TWI513465B

TWI513465B - 以ｄｌｌ４拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法

Info

Publication number: TWI513465B
Application number: TW099120547A
Authority: TW
Inventors: Irene Noguera-Troise; Gavin Thurston; Alain Thibault
Original assignee: Regeneron Pharma
Priority date: 2009-06-25
Filing date: 2010-06-24
Publication date: 2015-12-21
Also published as: IL216952A; JP2016006101A; TW201113036A; AU2010266004B2; UY32739A; JP6038650B2; PL2445528T3; HUE026356T2; BRPI1011818A2; AU2010266004A8; SG176791A1; KR20120102577A; MX2011013424A; US20100330106A1; WO2010151770A1; SMT201500315B; KR101750723B1; ES2556804T3; RS54477B1; EP2445528B1

Description

以DLL4拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法

本發明係關於以類戴爾他配體4(Dll4)拮抗劑，特別是人類抗體或其專一性結合人類Dll4之片段，合併一或多種化學治療劑以治療癌症或腫瘤之方法，以及包含一種Dll4拮抗劑與一種化學治療劑之醫藥組成物。

Dll4為納克配體(Notch ligand)之戴爾他(Delta)族的一員，其於血管內皮呈現高度選擇性表現(Shutter et al.,2000,Genes Develop. 14:1313-1318)，Dll4係納克受體(Notch receptors)，包括：納克1及納克4的一種配體，Dll4拮抗劑有用於抑制多種癌症之腫瘤生長，人類Dll4(hDll4)之核酸及胺基酸序列分別顯示於序列辨識碼編號1及2(SEQ ID NOS:1 and 2)，對人類Dll4專一之抗體及使用Dll4抗體之癌症/腫瘤治療係揭示於WO 2007/143689、WO 2008/042236及WO 2007/070671。

化學治療劑廣泛用於單獨及合併外科手術與/或放射治療以治療癌症，使用Dll4拮抗劑及化學治療劑之合併療法揭示於US 2008/0014196及US 2008/0107648。

第一方面，本發明特色為一種於有其需要之個體中治療癌症的方法，包括投與被治療癌症之個體一Dll4拮抗劑合併一化學治療劑，以本發明方法治療之該個體可包括任何哺乳類，但較佳為罹患癌症之人類。

本發明之合併療法特別有用於Dll4相關或Dll4媒介之症狀或疾病，其直接或間接受Dll4活性之調節作用影響，更特別是由於目前顯示Dll4涉及血管生長及發育，使用Dll4拮抗劑以抑制或降低Dll4媒介之血管生長或發育或成熟係為對其生長及存活需要充足血液供應之癌症/腫瘤的一種有效治療；此外，合併Dll4拮抗劑與化學治療劑，包括生長抑制劑及其他細胞毒性劑，可協同增加它們抗癌症/抗腫瘤效果，可為本發明之方法治療的癌症/腫瘤包括但不限於各種固態惡性腫瘤，包括卵巢癌、子宮癌、乳癌、肺癌、肝癌、大腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、胰臟癌、胃癌、骨癌、皮膚癌，包含：黑色素瘤、惡性軟組織肉瘤，包含但不限於艾文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、橫紋肌瘤、平滑肌瘤、脂肪細胞瘤、滑液膜瘤、惡性纖維組織細胞瘤、類上皮血管內皮瘤、血管肉瘤、纖維肉瘤及未分類肉瘤、白血病，包括骨髓瘤等。

於一具體實例中，Dll4拮抗劑係一Dll4抗體或其片段(“Dll4 Ab”)，其以高親和力專一性結合Dll4，並阻斷Dll4結合至納克受體，且/或中和Dll4活性，該抗體可為多株性、單株性、嵌合性、擬人化或一個完全的人類抗體，該抗體較佳是一完全人類單株抗體或單株抗體片段，該抗體片段可為單一鏈抗體，Fab或(Fab’)₂ 。

於另一具體實例中，該Dll4抗體結合Dll4(序列辨識碼編號2)之N-端功能域(S27-R172)或DSL功能域(V173-C217)或N-端DSL功能域(S27-C217)的一個抗原決定區，用於本發明方法之Dll4抗體可以高親和力結合人類Dll4，且其解離常數(K_D )以表面電漿子共振測量約500 pM或更少，包括約300 pM或更少及包括約200 pM或更少。舉例而言，Dll4抗體具有一包含三個重鏈CDRs(H-CDRs)之重鏈變異區(HCVR)及一包含三個輕鏈CDRs(L-CDRs)之輕鏈變異區(LCVR)，其中該三個重鏈CDRs包含胺基酸序列辨識碼編號20之CDR1、CDR2及CDR3，且該三個輕鏈CDRs包含胺基酸序列辨識碼編號28之CDR1、CDR2及CDR3。於另一具體實例中，Dll4抗體之重鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含序列辨識碼編號22、24及26之胺基酸序列；於另一具體實例中，Dll4抗體之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3分別包含序列辨識碼編號30、32及34之胺基酸序列；於再另一具體實例中，D114抗體包含含有序列辨識碼編號20或116之胺基酸序列的一個HCVR，或包含序列辨識碼編號28或118之胺基酸序列的一個LCVR；於再另一具體實例中，Dll4抗體包含一序列辨識碼編號20/28(REGN281)或116/118(REGN421)之HCVR/LCVR之組合。

於另一具體實例中，Dll4抗體包含一個重鏈CDR1/CDR2/CDR3組合及一個輕鏈CDR1/CDR2/CDR3組合，其選自：分別為序列辨識碼編號6/8/10及序列辨識碼編號14/16/18；分別為序列辨識碼編號38/40/42及序列辨識碼編號46/48/50；分別為序列辨識碼編號54/56/58及序列辨識碼編號62/64/66；分別為序列辨識碼編號70/72/74號及序列辨識碼編號78/80/82；分別為序列辨識碼編號86/88/90號及序列辨識碼編號94/96/98；分別為序列辨識碼編號102/104/106及序列辨識碼編號110/112/114。於另一具體實例中，Dll4抗體包含一個包含序列辨識碼編號4、36、52、68、84或110之胺基酸序列的HCVR，或一個包含序列辨識碼編號12、44、60、76、92或108之胺基酸序列的LCVR；於再另一具體實例中，Dll4抗體包含一HCVR/LCVR之組合，其選自序列辨識碼編號4/12(REGN279)、序列辨識碼編號36/44(REGN290)、序列辨識碼編號52/60(REGN306)、序列辨識碼編號68/76(REGN309)、序列辨識碼編號84/92(REGN310)及序列辨識碼編號100/108(REGN289)。

編碼序列辨識碼編號4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116及118號的胺基酸序列之核苷酸序列的序列辨識碼編號分別顯示為3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115及117。

於一具體實例中，該化學治療劑係一抗有絲分裂劑，如：歐洲紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)等；一以鉑為基礎之化學治療化合物，如：順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、異丙鉑(iproplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)…等，或其他習知細胞毒性劑，如：5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、卡培他濱(capecitabine)、伊立替康(irinotecan)、亞葉酸(leucovorin)、吉西他濱(gemcitabine)；酪胺酸激酶受體及/或血管生成之抑制劑，如：ErbB抑制劑、RTK第三型抑制劑、VEGFR抑制劑等，且該Dll4拮抗劑係上述之一種Dll4抗體或其片段。

第二方面，本發明特色為一種於有其需要之個體的減少、降低或終止腫瘤生長之方法，包括投與個體一Dll4拮抗劑合併一化學治療劑，使腫瘤生長被減少、降低或終止。

第三方面，相較於投與單獨每一藥劑，本發明特色為一種降低化學治療劑或Dll4拮抗劑之量以達成所欲療效之方法，其包含投與化學治療劑與Dll4拮抗劑。於一具體實例中，於共同投與Dll4拮抗劑存在下，達成所欲療效(例如：終止或降低腫瘤生長)之化學治療劑之量係至少小於10%、至少小於20%、至少小於30%、至少小於40%或至少小於50%，反之亦然；一般而言，化學治療劑或Dll4拮抗劑之量可降低約30%至50%為所欲的，因此，本發明之方法可藉由降低有效劑量而特別有利於對單獨一藥劑治療所需高劑量造成的副作用具低耐受性之癌症患者。

第四方面，本發明特色為一種包含一Dll4拮抗劑、一化學治療劑及一醫藥上可接受之載體的醫藥組成物；於一具體實例中，Dll4拮抗劑係為一Dll4抗體或其片段，其以高親和力專一性結合Dll4，並中和Dll4活性，化學治療劑係此處敘述之任一種。

第五方面，本發明特色為一種套組，其包含含有本發明醫藥組成物之容器，及一具使用說明書之仿單；於一具體實例中，一套組可包含一種其中包含抗體或其專一性結合人類Dll4之抗原結合片段之容器、一或多種其中包含至少一種選自此處敘述之任一化學治療劑之額外容器，及一具使用說明書之仿單。

其他目的及優點將由隨後詳細說明之檢視而成為明顯。

詳細說明

敘述本方法前，必須瞭解本發明係非限定於特定方法及所描述之實驗條件，因為該方法及條件可能有所不同；由於本發明之範圍將僅被附加申請專利範圍所限，亦必須瞭解此處使用之術語僅以描述特定具體實例為目的，而非意欲限制。

當使用於此說明書及該附加申請專利範圍，單數型式之“一(a)”、“一(an)”及“該(the)”包括複數關係，除非文意另有明確指示，因此，舉例而言，提及“一方法”包括一或多種方法，及/或此處所述類型之步驟，及/或其將對閱讀此明文資料後之精通本技術人士變為顯而易見。

除非另有規定，此處使用之技術及科學專有名詞與此發明所屬技術之一般熟悉含義相同，雖然任何類似或等同於此處所述之方法及材料可被使用於練習或測試本發明，最佳方法及材料為目前所述。

定義

交替使用“類戴爾他配體4”、“Dll4”、“hDll4”以歸因於該蛋白質由序列辨識碼編號1之核酸序列編碼，且該蛋白質具有序列辨識碼編號2之胺基酸序列。

Dll4拮抗劑包括可阻斷Dll4結合至納克受體(如：納克1及納克4)之Dll4抗體及其片段、包含融合至一多聚合成分之Dll4細胞外功能域的融合蛋白質或其片段(例如參見美國專利公開案號2006/0134121及2008/0107648)以及肽與肽體(peptibodies)(例如參見美國專利公開案號2003/0229023)。

