KR20200014304A - 암의 치료를 위한 제ii형 항-cd20 항체 및 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 - Google Patents

암의 치료를 위한 제ii형 항-cd20 항체 및 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 Download PDF

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마리나 바카크
사라 콜롬베티
크리스티안 클라인
요한네스 샘
파블로 우마나
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 질병의 치료 방법, 및 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출의 감소 방법에 관한 것이다. 본 발명은 특히 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체에 관한 것으로서, 상기 제II형 항-CD20 항체는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 조합으로 사용된다.

Description

암의 치료를 위한 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체
본 발명은 질병, 특히 B 세포 증식성 장애의 치료 방법, 및 T 세포 활성화 치료제의 투여에 대한 반응으로 역효과를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질병의 병용 치료 방법 및 이러한 방법에서 사용하기 위한 항체에 관한 것이다.
B 세포 증식성 장애는 백혈병 및 림프종을 모두 포함하는 암의 이종 군을 기술한다. 림프종은 림프구로부터 발달하며 2개의 주요 카테고리인 호지킨 림프종(HL) 및 비-호지킨 림프종(NHL)을 포함한다. 미국에서, B 세포 기원의 림프종은 모든 비-호지킨 림프종 사례의 약 80 내지 85%를 구성하며, B 세포 기원의 유전자형 및 표현형 발현 패턴을 기준으로, B 세포 부분집합 내에 상당한 이종이 존재한다. 예를 들어, B 세포 림프종 부분집합은 느리게 성장하는 무통의 난치성 질병, 예컨대 소포성 림프종(FL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL), 뿐만 아니라 보다 공격적인 아형인 맨틀 세포 림프종(MCL) 및 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)을 포함한다.
B 세포 증식성 장애의 치료를 위한 다양한 제제의 입수가능성에도 불구하고, 환자의 관해를 연장시키고 치유율을 개선시키기에 안전하고 효과적인 요법의 개발 필요성이 계속되고 있다.
현재 조사 중인 전략은 악성 B 세포에 대한 T 세포의 결합이다. 악성 B 세포에 대해 T 세포를 효과적으로 결합시키기 위해, 2개의 최신 접근법이 개발되었다. 이들 2개의 접근법은 하기와 같다: 1) 종양 세포를 인식하도록 생체외 조작된 T 세포의 투여(키메라 항원 수용체 변형된 T 세포 요법으로도 공지됨[CAR-T 세포])(문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]); 및 2) 내인성 T 세포를 활성화시키는 제제, 예컨대 이중특이적 항체의 투여(문헌[Oak and Bartlett, Expert Opin Investig Drugs (2015) 24, 715-724]).
상기 제1 접근법의 예는 모드(Maude) 등에 의한 연구에서 보고되었고, 여기서 30명의 성인 및 소아 환자를 CD19-지향 키메라 항원 수용체 렌티 바이러스 벡터로 형질도입된 자가 T 세포(CTL019 CAR-T 세포)로 처리하였다. 결과는, 67%의 6-개월 무-이벤트 생존율 및 78%의 전체 생존율을 기반으로 지속된 관해를 나타냈다. 그러나, 모든 환자는 시토카인 방출 증후군(CRS)(종양 부담과 관련됨)을 앓았고, 27%의 환자는 심각한 CRS을 앓았다. 미지의 원인의 중추 신경계 독성이 또한 높은 빈도로 기록되었다.
대조적으로, 내인성 T 세포를 활성화시켜 종양 표적을 인식함을 수반하는 상기 제2 접근법은 이러한 확장성의 난관을 우회하며, 또한 경쟁력 있는 효능, 안전성 데이터 및 반응의 잠재적 장기 지속을 제공할 수 있다. 상이한 CD20+ 혈액암에서, 이러한 접근법은, 최소 잔류 질병-양성 급성 림프구성 백혈병(ALL) 환자에 대해 최근 승인된 블리나투모맙(blinatumomab, CD19 CD3 표적화 T 세포 이중특이적 분자)에 의해 가장 잘 실증된다(문헌[Bargou et al., Science (2008) 321, 974-977]). 2개의 단쇄 Fv 단편으로 구성된 이러한 화합물(소위 BiTE(등록상표) 포맷)은 세포 용해 T 세포에 의한 CD19+ 세포의 용해를 유도한다. 블리나투모맙의 주요 제약은 이의 짧은 반감기(약 2시간)이며, 이는 4 내지 8주 동안 펌프를 통한 연속 주입을 필요하게 만든다. 그러나, 이는 심각한 시토카인 방출 증후군 및 CNS 독성을 완화시키는 데 필요한 단계적으로 증대하는 투여(SUD)에 의해 재발성/난치성 비-호지킨 림프종(r/r NHL) 및 ALL 모두를 갖는 환자에서 강한 효능을 갖는다(문헌[Nagorsen and Baeuerle, Exp Cell Res (2011) 317, 1255-1260]).
CD20 CD3 표적화 T 세포 이중특이적 분자인 CD20XCD3 bsAB는 차세대 B 세포 표적화 항체의 또 다른 예이다. CD20XCD3 bsAB는 B 세포 상에 발현되는 CD20 및 T 세포 상에 존재하는 CD3 엡실론 쇄(CD3e)를 표적화하는 T 세포 이중특이적(TCB) 항체이다.
CD20XCD3 bsAB 작용의 메커니즘은 T 세포 활성화 및 T 세포 매개된 B 세포의 사멸을 야기하는 CD20+ B 세포 및 CD3+ T 세포에 대한 동시 결합을 포함한다. CD20+ B 세포의 존재 하에, 순환 또는 조직 상주 여부에 관계 없이, 약리학적 활성 투여량은 T 세포 활성화 및 연관된 시토카인 방출을 촉발할 것이다. CD20XCD3 bsAB는 비임상 모델에서 경쟁 T 세포 결합제에 비해 향상된 효능을 나타냈고, IgG-계 포맷을 갖는 것은 블리나투모맙에 비해 크게 개선된 반감기를 갖는다.
시토카인 방출은 T 세포 활성화의 결과이다. 테제네로(TeGenero)에 의해 수행된 제1상 연구에서(문헌[Suntharalingam et al., N Engl J Med (2006) 355,1018-1028]), 6명의 건강한 지원자 모두는 부적절하게 투여된 T 세포 자극 과작용제 항-CD28 단클론 항체의 신속한 주입 후 거의 치명적인 심각한 시토카인 방출 증후군(CRS)을 경험했다. 보다 최근에, 상기에 언급된, 재발된 ALL 환자의 CD19-표적화 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T 세포) 처리에 대한 모드의 연구에서, 30명의 환자 모두는 시토카인 방출을 겪었고, 이는 27%의 환자에서 심각한 것으로 분류되었다. CRS는 CAR-T 세포 요법의 흔하나 심각한 합병증이다(문헌[Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178]에 논의됨).
심각한 CRS 및 CNS 독성은 또한 CD19-CD3 T 세포 이중특이적 제제인 블리나투모맙을 사용한 경우 빈번히 관찰되었다(문헌[Klinger et al., Blood. 2012;119(26):6226-6233]). 모든 임상 시험에서 블리나투모맙을 제공 받은 환자에서, 신경학적 독성이 약 50%의 환자에서 발생하였고, 관찰된 독성의 유형은 패키지 삽입물에 잘 정의되어 있다.
CNS 독성이 이른 시토카인 방출 또는 T 세포 활성화와 관련되는지 여부 또는 어떻게 관련되는지는 잘 이해되지 않는다. 블리나투모맙와 유사하게, CNS AE(섬망에서 포괄적 뇌병증까지 이르는 범위)가 CD19-표적화 CAR-T 세포로 치료 받은 r/r ALL 환자 중 43%(13/30)에 대해 보고되었다(문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]; [Ghorashian et al., Br J Haematol (2015) 169, 463-478]). 신경학적 독성 효과는 전형적으로 CRS의 증상이 정점에 이르고 해결되기 시작한 후에 발생하였다; 그러나, 심각한 CRS에 직접적이고 명백한 연관성은 관찰되지 않았다. 저자는, 신경 독성의 메커니즘이 직접적인 CAR-T 세포-매개된 독성을 수반할 수 있거나 시토카인-매개될 수 있음을 제안하였다. 대조적으로, 심각한 CRS와 신경 독성(예를 들어 뇌병증) 사이의 연관성은 CD19-표적화 CAR-T 세포 요법의 또 다른 연구에서 시사되었고(문헌[Davila et al., Sci Transl Med (2014) 6, 224ra25]) 직접적인 CAR-T-유도된 손상과 대조적으로 일반적 T 세포 활성화 때문인 것으로 추측되었다.
시토카인 방출 및/또는 CNS-관련된 독성은 CD3+ 세포를 조직-제한된(즉, 비-순환성) 표적 세포에 연결시키는 다른 T 세포 이중특이적 항체와 비교하여 CD3+ 세포를 B 세포에 연결시키는 T 세포 이중특이적 항체에서 특히 분명하였다.
따라서, B 세포 증식성 장애(예컨대 NHL 및 CLL) 환자의 치료에 크게 기여하는 데 잠재성을 갖는 이들 유망한 제제의 이러한 역효과를 감소시키거나 방지하는 방법이 필요하다.
본 발명은, T 세포 활성화 치료제, 예컨대 CD20XCD3 bsAB의 투여와 관련된 개체에 대한 시토카인 방출이, 상기 개체를 제II형 항-CD20 항체, 예컨대 오비누투주맙(obinutuzumab)으로 예비 치료함으로써 상당히 감소될 수 있다는 놀라운 발견을 기반으로 한다.
오비누투주맙은, 고 친화도에 의해 CD20 항원에 결합하여 항체-의존성 세포 독성(ADCC) 및 항체-의존성 식세포 작용(ADCP), 낮은 보체-의존성 세포 독성(CDC) 활성 및 높은 직접 세포사 유도를 유발하는 인간화된 당-조작된 제II형 항-CD20 mAb이다.
이론에 얽매이지 않고, GAZYVA(등록상표) 예비 치료(Gpt)의 사용은 말초혈 및 이차 림프 기관 모두에서 B 세포의 신속한 고갈을 보조할 수 있어, 투여 시작에서부터 종양 세포의 제거를 매개하는 데 충분히 높은 T 세포 활성화 치료제의 노출 수준을 지원하면서, T 세포 활성화 치료제에 의해 강한 전신 T 세포 활성화로부터 매우 관련 있는 유해 이벤트(AE)의 위험(예를 들어 CRS))이 감소된다. 지금까지, 오비누투주맙의 안전성 프로필(시토카인 방출을 포함함)을 진행 중인 오비누투주맙 임상 시험에서 수백명의 환자에게서 평가하고 관리하였다. 마지막으로, T 세포 활성화 치료제, 예컨대 CD20XCD3 bsAB의 안전성 프로필을 지지함에 더하여, Gpt는 또한 항-약물 항체(ADA)를 이들 독특한 분자로 형성하는 것의 방지를 보조할 수 있다.
환자에게, Gpt는 향상된 안전성 프로필을 갖는 보다 양호한 약물 노출로 이해되어야 한다.
Gpt는 T 세포 이중특이적 제제를 사용한 다른 방법, 예컨대 단계적 증대 투여(SUD)와 비교하여 상기 목표를 보다 효과적으로 달성해야 한다. 오비누투주맙의 단일 투여량은, 단계적 증대 투여로부터 시간 지연 없이, 결정된 후에, 재발성/난치성 환자가 T 세포 활성화 치료제, 예컨대 CD20XCD3 bsAB의 전체 치료 투여량을 제공받는 것을 가능하게 해야 한다. 예를 들어, 진행 중인 제2상 시험에서 r/r DLBCL 환자에 대한 블리나투모맙 투여 양생법이 이중 단계적 증대 접근법(즉, 9 →28 → 112 μg/m2/일)을 포함하고, 따라서 112 μg/m2/일의 최대 투여량에 도달하는 데 14일이 필요하다는 것이 최근에 보고되었다(문헌[Viardot el at., Hematol Oncol (2015) 33, 242(Abstract 285)]).
실시예에서 나타낸 바와 같이, 오비누투주맙에 의한 예비 치료 후에, 시노몰구스 원숭이에게 CD20XCD3 bsAB를 투여하는 것은 Gpt 없이 용인되는 것보다 10배 높은 수준까지 용인된다.
제1 CD20XCD3 bsAB 주사와 관련하여 말초혈에서 크게 감소된 시토카인 방출과 함께, 효율적인 말초혈 B 세포 고갈 및 항종양 활성이 Gpt에 대해 관찰되었다.
따라서, 제1 양태에서, 본 발명은 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키는 방법을 제공하되, 이는 상기 치료제의 투여 전에 제II형 항-CD20 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키에 충분하다.
추가적 양태에서, 본 발명은 개체에서 질병의 치료 방법을 제공하되, 상기 방법은 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 상기 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에게 치료제를 투여함과 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다.
추가적 양태에서, 본 발명은 치료제를 투여하기 전에 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체를 제공한다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
추가적 양태에서, 본 발명은 개체에서 질병을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체를 제공하되, 상기 방법은 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다.
추가적 양태에서, 본 발명은 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출의 감소를 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체의 용도를 제공하되, 상기 약제는 하기를 포함하는 치료 양생법에서 사용된다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다.
추가적 양태에서, 본 발명은 제II형 항-CD20 항체 조성물, 및 하기를 포함하는 치료 양생법에서 제II형 항-CD20 항체 조성물의 사용에 대한 지시서를 포함하는 패키지를 포함하는, 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출의 감소를 위한 키트를 제공한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체 조성물을 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체 조성물의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분함).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다. 한 실시양태에서, 키트는 치료제 조성물을 추가로 포함한다.
본 발명은 추가적 양태에서 개체에서 질병의 치료 방법에서 사용하기 위한 T 세포 활성화 치료제를 제공하되, 상기 방법은 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다.
본 발명은 추가적 양태에서 개체에서 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서 T 세포 활성화 치료제의 용도를 제공하되, 상기 방법은 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다.
본 발명은 추가적 양태에서 T 세포 활성화 치료제 조성물, 및 하기를 포함하는 치료 양생법에서 치료제 조성물의 사용에 대한 지시서를 포함하는 패키지를 포함하는, 개체에서 질병의 치료를 위한 키트를 제공한다: (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및 소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제 조성물을 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제 조성물의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
한 실시양태에서, 상기 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다. 한 실시양태에서, 키트는 제II형 항-CD20 항체 조성물을 추가로 포함한다.
본 발명의 방법, 용도, 제II형 항-CD20 항체, 치료제 및 키트는 하기에 기재되는 임의의 특징을 단독으로 또는 조합으로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
보다 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상은 푸코실화되지 않는다.
특정 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
한 실시양태에서, T 세포 활성화 치료제는 항체, 특히 다중특이적(예를 들어 이중특이적) 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 B 세포 항원, 특히 악성 B 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 CD20에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체는 다중특이적 항체, 특히 이중특이적 항체이다.
한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 (i) CD3 및 (ii) CD20 및 CD19로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 CD3 및 CD20에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 치료제는 하기를 포함하는 이중특이적 항체를 포함한다:
(i) CD3에 특이적으로 결합하며, 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하며, 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티.
특정 실시양태에서, 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
한 실시양태에서, 치료제는 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 CAR, 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
한 실시양태에서, 질병은 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애이다.
한 실시양태에서, 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가적 양태에서, 본 발명은 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체를 제공한다. 제II형 항-CD20 항체는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 조합으로 사용된다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 단일 조성물로 함께 또는 2개 이상의 상이한 조성물로 별개로 투여될 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 2개 이상의 상이한 조성물로 투여될 수 있다. 상기 2개 이상의 상이한 조성물은 상이한 시점에 투여될 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체일 수 있다. 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상은 푸코실화되지 않을 수 있다.
특히, 제II형 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
제II형 항-CD20 항체는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 동시에, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 전에 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 후에 투여될 수 있다.
또한, 항-PD-L1 항체, 바람직하게는 아테졸리주맙(Atezolizumab)이 투여될 수 있다.
항-PD-L1 항체는 별개로, 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체 중 하나 이상과 조합으로 투여될 수 있다. 여기서, "~ 중 하나 이상과 조합으로"는 항-PD-L1 항체가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 함께 투여되거나 제II형 항-CD20 항체와 함께 투여되거나 둘 모두와 함께 투여됨을 의미한다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD3에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 CD20에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는 제1 항원 결합 도메인, 및 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 CDR-H1 서열, 서열번호 98의 CDR-H2 서열 및 서열번호 99의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3); 및/또는 서열번호 100의 CDR-L1 서열, 서열번호 101의 CDR-L2 서열 및 서열번호 102의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및/또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20), 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD20에 결합하는 제3 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20); 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함한다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된 크로스-Fab 분자일 수 있고, 제2 및 존재하는 경우 제3 항원 결합 도메인은 통상적 Fab 분자일 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A, L235A 및 P329G(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 제3 항원 결합 도메인을 포함할 수 있되, 여기서 (i) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 대안적으로, (ii) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
제II형 CD20-항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 조합은 약 1주일 내지 3주일의 간격으로 투여될 수 있다.
또한, 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 의한 예비 치료는 병용 치료 전에 수행될 수 있다. 예비 치료와 병용 치료 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 대한 반응으로 개체에서 B 세포를 감소시키기에 충분하다. 예비 치료에 사용된 제II형 항-CD20 항체는 상기 및 하기에 기재되는 제II형 항-CD20 항체의 하나 이상의 특징을 가질 수 있다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 증식성 질병, 특히 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 단일 조성물로 투여되거나 2개 이상의 조성물로 투여된다.
본 발명의 추가적 양태는 병용 치료에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제, 및 임의적으로 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다. 약학 조성물의 요소는 병용 치료에서 순차적으로 또는 동시에 사용될 수 있다.
본 발명의 추가적 양태는 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제1 약제, 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 키트에 관한 것이다. 임의적으로, 상기 키트는 질병, 특히 암의 전술된 병용 치료에서 사용하기 위한 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함한다. 키트의 요소는 병용 치료에서 순차적으로 또는 동시에 사용될 수 있다.
키트는 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한 제1 약제, 제2 약제 및 임의적으로 제3 약제의 사용에 대한 지시서를 추가로 포함할 수 있다. 사용 지시서는 패키지 삽입물일 수 있다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 치료적 적용례를 위한, 바람직하게는 증식성 질병, 특히 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 조합의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체의 용도에 관한 것으로서, 상기 약제는 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하고, 상기 치료는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 상기 약제를 투여함을 포함한다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 용도에 관한 것으로서, 상기 약제는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하고, 상기 치료는 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 상기 약제를 투여함을 포함한다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20 항체의 제조에 관한 것으로서, 여기서 제II형 항-CD20 항체가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 조합으로 사용된다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제조에 관한 것으로서, 상기 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 제II형 항-CD20 항체와 조합으로 사용된다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여하는 단계 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에 관한 것이다. 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD30 이중특이적 항체는 이 둘의 조합이 유효량을 나타내도록 투여된다. 반대로, 제II형 항-CD20 항체는 자체로 유효량으로 투여되지 않고, 항-CD20/항-CD30 이중특이적 항체는 자체로 유효량으로 투여되지 않는다. 그러나, 이 둘의 조합은 유효량을 야기한다.
또한, 항-PD-L1 항체가 개체에게 투여될 수 있다. PD-L1 항체를 포함하는 조합은 유효량을 나타낸다.
본 발명의 추가적 양태는 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체에 관한 것이다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 제II형 항-CD20 항체와 조합으로 사용된다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 단일 조성물로 함께 투여되거나 2개 이상의 상이한 조성물로 별개로 투여될 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 2개 이상의 상이한 조성물로 투여될 수 있다. 상기 2개 이상의 상이한 조성물은 상이한 시점에 투여될 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3 5을 포함하는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체일 수 있다. 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상은 푸코실화되지 않을 수 있다.
특히, 제II형 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
제II형 항-CD20 항체는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 동시에, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 전에 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 후에 투여될 수 있다.
또한, 항-PD-L1 항체, 바람직하게는 아테졸리주맙이 투여될 수 있다.
항-PD-L1 항체는 별개로 투여되거나 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체 중 하나 이상과 조합으로 투여될 수 있다. 여기서, "~ 중 하나 이상과 조합으로"는 항-PD-L1 항체가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 함께 투여되거나 제II형 항-CD20 항체와 함께 투여되거나 둘 모두와 함께 투여됨을 의미한다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD3에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 CD20에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는 제1 항원 결합 도메인, 및 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 CDR-H1 서열, 서열번호 98의 CDR-H2 서열 및 서열번호 99의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3); 및/또는 서열번호 100의 CDR-L1 서열, 서열번호 101의 CDR-L2 서열 및 서열번호 102의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및/또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20), 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD20에 결합하는 제3 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20); 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된 크로스-Fab 분자일 수 있고, 제2 및 존재하는 경우 제3 항원 결합 도메인은 통상적 Fab 분자일 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A, L235A 및 P329G(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 제3 항원 결합 도메인을 포함할 수 있되, 여기서 (i) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 대안적으로, (ii) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
제II형 CD20-항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 조합은 약 1주일 내지 3주일의 간격으로 투여될 수 있다.
또한, 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 의한 예비 치료는 병용 치료 전에 수행될 수 있다. 예비 치료와 병용 치료 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 대한 반응으로 개체에서 B 세포를 감소시키기에 충분하다. 예비 치료에 사용된 제II형 항-CD20 항체는 상기 및 하기에 기재되는 제II형 항-CD20 항체의 하나 이상의 특징을 가질 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 단일 조성물로 함께 투여되거나 2개 이상의 상이한 조성물로 별개로 투여될 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체는 2개 이상의 상이한 조성물로 투여될 수 있되, 상기 2개 이상의 상이한 조성물은 상이한 시점에 투여된다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함할 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체일 수 있고, 여기서 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상은 푸코실화되지 않는다. 제II형 항-CD20 항체는 오비누투주맙일 수 있다.
제II형 항-CD20 항체는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 동시에, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 전에 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 후에 투여될 수 있다.
또한, 항-PD-L1 항체, 바람직하게는 아테졸리주맙이 투여될 수 있다.
항-PD-L1 항체는 별개로 투여되거나 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체 중 하나 이상과 조합으로 투여될 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD3에 결합하는 제1 항원 결합 도메인, 및 CD20에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는 제1 항원 결합 도메인, 및 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는 제2 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 97의 CDR-H1 서열, 서열번호 98의 CDR-H2 서열 및 서열번호 99의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3); 및/또는 서열번호 100의 CDR-L1 서열, 서열번호 101의 CDR-L2 서열 및 서열번호 102의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및/또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20), 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 CD20에 결합하는 제3 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20); 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된 크로스-Fab 분자일 수 있고, 제2 및 존재하는 경우 제3 항원 결합 도메인은 통상적 Fab 분자일 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A, L235A 및 P329G(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함할 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 제3 항원 결합 도메인을 포함한다. (i) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합될 수 있고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합될 수 있고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합될 수 있다. 대안적으로, (ii) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합될 수 있고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합될 수 있고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인은 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합될 수 있다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 CD20-항체의 조합은 약 1주일 내지 3주일의 간격으로 투여될 수 있다.
제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 의한 예비 치료는 병용 치료 전에 수행될 수 있다. 예비 치료와 병용 치료 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 대한 반응으로 개체에서 B 세포를 감소시키기에 충분하다. 예비 치료에 사용된 제II형 항-CD20 항체는 상기 및 하기에 기재되는 제II형 항-CD20 항체의 하나 이상의 특징을 가질 수 있다.
본 발명의 추가적 양태는 병용 치료에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체, 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제, 및 임의적으로 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 약학 조성물에 관한 것이다. 약학 조성물의 요소는 병용 치료에서 순차적으로 또는 동시에 사용될 수 있다.
본 발명의 추가적 양태는 상기에 기재된 발명에 관한 것이다.
도 1은 본 발명의 T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자(TCB)의 예시적 배열이다. (A, D) "1+1 CrossMab" 분자의 예시. (B, E) 대안적 순서의 Crossfab 및 Fab 성분을 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 예시("반전됨"). (C, F) "2+1 IgG Crossfab" 분자의 예시. (G, K) 대안적 순서의 Crossfab 및 Fab 성분을 갖는 "1+1 IgG Crossfab" 분자의 예시("반전됨"). (H, L) "1+1 IgG Crossfab" 분자의 예시. (I, M) 2개의 CrossFab를 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 예시. (J, N) 2개의 CrossFab 및 대안적인 순서의 Crossfab 및 Fab 성분을 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 예시("반전됨"). (O, S) "Fab-Crossfab" 분자의 예시. (P, T) "Crossfab-Fab" 분자의 예시. (Q, U) "(Fab)2-Crossfab" 분자의 예시. (R, V) "Crossfab-(Fab)2" 분자의 예시. (W, Y) "Fab-(Crossfab)2" 분자의 예시. (X, Z) "(Crossfab)2-Fab" 분자의 예시. 흑색 점: 이종 이량체화를 촉진하는 Fc 도메인에서의 임의적 변형. ++, --: CH1 및 CL 도메인에 임의적으로 도입된 반대 전하의 아미노산. Crossfab 분자는 VH 및 VL 영역의 교환을 포함한 것으로 도시되었으나, 전하 변형이 CH1 및 CL 도메인에 도입되지 않은 실시양태에서, 대안적으로 CH1 및 CL 도메인의 교환을 포함할 수 있다.
도 2는 상이한 처리군에서 말초혈의 B 세포 및 T 세포의 수를 나타낸다. 제1 및 제2 CD20XCD3 bsAB 투여 24시간 및 72시간 후에 비히클 및 CD20XCD3 bsAB-처리된 완전히 인간화된 NOG 마우스의 말초혈의 (A) CD19+ B 세포 및 (B) CD3+ T 세포의 유세포 분석. 흑색 화살표는 CD20XCD3 bsAB 투여일을 지시한다.
도 3은 상이한 처리군의 말초혈에 방출된 시토카인을 나타낸다. CD20XCD3 bsAB의 제1 및 제2 투여 24시간 및 72시간 후에 비히클 및 처리된 마우스의 혈액의 시토카인의 다중 분석. 막대그래프 막대는 표준 편차를 타나내는 오차 막대와 함께 5마리의 동물의 평균을 나타낸다. IFNγ, TNFα 및 IL-6에 대한 대표적인 그래프를 나타냈다. 오비누투주맙 예비 치료를 수행하거나 수행하지 않은 CD20XCD3 bsAB의 제1 주사의 시토카인 방출을 비교하였다(비교되는 막대는 선을 연결함으로써 표시되어 있다).
도 4는 CD20XCD3 bsAB, 오비누투주맙, 및 Gpt + CD20XCD3 bsAB의 항종양 활성을 나타낸다. 완전히 인간화된 NOG 마우스에서 단일 요법 또는 Gpt+CD20XCD3 bsAB로서 CD20XCD3 bsAB 및 오비누투주맙의 항종양 활성. 흑색 화살표는 요법의 시작을 지시한다. (8<n<10). 종양 모델: WSU-DLCL2.
도 5는 CD20XCD3 bsAB 및 Gpt+CD20XCD3 bsAB 치료를 사용한 투여 후에 시노몰구스 원숭이의 말초혈에 방출된 시토카인을 나타낸다.
도 6 (A-F)는 침습성 림프종 모드(WSU-DLCL2 종양)를 갖는 인간 조혈 줄기 세포 인간화된 마우스(HSC-NSG 마우스)에서 항-CD20/CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙 또는 아테졸리주맙의 병용 치료에서 항종양 활성의 분석을 나타낸다. (A) 비히클의 효능, (B) 항-CD20-항-CD3 T 세포 이중특이적 항체의 효능, (C) 오비누투주맙(GAZYVA(등록상표))의 효능, (D) 항-CD20/CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙(GAZYVA(등록상표))의 병용 치료의 효능, (E) 항-CD20/CD3 이중특이적 항체와 아테졸리주맙의 병용 치료의 효능, (F) 항-PD-L1 항체의 치료의 효능.
도 7 (A-B)는 침습성 림프종 모델(OCI-Ly18 종양)을 갖는 인간 조혈 줄기 세포 인간화된 마우스(HSC-NSG 마우스)에서 항-CD20/CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙의 병용 치료에서 항종양 활성의 분석을 나타낸다. (A) 비히클, 항-CD20/CD3 이중특이적 항체, 오비누투주맙, 및 항-CD20/CD3 이중특이적 항체 및 오비누투주맙의 조합의 효능. (B) 항-CD20/CD3 이중특이적 항체, 오비누투주맙, 및 항-CD20/CD3 이중특이적 항체 및 오비누투주맙의 조합의 개별적 마우스의 효능.
정의
용어는 하기에 달리 정의되지 않는 한 당분야에 일반적으로 사용되는 바와 같이 사용된다.
CD20(B 림프구 항원 CD20, B 림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5, 및 LF5로도 공지됨; 인간 단백질은 유니프롯(UniProt) 데이터베이스 항목 P11836을 특징으로 함)은 pre-B 및 성숙 B 림프구 상에 발현되는, 약 35 kD의 분자량을 갖는 소수성 막관통 단백질이다(문헌[Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; [Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; [Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; [Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; [Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]). 상응하는 인간 유전자는 막-스패닝 4-도메인, 아과 A, 구성원 1(MS4A1로도 공지됨)이다. 이러한 유전자는 막-스패닝 4A 유전자 과의 구성원을 암호화한다. 발생기 단백질 과의 구성원은 공통 구조적 특징 및 유사한 인트론/엑손 스플라이스 경계를 특징으로 하며, 조혈 세포 및 비-림프 조직 중에서 독특한 발현 패턴을 나타낸다. 이러한 유전자는 B 세포를 원형질 세포로 발달시키고 분화시키는 데 있어서 역할을 하는 B 림프구 표면 분자를 암호화한다. 이러한 과 구성원은 과 구성원의 클러스터 중에서 11q12로 국소화된다. 이러한 유전자의 대안적 스플라이싱은 상기 동일한 단백질을 암호화하는 2개의 전사 변이체를 야기한다.
