗原結合断片のシステイン又はリジン残基と反応する官能基又は官能部分(例えば、マレイミド又はN-ヒドロキシコハク酸イミド(NHS)エステル)である。いくつかの例において、反応基は、官能基、例えば、
Figure 2023511956000012
 であり、これは、抗体又はその抗原結合断片上のシステイン残基と反応して、それとの炭素-硫黄結合、例えば、
Figure 2023511956000013
 (ここで、Abは、抗体又はその抗原結合断片を指し、かつSは、それを介して官能基がAbに結合するシステイン残基上のS原子を指す)を形成する。いくつかの例において、反応基は、官能基、例えば、
Figure 2023511956000014
 であり、これは、抗体又はその抗原結合断片上のリジン残基と反応して、それとのアミド結合、例えば、
Figure 2023511956000015
 (ここで、Abは、抗体又はその抗原結合断片を指し、かつNHは、それを介して官能基がAbに結合するリジン側鎖残基上のNH原子を指す)を形成する。
本明細書で使用される場合、「生分解性部分」という語句は、インビボで分解して、通常の生物学的プロセスによって体から取り除かれることができる無毒の生体適合性成分となる部分を指す。いくつかの実施態様において、生分解性部分は、約90日以下、約60日以下、又は約30日以下の間にインビボで完全に又は実質的に分解し、ここで、分解の程度は、該生分解性部分のパーセント質量損失に基づくものであり、かつ完全な分解は、100％質量損失に対応する。例示的な生分解性部分としては、限定するものではないが、ポリ(ε-カプロラクトン)(PCL)、ポリ(3-ヒドロキシ酪酸塩)(PHB)、ポリ(グリコール酸)(PGA)、ポリ(乳酸)(PLA)、及びそのグリコール酸とのコポリマー(すなわち、ポリ(D,L-ラクチド-コグリコリド)(PLGA)などの脂肪族ポリエステルが挙げられる(その各々が、引用により本明細書中に完全に組み込まれる、Vert M、Schwach G、Engel R、及びCoudane Jの文献(1998) J Control Release 53(1-3):85-92; Jain RAの文献(2000) Biomaterials 21(23):2475-2490; Uhrich KE、Cannizzaro SM、Langer RS、及びShakesheff KMの文献(1999) Chemical Reviews 99(11):3181-3198;並びにPark TGの文献(1995) Biomaterials 16(15):1123-1130)。
本明細書で使用される場合、「結合剤リンカー」又は「BL」という語句は、結合剤(例えば、抗体又はその抗原結合断片)を、本明細書に記載されるペイロード化合物(例えば、VX-787及びその誘導体、並びに/又はバロキサビル及びその誘導体(例えば、バロキサビルマルボキシル))、並びに任意に、1以上の側鎖化合物と連結、接続、又は結合させる任意の二価、三価、又は多価の基又は部分を指す。通常、本明細書に記載される抗体コンジュゲートのための好適な結合剤リンカーは、抗体コンジュゲートの循環半減期を利用するのに十分に安定であり、かつ同時に、抗原によって媒介されるコンジュゲートの内在化の後にそのペイロードを放出することができるものである。リンカーは、切断性又は非切断性であることができる。切断性リンカーは、内在化後の細胞内代謝、例えば、加水分解、還元、又は酵素反応を介する切断によって切断されるリンカーである。非切断性リンカーは、内在化後の抗体のリソソーム分解を介して、取り付けられたペイロードを放出するリンカーである。好適なリンカーとしては、酸不安定性リンカー、加水分解不安定性リンカー、酵素切断性リンカー、還元不安定性リンカー、自壊性リンカー、及び非切断性リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。好適なリンカーとしては、ペプチド、グルクロニド、コハク酸イミド-チオエーテル、ポリエチレングリコール(PEG)単位、ヒドラゾン、マル-カプロイル単位、ジペプチド単位、バリン-シトルリン単位、及びパラ-アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)、パラ-アミノベンジル(PAB)単位であるか、又はこれらを含むものも挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、結合剤リンカー(BL)は、反応性リンカー(RL)の反応基(RG)と結合剤、例えば、抗体、修飾抗体、又はその抗原結合断片の反応性部分との反応によって形成される部分を含む。
いくつかの例において、BLは、以下の部分:
Figure 2023511956000016
 (ここで、
Figure 2023511956000017
 は、抗体又はその抗原結合断片のシステインとの結合である)
を含む。いくつかの例において、BLは、以下の部分:
Figure 2023511956000018
 (ここで、
Figure 2023511956000019
 は、抗体又はその抗原結合断片のリジンとの結合である)
を含む。
いくつかの実施態様において、結合剤は、抗体又はその抗原結合断片である。抗体は、当業者に公知の任意の形態のものであることができる。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、特定の抗原に特異的に結合するか又はそれと特異的に相互作用する少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)を含む任意の抗原結合分子又は分子複合体を指す。「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された2本の重(H)鎖と2本の軽(L)鎖の4本のポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子(すなわち、完全な抗体分子)及びその多量体(例えば、IgM)又はこれらの抗原結合断片を含む。各々の重鎖は、重鎖可変領域(本明細書ではHCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、CH1、CH2、及びCH3という3つのドメインを含む。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書ではLCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、1つのドメイン(CL1)を含む。VH及びVL領域は、フレームワーク領域(FR)と呼ばれるより高度に保存されている領域が散在する、相補性決定領域(CDR)と呼ばれる超可変領域にさらに細かく分けることができる。各々のVH及びVLは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、以下の順序: FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4で配置された、3つのCDR及び4つのFRから構成される。本明細書に開示される様々な実施態様において、本明細書における化合物に好適な抗体(又はその抗原結合性部分)のFRは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、又は自然にもしくは人為的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、2以上のCDRの対比分析に基づいて定義することができる。本明細書で使用される「抗体」という用語は、完全な抗体分子の抗原結合断片も含む。本明細書で使用される抗体の抗原結合ドメイン」又は「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得られる、合成された、又は遺伝子改変されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。ある実施態様において、「抗原結合断片」という用語は、多重特異性抗原結合分子のポリペプチド断片を指す。本明細書で使用される抗体の「抗原結合断片」、又は「抗体断片」という用語は、インフルエンザHAなどの抗原に結合する能力を保持する抗体の1以上の断片を指す。抗体の抗原結合断片は、任意の好適な標準的技法、例えば、タンパク分解的消化又は抗体可変ドメイン及び任意に定常ドメインをコードするDNAの操作及び発現を伴う組換え遺伝子工学技法を用いて、完全な抗体分子から得ることができる。そのようなDNAは公知であり、かつ/又は例えば、商業的供給源、DNAライブラリー(例えば、ファージ-抗体ライブラリーを含む)から容易に入手可能であるか、又は合成することができる。DNAをシークエンシングし、化学的に又は分子生物学的技法を用いることにより操作して、例えば、1以上の可変及び/もしくは定常ドメインを好適な配置に配置すること、又はコドンを導入し、システイン残基を生成させ、アミノ酸を修飾し、付加し、もしくは欠失させることなどができる。抗原結合断片の非限定的な例としては:(i)Fab断片;(ii)F(ab')2断片;(iii)Fd断片;(iv)Fv断片;(v)単鎖Fv(scFv)分子;(vi)dAb断片;及び(vii)抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位(例えば、CDRを含有する断片、もしくはCDR3ペプチドなどの単離されたCDR)、又は拘束性FR3-CDR3-FR4ペプチドが挙げられる。他の改変分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、CDR移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ(例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど)、小モジュラー免疫医薬(SMIP)、及びサメ可変IgNARドメインも、本明細書で使用される「抗原結合断片」という表現に包含される。抗体の抗原結合断片は、通常、少なくとも1つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズ又はアミノ酸組成のものであってもよく、通常、1以上のフレームワーク配列に隣接しているか又はそれとインフレームになっている少なくとも1つのCDRを含む。VHドメインがVLドメインと会合している抗原結合断片において、VHドメインとVLドメインは、互いに対して任意の好適な配置にあってもよい。例えば、可変領域は二量体であり、かつVH-VH、VH-VL、又はVL-VL二量体を含有していてもよい。或いは、抗体の抗原結合断片は、単量体のVH又はVLドメインを含有していてもよい。ある実施態様において、抗体の抗原結合断片は、少なくとも1つの定常ドメインに共有結合的に連結された少なくとも1つの可変ドメインを含有していてもよい。本開示の抗体の抗原結合断片内に見出し得る可変及び定常ドメインの非限定的で例示的な配置としては:(i)VH-CH1;(ii)VH-CH2;(iii)VH-CH3;(iv)VH-CH1-CH2;(v)VH-CH1-CH2-CH3;(vi)VH-CH2-CH3;(vii)VH-CL;(viii)VL-CH1;(ix)VL-CH2;(x)VL-CH3;(xi)VL-CH1-CH2;(xii)VL-CH1-CH2-CH3;(xiii)VL-CH2-CH3;及び(xiv)VL-CLが挙げられる。上記の例示的な配置のいずれかを含む可変ドメインと定常ドメインの任意の配置において、可変ドメインと定常ドメインは、互いに直接連結されていてもよく、又は完全なもしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接する可変ドメイン及び/又は定常ドメイン間に柔軟な又は半ば柔軟な連結を生じさせる少なくとも2つ(例えば、5、10、15、20、40、60、又はそれより多く)のアミノ酸からなっていてもよい。さらに、本明細書における抗体の抗原結合断片は、互いに及び/又は1以上の単量体VHもしくはVLドメインと(例えば、ジスルフィド結合によって)非共有結合的に会合した上記の可変ドメインと定常ドメインの配置のいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体(又はその他の多量体)を含み得る。完全な抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性又は多重特異性(例えば、二重特異性)であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合断片は、通常、少なくとも2つの異なる可変ドメインを含み、ここで、各々の可変ドメインは、別々の抗原に又は同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む、任意の多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能なルーチンの技法を用いて、本開示の抗体の抗原結合断片と関連した使用に適合させることができる。本明細書に記載されるある実施態様において、本明細書に記載される抗体は、ヒト抗体である。
1以上のCDR残基の置換又は1以上のCDRの削除も可能である。1つ又は2つのCDRを結合のために省くことができる抗体が科学文献に記載されている。Padlanら(1995 FASEB J. 9:133-139)は、公表されている結晶構造に基づいて、抗体とその抗原の間の接触領域を解析し、CDR残基のうちの約5分の1から3分の1だけが実際に抗原と接触するという結論を下した。Padlanらは、1つ又は2つのCDRに抗原と接触するアミノ酸がない多くの抗体も見出した(Vajdosらの文献、2002 J Mol Biol 320:415-428も参照)。
抗原と接触しないCDR残基を、以前の研究に基づいて、Chothia CDRの外側にあるKabat CDRの領域から、分子モデリングによって及び/又は実験的に同定することができる(例えば、CDRH2中の残基H60～H65は必要でないことが多い)。CDR又はその残基が削除される場合、それは、通常、別のヒト抗体配列又はそのような配列のコンセンサス中の対応する位置を占めるアミノ酸と置換される。置換すべきCDR及びアミノ酸内の置換の位置は、実験的に選択することもできる。実験的置換は、保存的又は非保存的置換であることができる。
本明細書に開示される完全ヒト抗インフルエンザ-HAモノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び/又はCDR領域中に1以上のアミノ酸置換、挿入、及び/又は欠失を含み得る。そのような突然変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公的な抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、容易に確認することができる。本開示は、1以上のフレームワーク及び/又はCDR領域内の1以上のアミノ酸が、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基に、又は別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、又は対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に突然変異させられている(そのような配列変化は、本明細書において「生殖系列突然変異」と総称される)、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片を含む。当業者は、本明細書に開示される重鎖及び軽鎖可変領域配列から出発して、1以上の個々の生殖系列突然変異又はその組合せを含む多くの抗体及び抗原結合断片を容易に産生することができる。ある実施態様において、VH及び/又はVLドメイン内の全てのフレームワーク及び/又はCDR残基を突然変異させて、抗体が由来したもとの生殖系列配列中に見出される残基に戻す。他の実施態様において、特定の残基のみ、例えば、FR1の最初の8つのアミノ酸もしくはFR4の最後の8つのアミノ酸に見出される突然変異残基のみ、又はCDR1、CDR2、もしくはCDR3に見出される突然変異残基のみを突然変異させて、もとの生殖系列配列に戻す。他の実施態様において、1以上の該フレームワーク及び/又はCDR残基を、異なる生殖系列配列(すなわち、抗体がもともと由来した生殖系列配列と異なる生殖系列配列)の対応する残基に突然変異させる。さらに、本開示の抗体は、例えば、特定の個々の残基が特定の生殖系列配列の対応する残基に突然変異させられている一方で、もとの生殖系列配列と異なる特定の他の残基が維持されているか又は異なる生殖系列配列の対応する残基に突然変異させられている、フレームワーク及び/又はCDR領域内の2以上の生殖系列突然変異の任意の組合せを含有し得る。ひとたび得られれば、1以上の生殖系列突然変異を含有する抗体及び抗原結合断片を、例えば、改善された結合特異性、増大した結合親和性、改善又は増強された拮抗的又は作動的生体特性(場合による)、低下した免疫原性などの1以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な方法で得られる抗体及び抗原結合断片は、本開示の範囲内に包含される。
本開示は、1以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるHCVR、LCVR、及び/又はCDRアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む完全ヒト抗インフルエンザ-HAモノクローナル抗体も含む。例えば、本開示は、例えば、本明細書に開示されるHCVR、LCVR、及び/又はCDRアミノ酸配列のいずれかと比べて、10以下、8以下、6以下、4以下などの保存的アミノ酸置換を有する、HCVR、LCVR、及び/又はCDRアミノ酸配列を有する抗インフルエンザ-HA抗体を含む。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本開示のヒトmAbは、例えば、CDRに、特にCDR3にヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基(例えば、インビトロでのランダムなもしくは部位特異的な突然変異誘発によるか、又はインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異)を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種(例えば、マウス)の生殖系列に由来するCDR配列がヒトFR配列に移植されているmAbを含むことが意図されない。この用語は、非ヒト哺乳動物において、又は非ヒト哺乳動物の細胞において組換え産生された抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された又はヒト対象で生成された抗体を含むことが意図されない。この用語は、修飾又はヒトによる介入/操作なしで、天然に存在する非修飾生物に通常存在する天然に存在する抗体を含まない。
本明細書で使用される「組換え体」という用語は、例えば、DNAスプライシング及びトランスジェニック発現を含む、組換えDNA技術のような当技術分野で公知の技術又は方法によって作出され、発現され、単離され、又は取得される抗体又はその抗原結合断片を指す。この用語は、非ヒト哺乳動物(トランスジェニック非ヒト哺乳動物(例えば、トランスジェニックマウス)を含む)、もしくは細胞(例えば、CHO細胞)発現系で発現されるか、又は組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体を指す。本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という語句は、組換え手段によって調製され、発現され、作出され、又は単離される全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物(例えば、マウス)から単離される抗体(例えば、Taylorらの文献(1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295を参照)、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のDNA配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製され、発現され、作出され、もしくは単離される抗体を含むことが意図される。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する。しかしながら、ある実施態様において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロでの突然変異誘発(又はヒトIg配列についてトランスジェニックな動物を使用する場合、インビボでの体細胞突然変異誘発)を受け、したがって、該組換え抗体のVH及びVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列VH及びVL配列に由来し、かつそれに関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい配列である。ヒト抗体は、ヒンジの不均一性と関連する2つの形態で存在することができる。ある形態では、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合によって結合している、約150～160kDaの安定な4鎖構築物を含む。第二の形態では、二量体が鎖間ジスルフィド結合によって連結されず、共有結合した軽鎖と重鎖(半分の抗体)から構成された、約75～80kDaの分子が形成される。これらの形態は、親和性精製の後でさえも、分離するのが極めて難しい。様々なインタクトのIgGアイソタイプにおける第二の形態の出現頻度は、限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプと関連する構造上の違いによるものである。ヒトIgG4ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、ヒトIgG1ヒンジを用いて通常観察されるレベルにまで第二の形態の出現を顕著に低下させることができる(Angalらの文献(1993) Molecular Immunology 30:105)。本開示は、所望の抗体形態の収量を向上させるために、例えば、製造において望ましくあり得る1以上の突然変異をヒンジ領域、CH2領域、又はCH3領域中に有する抗体を包含する。
本明細書で使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体(Ab)を実質的に含まない抗体を指すことが意図される(例えば、インフルエンザ-HAに特異的に結合する単離された抗体、又はその断片は、インフルエンザ-HA以外の抗原に特異的に結合するAbを実質的に含まない)。本明細書に記載される抗体は、単離された抗体であってもよい。本明細書で使用される「単離された抗体」は、同定され、かつその天然環境の少なくとも1つの構成要素から分離及び/又は回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも1つの構成要素から、又は抗体が天然に存在しもしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離又は除去された抗体は、本開示の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体は、組換え細胞内のインサイチュの抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも1つの精製又は単離工程にかけられた抗体である。ある実施態様によれば、単離された抗体は、他の細胞物質及び/又は化学物質を実質的に含まないものであってもよい。本明細書で使用される抗体は、抗体が由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び/又はCDR領域中に1以上のアミノ酸置換、挿入、及び/又は欠失を含むことができる。そのような突然変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公的な抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、容易に確認することができる。本開示は、1以上のフレームワーク及び/又はCDR領域内の1以上のアミノ酸が、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基に、又は別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、又は対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に突然変異させられている(そのような配列変化は、本明細書において、「生殖系列突然変異」と総称される)、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片を含む。当業者は、本明細書に開示される重鎖及び軽鎖可変領域配列から出発して、1以上の個々の生殖系列突然変異又はその組合せを含む多くの抗体及び抗原結合断片を容易に産生することができる。
本明細書で使用される「遮断抗体」、「中和抗体」、又は「アンタゴニスト抗体」は、抗原へのその結合が抗原と関連する少なくとも1つの生物活性の阻害をもたらす抗体を指すことが意図される。例えば、本開示の抗体又は抗体-薬物コンジュゲートは、宿主細胞へのインフルエンザの付着又は侵入を予防又は遮断することができる。さらに、「中和抗体」は、宿主内での感染を開始及び/又は永続させる病原体の能力を中和する、すなわち、予防し、阻害し、低下させ、妨げ、又は妨害することができる抗体である。そのような抗体又は抗体-薬物コンジュゲートは、インフルエンザHAへの結合を介する中和能力を保有する場合、「インフルエンザ-HA活性を中和する抗体」と称することができる。「中和抗体」及び「中和する抗体(an antibody that neutralizes)」又は「中和する抗体(antibodies that neutralize)」という用語は、本明細書において互換的に使用される。これらの抗体は、適切な製剤化により、又は能動的なワクチン接種と関連させて、又は診断ツールとして、単独で又は予防剤もしくは治療剤として他の抗ウイルス剤と組み合わせて使用することができる。本明細書で使用される場合、「抗インフルエンザ抗体」は、抗原(例えば、HA)へのその結合がインフルエンザウイルスと関連する少なくとも1つの生物活性の阻害をもたらす抗体を指すことができる。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域中の特異的抗原結合部位と相互作用する抗原性決定基を指す。単一の抗原は、複数のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体が抗原上の異なる部分に結合し得、かつ異なる生物学的効果を有し得る。「エピトープ」という用語は、B細胞及び/又はT細胞が応答する抗原上の部位も指す。これは、抗体によって結合される抗原の領域も指す。B細胞エピトープは、連続するアミノ酸又はタンパク質の三次折り畳みによって並置された不連続のアミノ酸の両方から形成されることができる。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、通常、変性溶媒に曝露したときに保持されるが、三次折り畳みによって形成されるエピトープは、通常、変性溶媒で処理したときに失われる。エピトープは、通常、独特の空間的立体構造中に少なくとも3つ、より一般的には、少なくとも5つ又8～10のアミノ酸を含む。エピトープは、構造的又は機能的として定義され得る。機能的エピトープは、通常、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープは、立体構造的であってもよい、すなわち、非線状アミノ酸から構成されてもよい。ある実施態様において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの、化学的に活性な表面分子群である決定基を含み得、ある実施態様においては、特定の三次元構造特徴及び/又は特定の電荷特徴を有し得る。
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、BIACORE(商標)システム(Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J)を用いた、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出による、リアルタイムの生体分子相互作用の解析を可能にする光学現象を指す。
バイオレイヤー干渉法は、生体分子相互作用を測定するための無標識技術である。これは、2つの表面：バイオセンサーの先端の固定化されたタンパク質の層及び内部参照層から反射した白色光の干渉パターンを分析する光学的な分析技法である。バイオセンサーの先端に結合した分子の数の何らかの変化によって、リアルタイムで測定することができる干渉パターンのシフトが引き起こされる(Abdiche,Y.N.らの文献、Analytical Biochemistry,(2008), 377(2), 209-217)。ある実施態様において、「リアルタイムバイオレイヤー干渉計に基づくバイオセンサー(Octet HTXアッセイ)」を用いて、ある特定の抗インフルエンザHA抗体の結合特徴を評価した。
本明細書で使用される「KD」という用語は、特定の抗体-抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
本明細書で使用される「交差競合する」という語句は、抗原に結合し、かつ別の抗体又はその抗原結合断片の結合を阻害又は遮断する抗体又はその抗原結合断片を意味する。この語句は、2つの抗体の間の両方向の競合、すなわち、第一の抗体が結合し、第二の抗体の結合を遮断すること、及びその逆も含む。ある実施態様において、第一の抗体と第二の抗体は、同じエピトープに結合し得る。或いは、第一の抗体と第二の抗体は、一方の結合が、例えば、立体障害によって、第二の抗体の結合を阻害又は遮断するように、異なっているが、重複するエピトープに結合し得る。抗体間の交差競合は、当技術分野で公知の方法、例えば、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイによって測定することができる。2つの抗体間の交差競合は、自己間結合(この場合、第一の抗体と第二の抗体は同じ抗体である)のためにバックグラウンドシグナルを下回る第二の抗体の結合として表すことができる。2つの抗体間の交差競合は、例えば、ベースラインの自己間バックグラウンド結合(この場合、第一の抗体と第二の抗体は同じ抗体である)を下回る第二の抗体の％結合として表すことができる。
