JP7133551B2 - 抗ａｎｇｐｔｌ８抗体を用いて肥満を処置する方法 - Google Patents

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Description

配列陳述
本出願は配列表を含有し、この配列表はＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されており、これにより、参照によってその全体を組み入れる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１７年１１月１０日に作成され、配列表＿３０ＰＣＴ．ＴＸＴと命名され、サイズは１５８キロバイトである。
本発明は、アンジオポエチン様タンパク質（ＡＮＧＰＴＬ）８に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片、これらの抗体を含む組成物、ならびにその使用方法に関する。
ＡＮＧＰＴＬ８（あるいはＴＤ２６、ＲＩＦＬ、リパシン（Ｌｉｐａｓｉｎ）、Ｃ１９ｏｒｆ８０およびベータトロフィン）は、トリグリセリド（ＴＧ）およびグルコース代謝に関係している新たに認識されたＡＮＧＰＴＬファミリーメンバーである。ＡＮＧＰＴＬ８は主に肝臓および脂肪組織で発現される循環タンパク質である。ＡＮＧＰＴＬ３およびＡＮＧＰＴＬ４と違って、ＡＮＧＰＴＬ８はＣ末端にフィブリノーゲン様ドメインを欠くが、他のＡＮＧＰＴＬファミリーメンバー同様、Ｎ末端コイルドコイルドメインを含有する。系統発生解析によれば、ＡＮＧＰＴＬ８はＡＮＧＰＴＬ３およびＡＮＧＰＴＬ４と共通の先祖を共有していることが明らかにされている（非特許文献１）。
ＡＮＧＰＴＬ８の肝臓過剰発現は高トリグリセリド血症と関連しており、Ａｎｇｐｔｌ８の不活化は血漿ＴＧレベルの低下を引き起こす（非特許文献２；非特許文献３）。ＡＮＧＰＴＬ８が脂質調節に関与しているという合意にもかかわらず、この過程の原因である機構はまだ議論中である。１つの提唱されている機構は、ＡＮＧＰＴＬ８がリポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）活性を抑制し、そのためにトリグリセリド加水分解およびクリアランスが低下するというものである（非特許文献４）。
ＡＮＧＰＴＬ８はマウスではベータ細胞増殖およびベータ細胞集団において役割を果たしているとも報告されており、そこではインスリン抵抗性はインスリン受容体アンタゴニスト、Ｓ９６１により誘導された（非特許文献５）。しかし、それに続く研究により、ＡＮＧＰＴＬ８はベータ細胞機能にもインスリン抵抗性に対するベータ細胞成長応答にも必要ではないことが明らかにされた。さらに、ＡＮＧＰＴＬ８の過剰発現はベータ細胞域を増やさず血糖コントロールを改善もしない（非特許文献６）。
ＡＮＧＰＴＬ８の肝臓過剰発現は高トリグリセリド血症と関連することと、Ａｎｇｐｔｌ８の不活化は血漿トリグリセリドレベルの低下を引き起こすことから、これに限定されないが、ＡＮＧＰＴＬ８の阻害剤またはアンタゴニストは、高トリグリセリド血症のような高レベルのトリグリセリドを一部特徴とする疾患を処置するのに有効だと判明する可能性がある。
Ｚｈａｎｇは、リパシンに対するモノクローナル抗体が、野生型マウスの腹腔内に注射されると、血清トリグリセリドレベルを減少させると報告した（非特許文献７）。しかし、高トリグリセリド血症を含む高レベルのトリグリセリドを特徴とする疾患、または状態を処置するために臨床背景で使用することができるＡＮＧＰＴＬ８に特異的な完全ヒト抗体で、現在まで記載されているものはない。
したがって、高トリグリセリド血症ならびに高トリグリセリドおよび脂質レベルに関連する他の障害または状態を患っている患者を処置するための、本明細書に記載される抗体のようなＡＮＧＰＴＬ８の新規のアンタゴニストの必要性が当技術分野には存在する。
Ｆｕ、Ｚ．ら、（２０１３）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４３０：１１２６～１１３１頁 Ｑｕａｇｌｉａｒｉｎｉ、Ｆ．ら、（２０１２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０９（４８）：１９７５１～１９７５６頁 Ｗａｎｇ、Ｙ．ら、（２０１３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁 Ｚｈａｎｇ、Ｒ．ら、（２０１２）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４２４：７８６～７９２頁 Ｙｉ、Ｐ．ら、（２０１３）、Ｃｅｌｌ １５３：７４７～７５８頁 Ｇｕｓａｒｏｖａ、Ｖ．ら、（２０１４）Ｃｅｌｌ １５９：６９１～６９６頁 Ｚｈａｎｇ、Ｒ．（２０１５）、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ’ｓ ９７ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＯＲ１３－６、Ｍａｒｃｈ ５－８、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ
本発明は、アンジオポエチン様タンパク質８（ＡＮＧＰＴＬ８）に結合する抗体およびその抗原結合断片を提供する。本発明の一態様は、ＡＮＧＰＴＬ８に結合し／と相互作用し、それによりそのような結合および／または相互作用が哺乳動物でのトリグリセリドレベルを低下させるヒト抗体およびその抗原結合断片を提供する。
したがって、第１の態様では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８、特にヒトＡＮＧＰＴＬ８（ジェンバンク受託番号ＮＰ＿０６１１５７．３のアミノ酸２２～１９８＝配列番号３４０のアミノ酸１～１７７）に特異的に結合し、その少なくとも１つの活性を中和し、阻害し、遮断し、抑止し、低減し、または妨害する完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）およびその抗原結合断片を提供する。本発明の抗体またはその抗原結合断片が中和し、阻害し、遮断し、抑止し、低減しまたは妨害することが可能であるＡＮＧＰＴＬ８の活性は、ＡＮＧＰＴＬ８によるＬＰＬ活性の阻害を含むがこれに限定されない。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合し、ＡＮＧＰＴＬ８に関連する少なくとも１つの活性を中和するまたは阻害するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片が以下の特徴：
ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
ｂ）配列番号３３７により定義されるヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域での線形エピトープに特異的に結合する；
ｃ）配列番号３３７により定義されるヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域での線形エピトープに結合しない；
ｄ）配列番号３３８のヒトＡＮＧＰＴＬ３ペプチドのＮ末端コイルドコイル領域にも、配列番号３３９のヒトＡＮＧＰＴＬ４ペプチドのＮ末端コイルドコイル領域にも結合しない；
ｅ）表面プラズモン共鳴により測定した場合、２５℃、約１５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＡＮＧＰＴＬ８に結合し、２５℃、約９０ｐＭ未満のＫＤでサルＡＮＧＰＴＬ８に結合する；
ｆ）約１０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下に投与された場合、哺乳動物においてトリグリセリドレベルを約６８％（最大）低下させる；
ｇ）約５ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ用量で皮下に投与された場合、約７日から２１日の範囲に及ぶ期間、哺乳動物においてトリグリセリドレベルを低下させる；
ｈ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２６６、２７４、２８２、２９０、２９８、３０６、３１４および３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む；
ｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および３２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む；または
ｊ）参照抗体と交差競合し、参照抗体が表１のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかからなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列を含む；
のうちの１つまたはそれ以上を示す。
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ｈＡＮＧＰＴＬ８の標的活性（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８のＬＰＬ阻害活性）に直接関与しているｈＡＮＧＰＴＬ８のエピトープに結合することにより、ｈＡＮＧＰＴＬ８の活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低減するまたは妨害することが可能である。別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、トリグリセリドクリアランスを改善する。
別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ｈＡＮＧＰＴＬ８の標的活性に直接関与していないｈＡＮＧＰＴＬ８のエピトープに結合することにより、ｈＡＮＧＰＴＬ８の活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低減するまたは妨害することが可能であるが、それに結合する抗体または断片は、立体的オーバーラップによりまたは抗体－抗原接触表面とは異なる部位でのアロリスティック効果によりｈＡＮＧＰＴＬ８の標的活性を阻害する、遮断する、抑止する、低減するまたは妨害する場合もある。
別の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原断片は、ｈＡＮＧＰＴＬ８の標的活性（例えば、ＬＰＬ活性を阻害するなど）に直接関与していないｈＡＮＧＰＴＬ８のエピトープに結合する（すなわち、非遮断抗体）が、抗体またはその断片は、抗体もその断片も非存在下でのトリグリセリドレベルの低下と比べて、ｉｎ ｖｉｖｏでのトリグリセリドレベルの低下をもたらす。
一実施形態では、本発明は、配列番号３４０の残基１～３９（配列番号３３７としても示される）でのＮ末端領域内に位置しているエピトープに結合する単離された抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその抗原結合断片を特色とする。
別の実施形態では、本発明は、配列番号３４０の残基１～３９（配列番号３３７としても示される）でのヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域内に位置しているエピトープに結合するが、ｈＡＮＧＰＴＬ３（配列番号３３８）のＮ末端コイルドコイル領域にも、ｈＡＮＧＰＴＬ４（配列番号３３９）のＮ末端コイルドコイル領域にも結合しない単離された抗体または抗体の抗原結合断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号３４０のアミノ酸残基１～３９（配列番号３３７としても示される）により定義されるヒトＡＮＧＰＴＬ８の領域の外側、すなわち、配列番号３４０のアミノ酸残基４０～１７７に位置しているエピトープに結合し、ｈＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性を中和する、阻害する、抑止する、低減するまたは妨害する単離された抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその抗原結合断片を特色とする。
一実施形態では、本発明は、ヒトＡＮＧＰＴＬ８（配列番号３４０のアミノ酸残基１～１７７；ジェンバンク受託番号ＮＰ＿０６１１５７．３のアミノ酸残基２２～１９８も参照）に結合するが、ヒトＡＮＧＰＴＬ３（配列番号３４２のアミノ酸配列、配列番号３４３で示される核酸配列によりコードされる）、またはヒトＡＮＧＰＴＬ４（配列番号３４４のアミノ酸配列、配列番号３４５で示される核酸配列によりコードされる）のような関係するタンパク質とは交差反応しない単離された抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその抗原結合断片を特色とする。
本発明の抗体は完全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）が可能である、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでいてもよく、機能性に影響を及ぼす、例えば、宿主における持続性を増加するまたは残留エフェクター機能を取り除くように改変してもよい（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５～１９３３頁）。ある特定の実施形態では、抗体は二重特異性でもよい。
本発明の例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は本明細書の表１および２に収載されている。表１は、例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を示している。表２は、例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子を示している。
本発明は、表１に収載されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含むＨＣＶＲを含む抗体、もしくはその抗原結合断片を提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含むＬＣＶＲを含む抗体、もしくはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対になった表１に収載されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＶＲとＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体、またはその抗原結合断片も提供する。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２５０、２６６／２５０、２７４／２５０、２８２／２５０、２９０／２５０、３０６／２５０、３１４／３２２、および３３０／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６６／７４、１６２／１７０、１９４／２０２および３１４／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６２／１７０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）表１に示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１つ内に含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；および（ｂ）表１に示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１つ内に含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体または抗原結合断片は
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、３１６および３３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、３１８、および３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、３２０および３３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２および３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、および３２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６および３２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対になった表１に収載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３のアミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態に従えば、本発明は、表１に収載される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれか内に含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は配列番号７２／８０（例えば、Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ）、１６８／１７６（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）、２００／２０８（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４５Ｐ）、および３２０／３２８（例えば、Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２）からなる群から選択される。一実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は配列番号１６８／１７６（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）である。
本発明は、表１に収載される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれか内に含有される６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）のセットを含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号６８－７０－７２－７６－７８－８０（例えば、Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ）；１６４－１６６－１６８－１７２－１７４－１７６（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）；１９６－１９８－２００－２０４－２０６－２０８（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４５Ｐ）；３１６－３１８－３２０－３２４－３２６－３２８（例えば、Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２）からなる群から選択される。一実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号１６４－１６６－１６８－１７２－１７４－１７６（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）である。
関係する実施形態では、本発明は、表１に収載される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれかにより定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含有される６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）のセットを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。例えば、本発明は、配列番号６６／７４（例えば、Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ）、１６２／１７０（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）；１９４／２０２（例えば、Ｈ４Ｈ１５３４５Ｐ）；３１４／３２２（例えば、Ｈ４１５３６７Ｐ２）からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含有されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む抗体またはその抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は当技術分野では周知であり、本明細書で開示される特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するのに使用することが可能である。ＣＤＲの境界を同定するのに使用することが可能な例示的慣行は、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義を含む。一般的に言えば、Ｋａｂａｔ定義は配列可変性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａアプローチの折衷案である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８～９２７２頁（１９８９）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を同定するのに公開のデータベースも利用可能である。
本発明は改変グリコシル化パターンを有する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含む。一部の実施形態では、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を高めるため、望ましくないグリコシル化部位を取り除く改変、またはオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く抗体は有用になる場合がある（Ｓｈｉｅｌｄら、（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３頁参照）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するためにガラクトシル化に改変を加えることが可能である。
本発明は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合断片とＡＮＧＰＴＬ８への特異的結合に関して競合する抗体およびその抗原結合断片も提供し、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ表１に収載されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２５０、２６６／２５０、２７４／２５０、２８２／２５０、２９０／２５０、３０６／２５０、３１４／３２２、および３３０／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体とＡＮＧＰＴＬ８への結合に関して競合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合断片とＡＮＧＰＴＬ８上の同じエピトープに結合する抗体およびその抗原結合断片も提供し、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ表１に収載されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、本発明は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２５０、２６６／２５０、２７４／２５０、２８２／２５０、２９０／２５０、３０６／２５０、３１４／３２２、および３３０／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体とＡＮＧＰＴＬ８上の同じエピトープに結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体は、組換え的に産生されたヒトモノクローナル抗体である。
一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体は、表１に見出されるアミノ酸配列から選択されるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲ配列を有する組換え的に産生されたヒトモノクローナル抗体である。
一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２５０、２６６／２５０、２７４／２５０、２８２／２５０、２９０／２５０、３０６／２５０、３１４／３２２、および３３０／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を有する組換え的に産生されたヒトモノクローナル抗体である。
一実施形態では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８活性を中和する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体またはその断片は以下の特徴：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２６６、２７４、２８２、２９０、２９８、３０６、３１４および３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および３２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、３２０および３３６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６および３２８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、３１６および３３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、３１８、および３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２および３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、および３２６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）配列番号３３７により定義されるヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域に特異的に結合する；ｖｉ）配列番号３３７により定義されるヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域に特異的に結合しない；ｖｉｉ）配列番号３３８のヒトＡＮＧＰＴＬ３ペプチドのＮ末端コイルドコイル領域にも、配列番号３３９のヒトＡＮＧＰＴＬ４ペプチドのＮ末端コイルドコイル領域にも結合しない；ｖｉｉｉ）表面プラズモン共鳴により測定した場合、２５℃、約１５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＡＮＧＰＴＬ８に結合し、２５℃、約９０ｐＭ未満のＫＤでサルＡＮＧＰＴＬ８に結合する；ｉｘ）約１０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下に投与された場合、哺乳動物においてトリグリセリドレベルを約６８％（最大）低下させる；ｘ）約５ｍｇ／ｋｇから約２５ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ用量で皮下に投与された場合、約７日から２１日の範囲に及ぶ期間、哺乳動物においてトリグリセリドレベルを低下させる；ｘｉ）参照抗体と交差競合し、参照抗体が表１のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかからなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列を含む；のうちの１つまたはそれ以上を示す。
第２の態様では、本発明は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその部分をコードする核酸分子も提供する。例えば、本発明は、表１に収載されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し；ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、表１に収載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。
本発明は、ＨＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ＨＣＶＲは３つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）のセットを含み、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットは表１に収載される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれかにより定義される通りである。
