KR20200121317A - 글리피칸 3 항체 및 그의 접합체 - Google Patents

글리피칸 3 항체 및 그의 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20200121317A
KR20200121317A KR1020207025196A KR20207025196A KR20200121317A KR 20200121317 A KR20200121317 A KR 20200121317A KR 1020207025196 A KR1020207025196 A KR 1020207025196A KR 20207025196 A KR20207025196 A KR 20207025196A KR 20200121317 A KR20200121317 A KR 20200121317A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
ser
val
occupied
thr
Prior art date
Application number
KR1020207025196A
Other languages
English (en)
Inventor
트래비스 비셸
윌리엄 아서
패트릭 버크
로리 웨스텐도르프
Original Assignee
시애틀 지네틱스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 시애틀 지네틱스, 인크. filed Critical 시애틀 지네틱스, 인크.
Publication of KR20200121317A publication Critical patent/KR20200121317A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/303—Liver or Pancreas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

본 발명은 GPC3에 특이적으로 결합하는 뮤린, 키메라 및 인간화 항체 및 그의 접합체를 제공한다.

Description

글리피칸 3 항체 및 그의 접합체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 2월 15일에 출원된 미국 출원 번호 62/631,353을 우선권 주장하며, 이는 그 전문이 참조로 포함된다.
글리피칸 3 (GPC3)은 간세포성 암종 세포에서 발현되는 것으로 공지된 세포 표면 프로테오글리칸이며, 수많은 악성 세포에서 보고되어 있다. 본 발명은 GPC3 항체 및 그의 접합체를 제공한다.
항-GPC3 항체 및 GPC3 지정 항체-약물 접합체가 본원에 제공된다. 특히, GPC3 지정 튜부리신 항체-약물 접합체 및 이러한 접합체를 사용하여 GPC3 발현 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 바람직한 항-GPC3 항체는 뮤린 GPC3-1 항체의 키메라 또는 인간화 형태이다. 뮤린 GPC3-1 항체는 서열식별번호: 8에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 9에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
도 1은 인간 GPC3의 서열을 제시한다.
도 2A는 인간 vH 공여자 서열, HV1-18/HJ4와 hGPC3-1 중쇄 변이체의 서열 정렬을 제시한다.
도 2B는 인간 vH 공여자 서열, HV1-69-2/HJ4와 hGPC3-1 중쇄 변이체의 서열 정렬을 제시한다.
도 3은 hGPC3-1 중쇄 변이체의 서열 정렬을 나타낸다.
도 4는 인간 vL 공여자 서열, KV2-30/KJ2와 hGPC3-1 경쇄 변이체의 서열 정렬을 나타낸다.
도 5는 hGPC3-1 경쇄 변이체의 서열 정렬을 제시한다.
도 6는 hGPC3-1ec에 대한 표면 플라스몬 공명 결합 데이터를 제시한다. (왼쪽) 다중 센서그램은 고정화된 hGPC3과 회합하는 hGPC3-1ec의 여러 농도 (400, 160, 64, 25.6, 10.2, 4.1 및 1.64 nM)를 제시한다. (오른쪽) KD는 각 농도에 대한 600초 최대 반응을 플로팅하여 결정되었으며, 최대의 절반의 결합에 의해 정의되었다.
도 7은 JHH7, Huh7 및 Hep3B를 포함하는 GPC3 발현 HCC 세포주 패널에 대한 인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체를 시험하는 시험관내 세포독성 검정의 결과를 제시한다.
도 8은 NCI-H661 및 NCI-H446을 포함하는 GPC3 발현 폐 암종 세포주 패널에 대한 인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체를 시험하는 시험관내 세포독성 검정의 결과를 제시한다.
도 9는 HCC 이종이식편 모델, JHH7의 결과를 제시한다.
도 10은 HCC 이종이식편 모델, Huh7의 결과를 제시한다.
도 11은 HCC 이종이식편 모델, Hep3B의 결과를 제시한다.
도 12는 폐 암종 이종이식편 모델, NCI-H661의 결과를 제시한다.
도 13은 S239C 또는 천연 시스테인에 접합될 때 튜부리신 M 아세테이트 안정성 및 링커 말레이미드 안정성의 생체내 평가의 결과를 제시한다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 개별 항체가 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다는 것을 의미한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득된 바와 같은 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256:495]에 최초 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4816567 참조)에 의해 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628] 및 [Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있거나, 또는 다른 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 기재된 항체는 모노클로날 항체이다.
항체는 전형적으로 단리된 형태로 제공된다. 이는 항체가 그의 생산 또는 정제로부터 발생하는 간섭 단백질 및 다른 오염물질에 대해 전형적으로 적어도 50% w/w 순수하다는 것을 의미하지만, 항체가 그의 사용을 용이하게 하도록 의도된 과량의 제약상 허용되는 담체(들) 또는 다른 비히클과 조합될 가능성을 배제하지 않는다. 때로는 항체는 생산 또는 정제로부터의 간섭 단백질 및 오염물질에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95 또는 99% w/w 순수하다. 단리된 항체를 포함하는 항체는 세포독성제에 접합되고 항체 약물 접합체로서 제공될 수 있다.
"단리된" 폴리뉴클레오티드는 그의 천연 상태의 구성성분으로부터 확인되고 분리되거/거나 회수된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
모노클로날 항체의 그의 표적 항원에 대한 특이적 결합은 적어도 106, 107, 108, 109 또는 1010 M-1의 친화성을 의미한다. 특이적 결합은 크기가 검출가능하게 더 높고, 적어도 하나의 비관련된 표적에 발생하는 비특이적 결합과 구별가능하다. 비특이적 결합은 일반적으로 반데르발스 힘의 결과인 반면, 특이적 결합은 특정한 관능기 또는 특정한 공간적 맞춤 (예를 들어, 자물쇠 및 열쇠 유형) 사이의 결합 형성의 결과일 수 있다. GPC3 지정 항체-약물 접합체 및 항-GPC3 항체는 GPC3에 특이적으로 결합한다.
기본 항체 구조 유닛은 서브유닛의 사량체이다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 쇄를 포함하며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이 가변 영역은 초기에 절단가능한 신호 펩티드에 연결되어 발현된다. 신호 펩티드가 없는 가변 영역은 때로는 성숙 가변 영역이라고 지칭된다. 그러므로, 예를 들어, 경쇄 성숙 가변 영역은 경쇄 신호 펩티드가 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 항체의 이소타입을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 아래첨자 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. (일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7]을 참조하며, 이는 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함됨). 각 경쇄/중쇄 쌍의 성숙 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 그러므로, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 쇄 모두는 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반적인 구조를 나타낸다. 각 쌍의 쇄 2개로부터의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프로의 결합을 가능하게 한다. N-말단으로부터 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘 다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 아미노산의 각 도메인으로의 할당은 카바트(Kabat)의 정의, 면역학적 관심 단백질의 서열 (미국 국립보건원(National Institutes of Health), 미국 메릴랜드주 베데스다, 1987 및 1991), 또는 문헌 [Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; [Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]에 따른다. 카바트는 또한 상이한 중쇄 가변 영역 사이의 또는 상이한 경쇄 가변 영역 사이의 상응하는 잔기가 동일한 수로 할당되는, 광범위하게 사용되는 넘버링 규칙 (카바트 넘버링 시스템)을 제공한다. 중쇄 불변 영역의 넘버링은 카바트 (카바트, 면역학적 관심 단백질의 서열 (미국 국립보건원, 미국 메릴랜드주 베데스다, 1987 및 1991))에 기재된 바와 같은 EU 인덱스를 통한 것이다.
용어 "항체"는 무손상 항체 및 그의 항원 결합 단편을 포함한다. "무손상 항체"는 항원-결합 가변 영역 뿐만 아니라 항체 클래스에 적절하다면 경쇄 불변 도메인 (CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2, CH3 및 CH4를 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 항체 단편은 별도의 중쇄, 경쇄 Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, 디아바디, Dab, 나노바디, 및 Fv를 포함하여 표적으로의 특이적 결합을 위해 유래된 무손상 항체와 경쟁한다. 단편은 재조합 DNA 기술, 또는 무손상 이뮤노글로불린의 효소적 또는 화학적 분리에 의해 생산될 수 있다. 용어 "항체"는 또한 디아바디 (동종이량체성 Fv 단편) 또는 미니바디 (VL-VH-CH3), 이중특이적 항체 등을 포함한다. 이중특이적 또는 이관능성 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다 (예를 들어, 문헌 [Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990)]; [Kostelny et al., J. Immunol., 148:1547-53 (1992)] 참조).
용어 "환자"는 예방적 또는 치료적 치료를 받는 인간 및 다른 포유동물 대상체를 포함한다.
아미노산 치환을 보존적 또는 비보존적 치환으로 분류하기 위해, 아미노산은 하기와 같이 그룹화된다: 그룹 I (소수성 측쇄): met, ala, val, leu, ile; 그룹 II (중성 친수성 측쇄): cys, ser, thr; 그룹 III (산성 측쇄): asp, glu; 그룹 IV (염기성 측쇄): asn, gln, his, lys, arg; 그룹 V (쇄 방향에 영향을 미치는 잔기): gly, pro; 및 그룹 VI (방향족 측쇄): trp, tyr, phe. 보존적 치환은 동일한 클래스의 아미노산 사이의 치환을 포함한다. 비보존적 치환은 이들 클래스 중 하나의 구성원을 또 다른 클래스의 구성원으로 교환하는 것을 구성한다.
서열 동일성 백분율은 카바트 넘버링 규칙에 의해 최대로 정렬된 항체 서열로 결정된다. 정렬 후, 대상 항체 영역 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 전체 성숙 가변 영역)이 참고 항체의 동일한 영역과 비교되는 경우, 대상 및 참고 항체 영역 사이의 서열 동일성 백분율은 대상 및 참고 항체 영역 둘 다에서 동일한 아미노산에 의해 점유된 위치의 수를 2개의 영역의 정렬된 총 위치 수로 나누고, 캡은 계수되지 않으며, 100을 곱하여 백분율로 전환된 것이다.
하나 이상의 인용된 요소를 "포함하는" 조성물 또는 방법은 구체적으로 인용되지 않은 다른 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체를 포함하는 조성물은 항체를 단독으로 또는 다른 성분과 조합하여 함유할 수 있다.
용어 "치료 유효량" 또는 "유효량"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 항체-약물 접합체의 양을 지칭한다. 암의 경우, 접합체의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고/거나; 종양 크기를 감소시키고/거나; 말초 장기로의 암 세포 침윤을 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 둔화 및 바람직하게는 정지); 종양 전이를 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 둔화 및 바람직하게는 정지); 종양 성장을 억제하고/거나; 암과 연관된 하나 이상의 증상을 완화시킬 수 있다. 암 요법의 경우, 효능은, 예를 들어, 질환 진행까지의 시간 (TTP)의 평가 및/또는 반응률 (RR)의 결정에 의해 측정될 수 있다. 용어 "유효한 레지멘"은 투여될 접합체의 양 및 장애 치료를 달성하기에 적절한 투여량 빈도의 조합을 지칭한다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 문맥상 달리 명시되지 않는 한, 치료적 치료를 지칭하며, 여기서 목적은 원치않는 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 발생 또는 확산을 억제하거나 둔화 (약화)시키는 것이다. 유익한 또는 원하는 임상 결과는 증상의 경감, 질환 정도의 감소, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 검출가능 또는 검출불가능 여부에 관계없이 관해 (부분 또는 완전)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우에 예상되는 생존과 비교하여 생존 연장을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 대상체는 검출가능한 질환을 갖는 대상체를 포함한다. 치료를 필요로 하는 대상체는 또한 검출불가능한 질환을 갖는 대상체, 예를 들어, GPC3 발현 장애에 대한 치료 후 완전 반응을 달성했지만 재발을 방지하기 위해 요법을 필요로 하는 환자를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "화합물"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 명시적으로 언급되거나 언급되지 않은 구조에 의해 명명되거나 표시된 화학적 화합물 자체 및, 문맥상 이러한 염 형태가 배제되어야 함이 명백하지 않는 한, 그의 염 형태(들)를 지칭하고 포괄한다. 화합물 염은 쯔비터이온성 염 형태, 및 유기 반대이온 또는 무기 반대이온을 갖는 산 부가 및 염기 부가 염 형태, 및 동일하거나 상이할 수 있는 2개 이상의 반대이온을 포함하는 염 형태를 포함한다. 일부 측면에서, 염 형태는 화합물의 제약상 허용되는 염 형태이다. 용어 "화합물"은 화합물의 용매화물 형태를 추가로 포괄하며, 여기서 화합물의 카르보닐 기가 수화되어 겜-디올을 형성할 때와 같이, 용매는 화합물과 비공유결합으로 회합되거나 화합물과 가역적으로 공유결합으로 회합된다. 용매화물 형태는 화합물 자체 및 그의 염 형태(들)를 포함하며, 수화물을 포함하는 반용매화물, 일용매화물, 이용매화물을 포함하며; 화합물이 2개 이상의 용매 분자와 회합될 수 있는 경우, 2개 이상의 용매 분자는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 상기 형태, 예를 들어, 염 및 용매화물에 대한 명백한 언급을 포함할 것이며, 이는 화합물의 임의의 고체 상태 형태를 암시하지 않지만; 이러한 언급은 단지 강조를 위한 것이며, 상기 확인된 바와 같은 임의의 다른 형태를 배제하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 또한, 화합물의 염 및/또는 용매화물 형태 또는 항체 약물 접합체 조성물에 대한 명백한 언급이 이루어지지 않는 경우, 그 생략은 이러한 염 및/또는 용매화물 형태가 배제되어야 한다는 것이 문맥상 명백하지 않다면, 화합물 또는 접합체의 염 및/또는 용매화물 형태(들)를 배제하는 것으로 해석되어서는 안된다.
문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "모이어티"는 분자 또는 화합물의 특정 세그먼트, 단편 또는 관능기를 의미한다. 화학적 모이어티는 때로는 분자, 화합물 또는 화학식에 내재되거나 첨부된 화학적 실체 (즉, 치환기 또는 가변 기)로서 표시된다.
문맥상 달리 나타내거나 암시되지 않는 한, 본원에 기재된 임의의 치환기 기 또는 모이어티에 대해, 주어진 범위의 탄소 원자에 의해 명명된 범위는 임의의 개별 수의 탄소 원자가 기재됨을 의미한다. 그러므로, 예를 들어, "임의로 치환된 C1-C4 알킬" 또는 "임의로 치환된 C2-C6 알케닐"에 대한 언급은 구체적으로 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환된 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 알킬 모이어티가 존재함, 또는 본원에 정의된 바와 같이 임의로 치환된 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 알케닐 모이어티가 존재함을 각각 의미한다. 이러한 모든 수적 명칭은 모든 개별 탄소 원자 기를 개시하도록 분명히 의도되고; 그러므로 "임의로 치환된 C1-C4 알킬"은 치환 또는 비치환 여부에 관계없이 모든 위치 이성질체를 포함하는 메틸, 에틸, 3-탄소 알킬, 및 4-탄소 알킬을 포함한다. 그러므로, 알킬 모이어티가 치환된 경우, 수적 명칭은 비치환된 염기 모이어티를 지칭하고, 해당 염기 모이어티의 치환기에 존재할 수 있는 염기 모이어티에 직접 부착되지 않은 탄소 원자를 포함하는 것으로 의도되지 않는다. 주어진 범위의 탄소 원자에 의해 확인되는 본원에 정의된 바와 같은 에스테르, 카르보네이트, 카르바메이트 및 우레아에 대해, 명명된 범위는 각각의 관능기의 카르보닐 탄소를 포함한다. 그러므로, C1 에스테르는 포르메이트 에스테르를 지칭하고, C2 에스테르는 아세테이트 에스테르를 지칭한다.