除非另有特別指示，此處使用之專有名詞“抗體”應理解為包括含有兩免疫球蛋白重鏈及兩免疫球蛋白輕鏈之抗體分子(亦即“完全抗體分子”)及其抗原結合片段；此處使用之專有名詞抗體之“抗原結合蛋白質”、抗體之“抗原結合片段”等，包括任何專一性結合至一抗原而形成複合體之自生、由酶得到、合成或基因工程多肽或糖蛋白質，一抗體之抗原結合片段可源自於例如：使用任何適宜標準技術之完全抗體分子，如：蛋白質分解消化作用或涉及操作及表現編碼抗體變異及選擇之固定功能域的DNA之重組基因工程技術，該DNA為已知且易得，例如由商業來源、DNA基因庫(包括例如：噬菌體抗體基因庫)，或可被合成，此DNA可使用分子生物技術以定序及化學性操作，例如：安排一或多種變異及/或固定功能域至一適宜之配置，或導入密碼子、製造半胱胺酸殘基，修飾、添加或刪除胺基酸等。

抗原結合片段之非限制性例子包括：(i)Fab片段、(ii)F(ab’)₂ 片段、(iii)Fd片段、(iv)Fv片段、(v)單鏈Fv(scFV)分子、(vi)dAb片段及(vii)由模擬抗體高度變異區的胺基酸殘基組成之最小辨識單位(例如：一被分離之互補決定區(CDR)，其他被設計分子，如：雙抗體、三抗體、四抗體及微小體，亦包含於此處使用之“抗原結合片段”的表現中。

一抗體之抗原結合片段通常包含至少一個變異功能域，此變異功能域可為任何大小或胺基酸組成，且一般包括至少一個臨近或位於一或多個架構序列之CDR；於具有與VL功能域關聯之VH功能域的抗原結合片段，在適宜之安排下，重鏈變異區及輕鏈變異區功能域可彼此相對座落，例如：變異區可為二聚的，且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體；或者，一抗體之抗原結合片段可包含一單體的VH或VL功能域。

於某些具體實例中，一抗體之抗原結合片段可包含至少一種共價性聯結到至少一種固定功能域之變異功能域，可於本發明之抗體的抗原結合片段中發現之變異及固定功能域的非限制代表性構型包括：(i) VH-CH1、(ii) VH-CH2、(iii) VH-CH3、(iv) VH-CH1-CH2、(v) VH-CH1-CH2-CH3、(vi) VH-CH2-CH3、(vii) VH-CL、(viii) VL-CH1、(ix) VL-CH2、(x) VL-CH3、(xi) VL-CH1-CH2、(xii) VL-CH1-CH2-CH3、(xiii) VL-CH2-CH3及(xiv) VL-CL。於任何變異及固定功能域之構型，包括任何上述代表性構型，變異及固定功能域可直接彼此聯結，或可藉由一完全或部份之絞合或鏈接區域聯結，一絞合區域可包括至少兩個(例如：5、10、15、20、40、60或更多)胺基酸，其導致一個介於一單一多肽分子之鄰近變異及/或固定功能域的彈性或半彈性鏈接，；此外，本發明之抗體的抗原結合片段可包含一個任何上述之彼此非共價性聯合及/或具一或多個單體VH或VL功能域(例如：藉由雙硫鍵)之變異及固定功能域結構的同二聚體或異二聚體(或其他多聚體)。

當偕同完全抗體分子時，抗原結合片段可為單專一性或多專一性(例如：雙專一性)，一抗體之多專一性抗原結合片段通常包含至少兩個不同的變異功能域，其中每一變異功能域可專一性結合至一分離抗原或位於相同抗原之一不同抗原決定區，任何多專一性抗體形式，包括此處揭示之代表性雙專一性抗體型式，可使用該技藝一般可得之技術改造，以使用於本文中發明之抗體的抗原結合片段。

此處使用之專有名詞“抗體”意指包括源自人類生殖系免疫球蛋白質序列，具有變異及固定區域之抗體，本發明之人類單株抗體(mAbs)可包括非編碼自人類生殖系免疫球蛋白質序列(例如：由試管內隨機或特定區位突變誘發作用或活體內體突變作用導入之突變)之胺基酸殘基，例如：CDRs且特別是CDR3。然而，此處使用之專有名詞“人類抗體”非意指包括單株抗體，其中源自其他哺乳類生殖系(例如：小鼠)之CDR序列已被移殖至人類FR序列。

當與對應之生殖系序列相較，此處揭示之完全人類抗Dll4抗體於該架構及/或重鏈及輕鏈變異功能域之CDR區可包含一或多個胺基酸取代、插入或刪除，此突變經由比對此處揭示之胺基酸序列與譬如由公共抗體序列資料庫而得之生殖系序列可易於確認；本發明包括抗體及其抗原結合片段，其源自此處揭示之任何胺基酸序列，其中於一或多個架構及/或CDR之一或多個胺基酸係對對應生殖系殘基或對應生殖系殘基(此處該序列改變係指“生殖系回復突變”)之保守胺基酸取代(自然或非自然)回復突變；具備該技藝普通技術之人士可始於此處重及輕鏈之變異區序列，而輕易生產無數抗體及抗原結合片段，其包含一或多個個別生殖系回復突變或其合併。於某些代表實例中，所有架構及/或於V_H 及/或V_L 功能域之CDR殘基係突變回復至生殖系序列；於其他代表實例中，僅某些殘基突變回復至生殖系序列，例如：僅於FR1之首八個胺基酸，或於FR4末八個胺基酸中發現的突變殘基，或僅於CDR1、CDR2或CDR3中發現的突變殘基；此外，本發明之抗體可含有於架構及/或CDR之二或多個生殖系回復突變的任何組合，亦即當某些其他異於生殖系序列之殘基不變時，其中某些個別殘基突變回復至生殖系序列。含有一或多個生殖系回復突變之抗體及抗原結合片段一旦被獲得，可輕易測試一或多個所需之屬性，如：已增進之結合專一性、已增加之結合親和性、已增進或增強之拮抗性或競爭性生物性質(視情況而定)、已降低之免疫遺傳性等，由此一般方式獲得之抗體及抗原結合片段包含於本發明中。

本發明亦包括抗Dll4抗體，其包含任何此處揭示之HCVR、LCVR及/或CDR的具有一或多個保守性取代之胺基酸序列的變異體，例如：本發明包括抗Dll4抗體，其具有HCVR、LCVR及/或CDR之與任何此處揭示的HCVR、LCVR及/或CDR有關之，如：10或更少，8或更少，6或更少，4或更少，2或1個保守性胺基酸取代。於一具體實例中，一HCVR包含具有10或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號116之胺基酸序列；於另一具體實例中，一HCVR包含具有8或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號116之胺基酸序列；於另一具體實例中，一HCVR包含具有6或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號116之胺基酸序列；於另一具體實例中，一HCVR包含具有4或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號116之胺基酸序列；於再另一具體實例中，一HCVR包含具有2或1個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號116之胺基酸序列。於一具體實例中，一LCVR包含具有10或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號118之胺基酸序列；於另一具體實例中，一LCVR包含具有8或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號118之胺基酸序列；於另一具體實例中，一LCVR包含具有6或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號118之胺基酸序列；於一具體實例中，一LCVR包含具有4或更少個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號118之胺基酸序列；於再另一具體實例中，一LCVR包含具有2或1個保守性胺基酸取代之序列辨識碼編號118之胺基酸序列。

一“中和”或“阻斷”抗體係意指一抗體其結合至Dll4，導致抑制Dll4之生物活性，Dll4生物活性之抑制可由測量一或多個Dll4生物活性之指標而評估，這些Dll4生物活性之指標可由一或多個於本技術已知之數種標準試管內或活體內測定法而評估，例如：一抗體中和Dll4生物活性之能力係由Dll4結合至納克受體之抑制而評估。

專有名詞“專一性結合”或其類似詞表示一抗體或其抗原結合片段與一抗原形成一個於生理環境下相對穩定之複合物，專一性結合特點係一至少約1×10^-6 M或更少之平衡解離常數(如：較小之K_D 代表更緊密之結合)，判斷兩分子是否專一性結合之方法係本技術眾所周知，且包括，例如：平衡透析、表面電漿子共振及類似方法；然而，一專一性結合人類Dll4之分離抗體可展現與其他抗原之交叉反應性，如：來自其他物種之Dll4分子，此外，結合至人類Dll4及一或多種額外抗原之多專一性(例如：雙專一性)抗體仍視為此處使用之“專一性結合”人類Dll4之抗體。

此處使用之專有名詞“K_D ”意指一特定抗體-抗原交互作用之解離常數。

專有名詞”高親和性”抗體係指那些以表面電漿子共振，例如：流動式生物感測系統(BIACORE^TM )或溶液親和性酵素免疫測定法(ELISA)測量小於約500 pM、小於約400 pM、小於約300 pM或小於約200 pM之K_D 結合Dll4的抗體，使用例如：單體Dll4；或以表面電漿子共振測量K_D 小於約100 pM、小於約50 pM或小於約20 pM，使用二聚體DDll4。

此處使用之專有名詞“表面電漿子共振”係指一光學現象，其允許以偵測生物感測器基質中蛋白質濃度改變而分析即時生物專一性之交互作用，例如：使用流動式生物感測(BIACORE^TM )系統(法瑪西亞生物感測器公司，瑞典‧烏普沙拉及紐澤西州‧皮斯卡塔威)(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden and Piscataway,N.J.)。

專有名詞“抗原決定區”係抗原之一個與抗體結合的區域，抗原決定區可結構性或功能性定義，功能性抗原決定區一般為結構性抗原決定區之子集，且具有那些直接提供交互作用親和力之殘基，抗原決定區亦可為形態性，其係非線性胺基酸構成，於某些具體實例中，抗原決定區可包括決定因子(determinants)，其為分子之化學活性表面基，如：胺基酸、糖側鏈、磷酸基或磺醯基，且於某些具體實例中可具有特殊三度空間結構特性及/或特殊電荷特性。