本発明は、ＬＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ＬＣＶＲは３つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）のセットを含み、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは表１に収載される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれかにより定義される通りである。
本発明は、ＨＣＶＲとＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子も提供し、ＨＣＶＲは表１に収載されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは表１に収載されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は表２に収載されるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列、および表２に収載されるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれに少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似する配列を含む。本発明の本態様に従ったある特定の実施形態では、核酸分子はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも表１に収載される同じ抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体に由来する。
本発明は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の重または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することができる組換え発現ベクターも提供する。例えば、本発明は、上記核酸分子、すなわち、表１に示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。そのようなベクターが導入されている宿主細胞、ならびに、抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養し、そのようにして産生された抗体および抗体断片を回収することにより抗体またはその部分を産生する方法も本発明の範囲内に含まれる。
一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合しおよび／またはこれに関連する少なくとも１つの活性を阻害する単離された抗体は、表２に見出される核酸配列から選択される核酸配列によりコードされるＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲを有する組換え産生されたヒトモノクローナル抗体である。
一実施形態では、本発明は、ヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合する抗体またはその断片をコードする単離された核酸分子を提供し、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）表１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｂ）表１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む。
一実施形態では、本発明は、ヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸分子を提供し、抗体または抗原結合断片は、表１に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるＨＣＶＲおよび表１に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるＬＣＶＲを含む。
第３の態様では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合する組換えヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、本発明は、表１に見出される抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のいずれかの抗体またはその抗原結合断片から選択されるヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的な少なくとも１つの抗体および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
関係する態様では、本発明は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と第２の治療薬の組合せである組成物を特色とする。一実施形態では、第２の治療薬は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と有利に組み合わされる任意の薬剤である。
一実施形態では、第２の治療薬は、高グリセリド血症のような高グリセリドレベルを特徴とする疾患または状態に患っている患者においてトリグリセリドを低下させるまたは少なくとも１つの症状を低減させることができる薬剤でもよい。
ある特定の実施形態では、第２の治療薬は、本発明の抗体または抗体の抗原結合断片に関連するいかなる起こりうる副作用（複数可）も、そのような副作用（複数可）が万一起こった場合には、相殺するまたは低減する一助となる薬剤でもよい。
第２の治療薬は、小分子薬物、タンパク質／ポリペプチド、抗体、アンチセンス分子、またはｓｉＲＮＡのような核酸分子でもよい。第２の治療薬は合成でも天然に由来するものでもよい。
本発明の抗体および薬学的に許容される組成物は他の組合せ療法で用いることが可能である、すなわち、抗体および薬学的に許容される組成物は、１つまたはそれ以上の他の所望の治療薬または医療処置と同時に、それに先立って、またはそれに続いて投与することが可能であることも認識される。組み合わせレジメンにおいて用いる療法（治療薬または処置）の特定の組合せは、所望の治療薬および／または処置の適合性ならびに達成される所望の治療効果を考慮することになる。用いる療法は同じ障害について所望の効果を達成することができる（例えば、抗体は同じ障害を処置するのに使用される別の薬剤と同時に投与してもよい）、または異なる効果を達成することができる（例えば、任意の有害作用の制御）ことも認識される。本明細書で使用される場合、特定の疾患、または状態を処置するまたは予防するために通常投与される追加の治療薬は、処置を受けている疾患、または状態に適している。
関係する実施形態では、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合断片と、（１）セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンなどのような３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－コエンザイムＡ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）還元酵素阻害剤；（２）コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤；（３）ナイアシン、リポタンパク質異化作用を増加する；（４）フィブレートまたは両親媒性カルボン酸、ＴＧレベル、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルを低下させ、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルを改善する；ならびに（５）２２－ヒドロキシコレステロールのようなコレステロール除去において役割を果たすＬＸＲ転写因子の活性化因子、またはエゼチミブプラスシンバスタチンのような一定の組合せ；胆汁樹脂と一緒のスタチン（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ナイアシンプラススタチン（例えば、ロバスタチンと一緒のナイアシン）の一定の組合せ；またはオメガ－３－脂肪酸エチルエステルのような他の脂質低下薬（例えば、オマコール）との組合せ、のような第２の治療薬の組合せである組成物を特色とする。
さらに、第２の治療薬は、ＡＮＧＰＴＬ８の１つまたはそれ以上の他の阻害剤ならびにＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３）およびプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）のような他の分子の阻害剤が可能であり、これら他の分子は、脂質代謝、特に、コレステロールおよび／またはトリグリセリド恒常性に関与している。これらの分子の阻害剤は、これらの分子に特異的に結合しその活性を遮断する小分子、アンチセンス分子および抗体を含む。
一実施形態では、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を使用して糖尿病（例えば、２型糖尿病）のような疾患を処置する場合、これらの抗体は、現在利用可能である糖尿病についての以下の処置の１つまたはそれ以上と組み合わせて使用することができる。これらは、以下のもの：インスリン、インスリン類似体（下参照）、ビグアナイド（メトホルミン）、スルホニル尿素（例えば、グリブリド、グリピジド）、ＰＰＡＲガンマアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）アゴニスト（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標）（エキセナチド）、ＴＲＵＬＩＣＩＴＹ（商標）（デュラグルチド）、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標）（リラグルチド）、Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標）（リキシセナチド）、Ｔａｎｚｅｕｍ（商標）（アルビグルチド））、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤（例えば、サキサグリプチン（ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、シタグリプチン（ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、およびビルダグリプチン（ＧＡＬＶＵＳ（登録商標））、ナトリウムグルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（商標）（カナグリフロジン）、ＦＯＲＸＩＧＡ（登録商標）（ダパグリフロジン）、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン）、ＳＹＭＬＩＮ（登録商標）（プラムリンチド）、グルカゴン受容体アンタゴニスト（例えば、米国特許第８５４５８４７号に記載されている）、およびグルカゴンアンタゴニストを含む。
ある特定の関係する実施形態では、組成物は、非スルホニル尿素分泌促進物質、速効性（例えば、リスプロ、アスパルト、グルリジン）および持効性（例えば、デテミルインスリン、デグルデクインスリン、またはグラルギンインスリン）を含むインスリン類似体、エキセンディン－４ポリペプチド、ベータ３アドレノセプターアゴニスト、コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤、ＬＤＬ－コレステロールアンタゴニスト、コレステリルエステル輸送タンパク質アンタゴニスト（例えば、トルセトラピブ、アナセトラピブ、ダルセトラピブ、またはエバセトラピブ）、エンドセリン受容体アンタゴニスト、成長ホルモンアンタゴニスト、インスリン感受性改善薬、アミリン模倣物またはアゴニスト、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド－１受容体アゴニスト、メラノコルチン、メラニン凝集ホルモン受容体アゴニスト、ＳＮＲＩ、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）模倣物（例えば、米国特許出願公開第２０１１０００２８４５号および米国特許出願公開第２００８０２６１２３６号参照）、線維芽細胞成長因子受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）アゴニスト（例えば、米国特許出願公開第２０１１０１５０９０１号参照）、アミノグアニジン、およびタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤のようなしかしこれらに限定されない高度糖化最終産物形成の阻害剤からなる群から選択される第２の薬剤を含んでいてもよい。
関係する実施形態では、第２の治療薬は、必要ならば、基礎状態に伴う症状を寛解するおよび／または低減するように、鎮痛剤、Ｃｏｘ－２阻害剤のような非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）を含む抗炎症剤などのような１つまたはそれ以上の他の治療薬でもよい。
第４の態様では、本発明は、それを必要とする患者においてＡＮＧＰＴＬ８に関連する少なくとも１つの活性を中和する、阻害する、遮断する、抑止する、低減するまたは妨害するための方法であって、表１に見出される本発明の抗体のいずれか１つもしくはそれ以上、またはこれらの抗体のいずれか１つもしくはそれ以上を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８に関連する少なくとも１つの活性が低減または減少する、方法を提供する。
一実施形態では、本発明は、本発明の１つまたはそれ以上の抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物、および、場合により、上記の１つまたはそれ以上の追加の治療薬をそれを必要とする対象に投与することを含む治療法を提供する。
第５の態様では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８の高発現および／または活性に一部関連する疾患または状態を処置するための方法であって、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを投与し、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストがＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片であることを含む方法を提供する。一実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片は、表１由来のアミノ酸配列からなる群から選択されるＨＣＶＲおよび表１由来のアミノ酸配列からなる群から選択されるＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、本発明の方法により処置可能である疾患または障害は、ＡＮＧＰＴＬ８活性を除去する、阻害する、低減する、または他の方法で妨害することにより、改善される、寛解する、阻害されるもしくは予防される任意の疾患もしくは状態であり、または抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体処置なしの重症度もしくは発生頻度（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８媒介疾患または障害）と比べた場合、疾患に関連する少なくとも１つの症状は重症度もしくは発生頻度が低減される。本発明の方法により処置可能である疾患または障害の例は、高脂血症、高リポ蛋白血症およびアテローム脂質異常症、糖尿病脂質異常症を含む脂質異常症、ＴＧ＞１０００ｍｇ／ｄＬの重症高トリグリセリド血症および関連急性膵臓炎を含む高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、カイロミクロン血症、複合型脂質異常症（肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病、等）、リポジストロフィー、脂肪萎縮症などのような脂質代謝に関わる疾患または障害を含むがこれらに限定されず、これらの疾患または障害は、例えば、減少したＬＰＬ活性および／またはＬＰＬ欠乏、変化したＡｐｏＣ２、ＡｐｏＥ欠乏、増加したＡｐｏＢ、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の増加した産生および／または減少した除去、ある特定の薬物処置（例えば、グルココルチコイド処置誘発脂質異常症）、任意の遺伝的素因、食事、生活様式などにより引き起こされる。
本発明の方法は、トリグリセリド血症（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ）、高トリグリセリド血症、高脂血症、高リポ蛋白血症、ならびに／またはアテローム性動脈硬化、動脈瘤、高血圧、狭心症、脳卒中、脳血管疾患、うっ血性心不全、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患などのような循環器疾患もしくは障害を含むがこれらに限定されない脂質異常症；急性膵炎；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；糖尿病のような血糖障害；肥満などに関連するまたはから生じる疾患または障害も予防するまたは処置することも可能である。
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその抗原結合断片は、メタボリックシンドローム関連脂質異常症、肥満を処置するため、または体重増加を予防するため、または正常な体重を維持するために使用してもよい。
一実施形態では、本発明は、血中トリグリセリドレベルを低下させるための、または、高血中トリグリセリドレベルに関連するもしくは一部これを特徴とする状態または疾患、もしくはその状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、表１由来のヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的な１つまたはそれ以上の抗体を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、それにより、血中トリグリセリドレベルが低下する、またはその状態または疾患が治療される、またはその状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症が寛解するかもしくは重症度が低減される、方法を提供する。
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその抗原結合断片を単独でまたは第２もしくは第３の治療薬と組み合わせて使用して、高トリグリセリド血症、もしく高トリグリセリド血症に関連する少なくとも１つの症状を処置することができる、または、これを使用して、例えば、高トリグリセリド血症、例えば、家族性高トリグリセリド血症もしくは家族性異常βリポ蛋白血症を発症する遺伝的素因のある患者において、高トリグリセリド血症に罹るリスクのある患者を処置することができる。
他の状態は患者を高レベルのトリグリセリドに罹りやすくする場合がある。例えば、βブロッカー、経口避妊薬、利尿剤、ステロイドのようなある特定の薬物、またはタモキシフェンの使用によりトリグリセリドレベルが上昇する場合があり、したがって、アテローム性動脈硬化、脳卒中、心臓発作、および他の心臓状態のような高レベルのトリグリセリドに関連する状態、もしくは合併症を発症する患者の可能性が高まる場合がある。
さらに、ある特定の他の状態が、肥満、管理不良の糖尿病、甲状腺機能低下症、腎疾患、または飲酒を含む高レベルのトリグリセリドをもたらす場合がある。
一実施形態では、抗体を使用して、高血中トリグリセリドレベルを一部特徴とする疾患もしくは障害の発病を予防する、または、そのような疾患もしくは障害を発症する可能性を妨げる、または、疾患もしくは障害の重症度、もしくは疾患もしくは障害に関連する少なくとも１つの症状を軽減することができる。本発明の抗体は単独で、またはこれに限定されないが、高トリグリセリド血症のような高血中トリグリセリドレベルを一部特徴とする疾患もしくは状態に罹っている患者を処置するための標準治療であることが知られている他の薬剤もしくは方法と一緒の補助療法として使用してもよいことが想定されている。そのような標準療法は、血中トリグリセリド、もしくは脂質を低下させるのに、または体重減少に有用である流体投与、または、他の任意の医薬品の投与を含んでいてもよい。
一実施形態では、本明細書に記載される抗体の使用は、正常レベルのトリグリセリドを達成し、それによって高トリグリセリドレベルを特徴とする疾患の１つもしくはそれ以上の症状またはその疾患に関連する長期の合併症を寛解する、もしくは予防する効果的な手段となる可能性がある。
一実施形態では、本発明の抗体は、高レベルのトリグリセリドを一部特徴とする任意の疾患または障害を処置するのに使用するための薬物の製造において使用することができる。
本発明の抗体は、深刻な状況での短期療法として使用してもよく、または
慢性療法として長期使用のために本発明の抗体を想定してもよい。
一態様では、本発明は、対象において体重減少を達成するための方法であって、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストはＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を、対象に投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、方法を提供する。
用語、阻害剤およびアンタゴニストは本明細書では互換的に使用される。
別の態様では、本発明は、対象において体脂肪量の減少を達成するための方法であって、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを、対象に投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、方法を提供する。
さらに別の態様では、本発明は対象においてエネルギー消費を増加させるための方法であって、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを、対象に投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、方法を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、対象においてＨＤＬ－Ｃを増加させるための方法であって、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを、対象に投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、方法を提供する。一実施形態では、前記対象での循環トリグリセリド（ＴＧ）は、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストの前記投与の１日後、少なくとも５０％低減される。
本発明に従った方法の追加の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６２／１７０または３１４／３２２に示される重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列対を含む。
本発明に従った方法の追加の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１６４／１６６／１６８／１７２／１７４／１７６または３１６／３１８／３２０／３２４／３２６／３２８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
一態様では、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニスト、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストはＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、または抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することにより、肥満に関連する状態または疾患、またはその状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、それにより、その状態または疾患が治療される、またはその状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症の頻度または重症度が軽減されるかもしくは低減される、方法を提供する。
追加の実施形態では、本発明に従った方法は第２の治療薬の投与をさらに含む。さらなる実施形態では、第２の治療薬は、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）、アンジオポエチン様タンパク質４（ＡＮＧＰＴＬ４）、アンジオポエチン様タンパク質５（ＡＮＧＰＴＬ５）、アンジオポエチン様タンパク質６（ＡＮＧＰＴＬ６）およびヒトプロタンパク質転換スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択される。第２の治療薬は、インスリン、インスリン類似体、ビグアナイド（メトホルミン）、スルホニル尿素（例えば、グリブリド、グリピジド）、ＰＰＡＲガンマアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）アゴニスト（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標）（エキセナチド）、ＴＲＵＬＩＣＩＴＹ（商標）（デュラグルチド）、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標）（リラグルチド）、ＬＹＸＵＭＩＡ（登録商標）（リキシセナチド）、ＴＡＮＺＥＵＭ（商標）（アルビグルチド）、または前述のもののいずれかの類似体、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤（例えば、サキサグリプチン（ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、シタグリプチン（ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、およびビルダグリプチン（ＧＡＬＶＵＳ（登録商標））、ナトリウムグルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（商標）（カナグリフロジン）、ＦＯＲＸＩＧＡ（登録商標）（ダパグリフロジン）、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン）、ＳＹＭＬＩＮ（登録商標）（プラムリンチド）、グルカゴン受容体アンタゴニスト、非スルホニル尿素分泌促進物質、インスリン類似体（例えば、速効性リスプロ、アスパルト、グルリジンおよび持効性デテミルインスリン、デグルデクインスリン、またはグラルギンインスリン）、エキセンディン－４ポリペプチド、ベータ３アドレノセプターアゴニスト、コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤、ＬＤＬ－コレステロールアンタゴニスト、コレステリルエステル輸送タンパク質アンタゴニスト（例えば、トルセトラピブ、アナセトラピブ、ダルセトラピブ、またはエバセトラピブ）、エンドセリン受容体アンタゴニスト、成長ホルモンアンタゴニスト、インスリン感受性改善薬、アミリン模倣物またはアゴニスト、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、メラノコルチン、メラニン凝集ホルモン受容体アゴニスト、ＳＮＲＩ、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）模倣物、線維芽細胞成長因子受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）アゴニスト、高度糖化最終産物形成の阻害剤（例えば、アミノグアニジン）、およびタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤らなる群から限定せずに選択することが可能である。
一態様では、本発明は、対象において体重減少を達成する、対象において体脂肪量の減少を達成する、対象においてエネルギー消費を増加する、対象においてＨＤＬ－Ｃを増加する、または肥満に関連する状態または疾患を処置する際の、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストの使用を提供する。