본원에 기재된 유기 치환기, 모이어티 및 기 (및 본원에 기재된 다른 임의의 다른 모이어티에 대해)는 이러한 불안정한 모이어티가 본원에 기재된 하나 이상의 용도를 위해 충분한 화학적 안정성을 갖는 화합물을 제조하기 위해 사용될 수 있는 일시적 종인 경우를 제외하고는 불안정한 모이어티를 일반적으로 배제할 것이다. 5가 탄소를 갖는 것을 초래하는 본원에 제공된 정의의 조작에 의한 치환기, 모이어티 또는 기가 구체적으로 배제된다.
그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로 본원에 사용된 용어 "알킬"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 메틸 또는 인접 탄소 원자의 집합을 지칭하며, 이 중 하나는 1가이며, 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 포화되고 (즉, 하나 이상의 sp3 탄소로 구성됨), 정상, 2급, 3급 또는 시클릭 배열, 즉, 선형, 분지형, 시클릭 배열 또는 이들의 일부 조합으로 공유결합으로 함께 연결된다. 인접 포화된 탄소 원자가 시클릭 배열인 경우, 이러한 알킬 모이어티는 일부 측면에서 카보시클릴이라고 지칭된다.
알킬 모이어티를 알킬 치환기로서 지칭하는 경우, 마쿠쉬 구조 또는 그와 회합된 또 다른 유기 모이어티에 대한 알킬 치환기는 메틸 또는 알킬 치환기의 sp3 탄소를 통해 구조 또는 모이어티에 공유결합으로 부착된 인접 탄소 원자의 쇄이다. 그러므로, 본원에 사용된 바와 같은 알킬 치환기는 적어도 하나의 포화된 모이어티를 함유하고, 불포화된 알킬 모이어티를 정의하기 위해 하나 이상의 독립적으로 선택된 이중 결합 및/또는 삼중 결합을 추가로 함유할 수 있고, 또한 본원에 기재된 바와 같은 적절한 임의의 치환기(들)를 포함하는 1 내지 4, 전형적으로 1 내지 3, 또는 1 또는 2개의 다른 모이어티에 의해 치환될 수 있다. 포화된 알킬 모이어티에서 탄소 원자의 수는 달라질 수 있고, 전형적으로 1-8, 1-6 또는 1-4개이고, 불포화된 알킬 모이어티에서 전형적으로 3-8, 3-6 또는 3-4개 사이에서 달라진다.
문맥상 달리 명시되거나 암시되지 않는 한, 용어 "알킬"은 포화된 비시클릭 탄화수소 라디칼을 나타낼 것이며, 여기서 탄화수소 라디칼은 "C1-C6 알킬" 또는 "C1-C6 알킬"과 같은 용어가 1개의 포화된 탄소 원자 (즉, 메틸) 또는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 인접 비시클릭 포화된 탄소 원자를 함유하는 알킬 모이어티 또는 기를 의미하도록 공유결합으로 연결된 포화된 표시된 수의 탄소 원자를 가지며, "C1-C8 알킬"은 1개의 포화된 탄소 원자 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 인접 포화된 비시클릭 탄소 원자를 갖는 알킬 모이어티 또는 기를 지칭한다.
포화된 알킬 치환기, 모이어티 또는 기가 명시되는 경우, 종은 모 알칸으로부터 수소 원자를 제거하여 유래된 것 (즉, 알킬 모이어티가 1가임)을 포함하고, 메틸, 에틸, 1-프로필 (n-프로필), 2-프로필 (이소-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-부틸), 2-메틸-1-프로필 (이소-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (sec-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-부틸, -C(CH3)3), 아밀, 이소아밀, sec-아밀 및 다른 선형 및 분지 쇄 알킬 모이어티를 포함할 수 있다.
그 자체로 또는 또 다른 용어의 일부로 본원에 사용된 용어 "알킬렌"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 치환된 또는 비치환된 포화된 분지쇄 또는 직쇄 탄화수소 디라디칼을 지칭하며, 여기서 하나 이상의 탄소 원자는 포화되고 (즉, 하나 이상의 sp3 탄소로 구성됨), 언급된 수의 탄소 원자는 1 내지 8, 1 또는 6, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 범위이고 2개의 라디칼 중심 (즉, 2가)을 갖는다. 이들 라디칼 중심은 디라디칼을 형성하기 위해 모 알칸의 동일한 또는 2개의 상이한 포화된 (즉, sp3) 탄소 원자로부터 또는 수소 원자가 그의 포화된 탄소의 또 다른 탄소로부터 또는 알킬 라디칼의 라디칼 탄소로부터 제거된 본원에 기재된 바와 같은 알킬 라디칼로부터 2개의 수소 원자의 제거에 의해 유래가능하다.
알킬렌 모이어티는 제한 없이 메틸렌 (-CH2-), 1,2-에틸렌 (-CH2CH2-), 1,3-프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸렌 (-CH2CH2CH2CH2-), 및 유사 디라디칼에 의해 예시된다. 전형적으로, 알킬렌은 sp3 탄소만을 함유하는 (즉, 라디칼 탄소 원자에도 불구하고 완전히 포화된) 분지쇄 또는 직쇄 탄화수소이며, 일부 측면에서 비치환된다. 다른 측면에서, 알킬렌은 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합 관능기, 전형적으로 1 또는 2개, 보다 전형적으로 1개의 이러한 관능기의 형태로 불포화(들)의 내부 부위를 함유하여, 불포화된 알킬렌 모이어티의 말단 탄소는 1가 sp3 탄소 원자이다. 또 다른 측면에서, 알킬렌은 비치환되거나, 또는 임의의 치환기에 대해 본원에 정의된 바와 같은 1 내지 4, 전형적으로 1 내지 3, 또는 1 또는 2개의 치환기로 치환된다.
본원에 사용된 바와 같은 "임의로 치환된 알킬" 또는 "임의로 치환된 페닐"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 또는 페닐 치환기, 모이어티 또는 기를 지칭하며, 여기서 치환기, 모이어티 또는 기의 수소 원자(들)는 상이한 모이어티(들) 또는 기(들)로 임의로 대체되었고, 시아노, 할로겐, -CX3, 본원에 정의된 바와 같은 N-연결 모이어티 및 O-연결 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된 것들을 포함하며, 여기서 X는 독립적으로 할로겐이다.
전형적으로, 존재하는 임의의 치환기는 -X, -Cl, -OH, -OR' -OC(=O)R', -NH2, -NH(R'), -NR'(R')2, -N(R')3, -CF3, -CN 및 -NO2로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 각각의 X는 독립적으로 할로겐이고, 각각의 R'는 독립적으로 C1-C6 알킬이다.
본원에 사용된 바와 같은 "O-연결 모이어티"는 마쿠쉬 구조에 직접 부착된 산소-함유 유기 모이어티 또는 산소 원자를 통해 회합된 또 다른 모이어티를 지칭한다. O-연결 모이어티는 -OH, 아실옥시 (즉, -OC(=O)Ra, 여기서 Ra는 전형적으로 -H, 임의로 치환된 알킬 또는 임의로 치환된 페닐, 및 에테르 기, 예컨대 C1-C6 알킬옥시이며, 여기서 알킬 모이어티는 포화 또는 불포화됨)를 포함한다. 다른 예시적인 O-연결 치환기는 카르바메이트에 대한 정의에 의해 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은 "N-연결 모이어티"는 마쿠쉬 구조에 직접 부착된 질소-함유 유기 모이어티 또는 그의 질소 원자를 통해 회합된 또 다른 모이어티를 지칭한다. N-연결 모이어티는 -NH2, -NHRa,- N(Ra)2 및 아미드 (즉, -NRaC(=O)Ra)를 포함하며, 여기서 Ra는 전형적으로 -H, 임의로 치환된 C1-C6 알킬 및 임의로 치환된 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 예시적인 N-연결 치환기는 카르바메이트에 대한 정의에 의해 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은 "카르바메이트"는 -O-C(=O)N(Ra)- 또는 -O-C(=O)N(Ra)2로 표시된 카르바메이트 관능기를 함유하는 치환기, 모이어티 또는 기를 의미하며, 여기서 독립적으로 선택된 Ra는 수소, 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고, 예시적인 카르바메이트 치환기인 -O-C(=O)NH(임의로 치환된 알킬) 또는 -O-C(=O)N(임의로 치환된 알킬)2를 포함하며, 여기서 임의로 치환된 알킬은 독립적으로 선택된 임의로 치환된 C1-C6 알킬이다. 카르바메이트가 마쿠쉬 기 (즉, 치환기)로서 사용되는 경우, 카르바메이트 관능기의 단일 결합된 산소 (O-연결) 또는 질소 (N-연결)는 그와 회합된 마쿠쉬 식에 부착된다. 카르바메이트 치환기의 연결은 이 치환기가 언급되는 문맥상 명시적으로 언급되거나 (N- 또는 O-연결) 또는 암시된다. 본원에 기재된 O-연결 카르바메이트는 예시적인 1가 O-연결 모이어티이고, N-연결 카르바메이트는 예시적인 N-연결 모이어티이다.
본원에 사용된 바와 같은 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 의미하고, 전형적으로 -F 또는 -Cl이다.
본원에 사용된 어구 "그의 염"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 화합물 (예를 들어, 약물, 약물 링커 화합물 또는 항체 약물 접합체 화합물)의 염 형태를 지칭한다. 화합물의 염 형태는 하나 이상의 내부 염 형태이고/거나, 또 다른 분자, 예컨대 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대이온의 포접을 포함한다. 화합물의 염 형태의 반대이온은 전형적으로 모 화합물 상의 전하를 안정화시키는 유기 또는 무기 모이어티이다. 화합물의 염 형태는 그의 구조에 하나 또는 하나 초과의 대전된 원자를 갖는다. 다중 대전된 원자가 염 형태의 일부인 경우, 다중 반대이온 및/또는 다중 대전된 반대이온이 존재한다. 따라서, 화합물의 염 형태는 전형적으로 화합물의 비-염 형태 및 하나 이상의 반대이온에 상응하는 하나 이상의 대전된 원자를 갖는다. 일부 측면에서, 화합물의 비-염 형태는 적어도 하나의 아미노 기 또는 다른 염기성 모이어티를 함유하며, 따라서 산의 존재 하에, 염기성 모이어티의 산 부가 염이 수득된다. 다른 측면에서, 화합물의 비-염 형태는 적어도 하나의 카르복실산 기 또는 다른 산성 모이어티를 함유하며, 따라서 염기의 존재 하에, 카르복실레이트 또는 다른 음이온성 모이어티가 수득된다.
화합물 염 형태의 예시적인 반대 음이온 및 반대 양이온은 술페이트, 트리플루오로아세테이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 니트레이트, 바이술페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p 톨루엔술포네이트, 및 파모에이트 (즉, 1,1' 메틸렌 비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
화합물의 염 형태의 선택은 의도된 투여 경로(들)에 따라 다양한 pH 값에서 적절한 수용성, 유동 특징을 사용한 결정화도, 및 가속 조건 하에서 화학적 및 고체-상태 안정성의 결정에 의해 (즉, 40℃ 및 75% 상대 습도에서 저장될 때 분해 또는 고체-상태 변화의 결정을 위해) 취급 및 필요한 저장 수명에 적합한 낮은 흡습성 (즉, 수분 흡수 대 상대 습도)을 포함하는, 약물 제품이 나타내야 하는 특성에 의존적이다.
용어 "제약상 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 승인가능한 것, 또는 동물에서 및 보다 특히 인간에서 사용하기 위해 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정되는 약전에 열거된 것을 의미한다. 용어 "제약상 상용성 성분"은 항체 또는 항체-약물 접합체가 대상체에게 함께 투여되는 제약상 허용되는 희석제, 아주반트, 부형제 또는 비히클을 지칭한다.
"제약상 허용되는 염"은 본원에 기재된 바와 같은 대상체에게 투여하기에 적합한 화합물의 염 형태이며, 일부 측면에서 문헌 [P. H. Stahl and C. G. Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zurich:Wiley-VCH/VHCA, 2002]에 의해 기재된 바와 같은 반대 양이온 또는 반대 음이온을 포함한다.
본 발명의 문맥에서 용매화물은 용매 분자와 배위를 통해 착물을 형성하는 본 발명의 화합물의 형태이다. 수화물은 하나의 특정 형태의 용매화물이며, 여기서 배위는 물과 함께 일어난다. 본 발명의 문맥에서 바람직한 용매화물은 수화물이다.
본원에 사용된 바와 같은 (문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한) "튜부리신 화합물"은 세포독성 또는 세포증식억제성 활성을 갖는 테트라펩티드-기반 튜불린 붕괴제이며, 중심 5-원 질소-함유 헤테로아릴렌 모이어티를 갖는 비-천연 아미노산 잔기 및 N-말단 피페콜산 잔기를 특징으로 하며, 이는 일부 측면에서 4급화된 약물 유닛으로서 항체 약물 접합체에 혼입하는데 사용될 수 있는 3급 아민을 함유한다. 4급화에 적합한 비제한적인 예시적인 튜부리신은 하기 구조를 갖는 것들:
Figure pct00001
또는 그의 염, 특히 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 표시된 질소 원자는 튜부리신 화합물이 4급화된 약물 유닛으로 혼입되는 경우에 4급화 부위이고; 원은 5-원 질소-함유 헤테로아릴렌 모이어티를 나타내며, 여기서 해당 헤테로아릴에 대한 제시된 치환기는 나머지 위치에서 임의로 치환되어 서로 1,3-관계에 있으며; X는 O, S 또는 NR2B이고; R3, R4, R5 및 R6은 독립적으로 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고, R7A는 임의로 치환된 페닐이고; R2B 및 R8A는 독립적으로 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고; Z는 -CH2-, -CH2CH2- 또는 -CH=CH-이고, R2A는 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이거나, 또는 -XR2A는 1가 O-연결 치환기 또는 1가 N-연결 치환기를 나타낸다.
튜부리신 약물의 예시적인 제조 방법 및 구조-활성 관계는 문헌 [Shankar et al. "Synthesis and structure-activity relationship studies of novel tubulysin U analogs-effect on cytotoxicity of structural variations in the tubuvaline fragment" Org. Biomol. Chem. (2013) 11: 2273-2287]; [Xiangming et al. "Recent advances in the synthesis of tubulysins" Mini-Rev. Med. Chem. (2013) 13: 1572-8]; [Shankar et al. "Synthesis and cytotoxic evaluation of diastereomers and N-terminal analogs of Tubulysin-U" Tet. Lett. (2013) 54: 6137-6141]; [Shankar et al. "Total synthesis and cytotoxicity evaluation of an oxazole analogue of Tubulysin U" Synlett (2011) 2011(12): 1673-6]; [Raghavan et al. J. Med. Chem. (2008) 51: 1530-3]; [Balasubramanian, R. et al. "Tubulysin analogs incorporating desmethyl and dimethyl tubuphenylalanine derivatives" Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008) 18: 2996-9]; 및 [Raghavan et al. "Cytotoxic simplified tubulysin analogues" J. Med. Chem. (2008) 51: 1530-3]에 의해 제공된다.
일부 측면에서, 4급화에 적합한 튜부리신은 하기 구조를 갖는 것들:
Figure pct00002
또는 그의 염, 특히 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 R2A는 메틸, 에틸 또는 프로필 또는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 상기 정의된 것이고; 및 R7B는 수소 또는 -OH이다. 다른 측면에서, 4급화에 적합한 튜부리신은 R2A가 -C(=O)CH3이고 R7B가 수소인 상기 구조를 갖는 튜부리신 M, 또는 R2A가 에틸이고 R7B가 수소인 상기 구조를 갖는 튜부리신 화합물이다.
본원에 사용된 바와 같은 (문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한) "4급화된 튜부리신 약물 유닛"은 3급 아민-함유 튜부리신 화합물에 관한 것이며, 여기서 그의 3급 아민 질소는 4급 아민 염으로서 4급화된 약물 유닛 구조에 존재하고, 4급화된 약물 유닛은 항체 약물 접합체의 약물 링커 모이어티로부터 그의 방출시 유리 3급 아민-함유 튜부리신 화합물을 제공한다. 일부 측면에서, 4급화된 튜부리신 약물 유닛 (D+)은 튜부리신 화합물의 C-말단 구성성분의 3급 아민 질소를 적합한 이탈기를 갖는 링커 유닛 전구체와 축합시킴으로써 수득된다. 다른 측면에서, C-말단 구성성분은 먼저 튜부리신 화합물의 나머지로 4급화된 후 부착되어 D+ 유닛을 완성시킨다. 그러므로, 4급화된 튜부리신 약물 유닛을 함유하는 구조는 D+가 형성된 특정한 방법을 암시하지 않으며, 그의 형성에 사용되는 반응물이 3급-아민 함유 약물일 필요는 없지만, 오직 D+가 항체 약물 접합체 화합물로부터 방출되도록 의도된 3급-아민 함유 구조에 혼입되거나 상응할 것을 요구한다.