化學治療劑係使用於治療癌症之化學化合物，且包括生長抑制劑或其他細胞毒性劑，可使用於本方法之化學治療劑的例子包括烷化劑，如：塞替派(thiotepa)及環磷醯胺(必治妥)(CYTOXAN)；烷基磺酸，如：硫酸布他卡因、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；吖環丙烷，如：苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa)；伸乙亞胺及甲基美醯胺(methylamelamines)包括：艾爾翠他命(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三乙炔磷酸醯胺(trietylenephosphoramide)、三乙炔硫代磷酸醯胺(triethylenethiophosphaoramide)及三甲基羅醯胺(trimethylolomelamine)；氮芥子氣，如：氯芥苯丁酸、萘氮芥(chlornaphazine)、寇羅磷醯胺(cholophosphamide)、益斯得錠(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧鹽酸鹽(mechlorethamine oxide hydrochloride)、黴法蘭(melphalan)、新恩比興(novembichin)、分尼思塔林(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子氣(uracil mustard)；亞硝酸尿素劑(nitrosureas)，如：卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，如：艾克拉新諾黴素(aclacinomysins)、放線菌素、奧塞拉黴素(authramycin)、氮絲胺酸、布雷歐黴素(bleomycins)、放線菌素C(cactinomycin)、鈣奇米新(calicheamicin)、卡拉比新(carabicin)、卡米諾黴素(carminomycin)、卡西諾費林(carzinophilin)、克若莫黴素(chromomycins)、戴克汀諾黴素(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比新(detorubicin)、6-重氮-5-側氧-L-正白胺酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、多柔比新(doxorubicin)、表柔比新(epirubicin)、依索比新(esorubicin)、伊達比新(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素、黴酚酸、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素、培洛黴素(peplomycin)、波福洛黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素、夸拉黴素(quelamycin)、羅多比新(rodorubicin)、鏈黴黑素、鏈佐新(streptozocin)、替伯西定(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比新(zorubicin)；抗代謝物，如：甲氨蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil(5-FU))；葉酸類似物，如：地諾特林(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，如：氟達拉濱(fludarabine)、6-巰嘌呤(6-mercaptopurine)、塞米普林(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，如：安西他濱(ancitabine)、艾薩西替定(azacitidine)、6-艾薩潤定(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿核苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氮尿苷(floxuridine)；雄性激素，如：卡普睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酪(testolactone)；抗腎上腺，如：胺格魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充液，如：福洛林酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯；醛基磷醯胺醣苷(aldophosphamide glycoside)；胺乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；貝司采布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾爾福米新(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基尿素；香菇多醣體(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托喹酮(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼采克林(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；非納米特(phenamet)；吡柔吡新(pirarubicin)；普多費里尼克酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；雲芝多醣體(PSK)；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；鏈格孢菌毒素细交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺(2,2',2"-trichlorotriethylamine)；烏拉坦(urethane)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；甲克託新(gacytosine)；阿拉伯醣苷(arabinoside("Ara-C"))；環磷酸醯胺；塞替派(thiotepa)；類紫杉醇或紫杉烷科之成員，如：太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)；歐洲紫杉醇(docetaxel)(TAXOTERE；Aventis Antony,France)及其類似物；氯芥苯丁酸(chlorambucil)；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；鉑類似物，如：順鉑(cisplatin)及碳鉑(carboplatin)；長春鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide(VP-16))；依弗醯(ifosfamide)；絲裂黴素C(mitomycin C)；米託蒽醌(mitoxantrone)；文克思丁(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；溫諾平(navelbine)；能滅瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；豆諾黴素(daunomycin)；胺喋呤(aminopterin)；截瘤達(xeloda)；依班卓納特(ibandronate)；CPT-11；拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS2000；二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine(DMFO))；視網酸(retinoic acid)；艾司派拉麥新(esperamicins)；卡培他濱(capecitabine)；酪胺酸激酶受體及/或血管生成抑制劑，包括：收拉分尼(sorafenib)(Nexavarby Bayer Pharmaceuticals Corp.)；蘇尼替尼(sunitinib)(Sutentby Pfizer)；帕佐潘尼(pazopanib)(Votrient^TM by GlaxoSmithKline)；突塞蘭尼(toceranib)alladia^TM by Pfizer)；凡迪他尼(vandetanib)(Zactima^TM by AstraZeneca)；西狄蘭尼(cediranib)(Recentinby AstraZeneca)；瑞苟拉分尼(regorafenib)(BAY 73-4506 by Bayer)；艾西汀尼(axitinib)(AG013736 by Pfizer)；萊司滔汀尼(lestaurtinib)(CEP-701 by Cephalon)；爾羅汀尼(erlotinib)(Tarcevaby Genentech)；吉費汀尼(gefitinib)(Iressa^TM by AstraZeneca)；BIBW 2992(Tovok^TM by Boehringer Ingelheim)；拉帕汀尼(lapatinib)(Tykerbby GlaxoSmithKline)；耐瑞汀尼(neratinib)(HKI-272 by Wyeth/Pfizer)及相似物，以及醫藥上可接受之鹽類、酸或任何上述之衍生物；本定義亦包括抗激素劑，其作用以調節或抑制激素作用於腫瘤，諸如：抗雌激素，包括例如：他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、凱歐昔芬(keoxifene)、LY 117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(法樂通)(Fareston)；及抗雄激素，如：氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳培林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；及藥物治療可接受之鹽類、酸或任何上述之衍生物；那些如衛曼等人(Wiemann et al.,)於1985年麥米蘭(McMillan)出版之醫用腫瘤學(Calabresi et al.,eds)第十章所揭示之其他習用細胞毒性化學化合物亦可應用於本發明之方法中。

專有名詞“生長抑制劑”係指一化合物或組成，其抑制細胞之生長，特別是試管內或活體內之細胞，生長抑制劑之例子包括阻礙細胞週期進行(除了合成期(S phase)之外的地點)之藥劑，如：引發第一生長期(G1 phase)停止及有絲分裂期(M phase)停止之藥劑，典型有絲分裂期阻礙劑包括文卡思(文克思丁(vincristine)及長春鹼)，紫杉烷(taxane)科之成員，包括但不限於太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL)，歐洲紫杉醇(docetaxel)(TAXOTERE)及其類似物(例如：XRP9881及XRP6258；參見Ojimaet al.,Curr Opin Investig Drugs 4:737,2003)，及拓樸異構酶抑制劑，如；伊立替康(irinotecan)、拓樸替康(topotecan)、喜樹鹼(camptothecin)、拉媚拉寧D(lamellarin D)、多柔比新(doxorubicin)、表柔比新(epirubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、依託泊苷(etoposide)及博來黴素(bleomycin)，這些停止第一生長期之藥劑亦波及合成期停止，例如：DNA烷化劑，如：他莫昔芬(tamoxifen)、普賴松(prednisone)、達卡巴嗪(dacarbazine)、氮芥(mechlorethamine)、順鉑(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及亞拉-C(ara-C)。

總述

本發明係基於發現共同投與Dll4拮抗劑，例如：一Dll4抗體或其專一性結合Dll4並阻斷Dll4活性之片段，與化學治療劑，例如：順鉑或歐洲紫杉醇(docetaxel)，導致比單獨其中之一劑更大抑制腫瘤生長，為了說明完全人類Dll4抗體，包括重組人類Dll4抗體，參見國際專利公開案號WO 2008/076379。

製備Dll4抗體之方法

製備Dll4抗體之方法係已知之技術，例如：參見Kohler & Milstein(1975) Nature 256:495-497;Harlow & Lane(1988)抗體：一實驗室手冊，冷泉港實驗室，紐約‧冷泉港(Antibodies: a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Lab.,Cold Spring Harbor,NY)，由人類以外生物如：小鼠、大鼠、兔、牛，分離之抗體可經由嵌合或擬人化而更近似人類。

非人類抗體(例：鼠科動物)之擬人化或嵌合型式係免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(如：Fv、Fab、Fab’、F(ab’)₂ 或其他抗體之抗原結合次序列)，其含有源自非人類免疫球蛋白，抗原結合所需之最少序列，作為一提供起始原料以構築嵌合或擬人化抗體之小鼠或其他非人類抗體，它們具有相同或相似結合專一性及親和力；嵌合抗體係其輕及重鏈基因，由屬於其他物種之免疫球蛋白基因片段典型經由基因工程所構築的抗體，例如：來自小鼠單株抗體基因之變異(V)片段可連結至人類固定(C)片段，如：IgG1及IgG4，一典型嵌合抗體因此係由小鼠抗體之變異或抗原結合功能域及人類抗體之固定或有效功能域的混合蛋白質組成；擬人化抗體具有大致來自人類抗體(稱為接受者抗體)之變異區域架構殘基，以及大致來自小鼠抗體(稱為供給者抗體)之互補決定區域(CDR區)，參見Queen et al.,Proc. Natl. Acad Sci. USA 86:10029-10033(1989)及WO 90/07861、美國專利5,693,762、5,693,761、5,585,089、5,530,101及5,225,539，若存在固定區，其亦大致或完全來自人類免疫球蛋白，人類變異區通常係選自架構序列與鼠科動物變異區功能域表現高度序列同一性之人類抗體，其中CDR源自該鼠科動物變異區功能域，重及輕鏈變異區架構殘基可源自相同或不同人類抗體序列，該人類抗體序列可為自然產生之人類抗體序列，或可為數種人類抗體之一致序列，參見WO 92/22653；來自人類變異區架構殘基之某些胺基酸係基於其對CDR之構造及/或抗原結合的可能影響而選為替換物，此可能影響之研究可由模擬、檢驗特定位置胺基酸之特性，或實驗觀察特定胺基酸之取代或突變誘發作用的影響，例如：當一胺基酸異於鼠科動物變異區架構殘基及所選之人類變異區架構殘基，該人類架構胺基酸通常應被來自小鼠抗體之等價架構胺基酸取代，然而合理預期該胺基酸：(1)非共價性直接結合抗原；(2)鄰近於一CDR；(3)或與一CDR作用(例：於CDR內約6)；或(4)參與V_L -V_H 接合部；其他替代物之候選者係人類免疫球蛋白於該位置不尋常之接受者人類架構胺基酸，這些胺基酸可被來自小鼠供給者抗體之等價位置，或來自更典型人類免疫球蛋白之等價位置的胺基酸取代；其他替代物之候選者係人類免疫球蛋白於該位置不尋常之接受者人類架構胺基酸，擬人化免疫球蛋白之變異區架構通常顯示與人類變異區架構序列或該一致序列至少85%之序列同一性。

生產人類抗體之方法包括，例如：費婁免疫(VelocImmune^TM )(再生元製藥(Regeneron Pharmaceuticals))、異種小鼠技術(XenoMouse^TM technology)(艾博基尼司(Abgenix))、“微小基因座”(“minilocus”)方法及噬菌體表現(phage display)；費婁免疫技術(美國專利6,596,541)包含一種生產對選擇抗原之高專一性完全人類抗體的方法，此技術涉及生產具有包含可操作聯結至內源性小鼠固定區基因座之人類重及輕鏈變異區基因體的基因轉殖小鼠，使小鼠對抗原刺激而產生含有人類變異區及小鼠固定區之抗體，編碼抗體重及輕鏈變異區之DNA被分離，且可操作聯結至編碼人類抗體重及輕鏈固定區之DNA，而後DNA於可表現完全人類抗體之細胞中被表現，於一具體實例中，該細胞為CHO細胞。