核酸又はその断片を指す場合の「実質的同一性」又は「実質的に同一」という用語は、適切なヌクレオチド挿入又は欠失を伴って、別の核酸(又はその相補鎖)と最適に整列させたとき、その各々が引用により本明細書中に完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号で論じられているような、任意の周知の配列同一性のアルゴリズム、例えば、FASTA、BLAST、又はGAPによって測定したとき、少なくとも約90％、より好ましくは、少なくとも約95％、96％、97％、98％、又は99％のヌクレオチド塩基においてヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子との実質的同一性を有する核酸分子は、ある例において、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じ又は実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
ポリペプチドに適用される場合、「実質的類似性」又は「実質的に類似した」という語句は、例えば、デフォルトのギャップウェイトを用いて、GAP又はBESTFITというプログラムによって最適に整列させたとき、2つのペプチド配列が、少なくとも90％の配列同一性、さらにより好ましくは、少なくとも95％、98％、又は99％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なっている。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の化学的性質(例えば、電荷又は疎水性)を有する側鎖(R基)を有する別のアミノ酸残基によって置換される置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的性質を実質的には変化させない。2以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、類似性のパーセント又は度合いを上方に調整して、置換の保存的性質に合わせて補正することができる。この調整を行うための手段は、当業者に周知である(例えば、Pearsonの文献(1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331を参照)。類似の化学的性質を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、1)脂肪族側鎖:グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン; 2)脂肪族-ヒドロキシル側鎖:セリン及びトレオニン; 3)アミド含有側鎖:アスパラギン及びグルタミン; 4)芳香族側鎖:フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン; 5)塩基性側鎖:リジン、アルギニン、及びヒスチジン; 6)酸性側鎖:アスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに7)硫黄含有側鎖:システイン及びメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は:バリン-ロイシン-イソロイシン、フェニルアラニン-チロシン、リジン-アルギニン、アラニン-バリン、グルタミン酸-アスパラギン酸、及びアスパラギン-グルタミンである。或いは、保存的置換は、Gonnetらの文献(1992) Science 256: 1443 45に開示されているPAM250対数-確率行列において正の値を有する任意の変化である。「中等度に保存的な」置換は、PAM250対数-確率行列において非負の値を有する任意の変化である。
ポリペプチドの配列類似性は、通常、配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、様々な置換、欠失、及び他の修飾に割り当てられる類似性の尺度を用いて、類似の配列をマッチさせる。例えば、GCGソフトウェアは、密接に関連するポリペプチド、例えば、異なる生物種由来のホモログポリペプチド間の、又は野生型タンパク質とその突然変異体間の配列相同性又は配列同一性を決定するために、デフォルトパラメータを用いて使用することができるGAP及びBESTFITなどのプログラムを含む。例えば、GCGバージョン6.1を参照されたい。ポリペプチド配列は、デフォルトの又は推奨されるパラメータを用いるFASTA: GCGバージョン6.1中のプログラムを用いて比較することもできる。FASTA(例えば、FASTA2及びFASTA3)は、クエリー配列と検索配列の間の最も高いオーバーラップ領域のアラインメント及びパーセント配列同一性を提供する(Pearsonの文献(2000)、上記)。配列は、12のギャップオープンペナルティ及び2のギャップ伸長ペナルティ、並びに62のBLOSUMマトリックスを用いるアフィンギャップ検索を使用するスミス-ウォーターマン相同性検索アルゴリズムを用いて比較することもできる。本発明の配列を様々な生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを用いる、コンピュータプログラムBLAST、特に、BLASTP又はTBLASTNである。例えば、Altschulらの文献(1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410及び(1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402を参照されたい。
「治療的有効量」という語句は、そのためにそれが投与される所望の効果をもたらす量を指す。正確な量は、治療の目的によって決まり、公知の技法を用いて、当業者によって確認可能である(例えば、Lloydの文献(1999)、医薬品の調合に関する技術、科学、及びテクノロジー(The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)を参照)。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ウイルス感染などの疾患又は障害の改善、予防、及び/又は治療を必要としている動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトを指す。対象は、インフルエンザ感染を有する可能性があるか、又はインフルエンザウイルス感染を発症しやすい。「インフルエンザウイルス感染を発症しやすい」対象、又は「インフルエンザウイルス感染にかかる危険性が高い可能性がある」対象は、自己免疫疾患が理由で免疫系不全を有する対象、(例えば、臓器移植後に)免疫抑制療法を受けている人、ヒト免疫不全症候群(HIV)もしくは後天性免疫不全症候群(AIDS)、白血球を枯渇させもしくは破壊するある種の貧血に苦しんでいる人、放射線もしくは化学療法を受けている人、又は炎症性障害に苦しんでいる人である。さらに、極端に若齢又は高齢の対象は、リスクが高い。感染した個体と物理的に接触するか又は物理的にごく近接する人はいずれも、インフルエンザウイルス感染を発症する危険性が高い。さらに、対象は、この疾患の発生地に近いために、例えば、対象は、人口密集都市に居住している、又はインフルエンザウイルスの感染が確認もしくは疑われている対象にごく近接しているために、或いは職業の選択、例えば、病院職員、医薬品研究者、感染地域への旅行者、又は頻繁に飛行機を利用する人であるために、インフルエンザ感染にかかる危険性がある。
本明細書で使用される場合、「治療する(treat)」、「治療する(treating)」、又は「治療」という用語は、それを必要としている対象への開示された抗体などの治療剤の投与による、インフルエンザ感染の少なくとも1つの症状又は兆候の重症度の低下又は改善を指す。これらの用語は、疾患の進行又は感染の悪化の阻害を含む。これらの用語は、疾患の前向きな予後、すなわち、開示された抗体又は抗体-薬物コンジュゲートなどの治療剤の投与により、対象が感染を免れ得るか、又は低下したウイルス力価を有し得るもしくはウイルス力価を全く有し得ないことも含む。治療剤は、対象に治療用量で投与することができる。
「予防する(prevent)」、「予防する(preventing)」、又は「予防」という用語は、開示された抗体又は抗体-薬物コンジュゲートの投与による、インフルエンザ感染又はインフルエンザ感染の任意の症状もしくは兆候の発現の阻害を指す。この用語は、ウイルスに曝露された又はインフルエンザ感染を有する危険性のある対象における感染の拡大の予防を含む。
本明細書で使用される場合、「防御効果」は、抗ウイルス剤などの薬剤、又は抗インフルエンザ-HA抗体などの抗体、又は本明細書に開示される抗体-薬物コンジュゲートが、以下のこと:例えば、感染性因子に曝露された後の生存の増大、ウイルス量の減少、又は感染性因子と関連する少なくとも１つの症状の改善のうちのいずれか1つ又は複数を示すことができるかどうかを決定するための当技術分野で公知の任意の標準的な手順によって示すことができる。
本明細書で使用される場合、「抗ウイルス薬」、「抗ウイルス剤」、「抗ウイルス化合物(antiviral compound)」、及び「抗ウイルス化合物(anti-viral compound)」という語句は、対象におけるウイルス感染(例えば、インフルエンザ感染)を治療、予防、又は改善するために使用される抗感染症薬又は療法に適用される。「抗ウイルス薬(anti-viral drug)」(又はその同義語「抗ウイルス薬(antiviral drug)」、「抗ウイルス化合物(anti-viral compound)」、及び「抗ウイルス化合物(antiviral compound)」)という用語は、TAMIFLU(登録商標)(オセルタミビル)、RELENZA(登録商標)(ザナミビル)、リバビリン、又はインターフェロン-α2bを含むが、これらに限定されない。抗ウイルス薬は、インフルエンザ阻害剤を含む。本明細書で使用される場合、「インフルエンザ阻害剤」は、インフルエンザウイルス感染を阻害するために使用される薬物を指し、オセルタミビルを含むが、これに限定されない。本明細書で使用される場合、ポリメラーゼ阻害剤は、インフルエンザポリメラーゼなどの核酸ポリメラーゼの阻害剤を指すことができる。例示的なポリメラーゼ阻害剤は、VX-787である。任意の特定の理論に束縛されることを望むものではないが、インフルエンザ阻害剤は、インフルエンザウイルスそのものを標的とすることによるか、又はインフルエンザウイルスによって標的とされ得る宿主細胞を標的とすることにより機能することができる。例えば、宿主細胞を標的とするインフルエンザ阻害剤は、細胞内での翻訳を阻害し、それにより、ウイルス複製を低下させることができる。
「特異的に結合する」又は「に特異的に結合する」などの語句は、抗体又はその抗原結合断片が生理的条件下で比較的安定である抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約1×10-8M以下の平衡解離定数によって特徴付けられることができる(例えば、より小さいKDは、より堅固な結合を意味する)。2つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書に記載されているように、抗体は、インフルエンザ-HAに特異的に結合するOctet(登録商標) HTXバイオセンサー上でのリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイによって同定されている。さらに、インフルエンザ-HA中の1つのドメイン及び1以上のさらなる抗原に結合する多重特異性抗体又はインフルエンザ-HAの2つの異なる領域に結合する二重特異性体は、それでもなお、本明細書で使用される「特異的に結合する」抗体とみなされる。中和抗体に加えて、HAに特異的に結合するが、非中和性である抗体を本開示の範囲内で用いて、抗体-薬物コンジュゲートを作製することもできる。そのような抗体は、例えば、ペイロードをインフルエンザ感染細胞に送達するように機能することができる。
「高親和性」抗体という用語は、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイによって、例えば、Octet(登録商標) HTXバイオセンサーによって、又は表面プラズモン共鳴、例えば、BIACORE(商標)によって、又は溶液親和性ELISAによって測定したとき、少なくとも10-8M;好ましくは、10-9M;より好ましくは、10-10M、一層より好ましくは、10-11M、さらにより好ましくは、10-12Mの、KDとして表される、インフルエンザ-HAに対する結合親和性を有するmAbを指す。
「緩徐な解離速度」、「Koff」、又は「kd」という語句又は用語は、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイ、例えば、Octet(登録商標) HTXバイオセンサー、又は表面プラズモン共鳴、例えば、BIACORE(商標)によって決定したとき、1×10-3s-1以下、好ましくは、1×10-4s-1以下の速度定数でインフルエンザ-HAから解離する抗体を指す。
本明細書で使用される抗体の「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの語句は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得られる、合成された、又は遺伝子改変されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。
具体的な実施態様において、本開示の抗体又は抗体断片は、インフルエンザ-HAによって引き起こされる感染を治療するのに有用な抗ウイルス薬、抗ウイルス薬を含むリンカー-ペイロード、第二の抗インフルエンザ抗体、又は任意の他の治療的部分などのリガンド又は治療的部分などの部分にコンジュゲートすることができる(「抗体-薬物コンジュゲート」又は「免疫コンジュゲート」)。
本明細書で使用される場合、「順次投与する」とは、各々の用量の化合物が、異なる時点で、例えば、所定の間隔(数時間、数日間、数週間、又は数カ月間)で区切られた異なる日に、対象に投与されることを意味する。
「初期用量」、「二次用量」、及び「三次用量」という語句は、本明細書に記載される化合物の投与の時系列を指す。したがって、「初期用量」は、治療レジメンの開始時に投与される用量(「ベースライン用量」とも呼ばれる)であり;「二次用量」は、初期用量の後に投与される用量であり;「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初期用量、二次用量、及び三次用量は全て、同じ量の本明細書に記載される化合物を含有し得るが、通常、投与の頻度に関して互いに異なり得る。
本明細書で使用される「直前の用量」という語句は、一連の複数回の投与において、介入用量のない順序で、まさに次の用量の投与の前に患者に投与される化合物の用量を意味する。
本明細書で使用される場合、「ペイロード」という用語は、所望の生物学的効果をもたらす(例えば、インフルエンザウイルス感染又は複製を阻害する)、直接的に又はリンカーを介して、抗体又はその抗原結合断片に任意にコンジュゲートされた、小分子活性成分(例えば、抗ウイルス化合物)を指す。ペイロードは、2,000Da以下、1,500Da以下、又は900Da以下であることができる。
(化合物又はペイロード)
本明細書に提供されるのは、抗ウイルス化合物又はペイロードである。任意の特定の操作理論に束縛されるものではないが、抗ウイルス化合物には、(1)VX-787及びその誘導体;並びに(2)バロキサビル及びその誘導体(例えば、バロキサビルマルボキシル)が含まれる。ある実施態様において、抗ウイルス化合物は、コンジュゲートの一部として細胞に送達することができる。ある実施態様において、抗ウイルス化合物は、標的、例えば、標的細胞で又はその中で、VX-787、バロキサビル、及び/又はバロキサビルマルボキシル、並びにこれらの誘導体の各々の任意の活性を実行することができる。ある種の抗ウイルス化合物は、1以上のさらなる活性を有することができる。
ある実施態様において、本明細書に記載されるのは、式Iの構造:
Figure 2023511956000020
 又はその医薬として許容し得る塩を有する化合物である。式I中、ある実施態様において、ZZは、-OR1又は-NHOHである。一実施態様において、ZZは、-NHOHである。一実施態様において、ZZは、-OR1である。式I中、ZZが-OR1であるとき、有用なR1基としては、水素及び
Figure 2023511956000021
 が挙げられる。一実施態様において、R1は、水素である。一実施態様において、R1は、
Figure 2023511956000022
 である。一実施態様において、化合物は、VX-787又は
Figure 2023511956000023
 である。
ある実施態様において、本明細書に記載されるのは、式IIの構造:
Figure 2023511956000024
 又はその医薬として許容し得る塩を有する化合物である。一実施態様において、R1は、水素である。一実施態様において、R1は、-CH2OC(O)OCH3である。一実施態様において、R1は、
Figure 2023511956000025
 である。一実施態様において、化合物は、バロキサビルマルボキシル又は
Figure 2023511956000026
 である。一実施態様において、化合物は、バロキサビル又は
Figure 2023511956000027
 である。
(結合剤)
本開示で提供されるコンジュゲートのいずれかのための好適な結合剤としては、抗体、ウイルス受容体、又は任意の他の細胞結合もしくはペプチド結合分子もしくは物質が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なインフルエンザHAの全長アミノ酸配列は、アクセッション番号ACP44150.1としてGenBankに示されている。
好適な結合剤としては、表面タンパク質ヘマグルチニン(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、及びMatrix-2(M2)などのインフルエンザウイルスタンパク質に特異的に結合する抗体(例えば、完全ヒト抗体)及びその抗原結合断片が挙げられる。いくつかの実施態様において、これらの結合剤は、インフルエンザウイルスと宿主細胞との相互作用を調節する。いくつかの実施態様において、抗体又はその抗原結合断片は、成熟ヘマグルチニンに結合する。いくつかの実施態様において、抗体又はその抗原結合断片は、HA0ヘマグルチニン前駆体タンパク質に結合する。抗インフルエンザHA抗体は、高い親和性でインフルエンザウイルスHAに結合することができる。ある実施態様において、本明細書における抗体は、遮断抗体であり、ここで、該抗体は、インフルエンザHAに結合し、宿主細胞へのウイルスの付着及び/又は侵入を遮断することができる。いくつかの実施態様において、本明細書における遮断抗体は、インフルエンザウイルスの細胞への結合を遮断することができ、したがって、宿主細胞のウイルス感染性を阻害又は中和することができる。いくつかの実施態様において、遮断抗体は、インフルエンザウイルス感染に苦しむ対象を治療するのに有用であり得る。抗体は、それを必要としている対象に投与されたとき、対象におけるインフルエンザなどのウイルスによる感染を低下させることができる。これらを用いて、対象におけるウイルス量を減少させることができる。これらは、単独で、又はウイルス感染を治療するための当技術分野で公知の他の治療的部分もしくはモダリティとともに補助療法として使用することができる。ある実施態様において、これらの抗体は、ウイルスHAのステム領域、ウイルスHAのヘッド領域、又はその両方におけるエピトープに結合することができる。さらに、同定された抗体は、哺乳動物を感染から保護するために予防的に(感染前に)使用することができるか、又は以前に確立された感染を改善するために、もしくは感染と関連する少なくとも1つの症状を改善するために治療的に(感染が確立した後に)使用することができる。
ある実施態様において、抗体は、全長インフルエンザHAなどの一次免疫原で又は組換え形態のインフルエンザHAもしくはその断片で免疫され、その後、二次免疫原で又はインフルエンザHAの免疫学的活性断片で免疫されたマウスから得られる。ある実施態様において、抗体は、インフルエンザワクチン組成物で免疫され、その後、1以上の組換え産生HAペプチドで追加免疫されたマウスから得られる。ある実施態様において、抗体は、ヒトから得られる。ある実施態様において、抗体は、哺乳動物(例えば、非ヒト哺乳動物)から得られる。ある実施態様において、抗体は、非ヒト霊長類から得られる。
免疫原は、インフルエンザHAの生物学的活性断片及び/もしくは免疫原性断片又はこれらの活性断片をコードするDNAであってもよい。該断片は、HAタンパク質のステム領域(2009年2月22日にオンラインで発表された、Suiの文献、Nature Struct, and Mol. Biol.; 1～9ページを参照)、HAタンパク質のヘッド領域、又はこれらの組合せから得られてもよい。
ペプチドは、タグ化のための又は担体分子、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)へのコンジュゲーションのための特定の残基の付加又は置換を含むように修飾することができる。例えば、システインをペプチドのN-末端もしくはC-末端のいずれかに付加してもよく、又は例えば、免疫用のKLHへのコンジュゲーションのためのペプチドを調製するために、リンカー配列を付加してもよい。
本明細書における特定の抗インフルエンザ抗体、抗インフルエンザ-HA抗体、又はADCは、抗ウイルス活性を有し、例えば、インビトロ又はインビボアッセイによって決定したとき、インフルエンザ-HAに結合し、かつその活性を中和することができる。本明細書における特定の抗インフルエンザ抗体、抗インフルエンザ-HA抗体、又はADCは、インビトロ又はインビボアッセイによって決定したとき、HAに結合することができるが、中和活性を有さない。インフルエンザ-HAに結合し、かつその活性、ひいては、宿主細胞へのウイルスの付着及び/又は侵入と、それに続いて起こるウイルス感染を中和する本明細書における抗体又はADCの能力は、本明細書に記載される、結合アッセイ又は活性アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準的な方法を用いて測定することができる。
インフルエンザ-HAに特異的な抗体又はADCは、追加の標識もしくは部分を含有していなくてもよく、又はこれらは、N-末端もしくはC-末端の標識もしくは部分を含有していてもよい。一実施態様において、該標識又は部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識(もしある場合)の位置は、ペプチドが結合している表面に対するペプチドの配向を決定することができる。例えば、表面がアビジンでコーティングされている場合、N-末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのC-末端部分が表面に対して遠位となるように配向されることになる。一実施態様において、標識は、放射性核種、蛍光色素、又はMRI検出可能な標識であり得る。ある実施態様において、そのような標識抗体は、イメージングアッセイを含む診断アッセイで使用することができる。一実施態様において、追加の部分は、ペプチドタグである。一実施態様において、ADCは、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、ADCは、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグ(例えば、ペンタペプチド)をさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、(例えば、トランスグルタミナーゼを介して、リンカー-ペイロードをコンジュゲートする際に使用するための)ペンタペプチド配列LLQGAである。一実施態様において、ADCは、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、ADCは、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。
ある実施態様において、抗体は、軽鎖を含む。ある実施態様において、軽鎖は、カッパ軽鎖である。ある実施態様において、軽鎖は、ラムダ軽鎖である。ある実施態様において、抗体は、重鎖を含む。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgAである。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgDである。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgEである。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgGである。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgMである。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgG1である。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgG2である。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgG3である。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgG4である。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgA1である。いくつかの実施態様において、重鎖は、IgA2である。
いくつかの実施態様において、抗体は、抗体断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、Fv断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、Fab断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、F(ab')2断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、Fab'断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、scFv(sFv)断片である。いくつかの実施態様において、抗体断片は、scFv-Fc断片である。
いくつかの実施態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、第一の抗原結合性ドメイン及び第二の抗原結合性ドメインを含む二重特異性抗体である。
いくつかの実施態様において、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒト抗体である。
ある実施態様において、抗体は、EU付番体系で295と付番された1以上の重鎖位置にグルタミン残基を含む。本開示において、この位置は、グルタミン295又はGln295又はQ295と呼ばれる。当業者は、これが多くの抗体の野生型配列中の保存されたグルタミン残基であることを認識しているであろう。残基Q295の特定は、本明細書に記載されているものを含む、標準的な配列アラインメントツールで容易に達成することができる。他の有用な実施態様において、抗体を、グルタミン残基を含むように改変することができる。ある実施態様において、抗体は、1以上のN297Q突然変異を含む。グルタミン残基を含むように抗体配列を修飾する技法は、当業者の能力の範囲内である(例えば、Ausubelらの文献、Current Protoc. Mol. Biol.を参照)。一実施態様において、抗体は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、抗体は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端に、ペプチドタグ、例えば、トランスグルタミナーゼ認識配列又はペンタペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。
(ヒト抗体の調製)
トランスジェニックマウスでヒト抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である。任意のそのような公知の方法を本開示との関連で用いて、インフルエンザ-HAに特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。以下のいずれか1つを含む免疫原を用いて、インフルエンザHAに対する抗体を作製することができる。ある実施態様において、本明細書における抗体は、全長のネイティブなインフルエンザHA(例えば、GenBankアクセッション番号FJ966082.1を参照)、又は生弱毒化ウイルスもしくは不活化ウイルス、又は該タンパク質もしくはその断片をコードするDNAで免疫されたマウスから得られる。或いは、インフルエンザ-HAタンパク質又はその断片を、標準的な生化学的技法を用いて産生し、修飾し、免疫原として使用することができる。一実施態様において、免疫原は、組換え産生されたインフルエンザ-HAタンパク質又はその断片である。本明細書におけるある実施態様において、免疫原は、インフルエンザウイルスワクチンであってもよい。ある実施態様において、1以上の追加免疫注射が投与されてもよい。ある実施態様において、追加免疫注射は、1以上のインフルエンザウイルス株、又はこれらの株に由来するヘマグルチニンを含むことができ、例えば、Protein SciencesのH1 A/ニューカレドニア/20/1999、H5 A/インドネシア/05/2005、H3 A/ビクトリア/361/2011、H7 A/ネーデルラント/219/2003、もしくはH9 A/香港/1073/1988、又はB型インフルエンザウイルス株B/ビクトリア/2/87、B/南昌/3451/93、B/シンガポール/11/1994、B/フロリダ/4/2006、又はB/山形/16/88を参照されたい。ある実施態様において、追加免疫注射は、インフルエンザ株の1:1混合物又は該株に由来するヘマグルチニン1:1混合物を含有し得る。ある実施態様において、免疫原は、大腸菌で又は任意の他の真核生物もしくは哺乳動物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞で発現された組換えインフルエンザHAペプチド、或いはインフルエンザウイルスそのものであってもよい。
モノクローナル抗体を作製するためのVELOCIMMUNE(登録商標)技術(例えば、US 6,596,541号、Regeneron Pharmaceuticals、VELOCIMMUNE(登録商標)を参照)又は任意の他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有するインフルエンザ-HAに対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。VELOCIMMUNE(登録商標)技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域及びマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域遺伝子座に機能的に連結されたヒト重鎖及び軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの作製を伴う。抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするDNAを単離し、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域をコードするDNAに機能的に連結する。その後、該DNAを、完全ヒト抗体を発現することができる細胞で発現させる。