본원에 사용된 바와 같은 "스트레처 유닛"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 링커 유닛의 숙신산 모이어티 또는 항체에 부착된 그의 가수분해된 형태 및 글루쿠로니드 유닛 사이에 개입하는 항체 약물 접합체의 글루쿠로니드-기반 약물 링커 모이어티에서 링커 유닛의 구성성분을 지칭한다. 대안적으로, 스트레처 유닛은 링커 유닛의 말레이미드 모이어티 및 글루쿠로니드 유닛 사이에 개입하는, 항체 약물 접합체의 제조에 사용될 수 있는 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물에서 링커 유닛의 구성성분을 지칭한다. 스트레처 유닛 (A)는 단일 유닛일 수 있거나, 또는 다중 서브유닛을 함유할 수 있다. 전형적으로, 하나의 별개 유닛은 2 내지 4개의 별개 서브유닛을 갖는다.
일부 측면에서, 스트레처 유닛 또는 그의 제1 서브유닛은 말레이미드 또는 숙신이미드 모이어티의 질소 원자에 부착된 그의 2가 중심 중 하나 및 카르보닐 잔기에 부착된 나머지 하나를 갖는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌 또는 그의 가수분해된 형태로 구성되며, 여기서 때로는 C1-C6 알킬렌의 임의의 치환기는 WO 2013/173337에 기재된 바와 같은 자기-안정화 링커를 제공하기 위한 기본 유닛으로서 존재한다. A가 2개 이상의 별개 서브유닛을 갖는 경우, 제2 서브유닛은 전형적으로 -LP(PEG) 모이어티이며, 여기서 LP는 삼관능성 아민-함유 아미노산 잔기로 구성된 평행 커넥터 유닛이고, PEG는 본원에 정의된 바와 같은 PEG 유닛, 또는 α-아미노산, β-아미노산 또는 다른 아민-함유 산 잔기이다. 어느 경우든, 제2 서브유닛의 아민-함유 산 잔기의 아민 질소 원자는 제1 서브유닛의 카르보닐 잔기에 부착되고, 제2 서브유닛의 카르보닐 잔기의 탄소 원자는 글루쿠로니드-기반 링커 유닛의 글루쿠로니드 유닛에 또는 A의 제3 서브유닛의 아민 질소 원자에 결합되며, 이는 전형적으로 그의 카르보닐 잔기가 글루쿠로니드-기반 링커 유닛의 글루쿠로니드 유닛에 결합된 또 다른 아민-함유 산 잔기이다.
본원에 사용된 용어 "평행 커넥터 유닛"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 항체 약물 접합체의 약물 링커 모이어티의 링커 유닛에서 또는 소수성 약물 유닛을 갖는 약물 링커 화합물의 링커 유닛에서 삼관능성 유기 모이어티이며, 여기서 삼관능기 중 하나는 PEG 유닛에 부착되고 나머지 2개는 링커 유닛 내의 평행 커넥터 (LP) 유닛에 부착되어, PEG 유닛은 그의 소수성을 적어도 부분적으로 마스킹하기 위해 소수성 약물 유닛에 대해 "평행" 방향일 수 있다. LP에 부착된 PEG 유닛은 마스킹을 제공하기 위해 전형적으로 8 내지 24 범위의 반복 수의 에틸렌 글리콜 서브유닛을 함유한다. LP, PEG 및 소수성 약물 유닛은 WO 2015/057699에 추가로 기재되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "글루쿠로니드 유닛"은, 문맥상 달리 언급되거나 암시되지 않는 한, 항체 약물 접합체의 글루쿠로니드-기반 약물 링커 모이어티의 약물 유닛에 부착된 링커 유닛의 절단가능한 구성성분 또는 약물 링커 화합물이고, 아미노 벤질 잔기 및 글리코시드 결합을 통해 이에 결합된 탄수화물 잔기로 구성되며, 여기서 벤질 잔기는 유리 약물로서 약물 유닛의 방출을 위해 해당 글리코시드 결합에서 글리코시다제에 의한 효소적 작용시 자기-희생할 수 있다. 일부 측면에서, 4급화된 약물 유닛, 예컨대 본원에 정의된 바와 같은 4급화된 튜부리신 약물 유닛은 링커 유닛의 나머지에 공유결합으로 부착된 그의 아미노 잔기의 질소 원자를 갖고 글리코시드-결합된 탄수화물 잔기, 예컨대 글루쿠론산 잔기로 치환된 그의 아릴렌 잔기를 갖는 아미노벤질 모이어티의 벤질계 탄소 원자에 공유결합으로 부착되며, 여기서 탄수화물 잔기는 벤질 탄소 원자와 오르토 또는 파라 관계에 있어서, 글리코시다제에 의한 글리코시드 결합의 절단시 벤질 모이어티는 4급화된 약물 유닛을 유리 3급-함유 약물로서 방출하기 위해 자발적 단편화를 겪는다. 다른 측면에서, 카르바메이트 관능기는 벤질계 탄소 원자, 및 카르바메이트 관능기의 1가 산소 원자가 벤질계 탄소 원자에 공유결합으로 부착된 비-4급화된 아민-함유 약물 유닛의 아민 질소 원자 사이에 개입한다. 이러한 측면에서, 카르밤산 관능기를 함유하는 약물 유닛이 방출되며, 이는 유리 아민-함유 약물을 제공하기 위해 CO2의 자발적 손실을 겪는다. 비-4급화된 약물 유닛에 부착된 글루쿠로니드 유닛은 WO 2007/011968에 추가로 기재되어 있으며, 4급화된 약물 유닛에 부착된 글루쿠로니드 유닛은 WO2016/040684에 추가로 기재되어 있다.
문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, 용어 "약"은 언급된 값의 표준 편차 내의 값을 포괄한다.
상세한 설명
I. 일반사항
본 발명은 부분적으로 인간 GPC3으로 표적화된 항체-약물 접합체를 포함하는 항체-약물 접합체가 GPC3+ 발현 세포를 사멸시키는데 특히 효과적이라는 발견에 기반한다. 특히, 높은 친화성 GPC3-1 인간화 항체는 중쇄 가변 영역 수용자 서열로서, 배선 hIGHv1-18 또는 hIGHV1-26-2 및 J 엑손 JH-4, 및 경쇄 가변 영역 수용자 서열의 경우, 배선 hIGKv2-30 및 J 엑손 JK-2를 사용하고 하나 이상의 핵심 부위에서 잔기를 뮤린 항체 또는 뮤린 배선 서열로 역돌연변이시킴으로써 구축될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 중쇄의 경우, 이들 핵심 부위는 위치 H24, H38, H48, H66, H67, H69, H71, H73, H93 및 H94 중 하나 이상을 포함하였다. 경쇄의 경우, 이들 핵심 부위는 위치 L45, L46, L105 및 L106 중 하나 이상을 포함하였다. GPC3-1 인간화 항체는 항체 약물 접합체 (ADC)의 일부로서 약물 전달에 효과적이었다. SGD-6859 튜부리신 M 약물-링커에 접합된 경우, 생성된 hGPC3-1ec 튜부리신 M 접합체 (hGPC3-1ec SGD-6859)는 HCC 세포주의 패널에 대해 매우 활성이었다. hGPC3-1 다음의 "ec" 명칭은 항체가 중쇄의 위치 239에 시스테인 치환을 갖는 것을 나타낸다 (넘버링은 카바트에 기재된 바와 같은 EU 인덱스에 의한 것임).
hGPC3-1ec SGD-6859 ADC는 GPC3-발현 종양, 예컨대 간세포성 암종 (HCC)을 표적으로 할 수 있다. HCC는 일반적으로 화학요법에 내성이 있는 것으로 분류되었다. 이는 HCC 세포에서 약물 유출 수송체의 높은 발현으로 인한 것이다. 이들 형질전환체는 전신 화학요법을 효율적으로 배제한다. 튜부리신 M은 약물 유출 수송체에 대한 불량한 기질이고, 그러므로 HCC-표적화 ADC를 위한 효과적인 약물-링커이다. 또한, 튜부리신 M은 적절한 방관자 활성을 갖기에 충분히 세포 투과성이다.
II. 본 발명의 항체
인간화 항체는 비-인간 "공여자" 항체로부터의 CDR이 인간 "수용자" 항체 서열로 그라프팅된 유전자 조작된 항체이다 (예를 들어, Queen, US 5,530,101 및 5,585,089; Winter, US 5,225,539; Carter, US 6,407,213; Adair, US 5,859,205; 및 Foote, US 6,881,557 참조). 수용자 항체 서열은, 예를 들어, 성숙 인간 항체 서열, 이러한 서열의 복합체, 인간 항체 서열의 컨센서스 서열, 또는 배선 영역 서열일 수 있다.
그러므로, 인간화 항체는 전적으로 또는 실질적으로 비-인간 공여자 항체 및 가변 영역 프레임워크 서열 및 불변 영역으로부터, 존재하는 경우, 전적으로 또는 실질적으로 인간 항체 서열로부터 일부 또는 모든 CDR을 갖는 항체이다. 유사하게, 인간화 중쇄는 전적으로 또는 실질적으로 공여자 항체 중쇄, 및 중쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 중쇄 불변 영역으로부터, 존재하는 경우, 실질적으로 인간 중쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 적어도 1개, 2개 및 대개 모든 3개의 CDR을 갖는다. 유사하게, 인간화 경쇄는 전적으로 또는 실질적으로 공여자 항체 경쇄, 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 경쇄 불변 영역으로부터, 존재하는 경우, 실질적으로 인간 경쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 적어도 1개, 2개 및 대개 모든 3개의 CDR을 갖는다. 나노바디 및 디아바디 이외에, 인간화 항체는 전형적으로 인간화 중쇄 및 인간화 경쇄를 포함한다. 인간화 또는 인간 항체에서 CDR은, 적어도 60%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 상응하는 잔기 (카바트에 의해 정의된 바와 같음)가 각각의 CDR 사이에 동일한 경우에, 비-인간 항체에서 상응하는 CDR로부터 실질적으로 유래하거나 또는 그와 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 또는 인간 항체에서 CDR은, 각각의 CDR에서 3 이하의 보존적 아미노산 치환이 존재하는 경우에 비-인간 항체에서 상응하는 CDR로부터 실질적으로 유래하거나 또는 그와 실질적으로 동일하다. 항체 쇄의 가변 영역 프레임워크 서열 또는 항체 쇄의 불변 영역은 카바트에 의해 정의된 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 상응하는 잔기가 동일한 경우에 각각 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 인간 불변 영역으로부터 실질적으로 유래한다. 본 발명의 일부 인간화 항체에서, 항체의 중쇄 가변 프레임워크 영역에서 적어도 3개 및 최대 9개의 뮤린 GPC3-1 역돌연변이 및 항체의 경쇄 가변 영역에서 최대 4개의 뮤린 GPC3-1 역돌연변이가 존재한다.
인간화 항체는 종종 마우스 항체로부터의 모든 6개의 CDR (바람직하게는 카바트에 의해 정의된 바와 같음)을 혼입하긴 하지만, 이들은 또한 마우스 항체로부터의 모든 CDR (예를 들어, 적어도 3, 4 또는 5개)보다 적은 CDR로 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002]; [Vajdos et al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002]; [Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999]; [Tamura et al., Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000]).
인간 가변 영역 프레임워크 잔기로부터의 특정 아미노산은 CDR 형태 및/또는 항원에 대한 결합에 대한 가능한 영향에 기반하여 치환을 위해 선택될 수 있다. 이러한 가능한 영향에 대한 조사는 특정한 위치에서의 아미노산의 특징의 검사, 또는 특정한 아미노산의 치환 또는 돌연변이유발의 효과의 실험적 관찰의 모델링에 의한 것이다.
본 발명은 인간 GPC3 항원에 대해 지정된 항체를 제공한다. 바람직한 항체는 뮤린 GPC3-1 항체로부터 유래된 키메라 또는 인간화 항체이다. 중쇄 가변 영역에 대한 바람직한 수용자 서열은 배선 hIGHV1-18 또는 hIGHV1-69-2 및 J 엑손 JH4이다. 경쇄 가변 영역에 대해, 바람직한 수용자 서열은 배선 hIGKV2-30 및 J 엑손 JK2이다.
예시적인 항-GPC3 항체는 서열식별번호: 1에 기재된 바와 같은 중쇄 CDR 및 서열식별번호: 2에 기재된 바와 같은 경쇄 CDR을 포함하는 인간화 항체이며, 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 또는 95% 동일성을 갖는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 또는 95% 동일성을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 추가로 갖는다. CDR은 카바트에 의해 정의된 바와 같다. 바람직하게는, 중쇄 가변 도메인 프레임워크의 하기 아미노산 잔기가 유지된다: H24는 V에 의해 점유되고, H38은 Q에 의해 점유되고, H48은 M에 의해 점유되고, H66은 R에 의해 점유되고, H67은 V에 의해 점유되고, H69는 L에 의해 점유되고, H71은 A에 의해 점유되고, H73은 K에 의해 점유되고, H93은 G에 의해 점유되고, H94는 R에 의해 점유되고, 경쇄의 하기 아미노산 잔기가 유지되며: L45는 R에 의해 점유되고, L46은 L에 의해 점유되고, L105는 E에 의해 점유되고, L106은 I에 의해 점유된다.
따라서, 서열식별번호: 1에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2에 기재된 바와 같은 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체가 본원에 제공되며, 단, H24는 V 또는 A에 의해 점유되고, H38은 Q, R 또는 K에 의해 점유되고, H48은 M 또는 I에 의해 점유되고, H66은 R 또는 K에 의해 점유되고, H67은 V 또는 A에 의해 점유되고, H69는 L에 의해 점유되고, H71은 A에 의해 점유되고, H73은 K 또는 T에 의해 점유되고, H93은 G 또는 A에 의해 점유되고, H94는 R에 의해 점유되고, 경쇄의 하기 아미노산 잔기가 존재하며: L45는 R 또는 K에 의해 점유되고, L46은 L 또는 R에 의해 점유되고, L105는 E 또는 V에 의해 점유되고, L106은 I 또는 M에 의해 점유된다.
마우스 GPC3-1 항체의 인간화 형태는 4개의 예시된 인간화 중쇄 성숙 가변 영역 (HA-HD) 및 7개의 예시된 인간화 경쇄 성숙 가변 영역 (LA-LE, LB-Q, LB-V)을 포함한다. 이들 쇄의 순열은 HALA, HALB, HALC, HBLA, HBLB, HBLC, HBLD, HBLE, HBLB-Q, HBLB-V, HCLA, HCLB, HCLC, HDLA, HDLB 및 HDLC를 포함한다. 이들 순열 중에서, HBLE가 바람직하다. HBLE는 서열식별번호: 1에 기재된 중쇄 및 서열식별번호: 2에 기재된 경쇄를 포함한다. 그러나, HBLE 대신에 HALA, HALB, HALC, HBLA, HBLB, HBLC, HBLD, HBLE, HBLB-Q, HBLB-V, HCLA, HCLB, HCLC, HDLA, HDLB 및 HDLC 중 임의의 하나가 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 인간 GPC3에 대한 인간화 GPC3-1 항체의 겉보기 해리 상수 (kd)는 바람직하게는 0.1 nM 내지 10 nM의 범위 내에, 보다 더 바람직하게는 0.1 nM 내지 5 nM의 범위 내에, 훨씬 바람직하게는 1 nM 내지 3 nM, 또는 2 nM 내지 약 3 nM의 범위 내에 있다. 일부 측면에서, 본 발명의 항체는 인간 GPC3에 대한 뮤린 GPC3-1 항체의 겉보기 해리 상수의 0.1 내지 1.5배, 또는 심지어 0.5 내지 2배의 범위 내의 겉보기 해리 상수를 갖는다. 일부 측면에서, 인간화 GPC3-1에 대한 항체의 겉보기 해리 상수 (kd)는 약 2.7이다.
A. 불변 영역의 선택
인간화 GPC3-1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 인간 불변 영역의 적어도 일부에 연결될 수 있다. 불변 영역의 선택은 부분적으로 항체-의존적 세포-매개 세포독성, 항체 의존적 세포성 포식작용 및/또는 보체 의존적 세포독성이 바람직한지 여부에 의존할 수 있다. 예를 들어, 인간 이소타입 IgG1 및 IgG3은 강한 보체-의존적 세포독성을 갖고, 인간 이소타입 IgG2는 약한 보체-의존적 세포독성을 갖고, 인간 IgG4는 보체-의존적 세포독성이 결여되어 있다. 인간 IgG1 및 IgG3은 또한 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개된 이펙터 기능을 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체, 별도의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 아래첨자 도메인이 스페이서를 통해 연결된 단일 쇄 항체로서 발현될 수 있다.
인간 불변 영역은 상이한 개체 사이에 동종이형 변이 및 이소동종이형 변이를 제시하며, 즉, 불변 영역은 상이한 개체에서 하나 이상의 다형성 위치에서 상이할 수 있다. 이소동종이형은 이소동종이형을 인식하는 혈청이 하나 이상의 다른 이소타입의 비-다형성 영역에 결합하는 동종이형과 상이하다.
경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카르복시 말단, 예컨대 중쇄의 C-말단 리신에서 하나 또는 여러 개의 아미노산은 분자의 일부 또는 전부에서 누락되거나 유도될 수 있다. 치환은 불변 영역에서 이펙터 기능, 예컨대 보체-매개 세포독성 또는 ADCC를 감소 또는 증가시키기 위해 (예를 들어, Winter et al., 미국 특허 번호 5,624,821; Tso et al., 미국 특허 번호 5,834,597; 및 문헌 [Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006] 참조), 또는 인간에서 반감기를 연장시키기 위해 (예를 들어, 문헌 [Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004] 참조) 이루어질 수 있다.
불변 영역은 약물-링커의 부위 특이적 접합을 허용하도록 변형될 수 있다. 이러한 기술은 자연 발생 또는 조작된 시스테인 잔기, 디술피드 브릿지, 폴리-히스티딘 서열, 글리코엔지니어링 태그, 및 트랜스글루타미나제 인식 서열의 사용을 포함한다. 박테리아 트랜스글루타미나제를 사용한 부위 특이적 접합을 위한 예시적인 치환은 N297S 또는 N297Q이다. 조작된 시스테인을 사용한 부위 특이적 접합을 위한 예시적인 치환은 S239C (US 20100158909; Fc 영역의 넘버링은 EU 인덱스에 따름)이다. 일부 측면에서, 추가 시스테인 잔기의 존재는 쇄간 디술피드 결합 형성을 허용한다. 이러한 쇄간 디술피드 결합 형성은 입체 장애를 유발하여, 이에 의해 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화성을 감소시킬 수 있다. IgG 불변 영역의 Fc 영역에 또는 이에 근접하여 도입된 시스테인 잔기(들)는 또한 치료제 (즉, 티올 특이적 시약, 예컨대 약물의 말레이미드 유도체를 사용한 세포독성 약물을 커플링시킴)로의 접합 부위로서 작용할 수 있다. 치료제의 존재는 입체 장애를 유발하여, 이에 의해 Fc 영역-FcγR 결합 상호작용의 친화성을 추가로 감소시킨다. 항체 단편은 또한 약물-링커의 부위-특이적 접합을 위해 변형될 수 있으며, 예를 들어, 문헌 [Kim et al., Mol Cancer Ther 2008;7(8)]을 참조한다.
B. 재조합 항체의 발현