본원에 사용된 용어 "CD20"은, 달리 지시되지 않는 한, 임의의 척추동물 공급원(포유동물, 예컨대 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)를 포함함)으로부터의 임의의 천연 CD20을 지칭한다. 상기 용어는 "전장"의 미처리된 CD20, 및 세포에서의 처리에 의해 야기된 CD20의 임의의 형태를 포괄한다. 또한, 상기 용어는 CD20의 천연 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 한 실시양태에서, CD20은 인간 CD20이다. 예시적 인간 CD20의 아미노산 서열을 서열번호 1에 나타냈다.
용어 "항-CD20 항체" 및 "CD20에 결합하는 항체"는, 항체가 CD20 표적화에 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 CD20에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 관련되지 않은 비-CD20 단백질에 대한 항-CD20 항체의 결합의 정도는 예를 들어 방사 면역 분석법(RIA)에 의해 측정시 CD20에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, CD20에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM 또는 ≤ 0.001 nM(예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 내지 10-13 M)의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-CD20 항체는 상이한 종의 CD20 중에서 보존되는 CD20의 에피토프에 결합한다.
"제II형 항-CD20 항체"는 문헌[Cragg et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; [Cragg et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, Klein et al., mAbs 5 (2013), 22-33]에 기재되고 하기 표 1에 나타낸 바와 같이 제II형 항-CD20 항체의 결합 특성 및 생물학적 활성을 갖는 항-CD20 항체를 의미한다.
제I형 및 제II형 항-CD20 항체의 특성
제I형 항-CD20 항체 제II형 항-CD20 항체
클래스 I CD20 에피토프에 결합 클래스 II CD20 에피토프에 결합
CD20을 지질 뗏목에 국소화시킴 CD20을 지질 뗏목에 국소화시키지 않음
고 CDC * 저 CDC *
ADCC 활성 * ADCC 활성 *
B 세포에 완전히 결합하는 능력 B 세포에 약 절반 결합하는 능력
약한 동형성 응집 동형성 응집
적은 세포사 유도 강한 세포사 유도
* IgG1 동형의 경우
제II형 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 오비누투주맙(GA101), 토시투무맙(tositumumab)(B1), 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1(WO 2005/044859에 개시된 키메라 인간화된 IgG1 항체), 11B8 IgG1(WO 2004/035607에 개시됨) 및 AT80 IgG1을 포함한다.
제I형 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), 벨투주맙(veltuzumab), 오카라투주맙(ocaratuzumab), 오크렐리주맙(ocrelizumab), PRO131921, 유블리툭시맙(ublituximab), HI47 IgG3(ECACC, 하이브리도마), 2C6 IgG1(WO 2005/103081에 개시됨), 2F2 IgG1(WO 2004/035607 및 WO 2005/103081에 개시됨) 및 2H7 IgG1(WO 2004/056312에 개시됨)을 포함한다.
용어 "인간화된 B-Ly1 항체"는 IgG1로부터 인간 불변 도메인에 의한 키메라화 및 후속 인간화에 의해 뮤린 단클론 항-CD20 항체 B-Ly1(뮤린 중쇄의 가변 영역(VH): 서열번호 2; 뮤린 경쇄의 가변 영역(VL): 서열번호 3(문헌[Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139] 참조))로부터 수득된, WO 2005/044859 및 WO 2007/031875에 개시된 인간화된 B-Ly1 항체를 지칭한다(WO 2005/044859 및 WO 2007/031875 참조). 이들 "인간화된 B-Ly1 항체"는 WO 2005/044859 및 WO 2007/031875에 상세히 개시되어 있다.
본원에 사용된 용어 "시토카인의 방출" 또는 "시토카인 방출"은 "시토카인 스톰" 또는 "시토카인 방출 증후군"("CRS"로 약칭됨)과 동의어이고, 치료제의 투여 동안 또는 직후에(예를 들어 투여 1일 이내에) 개체의 혈액에서 시토카인, 특히 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페론 감마(IFN-γ), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-2(IL-2) 및/또는 인터류킨-8(IL-8)의 수준의 증가를 지칭하며, 이는 유해 증상을 야기한다. 시토카인 방출은, 치료제에 대한 통상적인 유해 약물 반응이며 치료제의 투여와 시기적으로 관련된 주입-관련된 반응(IRR)의 한 유형이다. IRR은 전형적으로 주로 제1 주입에서 치료제의 투여 동안 또는 직후에, 즉, 전형적으로 주입 후 24시간 이내에 발생한다. 일부 경우에, 예를 들어 CAR-T 세포의 투여 후에, CRS는 또한 나중에, 예를 들어 CAR-T 세포의 확장시 투여 며칠 후에 발생할 수 있다. 발생 정도 및 심각도는 전형적으로 후속 주입에 의해 감소된다. 증상은 증상을 보이는 불편함에서 치명적인 이벤트에 이르는 범위일 수 있고, 열, 오한, 현기증, 고혈압, 저혈압, 호흡 곤란, 안절부절, 발한, 홍조, 피부 발진, 빈맥, 빈호흡, 두통, 종양 통증, 메스꺼움, 구토 및/또는 기관 부전을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아미노산 돌연변이"는 아미노산 치환, 결실, 삽입 및 변형을 포괄한다. 치환, 결실, 삽입 및 변형의 임의의 조합은 최종 구축물이 목적한 특징, 예를 들면, Fc 수용체에 대한 결합 감소, 또는 또 다른 펩티드와의 회합 증가를 보유하는 경우, 최종 구축물에 이르도록 만들어질 수 있다. 아미노산 서열 결실 및 삽입은 아미노산의 아미노- 및/또는 카복시-말단 결실 및 삽입을 포함한다. 특정한 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 예를 들어, Fc 영역의 결합 특징의 변경을 위해, 비-보존적 아미노산 치환, 즉, 하나의 아미노산을 상이한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 대체하는 것이 특히 바람직하다. 아미노산 치환은 자연적으로 발생하지 않은 아미노산에 의한 또는 20개 표준 아미노산(예를 들면, 4-하이드록시프롤린, 3-메틸히스티딘, 오르니틴, 호모세린, 5-하이드록시리신)의 자연 발생하는 아미노산 유도체에 의한 치환을 포함한다. 아미노산 돌연변이는 당분야에 널리 공지된 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 유전적 방법은 부위-지정된 돌연변이생성, PCR, 유전자 합성 등을 포함할 수 있다. 유전적 조작 이외의 방법, 예컨대 화학적 변형에 의해 아미노산의 측쇄 기를 변경하는 방법이 또한 유용할 수 있음이 간주된다. 동일한 아미노산 돌연변이를 나타내기 위해 본원에서 다양한 명칭이 사용될 수 있다. 예를 들면, Fc 도메인의 위치 329에서 프롤린으로부터 글리신으로의 치환은 329G, G329, G329, P329G 또는 Pro329Gly로서 나타낼 수 있다.
"친화도"는 분자의 단일 결합 부위(예를 들면, 수용체)와 이의 결합 파트너(예를 들면, 리간드) 사이의 비-공유결합 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍(예를 들면, 수용체 및 리간드)의 구성원 사이에 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화도를 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 표시될 수 있고, 이는 해리 및 결합 속도 상수(각각 koff 및 kon)의 비이다. 따라서, 동등한 친화도는 속도 상수의 비가 동일하게 유지되는 동안은 상이한 속도 상수를 포함할 수 있다. 친화도는 당분야에서 공지된 널리 수립된 방법에 의해 측정될 수 있다. 친화도를 측정하는 특정한 방법은 표면 플라즈몬 공명(SPR)이다.
"감소"(및 이의 문법적 변형, 예컨대 "감소하다" 또는 "감소함"), 예를 들어 B 세포의 수 또는 시토카인 방출의 감소는 당분야에 공지된 적절한 방법에 의해 측정된 각각의 수량의 감소를 지칭한다. 명료성을 위해, 상기 용어는 또한 0(또는 분석법의 검출 한계 미만)으로의 감소, 즉, 완전한 파괴 또는 제거를 포함한다. 역으로, "증가된"은 각각의 수량의 증가를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항원 결합 모이어티"는 항원 결정 인자에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 분자를 지칭한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 모이어티는 표적 부위, 예를 들면 특이적 유형의 종양 세포 또는 항원 결정 인자를 보유하는 종양 기질에 부착되는 독립체(예를 들면, 시토카인 또는 제2 항원 결합 모이어티)를 유도할 수 있다. 항원 결합 모이어티는 본원에 추가로 정의된 바와 같이 항체 및 이의 단편을 포함한다. 바람직한 항원 결합 모이어티는 항체의 항원 결합 도메인을 포함하고, 항체 중쇄 가변 영역 및 항체 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 모이어티는 본원에 추가로 정의되고 당분야에 공지된 바와 같이 항체 불변 영역을 포함할 수 있다. 유용한 중쇄 불변 영역은 5개의 동형(α, δ, ε, γ 또는 μ) 중 임의의 것을 포함한다. 유용한 경쇄 불변 영역은 2개의 동형(κ 및 λ) 중 임의의 것을 포함한다.
"특이적으로 결합하다"는 결합이 항원에 선택적이고 원치않거나 비-특이적인 상호작용으로부터 식별될 수 있음을 의미한다. 특이적 항원 결정 인자에 결합하는 항원 결합 모이어티의 능력은 효소-연결된 면역흡착 분석 (ELISA) 또는 당업자에게 친숙한 다른 기술, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기술(비아코어(BIAcore) 기기 상에 분석됨)(문헌[Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)]), 및 전통적인 결합 분석(문헌[Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)])을 통해 측정될 수 있다. 한 실시양태에서, 관련 없는 단백질에 대한 항원 결합 모이어티의 결합 정도는 예를 들면, SPR에 의해 측정된 바와 같이 항원에 대한 항원 결합 모이어티의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, 항원에 결합하는 항원 결합 모이어티, 또는 항원 결합 모이어티를 포함하는 항원 결합 분자는 ≤ 1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM(예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 내지 10-13 M))의 해리 상수(KD)를 갖는다.
"감소된 결합", 예를 들면 Fc 수용체에 대한 감소된 결합은 예를 들면 SPR에 의해 측정시 각각의 상호작용에 대한 친화도의 감소를 나타낸다. 명료성을 위해 상기 용어는 또한 0(또는 분석적 방법의 검출 한계 미만)으로의 친화도의 감소, 즉, 상호작용의 완전한 파괴를 포함한다. 역으로, "증가된 결합"은 각각의 상호작용에 대한 증가된 결합 친화도를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "항원 결합 분자"는 이의 광범위한 의미에서 항원 결정 인자에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 항원 결합 분자의 예는 면역 글로불린 및 이의 유도체, 예를 들면, 단편이다.
본원에 사용된 용어 "항원 결정 인자"는 "항원" 및 "에피토프"와 동의어이고, 항원 결합 모이어티-항원 복합체를 형성하는, 항원 결합 모이어티가 결합하는 폴리펩티드 매크로분자에서의 부위(예를 들면, 아미노산의 인접한 거리 또는 비-인접한 아미노산의 상이한 영역으로 구성된 배좌 배열)를 지칭한다. 유용한 항원 결정 인자는 예를 들면, 종양 세포의 표면에서, 바이러스-감염된 세포의 표면에서, 다른 질환의 세포의 표면에서, 혈청에서 자유롭게 및/또는 세포외 기질(ECM)에서 발견될 수 있다. 본원에서 항원으로서 지칭된 단백질(예를 들어 CD3)은, 달리 나타내지 않는 한, 포유동물, 예컨대 영장류(예를 들면 인간) 및 설치류(예를 들면 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 단백질의 임의의 천연 형태일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 항원은 인간 단백질이다. 본원에서 특이적 단백질이 언급되는 경우, 상기 용어는 "전장"의 미가공된 단백질 및 세포에서 가공하여 발생하는 임의의 형태의 단백질을 포괄한다. 또한, 상기 용어는 단백질의 자연 발생하는 변이체, 예를 들면, 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 항원으로서 유용한 예시적인 인간 단백질은 CD3, 특히 CD3의 엡실론 서브유닛을 포함한다(인간 서열의 경우 유니프롯 번호 P07766(버전 130), NCBI 기준 서열번호 NP_000724.1, 서열번호 105; 또는 시노몰구스[마카카 파스시쿨라리스(Macaca fascicularis)] 서열의 경우 유니프롯 번호 Q95LI5(버전 49), NCBI 진뱅크 번호 BAB71849.1, 서열번호 106 참조). 특정 실시양태에서, 본 발명의 T 세포 활성화 이중특이적 분자는 CD3 또는 상이한 종으로부터 표적 항원 중에서 보존되는 CD3의 에피토프 또는 표적 세포 항원에 결합한다.
본원에 사용된 용어 "폴리펩티드"는 아미드 결합(펩티드 결합으로도 공지됨)에 의해 선형으로 연결된 단량체(아미노산)로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "폴리펩티드"는 2개 이상의 아미노산의 임의의 쇄를 지칭하고, 특정한 길이의 생성물을 지칭하지 않는다. 따라서, 펩티드, 다이펩티드, 트라이펩티드, 올리고펩티드, "단백질", "아미노산 쇄", 또는 2개 이상의 아미노산의 쇄를 지칭하기 위해 사용된 임의의 다른 용어는 "폴리펩티드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩티드"는 임의의 이러한 용어 대신에 또는 임의의 이러한 용어와 상호교환적으로 사용될 수 있다. 용어 "폴리펩티드"는 또한 비제한적으로 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 또는 자연적으로 발생하지 않은 아미노산에 의한 변형을 비롯한 폴리펩티드의 발현 후 변형 생성물을 지칭하는 것으로 의도된다. 폴리펩티드는 천연 생물학적 공급원으로부터 유도되거나 재조합 기술에 의해 생성될 수 있지만, 나타낸 핵산 서열로부터 번역될 필요는 없다. 이는 화학적 합성을 비롯한 임의의 방식으로 생성될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 약 3 이상, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 25 이상, 50 이상, 75 이상, 100 이상, 200 이상, 500 이상, 1000 이상 또는 2000 이상 크기의 아미노산일 수 있다. 폴리펩티드는 한정된 3차원 구조를 가질 수 있지만, 반드시 상기 구조를 가질 필요는 없다. 한정된 3차원 구조를 갖는 폴리펩티드는 접힌 상태이지만, 확정된 3차원 구조를 갖지 않지만, 오히려 다수의 상이한 형태를 채택할 수 있는 폴리펩티드는 풀린 상태이다.
"단리된" 폴리펩티드, 또는 이의 변이체 또는 유도체는 이의 자연적 환경에서 존재하지 않는 폴리펩티드를 의도한다. 특정한 수준의 정제를 필요로 하지 않는다. 예를 들면, 단리된 폴리펩티드는 이의 천연 또는 자연 환경으로부터 제거될 수 있다. 숙주 세포에서 발현된 재조합적으로 생성된 폴리펩티드 및 단백질은 임의의 적합한 기술에 의해 분리되거나 분별되거나 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 천연 또는 재조합 폴리펩티드로서 존재한다.
기준 폴리펩티드 서열과 관련하여 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은 필요에 따라 서열을 정렬하고 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성에 도달하고 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않은 후, 기준 폴리펩티드 서열에서 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서 아미노산 잔기의 퍼센트로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하는 목적을 위한 정렬은 당분야의 기술 내에 있는 다양한 방식, 예를 들면, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST-2, 얼라인(ALIGN) 또는 메갈라인(Megalign)[디엔에이스타(DNASTAR)] 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 대한 최대 정렬을 달성하기 위해 요구되는 임의의 알고리즘을 비롯하여, 서열을 정렬하는 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 퍼센트 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 얼라인-2를 사용하여 생성된다. 얼라인-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크 인코포레이티드(Genentech, Inc)에 의해 창시되었고, 공급 코드는 미국 저작권 협회(U.S. Copyright Office; 미국 워싱턴 D.C., 20559 소재)에서 사용자 문서로 제출되었다(이는 미국 저작권 등록 번호 TXU510087 하에 등록됨). 얼라인-2 프로그램은 제넨테크 인코포레이티드(미국 캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코 소재)로부터 공개적으로 이용가능하거나, 공급 코드로부터 편집될 수 있다. 얼라인-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 비롯한 UNIX 작동 시스템에서 사용하기 위해 편집되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 얼라인-2 프로그램에 의해 설정되고 달라지지 않는다. 아미노산 서열 비교를 위해 이용되는 상황에서, 제공된 아미노산 서열 B에, 제공된 아미노산 서열 B와, 또는 제공된 아미노산 서열 B에 대하여 제공된 아미노산 서열 A의 퍼센트 아미노산 서열 동일성(이는 대안적으로 제공된 아미노산 서열 B에, 제공된 아미노산 B와, 또는 제공된 아미노산 B에 대하여 특정한 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 갖거나 포함하는 제공된 아미노산 서열로서 표현될 수 있음)은 다음과 같이 계산된다:
100 x X/Y
상기 식에서, X는 A 및 B의 프로그램의 정렬에서 서열 정렬 프로그램 얼라인-2에 의해 동일하게 일치하는 기록된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이는 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않고, B에 대한 A의 퍼센트 아미노산 서열 동일성은 A에 대한 B의 퍼센트 아미노산 서열 동일성과 같지 않음이 이해될 것이다. 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 모든 퍼센트 아미노산 서열 동일성 값은 얼라인-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 직전 문단에 기재된 바와 같이 수득된다.
본원에서 용어 "항체"는 이의 가장 넓은 의미로 사용되며 비제한적으로 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어 이중특이적 항체) 및 항체 단편(이들이 목적하는 항원 결합 활성을 나타내는 경우)을 포함하는 다양한 항체 구조물을 포괄한다.
용어 "전장 항체", "완전 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하는 데 상호교환적으로 사용된다.
"항체 단편"은 완전 항체가 결합하는 항원에 결합하는 완전 항체의 일부를 포함하는 완전 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 비제한적으로 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 다이아바디, 선형 항체, 단쇄 항체 분자(예를 들어 scFv), 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "항체 단편"은 또한 단일 도메인 항체를 포괄한다.
용어 "면역 글로불린 분자"는 천연 항체의 구조물을 갖는 단백질을 지칭한다. 예를 들어, IgG 클래스의 면역 글로불린은, 다이설파이드-결합된 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종 사량체성 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 영역(VH)(가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 지칭됨), 이어서 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)(중쇄 불변 영역으로 지칭됨)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 영역(VL)(가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 지칭하고), 이어서 불변 경쇄(CL) 도메인(경쇄 불변 영역으로도 지칭됨)을 갖는다. 면역 글로불린의 중쇄는 α(IgA), δ(IgD), ε(IgE), γ(IgG) 또는 μ(IgM)(이들 일부는 서브클래스, 예를 들어 γ1(IgG1), γ2(IgG2), γ3(IgG3), γ4(IgG4), α1(IgA1) 및 α2(IgA2)로 추가로 분류될 수 있음)로 지칭되는 5개의 클래스 중 1개에 할당될 수 있다. 면역 글로불린의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 카파(κ) 및 람다(λ)로 지칭되는 2개의 유형 중 하나에 할당될 수 있다. 면역 글로불린은 면역 글로불린 힌지 영역을 통해 연결된 2개의 Fab 분자 및 1개의 Fc 도메인으로 본질적으로 구성된다.
용어 "항원 결합 도메인"은, 항원의 일부 또는 전부에 특이적으로 결합하며 이에 상보적인 영역을 포함하는 항체의 일부를 지칭한다. 항원 결합 도메인은 예를 들어 하나 이상의 항체 가변 도메인(항체 가변 영역으로도 지칭됨)에 의해 제공될 수 있다. 바람직하게는, 항원 결합 도메인은 항체 경쇄 가변 영역(VL) 및 항체 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 수반되는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지되, 각각의 도메인은 4개의 보존된 골격 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다. 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다.
"인간 항체"는, 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나, 인간 항체 래퍼토리 또는 다른 인간 항체-암호화 서열을 사용하는 비-인간 공급원으로부터 유도된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 특별히 배제한다.
"인간화된" 항체는 비-인간 HVR의 아미노산 잔기 및 인간 FR의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 인간화된 항체는 HVR(예를 들어 CDR) 중 전부 또는 실질적으로 전부가 비-인간 항체의 것에 해당하고, FR 중 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 항체의 것에 해당하는 하나 이상의 가변 도메인 중 전부 또는 실질적으로 전부, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 부분을 임의적으로 포함할 수 있다. 항체, 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 수행한 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열에 있어서 초가변적("상보 결정 영역" 또는 "CDR")이고/이거나 구조적으로 한정된 루프("초가변 루프")를 형성하고/하거나 항원-접촉 잔기("항원 접촉부")를 함유하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR을 포함한다: VH에 3개(H1, H2, H3) 및 VL에 3개(L1, L2, L3). 본원에서 예시적 HVR은 하기를 포함한다:
(a) 아미노산 잔기 26-32(L1), 50-52(L2), 91-96(L3), 26-32(H1), 53-55(H2) 및 96-101(H3)에서 발생한 초가변 루프(문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]);
(b) 아미노산 잔기 24-34(L1), 50-56(L2), 89-97(L3), 31-35b(H1), 50-65(H2) 및 95-102(H3)에서 발생한 CDR(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))];
(c) 아미노산 잔기 27c-36(L1), 46-55(L2), 89-96(L3), 30-35b(H1), 47-58(H2) 및 93-101(H3)에서 발생한 항원 접촉부(문헌[MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)]); 및
(d) HVR 아미노산 잔기 46-56(L2), 47-56(L2), 48-56(L2), 49-56(L2), 26-35(H1), 26-35b(H1), 49-65(H2), 93-102(H3) 및 94-102(H3)를 포함하는 상기 (a), (b) 및/또는 (c)의 조합.
달리 지시되지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인의 기타 잔기(예를 들어 FR 잔기)는 상기 카바트 등에 따라 본원에서 넘버링된다.
"골격" 또는 "FR"은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 이루어진다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH(또는 VL)에서 하기 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
항체의 "클래스"는 이의 중쇄가 갖는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5개의 주요 항체의 클래스(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM)가 존재하고, 이들 중 몇몇은 서브클래스(동형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 면역 글로불린의 상이한 클래스에 해당하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 지칭된다.
본원에서 용어 "Fc 도메인" 또는 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역 글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. IgG 중쇄의 Fc 영역의 경계가 약간 변할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 Cys226 또는 Pro230에서 중쇄의 카복시-말단으로 연장하는 것으로 한정된다. 그러나, 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 중쇄의 C-말단으로부터 하나 이상, 특히 1 또는 2개의 아미노산의 번역 후 절단을 수행할 수 있다. 따라서, 전장 중쇄를 암호화하는 특이적 핵산 분자의 발현에 의한 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 전장 중쇄를 포함할 수 있거나 전장 중쇄의 절단된 변이체(본원에서 "절단된 변이체 중쇄"로도 지칭됨)를 포함할 수 있다. 이는 중쇄의 마지막 2개의 C-말단 아미노산이 글리신(G446) 및 리신(K447, 카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)인 경우일 수 있다. 따라서, Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447), 또는 C-말단 글리신(Gly446) 및 리신(K447)이 존재하지 않거나 존재할 수 있다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991](또한 상기 참조)에 기재된 바와 같이 EU 넘버링 시스템(EU 인덱스로도 지칭됨)에 따른다. 본원에 사용된 Fc 도메인의 "서브유닛"은 안정한 자기-회합이 가능한, 이량체성 Fc 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩티드(즉, 면역 글로불린 중쇄의 C-말단 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드) 중 하나를 지칭한다. 예를 들어, IgG Fc 도메인의 서브유닛은 IgG CH2 및 IgG CH3 불변 도메인을 포함한다.
"Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형"은, 동종 이량체를 형성하는, Fc 도메인 서브유닛을 포함하는 폴리펩티드를 동일한 폴리펩티드와 회합시킴을 감소시키거나 방지하는, 펩티드 주쇄의 조작 또는 Fc 도메인 서브유닛의 번역 후 변형이다. 본원에 사용된 회합을 촉진하는 변형은 특히 회합에 바람직한 2개의 Fc 도메인 서브유닛(즉, 도메인의 제1 및 제2 서브유닛) 각각에 대한 개별적 변형을 포함하되, 상기 변형은 2개의 Fc 도메인 서브유닛외 화합을 촉진하도록 서로 상보적이다. 예를 들어, 회합을 촉진하는 변형은 이의 회합을 각각 입체구조적으로 또는 정전기적으로 유리하게 만들기 위해 Fc 도메인 서브유닛 중 하나 또는 모두의 구조 또는 전하를 변경할 수 있다. 따라서, (이종) 이량체화는 제1 Fc 도메인 서브유닛을 포함하는 폴리펩티드와 제2 Fc 도메인 서브유닛을 포함하는 폴리펩티드 사이에 발생하고, 이는 각각의 서브유닛에 융합하는 추가적 요소(예를 들어 항원 결합 모이어티)가 동일하지 않다는 점에서 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 회합을 촉진하는 변형은 Fc 도메인의 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 회합을 촉진하는 변형은 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 각각에 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다.
"활성화 Fc 수용체"는 항체의 Fc 영역에 의한 결합 후에 수용체-함유 세포를 자극하여 효과기 기능을 수행하는 신호 전달 이벤트를 유도하는 Fc 수용체이다. 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa(CD16a), FcγRI(CD64), FcγRIIa(CD32) 및 FcαRI(CD89)를 포함한다.
항체와 관련하여 사용될 때 용어 "효과기 기능"은, 항체 동형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 하기를 포함한다: C1q 결합 및 보체-의존성 세포 독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체-의존성 세포-매개된 세포 독성(ADCC), 항체-의존성 식세포 작용(ADCP), 시토카인 분비, 항원 제시 세포에 의한 면역 복합체-매개된 항원 흡수, 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체)의 하향 조절 및 B 세포 활성화.
본원에 사용된 용어 "효과기 세포"는 효과기 모이어티 수용체, 예를 들어 시토카인 수용체 및/또는 이들 표면 상의 Fc 수용체(이를 통해 효과기 모이어티, 예를 들어 시토카인에 결합함) 및/또는 항체의 Fc 영역을 나타내는 림프구를 지칭하고, 표적 세포, 예를 들어 종양 세포의 파괴에 기여한다. 효과기 세포는 예를 들어 세포 독성 또는 식세포 효과를 매개할 수 있다. 효과기 세포는 비제한적으로 효과기 T 세포, 예컨대 CD8+ 세포독성 T 세포, CD4+ 헬퍼 T 세포, γδ T 세포, NK 세포, 림포카인-활성화된 살해(LAK) 세포 및 대식 세포/단핵구를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "조작하다", "조작된" 또는 "조작함"은 펩티드 주쇄의 임의의 조작 또는 천연 또는 재조합 폴리펩티드 또는 이의 단편의 번역 후 변형을 포함하는 것으로 간주된다. 조작함은 아미노산 서열의 변형, 글리코실화 패턴의 변형 또는 개별적 아미노산의 측쇄 기의 변형, 뿐만 아니라 이들 접근법의 조합을 포함한다. "조작함", 특히 접두사 "당-"이 붙은 "조작", 및 용어 "글리코실화 조작"은 세포에서 발현되는 당단백질의 변경된 글리코실화를 달성하기 위한 올리고사카라이드 합성 경로의 유전자 조작을 포함하는, 세포의 글리코실화 시스템의 대사적 조작을 포함한다. 또한, 글리코실화 조작은 글리코실화에 대한 돌연변이 및 세포 환경의 효과를 포함한다. 한 실시양태에서, 글리코실화 조작은 글리코실트랜스퍼라제 활성의 변경이다. 특정 실시양태에서, 조작은 변경된 글루코사민일트랜스퍼라제 활성 및/또는 푸코실트랜스퍼라제 활성을 야기한다. 글루코실화 조작은 "증가된 GnTIII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어, β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 증가된 수준을 발현하도록 조작된 숙주 세포), "증가된 ManII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어, α-만노시다제 II (ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 증가된 수준을 발현하도록 조작된 숙주 세포) 또는 "감소된 α(1,6) 푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어, α(1,6) 푸코실트랜스퍼라제의 감소된 수준을 발현하도록 조작된 숙주 세포)를 생산하는 데 사용될 수 있다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포(이러한 세포의 자손을 포함함)를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하고, 이는 일차 형질전환된 세포, 및 계대의 수와 상관 없이 이로부터 유도된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 함량에 있어서 완전히 동일하지 않으나, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 동일한 기능 및 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본원에 포함된다. 숙주 세포는 본 발명에 사용된 단백질을 생산하는 데 사용될 수 있는 임의의 유형의 세포 시스템이다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 변형된 올리고사카라이드를 갖는 항체의 생산을 가능하게 하도록 조작된다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 증가된 수준의 하나 이상의 폴리펩티드를 발현하도록 조작되었다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 증가된 수준의 하나 이상의 폴리펩티드를 발현하도록 조작되었다. 숙주 세포는 배양된 세포, 예를 들어 포유동물의 배양된 세포, 예컨대 CHO 세포, BHK 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, YO 골수종 세포, P3X63 마우스 골수종 세포, PER 세포, PER.C6 세포 또는 하이브리도마 세포, 효모 세포, 곤충 세포 및 식물 세포, 예를 들어 형질전환 동물, 형질전환 식물 또는 배양된 식물 또는 동물 조직에 포함된 세포를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "GnTIII 활성을 갖는 폴리펩티드"는 β-1,4 연결의 N-아세틸글루코사민(GlcNAc) 잔기를 N-연결된 올리고사카라이드의 트라이만노실 코어의 β-연결된 만노시드에 첨가하는 것에 촉매작용할 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. 이는 투여량 의존성 유무에 관계 없이, 특정 생물학적 분석에서 측정된, 생화학 및 분자 생물학 국제 연합 명명 위원회(NC-IUBMB)에 따라 β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(β-1,4-만노실-당단백질 4-베타-N-아세틸글루코사민일-트랜스퍼라제(EC 2.4.1.144))로도 공지됨)의 활성과 동일할 필요는 없으나 유사한 효소 활성을 나타내는 융합 폴리펩티드를 포함한다. 투여량 의존성이 존재하는 경우, 이는 GnTIII의 것과 동일할 필요는 없으나, GnTIII과 비교하여 제공된 활성에 있어서 투여량 의존성이 실질적으로 유사하다(즉, 후보 폴리펩티드는 GnTIII에 비해 보다 큰 활성, 또는 약 25-배 이하 적은 활성, 바람직하게는, 약 10-배이하 적은 활성, 가장 바람직하게는 약 3-배 이하 적은 활성을 나타낼 것이다). 특정 실시양태에서, GnTIII 활성을 갖는 폴리펩티드는 GnTIII의 효소 도메인 및 이종 골지(Golgi) 내재성 폴리펩티드의 골지 국소화 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드이다. 특히, 골지 국소화 도메인은 만노시다제 II 또는 GnTI의 국소화 도메인, 가장 특히 만노시다제 II의 국소화 도메인이다. 대안적으로, 골지 국소화 도메인은 만노시다제 I의 국소화 도메인, GnTII의 국소화 도메인 및 α1,6 코어 푸코실트랜스퍼라제의 국소화 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이러한 융합 폴리펩티드를 생산하는 방법 및 이를 증가된 효과기 기능을 갖는 항체를 생산하는 데 사용하는 방법이 WO 2004/065540, US 60/495,142 및 US 2004/0241817에 개시되어 있고, 이의 전체 내용은 본원에 분명히 참고로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "골지 국소화 도메인"은 골지 복합물 내의 위치에 폴리펩티드를 고정시키는 골지 내재성 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다. 일반적으로, 국소화 도메인은 효소의 아미노 말단 "테일"을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "ManII 활성을 갖는 폴리펩티드"는 N-연결된 올리고사카라이드의 분지된 GlcNAcMan5GlcNAc2 만노스 중간체의 말단 1,3- 및 1,6-연결된 α-D-만노스 잔기의 가수분해에 있어서 촉매작용할 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. 이는 화학 및 분자 생물학 국제 연합 명명 위원회(NC-IUBMB)에 따라 만노실 올리고사카라이드 1,3-1,6-α-만노시다제 II(EC 3.2.1.114)로도 공지된 골지 α-만노시다제 II의 활성과 동일할 필요는 없으나 유사한 효소 활성을 나타내는 폴리펩티드이다.