通常、VELOCIMMUNE(登録商標)マウスに、対象となる抗原を投与し、リンパ系細胞(例えば、B細胞)を、抗体を発現するマウスから回収する。該リンパ系細胞を骨髄腫細胞株と融合させて、不死ハイブリドーマ細胞株を調製し、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニング及び選択して、対象となる抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定する。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするDNAを単離し、重鎖及び軽鎖の望ましいアイソタイプの定常領域に連結することができる。そのような抗体タンパク質を、細胞、例えば、CHO細胞で産生することができる。或いは、抗原特異的キメラ抗体又は軽鎖及び重鎖の可変ドメインをコードするDNAを抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
最初に、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体を単離する。その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号に記載されているように、抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付け、選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本明細書における完全ヒト抗体、例えば、野生型又は改変型IgG1又はIgG4を作製する。選択された定常領域は具体的な用途に応じて様々に異なり得るが、高親和性抗原結合及び標的特異性特徴は、可変領域に存在する。
(生物学的等価物)
本明細書における抗インフルエンザ-HA抗体及び抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列と異なるが、インフルエンザHAに結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのような変異体抗体及び抗体断片は、親配列と比較したとき、アミノ酸の1以上の付加、欠失、又は置換を含むが、記載されている抗体の生物活性と本質的に等価である生物活性を示す。同様に、本開示の抗体コードDNA配列は、開示されている配列と比較したとき、ヌクレオチドの1以上の付加、欠失、又は置換を含むが、本明細書における抗体又は抗体断片と本質的に生物学的に等価である抗体又は抗体断片をコードする配列を包含する。他の生物学的に等価な抗インフルエンザ-HA抗体及び抗体断片は、その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号に記載されている通りである。
(抗体の生物学的特徴)
一般に、本明細書における抗体は、インフルエンザHAに結合することにより機能する。例えば、本明細書に提供されるのは、リアルタイムバイオレイヤー干渉計に基づくバイオセンサー(Octet HTXアッセイ)によるか又は表面プラズモン共鳴によって測定したとき、10nM未満のKDで(例えば、25℃又は37℃で)インフルエンザHAに結合する抗体及び抗体の抗原結合断片である。ある実施態様において、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号もしくはUS 2016/0176953 A1号に記載されているアッセイ形式、又は実質的に同様のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴によって測定したとき、約5nM未満、約2nM未満、約1nM未満、約500pM未満、約250pM未満、約又は約100pM未満のKDで、インフルエンザ-HAに結合する。
結合活性を測定するための非限定的で例示的なインビトロアッセイは、その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例3に示されている。WO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例3では、インフルエンザ-HAについての抗インフルエンザ-HA抗体の結合親和性及び解離定数がリアルタイムバイオレイヤー干渉計に基づくバイオセンサー(Octet HTXアッセイ)によって決定された。WO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例4及び5では、中和アッセイを用いて、インフルエンザウイルスの多様なグループ1株の感染性が決定された。WO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例6では、特定の抗体がウイルス感染細胞の補体依存的細胞傷害性(CDC)をインビトロで媒介することが示された。WO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例7及び10は、本開示の特定の抗体が、予防的又は治療的のいずれかで投与されたとき、A型インフルエンザ感染をインビボで中和することができることを示している。
また本明細書に提供されるのは、例えば、その各々が引用により本明細書中に完全に組み込まれるWO 2016/100807号もしくはUS 2016/0176953 A1号で定義されているアッセイ形式を用いる25℃での表面プラズモン共鳴、又は実質的に同様のアッセイにより測定したとき、約100分超の解離半減期(t1/2)でインフルエンザHAに結合する抗体及びその抗原結合断片である。ある実施態様において、本明細書における抗体又は抗原結合断片は、例えば、その各々が引用により本明細書中に完全に組み込まれるWO 2016/100807号もしくはUS 2016/0176953 A1号で定義されているアッセイ形式(例えば、imAb捕捉もしくは抗原捕捉形式)を用いる25℃での表面プラズモン共鳴、又は実質的に同様のアッセイにより測定したとき、約200分超、約300分超、約400分超、約500分超、約600分超、約700分超、約800分超、約900分超、又は約1000分超のt1/2でインフルエンザHAに結合する。一実施態様において、本明細書における抗体又は抗原結合断片は、300分超の解離半減期(t1/2)でインフルエンザHAに結合する。一実施態様において、本明細書における抗体は、サル及びマウスで試験したとき、対照I mAbと表記される比較抗体と比較して、約1.5～2倍の解離半減期の増加をもたらす。
また本明細書に提供されるのは、その宿主細胞に対するインフルエンザウイルスの感染性を中和する抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施態様において、該抗体は、例えば、その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例4及び5に示されているマイクロ中和アッセイ、又は実質的に同様のアッセイにおいて、約1.6nM～約130nMの範囲のIC50で、様々な代表的なグループ1インフルエンザウイルス(H1N1 A/プエルトリコ/08/1934; H5N1 A/ベトナム/1203/2004; H1N1 Aカリフォルニア/07/2009; H1N1 A/ウィスコンシン/1933; H1N1 A/ブリスベン/59/1997、H9N2 A香港/33982/2009、H13N6 a/カモメ/メリーランド/704/1977、及びH16N3 A/浜鳥/デラウェア/172/2006)に対する中和効力を示す。一実施態様において、その宿主細胞に対するインフルエンザウイルスの感染性を中和する抗体又はその抗原結合断片は、130nM未満のIC50で中和効力を示す。
また本明細書に提供されるのは、約20nM～約66nMの範囲のEC50で感染細胞の補体依存的細胞傷害性を媒介する抗体又はその抗原結合断片である(その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例6を参照)。一実施態様において、該抗体又はその抗原結合断片は、66nM未満のEC50で、感染細胞の補体依存的細胞傷害性を媒介する。
本明細書に記載されるのは、対照抗体と比較して、防御の増加又はインビボでのA型インフルエンザ感染の中和を示す抗インフルエンザ-A HA抗体である。特定の抗体は、予防的に(感染前に)又は治療的に(感染後に)投与されたとき、中和を示す;その各々が引用により完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号の実施例7を参照されたい。
一実施態様において、本明細書に提供されるのは、インフルエンザHAに特異的に結合する単離された組換え抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、該抗体又はその断片は、以下の特徴:(a)完全ヒトモノクローナル抗体であること;(b)表面プラズモン共鳴アッセイによって測定したとき、10-9M未満の解離定数(KD)でインフルエンザHAに結合すること;(c)約370分～1000分超の範囲の解離半減期(t1/2)を示すこと;(d)約1.6nM～約130nMのIC50で、H1N1、H5N1、H9N2、H13N6、及びH16N3から選択されるグループ1 A型インフルエンザウイルスの中和を示すこと;(e)約20nM～約66nMのEC50で、インフルエンザウイルス感染細胞の補体媒介性溶解を示すこと;又は(f)ウイルス投与の前もしくは後に投与されたときのインフルエンザウイルス感染の動物モデルにおける生存の増加によって示される防御を示すことのうちの2つ以上を示す。
本明細書における抗体は、上述の生物学的特徴又はその任意の組合せのうちの2つ以上を保有することができる。本明細書における抗体の他の生物学的特徴は、本明細書中の作業実施例を含む本開示の概観により、当業者に明白であろう。
(重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸及びヌクレオチド配列)
いくつかの実施態様において、リンカー-ペイロード又はペイロードにコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片は、インフルエンザHAを標的とする抗体であることができる。例示的なインフルエンザHA抗体は、例えば、その各々が引用により本明細書中に完全に組み込まれるWO 2016/100807号又はUS 2016/0176953 A1号に見出すことができる。いくつかの実施態様において、インフルエンザHA抗体は、配列番号20を含む重鎖相補性決定領域(HCDR)-1;配列番号22を含むHCDR2;配列番号24を含むHCDR3;配列番号28を含む軽鎖相補性決定領域(LCDR)-1;配列番号30を含むLCDR2;及び配列番号32を含むLCDR3を含む。いくつかの実施態様において、インフルエンザHA抗体は、配列番号18を含む重鎖可変領域(HCVR)及び配列番号26を含む軽鎖可変領域(LCVR)を含む。前述の実施態様のいずれかにおいて、インフルエンザHA抗体は、抗体機能又は結合の障害をもたらすことなく、ある部位にグルタミン残基を挿入する部位特異的突然変異誘発により調製することができる。例えば、前述の実施態様のいずれかにおいて、インフルエンザHA抗体は、Asn297Gln(N297Q)突然変異を含むことができる。N297Q突然変異を有するそのような抗体は、トランスグルタミナーゼに接近することができ、それゆえ、ペイロード又はリンカー-ペイロードにコンジュゲートすることができる1以上のさらなる天然グルタミン残基をその可変領域に含有することができる。一実施態様において、該抗体は、HCVRを含み、かつHCVRのC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、該抗体は、HCVRを含み、かつHCVRのC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。一実施態様において、該抗体は、2つのHCVRを含み、かつ各々のHCVRのC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、該抗体は、2つのHCVRを含み、かつ各々のHCVRのC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。
表1は、選択された抗インフルエンザHA抗体の重鎖及び軽鎖可変領域並びにCDRのアミノ酸配列識別子を示している。対応する核酸配列識別子は、表2に示されている。
表1:アミノ酸配列識別子
Figure 2023511956000028
 * mAbは、定常領域中に1以上の突然変異を含有する。
表2:核酸配列識別子
Figure 2023511956000029
 * mAbは、定常領域中に1以上の突然変異を含有する。
結合剤リンカーは、抗体又は抗原結合分子内の特定のアミノ酸における付加を介して、結合剤、例えば、抗体又は抗原結合分子に結合させることができる。本開示の本実施態様との関連において使用することができる例示的なアミノ酸付加は、例えば、リジン(例えば、US 5,208,020号; US 2010/0129314号; Hollanderらの文献、Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361; WO 2005/089808号; US 5,714,586号; US 2013/0101546号;及びUS 2012/0585592号を参照)、システイン(例えば、US 2007/0258987号; WO 2013/055993号; WO 2013/055990号; WO 2013/053873号; WO 2013/053872号; WO 2011/130598号; US 2013/0101546号;及びUS 7,750,116号を参照)、セレノシステイン(例えば、WO 2008/122039号;及びHoferらの文献、Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456を参照)、ホルミルグリシン(例えば、Carricoらの文献、Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322; Agarwalらの文献、Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51、及びRabukaらの文献、Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067を参照)、非天然アミノ酸(例えば、WO 2013/068874号及びWO 2012/166559号を参照)、並びに酸性アミノ酸(例えば、WO 2012/05982号を参照)を含む。リンカーは、炭水化物への付加を介して、抗原結合性タンパク質にコンジュゲートすることもできる(例えば、US 2008/0305497号、WO 2014/065661号、Ryanらの文献、Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130、及びJegerらの文献、Angew Chem Int Ed Engl., 2010, 49:9995-9997を参照)。
いくつかの例において、結合剤は、抗体又は抗原結合分子であり、該抗体は、リジン残基を介して、リンカーに結合している。いくつかの実施態様において、抗体又は抗原結合分子は、システイン残基を介して、リンカーに結合している。
リンカーは、トランスグルタミナーゼに基づく化学的酵素的コンジュゲーションを介して、1以上のグルタミン残基にコンジュゲートすることができる(例えば、Jegerらの文献、Angew Chem Int Ed Engl., 2010, 49:9995-9997及びDennlerらの文献、Bioconjugate Chem. 2014, 25:569-578を参照)。例えば、トランスグルタミナーゼの存在下において、抗体の1以上のグルタミン残基を一級アミン化合物にカップリングさせることができる。一級アミン化合物には、例えば、トランスグルタミナーゼ媒介カップリングを介して抗体薬物コンジュゲートを直接的に提供する、ペイロード又はリンカー-ペイロードが含まれる。一級アミン化合物には、抗体薬物コンジュゲートの合成に向けて後にさらなる化合物と反応することができる反応基で官能化されているリンカー及びスペーサーも含まれる。グルタミン残基を含む抗体は、天然源から単離するか又は1以上のグルタミン残基を含むように改変することができる。抗体ポリペプチド鎖中のグルタミン残基(グルタミニル修飾抗体又は抗原結合分子)を人為作製する技法は、当業者の能力の範囲内である。ある実施態様において、抗体は、アグリコシル化される。
ある実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、少なくとも1つのポリペプチド鎖配列中に、少なくとも1つのグルタミン残基を含む。ある実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、各々1つのGln295又はQ295残基を有する2つの重鎖ポリペプチドを含む。さらなる実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、重鎖295以外の部位に1以上のグルタミン残基を含む。本明細書に含まれるのは、本明細書に記載されるN297Q突然変異を担持する本節の抗体である。
一実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。一実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、抗体又はグルタミニル修飾抗体もしくは抗原結合分子は、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。
(リンカー)
ある実施態様において、本明細書に記載されるコンジュゲートのリンカーL部分は、結合剤を本明細書に記載されるペイロード化合物に共有結合的に連結させる部分、例えば、二価部分である。他の例において、リンカーLは、結合剤を本明細書に記載されるペイロード化合物に共有結合的に連結させる三価又は多価部分である。好適なリンカーは、例えば、各々の内容が引用により本明細書中に完全に組み込まれる、抗体-薬物コンジュゲート及び免疫毒素(Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins); Phillips, G.L.編; Springer Verlag: New York, 2013;抗体-薬物コンジュゲート(Antibody-Drug Conjugates); Ducry, L.編; Humana Press, 2013;抗体-薬物コンジュゲート(Antibody-Drug Conjugates); Wang, J.、Shen, W.-C.、及びZaro, J.L.編; Springer International Publishing, 2015に見出すことができる。ある実施態様において、本明細書に記載されるリンカー-ペイロードのリンカーL部分は、結合剤を本明細書に記載されるペイロード化合物に二価でかつ共有結合的に連結させることができる本明細書に記載されるペイロード化合物に共有結合的に連結された部分である。他の例において、本明細書に記載されるリンカー-ペイロードのリンカーL部分は、三価又は多価部分として、結合剤を本明細書に記載されるペイロード化合物に共有結合的に連結させることができる本明細書に記載されるペイロード化合物に共有結合的に連結された部分である。ペイロード化合物は、上記の式I及びIIの化合物を含み、かつリンカーLへの結合又はリンカーLの組込みの後のこれらの残基は、リンカー-ペイロードである。リンカー-ペイロードを抗体又はその抗原結合断片などの結合剤にさらに結合させて、抗体-薬物コンジュゲートを形成させることができる。当業者は、ペイロード部分の特定の官能基がリンカー及び/又は結合剤への連結に好都合であることを認識しているであろう。例えば、ある実施態様において、リンカーは存在せず、ペイロードは、結合剤に直接結合している。別の実施態様において、ペイロードには、カルボン酸が含まれ、結合剤には、リジンが含まれ、この場合、各々のカルボン酸及びリジンは、ペイロード残基を結合剤残基に直接結合させるためのアミド結合形成に関与する。ペイロード官能基にはさらに、ヒドロキシル(例えば、バロキサビル、及びその誘導体、例えば、バロキサビルマルボキシル誘導体)、並びにカルボン酸(例えば、VX-787及びその誘導体に見られるような、Lに連結したときにエステルの形態のもの)が含まれる。
ある実施態様において、リンカーは、生理的条件で安定である。ある実施態様において、リンカーは切断性であり、例えば、酵素の存在下で又は特定のpH範囲もしくは値で、少なくともペイロード部分を放出することができる。いくつかの実施態様において、リンカーは、酵素切断性部分を含む。例示的な酵素切断性部分としては、ペプチド結合、エステル連結、ヒドラゾン、及びジスルフィド連結が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、リンカーは、カテプシン切断性リンカーを含む。
いくつかの実施態様において、リンカーは、非切断性部分を含む。いくつかの実施態様において、非切断性リンカーは、
Figure 2023511956000030
 又はその残基に由来する。いくつかの実施態様において、非切断性リンカー-ペイロード残基は、
Figure 2023511956000031
 又はその位置異性体である。いくつかの実施態様において、非切断性リンカーは、
Figure 2023511956000032
 又はその残基に由来する。いくつかの実施態様において、非切断性リンカー-ペイロード残基は、
Figure 2023511956000033
 又はその位置異性体である。一実施態様において、リンカーは、マレイミドシクロヘキサンカルボキシレート又は4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボン酸(MCC)である。これらの構造中、
Figure 2023511956000034
 は、結合剤との結合を示す。これらの構造中、いくつかの例において、
Figure 2023511956000035
 は、例えば、アジド又はアルキン官能基を有する結合剤と相補的アルキン又はアジド官能基を有するリンカー-ペイロードの反応によって生じるクリック化学残基を示す。これらの構造中、他の例において、
Figure 2023511956000036
 は、例えば、マイケル付加反応を介する、1以上の結合剤システインとマレイミド官能基を有する1以上のリンカー又はリンカー-ペイロードとの反応によって生じる二価スルフィドを示す。これらの構造中、他の例において、
Figure 2023511956000037
 は、例えば、当業者によって理解されるような、1以上の結合剤リジンと活性化又は不活性化カルボキシル官能基を有する1以上のリンカー又はリンカー-ペイロードとの反応によって生じるアミド結合を示す。一実施態様において、
Figure 2023511956000038
 は、例えば、当業者によって理解されるような、1以上の結合剤リジンと活性化カルボキシル官能基を有する1以上のリンカー又はリンカー-ペイロードとの反応によって生じるアミド結合を示す。
いくつかの実施態様において、好適なリンカーとしては、単一の結合剤、例えば、抗体の2つのシステイン残基に化学的に結合されるものが挙げられるが、これらに限定されない。そのようなリンカーは、コンジュゲーションプロセスの結果として破壊される抗体のジスルフィド結合を模倣する働きをすることができる。
いくつかの実施態様において、リンカーは、1以上のアミノ酸を含む。好適なアミノ酸としては、天然、非天然、標準的、非標準的、タンパク質構成性、非タンパク質構成性、及びL-又はD-α-アミノ酸が挙げられる。いくつかの実施態様において、リンカーは、アラニン、バリン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、もしくはシトルリン、これらの誘導体、又はこれらの任意の組合せ(例えば、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドなど)を含む。ある実施態様において、アミノ酸の1以上の側鎖は、下記の側鎖基に連結される。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のバリン及びシトルリン(例えば、二価-Val-Cit-もしくは二価-VCit-)を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のアラニン及びアラニン、すなわち、二価-AA-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のグルタミン酸及びアラニン、すなわち、-EA-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のグルタミン酸及びグリシン、すなわち、-EG-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のグリシン及びグリシン、すなわち、-GG-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のグルタミン、バリン、及びシトルリン、すなわち、-Q-V-Cit-もしくは-QVCit-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のグルタミン酸、バリン、及びシトルリン、すなわち、-E-V-Cit-もしくは-EVCit-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-GGGGS-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-GGGGG-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-GGGGK-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-GFGG-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸のリジン、バリン、及びシトルリン、すなわち、-KVCit-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-KVA-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。いくつかの実施態様において、リンカーは、アミノ酸-VA-を含むか又は該アミノ酸からなるペプチドである。本段落の実施態様のいずれかにおいて、及び本開示の全体を通じて、当業者によって理解されるような、標準的な3文字又は1文字アミノ酸表記が使用される。例示的な1文字アミノ酸表記としては、グリシンを表すG、リジンを表すK、セリンを表すS、バリンを表すV、アラニンを表すA、及びフェニルアラニンを表すFが挙げられる。
いくつかの実施態様において、リンカーは、自壊基を含む。自壊基は、当業者に公知の任意のそのような基であることができる。特定の実施態様において、自壊基は、p-アミノベンジル(PAB)又はその誘導体である。有用な誘導体としては、p-アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)が挙げられる。当業者は、自壊基がペイロードからリンカーの残りの原子を放出する化学反応を行うことができることを認識しているであろう。
いくつかの実施態様において、リンカーは:
Figure 2023511956000039
 であり、
ここで:
SP1は、スペーサーであり;
SP2は、スペーサーであり;
Figure 2023511956000040
 は、結合剤との1以上の結合であり;
Figure 2023511956000041
 は、ペイロードとの1以上の結合であり;
各々のAAは、アミノ酸残基であり;かつ
nは、0～10の整数である。
SP1スペーサーは、(AA)n部分又は残基を結合剤(BA)又はBAに結合している反応基残基に接続する部分である。好適なSP1スペーサーとしては、アルキレンもしくはポリエーテル、又はその両方を含むものが挙げられるが、これらに限定されない。スペーサーの末端、例えば、BA又はAAに結合しているスペーサーの部分は、コンジュゲートの化学合成の間に抗体又はAAをスペーサーにカップリングさせる目的で使用される反応性部分に由来する部分であることができる。ある実施態様において、nは、0、1、2、3、又は4である(すなわち、nが0であるとき、AAは存在しない)。特定の実施態様において、nは、2である。特定の実施態様において、nは、3である。特定の実施態様において、nは、4である。