인간화 또는 키메라 GPC3-1 항체는 재조합 발현에 의해 생산될 수 있다. 재조합 폴리뉴클레오티드 구축물은 전형적으로 천연-회합된 또는 이종 프로모터 영역을 포함하는 항체 쇄의 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함한다. 바람직하게는, 발현 제어 서열은 진핵생물 숙주 세포형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터에서 진핵생물 프로모터 시스템이다. 벡터가 적절한 숙주에 혼입되면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 높은 수준 발현, 및 교차반응 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건 하에서 유지된다.
포유동물 세포는 이뮤노글로불린 또는 그의 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 세그먼트를 발현시키기에 바람직한 숙주이다. 문헌 [Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)]을 참조한다. 무손상 이종 단백질을 분비할 수 있는 수많은 적합한 숙주 세포주는 관련 기술분야에서 개발되었으며, CHO 세포주 (예를 들어, DG44), 다양한 COS 세포주, HeLa 세포, HEK293 세포, L 세포, 및 Sp2/0 및 NS0를 포함하는 비-항체-생성 골수종을 포함한다. 바람직하게는, 세포는 비-인간이다. 이들 세포에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 기원, 프로모터, 인핸서 (Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)), 및 필요한 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 발현 제어 서열은 내인성 유전자, 사이토메갈로바이러스, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다. 문헌 [Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992)]을 참조한다.
일단 발현되면, 항체는 HPLC 정제, 컬럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 관련 기술분야의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다 (일반적으로, 문헌 [Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)] 참조).
III. 핵산
본 발명은 본원에 기재된 임의의 인간화 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산을 추가로 제공한다. 전형적으로, 핵산은 또한 성숙 중쇄 및 경쇄 가변 영역에 융합된 신호 펩티드를 코딩한다. 핵산 상의 코딩 서열은 코딩 서열, 예컨대 프로모터, 인핸서, 리보솜 결합 부위, 전사 종결 신호 등의 발현을 보장하기 위해 조절 서열과 작동가능하게 연결될 수 있다. 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 발생할 수 있거나, 또는 하나 이상의 벡터로 클로닝될 수 있다. 핵산은, 예를 들어, 중첩 올리고뉴클레오티드의 고체 상태 합성 또는 PCR에 의해 합성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산은 하나의 인접 핵산으로서, 예를 들어 발현 벡터 내에서 연결될 수 있거나, 또는 예를 들어, 그 자신의 발현 벡터로 각각 별도로 클로닝될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 HA, HB, HC 또는 HD에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 예를 들어, 단리된 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 코딩할 수 있다. 이러한 단리된 폴리뉴클레오티드는 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 추가로 코딩할 수 있다. IgG 불변 영역의 이소타입은, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. 한 실시양태에서, IgG 불변 영역의 이소타입은 IgG1이다. 또 다른 실시양태에서, 코딩된 IgG1 불변 영역은 카바트 시스템에 기재된 바와 같은 EU 인덱스에 따라 잔기 239에 치환을 포함하는 아미노산 서열, 즉 S239C를 갖는다. 본 개시내용은 또한 HA, HB, HC 또는 HD에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역 (예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 그의 변이체)을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 추가로 상기 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포, 예를 들어 CHO 세포이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 LA, LB, LC, LD, LE, LB-Q 또는 LB-V에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드. 이러한 단리된 폴리뉴클레오티드는 인간 IgG 경쇄 불변 영역을 추가로 코딩할 수 있다. IgG 경쇄 불변 영역의 이소타입은, 예를 들어, 카파 불변 영역이다. 본 개시내용은 또한 LA, LB, LC, LD, LE, LB-Q, 또는 LB-V에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역 (예를 들어, 서열식별번호: 2 또는 그의 변이체)을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 및 추가로 상기 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포, 예를 들어 CHO 세포이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들을 제공하며, 여기서 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 인간 GPC3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편을 형성한다. 본 개시내용은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 발현 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 숙주 세포는 바람직하게는 포유동물 세포, 예를 들어 CHO 세포이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 및 제2 벡터를 제공하며, 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 인간 GPC3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편을 형성한다. 벡터를 포함하는 숙주 세포, 바람직하게는 포유동물 숙주 세포, 예컨대 CHO 세포가 제공된다.
IV. 항체-약물 접합체
항-GPC3 항체는 세포독성 모이어티 또는 세포증식억제성 모이어티에 접합되어, 항체-약물 접합체 (ADC)를 형성할 수 있다. 항체에 대한 접합에 특히 적합한 모이어티는 세포독성제 (예를 들어, 화학요법제), 전구약물 전환 효소, 방사성 동위원소 또는 화합물, 또는 독소 (이들 모이어티는 집합적으로 치료제라고 지칭됨)이다. 예를 들어, 항-GPC3 항체는 세포독성제, 예컨대 화학요법제, 또는 독소 (예를 들어, 세포증식억제제 또는 세포파괴제, 예컨대, 예를 들어, 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소)에 접합될 수 있다. 세포독성제의 유용한 클래스의 예는, 예를 들어, DNA 마이너 그루브 결합제, DNA 알킬화제, 및 미세소관 붕괴제를 포함한다. 예시적인 세포독성제는, 예를 들어, 튜부리신, 아우리스타틴, 캄프토테신, 칼리케아미신, 듀오카르마이신, 에토포시드, 메이탄시노이드 (예를 들어, DM1, DM2, DM3, DM4), 탁산, 벤조디아제핀 (예를 들어, 피롤로[1,4]벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀, 및 옥사졸리디노벤조디아제핀) 및 빈카 알칼로이드를 포함한다. 예시적인 항체-약물 접합체는 약물 구성성분이 튜부리신 약물임을 의미하는 튜부리신 기반 항체-약물 접합체, 약물 구성성분이 아우리스타틴 약물임을 의미하는 아우리스타틴 기반 항체-약물 접합체, 약물 구성성분이 메이탄시노이드 약물임을 의미하는 메이탄시노이드 항체-약물 접합체, 및 약물 구성성분이 벤조디아제핀 (예를 들어, 피롤로[1,4]벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀, 및 옥사졸리디노벤조디아제핀)임을 의미하는 벤조디아제핀 항체 약물 접합체를 포함한다.
치료제를 항체에 접합시키는 기술은 널리 공지되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Alley et al., Current Opinion in Chemical Biology 2010 14:1-9]; [Senter, Cancer J., 2008, 14(3):154-169] 참조.) 치료제는 항체에서 절단되지 않는 한 (예를 들어, 가수분해에 의해, 단백질가수분해 분해에 의해 또는 절단제에 의해), 그의 활성을 감소시키는 방식으로 접합될 수 있다. 일부 측면에서, 치료제는 GPC3-발현 암 세포의 세포내 환경에서 절단에 민감하지만 세포외 환경에 실질적으로 민감하지 않은 절단가능한 링커를 사용하여 항체에 부착되어, 접합체가 GPC3-발현 암 세포에 의해 내재화는 경우에 항체로부터 절단된다 (예를 들어, 엔도솜 환경에서 또는, 예를 들어 pH 민감도 또는 프로테아제 민감도에 의해, 리소좀 환경에서 또는 소포 환경에서). 일부 측면에서, 치료제는 또한 절단불가능한 링커를 사용하여 항체에 부착될 수 있다.
본 발명자들은 4급화된 튜부리신 약물-링커를 포함하는 GPC3 표적화된 ADC가 특히 링커 유닛이 글루쿠로니드 유닛으로 구성된 경우에 GPC3-발현 장애를 치료하는데 효과적이라는 것을 예상치 못하게 발견하였다.
글루쿠로니드-기반 링커는 프로테아제 절단가능한 링커, 예컨대 발린-시트룰린 및 발린-알라닌에 대해 대안적인 친수성이고, 약물 방출을 개시하기 위해 세포내 베타 글루쿠로니다제를 이용한다. 또한, 위치 239 또는 239/295 또는 294의 시스테인 변이체 (및 이중 시스테인 변이체)는, 글리칸 잔기에 근접한 접합 부위가 소수성 약물을 마스킹하는 역할을 하기 때문에, 소수성 약물, 예컨대 튜부리신 M에 대한 접합에 특히 적합하다. 튜부리신 및 튜부리신에 부착된 글루쿠로니드 링커는 WO2016040684에 더 자세히 기재되어 있다. 한 실시양태에서, GPC 표적화된 ADC는 내재화 후 비변형된 튜부리신 M을 세포로 방출한다.
따라서, 본 발명에 사용하기 위한 4급화된 튜부리신 약물 유닛을 갖는 바람직한 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태의 하기 구조를 가지며:
Figure pct00003
여기서 A는 스트레처 유닛이고; R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일, 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고; R7B는 -H 또는 -OH이다.
보다 바람직한 실시양태에서, 4급화된 튜부리신 약물 유닛은 튜부리신 M과 관련되며, 이는 또한 (αS,γR)-γ-[[[2-[(1R,3R)-1-(아세틸옥시)-4-메틸-3-[메틸[(2S,3S)-3-메틸-2-[[[(2R)-1-메틸-2-피페리디닐]카르보닐]-아미노]-1-옥소펜틸]아미노]펜틸]-4-티아졸릴]카르보닐]아미노]-α-메틸-벤젠펜탄산이라고 공지되어 있고 CAS 번호 936691-46-2를 갖는다. 그러므로, 4급화된 튜부리신 약물 유닛을 갖는 보다 바람직한 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물은 상기 구조를 가지며, 여기서 R2A는 -C(=O)CH3이고 R7B는 수소이다.
따라서, 본 발명에 사용하기 위한 특히 바람직한 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태로 하기와 같다:
Figure pct00004
여기서 표시된 mDPR 모이어티의 아민 질소 원자는 바람직하게는 양성자화되거나, 또는 적합한 산-불안정 보호기, 예컨대 BOC에 의해 보호된다. 다른 특히 바람직한 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물은 튜부발린 N-메틸 치환기를 에틸 또는 n-프로필 치환기로 대체한다.
다른 보다 바람직한 실시양태에서, 4급화된 튜부리신 약물 유닛은 튜부리신 M과 관련되며, 여기서 튜부발린 모이어티의 O-연결 아세테이트 치환기는 O-연결 에틸 에테르 치환기 (즉, R2A는 에틸임)에 의해 대체된다.
따라서, 본 발명에 사용하기 위한 다른 특히 바람직한 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태로 하기와 같다:
Figure pct00005
글루쿠로니드-기반 튜부리신 약물 링커 화합물의 제조는 WO20160404684에 상세히 설명되어 있으며, 구체적으로 본원에 참조로 포함된다. 이러한 제조는 하기 반응식에 의해 예시된다:
Figure pct00006
활성화된 에스테르 mDPR(BOC)-OSu 및 mDPR(BOC)-OPFF로 전환되는 mDPR(Boc)-OH의 제조는 문헌 [Nature Biotech, 2014, 32, 1059-1062]에 기재되어 있으며, 그에 대한 절차는 구체적으로 본원에 참조로 포함되며, 튜부리신 M의 4급화를 위해 브로민화된 글루쿠로니드 중간체의 제조는 문헌 [Molecular Cancer Therapeutics, 2016, 15, 938-945]에 기재되어 있으며, 그에 대한 절차는 구체적으로 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 항체 약물 접합체는 글루쿠로니드-기반 약물 링커 화합물의 상기 실시양태 중 임의의 하나의 구조를 가지며, 여기서 항-GPC3 항체의 위치 239 또는 239/295 또는 294의 시스테인 변이체 잔기는 마이클 첨가를 통해 화합물의 말레이미드 모이어티와 축합되며, 이에 의해 해당 모이어티를 숙신이미드 모이어티로 전환시키며, 이는 그 후 그의 카르보닐 탄소 중 하나에서 가수분해를 겪을 수 있다.
튜부발린 잔기의 아세테이트 기가 해당 질소 원자의 4급화를 통해 튜부리신 Mep 잔기의 3급 아민 질소에 대한 글루쿠로니드 링커의 부착을 갖는 에테르 또는 또 다른 에스테르 기에 의해 대체되고, 약물 링커 화합물, 예컨대 상기 기재된 것들로부터 제조될 수 있는 튜부리신 M 및 그의 유사체의 대표적인 항체 약물 접합체는 임의로 제약상 허용되는 염 형태로 하기와 같이 예시된다:
Figure pct00007
여기서 아래첨자 p는 약물 로딩을 나타내고, 전형적으로 1 내지 4의 범위이고, 일부 측면에서 2 또는 4이고, Ab는 항-GPC3 항체이고, S는 시스테인 239 또는 시스테인 295로부터의 황 원자이다.
항체 또는 융합 단백질은 또한 위치 239 또는 295를 점유하는 시스테인을 통해 검출가능한 마커, 예컨대 효소, 발색단 또는 형광 표지에 접합될 수 있다. 후자의 ADC 구조는 그의 카르보닐 기 중 하나에서 숙신이미드 모이어티의 가수분해에 의해 전자와 관련되며, 일부 실시양태에서 스트레처 유닛 A가 기본 유닛으로 구성되는 경우에 발생한다.
다른 예시적인 GPC3 표적화된 항체 약물 접합체는 임의로 제약상 허용되는 염 형태로 하기에 제시된다:
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
여기서 아래첨자 p는 약물 로딩을 나타내고, 전형적으로 1 내지 4의 범위이고, 일부 측면에서 2 또는 4이고, Ab는 항-GPC3 항체이고, S는 시스테인 239 또는 시스테인 295로부터의 황 원자이다.
약물 또는 표지 항체에 접합될 뿐만 아니라, 또한 항체 결합을 억제하는 억제성 또는 마스킹 도메인에 부착된 절단가능한 링커를 통해 연결될 수 있다 (예를 들어, WO2003/068934, WO2004/009638, WO 2009/025846, WO2101/081173 및 WO2014103973 참조). 링커는 특정 조직 또는 병리에 특이적인 효소에 의해 절단되도록 설계되어, 그러므로 항체가 원하는 위치에서 우선적으로 활성화되는 것을 가능하게 할 수 있다. 마스킹 모이어티는 항체의 결합 부위에 직접적으로 결합하여 작용할 수 있거나, 또는 입체 장애를 통해 간접적으로 작용할 수 있다.
약물 로딩 - "p"
상기 제시된 GPC3 표적화된 항체-약물 접합체를 참조하여, 아래첨자 p는 항체 분자에 대한 약물 로드 (항체 분자에 부착된 약물의 분자의 수)를 나타내며 정수 값이다. 항체-약물 접합체 분자의 집단을 포함하는 조성물에서, 평균 약물 로드 (예를 들어, 집단에서의 항체당 약물-링커 분자의 평균 수)는 표적 세포로 전달될 수 있는 약물의 양을 결정하기 때문에 중요한 품질 속성이다. 평균 약물 로드는 정수 또는 비-정수 값일 수 있지만, 전형적으로 비-정수 값이다. 최적의 평균 약물 로드는 약물 또는 약물-링커 조합의 동일성에 의존하여 달라질 것이다.
일부 측면에서, 항체-약물 접합체 조성물의 이질성은 약물-링커 분자를 항체 분자에 접합시키는데 사용되는 접합 기술에 의존적일 것이다. 예를 들어, 일부 측면에서, 약물-링커 분자를 항체 분자에 접합시키는데 사용되는 접합 기술은 항체 상의 약물-링커 분자의 분포에 대해 및/또는 항체 분자 상의 약물-링커의 수에 대해 이질적인 항체-약물 접합체 조성물을 초래할 것이다 (예를 들어, 비-부위 특이적 기술을 사용하여 쇄간 디술피드를 통해 접합시키는 경우). 다른 측면에서, 약물-링커 분자를 접합시키는데 사용되는 접합 기술은 리간드 분자 상의 약물-링커 분자의 분포에 대해 및/또는 항체 분자 상의 약물-링커 분자의 수에 대해 실질적으로 균질한 항체-약물 접합체 조성물을 초래할 것이다 (예를 들어, 부위 특이적 접합 기술을 사용하는 경우). 부위 특이적 및 비-부위 특이적 방법 둘 다를 사용하면, 전형적으로 또한 작은 백분율의 비접합된 항체 분자가 있을 것이다. 비접합된 항체 분자의 백분율은 평균 약물 로드 값에 포함된다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 조성물을 언급할 때, 평균 약물 로드는 약 2 내지 약 14, 바람직하게는 약 2 내지 약 10이다. 본원에 예시된 튜부리신 M 항체 약물 접합체의 경우, 특히 바람직한 평균 약물 로드는 약 2이다. 일부 측면에서, 항체-약물 접합체 화합물의 집단에서의 개별 항체 분자에 대한 실제 약물 로드는 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2이며, 우세한 약물 로딩은 2이다. 바람직한 측면에서, 약 2의 평균 약물 로드는 부위 특이적 접합 기술을 통해 달성된다 (예를 들어, 항체에 도입된 조작된 시스테인).