항체-의존성 세포-매개된 세포 독성(ADCC)은 면역 효과기 세포에 의해 항체-코팅된 표적 세포의 용해를 야기하는 면역 메커니즘이다. 표적 세포는 Fc 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편이 일반적으로 Fc 영역의 N-말단인 단백질 부분을 통해 특이적으로 결합하는 세포이다. 본원에 사용된 용어 "증가된/감소된 ADCC"는 상기에 정의된 ADCC의 메커니즘에 의해 표적 세포를 둘러싼 배지에서 항체의 제공된 농도에서 제공된 시간 내에 용해된 표적 세포의 수의 증가/감소, 및/또는 ADCC의 메커니즘에 의해 제공된 시간 내에 제공된 수의 표적 세포의 용해를 달성하는 데 필요한 효적 세포를 둘러싼 배지에서 항체의 농도의 감소/증가로 정의된다. ADCC의 증가/감소는 동일한 표준 생산, 정제, 제형화 및 저장 방법(당업자에게 공지되어 있음)을 사용하여 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생산되었으나 조작되지 않은 동일한 항체에 의해 매개된 ADCC에 상대적이다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법에 의해 (예를 들어 글리코실트랜스퍼라제, GnTIII 또는 다른 글리코실트랜스퍼라제를 발현하도록) 변경된 패턴의 글리코실화를 갖도록 조작된 숙주 세포에 의해 생산된 항체에 의해 매개된 ADCC의 증가는 조작되지 않은 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생산된 동일한 항체에 의해 매개된 ADCC에 상대적이다.
"증가된/감소된 항체-의존성 세포-매개된 세포 독성(ADCC)을 갖는 항체"는 당업자에게 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 결정된 증가된/감소된 ADCC를 갖는 항체를 의미한다. 하나의 공인된 시험관내 ADCC 분석은 하기와 같다:
1) 분석은 항체의 항원 결합 영역에 의해 인식되는 표적 항원을 발현하는 것으로 공지된 표적세포를 사용한다;
2) 분석은 효과기 세포로서 무작위하게 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 단리된 인간 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 사용한다;
3) 분석은 하기 프로토콜을 따라 수행된다:
i) PBMC를 표준 밀도 원심분리 절차를 사용하여 단리하고 RPMI 세포 배양 배지에서 5 x 106 세포/ml로 현탁시킨다;
ii) 표적 세포를 표준 조직 배양 방법에 의해 성장시키고 90% 초과의 생존능을 갖는 급격한 성장 상으로부터 채취하고 RPMI 세포 배양 배지에서 세척하고 100 μCi의 51Cr로 표지하고 2회 세포 배양 배지로 세척하고 105 세포/ml의 밀도로 세포 배양 배지에서 재현탁시킨다;
iii) 100 μL의 상기 최종 표적 세포 현탁액을 96-웰 마이크로타이터 플레이트의 각 웰로 옮긴다;
iv) 항체를 세포 배양 배지에서 4000 ng/ml에서 0.04 ng/ml로 연속 희석시키고, 50 μL의 생산된 항체 용액을 96-웰 마이크로타이터 플레이트의 표적 세포에 첨가하여 전체 농도 범위를 포함하는 다양한 항체 농도에서 3회 시험으로 시험한다;
v) 최대 방출(MR) 대조군의 경우, 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트의 3개의 추가적 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신에 비-이온성 세제(Nonidet, 시그마(Sigma, 미국 세인트 루이스 소재))의 2%(V/V) 수용액(50 μL)을 제공한다;
vi) 자발적 방출(SR) 대조군의 경우, 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트의 3개의 추가적 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신에 50 μL의 RPMI 세포 배양 배지를 제공한다;
vii) 이어서, 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 50 x g에서 1분 동안 원심분리하고 1시간 동안 4℃에서 항온처리한다;
viii) 50 μL의 PBMC 현탁액(상기 i)을 각각의 웰에 첨가하여 25:1의 효과기:표적 세포 비를 수득하고, 플레이트를 5% CO2 대기 하에 37℃에서 4시간 동안 항온처리기에 둔다;
ix) 각각의 웰의 무-세포 상청액을 채취하고, 실험적으로 방출된 방사능(ER)을 감마 카운터를 사용하여 정량화한다;
x) 특정 용해의 백분율을 각각의 항체 농도에 대해 하기 수학식에 따라 계산한다:
(ER-MR)/(MR-SR) x 100
상기 식에서, ER은 항체 농도에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, MR은 MR 대조군에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 v 참조)이고, SR은 SR 대조군(상기 vi 참조)에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 ix 참조)이다;
4) "증가된/감소된 ADCC"는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에 관찰된 특정 용해의 최대 백분율의 증가/감소, 및/또는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰된 특정 용해의 최대 백분율의 절반을 달성하는 데 필요한 항체의 농도의 감소/증가로서 정의된다. ADCC의 증가/감소는 당업자에게 공지된 동일한 표준 생산, 정제, 제형화 및 저장 방법을 사용하여 동일한 유형의 숙주 세포로부터 생산되나 조작되지 않은 동일한 항체에 의해 매개된, 상기 분석에서 측정된 ADCC에 상대적이다.
본원에 사용된 용어 "단클론 항체"는 가능한 변이체 항체(예를 들어, 천연 돌연변이를 함유하거나 단클론 항체 제제의 생산 동안 발생함, 이러한 변이체는 일반적으로 부수적인 양으로 존재한다)를 제외하고 실질적으로 동종인 항체(즉, 개별적인 항체가 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합하는 집단을 포함함)로부터 수득된 항체를 지칭한다. 전형적으로 상이한 결정 인자(에피토프)를 지향하는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 대조적으로, 단클론 항체 제제의 각각의 단클론 항체는 항원 상의 단일 결정 인자를 지향한다. 따라서, 수식어 "단클론"은 항체의 실질적으로 동종인 집단으로부터 수득된 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의해 항체의 생산이 필요한 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 비제한적으로 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법 및 인간 면역 글로불린 유전자 자리의 전부 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 사용하는 방법(상기 방법 및 기타 예시적 단클론 항체 생산 방법은 본원에 기재되어 있다)을 포함하는 다양한 기술에 의해 생산될 수 있다.
항원 결합 모이어티 등에 관련하여 본원에 사용된 용어 "제1", "제2", "제3" 등은 하나 초과의 각각의 유형의 모이어티가 존재하는 경우 구별의 편의성을 위해 사용되었다. 상기 용어의 사용은 명시적으로 언급되지 않는 한 특정한 순서 또는 배향을 부여하는 것으로 의도되지 않는다.
용어 "다중특이적" 및 "이중특이적"은 항원 결합 분자가 2개 이상의 별개의 항원 결정 인자에 특이적으로 결합할 수 있음을 의미한다. 전형적으로, 이중특이적 항원 결합 분자는 2개의 항원 결합 부위를 포함하며, 이들 각각은 상이한 항원 결정 인자에 특이적이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항원 결합 분자는 2개의 항원 결정 인자, 특히 2개의 별개의 세포 상에 발현된 2개의 항원 결정 인자에 동시에 결합할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "결합가"는 항원 결합 분자의 명시된 수의 항원 결합 부위의 존재를 나타낸다. 이와 같이, 용어 "항원에 대한 일가 결합"은 항원 결합 분자에서 항원에 대해 특이적인 하나(및 하나 이하)의 항원 결합 부위의 존재를 나타낸다.
"항원 결합 부위"는 항원과의 상호작용을 제공하는 항원 결합 분자의 부위, 즉, 하나 이상의 아미노산 잔기를 지칭한다. 예를 들어, 항체의 항원 결합 부위는 상보 결정 영역(CDR)의 아미노산 잔기를 포함한다. 천연 면역 글로불린 분자는 전형적으로 2개의 항원 결합 부위를 갖고, Fab 분자는 전형적으로 단일 항원 결합 부위를 갖는다.
본원에 사용된 "T 세포 활성화 치료제"는 개체에서 T 세포 활성화를 유도할 수 있는 치료제, 특히 개체에서 T 세포 활성화를 유도하도록 설계된 치료제를 지칭한다. T 세포 활성화 치료제의 예는 활성화 T 세포 항원, 예컨대 CD3 및 표적 세포 항원, 예컨대 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체를 포함한다. 추가적 예는 T 세포 활성화 도메인, 및 표적 세포 항원, 예컨대 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
본원에 사용된 "활성화 T 세포 항원"은 T 림프구, 특히 세포 독성 T 림프구에 의해 발현되는 항원 결정 인자를 지칭하고, 이는 항원 결합 분자와의 상호작용시 T 세포 활성화를 유도하거나 증대시킬 수 있다. 구체적으로, 항원 결합 분자와 활성화 T 세포 항원의 상호작용은 T 세포 수용체 복합체의 신호 전달 캐스케이드를 촉발함으로써 T 세포 활성화를 유도할 수 있다. 예시적 활성화 T 세포 항원은 CD3이다. 특정 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원은 CD3, 특히 CD3의 엡실론 서브유닛(인간 서열의 경우 유니프롯 번호 P07766(버전 130), NCBI RefSeq 번호 NP_000724.1, 서열번호 105; 또는 시노몰구스[Macaca fascicularis] 서열의 경우 유니프롯 번호 Q95LI5(버전 49), NCBI 유전자은행 번호 BAB71849.1, 서열번호 106 참조)이다.
본원에 사용된 "T 세포 활성화"는 하기로부터 선택되는 T 림프구, 특히 세포 독성 T 림프구의 하나 이상의 세포 반응을 지칭한다: 증식, 분화, 시토카인 분비, 세포 독성 효과기 분자 방출, 세포 독성 활성 및 활성화 마커의 발현. 본 발명에 사용된 T 세포 활성화 치료제는 T 세포 활성화를 유도할 수 있다. T 세포 활성화를 측정하는 데 적합한 분석은 본원에 기재된 분야에 공지되어 있다.
본원에 기재된 "표적 세포 항원"은 표적 세포, 예를 들어 종양 세포, 예컨대 암 세포 또는 종양 스트로마의 세포의 표면 상에 존재하는 항원 결정 인자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 표적 세포 항원은 CD20, 특히 인간 CD20(유니프롯 번호 P11836 참조)이다.
본원에 사용된 "B 세포 항원"은 B 림프구, 특히 악성 B 림프구(이 경우 항원은 "악성 B 세포 항원"으로도 지칭됨)의 표면 상에 존재하는 항원 결정 인자를 지칭한다.
본원에 사용된 "T 세포 항원"은 T 림프구, 특히 세포 독성 T 림프구의 표면 상에 존재하는 항원 결정 인자를 지칭한다.
"Fab 분자"는 면역 글로불린의 중쇄("Fab 중쇄")의 VH 및 CH1 도메인 및 면역 글로불린의 경쇄("Fab 경쇄")의 VL 및 CL 도메인으로 이루어진 단백질을 지칭한다.
"키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 항원 결합 모이어티, 예를 들어 표적화 항체의 단쇄 가변 단편(scFv), 막관통 도메인, 세포내 T 세포 활성화 신호 전달 도메인(예를 들어 T 세포 수용체의 CD3 제타 쇄) 및 임의적으로 하나 이상의 세포내 공자극 도메인(예를 들어 CD28, CD27, CD137(4-1BB), Ox40)을 포함하는 유전자 조작된 수용체 단백질을 의미한다. CAR은 항원 인식, T 세포 활성화, 및 - 제2세대 CAR의 경우 - T 세포 기능 및 잔존을 증대시키기 위한 공자극을 매개한다. 논의를 위해 예를 들어 문헌[Jackson et al., Nat Rev Clin Oncol (2016) 13, 370-383]을 참조한다.
"B 세포 증식성 장애"는 환자의 B 세포의 수가 건강한 개체에서 B 세포의 수와 비교하여 증가된 질병, 및 특히 B 세포의 수의 증가가 질병의 원인 또는 특질인 질병을 의미한다. "CD20-양성 B 세포 증식성 장애"는 B 세포, 특히 악성 B 세포가 (정상 B 세포에 더하여) CD20을 발현하는 B 세포 증식성 장애이다.
예시적 B 세포 증식 장애는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 및 일부 유형의 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)을 포함한다.
"융합된"은 성분(예를 들어 Fab 분자 및 Fc 도메인 서브유닛)이 직접 또는 하나 이상의 펩티드 링커를 통해 펩티드 결합에 의해 연결되는 것을 의미한다.
제제의 "유효량"은 제제가 투여된 세포 또는 조직에서 생리학적 변화를 야기하는 데 필요한 양을 지칭한다.
제제(예를 들어 약학 조성물)의 "치료적 유효량"은 필요한 투여량에서 필요한 시간 동안 목적하는 치료적 결과 또는 예방적 결과를 달성하는 데 유효한 양을 지칭한다. 제제의 치료적 유효량은 예를 들어 질병의 역효과를 제거하거나 감소시키거나 지연시키거나 최소화시키거나 예방한다.
"치료제"는 치료 받을 개체에서 질병의 자연적 과정을 변경하기 위한 시도로서 개체에게 투여되고, 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정 동안 수행될 수 있는 활성 성분, 예를 들어 약학 조성물을 의미한다. "면역 치료제"는 예를 들어 종양에 대한 개체의 면역 반응을 회복시키거나 증대시키기 위한 시도로서 개체에게 투여되는 치료제를 지칭한다.
"개별체" 또는 "개체"는 포유동물이다. 포유동물은 비제한적으로 가축(예를 들어 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)를 포함한다. 바람직하게는, 개별체 또는 개체는 인간이다.
용어 "약학 조성물"은 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효한 것을 가능하게 하는 형태이며 조성물을 투여할 개체가 받아들일 수 없게 독성인 추가적 성분을 미함유하는 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 담체"는 개체 에게 비독성인, 활성 성분 이외의 약학 조성물의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용되는 담체는 비제한적으로 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함한다.
본원에 사용된 "치료"(및 이의 문법적 변형, 예컨대 "치료하다" 또는 "치료함")는 치료 받는 개체에서 질병의 자연적 과정을 변경하기 위한 시도로서 임상적 개입을 지칭하며, 예방을 위해 또는 임상 병리학의 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 비제한적으로 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 경감, 질병의 임의의 직접적이거나 간접적인 병리학적 결과의 축소, 전이의 예방, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 개량 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 질병의 발달을 지연시키거나 질병의 진행을 느리게하는 데 사용된다.
용어 "패키지 삽입물" 또는 "사용 지시서"는 치료 제품의 상업적 패키지에 관례적으로 포함된 지시서를 지칭하고, 이는 적응증, 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 사용 금지 사유 및/또는 이러한 치료 제품의 사용에 관한 경고에 대한 정보를 포함한다.
본원에 언급된 용어 "병용 치료"는 병용 투여(2개 이상의 치료제가 동일하거나 개별적인 제형에 포함되는 경우), 및 개별적 투여(이러한 경우 본원에 보고된 항체의 투여는 추가적 치료제 또는 제제, 바람직하게는 항체의 투여 전에, 그와 동시에 및/또는 그 후에 발생할 수 있다)를 포괄한다.
"CD3"은, 달리 지시되지 않는 한, 포유동물, 예컨대 영장류(예를 들어 인간), 비-인간 영장류(예를 들어 시노몰구스 원숭이) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원의 임의의 천연 CD3을 지칭한다. 상기 용어는 "전장"의 미가공된 CD3, 및 세포에서의 처리로부터 야기된 CD3의 임의의 형태를 포괄한다. 상기 용어는 또한 CD3의 천연 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 한 실시양태에서, CD3은 인간 CD3, 특히 인간 CD3의 엡실론 서브유닛(CD3ε)이다. 인간 CD3ε의 아미노산 서열은 유니프롯(www.uniprot.org) 수탁번호 P07766(버전 144), 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1에 나타나 있다. 또한, 서열번호 91을 참조한다. 시노몰구스[Macaca fascicularis] CD3ε의 아미노산 서열은 NCBI 유전자은행 번호 BAB71849.1에 나타나 있다. 또한, 서열번호 92를 참조한다.
"CD19"는, 달리 지시되지 않는 한, B 림프구 표면 항원 B4 또는 T 세포 표면 항원 Leu-12로도 공지된 B 림프구 항원 CD19를 지칭하고, 포유동물, 예컨대 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)를 포함하는 임의의 척추동물 공급원의 임의의 천연 CD19를 포함한다. 상기 용어는 "전장"의 미가공 CD19, 및 세포에서의 처리로부터 야기된 CD19의 임의의 형태를 포괄한다. 상기 용어는 또한 CD19의 천연 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 한 실시양태에서, CD19는 인간 CD19이다. 예시적 인간 CD19의 아미노산 서열은 유니프롯(www.uniprot.org) 수탁번호 P15391(버전 174) 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_001770.5, 및 서열번호 93에 나타나 있다.
"크로스오버" Fab 분자("Crossfab"로도 지칭됨)는 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된(즉, 서로 대체된) Fab 분자를 의미하고, 즉, 크로스오버 Fab 분자는 경쇄 가변 도메인(VL) 및 중쇄 불변 도메인 1(CH1)로 구성된 펩티드 쇄(VL-CH1, N-말단에서 C-말단 방향), 및 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 불변 도메인(CL)로 구성된 펩티드 쇄(VH-CL, N-말단에서 C-말단 방향)를 포함한다. 명료함을 위해, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인이 교환된 크로스오버 Fab 분자에서, 중쇄 불변 도메인 1(CH1)을 포함하는 펩티드 쇄는 본원에서 (크로스오버) Fab 분자의 "중쇄"로 지칭된다. 역으로, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 불변 도메인이 교환된 크로스오버 Fab 분자에서, 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는 펩티드 쇄는 본원에서 (크로스오버) Fab 분자의 "중쇄"로 지칭된다.
이와 대조적으로, "통상적" Fab 분자는 천연 포맷, 즉, 중쇄 가변 및 불변 도메인으로 구성된 중쇄(VH-CH1, N-말단에서 C-말단 방향), 및 경쇄 가변 및 불변 도메인으로 구성된 경쇄(VL-CL, N-말단에서 C-말단 방향)를 포함하는 Fab 분자를 의미한다.
용어 "폴리뉴클레오티드"는 단리된 핵산 분자 또는 구축물, 예를 들어 전령 RNA(mRNA), 바이러스-유래된 RNA 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 통상적인 포스포다이에스터 결합 또는 비-통상적인 결합(예를 들어 아미드 결합, 예컨대 펩티드 핵산(PNA)에서 발견되는 아미드 결합)을 포함할 수 있다. "핵산 분자"란 용어는 폴리뉴클레오티드에 존재하는 임의의 하나 이상의 핵산 분절, 예를 들어 DNA 또는 RNA 단편을 지칭한다.
"단리된" 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드는 이의 천연 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA를 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 목적을 위해 단리된 벡터 중에 함유된 폴리펩티드를 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오티드가 고려된다. 단리된 폴리뉴클레오티드의 추가의 예는 이종 숙주 세포에서 유지된 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 용액 중 정제된(부분적으로 또는 실질적으로) 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 단리된 폴리뉴클레오티드는 상기 폴리뉴클레오티드 분자를 통상적으로 함유하는 세포 중에 함유된 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하지만, 상기 폴리뉴클레오티드 분자는 염색체외에 존재하거나 이의 자연적인 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다. 단리된 RNA 분자는 본 발명의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사물뿐만 아니라 양성 및 음성 가닥 형태, 및 이중-가닥 형태를 포함한다. 본 발명에 따른 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 합성적으로 생산된 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 프로모터, 리보솜 결합 부위 또는 전사 종결자와 같은 조절 요소일 수 있거나 프로모터, 리보솜 결합 부위 또는 전사 종결자와 같은 조절 요소를 포함할 수 있다.
본 발명의 참조 뉴클레오티드 서열에 적어도, 예를 들어 95% "일치하는" 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 또는 폴리뉴클레오티드는, 상기 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열이, 상기 폴리뉴클레오티드 서열이 상기 참조 뉴클레오티드 서열의 각 100 뉴클레오티드당 5개 이하의 점 돌연변이를 포함할 수 있음을 제외하고, 상기 참조 서열과 일치함을 의미한다. 즉, 참조 뉴클레오티드 서열에 적어도 95% 일치하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 수득하기 위해서, 상기 참조 서열 중 뉴클레오티드의 5% 이하를 결실시키거나 또 다른 뉴클레오티드로 치환하거나 상기 참조 서열 중 전체 뉴클레오티드의 5% 이하의 뉴클레오티드의 수를 상기 참조 서열 내에 삽입할 수 있다. 참조 서열의 이러한 변경은 참조 서열의 잔기들간에 개별적으로 또는 참조 서열 내 하나 이상의 연속적인 그룹 중에 산재된, 상기 참조 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치 또는 상기 말단 위치 사이의 어디에서나 발생할 수 있다. 실용적인 문제로서, 임의의 특정한 폴리뉴클레오티드 서열이 본 발명의 뉴클레오티드 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 일치하는지의 여부는 통상적으로 공지된 컴퓨터 프로그램, 예를 들어 폴리펩티드에 대해 상기 논의된 것(예를 들어 ALIGN-2)을 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "발현 카세트"는 표적 세포에서 특정 핵산의 전사를 허용하는 일련의 명시된 핵산 요소와 함께 재조합적으로 또는 합성적으로 생성되는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 재조합 발현 카세트를 플라스미드, 염색체, 미토콘드리아 DNA, 플라스미드 DNA, 바이러스 또는 핵산 단편에 통합시킬 수 있다. 전형적으로, 발현 벡터의 재조합 발현 카세트 부분은 다른 서열 중에서도 전사되는 핵산 서열 및 프로모터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 발현 카세트는 본 발명의 이중특이적 항원 결합 분자 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
용어 "벡터" 또는 "발현 벡터"는 "발현 구축물"과 동일어이며 특정한 유전자를 상기가 표적 세포와 작동적으로 관련되도록 도입시키고 이의 발현을 지시하는 데 사용되는 DNA 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조물로서 벡터뿐만 아니라 상기 벡터가 도입된 숙주 세포의 게놈 내에 통합된 벡터를 포함한다. 본 발명의 발현 벡터는 발현 카세트를 포함한다. 발현 벡터는 다량의 안정한 mRNA의 전사를 허용한다. 일단 상기 발현 벡터가 표적 세포 내에 있으면, 상기 유전자에 의해 암호화되는 리보핵산 분자 또는 단백질이 상기 세포 전사 및/또는 번역 기구에 의해 생성된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 본 발명의 이중특이적 항원 결합 분자 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 카세트를 포함한다.
제II형 항-CD20 항체
CD20 분자(인간 B 림프구-제한된 분화 항원 또는 Bp35로도 지칭됨)는 광범위하게 기재된, 악성 및 비-악성 pre-B 및 성숙 B 림프구의 표면 상에 발현되는 소수성 막관통 단백질이다(문헌[Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; [Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; [Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; [Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; [Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]).
CD20은 B 세포 비-호지킨 림프종(NHL)의 90% 초과에 의해 고도로 발현되나(문헌[Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433]), 조혈 줄기 세포, pro-B 세포, 정상 원형질 세포 또는 다른 정상 조직에서는 발견되지 않는다(문헌[Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (1985) 973- 979]).
CD20 결합 모드 및 생물학적 활성에 있어서 유의미하게 상이한 2개의 상이한 유형의 항-CD20 항체가 존재한다(문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; 및 [Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052]). 제I형 항-CD20 항체는 주로 표적 세포를 사멸시키는 보체를 주로 사용하는 반면에, 제II형 항체는 세포 사멸의 직접 유도를 통해 주로 작동한다.
제I형 및 제II형 항-CD20 항체 및 이들의 특징은 예를 들어 문헌[Klein et al., mAbs 5 (2013), 22-33]에 검토되어 있다. 제II형 항-CD20 항체는 CD20을 지질 뗏목에 국소화시키지 않고 낮은 CDC 활성을 나타내며 제I형 항-CD20 항체와 비교하여 약 절반의 B 세포에 대한 결합 능력만을 나타내고 동형성 응집 및 직접 세포 사멸을 유도한다. 이와 대조적으로, 제I형 항체는 CD20을 지질 뗏목에 국소화시키고 높은 CDC 활성, 세포에 대한 완전한 결합 능력, 및 동형성 응집 및 직접 세포 사멸의 약한 유도만을 나타낸다.
오비누투주맙 및 토시투무맙(CAS 번호 192391-48)은 제II형 항-CD20 항체의 예이고, 리툭시맙, 오파투무맙, 벨투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, PRO131921 및 유블리툭시맙은 제I형 항-CD20 항체의 예이다.
본 발명에 따라, 항-CD20 항체는 제II형 항-CD20 항체이다. 본 발명에 따른 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 개체에서 B 세포의 수를 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 전장 항체이다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 Fc 영역, 특히 IgG Fc 영역, 보다 특히 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다. 특히, 제II형 항-CD20 항체는 뮤린 B-Ly1 항체에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화된 IgG-클래스 제II형 항-CD20 항체이다(문헌[Poppema and Visser, Biotest Bulletin 3, 131-139 (1987)]; 서열번호 2 및 3).
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특히, 상기 제II형 항-CD20 항체의 중쇄 가변 영역 골격 영역(FR) FR1, FR2 및 FR3은 VH1_10 인간 생식 세포 서열에 의해 암호화되는 인간 FR 서열이고, 상기 제II형 항-CD20 항체의 중쇄 가변 영역 FR4는 JH4 인간 생식 세포 서열에 의해 암호화되는 인간 FR 서열이고, 상기 제II형 항-CD20 항체의 경쇄 가변 영역(FR) FR1, FR2 및 FR3은 VK_2_40 인간 생식 세포 서열에 의해 암호화되는 인간 FR 서열이고, 상기 제II형 항-CD20 항체의 경쇄 가변 영역 FR4는 JK4 인간 생식 세포 서열에 의해 암호화되는 인간 FR 서열이다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다(recommended INN, WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453). 본원에 사용된 오비누투주맙은 GA101과 동의어이다. 상표명은 GAZYVA(등록상표) 또는 GAZYVARO(등록상표)이다. 이는 모든 이전 버전을 대체하고(예를 들어 Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76), 아푸투주맙(afutuzumab)으로 이전에 공지되어 있다(recommended INN, WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176; Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124). 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 토시투모맙(tositumomab)이다.
본 발명에서 유용한 제II형 항-CD20 항체는 상응하는 조작되지 않은 항체와 비교하여 증가된 효과기 기능을 갖도록 조작될 수 있다. 한 실시양태에서, 증가된 효과기 기능을 갖도록 조작된 항체는 상응하는 조작되지 않은 항체와 비교하여 2-배 이상, 10-배 이상 또는 심지어 100-배 이상 증가된 효과기 기능을 갖는다. 증가된 효과기 기능은 비제한적으로 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 증가된 Fc 수용체 결합, 증가된 C1q 결합 및 보체-의존성 세포 독성(CDC), 증가된 항체-의존성 세포-매개된 세포 독성(ADCC), 증가된 항체-의존성 식세포 작용(ADCP), 증가된 시토카인 분비, 항원 제시 세포에 의한 증가된 면역 복합체-매개된 항원 흡수, NK 세포에 대한 증가된 결합, 대식 세포에 대한 증가된 결합, 단핵구에 대한 증가된 결합, 다형핵구 세포에 대한 증가된 결합, 세포 자멸을 유도하는 증가된 직접 신호 전달, 표적-결합된 항체의 증가된 가교, 증가된 수지상 세포 성숙 또는 증가된 T 세포 프라이밍.
한 실시양태에서, 증가된 효과기 기능은 증가된 Fc 수용체 결합, 증가된 CDC, 증가된 ADCC, 증가된 ADCP 및 증가된 시토카인 분비로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 것이다. 한 실시양태에서, 증가된 효과기 기능은 활성화 Fc 수용체에 대한 증가된 결합이다. 이러한 하나의 실시양태에서, 활성화 Fc 수용체에 대한 결합 친화도는 상응하는 조작되지 않은 항체의 결합 친화도와 비교하여 2-배 이상, 특히 10-배 이상 증가된다. 특정 실시양태에서, 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa, FcγRI 및 FcγRIIa로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa, 특히 인간 FcγRIIIa이다. 또 다른 실시양태에서, 증가된 효과기 기능은 증가된 ADCC이다. 이러한 하나의 실시양태에서, ADCC는 상응하는 조작되지 않은 항체에 의해 매개된 ADCC와 비교하여 10-배 이상, 특히 100-배 이상 증가된다. 또 다른 실시양태에서, 증가된 효과기 기능은 활성화 Fc 수용체에 대한 증가된 결합 및 증가된 ADCC이다.