いくつかの実施態様において、SP1スペーサーは、アルキレンを含む。いくつかの実施態様において、SP1スペーサーは、C5-7アルキレンを含む。いくつかの実施態様において、SP1スペーサーは、ポリエーテルを含む。いくつかの実施態様において、SP1スペーサーは、ポリエチレングリコール(PEG)などのエチレンオキシドのポリマーを含む。ポリエチエングリコールのポリマー単位は、一般に、-(OCH2CH2)p-(ここで、pは1～100の整数であることができる)と表される。例えば、-(OCH2CH2)2-は、-OCH2CH2-OCH2CH2-又はPEG2と表すこともできる。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG1である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG2である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG3である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG4である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG5である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG6である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG7である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG8である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG9である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG10である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG11である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG12である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG13である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG14である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG15である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG16である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG17である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG18である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG19である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG20である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG21である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG22である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG23である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG24である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG25である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG26である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG27である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG28である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG29である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG30である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG31である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG32である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG33である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG34である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG35である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG36である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG37である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG38である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG39である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG40である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG41である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG42である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG43である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG44である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG45である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG46である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG47である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG48である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG49である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG50である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG51である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG52である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG53である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG54である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG55である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG56である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG57である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG58である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG59である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG60である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG61である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG62である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG63である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG64である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG65である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG66である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG67である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG68である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG69である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG70である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG71である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG72である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG73である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG74である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG75である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG76である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG77である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG78である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG79である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG80である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG81である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG82である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG83である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG84である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG85である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG86である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG87である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG88である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG89である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG90である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG91である。ある実施態様において、ポリエチレングリコールは、PEG92である。
いくつかの実施態様において、SP1スペーサーは:
Figure 2023511956000042
 であり、
ここで:
RG'は、反応基RGと結合剤との反応後の反応基残基であり;
Figure 2023511956000043
 は、結合剤との結合であり;
Figure 2023511956000044
 は、(AA)nとの結合であり;
nは、0～10の整数であり;かつ
bは、独立に、1～92の整数である。
反応基RGは、結合剤との1以上の結合を形成することができる、当業者に公知の任意の反応基であることができる。反応基RGは、その構造内に、結合剤と反応して(例えば、抗体とそのシステインもしくはリジン残基で、又はアジド部分で、例えば、PEG-N3官能化抗体と1以上のグルタミン残基で;或いはアミノ部分で、例えば、PEG-NH2官能化抗体と1以上のグルタミン残基で反応して)、本明細書に記載される抗体-薬物コンジュゲートを形成することができる部分を含む部位である。結合剤へのコンジュゲーションの後、反応基は、反応基残基(RG')になる。例示的な反応基としては、結合剤と反応することができるハロアセチル、イソチオシアネート、スクシンイミド、N-ヒドロキシスクシンイミド、又はマレイミド部分を含むものが挙げられるが、これらに限定されない。
SP2スペーサーは、存在する場合に、(AA)n部分をペイロードに接続する部分である。好適なスペーサーとしては、SP1スペーサーとして上で記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。さらに好適なSP2スペーサーとしては、アルキレンもしくはポリエーテル、又はその両方を含むものが挙げられるが、これらに限定されない。SP2スペーサーの末端、例えば、ペイロード又はAAに直接結合した該スペーサーの部分は、コンジュゲートの化学合成の間に該ペイロード又はAAを該SP2スペーサーにカップリングさせる目的で使用される反応性部分に由来する部分であることができる。いくつかの例において、SP2スペーサーの末端、例えば、ペイロード又はAAに直接結合した該SP2スペーサーの部分は、コンジュゲートの化学合成の間に該ペイロード又はAAを該スペーサーにカップリングさせる目的で使用される反応性部分の残基であることができる。
いくつかの実施態様において、SP2スペーサーは、存在する場合に、-NH-(p-C6H4)-CH2-、-NH-(p-C6H4)-CH2OC(O)-、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、
Figure 2023511956000045
 及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある実施態様において、各々の
Figure 2023511956000046
 は、ペイロードとの結合であり、各々の
Figure 2023511956000047
 は、(AA)nとの結合であるか、又はn=0の場合、存在しない。
上の式において、各々の(AA)nは、アミノ酸又は任意に、p-アミノベンジルオキシカルボニル残基(PABC)である。nは0であることができ;その場合、(AA)nは、存在しない。PABCが存在する場合、好ましくは、ただ1つのPABCが存在する。好ましくは、PABC残基は、存在する場合、ペイロードの近位にある(AA)n基中の末端AAに結合している。各々のAAの好適なアミノ酸としては、天然、非天然、標準的、非標準的、タンパク質構成性、非タンパク質構成性、及びL-又はD-α-アミノ酸が挙げられる。いくつかの実施態様において、AAは、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、もしくはシトルリン、これらの誘導体、又はこれらの任意の組合せ(例えば、ジペプチド、トリペプチド、及びオリゴペプチドなど)を含む。ある実施態様において、アミノ酸の1以上の側鎖は、下記の側鎖基に連結される。いくつかの実施態様において、nは2である。いくつかの実施態様において、(AA)nは、バリン-シトルリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、シトルリン-バリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、バリン-アラニンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、アラニン-バリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、バリン-グリシンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、グリシン-バリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、バリン-シトルリン-PABCである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、シトルリン-バリン-PABCである。いくつかの実施態様において、nは3である。いくつかの実施態様において、(AA)nは、グルタメート-バリン-シトルリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、グルタミン-バリン-シトルリンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、リジン-バリン-アラニンである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、リジン-バリン-シトルリンである。いくつかの実施態様において、nは4である。いくつかの実施態様において、(AA)nは、グルタメート-バリン-シトルリン-PABである。いくつかの実施態様において、(AA)nは、グルタミン-バリン-シトルリン-PABCである。当業者は、PABCを、以下の構造:
Figure 2023511956000048
 を有するp-アミノベンジルオキシカルボニルの残基として認識しているであろう。PABC残基は、特定のリンカーの切断をインビトロ及びインビボで促進することが示されている。例えば、ある実施態様において、PABCの切断により、カルボキシレート又はカルボン酸部分(すなわち、それぞれ、
Figure 2023511956000049
 )は、抗ウイルス化合物又はペイロードの残りの部分とともにそのまま残っている。ある実施態様において、各々の
Figure 2023511956000050
 は、抗ウイルス化合物(例えば、ペイロード)の残りの部分との結合である。当業者は、PABを、p-アミノベンジル(すなわち、-NH-(p-C6H4)-CH2-又は
Figure 2023511956000051
 )の二価残基として認識しているであろう。ある実施態様において、PAB残基は、特定のリンカーの切断をインビトロ及びインビボで促進することが示されている。例えば、ある実施態様において、
Figure 2023511956000052
 の切断により、アルコキシド又はヒドロキシル部分(すなわち、それぞれ、
Figure 2023511956000053
 )は、抗ウイルス化合物(例えば、ペイロード)の残りの部分とともにそのまま残っている。ある実施態様において、各々の
Figure 2023511956000054
 は、抗ウイルス化合物又はペイロードの残りの部分との結合である。
(リンカー-ペイロード)
ある実施態様において、リンカー-ペイロードは、リンカーに結合した、上記の式I及び式IIのうちのいずれか1つ又は複数によって包含される任意の特定の化合物又はペイロードを含み、ここで、本明細書に記載されるリンカーは、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片と反応性である部分を含む。特定の実施態様において、リンカーは、上記の式I及びIIのいずれか1つ又は複数におけるカルボキシル又はヒドロキシルに結合している。一実施態様において、リンカー-ペイロードは、以下の構造
Figure 2023511956000055
 又はその医薬として許容し得る塩を有し、ここで、Lは、本明細書に開示される実施態様のいずれかに記載されているリンカーであり;かつRGは、本明細書に開示される実施態様のいずれかに記載されている反応性部分である。一実施態様において、リンカー-ペイロードは、
Figure 2023511956000056
 又はその医薬として許容し得る塩:であり、ここで、SP1及びSP2は、存在する場合、本明細書に開示される実施態様のいずれかに記載されているスペーサー基であり; RGは、本明細書に開示される実施態様のいずれかに記載されている抗体又はその抗原結合断片と反応性の部分であり;各々のAAは、本明細書に開示される実施態様のいずれかに記載されているアミノ酸であり;かつnは、1～10の整数である。
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、
Figure 2023511956000057
 からなる群から選択される化合物(すなわち、リンカー-ペイロード)である。
(コンジュゲート/抗体薬物コンジュゲート(ADC))
本明細書に提供されるのは、インフルエンザウイルス感染を治療するために、治療的部分、例えば、トキソイド又は抗ウイルス薬にコンジュゲートされた、ヒト抗インフルエンザ-HAモノクローナル抗体(すなわち、ADC)である。抗体は、該抗体がその標的に結合することができる限り、抗体に沿った任意の位置で治療剤に連結させることができる。一実施態様において、治療剤は、インフルエンザ-HAに対する第二の異なる抗体又はそのADCであってもよい。ある実施態様において、抗体は、ウイルスに感染した細胞に特異的な薬剤にコンジュゲートすることができる。抗インフルエンザ-HA抗体にコンジュゲートすることができる治療的部分のタイプは、治療されるべき疾病及び達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れることになる。ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、該抗体は、本明細書に記載される式I及び/又はIIの1以上の化合物にコンジュゲートされている。一実施態様において、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片は、各々、本明細書に開示されるそのそれぞれの実施態様のいずれかに記載されているリンカーを介して、ペイロードにコンジュゲートされている。
一実施態様において、抗体-薬物コンジュゲートは、以下の構造
Figure 2023511956000058
 を有し、ここで、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり; Lは、リンカーであり;かつPは、抗ウイルス化合物又はペイロードである。一実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、インフルエンザ阻害剤である。一実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、ポリメラーゼ阻害剤である。一実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、VX-787、その誘導体、又はその残基である。一実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、バロキサビル、その誘導体、又はその残基である。一実施態様において、Abは、抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、抗ウイルス化合物である。一実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、抗ウイルス化合物である。一実施態様において、Abは、抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、インフルエンザ阻害剤である。一実施態様において、Abは、抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、ポリメラーゼ阻害剤である。本段落のいずれかの実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体もしくはその抗原結合断片又は抗ヘマグルチニン抗体もしくはその抗原結合断片であり、ここで、該抗体は、上記の式Iの化合物にコンジュゲートされている。本段落のいずれかの実施態様において、Abは、抗インフルエンザ抗体もしくはその抗原結合断片又は抗ヘマグルチニン抗体もしくはその抗原結合断片であり、ここで、該抗体は、上記の式IIの化合物にコンジュゲートされている。一実施態様において、Abは、抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、VX-787、その誘導体、又はその残基である。一実施態様において、Abは、抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片であり;かつPは、バロキサビル、その誘導体、又はその残基である。本段落の実施態様のいずれかにおいて、kは、1～30の整数である。ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、抗体又はその抗原結合断片が、
Figure 2023511956000059
 の化合物又はその医薬として許容し得る塩にコンジュゲートされているADCであり、ここで、
Lは、本明細書に記載されるリンカーであり;かつRGは、本明細書に記載される反応性部分である。ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、コンジュゲートされた化合物が
Figure 2023511956000060
 (ここで、Lは、本明細書に記載されるリンカーである)
から選択されるADCである。
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、以下の構造:
Figure 2023511956000061
 を有するADC化合物であり、ここで、L及びBAは、本明細書の別所に記載されている通りであり、kは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10である。ある実施態様において、kは、1～2、1～3、2～3、2～4、3～4、又は1～4の範囲である。ある実施態様において、上記のように-L-BAにコンジュゲートされた化合物は、上記の式I及び/又はIIの1以上の化合物を含み、ここで、BAは、結合剤であり; Lは、リンカーであり;かつkは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10である。ある実施態様において、上記のように-L-BAにコンジュゲートされた化合物は、上記の式I及び/又はIIの1以上の化合物を含み、ここで、BAは、結合剤であり、かつLは、リンカーであり、kは、1～2、1～3、2～3、2～4、3～4、又は1～4の範囲である。
一実施態様において、本明細書に提供されるのは、
Figure 2023511956000062
Figure 2023511956000063
からなる群から選択されるADC化合物であり、ここで、BAは、抗体又はその抗原結合断片であり;かつkは、1～30の整数である。ある実施態様において、kは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10である。ある実施態様において、kは、1～2、1～3、1～4、1～5、1～6、1～7、1～8、1～9、1～10、2～3、2～4、2～5、2～6、2～7、2～8、2～9、2～10、3～4、3～5、3～6、3～7、3～8、3～9、3～10、4～5、4～6、4～7、4～8、4～9、4～10、5～6、5～7、5～8、5～9、5～10、6～7、6～8、6～9、6～10、7～8、7～9、7～10、8～9、8～10、又は9～10の範囲である。本段落の実施態様のいずれかにおいて、kが1よりも大きいとき、BAは、ペイロード及び/又はリンカー-ペイロードとのコンジュゲーションのための1以上のシステイン、リジン、及び/又はグルタミン残基を含むことが想定される。例えば、上記のADCの描写は、BAの1以上のシステイン、リジン、及び/又はグルタミン残基がペイロード及び/又はリンカー-ペイロードを含む場合(例えば、kが≧1であるとき)、1以上の薬物:抗体比(DAR)を想定している。BAから-S-への及び/又はBAから-NH-への結合は、それぞれ、結合剤(BA)からBAのシステイン又はトランスグルタミン化グルタミン残基への結合を示す。そして、BA-S-から及び/又はBA-NH-から炭素への結合は、示されているか、又は本明細書の別所に記載されているリンカーへの連結を示す。それゆえ、BAのシステイン残基由来の硫黄及び/又はBAのトランスグルタミン化グルタミン残基由来の窒素は、BAが複数のペイロード及び/又はリンカー-ペイロードとコンジュゲートされ得る(例えば、BAがDAR≧1を有する)ことを示すように、描かれた括弧の中にある。一実施態様において、BAは、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合断片である。
本明細書に記載されるあるADC実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも1つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも2つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも3つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、コンジュゲーションに使用される少なくとも4つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも1つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも2つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、コンジュゲーションに利用可能な少なくとも3つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、コンジュゲーションに使用される少なくとも4つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、2つのQ295残基におけるものであり;かつkは2である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションはEU付番体系の2つのQ295残基におけるものであり;かつkは2である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、該重鎖のC-末端におけるものであり;かつkは2である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、グルタミンを介するものである。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、グルタミンを介するものであり;かつkは2である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、抗体重鎖のC-末端のLLQGA配列中のグルタミンを介するものである。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、抗体重鎖のC-末端のLLQGA配列中のグルタミンを介するものであり;かつkは2である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつkは4である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、EU付番体系の2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつkは4である。一実施態様において、Ab又はBAは、本明細書に記載されるmAb11729である。