본 발명의 일부 다른 측면에서, 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 조성물을 언급할 때, 평균 약물 로드는 약 3 또는 약 4이고, 항체-약물 접합체 화합물의 집단에서의 개별 항체 분자에 대한 실제 약물 로드는 1 내지 8이다.
일부 측면에서, 항체-약물 접합체 화합물의 집단에서의 개별 항체 분자에 대한 실제 약물 로드는 1 내지 10 (또는 6 내지 10, 또는 6 내지 8)이다. 예를 들어, 쇄간 디술피드 이외에 약물-링커가 도입된 시스테인 잔기에 접합되는 경우에 더 높은 약물 로드가 달성될 수 있다 (예컨대, EU 인덱스에 따라 위치 239에 도입된 시스테인 잔기).
V. 치료적 적용
본원에 기재된 GPC3 표적화된 항체-약물 접합체는 GPC3 발현 장애, 예컨대 GPC3 발현 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 전형적으로 이러한 암은 단백질 (예를 들어, 면역검정에 의해) 또는 RNA 수준에서 측정된 GPC3의 검출가능한 수준을 나타낸다. 일부 이러한 암은 바람직하게는 동일한 환자로부터의 동일한 유형의 비암성 조직에 비해 GPC3의 상승된 수준을 나타낸다. 임의로, 암에서 GPC3의 수준은 치료를 수행하기 전에 측정된다.
GPC3 발현과 연관된 암의 예는 간세포성 암종 (HCC) 및 폐 암종을 포함한다 (GPC3은 대략 70%의 HCC 및 20%의 폐 암종에서 발현됨). 다른 암은 윌름스 종양 (신모세포종), 난소 투명 세포 암종, 결장직장 암종 및 육종을 포함한다.
본 발명의 방법은 본 발명의 항체-약물 접합체를 환자에게 투여하는 것을 포함하여 GPC3 발현 암을 갖는 환자를 치료하는 것을 포함한다. 암은, 예를 들어, HCC, 폐 암종, 윌름스 종양, 난소 투명 세포 암종, 결장직장 암종 또는 육종을 포함하는 임의의 GPC3 발현 암일 수 있다.
일부 암 세포는 단백질의 발현의 증가가 치료제의 암 세포 밖으로의 유출을 증가시킨 후 치료제에 대한 내성을 발생시킨다. 이러한 단백질은 P-당단백질, 다약제 내성-연관 단백질, 폐 내성-관련 단백질, 및 유방암 내성 단백질을 포함한다. 암 세포에서 약물 내성의 검출은 통상의 기술자에 의해 수행될 수 있다. 유출 단백질을 검출하는 항체 또는 검정은, 예를 들어, 프로메가(Promega), 밀리포어(Millipore), 압캠(Abcam), 및 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 시판된다. 본 방법에 의해 치료되는 암은 다중-내성 GPC3 발현 암일 수 있다. 일부 측면에서, 암은 다약제 내성의 GPC3+ HCC일 것이다.
GPC3 지정 항체-약물 접합체는 발병을 지연시키고/거나 중증도를 감소시키고/거나 추가 악화를 억제하고/거나 암의 적어도 하나의 징후 또는 증상을 호전시키는 투여량, 투여 경로 및 투여 빈도를 의미하는 유효한 레지멘으로 투여된다.
GPC3 지정 접합체에 대한 예시적인 투여량은 약 1.0 μg/kg 내지 약 10 mg/kg, 1.0 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 1.0 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 약 1.0 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 1.0 mg/kg, 또는 약 1.0 μg/kg 내지 500.0 μg/kg, 또는 약 1.0 μg/kg 내지 80.0, 100.0 또는 200.0 μg/kg을 포함한다.
GPC3 지정 튜부리신 M 접합체에 대한 예시적인 투여량은 일반적으로 약 1.0 μg/kg 내지 1.0 mg/kg, 또는 약 1.0 μg/kg 내지 500.0 μg/kg, 또는 약 1.0 μg/kg 내지 80.0, 100.0 또는 200.0 μg/kg이긴 하지만, 대안 투여량이 고려된다.
투여는 다양한 투여 경로에 의해 수행될 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체는 비경구로, 예컨대 정맥내로, 근육내로 또는 피하로 투여된다. 암 치료를 위한 ADC의 투여를 위해, 전달은 정맥내 또는 피하 투여에 의해 전신 순환으로 수행될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 투여는 정맥내 전달을 통해 수행된다. 정맥내 투여는, 예를 들어, 기간, 예컨대 30-90분에 걸친 주입 또는 단일 볼루스 주사에 의해 수행될 수 있다. 일부 측면에서, 투여는 말초 삽입된 중심 카테터에서 느린 IV 푸쉬 (즉, 30-60초에 걸쳐)를 통해 수행될 것이다.
투여 빈도는 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간 또는 동물인지 여부, 및 투여되는 다른 약물치료에 따라 달라진다. 빈도는 환자의 상태 또는 치료될 암의 진행에서 변화에 반응하여 매일, 매주, 매달, 분기별 또는 불규칙한 간격일 수 있다. 정맥내 투여를 위한 예시적인 빈도는 연속적인 치료 과정에 걸쳐 1주마다 2회 내지 분기별이긴 하지만, 다소 빈번한 투여도 가능하다. 정맥내 투여를 위한 다른 예시적인 빈도는 연속적인 치료 과정에 걸쳐 3주마다 또는 1주마다 1회 내지 1개월마다 1회이긴 하지만, 다소 빈번한 투여도 가능하다. 피하 투여를 위해, 예시적인 투여 빈도는 매일 내지 매달이긴 하지만, 다소 빈번한 투여도 가능하다.
비경구 투여를 위한 제약 조성물은 바람직하게는 멸균 및 실질적으로 등장성이고, GMP 조건하에 제조된다. 제약 조성물은 단위 투여 형태 (즉, 단일 투여를 위한 투여량)로 제공될 수 있다. 제약 조성물은 하나 이상의 생리학상 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 사용하여 제제화될 수 있다. 제형은 선택된 투여 경로에 따라 달라진다. 주사의 경우, 접합체는 수용액, 바람직하게는 생리학상 상용성 완충액, 예컨대 행크 용액, 링거 용액, 또는 생리식염수 또는 아세테이트 완충액으로 제제화될 수 있다 (주사 부위에서 불편함을 감소시키기 위해). 용액은 제형화제, 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체는 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어, 멸균 발열원-무함유 물로 구성하기 위해 동결건조된 형태일 수 있다. 액체 제형 중 접합체의 농도는 광범위하게 다양할 수 있다. 일부 측면에서, ADC는 약 0.5 mg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 0.5 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 1 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 약 2 mg/ml 내지 약 10 mg/ml, 또는 약 2 mg/ml 내지 약 5 mg/ml의 농도로 존재한다.
본 발명의 접합체를 사용한 치료는 화학요법, 방사선, 줄기 세포 치료, 수술, 및 치료될 특정한 장애에 대한 치료 표준을 포함하여 치료될 장애에 대해 효과적인 다른 치료와 조합될 수 있다. 따라서, 본 발명은 단일요법으로서 또는 예를 들어, 이러한 질환 및/또는 장애의 치료를 위한 치료 표준 또는 임상시험용 약물과의 조합 요법으로서 본원에 기재된 질환 및 장애의 치료 방법을 포괄한다. 암 치료 방법은 유효량의 본 발명의 GPC3 지정 항체-약물 접합체를 추가 항암제 또는 암을 치료하기 위한 다른 작용제와 조합하여 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
조합 요법을 위한 일부 작용제는 하기를 포함한다: 소라페닙, 레고라페닙, 니볼루맙, 독소루비신, FEMOX (겜시타빈 및 옥살리플라틴), 독소루빈, 시스플라틴, 카보플라틴, 도세탁셀, 겜시타빈, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 비노렐빈 및 미토마이신 C. 한 실시양태에서, 소라페닙, 레고라페닙, 니볼루맙, 독소루비신, FEMOX (겜시타빈 및 옥살리플라틴), 독소루빈, 시스플라틴, 카보플라틴, 도세탁셀, 겜시타빈, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 비노렐빈 및 미토마이신 C 중 하나 이상은 본 발명의 GPC3 지정 ADC와 조합 요법으로 투여된다.
추가 실시양태에서, 소라페닙, 레고라페닙, 니볼루맙, 독소루비신, FEMOX (겜시타빈 및 옥살리플라틴), 독소루빈, 시스플라틴, 카보플라틴, 도세탁셀, 겜시타빈, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 비노렐빈 및 미토마이신 C 중 하나 이상은 본 발명의 인간화 GPC3-1 ADC와 조합 요법으로 투여된다. 추가 실시양태에서, 소라페닙, 레고라페닙, 니볼루맙, 독소루비신, FEMOX (겜시타빈 및 옥살리플라틴), 독소루빈, 시스플라틴, 카보플라틴, 도세탁셀, 겜시타빈, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 비노렐빈, 및 미토마이신 C 중 하나 이상은 본 발명의 hGPC3-1ec-SGD-6859와 조합 요법으로 투여된다.
본 발명의 임의의 특징, 단계, 요소, 실시양태 또는 측면은 달리 구체적으로 명시되지 않는 한 임의의 다른 것과 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명은 명확성 및 이해를 목적으로 예시 및 예로써 일부 상세하게 설명되었지만, 첨부된 청구항의 범위 내에서 특정 변화 및 변형이 실시될 수 있음이 명백할 것이다.
실시예
하기 실시예에 기재된 세포주를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (ATCC) 또는 독일 브라운슈바이크 소재의 도이체 잠룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH) (DMSZ)에 의해 지정된 조건에 따라, 또는 달리 공지된 바와 같이 배양에서 유지하였다.
방법
항체 선택
아미노산 잔기 375-563을 포함하는 재조합 GPC3으로 마우스를 면역화함으로써 리드 항체인 GPC3-1을 확인하였다 (도 1 참조). GPC3 항체 생산 마우스의 비장 및 림프절로부터 수확된 림프구를 골수종 세포에 융합시켰다. 융합된 세포를 하이브리도마 성장 배지에서 밤새 회수하였다. 회수 후, 세포를 스핀다운시킨 후, 반고체 배지에 플레이팅하였다. 하이브리도마를 인큐베이션하고, IgG 생산 하이브리도마 클론을 골랐다. 이 하이브리도마 캠페인으로부터의 항체를 GPC3 발현 세포주 상에서 ADC로 스크리닝하였다. 여러 에피토프 클래스로부터의 항체는 ADC 활성을 나타내었다. 리드 항체는 그의 우월한 ADC 세포독성, 뿐만 아니라, 쉐딩을 초래할 수 있는 단백질가수분해 절단 부위에 근접한 막인 에피토프를 갖고 있는 것에 기반하여 선택되었다.
경쟁 결합 검정
10만개의 GPC3-양성 세포를 96-웰 플레이트로 옮기고, 3-5 nM 알렉사플루어(AlexaFluor)-488 표지된 mGPC3-1 및 증가하는 농도 (10 pM로부터 2 uM까지)의 비표지된 인간화 또는 뮤린 GPC3-1 mAb와 함께 얼음에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 원심분리하고, PBS로 3회 세척하고, 125 μL의 PBS+2% FBS 용액에 재현탁시켰다. 유동 세포계측기를 사용하여 형광을 분석하고, 포화된 형광 신호의 퍼센트를 사용하여, 표지된 GPC3-1 mAb 결합 퍼센트를 결정하였다. 가변 기울기를 갖는 시그모이드 용량-반응 곡선에 데이터를 피팅함으로써 EC50을 외삽하였다.
포화 결합 검정
10만개의 GPC3-양성 세포를 96-웰 플레이트로 옮겼다. 알렉사플루어-488 표지된 GPC3mAb를 10 pM 내지 5 uM 범위의 농도로 첨가하고, 세포를 얼음 위에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 원심분리에 의해 펠렛화하고, PBS + 1% BSA 용액으로 3회 세척하고, 125 μL의 PBS + 2% FBS에 재현탁시켰다. 유동 세포계측기를 사용하여 형광을 분석하고, 포화된 형광 신호의 퍼센트를 사용하여, 결합 퍼센트를 결정하고, 후속적으로 겉보기 Kd를 계산하였다.
표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 친화성
인간 GPC3 (hGPC3 GP3-H5258)을 아크로바이오시스템스(AcroBiosystems)에서 구입하고, 1.5:1 비오틴/단백질 비의 몰비로 피어스(Pierce) NHS-LC-LC-비오틴을 사용하여 비오틴화하였다. 분석물질로서 hGPC3-1ec를 사용하여 프로브로서 하이 프리시젼 스트렙타비딘 (SAX) 바이오센서스(High Precision Streptavidin (SAX) Biosensors) 및 GPC3을 사용하는 옥텟 레드(Octet Red) 384 시스템 (포르테바이오(ForteBio))에서 바이오층 간섭측정법 (BLI)을 수행하였다. 결합된 hGPC3에 대한 2가 결합은 600초의 회합 및 1800초의 해리에 대해 Х2=0.59 및 R2=0.9998로 2.04E-10M (kdiss 2.3E-5/kon 1.134E5)인 것으로 측정되었으며, 400, 160, 64, 25.6, 10.2, 4.1 및 1.64 nM에서 8개의 농도 포인트에 걸쳐 1:1 비로 피팅하였다. hGPC3-1ec (HBLE)의 결합 친화성 (KD)은 14 nM인 것으로 결정되었다 (도 6).
인간화 항체의 설계
인간화 항체는 뮤린 GPC3-1 항체로부터 유래되었다. 4개의 인간화 중쇄 (HA-HD) 및 7개의 인간화 경쇄 (LA-LE)를 상이한 위치에서 역돌연변이를 혼입하여 제조하였다. 일부 경우에, 역돌연변이는 뮤린 배선과 일치하지만, 다른 경우에는 그렇지 않았다 (체세포 돌연변이를 갖는 경우에서와 같이). 인간화 중쇄 및 경쇄는 쌍형성되었다. 서열 정렬에 대해 도 2-5 및 표 1-5를 참조한다. HA, HB, HC, HD, 및 LA, LB, 및 LC 변이체를 사용한 초기 인간화 후, CDR-L1 (서열식별번호: 13)에서 발견된 잠재적 탈아미드화 모티프 ("NG")를 겨냥하도록 추가 L-쇄 변이체를 개발하였다 (표 5).
표 1: hGPC3-1 가변 중쇄 (vH) 변이체에서 인간화 돌연변이
Figure pct00011
표 2: hGPC3-1 가변 경쇄 (vL) 변이체에서 인간화 돌연변이
Figure pct00012
표 3: hGPC3-1 중쇄 변이체에서 특이적 프레임워크 돌연변이
Figure pct00013
*뮤린 잔기
표 4: hGPC3-1 경쇄 변이체에서 특이적 프레임워크 돌연변이
Figure pct00014
*뮤린 잔기
표 5: hGPC3-1 경쇄 변이체에서 특이적 CDR-L1 탈아미드화 돌연변이
Figure pct00015
항체 약물 접합체의 생산
본원에 기재된 항-GPC3 항체를 사용하여 US 62/465,129 (2017년 2월 28일에 출원됨) 및 US 62/561,151 (2017년 9월 20일)에 기재된 바와 같이 항체 약물 접합체를 제조하였다. IgG1 mAb의 시스테인 돌연변이체의 제조는 일반적으로 US20100158909에 기재되어 있다. 약물-링커 SGD-6859는 항체의 IgG1 쇄의 위치 239에 도입된 시스테인 잔기의 티올 기를 통해 항-GPC3 항체에 접합되었고, 평균 약물 로드는 항체당 약 2개 약물이었다. 239 위치에 시스테인을 갖는 항체는 명칭 ec를 보유한다.
시험관내 세포독성 검정
항체-약물 접합체 (ADC) 처리전 24시간에 세포주를 플레이팅하였다. 세포를 표시된 용량의 ADC로 처리하고, 37℃에서 96시간 동안 인큐베이션하였다. 일부 실험에서, 비-항원 결합 ADC를 음성 대조군으로서 포함시켰다. 제조사의 지침서에 따라 셀타이터글로(CelltiterGlo) (프로메가 코포레이션(Promega Corporation), 미국 위스콘신주 매디슨)를 사용하여 세포주에 대한 세포 생육력을 측정하였다. 세포를 셀타이터글로 시약과 함께 실온에서 25분 동안 인큐베이션하고, 발광을 엔비전(Envision) 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 미국 매사추세츠주 월섬)에서 측정하였다. 비히클-처리 세포 (대조군 = 100%)와 비교하여 생육력의 최대의 절반의 감소를 산출하는데 필요한 화합물의 농도인 IC50으로 결과를 보고하였다.
생체내 활성 연구
피하 HCC 및 폐 암종 모델
누드 마우스를 5x105개 JHH7 또는 2.5x106개 Hep3B 또는 2.5x106개 Huh7 HCC 세포로 피하로 접종하였다. NSG 마우스를 1x106개 NCI-H661 세포로 피하로 접종하였다. 종양 성장을 캘리퍼로 모니터링하고, 평균 종양 부피를 식 (0.5 x [길이 x 폭2])을 사용하여 계산하였다. 평균 종양 부피가 대략 100 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 치료하지 않았거나 또는 단일 용량의 인간화 GPC3-1 ADC로 복강내로 투여하였다. 종양 부피가 대략 400 ㎣에 도달했을 때, 마우스를 안락사시켰다. 모든 동물 절차를 국제 실험 동물 관리 평가 인증 협회(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care)에 의해 승인된 시설에서 동물 실험 윤리 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해 승인된 프로토콜 하에 수행하였다.
S239C 또는 천연 시스테인에 접합 시 SGD-5937 또는 SGD-6859의 말레이미드 및 튜부리신 M 아세테이트 안정성의 생체내 평가
약물-링커 화학의 함수로서 약물 안정성을 이종이식편 모델에서 사용된 균주인 SCID 마우스에서 평가하였다. 천연 시스테인 상에 4-약물/mAb 및 조작된 S239C 상에 2-약물/mAb로 로딩된 MP 글루쿠로니드-튜부리신 M (SGD-6859) 및 mDPR 글루쿠로니드-튜부리신 M (SGD-5937)을 함유하는 인간화 IgG 접합체를 제조하였다. SCID 마우스에게 접합체를 3 mg/kg의 단일 ip 용량으로 투여한 후, 투여 후 4일 및 10일에 말단 출혈을 겪었다. 각 동물로부터의 혈액 샘플을 EDTA 코팅된 에펜도르프 튜브로 원심분리를 사용하여 혈장으로 프로세싱하였다. 2-8℃에서 3시간 동안 항-인간 포획 친화성 수지 (IgSelect, 지이 헬스케어(GE Healthcare))를 사용하여 혈장을 배치 정제하였다. 결합된 샘플을 PBS pH 7.4 (1X) + 0.5 M NaCl을 사용하여 세척하고, 50 mM 글리신, pH 3을 사용하여 용출시켰다. 용출된 샘플을 Tris pH 7.4로 중화시키고, PNGase F (뉴 잉글랜드 바이오랩스 인크(New England BioLabs Inc))를 사용하여 탈당화한 후, 10 mM DTT를 사용하여 환원시켰다. 질량 분석 검출 (워터스(Waters) 제보(Xevo) G2-S QTOF)과 커플링된 역상 UPLC (PLRP 8 um, 애질런트(Agilent))를 사용하여 각 샘플을 분석하였다. 각 샘플의 약물-항체 비 (DAR)는 비-로딩된 및 약물-로딩된 (아세틸화된 및 탈아세틸화된) 항체 피크의 디콘볼루션된 질량으로부터의 총 이온 수의 상대 비를 사용하여 계산하였다. 무손상 약물 (%아세틸화)은 약물 로딩된 경쇄 및 중쇄 종의 총 이온 수를 사용하여 계산하였으며, 42 달톤의 손실에 의해 평가되었다.