증가된 효과기 기능은 당분야에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. ADCC 측정에 적합한 분석은 본원에 기재되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하는 시험관내 분석의 다른 예는 US 5,500,362; 문헌[Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)] 및 [Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)]; US 5,821,337; 문헌[Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)]에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 분석 방법을 사용할 수 있다(예를 들어 유세포 분석을 위한 ACTI(상표) 비-방사성 세포 독성 분석(셀테크놀로지 인코포레이티드(CellTechnology, Inc., 미국 캘리포니아주 마운틴 뷰 소재)); 및 CytoTox 96(등록상표) 비-방사성 세포 독성 분석(프로메가(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)) 참조). 이러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초혈 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 부가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들어 동물 모델에서 문헌[Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)]에 개시된 바와 같이 평가될 수 있다. Fc 수용체에 대한 결합은 예를 들어 ELISA에 의해, 또는 표준 기기 장치, 예컨대 비아코어 기기(지이 헬스케어(GE Healthcare))를 사용하는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 용이하게 결정될 수 있고, 이와 같은 Fc 수용체는 재조합 발현에 의해 수득될 수 있다. 특정 실시양태에 따라, 활성화 Fc 수용체에 대한 결합 친화도는 25℃에서 비아코어(등록상표) T100 기계(지이 헬스케어)를 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된다. 대안적으로, Fc 수용체에 대한 항체의 결합 친화도는 특정 Fc 수용체, 예컨대 NK 세포 발현 FcγIIIa 수용체를 발현하는 것으로 공지된 세포주를 사용하여 평가될 수 있다. 또한, C1q 결합 분석은 항체가 C1q에 결합할 수 있어 CDC 활성을 가지는지를 결정하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J Immunol Methods 202, 163 (1996)]; [Cragg et al., Blood 101, 1045-1052 (2003)]; 및 [Cragg and Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004)] 참조).
증가된 효과기 기능은 예를 들어 Fc 영역의 당 조작 또는 항체의 Fc 영역의 아미노산 돌연변이의 도입으로부터 야기될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-CD20 항체는 Fc 영역의 하나 이상의 아미노산 돌연변이의 도입에 의해 조작된다. 특정 실시양태에서, 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 보다 더 구체적인 실시양태에서, 아미노산 치환는 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334(잔기의 EU 넘버링)에 존재한다. 추가로 적합한 아미노산 돌연변이가 예를 들어 문헌[Shields et al., J Biol Chem 9(2), 6591-6604 (2001)]; US 6,737,056; WO 2004/063351 및 WO 2004/099249에 기재되어 있다. 돌연변이체 Fc 영역은 당분야에 주지된 유전적 방법 또는 화학적 방법을 사용하여 아미노산 결실, 치환, 삽입 또는 변형에 의해 생산될 수 있다. 유전적 방법은 암호화 DNA 서열의 부위-특이적 돌연변이 유발, PCR, 유전자 합성 등을 포함할 수 있다. 정확한 뉴클레오티드 변화는 예를 들어 서열분석에 의해 확인될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 Fc 영역의 글리코실화의 변형에 의해 조작된다. 특정 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 항체의 Fc 영역의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 증가된 비율은 증가된 효과기 기능, 특히 증가된 ADCC를 갖는 항체를 야기한다.
보다 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%, 바람직하게는 약 40% 이상이 푸코실화되지 않는다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이의 약 40 내지 약 80%가 푸코실화되지 않는다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40 내지 약 60%가 푸코실화되지 않는다. 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합 유형의 것일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에서 이등분된 올리고사카라이드의 증가된 비율을 갖도록 조작된다. 보다 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 적어도 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%, 바람직하게는 약 40% 이상이 이등분된다. 한 실시양태에서, 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40 내지 약 80%가 이등분된다. 한 실시양태에서, 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40 내지 약 60%가 이등분된다. 이등분된 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합 유형의 것일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역의 이등분되고 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 증가된 비율을 갖도록 조작된다. 보다 구체적인 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 적어도 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%, 바람직하게는 약 15% 이상, 보다 바람직하게는 약 25% 이상이 이등분되고 푸코실되지 않는다. 이등분되고 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합 유형의 것일 수 있다.
항체 Fc 영역의 올리고사카라이드 구조는 당분야에 주지된 방법에 의해, 예를 들어 문헌[Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)] 또는 [Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]에 기재된 MALDI TOF 질량 분석법에 의해 분석될 수 있다. 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 백분율은, Asn297에 부착되고(예를 들어 복합물, 하이브리드 및 고 만노스 구조) MALDI TOF MS에 의해 N-글리코시다제 F 처리된 샘플에서 확인된 모든 올리고사카라이드에 대한, 푸코스 잔기가 없는 올리고사카라이드의 양이다. Asn297은 Fc 영역의 위치 297(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링) 주위에 위치된 아스파라긴 잔기를 지칭한다; 그러나, Asn297은 또한 항체의 부수적 서열 변이 때문에 위치 297의 약 ± 3개의 아미노산 상류 또는 하류에, 즉, 위치 294 내지 300에 위치될 수 있다. 이등분되거나, 이등분되고 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 백분율은 유사하게 결정된다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는, 하나 이상의 글리코실트랜스퍼라제의 변경된 활성을 갖는 숙주 세포에서 항체를 생산함으로써, 조작되지 않은 항체와 비교하여, Fc 영역에서 변형된 글리코실화를 갖도록 조작된다. 글리코실트랜스퍼라제는 β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII), β(1,4)-갈락토실트랜스퍼라제(GalT), β(1,2)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 I(GnTI), β(1,2)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 II(GnTII) 및 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는, 증가된 β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 숙주 세포에서 항체를 생산함으로써, 조작되지 않은 항체와 비교하여, Fc 영역에서 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 증가된 비율을 갖도록 조작된다. 보다 더 구체적인 실시양태에서, 숙주 세포는 α-증가된 만노시다제 II(ManII) 활성을 추가적으로 갖는다. 본 발명에서 유용한 항체를 조작하기 위해 사용될 수 있는 당 조작 방법론은 보다 상세히 문헌[Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)]; [Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]; WO 99/54342(US 6,602,684; EP 1071700); WO 2004/065540(US 2004/0241817; EP 1587921), WO 03/011878(US 2003/0175884)에 기재되어 있고, 이들 각각의 전체 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 이러한 방법론을 사용하여 당 조작된 항체는 본원에서 GlycoMab로 지칭된다.
일반적으로, 임의의 유형의 배양된 세포주(본원에 논의된 세포주를 포함함)는 변경된 글리코실화 패턴을 갖는 항-TNC A2 항체의 생산을 위한 세포주를 생산하는 데 사용될 수 있다. 특정 세포주는 CHO 세포, BHK 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, YO 골수종 세포, P3X63 마우스 골수종 세포, PER 세포, PER.C6 세포 또는 하이브리도마 세포 및 기타 포유동물 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 β(1,4)-N-아세틸글루코사민일트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 증가된 수준을 발현하도록 조작되었다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 증가된 수준을 발현하도록 추가로 조작되었다. 특정 실시양태에서, GnTIII 활성을 갖는 폴리펩티드는 GnTIII의 촉매 도메인 및 이종 골지 내재성 폴리펩티드의 골지 국소화 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드이다. 특히, 상기 골지 국소화 도메인은 만노시다제 II의 골지 국소화 도메인이다. 융합 폴리펩티드를 생산하고 이를 증가된 효과기 기능을 갖는 항체를 생산하는 데 사용하는 방법이 문헌[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)] 및 WO 2004/065540에 개시되어 있고, 이들의 전체 내용은 본원체 참고로 분명히 포함된다.
본 발명에 유용한 항체의 암호화 서열 및/또는 글리코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 폴리펩티드의 암호화 서열을 함유하고 생물학적 활성 유전자 생성물을 발현하는 숙주세포는 예를 들어 DNA-DNA 또는 DNA-RNA 하이브리드화; "마커" 유전자 기능의 존재 또는 부재; 숙주 세포에서 각각의 mRNA 전사체의 발현에 의해 측정된 전사의 수준을 평가; 또는 면역 분석 또는 이의 생물학적 활성을 측정에 의한 유전자 생성물의 검출에 의해 확인될 수 있다(이들 방법은 당분야에 주지되어 있다). GnTIII 또는 Man II 활성은 예를 들어 각각 GnTIII 또는 ManII의 생합성 생성물에 결합하는 렉틴을 사용함으로써 검출될 수 있다. 이러한 렉틴의 예는 E4-PHA 렉틴이고, 이는 이등분성 GlcNAc를 함유하는 올리고사카라이드에 우선적으로 결합한다. 또한, GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩티드의 생합성 생성물(즉, 특이적 올리고사카라이드 구조)은 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포에 의해 생산된 당단백질로부터 방출된 올리고사카라이드의 질량 분석 분석에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩티드에 의해 조작된 세포에 의해 생산된 항체에 의해 매개된, 증가된 효과기 기능, 예를 들어 증가된 Fc 수용체 결합을 측정하는 기능적 분석이 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는, 감소된 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포에서 항체를 생산함으로써, 조작되지 않은 항체와 비교하여, Fc 영역의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드의 증가된 비율을 갖도록 조작된다. 감소된 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포는, α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 유전자가 저해되거나 그렇지 않으면 불활성화된, 예를 들어 녹 아웃된, 세포일 수 있다(문헌[Yamane-Ohnuki et al., Biotech Bioeng 87, 614 (2004)]; [Kanda et al., Biotechnol Bioeng, 94(4), 680-688 (2006)]; [Niwa et al., J Immunol Methods 306, 151-160 (2006)] 참조).
탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 다른 예는 단백질 푸코실화가 부족한 Lec13 CHO 세포를 포함한다(문헌[Ripka et al., Arch Biochem Biophys 249, 533-545 (1986)]; US 2003/0157108; 및 WO 2004/056312, 특히 실시예 11). 본 발명에서 유용한 항체는 예를 들어 항체 생산을 위해 사용되는 숙주 세포에서 GDP-푸코스 수송체 단백질의 활성을 감소시키거나 제거함으로써, EP 1 176 195 A1, WO 03/084570, WO 03/085119, US 2003/0115614, 2004/093621, 2004/110282, 2004/110704, 2004/132140, 및 US 6,946,292(Kyowa)에 개시된 기술에 따라 Fc 영역에서 감소된 푸코스 잔기를 갖도록 대안적으로 당 조작될 수 있다.
또한, 본 발명에 유용한 당 조작된 항체는 변형된 당단백질, 예컨대 WO 03/056914(GlycoFi, Inc.) 또는 WO 2004/057002 및 WO 2004/024927(Greenovation)에 교시된 것을 생산하는 발현 시스템에서 생산될 수 있다.
T 세포 활성화 치료제
본 발명은 다양한 치료제, 특히 개체에서 T 세포를 활성화시키는, 즉, 개체에서 T 세포 활성화를 유도하는 능력을 갖는 치료제와 관련되어 유용하다. 이러한 치료제는 예를 들어 T 세포 항원(특히 활성화 T 세포 항원)에 대한 항체, 또는 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 재조합 T 세포 수용체(TCR)에 의해 변형된 T 세포를 포함한다. 본 발명은 B 세포 표적화된 T 세포 활성화 치료제와 관련하여 특히 유용하다.
한 실시양태에서, 치료제는 제II형 항-CD20 항체의 투여 없이 치료 양생법으로 개체에게 투여될 때 개체에서 시토카인 방출을 유도한다.
한 실시양태에서, 치료제는 생물 제제이다. 한 실시양태에서, 치료제는 폴리펩티드, 특히 재조합 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 개체에서 자연적으로 발생하지 않는 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 전신 투여된다. 한 실시양태에서, 치료제는 주입에 의해, 특히 정맥내 주입에 의해 투여된다.
한 실시양태에서, 치료제는 항원 결합 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 항체, 항체 단편, 항원 수용체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 수용체 리간드 또는 이의 수용체 결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 단클론 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 다클론 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 인간 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 인간화된 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 키메라 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 전장 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG-클래스 항체, 특히 IgG1 서브클래스 항체이다. 한 실시양태에서, 항체는 재조합 항체이다.
특정 실시양태에서, 치료제는 항체 단편을 포함한다. 항체 단편은 비제한적으로 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, scFv 단편, 및 하기에 기재된 기타 단편을 포함한다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌[Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]; 또한 WO 93/16185; 및 US 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해, US 5,869,046을 참조한다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 Fab 단편 또는 scFv 단편이다.
다이아바디는 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이며 이는 이가이거나 이중특이적일 수 있다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]; 및 문헌[Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트라이아바디 및 테트라바디가 또한 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
단일 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 항체의 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다(도맨티스 인코포레이티드(Domantis, Inc., 미국 매사추세츠주 월탐소재); 예를 들어 US 6,248,516 B1 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 완전 항체의 단백질 가수분해 절단 및 재조합 숙주 세포(예를 들어 에스케리키아 콜라이(Eschericia coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하는 다양한 기술에 의해 생산될 수 있다.
특정 실시양태에서, 치료제는 키메라 항체를 포함한다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 US 4,816,567; 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들어 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가적 예에서, 키메라 항체는 클래스 또는 서브클래스가 모 항체의 것으로부터 변한 "클래스 교환된" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 치료제는 인간화된 항체를 포함한다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간화되어 인간의 면역원성을 감소시키는 반면에, 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도는 유지한다. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR, 예를 들어 CDR(또는 이의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR(또는 이의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된, 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 또한, 인간화된 항체는 인간 불변 영역의 적어도 일부를 임의적으로 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는 비-인간 항체(예를 들어 HVR 잔기가 유래되는 항체)의 상응하는 잔기로 치환되어 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 회복시키거나 개선한다.
인간화된 항체 및 이의 생산 방법은 예를 들어 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에 검토되고, 예를 들어 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; [Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; US 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321 및 7,087,409; 문헌[Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)](특이성 결정 영역(SDR) 그래프팅을 기재함); [Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)]("리서피싱(resurfacing)"을 기재함); [Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)]("FR 셔플링"을 기재함); 및 [Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005)] 및 [Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)](FR 셔플링에 대한 "가이딩된 선택" 접근법을 기재함)에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 골격 영역은 비제한적으로 하기를 포함한다: "베스트-핏(best-fit)" 방법을 사용하여 선택된 골격 영역(예를 들어 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위군의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 골격 영역(예를 들어 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)]; 및 [Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙(신체적으로 돌연변이된) 골격 영역 또는 인간 생식 세포 골격 영역(예를 들어 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 골격 영역(예를 들어 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)] 및 [Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조).
특정 실시양태에서, 치료제는 인간 항체를 포함한다. 인간 항체는 당분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)] 및 [Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 변형된 형질전환 동물에게 면역원을 투여하여 항원 대항에 대한 반응으로 완전 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 완전 항체를 생산하여 제조될 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 인간 면역 글로불린 유전자 자리의 전부 또는 일부를 함유하며, 이는 내인성 면역 글로불린 유전자 자리를 대체하거나 염색체 외에 존재하거나 동물의 염색체 내로 무작위적으로 통합된다. 이러한 형질전환 마우스에서, 내인성 면역 글로불린 유전자 자리는 일반적으로 불활성화되었다. 형질전환 동물로부터 인간 항체를 생산하는 방법의 검토를 위해, 문헌[Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 US 6,075,181 및 6,150,584(XENOMOUSE(상표) 기술을 기재함); US 5,770,429(HuMab(등록상표) 기술을 기재함); US 7,041,870(K-M MOUSE(등록상표) 기술을 기재함) 및 US 2007/0061900(VelociMouse(등록상표) 기술을 기재함)을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생산된 완전 항체의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역을 조합함으로써 추가로 변형될 수 있다.
또한, 인간 항체는 하이브리도마-기반 방법에 의해 생산될 수 있다. 인간 단클론 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주가 기재되어 있다(예를 들어 문헌[Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)]; [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]; 및 [Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조). 또한, 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생산된 인간 항체는 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가적 방법은 예를 들어 US 7,189,826(하이브리도마 세포주로부터 단클론 인간 IgM 항체의 생산을 기재함) 및 문헌[Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)](인간-인간 하이브리도마를 기재함)에 기재된 것을 포함한다. 또한, 인간 하이브리도마 기술(트라이오마(Trioma) 기술)이 문헌[Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005)] 및 [Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.
또한, 인간 항체는 인간-유래된 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생산될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 바람직한 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기술은 하기에 기재되어 있다.
치료제에 포함된 항체는 목적하는 활성을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생산하고 이러한 라이브러리를 목적하는 결합 특성을 갖는 항체에 대해 스크리닝하기 위한 다양한 방법이에 당분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌[Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에 검토되어 있고, 예를 들어 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554]; [Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)]; [Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)]; [Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)]; [Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)]; [Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)]; 및 [Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 래퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 별개로 클로닝되고 파지 라이브러리에 무작위로 재조합된 후에, 이는 문헌[Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원 결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 단쇄 Fv(scFv) 단편 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 나타낸다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요 없이 고 친화도 항체를 면역원에 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리는 클로닝되어(예를 들어 인간으로부터) 문헌[Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 항체의 단일 공급원을 넓은 범위의 비-자기 및 또한 자기-항원에 제공할 수 있다. 마지막으로, 나이브 라이브러리는 또한 문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이 줄기 세포의 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고, 초가변 CDR3 영역을 암호화하고 시험관내 재배열을 달성하기 위해 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써 또한 합성적으로 생산될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하는 특허 문헌은 예를 들어 하기를 포함한다: US 5,750,373 및 US 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 및 2009/0002360.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
특정 실시양태에서, 치료제는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체를 포함한다. 다중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 부위에 결합 특이성을 갖는 단클론 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성은 상이한 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성은 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 대한 것이다. 또한, 이중특이적 항체는 세포 독성제를 항원을 발현시키는 세포에 국소화시키는 데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 생산될 수 있다.
다중특이적 항체 생산 기술은 비제한적으로 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역 글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현(문헌[Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)], WO 93/08829, 및 문헌[Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "놉-인-홀(knob-in-hole)" 조작(예를 들어 US 5,731,168 참조)을 포함한다. 또한, 다중특이적 항체는 항체 Fc-이종 이량체성 분자를 생산하기 위한 정전기 스티어링 효과를 조작함(WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편(예를 들어 US 4,676,980 및 문헌[Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조)를 가교시킴; 류신 지퍼를 사용하여 이중특이적 항체를 생산함(예를 들어 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편을 생산하기 위한 "다이아바디" 기술을 사용함(예를 들어 문헌[Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 단쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용함(예를 들어 문헌[Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 삼중특이적 항체를 생산함(예를 들어 문헌[Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재됨)에 의해 생산될 수 있다.
"옥토퍼스 항체(Octopus antibody)"를 포함하는, 3개 이상의 작용성 항원 결합 부위를 갖도록 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다(예를 들어 US 2006/0025576A1 참조).
또한, 본원에서 항체 또는 단편은 2개의 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다(예를 들어 US 2008/0069820 참조).
또한, "Crossmab" 항체가 본원에 포함된다(예를 들어 WO 2009/080251, WO 2009/080252, WO 2009/080253, WO 2009/080254 참조).
이중특이적 항체 단편를 생산하는 또 다른 기술은 "이중특이적 T 세포 관여자" 또는 BiTE(등록상표) 접근법이다(예를 들어 WO 2004/106381, WO 2005/061547, WO 2007/042261 및 WO 2008/119567 참조). 이러한 접근법은 단일 폴리펩티드 상에 배열된 2개의 항체 가변 도메인을 사용한다. 예를 들어, 단일 폴리펩티드 쇄는 2개의 단쇄 Fv(scFv) 단편을 포함하며, 이들 각각은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인을 가지며, 이들 도메인은 이들 2개의 도메인 사이의 분자간 회합을 허용하기에 충분한 길이의 폴리펩티드 링커에 의해 분리된다. 이러한 단일 폴리펩티드는 2개의 scFv 단편 사이에 폴리펩티드 스페이서 서열을 추가로 포함한다. 각각의 scFv는 상이한 에피토프를 인식하고, 이들 에피토프는 상이한 세포 유형에 대해 특이적일 수 있어, 2개의 상이한 세포 유형의 세포는, 각각의 scFv가 이의 이의 동족 에피토프와 결합할 때, 매우 근접하거나 묶인다. 이러한 접근법의 하나의 특정 실시양태는 표적 세포, 예컨대 악성 또는 종양 세포에 의해 발현되는 세포-표면 항원을 인식하는 또 다른 scFv에 연결된, 면역 세포에 의해 발현되는 세포-표면 항원, 예를 들어 T 세포 상의 CD3 폴리펩티드를 인식하는 scFv를 포함한다.
이것이 단일 폴리펩티드이기 때문에, 이중특이적 T 세포 관여자는 당분야에 공지된 임의의 원핵 세포 또는 진핵 세포 발현 시스템(예를 들어 CHO 세포주)을 사용하여 발현될 수 있다. 그러나, 특정 정제 기술(예를 들어 EP 1691833 참조)은, 단량체성 이중특이적 T 세포 관여자를, 단량체의 의도된 활성 이외의 생물학적 활성을 가질 수 있는 다량체성 종으로부터 분리하기 것이 필요할 수 있다. 한 예시적 정제 계획에서, 분비된 폴리펩티드를 함유하는 용액을 먼저 금속 친화도 크로마토그래피를 수행시키고, 폴리펩티드를 이미다졸 농도의 구배에 의해 용리시킨다. 용리액을 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 추가로 정제하고, 폴리펩티드를 염화 나트륨 농도의 구배를 사용하여 용리시킨다. 마지막으로, 이러한 용리액을 크기 배제 크로마토그래피시켜 단량체를 다량체성 종으로부터 분리한다.
2 초과의 결합가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중특이적 항체를 생산할 수 있다. 문헌[Tuft et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)].
특정 실시양태에서, 치료제에 포함된 항체는 당분야에 공지되고 용이하게 이용가능한 추가적 비단백성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화를 위해 적합한 모이어티는 비제한적으로 수용성 중합체를 포함한다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올(예를 들어 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 이의 수중 안정성 때문에 제조에서 유리할 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량의 것일 수 있고, 분지되지 않거나 분지될 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 변할 수 있고, 1개 초과의 중합체가 부착되는 경우, 이는 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용된 중합체의 수 및/또는 유형은, 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 한정된 조건 하에 요법에서 사용될 것인지 여부 등을 포함하는 고려사항을 기반으로 결정될 수 있다.
또한, 치료제는 하나 이상의 세포 독성제, 예컨대 화학 치료제 또는 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 이들의 단편) 또는 방사성 동위원소에 접합된 항체를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 항체가 하나 이상의 약물에 접합된 항체-약물 접합체(ADC)를 포함하고, 이는 비제한적으로 하기를 포함한다: 메이탄시노이드(maytansinoid)(US 5,208,020 및 5,416,064, 및 EP 0 425 235 B1 참조); 아우리스타틴(auristatin), 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(US 5,635,483, 5,780,588 및 7,498,298 참조); 돌라스타틴 (dolastatin); 칼리케아마이신(calicheamicin) 또는 이의 유도체(US 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001 및 5,877,296; 문헌[Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)]; 및 문헌[Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)] 참조); 안트라사이클린(anthracycline), 예컨대 다우노마이신(daunomycin) 또는 독소루비신(doxorubicin)(문헌[Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006)]; [Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006)];[ Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005)]; [Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000)]; [Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002)]; [King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)]; 및 US 6,630,579 참조); 메토트렉세이트(methotrexate); 빈데신(vindesine); 탁산(taxane), 예컨대 도세탁셀(docetaxel), 파클리탁셀(paclitaxel), 라로탁셀(larotaxel), 테세탁셀(tesetaxel) 및 오타탁셀(ortataxel); 트라이코테센(trichothecene); 및 CC1065.
또 다른 실시양태에서, 치료제는 효소 활성 독소 또는 이의 단편에 접합된 본원에 기재된 항체를 포함하고, 이는 비제한적으로 하기를 포함한다: 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합성 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터의 것), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알류리테스 포르디(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca Americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사포나리아 오피시날리스(Saponaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 리스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트라이코테센.
또 다른 실시양태에서, 치료제는 방사성 원소에 접합되어 방사성 접합체를 형성하는 본원에 기재된 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소는 방사성 접합체의 생산에 이용가능한 것이다. 예는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성 접합체가 검출에 사용되는 경우, 이는 신티그래피연구를 위한 방사성 원소, 예를 들어 Tc99m 또는 I123, 또는 핵자기공명(NMR) 이미지화(자기공명 이미지화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 라벨, 예컨대 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 라돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포 독성제의 접합체는 다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복시레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스터의 이작용성 유도체(예컨대 다이메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스터(예컨대 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아조 화합물(예컨대 비스 (p-아지도벤조일) 헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이이소시아네이트(예컨대 톨루엔 2,6-다이이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대 1,5-다이플루오로-2,4-다이니트로벤젠)을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역 독소는 문헌[Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 생산될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민펜타아세트산(MX-DTPA)이 방사성 뉴클레오티드를 항체에 접합시키기 위한 예시적 킬레이트화제이다. WO 94/11026을 참조한다. 링커는 세포에서 세포 독성 약물의 방출을 가능하게 하는 "절단성 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광-불안정 링커, 다이메틸 링커 또는 다이설파이드-함유 링커(문헌[Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)]; US 5,208,020)가 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 암의 치료를 위해 권고되는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료제는 암의 치료에 권고된다. 한 실시양태에서, 암은 B 세포 증식성 장애이다. 한 실시양태에서, 암은 CD20-양성 B 세포 증식성 장애이다. 한 실시양태에서, 암은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 치료제는 면역 요법제이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 치료 항체는 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
한 실시양태에서, 치료제는, 항체 H2C(WO 2008/119567), 항체 V9(문헌[Rodrigues et al., Int J Cancer Suppl 7, 45-50 (1992)] 및 US 6,054,297), 항체 FN18(문헌[Nooij et al., Eur J Immunol 19, 981-984 (1986)]), 항체 SP34(문헌[Pessano et al., EMBO J 4, 337-340 (1985)]), 항체 OKT3(문헌[Kung et al., Science 206, 347-349 (1979)]), 항체 WT31(문헌[Spits et al., J Immunol 135, 1922 (1985)]), 항체 UCHT1(문헌[Burns et al., J Immunol 129, 1451-1457 (1982)]), 항체 7D6(문헌[Coulie et al., Eur J Immunol 21, 1703-1709 (1991)]) 또는 항체 Leu-4이거나 이와 결합에 대해 경쟁할 수 있는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 또한 WO 2005/040220, WO 2005/118635, WO 2007/042261, WO 2008/119567, WO 2008/119565, WO 2012/162067, WO 2013/158856, WO 2013/188693, WO 2013/186613, WO 2014/110601, WO 2014/145806, WO 2014/191113, WO 2014/047231, WO 2015/095392, WO 2015/181098, WO 2015/001085, WO 2015/104346, WO 2015/172800, WO 2016/020444 또는 WO 2016/014974에 기재된 바와 같이 CD3에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 B 세포 항원, 특히 악성 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 치료제는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 리툭시맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 오카라투주맙, 벨투주맙 및 유블리툭시맙으로부터 선택된 항체를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 다중특이적 항체, 특히 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 T 세포 및 표적 세포(예를 들어 종양 세포)에 결합할 수 있는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 B 세포, 특히 악성 B 세포이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 T 세포 상의 CD3 및 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적 세포 항원은 B 세포 항원, 특히 악성 B 세포 항원이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 이중특이적 T 세포 관여자(BiTE(등록상표))를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 CD20을 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 XmAb(등록상표)13676이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 REGN1979이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 FBTA05(Lymphomun)이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 CD19를 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 블리나투모맙(BLINCYTO(등록상표))이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 AFM11이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 MGD011(JNJ-64052781)이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 CD38을 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 XmAb(등록상표)13551, XmAb(등록상표)15426 또는 XmAb(등록상표)14702이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 BCMA를 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 BI836909이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 CD33을 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 AMG330이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3 및 CD123을 지향하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 MGD006이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 XmAb(등록상표)14045이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 JNJ-63709178이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 재조합 수용체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 수용체는 T 세포 수용체(TCR)이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포(예를 들어 세포 독성 T 세포 또는 CTL)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 재조합 T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 B 세포 항원, 특히 악성 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 치료제는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD19를 지향하는 CAR, 또는 CD19를 지향하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 KTE-C19, CTL019, JCAR-014, JCAR-015, JCAR-017, BPX-401, UCART19를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD22를 지향하는 CAR, 또는 CD22를 지향하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 JCAR-018 또는 UCART22를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 T 세포 활성화 공자극 분자를 지향하는 작용제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포 활성화 공자극 분자는 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM 또는 CD127을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포 활성화 공자극 분자를 지향하는 작용제는 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM 또는 CD127에 결합하는 작용제 항체이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 GITR을 표적화하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, GITR을 표적화하는 항체는 TRX518이다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD137(TNFRSF9, 4-1BB 또는 ILA로도 공지됨)을 지향하는 작용제, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 우렐루맙(urelumab, BMS-663513으로도 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 CD137(TNFRSF9, 4-1BB 또는 ILA로도 공지됨)의 리간드, 예컨대 4-1BBL을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 CD40을 지향하는 작용제, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 CP-870893을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 OX40(CD134로도 공지됨)을 지향하는 작용제, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 항-OX40 항체(예를 들어 AgonOX)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 OX40의 리간드, 예컨대 OX40L을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 CD27을 지향하는 작용제, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 CDX-1127을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 제제, 예를 들어 본원에 명명된 항체의 포괄적이거나 바이오시밀러하거나 유사하지 않은 생물학적 버전을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 오비누투주맙을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 치료제는 CD3, 특히 CD3 엡실론에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가적 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 18의 것과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 19의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가적 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 전장 항체이다. 한 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 IgG 클래스의 항체, 특히 인간 IgG1 클래스의 항체이다. 한 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 항체 단편, 특히 Fab 분자 또는 scFv 분자, 보다 특히 Fab 분자이다. 특정 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된(즉, 서로 대체된) 크로스오버 Fab 분자이다. 한 실시양태에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간화된 항체이다.