異種小鼠技術(Green et al.,1994,Nature Genetics 7:13-21)產生具有來自重鏈及卡帕輕鏈(kappa light chain)基因座之人類變異及固定區的小鼠；於一替代方法中，有些利用一微小基因座方法，其中一外源免疫球蛋白基因座經由包含來自免疫球蛋白基因座之個別基因而模擬(例如：參見美國專利5,545,807)，編碼變異區之DNA可以或不以可操作聯結至編碼人類重及輕鏈固定區之DNA分離。

此外，噬菌體表現或相關表現技術可用來辨識抗體、抗體片段，如：變異功能域及專一性結合至D114之異體Fab片段(例如：參見美國專利公開案2003/0229023)。

所欲之免疫球蛋白(抗體)之篩選及選擇可經由多種已知技術之方法進行，例如：D114單株專一抗體之初步篩選可使用基於酵素免疫測定法(ELISA)之方法或噬菌體表現而進行；最好進行次級篩選以辨識及選擇所欲之單株抗體，次級篩選可用任何已知技術之適宜方法進行，於美國專利公開案2004/101920描述一較佳方法名為“生物感測器協助修飾研究法”(“Biosensor Modification-Assisted Profiling”)(“BiaMAP”)，生物感測器協助修飾研究法可迅速辨識產生所欲特性之單株抗體的融合瘤選殖株，更具體地說，單株抗體基於抗體：抗原交互作用之評估而被分為不同抗原決定區相關群；此外，可使用基於酵素免疫測定法、基於顆粒或基於流動式生物感測系統競爭測定法以辨識結合對，其結合至D114之不同抗原決定區，從而可能協同結合至具高親和力之配體。

投與方法

本發明提供包含投與個體一醫藥組成物有效量之治療方法，該組成物包含一種D114拮抗劑，如：一D114抗體，及一種化學治療劑，如：抗有絲分裂劑，例如：歐洲紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)及相似物(紫杉烷(taxane))；基於鉑之化學治療化合物，如：順鉑(cisplatin)、碳鉑(carboplatin)、異丙鉑(iproplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及相似物；嘧啶類似物，如：5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil(5-FU))、卡培他濱(capecitabine)(截瘤達()，羅氏藥廠)及相似物；拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑，如：伊立替康(irinotecan)、拓樸替康(topotecan)、喜樹鹼(camptothecin)、拉媚拉寧D(lamellarin D)及相似物；及/或佐劑，如：亞葉酸(leucovorin)(亞葉酸(folinic acid))及相似物(細節參見上述定義)。

Dll4拮抗劑及化學治療劑可一起或分開共同投與，當使用個別劑量調配物時，Dll4拮抗劑及化學治療劑可同時，或於分別錯開之時間分開、亦即連續投與。

已知多種輸送系統，且可用以投與本發明之醫藥組成物，例：封裝於微脂體、微粒子、微膠囊、可表現突變病毒之重組細胞、受體媒介之胞噬作用(receptor medicated endocytosis)(例：參見Wu and Wu,1987,J. Biol. Chem. 262:4429 4432)；導入法包括但不限於皮內、肌內、腹膜內、靜脈、皮下、鼻內、眼內、硬膜外，及口服途徑，該成份可經由任何途徑投與，例如：經由灌注或丸藥注射、經由上皮或皮膚黏膜內襯吸收(例：口腔黏膜、直腸或小腸黏膜等)，且可與其他生物活性劑共同投與；施用法可為系統或局部，可為急性或慢性(例：每日、每週、每月等)或與其他藥劑合併；亦可使用肺施用法，例如：經由使用一吸入器或噴霧器，及配與一霧化劑(aerosolizing agent)。

關於皮下輸送，一筆型輸送裝置已立即應用於輸送本發明之醫藥組成物，此筆型輸送裝置可重覆使用或一次性使用；可重覆使用之筆型輸送裝置通常採用含有醫藥組成物之替換匣，一旦所有匣中醫藥組成物被施用，且匣係空的，此空匣可立即被丟棄，並以一含有醫藥組成物之新匣替換，之後該筆型輸送裝置可再被使用；一次性使用之筆型輸送裝置無替換匣，相反地，一次性使用筆型輸送裝置採用於該裝置之一個容器中預先充滿醫藥組成物，一旦該容器被清空，整個裝置會被丟棄。

無數種可重覆使用之筆型輸送裝置已應用於皮下輸送本發明之醫藥組成物，例子包括但必定不限於自動筆系統(AUTOPEN^TM )(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、戴司川尼筆(DISETRONIC^TM pen)(Disetronic Medical Systems,Burghdorf,Switzerland)、休瑪洛混合75/25^TM 筆(HUMALOG MIX 75/25^TM pen)、休瑪洛筆、休瑪洛75/30^TM 筆(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、諾福筆1、2及3(N OVOPEN^TM I,II and III)(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、第二代諾福筆(NOVOPEN JUNIOR^TM )(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BD筆(BD^TM pen)(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、奧堤筆(OPTIPEN^TM )、奧堤專業筆(OPTIPEN PRO^TM )、奧堤始達雷筆(OPTIPEN STARLET^TM )，及奧堤林筆(OPTICLIK^TM )(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)，僅列名少數。已應用於本發明醫藥組成物之皮下輸送的一次性使用筆型輸送裝置之例子包括但必定不限於索羅星筆(SOLOSTAR^TM pen)(sanofi-aventis)、福類司筆(FLEXPEN^TM )(Novo Nordisk)及克威筆(KWIKPEN^TM )(Eli Lilly)。

於另一具體實例，活性劑可以囊泡或微脂體輸送(參見Langer(1990) Science 249:1527-1533)；於再另一具體實例，活性劑可以於受控釋出系統中輸送；於一具體實例，可使用唧筒(Langer(1990) supra)；於另一具體實例，可使用聚合材料(Howard et al.(1989) J. Neurosurg. 71:105)；於另一本發明之活性劑為編碼蛋白質之核酸的具體實例，經由建構其為適宜核酸表現載體之一部份並投與它，使其成為細胞內，該核酸可於體內投與以促使其編碼之蛋白質表現，例：經由使用反轉錄載體(參見例如：美國專利案號4,980,286)，或經由直接注射，或經由使用微粒子轟擊(例：基因槍；Biolistic,Dupont)，或以脂質或細胞表面受體或轉染劑包覆，或以聯結至已知為進入細胞核之類同源框(homeobox-like)肽而投與它(參見例如：Joliot et al.,1991,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868)；此外，核酸可經由同源性重組而被導入胞內且嵌入宿主細胞DNA表現。

於一特殊具體實例，可能希望投與本發明之醫藥組成物至需要治療之局部區域，這可能實現而不經由限制的方式，例如：經由手術過程中局部灌注，局部施用，例：經由注射、用導尿管、用植入管，植入管為多孔、無孔或凝膠狀材料，包括膜，如：矽質(sialastic)膜、纖維或商業皮膚代用品。

本發明之活性劑對癌症/腫瘤治療之有效量可用基於本敘述之標準臨床技術測定，此外，可隨意採用試管內測定法以幫助確認最理想劑量範圍，調配物中所採用之精確劑量亦取決於施藥途徑及嚴重情況，且應依據治療者(醫生)之判斷及每一個體狀況而決定；然而，靜脈施用法之適宜劑量範圍一般約為每公斤體重0.2至30毫克活性化合物，鼻內施用法之適宜劑量範圍一般約為每公斤體重0.01微微克(pg)至每公斤體重1毫克，有效劑量可由源自試管內或動物模型試驗系統之劑量反應曲線推斷。

對於全身性投與，治療有效劑量可由試管內測定法初步估計，例如：可配製於動物模型之劑量以達到包括如細胞培養測定之IC₅₀ 的循環濃度範圍，該資料可用於更精確測定人類有用劑量，初始劑量亦可由體內數據估計，例：動物模型，使用該技藝熟知之技術，具備該技藝一般技術者可基於動物數據立即有效進行投藥。

該劑量可能依投與之個體之年齡及尺寸(例：體重或身體表面積)、目標疾病、狀況、投與途徑及其類似條件而變動，對於系統施用Dll4拮抗劑，特別是對於Dll4抗體，靜脈投與之典型劑量範圍為每日劑量約0.01對約100毫克/公斤體重，約0.1對約50毫克/公斤體重，或約0.2對約10毫克/公斤體重；對於皮下施用，可投與抗體約10毫克對約500毫克，約20毫克對約400毫克，約30毫克對約300毫克，或約50毫克對約200毫克，於至少抗體濃度約25毫克/毫升，約50毫克/毫升，約75毫克/毫升，約100毫克/毫升，約125毫克/毫升，約150毫克/毫升，約175毫克/毫升，約200毫克/毫升，或約250毫克/毫升，至少每日一至五次，每週一至五次，或每月一至五次；或者，可初步經由靜脈注射投與抗體，隨後接續皮下投與。

一般而言，化學治療劑為每週劑量範圍介於500毫克/平方公尺及5000毫克/平方公尺靜脈或口服使用，但劑量範圍依各種因素而變動，包括：治療之個體、個體之體重及年齡、痛苦嚴重度、投與方式、使用之化學治療劑型式、開藥醫師之判斷及其類似因素；當症狀可察覺或甚至不可察覺時，治療可能間歇性重覆，治療持續期間亦可能依治療情況嚴重度及個體對有害作用之耐受性程度(若有的話)而變動，且可能有必要長期延續或延續至益處大於有害作用。

與單獨投與其中之一劑相較(參見以下實例1及2)，於合併療法中，每劑之劑量可進一步調整，降低其達到所欲療效之每一藥劑必須量(亦即表現協同效應)。

可使用於本發明之合併療法的化學治療劑包括那些運用於熟知之化學治療療程，例如：FOLFOX係一治療大腸直腸癌(CRC)之化學治療療程，且為5-氟尿嘧啶(5-FU)、亞葉酸(folinic acid)及奧沙利鉑(oxaliplatin)之組合，FOLFIRI係另一治療大腸直腸癌之化學治療療程，且為5-氟尿嘧啶、亞葉酸及伊立替康(irinotecan)之組合，XELOX係大腸直腸癌之第二線化學治療療程，且為卡培他濱(capecitabine)及奧沙利鉑之組合。

再者，合併化學治療劑及Dll4拮抗劑之療法可單獨提供或與額外藥物組合，如：其他抗血管生成劑，例：血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)拮抗劑，包括：抗血管內皮生長因子抗體(例：基因科技公司(Genentech)之)、血管內皮生長因子阱(例：再生元製藥(Regeneron Pharmaceuticals)之阿福立西柏(aflibercept))及其相似物，以及其他化學治療劑，如：止痛劑、抗發炎劑，包括：非類固醇抗發炎藥(NSAIDS)，如：Cox-2抑制劑及其相似物，以至於改善及/或降低伴隨潛在癌症/腫瘤之症狀。