一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、2つのQ295残基におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、EU付番体系の2つのQ295残基におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、該重鎖のC-末端におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、グルタミンを介するものである。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、グルタミンを介するものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、抗体重鎖のC-末端のLLQGA配列中のグルタミンを介するものである。一実施態様において、Ab又はBAは、抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、抗体重鎖のC-末端のLLQGA配列中のグルタミンを介するものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0もしくは約3.0もしくは約4.0であるか; g)約1.0であるか; h)約2.0であるか; i)約3.0であるか;又はj)約4.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、EU付番体系の2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0であるか; g)約1.0であるか;又はh)約2.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、トランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションは、2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつDARは、a)約2.0であるか; b)0～約12.0よりも大きいか; c)約0.5～約8.0であるか; d)約0.5～約6.0であるか; e)約1.0～約4.0であるか; f)約1.0もしくは約2.0もしくは約3.0もしくは約4.0であるか; g)約1.0であるか; h)約2.0であるか; i)約3.0であるか;又はj)約4.0である。一実施態様において、Ab又はBAは、本明細書に記載されるmAb11729である。
本明細書に記載されるあるADC実施態様において、Ab又はBAは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗A型インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗A型インフルエンザグループ1抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗インフルエンザH1抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗A型インフルエンザグループ2抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗インフルエンザH3抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、Ab又はBAは、抗B型インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片である。一実施態様において、ADCは、リンカーを介してペイロードにコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体-薬物コンジュゲートは、ポリメラーゼ塩基性タンパク質2(PB2)(VX-787)、ポリメラーゼ酸性タンパク質(PA)(バロキサビル及び/もしくはバロキサビルマルボキシル)、並びに/又はポリメラーゼ塩基性タンパク質1(PB1)に結合し、かつ/又はこれらを阻害する。一実施態様において、ADCは、リンカーを介してペイロードにコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体-薬物コンジュゲートは、ELISAによって測定したとき、少なくとも4.0×10-9M、少なくとも3.5×10-9M、又は少なくとも3.0×10-9Mの親和性でポリメラーゼ塩基性タンパク質2(PB2)(VX-787)に結合し、かつ/又はこれを阻害する。一実施態様において、ADCは、リンカーを介してペイロードにコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体-薬物コンジュゲートは、ELISAによって測定したとき、少なくとも4.0×10-9M、少なくとも3.5×10-9M、又は少なくとも3.0×10-9Mの親和性でポリメラーゼ塩基性タンパク質1(PB1)に結合し、かつ/又はこれを阻害する。一実施態様において、ADCは、リンカーを介してペイロードにコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体-薬物コンジュゲートは、ImmunoSpot(登録商標)解析によって測定したとき、少なくとも2.5×10-9M、少なくとも2.0×10-9M、又は少なくとも1.5×10-9MのIC50でポリメラーゼ塩基性タンパク質2(PB2)(VX-787)に結合し、かつ/又はこれを阻害する。一実施態様において、ADCは、リンカーを介してペイロードにコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体-薬物コンジュゲートは、ImmunoSpot(登録商標)解析によって測定したとき、少なくとも2.5×10-9M、少なくとも2.0×10-9M、又は少なくとも1.5×10-9MのIC50でポリメラーゼ塩基性タンパク質1(PB1)に結合し、かつ/又はこれを阻害する。
(化合物又はペイロード、及びリンカー-ペイロードを調製する方法)
本明細書に提供される化合物は、当業者にとって明らかな任意の方法によって調製、単離、又は入手することができる。例示的な調製方法は、下記の実施例で詳細に記載されている。ある実施態様において、本明細書に提供される化合物は、市販されているか、又は通常、スキームA～Cに従って調製することができる:
(スキームA。例示的な調製スキーム)
Figure 2023511956000064
 (スキームB1。例示的な調製スキーム)
Figure 2023511956000065
 (スキームB2。例示的な調製スキーム)
Figure 2023511956000066
 (スキームB3。例示的な調製スキーム)
Figure 2023511956000067
上記の例示的な調製スキームA(J. Med. Chem. 2014, 57, 6668を参照)において、R1は、式Iとの関連で記載されている。スキームAにおいて、無水マレイン酸及び1,3-シクロヘキサジエンによるディールス・アルダー付加環化の後、endo-A1を塩基性条件下で撹拌して、エピマー化したtrans-A2を提供することができる。クルチウス転位とベンジルアルコールによるトラップとによって、A3が提供される。水素化によって、A4が提供される。2,4-ジクロロピリミジンによる処理とキラル分離とによって、中間体A5を介して、A6が提供される。置換アザインドールボロン酸エステルによる鈴木カップリングと、その後の脱保護により、VX-787及びその誘導体を含む、式Iの化合物が生じる。
上記の例示的な調製スキームB1～B3(OPRD 2019, 23, 1298を参照)において、R1は、式IIとの関連で記載されている。スキームB1において、B1を保護して、B2を提供することができる。その後、B2を還元して、B3を提供し、その後、ヒドロキシルをメトキシに置換することにより、B4を提供する。B5をエステル化して、B6を提供することができる。B6をBoc-ヒドラジンで処理して、ピリドンB7を生じさせ、その後、酸性条件下で脱保護して、B8を提供することができる。ルイス酸の存在下でのB4とB8の組合せにより、二置換ヒドラジンB9が提供される。窒素の脱保護とPd媒介性環化とにより、rac-B10が提供される。ヒドラジドジアステレオマーの形成を介するrac-B10の分離と、その後の加水分解により、B12が生じる。
スキームB2において、B13をオルト金属化し、DMFでクエンチして、アルデヒドを提供し、これは、カルボン酸とともに分子内環化して、B14を提供する。B14をチオフェノールで処理して、B15を提供することができる。B15の還元により、B16が提供される。三環式スルフィドB17は、酸性条件下でのB16の処理により提供される。B17に還元により、B18が提供される。
スキームB3において、B12とB18との組合せにより、バロキサビル及びその誘導体が提供される。脱保護により、バロキサビル酸B19が提供される。バロキサビル酸B19を再アルキル化して、B20を提供することができる。
本明細書に記載されるリンカー-ペイロードは、通常、スキームCに示されているような一連のカップリング工程によって合成することができる:
(スキームC。例示的な調製スキーム)
Figure 2023511956000068
上記の例示的な調製スキームCにおいて、R1は、式Iとの関連で記載されている通りである。スキームCにおいて、VX-787及びその誘導体を、脱離基(LG)を担持するリンカーで処理して、リンカー-ペイロード(例えば、リンカー-(VX-787))を提供する。
本明細書に記載されるコンジュゲートは、本明細書に記載されるリンカー-ペイロードを、結合剤、例えば、本明細書に記載される抗体と、標準的なコンジュゲーション条件下でカップリングさせることにより合成することができる(例えば、引用により本明細書中に完全に組み込まれる、Doroninaらの文献、Nature Biotechnology 2003, 21, 778を参照)。結合剤が抗体である場合、該抗体を、該抗体の1以上のシステイン又はリジン残基を介してリンカー-ペイロードとカップリングさせてもよい。リンカー-ペイロードは、例えば、抗体を、還元剤、例えば、ジチオスレリトールに曝して、抗体のジスルフィド結合を切断し、還元された抗体を、例えば、ゲル濾過により精製し、その後、抗体を、好適な反応性部分、例えば、マレイミド基を含有するリンカー-ペイロードで処理することにより、システイン残基にカップリングさせることができる(例えば、例示的な調製スキームCを参照)。好適な溶媒としては、水、DMA、DMF、及びDMSOが挙げられるが、これらに限定されない。反応基、例えば、活性化エステル又は酸ハライド基を含有するリンカー-ペイロードは、抗体のリジン残基にカップリングさせることができる。好適な溶媒としては、水、DMA、DMF、及びDMSOが挙げられるが、これらに限定されない。コンジュゲートは、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、透析、及び限外濾過/透析濾過を含む、既知のタンパク質技法を用いて精製することができる。
結合剤、例えば、抗体は、クリックケミストリー反応によってコンジュゲートすることもできる。該クリックケミストリー反応のいくつかの実施態様において、リンカー-ペイロードは、アジドとの位置異性体的1,3-付加環化反応を受けることができる反応基、例えば、アルキンを含む。そのような好適な反応基は、上で記載されている。抗体は、1以上のアジド基を含む。そのような抗体としては、例えば、アジド-ポリエチレングリコール基で官能化された抗体が挙げられる。ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも1つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln295を有する抗体を、一級アミン化合物で処理することにより誘導される。ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも1つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln297を有する抗体を、一級アミン化合物で処理することにより誘導される。そのような抗体としては、Asn297Gln(N297Q)突然変異体が挙げられる。ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも2つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln295及び重鎖Gln297を有する抗体を、一級アミン化合物で処理することにより誘導される。そのような抗体としては、Asn297Gln(N297Q)突然変異体が挙げられる。ある実施態様において、抗体は、合計2つ又は合計4つのグルタミン残基に対して本段落に記載されているような2つの重鎖を有する。
ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも1つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln295を有する抗体を、一級アミン化合物又はペプチドタグで処理することにより誘導される。ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも1つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln297を有する抗体を、一級アミン化合物又はペプチドタグで処理することにより誘導される。そのような抗体としては、Asn297Gln(N297Q)突然変異体が挙げられる。ある実施態様において、そのような官能化抗体は、酵素トランスグルタミナーゼの存在下で、少なくとも2つのグルタミン残基、例えば、重鎖Gln295及び重鎖Gln297を有する抗体を、一級アミン化合物又はペプチドタグで処理することにより誘導される。そのような抗体としては、Asn297Gln(N297Q)突然変異体が挙げられる。ある実施態様において、抗体は、合計2つ又は合計4つのグルタミン残基に対して本段落に記載されているような2つの重鎖を有する。
一実施態様において、官能化抗体又は抗原結合分子は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、官能化抗体又は抗原結合分子は、抗体重鎖を含み、かつ抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。実施態様において、官能化抗体又は抗原結合分子は、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含む。一実施態様において、官能化抗体又は抗原結合分子は、2つの抗体重鎖を含み、かつ各々の抗体重鎖のC-末端にペプチドタグをさらに含み、ここで、該ペプチドタグは、ペンタペプチド配列LLQGAである。
ある実施態様において、抗体は、各々の重鎖に1つである、2つのグルタミン残基を含む。特定の実施態様において、抗体は、各々の重鎖にQ295残基を含む。さらなる実施態様において、抗体は、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つ、又はそれより多くのグルタミン残基を含む。これらのグルタミン残基は、重鎖、軽鎖、又は重鎖と軽鎖の両方に存在することができる。これらのグルタミン残基は、野生型の残基、又は改変された残基であることができる。該抗体は、標準的な技法によって調製することができる。
当業者は、抗体が、多くの場合、重鎖配列中の残基Q295の近くの残基N297でグリコシル化されていることを認識しているであろう。残基N297でのグリコシル化は、残基Q295でトランスグルタミナーゼと干渉することがある(Dennlerらの文献、上記)。したがって、有利な実施態様において、抗体は、グリコシル化されていない。ある実施態様において、抗体は、脱グリコシル化又はアグリコシル化されている。特定の実施態様において、抗体重鎖は、N297突然変異を有する。換言すると、抗体は、もはや位置297にアスパラギン残基を有さないように突然変異している。特定の実施態様において、抗体重鎖は、N297Q突然変異を有する。そのような抗体は、グリコシル化配列を除去もしくは無効化する部位特異的変異誘発によるか、又は任意の干渉するグリコシル化部位もしくは任意の他の干渉する構造から離れた部位にグルタミン残基を挿入する部位特異的変異誘発によって調製することができる。そのような抗体は、天然源又は人工源から単離することもできる。
その後、グリコシル化を妨害しない抗体を、一級アミン化合物と反応させるか又はそれで処理する。ある実施態様において、アグリコシル化抗体を、一級アミン化合物と反応させるか又はそれで処理して、グルタミニル修飾抗体を生じさせる。ある実施態様において、脱グリコシル化抗体を、一級アミン化合物と反応させるか又はそれで処理して、グルタミニル修飾抗体を生じさせる。
一級アミンは、トランスグルタミナーゼの存在下でグルタミン残基と共有結合を形成することができる任意の一級アミンであることができる。有用な一級アミンは、本明細書に記載されている(例えば、例示的な調製スキームCを参照)。トランスグルタミナーゼは、当業者によって好適であるとみなされる任意のトランスグルタミナーゼであることができる。ある実施態様において、トランスグルタミナーゼは、一級アミン化合物上の遊離のアミノ基とグルタミン残基の側鎖上のアシル基との間のイソペプチド結合の形成を触媒する酵素である。トランスグルタミナーゼは、タンパク質-グルタミン-γ-グルタミルトランスフェラーゼとしても知られる。特定の実施態様において、トランスグルタミナーゼは、EC 2.3.2.13として分類される。トランスグルタミナーゼは、好適であるとみなされる任意の源由来のものであることができる。ある実施態様において、トランスグルタミナーゼは、微生物のものである。有用なトランスグルタミナーゼは、ストレプトマイセス・モバラエンス(Streptomyces mobaraense)、ストレプトマイセス・シナモネウム(Streptomyces cinnamoneum)、ストレプトマイセス・グリセオカルネウム(Streptomyces griseo-carneum)、ストレプトマイセス・ラベンデュラエ(Streptomyces lavendulae)、及び枯草菌(Bacillus subtilis)から単離されている。哺乳動物のトランスグルタミナーゼを含む非微生物のトランスグルタミナーゼ、例えば、補因子と組み合わせた非微生物トランスグルタミナーゼを使用することもできる。ある実施態様において、トランスグルタミナーゼを、当業者によって好適であるとみなされる任意の技法によって産生することができ、又は当業者によって好適であるとみなされる任意の源から入手することができる。特定の実施態様において、トランスグルタミナーゼは、商業的な源から入手される。
ある実施態様において、グルタミニル修飾抗体を、反応性リンカー-ペイロードと反応させるか又はそれで処理して、抗体-リンカー-ペイロードコンジュゲートを形成させる。該反応は、当業者によって好適であるとみなされる条件下で進行し得る。ある実施態様において、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とリンカー-ペイロード化合物との間に結合を形成させるのに好適な条件下で、反応性リンカー-ペイロード化合物と接触させる。好適な反応条件は、当業者に周知である。
(医薬組成物及び治療方法)
本明細書に提供されるのは、疾患、疾病、又は障害を治療及び予防する方法であって、本明細書に開示される化合物のうちの1つ又は複数、例えば、本明細書に提供される式の化合物のうちの1つ又は複数の治療的又は予防的有効量を投与することを含む、方法である。疾患、障害、及び/又は疾病としては、本明細書に記載されるウイルス感染と関連するものが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される化合物は、単独で又は1以上の追加の(補助的な)治療剤と一緒に投与することができる。1以上の追加の治療剤は、本明細書に記載される化合物の投与の直前に、それと同時に、又はその直後に投与することができる。本開示は、本明細書に記載される化合物のいずれかを1以上の追加の治療剤との組合せで含む医薬組成物、及びそのような組合せを、それを必要としている対象に投与することを含む治療方法を含む。
好適な追加の治療剤としては、抗ウイルス薬、例えば、第二の抗ウイルス化合物もしくはペイロード、自己免疫治療剤、ホルモン剤、生物製剤、又はモノクローナル抗体:が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、補助的な治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬(例えば、コルチコステロイド又は非ステロイド性抗炎症薬)、インフルエンザHAに特異的に結合する抗体、インフルエンザのワクチン、栄養補助食品(例えば、抗酸化剤)、及びインフルエンザ感染を治療するための姑息的療法:からなる群から選択されることができる。一実施態様において、抗炎症薬は、コルチコステロイド及び非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される。一実施態様において、栄養補助食品は、抗酸化剤である。好適な治療剤としては、本明細書に記載される抗ウイルス化合物又はペイロードの任意の医薬として許容し得る塩又は誘導体を挙げることもできるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、補助的な治療剤は、本明細書に記載される抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物として、様々な投与経路を介して投与される。例えば、補助的な治療剤は、経口投与することができる。補助的な治療剤として投与されることになる例示的な抗ウイルス薬は、オセルタミビルである。いくつかの実施態様において、オセルタミビルは、抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与の前に投与される。いくつかの実施態様において、オセルタミビルは、抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与と同時に投与される。いくつかの実施態様において、オセルタミビルは、抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与の後に投与される。いくつかの実施態様において、抗ウイルス薬は、抗A型インフルエンザ薬又は抗B型インフルエンザ薬(例えば、抗体又はその抗原結合部分)、例えば、A型インフルエンザHAに特異的に結合する抗体又はB型インフルエンザHAに特異的に結合する抗体である。
本明細書に記載される方法のいくつかの実施態様において、複数用量の本明細書に記載される化合物(又は本明細書に記載される化合物と本明細書で言及される追加の治療剤のうちのいずれかとの組合せを含む医薬組成物)を、規定の時間経過にわたって対象に投与することができる。本開示のこの実施態様による方法は、対象に、複数用量の本明細書に記載される化合物を順次投与することを含む。本開示は、患者に、本明細書に記載される化合物の単一の初期用量、それに続く、該化合物の1以上の二次用量、及び任意にそれに続く、該化合物の1以上の三次用量を順次投与することを含む方法を含む。本開示の化合物例示的な用量としては、50mg/kg、49mg/kg、48mg/kg、47mg/kg、46mg/kg、45mg/kg、44mg/kg、43mg/kg、42mg/kg、41mg/kg、40mg/kg、39mg/kg、38mg/kg、37mg/kg、36mg/kg、35mg/kg、34mg/kg、33mg/kg、32mg/kg、31mg/kg、30mg/kg、29mg/kg、28mg/kg、27mg/kg、26mg/kg、25mg/kg、24mg/kg、23mg/kg、22mg/kg、21mg/kg、20mg/kg、19mg/kg、18mg/kg、17mg/kg、16mg/kg、15mg/kg、14mg/kg、13mg/kg、12mg/kg、11mg/kg、10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg、0.1mg/kg、及び0.05mg/kgが挙げられるが、これらに限定されない。
ある実施態様において、初期、二次、及び/又は三次用量に含まれる化合物の量は、治療の過程で互いに異なる(例えば、必要に応じて上方又は下方調整される)。ある実施態様において、2以上の(例えば、2、3、4、又は5)用量が治療レジメンの開始時に「ローディング用量」として投与され、その後、より低い頻度で投与される後続の用量(例えば、「維持用量」)として投与される。
本開示のある例示的な実施態様において、各々の二次及び/又は三次用量は、直前の用量から1～26週間(例えば、1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2週間、又はそれより長い期間)後に投与される。
本開示のこの態様による方法は、患者に、任意の数の二次及び/又は三次用量の化合物を投与することを含み得る。例えば、ある実施態様において、単一の二次用量のみが患者に投与される。他の実施態様において、2以上(例えば、2、3、4、5、6、7、8、又はそれより多く)の二次用量が患者に投与される。同様に、ある実施態様において、単一の三次用量のみが患者に投与される。他の実施態様において、2以上(例えば、2、3、4、5、6、7、8、又はそれより多く)の三次用量が患者に投与される。投与レジメンは、特定の対象の生涯にわたって無期限に、又はそのような治療がもはや治療的に必要でなくなるかもしくは有益でなくなるまで実施することができる。
複数の二次用量を含む実施態様において、各々の二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各々の二次用量は、患者に、直前の用量から1～2週間後又は1～2カ月後に投与されてもよい。同様に、複数の三次用量を含む実施態様において、各々の三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各々の三次用量は、患者に、直前の用量から2～12週間後に投与されてもよい。ある実施態様において、二次及び/又は三次用量が患者に投与される頻度は、治療レジメンの過程にわたって様々であり得る。投与の頻度はまた、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師により、治療の過程で調整されてもよい。
本開示は、2～6のローディング用量が、第一の頻度(例えば、週に1回、2週間毎に1回、3週間毎に1回、月に1回、2カ月毎に1回など)で患者に投与され、その後、2以上の維持用量がより低い頻度で患者に投与される投与レジメンを含む。例えば、本発明のこの態様によれば、ローディング用量が月に1回の頻度で投与される場合、維持用量は、6週間毎に1回、2カ月毎に1回、3カ月毎に1回などで、患者に投与されてもよい。
本開示は、本明細書に記載される化合物及び/又はコンジュゲート、例えば、式I及びIIの化合物の抗体-薬物コンジュゲートの医薬組成物、例えば、本明細書に記載される化合物、その塩、立体異性体、位置異性体、多形、並びに医薬として許容し得る担体、希釈剤、及び/又は賦形剤を含む組成物を含む。好適な担体、希釈剤、及び賦形剤の例としては、適切な組成物pHの維持のためのバッファー(例えば、クエン酸バッファー、コハク酸バッファー、酢酸バッファー、リン酸バッファー、乳酸バッファー、シュウ酸バッファーなど)、担体タンパク質(例えば、ヒト血清アルブミン)、生理食塩水、ポリオール(例えば、トレハロース、スクロース、キシリトール、ソルビトールなど)、界面活性剤(例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート80、ポリオキソレートなど)、抗微生物薬、及び抗酸化剤が挙げられるが、これらに限定されない。
ある実施態様において、化合物もしくはペイロード、リンカー-ペイロード、ADC、又はこれらの組成物は、別の投与経路を介して提供されてもよい。ある実施態様において、組成物の投与経路は、皮下、皮内、筋肉内、経口、静脈内、腹腔内、吸入、及び鼻腔内からなる群から選択される。一実施態様において、組成物の投与経路は、経口である。一実施態様において、組成物の投与経路は、静脈内である。一実施態様において、組成物の投与経路は、腹腔内である。一実施態様において、組成物の投与経路は、吸入である。一実施態様において、組成物の投与経路は、鼻腔内である。
いくつかの例において、本明細書に記載されるのは、対象における感染と関連する疾患、障害、又は状態の治療、予防、軽減、又は阻害のための方法であって、該対象に、式I及び/又はIIの化合物、本明細書に記載されるリンカー-ペイロード、及び/又は本明細書に記載されるADC、これらの組合せ、又はこれらの医薬組成物の有効量又は治療的有効量を投与することを含む、方法である。いくつかの実施態様において、感染は、ウイルス感染である。いくつかの実施態様において、感染は、インフルエンザウイルス感染である。いくつかの実施態様において、感染は、A型インフルエンザウイルス感染である。いくつかの実施態様において、感染は、B型インフルエンザウイルスである。いくつかの実施態様において、感染は、A型インフルエンザウイルス感染及びB型インフルエンザウイルス感染である。ある実施態様において、対象へのコンジュゲートされていないペイロードの投与と関連する副作用は、同等の対象へのコンジュゲートされたペイロード又はADCの投与と比較したとき、軽減される。
本明細書に開示される化合物は、対象に、本明細書に記載される抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の有効量を投与することを含む、対象におけるインフルエンザ感染の治療、予防、軽減、又は阻害に使用することもできる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、A型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、グループ1のA型インフルエンザウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、A型インフルエンザH1ウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、グループ2のA型インフルエンザウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、A型インフルエンザH3ウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、未知又は不明のインフルエンザウイルスによって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、B型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、A型インフルエンザウイルス感染及びB型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる。いくつかの実施態様において、インフルエンザ感染は、A型インフルエンザウイルス感染、グループ1のA型インフルエンザ感染、A型インフルエンザH1感染、グループ2のA型インフルエンザ感染、A型インフルエンザH3感染、未知又は不明のインフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス感染、又はこれらの任意の組合せによって引き起こされる。
(実施例)
本明細書に提供されるのは、VX-787及びその誘導体、バロキサビル及びその誘導体、バロキサビルマルボキシル及びその誘導体、これらのタンパク質コンジュゲート、並びに疾患、障害、及び疾病を治療する方法であって、VX-787、バロキサビル、及びバロキサビルマルボキシル、並びにこれらのコンジュゲートを投与することを含む、方法である。
(実施例1:リンカー-ペイロード合成)