한 실시양태에서, 치료제는 다중특이적 항체, 특히 이중특이적 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 다중특이적 항체는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 이중특이적 항체는 WO 2016/020309 및 EP 15188093 및 EP 16169160에 기재되어 있다(각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다).
한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD3 및 CD20에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티를 포함한다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 모이어티, 및 CD20에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 모이어티를 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 항원 결합 모이어티는 크로스오버 Fab 분자이고, 제2 및 제1 항원 결합 모이어티는 각각 통상적 Fab 분자이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 이중특이적 항체는 본원에 기재된 바와 같이 Fc 영역 및/또는 항원 결합 모이어티에 변형을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 하기를 포함하는 이중특이적 항체를 포함한다:
(i) CD3에 특이적으로 결합하며, 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하며, 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티.
한 실시양태에서, 치료제는 하기를 포함하는 이중특이적 항체를 포함한다:
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티.
특정 실시양태에서, 치료제는, a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자;
b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 Fab 분자(여기서, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH는 서로 대체된다);
c) 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자; 및
d) 안정하게 회합할 수 있는 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이적 항체를 포함하되,
(i) 상기 제1 항원은 CD20이고, 상기 제2 항원은 CD3, 특히 CD3 엡실론이고;
(ii) 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자 각각은 서열번호 4의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 5의 중쇄 CDR 2, 서열번호 6의 중쇄 CDR 3, 서열번호 7의 경쇄 CDR 1, 서열번호 8의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 9의 경쇄 CDR 3을 포함하고, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 12의 중쇄 CDR 1, 서열번호 13의 중쇄 CDR 2, 서열번호 14의 중쇄 CDR 3, 서열번호 15의 경쇄 CDR 1, 서열번호 16의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 17의 경쇄 CDR 3을 포함하고;
(iii) 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 리신(K)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링) 위치 123의 아미노산은 리신(K) 또는 아르긴(R), 특히 아르긴(R)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링) 위치 213의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링);
(iv) 상기 a)의 제1 Fab 분자는 상기 b)의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 b)의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 b)의 제2 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 d)의 Fc 도메인의 서브유닛 중 하나의 N-말단에 융합된다.
한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 10의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 18의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 19의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 추가적 실시양태에서, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 서열번호 20의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 서열번호 21의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 서열번호 22의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 및 서열번호 23의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 추가적 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 서열번호 20의 폴리펩티드 서열, 서열번호 21의 폴리펩티드 서열, 서열번호 22의 폴리펩티드 서열 및 서열번호 23의 폴리펩티드 서열을 포함한다. (CD20XCD3 bsAB).
한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티를 포함한다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 모이어티, 및 CD19에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 모이어티를 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 항원 결합 모이어티는 크로스오버 Fab 분자이고, 제2 및 제1 항원 결합 모이어티는 각각 통상적 Fab 분자이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체는 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 이중특이적 항체는 본원에 기재된 바와 같이 Fc 영역 및/또는 항원 결합 모이어티에 변형을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 치료제는 하기를 포함하는 이중특이적 항체를 포함한다:
(i) CD3에 특이적으로 결합하며, 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티; 및
(ii) CD19에 특이적으로 결합하며, 서열번호 24의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 25의 HCDR2 및 서열번호 26의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 27의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 28의 LCDR2 및 서열번호 29의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티.
한 실시양태에서, 치료제는 하기를 포함하는 이중특이적 항체를 포함한다:
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티; 및
(ii) CD19에 특이적으로 결합하고 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 31의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 모이어티.
특정 실시양태에서, 치료제는, a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자;
b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 Fab 분자(여기서, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH는 서로 대체된다);
c) 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자; 및
d) 안정하게 회합할 수 있는 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이적 항체를 포함하되,
(i) 제1 항원은 CD19이고, 제2 항원은 CD3, 특히 CD3 엡실론이고;
(ii) 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 24의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 25의 중쇄 CDR 2, 서열번호 26의 중쇄 CDR 3, 서열번호 27의 경쇄 CDR 1, 서열번호 28의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 29의 경쇄 CDR 3을 포함하고, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 12의 중쇄 CDR 1, 서열번호 13의 중쇄 CDR 2, 서열번호 14의 중쇄 CDR 3, 서열번호 15의 경쇄 CDR 1, 서열번호 16의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 17의 경쇄 CDR 3을 포함하고;
(iii) 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 리신(K)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링) 위치 123의 아미노산은 리신(K) 또는 아르긴(R), 특히 아르긴(R)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링) 위치 213의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링);
(iv) 상기 a)의 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 b)의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 b)의 제2 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 d)의 Fc 도메인의 서브유닛 중 하나의 N-말단에 융합된다.
한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 30의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 31의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자 및 상기 c)의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 18의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 19의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 추가적 실시양태에서, 상기 b)의 제2 Fab 분자는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 서열번호 23에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 서열번호 32에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 서열번호 33에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드, 및 서열번호 34에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 추가적 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 서열번호 23의 폴리펩티드 서열, 서열번호 32의 폴리펩티드 서열, 서열번호 33의 폴리펩티드 서열 및 서열번호 34의 폴리펩티드 서열을 포함한다.
항체 포맷
치료제에 포함된 항체, 특히 다중특이적 항체의 요소는, 다양한 배치로 서로 융합될 수 있다. 예시적 배치가 도 1에 도시되어 있다.
특정 실시양태에서, 항체에 포함되는 항원 결합 모이어티는 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 등의 항원 결합 모이어티는 본원에서 각각 제1, 제2, 제3 등의 Fab 분자로 지칭될 수 있다. 또한, 특정 실시양태에서, 항체는 안정하게 회합할 수 있는 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 이러한 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 이러한 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 개략적으로 도 1G 및 1K에 도시되어 있다. 임의적으로, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 추가적으로 서로 융합될 수 있다.
또 다른 이러한 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 구체적인 이러한 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 및 제2 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 서브유닛 중 하나의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 개략적으로 도 1A 및 1D에 도시되어 있다. 제1 및 제2 Fab 분자는 Fc 도메인에 직접 또는 펩티드 링커를 통해 융합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 Fab 분자는 각각 Fc 도메인에 면역 글로불린 힌지 영역을 통해 융합된다. 특정 실시양태에서, 면역 글로불린 힌지 영역은 인간 IgG1 힌지 영역, 특히 여기서 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다.
다른 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 이러한 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 이러한 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 개략적으로 도 1H 및 1L에 도시되어 있다. 임의적으로, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 추가적으로 서로 융합될 수 있다.
Fab 분자는 직접 또는 펩티드 링커(하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 2 내지 20개의 아미노산을 포함함)를 통해 Fc 도메인에 또는 서로 융합될 수 있다. 펩티드 링커는 당분야에 공지되어 있고 본원에 기재되어 있다. 적합한, 비-면역원성 펩티드 링커는 예를 들어 (G4S)n, (SG4)n, (G4S)n 또는 G4(SG4)n 펩티드 링커를 포함한다. "n"은 일반적으로 1 내지 10의 정수, 전형적으로 2 내지 4의 정수이다. 한 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 5개 이상의 아미노산의 길이, 한 실시양태에서, 5 내지 100개, 추가적 실시양태에서, 10 내지 50개의 아미노산의 길이를 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 (GxS)n 또는 (GxS)nGm이되, G=글리신, S=세린, (x=3, n= 3, 4, 5 또는, m=0, 1, 2 또는 3) 또는 (x=4, n=2, 3, 4 또는 5, m= 0, 1, 2 또는 3)이고, 한 실시양태에서, x=4, n=2 또는 3이고, 추가적 실시양태에서, x=4, n=2이다. 한 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 (G4S)2이다. 제1 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄를 서로 융합시키는 데 특히 적합한 펩티드 링커는 (G4S)2이다. 제1 및 제2 Fab 단편의 Fab 중쇄를 연결시키는 데 적합한 예시적 펩티드 링커는 서열 (D)-(G4S)2(서열번호 95 및 96)을 포함한다. 또 다른 적합한 이러한 링커는 서열 (G4S)4를 포함한다. 추가적으로, 링커는 면역 글로불린 힌지 영역(의 일부)을 포함할 수 있다. 특히, Fab 분자는 Fc 도메인 서브유닛의 N-말단에 융합되는 경우, 이는 면역 글로불린 힌지 영역 또는 이의 일부를 통해 추가적 펩티드 링커의 존재 또는 부재 하에 융합될 수 있다.
표적 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단일 항원 결합 모이어티(예컨대 Fab 분자)를 갖는 항체(예를 들어 도 1A, D, G, H, K, L에 도시됨)는 특히 표적 세포 항원의 내재화가 고 친화도 항원 결합 모이어티의 결합 후에 예상되는 경우 유용하다. 이러한 경우, 표적 세포 항원에 특이적인 하나 초과의 항원 결합 모이어티의 존재는 표적 세포 항원의 내재화를 증대시켜 이의 이용가능성을 감소시킬 수 있다.
그러나, 많은 다른 경우에, 예를 들어 표적 부위의 표적화를 최적화시키거나 표적 세포 항원을 가교시키는 것을 허용하는 표적 세포 항원에 특이적인 2개 이상의 항원 결합 모이어티(예컨대 Fab 분자)를 갖는 항체(도 1B, 1C, 1E, 1F, 1I, 1J. 1M 또는 1N에 도시된 예 참조)가 유리할 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 항체는 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함한다. 제1 항원은 바람직하게는 표적 세포 항원이다. 한 실시양태에서, 제3 Fab 분자는 통상적 Fab 분자이다. 한 실시양태에서, 제3 Fab 분자는 제1 Fab 분자와 동일하다(즉, 제1 및 제3 Fab 분자는 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하고 도메인의 동일한 배열(즉 통상적이거나 크로스오버)를 가질 수 있다). 특정 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 특이적으로 결합하고, 제1 및 제3 Fab 분자는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
대안적 실시양태에서, 항체는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함한다. 이들 실시양태에서, 제2 항원은 바람직하게는 표적 세포 항원이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 제3 Fab 분자는 크로스오버 Fab 분자(Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CL 및 CH1이 서로 교환된/대체된 Fab 분자)이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 제3 Fab 분자는 제2 Fab 분자와 동일하다(즉, 제2 및 제3 Fab 분자는 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하고 도메인의 동일한 배열(즉, 통상적이거나 크로스오버)을 갖는다). 하나의 이러한 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 특이적으로 결합하고, 제2 및 제3 Fab 분자는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
특정 실시양태에서, 제2 및 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 서브유닛 중 하나의 N-말단에 융합되고, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 개략적으로 도 1B 및 1E(제3 Fab 분자가 통상적 Fab 분자이고, 바람직하게는 제1 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태) 및 도 1I 및 1M(제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고, 바람직하게는 제2 Fab 분자와 동일한 대안적 실시양태)에 도시되어 있다. 제2 및 제3 Fab 분자는 Fc 도메인에 직접 또는 펩티드 링커를 통해 융합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 및 제3 Fab 분자는 각각 Fc 도메인에 면역 글로불린 힌지 영역을 통해 융합된다. 특정 실시양태에서, 면역 글로불린 힌지 영역은 인간 IgG1 힌지 영역, 특히 여기서 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다. 임의적으로, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 추가적으로 서로 융합될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 제1 및 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 서브유닛 중 하나의 N-말단에 융합되고, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 개략적으로 도 1C 및 1F(제3 Fab 분자가 통상적 Fab 분자이고, 바람직하게는 제1 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태) 및 도 1J 및 1N(제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고, 바람직하게는 제2 Fab 분자와 동일한 대안적 실시양태)에 도시되어 있다. 제1 및 제3 Fab 분자는 Fc 도메인에 직접 또는 펩티드 링커를 통해 융합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제3 Fab 분자는 각각 Fc 도메인에 면역 글로불린 힌지 영역을 통해 융합된다. 특정 실시양태에서, 면역 글로불린 힌지 영역은 인간 IgG1 힌지 영역, 특히 여기서 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다. 임의적으로, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 추가적으로 서로 융합될 수 있다.
Fab 분자가 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 각각의 서브유닛의 N-말단에 면역 글로불린 힌지 영역을 통해 융합되는 항체의 배치에서, 2개의 Fab 분자, 힌지 영역 및 Fc 도메인은 본질적으로 면역 글로불린 분자를 형성한다. 특정 실시양태에서, 면역 글로불린 분자는 IgG 클래스 면역 글로불린이다. 보다 더 특정한 실시양태에서, 면역 글로불린은 IgG1 서브클래스 면역 글로불린이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 글로불린은 IgG4 서브클래스 면역 글로불린이다. 추가적 특정 실시양태에서, 면역 글로불린은 인간 면역 글로불린이다. 다른 실시양태에서, 면역 글로불린은 키메라 면역 글로불린 또는 인간화된 면역 글로불린이다.
일부 항체에서, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는, 임의적으로 펩티드 링커를 통해, 서로 융합된다. 제1 및 제2 Fab 분자의 배치에 따라, 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄는 이의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄의 N-말단에 융합될 수 있거나, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 이의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄의 N-말단에 융합될 수 있다. 제1 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄의 융합은 추가로 매칭되지 않은 Fab 중쇄 및 경쇄의 미스페어링을 추가로 감소시키고, 또한 일부 항체의 발현에 필요한 플라스미드의 수를 감소시킨다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)-CH2-CH3(-CH4)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)) 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)-CH2-CH3(-CH4)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)) 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 다른 실시양태에서, 항체는, 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다.
일부 이들 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 제2 Fab 분자의 크로스오버 Fab 경쇄 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)) 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 이들 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드와 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)-VL(1)-CL(1)) 또는 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(1)-CL(1)-VH(2)-CL(2))를 적절하게 추가로 포함한다.
이들 실시양태에 따른 항체는 (i) Fc 도메인 서브유닛 폴리펩티드(CH2-CH3(-CH4)), 또는 (ii) 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(3)-CH1(3)-CH2-CH3(-CH4)) 및 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 다른 실시양태에서, 항체는, 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다.
일부 이들 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 제2 Fab 분자의 크로스오버 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 이들 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드와 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)-VL(1)-CL(1)), 또는 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(1)-CL(1)-VH(2)-CL(2))를 적절하게 추가로 포함한다.
이들 실시양태에 따른 항체는 (i) Fc 도메인 서브유닛 폴리펩티드(CH2-CH3(-CH4)), 또는 (ii) 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 Fc 도메인 서브유닛과 공유하는 폴리펩티드(VH(3)-CH1(3)-CH2-CH3(-CH4)) 및 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 Fc 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1O 및 1S에 개략적으로 도시되어 있다.
다른 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 Fc 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1P 및 1T에 개략적으로 도시되어 있다.
일부 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하되, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CL 및 CH1이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1Q 및 1U에 개략적으로 도시되어 있다(제3 Fab 분자가 통상적 Fab 분자이고, 바람직하게는 제1 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태).
일부 실시양태에서, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하되, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 다른 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적 Fab 분자이다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1W 및 1Y에 개략적으로 도시되어 있다(제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고, 바람직하게는 제2 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태).
일부 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하되, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적 Fab 분자이다. 다른 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1R 및 1V에 개략적으로 도시되어 있다(제3 Fab 분자가 통상적 Fab 분자이고, 바람직하게는 제1 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태).
일부 실시양태에서, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하되, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 다른 이러한 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적 Fab 분자이다. 특정한 이러한 실시양태에서, 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의적으로 하나 이상의 펩티드 링커로 본질적으로 이루어지되, 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 이러한 배치는 도 1X 및 1Z에 개략적으로 도시되어 있다(제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고, 바람직하게는 제1 Fab 분자와 동일한 특정 실시양태).
특정 실시양태에서, 항체는, 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다) 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)) 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다) 폴리펩티드(VH(3)-CH1(3)-VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다) 폴리펩티드(VH(3)-CH1(3)-VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1)-VH(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1)-VH(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는(즉, 제3 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다) 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2)-VL(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄는 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는(즉, 제3 Fab 분자가 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다) 폴리펩티드(VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2)-VH(3)-CL(3))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)) 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(3)-CH1(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제3 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VL(3)-CH1(3)-VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(2)-CL(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VH(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제3 Fab 분자가 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 공유하고, 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 공유하고(즉, 제2 Fab 분자는 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역으로 대체된 크로스오버 Fab 중쇄를 포함한다), 차례로 카복시-말단 펩티드 결합을 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 공유하는 폴리펩티드(VH(3)-CL(3)-VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(2)-CH1(2)), 및 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩티드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 카복시-말단 펩티드 결합을 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 공유하는 폴리펩티드(VL(3)-CH1(3))를 추가로 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 하나에 따라, 항체의 요소(예를 들어 Fab 분자, Fc 도메인)는 직접 또는 다양한 링커, 특히 하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 2 내지 20개의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커(본원에 기재되거나 당분야에 공지됨)를 통해 융합될 수 있다. 적합한, 비-면역원성 펩티드 링커는 예를 들어 (G4S)n, (SG4)n, (G4S)n 또는 G4(SG4)n 펩티드 링커(여기서, n은 일반적으로 1내지 10의 정수, 전형적으로 2 내지 4의 정수이다)를 포함한다.
Fc 도메인
치료제에 포함된 항체, 예를 들어 이중특이적 항체는 항체 분자의 중쇄 도메인을 포함하는 폴리펩티드 쇄로 이루어진 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역 글로불린 G(IgG) 분자의 Fc 도메인은 이량체이고, 이의 각각의 서브유닛은 CH2 및 CH3 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함한다. Fc 도메인의 2개의 서브유닛은 서로에 대해 안정하게 회합할 수 있다.
한 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG Fc 도메인이다. 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다. 또 다른 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인이다. 보다 구체적인 실시양태에서, Fc 도메인은 위치 S228에서의 아미노산 치환(카바트 넘버링), 특히 아미노산 치환 S228P를 포함하는 IgG4 Fc 도메인이다. 이러한 아미노산 치환은 IgG4 항체의 생체내 Fab 아암 교환을 감소시킨다(문헌[Stubenrauch et al., Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010)] 참조). 추가적 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 인간이다. 인간 IgG1 Fc 영역의 예시적 서열은 서열번호 94에 제공된다.
(i) 이종 이량체화를 촉진하는 Fc 도메인 변형
치료제에 포함되는 항체, 특히 이중특이적 항체는 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 하나 또는 나머지 하나에 융합된 상이한 요소(예를 들어 항원 결합 도메인)를 포함할 수 있고, 따라서 Fc 도메인의 2개의 서브유닛은 전형적으로 2개의 동일하지 않은 폴리펩티드 쇄에 포함된다. 이들 폴리펩티드의 재조합 공-발현 및 후속 이량체화는 2개의 폴리펩티드의 가능한 여러 조합을 야기한다. 재조합 생산에서 이러한 항체의 수율 및 순도를 개선하기 위해, 항체의 Fc 도메인에 목적하는 폴리펩티드의 회합을 촉진하는 변형을 도입하는 것이 유리할 것이다.
따라서, 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형을 포함한다. 인간 IgG Fc 도메인의 2개의 서브유닛 사이의 가장 광범위한 단백질-단백질 상호작용의 부위는 Fc 도메인의 CH3 도메인에 존재한다. 따라서, 한 실시양태에서, 상기 변형은 Fc 도메인의 CH3 도메인에 존재한다.
이종 이량체화를 수행하기 위한 Fc 도메인의 CH3 도메인의 변형에 대한 여러 접근법이 존재하며, 이는 예를 들어 WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012/058768, WO 2013/157954 및 WO 2013/096291에 기재되어 있다. 전형적으로, 모든 이러한 접근법에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인은 모두 상보적 방식으로 조작되어, 각각의 CH3 도메인(또는 이를 포함하는 중쇄)이 더 이상 자신과의 동종 이량체화를 수행하지 않으나 상보적으로 조작된 다른 CH3 도메인과의 이종 이량체화를 수행하도록 강요받는다(제1 및 제2 CH3 도메인은 이종 이량체화되고 2개의 제1 또는 2개의 제2 CH3 도메인 사이에동종 이량체가 형성되지 않는다). 개선된 중쇄 이종 이량체화를 위한 이들 상이한 접근법은 중쇄-경쇄 변형(예를 들어 Fab 아암에서 가변 또는 불변 영역 교환/대체, 또는 CH1/CL 계면에서 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산의 치환의 도입)과 조합된 상이한 대안으로서 고려되고, 이는 경쇄 미스페어링 및 벤스 존스(Bence Jones)-유형 부산물을 감소시킨다.
특정 실시양태에서, 상기 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형은 소위 "놉-인투-홀(knob-into-hole)" 변형이고, Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 1개에서 놉 변형 및 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 나머지 1개에서 홀 변형을 포함한다.
상기 놉-인투-홀 기법은 예를 들면, US 5,731,168; US 7,695,936; 문헌[Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621(1996)] 및 문헌[Carter, J Immunol Meth 248, 7-15(2001)]에 기재되어 있다. 일반적으로, 상기 방법은 돌출부가 이종 이량체 형성을 촉진하고 동종 이량체 형성을 방해하기 위해 캐비티에 위치될 수 있도록, 제1 폴리펩티드의 계면에서 돌출부(놉) 및 제2 폴리펩티드의 계면에서 상응하는 캐비티(홀)를 도입하는 것을 수반한다. 돌출부는 제1 폴리펩티드의 계면으로부터 작은 아미노산 측쇄를 큰 아미노산 측쇄(예를 들면, 티오신 또는 트립토판)로 대체하여 구축된다. 돌출부와 유사하거나 유사한 크기의 상보적인 캐비티는 큰 아미노산 측쇄를 작은 아미노산 측쇄(예를 들면, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체하여 제2 폴리펩티드의 계면에서 생성된다.
따라서, 특정 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기는 더 큰 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기로 대체되어, 제2 서브유닛의 CH3 도메인 내의 캐비티에 위치할 수 있는 제1 서브유닛의 CH3 도메인 내에 돌출부를 생성하고, Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기는 작은 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기로 대체되어, 제1 서브유닛의 CH3 도메인 내에 위치할 수 있는 돌출부 내에 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 캐비티를 생성한다.
바람직하게는 보다 큰 측쇄 부피를 갖는 상기 아미노산 잔기는 아르긴(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직하게는 보다 작은 측쇄 부피를 갖는 상기 아미노산 잔기는 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T) 및 발린(V)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
돌출부 및 캐비티는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 변경시켜, 예를 들면, 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다.
특정 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛("놉" 서브유닛)의 CH3 도메인에서 위치 366에서 트레오닌 잔기는 트립토판 잔기로 대체되고(T366W), Fc 도메인의 제2 서브유닛("홀" 서브유닛)의 CH3 도메인이에서 위치 407에서 티로신 잔기는 발린 잔기로 대체된다(Y407V). 한 실시양태에서, Fc 도메인의 제2 서브유닛에서 추가적으로 위치 366에서 트레오닌 잔기는 세린 잔기로 대체되고(T366S), 위치 368에서 류신 잔기는 알라닌 잔기로 대체된다(L368A)(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
또 다른 추가적 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛에서 추가적으로 위치 354에서 세린 잔기는 시스테인 잔기로 대체되거나(S354C) 위치 356에서 글루탐산 잔기는 시스테인 잔기로 대체되고(E356C), Fc 도메인의 제2 서브유닛에서 추가적으로 위치 349에서 티로신 잔기는 시스테인 잔기로 대체된다(Y349C)(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 이러한 2개의 시스테인 잔기의 도입은 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 사이에 다이설파이드 가교의 형성을 야기하여 이량체를 추가로 안정화시킨다(문헌[Carter, J Immunol Methods 248, 7-15(2001)]).
특정 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛은 아미노산 치환 S354C 및 T366W를 포함하고, Fc 도메인의 제2 서브유닛은 아미노산 치환 Y349C, T366S, L368A 및 Y407V를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 CD3 항원 결합 모이어티는 Fc 도메인의 제1 서브유닛("놉 " 변형을 포함함)에 융합된다. 이론에 얽매이지 않고, Fc 도메인의 놉-함유 서브유닛에 대한 CD3 항원 결합 모이어티의 융합은 2개의 CD3 항원 결합 모이어티를 함유하는 이중특이적 항체의 생산(2개의 놉-함유 폴리펩티드의 입체적 충돌)을 (추가로) 최소화할 것이다.
이종 이량체화를 수행하는 CH3-변형의 다른 기술은 본 발명에 따라 대안으로서 고려되며, 예를 들어 WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012/058768, WO 2013/157954 및 WO 2013/096291에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, EP 1870459 A1에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다. 이러한 접근법은 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 사이의 CH3/CH3 도메인 계면에서 특정 아미노산 위치에서 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산의 도입을 기반으로 한다. 하나의 바람직한 실시양태는 (Fc 도메인의) CH3 도메인 중 하나에서 아미노산 돌연변이 R409D; K370E 및 Fc 도메인의 CH3 도메인의 나머지 하나에서 아미노산 돌연변이 D399K; E357K이다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
또 다른 실시양태에서, 항체는 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 T366W, 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 T366S, L368A, Y407V, 및 추가적으로 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 R409D; K370E, 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 D399K; E357K(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 S354C, T366W, 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 Y349C, T366S, L368A, Y407V를 포함하거나, 항체는 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 Y349C, T366W, 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 S354C, T366S, L368A, Y407V, 및 추가적으로 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 R409D; K370E, 및 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에 아미노산 돌연변이 D399K; E357K를 포함한다(모든 넘버링은 카바트 EU 인덱스에 따름).
한 실시양태에서, WO 2013/157953에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다. 한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366K를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351D를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 추가적 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351K를 추가로 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제2 CH3 도메인은 Y349E, Y349D 및 L368E로부터 선택된 아미노산 돌연변이(바람직하게는 L368E)를 추가로 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
한 실시양태에서, WO 2012/058768에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다. 한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351Y, Y407A를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366A, K409F를 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제2 CH3 도메인은 위치 T411, D399, S400, F405, N390 또는 K392에서의 아미노산 돌연변이, 예를 들어 a) T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, T411E 또는 T411W, b) D399R, D399W, D399Y 또는 D399K, c) S400E, S400D, S400R 또는 S400K, d) F405I, F405M, F405T, F405S, F405V 또는 F405W, e) N390R, N390K 또는 N390D, f) K392V, K392M, K392R, K392L, K392F 또는 K392E로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 추가로 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 추가적 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351Y, Y407A를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366V, K409F를 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407A를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366A, K409F를 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 K392E, T411E, D399R 및 S400R을 추가로 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
한 실시양태에서, 예를 들어 368 및 409로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서의 아미노산 변형을 갖는, WO 2011/143545에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
한 실시양태에서, 상기에 기재된 놉-인투-홀 기술을 또한 사용하는 WO 2011/090762에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다. 한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366W를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407A를 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366Y를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407T를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
한 실시양태에서, 항체 또는 이의 Fc 도메인은 IgG2 서브클래스의 것이고, WO 2010/129304에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다.
대안적 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형은 예를 들어 WO 2009/089004에 기재된 바와 같이 정전기 스티어링 효과를 매개하는 변형을 포함한다. 일반적으로, 이러한 방법은 2개의 Fc 도메인 서브유닛의 계면에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 하전된 아미노산 잔기로 대체하여 동종 이량체 형성을 정전기적으로 불리하게 만드나 이종 이량체화를 정전기적으로 유리하게 만드는 것을 수반한다. 하나의 이러한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 음으로 하전된 아미노산(예를 들어 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D))에 의한 K392 또는 N392의 아미노산 치환(바람직하게는 K392D 또는 N392D)을 포함하고, 제2 CH3 도메인은 양으로 하전된 아미노산(예를 들어 리신(K) 또는 아르긴(R))에 의한 D399, E356, D356 또는 E357의 아미노산 치환(바람직하게는 D399K, E356K, D356K 또는 E357K, 보다 바람직하게는 D399K 및 E356K)을 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 음으로 하전된 아미노산(예를 들어 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D))에 의한 K409 또는 R409의 아미노산 치환(바람직하게는 K409D 또는 R409D)을 추가로 포함한다. 추가적 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 추가적으로 또는 대안적으로 음으로 하전된 아미노산(예를 들어 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D))에 의한 K439 및/또는 K370의 아미노산 치환을 포함한다(모든 넘버링은 카바트 EU 인덱스에 따름).
또 다른 추가적 실시양태에서, WO 2007/147901에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다. 한 실시양태에서, 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 K253E, D282K 및 K322D를 포함하고, 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 D239K, E240K 및 K292D를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
또 다른 실시양태에서, WO 2007/110205에 기재된 이종 이량체화 접근법이 대안적으로 사용된다.