別の態様では、本発明は、対象において体重減少を達成する、対象において体脂肪量の減少を達成する、対象においてエネルギー消費を増加する、対象においてＨＤＬ－Ｃを増加する、または肥満に関連する状態または疾患を処置するための薬物の製造での、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であるか、またはその抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物であるＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストの使用を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、対象において体重減少を達成する、対象において体脂肪量の減少を達成する、対象においてエネルギー消費を増加する、対象においてＨＤＬ－Ｃを増加する、または肥満に関連する状態または疾患を処置するための医薬組成物を提供し、医薬組成物はＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを含み、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストはＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片である。
他の実施形態は、次の詳細な説明をよく調べることから明らかになる。
図１Ａおよび１Ｂは、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの単回皮下用量を投与されたヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける血清トリグリセリド（１Ａ）および全コレステロール（１Ｂ）濃度の平均＋／－ＳＥＭ。投与された用量は研究０日目に１、５、１０、または２５ｍｇ／ｋｇであった。統計的比較は対照Ａｂからの差の二元配置分散分析により行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図２は１、５、１０、または２５ｍｇ／ｋｇの用量でのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの一回皮下用量の投与後の循環抗ヒト抗体のレベルを示している。 図３Ａおよび３Ｂは、対照抗体と比べたＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける血清リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）（３Ａ）および肝性リパーゼ（３Ｂ）に対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐ ｍＡｂの効果を示している。統計は対応のないスチューデントｔ検定により行った；＊＊ｐ＜０．０１。 図４は、ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける脂質負荷試験でのｍＡｂ Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの効果を示している。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ ｍＡｂの投与は、対照抗体と比べた急性脂肪負荷後のトリグリセリドレベルの低下について評価した。統計はボンフェローニの事後検定を用いた二元配置分散分析により行った；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、および５Ｆは、ｍＡｂ Ｈ４Ｈ１５３４１ＰがＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて血清トリグリセリドを低減することを示している。血清サンプルは非絶食オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（ｎ＝５／群）から７日前に（ベースライン）およびＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体の単回皮下注射（１０ｍｇ／ｋｇ）に続く指定された日に収集した。血清トリグリセリド（５Ａ）およびコレステロール（５Ｂ）は酵素的に測定した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いた処置の７日後に収集されたそれぞれのマウス由来の血清（２０μｌ）はＨＰＬＣによりサイズ分画した。トリグリセリド（５Ｃ）およびコレステロール（５Ｄ）はそれぞれの画分で測定した。（５Ｅ）ヒトＡＮＧＰＴＬ８の全（遊離プラス抗体結合）血清レベルはＥＬＩＳＡにより測定した。（５Ｆ）固形飼料給餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおけるＨ４Ｈ１５３４１Ｐによる血清トリグリセリドの用量依存性低下は、抗体投与の７および１４日後に測定した。値は平均値のみが示されるクロマトグラムを除いて平均±ＳＥＭである。統計解析はサイダックの補正事後検定を用いて二元配置分散分析により行った；＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図５－１の続き。 図６Ａおよび６Ｂ。Ｈ４Ｈ１５３４１ＰはＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいてＬＰＬ活性を増加しトリグリセリドクリアランスを改善する。（６Ａ）Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いて処置した固形飼料給餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５／群）のヘパリン後血漿ＬＰＬおよびＨＬ活性。ヘパリン後血漿はプールし、ヘパリンカラム上で分画して、ＨＬとＬＰＬを分離し、トリグリセリドヒドロラーゼ活性を測定した。（６Ｂ）脂質負荷試験に続く血漿トリグリセリドレベルに対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐ処置の効果。オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ ｈｕｍマウスは、イントラリピッド（２．５μｌ／ｇの２０％イントラリピッド）の静脈内投与の４日前にＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を用いて処置した（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５／群）。値は平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定（Ａ）およびボンフェローニの事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析（Ｂ）により行った。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。ＨＬ＝肝性リパーゼ、ＬＰＬ＝リポタンパク質リパーゼ。 図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、および７Ｇ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを多回投与するとＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて血清トリグリセリド、体重および脂肪含量を低減し、エネルギー消費を増やす。血清サンプルは、非絶食状態のオスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス（ｎ＝８／群、生後７週間）から収集した。その後、マウスは高脂肪、高コレステロールの食事（ＨＦＨＣ）をさせた。７日後、マウスはＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）の毎週皮下注射を受けた。血清サンプルはそれぞれの注射の非絶食６日後に収集した。ＴＧの変化は研究の経過にわたり測定した（７Ａ）。体重は毎週モニターした（７Ｂ）。身体組成は１５週目に測定した（７Ｃ）。呼吸交換率（ＲＥＲ）（７Ｄ）、エネルギー消費（７Ｅ）、食物摂取量（７Ｆ）および自発運動活性（７Ｇ）はＨ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスにおいて明暗周期中に測定した。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はおよびボンフェローニの補正事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析（７Ａおよび７Ｂ）またはウェルチのｔ検定（７Ｃ～７Ｇ）により行った。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図７－１の続き。 図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、８Ｄ、８Ｅ、および８Ｆ。自然発生高トリグリセリド血症のカニクイザルにＨ４Ｈ１５３４１Ｐを単回投与すると、血漿トリグリセリドが減少し、ＨＤＬ－Ｃが増加する。ベースライン血清サンプルは、非絶食動物から－１５、－７および０日目に収集した。１８頭のサルを３つの群に分けＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（３、７または１０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。生理食塩水は６頭のサルに投与した。血清サンプルは複数日に収集し、トリグリセリド（８Ａ）、ＨＤＬ－Ｃ（８Ｂ）およびＬＤＬ－Ｃ（８Ｃ）について分析し、ベースラインからのパーセンテージ変化としても表した：トリグリセリド（８Ｄ）、ＨＤＬ－Ｃ（８Ｅ）およびＬＤＬ－Ｃ（８Ｆ）。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計はサイダックの事後検定を用いて反復測定二元配置分散分析により実施した；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図８－１の続き。 図８－２の続き。 図９Ａおよび９Ｂ。ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃおよびｍｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ結合についてのセンサーグラム。約３０ＲＵのｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ（９Ａ）およびｍｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ（９Ｂ）を先ずヤギ抗マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体固定化ＨＣＡ表面で捕捉した。ＨＢＳ－ＥＴランニングバッファーで３倍に連続希釈した異なる濃度のＨ４Ｈ１５３４１Ｐを後に４分間注射し、１０分間の解離工程が続いた。結合センサーグラムは黒色で示され、動態学値を計算するための作成されたグローバルフィットは灰色で示されている。結合データを適合させるのに使用される最高抗原濃度も提供され、動態学解析の結果は表２０に作表している。 図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの代謝パラメータ。循環脂質レベルは、オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスおよびその野生型同腹仔から収集した血清から評価した。（１０Ａ）全コレステロール、（１０Ｂ）トリグリセリド、（１０Ｃ）ＬＤＬ－Ｃ、および（１０Ｄ）ＨＤＬ－Ｃが示されている。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。＊ｐ＜０．０１。 図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、および１１Ｄ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを多回投与すると、ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいてエネルギー消費、Ｏ２消費、およびＣＯ２生成が増加する。Ｏ２消費（１１Ａ）およびＣＯ２生成（１１Ｂ）の変化を、図７Ａ～７Ｇに記載される研究においてＨ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスで明暗周期中に評価した。共分散分析を使用して、図１１Ｃに記載される研究において、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスについてエネルギー消費と体重の間の相関関係を示している明暗周期中散布図として、ならびに０．０３６８８ｋｇの調整平均体重について明暗周期中の調整平均エネルギー消費として（１１Ｄ）表される間接的熱量測定。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 図１１－１の続き。 図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、および１２Ｆ。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照ａｂ処置ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの代謝パラメータ。データは、ＶＯ２（１２Ａ）、ＶＣＯ２（１２Ｂ）、呼吸商（ＲＥＲ）（１２Ｃ）、食物摂取量（１２Ｅ）、エネルギー消費（１２Ｄ）、および自発運動活性（１２Ｆ）について明暗周期中の７２時間にわたる連続測定値として表す。群はすべて８頭の動物を有する。値は平均±ＳＥＭである。 図１２－１の続き。 図１２－２の続き。 図１３Ａ、１３Ｂ、１３Ｃ、１３Ｄ、１３Ｅ、１３Ｆ、および１３Ｇ。ＨＦＨＣ食事で維持されたＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ毎週投与は、体温にも組織ＴＧ貯蔵にも何の効果を及ぼさなかった。体温は、ＨＦＨＣ給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの１０週間の多回注射後直腸プローブを使用して評価した（１３Ａ）。肝臓（１３Ｂ）、心臓（１３Ｃ）、腓腹筋（ＧＡ筋）（１３Ｄ）、精巣上体白色脂肪組織（ｅｐｉＷＡＴ）（１３Ｅ）、皮下白色脂肪組織（ｓｃＷＡＴ）（１３Ｆ）、および褐色脂肪組織（ＢＡＴ）（１３Ｇ）のＴＧ含有量は研究の終了時に測定した。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はウェルチのｔ検定により行った。 図１３－１の続き。 図１４Ａ、１４Ｂ、および１４Ｃ。ＨＦＨＣ食餌で維持されたＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐ毎週投与は、血糖管理に何の効果も及ぼさなかった。非絶食グルコースの変化（１４Ａ）は図７Ａ～７Ｇに記載される研究において複数の時点で評価した。グルコース負荷（１４Ｂ）およびインスリン負荷（１４Ｃ）試験はそれぞれ抗体の９および１０の多回用量後に行った。値はすべて平均±ＳＥＭである。統計解析はおよびボンフェローニの事後検定を用いた反復測定二元配置分散分析により行った。 図１４－１の続き。
本発明を説明する前に、本発明は記載される特定の方法および実験条件に限定されず、したがって、方法および条件は変動する場合があることは理解されるべきである。本明細書で使用される用語法は特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定的であることを意図していないことも理解されるべきである。なぜならば、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。
他の方法で定義されていなければ、本明細書で使用される専門用語および科学用語はすべて、本発明が属する分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、特定の列挙される数値に関連して使用される場合、その値は列挙された値から１％以下で変動することがあることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、表現「約１００」は９９および１０１およびその間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、等）を含む。
本明細書に記載される方法および材料に類似するまたは等価であるいかなる方法および材料も本発明の実行または試験において使用することが可能であるが、ここでは好ましい方法および材料を記載する。本明細書において言及するすべての特許、出願および非特許出版物は参照によりその全体を本明細書に組み込む。
定義
「アンジオポエチン様タンパク質８」またはＡＮＧＰＴＬ８は、タンパク質のアンジオポエチンファミリーのメンバーであり、ＴＤ２６、ＲＩＦＬ、リパシン、Ｃ１９ｏｒｆ８０およびベータトロフィンと呼ばれることもある。「ＡＮＧＰＴＬ８」とは、本明細書で使用される場合、配列番号３４０のアミノ酸残基１～１７７に示されるアミノ酸配列を含むヒトＡＮＧＰＴＬ８のことである。完全長ヒトＡＮＧＰＴＬ８アミノ酸配列は、シグナル配列を含み、ジェンバンク受託番号ＮＰ＿０６１１５７．３にも見出すことが可能であり、ヒトＡＮＧＰＴＬ８をコードする完全長核酸配列は公知である（Ｅｊａｒｑｕｅ、ら、２０１７年 Ｔｒａｎｓｌ Ｒｅｓ １８４：３５～４４頁）。ヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端コイルドコイルドメインは配列番号３４０のアミノ酸残基１～３９にまたがり、配列番号３３７としても表される。本明細書でのタンパク質、ポリペプチドおよびタンパク質断片への言及はすべて、非ヒト種由来であると明確に指定されていなければ、それぞれのタンパク質、ポリペプチドまたはタンパク質断片のヒトバージョンのことである。したがって、表現「ＡＮＧＰＴＬ８」は、非ヒト種由来である、例えば、「マウスＡＮＧＰＴＬ８」、「サルＡＮＧＰＴＬ８」、等と指定されていなければ、ヒトＡＮＧＰＴＬ８を意味する。
用語「ヒトアンジオポエチン様タンパク質３」または「ｈＡＮＧＰＴＬ３」は、本明細書で使用される場合、配列番号３４３に示される核酸配列を有するＡＮＧＰＴＬ３および配列番号３４２のアミノ酸配列、またはその生物学的に活性な断片のことである。ヒトＡＮＧＰＴＬ３のＮ末端コイルドコイルドメインは配列番号３３８として表される。
用語「ヒトアンジオポエチン様タンパク質４または「ｈＧＰＴＬ４」は、本明細書で使用される場合、配列番号３４５に示される核酸配列を有するＡＮＧＰＴＬ４および配列番号３４４のアミノ酸配列、またはその生物学的に活性な断片のことである。ヒトＡＮＧＰＴＬ４のＮ末端コイルドコイルドメインは配列番号３３９として表される。
本発明の特定の実施形態、抗体または抗体断片は、第２のＡＮＧＰＴＬ８アンタゴニストのような治療部分（「免疫コンジュゲートする」）、または一部高トリグリセリドレベルにより引き起こされる疾患または状態を処置するのに有用である他の任意の治療部分にコンジュゲートしていてもよい。
本明細書で使用される場合、表現「抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体」は、単一特異性を有する一価抗体、ならびにＡＮＧＰＴＬ８に結合する第１のアームおよび第２（標的）の抗原に結合する第２のアームを含む二重特異性抗体の両方を含み、抗ＡＮＧＰＴＬ８アームは本明細書の表１に示されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲ配列のいずれかを含む。
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、特定の抗原（例えば、ＡＮＧＰＴＬ８）に特異的に結合するまたはこれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互連結している２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖である、４つのポリペプチドを含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられるより保存されている領域で分散されている相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられる超可変領域にさらに細区分することが可能である。それぞれのＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順番、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４に配置されている。本発明の異なる実施形態では、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲはヒト生殖系列配列と同一でもよく、または天然にもしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれ以上のＣＤＲの並列解析に基づいて定義することができる。
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。用語抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などは、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する任意の天然に存在する、酵素的に入手可能な、合成的または遺伝的に操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、タンパク質消化または抗体可変および場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現に関わる組換え遺伝子操作技法のような任意の適切な標準技法を使用して完全抗体分子から導き出してもよい。そのようなＤＮＡは公知でありおよび／または、例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能である、もしくは合成することが可能である。ＤＮＡは、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを適切な立体配置に並べるため、またはコドンを導入し、システイン残基を作り出し、アミノ酸を改変し、付加しもしくは欠失する等のために、化学的にまたは分子生物学技法を使用することにより塩基配列決定し操作してもよい。
抗原結合断片の非限定的例は：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ、等）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインのような他の操作された分子も、本明細書で使用される表現「抗原結合断片」内に包含される。
抗体の抗原結合断片は典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むことになる。可変ドメインはいかなるサイズでもまたはアミノ酸組成でもよく、一般的には少なくとも１つのＣＤＲを含み、これは１つまたはそれ以上のフレームワーク配列に隣接しているまたはこれのインフレームにある。ＶＬドメインに関連するＶＨドメインを有する抗原結合断片では、ＶＨおよびＶＬドメインは互いに対していかなる適切な配置にも位置していることができる。例えば、可変領域は二量体でありＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＬ二量体を含有していてもよい。代わりに、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有していてもよい。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合している少なくとも１つの可変ドメインを含有することができる。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変および定常ドメインの非限定的例示的立体配置は：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。可変および定常ドメインのいかなる立体配置でも、上に収載される例示的立体配置のいずれかを含むが、可変および定常ドメインは互いに直接連結していてもよく、または完全もしくは部分的ヒンジもしくはリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなっていてもよく、このアミノ酸が、単一ポリペプチド分子の隣接する可変および／または定常ドメイン間に柔軟なまたはセミフレキシブルな連鎖をもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いにおよび／または１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメイン（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）の非共有会合で、上に収載される可変および定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含んでいてもよい。
完全抗体分子の場合と同様に、抗原結合断片は単一特異性でも多特異性（例えば、二重特異性）でもよい。抗体の多特異性抗原結合断片は典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、それぞれの可変ドメインは別々の抗原にまたは同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的二重特異性抗体フォーマットを含む、いかなる多特異性抗体フォーマットでも、当技術分野で利用可能な常用の技法を使用して本発明の抗体の抗原結合断片という状況で使用するのに適用させてもよい。
用語「ヒト抗体」とは、本明細書で使用する場合、天然には存在しないヒト抗体を含むことが意図されている。この用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞において組換え的に産生される抗体を含む。この用語はヒト対象から単離されたまたはヒト対象において産生される抗体を含むことを意図していない。
本発明の抗体は、一部の実施形態では、組換えヒト抗体でもよい。用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、宿主細胞にトランスフェクトされる組換え発現ベクターを使用して発現される抗体（下でさらに説明される）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（下でさらに説明される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら、（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７～６２９５頁参照）またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることを含む他の任意の手段により製造される、発現される、創造されるもしくは単離される抗体のような組換え手段により製造される、発現される、創造されるもしくは単離されるあらゆるヒト抗体を含むことが意図されている。ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体にｉｎ ｖｉｔｒｏ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列にトランスジェニックな動物が使用される場合は、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）を行い、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に関係しているが、ｉｎ ｖｉｖｏではヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しない場合がある配列である。
ヒト抗体は、ヒンジ不均一性に関連している２つの形態で存在することが可能である。１つの形態では、免疫グロブリン分子はおおよそ１５０～１６０ｋＤａの安定な４鎖構築物を含み、そこでは二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合により１つに結合されている。第２の形態では、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合軽および重鎖で構成されている約７５～８０ｋＤａの分子（半抗体）が形成される。これらの形態は、親和性精製後でも分離するのが極めて困難であった。
種々の無傷のＩｇＧアイソタイプ中での第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的違いに起因するがこれに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域での単一アミノ酸置換は第２の形態の出現（Ａｎｇａｌら、（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１０５頁）をヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観察されるレベルまで著しく低減することが可能である。本発明は、所望の抗体形態の収率を改善するために、例えば、生産において望ましい場合があるヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３領域での１つまたはそれ以上の突然変異を有する抗体を包含する。
本発明の抗体は単離された抗体であってもよい。「単離された抗体」は、本明細書で使用される場合、同定され、その天然環境の少なくとも１つの成分から分離されおよび／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から、または抗体が天然に存在するもしくは天然に産生される組織もしくは細胞から分離されているまたは取り除かれている抗体は、本発明のための「単離された抗体」である。単離された抗体は組換え細胞内にインサイチュでの抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離工程を受けている抗体である。ある特定の実施形態に従えば、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質が実質的になくてもよい。