VX-787及びバロキサビルを抗ヘマグルチニン抗体による送達のためのペイロードとして使用した。VX-787又はバロキサビルと組み合わせた様々なリンカーの効果を試験するために、リンカー-ペイロードを下に示されているように合成した(リンカー-(VX-787)):化合物6及び化合物11;リンカー-バロキサビル:化合物15)。使用された溶媒は全て、そのまま使用し、Sigma Aldrich又はFisher Scientificのいずれかから購入した。1Hスペクトルは、Varian Inova 300 MHz及び500 MHz NMR装置で記録した。化学シフト(δ)は、分析に使用されるNMR溶媒に関してppmで報告し、かつs-一重線、d-二重線、t-三重線、q-四重線、dd-二重線の二重線、dt-三重線の二重線、dq-四重線の二重線、及びm-多重線として報告した。カップリング定数(J)は、ヘルツ(Hz)で報告した。クロマトグラフィー純度は、Chromolith(登録商標) FastGradient RP-18e分析用カラム(50×2mm、Merck KGaA, P/N 1.52007.0001)及び以下の分析的HPLC法を用いて、6130 Quadrupole LC/MSを備えたAgilent 1100、1260 Infinity、又は1200 Series LC/MSシステムで決定した:注入容量2～10μL;流量1mL/分;水中の5～95％アセトニトリル、4分間; Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝254nm;室温。低分解能マススペクトロメトリーを、エレクトロスプレーイオン化源を用いるAgilentシステムで実施し、単一四重極又はイオントラップ質量検出器のいずれかで分析した。
化合物6を、下のスキーム1に記載されている通りに、VX-787から合成した。
(スキーム1)
Figure 2023511956000069
 化合物2:化合物2を、PCT Int. Appl., 2014145090を用いて調製した。tert-ブチル((S)-1-(((S)-1-((4-(ヒドロキシメチル)フェニル)アミノ)-1-オキソ-5-ウレイドペンタン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)カルバメート1(700mg、1.46mmol)をCH3CN/H2O/TFA(3:1:1＝v/v/v、6mL/2mL/2mL)の混合物に溶解させた。反応混合物を室温で19時間撹拌し、LCMSによりモニタリングした。真空中で濃縮した後、粗生成物2(0.5g塩)を、それ以上精製することなく、次の工程でそのまま使用した。MS(ESI、pos.): C18H29N5O4の計算値、379.2;実測値380.2(M+H)。
化合物4:化合物2(100mg、0.263mmol)、6-(Fmoc-アミノ)カプロン酸3(93mg、0.263mmol)、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム 3-オキシドヘキサフルオロホスフェート(HATU、200mg、0.526mmol)、及び1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール(HOAt、35mg、0.263mmol)をオーブン乾燥した2ドラムのバイアルに投入した。その後、無水DMF(2mL)を添加し、反応混合物を周囲温度で5分間熟成させ、その後、シリンジを介して、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、137μL、0.789mmol)を滴加した。均一な黄色の溶液を、窒素下、室温で2時間撹拌し、反応を終了についてLC/MSによりモニタリングした。反応混合物を50g C18 Aq Goldカラム(勾配溶出:水中の10～95％MeCN、両方とも0.05％酢酸を有する)で20分間精製した。純粋な画分を合わせ、ドライアイス上で凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物4が白色の固体(120mg、65％)として得られた。MS: C39H50N6O7の計算値、714.3;実測値715.3(M+H)、737.3(M+Na)。
化合物5:化合物4(39.4mg、0.055mmol)及び4-ジメチルアミノピリジン(DMAP、5mg、0.039mmol)をアルゴン下のVX-787(22mg、0.055mmol)の無水THF(6mL)撹拌懸濁液に室温で添加した。その後、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC、17mg、0.083mmol)の無水THF(2mL)溶液を反応混合物に滴加した。16時間撹拌した後、混合物を蒸発乾固させ、残渣を3mLのDMSOに溶解させた。粗材料を50g C18 Aq Goldカラム(勾配溶出:水中の10～95％MeCN、両方に0.05％AcOH)で精製した。生成物画分を合わせ、ドライアイス上で凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物5が白色の固体(38mg、63％)として得られた。MS(ESI、pos.): C59H67F2N11O8の計算値、1095.5;実測値1096.4(M+H)。
化合物6: DMF中の5％ピペリジン(0.8mL)を化合物5(33mg、0.0301mmol)のN,N-ジメチルホルムアミド(DMF、1mL)撹拌溶液に、アルゴン下、周囲温度で30分間添加し、得られた溶液を撹拌した。LC/MSにより、反応の終了が確認された。反応液を、ISCOシステムを介する30g C18 Aq. Goldカラム(勾配溶出:水中の10～95％MeCN、両方に0.05％酢酸、30分)で直接精製した。生成物を含有する画分を合わせ、ドライアイス上で凍結させ、一晩凍結乾燥させると、表題化合物6がオフホワイト色の固体(22mg、85％)として得られた。MS: C44H57F2N11O6の計算値、873.4;実測値874.4(M+H)。
Figure 2023511956000070
化合物11を、下のスキーム2に記載されている通りに、VX-787から合成した。
(スキーム2)
Figure 2023511956000071
 化合物8: N-エトキシカルボニル-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリン(EEDQ、1.99g、8.05mmol)を、ジクロロメタン(19mL)及びメタノール(7.6mL)中のp-アミノベンジルアルコール(0.99g、8.05mmol)の溶液に室温で添加した。5分間撹拌した後、Fmoc-バリン-シトルリン7(2.0g、4.03mmol)を一度に添加し、得られた溶液を18時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去し、残渣をエーテル(20mL)で粉砕化し、エーテル(20mL)、酢酸エチル(20mL)、及びエーテル(20mL)で順次洗浄すると、表題化合物8(2.2g、98％収率)が薄黄色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C33H39N5O6の計算値、601.29;実測値602.3(M+H)。
化合物2: 20mLバイアル中、Fmoc-バリン-シトルリン-PAB(OH) 8(2.0g、3.33mmol)をDMF(10mL)中の5％ピペリジンに溶解させ、室温で1時間撹拌した。沈殿を濾過により除去し、濾液を、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％TFAを有する)を用いる100g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させた。精製を凍結乾燥した固体に対して繰り返すと、表題化合物2(0.98g、61％収率)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C18H29N5O4の計算値、379.22;実測値380.2(M+H)。
化合物9: DIEA(40μL、0.22mmol)をバリン-シトルリン-PAB(OH)*TFA塩2(100mg、0.2mmol)及びFmoc-PEG8-NHSエステル(167mg、0.22mmol)の無水DMF(2mL)溶液に添加し、45分間撹拌した。反応液をLC/MSによりモニタリングし、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる100g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物8(145mg、71％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C52H76N6O15の計算値、1024.54;実測値1025.5(M+H)。
化合物10:室温のDCC(18.6mg、0.09mmol)のジクロロメタン(3mL)溶液を、Fmoc-PEG8-バリン-シトルリン-PAB(OH) 9(61.8mg、0.06mmol)、VX-787(24mg、0.06mmol)、及びDMAP(7.2mg、0.06mmol)の無水ジクロロメタン(12mL)懸濁液に室温で滴加し、16時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOH)を用いる50g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物10がふわふわしたオフホワイト色の固体(50mg、51％収率)として得られた。MS(ESI、pos.): C72H93F2N11O16の計算値、1405.68;実測値1406.6(M+H)。
化合物11: DMF(0.8mL)中の5％ピペリジンを化合物10(50mg、0.035mmol)の無水DMF(1.6mL)溶液に添加し、40分間撹拌した後、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる50g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物11(43mg、95％収率)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C57H83F2N11O14の計算値、1183.61;実測値1184.6(M+H)。
Figure 2023511956000072
(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン13からの化合物15の合成は、下のスキーム3に記載されている。
(スキーム3)
Figure 2023511956000073
 化合物12:塩化チオニル(11.8mg、0.1mmol)をFmoc-Cap-バリン-シトルリン-PAB(OH) 4(61.2mg、0.086mmol)の無水ジクロロメタン(1mL)撹拌溶液に室温で添加し、1時間撹拌した。出発材料が消費された後、揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる30g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物12がふわふわしたオフホワイト色の固体(38mg、60％収率)として得られた。MS(ESI、pos.): C39H49ClN6O6の計算値、732.3;実測値733.3(M+H)。
化合物14: K2CO3(28mg、0.20mmol)及びNaI(6mg、0.041mmol)を(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン13(20mg、0.041mmol)及びFmoc-Cap-バリン-シトルリン-PAB-Cl(40mg、0.052mmol)中のDMF溶液(1ml)に添加し、混合物を65℃に40分間加熱した。反応液を室温に冷却し、5～60％MeCN/H2O(両方とも0.05％酢酸を有する)を用いる30g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物14がふわふわしたオフホワイト色の固体(40mg、83％収率)として得られた。MS(ESI、pos.): C63H67F2N9O10Sの計算値、1179.5;実測値1180.3(M+H)。
化合物15: 1M TBAFのTHF(21μL、0.021mmol)溶液を化合物14(25mg、0.021mmol)のTHF(1.5mL)溶液に滴加し、室温で1.5時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、5～60％MeCN/H2O(両方とも0.05％酢酸を有する)を用いる30g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物15(14mg、70％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C48H57F2N9O8Sの計算値、957.4;実測値958.3(M+H)。
Figure 2023511956000074
(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン(13)からの化合物18の合成は、下のスキーム4に記載されている。
(スキーム4)
Figure 2023511956000075
 化合物17:塩化チオニル(9μL、0.122mmol)をMal-cap-Val-Cit-PAB-OH(16)(35mg、0.061mmol)の無水DCM(3mL)懸濁液に添加し、反応液を室温で1時間撹拌した。反応液を真空中で濃縮し、トルエン(4mL)で共沸乾燥させ、その後、それ以上精製することなく、次の工程で使用した。MS(ESI、pos.): C26H39ClN6O6の計算値、590.3;実測値591.3 M+H)。
化合物18: K2CO3(41.5mg、0.3mmol)及びヨウ化ナトリウム(9mg、0.06mmol)を、(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン(13)(23mg、0.048mmol)及びMal-cap-Val-Cit-PAB-Cl(17)(35mg、0.06mmol)のDMF(2mL)溶液に添加した。反応液を60℃に1時間加熱し、その後、室温に冷却し、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる30g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物18(28mg、57％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C52H57F2N9O10Sの計算値、1037.4;実測値1038.3(M+H)。
Figure 2023511956000076
(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン(13)からの化合物23の合成は、下のスキーム5に記載されている。
(スキーム5)
Figure 2023511956000077
 化合物20: DIEA(41μL、0.236mmol)を、(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン(13)(30mg、0.044mmol)及び化合物19(28.5mg、0.059mmol)のクロロホルム(0.5mL)溶液に添加した。反応液を室温で0.5時間撹拌し、その後、0～5％MeOH/DCMを用いる4gシリカgoldカラムで精製すると、化合物20(31mg、75％)が無色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C30H29F2N7O7S2の計算値、701.2;実測値702.1(M+H)。
化合物21:トリフェニルホスフィン(28.8mg、0.11mmol)を化合物20(31mg、0.044mmol)の10:1 THF/H2O(0.88mL)溶液に添加した。室温で24時間撹拌した後、反応液を濃縮乾固し、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる5.5g C18 Aqカラムで精製すると、化合物21(20mg、68％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C30H31F2N5O7S2の計算値、675.2;実測値676.1(M+H)。
化合物23: HATU(28.5mg、0.075mmol)及びDIEA(13μL、0.075mmol)を化合物21(20mg、0.030mmol)及びMal-cap-Val-OH(22)(27.5mg、0.089mmol)のDMF(1.0mL)溶液に添加した。1時間撹拌した後、反応液を、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる30g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物23(4.5mg、16％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C45H51F2N7O11S2の計算値、967.3;実測値968.2(M+H)。
Figure 2023511956000078
(スキーム6)
Figure 2023511956000079
 化合物24:トリエチルアミン(17μL、0.12mmol)、トリフルオロメタンスルホン酸無水物(20μL、0.12mmol)、及びDMAP(0.7mg、0.006mmol)を、(R)-12-((S)-7,8-ジフルオロ-6,11-ジヒドロジベンゾ[b,e]チエピン-11-イル)-7-ヒドロキシ-3,4,12,12a-テトラヒドロ-1H-[1,4]オキサジノ[3,4-c]ピリド[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6,8-ジオン(13)(29mg、0.06mmol)のDCM(2mL)溶液に0℃で添加した。1時間撹拌した後、反応液を真空中で濃縮し、残渣を、酢酸エチル/ヘキサンを用いる4gシリカgoldカラムで精製すると、化合物24(24mg、66％)が帯黄色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C25H18F5N3O6S2の計算値、615.1;実測値616.0(M+H)。
化合物25:マイクロ波管に、無水1,4-ジオキサン(1mL)中のトリフレート24(24mg、0.04mmol)を投入し、水性水酸化アンモニウム(0.4mL)を添加した。反応液を80℃に48時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を、5～95％MeCN/水(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる15.5g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物25(18.3mg、75％)がふわふわした帯黄色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C24H20F2N4O3Sの計算値、482.1、実測値483.1(M+H)。
Figure 2023511956000080
(スキーム7)
Figure 2023511956000081
 化合物26:バイアルに、アルゴン下で、無水DMF(1mL)中のトリフレート24(24.4mg、0.04mmol)を投入し、LiCl(5.2mg、0.12mmol)、Pd(PPh3)4(2.3mg、0.002mmol)、及びEt3SiH(19μL、0.12mmol)を添加した。反応液を65℃に2時間加熱した。5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる15.5g C18 Aqカラムで精製すると、表題化合物26(4.6mg、25％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C24H19F2N3O3Sの計算値、467.1;実測値468.1(M+H)。
Figure 2023511956000082
(スキーム8)
Figure 2023511956000083
 化合物27: THF(90μL、0.072mmol)中のDIEA及び0.8M H2S溶液を、トリフレート24(15mg、0.024mmol)のDMF(1mL)溶液に添加した。1時間撹拌した後、揮発性物質を真空中で除去し、残渣を、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる5.5g C18 Aqカラムで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、表題化合物27(7.0mg、58％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C24H19F2N3O3S2の計算値、499.1;実測値500.1(M+H)。
Figure 2023511956000084
(スキーム9)
Figure 2023511956000085
 化合物28をBioconjugate Chemistry(2016), 27(10), 2549-2557の文献手順に従って調製した。
化合物29: DCC(57mg、0.227mmol)を、化合物28(90mg、0.185mmol)、VX-787(74mg、0.185mmol)、及びDMAP(22mg、0.185mmol)の無水DCM(8mL)溶液に添加した。混合物を室温で3時間撹拌した。固体を濾過除去し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる100g C18 Aqを備えたTeledyne ISCOで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、表題化合物29(120mg、75％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C40H40F2N6O14の計算値、866.3;実測値867.3(M+H)。
化合物30:窒素を化合物29(120mg、0.138mmol)のTHF(10mL)溶液に通して10分間バブリングさせることにより、それを脱酸素化した。亜鉛粉末(180mg、2.76mmol)及びギ酸アンモニウム(26mg、0.414mmol)をこの溶液に添加した。反応液を再び5分間脱酸素化し、60℃に3.5時間加熱した。反応液を周囲温度まで冷却し、固体を濾過により除去し、濾液を真空中で濃縮すると、表題化合物30(110mg、100％)が得られ、これを、それ以上精製することなく、次の工程で使用した。MS(ESI、pos.): C40H42F2N6O12の計算値、836.3;実測値837.3(M+H)。
化合物31:塩化オキサリル(26μL、0.304mmol)及びDMF(2μL)をFmoc-N-アミド-PEG8-酸(100mg、0.152mmol)の無水DCM(5mL)溶液に添加した。30分間撹拌した後、揮発性物質を真空中で除去すると、Fmoc-N-アミド-PEG8-COClが得られた。別のバイアル中で、化合物30(110mg、0.138mmol)を無水THF(3mL)に溶解させ、DIEA(53μL、0.304mmol)、次いで、Fmoc-N-アミド-PEG8-COClのTHF(4mL)溶液を添加した。1時間後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる100g C18 Aqを備えたTeledyne ISCOで精製した。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物31(86mg、回収された出発材料に基づくと53％収率)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C74H89F2N7O23の計算値、1481.6;実測値1482.6(M+H)。
化合物32:化合物31(86mg、0.058mmol)の0℃のMeOH(12mL)溶液に、MeOH中の0.1M NaOMe溶液(1.16mL、0.116mmol)を添加し、反応液0℃で1時間を撹拌した。Dowex(登録商標)樹脂を添加することにより、反応液をクエンチした。樹脂を濾過除去し、濾液を濃縮すると、化合物32が得られ、これを、精製することなく、次の工程で使用した。
化合物33:化合物32(0.058mmol)のDMF(3mL)溶液に、DMF(1.5mL)中の5％ピペリジン溶液を添加し、反応液を45分間撹拌し、その後、Teledyne ISCO 50g C18 Aqカラムに注入し、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを調整剤として有する)で溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物33(32mg、2工程かけて49％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C53H73F2N7O18の計算値、1133.5;実測値1134.4(M+H)。
化合物34:室温のTHF(2mL)及び水(1mL)中の化合物33(32mg、0.028mmol)の溶液に、水中の0.025mM LiOH溶液(1.1mL、0.028mmol)を添加し、反応液を2時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、残渣を、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを調整剤として有する)を用いるGemini 30×150mmカラムを備えたTeledyne ISCOで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物34(26mg、82％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C52H71F2N7O18の計算値、1119.5;実測値1120.4(M+H)。
Figure 2023511956000086
(スキーム10)
Figure 2023511956000087
 化合物35をBioconjugate Chemistry(2016), 27(10), 2549-2557の文献手順に従って精製した。
化合物36: EDC-HCl(67mg、0.350mmol)及びDMAP(34mg、0.278mmol)をCH2Cl2(16mL)中のVX-787(100mg、0.250mmol)とアルコール37(125mg、0.250mmol)の混合物に添加した。周囲温度で22時間撹拌した後、反応液を酢酸エチル(20mL)で希釈し、H2O(20mL)で洗浄した。水性層を3つの20mL部の酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を0.5N HCl(水性)溶液(20mL)で、その後、飽和NaHCO3(水性)溶液(20mL)で、最後に、ブライン(20mL)で洗浄し、その後、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。ヘキサン中の45～100％酢酸エチルを用いる12gシリカゲル上でのクロマトグラフィーによる精製により、化合物58b(149mg、67％収率、82％純度)が得られ、これを、それ以上精製することなく、次の工程で使用した。MS(ESI、pos.): C41H42F2N6O14の計算値、880.27;実測値881.30(M+H)。
化合物37:アルゴンを化合物36(35mg、0.0397mmol)のTHF(1.5mL)溶液に通して5分間バブリングさせることにより、それを脱酸素化した。粉末化Zn(102mg、1.56mmol)、次いで、ギ酸アンモニウム(12mg、0.0.190mmol)を添加した。アルゴンを混合物に通してもう3分間バブリングさせ、その後、反応液を、アルゴン下、60℃のパイブロックで24時間加熱した。反応液を濾過し、固体を数部のTHFで洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、その後、ヘキサン中の40～100％酢酸エチルで溶出させる4gシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製すると、化合物37(14mg、42％)が淡黄色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C41H44F2N6O12の計算値、850.30;実測値851.30(M+H)。
化合物38:塩化オキサリル(8μL、0.0933mol)及びDMF(2μL)をFmoc-N-アミド-PEG8-酸(30mg、0.0452mmol)の無水CH2Cl2(1mL)溶液に添加した。得られた薄黄色の溶液を周囲温度で1時間撹拌し、その後、真空中で濃縮した。得られた残渣に、3つの1mL部の無水CH2Cl2を添加し、各々の添加後に濃縮した。別のバイアル中で、iPr2NEt(16μL、0.0918mmol)を化合物37(20mg、0.0235mmol)のCH2Cl2(200μL)懸濁液に添加した。この混合物に、酸塩化物(0.0452mmol)のCH2Cl2(400μL)溶液を滴加した。周囲温度で1時間撹拌した後、混合物を真空中で濃縮した。粗生成物をDMSOに溶解させ、5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の20～100％MeCNで溶出させた。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物38(7.3mg、21％収率)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C75H91F2N7O23の計算値、1495.61;実測値1496.60(M+H)。
化合物39: 0.1M NaOMe/MeOH溶液(13μL、0.0013mmol)を化合物38(2.0mg、0.00134mmol)の0℃の無水メタノール(400μL)溶液に添加した。氷浴中で4時間撹拌した後、反応液を0.2M HCl/MeOH溶液(6.5μL、0.0013mmol)で中和し、真空中で濃縮した。CH2Cl2(0.5mL部)を3回添加し、各々の添加の後、混合物を濃縮した。得られた残渣を無水DMF(0.2mL)に溶解させ、10％ピペリジン/DMF溶液(0.2mL)で処理した。30分後、反応液を5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.1％TFAを含むH2O中の0～100％MeCNで溶出させた。きれいな生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物39のTFA塩(1.1mg、71％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C52H73F2N7O17の計算値、1105.50;実測値1106.50(M+H)。
Figure 2023511956000088
(スキーム11)
Figure 2023511956000089
 化合物41a:一般的な手順A: Fmoc-Phe-OSu(40a)(107mg、0.22mmol)及びVal-Cit-PABA TFA塩(2)(99mg、0.2mmol)のDMF(1.5mL)溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(105μL、0.6mmol)を添加した。反応液を室温で30分間撹拌し、その後、50g C18 Aq.カラムに注入し、勾配5～95％MeCN:H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)で溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物41a(23mg、14％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C42H48N6O7の計算値、748.4;実測値749.3(M+H)。