결과
실시예 1: 인간화 mAb의 설계 및 시험
hIGHv1-18/hIGHJ4 또는 hIGHV1-69-2/hIGHJ4 중쇄 가변 영역 인간 배선 및 hIGK2-30/hIGKJ2 경쇄 가변 영역 인간 배선을 인간 수용자 서열로서 사용하여 여러 인간화 GPC3-1 항체를 구축하였다. 항체는 마우스 항체 또는 마우스 배선 서열로 역돌연변이되는 아미노산 잔기의 선택에서 상이하였다. HBLE라고 명명된 항체 (서열식별번호: 1에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 (vHB) 및 서열식별번호: 2에 기재된 바와 같은 경쇄 가변 영역 (vLE))는 다른 변이체와 비교하여 그의 (i) 결합 특징 (표 6 및 7 참조), (ii) 약물을 전달하는 능력 및 (iii) 역돌연변이의 수에 기반하여 리드 인간화 GPC3-1 항체로서 선택하였다.
HALA (vHA라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLA라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HALB (vHA라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HALC (vHA라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLC라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLA (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLA라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLB (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLC (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLC라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLD (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLD라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLE (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLE라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLB-Q (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB-Q라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HBLB-V (vHB라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB-V라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HCLA (vHC라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLA라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HCLB (vHC라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HCLC (vHC라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLC라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HDLA (vHD라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLA라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체), HDLB (vHD라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLB라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체) 및 HDLC (vHD라고 명명된 중쇄 가변 영역 및 vLC라고 명명된 경쇄 가변 영역을 갖는 항체)라고 명명된 항체가 HBLE 항체 대신에 본 발명에 사용될 수 있다. vHA, vHB, vHC, vHD, vLA, vLB, vLB-Q, vLB-V, vLC, vLD 및 vLE 서열에 대해 도 2-5를 참조한다.
표 6: hGPC3-1 항체 변이체의 hGPC3 결합
Figure pct00016
표 7: hGPC3-1 탈아미드화 변이체의 hGPC3 결합
Figure pct00017
실시예 2: hGPC3-1ec SGD-6859/SGD-6183의 시험관내 항종양 활성
인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체의 세포독성 활성을 JHH7, Huh7 및 Hep3B를 포함하는 GPC3 발현 HCC 세포주의 패널에 대해 평가하였다. 도 7에 제시된 바와 같이, 인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체는 모든 3개의 세포주에서 활성이었다.
인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체의 세포독성 활성을 NCI-H661 및 NCI-H446을 포함하는 GPC3 발현 폐 암종 세포주의 패널에 대해 평가하였다. 도 8에 제시된 바와 같이, 인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1 SGD-6183 항체-약물 접합체는 세포주 둘 다에서 활성이었다.
실시예 3: HCC 종양에 대한 인간화 GPC3-1ec SGD-6859 또는 GPC3-1(S239C, Q295C) SGD-5937 또는 GPC3-1 SGD-6183의 생체내 항종양 활성
hGPC3-1ec SGD-6859 또는 hGPC3-1ec SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183의 활성을 3개의 피하 HCC 이종이식편 모델, JHH7, Huh7 및 Hep3B에서 시험하였다. 확립된 (~ 100 ㎣) 종양을 보유한 누드 마우스에게 JHH7 모델에 대해 도 9에 도시된 바와 같이 hGPC3-1ecSGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183, Huh7 종양 모델에 대해 도 10에 도시된 바와 같이 hGPC3-1ec SGD-6859 또는 hGPC3-1 SGD-6183, 및 Hep3B 종양 모델에 대해 도 11에 도시된 바와 같이 hGPC3-1ec SGD-6859 또는 hGPC3-1 SGD-6183을 투여하였다. hGPC3-1ec SGD-6859 또는 hGPC3-1ecSGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183을 사용한 치료는 비치료된 것과 비교하여 종양 성장을 감소시켰다. 단일 ADC 투여 후 여러 마우스에서 항구적 퇴행을 수득하였다. hGPC3-1(S239C, Q295C) SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183의 활성을 1개의 피하 폐 암종 이종이식편 모델, NCI-H661에서 시험하였다. 확립된 (~ 100 ㎣) 종양을 보유한 NSG 마우스에게 도 12에 도시된 바와 같은 hGPC3-1(S239C, Q295C) SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183을 투여하였다. hGPC3-1(S239C, Q295C) SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183을 사용한 치료는 비치료된 것과 비교하여 종양 성장을 감소시켰다. 단일 ADC 투여 후 여러 마우스에서 항구적 퇴행을 수득하였다. 데이터는 hGPC3-1ec SGD-6859 또는 hGPC3-1ec SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183이 GPC3 발현 HCC 이종이식편 모델에서 유의한 용량-의존적 항종양 활성을 나타내고, hGPC3-1(S239C, Q295C) SGD-5937 또는 hGPC3-1 SGD-6183이 GPC3 발현 폐 이종이식편 모델에서 유의한 용량-의존적 항종양 활성을 나타냄을 입증하였다.
실시예 4: S239C 또는 천연 시스테인에 접합 시 SGD-5937 또는 SGD-6859의 말레이미드 및 튜부리신 M 아세테이트 안정성의 생체내 평가
튜부리신 M의 탈아세틸화는 그의 효력을 유의하게 감소시킨다. h00ec SGD-6859 또는 h00ec SGD-5937을 S239C에 접합된 DAR 2 ADC로서 제조하였다. h00 SGD-6859 또는 h00 SGD-5937을 천연 시스테인에 접합된 혼합된 평균 DAR 4 ADC로서 제조하였다. SCID 마우스에게 3 mg/kg의 ADC 중 하나를 복강내로 투여하였다. 말레이미드 안정성 및 튜부리신 M 아세테이트 안정성을 PLRP-MS에 의해 0일, 4일 및 10일 포트 용량에서 평가하였다. 천연 시스테인에 접합된 SGD-6859 및 SGD-5937 둘 다는 S239C에 접합된 것과 비교하여 증가된 말레이미드 및 튜부리신 M 불안정성을 나타내었다 (도 13). 이러한 데이터는 S239C로의 접합이 효력에 중요한 튜부리신 M 아세테이트에 대한 보다 안정한 DAR 및 보호를 초래함을 제시한다.
SEQUENCE LISTING <110> Seattle Genetics, Inc. <120> Glypican 3 Antibodies and Conjugates Thereof <130> 4700-00111PC <150> US 62/631,353 <151> 2018-02-15 <160> 29 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region for HB <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain variable region for LE <400> 2 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 3 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain for HB with mutant IgG1 <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Cys Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 4 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain for LE <400> 4 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 5 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant heavy chain constant region <400> 5 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Cys Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 6 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Naturally occurring heavy chain constant region <400> 6 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain constant region <400> 7 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 8 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> murine GPC3-1 antibody heavy chain variable region <400> 8 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> murine GPC3-1 antibody light chain variable region <400> 9 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Leu Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Gly Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Val Met Lys 100 105 110 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-H1 of humanized GPC3-1 <400> 10 Asp Tyr Glu Met His 1 5 <210> 11 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-H2 of humanized GPC3-1 <400> 11 Trp Ile Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln 1 5 10 15 Lys Phe Lys Gly 20 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-H3 of humanized GPC3-1 <400> 12 Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr 1 5 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-L1 of humanized GPC3-1 <400> 13 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln 1 5 10 15 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-L2 of humanized GPC3-1 <400> 14 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of CDR-L3 of humanized GPC3-1 <400> 15 Phe Gln Val Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 16 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvHA <400> 16 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvHC <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvHD <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Tyr Tyr Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLA <400> 19 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 20 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLB <400> 20 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 21 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLB-Q <400> 21 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Gln Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 22 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLB-V <400> 22 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Val Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 23 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLC <400> 23 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Val Met Lys 100 105 110 <210> 24 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GPC3-1 hvLD <400> 24 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Val 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 25 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mu IGHV1-15 <400> 25 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Asp Pro Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Ile Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg <210> 26 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu IGHV1-18/HJ4 vH <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 27 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu IGHV1-69-2/HJ4 vH <400> 27 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Val Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 28 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mu IGKV1-117 <400> 28 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro 100 <210> 29 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu IGKV2-30/KJ2 vL <400> 29 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Thr His Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (59)