本明細書に開示される抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、重および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含んでいてもよい。そのような突然変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公開されている抗体配列データベースから入手可能な配列と比較することにより容易に確かめることが可能である。入手した後は、１つまたはそれ以上の突然変異を含有する抗体および抗原結合断片は、改善された結合特異性、増加した結合親和性、改善されたまたは増強された拮抗性のまたはアゴニスティックな生物学的特性（場合によっては）、低下した免疫原性、等のような１つまたはそれ以上の所望の特性について容易に試験することが可能である。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合断片は本発明内に包含される。
本発明は、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書の表１に示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比べて、例えば、１０またはそれよりも少ない、８またはそれよりも少ない、６またはそれよりも少ない、４またはそれよりも少ない、等の保存的アミノ酸置換のあるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含む。
「遮断抗体」または「中和抗体」は、本明細書で使用される場合（または、「ＡＮＧＰＴＬ８活性を中和する抗体」）、ＡＮＧＰＴＬ８との結合および／または相互作用により、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの生物活性を阻害する抗体を指すことが意図されている。例えば、本発明の抗体はＡＮＧＰＴＬ８のリポタンパク質リパーゼ阻害活性を阻害することができる、または本発明の抗体は、ＡＮＧＰＴＬ８のＬＰＬ阻害活性の阻害を通じて以外の機構を通じて血漿トリグリセリドを減らすことができる。ＡＮＧＰＴＬ８の生物活性のこのような阻害は、当技術分野で公知のいくつかの標準ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイの１つまたはそれ以上によりＡＮＧＰＴＬ８生物活性の１つまたはそれ以上の指標を測定することにより評価することが可能である。代わりの活性は、本発明の抗体に関連するトリグリセリド低下活性である。
用語「表面プラズモン共鳴」または「ＳＰＲ」は、本明細書で使用される場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはＭＡＳＳ－１システム（Ｓｉｅｒｒａ Ｓｅｎｓｏｒｓ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｖｉｌｌｅ、ＲＩ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内でのタンパク質濃度の変化の検出によりリアルタイム生体分子相互作用の分析を可能にする光学的現象のことである。
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図されている。
用語「エピトープ」とは、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用をする抗原決定基のことである。単一抗原は１つよりも多いエピトープを有していてもよい。したがって、抗体が異なれば結合する抗原上の領域も異なる場合があり、生物学的効果も異なる場合がある。エピトープは高次構造的であっても線形であってもよい。高次構造的エピトープは、線形ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸により作成される。線形エピトープはポリペプチド鎖において隣接するアミノ酸残基により作成されるエピトープである。ある特定の状況では、エピトープは抗原上で糖類の部分、ホスホリル基、またはスルホニル基を含む場合がある。
用語「実質的な同一性」または「実質的に同一な」は、核酸またはその断片に言及する場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失と一緒に、別の核酸（またはその相補鎖）と最適に整列させた場合、下に記載されるＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐのような配列同一性の任意のよく知られたアルゴリズムにより測定した場合、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、さらに好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％でヌクレオチド配列同一性が存在することを示している。参照核酸分子に実質的同一性を有する核酸分子は、ある特定の例では、参照核酸分子がコードするポリペプチドと同じまたは実質的に類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な類似性」または「実質的に類似する」は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重み付けを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによりのように最適に整列させた場合、少なくとも９５％配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９８％または９９％配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似する化学的特性（例えば、電荷または疎水性）のある側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置き換えられる置換である。一般に、保存的アミノ酸置換はタンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つまたはそれ以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なっている場合には、パーセント配列同一性または類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。このような調整を行うための手段は当業者には周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７～３３１頁を参照されたい。前記文献は参照により本明細書に組み込まれる。類似する化学的特性のある側鎖を有するアミノ酸の群の例は、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族－ヒドロキシル基側鎖：セリンおよびスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸置換群は：バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。代わりに、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔら、（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３～１４４５頁に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化であり、前記文献は参照により本明細書に組み込まれる。「中程度に保存的な」置換はＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有する任意の変化である。
ポリペプチドについての配列類似性は典型的には、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の改変に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を適合させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる生物の種由来のまたは野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の相同ポリペプチドのような密接な関係があるポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためにデフォルトパラメータを用いて使用することが可能なＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴのようなプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨されるパラメータを用いてＦＡＳＴＡを使用しても比較することが可能であり；ＧＣＧバージョン６．１．ＦＡＳＴＡのプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリーとサーチ配列の間の最良のオーバーラップの領域のアライメントおよびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）、上記）。本発明の配列を異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用する、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁および（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～４０２頁を参照されたい。前記文献はそれぞれ参照により本明細書に組み込む。
語句「治療有効量」は、それが投与される目的の所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に依拠し、公知の技法を使用して当業者が確認可能である（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ参照）。
用語「処置する」または「処置」は、本明細書で使用される場合、有益なまたは所望の臨床結果を得るためにアプローチのことである。本発明の一実施形態では、有益なまたは所望の臨床結果は、血中トリグリセリドレベルの改善、または高グリセリド血症を含むがこれに限定されない高レベルのトリグリセリドに関連するもしくはこれから生じるいずれか１つもしくはそれ以上の状態、疾患、もしくは症状の改善、等を含むがこれらに限定されない。
ｐＨ依存性結合
本発明はｐＨ依存性結合特性を有する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含む。例えば、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、中性ｐＨと比べた場合、酸性ｐＨではＡＮＧＰＴＬ８への結合の低減を示す場合がある。代わりに、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、中性ｐＨと比べた場合、酸性ｐＨではＡＮＧＰＴＬ８への結合の増強を示す場合がある。表現「酸性ｐＨ」は、約６．２未満のｐＨ値、例えば、約６．０、５．９５、５，９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０またはそれ未満を含む。本明細書で使用される場合、表現「中性ｐＨ」は約７．０から約７．４のｐＨを意味する。表現「中性ｐＨ」は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。
ある特定の例では、「中性ｐＨと比べた場合の酸性ｐＨでのＡＮＧＰＴＬ８への結合の低減」は、中性ｐＨでＡＮＧＰＴＬ８に結合する抗体のＫＤ値に対する酸性ｐＨでＡＮＧＰＴＬ８に結合する抗体のＫＤ値の比（または逆も同様）の点から表される。例えば、抗体またはその抗原結合断片が約３．０またはそれ以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合は、抗体またはその抗原結合断片は、本発明のために「中性ｐＨと比べた場合の酸性ｐＨでのＡＮＧＰＴＬ８への結合の低減」を示すと見なすことができる。ある特定の例示的実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片についての酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０またはそれ以上が可能である。
ｐＨ依存性結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比べた場合の酸性ｐＨでの特定の抗原への結合の低減（または増強）を求めて抗体の集団をスクリーニングすることにより、得ることができる。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの改変によりｐＨ依存性結合特性を有する抗体が得られる場合がある。例えば、抗原結合ドメインの１つまたはそれ以上のアミノ酸（例えば、ＣＤＲ内で）をヒスチジン残基で置き換えることにより、中性ｐＨと比べた酸性ｐＨでの抗原結合が低減している抗体を得ることができる。
Ｆｃバリアントを含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体
本発明のある特定の実施形態に従えば、１つまたはそれ以上の突然変異を含むＦｃドメインを含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体が提供され、この突然変異は、例えば、中性ｐＨと比べた場合、酸性ｐＨでＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するまたは減少させる。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に突然変異を含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含み、ここでは突然変異（複数可）は酸性環境では（例えば、ｐＨが約５．５から約６．０の範囲に及ぶエンドソームでは）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加する。そのような突然変異は、動物に投与されると、抗体の血清半減期を増加させる場合がある。そのようなＦｃ改変の非限定的例は、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での改変；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）ならびに／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、ＦまたはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４ＦまたはＮ４３４Ｙ］）での改変；または２５０位および／もしくは４２８位での改変；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での改変を含む。一実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）改変；２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌ改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、ならびに３０７および／または３０８改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、改変は２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）改変を含む。
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される突然変異の１つまたはそれ以上の対またはグループを含むＦｃドメインを含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含む。前述のＦｃドメイン突然変異、および本明細書で開示される抗体可変ドメイン内の他の突然変異の考えられるあらゆる組合せは、本発明の範囲内に想定されている。
本発明はキメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体も含み、キメラＣＨ領域は１つよりも多い免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域由来のセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子由来のＣＨ３ドメインの一部またはすべてと組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子由来のＣＨ２ドメインの一部またはすべてを含むキメラＣＨ領域を含んでいてもよい。ある特定の実施形態に従えば、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域由来の「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けに従って２２８位から２３６位までのアミノ酸残基）と組み合わせた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域由来の「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けに従って２１６位から２２７位までのアミノ酸残基）を含んでいてもよい。ある特定の実施形態に従えば、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジ由来のアミノ酸残基およびヒトＩｇＧ２下部ヒンジ由来のアミノ酸残基を含む。本明細書に記載されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある特定の実施形態では、抗体の治療または薬物動態特性に悪影響を与えずに改変されたＦｃエフェクター機能を示すことができる（例えば、２０１３年２月１日提出の米国特許仮出願第６１／７５９，５７８号参照、前記特許文献の開示はこれにより参照によりその全体を組み込む）。
抗体の生物学的特性
本発明は、ＡＮＧＰＴＬ８に高親和性で結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。例えば、本発明は、本明細書の実施例３および４に定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイにおいて、例えば、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃ Ｃ末端融合物との組換えＡＮＧＰＴＬ８タンパク質を使用して、２５℃で、または３７℃で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した場合、ヒトまたはサルＡＮＧＰＴＬ８に約１５０ｎＭ未満のＫＤで結合する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含む。ある特定の実施形態に従えば、例えば、本明細書の実施例３および４に定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定した場合、約９０ｎＭ未満、または約５０ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、もしくは約９０ｐＭ未満のＫＤで、２５℃または３７℃でヒトまたはサルＡＮＧＰＴＬ８に結合する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を提供する。
本発明は、例えば、本明細書の実施例３に定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴により測定した場合、約１００分よりも大きな解離半減期（ｔ１／２）でヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域由来の配列番号３３７のペプチドに結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。ある特定の実施形態に従えば、例えば、本明細書の実施例３に定義されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定した場合、約１１０分より大きなもしくはこれに等しい、約１２０分よりも大きな、約１３０分よりも大きな、約２００分よりも大きな、約３００分よりも大きな、約４００分よりも大きな、約５００分よりも大きな、またはそれよりも長いｔ１／２でヒトＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域由来のペプチドに２５℃で結合する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を提供する。
本発明は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約２５ｍｇ／ｋｇ、または約５０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇの用量で皮下に投与された場合、哺乳動物においてトリグリセリドを約２０％、または３０約％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、またはそれよりも多く低下させる抗体およびその抗原結合断片も含む。血漿トリグリセリドを低下させることに対する本発明の抗体の効果は、投与後少なくとも７日から投与後約３週間、または４週間、またはそれよりも長く持続することができる。
本発明の抗体は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２６６、２７４、２８２、２９０、２９８、３０６、３１４および３３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、および３２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む；または参照抗体と交差競合してもよく、参照抗体は、表１のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかからなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列を含む。
本発明の抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２５０、２６６／２５０、２７４／２５０、２８２／２５０、２９０／２５０、３０６／２５０、３１４／３２２、および３３０／３２２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含んでいてもよい。
本発明の抗体は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２６８、２７６、２８４、２９２、３００、３０８、３１６および３３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７０、２７８、２８６、２９４、３０２、３１０、３１８、および３３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２７２、２８０、２８８、２９６、３０４、３１２、３２０および３３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２および３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、および３２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６および３２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含んでいてもよい。
本発明の抗体は、前述の生物学的特性の１つもしくはそれ以上、またはその任意の組合せを有することができる。本発明の抗体の生物学的特性の前述の一覧表は網羅的であることを意図していない。本発明の抗体の他の生物学的特性は、本明細書の作業実施例を含む本開示の概説から当業者には明らかになる。
エピトープマッピングおよび関係する技術
本発明の抗体が結合するエピトープは、ＡＮＧＰＴＬ８タンパク質の３つまたはそれ以上の（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれよりも多い）アミノ酸の単一近接配列からなるものでもよい。代わりに、エピトープは、ＡＮＧＰＴＬ８の複数の非近接アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなるものでもよい。
当業者には公知の種々の技法を使用して、抗体がポリペプチドまたはタンパク質内の「１つまたはそれ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することが可能である。例示的技法は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．、ＮＹ）に記載されるアッセイのような常用クロスブロッキングアッセイ、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ、２００４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３～４６３頁）、およびペプチド切断分析を含む。さらに、エピトープ切除、エピトープ抽出および抗原の化学的改変のような方法を用いることが可能である（Ｔｏｍｅｒ、２０００年、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するのに使用することが可能な別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般的には、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識し、続いて抗体を重水素標識タンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体により保護されている残基（重水素標識されたままである）を除くすべての残基で水素－重水素交換を起こさせる。抗体の解離後、標的タンパク質はプロテアーゼ切断および質量分析を受け、それによって抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２～２５９頁；Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照されたい。
本発明は、本明細書に記載される特定の例示的抗体（例えば、本明細書の表１に示されるアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体をさらに含む。同様に、本発明は、本明細書に記載される特定の例示的抗体（例えば、本明細書の表１に示されるアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）のいずれかとＡＮＧＰＴＬ８への結合に関して競合する抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体も含む。
当技術分野では公知であり本明細書で例証される常用の方法を使用することにより、抗体が参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と同じエピトープに結合する、または結合に関してこれと競合するかどうかは容易に判定することが可能である。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と同じエピトープに結合するかどうかを判定するため、参照抗体をＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合させておく。次に、ＡＮＧＰＴＬ８分子に試験抗体が結合する能力を評価する。試験抗体が、参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を用いた飽和結合に続いてＡＮＧＰＴＬ８に結合することができる場合、試験抗体は参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることが可能である。一方、試験抗体が、参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を用いた飽和結合に続いてＡＮＧＰＴＬ８分子に結合することができない場合、試験抗体は、本発明の参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。次に、追加の常用実験（例えば、ペプチド突然変異および結合分析）を実行して、試験抗体の観察された結合の欠如が実際に参照抗体と同じエピトープに結合するせいなのかどうか、または立体的ブロッキング（または別の現象）が観察される結合の欠如の原因なのかどうかを確かめることが可能である。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリーまたは当技術分野で入手可能な他の任意の定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを使用して実施することが可能である。本発明のある特定の実施形態に従えば、２つの抗体は、例えば、１、５、１０、２０または１００倍の過剰な１つの抗体が、競合的結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０年：５０：１４９５～１５０２頁参照）で測定した場合、少なくとも５０％、しかし、好ましくは、７５％、９０％または９９％ももう一方の抗体の結合を阻害するならば、同じ（または重複する）エピトープに結合する。代わりに、２つの抗体は、１つの抗体の結合を低減するまたは除去する抗原中の本質的にすべてのアミノ酸突然変異がもう一方の抗体の結合を低減するまたは除去するならば、同じエピトープに結合すると見なされる。２つの抗体は、１つの抗体の結合を低減するまたは除去するアミノ酸突然変異のサブセットのみがもう一方の抗体の結合を低減するまたは除去するならば、「重複するエピトープ」を有すると見なされる。