化合物41b:一般的な手順B: Fmoc-Asp(Oアリル)-OH(40b)(83mg、0.21mmol)、Val-Cit-PABA.TFA塩(2)(99mg、0.2mmol)、及びHOAt(41mg、0.3mmol)のDMF(1.5mL)溶液に、NMM(66μL、0.6mmol)及びEDCI(48mg、0.25mmol)を添加した。反応液を室温で2時間撹拌し、その後、Teledyne ISCO 30 g C18 Aq.カラムに注入し、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)で抽出した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物41b(85mg、56％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C40H48N6O9の計算値、756.3;実測値757.4(M+H)。
化合物41c: Fmoc-His(Trt)-OH(40c)(130mg、0.21mmol)を用いる一般的な手順Bにより調製した。ふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝146mg(74％)。MS(ESI、pos.): C58H60N8O7の計算値、980.5;実測値981.4(M+H)。
化合物41d: Fmoc-Glu(Oアリル)-OSu(40d)(51mg、0.1mmol)を用いる一般的な手順Aにより調製した。ふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝25mg(33％)。MS(ESI、pos.): C27H26N2O8の計算値、506.2;実測値507.2(M+H)。
化合物41e:無水DMA(5mL)中の0℃のVal-Cit-PABA(380mg、1.0mmol)の溶液に、FmocLeuOH(40e)(424mg、1.2mmol)、HOAt(170mg、1.2mmol)、EDC-HCl(240mg、1.2mmol)、及びN-メチルモルホリン(220μL、2.0mmol)を添加した。氷浴中で2.5時間撹拌した後、反応液をH2O(35mL)で希釈した。生成物を真空濾過により回収し、H2O(5mL部)で、その後、LCMS分析により、＜5％のFmocLeuOHが残存することが示されるまで、6つの10～20mL部の酢酸エチルで3回洗浄した。真空下で一晩乾燥させた後、白色の固体を破砕して、粉末にし、真空下で再び乾燥させると、化合物41e(616mg、86％)が得られた。MS(ESI、pos.): C39H50N6O7の計算値、714.4;実測値715.4(M+H)。
化合物41f:無水DMF(5mL)中の0℃のVal-Cit-PABA(200mg、0.527mmol)とFmocArg(Pbf)OH(40f)(410mg、0.632mmol)とHOAt(86mg、0.632mmol)の混合物に、N-メチルモルホリン(90μL、0.818mmol)及びEDC-HCl(120mg、0.626mmol)を添加した。反応液を氷浴中で3時間撹拌し、その後、100g C18カラムに充填し、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の10～60％MeCNで溶出させた。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物41f(345mg、65％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C52H67N9O10Sの計算値、1009.47;実測値1010.40(M+H)。
化合物42a:一般的な手順A: VX-787(11mg、0.026mmol)、DMAP(3.2mg、0.026mmol)、及びDCC(8mg、0.039mmol)をFmoc-Phe-Val-Cit-PAB-OH(41a)(20mg、0.026mmol)のDCM(3mL)溶液に添加した。5時間撹拌した後、追加のVX-787(4mg)を添加し、反応液を16時間撹拌し、その後、真空中で濃縮した。残渣をDMSO(1mL)に溶解させ、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる15.5g C18 Aq.カラム上のTeledyne ISCOで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物42a(10mg、回収された出発材料に基づくと50％収率)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C62H65F2N11O8の計算値、1129.5;実測値1130.4(M+H)。未反応の41a(7mg)も回収した。
化合物42b:一般的な手順B: EDCI(13.2mg、0.069mmol)を、化合物41b(35mg、0.046mmol)、VX-787(18.5mg、0.046mmol)、及びDMAP(5.6mg、0.046mmol)のDCM(6mL)溶液に添加し、反応液を室温で2時間撹拌した。追加のVX-787(6mg)を添加し、反応液を一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をDMF(1.5mL)に溶解させ、5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％TFAを有する)を用いる30g C18 Aqカラムを備えたTeledyne ISCOで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、表題化合物42b(23mg、44％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C60H65F2N11O10の計算値、1137.5;実測値1138.4(M+H)。
化合物42b': Pd(PPh3)4(2.4mg、0.002mmol)及びフェニルシラン(1滴)を化合物42b(23mg、0.020mmol)のTHF(0.8mL):DMF(0.4mL)溶液に添加し、反応液を30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去すると、化合物42b'が得られ、これを、精製することなく、次の工程で使用した。
化合物42c:化合物41c(39mg、0.04mmol)を用いる一般的な手順Bに従って合成すると、表題化合物42c(30mg、55％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C78H77F2N13O8の計算値、1361.6;実測値1362.4(M+H)。
化合物42d:化合物41d(15.4mg、0.02mmol)を用いる一般的な手順Aに従って合成すると、表題化合物42d(13mg、57％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C61H67F2N11O10の計算値、1151.5;実測値1152.4(M+H)。
化合物42d': Pd(PPh3)4(1.3mg、0.001mmol)及びフェニルシラン(2μL、0.0165mmol)を化合物42d(13mg、0.011mmol)のTHF(1.5mL)/DMF(0.5mL)溶液に添加し、反応液を20分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去すると、化合物42d'が得られ、これを、精製することなく、次の工程で使用した。
化合物42e: Fmoc-Leu-Val-Cit-PABA(41e)(89mg、0.125mmol)、DMAP(30mg、0.245mmol)、及びEDC-HCl(48mg、0.250mmol)をVX-787(100mg、0.250mmol)の3:1 THF:DMA(3mL)溶液に添加した。反応液を周囲温度で2時間撹拌し、その後、真空中で濃縮して、THFを除去した。残りのDMA溶液を50g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の5～100％MeCNで溶出させた。生成物を含有する画分を凍結乾燥させ、その後、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の50～100％MeCNで溶出させる30g C18 Aqカラム上でのクロマトグラフィーにより再精製した。凍結乾燥後、表題化合物42e(37mg、24％)がLCMSにより～90％純粋である白色の固体として得られた。生成物を、それ以上精製することなく、次の工程で使用した。MS(ESI、pos.): C59H67F2N11O8の計算値、1095.51;実測値1096.50(M+H)。
化合物42f: DMAP(8mg、0.0655mmol)及びEDC-HCl(12mg、0.0626mmol)を化合物41f(31mg、0.0307mmol)及びVX-787(25mg、0.0626mmol)の3:1 THF:DMA(760μL)溶液に添加した。周囲温度で4時間撹拌した後、THFを真空中での濃縮により除去した。残りのDMA溶液を15.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の0～100％MeCNで溶出させた。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物42f(7mg、16％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C72H84F2N14O11Sの計算値、1390.61;実測値1391.45(M+H)。
Fmoc除去のための一般的な手順:化合物43a: DMF(1mL)中の5％ピペリジンを化合物42a(10mg、0.01mmol)のDMF(1mL)溶液に添加し、反応液を45分間撹拌した。反応液をTeledyne ISCO 15.5g C18 Aqカラムに注入し、5～95％MeCN:H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)で溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物43a(7mg、63％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C47H55F2N11O6の計算値、907.4;実測値908.4(M+H)。
化合物43b: Fmoc除去のための一般的な手順に従った。粗42b'からふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝78％。MS(ESI、pos.): C42H51F2N11O8の計算値、875.4;実測値876.4(M+H)。
化合物43c: Fmoc除去のための一般的な手順に従った。42cからふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝53％。MS(ESI、pos.): C66H67F2N13O8の計算値、1139.5;実測値1140.4.(M+H)。
化合物43d: Fmoc除去のための一般的な手順に従った。42d'からふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝59％。MS(ESI、pos.): C43H53F2N11O8の計算値、889.4;実測値890.4(M+H)。
化合物43e: DMF(400μL)中の10％ピペリジンを化合物42e(20mg、0.0182mmol)の無水DMF(400μL)溶液に添加した。周囲温度で30分間撹拌した後、反応液を5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.1％TFAを含むH2O中の5～25％MeCNで溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物43e(13mg、72％)のTFA塩が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C44H57F2N11O6の計算値、873.45;実測値874.40(M+H)。
化合物43f: 10％ピペリジン/DMF溶液(100μL)を化合物42f(6.8mg、0.00489mmol)のDMF(100μL)溶液に添加した。周囲温度で1時間撹拌した後、溶液を5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の0～100％MeCNで溶出させた。生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物43f(5.2mg、91％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C57H74F2N14O9Sの計算値、1168.55;実測値1169.40(M+H)。
Fmoc-N-アミド-PEG8を取り込むための一般的な手順:化合物44a:化合物43a(7mg、0.008mmol)のDMF(1mL)溶液に、Fmoc-N-アミド-PEG8-NHSエステル(7mg、0.009mmol)、次いで、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(4μL、0.023mmol)を添加し、反応液を2時間撹拌した。生成物を、勾配溶出5～95％MeCN/H2O(両方とも0.05％AcOHを有する)を用いる15.5g C18 Aqカラムを備えたTeledyne ISCOで精製した。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物44a(5mg、42％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C81H102F2N12O17の計算値、1552.7;実測値1553.7(M+H)。
化合物44b: Fmoc-N-アミド-PEG8を取り込むための一般的な手順に従った。43bからふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝61％。MS(ESI、pos.): C76H98F2N12O19の計算値、1520.7;実測値1521.4(M+H)。
化合物44c: Fmoc-N-アミド-PEG8を取り込むための一般的な手順に従った。43cからふわふわしたオフホワイト色の固体として、収率＝83％。MS(ESI、pos.): C97H114F2N14O17の計算値、1784.4;実測値1785.6(M+H)。
化合物44c':化合物44c(17mg、0.0073mmol)のDCM(2mL)溶液に、TFA(0.2mL)を添加した。3時間撹拌した後、反応液をMeOH(3mL)で希釈し、揮発性物質を真空中で除去した。残渣を1:1のMeCN:H2O(1.5mL)及びDMSO(0.2mL)に溶解させ、Teledyne ISCO 15.5g C18 Aqカラムに注入し、勾配溶出5～95％MeCN:H2O(両方とも10mmol酢酸アンモニウムを調整剤として有する)を用いて溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結させ、凍結乾燥させると、表題化合物44c'(12mg、82％)がふわふわしたオフホワイト色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C78H100F2N14O17の計算値、1542.7;実測値1543.8(M+H)。
化合物44d: 43dを用いて、一般的な手順に従って調製した。生成物44dを、精製することなく、次の工程で使用した。
化合物44e: iPr2NEt(15μL、0.0861mmol)を化合物43e-TFA塩(20mg、0.0206mmol)及びFmoc-N-アミド-PEG8-NHSエステル(20mg、0.0263mmo)の無水DMA(400μL)溶液に添加した。周囲温度で2時間撹拌した後、反応液を15.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.1％TFAを含むH2O中の10～100％MeCNで溶出させた。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物44e(13mg、42％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C78H104F2N12O17の計算値、1518.76;実測値1519.70(M+H)。
化合物44f:化合物43f(7mg、0.00599mmol)の無水DMF(100μL)溶液に、DMF(33μL)中の10％iPr2NEt溶液、次いで、無水DMF(100μL)中のFmoc-N-アミド-PEG8-NHSエステル(6mg、0.00789mmol)を添加した。1時間後、LCMSにより、不完全な反応が示された。追加のFmoc-N-アミド-PEG8-NHSエステル(25μLの6％DMF溶液)を添加し、反応液をさらに2時間撹拌して、反応を終了させた。両方の溶媒に0.05％HOAcを含むH2O中の0～100％MeCNを用いる5.5g C18 Aq ISCOカラム上でのクロマトグラフィーによる精製と、その後の純粋な画分の凍結乾燥により、化合物44f(9mg、82％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C91H121F2N15O20Sの計算値、1814.0;実測値1815.7(M+H)。
化合物45a: Fmoc除去のための一般的な手順に従って、表題化合物45aを、ふわふわしたオフホワイト色の固体として、44aから93％収率で得た。MS(ESI、pos.): C66H92F2N12O15の計算値、1330.7;実測値1331.6(M+H)。
Figure 2023511956000090
化合物45b: Fmoc除去のための一般的な手順に従って、表題化合物45bを、ふわふわしたオフホワイト色の固体として、44bから69％収率で得た。MS(ESI、pos.): C61H88F2N12O17の計算値、1298.6;実測値1299.5(M+H)。
Figure 2023511956000091
化合物45c: Fmoc除去のための一般的な手順に従って、表題化合物45cを、ふわふわしたオフホワイト色の固体として、44c'から89％収率で得た。MS(ESI、pos.): C63H90F2N14O15の計算値、1320.7;実測値1322.0(M+H)。
Figure 2023511956000092
化合物45d: Fmoc除去のための一般的な手順に従って、表題化合物45dを、ふわふわしたオフホワイト色の固体として、未精製の44から47％収率で(2工程かけて)得た。MS(ESI、pos.): C62H90F2N12O17の計算値、1312.7;実測値1313.6(M+H)。
Figure 2023511956000093
化合物45e: DMF(100μL)中の10％ピペリジンを化合物44e(16mg、0.0153mmol)のDMF(100μL)溶液に添加した。周囲温度で30分間撹拌した後、反応液を5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.1％TFAを含むH2O中の5～100％MeCNで溶出させた。きれいな画分を凍結乾燥させると、化合物45eのTFA塩(7mg、47％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C63H94F2N12O15の計算値、1296.69;実測値1297.60(M+H)。
Figure 2023511956000094
化合物45f:化合物44f(4mg、0.0022mmol)のCH2Cl2(50μL)懸濁液に、トリイソプロピルシラン(5μL)、次いで、TFA(50μL)を添加した。周囲温度で90分間撹拌した後、反応液を真空中で濃縮した。残渣をCH2Cl2(200μL)で希釈し、濃縮した。生成物をCH2Cl2(200μL部)でさらに3回希釈し、毎回濃縮した。得られた黄色の泡状物(化合物44f')をDMF(100μL)中の5％ピペリジンで処理した。周囲温度で1時間撹拌した後、反応液を5.5g C18 Aqカラムに充填し、両方の溶媒に0.1％TFAを含むH2O中の0～100％MeCNで溶出させた。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させると、化合物45fのTFA塩(1mg、47％)が白色の固体として得られた。MS(ESI、pos.): C63H95F2N15O15の計算値、1339.7;実測値1340.5(M+H)。
Figure 2023511956000095
(実施例2:抗ヘマグルチニン非細胞傷害性抗体薬物コンジュゲート合成)
抗ヘマグルチニン非細胞傷害性抗体薬物コンジュゲートを下記の通りに合成した。
抗ヘマグルチニン(抗HA)モノクローナル抗体mAb11729を突然変異させて、重鎖及び軽鎖のC-末端に、コンセンサスLLQGAペンタペプチド配列を導入した。この突然変異により、抗体を重鎖に2つ(各々の重鎖に1つ)の最大積載量まで酵素的にコンジュゲートすることが可能になった。重鎖のC-末端に同じコンセンサス配列を含有する非HA結合mAb(感染性疾患と関係のない免疫学的抗原に由来する)を非結合アイソタイプ対照として使用した。
PBS pH 7.4中の400U/mg mAbのPNGアーゼF(NEB P0704L)を用いて、天然mAb11729及びアイソタイプ対照抗体を37℃で一晩脱グリコシル化した。その後、スピンフィルター(Amicon、30kDaカットオフ)を用いて、反応混合物をPBS pH 7.4にバッファー交換した。この手順により、抗体を重鎖上のQ295部位で最大積載量2まで酵素的にコンジュゲートすることが可能になった。
第二の抗ヘマグルチニン(N3H2)モノクローナル抗体mAb5385(J Virology 2014, vol 88, 7130-7144に記載されているもの)を突然変異させて、重鎖のC-末端に、コンセンサス
Figure 2023511956000096
 ペンタペプチド配列、又は軽鎖のC-末端に、
Figure 2023511956000097
 を導入した。この突然変異により、抗体を最大積載量2まで酵素的にコンジュゲートすることが可能になった。重鎖のC-末端又は軽鎖のC-末端に同じコンセンサス配列を含有する非HA結合mAb(感染性疾患と関係のない免疫学的抗原に由来する)を非結合アイソタイプ対照として使用した。
重鎖のC-末端か又はQ295部位かのいずれかにコンジュゲーション部位を有する抗体を、PBS pH 7.4中、1mg/mLでコンジュゲートした。化合物6又は11(どちらもVX-787を含むが、異なるリンカーを有する)を抗体よりも10～40倍モル濃度過剰で添加し、抗体1mg当たり14単位の細菌トランスグルタミナーゼ(Zedira, T1001)の添加により、酵素反応を開始させ、37℃で16時間インキュベートした。コンジュゲートをプロテインAクロマトグラフィー(PierceプロテインAカラム、ThermoScientific、製品番号20356)により精製した。コンジュゲートを、Waters Acquity UPLCを用いるペイロード:抗体比(DAR)の決定のためのESI-MSにより分析した。クロマトグラフィーによる分離を、10分の勾配(移動相Bの分:パーセンテージ; 0:10％、1:10％、5:90％、7:90％、7.2:10％、10:10％)で、C4カラム(2.1×50mm ACQUITY UPLC BEH Protein C4、1.7um、300A)で達成した。移動相Aは、水中の0.1％ギ酸とし、移動相Bは、アセトニトリル中の0.1％ギ酸とした。流量は、0.3mL/分に設定した。検出器TOFスキャンは、m/z 500～4500から設定し、主なパラメータは掲載されている通りであった(キャピラリー電圧3.0kV;サンプリングコーン80V; 100Vのソースオフセット;ソース温度150℃;脱溶媒和温度450℃;コーンガス0L/hr;脱溶媒和ガス800L/hr)。スペクトルを、MassLynxソフトウェア内のMaxEnt関数を用いてデコンボリューション処理した。得られる分子イオンは、強度に従って重み付けしたとき、表3及び4に掲載されているローディングに対応した。実際の質量分析スペクトルは、図1及び2に掲載されている。或いは、抗体上へのペイロードのローディングを決定するために、コンジュゲートを、1Mリン酸カリウムpH 8.5から水への60分にわたる線形勾配を用いるTSK-NPRブチルHIC(疎水性相互作用クロマトグラフィー)カラムを用いて、Agilent 1260で泳動させた。ペイロードローディングは、コンジュゲートされた抗体及びコンジュゲートされていない抗体の種に対応するピーク面積の積分によって決定した。ペイロード:抗体比は、表5に報告されている。サイズ排除HPLCにより、全てのコンジュゲートが＞92％単量体であることが立証された(表5)。この手順により、抗体重鎖C-末端でLLQGAペンタペプチドを介して化合物11にコンジュゲートされたmAb11729を有するmAb11729-VX-787非細胞傷害性抗体-薬物コンジュゲート(ncADC)(「11729-HC-Cterm-11」)、抗体重鎖N-末端でLLQGAペンタペプチドを介して化合物11にコンジュゲートされたmAb11729を有するmAb11729-VX-787 ncADC(「11729-HC-Nterm-11」)、抗体軽鎖C-末端でLLQGAペンタペプチドを介して化合物11にコンジュゲートされたmAb11729を有するmAb11729-VX-787 ncADC(「11729-LC-Cterm-11」)、抗体軽鎖N-末端でLLQGAペンタペプチドを介して化合物11にコンジュゲートされたmAb11729を有するmAb11729-VX-787 ncADC(「11729-LC-Nterm-11」)、Q295部位にコンジュゲートされた化合物11を有するmAb11729-VX-787 ncADC(「11729-Q295-11」)、LLQGAペンタペプチドを介して重鎖C-末端でコンジュゲートされた化合物11を有するアイソタイプ対照抗体(「アイソタイプ対照-HC-Cterm-11」)、Q295部位でコンジュゲートされた化合物11を有するアイソタイプ対照抗体(「アイソタイプ対照-Q295-11」)、Q295部位でコンジュゲートされた化合物6を有するmAb11729-VX-787 ncADC(「11729-Q295-6」)、LLQGAペンタペプチドを介して重鎖C-末端でコンジュゲートされた化合物6を有するアイソタイプ対照抗体(「アイソタイプ対照-HC-Cterm-6」)、Q295部位でコンジュゲートされた化合物6を有するアイソタイプ対照抗体(「アイソタイプ対照-Q295-6」)、LLQGAペンタペプチドを介してmAb11729重鎖C-末端でコンジュゲートされた化合物15を有するmAb11729-バロキサビルncADC(「11729-HC-Cterm-15」)、及び重鎖C-末端でコンジュゲートされた化合物15を有するアイソタイプ対照抗体(「アイソタイプ対照-HC-Cterm-15」)が産生された。
50mM HEPES、150mM NaCl、pH 7.5中のネイティブなmAb11729及びアイソタイプ対照抗体(1～10mg/mL)を、37℃で30分間、1mMジチオスレイトールで処理した。ゲル濾過(G-25、pH 4.5酢酸ナトリウム)の後、DMSO(10mg/ml)中のマレイミドリンカーペイロード誘導化合物18(1.2当量/SH基)を還元された抗体に添加し、混合物を1M HEPES(pH 7.4)でpH 7.0に調整した。コンジュゲートをサイズ排除クロマトグラフィーにより5％グリセロールを含むPBSを用いて精製し、滅菌濾過した。タンパク質濃度及びペイロード対抗体比をUVスペクトル分析により決定した。サイズ排除HPLCにより、使用された全てのコンジュゲートが＞95％単量体であることが立証された。全てのコンジュゲートされた抗体をリンカーペイロードローディング値について質量分光測定により分析した。ペイロード対抗体比は、表6に報告されている。
表3、表4、及び表5は、特定のコンジュゲートのローディングデータ(ESI-MS DAR)を含む。トランスグルタミナーゼがコンジュゲートされた化合物11及び15により、理論値2に接近するDARがもたらされた。表6は、ncADCの純度及びDAR値のリストを含む。
表3. 11729-Q295-11及びアイソタイプ対照-Q295-11における強度加重平均ペイロードローディングのまとめ
Figure 2023511956000098
 表4. 11729-HC-Cterm-11及びアイソタイプ対照-HC-Cterm-11における強度加重平均ペイロードローディングのまとめ
Figure 2023511956000099
 表5. 11729-HC-Cterm-15及びアイソタイプ対照-HC-Cterm-15における強度加重平均ペイロードローディングのまとめ
Figure 2023511956000100
 表6.化合物6、11、及び15コンジュゲートの純度(SECによる)及びDAR
Figure 2023511956000101
(実施例3:抗HA感染細胞結合ELISA及び薬物抗ウイルス効力アッセイ)
MDCK London細胞を、96-ウェルプレート中の1％ピルビン酸ナトリウム(Life Technologies)、0.21％低IgG BSA溶液(Sigma Aldrich)、及び0.5％ゲンタマイシン(Life Technologies))を含有する50μLの感染培地(DMEM(Life Technologies)に40,000細胞/ウェルで播種した。該細胞を5％CO2にして37℃で4時間インキュベートした。その後、プレートに50μLのH1N1 A/プエルトリコ/08/1934インフルエンザウイルスを1.2のMOIで感染させ、軽く叩き、5％CO2にして37℃で20時間戻した。その後、プレートをリン酸緩衝生理食塩水(PBS、Life Technologies)で1回洗浄し、PBS中の200μLの4％パラホルムアルデヒド(PFA、Alfa Aesar)で固定し、室温で15分間インキュベートした。プレートをPBSで3回洗浄し、300μLのStartingBlockブロッキングバッファー(ThermoFisher)で室温で1時間ブロッキングした。対照抗体を、11729-HC-Cterm-11、11729-HC-Nterm-11、11729-LC-Cterm-11、及び11729-LC-Nterm-11に対して試験した。使用された対照抗体は、コンジュゲートされていないmAb11729、コンジュゲートされていないアイソタイプ対照抗体、アイソタイプ対照-HC-Cterm-6、アイソタイプ対照-LC-Cterm-6、アイソタイプ対照-HC-Cterm-45a、アイソタイプ対照-LC-Cterm-45a、アイソタイプ対照-HC-Cterm-34、アイソタイプ対照-LC-Cterm-34、アイソタイプ対照-HC-Cterm-45d、及びアイソタイプ対照-HC-Cterm-11であった。