한 실시양태에서, Fc 도메인의 제1 서브유닛은 아미노산 치환 K392D 및 K409D를 포함하고, Fc 도메인의 제2 서브유닛은 아미노산 치환 D356K 및 D399K를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
(ii) Fc 수용체 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 Fc 도메인 변형
Fc 도메인은 항체, 예컨대 이중 특이적 항체에, 표적 조직에서 우수한 축적에 기여하는 긴 혈청 반감기 및 유리한 조직-혈액 분포 비를 비롯한 유리한 약동학 특성을 부여한다. 그러나, 동시에 이는 바람직한 항원-함유 세포보다 Fc 수용체를 발현하는 세포에 항체를 바람직하지 않게 표적하도록 할 수 있다. 더욱이, Fc 수용체 신호전달 경로의 공-활성화는 항체가 가질 수 있는 다른 면역 자극 특성 및 항체의 긴 반감기와 함께 시토카인 방출을 야기하여 전신 투여시 시토카인 수용체의 과도한 활성화 및 심각한 부작용을 초래할 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 치료제에 포함된 항체, 특히 이중특이적 항체의 Fc 도메인은, 천연 IgG1 Fc 도메인과 비교하여, Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화도 및/또는 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 하나의 이러한 실시양태에서, Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)은, 천연 IgG1 Fc 도메인(또는 천연 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)과 비교하여, Fc 수용체에 대한 결합 친화도의 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만, 가장 바람직하게는 5% 미만, 및/또는 천연 IgG1 Fc 도메인(또는 천연 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)과 비교하여, 효과기 기능의 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만, 가장 바람직하게는 5% 미만을 나타낸다. 한 실시양태에서, Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)은 Fc 수용체에 실질적으로 결합하지 않고/않거나 효과기 기능을 유도하지 않는다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 한 실시양태에서, Fc 수용체는 인간 Fc 수용체이다. 한 실시양태에서, Fc 수용체는 활성화 Fc 수용체이다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체는 활성화 인간 Fcγ 수용체, 보다 구체적으로 인간 FcγRIIIa, FcγRI 또는 FcγRIIa, 가장 구체적으로 인간 FcγRIIIa이다. 한 실시양태에서, 효과기 기능은 CDC, ADCC, ADCP 및 시토카인 분비로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 것이다. 특정 실시양태에서, 효과기 기능은 ADCC이다. 한 실시양태에서, Fc 도메인 도메인은 천연 IgG1 Fc 도메인과 비교하여 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 실질적으로 유사한 결합 친화도를 나타낸다. FcRn에 대한 실질적으로 유사한 결합은 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)이 FcRn에 대한 천연 IgG1 Fc 도메인(또는 천연 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)의 결합 친화도의 약 70% 초과, 특히 약 80% 초과, 더욱 특히 약 90% 초과를 나타낼 때 달성된다.
특정 실시양태에서, Fc 도메인은 조작되지 않은 Fc 도메인에 비해 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화도 및/또는 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작된다. 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화도 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 전형적으로, 동일한 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 Fc 도메인의 2개의 서브유닛의 각각에 존재한다. 한 실시양태에서, 아미노산 돌연변이는 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화도를 감소시킨다. 한 실시양태에서, 아미노산 돌연변이는 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화도를 2배 이상, 5배 이상, 또는 10배 이상 감소시킨다. Fc 수용체의 Fc 도메인의 결합 친화도를 감소시키는 아미노산 돌연변이가 1개 초과인 실시양태에서, 이러한 아미노산 돌연변이의 조합은 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화도를 10배 이상, 20배 이상, 또는 심지어 50배 이상만큼 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 조작된 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체는 조작되지 않은 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자와 비교하여 20% 미만, 특히 10% 미만, 더욱 특히 5% 미만의 Fc 수용체에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체는 인간 Fc 수용체이다. 일부 실시양태에서, Fc 수용체는 활성화 Fc 수용체이다. 특정 실시양태에서, Fc 수용체는 활성화 인간 Fcγ 수용체, 보다 구체적으로 인간 FcγRIIIa, FcγRI 또는 FcγRIIa, 가장 구체적으로 인간 FcγRIIIa이다. 바람직하게, 이러한 수용체의 각각에 대한 결합은 감소된다. 일부 실시양태에서, 보체 성분에 대한 결합 친화도, 구체적으로 C1q에 대한 결합 친화도는 또한 감소된다. 한 실시양태에서, 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합 친화도는 감소되지 않는다. FcRn에 대하여 실질적으로 유사한 결합, 즉, 상기 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화도의 보존은 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)이 약 70% 초과의 FcRn에 대한 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인의 조작되지 않은 형태를 포함하는 상응하는 분자)의 조작되지 않은 형태의 결합 친화도를 나타낼 때 달성된다. Fc 도메인, 또는 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)는 약 80% 초과, 심지어 약 90% 초과의 상기 친화도를 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, Fc 도메인은 조작되지 않은 Fc 도메인과 비교하여 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작된다. 감소된 효과기 기능은 비제한적으로, 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 감소된 보체-의존적 세포독성(CDC), 감소된 항체-의존적 세포 매개된 세포독성(ADCC), 감소된 항체-의존적 세포 식균작용(ADCP), 감소된 시토카인 분비, 항원-제시 세포에 의한 감소된 면역 복합체-매개된 항원 흡수, NK 세포에 대하여 감소된 결합, 대식세포에 대하여 감소된 결합, 단핵구에 대하여 감소된 결합, 다형핵 세포에 대하여 감소된 결합, 세포자멸을 유도하는 감소된 직접 신호전달, 표적-결합된 항체의 감소된 교차결합, 감소된 수지상 세포 성숙, 또는 감소된 T 세포 프라이밍(priming). 한 실시양태에서, 감소된 효과기 기능은 감소된 CDC, 감소된 ADCC, 감소된 ADCP, 및 감소된 시토카인 분비의 군으로부터 하나 이상 선택된다. 특정한 실시양태에서, 감소된 효과기 기능은 감소된 ADCC이다. 한 실시양태에서, 감소된 ADCC는 20% 미만의 조작되지 않은 Fc 도메인(또는 조작되지 않은 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)에 의해 유도된 ADCC이다.
한 실시양태에서, Fc 수용체의 Fc 도메인의 결합 친화도 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 한 실시양태에서, Fc 도메인은 E233, L234, L235, N297, P331 및 P329로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 아미노산 치환을 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 더욱 특정한 실시양태에서, Fc 도메인은 L234, L235 및 P329로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 아미노산 치환을 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A 및 L235A를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 하나의 상기 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인, 특히 인간 IgG1 Fc 도메인이다. 한 실시양태에서, Fc 도메인은 위치 P329에서 아미노산 치환을 포함한다. 더욱 특정한 실시양태에서, 아미노산 치환은 P329A 또는 P329G, 특히 P329G이다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 한 실시양태에서, Fc 도메인은 위치 P329에서 아미노산 치환 및 E233, L234, L235, N297 및 P331로부터 선택된 위치에서 추가의 아미노산 치환을 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 더욱 특정한 실시양태에서, 추가의 아미노산 치환은 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D 또는 P331S이다. 특정한 실시양태에서, Fc 도메인은 위치 P329, L234 및 L235에서 아미노산 치환을 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 더욱 특정한 실시양태에서, Fc 도메인은 아미노산 돌연변이 L234A, L235A 및 P329G("P329G LALA")를 포함한다. 하나의 이러한 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인, 특히 인간 IgG1 Fc 도메인이다. 아미노산 치환의 "P329G LALA" 조합은 전체가 참조로서 본원에 혼입된 PCT 공개 WO 2012/130831에 기재된 바와 같이, 인간 IgG1 Fc 도메인의 Fcγ 수용체 (및 보체) 결합을 거의 완전히 파괴한다. 또한, WO 2012/130831은 상기 돌연변이체 Fc 도메인의 제조 방법 및 이의 특성, 예컨대 Fc 수용체 결합 또는 효과기 기능의 측정 방법을 기재한다.
IgG4 항체는 IgG1 항체와 비교하여 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화도 및 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 이로 인해, 일부 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인, 특히 인간 IgG4 Fc 도메인이다. 한 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인은 위치 S228에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 S228P를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). Fc 수용체에 대한 이의 결합 친화도 및/또는 이의 효과기 기능을 추가로 감소시키기 위해, 한 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인은 위치 L235에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 L235E를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 또 한 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인은 위치 P329에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 P329G를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 특정한 실시양태에서, IgG4 Fc 도메인은 위치 S228, L235 및 P329에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 S228P, L235E 및 P329G를 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 상기 IgG4 Fc 도메인 돌연변이체 및 이의 Fcγ 수용체 결합 특성은 전체가 참조로 본원에 혼입된 PCT 공개 WO 2012/130831에 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 천연 IgG1 Fc 도메인과 비교하여 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화도 및/또는 감소된 효과기 기능을 나타내는 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A, L235A 및 임의적으로 P329G를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인, 또는 아미노산 치환 S228P, L235E 및 임의적으로 P329G를 포함하는 인간 IgG4 Fc 도메인이다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
특정 실시양태에서, Fc 도메인의 N-글리코실화는 제거되었다. 하나의 이러한 실시양태에서, Fc 도메인은 위치 N297에서 아미노산 돌연변이, 특히 아스파라긴을 알라닌(N297A), 아스파르트산(N297D) 또는 글리신(N297G)으로 대체하는 아미노산 치환을 포함한다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
전술되고 PCT 공개 WO 2012/130831에 기재된 Fc 도메인 이외에, 감소된 Fc 수용체 결합 및/또는 효과기 기능을 갖는 Fc 도메인은 또한 Fc 도메인 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다(미국 특허 6,737,056)(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링). 상기 Fc 돌연변이체는 잔기 265 및 297을 알라닌으로 치환하는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체(미국 특허 7,332,581)를 비롯한, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다.
돌연변이체 Fc 도메인은 당분야에 널리 공지된 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 아미노산 결실, 치환, 삽입 또는 변형에 의해 제조될 수 있다. 유전적 방법은 암호화 DNA 서열의 부위-특이적 돌연변이 생성, PCR, 유전자 합성 등을 포함할 수 있다. 정확한 뉴클레오티드 변화는 예를 들면 서열확인에 의해 입증될 수 있다.
Fc 수용체에 대한 결합은 예를 들면, ELISA에 의해, 또는 표준 기기 장치, 예컨대 비아코어 기기(지이 헬스케어)를 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 용이하게 측정될 수 있고, Fc 수용체는 예컨대 재조합 발현에 의해 수득될 수 있다. 대안적으로, Fc 수용체에 대한 Fc 도메인 또는 분자의 결합 친화도는 특정한 Fc 수용체를 발현하기 위해 공지된 세포주, 예컨대 FcγIIIa 수용체를 발현하는 인간 NK 세포를 사용하여 평가될 수 있다.
Fc 도메인, 또는 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)의 효과기 기능은 당분야에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. ADCC를 측정하기에 적합한 분석이 본원에 기재된다. 관심 분자의 ADCC 활성을 추정하는 시험관내 분석의 다른 예는 미국 특허 5,500,362; 문헌[Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063(1986)] 및 [Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502(1985)]; 미국 특허 5,821,337; 문헌[Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361(1987)]에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사선 분석 방법이 이용될 수 있다[예를 들면, 유동 세포계측을 위한 ACTI(상표) 비-방사선 세포독성 분석(셀테크놀로지 인코포레이티드(CellTechnology, Inc), 미국 캘리포니아주 마운틴 뷰 소재); 및 사이토톡스(CytoTox) 96(등록상표) 비-방사선 세포독성 분석(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 참조]. 상기 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 천연 살해자(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 예컨대 문헌[Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656(1998)]에 기재된 동물 모델에서 생체내 평가될 수 있다.
일부 실시양태에서, 보체 성분, 구체적으로 C1q에 대한 Fc 도메인의 결합은 감소된다. 따라서, Fc 도메인이 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작된 일부 실시양태에서, 상기 감소된 효과기 기능은 감소된 CDC를 포함한다. C1q 결합 분석은 Fc 도메인 또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)가 C1q에 결합할 수 있고 이로 인해 CDC 활성을 갖는지를 결정하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석이 수행될 수 있다(예를 들면, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J Immunol Methods 202, 163(1996)]; 문헌[Cragg et al., Blood 101, 1045-1052(2003)]; 및 문헌[Cragg and Glennie, Blood 103, 2738-2743(2004)] 참조).
항원 결합 모이어티
치료제에 포함된 항체는 이중특이적일 수 있다, 즉, 이는 2개의 별도의 항원 결정 인자에 특이적으로 결합할 수 있는 2개 이상의 항원 결합 모이어티를 포함한다. 특정 실시양태에 따라, 항원 결합 모이어티는 Fab 분자(즉, 각각 가변 및 불변 도메인을 포함하는, 중쇄 및 경쇄로 구성된 항원 결합 도메인)이다. 한 실시양태에서, 상기 Fab 분자는 인간의 것이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 Fab 분자는 인간화된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 Fab 분자는 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 모이어티 중 하나 이상은 크로스오버 Fab 분자이다. 이러한 변형은 상이한 Fab 분자의 중쇄 및 경쇄의 미스페어링을 감소시켜 재조합 생산에서 항체의 수율 및 순도를 개선시킨다. 항체에 유용한 특정 크로스오버 Fab 분자에서, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인(각각 VL 및 VH)은 교환된다. 그러나, 이러한 도메인 교환에도 불구하고, 항체 제제는 미스페어링된 중쇄 및 경쇄 사이에 소위 벤스 존스 유형 상호작용 때문에 특정 부산물을 포함할 수 있다(문헌[Schaefer et al, PNAS, 108 (2011) 11187-11191] 참조). Fab 분자의 중쇄 및 경쇄의 미스페어링을 추가로 감소시키고 목적하는 항체의 순도 및 수율을 증가시키기 위해, 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산이 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 Fab 분자 또는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 Fab 분자의 CH1 및 CL 도메인의 특정 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 항체에 포함된 통상적 Fab 분자(예컨대 도 1 A-C, G-J에 도시됨) 또는 항체에 포함된 VH/VL 크로스오버 Fab 분자(예컨대 도 1 D-F, K-N에 도시됨)에서 전하 변형이 있다(그러나 둘 모두에서의 전하 변형은 없음). 특정 실시양태에서, 항체에 포함된 통상적 Fab 분자(특정 실시양태에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합함)에 전하 변형이 있다.
본 발명에 따른 특정 실시양태에서, 항체는 표적 세포 항원, 특히 종양 세포 항원 및 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 동시 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 표적 세포 항원 및 활성화 T 세포 항원에 대한 동시 결합에 의해 T 세포 및 표적 세포를 가교시킬 수 있다. 보다 더 특정한 실시양태에서, 이러한 동시 결합은 표적 세포, 특히 종양 세포의 용해를 야기한다. 한 실시양태에서, 이러한 동시 결합은 T 세포의 활성화를 야기한다. 다른 실시양태에서, 이러한 동시 결합은 증식, 분화, 시토카인 분비, 세포독성 효과기 분자 방출, 세포독성 활성 및 활성화 마커의 발현으로 이루어진 군으로부터 선택된, T 림프구, 특히 세포독성 T 림프구의 세포 반응을 야기한다. 한 실시양태에서, 표적 세포 항원에 대한 동시 결합 없이 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 대한 항체의 결합은 T 세포 활성화를 야기하지 않는다.
한 실시양태에서, 항체는 표적 세포에 대한 T 세포의 세포 독성 활성을 재유도할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 재유도는 표적 세포에 의한 MHC-매개된 펩티드 항원 제시 및/또는 T 세포의 특이성에 독립적이다.
특히, 본 발명의 임의의 실시양태에 따른 T 세포는 세포독성 T 세포이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포, 특히 CD8+ T 세포이다.
(i) 활성화 T 세포 항원 결합 모이어티
일부 실시양태에서, 치료제에 포함된 항체, 특히 이중특이적 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자(본원에서 "활성화 T 세포 항원 결합 모이어티 또는 활성화 T 세포 항원 결합 Fab 분자"로도 지칭됨)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 1개 이하의 항원 결합 모이어티를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 활성화 T 세포 항원에 대한 일가 결합을 제공한다.
특정 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 바람직하게는 통상적 Fab 분자이다. 항체에 포함된 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 1개 초과의 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자가 존재하는 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 바람직하게는 크로스오버 Fab 분자이고, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 통상적 Fab 분자이다.
대안적 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 통상적 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다.
한 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원은 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원은 CD3, 특히 인간 CD3(서열번호 91) 또는 시노몰구스 CD3(서열번호 92), 가장 특히 인간 CD3이다. 특정 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원 결합 모이어티는 인간 및 시노몰구스 CD3에 대해 교차 반응성이다(즉, 인간 및 시노몰구스 CD3에 특이적으로 결합한다). 일부 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원은 CD3의 엡실론 서브유닛(CD3 엡실론)이다.
일부 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원 결합 모이어티는 CD3, 특히 CD3 엡실론에 특이적으로 결합하고, 서열번호 12, 서열번호 13 및 서열번호 14로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 중쇄 상보 결정 영역(CDR), 및 서열번호 15, 서열번호 16 및 서열번호 17로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함한다.
한 실시양태에서, CD3 결합 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 12의 중쇄 CDR1, 서열번호 13의 중쇄 CDR2 및 서열번호 14의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 15의 경쇄 CDR1, 서열번호 16의 경쇄 CDR2 및 서열번호 17의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, CD3 결합 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 18에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 19에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, CD3 결합 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, CD3 결합 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
(ii) 표적 세포 항원 결합 모이어티
일부 실시양태에서, 치료제에 포함된 항체, 특히 이중특이적 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 2개의 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자를 포함한다. 특정한 이러한 실시양태에서, 이들 항원 결합 모이어티 각각은 동일한 항원 결정 인자에 특이적으로 결합한다. 보다 더 특정한 실시양태에서, 이들 항원 결합 모이어티 모두는 동일하다, 즉, 이들은 본원에 기재된 바와 같이 (존재하는 경우) CH1 및 CL 도메인에 동일한 아미노산 치환을 포함하는 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 면역 글로불린 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 2개 이하의 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자를 포함한다.
특정 실시양태에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 통상적 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다.
대안적 실시양태에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 본원에 기재된 크로스오버 Fab 분자, 즉, Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로 교환된/대체된 Fab 분자이다. 이러한 실시양태에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티는 통상적 Fab 분자이다.
표적 세포 항원 결합 모이어티는 항체가 표적 부위, 예를 들어 표적 세포 항원을 발하는 특정 유형의 종양 세포를 향하도록 할 수 있다.
한 실시양태에서, 표적 세포 항원은 B 세포 항원, 특히 악성 B 세포 항원이다. 한 실시양태에서, 표적 세포 항원은 세포 표면 항원이다. 한 실시양태에서, 표적 세포 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 표적 세포 항원은 CD20, 특히 인간 CD20이다.
한 실시양태에서, CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 4의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 5의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 6의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 7의 경쇄 CDR 1, 서열번호 8의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 9의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가적 실시양태에서, CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 10의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 추가적 실시양태에서, CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 표적 세포 항원은 CD19, 특히 인간 CD19이다.
한 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 24의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 25의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 26의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 27의 경쇄 CDR 1, 서열번호 28의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 29의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 30의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 31의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 31의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 35의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 36의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 37의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 38의 경쇄 CDR 1, 서열번호 39의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 40의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 41의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 42의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 42의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 하기를 포함한다:
(i) 서열번호 43의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 44의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 45의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 46의 경쇄 CDR 1, 서열번호 47의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 48의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(ii) 서열번호 51의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 52의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 53의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 54의 경쇄 CDR 1, 서열번호 55의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 56의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(iii) 서열번호 59의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 60의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 61의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 62의 경쇄 CDR 1, 서열번호 63의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 64의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(iv) 서열번호 67의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 68의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 69의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 70의 경쇄 CDR 1, 서열번호 71의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 72의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(v) 서열번호 75의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 76의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 77의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 78의 경쇄 CDR 1, 서열번호 79의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 80의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(vi) 서열번호 83의 중쇄 상보 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 84의 중쇄 CDR 2 및 서열번호 85의 중쇄 CDR 3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 86의 경쇄 CDR 1, 서열번호 87의 경쇄 CDR 2 및 서열번호 88의 경쇄 CDR 3을 포함하는 경쇄 가변 영역.
추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 하기를 포함한다:
(i) 서열번호 49의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 50의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역;
(ii) 서열번호 57의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 58의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역;
(iii) 서열번호 65의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 66의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역;
(iv) 서열번호 73의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 74의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역;
(v) 서열번호 81의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 82의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역; 또는
(vi) 서열번호 89의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 90의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경쇄 가변 영역.
또 다른 추가적 실시양태에서, CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모이어티, 특히 Fab 분자는 하기를 포함한다:
(i) 서열번호 49의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 서열;
(ii) 서열번호 57의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 서열;
(iii) 서열번호 65의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 서열;
(iv) 서열번호 73의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 서열;
(v) 서열번호 81의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(vi) 서열번호 89의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 90의 경쇄 가변 영역 서열.
전하 변형
치료제에 포함되는 항체, 특히 다중특이적 항체는 이들의 결합 아암 중 하나(또는 2개 초과의 항원 결합 Fab 분자를 포함하는 분자의 경우 하나 이상)에서 VH/VL 교환을 갖는 Fab-기반 이중/다중특이적 항원 결합 분자의 생산에서 발생할 수 있는, 경쇄와 비-매칭된 중쇄의 미스페어링(벤스 존스 유형 부산물)을 감소시키는 데 특히 효율적인, 내부에 포함된 Fab 분자에 아미노산 치환을 포함할 수 있다(그 전체가 본원에 참고로 포함된 WO 2015/150447, 특히 이의 실시예 참조).
따라서, 특정 실시양태에서, 치료제에 포함된 항체는
(a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자, 및
(b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 Fab 분자(여기서, Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH는 서로 대체된다)
를 포함하되, 상기 제1 항원이 활성화 T 세포 항원이고 상기 제2 항원이 표적 세포 항원이거나, 상기 제1 항원이 표적 세포 항원이고 상기 제2 항원이 활성화 T 세포 항원이고;
i) 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 양으로 하전된 아미노산으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산 또는 위치 213의 아미노산은 음으로 하전된 아미노산으로 치환되거나(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링);
ii) 상기 b)의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 양으로 하전된 아미노산으로 치환되거나(카바트에 따른 넘버링), 상기 b)의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산 또는 위치 213의 아미노산은 음으로 하전된 아미노산으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
항체는 상기 i) 및 ii)의 변형 모두를 포함하지는 않는다. 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 CH1는 서로 대체되지 않는다(즉, 교환되지 않은 상태로 남아 있음).
항체의 한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 독립적으로 리신(K), 아르긴(R) 또는 히스티딘(H)으로(카바트에 따른 넘버링)(하나의 바람직한 실시양태에서, 독립적으로 리신(K) 또는 아르긴(R)으로) 치환되고, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산 또는 위치 213의 아미노산은 독립적으로 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
추가적 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 독립적으로 리신(K), 아르긴(R) 또는 히스티딘(H)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 독립적으로 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
특정 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 독립적으로 리신(K), 아르긴(R) 또는 히스티딘(H)으로(카바트에 따른 넘버링)(하나의 바람직한 실시양태에서, 독립적으로 리신(K) 또는 아르긴(R)으로) 치환되고, 위치 123의 아미노산은 독립적으로 리신(K), 아르긴(R) 또는 히스티딘(H)으로(카바트에 따른 넘버링)(하나의 바람직한 실시양태에서, 독립적으로 리신(K) 또는 아르긴(R)으로) 치환되고, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 독립적으로 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링) 위치 213의 아미노산은 독립적으로 글루탐산(E) 또는 아스파르트산(D)으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
보다 특정한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 리신(K)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링) 위치 123의 아미노산은 리신(K) 또는 아르긴(R)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링) 위치 213의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
보다 더 특정한 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 위치 124의 아미노산은 리신(K)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링) 위치 123의 아미노산은 아르긴(R)으로 치환되고(카바트에 따른 넘버링), 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 위치 147의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환되고(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링) 위치 213의 아미노산은 글루탐산(E)으로 치환된다(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링).
특정 실시양태에서, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL은 카파 동형의 것이다.
대안적으로, 상기 a)의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1 대신에 상기 b)의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서 상기 실시양태에 따른 아미노산 치환이 있을 수 있다. 특정한 이러한 실시양태에서, 상기 b)의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL은 카파 동형의 것이다.
항체는 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 제3 Fab 분자는 상기 a)의 제1 Fab 분자와 동일하다. 이들 실시양태에서, 상기 실시양태에 따른 아미노산 치환은 각각의 제1 Fab 분자 및 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에 있을 수 있다. 대안적으로, 상기 실시양태에 따른 아미노산 치환은 제1 Fab 분자 및 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서가 아닌 상기 b)의 제2 Fab 분자 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에 있을 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체는 안정하게 회합할 수 있는 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인을 추가로 포함한다.
치료 양생법
본 발명에 따라, 제II형 항-CD20 항체 및 치료제는, 제II형 항-CD20 항체가 치료제 전에 투여되고 상기 제II형 항-CD20 항체의 투여가 치료제가 투여될 때까지는 치료 받는 개체에서 B 세포의 수의 감소를 효과적으로 유도하는 한은 (예를 들어 투여 경로, 투여량 및/또는 시기에 관해) 다양한 방식으로 투여될 수 있다.
이론에 얽매이지 않고, 치료제의 투여 전에 개체에서 B 세포의 수의 감소는 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키거나 방지할 것이고, 따라서 치료제의 투여와 관련하여 개체에서의 유해 이벤트(예컨대 IRR)를 감소시키거나 방지할 것이다.
한 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 투여와 관련하여 개체에서 시토카인 방출을 효과적으로 감소시킨다. 한 실시양태에서, 시토카인 방출은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 2-배 이상, 3-배 이상, 4-배 이상, 5-배 이상, 10-배 이상, 20-배 이상, 50-배 이상 또는 100-배 이상 감소된다. 한 실시양태에서, 시토카인 방출은 본질적으로 방지된다. 한 실시양태에서, 시토카인 방출의 감소 또는 방지는 치료제 투여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 후에 발생한다. 한 실시양태에서, 시토카인 방출의 감소 또는 방지는 치료제 투여 처음 24시간 이내에 발생한다.
한 실시양태에서, 치료제 투여후 개체의 시토카인 농도(예를 들어 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 측정됨)는 치료제 투여 전 개체의 시토카인 농도를 넘지 않는다. 한 실시양태에서, 치료제 투여 후 개체의 시토카인 농도는 치료제 투여 전 개체의 시토카인 농도를 1.1-배 초과, 1.2-배 초과, 1.5-배 초과, 2-배 초과, 3-배 초과, 4-배 초과, 5-배 초과, 10-배 초과, 20-배 초과, 50-배 초과 또는 100-배 초과만큼 넘지 않는다. 한 실시양태에서, 치료제 투여 후 개체의 시토카인 농도는 치료제 투여 전 개체의 시토카인 농도와 비교하여 1.1-배 미만, 1.2-배 미만, 1.5-배 미만, 2-배 미만, 3-배 미만, 4-배 미만, 5-배 미만, 10-배 미만, 20-배 미만, 50-배 미만 또는 100-배 미만으로 증가한다. 한 실시양태에서, 치료제 투여 후 개체의 시토카인 농도는 치료제 투여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 후 시토카인 농도이다. 한 실시양태에서, 치료제 투여 후 개체의 시토카인 농도는 치료제 투여 처음 24시간 이내의 시토카인 농도이다.
한 실시양태에서, 시토카인 농도의 본질적으로 증가 없음은 치료제 투여 후, 특히 치료제 투여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 후 개체에서 검출가능하다.
시토카인은 당분야에 공지된 방법, 예컨대 ELISA, FACS 또는 루미넥스(Luminex, 등록상표) 분석에 의해 검출될 수 있다.
시토카인은 예를 들어 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 검출될 수 있다. 한 실시양태에서, 시토카인 농도는 개체의 혈액 내 농도이다.
일부 실시양태에서, 시토카인은 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페론 감마(IFN-γ), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-2(IL-2) 및 인터류킨-8(IL-8)로 이루어진 군, 특히 TNF-α, IFN-γ 및 IL-6으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 시토카인이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 TNF-α이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 IFN-γ이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 IL-6이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 IL-10이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 IL-2이다. 일부 실시양태에서, 시토카인은 IL-8이다.
일부 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 안전성을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 유해 이벤트를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 효능을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 혈청 반감기를 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 독성을 감소시킨다.
본 발명에 따라, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 제II형 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키는 데 충분하다.
한 실시양태에서, 상기 기간은 3 내지 21일, 5 내지 20일, 7 내지 21일, 7 내지 14일, 5 내지 15일, 7 내지 15일, 8 내지 15일, 10 내지 20일, 10 내지 15일, 11 내지 14일 또는 12 내지 13일이다. 한 실시양태에서, 상기 기간은 7 내지 14일이다. 한 실시양태에서, 상기 기간은 5 내지 10일이다. 특정 실시양태에서, 상기 기간은 7일이다.
한 실시양태에서, 상기 기간은 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일, 약 15일, 약 16일, 약 17일, 약 18일, 약 19일, 약 20일, 약 21일, 약 22일, 약 23일, 약 24일, 약 25일, 약 26일, 약 27일, 약 28일, 약 29일 또는 약 30일이다.
한 실시양태에서, 상기 기간은 3일 이상, 4일 이상, 5일 이상, 6일 이상, 7일 이상, 8일 이상, 9일 이상, 10일 이상, 11일 이상, 12일 이상, 13일 이상, 14일 이상 또는 15일 이상이다. 특정 실시양태에서, 상기 기간은 5일 이상이다. 추가적 특정 실시양태에서, 상기 기간은 7일 이상이다.
한 실시양태에서, 상기 기간은 제II형 항-CD20 항체의 마지막 투여와 치료제의 (여러회인 경우 제1) 투여 사이의 기간이다. 한 실시양태에서, 상기 기간 동안 치료제 투여는 이루어지지 않는다.
특정 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 개체의 혈액 내에서의 B 세포의 수의 감소이다. 한 실시양태에서, B 세포는 말초혈 B 세포이다. 한 실시양태에서, B 세포는 악성 또는 정상 B 세포이다. 한 실시양태에서, B 세포는 악성 B 세포이다.
일부 실시양태에서, B 세포의 감소는 개체의 조직 내에서의 B 세포의 감소이다. 한 실시양태에서, 조직은 종양이다. 한 실시양태에서, 조직은 림프절이다. 한 실시양태에서, 조직은 비장이다. 한 실시양태에서, 조직은 비장의 변연부이다. 한 실시양태에서, B 세포는 림프절 B 세포이다. 한 실시양태에서, B 세포는 비장 B 세포이다. 한 실시양태에서, B 세포는 비장 변연부 B 세포이다. 한 실시양태에서, B 세포는 CD20-양성 B 세포, 표면 상에 CD20을 발현하는 B 세포이다.
한 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 약 10% 이상, 약 15% 이상, 약 20% 이상, 약 25% 이상, 약 30% 이상, 약 35% 이상, 약 40% 이상, 약 45% 이상, 약 50% 이상, 약 55% 이상, 약 60% 이상, 약 65% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상 또는 약 95% 이상의 감소이다. 한 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 B 세포의 완전한 제거이다. 특정 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 개체의 (말초) 혈액의 B 세포의 수의 90% 이상, 특히 95% 이상의 감소이다. 한 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 개체에 대한 제II형 항-CD20 항체의 (여러회 존재하는 경우 제1) 투여 전에 개체에서 B 세포의 수와 비교한 감소이다.