抗体が参照抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と結合に関して競合する（または結合に関して交差競合する）かどうかを判定するため、上記の結合方法は２つの方向性で実施され：第１の方向性では、参照抗体は飽和条件下でＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合させておき、続いてＡＮＧＰＴＬ８分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向性では、試験抗体は飽和条件下でＡＮＧＰＴＬ８分子に結合させておき、続いてＡＮＧＰＴＬ８分子への参照抗体の結合を評価する。両方の方向性では、第１の（飽和）抗体のみがＡＮＧＰＴＬ８分子に結合することができるならば、試験抗体と参照抗体はＡＮＧＰＴＬ８への結合に関して競合すると結論付けられる。当業者であれば認識することになるように、参照抗体と結合に関して競合する抗体は必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合しない場合があるが、重複するまたは隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的にブロックする場合もある。
ヒト抗体の製造
本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、完全ヒト（天然に存在しない）抗体が可能である。完全ヒトモノクローナル抗体を含む、モノクローナル抗体を産生するための方法は当技術分野では公知である。そのようないかなる公知の方法も、ヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的に結合するヒト抗体を作成する本発明の状況で使用することが可能である。
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）参照）またはモノクローナル抗体を産生するための他の任意の公知の方法を使用して、ヒト可変領域とマウス定常領域を有するアレルゲンに対する高親和性キメラ抗体は最初単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域とマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結されたヒト重および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの作成を含む。抗体の重および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結される。次に、ＤＮＡは完全ヒト抗体を発現することができる細胞で発現される。
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに目的の抗原を負荷し、リンパ細胞（Ｂ細胞のような）は抗体を発現するマウスから回収される。リンパ細胞は骨髄腫細胞株と融合させて不死ハイブリドーマ細胞株を製造してもよく、そのようなハイブリドーマ細胞株はスクリーニングされて選択され、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプの定常領域に連結してもよい。そのような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞において産生してもよい。代わりに、抗原特異的キメラ抗体または軽および重鎖の可変領域をコードするＤＮＡを抗原特異的リンパ細胞から直接単離してもよい。
下の実験の部に記載されるように、高親和性キメラ抗体は、ヒト可変領域とマウス定常領域を有するまま単離されるが、親和性、選択性、エピトープ、等を含む、望ましい特性について特徴付けられ選択される。次に、マウス定常領域は、所望のヒト定常領域で置き換えられて本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または改変ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４を産生する。選択された定常領域は特定の使用に応じて変動する場合があるが、高親和性抗原結合および標的特異性特性は可変領域に存在する。
一般に、本発明の抗体は極めて高い親和性を有し、固相上に固定化されたまたは液相中の抗原への結合により測定した場合、典型的には、約１０－１２から約１０－９ＭまでのＫＤを有する。
生物学的な均等物
本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体および抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列とは異なるがヒトＡＮＧＰＴＬ８に結合する能力を保持しているアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのような変異抗体および抗体断片は、親配列と比べた場合、アミノ酸の１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載されている抗体の生物活性と本質的に等しい生物活性を示す。同様に、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体コードＤＮＡ配列は、開示されている配列と比べた場合、ヌクレオチドの１つまたはそれ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体または抗体断片に本質的に生物学的同等性の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。そのような変異アミノ酸およびＤＮＡ配列の例は上で考察されている。
２つの抗原結合タンパク質、または抗体は、例えば、単回用量でまたは多回用量で、類似する実験条件下で同じモル用量で投与される場合、その吸収速度および程度が有意差を示さない製剤学的な均等物または製剤学的な代替物であるならば、生物学的に同等だと見なされる。一部の抗体は、その吸収の程度は等しいが、その吸収速度は等しくなくても、等価物または製剤学的代替物と見なされるが、吸収速度のそのような違いは意図的でありラベリングに反映され、例えば、連用に効果的な身体薬物濃度の達成に不可欠ではなく、研究されている特定の製剤にとり医学的には取るに足りないと見なされるので生物学的に同等であると見なしてもよい。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、その安全性、純度、および効力に臨床的に意味のある差がなければ、生物学的に同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、患者での切り替えのない継続治療と比べた場合、免疫原性の臨床的に重大な変化または有効性の減少を含む、副作用のリスクの予想される増加なしで、患者で参照製品と生物由来製品を１回またはそれ以上切り替えることが可能ならば、生物学的に同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合タンパク質は、その両方が使用条件（単数または複数）について共通の作用機序（単数または複数）により作用するならば、そのような機序が知られている限り、生物学的に同等である。
生物学的同等性はｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ方法により実証してもよい。生物学的同等性の尺度は、例えば、（ａ）ヒトまたは他の哺乳動物でのｉｎ ｖｉｖｏ試験、そこでは抗体またはその代謝物の濃度が血液、血漿、血清、または他の生体液において時間の関数として測定される；（ｂ）ヒトｉｎ ｖｉｖｏ生物学的利用能データと相関しておりこれを適度に予想するｉｎ ｖｉｔｒｏ試験；（ｃ）ヒトまたは他の哺乳動物でのｉｎ ｖｉｖｏ試験、そこでは抗体（またはその標的）の適切な急性薬理効果が時間の関数として測定される；および（ｄ）抗体の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的同等性を確立するよく管理された臨床試験を含む。
本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の生物学的に同等のバリアントを、例えば、生物活性に必要ではない残基もしくは配列の種々の置換をするまたは末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することにより構築してもよい。例えば、生物活性にとり不可欠ではないシステイン残基は欠失させるまたは他のアミノ酸と交換して、再生による不必要なまたは不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防ぐことが可能である。他の状況では、生物学的に同等の抗体は、抗体のグリコシル化特性を改変する、アミノ酸変化、例えば、グリコシル化を除去するまたは取り除く突然変異を含む抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体バリアントを含んでもよい。
多特異性抗体
本発明の抗体は単一特異性でも多特異性（例えば、二重特異性）でもよい。多特異性抗体は１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的な、または１つよりも多い標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有していてもよい。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８～２４４頁を参照されたい。本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結するまたはこれと共発現することが可能である。例えば、抗体またはその断片は、別の抗体または抗体断片のような１つまたはそれ以上の他の分子実体に機能的に連結させて（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有会合によりまたは他の方法で）、第２の結合特異性を有する二重特異性または多特異性抗体を産生することが可能である。
本発明は、免疫グロブリンの１つのアームがヒトＡＮＧＰＴＬ８に結合し、免疫グロブリンのもう一方のアームが第２の抗原に特異的な二重特異性抗体を含む。ＡＮＧＰＴＬ８結合アームは、本明細書の表１に示されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含むことが可能である。
本発明の状況で使用可能である例示的二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用を含み、第１と第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸差は、アミノ酸差のない二重特異性抗体と比べた場合、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合を低減させる。一実施形態では、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエクソン番号付けによれば；ＥＵ番号付けによればＨ４３５Ｒ）のようなプロテインＡ結合を低減するまたは消失させる突然変異を含有する。第２のＣＨ３はＹ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによれば；ＥＵによればＹ４３６Ｆ）をさらに含んでいてもよい。第２のＣＨ３内に見出され得るさらなる改変は、ＩｇＧ１抗体の場合は、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによれば；ＥＵによればＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ））；ＩｇＧ２抗体の場合は、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによれば；ＥＵによればＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合は、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによれば；ＥＵによればＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）を含む。上記の二重特異性抗体フォーマットの変動は本発明の範囲内に想定されている。
本発明の状況で使用可能な他の例示的二重特異性フォーマットは、限定せずに、例えば、ｓｃＦｖベースのまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合物、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ、ノブイントゥーホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）、共通の軽鎖（例えば、ノブイントゥーホールを有する共通の軽鎖、等）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性フォーマットを含む（例えば、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ ４：６、１～１１頁、および前述のフォーマットの概説については本明細書で引用される参考文献参照）。二重特異性抗体はペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することも可能であり、例えば、直交性化学反応性のある非天然アミノ酸を使用して部位特異的抗体オリゴヌクレオチドコンジュゲートを作成し、次にこれは自己組織化して限定された組成、結合価および幾何形状を有する多量体複合体になる（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：Ｄｅｃ．４、２０１２年］参照）。
治療製剤および投与
本発明は、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、改善された移動、送達、耐久性などを提供する適切な担体、賦形剤、および他の薬剤と一緒に処方される。多数の適切な製剤が全ての薬剤師に知られている処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見出すことが可能である。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡのような）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳濁液、乳濁液カーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８～３１１頁も参照されたい。
患者に投与される抗体の用量は、患者の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動してもよい。好ましい用量は典型的には、体重または体表面積に従って計算される。成人患者では、通常は、約０．０１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは、約０．０２～約７、約０．０３～約５、または約０．０５～約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量で本発明の抗体を静脈内に投与するのが有利であり得る。状態の重症度に応じて、処置の回数および期間は調整することが可能である。抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を投与するための効果的投与量およびスケジュールは、経験的に決定してもよく；例えば、患者進行は定期評価によりモニターすることが可能であり、それに従って用量は調整される。さらに、投与量の種間スケーリングは、当技術分野の周知の方法を使用して実施することが可能である（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉら、１９９１年、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１頁）。
種々の送達方式、例えば、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセルへのカプセル封入、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕら、１９８７年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９～４４３２頁参照）が知られており、これを使用すれば本発明の医薬組成物を投与することが可能である。導入方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜内、および経口経路を含むがこれらに限定されない。組成物はいかなる便利な経路によっても、例えば、注入またはボーラス注入により、上皮または皮膚粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜、等）を通じた吸収により投与してもよく、他の生物活性剤と一緒に投与してもよい。投与は全身的でも局所的でも可能である。
本発明の医薬組成物は、標準的針と注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することが可能である。さらに、皮下送達に関しては、ペン型送達装置は本発明の医薬組成物を送達するのにすぐに用途がある。そのようなペン型送達装置は再利用可能であるまたは使い捨て可能である。再利用可能なペン型送達装置は一般に、医薬組成物を含有する取り換え可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与されカートリッジが空になった後は、空のカートリッジはすぐに破棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジで置き換えることが可能である。次に、ペン型送達装置は再利用可能である。使い捨て可能なペン型送達装置では、取り換え可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨て可能な送達装置は、装置内のリザーバーに保持された医薬組成物で予め満たされる。リザーバーの医薬組成物が空になった後は、全装置は破棄される。
多数の再利用可能ペンおよび自動注入送達装置は、本発明の医薬組成物の皮下送達に用途がある。例は、ごく少数の例を挙げれば、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むがこれらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に用途のある使い捨て可能ペン型送達装置の例は、ごく少数の例を挙げれば、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ｔｈｅ ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびｔｈｅ ＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ｔｈｅ ＳＵＲＥＣＬＩＣＫＴＭ Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ｔｈｅ ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ｔｈｅ ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、ならびにｔｈｅ ＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ ＩＬ）を含むがこれらに限定されない。
ある特定の状況では、医薬組成物は徐放方式で送達することが可能である。一実施形態では、ポンプを使用してもよい（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７年、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することが可能である；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（編）、１９７４年、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、徐放方式は組成物標的の近くに置くことが可能であり、したがって全身用量の一部のみで済む（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４年、ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、第２巻、１１５～１３８頁参照）。他の徐放方式はＬａｎｇｅｒ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７～１５３３頁による概論で考察されている。
注射可能調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入、等用の剤形を含んでいてもよい。これらの注射可能調製物は公知の方法により製造してもよい。例えば、注射可能調製物は、例えば、上記の抗体またはその塩を注射のために習慣的に使用される無菌水性媒体または油性媒体に溶解する、懸濁するまたは乳化することにより製造してもよい。注射用の水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張液、等があり、これらの媒体は、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水添ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加体）］、等のような適切な可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油、等が用いられ、これらの媒体は、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール、等のような可溶化剤と組み合わせて使用してもよい。このようにして製造される注射液は適切なアンプルに充填されるのが好ましい。
上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に合うように適合させた単位用量で剤形に製造されるのが有利である。単位用量でのそのような剤形は、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射液（アンプル）、坐薬、等を含む。含有する前述の抗体の量は一般に、単位用量での剤形あたり約５から約５００ｍｇであり；特に、注射の形態では、その他の剤形には前述の抗体が約５から約１００ｍｇでおよび約１０から約２５０ｍｇで含有されるのが好ましい。
免疫コンジュゲート
本発明は、血中トリグリセリドまたは脂質レベルを低減することができる薬剤のような治療部分にコンジュゲートされたヒト抗ＡＮＧＰＴＬ８モノクローナル抗体（免疫コンジュゲート）を包含する。抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体にコンジュゲートしてもよい治療部分のタイプは、処置する状態および達成される所望の治療効果を考慮に入れることになる。例えば、高トリグリセリド血症、または血中トリグリセリドを低下させる、および／もしくは正常な血中トリグリセリドレベルを維持するのが望ましい他の任意の状態を処置するためには、薬剤をＡＮＧＰＴＬ８抗体にコンジュゲートしてもよい。代わりに、所望の治療効果が高トリグリセリド血症、または高い、もしくは制御されていない血中トリグリセリドレベルから生じる他の任意の状態に関連する続発症または症状を処置することである場合、その状態の続発症または症状を処置するのに適した薬剤をコンジュゲートするのが有利である可能性がある。免疫コンジュゲートを形成するための適切な薬剤の例は当技術分野では公知であり、例えば、国際特許第０５／１０３０８１号を参照されたい。
抗体の治療的使用
本抗体は、例えば、高トリグリセリド血症に罹っている患者において血中トリグリセリドレベルを低下させるのに、およびＡＮＧＰＴＬ８の活性を阻害するのが有益である広範囲の状態および障害の処置にも有用である。したがって、抗体は、例えば、現行の処置に関連する望ましくない副作用の１つまたはそれ以上を低減するおよび／または除去しつつ、内分泌系、中枢神経系、末梢神経系、心臓血管系、肺系、および胃腸管系の疾患もしくは状態または関連する症状もしくは続発症を予防する、処置する、または軽減する用途がある可能性がある。
例えば、本発明の抗体を使用して、高脂血症、高リポ蛋白血症およびアテローム生成脂質異常症、糖尿病性脂質異常症を含む脂質異常症、ＴＧ＞１０００ｍｇ／ｄＬの重篤な高トリグリセリド血症および関連する急性膵炎を含む高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、カイロミクロン血症、混合型脂質異常症（肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病、等）、リポジストロフィー、脂肪萎縮症などのような脂質代謝を含む疾患または障害を含むがこれらに限定されない疾患または障害を処置することができ、これらの疾患または障害は、例えば、減少したＬＰＬ活性および／もしくはＬＰＬ欠損、変化したＡｐｏＣ２、ＡｐｏＥ欠損、増加したＡｐｏＢ、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の増加した産生および／もしくは減少した除去、ある特定の薬物処置（例えば、グルココルチコイド処置誘発脂質異常症）、任意の遺伝的素因、食事、生活様式などにより引き起こされる。
本発明の方法は、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、高血圧、狭心症、脳卒中、脳血管疾患、うっ血性心不全、冠動脈疾患、心筋梗塞、末梢血管疾患などのような循環器疾患もしく障害を含むがこれらに限定されないトリグリセリド血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高リポ蛋白質血症、ならびに／または脂質異常症；急性膵炎；非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；糖尿病（例えば、ＩＩ型糖尿病）のような血糖障害；肥満などに関連するまたはこれから生じる疾患または障害を予防するまたは処置することも可能である。
本発明の方法は肥満に関連する疾患または障害を予防するまたは処置することも可能である。ある特定の実施形態では、本発明の方法を使用すれば、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤／アンタゴニストを投与することにより、対象において体重の低下を達成する、体脂肪量の低減を達成する、エネルギー消費を増加する、褐色脂肪特異的遺伝子の発現を誘発する、および／またはＨＤＬ－Ｃを増加することが可能である。
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその抗原結合断片は、脂質異常症、肥満に関連するメタボリックシンドロームを処置するために、または体重増加を予防するために、または正常な体重を維持するために使用してもよい。
一実施形態では、本発明は、血中トリグリセリドレベルを低下させるための、または部分的に高血中トリグリセリドレベルに関連する、もしくはこれを特徴とする状態または疾患、もしくは状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症を処置するための方法であって、表１由来のヒトＡＮＧＰＴＬ８に特異的な１つまたはそれ以上の抗体を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含み、それにより、血中トリグリセリドレベルを低下させる、またはその状態または疾患が治療される、またはその状態または疾患に関連する少なくとも１つの症状または合併症が軽減されるかもしくは重症度が低減される、方法を提供する。
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその抗原結合断片は、単独でまたは高トリグリセリド血症、もしくは高トリグリセリド血症に関連する少なくとも１つの症状を処置する第２もしくは第３の治療剤と組み合わせて使用してもよく、または、例えば、高トリグリセリド血症、例えば、家族性高トリグリセリド血症もしくは家族性異常βリポ蛋白血症を発症する遺伝的素因を有する患者において、高トリグリセリド血症に罹るリスクのある患者を処置するために使用してもよい。
他の状態は患者を高レベルのトリグリセリドになりやすくする場合がある。例えば、ベータブロッカー、経口避妊薬、利尿剤、ステロイドのようなある特定の薬物、またはタモキシフェンの使用により、トリグリセリドのレベルが上昇する場合があり、したがって、アテローム性動脈硬化症、脳卒中、心臓発作、および他の心臓状態のような、高レベルのトリグリセリドに関連する状態もしくは合併症を発症する可能性が患者で高まる場合がある。