節律化療法(Metronomic Chemotherapies)

節律化療法正新興為投與化療法之改良方式，傳統化療法投與不造成危及生命之毒性程度，例：最大耐受劑量(MTD)，最高可能劑量的單一劑量或短期治療，最大耐受劑量療法於連續循環治療中需要二至三週長期暫停，儘管眾多化療藥物及大量測試之臨床試驗，在治癒或顯著延長癌症患者生命方面進步不多(Kerbel & Kamen,2004,Nature Reviews Cancer 4:423-436)。

節律化療法係指頻繁甚至每日投與顯著低於MTD劑量之化療藥物投藥，其無長期無藥物之暫停期，除了降低劇烈毒性，當合併投與特殊抗血管生成劑，如：血管內皮生長因子抑制劑，可增加節律化療法之功效(Kerbel & Kramen,2004,supra )。

因此，本發明特色為一種治療所需個體癌症之節律化療法，包含投與個體一D114拮抗劑合併一化學治療劑，於此得以治療癌症，於一特殊具體實例中，D114拮抗劑及化學治療劑可一起或較短時間內連續施用，例如：一至十二週，隨後超過一長時間之化學治療劑的節律化療法，例如：六至二十四個月。

醫藥組成物

本發明提供包含一D114拮抗劑、一化學治療劑及一醫藥上可接受之載體的醫藥組成物，專有名詞“醫藥上可接受”意指聯邦或州政府之管理機關批准，或列入美國藥典或其他一般公認供動物，特別是人類，使用之藥典。專有名詞“載體”係指一稀釋劑、佐劑、賦形劑，或投與治療劑之囊泡，此藥品載體可為無菌液體，如：水及油，包括：那些石油、動物、蔬菜或合成來源，如：花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及相似物。適宜之藥品賦形劑包括：澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇及相似物。若想要，成份亦可包含少量潤濕劑或乳化劑或酸鹼緩衝劑，這些成份形式可為溶液、懸浮液、乳狀液、藥片、藥丸、膠囊、粉末、緩釋調配物及相似物。成份可配為栓劑與傳統黏合劑及載體，如：三酸甘油酯。口服調配物可包括標準載體，如：藥品級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、甜精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適宜藥品載體之例子敘述於馬丁(E. W. Martin)之“雷明頓藥品科學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)”。

於一較佳具體實例中，該成份係依照用於人類靜脈施用之醫藥組成物的例行程序調配，如有需要，成份亦可包括一助溶劑及一局部麻醉劑，如：利多卡因(lidocaine)以減輕注射位置之疼痛；如成份以灌注方式投與，其可於一含有藥品級無菌水或生理食鹽水之灌注瓶中配製；如成份以注射方式投與，可提供一安瓶注射用無菌水或生理食鹽水，則可於投與前混合成份。

本發明之活性劑可以中性或鹽類型式配製，可用於製藥之鹽類包括那些與游離胺基形成之物質，如：那些源自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等，及那些與羧基形成之物質，如：那些源自鈉、鉀、銨、鈣、鐵之氫氧化物、異丙胺、三乙胺、2-乙基胺基乙醇、組胺酸、普羅卡因等。

用以實行本發明方法之成份可為一液體，其包含本發明劑於溶液、懸浮液或二者皆具；專有名詞“溶液/懸浮液”係指一液體成份，其活性劑之第一部份呈現於溶液中，活性劑之第二部份呈現於微粒、懸浮液、液體基質中，該液體成份可為水狀，且亦包括凝膠及軟膏型式。

用以實施本發明方法之水狀懸浮液或溶液/懸浮液可包含一或多種聚合物，如：懸浮劑；可用之聚合物包括水溶性聚合物，如：交聯具羧基之聚合物，本發明之水狀懸浮液或溶液/懸浮液最佳係黏性或黏膜黏著性，或甚至更佳，皆具黏性及黏膜黏著性。

套組

本發明進一步提供一製造物件或套組，其包含包裝材料、容器及置於容器中之藥劑，其中該藥劑包含至少一種Dll4拮抗劑，如：Dll4抗體，及至少一種化學治療劑，且其包裝材料包含一說明Dll4拮抗劑及化學治療劑可用以治療癌症或降低或終止腫瘤生長之標籤或仿單。於一具體實例中，Dll4拮抗劑及化學治療劑可置於分離容器中，因此，本發明提供一套組，其包含一個含有專一性結合人類D114之抗體或其抗原結合片段的容器，以及一或多個含有至少一種化學治療劑之額外容器。

實例

提出下列例子以提供那些具本技藝之通常技術的人士一完整揭示與描述如何製造及使用本發明之方法及成份，而非企圖限制何者為發明者視為其發明之範圍，付出努力以確保關於使用數字方面之準確性(例：數量、溫度…等)，但應計入一些實驗失誤及誤差，除非另有說明，部份為體重之部份，溫度為攝氏溫度，及壓力為達到或接近大氣壓。

實例1：抗人類D114抗體合併順鉑(cisplatin)對人類VM-Cub1腫瘤生長之效果

評估抗人類D114抗體(RGEN421)合併順鉑(鉑醇，順式雙氨雙氯鉑(Platinol,cis-diamminedichloroplatinum))對植入於表現擬人化D114蛋白質的嚴重複合免疫缺失(SCID)小鼠(擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠)之腫瘤的效果，於胚胎幹(ES)細胞中，經由以相對之人類D114基因(7kb)取代小鼠D114基因之整個細胞外功能域，製造該擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠，製備同型人類D114小鼠，且培育為嚴重複合免疫缺失基因背景。

每一小鼠被皮下(sc)植入1×10⁶ 個人類VM-Cub1腫瘤細胞(膀胱癌細胞)外加麥粹膠(MATRIGEL^TM )(BD Biosciences,#354234)，於小鼠中置放腫瘤後(植入約14天後腫瘤大小為150-200立方毫米)，測量腫瘤、隨機安排，並處以人類抗體固定區(hFc)、REGN421、順鉑，或合併REGN421及順鉑，總數45隻小鼠分為9組(每組n=5)，第一組皮下(sc)處以人類抗體固定區2毫克/公斤；第二及第三組皮下分別處以0.5及2毫克/公斤之REGN421；第四及第五組腹膜內(ip)分別處以順鉑0.5及2毫克/公斤；第六組皮下處以0.5毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑0.5毫克/公斤；第七組皮下處以0.5毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑2毫克/公斤；第八組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑0.5毫克/公斤；及第九組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑2毫克/公斤；於第14天開始，每3-4天投與REGN421，小鼠共接受三劑；於第14天開始，每24小時投與順鉑，小鼠共接受四劑。

為了評估單劑或合併治療之REGN421及順鉑的效果，記錄腫瘤大小之變化，於初始REGN421治療3天前、每次REGN421治療之日(第14、17及21天)及之後每3-4天測量腫瘤生長，直到腫瘤大小達到約600立方毫米，使用公式(長度×寬度² )/2計算體內腫瘤大小，對腫瘤生長之效果顯示於圖1及表1。

於對照組安樂死日(亦即於第32天)，經由計算治療(T)對對照(C)腫瘤大小差異測定腫瘤生長抑制，TGI；TGI=[1-(T_末 -T_初 )/(C_末 -C_初 )]×100。

當每一組達到特定腫瘤大小，以治療(T)對對照(C)間不同天數估計腫瘤生長遲滯，TGD，本實驗之預定腫瘤大小為600立方毫米。

結果顯示單獨以REGN421治療造成腫瘤生長54%降低量，單獨以順鉑治療造成腫瘤生長降低(0.5毫克/公斤/注射之劑量降低61%，2毫克/公斤/注射之劑量降低54%)，合併療法比單獨其中之一劑之療法引起更高之腫瘤生長降低量(順鉑0.5毫克/公斤/注射加REGN421 2毫克/公斤/注射降低104%，順鉑2毫克/公斤/注射加REGN421 2毫克/公斤/注射降低58%)。

這些結果顯示以合併D114阻斷劑與順鉑治療腫瘤，D114阻斷劑2毫克/公斤/注射及順鉑0.5毫克/公斤/注射，比單獨其中之一劑造成更大抑制腫瘤生長。

實例2：抗人類D114抗體合併順鉑對人類A549腫瘤生長之效果

評估抗人類D114抗體(RGEN421)合併順鉑(鉑醇，順式雙氨雙氯鉑(Platinol,cis-diamminedichloroplatinum))對植入於如上述擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠之腫瘤生長的效果，每一小鼠被皮下(sc)植入5×10⁶ 個人類A549腫瘤細胞(非微小型細胞肺癌或“NSCLC”)，於小鼠中置放腫瘤後(植入約29天後腫瘤大小為100-150立方毫米)，測量腫瘤、隨機安排，並處以人類抗體固定區、REGN421、順鉑，或合併REGN421及順鉑，總數36隻小鼠分為6組(每組n=6)，第一組皮下處以人類抗體固定區2毫克/公斤；第二組皮下處以2毫克/公斤之REGN421；第三及第四組腹膜內(ip)分別處以順鉑2.5及4.5毫克/公斤；第五組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑2.5毫克/公斤；及第六組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以順鉑4.5毫克/公斤；於第29天開始，每3-4天投與REGN421，小鼠共接受三劑；於第29天開始，每24小時投與順鉑，小鼠共接受四劑。

為了評估單劑或合併治療之REGN421及順鉑的效果，我們測量腫瘤大小(體積)，於初始REGN421治療3天前、每次REGN421治療之日(第29、30、33及36天)及之後每3-4天測量腫瘤生長，直到腫瘤大小達到約600立方毫米，使用公式(長度×寬度² )/2計算體內腫瘤大小，對腫瘤生長之效果顯示於圖2及表2。

結果顯示單獨以REGN421治療造成腫瘤生長54%降低量，單獨以順鉑治療造成腫瘤生長降低(2.5毫克/公斤/注射之劑量降低35%，及4.5毫克/公斤/注射之劑量降低22%)，合併療法比單獨其中之一劑之療法引起更高之腫瘤生長降低量(順鉑2.5毫克/公斤/注射加REGN4212毫克/公斤/注射降低69%，順鉑4.5毫克/公斤/注射加REGN421 2毫克/公斤/注射降低80%)；與對照組及單獨其中之一劑比較(p＜0.01)，合併療法顯著延遲腫瘤生長(順鉑2.5毫克/公斤/注射加REGN4212毫克/公斤/注射為21天，順鉑4.5毫克/公斤/注射加REGN421 2毫克/公斤/注射為26天)。