개체에서 B 세포의 수는 환자 혈액 또는 조직의 B 세포를 정량화하는 데 적합한 당분야에 공지된 임의의 방법, 예컨대 유세포 분석법, 면역 조직화학법 또는 면역 형광법(B 세포 마커에 대한 항체, 예컨대 CD20, CD19, 및/또는 PAX5를 사용함)에 의해 결정될 수 있다.
또한, B 세포의 수는 환자 혈액 또는 조직의 B 세포 마커의 단백질 또는 mRNA 수준을 정량화함으로써 간접적으로 결정될 수 있다. 특정 단백질 수준의 결정을 위해 당분야에 공지된 적합한 방법은 면역 분석법, 예컨대 효소-연결된 면역흡착 분석(ELISA) 또는 웨스턴 블롯(Western Blot)을 포함하고, mRNA 수준의 결정을 위한 방법은 예를 들어 정량적 RT-PCR 또는 마이크로어레이 기술을 포함한다.
전술된 모든 방법 및 기술은 당분야에 주지되어 있고 표준 교과서, 예컨대 문헌[Lottspeich (Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998)] 또는 [Sambrook and Russell (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A., 2001)]으로부터 추론될 수 있다.
특정 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 개체의 혈액(예를 들어 개체로부터 채취한 샘플)의 B 세포의 정량화에 의해 결정된다. 하나의 이러한 실시양태에서, B 세포는 유세포 분석에 의해 정량화된다. 유세포 분석법(FACS)은 혈액 또는 조직 샘플의 세포의 정량화를 위해 당분야에 주지되어 있다. 특히, 이는 혈액 또는 조직 샘플(예를 들어 혈액 샘플 또는 조직 생검(의 일부))의 세포의 정의된 총 수 중에 특이적 항원(예를 들어 CD20 및/또는 CD19)을 발현하는 세포로서 결정된다. 한 실시양태에서, B 세포는 항-CD19 항체 및/또는 항-CD20 항체를 사용하여 유세포 분석에 의해 정량화된다.
다른 실시양태에서, B 세포의 수의 감소는 개체의 조직, 예를 들어 종양(예를 들어 개체로부터 채취한 조직 생검)의 B 세포의 정량화에 의해 결정된다. 하나의 이러한 실시양태에서, B 세포는 면역 조직화학 분석 또는 면역 형광 분석에 의해 정량화된다. 한 실시양태에서, B 세포는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체 및/또는 항-PAX5 항체를 사용하는 면역 조직화학 분석에 의해 정량화된다.
본 발명의 방법은 사용된 치료제에 따라 다양한 질병의 치료에 적용될 수 있다. 그러나, 상기 방법은 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애(여기서, (CD20-양성) B 세포가 많은 양으로 존재한다(즉, 건강한 개체와 비교하여 증가된 B 세포의 수가 상기 장애를 앓는 개체에서 존재한다))의 치료에 특히 유용하다. 따라서, 한 실시양태에서, 질병은 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애이다.
한 실시양태에서, 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 또는 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL) 및 변연부 림프종(MZL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 질병은 NHL, 특히 재발성/난치성(r/r) NHL이다. 한 실시양태에서, 질병은 DLBCL이다. 한 실시양태에서, 질병은 FL이다. 한 실시양태에서, 질병은 MCL이다. 한 실시양태에서, 질병은 MZL이다.
숙련가는 많은 경우에 치료제가 치유를 제공하지 않지만 단지 부분적 이익을 제공할 수 있음을 용이하게 인지한다. 일부 실시양태에서, 일부 이익이 있는 생리학적 변화가 또한 치료적으로 유익한 것으로 고려된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 생리학적 변화를 제공하는 치료제의 양은 "유효량" 또는 "치료적 유효량"으로 고려된다.
치료가 필요한 개체, 환자 또는 개별체는 전형적으로 포유동물, 보다 구체적으로 인간이다.
특정 실시양태에서, 개체는 인간이다. 한 실시양태에서, 개체는 B 세포 증식성 장애, 특히 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 또는 호지킨 림프종(HL)을 앓는다.
한 실시양태에서, 개체는 재발성/난치성(r/r) NHL을 앓는다.
제II형 항-CD20 항체의 투여
본 발명에 따라, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간 및 제II형 항-CD20 항체의 투여량은 치료제의 투여 전 개체에서 B 세포의 수를 효과적으로 감소시키도록 선택된다.
제II형 항-CD20 항체는 비경구, 폐내 및 비강내 투여, 및 필요에 따라 국소 치료를 위한 병소내 투여를 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는, 부분적으로 투여가 잠시 동안 이루어지거나 만성적으로 이루어지는지에 따라 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의해 수행될 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여, 및 펄스 주입을 포함하는 다양한 투여 일정이 본원에서 고려된다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체는 비경구로, 특히 정맥내로, 예를 들어 정맥내 주입에 의해 투여된다.
제II형 항-CD20 항체는 타당한 의료 행위와 일치하는 방법에 의해 제형화되고 투여되고 투약될 수 있다. 이러한 맥락에서 고려 인자는 치료할 장애, 치료 받을 특정 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정 및 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 단일 투여이다. 또 다른 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 2회 이상의 별개의 투여이다. 한 실시양태에서, 2회 이상의 별개의 투여는 2일 이상의 연속하는 날에 수행된다. 한 실시양태에서, 치료제의 투여 전 또는 후에 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 추가적 투여가 없다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 단일 투여 또는 2일의 연속하는 날에 수행되는 2회의 투여이거나, 제II형 항-CD20 항체의 추가적 투여는 없다. 한 실시양태에서, 기간은 제II형 항-CD20 항체의 마지막 투여와 치료제의 (여러 회인 경우 제1) 투여 사이의 기간이다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 개체에서 B 세포의 감소에 효과적인 제II형 항-CD20 항체 투여량이다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여량은 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간 내에 개체에서 B 세포의 수의 감소에 효과적이다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간 및 제II형 항-CD20 항체의 투여된 투여량은 제II형 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키는 데 충분하다.
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 약 2 g의 제II형 항-CD20 항체의 투여량이다. 약 2 g의 제II형 항-CD20 항체의 투여량은 약 2 g의 단일 투여로서 또는 여러 회의 투여로서, 예를 들어 각각 약 1 g의 2회 투여 또는 예를 들어 100 mg, 900 mg 및 1000 mg의 3회 투여로서 개체에게 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 개체에게 약 2 g의 제II형 항-CD20 항체의 1회 투여가 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 각각 약 1 g의 제II형 항-CD20 항체의 2회 투여가 2일의 연속하는 날에 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 (i) 약 100 mg의 제II형 항-CD20 항체, (ii) 약 900 mg의 제II형 항-CD20 항체 및 (iii) 약 1000 mg의 제II형 항-CD20 항체의 3회 투여((i) 내지 (iii))가 3일의 연속하는 날에 수행된다. 한 실시양태에서, 개체에게 약 1 g의 제II형 항-CD20 항체의 2회 투여가 치료제 투여 10 내지 15일 전에 2일의 연속하는 날에 수행된다. 한 실시양태에서, 개체에게 약 2 g의 제II형 항-CD20 항체의 1회 투여가 치료제 투여 10 내지 15일 전에 수행된다. 한 실시양태에서, 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 추가적 투여는 수행되지 않는다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여 전에 개체에게 치료제 투여가 수행되지 않는다(적어도 동일한 치료 과정 내에 있지 않음).
한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여는 약 1000 mg의 제II형 항-CD20 항체의 투여량이다. 약 1000 mg의 제II형 항-CD20 항체의 투여량은 약 1000 mg의 단일 투여로서, 또는 여러 회의 투여, 예를 들어 각각 약 500 mg의 2회 투여로서 개체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 개체에게 약 1000 mg의 제II형 항-CD20 항체의 1회 투여가 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 각각 약 500 mg의 제II형 항-CD20 항체의 2회 투여가 2일의 연속하는 날에 수행된다. 한 실시양태에서, 개체에게 약 1000 mg의 제II형 항-CD20 항체의 1회 투여가 치료제 투여 7일 전에 수행된다. 한 실시양태에서, 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 추가적 투여가 수행되지 않는다. 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여 전에 개체에게 치료제의 투여가 수행되지 않는다(적어도 동일한 치료 과정 내에 있지 않음).
한 실시양태에서, 치료 양생법은 제II형 항-CD20 항체의 투여의 전에 전약물의 투여를 추가로 포함한다. 실시양태에서, 전약물은 코르티코스테로이드(예컨대 프레드니솔론, 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론), 파라아세타몰/아세트아미노펜, 및/또는 항-히스타민(예컨대 다이펜하이드라민)을 포함한다. 한 실시양태에서, 전약물은 제II형 항-CD20 항체의 투여 60분 이상 전에 투여된다.
한 실시양태에서, 치료 양생법은 치료제의 투여 전에 제II형 항-CD20 항체 (및 임의적으로 전술된 전약물) 이외에 면역 억제제의 투여를 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 치료 양생법은 치료제의 투여 전에 메토트렉세이트, 아자티오프린, 6-머캅토푸린, 레플루노미드, 사이클로스포린, 타크롤리무스/FK506, 미코페놀레이트 모페틸 및 미코페놀레이트 나트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된 제제의 투여를 포함하지 않는다. 한 실시양태에서, 치료 양생법은 치료제의 투여 전에 제II형 항-CD20 항체에 더하여 추가적 항체의 투여를 포함하지 않는다.
치료제의 투여
치료제는 비경구, 폐내 및 비강내 투여, 및 필요한 경우 국소 치료를 위해 병소내 투여를 포함하는 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 본 발명의 방법은 비경구, 특히 정맥내, 주입에 의해 투여된 치료제와 관련하여 특히 유용하다.
비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는, 부분적으로 투여가 잠시 동안 이루어지거나 만성적으로 이루어지는지에 따라 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의해 수행될 수 있다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여, 및 펄스 주입을 포함하는 다양한 투여 일정이 본원에서 고려된다. 한 실시양태에서, 치료제는 비경구로, 특히 정맥내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 정맥내 주입에 의해 투여된다.
치료제는 타당한 의료 행위와 일치하는 방법에 의해 제형화되고 투여되고 투약될 수 있다. 이러한 맥락에서 고려 인자는 치료할 장애, 치료 받을 특정 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정 및 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 치료제는 당해 장애를 예방하거나 치료하는 데 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 함께 제형화될 필요는 없으나 임의적으로 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제형에 존재하는 치료제의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기에 논의된 다른 인자에 좌우된다. 이는 일반적으로 동일한 투여량으로 상기에 기재된 투여 경로로, 또는 상기에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%, 또는 실증적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량으로 임의의 투여 경로로 사용된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, (단독으로 또는 하나 이상의 다른 추가적 치료제와 조합으로 사용될 때) 치료제의 적절한 투여량은 치료할 질병의 유형, 치료제의 유형, 질병의 심각도 및 추이, 치료제가 예방적 목적으로 투여되거나 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 환자의 병력 및 치료제에 대한 반응 및 담당의의 재량에 좌우될 것이다. 치료제는 적합하게 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. 질병의 유형 및 심각도에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg(예를 들어 0.1 내지 10 mg/kg)의 치료제는 1회 이상의의 개별 투여에 의해 또는 연속 주입에 의해 개체에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 일일 투여량은 전술된 인자에 따라 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 이상 범위일 수 있다. 며칠 이상의 반복된 투여를 위해, 상태에 따라, 치료는 일반적으로 목적하는 질병 증상의 억제가 발생할 때까지 지속될 수 있다. 치료제의 하나의 예시적 투여량은 약 0.05 내지 약 10 mg/kg 범위일 수 있다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg(또는 임의의 이들의 조합)의 1회 이상의 투여량이 개체에게 투여될 수 있다. 이러한 투여량은 간헐적으로, 예를 들어 1주일 마다, 2주일 마다 또는 3주일 마다 투여될 수 있다(예를 들어 개체는 약 2 내지 약 20회, 예를 들어 약 6회 투여량의 치료제를 제공받는다). 높은 초기 로딩 투여량 후에 1회 이상의 낮은 투여량, 또는 낮은 초기 투여량 후에 1회 이상의 높은 투여량이 투여될 수 있다. 예시적 투여 양생법은 치료제의 약 10 mg의 초기 투여량 후에, 약 20 mg의 치료제의 1주일에 2회 투여량 투여를 포함한다. 그러나, 다른 투여량 양생법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상적 기술 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.
한 실시양태에서, 치료제의 투여는 단일 투여이다. 특정 실시양태에서, 치료제의 투여는 2회 이상의 투여이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 치료제는 1주일 마다, 2주일 마다 또는 3주일 마다, 특히 2주일 마다 투여된다. 한 실시양태에서, 치료제는 치료적 유효량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 치료제는 약 50 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 200 μg/kg, 약 300 μg/kg, 약 400 μg/kg, 약 500 μg/kg, 약 600 μg/kg, 약 700 μg/kg, 약 800 μg/kg, 약 900 μg/kg 또는 약 1000 μg/kg의 투여량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 치료제는 제II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 양생법의 치료제의 투여량보다 높은 양의 투여량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 치료제의 투여는 치료제의 제1 투여량의 초기 투여, 및 치료제의 제2 투여량의 1회 이상의 후속 투여를 포함하되, 상기 제2 투여량은 상기 제1 투여량보다 높다. 한 실시양태에서, 치료제의 치료제의 제1 투여량의 초기 투여, 및 치료제의 제2 투여량의 1회 이상의 후속 투여를 포함하되, 상기 제1 투여량은 상기 제2 투여량보다 낮지 않다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 치료 양생법에서 치료제의 투여는 개체에게 상기 치료제의 제1 투여이다(적어도 동일한 치료 과정 내에 있음). 한 실시양태에서, 제II형 항-CD20 항체의 투여 전에 개체에게 치료제의 투여가 수행되지 않는다.
본 발명에서, 치료제는 단독으로 또는 요법의 다른 치료제와 조합으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 치료제는 하나 이상의 추가적 치료제과 공동-투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가적 치료제는 면역 요법제이다.
상기에 언급된 이러한 병용 요법은 조합된 투여(여기서 2개 이상의 치료제가 동일하거나 별개의 제형에 포함된다) 및 별개의 투여(치료제의 투여가 추가적 치료제의 투여 전에, 동시에 및/또는 후에 발생할 수 있다)를 포괄한다. 한 실시양태에서, 치료제의 투여 및 추가적 치료제의 투여는 서로 약 1개월 이내에, 약 1, 2 또는 3주 이내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 이내에 발생한다.
제조 물품
본 발명의 또 다른 양태에서, 질병의 치료, 예방 및/또는 진단을 위하거나 본원에 기재된 바와 같이 시토카인 방출의 감소를 위해 유용한 물질을 함유하는 제조 물품, 예를 들어 키트가 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 상기 용기 상의 또는 상기 용기에 결합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 조성물을 단독으로, 또는 질환의 치료, 예방 및/또는 진단에 효과적인 또 다른 조성물과 조합된 조성물을 함유하거나, 시토카인 방출에 효과적인 조성물을 함유하고, 멸균 접근 포트(예를 들어 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다)를 가질 수 있다. 조성물의 하나 이상의 활성 제제는 본원에 기재된 제II형 항-CD20 항체 또는 치료제이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택된 질환의 치료를 위해 및/또는 시토카인 방출을 감소시키기 위해 사용됨을 나타낸다. 또한, 제조 물품은 (a) 내부에 함유된 조성물을 갖는 제1 용기(여기서, 상기 조성물은 본원에 기재된 제II형 항-CD20 항체를 포함한다); 및 (b) 내부에 조성물을 갖는 제2 용기(여기서 상기 조성물은 본원에 기재된 치료제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 본 발명의 실시양태에서, 제조 물품은 조성물이 특정 질환을 치료하고/하거나 시토카인 방출을 감소시키는 데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 주사용 정균수(BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 상업 또는 사용자 관점으로부터 바람직한 기타 물질(기타 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함함)을 추가로 포함할 수 있다.
용어 "PD-1 결합 길항제"는 PD-L1과 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1, B7-1) 중 어느 하나의 상호작용으로부터 야기된 신호 전달을 감소시키거나 차단하거나 억제하거나 없애거나 간섭하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1이 이의 결합 파트너에 결합하는 것을 억제하는 분자이다. 구체적 양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1 및/또는 B7-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역 접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 기타 분자를 포함하되, 이는 PD-L1과 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1, B7-1) 중 어느 하나의 상호작용으로부터 야기된 신호를 감소시키거나 차단하거나 억제하거나 없애거나 간섭한다. 한 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 기능이상 T 세포를 덜 기능이상적이도록 만들기 위해(예를 들어 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증대시킴) PD-L1을 통해 신호 전달을 매개하는 T 림프구 상에 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공자극 신호를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 YW243.55.S70이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MDX-1105이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MPDL3280A(아테졸리주맙)이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MDX-1105이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 YW243.55.S70이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MEDI4736(더발루맙(durvalumab))이다. 또 다른 구체적 양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 기재된 MSB0010718C(아벨루맙(avelumab))이다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 리간드 결합 파트너에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1 및 PD-L2 둘 다에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MDX 1106(니볼루맙(nivolumab)), MK-3475(펨브롤리주맙(pembrolizumab)), CT-011(피딜리주맙(pidilizumab)), MEDI-0680(AMP-514), PDR001, REGN2810 및 BGB-108로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 B7-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1 및 B7-1 둘 다에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 MPDL3280A(아테졸리주맙), YW243.55.S70, MDX-1105, MEDI4736(더발루맙) 및 MSB0010718C(아벨루맙)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 MPDL3280A(아테졸리주맙)이다. 일부 실시양태에서, MPDL3280A는 약 800 내지 약 1500 mg의 투여량으로 3주일 마다 투여된다(예를 들어 3주일 마다 약 1000 내지 약 1300 mg, 예를 들어 3주일 마다 약 1100 내지 약 1200 mg). 일부 실시양태에서, MPDL3280A는 약 1200 mg의 투여량으로 3주일 마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 서열번호 107의 HVR-H1 서열, 서열번호 108의 HVR-H2 서열 및 서열번호 109의 HVR-H3 서열을 포함하는 중쇄; 및/또는 서열번호 110의 HVR-L1 서열, 서열번호 111의 HVR-L2 서열 및 서열번호 112의 HVR-L3 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 서열번호 113 또는 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 본원에 참고로 포함된 WO 2010/077634 및 US 8,217,149에 기재된 항체 YW243.55.S70의 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 항체 YW24355.S70의 3개의 경쇄 HVR 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 항체 YW243.55.S70의 중쇄 가변 영역 서열 및/또는 항체 YW24355.S70의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-L2 결합 길항제이다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 면역 접합체이다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 항체(예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체)이고, 글리코실화 부위 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 글리코실화 부위 돌연변이는 치환 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, 치환 돌연변이는 아미노산 잔기 N297, L234, L235 및/또는 D265(EU 넘버링)에 존재한다. 일부 실시양태에서, 치환 돌연변이는 N297G, N297A, L234A, L235A 및 D265A로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 치환 돌연변이는 D265A 돌연변이 및 N297G 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, 글리코실화 부위 돌연변이는 항체의 효과기 기능을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제(예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L2 항체)는 EU 넘버링에 따라 위치 297에서 Asn에서 Ala로의 치환을 갖는 인간 IgG1이다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는 PD-L2와 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1) 중 어느 하나의 상호작용으로부터 약기된 신호 전달을 감소시키거나 차단하거나 억제하거나 없애거나 간섭하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 하나 이상의 PD-L2의 결합 파트너에 대한 PD-L2의 결합을 억제하는 분자이다. 구체적 양태에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L2 길항제는 항-PD-L2 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역 접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 기타 분자를 포함하고, 이는 PD-L2와 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1) 중 어느 하나의 상호작용으로부터 야기된 신호 전달을 감소시키거나 차단하거나 억제하거나 제거하거나 간섭한다. 한 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 기능이상 T 세포을 덜 기능이상적이도록 만들기 위해(예를 들어 항원 인식에 대한 효과기 반응을 증대시킴) PD-L2를 통해 신호 전달을 매개하는 T 림프구 상에 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공자극 신호를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 면역 접합체이다.
본 발명의 추가적 양태
본 발명의 추가적 실시양태에서, 병용 치료는 적어도 항-CD20 항체의 제1 투여 및 적어도 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 투여를 포함하되, 적어도 제1 투여 및 적어도 제2 투여 사이의 기간은 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수의 감소를 위해 불충분하다.
추가적 실시양태에서, 병용 치료는 면역 접합체, 바람직하게는 불변 영역(예를 들어 면역 글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역 접합체, 보다 바람직하게는 항-PD-L1 항체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105 및 MEDI4736으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 항체 YW243.55.S70은 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-L1 항체이다. MDX-1105(BMS-936559로도 공지됨)는 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 항체이다. MEDI4736은 WO2011/066389 및 US 2013/034559에 기재된 항-PDL1 단클론 항체이다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다.
실시양태
하기에, 본 발명의 일부 실시양태가 나열된다.
1. (i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 양생법을 포함하는 개체에서 질병의 치료 방법으로서,
상기 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 방법.
2. 치료 양생법이, 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여, 치료제의 투여와 관련된 개체에서 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 실시양태 1의 방법.
3. 제II형 항-CD20 항체를 치료제의 투여 전에 개체에게 투여함을 포함하는, 개체에서 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키는 방법.
4. 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 실시양태 3의 방법.
5. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
6. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
7. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체인, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
8. 제II형 항-CD20 항체가 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작된, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
9. 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않는, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
10. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
11. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
12. 항체가 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 실시양태 11의 방법.
13. 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 11 또는 12의 방법.
14. 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 11 내지 13 중 어느 하나의 방법.
15. 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 실시양태 11 내지 14 중 어느 하나의 방법.
16. 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 15의 방법.
17. 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 15 또는 16의 방법.
18. 항체가 (i) 실시양태 12 내지 14 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 실시양태 15 내지 17 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
19. 치료제가 CD20XCD3 bsAB를 포함하는, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
20. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 실시양태 1 내지 10 중 어느 하나의 방법.
21. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 이전 실시양태 중 어느 하나의 방법.
22. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체로서, 상기 방법은
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 양생법을 포함하고,
상기 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 위한 제II형 항-CD20 항체.
23. 치료 양생법이 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 투여와 관련된 개체에서 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 실시양태 22의 제II형 항-CD20 항체.
24. 치료제를 투여하기 전에 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
25. 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 제II형 항-CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 실시양태 24의 제II형 항-CD20 항체.
26. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 22 내지 25 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
27. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 22 내지 26 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
28. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체인, 실시양태 22 내지 27 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
29. 제II형 항-CD20 항체가 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작된, 실시양태 22 내지 28 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
30. 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않은, 실시양태 22 내지 29 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
31. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 실시양태 22 내지 30 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
32. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 실시양태 22 내지 31 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
33. 치료제에 포함된 항체가 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 실시양태 32의 제II형 항-CD20 항체.
34. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 32 또는 33의 제II형 항-CD20 항체.
35. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 32 내지 34 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
36. 치료제에 포함된 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 실시양태 32 내지 35 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
37. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 36의 제II형 항-CD20 항체.
38. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 36 또는 37의 제II형 항-CD20 항체.
39. 치료제에 포함된 항체가 (i) 실시양태 33 내지 35 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 실시양태 36 내지 38 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 실시양태 22 내지 38 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
40. 치료제가 CD20XCD3 bsAB를 포함하는, 실시양태 22 내지 39 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
41. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 실시양태 22 내지 31 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
42. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 실시양태 22 내지 41 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
43. 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출의 감소를 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체의 용도로서, 상기 약제는
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 양생법에서 사용하기 위한 것이고,
상기 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 용도.
44. 개체에서 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서 T 세포 활성화 치료제의 용도로서, 상기 치료가
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 양생법을 포함하고,
상기 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 용도.
45. 치료 양생법이 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 실시양태 43 또는 44의 용도.
46. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 43 내지 45 중 어느 하나의 용도.
47. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 43 내지 46 중 어느 하나의 용도.
48. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체인, 실시양태 43 내지 47 중 어느 하나의 용도.
49. 제II형 항-CD20 항체가 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작되는, 실시양태 43 내지 48 중 어느 하나의 용도.
50. 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않은, 실시양태 43 내지 49 중 어느 하나의 용도.
51. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 실시양태 43 내지 50 중 어느 하나의 용도.
52. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 실시양태 43 내지 51 중 어느 하나의 용도.
53. 항체가 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 실시양태 51의 용도.
54. 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 52 또는 53의 용도.
55. 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 52 내지 54 중 어느 하나의 용도.
56. 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 실시양태 52 내지 55 중 어느 하나의 용도.
57. 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 56의 용도.
58. 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 56 또는 57의 용도.
59. 항체가 (i) 실시양태 53 내지 55 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 실시양태 56 내지 58 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 실시양태 43 내지 58 중 어느 하나의 용도.
60. 치료제가 CD20XCD3 bsAB를 포함하는, 실시양태 43 내지 59 중 어느 하나의 용도.
61. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 실시양태 43 내지 51 중 어느 하나의 용도.
62. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 실시양태 43 내지 61 중 어느 하나의 용도.
63. 제II형 항-CD20 항체 조성물, 및 하기를 포함하는 치료 양생법에서 상기 제II형 항-CD20 항체 조성물의 사용에 대한 지시서를 포함하는 패키지를 포함하는, 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출의 감소를 위한 키트:
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체 조성물을 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체 조성물의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
64. T 세포 활성화 치료제 조성물을 추가로 포함하는 실시양태 63의 키트.
65. T 세포 활성화 치료제 조성물, 및 하기를 포함하는 치료 양생법에서 상기 치료제 조성물의 사용에 대한 지시서를 포함하는 패키지를 포함하는, 개체에서 질병의 치료를 위한 키트:
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제 조성물의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
66. 제II형 항-CD20 항체 조성물을 추가로 포함하는 실시양태 65의 키트.
67. 치료 양생법이 제II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 개체에서 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 실시양태 63 내지 66 중 어느 하나의 키트.
68. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 63 내지 67 중 어느 하나의 키트.
69. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 63 내지 68 중 어느 하나의 키트.
70. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체인, 실시양태 63 내지 69 중 어느 하나의 키트.
71. 제II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작되는, 실시양태 63 내지 70 중 어느 하나의 키트.
72. 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않는, 실시양태 63 내지 71 중 어느 하나의 키트.
73. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 실시양태 63 내지 72 중 어느 하나의 키트.
74. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 실시양태 63 내지 73 중 어느 하나의 키트.
75. 항체가 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 실시양태 74의 키트.
76. 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 74 또는 75의 키트.
77. 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 74 내지 76 중 어느 하나의 키트.
78. 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 실시양태 74 내지 77 중 어느 하나의 키트.
79. 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 78의 키트.
80. 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 78 또는 79의 키트.
81. 항체가 (i) 실시양태 75 내지 77 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 실시양태 78 내지 80 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 실시양태 78 내지 80 중 어느 하나의 키트.
82. 치료제가 CD20XCD3 bsAB를 포함하는, 실시양태 63 내지 81 중 어느 하나의 키트.
83. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 실시양태 63 내지 73 중 어느 하나의 키트.
84. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애, 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 실시양태 63 내지 83 중 어느 하나의 키트.
85. 개체에서 질병을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 T 세포 활성화 치료제로서, 상기 방법은 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함한다:
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
86. 치료 양생법이 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 투여와 관련된 개체에서 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 실시양태 85의 T 세포 활성화 치료제.
87. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 85 또는 86의 T 세포 활성화 치료제.
88. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 85 내지 87 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
89. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체인, 실시양태 85 내지 88 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
90. 제II형 항-CD20 항체가 조작되지 않은 항체와 비교하여 Fc 영역에 증가된 비율의 푸코실화되지 않은 올리고사카라이드를 갖도록 조작되는, 실시양태 85 내지 89 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
91. 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않는, 실시양태 85 내지 90 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
92. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 실시양태 85 내지 91 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
93. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 실시양태 85 내지 92 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
94. 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 실시양태 93의 T 세포 활성화 치료제.
95. 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 93 또는 94의 T 세포 활성화 치료제.
96. 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 93 내지 95 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
97. 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 실시양태 93 내지 96 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
98. 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 실시양태 97의 T 세포 활성화 치료제.
99. 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 실시양태 97 또는 98의 T 세포 활성화 치료제.
100. 항체가 (i) 실시양태 94 내지 96 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 실시양태 97 내지 99 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 실시양태 85 내지 99 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
101. 치료제가 CD20XCD3 bsAB를 포함하는, 실시양태 85 내지 100 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
102. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 실시양태 85 내지 92 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
103. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포, 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 실시양태 85 내지 102 중 어느 하나의 T 세포 활성화 치료제.
하기에 본 발명의 추가적 양태가 제공된다.
I. 개체에서 질병을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체로서, 상기 방법이 하기를 포함하는 치료 양생법을 포함하는, 제II형 항-CD20 항체:
(i) 개체에게 제II형 항-CD20 항체의 투여함, 및
소정의 기간 후에 잇달아 (ii) 상기 개체에게 T 세포 활성화 치료제를 투여함(여기서, 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간은 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다).
II. 치료 양생법이 제II형 항-CD20 항체의 투여 없는 상응하는 치료 양생법과 비교하여 치료제의 투여와 관련된 개체에서 시토카인 방출을 효과적으로 감소시키는, 양태 I의 제II형 항-CD20 항체.
III. 치료제를 투여하기 전에 개체에게 제II형 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 T 세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 시토카인 방출을 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
IV. 제II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 CD20 항체의 투여에 대한 반응으로 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분한, 양태 III의 제II형 항-CD20 항체.
V. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 양태 I 내지 IV 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
VI. 제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 양태 I 내지 V 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
VII. 제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이고, 제II형 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않는, 양태 I 내지 VI 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
VIII. 제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 양태 I 내지 VII 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
IX. 치료제가 항체, 특히 다중특이적 항체를 포함하는, 양태 I 내지 XIII 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
X. 치료제에 포함된 항체가 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(4-1BB로도 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM 및 CD127로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는, 양태 IX의 제II형 항-CD20 항체.