さらに、肥満、管理が不十分な糖尿病、甲状腺機能低下症、腎疾患、またはアルコール摂取を含むある特定の他の状態は高レベルのトリグリセリドをもたらす場合がある。
一実施形態では、抗体を使用して、高血中トリグリセリドレベルを一部特徴とする疾患もしくは障害の発病を予防する、またはそのような疾患もしくは障害を発症する可能性を予防する、またはその疾患もしくは障害の重症度、もしくはその疾患もしくは障害に関連する少なくとも１つの症状を緩和してもよい。本発明の抗体は、これに限定されないが、単独でまたは高トリグリセリド血症のような高血中トリグリセリドレベルを一部特徴とする疾患もしくは状態に罹っている患者を処置するための標準的な治療であることが知られている他の薬剤もしくは方法と一緒に補助療法として使用してもよいことが想定されている。そのような標準療法は、流体投与、または血中トリグリセリド、もしくは脂質を低下させるのに、もしくは体重減少に有用である他の任意の医薬品の投与を含んでいてもよい。
一実施形態では、本明細書に記載される抗体の使用は、正常レベルのトリグリセリドを達成し、それにより高トリグリセリドレベルを特徴とする疾患の１つまたはそれ以上の症状、または疾患に関連する長期合併症を軽減する、または予防する効果的な手段である可能性がある。
本発明の抗体は、急性状況に（短期使用のため）、またはもっと長期の（慢性）使用のために使用してもよいことが想定されている。
併用療法
併用療法は、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体および本発明の抗体と、または本発明の抗体の生物学的に活性な断片と組み合わせるのが有利である任意の追加の治療薬を含んでいてもよい。
例えば、本発明の抗体は、高トリグリセリド血症のような高トリグリセリドレベルを一部特徴とする疾患または状態を処置するのに使用するために企図されている場合、第２の治療薬は、高血中トリグリセリドレベルを特徴とする疾患もしくは状態に罹っている患者において、トリグリセリドレベルのさらなる低下を助けるのに、または少なくとも１つの症状を低減するのに用いてもよい。そのような第２の薬剤は、例えば、別のＡＮＧＰＴＬ８アンタゴニスト（例えば、別の異なる抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体またはＡＮＧＰＴＬ８の小分子阻害剤）から選択してもよく、またはトリグリセリド血症、もしくは高血中トリグリセリドレベルに関連する、もしくはから生じる他の疾患もしくは状態を処置するのに有用な他の治療部分、もしくは高いおよび／もしくは制御されていない血中トリグリセリドレベルに関連する任意の長期合併症を処置するのに有用な薬剤を含んでいてもよい。
関係する実施形態では、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合断片と、（１）セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンなどのような３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－補酵素Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）レダクターゼ阻害剤；（２）コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤；（３）ニコチン酸、これはリポ蛋白質異化作用を増加する；（４）フィブラートまたは両親媒性カルボン酸、これは低密度リポ蛋白質（ＬＤＬ）レベルを低下させ、高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）およびＴＧレベルを改善し、非致死性心臓発作の数を低減する；ならびに（５）２２－ヒドロキシコレステロールのようなコレステロール除去において役割を果たすＬＸＲ転写因子の活性化因子のような第２の治療薬の組合せ、またはエゼチミブとシンバスタチンのような固定された組合せ；スタチンと胆汁樹脂（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ナイアシンとスタチン（例えば、ナイアシンとロバスタチン）；もしくはオメガ－３－脂肪酸エチルエステル（例えば、オマコール）のような他の脂質低下薬との固定された組合せである組成物を特色とする。
さらに、第２の治療薬は、グルカゴンの１つまたはそれ以上の他の阻害剤／アンタゴニストまたはグルカゴン受容体の阻害剤／アンタゴニスト、ならびにＡＮＧＰＴＬ８の他の阻害剤のような他の分子の阻害剤、ならびにＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、アポリポ蛋白質Ｃ－ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３とも呼ばれる；例えば、米国特許第８５３０４３９号、米国特許第７７５０１４１号、米国特許第７５９８２２７号に記載されるＡＰＯＣ３の阻害剤およびｖｏｌａｎｅｓｏｒｓｅｎ、ＩＳＩＳ－ＡＰＯＣＩＩＩＲｘとも呼ばれる参照）およびプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）のような他の分子の阻害剤が可能であり、これらの分子は脂質代謝、特に、コレステロールおよび／またはトリグリセリド恒常性に関与している。これらの分子の阻害剤は、小分子、アンチセンス分子およびこれらの分子に特異的に結合しその活性を遮断する抗体を含む。
一実施形態では、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を使用して糖尿病（例えば、２型糖尿病）のような疾患を処置する場合、これらの抗体は現在利用可能な糖尿病についての以下の処置の１つまたはそれ以上と組み合わせて使用してもよい。これらの処置は以下の：インスリン、インスリン類似体（下参照）、ビグアナイド（メトホルミン）、スルホニル尿素（例えば、グリブリド、グリピジド）、ＰＰＡＲガンマアゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニスト（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標）（エキセナチド）、ＴＲＵＬＩＣＩＴＹ（商標）（デュラグルチド）、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標）（リラグルチド）、ＬＹＸＵＭＩＡ（登録商標）（リキシセナチド）、ＴＡＮＺＥＵＭ（商標）（アルビグルチド）、または前述のもののいずれかの類似体）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤（例えば、サキサグリプチン（ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、シタグリプチン（ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、およびビルダグリプチン（ＧＡＬＶＵＳ（登録商標））、ナトリウム－グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ＩＮＶＯＫＡＮＡ（商標）（カナグリフロジン）、ＦＯＲＸＩＧＡ（登録商標）（ダパグリフロジン）、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン）、（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標）（プラムリンチド）、グルカゴン受容体アンタゴニスト（例えば、米国特許第８５４５８４７号に記載されている）、およびグルカゴンアンタゴニストを含む。
ある特定の関係する実施形態では、組成物は、非スルホニル尿素分泌促進物質、速効型（例えば、リスプロ、アスパルト、グルリジン）および持効型（例えば、デテミルインスリン、デグルデクインスリン、またはグラルギンインスリン）を含むインスリン類似体、エキセンディン－４ポリペプチド、ベータ３アドレナリン受容体アゴニスト、コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤、ＬＤＬ－コレステロールアンタゴニスト、コレステリルエステル輸送タンパク質アンタゴニスト（例えば、トルセトラピブ、アナセトラピブ、ダルセトラピブ、またはエバセトラピブ）、エンドセリン受容体アンタゴニスト、成長ホルモンアンタゴニスト、インスリン感受性改善薬、アミリン模倣物もしくはアゴニスト、カンナビノイド受容体アンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド－１受容体アゴニスト、メラノコルチン、メラニン凝集ホルモン受容体アゴニスト、ＳＮＲＩ、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）模倣物（例えば、米国特許出願公開第２０１１０００２８４５号および米国特許出願公開第２００８０２６１２３６号参照）、線維芽細胞成長因子受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）アゴニスト（例えば、米国特許出願公開第２０１１０１５０９０１号参照）、アミノグアニジンおよびタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤のようなしかしこれらに限定されない高度糖化最終産物形成の阻害剤からなる群から選択される第２の薬剤を含んでいてもよい。
関係のある実施形態では、第２の治療薬は、必要であれば、根底にある状態に伴う症状を軽減するおよび／または低減するように、鎮痛剤、Ｃｏｘ－２阻害剤のような非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）を含む抗炎症薬などのような１つまたはそれ以上の他の治療薬でもよい。
追加の治療活性成分（複数可）は、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の投与に先立って、これと同時に、またはこの後で投与してもよい。本開示のために、そのような投与レジメンは、第２の治療活性成分「と組み合わせた」抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の投与と見なされる。
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態に従えば、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の多回用量（または、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体と本明細書で言及される追加の治療活性薬剤のいずれかの組合せを含む医薬組成物）は、既定の時間経過にわたり対象に投与してもよい。本発明のこの態様に従った方法は、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の多回用量を対象に順次投与することを含む。本明細書で使用される場合、「順次投与する」とは、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のそれぞれの用量が異なる時点で、例えば、既定の間隔（例えば、時間、日、週または月）が開けられた異なる日に、対象に投与されることを意味する。本発明は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の最初の単回用量、続いて抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の１つまたはそれ以上の第２の用量、場合により、続いて抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の１つまたはそれ以上の第３の用量を患者に順次投与することを含む方法を含む。
用語「最初の用量」、「第２の用量」、および「第３の用量」とは、本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の投与の時間的順序のことである。したがって、「最初の用量」は処置レジメンの開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」とも呼ばれる）、「第２の用量」は最初の用量の後で投与される用量であり、「第３の用量」は第２の用量の後で投与される用量である。最初、第２、および第３の用量はすべて同量の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を含有していてもよいが、一般には投与回数の点で互いに異なっていてもよい。しかし、ある特定の実施形態では、最初、第２、および／または第３の用量に含有される抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の量は一連の処置中互いに異なる（必要に応じて上または下に調整される）。ある特定の実施形態では、処置レジメンの開始時に２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４または５）の用量が「負荷投与量」として投与され、続いて回数を少なくしてその後の用量（例えば、「維持量」）として投与される。
本発明のある特定の例示的実施形態では、それぞれの第２および／第３の用量は直前の用量の１から２６（１、１と２分の１、２、２と２分の１、３、３と２分の１、４、４と２分の１、５、５と２分の１、６、６と２分の１、７、７と２分の１、８、８と２分の１、９、９と２分の１、１０、１０と２分の１、１１、１１と２分の１、１２、１２と２分の１、１３、１３と２分の１、１４、１４と２分の１、１５、１５と２分の１、１６、１６と２分の１、１７、１７と２分の１、１８、１８と２分の１、１９、１９と２分の１、２０、２０と２分の１、２１、２１と２分の１、２２、２２と２分の１、２３、２３と２分の１、２４、２４と２分の１、２５、２５と２分の１、２６、２６と２分の１またはそれ以上）週間後に投与される。用語「直前の用量」とは、本明細書で使用される場合、一連の複数回投与において、介在する用量なしで、順にすぐ次の用量の投与に先立って患者に投与される抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の用量を意味する。
本発明のこの態様に従った方法は、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の任意の数の第２および／または第３の用量を患者に投与することを含んでもよい。例えば、ある特定の実施形態では、単回の第２の用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）の第２の用量が患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単回の第３の用量のみが患者に投与される。他の実施形態では、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）の第３の用量が患者に投与される。投与レジメンは、特定の対象の生存期間にわたって無期限に、またはそのような処置がもはや治療的に必要でなくなるもしくは有利になるまで実行してもよい。
複数の第２の用量を含む実施形態では、それぞれの第２の用量はその他の第２の用量と同じ頻度で投与してもよい。例えば、それぞれの第２の用量は、直前の用量の１から２週間または１から２カ月後に患者に投与してもよい。同様に、複数の第３の用量を含む実施形態では、それぞれの第３の用量はその他の第３の用量と同じ頻度で投与してもよい。例えば、それぞれの第３の用量は、直前の用量の２から１２週間後に患者に投与してもよい。本発明のある特定の実施形態では、第２および／または第３の用量が患者に投与される頻度は処置レジメンの経過にわたって変動することが可能である。投与頻度は、臨床試験に続く個々の患者の必要に応じて医師が処置の経過中に調整してもよい。
抗体の診断使用
本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体を使用して、例えば、診断目的で、サンプルにおいてＡＮＧＰＴＬ８を検出するおよび／または測定してもよい。例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体、またはその断片を使用して、ＡＮＧＰＴＬ８の異常な発現（例えば、過剰発現、過小発現、発現の欠如、等）を特徴とする状態または疾患を診断してもよい。ＡＮＧＰＴＬ８についての例示的診断アッセイは、例えば、患者から得たサンプルを本発明の抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体に接触させることを含んでいてもよく、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されている、または患者サンプルからＡＮＧＰＴＬ８タンパク質を選択的に単離する捕捉リガンドとして使用する。代わりに、非標識抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、それ自体が検出できるほどに標識されている第２の抗体と組み合わせて診断用途に使用することが可能である。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのような放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素が可能である。
サンプル中のＡＮＧＰＴＬ８を検出するまたは測定するのに使用可能な特定の例示的アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を含む。
本発明に従ったＡＮＧＰＴＬ８診断アッセイにおいて使用可能なサンプルは、患者から入手可能な任意の組織または流体サンプルを含み、このサンプルは正常なまたは病的状態下で検出可能量のＡＮＧＰＴＬ８タンパク質、またはその断片を含有する。一般に、健康な患者（例えば、異常なＡＮＧＰＴＬ８レベルまたは活性に関連する疾患または状態に悩まされていない患者）から得られた特定のサンプル中のＡＮＧＰＴＬ８のレベルが測定され、最初にＡＮＧＰＴＬ８のベースライン、または標準レベルを確立することになる。次に、ＡＮＧＰＴＬ８のこのベースラインレベルは、ＡＮＧＰＴＬ８関係疾患もしくは状態、またはそのような疾患もしくは状態に関連する症状を有すると疑われる個人から得られたサンプルにおいて測定されたＡＮＧＰＴＬ８のレベルと比較することが可能である。
本方法を説明する前に、本発明が記載される特定の方法、および実験条件に限定されてはおらず、したがってそのような方法および条件は変動し得ることは理解されるべきである。本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することだけを目的としており、限定的であることを意図していないことも理解されるべきである。なぜならば、本発明の範囲が限定されるのは添付の特許請求の範囲のみによるからである。使用される数字（例えば、量、温度、等）に関しては正確さを保証するように努力を重ねてきたが、一部の実験誤差および逸脱は説明されるはずである。他の方法で示されなければ、割合は重量割合であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。
他の方法で定義されてなければ、本明細書で使用される専門用語および科学用語はすべて本発明が属する分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は特定の列挙される数値に関して使用される場合、値が列挙された値から１％以下で変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、表現「約１００」は９９および１０１ならびにその間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、等）を含む。
本明細書に記載される方法および材料に類似するまたはこれと等価のいかなる方法および材料も本発明の実行または試験において使用可能であるが、ここでは好ましい方法および材料が記載される。本明細書で言及される出版物はすべて参照によりその全体を本明細書に組み込む。
抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の産生
抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、Ｃ末端マウスＩｇＧ２ａタグ（配列番号３４０参照）と一緒に発現される組換えヒトＡＮＧＰＴＬ８を含む免疫原を用いて、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む操作マウス）を免疫することにより得られた。抗体免疫応答はＡＮＧＰＴＬ８特異的免疫アッセイによりモニターした。所望の免疫応答が達成されると、いくつかの完全ヒト抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体は、米国特許出願公開第２００７／０２８０９４５号Ａ１に記載される抗原陽性Ｂ細胞から産生した。前記特許文献は参照によりその全体を本明細書に組み込む。
本実施例の方法に従って産生される例示的抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体のある特定の生物学的特性は、下に示される実施例において詳細に説明される。
重および軽鎖可変領域アミノ酸ならびに核酸配列
表１は、本発明の選択された抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体の重および軽鎖可変領域アミノ酸ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示している。対応する核酸配列識別子は表２に示されている。
Figure 0007133551000001
Figure 0007133551000002
表１および２に示されるように、抗体は典型的には、本明細書では以下の命名法：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」、「Ｈ４Ｈ」、等）、続いて数字識別子（例えば、「１５３２１」、「１５３４１」、「１５３５０」、等）、続いて「Ｐ」または「Ｎ」接尾辞に従って呼ばれる。したがって、本命名法に従えば、抗体は本明細書では、例えば「Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ」、等と呼ばれる場合がある。本明細書で使用される抗体名称のＨ４Ｈ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ４Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ２ Ｆｃを有する（すべての可変領域は、抗体名称中最初の「Ｈ」で表されるように完全ヒトである）。当業者であれば認識するように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することが可能である（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体はヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することが可能である、等）が、いずれにしても、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、表１および２に示される数字識別子により示されるが、依然として同じであり、結合特性はＦｃドメインの性質とは無関係に同一であるまたは実質的に類似していると予想される。
ＡＮＧＰＴＬ８、ＡＮＧＰＴＬ３、およびＡＮＧＰＴＬ４ペプチドに結合するＡＮＧＰＴＬ８抗体についての解離速度定数（Ｋｄ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）決定
ＡＮＧＰＴＬ３［国際公開第２０１２／１７４１７８号Ａ１；Ｌｅｅら、（２００９）ＪＢＣ、２８４：１３７３５～１３７４５頁］およびＡＮＧＰＴＬ４［Ｄｅｓａｉら、（２００７）ＰＮＡＳ、１０４：１１７６６～１１７７１頁］のＮ末端コイルドコイル領域に結合する抗体がＡＮＧＰＴＬタンパク質のＬＰＬ阻害活性を遮断することは以前に立証されていた。本実験では、ＡＮＧＰＴＬ８に対する抗体を、ＡＮＧＰＴＬ８のＮ末端領域由来のペプチドへの結合について試験した。
ヒトＡＮＧＰＴＬ８ペプチド（ｈＡＮＧＰＴＬ８ペプチド、配列番号３３７）に結合するＡＮＧＰＴＬ８抗体の解離速度定数は、リアルタイム表面プラズモンベースのＭＡＳＳ－１バイオセンサープラットホームを使用して決定した。アッセイは、ＡＮＧＰＴＬ８抗体がセンサー表面で捕捉され、ペプチドが抗体表面に注射されるフォーマットを利用した。ヒトＡＮＧＰＴＬ３（ｈＡＮＧＰＴＬ３ペプチド、配列番号３３８）およびヒトＡＮＧＰＴＬ４（ｈＡＮＧＰＴＬ４ペプチド、配列番号３３９）のＮ末端コイルドコイル領域由来のペプチドも対照として含まれた。ＡＮＧＰＴＬ４ペプチドに結合する対照抗体（米国特許出願公開第２０１１／０１５９０１５号Ａ１からのＨ４Ｈ２６８Ｐ）および負のアイソタイプ対照抗体も含まれた。結合研究はすべて、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ ｖ／ｖ サーファクタントＴｗｅｅｎ－２０（ＨＢＳ－ＥＴランニングバッファー）において２５℃で実施した。ＨＣＡセンサー表面は、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ－１００８－３９）へのアミンカップリングを介して誘導体化し、この表面にはおおよそ１０００ＲＵのそれぞれのＡＮＧＰＴＬ８抗体または対照抗体が捕捉された。ペプチドストック溶液はＨＢＳ－ＥＴランニングバッファーで５００ｎＭまで希釈し、これを抗体捕捉表面上に流速３０μＬ／分で４分間注射し、続いてＨＢＳ－ＥＴランニングバッファーにおいて結合ペプチドを１０分間解離させた。
捕捉されたＡＮＧＰＴＬ８抗体に結合するペプチドの会合段階は１対１結合モデルに適合することはできず；したがって、解離速度定数（Ｋｄ）値のみを、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、リアルタイム結合センサーグラムを適合させることにより計算した。解離半減期（ｔ１／２）は
Figure 0007133551000003
 としてＫｄから計算した。
補足されたＡＮＧＰＴＬ８抗体、対照ＡＮＧＰＴＬ４抗体、およびアイソタイプ対照抗体に結合するＡＮＧＰＴＬ８、ＡＮＧＰＴＬ３、およびＡＮＧＰＴＬ４Ｎ末端領域ペプチドについての結合パラメータは表３～５に示されている。
結果
これらの実験条件下では、５００ｎＭのｈＡＮＧＰＴＬ８、ｈＡＮＧＰＴＬ３、またはｈＡＮＧＰＴＬ４ペプチドによりブランク抗ｈＦｃ表面に示される最大非特異的結合シグナルは３ＲＵであった。したがって、３ＲＵ非特異的バックグランドの３倍であるシグナル（すなわち、≧９ＲＵ）を有する結合相互作用は特異的結合相互作用と見なした。この基準に基づいて、９ＲＵ未満の抗体－ペプチド結合シグナルは非結合と見なした（表１中ＮＢ）。
この結合研究から、ＡＮＧＰＴＬ８抗体、Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ、Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１５３４５ＰがＮ末端領域ＡＮＧＰＴＬ８ペプチド（配列番号３３７）に特異的に結合することが明らかにされた。ＡＮＧＰＴＬ８抗体のどれも、ｈＡＮＧＰＴＬ３（配列番号３３８）にもｈＡＮＧＰＴＬ４（配列番号３３９）Ｎ末端領域ペプチドにも結合しなかった。
Figure 0007133551000004
Figure 0007133551000005
Figure 0007133551000006
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による完全長ヒトおよびサルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合するＨ４Ｈ１５３４１Ｐについての動態学的結合パラメータの決定
完全長ヒトおよびカニクイザルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合するＡＮＧＰＴＬ８抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐについての平衡解離定数（ＫＤ）を、リアルタイム表面プラズモン共鳴ベースのＭＡＳＳ－１バイオセンサープラットホームを使用して決定した。アッセイでは、ヒトまたはサルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質が固定化されているセンサー表面上にＨ４Ｈ１５３４１Ｐを注射した。結合研究はすべて、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ ｖ／ｖ サーファクタントＴｗｅｅｎ－２０（ＨＢＳ－ＥＴランニングバッファー）において２５℃で実施した。ＨＣＡセンサー表面は先ずアミンカップリングヤギ抗マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃１０８０－０１）により誘導体化し、次にその上にＣ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ（ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ；配列番号３４０）と一緒に発現されたヒトＡＮＧＰＴＬ８またはＣ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ（ＭｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ；配列番号３４１）と一緒に発現されたサルＡＮＧＰＴＬ８がおおよそ３０ＲＵ（結合単位）捕捉された。異なる濃度のＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂは先ず、ＨＢＳ－ＥＴランニングバッファー（３００ｎＭ～１．２３ｎＭ；３倍連続希釈）で製造し、次にＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ捕捉表面上に流速３０μＬ／分で４分間注射し、続いてＨＢＳ－ＥＴランニングバッファーにおいて結合ｍＡｂを１０分間解離させた。