這些結果顯示以合併Dll4阻斷劑與順鉑治療腫瘤，Dll4阻斷劑2毫克/公斤/注射及順鉑2.5-4.5毫克/公斤/注射，比單獨其中之一劑造成更大抑制腫瘤生長。

實例3：抗人類Dll4抗體合併歐洲紫杉醇(docetaxel)對大鼠C6腫瘤生長之效果

評估抗人類Dll4抗體合併歐洲紫杉醇(剋癌易(TAXOTERE))對植入於嚴重複合免疫缺失(SCID)小鼠之腫瘤生長的效果，每一小鼠被皮下(sc)植入1×10⁶ 個大鼠C6腫瘤細胞(神經膠母細胞瘤細胞)，於小鼠中置放腫瘤後(植入約13天後腫瘤大小為100-150立方毫米)，小鼠被處以人類抗體固定區、歐洲紫杉醇、Dll4抗體，或合併歐洲紫杉醇及Dll4抗體；由於這些小鼠表現小鼠Dll4，用於本實驗之根據已發表序列(WO 2007/143689)的Dll4抗體已內部製備，且定名為REGN577，REGN577結合至人類及小鼠Dll4，但未發現結合人類Dll4及JAG1。，總數30隻帶有腫瘤之雄鼠隨機安排為6組(N=5)，第一組皮下處以人類抗體固定區(25毫克/公斤)及靜脈(iv)處以載體；第二組皮下處以5毫克/公斤之REGN577；第三組靜脈處以歐洲紫杉醇4.5毫克/公斤；第四組靜脈處以歐洲紫杉醇6毫克/公斤；第五組靜脈處以歐洲紫杉醇4.5毫克/公斤加皮下處以5毫克/公斤之REGN577；第六組靜脈處以歐洲紫杉醇6毫克/公斤加皮下處以5毫克/公斤之REGN577；於同日投與歐洲紫杉醇及/或Dll4抗體，動物每週治療兩次並共接受三劑；於起始治療日開始，每週測量體重及腫瘤生長兩次，直到當腫瘤大小達到約600立方毫米而安樂死小鼠，使用公式(長度×寬度² )/2計算腫瘤大小。

對照組腫瘤大小達到約600立方毫米，並於第25天收取，在第25天，結果顯示單獨以Dll4抗體治療對腫瘤生長造成中等降低量(大約44%)，單獨以歐洲紫杉醇治療造成腫瘤生長降低(4.5毫克/公斤/注射之劑量降低62%，及6毫克/公斤/注射之劑量降低70%)，合併療法比對照組及單獨其中之一劑之療法引起更大之腫瘤生長降低量(歐洲紫杉醇4.5毫克/公斤加Dll4抗體降低75%，歐洲紫杉醇6毫克/公斤加Dll4抗體降低81%)；探討腫瘤生長抑制及腫瘤生長遲滯，結果總結於表3。

這些結果顯示以合併Dll4阻斷劑與各種不同劑量之歐洲紫杉醇治療腫瘤可幾乎兩倍延遲腫瘤生長，且比單獨其中之一劑造成更大抑制腫瘤生長。

實例：抗人類Dll4抗體合併歐洲紫杉醇對人類MDA-MB-231腫瘤生長之效果

評估抗人類Dll4抗體合併歐洲紫杉醇(Taxotere,Sanofi aventis)對植入於嚴重複合免疫缺失(SCID)小鼠之腫瘤生長的效果，每一小鼠被“偽正位(皮下至第三乳腺)”植入5×10⁶ 個人類MDA-MB-231胸腫瘤細胞與麥粹膠(MATRIGEL^TM )(BD Biosciences lot #84540)，於小鼠中置放腫瘤後(植入約45天後腫瘤大小為150-200立方毫米)，小鼠被處以人類抗體固定區、歐洲紫杉醇、Dll4抗體，或合併歐洲紫杉醇加Dll4抗體，總數25隻帶有腫瘤之雄鼠隨機安排為5組(每群N=5)，第一組皮下處以人類抗體固定區(25毫克/公斤)及靜脈(iv)處以載體；第二組皮下處以5毫克/公斤之Dll4抗體REGN577；第三組靜脈處以歐洲紫杉醇4.5毫克/公斤；第四組靜脈處以歐洲紫杉醇6毫克/公斤；第五組靜脈處以歐洲紫杉醇6毫克/公斤加皮下處以5毫克/公斤之REGN577；於同日投與歐洲紫杉醇及/或Dll4抗體，動物每週治療兩次並共接受三劑；於起始治療日開始，每週測量體重及腫瘤生長兩次，直到小鼠被安樂死，當腫瘤大小達到約600立方毫米而安樂死小鼠，使用公式(長度×寬度² )/2計算腫瘤大小。

對照組腫瘤大小達到約600立方毫米，並於第63天收取，在第63天，結果顯示單獨以歐洲紫杉醇治療對腫瘤生長造成中等降低量(4.5毫克/公斤之劑量降低37%，及6毫克/公斤之劑量降低52%)，單獨以Dll4抗體治療造成顯著腫瘤生長降低(大約降低85%)；同時，合併療法造成腫瘤退化(歐洲紫杉醇6毫克/公斤加Dll4抗體降低105%)；探討腫瘤生長抑制及腫瘤生長遲滯，結果總結於表4。

單獨以歐洲紫杉醇治療對腫瘤生長造成最小延遲(4.5毫克/公斤之劑量延遲4天，6毫克/公斤之劑量延遲4天)，單獨以Dll4抗體治療延遲腫瘤生長21天，與對照組及單獨其中之一劑之療法相較，合併療法進一步延遲腫瘤生長(歐洲紫杉醇6毫克/公斤加Dll4抗體延遲28天，p＜0.5)。

這些結果顯示MDA-MB-231腫瘤對單獨以歐洲紫杉醇治療反應不大，但對抗Dll4抗體治療非常敏感，與單獨其中之一劑相較，合併Dll4阻斷劑與歐洲紫杉醇可進一步延遲腫瘤生長，且稍微增進腫瘤生長之抑制作用。

實例5：抗人類Dll4抗體合併5-氟尿嘧啶(5-FU)對人類HTC116(CRC)腫瘤生長之效果

評估抗Dll4抗體(REGN421)合併5-氟尿嘧啶(5-FU，氟嘧啶類似物)對植入於擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失(SCID)小鼠之腫瘤生長的效果，每一小鼠被皮下植入5×10⁶ 個人類HTC116腫瘤細胞(大腸直腸癌或“CRC”)，於小鼠中置放腫瘤後(植入約22天後腫瘤大小約150立方毫米)，測量腫瘤、隨機安排，之後小鼠被處以人類抗體固定區、REGN421、5-氟尿嘧啶，或合併REGN421及5-氟尿嘧啶，總數30隻小鼠分為6組(每群n=5)，第一組皮下處以人類抗體固定區2毫克/公斤；第二組皮下處以2毫克/公斤之REGN421；第三及第四組腹膜內分別處以5-氟尿嘧啶15及25毫克/公斤；第五組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以5-氟尿嘧啶15毫克/公斤；及第六組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以5-氟尿嘧啶25毫克/公斤；於第22天開始，每3-4天投與REGN421，小鼠共接受三劑；於第22天開始，每3-4天投與5-氟尿嘧啶，小鼠共接受三劑。

為了評估單劑或合併治療之REGN421及5-氟尿嘧啶的效果，於初始REGN421治療3天前，及之後每次藥劑治療之日(第22、26、29天)及之後每3-4天測量腫瘤大小(體積)之變化，直到腫瘤大小達到約600立方毫米，使用公式(長度×寬度² )/2計算體內腫瘤大小，結果顯示於圖3及表5。

單獨以5-氟尿嘧啶治療對腫瘤生長造成最小延遲(45毫克/公斤之總劑量延遲4天，75毫克/公斤之總劑量延遲2天)，單獨以D114抗體治療延遲腫瘤生長6天，與對照組相較，合併療法進一步延遲腫瘤生長(p＜0.043)。

實例6：抗人類D114抗體合併伊立替康(irinotecan)對人類HTC116(CRC)腫瘤生長之效果

評估抗D114抗體(REGN421)合併伊立替康(伊立替康氫氯化物)對植入於擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠之腫瘤生長的效果。

每一小鼠被皮下(sc)植入5×10⁶ 個人類HTC116腫瘤細胞，於小鼠中置放腫瘤後(植入約15天後腫瘤大小約150立方毫米)，測量腫瘤、隨機安排，之後小鼠被處以人類抗體固定區、REGN421、伊立替康，或合併REGN421及伊立替康，總數30隻小鼠分為6組(每群n=5)，第一組皮下處以hFc 2毫克/公斤；第二組皮下處以2毫克/公斤之REGN421；第三及第四組腹膜內分別處以伊立替康7.5及25毫克/公斤；第五組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以伊立替康7.5毫克/公斤；及第六組皮下處以2毫克/公斤之REGN421及腹膜內處以伊立替康25毫克/公斤；於第15天開始，每3-4天投與REGN421，小鼠共接受三劑；於第15天開始，每3-4天投與伊立替康，小鼠共接受三劑。

為了評估單劑或合併治療之REGN421及伊立替康的效果，於初始REGN421治療3天前，及之後每次藥劑治療之日(第15、19、22天)及之後每3-4天測量腫瘤大小(體積)之變化，直到腫瘤大小達到約600立方毫米，使用公式(長度×寬度² )/2計算體內腫瘤大小，結果顯示於圖4及表6。

單獨以伊立替康治療對腫瘤生長造成最小延遲(22.5毫克/公斤之總劑量延遲8天，75毫克/公斤之總劑量延遲16天)，單獨以Dll4抗體治療延遲腫瘤生長9天，與單獨其中之一劑治療相較，合併療法顯著增進抗腫瘤功效，並進一步延遲腫瘤生長(伊立替康75毫克/公斤加Dll4抗體延遲19天，p＜0.0001)。