  1. 인간 글리피칸-3 (GPC3) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체로서, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열식별번호: 2의 3개의 경쇄 CDR을 포함하며, 여기서 CDR은 카바트(Kabat)에 의해 정의된 바와 같은 것인 항체.
  2. 제1항에 있어서, 인간화, 키메라 또는 베니어링된 항체인 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열식별번호: 1과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 성숙 중쇄 영역 및 서열식별번호: 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 1과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체인 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 성숙 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 1과 적어도 95% 서열 동일성을 갖고, 성숙 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 2와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 것인 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, H24가 V 또는 A에 의해 점유되고, H38이 Q, R 또는 K에 의해 점유되고, H48이 M 또는 I에 의해 점유되고, H66이 R 또는 K에 의해 점유되고, H67이 V 또는 A에 의해 점유되고, H69가 L에 의해 점유되고, H71이 A에 의해 점유되고, H73이 K 또는 T에 의해 점유되고, H93이 G 또는 A에 의해 점유되고, H94가 R에 의해 점유되고, 경쇄의 하기 아미노산 잔기가 존재하며: L45가 R 또는 K에 의해 점유되고, L46이 L 또는 R에 의해 점유되고, L105가 E 또는 V에 의해 점유되고, L106이 I 또는 M에 의해 점유되고; 넘버링이 카바트 넘버링 시스템을 통한 것인 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 가변 영역 프레임워크 위치가 명시된 바와 같이 점유되며: H24가 V에 의해 점유되고, H38이 Q에 의해 점유되고, H48이 M에 의해 점유되고, H66이 R에 의해 점유되고, H67이 V에 의해 점유되고, H69가 L에 의해 점유되고, H71이 A에 의해 점유되고, H73이 K에 의해 점유되고, H93이 G에 의해 점유되고, H94가 R에 의해 점유되고; 넘버링이 카바트 넘버링 시스템을 통한 것인 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 가변 영역 프레임워크 위치가 명시된 바와 같이 점유되며: L45가 R에 의해 점유되고, L46이 L에 의해 점유되고, L105가 E에 의해 점유되고, L106이 I에 의해 점유되고; 넘버링이 카바트 넘버링 시스템을 통한 것인 항체.
  9. 제1항에 있어서, HALA, HALB, HALC, HBLA, HBLB, HBLC, HBLD, HBLE, HBLB-Q, HBLB-V, HCLA, HCLB, HCLC, HDLA, HDLB 및 HDLC인 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 성숙 중쇄 가변 영역이 중쇄 불변 영역에 융합되고, 성숙 경쇄 가변 영역이 경쇄 불변 영역에 융합되는 것인 항체.
  11. 제10항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 천연 인간 불변 영역에 비해 Fc 감마 수용체에 대한 감소된 결합을 갖는 천연 인간 불변 영역의 돌연변이체 형태인 항체.
  12. 제10항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 IgG1 이소타입의 것인 항체.
  13. 제10항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6을 포함하는 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 불변 영역이 서열식별번호: 7을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 것인 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 세포독성제 또는 세포증식억제제에 접합되는 것인 항체.
  15. 제14항에 있어서, 접합된 세포독성제가 튜부리신인 항체.
  16. 제14항에 있어서, 접합된 세포독성제가 하기 구조를 갖는 접합된 튜부리신인 항체:
    Figure pct00018