動態結合（Ｋａ）および解離（Ｋｄ）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、リアルタイム結合センサーグラムをマストランスポート限界のある１対１結合モデルに適合させることにより決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）は
Figure 0007133551000007
 として動態速度定数から計算した。
２５℃でｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃおよびＭｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃに結合する抗ＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂについての結合動態パラメータは表６に示されている。
結果
抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐはセンサー表面に固定化されたヒトとサルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質の両方に結合し、記録された解離段階中は測定可能な解離を示さなかった。結合親和性の概算を得るために、解離速度定数Ｋｄは実験条件下の上限検出限界１．０Ｅ－０５ １／ｓに固定した。ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃおよびＭｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃに結合するＨ４Ｈ１５３４１Ｐの平衡解離定数（ＫＤ）値はそれぞれ１１７ｐＭおよび８６ｐＭまたはそれ以下であると推定した。
Figure 0007133551000008
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるヒトおよびサルＡＮＧＰＴＬ８結合特異性の決定
ヒトおよびサルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質へのＡＮＧＰＴＬ８抗体の結合を
Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸバイオセンサープラットホーム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの一部門）を用いたバイオレイヤー干渉法を使用して調べた。実験はすべて、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％ ｖ／ｖ サーファクタントＴｗｅｅｎ－２０および１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡにおいて、反応多重ウェルプレートを１０００ｒｐｍで撹拌しながら２５℃で実施した。Ｃ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ（ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ；配列番号３４０）付きで産生されたヒトＡＮＧＰＴＬ８またはＣ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ（ＭｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ；配列番号３４１）付きで産生されたカニクイザルＡＮＧＰＴＬ８はおおよそ１．６ｎｍが、１０μｇ／ｍＬのそれぞれのタンパク質を含有するウェルにセンサーを４分間浸すことにより抗ｍＦｃ（ＡＭＣ）Ｏｃｔｅｔバイオセンサー上で捕捉した。同じ条件下で、同じｍＦｃタグ付の負の対照タンパク質（ｈＬＤＬＲ－ｍＦＣ）もＡＭＣセンサーに結合させた。次に、４つのセンサー全て、３つはタンパク質結合および１つはブランク、は１００ｎＭの異なるＡＮＧＰＴＬ８モノクローナル抗体またはアイソタイプ対照を含有するウェルに４分間浸した。４分間の結合工程後に観察された結合シグナルは表７にまとめている。
結果
本研究で試験した２５のＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂのうち、２４の抗体が無関係な対照センサーチップ上の最大結合シグナルよりも高い結合シグナルを示した（０．０３ｎｍ；この値を使用してバックグランドの何倍として結合シグナルを計算した）。２４のヒトＡＮＧＰＴＬ８バインダーのうち、２０はサルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質上での陽性結合を示した。サルＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合しなかった４つの抗体も、バックグランド結合シグナルの１～２倍の間の値を有する低結合シグナルをヒトＡＮＧＰＴＬ８タンパク質上で示した。ヒトＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合する２４の抗体では、４つの抗体（Ｈ４Ｈ１５３６２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１５３２１Ｐ、Ｈ４Ｈ１５３３０Ｐ、Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２）がバックグランドの１０倍の結合シグナルを示した。別のグループの１２の抗体はバックグランドの５～１０倍の間の結合シグナルを示した。残りの抗体はバックグランドレベルの１～５倍の間の結合シグナルでヒトＡＮＧＰＴＬ８タンパク質に結合した。
Figure 0007133551000009
ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける循環トリグリセリドレベルに対するＩｇＧ４抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効果
血清トリグリセリド（ＴＧ）レベルに対する抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体の効果はヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおいて決定した。マウスは実験の７日前に予め出血させて５頭のマウスの群に入れ、それぞれを抗体ごとに試験した。抗体は、研究の０日目に皮下注射により１０ｍｇ／ｋｇ用量で投与した（抗ｈＡＮＧＰＴＬ８および無関係な特異性を有するアイソタイプ適合（ｈＩｇＧ４）対照）。マウスは抗体注射後連続日で出血させ（非断食）、ＴＧレベルをＡＤＶＩＡ（登録商標）１８００血清化学アナライザー（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清中で決定した。平均はすべての試験抗体について時点ごとに計算した。結果は、血清ＴＧ濃度の（平均±ＳＥＭ）として表されるが、表８～１３に示されている。循環抗ｈＡＮＧＰＴＬ８抗体（血清Ａｂ）のレベルも標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定した。手短に言えば、プレートをヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で被覆して血清Ａｂを捕捉した。次に、血清をプレートに添加し、捕捉抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して化学発光により検出した。結果は、（平均±ＳＥＭ）として表されるが、表１４～１９に示されている。対照：アイソタイプ適合対照Ａｂを受けたマウス。
結果
循環ＴＧレベルに対するｈＡＮＧＰＴＬ８への２５のｍＡｂの効果はヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおいて試験した。抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは、投与後循環ＴＧの有意な低下（最大６８％平均）をもたらした（対照ｍＡｂと比べて）。
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ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおけるｈＡＮＧＰＴＬ８抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの用量応答
血清トリグリセリド（ＴＧ）に対するｈＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂ、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ、の異なる用量の効果をヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおいて評価した。マウスは実験の７日前に予め出血させて５頭のマウスの群に入れ、それぞれを用量ごとに試験した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは、研究の０日目に単回用量皮下注射により１、５、１０および２５ｍｇ／ｋｇでならびに無関係な特異性を有するアイソタイプ適合（ｈＩｇＧ４）対照を１０ｍｇ／ｋｇで投与した。マウスは抗体注射後２、７，１４および２１日目に出血させ（非断食）、ＴＧレベルをＡＤＶＩＡ（登録商標）１８００血清化学アナライザー（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により血清中で決定した。平均は時点ごとに計算した。結果は、血清ＴＧ濃度の（平均±ＳＥＭ）として表されるが、図１Ａに示されている。
循環抗ヒト抗体（血清Ａｂ）のレベルは標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定した。手短に言えば、プレートをヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で被覆して血清Ａｂを捕捉した。次に、血清をプレートに添加し、捕捉抗体は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して化学発光により検出した。結果は、（平均±ＳＥＭ）として表されるが、図２に示されている。対照Ａｂとはアイソタイプ適合対照Ａｂを受けたマウスのことである。
結果
循環ＴＧおよびコレステロールレベルに対する４つの異なる用量のＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（抗ｈＡＮＧＰＴＬ８）の効果をヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおいて試験した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐにより血清ＴＧの用量依存的な持続する有意な低下（最大６６％平均、対照ｍＡｂと比べて）がもたらされ、５ｍｇ／ｋｇが最低の有効用量であった。全コレステロールレベルに対しては効果は観察されなかった。
ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける抗ｈＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂ処置後のリポ蛋白質リパーゼ（ＬＰＬ）活性の評価
ＬＰＬ活性に対するｈＡＮＧＰＴＬ８ ｍＡｂ（Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ）投与の効果をヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおいて評価した。マウスは実験の７日前に予め出血させて５頭のマウスの群に入れ、それぞれをｍＡｂごとに試験した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照Ａｂは、研究の０日目に単回用量皮下注射により１０ｍｇ／ｋｇ用量で投与した。研究４日目、マウスに尾部静脈を介する静脈注射によりヘパリンを２５０Ｕ／ｋｇで投与し、これは血管内皮表面からＬＰＬを放出する。５分後、マウスは後眼窩から出血させ、ヘパリン後血漿を収集して分画し、ＬＰＬをヘパリン－セファロースクロマトグラフィーを使用して肝性ヘパリンから分離した。ヘパリン後血漿は、ＧＥ Ａｋｔａ Ｐｒｉｍｅにより制御される１．０－ｍｌヘパリン－セファロースＨｉＴｒａｐカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に充填し、０．２５ＭのＮａＣｌ、２０％のグリセロール、１％のＢＳＡ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５で平衡化した。カラムは１０ｍｌの平衡バッファーで洗浄し、３０ｍｌのＮａＣｌ勾配（２０％のグリセロール、１％のＢＳＡ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５中０．２５～１．５Ｍ）で溶出した。得られた画分は肝性リパーゼによりプールし、ＬＰＬピークおよびリパーゼ活性はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｅｎｚｃｈｅｋリパーゼ基質（カタログ番号Ｅ３３９５５）を使用してアッセイした。動態反応はＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３プレートリーダー上４８２ｎｍ励起／５１８ｎｍ放出で読み取った。結果は、相対的蛍光単位（ＲＦＵ）（平均±ＳＥＭ）として表され、図３Ａおよび３Ｂに示されている。対照Ａｂとはアイソタイプ適合負の対照Ａｂを受けたマウスのことである。
結果
結果によれば、ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（抗ｈＡＮＧＰＴＬ８）を投与するとＬＰＬ活性は有意に増加し、肝性リパーゼ活性には何の効果もないことが明らかになった。
ｈＡＮＧＰＴＬ８ｍＡｂ Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを用いて処置したヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにおける脂質負荷試験
トリグリセリドクリアランスに対するｍＡｂ Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを用いたＡＮＧＰＴＬ８阻害の効果を急性脂肪負荷により評価した。ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスは実験の８日前に予め出血させて６頭のマウスの群に入れ、それぞれをｍＡｂごとに試験した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよびアイソタイプ適合対照Ａｂは、研究の０日目に単回用量皮下注射により１０ｍｇ／ｋｇ用量で投与した。研究４日目、マウスは、２．５μｌ／ｇ体重での２０％のイントラリピッド（Ｂａｘｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＩＬ）の静脈内投与に続いて４日間断食した。ＴＧレベルは、引き続く時点で尾部静脈から収集した血液で評価した。結果は、ＴＧ濃度の（平均±ＳＥＭ）として表され、図４に示されている。対照Ａｂとはアイソタイプ適合負の対照Ａｂを受けたマウスのことである。
結果
ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウスにＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（抗ｈＡＮＧＰＴＬ８）を投与すると、対照抗体と比べて、急性脂肪負荷後のＴＧレベルは有意に低くなる。これらのデータから、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐが、ＡＮＧＰＴＬ８を遮断することにより、循環からの加速されたＴＧクリアランスを促進することが示唆される。
アンジオポエチン様タンパク質８についてのＨｉｓｅｎｓｅ線形エピトープマッピング
ＨｉＳｅｎｓｅ線形ペプチドを使用するＰｅｐｓｃａｎ分析を用いて抗体Ｈ４Ｈ１５３４１ＰおよびＨ４Ｈ１５３６７Ｐ２についての線形エピトープを確立した。研究はＰｅｐｓｃａｎ Ｐｒｅｓｔｏ ＢＶ（Ｚｕｉｄｅｒｓｌｕｉｓｗｅｇ ２、８２４３ＲＣ Ｌｅｌｙｓｔａｄ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）で行った。Ｐｅｐｓｃａｎデータはすべて、自社で開発されＰｏｓｔｇｒｅＳＱＬストーレッジバックエンド上に築かれた商標登録されたデータベースアプリケーションであるソフトウェアパッケージＰｅｐｌａｂ（商標）に保管する。
ペプチドの合成
標的分子のエピトープを再構築するため、ペプチドのライブラリーを合成した。アミノ官能化ポリプロピレン支持体は、商標登録された親水性ポリマー製剤を移植し、続いてヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と一緒にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＤＣ）を使用してｔ－ブチルオキシカルボニル－ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用してＢｏｃ基を引き続き切断することにより得た。標準Ｆｍｏｃペプチド合成を使用して、カスタム修正されたＪＡＮＵＳリキッドハンドリング装置（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によりアミノ官能化ポリプロピレン支持体上でペプチドを合成した。
アレイ上へのアンジオポエチン様タンパク質８の結合
標的タンパク質を正の対照としてミニカード上に結合させた。アンジオポエチン様タンパク質８（ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ）をアレイ上に結合させるため、２つの架橋剤、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）およびグルタルアルデヒド（ＧＤＡ）を使用した。ＭＢＳでは、４０μｌのｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃを１μｌのＭＢＳ（２ｍｇ／ｍｌ）と混合し、室温で４５分間インキュベートし、次にアレイ上のリンカーモチーフＣＧＧＣＧＧ（配列番号３４６）を含有する位置に適用した。ＧＤＡ連結では、リン酸バッファー（ｐＨ５．０）中０．０５％ＧＤＡをアレイ上に適用し、室温で４時間インキュベートし、次にリン酸バッファーｐＨ８．０中５または２０μｇ／ｍｌの濃度でｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃをアレイ上のＧｌｙのみを含有する位置に添加し、遊離のＮ末端への結合を可能にした。
ＥＬＩＳＡスクリーニング
合成されたペプチドのそれぞれへの抗体の結合をＰＥＰＳＣＡＮベースのＥＬＩＳＡで試験した。ペプチドアレイは一次抗体溶液と一緒にインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイは１／１０００希釈の適切な抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ヤギ抗ヒトＨＲＰコンジュゲート、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０１０－０５）と一緒に２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホン酸塩（ＡＢＴＳ）および２０μｌ／ｍｌの３パーセントＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色現象を測定した。発色現象は電荷結合素子（ＣＣＤ）－カメラおよび画像処理システムを用いて定量化した。
スクリーニング詳細
抗体結合は、抗体の濃度ならびにＥＬＩＳＡバッファー中の競合タンパク質の量および性質を含む、要因の組合せに依存する。その上、プレコート条件（実験サンプルと一緒のインキュベーションに先立つペプチドアレイの特定の処理）は結合に影響を及ぼす。これらの詳細は以下の通りに要約される。
ラベル 希釈 サンプルバッファー 前条件付け
Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ １μｇ／ｍｌ １００％ ＳＱ １００％ ＳＱ
Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２ １μｇ／ｍｌ １００％ ＳＱ １００％ ＳＱ
負のアイソタイプ対照 １μｇ／ｍｌ １００％ ＳＱ １００％ ＳＱ
Ｐｅｐｓｃａｎバッファーおよび前条件付け（ＳＱ）では、数は競合タンパク質の相対量を示す（ウマ血清と卵白アルブミンの組合せ）。
データ処理
ＣＣＤカメラから得られる値は０から３０００ｍＡＵに及ぶ範囲があり、標準９６ウェルプレートＥＬＩＳＡリーダーに類似している。結果は定量化され、Ｐｅｐｌａｂデータベースに保管される。時折、ウェルは気泡を含有し、偽陽性値を生じ、カードは手作業で点検し、気泡が引き起こすいかなる値も０とスコアー化される。
合成品質管理
合成されたペプチドの品質を検証するため、別々のセットの正および負の対照ペプチドを並行して合成した。これらのペプチドは抗体５７．９を用いてスクリーニングした（Ｐｏｓｔｈｕｍｕｓら、１９９０年 Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６４：３３０４～３３０９頁）。
結果
ペプチドの設計
ペプチドの以下のセット：
ヒトＡＮＧＰＴＬ８、成熟配列、ＮＰ＿０６１１５７．３由来のアミノ酸２２～１９８
１ ＡＰＭＧＧＰＥＬＡＱ ＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧ ＴＬＱＬＧＱＡＬＮＧ ＶＹＲＴＴＥＧＲＬＴ ＫＡＲＮＳＬＧＬＹＧ ５０
５１ ＲＴＩＥＬＬＧＱＥＶ ＳＲＧＲＤＡＡＱＥＬ ＲＡＳＬＬＥＴＱＭＥ ＥＤＩＬＱＬＱＡＥＡ ＴＡＥＶＬＧＥＶＡＱ １００
１０１ ＡＱＫＶＬＲＤＳＶＱ ＲＬＥＶＱＬＲＳＡＷ ＬＧＰＡＹＲＥＦＥＶ ＬＫＡＨＡＤＫＱＳＨ ＩＬＷＡＬＴＧＨＶＱ １５０
１５１ ＲＱＲＲＥＭＶＡＱＱ ＨＲＬＲＱＩＱＥＲＬ ＨＴＡＡＬＰＡ １７７（配列番号３４７）
は標的配列上で合成した。
抗体は、ＡＮＧＰＴＬ８の完全配列を網羅する一連の１５マーペプチドへの結合について試験し、それぞれのペプチドはその次のペプチド由来の１つのアミノ酸により相殺される。もっと細かいエピトープ分析のために一連の試験されるペプチド内にはダブルアラニン（「ＡＡ」）置換も含まれた。
ＳＥＴ１．模倣物：線形 タイプ：ＬＩＮ
説明 アンジオポエチン様タンパク質８の標的配列に由来する長さ１５のペプチドで１残基が相殺される。
配列（最初の１０）
ＡＰＭＧＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴ（配列番号３４８）
ＰＭＧＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬ（配列番号３４９）
ＭＧＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬ（配列番号３５０）
ＧＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦ（配列番号３５１）
ＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨ（配列番号３５２）
ＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧ（配列番号３５３）
ＥＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧＴ（配列番号３５４）
ＬＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧＴＬ（配列番号３５５）
ＡＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧＴＬＱ（配列番号３５６）
ＱＨＥＥＬＴＬＬＦＨＧＴＬＱＬ（配列番号３５７）
ＳＥＴ２．模倣物：線形 タイプ：ＬＩＮ．ＡＡ
説明 ｓｅｔ１のペプチドであるが、１０位と１１位の残基がＡｌａで置き換えられている。どちらかの位置に天然のＡｌａが存在すると考えられる場合、そのＡｌａはＧｌｙで置き換えられる。このセットでのペプチドの順は無作為化された。アレイ上の実際の順が示されている。
配列（最初の１０）
ＴＡＥＶＬＧＥＶＡＡＧＱＫＶＬ（配列番号３５８）
ＶＹＲＴＴＥＧＲＬＡＡＡＲＮＳ（配列番号３５９）
ＧＶＹＲＴＴＥＧＲＡＡＫＡＲＮ（配列番号３６０）
ＶＱＲＬＥＶＱＬＲＡＧＷＬＧＰ（配列番号３６１）
ＬＴＧＨＶＱＲＱＲＡＡＭＶＡＱ（配列番号３６２）
ＶＬＫＡＨＡＤＫＱＡＡＩＬＷＡ（配列番号３６３）
ＬＲＤＳＶＱＲＬＥＡＡＬＲＳＡ（配列番号３６４）
ＲＲＥＭＶＡＱＱＨＡＡＲＱＩＱ（配列番号３６５）
ＶＳＲＧＲＤＡＡＱＡＡＲＡＳＬ（配列番号３６６）
ＡＹＲＥＦＥＶＬＫＧＡＡＤＫＱ（配列番号３６７）
スクリーニングの生のＥＬＩＳＡ結果が提供されプロットされて（箱髭図、データは示していない）それぞれのデータセットを描き平均ＥＬＩＳＡシグナル、分布、およびそれぞれのデータセット内の外れ値を示している。実験条件（抗体の量、ブロッキング強度、等）に応じて、ＥＬＩＳＡデータの異なる分布が得られた。
抗体Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２
高厳密性条件下で試験した場合、抗体Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２は、配列１ＡＰＭＧＧＰＥＬＡＱＨＥＥＬＴ１５（配列番号３４８）からなる１つの線形ペプチドのみに強く結合した。このサンプルは同じ条件下で２度試験し、繰り返し同じ結果が得られた。抗体Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２はアンジオポエチン様タンパク質８にも強く結合し、これは正の対照としてアレイ上に結合させた。興味深いことに、ＧＤＡカップリングと比べるとＭＢＳを使用して結合させた標的タンパク質とは多少弱い結合が得られた。
抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ
高厳密性条件下で試験した場合、抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは一連の線形ペプチドに強く結合し、これらのペプチドは共通配列１５０ＱＲＱＲＲＥＭＶＡＱ１５９（配列番号３６８）を含有する。ｓｅｔ１（天然の線形エピトープ模倣物）とｓｅｔ２（ダブルＡｌａ突然変異体）に記録される強度プロファイルを比較すると、残基Ｒ１５４、Ｅ１５５、およびＱ１５９が抗体結合に不可欠であることが示される。抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐはアンジオポエチン様タンパク質８にも強く結合し、これは固定化とは無関係に、正の対照としてアレイ上に結合させた。
負のアイソタイプ対照
負のアイソタイプ対照はアレイ上に存在するいかなるペプチドにも結合しなかった。さらに、アンジオポエチン様タンパク質８との検出可能な結合は記録されず、アンジオポエチン様タンパク質８は正の対照としてアレイ上に結合させた。負のアイソタイプ対照は、Ｐｅｐｓｃａｎ ＥＬＩＳＡにおいて使用されるヤギ抗ヒト二次コンジュゲートを用いてさらに試験した。抗体はこの二次により認識可能である。
結論
本研究のために提供される３つの抗体はＨｉＳｅｎｓｅペプチドアレイ上で試験した。２つの抗体に対して仮の線形ペプチドを確立することが可能であった。繰り返しインキュベートしたにもかかわらず、抗体負のアイソタイプ対照はアレイに結合しなかった。本研究で同定されたコアとなる仮のエピトープは以下に収載されている：
Figure 0007133551000026
したがって、抗体Ｈ４Ｈ１５３４１ＰおよびＨ４Ｈ１５３６７Ｐ２はそれぞれＣおよびＮ末端内で異なる線形配列を認識する。ＭＢＳカップリングを用いた抗体Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２について得られたシグナルはＧＤＡカップリングを用いたよりも少なかったという事実は、その所在が先端のＮ末端であることと併せて、Ｎ末端アミンそれ自体がエピトープの一部である可能性があることを示している。さらに、抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐでは、ダブルアラニン突然変異体は結合にとって決定的に重要な残基を特定する役割を果たした（薄灰色で陰影をつけた残基、上記）
抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐはアンジオポエチン様タンパク質８のＣ末端領域を標的にし、Ｈ４Ｈ１５３６７Ｐ２が標的にするのはＮ末端に他ならない。抗体負のアイソタイプ対照はアレイに結合しなかった。
モノクローナル抗体を用いたＡＮＧＰＴＬ８遮断はマウスにおいて血漿トリグリセリドクリアランス、エネルギー消費および体重減少を促進する