實例7：抗人類Dll4抗體對C0lo205腫瘤Hey1基因表現之效果

研究抗Dll4抗體對植入於擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失小鼠之人類Colo205大腸直腸腫瘤細胞不同基因表現的效果，簡言之，每隻雄與雌性擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失小鼠被皮下植入2×10⁶ 個Colo205腫瘤細胞，當腫瘤達到約150立方毫米，小鼠(每組四隻)被處以0.5、5或15毫克/公斤之單劑REGN421，或對照之人類抗體固定區15毫克/公斤；腫瘤於處理後5小時、10小時、24小時、72小時及7天時切除，之後並儲存於核糖核酸穩定劑(凱傑生技(Qiagen))，使用核糖核酸易中套組(RNeasyMidi Kit)(凱傑生技)純化腫瘤核糖核酸，組織於含有β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)之裂解緩衝液的混合研缽中均質化，置入管柱，洗去未結合之污染物，於管柱中進行DNA酶I分解作用，並於無核糖核酸酶水中洗提出核糖核酸，於使用快增核糖核酸擴增套組(Quick Amp^TM RNA Amplification Kit)(安捷倫科技(Agilent Technologies))由500奈克之總核糖核酸的擴增cRNA中嵌入花青素3(Cy3)-胞苷三磷酸，每一樣品之花青素3標記cRNA之後雜合至一包覆小鼠及人類轉錄體(transcriptome)兩者之訂製陣列，依據產品程序進行雜合作用與清洗陣列，並以安捷倫微陣列掃瞄器掃瞄陣列，由使用安捷倫特選軟體9.5(Agilent Feature Extraction Software 9.5)掃描之陣列影像中取得數據。

為辨識對照組及處理組間不同基因表現，每一中位中心晶片適用於每一樣品之完整基因數據，之後以隨機方差模式t檢驗比較兩組之基因表現值(Simon,R.A.et al .,2007,“Analysis of Gene Expression Data Using BRB-Array Tools”,Cancer Inform 3:11-7)，選出兩組間那些平均差大於1.5倍及p值小於0.05之基因，並以下降倍數變化排列，亦於標記排列大於1000倍之個別樣品進行總體檢驗，且重覆基因篩選過程，這確定兩組間被辨識為差異表現之基因數目是否多於單獨隨機預期。

Hey1係Hey族之一員，其已被視為納克活化作用之直接下游目標，且其於小鼠體內腫瘤之研究已顯示Dll4-納克信號途徑之抑制作用造成Hey1核糖核酸量降低(Noguera-Troise,Iet al .,2006,Nature 444(7122):1032-7)；如圖五所示，目前使用微陣列分析Hey1訊息核糖核酸量之研究顯示:與對照組處以人類抗體固定區之小鼠相較，處理開始10小時後，處以REGN421之小鼠的Hey1核糖核酸量減少，但於處理72小時及7天後非常明顯減少，未於0.5毫克/公斤發現明顯減少，亦即最低劑量之REGN421；這些結果顯示REGN421有效阻斷納克信號途徑，且Hey1可為由Dll4抗體抑制納克信號之一個有用藥效標記物。

實 例8：第一期初步藥物動力研究

REGN421目前正在第一期人體試驗研究，該研究之主要目標係為了測定未來功效試驗之REGN421建議劑量，次要目標為定出藥物安全性數據、其藥物動力學、免疫遺傳性，及與功效之初步證據相同的藥效學；於這項研究中，每三週對已進行習知治療之癌症患者靜脈投與抗Dll4抗體REGN421，該研究設計遵循劑量逐昇之標準方法學及限制劑量毒性之規定，迄今，七名患者已每三週以0.25毫克/公斤/劑量治療，而六名患者已每三週以0.50毫克/公斤/劑量治療；為了藥物動力研究，於劑前、0小時，及劑後第一天1、2、4及8小時，之後第一循環之2、3、4、8及15天，大於等於第二循環之第一天0小時，及治療後續之第15、30及60天採集血液樣本，以定量上限2.5微克/毫升及定量下限0.039微克/毫升之有效酵素免疫測定法(ELISA)測量於未稀釋血清樣本之血漿/血清REGN421量，該研究正在進行以意圖投與規則所限定之1、2、4及7毫克/公斤/劑量。

以下顯示單一30分鐘靜脈灌注REGN421 0.25毫克/公斤(七名患者)及0.5毫克/公斤(兩名患者)之血漿藥物動力參數的目前所得數據顯示於表7，C_max ：藥物最大血清濃度；T_last ：藥物最後量化濃度之時間；C_last ：藥物最後量化濃度；AUC_last ：至藥物最後濃度之曲線下面積；AUC：曲線下總面積(亦即藥物暴露)；t_1/2Z ：終端半生期；V_ss ：穩定態之體積分布；CL：藥物清除率，數值為：平均值、(變異係數百分比(CV%))及[範圍)。

如表7所示，REGN421之最高血清濃度對劑量0.25毫克/公斤為6.27微克/毫升，對劑量0.50毫克/公斤為9.88微克/毫升，這些數值位於與動物異體移植模型相關之抗腫瘤活性的REGN421濃度範圍。

已使用微陣列技術分析於REGN421施用前及施用後24小時後收集之患者血清樣本中REGN421對Dll4-納克信號途徑之藥效作用，結果顯示於表8。

如表8所示，於所有樣本中，與治療前樣本相較，在REGN421施用後，Hey1基因表現減少，如同於擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失小鼠之異體移植腫瘤模型所觀察(參見上例七)，該發現表示REGN421確實抑制人類Dll4生物活性。

實例9：對第一期患者投與Dll4抗體合併吉西他濱(Gemcitabine)

將於難以正規治療或無核准療法之晚期或轉移性癌症的患者實施該研究，依據以ECOG(東岸癌症臨床研究合作組織(Eastern Cooperative Oncology Group))進行狀態評分為0-2(0-5級)之病理、生理及放射檢查，及足夠的腎臟、肝臟及血液化驗參數而被診斷有晚期固體惡性腫瘤之患者有資格參與該研究，於研究期間，患者被允許同時接受支持性治療，如：輸血及止痛劑，患者可能之前為了轉移性疾病已接受化學療法或生物性療法，患者被分配於以3加3設計之連續給藥組中，患者將加入一劑量層級，且若未發生劑量限制毒性(DLT)，將進行劑量升級至下一劑量層級，若三位患者其中一位發生劑量限制毒性，之後另外三位患者可能加入該劑量層級，若三位患者其中兩位發生劑量限制毒性，之後該劑量層級將被視為具有過度毒性，且另外三位患者可能加入該劑量之前層級。患者將接受第一天：0.25至10毫克/公斤之抗D114抗體(例：REGN421或REGN281)靜脈注射超過30分鐘加1250毫克/平方公尺之吉西他濱靜脈灌注超過30分鐘，及第八天：1250毫克/平方公尺之吉西他濱靜脈灌注超過30分鐘，每三週重覆該合併養生法，直到癌症惡化或無法忍受之毒性發生。

主要終點係於晚期固體惡性腫瘤之患者評估抗D114抗體合併吉西他濱之安全性、耐受性及劑量限制毒性，及確認抗D114抗體合併吉西他濱之最大耐受劑量(MTD)，次要終點包括依據RECIST標準(由Eisenhaueret al. ,2009,Eur J Cancer 4 5:228-247)之抗腫瘤活性的描述、合併吉西他濱給予之抗D114抗體的藥物動力(PK)數據之評估，及抗D114抗體免疫遺傳性之測定，使用生理檢查、放射性方法(X光、電腦斷層攝影或核磁共振影像)評估疾病緩解，使用國家癌症研究院不良事件常用術語標準評估反面結果(CTCAE v 4.0，可由國家癌症研究院網站之癌症治療法評估計畫或CETP而得)，由患者取得血清樣本以測量抗Dll4抗體濃度，以及可能存在之對抗抗Dll4抗體之抗體。

實例10：對大腸直腸癌(CRC)患者投與Dll4抗體及FOLFOX

簡言之，依據以ECOG(東岸癌症臨床研究合作組織(Eastern Cooperative Oncology Group))進行狀態評分為0-2(0-5級)之病理、生理及放射檢查，及足夠的腎臟、肝臟及血液化驗參數而被診斷有局部晚期或轉移性大腸直腸癌之成年患者有資格參與該研究，於研究期間，患者被允許同時接受支持性治療，如：輸血及止痛劑，患者可能之前為了轉移性疾病未接受化學療法(或抗血管生成，或抗表皮生長因子受體)，允許治療前為了其疾病之輔助治療，且須於加入此研究前至少12個月完成，以1比1比例隨機安排患者接受每兩週靜脈FOLFOX化學療法(第一天：奧沙利鉑(oxaliplatin)85毫克/平方公尺靜脈灌注及亞葉酸(leucovorin(亞葉酸，folinic acid))200毫克/平方公尺靜脈灌注，隨後以5-氟尿嘧啶400毫克/平方公尺靜脈灌注超過2-4分鐘，隨後以5-氟尿嘧啶600毫克/平方公尺靜脈連續22小時灌注；第二天：亞葉酸200毫克/平方公尺靜脈灌注，隨後以5-氟尿嘧啶400毫克/平方公尺靜脈給予丸藥超過2-4分鐘，隨後以5-氟尿嘧啶600毫克/平方公尺靜脈連續22小時灌注)及貝凡西茹瑪(bevacizumab)(癌思停()：擬人化單株抗血管內皮生長因子(VEGF)抗體，基因科技)(第一天：10毫克/公斤靜脈注射)，或於第一天靜脈注射0.25至10毫克/公斤抗Dll4抗體(REGN421)合併先前所述之療法，每兩週重覆該合併療法，直到癌症惡化或無法忍受之毒性發生。

主要終點係達到至少部份緩解的患者比例(依據RECIST標準(由Eisenhaueret al .,2009,supra )確認直徑總和30%或以上之降低)，且次要終點包括癌症惡化時間及總存活率，使用生理檢查、放射性方法(X光、電腦斷層攝影或核磁共振影像)及測量血清中致癌胚胎抗原(CEA)量評估疾病緩解，亦使用國家癌症研究院不良事件常用術語標準(CTCAE v 4.0，supra)評估其他臨床參數，如：反面結果，由患者取得血清樣本以測量血清中抗Dll4抗體濃度，以及可能存在之對抗抗Dll4抗體之抗體。

實例11：對乳癌患者(第二期患者)投與Dll4抗體合併歐洲紫杉醇

將於具有晚期無法動手術或轉移性乳癌的成年患者實施該研究，他們可能已於之前輔助療法失敗，依據以ECOG(東岸癌症臨床研究合作組織(Eastern Cooperative Oncology Group))進行狀態評分為0-2(0-5級)之病理、生理及放射檢查，及足夠的腎臟、肝臟及血液化驗參數而被診斷有乳癌之患者有資格參與該研究，於研究期間，患者被允許同時接受支持性治療，如：輸血及止痛劑，患者可能之前為了轉移性疾病未接受化學療法或生物性療法，成功通過篩選程序以確認患者符合資格後，將治療連續高達100位患者，患者將接受第一天：0.25至10毫克/公斤之抗Dll4抗體(REGN421)靜脈注射超過30分鐘加75毫克/平方公尺之歐洲紫杉醇靜脈灌注超過30分鐘，每三週重覆該合併養生法，直到癌症惡化或無法忍受之毒性發生。