XI. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 12의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 13의 HCDR2 및 서열번호 14의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 15의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 16의 LCDR2 및 서열번호 17의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 양태 IX 또는 X의 제II형 항-CD20 항체.
XII. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 19의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 양태 IX 내지 XI 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
XIII. 치료제에 포함된 항체가 B 세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합하는, 양태 IX 내지 XII 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
XIV. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 양태 XIII의 제II형 항-CD20 항체.
XV. 치료제에 포함된 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 양태 XIII 또는 IV의 제II형 항-CD20 항체.
XVI. 치료제에 포함된 항체가 (i) 청구항 10 내지 12 중 어느 하나에 정의된 항체 및 (ii) 양태 XIII 내지 XV 중 어느 하나에 정의된 항체를 포함하는 이중특이적 항체인, 양태 I 내지 XV 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
XVII. 치료제가 키메라 항원 수용체(CAR), 특히 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는, 양태 I 내지 VIII 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
XVIII. 질병이 B 세포 증식성 장애, 특히 CD20-양성 B 세포 장애, 및/또는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 소포성 림프종(FL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어진 군으로부터 선택된 질병인, 양태 I 내지 XVII 중 어느 하나의 제II형 항-CD20 항체.
실시예
본 발명의 방법 및 조성물의 실시예가 하기에 제공된다. 상기에 제공된 일반적 설명을 고려하여 다양한 다른 실시양태가 실행될 수 있음이 이해된다.
실시예 1
완전히 인간화된 마우스에서 CD20XCD3 bsAB ± 오비누투주맙 예비 치료(Gpt)에 의해 매개된 항종양 활성 및 시토카인 방출의 평가
Gpt가 완전히 인간화된 NOG 마우스에서 CD20XCD3 bsAB의 제1 투여와 관련된 시토카인 방출을 방지할 수 있는지를 조사하였다.
모든 처리 옵션(오비누투주맙, CD20XCD3 bsAB, 및 Gpt + CD20XCD3 bsAB)은 제1 요법 투여 24시간 후에 검출된 효율적인 말초혈 B 세포 고갈을 야기하였다(도 1A). T 세포수는 CD20XCD3 bsAB의 제1 투여 24시간 후에 말초혈에서 일시적 감소를 나타냈으나, 오비누투주맙 또는 Gpt + CD20XCD3 bsAB 후에는 나타나지 않았다(도 1B). 따라서, CD20XCD3 bsAB 전에 투여될 때, 오비누투주맙의 단일 투여는 말초혈에서 CD20XCD3 bsAB-매개된 T 세포 감소를 없앴다.
상이한 실험군으로 처리된 마우스의 혈액에 방출된 시토카인의 분석은, CD20XCD3 bsAB 처리가, 제1 투여 24시간 후에 피크 및 72시간까지 기선 수준에 가까운 복귀와 함께, 혈액에서 여러 시토카인의 일시적 상승을 유발하였음을 나타냈다(도 2). MIP-1b, IL-5, IL-10, MCP-1은 IFNγ, TNFα 및 IL-6과 유사한 경향을 나타냈다(도시되지 않음). Gpt는 제1 CD20XCD3 bsAB 주사와 관련된 말초혈에서 시토카인 방출을 강하게 감소시켰다(표 2).
CD20XCD3 bsAB, 및 Gpt + CD20XCD3 bsAB 처리시 완전히 인간화된 NOG 마우스의 말초혈에 방출된 시토카인
처리
시토카인 비히클
(pg/ml)		 CD20XCD3 bsAB
(pg/ml)		 Gpt + CD20XCD3 bsAB
(pg/ml)
IFN-g 18.50 (18.07) 756.95 (357.30) 183.134 (171.91)
TNF-a 12.47 (2.95) 79.56 (28.98) 14.89 (2.56)
IL-6 15.39 (7.15) 613.27 (140.60) 178.34 (117.85)
IL-8 11.44 (2.64) 292.68 (132.36) 150.58 (96.76)
MIP-1b 272.70 (97.05) 2129.44 (132.36) 338.95 (71.25)
MCP-1 73.49 (13.89) 2146.31 (672.69) 393.29 (188.86)
IL-10 223.48 (62.48) 15,278.89 (6584.50) 945.04 (604.89)
IL-4 0.75 (0.14) 1.99 (0.77) 0.81 (0.02)
G-CSF 14.60 (5.14) 21.23 (16.36) 3.82 (2.02)
GM-CSF 945.97 (155.74) 1207.48 (299.83) 626.18 (282.46)
IL-5 10.42 (3.35) 162.33 (140.82) 13.58 (8.44)
IL-2 19.1 (8.42) 369.70 (360.64) 19.59 (17.64)
IL-13 5.39 (3.66) 15.42 (11.18) 2.96 (1.11)
IL-1b 1.48 (0.2) 6.40 (1.94) 3.47 (1.88)
IL-7 6.98 (0) 4.27 (2.55) 6.17 (1.79)
IL-12p40 43.59 (19.45) 51.31 (23.12) 17.05 (2.62)
IL-17 194.40 (96.32) 274.79 (112.20) 73.33 (32.43)
주의: 데이터를 산술 평균(SD)으로 나타냈다. N　=　5(둘 모두의 처리에서).
CD20XCD3 bsAB의 항종양 활성은 오비누투주맙을 사용한 예비 치료에 의해 영향 받지 않았다(도 3). 단일 요법으로서 오비누투주맙 처리는, 본 종양 및 마우스 모델에서 CD20XCD3 bsAB와 비교하여 느린 동력학을 가지나, 강한 항종양 활성을 나타냈다.
따라서, 데이터는, Gpt가 제1 CD20XCD3 bsAB 주사와 관련된 시토카인 방출을 감소시키나, 종양 세포 상의 동일한 항원을 표적화시킴에도 불구하고, CD20XCD3 bsAB의 항종양 활성은 Gpt에 의해 영향 받지 않았음을 시사한다.
실시예 2
시노몰구스 원숭이에서 오비누투주맙 예비 치료 연구
수컷 시노몰구스 원숭이에서 기계론 연구(비-GLP)를 수행하여 0.1, 0.3 및 1 mg/kg의 투여량에서 CD20XCD3 bsAB에 대한 오비누투주맙을 사용한 예비 치료를 평가하였다(표 3). 본 연구에서, 6마리의 수컷 나이브 시노몰구스 원숭이/군(군 1의 경우 4마리)에게 대조군 물품 1(군 1 및 2) 또는 오비누투주맙(50 mg/kg, 군 3, 4, 5)의 IV 투여량을 제공하고, 4일 후에 대조군 물품 2(군 1), CD20XCD3 bsAB, 0.1 mg/kg(군 2, 군 3), CD20XCD3 bsAB, 0.3 mg/kg(군 4) 또는 CD20XCD3 bsAB, 1 mg/kg(군 5)의 제공이 뒤따랐다. 오비누투주맙과 CD20XCD3 bsAB 투여 사이에 4일이, 오비누투주맙에 의해 말초혈, 림프절 및 비장에서의 B 세포를 고갈시키는 데 충분한 것으로 간주되었다. 제12일에, 군 1의 2마리의 동물, 군 2 내지 4의 4마리의 동물을 부검하였다(종말 부검). 각각의 군의 2마리의 동물을 8-주의 회복 기간 동안 유지시켰다.
연구 설계: 시노몰구스 원숭이에서 오비누투주맙 예비 치료
군 번호 시험 물품 투여 일 투여량 수준 (mg/kg) 수컷의 수
주요a 회복b
1 대조군 물품 1 1 0 2 2
대조군 물품　 2 5 0
2 대조군 물품　1 1 0 4 2
CD20XCD3 bsAB 5 0.1
3 오비누투주맙 1 50 4 2
CD20XCD3 bsAB 5 0.1
4 오비누투주맙 1 50 4 2
CD20XCD3 bsAB 5 0.3
5 오비누투주맙 1 50 4 2
CD20XCD3 bsAB 5 1
주의: 대조군 물품 1　=　오비누투주맙에 대한 대조군: 대조군 물품 2　= CD20XCD3 bsAB에 대한 대조군.
a 주요 군 동물, 제12일 종말 부검.
b 회복 동물, 제8주 부검.
하기 예비 데이터가 현재 진행 중인 본 연구로부터 입수가능하다:
· 오비누투주맙(50 mg/kg, Gpt)을 사용한 예비 치료 후에, CD20XCD3 bsAB의 IV 투여가 1 mg/kg(시험된 최고 투여량)까지 용인되었다. CD20XCD3 bsAB를 단독으로 사용하여 관찰된 임상적 신호(구토, 구부린 자세 및 과소 활성)가 CD20XCD3 bsAB의 모든 투여량에서 Gpt에 의해 현저하게 감소되었다.
· CD20XCD3 bsAB 단독 투여는 B 림프구의 감소, 및 T 림프구(CD4+ 및 CD8+) 서브세트 및 NK 세포의 활성화 및 확장을 야기하였다. 또한, CD20XCD3 bsAB 투여 전에 오비누투주맙의 투여는, CD20XCD3 bsAB 단독으로 처리된 동물에 대해 제시되는 변화에 비해, B 림프구 고갈, T 림프구 활성화의 후속 감쇠(CD20XCD3 bsAB 투여 후 림프구 및 단핵구 집단의 일시적 감소에 의해 입증됨), 및 T 세포 활성화 마커 상향 조절 및 확장의 감소를 야기하였다.
· IFNγ, IL-8, TNFα, IL-2 및 IL-6의 방출(4-시간 후, 0.1 mg/kg CD20XCD3 bsAB 처리)은 Gpt 군에서 현저하게 감소하였다. 유사하게, 낮은 수준의 시토카인 방출이 Gpt 군에서 높은 투여량의 CD20XCD3 bsAB에서 기록되었다.
CD20XCD3 bsAB-관련된 병리조직학적 결론은 림프 기관에 제한된다(예를 들어 CD20-양성 세포에 특이적으로 영향을 미치는 감소된 세포질이 비장의 림프 여포에 존재한다). CD20-양성 세포 감소는 8주 무-처리 기간 후에 거의 완전히 역전되었다. CD20XCD3 bsAB로 0.1 mg/kg으로 처리된 원숭이 및 Gpt 후에 CD20XCD3 bsAB로 0.1, 0.3 또는 1 mg/kg으로 투여된 동물의 뇌, 척수 및 좌골 신경을 포함하여 다른 병리조직학적 변화는 존재하지 않았다.
실시예 3
r/r NHL 환자에서 CD20XCD3 bsAB와 오비누투주맙 예비 치료의 안전성, 관용성 및 약동학의 임상적 평가
제I상 투여량-단계적 확대 연구를 수행할 것이고, 이의 일차 목적은 재발성/난치성(r/r) NHL 환자에서 CD20XCD3 bsAB와 오비누투주맙 예비 치료의 안전성, 관용성 및 약동학의 평가를 포함한다.
본 연구에 r/r NHL 환자가 등록할 것이고, 이의 종양은 B 세포에서 CD20을 발현할 것으로 예상된다. CLL 환자는 등록하지 않을 것이다. 환자는 1회 이상의 예비 치료 양생법 후에 재발했거나 반응하지 않았을 것으로 예상된다.
오비누투주맙 및 CD20XCD3 bsAB를 정맥내로(IV) 투여할 것이다.
오비누투주맙 및 CD20XCD3 bsAB의 투여 전에, 코르티코스테로이드를 갖는 전약물을(예를 들어 100 mg IV 프레드니솔론 또는 등가물) 항-히스타민 및 아세트아미노펜과 함께 투여할 것이다. 또한, 다른 이벤트, 예컨대 종양 용해 증후군에 대한 예방 조치가 필요에 따라 권고되거나 명령될 것이다.
제1 CD20XCD3 bsAB 투여량(제1주기/제1일)보다 7일 앞서(제1주기/제-7일) 단일 투여량의 오비누투주맙(1000 mg; IV)을 사용한 예비 치료 후에, CD20XCD3 bsAB가 제1주기/제1일(C1/D1)에 단일 제제로서 정맥내(IV) 주입에 의해 개시될 것이다. CD20XCD3 bsAB의 예상된 출발 투여량은 5 μg일 것이다(고른 투여). 모든 투여 주기는 14일(Q2W) 길이이다. 투여 계획은, 제1주기의 제1일 및 제8일(C1/D1; C1/D8)에 CD20XCD3 bsAB 투여 후에, 처리의 총 12주기(24주) 동안 또는 허용되지 않는 독성 또는 진행이 발행할 때까지 모든 후속 주기의 제1일에(Q2W) 투여이다.
혈액 샘플을 적절한 시점에 수집하여 CD20XCD3 bsAB의 관련 PK 특성, 및 혈액에서 PD 마커 범위를 결정하고, 예를 들어 Gpt 및 CD20XCD3 bsAB 투여량 개시 후 B 세포 고갈의 규모 및 동력학, T 세포 표현형을 평가하고, 선택된 시점에서 Gpt 및 CD20XCD3 bsAB의 투여 후 가용성 매개자 방출(시토카인 및 케모카인)를 평가할 것이다.
실시예 4
CAR-T 세포를 사용한 입양 T 세포 요법 후에 시토카인 방출을 피하는 GAZYVA 예비 치료
시토카인 방출 증후군(CRS)은 CD19 CAR-T 세포 및 CD20 또는 CD22를 지향하는 CAR-T 세포를 사용한 처리 후 매우 흔한 현상이며, 이는 치명적인 부작용을 야기할 수 있다. CRS를 피하거나 감소시키는 전략은 CAR-T 요법의 다양한 양태에 초점을 맞춘다(문헌[Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178]에 리뷰되어 있음).
오비누투주맙 예비 치료를 사용하여 말초 및 악성 B 세포의 고갈에 의해 B 세포 증식성 장애에서 CAR-T 세포를 사용한 치료 후에 CRS를 피하는 새로운 접근법을 제안한다.
이를 위해, B 세포 증식성 장애(예를 들어 NHL) 환자를 오비누투주맙 예비 치료 아암 및 오비누투주맙 예비 치료 없는 대조군 아암으로 무작위 추출한다. 오비누투주맙 예비 치료 아암의 환자에게 CD19, CD20 또는 CD22 CAR-T 세포 투여 전에 제-7일(+/-2일)에 투여되는 1 g의 오비누투주맙을 제공한다.
환자에게, 사용된 특정 CAR-T 세포, 환자 및 치료할 질병에 적절한 투여량으로(예를 들어 문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]에 기재된 바와 같이 1 kg 체중 당 0.76×106 내지 20.6×106 CAR-T 세포; 문헌[Grupp et al., New Engl J Med (2013) 368, 1509-1518]에 기재된 바와 같이 1 kg 체중 당 1.4×106 내지 1.2×107 CAR-T 세포; 또는 문헌[Porter et al., Sci Transl Med (2015) 7, 303ra139]에 기재된 바와 같이 0.14 × 108 내지 11 × 108 CAR-T 세포) CAR 렌티 바이러스 벡터에 의해 형질도입된 자가 T 세포를 주입한다. 환자를 반응, 독성 효과, 및 순환성 CAR-T 세포의 확장 및 지속에 대해 모니터링하였다.
각각의 오비누투주맙 투여 전에 전약물이 제공된다. 혈액 샘플을 B 림프구 수 모니터링 동안 처리 기간 전에 및 동안에 수집한다. B 세포 수를 유세포 분석 및 CD19에 대한 염색을 사용하여 수득한다. 또한, CRS의 발생 정도를 IL-6을 포함하는 시토카인을 측정함으로써 스크리닝한다.
실시예 5
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙 또는 항-PD-L1 항체의 병용 치료
도 6은 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙의 병용 치료의 효능(도 6D) 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 항-PD-L1 항체의 병용 치료의 효능(도 6E)을 나타낸다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 2개의 단편 항원 결합(Fab) 도메인을 통해 종양 세포 상의 인간 CD20에, 및 단일 Fab 도메인을 통해 T 세포 상의 T 세포 수용체(TCR) 복합체의 인간 CD3 엡실론 서브유닛(CD3e)에 결합하는 "2:1" T 세포 이중특이적 인간화된 단클론 항체이다. 분자는 인간 IgG1 동형을 기반으로 하나, Fc 감마 수용체(FcγR) 및 보체(C1q) 결합이 없는 Fc-부분을 함유한다. 분자량은 약 194 kDa이다. 실시예 5에서, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체는 서열번호 116에 따른 중쇄, 서열번호 117에 따른 중쇄, 두 번 서열번호 118에 따른 경쇄 및 서열번호 119에 따른 경쇄를 포함한다.
항-PD-L1 항체는 WO 2010/077634에 기재된 YW243.55.S70 PD-L1 항체(WO 2010/077634의 도 11에 나타낸 서열)를 기반으로 한다. 이러한 항체는 FcγR 상호작용을 없애는 DAPG 돌연변이를 함유하였다. YW243.55.S70의 가변 영역은 DAPG Fc 돌연변이를 갖는 뮤린 IgG1 불변 도메인에 부착되었다. 실시예 5에 사용된 항-PD-L1 항체는 서열번호 120에 따른 중쇄 및 서열번호 121에 따른 경쇄를 포함한다.
오비누투주맙(GAZYVA; 도 6D) 또는 항-PD-L1 항체(도 6E)와 조합시 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 항종양 활성을 제0일에 피하 주사된 침습성 림프종 모델(WSU-DLCL2 종양)을 함유하는 인간 조혈 줄기 세포 인간화된 마우스(HSC-NSG 마우스)에서 분석하였다. 도 6A 내지 F에서 화살표로 표시된 바와 같이 종양 평균 부피가 600 mm3일 때 요법을 시작하였다. 600 mm3의 종양 평균 부피는 연구 제15일에 도달하였다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙의 병용 치료를 위해, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체를 1주일 당 1회 0.15 mg/kg의 차선으로 효과적인 투여량으로 정맥내로 투여하였다. 오비누투주맙을 1주일 당 1회 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다(도 6D). 2개의 파트너를 동시에 주사하였다.
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 항-PD-L1 항체의 병용 치료를 위해, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체를 1주일 당 1회 0.15 mg/kg의 차선으로 효과적인 투여량으로 정맥내로 투여하고, 항-PD-L1 항체를 1주일 당 1회 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다(도 6E). 2개의 파트너를 또한 동시에 주사하였다.
비히클 군의 동물에게 포스페이트 완충제 염수의 정맥내 주사를 매주 제공하였다(도 6A). 단일 요법 군에서, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체(도 6B)를 1주일 당 1회 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하고, 오비누투주맙(도 6C)을 1주일 당 1회 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하고, 항-PD-L1(도 6F) 항체를 1주일 당 1회 10 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 각각의 군은 10마리의 동물을 포함하였다. 단일 요법 군은 던네트(Dunnet) 방법을 사용시 표준화된 곡선 아래 면적(sAUC)의 원-웨이 ANOVA에 따라 서로간에 통계적으로 상이하지 않았다(표 4).
단일 요법 군의 생체내 데이터의 통계적 분석
연구군 비히클 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 오비누투주맙 항-PD-L1 항체
비히클 1.0000 0.2250 0.2038 0.3319
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 0.2250 1.0000 1.0000 0.9989
오비누투주맙 0.2038 1.0000 1.0000 0.9974
항-PD-L1 항체 0.3319 0.9989 0.9974 1.0000
상기에 나타낸 바와 같이 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 항-PD-L1 항체의 병용 치료는 연구 과정 동안 종양 평균 크기의 유의미한 감소를 나타낸다. 이는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체, 오비누투주맙 또는 항-PD-L1 항체의 개별적 치료와 비교하여 종양 평균 크기를 감소시키는 병용 치료의 우수한 잠재력을 시사한다.
실시예 5의 병용 치료와 관련된 상기 생체내 데이터를, 던네트 방법을 사용하여 sAUC의 원-웨이 ANOVA에 따라 통계적으로 분석하였다(표 5).
병용 치료의 생체내 데이터의 통계적 분석
항체 조합 비교되는 항체 또는 항체 조합 p-값
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 오비누투주맙 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 <0.0001
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 항-PD-L1 항체 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 0.0084
항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 항-PD-L1 항체 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 오비누투주맙 0.0007
시험된 조건에서, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙의 병용 치료는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 항-PD-L1 항체의 병용 치료와 비교하여 평균 종양 크기의 감소에 대해 보다 강한 효과를 나타냈다.
도 7은 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 오비누투주맙(도 7A 및 7B)의 병용 치료의 효능을 나타낸다. 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 구조에 관하여, 이는 실시예 5에 언급되어 있다. 오비누투주맙과 조합시 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체(여기서 RO7082859)의 항종양 활성을 침습성 림프종 모델(OCI-Ly18 종양)을 갖는 인간 조혈 줄기 세포 인간화된 마우스(HSC-NSG 마우스)에서 시험하였다. 상기 조합을 제0일에 피하로 주사하였다. 요법을 종양 평균 부피가 500 mm3(이는 연구 제14일에 도달하였다)일 때 시작하였다. 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체를 1주일에 1회 0.5 mg/kg의 투여량으로 정맥내로 투여하였다. 오비누투주맙을 1주일 당 1회 30 mg/kg으로 정맥내로 투여하였다. 조합의 2개의 파트너를 동시에 병용 요법 군에 주사하였다. 비히클 군의 동물에게 매주 포스페이트 완충제 염수(PBS)의 주사를 제공하였다. 각각의 군은 8마리의 동물을 포함하였다. 도 7A는 모든 군의 종양 성장 동력학을 평균 및 평균의 표준 오차(SEM)로 나타낸다. 도 7B는 각각의 처리군의 단일 마우스의 종양 성장 동력학을 나타낸다. 통계적 분석을 원-웨이 ANOVA에 의해 수행하였다. 개별적 군을 비교하였고, 도 7A에서 "*"는 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체 대 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체와 오비누투주맙의 조합을 나타내고, "**"는 오비누투주맙 대 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체와 오비누투주맙의 조합을 나타낸다.
2개의 항체를 여러 투여 주기 동안 함께 투여하였을 때 항-CD20/항-CD3-이중특이적 항체 및 오비누투주맙의 병용 가능성이 강한 항-종양 효능에 의해 예증되었다. 이들 조합의 상승효과는 2개의 상이한 DLBCL 모델(즉, WSU-DLCL2 및 OCI-Ly18)에서 관찰되었고 상응하는 단일 항체와 비교하여 모든 동물에서 및 둘 다의 종양 모델에서 신속한 종양 퇴화에 의해 증명되었다.
전술한 본 발명은 이해의 명확성을 위해 예시 및 예로서 다소 상세하게 설명되었지만, 설명 및 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전문이 참고로 명백하게 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> TYPE II ANTI-CD20 ANTIBODY AND ANTI-CD20/CD3 BISPECIFIC ANTIBODY FOR TREATMENT OF CANCER <130> PX <140> PCT/EP2018/064319 <141> 2018-05-31 <150> EP 17174320.6 <151> 2017-06-02 <160> 121 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 297 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro 1 5 10 15 Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg 20 25 30 Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile 50 55 60 Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile 65 70 75 80 Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile 85 90 95 Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu 100 105 110 Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile 115 120 125 Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser 130 135 140 His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn 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Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 355 360 365 Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 118 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 118 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg 115 120 125 Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 119 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 119 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val 115 120 125 Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 130 135 140 Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 145 150 155 160 Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 165 170 175 Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 180 185 190 Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 195 200 205 Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 210 215 220 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 120 <211> 442 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 120 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr 180 185 190 Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro 210 215 220 Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Ala Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp 260 265 270 Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser 305 310 315 320 Ala Ala Phe Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln 340 345 350 Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe 355 360 365 Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu 370 375 380 Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe 385 390 395 400 Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn 405 410 415 Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 420 425 430 Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 121 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 121 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 145 150 155 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210

Claims (63)

  1. 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체로서, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 조합으로 사용되는, 제II형 항-CD20 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체가 단일 조성물로 함께 투여되거나 2개 이상의 상이한 조성물로 별개로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체가 2개 이상의 상이한 조성물로 투여되되, 상기 2개 이상의 상이한 조성물이 상이한 시점에 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이고, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않은, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    오비누투주맙인 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 동시에, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 전에 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 후에 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    추가로 항-PD-L1 항체, 바람직하게는 아테졸리주맙이 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  10. 제9항에 있어서,
    항-PD-L1 항체가 별개로 투여되거나 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체 중 하나 이상과 조합으로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 CD3에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 CD20에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  12. 제11항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는 제1 항원 결합 도메인, 및 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 서열번호 97의 CDR-H1 서열, 서열번호 98의 CDR-H2 서열 및 서열번호 99의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3); 및/또는 서열번호 100의 CDR-L1 서열, 서열번호 101의 CDR-L2 서열 및 서열번호 102의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  14. 제11항 또는 제12항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및/또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20), 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  16. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  17. 제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 CD20에 결합하는 제3 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  18. 제17항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20); 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  20. 제11항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된 크로스-Fab 분자이고, 제2 및 존재하는 경우 제3 항원 결합 도메인이 통상적 Fab 분자인, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  21. 제20항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 IgG1 Fc 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  22. 제21항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인이 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인이 아미노산 치환 L234A, L235A 및 P329G(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 제3 항원 결합 도메인을 포함하되, (i) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합되거나, (ii) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    조합이 약 1주일 내지 3주일의 간격으로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 의한 예비 치료가 병용 치료 전에 수행되되, 예비 치료와 병용 치료 사이의 기간이 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 대한 반응으로 개체에서 B 세포를 감소시키기에 충분한, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체.
  27. 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 증식성 질병, 특히 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법으로서, 상기 제II형 항-CD20 항체 및 상기 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 단일 조성물로 또는 2개 이상의 조성물로 투여되는, 방법.
  28. 병용 치료에서 사용하기 위한 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제, 및 임의적으로 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 약학 조성물.
  29. 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제1 약제, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제, 및 임의적으로 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 키트.
  30. 제29항에 있어서,
    개체에서 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 제1 약제, 제2 약제 및 임의적으로 제3 약제의 사용에 대한 지시서를 포함하는 키트.
  31. 개체에서 치료적 적용례를 위한, 바람직하게는 증식성 질병, 특히 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 용도.
  32. 개체에서 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 제II형 항-CD20 항체의 용도로서, 상기 약제가 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하고, 상기 치료가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 조성물과 조합된 상기 약제의 투여를 포함하는, 용도.
  33. 개체에서 암의 치료 또는 이의 진행의 지연을 위한 약제의 제조에서 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 용도로서, 상기 약제가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하고, 상기 치료가 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 조성물과 조합된 상기 약제의 투여를 포함하는, 용도.
  34. 제II형 항-CD20 항체 및 항-CD20/항-CD3 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법.
  35. 제34항에 있어서,
    추가로 항-PD-L1 항체가 개체에게 투여되는, 방법.
  36. 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체로서, 제II형 항-CD20 항체와 조합으로 사용되는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  37. 제36항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체가 단일 조성물로 함께 투여되거나 2개 이상의 상이한 조성물로 별개로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체가 2개 이상의 상이한 조성물로 투여되되, 상기 2개 이상의 상이한 조성물이 상이한 시점에서 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  41. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이고, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역의 N-연결된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 푸코실화되지 않은, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 오비누투주맙인, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  43. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체가 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체와 동시에, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 전에 또는 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 후에 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  44. 제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    추가로 항-PD-L1 항체, 바람직하게는 아테졸리주맙이 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  45. 제44항에 있어서,
    항-PD-L1 항체가 별개로 투여되거나 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 제II형 항-CD20 항체 중 하나 이상과 조합으로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  46. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 CD3에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 CD20에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  47. 제46항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는 제1 항원 결합 도메인, 및 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  48. 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 서열번호 97의 CDR-H1 서열, 서열번호 98의 CDR-H2 서열 및 서열번호 99의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3); 및/또는 서열번호 100의 CDR-L1 서열, 서열번호 101의 CDR-L2 서열 및 서열번호 102의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  49. 제45항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD3) 및/또는 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD3)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  50. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20), 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  51. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  52. 제45항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 CD20에 결합하는 제3 항원 결합 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  53. 제52항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 서열번호 4의 CDR-H1 서열, 서열번호 5의 CDR-H2 서열 및 서열번호 6의 CDR-H3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20); 및/또는 서열번호 7의 CDR-L1 서열, 서열번호 8의 CDR-L2 서열 및 서열번호 9의 CDR-L3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  54. 제52항 또는 제53항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VHCD20) 및/또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VLCD20)을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  55. 제45항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된 크로스-Fab 분자이고, 제2 및 존재하는 경우 제3 항원 결합 도메인이 통상적 Fab 분자인, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  56. 제55항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 IgG1 Fc 도메인을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  57. 제56항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인이 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 IgG1 Fc 도메인이 아미노산 치환 L234A, L235A 및 P329G(카바트 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  59. 제56항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체가 제3 항원 결합 도메인을 포함하되,
    (i) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제1 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합되거나, (ii) 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제1 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 제2 항원 결합 도메인의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제2 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체의 제3 항원 결합 도메인이 Fab 중쇄의 C-말단에서 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  60. 제36항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    조합이 약 1주일 내지 3주일의 간격으로 투여되는, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  61. 제36항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
    제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 의한 예비 치료가 병용 치료 전에 수행되되, 예비 치료와 병용 치료 사이의 기간이 제II형 항-CD20 항체, 바람직하게는 오비누투주맙에 대한 반응으로 개체에서 B 세포를 감소시키기에 충분한, 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체.
  62. 병용 치료에서 사용하기 위한 항-CD20/항-CD3 이중특이적 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체, 제II형 항-CD20 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제2 약제, 및 임의적으로 항-PD-L1 항체 및 약학적으로 허용되는 임의적 담체를 포함하는 제3 약제를 포함하는, 질병, 특히 암의 병용 치료에서 사용하기 위한 약학 조성물.
  63. 상기에 기재된 바와 같은 발명.
KR1020197035371A 2017-06-02 2018-05-31 암의 치료를 위한 제ii형 항-cd20 항체 및 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체 KR20200014304A (ko)

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