以下の実施例では、完全ヒトモノクローナル抗体を用いたＡＮＧＰＴＬ８遮断は、マウスにおいて血漿ＴＧを減らし、ＬＰＬ活性を増やし、体重および脂肪含量を低下させることが明らかにされている。上のデータに加えて、これらのデータは、ＡＮＧＰＴＬ８阻害が高トリグリセリド血症の処置の標的であり、脂肪含量および体重に追加の利益があることを示している。
材料および方法
抗体およびタンパク質試薬
上述のように、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ’ｓ Ｖｅｌｏｃｉｍｍｕｎｅ（登録商標）テクノロジープラットホーム（Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｌ．Ｅ．ら、２０１４年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１１：５１４７～５１５２頁；Ｍｕｒｐｈｙ、Ａ．Ｊら、２０１４年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１１：５１５３～５１５８頁）を使用して導き出したもので、サルおよびヒト由来のＡＮＧＰＴＬ８に対して高親和性を有する完全ヒトモノクローナル抗体である。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは、半抗体形成を最小限にするために（Ｌａｂｒｉｊｎ、Ａ．Ｆ．ら、２００９年．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２７：７６７～７７１頁）ヒンジ領域に安定化突然変異（１０８位でセリンからプロリンへ）のあるヒトＩｇＧ４定常領域を有する（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ、Ｐ．Ｈ．ら、１９８１年 ＰＮＡＳ ＵＳＡ ７８（７）：４４９５～４４９９頁）。無関係な特異性を有するアイソタイプ適合抗体を対照として使用した。
結合研究
ヒトおよびサルＡＮＧＰＴＬ８へのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの結合は、２５℃で、
１０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ ｖ／ｖのサーファクタントＴｗｅｅｎ－２０（ＨＢＳ－ＥＴ）ランニングバッファー中で表面プラズモン共鳴イメージング（ＳＰＲｉ）ベースのＭＡＳＳ－１バイオセンサーを使用して研究した。ＨＣＡセンサー表面は先ずヤギ抗マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃１０８０－０１）とアミンカップリングし、Ｃ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ付で発現されたＡＮＧＰＴＬ８（ｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ）またはＣ末端マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグ付で発現されたサルＡＮＧＰＴＬ８（ｍｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ）が約３０ＲＵ捕捉された。異なる濃度のＨ４Ｈ１５３４１Ｐは、ＨＢＳ－ＥＴランニングバッファー中で製造されるが、後にｈＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃまたはｍｆＡＮＧＰＴＬ８－ｍＦｃ捕捉表面上に流速３０μＬ／分で４分間注射し、続いてＨＢＳ－ＥＴランニングバッファー中で１０分間結合ｍＡｂを解離させた。分析物なしでのランニングバッファーの注射を実施して、結合したヤギ抗マウスＩｇＧ２ａポリクローナル抗体表面からの捕捉されたｍＡｂの自然な解離から得られるベースライン変動の引き算を可能にした。生の結合データは分析物注射の開始に整列させ、続いて参照フローセルから引き算した。処理したデータは後にＳｃｒｕｂｂｅｒ（ｖ．２．０ｃ、ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して解析し、対照バッファー注射を使用する第２の参照引き算を実施した。会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）および解離定数（ＫＤ）は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃソフトウェアを使用して、二重参照引き算結合データをマストランスポート限界付きの１対１ラングミュア結合モデルに包括的に適合させることにより計算した。
マウスでの研究
ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウス（ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウス）は、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ技術（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ、Ｄ．Ｍ．ら、２００３年．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１：６５２～６５９頁）を使用して７５％のＣ５７Ｂｌ／６および２５％の１２９Ｓ６／ＳｖＥｖバックグランドで作成した。ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ対立遺伝子識別番号はＶＧ７１８２である。すべての手順はリジェネロンファーマシューティカルズ施設動物実験委員会の承認を得たプロトコルに従って行った。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体はマウスへの皮下（Ｓ．Ｃ．）注射のために無菌ＰＢＳで希釈した。
単回投与研究：オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスは固形食餌（５００１、ＬａｂＤｉｅｔ）で維持し、自由摂食させた。血清化学パラメータのベースラインを確立するために、血清サンプルを非断食状態で抗体投与の７日前に収集した。研究０日目、マウスはその血清ＴＧレベルに基づいて処置群に振り分けた。マウス（ｎ＝５／群）（適宜）はＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体の単回Ｓ．Ｃ．注射を指示用量で投与した。引き続く血清サンプルは研究継続期間にわたり非断食マウスから収集し、血清化学パラメータおよびヒトＡＮＧＰＴＬ８レベルについて分析した。ヘパリン後血漿ＬＰＬ活性をＨ４Ｈ１５３４１Ｐの単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ）の４日後に測定した。ヘパリン後血漿は、以前記載された（Ｗａｎｇ、Ｙ．Ｆ．ら ２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁）通りに、ヘパリンカラム上で分画して肝性リパーゼとＬＰＬを分離した。ＴＧヒドロラーゼ活性は、他の場所（Ｂａｓｕ、Ｄ．Ｊ．Ｍａｎｊｕｒ、およびＷ．Ｊｉｎ．２０１１年．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：８２６～８３２頁）に記載されている通りに、ＥｎｚＣｈｅｃｋ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定した。脂肪負荷試験は、単回用量のＨ４Ｈ１５３４１Ｐ（１０ｍｇ／ｋｇ）の４日後に実施した。マウスは、２．５μｌ／ｇ体重での２０％のイントラリピッド（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の静脈内用途前の２時間断食させた。ＴＧは、その後の時点で尾部から収集した血液で評価した。
多回投与研究：抗体投与の７日前に（－７日目）、ベースライン血清化学を非断食動物において測定した。－６日目、オスＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスは高脂肪高コレステロール（ＨＦＨＣ）食餌（２１％脂肪、０．２１％コレステロール、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ）状態に置いた。研究０日目、マウスはその血清ＴＧおよび体重に基づいて処置群に振り分けた（ｎ＝８／群）。マウスはＨ４Ｈ１５３４１Ｐまたは対照抗体を週１回（Ｓ．Ｃ．、１０ｍｇ／ｋｇ）１６週間注射した。体重は毎週測定した。身体組成および代謝分析はそれぞれ１５週および１４週目に評価した。マウスは最後の抗体注射の１週間後屠殺し、肝臓、心臓、筋肉、精巣上体および皮下白色および褐色脂肪組織を収集した。
血清化学分析
血清ＴＧ、全コレステロール（ＴＣ）、ＬＤＬ－ＣおよびＨＤＬ－Ｃレベルは、ＡＤＶＩＡ（登録商標）１８００血液化学分析機（Ｂａｙｅｒ、Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して血清中で決定した。ＨＰＬＣによるリポ蛋白質分離は以前記載された（Ｇｕｓａｒｏｖａ、Ｖ．ら、２０１５年．Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ ５６：１３０８～１３１７頁）通りに実施した。
身体組成、代謝速度および食物摂取測定
身体組成は、他の場所に記載されている（Ｍａｓｔａｉｔｉｓ、Ｊ．ら、２０１５年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１２：１８４５～１８４９頁）通りにＱｕａｎｔｕｍ ＦＸマイクロＣＴ前臨床ｉｎ ｖｉｖｏ撮像システム（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するμＣＴを使用して測定した。代謝ケージデータはＯｘｙｍａｘ Ｌａｂ動物モニタリングシステム：ＣＬＡＭＳ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して作成した。マウスは、センターフィード付きのケージで９６時間個別にモニターした。最初の２４時間で作成されたデータは、解析から取り除いた。食糧摂取は連続して測定し、光リサイクルの明および暗期ごとに消費されるカロリーに分割した。ＶＯ２およびＶＣＯ２は４－ｄスパンにわたり１７分間隔で測定して、時間刻みでプロットした。エネルギー消費は、体重に正規化して、呼吸商および酸素消費の関数として計算した。さらに、群は分析時には異なった体重を有していたので、エネルギー消費は、組み合わせた２つの群の調整平均体重を使用してマウスあたりＫｃａｌ／ｈｒとして表した。これは、記載されている（Ａｒｃｈ ＪＲら、２００６年．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３０（９）：１３２２～１３３１頁；Ｗｈｉｔｔｌｅ ＡＪら、２０１５年．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ６：８９５１頁）通りに、共分散として体重を用いる共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を使用して達成した。手短に言えば、動物ごとの調整エネルギー消費は、Ｙ＝ｙ－ｂ（ｘ－Ｘ）として計算し、群ごとに平均±ＳＥＭとしてプロットし、式中、Ｙは単一動物調整エネルギー消費（Ｋｃａｌ／ｈｒ）、ｙ－単一動物エネルギー消費（Ｋｃａｌ／ｈｒ）、ｘ－単一動物体重（ｋｇ）、Ｘ－組み合わせた２つの処置群の調整平均体重（ｋｇ）、ｂ－線形回帰分析により計算した動物ごとのおよび処置群ごとの体重に対してプロットされたエネルギー消費の線の傾斜度である。
グルコース測定、グルコースおよびインスリン負荷試験
血糖は、Ａｃｃｕ－Ｃｈｅｋ血糖値測定器（Ｒｏｃｈｅ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して尾先端部から測定した。経口グルコース負荷試験では、マウスは一晩（１６時間）断食させ、続いて２ｇ／ｋｇ体重でのグルコースの経口経管栄養を行った。血糖レベルは、注射０、１５、３０、６０および１２０分後に評価した。インスリン負荷試験では、マウスは４時間断食させ、続いて２Ｕ／ｋｇのヒトインスリン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）の腹腔内注射を行った。血糖レベルは、注射後０、１５、３０、６０および１２０分に評価した。
ＴＧ組織含有量
肝臓、心臓、腓腹筋、精巣上体ならびに皮下白色脂肪組織および褐色脂肪組織を、ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの多回投与の終了時に収集し、脂質は記載される（Ｆｏｌｃｈ Ｊ．ら、１９５７年．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２２６（１）：４９７～５０９頁）通りに抽出した。脂質は以前概要が述べられた（Ｃａｒｒ ＴＰ Ａｎｄｒｅｓｅｎ ＣＪ、Ｒｕｄｅｌ ＬＬ．１９９３年．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２６（１）：３９～４２頁）通りに可溶化した。ＴＧのレベルは酵素アッセイ（Ｉｎｆｉｎｉｔｙ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定し湿組織重量に正規化した。
カニクイザルにおける研究
研究はＣｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｔａｉｃａｎｇ、Ｊｉａｎｇｓｕ、Ｃｈｉｎａ）で実施した。１８頭の自然発症高トリグリセリド血症サルを、その非断食血清ＴＧレベルに基づいて選択し、３つの群に分けた。サルは個別に収容し、水は自由に利用させ、季節の果実および野菜で栄養価を高めた完全な栄養バランスを備えた食餌（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｈｉｌｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を１日２度与えた。すべての動物手順は、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ施設動物実験委員会により承認され、実験動物ケア評価認証協会が承認した指針に従って実施した。０日目に、サルに３、７または１０ｍｇ／ｋｇでＨ４Ｈ１５３４１Ｐを投与した。血液（４ｍｌ）は、４５日目まで１から５日間隔で非断食動物からＢＤ無菌静脈血液収集チューブ（ＡＣＣＵ－ＣＨＥＫ Ａｃｔｉｖｅ、Ｒｏｃｈｅ）中に収集した。すべての動物についてＴＧレベルがベースラインに戻った後、動物には少なくとも２週間洗い出しをさせ、その後生理食塩水での処置のために５頭の動物を選択した。血液は、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ注射群と同じスケジュールでの生理食塩水投与後連日収集した。血清ＴＧ、ＴＣ、ＬＤＬ－ＣおよびＨＤＬ－ＣはＡＤＶＩＡ（登録商標）２４００（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により測定した。
データ解析
すべてのデータは平均±ＳＥＭとして示している。統計分析はＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０ソフトウェアを利用して実施した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐおよび対照抗体処置マウスにおけるＬＰＬおよびＨＬ活性はウェルチｔ－検定により比較した。他のパラメータはすべて反復測定して二元配置分散分析により分析した。二元配置分散分析を用いて有意なＦ比が得られた場合、ボンフェローニまたはサイダックの事後検定を用いて群間で事後分析を行った。サルの研究では、－１５、－７、および０日目のそれぞれのパラメータの平均をベースライン値として使用した。
結果
ＡＮＧＰＴＬ８遮断抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ特徴付け
ヒト、マウスおよびサルＡＮＧＰＴＬ８に対するＡＮＧＰＴＬ８遮断抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの相対的親和性は表面プラズモン共鳴を使用して比較した。Ｈ４Ｈ１５３４１ＰはヒトおよびサルＡＮＧＰＴＬ８に匹敵する親和性で結合する（表２０ならびに図９Ａおよび９Ｂ）。Ｈ４Ｈ１５３４１ＰはマウスＡＮＧＰＴＬ８にもヒトまたはマウスＡＮＧＰＴＬ３またはＡＮＧＰＴＬ４にも結合しない（データは示さず）。
Figure 0007133551000027
ＡＮＧＰＴＬ８抗体遮断はリポ蛋白質リパーゼ活性の上方調節を介して血清トリグリセリドを低下させる
血清脂質レベルに対するヒトＡＮＧＰＴＬ８抗体の効果を評価するため、ヒト化ＡＮＧＰＴＬ８マウス（ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍ）を作成した。これらのマウスはベースラインＴＧはわずかに増加しており、他の脂質は野生型マウスに類似していた（図１０Ａ～１０Ｄ）。固形飼料給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ）により、対照抗体処置と比べて循環ＴＧは有意に低下した（図５Ａ）が、全コレステロールレベルには影響しなかった（図５Ｂ）。血清脂質のＨＰＬＣ分離により、ＡＮＧＰＴＬ８阻害がＶＬＤＬ－ＴＧを低下することが確かめられた（図５Ｃ）。ＴＧの低下は１４日間維持され、ＡＮＧＰＴＬ８の血漿レベルの顕著な増加と関連付けられた（図５Ｅ）。固形飼料給餌ＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおける循環ＴＧに対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐの用量増加の効果を評価した。５、１０および２５ｍｇ／ｋｇでのＨ４Ｈ１５３４１Ｐの単回投与は、対照レベルの６０％までのＴＧの漸減を引き起こした（図５Ｆ）。
Ａｎｇｐｔｌ８－／－マウスはヘパリン後血漿ＬＰＬ活性の上方調節を介してＴＧクリアランスを増加させることが以前報告された（Ｗａｎｇ、Ｙ．ら、２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁）。これと一致して、Ｈ４Ｈ１５３４１ＰでのＡＮＧＰＴＬ８遮断は肝性リパーゼ活性の変化なしでヘパリン後血漿ＬＰＬ活性を増加させた（図６Ａ）。ＬＰＬ血漿活性の増加はＨ４Ｈ１５３４１Ｐを受けているＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの脂質耐性を改善した（図６Ｂ）。これらのデータにより、モノクローナル抗体でのＡＮＧＰＴＬ８遮断はＬＰＬ活性の上方調節を通じて血漿ＴＧを低下させたことが明らかにされている。
ＡＮＧＰＴＬ８抗体阻害はＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいてエネルギー消費を増加させ脂肪含量および体重を低減する
エネルギー消費、身体組成および体重に対するＡＮＧＰＴＬ８の長期阻害の効果を高脂肪、高コレステロール（ＨＦＨＣ）食餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて評価した。１６週間のＨ４Ｈ１５３４１Ｐの毎週投与（１０ｍｇ／ｋｇ）は、対照抗体と比べて摂取後循環ＴＧレベルは顕著に持続して低減された（図７Ａ）。ＡＮＧＰＴＬ８抗体は体重の漸減も引き起こし、この低減は１２週目に統計的有意性に到達した（図７Ｂ）。μＣＴにより決定した場合、体重の減少は体脂肪量の減少と相関していた（図７Ｃ）。徐脂肪組織量の変化は検出されなかった。
１４週目の代謝ケージ分析では、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐで処置されたマウスはＯ２消費およびＣＯ２産生が増加していることが明らかになった（図１１Ａおよび１１Ｂ）。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ処置により、体重に正規化された（図７Ｅ）または体重正規化なしで共分散として体重との共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を使用して計算された（図１１Ｃおよび１１Ｄ）エネルギー消費の増加ももたらされた。抗体処置は呼吸商または食物摂取には影響を及ぼさなかったが、自動運動活性を増やす傾向があった（図７Ｄ、７Ｆ、および７Ｇ）。すべての代謝ケージデータについての生のトレースは図１２Ａ～１２Ｅに示されている。深部体温はＨ４Ｈ１５３４１Ｐ処置による変化はなしのままであった（図１３Ａ）。Ａｎｇｐｔｌ８－／－マウスにおけるデータ（Ｗａｎｇ，Ｙ．ら、２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁；Ｇｕｓａｒｏｖａ Ｖら、２０１４年．Ｃｅｌｌ １５９（３）：６９１～６９６頁）と一致して、グルコース恒常性に対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐの効果は観察されなかった（図１４Ａ～１４Ｃ）。これらのデータによれば、ＡＮＧＰＴＬ８阻害は、エネルギー消費の増加に次いで、体脂肪含量および体重を低減したことが明らかにされている。
Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは脂質異常症のカニクイザルにおいて血清ＴＧおよびＨＤＬ－Ｃを調節する
最後に、自然発症脂質異常症のカニクイザルにおける血清脂質に対するＨ４Ｈ１５３４１Ｐの効果を評価した。６頭のサルの群には、３、７または１０ｍｇ／ｋｇで単回用量のＨ４Ｈ１５３４１Ｐを与えた。溶媒を受けるサルの群は休薬期間の終了時に選択した。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは循環ＴＧの強い維持された用量依存性の減少を生じ、その減少は抗体投与に続く１日以内に最大－６５％に到達した（３２３±２０ｍｇ／ｄｌから１１４±２１ｍｇ／ｄｌ；Ｐ＜０．０００１；ｎ＝６）（図８Ａおよび８Ｄ）。興味深いことに、すべての用量がＴＧの同じ最大減少を生じたが、効果の持続期間は用量依存性であった（図８Ａ）。ＡＮＧＰＴＬ８の阻害はすべての用量でＨＤＬ－Ｃの３０％の増加ももたらした（図８Ｂおよび８Ｅ）。ＬＤＬ－Ｃの変化は観察されなかった（図８Ｃおよび８Ｆ）。
考察
本研究では、モノクローナル抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを用いたＡＮＧＰＴＬ８遮断がＬＰＬ活性の上方調節を通じて循環ＴＧを効率的に低減することが明らかにされ、これはＡｎｇｐｔｌ８－／－動物において報告された表現型と一致している（Ｗａｎｇ，Ｙ．ら、２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁；Ｇｕｓａｒｏｖａ Ｖら、２０１４年．Ｃｅｌｌ １５９：６９１～６９６頁）。さらに、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐは、ＨＦＨＣ食餌に置かれた場合のマウスにおいて体脂肪蓄積および体重増加を低減した。体重の減少はエネルギー消費の増加に続発した。さらに、自然発症高トリグリセリド血症カニクイザルにおけるＡＮＧＰＴＬ８遮断により、血清ＴＧは著しく低減されＨＤＬ－Ｃは増加した。これらのデータにより、モノクローナル抗体を用いたＡＮＧＰＴＬ８の阻害が高トリグリセリド血症および肥満を抱えた患者にとり有益である可能性があることが示唆される。
ＡＮＧＰＴＬ８の抗体阻害は、正常リポ蛋白Ｃ５７Ｂｌ／６マウスでのＴＧを３０％低減することが最近報告されたが、３０ｍｇ／ｋｇでの３日間投与が必要であった（Ｆｕ、Ｚ．ら、２０１５年．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ５：１８５０２頁）。最近の研究では、マウスおよびサルにおいて≦５ｍｇ／ｋｇの単回投与で循環ＴＧを６５％効果的に低減するＡＮＧＰＴＬ８に対する完全ヒトモノクローナル抗体の開発が記載されている。ＡＮＧＰＴＬ８阻害は、ＬＰＬ活性の抑制解除を通じて血漿ＴＧを低減した。カニクイ脂質異常症ザルにおけるＡＮＧＰＴＬ８抗体阻害は、ＨＤＬ－Ｃも３０％増やし、ＡＮＧＰＴＬ８の機能突然変異のヒト喪失で報告されている所見に一致していた（Ｐｅｌｏｓｏ、Ｇｉｎａ Ｍ．ら、２０１４年．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ９４：２２３～２３２頁）。
再給餌中、ＬＰＬ活性はＷＡＴにおいて上方調節され、心臓および骨格筋では減少している（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ｉ．Ｊ．、Ｒ．Ｈ．Ｅｃｋｅｌ、およびＮ．Ａ．Ａｂｕｍｒａｄ．２００８年．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：Ｓ８６～Ｓ９０頁）。マウスでのＡｎｇｐｔｌ８の欠失はＬＰＬ活性のこれらの変化を妨害し；これらのマウスにおいて再給餌している酸化性組織ではＬＰＬ活性の摂食後減少は起こらない。その結果、ＴＧは脂肪組織よりもむしろ酸化性組織に送達される。これらのデータにより、ＡＮＧＰＴＬ８は、食物摂取後脂肪酸を酸化性組織から白色脂肪組織に向け直す代謝スイッチとして機能することが示唆される（Ｗａｎｇ，Ｙ．ら、２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁）。
Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐの多回用量を用いたＡＮＧＰＴＬ８の慢性阻害により、ＨＦＨＣ食餌のＡｎｇｐｔｌ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおいて体重増および体脂肪蓄積は低減された。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ処置マウスにおける体重減少は、エネルギー消費の増加から生じる可能性がある。Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ処置は呼吸商を変化させず、Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐ処置が燃料利用率を変化させないことを示している。体重および脂肪組織量の低減が以前固形飼料給餌Ａｎｇｐｔｌ８－／－マウスにおいて報告された（Ｗａｎｇ、Ｙ．ら、２０１３年．ＰＮＡＳ ＵＳＡ １１０：１６１０９～１６１１４頁）。したがって、ＡＮＧＰＴＬ８は白色脂肪組織におけるＴＧ貯蔵の重要な調節因子である。
結論として、モノクローナル抗体Ｈ４Ｈ１５３４１Ｐを用いたＡＮＧＰＴＬ８阻害により、ＬＰＬ活性の上方調節を通じてマウスおよびサルにおいて循環ＴＧが低減された。ＨＦＨＣ食餌のＡＮＧＰＴＬ８ｈｕｍ／ｈｕｍマウスへのＡＮＧＰＴＬ８抗体の多回用量投与により体重および体脂肪含量が減少した。データによれば、モノクローナル抗体を用いたＡＮＧＰＴＬ８阻害は、高トリグリセリド血症および肥満を抱えた患者において有益であると考えられることが示される。

Claims (6)

  1. 対象において体重の減少を達成するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６、１６８、１７２、１７４および１７６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３ドメインを含み、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
  2. 対象において体脂肪量の低減を達成するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６、１６８、１７２、１７４および１７６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３ドメインを含み、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
  3. 対象においてエネルギー消費を増加するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６、１６８、１７２、１７４および１７６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３ドメインを含み、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
  4. 対象においてＨＤＬ－Ｃを増加するための方法で使用するための、ＡＮＧＰＴＬ８阻害
    剤を含む医薬組成物であって、前記ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片であり、前記ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６、１６８、１７２、１７４および１７６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３ドメインを含み、前記方法は前記対象に前記医薬組成物を投与することを含み、ＡＮＧＰＴＬ８の少なくとも１つの活性が低減または減少する、前記医薬組成物。
  5. ＡＮＧＰＴＬ８に特異的な抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号１６２および１７０に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ）配列対を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  6. 前記対象における循環トリグリセリド（ＴＧ）が、ＡＮＧＰＴＬ８阻害剤の前記投与１日後、少なくとも５０％低減される、請求項４に記載の医薬組成物。
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