    여기서 접합된 튜부리신은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태, 또는 그의 용매화물이고, 여기서 파상선은 튜부리신이 항체에 접합된 부위를 나타내고;
    R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고;
    R7B는 -H 또는 -OH이다.
  17. 제14항에 있어서, 접합된 세포독성제가 하기 구조를 갖는 접합된 튜부리신인 항체:
    Figure pct00019

    여기서 접합된 튜부리신은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태, 또는 그의 용매화물이고, 여기서 파상선은 튜부리신이 항체에 접합된 부위를 나타낸다.
  18. 제14항에 있어서, 접합된 세포독성제가 하기 구조를 갖는 접합된 튜부리신인 항체:
    Figure pct00020

    여기서 접합된 튜부리신은 염 형태, 특히 제약상 허용되는 염 형태, 또는 그의 용매화물이고, 여기서 파상선은 튜부리신이 항체에 접합된 부위를 나타낸다.
  19. 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물:
    Figure pct00021

    여기서
    A는 스트레처 유닛이고;
    R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일, 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고;
    R7B는 -H 또는 -OH이고;
    Ab는 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항체이고;
    S는 항체로부터의 황 원자이고;
    아래첨자 p는 1 내지 4의 정수이다.
  20. 제19항에 있어서, 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물.
    Figure pct00022
  21. 제19항에 있어서, 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물.
    Figure pct00023
  22. 제19항에 있어서, 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물.
    Figure pct00024
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, Ab에 대한 부착이 Ab의 조작된 시스테인 잔기의 황 원자를 통한 것인 항체-약물 접합체 화합물.
  24. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, Ab에 대한 부착이 EU 넘버링 인덱스 시스템에 따라 중쇄 불변 영역의 위치 239에서 황 원자 또는 조작된 시스테인 잔기를 통한 것인 항체-약물 접합체 화합물.
  25. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, p가 2인 항체-약물 접합체 화합물.
  26. 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 항체-약물 접합체 조성물:
    Figure pct00025

    여기서
    A는 스트레처 유닛이고;
    R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일, 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고;
    R7B는 -H 또는 -OH이고;
    Ab는 제1항에 기재된 바와 같은 항체이고;
    S는 항체로부터의 황 원자이고;
    아래첨자 p는 각 항체 약물 접합체 화합물에 대해 1 내지 4의 정수이고; 조성물의 평균 약물 로딩은 약 2이고,
    아래첨자 p는 1 내지 4의 정수이고; 조성물의 평균 약물 로드는 약 2이다.
  27. 제26항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 항체-약물 접합체 조성물.
    Figure pct00026
  28. 제26항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 것인 항체-약물 접합체 조성물.
    Figure pct00027
  29. 제26항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 항체-약물 접합체 조성물.
    Figure pct00028
  30. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, Ab에 대한 부착이 Ab의 조작된 시스테인 잔기의 황 원자를 통한 것인 항체-약물 접합체 조성물.
  31. 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, Ab에 대한 부착이 EU 넘버링 인덱스 시스템에 따라 중쇄 불변 영역의 위치 239에서 황 원자 또는 조작된 시스테인 잔기를 통한 것인 항체-약물 접합체 조성물.
  32. GPC3 발현 암을 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항의 조성물의 유효한 레지멘을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 암이 간세포성 암종 (HCC), 폐 암종, 윌름스 종양 (신모세포종), 난소 투명 세포 암종, 결장직장 암종 또는 육종인 방법.
  34. 제32항에 있어서, 암이 HCC인 방법.
  35. 자가면역 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 조성물의 유효한 레지멘을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체; 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  37. 제1항에 있어서, 3개의 중쇄 CDR이 서열식별번호: 10, 11 및 12에 기재된 바와 같고, 3개의 경쇄 CDR이 서열식별번호: 13, 14 및 15에 기재된 바와 같은 것인 항체.
  38. 인간 GPC3 단백질에 특이적으로 결합하는 항체로서, 서열식별번호: 10, 11 및 12에 기재된 바와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 서열식별번호: 13, 14 및 15에 기재된 바와 같은 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 항체.
  39. 서열식별번호: 10, 11 및 12에 기재된 바와 같은 3개의 중쇄 CDR 및 서열식별번호: 13, 14 및 15에 기재된 바와 같은 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  40. 제39항에 있어서, 서열식별번호: 1에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 2에 기재된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 성숙 중쇄 영역을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  41. 제39항 또는 제40항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 벡터.
  42. 제41항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  43. 제42항에 있어서, 숙주 세포가 CHO 세포인 숙주 세포.
  44. 항-GPC3 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서,
    a) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건 하에 제42항의 숙주 세포를 배앙하는 단계; 및
    b) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 단리하는 단계
    를 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 숙주 세포가 CHO 세포인 방법.
  46. 항-GPC3 항체 약물 접합체를 제조하는 방법으로서,
    a) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건 하에 제42항의 숙주 세포를 배앙하는 단계;
    b) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 단리하는 단계; 및
    c) 세포독성제를 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 접합시키는 단계
    를 포함하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 숙주 세포가 CHO 세포인 방법.
  48. 제46항에 있어서, 세포독성제가 튜부리신인 방법.
  49. GPC3 발현 암을 갖는 환자를 치료하는 방법으로서 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 조성물의 유효한 레지멘을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법:
    Figure pct00029

    여기서
    A는 스트레처 유닛이고;
    R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일, 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고;
    R7B는 -H 또는 -OH이고;
    Ab는 제1항에 기재된 바와 같은 항체이고;
    S는 항체로부터의 황 원자이고;
    아래첨자 p는 각 항체 약물 접합체 화합물에 대해 1 내지 4의 정수이고; 조성물의 평균 약물 로딩은 약 2이다.
  50. 제49항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 방법.
    Figure pct00030
  51. 제49항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 것인 방법.
    Figure pct00031
  52. 제49항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 방법.
    Figure pct00032
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 HCC, 폐 암종, 윌름스 종양 (신모세포종), 난소 투명 세포 암종, 결장직장 암종 또는 육종인 방법.
  54. 제53항에 있어서, 암이 HCC인 방법.
  55. 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 제약 조성물:
    Figure pct00033

    여기서
    A는 스트레처 유닛이고;
    R2A는 -C(=O)R2B이며, 여기서 R2B는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 2-메틸-프로프-1-일, 2,2-디메틸-프로프-1-일, 또는 비닐이거나, 또는 R2A는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 프로프-2-엔-1-일 또는 2-메틸-프로프-2-엔-1-일이고;
    R7B는 -H 또는 -OH이고;
    Ab는 서열식별번호: 1의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열식별번호: 2의 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 항체이며, 여기서 CDR은 카바트에 의해 정의된 바와 같고;
    S는 항체로부터의 황 원자이고;
    아래첨자 p는 2이다.
  56. 제55항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 제약 조성물.
    Figure pct00034
  57. 제55항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 것인 제약 조성물.
    Figure pct00035
  58. 제55항에 있어서, 항체-약물 접합체 화합물이 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식 중 하나를 갖는 것인 제약 조성물.
    Figure pct00036
  59. 염 형태, 특히 제약상 염 형태, 또는 그의 용매화물인 하기 화학식을 갖거나, 또는 티오-치환된 숙신이미드가 가수분해된 형태인 하기 화학식을 갖는 항-GPC3 항체-약물 접합체 화합물의 집단을 포함하는 제약 조성물:
    Figure pct00037

    여기서
    Ab는 서열식별번호: 1의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열식별번호: 2의 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 항체이며, 여기서 CDR은 카바트에 의해 정의된 바와 같고;
    S는 항체로부터의 황 원자이고;
    아래첨자 p는 2이다.
KR1020207025196A 2018-02-15 2019-02-15 글리피칸 3 항체 및 그의 접합체 KR20200121317A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862631353P 2018-02-15 2018-02-15
US62/631,353 2018-02-15
PCT/US2019/018182 WO2019161174A1 (en) 2018-02-15 2019-02-15 Glypican 3 antibodies and conjugates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20200121317A true KR20200121317A (ko) 2020-10-23

Family

ID=67620075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207025196A KR20200121317A (ko) 2018-02-15 2019-02-15 글리피칸 3 항체 및 그의 접합체

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11819553B2 (ko)
EP (1) EP3752534A4 (ko)
JP (2) JP7402807B2 (ko)
KR (1) KR20200121317A (ko)
CN (1) CN111712520A (ko)
AR (1) AR114112A1 (ko)
AU (1) AU2019220700A1 (ko)
CA (1) CA3090251A1 (ko)
IL (1) IL276514A (ko)
MX (1) MX2020008030A (ko)
SG (1) SG11202007073SA (ko)
TW (1) TW201938587A (ko)
WO (1) WO2019161174A1 (ko)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3032147A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates with self-stabilizing linkers having improved physiochemical properties
AR114112A1 (es) 2018-02-15 2020-07-22 Seattle Genetics Inc Anticuerpos de glipicano 3 y conjugados de los mismos
EP4132588A1 (en) 2020-04-10 2023-02-15 Seagen Inc. Charge variant linkers
CA3173176A1 (en) * 2020-05-07 2021-11-11 Huiwen WU Anti-tumor associated antigen antibodies and uses thereof
CN112921005B (zh) * 2021-04-14 2023-07-07 中国农业科学院兰州兽医研究所 一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒vp2蛋白单克隆抗体和应用
AU2022283467A1 (en) 2021-05-28 2023-12-07 Seagen Inc. Anthracycline antibody conjugates
WO2023045151A1 (en) * 2021-09-24 2023-03-30 Zhejiang Shimai Pharmaceutical Co., Ltd. Antibodies against gpc3 and uses thereof
US20230381321A1 (en) 2022-03-17 2023-11-30 Seagan Inc., Camptothecin conjugates
WO2023207475A1 (zh) * 2022-04-24 2023-11-02 昱言科技(北京)有限公司 靶向gpc3的单克隆抗体和包含此抗体的抗体药物缀合物
WO2024061305A1 (zh) * 2022-09-22 2024-03-28 上海美雅珂生物技术有限责任公司 Gpc3抗体药物偶联物及其应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7361336B1 (en) 1997-09-18 2008-04-22 Ivan Bergstein Methods of cancer therapy targeted against a cancer stem line
JP4281869B2 (ja) 2001-06-22 2009-06-17 中外製薬株式会社 抗グリピカン３抗体を含む細胞増殖抑制剤
WO2004022597A1 (ja) 2002-09-04 2004-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3の血中可溶化ｎ端ﾍﾟﾌﾟﾁﾄﾞに対する抗体
EP2314317A3 (en) 2004-07-09 2011-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-glypican 3 antibody
JP6005519B2 (ja) * 2009-11-30 2016-10-12 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト 全身性エリテマトーデス（ｓｌｅ）を治療するためのヒト化抗ｉｌ−１０抗体
AR100353A1 (es) * 2014-05-08 2016-09-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Droga de direccionamiento a glipicano 3 (gpc3) que se administra a un paciente que responde a la terapia con drogas de direccionamiento a gpc3
BR112016027222A2 (pt) 2014-05-22 2018-01-30 Genentech Inc anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de um indivíduo com um câncer, de inibição da proliferação de uma célula, de detecção de gpc3 humano e de detecção de um câncer
EP2963057A1 (en) 2014-07-02 2016-01-06 Calypso Biotech SA Antibodies to IL-15
PT3191502T (pt) * 2014-09-11 2021-08-26 Seagen Inc Entrega direcionada de fármacos contendo uma amina terciária
WO2017181109A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Michael Molloy Anti-human vista antibodies and use thereof
US20170326249A1 (en) * 2016-05-10 2017-11-16 Bristol-Myers Squibb Company Antibody-drug conjugate of an anti-glypican-3 antibody and a tubulysin analog, preparation and uses
AR114112A1 (es) 2018-02-15 2020-07-22 Seattle Genetics Inc Anticuerpos de glipicano 3 y conjugados de los mismos

Also Published As

Publication number Publication date
EP3752534A1 (en) 2020-12-23
CA3090251A1 (en) 2019-08-22
AR114112A1 (es) 2020-07-22
US11819553B2 (en) 2023-11-21
CN111712520A (zh) 2020-09-25
US20210361776A1 (en) 2021-11-25
JP2023089195A (ja) 2023-06-27
EP3752534A4 (en) 2021-12-01
WO2019161174A1 (en) 2019-08-22
MX2020008030A (es) 2020-09-10
AU2019220700A1 (en) 2020-09-24
SG11202007073SA (en) 2020-08-28
JP7402807B2 (ja) 2023-12-21
IL276514A (en) 2020-09-30
TW201938587A (zh) 2019-10-01
JP2021513844A (ja) 2021-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11819553B2 (en) Glypican 3 antibodies and conjugates thereof
US20210128742A1 (en) CD123 Antibodies and Conjugates Thereof
US20200289661A1 (en) Cd48 antibodies and conjugates thereof
KR20180021177A (ko) 항-cd123 항체 및 이들의 접합체와 유도체
CA3082160A1 (en) Anti-mesothelin antibody and antibody drug conjugate thereof
AU2016354009B2 (en) Anti-CD22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
CA3082912A1 (en) Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates, combinations, and methods of use thereof
AU2022207454A1 (en) Camptothecine antibody-drug conjugates and methods of use thereof