主要終點係評估依據RECIST標準(由Eisenhaueret al. ,2009,Eur J Cancer 4 5:228-247)基於腫瘤反應速率之治療功效及腫瘤惡化時間，次要終點將包括一安全性及當合併給予歐洲紫杉醇和免疫遺傳測定抗Dll4抗體之抗Dll4抗體的藥物動力(PK)數據敘述，使用生理檢查、放射性方法(X光、電腦斷層攝影或核磁共振影像)評估疾病緩解，使用國家癌症研究院不良事件常用術語標準評估反面結果(CTCAE v 4.0，可由國家癌症研究院網站之癌症治療法評估計畫或CETP而得)，由患者取得血清樣本以測量抗Dll4抗體濃度，以及可能存在之對抗抗Dll4抗體之抗體。

實例12：對膀胱癌患者(第二期患者)投與Dll4抗體合併順鉑/吉西他濱

將於具有晚期無法動手術或轉移性膀胱癌的成年患者實施該研究，依據以ECOG(東岸癌症臨床研究合作組織)進行狀態評分為0-2(0-5級)之病理、生理及放射檢查，及足夠的腎臟、肝臟及血液化驗參數而被診斷有侵入性膀胱癌之患者有資格參與該研究，於研究期間，患者被允許同時接受支持性治療，如：輸血及止痛劑，患者可能之前為了轉移性疾病未接受化學療法或生物性療法，成功通過篩選程序以確認患者符合資格後，將治療連續高達100位患者，患者將於第一天接受0.25至10毫克/公斤之抗Dll4抗體(REGN421)靜脈注射超過30分鐘，加上於第1、8及15天1000毫克/平方公尺之吉西他濱超過30至60分鐘，加上於第2天70毫克/平方公尺之順鉑，每四週重覆該合併養生法，直到癌症惡化或無法忍受之毒性發生。

主要終點係評估依據RECIST標準(由Eisenhaueret al .,2009,Eur J Cancer 4 5:228-247)基於腫瘤反應速率之治療功效及腫瘤惡化時間，次要終點將包括一安全性及當合併給予歐洲紫杉醇和免疫遺傳測定抗D114抗體之抗D114抗體的藥物動力(PK)數據敘述，使用生理檢查、放射性方法(X光、電腦斷層攝影或核磁共振影像)評估疾病緩解，使用國家癌症研究院不良事件常用術語標準評估反面結果(CTCAE v 4.0，可由國家癌症研究院網站之癌症治療法評估計畫或CETP而得)，由患者取得血清樣本以測量抗D114抗體濃度，以及可能存在之對抗抗D114抗體之抗體。

<110>再生元製藥企業(Regeneron Pharmaceuticals,Inc.)

<120>以DLL4拮抗劑與化學治療劑治療癌症之方法

<130>　6043A-WO

<140>將被分派

<141>隨函歸

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<170>　FastSEQ專利軟體供Windows 4.0版

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<220>

<223>　合成

<400>　88

<210>　89

<211>　36

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　89

<210>　90

<211>　12

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　90

<210>　91

<211>　324

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　91

<210>　92

<211>　108

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　92

<210>　93

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　93

<210>　94

<211>　7

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　94

<210>　95

<211>　9

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　95

<210>　96

<211>　3

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　96

<210>　97

<211>　27

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　97

<210>　98

<211>　9

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　98

<210>　99

<211>　363

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　99

<210>　100

<211>　121

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　100

<210>　101

<211>　30

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　101

<210>　102

<211>　10

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　102

<210>　103

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　103

<210>　104

<211>　7

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　104

<210>　105

<211>　39

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　105

<210>　106

<211>　13

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　106

<210>　107

<211>　324

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　107

<210>　108

<211>　108

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　108

<210>　109

<211>　21

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　109

<210>　110

<211>　7

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　110

<210>　111

<211>　9

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　111

<210>　112

<211>　3

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　112

<210>　113

<211>　27

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　113

<210>　114

<211>　9

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　114

<210>　115

<211>　369

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　115

<210>　116

<211>　123

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　116

<210>　117

<211>　321

<212>　DNA

<213>　人工序列

<220>

<223>　合成

<400>　117

<210>　118

<211>　107

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 118

下圖之誤差槓代表平均值±平均標準差(standard deviation of the mean,SEM)

圖1顯示D114抗體合併順鉑(cisplatin)對植入於表現擬人化D114蛋白質的嚴重複合免疫缺失(SCID)小鼠(擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠)之人類VM-Cub1腫瘤(膀胱癌)生長的效果(例一)。對照組人類抗體固定區(F_C )(◆及實線)，REGN421(D114抗體)2毫克/公斤/注射(◆及虛線)，順鉑0.5毫克/公斤/注射(□)，順鉑2毫克/公斤/注射(■)，REGN421 2毫克/公斤/注射+順鉑0.5毫克/公斤/注射(○)，及REGN421 2毫克/公斤/注射+順鉑2毫克/公斤/注射(●)。

圖2顯示Dll4抗體合併順鉑對植入於擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失小鼠之人類A549腫瘤(非微小型細胞肺癌)生長的效果(例二)。對照組人類抗體固定區(●)，REGN421總劑量6毫克/公斤(○)，順鉑總劑量5毫克/公斤(△)，順鉑總劑量9毫克/公斤(▲)，REGN421 6毫克/公斤+順鉑總劑量5毫克/公斤(◇)，及REGN421 6毫克/公斤+順鉑總劑量9毫克/公斤(◆)。

圖3顯示Dll4抗體合併5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)對植入於擬人化Dll4嚴重複合免疫缺失小鼠之人類HCT116腫瘤生長的效果(例五)。對照組人類抗體固定區(●)，REGN421總劑量6毫克/公斤(○)，5-氟尿嘧啶總劑量45毫克/公斤(△)，5-氟尿嘧啶總劑量75毫克/公斤(▲)，REGN421 6毫克/公斤+5-氟尿嘧啶總劑量45毫克/公斤(◇)，及REGN421 6毫克/公斤+5-氟尿嘧啶總劑量75毫克/公斤(◆)。

圖4顯示Dll4抗體合併伊立替康(irinotecan)對植入於擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠之人類HCT116腫瘤生長的效果(例六)。對照組人類抗體固定區(●)，REGN421總劑量6毫克/公斤(○)，伊立替康總劑量22.5毫克/公斤(△)，伊立替康總劑量75毫克/公斤(▲)，REGN421 6毫克/公斤+伊立替康總劑量22.5毫克/公斤(◇)，及REGN421 6毫克/公斤+伊立替康總劑量74毫克/公斤(◆)。

圖5顯示於服藥後5、10、24及72小時與7天後測量，與服用15毫克/公斤人類抗體固定區相較，服用單一劑量0.5、5或、10毫克/公斤REGN421之植入於擬人化D114嚴重複合免疫缺失小鼠之Colo205人類大腸直腸腫瘤細胞之Hey1基因表現的平均(4小鼠/組)倍數變化。

Claims

一種專一性結合至人類類戴爾他配體4(hDll4)的人類抗體或其抗原結合片段於藥物製造之用途，其用於經由與一化學治療劑合併以於一個體中治療癌症或降低或終止腫瘤生長，其中該人類抗體或其抗原結合片段包含一個包含序列辨識碼編號分別為22、24及26之重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列的重鏈變異區(HCVR)，以及一個包含序列辨識碼編號分別為30、32及34之輕鏈CDR1、CDR及CDR3序列的輕鏈變異區(LCVR)，該化學治療劑係以鉑為基礎之化學治療劑或嘧啶類似物，及該癌症或腫瘤為固體惡性腫瘤。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該抗體或抗原結合片段包含一個序列辨識碼編號20或序列辨識碼編號116之HCVR序列。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該抗體或抗原結合片段包含一個序列辨識碼編號28或序列辨識碼編號118之LCVR序列。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該抗體或抗原結合片段包含一個序列辨識碼編號20/28或序列辨識碼編號116/118之HCVR/LCVR組合。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該化學治療劑係以鉑為基礎之化學治療劑。
如申請專利範圍第5項之用途，其中該以鉑為基礎之化學治療劑係順鉑(cisplatin)、碳鉑(carboplatin)、異丙鉑(iproplatin)，或奧沙利鉑(oxaliplatin)，或其醫藥上可接受之鹽類。
如申請專利範圍第6項之用途，其中該以鉑為基礎之化學治療劑係順鉑。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該化學治療劑係嘧啶類似物。
如申請專利範圍第8項之用途，其中該嘧啶類似物係吉西他濱(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶(5-FU)，或卡培他濱(capecitabine)，或其醫藥上可接受之鹽類。
如申請專利範圍第9項之用途，其中該嘧啶類似物係5-氟尿嘧啶。
如申請專利範圍第1至10項中任一項之用途，其中該固體惡性腫瘤選自由卵巢癌、子宮癌、乳癌、肺癌、肝癌、大腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、胰臟癌、胃癌、骨癌、皮膚癌及惡性軟組織肉瘤組成之群。
如申請專利範圍第7項之用途，其中該固體惡性腫瘤為肺癌或膀胱癌。
如申請專利範圍第10項之用途，其中該固體惡性腫瘤為大腸直腸癌。
如申請專利範圍第1至10項中任一項之用途，其中該抗體或抗原結合片段及該化學治療劑係同時或連續地合併使用。
如申請專利範圍第1至10項中任一項之用途，其中該個體係人類個體。
一種醫藥組成物，其包含一個專一性結合至hDll4之抗體或其抗原結合片段、一化學治療劑及一醫藥上可接受之載體，其中該抗體或抗原結合片段包含一個包含序列辨識碼編號分別為22、24及26之重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列的HCVR，以及一個包含序列辨識碼編號分別為30、32及34之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列的LCVR；且該化學治療劑係以鉑為基礎之化學治療劑或嘧啶類似物。
如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該抗體或抗原結合片段包含一個序列辨識碼編號20/28或序列辨識碼編號116/118之HCVR/LCVR組合。
一種套組，其包含一個其中包含一種專一性結合至hDll4之抗體或其抗原結合片段的容器，及一或多種其中包含由以鉑為基礎之化學治療劑或嘧啶類似物中選出的至少一種化學治療劑之額外容器，其中該抗體或抗原結合片段包含一個序列辨識碼編號20/28或序列辨識碼編號116/118之HCVR/LCVR組合。
如申請專利範圍第18項之套組，其中該化學治療劑係順鉑。
如申請專利範圍第18項之套組，其中該化學治療劑係5-氟尿嘧啶。