抗体を100μg/mLの出発濃度までStartingBlockブロッキングバッファーに希釈し、各々を6.1×10-3μg/mLの最終濃度まで1:4で漸減させた。プレートをインキュベートした後、StartingBlockブロッキングバッファーを除去し、希釈された抗体を75μL/ウェルで細胞に添加した。プレートを室温で1時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄バッファー(イミダゾール緩衝生理食塩水及びMilli-Q水に1×まで希釈したTween(登録商標) 20; KPL)で3回洗浄し、StartingBlockブロッキングバッファーに1:2000で希釈した75μL/ウェルの二次抗体(HRPコンジュゲートされたロバ抗ヒトIgG; Jackson ImmunoResearch)を重層した。この二次溶液を、プレート上で、室温で1時間インキュベートした。その後、プレートを洗浄バッファーで3回洗浄し、その後、75μL/ウェルのELISA Pico化学発光基質の1:1調製物を添加した。プレートを、発光について、Molecular Devices Spectramax i3xプレートリーダーですぐに読み取った。
11729-HC-Cterm-11、11729-LC-Cterm-11、及び11729-LC-Nterm-11は、表7及び図3に示されているように、A型インフルエンザ感染細胞にナノモル濃度未満の濃度で結合し、特異的結合を示した。特に、この特異的結合は、コンジュゲートされていないmAb11729抗体と同じ範囲のものであり、ペイロードの添加が結合に対する過度に有害な作用を有さないことを示した。図11に示されているように、重鎖のN-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、インフルエンザA/H1N1/PR8感染細胞への結合の低下がもたらされたが、重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、インフルエンザA/H1N1/PR8感染細胞への結合が保持された。
表7. A型インフルエンザ感染細胞抗HA結合ELISA
Figure 2023511956000102
抗ウイルス効力を試験するために、インフルエンザウイルスによる細胞の感染を抑制するその能力について11729-HC-Cterm-11をアッセイした。MDCK London細胞を、96-ウェルプレート中の100μLの増殖培地(1％ピルビン酸ナトリウム、10％胎仔ウシ血清、及び0.5％ゲンタマイシンを含有するDMEM)に、20,000細胞/ウェルで播種した。細胞を37℃及び5％CO2で18時間インキュベートした。翌日、全ての抗体を500μg/mLの出発濃度までトリプシン感染培地(1％ピルビン酸ナトリウム、0.21％低IgG BSA溶液、1mg/mL TPCK処理トリプシン、及び0.5％ゲンタマイシンを含有するDMEM)に希釈し、1.143×10-1μg/mLの最終濃度まで1:3で漸減させた。それが感染する細胞内でGFPを発現するように改変されているH1N1 A/プエルトリコ/08/1934インフルエンザウイルス(「H1N1 A/プエルトリコ/08/1934-GFP」)をMOI 1までトリプシン感染培地(Life Technologies)に希釈し、希釈した抗体又はADCと1:1混合した。増殖培地を播種した96-ウェルプレートから除去し、ウイルス-抗体又はウイルス-ADC混合物をウェル当たり100μLで細胞に添加した。プレートを軽く叩き、37℃、5％CO2に20時間戻した。その後、プレートをPBSで1回洗浄し、50μLのPBS中の4％PFAで固定し、室温で15分間インキュベートした。プレートをPBSで2回洗浄し、50μLのPBSを重層した。プレートを、GFPシグナルについて、ImmunoSpot分析装置(Cellular Technology Limited)ですぐに読み取った。
表8及び図4に示されているように、重鎖及び軽鎖のC-末端並びに軽鎖のN-末端へのリンカー-ペイロード11のコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H1N1/Pr8ウイルスに対して親抗体よりも3～163倍増強された。表9及び図6に示されているように、重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロード11のコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H1N1/Cal09ウイルスに対して親抗体よりも10倍増大した。表8及び図7に示されているように、重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロード6のコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H1N1/PR8に対して親抗体よりも51倍増大したが;軽鎖のC-末端への6のコンジュゲーションにより、抗ウイルス活性が親抗体よりも増大しなかった。表8及び図8に示されているように、重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H1N1/PR8ウイルスに対して親抗体よりも、11729-HC-Cterm-34の場合は7倍、1129-HC-Cterm-45aの場合は35倍増大したが、軽鎖のC-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、抗ウイルス活性が親抗体よりも増大しなかった。表9及び図9に示されているように、軽鎖及び重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H3N2/HK68X31ウイルスに対して親抗体よりも3～10倍増大した。表8及び図10に示されているように、重鎖のC-末端へのリンカー-ペイロードのコンジュゲーションにより、抗体-薬物コンジュゲートの抗ウイルス活性は、インフルエンザA/H1N1/PR8に対して親抗体よりも71倍増大した。
表8.インフルエンザA/H1N1/PR8ウイルスに対する抗体の抗ウイルス活性
Figure 2023511956000103
 表9.インフルエンザA/H1N1/Cal09ウイルスに対する抗体の抗ウイルス活性
Figure 2023511956000104
 表10.インフルエンザA/H3N2/HK68x31ウイルスに対する抗体の抗ウイルス活性
Figure 2023511956000105
(実施例4:サル又はIgG除去ヒト血漿中での抗インフルエンザHA mAb11729抗体-薬物コンジュゲートのインビトロ血漿安定性)
11729-HC-Cterm-11を様々な種由来の血漿とともにインビトロでインキュベートし、DARを評価した。
ncADC試料を、プールされた新鮮なカニクイザル血漿(BioReclamation, Lot CYN260056-CYN260057)又はIgG除去ヒト血漿(BioIVT, lot#BRH1097869)に、エッペンドルフチューブ(Eppendorf, Cat# 022363514)中、50μg/mLの最終濃度まで独立に添加し、その後、水浴中、37℃で0～72時間インキュベートした。試料を、0、24、48、及び72時間の時点で取り出し、その後、分析まで-80℃で凍結保存した。
DAR分析のために、DynaMag-2磁気粒子プロセッサー(Life Technologies, Cat#12321D)を使用することにより、ncADCを血漿試料から親和性捕捉によって精製した。まず、ビオチン化抗ヒトカッパ抗体(Regeneron製の試薬)をストレプトアビジン常磁性ビーズ(Invitrogen, Cat#605602)に固定した。ncADCを含有する各々の血漿試料を、1850rpmで1mgのビーズと、ThermoMixer Cユニット(Eppendorf、カタログ番号2231000574)中、室温で2時間混合した。その後、ビーズを600μLの50mM Tris-HCl pH 7.5バッファー(1M Tris-HCl pH 7.5バッファー、Invitrogen, Cat#15567-027から希釈したもの)で3回洗浄し、その後、600μLの水中の10％アセトニトリル(VWR Chemicals, Cat#BDH83640.100E)で1回洗浄した。洗浄後、ビーズを50μLの25:75アセトニトリル:水(v/v)中の1％ギ酸とともに室温で15分間インキュベートすることにより、ncADCを溶出させた。2μLの0.5M TCEP(Sigma, Cat 646547-10X1ML)を各々の試料(最終溶液中、19.2mM TCEP)に添加することにより、溶出した試料をさらに還元させ、ThermoMixer Cユニット中、50℃で30分間インキュベートした。
還元されたncADC試料を、Synapt G2-Si質量分析計(Waters)に連結された1.7μm BEH300 C4カラム(Waters Corporation, Cat# 186007567)に注入した。流量は、8μL/分(移動相A:水中の0.1％ギ酸;移動相B:アセトニトリル中の0.1％ギ酸)とし、液体クロマトグラフィー勾配は、10分の勾配とし、ncADCは、26～40％の移動相Bに対応する2.1～6.5分の間に溶出した。
MaxEnt1ソフトウェア(Waters Corporation)を、以下のパラメータ:質量範囲: 20～60kDa、m/z範囲: 700Da～4000Da;分割: 1.0Da/チャンネル;半値幅: 1.0Da;最小強度比: 33％;反復最大値: 15とともに用いて、獲得されたスペクトルをデコンボリューション処理した。
カニクイザル又はIgG除去ヒト血漿との72時間のインキュベーションの後、ncADCからのリンカー-ペイロードの顕著な損失は観察されなかった(図5)。
配列表
Figure 2023511956000106
Figure 2023511956000107
Figure 2023511956000108
Figure 2023511956000109
Figure 2023511956000110
Figure 2023511956000111
Figure 2023511956000112
Figure 2023511956000113
Figure 2023511956000114
Figure 2023511956000115
Figure 2023511956000116
Figure 2023511956000117
Figure 2023511956000118
Figure 2023511956000119
Figure 2023511956000120
Figure 2023511956000121
Figure 2023511956000122
Figure 2023511956000123
Figure 2023511956000124
Figure 2023511956000125
Figure 2023511956000126
Figure 2023511956000127
Figure 2023511956000128
Figure 2023511956000129
Figure 2023511956000130
Figure 2023511956000131
Figure 2023511956000132
Figure 2023511956000133
Figure 2023511956000134
Figure 2023511956000135
Figure 2023511956000136
Figure 2023511956000137
Figure 2023511956000138
Figure 2023511956000139
Figure 2023511956000140
Figure 2023511956000141
Figure 2023511956000142
Figure 2023511956000143
Figure 2023511956000144
Figure 2023511956000145
Figure 2023511956000146
Figure 2023511956000147
Figure 2023511956000148
Figure 2023511956000149
Figure 2023511956000150
Figure 2023511956000151
Figure 2023511956000152
Figure 2023511956000153
Figure 2023511956000154
Figure 2023511956000155
Figure 2023511956000156
Figure 2023511956000157
Figure 2023511956000158
Figure 2023511956000159
Figure 2023511956000160
Figure 2023511956000161
Figure 2023511956000162
Figure 2023511956000163
Figure 2023511956000164
Figure 2023511956000165
Figure 2023511956000166
Figure 2023511956000167
Figure 2023511956000168
Figure 2023511956000169
Figure 2023511956000170
Figure 2023511956000171
Figure 2023511956000172
Figure 2023511956000173
Figure 2023511956000174
Figure 2023511956000175
Figure 2023511956000176

Claims (75)

  1. 抗ウイルス化合物にコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含む抗体-薬物コンジュゲート。
  2. 前記抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片がリンカーを介して前記抗ウイルス化合物にコンジュゲートされている、請求項1記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  3. 以下の構造を有する、請求項1記載の抗体-薬物コンジュゲート
    Figure 2023511956000177
     (ここで、Abは、抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片であり;
    Lは、リンカーであり;
    Pは、抗ウイルス化合物であり;かつ
    kは、1～30の整数である)。
  4. Pがインフルエンザ阻害剤である、請求項3記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  5. Pがポリメラーゼ阻害剤である、請求項3記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  6. Pが、VX-787、その誘導体、又はその残基である、請求項3記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  7. Pが、バロキサビル、その誘導体、又はその残基である、請求項3記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  8. Abが抗ヘマグルチニン抗体又はその抗原結合断片である、請求項3記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  9. Pがインフルエンザ阻害剤である、請求項8記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  10. Pがポリメラーゼ阻害剤である、請求項8記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  11. Pが、VX-787、その誘導体、又はその残基である、請求項8記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  12. Pが、バロキサビル、その誘導体、又はその残基である、請求項8記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  13. 以下の構造を有する化合物
    Figure 2023511956000178
     (ここで、
    Lは、リンカーであり;
    BAは、結合剤であり;かつ
    kは、1～30の整数である)。
  14. Figure 2023511956000179
    Figure 2023511956000180
    Figure 2023511956000181
    からなる群から選択され、
    ここで、
    BAが抗体又はその抗原結合断片であり;かつ
    kが1～30の整数である、
    請求項13記載の化合物。
  15. BAが抗体又はその抗原結合断片である、請求項13記載の化合物。
  16. Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも1つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～15のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  17. Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも2つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～16のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  18. Ab又はBAがコンジュゲーションに使用される少なくとも3つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～17のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  19. Ab又はBAがコンジュゲーションに利用可能な少なくとも4つのグルタミン残基を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～18のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  20. Ab又はBAがトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションがEU付番体系における2つのQ295残基におけるものであり;かつkが2である、請求項19記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  21. Ab又はBAが抗体重鎖を含むトランスグルタミナーゼ修飾抗体又はその抗原結合断片であり、ここで、コンジュゲーションが該重鎖のC-末端におけるものであり;かつkが2である、請求項19記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  22. 前記コンジュゲーションがグルタミンを介するものである、請求項21記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  23. コンジュゲーションが前記抗体重鎖のC-末端のLLQGA配列中のグルタミンを介するものである、請求項21記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  24. コンジュゲーションが2つのQ295残基及び2つのN297Q残基におけるものであり;かつkが4である、請求項19記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  25. Ab又はBAがmAb11729である、請求項1～24のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  26. 請求項1～25のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物、及び医薬として許容し得る賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物。
  27. 前記医薬組成物が、経口、静脈内、腹腔内、吸入、及び鼻腔内投与:からなる群から選択される投与のために製剤化される、請求項26記載の医薬組成物。
  28. 対象における感染と関連する疾患、障害、又は疾病の治療、予防、軽減、又は阻害のための方法であって、該対象に、請求項1～27のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
  29. 前記感染がウイルス感染である、請求項28記載の方法。
  30. 前記感染がインフルエンザウイルス感染である、請求項29記載の方法。
  31. 前記感染がA型インフルエンザウイルス感染である、請求項29記載の方法。
  32. 前記感染がB型インフルエンザウイルスである、請求項29記載の方法。
  33. 前記感染がA型インフルエンザウイルス感染及びB型インフルエンザウイルス感染である、請求項29記載の方法。
  34. 前記対象に投与されたときの前記化合物の副作用が比較対象へのコンジュゲートされていない抗ウイルス化合物の投与と比較したとき軽減されている、請求項28～33のいずれか一項記載の方法。
  35. 対象におけるインフルエンザ感染の治療、予防、軽減、又は阻害のための方法であって、該対象に、請求項1～34のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の有効量を投与することを含む、前記方法。
  36. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  37. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザグループ1ウイルスによって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  38. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザH1ウイルスによって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  39. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザグループ2ウイルスによって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  40. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザH3ウイルスによって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  41. 前記インフルエンザ感染が未知又は不明のインフルエンザウイルスによって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  42. 前記インフルエンザ感染がB型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  43. 前記インフルエンザ感染がA型インフルエンザウイルス感染及びB型インフルエンザウイルス感染によって引き起こされる、請求項35記載の方法。
  44. 前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物が補助治療剤と組み合わせて投与される、請求項28～43のいずれか一項記載の方法。
  45. 前記補助治療薬が、インフルエンザ感染を治療するための抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザHAに特異的に結合する抗体、インフルエンザのワクチン、栄養補助食品、及び姑息的療法:からなる群から選択される、請求項44記載の方法。
  46. 前記抗炎症薬がコルチコステロイド及び非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項45記載の方法。
  47. 前記栄養補助食品が抗酸化剤である、請求項46記載の方法。
  48. 前記補助治療剤が、様々な投与経路を介して、前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物として投与される、請求項44～47のいずれか一項記載の方法。
  49. 前記補助治療剤が経口投与される、請求項44～48のいずれか一項記載の方法。
  50. 前記抗ウイルス薬がオセルタミビルである、請求項45記載の方法。
  51. 前記オセルタミビルが、前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与の前に投与される、請求項50記載の方法。
  52. 前記オセルタミビルが、前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与と同時に投与される、請求項50記載の方法。
  53. 前記オセルタミビルが、前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物の投与の後に投与される、請求項50記載の方法。
  54. 前記抗ウイルス薬が抗A型インフルエンザ薬又は抗B型インフルエンザ薬である、請求項45記載の方法。
  55. 前記抗A型インフルエンザ薬又は前記抗B型インフルエンザ薬が抗体又はその抗原結合部分である、請求項54記載の方法。
  56. 前記抗体がA型インフルエンザHA又はB型インフルエンザHAに特異的に結合する、請求項55記載の方法。
  57. 前記抗体-薬物コンジュゲート、化合物、又は医薬組成物が、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、又は経口投与される、請求項28～56のいずれか一項記載の方法。
  58. 以下の構造
    Figure 2023511956000182
     (ここで、
    Lは、リンカーであり;かつ
    RGは、反応性部分である)
    又はその医薬として許容し得る塩を有する、リンカー-抗ウイルス化合物。
  59. 前記リンカー-ペイロードが、
    Figure 2023511956000183
     (ここで、
    SP1及びSP2は、存在する場合、スペーサー基であり;
    RGは、抗体又はその抗原結合断片と反応する部分であり;
    各々のAAは、アミノ酸であり;かつ
    nは、1～10の整数である)
    又はその医薬として許容し得る塩である、請求項58記載のリンカー-抗ウイルス化合物。
  60. Figure 2023511956000184
     からなる群から選択される、請求項59記載のリンカー-抗ウイルス化合物。
  61. 抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、該抗体又はその抗原結合断片が請求項58記載の化合物にコンジュゲートされている、抗体-薬物コンジュゲート。
  62. 前記コンジュゲートされた化合物が、
    Figure 2023511956000185
     (ここで、Lは、リンカーである)
    から選択される、請求項61記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  63. 抗体-薬物コンジュゲートを調製する方法であって、結合剤を請求項58記載のリンカー-抗ウイルス化合物と接触させることを含む、前記方法。
  64. Ab又はBAが抗A型インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～63のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  65. Ab又はBAが抗A型インフルエンザグループ1抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～64のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  66. Ab又はBAが抗インフルエンザH1抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～65のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  67. Ab又はBAが抗A型インフルエンザグループ2抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～66のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  68. Ab又はBAが抗インフルエンザH3抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～67のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  69. Ab又はBAが抗B型インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片である、請求項1～68のいずれか一項記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  70. リンカーを介して抗ウイルス化合物にコンジュゲートされた抗インフルエンザ抗体又はその抗原結合断片を含み、ここで、前記抗体-薬物コンジュゲートが、ポリメラーゼ塩基性タンパク質2(PB2)(VX-787)、ポリメラーゼ酸タンパク質(PA)(バロキサビルマルボキシル)、及び/もしくはポリメラーゼ塩基性タンパク質1(PB1)に結合し、かつ/又はこれらを阻害する、請求項1～69のいずれか記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  71. 前記抗体-薬物コンジュゲート又は化合物が抗体重鎖を含み、かつ該抗体重鎖のC-末端にペンタペプチドをさらに含む、請求項1～70のいずれか記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  72. 前記ペンタペプチドがアミノ酸配列LLQGAを含む、請求項71記載の抗体-薬物コンジュゲート又は化合物。
  73. 前記抗体又はその抗原結合断片が配列番号26に示されたアミノ酸配列をさらに含むLCVR;及び配列番号18に示されたアミノ酸配列をさらに含むHCVRを含む、請求項1～72のいずれか記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  74. 前記抗体又はその抗原結合断片が抗体mAb11729である、請求項1～73のいずれか記載の抗体-薬物コンジュゲート。
  75. 前記抗体が、
    (a)配列番号20に示されたアミノ酸配列を含むHCDR1;
    (b)配列番号22に示されたアミノ酸配列を含むHCDR2;
    (c)配列番号24に示されたアミノ酸配列を含むHCDR3;
    (d)配列番号28に示されたアミノ酸配列を含むLCDR1;
    (e)配列番号30に示されたアミノ酸配列を含むLCDR2;及び
    (f)配列番号32に示されたアミノ酸配列を含むLCDR3
    を含む、請求項1～74のいずれか記載の抗体-薬物コンジュゲート。
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